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ANNALES

DE L'INSTITUT PASTEUR

SCEAUX, — IMPRIMERIE CHARAIRE ET FILS.

ANNALEN
DE L'INSTITUT PASTEUR

(JOURNAL DE MICROBIOLOGIE)

PUBLIÉES SOUS LE PATRONAGE DE M. PASTEUR

PAR

E. DUCLAUX

MEMBRE DE L'INSTITUT
PROFESSEUR A LA SORBONNE

Et un Comité de rédaction composé de MM.

CHAMBERLAND, chef de service à l'Institut Pasteur.
D: GRANCHER, professeur à la Faculté de médecine.
NOCARD, directeur de l'école vétérinaire d’Alfort.
D' ROUX, chef de service à l'Institut Pasteur.

Dr STRAUS, professeur à la Faculté de médecine.

DEUXIÈME ANNÉE
1888

PARIS

G. MASSON, ÉDITEUR
LIBRAIRE DE L'ACADÉMIE DE MÉDECINE
420. BOULEVARD SAINT-GERMAIN

EN FACE DE L'ÉCOLE DE MÉDECINE

1888

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INAUGURATION

DE

L'INSTITUT PASTEUR

INAUGURATION

DE

L'INSTITUT PASTEUR

LE 14 NOVEMBRE 1888
EN PRÉSENCE DE

È M. LE PRÉSIDENT DE LA RÉPUBLIQUE.

COMPTE RENDU

SCEAUX
CHARAIRE ET FILS,
IMPRIMEURS DES ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

1888

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NE

INAUGURATION

DE

LENSEEUR PASSÉE

Le 14 novembre 1888 a eu lieu l'inauguration de l’Institut Pas-
teur, situé rue Dutot. Les maisons voisines s'étaient pavoisées comme
pour une fête nationale. Des trophées de drapeaux ornaient la façade
de l'Institut Pasteur, bâti en briques et en pierres, dans le style
Louis XIIL. On lit sur le fronton : « Souscription publique 1888.» Touten
étant monumental, l'aspect de l’édifice est simple, sans ornementation
et sans sculpture. On accède au bâtiment principal, qu'une grille et un
terre-plein de gazon séparent de la rue, par dix marches qui condui-
sent à une grande porte d'entrée. Une galerie intérieure relie ce bâti-
ment aux deux ailes où seront installés le service du traitement de la
rage etlous les laboratoires d'enseignement, de recherches et d'études.

Dès midi, les portes étaient ouvertes. M. Pasteur, qui avait à ses
côlés son fils, secrétaire de l’ambassade de France auprès du Quirinal,
et son gendre, M. Vallery-Radot, se tenait sur le seuil de la salle
d'inauguration, située à gauche du perron, et recevait les invités.
L'illustre savant portait le grand cordon de la Légion d'honneur et la
plaque de grand-croix de Sainte-Anne de Russie. La salle, décorée de
drapeaux tricolores, pouvait contenir six cents personnes. Dans le fond,
se dressait une large estrade dominée par le buste de la République.
À droite et à gauche s’élevaient les bustes de deux grands souscripteurs :
le tsar et l'empereur du Brésil, puis entre les fenêtres, les bustes de
M. le baron de Rothschild et de M"° Boucicaut. Deux socles étaient
réservés pour les bustes de M. le comte de Laubespin et de M°* Furtado-
Heine.

A une heure et demie, M. le Président de la République, accom-
pagné du général Brugère et de deux officiers d'ordonnance, arrivait
en landau devant le perron. Il était salué par l'hymne national
exécuté par la musique de la Garde républicaine. M. Pasteur, après
avoir descendu les marches pour aller au devant de M. le Président de

Ô INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

la République, le conduisit dans un salon d'attente où s'était réuni le
cortège ofüiciel composé de: M. Méline, président de la Chambre des
députés ; M. Floquet, président du Conseil des ministres; M. Lockroy,
ministre de l'instruction publique; M. Peytral, ministre des finances ;
M. Pierre Legrand, ministre du commerce; M. Viette, ministre de
l’agriculture ; M. Bourgeois, sous-secrétaire d'Etat du ministère de
l'intérieur; M. Poubelle, préfet de la Seine; M. Lozé, préfet de police.
Le comité de l'Institut Pasteur était représenté par M. Bertrand,
président, secrétaire perpétuel de l'Académie des sciences, membre de
l'Académie française, MM. Camille Doucet, JulesSimon, 4. Wallon, Dela-
borde, le baron A. de Rothschild, Christophle et le docteur Grancher.
Ainsi formé, le cortège fit son entrée dans la salle et monta sur
l’estrade où des places avaient été réservées aux sénateurs et aux
députés, parmi lesquels on remarquait : MM. Léon Say, Berthelot, de
Marcère, le comte de Laubespin, Devès, Jules Ferry, Henri Brisson,
Spuller, Lévèque, Ribot. Venaient ensuite : MM. Le Guay, sous-
gouverneur du Crédit Foncier de France ; Jourde, directeur du Siècle :
Patinot, directeur du Journal des Débats: Reinach, directeur de la
République Française ; Liard, directeur de l’enseignement supérieur ;
Monod, Lavisse, Peyron, Collin, Dujardin-Beaumetz, directeur général
du service de santé des armées, E. Tisserand, directeur de l’agriculture.
Au premier rang des invités, et face à l’estrade, avaient pris place
M. le général Menabrea, ambassadeur d'Italie; M. l'ambassadeur de
Turquie; M. le ministre du Brésil; M. Kotzebue, conseiller de l’ambas-
sade de Russie. Puis immédiatement après, parmi les membres de
l'Académie française : MM. Legouvé, Duruy, le duc de Brogjlie,
Rousse, John Lemoinne, Gaston Boissier, Mézières, François Coppée ;
les membres de l’Académie des sciences : MM. Hébert, Chauveau,
Bouchard, Verneuil, Troost, Friedel, Mascart, Schlæsing, Janssen,
Tisserand, Wolf, Gaudry, Cailletet, Grandidier ; parmi les membres
des autres sections de l'Institut de France : MM. Guillaume, Delaunay,
Perrot, Alex. Bertrand, Beaussire; parmi les membres de l’Académie
de médecine : MM. Hérard, président, Bergeron, Proust, Ricord, Trélat,
Guéneau de Mussy, Dujardin-Beaumetz, Villemin, Gavarret, Lannelon-
gue, le bon Larrey, Rochard, Alphonse Guérin, Hayem, Mathias Duval,
Roger, Péan, A, Gautier, Féréol, Laboulbène, Laborde, Worms, Buc-
quoy, Labbé; parmi les médecins étrangers spécialement délégués
pour cette séance d’inauguration : MM. Metchnikoff, Gamaleïa,
Bujwid, Kraïouchkine, Helman.
Debout, au pied de l’estrade, une députation des étudiants de
Paris, leur drapeau déployé, formait comme une garde d'honneur
de la jeunesse et du travail.

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 7

Plusieurs pages ne suffiraient pas à énumérer tous ceux qui, parmi

les hommes de science et les publicistes, les anciens élèves de

M. Pasteur, MM. Raulin, Gayon, Maillot, et ses disciples actuels, les

souscripteurs importants, s'étaient placés plus ou moins facilement

dans cette salle devenue trop petite. À la porte et jusque dans la

galerie se tenaient debout les hommes les plus connus, les plus
célèbres, ne pouvant entrer dans la salle et ne s’en étonnant pas.

La séance s'ouvrit et M. Bertrand prononça le discours suivant:

DISCOURS DE M. BERTRAND.
Messieurs,

La tâche qui m'est échue est plus douce que facile. Je n’ai
rien à vous apprendre et les paroles me manquent pour remer-
cier dignement le chef de l’État, la réunion imposante et les
savantsillustres qui par leur bienveillance, leur protection et leur
concours empressé hâteront nos progrès aujourd'hui certains.

Nos espérances sont grandes : je n’ai pas à les dire aujour-
d'hui. Laissons à l'avenir sa part de joies et de triomphes, le pré-
sent nous suffit; le ngm de Pasteur, pour égaler les plus illus-
tres, n'a pas besoin de grandir encore.

Depuis quarante ans, mon cher Pasteur, vous laissez venir la
gloire sans la poursuivre. Entre tant de routes où souvent on la
cherche, vous n’en connaissez qu’une, celle de la vérité. Là
comme ailleurs on peut la rencontrer, votre renommée en est la
preuve.

La date du 14 novembre 1888 restera immortelle dans l’his-
toire de la médecine. Permettez-moi, pour toute contribulion à
cette belle journée, de me reporter un instant vers le temps déjà
ancien de vos premiers succès.

L’éclat de vos débuts ne pouvait frapper que les savants.
Quelques-uns seulement vous ont deviné et compris. Leurs
noms, célèbres ou illustres, recevront un éclat nouveau du
patronage empressé, spontanément offert à votre gloire nais-
sante.

En rappelant dans cette fête le souvenir de Biot, de Sénar-
mont, de Claude Bernard, de Balard et de J.-B. Dumas, je
réponds, j'en suis sûr, à vos sentiments les plus chers.

8 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

Je ne céderai pas à la tentation de passer en revue le long
enchainement des travaux admirés par de si grands juges. On
vous rencontre sur toutes les voies de la science. Je m'écarterais
du but de cette réunion en y cherchant à votre suite la trace
ineffaçable de votre empreinte.

Vos condisciples, longtemps avant vos maîtres, avaient
beaucoup auguré de vous.

Dans un rapide voyage sur les bords du Rhin, c'était en
1847, j'avais eu la bonne fortune de rencontrer et d'associer à
mes excursions un des plus brillants élèves de l'École dont
vous êtes la gloire. Curieux de toute science, savant dans l’his-
toire de l'ésprit humain, Émile Verdet savait tout comprendre.

Jugeant de haut lesgloires du passé, il portait sur l'avenir
de clairvoyants regards.

Pendant une belle soirée d'été, sur les confins de la Forèl-
Noire, nous abordâmes les plus difficiles problèmes. Encouragés
par une confiance mutuelle, nous laissions ce jour-là, quoique
sceptiques tout deux, libre carrière à nos espérances. Nous nous
demandions quels seraient parmi nos amis jeunes encore, les
mieux armés pour réaliser nos ambitieuses rèveries.

Beaucoup de noms furent prononcés, plus d’une célébrité
latente alors, fut prédite par Verdet qui ne se trompa guère; 1l
me parla de son ami Pasteur. Je vous connaissais à peine. Je
n’eus pas l’occasion de vous dire au retour les pronostics de ce
penseur judicieux et sévère.

Votre modestie, aujourd'hui mieux aguerrie, en aurait cer-
tainement souffert. Verdet cependant faisait sur chacun des
réserves. Sur vous comme sur les autres, il conservait des
doutes. « Pasteur, me dit-il, ne connaît pas les limites de la
science. Je crains pour lui de stériles efforts! ?/ aime les problèmes
insolubles. » Pouvait-on, je vous le demande, messieurs, se
tromper avec plus de perspicacité ?

Les problèmes qui, depuis un demi-siècle, tourmentent
sans repos votre esprit, ne sont plus insolubles aujourd'hui. C’est
pour vous en remercier au nom de la science, pour nous en
réjouir au nom de l'humanité, pour nous en glorifier tous
ensemble au nom de la France, que nous sommes réunis
aujourd'hui.

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. g

IL était impossible de mieux résumer l’état des esprits et de dire
plus simplement de si grandes choses.

M. le docteur Grancher prit ensuite la parole et, dans un discours
que nous donnons ?n ertenso, rendit compte des résultats de la vacci-
nalion antirabique non seulement en France, mais dans le monde entier,

Au cours de cet exposé lumineux se trouve une page historique des
luttes soutenues :,

DISCOURS DE M. LE PROFESSEUR GRANCHER.

Monsieur le Président de la République,

Messieurs,

La communication que M. Pasteur fit à l’Académie des
sciences, le 26 octobre 1885, dans laquelle il annonçait que le
jeune Meister avait subi avec succès l’inoculation antirabique,
causa dans le monde scientifique un émoi profond. C'était, en
effet, la première application à l’homme d'une méthode générale
de traitement des maladies virulentes et contagieuses, et l’on
comprend aisément l’enthousiasme et les espérances des uns, le
scepticisme, l'hostilité même des autres.

Après Meister et Jupille, les blessés affluèrent en si grand
nombre, que M. Pasteur et ses collaborateurs, pris au dépourvu,
durent improviser une organisation sommaire de tous les ser-
vices accessoires de la vaccination antirabique : inscription des
malades, pansement des plaies, correspondance, etc., etc., de
sorte que l’année 1886 fut absorbée tout entière dans l'énorme
labeur exigé par la vaccination de 2,682 personnes francaises ou
étrangères, chaque personne recevant, en moyenne, quinze à
vingt inoculations. M. Pasteur sentait dès ce moment le besoin
impérieux d’un journal ou d’une revue, organe officiel du labo-
ratoire, qui publierait mensuellement la statistique des vacci-
nations; malheureusement, sa santé, sérieusement ébranlée par
les fatigues et les émotions, le força à quitter Paris avant la fin
de 1886, et les Annales de l'Institut Pasteur, fondées par M. Du-
claux, professeur de chimie biologique à la Sorbonne, ne paru-
rent qu’en janvier 1887.

Cependant, les adversaires de la méthode de M. Pasteur ne

10 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

manquaient pas de tirer parti de notre silence, et, profitant de
quelques insuccès survenus dans le cours et à la fin de 1886, ils
racontaient çà et là que le laboratoire cachaït ses morts, dont
le nombre était légion. Ils allaient même jusqu’à dire que la
nouvelle méthode donnait la rage au lieu de la guérir.

Au commencement de janvier 1887, l’Académie de médecine
fut saisie de la question, et nous pûmes enfin combattre par des
faits et par des chiffres ces bruits calomnieux qui troublaient
l'opinion publique et risquaient de jeter l’effroi parmi nos malades.
En même temps. les Sociétés savantes de Naples, de Vienne et de
Saint-Pétershourg retentissaient du bruit de la querelle des Pas-
toriens et des Antipastoriens.

Dans ces discussions scientifiques où l'attaque et la défense
furent également ardentes, tout a été dit pour et contre la méthode
des vaccinations antirabiques ; les adversaires soutenant que la
méthode est inefficace ou dangereuse, selon les cas, les partisans
proclamant, au contraire, que la vaccination antirabique est inof-
fensive et merveilleusement efficace.

La bataille, suspendue pendant plusieurs mois, fut reprise en
juillet, en présence de M. Pasteur, qui répondit à ses contradic-
teurs avec sa vaillance accoutumée. Elle avait été provoquée par
le rapport de la Commission anglaise que M. Pasteur présentait
à l'Académie.

Cette Commission officielle, composée des savants les plus
célèbres de l'Angleterre, avec un jeune et habile physiologiste,
M. V. Horsley, pour rapporteur, était arrivée à Paris fort incré-
dule. Après uue enquête approfondie des faits, elle revint en
Angleterre et répéta les expériences de M. Pasteur ; son contrôle
expérimental dura plus d’une année. La conclusion de la Com-
mission, au grand désappointement de nos adversaires, fut, je
cite textuellement : que M. Pasteur avait découvert une méthode
préventive de la rage comparable à celle de la vaccination contre
la variole.

La discussion académique fut close enfin par les paroles sui-
vantes de M. Charcot :

€ Oui, l'inventeur de la vaccination antirabique peut, aujour-
d’hui plus que jamais, marcher la tête haute et poursuivre désor-
mais l’accomplissement de sa tâche glorieuse sans s’en laisser
détourner un seul instant par les clameurs de la contradiction

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 11

systématique ou par les murmures insidieux du dénigrement. »
Cette parole si autorisée fut entendue de tous et l’année 1888
s’est écoulée pacifiquement.

Messieurs, avant de vous présenter nos statistiques, Je vou-
drais vous dire quelles sont, à mon avis, les causes de cette
hostilité que la vaccination antirabique a rencontrée si pas-
sionnée.

Vous savez que M. Pasteur est un novateur, que son imagi-
nation créatrice, réglée par l'observation rigoureuse des faits, a
renversé bien des erreurs et édifié à leur place toute une science
nouvelle. Ses découvertes sur les ferments, sur la génération
des infiniment petits, sur les microbes causes des maladies con-
tagieuses, et sur la vaccination contre ces maladies, ont été pour
la chimie biologique, pour l’art vétérinaire et pour la médecine,
non pas un progrès régulier, mais une révolution radicale.

Or, les révolutions, même celles qu'impose la démonstration
scientifique, laissent partout où elles passent des vaincus quine
pardonnent pas aisément. M. Pasteur à donc, de par le monde,
beaucoup d’adversaires, sans compter ces Français d'Athènes
qui n'aiment pas que le même homme soit toujours juste ou
toujours heureux.

Et, comme si ses adversaires n'étaient pas encore assez nom-
breux, M. Pasteur s’en fait d’autres par la rigueur implacable
de sa dialectique et par la forme absolue qu'il donne quelquefois
à sa pensée.

Cette forme peut être dangereuse, surtout dans les choses de
la médecine, où rien n’est absolu, et où les exceptions à la règle
sont toujours nombreuses. Or, M. Pasteur. par habitude d'’es-
prit, néglige volontiers ces faits contingents qui ne sauraient.
il est vrai, prévaloir contre la loi, mais qui, lorsqu'il s’agit d’une
médication appliquée à l'espèce humaine, méritent d'être com-
ptés. Il a donc purement et simplement proclamé l'efficacité de
sa méthode de traitement de la rage, sans faire ses réserves sur
la possibilité d'échecs partiels, tandis que, s’il eüt été médecin,
il eût instinctivement pris ses précautions en prévoyant la possi-
bilité d’insuccès. Il n’en fit rien et s’exposa ainsi aux coups de
la médecine traditionnelle.

Or, pour comprendre la résistance de la médecine aux décou-

42 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

vertes de M. Pasteur, il suffit de jeter un regard sur les mouve-.
ments qui l’agitent depuis quinze ans.

Nous savions à peine que, dans certaines maladies, le sang,
les humeurs et les tissus sont occupés par des êtres infiniment
petits, lorsque M. Pasteur, conduit par ses travaux sur les fer-
ments, s’est jeté dans cette voie, nouvelle pour lui et pour nous.
Et quelles découvertes il y fait coup sur coup! Il nous éclaire;
ce n’est pas assez dire, il éblouit nos yeux habitués au demi-jour
de la médecine hippocratique.

Voyez M. Pasteur en face de la bactéridie charbonneuse. Non
seulement il en fait la biologie, non seulement 1l nous prouve
qu’elle est la cause unique du charbon, mais il éduque, il disci-
pline cet infiniment petit et lui apprend à servir contre soi-même
et à devenir son propre vaccin. L'expérience de Pouilly-le-Fort,
longuement préparée par les travaux de laboratoire de MM. Pas-
teur, Chamberland et Roux, est célèbre dans le monde entier.

Lorsque, au Congrès de Londres, en 1881, M. Pasteur
annonça cette grande découverte de l’atténuation des virus et
de la vaccination du choléra des poules et du charbon, un des
hommes les plus compétents en microbie, M. Koch, aurait dit :
« C’est trop beau pour être vrai! » et, trois mois après, dans le
premier numéro des Mittheilungen de Berlin, il prenait résolu-
ment parti contre M. Pasteur. Depuis, M. Koch a concédé que
l'atténuation et la vaccination sont des faits exacts et d’une
grande portée scientifique, mais il nie peut-être encore aujour-
d'hui la valeur pratique de ces vaccinations. Et cependant le
vaccin charbonneux se répand partout où le charbon existe :
en France, en Italie, en Hongrie, en Espagne, aux Indes, en
Australie. Quelle meilleure preuve de sa valeur scientifique et
pratique |

Cette opposition ne troublait pas M. Pasteur qui nous
disait : « Eh bien! qu'ils nient l’atténuation des virus et la vacei-
nation, nous aurons sur eux dix ans d'avance! »

Et le charbon est à peine achevé que M. Pasteur s'attaque
à larage. Là, pendant plusieurs années, avec l’aide de M. Roux,
il fait expériences sur expériences et arrive à des résultats plus
merveilleux encore. Le microbe de la rage a échappé jusqu'ici à
tous les regards, mais il existe assurément. Eh bien! sans le
connaître autrement que par ses effets, M. Pasteur a trouvé le

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 15

moyen de l'utiliser comme matière vaccinale. Et surtout,
M. Pasteur a osé proposer la vaccination après morsure, c'est-à-
dire après infection. Or, les médecins ont toujours vécu sur ce
dogme qu'un virus, quel qu’il soit, qui a pénétré dans le corps
humain est désormais inattaquable et doit y produire ses effets.

La résistance des médecins à tant de nouveautés subver-
sives est done bien compréhensible. Pour reconnaître qu’on a
appris d’abord, puis enseigné des erreurs, il faut, outre l'étude
personnelle et impartiale des faits nouveaux, une certaine lar-
geur d'esprit qu'on ne rencontre pas toujours, même chez les
hommes les plus distingués.

M. Pasteur, heureusement pour lui et peut-être même pour
nous, n’est pas médecin. Expérimentateur sans idées préconçues
et sans préjugés d'école, ila créé, à côté de la médecine tradi-
tionnelle qu'il ignore, une médecine nouvelle que ses contradic-
teurs ignorent à leur tour. Cette médecine est fondée sur cette
idée que la spontanéité morbide n’existe pas pour les maladies
infectieuses, et que les lois de la pathologie générale sont com-
munes aux hommes et aux animaux. Combien de médecins,
cependant, ont été élevés à croire le contraire ! Cela étant, com-
ment s'étonner de leur opposition et de leur révolte? Je trouve,
pour ma part, leur scepticisme fort excusable, puisqu'il procède
des idées traditionnelles, c’est-à-dire de l'esprit de conservation.

Il ne faut pas oublier toutefois, et M. Pasteur n'oublie pas,
qu'à l'heure critique, il s’est trouvé, pour défendre la vaccina-
tion antirabique, une élite de médecins, hommes de science et
d'avant-garde, dont l'autorité, universellement reconnue, a fait
pencher le plateau de la balance du bon côté. Au premier rang.
Vulpian, qui non seulement avait suivi M. Pasteur, mais l'avait
poussé à la vaccination antirabique, Vulpian combattit et mourut
sur la brèche en défendant avec une éloquence enflammée la
méthode nouvelle.

A côté de Vulpian, les Brouardel, les Charcot, les Verneuil,
les Chauveau, les Villemin se sont honorés en soutenant la
cause du progrès eten préparant son triomphe.

M. Pasteur eut ainsi la bonne fortune de trouver, même à
l'heure des défaillances et des défections, un double point d'appui,
d'une part dans la foule des malades qui n’hésita jamais, d’autre
part, dans la parole respectée de nos maîtres les plus éminents.

14 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

Beaucoup d’autres médecins partageaient la foi'scientifique de
M. Pasteur; je ne les nomme ni ne les connais tous, mais ils se
taisaient, et nos adversaires menaient un tel bruit dans toutes
les presses el les Académies qu’à les entendre, la vaccination
antirabique était morte.

îlle vit, Messieurs, et elle prospère, car il existe aujour-

d'hui, en comptant celui de Paris, plus de vingt instituts antira-
biques disséminés dans le monde entier. 11 y en a sept en
iussie : à Odessa, Saint-Pétersbourg, Moscou, Varsovie,
Charkow, Samara ef Tiflis; cinq en Italie : à Naples, Milan,
Turin, Palerme, Bo’ogne, ces deux derniers créés récemment et
dotés par le roi. Un à Vienne, un à Constantinople, un à Bar-
celone, un à Bucarest, un à Rio de Janeiro, un à la Havane, un
à Buenos-Ayres; enfin à Chicago et à Malte, deux nouveaux
laboratoires sont en voie d'organisation.

L'Institut antirabique de Paris est en relation suivie avec ces
laboratoires dont les chefs sont tous venus, sauf deux, étudier ici
la méthode de M. Pasteur pour l'appliquer à leurs malades avec
ses perfectionnements progressifs.

Dès l’origine, nous avons classé nos malades en trois
tableaux A, B et C. Le tableau A contient toutes les personnes
mordues par des animaux reconnus enragés par preuve expéri-
mentale absolue. Dans le tableau B sont inscrites toutes les
personnes mordues par des animaux déclarés enragés par cerli-
ficats de vétérinaires; c'est le tableau le plus chargé. Enfin, le
tableau C contient toutes les personnes mordues par des ani-
maux suspects de rage. La suspicion résulte ici des circonstances
même de la morsure. Un chien inconnu traversant un village y
mord plusieurs enfants et des animaux, chiens, moutons, puis
disparaît. Si les personnes mordues se présentent au laboratoire,
nous les inscrivons dans le tableau C. En fait, ce tableau est de
plus en plus restreint, car notre sélection est de plus en plus
sévère, de telle sorte que je crois pouvoir affirmer que 98 °/ des
personnes admises à la vaccination ont été mordues par des ani-
maux enragés.

Notre statistique générale comprend donc trois tableaux A,
B et C, réunis en un seul. Elle se subdivise en statistique parti-
culière à chacun des tableaux A, B et C et en statistiques spé-

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 15
ciales pour les morsures de la tête et de la face, des mains, des
membres et du tronc.

Pour ne point fatiguer inutilement votre attention, je ne
prendrai que quelques chiffres. Les Annales de l’Institut Pasteur
qui publient les tableaux mensuels donneront les tableaux com-
plets.

Le nombre des personnes traitées à Paris pendant les années
1886-1887 et la première moitié de 1888 s'élève à 5,374. En
1886, où l’affluence des étrangers était considérable, nous avons
inoculé2,682 personnes, 1,778 en 1887 et 914 jusqu'au 1° juillet
1888.

Le taux de la mortalité, en comptant tous les morts, même
ceux pris de rage le lendemain du traitement, est, pour 1886, de
1,34 0/,, pour 1887 de 1,12, et pour 1888 de 0,77!.

Mais il convient d’écarter des tables de la mortalité les
personnes qui succombent à la rage dans les quinze jours qui
suivent le traitement, car la vaccination pour être efficace doit
être achevée avant que l’incubation du virus du chien mordeur
ait commencé dans les centres nerveux. Or, le virus de la rage
commune, porté directement à la surface du cerveau d’un chien,
y incube pendant quinze ou dix-huit jours avant d'y produire
ses effets.

Chez les malades qui succombent à la rage dans la quinzaine
qui suit le traitement, celui-ci a été inutile, parce qu'il a été
trop tardif, mais il n’a pas été mis en échec, parce que les
conditions de son efficacité n'étaient point réalisées.

En opérant cette défalcation, que pas un médecin ne saurait
nous refuser, le taux de la mortalité, malgré le traitement,
tombe pour 1886 à 0,93 °/,, pour 1887 à 0,67 °/,, et pour 1888 à
05510).

Ces chiffres sont sensiblement plus faibles que les premiers,
puisque la mortalité reste toujours au-dessous de 1 °/,. Mais les
uns et les autres donnent une mortalité progressivement
décroissante alors que notre choix des personnes admises au
traitement est de plus en plus sévère.

Messieurs, cette décroissance dans la mortalité tient aux

1. Tous les chiffres de la statistique de 1888 ont été relevés sur nos registres
à la date du 31 octobre.

16 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR,

perfectionnements progressifs apportés à la première formule
de traitement. Nous faisons un traitement plus énergique, plus
prolongé, plus intensif, pour prendre le mot de M. Pasteur qui
a fait tant de bruit, et le traitement reste inoffensif. Cette effi-
cacité différente de la vaccination antirabique selon telle ou
telle formule, est la preuve la plus certaine de sa valeur théra-
peutique. Les savants russes qui combattaient la vaccination
antirabique à Odessa et à Saint-Pétersbourg le jugèrent ainsi, et
cessèrent toute opposition lorsque M. Gamaleïa leur eut montré
deux tables de mortalité fort différentes selon la méthode
employée.

À Odessa, le traitement simple appliqué à 136 personnes a
donné une mortalité de 5,88 °/,, tandis que le traitement intensif
appliqué à 997 personnes a donné une mortalité de 0,80 °/,.

M. le D' Bujwid, chef du Laboratoire de Varsovie, a fait de
son côté les mêmes observations. M. Bujwid, qui assiste à
cetle séance, ne me contredira pas si je dis que quand il vint à
Paris y étudier la vaccination antirabique, il était fort sceptique.
Élève de Koch, et déjà très habile technicien en microbie, il
travailla avec nous plusieurs mois, puis, dans son laboratoire
privé à Varsovie, il pratiqua les inoculations antirabiques.

M. Bujwid étudia le traitement simple, en s’arrètant à la
moelle de six jours. 195 personnes vaccinées donnèrent une
mortalité de 4,1 °/,. Au contraire, le traitement intensif appliqué
à des malades choisis sévèrement parmi ceux dont la morsure
était réellement dangereuse (30 étaient mordus au visage, dont
4 par des loups enragés) a donné les résultats les meilleurs : sur
370 personnes vaccinées jusqu’au 1° septembre, il n’y a pas eu
de mort, de sorte que M. Bujwid est devenu un partisan très
convaincu de la méthode.

Nos statistiques particulières, dressées pour chaque tableau
À, Bet C, conduisent aux mêmes conclusions. La mortalité,
dans le tableau À qui ne contient que des personnes dont la
morsure était sûrement virulente, ne diffère pas sensiblement
de la mortalité du tableau C, qui comprend les personnes
mordues par des animaux simplement suspects. Pour les trois
années 1886-87-88, la mortalité dans le tableau A est de 1,36 °/,
en comptant tous les morts, et de 1,09 en ne comptant que les
morts survenues 15 jours après le traitement. Dans le tableau

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 17

C, cette mortalité est de 1,30 ?/, ou de 0,54!°/,. Cette similitude
dans le chiffre de la mortalité pour deux tableaux en apparence
si différents, prouve deux choses : 1° que le très grand nombre
des animaux mordeurs, dits suspects, étaient bel et bien atteints
de rage ; 2° qu’il y a lieu de traiter avec la mème sévérité les
personnes des tableaux A et C.

Les statistiques spéciales, dressées séparément pour les
morsures du visage, des mains ou des membres, témoignent à
leur façon de l'efficacité de la vaccination antirabique. On sait
que dans les anciennes statistiques, la mortalité moyenne de
toutes morsures était évaluée à 10, 15 ou 20 ?‘/,, selon les
observateurs, et que la mortalité par morsure faite à la tête ou
au visage s'élevait à 80 et 88 °/,. Dans nos tableaux, la mortalité
après morsure à la tête ou au visage est de 3,84°/, si on compte
tous les morts ; elle est en réalité de 1,82 ‘/,, si on écarte les
morts survenues dans la quinzaine qui a suivi le traitement.
Ainsi, dans ce genre de morsure, la moitié des morts survient
dans les quinze premiers jours après le traitement, ce qui est
une nouvelle preuve de leur gravité exceptionnelle. Mais, cette
période dangereuse passée, le traitement est presque aussi effi-
cace pour elles que pour les morsures communes. Nous nous
expliquons ce résultat par la vaccination particulièrement éner-
gique donnée aux personnes mordues à la tête ou au visage.

L'écart du chiffre réel de notre statistique : 1,82 °/,, et des
chiffres des statistiques classiques : 80 et 88 ?/,, est tellement
considérable qu’il est impossible de méconnaitre l'intervention
bienfaisante du vaccin antirabique.

Les statistiques étrangères concordent avec les nôtres :

À Saint-Pétersbourg, le laboratoire fondé par Son Altesse
Impériale le Prince Alexandre d'Oldenbourg, et entretenu à ses
frais, a vacciné, depuis le 13 juillet 1886 jusqu’au 13 septembre
1888, 484 personnes. La mortalité moyenne a été de 2,68 °/.

Des renseignements fournis par M. le D' Kraïouchkine,
médecin de la station antirabique, il résulle que la mortalité,
un peu plus élevée que la nôtre, de cette statistique, s’explique
par la gravité extrême des morsures.

À Odessa, dans le laboratoire dirigé par M. le professeur
Metchnikoff, M. le D'Gamaleïa a vacciné :

18 IJNAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

En 1886, 324 personnes par divers traitements simples.
Mortalité : 3,39°/,.

En 1887, 345 personnes par le traitement intensif. Morta-
hié 4045827;

En 1888, 364 personnes par le traitement intensif. Morta-
lité : 0,64 °/,.

Pendant ces trois années, 1,135 personnes ont subi le trai-
tement antirabique avec une mortalité moyenne de 1,41 ?/.

A Moscou, à l'Institut antirabique fondé sous les auspices du
prince Dolgoroukow, M. le D' Gwozdelf à vacciné :

in 1886, 107 personnes par le traitement simple. Mortalité :
8,40 0).

En 1887, 280 personnes par le traitement intensif. Morta-
lité : 4,27 0/0.

En 1888, 246 personnes par le traitement intensif. Morta-
lité : 1,60 °/o.

À Varsovie, M. Bujwid a inoculé :

297 personnes par divers traitements simples. La mortalité
moyenne a été de 3 0/,.

310 personnes avec la méthode intensive. La mortalité,
jusqu'ici, est nulle. (Déjà, 16 mois se sont écoulés depuis le
commencement de l'application de cette méthode et deux mois
depuis le traitement du dernier malade.)

À Samara, le D' Parchenski a vacciné 53 personnes, dont
4 mordues par des loups. La mortalité, ici fort élevée : 5,67 °/,
s'explique par le traitement insuffisamment énergique et insuf-
fisamment prolongé, ainsi qu'il résulte des renseignements
fournis par une lettre du D' Parchenski.

À Charkow, el probablement pour les mêmes raisons, mais
nous manquons de renseignements précis, M. le D' Protopopoff
a vacciné 233 personnes avec une mortalité de 3,80 °/,.

A Turin, M. Bordoui Uffreduzzi a vacciné en 1886-87 et 88
502 personnes appartenant au tableau A. Mortalité 2.50 °/4. 221
appartiennent au tableau B. Mortalité 1.30 ‘/5. 43 appartiennent
au tableau C. Mortalité nulle.

A Milan, M. le D' Baratieri a vacciné 335 personnes, 2 sont
mortes malgré le traitement : mortalité 0,60 °/,.

À Palerme, M. le prof. A. Celli a vacciné, du 1% mars au
30 septembre 1888, 109 personnes sans insuccès.

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 19

À Naples, M. le prof. Cantani, assisté de MM. les D Vestea
et Zagari a dù fermer son laboratoire, faute de subsides de la
municipalité, de janvier à août 1888.

Dans cette ville les adversaires de M. Pasteur, très nom-
breux, avaient réussi, malgré un vote de confiance et d'encou-
ragement de l’Académie de Naples, à ébranler l'opinion publique
et à indisposer la junte municipale contre la méthode de M. Pas-
teur. Mais, pendant cette période d'interruption de sept mois,
9 morts par rage étant survenues à Naples, la municipalité a pro-
mis un subside, le gouvernement etla province de Naples en ont
promis d’autres, et le laboratoire a été ouvert de nouveau. Il est
aujourd'hui en plein fonctionnement.

246 personnes ont été vaccinées à Naples, 199 depuis le jour
de l'ouverture du laboratoire (22 septembre 1886) jusqu'à
janvier 1888 et 34 depuis la réouverture. La mortalité après vac-
cination est de 4,5 ‘/o.

A Constantinople, M. le général docteur Zoëros-Pacha a
vacciné 34 personnes, mortalité 0. — Cet institut a été fondé
par ordre et sous les auspices de Sa Majesté le Sultan.

A la Havane, dans l’Institut antirabique de M. le Dr Santos
Fernandez, M. le D' Tamayo a inoculé 170 personnes, parmi
lesquelles cinquante mordues par des animaux dont la rage
_fut prouvée expérimentalement. La mortalité est de 0,60 °/;.

A Rio de Janeiro, dans la station vaccinale due à l'initiative
de Sa Majesté l’empereur du Brésil, M. le D' Ferreira dos Santos
a vacciné 66 personnes. Jusqu'à présent il n’a pas d'insuccès ‘.

Messieurs, je ne puis passer sous silence la statistique du
département de la Seine qui, chaque année, est l’objet d'un rapport
spécial au conseil d'hygiène et desalubrité. Le rapport pour 1887
a été fait par M. le D' Dujardin-Beaumetz qui a pris ses docu-
ments à la Préfecture de police, et, pour ce qui concerne les
personnes vaccinées, au laboratoire de M. Pasteur. Or, en 1887,
le nombre des personnes mordues et vaccinées s'élève à 306 sur

4. Le laboratoire de Constantinople n'a pas été cité dans le rapport lu par
M. Grancher, le 14 novembre, parce que nous manquions à cette date de rensei-
gnements précis. Il en est de même pour la statistique de Turin. Pour l'Institut
de Rio de Janeiro, nous avions donné le chiffre de 53 personnes inoculées. Ce
chiffre était exact à l’époque où nous avons reçu le rapport de M. Ferreira dos
Santos ; il s'élève aujourd’hui à 66.

20 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

lesquelles deux sont mortes ‘: mortalité 0,76 °/; d'autre part,
sept cas de mort par rage sont survenus parmi les 44 personnes
qui figurent sur les listes administratives comme n'ayant pas subi
la vaccination antirabique. Dans ce groupe la mortalité atteint
15,90 »/,, chiffre que M. Leblanc avait donné et que MM. Pasteur
et Brouardel avaient accepté comme représentant la mortalité
moyenne avant la vaccination.

Et M. Dujardin-Beaumetz conclut: « Je ne connais pas de
témoignage plus éclatant à invoquer à l'appui de la méthode des
inoculations. »

Le rapport de M. Beaumetz contient une autre conclusion
non moins intéressante, c’est que la rage est une maladie qu'on
peut combattre par mesures sanitaires administratives. Il a rap-
pelé qu'en Allemagne la rage a presque disparu, grâce à une
prophylaxie intelligente. En effet, la rage n’est jamais spontanée,
elle est toujours transmise par inoculation d’un animal à un
autre, et de tous les animaux le chien est de beaucoup le plus
susceptible. Or, la surveillance des chiens est facile à exercer
quand l'autorité est vigilante et la population disciplinée.

Nous avons fait tracer un graphique qui donne la preuve écla-
tante du bon et prompt effet des mesures de police sanitaire. A
voir cette courbe rapidement décroissante, à partir de mai 1888,
époque de l'arrêté du préfet de police au sujet des chiens errants,
ne semble-t-il pas certain qu'avec un peu de persévérance de
la part des pouvoirs publics, et un peu de bonne volontéde la part
de la population, on réussirait à réduire la rage à un petit nombre
de cas, en France comme en Allemagne?

Vous savez, Messieurs, que l'Institut Pasteur a été fondé non
seulement pour le traitement de la rage, mais aussi pour l'étude
scientifique des moyens de combattre pratiquement les maladies
qui déciment l'espèce humaine: la diphtérie, la fièvre typhoïde,
la phthisie, etc. Les vastes laboratoires qui vont s'ouvrir aux
médecins français et étrangers seront ainsi pour l'humanité une
source de bienfaits, et un puissant moyen de diffusion et d’expor-
talion de la science française.

1. Ces chiffres sont ceux du rapport de M. Beaumetz. Depuis que ce rapport
a été fait une troisième personne vaccinée a succombé à la rage, ce qui élève la
mortalité à 0,97 0/;.

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 21

2

}°
FE

RARES /

Courbe indiquant par mois le nombre de personnes mordues
dans le département de la Seine et traitées à l'Institut Pasteur.

M.Christophle, gouverneur du Crédit Foncier de France, le trésorier
de la souscription, lut un rapport sur l’exposé financier qui provoqua
dès les premiers mots les applaudissements,

DISCOURS DE M. CHRISTOPHLE.
Monsieur le Président de la République,

Messieurs, '

Le rapport de votre trésorier pourrait commencer comme un
conte de fées : Il était une fois, dans un coin de Paris, mais un

22 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

coin si peu connu des Parisiens qu'aujourd'hui encore il faut des
indications spéciales pour le découvrir, un vaste terrain qui
appartenait depuis cent cinquante ans à une famille de marai-
chers. Les rares promeneurs qui s’égaraient dans ce quartier
pouvaient se donner le plaisir d’embrasser d’un coup d’æil onze
mille mètres de légumes. Chaque jour, depuis le lever du soleil
jusqu’à la tombée de la nuit, on voyait passer et repasser dans
cet enclos des braves gens qui avaient la philosophie de Candide,
sans l’avoir lu. et répétaient comme lui :

«€ Il faut cultiver son jardin. »

Or, un jour, à la fin de mai 1887, ainsi que l’on voit dans
Cendrillon une citrouille changée en carrosse doré, tous ces
pieds de laitue si correctement alignés semblèrent être frappés
par un coup de baguette et changés en tombereaux. Des centaines
d'ouvriers se précipitèrent sur cet hectare de salades. En un tour
de main, tout fut arraché, bouleversé. On creusa en toute hâte,
à d'énormes profondeurs, pour établir les bases d’un monument
que l’on voulait indestructible. S'il n’y avait pas eu à régler la
question du payement aux propriétaires du sol — ce qui nous fait
rentrer un peu dans la réalité — tout dans cette histoire serait
extraordinaire.

Les architectes, M. Petit et M. Brébant, déclaraient, avant de
commencer leurs plans, qu'ils n’accepteraient aucun honoraire
et, ce qui est plus surprenant encore, qu'ils ne dépasseraient pas
les devis; les entrepreneurs apportaient des comptes fantastiques
par leur simplicité; les maçons parlaient de travailler le lundi.

Quelle était done, Messieurs, la fée assez puissante pour ren-
verser ainsi toutes les habitudes de la vie, toutes les notions
connues ? C'était la fée Enthousiaste qui s'était invitée elle-même
dès le jour où elle avait entendu parler de l'Institut Pasteur.
Comme il s'agissait de combattre contre de mauvais génies que
M. Pasteur pouvait emprisonner dans des flacons de verre, etnon
seulement réduire à l'impuissance, mais encore transformer en
génies protecteurs, cette fée, accompagnée de sa sœur la Généro-
sité, se mit en campagne. Toutes deux parcoururent les com-
munes de France et même de l'étranger, en annonçant la bonne
nouvelle dans les palais, dans les châteaux et dans les chau-
mières.

Comme toujours, et pour ne pas faire mentir le conte, elles

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 23

rencontrèrent parfois sur leur route des fées plus ou moins
redoutables qui, soit isolées, soit en conseil, essayèrent de leur
jeter un sort en prononçant des paroles dont personne ne se
souvient aujourd'hui. Ainsi d’ailleurs que les choses se passent
dans les contes qui finissent bien, les bonnes fées triomphèrent
et tous leurs souhaits furent les plus beaux du monde. Nous
avons essayé de les mettre en pratique.

C’est à la Banque de France et au Crédit Foncier, Messieurs,
que toutes les sommes ont été centralisées. Les deux registres
qui sont là, sous vos yeux, contiennent la liste des souscripteurs.
En entendant le rapport de M. Grancher, vous pouviez vous dire
que les chiffres ont leur éloquence; j'oserai dire, en parlant des
nôtres, qu'il ont leur émotion. Les sommes prodigieuses et les
offrandes minimes, tout est inscrit — avec les noms en regard
— dans ce livre d'or dont les pages feront un jour un des
chapitres les plus touchants et les plus glorieux de l'histoire de
cette maison.

Je conseillerais à ceux qui ne voient l'humanité que sous un
vilain jour, qui vont répétant que tout est pour le pire ici-bas,
qu'il n'y a dans le monde ni désintéressement ni dévouement, de
jeter un coup d’æœil sur les documents humains de l'Institut Pas-
teur. Ils apprendront là, pour commencer par le commencement,
que l’on rencontre dans les Académies des confrères que non
seulement la gloire d’un autre n’offense pas, mais qui trouvent
leur bonheur et mettent leur fierté dans cette gloire; que les
hommes politiques et les journalistes ont souvent la passion du
vrai et du bien; que jamais à aucune époque les Français n’ont
mieux aimé leurs grands hommes, qu'ils leur rendent justice dès
ce monde — ce qui est encore la meilleure manière — que nous
avons acclamé la fète de Victor Hugo, le centenaire de Chevreul
et l'inauguration de l’Institut Pasteur. « Quand un Français dit
du mal de lui, disait un jour un des confrères de M. Pasteur, ne
le croyez pas : il se vante. » A l’inverse d'une phrase célèbre et
pessimiste, on pourrait dire que, dans cette souscription, toutes
les vertus se perdent dans le dévouement comme les fleuves se
perdent dans la mer.

Que d'exemples je pourrais citer, si les plus généreux dona-
teurs n'avaient demandé que l’on ne prononçât pas leur nom!
Mais si je ne puis parler des souscriptions isolées, vous me per-

24 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

PA

mettrez, Messieurs, derappeler quelques souscriptions collectives,
depuis les dotations offertes par l’admirable festival du Trocadéro
où, comme le disait M. Pasteur, « les grands charmeurs de l’hu-
manilé heureuse apportèrent leur glorieux concours à ceux qui
veulent servir l'humanité souffrante, » jusqu'aux fêtes de petites
villes et de villages où l’on se cotisait pour offrir « le cadeau de
la misère ». Un jour, des ouvriers de la verrerie d'Aumale de-
mandèrent au poète des humbles, à M. François Coppée, des vers
pour mieux honorer le génie de M. Pasteur et envelopper leur
obole. En les envoyant à M. Pasteur, M. Coppée finissait ainsi :

Ils ont le compliment rimé qui leur manquait
Et peuvent te l’offrir, Pasteur, comme un bouquet
Au patron, le jour de sa fête.

Il y eut une souscription plus louchante encore. Ce fut celle
de 43,000 francs qu'apportèrent les Alsaciens-Lorrains. C’est
d'Alsace qu'était venu le petit Joseph Meister, qui fut le premier
inoculé, et qui est reslé en correspondance avec « son cher
M. Pasteur », comme il l'appelle toujours. Ces lettres intimes,
ces pièces à l'appui, je les ai demandées à M. Pasteur. Mais il
n’a pas voulu me les donner. Jamais rapporteur n’a été moins
secondé que moi. Heureusement, j'ai les chiffres de la souscrip-
tion.

Hlles'esl levée de PT re 2,586,680

Dans ce chiffre, il faut compren-
dre les 200,000 francs votés par les
Chambres et le don offert par M. le
Président du Conseil.

Les dépenses s'élèvent à ce

LOU A ee MR TR PE ART ne AE ete 2, LOU
Nous avons encore à payer aux en-

HMÉDRBROUTE 2 de nie eo. 240,000
L'achat des instruments des labora-

LOIS VERID ER. en Ur Les, 100,000

Les dépenses totales s’élèveront

ES En NE CR NE RERO ET RENE 1,563,786
Ce qui laissera un solde disponible,

qui formera la dotation de l’Institut Pas-

teur des SENTE Eee OT 1,022,894

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 25

Si on veut connaître la nature de ces dépenses, on voit
qu’elles se décomposent ainsi :

Achat du terrain et droits. . . . . . . . . Fr. 441,475
Terrassements et constructions. . : . : . .. 947,577
nSstruments de laboratomes Re CRE 100,000

Frais de circulaires, imprimés, bulletins de
SAUSCHPHONS EÉCÉHISSÉS 70. M Cu. 12,421
Prat actes notariés RU UN EE 416
Entretien des laboratoires pendant trois ans. 941,897
DR RUN MES PS ETTE ET

On remarquera que cette souscription, qui à produit
2,586,680 francs. et qui, après toutes les dépenses payées, laissera
à l’Institut Pasteur un capital disponible de 1,022,894 francs,
n'aura coûté que 12,421 francs de frais. Si je ne craignais de
commettre uue indiscrétion, je rappellerais que, dans une séance
du comité, M. l'amiral Jurien de la Gravière, dont nous regret-
tons vivement l'absence dans cette fête, avait proposé de consa-
crer une somme de 6,000 francs à la publicité. Mais le concours
si bienveillant de la presse nous a permis d'économiser cette
somme.

Il me reste, Messieurs, à vous faire connaître un dernier
donateur qui abandonne à l'Institut les bénéfices de la vente, en
France, des vaccins découverts dans le laboratoire. MM. Cham-
berland et Roux ont suivi leur maître dans sa générosité. Après
avoir provoqué celte grande œuvre, M. Pasteur aura été un des
plus grands souscripteurs.

C'est ainsi, Monsieur (car mon incompétence scientifique
bien plus encore que ma modestie naturelle me défend de vous
dire : illustre maître, et je n’ose d'autre part, usant de la fami-
liarité naïve du jeune Meister, vous appeler: mon chermonsieur
Pasteur), c'est ainsi, Monsieur, que la générosité publique, le
concours du gouvernement, votre désintéressement, enfin, ont
fondé et consolidé l'établissement que nous inaugurons aujour-
d'hui. C'est ainsi qu'a été assuré à votre œuvre ce pain quotidien
qui fait parfois défaut aux plus ardentes prières et auquel l'avenir
ajoutera, je l'espère, pour ce qui vous concerne, les douceurs

26 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.
complémentaires, presque aussi nécessaires que le pain de
chaque jour.

La sollicitude publique qui a entouré cette œuvre à son
berceau ne lui fera pas défaut. L’élan des cœurs généreux ne
s'est pas ralenti : demain nous apportera ce qui fait défaut
aujourd'hui, et vos collaborateurs, vos élèves et vos successeurs
pourront poursuivre avec sécurité et avec confiance le cours de
leurs travaux.

Certes, c'est pour vous, Monsieur, un bonheur rare et
presque inespéré. Qu'il vous console des luttes passionnées, des
émotions poignantes, des crises parfois terribles que vous avez
traversées! Quand je songe à ce passé si plein de troubles et de
dangers, je songe aussi malgré moi à l'ironie de ces phrases
toutes faites qui parlent de la sérénité de la science et de la paix
des laboratoires.

Mais je m'écarte, Monsieur, et je vous en demande pardon,
de l’objet précis de ma mission. C'est votre faute, après tout.
Vous nous avez mis dans la maison. Vous avez cru obligeam-
ment que nous serions hons à quelque chose, ne füt-ce qu’à
maintenir l’ordre dans la comptabilité, la régularité dans la
gestion de ce trésor qui était bien le vôtre et avec lequel vous
avez conslitué une puissante réserve pour la science, en vue des
découvertes de l'avenir. Vous ne nous avez pas défendu d'ajouter
au zèle que vous attendiez de nous notre respect et notre affection.
C'est votre faute, encore une fois. On ne peut vous entendre
sans vous admirer. On ne peut vivre à côté de vous sans vous
aimer.

M. Pasteur, ne pouvant maîtriser son émotion, dut charger son fils
de lire son discours :

DISCOURS DE M. PASTEUR.

Monsieur le Président,
Messieurs,

Celui qui, dans vingt ans, écrira notre histoire contempo-
raine et recherchera quelles ont été, à travers les luttes des

|

INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR. 2

parüs, les pensées intimes de la France, pourra dire avec fierté
qu'elle a placé au premier rang de ses préoccupations l’ensei-
gnement à tous les degrés. Depuis les écoles de village jusqu'aux
laboratoires des hautes études. tout a été soit fondé, soit renou-
velé. Élève ou professeur, chacun a eu sa part.

Les grands maîtres de l'Université, soutenus par les pou-
voirs publics, ont compris que, s’il fallait faire couler comme
de larges fleuves l’enseignement primaire et l’enseignement
secondaire, il fallait aussi s'inquiéter des sources, c’est-à-dire
de l’enseignement supérieur. Ils ont fait à cet enseignement la
place qui lui est due. Une telle instruction ne sera jamais réser-
vée qu'à un petit nombre ; mais c'est de ce petit nombre et de
son élite que dépendent la prospérité, la gloire et, en dernière
analyse, la suprématie d’un peuple. x

Voilà ce qui sera dit et ce qui fera l'honneur de ceux qui ont
provoqué et secondé ce grand mouvement. Pour moi, Messieurs,
si j'ai eu la joie d'aller, dans quelques-unes de mes recherches,
jusqu'à la connaissance de principes que le temps a consacrés et
rendus féconds, c’est que rien de ce qui a été nécessaire à mes
travaux ne m'a été refusé.

Et le jour où, pressentant l'avenir qui allait s'ouvrir devant
la découverte de l’atténuation des virus, je me suis adressé direc-
tementà mon pays pour qu’il nous permit, par la force et l’élan
d'initiatives privées, d'élever des laboratoires qui non seulement
s'appliqueraient à la méthode de prophylaxie de la rage, mais
encore à l'étude des maladies virulentes et contagieuses, ce
jour-là la France nous a donné à pleines mains

Souscriptions collectives, libéralités privées, dons magni-
fiques dus à des fortunes qui sèment les bienfaits comme le
laboureur sème le blé, elle a tout apporté, jusqu à l’épargne
prélevée par l’ouvrier sur le salaire de sa rude journée.

Pendant que se faisait celte œuvre de concentration fran-
çaise, trois souverains nous donnaient un témoignage de sym-
pathie effective. Sa Majesté le sultan voulait être un de nos
souscripteurs ; l’empereur du Brésil, cet empereur homme de
science, inscrivait son nom avec la joie d'un confrère, disait-l,
et le tsar saluait le retour des Russes que nous avions traités
par un don vraiment impérial.

Devant les médecins russes qui travailleront dans nos labo-

28 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

raloires et sont déjà présents parmi nous, j'adresse au (sar l'hom-
mage de notre respectueuse gratitude.

Comment toutes ces sommes ont été centralisées au Crédit
Foncier de France et l'usage qui en a été fait, vous venez de l’ap-
prendre, Messieurs. Mais ce que M. Christophle ne vous a pas
dit, c'est avec quel souci il a géré ce bien national.

Avant la pose de la première pierre, le comité de patronage
de la souscription a décidé, malgré moi, que cet Institut porte-
rait mon nom. Mes objections persistent contre un titre qui
réserve à un homme l'hommage dû à une doctrine. Maïs, si je
suis troublé par un tel excès d'honneur, ma reconnaissance
n'en est que plus vive et plus profonde. Jamais un Français
s'adressant à d’autres Français n'aura été plus ému que je ne le
suis en ce moment.

La voilà donc bâtie, cette grande maison dont on pourrait
dire qu'il n’y a pas une pierre qui ne soit le signe matériel d’une
généreuse pensée. Toutes les vertus se sont cotisées pour élever
celte demeure du travail.

Hélas! j'ai la poignante mélancolie d'y entrer comme un
homme « vaincu du temps », qui n’a plus autour de lui aucun
de ses maîtres, ni même aucun de ses compagnons de lutte, ni
Dumas, ni Bouley, ni Paul Bert, ni Vulpian qui, après avoir été
avec vous, mon cher Grancher, le conseiller de la première
heure, a été le défenseur le plus convaincu et le plus énergique
de la méthode !

Toutefois, si j'ai la douleur de me dire : {ls ne sont plus,
après avoir pris vaillamment leur part des discussions que je
n'ai jamais provoquées, mais que j'ai dù subir; s'ils ne peuvent
m'entendre proclamer ce que je dois à leurs conseils et à leur
appui; sije me sens aussi triste de leur absence qu'au lende-
main de leur mort, j'ai du moins la consolation de penser que
tout ce que nous avons défendu ensemble ne périra pas.

Notre foi scientifique, les collaborateurs et les disciples
qui sont ici la partagent.

Le service du traitement de la rage sera dirigé par M. le pro-
fesseur Grancher, avec la collaboration des docteurs Chante-
messe, Charrin et Terrillon.

M. le ministre de l'instruction publique a autorisé M. Du-
claux, le plus ancien de mes élèves et collaborateurs, aujourd'hui

INAUGURATION DE L’INSTITUT PASTEUR. 29
professeur à la Faculté des sciences, à transporter ici le cours
de chimie biologique qu'il fait à la Sorbonne. Il dirigera le labo-
ratoire de microbie générale.

M. Chamberland sera chargé de la microbie dans ses rap-
ports avec l'hygiène ; M. le docteur Roux enseignera les méthodes
microbiennes dans leurs applications à la médecine. Deux savants
russes, les docteurs Metchnikoff et Gamaleïa, veulent bien nous
prêter leur concours. La morphologie des organismes inférieurs
et la microbie comparée seront de leur domaine.

Vots connaissez, Messieurs, les espérances que nous don-
nent les travaux du docteur Gamaleïa. C’est à dessein que je me
sers du mot espérances. L'application à l’homme est loin d'être
faite en ce moment; mais la plus rude étape est franchie.

Constitué comme je viens de le dire, notre Institut sera à
la fois un dispensaire pour le traitement de la rage, un centre de
recherches pour les maladies infectieuses el un centre d’ensei-
gnement pour les études qui relèvent de la microbie. Née d'hier,
mais née tout armée, cette science puise une telle force dans ses
victoires récentes qu’elle entraîne tous les esprits.

Cet enthousiasme que vous avez eu dès la première heure,
gardez-le, mes chers collaborateurs, mais donnez-lui pour com-
pagnon inséparable un sévère contrôle. N’avancez rien qui ne
puisse être prouvé d’une façon simple et décisive.

Ayez le culte de l'esprit critique. Réduit à lui seul, il n’est
ni un éveilleur d'idées, ni un stimulant de grandes choses. Sans
lui, tout est caduc. Il a toujours le dernier mot. Ce que je vous
demande Jà et ce que vous demanderez à votre tour aux disciples
que vous formerez, est ce qu'il y a de plus difficile à l'inventeur.

Croire que l’on a trouvé un fait scientifique important,
avoir la fièvre de l’annoncer, et se contraindre des journées, des
semaines, parfois des années à se combattre soi-même, à s’ef-
forcer de ruiner ses propres expériences, et ne proclamer sa
découverte que lorsqu'on a épuisé toutes les hypothèses con-
traires, oui, c'est une tâche ardue.

Mais quand, après tant d'efforts, on est enfin arrivé à la
certitude, on éprouve une des plus grandes joies que puisse res-
sentir l'âme humaine, et la pensée que l’oa contribuera à l'hon-
neur de son pays rend cette joie plus profonde encore.

Si la science n’a pas de patrie, l’homme de science doit en

30 INAUGURATION DE L'INSTITUT PASTEUR.

avoir une, et c'est à elle qu’il doit reporter l'influence que ses
travaux peuvent avoir dans le monde.

S'il m'était permis, Monsieur le Président, de terminer par
une réflexion philosophique provoquée en moi par votre présence
dans cette salle de travail, je dirais que deux lois contraires
semblent aujourd’hui en lutte : une loi de sang et de mort qui,
en imaginant chaque jour de nouveaux moyens de combats,
oblige les peuples à être toujours prêts pour le champ de bataille,
et une loi de paix, de travail, de salut, qui ne songe qu’à déli-
vrer l’homme des fléaux qui l’assiègent. .

L'une ne cherche que les conquêtes violentes, l’autre que
le soulagement de l'humanité. Celle-ci met une vie humaine au-
dessus de toutes les victoires ; celle-là sacrifierait des centaines
de mille existences à l’ambition d'un seul.

La loi dont nous sommes les instruments cherche même à
travers le carnage à guérir les maux sanglants de cette loi de
guerre. Les pansements inspirés par nos méthodes antiseptiques
peuvent préserver des milliers de soldats.

Laquelle de ces deux lois l’emportera sur l’autre ? Dieu
seul le sait. Mais ce que nous pouvons assurer, c’est que la
science française se sera efforcée, en obéissant à cette loi d’hu-
manité, de reculer Les frontières de la vie.

Les applaudissements, qui avaient éclaté à chaque paragraphe de
ce discours, reprirent enthousiastes, à cette dernière page. Dans cette
assemblée composée d'éléments si divers, il n’y eut plus qu’une âme
commune, l'âme de tout un peuple qui vibrait avec l’âme de cet
homme de labeur, de patriotisme et d'humanité. Ce fut une minute
inoubliable d'émotion haute et généreuse.

M. le Président de la République, après avoir serré la main de
M. Pasteur, se leva et dil :

« M. Pasteur n’a voulu d'autre récompense que celle que nous
pouvons donner à ses collaborateurs : M. Grancher et M. Duclaux sont
nommés officiers de la Légion d'honneur, M. Chantemesse est nommé
chevalier de la Légion d'honneur. Les palmes d'officier d’Académie
sont décernées à M. Brébant, architecte de l’Institut Pasteur. »

APPENDICE

Dans les journées des 13, 14 et 45 novembre, M. Pasteur a reçu de l'é-
tranger un grand nombre de télégrammes de félicitations, justifiant une
fois de plus la pensée rappelée dans son discours que la science n’a pas de
patrie.

Profondément touché des vœux formés pour sa personne et la prospérité
de l'établissement qui vient d'être inauguré, M. Pasteur prie les sociétés
savantes et les personnes dont les noms suivent de vouloir bien agréer ici
l'expression de sa vive reconnaissance :

La Société entomologique du midi de la Russie, à Odessa;

La Société impériale des Amis de la nature, à Moscou;

La Société des naturalistes d'Odessa;

La Station bactériologique d'Odessa;

L'Académie impériale de médecine de Saint-Pétersbourg;

La Société de médecine d'Odessa ;

Les médecins de l'hôpital de la ville d'Odessa;

La Société des pharmaciens d'Odessa;

La Régence provinciale de Bessarabie ;

Le Comité des Congrès des médecins russes, à Saint-Pétersbourg ;

Les étudiants de l'Université d’Odessa ;

Le Conseil médical russe, à Saint-Pétersbourg;

La Conférence des médecins de l'hôpital militaire de Moscou;

La Société de chirurgie de Moscou,

Le Congrès des médecins et des représentants du gouvernement de
Cherson ;

La Société des médecins praticiens de Saint-Pétersbourg ;

La Société des sciences médicales de Lisbonne;

S. A. le prince Alexandre d'Oldenbourg, en son nom et au nom de la
Station antirabique de Saint-Pétersbourg;

Le professeur Protopopoff, de Karkoff;

Le professeur Hueppe, de Wiesbaden;

Le professeur sir James Paget, de Londres;

Le professeur Poehl, de Saint-Pétersbourg;

Le directeur du journal de la Société agricole impériale d'Odessa;

Le professeur Cantani, de Naples;

La famille de Herz, de Bucarest;

La famille Retzius, de Stockholm ;

Jose Julio Rodriguez, de l'École polytechnique de Lisbonne ;

Le docteur E. Ullmann, de Vienne;

Le professeur Anrep, de Saint-Pétersbaurg ;

Le docteur Burnay, de Lisbonne.

SCEAUX. — IMPRIMERIE CHARAIRE.

vie ss
Ge VE re

9me ANNÉE. JANVIER 1888. N°1

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

SUR LA DESTRUCTION DES LAPINS EN AUSTRALIE
ET DANS LA NOUVELLE-ZÉLANDE,

Par M. PASTEUR.

M. Pasteur a adressé à MM. les agents généraux des posses-
sions de l'Australie et de la Nouvelle-Zélande la communication

que voici :
Paris, le 5 Janvier 1888.

La Revue des Deux-Môondes à publié, dans son numéro du
15 août 1887, un article de M. C. de Varigny, dont j’extrais les
passages suivants :

Enrichis subitement par la guerre de Sécession aux États-Unis, qui fit
hausser le prix des laines, en arrêtant la production américaine, les colons
de l'Australie se trouvèrent tout à coup disposer de revenus considé-
rables.…

Imitateurs zélés des coutumes anglaises, ils se prirent de passion pour
la chasse, et fondèrent en Australie et à la Nouvelle-Zélande des sociétés
d'acclimatation pour importer d'Europe des lièvres et des lapins. Ce fut
une véritable rage, un vent de folie qui souffla sur la colonie... Tout grand
propriétaire n'eut plus qu'une idée : se créer une chasse réservée. Le sol et
le climat convenaient si merveilleusement aux lapins, qui en Angleterre
ont de quatre à six portées par an, de trois à quatre petits, qu'en Australie
ils eurent jusqu'à dix portées par an, de huit à dix petits chacune.

Vainement on tenta d’enclore les terrains de treillis, ils creusaient par-
dessous et gagnaient le large, au grand désespoir des propriétaires qui

1

2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

redoublaient d'efforts et de soins pour en accroître le nombre. Ils ont si
bien réussi que, aujourd’hui, cette peste désole la Nouvelle-Zélande et
l'Australie. Les jardins maraïchers sont dévastés; les terrains qui produi-
saient, il y a quelques années, 130 boisseaux d'orge et de 75 à 80 de blé à
l'hectare, durent être abandonnés, toute culture, dans certains districts,
étant devenue impossible.

M. Crawford cite l'exemple d’un grand propriétaire qui, après avoir
dépensé 40,000 livres sterling ({ million de francs) pour se débarrasser de
ce fléau d’un nouveau genre, fut obligé d'y renoncer. Sur certaines fermes,
on évalue leur nombre à des centaines de mille, et, chaque année, leur
taille augmente avec leur nombre. D'une voracité extraordinaire, ils
mangent l'herbe jusqu’à la racine et convertissent d'immenses pâturages,
qui nourrissaient vingt-cinq à trente moutons à l’hectare, en terrains dénu-
dés et poussiéreux. Les vignobles ont été ruinés, et, jusqu'ici, les moyens
employés pour détruire ces animaux n'ont abouti à aucun résultat appré-
ciable, On les chasse, on les tue, on les empoisonne, et ils fourmillent.

M. Williamson dépose que, dans une excursion qu'il fit avec un délégué
du gouvernement, ils reconnurent que dans tout le district l'herbe avait
disparu. Des bandes d'énormes lapins parcouraient le pays, s’écartant à
peine pour faire place à leur voiture.

Le sol, raviné de terriers, ne permettait d'avancer qu'avec précaution :

« Partout des lapins, dit-il, sur la route et dans la plaine ; ils gambadent
en troupes, se poursuivent dans les sables; on les voit assis par centaines à
l'entrée de leurs terriers.. Traqués sur un point, ils se réfugient sur un
autre, et ils se multiplient avec une rapidité telle qu'un cataclysme de la
nature pourra seul en avoir raison. »

La publication suivante vint donner récemment une confir-
mation aux récits qui précèdent.

Le 9 novembre et le 2 décembre 1887, le journal le Zemps,
de Paris, publiait l'avis officiel suivant, émané du gouvernement
de la Nouvelle-Galles du Sud :

Direction des Mines. Sydney, le 31 août 1887.

Îl est donné avis, par la présente, que le gouvernement de la Nouvelle-
Galles du Sud payera la somme de 625,000 francs (£ 25,000) à quiconque fera
connaître et démontrera, à ses frais, une méthode ou un procédé encore
inconnu dans la colonie, pour exterminer d’une manière efficace les lapins,
procédé assujetti aux conditions suivantes :

1° Que cette méthode ou ce procédé recevra, après un essai d’une année,
l'approbation d’une Commission nommée à cet effet par le gouvernement,
avec l'avis du Conseil exécutif.

20 Que telle méthode ou tel procédé sera, d’après l'opinion de ladite
Commission, inoffensif pour Les chevaux, moutons, chameaux, chèvres, porcs

DESTRUCTION DES LAPINS EN AUSTRALIE. 3

et chiens, et ne présentera pas l'emploi de matières ou substances qui
pourraient leur nuire.

30 La Commission sera tenue de ne pas divulguer les détails de ces
méthodes ou de ces procédés, à moins que cette Commission ne décide
d'expérimenter ladite méthode ou ledit procédé.

Toutes les communications relatives à ce qui précède doivent être
adressées à the Honourable F. Abigail, Secretary for Mines Abigail. Sydney

Très peu de jours avant que cette nouvelle fût publiée par le
journal le Temps, j'avais reçu d’un habitant de la Nouvelle-
Zélande le récit des désastres que les lapins occasionnent égale-
ment dans cette île.

Le 27 novembre 1887, j'écrivis au journal le Zemps la lettre
suivante, qui fut insérée le 29 novembre :

A Monsieur le Directeur du Temwes.

Votre journal annonçait, il y a peu de jours, que le gouvernement de la
Nouvelle-Galles du Sud était tellement impuissant à lutter contre un fléau
d'un genre particulier — la pullulation des lapins — qu'il proposait un prix
de 625,000 francs pour la découverte d'un procédé destiné à leur extermi-
nation. Des portions considérables de la Nouvelle-Zélande, non moins
ravagées que l'Australie, sont abandonnées par les fermiers, qui renoncent
à l'élevage des moutons par l'impossibilité de les nourrir. Chaque hiver on
tue les lapins par millions, sans que ce carnage paraisse en diminuer le
nombre. Voulez-vous me permettre de faire parvenir dans ces lointains
pays, par l'organe du Temps, certaines idées dont l’application pourrait
peut-être avoir quelque succès ?

On a employé jusqu’à présent, pour la destruction de ce fléau, des
substances minérales,notamment des combinaisons phosphorées. En s’adres-
sant à de tels moyens, n’a-t-on pas fait fausse route? Pour détruire des
êtres qui se propagent selon les lois d’une progression de vie effrayante,
que peuvent de tels poisons minéraux? Ceux-ci tuent sur place, là où on les
dépose; mais, en vérité, pour atteindre des êtres vivants, ne faut-il pas
plutôt, si j'ose le dire, un poison comme eux doué de vie, et, comme eux,
pouvant se multiplier avec une surprenante fécondité?

Je voudrais donc que l’on cherchât à porter la mort dans les terriers de
la Nouvelle-Galles du Sud et de la Nouvelle-Zélande, en essayant de commu.
niquer aux lapins une maladie pouvant devenir épidémique.

Il en existe une que l’on désigne sous le nom de choléra des poules et
qui à fait l’objet d'études très suivies dans mon laboratoire. Cette maladie
est également propré aux lapins. Or, parmi les expériences que j'avais
instituées, se trouve celle-ci : je rassemblais dans un espace limité un
certain nombre de poules, et, en leur donnant une nourriture souillée par

4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

le microbe qui est la cause du choléra des poules, elles ne tardaient pas à
périr. Les basses-cours sont, quelquefois, ravagées par de véritables épi-
démies de ce mal, dont la propagation est due, sans nul doute, aux
déjections des premières poules malades qui souillent le sol et les ali-
ments.

J'imagine que la même chose arriverait pour les lapins, et que, rentrant
dans leurs terriers pour y mourir, ils communiqueraient la maladie à
d'autres qui pourraient la propager à leur tour. Mais comment faire pour
que les premiers lapins ingèrent dans leur corps le mal destructeur? Rien
n'est plus facile.

Autour d'un terrier, je placerais une barrière volante entourant un
certain espace où les lapins viendraient chercher leur nourriture. Des expé-
riences nous ont appris qu'il est facile de cultiver, en état de pureté parfaite
et sur une échelle aussi grande qu’on peut le désirer, le microbe du choléra
des poules, dans des bouillons de viandes quelconques. De ces liquides
pleins de microbes, on arroserait la nourriture des lapins qui, bientôt,
iraient périr ici et là et répandre le mal partout.

J'ajoute que le parasite de la maladie dont je viens de parler est inof-
fensif pour les animaux des fermes, excepté, bien entendu, pour les poules,
mais celles-ci n’ont pas besoin de vivre en pleine campagne.

Je ne doute pas qu'il n'y ait, dans les pays infestés, des personnes toutes
prêtes à appliquer le moyen que je propose, moyen très simple, qui, en tous
cas, vaut la peine d'être tenté.

Veuillez, etc.

Aussitôt après l'envoi de cette lettre, j'eus la curiosité de
faire des expériences directes sur les lapins. Je me rappelais
que le choléra des poules se communique facilement aux lapins ;
mais je n'avais pas fait d'étude suivie sur ces rongeurs; souvent
j'avais vu mourir des lapins qui avaient été placés dans des cages
non désinfectées où des poules avaient succombhé du choléra.
C’est une question de savoir, question résolue aflirmativement
par plusieurs, si le choléra des poules n’est pas simplement la
septicémie des lapins, étudiée autrefois par le Dr Davaine.

Je fus bientôt assuré de la facilité avec laquelle le moindre
repas donné aux lapins, après avoir souillé la nourriture par
une culture du microbe du choléra des poules, entraîne rapide-
ment la mort de ces rongeurs.

Voici quelques-unes des expériences que j'ai fait faire à
M. Loir, étudiant en médecine attaché à mon laboratoire.

Le 27 novembre, on place dans une caisse cinq lapins; ils y
restent jusqu'à 6 heures du soir sans prendre de nourriture; à
6 heures, on met dans une petite cuvette 100 d'une culture

DESTRUCTION DES LAPINS EN AUSTRALIE. bn)

virulente du choléra des poules, où l’on trempe les feuilles d'un
chou. On laisse égoutter ces feuilles, puis on les donne à man-
ger aux cinq lapins qui, après quelques minutes, ont achevé
leur repas. On place avec eux, à minuit, trois lapins neufs non
contaminés.

Le 28 novembre, à 8 heures du matin, les cinq lapins conta-
gionnés paraissent malades. A 11 heures, deux sont morts,
dix-sept heures après le début du repas. Les trois autres meu-
rent à 3 heures de l'après-midi, vingt heures après leur repas.

Le 28 novembre, à 7 heures du soir, on trouve mortun des
lapins mis la veille, à minuit, avec ceux qui ont mangé le repas
infectieux. Les deux autres lapins ne sont pas devenus malades.

Le samedi 3 décembre, à 5 heures du soir, on donne à man-
ger à quatre lapins des feuilles de chou sur lesquelles ont été
répandus 10° de culture virulente de choléra des poules, étendus
de 100 d’eau stérilisée. A minuit, tout le repas a disparu
depuis plusieurs heures; on place avec eux quatre lapins neufs.

Le 4 décembre, à 8 heures du matin, deux lapins semblent
tristes. À 11 heures, il y a un mort ; à 2 heures, deux autres
morts; à 4 heures meurt le dernier de ceux qui ont mangé.

On laisse les cadavres avec les lapins neufs mis la veille, à
minuit, dans la caisse.

Le 5 décembre, on trouve un de ces lapins mort; le 6 décem-
bre, un autre; le 7, un troisième; enfin le quatrième meurt le
9 décembre.

Les lapins précédents étaient des lapins domestiques.

Le 17 décembre, on donne à un lapin de garenne 10e de
culture de choléra des poules, également sur une feuille de chou.

Le 18 décembre, il meurt.

Dans tous Les cas précédents, on a vérifié que la mort était
bien due au microbe du choléra des poules.

Le 3 décembre et jours d’après, on fait des expériences sur
les animaux suivants : porcs, chiens, chèvres, moutons, rats,
chevaux, ânes, toujours par contamination des repas. Aucun de
ces animaux n’a été malade.

Il y a plus : l’action sur les lapins est si rapide, il est si peu
besoin de multiplier les repas que je suis persuadé, en me
reportant à mes anciennes expériénces sur les poules, que
celles-ci même ne mourraient pas si on les laissait sur le sol que

6 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

les repas des lapins auraient pu souiller en partie; elles ont,
pour la maladie, beaucoup moins de réceptivité que les lapins.

Au contact de l'air, le microbe du choléra des poules meurt
assez promptement. Il perd sa virulence à 51° C., température
quelquefois atteinte, dit-on, en Australie pendant l'été, mais 1l
ne serait jamais nécessaire de s'occuper des lapins, au milieu
du jour, en pleine chaleur.

La conservation du microbe du choléra des poules est facile,
au contraire, à l’abri de l'air et pendant plusieurs années : on
pourra donc toujours se procurer de la semence très virulente.
Mes expériences d'autrefois communiquées à l’Académie des
Sciences en sont la preuve.

Les cultures du choléra des poules peuvent être faites dans
les bouillons les plus divers d'animaux quelconques. Un des
plus économiques serait sans doute celui qu'on pourra préparer
avec la chair des lapins.

Il résulte des expériences qui précèdent que, non seulement
les lapins qui ont ingéré une nourriture souillée par le microbe
meurent très rapidement, en moins de vingt-quatre heures,
mais que les lapins associés à ces derniers, qui n’ont point eu
d'aliments contaminés, meurent également en grand nombre.

Je réserve la question du mode de contagion. C’est un point
que j'examinerai plus tard.

Est-il vrai que les lapins d’un terrier ne se mêlent pas à ceux
des terriers voisins ?

On peut envisager, sans appréhension pour la réussite du
procédé, le cas où les lapins d’un terrier ne frayeraient pas avec
ceux des terriers voisins et n’y porteraient pas la contagion
après qu'ils auraient été contaminés.

La maladie se communique si facilement par les repas que,
alors même que la contagion n’existerait pas des lapins infectés
aux autres non infectés, la destruction de ces animaux n'en
serait pas moins facile.

Je parle, dans ma lettre au journal le Temps, de barrières
volantes placées autour des terriers. Cette complication serait
inutile.

Je me représente l'épreuve en grand de la manière suivante :
autour d’un ou plusieurs terriers, je ferais faucher une certaine
quantité d'herbe qui serait ramenée ensuite avec des râteaux à

DESTRUCTION DES LAPINS EN AUSTRALIE. 7

la portée des lapins, avant leur sortie du soir. Cette herbe,
souillée de la culture du microbe, serait mangée par les lapins
dès qu'ils la rencontreraient sur leur passage. Une barrière
serait inutile pour les arrêter et les forcer à manger. On aurait
ainsi, en quelque sorte, la répétition de l'expérience de Reims,
dont je vais parler.

Il était bien désirable qu’une expérience püût avoir lieu sur
une grande échelle.

Le hasard vint bientôt me l’offrir dans les conditions les plus
favorables.

M°e V'° Pommery, de Reims, propriétaire de la grande maiï-
son de vins de Champagne qui porte son nom. m'adressa la
lettre suivante, après avoir lu ma note insérée dans le Temps :

Reims, le 3 décembre 1887.
MOonsSIEUR,

Je possède à Reims, au-dessus de mes caves, un clos de huit hectares,
totalement entouré de murs. J'ai eu la fâcheuse idée d'y mettre des lapins
pour procurer une chasse, en ville, à mes petits-enfants.

Ces bêtes ont tellement pullulé et minent le sol à un tel point que je
désire les détruire. Les furets sont impuissants à les faire sortir de tas
énormes de craie où ils se réfugient.

S'il pouvait vous être agréable d’expérimenter le procédé que vous préco-
nisez pour la destruction de ces animaux, en Australie, j'offre de vous en
faciliter le moyen.

Recevez, etc.

Signé : V'° Pommery.

Bientôt après, j’appris de mon intelligente correspondante
que, dans la crainte de voir les lapins de son clos, poussés par
la faim, prolonger outre mesure leurs galeries souterraines et
compromettre la solidité des voûtes des caves, on avait eu
depuis longtemps l’idée de les retenir dans leurs terriers, non
loin de la surface du sol, en leur servant, chaque jour, un repas
de luzerne ou de foin distribué autour des terriers. On comprend
dès lors aisément combien ilétait facile de tenter la destruction
des lapins du clos de M"° Pommery.

Le vendredi, 23 décembre, j’envoyai à Reims M. Loir arroser
le repas du jour d'une culture récente du microbe de choléra
des poules.

Comme à l'ordinaire, la nourriture fut consommée dans

8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

l'intervalle de quelques minutes. Le résultat en fut pour ainsi
dire surprenant.
Mre Pommery m'écrivit, le 26 décembre :

Samedi matin (par conséquent dès le lendemain du repas mortel), on
compta dix-neuf morts en dehors des terriers.

Le dimanche, le clos ne fut pas visité.

Le lundi matin, on compta encore treize morts, et depuis samedi on n’a
pas vu un seul lapin vivant courir sur le sol. En outre, comme il était
tombé un peu de neige pendant la nuit, on ne vit nulle trace de pattes de
lapins autour des tas de craie.

En général, les lapins meurent dans leurs terriers. Les
trente-deux cadavres trouvés sur le sol du clos devaient done
représenter une très faible minorité parmi les morts, ainsi qu’on
le verra tout à l’heure.

Dans une autre lettre du mardi 27, M"° Pommery m'écrit :

La luzerne (luzerne déposée autour des terriers le lundi soir) n'a pas été
touchée et de nouveau on n'a vu nulle trace de pattes imprimées sur la
neige. Tout est mort.

Et Me Pommery, faisant allusion à des journaux anglais
ui avaient beaucoup critiqué le procédé que j'avais proposé.
. I É

journaux qu’elle avait eu l'obligeance de m'adresser, ajoute :

Que deviennent les attaques anglaises en présence d’un tel résultat ? Un
clos de 8 hectares fourmillant de lapins, devenu un champ de mort.

M. Pasteur empoisonne un repas ordinaire de ces lapins, et les jours
suivants rien ne remue; tout est fini, tout est mort.

Combien de lapins sont morts dans les terriers? Il est diffi-
cile de le savoir exactement. Cependant M" Pommery m'in-
forme, par une lettre que je viens de recevoir, aujourd'hui 5 jan-
vier, « que les ouvriers estiment 4 beaucoup plus d'un mille le
nombre des lapins qui venaient manger chaque jour les huit
grosses bottes de foin qu’on distribuait autour de leurs terriers ».

D'autre part, ajoute M° Pommery, partout où l'on découvre
un peu les monceaux de craie, demeure habituelle des lapins,
on voit des tas de cadavres de deux, trois, quatre et cinq lapins.

NOUVELLES RECHERCHES SUR LA RAGE

Par le D' BARDACH,

Sous-directeur à l’Institut bactériologique d'Odeasa,

ÏJ. INOCULATIONS SOUS-CUTANÉES.

Dans le premier numéro des Annales, M. Pasteur émet
l'opinion que peut-être on pourrait obtenir l’immunité par lino-
eulation préventive de moelles longuement desséchées, et conte-
nant par suite une quantité de virus assez pelite pour ne plus
provoquer la rage chez les lapins inoculés sous la dure-mère.
J'ai fait à cet égard l'expérience suivante sur six chiens.

Aux dates des 2, 4 et 6 février, six chiens furent inoculés
sous la peau, chacun par trois seringues pleines de moelles dé-
layées et âgées de sept jours — du 26, 28 et 31 janvier.

Ces émulsions furent inoculées en même temps à des lapins,
Celui du 2 février mourut le 22, le lapin de passage, inoculé avec
son bulbe, a résisté; celui du # février mourut le 4% mars, le lapin
de passage eut une période d'inoculation de sept jours; le troi-
sième lapin du 6 février, resté indemne, fut employé pour d’au-
tres expériences après un mois et demi, terme complètement
suffisant pour la manifestation de la rage.

Le 12 février, les six chiens, plus un septième de contrôle, et
deux lapins furent inoculés par trépanation avec du virus de rage
des rues (2° passage, incubation de 13 jours).

Le 22 février un des chiens fut pris de rage furieuse et mou-
rut le 24. Un second tomba malade le 24 et mourut le 26. Le
26, ce furent le chien témoin, le troisième des chiens inoculés,
et un des lapins qui tombèrent malades; le chien de contrôle et
le lapin moururent le 28, et le troisième chien le 29. Le second
lapin de contrôle et le quatrième des chiens tombèrent malades
le 28 février et moururent le 1°’ mars. Les deux autres chiens
supportèrent la trépanationet sontencore aujourd'hui dans notre
chenil.

10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Cette expérience sert ainsi d'appui à l'opinion de M. Pasteur,
d’après laquelle les moelles à faible virulence peuvent à elles
seules rendre l'organisme réfractaire. L'immunité se développe
en raison de l'adaptation des phagocytes à digérer le virus vivant,
comme l’a exposé M. Gamaléia dans le 5° numéro des Annales.

La preuve que c’est justement le virus vivant, inoculé sous
la peau, qui développe l’immunité dans l'organisme, ressort des
principales expériences que M. Pasteur fit sur les chiens : il
leur inocula jusqu’à la moelle d’un jour et ne fit qu’ensuite l’o-
pération du trépan; tous les chiens survécurent.

J'ai fait des expériences analogues : six chiens inoculés de
cette même manière supportèrent impunément une inoculation
sous la dure-mère.

D'un autre côté je fis des inoculations préventives à trois
chiens, en commençant par une moelle de 14 jours et termi-
nant par celle de 4 jours. Le 11 novembre, les chiens furent ino-
culés de la rage des rues. Le 26 novembre, un d'eux fut pris de
rage paralytique, et le 8 février, c’est-à-dire après 87 jours, le
second mourut de rage furieuse. Le troisième chien avait acquis
un état réfractaire. La durée inusitée de l'incubation — 87 jours
— du second chien s'explique peut-être par une vaccination,
nommée « partielle » par M. Pasteur.

Ainsi, dès qu’on réduit l’inoculation à des moelles de viru-
lence faible, en supprimant celles d'un, de deux et de trois jours,
la préservation, au lieu d’être absolue, ne devient que relative :
elle se réduit à la minorité des cas, un sur trois.

L'inoculation préventive du second chien n’a fait que pro-
longer la période d’incubation.

Mes expériences d’inoculations sous-cutanées de virus de pas-
sage servent de preuve encore plus convaincante que ce sont
principalement les moelles les plus virulentes qui élaborent
l’immunité.

Le 22 novembre, sept chiens furent inoculés sous la peau du
flanc, chacun par une pleine seringue de virus de 138° passage.
Le 19 décembre, l’un d'eux fut pris de rage paralytique et mou-
rut le 21. Les six autres survécurent et furent trépanés le 197 fé-
vrier ainsi que deux lapins, à l’aide d’une moelle de rage des
rues (3° passage, 13 jours d’incubation).

RECHERCHES SUR LA RAGE. 11

Le 13 février, deux des chiens et un lapin furent pris de rage
paralytique et succombèrent le 15 et le 16. Un autre lapin et le
troisième chien tombèrent malades de rage paralytique le 15 fé-
vrier et moururent le 17.

Les lapins, inoculés avec une émulsion du bulbe des chiens
succombés eurent la période d’incubation de la rage des rues,
c'est-à-dire de 14 (dans deux cas) et de 45 jours(dans le troisième).

Les autres sont encore aujourd’hui en bonne santé. Ils furent
de nouveau inoculés le 8 mai avec le bulbe d’un chien enragé et
résistèrent, tandis que le chien témoin tomba malade le 13 mai
etsuccomba à la rage paralytique le 15.

Ainsiuneinoculation sous-cutanée, même d’uneseule seringue
de virus de passage, a rendu l'organisme assez réfractaire (dans
trois cas sur six) pour résister à des trépanations réitérées.

M. Pasteur a prouvé, comme l’on sait, qu’il y a des cas où le
virus de passage, inoculé sous la peau, ne provoque point la rage
et quelquefois même rend l'organisme réfractaire à des inocula-
tions subséquentes sous la dure-mère. L'expérience ci-dessus,
et celles qui vont suivre servent d'appui à cette conclusion.

Le 8 février, on inocula trois chiens, très grands, par cinq
seringues de virus du 150° passage sous la peau de la tête ; ils
survécurent tous. Après trois mois, le 8 mai, ils furent inoculés
(en même temps que les chiens de l'expérience précédente), avec
le bulbe d’un chien enragé. L'un des chiens tomba malade le
25 mai et mourut le 27; les deux autres restèrent vivants. Le
lapin de passage eut une incubation de 14 jours.

Le 13 février, on inocula deux chiens par deux seringues de
bulbe du 23° passage ‘incubation de 8 jours); ils survécurenttousles
deux. Le 8 mai, ils furent trépanés avec les précédents et tom-
bèrent malades tous les deux le 24 mai, ils moururent le 26. Le
lapin de passage eut une incubation de 13 jours.

A partir du 24 et du 25 mai, j'ai inoculé cinq chiens, journaliè-
rement, pendant dix jours, par une seringue de virus de passage
chacun, et cinq autres par une seringue de virus de la rage des
rues '. Pas un de ces chiens ne tomba malade. Le 8 et le
12 novembre, tous les dix furent trépanés.

4. Le bulbe du chien enragé était conservé dans la glycérine et à la glacière.
Un lapin, inoculé dix jours après, le 3 juin, fut pris de rage le 18 juin, ce qui
prouve que la moelle était encore virulente.

12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Tous les chiens inoculés par virus de la rage des rues suc-
combèrent aux dates des 20, 21 et 26 novembre: deux d'entre
eux de rage furieuse et trois de rage paralytique.

Des cinq chiens inoculés avec le virus de passage, un seul
mourut le 24 novembre de rage paralytique. (Le lapin de passage
eut une incubation de 14 jours.) ‘

On peut déduire deux conclusions de ces expériences :

10 On peut quelquefois obtenir l’immunité par l'introduction
sous la peau d’une seule seringue de virus fixe, et cette possibilité
s'accroît avec la quantité du virus de passage introduit; ainsi
sur six chiens inoculés par une RU pleine, trois devinrent
réfractaires ; sur trois, Inoculés avec 5 seringues pleines, deux le
devinrent; sur 5, inoculés avec 10 seringues pleines, quatre le
devinrent. En tout, 9 sur 1% obtinrent l'immunité, tandis que
ceux qui furent inoculés avec une seringue de moelle de passage
(23°) de lapin et avec 10 seringues de moelle à rage des rues suc-
combèrent tous à une nouvelle inoculation sur la dure-mère.

Ainsi, au moins d'après mes expériences, ce n’est que le virus
de passage qui peut contribuer au développement de l’immunité ;
le virus des rues, renforcé ou en recrudescence (23° passage) n'y
contribue point.

On peut faire la supposition suivante à cet égard : peut-
ètre le virus rabique, ayant passé par plusieurs générations de
lapins et étant devenu fixe, a acquis la faculté d'élaborer, en se
cultivant dans le système nerveux d’autres animaux, de certains
produits, résultant de son activité vitale, qui accroissent l’énergie
des phagocytes à digérer les microbes rabiques et donnent ainsi
une immunité durable. J'espère pouvoir confirmer cette hypothèse
par des expériences ultérieures.

2° L’inoculation sous-cutanée de bulbes à virus fixe, ainsi que
celle de la rage des rues, paraît être défavorable à la culture et à
la propagation du microbe Cour ainsi, des 22 chiens inoculés
sous la peau, il n’y en a eu qu’un pris de rage.

II. INOCULATION DANS LE TISSU NERVEUX.

En présence des résultats précédents, on se pose la question
suivante : quel milieu dans notre corps est le plus favorable à la
transmission du virus au système nerveux central? Letissu nerveux

RECHERCHES SUR LA RAGE. 13

étant le meilleur milieu pour la culture et la propagation de ce
virus, il est naturel de supposer que la transmission s'opère par
voie du système nerveux périphérique. Les expériences, entre
prises par moi à cet égard, donnèrent les résultats suivants.

Le 1% juin, j'introduis très graduellement sous le névrilème
du nerf radial droit, dégaïné dans le tiers supérieur de l'épaule
d'un chien, une demi-seringue de virus fixe (79° passage). Le
lapin inoculé en mème temps, par trépanation, tomba malade
le 8 et mourut le 10. Le 3 juin, je fais la même expérience avec
un chien et un lapin. Ce dernier tomba malade le 10 et suc-
comba le 11.

Le 5 juin, même expérience avec un chien et un lapin. Celui-
ci tomba malade le 12 juin et mourut le 14.

Le 6 juin, mème expérience sur 4 chiens et 2 lapins. Ceux-ci
tombèrent malades le 13 et moururent le 15.

Le 13 juin, le chien inoculé dans le nerf radial droit, à la
date du 3, cessa de manger, commença à avoir des envies de
mordre, sa démarche devint chancelante, son aboiement hurlant,
ses mouvements incoordonnés, etil succomba le lendemain àune
paralysie complète.

Les inoculations de premier et deuxième passages, faites avec
le bulbe de ce chien, donnèrent une incubation de 7 jours et
la mort après 9 jours.

Le 20 juin, ce fut le chien inoculé le 6 qui tomba malade. Il
cessa de manger, sa voix devint rabique, il s’affaissait du côté
droit en voulant se relever, le train de derrière fut paralysé, il eut
des crampes chroniques à la jambe gauche, la sensibilité et les
réflexes excités, et il succomba le lendemain à une paralysie
complète. À l’aide de son bulbe, on fit deux passages de lapin à
lapin, qui furent pris de rage après 7 jours et succombèrent après
9 et 10 jours. En outre, des lapins inoculés à l’aide des deux
nerfs radiaux tombèrent malades au bout de 9 jours et succom-
bèrent le 11° jour.

Les 5 autres chiens résistèrent. Il n’en résulte pas moins que
le virus rabique, mis en contact immédiat avec le système nerveux
périphérique, trouve en lui quelquefois un milieu favorable à
sa propagation, et alors la durée de l’incubation est de 10 à
14 jours.

ILest possible que la résistance de la majorité des chiens soit

14 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

due à ce que le nerf radial est entouré dans sa partie antérieure
d’un réseau de menus vaisseaux. Il est facile de s’en assurer en
injectant une solution saturée de couleur quelconque, par exemple
de violet de gentiane, qui fait alors voir un réseau de belle cou-
leur bleue de profonds vaisseaux lymphatiques, débouchant dans
le conduit brachial. La tension des vaisseaux produite par l’in-
jection fait peut-être émigrer des phagocytes, qui englobent et
digèrent les microbes rabiques et, par cela même, rendent l’or-
ganisme réfractaire. Cette explication est appuyée parles résultats
des injections subséquentes sous la dure-mère de ces mêmes
chiens.

Le 13 septembre, les 5 chiens qui avaient résisté furent ino-
culés par la moelle de 7° passage de la rage de loup (incubation
de 12 jours); en même temps on inocula 2 lapins, qui tombèrent
malades le 26 septembre et moururent le 29.

Le 27, 2 des chiens furent pris de rage paralytique et mouru-
rent le 29. Le virus de passage donna une incubation de 12 jours.

Le troisième chien fut pris de rage paralytique le 29 et mou-
rut le 30. Le virus de passage donna une incubation de 12 jours.

Les 2 autres chiens sont encore aujourd'hui vivants. Cela
fait que des 5 chiens ayant résisté à l’inoculation du virus dans
le nerf, — 2 avaient acquis l’immunité.

Il est ainsi hors de doute que les nerfs périphériques peuvent
servir quelquefois à la transmission et à la propagation du
virus rabique. Les faits cliniques suivants s'accordent complète-
ment avec cette conclusion.

S. L... a reçu le 25 mars quatre profondes plaies par morsure de
loup dans le lieu de ramification du nerf radial gauche. Il fut
pris de rage le 25 avril et mourut le 27. L'infection suivit au
début le cours du nerf : pendant que S. 1... mangeait, buvait
el avait encore une température normale, il se développa une
tumeur dans la région de ramification du nerf radial droit ; le
malade eut une sensation comme s’il maniait de la fourrure, et
des sensations d’engourdissement, de fourmillement. Ces symp-
tômes m'engagèrent à porter mes expériences de nécropsie sur
le quart inférieur du tronc du nerf radial; je m'en servis pour
faire l'opération du trépan à deux lapins. Les premiers symptômes
de la maladie se manifestèrent chez eux le 15 avril, et la mort
survint le 47. Je fis encore trois passages de lapin à lapin, qui

RECHERCHES SUR EA RAGE. 15
donnèrent une période d'incubation de 14 à 16 jours etle tableau
complet de la rage du lapin.

Le nerf radial gauche du malade ne fut malheureusement
pas expérimenté, de sorte que la question de savoir si ce nerf
non endommagé contenait du virus ne put point être résolue. Le
cas suivant est par suite beaucoup plus démonstratif.

G. M..., attaqué par un loup enragé, s’efforça de l’étrangler
de la main droite, en lui bouchant en mème temps la gueule de
la main gauche ; celle-ci y resta prise près d’une demi-heure et
ne fut retirée que lorsqu'on trancha la mâchoire supérieure du
loup. De nombreuses blessures étaient concentrées dans la
région du nerf médian et du cubital. Les premiers symptômes
de la maladie se manifestèrent par un exsudation sérosanguine
dans le lieu des morsures, par des douleurs et une sensation de
pesanteur dans le bras gauche jusqu’à l'articulation de l'épaule.
Ces phénomènes n’eurent pas lieu du côté droit.

Les troncs des nerfs médian et cubital, droit et gauche, furent
pris et la trépanation, faite à leur aide, donna les résultats sui-
vants.

Le 29 mai, on inocula deux lapins avec une émulsion du nerf
médian; ils tombèrent malades le 12 et le 13 juin et moururent
le 14.

Le 29 mai, on inocula deux lapins avec une émulsion du nerf
cubital ; ils tombèrent malades le 13 et le 14 juin, et moururent
le 15 et le 16.

Les cinq passages de lapin à lapin eurent une incubation de
12 à 16 jours, et la maladie présenta les symptômes ordinaires.

Les lapins de contrôle, inoculés avec les nerfs médian et
cubital droits, résistèrent.

Ainsi, dans les deux cas de maladie, le développement du
virus se faisait par la voie du système nerveux; les expériences
autant que les observations cliniques donnent ainsi à croire
que les nerfs sont une des voies par lesquelles le virus se dirige
vers le cerveau.

ILI. DU VIRUS RABIQUE DANS LA SALIVE HUMAINE.

La question de la présence du virus rabique dans la salive, ou,
ce qui est la même chose, dans les glandes salivaires des per-

16 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sonnes enragées n'a pas été résolue jusqu'à présent. Je vais
exposer ici les résultats que j'ai obtenus à cet égard.

Dans tous les cas suivants, on fit des inoculations par l’opéra-
tion du trépan à des chiens et à des lapins, à l’aide d’émulsions
des glandes salivaires, retirées de 12 à 24 heures après la mort.
Huit de nos rabiques nous étaient arrivés déjà malades, et
n'avaient ainsi point subi d'inoculations préventives.

Parallèlement à ces inoculations, on en faisaittoujours d’au-
tres, aussi à des chiens et à des lapins, à l’aide d'une émulsion du
bulbe de ces mêmes malades. Tous les animaux ainsi traités
mouraient toujours après 14 à 20 jours.

Le 3 juillet, 1886 on trépane deux lapins à l’aide d’une émulsion de la
glande salivaire de G., mordu par un chien enragé. Tous les deux tombè-
rent malades le 26 juillet et moururent le 28. Incubation de 23 jours.

Le 10 juillet, on trépane deux lapins (J. J.., mordu par un loup); ils
furent pris de rage le 29 juillet et moururent le 30. Incubation de 19 jours.

Le 12 octobre, on trépane trois lapins (Ch.…., mordu par un chien
enragé). Tous les trois tombèrent malades le 26 octobre et moururent le 98.
Incubation de 14 jours.

Le 43 octobre, on trépane deux lapins à l’aide de la glande salivaire de
K..., mordu par un chien enragé. L'un fut pris de rage le 29 octobre, l’autre
le 30, et ils moururent le {tr et le 2 novembre. Incubation de 16 jours. Le
premier lapin de passage eut une incubation de 44 jours.

Le 15 décembre, on trépane deux lapins (glande salivaire de V. $.,
mordu par un loup). Ils tombèrent malades le 30 décembre et moururent le
4% janvier. Incubation de 15 jours.

Le 17 décembre, on trépane deuxlapins (glande salivaire de V..., mordu
par un loup). Ils furent pris de rage les 7 et 8 janvier, et moururent le 40.
Incubation de 21-22 jours.

Le 18 décembre, on trépane deux lapins (G..., mordu par un loup); ils
tombèrent malades le 4 janvier et moururent le 5. Incubation de 17 jours.

Le 21 décembre, on trépane deux lapins (M.…, mordu par un loup); ils
tombèrent malades le 8 janvier et moururent le 9 et le 10. Incubation de
18 jours.

Le 3 janvier 1887, on trépane deux lapins (P..., mordu par un chien); ils
tombèrent malades le 20 janvier et moururent le 22. Incubation de 17 jours.

Le 16 janvier, on trépane deux lapins (B..., mordu par un loup); ilstom-
bèrent malades le 31 et moururent le 2 février. Incubation de 45 jours.

Le 20 janvier, on trépane deuxlapins (B..., mordu par un loup); ilstombè-
rent malades le 13-14 février et moururent le 15. Incubation de 24-95 jours.

Le 22 février, on trépane un chien (D..., mordu par un chien); il fut pris
de rage furieuse le 2 avril et mourut le 5, Incubation de 40 jours.

Le 95 février, on trépane deux lapins (S..., mordu par un loup); ils tombè-

RECHERCHES SUR LA RAGE. 17

rent malades le 47 avril et moururent le 18. Incubation de 20 jours. Un
chien, trépané à l’aide de la même émulsion, fut pris de rage furieuse le
25 avril et mourut le 27. Incubation de 98 jours.

Le 28 mars, on trépane deux lapins (J..., mordu par un loup); ils tombèrent
malades le 43 et le 45 avril, et moururent le 45 et le 16. Incubation de 16
et 18 jours. Un chien, trépané avec la même émulsion, fut pris de rage
furieuse le 43 mai et mourut le 17. Incubation de 45 jours. Le lapin de pas-
sage eut une période d'incubation de 14 jours.

Le 11 mai, on trépane deux lapins (J..., mordu par un chien), qui tombè-
rent malades le 26 mai et moururent le 98. Incubation de 45 jours. Un chien
trépané avec l'aide de la même émulsion fut pris de rage paralytique le
29 mai, et mourut le 30. Incubation de 48 jours.

Le 29 mai, on trépane deux lapins (M..., mordu par un loup); ils tombèe-
rent malades le 45 juin, et moururent le 16 et le 17. Incubation de 16 jours.
Deux chiens furent trépanés avec l’aide de la même émulsion. L'un fut pris
de rage paralytique le 27 juin, et mourut le 30. Incubation de 28 jours.
L'autre, après 51 jours, manifesta une légère parésie des extrémités posté-
rieures, une démarche chancelante ; le 22 juillet, la parésie des extrémités
progressa ; le jour suivant, par contre, il n’y eut qu'une légère incoordination
des mouvements qui disparut le 24 juillet. Le chien est encore aujourd'hui
bien portant.

Le 20 juillet, on trépane deux lapins (P..., mordu par unloup); ils tom-
bèrent malades le 4 août et moururent le 5. Incubation de 45 jours.

Le 22 juillet, on trépane deux lapins (P.... mordu par un loup); ils tom-
bèrent malades le 3 août et moururent le 5 et le 6. Incubation de 12 jours.

Le 12 août, on trépane un lapin (glande salivaire de Ka..); il tomba malade
le 25 août et mourut le 27. Incubation de 43 jours.

Le 12 août, on trépane un lapin (glande salivaire de Kr..); il tomba
malade le 27 août et mourut le 28. Incubation de 16 Jours.

Le 16 août, ont répane un lapin avec l’aide de la glande salivaire de E... ;
il tomba malade le 4 septembre et mourut le 3. Incubation de 16 jours.

Le 21 août, on trépane un lapin avec l’aide de la glande salivaire de A... ;
il tomba malade le 3 septembre et mourut le 5. Incubation de 14 jours.

Ainsi, dans 22 cas, tous leslapins succombèrent à la rage, avec
une période d'incubation de 18 jours, et, sur six chiens, cinq
succombèrent avec une période d’incubation de 32 jours.

La prolongation de l’incubation est, sans doute, due dans la
majorité des cas à la petite quantité de virus contenue dans la
glande salivaire ; mais néanmoins sa présence doit être reconnue
comme indubitable. Par conséquent l'opinion émise par M. Pas-
teur, d’après laquelle la rage pourrait être transmise par mor-
sure humaine, est appuyée expérimentalement.

NOTES DE LABORATOIRE SUR LA PRÉSENCE DU VIRUS RABIQUE
DANS LES NERFS,

Par E. ROUX.

Par quelle voie le virus rabique va-t-il de la morsure aux
centres nerveux ? par quelle voie se rend-il aux glandessalivaires ?
ce sont là des questions d’un grand intérêt dans l’étude de larage.
Les expériences faites au laboratoire de M. Pasteur ‘ ont mon-
tré que le virus rabique pouvait arriver au cerveau et à la moelle
par la voie sanguine. D’un autre côté les démangeaisons, les dou-
leurs partant de la blessure, que l’on observe si souvent chez les
personnes mordues, ont fait croire depuis longtemps que le virus
rabique se propageait le long des nerfs. M. Duboué, de Pau, a
soutenu que c'élait toujours par les nerfs que le virus rabique
atteignait les centres nerveux. Le récent mémoire de MM. Ves-
tea et Zagari, qui a été analysé page 92 de la première année de
ces Annales, a de nouveau appelé l'attention sur cet intéressant
sujet. Dans ce numéro même, M. Bardach consacre à cette question
une partie de son travail. Nous avons donc pensé que le moment
était bien choisi pour exposer quelques-unes des expériences
faites au laboratoire de M. Pasteur sur la présence du virus rabi-
que dans les nerfs.

Dans une note présentée en 1884 à l’Académie des Sciences,
MM. Pasteur, Chamberland et Roux * ont annoncé qu'ils
avaient donné la rage à des animaux par l’inoculation des nerfs
pneumogastriques et sciatiques d’un chien enragé. La matière
nerveuse avait été inoculée par trépanation, et la durée de
l'incubation de la maladie avait été beaucoup plus longue que
lorsqu'on inocule de la même façon la substance du cerveau ou

À. Pasteur, Chamberland, Roux et Thuillier, Comptes rendus. Acad. des sc. t. XCW,
p- 4187, 1882.
4. Comptes rendus Acad. des sc., p. 457, t. XCVIII.

VIRUS RABIQUE DANS LES NERFS. 19

de la moelle, comme si le virus rabique était très peu abondant
dans le tissu des nerfs. Dans une expérience, on a inoculé à
trois chiens le nerf pneumogastrique, divisé en trois tronçons :
chaque animal reçut sous la dure-mère le liquide obtenu en
broyant séparément un de ces tronçons dans un liquide stérilisé.
Les animaux qui avaient reçu le bout supérieur et le bout infé-
rieur du pneumogastrique prirent la rage, celui qui avait été
inoculé avec le bout intermédiaire resta bien portant. Il semble
donc que le virus rabique est peu abondant dans les nerfs, et il
faudra, pour le mettre en évidence, inoculer une quantité aussi
grande que possible de la matière du nerf qne l’on veut étu-
dier.

Si le virus rabique se propage le long des nerfs, on aura
quelques chances de le rencontrer dans les cordons nerveux qui
partent de la blessure. Nous avons pu inoculer les nerfs du mem-
bre mordu de plusieurs personnes ayant succombé à la rage.
Nous allons citer quelques-unes de ces expériences.

Le 6 novembre 1883, nous faisons, à l'Hôpital des enfants, l’autopsie d’un
enfant de sept ans mordu au bras droit à travers ses vêtements, 55 jours
auparavant. L'enfant avait succombé, le 5 novembre, à une rage caracté-
ristique. Dès le 24 octobre, il avait éprouvé un malaise général, et de temps
à autre une gêne dans le bras mordu. Le 3 et le 4 novembre, la cicatrice de
la morsure est douloureuse, et l'enfant accuse dans le bras une douleur qui
remonte jusqu'à l’aisselle.

A l’autopsie, on trouva les ganglions de l’aisselle rouges, très augmentés
de volume et succulents; les nerfs du bras avaient leur aspect normal. On
enlève, avec pureté, tout le paquet nerveux de l’aisselle sur une étendue de
trois centimètres environ, on broye les nerfs dans du bouillon stérilisé.
L'émulsion est passée sur une toile de platine fine préalablement chauffée
au rouge, et avec le liquide ainsi obtenu, on inocule, par trépanation, un
chien neuf et un lapin.

Le 26 novembre, le lapin est pris de rage (20 jours d’incubation). Le
4 décembre, le chien est devenu mordeur, il a la voix rabique. Le 5, il est
extrêmement furieux ; il meurt le 6 décembre (28 jours d’incubation).

Deux lapins inoculés avec le bulbe de cet enfant avaient été pris de
rage : l'un le 16 novembre (incubation 10 jours), l’autre le 23 novembre
(incubation 17 jours).

Dans ce cas, les nerfs du bras mordu contenaient le virus
rabique, mais on peut se demander si le virus venait du point
d’inoculation ou s’ils’était propagé de la moelle épinière dans les
nerfs, comme cela a lieu évidemment chez les animaux inoculés

20 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de la rage par trépanation, et dont les nerfs sont souvent viru-

lents.
Dans les expériences qui suivent nous avons inoculé, par
comparaison, les nerfs du membre mordu et les nerfs du mem-

bre sain.

CL... Eugène est mordu le 7 août 1886 par son chien à l’avant-bras droit
nu, qui porte trois morsures profondes. Il est traité à l'Institut Pasteur du
11 août au 93 août. Le 12 octobre, Cl... éprouve des fourmillements dans le
bras droit, et comme un engourdissement dans le petit doigt et dans
l’annulaire de la main droite. La douleur se fait sentir jusque dans l'épaule.
Le 45 octobre, les symptômes rabiques sont caractéristiques, impossibilité
d'avaler, aérophobie, etc. — Cl... succombe à l'hôpital Tenon dans la nuit.
du 17 au 18 octobre.

L'autopsie est faite le 49 octobre au matin : on enlève séparément et
avec pureté, le nerf cubital, lenerf radial et le nerf médian du bras mordu,
sur une longueur de 15 centimètres environ à partir des cicatrices : on
extrait de même les nerfs cubital, radial et médian du côté sain. Chaque
nerf est broyé séparément, et l’émulsion, obtenue avec chacun d'eux, est
inoculée par trépanation à un lapin : on a soin d’injecter une assez grande
quantité de liquide dans la cavité arachnoïdienne. Aucun des animaux
inoculés avec les nerfs, soit ceux de côté sain. soit ceux du côté malade,
n’a pris la rage. Ils ont, cependant, été conservés en observation pendant
plus de sept mois.

Les sensations d’engourdissement et de fourmillements
éprouvées dans le petit doigt et l’annulaire, trois jours avant que
larage fût déclarée, semblaient indiquer que le virus rabique avait
suivi le trajet du nerf cubital, et cependant celui-ci n’a rien
donné à l'inoculation. Peut-être le virus rabique était-il en
quantité insuffisante dans les nerfs pour communiquer la rage
aux lapins. On peut aussi supposer qu'il s'était cultivé silen-
cieusement dans les nerfs pendant l’incubation de la maladie et
qu’il n'y existait plus au moment de l’autopsie. Les lapins
inoculés avec le bulbe furent pris de rage le 14e jour, ainsi que
ceux quiavaient reçu la moelle ; ceux inoculés avec la substance
d'une circonvolution frontale droite et d’une circonvolution
frontale gauche étaient enragés le 16° jour.

Le 10 avril 1887 mourait de la rage, à l'Hôpital des enfants, une petite
fille mordue au poignet droit. Il fut impossible de savoir si l'enfant avait
éprouvé des douleurs dans le bras mordu pendant les jours précédents.
Elle ne s’était pas plainte, et la cicatrice de sa morsure ne paraissait nulle-

VIRUS RABIQUE DANS LES NEREFS. 21

ment douloureuse. On prend tout le paquet nerveux à la partie supérieure
du bras mordu et du bras sain. On broie ensemble les divers nerfs du bras
mordu, et on inocule l'émulsion par trépanation à deux lapins. On fait la
même chose pour les nerfs du bras sain, qui sont inoculés également par
trépanation à deux lapins. -

Deux lapins inoculés avec le bulbe furent pris de rage le 26 avril (incu=
bation : 45 jours).

Les lapins inoculés par le paquet nerveux du bras mordu furent pris de
rage le 4 mai (incubation : 34 jours).

Les lapins inoculés par le paquet nerveux du bras sain furent pris de
rage le 14 juin (incubation : 65 jours).

Il semble que dans ce cas les nerfs du bras mordu étaient
plus riches en virus rabique que ceux du bras sain.

Le 30 mai 1887, H... est mordu par un chien enragé au pouce droit :
1° sur l’ongle qui a été traversé; 2 sur le dos de la première phalange:
30 dans la pulpe du pouce; 4 sur le bord interne du pouce. Toutes ces
blessures sont profondes et ont bien saigné. H... est traité à l’Institut Pasteur.
Bien portant, en apparence, jusqu'au 30 juin, il a, cependant, souffert du
mal de tête le 27 juin. Le {er juillet, douleurs dans le pouce droit et le bras
droit, et aussi douleurs passagères dans la jambe droite. L'hydrophobie se
montre dans la journée du 4e juillet. H... est transporté, le 2 juillet, à
l'hôpital Saint-Antoine. Il meurt dans la nuit du 3 au 4 dans le service de
M. le D'Hayem.

Le 5 juillet, on enlève avec pureté le paquet nerveux du bras mordu, et
le paquet nerveux du bras sain au niveau des aisselles. Avec les nerfs du
bras mordu, broyés dans du bouillon stérilisé, on inocule par trépanation
un lapin. Tout ce qui reste de l’émulsion est injecté sous la peau d’un autre
lapin. Le liquide, obtenu par le broyage des nerfs du bras sain dans du
bouillon, sert à inoculer sous la dure-mère un lapin, et ce qui reste est
injecté sous la peau d'un autre lapin. Enfin un cinquième lapin est inoculé
sous la peau avec la matière du bulbe.

Le lapin inoculé par le bulbe sous la peau est pris de rage le 2 septembre
(28 jours d'incubation).

Le lapin trépané, inoculé par les nerfs du bras mordu, est pris de rage
le 24 août (50 jours d’incubation).

Le lapin inoculé sous la peau par les nerfs du bras mordu est pris de
rage le 5 août (30 jours d'incubation).

Le lapin trépané, inoculé avec les nerfs du bras Ne est pris de rage le
7 octobre (94 jours d'incubation).

Le lapin inoculé sous la peau avec les nerfs du bras sain est pris de
rage le 5 août (30 jours d'incubation).

Dans les expériences que nous venons de rapporter les nerfs
du côté mordu et du côté sain contenaient le virus rabique. On

22 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

remarquera que les lapins qui ont été pris de rage les premiers
ne sont pas ceux qui ontété trépanés, mais ceux qui ont été ino-
culés sous la peau. Cela lient à ce que la quantité de matière
inoculée sous la peau était beaucoup plus considérable que celle
déposée à la surface du cerveau. Les expériences précédentes
nous ont montré que les nerfs contiennent toujours peu de virus
rabique : il peut alors arriver que les quelques gouttes injectées
dans la cavité arachnoïdienne ne contiennent pas de virus
rabique ou en renferment trop peu pour donner la rage. Il con-
vient donc, quand on recherche le virus rabique dans les nerfs,
d'inoculer une quantité notable de matière nerveuse, et alors il
faut avoir recours, soit à l'injection intra-veineuse, soit à l’ino-
culation sous-cutanée.

La présence du virus rabique dans les nerfs du côté mordu
et dans ceux du côté sain ne prouve pas du tout que le virus soit
arrivé aux nerfs en partant de l’axe nerveux dans lequel il
aurait pullulé tout d’abord. Car il se pourrait aussi qu'après avoir
suivi les nerfs du bras mordu, il se soit cultivé dans la moelle à
leur point d'origine, et qu'il soit passé ensuite dans les nerfs du
bras opposé :. Pour surprendre cette propagation du virus de la
plaieaux centres nerveux, par les nerfs qui partent du point d'ino-
culation, il faudrait expérimenter sur ceux-ci pendant la durée
même de l’incubation. L'expérience directe sur les animaux
pourra donner des résultats plus nets que ceux que nous venons
de rapporter.

L'inoculation pratiquée directement dans un tronc nerveux
donne la rage, souvent avec une période d’incubation assez
courte, surtout si on emploie le « virus de passage ». Mais, dans
les conditions ordinaires des morsures, l’inoculation directe dans
un tronc nerveux se rencontre rarement. Nous avons inoculé, à
l'extrémité de la queue, des chiens avec du virus rabique, etnous
avons soigneusement observé chez eux l’apparition des pre-
miers signes de la rage. Si le virus suit la voie nerveuse, le début
de la rage devra se manifester par des symptômes qui relève-
ront de la moelle inférieure, et cette portion de l’axe spinal

1. Des fragments de nerfs du bras mordu ont été examinés au point de vue des
lesions histologiques en même temps que les nerfs du bras sain. M. Vaillard, qui
a une compétence spéciale, a bien voulu se charger de cet examen. Il n’a trouvé
dans ces nerfs aucune lésion apréciable.

VIRUS RABIQUE DANS LES NERFS. 23

devra contenir le virus rabique avant la moelle supérieure et le
bulbe :

Le 24 avril 4886, nous inoculons, avee M. Nocard, cinq chiens au bout
de la queue avec quatre gouttes d’une émulsion de la moelle de 70° passage.
Ces chiens sont attentivement surveillés plusieurs fois par jour, pendant tout
le temps de l'expérience. Le 49 mai, au matin, un de ces chiens à des
allures bizarres, le regard est changé, et vers onze heures du matin il se
met à hurler, la voix est modifiée. Pas de faiblesse musculaire, il reconnaît
très bien les personnes qui l’appellent, et essaye de lécher la main qu'on lui
tend. Il lèche avec fureur un chien que l’on met avec lui, puis se précipite
sur lui pour le mordre. Bref, ce 19 mai au matin (25 jours après l'inocu-
lation), ce chien présente les sympiômes typiques d’une rage furieuse au
début sans le moindre prodrôme de paralysie. A deux heures de l’après-
midi, on le sacrifie par strangulation, on l'ouvre, on prélève aussitôt des
segments du bulbe de la moelle lombaire et de la moelle dorsale, ainsi que
les glandes sous-maxillaires droite et gauche.

Un lapin est inoculé par trépanation avec la substance du bulbe.

A un autre lapin, on injecte dans les veines un centimètre cube de
l'émulsion du bulbe,

Un lapin est inoculé par trépauation avec la matière de la moelle dorsale.

A un autre lapin, on injecte dans les veines un centimètre cube de
l'émulsion de la moelle dorsale.

Un lapin est inoculé par trépanation avec la substance de la moelle
lombaire.

A un autre lapin on injecte dans les veines un centimètre cube de
l'émulsion de la moelle lombaire.

Enfin un lapin est inoculé par trépanation avec la substance des glandes
maxillaires droite et gauche broyées ensemble,

Un autre recoit dans une veine un centimètre cube du liquide de broyage
des glandes.

On a eu soin de prélever dans chacune des régions bulbaire, dorsale et
lombaire, des segments assez volumineux intéressant toute l'épaisseur de la
moelle, pour être bien sûr de mettre en évidence le virus rabique alors même
qu'il serait localisé dans un point de l’axe spinal, dans un des cordons
latéraux ou postérieurs par exemple.

Le lapin inoculé par trépanation avec le bulbe est pris de rage le
9 juin (20 jours d'incubation).

Le lapin inoculé dans les veines avec le bulbe est pris de rage le 98 juillet
(T0 jours d'incubation).

Le lapin inoculé par trépanation avec la moelle dorsale est pris de rage
le 40 juin (22 jours d'incubation).

Le lapin inoculé dans les veines avec la moelle dorsale n'a pas pris la
rage.

Le lapin inoculé par trépanation avec la moelle lombaire est pris de rage
le 7 juin {19 jours d'incubation).

24 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Le lapin inoculé dans les veines par moelle lombaire est pris de rage le
29 août (95 jours d'incubation).

Le lapin inoculé par trépanation avec les glandes salivaires est pris de
rage le 10 juin (21 jours d'inceubation).

Les premières manifestations de la rage chez ce chien
pouvaient faire croire que les régions du système nerveux
atteintes tout d’abord par le virus rabique étaient le bulbe et
les circonvolutions cérébrales; comme l’inoculation avait été
faite à la queue, il ne semblait pas que le virus eût suivi la voie
nerveuse qui l'aurait d’abord conduit à la partie inférieure de la
moelle. Or on n’a observé aucun affaiblissement dans le train pos-
térieur. Cependant lesinoculationsfaites au lapin ont montré quele
virus rabique existait dans la moelle lombaire et dans la moelle
dorsale aussi bien que dans le bulbe, et qu’il était présent dans
la moelle épinière sans avoir donné lieu à aucun symptôme
spécial qui pût y faire soupçonner sa présence. Cette expérience,
qui au premier abord semble contraire à l'idée de la propagation
par les nerfs, ne prouve en réalité rien contre elle. Elle montre
que le virus a pu suivre silencieusement le cordon médullaire
comme il chemine dans un nerf. La culture ne s’est pas géné-
ralisée; elle s’est faite dans quelques faisceaux nerveux que le
virus à suivis comme un conducteur jusqu'aux cellules du bulbe.
En sacrifiant l’animal quelques jours avant l'apparition de la
rage, peut-être aurait-on surpris le virus dans la moelle avant
que le bulbe soit atteint. Nous avons ainsi été conduit à recher-
cher le virus rabique dans la moelle avant l'apparition d'aucun
symptôme rabique. Avant d'exposer ces essais, il convient d’in-
sister, sur ce fait, que, chez le chien dont nous venons de parler
les glandes salivaires contenaient le virus dès le début de la rage,
bien que l’inoculation ait été pratiquée à la queue. Il y était sans
doute déjà présent avant le jour où l’animal a été sacrifié,
alors qu'il paraissait en parfaite santé. I] faut donc se garder de
déclarer inoffensives les morsures faites par des animaux
enragés dans les jours qui ont immédiatement précédé l’explo-
sion de la maladie. Il serait fort intéressant de faire des
expériences systématiques pour savoir à quel moment le virus
rabique apparaît dans la salive. Mais continuons l'exposé des
résultats de notre expérience.

VIRUS RABIQUE DANS LES NERFS. 25

Un second chien de cette série parut un peu triste le 30 mai au soir. Le
31 mai, les jambes postérieures sont fléchissantes, l'animal a manifestement de
la paraplégie. Il ébauche fréquemment des mouvements de coit. Il présente
un type de rage médullaire au début. À 10 heures du matin, il est sacrifié.
On prélève des segments de moelle lombaire et de bulbe; les segments
comprennent toute l'épaisseur de la moelle sur une étendue de deux centi-
mètres. Avec chacun d'eux, broyé à part dans du bouillon stérilisé, on
inocule un lapin à la surface du cerveau, un lapin dans les veines : ce
dernier lapin recoit une forte dose de substance nerveuse.

Le lapin inoculé par trépanation avec le bulbe est pris de rage le
84 jour. Celui injecté dans les veines est resté bien portant,

Le lapin inoculé par trépanation et celui injecté dans les veines avee la
moelle dorsale n’ont pas pris la rage.

Le lapin inoculé par trépanation avec la moelle lombaire est pris de
rage le 17e jour, et celui inoculé dans les veines avec la même moelle est
pris de rage le 28e jour.

Ces deux chiens inoculés en même temps à l'extrémité de la queue ont
présenté l'un une rage furieuse cérébrale et bulbaire, l’autre une rage
paralytique, une rage médullaire type. Le résultat des inoculations dans le
second cas montre que le virus a abordé la moelle par la partie inférieure
dans la région d’origine des nerfs qui viennent du lieu de l'inoculation. Au-
dessus du renflement lombaire le virus est peu abondant, la culture ne fait
que commencer. La moelle dorsale n’a pas donné la rage, et le bulbe ne l’a
donnée qu’au bout d’un temps très long.

Les trois autres chiens de cette série sont restés bien
portants.

Le virus rabique s’est déjà cultivé dans les centres nerveux
avant l'apparition de tout symptôme derage, et on peut le mettre
en évidence chez les animaux, alors qu’en apparence ils sont en
parfaite santé .

Le 18 juin 1886, on inocule, par trépanation, quatre lapins neufs avec
1/10° de centimètre cube du liquide obtenu en broyant un peu du bulbe d’un
lapin enragé de 70e passage, dans environ dix fois son volume de bouillon
stérilisé. On sait, par de nombreux essais, que ce virus de 70° passage
donne aux lapins auxquels on l'inocule par trépanation, une rage dont
l'incubation est exactement de huit jours.

Cinq jours après l’inoculation, on sacrifie, par strangulation, un de ces
lapins qui paraît en pleine santé, et on puise, au milieu du bulbe, un peu de
matière nerveuse qui sert à inoculer deux lapins neufs, à la surface du
cerveau.

Le lendemain 26 juin, on sacrifie un autre lapin et son bulbe est inoculé

1. Voir les expériences de MM. Vestea et Zagari sur le même sujet dans ces
Annales, p. 493, 1 Vol.

26 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

à deux lapins neufs par trépanation. Le 27 juin, on sacrifie un troisième
lapin dont le bulbe est aussi inoculé à deux lapins neufs.

Le 3 juillet, les lapins inoculés avec le bulbe du lapin sacrifié le 5e jour
après l’inoculation sont pris de rage (incubation : 8 Jours).

Le 4 juillet, les lapins inoculés avec le bulbe du lapin sacrifié le 6e jour
sont pris de rage (incubation : 8 jours).

Le 5 juillet, les lapins inoculés avec le bulbe du lapin sacrifié le 7° jour
sont pris de rage (incubation : 8 jours).

La durée totale de l’incubation de la rage causée par le virus
de 70 passage est de huit jours, et dès le 5° jour après l'inocu-
lation, par trépanation, le virus rabique s’est cultivé dans le bulbe
sans qu'aucun symptôme ait manifesté sa présence.

Dans une autre expérience, on a recherché le virus rabique
pendant la période d’incubation non dans le bulbe, mais dans un
point plus éloigné du lieu de la trépanation, dans la moelle
inférieure.

Le 8 juillet 1887, on inocule, par trépanation, six lapins avec le bulbe
d'un lapin de T# passage. À partir du 11 juillet, on sacrifie chaque jour
un de ces lapins, et on inocule des fragments de sa moelle inférieureet de son
bulbe (pris dans le centre du cordon médullaire) à deux lapins.

Le bulbe et la moelle lombaire du lapin sacrifié le 3 jour n’ont pas
donné la rage.

Il en est de même pour le bulbe et la moelle lombaire du lapin sacrifié
le 4e jour.

Le bulbe du lapin sacrifié le 5° jour a donné la rage en 8 jours. La
moelle lombaire n’a rien donné.

La moelle lombaire du lapin sacrifié le 6° jour donne la rage en
10 jours. : |

Les deux lapins non sacrifiés sont pris régulièrement de rage le
Se Jour.

Donc, deux jours avant qu'aucun symptôme rabique se soit
manifesté, la moelle inférieure contenait le virus rabique qui
s'était déjà cultivé dans le bulbe un jour auparavant. Il existe
donc une période de culture latente du virus rabique dans les
centres nerveux.

Dans son étude sur la pathogénie de la rage publiée dans le
tome le"de ces Annales, M. Gamaleïa avait déjà conclu à l'existence
de cette période de culture latente.

Nous avons entrepris, M. Nocard et moi, quelques expériences

VIRUS RABIQUE DANS LES NERFS. 27

pour rechercher comment le virus rabique se propage dans les
nerfs et avec quelle rapidité.

Pour cela nous avons inoculé un âne dans le nerf plantaire externe au
niveau du canon. La grosseur de ce nerf chez l'âne permet de faire facile-
ment l’inoculation dans le tissu nerveux; de plus, sa longueur le désignait
particulièrement pour l'expérience que nous nous proposions. Le virus
employé était du virus de 144e passage; huit jours après l'animal était
sacrifié et le nerf enlevé jusqu'à l’épaule. Le point d’inoculation est marqué
par une zone rouge. Le nerf est divisé en huit fragments qui sont broyés à
part. Avec chaque tronçon, on inocule par trépanation un lapin et on injecte
sous la peau d’un autre ce qui reste de l’émulsion. Seize animaux reçoivent
donc ainsi la substance de ce nerf; aucun d'eux n’est tombé malade, Ils
ont été conservés depuis le mois de mars 1887 jusqu’au mois d'octobre de
la même année.

Le 22 mai l'expérience est répétée sur le nerf plantaire externe d’un
cheval, avec cette différence que l’on inocule du virus de la rage des rues.
Le 7 juin le cheval est sacrifié, et le nerf, divisé en cinq tronçons à partir du
point d'inoculation, est inoculé à des lapins. Chaque segment sert à inoculer
un lapin par trépanation, un lapin sous la peau avec une grande quantité de
matière, etun lapin dans les veines avec deux centimètres cubes du liquide
d'inoculation. Aucun de ces animaux n’a pris la rage; ils sont encore tous
en bonne santé, même ceux qui avaient recu la portion du nerf où on avait
pratiqué l’inoculation. Dans ces deux essais, le virus employé était virulent,
puisqu'un chevreau et des lapins inoculés dans l'œil succombaient à la rage
en 14 jours.

Il faut se demander si ce cheval et cet âne auraient contracté
la rage, s'ils avaient été conservés? Il semble que non seule-
ment le virus ne s'était pas cultivé, mais même qu’il avait dis-
paru au point où on l'avait inséré.

Le 20 mars 1887, nous avons inoculé avec du virus fixe deux moutons
dans le nerf collatéral du canon de la patte postérieure ; ces deux animaux
conservés pendant neuf mois n’ont pas pris la rage, tandis que le même
virus inoculé dans l'œil à un autre mouton le faisait périr de rage 45 jours
après.

On voit donc que l’inoculation dans les nerfs ne donne pas
toujours la rage, et qu’elle ne présente point la sécurité de
l'inoculation par trépanation ni même celle de l’inoculation
dans l'œil.

DE LA CULTURE SUR POMME DE TERRE

Par EE ROUX,

L'aspect caractéristique que prennent les colonies de certains
microbes lorsqu'ils croissent sur la pomme de terre rend très
précieux pour les bactériologistes ce mode de culture. De plus, la
pomme de terre permet les cultures à haute température que
l'on ne peut pas faire avec la gélatine. La technique de la
culture sur pomme de terre, telle qu’elle a été fixée par M. Koch,
est assez compliquée, elle prescrit des lavages préalables de la
pomme de terre, la stérilisation de sa surface dans une solution
de sublimé de façon à la débarrasser des germes qu’elle apporte
avec elle, et qui résistent à une température supérieure à celle
employée pour sa cuisson. Enfin il est difficile de conserver
longtemps des cultures pures sur pomme de terre, surtout après
que l’on a fait des prises dans les colonies. L'emploi des boîtes
en verre munies d'une ouverture latérale fermée par un tampon
de coton, semblables à celles que nous avons décrites, M. Nocard
et moi, dans notre note sur la culture de la tuberculose, permet
d'éviter presque sûrement les germes qui tombent sur la pomme
de terre lorsqu'on fait les ensemencements ou les prises d'essai.

Depuis plus d’une année‘ nous faisons la culture sur pomme
de terre dans des tubes à essai dans les conditions suivantes :
on taille la pomme de terre en tranches, sans aucune précau-
tion de lavage antiseptique, de façon que les tranches puissent
entrer dans un tube à essai de deux centimètres et demi de
diamètre environ, figure 1. Ce tube porte vers le quart inférieur un
étranglement qui empêche la tranche de pomme de terre de
tomber au fond; dans la partie inférieure se rassemblera le
liquide qui sort de la pomme de terre après la cuisson. Il n’est
pas nécessaire que le tube soit stérilisé à l'avance. Lorsque la

1. Ce procédé est enseigné depuis plusieurs mois dans le cours de technique
bactériologique que M. Chautemesse fait à l'École de médecine de Paris.

DE LA CULTURE SUR POMME DE TERRE. 29

pomme de terre est introduite dans le tube, on ferme celui-ci par
un tampon de coton, et on le porte dans l’autoclave où on le
chauffe jusqu'à 115° : on le maintient à cette température pen-
dant 45 minutes. Les tranches doivent être assez épaisses pour
ne pas s’affaisser après la cuisson. À la sortie de l’autoclave, la
surface de la pomme de terre est un peu humide, il suffit de

Fig. 1. Fig. 2.

placer les tubes verticalement pendant quelques heures à l’étuve
pour que l’eau s’égoutte et que sa surface se sèche, elle est alors
prête pour l'emploi. Les avantages de ce procédé sont faciles à
saisir, il permet de préparer en très peu de temps autant de
tranches de pomme de terre que l’on voudra, et qu'il est facile
de conserver en recouvrant le tube à essai d’un capuchon de
caoutchouc. Il évite les lavages aux antiseptiques et l'emploi de
vases de verre encombrants. Il donne aux cultures sur pomme
de terre la précision, la commodité et toute la sécurité des
cultures sur gélose. Mais son principal avantage est dans la

30 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

stérilisation de la pomme de terre à 115°, qui assure en un temps
très court sa stérilisation parfaite.

En modifiant légèrement le tube que nous venons de décrire,
il est facile d’obtenir des cultures d’anaérobies sur la pomme de
terre. Pour cela on soude au tube à essai au-dessous de l’étran-
glement un tube latéral, étiré en a (fig. 2, A), etmuni d’un tampon
de coton, comme le montre la figure. Après avoir introduit la
tranche de pomme de terre dans le tube, on stérilise le tout à
l’autoclave comme il a été dit plus haut, puis, quand la surface de
la pomme de terre est égouttée, ou sème l'organisme anaérobie
que l’on veut cultiver, et on ferme à la lampe lapartie supérieure
du tube comme on le voit (fig. 2, B). La tubulure latérale est
reliée à la pompe à mercure et ou fait soigneusement le vide. La
tranche de pomme de terre est maintenue pendant quelques
instants sous le vide de la machine pour que l'air qu’elle contient
s'échappe, puis avec un trait de chalumeau porté en 4, on détache
le tube. Il est facile de suivre à travers la paroi du verre le
progrès de la culture. Nous avons ainsi obtenu de belles cultures
du vibrion septique qui creusent un sillon dans la pomme de
terre.

Au lieu de faire le vide, on pourrait, après avoir étiré la
partie supérieure du tube, faire passer un courant de gaz privé
d'oxygène, et fermer ensuite à la lampe le tube en haut et en
bas.

NOTE SUR LA RÉACTION CHIMIQUE DES BACILLES DU CHOLÉRA,

Par M. ODO BUJVID, ne Varsovie.

Dans untravail, résumé page 507 du tome [° de ces Annales,
M. Ali-Cohen dit que la réaction chimique des bacilles du
choléra qu'on produit au moyen des acides chlorhydrique et
sulfurique, n’est pas caractéristique pour ces bacilles, qu’elle
s’observe également avec ceux de Finkler, de Miller, de Deneke,
et qu’elle dépend de la présence de l’acide azoteux dans ls
acides employés.

Il y a du vrai et du faux dans cette affirmation. On peut,

RÉACTION CHIMIQUE DES BACILLES DU CHOLÉRA. 31

d'abord, obtenir la réaction avec un acide qui ne peut pas
apporter d'acide azoteux, par exemple, l’acide oxalique, qu'on
peut préparer dans un grand état de pureté. Il suffit d'en mettre
quelques cristaux dans une culture de bacille du choléra faite
dans un bouillon légèrement alcalin, à 2 0/0 de peptone, et
additionné de 0,5 0/0 de sel marin, pour observer le même
résultat qu'avec les acides sulfurique ou chlorhydrique. Avec
les autres bacilles, l’acide oxalique ne donne rien. Avec l'acide
chlorhydrique pur et ne renfermant pas d'acide azoteux, on
n'obtient de même la réaction d’un rouge violet foncé qu'avec
les bacilles du choléra, et c’est pour cela que j'ai recommandé
l'emploi de cet acide de préférence à l’acide sulfurique.

Ce dernier renferme, en effet, ordinairement de l'acide
azoteux, et il donne alors la même réaction avec les bacilles de
Miller, de Deneke, d'Emmerich, les bactéries fécales, et le
bacillus pyogenes fœtidus qu'avec le bacille du choléra. Elle est
seulement beaucoup plus intense avec ce dernier.

Seul, le bacille de Finkler, après 4 jours de culture à 37°,
donne avec l'acide chlorhydrique une réaction qui se rapproche
de celle des bacilles du choléra. Mais avec ces derniers, elle est
beaucoup plus prompte et s’observe quelques heures seulement
après l’ensemencement.

Salkowski explique cette réaction, en disant qu'ellen’estautre
que celle de l’indol sur l’acide azoteux. Ce qui caractérise la cul-
ture du bacille de Koch, c’est la production simultanée et rapide
d’indol et d’un azotite qui, décomposé par un acide, donne le
rouge observé. Les autres bactéries donnent de l’indol, mais pas
d'acide azoteux. D'après ce que nous avons dit plus haut, le bacille
de Finkler diffère des autres bacilles étudiés en ce qu’il donne
aussi de l’indol et un nitrite, comme les bacilles de Koch, mais
en un temps beaucoup plus long.

La réaction que j'ai signalée, appliquée dans les condilions
que j'ai indiquées, reste donc caractéristique du bacille-virgule.

REVUES ET ANALYSES

SUR L'ABSORPTION PAR INHALATION DES GERMES MORBIDER.

REVUE CRITIQUE.

Bucaxer. Sur les conditions du passage des microbes dans l'air et sur leur
inhalation. Aertxt. Intelligenxbl, n°5 19, 43 et 14, 1880. — Frucce. Les
microorganismes, 2° éd. 4886, p. 605. — Arno». Recherches sur l'inha-
lation et la métastase des poussières. Leipzig 1885. — MuskarBLutTx. Nou-
velles recherches sur l'infection par les poumons, Centralbl. f. Bact.,
1. I, p.321, 1887. — Kocn, Mittheilungen, etc., 1884. — CaDeac ET MALLET,
Comptes rendus, t. CV, p. 1190. — Bucaxer. Nouvelles recherches sur l'inha-
lation des spores charbonneuses, Munch. med. Wochens., 1887, p. 1027.

Par quelles voies une affection microbienne passe-t-elle de l'individu
malade sur l'individu sain ? C’est là une question longtemps discutée, sur
laquelle nous commencons seulement à avoir quelques renseignements
précis. La loi générale de notre organisation, telle qu’elle résulte des mémo-
rables expériences de M. Pasteur, est que l’intérieur de notre corps est d’or-
dinaire fermé aux germes des microbes. Par où passent ceux qui réussissent
à y pénétrer? Profitent-ils pour cela d’une porte antérieurement ouverte,
d'une lésion, d’une effraction quelconque de la peau ou d'une muqueuse ?
Ou peuvent-ils franchir d'eux-mêmes ces obstacles, en vertu d'une loi de leur
physiologie ? Tel est le problème; on voit qu'il n’en est guère de plus impor-
tant en théorie et en pratique. N'est-il pas surprenant que l’on ignore
encore, par exemple, si le virus du chancre mou peut se développer lors-
qu'il est déposé sur une muqueuse saine, ou s’il a besoin d'une érosion
préexistante ?

Je laisserai pourtant de côté, dans cette revue, tout ce qui se rapporte
aux modes de pénétration des microbes par la peau ou la muqueuse intesti-
nale. Là, il y aurait trop à dire, si on voulait creuser la question, et trop
peu, si on voulait résumer à son sujet l'état actuel de la science. Nous
sommes un peu mieux renseignés sur l'absorption pulmonaire, qui, pouvant
se produire sur une surface considérable, au travers d’un épithélium très
fin, a été tout naturellement mise en cause des premières pour expliquer
l'extension épidémique de certaines maladies. C'est ainsi que Pettenkofer,
même pour des maladies comme le {yphus et le choléra, admettait que les
germes de ces affections étaient absorbés par le poumon, passaient de
là dans le sang, et ensuite dans l'intestin pour y subir leur évolution carac-
téristique.

REVUES ET ANALYSES. 33

Toutefois, à cette mise en suspicion de l’absorption pulmonaire, on pou-
vait répondre par quelques arguments. S'il y avait là une voie ouverte ou à
peu près ouverte, on ne comprendrait pas que l’intérieur du corps fût,
comme nous l'avonsrappelé plus haut, fermé d'ordinaire aux germes patho-
gènes que nous sommes si souvent exposés à rencontrer autour de nous. On
ne comprendrait guère aussi l'absence des germes non pathogènes, s’il
est vrai, comme l'a montré M. Wyssokowitsch (V. ces Annales, t. T, p. 45),
que beaucoup de bactéries vulgaires, comme le B. subtilis, peuvent résister
et vivre longtemps dans le sang, quand elles y ont pénétré.

Cette conséquence avait sans doute frappé M. Wyssokowitsch quand il
s'est mis à étudier, dans le laboratoire de M. Flügge, la perméabilité du
poumon, et aussi celle de la peau, pour les germes des microbes. Dans les
deux cas, il a constaté que tant que l’épiderme ou la muqueuse étaient
intacts, il n’y avait aucune pénétration des bactéries dans le sang. Pour le
poumon en particulier, il a soumis ses animaux d’expériences à des inha-
lations de poussières sèches de cultures du bacille de la fièvre typhoïde, de
staphylococeus ou d'autres microbes. Il leur a fait respirer les liquides de
culture eux-mêmes après les avoir pulvérisés, ou encore les leur a injectés
dans la trachée. Il n'a jamais pu constater l’arrivée des microbes dans le
sang, alors même « que l'injection avait déterminé dans le poumon les
manifestations maladives les plus accentuées ».

Ces résultats étaient d'accord avec ceux que Arnold avait obtenus aupa-
ravant en soumettant ses animaux à l'inhalation de poudres colorées, qu’on
pouvait retrouver anatomiquement dans les tissus. Ni le noir de fumée, ni
l’outremer, ni l'émeri n’ont pu être décelés dans le sang ni dans les organes
profonds. On les retrouvait tout au plus dans les ganglions bronchiques.
Arnold a montré aussi que le poumon de l’homme se comporte à cet égard
comme celui des animaux. Le noir de fumée n’y pénètre jamais que par des
voies anormales.

Voilà des conclusions bien nettes. Sans doute, faites pour des matières
mortes, elles ne s'étendent pas nécessairement aux microbes, et Arnold lui-
même fait des réserves à ce sujet, mais, unies à celles de Wyssokowitsch,
elles témoignent d’une sorte d’imperméabilité de la muqueuse pulmonaire.
Faut-il maintenant envisager cette imperméabilité comme absolue? On aurait
bien tort, car l'histoire de la tuberculose nous montre nettement qu’au
moins pour cette maladie il peut y avoir pénétration pulmonaire directe.

On sait que la croyance à la contagiosité de la tuberculose, si bien établie
au siècle dernier, n’a pas été déracinée partout par les efforts du corps
médical, et qu'elle existe encore à l’état vivant dans beaucoup de campagnes,
Mais c’est M. Villemin, qui, dans son heureuse et féconde tentative de réaction
contre les idées de son temps, lui a donné le premier une consécration
expérimentale, en prouvant que des animaux, soumis à une inhalation
de poussières d'organes tuberculeux, devenaient tuberculeux. M. Koch a
recommencé depuis ces expériences, en leur donnant le cachet de précision
et de netteté que permettait sa belle découverte du bacille de la tuberculose.
En soumettant des animaux à l’inhalation, sous la forme d’eau pulvérisée,
de cultures pures de ce bacille, il a vu devenir tuberculeux tous ceux qui

3

34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

appartenaient à des espèces très accessibles à cette maladie, les cobayes, les
lapins, les souris des champs etles chats. Les espèces plus résistantes, chiens,
rats, et souris blanches, finissent aussi par succomber à l'infection par de
grandes quantités de cultures pures.

M. Koch opérait d'ordinaire en diluant dans l’eau une culture du bacille,
jusqu'à obtenir un liquide presque clair, et en soumettant les animaux,
pendant 3 jours de suite, à une demi-heure d'inhalation pendant laquelle
on pulvérisait, dans la caisse d'expérience, environ 50cc de ce liquide. En
recommençant ces essais pour juger de la réceptivité de l'appareil respira-
toire pour les bacilles de la tuberculose, MM. Cadéac et Mallet ont constaté,
comme M. Koch, que l'inhalation de liquides tuberculeux pulvérisés, ou
l'injection intra-trachéale de matières tuberculeuses, rendaient tubercu-
leux tous les animaux d'expérience. Mais ils sont aussi arrivés à ce résultat
imprévu que l’inhalation des poussières tuberculeuses sèches était presque
toujours inoffensive.

Quelques détails sont nécessaires pour apprécier la valeur de ce résultat.
MM. Cadéac et Mallet dessèchent à l’étuve de 30 à 35° des crachats de
phtisiques, ou laissent se dessécher à l'air de tout petits morceaux de pou-
mons de vaches tuberculeuses, pulvérisent ensuite dans un mortier, et pas-
sent le tout au moulin à poivre; puis, à l'aide de petits soufflets pour poudres
insecticides, ou d’autres moyens mécaniques, ils disséminent, en lesfraction-
nant, «un ou plusieurs litres de poussières tuberculeuses dans l'atmosphère
de caisses hermétiquement fermées oùon place journellement, pendant plu-
sieurs heures, un certain nombre d'animaux ». Relevons seulement, pour le
moment, dans ce court exposé, deux points sur lesquels nous aurons à re-
venir tout à l'heure: le premier est que ces poussières paraissent, au
moins à première vue, n'avoir été ni très sèches ni très fines; en second
lieu les animaux en expérience étaient soumis à des inhalations multipliées
(une demi-heure par jour pendant plusieurs jours consécutifs) dans un air
qui doit avoir été très riche en poussière, car on a dans une expérience
injecté 2 litres de poussières, en 3 semaines, dans une caisse d’un mètre cube
de capacité, et qui renfermait 8 lapins et 8 cobayes. Nous verrons bientôt
que le mode opératoire n’est pas indifférent.

On peut dire toutefois, au sujet de toutes ces expériences, que, très inté-
ressantes au point de vue de la tuberculose, elles se rapportent uniquement
à un être qui trouve dans le poumon un milieu d'élection, s’y cultive facile-
ment et y amène, avec la maladie qu’il produit, des désordres qui favori-
sent sa pénétration dans les organes profonds et la généralisation de la
maladie. Elles ne nous renseignent pas sur le mode de pénétration des
microbes qui ne deviennent pathogènes que dans les organes profonds, et
pour lesquels le poumon n’est qu’un lieu de passage. Comment ces derniers
s'ouvrent-ils cette porte ?

Pour résoudre cette question, Buchner s’est adressé à la bactéridie char-
bonneuse. Celle-ci a un défaut. Sitôt qu'elle a pénétré dans le sang, elle
devient rapidement mortelle, et la mort de l'animal interrompt brusque-
ment la période de transition qui est le point capital de l'étude. Peut-être
Buchner et les savants qui l'ont suivi dans cette voie auraient-ils trouvé interêt

REVUES ET ANALYSES. 39

et profit à se servir d’une bactéridie déjà atténuée, ou à opérer sur des ani-
maux vaccinés. Mais ils n’en sont pas moins arrivés à quelques résultats,
très intéressants, et que nous allons résumer.

Dans ses premières expériences, Buchner avait mélangé de spores char-
bonneuses des poudres fines et bien sèches de charbon de bois ou de tale,
qu'il avait répandues en nuage dans une caisse renfermant les animaux
d'expérience. Il avait vu ces animaux, qui étaient des souris blanches,
mourir du charbon quelques jours après l’inhalation. On pouvait dire que
l'infection avait tout aussi bien pu se produire par des érosions à la surface
de la peau ou par le canal intestinal que par voie pulmonaire; mais Buchner
avait répondu à cette objection en saupoudrant d'autres animaux avec des
poussières infectieuses, ou en les leur faisant avaler, et n'avait vu aucun
d’eux mourir charbonneux. Par voie d'exclusion, il mettait donc directement
en cause l'absorption pulmonaire.

Mais si ces expériences prouvaient que la pénétration était possible, elles
ne disaient pas comment elle se faisait, C’est le point qu'a étudié M. Muskat-
bluth. Il a employé pour cela deux méthodes différentes.

Dans la première, il injectait dans la trachée de lapins de petites quan-
tités (0,2 à 0,3 cc.) d’un liquide très riche en bacilles du charbon. Puis,
comme il y avait alors à redouter l'infection locale de la blessure, il sacrifiait
les animaux environ 16 heures après l'opération, avant que cette infection
locale n'ait pu venir troubler les résultats. Il retrouvait alors les bacilles
injectés sur les parois des alvéoles, enveloppés dans des cellules que leur
forme et leur position doivent faire considérercomme desdébris del’épithélium
alvéolaire, les cellules à poussière (Staubzellen); ces cellules sont bondées de
bacilles et contiennent fréquemment aussi de longs fils enroulés. On trouvait
aussi des bacilles dans les ganglions bronchiques, mais seulement dans les
lymphatiques du ganglion, et pas du tout dans les vaisseaux sanguins.
Cependant, les bacilles avaient déjà pénétré dans la circulation, car sur un
lapin tué 17 heures après l'injection on a trouvé, parla méthode des cultures,
des bacilles charbonneux dans le foie et dans la rate.

Dans un second procédé opératoire, M. Muskatbluth trachéotomisait
d'abord ses lapins, et ne faisait l'injection, et encore au travers de la canule,
que lorsque la plaie était entièrement fermée et cicatrisée. Assuré ainsi
contre toute infection locale, il pouvait attendre la mort de l'animal, qui
survenait au bout de 40 ou 48 heures, pour faire l'examen microscopique
des poumons. Le tableau était alors exactement l'inverse de tout à l'heure.
On ne trouvait plus de bacilles que dans les vaisseaux sanguins du poumon,
les cellules à poussière étaient presque toutes vides de microbes, et dans
les ganglions bronchiques toutes les bactéridies avaient disparu des vais-
seaux lymphatiques.

Ces expériences permettent de conclure : 4° que le poumon est perméable
pour les bacilles charbonneux; 2° que les voies de pénétration sont les Iym-
phatiques, les ganglions et le tronc lymphatique, d’où les bacilles passent
dans les vaisseaux sanguins.

Le seul point un peu obscur dans ces études, est le rôle des cellules à
poussière; sont-elles des agents d'expulsion ou des agents de pénétration des

36 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

microbes. En les voyant remplies de bacilles, on est tenté d'en faire des
phagocytes. Mais on n’aperçoit aucune trace de dégénérescence chez les ba-
cilles qui les habitent, et qui continuent à se colorer très bien. Elles ne
laissent pourtant pas que d’avoir un rôle protecteur. Beaucoup sont élimi-
nées avec les secrétions bronchiques, et éliminent ainsi les bacilles qui les
contiennent. Or, l'intensité de la sécrétion dépend de l'intensité de l’inflam-
mation pulmonaire ; elle augmente avec l'énergie de la desquamation et
de l'infiltration cellulaire, de sorte que s’il survient une pneumonie, une
partie des bacilles étant éliminée par voie mécanique, une autre se trouvant -
noyée dans des liquides d'infiltration qui remplissent les bronches ou les
alvéoles, et privée ainsi, sinon de nourriture, au moins d'air, l’évolution du
charbon peut se (trouver arrêtée par la maladie intercurrente provoquée par
l'inflammation pulmonaire. M. Muskatbluth en cite un exemple, et nousallons
en trouver d’autres dans les dernières expériences de Buchner.

Mais nous n'avons pas besoin d'attendre pour conclure que l’inhalation
de poussières infectieuses ou non infectieuses met peut-être en jeu un
mécanisme de résistance dont il importe de tenir compte dans le dispositif
des expériences et dans l'interprétation des résultats. Sans qu'on sache
encore grand'chose sur ce mécanisme, on a le droit de penser que, pour
réussir une inoculation tuberculeuse, il faudra d'abord arriver jusqu'aux
alvéoles, ce qui exigera l’'émploi d'une poudre très fine et très sèche, puis
tacher de réduire au minimum l'inflammation pulmonaire, puisqu'on ne
peut l’éviter totalement, et pour cela opérer avec une faible quantité de
poussière aussi infectieuse que possible. Toutes les expériences dans lesquelles
ces conditions ne sont pas réunies risquent d'être troublées par la cause
d'erreur ou d’insuccès que nous relevions tout à l'heure, et c’est ainsi peut-
être qu'on s'explique comment MM. Cadéac et Mallet n’ont pas trouvé infec-
tieuses par voie pulmonaire des poussières tuberculeuses sèches qui, insérées
sous la peau, donnaient la tuberculose aux animaux inoculés.

Dans ses dernières expériences sur le charbon, Buchner à retrouvé le
suceès des premières, en réunissant les conditions que nous venons de
signaler. Comme substance pulvérulente, il emploie les spores de Lyco-
perdon giganteum, dont le diamètre n'atteint pas la moitié du diamètre d'un
globule du sang humain, dont la légèreté est très grande, et qui, bien
sphériques, échappent au reproche qu’on peut faire aux poudres minérales de
présenter quelquefois des arêtes à bords tranchants qui peuvent léser la
muqueuse si délicate du poumon. Il imbibe largement cette poudre d’une
culture de bactéridies où il n’y a que des spores, la déssèche bien sur le
chlorure de calcium, et la transforme en nuage dans une chambre close
où respirent les animaux. La quantité de poudre mise en suspension dans
l'air est très faible, elle n’est que de 0,25 gr. dans une chambre de litres
environ de capacité, renfermant cinq souris blanches, du double dans une
chambre de 44 litres, renfermant deux cobayes. L'inhalation ne dure que
de 10 à 45 minutes, et les animaux n’y sont exposés qu'une fois.

On voit que nous sommes loin des conditions des expériences de
MM. Cadéac et Mallet. Il est vrai qu'il ne s’agit plus de tuberculose, mais les
résultats sont très nets. Les Souris succombent au charbon en moyenne

REVUES ET ANALYSES. 37

x

après 60 heures, et les cobayes du 3° au 5° jour. Sur 43 souris soumises à
l'expérience, il y en a eu 36 mortes par le charbon, 5 par pneumonie, et 2
restées vivantes. Sur 18 cobayes, 13 sont morts du charbon, 5 ont survécu.

Les cas de pneumonie nous rappellent notre observation de tout à l'heure.
Ici aussi, le microbe de la pneumonie, présent par hasard ou à la suite d'une
affection antérieure, et favorisé dans son développement par l'inflammation
pulmonaire résultant de l'inhalation, avait si bien arrêté l’évolution du
bacille qu'il a été impossible d'en retrouver dans les poumons des animaux
pneumoniques, ni au microscope, ni par voie d'ensemencement.

Nous avons aussi le droit de rappeler ici l'insuccès des expériences de
Wyssokowitsch que nous avons résumées plus haut, et dans lesquelles l’in-
jection répétée de petites quantités de culture de bacilles dans la trachée
s'était montrée inoffensive, « même lorsque le poumon montrait les mani-
festations maladives les plus accentuées ». Comme le font remarquer
MM. Muskatbluth et Buchner ce n’est pas mème, c'est parce que qu'il aurait
fallu dire sans doute.

C'est parce que le poumon était devenu le siège d'une congestion ou
d'une affection à marche rapide que l’évolution du mierobe inhalé avait été
arrêtée. Quoi qu'il en soit, on voit tout le danger de l'inhalation des pous-
sières charbonneuses. M. Buchner a cherché à pousser plus loin sa démons-
tration en apportant la preuve directe de la pénétration de la bactéridie
par les poumons. Les nombreuses tentatives qu’il a faites à ce sujet peuvent
se résumer dans l'expérience suivante, qui rappelle celles de M. Muskatbluth.

Une souris, tuée par le chloroforme 20 heures après l’inhalation, et dans
un état apparent de santé parfaite, a été soumise à un examen microsco-
pique soigneux. Dans ses poumons, on a trouvé, en deux points, des amas
de bacilles charbonneux dans les diverses couches de la paroi alvéolaire.
Comme l’inhalation avait porté uniquement sur des spores, il fallait bien
qu'il y eût eu végétation. Cette végétation ne résultait pas à son tour d'un
retour dans le peumon de bacilles ayant pullulé à l'intérieur du corps, car
d'abord, la rate, étudiée par la méthode des cultures, ne contenait aucun
bacille, puis on ne trouvait aucun bacille dans le réseau capillaire des pou-
mons, ce qui eût été nécessairement le cas si les microbes avaient été
transportés par le sang dans les poumons. Enfin, comme dernière preuve,
au milieu d’un des amas de bacilles révélés par le microscope, on a trouvé,
adhérent à la paroi alvéolaire, le fragment inhalé de poudre de charbon qui
avait apporté le germe. M. Buchner estime donc avoir le droit de tirer la
conclusion suivante qui résume ses expériences et celles de ses prédécesseurs:

« Les spores charbonneuses ou les bacilles qui enproviennent ont le pou-
voir de traverser la surface du poumon en dehors de toute lésion mécanique,
de passer dans les voies lymphatiques, et d'aller ainsi végéter dans les
organes profonds. Des phénomènes d’inflammation dans le tissu du poumon
ne sont nullement nécessaires pour tout cela, et constituent au contraire un
obstacle à la pénétration des bacilles. » Dx.

38 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Max Vorzscn. — Contribution à la question de la résistance des bacilles
tuberculeux. Beitr. x. path. Anat., t. II, 1887.

Le Mémoire de M. Voelsch est consacré à l'étude de quelques points très
controversés de l'histoire biologique du bacille tuberculeux, c’est-à-dire de
sa résistance à la putréfaction, à la chaleur, à la dessiccation.

Sur le premier point, les savants sont divisés en deux camps. Dans l'un,
nous trouvons Baumgarten!, Fischer? et Falk *, qui, les deux premiérs pour
la tuberculose transmise par les voies digestives, le dernier, pour la tuber-
culose d’inoculation, prouvent qu'après quelques jours de putréfaction, les
matières tuberculeuses perdent tout pouvoir infectieux. De Toma‘ est tout
récemment arrivé à des conclusions analogues pour la putréfaction des cra-
chats tuberculeux. Mais en face de ces affirmations se dressent les résultats
contradictoires obtenus dans le laboratoire de M. Koch par Schill et
Fischer, qui ont pu inoculer avec succès un erachat tuberculeux en putré-
faction depuis trois jours. M. Koch$ a confirmé ces résultats, et Wesener ne
les a pas contredits.

L'incertitude n'est pas moins grande sur d’autres points, pourtant très
importants, l’action de la chaleur, par exemple. L'ébullition peut-elle
rendre inoffensif un lait tuberculeux ? Schill et Fischer répondent qu'après
deux minutes d’ébullition un crachat tuberculeux n’a pas perdu sa viru-
lence, mais qu'il l'a perdue après cinq minutes. Wesener ajoute que l’ébul-
lition détruit plus sûrement les bacilles sans spores que les spores. Mais
Falk n’est d'accord ni avec eux ni avec de Toma sur l'influence d'une
longue conservation à haute température.

Enfin, au sujet de l'influence de la dessiccation, nous avons encore à
choisir entre des affirmations qui ne sont plus, il est vrai, aussi contradic-
toires, mais qui prêtent à l'embarras par leur manque de précision. Ce sont
ces incertitudes que M. Voelsch a essayé de faire disparaître.

Il s'est demandé si elles ne tenaient pas en partie à ce que les savants
cités plus haut avaient opéré tantôt sur des bacilles tuberculeux sans spores,
tantôt sur des bacilles sporifères peut-être plus résistants. Il à donc porté
son attention de ce côté, et s’est servi de semences tuberculeuses provenant
de trois sources. Une culture artificielle lui donnait des bacilles à peu près
privés de spores ; un crachat tuberculeux des bacilles très riches en spores,
et enfin un tissu tuberculeux jeune lui fournissait un mélange de bacilles à
spores et de bacilles sans spores.

Avec chacune de ces semences, il a fait l'étude de l'influence de la putré-
faction, de la dessiccation à basse et à haute température, d’un simple et
d'un double chauffage à 100°. C'était beaucoup entreprendre. Ajoutons tout

4. Centralbl. f. Klin. Med., 1884, no 9.

9, Arch. f. exp. Path. u. Pharmuk., t. XX,

3. Arch. f. path. Anat. und Physiol., t. XCIIT.
4. Annali univ. di medic. chirurg., 1886.

5. Mittheil. d. k. Gesund., t. 11, p. 543.
6..Id:, p.18.

REVUES ET ANALYSES. 39

de suite que vingt-neuf lapins lui ont suffi pour étudier toutes ces questions.
Ajoutons encore que, faute de temps, ces lapins ont été tués une quinzaine
de jours après l'inoculation, avant toute évolution possible d’une tubercu-
lose généralisée, et qu'on a jugé du degré d’affaiblissement subi par la
semence par le degré de développement du tubereule local produit au point
d'inoculation. Ajoutons enfin que le point capital qu'on pouvait essayer de
viser dans ce dispositif expérimental, à savoir la comparaison entre les
effets des divers traitements sur les bacilles sans spores de la culture
artificielle et les bacilles à spores du crachat tuberculeux, s'est entièrement
dérobé à l'expérience, par suite de l'intervention fortuite, dans l'une des
séries d'essai, d’une septicémie du lapin, dont les germes existaient sans
doute dans le crachat tuberculeux auquel on a emprunté la semence, et qui a
pris le pas sur la tuberculose. Il suffit de cette courte esquisse de la phy-
sionomie du Mémoire de M. Voelsch pour comprendre qu’il n’ait pu avan-
cer beaucoup les questions dont il a entrepris l'étude.

Ce qu'il trouve est un peu vague et difficile à résumer. Le point le plus
net est relatif à l'influence d’un simple et d’un double chauffage à 100°. La
semence en sort affaiblie, mais non morte. Mais le résultat n’a rien de bien
nouveau. Il avait été trouvé par quelques-uns des savants cités plus haut,
s'il avait été contesté par d’autres. Ce qui nous intéresserait, ce n’est pas
de savoir dans quel camp M. Voelsch se place, ni s’il a jugé plus juste de se
tenir entre les deux, ce serait d'apprendre de lui pourquoi, sur une question,
en apparence si simple, la science est divisée en deux camps, pourquoi des
savants ont trouvé inoffensive l’inoculation d’un bacille tuberculeux chauffé,
pourquoi d’autres savants, également habiles et autorisés, l'ont trouvée
virulente. Y avait-il une influence, restée inaperçue des uns ou des autres,
de la prédisposition individuelle ou de la race des animaux inoculés, ou de
la nature de la semence, ou de la réaction acide ou alcaline du milieu qui
les contenait, ou du mode de chauffage, ou de la température atteinte, ou
du mode d’échauffement ou de refroidissement, qui prolonge plus ou moins
l'action des températures voisines de la température mortelle? Un seul de
ces points, convenablement élucidé dans le mémoire de M. Voelsch, lui
aurait donné une autre valeur que celle que lui donne son vaste pro-
gramme, resté à l’état d’ébauche,

Nous pourrions en dire autant au sujet de la putréfaction. M. Voelsch
trouve qu'elle affaiblit aussi la virulence, mais ne la fait pas disparaître.
Il se place ainsi à côté de son maître, M. Baumgarten, de Falk, de
Fischer, ete. Mais ces questions ne sont pas des questions de majorité.
Pourquoi la putréfaction s’est-elle montrée active à Berlin, inactive à
Kænigsberg? et d’abord, de quelle putréfaction s'agit-il? M. Voelsch,comme
ses prédécesseurs, parle de la putréfaction comme d'un phénomène simple.
Mais il y a certainement plusieurs centaines de putréfactions diverses, ame-
nées par des microbes qui sécrètent des diastases différentes, donnent lieu
aux produits vitaux les plus variés, communiquent au liquide putride une
réaction tantôt acide, tantôt alcaline, et ne peuvent se ressembler dans leur
action sur les bacillestuberculeux. Le moindrerenseignement sur ce sujet eût
singulièrement diminué notreembarras à choisirentre des affirmationsrivales,

40 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Enfin, au sujet de l'influence dela dessiccation, M. Voelsch constate que la
virulence décroît lentement par une longue conservation à la température
ordinaire, et plus rapidement à l'étuve. Sur ce point, pas plus que sur les
autres, « il ne s’est révélé de différence bien sensible entre les bacilles spo-
rifères et non sporifères, ce qui revient à dire que la ténacité des bacilles
tubereuleux non sporifères est assez grande ». Ce serait le cas de faire
ici quelques réserves sur ce qu'on appelle spores dans le bacille tuberculeux,
mais comme cette question, dans le Mémoire de M. Voelsch, est plutôt
visée que traitée, nous attendrons une autre occasion pour l’étudier avee le
soin qu'elle mérite. Dr

Tu. Kirr. — Recherches sur le rouget des pores et son inoculation. Centralbl.
Bacteriol. u. Purasit., t. I, 1887, p. 693.

Le Mémoire de M. Kitt, résumé d’autres Mémoires plus étendus, publiés
dans d'autres recueils ‘, touche à une foule de points. Nous ne parlerons .
que de ceux qui sont d'un intérêt général et sur lesquels M. Kitt apporte des
notions nouvelles.

Ce sont surtout les questions d'atténuation qu'il a étudiées, et sur les-
quelles il se trouve en contradiction avec ce qu’on croyait savoir déjà.
M. Pasteur avait montré que, par des passages successifs au travers du
pigeon, la virulence du bacille du rouget s'exalte vis-à-vis du pore, qu'elle
s'atténue, au contraire, par des passages successifs au travers du lapin.
M. Kitt n'a pas pu observer ces variations de virulence, et se demande
comment on à pu les observer ailleurs. La durée de l’incubation et celle de
la maladie étant très courtes avec les petits animaux, chez lui, souris,
pigeons et lapins périssent également vite, qu'on les inocule avec le
premier vaccin Pasteur contre le rouget, qui doit ne renfermer que des
bacilles atténués, avec le second vaccin ou avec du rougetde pore. Les souris
meurent entre 4 et 4 jours, les pigeons entre 8 et 6 jours. Il y a pourtant là
une marge assez notable pour metire en évidence des effels d'atténuation.

I n'a pas été plus heureux dans l'étude de l'atténuation par des ino-
culations en série. Avec les souris, il n’a pu resserrer entre des limites
plus précises que celles de 1 à 3 jours les durées d'évolution du microbe

4. Nous profitons de l'analyse du travail de M. Kitt sur le rouget pour donner
la bibliographie complète du sujet, depuis la découverte du bacille :

Pasteur et Thuillier, sur le rouget ou mal rouge des porcs, C.-Rendus, 1883,
t. XCXV; Bull. de l’Ac. de med., 1883, n°0 48.

Loeffler. Recherches expérimentales sur le rouget. Arb. a. d. k. R. G. A.
1885. t. I.

Schutz. Arch. f. wiss. und prakt. Thierheilk. Berlin, 1885, t. XI; et 1886, t, XII;
et Arbeiten a. d. k. R. G. A., 1885-86.

Lydtin et Schottelius. Le rouget des porcs. Weisbaden, 1885.

Cornevin. Première étude sur le rouget du porc. Paris, 1885.

Baillet. Recherches sur le rouget. Recueil de méd. vet., 1884.

T. Kitt. Recherches sur le rouget des porcs et son inoculation. Jahresbericht d.
bayer. Thierzarzneisch, 1886. — Oesterreich. Revue f. Thierheilk., 1886.

REVUES ET ANALYSES. 41

inoculé. Avec les pigeons, les résultats de l'inoculation en série ont été
plus réguliers : la mort survenait d'ordinaire au bout de 3-4 jours. L'ino-
eulation se faisait à chaque fois à la lancette, trempée dans le sang du
pigeon qui venait de mourir, et avait lieu sous la peau du grand pectoral.
La quantité de virus inoculé était ainsi très faible, et la mort eût sûrement
été plus rapide si on en avait inoculé davantage. Mais s'il y avait eu
une diminution de virulence, elle aurait dû apparaître, pense M. Kitt,
dans la série de 30 pigeons inoeulés, et on n'en trouvait trace, ni dans
la durée d'évolution de la maladie, ni dans les résultats de l'inoculation
de ces virus de passage du pigeon à la souris ou au lapin, qui mouraient
aussi vite que lorsqu'on les inoculait avec du rouget de pore.

Avec les lapins, la contradiction est encore plus marquée et plus
curieuse. M. Pasteur a montré, comme on sait, que dans le passage au
travers du lapin, la virulence du bacille du rouget déeroît vis-à-vis du pore,
mais eroit vis-à-vis de cet animal qui, dans des inoculationsen séries, périt
de plus en plus vite. M. Cornevin a trouvé le même résultat. M. Kitt con-
firme la décroissance de la virulence vis-à-vis du porc par le passage au
travers du lapin, et a même réussi à conférer l’immunité à un pore par
l'inoculation d’un bacille ayant traversé une seule fois l'organisme d'un lapin;
mais il trouve, chose plus imprévue, que le transport du bacille de lapin
à lapin ne peut se faire au delà de deux fois de suite, et que d'ordinaire,
après une première génération « sa virulence est tellement affaiblie qu'une
nouvelle inoculation sur le lapin est impossible ».

L'impossibilité rencontrée par M. Kitt tient peut-être à son mode opéra-
toire. Le sang des lapins contient très peu de microbes, et l'insuccès des
transplantations successives à la pointe de la lancette tient peut-être à
cette circonstance. M. Kitt eût sans doute obtenu d’autres résultats s'il
avait inoculé ses animaux en série avec un fragment de rate broyée.

Chercher, comme il le fait tant sur ce sujet que sur d'autres, l'expliea-
tion des différences entre ses résultats et ceux des savants qui l'ont précédé,
dans l’impureté possible des cultures en milieux liquides en usage au labo-
ratoire de M. Pasteur, c’est porter contre ce mode de culture une accusation
sans preuves. Comment admettre que, depuis 1882, on conserve au labora-
toire de M. Pasteur des cultures de rouget, donnant l’immunité aux pores
auxquels on les inocule, si ces cultures étaient impures à l'origine. N'est-il
pas évident que, dans cette longue série de cultures en milieux liquides,
cette impureté aurait fini par disparaître ou dominer, et que ces cultures
auraient en ce moment des propriétés toutes différentes de celles qu'elles
possédaient autrefois? La condition de perpétuité dans les cultures et de la
préparation indéfinie des vaccins est précisément leur pureté absolue.

Ce n'est pas d’ailleurs la première fois, et ce ne sera sans doute pas la
dernière qu'on trouvera exprimée, dans des Mémoires étrangers, la pensée
que la culture en milieux liquides n'assure pas la pureté autant que la cul-
ture sur milieux solides. Ainsi M. Pasteur n'aurait jamais connu, à l'état
pur, les ferments alcooliques et le ferment lactique ; Raulin, l’Aspergillus
niger ; Van Tieghem, le ferment de l’urée, pour ne parler que des premiers

qui ont suivi M. Pasteur dans les voies nouvelles qu'il avait Dre GC A CA
L
SYLe a > #p

42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

culture sur milieux solides à été un grand progrès, mais dédaigner tout ce
qui ne vient pas d'elle est ou une prévention, contre laquelle l'expérience
proteste, où une prétention, amusante comme toutes les prétentions, et qu’il
faut laisser passer, en la saluant d’un sourire. Pour le microbe du rouget,
en particulier, la figure la plus exacte qui en ait été tracée est une pho-
tographie du D' Roux, que tout le monde à pu voir, en 1884, au labora-
toire de M. Pasteur, qui a été présentée, en 1885, à la Société de Biologie,
et publiée dans le premier volume des Annales.

Le Mémoire de M. Kitt contient, en outre, le résultat de ses études sur
le mode de propagation du rouget. Il trouve queles excréments des animaux
souffrant de cette maladie (souris, pigeons, porcs) sont extrêmement infec-
tieux, qu'une putréfaction de quelques jours leur laisse leur virulence, mais
qu'ils la perdent assez vite par la dessiccation.

On n’est pas encore bien fixé sur les espèces domestiques qui peuvent
contracter le rouget. M. Pasteur dit que les moutons sont dans ce cas, et
Lydtin dit la même chose, avec réserve, il est vrai, pour les bœufs. MM. Cor-
nevin et Herbet contredisent ces deux assertions. M. Cornevin a constaté
aussi l’état réfractaire du mulet, de l'âne, du chien, du chat et du cobaye,
de la poule, de l’oie et du canard. M. Kitt confirme quelques-unes de ces
conclusions, mais il y ajoute que le mulot (Waldmaus) est aussi indemne,
ce qui est un argument à ajouter à ceux qu'ont avancés MM. Loeffler et
Schutz, pour établir l'identité entre le microbe du rouget et celui de la sep-
ticémie de la souris, qui, pathogène pour la souris blanche et la souris
grise, ne l’est pas pour la souris des champs. Cette question d'identité ne
nous parait pas aussi démontrée que le pense M. Kitt. Mais ce n’est pas le

moment d'aborder cette question.
px

J. Porzs. Les microcoques du coryza contagiosa des chevaux. Fortschritte d.
Medicin, t. VI, 1888, p. 4.

M. Poels désigne sous le nom de glande (Druse), une affection conta-
gieuse du cheval, identique sans doute à ce que nous nommons gourmes
en France, et qui se caractérise par une hypersécrétion de la muqueuse respi-
ratoire, souvent suivie d'un gonflement et d'une formation secondaire d’ab-
cès dans les ganglions lymphatiques de la région.

L'inflammation est d'ordinaire bornée aux narines et à l’arrière-gorge,
mais elle peut aussi gagner le larynx, les voies respiratoires, les sinus
maxillaires et frontaux.

C'est une maladie très redoutée, parce que, dès qu'elle à pénétré dans
une écurie, elle s'étend sur presque tous les chevaux, tuant les jeunes, et
arrêtant les animaux de travail.

Quelle que soit la forme affectée par cette maladie, M. Poels a toujours
trouvé, dans le mucus nasal ou le pus des glandes des chevaux qu'il a
étudiés, un micrococeus, tantôt en articles isolés, tantôt en paires, tantôt
en chaînettes de 3, 4 ou 5 articles. Les chaînes ne sont jamais très
longues.

REVUES ET ANALYSES. 43

Ce coccus est rond où un peu allongé, et dans ce cas il montre, quand
il est en voie de division, deux pôles plus fortement colorés, en forme de
demi-sphère, en contact par leur surface plane. C'est là le début de la
multiplication. Les deux motiés du coceus s’arrondissent ensuite, s’allon-
gent à nouveau et se multiplient ainsi.

La plupart de ces coccus sont entourés d'une enveloppe non colorable,
mais ils ne l'emportent pas avec eux dans tous les milieux de culture.

Sur la gélatine ou la gélose, on n’observe aucun développement super-
ficiel. Sur la gélatine, il ne se forme sur la piqûre que des colonies isolées.
Dans le bouillon, il n’y a qu'un trouble léger au-dessus d’un abondant dépôt
de fond. C'est sur le sérum du sang de cheval que le coccus se développe
le mieux, à la condition que ce sérum ne soit pas trop fortement coagulé.
Quand il est encore à moitié gélatineux, il s’y forme des colonies mu-
queuses, demi-transparentes, qui ressemblent à de petites gouttelettes d’eau
superficielles. Quand on les touche avec un fil de platine, on s’apercoit qu'elles
sont un peu visqueuses, mais cela ne les empêche pas de couler le long de
la surface si on incline le tube de sérum qui les nourrit. Le coccus y pousse
aussi dans la profondeur.

Dans ce milieu, il montre, lorsqu'on le traite par une solution de violet
de gentiane, une belle capsule colorée, et quelques-unes de ces enveloppes
ressemblent beaucoup à celles du microbe de Friedlaender.

On les trouve non seulement autour des articles isolés, mais entourant
aussi les chaînettes.

« On trouve quelquefois des capsules dans lesquelles on ne voit aucun
coceus, et qui apparaissent alors parfaitement homogènes, ou présentent à
la place que devraient occuper les coceus des parties brillantes qui ont tout
à fait la forme de coccus. » Il ne s’agit sans doute, dans cette description,
que d’un effet de mise au point. Si l'enveloppe et ce coceus sont inégalement
réfringents, on doit, suivant les cas, voir le coccus clair sur un fond gris
ou le coceus noir sur un fond elair.

Sur la gélatine, la gélose et le bouillon, les capsules disparaissent pour
reparaître si on reporte la culture sur le sérum de sang.

Ce coccus est pathogène pour la souris, le lapin et le cobaye. Son inocu-
lation sous-cutanée à la souris provoque un gonflement et une infiltration
séreuse du tissu conjonctif. Parfois, ce gonflement et cette infiltration
gagnent de proche en proche, et sont suivis d’une infection générale qui
amène la mort à bref délai. On retrouve le coccus non seulement dans l’in-
filtration séreuse du tissu conjonctif, mais encore dans le foie et la rate de
la souris morte. Mais ces cas aigus sont rares. D'ordinaire il se forme au
point d'injection des foyers purulents, avec métastases dans le foie et ail-
leurs, qui gardent longtemps le microbe à l’état vivant.

Ce qui est plus important que ces inoculations sur la souris, c'est que
M. Poels à pu infecter à l’aide de son coccus deux chevaux bien portants.

Sur l’un on a injecté dans le larynx une culture de 5° génération du
coccus dans du bouillon. L'animal a eu l’inflammation de l’arrière-bouche
et le gonflement des ganglions supérieurs.

Sur un poulain âgé de 30 mois, on a injecté dans les cavités nasales,

44 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

après y avoir fait quelques piqûres, une culture de 6e génération sur du
sérum de sang de cheval, mélangée à 10 grammes de bouillon. En même
temps, on inclinait la tête de l'animal, de façon à amener en contact le
liquide d’inoculation avec la muqueuse du nez et de l’arrière-bouche. Ce
poulain présenta le coryza caractéristique avec gonflement et formation
d’abcès dans les ganglions du cou. Dans le mucus nasal et le pus des gan-
glions on retrouvait le eoccus. Il semble donc qu’il n’y ait pas de doute à

avoir sur la question de cause,
Dx.

J. Japassonx. Sur la connaissance du rouge de choléra. Breslauer Aert:l.
Zeitschr, nos 10 et 17, 1887.

L'article de M. Bujwid, qu'on trouvera dans les Mémoires originaux de
ce numéro des Annales, résume bien l’état actuel de la science au sujet du
choléra-roth ou rouge de choléra. Ce rouge est une combinaison d'indol et
d'acide azoteux que l’on obtient plus hâtive etplusabondante avec le bacille du
choléra qu'avec d’autres bacilles très analogues à celui du choléra pour leurs
formes ou leurs propriétés, parce que le premier développe à la fois, dans les
cultures, l’indol et l'acide azoteux nécessaires à la formation du choléra-
roth. Il y à des bacilles qui ne produisent que de l'indol, et qui ne donnent,
dès lors, la réaction rouge qu'avec un acide souillé de produits nitreux. Le
bacille de Finkler-Prior donne à la fois de l'indol et un nitrite, et pourrait
être confondu avec le bacille du choléra s’il n'était toujours, sous ce point
de vue, beaucoupen retard sur lui. Le bacille du choléra est donc jusqu'ici le
seul qui puisse, dès les premières heures après l'ensemencement, donner la
réaction du choléra-roth, qui se trouve être ainsi caractéristique pour lui,
à la condition de faire intervenir la question de temps.

En dehors de sa valeur pratique, cette réaction a une importante géné-
rale ; elle peut servir à caractériser la présence de l'indol, c'est-à-dire d'une
substance qui, comme le scatol, le glycocolle, la leucine, la tyrosine, est
un des produits de dislocation de la matière azotée dont se nourrissent
certains microbes. Nous ne savons pas encore grand’chose sur la forma-
tion de ces substances, dont le rôle nous apparaît pourtant de plus en plus
comme capital dans l'histoire des relations d'un microbe avec l'animal
envahi. On avait été conduit peu à peu à attribuer à ces produits d'éli-
mination du microbe quelques-uns des symptômes de la maladie ou de la
mort à laquelle il préside. Le remarquable travail de M. Roux, inséré
dans le dernier numéro de ces Annales, nous les montre en action dans les
questions de vaccination ou d’immunité. Il n'est donc pas inutile d'insister
un peu sur cette réaction du choléra-roth, et nous allons profiter pour cela
d'un Mémoire fait par M. Jadassohn à l'instigation de M. Neisser, et dans
lequel nous trouvons, en outre de la confirmation de faits antérieurement
connus, quelques nouveaux résultats appartenant à l’auteur.

Il débute par un court historique de la question. C'est Poehl qui a découvert
en 1886 ! la coloration rouge des cultures de bacilles du choléra sous l’in-

1. Bar. d. d. chem. Gesell.,t. XIX, p. 1162.

REVUES ET ANALYSES. 45

fluence des acides. Cette réaction, oubliée, fut retrouvée l'année suivante par
O. Bujwid !, et étudiée : par Brieger? d’abord, qui l'envisagea surtout au
point de vue chimique, puis par Dunham # qui a surtout recherché les con-
ditions dans lesquelles elle se produit. Ce sont ces conditions que nous
allons résumer en prenant pour base le travail de Dunham et celui de
M. Jadassohn qui le complète à divers égards.

Ces conditions peuvent se résumer sous les chefs suivants :

a. Nature de l'acide. — L'acide nitrique, l'acide chlorhydrique recom-
mandé à juste titre par Bujwid, et l'acide sulfurique employé par Dunham et
Brieger ne sont pas les seuls à pouvoir donner la réaction On l'obtient
aussi en traitant la culture de bacilles du choléra par les acides bromhy-
drique, phosphorique, tartrique, lactique, oxalique, mais non par les
acides acétique et formique. Ce sont les trois premiers acides qui valent
pourtant le mieux, et parmi eux l'acide chlorhydrique qui ne jaunit pas la
préparation comme le fait l'acide azotique, ou ne la noireit pas comme le
fait quelquefois l'acide sulfurique. À

b. Nature du milieu. — Dunham avait trouvé que la réaction était beau-
coup plus prompte et plus belle quand le milieu nutritif contenait de la pep-
tone. D'après Jadassohn, on l'obtient encore, mais dans un temps
un peu plus long, et avec une intensité un peu plus faible, avec des milieux
albumineux ne contenant pas de peptone, tels que ceux qu'on obtient en
stérilisant à la chaleur une solution très étendue d’albumine d'œuf, ou bien
encore en se servant de sérum de sang. Avec le lait ou le bouillon de veau,
les bacilles se développent très bien, mais la réaction ne réussit plus. IT en
est de même avec des cultures dans l’eau ou dans l’eau gélatinisée, qui se
font assez bien, comme on sait, mais ne se colorent pas par l'acide chlor-
hydrique. Avec une culture de gélatine-peptone ou de gélose-peptone, au
contraire, huit à dix heures après l’ensemencement, on peut, en versant de
l'acide chlorhydrique à la surface, voir une teinte rouge qui, d'abord confi-
née dans les couches supérieures occupées par les microbes, descend peu à
peu jusqu'au bas du tube, dans la portion qu'ils n'ont pas encore
envahie, La matière qui donne cette couleur est done une substance diffu-
sible.

L'ensemble de ces résultats est assez d'accord avec ce qu'on aurait pu
prévoir d'avance, en sachant que l’indol est nécessaire à la réaction. Cet
indol est un dérivé encore assez compliqué de la matière albuminoïde. On
comprend done que les bacilles du choléra en fabriquent aux dépens de l’al-
bumine ou des peptones qui en sont très voisines, mais n’en fournissent
pas avec les matériaux du bouillon ou les matières organiques qu'ils
trouvent dans l'eau. On comprend aussi qu’ils mettent plus de temps à
arriver x cet indol avec l'albumine d'œuf qu'avec les peptones beaucoup
plus assimilables.

1. Une réaction chimique des bacilles du choléra. Zeitschr. f. Hyg., 1887, p. 52.

2. Sur le tétanos traumatique, avec des remarques sur le rouge de choléra
Deuts. med. Wochenschr, 1878, nes 15 et 22.

3. Sur la réaction chimique des bactéries du choléra. Zeitschr. f. Hyg., 1887,
t. II, p. 337.

46 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

c. Présence de l'oxygène.— Le bacille du choléra n’a pas un besoin absolu
d'oxygène. Quand on lui ménage l'air, il pousse seulement un peu plus
lentement. Il se multiplie par exemple assez bien dans un milieu nutritif
recouvert d'une couche d'huile, mais même après plusieurs semaines, il ne
donne aucune réaction de choléra-roth. Ceci est plus inexplicable. La for-
mation d'un nitrite, nécessaire pour cette réaction, ne peut s’accomplir
que dans un milieu réducteur, et, 4 priori, il semblerait au contraire que
c’est quand le bacille est privé d'air qu'il doit donner la réaction la plus
intense.

d. Pureté des cultures. — Quel effet peut produire le mélange dans une
culture du bacille du choléra avec une espèce différente ? Pour étudier cette
question complexe et délicate, M. Jadassohn emploie l'ingénieux procédé
suivant. Il stérilise une culture de bacille du choléra donnant la couleur
rouge avec les acides, y ensemence un autre mierobe, et constate après deux
ou trois jours que ces cultures ne se colorent plus avec les acides chlorhy-
drique et sulfurique, mais prennent leur ancienne teinte avec l’acide nitrique.
Il a pu faire cette constatation avec plusieurs microbes qui, eux-mêmes, en
cultures isolées, ne se colorent pas par l'acide nitrique.

On obtient le même résultat en faisant des cultures simultanées de
bacille du choléra et d'autres microbes. L'auteur semble vouloir conclure
que la coloration par l'acide nitrique ne peut pas être assimilée à celles que
donnent les acides sulfurique et chlorhydrique. Mais on peut aussi s’expli-
quer ces résultats en admettant que le microbe ensemencé avec le bacille ou
après le bacille détruit les nitrites qui rendent possible la réaction par les
acides chlorhydrique et sulfurique, et que réintroduit l'acide nitrique ajouté,

A cette question de la pureté des cultures vient se rattacher celle de
savoir si le choléra-roth est, ou non, caractéristique des bacilles du cho-
léra. Sur ce point, M. Jadassohn est d'accord avec M. Bujwid, au travail
duquel nous renvoyons. Quant à savoir s’il y a beaucoup d'espèces capables
de communiquer à leurs milieux de culture la propriété de rougir sous
l'influence de l’acide nitrique ou d'un mélange d’acide nitrique et d’un autre
acide fixe, c’est une question qui est encore trop peu élucidée pour que nous

croyions devoir l’aborder ici.
Dx.

A. CeLui. Quelques-unes des propriétés du virus rabique, Bull. d. R. Acc.
med. di Roma, fasc. 8, 1886-1887.

La municipalité de Palerme a récemment créé une station de vaccina-
tion antirabique dans laquelle A. Celli a étudié le degré de résistance du
virus rabique vis à-vis de certains agents. Ses expériences confirment
quelques-uns des résultats déjà connus depuis les classiques travaux de
M. Pasteur (insensibilité au froid, sensibilité à la lumière) et en ajoutent
d’autres dont voici le résumé :

La virulence d’une émulsion de moelle rabique disparaît après une heure
passée à 500 et après 24 heures à 450. Elle résiste à un froid de — 160 à —
20° pendant environ 30 heures, à 60 heures de séjour dans de l'air comprimé

REVUES ET ANALYSES. 47

à 7 ou 8 atmosphères, tandis qu'elle est détruite après une exposition de
14 heures à la lumière, la température maximum de l'air au voisinage ayant
été de 37, et après une exposition de 24 heures, mais dans laquelle l’éprou-
velte contenant l'émulsion de moelle était contenue dans un vase plein
d'eau qui à atteint la température maxima de 350.

Pour essayer l'efficacité de certains agents chimiques, on à renoncé à
l'inoculation sous la dure-mère, trop rapidement mortelle, et on a choisi la
voie intrapéritoncale, après avoir constaté que 10 lapins, inoculés par cette
voie, sont tous morts de rage paralytique après une période d’incubation
qui, pour neuf d’entre eux, a été de 10 à 20 jours, et de 35 pour le dernier.
On à ainsi constaté l'inactivité complète de l'émulsion de moelle dans une
solution de sublimé à 1 p. 1000, injectée aussitôt faite, de l'émulsion dans
une solution d'hypermanganate de potasse à 2,5 p. 1000 et d'alcool à 50 et
à 90 degrés, injectées après 24 heures. L'émulsion dans de l'alcool à 250,
inoculée après 24 heures et après 3 jours, donne la rage après des périodes
d'incubation qui sont respectivement de 8et de 10 jours; inoculée après
> jours, elle s'est montrée inactive. L'alcool à 45 degrés n’a pas altéré la
virulence après un contact de 7 jours.

Enfin une émulsion rendue nettement acide aux papiers réactifs à l’aide
de 1 ou 2 gouttes d'acide acétique, ou nettement alcaline avec un petit
cristal de carbonate de soude, s’est montrée inoffensive, bien qu'inoculée en
volume de 5“ dans la cavité abdominale de deux lapins. Dx,

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES
DU À AU 31 DÉCEMBRE 1887.

Personnes traitées mortes de maladies non déterminées.

VazrA, Claude, 35 ans, de Salettes, commune de Sainte-Foy,
Haute-Loire, mordu le 8 novembre par son chien, reconnu
enragé par M. Gire, vétérinaire. Trois morsures, l’une sur le
bord interne de la main, près du petit doigt, les deux autres à
la paume de la main. Toutes ont saigné et ont été cautérisées
superficiellement au fer rouge. Traité du 13 au 27 novembre.

Le 17 décembre, Valla, après avoir beaucoup travaillé
dehors par un temps très froid, a été pris du mal de gorge avec
difficulté d’avaler, il souffrait d’une dyspnée très forte. Ces
symptômes disparurent complètement après l’application de
sinapismes. Le lendemain Valla paraissait remis, lorsqu'il tomba
en syncope et mourut subitement, le 20 décembre.

Valla n’a été vu par aucun médecin, les renseignements
précédents ont été fournis par le maire du Chambon.

48 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — DÉCEMBRE 1887

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A B C
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Morsures à la tête ( simples ..... »| 4] | 3, _|>| 3) ñ
et à la figure multiples....| »| » 2 )] A Life
Cautérisations efficaces............ » 126 2 PI » »| » |»
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Cuutérisations efficaces. ........... ART ER RS » dIESSER
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Cuutérisations efficaces ............ LS 0 AS re ». | 452
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Pas de cuutémisation: 5-60 D| » | » [14 » SA EU SA
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MOTS UNESALENU ee CR re et D ee M) » » »| » »
Morsures multiples en divers points
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Cautérisations efficaces............ » 0 » RSR
— INEINCACES TE UE UE » LE CRAN)
Pas de cautérisation......... rer Lo Der » » RS
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MOTSURES ADN AN ER RME ENAEIEETE HSAMsSn 7 » » JE

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MOTALAGÉNERAT Ce PET be Le

4. Pour l'interprétation des termes et la signification des diverses colonnes du
tableau, se reporter aux statistiques précédentes, p. 95, 143 et 207, t. I.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 126 fois ; chats, 6 fois.

Le Gérant : G. Massox.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fiis.

19

2me ANNÉE. FÉVRIER 1888. N°

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

INMUNITÉ CONTRE LE CHARBON SYMPTOMATIQUE CONFÉRÉE
PAR DES SUBSTANCES SOLUBLEN,

PARLE ER OGU

Dans le numéro de décembre 1887 de ces Annales, nous
avons montré, M. Chamberland etmoi, qu'ilest possible de donner
aux cobayes l’immunité contre la septicémie aiguë en leur injec-
tant des quantités suffisantes de sérosité septique ou de culture
de vibrion septique, complètement dépourvues d'organismes
vivants.

Après avoir fait cette preuve pour lasepticémie, il était naturel
de la tenter pour le charbon symptomatique. Ces deux maladies
sont en effet très voisines ; les microbes qui les causent sont
tous deux anaérobies, et les lésions qu'ils produisent dans les
muscles et le tissu cellulaire des animaux sont très analogues.

MM. Arloing, Cornevin et Thomas, auxquels nous devons
presque toutes nos connaissances sur le charbon symptomatique,
ont montré que cette affection ne récidive pas d'ordinaire, et que
l’on peut conférer l’immunité contre elle par des inoculations
préventives de virus atténués ‘. De plus, le charbonsymptomatique
est inoculable aux cobayes, ce qui fait qu'il est facile d'expéri-
menter sur cette maladie.

Les savants expérimentateurs de Lyon ont découvert que le

1. Voir le Charbon symptomatique du bœuf, par MM. Arloing, Côrnevin et
Thomas, 2° édition, 1887.

rS

50 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

charbon symptomatiqne est causé par un microbe spécial bien
différent de celui de la fièvre charbonneuse, et auquel ils ont
douné le nom de Bacterium Chauvaæi. Cet organisme micros-
copique se rencontre surtout dans les tumeurs musculaires qui
caractérisent cette espèce de charbon, et dans l’œdème qui les
entoure. Il s'y trouve sous forme de bâtonnets mobiles, souvent
munis d'une spore à une des extrémités. Les bacilles sporulés
ont parfois la forme d'un battant de cloche : ces apparences
rappellent celles du vibrion septique, mais le Bacterium Chauvæi
se distingue nettement par son action sur les animaux. Il est
inoffensif pour le lapin, les poules, le cheval, le porc, qui sont
tués par le vibrion de la septicémie.

Le microbe du charbon symptomatique se cultive à l’abri de
l'air dans le bouillon de poule et de veau légèrement alcalins *.
Ses germes périssent lorsqu'on les maintient pendant 10 minutes
à une température humide de 1002.

Le bœuf et le mouton sont les animaux qui prennent le plus
facilement le charbon bactérien; le cobaye présente plus de
résistance à la maladie ; il ne meurt pas toujours à la suite des
inoculations faites avec la pulpe de tumeur charbonneuse.
MM. Arloing, Cornevin et Thomas ont fait connaître un mode
d'inoculation qui amène toujours la mort des cobayes. Pour
obtenir ce résultat, il suffit de délayer le virus dans une solution
d'acide lactique au 1/5°. Avec ce moyen d’épreuve, on n’a pas à
craindre de soumettre les animaux à des inoculations inefficaces
et de voir résister les cobayes de contrôle.

Lorsqu'on injecte dans la cuisse d'un cobaye le virus du
charbon bactérien délayé dans la solution lactique, le membre
ne tarde pas à gonfler, à devenir chaud et douloureux. Il ne peut
servir d'appui à l’animal, qui devient triste, hérissé, et meurt
souvent en moins de 24 heures. A l’autopsie le muscle dans le-
quel on a fait l'injection est rouge, gonflé, friable, les fais-
ceaux musculaires sont dissociés par des gaz et des épanchements
sanguins ; un œdème rougeâtre s'étend dans le tissu cellulaire
sous-cutané. Le Bacterium Chauvæi se trouve en abondance dans
le muscle, l'æœdème, la sérosité du péritoine ?.

1. Voir, pour ce qui concerne les caractères et la physiologie du Bacterium
Chauvæiï, le remarquable travail de MM. Arloing, Cornevin et Thomas.
2, Voir Arloing, Cornevin et Thomas, Loc. cit.

CHARBON SYMPTOMATIQUE. d1

La marche suivie dans celte étude est la même que celle qui
a étéexposée dans le Mémoire que nous avons publié en commun
avec M. Chamberland sur le vibrion septique. Pour donner aux
cobayes l’immunité pour le charbon symptomatique, nous leur
injectons, dans le péritoine, de grandes quantités de culture du
Bacterium Chauvæi, après avoir tué dans le liquide tout élément
vivant par le chauffage à 1159, ou encore après avoir séparé tous
les microbes par la filtration sur porcelaine.

Toute expérience dans laquelle on n’a pas la certitude absolue
qu'aucun élément vivant n’a pu intervenir pour produire l'immu-
nité ne saurait avoir de valeur pour la démonstration qui nous
occupe. C’est pourquoi nouspratiquonsla stérilisation des liquides
de culture à 115° dans l’autoclave. Ce procédé est assurément
brutal et peut faire perdre aux substances vaccinales leur activité ;
aussi, avons-nous choisi, pour établir la possibilité de la vaccina-
tion par produits solubles, des maladies comme la septicémie
pour laquelle la matière vaccinale est résistante à la chaleur.

Les cultures du charbon symptomatique dans le bouillon de
veau sont chauffées, après 15 jours de séjour à l’étuve, dans l’au-
toclave à 115°. Le liquide ainsi stérilisé est injecté dans la cavité
péritonéale des cobayes à la dose de 40 cent. cubes, comme nous
l'avons décrit dans le n° 12 de ces Annales (1°° année). Ces injec-
tions sont répétées trois fois, à deux jours d'intervalle. Les ani-
maux ainsi préparés résistent, le plus souvent, à l’inoculation,
faite dans les muscles de la cuisse, avec 1/5 de centimètre cube
de virus du charbon symptomatique délayé dans l'acide lactique
au 4/5°; tandis que les animaux témoins inoculés en même
temps succombeunt quelquefois en moins de 24 heures.

Nous citerons ici, à titre de renseignements, une de nos
expériences.

EXPÉRIENCE. — À 4 cobayes on injecte en 3 fois dans la cavité péritonéale
120 cent. cubes d’une culture du charbon symptomatique stérilisée à 1150 ; à
4 autres cobayes on injecte, dansle péritoine, en 3 fois, 120 cent. cubes de bouil-
lon pur. Trois jours après l'injection, tous ces cobayes sont inoculés dans la
cuisseavec 1/5° decent. cube du liquide obtenu en délayant de la poudre viru-

lente ! de charbon symptomatique dans la solution d'acide lactique au 1/5,
24 heures après, 3 des cobayes qui ont recu le bouillon pur sont morts,

1. Voir le livre de MM. Arloing, Cornevin et Thomas, pour la préparation de la
poudre de charbon symptomatique.

d2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

le quatrième succombe 30 heures après l'inoculation. Les cobayes préparés
ont eu un petit gonflement de la cuisse qui s’est rapidement dissipé, ils sont
restés en bonne santé.

Dans cette expérience, les cobayes de contrôle avaient reçu
dans le péritoine un volume de bouillon pur égal au volume de
culture stérilisée employée pourla vaccination des autres cobayes.
Il nous a paru nécessaire de nous assurer que le bouillon n'avait
pas par lui-même d'action préservatrice. Parmi les substances
que l’eau extrait des muscles, :l pourrait s’en trouver d’ana-
logues à celles produites par l’action des microbes, et qui seraient,
elles aussi, capables de donner aux animaux un certain degré
d’immunité. Dans l’état d'ignorance où nous sommes sur la
nature de ces substances vaccinales, il n’est pas déraisonnable
de faire une semblable supposition.

Il est évident que la quantité de culture injectée, nécessaire
pour produire l’immunité, varie avec les animaux et surtout
avec les cultures, qui peuvent être plus ou moins actives. Aussi,
dans ces expériences, esl-il préférable de préparer en une fois de
grandes quantités de cultures, pour ne pas avoir à déterminer à
chaque nouvel essai l’activité des liquides que l’on emploie.

Comme nous l’avens vu pour les cultures de vibrion septique,
la température de 115° paraît aussi modifier les subtances actives
des cultures de charbon symptomatique. Les liquides filtrés sur
porcelaine paraissent mieux agir que ceux qui ont été chauffés.
Il est à remarquer que les cobayes auxquels on injecte les cul-
tures stérilisées de charbon bactérien sont moins affectés que
ceux qui reçoivent les cultures de vibrion septique privées de
microbes, comme si les premières ne contenaient pas des pro-
duits aussi toxiques pour eux que les secondes.

Cette différence est encore plus marquée quand on emploie
la sérosité du charbon symptomatique comparée à la sérosité
septique ‘. La sérosité septique filtrée, injectée à la dose de
20°* dans le péritoine d’un cobaye, le fait mourir rapidement;

1. Pour préparer cette sérosité, nous enlevons sur les cobayes qui sont morts
du charbon symptomatique les muscles et le tissu cellulaire œdématié où Île
microbe s'est développé. Ces parties sont divisées dans une petite machine
à hacher, macérées dans la moitié de leur poids d’eau et pressées. Le liquide qui
s'écoule est filtré sur porcelaine. On obtient ainsi une sérosité rougeûtre, alcaline,
albumineuse, qui peut se conserver sans altération.

CHARBON SYMPTOMATIQUE. D3

une semblable quantité de sérosité de charbon symptomatique,
privée de microbes, rend le cobaye malade, mais ne le tue pas.

Il est facile de rendre les cobayes réfractaires au charbon
bactérien en leur injectant chaque jour, sous la peau, un centi-
mètre cube de sérosité filtrée. Au bout de dix à douze injections,
l'immunité est acquise, On voit que la sérosité de l'œdème du
charbon de Chabert se comporte absolument comm: la sérosité
septique. (V. ces Annales, n° 12,t. I.)

EXPÉRIENCE. — 4 cobayes recoivent chaque jour, sous la peau, { cent. cube
de sérosité de charbon symptomatique pendant 12 jours; 3 jours après, on les
inocule dans le muscle de la cuisse avec de la poudre virulente délayée dans
la solution lactique au 1/5°, en même temps que 3 cobayes neufs. 26 heures
après, les 3 cobayes témoins ont succombé. Les cobayes qui ont recu la
sérosité sont bien portants, leurs cuisses sont un peu tuméfiées. Le gonfle-
ment disparaît les jours suivants.

Ce nouvel exemple de vaccination par l'injection desubstances
solubles présente d'autant plus d'intérêt qu'il se rapporte à une
maladie qui se rencontre chez les animaux domestiques. Il serait
d'un très grand intérêt de répéter ces essais de vaccination sur le
moulon et le bœuf. Le moment de les entreprendre sera venu
lorsqu'on saura préparer les matières solubles vaccinales à
l’élat de pureté.

Les ressemblances qui existent entre le vibrion septique et le
Bacterium Chauvæi nous ont conduit à chercher si les cobayes
qui ont l’immunité pour la seplicémie l’ont aussi pour le charbon
symptomatique, et inversement si ceux qui ne prennent plus
le charbon bactérien résistent à la septicémie. Les cobayes
vaccinés pour la seplicémie succombent au charbon symptoma-
tique. Mais ceux qui ont été rendus réfractaires à cette seconde
maladie résistent souvent à l’inoculation du vibrion septique.

Cette vaccination d’une maladie par une autre nous paraît
un point intéressant sur lequel nous reviendrons dans un pro-
chain mémoire.

DE L'IMMUNITÉ CONTRE LE VIRUS DE LA FIÈVRE TYPHOIDE
CONFÉRÉE PAR DES SUBSTANCES SOLUBLES

Par MM. A. CHANTEMESSE Er FERNAND WIDAÏI.

L'immunité contre une maladie virulente, conférée par les
substances chimiques qui tirent leur origine des microbes, n’est
pas une idée tout à fait neuve, mais à cette idée 11 manquait jus-
qu'ici le fait nécessaire et suffisant : une démonstration expéri-
mentale.

Pour la première fois, dans le Mémoire de M. Pasteur sur le
choléra des poules, cette idée se trouve nettement exprimée.
M. Toussaint crut à tort qu'il tenait la démonstration de la vac-
cination par des produits solubles, car le sang charbonneux
chauffé à 55°, s’il donnait quelquefois l’immunité, contenait des
bactéridies vivantes. M. Chauveau attribua l’immunité des fœtus
de brebis charbonneuses à des substances chimiques, et non à
la pénétration des bactéridies dans leur sang. Les recherches de
Straus et Chamberland, confirmées par celles de Koubassoff et
d’autres savants, qui découvrirent la bactéridie vivante dans le
sang des fœtus de bêtes charbonneuses, enlevèrent aux expé-
riences de M. Chauveau les qualités d’une preuve irréfutable.

En 1886, Salmon rendit réfractaires au choléra Hog des
pigeons qu'il avait inoculés avec des cultures stérilisées du
microbe de celte maladie. L'expérience était peu concluante,
parce que le pigeon est doué d’une faible réceptivité pour ce
virus, et que le procédé de vaccination appliqué aux pores et aux
autres mammifères échouait complètement.

Récemment M. Charrin fit voir que les lapins qui avaient
reçu des cultures stérilisées du bacille de la pyocyanine de
Gessard, sans contracter l’immunité, étaient plus résistants que
les lapins non inoculés.

IMMUNITÉ CONTRE LA FIÈVRE TYPHOIDE. DD

Il manquait une expérience inattaquable qui montrât l’im-
munité donnée à une espèce animale très sensible à un virus,
au moyen des substances solubles sécrétées par ce virus.

Cette expérience et cette démonstration se trouvent dans le
Mémoire que MM. Roux et Chamberland ont publié au mois de
décembre 1887, dans les Annales de l'Institut Pasteur, sur l'im-
munité contre la septicémie,

Ce travail inaugure une ère nouvelle en bactériologie.

Dans la médecine humaine, quel rôle jouent les substances
solubles produites par les microbes pathogènes ?

Des travaux dans ce sens ont été publiés en France pour
le choléra par M. Bouchard, en Allemagne pour la fièvre typhoïde
par Brieger, Sirotinin, Beumer et Peiper.

Aucun auteur, à notre connaissance, n’a étudié expérimentale-
ment, dans un but de vaccination, le rôle des substances solubles
produites par le bacille typhique et séparées du virus vivant.

Depuis plusieurs mois nous avons entrepris cette étude et
nous en avions annoncé les résultats, en mai dernier, aux méde-
cins qui suivent les cours pratiques du laboratoire de M. Cornil.

Nous avions été amenés à cette recherche par un fait que
nous avons mentionné dans notre Mémoire publié dans les
Archives de physiologie au mois d'avril 1887.

La culture du microbe d’'Eberth, ensemencé par strie sur un
tube de gélatine incliné, reste assez étroitement limitée aux points
d'inoculation. Si au bout de quelques jours on enlève, sur un
espace de 2 centimètres, les colonies qui se sont développées, et
que l’on sème sur cette place mise à nu du bacille typhique très
vivace, ce dernier ne s’y développe pas. La première culture a
modifié au-dessous d’elle le milieu nutritif d'une façon assez puis-
sante pour qu’il soit incapable de nourrir de nouveaux microbes
de la même espèce. La gélatine semble en ce point « vaccinée ».

Nous avons tenté de répéter l'observation en faisant l'expé-
rience sur des animaux.

19 Les souris sont sensibles au virus typhique

Expérience. Trente souris blanches sont inoculées dans le
péritoine avec 4 gouttes d’un bouillon peptonisé ensemencé depuis
3 jours avec du bacille typhique virulent pris sur une rate

06 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

humaine, et laissé à l'étuve à 37°. Au bout de 36 heures, toutes
les souris étaient mortes. L’intestin était rempli de diarrhée
liquide, les plaques de Peyer un peu tuméfiées, la rate grosse.
La rate et la moelle des os contenaient des bacilles typhiques.

Cette expérience est semblable comme résultats à celles qui
ont été publiées par Fränkel et Simmonds, Seitz, Sirotinin,
Beumer et Peiper, etc., et nous-mêmes. Tous les auteurs s’accor-
dent sur ce point; le seul débat est le suivant : à quoi ont suc-
combé ces souris? ont-elles péri par infection typhique ou par
intoxication due à la ptomaïne produite par les bacilles dans le
bouillon ? Les uns admettent l'infection, les autres la rejettent.
lis disent qu'il est impossible d'assimiler cette maladie à celle de
la fièvre typhoïde de l'homme. Sa marche est trop rapide.

Nous croyons avec Fränkel et Simmonds, Seitz, K. Kilcher,
qu'il s’agit bien d’une infection. Tout d’abord, en pathologie
comparée, on ne peut demander une similitude complète entre
les symplômes présentés par l’homme et par les animaux atteints
de la même maladie. Qui songe à exiger que le cobaye ait une
pustule maligne quand il contracte le charbon de l’homme ?

En second lieu, les produits solubles fournis par les bacilles
qui vivent dans un bouillon sont, il est vrai, capables de faire
périr les souris avec des symptômes, une période de maladie,
et des lésions sensiblement pareilles aux précédentes, mais il
faut pour cela iuoculer une dose de bouillon 5 ou 6 fois plus forte.

A dose égale, minime, une culture stérilisée ne tue pas et une
cullure vivante tue. La cause immédiate de la mort, nous le
concédons volontiers, ce sont les substances chimiques élaborées
par le bacille, mais la dose de poison contenue dans deux gouttes
de bouillon n'est suffisante qu'à condition que le microbe
continue à vivre quelque temps dans le corps de l'animal pour
y fabriquer l’appoint de la substance toxique nécessaire pour
donner la mort. Or si le bacille vit dans le corps de la souris et
y élabore des poisons, cela suffit pour dire qu'il y a infection.

29 Les souris qui ont été préalablemeut inoculées avec du bouillon
privé de bacilles, mais dans lequel ont vécu des colonies typhiques,
résistent au virus virulent.

Expérience 1. — Le 20 mai 1887, 12 souris blanches re-
çoivent dans le péritoine un demi-centimètre cube d’un bouillon

IMMUNITÉ CONTRE LA FIÈVRE TYPHOIDE, 57

ensemencé depuis 3 jours avec du bacille typhique virulent,
et laissé à 370. Avant l'inoculation, le bouillon a été stérilisé à
l'autoclave à 120° pendant dix minutes, et il est privé de tout
germe vivant, ainsi qu'on s'en assure en semant un tube vierge.

Le 21 mai, les animaux reçoivent une même quantité de
culture vieille de 5 jours et stérilisée.

Les 22, 23, 24 et 25 mai, l’inoculation intra-péritonéale de
culture stérilisée est faite avec un 1/3 de cent. cube de bouillon
ensemencé depuis 6, 7, 8 et , jours.

Pendant le cours de ce traitement précipité, et difficile à sup-
porter par des animaux de petite taille, 4 succombent. 8 souris,
après avoir présenté des signes de malaise plus ou moins grands,
reviennent à la santé.

Le 30 mai, ces 8 souris traitées et 4 souris neuves sont in-
jectées dans le péritoine avec un demi-centimètre cube de culture
virulente développée depuis 3 jours à l’éluve et non stérilisée.

Le 2 juin, les 4 souris neuves étaient mortes et présentaient
à l’autopsie les lésions ordinaires.

Les 8 souris vaccinées étaient toutes vivantes et paraissaient
un peu malades. Une a succombé le 7 juin, une seconde le
29 juin. Leurs organes ne renfermaient plus de bacilles vivants.

Plusieurs de ces animaux vivaient encore à la fin de décembre.

ExpérieNcE I. — 5 souris blanches sont inoculées avec 1/4
de cent. cube de bouillon de culture typhique vieille de 3 jours,
et stérilisée. Elles résistent toutes. 5 autres souris sont inocu-
lées pour la première fois avec une culture de même origine,
vieille de 9 jours et stérilisée. Vingt-quatre heures après, 3 souris
avaient succombé sur les à.

Par conséquent la toxicité d’une culture typhique s'accroît
avec la durée de cette culture pendant les premiers jours.

Expérience INT. — Le 20 juin, 12 souris blanches recoivent
1/4 de cent. cube d’une culture stérilisée vieille de 3 jours.

Le 22, une même dose de culture vieille de 5 jours.

Le 24, une mème dose de culture vieille de 7 jours, et enfin,
le 26, elles sont inoculées avec une culture vieille de 9 Jours.

Trois ont succombé pendant la durée du traitement.

Le 1% juillet, les 9 souris traitées et 4 souris neuves sont
inoculées dans le péritoine avec un 1/4 de cent. cube de culture
typhique vieille de 3 jours, non stérilisée.

58 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Le 3 juillet, toutes les souris témoins avaient succombé ;
une seule des souris traitées était morte. Deux autres moururent
le 12 et le 20 juillet. Les survivantes restèrent bien portantes
pendant plusieurs mois.

ExPéreNce IV. — Le 5 janvier 1888, dix souris blanches
recoivent dans le péritoine 1/4 de cent. cube d’une culture
typhique vicille de 3 jours et stérilisée à l’autoclave.

Le 6 janvier, une souris était morte

Le 8 janvier les 9 survivantes reçoivent 1/4 de cent. cube
d'une culture stérilisée vieille de 6 jours.

Le 12, une des souris mourut.

Le 23, 5 des souris traitées et 5 souris neuves recoivent dans
le péritoine deux gouttes d'une culture virulente vieille de 6 jours.

Le 24, toutes les souris témoins étaient mortes.

Le 25, une des souris vaccinées succombe. Les 4 autres con-
tinuent à se bien porter.

Des expériences précédentes il découle quelques faits. Les
souris neuves résistentexceptionnellement à une dose déterminée
de culture typhique virulente. Les souris traitées préventivement
résistent dans la grande majorité des cas à la même inoculation.

Elles doivent cette immunité à la seule pénétration dans leur
organisme de principes chimiques solubles élaborés par les
bacilles typhiques.

La quantité de substance soluble contenue dans une culture
croît avec l’âge de celle-ci.

L'immunité n'appartient pas aux animaux pour quelques
heures ; elle est susceptible de persister pendant un assez long
temps, encore indéterminé (Expér. IV).

Quelle est dans nos expériences la dose suffisante de poison
pour donner l’immunité à une souris, sans dépasser la résistance
de celle-ci au poison? Quelle est aussi cette substance soluble ?

Nous avons étudié l’action physiologique de cette substance
sans la connaître complètement, et nous n'avons pas déterminé
le rôle d'un alcaloïde isolé dans les cultures typhiques par Brie-
ger, sous le nom de Typhotoxine. Ce que nous pouvons dire
cependant, c’est que la substance contenue dans les cultures, qui
donne une notable immunité contre le microbe virulent, paraît
bien être de celles que les bacilles fabriquent dans l'intérieur d’un

IMMUNITÉ CONTRE LA FIÈVRE TYPHOIDE. D9

organisme vivant. On peut en effet donner aux souris un degré
d'immunité sensiblement égal au précédent, en les inoculant
avec des doses extrêmement faibles d’abord, puis progressi-
vement plus grandes d’un virus virulent. La vie du bacille dans
leur organisme a peu à peu fabriqué la dose de poison qui suffit
à donner l'état réfractaire.

Mais dans la fièvre typhoïde comme dans toute autre maladie
infectieuse, l'état réfractaire n’est presque jamais absolu. On
peut bien théoriquement supposer une condition chimique de
l'organisme qui rende impossible le début d’une culture d'un
microbe, l’imprégnation par des produits solubles jouant cons-
tamment le rôle d’un antiseptique. Reste à savoir si une pareille
dose de substance toxique permettrait la vie normale des cel-
lules. Mais d'ordinaire, l’immunité n’est pas absolue et doit être
mesurée par un coefficient. Elle se compose en effet de deux
facteurs d'importance variable suivant les cas : 1° la résistance
des cellules ; 2° l'imprégnation par les produits de la vie d’un
microbe; on conçoit que si l’un quelconque de ces facteurs vient
à faiblir, les causes qui empêchaient le début d’une culture
disparaissent, et l'immunité fait place à la maladie.

Les substances qu'on injecte à des animaux aussi fragiles
que des souris, sont pour elles des poisons violents, et nous
ne pouvons qu'approximativement indiquer les doses utiles et
celles qui dépassent le but. De plus, notre méthode d’inocula-
tion intra-péritonéale d'une quantité de liquide relativement
considérable, est quelque peu brutale et dangereuse. Toutes
ces raisons font comprendre que le chiffre des animaux qui
survivent où qui succombent peut être un peu variable, suivant
la virulence des cultures et la main de l’expérimentateur. Mais
ce qui ne change pas, c’est le sens général du phénomène que
nous avons constaté : une dose de culture typhique qui tue
invariablement des souris saines, ne tue pas dans la grande
majorité des cas les souris qui ont absorbé préventivement des
produits solubles non vivants élaborés par le bacille typhique.
Celles-ci ont acquis l’immunité.

DE L'ACTION DE QUELQUES ANTISEPTIQUES ET DE LA CHALEUR
SUR LE BACILLE DE LA TUBERCULOSE,

Par M. A. YERSIN.

Chaque microbe se comportant d’une façon qui lui est parti-
culière en présence d'un antiseptique donné, le pouvoir antisep-
tique d’une substance chimique doit être étudié à part sur chacun
d'eux.

L'action des antisepliques sur les bactéries pathogènes est
surlout intéressante à connaître parce qu’elle nous fournit des
moyens de détruire les matières virulentes, et aussi parce qu'elle
peut nous donner des indications thérapeutiques.

Il faut donc, dans l'étude de l’action d'un antiseptique sur un
microbe, rechercher : 4° Quelle est la quantité. d’antiseptique
nécessaire pour faire périr le microbe dans un temps donné;
20 quelle est la quantité qu'il faut ajouter à un milieu nutriuf
déterminé pour empêcher le développement du microbe.

Dans cette note, nous ferons connaître l’action de quelques
antiseptiques sur le bacille de la tuberculose ; nous ne traiterons
que le premier des points dont nou$ parlions plus haut, à savoir:
déterminer quelles sont les doses d’antiseptiques qui tuent le
bacille tuberculeux dans un temps donné.

Parmi les travaux qui ont été faits sur ce sujet, le plus im-
portant est celui de MM. Shill et Fischer (Ueber die Desinfection
des Auswurfs des Phthisiker) paru en 1884, dans le deuxième vo-
lume des Mittheilungen ‘. La matière virulente employée par
MM. Shill et Fischer était des crachats tuberculeux qu'ils ino-
culaient à des cobayes après leur avoir fait subir l’action de l'an-
tiseplique étudié. Cette méthode répondait parfaitement au but
que s'étaient proposé les auteurs et leur a donné des résultats
importants dont l'hygiène a fait son profit. Cependant elie ne
permet pas une grande précision scientifique. Rien n'est plus
variable, en effet, que le nombre des bacilles contenus dans les

4. Miltheilungen aus dem Kaiserlichen Gesundheitsamte (2° vol. 1884).

BACILLE DE LA TUBERCULOSE. 61

crachats tuberculeux, et par conséquent rien n’est plus variable
aussi que la quantité de virus inoculée aux animaux. La résis-
tance des bacilles aux antiseptiques varie aussi suivant les con-
ditions dans lesquelles s’est faite leur culture, selon qu'ils sont
jeunes ou vieux, qu’ils renferment des spores ou qu'ils en sont
privés. De plus, la réaction des sels métalliques sur les crachats
est complexe, une partie de la substance active se combine à la
matière organique et n’agit pas sur les bacilles. Enfin, l’inocu-
lation aux cobayes nous fait bien connaître si les bacilles sont
capables de donner, après l’action de l’antiseptique, la tubercu-
lose à ces animaux, mais lorsque ceux-ci restent en bonne santé,
elle ne nous permet pas d'affirmer que tous les bacilles inoculés
avaient été tués. Sans parler de la réceptivité pour la tuberculose
qui n’est pas la même chez tous les cobayes, il faut remarquer
que les bacilles modifiés dans leur vitalité, par l'action passagère
d'un antiseptique, peuvent se montrer inoffensifs pour un animal,
sans avoir perdu pour cela le pouvoir de se cultiver de nouveau
dans un milieu approprié où ils reprendront peut-être leur
virulence. Outre les bacilles de la tuberculose, les crachats ren-
ferment d'autres organismes microscopiques qui peuvent, s'ils
n’ont pas succombé à l’action de l’antiseptique, rendre incertain
le résultat des inoculations. Nous avons täché d'éviter toutes ces
causes d'incertitude. |

Pour que toutes nos expériences soient aussi comparables
que possible entre elles, nous avons faitagir les antiseptiques sur
des bacilles cultivés de même âge et de même virulence. Après
leur contact avec l’antiseptique, nous éprouvions la vitalité des
bacilles, non plus en les inoculant à des cobayes, mais en ies
semant sur un milieu nutritif favorable. Les perfectionnements
que MM. Roux et Nocard ont apportés dans la culture du bacille
de la tuberculose ont rendu ces expériences faciles; elles peuvent
être multipliées et donnent des résultats très constants.

Voici la technique que nous avons suivie : avec une eflilure
de verre, nous prélevons une petite parcelle de la couche blan-
châtre formée par les bacilles à la surface d’un tube de gélose
glycérinée ensemencé 15 jours auparavant‘. L'effilure chargée

1. Les bacilles de ces cultures présentent déjà des spores. Une parcelle de

cette couche blanchâtre, uniquement composée de bacilles, portée sur du papier de
tournesol, donne une réaction légèrement alcaline.

62 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de bacilles est plongée dans un lube à essai qui contient la
solution antiseptique. Après un temps déterminé, on fait une
prise dans le dépôt au moyen d'un tube effilé, et on la fait tomber
dans un tube à essai plein d’eau distillée, stérilisée. Quelques
heures après on puise de nouveau cette semence bien lavée
pour la porter dans un flacon de bouillon de veau peptonisé
glycériné, que l’on met à l’étuve à 39°.

En opérant ainsi, les bacilles sont seuls soumis à l’action de
l'antiseptique, pendant des temps variables, sans qu'il y ait
d'action secondaire de l’antiseptique sur les milieux de culture.

Il serait fastidieux pour le lecteur de rapporter ici tous les
chiffres relevés dans les nombreuses expériences que nous
avons faites. Le tableau suivant résume les résultats obtenus
avec les antiseptiques les plus employés.

Les proportions indiquées dans la seconde colonne le sont
en millièmes en volumes pour les liquides, en millièmes en
poids pour les solides. La troisième colonne, marquée A, donne
les durées de contact du microbe et de l'antiseptique pour les-
quelles fous les germes ne sont pas tués; la colonne B les
durées d'actions suffisantes pour tuer tous les germes.

ANTISEPTIQUES. Millièmes, A. B

Acide phénique . . .. 0 — 30 secondes
— HONTE 10 SEE 1 minute

Alcoolabsolu 40e 1000 _ Div 14;
Ether iodoformé. . . .| 10 = D PSE
ÉTRErA LNARS Ress 1000 5 minutes 1014:
Bichlorure de mercure. 1 Due 10 id.
TAPMOI- EE EURE 3 9 heures 2 heures
Eau sat. de créosote. .| — 1 heure ra

id. naphtolf.| — init: FE
Acide salicylique. . .. 2,9 ds id: 6 heures
Acide borique . . . .. 40 12 heures FA

Les bacilles qui ont subi l’action de l’antiseptique se cul-
tivent d'autant plus lentement que l’antiseptique est plus éner-
gique, et que son action a été plus prolongée.

BACILLE DE LA TUBERCULOSE. 63

IT

Dans une autre série d'expériences, nous avons déterminé la
température à laquelle sont tués les bacilles de la tuberculose.
Nous avons étudié la résistance à la chaleur des bacilles tuber-
culeux sans spores et des bacilles sporulés ‘.

Pour avoir des bacilles tuberculeux privés de spores, nous
avons pris de la pulpe de la rate de lapin mort à la suite d’une
injection intraveineuse de culture de tuberculose sur gélose
glycérinée. MM. Roux et Nocard ont montré que lorsqu'on in-
jecte ainsi dans les veines des lapins des bacilles cultivés par
leur méthode, les animaux succombent très rapidement (15 à
20 jours) à une tuberculose infectieuse généralisée. La rate est
très augmentée de volume, et elle contient une quantité énorme
de bacilles qui sont aussi en grand nombre dans la moelle des
os. Cependant dans aucun organe on ne voit de tubercules
appréciables à l’œil; la marche de Ja maladie a été si rapide que
les tubercules proprement dits n’ont pas eu le temps de se
former.

Dans ces formes de tuberculose infectieuse, les bacilles sont
très homogènes, se colorent également dans toutes leurs parties,
et ne présentent pas l'aspect granuleux des bacilles des crachats.
On aspire dans des tubes effilés un peu de la pulpe d’une rate très
riche en bacilles, et, après avoir fermé ces tubes à la lampe, on les
plonge dans un bain-marie dont la température est bien réglée.
Après chauffage pendant un temps déterminé, on sème la
pulpe dans un bouillon glycériné. La quantité de matière chauf-
fée est ainsi très petite, et comme elle est contenue dans une
effilure de moins de un demi-millimètre de diamètre, elle prend
rapidement la température du bain-marie et est chaulflée égale-
ment dans tous les points.

Voici les résultats que nous avons obtenus : Les flacons en-

1, Nos connaissances sur les spores de la tuberculose sont encore fori incom-
plètes. Les spores, dans les bacilles qui ont servi à nos expériences, apparaissaient
non pas comme des granulations plus ou moins irrégulières et prenant fortement
la matière colorante, mais bien comme des spores véritables à contours nets, au
nombre de une ou deux par bacille, trois au plus. Ces spores sont particulière-
ment nettes dans les cullures sur gélose glycérinée âgées de quelques semaines, et
aussi dans les cultures d'nn bouillon glycériné albuminé,

64 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

semencés avec les bacilles chauffés à 55° pendant 10 minutes ont
donné une culture après 15 jours. Ceux ensemencés avec les
bacilles portés à 60° pendant 10 minutes se sont peuplés après
37 jours. Enfin les bacilles chauffés à 70° pendant 10 minutes
n'ont pas donné de culture.

Les bacilles sporulés qui ont servi à la seconde série d’expé-
riences venaient d’une vieille culture dans bouillon glycériné
légèrement alcalin. Beaucoup d’entre eux présentaient des spores
très nettes; nous les avons chauffés dans un tube eflilé, pendant
10 minutes, aux températures de :

550, 60°, 65°, 700, 75°, 80°, 85°, 90°, 100°

4

Au bout de 10 jours, les bacilles chauffés à 55° avaient donné
une culture dans le bouillon glycériné; ceux chauffés à 60° ont
poussé après 22 jours; les bacilles chauffés au-dessus de 70°
n'ont donné aucun développement. Celte expérience, répétée un
grand nombre de fois, nous a toujours fourni les mêmes résultats.

Les bacilles de la tuberculose résistent donc pendant 10 mi-
nutes à une température de 609, et il est à remarquer que la
résistance des spores à la chaleur ne paraît pas supérieure à celle
des bacilles eux-mêmes.

Ces résultats sont en désaccord avec ceux qui ont déjà été
publiés sur la résistance des bacilles de la tuberculose à la cha-
leur. Ainsi MM. Shill et Fischer ont donné, dans un cas, la
tuberculose à deux cobayes avec des crachats restés pendant
15 minutes dans la vapeur d’eau à 100°. Dans d’autres expé-
riences, faites dans les mêmes conditions, les résultats ont été
négatifs. Les crachats, en nature ou additionnés d’eau, portés à
l'ébullition,se sont loujours montrés stériles, lorsque l’ébullition
a duré plus de 2 minutes. Dans un travail récent, M. Vælsh ‘
dit qu'après un chauffage simple ou répété à 100°, la semence
tuberculeuse est affaiblie, mais non morte. 1l faut remarquer
que les résultats que nousavons obtenus en chauffant des bacilles
de cultures dans des conditions bien déterminées sont très
constants, tandis qu'il n’en est pas de même dnns les expé-
riences où l'on a employé les crachats. Dans ce dernier cas,

1. Vœlsch. Contribution à la question de la résistance des bacilles tuberculeux.
Beilr. z. path. Anat., t. II, 1887. V. ces Annales, janvier 1888, p. 38.

BACILLE DE LA TUBERCULOSE. 65

l'acidité ou l’alcalinité de la matière chauffée a une grande in-
fluence sur la résistance des bacilles. Il en est de même du mode
de chauffage, il est évident que si l’on chauffe les crachats dans
un tube à essai, ils prendront moins rapidement la température
du bain-marie que s'ils sont chauffés par très petites quantités
dans une effilure très Lénue. En tenant compte des expériences
des auteurs que nous venons de citer, il semble que les bacilles
des cultures que nous avons employées soient moins résistants
à la chaleur que ceux que l’on trouve dans les crachats. -
Nous avons, sur les conseils de M. Roux, essayé d'appliquer
les données fournies par les essais précédents à l'isolement des
bacilles des crachats tuberculeux. La plupart des organismes
microscopiques qui accompagnent le bacille de Koch dans les
crachats sont tués à une température inférieure à 60°; en chaut-
fant à cette température des crachats riches en bacilles, et en les
semant ensuite dans du bouillon glycériné, on pouvait espérer
avoir des cultures pures de bacilles. MM. Roux et Nocard et
nous-même nous avons réussi à oblenir des cultures pures de
bacilles tuberculeux par cette méthode. Cependant, nous devons
dire qu’elle n'est pas à conseiller, parce qu’elle ne réussit que
rarement et seulement avec des crachats très riches en bacilles.
De plus la culture, lorsqu'on en obtient une, est si longue à se
produire qu'il est beaucoup plus court d'avoir recours aux mé-
thodes ordinaires pour se procurer des cultures de bacilles.

66 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

SUR LE MÉCANISHE DE L'IMNUMITÉ

Par M. A. CHAUVEAU.

Il y a longtemps que cette importante question me préoccupe.
Les travaux dont elle a été l’objet de ma part, depuis plus de
huit ans, sont connus ‘. On sait comment j'ai cherché à y expli-
quer la création de l’immunité acquise, c’est-à-dire la résistance
de l'organisme aux microbes infectieux qui s’y sont développés
une première fois : celte résistance serait le fait de l'imprégnation
des différents milieux organiques par le poison soluble ou toute
autre matière dissoute résiduelle, provenant de la première
évolution microbienne. La démonstration de ce mécanisme
repose, dans mesrecherches, sur deux faits principaux: 1° l’aggra-
vation ou l’atténuation des effets produits par cerlains agents
infectieux, suivant qu'on les inocule en grande ou en petite quan-

4. Consulter : 19 Comptes rendus des séances de l’Académie des sciences. — Des
causes qui peuvent faire varier les résultats de l’inoculation charbonneuse sur
les moutons algériens. — Influence de la quantité des agents infectants. — Appli-
cations à la théorie de l'immunité. Tome XC, 28 juin 1850.

Du renforcement de l’immunité des moutons algériens à l'égard du sang de
rate, par les inoculations préventives. — Influence de l’inoculation de la mère
sur la réceptivité du fœtus. Tome XCI, 19 juillet 1880.

Sur la résistance des animaux de l'espèce bovine au sang de rate et sur la pré-
servation de ces animaux par les inoculations préventives. Tome XCI, 18 octobre
1880.

Étude expérimentale de l’action exercée sur l'agent infectieux par l'organisme des
moutons plus ou moins réfractaires au sang de rate; ce qu'il advient des microbes
spécifiques introduits directement dans le torrent circulatoire par transfusions
massives de sang charbonneux. Tome XCI, 26 octobre 1880.

De l'atténuation des effets des inoculations virulentes par l'emploi de très petites
quantités de virus. Tome XCII, 4 avril 1881.

Sur le mécanisme de l’immunité. Tome CXVI, 6 février 1888.

20 Revue scientifique. — L'inoculation préventive du choléra. 1885. Tome 1,
page 558.

30 Revue mensuelle de médecine et de chirurgie. — De la prédisposition et de
limmunité pathologiques. 1878. Tome III, page 868 et 869.

49 Revue de médecine. — Sur la théorie des inoculations préventives, Mars 1887.

Tome VIT, page 177. Ce dernier travail rappelle la plupart de mes autres tra-
vaux, et donne la formule synthétique de leur signification,

SUR LE MÉCANISME DE L'IMMUNITÉ. 67

tiLé et qu'ils se présentent ainsi dans des conditions plus ou moins
favorables pour vaincre la résistance de l’organisme ; 2° l’acquisi-
tion constante de l’'immunité par les jeunes sujets nés de mères
inoculées du sang de rate dans les dernières semaines de la
gestation, et appartenant à une espèce qui ne se prèle que très
exceptionnellement au passage du bacille du sang de la mère
dans celui du fœtus.

Mes expériences sur l'influence du nombre des microbes
infectieux ont porté principalement sur le virus du sang de
rale.

J'ai montré que ce virus, inoculé à l’état de virus fort sur
des moutons doués de l’immunité naturelle, ou rendus plus ou
moins réfractaires par des inoculations préventives, a bien
plus de chances d’infecter et de tuer ces animaux, quand le virus
est abondant, que s'il est introduit en quantité très minime.
Plus tard, ce fait a été absolument confirmé par le résultat de
mes expériences sur deux autres virus beaucoup plus faciles
à manier : ceux du charbon emphysémateux et de la septicémie
gangréneuse.

J'étais autorisé, par ces expériences, à conclure qu'un microbe
infectieux, s'étant une première fois multiplié dans son milieu
naturel de culture, et l'ayant ainsi rendu rebelle à une culture
ultérieure, exerce cette action, non pas en épuisant le terrain,
en le privant de toutes les substances nécessaires au développe-
ment du microbe, mais bien en y laissant des substances nui-
sibles, plomaïnes ou autres matières solubles, qui imprègnent ce
milieu de culture et lui font subir certaines modifications incon-
nues d’où résulte sa stérilisation plus ou moins complète.

Aujourd'hui ces expériences ne sont plus contestées. On en
accepte les résultats et la conséquence doctrinale que j'en ai
tirée. Je ne veux done pas en parler de nouveau, malgré l'intérêt
que présentent un certain nombre de ces expériences qui n'ont
jamais été publiées.

Mais les expériences sur les agneaux qui acquièrent l'immu-
nité dans le ventre de la mère ont besoin d'être rappelées. J'y
ai toujours attaché une grande importance, car elles donnent
une démonstration directe du mécanisme de l’immunité qui se
déduit de mes recherches sur l'influence du nombre des agents

infectants.

68 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

L'idée directrice de ces expériences est bien simple. Dans les
cas courants d’immunilé acquise, l'organisme qui est devenu
plus ou moins réfractaire, à la suite d’inoculations préventives, a
été soumis à l’action simultanée des microbes pathogènes et des
produits solubles que ceux-ci engendrent. Je me suis dit que,
s’il était possible de conférer l'immunité, contre le sang de rate,
à un organisme dans lequel il ne pourrait pénétrer que ces pro-
duits solubles, la démonstration du mécanisme de l'immunité ne
laisserait rien à désirer. Or, d’après les recherches de Brauëll,
chez les brebis pleines atteintes du saug de rate, les bacilles
fourmillant dans le sang de la mère ne passent point dans le
sang du fœtus. Le placenta les intercepte, comme il arrête les
autres éléments figurés. I] n’y a que les matières solubles du sang
qui puissent traverser le placenta, envahir les humeurs et im-
prégner les lissus du fœtus. Si donc ces humeurs et ces tissus
devenaient inaptes à la prolifération du bacille charbonneux, il
faudrait bien admettre que la résistance qu'ils acquièrent est due
à l’action des matières solubles qui, du sang de la mère, sont
passées dans celui du jeune sujet.

L'expérience m'a enseigné qu'il en est ainsi ; il a été démontré
par mes recherches que les agneaux nés de mères inoculées du
sang de rate, pendant la gestation, deviennent fous plus ou moins
réfractaires à l’action du virus charbonneux. La preuve directe
cherchée a donc été faite.

Il est vrai qu'on en a contesté la valeur. Mais c’est faute
d'avoir tenu compte des conditions toutes spéciales dans lesquelles
mes expériences ont été faites. J'en suis peut-être aussi un peu
coupable. Comme je ne m'étais pas imaginé qu’on pourrait
appliquer à ces expériences les conclusions d’autres expériences
faites dans des conditions toutes différentes, je n'ai pas cru
devoir soutenir mes propres conclusions — qui me semblaient
absolument inattaquables — en donnantdes détails circonstanciés
sur la manière dont mes recherches avaient été conduites et les
précautions dont elles avaient été entourées. Le moment est venu
d’en dire ici quelques mots.

Mes expériences ont été commencées au milieu de l’année
1879 et se sont continuées presque sans interruption jusqu’à la
lin de l’année 1886. L’explication que j'en aï tirée, pour le
mécanisme de l’immunité acquise, a été publiée en 1880 (Comptes

SUR LE MÉCANISME DE L'IMMUNITÉ. 69

rendus, 19 juillet) après mes premières expériences. Toutes mes
expériences ultérieures ayant confirmé celles-ci d'une manière
éclatante, j'ai, dès 1884 (Revue scientifique, tome IT, page 358),
maintenu l'exactitude absolue des faits que j'avais fait connaître
plus de quatre ans auparavant, et qui élablissaient l'acquisition
de l’immunité par l’action de matières solubles empruntées par
le jeune sujet à la mère pendant la vie fœtale. J'ai réitéré cette
affirmation en 1887 (Revue de médecine, tome VIT, page 186). Il
me reste à montrer que j'y suis parfaitement autorisé.

Le faisceau de preuves accumulées, pendant ce laps de sept
années, comprend un nombre considérable d'expériences, dont
quarante au moins ont été consacrées à la démonstration de la
vaccination intra-utérine de l’agneau contre le sang de rate.
Voici dans quelles conditions ces expériences ont été faites. Celles
de 1879, 1880 et 1881, exécutées presque toutes sur des brebis
pleines algériennes, ont été exclusivement consacrées à l'étude
spéciale pour laquelle elles étaient instituées. Les autres, datant
de 1882 à 1886, ont été faites pour ainsi dire accessoirement, au
cours d'expériences inslituées dans un tout autre but. Des sujets
indigènes de l'espèce ovine étaient alors entretenus constamment
dans mon laboratoire, pour l'essai de virus charbonneux alténués
par diverses méthodes. Bon nombre de ces animaux se sont
trouvés être des brebis pleines arrivées aux dernières semaines
de la gestation. Elles subissaient, comme les autres sujets, les
inoculalions préventives, souvent réitérées et toujours suivies
de l'épreuve avec le virus fort. Quelques-unes mouraient du
sang de rate. On verra plus loin comment elles étaient utilisées.
Le plus grand nombre échappaient etdonnaient bientôt naissance
à des agneaux parfaitement bien portants. On n'a compté en
tout que deux avortements.

Comment se sont comportés, à l'épreuve de l’inoculation avec
du virus fort, les agneaux nés dans ces conditions? Pour s'en
bien rendre compte, il faut savoir ce qui arrive des agneaux pro-
venant de mères non inoculées pendant la gestation. Si les jeunes
sujets appartiennent à nos races indigènes, ils se montrent,
comme on le sait, encore plus impressionnables que les adultes
et meurent presque tous avec une grande rapidité. Ceux qui
proviennent de mères algériennes se comportent à peu près
comme les adultes. Il y en a qui succombent; c’est la petite

70 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

minorité. D'autres, en beaucoup plus grand nombre, présentent
des malaises évidents. Enfin quelques-uns ne paraissent pas du
tout malades. Mais chez ces derniers, comme dans les autres,
l'infection se manifeste par des signes évidents, plus ou moins
marqués, qui ne manquent jamais : un signe général, l'élévation
de la température; un signe local, la tuméfaction du ou des
ganglions lymphatiques les plus proches du point d’inoculation.
Comme j'ai toujours fait mes inoculations à l'oreille, par piqüres
sous-épidermiques ou par injection sous-cutanée d’une petite
quantité de virus, cesontles ganglions parotidien etpré-scapulaire
quiontprésenté, dans mes expériences, les signes de tuméfaction.

Or voici ce qui est arrivé, quand il s’est agi de l’acquisition
intra-utérine de l’immunité. Tous les agneaux nés de mères algé-
riennes ont complètement échappé à l'infection; aucun n'est
mort; aucun n’a éprouvé de malaises ; aucun n’a présenté d’une
manière sensible l'élévation de la température ou la tuméfaction
ganglionnaire. Chose plus remarquable encore, parmi lesagneaux
indigènes, plus nombreux que les algériens, il n’y en a pas un
qui ait succombé. La plupart, il est vrai, ont éprouvé des malaises
passagers, plus ou moins forts ; mais, en cela, ils se sont com-
portés comme les adultes inoculés préventivement et soumis
ensuite à l'épreuve du virus fort.

J'ai dit plus haut que le nombre des agneaux ainsi éprouvés
est de quarante, au moins. Si je n’en puis donner le chiffre
absolument précis, c’est qu'on avait fini par ne plus recueillir
les observations, tant était éclatante et nette la signification du
nombre considérable de faits enregistrés pendant les cinq pre-
mières années. Il est étonnant, en eftet, qu'aucun cas de mort
ue soit survenu à l'épreuve de l’inoculation avec du virus fort.
On n’est pas toujours aussi heureux quand on éprouve
les adultes vaccinés. Certes, j'aurais eu quelque cas de mort, sur
mes agneaux, que la preuve cherchée dans mes expériences
n'en aurait pas été amoindrie. Mais cet accident prévu ne m'est
pas même arrivé.

Ainsi donc, tous les agneaux nés de mères inoculées du sang
de rate pendantles dernières semaines de la gestation acquièrent
l’immunité. Par quel mécanisme? Est-ce bien celui dont j'avais
la vérification en vue en instituant mes expériences? L’immunité
résulte-t-elle de l’imprégnation du fœtus par des matières so-

SUR LE MÉCANISME DE L'IMMUNITÉ. 71

lubles puisées dans le sang de la mère ? Incontestablement, s'il
est vrai que les bacilles de celles-ci ne passent jamais ou ne pas-
sent qu'exceptionnellement dans le sang du fœtus. Examinons
ce point, rendu tout particulièrement intéressant et délicat
par les recherches de MM. Straus et Chamberland sur la loi
Brauëll-Davaine.

Quand j'ai commencé mes expériences sur le présent sujet,
je ne doutais pas du tout de l'exactitude de cette loi; elle m'était
garantie par le talent d'observateur de Davaine, si universel-
lement connu et apprécié. Aussi me suis-je borné à vérifier, sans
prendre aucune précaution particulière, le fait constaté par
Brauëll, sur la brebis pleine qui meurt du sang de rate, à savoir
que le sang du fœtus n’est pas inoculable, tandis que celui de la
mère communique toujours la maladie quand on l’inocule. Mais
mes premières expériences étaient à peine publiées que j'étais
amené à me demander, bien avant MM. Straus et Chamberland, si
l'arrèt du bacille charbonneux par le placenta est aussi absolu que
l'avait proclamé Davaine; et cela, sans penser que la constatation
de quelques exceptions püt affaiblirla valeur de la démonstration
que javais demandée à mes expériences.

Voici dans quelles circonstances j'ai été entrainé à cette
recherche. Toussaint s'était appuyé sur la vaccination intra-
utérine de l'agneau, prouvant l'existence d'une matière vaccinale
soluble, pour imaginer sa retentissante expérience de vaccination
préventive du mouton contre le sang de rate. En fait, il avait
réussi à vacciner des moutons avec du sang dans lequel il croyait
avoir tué tous les bacilles par le chauffage. Quoique ce mémorable
résultat eùt été obtenu par une application de la notion que je
venais d'introduire dans la science, la vaccination intra-utérine
des agneaux par une matière vaccinale soluble, je n’acceptai pas
l'interprétation de Toussaint. Il venait de s'installer pour plu-
sieurs semaines dans mon laboratoire. Nous discutâmes cette
interprétation. Je la rejetai, en raison de la petite quantité de
matière vaccinale que Toussaint avait employée sur ses moutons,
et parce que je ne pouvais admetire a priori que cette matière
fût capable de se reproduire, de se multiplier par elle-même.
Pour moi, c'était un produit de la vie bacillaire, etil aurait fallu,
pour l’introduire en quantité efficace dans l'organisme des mou-
tons à vacciner, injecter de grandes masses de sangcharbonneux

72 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

chauffé. Je soutins à Toussaint que le beau et important résultat
qu'il venait d'obtenir devait être attribué à la persistance d’un
certain degré de vitalité dans les bacilles soumis à l’action des-
tructive de lachaleur. Effectivement, M. Pasteur donnait, quelque
peu de temps après, la preuve éclatante de l'exactitude de cette
interprétation.

Mais celui-ci ne se rendit pas à mes objections. Il persista à
essayer de préserver les moutons avec de pelites quantités de
matière vaccinale soluble, prise non plus dans le sang des adultes,
mais bien dans celui des fœtus trouvés sur les brebis ayant suc-
combé au charbon. De cette manière il agirait, croyait-il, avec
du sang privé de tout bacille et pourvu seulement de la matière
vaccinale soluble, tout à fait naturelle, n'ayant pas subi les
atteintes possibles du chauffage. C’est alors que je lui fis une
nouvelle objection, qui a été l’origine des recherches que j'ai
entreprises pour contrôler sérieusement les expériences de
Brauëll et de Davaine. J’arguai de la possibilité de la présence,
dans le sang du fœtus, de quelques bacilles erratiques, qui auraient
pu exceptionnellementtraverserle placenta. J’engageai Toussaint
à faire d’abord des recherches dans le but de s’éclairer sur ce
point préalable. Justement les circonstances étaient très favora-
bles à ces recherches. Les animaux de l'espèce ovine qui étaient
alors soumis, dans mon laboratoire, à des essais d’inoculations
charbonneuses capables d'entraîner la mort se trouvaient être, en
assez grand nombre, des brebis pleines arrivées à une période
avancée de la gestation. Toussaint eut bientôt plusieurs occasions
d'essayer sur le cobaye, en employant une notable quantité de
matière, le sang de fœtus de brebis ayant succombé au sang de
rate.

Quels furent les résultats de ces expériences ? Il arriva juste-
ment que le sujet de la première expérience mourut du sang de
rate. Mais les sujets des troisexpériences subséquentes résistèrent
parfaitement. Aussi Toussaint, qui avait quelques raisons
légitimes de soupçonner que la première expérience n'avait pas
étéfaite dans des conditions de sécurité absolue, contreles chances
de contamination accidentelle par le sang du placenta maternel,
resta-t-il convaincu qu'il y avait lieu de donner suite à son pro-
jet. I ne le poursuivit pourtant pas, parce que, sur les entrefaites,
survint labrillante démonstration de M. Pasteur, sur le rôle,joué,

SUR LE MÉCANISME DE L'IMMUNITÉ. 13

dans l'expérience fondamentale de Toussaint, par les bacilles du
sang chauffé. L'idée de Toussaint n'en restait pas moins légitime
au fond; mais elle était en avance sur les faits et sur l’époque.

Je continuai toutefois, seul, les recherches propres à m'éclairer
sur la virulence du sang des fœtus de brebis mortes du sang de
rate à une période avancée de la gestation. Sept expériences
furent ajoutées à celles que j'avais fait faire à Toussaint. Cette
fois, ce furent des moutons qui servirent de sujets d’épreuve pour
la virulence du sang fœtal, la taille des animaux permettant alors
d'injecter sous la peau de plus grandes quantités de sang : un
centimètre cube. Or, un seul de ces animaux mourut du sang
de rate. Les autres ne devinrent pas malades.

Ainsi, en additionnant tous les cas d’essai du sang fœtal qui
ont été recueillis dans mou laboraloire, on en compte onze en
tout, et, sur ce nombre, le sang ne s’est montré virulent que deux
fois au plus. Qu'on rapproche cette proportion de celle des agneaux
qui acquièrent l'immunité dans le ventre de la mère (40 sur 40),
et l’on jugera si l’immunité conférée par la mère au fœtus résulte
de la contamination directe de l'organisme fœtal par le bacillus
anthracis, comme le pensent MM. Straus et Chamberland.

Si l’on s’en rapportait aux chiffres cilés ci-dessus, 7, au
plus, de ces 40 sujets qui ont acquis l’immunité pendant la vie
intra-utérine, auraient été exposés à être pénétrés — et encore
en quantlé presque inappréciable — par les bacilles du sang de
la mère. Je suis disposé à trouver celte proportion encore trop
forte. Il est probable, sinon absolument certain, que l’immunité
a été créée chez {ous ces agneaux sans qu’un seul bacille de la
mère ait pénétré dans le sang d'aucun d'eux. Et en effet, quand
l'évolution du virus charbonneux, fort ou atténué, sur les brebis
pleines, n’entraîne ni la mort, ni l'avortement, il y a les plus
grandes chances pour que le bacille, si rare, parfois même tout
à fait absent dans le sang de la mère, ne se trouve, ex aucun cas,
dans celui de fœtus. Je n’ai jamais réussi à en déceler l'existence
sur les fœtus de brebis inoculées du sang de rate, dans des con-
diions assurant la survie, et Luées au moment où l’on jugeait
arrivée la fin de la période aiguë de l'infection.

Je désire faire une dernière observation. Nous connaissons
des maladies infectieuses qui, chez la brebis pleine, se trans-
mettent au fœtus avec la plus grande facilité, avec tous leurs

74 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

caractères anatomo-pathologiques : par exemple, le charbon
symptomatique. Or, a-t-on jamais observé les lésions du charbon
ordinaire chez les fœtus de brebis mortes de cette maladie? En
ce qui me concerne, je n’en ai point rencontré, pas même sur les
fœtus dont le sang cardiaque a été trouvé virulent. On sait que
la lésion principale réside dans la rate, d'où le nom de sang de
rate (splenic fever des Anglais) par lequel on désigne le plus
communémentla maladie. Or, jamais, dans les nombreuses obser-
vations que j'ai été à même de faire, je n’ai rencontré la moindre
altération de la rate des fœtus. Cet organe était parfaitement
sain. J'en puis dire autant de tous les autres organes et en par-
ticulier des ganglions lymphatiques. C'estdoncune exagération de
prétendre que les jeunes peuvent prendre le sang de rate dans le
ventre de la mère. Ils ne contractent même pas la maladie rudi-
mentaire qui succède aux inoculations préventives avec des virus
atténués, chez les sujets qui vivent de leur vie propre. En sorte
que je me sens entraîné à considérer les rares agents infectieux
qui rendent quelquefois virulent le sang du fœtus comme des
bacilles erratiques, venus tous de la mère, et incapables ou peu
capables de se multiplier dans le jeune sujet. Il ne serait pas
impossible, en effet, que celui-ci fût imprégné par la matière
vaccinale, empruntée à la mère, avant que la multiplication des
bacilles, qui est toujours tardive, fût assez avancée pour créer des
chances de pénétration trans-placentaire.

Dans tout ce que je viens de dire, il n’y a rien qui tende à
iufirmer la valeur des expériences faites par MM. Straus et Cham-
berland, sur le même sujet, mais dans des conditions différentes
de celles où j'ai opéré moi-même.

Je n'ai plus qu’à tirer la conclusion de ce travail : mes expé-
riences sur la vaccination intra-utérine des agneaux ont bien la
signification que je leur ai donnée; elles démontrent que l'im-
munité acquise par ces agneaux, dans le ventre de la mère, est
le fait de la matière vaccinale soluble que celle-ci a cédée à son
produit.

Si j'en avais eu le temps, j'aurais ajouté quelques considé-
rations relatives aux expériences que j'ai faites en 1884 avec
M. Arloing sur la maladie du vibrion seplique. Ce sera pour une
autre fois.

VARIATIONS DE FORME CHEZ LES BACTÉRIES,
Par EE. WASSERZUG.

Les caractères morphologiques servent de base à toutes les
classifications en histoire naturelle, et, comme les êtres supé-
rieurs, les bactéries sont classées surtout d’après leur forme.
Or pour qu’un caractère puisse servir utilement dans une clas-
sification, il faut que les indications qu’on en peut tirer soient
toujours comparables entre elles. On ne pourra donc faire pré-
dominer les caractères morphologiques que si ces caractères
restent invariables. Le problème de l’invariabilité de la forme,
qui a été soulevé d’une façon générale pour tous les êtres vivants,
s’est surtout posé pour les infiniment petits, dont les dimensions
rendent l'observation difficile, et dont la structure très simple
prête davantage à la confusion. Chez les bactéries, ce problème
a reçu deux solutions très différentes

Pour Ferd. Cohn, qui essaya le premier, en 1872, de donner
une classification systématique des bactéries, la constance de la
forme ne faisait aucun doute. Il y avait lieu d'établir, chez ces
organismes, des espèces morphologiquement distinctes et aussi
nettement délimilées que chez les êtres supérieurs. Ces espèces
furent rangées dans quatre groupes différents, caractérisés
chacun par une forme spéciale : microcoque, bactérium, bacille
et spirille.

La classification de Cohn avait à peine paru, que Ray Lan-
kaster observa un microbe coloré, le Clathrocystis roseopersicina,
qui présentait dans les différents stades de son développement
les quatre formes établies par Cohn et regardées par lui comme
absolument distinctes. D’autres observations de Billroth, War-
miog, Klebs, ete., donnèrent lieu à une théorie toute différente
de celle de Cohn, qui fut soutenue et développée surtout par
Nægeli.

76 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Pour Nægeli, la forme est éminemment variable chez les bac-
téries. Chaque espèce peut, suivant les conditions du milieu,
prendre toutes les formes, depuis celle de microcoque jusqu'à
celle de spirille. L'espèce n'existe donc pas comme l'avait dé-
finie Ferd. Cohn. D'ailleurs, la fonction spécifique n'existe pas
davantage : forme et fonction varient également suivant les
conditions extérieures. Une mème bactérie transplantée dans
des milieux différents « peut successivement, dans le cours de
ses généralions, produire ici l'acidité du lait ou la fermentation
butyrique, ou l’altération des vins, ou la putréfaction des matières
albuminoïdes, ou la destruction de l’urée. et là engendrer la
diphtérie, ou le typhus, ou la fièvre récurrente, ou le choléra‘... »

Ces conclusions, inspirées visiblement par les idées darwi-
niennes, ne s'appuyaient malheureusement pas sur une expéri-
mentalion rigoureuse. [Il ne fut pas difficile aux partisans de
Cohn de montrer que les expériences fondamentales de leurs
adversaires étaient le plus souvent entachées d'erreurs. Aucun
d'eux, en effet, n'opérait ni même ne se souciait d'opérer avec
des cultures pures. Nægeli déclare d’ailleurs « qu’il est impos-
sible de faire sûrement des cultures pures avec les bactéries, tant
à cause de leur petitesse extrême que de leur dissémination
générale dans l'air et dans l’eau » *. Seul Lankaster avait opéré,
semble-t-il avec pureté; le choix qu'il avait fait d’une espèce
colorée rendait d'ailleurs le contrôle plus facile ; mais ii s'était
adressé à un organisme plus voisin des Nostocacées que des
Bactéries proprement dites, el il avait eu le tort d'appliquer d'une
façon générale à toutes les bactéries un fait qu’il n'avait observé
que sur une seule espèce d'organisme, et que, d’ailleurs, il n'avait
jamais pu reproduire chez une bactérie vulgaire.

Les erreurs d'expérience, dans lesquelles Nægeliet ses parti-
sans étaient le plus souvent tombés, contribuèrent pour beau-
coup à éloigner les esprits de la théorie qu’ils voulaient établir.
Toutefois les idées de Cohn sortirent un peu modifiées de ces
attaques. Si la plupart des auteurs admettent aujourd’hui, en
principe, la constance de la forme enseignée par Cohn, ils recon-
naissent cependant qu'une espèce peut parfois, dans des condi-
tions données, acquérir temporairement des formes anormales

4. NæGeur. Die niederen Pilze, ete. Munich, 1877.
2. Nxceur. Das Mikroskop, 2° édition, 1877, p. 644.

VARIATIONS DE FORME CHEZ LES BACTÉRIES. 41

(Involutions-formen). Ces formes anormales s'écartent d’ailleurs
très peu d’une forme constante et définitive qui finit toujours
par prédominer et qui sert à caractériser l'espèce. Au lieu des
quatre groupes établis primitivement, on n’en reconnaît plus
que trois: celui des microcoques, des bacilles et des spirilles.
Ces trois groupes sont du reste aussi nettement séparés les uns
des autres que l’étaient les anciens, et M. Gaffky déclare textuel-
lement à ce sujet !: « Il n’est personne qui puisse dire avoir vu
un spirille ou un spirochète provenir d’un organisme de forme
bacillaire ni un bacille d'un microcoque. »

Bien que chaque bactérie soit classée d’une façon exclusive
dans l’un des trois groupes qui vienent d'être indiqués, l’exis-
tence des formes d’involution élargit forcément les limites entre
lesquelles l'espèce peut se mouvoir. Ces formes d'involution
apparaissent d'ordinaire dans les cultures âgées ou en présence
des antiseptiques; autrement dit, elles surviennent à la suite de
modifications apportées dans le milieu primitif, soit par la vie
même du microbe, soit par l’adjonction préalable de certaines
substances étrangères. Jusqu'à quel point ces changements de
forme dépendent-ils des modifications du milieu, et dans quelles
limites peuvent-ils se produire ? D'une façon plus générale, quels
sont les changements apportés dans la vie d’un microbe par les
variations du milieu ? Pour aborder sérieusement ce problème,
il est de toute nécessité d’expérimenter avec des cultures dont
la pureté soit absolue. Afin d’avoir un contrôle plus facile de
cette pureté, nous avons choisi, pour faire cette étude, les
microbes colorés, qui se distinguent aisément par la coloration
qu'ils donnent à certains milieux. Nous avons d'abord étudié
parmi eux le bacille du pus bleu et nous avons montré récem-
ment * les variations que peut subir la fonction chromogène de
ce bacille sous l'influence des changements du milieu.

Ces variations ne sont du reste pas spéciales au Bacillus
pyocyaneus et il est facile de les reproduire avecd’autres microbes
colorés. Considérons en particulier un organisme bien connu, le
Micrococcus prodigiosus, nettement caractérisé tant par sa forme
que par sa coloration. Cohn, Schrotter, Gaffky et la plupart des

1. Miltheilungen aus d, k. Ges. amt., &. , p. 116.
2, Voir le n° 11, tome l'‘ de ces Annales.

18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

auteurs le considèrent comme le type des microcoques !, el le
décrivent comme formé de cellules isolées, sphériques, mesurant
0,4 à 0,62 de diamètre. D’après Flugge, ces cellules sont mobiles
et légèrement elliptiques quand on les observe à un très fort
grossissement, ce qui leur donne l'aspect d’un très court bacté-
rium qui du reste n’atteint pas 1v de long.

Cet organisme est surtout remarquable par la belle colora-
tion rouge caractéristique qu'il donne aux milieux solides sur
lesquels on le cultive d'ordinaire, pomme de terre, gélose, etc.
Avec la gélatine, qui est rapidement liquéfiée, cette coloration
n'apparait qu'assez tardivement. La matière colorante se forme
d'abord dans les couches superficielles exposées à l’action de
l'air, et ne gagne qu'au bout d'un temps plus ou moins long les
parties profondes. Mais cette coloration, si vive et si accusée avec
les milieux solides, disparait complètement quand on cultive
l'organisme dans les liquides neutres ou alcalins qui servent
d'ordinaire à la culture des microbes. Tout au plus voit-on par-
fois un léger cercle rosé se former sur la paroi intérieure du
ballon de culture un peu au-dessus de la surface du liquide. Les
générations successives dans ces mêmes milieux restent indéfi-
niment incolores. Cette absence de coloration s’observe surtout
quand la semence originelle provient d’une culture faite pendant
de nombreuses générations sur un milieu solide.

On peut obtenir toutefois des cultures colorées dans les
liquides; il suffit pour cela de faire une ou plusieurs cultures
dans un liquide très légèrement acide. Il importe peu dans ce
cas que l’on parte d’ane semence prise sur un milieu solide ou
dans l'un des liquides restés primitivement incolores. On finit
toujours par obtenir des liquides légèrement colorés en rose, et
la coloration se conserve alors quelle que soit la réaction du
liquide employé pour les cultures ultérieures. Il semble, d'après
ce qui précède, que les cultures successives faites sur les milieux
solides, en présence d'un excès d'oxygène, aient rendu les cel-
lules incapables de produire leur matière colorante dans d’autres
conditions, quand on les transporte par exemple dans un milieu
liquide où l'air est en moindre abondance, L'action plus ou
moins prolongée d’un acide, à dose très faible, suffit pour leur
rendre cette propriété colorante. Nous avons observé un fait

1. Voir Scaroren, Kryptogamenflora von Schlesien, LI, 2.

VARIATIONS DE FORME CHEZ LES BACTÉRIES. 19

analogue chez le bacille du pus bleu, dont la couleur est bien
plus accusée quand on le cullive en présence d’un acide. Cette
action des acides s’observe encore avec d’autres microbes colo-
rés, en particulier avec le bacille du lait bleu. Je possède de cet
organisme une culture sur gélose parfaitement colorée et con-
servée sur le même milieu depuis de nombreuses générations.
Ensemencé dans du lait, le bacille de cette culture s’y développe
très bien, mais sans donner la moindre trace de la coloration
bleue qui le caractérise habituellement. Il n’a pas fallu moins de
dix cultures successives dans un liquide acide pour lui rendre
dans le lait sa coloration bleue.

En s’en tenant, pour le Micrococcus prodigiosus, aux milieux
solides sur lesquels il produit très nettement sa matière colorante,
on peut éludier, comme nous l’avons fait pour le Bacillus pyo-
cyaneus, les variations de la fonction chromogène dans ces
milieux. L'emploi des mèmes procédés amène mème plus rapi-
dement que pour ce dernier organisme l'abolition durable de
celte fonction. Il est très facile de suivre pas à pas toutes les
phases du phénomène. Contrairement à ce qui se passe avec le
Bacille du pus bleu, la matière colorante du Micrococeus prodi-
giosus ne se répand pas, dans les cultures sur gélose, en dehors
des colonies formées, qui restent seules colorées. On peut donc
toujours déterminer sans peine combien il existe, dans une cul-
ture quelconque du microcoque, de cellules capables de repro-
duire la matière colorante. Il suffit d’ensemencer un certain
nombre de ces cellules à la surface d’un peu de gélose, contenue
par exemple dans un tube à essai, et de compter le nombre des
colonies colorées qui se sont formées. On peut s'assurer ainsi
que, dans une même colonie parfaitement rouge, venue sur
pomme de terre ou sur gélose, toutes les cellules ne sont pas
aptes à reproduire des colonies colorées. Le nombre des colonies
incolores est bien plus grand quand on s'adresse à des cultures
faites dans des liquides, surtout dans des liquides alcalins. En
choisissant de préférence les colonies incolores, et en faisant
alternativement des cultures sur gélose et dans des liquides
alcalins, on arrive à avoir très rapidement des cultures qui ont
perdu d’une façon durable leur fonction chromogène, tant sur
pomme de terre que sur gélose. Comme on le voit, l'emploi des
antiseptiques n’est même pas nécessaire pour arriver à ce résultat

80 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

que nous avons déjà obtenu précédemment avec le Bacillus pyo-
cyaneus. Tout ce que nous venons de dire n’est d’ailleurs que la
confirmation des faits que nous avons rencontrés chez ce der-
nier Organisme.

M. Schottelius est arrivé naguère à oblenir des cultures in-
colores avec le Micrococcus prodigiosus. I a employé pour cela
des cultures successives longtemps prolongées à 37° sur la
pomme de terre. Nous venons de voir qu’on peut les obtenir
beaucoup plus rapidement avec des milieux liquides : on peut
alors rester à des températures inférieures à 37°, qui conviennent
beaucoup mieux à la vie du microbe.

Comme la plupart des Bactéries, le #. prodigiosus possède
des formes d'involution. Ces formes anormales se produisent
souvent dans les cultures âgées, sur pomme deterre par exemple.
Quelques cellules grossissent beaucoup, se renflent tout en
reslant sphériques; et atteignent alors de 1 à 24 de diamètre,
ou bien s’allongent et prennent soit l'aspect de gros bâtonnets
soit l’aspect de levures, d’après l'expression de M. Schottelius
qui les a décrites". Mais les cultures récentes, tant sur les milieux
solides que dans les liquides neutres et alcalins. ne présentent
que la forme sphérique ou elliptique qui sert d'ordinaire à carac-
tériser cet organisme. |

Mais on peut aisément obtenir d'emblée des formes s’écar-
lant très notablement des formes normales; l'emploi des milieux
antiseptisés conduit rapidement à ce résultat et nous retrou-
verons ici les changements morphologiques que nous avons
déjà signalés avec le bacille du pus bleu ?.

1. Dans ses Recherches biologiques sur le M. prodigiosus (Leipzig 1887),
M. Schottelius compare un instant cet organisme aux levures et déclare (p.8)
que « son pouvoir de transformer le sucre en alcool et acide carbonique est vrai-
ment considérable ». II ne m'a pas été possible de vérifier ce pouvoir ferment
avec l'organisme que j'ai étudié; Je n'ai jamais pu constater la moindre trace
d'alcool dans les liquides sucrés où il avait vécu soit en présence du glucose
soit en présence du saccharose. Ce serait, Je crois, la première bactérie connue
qui donnât avec le glucose une vraie fermentation alcoolique comparable à celle
de la levure de bière. Du reste le microcoque que j'ai étudié ne donnait pas d'in
vertine avec le saccharose.

2. MM. Guignard et Charrin ont signalé chez le Bacille du pus bleu (Comptes
rendus, 12 décembre 1887) ces changements de forme se produisant sous l'influence
du naphtol, de l'acide borique et du bichromate de potasse, pour des doses déter-
minées de ces substances. Comme nous l'avons déjà fait remarquer dans notre
étude sur le Bacillus pyocyaneus, ces variations de forme peuvent être obtenues non

VARIATIONS DE FORME CHEZ LES BACTÉRIES. 81

Prenons, par exemple, du bouillon de veau auquel on a
ajouté une quantité d'acide tartrique relativement considérable
pour le M. prodigiosus, une dose de 4 à 5 décigrammes d’acide
par litre. Ensemençons-le avec une trace d'une culture prove-
nant d’une colonie bien colorée sur gélose. Au lieu de se faire
en abondance dans les 24 heures, le développement est alors
retardé de 3 à 5 jours, et, quandil s’est produit, l'examen micros-
copique montre un changement très considérable dans la forme
des cellules. Au lieu des microcoques isolés et sphériques, on
ne trouve plus que des bâtonnets de grandeur très diverse. Les
uns sont isolés, épais et ont de 2à 54 de long; le plus sou-
vent ils sont réunis en un filament qui peut être composé de 2 à
20 articles et davantage, séparés les uns des autres par un
espace clair dù à la présence d’une matière gélatineuse qui
entoure abondamment chacun des bacilles; ailleurs cette matière
gélatineuse disparait presque complètement, et les bacilles
s’allongent beaucoup de manière à se toucher et même à former
un très long filament continu qui s’enroule plusieurs fois sur
lui-même. Toutes les formes de passage existent entre ce fila-
ment très allongé et Le bacille court isolé.

Les bacilles sont presque toujours mobiles, qu'ils soient isolés
ou réunis, et il n’est pas rare de voir un filament de 30à40&
de long traverser avec de lentes ondulations le champ du mi-
croscope. Quand les filaments sont composés d'articles séparés,
ces mouvements leur donnent souvent l’aspect de spirilles. Ces
différentes formes ne s’observent bien qu'au début du dévelop-
pement, et dès le second ou le troisième jour les longs filaments
disparaissent peu à peu. Les articles bacillaires se raccourcissent
jusqu’à prendre la forme sphérique, et, quand ils restent réunis,
l’on obtient la forme décrite sous le nom de Staphylocoque.
Bientôt les articles se séparent et l’on revient à la forme micro-

seulement avec les substances que nous venons d'indiquer, mais avec un très grand
nombre d'antiseptiques. D'une façon générale il existe toujours, pour un antisep-
tique donné, une dose inférieure à la dose toxique et capable de produire des varia-
tions morphologiques. Mais comme la dose toxique varie, nous l'avons vu, pour
chaque antiseptique, avec la qualité de la semence employée, il en est de même
de la dose qui amène les changements de forme dont nous parlons. De plus ces
changements morphologiques sont tout à fait transitoires, et, quand on aandonne
la culture à elle-même, la forme primitive ne tarde pas à prédominer de nou-
veau.

nu

6

82 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

coque proprement dite, qui semble être ainsi la forme définitive
de l'organisme. A ce moment la réaction du liquide varie et,
probablement par suite de la formation de sels ammoniacaux
dus à la vie du microbe, le liquide cesse d’être acide et devient
même légèrement alcalin.

Qu'arriverait-1l si le développement se faisait dans un milieu
qui resterait constamment acide? Pour obtenir ce résultat, au
lieu d'abandonner la culture à elle-même, prélevons-en une
semence dès le premier ou le second jour du développement, et
portons-en une quantité très pelite dans un second milieu acide
identique au premier. Renouvelons ensuite ces ensemencements
dans les mêmes conditions, pendant un grand nombre de géné-
rations, de manière que le milieu de cullure reste continuelle-
ment acide. En prenant ces précautions, on ne tarde pas à voir
que les formes filamenteuses sont de plus en plus nombreuses à
mesure que les cultures se continuent, et que ces formes per-
sistent plus longtemps. Îl arrive enfin un moment où elles ne
disparaissent plus, même quand la culture est abandonnée à elle-
même et que le milieu a perdu sa réaction acide. On n’a plus
alors que des formes nettement bacillaires qui se conservent in-
définiment et ne se transforment plus en microcoques. Voici
done un moyen de fixer, dans un milieu donné, une forme
différente de la forme considérée comme normale; les microco-
ques ont fait place à des bacilles et à des filaments. En partant
d'une colonie rouge sur gélose, il m'a fallu quinze générations
successives pour arriver à ce résultat; il n’est pas douteux qu'en
continuant les cultures-<ans les mêmes conditions, je n'arrive à
faire prédominer les longs filaments enroulés et à faire disparaitre
même les bacilles courts.

Au lieu de conserver les milieux acides, revenons aux bouil-
lons alcalins : le retour à la forme primitive est alors beaucoup
plus rapide et beaucoup plus persistant. Cela n’a rien d'étonnant
si on réfléchit que les milieux acides, qui conviennent mal à la
vie du microbe, ne sont guère employés, et que toutes les cul-
tures sont faites et conservées dans les laboratoires pendant de
très nombreuses générations sur la gélaline ou sur la gélose,
c'est-à-dire sur des milieux alcalins. Le microbe a donc pris
dans ces milieux une forme spéciale, qui s'y conserve indéfini-
ment même quand on modifie le milieu, que l’on change diffici-

VARIATIONS DE FORME CIHEZ LES BACTÉRIES. 83

lement d’une façon durable, et qui réapparaît avec la plus grande
facilité, surtout quand on retourne aux milieux alcalins où le
microbe a pris l'habitude de vivre. Toutefois, le changement de
forme dans les milieux alealins n’est pas absolument impossible,
et, après quinze cultures dans un milieu acide, le retour dans
le bouillon alcalin a reproduit d’une façon persistante, sinon la
forme filamenteuse, du moins la forme bacillaire. Je dois dire
cependant que dans ces conditions, les microcoques n'ont pas
encore complètement disparu, et il faudra sans doute prolonger
les cultures dans les milieux acides pour que les bacilles exis-
tent seuls dans les liquides alcalins.

On aura pu remarquer tout à l'heure que les microcoques ne
reparaissent plus dans un milieu d’abord acide, même quand
l'acidité a disparu. Ce fait est en apparence contradictoire avec
ce que nous venons de dire sur le relour à la forme primitive
dans les milieux alcalins. En réalité il n’y a pas contradiction,
car il faut évidemment distinguer entre un bouillon rendu alcalin
avant la culture et celui qui doit son alcalinité aux bases sécré-
tées par le microbe.

Nous n’envisagerons pas pour le moment les variations mor-
phologiques subies par le microbe sous l'influence d’autres subs-
tances que les acides. Nous avons voulu montrer surtout, dans
cette étude, que ces variations peuvent se produire à la suite
de modifications qui se rencontrent chaque jour dans la nature
et qui se traduisent simplement par la réaction acide ou alcaline
du milieu. Le Micrococcus prodigiosus se prête merveilleusement
à cette démonstration.

Il est donc permis de penser que les modifications du milieu
font varier d’une facon durable la forme aussi bien que la fonc-
tion d’un microbe. Mais pour que ces conclusions puissent être
un jour généralisées, il faut les établir pour le plus grand
nombre d'organismes possible. J'ai pu obtenir des résultats ana-
logues avec d’autres microbes colorés, tels que le bacille du lait
bleu, le bacille violet, les deux bacilles verts de l’eau, ete. Mais si
les conclusions sontidentiques, les procédés varient avec chaque
espèce d'organisme et ils doivent être étudiés à part. C'est ce que
j espère pouvoir faire prochainement.

D mme mime ne mme tee à ee

REVUES ET ANALYSES

CARGINOME ET SARCOME.

REVUE CRITIQUE.

Rae. Recherches sur l'étiologie des tumeurs malignes, Nantes, 1887. —
BaLLAncE Er Saarrocx. Rapport sur des expériences de culture avec les
tumeurs malignes, Brit. med. Journal, no 1,400, 1887. — SCHEURLEN.
Sur l’étiologie du carcinome, et Scxizz, Communication sur le même
sujet, séance du 28 novembre de lu Société de médecine de Berlin, et
Deutsche med. Wochens., 1887, p. 1033. — France. Sur l'étiologie et
la diagnose du sarcome et du carcinome, Munch. med. Wochens., 1888,
pots

Nous n'avons pas encore parlé des travaux récents sur le cancer par
embarras de savoir qu’en penser et qu’en dire. Nous aurions voulu pouvoir
applaudir des deux mains à la découverte de M. Scheurlen. Il est si
agréable d'acquérir la certitude d’un fait nouveau! Il est si ennuyeux, el
parfois si difficile, d’avoir à se défendre contre le doute!

Or, dans cette question, le doute exigeait impérieusement qu'on lui fit
une place. Est-ce la difficulté du sujet? est-ce une coïncidence fortuite? tous
les travaux mentionnés en tête de cet article traduisent une certaine indé-
cision et quelques-uns une certaine inexpérience chez leurs auteurs. Aucun
n’est un de ces travaux de maître qui, surmontant avec bonheur les difficul-
tés, dédaignant les points secondaires, ne faisant naître une objection que
pour la résoudre, vont droit au but en y entraînant le lecteur. La courte
revue que nous allons en faire montrera, qu'après eux, l'hésitation est encore
plus commandée que permise.

Je passe rapidement sur le travail de M. Rappin, qui, mal servi par sa
méthode expérimentale, trouve des microbes non seulement dans les tissus
carcinomateux, mais encore dans les tissus normaux, et qui, entraîné par
de fausses idées théoriques qui procèdent à la fois de celles de Béchamp et
de Nægeli, aime mieux croire à la création du microbe par la maladie
qu'à celle de la maladie par le microbe. Voilà longtemps que cette idée
fait son stage; nous ne voyons pas qu'elle l'ait encore terminé.

C'est aussi un peu d’inexpérience qu'on peut relever dans le travail de
MM. Ballanceet Shattock, mais d’inexpérience méfiante d'elle-même, et qui
cherche à se contrôler. Ces savants ont ensemencé dans des milieux formés
de gélatine nutritive, de gélose et de sérum de sang coagulé, des fragments
de tissus provenant de 22 cas de carcinome, 1 de sarcome, 3 de lipome et

REVUES ET ANALYSES. 85

et { de myxome, et mis en œuvre aussitôt après l'opération chirurgicale.
Avec un premier couteau stérilisé, on enlevait la surface; avec un second
couteau, on faisait une incision; avec un troisième, un quatrième, etc., quel-
quefois un sixième couteau flambé, on finissait par arracher un fragment
qu'on ensemencait et qu'on portait à l’étuve. C'était beaucoup de petits cou-
teaux, et l'opération devait être assez longue, assez périlleuse par suite, au
point de vue de l'introduction des germes étrangers. Mais ce qu'il y a d’es-
sentiel, c’est qu'au fur et à mesure que MM. Ballance et Shattock s’y per-
fectionnaient et la rendaient plus courte, ils voyaient augmenter la pro-
portion des ensemencements qui restaient stériles. Ceux qui devenaient
féconds ne présentaient d'ailleurs rien de caractéristique, et semblaient
avoir été peuplés par le hasard. Ce qui prouve que tel était le cas, c'est
qu'en recommençant, comme contrôle, les mêmes expériences avec des
tissus sains, on retrouvait exactement les mêmes résultats. Il fallait done
ajouter plus d'importance aux ensemencements restés stériles qu'aux autres,
et finalement, MM. Ballance et Shatthock ont pu montrer, à la séance du
17 mai 1887 de la Société pathologique de Londres, 58 fragments de tu-
meurs, dont 39 de carcinome, 8 de lipome, 6 de sarcome et 5 de myxome,
restés stériles après un séjour d'un mois à l’étuve, suivi pour quelques-uns
de plusieurs mois de conservation.

Il est certain que cette expérience ést loin d'être favorable ;à l’idée d'un
microbe habitant les tissus cancéreux, et pourtant, des faits nombreux
semblent prouver que le cancer est dû à un contage vivant. La science n'a
pas enregistré, il est vrai, de cas bien net d'infection d'un individu par un
autre, mais il existe des cas d'auto-infection assez nombreux. M. Scheurlen
cite un exemple dans lequel la ponction d'un liquide ascitique d'un cancer
du péritoine a amené l'infection carcinomateuse de la plaie opératoire, et
un autre dans lequel un cancer de la lèvre inférieure provoqua, au bout de
quelques jours, l'apparition d'un autre carcinome sur la lèvre supérieure,
en face du premier. Les recherches de Langenbeek (1840), suivies de celles
de Follin, Lebert, O0. Weber et Goujon et autres savants, témoignent d’ail-
leurs que si l’inoculation du tissu cancéreux à un animal ne réussit pas
toujours, elle est quelquefois possible,

On est donc fondé à rechercher l’agent de cette transmission, et c’est
dans cette foi que Scheurlen a commencé ses recherches, qui ont consisté à
la fois en études microscopiques et en tentatives de culture et d’inoculation.
Examinons-les séparément.

Dans une préparation non colorée de suc cancéreux délayé dans de l'eau
ou dans une solution de chlorure de sodium, on voit cà et là « des corpus-
cules à reflet verdàtre, animés de mouvements faibles, mais nettement
perceptibles ». Ces formes sont « tellement caractéristiques qu'elles ne
peuvent pas être confondues avez autre chose ». Cependant les gouttelettes
adipeuses peuvent leur ressembler beaucoup. Ces spores sont rarement iso-
lées. Elles sont souvent en amas, eomme si elles avaient toutes été con-
tenues dans une cellule qui aurait disparu. Quelquefois cependant, mais
rarement, on les voit encore renfermées à l’intérieur des cellules.

« J'ai trouvé, continue M, Scheurlen, ces spores au moins dans un tiers

86 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de mes observations microscopiques. J'ai peu recherché les bacilles. Cepen-
dant je les ai trouvés huit fois sur dix en employant la méthode de colo
ration de Gram. »

« Jusqu'à présent je n'ai pas réussi à constater d’une façon sûre la pré-
sence des bacilles et des spores sur les coupes du tissu durci; mes recherches
n'ont été faites que sur de la matière étalée sur le couvre-objet. »

Voilà déjà de quoi surprendre et donner carrière à l'esprit de doute, pour
peu qu'il soit éveillé. Des spores en mouvement! Des spores qu’on réussit
aussi bien à distinguer de toutes les granulations environnantes dans des
préparations non colorées! Tant de spores et de bacilles dans le sue, et si
peu sur les coupes ! Tout cela est certainement possible, Aucune de ces cir-
constances n’est par elle-même invraisemblable, mais on est surpris de voir
tant de faits excep‘ionnels sur un si étroit espace, et celà dans un mémoire
évidemment un peu hâtif. Voyons maintenant ce que donnent les expé-
riences d’ensemencement.

Comme milieu, M. Scheurlen se sert d’une sérosité pleurétique ou asci-
tique obtenue par une ponction; on la stérilise pendant 5 jours par le pro-
cédé Tyndall, et on finit par la coaguler par l’action d’une température
convenable, qu'on ne peut pas indiquer à l'avance, car elle varie suivant la
nature du liquide. On désinfecte alors au sublimé le néoplasme encore
entouré de son tissu adipeux; on y fait une première coupe avec un Couteau
flambé, une deuxième coupe, perpendiculaire à la première, avec un second
couteau, et sur cette seconde surface, on prélève, à l’aide d’un fil de pla-
tine stérilisé, une gouttelette de suc qu’on porte sur le milieu nourricier. On
garde à l’étuve à 39°.

« Dès le troisième jour, on voit la surface du sérum recouverte d’une
pellicule incolore, qui se plisse peu à peu et prend une teinte jaune bru-
nâtre après quelques jours ou quelques semaines... La multiplication des
colonies se fait uniquement en surface. Avec chaque carcinome et chaque
ganglion cancéreux, j'ai toujours fait au moins 20 inoculations semblables.
Il y en à toujours eu au moins T (souvent plus, mais rarement toutes) qui
m'ont donné un résultat. Les autres inoculations restaient stériles. Jamais
je n’ai eu de cultures impures. »

Il faut féliciter M. Scheurlen de ce dernier résultat, qui témoigne de
son habileté opératoire. Mais l'élimination des chances d'erreur ainsi faite,
il n’en devient que plus embarrassant de répondre à deux questions con-
tradictoires qui se posent devant l'esprit à la lecture de ce qui précède,
Pourquoi tant d’insuccès? Pourquoi tant de succès?

Pourquoi tant d’insuceës, lorsqu'on voit si souvent dans le sue cancéreux
les spores, pourtant si difficiles à découvrir, lorsqu'il y a des bacilles au moins
« huit fois sur dix dans ce suc »? Pourquoi tant de suecès, se demande-
t-on d’un autre côté, quand on se rappelle les nombreux insuccès de
MM. Ballante et Shattock? Les milieux, peut-on dire, ne sont pas les
nèmes. Mais le bacille du cancer semble être très peu difficile pour ses
besoins nutritifs. MM. Ballance et Shattock ont, nous l’avons dit, opéré sur
la gélatine nutritive, sur la gélose et sur le sérum du sang. Le bacille du
cancer se développe péniblement, il est vrai, sur la gélatine qu'il ne liquéfie

REVUES ET ANALYSES. 87

pas, et sur laquelle il produit des excavations en entonnoir recouvertes
d’une pellicule ridée; mais enfin, il s’y développe. IL peut aussi se déve-
lopper sur la gélose, avec laquelle des inoculations de tissu cancéreux n’ont
réussi à M, Scheurlen que 6 fois sur 70, mais qui nourrit très bien les
semences provenant d'une culture pure. Le bacille du cancer peut aussi
vivre sur la pomme terre, dans le bouillon de viande et même dans le
bouillon de choux. Un être qui s'accommode de milieux si divers n'est pas
difficile sur son terrain de culture; et nous en revenons à la question
ci-dessus : Pourquoi MM. Ballance et Shattock l’ont-ils si rarement ren-
contrés? pourquoi M. Scheurlen ne le rencontre-t-il pas toujours ?

Cherchons maintenant du côté des propriétés biologiques du bacille.
Le premier point à y relever est son développement superficiel, en rapport
certain avec son caractère aérobie. Ce caractère, remarquons-le en passant,
ne s'accorde guère, au moins à première vue, avec le cheminement dans
les profondeurs d'une maladie aussi nettement spécifique.

Les autres propriétés sont de celles qu'il faut se contenter d'enregistrer
soigneusement. « En examinant avec un fort grossissement une pellicule
non colorée d'une culture, on y remarque, à côté de bacilles courts et
larges (longueur 1,5 à 2,5 u, largeur 0,5 &), qui frappent peu les yeux de
l'observateur, d’autres formes (les spores) presque aussi longues, mais
ovoïdes, très brillantes et à reflet verdâtre, qui possèdent une mobilité très
nette. Sont-ce là des mouvements spontanés où molée eee C'est une
question que je ne puis résoudre. »

« Les bacilles semblent aussi animés d'un mouvement autour de leur
centre, analogue au mouvement du fléau d’une balance qui oscillerait dans
toutes les directions. Le mouvement des spores est oscillatoire et rota-
toire. »

« Les bacilles se laissent colorer par presque tous les procédés. Par la
méthode de Gram, l’alcool les décolore presque instantanément, et ne
laisse de couleur qu’à leurs extrémités. Les spores se colorent par le pro-
cédé d'Ehrlich, après un séjour d'une demi-heure ou 4 heure dans une
solution d’aniline-fuchsine bouillante ; après quoi il faut décolorer pendant
4 à 3 heures par l'acide nitrique et laver à grande eau. Leur coloration
n'est pas uniforme, Les unes se colorent fortement et sont très brillantes,
d'autres restent moins colorées et sont ternes. Toutes ont les mêmes di-
mensions (1,5 & sur 0,8 4)... Sur la gélose, la pellicule est d’abord formée
uniquement de bacilles. La formation des spores commence après 12 heures,
et, après 24, les spores libres se substituent de plus en plus aux bacilles. »

Comme l’a fait observer avec raison M. A. Fraenkel dans la discussion
qui à Suivi la présentation de la note de M. Scheurlen à la Société de méde-
cine interne de Berlin, une évolution aussi rapide du bacille et de la spore
jure un peu avec la marche lente et chronique du cancer. Mais toutes ces
objections sont assez caduqués et tomberaient d’une pièce étant un succès
authentique de l’inoculation du bacille et une reproduction du cancer à
son aide. M. Scheurlen a fait sur ce sujet quelques expériences. Voyons ce
qu'il en dit.

« J'ai inoculé 6 chiennes, dont 4 vivent encore et 2 ont été tuées pour

88 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

l'examen anatomo-pathologique. L'inoculation a été faite en injectant dans
la glande mammaire de l'arrière 3 divisions de la seringue de Pravaz,
chargée d’une émulsion de culture pure sur la gélose ou la pomme de terre.
La culture avait 3 ou 4 jours. »

« 14 jours après cette injection, il s'était formé une tumeur de consis-
tance molle, mal limitée, atteignant environ le volume d'une noix, et dimi-
nuant ensuite jusqu’à celui d’une noisette ou d'un haricot. On ne pouvait
savoir si cette tumeur provenait d’un ganglion lymphatique ou du tissu de
la glande elle-même. -

« L'examen microscopique montra une abondante prolifération cellu-
laire. Les cellules étaient augmentées de volume et fortement granuleuses.
Par places, elles méritaient certainement le nom de cellules épithélioïdes,
et contenaient des spores brillantes comme celles des tumeurs carcinoma-
teuses. On y a décelé des bacilles au microscope et au moyen des cul-
tures. »

Cette description est un peu vague. Les variations de volume de la tu-
meur ne concordent pas avec ce qu'on sait de la marche progressivement
envahissante des tumeurs cancéreuses. Les caractères présentés au micros-
cope par les cellules de la tumeur n’ont aussi rien de spécifique. Mais ce sont
des questions à juger sur pièces. Il faut attendre que M. Scheurlen publie
son mémoire 2x extenso, et surtout qu'il ait fait l'examen des tumeurs
provoquées sur les 4 chiennes qu'il a conservées pour les étudier en temps
opportun.

Si je ne me trompe, l'impression générale soulevée par ce travail dans
le monde savant a été celle du doute; mais, comme je le disais en com-
mençant, d’un doute bienveillant, et qui ne demande qu’à s’avouer vaincu.
Les conclusions de M. Scheurlen ont, du reste, rencontré quelques confirma-
tions précieuses. Dans la séance qui a suivi la présentation de la note de
M. Scheurlen, M. Schild a annoncé avoir trouvé depuis longtemps, dans une
tumeur carcinomateuse, des bacilles à deux pôles colorés, une fois et demie
à deux fois plus épais que les bacilles de la tuberculose, et dont la diffé-
rence d'aspect avec celui de M. Scheurlen tient peut-être à des différences
dans les méthodes de coloration. De son côté, M. Carl Francke a trouvé,
dans l'étude de neuf cas de careinome, des résultats presque identiques à
ceux de M. Scheurlen au sujet du bacille, de ses conditions de culture et
de ses spores. Il à réussi de plus à trouver dans les coupes de tissus cancé-
reux les spores, et même des bacilles en longs fils, à la condition de colorer
par la méthode de Orth des coupes faites sur la limite de la tumeur. Toutes
ces conclusions sont pleines de promesses qu’il faut souhaiter de voir
bientôt transformer en réalité. Mais nous n’en sommes pas encore là.

M. Sehill à aussi étudié plusieurs cas de sarcome, et y a trouvé des
bacilles très semblables à ceux des carcinomes, mais beaucoup plus petits.
M. Francke, qui a fait la même constatation, donne des indications plus
précises. Les bacilles du sarcome ont 3 à 4 y de long sur 0,4 & de large.
Les spores du earcinome ont 4,2 & sur 0,6 y, celles du sarcome 1,5 & sur
0,8 &. En cultures, le bacille du sarcome se comporte comme l’autre et vit
sur les mêmes milieux. Il prospère comme lui sur les milieux acides et y

REVUES ET ANALYSES. 89

forme un pigment rouge brun. Ces deux bacilles peuven, lorsqu'ils sont
cultivés sur des milieux pas trop solides à la température du corps, donner
tous deux, surtout celui du sarcome, des filaments longs qui ressemblent
si bien à des mycéliums de champignons, que M. Schill, aussi bien que
M. Francke, semblent disposés à en faire une moisissure. Mais aucun d'eux
n'apporte d'argument bien démonstratif en faveur de cette opinion, pas plus
du reste qu'en faveur de la spécificité du microbe. L’inoculation est restée
sans résultat entre les mains de M. Francke, qui, résume son travail
dans cette proposition prudente : « Ce bacille est vraisemblablement la cause
de la maladie. » Mais, en science, le vraisemblable n’est pas toujours vrai,

et le vrai n’est pas toujours vraisemblable.
DE

G. Borponi-Urrrepuzzi. Sur la culture des bacilles de la lèpre. Zeitschr.
f. Hyg., t. NII, 4887.

Depuis les travaux de Hansen, on ne conteste plus guère le caractère
spécifique du bacille découvert par ce savant dans les tissus lépreux. Sur
ces questions de maladies microbiennes, les convictions sont aujourd'hui
beaucoup moins rebelles qu’elles ne l'étaient il y a quelques années. Du
reste, pour la lèpre, l’ensemble de preuves nécessaires pour la conviction se
trouve aujourd’hui à peu près établi. Après la découverte de Hansen, on
peut citer en effet les recherches de Melcher et Ortmann !, qui en inoculant
des fragments de nodules lépreux dans la chambre antérieure de l'œil d'un
lapin, ont réussi à amener dans tout le corps de l'animal des néoformations
pathologiques très accentuées. La lèpre et la tuberculose étant souvent mé-
langées sur le même individu, et leurs lésions étant même très difficiles
quelquefois à distinguer les unes des autres, on a dit que ces néoformations
étaient de nature tuberculeuse, non lépreuse. Mais les préparations de
MM. Melcher et Ortmann ont été étudiées avec soin au laboratoire de
M. Koch, et classées, il semble, définitivement comme lèpre.

En dehors des cas de contagion lépreuse, la science possède, d'ailleurs, un
autre cas d'inoculation involontaire, mais très probant malgré cela ?. Dans
une île intertropicale, où la lèpre est à l’état endémique, un médecin avait
vacciné son fils avec le virus venant d'un vaccinifère, nouveau-né d'une
famille de lépreux, et chez lequel la lèpre s'était déclarée après la vaccina-
tion, puis, se servant de son fils comme vaccinifère, il avait vacciné un autre
enfant. Le fils du médecin, examiné à plusieurs reprises pendant son ado-
lescence et jusqu'à la fin de ses études, était incontestablement affecté de
lèpre, mais d'une lèpre bénigne, se traduisant seulement par des décolora-
tions de la peau, des cicatrices et une large plaque anesthésique sur un
membre. L'autre enfant, vacciné avec celui-ci, eut au contraire une lèpre

4. Lèpre experimentale chez les lapins. Bert. Klin. Wochens, 1886.
2. Dr Garnoxer. La lèpre est-elle communicable par la vaccination? Brit. med.
journ., juin 4887, p. 1269,

90 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

mutilante qui le fit périr jeune. A ces notions, sur le caractère inoeulable
de la lèpre, M. Bordoni-Uffreduzzi vient ajouter celle-ci. Le bacille est culti-
vable en dehors de l'organisme. Cela ne complète pas absolument la démons-
tration, car il faudrait pouvoir reproduire et réinoculer la maladie, non pas
avec la lèpre initiale, mais avec le produit des cultures du bacille lépreux.
C'est là un dernier progrès que M. Bordoni-Uffreduzzi n’a pas encore
réalisé. Mais il n’en faut pas moins lui savoir gré d’avoir réussi là où
d'autres avaient échoué, dans la culture artificielle du bacille.

Hansen ! avait vu ses cultures sur un porte-objet, dans une goutte de
sérum gélatinisé, être envahies par des microbes étrangers. Neisser avait
exposé un tubercule lépreux dans un milieu nutritif, à la température de
37 à 392 pendant trois semaines, et n'y avait constaté, au bout de cet inter-
valle, qu'un gonflement avec apparition autour du tubercule, qui était gros
comme un grain de millet, d'une couche mince dans laquelle il était difficile
de démêler ce qui provenait de la croissance des bacilles et ce qui provenait
du gonflement du tissu.

De ces tentatives avortées, on pouvait conclure que le bacille de la lèpre
était difficile à cultiver. M. Bordoni-Uffreduzzi y a pourtant réussi du pre-
nier coup, en ensemencçant, dans du sérum additionné de gélatine et de pep-
tone et maintenu à 33-35°, de la moelle d’un os de lépreux. Il a essayé ce tissu
parce qu'il y avait trouvé au microscope, en outre des bacilles contenus dans
les cellules lépreuses, une certaine quantité de bacilles libres. Leur culture
est lente. Ils finissent par former sur le milieu solide des colonies linéaires
à contours irréguliers, d'aspect cireux, colorées faiblement en jaune, se
liquéfiant par le sérum. Surla gélose glycérinée, si l’ensencement est médio-
cre, on obtient des colonies isolées, très lentement confluentes, apparaissant
au microscope, à un grossissement de 80 à 100 fois, comme des taches rondes,
à bords dentelés, plus épaisses en leur centre. Le développement est beau-
coup plus pénible sur le sérum normal ou la gélose ordinaire. Il est impos-
sible sur la gélatine, la pomme de terre ou le bouillon.

Les bacilles des cultures ont las mêmes caractères que dans la moelle. Co-
lorés avec la fuchsine ou le violet de gentiane et l’eau d’aniline, décolorés
ensuite par l'alcool, ils se présentent sous la forme defilsrectilignes ou courbés
ayant de 4 à 5 ou 6& de longueur, les uns du même diamètre en tous leurs
points, la plupart avec un renflement aux extrémités. Ils sont tous immo-
biles; ils sont aussi tous entourés d'une enveloppe dont les bords restent un
peu colorés lorsqu'on n'a pas laissé agir l'alcool trop longtemps, et qui reste
incolore quand on emploie la méthode de Koch-Ehrlich. Cette enveloppe est
assez singulière, elle enferme quelquefois des bacilles isolés, mais le plus
souvent, elle entoure des amas de bacilles d'un contour assez régulier pour
donner au tout l'aspect d'une cellule lépreuse.

Par quelques-unes de leurs propriétés, ces bacilles se rapprochent des ba
cilles de la tuberculose, mais ils s’en éloignent par d’autres, et, à raison de
l'affinité des deux maladies, M. Bordoni-Uffreduzzi s'est attaché à bien
mettre en évidence leurs caractères différentiels.

1. Virchow’s Archiv, 1882, t. XC.

REVUES ET ANALYSES. 91

C'est d'abord le renflemen., des extrémités du bacille lépreux, que l'on
trouve dans les cultures, et aussi, mais un peu moins prononcé, dans les
bacilles des tissus; ces bacilles renflés sont le plus souvent libres et sont
surtout abondants dans la moelle. Les bacilles de la tuberculose ont au
contraire leurs extrémités arrondies, mais non renflées.

Ce sont ensuite des différences à la coloration. La méthode de Baumgar-
ten, qui permet une différenciation entre les cellules tuberculeuses et les
cellules lépreuses des tissus, donne des résullats beaucoup moins nets
pour la comparaison des deux bacilles en culture. La meilleure méthode est
celle qui a été proposée par Neisser. En traitant par des solutions aqueuses
et alcalines de bleu de méthylène, les bacilles lépreux restent incolores, tan-
dis que les bacilles de la tuberculose se colorent nettement après 24 heures.

Il est curieux de voir la méthode de Baumgarten réussir dans le cas des
tissus, échouer dans le cas des bacilles. M. Bordoni-Uffreduzzi a raison d'en
conelure la non spécificité d’une méthode déterminée de coloration pour
un microbe déterminé. C'est une idée que nous avons déjà émise dans ces
Annales. Tout phénomène de coloration dépend d’un phénomène de mor-
dancage, qui lui-même est lié aux conditions de composition de milieu.

I y à un autre point sur lequel nous sommes tout à fait d'accord avec
M. Bordoni-Uffredezzi. C'est au sujet des espaces alternativement clairs et
obseurs qu'un assez fort grossissement permet de relever chez le bacille
lépreux de même que chez d’autres bacilles. Les uns font de ces espaces
clairs de véritables spores, uniquement parce que, comme les spores, ils ne
prennent pas la couleur dans les procédés de coloration. D’autres, un peu
moins affirmatifs, mais se laissant aussi entrainer par les apparences, par
l'aspect brillant que ces espaces clairs doivent à leur encadrement entre
deux espaces noirs, en font des productions mal définies qu'ils appellent
pseudospores. Nous n’y voyons, pour notre part, que des condensations ou
concrétions protoplasmiques analogues à celles qui se produisent dans une
cellule de levure qui vieillit dans son milieu de culture Je laisse de côté
les dislocations protoplasmiques qu'amène quelquefois le procédé de colo-
ration, auquel on attribue alors le mérite de révéler une structure
méconnue, alors qu'il ne révèle que celle qu’il a produite lui-même. Je ne
parle que de ces granulations qu’on observe quelquefois, sur les bacilles dans
leur milieu naturel ou artificiel. Elles traduisent toujours de mauvaises
conditions d'existence, et si M. Bordoni-Uffreduzzi les relève sur les bacilles
de ses cultures, dans les premiers jours du développement, c’est que le milieu
qu'il leur a donné n'est pas à tous égards le plus favorable.

Cette infériorité du milieu de culture se révèle par une autre particula-
rité, l'impossibilité où a été M. Bordoni-Uffreduzzi de donner au moyen de
ces cultures la lèpre à des animaux, lapins, cobayes et souris, quelle qu'ait
été la variété des procédés d’inotulation mis en œuvre, inoculation sous-cu-
tanée, intraveineuse, abdominale ou intraoculaire. Il y avaitune diminution
de virulence qui, jusqu'ici, dans tous les exemples connus, coïncide avec une
infériorité dans les conditions de culture.

D'ailleurs cette infériorité se traduit aussi autrement, par l'impossibilité
de faire une série indéfinie de cultures successives. Au lieu de ce fait général,

92 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

M. Bordoni-Uffreduzzi a rencontré un fait particulier fort curieux, s'il n'y a
pas eu de cause d'erreur, c'est un changement dans les propriétés biologiques
du bacille lépreux. qui lui permet de se développer plus rapidement et plus
abondamment dans les milieux solides, et à des températures inférieures à
celles qu'il exigeait à l'origine.

Tandis qu'à sa sortie des tissus, il ne pousse pas à 22 ou 24°, M. Bordoni
Uffreduzzi l'a vu se développer à la température de 20 à 25°, dans de la
gélatine glycérinée, et même dans la gélose ou le sérum ordinaires, dont il
ne se contentait pas au début.

Pour expliquer ces faits, sur lesquels d’ailleurs il n'insiste guère, M. Bor-
doni-Uffreduzzi fait intervenir des notions très répandues, paraît-il, en Alle-
magne, et très bien résumées, tout récemment, dans une conférence de
M. Hueppe ! sur laquelle nous reviendrons. C'est l'établissement d’une dif-
férence entre la vie saprophytique d’une espèce pathogène, et sa vie à l'in-
térieur des tissus. L'habitude que nous avons en France des cultures en
milieux liquides, la comparaison que ce mode de culture a si souvent permise
dans nos laboratoires entre les propriétés du bacille charbonneux, du
vibrion septique, du microbe du choléra des poules cultivés à l'intérieur et
à l'extérieur des tissus, qui sait? peut-être aussi un goût un peu moins vif
qu'en Allemagne pour les dichotomisations et les distinctions d'ordre surtout
pédagogique, toutes ces raisons nous empêchent d'accorder beaucoup d’im-
portance à ces notions. Nous croyons qu’on ne gagne rien à séparer la bio-
logie saprogène d'un microbe de sa biologie pathogène, et c'est dans la bio-
logie générale des infiniment petits qu'il faudra ouvrir un nouveau chapitre,
si les changements de propriétés relevés dans celui du bacille de la lèpre
se retrouvent chez lui et chez ses congénères.

Dx

G. ZaGari. Expériences sur la transmission de la rage de la mère au fœtus à
travers le placenta et par le moyen du lait. Giorn. Int. d. Scienze mediche,
40° année, 1888 ?.

Nous avons publié (t. 1, p. 177) un ensemble d'expériences sur la trans-
mission de la rage de la mère au fœtus à travers le placenta et par le lait,
dues à MM. Perroncito et Carita, à M. Bardach, à M. Roux, à M. Nocard, et

1. Sur les relations de la fermeutation avec les maladies infectieuses. Berlin, 4889.

2. Nous profitons de l'intéressant travail de M. Zagari pour donner, confor-
mément à une habitude que nous prendons, la bibliographie de tout ce qui a paru
sur la transmission fœtale de diverses maladies.

Breauezz -— Nouvelles communications sur le charbon et le sang charbonneux,
Virchows Archiv, t. XIV, 1858.

DAvaine. — Acad. de médecine, 9 déc. 1867.

BoLLiNGER. — Sur l'importance des bactéries du charbon. Zeüschr. f. Thier.
Path., t.II, p. 344, 1876.

Cuauveau. — Du renforcement de l'immunité des moutons algériens ; influence de
l'inoculation de la mère sur la réceptivité des fœtus. Comples rendus, t. XCI, 1880.

ARLOING, Connevin Er THoMas. — Gaz. Hebd. de méd. et chir., 1881.

REVUES ET ANALYSES. 93

dont les résultats étaient contradictoires. A les envisager en bloc, et en leur
accordant la même créance, on était conduit à conclure que la transmission
de la rage par ces deux voies est un fait possible, mais rare. On est amené
à accentuer encore cette conclusion, si on tient compte des résultats cons-
tamment négatifs du travail de M. Zagari.

Ce savant à inoculé 12 femelles pleines, à savoir 5 lapins, 6 cobayes et
une chienne, avec du virus de passage ou du virus de la rage des rues. Dix
de ces animaux ont été inoculés par trépanation, deux lapines par la voie

SANGALLI, — GOLGt, — GRiFFini. — Discussion et documents relatifs au charbon.
Rendiconti d. R. Instituto Lombardo, 1882.

Srraus et CHAMBERLAND. — Memoires de la Socielé de biologie, 4882 ; et Comptes
rendus, 1882.

Nosorri. — Sur le génie et la nature du charbon, Italia agricoia, Milan, 1883.

Carrra. — Expériences sur le mode de transmission du charbon de la mère au
fœtus. R. Acc. di medic. Turin, 1883.

Marctarava ET CELUI. — Une épizootie de choléra des poules, Rome, 1883.

MinoPozsky. — Du passage dans le sang du fœtus de matières solides contenues
dans le sang de la mère. Archiv. de physiol, 1885.

Taraxs — La circulation dans le placenta de quelques mammifères, Lo speri-
mentale, août 1885.

KouBassorr. — Passage des microbes pathogènes de la mère au fœtus, Comples
rendus, t. XCIX, p. 451 et 508, 1885.

Tizzoni et Carran. — Sur la transmissibilité de l'infection cholérique de la mère
au fœtus, Gazzelta degli Ospel., 1885.

Wor. — Sur la transmission héréditaire des microbes pathogènes. Virchow's
Arcluiv, t. CV, 1886.

Morisant. — Sur un cas de pustule maligne non transmise de la mère au fœtus,
Morgagni, 1886. À

Canéac et Mazcer. — Transmission de la morve de la mère au fœtus. Comptes

re. dus, janvier 1886.

SanTI-SiRENA. — Sur la transmissibilité de la tuberculose et sa prophylaxie.
Giorn. Inlernaz. d. Sc. mediche. 1886.

Jaxr. — Sur la présence de bacilles tuberculeux dans l'appareil génital sain
dans la pbtisie, avec des remarques sur l'état du fœtus dans la tuberculose géné-
ralisée de la mère. Virchow's Archiv. 1886.

Laxvouzy et QuexraT. —- Note sur la tuberculose infantile, Gaz. Hebd., 1836.

Mareucet et Bacquis. — De l'action du virus charbonneux sur lembryon de
poules. Rivista Internaz., 1856.

Oresre et Armani. — Etudes et recherches sur le barbone des buffles. Alli d.
Instit. d'Incorragg. 1886, analysée dans ces Annales, t. I, p. 400.

Kroner. — Sur l'état actuel de la question du passage des microbes pathogènes
de la mère à l'enfant. Breslauer aertzl. Zeitschr., 1886.

Wyssokowirsen. — Sur le sort des microorganismes injectés dans le sing des
animaux à sang chaud. V. ces Annales, t. I, p. 45.

Marcaanr. — Sur un cas remarquable de charbon chez une femme enceinte,
avec infection mortelle de l'enfant. Virchow’s Archiv, t. CIV, 1887.

LanxeconGue. — De la tuberculose congénitale et précoce. Etudes publiees par
M. Verneuil. Paris, 1886.
BLaixe. — Tuberculose bovine, sa communication par ingestion, respiration et

transmission héréditaire. Medic. Record, 1887, t, I.

94 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

d'un nerf périphérique. De ces animaux, on à obtenu 32 fœtus provenant
du travail abortif, ou retirés de l'utérus de la mère morte. De ces fœtus, on
a inoculé les centres nerveux par trépanation. On a aussi inoculé une fois
le liquide amniotique et deux fois le foie. Deux fois aussi on a inoculéle lait
de la mère, recueilli avec pureté dans la glande mammaire. Trois fois on a
fait teter à de jeunes cobayes des femelles à l’état d'incubation rabique. Tous
les animaux qu'on avait ainsi essayé de rendre enragés sont restés en
bonne santé, ou s'ils sont morts, c’est d'autres maladies que la rage.
L'auteur est tout prêt, on le sent, à faire de ces faits un argument en
faveur de la ciréulation purement nerveuse du virus rabique, et il y a même
dans le récit de ces expériences un fait intéressant à ce point de vue, etqu'on
peut utilement rapprocher de quelques-uns de ceux qui ont été insérés dans
le dernier numéro de ces Annales. Une lapine inoculée dans le nerf sciatique,
au moyen de virus fixe, présenta le 7 jour un peu de rigidité dans le
membre inoculé, du côté duquel l'animal tombait facilement. Le soir du
même jour, la paralysie avait envahi l’autre jambe, et l'animal pouvait
encore entrainer son train postérieur avec les jambes de devant. La paralysie
était complète deux jours après, et le 10° jour l’animal fut trouvé mort.
Mais bien que ce fait soit d'accord avec la relation générale signalée par
MM. di Vestea et Zagari (V. ces Annules, t. 1, p. 492) entre le siège dela mor-
sure et la forme clinique de la rage obtenue, il ne cadre guère avec d’autres
observations, et on à encore le droit de réserver son opinion à ce sujet.

E. Hôacyës. Nouvelle méthode pour prévenir la rage avant l'infection.
Acudémie des sciences de Buda-Pest, 17 octobre 1887.

« Quand on inocule à des chiens, dit M. Hôgyes, des dilutions aqueuses
faites à des degrés de concentration divers, d'un virus rabique fixe obtenu
par de nombeux passages successifs à travers des lapins, et qu’on commence
les inoculations par les dilutions les plus faibles pour finir par les plus
fortes, les chiens ainsi traités peuvent être rendus réfractaires à une
infection rabique ultérieure de quelque facon qu'elle soit faite, Ils sont ainsi
préservés non seulement contre la morsure d'un chien enragé, mais contre
une infection artificielle faite soit sous la peau, soit sous la dure-mère,
que l’on prenne le virus du chien à rage des rues ou un virus plus éner-
gique, à savoir le virus fire. »

Lanpouzy Er Marin. — Sur quelques faits expérimentaux relatifs à l'histoire
de l'Hérédo-tuberculose. Mémoires publiés par M. Verneuil, Paris, 1887.
Finker. — Etudes sur les conditions anatomiques de l’hérédité de la tuberculose.

Revue de médecine, 1887.
Marrucer. — Contribution expérimentale à la pathologie de l'infection dans la

vie enbryonnaire. Rivista Internaz., 4° année, 1887.

PErRonciro et CariTA. — BArDAcH. — Roux. — Nocarp. — Annales de l'Instüut
Pasteur, t. T, p. 177.
G. Fox et Bornoi-Urrnebuzzr. — Sur l’action abortive du meningococcus et

son passage de la mère au fœtus. Riformu medica, 1887, no 39,

REVUES ET ANALYSES. 95

Dans cette nouvelle méthode, plus de préparation de virus atténués: le
virus vaccinal de M. Hôgyes est précisément le virus rabique de passage,
cest-à-dire le plus virulent ; plus d'inoculations successives de virus gra-
dués: le même virus fort sert à toutes les inoculations, il est simplement
dilué dans plus ou moins d’eau. Cest donc là une méthode plus simple que
celle de M. Pasteur, elle supprime et la dessication des moelles et leur
conservation à une température constante.

Voici, d'ailleurs, un exemple de la facon dont opère M. Hôgyes :

« Le 2% mars, un chien recoit, sous la peau, de deux heures en
deux heures, et à chaque fois, un centimètre cube d'une émulsion de la
moelle fraiche d'un lapin ayant succombé à l'inoculation de la rage faite
sept jours et demi auparavant. Cette moelle était broyée dans de l’eau
contenant 7 pour 1000 de sel de cuisine. Le chien reçut six inoculations
faites chacune ayec une dilution de force croissante dans l’ordre suivant :
Ao 14/3000; 2 41/2000; 3° 1/500; 40 1/950; 5° 1/100; 6° 1/10. Le. 26 et le
27 mars, on recommenca ce traitement de la même facon; on le répéta
encore le 4, le à et le 6 avril avec des solutions analogues de virus fixe.
Enfin, l'animal subit une nouvelle série d’inoculations, le 18, le 19 et le
20 avril. Ces traitements ne lui causèrent aucun malaise. Quarante et
un jours après le premier traitement (le 4 mai) et quatorze jours après la
dernière inoculation, ce chien fut inoculé sous la dure-mère avec une
moelle d’un lapin, inoculé lui-même de la rage neuf jours et demi aupa-
ravant. Il resta vivant, tandis qu'un chien témoin inoculé de la même
facon mourut après quatorze jours et demi. »

Les 26, 27, 28 mai, trois chiens furent inoculés préventivement sous la
peau comme le premier avec des dilutions de virus fixe. Le 16 juillet, ils
furent mordus par un chien enragé; aucun ne prit la rage. Le 1* septembre,
quatre mois après la première vaccination, ces trois chiens furent inoculés
par trépanation avec le virus de passage. Il restèrent bien portants; un
chien et un lapin témoins, trépanés en même temps qu'eux, moururent
de rage le 24 et le 26 septembre.

Les quatre chiens traités, dont nous venons de rapporter l’histoire,
étaient encore vivants le 17 octobre au moment de la communication de
M. Hôgyes.

Telles sont les quatre expériences sur lesquelles s'appuie « la nouvelle
méthode pour prévenir la rage ». Il faut, d’abord, remarquer, comme
l'indique le titre même de la note que nous analysons, qu'il s’agit de la
prévention de la rage avant l'infection; M. Hôügyes ne nous apporte pas
encore de méthode de prévention de la rage après morsure.

Les quatre chiens inoculés préventivement, comme nous venons de le
dire, se sont montrés absolument réfractaires à la rage; mais quatre chiens!
n'est-ce pas un bien petit nombre d'animaux pour établir une méthode de
prévention de la rage même avant l'infection ?

Bien que M. Hügyes n'indique pas quelle est la quantité de moelle
rabique qu’il emploie, on peut dire que sa méthode revient à inoeuler
d'emblée du virus virulent et à assez fortes doses sous la peau des animaux

96 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

qu'il veut rendre réfractaires à la rage ‘. Ces inoculations répétées, faites
en 12 heures, rappellent les inoculations rapides préconisées par M. Pasteur
pour les morsures graves, dans la forme de traitement dite traitement
intensif 2. Puisque M. Hôüzyes n'emploie pas de virus atténués et gradués, il
semble, au premier abord, assez indifférent que l'animal ait recu le matin
et dans l'après-midi des dilutions au 41/5000 et au 1/500, etc, s’il reçoit le
soir le même virus virulent au 1/10. On se demande ce qui arriverait si le
chien avait recu en une seule fois la même quantité de virus qu'on lui
inocule dilué et en plusieurs fois? On regrette de ne pas trouver cette
expérience à côté de celles que M. Hôgyes a faites. En effet, les chiens qui
recoivent sous la peau du virus rabique, même du virus fixe, ne suc-
combent pas toujours à la rage, et souvent ils sont réfractaires après une
seule inoculation. Dans la lettre sur la rage qu'il a écrite dans le premier
numéro de ces Annales, M. Pasteur cite des exemples de ce genre.
Je ne rappellerai ici que le cas de ces sept chiens inoculés d'emblée le
13 juillet 1886, sous la peau, avec deux centimètres cubes d’émulsion du
bulbe d'un lapin rabique de 118° passage. Six de ces chiens n'ont aucu-
nement souffert de l'inoculation, et quatre d’entre eux ont résisté à l'ino-
culation par trépanation du virus de la rage des rues. De même, deux
chiens qui recurent d'emblée, sous la peau, dix centimètres cubes de
l’'émulsion faite avec une moelle rabique de 122° passage, n’éprouvèrent
aucun malaise, et supportèrent sans périr l'inoculation intra-crânienne du
virus de la rage des rues. Dans ces deux expériences, les animaux témoins
succombèrent à la rage après l’inoculation sous la dure-mère.

On pourrait citer bien d’autres exemples où l’immunité a été conférée à
des chiens par une ou plusieurs inoculations de virus de passage sous la
peau. On est done conduit à se demander si M. Hôgyes aurait obtenu
des résultats différents, en inoculant la même dose de virus fixe sans
dilutions graduées? De plus, ce n'est pas avec quatre expériences que
M. Hôgyes a pu s'assurer que les inoculations de doses relativement
assez considérables de virus rabique virulent, dans une seule journée,
ne causent jamais la rage, même lorsqu'on commence par des dilutions
faibles.

C’est dans la dilution du virus que se trouve la nouveauté dela méthode,
il faut donc établir par de nombreux essais que cette dilution est nécessaire,
et qu’elle donne une sécurité que l’on n'a pas quand on inocule d'emblée des
virus virulents.

Pour M. Hôzyes, l'immunité s'acquiert par l'accoutumance de l'organisme
à un virus donné; il compare cette accoutumance à celle qui s'établit par
l'usage de substances chimiques toxiques. Cette idée nous explique
comment M. Hüyyes a été conduit à injecter des dilutions de plus en plus

1. M. Hôgyes constate que les dilutions au 1/500 donnent la rage aux lapins
quand on les injecte sous la dure-mère.

2, Voir Lettre de M. Pasteur, premier numéro de ces Annales, et Comptes rendus
Académie des sciences, novembre 18$6,

3. Voir ces Annales, numéro 1.

REVUES ET ANALYSES. 97

fortes de virus rabiques. Il ne faut pas oublier que le virus rabique vivant
contenu dans la moelle ne se dilue pas comme un simple composé chi-
mique soluble. À une parcelle de matière nerveuse peut rester attachée une
grande quantité de virus, et tel centimètre cube d'une dilution au 1/100e
peut être plus riche en éléments virulents qu'un centimètre cube d'une
dilution au 1/10.

M. Hôügyes procède comme l'a fait M. Pasteur; il établit, d’abord, la
possibilité de rendre, par sa méthode, les chiens réfractaires à la rage
avant l'infection; lui aussi nous conduira sans doute à la vaccination de la
rage après morsure, c'est pourquoi là communication qu'il a faite à l'Aca-
démie de Buda-Pest devait être présentée à nos lecteurs avec les remarques
que comportent les résultats intéressants qu'elle contient, On la comparera

très utilement au travail qui suit.
E. Roux.

D' FerRaN. Sur la vaccination antirabique de l'homme, Gaceta medica
Catulana, t. XI, n° 4, 1888.

M. le Dr Ferran a été récemment nommé directeur de l'Institut micro-
biologique de la municipalité de Barcelone; il a profité des facilités que lui
donnait ce poste éminent pour étudier la question de la vaccination anti-
rabique, et se poser, à ce propos, les questions suivantes :

« De ce qu'on obtient de bons résultats, à l'InstitutPasteur, avec la méthode
primitive etavecla méthode intensive, faut-il conclure en bonne logique qu’il
soit nécessaire d'inoculer les degrés d'atténuation si nombreux et si variés
qui constituent le traitement pastorien ?

« Puis, a-t-on démontré que le virus rabique, tel qu'il est acclimaté dans
les lapins, et sans atténuation préliminaire, est mortel pour l’homme ?

« N'est-il pas possible que les effets prophylactiques puissent s’obtenir
avec une seule vaccination rabique, et que toutes les autres soient inutiles
sinon superflues? »

« La légitimité de ces doutes est indiscutable, » continue M. le D? Ferran.
Nous en convenons volontiers. Nous sommes sûrs d'avance de n'être pas en
contradiction ayec ce savant médecin en ajoutant que ces doutes ne peuvent
être levés que par l'expérience, et qu'aucune considération théorique n'a
sur ce sujet de valeur probante, pas même les vues ingénieuses émises par
M. Ferran sur la théorie de la vaccination, et que nous n’entendons ni
appuyer ni contester, parce qu'elles sont théoriques.

C'est à l'expérience à décider, et avant de changer la méthode de vacei-
nation suivie à l’Institut Pasteur, M. Ferran a dû, sans aucun doute, faire
sur des animaux, sur des chiens par exemple, des tentatives lui donnant
toute confiance sur l'efficacité et l’innocuité de son procédé. On aimerait à
trouver dans son Mémoire le récit ou le résumé de ses expériences et des
raisons qui l'ont conduit à abandonner une méthode qui a fait ses preuves
et lui en substituer une autre.

Sa méthode de vaccination supra-intensive, qui débute par l'inoculation

7

98 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de la moelle du jour, a été fréquemment essayée à Paris sur les chiens. Elle
donne, il est vrai, une immunité complète aux chiens qui résistent, mais
elle n'est pas dépourvue de tout danger, car quand on opère sur un nombre
d'animaux un peu considérable, on voit que quelques-uns succombent à l’i-
noculation préventive !. C'est à raison de ces faits qu'on a adopté à l'Institut
Pasteur la méthode qu'on y suit.

M. Ferran pourra nous dire, et c'est en effet la seule justification que
contienne son Mémoire, que la valeur de sa méthode se démontre par les
succès de son application. Il est certain que la statistique que nous publions
plus bas est très encourageante. Mais elle n’est pas encore très longue.
Tout ce qu’on peut souhaiter, c'est qu'elle continue à rester aussi heureuse.

En ce moment, dans la pratique de M. Ferran, on peut distinguer deux
périodes. Pendant la première, qui comprend 22 cas, on inoculait la matière
cérébrale d'un lapin de passage, mort le 8 jour après trépanation. M. Ferran
trouve plus commode l'ablation du cerveau que celle de la moelle. Il le
coupe en fragments qu'il garde 24 heures, à 37°, en présence de la potasse
caustique. C’est une température plus élevée que celle qu'on utilise à Paris;
aussi l’atténuation est des plus rapides, et après 24 heures cette pulpe
encéphalique, inoculée par trépanation à des lapins, ne provoque l'explosion
de la rage qu'après une incubation de 45 jours. On broie, pour l'usage, le
tiers environ d’un cerveau de lapin avec du sable pour obtenir une désagré-
gation complète. On ajoute 24 centimètres cubes d’eau stérilisée, on laisse
le sable se déposer quelques minutes, et on fait à chaque mordu deux injec-
tions de À centimètre cube de cette émulsion le matin, et deux le soir pen-
dant 10 jours *?.

La deuxième période comprend le reste des eas de la statistique, soit 63,
et voici la description du procédé opératoire qu'on y suit.

« Aussitôt la vie éteinte chez les lapins trépanés, on enlève le cerveau, et
au moyen de sable, on en fait une émulsion dans l’eau stérilisée suivant le
mode indiqué : 40 grammes de pulpe encéphalique donnent 30 centimètres
cubes d’émulsion inoculable... Chaque individu mordu recoit durant le trai-
tement 40 centimètres cubes de cette émulsion ? : cela revient à inoculer tout
le principe actif et tous les germes de la rage contenus dans un cerveau
de Japin et quelquefois davantage.

« Nous pensons pourtant, continue M. Ferran, que cette quantité pourrait
être réduite notablement sans préjudice pour le résultat. »

« Voici les données statistiques qui établissent l'innocuité et la valeur
préventive des méthodes imaginées et mises en œuvre dans mon laboratoire
bactériologique du 10 mai au 10 décembre 1887. »

Elles se résument en ceci. Sur 83 individus traités, il n’y a aucun mort;
25 appartiennent pourtant à la série À, 15 à la série B, et 37 à la série C
de nos statistiques mensuelles. Pour 43, la fin du traitement date de plus

4. Pasteur, lettre sur la rage. Annales de l'Institut Pasteur, t. T, p.1.

2. L'émulsion est sans doute renouvelée tous les jours, mais ce point n'est pas
indiqué dans le Mémoire.

3. Probablement à raison de 4 inoculations pat jour, pendant 10 jours, avec
l’'émulsion renouvelée tous les jours. Lé Mémoire ne le dit pas.

REVUES ET ANALYSES. 99

de 3 mois, et de plus de 40 jours pour 63. En outre de ces 85 traités, 63 per-
sonnes se sont présentées au traitement, mais n’y ont pas été admises, parce
qu'on n'en a tiré aucune raison de croire suspects les animaux qui les
avaient mordues. Dx.

V. GALTIER, Persistance de la virulence rabique dans les cadavres enfouis,
Comptes rendus Acud. des Sc., 30 janvier 1888, p. 364.

M. Galtier fut appelé, le 25 novembre 1887, à examiner le cadavre d’un
chien mort seize jours auparavant et qui était resté enfoui durant quinze
jours. Quelques-uns des symptômes observés pendant la vie de l'animal
faisaient supposer qu'il avait succombé à la rage. Bien que les organes
abdominaux fussent déjà très altérés, M. Galtier a pu, en inoculant par
trépanation à un chien neuf un peu de la matière du bulbe, donner à ce
dernier une rage caractéristique qui s’est déclarée le 12° jour après l’inocu-
lation.

Le fait de la conservation de la virulence rabique dans le cerveau, pen-
dant un temps très long après la mort, a été constaté pour la première
fois par MM. Pasteur, Chamberland, Roux et Thuillier. On lit en effet dans
les Comptes rendus de l’Académie des sciences (t. XCV, p. 1187, 1882) le
passage suivant : «Tant que les matières de l’encéphale ou de la moelle
ne sont pas envahies par la putréfaction, la virulenee y persiste. Nous avons
pu conserver un cerveau rabique avec toute sa virulence trois semaines
durant, à une température voisine de 12 degrés. »

Nous sommes done pleinement d'accord avec M. Galtier pour appeler .
l'attention des médecins et des vétérinaires sur ce fait. Ils devront avoir
recours à la méthode d’inoculation à la surface du cerveau, lorsqu'ils auront
des doutes sur la maladie d’un animal soumis à leur examen. Si le cadavre
a déjà été enfoui, « il est indiqué de demander l’exhumation pour pratiquer
l’inoculation du bulbe. » On a souvent eu l'occasion, à l’Institut Pasteur, de
faire exhumer des chiens rabiques pour inoculer leur bulbe, et les résultats
obtenus s'accordent avec celui que rapporte M. Galtier.

Roux.

B. Fiscer. Sur un nouveau bacille lumineux. Centralbl. f. Bakt., t. IL, 1888,

Dans une revue critique sur les microbes phosphorescents (V. t. 1, p. 489).
nous avons déjà parlé d’un bacille rapporté par M. Fischer d'un voyage aux
Indes, et qui donne en 24 heures une phosphorescence bleuâtre aux poissons
morts sur lesquels on l’ensemence. Avec les cultures pures de ce microbe,
on à pu produire artificiellement et montrer aux curieux, à l'aquarium de
Berlin, cette phosphorescence en masse de J'eau de mer qui donne ce que
les marins appellent la mer de lait, phosphorescence continue très différente
de cette phosphorescence passagère qu'on remarque dans l’eau de mer, quand
elle entoure d'une frange lumineuse les obtacles contre lesquels elle se brise,

100 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

A côté de ce bacille et du bacterium phoshorescens dont nous avons parlé
aussi, M. Fischer place aujourd’hui un nouveau bacille lumineux rencontré
en telle abondance dans la Baltique. que l’eau du port de Kiel en contient
de 4 à 20 germes par centimètre cube. A raison de ce fait, il l'appelle bacille
indigène.

Ce bacille est un peu plus court, mais aussi épais que le bacille indien,
et lui ressemble beaucoup. C'est un bâtonnet court à extrémités arrondies,

animé de mouvements rapides. Il se colore bien par les couleurs d’aniline.
mais on n’y observe pas cette coloration bornée aux extrémités que présen-
tent si souvent le bacille indien et aussi celui de la septicémie du lapin.

Il pousse très bien sur la gélatine nutritive ordinaire, mais mieux ercore
quand on y ajoute 3 0/0 de sel marin, et qu'on y remplace la viande de
veau par la chair de hareng vert. Il ne pousse pas sur la pomme de terre,
le lait, le bouillon et le sérum de sang. Ce dernier fait le différencie du bacille
indien qui pousse bien sur le sérum. Il se distingue aussi du bacterium phos-
phorescens en ce qu'il envahit plus rapidement la surface d'un poisson sur
lequel on l’ensemence. Déposé sur un point, il a recouvert en quelques jours
l'animal d’une couche continue et phosphorescente, tandis qu’il faut mul-
tiplier les stries d'ensemencement avec la bactérie pour arriver au même
résultat.

Le bacille indigène et le bacille indien ont tous deux la propriété de
liquéfier la gélatine et de provoquer une abondante évaporation du liquide
qu'ils forment ainsi, si bien qu'autour de chaque colonie se forme une petite
cupule, plus ou moins profonde suivant l’âge, dont les bords ont l’air d’être
découpés à l’emporte-pièce, et dont le fond est occupé par la colonie toute
seule sans trace de liquide. Cette curieuse apparence se retrouve dans les
cultures par piqûre, dans lesquelles on voit quelquefois, au bout de quelques
mois, des trous de 3 à 4 mm. de diamètre, de 2 à 5 cent. de profondeur, et
dans les cultures en stries, où un sillon se forme sur le trajet du fil de
platine. M. Fischer n'en cherche pas l'explication. Peut-être pourrait-on la
trouver dans la chaleur produite pa» la combustion produite parees microbes,
et dont la lueur qu'ils répandent est une traduction.

Le bacille indigène peut croître à des températures de 5 à 10°, et se
différencie sous ce point de vue du bacille indien, qui, habitant les tropiques,
exige des températures supérieures à 15°. Par contre, il se rapproche du
bacille que nous avons cité dans notre revue comme provenant du Dr Forster,
et lui ressemble tellement par ailleurs qu'il serait bien intéressant de savoir
si ce n’est pas le même être.

Tout ce que nous disons dans notre revue du bacille de Forster se retrouve
en effet dans le Mémoire que M. Fischer consacre à son nouveau bacille,
nécessité de l'oxygène, couleur de la lumière, étendue du spectre, éclat assez
grand pour qu'on ait pu photographier les bactéries avec leur propre
lumière. M. Fischer a même réussi, avec des plaques assez sensibles et une
durée d'exposition assez longue, à avoir les images de deux bocaux renfer-
mant deux harengs phosphorescents, et même celle d'une montre placée
entre les deux.

Dx.

REVUES ET ANALYSES. 101

O. Prove. Le micrococcus ochroleucus, une nouvelle bactérie chromogène.
(Beitruge zur Biol. der Pflanxen de F. Cohn, IV, 38, p. 409.)

Il n'existe pas moins de 16 espèces connues de microbes colorés en jaune ;
M. Prove nous en fait connaître une espèce nouvelle qu'il a trouvée dans de
l'urine humaine, et qu'il nomme Micrococeus ochroleucus. Cette espèce se dis-
tingue par la forme de ses colonies sur la gélatine, par leur couleur d'un
jaune de soufre, par la forme de ses cellules qui sont des microcoques
isolés ou réunis en chapelet au nombre de 2 à 19, et dont le diamètre varie
entre 0,2 et 0,8 y. L'auteur s’est proposé, en étudiant cette espèce, de résou-
dre plusieurs problèmes qui sont d’un très grand intérêt théorique. Il s'est
demandé : 1° si la forme microcoque persistait dans toutes les condilions, et
si on ne pouvait pas la faire varier en même temps que le milieu de cul-
ture; 2% si la fonction chromogène se conservait avec tous ses caractères
dans les divers milieux où l'organisme est appelé à se cultiver. Autrement
dit, c'était soulever la question de la variabilité de la forme et de la fonction
sous l'influence des changements du milieu. Si M. Prove n'a pas résolu d'une
façon définitive ce double problème, du moins est-ce un mérite. que de
l'avoir soulevé, et son travail se ressent de l’idée qui a dominé ses recher-
ches. Il renferme un certain nombre de faits intéressants dont quelques-uns
sont nouveaux.

Le M. ochroleucus est composé, nous l'avons dit, de cellules sphériques
isolées ou réunies en diplocoques ou en streptocoques. De plus, ces cellules sont
mobiles, et, cultivées à 36° dans un milieu liquide sucré, ellesse renflent de
façon à atteindre 1,78 ÿ de diamètre et à donner des spores endogènes.
Ces spores se forment aussi sur de l'albumine coagulée par la chaleur. Les
colonies formées ainsi sur l’albumine peuvent résister parfois à une ébullition
d'une demi-heure à 100°. Mais M. Prove n'indique pas s’il a employé la
chaleur humide ou la chaleur sèche. Tous ces caractères, la mobilité des
cellules, l'existence des spores endogènes, leur résistance à la chaleur, ne
se rapportent guère à ce que l'on connaît sur les espèces que l'on décrit
d'ordinaire sous le nom de microcoques. On serait porté à eroire que l’on
a plutôt affaire à un bacille. Ce n'est pas la conclusion que donne M. Prove
qui déclare, au contraire, que la forme mierocoque s'est conservée dans
toutes les conditions et dans tous les milieux qu'il a essayés.

Ces milieux sont assez nombreux : en dehors des milieux solides ordi-
naires, l’auteur a employé des solutions sucrées, du lait, de l'amidon, de
l'urine, et un milieu minéral contenant du phosphate de potasse, des sul-
fates de potasse et de magnésie, du carbonate de chaux et de l’acétate
d'ammoniaque avec ou sans urée. L'organisme préfère les milieux solides et
les milieux alcalins ou neutres. Cependant, chose curieuse, dans la solution
minérale et dans les solutions sucrées, la réaction finale du liquide resta
acide; en présence de l’urée et dans tous les autres milieux, la réaction fut
alcaline même quand le milieu primitif était nettement acide.

La fonction chromogène ne se conserve pas comme la forme dans toutes
les conditions. La couleur se développe, d'ailleurs, tardivement même dans

102 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

les circonstances les plus favorables, sur la gélatine par exemple, qui se
liquéfie lentement avant que la coloration n'ait nettement apparu. Cette
coloration se produit toujours en présence d’un excès de matières albumi-
noïdes; en présence des substances hydrocarbonées, comme les sucres, la
couleur ne se forme pas. M. Prove a eu l’occasion d'observer les mêmes faits
pour le Micrococcus prodigiosus, et il est porté à croire que, d'une manière
générale, la formation des pigments colorés chez les microbes est due à la
présence des albuminoïdes en excès. Avec le M. prodigiosus, assure-t-il, la
couleur ne fait jamais défaut dans les milieux où les matières albuminoïdes
existent en abondance. On sait cependant que l'on peut obtenir des cultures
du M. prodigiosus qui restent incolores sur tous les milieux. Ce qu'il dit
sur l’action des sucres pour empêcher la production de la couleur chez
l'organisme qu’il a étudié vient confirmer ce que nous en avons dit ailleurs
à propos des microbes colorés. Il est un fait entièrement nouveau que
M. Prove signale en passant, et sur lequel il nous promet une étude plus
complète. Je veux parler de l’action de la lumière sur son microbe.

La lumière ne change ni la forme ni la marche de développement de
l'organisme ; mais elle a une action marquée sur la fonction chromogène.
La lumière solaire ainsi que la lumière diffuse activent beaucoup la produc-
tion de la couleur jaune ; l'obscurité ralentit cette coloration quand elle à
commencé à se former, et l'empêche tout à fait dans les cultures conservées
complètement à l'abri de la lumière. On obtient ainsi des cultures qui restent
incolores tant qu'on ne les expose pas de nouveau au soleil. C'est le premier
exemple connu, chez les microbes colorés, de cette action de la lumière. Il
resterait à voir si l’action prolongée de l'obscurité pendant un certain nombre
de cultures successives arrive à abolir d'une facon durable la fonction chro-
mogène, soit quand on reporte les cultures à la lumière, soit quand on les
ensemence sur de nouveaux milieux. C’est un point très intéressant qui reste
à étudier et que M. Prove tiendra sans doute à éclaircir dans le travail
qu'il prépare sur l’action de la lumière chez le microbe coloré qu'il a décrit

le premier.
E. W.

Dr GLogiG. Sur le développement des Bactéries entre 50 et 70° (Zeitschrift
fur Hygiene, WI, 2, 1887, p. 294.)

La plupart des microbes ne peuvent guère se développer facilement au
delà de 45°, et les températures de 50 et 60° sont considérées, pour le plus
grand nombre d'entre eux, comme les limites extrêmes où peut se faire leur
développement. Cependant on a trouvé quelques microbes dans l’eau, en
particulier dans les eaux thermales, pouvant croître encore à 64° et 74°
(Miquel, Van Tieghem, Certes et Garrigou).

M. Globig s'est proposé d'étudier d’une façon systématique les microbes
qu'il a vus souvent se développer au delà de 50, sur du sérum du sang
soumis à la stérilisation fractionnée d’après la méthode de Koch. Ces micro-
bes se trouvent facilement dans de la terre de jardin, et il suffit d'en met-

REVUES ET ANALYSES. 103

tre des traces sur du sérum maintenu à 58° pour donner naissance à de
nombreuses colonies.

Pour séparer les différentes espèces qui se développent facilement dans
ces conditions, M. Globig s’est servi de la pomme de terre, afin de conserver
à des températures élevées l'avantage que donne l'emploi des milieux soli-
des La pomme de terre lavée longuement au sublimé, puis brossée et sté-
rilisée une première fois à 4009, d'après la méthode de Koch, est ensuite cou-
pée avec un couteau flambé, en morceaux de grandeur convenable, puis
introduite dans des tubes à essai, que l’on soumet une seconde fois et à
trois reprises différentes à la stérilisation fractionnée à 100°. La longueur de
ce procédé de stérilisation, d’ailleurs connu, mais minutieusement décrit
par M, Globig, lui a fait essayer un procédé plus commode analogue à celui
qu'a déerit M. Roux dans le dernier numéro de ces Annales; il introduit la
pomme de terre crue dans les tubes à essai et fait ensuite d’un seul coup
la cuisson et la stérilisation. M. Globig a malheureusement opéré en tubes
elos et dans une atmosphère imparfaitement humide, ce qui rend la surface
de la pomme de terre sèche et ridée, impropre à la culture des microbes,
et, ce qui est un inconvénient pius grave, donne souvent une stérilisation
incomplète à 100°, température à laquelle M. Globig fait ses stérilisations.
Il eût suffi d'introduire un peu d'eau dans le tube à essai et de porter pen-
dant 10 15 minutes à 415° pour amener sûrement le double résultat qu'on
se propose.

Quoi qu’il en soit, M. Globig a pu isoler dans la terre de jardin 30 espèces
différentes de microbes pouvant se développer entre 50 et700, donnant faci-
lement des spores, et ayant tous la forme bacillaire. La forme coccus n’a pas
été rencontrée dans ces conditions. Aucune des espèces isolées ne s’est mon-
trée pathogène pour le cobaye ni la souris, ce qui ne doit pas surprendre,
puisque d'ordinaire les températures élevées auxquelles ont été faites toutes
ces cultures amènent l’atténuation rapide de la virulence chez la plupart des
bactéries pathogènes connues.

Nous disions que la forme coceus n’a pas été observée : M.Globig signale
cependant deux espèces de microorganismes formées de corpuscules ronds,
très petits, parmi lesqueis on distingue parfois quelques rares filaments
courts et très grêles, qu'il est porté à prendre pour des filaments de mucé-
dinées dont les corpuseules seraient les conidies ou les spores. Il est très
probable que cette hypothèse est exacte. L'on rencontre en effet un assez
grand nombre de mucédinées pouvant vivre au delà de 50°, J'ai eu l'occa-
sion d'en observer plusieurs et j'en ai signalé! qui sont remarquables par
leur propriété de sécréter tardivement de l’invertine au moment de leur
fructification. Il en existe beaucoup qui peuvent se rapporter à la descrip-
tion assez incomplète qu'en donne M. Globig. On obtient facilement des
formes analogues, à 50° et au delà, sur du pain humecté d’un liquide légère-
ment acidulé, et souvent sur du simple papier buvard en présence de l’eau.
Les spores rondes, très petites, douées d'un vif mouvement brownien, don-
nent en germant un filament très grêle, qui se ramifie parfois, mais qui

4. Voir le no XI, 1887 de ces Annales.

104 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

reste souvent très court, de facon à produire l'illusion d’un bacille portant à
l'une de ses extrémités un spore renflée.

Si M. Globig n'a observé qu'un très petit nombre de mucédinées, une ou
deux espèces tout au plus, dans les conditions où il a.opéré, cela tient sans
doute à ce qu'il a fait constamment ses cultures dans des milieux neutres,
ou même alcalins, comme le lait ou les bouilions dont il s’est servi à une ou
deux reprises.

En cherchant à déterminer les limites supérieures de température qui
permettent la vie des microbes, M. Globig a expérimenté, tant sur ceux qu’il
avait isolés que sur les microbes les plus vulgaires. Il assure que, parmi ces
derniers, il n’en a trouvé aucun qui puisse se développer à 46 et à 50°; cela
tient sans doute aux conditions particulières dans lesquelles M. Globig s'est
placé, car on pourrait citer un grand nombre de bactéries parmi les plus
vulgaires, à ne prendre que le Bacillus subtilis, que l'on voit pousser facile-
men t à 55 et même à 60 dans les milieux légèrement alcalins.

Parmi les trente espèces étudiées, il en est très peu qui puissent se cul-
tiver jusqu'à 70°. La température moyenne de culture a été de 58, et, pour
un grand nombre de ces espèces, l'optimum de température se trouve dans
les environs de 550. Mais ce qu'il y a d'intéressant à tirer de ces observations,
c’est que plusieurs espèces ne peuvent descendre au-dessous de 50° dans les
cultures sur pomme de terre. Ce minimum existe-t-il d’une façon absolue?
est ce qui n’a pas été établi, M. Globig ayant négligé de déterminer les
limites de température en employant les milieux liquides pour ses cultures.

Ce n'est que dans la terre de jardin que M. Globig a pu trouver ces bac-
téries particulières. Les déjections intestinales et les excréments de divers
animaux, pas plus que des eaux d’origine très diverse ne lui en ont fourni.
Cette absence des bactéries dans les eaux est faite pour surprendre. J'ai eu
souvent l'occasion d'en observer qui provenaient des eaux ordinaires, et qui
se cultivaient facilement à 55 et 60° dans les liquides neutres ou alcalins.
Une des causes d’insuccès de M. Globig provient, sans doute, de ce qu'il a
surtout expérimenté avec de l’eau de marais où avaient séjourné pendant
longtemps des corps en putréfaction, contenant, par conséquent, des bacté-
ries vulgaires en grand nombre, dont le développement exagéré avait
amené la destruction des espèces incapables de vivre dans les mêmes con-
ditions de basse température.

Pour ne nous en tenir qu'aux résultats de M. Globig, nous noterons avec
lui la présence de ces bactéries particulières dans les terres les plus diverses,
qu'il a eu l’occasion d'examiner, et dont quelques-unes provenaient des îles
Hébrides, de la Nouvelle-Guinée ou de régions plus froides, comme les îles
de la mer Baltique. On les trouve, tant à la surface que dans les couches
profondes du sol, jusqu'à 2 et 4 mètres de profondeur.

Un détail intéressant, signalé par M. Globig, sans autre explication, est
le fait de l'absence de tout germe vivant, à la profondeur de 80 centimètres,
dans le sol avoisinant la partie nord de l’Institut de M. Koch, tandis que les
couches plus superficielles ou plus profondes en contiennent un grand
nombre, se développant à toute température, depuis 15° jusqu’à 65°. En
consultant ses tableaux, on peut remarquer que la couche située entre 60

REVUES ET ANALYSES. 105

et 80 centimètres se compose d'un sable fin très argileux, par conséquent
peu perméable à l'eau, et surmonté d'une couche épaisse de 40 centimètres
d'un sable plus grossier, Le tout constitue, on le voit, un filtre parfait, qui
ne laisse pas arriver à la profondeur de 80 centimètres les eaux de la surface
et, par suite, les germes que ces eaux entraînent avec elles. Au-dessous, on
a, au contraire, un sable grossier et caillouteux, contenant des germes en
quantité. D'une façon générale, le nombre des microbes diminue avec la
profondeur, et cela est particulièrement vrai pour les bactéries qui nous
occupent. Dans le sol sableux de la montagne de Gatow, à sable très fin,
elles disparaissent au-dessous de 20 centimètres,

S'il est vrai que certains microbes ne peuvent pas se développer au-des-
sous de 50°, on comprend difficilement l'existence de leurs germes à la sur-
face des sols Les plus divers, d’où les eaux d'infiltration les répartissent en
plus ou moins grand nombre dans les couches sous-jacentes.

Sans doute, le soleil de juillet et d'août est capable d'échauffer parfois la
surface du sol jusqu'à des températures qui dépassent 45 et 50°. Mais cela
suffit-il pour expliquer la présence constante de ces germes dans toutes les
terres ? ILest permis de croire que ces germes sont capables de se développer
à des températures inférieures, autres que celles où l’auteur s'est exelusive-
ment placé. Signalons toutefois ce fait intéressant, que ces germes existene
en nombre relativement plus considérables dans les sols des pays très
chauds, comme la Nouvelle-Guinée.

E. WASSERZUG.

NogcGerara. Sur une nouvelle méthode de culture des bactéries sur mi-
lieux colorés dans un intérêt de diagnostic. Fortschritte der Medicin, t. VE,
1885, p. 1.

Une méthode qui permettrait d'établir, entre les diverses espèces de
coceus, des différences bien caractéristiques, rendrait évidemment de grands
services. Il n'y a guère à croire qu'il existe une méthode pareille, ayant des
applications tout à fait générales. Les produits de l'activité vitale d'un
miecrobe, qui pourraient servir à le caractériser, ne varient pas seulement
avec le genre et l'espèce du microbe, ils varient aussi avec les conditions et
le milieu de culture, et par suite telle méthode qui, dans un cas, donnera
telle réaction caractéristique d'un microbe pourra fort bien ne rien donner
dans un autre cas avec le même microbe.

Mais il n’en faut pas moins savoir bon gré aux savants qui nous font
connaître un nouveau moyen d'étude et de diagnostie. M. Noeggerath en a
d’abord cherché un dans une méthode de coloration des microbes morts
avec un mélange de couleurs. Mais il a bientôt trouvé qu'il valait mieux
cultiver le microbe vivant sur un milieu nutritif coloré avec ce mé
lange.

Sa méthode est la suivante. On mélange ensemble et dans l'ordre sui-

106 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

vant les quantités voulues de solutions concentrées de diverses couleurs
d'aniline, savoir :

Bleu de métylène . . . . :.. ..." M Lie
Violet de gentiane. . . .... qe,
Vert de MOVIE ARRETE 1
Chrysoidiner rester etes 4e,
FUCRSMESET TER NET ER TERRE FA

Le tout est étendu à 200%. On obtient ainsi un liquide qui colore le
papier à filtre en gris foncé ou noir bleuâtre. Il est bon de le conserver 10
ou 45 jours avant de s'en servir. Il se fait alors des modifications de cou-
leur qu'il vaut mieux laisser s’'accomplir. Au bout de cet intervalle, on cor-
rige sa teinte. Si elle est trop rouge, on y ajoute un peu de vert et de violet;
si elle est trop verte, on ajoute du rouge et un peu de violet; si c’est la
nuance bleue ou violette qui domine, on ajoute un peu de chrysoïdine. On
tâche d'obtenir une teinte neutre.

C'est ce liquide qui sert à colorer le milieu nutritif. À 10° de gélatine
poptonisée on ajoute de 7 à 10 gouttes de teinture, de facon à ce que le
mélange commence à n'être plus transparent. On chauffe et on étend sur
une plaque de porcelaine. Sur la gélatine refroidie on fait alors des cultures
en boutonnière du microbe à étudier. On observe alors des changements de
couleur très marqués. La portion de gélatine envahie par la culture forme
une bande colorée, entourée de deux bandes plus claires, le tout très dis-
tinct comme teinte, sinon comme contours, de la couleur neutre du milieu
gélatinisé. 11 serait intéressant de savoir quelles sont les actions chimiques
qui amènent ces changements de couleur, et c'est peut-être pour des
recherches dans cette voie que cette méthode si sensible des colorations
sera le plus utile. Il suffit pour s’en convaincre de songer aux services que
rendent journellement dans les laboratoires, le papier de tournesol ou les
réactifs colorés. C’est là un sujet sur lequel M. Noeggerath promet de nou-
velles recherches.

Dx.

BEexRiNG. Sur le sublimé corrosif dans les liquides albumineux. Centrabl. f.
Bakter. M. und Parasit., 14888, t. I, p. 27 et 64.

Nous avons publié, p. 553 du t. Ier de ces Annales, le résumé d'un travail
du D' Laplace, prouvant que la valeur du sublimé corrosif comme anti-
septique était notablement augmentée par l’addition d'un peu d'acide tar-
trique. M. le Dr Behring, après vérification, se rallie à cette conclusion,
mais il lui enlève et lui ajoute quelque chose.

Ce qu'il lui enlève, c’est un peu de son caractère absolu. Il est certain
qu'il ne peut y avoir de formule absolue dans les questions d’antiseptiques.
Ainsi la solution de Laplace semble à M. Behring moins active pour la
désinfection du pus que pour celle du sérum de sang. Il lui paraît aussi
que la solution non acidulée de bichlorure de mereure est de un quart plus

REVUES ET ANALYSES. 107

active que la solution additionnée d'acide tartrique, quand on l’emploie
contre les spores charbonneuses. En revanche, en injections sous-cutanées,
la solution acide, qui ne donne pas de précipité avec les liquides organiques,
est absorbée plus vite que l'autre, et les animaux qui l'ont recue meurent
non seulement plus vite, mais encore pour des doses plus faibles que si on
se sert de solution non acidulée.

Nous retrouvons done, même pour cet antiseptique si actif, la contingence
ordinaire dans cet ordre de phénomènes. Cette contingence tient à des
causes qu'il serait on ne peut plus utile de mettre en lumière pour chaque
cas. Ici nous connaissons deux de ces causes. En premier lieu, M. Wasserzug,
dans un travail que nous avons publié, a montré que l'acidité de la liqueur
pouvait, si faible qu'elle fût, avoir à elle seule de l'influence sur certaine
microbes, par exemple sur la bactérie du pus bleu. Puis, voici M. Behring
qui en éclairant un peu le mécanisme de l’action de l'acide, nous permet
de comprendre qu’il puisse quelquefois ne pas fonctionner.

On pouvait interpréter les résultats de Laplace en disant que l'acide,
empêchant le sublimé de se précipiter à l'état d'albuminate de mercure, le
maintenait par là, actif, dans la liqueur. D'après M. Behring, cet albuminate
de mercure n'existe pas, ou plutôt n’a aucune ressemblance avec les coagu-
lums albumineux insolubles provoqués par l’action des acides ou de la
chaleur. L'albuminate de mercure se redissout facilement dans les acides,
le cyanure de mercure, l'iodure de potassium, bref dans tous les corps qui
ont la propriété de redissoudre les précipités mercuriques obtenus en solution
aqueuse. D'un autre côté, on peut obtenir, du sérum de sang dans lequel on
tient du sublimé dissous au moyen d'un acide, les mêmes réactions que
celles que donne le sublimé simplement dissous dans l’eau. Ainsi la potasse et
la soude y donnent un précipité jaune, l’ammoniaque un précipité blanc,
les carbonates alcalins un précipité brun, etc.

On retrouve les mêmes faits pour le chlorure d'argent et le calomel.
Tous les réactifs capables, par exemple, de dissoudre le chlorure d'argent,
comme l'ammoniaque, le cyanure de potassium, l’hyposulfite de soude sont
aussi capables d'empêcher le chlorure d'argent de précipiter les solutions de
sérum, et d'y dissoudre le précipité quand il s’en est formé.

Tout cela prouve que ce sont les sels présents dans le sérum du sang qui
ont le rôle essentiel dans la formation des propriétés métalliques, et que
l'albumine n’est entraînée dans le précipité que par « voie mécanique », dit
M. Behring. J'aimerais mieux dire par voie d'adhésion moléculaire, car ce
mot implique, comme je l'ai montré dans plusieurs cas, une certaine
constance de composition, inférieure à celle que l’on rencontre dans les
composés chimiques, mais supérieure à celle qu'on peut attendre d'un phi-
nomène d'entraînement mécanique.

Quoi qu'il en soit, M. Behring termine son travail en retrouvant le fait,
déjà connu pour d’autres matières albuminoïdes, que du sérum de sang;
privé de sel par la dialyse, ne donne avec le bichlorure aucun précipité, et
s'empare avec raison de cet argument en faveur de sa thèse.

Dx.

108 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

F.GRim. Le tribromophénol comme antiseptique. Deutschemed. Wochenschr.,
1882, p. 4121.

Comme nous l'avons fait observer à diverses reprises, l'étude des anti-
septiques a quelque peine à sortir de la voie dans laquelle l’ont lancée les
premiers qui s'en sont occupés. Elle passe presque toujours par les mêmes
phases. Un antiseptique étudié et vanté par un savant est en général déprécié
par un autre savant qui l'essaye dans d’autres conditions ou sur d'autres
microbes. Pendant qu'on discute à son sujet, un praticien s'en empare et
lui trouve divers emplois. Là aussi, souvent des contradictions se produisent,
des contre-indications se révèlent. Les tissus qu'il s'agit de désinfecter ne
sont pas, en effet, matière de chimiste, et on ne peut conclure de l'expérience
in vitro à l'essai sur un être vivant. Puis, quand l’antiseptique à réussi a
entrer dans la pratique, il y a dans son histoire une période brillante après
laquelle il décline et semble devenir incapable de produire les effets qu'on
pouvait lui demander à peu près sûrement jadis.

Cette décadence est un fait trop commun pour qu'on puisse l’attribuer
au hasard. Elle est le résultat d'un ensemble de causes complexes. Peut-
être y a-t-il un fait d'astoutumance, d'acclimatation, mais il y a surement
autre chose, la négligence dans l'emploi d’un corps devenu usuel, et surtout
les falsifications que l'industrie se hâte de faire subir à tout produit dont
la vente courante augmente.

Tous ces inconvénients, même le dernier, auquel il semble qu'il n'y ait
pas de remède, tiennent en grande partie, remarquons-le, à ce que d’un
bout à l’autre, l'étude de l’antiseptique est restée l'œuvre de l'empirisme
et non celle de l'expérience. Un antiseptique introduit dans une solution
organique, ensemencée ou non à l'avance, l'empêche de fermenter lorsqu'il
y atteint une certaine dose. Voilà à la fois le point de départ et la conclusion
de beaucoup de travaux sur la matière. Réduite à ces éléments, cette notion
est pourtant tout à fait insuffisante, parce qu'elle n'est que la traduction d'un
fait contingent, et ne vise aucune loi. Si encore on connaissait et on indiquait
toutes les conditions de contingence du fait qu'on mentionne! Mais point! il
en est d'inconnues et de méconnues. Aussi n'est-il presque jamais arrivé
que deux expérimentateurs, après avoir travaillé à se mettre dans les mêmes
conditions, aient observé le même résultat. Aussi est-il quelquefois arrivé
que le même savant, recommençant ses essais à huit jours de distance,
aurait été amené à se contredire lui-même, si un instinet secret ne l'avait
arrêté dans cette voie périlleuse.

Ce n’est pourtant pas une raison pour dédaigner toute recherche sur ces
questions. M. Grimm nous apporte au sujet du tribromophénol des rensei-
gnements qui, tout incomplets qu'ils sont, sont les bienvenus. Ce corps est
le résultat de l’action du brome sur l'acide phénique. Il est cristallisé en
aiguilles blanches, fusibles à 95°, et donnant en se refroidissant une masse
cristalline facile à pulvériser. Très soluble dans l'alcool, l’éther, le chloroforme,
il est peu soluble dans la glycérine, l'alcool étendu et l'eau. Les solutions de
gélatine nutritive en dissolvent des quantités variables avec leur degré d’al-

REVUES ET ANALYSES. 109

calinité, et qui oscillent à la température ordinaire, entre 2 gr. 5 et 3gr. 3
par litre.

Nous passerons rapidement sur les résultats des expériences de stéri-
lisation de solutions organiques au moyen du tritromophénol. Comme nous
le faisions remarquer plus haut, les chiffres individuels de ces diverses expé-
riences n'ont pas grande signification, et on peut résumer l’ensemble des
résultats de M. Grimm en disant :

Que le tribromophénol, dissous en proportion de 3 grammes par litre
dans de la gélatine nutritive, y empêche le développement des bactéries de
la putréfaction ;

Qu'avec les liquides animaux, dans lesquels ce corps est presque inso-
luble, il retarde la putréfaction sans s'y opposer d’une facon absolue;

Qu'il est plus actif avec l'urine qu'il peut stériliser à la proportion de
0 gr. 1 par litre;

Qu’après un séjour de 30 minutes dans une solution ammoniacale de
tribromophénol à 1 0,0, ou après un séjour d’une heure dans une solution à
0,5 0/0, les bactéries de la fermentation putride sont devenues incapables
de se développer dans un nouveau milieu. Rien de moins précis que ces
mots de fermentation putride, mais il faut bien nous en contenter.

Ce qui est plus intéressant que ces conclusions, c’est l'étude de la facon
dont se comporte le tribromophénol sur les êtres vivants. Son odeur est
faible mais désagréable, et son contact irrite les narines. Sa saveur est mor-
dante, désagréable et persistante, mais il n’a aucun effet caustique sur les
muqueuses et sur la peau. Appliqué sur des blessures fraîches, il les cauté-
rise et les nécrose superficiellement. Il amène souvent de petites hémorragies
sur celles qui sont en voie de granulation, mais ne détruit pas plus profon-
dément les bourgeons, dont l'aspect s'améliore au contraire notablement.

Dans les procès purulents et gangréneux, le tribromophénol agit comme
un désinfectant énergique ; il active la démarcation et la séparation du tissu
nécrosé, et le développement denombreux bourgeons. En général, les patients
le supportent bien. Comme il est sans action sur la peau, il peut servir à
imprégner de la gaze ou les linges de pansement,

M. Grimm a pu en absorber jusqu'à 4 gramme par jour, pris en plusieurs
doses, sans rien éprouver autre chose qu'un peu de malaise. Comme ce
corps ne se dissout pas dans les liquides de l'estomac, et qu'il peut au
contraire se dissoudre dans les liquides alcalins de l'intestin, il pourra
peut-être servir à désinfecter le canal digestif dans certains cas de maladies
infectieuses ou de blessures. Les expériences de Baumann et Herter (Zeitschr.
f. phys. Chemie, t. 1) prouvent qu'après dissolution dans le suc intestinal, il

est éliminé à l'état d'acide tribromo-sulfophénique.
Dx.

A. LusserT. L'aide oxynaphtoïque. Fortschr. d. Med., t. VI, p.4, 1888.

Le corps essayé par M. Lubbert comme antiseptique résulte de l'union
d’une molécule d'acide carbonique à l'x Naphtol étudié par M. Bouchard,
et présente par suite vis-à-vis de cet agent les mêmes relations que l'acide

110 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

salicylique vis-à-vis de l'acide phénique. C'est un corps cristallisé, non com-
bustible, fusible à 1860 avec un commencement de décomposition. Il ne
se dissout dans l’eau que dans la proportion de 1 : 30,000, cette solubilité
diminue environ de moitié dans l’eau acide, mais augmente dans les solu-
tions alcalines, et aussi en présence des sels à réaction alcaline, tels que
le borax ou le phosphate de soude, avec lequel on peut avoir des solutions
à #9.

Ces qualités chimiques pourraient rendre très précieux, dans certains
cas, l'acide oxynaphtoïque, s’il est vraiment un antiseptique actif. C'est ce
que M. A. Lubbert s’est proposé de rechercher, Son ambition a même été
plus haut, car voici son programme.

L'acide «oxynaphtoïque peut-il empêcher le développement des microbes
dans les milieux appropriés, et dans quelles conditions? Quelle influence
exercent sur ses propriétés aseptiques éventuelles la composition chimique
du milieu nutritif, la température, l'action de la lumière, et quelle est la
durée de l'action ?

On ne saurait qu’applaudir à ce programme. Il embrasse quelques-uns des
points que nous n'avons cessé de signaler dans ces Annales, comme devant
entrer nécessairement dans une étude scientifique des antiseptiques. Mais
ce n'est pas tout que de faire un programme, il faut l’exécuter, et force
nous est de dire que M. Lubbert n’a pas touché au sien.

Quels moyens y avait-il de résoudre l'intéressante question qu'il s'était
posée ? Celui-ci par exemple. Etudier dans un milieu donnné la valeur anti-
septique de solutions d'acide oxynaphtoiïque de concentrations décroissantes,
s'arrêter à la solution la plus forte de celles qui permettent encore le déve-
loppement de l'espèce de microbe ensemencée, ou à la plus faible de celles
qui l'empêchent, et voir si en changeant les conditions de milieu, de tem-
pérature, d'insolation, etc., on est conduit à augmenter ou à diminuer, dans
une ou plusieurs expériences nouvelles ordonnées en série, la richesse en
antiseptique de ces deux liqueurs d'épreuve, qui représentent en quelque
sorte le papier rouge et le papier bleu qui servent à éprouver la neutralité
d'une liqueur.

Au lieu de suivre cette méthode ou toute autre équivalente, M. Lubbert
prend, dans celles de ces expériences qui ont pour objet la solution du
problème posé plus haut, une proportion d’antiseptique assez grande pour
qu'aucun développement de microbes ne se produise dans ses liqueurs,
qu'elles soient à l’étuve à 37° ou dans la chambre à 16°, à l'obscurité ou à
la lumière, protégées ou non par des écrans formés de solutions d'oxyde
de cuivre, ammoniacal, ou de chromate de potasse. Il n’est pas éloigné de
tirer la conclusion que toutes ces circonstances sont indifférentes. IL est
clair qu'il n’y a rien à conclure de ces expériences : le réactif manquait de
sensibilité.

Il n'y à même pas à en tirer la notion de la dose active de l’antiseptique,
car elle n’est pas indiquée. On voit bien dans le Mémoire qu'en présence
de 2°/, de phosphate de soude, il faut 4 °/, d'acide oxynaphtoïque pour
antiseptiser l'urine, la solution d'extrait Liebig et le bouillon albumineux.
Mais M. Lubbert juge que la présence du phosphate de soude diminue la

REVUES ET ANALYSES. aff

propriété antiseptique de l'acide. Il en faut donc moins de 1 °/, dans les cas
ordinaires.

La seconde partie du travail de M. Lubbert est consacrée à l'étude de
cette question : peut-on, avec l'acide oxynaphtoïque détruire des cellules .
adultes de microbes, humides ou sèches? lei, les conclusions sont plus
nettes, En introduisant dans un liquide en pleine putréfaction 0,75 ?/, d'a-
cide, et en agitant, on trouve qu’au bout d'une heure le mélange ne peut
plus servir à ensemencer un nouveau milieu. En humectant avec une cul-
ture de Sfaphylococcus pyogenes aureus des cristaux d'acide oxynaphtoique,
de facon à former avec ce mélange des granules qu'on ensemence, après
des temps variables, dans un bouillon alcalin ou sous la peau d’un lapin, on
trouve qu'après un à deux jours de contact, le coccus est devenu incapable
de se développer.

Les solutions à 1 : 30,000 d'acide dans l'eau se montrent à peu près
incapables de tuer des cellules en pleine évolution. Avec les solutions à
41/, qu'on réussit à obtenir en se servant comme adjuvant du phosphate
de soude, deux ou trois heures de contact suffisent à détruire le Staphylo-
coceus ou des bacilles charbonneux sans spores.

Les spores résistent davantage : ce n’est qu'après 6 jours de contact qu'on
les a trouvées mortes dans cette solution. Tous les autres modes d'emploi
de l'acide se sont montrés inactifs, même la solution alcoolique saturée.

Resterait à étudier l’action physiologique, qui se trouve à peine abordée
dans le Mémoire actuel. L'auteur promet sur ce sujet un nouveau travail

dont nous rendrons compte.
Dx.

———————
ES NN

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES
PENDANT LE MOIS DE JANVIER 1888.

Personnes traitées mortes de rage.

Mazoyer (Joanny), # ans, de Saint-Albain (Saône-et-Loire),
mordu le 6 décembre 1887 à la face. Trois morsures sur le côté
droit du nez, une morsure à l'angle interne du sourcil droit, une
morsure sur le côté gauche du menton, deux morsures à la lèvre
inférieure. En tout sept morsures à la figure. Toutes ont saigné,
Cautérisées au crayon Moser trois heures après. Le chien mordeur
était inconnu au pays ; il a parcouru la commune après avoir
mordu plus de vingt chiens.

Il a disparu sans qu’on ait pu l’abattre.

Mazoyer a été traité du 12 décembre au 7 janvier 1888, il a été
pris de rage dans la nuit du 21 au 22 janvier. Renseignements
donnés par le docteur Padzinski, de Viré (Saône-et-Loire).

112 ANNALES DE L'INSTITUT. PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — JANVIER 1888
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4. Pour l'interprétation des termes et la signification des diverses colonnes du
tableau, se reporter aux statistiques précédentes, p. 95, 143 et 207, t. I.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 113 fois ; chats, 4 fois ; vaches, 2 fois.

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

9me ANNÉE. MARS 1888. N° 3

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

LETTRE DE M. PASTEUR A M. DUCLAUX

Mon cher Duclaux,

Le Dr Gamaleïa, directeur de la clinique de la rage au Labo-
ratoire microbiologique de M. Metchnikoff, à Odessa, et le
Dr Bujwid, directeur du laboratoire antirabique de Varsovie, me
font part de résultats très dignes d’être publiés. Je laisse d’abord
la parole au docteur Gamaleïa :

.… Pendant l’année 1887 nous avons vacciné 389 personnes, dont 38
avaient été mordues par des loups enragés, 348 autres par des chiens, des
chats, chevaux, ânes, porcs ; 3 n'avaient pas été mordues, mais travail-
lant au laboratoire, elles ont tenu à se garantir contre la possibilité d'une
infection rabique. Vous vous rappellerez qu'en 1856, 14 personnes, non
mordues, occupées au laboratoire, s'étaient également fait vacciner.

Des 38 personnes mordues par des loups enragés, 30 seulement ont pu
terminer leur traitement. De ces 30, une seule est morte de rage quelques
jours après la fin de ses inoculations. Les 8 autres, arrivées tardivement au
laboratoire et présentant des plaies extraordinairement graves, sont mortes
avant la fin de leur traitement — Pas moins de 15 personnes n'ont pu arri-
ver que 18 jours après l’accident. De celles-ci, 3 sont encore mortes pen-
dant leur vaccination. Restent 345 personnes dont la vaccination à été com-
plète et sur ce nombre nous n’avons eu qu’un seul cas de mort. C'était une
fille du nom de Korobtcherko, pour laquelle la méthode intensive n’a pas
été employée vu les froids de l'hiver. (Voir mon article des Annales de
M. Duclaux : Sur les vaccinations, p. 230, note 1rc.)

La méthode intensive n’a donc pas eu d’insuecès sur plus de 300 eas, si

8

118 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. .

on ne compte pas les plaies trop graves qui ne laissent pas aux vaccinations
le temps nécessaire pour donner l’immunité.
Cette méthode a été la seule employée ici depuisle mois de février 1887 !.

Voici maintenant la lettre du docteur Bujwid :

… J'ai obtenu du traitement intensif quelques succès que je désire
yous communiquer.

Ainsi que vous le savez, j'ai voulu d’abord constater si le traitement
simple est suffisant et dans quels cas. Chez plus de 200 personnes mordues
aux membres, j'ai obtenu des résultats qui me semblent très bons. Cependant
j'ai eu deux morts.

Dès le commencement du mois de février jusqu'au mois de juin 1887, j'ai
recu 6 personnes grièvement mordues aux membres et au visage. Je leur ai
appliqué également le traitement simple en bornant les inoculations à la
moelle de 6 jours. Toutes, malgré le traitement, sont mortes de rage.

Le 21 juillet on m'a adressé deux paysans mordus très grièvement au
visage et à la tête par un loup enragé. J'ai poussé les inoculations jusqu’à
la moelle de 3 et2 jourset je les ai répétées deux fois.

Un mois après on m'a envoyé deux autres personnes mordues par un
loup enragé, dans le même district : morsures également profondes, nom-
breuses à la tête et au visage. Le traitement a été aussi intensif que dans
les deux cas précédents.

La rage des deux loups a été confirmée chaque fois par trépanation de
leur cerveau à des lapins qui ont pris la rage en 15 ou 16 jours.

Jusqu'ici, c'est-à-dire depuis 8 à 9 mois déjà depuis leurs morsures,
ces quatre personnes sont en bonne santé.

Maintenant, chez nous, à Varsovie, la méthode Pasteur est de plus en
plus considérée comme la seule et unique méthode capable de sauver la
vie des personnes, mordues par des animaux enragés, même dans les cas
les plus désespérés.…

Jusqu'ici j'ai traité 400 personnes, avec 8 morts. Par l'application du
iraitement intensif, j'ai traité 140 personnes, dont 7 mordues au visageet
à la tête et 4 par des loups enragés, sans aucun accident...

4. Je dois ajouter un détail intéressant de la lettre du D' Gamaleïa, relatif-au
charbon. {Fièvre charbonneuse.) :

°« J'ai préparé, dit-il, les vaccins charbonneux dans l'été de 1887, et j'en ai fait
l'épreuve en grand sur cent moutons. Ces cent moutons ont reçu le premier vaccin
le 9 décembre et le deuxième vaccin le 95 décembre. Pas un seul n’est mort. Tous
vont bien. Le 3 janvier, quatorze jours après le deuxième vaccin, dix de ces
moutons vaccinés ont été inoculés par le virus charbonneux virulent. Pas un des
dix n’est mort, n’a pas eu même la plus légère élévation de la température, qui a
élé prise deux fois par jour. Le même virus virulent a été inoculé à trois moutons
non vaccinés: deux sont morts du charbon, les 8e et 4e jour après l'infection ; le
troisième mouton a été gravement malade pendant 8 jours, avec une température
reclale qui a atteint 410,9; mais ce mouton a fini par se rétablir. »

/

LETTRE DE M. PASTEUR A M. DUCLAUX. 419

Je voudrais, mon cher Duclaux, ajouter quelques remarques
au sujet des virus et de leurs vaccins.

L'an dernier, dans la lettre que je vous ai adressée de Bor-
dighera sur la rage, et qui a paru dans le premier numéro de ces
Annales, le 25 janvier 1887, je constatais que la durée d’incuba-
tion de la rage chez nos lapins de passage, durée dont le terme
est fixé pour nous au début des premiers symptômes de para-
lysie, étail encore de sept jours comme au temps du petit Meister
(le premier inoculé), mais avec tendance à descendre à six jours.
Nous étions alors au 133° passage; présentement nous avons at-
teint le 178°, et l’incubation habituelle, depuis une année environ,
est de six jours, mêlée encore à celle de 7 jours, une fois sur trois
environ. On peut considérer que le virus de passage par lapins
est arrivé à sa fixité. Pour en arriver là, quelle longueur de temps
écoulé! Il n’a pas fallu moins de 4 à 5 années sans interruption
dans les passages successifs. Le virus des chiens des rues se
propageant par morsures de chien à chien depuis des milliers
d'années, doit ètre considéré également comme fixé. Entre ces
deux virus, celui du lapin et celui du chien, la différence est
certainement très grande, tant pour la durée d’incubation que
par les symptômes eux-mêmes de la maladie. La différence peut
rappeler celle que l’on observe entre le cow-pox et la variole.
Aussi je ne crois pas qu’on ait de motifs sérieux de considérer
ces deux dernières maladies comme distinctes l’une de l’autre.
Pour être éclairé sur la commune origine de ces aftections, ce
n'est pas un ou deux passages du virus varioleux humain à la
vache, comme l'a fait en 1865, la commission de Lyon, qui
pourrait suffire à accuser une possibilité de transformation de la
variole en cow-pox. Il faudrait peut-être des centaines de passages
par la vache, pour obtenir un cow-pox propre à se conserver
ensuite de bras à bras avec des caractères spécifiques, si tant est
que la chose soit possible par ce moyen.

Je dois faire observer, d'autre part, que l’état initial d’un
virus qu'on fait passer à plusieurs reprises par une autre espèce
que celle d’où il provient, peut conserver pendant de nombreux
passages successifs les particularités de sa nature propre. Je
m'explique : Dans les inoculations préventives de l’homme, nous
nous servons encore de la série des lapins de passage employés
jadis pour Meister. Dans la crainte que par un motif quelconque,

120 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

cette série füt perdue, ou düt être abandonnée, j'ai fait mettre en
train depuis bien longtemps une autre série de passages de lapin à
lapin. Or, il n’y a pas eu parallélisme entre cette nouvelle série
et celle de Meister, quoiqu’on constate sur elle également le fait
général de l’augmentation de la virulence par les passages,
virulence mesurée par la diminution progressive de la durée de
l’incubation de la rage chez les lapins.

Dans une autre circonstance, dans une série de passages de
lapin à lapin, dont le virus de début provenait d’un singe, virus
qui, lui-même, provenait d’un chien des rues, l'accroissement de
la virulence par l'augmentation du nombre des passages a été
des plus lents, si bien qu'il fallut renoncer à conduire ce virus
à sa fixité, par la crainte d’avoir à y employer un trop grand

nombre d'années ‘.
L. Pasreur.

Paris, le 8 mars 1888.

1. Je reçois au dernier moment le compte rendu suivant des vaccinations faites
au Laboratoire histo-bactériologique de la Havane, dirigé par M. le D' Tamayo.
J'extrais ce qui suit de la lettre adressée à M. le Prof. Grancher :

« Le total des vaccinés, à la fin de décembre, était de 83. Il ne s’est produit
chez eux aucun cas de rage, bien que beaucoup d’entre eux eussent été mordus par
des animaux certainement enragés, comme on l’a démontré par des inoculations à
des lapins. C'est une preuve de plus en faveur du traitement de M. Pasteur.

« Notre journal, la Cronica medico-quirurgica, a publié, au mois d'août de l'an
dernier, et au mois de janvier 1888, nos statistiques avec des notes explicatives. »

SUR LA TRANNMINNION INTRAPLACENTAIRE DES MICROORGANISMEN,
Par E. MALVOZ,

ex-préparateur à l’Université de Liége 1.

Nous avons entrepris une série d'expériences pour recher-
cher par quel mécanisme s’effectue le passage des bactéries de
la mère au fœtus. Ces recherches nous conduisent à émettre
l'opinion que les microorganismes ne franchissent la barrière
placentaire, pour atteindre l’embryon, que dans les cas où le
placenta présente des altérations histologiques des villosités
choriales, lésions généralement dues à l’action pathogène des
éléments parasitaires eux-mêmes.

Nous renvoyons à un mémoire que nous avons déjà publié
sur ce sujet ?, et que le présent travail est destiné à compléter,
pour l'exposé de l’historique de la question, tant au point de
vue clinique et anatomique que sous le rapport expérimental.
Rappelons seulement que, de toutes les maladies infectieuses et
vraisemblablement microbiennes, dont on a décrit des manifesta-
tions anatomiques chez le fœtus, la variole occupe, certainement,
après la syphilis, la première place. Vient ensuite Ja tubercu-
lose congénitale, dont Jouxe a rapporté le plus beau spécimen,
avec constatation des bacilles de Koch dans le foie d’un jeune
veau, exemple à côté duquel se placent les cas de Lyprix,
SCHWANEFELD, etc., chez les animaux, et de Merkez et Cnarrin
dans l'espèce humaine *.

4. Travail du laboratoire du professeur Firker, à Liège, et de MM. Cornir et
CHANTEMESSE, à Paris.

2. Ces recherches ont cté publiées par les soins du Ministère de l'instruction
publique de Belgique : Sur le mécanisme du passage des bactéries de la mère au
fœlus, par le docteur E. Mazvoz. Mémoire présenté au concours pour la collation des
bourses de voyage et agrée par le jury. Bruxelles, 4887.

3. Lanpouzy et Queyrar ont aussi tuberculisé des animaux par l’inoculation de
fragments d'organes provenant de fœtus de mères tuberculeuses.

122 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

La rougeoie, la scarlatine, la morve (Lorrrcer, Capéac et
Mazcer), la pneumonie croupale (Taorner), la fièvre récurrente
(Azsrecur, Srirz), l’érysipèle, etc., constitueraient autant d’af-
fections susceplibles de passer parfois de la mère à l'enfant. Srrrz
aurait même retrouvé les spirilles de la fièvre récurrente et
Lepeperr les cocci de l’érysipèle dans les lésions présentées par
l'embryon. SaxGazzt et MarcHanp ont aussi décrit le passage du
bacillus anthracis chez des fœtus humains dontles mères avaient
succombé à l'infection charbonneuse. Citons enfin, pour être
complet, la constatation du bacille de Gaffky dans la rate d’un
embryon dont la mère était atteinte de typhus abdominal (Neu-
HAUss), et la présence du bacille-virgule de Kocu chez un fœtus
humain, signalée par Tizzont et CarTrant.

Ces nombreux faits cliniques et anatomiques, relevés par
tant d'auteurs différents, ont soulevé depuis longtemps le pro-
blème du mode de passage des microorganismes à travers le
placenta, et bien des recherches expérimentales ont été déjà en-
treprises dans cette direction. Tandis que, pour le charbon, on
admit longtemps, sur la foi de BrauEeLL, Davainxe, BoLuiNGER, que
le placenta se comportait comme un filtre parfait, protégeant le
fœtus contre l'invasion bacillaire, les travaux de Srraus et CHam-
BERLAND, de PErRoNcIro, démontrent au contraire le passage pos-
sible du bacille à l'embryon. Dans ces derniers temps, Wor,
ayant repris ces recherches, n’obtint que des résultats négatifs
chez le lapin, tandis que Kourassor, chez le cobaye, arrivait au
contraire à retrouver les bacilles charbonneux chez l'embryon
par le seul examen microscopique, alors que les autres obser-
vateurs n'avaient jamais constalé le passage que par les cul-
tures.

On observa aussi expérimentalement la transmission au fœ-
tus du microbe du charbon symptomatique (ARLoING, CORNEVIN et
Taomas), du choléra des poules inoculé au lapin {CHAMBRELENT),
de la septicémie des lapins (Kroxer), du streptococcus de la
pyémie (SIMoNE), du rouget et même du bacille tuberculeux(Kou-
BASSOF).

C’est en présence des résultats mal concordants obtenus par

1. L'expérience sur laquelle se base Kourassor pour affirmer le passage du ba-

cille tuberculeux à Pembryon nous semble trop mal instituée pour qu'on puisse en
tirer une conclusion définitive (V. Comptes rendus, 1885).

TRANSMISSION PLACENTAIRE DES MICROBES. 123

les divers expérimentateurs qui ont étudié le passage du char-
bon au fœtus que nous avons repris ces recherches. Nous nous
sommes entouré des conditions d’expérimentation les plus rigou-
reuses. Nous avons eu recours non seulement à l'examen micros-
copique, mais encore à la méthode plus sûre des cultures et des
inoculations à d’autres animaux. Toujours, nous avons fait des
cultures comparatives des organes maternels et fœtaux. Les fæœ-
tus étaient lavés soigneusement au sublimé, puis à l'alcool ab-
solu et à l’eau stérilisée, avant leur ouverture. C'est le foie fœtal
qui a surtout servi à nos ensemencements : en effet, le sang de
la veine ombilicale se rend directement à l'organe hépatique.
Nous avons aussi cultivé le sang du cœur droit, car on sait
qu'une partie du sang de la veine ombilicale se rend à la veine
cave inférieure et au cœur droit par le conduit veineux d’Aran-
tius. C’est d’ailleurs dans le foie qu’on a constaté de préférence
les altérations congénitales, rares il est vrai, de la tuberculose
et de la syphilis.

Nous avons inoculé le charbon à plusieurs lapines pleines :
toutes ont succombé. Sur les cent soixante-trois tubes ou pla-
ques * de cultures, ensemencés avec des fragments d'organes ?
provenant de trente-deux fœtus, quatre tubes seulement ont
montré la poussée caractéristique du bacillus anthracis. Dans
les nombreuses coupes des organes fœtaux que nous avons
faites, nous n'avons pu, par la méthode de Gram, retrouver des
bacilles charbonneux. Nous avons aussi réussi à faire mourirun
lapin en lui injectant un centimètre cube d’eau salée stérilisée,
dans laquelle nous avions broyé un foie fœtal tout entier. Mais,
dans les mêmes conditions, 3 autres lapins n’ont pas succombé.

Ces résultats démontrent que si le bacille charbonneux, chez
le lapin, peut passer au fœtus, ce n’est qu’en très faible quantité
et dans la minorité des cas.

Tels étaient les résultats auxquels nous arrivions, résultats
assez semblables à ceux de Srraus et CHAMBERLAND, quoique

1. Nous ne nous sommes pas contenté d'ensemencer des tubes de gélatine
nutritive, nous avons fait également un très grand nombre de cultures sur
plaques, parce que nous voulions éventuellement comparer le nombre des colo-
nies données par les organes maternels et fætaux.

2. Nous avons ensemencé de petits fragments d'organes, du foie surtout, et
non le sang obtenu par aspiration, parce que Kousassor dit avoir observé les ba-
cilles hors des vaisseaux.

124 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

moins positifs, mais entièrement différents de ceux qu'avait
observés Kourassor, qui considère le passage du charbon au
fœtus comme un fait à peu près constant, normal.

Nous avons aussi inoculé le choléra des poules au lapin,
comme l'avait déjà fait CrampreLenr. Aïnsi que ce dernier, nous
avons obtenu des résultats entièrement positifs, c'est-à-dire que
les cultures des foies fœtaux ont toutes donné un développement
des organismes de cette affection : nous avons remarqué cepen-
dant que la poussée des colonies sur gélatine était bien moins
riche dans les cultures provenant des embryons que dans les
tubes ensemencés avec les organes maternels.

Il s'agissait d’interprèter les résultats contradictoires obtenus
par les divers auteurs à propos du charbon. Le travail très im-
portant de Wyssoxowirscx attira vivement notre attention. Ses
recherches, qui ont été résumées dans ces Annales, démontrent
qu'à l’état normal les membranes dites fi/frantes (reins, mu-
queuse intestinale, etc.), ne sont pas perméables pour les bac-
téries ; que ce n’est qu'exceptionnellement que le sang se débar-
rasse au dehors des éléments étrangers qui ont pu l’envahir, et
seulement dans les cas où il existe des lésions (hémorragies, in-
farctus, petits abeès, etc.) des organes excréteurs. Ces résultats
sur le sort des microorganismes en circulation dans le sang
avaient d’ailleurs été observés autrefois par Ponrick, HormanN
et LanGerHans, etc., dans des expériences d’inoculations de parti-
cules inertes insolubles (cinabre, indigo, etc.).

WyssorowirscH constate que si l'on introduit dans la circu-
lation les bactéries les plus diverses, pathogènes ou non, tou-
jours le sang s'en débarrasse rapidement, et les microbes, tout
comme les particules inorganiques, vont se localiser dans cer-
tains organes de prédilection, qui sont le foie, la rate, la moelle
osseuse. Les microorganismes sont-ils pathogènes pour l'animal
en expé:ience ? Dans ce cas, il se produira au point où ils se
sont primitivement fixés, dans un des organes susnommés, une
multiplication sur place des parasites, et ceux-ci se déverseront
de là dans l'organisme. Dans le cas contraire, ils seront véritable-
ment digérés, après absorption par les cellules endothéliales,
et peu à peu, ils disparaîtront, c'est-à-dire que les ensemence-
ments de ces organes seront dès lors stériles.

TRANSMISSION PLACENTAIRE DES MICROBES. 125

Mais Wyssorowirsen n'avait pas étudié comment se com-
porte, à ce point de vue, l’organe placentaire. Celui-ci est très
vascularisé, la circulation y est lente. Ne peut-il pas, lui aussi,
constituer un terrain de prédilection pour la fixation des élé-
ments étrangers entraînés par le sang, au même titre que le foie,
par exemple ? S'il en est ainsi, il est clair que cette propriété
constituera une circonstance favorable à l'atteinte du fœtus par
les bactéries; dans le cas contraire, l'embryon jouira déjà d’une
sorte de protection, faible peut-être, mais réelle, contre l’en-
vahissement parasitaire.

D'autre part. le placenta ne pouvait-il pas être assimilé aux
organes rénaux, au point de vue de la filtration des microor-
ganismes, et, de la même façon que les bacilles du charbon ne
se retrouvent dans l'urine qu’à la suite d’hémorragies ou d’au-
tres lésions rénales, ainsi ils n’atteindraient le fœtus qu'après
avoir altéré les villosités placentaires ?

Tels sont les deux points que nous avons essayé de mettre en
lumière.

En inoculant le charbon à des lapines pleines, et en ense-
mençant des plaques de gélatine avec des fragments sensible-
ment de même volume du foie maternel et des placentas, nous
avons toujours constaté que le nombre des colonies était bien
plus abondant sur les plaques fournies par le foie. Tandis qu'on
ne pouvait pour ainsi dire pas compter les colonies dans ce der-
nier Cas, on en trouvait en moyenne de 13 à 20 par centimètre
carré quand il s'agissait des cultures placentaires. De même, la
liquéfaction est plus rapide dans les tubes ensemencés avec le
foie que dans les tubes du placenta.

Si nous introduisions dans le système veineux de lapines en
gestation des microbes non pathogènes, comme le micrococcus
prodiqgiosus, le micrococcus tetragenus, et qu'après quinze à vingt
heures nous pratiquions l’autopsie de l'animal sacrifié, tandis que
les cultures du foie, de la rate nous montraient des colonies très
nombreuses, les placentas, ou bien n’en fournissaient pas, ou
ne nous donnaient qu’un développement bien moins abondant.

Enfin, en injectant à cinq lapines pleines, dans la veine delo-
reille, de l'encre de Chine broyée dans l’eau, nous avons retrouvé,
le plus nettement possible, les particules noires microscopiques
localisées dans le foie, la rate, la moelle des os, tandis que nous

126 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ne retrouvions que difficilement quelques granulations perdues
dans les sinus placentaires.

Nous avons cru pouvoir conclure, en présence de ces résul-
tats, que le placenta ne constitue pas un organe de prédilection
pour la fixation des éléments étrangers en circulation dans le sany.

Ce fait acquis, par quel mécanisme les bactéries passent-elles
éventuellement au fœtus? Ne s'agit-il là que d’une simple f/tra-
tion ?

Dans nos inoculations de particules inertes d'encre de
Chine, nous n'avons jamais pu les retrouver ni dans la veine
ombilicale ni dans les organes fœtaux, résultats qui concordent
d’ailleurs avec les expériences de J'assivsky, HorFMANX, AHLFELD,
Feuuiwe, etc.

Les microbes non pathogènes (microc. prodigiosus: macr.
tetragenus) se comportent de la même façon; les cullures des
organes fœtaux, dans nos expériences, sont restées stériles !.

Les éléments indifférents, particules inorganiques ou micro-
pes inertes, ne passent donc pas au fœtus. Il semble dès lors
qu'on soit autorisé à admettre que si des microorganismes pa-
thogènes (bacillus anthracis, ete.), pénètrent, dans certains cas,
presque dans le sang fœtal, ce n’est pas le fait d’une filtration à
travers le placenta intact, mais seulement à la faveur des
altérations produites dans cet organe.

Et en effet, un examen attentif des placentas provenant de
nos inoculations de choléra des poules au lapin nous montra des
hémorragies, reconnaissables même nacroscopiquement, et sié-
geant notamment dans la partie du placenta la plus rapprochée
de l’amnios. D'ailleurs, le choléra des poules inoculé au lapin
constitue précisément une des septicémies où les lésions hémor-
ragiques sont les plus communes (ecchymosestrachéennes, etc.).

Les placentas de nos lapines charbonneuses ne présentaient
pas de lésions du même genre : or, on se souviendra que nos
ensemencements fœtaux étaient le plus souvent stériles.

La loi générale de Wyssoxowi:rscx semblait donc se vérifier
aussi pour le placenta, au même titre que pour les organes
rénaux : le passage des microorganismes au fœtus semblait
devoir êtrelié à des lésions anatomiques.

?

1. Krukemberg (Arch. fur Gynek.) a obtenu les mêmes résultats négatifs avec
le M. prodigiosus, chez les lapines pleines.

TRANSMISSION PLACENTAIRE DES MICROBES. 127

C'est alors que nous nous sommes demandé si ce mécanisme
du passage des bactéries à l'embryon, tel que nous le concevions,
ne pouvait pas expliquer précisément pourquoi Srraus et CHAMBER-
LAND avaient obtenu des résultats en général plus positifs que les
nôtres, bien qu'ils ne fussent pas toujours constants. Nous avions
pris des lapins pour pratiquer nos inoculations charbonneuses ;
Srraus et CHAMBERLAND avaient expérimenté sur des cobayes.
Rien n’empêchait d'admettre que la constitution différente du
placenta d’un animal à l’autre, la fragilité plus grande des villo-
sités, la prédisposition plus prononcée des tissus du cobaye aux
altérations des éléments, ou toute autre cause analogue, pou-
vaient peut-être rendre compte de la différence des résultats.

Nous avons fait quelques expériences sur le cobaye : nos
résultats confirment bien ceux de Srraus et CHAMBERLAND.

Le bacille charbonneux, inoculé au cobaye, passe bien plus
régulièrement au fœtus que chez le lapin; la mortié de nos ense-
mencements, environ, ont montré la poussée de colonies du char-
bon. Les résultats les plus positifs nous ont été donnés, encore
une fois, par les cultures de fragments de foies fætaux. Mais 1l
est à remarquer que la liquéfaction de la gélatine était obtenue
bien plus tardivement dans ces tubes que dans les cultures cor-
respondantes des organes maternels; de plus, les colonies étaient
beaucoup plus clairsemées le long de la ligne de piqüre : ce qui
démontre que si les bacilles passent au fœtus, ce n’est qu'en très
petite quantité. Et, en effet, les coupes des foies fœtaux, traitées
par la nouvelle méthode de coloration de WeiGerT ‘, ne nous ont
montré que quelques rares bacilles, et seulement dans quelques
coupes ; la plupart n’en présentaient pas.

Ces résultats bien positifs que nous donnaient nos cultures,
devaient coïncider, si notre conception était exacte, avec des
lésions placentaires ; c’est ce que l'examen des placentas a pleine-
ment confirmé.

Ces placentas mesuraient environ 4 centimètres dans leur plus
long diamètre et 12 mm. d'épaisseur; nous en avons pratiqué de
grandes coupes comprenant toute la section de l'organe.

A l'œil nu, mais mieux encore à la loupe, on distingue nette-
ment dans le placenta du cobaye des cloisonnements assez épais

1. Coloration au méthyl-violet, puis iode, et différenciation par l'huile d'aniline,
au lieu d'alcool absolu.

128 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

qui parlent de la caduque utérine, et vont directement, à peu
près en ligne droite, jusqu’au voisinage du chorion, traversant
ainsi le placenta de part en part : ce sont les sep{a placentaires
divisant l'organe en cinq ou six cotylédons, mesurant chacun à
peu près 7 à 8 mm. d'épaisseur.

A un faible grossissement, on trouve dans ces septa la coupe
de nombreuses veines, dépendant des veines utérines et par
conséquent en rapport avec la circulation maternelle.

Au centre de chaque cotylédon, dans l’axe de celui-ci, le
plus loin possible des veines précédentes, on aperçoit la coupe
de deux ou trois vaisseaux assez larges, constituant des dépen-
dances de la veine ombilicale, qui, on le sait, fournit une bran-
che à chaque cotylédon. De ces vaisseaux centraux partent un
grand nombre de ramifications, se divisant et se subdivisant à
l'infini, comme les villosités choriales elles-mêmes, et se termi
nant en fins capillaires, dont on aperçoit la coupe dans les der-
nières expansions du chorion.

De Ja même façon, les grands septa intercotylédonaires en-
voient des cloisons qui vont s'insinuer entreles ramificalions de;
villosités, pour constituer un enchevètrement très serré, telle-
ment qu'il est bien difficile, dans le tissu qui constitue la masse
principale du cotylédon, de distinguer nettement ce qui dépend
de la circulation fœtale de ce qui appartient au réseau maternel.
Il n’y a guère qu'au centre du cotylédon qu’on voit très bien la
coupe de deux ou trois vaisseaux dépendant certainement de la
veine ombilicale : on peut être sûr que le sang qu'ils contiennent
appartient au fœtus.

A l’œil nu, mais mieux à la loupe, on peut distinguer, parti-
culièrement au voisinage du point de pénétration des septa
intercotylédonaires, de petits points hémorragiques très nom-
breux, assez serrés les uns contre les autres; mais ils apparais-
sent surtout quand on examine les coupes avec un faible grossis-
sement. Nous n'avions pas trouvé, dans les placentas de nos
lapines en gestation, des foyers du même genre.

Dans les mêmes coupes, traitées par la méthode de Wercerr
pour faire apparaitre les microorganismes, on trouve une dis-
position très curieuse et très intéressante des bacilles charbon-
neux, disposition qui mérite d’être signalée parce que nous
n'avons lu nulle part cette description.

TRANSMISSION PLACENTAIRE DES MICROBES. 129

Dans la lumière des veines situées à l’intérieur des septa coty-
lédonaires, par conséquent dans des vaisseaux dépendant de la
circulation maternelle, les bacilles existent presque toujours en
grand nombre, pressés les uns contre les autres. A partir de ces
septa, des trainées bacillaires rayonnent en suivant la direction
des cloisons secondaires qui en partent, et en se dirigeant vers
la veine centrale du cotylédon, qu’on sait être une division de la
veine ombilicale. Mais, tandis que les traînées de bacilles sont
fort serrées au voisinage des cloisons intercotylédonaires, les
bactéridies deviennent de plus en plus clairsemées au fur et à
mesure qu’on se rapproche de l’axe central du cotylédon, et, si
dans les deux ou trois grands vaisseaux qui existent en ce point
on peut distinguer quelques bacilles, ils sont bien moins nom-
breux que dans la lumière des veines maternelles : le contraste
est très net, très frâppant et visible dans presque toutes nos
coupes. C’est bien là la preuve que Zes bacilles passent dans le
sang [œtal, mais seulement en très petite quantité.

Dans les petits foyers hémorragiques très nombreux déjà
signalés, on voit souvent des bacilles, dont la disposition en chai-
nettes semble indiquer que ces éléments parasitaires se sont
mullipliés au sein même de la lésion.

Tout le monde admet aujourd’hui qu'il n’y a pas de commu-
nications directes entre le sang maternel et le sang fœtal. Ces
hémorragies rendent très bien compte de la facon dont le
passage des bacilles au fœtus s'effectue : il suflit qu'en quelques
points il se développe de petits foyers destructifs pour mettre en
rapport immédiat et le sinus placentaire charriant le sang
maternel et le capillaire d’une villosité choriale. De la sorte, les
bacilles pénètrent, par une véritable effraction, peut-on dire, et
non par filtration, jusque dans le sang fœtal.

Nous pensons que ces recherches démontrent, le mieux pos-
siblé, que le passage des microorganismes au fœtus est lié à des
lésions anatomiques; dès lors, on ne peut admettre, avec
Kourassor, que cette transmission soit un fait constant : elle
sera aussi variable et aussi inconstante que les propriétés des
éléments parasitaires eux-mêmes. Certes, il est toujours difficile

130 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de critiquer des recherches qu'ou n’a pas suivies, et dont on ne
possède qu’un exposé sommaire. Cependant, le fait que Kourassor
ait pu, seul jusqu’à maintenant, observer aussi fréquemment le
passage des bactéries au fœtus, et par le seul examen microsco-
pique, la facon dont 1l a expérimenté avec le bacille tuberculeux
pour démontrer la transmission de celui-ci à l'embryon, ces rai-
sons nous autorisent à faire nos réserves sur les résultats qu’il
a publiés. Ajoutons que nos considérations sur le mécanisme du
passage intra-utérin des microorganismes sont précisément le
contrepied d’une des conclusions de Kousassor; celui-ci, en effet,
se basant sur une seule expérience, mal instituée, conclut que les
altérations placentaires empêchent au contraire le passage.

Si notre opinion est la vraie, on comprend de suite qu'il
faudra toujours tenir compte, dans l’appréciation de la possibilité
de l'atteinte du fœtus par uu parasite déterminé, de diverses
circonstances : degré de virulence, atténuation plus ou moins
grande, action plus ou moins destructive sur les cellules et les
tissus, temps écoulé entre le moment de l’inoculation et la mort,
texture différente du placenta d’un animal à l’autre, et notamment
épaisseur très variable, suivant les espèces, de l’épithélium des
villosités, ete., etc.

Les altérations placentaires, inconstantes dans le charbon et
variables d'une espèce animale à l’autre (et ainsi s'expliquent les
résultats en apparence contradictoires obtenus par les divers
expérimentateurs), seraient au contraire la règle dans des mala-
dies comme le charbon symptomatique et surtout le choléra des
poules, affections où la transmission du microbe au fœtus a été
bien plus régulièrement constatée. Si on applique ces données
à des maladies comme la variole, le tuberculose, la pyémie, etc.,
on comprendra que le fœtus sera menacé chaque fois qu'il se .
sera produit une altération susceptible de rompre les barrières
cellulaires du placenta : point hémorragique dans la variole,
ramollissement d'une nodosité dans la tuberculose, foyer d’ab-
cession dans la pyémie. Et précisément, on a remarqué de tout
temps que la variole, chez la femme enceinte, se présentait sou-
vent sous la forme hémorragique, circonstance qui explique
très bien les lésions placentaires et les cas, déjà nombreux, de
transmission de variole au fœtus :.

1. Nous avons supposé, dans tout cet exposé, le fœtus menacé par des bactéries

TRANSMISSION PLACENTAIRE DES MICROBES. 131

A côté de son intérêt pratique, la question du passage des
bactéries au fœtus touche encore à différents problèmes d'une
haute importance scientifique. Pendant longtemps on admit,
comme une vérité classique, que le placenta se comportait
comme un filtre parfait à l'égard des bactéries; ce fut même un
argument puissant dont se servirent ceux qui soutenaient alors,
comme on l’admet généralement aujourd’hui, que l'infection est
directement liée à la présence des parasites, puisque les inocu-
lations de sang fœtal, libre de microorganismes, ne donnaient
pas le charbon. 11 y a quelques jours à peine que Crauveau, à
l'Académie des sciences, vient d'invoquer de nouveau l'opinion
ancienne pour démontrer que l’immunité dans les maladies
infectieuses doit être attribuée à la présence d’une substance
soluble laissée dansle corps par le passage du microbe pathogène.
Caauveau a observé que chez les brebis pleines qui meurent du
charbon, les bacilles fourmillent dans le sang de la mère et ne
passent point dans le sang du fœtus; or, les agneaux nés de
mère inoculée du sang de rate pendant la gestation deviennent
tous réfractaires à l’action du virus charbonneux. C’est du moins
ce que CHauveau a noté depuis longtemps. Donc la vaccination
congénitale ne peut être due qu’au passage d'une substance
soluble à l'embryon.

Caauveau démontre le non passage du microbe par l'examen
microscopique et par l’inoculation du sang du cœur à d’autres
animaux.

Or, l'examen microscopique, nous l'avons montré, après
Srraus et CHAmBERLAND, est insuffisant. Quant aux ensemence-
ments du sang du cœur, ils restent bien souvent stériles, alors
que ceux du foie fœtal donnent un développement de colonies ;
c'est en effet au foie que la plus grande masse des bactéries est
apportée par la veine ombilicale.

Enfin, il est difficile, nous semble-t-il, d'affirmer, sur la foi

en circulation dans le sang maternel. Le fait constaté que des affections comme
la rage, l’érysipéle, dont le microbe ne semble pas envahir le sang, seraient parfois
susceptibles de se transmettre à l'embryon, conduit à penser qu'il s'établit peut-
être dans certains cas des relations entre le fœtus et la mère par d’autres voies
que la voie sanguine. LEBEDEFF a même cru pouvoir expliquer le passage du coccus
de FEuLEsEN à l'embryon par les lymphatiques du cordon. C’est là tout un nou-
veau côté de la question, que nous ne faisons qu'indiquer en passant.

132 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

de quelques expériences négatives, que, dans tous les cas d’in-
fection maternelle, le fœtus est resté indemne, parce que rien
n'est plus variable et plus inconstant que les altérations histo-
logiques provoquées par les microorganismes, notamment dans
le placenta, et auxquelles il faut rapporter, nous croyons du
moins l'avoir démontré, la cause du passage à l'embryon. Le
problème serait évidemment bien plus facile à résoudre s’il ne
s'agissait pas d’une simple filtration; dans ce cas, il suffirait de
quelques expériences pour se rendre compte si, oui ou non, les
bactéries franchissent le placenta.

Enfin, il est à remarquer que l'infection charbonneuse chez
la brebis dispose précisément à des lésions hémorragiques, sou-
vent très prononcées. Nous pensons donc qu'il y aurait lieu de
soumettre à quelques expériences nouvelles la question du pas-
sage du charbon au fœtus chez la brebis, avant de pouvoir décla-
rer définitives les conclusions du savant professeur du Muséum.

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES DANS NES PASSAGES
DE LAPIN A LAPIN,

Par M. ANDRÉ HOGYES,

Professeur à l'Université de Budapest.

Je résume dans ce travail les observations, que j'ai faites
depuis deux ans, à propos de mes recherches sur le traitement
antirabique pastorien. Je m'y étais proposé, d’abord d'obtenir un
virus fixe d’une pureté parfaite, puis d'étudier les changements
que subissent les propriétés du virus rabique des chiens de rue
lorsqu'on le fait passer successivement de lapin à lapin.

Ces observations s'accordent en général avec celles de
M. Pasteur, et peut-être suflirait-il de n’en donner qu’un court
résumé. Si je les développe davantage, c'est d’abord que, à ma
connaissance, cette partie des expériences de M. Pasteur n’a pas
encore été répétée sur une aussi large échelle, et n’a pas été
encore publiée avec les détails nécessaires, puis parce je crois
pouvoir ajouter quelques détails nouveaux, qui nous permettent
de nous orienter plus aisément dans l'appréciation de l’état de
virulence du virus rabique ; et enfin parce que ces expériences
forment la base d’un prochain Mémoire sur la pathologie et la
thérapeutique expérimentales du traitement antirabique pasto-
rien.

Dans la série d'expériences dont je vais parler, c’est la moelle
d'un chien enragé, provenu de l’École vétérinaire de Budapest,
qui m'a servi de point de départ. J'ai fait les inoculations suc-
cessives sous la dure-mère, ce qui, je m'en suis convaincu par
des expériences préliminaires, est le plus sûr moyen de provoquer
la rage. Cette méthode est plus sûre que même l'inoculation
directe sur le plancher du quatrième ventricule.

134 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Au lieu du bouillon stérilisé, j'ai délayé la moelle dans une
solution stérilisée de sel marin à raison de sept pour mille. Au
lieu du trépan ordinaire, je me sers du dental engine de White
avec lequel on peut scier ou forer, vite et facilement, une petite
ouverture dans le crâne du lapin ou du chien.

Nos races de lapins diffèrent un peu des races françaises.
Nos animaux sont en général plus petits. Lorsqu'ils ont atteint
toute leur croissance, leur poids variede 1,000 à 2,500 grammes ;
mais on peut les employer mème dans leur jeunesse, lorsque leur
poids est de 700 à 1,000 grammes.

J'ai fait une certaine sélection entre les lapins pour mes ino-
culationssuccessives. Dans les premiers passages, je n’aiemployé
que de jeunes lapins, espérant par là arriver plus vite à un virus
slable. Je m'appuyais sur l'expérience de M. Pasteur que
l'incubation de la rage chez les jeunes animaux est plus courte
que chez les vieux. De plus, comme à chaque passage j'inocu-
lais toujours plusieurs lapins, j'ai toujours pris le virus, pour le
transporter au passage suivant, sur l’animal qui mourait le pre-
mier. L'expérience a répondu à mon attente, et je suis ainsi
arrivé assez vite à fixer la virulence, ainsi que je le prouverai plus
loin,

Le nombre des inoculations faites dans les 77 passages que
j'ai atteints jusqu'ici a déjà dépassé mille. Le nombre des inocu-
lations faites seulement pour la conservation du virus est à peu
près de 476, ce qui est suffisant pour juger des changements de
nature de la rage des chiens de rue pendant les inoculations
successives.

Comme nous ne connaissons pas encore les microbes de la
rage, ni les changements chimiques que subit le système nerveux
devenu virulent, nous ne pouvons juger de ces changements de
nature du virus rabique que par les effets physiologiques qu'il
amène sur les fonctions des animaux infectés.

On sait que ces effets consistent dans l'apparition de certains
symptômes nerveux après une période plus ou moins longue
d'incubation. Ces symptômes nerveux sont en général très va-
riables. Ils se traduisent soit par un état de surexcitation (rage
furieuse) qui passe avant la mort à un état d'épuisement, soit
par l’apparilion d'emblée de phénomènes de paralysie des
extrémités postérieures ou antérieures, qui s'étendent successi_

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 135

vement sur le corps tout entier et ne finissent que par la mort
(rage paralytique). Mais il y a encore des cas mixtes où les symp-
tômes de l'irritation et de la paralysie apparaissent à peu près
simultanément. Les animaux ne peuvent par exemple pas remuer
leurs extrémités postérieures et malgré cela leur tête et leurs
extrémités antérieures sont dans un état de surexcitation. Il
arrive aussi, quoique rarement, que l'animal inoculé périt sans
aucun symptôme nerveux, dans les délais normaux, et que l'ino-
culation seule de sa moelle prouve qu'il est mort de rage.

Si on veut faire une statistique sur les inoculations succes-
sives, il faut, je crois, établir pour ces cas une troisième caté-
gorie, la catégorie des cas mixtes.

Les phénomènes nerveux finissent par la mort, qui vient le
2°, 3° ou 4° jour après leur première apparition: celte périodeestla
durée de la rage, et la comparaison des dates de l’inoculation
sous la dure-mère, de la première apparition des symptômes
nerveux, et de celle de la mort, offre une base suffisante pour juger
des changements du virus pendant la longue série des inocula-
tions successives de lapin à lapin.

Voici la statistique de mes résultats. J’ai fait 77 passages suc-
cessifs, dans lesquels j'ai inoculé 476 animaux; 167 ont été
alteints de rage furieuse, 165 de rage paralytique, et 144 de la
rage à symplômes mixtes.

Quant à l’histoire résumée de chacun des passages, on la
trouvera dans le tableau ci-après, dans lequel les gros chiffres de
la colonne horizontale P représentent les numéros des passages
1 à 77, à dater du 27 février 1886 jusqu'à la fin février 1888. Les
petits chiffres de la colonne N sont les ombres des lapins ino-
culés dans chaque passage. Au-dessous du chiffre de chaque
passage sont notés en #2 la durée en jours de la survie après
l'inoculation, en 2 la durée de l’incubation, comptée du jour de
l'inoculation jusqu’à la première apparition des symptômes ner-
veux. La différence entre ces deux chiffres donne la durée de la
période de rage déclarée. Ils servent tous à apprécier la virulence
du virus employé.

Leur signification apparaît mieux si on les représente dans
un graphique dont les ordonnées, correspondant à chacun des
passages, présentent, en trait fin, la période d’incubation, et en
trait plus gros la période de rage déclarée pour chaque passage,

136 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Tableau statistique du résultat des 77 inoculations successives
de lapin à lapin du virus rabique des chiens des rues.

|
| P 1 2 3 4 5 6 1266 9 10
N p) 2 8 9 8 (à 8 TES 5
m | 21,0 | 17,5 | 44,5 | 44,4 112,51 40,8 11414 | 142,5 | 142,54 14,8
| 480 | 440 | 4255 | 425 | 400 | 9.3 | 140 | 9,8 | 10,4 | 81
P 11 12 13 14 45 16 47 18 19 | 20
N | 16 10 20 11 A 5 6 6 5 6
m°110,62110.3. 199 ot ST SSI 04160 eee
i 8,8 8,4 8,3 755 1-0) 1P6EARECS STRESS 1 8,27)
P 21 22 23 24 25 | 26 tee Res) 29 | 30
N 7 7 6 8 ÿ 6 10 8 pl 15
m 7,9 7,9 8,3 8.3 S:818:0 2282 1108 8,8 | 8,2
ie re V6 260 70 pol PET NRA Ne
P 31 32 33 34 35 13647937 38 39 | 40
N 7 6 fl 8 9 8 3 4 7 5
ml 81! 84! 80| 821) 85| 88|400! 9,6! 90) 95
i 6,7 HA 6,5 6,7 6,9 1e 0 TES 8,0 6,7 7,4
p A A2 43 44 45 46 47 48 A9 50
N 5) 9 8 6 6 6 8 5 5 4
ni 8,8 8,8 8,8 9,0 Le OR EE A RL sv AD à 9,1 8,2
dure Dali ne naine ner 6e Le OER
P 51 52 53 54 55*1"56 511498 59 60
N 3 6 6 6 D ) 7 fl 7 /
ml 96) 02/82) 86 | s861/86|-88| 90/0012
De OO EE 667 °6 61 66: 666 LINE
P 61 62 63 64 65 66 | 67 68 | 69 70
N 7 6 4 il 2 nr 3 5 \ 5
ni 9,0 8,3 8,5 8,0 Sp 40; 9141:-8:815:19,0 17024
el 268) 68.176717 | 60 | 601 65 ré e ete IRee
p 11 72 73 74 15 76 vil
N ) 4 2 dl 5 4 3
mil 8,8 140,0 | 88180 76 |" 9.0! “90
alomoNeneur6 16 0hible le Tele

Les chiffres du tableau et du graphique de la page 137 sont
des nombres moyens, calculés en partant des chiffres individuels
de chacun des lapins inoculés à chaque passage.

Le nombre de ces lapins n’est pas toujours le même, mais
celte circonstance n'influe pas trop sur les valeurs moyennes
et n'empêche pas de se faire une idée générale des résultats.

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 137

LEE RE 2689 us RER QE PUS AU ETES
ÈE= FREE
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IDÉES nms secoue

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-

|
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|

F

TELE OT

Î. — Fluctuations de la virulence du virus rabique.

138 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Si nous envisageons d’abord la durée de l’incubation, nous
voyons qu'elle a d’abord été de 19 jours, en moyenne, dans la
première inoculation du virus rabique d’un chien des rues à
deux lapins. Je suis tombé à peu près sur le même chiffre moyen
dans d’autres cas, où j'ai inoculé le virus rabique d’un chien des
rues ou celui d’un homme enragé.

On voit ensuite que dans cette série, où je n’ai employé,
comme je l’ai dit, pour les inoculalions successives, que de
jeunes lapins d’un poids de 800 à 1,000 grammes, la durée
moyenne de l'incubation décroît rapidement dès les premiers
passages. Elle est déjà tombée à 7 jours dès le 16° passage, cinq
mois environ après le commencement des inoculations succes-
sives, et se maintient à ce niveau, oscillant entre 7 et 8 jours et
demi à travers tous les passages ultérieurs, pendant une année
et demie environ.

On trouve les mêmes résultats quand on considère la durée
moyenne de la survie. Elle descend aussi rapidement dès les
premiers passages, tout à fait parallèlement avec la diminution
de la durée moyenne de l’incubation, et reste, à quelques petites
fluctuations près, fixée de 8 et demi à 10 jours pendant la lon-
gue série des inoculations.

La durée moyenne de la rage déclarée ne change guère non
plus dans la série des inoculations successives. Après avoir été
quelquefois de 3 à 4 jours, à l’origine, elle n’est plus à la fin que
de 1 à 3 jours et reste à ce niveau. On ne relève pas non plus
de grandes différences dans la nature des symptômes nerveux
dans la série des passages.

Toutefois, quand on examine une à une, à chaque passage,
les durées de l’incubation et de la survie des animaux inoculés,
on trouve une certaine fluctuation d'un à plusieurs jours, plus
grande dans les premiers passages que pendant les passages ul-
térieurs. Cette fluctuation provient des différences dans le
poids et l’âge des animaux employés. Les jeunes animaux d’un
poids inférieur sont atteints de la rage plus vite, et après une
incubation moins longue, que les animaux vieux et plus pesants.

Comme je viens de le dire plus haut, dans les 21 premiers pas-
sages de cette série, je n’ai employé pour les inoculations succes-
sives que de jeunes lapins d’un poids de 800 à 1,000 grammes.
Je crois que c’est à cela qu'est due la diminution rapide de la

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 139

durée de l’incubation et de la survie, diminution qui m'a mis
enmesure d'obtenir la fixité du virus rabique en six mois envi-
ron, période proportionnellement très courte, comparée à celle
qui résulle des expériences de M. Pasteur. Dans une autre série
que j'avais entamée parallèlement, mais où j'avais employédes
lapins d’âges el de poids supérieurs, je n’ai pas réussi à réduire
si vite la durée de la survie, qui au bout du 15° passage n'était
pas encore tombée au-dessous de 15 jours.

Peut-on maintenant considérer comme fixé le virus rabique
de mes expériences? Je crois que oui, si le mot « virus fire » est
pris dans son sens habituel. Il n’y a pas une différence considé-
rable dans ses effets pendant les derniers 56 passages, qui com-
prennent une période d’une année et demie.

De plus, son degré de fixité est à peu près égal à celui du
virus rabique du laboratoire de M. Pasteur, ce que nous allons
démontrer par la comparaison suivante.

IL

J'ai fait deux fois cette comparaison. Une première fois, aux
mois d'octobre et de décembre 1886, j'ai comparé les 10 passages
21 à 30 de ma série, avec 10 passages du virus fixe de Paris
conservé par M. Babes dans son laboratoire par des inoculations
successives de lapin à lapin. Une seconde fois, après un an, de
la fin d'août 1887 àla fin de février 1888, j'ai comparé les 21 pas-
sages 57 à 17 de ma série avec 21 passages de ce mème virus
fixe de Paris, mais conservé dans mon laboratoire par des
inoculations successives.

On peut voir dans le tableau graphique de la page 137 les résul-
tats de cette comparaison. Les passages 21-30 et 57-17 de ma série
surmontés de deux petits cadres où sont indiqués les résultats sont
des inoculations successives avec le virus fixe de Paris. Le pre-
mier petit cadre n° IT donne la durée moyenne de la survie des
lapins des 10 premiers passages ; le second n° III donne la durée
moyenne de l’incubation et de la survie dans la seconde com-
paraison.

En comparant avec les passages correspondants du grand
tableau graphique n° I, on peut voir que dans le premier cas, la

Le

durée moyenne de la survie a été de 7,5 à 8,3 jours avec mon

140 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

virus, et de 7,2 à 8,3 jours avec le virus de Paris. Dans le
second, les durées d'incubation ont été de 6 à 7,6 jours avec mon
virus, de 5,5 à 8 jours pour celui de Paris. Les durées de survie
ont été de 8 à 9,4 jours avec mon virus, de 8,3 à 11 jours avec
le virus de Paris.

Il est évident, d’après cela, que la virulence du virus rabique
de Budapest dans les passages 21-530 était déjà presque aussi grande
que celle du virus de Paris, qui pouvait déjà être à ce moment
à son 130° passage, et cette parité ne semble pas s'être modifiée
après un an. Tous deux avaient done à peu près la même sta-
bilité.

11

Nous avons encore à étudier deux autres effets du virus
rabique : l'élévation de la température et la diminution du poids
du corps; tous les deux sont assez intéressants pour qu'on sur-
veille leur apparition au courant de l'infection et pendant les
inoculations successives. ;

Tous les deux devancent dans la plupart des cas l’apparition
des symptômes nerveux, et sont pour ainsi dire les premiers
symptômes de la rage. Ce sont eux qui indiquent la fin de l’in-
cubation et le commencement de la maladie. Le D' Lôüte, mon
assistant et mon collaborateur, a étudié avec grande assiduité dans
mon laboratoire les circonstances de leur apparition, et les résul-
tats de son étude ont été communiqués par moi à l’Académie
hongroise des sciences dans sa séance du 15 novembre 1886 :.
Il a relevé avec grand soin, et jour par jour, depuis celui de l’ino-
culation jusqu'à celui de la mort, le poids de 60 de nos lapins
inoculés dans les passages 5 à 15. Le commencement de la
diminution de poids coïncide en général avec l'apparition des
symptômes nerveux, la précède rarement, et ne la suit que dans
la minorité des cas. La perte, une fois commencée, va continuant
jusqu'à la mort, et peut s'élever jusqu'au 1/4 du poids originel.
Elle dépasse rarement celte limite : elle se montre presque sans
exception dans tous les cas de rage, que l’incubation soit courte
vu longue, et même dans les cas mixtes dont nous avons parlé
plus haut.

4. Lore, Orvosi hetilap. 1887.

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 141

Il n’est pas moins intéressant de suivre les observations
que M. Lüte a faites à l'égard de la thermométrie de cette mala-
die, avec toutes les précautions que j'ai reconnues nécessaires
pour la thermométrie chez les lapins t.

Les conclusions principales à tirer de ces études sur la tem-
pérature de nos lapins sont qu'on peut distinguer chez eux, à
partir du jour de l’inoculation jusqu’à la mort, trois grandes
périod:s. La première période est l'état afébrile, troublé
quelquefois seulement par une petite élévation de la tempéra-
ture passagère qui survient le lendemain de la trépanation,
et qu'on peut prévenir par une soigneuse désinfection. La
seconde phase est la période fébrile, suivie de la troisième
phase, la période de l’abaissement rapide de la température,
qui aboutit à la mort. On peut se faire une idée de la durée
de ces différentes phases par les chiffres suivants calculés
pour la première ligne avec 12 cas et pour la seconde ligne
avec 7 cas examinés :

t Durée totale

: * période. 2 période. 3° période.
de la vie. 1" période période > période

I. 8—9 jours.|4 jours 7 heures.|2 jours 10 heures.[1 jour 6 heures.
I. 7-8 — 13 —. 20 — 12 —. 14 — |1 — —

La période fébrile commence généralement du quatrième
au sixième jour, après l’inoculation du virus de passage. L’élé-
vation de la température au-dessus de la température moyenne
de la période afébrile varie entre 1 et 2°. Elle est en moyenne
de 1°,6. La durée de l’incubation n’a pas d'influence sur la
durée de la période fébrile.

De l’acmé de la fièvre, la température élevée descend géné-
ralement en 12 heures environ, quelquefois tout d’un coup, d’au-
tres fois plus ou moins lentement, àla température normale, puis,
de là sans interruption jusqu’à la mort, où elle tombe presque
au niveau de la température ambiante.

Voilà ce qu'on observe presque sans exception chez les

1. Hocyes. Remarques sur la méthode de mesure de la température rectale
chez les animaux. Orvosi hetilap. 1880, e& Arch. fur exp. Pathologie et Pharmalkologie,
Bd. XIII.

142 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

lapins infectés avec le virus fixe, inoculé par trépanalion. En
l'inoculant sous la peau, ou en inoculant sous la dure-mère un
virus atténué, on retrouve ces mêmes caractères de la marche
de la température. Il n'y a que la période afébrile qui soit
plus longue, correspondant à une plus longue durée de l’incu-
balion.

On ne trouve pourtant pas toujours cette régularité dans la
marche de la température après l’inoculation intracrânienne du
virus rabique des chiens des rues. Chez 5 lapins ainsi inoculés
avec la moelle d’une femme morte de la rage, et qui succom-
bèrent 15 à 21 jours après l’inoculation, il n'y a eu que dans un
seul cas une période fébrile, tandis que les autres symptômes ont
évolué régulièrement. Sur 15 lapins inoculés sous la dure-mère
avec la moelle rabique de chiens des rues, 5 n’ont pas eu la
période fébrile qui caractérise l'effet du virus fixe, tandis que
les autres symptômes ont apparu comme à l'ordinaire.

Dans les cas de rage avec longue incubation, on peut trouver
quelquefois, pendant la période afébrile, dans la marche de la
température, une petite élévation d’une durée de 12 à 24 heures,
qui, dans 5 de nos lapins, sur 12 inoculés avec le virus de chien
de rues, a été de 0,3 à 1 degré. Dans les cas de longue incubation
après inoculation du virus atténué, nous n'avons même pas
trouvé ces petites oscillations. Je ne crois pas devoir attri-
buer une importance quelconque à ces petites élévations de tem-
pérature, bien que M. Babès ! y voie un symptôme prémonitoire
de la rage, d’abord parce qu'elles ne sont pas constantes, puis,
parce qu’on en observe souvent de pareilles avec des lapins en
pleine santé, comme on peut le voir dans les tableaux de M. Lüte
publiés dans son Mémoire susdit.

Quant à l’ordre chronologique des phénomènes prineipaux
de la rage expérimentale après l’inoculation du virus, voici ce
qui résulte de l'examen soigneux de 25 cas de rage. L’élévation
de température a toujours été le premier symplôme et a toujours
devancé l'apparition des symptômes nerveux; même, dans 6 cas,
la diminution de la température avait commencé avant que la
rage eût éclaté, Celte diminution de la température a coïncidé
13 fois avec l'apparition des symplômes nerveux et n’est sur-
venue après eux que dans six cas seulement.

4, Virchow’s Arehiv, A887, p. 562.

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 143

La diminulion du poids du corps a devancé dans 13 de ces
25 cas l'apparition de la rage, l'a accompagnée dans 10 cas, et
ne lui a succédé que deux fois. Dans 15 de ces 25 cas, elle a aussi
précédé la diminution de température, et l’a accompagnée dans
9 cas; enfin, dans 7 cas, on a vu apparaître simultanément les
symplômes de la rage, l'abaissement de température et la dimi-
nulion de poids.

Il y a encore un symptôme à mentionner dans le cours de
la rage, que M. Lôte a étudié avec soin chez 7 lapins infec-
tés. C’est la polyurie qui s’est montrée dans chacur des cas
examinés après l'apparition de la fièvre. Les animaux qui jus-
que-là n'urinaient, comme à l'ordinaire, qu’une fois tous les
deux ou trois jours, urinent plusieurs fois par jour jusqu'à la
mort. Cette polyurie a devancé, 5 fois sur les 7 cas examinés, le
commencement de la diminution définitive du poids, et la quan-
tité de l'urine excrétée équivalait à peu près à la perte du poids
du corps. Il faut, par conséquent, attribuer en partie à la
polyurie la perte rapide du poids du corps pendant le cours de
la rage déjà déclarée.

Si nous cherchons maintenaut à résumer les faits que nous
avons trouvés relativement au cours des phénomènes principaux
de la rage expérimentale, nous arrivons à formuler les conclu-
sions suivantes :

Les phénomènes produits par l'inoculalion intracränienne
du virus fixe se déroulent, chez le lapin, dans un ordre très régu-
lier du jour de l'infection jusqu’à la mort. I n’y a d’abord
aucun changement dans l'état des animaux. Ils mangent et boi-
vent comme à l'ordinaire, leur poids même peut s'accroître. C’est
la période de l'incubation. Puis, après 4-6 jours, apparaît la
période fébrile : la température monte subitement. Les animaux
ne semblent pas encore atteints, mais bientôt ils perdent l'appétit,
ils ne mangent ni ne boivent plus, et la diminution de poids
s'accuse. Cet état fébrile fait place plus tard à la période de la
rage proprement dite, dans laquelle les symptômes de surexci-
tation ou de paralysie coïncident avec le commencement de
l'abaissement définitif de la température, et qui dure jusqu’à
la mort.

144 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

IV

De la nature et de l’ordre d'apparition des divers symptômes
de la rage, on peut déduire quelque idée de leurs corrélations
patho-physiologiques. L'agent infectieux de la rage, quel qu’il
soit, microbe ou produits microbiens, porte d’abord son action
sur les parties du système nerveux central (moelle allongée),
qui dirigent la régularisation de la température; et celte action
peut être comparée à celle de certains alcaloïdes toxiques. Elle
amène d'abord de la surexcitation (fièvre) puis un épuisement,
(abaissement de température), etc. On peut regarder aussi la
polyurie comme un signe de l'affection de la moelle allongée,
vraisemblablement comme un trouble des centres du système
vasomoleur. lea. |

Les troubles des autres centres nerveux de la moelle et du
cerveau ne viennent que plus tard, après un certain progrès des
altérations matérielles dans les tissus nerveux. Ces troubles se
manifestent aussi d'abord par de la surexcitation, puis par de la
paralysie. Les deux phases se montrent dans la plupart des cas
de rage. Dans d’autres cas, la période de surexcitation est à peine
perceplüible. Ce sont les paralysies qui prévalent dès le début
comme dans les effets de certains alcaloïdes, où une dose faible
produit d'abord une exaltation puis une paralysie des fonctions
des centres nerveux affectés, taudis qu'une forte dose amène
d'emblée la paralysie. Toute la scène de la sürexeitation et de la
paralysie se déroule uniquement dans les centres nerveux. La
preuve, c'est que les nerfs périphériques conservent encore quel-
que temps leur irritabilité même après l'extinction de la: cireu-
lation et de la respiration; en excitant électriquement le nerf
sciatique par exemple, ses extrémités postérieures tombent en
convulsion, bien qu'il ait déjà paru totalement paralytique du
vivant de l'animal.

V

._ En possession des données expérimentales susdites, 1l me
semble intéressant de les faire entrer dans ma comparaison entre
le virus fixe de Paris et celui de Budapest.

J'ai fait deux fois cette comparaison, une première fois vers

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 145

la mi-décembre 1886, puis, une année après, au courant du mois
de décembre 1887.

Pour la première comparaison, j'ai pris 12 lapins ; dont 6 ont
reçu par trépanalion du virus fixe de Paris provenant d’un lapin
mort en 7 jours 18 heures, et les 6 autres, du virus rabique du
29° passage provenant d’un lapin mort en 8 jours. Voici les obser-
vations pour un lapin de chaque série de ces inoculations paral-
lèles :

LAPIN N° 643. VIRUS DU LABORATOIRE DE M. PASTEUR

= = S + RG OBSERVATIONS
E|mls|m
45 dé 16° |38,9138,9/1100/1100
16 » {17° 38,9139,9/1100/1050 Inoculé entre midi et 1 heure.
REINE 15° |40,0/40,2/1080/1060

18 » [IL |18° |39,1/39,311120/1100
19 » [lit Ji |38:8139:5/1070/1080
20 » [IV |18° |40,0/40,3/1070 | 1080
21 » [V |19° |40,0/40,5/1050/1050
22 » [VI |17° |40,2/40,8/1040/1030

93 » [VII 1162 139,9 39,5 1020/1000 se PR Niquer se heurte aux meu-
, r - e RS > les. 5h s. trébuche.

24 VIII Dee 31,0 39,5 1000 930 10h ». Parésie du train ant'. 5h s. couché,

29 » [IX 13,5 18,5 — JOIE ne peut lever la tête et se meurt à

midi précis. Perte totale, 120 gr.

LAPIN N° 69). VIRUS DE MON LABORATOIRE

48 fév. [19° | —- [89,2] — 11350
19 » 18° 139,5 41,0 1350114320 |Inoculé à midi 17.
20111 18° 139,7139,611300/1300
21 » |II |19° |39,4139,61132011300
22 _» [III |17° |39,0140,11132011270
23 » [IV |16° |40,3/40,71124011250 PRO PRE
24, » [NV [7° 44,2 40,8 1293011200 E matin, inquiet; le ous DORE
2. » de 14° 40,3 39,8 1170111460 Fenune me meubles, bondit en courant,
20 4 IL 15 37,9 35,8 1170/1110 Paralysie du train antérieur. Le soir, couché,
27 » |VIIL 140 117 OA OI ne peut lever la tête.
Trouvé mort le matin. Perte totale, 250 gr.

On voit que l’évolution du virus a été dans les deux cas à peu
près la même et a suivi la marche signalée plus haut. Pour mieux
faire ressortir ces ressemblances, j'ai résumé dans le tableau
suivant les résultats des expériences sur mes deux séries de
6 lapins :

140 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

A. VIRUS FIXÉ DE PARIS (130° passage).

JOURS APRÈS L'INOCULATION

Perte de poids.

2000 ur. |:
1570 |270

1490 280

1050 120

800 120

1000

B. VIRUS

[250 LR

250

F, commencement de la fièvre, f, fin de la fièvre et commencement
de la perte de température. p, commencement de la perte de poids. R, com-
mencement des symptômes nerveux de la rage. m, moment dela mort.

En regardant ces tableaux synoptiques, ou voit que dans les
12 cas c’est la fièvre qui apparaît la première et dans le même
temps à peu près. On peul y voir aussi que l'ordre d'apparition
des symptômes principaux est le même dans tous les 12 cas :
fièvre, diminution de poids, apparition des premiers symptômes
nerveux, abaissement de température et en8r la mort.

147
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DES CHIENS DES:RUES, ETC.

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ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

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LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 149

La ressemblance des variations de la température et du poids

du corps dans les infections avec ces deux sortes de virus est

inscrite pour un cas de chaque série dans les graphiques sui-
vanis :

a Virus de Paris. b. Virus de Budapest.

L'astérique indique la première apparition des symptômes rabiques, la
croix le moment de la mort; la courbe supérieure est celle des températures,
la courbe inférieure est celle des poids.

En comparant toutes ces données expérimentales, on peut
voir qu'il y a identité dans les effets de ces deux sortes de virus
rabique, tant pour leur degré de virulence que pour la nature et
le mode d'apparition des symptômes qu'ils produisent.

La seconde comparaison, après une année environ, m'a donné
desrésultats analogues et je la passerai sous silence. Je crois donc
pouvoir conclure de cette double série d'expériences que les deux
sortes de virus sont restés identiques même après une année, à
l'égard de leur virulence et de leurs autres effets, dans les limites
des fluctuations individuelles.

10

150 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

VI

Quelle interprétation peut-on donner de ce grand fait de l’aug-
mentation successive du virus rabique pendant les inoculations
de lapin à lapin? Comment peut-on expliquer ce phénomène que
la durée de l’incubation devient sucessivement plus courte quand
on avance de passage à passage, tandis que la quantité de moelle
inoculée reste toujours à peu près la même?

Plusieurs pensées s'offrent à l'esprit pour rendre compte de
ce phénomène particulier.

On peut imaginer que l'agent infectieux de la rage (un
microbe encore inconnu) subit pendant le cours des inoculations
successives un certain changement dans sa qualité. Il devient
individuellement de plus en plus fort à mesure qu'il s'adapte
successivement à son nouveau milieu. En conséquence de cette
énergie plus exaltée, le changement qu’il peut produire d’une ma-
nière ou d’une autre dans la moelle devient plus intensif, et les
altérations du système nerveux, premiers symptômes de la rage,
peuvent apparaître après une durée plus courte d’incubation. Ce
serait donc par la qualité, la vigueurindividuellement augmentée,
que la même quantité de virus agit plus énergiquement dans les
passages plus avancés.

D'autre côté, on peut imaginer que c’est la quantité de l'agent
infectieux de la rage qui subit an changement pendant les ino-
culations successives. Sa puissance de reproduction augmente,
et dès lors la même quantité d’une moelle rabique des passages
avancés contient plus d'agents infectieux que celle d'une moelle
rabique des premiers passages. Ce serait la quantité, la reproduc-
tivité exagérée qui agirait pour l’augmentation de la virulence,
sans aucun changement individuel de l’agent infectieux.

On peut enfin supposer que l’agentinfectieux de la rage subit
à la fois ces deux modifications, et dès lors, dans les passages
de hautrang, la moelle inoculée contient plus d'agents infectieux
fortifiés à la fois quantitativement et qualitativement.

L'expérience suivante nous porte à croire à l'existence d’un
changement quantitatif. Si on porte sous la dure-mère le virus
rabique dérivé de n'importe quel passage, en état plus dilué qu’a
l'ordinaire, le lapin meurt après une incubation prolongée;

LE VIRUS RABIQUE DES CHIENS DES RUES, ETC. 151

on peut même alleindre un tel degré de dilution que le virus
fixé lui-même n'a plus d'effet sur l'animal; de sorte qu'on
est forcé de croire que c’est par le nombre que l’agent infectieux
de la rage doit produire ses effets. En faveur de celte explica-
lion, on peut aussi citer l'expérience que j'ai faite, c’est qu'on peut
rendre aisément les chiens réfractaires à la rage, en leur inocu-
lant sous la peau le virus fixe de la rage à des degrés différents
de dilution, en commençant par la plus faible et continuant
successivement jusqu'à la plus forte’,

D'autre côté, il faut regarder comme une preuve pour l’exis-
tence d’un changement qualitatif une observation de M. Pasteur
que j'ai aussi faite dans mes expériences. Un lapin inoculé par
trépanation avec du virus fixe succombe, comme nous le savons,
après une incubation de 7 ou8 jours. La mème moelle inoculée
sous la dure-mère après 7 ou 8 jours de dessiccation ne tue le la-
pin qu'après une plus longue incubation, de 15 ou 20 jours par
exemple. Mais si on fait servir ce lapin à une inoculation nou-
velle sous la dure-mère, on voit reparaître l’incubation courte du
virus qui a servi de point de départ. Le retard du cas intermédiaire
est l'effet de l’appauvrissement quantitatif du virus rabique
dans la moelle séchée, et la récupération rapide de la durée de
l’incubation dans le cas ultérieur est due sans doute à ce que la
qualité de l’agent infectieux rabique est restée invariable dans la
moelle desséchée.

Les effets de la culture du virus rabique ont une grande res-
semblance avec ceux qu’on obtient en agriculture avec des
soins culturaux, combinés avec une intelligente méthode de sé-
lection?. C’est ainsi qu'Hallett, en choisissant comme semencesles
plus beaux grains et les plus beaux épis d’une variété de blé
quelconque, a réussi àaugmenteret à maintenir de plusassezcons-
tants, dans les limites des variations saisonnières, d’abord le
rendement à l’épi, c’est-à-dire le degré de fécondité de la graine,
puis la qualité individuelle du grain, qui devenait plus lourd et
plus dense.

On peut donc augmenter ainsi non seulement la quantité
mais aussi la qualité des produits dans le mème sol et avec la

V. Akadémiai ertesito d'octobre 1887. V. aussi ces Annales, t. If, p. 94.
dE

4.
De A. Novacki. Getreideban, 1886, p. 177, 179.

152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

mème fumure, non seulement la quantité de la récolte par hec-
tare, mais aussi le poids du blé par hectolitre.

En inoculant de lapin à lapin, c’est-à-dire en ensemencçant
régulièrement dans le même terrain le virus rabique, on le voit
aussi se fortifier dans sa vigueur individuelle et sa repro-
ductibilité jusqu’à un certain maximum où, à quelques fluctuations
près, les propriétés se fixent si les conditions de la culture res-
tent les mêmes. La ressemblance entre les microbes et les végé-
taux d’une organisation plus complète et plus élevée paraît done
à ce point de vue être tout à fait parfaite.

VARIATIONS DURABLES DE LA FORME ET DE LA FONCTION
CHEZ LES BACTÉRIES

Par EE. WASSERZU SG.

Lorsqu'on cultive les bactéries à l’état de pureté, chacune
d'elles prend une forme qui reste assez constante dans les divers
milieux nutritifs qu'on lui offre, et amène dans ces milieux des
transformations, variables naturellement de l’un à l’autre, mais qui
se reproduisent avec constance, quand les conditions de culture
se retrouvent les mêmes. De cette observation. tant de fois répétée, .
est sorti le principe de la constance de la forme et de la fonction
chez les microbes, principe qui est le fond de nos connaissances
actuelles, et a servi de base à toutes les classifications qui ont été
proposées.

Ce n’est pas qu'il soitabsolu. Du côté dela morphologie, ilest
atteint par l'existence des formes d'involution, formes anormales
ou pathologiques, qu’on voit apparaître dans les cultures vieillies,
lorsque le milieu nutritif est épuisé de ses éléments assimilables
ou altéré par les sécrétions des microbes qui y ont vécu, qu’on
peut voir apparaître aussi dans les premiers temps de la culture,
lorsqu'elle se fait dans des milieux peu favorables, par exemple
en présence des antiseptiques. Mais dans les milieux antiseptisés,
ces formes anormales n'apparaissent qu'au début des cultures,
elles sont transitoires, et la forme considérée comme normale
ne tarde pas à prédominer. D'un autre côté, on peut faire dis-
paraître tout à fait les formes de vieillesse ou au moins en
diminuer beaucoup le nombre: il suffit pour cela de faire des
ensemencements répétés, à de courts intervalles, dans des
milieux favorables. On obtient ainsi des générations chez
lesquelles les formes de début se conservent, quels que soient
la durée et l’état des cultures.

Du côté de la persistance de la fonction, les mêmes objections

154 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

provoquent les mêmes réponses. Toutes les cellules d’une même
masse de levure n’ont pas le mème pouvoir ferment; tous les
bacilles ou toutes les svores d’une même culture de bactéridie
charbonneuse ne sont pas également pathogènes; tous les articles
d'une culture du microbe du pus bleu ne sont pas également
aptes à reproduire la matière colorante. Mais on peut toujours,
et j'ai montré comment on pouvait y arriver pour le Bacillus
pyocyaneus, obtenir des cultures tout à fait homogènes au point
de vue de la forme et de la fonction, c’est-à-dire chez lesquelles
tous les éléments possèdent les mêmes caractères taxonomiques.

Les exceptions à la loi de la constance de la forme et de la
fonction semblent donc avoir un caractère transitoire qui con-
firme le principe, au lieu de l’infirmer. Mais l'importance de ces
faits exceptionnels serait autre si on leur communiquait un
caractère permanent, et si on montrait par suite que la forme et
la fonction ne sont nullement indépendantes, comme on le pro-
fesse d'ordinaire, des modifications du milieu. C’est là ce que j’ai
essayé de faire.

J'ai montré en effet, pour Le bacille du pus bleu et le Micrococcus
prodigiosus, que l’on pouvait abolir d'une façon permanente chez
ces êtres la fonction productrice de matière colorante dans des
milieux pour lesquels cetLe fonction était normale et faisait partie
de la définition donnée au microbe étudié. La forme est tout aussi
variable, et à l’aide de quelques traitements très simples, on peut
la modifier assez profondément pour que l'être vivant, rapporté
dans son milieu originel, y prenne et y conserve une forme dif-
férente de la forme primitive.

Ces deux espèces de modifications ontété obtenuesenemployant
d’abord l’action des antiseptiques, puis les cultures prolongées
dans des milieux acides, remplaçant les milieux alcalins dont on
se sert d'ordinaire. Maisil y a d’autres procédés pouvant donner
les mêmes résultats et d’autres microbes capables de présenter
les mêmes phénomènes. Il est non seulement intéressant, mais
encore nécessaire de multiplier les exemples en faveur de cette
thèse nouvelle, eten voici qu’on peut joindre à ceux que j'ai déjà
cités.

Reprenons le Micrococcus prodigiosus que nous avons déjà
étudié, et considérons-en une culture dans un bouillon de veau
légèrement alcalin, où les cellules prennent nettement la forme

FONCTION CHEZ LES BACTÉRIES. : 155

microcoque. Soumettons celte culture, le premier ou le second
jour de développement, pendant cinq minutes environ, à la tem-
pérature de 50° ‘. Prélevons, après refroidissement, une petite
quantité de semence que nous porterons dans un milieu sem-
blable au premier : le développement se fait très abondamment
dans ces conditions. Traitons cette seconde culture comme nous
avons fait de la première, et répétons ces chauffages à 50° pour
toutes les cultures successives.

On constate ainsi, au bout de quelques cultures, que la forme
microcoque disparaît et fait place à une forme très nettement
bacillaire qui se conserve d’autant mieux dans la suite des géné-
rations que les chauffages ont été plus nombreux. Nous obtenons
donc, en employant l’action répétée de la chaleur, les résultats
déjà trouvés sous l'influence des antiseptiques ou des milieux
acides. Ajoutons de suite que ces résultats s’obtiennent encore
plus rapidement quand, à l’action de la chaleur, on superpose
l’action du milieu acide ?.

Cette action combinée de la chaleur et des milieux acides
permet de produire des variations durables de la forme avec
d’autres microbes que ceux que nous avons déjà étudiés, en
particulier avec un bacille vert trouvé dans l’eau. Cet organisme
se présente, dans les cultures originelles, comme un petit bacille
relativement grèle et très court, au point d’avoir presque l'aspect
d'un microcoque. Il donne, surtout dans les milieux acides, une
belle couleur verte. J’ai pu l'obtenir d’une façon permanente, au
moyen de chauffages à 50° et de cultures en milieux acides, à
l'état de bacille allongé, mesurant jusqu’à 5 et 8 & de long.

On obtient les mêmes résultats avec le bacille du lait bleu;
mais cet organisme est surtout intéressant, nous l'avons déjà
indiqué, par les variations de sa fonction chromogène. Quand
on le cultive longtemps sur un milieu solide, de la gélatine
alcaline par exemple ou de la gélose, il y conserve sa coloration,
mais, reporté dans les milieux liquides, notamment dans le lait, il
se montre incapable de les colorer; j'ai pu lui rendre sa fonction

1. Le Micrococcus prodigiosus ne périt dans ces conditions qu'entre 55 et 56o.

2. Comme précédemment, nous avons fait nos expériences avec l’acide tartrique
à la dose de 1 à 6 décigrammes par litre. Les cultures sur gélatine acide
donnent des résultats analogues; comme la gélatine se liquéfie rapidement, l’em-
ploi des milieux liquides proprement dits est beaucoup plus commode.

156 . ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

chromogène par une culture prolongée dans un milieu acide‘.

Nous pouvons encore citer un autre organisme chez qui cette
action de la chaleur et des acides amène rapidement des chan-
gements morphologiques: c’est la bactéridie charbonneuse. La
bactéridie se présente, on le sait, dans le sang des animaux et
dans les milieux de culture, sous deux formes très différentes :
dans le sang, elle est composée de bacilles courts et séparés ; dans
les milieux artificiels, les bacilles sont réunis en longs filaments
enroulés el pouvant contenir des spores. On peut facilement
reproduire, dans les cultures, la forme courte que l’on rencontre
dans le sang : il suffit de faire quelques cultures successives
dans les milieux acides qui nous ont servi pour les microbes
colorés. On arrive à obtenir ainsi des formes très courtes, pouvant
même atteindre les dimensions des bactériums. Le nombre des
cultures nécessaires pour arriver à ce résultat est moins considé-
rable quand on a le soin de ne semer chaque fois que des spores,
c’est-à-dire de tuer préalablement les bacilles adultes par un
chauffage entre 60 et 70°. En partant d’une culture faite avec une
goutte de sang charbonneux, on peut avoir ainsi une série de
cultures successives dans un milieu acide. Les spores de ces
cultures successives ensemencées au même moment dans une
série de bouillons identiques donneront naissance à des généra-
tions de formes très différentes, depuis la forme baciilaire très
courte jusqu’à la forme ordinaire de longs filaments; les bacilles
seront d'autant plus courts qu'il proviendront d’une culture en
milieu acide de rang plus élevé.

Nous n'insisterons pas davantage sur les changements mor-
phologiques que l’on peut obtenir, avec les procédés que nous
avons indiqués, chezles organismes bacillaires. Ces changements
sont surtout intéressants à constater chez les microbes à qui
l’on reconnaît nettement la forme microcoque, comme le M. pro-
digiosus, puisqu'on peut arriver à combler ainsi l'intervalle qui
sépare, pour la plupart des auteurs, le groupe des microcoques du
groupe des bacilles.

1. Voir Hueppe : Surles altérations du lait par les microorganismes. Arbeit. aus
dem kais. Ges. amt., Il, 1884, p. 355. Cette action des acides sur la fonction chromo-
gène de ce bacille avait déja été observée : on avait remarqué que la coloration
bleue du lait n'apparaissait souvent que si ce liquide avait subi au préalable la fer-
mentation lactique.

FONCTION CHEZ LES BACTÉRIES. 157

L'étude que nous venons de faire nous permet en outre de
nous expliquer la véritable signification des formes d’involution.
Nous avons vu d’une part que ces formes se produisent dans les
cultures âgées, et qu’on peut les faire disparaître en soumettant
l'organisme à des cultures prolongées faites àde courts intervalles

dans certains milieux favorables. Nous avons constaté d'autre
part que ces formes peuvent prédominer au contraire et rem-
placer la forme primitive, considérée comme normale, au point
que celle-ci puisse être regardée à son tour comme une forme
d'involution. En réalité nous voyons intervenir ici les lois de
l’hérédité, qui tiennent une si grande place dans la vie des orga-
nismes. Quand une forme est une fois acquise dans un milieu
donné, elle arrive à s’y fixer d’une façon permanente, et, quand
on modifie le milieu, la forme ne varie pas ou commence par
varier très peu : le retour à la forme fixée est d'autant plus rapide
que l’action du milieu primitif a été plus prolongée. Toutefois, à
mesure que l'influence du milieu nouveau se prolonge à son tour,
le changement morphologique s’accentue davantage, et setrans-
met de génération en génération jusqu’au moment où le retour
à la forme antérieure ne peut plus s'effectuer. Ges résultats s’ap-
pliquent à la fonction aussi bien qu’à la forme. Il va sans dire
que les mêmes modifications du milieu n’influeront pas au même
degré sur la forme etla fonction, et que l’étude de ces deux sortes
de modifications devra d'ordinaire être faite séparément. Mais, en
envisageant les résultats de notre étude, il nous paraît qu'il sera
toujours possible de déterminer des variations durables de la
forme et de la fonction avec les infiniment petits, gràce au
nombre très considérable de générations que l’on peut soumettre,
dans un temps relativement court, à l'influence d'un milieu
déterminé.

REVUES ET ANALYSES

A. C. Core et prof. Horscey. — Rapports sur une épidémie de rage parmi les
daims du parc de Richmond pendant les années 1886-1887, Londres 1888.

Le premier de ces rapports est dû à M. Cope; il contient l’histoire de
l'épidémie de Richmond ; le second renferme les observations et les expé-
riences que M. Horsley a faites sur les daims enragés.

Avant d'exposer ce qu'il a observé à Richmond, M. Cope a recherché si
on avait recueilli en France ou en Allemagne des renseignements sur la rage
des daims.

D'après M. Cagny, on n’a jamais signalé en France d'épidémie de rage
sur les daims. |

M. Muller de Berlin a fait connaître à M. Cope que la rage a été observée
en Allemagne sur des daims mordus par des renards ou des chiens enragés,
mais que la maladie n’a jamais régné sous forme d’épidémie, sans doute à
cause des conditions de liberté dans lesquelles les daims vivent en Allema-
gne, et surtout, croit M. Muller, parce que la rage ne se transmet pas d’her-
bivore à herbivore, ces animaux ne faisant pas de morsures.

L'épidémie de Richmond n’est pas la première observée en Angleterre, où
on entretient des daims en grande quantité dans beaucoup de pares. Ainsi,
en 1795 et en 1798 les daims de Grove Park, de Windsor Park, de Cas-
siobury Park périrent en grand nombre. Si on se reporte aux symptômes
signalés pendant ces épidémies, on reconnaît que des animaux ont suc-
combé à la rage. Dans le pare d'Eaton Hall en 1872, la rage a sévi sur
les daims, et en 1880 elle s’est montrée avec les mêmes symptômes dansle
parc de Swythamley.

Toutes ces épidémies ont été vraisemblablement causées par des mor-
sures de chiens.

Celle de Richmond, qui fait le sujet du rapport de M. Cope, a suivi une épi-
démie de rage observée sur les chiens à Londres et autour de cette ville.

Le pare de Richmond a une étendue de 2,300 acres et contient 1,200
daims. Il est ouvert au publictoute la journée, les portes sont ferméesle soir, de
sorte qu'un chien peut y pénétrer et en sortir sans être vu. Les daims y vi-
vent en troupeaux de 100 à 200 têtes, restant sur les mêmes pâturages;
aussi la maladie demeure-t-elle confinée dans le troupeau où elle s'est
montrée. Le premier cas a été observé à la fin de septembre 1886, dans le
troupeau qui pâturait près de la porte d'East Sheen. Quelques jours après
d'autres animaux tombèrent malades, On crut à un empoisonnement, et
M. Lupton, vétérinaire, fit évacuer le troupeau sur un autre pâturage. Mais la
maladie continua. Un mâle et un faon malades furent envoyés au collège

REVUES ET ANALYSES. 159

royal des vétérinaires. La maladie fut ainsi observée dans tous ses détails.
Après la mort, la moelle épinière des animaux fut inoculée par M. Horsley
à des lapins et à un chien qui moururent de la rage la mieux caractérisée.
{ n'y avait done plus aucun doute sur la nature de l'affection qui faisait
périr les daims de Richmond.

Au mois de Juin, un troupeau qui paissait dans le voisinage de la harde
infectée fut atteint à son tour et perdit beaucoup de bêtes. L'épidémie a duré
jusqu’au 24 septembre et a fait périr 264 animaux.

M. Cope décrit ainsi les symptômes de la rage chez le daim. Au début de
la maladie, les animaux portent la tête en arrière sur les épaules, le museau
en l'air, ils ont des tressaillements subits et partent au galop droit devant
eux. Bientôt ils s’élancent contre leurs compagnons, se jetant tête baissée
sur les poteaux, les arbres et les obstacles qu'ils voient, et avec tant de vio-
lence qu'ils brisent leurs cornes et s’arrachent des lambeaux de peau. De
timides qu'ils sont, d'ordinaire, ils deviennent agressifs et mettent le désor-
dre dans le troupeau. Séparés et enfermés dans un endroit clos, ils se pré-
cipitent sur les objets et sur les personnes qui se présentent. A celte période
de la maladie, on voit des faons poursuivre audacieusement et mordre de
vieux daims.

Après quelques jours, des animaux meurent dans une crise ou après avoir
montré de la paralysie des membres.

L'observation la plus intéressante qui ait été faite au cours de cctte
épidémie est celle de la transmission de la rage du daim à un autre animal
de même espèce, et cela par morsure. Ces morsures ne font pas ordinaire-
ment de véritables plaies pénétrantes de la peau; la pression des dents pro-
duit des meurtrissures qui restent souillées de bave. L'animal mordu lèche
la partie blessée comme pour soulager la douleur qu'il ressent. Cependant
ces morsures suffisent pour inoculer la maladie. Un daim enragé fut isolé
et enfermé avec un animal sain; le daim enragé s’élança comme un chien
furieux sur son compagnon et le mordit aux oreilles et au cou. Le daim
mordu fut isolé et conservé; 19 jours après, il présentait les symptômes
caractéristiques de la rage. L'opinion longtemps admise que les herbivores
ne transmeltent pas la rage par morsure est donc controuvée. L'absence
d'incisives supérieures chez ces animaux rend leurs morsures moins dan-
gereuses que celles des chiens, mais l'expérience prouve qu'elles sont encore
capables de donner la-rage. Ce fait était déjà rendu très probable par la
persistance de la maladie dans les troupeaux de daims sévèrement isolés
depuis plus de six mois.

Les herbivores ne prennent point la rage en paissant l'herbe sur laquelle
ont vécu des animaux enragés, mais bien par morsure comme les autres
espèces.

Le rapport de M. Horsley fait suite à celui de M. Cope; il renferme les
observations faites sur les daïms enragés conduits à la « Brown Institution »,
et les résultats des expériences entreprises avec la moelle épinière de ces
animaux.

Les lésions trouvées à l'autopsie sont une congestion du pharynx, du
larynx et de la trachée. L’estomac est rouge, l'intestin est vide d'aliments,

160 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

la vessie contenait de l'urine, les centres nerveux étaient congestionnés.

La moelle épinière de deux daims, qui ont succombé au laboratoire de
M. Horsley, a été inoculée par trépanation à des lapins. La rage a éclaté
chez ces animaux après une incubation de 10 à 16 jours. Un chien inoculé
dans les mêmes conditions est devenu enragé après {2 jours. On voit que
chez le daim les caractères de la rage sont semblables à ceux que l’on
observe dans la rage des autres herbivores.

Un daim enragé amené à la « Brown Institution » était une femelle
pleine. M. Horsley a profité de cette circonstance pour rechercher si le virus
rabique passait de la mère au fœtus. Deux lapins furent inoculés avec de la
moelle épinière du fœtus. L'un d'eux mourut de septicémie, l'autre resta
bien portant et ne manifesta aucune immunité lorsqu'il fut inoculé avec du
virus rabique plusieurs mois après.

La rage des daims est done une maladie désormais bien connue, ce
résultat est dû aux rapports de MM. Cope et Horsley, qui ont en outre
démontré que les herbivores peuvent transmettre la rage par morsure.

E. Roux.

O. Luparscn. Sur l’atténuation du bacille charbonneux dans le corps de la
crenouille (Fortschritte der Medizin, n° 4, 1855, p. 121).

Les faits sur lesquels s'appuie la théorie des phagocytes de M. Metch-
nikoff ne sont plus guère contestés aujourd'hui. Mais si l’on admet l'exis-
tence de la lutte que les cellules de l'organisme soutiennent contre les
microbes venus du dehors, on ne connaît pas les causes qui déterminent l'issue
de cette lutte et la victoire ou la défaite de l’un des deux partis. On ne sait
même pas d’une facon précise à quel état les microbes pénètrent dans les
cellules, si c'est comme des assaillants qui y entrent de vive force et con-
tinuent à s'y développer comme dans un milieu favorable, ou s'ils sont
englobés par les leucocytes après avoir été détruits en dehors d'eux par une
substance soluble. Les bacilles tuberculeux peuvent, on le sait, vivre à l'inté-
rieur des cellules. En est-il de même des bactéridies charbonneuses ? C’est
cette dernière question que s’est posée M. Lubarsch. En essayant de la
résoudre, il a été amené incidemment à étudier les variations que peut subir
la bactéridie en passant par l'organisme de la grenouille.

« Si les bacilles charbonneux, se disait-il, meurent avant de péné-
trer dans les leucocytes, on pourra trouver un moment où les baeilles
encore vivants, même parmi ceux qui sont en dehors des cellules, seront
devenus très rares. En essayant de les cultiver, on n’obtiendra que des
cultures très tardives ou, dans tous les cas, beaucoup moins abondantes. »
Pour avoir quelque chance de pouvoir vérifier cette hypothèse, il fallait
choisir un animal chez qui la bactéridie trouvàt un mauvais terrain de eul-
ture et chez qui la phagocytose jouât rapidement un rôle très considérable.
La grenouille remplit parfaitement ces conditions : c’est d’ailleurs chez elle
que le rôle des phagocytes avait été démontré d’une façon très concluante
par M. Metchnikoff.

Un certain nombre de grenouilles recurent dans leur sac lymphatique

REVUES ET ANALYSES. 161

dorsal de petites parcelles de poumons ou de rates prises à des souris
ayant succombé au charbon. C'est le mode d'inoculation indiqué par
M. Metchnikoff, Les grenouilles étaient conservées à une température de
13 à 490, et à partir du lendemain de l'inoculation on en sacrifia chaque jour
quelques-unes ; des ensemencements furent faits dans des milieux favorables,
avec la sérosité lymphatique et les parcelles charbonneuses qui avaient
séjourné un temps plus ou moins long sous la peau de l'animal. Deux gre-
nouilles moururent au bout de un jour et de 2 jours et demi : la première
périt avec une hémorrhagie capillaire de la bouche et des yeux, et le liquide
sanguinolent qui s'écoulait renfermait un grand nombre de bactéridies. Chez
la 2 orenouille, les bactéridies se montrèrent réparties dans tous les organes.
Dans ces 2 cas, la mort survenue malgré la température relativement basse
à laquelle les animaux étaient conservés, l'examen microscopique ne révéla
aucune trace de bacilles intracellullaires, bien qu'ils fussent très abondants
dans les divers organes, ce qui n'a pas lieu d'ordinaire chez la grenouille.
Chez tous les autres animaux n'ayant pas succombé au charbon, les parcelles
d'inoculation étaient entourées d’une masse abondante de leucocytes dont
quelques-uns seulementcontenaientdes baeïlles : danstousces cas, à l'exception
d’un seul, les bacilles se montrèrent parfaitement vivants et donnèrent sur
la gélose de très belles cultures. M. Lubarsch ne nous dit pas comment étaient
faits les ensemencements et quelles précautions il prenait pour ne semer
qu'un nombre très petit de bacilles et pour rendre ses ensemencements com-
parables entre eux.

Son attention fut, du reste, attirée par un fait très intéressant et assez
inattendu : & A partir du troisième jour les bacilles avaient en totalité ou
en partie perdu leur virulence..; au 6° jour, aucune des cultures n’avait tué
les souris; vers le 3° ou 5° jour, le résultat n'est pas constant. Piusieurs
cultures tuaient, il est vrai, des souris au bout de 20 à 56 heures, mais
jamais des lapins ou des cobayes, et même quelques-unes des cultures ne
parvenaient pas à tuer des souris. » Devant ces résultats, M. Lubarsch s’est
demandé tout d'abord s'ils n'étaient pas dus à une erreur d'expérimentation,
à une impureté survenue dans ces cultures, ou à tout autre cause du même
genre. Après vérification, il s'est assuré qu'il n’en était rien, et il arrive à
cette conclusion que le passage à travers l'organisme de la grenouille suffit
pour atténuer la bactéridie charbonneuse. .

Ce résultat est trop important pour qu'on ne cherche pas à se rendre
compte ayec soin des conditions dans lesquelles M. Lubarsch a opéré. Il part,
nous l’avons vu, de la rate d’une souris morte du charbon, qu’il introduit
sous la peau de la grenouille, et qu'il y laisse pendant 1 à 10 jours à une tem
pérature moyenne de 45°, La parcelle de rate est ensuite retirée et sert à
inoculer, directement ou après une culture sur gélose, des souris, des lapins
et des cobayes. Parfois les souris meurent; d’autres fois elles résistent; les
lapins et les cobayes résistent aussi. Y a-t-il vraiment là une variation de
virulence due au passage à travers la grenouille? et l’atténuation constatée ne
pourrait-elle s’expliquer autrement? M. Lubarsch oublie de nous dire quelétait
le degré de virulence du bacille dont il est parti. Dans le cas où il eût été
déjà très atténué et n’eût tué que la souris, on ne devrait pas s'étonner qu’un

162 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

séjour prolongé à basse température, dans des conditions peu favorables, eût
amené de petites différences dans la virulence, différences qu'on aurait pu
obtenir en dehors même de la grenouille.

Malgré cette lacune regrettable sur l’état de la virulence primitive, qui
jette quelque doute sur les conclusions auxquelles arrive M. Lubarsch, on
voit qu'elles peuvent être comparées à celles qu'a données M. Metchnikoff
dans une étude analogue faite sur les moutons réfractaires au charbon
(voir le tome [° de ces Annales). Dans ce travail, M. Metchnikoff est arrivé
le premier à montrer d’une façon non douteuse l’atténuation de la bacté-
ridie par son passage à travers un animal réfractaire. M. Lubarseh n'avait
d’ailleurs pas eu connaissance de ce travail en entreprenant le sien, qui lui
donne, on le voit, des conclusions analogues. Il a de plus constaté, comme
M. Metchnikoff, que l’atténuation de la bactéridie était passagère et que, par
suite, les animaux qui reçoivent les cultures atténuées ne résistent pas « à
l’inoculation d’un charbon fortement virulent ». Autrement dit, l’atténuation
ne confère pas à la bactéridie la propriété d’être un vaccin.

Du reste, cette atténuation semble être particulière au mode d'inoculation
sous la peau de la grenouille de parcelles d'organes charbonneux. Quand, au
lieu de faire l’inoculation sous-cutanée, on injecte dans la veine abdominale de
la grenouille « une culture de charbon » (quel charbon ?), les baëilles se trou-
vent presque exclusivement cantonnés, au bout de 6 à 17 heures, dans les
cellules de la rate, du foie et dans le sang. Il semble donc que l’on soit dans
les meilleures conditions possibles, pour que l’action des leucocytes puisse
être constatée facilement par une diminution dans la virulence de la baec-
téridie. Il n’en est rien, et le sang aussi bien que les divers organes donnent,
sur gélose, d’abondantes cultures qui, inoculées à des souris, les tuent en
20, 26 à 54 heures. Dans ce cas, il n’y à pas d'atténuation sensible.

Cette expérience fournit un nouvel argument aux réserves que nous for-
mulions tout à l'heure sur les causes véritables de latténuation. Dans l’inté-
rieur d'un morceau d'organe charbonneux introduit sous la peau, les
bactéridies se développent mal, et la température de 45°, jointe à ces
mauvaises conditions de culture, suffit pour expliquer les différences très
petites que l’on constate dans la virulence. Cette question demande donc à
être reprise avec soin, et, siles résultats obtenus par M. Metchnikoff sur les
moutons réfractaires permettent de croire qu'ils pourront être étendus à d’au-
tres animaux réfractaires au charbon, on voitcependantqueles conclusions de
M. Lubarsch ne s'appuient pas sur des expériences tout à fait convaincantes.

Du moins cette dernière expérience de M. Lubarsch nous permet de tirer
une autre conclusion : c’est que les bacilles sont encore vivants dans l’inté-
rieur des cellules, puisque les cellules de la rate, par exemple, donnent des
cultures aussi abondantes que si l’on semait du sang charbonneux de lapin.
Une autre expérience prouve du reste que les bacilles n’ont pas besoin d’être
tués pour être mieux englobés par les leucocytes. Quand on injecte dans la
veine abdominale d’une grenouille une culture de charbon stérilisée par le
chauffage, les leucocytes n’en contiennent qu’un nombre très restreint, même
au bout de 2% heures, tandis qu’ils en sont bourrés dès la 6° heure avec une
culture de bactéridies vivantes. Il y a donc une action directe de la bactéridie

INSTITUT PASTEUR. 163

qui amène une augmentation dans l’activité des cellules de l'organisme et
leur permet de résister dans leur lutte contre les microbes.

M. Lubarsch a essayé de répéter avec le micrococcus tetragenus et le
bacille de la septicémie des souris les expériences qu'il a faites avec le
charbon. Elles ne l’ont conduit à aucun résultat positif. Mais il se promet
de ne pas les abandonner, et nous espérons qu’il fera connaître à bref délai
les résultats qu'ils aura obtenus dans cette étude si intéressante de l’atté-

nualion des microbes.
E, W.

>= ——

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES
PENDANT LE MOIS DE FÉVRIER 1888.

Personnes mortes de rage pendant le cours du traitement.

Me Delpéche, née Marie Wagner, 52 ans, concierge à Paris,
mordue le 23 janvier par un chien errant, inconnu, qui a été tué
par un sergent de ville après avoir mordu 3 autres personnes el
5 chiens.

Mne Delpéche a été mordue : 4° dans la pulpe du pouce droit,
une morsure ; 2° sur le dos du poignet droit, 8 morsures. Ces
blessures ont presque toutes saigné. La première est profonde.
Cautérisation à l’acide azotique quelques instants après la mor-
sure. Mise en traitement le 28 janvier, M"° Delpéche ne s’est
pas présentée à l’Institut Pasteur le 13 février, bien que le trai-
tement ne füt pas achevé. Elle est tombé malade le jour même et
a succombé le 17 février.

MneDelpéche, n'ayant pas subi Le traitement complet, n’est pas
comptée dans la statistique de janvier.

164 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — FEVRIER 1888
A | B
FREE.)
Morsures à la tête ( simples ..... nr Sie >,
et à la figure {| multiples....| »| 2! » 4)
Cautérisations efficaces. ........... »| » | » | » »
— INbINCACES RUE Di AT »
Pas delcautérisalion: TEE A ES PRE DEC
3 HOSIples:-. |) 8) »| 24)
Morsures aux mains) multiples... | » ss" »| 33
Cuutérisations effiraces............ Dana |
— INCICACES ES. er 6| |» 49h.
Pas de CuutéMisSaton..- RSC PRO AISS IS
Morsures aux mem-({ simples......| »| æ) s|? 9
bres et au tronc | multiples....| »| 4 »| 24
Cautérisations efficaces ......:...... PILE nai EE DE
— TRENNEUCES RE TRE 4\:5 1» M8"
Pas decuutérisahon. 1.25 ee LE 4 TEA »
HODIES = DéChITES MATE ART re AU FER
MOTSUTES NUE Le ee EE ES LUZ 9 ES
Morsures multiples en divers points
COEDS ER ASE RE »| 1| |» 4
Cautérisations efficaces 2e COURT » {> 1 »
— INCINCACES A DR EEUIE FRE Ve LA »
Pas de cuutérisation........ est LME 1 AE ER »
HAbRiS QD ÉCRATÉS EAN EE ERA A PRE EEE SR LE À RER
MONSUTES BUENU SERIE RER RER loteries
Françai Algériens..|..| 33 1
TOtAUe , çais et Algériens 33) 103),93
l'ÉtTANGOrS PES TNT 3 2 4
A B
————————————— EE — —
TOTAD GENERATE STE RP URRSE 165%

4. Pour l'interprétation des termes et la signification des diverses colonnes du
tableau, se reporter aux statistiques précédentes, p. 95, 148 et 207, &. I.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 154 fois ; chats, 7 fois; mulet, 1 fois; cheval, 1 fois:
porc, 1 fois; mouton, 1 fois.

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

Annales de l'Institut Pasteur TA.

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Doct: Roux. Photo

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Héliolypi À Quinsac 4 GBagquié, Paris.
Pasteuria ramosa

9me ANNÉE. AVRIL 1888. N° à

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

PASTEURIA RAMOSA

UN REPRÉSENTANT DES BACTÉRIES A DIVISION LONGITUDINALE
Par M. ÊLIE METCHNIKOFF,

Pour se faire une idée suffisante sur les relations taxono-
miques des bactéries, groupe devenu si important sous tant de
rapports, il convient de ne pas se borner aux formes les plus
habituelles et à cause de cela les mieux connues ; il faut diriger
les recherches sur des bactéries particulières, capables de donner
quelques aperçus nouveaux sur la question de la morphologie
du groupe en général.

Les Daphnies d’eau douce constituent un terrain très favo-
rable à ce genre d’investigations. Pendant mes recherches sur
les maladies infectieuses des animaux inférieurs, recherches
entreprises à un tout autre point de vue, j’ai été souvent frappé
de la richesse des formes nouvelles et remarquables appartenant
à des groupes de sporozoaires et de bactéries. Aïnsi j'ai ren-
contré chez les Daphnies un bacille parasitique se transformant
en microcoques, et un autre bacille, donnant des spirilles en
boucle, qui peut servir de modèle du pléomorphisme chez les
bactéries. En remettant la description de ces formes à une autre
occasion, je veux insister dans cet article sur un type nouveau
de bactéries parasitiques, que je me permets d'introduire dans
la science sous un nom dédié à notre illustre et vénéré maître,
qui, en découvrant les organismes provoquant la fermentation

lactique et butyrique, créa une ère nouvelle dans la science en
11

+

166 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

général et dans la microbiologie en particulier. Quoique les
bactéries soient connues depuis le xvu* siècle, néanmoins leur
rôle dans la nature n’a été démontré que par M. Pasteur lui-
même ou par ceux qui ont suivi la voie ouverte par lui.

Pasteuria ramosa (nov. gen., nov. sp.) est une bactérie para-
sitaire qui s’introduit dans la cavité générale du corps des
Daphnia pulez et D. magna, et provoque chez ces animaux une
maladie toujours mortelle. Dans son état de développement le
plus primitif que j'ai observé, ce parasite se présente sous forme
de colonies plus ou moins arrondies, à surface anfractueuse
(fig. 1). En observant ces colonies avec de plus forts grossisse-
ments, on reconnaît aisément qu’elles se composent de corps en
forme de choux-fleurs : on aperçoit un tronc central qui se
ramifie en rameaux secondaires, tertiaires, etc., et donne finale-
ment des articles terminaux arrondis à leur surface extérieure
(fig. 2). Pendant l’évolution de la Pasteuria, ses ramifications se
détachent les unes des autres, et il se produit une dissolution gra-
duelle de tous les membres de la colonie primitive. C’est d’abord
le tronc principal qui se divise, de sorte qu’il apparaît plusieurs
colonies-filles, composées chacune d’une série de ramifications.
Ce procédé de scission, se répétant plusieurs fois, aboutit à la
formation d’un nombre considérable de petites colonies (fig. 3-8
et photogrammes I et Il), dont les membres se trouvent ratta-
chés par un lien qui devient de plus en plus mince.

Pendant ce travail incessant de subdivision, les membres de
la colonie grandissent à vue d'œil, et, partant de l’état de pointe
arrondie à peine appréciable, ils deviennent bientôt des corps
rappelant par leur forme des grains de raisin. Dans un état
encore plus avancé, les individus de la Pasteuriane se montrent
plus que réunis par quatre (fig. 9, 10) et plus souvent par deux
(fig. 11, 42 et photogramme 3); leur point de réunion apparait
aussi de plus en plus fin, de sorte qu'ils se détachent très faci-
lement l’un de l’autre. Il se produit alors une grande quantité
de bactéries isolées (fig. 13, 17) qui rappellent quelque peu les
bacilles du genre Clostridium ou d’autres formes analogues.
Dans les individus adultes de Pasteuria, on reconnaît néanmoins
un pôle large et arrondi et un autre pointu en bec, le pôle infé-
rieur, qui était le point de liaison avec un autre individu.

Toutes ces formes sont le résultat de divisions successives dans

PASTEURIA RAMOSA. 167

le sens longitudinal; mais ce procédé de multiplication, au lieu
de se poursuivre jusqu’au bout, s’arrète à un certain point, ce
qui amène la production de colonies d'individus réunis par leur
partie inférieure. Ce n'est que dans une période plus avancée de
l'évolution que la division longitudinale est poussée à bout et
provoque une véritable dissolution de la colonie en individus
isolés. Les figures 3, 4, 8 nous montrent qu’un article de Pas-
teuria peut subir en même temps plusieurs (jusqu’à cinq) divi-
sions, ce qui donne des formes en éventail très caractéristiques.

Si dans ce mode de reproduction et dans la forme extraor-
dinaire des colonies de Pasteuria, on voulait voir une objection
contre son admission dans le groupe des bactéries, l'inspection
de l'individu isolé pourrait déjà dissiper le doute. Du reste il
ne faut pas oublier que la division longitudinale n’est pas com-
plètement étrangère à ce groupe. Quoique le plus grandnombre
de bactériens se divise toujours uniquement dans le sens trans-
versal, il existe néanmoins des genres, comme la Sarcina, où la
division s'opère dans les trois plans perpendiculaires de l’espace,
dont l’un doit être considéré comme longitudinal. La particula-
rité de la Pasteuria se réduit donc à sa faculté de se diviser en
un seul sens, le sens longitudinal. En supposant que les bac-
téries les plus primitives possédaient la faculté de scission en
trois directions différentes, on peut facilement admettre que
dans la plupart des formes dérivées, c'est la division transver-
sale qui s’est conservée, landis que dans la minorité des cas
c'est la division longitudinale qui a pris le dessus.

* La preuve la plus irrécusable de la nature bactérienne de la
Pasteuria nous est donnée par le mode de sporulation qui, sous
tous les rapports, se rattache à la production d’endospores, si
répandue parmi les bactéries les plus authentiques. Ce ne sont
que les individus isolés qui possèdent la faculté de produire les
spores. En observant les cellules vivantes, on peut distinguer
dans leur portion antérieure des espaces ronds, remplis d’une
substance plus transparente que le protoplasme (fig. 18); chez
les individus plus adultes (fig. 19) on aperçoit au milieu de cette
espèce de vacuole un point réfringent à peine perceptible. Deve-
nant de plus en plus grand (fig. 20, 21), ce petit corps se trans-
forme en spore sphérique entourée par une couche de substance
transparente (fig. 22) et finit par remplir la partie antérieure de

168 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

la cellule, devenue plus grande et surtout beaucoup plus large
(fig. 23 et photogramme IV). Pour mieux apprécier certains
détails de la sporulation, il convient d’observer les Pasteuria
colorées avec le bleu de méthylène. On peut bien voir alors que
les cellules qui paraissent d'abord complètement homogènes
sont composées de trois parties distinctes, dont l’une forme le
segment antérieur, l’autre, plus grande, le segment moyen, et la
troisième la pointe effilée qui servait de point de jonction avec
les autres membres de la colonie (fig. 24). C’est le segment an-
térieur qui est le siège de la production des spores. Il y appa-
raît d’abord une vacuole transparente, qui, sur des préparations
desséchées et colorées, semble beaucoup moins grande que sur
le vivant ; elle se remplit d’une spore arrondie qui devient plus
considérable à mesure de l'accroissement de la cellule entière.
Longtemps encore la spore en voie de formation se colore faci-
lement par le bleu de méthylène ; mais, arrivée à son état défi-
nitif, elle perd cette faculté et reste incolore et fortement réfrin-
gente. Pour arriver à la colorer, il faut recourir au procédé de
la double coloration, usité pour les bacilles de la tuberculose
et les endospores d’autres bactéries. On parvient alors à colorer
les spores en rouge de fuchsine et le reste du contenu en bleu
de méthylène. Avec cette méthode, on arrive facilement à dis-
tinguer la membrane de la cellule {fig. 26, 27), tandis qu'en
observant les Pasteuria vivantes (fig. 23), on peut se faire une
idée erronée sur la position des spores, qui paraissent être tout
à fait découvertes dans leur partie antérieure.

Dans les Daphnies mortes à la suite du parasitisme de cette
bactérie, on rencontre une grande quantité de spores enveloppées
par le reste dela cellule, et qui se dispersent plus tard surle fond
du vase. Quoique j'y aie fait grande attention, je ne suis néan-
moins jamais parvenu à observer le mode d'infection par les
spores, pas plus que leur germination et la production des pre-
mières colonies. Je ne suis pas non plus parvenu à obtenir des
cultures de ces bactéries sur la gélatine ou la gélose glycérinée,
milieux nutritifs que j'avais avec moi à la campagne (dans le
gouvernement de Kieff en Russie), où je fis la découverte de la
Pasteuria. Pour la première fois je la vis dans l’été de 1884, dans
un petit étang peuplé par des milliers de Daphnia pulez ; depuis
lors je l’ai perdue de vue jusqu'à l'été de 1887, où je la rencontrai

PASTEURIA RAMOSA. 169

de nouveau dans une mare habitée par les Daphnia magna. Ii
paraît donc que notre bactérie est assez rare, d'autant plus que
parmi les parasites des Daphnies mentionnés par Leydig, Claus,
Weismann et Moniez, il ne s'en trouve aucun qu'on pourrait
prendre pour la Pasteuria ramosa ou une bactérie voisine.

En observant les différents stades du développement de la
Pasteuria à l'état vivant, à travers les parois de la Daphnie, on
remarque d'abord que les colonies, aussi bien que les individus
isolés, sont complètement privées de mouvements actifs ; ce n’est
qu'à l’aide des courants sanguins qu'ils sont transportés d’un
endroit à l’autre. Les parasites, suspendus dans le liquide san-
guin, restent à quelques exceptions près tout à fait libres au
milieu d’une multitude de leucocytes, ce qui semble démontrer
que les premiers sécrètent une substance quelconque qui les
protège contre l'agression des phagocytes. Ce fait confirme
donc la règle d'après laquelle le parasite, évité par les phago-
cyles, se propage sans obstacles et finit par tuer l'animal. Cepen-
dant, dans des cas très rares, j'ai pu observer que les leucocytes
dévoraient l’agresseur, mais seulement dans son état de spore
(Hg. 28, 30); c’est ce que j'ai également constaté pour la pébrine
des Daphnies, et tout cela confirme l'opinion que les états végé-
tatifs sont doués d’une faculté spéciale de résistance à l’action
des phagocytes, faculté absente dans l’état mür du parasite.

Puisque je suis amené à parler de cette théorie des phago-
cytes, je voudrais m'arrêler en terminant sur une objection
récemment exprimée par MM. Roux et Chamberland (Noir : An-
nales, n° 12, 1887) dans leur remarquable travail sur l’immunité
obtenue par l'injection des substances chimiques. Ces auteurs
expliquent le fait d'une pareille immunité, bien constatée par
eux, par l'existence d'une matière antiseptique qui rend l’orga-
nisme impropre à la culture des bactéries infectieuses. Mais
on pourrait supposer aussi bien l'adaptation des cellules de l'or-
ganisme, et notamment des phagocytes, à l'influence nuisible
de substances sécrétées par les parasites, conformément à l'o-
pinion de M. Hesse, exprimée dans son mémoire publié dans
les Archives de Virchow (T. CIX, p. 385). Pour résoudre la
question d’une manière précise, il serait intéressant de recher-
cher si le vibrion septique serait apte à végéter pendant un
certain temps, à l’abri des phagocytes, dans l'humeur aqueuse

170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de l'œil des cobayes réfractaires, comme c’est le cas pour
d'autres exemples d'immunité naturelle ou acquise. Ainsi le
premier vaccin du charbon se cultive parfaitement dans la cham-
bre antérieure de l'œil des moutons devenus réfractaires à des
doses considérables du virus fort. De même le bacille du rouget
des pores, qui disparaît en peu d'heures après l’inoculalion sous
la peau des chiens, croît dans la chambre antérieure et produit
un hypopyon chez les mêmes animaux ; j'ai observé les mêmes
phénomènes après l’inoculation du premier vaccin du rouget
des pores sous la peau et dans l'œil des lapins.

EXPLICATION DE LA PLANCHE Î.

Les dessins ont été faits par moi à l’aide de la chambre claire de
M. Nachet, et je dois les photographies à l’obligeance de M. Roux.

Les fig, 1, 28, 29 et 30, ont été dessinées avec le grossissement fourni
par l'Oc. 4 et l’obj. 9 de Hartnack, les autres figures avec l’Oe. 4 et le sys-
tème à l'huile 1/18 de Zeiss.

Fig. 1. Quatre colonies de Pasteuria ramosa de l'intérieur d'une seconde
antenne de Daphnia pulex. Dessiné d’après le vivant.

Fig. 2. Coupe optique d’une colonie de la même espèce. Dessiné d’après
le vivant.

Fig. 3 à 8. Différents états de division longitudinale des petites colonies
de Pasteuria ramosa.

Fig. 9 et 10. Colonies composées chacune de quatre individus.

Fig. A et 12. Colonies constituées chacune par deux individus.

Les fig. 3 à 12 ont été dessinées d’après des préparations colorées par la
fuchsine.

Fig. 13. Un individu isolé, dessiné d'après le vivant.

Fig. 14 à 17. Individus isolés, dessinés d’après des préparations colorées
par la fuchsine.

Fig. 18 à 23. Six états du développement de la spore, dessinés d'après
le vivant,

Fig. 24 à 27. Quatre états de sporulation, d'après des préparations à
coloration double (fuchsine-aniline et bleu de méthylène).

Fig. 28. Un leucocyte de! Daphnia pulex rempli d'individus sporifères de
Pasteuria, dessiné d’après le vivant.

Fig. 29. Le même leucocyte, pris dix minutes plus tard.

Fig. 30. Un autre leucocyte du même animal.

Pour les photogrammes I à IV, voir le texte.

SUR UN PROCÉDÉ PBRFRCTIONNÉ D'ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE
DE L'AIR,

Par MM, I STRAUS ET KR, WURTZ.

Il

Les procédés employés pour la détermination et la numéra-
tion des germes de l'air sont déjà très nombreux ; leur multi-
plicité même montre qu'aucun d’eux n’est irréprochable. L’ex-
posé de tous ces procédés nous entraiînerait trop loin; nous
indiquerons seulement les plus importants, renvoyant pour les
détails à la monographie remarquable de M. Miquel : et au récent
mémoire de M. Petri *, où l'historique de la question est traité
avec soin.

Les méthodes actuellement employées peuvent, en somme,
èlre ramenées à deux types fondamentaux, selon que l’on a
recours aux milieux de culture liquides ou aux milieux solides.

Les premières recherches précises sur les organismes de l'air
sont dues à M. Pasteur ; elles sont consignées dans son mémoire
célèbre «sur les corpuscules organisés qui existent dans Patmo-
sphère » #, M. Pasteur faisait passer, à l’aide d’un aspirateur, de
l'air à travers des bourres de coton nitrique ; ces bourres étaient
ensuite dissoutes dans un mélange d’alcoolet d'éther et donnaient
un collodion laissant déposer, par décantation, les poussières
atmosphériques arrêtées au passage. Ce sédiment était examiné
au microscope et révélait la présence de spores de champi-
gnons. En outre, en introduisant ces bourres dans un bouillon
nutritif dûment stérilisé, M. Pasteur y constata le développement

1. Des organismes vivants de l'atmosphère, Paris, 1883; voy. aussi la série des
mémoires du même auteur publiés dans l'Annuaire de Montsouris.

9. Nouvelle méthode de recherche et de numération des bactéries et des spores de
moisissures de l'air (Zeïitschr. f. Hygiene, 1887, t. III, p. 1-146).

3. Pasreur. Mémoire sur les corpuscules organisés qui existent dans l’atmosphere
(Annales de chimie et de phys., t. LXIV, 1862, p. 1-110, et Comptes rendus, 1865,
t. LVI, passim).

172 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de bactéries et de moisissures. Plus tard, il imagina une mé-
thode plus parfaite, consistant à faire arriver dans un certain
nombre de ballons renfermant du bouillon stérilisé. et dont on
cassait la pointe au moment de l’expérience, un volume déter-
miné d'air; d’après la proportion des ballons qui se troublaient
et de ceux qui restaient stériles, on concluait au nombre de
germes contenus dans l’air.

C'est de celle méthode que dérivent celles qui ont été
employées par M. Miquel dans les patientes recherches qu'il
poursuit depuis longtemps à l'observatoire de Montsouris. Sans
entrer dans le détail des perfectionnements successifs que
M. Miquel lui a fait subir, sa méthode revient, en dernière
analyse, à faire barbotter à travers des ballons à deux tubulures
une quantité déterminée d'air. Le nombre des ballons pour
chaque essai d'air est d'environ une trentaine; et il importe de
faire passer, à travers chacun de ces ballons, une quantité d’air
telle que, sur la totalité de ces ballons placés ensuite à l’étuve,
la moitié seulement se trouble. On suppose que chacun des
ballons troublés n’a reçu qu’un seul germe, et du nombre des
ballons qui se sont troublés on déduit le nombre des germes que
renferme le volume d’air ayant traversé tous les ballons.

Ce procédé qui, entre les mains de M. Miquel, a donné des
résultats dont on ne saurait méconnaître l'importance, présente
de sérieux inconvénients. Il nécessite, pour chaque expérience,
des manipulations et un outillage compliqués, l'emploi d'un
grand nombre de ballons et d’une notable quantité de bouillon.
On suppose en outre, sans en fournir la démonstration, que
lorsqu'un ballon se trouble, ce trouble n’est dû qu’à l’'ensemen-
cement d'un seul germe; or l'expérience tend au contraire à
montrer que les germes des bactéries existent dans l'air, non
pas par unités, mais par agglomération de plusieurs germes. Les
résultats obtenus par cette méthode peuvent donc être très ins-
tructifs en fournissant des chiffres comparables entre eux, mais
on ne peut guère attribuer à ces chiffres une valeur absolue.

Dès que M. Koch eut imaginé la culture sur milieux solides,
il l'appliqua à l'analyse bactériologique de l’air. Une capsule de
verre renfermant de la gélatine stérilisée et ayant fait prise, es
exposée, pendant un temps déterminé, à l'air ; puis on laisse aux
colonies le temps de se développer, on les compte et on les

ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE DE L'AIR. 173

examine. Utile comme moyen d'orientation, ce procédé ne peut
servir à une détermination précise du nombre des microbes de
l'air.

Le procédé de M. Hesse !, dérivé de celui de M. Koch, cons-
liltue un progrès notable. Il consiste, comme l’on sait, à faire
cheminer une quantité d'air déterminée, à l’intérieur d’un tube
de verre, sur la paroi interne duquel à été étalée et a fait prise
une mince couche de gélatine nutritive. L'air doit progresser
assez lentement à l’intérieur du tube, et celui-ci doit avoir une
longueur suffisante pour que tous les germes aient le temps de
se déposer.

Les numérations faites par M. Hesse et après lui par plusieurs
observateurs qui eurent recours à sa méthode, par M. Fischer
notamment, ont donné des résultats intéressants. Ils nous ont
appris, entre autres particularités, que les spores des moisissures
sont plus légères que les germes des schizomycètes (les colonies
de moisissures se développent généralement plus loin du point
d'entrée de l’air dans le tube que les colonies de bactéries). Mais
la méthode de Hesse comporte, elle aussi, plusieurs inconvé-
nients. L'appareil est encombrant, difficile à stériliser. Les
sermes, au lieu d'être incorporés à la gélatine, sont simplement
déposés à sa surface, qui peut être plus ou moins sèche et
raccornie : d'où la possibilité qu’un certain nombre d’entre eux
n'arrivent pas à développement. L'examen microscopique des
colonies est très difficile, vu le gros diamètre du tube; il en est
de même de la cueillelte des colonies à l’aide du fil de platine.

Enfin, la plus grave des objections que nous faisons à cette
méthode est la lenteur que demande la prise d'air. La vitesse
maxima avec laquelle l'air peut cheminer dans le tube étant d'un
litre en trois minutes, l'examen ne peut porter que sur de pelits
volumes d’air : circonstance très fâcheuse, puisque en ramenant
les résultats au mètre cube d'air, le multiplicateur devient très
grand et les erreurs se trouvent elles-mêmes multpliées par un
gros chiffre. La longue durée de chaque expérience est aussi un
inconvénient, à cause de la perte de temps, et surtout parce que
les conditions atmosphériques que l'on veut étudier peuvent
varier elles-mêmes pendant la durée de l'expérience.

{. Sur la détermination quantilative des micro-organismes contenus dans l'air
(Mittheil. a. d, k, Gesundheitsamte. Bd. I, p- 182).

174 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Les défectuosités de cette méthode en ont fait naître d’au-
tres : parmi celles-ci nous mentionnerons seulement celle de
M. Frankland et celle de M. Petri ; toutes deux sont basées sur
le principe suivant : employer une bourre filtrante et incorporer
ensuite celte bourre à du bouillon gélatinisé. M. Frankland
emploie une bourre de coton de verre, el fait faire prise à la géla-
tine sur la paroi intérieure d’un ballon de verre, à la façon d'un
tube d'Esmarch'. Son procédé offre aussi des désavantages; la
division parfaite de la bourre de coton de verre est difficile à
obtenir, etson mélange avec la gélatine forme une couche laiteuse
au milieu de laquelle les colonies sont difficiles à apercevoir.

M. Petri, au lieu d’une bourre de coton de verre, emploie un
double filtre formé de sable fin emprisonné entre deux culots de
toile de cuivre à mailles très fines, le tout engagé dans un tube
de verre. L'air, aspiré par une trompe ou une pompe à main, est
obligé de traverser le filtre de sable, et s’y dépouille de tous ses
germes. Le sable ainsi que les culots de toile de cuivre sont
ensuite répartis dans des godets de verre et arrosés de gélatine
nutritive; on compte les colonies qui se développent, comme
pour une culture sur plaques. On trouvera dans le travail très
complet de M. Petri la description minutieuse de son procédé et
la comparaison qu’il en fait avec les procédés antérieurement
employés. Nous l'avons nous-mêmes employé et nous lui
avons aussi reconnu quelques inconvénients : le dispositif de
l'appareil ne laisse pas que d’être compliqué, les culots de toile
de cuivre devant être minutieusement calibrés et ajustés, pour
ne pas permettre la fuite du sable. Mais l’objection principale
que l’on peut faire à cette méthode est la suivante : le passage
de l’air à travers deux filtres de sable fin de 3 centimètres de
hauteur chacun nécessite, pour avoir une vitesse convenable,
une ‘aspiration puissante, d'où l'impossibilité de recourir à un
simple aspirateur et la nécessité de recourir à la pompe à main
ou à une trompe.

Il

La méthode que nous avons employée consiste, en dernière

x

analyse, à faire barbotter un volume déterminé d'air à travers

4. FRANKLAND (Percy). Proceedings of the R. Soc. Vol. XI, p. 443; voir l'analyse de
ce travail dans ces Annales (t. I, p. 315); voir en outre Zeitschr. [. Hyg., A887, t. ILL,

ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE DE L'AIR. 179

de la gélaline nutrilive. L'idée de recourir à un procédé analogue
avait déjà été plusieurs fois émise; il existe même des essais
tentés dans cette direction, notamment par M. von Sehlen, dans
ses recherches sur l’air des régions palustres en Italie ‘. Mais les
résultats ainsi obtenus ont été peu satisfaisants, pour plusieurs
raisons qui seront développées plus loin, et les procédés basés
sur la méthode du barbottage à travers la gélatine nutritive ont
été presque universellement délaissés.

Notre appareil à barbottage se compose d’un tube de verre A,

avec un fort renflement cylindrique à sa partie moyenne, et
mesurant 15 millimètres de diamètre à ses deux extrémités.
Ce tube reçoit la gélatine nutritive. Au fond de ce tube plonge
un second tube B, de petit calibre, dont l'extrémité inférieure
est finement effilée ; à la partie supérieure, il porte un renflement
rodé, G, qui ferme hermétiquement le tube A. Celui-ci porte
latéralement une tubulure de dégagement D, munie d’un étran-
glement pour maintenir les bourres.

1. Etudes sur la Malaria (Fortschritte der Med., 1884, n° 18, p. 583).

176 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Pour se servir de l'appareil, on garnit d’ouate l’orifice supé-
rieur (e) du tube B, ainsi que la tubulure de dégagement D, de
chaque côté de l’étranglement, et on stérilise l'appareil par la
chaleur sèche. Après avoir retiré lé tube intérieur B, on versedans
le tube À 10 centimètres cubes de bouillon gélatiné, à 10 0/0,
liquéfié à une douce chaleur. On a soin d'ajouter à la gélatine
une goutte d'huile stérilisée. Cette dernière précaution est absolu-
ment indispensable; elle empêche la gélatine de mousser pen-
dant le barbottage et de sortir par le tube de dégagement. Le
tout est stérilisé à l’autoclave à 115° pendant un quart d'heure,
et l'appareil est dès lors prêt à servir.

On tient, pendant toute la durée de l'opération, l'appareil à la
main, pour que la chaleur de celle-ci empêche la gélatine de se
solidifier. Par un tube de caoutchouc, on relie le tube latéral D
à un aspirateur; puis on enlève la bourre qui ferme l'extrémité e.
On fait alors fonctionner l'aspirateur à la vitesse voulue, eton
fait barbotter à travers la gélatine un nombre déterminé de litres
d'air. Grâce à la présence de l'huile, les bulles formées par le
passage de l'air à travers leliquide sont très fines et la mousse très
peu accusée, quelle que soit la vitesse de ce passage. I en résulte
que l’on peut ainsi faire barbotter un volume notable d'air pen-
dant un temps relativement court (50 litres en un quart d'heure).
L'opération terminée, on replace la bourre en e, puis, en souf-
flant par la tubulure latérale D, on fait monter, à diverses reprises,
la gélatine à l'intérieur du tube A, pour entrainer les germes
qui ont pu y rester adhérents. Cela fait, on retire la bourre de
sûreté /, et à l'aide d’un fil de platine stérilisé on pousse à l'in-
térieur du tube A la bourre g. On replace la bourre de sûreté et
on agite doucement et à diverses reprises l'appareil, pour répar-
tir dans la gélatine les germes qui, ayant échappé au barbottage,
ont été retenus par la bourre g*.

On peut alors procéder de deux façons, selon que l’on veut
employer la méthode de culture sur plaques, d’après M. Koch,
ou que l’on veut utiliser le tube A à la façon d'un tube d'Esmarch.

Dans le premier cas on aspire par le tube B, gradué à cet
effet, 2 centimètres cubes de gélatine que l’on étale sur une
plaque; la gélatine totale donne ainsi cinq plaques. On laisse les

1. L'appareil a été construit sur nos indications, par M. Leune, 31, rue des
Deux-Ponts. 3

ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE DE L'AIR. 114

colonies se développer et on procède à leur numération, absolu-
ment comme cela se fait pour l'analyse de l’eau. En addition-
nant les colonies développées au bout de 4 à 5 jours sur les
5 plaques, on a le nombre de germes de schizomycètes et de
moisissures (susceplibles de se développer sur la gélatine) que
renferme le volume d'air ayant traversé l'appareil‘.

L'autre procédé est plus expéditif et a l'avantage de mettre
à l'abri de toute contamination ultérieure par les germes de l’air.
Il consiste à répandre la gélatine, après le barbottage, à la face
interne du tube A et à la faire prendre rapidement en plaçant
l'appareil horizontalement, et en le faisant tourner sous le jet
d’un robinet d’eau froide. — C’est alors une variante du tube
d'Esmarch ; mais nous donnons la préférence à la méthode des
plaques qui permet mieux l'examen des colonies.

Pour ne pas trop allonger ce travail, nous ne relaterons que
quelques-unes des nombreuses expériences comparatives que
nous avons faites dans les salles de l'hôpital Saint-Antoine et
dans le laboratoire de pathologie de la Faculté.

EXPÉRIENCE x1. 1887, salle Roux, hôpital de Saint-Antoine. T, 46°. H. 759,
(Méthode de Hesse.) 10 litres d'air passent en 30 minutes à travers un
tube de Hesse de 4 centimètres de diamètre et de 75 centimètres de long.
Au bout de 4 jours, on compte 53 colonies de bactéries et 4 de moisissures.
Expérience comparative avec la méthode de barbottage. On fait passer,
dans la même salle, au même moment, dans l'appareil à barbottage placé
à côté du tube de Hesse, 10 litres d'air. L'expérience a duré 9 minutes. Au
bout de # jours, les plaques donnent 335 colonies de bactéries et 15 de
moisissures.

EXPÉRIENCE x11. Hôpital Saint-Antoine, salle Marjolin. T. 190. H. 757.

(Méthode de Hesse.) 10 litres d'air passent en 30 minutes à travers le
tube de Hesse. Au bout de 4 jours, on compte 85 colonies de bactéries et
20 moisissures.

(Méthode de barbottage.) 10 litres d'air barbottent en 10 minutes à travers
l'appareil. La numération sur les plaques donne au bout de 4 jours 355 co-
lonies de bactéries et 4 moisissures.

EXPÉRIENCE xx. Hôpital Saint-Antoine, salle Roux. T. 190. H. 758.

(Méthode de Hesse.) 10 litres d'air passent en 30 minutes à travers un
tube de 3,5 centimètres de diamètre et 75 centimètres de longueur. Au bout
de 4 jours, on note le développement de 100 colonies bactériennes et de
à moisissures.

1. Pour que la numération soit absolument rigoureuse, il faut avoir soin de
laisser la très petite quantité de gélatine qui reste dans l'appareil faire prise et
compter les quelques colonies qui peuvent encore s’y développer. On ajoutera ce
chiffre à celui qui est fourni par les plaques.

178 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

(Méthode de burbottage.) Les plaques montrent, au-bout de 4 jours,
531 colonies bactériennes et 8 moisissures.

Expérience xvu. 145 février 1888, laboratoire de la Faculté !. T. 440.
H. 764.

(Méthode de Frankland.) 50 litres d’air passent en 15 minutes à travers
les bourres de coton de verre; l'aspiration se fait au moyen de la trompe à
eau. Les ballons de gélatine où les bourres ont été semées ont donné, au
bout de 4 jours, 95 colonies bactériennes et 20 de moisissures.

(Méthode de barbottage.) 50 litres d'air passent au même moment, et
également en 45 minutes, à travers l'appareil à barbottage. Les plaques
donnent au bout de #4 jours 141 colonies bactériennes et 15 moisissures.

ExPÉRIENCE xvux. 46 février 1888, laboratoire de la Faculté de médecine.
12420-H00101

(Méthode de Frankland.) 50 litres d'air passent en 13 minutes sur les
bourres en coton de verre; celles-ci, noyées dans deux ballons contenant de
la gélatine, donnent, au bout de #4 jours, 80 colonies bactériennes et
39 moisissures.

(Méthode de burbottage.) En même temps, et également en 43 minutes,
50 litres d'air barbottent dans notre appareil. Les plaques donnent au bout
de 4 jours 125 colonies bactériennes et 29 moisissures.

ExPÉRIENCE xx. 49 février 1888, laboratoire de la Faculté. T. 12.

(Méthode de Petri.) 50 litres d'air passent en 12 minutes à travers les
filtres en sable, à l’aide de la trompe d’Alvergniat. Des godets de gélatine
ensemencés avec le sable chargé de germes montrent, au bout de 3 jours,
91 colonies de bactéries et 95 moisissures (la fenêtre de la pièce était
ouverte pendant la durée de l'expérience, de là sans doute le grand nom-
bre de moisissures).

(Méthode de burbottage.) Simultanément et pendant le même espace de
temps, on fait barbotter 50 litres d'air à travers notre appareil; les plaques,
au bout de 3 jours, donnent 485 colonies de bactéries et 91 moisissures.

ExPÉRIENCE xx. 21 février 1888, laboratoire de la Faculté. T. 130.

(Méthode de Petri.) 50 litres d'air passent en 14 minutes à travers l’ap-
pareil de Petri; l'aspiration est faite par la trompe d'Alvergniat. Les godets
à gélatine donnent au bout de 4 jours 88 colonies bactériennes et 65 moi-
sissures.

(Méthode de barbottage.) 50 litres barbottent en 1% minutes à travers
notre appareil, au même moment que se fait l'expérience précédente. Les
plaques, au bout de 4 jours, donnent 179 colonies bactériennes et 43 moi-
sissures.

ExPÉRIENCE xxIV. 24 février 1888, laboratoire de la Faculté. T. 43,
H. 753.

(Méthode de Petri.) On fait passer, à l’aide de la trompe, 50 litres d'air
à travers le filtre de sable; les godets ensemencés avec le sable chargé des

1. La pièce du laboratoire où ces expériences ont été faites est humide, froide
et peu fréquéntée. — Les volumes d'air ont été mesurés à l'aide d'un compteur à
gaz.

ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE DE L'AIR. 179
germes ont donné, au bout de 4 jours, 40 colonies bactériennes et 9 moi-
à

issures.
(Méthode de barbottage.) Au même moment et pendant le même temps
50 litres d’air barbottent à travers notre appareil; les plaques au bout de

=

4 jours ont donné 8% colonies bactériennes et T moisissures,

III

Dans le procédé qui vient d’être exposé, se trouvent écartés
la plupart des inconvénients qui ont fait rejeter jusqu'ici l’em-
ploi de procédés analogues. Le plus grave de ces inconvénients
tient à ce que l’air, en barbottant à travers un liquide albumi-
neux, y forme des bulles très volumineuses, qui remplissent
rapidement et débordent l'appareil, d’où l'impossibilité de faire
barbotter des quantités notables d'air avec une vitesse suffi-
sante. Grâce à l’artifice employé par nous, de l'addition d’une
goutte d'huile, nous avons supprimé complètement cet obstacle.
L'émulsion très fine que l'huile forme avec le liquide lui donne,
il est vrai, un aspect opalescent ; mais c'est là, pour les cultures
sur plaques surtout, un inconvénient négligeable, rien n'étant
plus facile que de distinguer au microscope les gouttelettes
d'huile d'avec les colonies naissantes.

La bourre de coton placée à l’intérieur de la tubulure
de sortie de l'air retient les germes qui ont pu échapper
au barbottage et donne à celui-ci toute la sécurité nécessaire.
Du reste nous avons pu nous assurer, en semant ces bourres à
part dans de la gélatine stérilisée, qu’elles ne donnent en général
naissance, même quand de grandes quantités d’air ont barbotté
rapidement à travers le liquide, qu’à quelques colonies de bac-
téries ou de moisissures. Le barbottage retient donc la grande
majorité des germes de l'air.

On a aussi exprimé la crainte, formulée surtout par
M. Flügge, que pendant la durée du barbottage les germes
déposés dans le liquide nutritif n'aient déjà le temps de se mul-
tiplier, ce qui fausserait nécessairement les résultats de l'expé-
rience. On pourrait être tenté d'expliquer ainsi les chiffres plus
élevés que nous avons obtenus avec notre procédé, comparative-
ment aux autres. Il n’en est rien. Nous nous sommes assurés
qu’alors même que le barbottage dure près d’une heure, le nom-
bre des organismes n’augmente pas sensiblement dans le liquide.
Si l'expérience devait se prolonger davantage, on pourrait aisé-

180 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ment obvier à ce danger. Le barbottage, au lieu de s’effectuer
dans du bouillon gélatiné, qui pour rester liquide doit être main-
tenu à une température de 25°, peut se faire dans du simple
bouillon que l’on maintient à 0°, en plaçant l'appareil dans la
glace. Le barbottage terminé, on ajoute à ce bouillon un vo-
lume égal de gélatine nutritive stérilisée, on mélange et on fait
les plaques. |

La méthode employée par nous présente sur celles qui ont
été suivies jusqu'ici plusieurs avantages. L'appareil est très
simple et facilement maniable. Il permet de recueillir tous les
germes d'un volume considérable d'air, dans un temps relative-
ment court, condition éminemment favorable pour les recherches
météorologiques. L'opération peut s'effectuer sur de l’air animé
des vitesses les plus différentes et à l’aide des pressions les plus
variables. Enfin, la méthode est d’une sensibilité plus grande que
les autres, c'est-à-dire qu’elle permet de déceler, toutes choses
égales d’ailleurs, un plus grand nombre de colonies bacté-
riennes que celui que l’on obtient par les autres procédés‘.
Cela tient sans doute à ce que les germes des bactéries ne se trou-
vent pas dans l’air à l’état d'individus isolés, mais sous forme
d'agrégats de plusieurs individus. Dans les procédés de M. Hesse,
M. Petri et M. Frankland, ces agrégats ne sont pas dissociés ou
le sont insuffisamment; ce résultat est obtenu avec beaucoup
plus de sûreté, grâce au barbottage très intime auquel l'air
est soumis dans notre procédé; de là sans doute les chiffres plus
considérables auxquels nous sommes arrivés dans les expé-
riences comparatives.

La méthode employée par nous, ainsi que celle de nos pré-
décesseurs, ne saurait avoir la prétention de déceler tous les
germes vivants répandus dans l’atmosphère. Beaucoup d’entre
eux, qu'il s'agisse de spores de moisissures ou de germes de
bactéries, n'arrivent sans doute pas à développement parce que
le milieu de culture qui leur est ainsi offert ne leur est pas con-
venable. Les organismes exclusivement anaérobies notamment
demandent, pour être mis en évidence, de tout autres procédés ;
nous aurons à revenir sur ce point dans un travail ultérieur.

1. Cela est vrai pour les colonies bactériennes seulement et non pour les moi-
sissures, pour lesquelles cette méthode ne saurait revendiquer de supériorité. Cela
tient à çe que, très probablement, les spores des moisissures flottent isolées dans
l'air.

SUR L'ABSENCE DE MICROBES DANS L'AIR EXPIRE

Par MT STE AUS:

Lister, le premier, fut frappé de ce fait remarquable que,
dans les fractures simples des côtes, avec pénétration du poumon
par l’un des fragments osseux, le sang épanché dans la cavité
pleurale, quoique librement mélangé à l’air, ne subit pas de
décomposition et ne donne pas naissance à l’'empyème. Il arrive
même quelquefois, dans cette variété de pneumo-thorax, que l’air
s’infiltre sous la plèvre pariétale, envahit les médiastins et
distend le tissu cellulaire du corps tout entier, sans que cepen-
dant cet accident inquiète sérieusement le chirurgien. Lorsqu'au
contraire l’air pénètre dans la plèvre par une plaie extérieure,
une plaie pénétrante de la poitrine, l'empyème est la règle avec
toutes ses conséquences redoutables. « La raison pour laquelle,
dit Lister, l'air introduit dans la cavité pleurale, quoique à
travers un poumon blessé, produit des effets tout différents de
l'air pénétrant directement par une blessure, fut pour moi un
mystère, jusqu'à ce que, grâce à la théorie des germes, je com-
pris qu'il est naturel que l'air füt filtré par les bronches, dont un
des offices est d'arrêter les particules de poussière inhalées et de
les empêcher d'entrer dans les vésicules pulmonaires. »

Tyndall s'appliqua à établir expérimentalement l'exactitude
de l'explication de Lister ; il eut recours, pour cela, au pro-
cédé imaginé par lui pour démontrer que les gaz privés de par-
licules solides sont incapables de disperser la lumière. Il s'as-
sura que l’air expiré (ou plus exactement les dernières portions
d’air provenant de l'expiration) est opfiquement pur, c'est-à-
dire que cet air, traversé par un faisceau lumineux, ne manifeste
pas de traînée lumineuse dans une chambre noire. « Projetant,
dit-il, dans une chambre sombre et dans de l'air chargé de ses

12

182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

poussières, un puissant rayon lumineux, et respirant à l’aide
d'un tube de verre (le tube employé fut un verre de lampe,
chauffé pour prévenir la condensation de l’haleine) à travers le
foyer, j'observai d'abord une diminution de la lumière disper-
sée; mais, vers la fin de l'expiration, la trace blanche du rayon
fut brisée par une brèche parfaitement noire, dont la teinte
tranchée était due à l’absence totale, dans l’air expiré, de ma-
tières quelconques capables de disperser la lumière. Les portions
plus profondes des poumons se montrèrent ainsi être remplies
d’air optiquement pur’. »

Récemment, M. W. Dubreuil et moi, nous avons cherché à
appliquer à cette recherche des microbes dans l'air expiré les
méthodes bactériologiques, bien autrement délicates que le
moyen d'investigation physique auquel avait eu recours Tyndall.
Pour cela nous nous sommes servis de flacons à deux tubulures,
remplis de bouillon alcalinisé et stérilisé. L'un des tubes, par
lequel arrivait l’air expiré, était effilé à son extrémité inférieure
qui plongeait au fond du liquide; l'air expiré barbottait ainsi, en
bulles très fines, à travers une couche épaisse de bouillon. Les
séances d'expiration élaient d'environ une demi-heure pour
chaque flacon; les flacons étaient ensuite mis pendant plusieurs
jours à l’étuve à 35°. Le plus grand nombre de ces flacons demeu-
rèrent stériles ; quelques-uns seulement se troublèrent par des
micro-organismes ou laissèrent se développer des moisissures.
Une partie, sans doute, de ces cas exceptionnels étaient attri-
buables à des fautes de manipulation (projection d'un peu de
salive, expiralion trop brusque, ete.) ?.

Depuis la publication de cette note, nous avons eu connais-
sance d'un travail de M. Gunning (d'Amsterdam)*, datant de 1882
et publié dans un journal d'oculistique. Dans ce travail,
M. Gunning relate des expériences instituées à peu près de la
même façon que les nôtres, et qui lui ont donné les mêmes résul-
tats : il arrive à cette conclusion que « l'air expiré ne contient
pas de micro-organismes capables de provoquer la putréfaction
des liquides stériles à travers lesquels on le fait passer ».

1. Tyxpai. Les Microbes, trad. française par Dollo, Paris, 1882, p. 52.

2, Srraus et W. Dusreutr. Sur l'absence de microbes dans l'air expire (C. KR
de l'Acad. des sciences, 1887, séance du 5 décembre).

3. Guxxixc. Werden mit der Expirationsluft Bacterien aus dem Kôrper ent-
hufrt? (Klin. Monatsblatter F. Augenheilkunde, 1822, p. 1.)

ABSENCE DE MICROBES DANS L'AIR EXPIRÉ. 183

Ces expériences, on le voit, tendent à établir que l’air prove-
nant de l'expiration est à peu près complètement privé de
germes ; toutefois, elles comportent un certain nombre d’objec-
tions qui en diminuent la valeur : le barbottage, tel que
M. Gunning et nous l'avons employé, n'arrête pas avec
cerlitude toutes les particules solides que l'air peut charrier;
nous avons négligé l'emploi d’une bourre de coton placée sur le
trajet de sortie de l'air, destiné à recueillir ces particules,
bourre qu'on devait ensuite plonger dans le bouillon de culture.
Enfin, le milieu de culture liquide auquel nous avions recours
ne permettait pas la numération exacte des germes que l'air
expiré pouvait contenir.

Toutes ces lacunes ont pu être remplies, grâce à l’empioi du
procédé de numération des germes de l'air exposé dans le
mémoire précédent. Je renvoie le lecteur à ce mémoire pour
la description du procédé emplové, et je donne immédiatement
les résultats que j'ai obtenus en pratiquant par ce procédé
l'analyse bactériologique de l'air expiré.

Les expériences ont été faites dans des salles de l’hôpital
Tenon dont l'air était chargé de germes. Chaque expérience
comprenait deux recherches. On déterminait la richesse en
germes d'un volume déterminé d'air, qui barbottait à travers
l'appareil à l'aide d'un aspirateur. Au même moment, l'expéri-
mentateur placé tout à côté du premier appareil faisait passer
à travers un deuxième appareil, identique au premier, le même
volume d'air sortant de ses poumons et mesuré, après sa sortie
de l'appareil, à l’aide d’un compteur à gaz. Le barbottage fini,
on avait soin d’aspirer, à différentes reprises, la gélatine à l’in-
térieur du tube B, de façon à balayer les germes qui auraient pu
se fixer à sa paroi. Toutes les précautions étaient prises pour que
la bouche de l'expérimentateur n’envoyât pas de salive par
l'orifice d'entrée de l'air. Cette entrée s’effectuait par le tube
B de l'appareil, légèrement recourbé à cet effet. La tubulure
de sortie de l'air était munie d’un tampon d’ouate destiné à
retenir les germes qui auraient pu échapper au barbottage. Ce
tampon était repoussé et agité dans la gélatine, à la fin de
l'expérience. L’expiration se faisait naturellement et sans effort,
et la fotalité de l'air expiré barbottait à travers la gélatine,
L'expérience terminée, la gélatine des appareils était répandue

184 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sur des plaques et les colonies comptées au bout de trois ou
quatre jours. Voici les résultats ainsi obtenus.

Expérrexce 1. Hôpital Tenon, salle Béhier, le 8 décembre 1887. T. 140.

a. On fait passer en 28 minutes 50 litres d’air, à l’aide d’un aspirateur.
Au bout de 4 jours, les plaques donnent 1,035 colonies, dont 34 moisissures.

b. En même temps, on expire à travers un second appareil placé à côté
du premier, 30 litres d'air. Les plaques ont donné au bout de 4 jours
2 colonies (pas de moisissures).

Expérience 11. Salle CI. Bernard, le 9 décembre. T. 150.

a. On fait passer en 23 minutes 50 litres d'air; au bout de 3 jours, les
plaques donnent 765 colonies dont 28 moisissures.

b. On expire, au même moment, 50 litres d'air, qui barbottent à travers
un appareil placé à côté du premier. Les plaques, au bout de trois jours,
donnent 2 colonies (pas de moisissures).

ExPÉRIENCE ut. Salle Béhier, 11 décembre. T, 130.

a. On fait passer à l’aide d’un aspirateur, en 30 minutes, 50 litres d'air.
Les plaques, au bout de 4 jours, donnent 975 colonies, dont{23 moisissures.

b. En même temps, on fait passer à travers un deuxième appareil,
50 litres d'air expiré. Les plaques révèlent au bout de 4 jours 1 colonie.

ExPÉRIENCE 1V. Parloir des malades, 15 décembre 1887. T. 46°.

a. En 17 minutes, on fait barbotter à travers l'appareil 50 litres d'air.
Les plaques donnent au bout de 3 jours, 880 colonies, dont 18 moisissures.

b. 50 litres expirés au même moment, à travers un autre appareil,
donnent au bout de 3 jours, 1 colonie,

ExPÉRIENCE v. Salle CI. Bernard, 16 décembre. T. 140. On a fait balayer
la salle pendant toute la durée de l'expérience, et battre les rideaux et les
édredons des lits, de facon à soulever beaucoup de poussière,

a. 50 litres d'air ont passé en 27 minutes; au bout de 4 jours, les plaques
donnent 11,690 colonies, dont 325 moisissures.

b. Au même moment, 50 litres d'air sont expirés à travers un appareil
voisin du premier. Les plaques donnent 26 colonies au bout de 4 jours.

ExPÉRIENCE vi. 48 décembre, salle C1. Bernard, T. 45°, On soulève la
poussière comme dans l'expérience précédente, après avoir fait gratter les
fentes du parquet.

a. 50litres d'air de la salle, ainsi chargé d'un véritable nuage de poussière,
ont passé à travers l'appareil en 22 minutes. Au bout de 3 jours, les plaques
donnent 23,305 colonies, dont 833 moisissures.

b. 50 litres d'air inspirés dans ce milieu si chargé de poussière, sont
expirés dans un deuxième appareil; les plaques montrent 59 colonies au
bout de 3 jours.

EXPÉRIENCE vi. Salle Béhier, 149 décembre. T, 16°.

a. 50 litres d'air barbottent à travers un appareil en 23 minutes; les
plaques donnent, au bout de 4 jours, 1,470 colonies, dont 67 moisissures.

b. 50 litres d'air expirés au même moment dans un autre appareil
donnent sur les plaques, au bout de 4 jours, 2 colonies.

ABSENCE DE MICROBES DANS L’AIR EXPIRÉ. 185

EXPÉRIENCE Vin. Dans un couloir de l'hôpital, le 20 décembre. T. 140.
a. 50 litres d'air barbottent pendant 20 minutes à travers notre appareil:
Les plaques, après 4 jours, donnent 1,330 colonies, dont 42 moisissures.
b. 50 litres d'air expiré, au même temps, à travers un deuxième appareil,
donnent sur les plaques, après 4 jours, 2 colonies.
Voici an tableau qui résume les résultats de ces numérations
comparalives ramenés au mètre cube Œar.

GERMES CONTENUS DANS UN MÈTRE CUBE D’AIR

AIR AMBIANT AIR EXPIRÉ RAPPORT

20.700 40 SA UE
15.300 40 302 :
19.500 20 975 :
17.600 20 880 :
233.800 220 449 :
466.100 (!) 1.180 390 :
24.400 40 610 :
26.600 40 665 :

= me me pie Me mie pie pe

On voit donc qu'en moyenne, sur 609 germes de bactéries
ou spores de moisissures qui pénètrent dans les poumons avec
l'air inspiré, 1 seul germe en ressort avec l'air expiré. Je ferai
remarquer que mes expériences ont porté sur la totalité de l'air
qui sort des poumons à chaque expiration et non pas, comme
dans l'expérience de Tyndall, sur les dernières portions de chaque
expiration seulement. D'autre part, malgré toutes les précau-
tions prises, il est certain que toutes les causes de contamina-
uon de l'air expiré, pendant la durée du barbottage et lors de
l'établissement des plaques, n’ont pu être écartées, ce qui a dù
nécessairement forcer un peu le chiffre des colonies obtenues
sur les plaques.

Ces expériences démontrent donc nettement que l'air expiré
est presque complètement privé de germes. Le poumon joue
donc réellement, pour ces germes, le rôle de filtre que Lister lui
attribue. L'air en cheminant, pendant l'inspiration et pendant
l'expiration, dans des canaux d’une étroitesse croissante et
tapissés par un épithélium humide, se dépouille de la presque
totalité des particules solides qu'il avait entraînées avec lui. Les
voies respiratoires supérieures, les parois humides de l’isthme

186 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

du gosier, de la bouche, et les anfractuosités sinueuses des fosses
nasales y contribuent aussi pour leur part. Il en résulte que l’air
quitte les poumons optiquement pur, comme l’a montré Tyndall,
et aussi bactériologiquement pur.

Il ne faut donc plus s'étonner que les recherches ayant pour
but de retrouver dans l'air expiré par les malades des microbes
pathogènes aient toujours donné des résultats négatifs. M. Gran-
cher notamment a fait un grand nombre d'expériences sur l’air
expiré par les phtisiques; jamais il n’a pu y déceler la présence
du bacille de Koch ou de ses spores. MM. Charrin et Karth,
MM. Cadéac et Mallet ont fait des recherches analogues, sans
plus de résultats.

De l’ensemble de ces faits, il faut tirer la conclusion que les
hommes ou les animaux, réunis dans un espace confiné, loin de
souiller l'air par leur respiration, tendent au contraire à le
purifier, en ce qui concerne les microbes. I doit nécessairement en
être ainsi, puisque l'air, à sa sortie des poumons, renferme infi-
niment moins de germes qu’à son entrée (plus de six cents fois
moins, d'après mes numérations). Cette donnée n'infirme en rien
le fait constaté depuis longtemps par tous les bactériologues,
à savoir que les germes des microbes sont très abondants dans
l'air des locaux encombrés (salles d'hôpital, casernes, etc.). L'acte
de la respiration n’est pour rien dans ce phénomène; ce n’est
pas par l'air qu'ils expirent, par leur haleine, que les hommes
agelomérés chargent l'air ambiant de microbes ; c'est par leurs
vêtements, par les poussières que leurs mouvements soulèvent,
par leur expectoration désséchée sur le plancher et disséminée
plus tard sous forme pulvérulente, que s'effectue la souillure de
l'air par les microbes. La respiration des hommes ou des animaux
apporte, dans un espace clos, son contingent de gaz nuisibles ;
mais elle tend à purifier l'air des microbes qu'il contient.

CONTRIBUTION À L'ÉTUDE NÉMÉTOLOGIQUE ET PATHOGÉNIQUE DE LA RAGE

Par le Dr G. FERRÉ

Professeur agrégé à la Faculté de médecine de Bordeaux.

On sait que la rage peut se présenter sous deux formes bien
distinctes : la rage des rues ou forme violente, et la rage paraly-
tique.

La première, affectant surtout l'homme, le chien, le pore, le
cobaye, parcourt généralement trois périodes : 1° une période
de tristesse ; 2° une période d’excitation, la plus longue, débu-
tant par des accidents bulbaires ; 3° une période de paralysie,
beaucoup plus courte que la précédente, quelquefois même com-
plètement nulle,

Dans la rage paralytique, affectant, dans certains cas, l'homme
et le chien, mais dont le type est la rage du lapin et des oiseaux,
la période dominante est la période paralytique. Pour un œil
exercé, la période de tristesse y est visible ; il n’en est pas de
même de la période d’excitation, qui peut passer inaperçue.
Dans la rage paralytique de l'homme, cette dernière période a
pu, il est vrai, être aisément constatée (voir thèse Ygouf, Paris
1887). Chez le lapin lui-même, elle est quelquefois très appa-
rente; sur deux cents animaux inoculés par moi, j'ai vu deux
lapins agités, essayant de mordre; mais la plupart du temps
l'envahissement paralytique semble suivre immédiatement la
période de tristesse.

L'évolution de la rage paralytique se produit avec une régu-
larité parfaite chez les lapins inoculés, après trépanation crà-
nienne, par des passages successifs. C'est précisément chez ces
animaux que l'examen de la respiration nous a révélé, parmi
quelques faits intéressants, l'existence d’une accélération, compa-
rable, au point de vue de la séméiologie générale, à la période
d'excitation de la rage des rues. La comparaison est d’autant

183 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

plus plausible, que cette accélération précède immédiatement,
nous le verrons, la phase paralytique, et qu’elle coïncide avec le
début de la virulence dans les parties du bulbe tenant la respi-
ration sous leur dépendance. Disons, toutefois, avant d'aller
plus loin, que les analogies signalées ne le sont qu'entre la rage
des rues et la rage paralytique donnée au lapin par trépanation.
Des expériences en cours d'exécution nous apprendront si elles
doivent être maintenues pour la rage paralytique du lapin ino-
culé sous la peau.

Les recherches dont nous donnons actuellement le résultat,
ont été faites dans le laboratoire de MM. Jolyet, Oré et Viault,
auxquels nous adressons tous nos remerciments pour leur gra-
cieux accueil. Elles ont porté sur 24 séries de lapins allant du 16°
au 39 passage d’un virus primitif de rage des rues.

Elles ont été, en partie, déjà communiquées à la Société
d'anatomie de Bordeaux, et notre première communication à
cette Société date du 26 juillet 1887.

1. — RESPIRATION DU LAPIN RABIQUE INOCULÉ PAR TRÉPANATION,

Nous l'avons déjà dit ; c'est l'examen de la respiration qui

nous a permis de retrouver dans la rage paralytique typique et
régulière l'équivalent de la période d’excitation de la rage des
rues.
Si l’on prend, en effet, régulièrement et jour par jour, les
tracés respiratoires des lapins inoculés par trépanation, on peut
constater chez ces animaux, à la suite d’une période d’incubation
qui ne présente, comme nous le verrons plus loin, rien de bien
caractéristique, l'apparition de deux phases très nettes dont la
première élait restée inaperçue, et la seconde était plutôt soupçon-
née que connue : 1° une phase d'accélération respiratoire, cor-
respondant à la période d’excitation de la rage furieuse, et la
représentant seule la plupart du temps ; 2° une phase de ralen-
tissement respiratoire continu, aboutissant à la mort.

Ralentissement respiratoire final. — Nous l'avons constaté dès
le début de nos recherches. Nous l'avons souvent retrouvé
depuis, et nous pouvons affirmer sa constance presque absolue.
En effet, sar 28 animaux examinés à ce point de vue, iln’a man-

ÉTUDE SÉMÉIOL OGIQUE ET PATHOGÉNIQUE D E LA RAGE. 189

qué qu'une seule fois. Il coïncide toujours avec la paralysie des
membres. 11 laisse à la respiration sa régularité. (V. fig. 1.)

Fig. 4. — Tracés respiratoires du lapin a'$.

Dans tout ce mémoire, chaque lapin est désigné par une lettre italique
marquant son rang d'inoculation dans la série ou le passage dont le numéro
figure en exposant.

I. — Tracé respiratoire avant l’inorulation.

II. — Même tracé pris au commencement du Te jour. Début du ralentisse-
ment final.

Ce _— ntissement, continu et progressif, comme on peut le voir par
les tracés, LIT, IV, V et VI, a débuté avant l'apparition des phénomènes
paralytique s qui se sont montrés au commencement du 8° jour.

Continu et progressif dans la plupart de nos séries et notam-
ment dans les premières (voir fig. 1, 2,3, 5 et 6), il est seulement
continu dans d’autres. La respiration est donc — ralentie
dans cette période paralytique de la rage : on dirait que le virus
agit sur l’appareil respiraloire, comme sur l'appareil locomoteur,
d'une façon continue, progressive et régulière, et on est ainsi
conduit à attribuer ces troubles à une suspension progressive et
continue de l’action du pneumogastrique. Nous verrons. plus loin,
que cette idée est loin d’être inacceptable, car à cette période,
les centres bulbaires de la respiration, tout au moins, sont viru-
lents.

190 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Ce ralentissement final une fois constaté, il était important
de rechercher à quel momentil débutait. Nous avons vu qu'il pré-
cédait l'apparition de tout accident paralytique du côté des mem-

Fig. 2. — Tracés respiratoires du lapin « ?f.

I. — Tracé normal.

IT. — Tracé respiratoire pris trois jours après l’inoculation. Un premier
ralentissement commence à se produire.

III. — Quatre jours après l'inoculation. Maximum du premier ralentis-
sement.

1V. — Cinq jours après l’inoculation. Diminution du premier ralentisse-
ment.

VF. — Six jours après l'inoculation. Accélération intermédiaire.

VI. — Sept jours après l’inoculation. Début du ralentissement définitif.

VII. VIIT et IX. — Ces tracés ont été pris les huitième, neuvième et

onzième jours après l'inoculation. Les accidents paralytiques ont débuté à
la fin du huitième jour,

ÉTUDE SÉMÉIOLOGIQUE ET PATHOGÉNIQUE DE LA RAGE. 194

bres, et qu'en moyenne il débutait un jour avant l'apparition
des accidents paralytiques. Les exceptions à cette règle sont très
rares. Sur 15 animaux, un seul n’y a pas obéi. Ces faits peuvent
ètre constatés sur les figures 1, 2, 3, 5 et 6. Nous pourrions
déjà conclure que, dans la rage paralytique régulière, les trou-
bles somatiques semblent être précédés, comme dans la rage
des rues, par des troubles d’origine centrale, mais nous allons
voir cette conclusion s'affirmer davantage en étudiant la période
qui précède ce ralentissement final.

Troubles respiratoires précédant le ralentissement final. — En
recherchant le début du ralentissement final, nous avons été
amenés à prendre le tracé de nos animaux pendant toute l’évo-
lution rabique. Ces tracés ne manifestent rien de constant dans
les jours qui suivent la trépanation. Ils témoignent d'ordinaire
(17 fois sur 30 dans nos expériences) d’un ralentissement de la

20

F. 3. — Tracés respiratoires du lapin b°?.
1. — Tracé normal.

2, 3, 4 et 5. — Tracés pris au commencement des 2, 3, 4 et 5e Jour,

c’est-à-dire période d’incubation. La respiration est à peu près normale.
6. — Accélération. Commencement du 6e jour.

1. — Début du ralentissement final.

respiration (fig. 2 et 6). Dans d’autres cas il y a accélération
(fig. 5). Dans d’autres cas, maintien du rythme (fig. 6).

192 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Nous avions cru d’abord pouvoir attribuer le ralentissement
que nous observions au début à un envahissementmomentané des
centres respiratoires, par analogie avec ce qui se produit pendant
la période paralytique. Mais des lapins, inoculés par trépanation
avec du bulbe sain, peuvent présenter ce ralentissement dès les
premiers jours de l’incubation (fig. 4). Nous l'avons observé d’au-

Fig. 4. — Tracés d'un lapin inoculé par trépanation avec un bulbe sain.
{. — Tracé normal.
2 à 10. — Tracés pris au commencement du 2 au 10 jour.

tre part chez un animal inocuié à blanc, mais atteint d’une syno-
vite aiguë causée par une constriction trop forte des liens qui le
maintenaient. Nous sommes donc tentés d'attribuer la produc-
tion de ce ralentissement primordial aux suites de l’opération.
Du reste, au moment où il a lieu, le bulbe n’est pas virulent, pas
plus que le pneumogastrique, comme nous le verrons plus loin.
Nous laissons donc de côté pour le moment cette période d'in-
cubation. Le point important est qu’elle se termine presque tou-

ÉTUDE SÉMÉIOLOGIQUE ET PATHOGÉNIQUE DE LA RAGE. 193
jours par une période d'accélération respiratoire précédant immé-
diatement le ralentissement final.

La durée de cette période d'accélération varie : elle est géné-
ralement assez courte et peut passer inaperçue. Sur 29 animaux,
nous l'avons retrouvée 23 fois. Dans la majorité des cas, elle se
produit dans le courant du cinquième jour de l’incubation (47 fois
sur 23). On peut l’observer dans le courant du 4e jour (5 sur 23).
Nous l’avons observée une seule fois dans le courant du 6e, mais
tout à fait au début de nos inoculations. Dans cette phase, l’accé-
lération est telle que la respiration tend à revenir vers la normale
lorsqu'elle avait été précédée d’un ralentissement primordial bien
marqué (voir fig. 2); mais lorsque la respiration est restée à peu
près normale jusqu'à cette phase accélérée, les mouvements du

thorax deviennent plus nombreux qu'à l’état normal. (Voir
fig. 5, 6, 8.)

Fig. 5. — Tracés respiratoires du lapin q#.

1. — Tracé normal.

2. — Accélération. Commencement du # jour.

3. — Commencement du 5° jour.

4. — Commencement du 6e jour. Phase d'accélération.

5, 6, 7. — Période de ralentissement final. L'animal a suceombé au com-

mencement du 8° jour.

L'existence de cette phase d'accélération est, croyons-nous,
très importante au point de vue de la pathogénie eomparée de

la rage. C'est elle qui caractérise la période d’excitation de la
è ] F

194 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

rage paralytique régulière. Elle n’est pas d'observation facile,
puisqu'on est obligé d'employer les appareils enregistreurs pour
la déceler : c’est ce qui explique qu’elle ait pu passer inaperçue ;
on a vu plus haut qu'elle nous a échappé dans quelques cas. Elle
manque tout naturellement (fig. 4) dans les lapins inoculés à

blanc.
Fig. 6. — Traces respiraloires du lapin b °°.
A Tracéemormal.
9 3, 4. — Pcriode d'incubation,
5. — Phase d'accélération. Début du 5e Jour.
6, 7. — Début du ralentissement final. Commencement des 6° et Te jours.

La raideur a apparu le T° jour,

Nous pouvons donc dire que chez le lapin inoculé par trépa-
nation, l'évolution des symptômes rabiques comprend deux
phases respiratoires distinctes.

1° Vers le 5° jour de l’inoculation, après une période de
troubles variables attribuables aux suites de l'opération, appa-
raît une accélération, constituant une phase équivalente à la
période d’excitation de la rage des rues.

2° Après cette accélération, la respiration se ralentit tout en
restant régulière, d'une façon continue el progressive jusqu’à la
mort dans la plupart des cas, d'une façon continue dans d’autres.
Ce ralentissement final débute au moins un jour avant l’appari-
tion des phénomènes paralytiques.

ÉTUDE SÉMÉIOLOGIQUE ET PATHOGÉNIQUE DE LA RAGE. 195

Ces faits étant bien constatés, nous avons recherché s'ils
pouvaient êlre attribués à des troubles causés par le virus dans
les régions qui tiennent la respiration sous leur dépendance. Et,
d'abord, y avait-il des troubles cardiaques concomitants, pouvant
mettre en cause le système du pneumogastrique?

Pour le savoir, nous n'avons pu que rechercher les variations
du nombre des battements du cœur : il était, en effet, impossible
d'étudier les variations de la pression sanguine chez des ani-
maux devant servir à une prise continue de tracés. Nous avons
compté ces battements directement avec le doigt, dans la région
précordiale. Nous avons pu vérifier que le nombre des battements
du cœur était l'inverse de celui des mouvements respiratoires.

_ JOURS depuis L'INOCULATION.

GODONONE
SEE HE
40 Lt |
MP NET TA

SÉRIE

SHÉreRRant

)

Fig. 7. — Nombre des battements du cœur du lapin 4°, en un quart de

minute.

C'est ce que montre la figure 7 qui, comparée au tracé respira-
toire (fig. 2) appartenant au même animal, montre qu'à chaque
ralentissement respiratoire marqué par les lettres R, et R:, cor-
respond une accélération marquée du cœur.

La coexistence de ces troubles respiratoires et cardiaques,
nous a tout naturellement amené à essayer ce que donnait
linoculation du tronc du pneumogastrique et de la partie infé-
rieure du plancher du quatrième ventricule. C’est le résultat de
ce second ordre de recherches qu'il nous reste maintenant à
exposer.

196 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Il

INOCULATION DU TRONC DU PNEUMOGASTRIQUE

ET DES CENTRES BULBAIRES RESPIRATOIRES.

Sur des lapins inoculés par trépanalion, et sacrifiés par
transfixion du cœur à diverses époques de l’incubation, nous
prenions le tronc du nerf pneumogastrique dans une longueur
de 7 ou 8 centimètres dès son origine crânienne. Après l'avoir
disséqué et broyé, nous l'avons inoculé à des lapins sains.

Une première inoculation, faite avec le pieumogastrique d'un
lapin 4? sacrifié au commencement du 4° jour de l’évolution
rabique, le 8 octobre 1887, est restée sans résultat. L'animal ino-
culé par trépanation avec ce nerf est encore vivant. Il en est de
même pour un autre lapin inoculé le 25 octobre 1887, avec le pneu-
mogastrique d'un lapin &*° sacrifié au commencement du T° jour
de l’évolution rabique. À ce moment, fait très important, la
respiration était entrée dans sa période de ralentissement final
et l'animal ne présentait encore aucune trace de raideur.

La même expérience a été faite une troisième fois avec le
preumogastrique de l'animal 4°, sacrifié dans les derniers
moments de la période paralytique, au 9 jour de l'évolution
rabique. L’auimal inoculé n’est mort de la rage qu’au bout de
18 jours, après une période d'incubation de 15 jours.

Si peu nombreux que soient ces essais, 1ls montrent pourtant
que le tronc du pneumogastriquene semble pas être virulent au
momentoùse produisent l'accélération symptomatique et le début
du ralentissement final. En revanche, il semble l'être dans les
dernières périodes de la phase paralytique. Il eût été souhai-
table de pouvoir inoculer les origines réelles de ce nerf et de
préciser ainsi le moment où il est virulent. Comme cela est
impossible, nous avons dù nous contenter d’inoculer la partie
inférieure du 4° ventricule qui contient, on le sait, les centres de
la respiration chez le lapiu ; on la coupait avec un scalpel flambé,
on la lavait dans certains cas, avec de l’eau stérilisée, de manière
à éliminer le liquide céphalo-rachidien. Cette précaution n’a rien
changé aux résultats. Enfin, après avoir broyé, on inoculait
par trépanation à des lapins sains.

ÉTUDE SÉMÉIOLOGIQUE ET PATHOGÉNIQUE DE LA RAGE. 197

Nous avons cherché d’abord une limite inférieure, et nous
avons choisi le commencement du 4e jour de l’évolution, en sacri-
liant à ce moment précis, Loujours par trausfixion du cœur, un
lapin 42°. Nous avons inoculé avec ses centres nerveux, le 11 oc-
tobre 1887, un lapin qui est encore vivant. Par conséquent, au
commencement du 4° jour, les centres respiratoires pas plus que
le tronc du pneumogastrique ne sont virulents. Comme le lapin
sacrifié était à ce moment dans une période de ralentissement
marqué de la respiration, on voit en outre que ce ralentissement
est sans relation avec l’état du bulbe qui, à ce moment n’est
pas virulent. Au contraire, au début de la période de ralentisse-
ment final, les centres respiratoires sont virulents. Nous avons
fait l'expérience deux fois, sur les lapins 4? et 4°?7, sacrifiés au
commencement du 7° jour. Les animaux inoculés sont morts de
la rage. On a donc le droit d'attribuer le ralentissement final à
une action du virus sur le bulbe, action qui semble se traduire
par une suspension progressive et continue de l'influence du nerf
preumogastrique. Nous ferons remarquer, de même, que dans
la période paralytique de la rage du lapin inoculé par trépanation,
des troubles que l’on peut considérer comme d’origine bulbaire,
précèdent les troubles somatiques, puisque le début du ralentis-
sement respiratoire précède la paralysie des membres.

Ayant, par les deux séries d’inoculations précédentes, une
limite inférieure et une limite supérieure de l'apparition de la
virulence, nous avons cherché à resserrer ces limites, en inocu-
lant les centres respiratoires entre le commencement du 4 jour
et le commencement du 7°.

Les centres des lapins «°°, «°° et 4°", pris au commencement
du 6° jour de l’évolution rabique, inoculés à des animaux sains,
ont produit la rage. Nous ferons remarquer, à propos de cette
série d’'inoculations, que le lapin a°° (voir fig. 8) a élé sacrilié en
pleine période d'accélération.

Il en a été de même du lapin 4?* : ce fait peut nous faire pré-
voir, ce que nous vérifierons plus loin d’une façon plus complète,
qu'à ce moment-là, le bulbe est déjà virulent.

En resserrant davantage nos limites, nous avons inoculé les
centres respiratoires des lapins &°° et 4° pris au milieu du cin-
quième jour de l’évolution : ils ont produit la rage.

Puis, nous avors inoculé les centres respiratoires des lapins

15

198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.
bp, a, aït, e**, a, pris au commencement du 5° jour. Ces
inoculations ont donné les résultats suivants :

L'animal inoculé avec le bulbe de 4°° est mort des suites de
l’opéralion.

Celui qui a été inoculé avec le bulbe de «°°, le 18 décembre
1887, est encore vivant.

Les lapins inoculés avec les centres de a°°, «°°, e**, sont morts

de la rage.

Fig. 8. — Tracés respiratoires du lapin 4°°.

{. — Tracé normal.

2, 8, 4 et 5. — Tracés pris au commencement du 2, 8e, 4 et 5e jour.
Ralentissement au 4.

6. — Phase d'accélération. — Le bulbe de l'animal, sacrifié après la

prise du tracé, a produit la rage.

Les centres respiratoires se montrent donc d'ordinaire viru-
lents au début du cinquième jour, dans nos séries actuelles : il
ne nous restait pour rejoindre notre limite inférieure qu'à tenter
l’inoculation dans le courant du quatrième jour. Nous avons
inoculé les bulbes des animaux «°°, le 3 février dernier, et c°° le
10 du même mois. Ces bulbes ont été pris au milieu du qua-
trième jour de l’évolution. Les animaux inoculés sont encore
vivants, et en tout cas, s'ils doivent mourir de la rage, le virus
qu'ils possèdent est certainement trèsfaible, puisque les périodes
d'incubation dépassent déja deux mois.

Il résulte de ces diverses séries d’inoculation que, dans Pétat
actuel de nos séries, la virulence des centres bulbaires qui üen-

ÉTUDE SÉMÉIOLOGIQUE ET PATHOGÉNIQUE DE LA RAGE. 199

nent la respiration sous leur dépendance apparaît entre le milieu
du #° jour et le commencement du 5°. Il pourrait se faire que
dans des séries d'ordre plus élevé, la virulence débutât à une
période moins avancée de l’évolution.

Avant de clore momentanément nos recherches à ce sujet,
nous avons voulu faire une expérience de récapitulation: Nous
avons inoculé le 6 février dernier 4 lapins.4°", c°”, d°°, e°°, avec
le balbe de l'animal 4**.

Le bulbe de d’° sacrifié au milieu du 3° jour, n'a pas en-
core produit la rage; il en est de mème de celui du lapin 4°
sacrifié au commencement du 4° jour. Le bulbe de c*" sacrifié
au milieu du 4° jour n'a pas davantage produit la rage. Mais
le bulbe de e°° sacrifié au commencement du 5° jour l’a pro-
duite. Cette expérience montre bien que la virulence de la partie
inférieure du plancher du 4° ventricule apparaît comme nous
l'avons dit plus haut, entre le milieu du # jour et le commen-
cement du 5°.

En présence de ces résultats, si nous nous rappelons que l'ac-
célération intermédiaire se produit généralement dans le cou-
rant du ÿ° jour, on voit qu'elle coïneide avec l'apparition de la
virulence dans les centres respiratoires. Si nous considérons, de
plus, cette accélération comme l'équivalent de la période d’exci-
lation de la rage violente, on voit qu’elle peut être attribuée
comme cette dernière, à des troubles d’origine bulbaire.

En nous bornant pour le moment aux faits expérimentaux
que nous venons d'exposer, nous conelurons donc :

1° Que la rage des rues et la rage paralytique donnée au lapin
par trépanation présentent, d’une facon générale, les mêmes
phases ;

2° Que la période d’excitation dans cette forme de rage para-
lytique se traduit, le plus souvent, par une accélération de la
respiration ;

3° Que cette accélération parait devoir être attribuée à l’en-
vahissement par le virus des centres qui tiennent cette fonction
sous leur dépendance, puisque cet envahissement coïncide avec
cette accélération ;

1° Que les deux formes de rage comparées plus haut, présen-
tent des caractères de similitude au point de vue pathogénique,
puisque l’une et l’autre débutent par des accidents bulbaires.

DE L'ANTAGONINME DES BACTÉRIES ET DE L'IMMUMTÉ QUIL CONFÈRE
AUX MILIEUX DE CULTURE

Par E. DE FREUDENREICH.

L’analogie entre l’organisme vivant dans lequel se développe
le microbe d'une maladie virulente et le milieu de culture dans
lequel vit un micro-organisme est frappante à beaucoup d’égards.
Aussi n’a-t-on pas manqué, en particulier pour expliquer le
mécanisme de l’immunité que confère à l'organisme une première
atteinte de certaines malacies virulentes, de comparer les chan-
gements qui surviennent dans le corps et produisent l’état
réfractaire, aux modifications d'ordre chimique provoquées
par les microbes dans les milieux de culture. De même que l’on
voyait un microbe, semé dans du bouillon ou sur de la gélatine,
se développer pendant un certain temps, puis s’arrèter dans sa
croissance, soit en raison de l'épuisement du milieu nutritif, soit
par suite dela production, par le microbe lui-même, de substances
(ptomaines) qui entravent sa multiplication ultérieure, ainsi,
pensait-on, une première atteinte de la maladie confère l’im-
munité subséquente soit parce que le microbe, cause de cette
maladie, avait après un certain temps de culture dans lor-
ganisme, consommé les principes nécessaires à sa vie, soit
parce qu'il l'avait saturé de substances incompatibles avec son
développement ultérieur.

Cette dernière théorie de l’immunité, restée jusqu'ici à l’état
de simple hypothèse, vient de recevoir un appui expérimental
considérable par les expériences de MM. Roux et Chamberland,
pubhées iei même, sur l’immunité produite à l'égard de la sep-
ticémie et du charbon symptomatique par des substances solu-
bles formées dans les cultures des microbes de ces maladies,
expériences auxquelles il faut ajouter celles de MM. Chantemesse
et Widal sur l’immunité conférée de la même manière aux souris
contre le bacille typhique :.

1. Annales de l’Institut Pasleur, détembre 1887 et février 1888.

ANTAGONISME DES BACTÉRIES. 201

*

Ces résultats déjà si importants, joints à ceux obtenus par
Emmerich et Paulowsky ‘, qui paraissent avoir produit chez des
animaux un élat réfractaire au charbon par linoculation de
microbes différents de celui qui cause celte maladie (streptococcus
de l'érysipèle et pneumocoque de Friedlaender), donnent lieu
d'espérer que l’on arrivera à vacciner, non seulement comme dans
les expériences de MM. Roux et Chamberland, au moyen des
produits élaborés par le microbe qui a causé la maladie, mais
aussi par ceux élaborés. par d’autres microbes, parfaitement
inoffensifs peut-être. On est d'autant plus fondé à espérer un
tel résultat que M. Pasteur, dans ses expériences sur le choléra
des poules, était déjà parvenu à donner l'immunité charbon-
neuse à ces animaux en les vaccinant contre le choléra des
poules. Il est bon dè rappeler ici cette expérience qui constitue,
croyons-nous, le premier essai de bactériothérapie {Comptes
rendus de l’Académie des sciences, 1880, IT, p. 315).

La solution du problème de l’immunité ne pourra donc,
pensons-nous, qu'être puissamment aidée par l'étude complète
et méthodique de ce que l’on peut appeler l’antagonisme des
bactéries, c'est-à-dire le pouvoir que peuvent avoir certains
microbes de rendre les milieux de culture dans lesquels ils ont
vécu, impropres à la vie d’autres micro-organismes. C'est encore
M. Pasteur qui a le premier mis en évidence quelques faits de
cette nature. C’est ainsi qu'il avait constaté que la culture du
microbe du choléra des poules devenait promptement difficile et
impossible dans un bouillon où ce microbe avait déjà pullulé,
fait qui concorde, comme on le verra, parfaitement avec les
résultats que nous avons obtenus. C’est également après avoir
constalé un développement pénible du bacille charbonneux
dans un bouillon de culture du microbe du choléra des poules,
qu'il fit l'expérience dont il a été parlé plus haut. Ces faits
semblaient presque oubliés lorsque Garré, de Bâle, commu-
niqua dans une conférence faite il y a un an à la Société de mt-
decine suisse ?, avant la publication des expériences de MM. Roux
et Chamberland, quelques intéressants résultats sur l'immunité
conférée aux terrains de culture par l'inoculation antérieure

1. Evmericu. Heilung des Milzbrandes, Archiv für Hygiene, VI, 1887 et Pau-
Lowsky : Heilungdes Milzhrandes durch Bacterien, Vérchow’s Archiv. Bd. CVILT, 1887.
2. Correspondenzblatt für Schweizer Aerzte, 1887, n° 13. Voir ce n°, p. 244.

0

202 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

d’un autre microbe, et attira l'attention sur l'importance de ces
faits pour l'explication du phénomène de l’immunité. On ne
peut qu'espérer que ce savant nous communiquera plus tard
la suite des recherches qu'il a si bien inaugurées sur cette
matière.

Dans ses expériences, Garré inoculait des tubes de gélatine
nutritive avec différents microbes; au bout de quelque temps
il excisait la culture et semait d’autres microbes sur cette géla-
line après l'avoir, le cas échéant, stérilisée à nouveau. Ce
mode de procéder ne peut naturellement s'appliquer aux
espèces microbiennes qui liquéfient la gélatine. Pour celles-ci,
Garré les cultivait dans du bouillon, stérilisait les cultures par
filtration, et rajoutait de la gélatine pour obtenir un milieu
solide qui servait alors aux essais de culture.

J'ai trouvé préférable de me servir à peu près exclusivement
de cultures liquides. On ensemence les espèces microbiennes
dont on veut étudier l’antagonisme à l'égard d’autres bactéries
dans des ballons contenant 200 à 300 grammes de bouillon de
bœuf bien neutralisé, salé à 1/2 0/0. Ces cultures sont filtrées
plus tard, après leur entier développement, sur un filtre Cham-
berland et réparties dans de petits ballons de culture. Les bouil-
lons que l’on obtient ainsi sont alors parfaitement limpides et
permettent de constater le plus faible développement de bac-
téries. Seules quelques espèces chromogènes donnent au bouillon
une teinte assez prononcée ; ainsi par exemple, le bacillus pyo-
cyaneus qui lui donne une couleur verdâtre. Après que l’on s’est
assuré par un séjour suffisant à l’étuve que ces bouillons sont bien
débarrassés des microbes à la culture desquels ils ont servi, on y
sème alors au moyen d’un fil de platine, à l'état de pureté, les
différents microbes dont on veut étudier le développement dans
ces milieux de culture altérés. Le temps pendant lequel on
abandonne les cultures, avant de les filtrer, à l’action altérante
des microbes, n’est pas indifférent. Ainsi nous avons remarqué,
dans le cours de nos expériences, que les bouillons filirés au
bout de 8 jours entravaient, en général, beaucoup moins le
développement des microbes qui y étaient semés dans la suite,
que ceux filtrés au bout de #à 6 semaines seulement. C’est donc
cette dernière limite que nous avons adoptée comme règle dans
nos expériences. Il serait intéressant, toutefois, de noter si des

ANTAGONISME DES BACTÉRIES, 204

bouillons beaucoup plus vieux, d'un an, par exemple, jouissent
de propriétés plus nocives encore.

L'emploi du bouillon permet aussi d'exposer les cultures à
une température plus favorable et j'ai, du reste, pu me con-
vaincre que la diffusion des substances sécrélées se fait plus
facilement dans les liquides. Ainsi l’on verra que dans du
bouillon qui a servi de milieu de culture au microbe du choléra
des poules, le bacille typhique ne croit que très mal; il se déve-
loppe bien, par contre, sur de la gélatine ensemencée cinq
semaines auparavant avec le même microbe du choléra des
poules. J'ai quelquefois aussi fait les cultures dans des tubes de
gélose; après quelque temps on stérilise à l’autoclave à 110,
la culture tombe au fond pendant que la gélose est encore liquide,
et l’on obtient après refroidissement une belle surface sur
laquelle on implante les autres espèces. Bien que l’on s'expose
à détruire par cette chaleur les ptomaines formées, ce procédé
pourra servir quand il s'agira d'étudier des microbes, croissant
mieux sur ce milieu que dans le bouillon, et exigeant l'emploi
d'une température incompatible avec l'usage de la gélatine.

Le tableau qui suit ne demande pas de longue explication.
La première colonne donne la liste des espèces microbiennes
dont on a étudié le développement dans des bouillons ayant
préalablement servi à la cullure d’autres microbes. Elles sont au
nombre de 21 et pour la plupart bien connues. Je puis donc me
dispenser de les décrire. Disons seulement que le bacille de la
strumite est un petit bâtonnet, long de 1-1,54, etlarge de 0,4-0,54,
que le D' Tavel ! a trouvé dans 2 cas de strumite. Il est patho-
gène pour les souris et les lapins, et ses cultures donnent
lieu, inoculées par piqure dans la gélose, à un développement
de gaz. Le bacterium phosphoresens à été décrit ici-même
(p. 491 du premier volume des Annales). Le micrococcus roseus
est décrit par Flügge dans son ouvrage sur les micro-organismes.
Il forme des colonies roses sur la gélatine, qu'il ne liquéfie pas,
et se trouve dans l'air. Les colonnes suivantes donnent Îles
résultats des ensemencements de ces microbes dans les bouil-
lons de culture dont la provenance est indiquée au haut de
chaque colonne. Ce sont les bouillons de culture du s/aphylo-

1. N° 10 du Correspondenzblalt für Scloeizer Aerzte pour 1887.

ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

BOUILLONS DE CULTURE DU

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s poules.

escens.
de Friedlaender.

aureus.
albus..
citreus. .
fœtidus .

tragenus .

A

de la morve.
de

pyog.

prodigiosus. .

roseus .
du lait bleu .

ENSEMENCEMENTS
Le

pyocyaneus .
— typhique. .

du charbon .

de la strumite. .

megaterium.

du chol.

de Miller

de Deneke. .

PRATIQUES

Spirille du chol. asiat

Bact. phosphor
Spir. de Finkler

Slaphyl.
Pneumoc.

Microc.
Bac.
Mic.

ANTAGONISME DES BACTÉRIES. 205

coccus pyogenes aureus, du staphylococcus pyogenes albus, du
staphylococcus pyogenes fœwtidus, du bacillus pyocyaneus (bacille
du pus bleu), des bacilles du typhus et du charbon, du microbe
du choléra des poules, du pneumocoque de Friedlaender, du
bacterium phosphorescens et des spirilles du choléra asiatique, de
Finkler, de Miller et de Deneke, 13 espèces en tout. Pour rendre
ce tableau aussi bref que possible, nous avons indiqué le degré
de croissance par les signes suivants :

— signifie une croissance normale.

F signilie une croissance faible.

FF signifie une croissance très faible.

R signifie un retard dans le début de la culture.

0 signifie une croissance absolument nulle.

Un simple coup d'œil jelé sur ce tableau en dira plus long
au lecteur que tous les commentaires. I serait, du reste, hasardé
dans une matière si neuve, de tirer d'un nombre de faits aussi
limité encore des conclusions trop absolues. Nous nous borne-
rons donc à indiquer celles qui nous paraissent le mieux établies.

Il résulte de mes expériences qu’un certain nombre de mi-
crobes exercent à l'égard des autres un pouvoir bien réellement
nocif. C’est ainsi que le bacillus pyocyaneus, par exemple, et le
bacterium phosphorescens entravent dans une notable mesure, s'ils
ne l’empèchent pas complètement, la croissance des microbes
que l’on implante dans les milieux où ils ont vécu; d’autres, au
contraire, comme le bacille typhique, le bacille du charbon, le
microbe du choléra des poules, le spirille de Deneke, semblent
exercer une Influence très faible sur le pouvoir nutritif du bouil-
lon dans lequel ils ont cru. Cependant, tout en ne génaut nulle-
ment la plupart des autres microbes, leur antagonisme s'accuse
nettement à l'égard de certains d'entre eux. Ainsi le staphylo-
coccus pyogenes fætidus entrave la croissance du spirille du cho-
léra asialique, du #ricrococcus roseus et du tetragenus, sans qu'il
soit pour cela l'ennemi de la plupart des autres bactéries mises
en expérience.

D'autre part, nous voyons qu'un certain nombre de microbes
sont peu difliciles dans le choix de leur nourriture. Le bacille du
charbon surtout, le bacillus pyocyaneus, le micrococcus prodigiosus
et, en général, les espèces saprophytes, s'accommodent assez bien

206 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de tous les bouillons qu'on leur offre. Par contre le microbe du
choléra des poules, le bacille typhique, celui de la morve, le
tetragenus, sont plus délicats et résistent moins bien à une alté-
ration de leur milieu de culture. ;

Il faudra donc, avant de conclure à un antagonisme réel,
bien examiner si le manque de croissance ne provient pas sim-
plementde ce que l’on a affaire à un microbe très sensible à la com-
position de son milieu de culture. Aïnsi, si l’on voyait, par
exemple, le bacille de la tuberculose, si lent à croître même dans
les milieux les plus favorables, ne pas pousser dans un bouillon
alteré, l’on ne serait pas encore pour cela fondé à supposer un
véritable antagonisme. Au contraire, quand on verra un microbe
croissant en général bien dans tous les bouillons possibles, être
fortement entravé dans sa croissance par l'influence d’une autre
bactérie, on sera alors en droit de conclure à un antagonisme
formel.

Une chose est encore à noter. Le microbe du choléra des
poules, le bacille typhique et le spirille du choléra asiatique ne
se cultivent pas très facilement dans leurs propres bouillons
de culture; ceci présente quelque ressemblance avec ce que nous
savons de l’état plus ou moins réfractaire que crée dans l’orga-
nisme vivant unepremière atteinte des maladies dont ces microbes
sont la cause.

Par contre, fait déjà noté par M. Pasteur, le bacille du char-
bon se cultive avec la plus grande facilité dans le bouillon qui a
déjà servi à sa propre culture, ce qui tient peut-être à ce que ce
bacille ne forme pas dans le bouillon employé les mêmes pto-
maines que dans l'organisme vivant ou dans d’autres milieux
de culture.

Nous savons, en effet, par les expériences de Hoffa ‘, que
si l'on cultive le bacille charbonneux sur de la viande hachée et
réduite en bouillie, on peut en extraire une ptomaine très active
que l’on ne retrouve pas dans les cultures faites avec du bouil-
lon. Ce fait montre la nécessité, pour étudier la question de l’im-
munilé des milieux de culture, d'en varier la composition. En
général on ne saurait trop multiplier et répéter les expériences
avant de formuler des lois dans cette matière.

1, Horra, Die Natur des Milzbrandagiftes,

RECHERCHES MORPHOLOGIQUES ET PHYSIOLOGIQUES
SUR UN HYPHOMYCÈTE,

Par EE. WASSERZUG!.

J'ai eu l'occasion d'étudier récemment un champignon infé-
rieur venu spontanément sur des feuilles de violettes qui étaient
restées quelque temps à macérer dans un peu d'eau au fond
d’un bocal largement ouvert. Après avoir apparu par places en
différents points de l'une des feuilles, il s’étendit bientôt de
proche en proche sur toutes les autres, qu'il recouvrit uniformé-
ment d'un fin mycélium d’un blanc de neige, à filaments courts
el dressés. Au microscope, ces filaments se montrèrent cloison-
nés, larges de 2 à 4 & au plus, abondamment ramifiés; les rameaux
secondaires portaient à leur extrémité une conidie (fig. 4, 4, 6)

{
e.
092,01
80 ÿ0
A Sal _ 4
KP
Fig. 4. — Première forme conidienne. @, b, ec montrent les diverses

variations que présentent ces conidies. &, conidies développées dans un
milieu peu nitritif, liquide Raulin, ete., b et c, conidies développées sur la
pomme de terre et la gélatine sucrée acide, etc.

1. Nous ne voulons pas nous séparer de notre ami Wasserzug, emporté par une
scarlatine huit-jours après avoir écrit ce mémoire, sans lui adresser un cordial
souvenir au nom de ces Annales dont il a été un des premiers collaborateurs.
Nos lecteurs ont pu apprécier, par les mémoires qu'il a fait passer sous leurs yeux,
quelles idées fécondes il a remué dans sa courte carrière de savant, el quelles
espérances on était en droit de fonder sur lui. Si, comme cela nous semble certain,
l'avenir donne une consécration définitive à cette notion que la forme n’est pas plus
stable chez un microbe que la fonction, il ne pourra, sans injustice, oublier de
compter Wasserzug au nombre des premiers savants qui auront donné à cette
idée une base expérimentale sérieuse.

ND AIR

208 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

incolore comme le filament mycélien, longue de 10 à 15 x sur
2 à 3 uv de large, légèrement fusiforme, et portant deux à trois
cloisons transversales. Un grand nombre de ces conidies se
trouvaient à la surface du mycélium, et c’est à ces conidies déta-
chées que se rapporte surtout la description que nous venons
de donner.

L'existence d’un mycélium incolore, la forme et la grandeur
des conidies septées permettent de rapprocher cette espèce soit
des Fusarium soit des Fusoma, d'aprèsla description que Saccardo
donnede ces2 genres dans son Sylloge Fungorum (vol. IV). Comme
chez les Fusoma, le mycélium est bas et court et uniformément
étendu sur le substratum. ies rameaux conidifères ne sont qu’ex-

Fig. 2, — Germination des conidies précédentes.

ceplionnellement verticillés ; ils semblent toutefois, comme chez
les Fusartum, se grouper en grand nombre par places, et former
comme des buissons fertiles dont chaque branche porterait une
grande quantité de conidies. Mais cela n'arrive, nous le verrons,
que dans certaines conditions de milieu, et n’ajamais été observé
sur la forme spontanée venue sur les feuilles de violette’. Pour
cette raison, nous rapprocherons cette espèce des Fusoma, soil
du F, glandarium Corda soit du F. tomentiforme, tout en faisant
remarquer que la distinction établie entre les Fusarium et les
Fusoma est peut-être tout à fait artificielle.

Pour faire de cet organisme une étude plus approfondie, j'ai

1 L'espèce que nous étudions en ce moment a été provisoirement désignée par
nous sous le nom de Fusarium dans une étude que nous avons faite précédemment
sur la formation de l’invertine chez quelques espèces de champignons (voir Îles
Annales de l’Institut Pasteur, &. Ier, n° 41).

REÉCHERCHES MORPHOLOGIQUES ET PHYSIOLOGIQUES. 209

essayé de le cultiver, à l’état de pureté absolue. dans des milieux
arlificiels ; j'y suis arrivé très facilement. Qu'il me soit permis,
à ce propos, d'indiquer brièvement quelques-uns des procédés
que l’on peut employer pour cultiver certains champignons infé-
rieurs et pour suivre commodément leur évolution.

Il existe, d’une façon générale, deux espèces de milieux de
culture : les milieux liquides et les milieux solides. Les meilleurs
milieux liquides sont l’eau de levure, l’eau de carottes, l’eau de
pruneaux, elc., qui sont en général légèrement acides, au lieu
d’être alcalines comme pour les cultures des bactéries. IT faut
toujours les obtenir à l’état de limpidité aussi grande que pos-
sible pour faciliter l'observation. Maïs un très grand nombre de
champignons ne se développent pas dans les milieux liquides, et
les milieux solides leur conviennent mieux d'ordinaire : outre
la gélatine, et la gélose nutritives dont on use en bactériologie,
on peut se servir de tranches de pommes de terre, de carottes,
de raves, etc., qui forment le plus souvent un milieu de culture
excellent. On les cuit et on les stérilise au préalable : pour cela, au
lieu de la méthode due à M. Koch, dont la complication ne met
pas toujours les cultures à l’abri des impuretés, on pourra se
servir du procédé suivant. Sans cuire d'avance la pomme
de terre entière et préalablement lavée au sublimé corrosif, on
la coupera crue en tranches convenables?, que l’on introduira
dans un cristallisoir, ou dans un tube à essai, ou dans le vase qui
doit servir plus tard aux cultures. On passe ensuite le tout à
l'autoclave à 115° pendant 15 minutes, el l'on oblient ainsi d'em-
blée et à coup sûr à la fois la cuisson et la stérilisation de la
pomme de terre.

Contrairement à ce qui se passe pour la plupart des champi-
gnons, le Fusoma se développe également bien dans les milieux
les plus divers, liquides ou solides, sur lesquels on l’ensemence.
Rien n’a donc été plus facile, en partant de la semence originelle
venue spontanément sur les feuilles de violettes, que d'en obtenir
des cultures parfaitement pures et provenant mème d'une seule

1. La gélatine, qui est pourtant très commode, est souvent liquéfiée par les
champignons et l'avantage du milieu solide est rapidement perdu.

2. Si cela est nécessaire, on pourra d'avance arroser la pomme de terre avec une
solution acide, dans le cas où l'organisme à étudier ne se cultiverait que dans les
milieux acides.

210 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

conidie primitive. Ce sont ces cultures pures faites en grand qui
m'ont servi dans mon étude. Elles sont préférables, même pour
l'étude morphologique, aux cultures sur porte-objets qui sont
constamment employées en mycologie, pour suivre le développe-
ment d’un champignon. Toutefois j'ai fait très souvent usage
de ces cultures en cellules pour contrôler les résultats obtenus
par d’autres procédés; dans ce cas, j’ai trouvé très commode de
remplacer le liquide nutritif que l’on met ordinairement sur la
pelite lamelle où se fait la culture, par un milieu gélatinisé,
qui se solidifie rapidement, ce qui maintient les filaments à la
place où ils se sont formés et facilite ainsi l'observation de l’or-
ganisme aux phases diverses de son développement‘.

Nous avons dit que le Fusoma possède des filaments relative-
mentgrèles, très ramiliés et des conidées septées, fusiformes (fie.

6

1,4,cetfig. 3) à protoplasma granuleux et à membrane incolore

Fig... — Appareil conidien. 4 et b, conidies encore fixées sur leur
support et non cloisonnées.

comme celle des filaments mycéliens. Ces conidies se forment à
l'extrémité de filaments secondaires, qui s’insèrent normalement
sur un filament plus âgé. L’extrémité du filementconidifère grossit

1. Au lieu de cultures en cellules, on peut suivre en grand le développement
du champignon en faisent la culture sur gélatine dans un très petit cristallisoir à
fond plat et très mince, sur lequel on verse une mince couche de gélatine. Le cris-
tallisoir est fermé à l'aide d'une plaque en verre à rainure rodée, et il porte sur
le côté un petit trou bouché à l'aide d'un peu de ouate qui sert au passage de l'air
et permet de faire l'ensemencement sans lever le couvercle. On peut suivre direc-
ement le développement au microscope par la face inférieure.

RECHERCHES MORPHOLOGIQUES ET PHYSIOLOGIQUES. 211

légèrement, s'allonge et se sépare par une cloison du reste du fila-
ment qui continue à croitre, en repoussant la conidie terminale
qui se détache et tombe : elle se trouve remplacée par une
deuxième conidie, repoussée à son tour par une troisième, el ainsi
de suite. Les conidies anicellulaires ainsi produites tombent au
fur et à mesure de leur formation et peuvent être considérées
comme formant un capitule dissocié (fig. #). Cette production de

Fie. 4, — Germination d'une chlamydospore bicellulaire d reproduisant
le premier appareil conidien.

nombreuses conidies sur un même filament se constate aisément
dans une culture en cellule sur gélatine, où les conidies restent
groupées tout près du filament qui leur a donné naissance.
Dans les milieux qui sont pauvres en éléments nutritifs, l’eau
légèrement sucrée par exemple, les filaments conidifères sont
isolés ou peu ramifiés ; dans un milieu très nutritif, en parlicu-
lier sur la pomme de terre, les filaments conidifères sont rassem-
blés en un corymbe composé parfois de 10 à 20 rameaux fertiles.
D'ailleurs la forme du champignon éprouve des changements très
notables suivant les milieux. Ces changements portent tant sur
les filaments mycéliens que sur les conidies.

Les filaments sont ordinairement formés de cellules allongées
et relativement grêles. Quand il y a du sucre interverti dans le
milieu, ces cellules végétalives deviennent courtes et grossis-

212 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sent beaucoup dans un liquide, elles prennent souvent dans les
parlies immergées une forme sphérique qui rappelle tout à fait
celle des cellules-ferments qui se produisent chez les mucors dans
les mèmes conditions (fig. 5). Elles peuvent s’isoler à cet état et
atteignent jusqu'à 12 à 15 w de diamètre : ces cellules sphériques

Fig. 5. — Cellules ferments se développant dans un milieu contenant
du sucre interverti.

proviennent du cloisonnement de cellules d’abord plus allon-
gées, à contours sinueux, ayant 30 à 40 y de long sur 8 à 10 de
large, et qui sont remplies d'un protoplasma homogène sans
vacuoles, ni gouttelettes d'huile. Dans les milieux non sucrés,
mais riches en éléments nutritifs, les filaments un peu âgés sont
lécèrement renflés de distance en distance, aux points où se
font les cloisonnements.

Les conidies septées et fusiformes varient beaucoup d'aspect,
de grandeur et de nombre suivant les divers milieux. Toutefois
on peut dire, d’une façon générale, qu’à un milieu donné cor-
respond une forme déterminée de conidies. Leurs dimensions
peuvent varier entre 4 à 304 de long parfois davantage, sur 2 à
8z de large. Dans un milieu peu nutritif, dans un milieu miné-
ral alcalin, par exemple, plus ou moins analogue à un liquide
Raulin ou Cohn-Maver, elles restent pelites et unicellulaires, ova-
les et presque rondes (fig. 1, 4). C’est d’ailleurs la forme qu'elles
affectent sur le filament conidifère dans toutes les conditions, et
elles ne grossissent etn’acquièrent de cloisons transversales qu’a-
près être devenues libres. Sur la pomme de terre elles ont jusqu’à
184 de long sur le filament conidifère, et peuvent en avoir jus-

RECHERCHES MORPHOLOGIQUES ET PHYSIOLOGIQUES. 9213

qu'à 35 après qu'elles se sont détachées. Elles arrivent presque
à ces dimensions sur de la gélatine sucrée et légèrement acide.
Dans les liquides, elles se forment également bien dans l’inté-
rieur même du liquide, sur les filaments immergés et sur les
filaments aériens qui se dressent à la surface. Toutefois les co-
nidies internes paraissent plus petites et moins cloisonnées que
les conidies aériennes. Il semble qu'il y ait une certaine diffé-
rence physiologique dans la production de ces deux espèces de
conidies : en faisant les cultures dans des milieux minéraux
alcalins et à température un peu élevée, à 35°, on peut empècher
les conidies aériennes de se former : les filaments mycéliens
n'émergent pas à la surface du liquide. En continuant les cul-
tures à 37° dans des milieux minéraux alcalins non sucrés, on
peut mème aller plus loin et empêcher complètement la forma-
tion des conidies : les filaments mycéliens existent seuls dans
ces conditions, au bout de quelques cultures. En effet le Fusoma
ne pousse bien qu’à des températures inférieures ; son optimum
de température est à 25° environ ; dans ces conditions et en pré-
sence d'un milieu sucré par exemple, il se développe avec rapi-
dité, et forme ses conidies au bout de 24 heures.

La pomme de terre est un milieu très favorable à la vie du
champignon; au bout de 24 heures, le mycélium a envahi toute
la surface, el quelques heures après les conidies apparaissent en
grand nombre : les rameaux conidifères se groupent en certains
points, et les amas de conidies qui y prennent naissance forment
des taches grisâtres visibles à l’œil nu. Ces taches se produisent
également dans d’autres conditions, quand on fait les cultures
en liquides alcalins, sucrés avec du glucose : mais elles n’appa-
raissent que très tardivement, six semaines ou deux mois après
l'ensemencement, lorsque la surface du liquide est absolument
couverte par une épaisse couche de filaments mycéliens anasto-
mosés. Quand on conserve les cultures encore plus longtemps,
on peut constater que les taches d’abord grisätres deviennent
plus sombres, et forment enfin de légères protubérances dont la
couleur varie du brun au vert foncé. Cette coloration est due à
l'existence en nombre considérable de cellules isolées, rondes
ou ovales, à membrane épaisse souvent ornementée, remplies de
granulations huileuses, et qui constituent une seconde espèce de
conidies très différentes des premières (fig. 6).

14

214 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.
Ces conidies ont deux origines différentes : elles prennent

généralement naissance à l'extrémité de filaments mycéliens

Fig. 6. — Deuxième forme conidienne : Chlamydospores aériennes.
ä. Chl. unicellulaires lisses ou échinulées.

très grêles ; cette extrémité se renfle, grossit et forme une
conidie unicellulaire et sphérique ou bi-cellulaire et ovale, à
membrane épaisse, et qui s'enchâsse sur le filament conidifère
comme un gland de chêne dans sa cupule (fig. 5). Elles
peuvent aussi (fig. 7) naître directement des conidies septées
auxquelles elles se relient par un très court pédoncule qui
souvent est absent, et c’est alors qu’elles forment les taches
sombres dont nous avons parlé.

Il existe enfin une troisième espèce de spores qui se produi-
sent en même temps que les conidies dont nous venons de parler.
Les filaments mycéliens se renflent de distance en distance ; ces
renflements s’isolent par des cloisons, deviennent sphériques,
leur membrane s’épaissit tandis que les autres parties du thalle
se résorbent (fig. 8). Ce sont des kystes analogues à ceux que l'on

RECHERCHES MORPHOLOGIQUES ET PHYSIOLOGIQUES. 215

rencontre chez diverses mucorinées et que l’on désigne sous le
nom de chlamydospores. On en trouve aussi chez plusieurs Asco-

Fig. 7. — Chlamydospores aériennes. Deuxième mode de formation,
quand elles naissent directement des conidies septées fusiformes «a et b.

En c, conidies septées ayant produit une chlamydospore aérienne qui
commence à germer.

mycètes et M. Van Tieghem en a signalé récemment chez un
genre nouveau, l’'Oleina. Il semble du reste assez probable que

Fig. 8. — Chlamydospores formées à l’intérieur du liquide.

les conidies dont nous venons de parler tout à l'heure peuvent
être considérées comme des chlamydospores terminales. En

216 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

effet, il existe, morphologiquement, tous les intermédiaires entre
ces deux espèces de formation, Toutefois je ferai remarquer
qu'elles sont différentes au point de vue physiologique, les chla-
mydospores terminales ne se formant qu'à l'extrémité des fila-
ments aériens ou sur les conidies septées aériennes, tandis que
les chlamydospores mycéliennes se produisent dans l'intérieur
du liquide. De plus ces chlamydospores ne se rencontrent
jamais dans les milieux acides ni dans les liquides ne contenant
que du saccharose.

C’est surlout en présence du saccharose que l'étude physio-
logique du Fusoma est des plus instructives. Faisons un ense-
mencement dans un liquide nutritif neutre contenant du saccha-
rose : le Fusoma pousse rapidement et, au bout de 24 heures,
ses filaments mycéliens ont apparu en grand nombre. A ce
moment la liqueur de Fehling n’est pas réduite par le liquide de
culture, et il en est souvent de même le lendemain et les jours
suivants. On peut donc admettre que le Fusoma doit être classé
parmi les champignons qui ne produisent pas d’inversion, comme
certains Mucors étudiés par M. Gayon. En effet les champignons
qui intervertissent le sucre candi, l’Aspergillus niger, le Peni-
cillium glaucum et bien d’autres, donnent de l’inversion au début
même de leur développement; le Fusoma ne peut donc leur être
assimilé. Mais si l’on poursuit pendant plusieurs jours l'examen
du liquide, on constate que le 4° ou le 5° jour, parfois plus tard,
l'inversion du sucre, qui ne s’élait pas produite jusque-là, se
manifeste brusquement, et la quantité de sucre interverti va en
augmentant à partir de ce moment jusqu’au moment où le sac-
charose finit par disparaître complètement !. Si, en même temps,
on à suivi avec soin l’état du développement de la plante, on
constate que le moment où l’inversion du sucre apparaît coïn-
cide précisément avec celui où les premières conidies se montrent
dans les liquides.

Ainsi la fructification du Fusoma correspond à un change-
ment physiologique dans la vie de l'organisme, changement qui

4. À partir du moment où le saccharose est interverti apparaît la mise en
train d’une fermentation alcoolique très nette. Mais la quantité d'alcool ne dépasse
guère 4, 5 °/,. Dans les liquides sucrés avec du glucose, cette fermentation alcoo-
lique se produit également. C'est à ce moment aussi qu'apparaissent les cellules
sphériques, les cellules ferments dont nous avons parlé plus haut,

RECHERCHES MORPHOLOGIQUES ET PHYSIOLOGIQUES, 217

se manifeste par une propriété nouvelle acquise par la plante.

Si la sécrétion de l’invertine correspond bien réellement au
changement morphologique, il sera facile de la retarder en retar-
dant l'apparition des conidies. C’est ce qui arrive en effet. On
peut démontrer tout aussi aisément que l'apparition de la diastase
ne dépend pas de la ‘quantité de cellules végétatives formées ‘;
l'invertine n'existe qu'à partir du moment où les filaments végé-
tatifs sont devenus nettement conidifères. On trouve d’ailleurs
des résultats analogues avec l’amidon.

La betterave et la canne à sucre présentent des faits que l’on
peut rapprocher jusqu'à un certain point de celui que nous
venons d'indiquer. Ces plantes ne produisent de l'invertine qu'à
un moment donné de leur développement, pour consommer les
réserves de saccharose qu’elles avaient accumulées antérieure-
ment. Mais c'est, je crois, la première fois que l’on signale chez
les champignons l'apparition d'une faculté nouvelle au moment
de la fructification.

4. Voir pour plus de détails sur ces expériences l'article déjà cité « sur la pro-
duction de l’invertine chez quelques champignons » (Annales de l'Institut Pasteur).

REVUES ET ANALYSES

D' GaRRÉ. Sur les antagonismes entre les bactéries. Correspondenx-Blatt f.
Sch. Aertxte, 1887.

Les questions d'antagonisme entre les microbes ont frappé tous ceux qui
se sont livrés à l'étude de ces petits êtres. Mais le mot antagonisme n’a pas
toujours eu la même signification, et il est curieux de noter la série de sens
divers par où il a passé. A l’origine, il correspondait à cette notion, fournie
par l'étude des végétaux supérieurs, que chaque espèce microscopique a son
terrain de prédilection, sur lequel elle se défend mieux que sur tous les
autres. C’est à cette loi qu'on à eu recours, tant que n’a pas été inventée la
méthode de culture sur milieux solides, pour isoler les diverses espèces
microscopiques entrant dans un mélange.

Entre temps, le travail de Raulin sur l'Aspergillus niger est venu montrer
combien était à la fois délicat et sûr le mécanisme qu'on faisait fonctionner.
Il nous à appris d'un côté que quand on connaît bien le milieu de culture
d'une espèce déterminée, on peut renoncer pour elle au luxe de précautions
dont on entoure d'ordinaire la culture des microbes, et la cultiver à l'air
libre, et même dans un liquide et un vase non stérilisés, avec autant de
sécurité, et même plus, que celle d'un maraïcher opérant sur un carré de
son jardin. D'un autre côté, ce même mémoire nous apportait pour la pre-
mière fois, dans un exemple qui mérite de rester classique, la vision nette
des deux causes qui peuvent empêcher une espèce microscopique de se
développer sur un liquide déterminé : c'est, ou bien qu'elle n’y trouve pas un
élément dont elle à besoin, ou bien qu'il y manque une substance capable
de protéger la plante contre une de ses sécrétions.

Quand on en est arrivé à étudier l’immunité naturelle vis-à-vis de cer-
taines affections, ou l’immunité acquise que confère une première atteinte
d’une maladie virulente, on n’a eu qu'à transporter sur le terrain de l'être
vivant les notions fournies par l'étude du liquide Raulin. De là, les deux
théories de l’immunité récemment discutées dans ces Annales. De Ià aussi,
comme un rameau détaché de la même tige, les tentatives de bactério-
thérapie inaugurées par M. Pasteur, et qui, reprises par M. Cantani, ont
depuis tant frappé l'attention.

C'est que dans l'intervalle les savants s'étaient fait une idée plus nette
du mécanisme de l'action et de la réaction de deux espèces vivantes, ense-
mencées et poussant côte à côte dans le même liquide. Si ces espèces ont
des besoins différents ou même opposés, si par exemple l’une demande le
contact de l'air pendant que l’autre le redoute, elles s'arrangent de façon à

REVUES ET ANALYSES. 219

se trouver bien de leur contact et elles s'entr'aident. Si elles ont les mêmes
besoins et d'abondants moyens de les satisfaire, si elles ne se gênent pas
par leurs sécrétions, elles pourront vivre en communauté, sans se nuire, au
moins au début; c'est ce qui arrive en général dans toutes les infusions qu’on
abandonne à elles-mêmes et qui, pour peu qu’elles soient riches en matière
alimentaire, se peuplent tout d'abord d’une foule d'êtres divers. Mais le cas
le plus intéressant, celui auquel s'attache M. Garré, c’est l’action réciproque
de deux microbes dont l'un laisse son milieu de culture dans un état défa-
vorable au développement de l’autre, ce qui crée entre les deux un état
d'antagonisme.

Pour étudier ce sujet, il sème à la surface d'un tube de gélatine une
espèce qui ne liquéfie pas cette substance, racle la culture quand elle est
assez développée, stérilise à nouveau la gélatine si cela est nécessaire, et y
ensemence une autre espèce qui pousse mal, médiocrement, ou bien, suivant
la nature des modifications amenées dans le milieu par la première culture.
Il est bien entendu qu'on s’est assuré à l'avance que ce milieu, lorsqu'il est
intact, nourrit bien la seconde espèce.

Quand on à affaire à une espèce liquéfiant la gélatine, il faut modifier
le procédé. On fait alors une abondante culture dans du bouillon qu'on filtre
ensuite sur de la porcelaine, et qu'on additionne alors de gélatine pour en
faire un nouveau milieu sur lequel on porte divers microbes.

Comme on le voit, ce procédé ne permet guère de savoir à quoi est due
la stérilité du second ensemencement. Est-ce parce que le premier a enlevé
au milieu une substance utile? Est-ce parce qu'il y a déposé une substance
nuisible? M. Garré penche en faveur de cette seconde interprétation, mais
ne la démontre pas.

Il à opéré avec un grand nombre d'espèces, mais il a surtout étudié
le bacillus fluorescens putidus décrit par Flügge. C'est un petit bâtonnet
mobile, arrondi à ses deux extrémités, aérobie, se développant en surface,
donnant à la gélatine une couleur jaune d’urane et une fluorescence verte
très belle. Cette fluorescence exige le contact de l'air, et « est très vraisem-
blablement produite par l'oxydation d'une matière très diffusible sécrétée
par le bacille ». La gélatine devient alcaline et sent la triméthylamine. En
enlevant à sa surface la culture qui y a poussé, et en ensemençant à la
place le staphylococcus pyogenes aureus, le bacille de la fièvre typhoïde, le
bacille de la pneumonie de Friedlaender, la levure rose, ete., on n'observe
aucun développement. Le bacille du choléra asiatique, le bacillus mycoïdes
se multiplient péniblement, le bacillus anthracis et le bacille de Finkler-
Prior ont, au contraire, un développement abondant.

Très instructives sont les inoculations sur plaques de gélatine « J'inocule
au même moment sur la plaque refroidie, et en lignes parallèles alternantes,
le bacille fluorescent et le staphylococcus pyogenes, en augmentant peu à peu
la distance de mes lignes, de facon à l’amener de 3 à 15 millim. environ.
Le bacille fluorescent croît le plus vite. Les produits d'élimination se diffu-
sent dans le voisinage des lignes et sont un obstacle parfait au développe-
ment des semences de staphylococcus, quand celles-ci sont très voisines.
Quand la distance entre les lignes augmente, le développement du staphy-

2920 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

lococeus peut commencer et atteindre même un certain niveau, avant que
le poison du microbe antagoniste commence à exercer son action. Les lignes
extérieures de staphylococcus, qui ne sont flanquées que d’un côté par
l'espèce antagoniste, ont un développement presque normal. »

L'expérience est comme on voit intéressante et faite d’une facon ingé-
nieuse, mais pas plus que celles que nous avons résumées plus haut, elle ne
témoigne que la stérilité des lignes de staphylococeus soit plutôt due à une
substance sécrétée qu'à une substance absorbée par le bacille fluorescent.

Quoi qu'il en soit du mode d'interprétation, on peut vérifier de même que
le bacille fluorescent est un antagoniste du coccus du pus, des bacilles de la
pneumonie et de la fièvre typhoiïde; mais l'inverse n’est pas toujours vrai,
et l’antagonisme n’est pas toujours réciproque. Il l'est pour le bacille du
typhus, c'est-à-dire que « sur un sol de typhus », le bacille fluorescent ne
peut pas germer, mais de la gélatine qui a nourri le staphylococcus et le
bacille de la pneumonie reste un bon terrain pour une culture de bacille
fluorescent.

Examinant ensuite le rôle naturel de ces actions d'antagonisme,
M. Garré montre que le bacille du choléra peut être arrêté dans son déve-
loppement et même détruit au bout de peu de jours par les microbes de la
putréfaction. Il rapproche aussi de ces phénomènes une observation curieuse
de Billroth sur un cancer de la poitrine qui répandait une odeur insuppor-
table et faisait de la malade un objet de répulsion, même pour sa famille.
« Un jour, dit Billroth, la malade vint me consulter au sujet d’un mode de
traitement des plaies cancéreuses odorantes, qui consistait dans l'emploi de
figues sèches, cuites dans du lait, et renouvelées deux ou trois fois par jour.
Bien que convaincu que ces applications n'auraient d'autre effet que de
rendre l'odeur encore plus insupportable, je ne voulus pas m'’opposer au
désir de la malade, et je ne fus pas peu surpris en constatant, 2 à 3 jours
après, que l’odeur avait non seulement diminué, mais à peu près disparu.
La plaie était couverte d’une couche légèrement coagulée, ayant une faible
odeur de lait aigri. »

« Cette observation, continue Billroth, a fait sur moi une telle impression
qu® je ne l’ai jamais oubliée. » Elle mériterait plus, elle vaudrait d'être
reprise et étudiée à la lumière nouvelle apportée par les notions que nous

possédons aujourd’hui au sujet de l’antagonisme des bactéries.
px

Dr, Seyper. Gangrène septique suraiguë après une lésion sous-cutanée.
Münch. med. Wochens., 1888, p. 41.

Il s'agit ici d'un cas de cette affection appelée gangrène foudroyante par
Maisonneuve, gangrène méphitique par Pirogoff, emphysème putride par
d'autres chirurgiens, et qui, rare en temps de paix, se rencontre assez fré-
quemment dans la chirurgie d'armée, et toujours avec un pronostic redou-
table.

Un homme, très fort et très gras, âgé de 40 ans, s'était démis le pied
en tombant de voiture, L'astragale avait subi une demi-luxation sur l'arti-

REVUES ET ANALYSES. 221

eulation avee la jambe, une luxation complète sur l'articulation astragalo-
tarsienne. Il n'y avait pas de fracture, et la peau semblait intacte, mais
elle était fortement tendue sur les os. La réduction se fit sans peine. Le
traitement consista dans l'application d’attelles, d’un bandage, d'une vessie
pleine de glace, et tout allait très bien, lorsque le treizième jour du traitement
apparaît la fièvre. On découvre alors sur les côtés du pied et sur les mal-
léoles des phlyetènes noirâtres, grandes comme une pièce de 50 centimes. On
les ouvre avec des précautions antiseptiques; il en sort une sanie noirâtre
et mousseuse. Les jours suivants, malgré un traitement antiseptique éner-
gique, la peau devient emphysémateuse au voisinage des pustules, et on y
sent un léger erépitement. On multiplie les soins, on fait des incisions, on
enlève chaque jour les portions gangrenées, mais tout cela n'arrête nil’em-
physème de la peau ni l'infiltration du tissu musculaire. Quand le D' Seydel
est appelé, il trouve la plaie très étendue, et le malade présente tous les
caractères d’une intoxication avancée : somnolence, couleur jaunâtre de la
peau, sueur froide sur le front, le regard affaissé, le pouls misérable, la peau
brûlante, Dans une nuit, la gangrène avait progressé de la largeur d'une
main. On essaie d'une amputation faite avec des précautions et des soins
antiseptiques multipliés. Après l’amputation, l’état du malade semble
meilleur, mais le lendemain la gangrène reparaïît, etle malade meurt avec
les symptômes septiques les plus accusés.

On comprend combien l'étude bactériologique de ce cas eût été intéres-
sante. MM. Chauveau et Arloing, Brieger et Ehrlich ont identifié la gangrène
foudroyante des chirurgiens avec la septicémie produite par le vibrion
septique de M. Pasteur, laquelle est la même que l'œdème malin de la souris,
du cochon d'Inde et du lapin. Mais si ces deux dernières affections sont
identiques, et si on a par suite le droit de considérer les mots Bacillus
ædematis maligni comme synonymes de vibrion seplique, nous sommes
moins assurés de l'identité avec la gangrène foudroyante, parce que,
faute d'entente, ces mots sont sûrement appliqués à des maladies très
diverses. J'ai vu, dans le service de M. le prof. Fournier, une gangrène fou-
droyante de la verge qui s’est étendue rapidement sur la presque totalité
du serotum, et qui, malgré son caractère gangreneux accusé, malgré son
caractère foudroyant, n'avait pourtant aucune ressemblance avec la gangrène
foudroyante des chirurgiens d'armée. Les tissus étaient sphacélés, mais
nullement sanieux ni purulents, au moins au début, et surtout il n’y avait
pas ces dégagements gazeux que nous venons de rencontrer dans la des-
cription de M. Seydel. J'ai trouvé, comme agent actif dans ce cas, un Ccoc-
eus, que M. Fournier a mentionné dans la description qu’il a donnée de la
maladie, et qui était totalement différent du vibrion septique. Dans le même
ordre d'idées, le coceus que j'ai décrit sous le nom de microbe du clou de
Biskra peut aussi donner naissance à des nécroses à évolution très rapide.

Il eût donc été très intéressant de savoir si on retrouvait, dans le cas de
M. Seydel, le vibrion septique ou un autre microbce. Il n’y a dans le mémoire
que deux lignes consacrées à cet examen bactériologique. On y lit que le
liquide purulent des articulations, soumis à l'examen de M. le D° Buchner, ne
lui a fourni que des streptococcus et des staphylococçus en quantités énormes,

222 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Des coceus peuvent produire la gangrène, nous en avons tout vu à
l'heure des exemples, mais je ne connais pas de cas où ils donnent des
dégagements gazeux comparables à ceux que nous avons signalés plus haut.
L'existence de ces gaz plaide au contraire en faveur de la présence du vibrion
septique ou au moins d'un mierobe anaérobie. Le mémoire ne dit pas com-
ment M. Buchner a opéré. S'il s'est borné à un examen microscopique, le
bacille peut lui avoir échappé; s'il s'est contenté, comme on le fait trop
souvent en Allemagne, d'une simple culture sur gélatine, il y a grandes
chances pour que ce mitrobe anaérobie ait refusé de se développer, et que
M. Buchner soit tombé sur un des innombrables staphylococeus pyogenes
aureus et même citreus qui constellent le ciel de la microbiologie. On n’a donc
pas le droit de prendre au pied de la lettre les conclusions de M. le D' Buch-
ner, ni d'y voir une infirmation de la coexistence du vibrion septique et de
celte espèce de gangrène foudroyante. Il est sûr qu'il y avait des coccus dans
les tissus de son malade puisqu'il en a trouvé, mais on ne sera sûr qu'il
n'y avait pas de vibrion septique que quand il nous dira comment il l’a
cherché sans le rencontrer.

Dx.

Noxewirsea. Les microorganismes d’une inflammation enzootique du foie
chez les porcelets (Hepatis enzootica porcellorum). Ceatralbl. f. Bakt. u.
Purasit., t. IT. p. 233, 1888.

M. Nonewitsch a eu à examiner en 1887, à l'Institut vétérinaire de Dor-
pat, trois maladies différentes du pore, à savoir : 5 cas de ce que nous
appelons en France, avec MM. Cornil et Chantemesse, pneumo-entérite du
pore, et qui porte en Allemagne le nom de Schweine seuche : ? cas de rouget,
et 4 cas d’une maladie moins connue qui sévit, surtout en Russie, sur les
porcelets, et qu'on a nommée hépatite enzootique.

Dans la première de ces maladies, il a retrouvé les bactéries ovales et
courtes décrites par Schutz, qui se cultivent bien sur des milieux liquides
et gélatineux, et dont l'inoculation au porc, au lapin, au cobaye, au rat et
à la souris, donne toujours des résultats positifs. La ressemblance avec le
microbe étudié par Loeffler et par Schutz serait complète, si celui de
M. Nonewitsch ne liquéfiait pas la gélatine au bout de 6 à 8 jours. De cette
petite différence, M. Loeffler conclut, dans une note ajoutée au travail que
nous analysons, que les deux microbes sont tout à fait différents. Cela est
possible, mais la liquéfaction de la gélatine nous semble une base bien
étroite pour asseoir un pareil jugement. La sécrétion de la diastase liquéfiant
la gélatine est sans doute, comme toutes les sécrétions de diastases, un
phénomène contingent, sur lequel il est, dès lors, imprudent de tabler d'une
facon absolue. Ce sont surtout les ressemblances anatomo-physiologiques
de l'affection dans la série des animaux inoculés qu'il faut consulter, et sur
ce point, nous sommes obligés de nous en rapporter, jusqu'à plus ample
informé, à l'affirmation de M. Nonewitsch.

Dans les cas de rouget qu'il a eus à examiner, M. Nonewilsch a retrouvé
le bacille ordinaire de cette affection. C’est sur l'hépatite des porcelets qu'il

REVUES ET ANALYSES. 223

apporte les documents les plus nouveaux. Elle frappe surtout les jeunes
animaux, et les morts surviennent surtont entre 2 et 4 mois après la naïs-
sance. A l’aulopsie, on trouve des taches d’un rouge intense sur la peau;
le foie grossi, parsemé de taches rouges, bosselé sur sa surface, porte
parfois de grosses saillies gangliformes, formées d'un tissu hypertrophique.
La coupe du foie est couleur de noix muscade, avec des parties jaune grisà-
tre et brun rouge. Les cellules du foie sont gonflées et troubles, sans avoir
pourtant subi la dégénéresrence graisseuse. L'épithélium des canalicules
urinaires est trouble aussi, et l'urine albumineuse.

Dans le foie, la rate et le sang, on trouve de gros coceus visibles sans
coloration, et ayant environ le quart ou le cinquième du diamètre d'un
elobule sanguin. Semés sur la gélatine, ils donnent au bout de deux jours
des colonies rondes et brillantes de la grosseur d’une tête d’épingle. Dans
le bouillon, il y à un trouble suivi d'un dépôt grisâtre. On voit au micro-
scope, dans les cultures, des coccus isolés, par paires ou en glæas, qui se
colorent bien avec les couleurs d'aniline; au troisième jour du développe-
ment, la gélatine commence à se liquéfier et l’est complètement vers le
dixième jour.

On a inoculé, avec les cultures de ce micrococcus, 6 porcelets, 13 cobayes,
3 lapins et 4 rats. Il est mort 3 porcelets, 6 cobayes, 2 lapins et 2 rats, les
porcelets en T ou 8 semaines, les cobayes 4 à 10 jours après l’inoculation,
les lapins en 3 ou 4 semaines, et les rats au bout de 3 à 17 jours. On a
retrouvé chez les porcelets les lésions anatomo-pathologiques du foie relevées
dans la maladie naturelle. Les changements du foie étaient moins marqués
chez les autres animaux. Mais chez tous on retrouvait dans le sang et les
tissus le microcoque ensemencé.

La longueur de la période d'incubation chez le porcelet fait penser que
les animaux qui meurent après leur naissance ont été infectés dès les pre-

miers jours, sans doute par la voie ombilicale.
Dx.

AxEL Hossr. Un cas de carcinome du sein (récidive), traité par une inocu-
lation d’érysipèle. Centralbl. f. Bakt., t. I, p. 593, 1888.

La malade était une femme solide d'environ 40 ans, qui, après avoir subi
au printemps de 1887 une ablation du sein droit pour carcinome, avait vu
reparaître quelques mois après un nouveau nodule sur la cicatrice, auquel
avait suceédé l'évolution rapide d'un cancer de la peau, si bien qu'en
août 1887, toute la partie droite de la poitrine était une plaie bourgeon-
nante irrégulière, saignant facilement, fortement infiltrée, et bordée de
groupes de nodules eancéreux sous-cutanés, dont la grosseur variait de celle
d'un noyau de cerise à celle d’une grosse noix. Malgré tout, l'état général
était resté bon, l'appétit et les forces normales, et l'aspect florissant.

En désespoir de cause, les médecins engagent la malade à se soumettre
à une inoculation d'érysipèle, ce qu'elle accepte sans hésitation. Une pre-
mière tentative resta sans succès. Elle avait été faite avec une semence
dont la virulence sembla avoir diminué par une trop longue série de eul-

224 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

tures successives sur gélatine nutritive. On refit l'inoculation avec une nou-
velle culture fournie par M. le D' Fehleisen, et en faisant au scalpel de
petites incisions à la fois sur la plaie et sur son pourtour.

Vingt et une heures après, survient un fort frisson qui se renouvelle
deux fois dans la journée. Trois heures après le frisson, on aperçoit sur les
bords extérieurs de la plaie une rougeur érysipélateuse qui s'étend peu à
peu sur le bras droit, et revêt les caractères d’un érysipèle typique. En
même temps, toute la surface de la plaie devient plus rouge et plus cuisante
qu’à l'ordinaire. Peu à peu la rougeur s'étend à la partie gauche de la poi-
trine et au dos. Puis on l’observe autour des bords supérieurs et inférieurs
de la plaie. Le mode d'extension des rougeurs sur les bords de la plaie
sembla n'avoir aucune relation avec les scarifications qu’on y avait faites.
Tout parut au contraire se passer comme si l’érysipèle avait passé des
bords dans la plaie.

Au frisson initial avait succédé une forte fièvre, pendant laquelle s'é-
taient formées sur le bras des bulles de diverses grosseurs. Le septième jour
au malin, la fièvre tomba subitement.

Ceci démontre, comme l'avait du reste prouvé Fehleisen, que le strepto-
coccus de l’érysipèle peut déterminer sur l’homme un érysipèle typique.
Mais ce qui est plus nouveau, c’est l'effet produit sur la malade sur
laquelle on avait essayé ce moyen curatif.

Voici son état 4 mois et demi après l'inoculation : L'effet sur le cancer a
done d’abord semblé bon. < Environ un mois et demi après l'inoculation
la plaie tout entière sembla diminuer par voie de rétraction. » Le bras
droit restait pourtant gonflé : mais deux mois et demi après, l'amélioration
avait disparu. Les portions qui s'étaient recouvertes d'une couche épider-
mique recommencaient à s’ulcérer. On est revenu à l’état initial. Puis de
nouveaux nodules cancéreux ont apparu sur la partie interne du bras, celle
qui appuie contre la plaie. Enfin d’autres nodules, qui paraissent suivre la
marche de l’extension de l'érysipèle, ont apparu jusque sur le carpe.

L'érysipèle n'a en effet pas disparu. Il est devenu en quelque sorte
chronique, ct de temps en temps on voit apparaître sur le bras des rougeurs
comme au lendemain de l’inoculation. « Les éruptions noduleuses qui
l’'accompagnent ressemblent tout à fait aux proliférations carcinomateuses
qu'on observe sur les bords de la plaie », mais peut-être, en l'absence de
toute étude microscopique, faut-il ne pas trop insister sur ce fait. En tout
cas, l'appétit s’est amoindri, les forces ont déeliné, et l’état général a empiré
en apparence beaucoup plus vite que si le carcinome avait été abandonné
à lui-même. Cette expérience fâcheuse de bactériothérapie doit être rap-
prochée d'un cas rapporté par Neelsen (Centralbl. f. chir., 44, 1884), où une
augmentation dans la rapidité d'évolution d’un cancer coïncide avec l’ap-
parition fortuite d’un érysipèle,

Dx.

REVUES ET ANALYSES. 295

J. Maximmoviron. Des propriétés antiseptiques du naphtol x. — Comptes rendus
Académie des sciences, 30 janvier 1888.

M. Maximovitch a d'abord établi que le naphtol ; est insoluble dans
l'eau froide, soluble à 0,44 pour 1000 dans l'eau à 70°, à 1 pour 100 dans
l'eau alcoolisée à 40 pour 100.

Il a étudié ensuite sa toxicité. Pour provoquer la mort, il faut en faire
ingérer à un lapin 9 grammes par kilogramme, ou en injecter sous la peau
3 vr. 3 en solution alcoolique, ou bien encore en injecter dansles veines 0,13
par kilogramme. M. Maximoviteh s'est assuré que les accidents (secousses
musculaires), produits par l'introduction du naphtol dans les veines,
n'étaient pas attribuables à l'alcool.

Le pouvoir antiseptique a été établi en cultivant quatorze microbes dif-
férents, dans divers milieux nutritifs (bouillon de bœuf, gélose, gélatine),
additionnés de naphtol à doses variées.

Dans le bouillon de bœuf, le naphtol à la proportion de 0.10 pour 1000
empêche complètement le développement des microbes de la morve, de la
mammite des brebis, du choléra, des poules, du charbon bactéridien, de la
pneumonie, du clou de Biskra, de la fièvre typhoïde, de la diphtérie des
pigeons, du staphylococcus albus, du staphylococcus aureus, du tetragenus.

A la dose de 0,25 pour 1000, il arrête le développement du bacille de la
tuberculose ; à 0,40 pour 1000, dans les milieux solides, il empêche le déve-
loppement du bacille de la pyocyanine et d’un bacille donnant naissance à
une matière verte chromogène.

Les doses nécessaires pour empêcher ces développements varient avec
les milieux employés. Il faut en général les élever un peu pour obtenir dans
la gélose les mêmes résultats que dans les bouillons. On peut ajouter que
d’autres causes, telles que la quantité de semence, la vitalité des microbes
semés, la température, ete., sont également capables d’influencer ces doses.

L'urine agitée avec le naphtol en poudre ne fermente pas; dans des
bouillons additionnés de 0,12 pour 1000 de naphtol, la matière fécale hu-
maine ne fait apparaître qu'un léger louche.

Il résulte de l'intéressant travail de M. Maximovitch que le corps
qu'il a étudié paraît réunir les qualités voulues pour être classé avec
honneur parmi les antiseptiques de l'intestin. Il empêche ou retarde, à
quantités minimes, le développement d’un bon nombre de bactéries, de
celles des matières fécales en particulier. Il est insoluble dans l’eau pure,
fort peu soluble dans l’eau alcoolisée. IL peut être ingéré sans accident à
doses considérables. Les doses administrées par fractionnement, à inter-
valles rapprochés, introduiront des quantités successives de naphtol. En
raison du peu de toxicité, on pourra renouveler les doses un grand nombre
de fois, de telle sorte que l'antiseptique employé tapissera, dans la mesure
du possible, la surface du tube digestif d'une extrémité à l'autre. Son
manque de solubilité ne lui permettra pas de s'échapper et de passer dans
la circulation générale. Il agira localement et par contact sur une grande
étendue. Or, ce sont là précisément les conditions indiquées par M. Bou-

226 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

chard comme nécessaires pour réaliser l’antisepsie intestinale. Le travail
de M. Maximovich ne nous dit rien des effets du naphtol introduit dans
d'autres cavités, dans les séreuses par exemple, dont les lésions infec-
tieuses devront aussi bénéficier de l’action des antiseptiques insolubles.
Le naphtol « placé dans le tube digestif est fort peu toxique, mais cela ne
nous autorise pas à conclure qu'il en serait-de même si on le déposait sur
une surface séreuse. Un corps tout voisin, le naphtol 6, peut être, sans
danger, mélangé à l'alimentation du lapin à la dose de 8 gr. 60 par kilo-
gramme; injecté même à doses moindres dans les séreuses, dans la plèvre,
dans le péritoine, il provoque des accidents se terminant par la mort.

Le naphtol «, étant insoluble, constituerait un antiseptique général
médiocre, On ne peut l'introduire dans le sang qu’en le dissolvant à l’aide de
l'alcool, et si on l’injecte dans la circulation, sa toxicité est relativement
élevée,

CHARRIN.

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES A L'INSTITUT

PASTEUR DU 1°* AU 31 MARS 1888.
Personnes traitées mortes de rage.

Srôgcer (Henri), 54 ans, maréchal ferrant, rue des Carrières,
Paris. Mordu, le 8 novembre 1887, au pouce droit par un chien
reconnu enragé à l’École d’Alfort. Deux morsures au pouce
droit au niveau de l'articulation de la première et de la deuxième
phalanges, une sur la face dorsale, l’autre sur la face palmaire.
Ces morsures pénétrantes ont donné beaucoup de sang. Stôbler
a mis sur les plaies de l'essence de térébenthine qu'il a allumée.
Les blessures ne présentent aucune trace de cautérisation le 19,
lorsque Stübler se présente à l’Institut Pasteur.

Traité du 10 au 24 novembre, Stôbler a été pris de rage
confirmée le 31 mars. Il a succombé le 2 avril au matin.

Plus d’un mois avant l’accès de rage, Stôbler avait présenté
de grands changements dans son caractère. Il était devenu iras-
cible et nerveux et montrait à certaines personnes une affection
véritablement maladive. Son appétit était devenu exagéré et le
sommeil était fréquemment interrompu par de véritables hallu-

INSTITUT PASTEUR. 297

cinations. Le 19 mars, Stôbler s’est foulé le pouce en travail-
lant. Les douleurs dans le doigt ont persisté et, le 30 mars, elles
se sont étendues au bras et à l’épaule, avec impotence du
membre. Ces douleurs ont disparu dans la nuit du 31 mars au
D avril.

Marior (Alphonse), 23 ans, soldat au 129% de ligne. Mordu
à Paris, le 15 février par un chien reconnu enragé : 1° au pouce
droit, morsure très forte, contuse, intéressant l'extrémité du
pouce; 2° à la base du pouce droit, cinq morsures; 3° une
morsure à la face palmaire et sur l’éminence thénar; 4° une
morsure ayant traversé l’ongle de l'index et pénétré dans la
pulpe du doigt; 5° une très forte plaie à la deuxième phalange du
médius ; 6° une morsure à la deuxième phalange de l’annulaire.
De plus, des plaies pénétrantes sous les ongles du médius et de
l'annulaire.

Les blessures de Marinot sont très fortes, contuses; presque
toutes sont faites par arrachement; il y a perte de substance sur
plusieurs points.

Cautérisé au fer rouge un quart d'heure après la morsure. La
cautérisation est tout à fait superficielle et insuffisante. Plu-
sieurs plaies n'ont pas été cautérisées.

Traité du 15 février au 3 mars. Quelques jours après la fin
du traitement, Marinot a ressenti des douleurs très vives dans
la main mordue. Ces douleurs ont envahi le bras, qui était
comme engourdi. Marinot ne pouvait presque plus se servir du
bras droit. Ces douleurs d’impotence du membre ont diminué
dans la suite. Ces détails n’ont été connus que le 30 mars, où
Marinot est entré à l'hôpital du Val-de-Gräce avec la rage
confirmée.

Mort le 1% avril.

Cosre (Denis), 28 ans, coutelier à Thiers (Puy-de-Dôme).
Mordu le 6 mars dans la pulpe de la troisième phalange de l’in-
dex droit, une morsure profonde, lavée aussitôt chez un phar-
macien avec une eau (?). Coste a élé mordu par son chien, re-
connu enragé par M. Guimbal. Le bulbe du chien, remis au
laboratoire et inoculé à des cobayes, leur a donné la rage.

Traité du 9 au 20 mars 1888. Pris de rage paralytique le
8 avril, mort le 10. (Renseignements fournis par le D° Guille-
mot, de Thiers.)

228 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — Mars 1888

Morsures à la tête ( simples .....| » 1 Sn 4 »| » :
et à la figure multiples....| v| æi ®|»| »\ 5)
Cautérisations efficaces. ........ Re A RES PE 121 NE] TO) »'. [> >| pe

== inef| ACCES Er IE 2| » » il » » 4! » »
Pas Te CHULETISAUONRE. EE ES 3| » | » | 4| » » | »] » | »
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Morsures aux mains] multiples... .| » 20) é 2 5?2| | 915
Cuutérisations efficaces............ 19240) 11] 21e
== inefficuces Ste alelale ere 40 { ) » » 25 » » 19 » »
Pas dercuuténsanon 2e eee pme rs » | olmalE
Morsures aux mem-( simples......| »| …} sl ”| 19 »| 5) 9
bres et au tronc | multiples....| »| 2j ‘|»| 14 84, ,| 4
Cautérisations efficaces ............ A fs AE 5 » +2 308
— TRE NCACES NL (OUPS EE EC RG »y | 4] » | »
PusideCHRlCNSQUOR OR RER ee 11» |» [11 » D 20) M 5
Habtisidéchirési 20. SIA T| »:| » [29] » HA ET DS EE
MOTSUTES GENE. 1 à. HR rasbele PES Ne ».1r2/"2lxx
Morsures multiples en divers points
LUCE TS RER ME Re RE RER »| ®| 2|» 5| S%|°| 1| 1
Cautérisations efficaces. ........... » » | » » perl S LED ALES
— ef RCUCES 250 Re 8 Alpes ED » | »l:» | »
Pas de cautérisation......... FH dat ro La al Le) Pi » EL IS SNe
Habitsadéchirési mt dome: rue. 1 ET LED. ei PR ER rte
HOTSUTES 0 NU TER Se. 2e 91 » |» 51 »7 A0 es

Français et Algériens..|..| 50) .,|.. 5; A ER
GES Etrangers .: 3:00 2 ha nee sil se PRIS
|
A B C
TT © mm
TOTAL GENERAL EE ere 165

1. Pour l'interprétation des termes et la signification des diverses colonnes du
tableau, se reporter aux statistiques précédentes, p. 95, 143 et 207, t. I.

Les animaux mordeurs ont été :

Chiens, 149 fois; chats, 13 fois; loup, 2 fois; vache, 1 fois.

Le Gérant : G. Massox.

ee ame mon 4e

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

2m ANNÉE. MAI 1888. N° 5

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

SUR LA DESTRUCTION DES MICROBES
DANS LES ORGANISMES FÉBRICITANTS,

Par MN GAMALÉIA:

Toute fièvre intense et prolongée est le plus souvent liée à la
présence des microbes pathogènes dans l’organisme malade.
Cette coexistence de la fièvre avec les microbes peut être diverse-
ment expliquée.

On peut penser d'abord que la fièvre traduit une augmen-
tation de la métamorphose régressive des tissus et résulte
directement de l’action fermentative des bactéries. Les bactéries
dédoublent, comme on sait, très énergiquement les substances
organiques, et la désassimilation fébrile pourrait être produite
par ce dédoublement.

Cette idée cependant n’est pas confirmée par l'examen atten-
lif des faits. Les observateurs ont été souvent étonnés en cons-
tatant que dans diverses maladies infectieuses (entre autres dans
la mieux étudiée, le charbon), le développement des bactéries dans
le corps n’est pas en rapport apparent avec la gravité de l'affection
pendant la vie, tandis qu’on retrouve les microbes en quantités
énormes sur le cadavre.

Les recherches systématiques que j'ai faites dans cette direc-

tion. sur la fièvre vaccinale charbonneuse chez les moutons,
15

230 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

m'ont montré que souvent, dans ces cas, on ne trouve pas une
seule bactérie vivante, n1 dans le sang, ni dans les organes inté-
rieurs des animaux sacrifiés pendant la fièvre, qui peut pourtant
s'élever jusqu'à 41° et au delà.

D'un autre côté la fièvre peut être provoquée aussi par les
bactéries mortes. Je citerai les expériences suivantes

EXPERIENCE [. — 4 novembre 1887, 9 h. m. Un lapin est inoculé dans la
veine de l'oreille par 4°° d’une émulsion de culture du bacille de la morve
sur la gélose de Roux, tué par la chaleur de 120° pendant 20 minutes.

A 10 h., on répète cette injection.

A 9 h. m. avant l’inoculation. T—3908
AS A DONS SEEN PSE 4002
ACTE OMhÉSS PETER IE RENE 4055
A 5 h. m. le 5 novembre . 20c9
AO Ne: 1003

ExPÉRIENCE IL — 13 février 1888, 9 h. Un lapin est inoculé dans la veine
de l'oreille par 2°° d'une émulsion stérilisée de la culture de bacillus pro-

digiosus sur la gélose.

À 9h. m. avant l'inoculation. T = 39°
A A0 PER NT ENS RE RE 40°9
AMOR air ete 4106
AL ARS SRE MT TASER 440
AS LE PRE SRE Te | 400
AMONT ER ARR STATE 419
AT SRE A A CDS 4009
ExPÉRIENCE HE — 1% mars, S h. m. Un lapin est inoculé par 1,5 d'une
émulsion stérilisée de D. prodigiosus.
S h. m. avant l'inoculation. T = 400
DADÉMND ASE TERRES 3 C5)
DRE PP RER LORIE 4407
FOR PRE NE EE nr 1109
10 LR DER SANTE 12
HA fbi AO SERRE + PE Ar

On voit ainsi que les bactéries mortes peuvent amener une
fièvre intense, quoiqu'elles soient, comme de raison. inaptes à
toute action fermentative.

On ne peut pas attribuer non plus le rèle pyrogène aux dias-
tases ou enzymes produits pendant leur vie par les bactéries qui
ont été injectées mortes : ces diastases sont détruites par la tem-
pérature de 120° supportée par les cultures avant leur injection.

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE. 231

Enfin, il faut aussi mettre hors de cause les produits de
l'activité vitale des microbes, tels par exemple que les ptomaïnes
qu'ils sont certainement capables de sécréter, et dont la nature
variable est sûrement en relation avec la virulence spéci-
fique des bactéries, mais qui, nous allons le voir, n’ont rien à
faire dans la production de la fièvre. On peut, en effet. établir
d'abord comme un principe général qu'une augmentation dans
la virulence des bactéries diminue à la fois le degré et la durée
de la fièvre qu’elles provoquent. Pour le charbon et la pneumonie,
on peut le démontrer par des expériences directes.

Î. — INDÉPENDANCE DE LA FIÈVRE ET DES PRODUITS DE SÉCRÉTION

DES MICROBES,

Une infection des lapins par les bactéries du charbon amène
déjà en quelques heures un accroissement de la température
jusqu’à 41° et 41°,5, qui persiste environ 24 heures et tombe
rapidement au-dessous de l'état normal. L’abaissement de la
température s'accompagne d’un affaiblissement musculaire et
d'un état somnolent menant immédiatement à la mort.

Une inoculation des lapins par des bactéries plus atténuées

prolonge au contraire considérablement la durée de la fièvre.

ExPÉRIENCE IV. — Ainsi le 10 décembre, on fait à un lapin une injection
sous-cutan'e d’une culture affaiblie de charbon (2° vaccin). Le lendemain
matin, il présente une température de #1, et cet état fébrile persiste trois
jours, jusqu au 14 décembre. Le soir, le lapin succombe au charbon avee
une rate considérablement hypérémiée,

ExPÉRIENCE Ÿ. — Le 10 décembre, une émulsion de sang pris dans le
cœur d'un lapin charbonneux est injectée (0,2:°) dans le sang d’un lapin à
10 h. du matin. A 5 h.s. T — 59%8. Il a la fièvre durant la nuit, A 10h. m.
le 14, la température est encore 4065, 1 meurt à 3 neures,

Infecte-t-on au contraire non par le sang charbonneux, mais
par une émulsion faite avec l'œdème inflammätoire qui s'est
formé à l'endroit de l'inoculation chez l'animal mort de charbon,
œædème où les bactéries, en pleine évolution, doivent, suivant
toute apparence, produire de grandes quantités de leurs pto-
maïnes, la fièvre n’apparaît plus du lLout. Ainsi :

232 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ExPérience VI. — Le 11 novembre, à 9 h. 30’ m., un lapin est inoculé dans
le sang par une émulsion de l’œdème d'un lapin charbonneux.

LP LR Ten A Hotaiel— 00
A0 RS SUR EE E RERTRRSRERE 39°9
12 MALE MEET ER EE SAIS 398
L'HILADE M PE NOR 3805
DRE EPA SANTE OS 5 3809

Paralysie. On sacrifie l'animal. A l’autopsie, rate anémique et non
agrandie. Grand nombre de bactéries dans le sang et dans les organes
intérieurs.

ExPÉRIENCE VIL — Le même jour, à 10 h. du matin, on a inoculé un autre
lapin, avec la même émulsion.

10 h. 30° im. avant l'inoculation. T—3809

ADR ra ne cie Per 3904
AEREREER ER R NE eieEEe 38°2
DS RE OT ri PT Us mais 3906

Paralysie. Vers 5 h. l'animal meurt et, à l’autopsie, on constate les
mêmes faits que chez le lapin précédent.

Donc, les bactéries très virulentes qui donnent la mort dans
un délai de 5 à 8 heures, ne provoquent plus la fièvre.

La pneumonie présente les mêmes phénomènes. Tandis que
les bactéries pneumoniques de virulence moyenne amènent chez
le lapin, comme l’ont déjà montré M. Pasteur et ensuite M. Fræn-
kel, une température montant jusqu'à 4295 et ne tombant
que deux heures avant la mort, les mèmes bactéries, accrues
de virulence grâce au passage par les lapins, tuent avec une
fièvre peu intense. Les expériences suivantes parlent dans le
mème sens.

EXPERIENCE VIII, — Le 19 mars 1888, un lapin partiellement vacciné est
inoculé sous la peau par 1/10 de cent. cube du sang virulent, pris dans
le cœur d'un lapin mort de pneumonie infectieuse.

C0
SN AT ete à PURE T = 4409
CREER LE NOR BPeGe 490
DRE MAIRE: LE Se =: 4105

RON ce Re AREA 4197

L'animal succomba le 12.

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE. 233

Des microbes plus virulents donnent la mort beaucoup plus
vite et avec une fièvre moins intense. Ainsi :

EXPÉRIENCE IX. — Le 91 janvier, 9 h. m. Inoculé un lapin de 14° passage.

Température avant l'inoculation. T—39°2

UMR TOR RSS OU MERE SRTR 3904
PLAN 1 PATES PERRET 40°6
LA DS MS TRS TRE RO 4194
En ER ERNEST ADS 3905
À 5 h. 30° le lapin succombe. Rate anémiée, non grossie.
EXPERIENCE X. — Le 14 février, à 8 h. 30° m., est inoculé un lapin de

, acc 3
40° passage.

Avant l’inoculation T = 3905

lONh 30 eme 3908
ERA EURE 40°9
DENMAUEENSE 40°9
HANOVRE ES 388

» h. 30’, l'animal périt.

ExPÉRIENCE XI. — Le 45 février, à 9 h. du matin, on inocule dans le
sang un lapin de 42° passage.
Ans = 3004
Ath 4002
Ale hiee 40°8

Ensuite la température commença à tomber, et à 2 h. 30’ de l’après-
midi l'animal périt.

C'est ainsi que, lorsque les bactéries pneumoniques tuent les
lapins dans un délai de plusieurs jours après l’inoculation, elles
donnent une fièvre montant à 42%, et sur le cadavre on retrouve
la rate cramoisie, hypertrophiée. Lorsque ces mêmes bactéries
tuent dans un intervalle de 7 heures et demie, la température
ne monte que jusqu'à 41°4 et 40°9. Quand la mort vient au bout
de 5 heures et demie, la température ne dépasse pas 4008. Dans
les derniers cas, la rate ne présente ni hyperémie ni hyper-
trophie.

Il résulte de ces expériences qu'avec l'accroissement de la
virulence des bactéries disparaissent, et la fièvre, et aussi son
phénomène satellite, l’hypertrophie et l’hyperémie de Ja rate.

234 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Ceci peut ètre considéré comme élabli au moins pour deux
maladies : le charbon et la pneumonie.

Mais, pourrait-on objecter, les mêmes ptomaïnes, qui, accu-
mulées en grande quantité, produisent la paralysie et le coma,
ne provoqueraient en quantités moindres que la fièvre.

Les expériences directes de Hoffa' qui a isolé à l'état de
pureté un alcaloïde des bactéries charbonneuses, démontrent
pourtant que cet alcaloïde, même à des doses non mortelles,
provoque, non pas la fièvre, mais tout à fait comme dans les
cas précédents, un état somnolent et le coma succédant à une
élévation minime de la température. Ainsi donc les expériences
directes nous démontrent que ni l’action fermentative des bac-
téries, ni les ptomaïnes qu'elles produisent, n'expliquent l’ap-
parition de la fièvre.

Done, si la fièvre ne dépend pas directement des bactéries,
elle ne peut apparaître que comme une réaction de l'organisme
contre leur présence. En quoi consiste donc ce rôle actif de l’or-
ganisme ?

RER MODE DE RÉACTION DE L'ORGANISME FÉBRICITANT.

La réponse à cette question nous est donnée par l’examen
direct des organes des animaux fébricitants.

Il esi facile de s'assurer tout d’abord que, dans le charbon,
les animaux mis à mort pendant que leur température est élevée,
présentent une hyperémie des organes intérieurs, c'est-à-dire
des reins, du foie, de la moelle des os et de la rate. Celle-ci
peut subir un accroissement énorme de volume, et changer sa
couleur rose en cramoisi foncé, quand elle est hyperémiée.
Que celte hyperémie des organes internes soit due à des phéno-
mènes de réaction, et ne soit pas provoquée par les influences
chimiques ou mécaniques des bactéries, c’est ce que prouvent
les expériences précitées, dans lesquelles, quand la virulence
des bactéries devient plus grande. on voit disparaître non seule-
ment la fièvre, mais aussi le gonflement de la rate.

Il est à remarquer que ce gontlement réactionnel de la rate
qui accompagne la fièvre n’est pas une propriété exclusive du

1. Die Natur des Milzhrandgiftes, 1836, 7

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE. 239

charbon virulent chez le lapin : on peut l’observer en inoculant
le virus fort aux autres animaux sujets au charbon, ainsi qu'aux
animaux réfractaires; je lai trouvé aussi expérimentalemeni
avec les vaccins charbonneux. Enfin, il s’observe aussi pen-
dant l'acmé de la fièvre dans d’autres infections mortelles, telles
que la pneumonie, la tuberculose, le rouget; il est accompagné
d'un accroissement de température dans les cas d'infection avec
des bactéries inoffensives, par exemple avec les bac. subtilis,
megaterium et prodigiosus, de mème que dans les cas d'infections
avec des cultures stérilisées de bac. mallei, tuberculosis el prodi-
giosus. Elle se manifeste aussi pendant l’accroissement de tem-
pérature qui suit chez les lapins l’injection dans les veines de
sang de pigeon et de lait stérilisé.

Non seulement ce gonflement et cette hyperémie de la rate
accompagnent l'élévation de la température, mais même ils la
précèdent,

Ainsi le premier vaccin charbonneux provoque, quand on
en injecte 50 €. c. dans le sang du lapin, une élévation de tem-
pérature qui a lieu après 6 à 7 heures. Ainsi :

ExpÉRIENCE XIL — Le 6 novembre, à 10 h. m., le premier vaccin a été
inoculé à deux lapins.

A midi la température est 3% et 3903

LAON te EE PR RAA 40°5
AA ERNANE DR NCAA 4495
2 QE D FO EE ARR A 28920 Gi LA

Tandis que l’hyperémie de la rate survient déjà après deux
heures, comme dans le cas suivant.

Expérience XII — 12 décembre. Premier vaccin inoculé à un lapin à la
température 38°9. Deux heures plus tard, elle monta à 3995. On sacrifie
l'animal. Rate agrandie, eramoisie: hyperémie de la couche corticale du
rein.

La signification de ces changements dans la distribution du
sang est fournie par l'examen microscopique des organes pris à
l’'acmé de la fièvre. On reconnait alors que pendant la fièvre a
lieu une lutte active avec les bactéries, lutte dont il est facile de
suivre toutes les phases avec le Bac. anthracis que sa grandeur
rend très commode pour cette étude.

La bactéridie charbonneuse subit dans les organes intérieurs,

236 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

et principalement dans la moelle des os et dans la rate gonflée
des animaux fébricitants, des changements morphologiques con-
sidérables, qui se font dans les deux directions que voici :

Premièrement, il se produit un gonflement et une segmen-
tation des bactéries en petits articles courts qui s’arrondissent
en prenant la forme de coccus, pàlissent, et refusent ensuite de
se colorer par les couleurs alcalines d’aniline. Parfois la seg-
mentation va encore plus loin, et à la place des petits segments
il ne reste que de minces fragments, sous forme de tronçons
prismatiques conservant parfois leur groupement de bacilles.
Dans les coupes, on ne réussit presque jamais à donner à ces
fragments la coloration typique bactéridienne, de sorte qu'ils
ont l'aspect et la forme des grains de pigment. Ce phénomène
de désorganisation des bactéries correspond complètement à la
digestion intracellulaire indiquée par M. Æ. Metchnikoff et
confirmée depuis par d’autres auteurs (Pavloffsky, Hesse).

La seconde forme de l’influence de la rate fébrile sur les bac-
téries est la suivante. Les bactéries conservent leur aspect de
baguettes à bouts nettement tranchés, elles se rétrécissent cepen-
dant en dimensions, s’amincissent, se raccourcissent de sorte que
leur grandeur peut se réduire notablement. J'ai nommé afténua-
tion celte transformation des bactéries, puisqu'elle est parfaite-
ment analogue à la formation des vaccins du charbon, qui sont
plus minces que les formes virulentes et qui s’obtiennent par un
développement des bactéries dans des conditions chimiques défa-
vorables. Dans ces deux cas de défiguration bactéridienne, on
remarque quelquefois, autour des bactéries déformées, de grands
sacs les enveloppant coume le fourreau d'un sabre. J’ai réussi à
reproduire ces formes en soumettant les bactéridies à l'influence
du suc gastrique naturel ou artificiel ‘.

Ainsi nous voyons que dans la période fébrile, dès le début
du mal, ilse fait dans les organes intérieurs et principalement
dans la rate hyperémiée, une déformation et une atténuation
des bactéries. Je veux citer à ce sujet quelques expériences.

ExPÉRIENCE XIV. — Le 6 novembre, à 9 h. m., une culture de charbon
a'été injectée, en vol. de 4%, à trois lapins. Chez le premier d’entre eux,

4. J'ai reproduit aussi toutes les formes décrites au moyen d'une substance
formée par l’organisme vacciné contre le charbon. Je reviendrai prochainement
sur ce fait.

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE. 237

la température ordinaire de 39°7 monte 5 heures plus tard jusqu'à 40c4. L'ani-
mal est sacrifié; la rate est hyperémiée et grossie; une investigation mi-
croscopique révèle un grand nombre de formes digérées ou atténuées. Les
bacilles intacts ne se retrouvent que dans les reins.

ExPÉRIENCE XV, — Un autre lapin présente le lendemain matin, 26 heures
après l'inoculation, une température de 4092. IL est tué; les organes inté-
rieurs et surtout la rate sont hypérémiés. Dans la rate, on retrouve toutes
les formes possibles de désorganisation et d'atténuation des bactéries char-
bonneuses. Ces mêmes formes se retrouvent aussi dans les autres organes
intérieurs, de même que dans les muscles, l'œdème sous-cutané, les intes-
tins, etc.

EXPÉRIENCE XVI. — Le 10 décembre, à 9 h. m., on injecte du sang d'un
lapin mort du charbon, dans la circulation générale de deux lapins. Un
lapin noir recoit 8ce; un lapin blane 4°,

A { h.la température du lapin noir est de 40°3; du blanc : 3909.
À 4 h. la température du lapin noir est de 41°2; du blanc : 398.

Le noir est tué à 4 h. On lui trouve la rate très agrandie e{ cramoisie,
le foie et les reins hyperémiés.

Une investigation microscopique révèle, dans la rate, les formes les
plus diverses atténuées ou détruites; on les trouve aussi dans le foie, les
poumons, les reins et l'urine.

Une culture du sang et du foie donna, en même temps que des colonies
de bactéries très virulentes, d'autres colonies des formes atténuées (minces
baguettes à bouts arrondis) qui se reproduisirent avec les mêmes caractères
dans des cultures ultérieures.

Le second des lapins inoculés le 10 décembre fébricitait le lendemain, et
succomba vers le soir au charbon.

Mais je ne veux pas énumérer en détail toutes mesexpériences :
je me contente d'indiquer à grands traits leurs résultats com-
muns.

Cette destruction des bactéries charbonneuses s'observe
pendant la fièvre, non seulement après l'infection des lapins par
le sang, mais encore après l'inoculation sous-cutanée. Elle à
lieu aussi dans les cas d'infection des moutons par le charbon.
Et puisqu'on l’observe chez des animaux excessivement suscep-
tibles comme lapins et moutons, elle doit d'autant plus se mani-
fester chez des animaux plus résistants.

En effet, j'ai trouvé les deux genres de déformation des
bacilles aussi bien chez les animaux peu susceptibles au charbon,
comme le pigeon et le rat blanc, que chez les réfractaires.
comme le chien, la poule et le lapin (au moins, pour ce dernier

238 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. Ù

animal, avec le premier vaccin, vis-à-vis duquel le lapin peut
être considéré comme un animal réfractaire).

Il faut ajouter que cette destruction des bactéries n'est nul-
lement bornée à la rate. Je l’ai aussi observée sous la peau à
l'endroit de l’inoculation, ainsi que dans les glandes lyÿmpha-
tiques et la moelle. Je citerai seulement l'exemple suivant :

EXPÉRIENCE XVI — Le 26 février, à 6 h. s., un lapin est inoculé avec
une émulsion du sang du cœur d'un lapin mort du charbon. Vers 8 h.
du matin, le lendemain, le lapin était mort. Daus la moelle du fémur
prise peu de temps après sa mort, on trouve avee des bactéries saines,
intactes, les deux formes de leur décomposition, et une culture sur plaque,

faite avec ce tissu. donna aussi bien des formes saines du charbon que des
formes affaiblies.

Donc, chez tous les animaux, les bactéries charbonneuses
subissent pendant la fièvre les deux genres de déformation
décrits, les menant à leur destruction. Quant à la détermination
du lieu précis de ces procès de destruction, je ne puis que con-
firmer les observations de M. Metchnikoff qui trouva que les
macrophages de la rate ont, même chez les animaux susceptibles,
la faculté de dévorer et de digérer les bactéries.

C’est ainsi que dans toutes mes expériences avec la rate, j'ob-
servai de mon côté une décomposition des bactéries dans les
cellules de la pulpe de la rate, munies d’un seul gros noyau
arrondi. Avec ces cellules il est possible de poursuivre sur
des coupes toutes les phases de la digestion des bactéridies, en
commençant par les baguettes grosses et saines, et finissant par
des fragments prismatiques ou en boulettes. On voit aussi qu'une
baguette normale cernée par la cellule donne un rejeton mince
et raccourci.

Il devient donc évident que la fièvre charbonneuse s’accom-
pagne d'une destruction des bactéridies. Chez des animaux
réfractaires, tels que rat, poule, pigeon, chien, cette destruc-
tion mène à un triomphe complet de l'animal. Quand le mal
est provoqué par un virus charbonneux atténué, tel que le pre-
mier et le second vaccin de Pasteur avec les lapins et les moutons,
cette destruction amène aussi la guérison, et en outre, elle
procure l’immunité par rapport au virus mortel. Au contraire
dans les cas aboutissant à la mort, ies macrophages ne réus-
sissent pas à détruire toutes les bactéries nouvellement nées

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE, 239

qui, peu à peu, infectent l’organisme de leurs plomaïnes,
abaisseni la température et tuent.

Donc, l'élévation fébrile de la température s'accompagne,
pour le charbon chez tous les animaux, d'une activité des macro-
phages digérant les bactéries.

Il est naturel de se demander maintenant si cette corrélation
entre la destruction des bactéries et la fièvre est générale, et si
elle se laisse observer également aussi dans d’autres maladies
infectieuses ?

Mes expériences avec les diverses bactéries pathogènes et
inoffensives. vivantes et mortes, me conduisent à répondre à
cette question par l’affirmative. Dans tous les cas, à l’acmé de
la fièvre, j'ai vu les bactéries introduites dans l'organisme,
encore vivantes ou déjà détruites dans les macrophages.
D'autre part je n’ai pu trouver de connexité entre la fièvre et l’acti-
vité d’autres cellules, par exemple les leucocytes polynucléaires.

EXPÉRIENCE X VII. — Ainsi, le 6 décembre, à 9 h. m., on injecte 50 & de
vaccin charbonneux dans le sang d’un lapin, qui est tué 2 heures plus tard
avec une température de 3905, La rate, très agrandie, de couleur cramoisi
foncé, ainsi que le foie, contiennent un grand nombre de bacilles au dedans
des leucocytes polynueléaires,

ExPERIENCE XIX. — Le 11 décembre, à 9h. m., on injecte à deux lapins
4% de culture tubereuleuse dans le sang. Le premier présente à 9 h. m.
une température de 3993; à 10 h. : 40°. Sacrifié. Rate et reins hyperémiés,
Dans le sang du cœur et principalement celui du foie, les bacilles tuber-
culeux se trouvent en dedans des leucocytes. La rate en contient beaucoup
moins.

EXPÉRIENCE XX. — Le second lapin: 9 h. m. T—39°3

40h) ns
11 h. | =
{2%h;: 46°2
1e he 40°6
4h: 4028

On le tue à ce moment. Rate hyperémiée dans laquelle les leucocytes,
avec les bacilles tuberculeux, se trouvent dans les macrophages.

Donc on a le droit de penser qu’il existe une relation entre
l'élévation de la température et la destruction des bactéries
dans les macrophages. Le phénomène pathologique de la fièvre
dans les maladies infectieuses se laisse donc considérer comme

240 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.
l'ensemble des changements dans les appareils de la circulation

ainsi que dans les systèmes glandulaires, à l'aide desquels s'opère la
destruction et l'élimination des bactéries.

MÉCANISME DE L'ÉLÉVATION DE LA TEMPÉRATURE.

Nous avons jusqu'à présent laissé tout à fait de côté l'étude
des causes plus intimes de l'élévation de la température. Et, en
premier lieu, qu'est-ce qui apparaît d’abord, la destruction des
bactéries ou l'élévation de la température ?

Afin de résoudre ce problème, j'ai eu recours à une maladie
typique des moutons, accompagnée d’une forte fièvre et ne
menant jamais à la mort. C’est la fièvre vaccinale charbonneuse,
donnée par le premier ainsi que par le second vaccin; elle
apparaît le surlendemain de l’inoculation, dépasse parfois à son
acmé 41°, et ne dure ordinairement pas plus de 24 heures.
L'examen des organes intérieurs de ces moutons vaccinés et
sacrifiés à différentes périodes de la fièvre vaccinale, montre qu'il
se passe ici, de même, un phénomène extrémement accentué
de destruction des bactéries.

EXPÉRIENCE XXI. — Le 12 août, on inocule à un mouton le second
vaccin :
Le 12 la température est de 393 le matin. de 3994 le soir
De MAS CES ce NE Cr LEE Da rem es vi0P AIG SDIE
Meta US EL 4 40007 40° le soir

On sacrifie l'animal. Foie et reins fortement hyperémiés, rate hyperé-
miée. Celle-ci ne contient pas de bactéries, tandis que dans le foie et sur-
tout dans les reins on retrouve beaucoup de bactéries détruites. Le foie et
les reins servent à l’inoculation de lapins qui restent vivants ‘.

EXPÉRIENCE XXI. — Le 12 octobre, on sacrifie un mouton pendant
l'abaissement de température qui a suivi la fièvre provoquée par le second
vaccin inoculé le 10 octobre. Reins et rate hyperémiés. Tous les organes,
mais principalement le foieet les reins, sont remplis de bactéridies charbon-
neuses détruites. Avec tous les organes on f&it des ensemencements dans
des milieux nutritifs qui sont restés tous stériles.

ExPÉRIENCE XXIIT. — Le 14 octobre, à midi, un mouton est vacciné du
deuxième vaccin. Le lendemain, à 7 h. m., sa température est de 4191, et
à 9 h. de 4192. On le tue.

Là rate est fortement hyperémiée. Les reins de même dans la couche

4 Notre race de lapins ne résiste jamais à l'inoculation par le deuxième vaccin.

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE. 241

corticale. Les reins et les poumons présentent une masse de bactéries char-
bonneuses détruites, les autres organes en contiennent peu. Pas un seul de
ces organes n'a donné de culture, Une émulsion des poumons fut injectée à
une souris qui resta vivant(e.

ExPÉRIENCE XXIV. — Le 93 octobre, on sacrifie un mouton inoculé le 14:
la température des cinq derniers jours était normale. Dans le foie et les
reins on trouva une quantité de bactéries charbonneuses déformées en
coceus. La culture n’a été possible avec aucun des organes,

EXPÉRIENCE XXV. — Le 11 octobre, un mouton, inoculé la veille par le
second vaccin, est mis à mort pendant l'élévation de la température à 4401,
La rate est agrandie et hyperémiée, les reins hyperémiés, Dans la rate, on
trouva une masse de bactéries charbonneuses déformées. Dans le sang du
cœur on en trouve d’intactes. Pourtant un lapin, infecté avec le sang, resta
vivant.

EXPERIENCE XX VI — Le 30 octobre, le matin, on sacrifie un mouton
inoculé la veille au soir. La température reste encore normale. Dans tous
les organes, et surtout dans la rate, on trouve en grandes quantités des
bactéridies normales et toutes sortes de formes de leur destruction. Des
émulsions du foie et de la rate sont inoculées à deux lapins, qui restent
vivants. Dans des cultures ensemencées avec la rate et le foie poussèrent les
bacilles du second vaccin. Avec les reins, rien.

EXPÉRIENCE XXVII. — Le 2 novembre, à 9 h. s., le second vaccin est
inoculé à une brebis, Le lendemain matin, à 7 h., la température est de
39°4, et à 9 h. de 40%. On sacrifie l'animal. Dans la rate, le foie et les
museles, J'ai trouvé beaucoup de bacilles intacts et en voie de démembre-
ment; dans les reins, il y en avait beaucoup moins.

Le sens général de ces expérinces est évident. Dans la
période de l’abaissement de la température, les bactéries détrui-
tes se trouvent principalement dans les reins ; la rate n’en con-
tient pas. Pendant l’acmé, on peut observer dans la rate les diffé-
rentes phases de destruction des bactéries du deuxième vaccin.
Les ensemencements restent pourtant inféconds. Dans la période
enfin où la température monte, les bactéries intactes, donnant
des cultures, existent déjà dans la rate, le sang du cœur, et d’au-
tres organes intérieurs. Outre cela il y a déjà dans la rate les
différentes phases de leur décomposition.

J'ai des expériences toutes pareilles faites avec le premier
vacein sur des moutons frais, et avec du virus fort chez des mou-
tons partiellement réfractaires. Dans tous ces cas le phénomène
de la destruction des bactéries apparaît comme complètement
terminé vers l'époque de l’abaissement dé la température etmême

249 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

déjà pendant l’acmé ; et au contraire ce phénomène est en pleine
marche pendant la période de l'élévation de la température.

Ainsi, me fondant sur les expériences avec les vaccins char-
bouneux ‘, je crois pouvoir conclure que l'élévation de la tempé-
rature fait suite à l’activité des macrophages et à la destruction
des bactéries, et ne se présente donc que comme un phénomène
secondaire.

Cette conclusion résultait déjà des relations observées entre
la température et l’état de la rate fébrile, dont l'hyperémie,
ainsi que celle d’autres organes intérieurs, précède l'élévation de
la lempérature, ce qui revient à dire que le fonctionnement des
macrophages devance la fièvre.

Tirons maintenant les conclusions. La période fébrile des
maladies infectieuses accompagne la destruction des bactéries
dans l'organisme fébricitant, c’est ce que prouvent denombreuses
expériences pour le charbon. et c’est ce qui a été trouvé aussi
pour la pneumonie et autres infections. Le procès fébrile n’est
donc pas le résultat de l’action des bactéries ; 1l traduit, au con-
traire, une réaction de l'organisme contre leur présence, et
consiste en leur destruction et leur éloignement.

ILE. -— RELATION ENTRE L'ACTIVITÉ DES MACROPHAGES ET L ÉLÉVATION
ULTÉRIEURE DE LA TEMPÉRATURE.

Ici se présente la question : quelle sorte de connexité
existe-t-il entre ces deux phénomènes, l'activité des macro-
phages et l'élévation de la température qui le suit?

Peut-on admettre entre eux un lien purement physique
et expliquer l'excédent thermique par l’afflux plus rapide du sang
dans les organes intérieurs?

Il faut répondre non à cette question. L’assimilation par les
macrophages de 50 c.c. de lait introduit dans les veines, ce qui
équivaut à la moitié de la quantité du sang de l'animal, ne
porte point la température du lapin à 41°; une digestion par
les macrophages de 50 c.c. de culture du premier vaccin ne
fait monter la température à 41l°5 que pendant deux heures
tout au plus ; tandis que 2 c.c. de culture stérilisée du bac. pro-

1. Les résultats concernant l'acquisition de l’immunité fercnt l'objet d'un autre
article.

DESTRUCTION DES MICROBES DANS LA FIÈVRE. 243

digiosus provoque pendant 8 à 10 heures de suite une tempéra-
ture de 41°. Évidemment, l'intensité de la fièvre est en rapport
avec la composition chimique des substances à digérer. Ilse peut
que pendant cette digestion, quoiqu'elle soit intracellulaire, il
s'élimine, quand mème, au dehors des cellules, une diastase
produisant une destruction des matières organiques, et par
conséquent, un élèvement de température.

En faveur de cette dernière idée, je peux citer plusieurs
expériences. Dans la rate de différents animaux sacrifiés pen-
dant la fièvre, j'ai pu trouver une substance qui, injectée dans le
sang des lapins, leur donnait un considérable et typique élève-
ment de température.

On procédait de la manière suivante : on versail sur la rate
fraichement hachée de l'alcool absolu qu'on séparait après
2 heures par simple filtration : le résidu était alors pulvérisé et
mélangé avec de l’eau. Cette masse était filtrée sur le filtre
Chamberland, et ce liquide filtré injecté dans la veine de l'oreille
de lapins en quantité de 4 c.c.

Voici quelques expériences :

EXPÉRIENCE XX VII. — Le 27 février, à 6 h. s., on injecte ns la veine
de l'oreille d'un lapin 4° du liquide obtenu par filtration de la rate d'un
mouton sacrifié après l'infection par le deuxième vaccin.

Avant lPNIeCton Can NS ER UREMe T—=3908

Après l'injection, à 6 h. 30° . . . . .. 10
— _ AAA NES 7 0e 4107
— — à 8 h. MNT 2007

ExpERIENCE XXIX, — Le 98 février, un autre lapin recoit la même dose
du même liquide à 3 h. de l'après-midi.

Avant l'injection, 81 3h us ep h=:5 Ja

Après l'injection, à 3 h. 30° . . . . . . AA

—— — à 4 h. + ANS AI

— — HR LE A FE 1005

_ — à 6 h. NES AE 1005
Expérience XXX. — Le 29 février, un autre lapin reçoit la même dose

du mème liquide, rendu alcalin par la potasse caustique

Avantiliniections a Jehe se. © T —3968
Après l'injection, à 2 h. 30’ AIS
— —- à 8h 4lo
® —Æ De AN ce 0 Ee 4197
= = EPA ne FM 1001

244 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ExPÉRIENCE XXXI. — Le 1% mars, un liquide filtré, préparé de la même
manière avec la rate d’un mouton infecté par le premier vaccin charbonneux.
est injecté en quantité de 4 dans la veine d’un lapin :

Avant'l'injechon; à 6 /h2s rte T = 39%
Après l'injection, à 6 h. 40 ,..... 4002
— — PRET eg LPS SRE A 4109
— — des A0 ET ER à 4007

On voit d'après ces expériences qu'on peut extraire des rates
une substance qui a une action pyrogène très prononcée. Nous
croyons intéressant de faire remarquer que cette action pyrogène
est immédiate : elle apparaît déjà 30 minutes après l'injection et
atteint son maximum au bout d'une heure. Avec cette subs-
tance on n’a pas cette période latente de 5-12-24 heures que l’on
voyait dans nos précédentes expériences avec l'infection bacté-
rienne. Cette période latente serait très bien expliquée par la
durée nécessaire à la multiplication des bactéries inoculées, à
l'hyperémie des organes intérieurs et au passage de la sub-
stance pyrogène dans le sang.

Nous laissons ouverte la question sur la nature de cette
substance qui pourrait ètre identique avec l'hystozyme que
M. Schmiedeberg * avait éludiée et à laquelle il a attribué la
désassimilation physiologique.

Ainsi, on peut envisager la fièvre infectieuse comme une
réaction organique contre l'invasion des microbes, où, par suite
de l’action digestive des macrophages, serait produite une sub-
stance pyrogène.

A ce point de vue, l’action des antipyrétiques qui agissent
non pas directement contre les microbes, mais contre la fièvre
en modifiant la répartition du courant sanguin, paraît extrème-
ment douteuse, vu que, détournant le sang des organes inté-
rieurs, ils ne peuvent que retarder le procès de la guérison.

D'un autre côté, le phénomène pathologique de la fièvre,
considéré comme une activité digestive des macrophages, serait,
au contraire, salutaire et même désirable, dans certains cas de
faible réaction contre les microbes. Cet ordre d'idées sera du
reste discuté dans un travail prochain.

1. Archiv. f. esp. Pathologie vu. Pharmacol. Bd XIIE.

ETUDE SUR LE DEVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL,

Par M. À. YERSIN.

FE:

Il n'y a pas de sujet sur lequel les anatomo-pathologistes se
soient plus exercés que sur la tuberculose. Avant que l’on ne
connüt son étiologie, on distinguait plusieurs maladies : scrofu-
lose, pneumonie caséeuse, lupus, coxalgie, etc., dont chacune
avait son anatomie pathologique et avait été l'objet de nombreux
travaux. Depuis, les découvertes de M. Villemin et surtout de
M. Koch ont permis d'attribuer ces diverses affections à une
seule et même cause, le bacille de la tuberculose, et des lors,
l'obscurité cesse, et la maladie est définie par sa cause même.

Aussi les travaux antérieurs, quel qu'ait été du reste leur
mérite, perdent un peu de leur importance; ce n’est pas que ceux
qui étaient bons aient cessé d’être bons, c’est que le point de vue
a changé. Il faut aujourd'hui refaire l'anatomie pathologique de
la tuberculose en prenant pour élément essentiel le bacille. Com-
ment pénètre-t-il dans les tissus? Comment autour de lui se déve-
loppe le tubercule? Par quel mécanisme se produisent la maladie
et la mort?

Ainsi envisagée, l'anatomie pathologique prend un intérêt
tout particulier, Il ne suffit plus d'étudier les lésions sur ie
cadavre : il faut, pour bien suivre toutes les phases de la maladie,
associer la pathologie expérimentale à l’ancienne anatomie
pathologique.

M. Koch, le premier, est entré dans cette voie, et dans son
beau mémoire Die Aetioloqie der Tuberkulose ‘ , nous a donné
une description du tubercule et de ses rapports avec les bacilles.
Pour lui, un bacille qui pénètre dans l'organisme est bientôt

{. Mittheilungen ans dem kaiserlichen Gesundheitsamte, vol. IL.
16

946 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

englobé par une cellule migratrice ; celle-ci le transporte dans
un organe, dans un ganglion par exemple. Le bacille prolifère,
et sous l’action d’une substance chimique qu’il sécrète, la cel-
lule migratrice prend un aspect spécial qui lui a fait donner le
nom de cellule épithéhoïde. Le tubercule est formé par un groupe
de ces cellules épithélioïdes. Les cellules géantes ne sont que des
cellules épithélioïdes dont le noyau seul s’est multiplié. La caséi-
fication du tubercule résulte d’une nécrose des cellules; elle a
lieu du centre à la périphérie, et est accompagnée d’une dimi-
nution dans le nombre des bacilles.

M. Baumgarten ‘, peu après, publia à son tour un important
travail sur le mode de développement du tubercule. Il employa
le procédé élégant de l’inoculation dans la chambre antérieure
de l'œil du lapin. Il sacrifiait ses animaux à des époques variables,
et il a pu ainsi observer des faits très intéressants.

M. Baumgarten relègue tout à fait au deuxième plan l’action
des leucocytes dans la formation du tubercule, et par contre,
il fait jouer aux cellules fixes du tissu un rôle prépondérant.

En résumé, voici comment il décrit la formation du tubercule.

On inocule dans la chambre antérieure de l'œil du lapin un
fragment d’organe tuberculeux. La cicatrisation de la plaie se fait
rapidement sans amener aucune réaction. Pendant les 3 ou 4pre-
miers jours, les bacilles prolifèrent silencieusement dans le
fragment d’organe lui-même; puis, dès le cinquième jour, ils
commencent à s'étendre dans le Lissu avoisinant immédiatement
leur premier point de culture. On les voit, soit libres entre lés
fibrilles connectives, soit contenus dans l’intérieur des cellules
fixes du issu conjonctif, jamais dans les leucocytes. Dès le 6° jour,
on observe qu'un certain nombre de cellules fixes du Ussu con-
jonctif sont en voie de division indirecte. Le plus souvent, ces
cellules contiennent de un à trois bacilles; elles prennent un
aspect épithélioïde; ce sont elles et non pas des cellules migra-
trices qui vont former le jeune tubercule. Plus tard, lorsque les
bacilles sont devenus très nombreux, les figures karyokinétiques
deviennent de plus en plus rares. On voit alors dans le centre du
tubercule les cellules épithélioïdes grossir de plus en plus, et
leur noyau se multiplier sans division du protoplasma cellulaire ;

1. Ueber Tuberke! und Tuberkulose. Zeitschr, f. klin. Med., Bd. IX et X, 1885.

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 247

ainsi se forment les cellules géantes. Dès le 10° jour seulement,
on observe une dilatation des vaisseaux qui entourent le tuber-
cule, et une émigration de leucocytes qui viennent se mêler aux
cellules épithélioïdes. La caséification résulte de la désagrégation
des cellules et commence au centre du tubercule.

M. Baumgarten, en étudiant la tuberculose pulmonaire,
ganglionnaire, hépatique, splénique, intestinale, rénale, arrive
toujours au même résultat : le tubercule est formé par la multi-
plication karyokinétique des éléments épithéliaux, de l’endo-
thélium des vaisseaux, des cellules hépatiques, spléniques, et
des éléments fixes du tissu conjonctif. Le rôle joué par les leuco-
cytes reste toujours très secondaire. L'auteur fait cependant
remarquer que dans les formes de tuberculose à marche très
rapide, l’infiltration lymphoïde du tubercule a lieu beaucoup
plus vite que dans les formes chroniques.

Les travaux qui ont été faits dans ces derniers temps sur
l'anatomie pathologique de la tuberculose sont si nombreux que
nous renonçons à les citer. Aussi bien, pour la plupart, ne se
rapportent-ils pas à notre sujet, qui est étroitement limité à
l'étude du développement d’un tubercule expérimental.

Dernièrement, M. le professeur Cornil a fait à ce sujet une
intéressante lecon à la Faculté de médecine ‘.

Il avait inoculé dans les veines d'un lapin une culture pure
de bacilles de la tuberculose, et avait sacrifié l'animal au bout
de huit jours.

A l’autopsie, on voyait déjà une hypertrophie considérable
du foie et de la rate, mais aucune granulation n'était encore
visible à l’œil nu. Dans les coupes du foie, on trouvait les petites
veines altérées, thrombosées par places, et contenant dans la
partie thrombosée et dilatée une quantité énorme de bacilles,
avec des globules blancs accumulés, et une cellule géante déjà
formée dans le milieu du jeune tuereule. Dans les vaisseaux
mêmes, on observait de nombreux éléments lymphatiques en
karyokinèse, une inflammation de l’endothélium vasculaire et
du tissu hépatique avoisinant. Dans ces mêmes expériences, la
rate est devenue, comme le foie, le siège d'une accumulation
considérable de bacilles de la tuberculose dans ses vaisseaux.

1. Elle a été publiée dans le Journal des connaissances médicales, 1888, n°$ 4, 5, 6,

248 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

On en trouve en particulier des amas dans les veines de la pulpe,
soit libres, soit contenus dans les cellules lymphatiques. Au
milieu de ces veines, il existe, comme dans celles du foie, des
oblitérations vasculaires causées par de la fibrine, des cellules
lymphatiques et des cellules géantes.

Pour M. Cornil, les cellules géantes semblent débuter dans
ces vaisseaux « par des accumulalions d’une substance granu-
leuse ou réfringente qui se fond avec les cellules lymphatiques
voisines, ou bien par Îa prolifération par karyokinèse des
cellules lymphatiques. On trouve souvent en effet dans la rate
des cellules intravasculaires présentant les figures de la
karyokinèse ».

Si l’on suit la marche ultérieure de la tuberculose expéri-
mentale de M. Cornil, on trouve que les tubercules deviennent
visibles au bout de 15 jours. et apparaissent alors comme un fin
semis blanchätre des organes. « Les nodules tuberculeux sont
formés ; au centre sont les cellules géantes, à leur périphérie une
zone d'éléments embryonnaires provenant des globules blancs
extravasés el des cellules conjonctives ou hépatiques proliférées ;
les parois des vaisseaux qui étaient primilivement le siège de
cette lésion ne sont plus reconnaissables, car ils ont été entourés
d’une zone proliférante formée par le tissu voisin. Les lésions
s’accentuent et se généralisent rapidement, et au bout d’un mois
environ, les animaux meurent. »

Dans cette étude, nous nous bornerons à étudier le dévelop-
pement de cette forme curieuse de tuberculose que l’on obtient en
injectaut daus les veines de lapins une certaine quantité d’une
culture du bacille de la tuberculose, faite sur un milieu glycé-
riné, d’après la méthode de MM. Roux et Nocard. Cette forme
de tuberculose diffère considérablement de la forme ordinaire si
bien décrite par MM. Koch, Baumgarten et Cornil; aussi on
ne sera pas élonné si, sur plus d’un point, nous paraissons en
désaccord avec ces savants, ce qui s'explique peut-être par
une différence dans la virulence des cultures que nous avons

employées.

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 249

i12

Lorsqu'on inocule à des lapins, par injection intraveineuse,
de une à 10 gouttes d’une culture de tuberculose dans le milieu
glycériné ‘,les animaux succombentrapidement avec des lésions
caractéristiques.

La durée moyenne de la maladie est (pour une série de
32 lapins) de 17 à 18 jours. Les limites extrèmes auxquelles on
a observé la mort ont été le 12 et le 27° jour.

Les animaux ont constamment maigri, jusqu’à perdre le quart
ou le tiers de leur poids. Cet amaigrissement est surtout marqué
pendant les derniers jours, où les animaux restent couchés,
tristes et refusant toute nourriture.

La température des lapins subit une élévation notable dès la
fin de la première semaine, et monte rapidement pendant les
derniers jours.

La mort arrive à la suite d'une faiblesse croissante. Elle est
plus hâtive lorsque la température extérieure est basse.

A l’autopsie, on ne trouve comme lésions macroscopiques
qu'une rate très hypertrophiée, souvent énorme, et un gros foie.
Nulle part, aucun tubercule apparent. Quelquefois, on observe
de plus un peu de péritonite séro-fibrineuse, de la dégénéres-
cence graisseuse desmuseles adducteurs de la cuisse ; mais c’est
l'exception.

Nous donnons ci-joint l'histoire d’un lapin, qui, mort le
27° jour seulement, offrait à l’autopsie les lésions ordinaires
dans toute leur netteté.

Le 9 décembre 1886, on inocule dans les veines de 2 lapins, à
chacun 2/10 de centimètre cube d’une culture de tuberculose
dans bouillon glycériné.

Le lapin A pèse 2 kilog. 820. Le lapin B pèse 2 kilog. 485.

Le 29 décembre (20e jour), le lapin A meurt après avoir maigri
de 340 grammes, 1/8 de son poids.

Le 5 janvier 1887 (27° jour), le lapin B meurt. Il a maigri de
840 grammes, soit de 1/3 de son poids.

A l’autopsie de ce dernier, on trouve la paroi musculaire de

4. Culture sur sérum ou gélose glycérinés, diluée dans un peu d’eau, de façon à
ce que le liquide d'inoculation soit légèrement trouble. Nous avons aussi employé
des cultures dans le bouillon glycériné.

250 "ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

l'abdomen amincie. On voit par transparence la vessie dilatée
et remontant jusqu’au niveau de l’ombilic. Elle renferme une
urine acide avec de gros flocons de mucus. Il n’y a ni albumine
ni sucre. On n'y trouve également pas de bacilles sur des pré-
parations colorées. La surface du péritoine pariétal et viscéral
présente de petits dépôts fibrineux simulant des tubercules. 11 y
a de plus un peu de liquide trouble épanché dans le péritoine.
On fait des préparations colorées avec ce liquide, et on trouve
qu'il contient des bacilles en petit nombre, soit libres, soit dans
les cellules.

La paroi de la vessie et celle du gros intestin sont hypérémiées
et ecchymosées. De plus, la paroi de l'intestin est œdématiée.

La rate est rendue adhérente au bord inférieur du foie par
un dépôt fibrineux. Elle est molle, friable, très hypertrophiée. Ses
dimensions sont de : 10, 5 centimètres en longueur ; 2,5 centi-
mètres en largeur. Elle pèse 12 grammes”. Des préparations colo-
rées faites avec sa pulpe montrent une quantité énorme de bacilles
soit libres, soit surtout dans les cellules.

L’aorte abdominale, la veine cave inférieure ont leurs parois
œædématiées. Les veines mésentériques sont dilatées; la veine
rénale, en particulier, l’est extraordinairement : elle est grosse
comme un tuyau de plume.

Les reins sont jaunâtres, pâles.

Le foie est gros, brunâtre. Son tissu est ferme.

Les poumons, de couleur rosée, paraissentparfaitement sains.

Les muscles adducteurs des cuisses ont une couleur blan-
châtre et présentent une striation dans la direction des fibres.
A l’examen histologique, on constate qu’ils présentent un haut
degré de dégénérescence graisseuse *.

Les autres muscles paraissent normaux.

En ouvrant le crâne et les vertèbres, on remarque que la
substance osseuse est très fragile, friable, comme raréfiée. Des
préparations colorées faites avec la substance médullaire des ver-
tèbres montrent une grande quantité de bacilles disposés comme
dans la rate.

Les os longs présentent les mêmes particularités : ils sont

1. Une rate ordinaire de lapin pèse 1 gramme.
2. Pendant les 8 derniers jours de sa vie, le lapin présentait une curieuse atti-
tude, ne pouvant plus rapprocher ses cuisses l’une de l’autre.

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 9251
friables, leur moelle est congestionnée et contient beaucoup de
bacilles. |

Les ganglions lymphatiques, bien que de volume normal,
renferment des cellules remplies de bacilles.

Dans le sang, il n'y en a pas, ou tout au moins nous n’en
avons pas trouvé en faisant plusieurs préparations.

On n’en trouve pas non plus dans la substance nerveuse de la
moelle épinière.

EH:

Nous avons fait des coupes des organes de ce lapin (rate, foie.
poumons, reins) et nous avons coloré les bacilles en violet par
le violet de gentiane, et le tissu en rouge et jaune au moyen du
picrocarmin de Orth.

Rate. — La rate, examinée à un faible grossissement (70 dia-
mètres), présente déjà des altérations très apparentes. Les corpus-
cules de Malpighi sont’heaucoup plus écartés entre eux qu'ils ne
le sont normalement; ils sont infiltrés et présentent une hyper-
trophie, plus apparente que réelle, et provenant de la dissémi-
nation de leurs éléments. Leurs limites sont mal tranchées. Dans
leur intérieur, on remarque de nombreux nodules hyalins. La
pulpe splénique, elle-mème, a un aspect délayé, infiltré, à cause
de la présence d’une très grande quantité de petits nodules hyalins
qui sont placés entre les éléments lymphatiques. Les trabécules
connectifs sont visibles, mais paraissaientamincis, comme étirés.

A un plus fort grossissement (300 diamètres), on constate
que les nodules hyalins observés dans les corpuscules de Malpi-
ghi et dans la substance splénique sont formés par des cellules
épithélioïdes avec un ou plusieurs noyaux. Elles paraissent con-
tenir de nombreux bacilles. Ces nodules sont très serrés, si ser-
rés que leurs limites en deviennent peu nettes. Ce sont les jeunes
tubercules. Les trabécules connectives sont comme dissociées ;
leurs noyaux ne se colorent plus bien. (PI. VI, fig. 18.)

A'un fort grossissement (Immersion + — 500 diamètres), il
devient difficile de bien différencier les nodules tuberculeux dans
la pulpe splénique, tant ils sont serrés les uns contre les autres.
Les bacilles sont contenus en grand nombre dans les leucocytes
et les cellules géantes; ils sont souvent disposés dans ces der-
nières comme les rayons d'une roue. On trouve également des

202 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR,

bacilles libres peu nombreux. Ün certain nombre de cellules
géantes paraissent ne pas contenir de bacilles. Nous n’en avons
vu aucuu dans les trabécules connectives. (PI. VI, fig. 19.)

Foie. — Le foie, comme la rate, paraît, à un grossissement de
70 diamètres, infiltré par une masse énorme de petits nodules
arrondis ou de forme irrégulière qui sont assez uniformément dis-
séminés dans la substance hépatique. La structure de l'organe est
tellement altérée par cette sorte d'infiltration, que les lobules
hépatiques deviennent très difficiles à distinguer. Les gros vais-
seaux sont plus écartés entre eux que dans l'état normal, ce qui
s'explique facilement par l’hypertrophie du foie. On n'’observe
aucune formation nouvelle de tissu conjonctif dans les espaces
porte.

A 300 diamètres, les capillaires paraissent très dilatés. Par
places, ils sont obstrués par un gros nodule arrondi ou allongé,
cylindrique, formé par des cellulles épithélioïdes, des leucocytes
et des cellules géantes avec une masse énorme de bacilles. (PI. IV,
fig. 10.)

Avec l'immersion (7 — 500 diamètres) on constate que les
bacilles pullulent dans les nodules tuberculeux. Ils sont disposés
en colonies, soit librement dans la fibrine, soit dans les cellules
épithélioïdes, les leucocyteset les cellules géantes. (PI. IV, fig. 14.)

Dans les cellules hépatiques mêmes, il n'y à pas de bacilles.
Leurs noyaux se colorent bien et leur protoplasma paraît nor-
mal.

La délimitation des tubercules est en général assez nette. On
voit bien que par leur développement ils ont écarté les cellules
hépatiques en dissociant ainsi les lobules.

Les noyaux des capillaires sont partout très visibles et gon-
flés; on constate de plus la présence de beaucoup de leucocytes
libres dans les vaisseaux.

Les reins ne présentent aucune altération. Les glomérules
sont de grosseur normale ; l’épithélium des tubuli est conservé.
Il n’y a nulle part de nodules tuberculeux n1 de cellules migra-
trices. Il faut bien chercher pour trouver dans les capillaires de
quelques glomérules deux ou trois bacilles contenus dans l’in-
térieur d’un leucocyte.

Les poumons sont également normaux. Nulle part on ne note
d’exsudat : ni dans les alvéoles ni entre elles. Aucune desqua-

die
RQ
PTS ae

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 953
mation épithéliale. Cà et là, dans les fins capillaires, on voit un
leucocyte porteur d’un ou deux bacilles.

Dans un seul cas, sur 32 lapins inoculés dans les veines, nous
avons observé sur les poumons un semis de petites taches ecchy-
motiques qui, sur des coupes, paraissaient être de nombreux
tubercules à tous les stades de développement, depuis la simple
accumulation de leucocytes obstruant un capillaire dilaté, jus-
qu'au tubercule bien formé avec centre caséeux, cellules géantes
et épithélioïdes à la périphérie.

Nous avons choisi pour notre étude cette forme particulière
de tuberculose à cause de la régularité de son évolution : les
animaux meurent toujours en un temps relativement court et
avec les mêmes lésions. Il est donc facile de suivre pour ainsi
dire pas à pas toutes les phases de la maladie avec un nombre res-
treint d'animaux qu'on inocule la même jour, avec la même cul-
ture, et qui, pendant l’évolution de la maladie, restent toujours
à peu près comparables. Enfin l'injection intra-veineuse de cul-
tures pures nous met à l'abri de toute action microbienne secon-
daire, comme cela peut avoir lieu lorsqu'on expérimente par
exemple avec des crachats tuberculeux.

IV.

Dans le but de suivre jour par jour le développement des
lésions que nous venons de décrire, nous avons inoculé en une
fois une série de 9 lapins; puis, tous les 2 jours, nous avons
sacrifié un animal; le dernier, resté comme témoin, est mort
le 21° jour. -

La culture employée pour cette expérience avait pour origine
une tuberculose de veau inoculée à un cobaye, qui lui-même
était mort en 6 semaines avec d'énormes lésions tuberculeuses.
Avec la rate de ce cobaye, on avait ensemencé des tubes de
sérum glycériné. En 15 jours, le développement des colonies
était devenu manifeste. Deux lapins inoculés dans les veines
avec celte première cullure étaient morts au bout de 20 et
23 jours avec les lésions décrites ci-dessus, tandis que un lapin
inoculé dans les veines directement, avec la rate du cobaye,
mourut au bout de 41 jours avec une belle granulie de tous les
organes.

Nous avons fait des générations successives sur gélose glycé-

254 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

rinée avec cette première culture; celle que nous avons employée
pour notre série était une 6° génération ensemencée depuis un
mois.

Chaque lapin a reçu, dans une veine de l'oreille, un demi-
centimètre cube d'eau distillée dans laquelle on avait délayé une
petite quantité de la couche blanchâtre de bacilles qui s'était
développée sur la surface nutritive ensemencée. Chaque jour, on
a pris la température et le poids des animaux. et voici le résumé
de leurs histoires individuelles.

LAPIN A. — [L'inoculation des lapins ayant eu lieu le
6 décembre 1887, on en sacrifie un (A) par le chloroforme le
8 décembre, soit 2 jours après l'inoculation. Ses variations de
poids et de température sont inscrites dans le tableau ci-dessous.

La température et le poids sont restés normaux.

Les organes paraissent également sains. On fait des coupes
de la rate, du foie, des poumons et des reins.

La rate, à uu faible grossissement, ne présente rien à noter.
Les corpuscules de Malpighi sont bien limités; la pulpe splé-
nique est homogène. Les noyaux des tractus fibreux se colorent
bien. (PI. V, fig. 12.)

Avec un objectif à immersion, on aperçoit çà et là, entre
les cellules, jamais dans leur intérieur, un bacille isolé, quelque-
fois deux. Il est difficile de dire si ces bacilles sont contenus dans
les capillaires, à cause du peu de netteté de ces vaisseaux dans
la rate.

Mèmes remarques pour le foie. Ici, seulement, on constate

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 9255
très nettement que les rares bacilles que l’on rencontre sont bien
situés dans les capillaires. Il se sont arrètés en général très
près des espaces porte, et sont accolés à la paroi du capillaire
par un petit dépôt de fibrine. (PL. IE, fig. 2.)

Rien à noter dans le rein et le poumon.

LAPIN 8. — Le 10 décembre (5° jour) on sacrifie le lapin B.

Température et poids réguliers. (Fig. 2.)

Comme chez A, rien à noter à l’autopsie.

Les coupes des organes ne présentent à un faible grossisse-
ment aucune lésion apparente.

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BEF AÈNEE

BC SNBREER

.

A l’immersion, on constate dans la rate et dans le foie que
les bacilles sont en prolifération active. Dans les capillaires du
foie, en particulier, on les voit souvent former dans leur sup-
port de fibrine de petites colonies en croissant. (PI. IE, fig. 5.)
Nulle part on ne trouve de bacilles dans les leucocytes, ni
de leucocytes en excès dans les vaisseaux.

Lapin c. — Le 3° lapin est sacrifié le 12 décembre (T° jour).

Pas d’élévation de température (fig. 3), ce qui est une excep-
tion, car chez tous les autres lapins, on a noté un peu de fièvre
depuis le 5° jour. L'animal a un peu maigri.

Les organes ne présentent aucune lésion macroscopique
apparente.

A un faible grossissement, on ne voit rien encore d’anormal.

À l'immersion, les colonies et groupes de bacilles sont plus

256 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

denses et plus nombreux, mais n amènent toujours aucune réac-
tion apparente dans les tissus.

LAPIN D, — Le 4° lapin est sacrifié le 14 décembre (9° jour).
La température s’est élevée depuis le 6° jour; l’animal a
maigri. (Fig. 4.)

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Aucune lésion macroscopique à l’autopsie.

Les coupes colorées de la rate et du foie sont très instructives.

Dans la rate, à un faible grossissement, on aperçoit entre les
corpuscules de Malpighi, dans la pulpe splénique, de nombreux
petits groupes de cellules fortement colorées. (PI. V, fig. 13.)
A un fort grossissement, on constate tout d’abord que ces nodu-
les ne contiennent aucun bacille, mais qu'ils sont formés par des

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 257

cellules spléniques en prolifération active. On voit des figures de
karyokinèse parmi elles. (PI. V. fig. 14.)

Les bacilles forment des colonies de plus en plus nombreuses
el denses. Il est difficile de déterminer si autour de ces colonies
il y a ou non accumulation de leucocytes; on n’observe en tous
cas pas de cellules en division karyokinétique auprès d'elles. En
certains points, on voit des cellules migratrices renfermant un ou
plusieurs bacilles.

Dans le foie, on trouve, à un faible grossissement, de
nombreux petits nodules groupés surtout le long des espaces
porte, et qui paraissent formés par une accumulation de leu-
cocytes dans les fins capillaires; ceux-ci sont en ces points-là
dilatés en ampoule. Souvent au milieu du nodule on aperçoitun
espace plus clair. (PI. IL fig. 4.)

A l'immersion, on remarque de nombreuses cellules migra-
trices dans les capillaires, dont les parois sont enflammées, car
les noyaux deleur endothélium paraissent gonfléset ils se colorent
fortement. Elles sont arrondies, en croissant, en bâtonnets. On
en voit un grand nombre en division karyokinétique. Quelques-
unes sont remplies de bacilles et entourées d’une petite coque
fibrineuse à limites mal tranchées. (PI. IL fig. 5.)

En certains points, elles se sont accumulées autour des
colonies de bacilles, toujours dans leur support de fibrine. En
ces points-là, le capillaire est dilaté par ce petit nodule qui
formera le tubercule. Les bacilles qu'il contient sont en partie
libres, en partie dans les leucocytes. On peut parfois surprendre
un bacille pénétrant dans un leucocyte. La lutte est donc enga-
gée entre les microbes et les phagocytes de M. Metchnikoff.

Dans les coupes du rein et du poumon, il y a dans les vais-
seaux beaucoup de leucocytes, mais pas de bacilles.

Il est curieux de remarquer combien longtemps les bacilles
ont pu se multiplier librement sans causer aucune réaction appa-
rente du côté de l'organisme. Pendant 6 jours au moins, leurs
colonies se développent sans que l’on observe la moindre inflam-
mation autour d'elles. Il est probable, d’après cela, que la sub-
stance chimique qu’ils sécrètent est bien peu active ou peu
abondante avec ce mode d’inoculation.

Observons de plus que le processus tuberculeux semble
rester limité aux vaisseaux. Nulle part, nous n'avons pu trouver

258 ... ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de cellules hépatiques en karyokinèse ou en dégénérescence, et
cela chez tous les animaux de notre série.

Lapix E. — Le 5° lapin est sacrifié le 16 décembre (11° jour).

L'élévation de température a eu lieu dès le 7 jour, et l’ani-
mal a beaucoup maigri. (Fig. 5.)

À l’autopsie, on ne note rien d’anormal. La rate est petite;
elle pèse un gramme comme celle des quatre premiers lapins.

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Fig. 5.

Les coupes de la rate et du foie ne diflèrent guère de celles
du lapin précédent. On trouve cependant beaucoup moins de
bacilleslibres. Leplus grand nombre sont contenus dans les leuco-
cytes, où ils pullulent au point que l'on a souvent de la peine
à reconnaître la forme de la cellule qui les porte ‘. (PI. V, fig. 15.)
Ici donc, en adoptant l'interprétation de M. Metchnikoff, le
phagocyte sert de nourriture aux bacilles.

Lapix r. — Le 13e jour (18 décembre), on sacrifie un nou-
veau lapin.

La température a monté depuis le 7° jour, et l'animal a
perdu 200 grammes de son poids. (Fig. 6.)

A l’autopsie,on trouve que la rate commence manifestement
à s'hypertrophier. Elle pèse 2 grammes. Le foie paraît un peu
grossi. Il saigne moins à la coupe que chez les lapins précédents.
La moelle des os est un peu congestionnée.

1. On trouve également quelques bacilles dans les noyaux des cellules endo-
théliales des capillaires.

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 259

Dans les coupes de la rate, on voit toujours les petits nodules
de prolifération décrits plus haut, mais les tubercules com-
mencent aussi à se former. Ils sont encore très peu nets et ne
consistent guère que dans des groupes de cellules remplies de
bacilles avec un peu de fibrine entre elles. La prolifération des
bacilles dans les phagocytes a été telle en certains points qu'on
ne voit plus le phagocyte, et qu'il ne reste que la colonie de

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bacilles comme moulée sur son intérieur. Les cellules géantes
n’existent pas encore. On voit cependant çà et là, autour de ces
détritus de leucocytes dans lesquels les bacilles continuent à
pulluler, un certain nombre de nouveaux leucocytes qui se
groupent à la périphérie en demi-cercle ou en croissant, serrés
les uns contre les autres : c'est le commencement de la formation
des cellules géantes.

Dans le foie, ou a toujours des nodules tuberculeux formés
de leucocytes disposés en couches concentriques, et qui con-
tiennent pour la plupart des bacilles. Il est très intéressant de
noter qu'autour de ces leucocytes on voit la fibrine se rétracter,
en sorte que ceux-ci sont entourés d’une zone encore mal
limitée ressemblant au protoplasma d'une cellule épithéliale.
C'est là le début de la formation des cellules épithélioïdes qui
plus tard constitueront le tubercule. On voit toujours, cà et là
dans les capillaires, des cellules migratrices libres chargées de
bacilles.

Lapix 6, — Le 20 décembre (15° jour) on sacrifie le 7° lapin.

260 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Dans sa courbe de température (fig. 7) l'élévation du 5° jour
est peu nette, mais dès le 12° jour, on a une hausse rapide.
L'amaigrissement est peu considérable.

L'autopsie nous montre uneratehypertrophiée, de 3 grammes;
un foie d'une couleur plus brune que rouge, d’une consistance
ferme, et ne saignant presque plus à la coupe au moment où on
sacrifie l'animal.

Dans les coupes de la rate, les tubercules deviennent plus
nets quoique encore irès pelits ; ils sont constitués surtout par
des cellules épithélioïides qui se sont formées, ainsi que nous

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Fig. 7

venons de le décrire à propos du foie du lapin F, par rétraction
de la fibrine autour des leucocytes porteurs de bacilles. (PI. VE
fig. 16.) Les cellules géantes sont maintenant bien formées, grâce
à la rétraction et à la délimitation nette du détritus homogène
autour duquel étaient groupés en demi-couronne les leucocytes.
Les cellules spléniques s’espacent de plus en plus à cause de
l'infiltration de l'organe. Les noyaux des trabécules fibreuses ne
prennent plus bien la matière colorante.

Dans le foie, les tubercules grossissent. Ceux qui sont rap-
prochés commencent à se confondre entre eux. Ils sont toujours
disposés en majorité au pourtour des lobules hépatiques, près
des espaces porte. Comme dans la rate, on observe avec une
grande netteté la formation des premières cellules géantes au
centre des nodules tuberculeux, là où les bacilles, par leur multi-
plication incessante, ont réduit leurs phagocyles en un détritus

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DÉVELOPPEMENT DU TUBKRCULE EXPERIMENTAL. 961

homogène. Les cellules épithélioides se limitent de mieux en
mieux. (PL. IIT. fig. 6.)

LAPIN H. — Le 8° lapin est sacrilié le 22 décembre (13° jour).

La courbe de température (fig. 8) nous montre la première
élévation au 6° jour, et la deuxième depuis le 14° jour. L’amai-
grissement n’est pas encore bien marqué.

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À l’autopsie, on trouve une rate de 4 grammes, un foie éga-
lement grossi et ne donnant plus que quelques gouttes de sang
à la coupe, au moment où l'animal est sacrifié.

Dans les coupes de la rate, on voit que les tubercules sont
bien formés avec leurs cellules épithélioïdes, leurs cellules
géantes et leurs bacilles. (PL. VI. fig. 17.)

Dans le foie, les tubercules sont très nombreux ; ils com-
mencent même à devenir confluents. Il y a beaucoup de cellules
géantes ; les bacilles qu’elles contiennent se colorent tous bien ;
ils ne sont pas granuleux: il n’y en a que peu qui soient con-
tenus dans les noyaux leucocytaires. (PI. [V, fig. 8 et 9.) Les
cellules épithélioïides sont très nettes; leur corps cellulaire,
qui, nous l’avons vu, nest que de la fibrine rétractée, a ses
contours bien limites.

17

262 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

LAPIN 1. — Le dernier lapin, enfin, meurt spontanément le
26 décembre (21° jour).

Dans sa courbe de température (fig. 9) on note les deux éléva-
tions, le 4° et le 13° jour, et un refroidissement rapide le dernier
jour. On peut voir comme l’amaigrissement est considérable
pendant les derniers jours.

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E

L’autopsie nous montre les lésions déjà décrites plus haut
(p. 251). La rate pèse 5 grammes, le foie est hypertrophié, la
moelle des os est très congestionnée.

Nous ne reviendrons pas sur l’examen des coupes des
organes, que nous avons déjà fait plus haut. (PI. TV, fig. 10 et 11
“et pl. VL fig. 18 et 19.) |

Signalons seulement ici ce fait'curieux que dans la moelle
des os, dont nous avons fait des préparations colorées avec tous
nos lapins sacrifiés, ce n’est que chez ce dernier animal que

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 263

nous avons pu constater un grand nombre de bacilles. Chez tous
les autres, il fallait beaucoup chercher pour en trouver 2 ou 3
par lamelle. Il semble donc que la généralisation de la tuberculose
dans la moelle des os ne se fait que tout à fait dans les der-
niers jours de la maladie.

NE

Ainsi, nous donnors à nos lapins, par l'injection intravei-
neuse de cultures sur milieux glycérinés, une forme de tubercu-
lose toute particulière dans sa marche, sa durée et ses lésions.

Les bacilles inoculés s'arrêtent surtout dans les capillaires
de la rate et du foie (près des espaces porte). Là, ils déterminent
la formation d’un petit coagulum de fibrine, dans lequel ils se
multiplient jusqu'au 5°-7° jour, saus qu'il paraisse y avoir de
réaction du côté de l’organisme infecté, ni élévation de tempé-
rature, ni émigration de cellules.

Dès la fin de la première semaine, on observe une proliféra-
tion active des cellules de la rate et des leucocytes libres dars
les vaisseaux, concordant avec une élévation de la température
des animaux. Dans le foie, les colonies de bacilles sont alors
entourées par des cellules migratrices, les phagocytes de
M. Metchnikoff; on observe ainsi la formation de petits nodules
qui dilatent les capillaires aux points où ils se trouvent. Çà et là,
on voit des cellules migratrices remplies de bacilles, libres dans
les capillaires. À aucun moment, on n’observe une multiplication
karyokinétique ou une dégénérescence des cellules hépatiques.

Vers le milieu de la deuxième semaine, presque tous les
bacilles sont contenus dans les cellules où ils continuent à pro-
liférer activement. Sous l’action très probable d'une diastase
qu'ils sécrètent, on voit les leucocytes qui les portent s’entourer
d'une petite coque de fibrine qui se rétracte autour d'eux en leur
donnant l'aspect de cellules épithéliales (formation des cellules
épithélioïdes). Bientôt un certain nombre de leucocytes sont
entièrement détruits par les bacilles, en sorte que ceux-ci devien-
nent de nouveau libres.

C’est alors que les phagocytes reviennent à la charge, mais
celte fois en plus grand nombre et comme avec une nouvelle
tactique : ils se massent en demi-cercle auprès de la colonie de
bacilles et provoquent la rétraction de la fibrine et la délimitation

264 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

nette du détritus granuleux dans lequel se trouve la colonie; en
un mot, la cellule géante est formée.

Ce phénomène a lieu à la fin de la deuxième semaine et au
commencement de la troisième; il est accompagné d’une
nouvelle et forte élévation de la température.

Mais les animaux sont épuisés et meurent toujours avant
que le tubercule ait commencé à se caséifier.

A l’autopsie, nous le répétons, aucun tubercule apparent,
mais seulement une rate énorme et un foie très hypertrophié.

VL.

La méthode que nous avous suivie dans cette étude nous a
permis d’éclaireir plusieurs points encore controversés dans la
formation du tubercule, notamment en ce qui concerne le rôle
des leucocytes et la formation des cellules épithélioïdes. S'il est
en elfet souvent fort difficile d'interpréter des lésions anatomi-
ques achevées, il en est autrement lorsqu'on les voit se
développer dans toutes leurs phases et cela dans les divers
organes. Ces conditions favorables, réalisées dans nos observa-
tions, nous permettent d'affirmer, contrairement à l'opinion de
M. Baumgarten, le rôle important que jouent les leucocytes dans
la formation des tubercules. De plus, dans nos examens en série,
nous avons suivi, de la facon la plus nette, la transformation des
leucocytes en cellules épithélioïdes : les phases de cette transfor-
mation, ainsi que celles de la production des cellules géantes,
peuvent se lire sur les figures jointes à ce mémoire. Nous pou-
vons ainsi confirmer l’opinion avancée par MM. Koch et Cornil
à ce sujet.

Les conclusions que nous avons tirées de l'étude anatomique
qui précède ne se rapportent rigoureusement qu'à l’évolution du
lubercule dans les conditions où nous nous sommes placé;
c’est-à-dire dans le cas de l'injection intraveineuse de bacilles
d'une virulence donnée et que nous avons définie pour le lapin.
Elles nous paraissent cependant pouvoir s'étendre aux tubercu-
loses généralisées qui suivent l'inoculation sous-cutanée ou intra-
péritonéale de matière tuberculeuse. Les bacilles se multiplient
d'abord au point d'inoculation. Ils pénètrent ensuite dans les
slobules blanes qui les transportent dans les divers organes par

DÉVELOPPEMENT DU TUBERCULE EXPÉRIMENTAL. 265

les voies lymphatique et sanguine. Là où s'arrêtent ces leucocytes
commence le processus que nous avons décrit et qui aboutit à

la formation du tubercule typique.

EXPLICATION DES PLANCHES.

PI. IL.

Fig. 4. — Foie du lapin A. sacrifié 2 jours après une imoculation intravei-
neuse d'une culture de tuberculose (G — 125).
«. veine hépatique; — b. espace périportal avec les vaisseaux porte, hépa-
tique et biliaires.
Fig. 2. — Foie du même lapin à un grossissement de 660.
a, capillaire: — b, cellule hépatique; — €. bacilles arrêtés sur la paroi du
capillaire par un petit coagulum de fibrine.
Fig. 3. — Foie du lapin B, sacrifié le 5° jour {G — 660).
a, capillaire; — b, cellule hépatique; — ce, colonies de bacilles dans un
petit coagulum fibrineux.
Fig. 4. — Foie du lapin D, sacrifié le 9% jour (G — 200).
a, veine hépatique; — bb. accumulation de leucocytes, etleucocytes libres

dans les capillaires.
PL. EII.

Fig. 5. — Foie du lapin D. sacrifié le 9 jour (G — 660).

a, accumulation de leucocytes autour des bacilles dans un capillaire dilaté :
— bb, leucocytes libres contenant des bacilles: — ce, leucocytes libres
sans baecilles.

Fig. 6. — Foie du lapin G, sacrifié le 15° jour (G — 660).

a a, capillaires; — bb, leucocytes avec leur coque fibrineuse. déjà bien
formée: — c, colonie de bacilles qui a détruit un leucocyte et qui est
entourée de nouvelles cellules migratrices.

Fig. 7. — Foie du lapin H, sacrifié le 172 jour (G — 200).

æ. veine hépatique; — b,b, tubercules confluents.

PL. EV,

Fig. 8. — Foie du lapin H. sacrifié le 47e jour (G. — 660).
au, capillaires; — b, détritus fibrinoïde granuleux avec bacilles; — c, groupe
de cellules migratrices agglomérées à aspect souvent épithélioïde.
Fig. 9 — Foie du même lapin H (G = 660).
au, capillaires avec de nombreuses cellules migratrices libres à aspect
souvent épithélioïde; — b, cellule géante bien limitée avec ses bacilles;
— €, un des noyaux leucocytaires de la cellule géante b.

266 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Fig. 40. — Foie du lapin], mort spontanément le 21e jour (G = 200).
aa, tubercules confluents; — b, capillaires avec de nombreux leucocytes
libres; — c, cellules hépatiques.
Fig. 11.— Foie du même lapin J, à un grossissement de 340.
u, capillaire dilaté avec cellules épithélioïdes et bacilles; — b, cellules
hépatiques; — cc, cellules géantes.

PI. V.

Fig. 42. — Rate du lapin A, sacrifié le 8° jour (G — 150).

a, capsule de la rate; — b, corpuscule de Malpighi: — c, vaisseau central

du corpuscule de Malpighi:; — d, pulpe splénique.
Fig. 13. — Rate du lapin D, sacrifié le 9: jour (G — 125).

a, corpuseule de Malpighi; — b, vaisseau central du corpuscule de Mal-
pighi; —ce, nodules de prolifération dans la pulpe splénique; — 4, pulpe
splénique.

Fig. 44. — Rate du même lapin D, à un grossissement de 660.

a, nodule de la prolifération dans la bulbe splénique ; — bcdefqh,

cellules spléniques en karyokinèse; — 1, capillaire.
Fig. 45. — Rate du lapin E, sacrifié le 11° jour (G — 660).

au, cellules spléniques; — b, bacilles libres; — cc, leucocytes avec des

bacilles.

PI. VI.

Fig. 16. — Rate du lapin G, sacrifié le 15° jour {G — 200).
aa, cellules spléniques déjà assez espacées; — bb, nodules de proliféra-
tion; — cc, tubercules naïissants,
Fig. 17. — Rate du lapin H, sacrifié le 17° jour (G — 195).
a, corpuscule de Malphighi; — bb, tubereules; — c, cellules spléniques
espacées.
Fig. 18. — Rate du lapin I, mort spontanément le 21e jour (G — 200).
aa, tubercules avec bacilles; — b, pulpe splénique.
Fig, 19. — Rate du même lapin I, à un grossissement de 660.
a, Capillaire avec leucocytes épithélioïdes et bacilles libres: — b, tuber-
cule; — ce, cellules géantes.

LÀ

INFLUENCE DEN VAPEURN D'ACIDE BLUORHYDRIQUE SUR LES BACILLEN
TUBERCULEUX,

Par MM. J. GRANCHER et P. CHAUTARD.

Nous avons étudié :

1° L'influence de l'absorption de vapeurs d’acide fluorhydri-
que par les voies respiratoires sur l’évolution de la tuberculose
conférée aux lapins par inoculation intra-veineuse.

2 L'action de l'acide fluorhydrique sur les cultures de
tuberculose, 2x vitro.

L'exposé de nos recherches comprend donc naturellement
deux chapitres, subdivisés en trois parties consacrées : la pre-
mière à la description des dispositions expérimentales, la
deuxième à la relation des expériences, la troisième aux conclu-
sions.

Ï. — INFLUENCE DE L'ABSORPTION DE L'ACIDE FLUORHYDRIQUE PAR LES
VOIES RESPIRATOIRES,

Dispositions expérimentales. — Pour soumettre nos animaux
à des inhalations méthodiques de mélanges titrés d'air et de
vapeur d'acide fluorhydrique, nous avons fait choix des dispo-
sitions suivantes :

Le lapin en expérience est placé, dans sa cage, sous une
grande cloche de verre rodée et bitubulée de 70 litres de capacité.
Cette cloche est rendue parfaitement adhérente au plan de verre
sur lequel elle repose par l’interposition d’un peu de graisse,
de sorte que l’accès de l’air dans la cloche et sa sortie ne
peuvent se faire que par les tubulures.

L'une de ces tubulures (A) est en communication avec un
aspirateur qui détermine un appel d'air de vitesse constante.
Pour obtenir ce résultat, nous avons légèrement modifié la
trompe de Bunsen, comme l'indique la figure 1. L'eau arrive dans
le réservoir R par Le tube T et elle prend, dans ce réservoir, Le
niveau du trop-plein T’. Quelles que soient les variations de la
pression dans les conduites, ce niveau reste le même, et, par

268 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

suite, l'aspiration est toujours produite par une même colonne
d’eau HH, limitée en haut par le niveau de l’eau dans le réser-
voir, et, en bas, par l’orifice du tube de déversement. La chute
d’eau étant constante, l'appel d’air l’est aussi.

Fig. 4.

On peut à volonté diminuer ou augmenter cet appel d'air
en ouvrant ou fermant le robinet V qui règle le débit de l’eau
dans la trompe. Le volume d'air qui passe dans l'appareil est
mesuré au moyen d’un compteur à expériences. Dans nos recher-
ches, il donnait le plus souvent 60 à 70 litres à l'heure.

La deuxième tubulure B est en communication avec un
flacon laveur dans lequel l’air barbotte, avant son entrée dans la
cloche, dans la disolution d'acide fluorhydrique qu'on veut
expérimenter. Ce flacon a été enduit, au préalable, d’une mince
couche de paraffine qui préserve ses parois de l’action de
l'acide fluorhydrique.

Expérience’ Lf— Le 6 janvier 1888,isix lapins reçoivent dans
la veine de l'oreille 1° de bouillon de veau stérilisé contenant en

ACIDE FLUORHYDRIQUE ET TUBERCULOSE. 269
suspension une culture pure de tuberculose ensemencée le
28 décembre 1887. |

Deux de ces animaux sont réservés comme témoins; les
quatre autres ont respiré, dans l'appareil ci-dessus décrit,
pendant deux heures chaque jour, de l'air qui avait traversé
une dilution à 10 °/, d'acide fluorhydrique du commerce *.

Les deux témoins sont morts le même jour, le 29 janvier.

Deux des lapins soumis aux inhalations de vapeurs d’acide
fluorhydrique sont morts le 27 janvier.

Le troisième est mort le 29 et le quatrième le 30 janvier.
Tous ces animaux étaient porteurs des mêmes lésions : Rate
tuméfiée. foie décoloré, muscade, poumons congestionnés. Pas
de tubercules apparents. Mais l'examen microscopique fait voir
que le foie, la rate, le poumon, le foie surtout, contiennent une
grande quantité de bacilles tuberculeux, et de nombreux tuber-
cules élémentaires disposés à la périphérie du lobule hépatique.

Tous les lapins avaient perdu dans les derniers jours de leur
vie une grande quantité de leur poids, variable de 250 à
515 grammes.

Conclusion. — Dans cette expérience, l’action des vapeurs
d'acide fluorhydrique a été nulle.

Mais on pouvait attribuer cet insuccès à la trop forte dilution
de l'acide employé, nous avons donc fait une nouvelle expérience.

Expérience 11. — Le 30 janvier, six lapins reçoivent, chacun,
dans la veine de l'oreille 1e de culture de tuberculose ense-
mencée le 6 janvier, et mise en suspension dans du bouillon
stérilisé.

Deux de ces animaux sont conservés comme témoins. Les
quatre autres respirent, chaque jour pendant deux heures, l’air
de la cloche mélangé de vapeurs d'acide fluorhydrique. Le titre
de la dilution employée était de 40 °/, pour les deux premiers
lapins et de 60 °/, pour les deux derniers.

Les lapins témoins sont morts le 14 février.

Les deux lapins qui ont respiré les vapeurs d'acide fluorhy-
drique à 40 °/, sont morts l’un le 12, l’autre le 14 février.

Les deux lapins qui ont respiré les vapeurs d'acide fluorhy-
drique à 60 °/, sont morts l’un le 13, l’autre le 14 février.

1. L'acide fluorhydrique du commerce dont nous nous sommes servis contien
44 9/0 d’'H F1 gazeux pur.

t9

70 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Les lésions trouvées à l’autopsie sont les mêmes chez les
témoins et les animaux traités. C’est le tubercule microscopique
du foie, de la rate et du poumon.

Conclusion. — Dans cette seconde expérience l'action des

, Ç Ê , . ;
vapeurs d'acide fluorhydrique sur l'évolution de la tuberculose expi-
rimentale a été nulle.

IT, — ACTION DE L’ACIDE FLUORHYDRIQUE SUR LES CULTURES
DU BACILLE TUBERCULEUX.

On peut objecter à ces premières expériences que le mode
d’inoculation choisi (linoculation intra-veineuse) est, de tous,
le moins favorable à l’action utile de vapeurs médicamenteuses ;
car l'infection directe du sang, qui retentit d’abord sur le foie et
la rate, et secondairement sur le poumon, semble «& priori peu
justiciable d’une thérapeutique dont l'effort principal porte sur
la surface des voies respiratoires.

Nous avons donc recherché si les vapeurs d’acide fluorhy-
drique, mises en contact direct avec une culture pure de tuber-
culose, étaient capables de tuer les bacilles de cette culture.

Dispositions expérimentales. — Un fragment de culture pure
de tuberculose sur peptone gélosée et glycérinée est délayé dans
106 d’eau stérilisée, et introduit dans une pipette Pasteur modi-
liée par l’adjonction de deux tubes plongeants (fig. 2). La pipette

Fig. 2.

est alors réunie d’une part à l'aspirateur déjà décrit, d’autre part
à un flacon laveur dans lequel vient barbotter l’air qui doit la tra-
verser. Dans ce flacon b, on verse 50° d’une dissolution aqueuse
d’acide fluorhydrique au titre que l’on se propose d’expérimenter.

ACIDE FLUORHYDRIQUE ET TUBERCULOSE. 271

Ainsi que le représente la figure 2, l’aspiration se fait en 4,

et l’air entré en b se charge de vapeurs d’acide fluorhydrique et

barbotte dans la pipette c, qui contient la culture tuberculeuse

diluée. Il suffit de régler avec soin le débit de la trompe pour

éviter la mousse et le mouillage du tampon de coton qui ferme
le tube de la pipette.

Expérience I. — Dans quatre pipettes disposées ainsi, nous
faisons passer pendant une heure et demie un courant d'air,
réglé à 50 litres à l'heure environ, et traversant au préalable des
flacons laveurs qui contiennent des dilutions d'acide fluorhydri-
que du commerce aux titres : 10 °/, 20°/,, 40°), (5 M Pa

Ceci fait, nous prélevons dans chaque pipette 1° de son con-
tenu, et nous l’injectons dans la veine de l'oreille d’un lapin.
Un second lapin /émoin recoit la mème quantité de la même
culture, ou mieux, de la même dilution, qui n’a pas été soumise
à l’action des vapeurs d'acide fluorhydrique.

Ainsi, 8 animaux ont été inoculés, 4, servant de témoins,
avec une culture pure diluée dans l’eau stérilisée, et 4 avec la
même culture après action des vapeurs d'acide fluorhydrique.

Les inoculations ont été faites le 10 février.

PREMIÈRE SÉRIE.
Vapeurs d'acide fluorhydrique, Le témoin meurt le 27 février,
titré à 40 0/,. Le lapin d'essai meurt le 2 mars.
DEUXIÈME SÉRIE.
Vapeurs d’acide fluorhydrique, | Le témoin meurt le 4° mars.
titré à 20 ?/,. | Le lapin d'essai meurt le 4 mars.
TROISIÈME SÉRIE.
Vapeurs d’acide fluorhydrique, (| Le témoin meurt le 2 mars.
titré à 40 0}. | Le lapin d'essai meurt le 3 mars.

QUATRIÈME SÉRIE.

Vapeurs d'acide fluorhydrique, { Le témoin meurt le 29 février.
titré à 60 9/5. Le lapin d'essai meurt le 4 mars.
L
Conclusion. — De cette première série d'expériences on peut

conclure que l'action directe des vapeurs d’acide fluorhydrique
sur le bacille tuberculeux est réelle, puisque les animaux d’essai
sonttous morts un, trois et quatre jours après les témoins, nas
que cette action est faible, puisque la survie a été très courte.

272 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Les huit animaux autOpsiés portaient toujours les mêmes
lésions microscopiques qu'on ATOS constamment dans ce
mode d’inoculation.

Expérience II. — Comme on pourrait attribuer l’insuccès de
ces expériences à une trop grande dilution de l'acide fluorhy-
drique et à une trop faible durée d'action de ses vapeurs sur la
culture du tubercule, nous avons refait la même expérience
dans les conditions suivantes :

Les dilutions d'acide fluorhydrique introduites dans les fla-
cons laveurs ont été de 40 °/,, 60 ?/,, 80 ‘/,, et enfin l'acide pur
du commerce ‘

De plus, nous avons prolongé le barbottage pendant quatre
heures et demie.

Puis, le 7 mars, nous avons procédé à l’inocuiation de six
lapins, deux servant de témoins, chacun des quatre autres rece-
vant dans la veine de l'oreille 1°° de culture traitée par les va-
peurs de l'acide fluorhydrique aux titres sus-indiqués.

Les deux témoins meurent, l’un le 20, l’autre le 24 mars:

Le lapin d'essai à 40 °/, meurt le 2 avril;

Le lapin d'essai à 60 °/, meurt le 3 avril;

Le lapin d'essai à 80 ‘/, meurt le 16 avril;

Le lapin d'essai à l’acide pur est sacrifié le 3 mai. Il est en-
core vivant ce jour-là, mais est très maigre et pèse 1,6506° au
lieu de 2,100%, son poids initial. Sa rate contient quelques tu-
bercules miliaires apparents, son foie est muscade, son poumon
contient de nombreux groupes de tubercules miliaires. Tous les
autres animaux ont succombé avec la lésion de la tuberculose
microscopique.

Conclusion. — De cette seconde série d'expériences, on peut
conclure que l’action directe et prolongée des vapeurs d'acide
fluorhydrique sur le bacille tuberculeux diminue sa virulence, mais
ne le tue pas.

1. La culture dans laquelle a passé, pendant 4 heures et demie, un courant d'air
barbottant dans 50“ d'acide fluorhydrique du commerce dilué à 40 0/5, a retenu
0gr,041 d’acide gazeux pur, soit 1,6 p. 1000.

La culture traitée par la dilution à 60 °/, en a retenu 0°,107, soit 4,3 p. 4000.

La culture traitée par la dilution à 80 °/, en a retenu 0,213, soit 8,5 p. 1000.

La culture traitée par l'acide concentré du commerce a retenu 0,903 d’acide,
soit 36 p. 1000.

ACIDE FLUORHYDRIQUE ET TUBERCULOSE. 273

Dans cette expérience, l’action des vapeurs d'acide fluorhy-
driquea été proportionnelle à la concentration de l'acide employé.
Plus cette concentration a été grande, et plus les animaux ont
résisté. Le lapin inoculé après action des vapeurs d'acide fluor-
hydrique pur a survécu deux mois environ, et aurait peut-être
vécu encore une ou deux semaines. Cependant, il était tuber-
culeux à l’autopsie. Les vapeurs d’acide fluorhydrique pur, mises
pendant plus de quatre heures en contact direct avec une culture
de tuberculose, n’ont donc pas réussi à luer tous les bacilles de
cette culture. Or, ces vapeurs, malgré la paraffine protectrice,
avaient attaqué le verre de la pipette Pasteur, qui contenait la
culture essayée, et formé une grande quantité d'acide hydro-
fluosilicique, et c’est un liquide trouble, blanchi par cet acide, que
nous avons injecté dans l'oreille de notre quatrième lapin.

La résistance des bacilles tuberculeux aux vapeurs d’acide
fluorhydrique est donc bien plus grande qu'on ne pouvait le
supposer, d’après les expériences de M. H. Marün, qui a vu
qu'une trace presque impondérable, ww, ww d'acide fluorhy-
drique du commerce, ajoutée à un milieu ensemencé de tuber-
cules, empêche le développement de la culture.

Il semble aussi que ces expériences n’autorisent pas toutes
les espérances qu'a fait naître l'observation de cas favorables
dans l’espèce humaine, à moins que, par une action indirecte
sur les sécrétions et sur la nutrition. les vapeurs d’acide fluor-
hydrique n’influencent favorablement la marche de la tubercu-
lose. Nous ne croyons pas qu'on puisse légitimement espérer
atteindre et détruire, au plus profond de l’économie, par les
vapeurs de l'acide fluorhydrique, le bacille tuberculeux, que ces
mêmes vapeurs atténuent, mais ne tuent pas in vitro, après un
contact prolongé pendant plus de quatre heures. Mais toutes les
tentatives sont légitimes pour combattre l’agent de la phtisie
pulmonaire, et les vapeurs d’acide fluorhydrique, qui sont très
bien supportées par la plupart des malades, sont, en somme, un
moyen d'atténuation, sinon de destruction du bacille tuber-
culeux. C’est déjà quelque chose.

ÉTUDE SUR LES FORMES FURIEUSE ET PARALYTIQUE
DE LA RAGE CHEZ LE LAPIN,

Par M. HELMAN.

Dans son zèle éclairé pour les recherches scientifiques qui.
comme celles de M. Pasteur, sont fécondes pour le bien de l’hu-
manité, S. À. Mgr le prince d'Oldenbourg a créé, à ses frais,
un Institut antirabique à Saint-Pétersbourg, et l’a doté de façon
à y permettre l'étude de beaucoup de problèmes. J'en ai abordé
quelques-uns, à la solution desquels j'aiconsacré jusqu'icienviron
2,500 animaux (chiens, lapins, singes, chats, cobayes, rats,
loups, chevaux, chèvres, pigeons, canards). Je ne parlerai pour
aujourd'hui que du problème des relations entre les deux formes
typiques de la rage chez les lapins, la forme furieuse et la forme
paralytique.

On connaît depuis longtemps les deux formes chez le chien.
On sait aussi, par les travaux de M. Pasteur et de ses collabora-
teurs, que l’on peut passer par inoculation de l’une de ces formes
à l’autre, et qu’il faut dès lors les considérer comme produites par
un seul et même virus. Toutefois, de faibles doses de virus,
introduites par trépanation ou par injections sous-cutanées,
donnent le plus souvent la rage furieuse ; de fortes doses, sur-
tout quand elles sont introduites par injections sous-cutanées
ou intraveineuses, donnent de préférence la forme paralytique.
On est donc conduit à croire que les symptômes: rabiques
dépendent, non du virus lui-même, mais de la nature des points
du système nerveux où 1l se localise et se cultive.

Sur les lapins, on est arrivé depuis longtemps, au labora-
toire de M. Pasteur, à une forme paralytique régulière. La rage
furieuse n ÿ apparaît plus qu'exceptionnellement, après avoir été
plus fréquente dans les premiers passages. Cette stabilité ne
üendrait-elle pas à ce qu’une longue série de cultures, faites tou-
jours dans les mêmes conditions et dans le même sens, en prenant

RAGE FURIEUSE DES LAPINS. 275

toujours pour point de départ des moelles de lapin mort de rage
paralytique, ont donné des allures constantes à une ou plusieurs
des qualités du virus, sans aller pourtant jusqu à en changer la
nature. C’est avec cette idée que cadrent le mieux et s'inter-
prètent le plus nettement les faits qu’il me reste à exposer.

Le 20 novembre 1885, j'inoculai par trépanation, à trois
lapins, la moelle d’un chien incontestablement enragé d’après son
autopsie, et qui avait mordu son maître, un officier qui depuis a
subi avec succès le traitement préventif. Un de ces lapins mourut
d'une maladie probablement étrangère à la rage, le 7° jour après
l’inoculation. Les deux autres moururent de la rage furieuse qui
éclata chez l’un après 11 jours, chez l’autre après 26 jours, et les
emporta le 13e et le 28° jour après l’inoculation.

Le 4 décembre, j'inoculai par trépanation à un autre lapin
la moelle de celui qui avait eu une inoculation de 11 jours. Le
lapin du second passage fut atteint le 11° jour et mourut le 12.

Ainsi se trouvait commencée une série que j'ai poussée aujour-

P 1 2 3 4 5 6 7 8 9° 40
I 11 {1 93 12 4 | 43 Qu A0 10 8
M | 43 12 31 6 ete AA 15242 20
Y t t Î t t t { iF {F CSC
PR ta anne Fat 45. "16 717-2817 20" "20
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M | 43 16 23 | 43 16 (32 Mol 19 1 il
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p |-24:.) 292) 99341v041/:96:L96:127|,9281-929.}.30
I 17 (1 11 12 12 9 9 10 | 40 11
M | 49 13 14 12 43 1 40-| 41 EE 12743
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M | 13 12 19 31 414 {9 | 42 11 12 16
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Mio eat À | 41-48) 43 | 19 | 43 | 421)
V { t t t | nt | t | { t

1. 0,4, — 2, A, — 5. 07,8. — 4. Dans l'humeur aqueuse. — 5, Dans Ja queue.

276 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

d'hui au 60° passage, et dont l’histoire abrégée se trouve contenue
dans le tableau précédent, dans lequel les gros chiffres de la ligne
horizontale P sont les numéros des passages. La ligne | donne
les durées d’incubation, la ligne M la durée de la survie après
l’inoculation. Les modes d'inoculation sont indiqués en abrégé
dans la ligne V, où { signifie trépanalion, sc, sous-cutanée,
it etim intratrachéale et intramusculaire.

J'ai, comme on peut le voir sur ce tableau, employé les modes
d'inoculation les plus divers. J'ai fait varier les doses, et suis
mème allé jusqu'à inoculer par trépanation 06,25 et par injection
sous-cutanée 3° de moelle délayée dans du bouillon stérilisé. J’ai
pris mes virus tour à tour dans le bulbe et la moelle épinière, et
j'ai fait varier l’âge et la race de mes lapins. J’ai eu beau modifier
de toutes les facons possibles les conditions de l’inoculation.
tous ces lapins sont morts sans exception de la rage furieuse, et le
transport de ce virus sur le chien ou le cobaye n’a rien changé à
la nature deson action.

Voici, en regard de ce fait, une autre série de résultats.

Le 20 mai, j'ai inoculé un lapin par injection sous-cutanée
et 2 autres lapins par injection sous-cutanée et par trépanation,
avec le bulbe d’un lapin du 12° passage, inoculé le % mai sous la
peau, qui avait eu la rage furieuse, mais avait présenté avant la
mort un état paralytique prolongé. Les deux lapins trépanés
furent atteints les 30 et 31 mai d’une forme rabique mixte. Ils
avaient de l'agitation, et leur train de devant était resté actif
pendant que le train de derrière était paralysé.

Le 51 mai, avec la moelle d’un de ces lapins, j'en inoculai
par trépanation deux autres qui succombèrent tous deux à la
rage paralytique avec des durées d’incubation de 8 à 11 jours.
J’arrivai ainsi à embrancher sur la série principale une autre
série, allant du 11° au 20° passage de la première, et dont
le tableau suivant résume l'histoire :

P 12 13 14 9

I 14 40 8 11 9 11 9 9 8
M 16 41 9 < 49 4
V se t t

Dans cette serie, le 12° passage avait, comme nous venons :

RAGE FURIEUSE DES LAPINS. 274

de le voir, présenté la rage furieuse ; le 13° la rage mixte; fous les
autres ont été des cas de rage paralytique, sans aucun cas de rage
furieuse. On peut même remarquer en même temps que les
durées d'incubation de cette forme paralytique sont devenues
plus régulières que dans la série précédente et oscillent entre
8 et { jours.

Les deux séries semblent donc rester très distinctes, et le point
de bifurcation est aussi très net. C’est en effet le 3° lapin inoculé
le 20 mai sous la peau, en même temps que les deux animaux
qui ont servi à constituer la série paralytique, qui a servi à con-
tinuer la série de la rage furieuse, et qui figure au 13° passage du
grand tableau de la p.275. Ce lapin mourut de rage furieuse, et sa
moelle servit à trépaner un autre lapin du 14° passage qui mourut
aussi de la rage furieuse. Pour ne plus sortir de cette forme je
n'ai eu que deux précautions à prendre : 1° éliminer avec soin tous
les lapins qui se trouvaient accidentellement atteints de la forme
mixte dont j'ai parlé plus haut, et n’employer comme lapins de
passage que ceux qui avaient la rage furieuse bien caractérisée:
2° quand les deux lapins qu’on inoculait d'ordinaire à chaque
passage étaient tous deux atteints de la rage à forme mixte,
continuer la série de la rage furieuse avec des lapins inoculés
à part avec des doses très faibles de virus, ayant dès lors une
incubation très longue, mais qui, dans ces conditions, ont tous
invariablement la forme furieuse.

L'incubation, chez les lapins ainsi inoculés, a parfois une
durée très longue. En 1886, j'ai communiqué à M. Pasteur
l'histoire de deux cas dans lesquels elle avait été de 3 et 6 mois.
Plus tard, j'ai vu un lapin du 8° passage, inoculé par trépana-
tion le 16 mars 1886, tomber malade le 6 janvier 1887, après
9 mois et 20 jours, et mourir le 8 janvier avec tous les caractères
de la rage furieuse. L'animal est inquiet, ses oreilles sont frémis-
santes, 1l gratte le sol avec ses pattes, se jette sur les parois de
sa cage ou sur ses compagnons, tombe, crie, se relève, mani-
feste une vive excitation sexuelle, fait des bonds désordonnés
pour sortir de sa cage, et ces périodes d’agitation alternent avec
des périodes de tranquillité relative jusqu'à la mort, qui a lieu
généralement le 2° ou 3° jour après l'apparition des premiers
symptômes rabiques. La raideur cadavérique suit d'ordinaire
immédiatement la mort.

18

278 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Quant à l’origine de cette forme furieuse que j'ai réussi à
conserver pure, il faut la chercher dans la forme de la rage du
chien qui avait servi de point de départ. Cet animal, incontes :
tablement atteint de rage furieuse, était mort le 18 novembre,
dans une crampe, brusquement, et sans avoir présenté aucune
paralysie du train de derrière. Cette paralysie est d'ordinaire
comptée comme un des symptômes terminaux de la rage furieuse.
Depuis qu'il existe ici un Institut antirabique où on conduit
presque tous les chiens ayant mordu quelqu'un, j'ai eu souvent
l'occasion d'observer des cas de rage furieuse. J'ai toujours vu
la mort arriver sans paralysie préalable du train de derrière,
soit pendant un accès, le chien ayant encore dans la gueule un
des barreaux de sa cage, soit dans une période de calme succé-
dant à une période d’excitation violente. La durée de la maladie
est courte, 2 à # jours, et la raideur cadavérique suit immédia-
tement la mort. Les lapins inoculés avec le virus de ces chiens
ont presque tous la forme furieuse, tandis qu'il n'y a que 5 0/0
environ de rages furieuses chez ceux qu'on inocule avec le virus
ordinaire de la rage des rues.

La forme furieuse peut être, dans certains cas, donnée au
lapin par inoculation de la bave, dans d’autres par la morsure
d’un chien enragé.

Les propriétés du virus fixe de la rage furieuse sont, d’ail-
leurs, les mêmes que celles du virus fixe de la rage paralytique.
La virulence des moelles disparait en 24 heures, quand on les
dessèche à 35-40°; elle persiste de 3 à 4 jours à 23-25°. Ces moelles
ne donnent non plus aucun développement dans les bouillons de
culture. On peut conférer l’immunité aux chiens en leur injec-
tant sous la peau les moelles virulentes de la forme furieuse,
comme celles de la forme paralytique.

Les deux virus semblent, en résumé, aussi peu distincts
chez le lapin, qu’ils le sont chez le chien, mais il n’en est pas
moins possible de cultiver, à part et en série, la forme furieuse
et la forme paralytique. M. Pasteur, qui cherchait à obtenir un
virus renforcé, à période d'incubation très courie, est arrivé
exclusivement à la forme paralytique, dont l’évolution est, en
effet, en moyenne plus rapide que celle de l’autre. Par un autre
mode de sélection, je suis arrivé, de mon côté, à conserver la
forme furieuse.

ABSENCE DE GERMES VIVANTS DANS LES CONSERVES. 279

En songeant que, dans les inoculations faites à l'extrémité
d'un membre, la paralysie apparaît d'ordinaire, tout d’abord,
sur le membre inoculé, on est conduit à penser que le virus de
la forme paralytique se développe plus rapidement dans les nerfs
moteurs, tandis que le virus de la forme furieuse préfère la
substance des nerfs sensitifs. C’est une idée en faveur de laquelle
on pourrait invoquer d’autres considérations, mais que je me
borne à mentionner.

DE L'ABSENCE DE GERMES VIVANTS DANS LES CONSERVES,

Par M. A. FERNBACH,

Préparateur à la Sorbonne.

Dans un travail sur l'action toxique des conserves, présenté
récemment à la Société de médecine publique (25 janvier 1888),
et publié dans la Revue d'hygiène (t. X, p.107), M. Poincaré dit
avoir trouvé dans des boîtes de conserves alimentaires, à leur
ouverture, une quantité considérable de microbes vivants (p. 114,
ligne 22). Le fait aurait une grande importance, s’il était général.
Il y aurait lieu, en effet, de se demander à quoi est due la con-
servation non douteuse des matières contenues dans ces boîtes.
Elles sont un excellent aliment pour les microbes, ainsi qu’en
témoigne leur rapide altération lorsqu'elles arrivent à l'air;
sitôt envahies, elles changent tellement de goût, qu’on ne sau-
rait admettre qu’elles aient été, en boites closes, la proie des
microbes. Comment ceux que M. Poincaré dit y avoir rencontrés
auraient-ils pu se maintenir vivants sans agir?

Il faudrait, pour expliquer ce fait, revenir aux anciennes
idées d’Appert et de Gay-Lussac, et invoquer l'absence d'oxygène
dans les boîtes; mais cet argument, dont M. Chamberland nous
a appris tout récemment à préciser la valeur, ne s'applique
qu'aux aérobies, et n’explique nullement l'absence de dévelop-
pement et d’action des anaérobies. Les germes de ces derniers

280 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sont certainement tués, puisqu'ils ne se développent pas ; mais la
question est plus douteuse pour les aérobies, et il y avait lieu, à
leur sujet, de se demander tout d'abord si l’assertion de M. Poin-
caré était toujours vérifiée.

Mes expériences ont porté sur 28 boîtes de conserves de
légumes et sur 10 boîtes de conserves de viande. Ces boîtes
avaient les origines les plus diverses, et avaient évidemment,
au moment de leur ouverture, les âges les plus variés. Il est
inutile d'indiquer ici les noms des fabricants ; je me contente de
dire que je me suis adressé à quelques-unes des marques citées
par M. Poincaré dans son travail. Les conserves de viande
étaient, avant l'ouverture, chauffées au bain-marie pendant
10 minutes, à 30-359, afin de réunir en une seule masse, au
fond des boîtes, les portions aqueuses qu'elles renferment. Une
portion de la surface de la boîte, maintenue à plat, étant stéri-
lisée au moyen de la flamme d'un bec de gaz renversé, j'y prati-
quais une petite ouverture, en y enfonçant brusquement un
poinçon également flambé et encore très chaud. Avec une pipette
flambée, d'une capacité de 2° au moins, je puisais le liquide de
la conserve, et j’ensemençais deux matras Pasteur, renfermant
l’un du bouillon de veau neutre, et l’autre de l’eau de navets
sucrée.

Mes expériences comportent donc 56 ensemencements, d’au
moins 4e chacun. Tous mes ballons, sans exception, sont restés
stériles. Il en résulte qu'il faut conclure à l'absence des microbes
dans les 28 boîtes que j'ai étudiées.

En présence de cette uniformité de résultats, j'ai jugé inu-
tile de pousser cette étude plus loin, et je crois pouvoir affirmer
que, dans ies boîtes de conserves bien faites, il ny a pas de
germes vivants. C’est évidemment la chaleur qui les à tués,
et l’interprétation qu’on donne des procédés d’Appert est bien
exacte.

REVUES ET ANALYSES

H. Bucuxer. Sur la preuve expérimentale de l'absorption des microbes
infectieux par les voies respiratoires, Munch. med. Wochenschr..
p. 263 et 287, 1858.

Nous avons déjà traité ce sujet il y a quelques mois. (V. T. II, p. 32). Si
nous y revenons aujourd'hui, c'est d'abord qu'il s'y est produit des docu-
ments nouveaux, c’est aussi que l'attention est en ce moment fixée sur lui.
On sait où en étaient, il n’y a pas encore bien longtemps, nos connaissances
au sujet des dangers d'infection par l'air, les liquides et les solides avee
lesquels nous sommes journellement en contact. Après avoir constaté que
l'air était relativement très pauvre en germes vivants, après avoir remarqué
aussi que, cliniquement, la contagion semblait avoir des voies plus sûres et
plus régulières, on avait fini par négliger à peu près complètement les
dangers d'infection qui pouvaient provenir de cette voie, et dernièrement,
M. Lucas-Championnière a pu dire, et démontrer par son expérience person-
nelle, que le milieu est indifférent et que c’est le soin du patient qui est tout.

Cela est beaucoup plus vrai qu'on ne le suppose d'ordinaire, et M. Lucas-
Championnière a donné un grand exemple en montrant que l’antisepsie et
l'hygiène ne sont pas tant des questions d'architecte et de constructeur que
des questions de médecin ou de chirurgien. Mais si soigneuses que soient les
pratiques antiseptiques, elles ne vont pas encore à se précautionner contre
l'air qu'on respire, et la question est précisément de savoir si cette source
d'infection est aussi négligeable qu'on l'a supposé jusqu'ici.

On à, pour la mettre en suspicion, un certain nombre de faits cliniques
démontrant que le iransfert de certaines maladies contagieuses peut se
faire par cette voie. Mais il y a toujours profit à substituer aux faits d’obser-
vation pure une bonne expérience, dont on fait et dont on surveille bien les
conditions. En l'espèce, cette expérience était particulièrement nécessaire.
L'air chargé de germes nuisibles ne pénètre pas seulement dans les
poumons, il arrive aussi dans la bouche et par elle dans les cavités diges-
lives, si bien que dans les cas de maladie et même de mort suivie d’au-
topsie, il estsouvent très difficile, sinon impossible, de connaître la voie par
laquelle a pénétré le germe contagieux.

L'expérience seule peut nous conduire à ce résultat. On connaît celles qui
ont été faites par M. Pasteur et ses collaborateurs, par M. Koch, sur la trans-
mission du charbon par les voies digestives. Elles ont abouti à cette conelu-
sion générale que l'infection est d'autant plus sûre et plus fréquente que
l'on multiplie davantage les chances d’érosion de la muqueuse du canal
digestif.

282 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Au sujet du poumon, les résultats avaient été plus contradictoires, et on
trouvera dans l’article signalé plus haut le résumé des travaux faits et des
conclusions trouvées dans cette voie.

Elles se résument en ceci. Pour la tuberculose, la transmission par le
poumon n'est pas chose douteuse. Elle résulte des expériences de Villemin,
Koch, Cadéac et Mallet, etc. Mais la tuberculose est une maladie spéciale,
dont le point de départ par le poumon n'a pas lieu d’étonner. Il serait
bien plus intéressant d'être renseigné sur le mode de pénétration d’un de
ces microbes qui, comme la bactéridie charbonneuse, ne deviennent d’ordi-
naire pathogènes que dans les organes profonds, et pour lesquels le poumon
n’est, en quelque sorte, qu'un lieu de passage. Comment le microbe du
charbon, celui de la morve, celui de la septicémie, celui du choléra des
poules peuvent-ils franchir ce passage?

Nous avons relaté sur ce point les conclusions de M. Buchner et de
M. Muskatbluth, en contradiction avec celles de M. Wyssokowitch et de M.Ar-
nold, mais qui n'en démontrent pas moins que des spores charbonneuses,
amenées dans le poumon à l’état de poussières sèches, peuvent franchir la
paroi alvéolaire et arriver par les ganglions et le tronc lymphatique jusque
dans le sang.

C'est sur ces résultats que M. Buchner insiste aujourd’hui. La méthode
de l'inhalation des poussières sèches avait quelques inconvénients. D'abord,
elle ne s’appliquait pas aux microbes qui ne supportent pas la dessiccation
sans périr. Puis, des poussières sèches semblent, au premier abord, devoir
pénétrer moins facilement dans les alvéoles que de fines gouttelettes liquides
tenant des germes de microbes en suspension.

M. Buchner est donc revenu à l’inhalation des liquides pulvérisés, mais
en évitant quelques-uns des inconvénients ordinaires de cette pratique. Le
jet pulvérisé est formé de gouttelettes très fines et. de gouttes relativement
grosses. Ces dernières, obéissant rapidement aux lois de la pesanteur, sont
inaptes en conséquence à pénétrer très avant dans les ramifications bron-
chiques, ont l'inconvénient de mouiller les animaux en expérience, et chan-
gent les conditions de leur respiration, en humectant outre mesure leurs fosses
nasales. Il y a tout avantage à les séparer des fines gouttelettes auxquelles
M. Buchner attribue, on ne sait pourquoi, la qualité. de vésicules creuses, car
il leur suffit d'être très petites pour pouvoir rester longtemps en suspension
dans l’air, à la facon des poussières organiques et minérales qu'un rayon de
soleil nous y fait constamment apercevoir.

M. Buchner arrive à ce résultat en amenant le jet de liquide pulvérisé
dans un flacon de 3 litres dans lequel plonge un tube recourbé vers le haut,
et par lequel sort la partie la plus fine du jet. Elle a la forme d’un léger brouil-
lard ou d’une légère fumée de cigare, visible seulement quand on l’éclaire .
fortement, et assez émulsionnée avec l'air pour pouvoir traverser intégrale-
ment des tubes de plusieurs mètres de longueur. C'est ce nuage qu'on dirige
pendant un quart d'heure ou une demi-heure dans une caisse de fer-blanc
.de 50 litres dans laquelle une toile de fil de fer soutient les animaux d’expé-
rience. Pour plus de sûreté, l'air qui sort de la caisse traverse une couche
d'ouate qui arrête les germes au passage. Le

REVUES ET . ANALYSES. 283

M. Buchner a étudié ainsi les effets de l’inhalation de liquides contenant
des microbes du charbon, du choléra des poules, de la septicémie, du rouget
et de la morve. Pour le charbon, il a essayé à part les liquides chargés de
spores et céux qui ne contenaient que des bacilles adultes.

Avec les spores, il a opéré sur 22 cobayes et un lapin. A l'exception de
3, tous ces animaux sont morts du charbon dans un intervalle de 48 à
60 heures après l'inhalation. Dans un cas seulement, où la quantité de spores
avait été très faible, la mort n’est survenue, chez deux animaux, qu'après
71 et 80 heures. C’est en somme une mortalité de 87 0/0, tandis que la
mortalité après mhalation de poussières sèches ne s'était élevée qu'a 80 0/0.
Mais M. Buchner a soin de faire remarquer lui-même que ces nombres
n'ont qu'une valeur restreinte. En diminuant la quantité de spores inhalées,
on diminue naturellement la mortalité, on l’augmente au contraire en char-
geant davantage de spores le liquide pulvérisé.

Voilà donc une preuve nouvelle du danger de l’inhalation de microbes
virulents. Mais avant de pousser plus avant l'étude théorique de cette ques-
tion, nous avons à nous préoccuper de son côté pratique. Devons-nous, en
présence de ces résultats, renoncer à l'idée que l'air est une source de con-
tagion en somme peu dangereuse ? Faut-il au contraire admettre, comme le
font encore beaucoup de médecins et de chirurgiens, que les questions de
milieu ambiant jouent un grand rôle ? Pour étudier cette question d’un peu
près, il faut faire intervenir la notion de doses, sur laquelle nous n'avons
encorerien dit.

On peut à la rigueur savoir approximativement ce que contient de micro-
bes le liquide pulvérisé. De ce liquide, une petite partie seulement passe à
l'état de nuage dans la chambre à respiration. M. Buchner l’évalue à 0, 5 0/0
environ du volume total, ce qui représente de 2 à 3 gouttes pour la pulvé-
risation de 20 à 60cc de liquide virulent. Il serait très difficile de dire quelle
est la proportion de cette masse nuageuse, arrivée dans la chambre, qui
pénètre dans les voies respiratoires de l'animal soumis à l'expérience. Mais
nous avons heureusement le droit de ne pas nous en préoccuper au point
de vue pratique. L'intérêt pour nous est de savoir approximativement la
richesse en germes d’un air dont la respiration se montre aussi dange-
reuse,

M. Buchner a calculé que dans une de ses expériences, 5 millions de spores
du charbon, environ, avaient pénétré dans la chambre à respiration. Il
trouve cette quantité faible, surtout « quand on la compare aux grandes
quantités de bactéries qu'on inocule d'ordinaire dans les expériences avec
des microbes infectieux ». Mais là n’est pas la question. Au point de vue
pratique, elle est tout entière en ceci : est-on exposé à rencontrer autour de
soi, en dehors de circonstances tout à fait exceptionnelles, de l'air si chargé
de spores ?

A cette question, on ne peut répondre que par des comparaisons. Nous
voyons, dans le dernier travail de M. Straus (V. ces Annales, p. 155)
que nous choisissons parce que c’est celui qui donne les évaluations les plus
élevées, que l’on trouve moins de 500,000 germes par mètre cube dans l’air
d’une salle d'hôpital qu'on s’est attaché à charger le plus possible de pous-

284 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sières flottantes, et qu’il n° y en a guère en moyenne plus de 10 ou 15,000
dans un air ordinaire. Or, dans les expériences de Buchner, il y en a 100
millions. Il semble que ces chiffres donnent une idée assez nette des réalités,
et qu’on ait le droit de conclure en disant que si l'air n’est plus un facteur
de contagion aussi négligeable qu'on s'était jusqu'ici plu à le croire ou à
l'espérer, il n’est pourtant pas devenu, même après les expériences de
M. Buchner, cet ennemi redoutable que ce savant cherche à nous dépeindre
en nous parlant de mortalité de 100 0/0, et en nous présentant « l'inha-
lation comme plus dangereuse que l’inoculation sous-cutanée ».

Il y a pourtant un sens dans lequel cette affirmation est exacte, mais
pour la trouver telle, il faut quitter le terrain de la pratique, et arriver à
comparer le nombre de microbes qui pénètrent dans les alvéoles et amènent
une mort rapide, au nombre beaucoup plus grand de microbes mis en
œuvre dans une injection sous-cutanée pour amener la mort au bout du
même temps. Ceci nous amène à l'étude du mécanisme de la mort parinha-
lation de spores charbonneuses.

Disons d’abord, pour déblayer le terrain, que pas plus ici qu'à propos de
l'inhalation des poussières sèches, il n’y a à accuser la pénétration du char-
bon par les voies digestives. Das expériences directes ont montré que la
contagion par ces voies exige beaucoup plus de spores (environ 3,000 fois
plus. d’après M. Buchner), n'amène la mort qu'au bout de 4 ou 5 jours, au
lieu de 48 ou 60 heures, et s'accompagne de lésions toutes différentes.

C'est par le poumon que sont atteints les animaux soumis à l’inhalation.
On le montre en recherchant, par la méthode des ensemencements, la pré-
sence et le nombre des bacilles charbonneux dans les organes des ani-
maux sacrifiés à divers moments après l’inhalation. On constate ainsi qu'ils
existent, en nombres croissants, dans le poumon, alors qu'il n'y en à pas
encore dans la rate. Ce n’est que dans les dernières heures de la vie qu’on
en trouve partout. À l'examen microscopique, on trouve dans le poumon de
véritables colonies de bacilles. Mais ici se présente un fait curieux.

Dans les morts par inhalation de spores charbonneuses en suspension dans
un liquide, les poumons, dans leur ensemble, semblent parfaitement intacts.
Ils sont pâles, gorgés d'air, et n'ont un aspect anormal que là où il y a des
vaisseaux sanguins remplis de bacilles. Quand on a fait inhaler aux ani-
maux des bacilles adultes, la mort est plus rapide. Sur 5 cobayes soumis à
cette épreuve, 3 sont morts en 36 heures, les deux autres en moins de
54 heures, et leurs poumons avaient un aspect tout différent des précédents.
Is étaient d'une couleur rouge sombre, volumineux, hepatisés, et leurs
fragments allaient au fond de l'eau. Au microscope, on y voyait les alvéoles
partiellement ou totalement remplies de corpuscules rouges, de leucocytes,
de cellules épithéliales détachées ou de fins coagulums fibrineux: au milieu
de ces masses, on voit, en unités ou en groupes, des bacilles, mais unique-
ment dans les alvéoles, jamais dans la paroi ni dans les vaisseaux san-
guins. Le contraste est complet avec le poumon des animaux morts par
inhalation de spores.

Voilà un nouvel exemple, et non des moins curieux, de la variété des
genres de mort que peut produire sur le même animal le même miecrobe

REVUES ET ANALYSES. 285

pathogène. Que devient en pareil cas la question symptôme ? N'est-elle pas
plutôt faite pour égarer que pour guider vers la vérité? Les poumons de
ces lapins, soumis à la diagnose anatomique si autorisée de M. le professeur
Bollinger, ont été rapportés par lui à une pneumonie séro-fibrineuse
hémorrhagique. Il est vrai qu'il a avec beaucoup de flair rapproché cette
pneumonie de celle qu'amène la pustule maligne, mais il n’en est pas moins
vrai que c’est le bacille seul qui crée un trait d'union entre les deux maladies,
extérieurement si différentes, qui suivent l’inhalation des spores ou des
bacilles charbonneux.

Quant à l'explication de ces différences, il faut évidem ment la chercher
dans ce fait que dans le cas de l’inhalation des spores, celles-ci, à raison de la
lenteur de leur premier développement dans le poumon, n'ont pas encore
amené dans cet organe de graves désordres au moment où elles pénètrent
dans ce sang, où leur multiplication rapide les rend tout de suite mortelles.
Dans l’inhalation de bacilles, ceux-ci se développent de suite dans les
alvéoles, y amènent soit par eux-mêmes, soit par leurs sécrétions, les
désordres que nous avons constatés, et l'animal meurt par le poumon, alors
que dans le premier cas, il mourait par le sang, sans qu'on pût trouver
traces du passage de la bactéridie dans le poumon, qui pourtant lui avait
servi de porte.

On retrouve les mêmes résultats avec d’autres microbes. L'inhalation de
celui du choléra des poules à tué un lapin en 60 heures et 4 souris sur
7 en 36 à 60 heures. Les quantités inhalées étaient trop faibles pour qu'on
puisse accuser la pénétration par les voies digestives, même chezle lapin, si
sensible pourtant à l'action de ce microbe. [ci encore on retrouvait des foyers
pneumoniques, tout à fait analogues à ceux dont nous parlions tout à l'heure.
Ici encore, les alvéoles contenaient des exsudats fibrineux. De plus on trou-
vait des microbes non seulement dans leur intérieur, mais dans l’épais-
seur de leurs parois. Même résultat encore avec la septicémie.

Ainsi, le poumon est perméable à certains microbes, mais comment
l'est-il? A ce sujet, M. Buchner n'accepte pas complètement l'opinion de
M. Muskatbluth, qui concorde sur ce point, comme on pourra le voir dansle
résumé critique que nous avons publié, avec celle de M. Arnold. Pour lui, la
pénétration peut avoir lieu par les ymphatiques, les ganglions bronchiques et
le tronc lymphatique, mais elle peut aussi se faire par pénétration directe
dans les capillaires du poumon. Il reconnaît qu'il n'en apporte pas de
preuves précises, mais il fait remarquer que lorsque l'examen microscopi-
que des coupes conduit à admettre ce mode de pénétration, il n’y à vraiment
aucune raison théorique de s’y refuser. Les poussières colorées que M. Ar-
nold à fait inhaler à ces animaux ne vont pas, il est vrai, plus loin que les
wanglions bronchiques, mais des bacilles pouvant se développer dans le sang
ne sont pas assimilables à des poussières inertes, « leur pénétration est un
procès actif », et s'ils peuvent dépasser, comme l'expérience le montre, les
ganglions bronchiques, ils doivent évidemment pouvoir traverser aussi la paroi
du capillaire, non pas en y faisant un trou, mais en profitant des lacunes
qu'amène dans la paroi du vaisseau l'irritation morbide que produit le
microbe lorsqu'il est pathogène.

286 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

On ne voit pas bien comment M. Buchner concilie cette opinion avec
ce fait, démontré par ses expériences antérieures, que plus ‘l’irritation
est grande dans le tissu du poumon, moins est facile le passage des micro-
bes. Il entre probablement en jeu, dans ce cas, une action nouvelle qui vient
contrarier la première. Mais de l’ensemble de ces faits n’en résulte pas
moins la conclusion importante que le poumon peut servir quelquefois de
porte d'entrée à des microbes pathogènes, et cela, sans qu'il y reste de traces
microscopiques du passage. On n’est donc nullement autorisé à nier, sur la
foi d'une autopsie, la pénétration par le poumon d’une maladie contagieuse.
En reprenant à ce point de vue les notions admises pour le charbon, la fièvre
récurrente, la malaria, la tuberculose, la morve, l’érysipèle et même le
typhus et le choléra, M. Buchner montre que tout n'est pas dit sur le mode
de pénétration de ces maladies dans un animal. Mais là, ses idées, quoi-
que très suggestives, restent trop théoriques pour qu'il soit utile d'en pous-
ser plus loin l'exposé. Nous les retrouverons quand il les’aura soumises au
Critérium de l'expérience, car le sujet est trop important pour qu'il l’aban-
donne.

Dx.

D'. FERRAN. Sur l'incubation de la rage par trépanation, et sur un moyen
nouveau, de produire cette maladie chez les lapins. Gaceta médica cata-
luna, t. XI, p. 65.

M. le, D' Ferran paraît avoir rencontré, dans ses opérations de trépana-
tion des lapins, des difficultés qui tiennent peut-être à des questions de race
des animaux inoculés, peut-être à des questions de mode opératoire, mais
que l’on n’a, à ma connaissance, rencontrées nulle part ailleurs, au moins
à ce degré d'intensité. C'est ainsi qu'il meurt presque autant de lapins tre-
panés du premier au septième jour après la frépanation et du onzième au
vingt-septième, que dans la période du huitième au dixième jour qui est la
période normale d'évolution du virus de passage. Le chloroforme ou les
moyens de l’'administrer ont une part considérable dans cette mortalité.
« Les morts dues au chloroforme représentent 60 0/0 des décès enregistrés
dans les cinq premiers jours, et il convient de noter que le chloroforme
ordinaire du commerce nous donnait moins de morts que celui de Dunckham,
considéré comme pur. »

Pour éviter les ennuis et l'absence de sécurité que rencontre alors la
préparation des vaccins antirabiques, M. Ferran a eu l’idée de revenir à la
pratique bien connue de l’inoculation de la rage dans la chambre antérieure
de l'œil, On a abandonné, cette méthode, au laboratoire de M. Pasteur,
pour la préparation des moelles vaccinales, parce qu'avec elle les périodes
d’incubation sont beaucoup moins régulières qu'avec la méthode par trépa-
nation. 11 y a des cas de retard dans l'apparition des premiers symptô-
mes, par conséquent des irrégularités d'évolution très gênantes pour le
service de vaccination.

D’après: les renseignements particuliers que M. te D'Ferran a bien voulu
me fournir, dans une lettre datée du 14 mai, il rencontre aussi quelques

REVUES ET ANALYSES. 287

irrégularités du même ordre, mais il n’en reste pas moins très satisfait de
sa méthode. Il peut même se horner à de simples érosions dans la cornée,
avant ou après instillation d’une goutte d'émulsion de virus rabique.

Dans cette même lettre. M. Ferran nous dit que le. nombre de ses mala-
des, traités par sa méthode supra-intensive, qui était en décembre de 85,
est aujourd'hui de 187, sans qu'il y ait aucun accident. Nous lui donnons
avec plaisir acte de ces affirmations très intéressantes,

Dx.

P. BaumGarTex. Sur la question de la formation des spores dans le bacille
de la morve. Centralbl. f. Bakt., t. IL. p. 397, 1888.

Au sujet de la formation des spores dans les bacilles de la morve, on
en était resté aux résultats de Loeffler qui n’avait pas réussi à l'observer, et
l'avait même considérée comme peu probable, Mais il n'avait comme
unique argument que l’insuccès des méthodes de coloration employées
d'ordinaire à déceler les spores, Sous l'impulsion de M. Baumgarten,
M. Rosenthal s’est appliqué à l'étude de cette question, et il est arrivé à
montrer que de vieilles cultures du bacille de la morve sur la pomme de
terre, traitées par la méthode de coloration de Neisser (contact d’une heure
à 400° dans la vapeur d’eau, ou a 1500 à l’étuve sèche, avec la solution de
fuchsine d'Ehrlich; décoloration dans l’alcool chargé d'acide chlorhydrique.
puis recoloration au bleu de méthylène), donnent les mêmes apparences que
les bacilles du charbon ou les autres bacilles à spores endogènes. Les bacilles
se colorent en bleu, et les spores, tantôt libres. tantôt contenues à l’intérieur
du bacille. sont d'un rouge foncé.

« D’après ce critérium, généralement considéré comme sûr, il faut done
attribuer aux bacilles de la morve la faculté de former des spores. Il reste
à voir si cela a toujours lieu, ou seulement dans certaines circonstances. »

Dx.

Dr pa Camara MELLo-CaBraz et pa RocxA. Recherche du bacille typhique
dans les eaux potables de Coïmbre. Rapport à M. le gouverneur civil du
district. Coiïmbre, 1888.

A la suite d'une épidémie de fièvre typhoïde qui avait atteint, dans les
premiers mois de l'année 1887, la partie haute de la ville de Coimbre
(Portugal), et y avait attaqué environ 2 et demi pour cent de la population,
les Dr da Camara Mello Cabral et A. da Rocha ont reçu la mission de
rechercher si on pouvait retrouver le bacille de la fièvre typhoïde dans une
ou plusieurs des eaux potables qui alimentent la ville. Ils y ont réussi. Dans
les eaux d’une source à laquelle s’alimentaient les rues les plus éprouvées de
la ville, ils ont trouvé le bacille typhique, et en quantités assez grandes, car
six gouttes de l’eau de cette source ne leur ont pas fourni moins de 45 co-
lonies du bacille, présentant les caractères ordinaires, Ils n'en ont pas
trouvé dans les autres eaux de la ville.

Ce qui ajoute à l'intérêt de cette constatation, c’est que les deux auteurs
<S! CA

oP$ 4,

288 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

étaient, ils le disent eux-mêmes, très novices sur ces matières, qu'ils n’ont
fait leur éducation expérimentale qu'en étudiant les livres, qu'ils n’ont pas
fréquenté de laboratoire de bactériologie, et paraissent n'avoir eu que des
ressources très restreintes à leur disposition. Cela ne les a pas empêchés
d'essayer et d'aboutir. [ls ont surtout employé l'excellente méthode de cul-
ture et de séparation de MM. Chantemesse et Widal, qui repose sur l’em-
ploi de l’acide phénique dans les milieux de culture. Get exemple est fait
pour encourager à cette recherche beaucoup de médecins, qui en ce moment
y répugnent en alléguant leur incompétence ou leur manque d'outillage. Si
ces études se multipliaient, elles révéleraient sans doute une large diffusion
du bacille typhique, et donneraient à l'hygiène prophylactique de cette
maladie une orientation plus décidée que celle qui ne s’accuse maintenant
que par la mise en suspicion des eaux potables.
Dx.

D' GLosic. Sur un bacille venu sur la pomme de terre et dont les spores
offrent une résistance remarquable dans la vapeur d'eau surchauffée,
Zeitschrift fur Hygiene, t. IX, 1887, p. 322.

Au cours des recherches sur les microbes poussant à haute température
dont nous avons parlé page 102 de ces Annales, M. Globig a eu l’occasion
d'observer un bacille venu sur la pomme de terre, où il forme des colonies
d’un rose pâle, et se développant facilement jusqu’à 50° seulement. Il donne
rapidement des spores qui sont douées, d’après M. Globig, d’une résistance
extraordinaire à l’action de la chaleur. Elles sont capables de germer après
l’action de la vapeur d’eau à 100° pendant 5 à 6 heures, et pendant 3/4 d'heure
eutre 109 et 113. Elles ne sont tuées qu’au bout de 25 minutes entre 113 et
416, de 10 minutes entre 192 et 193, de 3 minutes à 196, et de 2 minutes à
127°. Ces chiffres, on le voit, s’éloignent notablement de ceux qu'on admet
généralement pour la destruction des germes dans une atmosphère humide.

Il convient done de dire comment M. Globig opère.

Pour étudier l’action de la chaleur sur les spores de son bacille, il em-
ploie le procédé classique des fils de soie enduits de germes et soumis à une
dessiccation préalable. Les fils de soie sont ensuite placés dans un double de
papier formant une espèce de boîte fermée, qui les protège contre les impu-
retés extérieures qui pourraient troubler les résultats de l'expérience: ces
boîtes de papier sont placées dans l’autoclave sur un treillis en fil de fer
replié en forme d'U renversé, dont les branches plongent dans l’eau, de
facon à maintenir la partie supérieure à 40 centimètres au-dessus de la sur-
face de l’eau.

On peut se demander si dans ces conditions, et surtout si l'air de l’au-
toclave n’est pas entièrement évacué par une ébullition à 100° de durée
convenable, les fils de soie sont bien à la température qu'indique le thermo-
mètre plongé dans la vapeur d’eau.

E. W.

REVUES ET ANALYSES. 289

Le GENDRE, BARETTE ET LEpAGe. Traité pratique d’antisepsie. Paris, G. Stein-
heil, 4888.

« Bien peu de médecins contestent encore l'utilité des études bactériolo-
giques. La plupart admettent que la connaissance des microbes, de leur
morphologie, de leur biologie, des procédés de recherche et des méthodes
de coloration qui les mettent en évidence, constitue vraiment une science
aussi indispensable à l'exercice de l’art médical que les autres sciences dites
auxiliaires ou mieux fondamentales, la physique, la zoologie, la botanique
et la chimie. »

Voilà une profession de foi, qui, il y a quelque dix ans, eût paru bien
audacieuse, et qui le paraîtra peut-être encore un peu à quelques personnes.
Ces mêmes personnes ne se scandaliseront sans doute pas moins du titre
du volume, qui est un Traité d'antisepsie médicale, chirurgicale et obstétri-
cale, dont la première partie, l'antisepsie médicale a seule paru sous la
signature du D' Le Gendre. Antisepsie médicale, c’est-à-dire thérapeutique
des maladies microbiennes. La thérapeutique devenue une question d’anti-
septiques, voilà le progrès.

Sans doute, tout n’est pas fait dans cette voie, et on ne saurait faire un
crime au livre de M. le D' Be Gendre de refléter les hésitations et les incer-
titudes du temps présent. Le mot antiseptique à flotté comme un mirage
devant les yeux de la plupart des médecins qui ont accepté les idées
nouvelles. Dire d’une substance qu'elle est antiseptique, dire d'une autre
qu'elle est colorée, sans rien ajouter sur la couleur ni le ton, c’est être aussi
peu précis dans un cas que dans l’autre. C'est dans ces derniers temps seule-
ment que la thérapeutique médicale, surtout sous l'impulsion de M. Bou-
chard, a renoncé à cette expérimentation aveugle qui a successivement fait
essayer sur toutes les maladies l’action de tous les antiseptiques, et a tenté
d'établir un accord, ou plutôt un désaccord, entre les caractères et les
propriétés de l’antiseptique à choisir, et la nature et le siège du microbe
a combattre. En un mot la thérapeutique a commencé, et tend de plus en
plus à devenir rationnelle. Le jour où elle Le sera, la médecine sera non
pas l’art dont parlait M. le D' Le Gendre dans les lignes que nous avons
citées, mais une science, et la bactériologie, loin d’être un accessoire, sera
le squelette de sa main bienfaisante. Le livre du D' Le Gendre fait pres-

sentir cette aurore.
Dx.

N. Lugimorr. Sur la technique de la coloration des bacilles de la tuberculose
et de la lèpre. Centralbl. f. Bakt. u. Parasit, t. UE, p. 540.

Presque tous les procédés de coloration du bacille de la tuberculose qui,
obéissant à la préoccupation d'Ehrlich d'opérer en milieu alcalin, emploient
pour cela l’aniline pure ou l’eau d’aniline, ont l'inconvénient que ce liquide
colorant ne peut être préparé à l'avance. Seul, le procédé de Ziehl, dans
lequel on remplace l'aniline par une substance acide, l’acide phénique,
donne un liquide qui se conserve, mais en devenant plus sombre. M. Lubi-

290 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

moff paraît avoir notablement amélioré cette méthode, restée jusqu'ici un
peu dans l'ombre, en remplaçant le phénol par l'acide borique.

Voici comment il opère. Dans 20- d’eau, on introduit 0#, 5 de cristaux
d'acide borique, dont on hâte la solution en versant 15" d’alcool absolu.
(On pourrait peut-être remplacer l'alcool absolu par un autre dosage d’eau
et del’alcool ordinaire, mais, dansleslaboratoires de bactériologie, la croyance
en l’alcool absolu est absolue.) Quoï qu’il en soit, lorsqu'il ne reste plus que
quelques cristaux non dissous, on ajoute 05", 5 de Fuchsine (Rubine), qui se
dissout par l'agitation. On obtient ainsi un liquide qui se conserve et est
toujours prêt pour l'emploi, sans filtration nouvelle.

Pour colorer des préparations sèches de crachats tuberculeux, on cou-
vre la lamelle de liquide colorant, et on chauffe une ou deux minutes
à la flamme du gaz; on décolore dans une solution d’acide sulfurique au
1/5 ; on lave à l'alcool ; on porte une minute et demie dans une solution
alcoolique saturée de bleu de méthylène; on lave à l’eau: on sèche, et on
monte dans l'huile de bois de cèdre ou dans une solution de trois parties
de baume de Canada dans une partie de xylol.

Pour colorer les coupes de tissus, on les chauffe pendant une ou deux
minutes dans un bain de matière colorante qu’on porte presque à l’ébulli-
tion ; on leur fait passer quelques secondes dans un bain d’alcool; puis on
les immerge pendant une ou deux minutes, suivant leur épaisseur, dans la
dilution d’acide sulfurique, on lave à l'alcool, et on plonge une demi-
minute ou une minute dans une solution alcoolique saturée de bleu de
méthylène, étendue de trois fois son volume d’eau distiliée. On déshydrate
et on lave à l’alcool, on éclaircit à l'huile de bois de cèdre, et on monte au
baume additionné de xylol.

La même méthode réussit pour les bacilles de la lèpre. La seule diffe-
rence est qu'il ne faut faire durer que quelques instants le bain d'acide sul-
furique étendu, jusqu’à ce que la couleur brun noir de la préparation ait
passé au brun jaune. En le prolongeant plus longtemps, les bacilles de la
lèpre se décolorent, ce qui les distingue tout à fait des bacilles de la tuber-

culose.
Dx

Kirr. Sur la diminution de virulence du microbe du charbon symptomatique
par la vapeur d'eau bouillante. Centralbe, f. Bakt, t. NX, p. 572 et 605.

Le seul point sur lequel le mémoire de M. Kitt nous paraisse ajouter
quelque chose de nouveau aux résultats de M. Arloing, Cornevin et Tho-
mas sur le même sujet, c’est qu'on peut vacciner solidement, en une seule
opération, un animal au moyen de virus du charbon symptomatique chauffé
six heures dans la vapeur d’eau bouillante à 100°. C'est la chair musculaire
de l'animal qui, desséchée et broyée, sert à l'expérience. Quand on en ino-
cule 5, 10, 43 centigrammes sous la peau d’une brebis, on lui communique
une maladie légère qui lui donne l’immunité. Avec 2 centigrammes, le ré-
sultat est moins sûr. Mêmes résultats pour le veau. Reste à savoir si ces
résultats sont constants, et si cette méthode de vaccination, que M. Kitt pro-

INSTITUT PASTEUR. 294

pose sur la foi d’un petit nombre d'expériences, pourrait supporter sans
à-coups une épreuve en grand.

Avec un chauffage de cinq heures, la virulence est restée beaucoup plus
grande et les doses ci-dessus peuvent tuer l’animal. La zone vaccinale con-
fine donc de très près à la zone dangereuse, et quand on fait intervenir, en
outre, les questions de prédisposition individuelle de chaque animal à
vacciner, on ineline à eroire que le procédé ne présente pas une grande
sécurité. MM. Arloing, Cornevin et Thomas ont employé le virus chauffé à
100° ou 104° pour donner un commencement d’immunité qu'ils renforcaient
avec du virus chauffé à 85° ou 90°. Mais, expérience faite, ils en sont arri-
vés à préférer encore leur mode actuel de vaccination. x

x.

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES À L'INSTITUT
PASTEUR DU 1°" Au 30 aAvriz 1888.

Personnes prises de rage dans le cours du traitement.

Parra (Michel), 19 ans, de Sidi-bel-Abbès, département
d'Oran, Algérie. Mordu le 18 mars 1888 par un chien, 1° à la
joue droite, très forte morsure ayant beaucoup saigné, 2° à la
lèvre supérieure, morsure ayant saigné, 3° dans l'intérieur de
la bouche sur la muqueuse de la lèvre supérieure, une forte
morsure qui a beaucoup saigné.

Ces blessures ont été lavées avec un liquide par un sorcier,
12 heures après qu'elles ont été faites.

Le chien mordeur appartenait au patron de Parra. Il a mordu
trois chiens et a été reconnu enragé par M. Gouze, vétérinaire
à Sidi-bel-Abbès.

Parra a été mis en traitement le 28 mars. Dès le 8 avril un
srand changement survient dans l'état de Parra ; il se plaint de
mal à la tête, de mal au ventre, ilne mange pas, devient inquiet
et dort mal. Il se lève dans la nuit du 12 au 13 avril, il erre dans
la maison, heurte aux portes. Le 14 au soir, en montant se cou-
cher, il se livre à des actes délirants. Depuis le 10 mars. il a
une hyperesthésie cutanée généralisée. Le 15, il éprouve des
fourmillements dans la lèvre mordue, il veut la couper. Le 16,
accès de fureur dans la matinée. Dans l après-midi, il a de l’aé-
rophobie, de l'hydrophobie et une exaltation très vive. Il meurt
à l'Hôtel-Dieu dans la nuit du 16 au 17 avril.

Le bulbe de Parra, inoculé par trépanation à des lapins, leur
a donné la rage en quatorze jours.

292 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — AVRIL 1888

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INnCIRCACESI RENTE 6! » | » [LS ) » |-SAINS
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MOTSUrES GINU NS CAN Re Cu D) | NES » » 1 Pr 0)
Morsures multiples en divers points
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Cautérisations efficaces. ........... » » | » » a ||
= inefficaces DORÉ NOIR D] » » 9 » ) » D] »
Pas de cautérisation......... MORE A NE) DEN EP NO ETS NE
Habits a0échines SRE REA DRE re FETE) » | » |»
MORSUTESS ANUS RSS INR ARE RE E 2 D Alpes » »[ » |»

{ Français et Algériens..|..| 26) .. [400

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TOFTAL. GENÉRADE ES ET AAC 156

1. Pour l'interprétation des termes et la signification des diverses colonnes du
tableau, se reporter aux statistiques précédentes, p. 95, 443 et 207, t. I.

Les animaux mordeurs ont été :

Chiens, 145 fois; chats, 10 fois; cheval, 1 fois.

Le Gerant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils,

Annales de l'Institut Pasteur PI VI

" Fig. 3 Fig. 2
_ 4

Ro ux pholo

Couzin del llotypu À Quensac &C LPoquie

PI VI

Annales de l'Institut Fasteur

Fig 9

— cite

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Fig 2

9me ANNÉE. JUIN 1888. N° 6

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

NOTE SUR LA MALADIE DES BŒUFS DE LA GUADELOUPE

CONNUE SOUS LE NOM DE FARCIN,

Par M. E. NOCARD.

Les anciens auteurs, Hurtrel d'Arboval‘, Gellé?, Cruzel®,
ont décrit, sous le nom de /arcin du bœuf, une maladie chro-
nique caractérisée par l’inflammation suppurative des vaisseaux
et des ganglions lymphatiques superficiels, entraînant rarement
la mort, mais se traduisant à la longue par l’amaigrissement et
« par des symptômes de phtisie tuberculeuse » (Cruzel).

Cette affection, jadis fréquente, si l’on en juge par les obser-
vations assez nombreuses que renferment les premiers volumes
du Recueil de médecine vétérinaire, paraît être devenue très rare
aujourd’hui, au moins en France. En effet, Zundel, dans sa
réédition d'Hurtrel d'Arboval‘, Peuch, dans celle du livre de
Cruzel Ÿ, n’en font plus mention. Elle existerait cependant encore
dans la Bresse et dans le nord de la France, d’après ce que
m'ont dit plusieurs confrères; elle existe certainement à la
Guadeloupe où, d’après M. Couzin:, elle est très fréquente et,
4. Dictionnaire, 2° édition, 1838.

. Pathologie bovine, 1846.

. Trailé des maladies de l'espèce bovine, 1" édition, 1869.
. Dictionnaire, nouvelle édition, 1876.

3. 2° édition, 1883.

. Revue vétérinaire de Toulouse, 1879.

D oc # O2 09 >

19

294 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

malgré son évolution toujours lente, — (elle dure ordinairement
plusieurs années), — beaucoup plus grave qu’en France; la
mort, à plus ou moins longue échéance, en serait la terminaison
fatale.

Le farcin du bœuf, il serait superflu d'insister sur ce point,
n’a rien de commun avec le farcin morveux des équidés; les
expériences déjà anciennes de Renault, celles plus récentes de
MM. Cadéac et Malet ont démontré d’une façon péremptoire que
le bœuf est absolument réfractaire à l’inoculation du virus
morveux.

Mais s’il est certain que le farcin du bœuf est autre chose
qu'une manifestation de la morve, on n’avait jusqu'ici aucune
donnée certaine sur sa véritable nature ; dans l’article Maladies
des lymphatiques du dictionnaire de M. H. Bouley, j'ai émis
l'hypothèse, — basée sur la description qu’en ont donnée les
auteurs, car pour ma part je n’ai jamais eu l’occasion de l’obser-
ver, — quil s'agissait vraisemblablement d’une lymphangite
tuberculeuse; c'était aussi l’avis de M. Couzin qui a vu beau-
coup de malades, et fait de nombreuses autopsies.

C'était une erreur : M. Couzin ayant bien voulu m'envoyer
du pus recueilli purement et des fragments de tissus malades,
j'ai pu m'assurer que le farcin du bœuf est une maladie micro-
bienne très différente de la tuberculose.

I. — Symptômes, marche et lésions de la maladie.

La description suivante, que j’emprunte à Cruzel, donnera
une bonne idée des symptômes et de la marche de l'affection :

« Le farcin du bœuf a son siège ordinaire aux membres et sous le ventre
en suivant le trajetdes sous-cutanées. Il se présente sous la forme de tumeurs
circonscrites et de cordes; et chez le même animal, lorsque le farcin existe
sur deux membres, on remarque parfois les deux formes différentes. Les
cordes ou tumeurs (boutons) sont indolentes, quelquefois très dures, d’autres
fois légèrement fluctuantes; on les trouve aux deux faces du canon, à
l’avant-bras et à la face interne de la cuisse; elles se dirigent toujours vers
les ganglions lymphatiques, qui sont ordinairement engorgés.

« Lorsque des cordes ou des boutons de farein existent au canon ou aux
avant-bras, il est rare que les ganglions lymphatiques placés en avant de
l'épaule ne soient pas plus ou moins engorgés, et il est également rare que
des symptômes de phtisie tuberculeuse ne se manifestent pas lorsqu'il y a du

LE FARCIN DU BOEUF À LA GUADELOUPE. 295

farcin aux membres et que l'engorgement ganglionnaire dont je parle est ap-
parent. On rencontre sur le trajet des cordes des abcès circonserits qui se
dessinent parfaitement, ce qui n'empêche pas que, dans bien des cas, ces
cordes soient empâtées et fluctuantes.

« Les abcès farcineux s'ouvrent quelquefois, mais surtout au pli du genou
ou du jarret. En incisant les cordes ou les tumeurs, on fait sortir par
l'ouverture pratiquée, en comprimant la tumeur ou la corde à sa base, une
matière blanchâtre, ressemblant assez à de la crème épaisse. Cette matière
est inodore.

« Le farcin se développe insensiblement chez le bœuf, et sa durée par
conséquent est très longue. J'ai vu des bœufs qui portaient des tumeurs
farcineuses depuis plusieurs années sans que jamais aucun autre symptôme
morbide se fût manifesté chez ces animaux. Ils avaient travaillé, ils s’en-
graissaient et ils arrivaient à l’abattoir tout aussi bien que s'ils n’eussent pas
été atteints du farcin.

« Les tumeurs farcineuses ne se terminent point par la résolution chez le
bœuf, et la suppuration est un état permanent qui ne se modifie que par
l'induration. »

Le tableau symptomatique qui précède concorde bien avec
les observations recueillies en France. Toutefois, au point de
vue du pronostic, il paraît un peu bien optimiste; d’après
Maillet', en effet, « les malades engraisseraient très difficile-
ment; aussi les propriétaires finissent-ils par s’en défaire tôt
ou tard, lorsqu'ils s’apercoivent que la maiïgreur persiste, malgré
les soins qu'ils prennent pour faire cesser cet état ». D'ailleurs,
s’il est vrai, comme le dit Cruzel, qu’ « à la longue les malades
finissent par présenter des symptômes de phtisie tuberculeuse »,
il est difficile d'admettre avec lui qu'ils puissent « travailler,
engraisser et arriver à l’abattoir tout aussi bien que s'ils n'étaient
pas atteints de farcin ».

M. Couzin a observé sur les bœufs de la Guadeloupe des sym-
ptômes plus accusés. L’affection semble débuter par l’inflam-
mation d’un ganglion lymphatique; les ganglions brachiaux,
pré-scapulaires, pré-pectoraux sont les premiers et le plus
fréquemment atteints; le ganglion tuméfié, chaud, douloureux,
œædémateux, augmente lentement de volume et finit par offrir les
caractères d’un abcès froid induré; la ponction donne issue à un
pus épais, crémeux, parfois caséeux et grumeleux. La paroi de
l’abcès est extrêmement épaisse (8, 10, 12 centimètres), indurée,
lardacée, eriant sous le tranchant du bistouri, et sa face interne

4. Recueil de medecine vétérinaire, 1837.

296 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

est tomenteuse, douce au toucher, bourgeonneuse. Après la
ponction, le sujet semble revenir à la santé ; mais à une échéance
plus ou moins éloignée, parfois 6 mois, d’autres tumeurs
apparaissent, parcourant les mêmes phases que la première
(Voy. fig. 1, pl. VID); l'animal meurt dans le marasme.

Il est intéressant de noter qu'aucun des vétérinaires français
qui ont écrit sur le farcin du bœuf ne paraît avoir eu l’oécasion
de pratiquer l’autopsie d’un malade. M. Couzin a été plus heu-
reux ; dans toutes les autopsies qu'il a faites, outre les collections
purulentes qui s'étaient développées dans les ganglions des
membres et du tronc, il a trouvé les poumons, le foie, la rate et
les ganglions farcis de pseudo-tubercules, dont la partie centrale
avait subi la tranformation caséeuse ou purulente, suivant le
volume de la tumeur {communication inédite).

II. — Étude microbiologique de la maladie.

Comme je l’ai dit plus haut, M. Couzin a bien voulu me
procurer du pus et des fragments d'organes recueillis à l’au-
topsie d’un bœuf farcineux depuis deux ans. Le pus avait été
aspiré purement dans des tubes effilés, stérilisés et fermés à la
lampe; les pièces étaient conservées en petits fragments dans
l'alcool fort.

L'examen du pus pratiqué suivant le procédé d’Ehrlich, avec
double coloration au bleu de méthylène ou au brun de Bismark,
permet tout d’abord d'éliminer l'hypothèse d’une lésion tuber-
culeuse : le bacille de Koch y fait défaut, et l’on n’y observe
aucun autre microbe ayantfixé la couleur secondaire. Le procédé
de Gram donne le même résultat négatif, lorsqu'on pousse à
fond la décoloration par l'alcool; mais si l’on décolore par
l'huile d’aniline, suivant les indications de Weigert, on obtient
un tout autre résultat: au milieu des globules de pus, colorés en
rose par l’éosine ou le carmin, apparaît en quantité considérable
un microbe spécial différent de tous ceux décrits jusqu'ici. C'est
un fin et long bacille se présentant sous forme de petits amas,
enchevèêtrés d’une façon inextricable, la partie centrale figurant
un noyau opaque, d'où rayonnent à la périphérie une myriade
de fins prolongements, dont la plupart semblent ramifiés; on
dirait une tête de choux-fleurs, un fagot épineux ou encore une
semence de bardane. (Fig. 2, pl. VIL.)

LE FARCIN DU BOEUF A LA GUADELOUPE. 297

Sous le rapport des dimensions, ce bacille peut être comparé
à celui du rouget du pore.

L'examen des tissus malades (poumons, foie, rate, gan-
glions) les montre farcis de nodules tuberculiformes dont la
partie centrale, purulente plutôt que caséeuse, présente en
grande quantité les mêmes amas bacillaires en forme de brous-
sailles.

La culture de ce microbe se fait aisément dans tous Îles
milieux liquides ou solides, maintenus au contact de l'air, à une
température variant entre 30 et 40°. Les tubes de gélatine
peptone ensemencés ne donnent pas trace de culture, à la tempé-
rature de la chambre; si on les met à l’étuve, la semence y pul-
lule en quelques jours.

Le pus recueilli purement au centre d'un abcès ou d’un
pseudo-tubercule convient à merveille pour l'ensemencement:
il ne renferme pas d’autre microbe que le bacille décrit plus haut.

Sur la gélose, le microbe se développe en petits amas irré-
gulièrement arrondis, saillants, opaques, plus épais sur les
bords, d’une teinte blanc jee à surface mamelonnée, terne
et comme poussiéreuse (fig. 4, 5 et 6, pl. VITE); à la longue, ces
plaques, d’aspect lhéncide se réunissent et se confondent,
donnant à l’ensemble de la culture l'apparence d’une membrane
épaisse et grossièrement plissée (Fig. 5).

Sur la pomme de terre, la culture se fait rapidement sous
forme de petites plaques écailleuses, très saïllantes, très sèches,
de couleur jaune pâle, dont les bords, comme taillés à pic, sem-
blent se soulever au-dessus du niveau du substratum (Fig. 7).

Sur le sérum gélatinisé, la culture est moins rapide; mais
elle a le même aspect que sur la gélose, à cela près qu'elle est
plus humide.

Dans les différents bouillons, c'est encore sous forme d’amas
irréguliers que se multiplie le bacille ; amas blanchâtres, dont la
plupart tombent au fond du ballon, dont quelques-uns restent
flottants à la surface, où ils s'étalent en une sorte de pellicule
arrondie, lenticulaire, de couleur gris sale, avec un reflet ver-
dâtre, d'aspect poussiéreux, qui ne se laisse pas mouiller par le
liquide. C’est surtout dans les bouillons additionnés de glycé-
rine et de peptone que la culture revêt cet aspect; on dirait alors
des feuilles de nénuphar s'élalant à la surface d'un étang, ou

298 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

mieux encore du bouillon gras dont les yeux se seraient figés
par le refroidissement.

La culture réussit encore, moins abondante et moins rapide,
dans les milieux dont la réaction est légèrement acide; elle ne
parait pas modifier la réaction des bouillons neutres ou alca-
lins, alors même qu’on y a ajouté du sucre.

Ensemencé dans du lait, le microbe s’y développe avec les
mêmes caractères sans en provoquer la coagulation, sans en
modifier la réaction.

L'organisme est exclusivement aérobie ; toutes les tentatives
de culture dans le vide ou en présence de l'acide carbonique
ont échoué.

Quel que soit le milieu de culture, l'examen microscopique
montre que le microbe s’y est reproduit en affectant la même
disposition qu'il présente dans les tissus vivants; ce sont tou-
jours les mêmes amas filamenteux, enchevètrés d’une façon
inextricable, dont la nature bacillaire n’est appréciable que sur
les bords, où les irradiations ont encore l'aspect rameux que je
signalais plus haut (fig. 3, pl. VI).

Cette ramilication est plus apparente que réelle; l'étude
attentive des colonies récentes montre que le développement des
filaments se fait par élongation; lorsque le bacille a acquis le
double de sa longueur primitive, il se segmente et l’article
nouvellement formé s’infléchit, le plus souvent à angle droit, sur
le segment ancien qui continue à croître en droite ligne; en
somme, il s’agit là d’une fausse dichotomisation analogue à ce
que l’on observe chez les Cladothrix; mais l'étude en est ren-
due plus difficile par les très petites dimensions du microbe
et son inaptitude à fixer la plupart des couleurs d’aniline. Du
reste, la coloration par le procédé de Gram est grossière, et
peu favorable à la définition des particularités morphologiques
des microbes.

Les colonies anciennes paraissent riches en spores, celles
surtout qui se sont développées à la surface des liquides glycé-
rinés ; les spores, extrêmement petites, résistent à l’imprégnation
par les matières colorantes: elles apparaissent sous forme de
lacunes ovoïdes incolores, à l'extrémité des segments bacillaires,
au niveau des points où semble s’opérer la dichotomisation.

Les cultures conservent longtemps leur virulence et leur

LE FARCIN DU BOEUF A LA GUADELOUPE. 299

végétabilité ; après 4 mois de séjour à l’étuve à 40°, elles poussent
avec la même vigueur dans les différents milieux, etlescobayes
qu'elles servent à inoculer meurent aussi rapidement qu’au
début.

Le chauffage ne m'a paru tuer le bacille qu'à la condition
d'être poussé jusqu'au-dessus de 65°. À 659, une vieille culture
chauffée pendant 15 minutes a donné de nouvelles cultures, et
tué les cobayes inoculés par injection intrapéritonéale; 10 mi-
nutes de chauffage à 70° ont détruit la virulence et la végéta-
bilité du microbe.

TL. — Action pathogène du microbe.

Le bacille du farcin du bœuf est inoculable : mais les résultats
de l’inoculation sont très différents suivant l’espèce de l’animal
auquel on a eu recours et surtout-:suivant le procédé d’inocula-
tion mis en œuvre.

En thèse générale, c’est au cobaye qu'il faut s'adresser de pré-
férence; puis viennent le bœuf et le mouton. Le lapin, le chien,
le chat, le cheval et l’âne peuvent être considérés comme réfrac-
taires.

L'injection intra-péritonéale et l'injection intra-veineuse
provoquent constamment chez le cobaye, dans un délai variable
de 9 à 20 jours, des lésions qui simulent à s’y méprendre celles
de la tuberculose miliaire.

A l'ouverture des cobayes inoculés par le péritoine, la
séreuse se montre littéralement farcie de nodules tuberculifor-
mes, au centre desquels a pullulé le microbe quise présente tou-
jours sous l’aspect d’amas bacillaires en forme de broussailles ;
ces nodules sont surtout confluents dans l’épiploon qui est trans-
formé en une sorte de boudin volumineux mamelonné ; la pres-
sion en fait sourdre quelques gouttelettes de matière puriforme,
épaisse, difficile à dissocier, où l'examen microscopique montre
une quantité considérable d’amas bacillaires.

Les viscères de la cavité abdominale (foie, rate, reins, intes-
tins), paraissent également farcis de pseudo-tubercules ; mais un
examen attentif permet de s’assurer que leur enveloppe péri-
tonéale est seule atteinte; leur parenchyme est tout à fait
intact. Les organes de la cavité thoracique ne sont jamais
envahis.

300 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Les lésions consécutives à l'injection intra-veineuse simulent
mieux encore la tuberculose miliaire généralisée ; à l’autopsie
du sujet d'expérience, on trouve tous les viscères, mais surtout
le poumon, le foie et la rate, infiltrés d'un nombre considérable
de petits nodules tuberculiformes au centre desquels l'examen
microscopique, après coloration par la méthode Gram-Weigert,
montre une ou plusieurs touffes de bacilles.

Que l’on ait injecté du pus ou du liquide de culture, peu
importe; le résultat est toujours le même : les lésions sont iden-
tiques ; la mort survient toujours également vite.

Chez la vache et chez le mouton, l'injection intra-veineuse
provoque des lésions analogues, également généralisées à lous
les parenchymes ; mais les animaux résistent si longtemps que
je ne puis dire encore si la mort peut en être la conséquence.

Deux vieilles vaches et deux moutons bretons ont été inoculés
le 26 mars 1888, par injection dans la jugulaire d’une dilution
de pus prélevé sur un cobaye.

L'une des vaches a dü être sacrifiée le 11 avril, pour servir
aux exercices de médecine opératoire; à l’autopsie, les poumons
ont montré un nombre considérable de granulations miliaires,
grisâtres, semi-transparentes, abondantes surtout dans les
couches superficielles, dont chacune avait pour centre une
grosse touffe de bacilles enchevèêtrés. Le foie et la rate présen-
taient des lésions semblables, mais en petit nombre.

L'un des moutons, sacrifié le 22 avril, avait des lésions iden-
tiques, mais beaucoup plus accusées.

Les deux autres sujets sont encore vivants ; ils n’ont pas
cessé de se bien porter.

Chez le lapin, le chien, le chat, le cheval et l’âne, les injec-
tions intra-vasculaires ou intra-péritonéales ne provoquent aucun
accident ; à quelque date que l’on sacrifie les sujets d'expérience
après l’inoculation, quelle que soit la dose du produit injecté, pus
ou culture, on ne retrouve pas trace du microbe.

L'inoculation hypodermique réalise à peu près les conditions
de l'infection naturelle, en ce sens que, même chez le cobaye, la
lésion provoquée marche avec une extrême lenteur.

. Au point d’inoculation, il se forme constamment, chez tous
les sujets, un abcès dont le pus est très riche en microbes; mais
tandis que cet abcès reste peu volumineux, s'ouvre, se vide et se

LE FARCIN DU BOEUF A LA GUADELOUPE. 301

cicatrise rapidement chez les animaux spécifiquement réfrac-
taires (lapin, chien, cheval, âne), il persiste chez les autres;
chez le mouton et chez la vache, il reste peu volumineux, s'ulcère
de temps à autre, s’indure, puis semble disparaître; mais plu-
sieurs semaines, plusieurs mois après, un nouvel abcès se montre
au voisinage, en un point plus rapproché du centre, qui se com-
porte comme le premier; il faudrait sans doute de longs mois
et peut-être plusieurs années pour que le microbe, toujours
présent dans le pus, gagnât les viscères et s’y généralisät.

Chez le cobaye, les lésions provoquées par l’inoculation hypo-
dermique sont plus graves et plus rapides. L’abeès qui se forme
au point d'inoculation est toujours volumineux ; en quelques
joursles vaisseaux etles ganglionslymphatiques dela région s’en-
gorgent, s'indurent,etdeviennentle siège d’un énorme phlegmon
dont l’ulcération verse au dehors plusieurs centimètres cubes de
pus ; à ce moment, l'animal, très amaigri, semble devoir bientôt
succomber; mais au contraire il revient peu à peu à son état
normal, il engraisse et ne conserve plus, dela lésion si grave qu'il
avait présentée, qu'une induration des lymphatiques et des gan-
glions primitivement atteints.

Sur 16 cobayes inoculés sous la peau, 1 seul est mort le
54° jour, avec une pseudo-tuberculose miliaire, généralisée à
tous les viscères ; tous les autres ont résisté; leur état général
est excellent, et ceux que j'ai sacrifiés 1, 2, 3 el mois après l'ino-
culation n'avaient pas d’autres lésions que celles des ganglions
et des vaisseaux qui collectent la lymphe de la région inoculée :
petits foyers purulents, riches en amas bacillaires, qui ont con-
servé leur virulence, entourés d'une induration considérable.

C’est pourquoi je suis tenté de croire que chez le cobaye, où
l’inoculation sous-cutanée a provoqué des légions généralisées,
une veine a dû être perforée et recevoir une petite quantité du
liquide inoculé.

En somme, l’expérimentation confirme pleinement les don-
nées de la clinique. Le ba cille du farcin du bœuf, injecté dans
les veines ou dans le péritoine, tue le cobaye en quelques jours ;
au contraire, inoculé sous la peau du même animal, il reste pen-
dant de longs mois confiné dans les vaisseaux ou les ganglions
lymphatiques du voisinage, sans modifier l’état général du sujet,
sans ralentir son engraissoment.

302 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

On comprend dès lors que les bœufs farcineux puissent con-
tinuer leurs services aussi longtemps que le bacille n'a pas
franchi les ganglions et pullulé dans les viscères.

EXPLICATION DES FIGURES.

Planche VIE.

Fig. 4. Bœuf indigène de la Guadeloupe, farcineux depuis 2 ans, encore
très vigoureux; n'a pas cessé de travailler.

Dessiné d'après nature par M. Couzin.

Fig. 2. Très petit amas bacillaire en forme de broussailles, du pus gan-
glionnaire d'un cobaye inoculé par injection hypodermique d’une goutte de
culture dans le bouillon de poule. G. = 850.

Pus coloré au Gram-Weigert, sans double coloration. Les filaments
montrent nettement la fausse dichotomisation qui caractérise le microbe.

Fig. 3. Amas bacillaire provenant d'une culture dans le bouillon de
poule après un séjour de 4 jours à 37°. G. = 850.

Dissociation par écrasement entre 2 lamelles. Coloration simple au
Gram-Weigert,

Planche VEEX.

Fig. 4. Culture sur gélose (5° passage), après 8 jours de séjour à 370.

Aspect lichénoïde très accusé.

Fig. 5. Culture sur gélose après 20 jours de séjour à l'étuve (37°). On a
ensemencé largement le contenu d’un pseudo-tubercule de l’épiploon d’un
cabaye mort 44 jours après l’inoculation intrapéritonéale d’une goutte de
culture sur gélose.

Les colonies, d’abord isolées. et confluentes, se sont rapidement confon-
dues pour former une seule plaque sèche, mince, écailleuse, plissée.

Fig. 6. Culture sur une épaisse couche de gélose glycérinée, contenue
dans un iarge vase à fond plat, ensemencée avec une trace de pus gan-
glionnaire de cobaye inoculé sous la peau.

20 jours de séjour à l’étuve à 37°.

Fig. 7. Culture sur pomme de terre après 15 jours de séjour à l’étuve.
On a ensemencé une trace de pus qu'on a soigneusement étalée sur la
tranche de pomme de terre.

Les colonies, d’abord isolées et confluentes, se sont promptement réunies
pour former une plaque très mince, très sèche, à surface écailleuse, à bords
tranchants et nettement soulevés.

Lorsqu'on ensemence une très petite quantité de matière, la culture
revêt l'aspect lichénoïde si accusé sur la figure 4.

Les cultures sur betteraves ont le même aspect; elles sont cependant
moins sèches, plus succulentes.

CULTURE DES BACILLES DE LA TUBERCULOSE SUR LA POMME DE TERRE,

Par le Dr A.-D. PAWLOWSKY, de Saint-Pétersbourg.

La question du développement des bacilles tuberculeux en
dehors de l'organisme humain et sur les milieux d’origine
végétale est, d’après Koch, intéressante pour l’étiologie et la
prophylaxie de la tuberculose. Aussi Koch a-t-il essayé de cul-
tiver ces bacilles sur la pomme de terre, mais ses tentatives
échouèrent. Après une série d'expériences ! « qui ne donnèrent
aucun résultat positif », Koch déclare que les bacilles de la
tuberculose ne se laissent pas cultiver sur la pomme de terre,
ne se développent que sur des substances animales et dans l’orga-
nisme de l'homme et desanimaux, etne se transmettent à l'homme
que par l'homme ou par les produits des animaux. Ce sont de
« véritables parasites » qui, en déhors des organismes animaux
et de leurs produits, ne trouvent nulle part les conditions indis-
pensables à leur développement et à leur transmission directe à
l’homme par les substances végétales.

Ces conclusions conservent toute leur valeur en ce qui con-
cerne la transmission de la tuberculose. Elles sont trop absolues
lorsqu'elles nient la possibilité de cultiver le bacille tuberculeux
sur des milieux d’origine végétale.

En effet, dans des recherches sur la tuberculose locale chi-
rurgicale, faites au laboratoire de M. Pasteur et qui seront pu-
bliées prochainement, j'ai réussi à obtenir des cultures du
bacille de la tuberculose sur la pomme de terre. Le procédé
employé était le suivant :

On coupe avec un couteau d'argent des tranches de pommes
de terre qu’on introduit ensuite, sans stérilisation préalable, dans
des tubes à essai étranglés dans leur tiers inférieur, semblables

1. Kocn, Die Aetiologie des Tuberculose. Mittheilungen aus dem Kaiserl. Gesund-
heitsamte, &. IT, p. 57 et 76-82. Berlin, 1884.

304 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

à ceux qui ont été proposés dans ce but par M. Roux. (V. ce vol.
p. 28). Les tranches sont poussées jusqu’à la partie rétrécie qui
“les empêche de tomber au fond du tube. Les tubes et leur contenu
sont stérilisés dans l’autoclave pendant 25 à 30 minutes à une
température de 115°, et placés ensuite quelques heures dans
l’étuve à 30°. La surface des tranches de pomme de terre s’é-
goutte, et l’eau tombe au fond du tube.

Les surfaces des tranches ainsi préparées sont ensemencées,
soit avec des cultures pures des bacilles de la tuberculose, soit
avec des tissus tuberculeux. On fait pénétrer la semence dans la
substance de la pomme de terre par des frictions avec uñe spa-
tule en platine. Quant aux tissus tuberculeux (tubercules isolés
des articulations ou moelle tuberculeuse des os), on les triture
entre la spatule de platine et un bistouri stérilisés, et on les fait
également pénétrer par friction dans la substance de la pomme
de terre. On peut aussi les broyer, au moyen d’une baguette
de verre, dans un tube en verre fermé à l’un de ses bouts et sté-
rilisé. On procède ensuite à l’ensemencement au moyen de la
spatule. Les tubes ensemencés avec des cultures pures et des
tissus tuberculeux sont fermés à la lampe à leurs parties supé-
rieures, et placés dans l’étuve à une température de 39°.

1° Cultures sur la pomme de terre, issues de cultures pures sur
gélose pepto-glycérinée. — Quand on emprunte la semence à des
cultures faites sur gélose glycérinée. on ne remarque rien de
particulier pendant les premiers dix jours qui suivent l’ense-
mencement. Au douzième jour, on peut déjà constater sur la
tranche de la pomme de terre des parties grisâtres dont l'aspect
est plus secque le reste de la surface. Une parcelle de cet enduit
montre au microscope une culture assez abondante des bacilles
de la tuberculose. Au vingtième ou vingt et unième jour, les cul-
tures deviennent tout à fait caractéristiques. La surface ense-
mencéeestsèche, blanchâtre, lisse, moins consistante, et se laisse
facilement enlever par le raclage avec la spatule. Par sa couleur
blanchâtre et sa sécheresse, elle se distingue nettement des par-
ties non ensemencées de la pomme de terre, qui sont jaunes. plus
fermes, grenues et humides. La multiplication des bacilles se fait
dans les couches superticielles. La culture ne s'élève que peu
au-dessus de la surface de la pomme de terre. Après un mois,
les cultures sont plus abondantes, elles sont très manifestes

BACILLE DE LA TUBERCULOSE. 305

même dans les tubes ensemencés avec des aiguilles de platine.
Au bout de cinq à six semaines, elles se présentent comme
un enduit blanchâtre qui, dans quelques tubes, prend l'aspect
de granules blanc grisätres, de la dimension d’une tête d’épin-
gle. Ces granules s’observent surtout au tiers inférieur de la
pomme de terre. Dans les ensemencements consécutifs, cette
première génération donne lieu, au bout de deux à trois semaines,
au développement, dans tousles tubes, de nouvelles générations
qui présentent les mêmes particularités que la première.

2 Cultures sur la pomme de terre des bacilles tuberculeux de
la moelle des os des lapins. — À l’occasion d’un autre genre de
recherches, j'ai introduit, dans la moelle du fémur du lapin, des
cultures tuberculeuses provenant de gélose pepto-glycérinée,
et délayées dans du bouillon. En dix semaines, les animaux suc-
combaient à la tuberculose généralisée. La moelle du fémur, mise
à découvert avec des instruments bien stérilisés, était préparée
au moyen des procédés déjà mentionnés, et ensemencée sur la
pomme de terre. En même temps la moelle des os était aussi
semée sur du sérum glycériné et peptonisé.

Au bout de deux semaines, on pouvait constater, dans la
moitié des tubes ensemencés, l'apparition d’une strie blanchâtre,
lisse, sèche, absolument caractéristique. Une semaine plus tard,
l'examen microscopique décelait dans les tubes en question une
culture abondante des bacilles de la tuberculose, tandis que sur
le sérum sanguin pepto-glycériné, les ensemencements restèrent
stériles. En observant pendant trois à six semaines les cultures
de la moelle des os sur la pomme de terre, on y remarque les
mêmes particularités caractéristiques que celles des cultures sur
la pomme de terre provenant de la gélose. Aprèstrois semaines, les
surfaces de cultures sont sèches et blanchätres. Au bout de cinq
à six semaines, on voits’éleverdes granules gris blanchâtres de la
grosseur d’une tête d’épingle. Comme dans les expériences pré-
cédentes, l’examen microscopique décèle aussi des cultures
abondantes, se laissant facilement enlever avec la spatule.

En partant de cette première génération de cultures de la
moelle des os sur la pomme de terre, on obtient, par ensemence-
ments successifs sur le même milieu, dans un délai de deux à trois
semaines, une deuxième et une troisième génération de bacilles.

J'ai aussi fait des ensemencements sur la pomme de terre

306 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

glycérinée. Je me servais de glycérine à 5 pour cent, stérilisée
à l’autoclave à 115°. Les tranches de pomme de terre, arro-
sées de quelques gouttes de liquide glycériné, étaient placées
dans l’étuve afin d'obtenir l’imbibition de la pomme de terre par la
glycérine, et l’égouttage des surfaces de culture. Les bacilles de
la tuberculose se développent sur la pomme de terre glycérinée
un peu plus rapidement que sur la pomme de terre pure. Ainsi,
dans deux expériences avec la pomme de terre glycérinée
(deuxième génération provenant de la moelle des os), j'ai obtenu
des cultures abondantes déjà au huitième el au douzième jour.
D’autres fois je n'ai remarqué aucune différence entre les deux
milieux relativement à la rapidité du développement des cultures.

La réaction des tranches de pomme de terre sur lesquelles
on culüive le bacille de la tuberculose, et celle de l’eau accumulée
au fond du tube sont faiblement alcalines.

Au point de vue morphologique, les cultures de la tubercu-
lose sur la pomme de terre présentent quelques particularités
intéressantes. Dans les cultures datant de huit à douze jours, les
bacilles, vus au microscope, sont homogènes, ne contiennent pas
de spores, se colorent facilement par le procédé d'Ehrlich, et sont
beaucoup plus larges que les bacilles provenant du sérum pur,
des crachats, ou des cultures de Koch (que j'ai eu l’occasion
d'examiner au laboratoire même de M. Koch). Au bout de trois
semaines, les cultures se laissent toujours bien colorer par la
méthode d'Ebrlich. D'une manière générale, la structure des
bacilles est homogène. A côté des exemplaires pour ainsi dire
ordinaires, on en voit d'autres beaucoup plus longs et plus
larges, avec des spores bien apparentes, en forme de corpuscules
un peu ovales, clairs, non colorés. Il est facile de se convaincre
que ce sont de véritablesspores et non des «granulations ». Dans
quelques bacilles on trouve jusqu’à quatre spores. Les bacilles
sporifères sontrares. Dans les cultures anciennes (six semaines),
on aperçoitaussi, à côté des bacilles à spores claires, non colorées,
des corpuscules ronds, fortement colorés, libres, tantôt ronds,
tantôt ovales ou allongés en bâtonnets de longueur variable,
allant jusqu'aux dimensions d’un bacille adulte type. Nous
voyons donc que la croissance des spores se fait par allonge-
ment ou, autrement dit, que le développement des bacilles a
lieu dans la direction du plus grand diamètre de la spore.

BACILLE DE LA TUBERCULOSE. 307

Expériences. — Les cultures des bacilles de la tuberculose
sur la pomme deterre {deuxième génération sur la pomme de terre
de la culture sur gélose glycérinée primitive, ettroisième généra-
tion sur la pomme deterre de la semence empruntée à lamoelle des
os du lapin) ont été injectées dans une veine de l'oreille des lapins.
Les animaux moururent 18 jours après l'injection. A l’autopsie
on constata une tuberculose miliaire des poumons, la présence
des bacilles dans la moelle des os, et une rate très volumineuse
et tuméfiée, dont la pulpe était remplie de bacilles, tandis que
sa capsule présentait des groupes de tubercules miliaires gris.

Ces expériences démontrent que les bacilles de latuberculose,
cultivés sur la pomme de terre, ont une virulence égale à celle
qu'ils ont dans les cultures sur gélose glycérinée. Il a été en effet
constaté par MM. Nocard, Roux, Yersin, qu'après une injection
dans le sang des bacilles de ces cultures, les animaux meurent
en 18 jours environ, de tuberculose généralisée sans tubercules
apparents, et présentent constamment une rate très volumineuse
dont la pulpe est remplie de bacilles.

Nous voyons donc que les bactlles de la tuberculose se déve-
loppent très bien sur les milieux nourriciers végétaux, en con-
servant leurs particularités morphologiques et leur virulence.

Si jusqu'ici on n’a pas obtenu des cultures sur la pomme de
terre, la faute en est à l’imperfection de la méthode employée
(cultures dans de grandes cloches de verre) qui ne prévient pas
les impuretés et la dessiccation de la substance nourricière. Dans
les tubes fermés à la flamme, les tranches de pommes de terre
se trouvent dans des conditions exceptionnellement favorables,
c'est-à-dire dans une atmosphère invariablement chaude et
humide. L'importance de cette dernière condition m'est apparue
nettement dans plusieurs de mes expériences. Dans quelques cas,
après la fermeture du tube à la flamme, il s'était produit des fis-
sures très fines dans le verre. Dans les tubes de ce genre les eul-
tures ne se développèrent pas; les tranches de pommes de terre
noircirent et se desséchèrent au bout de deux à trois semaines.
Il suffit donc de la moindre fissure, passée souvent inaperçue
pendant la fermeture du tube, pour arrêter le développement
des cultures, par suite de l’évaporation continue de l’eau et

de la dessiccation du milieu.
Mes résultats positifs m’amènent à cette conclusion que la

308 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

pomme de terre peut être employée en qualité de milieu nourri-
cier pour obtenir, par ensemencement des tissus tuberculeux,
des cultures pures de bacilles de la tuberculose, el qu’elle peut
remplacer avec avantage le sérum du sang. La préparation des
tranches et leur stérilisation sont plus faciles que celles du sérum
gélatinisé. La pénétration par friction des bacilles des tissus
tuberculeux dans la substance nourricière, conditio sine qua non
du succès, est aussi plus facile avec la pomme de terre.

Il faut remarquer toutefois que dans les essais que nous
venons de rapporter, les ensemencements sur pomme de terre
ont été faits, soit avec des cultures sur gélose glycérinée, soit
avec la moelle des os d'un lapin inoculé lui-mème avec des
bacilles cultivés sur gélose glycérinée. Or, on sait, par les
expériences de MM. Nocard et Roux, que les bacilles qui ont
poussé sur un milieu glycériné se développent ensuite plus
facilement, si on les porte sur d’autres milieux moins favorables.
Obtiendrions-nous aussi facilement des cultures sur pomme de
terre, si nous prenions, comme semence, de la tuberculose
humaine ou des tubercules d'animaux morts à la suite d’inocu-
lations de crachats tuberculeux? Tous ceux qui ont étudié la
tuberculose savent la difficulté qu’on rencontre à obtenir une
première culture dans ces conditions. Dans deux cas, nous
n'avons obtenu aucune culture, ni sur la pomme de terre
(12 tubes), ni sur milieux glycérinés (24 tubes), en ensemençant
les fongosités d’une synovite tuberculeuse développée chez un
lapin, à la suite de l'injection, dans une articulation, du pus d’un
abcès froid.

Des expériences comparatives ont montré que le développe-
ment des cultures de la tuberculose sur le sérum pepto-glycé-
riné est plus abondant que sur la pomme de terre, mais il n’en
est pas moins prouvé, par nos expériences, que les bacilles de la
tuberculose se développent très bien sur les substrats végétaux
(pomme de terre) et peuvent par conséquent trouver les condi-
tions nécessaires à leur développement en dehors du corps des
animaux et des substances qui en dérivent.

l'institut Pasteur

mr
1INp

SUR L'OXYDATION DU GLUCOSE PAR LES MICROBES,

Par M. L. BOUTROUX.

En 1880, j'ai montré que plusieurs espèces de mycoderme
du vinaigre sont capables d’oxyder d’autres corps que l'alcool ;
j'ai particulièrement étudié l’action d’un mycoderme, que j'ai
nommé Micrococcus oblonqus, sur le glucose. Si l’on sème ce
Micrococcus dans une solution aqueuse de glucose additionnée
de substances nutritives, à mesure que le ferment se développe,
la liqueur devient acide. L’acidité mettrait bientôt un terme au
développement du Micrococcus. Si, par un excès de carbonate de
chaux, ajouté d'avance à la liqueur, on fait en sorte que celle-ci
reste presque neutre, le glucose est bientôt totalement remplacé
par un acide ayant pour formule C° H'° 0”.

Cette formule est celle de l'acide gluconique, obtenu pour la
première fois par MM. Hlasiwetzet Habermann dans l'oxydation
du glucose par le chlore. L'’acide que j'obtenais différait de
l'acide gluconique, tel que l'avaient décrit les auteurs de sa
découverte, sur un point important, c’est qu’il ne réduisait pas
la liqueur de Fehling, tandis que, d’après MM. Hlasiwetz et
Habermann, « l'acide gluconique la réduisait comme le glu-
cose! ». Je donnai donc, au moins provisoirement, le nom
d'acide zymogluconique à celui que je préparais par fermentation.
Depuis cette époque, M. Heinrich Kiliani perfectionna la prépa-
ration de l'acide gluconique , obtint cet acide plus pur et
démontra qu'il ne réduisait pas la liqueur de Fehling. Je n'avais
plus de raison pour supposer que mon acide zymogluconique
en füt distinct. Je préparai l'acide gluconiqne par le pro-
cédé Kiliani et je constatai qu'il était identique avec celui que
j'obtenais par fermentation.

Ainsi donc, par l'intermédiaire d'un Micrococcus capable
de transformer l'alcool en acide acétique, on peut fixer aussi
O sur C° H:? 05 pour former l'acide gluconique C° H:? O7,

4. Liebig's Annalen, CLV, 193.

310 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Ce fait a été vérifié depuis par un chimiste anglais, M. A.-
J. Brown ‘. Ce savant n’a eu connaissance que des notes que j'ai
publiées dans les Comptes Rendus de l’Académie des sciences.
Désirant savoir si l'acide gluconique était le seul produit de cette
fermentation, 1l se borne, après avoir trouvé le gluconate de
chaux dans la liqueur, à examiner le résidu insoluble et à cons-
tater qu'il n’y trouve pas autre chose que du carbonate de chaux
et des cellules de ferments. La conclusion qu'il en tire ressort
avec plus de rigueur des expériences que j'ai décrites dans mon
mémoire complet, publié dans les Annules de l'École normale
supérieure, 2, série, t. X, p. 67 (1881). J'y établis expérimentale
ment la formule complète de la réaction. Je fais une fermenta-
tion en vase clos, sans craie, et, mesurant les poids du glucose
détruit et de l’acide gluconique formé, faisant l'analyse du gaz
avant et après fermentation, je démontre que chaque équivalent
de glucose absorbe deux équivalents d'oxygène et produit un
équivalent d'acide gluconique. En réalité, il y a absorption d’un
petit excès d'oxygène et prodaction d’une petite quantité d’acide
carbonique, ce qui s'explique parles fonctions vitales du ferment
lui-même.

Le premier degré d'oxydation du glucose se fait donc par
l'intermédiaire d’un ferment d'une manière parfaitement nette ;
c’est là un agent spécial d’oxydation, beaucoup plus délicat que
les agents purement chimiques, tels que l'acide nitrique, l’acide
chromique, le chlore, etc...

J'ai obtenu, par l'intermédiaire d’un second ferment, un
second degré d’oxydation. Ce ferment est encore un Micrococeus,
indiscernable morphologiquement du premier. Comme celui-ci,
il est en petits grains à l’état jeune, et peut s’allonger en longs
filaments contournés comme des poils en vieillissant?. Il a
même des actions chimiques communes avec le premier; mais il
possède aussi des actions spéciales.

Il est capable d'acétifier l'alcool, mais beaucoup plus lente-
ment que le M. oblongus dans les mêmes conditions. Étudions

son action sur le glucose.

4. Journ. of chem. Soc. 1886, p. 172.
2. J'emprunte à mon mémoire déjà cité des figures qui montrent cette varia-
bilité de forme. Le grossissement est d'environ 400 diamètres. La figure 1 repré-

SUR L'OXYDATION DU GLUCOSE PAR LES MICROBES. 341

Semons ce microorganisme dans une solution de glucose
additionnée de bouillon de levure comme substance nutritive. La
liqueur devient acide, et bientôt cette acidité même met fin à la
fermentation. Analysons la liqueur : nous y trouvons encore, et
uniquement, l’acide gluconique. Jusqu'ici rien de nouveau.

sente le M. oblongus très jeune, se développant dans les conditions les plus favo-
rables. II est encore mieux figuré dans la partie gauche de la PI, IX, G— 500. La
partie droite donne l'aspect de la fermentation quand elle est terminée, avec les
cristaux de gluconate de chaux.

©
SSS

La figure 2 le représente vieilli dans un milieu neutre, plusieurs mois après la
fin de la fermentation.

}

La figure 5 montre le rajeunissement des cellules en filaments de la figure 2,
semées dans un milieu favorable au développement.

Les figures 4e 5 montrent des cellules de forme anormale quoique jeunes, provenant
du développement d'une semence normale dans un milieu de culture défectueux.

Ces faits de déformations imprimées à un micrococcus soit par le vieillissement
dans un milieu où il a produit une fermentation, soit par la culture dans un
milieu mal approprié à son développement, étaient nouveaux en 1880. Il convient

. de les rapprocher des faits analogues signalés par M. Wasserzug dans ces Annales,
présent volume, p. 75.

312 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Mais semons le même microorganisme dans un milieu com-
posé de la même manière, sauf qu'on y a ajouté du carbonate de
chaux en excès. La fermentation engendre d'abord du gluconate
de chaux; quelquefois elle ne va pas plus loin. Mais si la forme
du vase est convenable, le gluconate de chaux, à son tour, est
transformé en un sel de chaux insoluble, qui cristallise en
croûtes superficielles et en dépôts le long des parois du vase.

Si le même Micrococcus est semé dans une solution de glu-
conate de chaux additionnée de bouillon de levure, les mêmes
cristaux de sel insoluble se forment à mesure que le ferment se
développe. J’ai appelé l'acide formé ainsi acide oxygluconique.
Nous reviendrons tout à l'heure sur sa composition et ses pro-
priétés.

Voici done un microbe qui, à lui seul, peut produire une
échelle d’oxydation. Il était nécessaire de m’assurer que la
semence employée ne comprenait qu'une seule espèce, pour
pouvoir affirmer que ce rôle multiple appartenait à un seul et
même être. J’en ai eu la certitude par les deux preuves suivantes :

D'abord, j'ai traité la semence, qui paraissait déjà pure,
comme un mélange, et j'ai cherché à faire l'analyse de ce
mélange supposé, par la méthode de dilution, en opérant à peu
près comme fait M. Miquel pour le dénombrement des bactéries
des eaux. Le Micrococeus, ainsi isolé, avait les propriétés qui
viennent d'être décrites.

En second lieu, comme il importait surtout de savoir si la
semence n’était pas mélangée de M. oblongus, j'ai semé dans un
même milieu, composé d'oxygluconate de potasse et de bouillon
de levure, d’une part la semence à éprouver, d'autre part du
M. oblongus pur. Ce dernier a acquis un développement bien
visible à l'œil, tandis que l’autre semence ne s’est pas développée
du tout dans ce milieu. Les deux semences étaient donc bien
distinctes : l'acide oxygluconique, produit de sécrétion de l’une
d'elles, était pour celle-ci un antiseptique, tandis qu’il pouvait
servir à l’autre de milieu de culture.

D'après cela, quand j’obtenais de l’acide gluconique au moyen
du Micrococcus nouveau, ce n’était pas par une action étrangère
due à l'intervention accidentelle du M. oblongus.

= Étudions maintenant l'acide oxygluconique. La fermentation
le donne à l’état de sel de chaux. Ce sel est presque insolubl,

SUR L’OXYDATION DU GLUCOSE PAR LES MICROBES. 313

dans l’eau froide. Pour en tirer l’acide, on le transforme en sel de
cadmium : on dissout le sel de chaux dans l’acide chlorhydrique,
on ajoute une solution de sulfate de cadmium en quantité équi-
valente à la chaux du sel, puis de l’alcool. Le sulfate de chaux
qui précipite est éliminé par filtration, puis la liqueur est exac-
tement neutralisée par l’ammoniaque. L’oxygluconate de cad-
mium cristallise. Ce sel, convenablement purifié, est ensuite
décomposé par l'hydrogène sulfuré. L'acide oxygluconique
obtenu, desséché dans le vide sec, est un sirop presque incolore,
d’une saveur très acide, très soluble dans l’eau et dans l’alcool,
peu soluble dans l’éther. Il dévie à gauche le plan de polarisa-
tion de la lumière, et son pouvoir rotatoire, calculé en admettant
la formule C°H'° 0’, est{al, — — 149,5 pour des solutions con-
tenant environ 2 grammes d'acide dans 100 de solution. Il est
extrêmement altérable. La moindre élévation de température le
fait brunir. On ne peut même pas le dessécher à froid, dans l'air
sec, au-dessus de l’acide sulfurique : dans ces conditions, il perd
indéfiniment de son poids en devenant de plus en plus brun. Le
moindre excès de base l’altère. L’ammoniaque le fait noireir
rapidement. Il est fortement réducteur. Ses sels réduisent le
nitrate d'argent lentement à froid, instantanément à l’ébullition.
Avec le nitrate d'argent ammoniacal, ils donnent un beau mi-
roir. Ils réduisent la liqueur de Fehling bouillante. Ils font
noircir, à l’ébullition, le sous-nitrate de bismuth en présence de
la soude. Ils donnent à l’ébullition un précipité noir avec le
nitrate mercureux. Ils ne donnent rien à froid avec le chlorure
mercurique; mais à l’ébullition, ils forment avec ce sel un pré-
cipité blanc qui peu à peu devient gris.

Il fallait déterminer la formule de cet acide. On ne peut
guère se servir de l’acide libre pour résoudre ce problème,
parce que sa grande altérabilité ne permet pas de l'obtenir assez
pur. J'ai analysé les sels de chaux, de strontiane, de cadmium
et de plomb. Voici les résultats :

Sel de chaux (combustion par le chromate de plomb mélangé
de bichromate de potasse dans l'oxygène libre).

Observé. Calculé pour Différence,
C12 H24 CaO17,
DE LR 29,76 °/, 30,00 °/, —_ 0,2% %
HT 5.24 5.00 + 0,2%

Cars 62 11,67 — 0,05

314 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.
Sel de strontiane (mème procédé de combustion).

Observé. Calculé pour Différence.

C'2 H?24 SrO17,
Gr ft OT 27,29 0/, + 0,36
HS MNT 4,33 + 0,22
Sr0 24004808 19,63 004

Sel de plomb (combustion par l'oxygène et oxyde de cuivre).

Observé. Calculé pour Différence.

C22"H222Ph016°
CE ASE 2079 200 22,690, — 0,60
Here 3,63 3,0 + 0,43
ÉDOUF EN 85; 20 35.40 0, 00

Sel de cadmium.

Observé. Calculé pour Différence.
C1? H22 CdO16.
CA MOOD 076 2091007: + 0,03

De plus, j'ai fait une dissolution avec un poids connu d'acide
libre, desséché à froid dans le vide, et un dosage de l’acidité
par les liqueurs titrées a indiqué pour l'équivalent le poids 230,
qui s’accorderait avec la formule C° H'* 0°. :

En considérant comme anhydres ceux des composés analy-
sés qui contiennent le moins d'hydrogène, c’est-à-dire les sels
de plomb et de cadmium, y déduit de ces analyses, pour la for-
mule de l'acide, C° H ‘*O*. Ce n’est là qu’une formule purement
empirique, établie en dehors de toute hypothèse relative à la
constitution. En donnant cette formule (Comptes rendus. Ac.
Sc. 1886, CIF, p. 924) j'ai fait remarquer qu’elle était celle d’un
acide signalé par M. Maumené, sous le nom d'acide hexépique.
J'ai cherché à préparer l’acide hexépique de M. Maumené au
moyen des méthodes indiquées par lui. Je n'ai pas réussi à obte-
nir ainsi un acide qui possédàt des propriétés semblables à celles
de l'acide que j'obtenais par fermentation. Je ne puis pas tran-
cher la question de l'identité ou de la différence de ces deux
acides, parce que je n'ai jamais pu avoir entre les mains l’acide
hexépique. D'ailleurs cette question est, à mes yeux, secondaire.
Que l'acide oxygluconique soit nouveau ou non, l'intérêt est ici,
je crois, surtout dans son mode de production. De plus la for-

“mule Cf H° Of n’est qu’une formule brute, pouvant renfermer

x

de l’eau étrangère, et ne se prêtant à aucune interprétation

SUR L’OXYDATION DU GLUCOSE PAR LES MICROBES. 315

rationnelle, La grande altérabilité de l’acide oxygluconique au
contact des alcalis, son pouvoir réducteur énergique conduisent
à lui attribuer la double fonction d’acide monvobasique et d’aldé-
hyde. J'ai d’ailleurs constaté qu'il donne avec le chlorhydrate de
phénylhydrazine, en présence de l’acétate de soude, un composé
cristallisé en lamelles jaunes. Je n’en ai pas fait l'analyse parce
que je ne l’ai pas obtenu assez pur. Mais le seul fait de sa forma-
tion est un argument de plus pour attribuer à cet acide la fonc-
tion aldéhyde. Dès lors, il serait naturel d'admettre qu'il dérive
de l’acide gluconique (acide alcool) par la suppression de H°, et
que sa formule est C° H°'° 07. Les corps analysés prennent ainsi
les formules suivantes :

Acide oxygluconique desséché dans

lende AÉEDId: ME mL CSH1007 + 2H°0
Oxygluconate de chaux . . . . .. (CSH°07)?Ca+ 3H20
— de strontiane . . . . (C5 H° 07) ?Sr +3 H°0
— dCPplOINDe. RAR (C6 H° 07) ?Pb + 2H°0
— de cadmium . . . .. (CSH2 07) ?Cd+ 2H°0

Or la formule C° H*° O7 appartient à un acide connu, l'acide
glycuronique, découvert par MM. Schmiedeberg et Meyer (Zeit.
für phys. Chemie, TT, 422). Des dérivés de cet acide prennent
naissance dans l’organisme des animaux à qui l’on a ingéré
diverses substances : camphre, bornéol, menthol, divers phé-
nols, chloral. Au point de vue des propriétés chimiques, il a été
étudié surtout par M. Thierfelder. Ce chimiste lui attribue la
formule de constitution

CO®H (CHOH): COH

qui est précisément celle que je donnerais aussi à mon acide
oxygluconique. Ces deux acides sont cependant bien distincts,
comme le montre la comparaison de leurs propriétés :

1° L'ucide glycuronique, en solution aqueuse, donne, quand
on l’évapore par l’action de la chaleur, un anhydride en grands
cristaux brillants, fusibles à 167°. — L'’acide oxygluconique,
évaporé au bain-marie, ne fournit qu'un sirop brun, devenant
de plus en plus noir.

2° L'acide glycuronique est dextrogyre : — l'acide oxygluco-
nique est lévogyre.

316 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

3° L’acide glycuronique est insoluble dans l'alcool, — l’acide
oxygluconique y est très soluble.

4° M. Thierfelder a obtenu les glycuronates de potasse et de
soude cristallisés, et n'a pu faire cristalliser ceux de cadmium
et de chaux. — Au contraire, je n'ai pas pu faire cristalliser les
oxygluconates de potasse et de soude, tandis que ceux de cad-
mium et de chaux cristallisent très facilement. On obtient par
exemple des cristaux très nets d’oxygluconate de chaux, quant
à une solution d'oxygluconate de potasse on ajoute une solution
de chlorure de calcium.

L'acide oxygluconique est donc distinct de l’acide glycuro-
nique, bien que ses propriétés conduisent à lui attribuer la for-
mule qui a déjà été donnée à ce dernier acide. Je ne saurais dire
lequel des deux a le plus de droits à la conserver.

En résumé, le nouveau Micrococcus que j'ai étudié a la pro-
priété d’oxyder le glucose en deux temps :

Premier temps : conversion de la fonction aldéhyde en fonc-
tion acide, d'où résulte l’acide gluconique; cette réaction a lieu
seule et est définitive quand le milieu de culture peut devenir
de plus en plus acide.

Deuxième temps : conversion d'une fonction alcool de l’acide
gluconique en fonction aldéhyde, d'où résulte l'acide oxygluco-
nique; cette réaction peut se faire en prenant pour point de
départ soit le gluconate de chaux, soit le glucose ; dans ce second
cas, elle exige la présence d’un excès de carbonate de chaux et
elle ne se produit qu'après la transformation du glucose en glu-
conate de chaux.

Dans l'étude de la fermentation gluconique du glucose, je
montrais qu'un même ferment peut produire des fermentations
distinctes quand on le fait agir sur diverses matières fermentes-
cibles. Maintenant je fais voir, d’une part, qu’une même trans-
formation chimique (conversion du glucose en acide gluconique)
peut être produite par deux microbes différents, ce qui n’est plus
un fait nouveau; et d'autre part, qu'un même ferment peut
produire, dans un même milieu, deux réactions chimiques suc-
cessives,

REVUES ET ANALYSES

Max Wozrr. — Sur la transmission par hérédité des maladies infectieuses.
Virchow’s Archiv, 1888, t. CXIT.

Le placenta oppose-t-il, oui ou non, une barrière infranchissable aux
éléments microbiens? Cette question de la transmission des bactéries à
l'embryon n’a pas seulement une grande importance au point de vue pra-
tique; elle présente encore un extrême intérêt par les problèmes scienti-
fiques auxquels elle est intimement rattachée : aussi son étude a sollicité
depuis longtemps l'attention des expérimentateurs. Mais, dans le monde des
infiniment petits plus qu'ailleurs encore, les problèmes en apparence les
plus simples sont souvent si compliqués, tant de facteurs entrent en jeu
dans l'appréciation des faits que ce n’est qu'après bien des tâtonnements,
bien des essais souvent infructueux que la vérité finit enfin par se dégager.
C'est ce qui explique comment il se fait que cette question du passage des
microorganismes au fœtus, tant étudiée déjà, est loin d'être complètement
élucidée encore. Le sujet est toujours à l’ordre du jour, et tandis que le
numéro d'avril de ces Annales publiait quelques recherches que nous avons
faites sur ce sujet, les Archives de Virchow inséraient presque en même
temps un important travail du prof. Wolff, de Berlin : Ueber Vererbung
von Infectionskrankheiten.

C'est au bacille charbonneux, l'agent parasitaire par excellence, qu'on a
demandé depuis longtemps une réponse à la question qui nous occupe. On
se souvient que les premières expériences de Brauell, Davuine, Bollinger
tendaient à faire admettre comme un fait classique l’imperméabilité des
villosités placentaires pour les bactéridies. Ce furent les expériences bien
connues de Sfraus et Chamberland qui, les premières, ébranlèrent fortement
cette doctrine : il fut démontré que « le placenta ne constitue pas une
barrière infranchissable pour la bactéridie charbonneuse. Dans bon nombre
de cas, le sang des fœtus des mères charbonneuses renferme des bactéridies
et est virulent. » C'était la méthode des cultures dans les milieux liquides
qui, appliquée pour la première fois à ces recherches, renversait la loi de
Brauell-Davaine. Il convient d’ailleurs de remarquer que Straus et Cham-
berland se sont bien gardés de traduire en loi générale ces faits positifs :
un certain nombre de cultures fætales restaient stériles. Aussi ne prétendent-
ils nullement considérer le passage des microorganismes au fœtus comme
un fait absolument normal.

Le professeur Chauveau, au contraire, n’a jamais pu démontrer le passage
du bacille charbonneux au fœtus, chez la brebis pleine; il n’y a guère que
Koubassof qui soit arrivé à des résultats extraordinairement positifs. Sans

318 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

même recourir à la méthode des cultures, par le seul examen de coupes
fœtales colorées pas la méthode de Gram, Koubassof constata, ce qui
Jamais n'avait été vu avant lui, le passage constant au fœtus non seule-
ment du bacille charbonneux, mais du vibrion septique, du rouget, et même
du bacille tuberculeux! C'est là, on le voit, le renversement complet de
l'ancienne doctrine. On comprend que l'apparition du travail de Koubassof
ait fait naître bien des réflexions; il y avait une opposition si frappante
entre les premiers résultats et ceux éommuniqués par ce dernier observateur
qu'une nouvelle étude de la question s'imposait véritablement. C’est ce qui
explique sans doute l'apparition presque simultanée du travail de Wolf et
du nôtre.

Nous allons analyser brièvement les expériences fort bien conduites du
professeur de Berlin; on nous permettra de les mettre en regard de nos
propres recherches et de tirer de cette comparaison quelques réflexions
qu'elles nous ont suggérées.

La technique suivie par Wolff et nous est, au fond, la même. Les fœtus
enlevés de l'utérus étaient portés quelque temps dans le sublimé à 1/1000 :
puis, pour enlever l’antiseptique, on les plongeait dans l'alcool et enfin
dans l'eau stérilisée. Les instruments dont on se servait étaient toujours
soigneusement flambés. La cavité abdominale une fois ouverte, on pratiquait
dans l'organe à ensemencer une incision; les bords de celle-ei étaient
écartés par les deux branches d’une pince, tandis que dans la profondeur de
l'incision, on détachait un petit fragment de tissu de la grosseur d'un
pois. Ce fragment était agité de suite dans la gélatine nutritive liquéfiée et
celte dernière étendue sur plaque de verre, dans le but de compter éven-
tuellement les colonies charbonneuses qui s’y seraient développées. On n'a
pas, comme Straus et Chamberland l'ont fait, aspiré le sang des organes au
moyen d'une pipette, en raison d’un passage du travail de Koubassof qui
dit avoir observé les bactéridies, dans les organes fœtaux, ex dehors des
vaisseaux,

Wolff a inoculé le charbon à neuf femelles pleines (huit cobayes, une
lapine), portant ensemble vingt-neuf fœtus. La mort est arrivée après un
temps variable entre 36 heures et 3 jours. Pas une seule fois, il n’a retrouvé
les bacilles dans les organes du fœtus, traités par la méthode de Gram, mal-
gré les nombreux examens auxquels il s’est livré : voilà déjà un premier résul-
tat bien différent des faits constatés per Koubassof! Quant aux placentas,
ceux-ci montraient des bacilles charbonneux dans la partie maternelle de
l'organe; jamais Wolff ne les a vus dans les villosités choriales.

Des organes fœtaux, foie, rate, reins, poumons, Wolff à pratiqué en
tout cent cinquante-six cultures; six seulement ont montré la poussée de
colonies charbonneuses, et, chose curieuse, nous remarquons que ces quelques
résultats positifs sont fournis par deux animaux seulement, les cobayes des
expériences VII et IX.

Enfin, sur vingt-neuf inocuiations faites au moyen de fragments d'organes
fœtaux à treize cobayes et seize souris blanches, trois animaux seulement
ont succombé (deux cobayes, une souris).

Tels sont les résultats auxquels est arrivé l’expérimentateur de Berlin.

REVUES ET ANALYSES. 319

Wolff revendique pour ces expériences, et à très juste titre, une supériorité
incontestable sur celles des observateurs précédents; en effet, pour chaque
examen, les trois moyens de contrôle, étude microscopique, cultures,
inoculations aux animaux, ont été combinés et utilisés avec un soin
extrême, C'est, du reste, ce qui distingue ces nouvelles recherches et leur
assure une grande importance, car l'application à chaque cas des trois
modes d'examen est loin d’avoir toujours été faite par les autres expéri-
mentateurs : Koubassof s’est contenté de l'examen microscopique, Straus
et Chamberland ont surtout fait des cultures, Chauveau à eu recours parti-
culièrement à l'inoculation de sang fœtal à d'autres animaux ; aucun n’a
combiné, aussi heureusement que Wolff, les trois moyens de contrôle,

Il s'agit maintenant d'interpréter ces quelques résultats positifs : Wolff
émet, à ce sujet, deux hypothèses.

Les ensemencements féconds sont tellement minimes à côté du grand
nombre de cultures et d’inoculations restées stériles que Wolff se demande
s'il n'y a pas lieu de les attribuer à une contamination accidentelle. Il est
bien vrai que la technique qu'il a suivie a été adoptée comme offrant le
maximum de garanties; il est bien vrai que les précautions les plus minu-
tieuses ont été prises dans tous les cas pour éviter toute souillure. Mais,
malgré cela, dit Wolff, une infection accidentelle est toujours possible, et il
ne serait pas improbable que les quelques cultures positives obtenues ne
fussent le résultat d’une contamination par des bacilles venus de la mère,
Nous ne partageons pas cette manière de voir de Wolff et nous avons meil-
leure opinion que lui de son habileté opératoire; nous pensons que la
bactériologie est actuellement assez maîtresse de ses méthodes, assez sûre
de ses procédés pour que, en présence d'un cas à étudier, on puisse, en
toute sécurité, décider la part qui doit être faite à lintervention du
hasard. Comment d’ailleurs comprendre, en acceptant cette idée d’une
cause d'erreur pour expliquer les résultats positifs, que Wolff n'ait obtenu
de ces résultats que dans ses deux dernières expériences, celles qui ont dû
être les mieux faites ?

Cette hypothèse d’une contamination accidentelle a tellementséduit Wolff
qu'il est bien près de ne pas accorder aux expériences de Straus et Cham-
berland la valeur qu'on leur à toujours reconnue. Certes, le professeur de
Berlin, travaillant dans les conditions les plus heureuses, a dû se trouver
frappé du très petit nombre d’ensemencements positifs obtenus par lui, à
côté des cultures généralement bien plus fécondes observées par Straus et
Chamberland. Mais d’abord, Straus et Chamberland faisaient leurs ense-
mencements dans des bouillons nutritifs, et Wolf employait des cultures
sur plaque de verre. Il y a peut-être là de quoi expliquer ce désaccord
entre les résultats. Puis ce désaccord, à lui seul, n’est vraiment pas une
raison suffisante pour admettre que l'observation des auteurs français ne
correspond pas à la réalité des faits. Wolff dit que la technique adoptée
par Straus et Chamberland ne présentait pas toute garantie, et qu’elle
n'était pas assez rigoureuse pour empêcher une infection maternelle. Nous
pensons qu'en soumettant les fœtus à l’action de l’eau bouillante, en les
ouvrant ensuite au thermo-cautère, et en puisant le sang des organes par

320 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

une pipette stérilisée, les observateurs français se sont placés dans des
conditions très suffisantes pour qu’on puisse accorder toute confiance à leurs
expériences.

Aussi attribuons-nous beaucoup plus d'importance à la seconde hypo-
thèse émise par Wolff, celle qui explique le passage des bactéries au fœtus,
si le fait d'une contamination accidentelle peut être écarté, par des al-
térations de l'organe placentaire. Wolff se livre à ce propos à des considéra-
tions théoriques fort bien présentées, pour démontrer que la transmission
des bactéries à l'embryon, si elle à lieu, est liée à des localisations morbi-
des sur le’ placenta. C'est là précisément la manière de voir que nous
avons soutenue à la suite d’un certain nombre d'expériences ‘. Nouscroyons
avoir démontré que les microorganismes sont susceptibles de pénétrer dans
le sang fœtal à la faveur des lésions qui ont pu se produire dans le pla-
centa. Si, chez le lapin, nous avons observé, comme Wolff chez le cobaye,
que le bacille charbonneux ne passait que rarement et en petite quantité
à l'embryon, chez le cobaye, au contraire, nous avons vu, comme Straus et
Chamberland, contrairement à Wolff, et cependant par la même techni-
que que ce dernier, qu'un bon nombre d’ensemencements des organes
fœætaux étaientféconds. Mais, dansle placenta du cobaye, nous avons retrouvé
de très nombreux petits foyers hémorragiques, siégeant dans la pulpe même
des cotylédons de l’organe; nous avons vu les bacilles s’insinuer par une
véritable effraction jusque dans le sang fœtal lui-même, c'est-à-dire jusque
dans les veines dépendant de la veine ombilicale. Et c’est très vraisembla-
blement à la faveur de ces lésions rompant les barrières cellulaires entre
le sang maternel et le sang fœtal, que les bacilles ont pu pénétrer dans
celui-ci. En effet, dans des expériences d’inoculations de microbes non
pathogènes, de particules inertes d'encre de Chine, nous n'avons jamais pu
retrouver ces éléments dans le sang du fœtus. Si le passage des corps
étrangers microscopiques à l'embryon se faisait par simple fütration, les
résultats eussent évidemment été tout différents. Ajoutons enfin que dans
le placenta du lapin charbonneux, nous n’avons pas vu ces lésions hémor-
ragiques : or chez le lapin, la plupart de nos ensemencements sont restés
stériles.

Au contraire, dansle choléra des poules inoculé à la lapine pleine, toutes
nos cultures fœtales ent été positives, comme Chambrelent l'a observé égale-
ment, et dans les placentas, nous avons vu des lésions hémorragiques. La
grande loi générale si bien mise en lumière par Wyssokowitsch se vérifiait
donc encore une fois pour l'organe étudié à cet égard, pour le placenta : de
même que les bactéries en circulation dans le sang ne s'éliminent par les
voies excrétrices, reins, muqueuse intestinale, ete., qu'à la faveur de pro-
ductions morbides dans ces organes (hémorragies, infarctus, abeès etc), de
même elles n’atteignent l'embryon qu'après avoir lésé les villosités pla-
centaires.

Ce mécanisme du passage des bactéries au fœtus, que nous croyons avoir

1. Sur la transmission intraplacentaire des microorganismes, par E. Malvoz. —
Annales de l'Institut Pasteur. Avril 1888.

REVUES ET ‘ANALYSES. 321

démontré expérimentalement, a encore l'avantage d'expliquer parfaitement
les contradictions, plus apparentes que réelles, entre les travaux des divers
expérimentateurs. En effet, si dans certaines infections, quelques lésions
sont à peu près constantes, comme par exemple les hémorragies de la tra-
chée dans la septicémie des lapins, dans d'autres maladies ces altérations
morbides sont très variables d'intensité et de fréquence. C’est ainsi que
Wyssokowitsch n’a vu que dans quelques cas l'urine contenir des bacilles
charbonneux à la suite d'hémorragies rénales. On n'a pas déterminé les
conditions de ce fait, pas plus qu’on ne sait pourquoi, à la suite de l'ino-
culation du staphylococcus aureus, il n'y a que dans quelques cas de petits
abcès dans les reins, et à leur suite, des microbes dans l'urine. I] est done
actuellement très difficile de déterminer, a priori, dans quelles conditions
ces lésions sont susceptibles de se manifester.

Pour ce qui concerne le placenta, les conditions de leur production ne
sont pas connues. Mais, en tout cas, si Wolff n’a vu que très rarement les
bacilles charbonneux passer à l'embryon, c'est que vraisemblablement,
dans les conditions où il s’est placé et avec le virus dont il s’est servi, les
barrières placentaires n'ont pas été lésées. Au contraire, dans les expé-
riences de Straus et Chamberland, peut-être aussi dans celles de Koubassof,
dans les nôtres en tout cas, chez le cobaye, les hémorragies placentaires
ont vraisemblablement permis aux bacilles d'atteindre le sang fœtal.

La question se pose done un peu différemment d'autrefois : il ne s'agit
plus de savoir si les bactéries passent dans certains cas au fœtus : le fait
paraît certain. Le problème à résoudre consiste à déterminer dans quelles
circonstances, sous quelles influences, le fait est susceptible de se produire,

Pour le moment, les données sont trop incomplètes pour trancher la
question. Il faudra notamment établir, beaucoup mieux qu’on ne l’a fait
jusqu'à présent, jusqu’à quel point la virulence de l'élément joue un rôle à
cet égard. Nous inclinons à croire que les altérations placentaires doivent
dépendre en partie de l’énergie du virus. Précisément, on remarquera que
les deux expériences qui ont donné à Wolff quelques résultats positifs ont
été faites plus d’une année après les autres inoculations : peut-être Wolff
s'est-il servi de cultures charbonneuses plus virulentes.

D'autres facteurs entrent encore en jeu, très vraisemblablement : c’est en
les étudiant successivement qu'on arrivera à connaître à fond tout ce qui se
rattache au problème capital de la transmission héréditaire des maladies,

E. Mazvoz.

S. Winocrapsky. — Sur les bactéries ferrugineuses. Bot. Zeily, 1888,

On connaît, depuis Ehrenberg, des bactéries filamenteuses enfermées
dans une espèce de gaine gélatineuse colorée par des dépôts ocreux d’oxyde
de fer hydraté. Quelle est la signification de ces dépôts? Dans quelles
conditions se forment-ils? quelle relation ont-ils avec la physiologie de la
cellule? ce sont là autant de questions restées jusqu'ici sans solution.

Cohn, qui a étudié à ce point de vue une bactérie très répandue, le
Crenothrix polyspora, assimile les dépôts d'oxyde de fer dans l'enveloppe

322 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

gélatineuse du filament aux dépôts de silice dans les diatomées, ou de car-
bonate de chaux dans la membrane cellulaire des Mélobésiacées : c’est poser
autrement la question, ce n’est pas la résoudre. Zopf admet, de son côté,
que ce dépôt d'ocre se forme par une action purement mécanique, analogue
à celles qui commandent aux phénomènes de teinture. Mais d’abord la
teinture ne dépend nullement d'actions mécaniques. De plus, comme
M. Winogradsky le fait remarquer avec raison, le fer est en solution dans
l’eau à l'état de protoxyde, et non à l'état de sesquioxyde, et le dépôt d’ocre
est par suite nécessairement beaucoup plus compliqué qu'un dépôt de
matière colorante.

M. Winogradsky revient sur ce problème à l'aide des méthodes que nous
lui avons vu employer dans son travail sur les bactéries des eaux sulfureuses
(V. ces Annales, t. 1, p. 548), c'est-à-dire au moyen de cultures faites sur
la platine du microscope. D'une manière générale, cette méthode ne vaut
évidemment pas celle des cultures pures dans des milieux stérilisés. Mais
quand elle est mise en œuvre avec délicatesse, par un observateur soigneux,
attentif et prudent, elle peut rendre de bons services, et même se montrer,
sur certains points, supérieure à toutes les autres. On connaît les bons
résultats qu'en ont tirés par exemple MM. Van Tieghem et Lemonnier.
M. Winogradsky ne l’a pas trouvée moins féconde.

L'espèce qu'il a étudiée est surtout le Leptothrir ochracea, Kutz., qui est
très caractéristique, et qui, contrairement aux assertions de Zopf, n’a aucune
relation génétique avec le Cladothrix dichotoma. I la cultive facilement
dans des éprouvettes, au fond desquelles il met une poignée de foin macéré
et cuit dans beaucoup d’eau, et qu’il remplit ensuite d’eau de source conte-
nant en suspension de l'oxyde de fer récemment précipité. Aussitôt qu'un
dégagement gazeux commence à se produire, on voit se former, à la surface
de l’eau et sur les parois du vase, des flocons colorés qui, en 8 ou 10 jours,
recouvrent tout, et qui sont formés surtout de Leptothrix ochracea mélangé
d'autres espèces analogues. Toutes ces espèces se retrouvent dans les eaux
ferrugineuses naturelles, où le fer est à l’état de sel de protoxyde, et dans
les eaux marécageuses, où le fer, comme dans la culture artificielle ci-dessus,
est à l’état d'ocre, mais où il est au préalable réduit à l'aide d’une fermen-
tation anaëérobie et à dégagements gazeux, par exemple par une fermenta-
tion de la cellulose. C'est après cette réduction qu'il subit une oxydation
nouvelle en se déposant autour du filament.

Ce qui prouve qu'il en est bien ainsi,.et que l’ocre qu’on retrouve autour
de la bactérie ne provient pas d'un simple dépôt de l’ocre mis en suspension
dans le liquide, c’est que si on fait vivre, sous le microscope, des filaments
incolores de Leptothrix en présence d’une eau renfermant de fines granula-
tions d'oxyde de fer, ilsrestent incolores, tandis qu'ils se colorent très vite, en
10 ou 15 heures, si on les baigne avec une eau naturelle ou artificielle,
renfermant du carbonate de protoxyde de fer.

Pour pousser plus loin notre étude, nous avons besoin de quelques
notions sur la morphologie de ces êtres. Ce sont des bâtonnets très
fins, entourés d'une gaine gélatineuse plus ou moins épaisse. La chaîne
d'articles ou de bâtonnets qui constitue le filament est fixée par une

REVUES ET ANALYSES. 323

extrémité sur la paroi du vase, et s'accroît par l’autre qui est libre. Elle a
donc une base et un sommet. A la base, la gaine est très épaisse et atteint
jusqu’à % fois le diamètre du filament; elle s'effile à mesure qu'on se
rapproche du sommet, si bien que les 2 à 10 derniers articles n’en ont pas.
La croissance de la gaine ne marche pas du même pas que celle du bacille.
Au contraire, à mesure que la gaine s’épaissit et s'infiltre, le bacille s'en
débarrasse. Ou bien il la quitte complètement, ou bien il lui reste adhérent
après en être sorti, et, se mettant à pousser de nouveau, simule des fausses
bifurcations qui ont fait donner au Cladothrix dichotoma le nom qu’il porte.

Le bâtonnet reste toujours incolore; c’est la gaine seule qui se remplit
d'ocre, et à voir ainsi cette substance se déposer dans la partie la moins
vivante du végétal, et en dehors de sa paroi cellulaire, on pourrait croire
qu'il ne s’agit, en effet, que d'une action mécanique ou chimique. On sait, en
effet, que les dissolutions des sels de protoxyde de fer se couvrent d’une couche
ocreuse à leur surface et sur les parois des vases ou on les conserve :
dans les cultures sous le microscope, il se forme de même une couche
ocreuse sur le pourtour de la lamelle, aux points où le liquide est au contact
de l'oxygène de l'air. Mais, fait observer finement M. Winogradsky, cette
couche ne s'étend pas à plus de un demi-millimètre du bord dans l’inté-
rieur du liquide, et au delà de cette marge, on ne voit se former le dépôt
ocreux que dans la gaine qui enveloppe les filaments. Il y a plus : si on
lave, avec de l’eau chargée d'acide carbonique, des gaines peu colorées,
elles peuvent redevenir incolores, à la fois dans les régions où elles ont
retenu le bâtonnet intérieur et dans les régions d’où il s’est échappé. Si, alors,
on alimente de nouveau avec de l’eau chargée de carbonate de fer, on voit
la gaine se colorer de nouveau en brun, mais seulement dans les points
où elle contient des cellules vivantes. Le dépôt d’ocre doit donc être con-
sidéré comme un acte vital.

Ajoutons enfin, comme preuve dernière, que les filaments de Leptothrix
ne poussent pas si on ne leur donne pas d’eau renfermant un peu de proto-
xyde de fer. Une eau nutritive qui a séjourné quelques jours à l'air et s’y
est oxydée devient inerte; on a beau la renouveler, les filaments restent
stationnaires, et ne croissent de nouveau que si on ajoute du carbonate de
fer. ;;

Les sels de fer font donc partie du mélange alimentaire du Leptothrix
ochracea, comme les sulfures de celui des bactéries sulfureuses, M. Wino-
sradsky cherche à pousser sa démonstration plus loin, et à prouver que
le sesquioxyde de fer de la gaine est le résultat de l'oxydation, dans le proto-
plasma de la cellule, du sel de protoxyde de fer consommé. Il en résulterait
la formation d’un sel de sesquioxyde qui, retenu par la matière gélatineuse
de la gaine, en vertu de son caractère colloïdal, s'y décomposerait par un
mécanisme quelconque. Mais tout ceci nous semble fort problématique.
Le mot oxydation a, quand il s’agit d’un protoplasma vivant, un sens fort
mal défini. On peut dire que dans tout protoplasma, il y a, mélangés et
superposés, un phénomène de réduction qui crée de nouveaux éléments
protoplasmiques, un phénomène d’oxydation qui détruit à la fois ceux dont
le rôle est terminé, et la matière alimentaire constamment consommée.

324 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Dans ce phénomène d'oxydation lui-même, il faut faire des distinctions entre
la partie de l’action due à l’intervention de l'oxygène de l'air, c'est-à-dire à
des combustions extérieures, et la partie due à des combustions intérieures.
L’acide carbonique d'une fermentation alcoolique est un produit d’oxydation
qui ne résulte pas d’une action oxydante, mais plutôt d’une action réduc-
trice. De même un sel organique de protoxyde de fer peut donner du ses-
quioxyde par une action réductrice. Notons que le microbe de M. Wyssoko-
witch possède cette action réductrice, puisqu'on réussit à nettoyer de leurs
dépôts d'ocre les gaines colorées, à la condition d'employer de l’eau chargée
d'acide carbonique. Il faut bien, avant, réduire lesesquioxyde, et il n’y a quele
microbe qui puisse s’en charger. Mais ce n’est pas le moment d'insister sur
ces points délicats que nous aborderons dans une prochaine Revue critique
sur la respiration de la cellule. Nous n'avons voulu que relever les principaux
résultats de M. Winogradsky, et mettre en lumière l'élégance de quelques-
unes de ses démonstrations. Dx.

G. Banri. — Sur la destruction des bactéries dans l'organisme, Archivio p. L
scienxe mediche, t. XII, n° 9, 1888.

Par quelles voies les microbes s'introduisent-ils dans l'organisme, et qu'y
deviennent-ils lorsqu'ils y ont pénétré? c’est une question que nous avons
déjà souvent abordée, et sur laquelle nous ne nous lasserons pas de revenir,
tant que nous rencontrerons sur elle des documents dignes d'attention. De
cet ordre est le mémoire dans lequel M. G. Banti à résumé toutes ses
études antérieures sur ce sort des bactéries injectées par les trois voies des
bronches, de ia cavité péritonéale, et des veines.

Au sujet du poumon, nous avons déjà résumé les travaux de Arnold,
Wyssokowitsch, Muskatbluth et Buchner, en contradiction sur beaucoup de
points. Ils ont pourtant ceci de commun qu'ils nient la possibilité de la
pénétration par les bronches et les alvéoles pulmonaires dans leur état
physiologique et normal. Ce n’est que lorsque des cultures sur place ont
produit de l'inflammation, de la desquammation épithéliale, un foyer
pneumonique plus ou moins accusé, que le microbe peut pénétrer. Il semble
aussi, mais ici les opinions sont moins unanimes, que lorsque l’infiltration
preumonique est très marquée, elle serve de protection en obstruant les
ouvertures, ou en détruisant sur place, dans un véritable procès de réaction
locale, les microbes inoculés.

M. Banti s’est surtout proposé d'étudier ce procédé de destruction,
et d’en rechercher le mécanisme sur les divers points où il peut se mani-
fester. Il a pour cela inoculé à des lapins des microbes pathogènes et non
pathogènes, empruntés à une culture sur gélose, et mis en suspension
dans de l’eau salée jusqu’à en faire un liquide assez opaque, dont il injectait
des quantités variables de 1/4 à 6 centimètres cubes.

Parmi les microbes non pathogènes, il a surtout employé le bacille de
Finkler et Prior, le bacillus subtilis, le mic. telragenus. Après les avoir
injectés dans la trachée, on tuait l'animal de 2 à 72 heures après l’opéra-
tion, et on soumettait ses organes à une étude soigneuse,

REVUES ET ANALYSES. 325

Macroscopiquement, on voit qu'il se forme ainsi dans les premières heures
une congestion plus ou moins intense, qui, suivant les cas, suivant la
nature et la quantité du liquide inoculé, suivant aussi la force de l'animal,
peut disparaître sans laisser de traces, ou aboutir au contraire à de véri-
tables foyers pneumoniques, occupant quelquefois la plus grande partie
d'un lobe.

En allant chercher dans le tissu pulmonaire, mis à nu et ouvert avec
toutes les précautions antiseptiques, une goutte de liquide au moyen d'une
anse de platine qu'on portait ensuite dans de la gélatine liquéfiée, on
pouvait, en faisant des cultures sur plaques, se faire une idée de la dissémi-
nation dans le poumon du microbe injecté. On trouve ainsi, et ici M. Banti est
d'accord avec M. Wyssokowitsch, que le nombre des colonies capables de se
développer dans la gélatine va en diminuant à mesure que le tempsaugmente,
et finit par être nul. Le temps nécessaire à la disparition des microbes est
naturellement variable avec leur nombre et leur nature : quelquefois il ne
faut que de 4 à 6 heures, quelquefois il en faut 20, 40, ou davantage.

Que deviennent les microbes qu'on voit ainsi disparaître du poumon?
Ils ne passent pas dans la circulation, on ne les rencontre à aucun moment
dans le sang extrait de l'oreille et employé comme semence. Ils sont donc
détruits sur place dans les bronches et les alvéoles, sans entrer dans la
circulation générale.

Pour étudier le mode de disparition, il n'y à qu'à faire des coupes et
des préparations colorées. On peut ainsi, sur des animaux sacrifiés à
diverses époques, étudierle mode de développement des lésions histologiques
du poumon. Elles commencent par une forte injection des alvéoles, dans
lesquelles on trouve des bactéries libres, de rares leucocytes, des globules
rouges parfois assez abondants. Les cellules épithéliales sont gonflées et
en partie en voie de desquamation. Rapidement, celle injection s'aggrave,
la desquamation devient plus abondante, les leucocytes apparaissent en
plus grand nombre. Une partie des bactéries est encore libre, une autre est
enfermée dans le protoplasma des cellules épithéliales et plus rarement
dans les leucocytes, mais a encore conservé sa forme, son aspect et sa
puissance de coloration. Puis on voit les microbes inclus dans les cellules
se déformer et se transformer en fragments irréguliers et amorphes,
pendant que les cellules qui composent l'exsudat présentent des phénomènes
de métamorphose régressive. A la fin, en tuant les lapins de 48 à 72 heures
après l'injection, on peut quelquefois trouver des foyers de pneumonie en
voie de régression, dans lesquels on ne réussit par aucun moyen à
démontrer la présenee des bactéries, et qu'on aurait le droit d'attribuer à
toute autre chose qu'à une infection microbienne, si l’on n'avait pas suivi
pas à pas leur développement régulier.

On peut donc dire que la destruction des microbes non pathogènes se
fait sur place. Pour les microbes pathogènes, le procès doit évidemment
être différent et plus variable, et, à ce propos, on peut même remarquer que
cette distinction entre les microbes pathogènes et non pathogènes est tout
à fait artificielle, puisque des bactéries inoffensives comme le bac. subilis
ne peuvent disparaître qu’au prix d’une réaction locale qui est une véritable

21

926 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

maladie, qu'il suffirait sans doute d'étendre à tout le poumon en augmen-
tant la quantité de microbes injectés pour la rendre mortelle, qu’on pourrait
aussi sûrement rendre plus grave, sans augmenter la dose de l'injection,
en relevant la virulence du microbe, c’est-à-dire son aptitude à résister
aux ennemis et aux causes chimiques de destruction qu'il rencontre dans
l'organisme.

Quoi qu'il en soit, M. Banti a surtout étudié, parmi les microbes patho-
uènes, le coteus de la pneumonie de Fränkel et la bactéridie charbonneuse.
Il prenait toutes les précautions nécessaires pour éviter la contamination
par la blessure faite à la trachée, et il a vu, comme M. Muskatbluth, tous
ses animaux succomber à la septicémie salivaire ou au charbon. Les deux
microbes étudiés passent donc dans le sang, non pas de suite, mais après
avoir déterminé dans les alvéoles des lésions en grande partie identiques à
celles que nous avons signalées plus haut pour les bactéries non pathogènes.
Comme plus haut, une partie des microbes est absorbée par les cellules
épithéliales ou par les leucocytes, et y subit des modifications régressives;
mais il en reste toujours de libres. Quels sont ceux qui portent l'infection
dans tout l'organisme, et par quelle voie pénètrent-ils dans le sang, c’est
ce que M. Banti ne nous dit pas nettement. À côté de l'opinion de M. Muskat-
bluth, qui admet le passage par les lymphatiques, il émet celle de la péné-
tration directe par les capillaires sanguins demeurés à nu, et dont les
parois ont aussi certainement subi les altérations propres à la phlogose.
« J'identifie le mode de pénétration à celui qu’on observe pour les substances
pulvérulentes, et aussi, comme nous allons le voir, pour les bactéries
injectées dans la cavité abdominale; cette pénétration aurait lieu à travers
les interstices des cellules endothéliales, ou, comme d’autres l'ont pré-
tendu, à travers les endothéliums eux-mêmes ».

Notons, avant de quitter ce sujet, que M. Banti, après Flugve et Muskat-
bluth, a vu un lapin, inoculé dans la trachée avec 4° d’une culture très
virulente du bac. anthracis, succomber après 10 jours, non au charbon, mais
à une pneumonie catarrhale étendue. Voilà donc encore un cas où la réaction
locale a servi de protection contre le microbe inoculé, ou au moins contre
sa diffusion dans l'organisme, si bien que des cultures faites avec le sue
splénique ou le sang de ce lapin sont restées stériles.

Nous arrivons maintenant à l'injection dans la cavité péritonéale. Dans
un travail important, Grawitz a démontré que d'ordinaire, même l'injec-
tion dans le péritoine de bactéries pyogènes n’amène pas de péritonite. Ces
bactéries sont absorbées, mais Grawitz n’a pas cherché par quelles voies.
Dansses recherches, M. Banti s’est surtout servi des mic. tetragenus etpyogenes
aureus, et du bacille de Finkler et Prior, mis en suspension dans de l’eau
salée, et injectés, en volumes de 2 à 4ce et au moyen d’un trocart, dans la
cavité abdominale de lapins.

En sacrifiant les animaux à des intervalles divers, de 30 minutes à
48 heures après l'injection, on trouve, comme l'avait vu Grawitz, que le
liquide est rapidement absorbé. En faisant des cultures sur plaques avec ce
qui en reste, on trouve que les bactéries disparaissent aussi, moins vite que
le liquide qui les tient en suspension. Avec un lapin qui avait recu 4e d’une

REVUES ET ANALYSES. 327

injection très opaque de staphylococcus aureus, M. Banti a trouvé après 40 mi
nutes, comme moyenne de quatre cultures, faites chaeune avec une goutte
du contenu péritonéal, 480 colonies, La durée de la disparition totale est
naturellement variable suivant le nombre et la nature des bactéries injec-
tées. Mais jusqu'à la fin, on les trouve libres, ef jamais contenues dans les
leucocytes ou dans l’endothélium de la séreuse.

Que deviennent done ces bactéries? On constate assez facilement, par la
méthode des cultures, qu'elles passent dans le sang, où on les retrouve déjà
dix minutes après l’injection. Mais elles y sont toujours relativement rares.
Par exemple, dans le lapin signalé plus haut, et qui, tué après 40 minutes,
ne donnait que 180 colonies par goutte de liquide péritonéal, on a trouvé,
comme moyenne de 6 essais, 62 colonies par goutte du sang du cœur,etdes
chiffres très voisins pour les cultures faites par la méthode de Wysso-
kowitch avec le tissu du foie, de la raté et la moelle osseuse. Dans le
sang, iles microbes sont toujours libres, aussi bien que dans le liquide
péritonéal,

C'est par les lymphatiques que se fait la pénétration, et surtout par
ceux du centre phrénique. Sur de jeunes lapins, cette portion du péritoine
est assez transparente pour permettre, après durcissement à l'alcool et colo-
ration, l'examen avec un fort objectif, et on y voit, dans les lymphatiques,
de grands amas de microbes tantôt libres, tantôt contenus dans des leuco-
cytes. Il n’y en a pas dans les endothéliums des lymphatiques. Il sem-
ble par suite que les bacilles aient pénétré à l’état libre dans les vaisseaux.
Si c’étaient des leucocytes qui étaient chargés d'aller les prendre dans le
suc péritonéal, on y en retrouverait quelques-uns. Ce n’est qu'après avoir
pénétré à travers l’endothélium, ou mieux à travers la couche de ciment in-
tracellulaire, que les microbes sont absorbés par les globules blancs qui, par
places, se montrent tellement chargés qu'il ne reste plus de microbes libres.

Quel est le sort de ceux qui sont ainsi engloutis? C'est ce que M. Banti ne
peut encore dire. Il a une tendance à croire que c’est dans les lymphatiques
eux-mêmes que les bactéries sont détruites par les cellules blanches, et il
se base pour cela surtout sur ce que le nombre des bactéries qu’on trouve
dans le sang est toujours petit, nous l’avons dit plus haut, par rapport au
nombre des bactéries injectées dans le péritoine. Maïs quand les bactéries
ont pénétré dans le sang et ont été promenées par lui dans tousles organes,
elles ont subi une énorme dilution dont on ne voit nulle part que M. Banti
ait cherché à tenir compte dans ses comparaisons, et ceci suffit à enlever à
son raisonnement toute valeur probante.

En arrivant maintenant aux injections dans le sang, nous avons à rap-
peler le travail de Traube et Gscheidlen, qui ont constaté en 1874 la rapide
disparition des bactéries de la putréfaction injectées dans le sang des chiens
ou des lapins, et ont attribué ce résultat à l’action de l'ozone colporté par
les globules rouges. Plus tard, en 1879, M. Watson Cheyne à retrouvé le
même fait, et lui a cherché des causes plus physiologiques. Enfin, Wyssoko_
witsch, dont nous avons analysé le travail dans le 4€ numéro deers Annales,
a démontré que la disparition rapide des bactéries non pathogènes injectées
dans le sang n’était pas due à une élimination physiologique par le rein,

328 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Fintestin ou les glandes mammaires, mais que ces microbes se réunissent
dans certains organes, surtout dans le foie, la rate et la moelle osseuse, où
ils sont absorbés par les cellules endothéliales des capillaires sanguins.

C'est sur ce dernier point que M. Banti n’est point d'accord avec M. Wys-
sokowitsch, dont il attribue l'erreur à ce qu'il a tué ses animaux trop tard
après l'injection. Il y a, pour faire l'étude, un moment propice, variable avec
la nature et la quantité de bactéries inoculées, et qui, pour le mic. tetragenus,
est de 2 à 4 heures après l'injection de 3 à 4 centimètres cubes d'un liquide
assez fortement chargé de microbes. L'organe qui se prête le mieux à la
recherche est le foie, tant à cause de la netteté qu'y présentent les capil-
laires que de ce que le mic. tetragenus y persiste beaucoup plus longtemps
que dans la rate ou la moelle. On voit ainsi, en sacrifiant des animaux à
divers intervalles, les microbes, d’abord libres dans le sang, quitter la circu-
lation générale pour s’accumuler dans les capillaires dans lesquels on les
trouve d’abord libres, mais où, à mesure que le temps s’avance, on les voit,
en proportion de plus en plus grande, absorbés par les leucocytes.

« Dans certains capillaires, on trouve adossées à la paroi, des cellules
fusiformes, ressemblant aux cellules endothéliales, seulement un peu plus
gonflées et tuméfiées qu’elles, et qui contiennent des bactéries. Mais ces
éléments cellulaires ne sont pas nombreux, et il y en a beaucoup moins que
de leucocytes contenant des bactéries. » C'est là la contradiction relevée
avec M. Wyssokowitsch.

Ce seraient donc surtout, d’après M. Banti, les leucocytes qui joueraient
le rôle de phagocytes, et qu'on voit en effet déformer peu à peu le microbe
jusqu’à le faire disparaître. Mais arrivés là, nous ne pouvons que constater
le phénomène qui se passe sous nos yeux, sans pouvoir, au moins jusqu'ici,
en pénétrer le mécanisme avec sûreté. Le microbe est-il en réalité mort ou
malade, tout en conservant son aspect normal, avant son absorption par le
phagocyte, qui alors agirait sur lui comme un corps inerte ? ou bien est-il
absorbé à l’état vivant et tué dans le phagocyte, par digestion intracellulaire
ou autrement ? Quel est le rôle que jouent dans le phénomène les diastases
que peut sécréter le microbe, s'il est vivant au moment de la pénétration,
ou qui peuvent lui survivre, s’il est mort ? Quel est le rôle de ses produits
de sécrétion, parmi lesquels il y a des substances morbigènes et vaccinales?
Quelle importance faut-il attribuer aux phénomènes de coloration, à ces
actions de teinture qui, dans l’industrie nous apparaissent trop contingentes
pour que nous ayons le droit de leur refuser, sous le microscope, un peu de
la confiance qu'on leur attribue trop généreusement? Autant de questions
délicates, non encore tout à fait résolues, mais qui ne tarderont pas à l'être,
étant donné le nombre et la valeur des savants qui s’en occupent.

Dx.
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À. PAvONE. — Sur la concurrence vitale des bacilles de la fièvre typhoïde et
du bacille du charbon. Giorn. Internaz., IX.

Les questions de concurrence vitale entre les microbes ont le mérite
d'être intéressantes, et le défaut d’être difficiles à résoudre. IL est assez gé-
néralement admis qu’on les simplifie en prenant pour terrain d’études, non
pas un être vivant, dont là réaction introduit un élément nouveau difficile
à apprécier, mais un milieu inerte de culture. Cette opinion semble diseu-
table. À passer de l'animal aux cultures in vitro, on gagne d’un certain
côté, mais on perd de l'autre. On gagne de supprimer toute la partie de la
réaction qu’on peut appeler vivante, partie dont il ne faut pas s'exagérer
l'importance, car elle paraît dépendre d'un mécanisme qui, s’il est d’ordi-
naire sûr, est aussi très délicat. On y perd cette égalité dans les conditions
de milieu et de température que l’on rencontre dans les êtres d'une même
race, qu'on ne réalise au même degré, dans les eultures artificielles, qu’au
prix de soins infinis, qu’on est dès lors conduit à négliger, et dont l'aban-
don enlève toute sécurité aux conclusions d'un travail quelquefois long et
consciencieux.

Quelques mots suffisent à prouver ce que j'avance. Quand il s'est agi
d'étudier l’antagonisme de certains microbes dans les milieux inertes, deux
méthodes ont surtout été employées jusqu'ici. La première en date, dont le
travail de M. Pavone nous fournit un nouvel exemple, est de faire vivre côte
à côte les deux microbes dans le même milieu, en les maintenant séparés,
si l’on veut etsi l’on peut, sur les milieux solides, ou en les laissant se mélan-
ser dans les bouillons. Dans ce cas, l’un d’eux est d'ordinaire écrasé par
l’autre. La question d’antagonisme semble ainsi résolue, alors qu’elle est loin
de l'être, car le résultat pourrait sûrement être rendu inverse en changeant
les conditions de milieu, de température, et même quelquefois seulement
les proportions relatives des deux microbes ensemencés. Je ne parle que
pour mémoire des changements qui peuvent survenir, pendant la culture,
dans les relations du liquide avec l'oxygène, dans sa composition, dans sa réac-
tion acide ou alcaline. On voit de quel mélange complexe d'influences peut
résulter la suprématie d’un microbe l'un sur Pautre.

Pour éviter ces actions mutuelles des deux espèces de cellules vivantes,
on a eu recours à une autre méthode, dont le travail de M. Freudenreich, dans
l'avant-dernier numéro de ces Annules, a fourni un fort bon exemple, celle de
l’ensemencement d’un mierobe dans un bouillon qui en a nourri un autre,
et qui en a été débarrassé par une stérilisation. Ici, l’action nocive, anti-
septique ou vaccinale de la première culture sur la seconde se manifeste
mieux. Mais l'interprétation et surtout la généralisation des résultats n’en
restent pas moins périlleuses. Le non développemeut du second microbe peut

REVUES ET ANALYSES. 331

être attribué, soit à cequele premier a fait disparaître du milieu une substance
utile, soit à ce qu'il y a déposé une substance nuisible, etrien ne prouve que
dans un autre milieu, ou dans le même milieu plus dilué ou plus concentré,
les résultats eussent été les mêmes. Quand on s'adresse surtout, comme
M. de Freudenreich l'a remarqué lui-même, à des bacilles difficiles sur leur
milieu de culture, la plus légère modification apportée par un premier
microbe peut transformer pour eux en terrain stérile un milieu dont ils se
contentaient auparavant, sans qu'il y ait, à proprement parler, d’antago-
nisme mis en jeu. C’est ainsi qu'un courant d'air qui éteint une lampe
mourante fait vivre une lampe qui fonctionne bien.

On peut, pour éviter une partie de ces objections, employer une troisième
méthode. On cherche d’abord, pour les microbes a et b dont on veut étudier
l'antagonisme, les meilleurs milieux de culture À et B, qui, quand ils ont
nourri le microbé, sont modifiés et deviennent A’ et B’. On stérilise ces
derniers, soit par la chaleur, soit au filtre Chamberland, et on les mélange
en proportions variables, par moitié, par exemple, avec les liquides primi-
tifs, de façon à avoir des mélanges AA’, AB’., BA’ et BB’ Dans les deux
premiers, on sème le microbe a, et dans les deux derniers le microbé b. La
comparaison des cultures montre bien si pour l’un quelconque de ces
microbes, les produits de la culture de l’autre sont plus nocifs que ceux qui
résultent de la sienne, et si par conséquent, l’un quelconque d’entre eux perd
ou gagne à être rapproché de l’autre. Les résultats obtenus par cette mé-
thode sont moins contingents que ceux que fournissent les autres, mais ils
n'ont encore à aucun degré le caractère absolu, car la nature de substances
sécrétées variant avec la nature du liquide, rien ne dit que l’antagonisme -
observé ne se résoudrait pas d’une tout autre facon dans d’autres milieux.

Je passe brièvement sur ces considérations, qu'il serait facile et peut-
être utile d'envisager de plus près, parce que j'ai moins pour objet d'établir
les conditions d’une étude précise que de montrer que cette étude est
difficile, et qu'il ne faut pas s'étonner qu'elle ne soit pas encore faite. Ici,
- comme à propos des antiseptiques, nous sommes condamnés, peut-être pour
longtemps encore, au régime des tâtonnements. Tous les travaux bien
faits dans cet ordre d'idées sont les bienvenus, parce qu'ils concourent à
l'avancement de la science, mais à la condition d'être considérés comme
des travaux de tâtonnement, visant plutôt à définir la question qu'à la
résoudre.

C'est avec cette lumière que nous avons à envisager le travail dé M. Pa-
vone, intéressant en ce qu'il fait intervenir dans cette question de lutte
entre les microbes l'examen d’un degré intermédiaire qui n'avait pas
encore été si soigneusement envisagé, celui qui correspond, non à la destruc-
tion complète de l’un des microbes, mais à son affaiblissement et à sa
diminution de virulence.

M. Pavone a mis en concurrence le bacille de la fièvre typhoide et la
bactéridie charbonneuse, « qui aiment tous les deux les terrains alcalins, qui
sont tous deux aérobies, qui ont ainsi un certain nombre de besoins com-
muns. Mais le premier végète bien à des températures élevées (35°, 40°) qui
sont moins favoräbles à la bactéridie charbonneuse, Le premier a un

332 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

développement plus précoce que la seconde. Le premier est mobile et peut
aller chercher à distance des aliments nouveaux, l’autre non. Si ces deux
bactéries sont obligées de vivre sur un terrain commun, la conséquence
devra être un développement précoce et prépondérant de la bactérie du
typhus aux dépens du bacille charbonneux. »

Ces quelques lignes, que nous empruntons au mémoire de M. Pavone, en
résument assez bien la première partie. Peut-être pourrait-on leur reprocher
une forme un peu trop dogmatique. Ce n'est pas seulement pour les
raisons énoncées que le bacille du typhus l'emporte sur son concurrent. La
nature du terrain de eulture y est certainement pour quelque chose.
M. Pavone a, il est vrai, beaucoup multiplié ses milieux de culture et ses
modes d’ensemencement. Il a semé ses microbes en lignes parallèles sur une
plaque de gélatine, il en à mélangé les semences dans un tube de gélatine
et les a coulés sur une plaque comme pour les cultures d'isolement; il les a
inoculés tous deux dans une même piqûre faite dans un tube de gélatine, il les
a mélangés dans une goutte pendante, et les a cultivés ensemble dans du
bouillon peptonisé. Partout et toujours, il a vu que les deux bacilles
pouvaient vivre côte à côte ; celui de la fièvre typhoïde paraissait prendre le
dessus, au point d'arriver quelquefois, avec le temps, à faire disparaître
l'autre. Mais il sait bien lui-même que ce résultat est contingent, et ne se
retrouverait pas nécessairement le même avec d’autres milieux de culture.
Peut-être serait-il intéressant d'essayer à ce point de vue l'urine, dans
laquelle la bactéridie charbonneuse se développe bien.

M. Pavone a fait plus, il a porté la bactérie de la fièvre typhoiïde dans
une culture pure de bactéridie charbonneuse dans du bouillon peptonisé, et
a vu alors cette dernière subir, dans la majorité des cas, une destruction
progressive, plus rapide à température élevée qu'à température basse,
tandis qu'il n’a jamais vu la bactéridie charbonneuse se développer dans
une culture de bacille du typhus maintenue à 37°. À 200, il y a quelquefois
développement. Dans ce eas, il y a lutte entre les cellules, et non entre
leurs produits d'élimination, car le bacille du charbon se développe
généralement assez bien dans des cultures de typhus stérilisées par la
chaleur, quel que soit l’âge de ces cultures. Il se développe un peu moins
bien à des températures basses.

On voit apparaître partout, dans ces énoncés, le caractère contingent des
résultats de ces expériences, qui paraissent pourtant avoir été nombreuses et
bien faites. Mais, à mon avis, leur véritable intérêt, n'est pas là, il est dans
la mise en lumière de ce fait que la bactéridie charbonneuse soit parfois
atténuée de cette lutte contre le bacille de la fièvre typhoide.

« Le bacille du charbon, obligé de vivre en présence de la bactérie du
typhus dans le même bouillon nutritif, montre d'ordinaire, tant qu'on
réussit à en constater la présence dans la culture mixte, et qu'il n’a pas été
écrasé par l’autre, une atténuation plus ou moins notable dans sa virulence.
Avec les rats, j'ai eu jusqu'à cinq jours de retard dans l'époque de la mort;
avec les cobayes, de trois à quatre jours. L'atténuation est en général pro-
portionnelle à l’âge de la culture mixte... et peut aller dans certains cas Jus-
qu'à l'abolition de la virulence : il semble que le degré d'atténuation atteint

REVUES ET ANALYSES. 333

sur un terrain déterminé persiste dans le passage sur les terrains nutritifs
ordinaires, et dans les passages d'un animal à un autre.Je ne peux pas
dire si c'est indéfiniment. »

M. Pavone aurait eu, je crois, grand avantage à porter sur cette question
tout l'effort de son travail et de son mémoire, et à donner à ces conclu-
sions une base solide. Il faut dire qu'elles en manquent encore un peu. Une
diminution de virulence qui n'est prouvée que par des retards plus ou
moins longs dans la mort des animaux auxquels on inocule une culture im-
pure de bactéridie charbonneuse, ne peut être considérée comme un phéno-
mène démontré ef acquis à la science. M. Pavone en a bien conscience. Il
pose, en effet, comme second témoignage en faveur de la diminution de
la virulence, la condition que le sang de l’animal mort du charbon avec
un retard, inoculé aussitôt à un autre animal, le tue aussi avec un retard. Le
passage au travers du corps d’un animal est une cause de variation sur
laquelle on sait encore trop peu de chose pour qu'il soit sûr de compter
sur cette preuve. Il aurait peut-être mieux valu isoler la bactéridie de cette
culture mixte, et l'inoculer à l'état pur, par comparaison avec une bactéridie
qui n'aurait pas passé par le contact du bacille typhique.

Quoi qu'il en soit, M. Pavone retrouve ces effets d'atténuation dans les
cultures de bactéridies que l’on souille, à un moment donné, en y portant
une semence de bacille typhique, comme nous l'avons dit plus haut, et
même dans les cultures de bactéridies faites dans un milieu où le bacille ty-
phique a vécu et a été tué par la chaleur. Il semble donc qu’il y ait là une
loi générale, qui sort du domaine des faits contingents, et que M. Pavone
s’attachera sûrement à mettre en lumière. Il promet de faire dans un autre
mémoire une étude plus attentive de la concurrence vitale de ses deux mi-
crobes portés sur un même être vivant. La meilleure préface à cette étude
est évidemment la démonstration nette d’une diminution de virulence chez
celui des deux microb?s qui se met en retard et finit par être écrasé par
l’autre. Dx.

C. FRAENKEL. — Sur la culture des microbes anaérobies, Centrabl f. Bakt.,
t. IL, p. 735 et 763.

Les questions de technique sont de celles qui intéressent toujours les
bactériologistes, parce qu'il n’y a guère de science où le plus petit perfec-
tionnement apporté aux méthodes, aux procédés opératoires ou aux
appareils, puisse se montrer plus fécond. En ce qui concerne la culture des
êtres aérobies, nous sommes arrivés à une sorte de perfection relative, et
les deux méthodes qui se résument dans les noms de Koch et de Pasteur
n’ont rien à s'envier l’une à l’autre pour la commodité et la sécurité des
opérations. Nous les pratiquons toutes deux en France, en demandant à
chacune ce qu’elle peut donner : à la méthode des cultures sur gélatine ou
gélose, un incomparable moyen de séparation et d'isolement des microbes,
et les renseignements parfois très intéressants que fournissent l'aspect et
l'examen des colonies ; à la culture dans des milieux liquides, nous deman-
dons non seulement des renseignements sur la morphologie du microbe,

3934 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

qu'elle peut nous donner à l’égal de la précédente, mais surtout des notions
sur sa biologie, la nature des aliments qu'il préfère, des transformations
qu'il leur fait subir, etc, toutes choses que la méthode de culture sur
milieux solides ne nous révèle que d’une façon insuffisante.

C'est surtout quand il s’agit des microbes anaérobies que les différences
entre.les deux méthodes apparaissent. Avec les milieux liquides, il n'y à
qu'à modifier la forme des vases, à prendre par exemplele tube à deux bran-
ches, si souvent employé par M. Pasteur et ses élèves, pour retrouver la faci-
lité et la sûreté opératoires présentées par l'emploi des matras Pasteur pour les
aérobies. Il est vrai que pour cela, une pompe à mercure est indispensable,
et M. Frænkel y voit un inconvénient, car « il n'y a d'ordinaire de pompe
à air que dans les grands laboratoires ». Nous voulons croire que
M. Frænkel exagère la pauvreté des laboratoires allemands. S'ils n’ont pas
encore de pompe à air, c’est qu'ils n’ont pas senti le besoin d'en avoir, les
savants allemands, si féconds par ailleurs, étant restés jusqu'à ces derniers
temps très froids au sujet de la culture des anaérobies.

La raison en est qu’elle se fait difficilement dans les milieux solides
auxquels ils sont habitués. Ils avaient pourtant, sans le savoir, un auxiliaire
dans la gélatine elle-même dont ils se servaient. Quand, suivant l'indication
donnée par Koch, ils recouvraient d'une lame de mica une couche mince
de gélatine nutritive, ou quand, à la suite de Hesse ! et de Liborius ?, ils
faisaient leurs ensemencements dans les couches inférieures d’un tube à
essai rempli de gélatine, ils avaient recours, pour éliminer l'air, à des pra-
tiques qui n'eussent absolument rien donné si le milieu nutritif avait été
différent, Rien n'égale la rapidité avec laquelle l'air pénètre dans un liquide
désaéré exposé à l'air même sur une étroite surface, lorsqu'il n'est pas
arrêté au passage, dans les couches successives qu'il aborde, par des
phénomènes d'oxydation. Mais s’il est absorbé, sa pénétration est au con-
faire très pénible et très lente, et telest le cas pour la gélatine, ainsi que
je l’ai fait remarquer (v. ces Annales, t. 1, p. 410), à propos d'un travail de
M. Spina. La gélatine emploie à des oxydations intérieures l'oxygène de l'air
dissous, et si alors on la couvre d’une plaque de mica, ou si on la verse en
épaisseur dans un tube, les couches éloignées de la surface aérée peuvent se
trouver à l’abri de l'oxygène. Voilà pourquoi on peut y faire des cultures
d'êtres anaérobies, et pourquoi, comme le dit M. Frænkel en énumérant
les avantages de la méthode Liborius de culture dans des tubes à essai
remplis de gélatine, on peut en quelque sorte, en ensemencant dans ces
tubes un mélange d'espèces diverses, voir s’échelonner les anaérobies au
bas du tube, les aérobies purs à la surface, et entre les deux les êtres
facultativement anaérobies ou aérobies.

En revanche, cette méthode présente l'inconvénient de se prêter très mal
à l'examen, à l'étude et à la réinoculation des colonies formées, qu'il faut
aller péniblement chercher, après avoir cassé le tube, au milieu de la masse
gélatineuse qui les contient. On peut, ilest vrai, essayer de la combiner avec

1. Deutsch. med. Wochenschr., 1885.
2. Zeüschr. f. Hyg., t. L V. aussi ces Annales.,t. 1, p. 311.

REVUES ET ANALYSES. BbD)

la méthode Esmarch, et faire rouler sur la paroi intérieure du tube la gélatine
ensemencée jusqu'à ce qu’elle y fasse prise, laissant ainsi un vide central
qu'on remplit avec de la gélatine stérile. [ei le mécanisme invoqué plus
haut intervient encore pour protéger les couches profondes, mais il ne pro-
tège que ces couches. Les microbes anaérobies que l’enrobage de la gélaline
a amenés près de la surface ont le contact de l'oxygène, et, à l'usage, cette
pratique s’est montrée inférieure à ce qu'on en attendait.

Grüber!, sans se laisser arrêter par les scrupules que nous signalions
tout à l'heure chez M. C. Frænkel, est alors courageusement revenu à l’em-
ploi de la pompe à air. Il effile un tube à essai à environ 15 centimètres du
fond, le bouche avec de la ouate, le stérilise, et y fait arriver au moyen d'un
entonnoir capillaire un peu de gélatine nutritive, après quoi il stérilise de
nouveau. Il ensemence, en enlevant le tampon de ouate, au moyen d'un fil
de platine, fait le vide en portant la gélatine de 30 à 35° de facon à la
faire bouillir, ferme à la lampe, et roule la gélatine en manchon, suivant
Fa méthode d'Esmarch. Il est alors très facile d'examiner les colonies dans
le tube clos, et de les manipuler en ouvrant l'extrémité fermée à la lampe.

D’autres méthodes, plus ou moins semblables à celle-là, étaient depuis
longtemps en usage au laboratoire de M. Pasteur, quand M. Roux les a
publiées dans ces Annales, t. I, p. 49 et t. II, p. 28. MM. Vignal?, Nencki,
Rosenbach*, Hufnerÿ, Buchnerf, ont proposé d’autres procédés, dont quel-
ques-uns basés sur le remplacement de l’air par un gaz inerte.

Liborius avait déjà fait un pas dans cette voie en faisant barboter de
l'hydrogène dans le milieu nutritif, contenu dans un tube muni d’une tubu-
lure latérale, et cela jusqu’à élimination des dernières traces d'air. On ferme
alors le tout à la lampe et on applique la méthode d'Esmarch. M. Frænkel
reproche à cette méthode d'exiger l'emploi d'un tube de verre fait exprès et
coûteux. Il trouve aussi que rien n’est plus difficile que de bien régler le cou-
rant d'hydrogène, S'il va trop vite, il y a de la gélatine emportée dans le tube
abducteur qui se bouche. S'il va trop lentement, l'opération est très longue.
M. Frænkel s'est donc proposé de trouver une méthode qui réunisse les
avantages de celles de Grüber et de Liborius, sans en présenter les inconvé-
nients, et qui n'exige en même temps l'emploi d'aucun appareil coûteux ou
difficile à remplacer. A ce point de vue, on peut dire qu'il a bien réussi.

Il se sert en effet d’un simple tube à essai fermé par un bouchon de
caoutchouc par lequel passent deux tubes coudés, un tube d'arrivée qui s’en-
fonce jusqu’au fond du tube et d'un tube de sortie qui commence au-dessous
du bouchon. Ces deux tubes sont au préalable effilés dans leur partie extérieure
et fermés avec des tampons de ouate. Le tube à essai et le milieu nutritif
ayant été stérilisés convenablement, on fait passer un courant d'hydrogène,
obtenu avec du zine pur et de l'acide sulfurique pur, et lavé, de façon à le

4. Centralbl., &. I, p. 307.

2. Annales de l'Institut Pasteur, t. I, p. 358.
3. Archiv. f. gesammte Physiol., t. XXXIIL.
4. Deutsche Zeülschr. f. Chir., t. XVL.

5. Journal f. prakt. Chem., t. XII.

6, Arch. f. Hyg., t. AI,

336 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

débarrasser des produits sulfurés, arsenicaux, et de la petite quantité d’oxy-
scène qu'il pourrait encore contenir. Quand l'air est tout à fait chassé, on
ferme à la lampe, en leurs effilures, d’abord le tube de sortie, puis le tube
d'entrée, et on étend le liquide gélatinisé sur les parois du tube.

Une précaution essentielle à prendre est de stériliser avec soin le bou-
chon de caoutchouc et les tubes de verre. On laisse séjourner le bouchon
pendant une heure dans une solution de sublimé à 1/,600, puis pendant
3/, d'heure dans la vapeur d’eau bouillante. Les tubes, une fois recourbés et
munis de leur tampon d'ouate, sont stérilisés à sec, et enfoncés dans les bou-
chons avec les mains lavées dans une solution de sublimé à 1/,,,,. On relie
avec un court tube de caoutchouc le tube d'arrivée de l'hydrogène, et on
les effile tous deux. On chauffe enfin le long tube à la flamme avant de
l'enfoncer dans le tube à essai. Il nous semble qu'on pourrait arriver plus
vite et plus sûrement au même résultat par l'emploi judicieux de l'étuve
db:

Une autre cause d'erreur est la diffusibilité de l'hydrogène qu’on est tou-
jours exposé à voir remplacer par de l’air. Pour éviter cet inconvénient,
grave dans l'espèce, M. Frænkel recommande de couvrir le bouchon et
l'extrémité du tube d’une couche de paraffine. Peut-être y aurait-il avantage
à remplacer l'hydrogène par de l'azote qu'on isole facilement de l'air au
moyen de l'hydrosulfite de soude.

Quoi qu'il en soit, la disparition de l'air est très prompte, au dire de
M. Frænkel. Il ne faut pour cela que 1,5 à 2 minutes avec le bouillon, lors-
que le courant est énergique; que 3 à 4 minutes avec un milieu à 5°/, de
sélatine additionné de 1 p. 100 de glucose, et maintenu à 87°. Avec la gélose
il ne faut pas dépasser 2 ©/,, et encore, comme de la gélose à ce titre se
prend déjà en masse au-dessous de 40°, il faut aller très vite et ne faire
passer le gaz que 2 à 3 minutes.

Il faut féliciter M. Frænkel de ces simplifications. Il a raison de tenir
à l'emploi d'appareils usuels, commodes à se procurer, et bon marché. Mais,
en diminuant l'outillage, on complique presque toujours la manipulation et
on augmente les difficultés. C'est à la pratique, et à elle seule, à nous dire
dans quelle mesure les avantages de la nouvelle méthode sont balancés par
ces inconvénients inévitables. Dx.

EBERTH ET SCHIMMELBUSCH. — Bactérie du furet. Fortschr. d. Medicin.
1888 11.0Nh 2 p1295:

Une épidémie sur les furets, que l’on emploie aux environs de Halle à
la chasse des nombreux lapins de la contrée, a fourni à M. le prof. Eberth
et à M. le D' Schimmelbusch le sujet du présent travail. Sur deux animaux
examinés très peu de temps après leur mort, ils ont trouvé comme symp-
tômes généraux une pneumonie qui, chez l’un, était restée lobulaire, qui
chez l’autre avait amemé l’hépatisation de toute une moitié des poumons. II
y avait aussi gonflement de la rate.

L'étude microscopique du poumon, coloré par le violet de gentiane, le

REVUES ET ANALYSES. 337

violet de méthyle, ou le bleu de méthylène de Lôffler, permit d'y voir
de nombreux bacilles, en amas de 5 à 30 individus isolés, contenus
tantôt dans le tissu du poumon, tantôt dans l’exsudat séreux qui remplit
l’alvéole. La réaction sur le tissu environnant est faible et se borne à une
infiltration de grosses cellules épithéliales et de leucocytes dans l’alvéole, et
à une prolifération abondante des noyaux dans le tissu intersticiel. Dans
les autres organes, on ne relève rien d’anormal, alors pourtant que le
microscope y montre des bacilles.

Ceux-ci sont en effet répandus un peu partout. On a ensemencé dans
un cas, le tissu du poumon et le sang du cœur, dans l’autre, on a ense-
mencé, en outre, le tissu du foie et de la rate. Partout on à obtenu des
cultures pures du même bacille, que sa ressemblance avec quelques microbes
pathogènes, décrits dans ces temps derniers, nous oblige à éludier avec
quelques détails.

Sur la gélose, à 37°, il donne après 24 heures, le long de la ligne
d'inoculation, des traînées blanches, brillantes, qui prennent au bout de
2 à 3 jours une largeur de 3 à 5 millim; puis s'arrêtent dans leur dévelop-
pement.

Dans les cultures en piqûre sur gélatine, ilse forme, le long de la piqûre,
un léger voile gris qui finit par se résoudre en colonies rondes, distinctes,
d'un aspect blanchâtre, et dont quelques-unes, au bout de deux mois,
peuvent atteindre 4 a 2 millimètres de diamètre. La croissance est beaucoup
plus rapide à la surface, où se forme, en 8 jours environ, un petit bouton
plat, brillant, d'environ 2 millim. de diamètre, qui, au bout de quelques
semaines est devenu un amas blanchâtre, à bords saillants et à contours
inégaux. La gélatine n’est pas liquifiée, même à la surface.

Le développement est très rapide sur la pomme de terre, et donne
en 24% ou 36 heures à 370, et en 5 jours à la température ordinaire, des
masses gris-blanchâtres à bords saillants.

Dans le bouillon de veau, qui entre péniblement dans les habitudes
allemandes, mais qui finit pourtant par y pénétrer, il survient, au bout de
1 à 2 jours, un trouble diffus, même à la température ordinaire, et le
bouillon devient et reste alcalin. Les bacilles s’y montrent mobiles.

Ces bacilles sont arrondis à leurs extrémités, environ deux fois aussilongs
que larges, environ plus longs de moitié que les globules rouges du sang du
furet, environ de un tiers plus petits que les bacilles du typhus. Mais ils
donnent quelquefois, dans les cultures aussi bien que dans les organes, des
formes plus petites, ovoïdes, et plus rarement des filaments ayant de 3 à
5 fois la longueur des bacilles isolés.

Dans les préparations durcies à l'alcool, ou fixées à la chaleur, et colorées
aux couleurs d’aniline, on voit fréquemment, et moins souvent dans les
bacilles empruntés à des cultures, des noyaux protoplasmiques, plus
fortement colorés que le reste, tantôt au nombre de 3 par bacille, tantôt de
2, placés chacun à l’une des extrémités. À un faible grossissement, on
croirait quelquefois voir des chaînes de coccus.

Les couleurs à l'eau que les bacilles prennent le mieux sont le bleu de
gentiane et le bleu de méthylène en solution légèrement alealine. Le violet

338 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de méthyle, la fuchsine et le brun Bismarck donnent aussi de bons résultats.
La méthode de Gram ne réussit pas. Pour les préparations colorées, on les
laisse une demi-heure dans une solution aqueuse de bleu de gentiane ou de
bleu de Lôffler, et on les nettoie par l’eau acidulée avec l'acide acétique.

Etudié au point de vue de ses propriétés pathogènes, ce bacille se
montre très toxique sur le moineau, que la plus légère inoculation dans les
muscles pectoraux tue en 24-36 heures, et dont le sang contient alors
beaucoup de bacilles. Les pigeons résistent plus longtemps et échappent
quelquefois; quand ils meurent, on y relève des collections purulentes
autour du point d'inoculation, de la péricardite, de la pleurésie et de
l'hypérémie de l'intestin. Les poules semblent réfractaires, les lapins aussi,
et encore plus les cobayes.

Comme on le voit, l'étude de ce microbe au point de vue pathologique
n'est pas encore complète, mais ce qu'on en sait suffit pour le distinguer
d'autres microbes avec lesquels on pourrait le confondre. La mobilité du
bacille, et son innocuité sur les poules le différencie complètement des
microbes du choléra des poules, de la septicémie des lapins et de la peste
porcine, microbes que quelques savants ont été, comme on sait, tentés de
confondre. En revanche le bacille du furet se rapproche par sa mobilité
d'un bacille trouvé par Selander dans des cas de peste porcine observés en
Suède et dans le Danemark. Mais ce dernier bacille est sans action sur les
pigeons et tue les lapins, au contraire de celui du bacille du furet. Telles sont
au moins les raisons données par MM. Eberth et Schimmelbusch, mais il est
difficile de les trouver coneluantes, parce qu’elles ne tiennent aucun compte
des variations de virulence que peut amener dans un miecrobe le change-
ment dans les conditions de culture ou d’inoculation. Toute cette histoire
compliquée des maladies étudiés sousle nom de peste porcine, Schweineseuche,
Wildseuche, Schweinepest, a besoin d'être reprise à ce point de vue, et on ne
peut que souhaiter de trouver des éclaircissements à ce sujet dans les
nouvelles recherches que MM. Eberth et Schimmelbusch annoncent en
terminant. Dx.

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES À L'INSTITUT
PASTEUR DO 1°" AU 31 Mar 1888.

Personnes traitées mortes de rage.

Pourer (Jean-Baptiste), garcon coiffeur, 20 ans. Mordu le
6 décembre 1887, à 10 heures du soir, au Pecq (Seine-et-Oise);
1° une plaie horizontale intéressant la paupière inférieure droite
sur toute son étendue; 2° une plaie allant de l’angle interne de

INSTITUT PASTEUR, 339
l'œil droit à la commissure droite des lèvres; 3° une plaie par-
tant de la commissure droite des lèvres et se dirigeant en bas
déchire la lèvre inférieure : ces trois plaies sont confondues et
ont soulevé un énorme lambeau de la joue; 4° sur le premier,
le troisième et le quatrième doigt de la main gauche, une mor-
sure siégant à la face dorsale; 5° une forte morsure à l’avant-
bras droit ; 6° une forte morsure au bras droit : les habits ont
été déchirés; 7° aux fesses, près de la marge de l’anus, trois
fortes morsures ayant saigné. En tout onze morsures non
cautérisées.

Le chien mordeur a élé reconnu enragé par un vétérinaire.

Les blessures de la figure ont nécessité des sutures, et pen-
dant quelques jours Poulet ne peut avaler que des liquides. Au-
dessus de la commissure des lèvres, à droite, il y a une perte de
substance qui laisse écouler la salive pendant près de deux
semaines. La paupière inférieure est retroussée en dehors. Au
mois d'avril 1888, Poulet subit une opération pour la restaura-
tion de sa paupière inférieure.

Mis en traitement le 8 décembre 1887, Poulet est renvoyé le
6 janvier 1888 après que les plaies sont cicatrisées. Pris de rage
le 13 mai. Mort à l’Hôtel-Dieu, le 16 mai 1888.

Auvré (Paul-Louis), 10 ans et demi, de Boisguillaume (Seine-
Inférieure). Mordu le 12 avril, 1° à la lèvre supérieure qui a
été déchirée au point que les lambeaux ont été suturés; 2° à la
cuisse droite, partie postérieure et moyenne, une morsure péné-
trante ; 3° à la jambe droite au-dessous du genou, une morsure
ayant saigné. Le pantalon a été traversé. Aucune cautérisation.
Le chien mordeur a été reconnu enragé par M. Bourgeois, vété-
rinaire à Rouen. Deux pores mordus par le mème chien ont
succombé à la rage.

Auvré a élé mis en traitement le 17 avril, 5 jours après qu'il
a été mordu.

Mort de rage le 27 mai, à l'Hôtel-Dieu de Rouen, dix-sept
jours après la fin du traitement.

340 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — MAI 1888

Morsures à la tête ( simples ..... »| 8) |” 1, sl’)
et à la figure multiples....f »| 4 » r D ANS EAST
Cautérisations efficaces. =... 2 GES A ed >= el 508

= inefficaces Recto 2| » » 1] » » »| » »
PAS dE TOUEMSAON EE cs | RS JE ES Se (ER (IEC PO DE À HE 2
: simples......| »|#: »| 28 DE
Morsures aux mains) Re 2 13131 » + eo 8 12
Cautérisations effiraces............ 4] » | » | 4 » >|, 412
— inefficaces See le delete te 15! » » |33 » » 91 » »
Pas-decuutérisalion.- Lu LE A ET Red » | 8! » | »
Morsures aux mem-( simples......| »| ®) _|» 6) >4| ” 3) _
bres et au trone | multiples....| »| æ ®| »| #8) LE Je
Cautérisations efficaces............ » 52 |» 131" » >» Folses
— 1H NACUCES 2e ee ot DA PI PReTES HA EN Ps EL) I CA DE
Puside cautérisation LE LR See tre 20 | ES A SPA
ABUS AEChIrES SE CES EEE 4!» 0194 » A | OS IE)
MONSUTESIUENU Er Re EL RCE » 3 » » »| » »
Morsures multiples en divers points
AU COPPS ER ee re: » 0e) > 51 2?
Cautérisations efficaces............ » » | » » NB CIE
— INC NCLCES PTT EE" : be 20 RE A RE » 4160 00
Pas descautérisation rs Tee nr fl »|l >» [13 ) » à UE
HO ATÉCRITÉS ER RER re DTA TE AO » Ole
MONSUTES NUS Te. Avr eme PAS PA EC PE > ADI AE
ns | cn | ms | ms | mcm | ee | | CS | mn
( Français et Algériens..| .| 45) ,_|..| 89 | 43
DÉELES Eee a enr ral20 (45 ei 8, SA PE si
| | Ü
A B C
Te Re UE CE
T'OTATOGENER ADR 2 Re I16I

4. La colonne À comprend les personnes mordues par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement ; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire la colonne C les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 142 fois; chats, 18 fois ; cheval, 1 fois.

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — [Imprimerie Charaire et fils.

9me ANNÉE. JUILLET 1888. N° 7

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

EXPÉRIENCES SUR LA VACCINATION DES RUMENANTS CONTRE LA RAGE,
PAR INJECTIONS INTRA-VEINEUSES DE VIRUS RABIQUE,

Par MM. NOCARD Er ROUX.

M. Galtier, à qui nous devons l'étude de la rage chez
le cobaye et le lapin, a fait connaître à l’Académie de méde-
cine, le 25 janvier 1881, « qu'il avait injecté sept fois de la
salive rabique dans la jugulaire du mouton sans jamais obtenir
la rage. » Un de ces moutons, inoculé ensuite avec de la bave de
chien enragé, n'avait pas pris la rage quatre mois après l’ino-
culation, et M. Galtier concluait que ce mouton « semblait avoir
acquis l’immunité ». Au mois d’août de la même année, M. Gal-
tier ajoutait à ce premier résultat ceux de sept autres expé-
riences portant sur neuf moutons et une chèvre ; non seulement
ces animaux n'avaient pas pris la rage à la suite de l'injection
intraveineuse de salive rabique, mais ils avaient résisté à des
inoculations de virus rabique faites dans la peau et le tissu
sous-cutané. La communication de M. Galtier se Lerminait par
cette conclusion : « Les injections de virus rabique dans les
veines du mouton ne font pas apparaître la rage et semblent
conférer l'immunité ‘. »

Au moment où elles furent publiées, les expériences de

1. Comptes rendus, Acad. des Sciences, 1" août 1881.
22

342 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

M. Galtier n’ont pas fixé lattention comme elles le méritaient.
On savait, en effet, que la bave du chien enragé est un virus très
infidèle, qu'elle ne contient pas le virus rabique pur, mais asso-
cié à un grand nombre de microbes étrangers dont le dévelop-
pement peut arrêter celui du virus rabique, et même causer la
mort par septicémie des animaux d'expériences. L'emploi d’une
malière d’ineculation aussicomplexe faisait perdre de leurpréci-
sion aux résultats de M. Galtier, et l’on pouvait se demander si
l’immunité, qui suit l'injection intra-veineuse de la salive rabi-
que, était due au virus de la rage ou à la culture dans le corps
de l’un des microbes de la salive. De plus, pour éprouver leur
état réfractaire, M. Galtier inoculait à ses animaux de la bave
de chien enragé, soit dans le tissu sous-cutané, soit par scarifica-
tions de la peau; ces procédés donnent des résultats peu cons-
tants, sur les chiens comme sur les moutons ‘ et les lapins.
Un grand nombre des animaux ainsi inoculés ne prennent pas
la rage, et chez ceux qui deviennent enragés l’incubalion est
souvent fort longue. Pour faire disparaître ces incertitudes,
dues aux méthodes d’inoculation qui ne donnent pas la rage à
coup sûr, il faut multiplier les expériences, ce qui rend les
recherches longues et dispendieuses.

Peu de temps après les communications de M. Galtier, des
injections de salive rabique, dans les veines des chiens, furent
faites au laboratoire de M. Pasteur, en 1882. Des chiens qui
avaient reçu, dans la veine du jarret, plus de un centimètre
cube de salive rabique, ne prirent pas la rage à la suite de cette
injection, mais devinrent enragés lorsqu'on les inocula ensuite
sous la dure mère ou dans les veines avec de la moelle rabique
pure; aucun d’eux n'avait l’immunité. L'introduction de bave
rabique dans les veines du chien peut donc être inoffensive et
ne pas préserver l'animal, tandis que l'injection de virus rabique
pur, faite dans les mêmes conditions, donne sûrement la rage
aux chiens et aux lapins, et cela dans un temps très court; de
sorte que cette méthode d’inoculation est devenue très précieuse
pour l'étude de cette maladie. [Il paraissait surprenant qu’un pro-

1. Dans une de nos expériences, 4 moutons inoculés sous la peau et par scari-
fications avec de la moelle de chien enragé, au mois de mai 1884, étaient encore
bien portants plus d'un an après.

VACCINATION DES RUMINANTS CONTRE LA RAGE. 343

cédé d'injection aussi meurtrier pour le chien et le lapin fût
inoffensif pour le mouton, il importait donc de savoir si cet
animal supporterait aussi bien l'introduction dans les veines du
virus rabique pur que celle de la bave impure et peu riche en
éléments virulents.

Depuis l’année 1884, nous avons entrepris des expériences
sur le sujet que M. Galtier avait abordé dès 1881. Nous avons
fait un grand nombre d'essais sur la vaccination des ruminants
contre la rage, en tenant compte des progrès que nous devons
aux travaux du laboratoire de M. Pasteur. Grâce à eux, on peut
maintenant conduire de semblables expériences avec sécurité et
obtenir dans un délai relativement court des résultats d’une par-
faite netteté.

Au lieu d'employer la salive d'animaux enragés, nous nous
sommes servis, comme source de virus rabique, de la matière du
bulbe d’un animal qui vient de succomber à larage'. L’immunité
des animaux a toujours été éprouvée par l'injection de virus
rabique pur dans la chambre antérieure de l'œil. Ce procédé
d'inoculation donne la rage presqu'aussi sûrement que la trépa-
nation et dans un temps très court. On est ainsi à l'abri des
incertitudes que causent l'emploi de la salive et l’inoculation
sous la peau; et on évite l'ennui des longues incubations. Les
résultats de nos expériences ont été communiqués sommairement
par M. Nocard, danslerapportqu'il a fait à l’Académie de médecine,
le 2 novembre 1887, sur les travaux envoyés pour le concours
du prix Barbier: ils confirment ceux obtenus par M. Galtier.

H

L'INJECTION DE MOELLE RABIQUE DANS LES VEINES DES MOUTONS ET DES
CHÈVRES NE LEUR DONNE PAS LA RAGE ET LEUR CONFÈRE L’IMMUNITÉ.

La moelle rabique agit-elle comme la salive du chien enragé,
lorsqu'on l’injecte dans les veines des ruminants? Les moelles
de lapins de passage, telles qu’on peut aisément se les procurer

1. Dans ses leçons sur la rage, publiées en 1886, M. Galtier rapporte un cer-
tain nombre d'expériences dans lesquelles il a donné l’immunité contre la rage
par injection de virus rabique dans les veines de moutons et de chèvres. M. Galtier
se sert de l'expression « virus rabique », sans dire de quel virus il se sert, salive
ou émulsion de moelle rabique.

344 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

en tout temps dans le laboratoire, peuvent-elles remplacer le virus
du chien à rage des rues? Le virus rabique peut-il être injecté à
toutes doses dans les veines des ruminants ? Quelle est la durée
de l’immunité que confèrent ces injections? Telles sont les ques-
tions auxquelles nous avons cherché à répondre par les expé-
riences suivantes :

EXPÉRIENCE 1. — Le 10 juin 1885, on injecte dans la veine du Jarret
droit de 3 moutons 1“ de l'émulsion obtenue en broyant avec un peu d’eau
stérilisée de la matière du bulbe d’un chien qui vient de succomber à la rage
des rues. Au mois de décembre 1885, ces trois moutons sont inoculés, en
même temps qu'un mouton témoin, dans la chambre antérieure de l'œil
avec une goutte d’émulsion préparée avec la moelle d’un lapin mort en
20 jours de la rage des rues. Les trois moutons qui ont recu l'injection intra-
veineuse sont encore bien portants trois mois après; le témoin est pris de
rage le 16° jour après l’inoculation.

EXPÉRIENCE 2. — En décembre 1886, on injecte dans la jugulaire de
deux chèvres, 1/2 centimètre cube de l’émulsion obtenue avec de la moelle
de lapin de 130° passage, qui est en même temps inoculée par trépanation à
10 lapins. Ces lapins sont pris de rage le 6° jour, les deux chèvres restent
bien portantes. Le 3 juillet 1887, les deux chèvres sont inoculées dans la
chambre antérieure de l'œil, par 3 gouttes d'émulsion, faite avec un bulbe
de chien mort de rage mue (rage des rues), en même temps que 4 moutons
algériens neufs. Les 4 témoins étaient morts de rage le 29 juillet, une des
chèvres succombait le 24 juillet. L'autre est encore bien portante plus de
deux ans après.

EXPÉRIENCE 3. — Le 28 mars 1887, une chèvre et un boue reçoivent dans
la jugulaire 10 gouttes de l’émulsion faite avec de la moelle de lapin de
passage; en même temps, une chèvre et un chien sont inoculés avec la
même émulsion dans la chambre antérieure de l'œil. Le chien meurt de la
rage mue le 7 avril, la chèvre témoin succombe le 18 avril.

Le 22 mai le bouc et la chèvre sont éprouvés par l’inoculation dans l'œil
de 3 gouttes de l’émulsion faite avec le bulbe d’un chien mort de la rage
des rues. Un jeune bouc d’un an qui sert de témoin est inoculé de la même
facon. Le 8 juin, le bouc témoin est pris de rage, il meurt le 45 juin. Le
bouc et la chèvre qui ont subi l'injection intra-veineuse sont encore bien
portant(s.

EXPÉRIENCE 4. — Le 12 août 1887, une émulsion épaisse du bulbe d'un chien
mort de rage furieuse (rage des rues) est injectée à la dose de 10 gouttes dans
la jugulaire de 7 moutons bretons. Pour éprouver l'activité du virus employé,
on en injecte une goutte dans la chambre antérieure de l’œil d'un cobaye
et d’un lapin qui succombent à la ragele 28 et le 30 août. Le 14 septembre 1887,
les 7 moutons bretons sont inoculés dans l'œil avec 3 gouttes d'émulsion
rabique préparée avec le bulbe d'un chien atteint de rage furieuse (rage des

VACCINATION DES RUMINANTS CONTRE LA RAGE. 345

rues); un lapin reçoit une goutte de la même émulsion dans l'œil. Il est
enragé le 30 septembre, et les moutons sont encore bien portants.

Ces expériences démontrent que l'introduction dans les vei-
nes des chèvres et des moutons du virus rabique pur, le plus
virulent, ne leur donne pas la rage et leur confère l'immunité.
Le même virus, injecté à doses beaucoup plus faibles dans les
veines des chiens ou des lapins, aurait amené leur mort. Cette
indifférence aux injections intra-veineuses de virus rabique est
donc spéciale aux moutons et aux chèvres.

Tient-elle à une atténuation rapide du virus rabique dans le
sang de ces animaux ? Il est bien difficile, dans l’état actuel de nos
connaissances, de proposer de ce fait une explication qui paraisse
fondée. On ne saurait invoquer que ces animaux sont beaucoup
plus réfractaires à la rage que les chiens, puisque chèvres et
moutons deviennent facilement enragés à la suite des inocula-
tions dans l'œil, qu’ils prennent aussi la rage par inoculation
sous-cutanée, et, qu'à la suite des morsures de chiens enragés,
les moutons et les chèvres fournissent une mortalité parfois très
forte. D'ailleurs une réceptivité un peu moindre que celle du
chien ne saurait expliquer cette résistance des petits ruminants
à des doses de virus aussi massives que celles que nous avons
injectées dans le sang. C'est évidemment au mode d'inoculation
qu'il faut attribuer le résultat obtenu ; c’est parce que le virus
est versé directement dans le sang que les moutons résistent !.
C'est donc dans quelque propriété spéciale de leur milieu sanguin
qu'il faut chercher l'explication des faits qui nous occupent.

Les expériences que nous venons de rapporter montrent que
le résultat est le même, quelle que soit l’origine du virus injecté
daus les veines, qu’il provieune d'un chien atteint de la rage des
rues ou d'un lapin de passage. Cependant le virus de passage est
beaucoup plus actifsur le chien et sur le lapin que celui dela rage
des rues. C’est un fait important pour la pratique que cette effi-
cacité du virus de passage jointe à son innocuité. En effet, on n’a
pas toujours sous la main un chien enragé pour se procurer
l'émulsion préservatrice, tandis qu’il est toujours facile d’entre-
tenir dans le laboratoire le virus rabique sur des lapins. Cette cir-

1. Rapprocher ce fait de l'injection intra-veineuse du virus du charbon SyMmp-
tomatique d’après la méthode de MM. Arloing, Cornevin et Thomas.

346 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

constance peut faire de la vaccination des moutons mordus par
un chien enragé une opération vétérinaire courante. Il ne s’agit
plus en effet d'inoculations en série ni de virus gradués,
comme pour la vaccination des chiens contre la rage, mais d’une
injection pratiquée une fois pour toutes.

L'immunité donnée aux petits ruminants, par l'injection in-
tra-veineuse, est une immunité solide, puisqu'elle résiste à une
épreuve aussi sévère que celle de l’inoculation intra-oculaire de
la moelle rabique. Cette épreuve excessive aurait pu causer la
mort des moutons préalablement vaccinés, sans que les résultats
annoncés par M. Galtier fussent ébranlés. L'état réfractaire peut
en effet être suffisant pour mettre l'animal à l'abri des suites
d’une inoculation virulente faite dans la peau, mais non d’une
inoculalion pratiquée dans l'œil. Le succès des essais que nous
venons de rapporter ne fait que rendre plus évidente l'efficacité
de ce mode de préservation, qui nous donne plus que ce qui est
nécessaire dans les conditions ordinaires de l'infection. L’immu-
nité ainsi acquise n’est pas éphémère, elle est encore solide neuf
mois après la vaccination; de plus, elle est acquise peu de temps
après l'opération préservatrice, ainsi que nous le verrons dans
des expériences rapportées plus loin.

Ce procédé n’exige pas un dosage exact du virus employé,
il réussit avec des quantités très diverses. Nous avons injecté
tantôt 1 centimètre cube, tantôt 1/2 centimètre cube; d’ailleurs
il ne faut pas parler de mesures rigoureuses quand il s’agit d'une
matière comme celle du bulbe d’un animalenragé, dontles diverses
parties plus où moins riches en virus sont réparties inégalement
dans l’émulsion injectée. Il est probable cependant que les quan-
tités de virus ne sont pas indifférentes, et ce qui est vrai pour la
méthode de vaccination anti-rabique de M. Pasteur doit encore
l'être ici. Pour obtenir un effet certain, il faut sans doute plus
de virus pour les grands animaux que pour les petits. Si l’on peut
injecter sans danger de grandes proportions de moelle rabique
dans les veines des moutons, il est cependant des quantités qu'il
ne faut pas dépasser.

EXPÉRIENCE. — 3 moutons recoivent dans une veine du jarret douze
centimètres cubes d’émulsion préparée avec un bulbe de lapin de 184e pas-
sage. 13 jours après, deux de ces moutons sont pris de rage. Le troisième
mouton devient enragé le 36° jour après l'injection.

VACCINATION DES RUMINANTS CONTRE LA RAGE. 347

Dans ce cas, où la dose de virus injecté a été excessive, les
animaux sont morts des suites de l'injection intra-vemneuse
comme les chiens que l’on inocule de la même façon. On peut
arriver à faire absorber au mouton, en les lui injectant dans les
veines, des quantités énormes de virus rabique, mais à condition
d'espacer les injections ; on arrive ainsi à conférer des immuni-
tés à toute épreuve. Les résultats obtenus avec des doses
d'émulsion rabique qui ne dépassent pas 1 ou 2 centimètres
cubes, sont assez complets pour qu'il soit inutile d'en injecter
davantage. Dans un cas, nous avons fait pénétrer 5 centi-
mètres cubes d’émulsion rabique dans la jugulaire d’un mouton
sans effet nuisible pour l'animal, et il est inutile de dire qu'après
cette opération il avait acquis une immunité solide.

Le virus employé dans toutes nos inoculations d’épreuve est
celui de la rage des rues, parce que c'est ce virus dont il faut
prévenir les effets après les morsures de chiens enragés. Les
animaux rendus réfractaires à ce virus le sont-ils également
pour un virus plus fort, pour le virus de lapin de passage, par
exemple ?

L'expérience suivante répond à cette question :

ExPÉRIENCE. — Le 2 juillet 1887, on injecte à 11 moutons 1 centimètre
cube d'émulsion de bulbe de lapin de 154 passage. 46 jours après, les
11 moutons sont bien portants; ils sont alors inoculés dans la chambre
antérieure de l’œil avec 2 gouttes de l’émulsion faite avec un bulbe de
lapin de 157e passage. 17 jours après, 3 moutons deviennent enragés. Un
autre est pris de rage le 18 jour et 3 autres le 21° jour. 4 moutons seulement
résistèrent et furent conservés en bonne santé pendant plus de six mois,
époque à laquelle ils furent abattus.

L’injection de 1 centimètre cube d'émulsion de moelle de lapin
de passage, qui dans les autres exnériences a toujours donné
l’immunité aux moutons contre le virus de la rage des rues,
s’est trouvée ici insuffisante à les préserver tous contre le virus
de lapin de passage. Cependant 4 moutons ont résisté à cette
épreuve et il est probable qu'il en aurait été de même du plus
grand nombre, si on avait fait deux injections préservatrices.
Aucun d'eux n'aurait suecombé si l’inoculation d’épreuve avait
été faite sous la peau au lieu d’être faite dans l'œil.

348 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

IT

VACCINATION DES BÊTES BOVINES CONTRE LA RAGE

On sait quelle mortalité, parfois effrayante, sévit sur les
vaches mordues par un chien enragé; les prescriptions de la
loi sur la police sanitaire interdisent de livrer à la boucherie
les animaux mordus et laissent les propriétaires désarmés devant
l'imminence de pertes considérables. S'il était possible dans ces
cas de donner, aux bêtes bovines, l’immunité par injection
intra-veineuse, on rendrait un grand service aux agriculteurs.
Nous avons eu l’occasion de faire une expérience sur des vaches
et des veaux dans les conditions suivantes :

Expérience. — Le 3 juillet 1887, on injecte, dans la jugulaire de 3 vaches,
20 gouttes d'émulsion de moelle de lapin de 153° passage. 3 veaux reçoivent
aussi dans la jugulaire 10 gouttes de la même émulsion, qui est en même
temps inoculée à là dose de 2 gouttes dans la chambre antérieure de l'œil
d'un bouc. 40 jours après, le bouc est pris de rage; les vaches et les veaux
restent bien portants. Le 21 août 1887, vaches et veaux sont inoculés dans
l'œil, avec 2 gouttes de l’'émulsion préparée avec le bulbe d’un chien enragé
furieux (rage des rues). Un lapin témoin recoit la même dose dans la
chambre antérieure de l'œil; il est pris de rage 12 jours après, le 2 septembre.
Les vaches deviennent enragées le 17° et le 19° jour, et les veaux le 21e et
le 24e jour après l'inoculation virulente.

Aucun des animaux de cette expérience n’avait acquis une
immunité suffisante. Cela tient probablement à ce que l'injection
préservatrice a été trop peu abondante ; il aurait fallu la renou-
veler deux et trois fois. Les veaux, d’un poids moindre que les
vaches, ont résisté un peu plus longtemps, bien que les jeunes
soient en général plus sensibles à la rage que les adultes; cette
circonstance est d'accord avec l’idée que la quantité de virus
injecté a été trop faible. Il ne faut pas oublier non plus que l’ino-
culation d'épreuve était faite dans l'œil; si elle avait été prati-
quée sous la peau, le résultat aurait pu être tout différent.

Instruits par l'essai précédent, nous avons injecté beaucoup
plus de virus et à plusieurs reprises‘, dans la jugulaire d’un
cheval mordu au nez par un chien enragé. Ce cheval est bien

1, 30cc de virus de passage, en 5 injections faites à deux jours d'intervalle.

VACCINATION DES RUMINANTS CONTRE LA RAGE. 349

portant aujourd’hui, 70 jours après la morsure, bien que le siège
de celle-ci la rendit particulièrement grave. Il n'y a évidemment
rien à conclure de ce seul cas, si ce n’est que le cheval n’a pas
souffert des injections préservatrices. On est donc encouragé à
recommencer l'essai, et à étendre au cheval la méthode essayée
jusqu'ici sur les ruminants.

III

VACCINATION DES MOUTONS APRÈS L'INFECTION ! .

Toutes les expériences que nous venons d'exposer montrent
qu'il est facile de rendre les bêtes ovines réfractaires à la rage.
Il faut maintenant, à l'exemple de ce que M. Pasteur a fait
pour les chiens, essayer d'établir que la préservation des mou-
tons peut être obtenue aprés l'infection. L'expérience qui vient
naturellement à l'esprit, pour faire cette démonstration, consiste
à faire mordre par un chier enragé ou à inoculer sous la peau
un certain nombre de bêtes ovines. à traiter la moitié de celles-
ci, et à attendre un temps très long pour comparer la mortalité
des traitées et des témoins. Pour qu'une semblable expérience
soit concluante, il faut qu’elle porte sur beaucoup d’animaux,
sans quoi nous retomberons dans ces incertitudes dont nous
avons déjà parlé et qui sont dues à ce que la méthode d’inocula-
tion sous la peau ne donne pas sûrement la rage.

Pour éviter ces incertitudes et ces retards, nous avons essayé
de conférer l'immunité aux moutons, après qu'ils ont été inoculés
par injection intra-oculaire de virus rabique, procédé qui leur
donne la rage presque à coup sûr. Si dans ces conditions on par-
vient à empècher l’apparition de la rage, il est évident qu'il sera
facile de préserver les animaux mordus ou inoculés sous la peau.

ExpÉRiENCE. — Le 3 juillet 1887, 4 moutons algériens sont inoculés dans
9

l'œil par 3 gouttes de l’émulsion préparée avec le bulbe d’un chien mort
de rage mue (rage des rues). Le 5 juillet, on injecte, dans la jugulaire de 3

4. M. Galtier a publié dans les Comptes-rendus de l’Académie des sciences,
16 avril 1888, des expériences sur ce sujet. 4 moutons inoculés sous la peau avec
de l’émulsion du bulbe d’un chien rabique reçurent 4° de la même émulsion
dans les veines, en 2 injections faites 4 heures et 30 heures après l'infection.
Ces 4 animaux ne sont pas devenus enragés. Un mouton témoin non traité mou-
rut de rage,

800 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de ces moutons, 1 centimètre cube de l’émulsion faite avec la moelle
d’un lapin de 153e passage. Le quatrième mouton, gardé comme témoin,
est pris de rage le 19 juillet. Parmi les moutons traités, deux deviennent
enragés furieux le 22 juillet, le troisième est pris de la même forme de
rage le 27 juillet.

Les moutons traités ont résisté notablement plus longtemps
que le témoin; de plus l'injection préservatrice a été faite
plus de quarante-huit heures après l’inoculation virulente, et l’on
sait par les expériences du laboratoire de M. Pasteur et celles
d’autres expérimentateurs, combien il est important de com-
mencer le traitement aussitôt que possible quand il s’agit de
préserver des animaux inoculés par trépanation ou injection
intra-veineuse.

EXPÉRIENCE. — 4 moutons sont inoculés dans l'œil droit avec une goutte
de l’émulsion du bulbe d’un lapin de 16° passage. 2 heures après, 3 de ces
moutons reçoivent dans la veine du jarret 12 centimètres cubes de l’'émulsion
préparée avec le bulbe d’un lapin de 1842 passage. Le quatrième mouton
est gardé comme témoin. 10 jours après ce mouton est pris de rage en
même temps que deux des trois moutons injectés dans les veines. Le qua-
trième mouton vacciné reste bien portant:

Le traitement a été commencé à temps dans cette expérience,
puisque l'injection intra-veineuse était pratiquée 2 heures après
l’inoculation virulente. Les doses injectées étaient plutôt exagé-
rées qu'insuflisantes, et cependant un seul mouton a sur-
vécu.

Cette grande mortalité est peut-être due à ce que le virus
d'épreuve était un virus déjà passé 16 fois par le lapin : nous
avons déjà vu (p. 347) que le virus de passage paraît plus actif
sur les petits ruminants que celui de la rage des rues. On pour-
rait aussi se demander si la mort n'a pas élé causée, dans ce
cas, par la grande quantité de virus de passage injectée dans les
veines? Il n’en est rien, car le bulbe du mouton témoin et celui
des moutons traités, inoculés à des lapins, leur donnèrent la
rage en 13 et 14 jours.

EXPÉRIENCE. — 12 moutons sont inoculés dans l'œil avec 2 gouttes
de émulsion du bulbe d’un chien mort de la rage des rues, puis ils sont
divisés en 3 lots de 4 animaux chacun. Disons tout de suite qu’un mou-

°
VACCINATION DES RUMINANTS CONTRE LA RAGE. 351
ton témoin, inoculé ! de la même façon dans l'œil, a pris la rage 13 jours
après.

Le traitement des 42 moutons consiste dans l'injection, dans la jugu-
laire, d'émulsion de moelle de lapin de 185° passage. On fait à chaque
animal deux injections à 48 heures d'intervalle. Pour le 1 lot, le traite-
ment commence 24 heures; pour le 2% lot, 48 heures; pour le 3 lot,
72 heures après l’inoculation.

Dans chaque lot, les animaux sont numérotés de 4 à 4. Le n° 1, de
chaque lot, recoit un demi-centimètre cube ; le n° 2, un centimètre cube;
le no 3, deux centimètres eubes; le n° 4, trois centimètres cubes de lémul-
sion rabique à chaque injection.

Les résultats de l'expérience ont été les suivants :

Tous les moutons du lot n° 1, traités 24 heures après l'inoculation, ont
résisté à l'exception du n° 3, qui a pris la rage 29 jours après l’inoculation
virulente. Tous les animaux des lots 2 et 3, traités 48 et 72 heures après
l'inoculation dans l'œil, sont morts de rage dans des délais variant de 12 à
21 jours.

Nous nous sommes efforcés de réunir dans cette expérience
toutes les conditions capables de nous éclairer sur l'influence
des doses de virus injectées et surtout sur celle du délai écouié
entre l’inoculation virulente et le commencement du traitement.
Les résultats nous montrent que les doses sont assez indifté-
rentes et que 2 centimètres cubes d’émulsion rabique injectés en
deux fois sont suffisants pour prévenir la rage, si le traitement
est commencé en temps opportun. Sur # moutons traités
24 heures après l'inoculation dans l'œil, 3 ont résisté: ce
résultat suffit à établir l'efficacité de la méthode. Il est certain
qu'employée à temps, elle préserverait tous les animaux mordus
par un chien enragé ou inoculés sous la peau. Il est remarquable
que l’on obtienne de pareils succès avec le mouton, tandis qu'il
est toujours difficile d'empêcher la rage chez les chiens inoculés
par trépanation ou dans la chambre antérieure de l'œil. L'in-
fluence du délai qui s'écoule entre l’inoculation et le traitement
estici éclatante : en effet les animaux traités après 48 et 72 heures
ont tous succombé, alors que ceux traités après 24 heures ont
survécu. À la suite de l'injection intra-veineuse, l’état réfractaire
est très rapidement acquis, puisqu'elle prévient la rage alors
mème que les animaux sont inoculés dans l'œil.

1. Un autre mouton inoculé, sous la peau du cou, avec 5 centimètres cubes de

la même émulsion, est encore bien portant; c'est un nouvel exemple de linfidé-
liié des inoculations sous-cutanées.

302 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Comme il est beaucoup plus facile d'empêcher le développe-
ment de la rage, après une inoculation faite à la peau ou dans
le tissu cellulaire, qu'après l’inoculation pratiquée dans l’æil, le
traitement des animaux mordus pourra réussir même quand il
sera entrepris trois ou quatre jours après la morsure. Les
praticiens auront donc tout le temps nécessaire pour se procurer
le virus après que l'accident se sera produit.

La technique de l’inoculation intra-veineuse est très simple :
il faut injecter dans les veines du virus rabique pur, c’est-à-dire
que l’on doit rejeter la salive rabique et prendre le virus dans le
bulbe d’un animal mort de la rage. L’émulsion de la matière
nerveuse sera préparée en broyant des fragments du bulbe dans
un mortier ou dans un verre avec de l’eau, de facon à obtenir
un liquide laiteux facile à aspirer dans la seringue. Pour éviter
d'introduire dans les veines des grumeaux de matière nerveuse
qui produiraient des embolies et la mort, il faut passer l'émul-
sion sur une toile de batiste très fine. Toutes ces opérations
doivent être faites avec pureté : c’est-à-dire que les ciseaux qui
servent à prélever les fragments du bulbe, le verre ou le
mortier, la batiste et la seringue doivent avoir été stérilisés dans
l’eau bouillante. Pour faire l’'émulsion, on doit enployer de l'eau
bouillie, puis refroidie.

Il est facile de faire pénétrer la canule de la seringue,
à travers la peau, dans la veine jugulaire, si on a soin de faire
gonfler celle-ci en la comprimant à la base du cou. Pour plus de
sécurité on peut employer une canule double.

L'injection doit ètre poussée lentement; il n’arrive jamais
d'accident sil’émulsion est bien tamisée, alors même que l’on en
fait pénétrer de grandes quantités. M. Galtier rapporte dans ses
Leçons sur larage! « qu'il a constaté que le virus rabique inoculé
à doses massives, peut faire périr les animaux par suite d’une:
véritable intoxication. Il a vu mourir presque comme foudroyés
des lapins qui venaient de recevoir une injection intra-veineuse
de matière rabique. » Chezles moutons et les chiens, M. Galtier a
constaté de l’essoufflement, de la salivation, des frissons. Ces phé-
nomènes ne se produisent pas quand on emploie de faibles doses.

1. Journal de médecine vétérinaire et de Zootechnie de l’École de Lyon. — Août
1886, p. 413,

VACCINATION DES RUMINANTS CONTRE LA RAGE. 353

Nous n'avons jamais observé ces elffets d'intoxication dont
parle M. Galtier, même en injectant 12 centimètres cubes d’é-
mulsion rabique dans les veines du mouton. Jamais il n’y a eu
d'accidents immédiats, si la matière d'injection ne contenait pas
de grumeaux. Chez le lapin, des doses de 6 à 10 centimètres
cubes ont été bien supportées. Chez plusieurs chiens, il nous est
arrivé d'injecter jusqu'à 35 centimètres cubes de moelle rabique
dans les veines sans remarquer aucun phénomène d’intoxi-
cation.

Nous pensons que les accidents que rapporte M. Galtier sont
dus à des embolies causées par des particules solides en suspen-
sion dans le liquide injecté. Dans aucun cas nous n'avons vu
ces manifestations rapides du poison rabique, même lorsque
nous avons introduit, dans le péritoine d’un lapin, un cerveau
entier d’un lapin rabique de passage. L'animal qui avait reçu
cette dose formidable de virus rabique prit la rage le 8° jour,
mais ne manifesta aucun malaise après l'opération.

De tout ce qui précède on peut conclure : 1° L'injection intra-
veineuse de moelle rabique ne donne pas la rage aux petits
ruminants et leur confère l’immunité, ainsi que l’a annoncé
M. Galtier. 2° Cette méthode peut prévenir la rage même après
l’inoculation dans l'œil et par conséquent après morsure. Elle
est d'un emploi facile, puisqu'elle réussit bien avec de la moelle
rabique des lapins de passage, et enfin elle mérite d’être essayée
sur une grande échelle.

SUR LA TRANSFORMATION DES MATIÈRES AZOTÉES
DANS LES CULTURES DE BACTÉRIDIE CHARBONNEUSE,

PATENT MI EUDIEAIEXE

Quelles sont les modifications elfectuées par les organismes
pathogènes dans les milieux de cultures ? Comment ces orga-
nismes utilisent-ils les matériaux qui leur sont fournis? La con-
naissance de ces transformations est intéressante, parce qu'elle
peut renseigner sur celles que ces mêmes microbes pathogènes
produisent quand ils se développent dans les êtres vivants. J'ai
étudié en particulier, dans ce mémoire, ce que devient la ma-
tière azotée dans les milieux où l’on a cultivé la bactéridie char-
bonneuse.

J'ai employé à cet effet des bouillons de veau de réaction
légèrement alcaline, préparés avec poids égaux de viande et
d'eau.etles bouillons de veau étendus, contenant un poids donné
de viande, pour un poids double d’eau. Ce sont les bouillons
généralement employés, le dernier surtout, pour la culture de
la bactéridie charbonneuse.

J'ai expérimenté également sur le sérum du sang de bœuf,
slérilisé par une série de chauffages successifs à la température
de 56° ; les expériences ont été faites sur le sérum liquide.

J'ai opéré aussi sur le lait de vache ordinaire. J’exposerai
successivement les résultats obtenus pour ces différents milieux.

Il

Lorsqu'on sème dans du bouillon de veau stérilisé et légè-
rement alcalin une trace du sang d’un animal mort du charbon,
la bactéridie se développe aux dépens des éléments du bouillon
et produit d’abord des filaments qui ne troublent pas la limpi-

TRANSFORMATION DES MATIÈRES AZOTÉES. 355

dité du liquide. Bientôt les spores apparaissent, les filaments
se désagrègent; un mois ou deux après l’ensemencement, la
culture s’arrèle, les filaments sont complètement transformés
en spores.

Dans toutes les expériences, afin de diminuer autant que
possible les chances d'erreurs, j’ai toujours comparé un flacon
de bouillon ensemencé avec un autre de même bouillon non
ensemencé, servant de témoin. Le flacon de culture et le témoin
étaient toujours de même forme, de même grandeur ; ils conte-
naient toujours le même poids de liquide et étaient toujours
placés simultanément dans des conditions identiques.

Si l’on examine chaque jour une culture de bactéridie dans
le bouillon de veau, on s'aperçoit qu’au bout de quelque temps
le bouillon de cullure prend une teinte plus foncée que celle
du témoin ; cette teinte continue à s’accentuer à la température
de 35°. L'action oxydante de l’air s'exerce donc d’une façon plus
intense sur les liquides de culture que sur les bouillons eux-
mêmes.

Un résultat général toujours observé, est la diminution de la
densité du bouillon par le fait de la culture.

Voici par exemple, les densités comparatives trouvées dans
trois séries d'expériences:

Densité Densité

de la culture. du bouillon témoin.
A. — Bouillon de veau + (49 jours de culture) 1,0103 1,0113
B. — Bouillon de veau ‘/, (75 jours de culture) 1,0037 1,0041
€. — Bouillon de veau !/, (38 jours de culture) 4,004%1 1.0047

Le volume des liquides a été mesuré dans les flacons avant
et après l'expérience; la diminution du liquide était sensible-
ment la même : on ne peut donc attribuer la diminution de den-
sité qu'à la perte d'éléments à l’état gazeux : acide carbonique
produit par la vie du microbe, et azote éliminé à l’état d’ammo-
niaque, comme je l’indiquerai plus loin.

Cette conclusion est d’ailleurs confirmée par les deux faits
suivants :

1° Dans les mêmes conditions, le résidu sec est toujours
moindre pour le bouillon cultivé que pour le bouillon pur.

En desséchant sous la même cloche, à la température du

306 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

laboratoire, des volumes égaux de culture et de bouillon, j'ai
trouvé pour poids des résidus secs:

Cultures. Témoins.
A. 2 gr. 20 pour 100cc 2 gr. 87 pour 400cc
B. 0 gr. 94 pour 100cc 4 gr. 14 pour 100°°

2° Une partie de l'azote est éliminée et disparait.

L’azote total, déterminé comparativement par le procédé de
Kjeldahl, est moin dre pour les bouillons cultivés que pour les
témoins.

Voici les nombres trouvés pour les trois séries de bouillons
employés :

Azote total pour 1006,

Cultures. Témoins.
A. 0 gr. 255 0 gr. 265
B. 0 gr. 089 0 gr. 098
€. 0 gr. 088 0 gr. 097

La matière azotée du bouillon est employée en partie par la
bactéridie pour servir à la constitution des cellules nouvelles.
Une autre partie est transformée en ammoniaque. En détermi-
nant comparativement, à l’aide de l'appareil de M. Schlæsing,
la quantité d’'ammoniaque contenue dans les cultures et dans les
bouillons témoins, j'ai trouvé les résultats suivants :

Ammoniaque pour 400c.

Cultures. Témoins.
A. 0 gr. 064 0 gr. 015
B. 0 gr. 036 0 gr. 006
c. 0 gr. 033 0 er. 005

La matière azotée est donc partiellement transformée en
ammoniaque. Mais est-ce bien véritablement de l’ammoniaque
qui se forme dans ces conditions? N'est-ce pas plutôt une am-
moniaque composée, une amine volatile? À quel état cette
amine se trouve-t-elle dans les cultures? Quelle est la dose
maxima qu’elle peut atteindre? Est-elle une des causes arrêtant
le développement de la bactéridie?

Pour reconnaître quelle est l’amine volatile existant dans les
bouillons de culture, j'ai fait bouillir une culture avec de la ma-
gnésie calcinée; la base volatile était recueillie dans l’acide
chlorhydrique en excès. Ce chlorhydrate, traité par le chlorure de

TRANSFORMATION DES MATIÈRES AZOTÉES. 397

platine, a donné un précipité jaune de chloroplatinate. Les
mêmes opérations ont été effectuées sur du sel ammoniac pur,
et l’on a obtenu de la même façon un précipité de chloroplati-
nate d’ammoniaque. Ces précipités ont été recueiilis sur deux
filtres, lavés, séchés simultanément et pendant 4 heures dans
une étuve à 1009, puis calcinés dans un creuset de platine.

J'ai trouvé ainsi que le chloroplatinate de l’amine de la cul-
ture contenait 43,8 pour 100 de platine; le chloroplatinate
d'ammoniaque, traité de la même façon, contenait 43,7 pour
100 de platine. L'amine volatile produite par la culture de la
bactéridie charbonneuse dans le bouillon de veau, est donc
simplement de l’ammoniaque.

L'ammoniaque se trouve partiellement à l’état libre dans les
cultures, et le papier de tournesol indique une réaction bien
alcaline. Si l’on fait bouillir la culture, sans addition d’alcali,
elle dégage de l'ammoniaque et bleuit le papier de tournesol. J'ai
déterminé la quantité d’ammoniaque qui pouvait ainsi être mise
en hberté, dans une culture de trois mois, par une simple ébul-
lition. Dans le bouillon pur, j'ai trouvé à peine une trace d'am-
moniaque libre; dans la culture, il y en avait 05,031 pour 100°,
tandis que la quantité totale d’ammoniaque était (05,041
pour 100%. Les trois quarts de l’ammoniaque contenue dans la
culture pouvaient ainsi être chassés par l’ébullition ou par un
simple courant d’air suffisamment prolongé. Dans l’état ordi-
naire, les cultures à l’étuve diffusent de l’ammoniaque:; et si l’on
considère que ce qui existe pour le charbon se produit d'une
façon analogue pour beaucoup d’autres organismes, il ne faut
pas s'étonner que l'air d’une étuve à cultures contienne des
vapeurs ammoniacales.

Cependant, tandis qu'uñe partie de l'ammoniaque est libre,
une autre partie se trouve combinée aux acides du bouillon et
en particulier à l'acide phosphorique. Dès le second mois, à la
température de 35°, on voit se déposer sur le fond des vases
qui contiennent les cultures des cristaux très nets, très brillants,
qui augmentent peu à peu en nombre et en grosseur. Les plus
petits de ces cristaux restent d’abord en suspension dans le
liquide, formant des paillettes nacrées, scintillantes à la lu-
mière. [ls ont tendance à se dissoudre légèrement, quand on
retire quelque temps le ballon de l’étuve; à la loupe, ils pré-

23

398 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sentent l'aspect de prismes quadratiques tronqués. Il est facile
de les séparer et de les laver; ils sont insolubles dans l'eau,
surtout dans l’eau un peu alcaline; ils se dissolvent dans les
acides étendus. Chauffés avec un alcali fixe, ils dégagent de
l’ammoniaque. La dissolution acide chauffée avec du molybdate
d’'ammoniaque donne un précipité de phosphomolybdate. Ils
présentent tous les caractères de phosphate ammoniaco-ma-
gnésien, qui cristallise dans toutes les cultures anciennes de
bactéridie charbonneuse.

Si pour les bouillons de concentration 1/2, dans lesquels la
culture est terminée, on prend le rapport de l'azote ammoniacal
à l'azote total, on trouve des nombres tels que TL Fr 7" Lors-
que la culture s'arrête dans ces bouillons, la quantité d’ammo-
niaque est telle que son azote est presque le tiers de l’azote total.
Un résultat analogue se produit avec les bouillons concentrés;
mais, dans ce cas, le nombre constant est environ

Plus un bouillon est riche en matière azotée, plus est faible
la proportion de cette matière azotée transformée en ammo-
niaque ; et lorsque la culture s'arrête dans un bouillon de con-
centration déterminée, l’ammoniaque produite par la transfor-
mation de la matière azotée est en quantité déterminée : 4 déci-
grammes environ par litre pour les bouillons de veau de
concentration :° 8 décigrammes par litre pour les bouillons de
concentration ;* Bien qu’en valeur absolue, la quantité d'’ammo-
niaque formée dans les bouillons concentrés soit plus considé-
rable, le rapport de l'azote correspondant à l’azote total est plus
faible que dans les bouillons étendus.

L'ammoniaque ainsi formée contribue pour une certaine part
àarrèter le développement de la bactéridie. Si l'on sème, en effet,
de la bactéridie dans des bouillons neufs contenant des quan-
tités croissantes d’ammoniaque (à l’état de chlorhydrate ou de
phosphate, afin de ne pas modifier la réaction du bouillon), la
bactéridie se développe, jusqu’au moment où la teneur en am-
moniaque est de 4 à 2 pour 100. A partir de cette dose, l’am-
moniaque empêche le développement de la bactéridie : elle se
comporte alors comme un antiseptique. Il en est de même
des ammoniaques composées : la triméthylamine, par exem-
ple, employée à l’état de chlorhydrate, empèche la culture,
quand le bouillon en renferme à l’origine 5 décigrammes

TRANSFORMATION DES MATIÈRES AZOTÉES. 399
pour 100, bien que la réaction du milieu ne soit pas changée.
Comme une partie de l’ammoniaque peut être enlevée par
une simple ébullition, ainsi que je l’ai indiqué, on peut, en
faisant bouillir la culture dans le vide à la température ordinaire,
diminuer dans une proportion très notable la quantité d'ammo-
niaque qu'elle contient. Dans ces conditions, il se produit de
nouveaux filaments, dans un milieu où la croissance paraissait
arrêtée.

IT

Il était intéressant d'effectuer des recherches analogues sur
une matière albuminoïde, telle que la sérine du sang. C’est en
effet la matière azotée que la bactéridie trouve le plus abondam-
ment dans le sang des animaux où elle se développe.

J'ai employé le sérum de sang de bœuf stérilisé par une série
de chauffages successifs à la température de 56°. Ce sérum était
placé dans des vases coniques à fond plat, de façon à présenter
une très large surface à l’action de l'oxygène de l'air.

La bactéridie se développe très bien dans le sérum liquide,
qui est pour elle un milieu très favorable. Dès le second jour,
la culture a l’aspect de flocons enchevêtrés; du quatrième au
cinquième jour, elle ressemble à une gelée et se déplace tout
d’une pièce; on peut encore la désagréger par l'agitation. Du
dixième au quinzième jour, le sérum forme une masse gélatineuse
presque solide, ayant perdu sa transparence, et l’on peut retour-
ner complètement, sans qu’elle s'écoule, le vase qui la contient.
La consistance passe ensuite par des états inverses; la fluidité
reparait peu à peu. Un mois et demi ou deux mois après l’ense-
mencement, le liquide a repris presque complètement la fluidité
du sérum pur; les cultures plus anciennes sont aussi fluides que
le sérum témoin. Si le sérum est en couche plus épaisse, les
mêmes phénomènes se produisent, mais plus lentement.

Ces différents aspects de la culture correspondent à différents
états de la bactéridie. Celle-ci, en effet, trouvant un milieu très
favorable, se développe abondamment en donnant des filaments
très denses, très enchevètrés, et finit par former un tissu serré et
résistant. Puis, peu à peu, les filaments se résolvent en spores
qui deviennent libres et le liquide réprend sa fluidité primitive.

La bactéridie transforme une partie de la matière albuminoïde

360 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

du sérum eu ammoniaque, absolument comme elle le faisait
pour la matière azotée du bouillon : les résultats sont du même
ordre.

La densité du sérum diminue : après 65 jours de culture, elle
était devenue 1,0305, celle du témoin étant 1,0335. Le dosage
de l’azote total donnait 15,26 pour 100, au lieu de 1,40.

Une grande quantité d’ammoniaque s'était formée; on en
trouvait 0#,29 pour 100 au lieu de 05,02. De même que dans le
bouillon du veau, il se forme à la longue des cristaux de phos-
phate ammoniaco- magnésien.

Le sérum employé permettait de déterminer directement la
quantité de matière albuminoïde coagulable avant et après la
culture et de rechercher si la sérine disparue était intégralement
transformée en ammoniaque, ou si une partie en était simple-
ment peptonisée.

Après avoir étendu de 20 fois leur poids d’eau des volumes
égaux de sérum cultivé et de sérum pur, j'ai effectué la coagula-
tion de la sérine en présence de l’acide acétique. Les précipités
ont été recueillis sur deux filtres, lavés de la même facon et
desséchés simultanément pendant # heures, à l’'étuve à 100°.

100% de sérum pur contenaient 5,90 de matière azotée
coagulable et desséchée; 100°° de sérum cultivé n’en contenaient
plus que 35,35. Pour 100 centimètres cubes, 25,55 de sérine
avaient été employés par la bactéridie.

Le liquide filtré après la coagulation ne précipitait ni par le
bichlorure de mercure, ni par le sous-acétate de plomb. Il n’y
avait donc pas de peptone dans les cultures achevées. Il est ce-
pendant très probable que l'oxydation de l’albumine qui aboutit
à sa transformation en ammoniaque est précédée d'une peplo-
nisation véritable.

Or, les 2%,55 de sérine disparus contenaient 0,4 d'azote.
L'ammoniaque formée (0,27 pour 100) en contient 05,22 ; et
l’azote total a diminué de 0,44. On trouve donc 0,36 d'azote à
l’état ammoniacal restant dans la culture, on disparus par diffu-
sion; c’est-à-dire la presque totalité de l'azote de la matière albu-
minoïde employée. En résumé, la culture de la bactéridie dans
le sérum à l'air transforme la matière azotée en ammoniaque.

Devant ces résultats, qui montrent avec quelle facilité, dans
une culture, la bactéridie transforme en ammoniaque les matières

TRANSFORMATION DES MATIÈRES AZOTÉES. 301

albuminoïdes du sang, il était naturei de rechercher si le sang
d'un animal charbonneux contient de lammoniaque. J'ai pris
dans le cœur d’un lapin, qui venait de mourir du charbon,
10 centimètres cubes de sang : ces 10 centimètres cubes conte-
naient environ un demi-milligramme d'ammoniaque totale,
quantité insignifiante.

Les produits de la culture de la bactéridie dans le sang de
l'animal vivant sont donc différents de ceux que l’on trouve dans
les cultures sur sérum. Cela tient sans doute, soit à des phéno-
mènes d'absorption de l’ammoniaque pendant la circulation,
soit à ce que, chez l’animal vivant, l'oxygène est fourni à la bac-
téridie à l’état de combinaison avec l'hémoglobine, tandis que
dans nos cultures artificielles la bactéridie utilise l'oxygène libre
de l'air.

III

La caséine du lait, aussi bien que la matière azotée du
bouillon et que celle du sérum, est transformée également en
ammoniaque par la bactéridie charbonneuse.

Si l’on fait une culture de charbon dans du lait stérilisé, on
voit la bactéridie se développer avec beauconp d'énergie. Au
bout de quelques jours, le lait devient plus limpide, plus mobile
et se colore légèrement en jaune clair.

Bientôt, le liquide se divise en deux zones; la matière grasse
se rassemble à sa surface et le petit lait se sépare à la partie
inférieure. Dans les premiers temps, il est encore facile d'émul-
sionner lamatière grasseenagitant le flacon, et l’émulsion persiste
pendant plusieurs heures. Plus tard, l'émulsion est plus difficile
à produire. À la longue une partie de la matière grasse est digérée.
Cette disparition de la matière grasse est plus eu moins rapide
suivant la concentration du lait employé et suivant la nature de
la bactéridie ; elle peut être complète quand le lait est un peu
étendu.

Les cultures dans le lait prennent rapidement une odeur très
marquée, qui rappelle un peu le fromage pourri ; la teinte jaune
de la culture va constamment en s’accentuant: une culture
abandonnée à l’étuve pendant six mois avait pris une teinte
acajou foncé. Le lait, comme le bouillon, diminue de densité,
quand la bactéridie s’y développe ; mais celte diminution est

362 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

moins rapide que pour le bouillon, la culture y étant plus lente.
Au bout de 20 jours, dans une de mes expériences, la densité
avait baissé de 1,036 à 1,035 ; au bout de deux mois, elle était
devenue 1,0335. Dans un autre cas, la densité, de 1,035, était
devenue 1,031.
Une partie de l'azote avait disparu ; l’azote total était en

moins grande quantité :

057,52 au lieu de 0,55 pour 100 :
et dans une autre expérience :

05,49 au lieu de 05,52 pour 100.

Il se forme de grandes quantités d'’ammoniaque aux dépens
de la matière azotée du lait: 0,301, 05,271 pour 100; et à la
longue, on obtient des cristaux de phosphate ammoniaco-ma-
gnésien.

L'amine du lait est aussi de lammoniaque : son chloroplatinate
traité comme je l’ai indiqué plus haut et comparé au chloropla-
tinate d’'ammoniaque, a donné pour résidu 43,6 pour 100 de
platine ; le chloroplatinate d'ammoniaque dans les mêmes con-
ditions donnait 43,7 pour 100.

Lorsque la culture est terminée, si l’on prend le rapport de
l’azote ammoniacal à l'azote total, on trouve des nombres, tels
que : 5, 560 5% 5n - azote ammoniacal est presque moitié de
l'azote total; la quantité d’ammoniaque est alors environ de
3 grammes par litre.

Ce résultat est analogue à celui que j'ai trouvé précédem-
ment pour les bouillons. Il est cependant à remarquer que la
transformation de la matière azotée en ammoniaque est beau-
coup plus complète dans le lait que dans les bouillons, bien que
le poids de cette matière azotée soit plus considérable.

Outre la matière albuminoïde, le lait renferme deux éléments
importants : le sucre de lait et la matière grasse.

Le sucre de lait est peu attaqué par la bactéridie. Au bout
d’un mois, on trouve sensiblement la même quantité de lactose
dans le lait cultivé et dans le lait témoin; cependant, dans les
cultures plus anciennes, une petite quantité de lactose disparait.
Dans une expérience, j'ai trouvé 3“,8 0/0, au lieu de 4#,3. On
peut, au moyen de l'alcool fort, retirer des cultures une grande
quantité de sucre non utilisé. Cependant, si l’on augmente l’ac-

TRANSFORMATION DES MATIÈRES AZOTÉES. 363

tion de l'oxygène, en faisant passer un courant d’air dans le lait
pendant toute la durée de la culture, le lactose est plus vite
attaqué, et le lait devient acide. En mème temps, la matière
azotée est plus rapidement transformée en ammoniaque.

Pour étudier directement l’action de la bactéridie sur le lac-
tose, j'ai employé un bouillon de veau contenant de ce sucre. La
culture s’y effectue comme dans le bouillon de veau ordinaire ;
les filaments y paraissent seulement un peu plus épais, surtout
aux points où se forment les spores. Au bout de quelques jours,
la réaction du milieu change : elle devient légèrement acide; au
bout d’un mois, une petite quantité de lactose a disparu et le
bouillon est franchement acide. Une culture dans ces conditions
contenait 6€", 35 0/0 de lactose, et le témoin en contenait 68,6 0/0.

J'ai semé par comparaison de la levure de bière dans le bouil-
lon sucré ayant servi à la culture de la bactéridie et dans le
témoin; j'ai semé simultanément de la bactéridie et de la levure
dans un bouillon pur contenant du lactose. La levure de bière
s’est bien développée; dans le 3"° flacon, elle a poussé concur-
remment avec la bactéridie. Dans aucune de ces cultures, il ne
s’est formé la moindre trace d’alcool; il en résulte que la bacté-
ridie ne rend pas le lactose fermentescible par la levure de bière.

Les acides produits par l'oxydation du lactose ont été rassem-
blés par l’éther, saturés par l’eau de chaux et étudiés par le pro-
cédé de la distillatiôn fractionnée indiqué par M. Duclaux pour
la détermination des acides gras volatils. Il sont formés princi-
palement d'acide butyrique, mélangés à des acides gras infé-
rieurs. L'équivalent de ce mélange d’acides est environ 80.

Quant à la matière grasse du lait, elle est partiellement sapo-
nifiée et transformée en un savon ammoniacal. En filtrant la cul-
ture et ajoutant un peu d'acide sulfurique, on peut séparer les
acides par l’éther, qui dissout en même temps la matière grasse.
Il suffit alors d'ajouter à cet éther un peu d’eau de chaux pour
obtenir le savon de chaux.

En résumé, la matière azotée des bouillons, celle du sérum,
la caséine, par l’action de la bactéridie, en présence de l'oxygène
de l'air, sont transformées en ammoniaque. Pour un milieu
déterminé, cette transformation s'arrête quand la quantité d’am-
moniaque atteint un chiffre déterminé, variable avec la matière
albuminoïde et avec la concentration.

DES PROCÉDÉS USITÉS POUR LE DOSAGE DES BACTÉRIES
ATMOSPHÉRIQUES.

PAR Le D eP.MIOUETL:

Les premiers essais qui ont eu pour but l’analyse microscopi-
que de l’air remontent à la première moitié de ce siècle. Parmi
les savants que ce sujet a intéressés, on doit citer Ehrenberg,
Gaultier de Claubry, Budd, Dundas Thompson, Baudrimont,
Pouchet et quelques autres auteurs. Dans ces premières recher-
ches, il fut surtout établi que l’air atmosphérique charrie de
nombreuses spores de cryptogames, des algues, des pollens, des
grains d’amidon et d’abondantes dépouilles du règne animal et
du règne végétal. Les procédés employés à cette époque pour
récolter les organismes aériens, consistaient à exposer au contact
de l'atmosphère des lamelles de verre enduites de liquides peu
siccatifs (huile ou glycérine). Dundas Thompson et Baudrimont,
d'après le procédé déjà ancien à cette époque, imaginé par
Moscali et Robiquet, firent passer l'air bulle à bulle dans de
faibles volumes d’eau distillée. Cette méthode de barbotement
employée plus tard par Dancer de Manchester, Angus Smith et
d’autres expérimentateurs, est encore en honneur aujourd’hui.
Pouchet se servit d'instruments qu'il appela aéroscopes.

Pour récolter les germes de l’air et les apporter directement
sur le porte-objet du microscope, M. Pasteur employa à son
tour des bourres de coton soluble, et inaugura le procédé des bal-
lons scellés qui fut le point de départ de l'analyse microscopique
des poussières atmosphériques par la voie des cultures dans un
milieu nutritif. Ce procédé sert de base aux méthodes actuelle-
ment en usage. Je ne rappellerai pas les travaux si consciencieux
publiés depuis cette époque par Samuelson, les docteurs Maddox

DOSAGE DES BACTÉRIES ATMOSPHÉRIQUES. 365

et Cunningham, sur le nombre et la nature des spores cryptoga-
miques et des œufs d'infusoires, charriés par les courants atmos-
phériques ; ces sujets sont étrangers à la question quinous occupe.

Chargé en 1876 d'analyser l'air de Paris, j’employai au
début de mes recherches la méthode des ballons scellés de
M. Pasteur pour le dosage des bactéries. Cette méthode, comme
on sait, consiste à introduire dans des ballons vides d’air, conte-
nant des liquides nutritifs, un faible volume de l'atmosphère à
explorer, 100 à 150 centimètres cubes. Cette opération s’effectue
en déterminant la rupture de la pointe effilée du ballon scellé au
moyen d'une pince ou d’une paire de ciseaux fortement flambés
au préalable. Si 4 litres d’air amenés ainsi dans 30 à 40 ballons
accusent 10 bactéries, on est en droit d'affirmer, après l’obser-
vation au microscope des liqueurs altérées, que l'atmosphère
considérée renferme au moins 2, 5 bactéries par litre.

Si l'air à doser est très impur, on doit évidemment employer
destubes scellés d’un très faible volume, pour conserver la chance
de voir le quart des ballons seulement devenir le siège d'une
altération ; si au contraire l’airest très peu riche en bactéries, on
doit avoir recours à des ballons d’un très grand volume, ou sinon
les vases scellés mis en expérience ne présentent que quelques
végétations cryptogamiques.Pourremédier à cetinconvénient et à
l'encombrement inévitable créé par la méthode des ballons
scellés, j'imaginai le tube à boule qui permet d'amener au contact
des liqueurs nutritives des volumes d'air variant de quelques
centimètres cubes à mille litres. Jusqu'en 1884, j'ai analysé avec
le secours de ces instruments les atmosphères les plus diverses :
l'air des campagnes, des habitations, des hôpitaux, des égouts,
et j'ai pu découvrir avec l’aide de ces mêmes appareils les
influences qu’exercent les conditions météorologiques régnantes
sur le nombre des bactéries aériennes, ainsi que les variations
que présentent ces organismes, aux mois de l’année, aux jours
de la semaine et aux heures du jour. Toutes ces recherches
sont consignées avec diagrammes à l'appui dans les Annuaires de
l'Observatoire de Montsouris.

En 1884 et 1885, j'étudiai le moyen de perfectionner la mé-
thode des tubes à boule qui exige une attention constante très
fatigante, des manipulations nombreuses, des lectures de
compteurs captivantes, et je substituai au tube à boule un flacon

366 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

barboteur à trois branches, construit sur mes indications par
M. Alvergniat.

Les poussières de l’air amenées au contact de 25 à 30 centi-
mètres cubes d’eau stérilisée, sont distribuées dans cette nou-
velle méthode, à la fin de chaque expérience, dans 30 à 40 con-
serves de bouillon de bœuf neutralisé. Je m'étais servi, en 1881,
d'un procédé analogue pour l'analyse de l'air du cimetière du
Sud, maïs le barboteur était alors un simple tube à boule bien
plus incommode que le barboteur actuel, dont voici d’ailleurs
la description, telle que je l’ai donnée dans l'Annuaire de Mont-
souris pour l’année 1886, page 472.

Cet appareil consiste en un matras de verre, dont le col long, muni d’un

D)
capuchon tubulé et rodé, se prolonge jusqu’au fond du vase en s’effilant en
pointe, et s'y termine par une ouverture capillaire par laquelle l'air entre
au moment de l'aspiration. Ce matras est également muni de deux tubu-
lures latérales : la première G, garnie de deux bourres de coton est destinée
à être mise en communication avee l'appareil aspirateur, la seconde B,
recourbée, porte un petit tube de caoutchouc retenant une pointe de verre
scellée. C’est par cette sorte de bec de burette que se fait la distribution de
l'eau contaminée à la fin de l'expérience.

Prépuration de l'expérience. — L'appareil recoit 30 à 40 centimètres cubes
d'eau distillée, on vérifie si la cheminée du capuchon et le tube C portent
des bourres de coton, si la pointe B est bien scellée, puis l'instrument est
chauffé deux héures à 410° dans un bain de vapeur d’eau. Après refroidis-
sement, on retire l'appareil de Pautoclave et on le garde jusqu'au moment
d'en faire usage. Je prépare ainsi à la fois 20 à 30 de ces petits matras.

Expérience. — À la tubulure C on adapte le tube de caoutchouc destiné
à transmettre l'aspiration, on flambe le capuchon A, on l’enlèveet l'on
s'éloigne; alors l’air à doser en bactéries est dirigé bulle à bulle dans l'ap-
pareil; l'aspiration achevée, on replace le capuchon après l'avoir fortement

DOSAGE DES BACTÉRIES ATMOSPHÉRIQUES. 367

chauffé. Il ne reste plus qu'à connaître Le chiffre des bactéries retenues dans
le matras.

Fin de l'expérience. — Par le tube de caoutchouc encore fixé à la tubu-
lure C, on produit une pression qui force le liquide à s'élever jusqu'à l’extré-
mité du col, puis on laisse la colonne d'eau redescendre par son propre
poids, ou en aidant à sa chute par une légère succion. Par cette manœuvre
recommencée 10 à 12 fois, on lave complètement le col du matras par lequel
l'air a été d'abord introduit. Je n'ai pas besoin d'ajouter que ce lavage se
fait entièrement à l'abri des poussières atmosphériques, la bourre de la
cheminée du capuchon faisant l'office de filtre parfait. Après avoir cassé
la pointe B avec les précautions d'usage, on distribue par fraction le con-
tenu de l'appareil dans 30 à 40 conserves de bouillon stérilisé. Le volume de
l'air aspiré a été calculé de facon que les 3/4 ou les 4,5 des conserves ainsi
ensemencées restent dans la suite parfaitement limpides. Finalement, le
matras où s'est fait la dilution des poussières reçoit à son tour 25e de
bouillon, puis on projette dans ce bouillon, au moyen d’un fil de platine
rougi, la bourre intérieure de la tubulure GC, sur laquelle s’est filtré l’air
avant de quitter le matras pour se rendre dans un appareil jaugeur.. ete.

Il est superflu de faire observer que l’eau contaminée, au lieu de faire
l'objet d’une répartition dans un grand nombre de conserves distinctes,
peut être mélangée aux milieux nutritifs semi-solides, aux gelées de bouillon
aisément fusibles à la surface ou dans la profondeur desquelles plusieurs
colonies de microphytes peuvent apparaître et se développer. J'ai essayé
longtemps ce procédé de numération, et je dois à la vérité d’avoucr qu'il m'a
paru très peu précis, les gelées étant habituellement envahies par des
moisissures, souvent liquéfiées en partie ou en totalité, avant même qu'une
colonie bactérienne ait eu le temps d’apparaître sur le substratum.

Depuis trois ans que cette phrase est écrite, je n'ai pas fait
une seule expérience qui ne soit venue confirmer le jugement
que j'ai porté sur le procédé de cultures en plaques appli-
qué à l'analyse microscopique de l'air. À Montsouris, où le
chiffre des spores fécondes de moisissures dépasse celui des bac-
téries, l'eau des matras barboteurs, distribuée dans 25 plaques
de gelée, occasionne des cas si fréquents de liquéfaction, que
toute numération sérieuse est rendue impossible. Au centre de
Paris, où le chiffre des mucédinées est dix fois plus faible que
celui des schizophytes, on obtient des résultats plus encoura-
geant{s, à la condition d'obtenir au plus une ou deux colonies
sur chacune de ces 25 plaques de gelée. J'ai donné à cette
méthode du fractionnement dans la gélatine, le nom de Méthode
mixte. Elle fournit des résultats satisfaisants quand on l’applique
à l'analyse des eaux.

308 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Pour analyser les atmosphères éloignées des laboratoires,
M. de Freudenreich, le commandant Moreau et moi, avons
employé des tubes de verre contenant une ou plusieurs bourres
de coton de verre ou d'amiante stérilisées à une haute tempé-
rature. C’est ainsi que nous avons opéré en 1884 pour nos
essais multiples sur l’air des montagnes et l'air de la mer. Ces
bourres, après avoir filtré quelquefois plusieurs mètres cubes
d'air, sont plus tard émulsionnées dans de l’eau vierge de
germes, dontil reste à déterminer ensuite la teneur en bactéries.

Ce procédé des bourres d'amiante et de coton de verre, très
ancien dans la science, a récemment séduit plusieurs savants
au nombre desquels MM. Percy, Frankland et Pétri.

M. Frankland n’arien changé à notre procédé, M. Pétri (1887)
a remplacé les silicates qui nous ont servi par du sable.

MM. Frankland et Pétri jettent, après le passage de l’air, les
bourres de leur tube dans la gélatine fondue; nous préférons,
M. de Freudenreich et moi, les jeter dans l’eau stérilisée, et
doser immédiatement cette eau par la méthode qui nous paraît
présenter le plus de garanties.

Aujourd'hui j'ai abandonné l'usage des filtres insolubles,
pour adopter de préférence les fillres solubles dans l’eau con-
seillés il y a 25 ans par M. Pasteur (silicates solubles, laine de
sucre), et employés par M. Gautier qui a préconisé à cet effet le
sulfate de soude desséché et pulvérisé. On peut encore employer,
comme l’a fait M. Fol, le sel marin privé de son eau d'interpo-
sition, pulvérisé de facon à présenter la grosseur du camphre
râpé, et stérilisé finalement à 200°; toute autre substance soluble
dans l’eau, infusible à la température de 180 à 200°, non anti-
septique vis-à-vis des bactéries au degré de dilution où elle est
amenée, peut servir au même usage.

La filtration de l'air à travers les bourres solubles ou inso-
lubles est à mon avis le procédé d'analyse le plus général qu’on
puisse appliquer au dosage des bactéries atmosphériques. En
effet, avec l’aide des filtres solides, il est facile d'analyser
l'atmosphère dans tous les lieux et à toutes les températures,
tandis que l’eau des barboteurs se congèle pendant les grands
froids, comme j'ai l'occasion de l’observer tous les hivers à
Paris. À plus forte raison, cette remarque s’applique-t-elle au
barbotement dans la gélatine, méthode employée depuis plusieurs

DOSAGE DES BACTÉRIES ATMOSPHÉRIQUES. 369

années par quelques expérimentateurs. Les tubes filtrateurs
peuvent voyager, rester exposés à toutes les variations de
température sans subir la moindre avarie; il est loin d’en être
de même des matras barboteurs et surtout des tubes de gélatine,
transportés dans les pays où la température peut osciller
entre 20 et 30°.

Je bornerai là l'énuméralion des méthodes inventées pour
doser les bactéries atmosphériques; celles qu’on pourrait encore
citer sont simplement des variantes des procédés généraux
déjà décrits, basés sur la captation des poussières par les liquides
ou par les filtres solides. Le procédé imaginé en 1884 par le
D' Hesse ne manque pas d'originalité, et me parait pour ce
motif mériter une mention spéciale. Il repose sur la fixation des
poussières aériennes sur la paroi intérieure d’un tube dans
lequel on fait cheminer lentement un courant d'air. M. Pasteur
avait déjà établi qu'en faisant bouillir des liquides très altérables
dans des ballons à cols longs et sinueux, on parvient à les
préserver de toule altération ultérieure, bien qu'ils soient en
communication directe avec l'air ambiant. M. le D' Hesse s’est
emparé de ce fait, il a enduit les parois d’un tube de verre d’une
couche de gelée nutritive, et a pu se convaincre de même, qu’en
le faisant traverser par un ou plusieurs litres d’air, la majeure
partie des bactéries et des moisissures viennent se déposer à
l'extrémité ouverte du tube. De la pénétration plus profonde
des mucédinées dans le tube, cet auteur a cru pouvoir déduire
que les semences d’origine cryptogamique étaient moins denses
que les spores des bactéries. Cette affirmation ne me paraît pas
suffisamment justifiée, par la raison que les germes des bactéries
voyagent dans l'air habituellement fixés sur des détritus divers,
minéraux et organiques, alors que les spores des moisissures,
nées le plus souvent au sommet de tiges dressées sur le
mycélium, n’ont pas de contact direct avec le sol, et sont à leur
maturité emportées dans l’espace comme des bulles de savon
microscopiques ; 1l n’est donc pas surprenant que les spores
des bactéries lestées par de l’humus ou un grain de silex soient
plus lourdes.

La détermination de la densité des spores des schizomycètes
et des hyphomycètes offre d’ailleurs un très faible intérêt. Il
n'en est pas de mème de l’étude des conditions dans lesquelles

3170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.
il faut placer les spores atmosphériques, pour les faire germer

de manière à obtenir des statistiques fidèles et voisines de la
réalité. Cette question importante va maintenant nous occuper.

Les conditions indispensables à l’éclosion des poussières
vivantes sont au nombre de trois : Ces poussières doivent être
reçues dans un milieu fécond, ce milieu doit être maintenu vers
30°, et ces poussières rester en observation pendant 30 à 40 jours.

À — Les milieux liquides conviennent mieux queles milieux
solides au développement de la majeure partie des semences
aériennes. D’après une longue suite d'expériences comparatives
prolongées pendant deux ans, j’ai pu constater, toutes choses
égales d’ailleurs (température et temps), que la gélatine entrave
le rajeunissement de beaucoup de germes; un poids d’eau
stérilisée, contaminé par le courant d'air, distribué en parties
égales dans du bouillon de peptone et de la gelée peptonisée, a
fourni, comme moyenne de 300 essais, les chiffres suivants :

Nombre de colonies après 30 jours d'attente, dans :

Bactéries, Moisissures.
le bouillon maintenu à 18°. . . 100 100
la gélatine maintenue à 18° . . D7 69

La moitié à peu près des bactéries de l'air et le tiers des
mucédinées atmosphériques trouvent un tombeau dans les
plaques de gelée.

B — La température exerce une influence favorable sur
l’éclosion des germes desséchés et affaiblis par les intempéries;
il est regrettable que les cultures sur les gelées privent l’expéri-
mentateur de cet agent précieux.

Nombre de colonies après 30 jours d'attente, dans :

Bactéries. Moisissures
le bouillon maintenu à 30e. .,. 100 100
la gélatine maintenue à 18°-20o, AT 60

Ainsi, en calculant le nombre des germes aériens, d’un côté
par la méthode des plaques, d’un autre par le procédé des cul-
tures dans le bouillon, on arrive à ce résultat instructif, que l’em-
ploi de ce dernier procédé fournit un nombre d'organismes deux
fois plus élevé que les cultures sur les plaques de gelée. M. Pétri
prétend à cet égard que les avantages obtenus au moyen des

DOSAGE DES BACTÉRIES ATMOSPHÉRIQUES. 374

cultures dans les liquides sont négligeables; je ne suis en aucune
façon de son avis.

C— La plupart des expérimentateurs qui appliquent au dosage
des bactéries atmosphériques, le procédé de culture sur les
plaques de gelée, semblent croire qu’une durée d’incubation très
restreinte, de #, 6, 10 jours, est suffisante pour permettre aux
organismes de l’air de manifester leur présence par des taches
de forme, de grandeur et de couleurs diverses appelées colonies.
Il n’en est malheureusement pas ainsi : après un mois d’attente,
on voit encore fréquemment des germes de bactéries entrer en
évolution. Je sais bien que sur une plaque chargée d'une quin-
zaine de colonies, une attente si prolongée ne saurait avoir lieu
avant l’envahissement et la destruction complète du substratum,
mais enfin le désir d’être rapidement informé ne justifie pas suf-
fisamment la suppression de ces plaques avant trente jours.
Pour se soustraire à cette nécessité, 1l faut, quand on opère sur de
grandes surfaces de gelée, cultiver collectivement au plus 5 à
6 organismes, et si on opère comme je le fais sur des surfaces
de 10 à 12 centimètres carrés, un ou deux microbes, encore
n’arrive-t-on pas toujours à les préserver de ces liquéfactions
fâcheuses, qui détruisent rapidement Le substratum.

On connaît d’ailleurs les travaux que j'ai déjà publiés sur la
durée d’incubation des bactéries atmosphériques dans le bouillon
maintenu à 30°.

Du {au 5° jour, il se développe 66 p. 100 des germes aériens,

Du 6*au 10° jour, — 21 p. 100 —
Du {4° au 15° jour, == 6 p. 100 —
Du 16° au 40° jour, - 1 p. 100 —

Sur la gélatine maintenue à 18°-20°, ces durées d’incubation
sont beaucoup plus longues. En employant la méthode rirte,
c'est-à-dire de fractionnement dans la gelée, on obtient les chif-
fres suivants :

Du {“au 15° jour, il se développe sur la gélatine 72 p. 100 des germes,
Du 16° au 30° jour, = — 28 p. 100 ==

Je n’ai pas besoin de faire remarquer que du 16° au 40° jour
nombre des microbes rajeunis dans le bouillon est seulement

le
7 p. 100, autrement dit 4 fois plus faible.

372 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Finalement, en supprimant dès le 15° jour une plaque de
gélatine ensemencée avec les poussières aériennes, on ne tient
aucun compte du quart des germes qui restent à éclore.

La méthode des plaques de culture appliquée à l'analyse
microscopique de l'air, ne saurait donc devenir rigoureuse qu'à
la condition de la débarrasser des causes d'erreurs nombreuses
qui lui sont inhérentes, et que je viens de mettre en évi-
dence.

On a reproché au procédé de fractionnement des poussières
de l’air dans le bouillon, d'introduire à la fois dans le même vase
à culture un graud nombre de germes; ce reproche n’est pas
fondé quand le chiffre des conserves s’altère dans la proportion
de 20 p. 100. Il esten effet rare qu’on introduise dans ce dernier
cas une quantité de poussières capable de fournir plus d’une
colonie. Quand la proportion des conserves altérées double et
s'élève à 40, le chiffre des conserves contaminées par deux colo-
nies s'élève à peine à la dixième partie du total des conserves
altérées par une colonie. |

Pour démontrer, contrairement à mes affirmations, que les
vases de bouillon ensemencés d'après mes indications, recevaient
plusieurs particules bactérifères dans l'opération du fractionne-
ment, M. Pétri a compté par la méthode des plaques le chiffre
des espèces écloses dans le bouillon. Cette manière d'opérer
est illégitime, et je regrette de relever ici une cause d'erreur et
d'illusion qui semble avoir échappé au directeur du musée
d'hygiène de Berlin. ‘

Les colonies produites par les poussières atmosphériques
procèdent assez rarement d’une particule bactérifère chargée
d'un germe unique; le plus souvent ces germes sont fixés en
grand nombre sur cette particule, et sont ou de la même espèce,
ou d'espèces hétérogènes. Le bouillon possédant la faculté de
féconder simultanément l’éciosion des semences les plus diverses,
on obtient une culture parfois boueuse et très impure, là où la
même particule chargée d'organismes différents ne donne
qu'une seule colonie sur la gélatine.

Ayant eu la curiosité d’ensemencer en leur entier dans Île
bouillon 100 colonies bien homogènes en apparence, nées sur
de la gélatine, et dues à des germes aériens, le simple examen
microscopique à accusé 134 espèces bien distinctes; c’est là un

DOSAGE DES BACTÉRIES ATMOSPHÉRIQUES. 373

minimum, Car on sait que le microscope ne peut nous éclairer
que sur les variétés de forme.

Ainsi donc, sile fractionnement des poussières dansle bouillon
peut accidentellement introduire deux particules bactérifères de
même nature, qu'on peut plus tard compter par une particule
unique, cette cause d'erreur très faible est grandement rachetée :

1° Par la possibilité de maintenir les cultures liquides aux
températures les plus favorables au rajeunissement des germes.

2° Par la faculté que possède le bouillon de rappeler à la vieles
germes désséchés, malades et maltraités par la sécheresse.

3° Par la faculté que présentent les bouillons de favoriser si-
multanémentle développement de plusieurs êtres microscopiques.

Je déclare enfin en terminant que la méthode des plaques de
gelée est inapplicable à l'analyse de l'air, toutes les fois que les
atmosphères à doser en bactéries renferment une proportion de
mucédinées égale ou supérieure au nombre des schizophytes; ce
qui est toujours vrai pour les atmosphères des campagnes ou
des districts suburbains.

24

SUR UNE ÉLÉVATION DE TEMPÉRATURE DANS LA PÉRIODE D'INCUBATION
DE LA RAGE,

Par M. V. BABES.

Dans une note publiée dans le Journal des connaissances mé-
dicales du 26 mai 1887, j'ai signalé chez le lapin inoculé avec le
virus de la rage des rues une élévation assez fréquente de tempé-
rature, qu'il ne faut confondre ni avec la fièvre qui suit sou-
vent la trépanation, ni avec celle qui précède immédiatement les
symptômes nerveux terminaux. Cette fièvre se montre ordinaire-
ment de quatre à dix jours après l’inoculation intracrânienne
du virus de rage des rues ou d’un virus fixe modifié. Elle fait
monter la température de 39°,9 à 40°,5, mais ne dure que un à
deux jours, après quoi la température redevient normale.
Ordinairement cette fièvre recommence plusieurs fois.

Dans une étude sur la rage (Archives de Virchow, 1887,
t. CX), j'ai exposé la marche de cette fièvre et les circons-
tances dans lesquelles elle se manifeste. Dans le n° 4 du tome II
1888 des Annales de l’Institut Pasteur, M. Hôügyes constate aussi
cette élévation de température, mais croit ne pas devoir lui
attribuer une importance quelconque.

D'abord :l me semble difficile de nier «à priori l'importance
du fait, alors même qu'il ne serait pas constant et n'aurait pas
pour le moment d'application pratique ; rien ne prouve qu'il ne
soit pas à noter dans la question de la propagation et de la
généralisation du virus rabique.

M. Hôügyes prétend, il est vrai, que les lapins en bonne santé
montrent aussi parfois une élévation semblable de la tempéra-
ture, mais je ne saurais accepter cette objection, car sur 745
lapins, sains en apparence, examinés à ce point de vue, je
n'ai vu que sept fois la température s'élever dans la période
indiquée, et encore de quantités variables, qui ne l'ont fait
s'arrêter quelque temps au-dessus de 40°-40°,5 que dans deux

PÉRIODE D’INOCULATION DE LA RAGE. 37)

cas, dans lesquels l’animal eut, au bout de quelques jours, une
maladie intercurrente? On doit en conclure que cette élévation
de température, très rare chezle lapin, est probablement toujours
pathologique. Dans une série de 20 lapins arrivés d’un long
voyage, deux présentèrent cette fièvre et l’un d’eux succomba
quelques jours après.

Je ne saurais donc confondre ces fièvres rares et éphémères
avec l'élévation de température fréquente et régulière que j'ai
décrite.

Un autre argument de M. Hôügyes contre « l'importance » de
cette fièvre est que cette fièvre n'est pas constante. On pourrait
dire la même chose non seulement pour la fièvre terminale dela
rage, mais pour la plupart des fièvres prémonitoires, et il suffit
que celle dont nous parlons se rencontre dans la plupart des cas,
à une certaine époque après l’inoculation, pour qu'on soit obligé
de compter avec elle.

Parmi les cas dans lesquels j'avais signalé l'apparition de
cette fièvre, ceux dont j'ai le plus d'expérience sont les cas
d'inoculation intracrânienne du virus de la rage des rues.

Dans mes 25 derniers cas d’inoculation avec la moelle de
différents chiens morts de la rage des rues, j'ai constaté 23 fois
la présence de cette fièvre. Elle à commencé dans neuf cas, quatre
jours et demi, et dans cinq cas cinq jours et demi après l'inocu-
lation. Dans les autres cas elle a commencé de six à dix jours
après l'infection.

Dans 20 cas elle a été intermittente et a produit deux ou
trois accès, d’une durée de 12 heures à deux jours, avec des
intervalles également courts de un à deux jours.

Dans la plupart des cas, tous ces symptômes prémonitoires
avaient pris fin dix à douze jours après l'infection, et la tempé-
rature redevenait normale jusqu’au moment où commençaient
la fièvre terminale ou des symptômes nerveux.

La fièvre prémonitoire commence en général plus tôt chez les
lapins qui meurent de treize à dix-sept jours après l'inoculation
que chez les lapins qui meurent plus tard.

Après l’inoculation intracränienne du virus fixe, la fièvre pré-
monitoire manque d'ordinaire, et on observe presque toujours
une fièvre terminale, précédant immédiatement les symptômes
nerveux. Au contraire, chez les lapins inoculés par la même

316 | ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

voie avec le virus de la rage des rues, la fièvre prémonitoire
est presque la règle, tandis que la fièvre terminale est moins
fréquente. Elle a fait défaut neuf fois sur vingt-cinq.

Sur six lapins sains examinés deux fois par jour, un seul
a eu, en 23 jours, quelques heures de fièvre, tandis que les
autres n'ont présenté aucune élévalion remarquable de tempé-
rature. Pour voir enfin si la fièvre « prémonitoire » n’est pas due
à l’acte de la trépanation ou de l’inoculation intracränienne, j'ai
trépané deux lapins, en injectant entre les méninges de l’eau
simple. Ces lapins examinés pendant un mois n’eurent pas de
fièvre. En inoculant dans les méninges ou dans la cavité périto-
néale la substance cérébrale rabique, filtrée par le filtre Pasteur-
Chamberland, les lapins inoculés ne présentèrent pas non plus de
fièvre. Ces expériences furent répétées plusieurs fois et toujours
avec le même résultat. Les animaux de contrôle étaient placés
dans les mêmes conditions que les animaux inoculés avec le
virus rabique.

La différence entre la température des animaux sains et celle
des animaux inoculés avec le virus de la rage des rues, devient
encore plus manifeste quand on compare le nombre des examens
de température faits, avec le nombre des cas où on a constaté
une élévation de température. Ainsi chez 25 lapins inoculés avec
le virus de rage des rues, etobservés deux fois par jour, 782 obser-
vations de température nous ont donné 109 observations de fièvre
« prémonitoire », sans compter ni la fièvre qui suit souvent la
trépanation, ni celle qui précède et accompagne souvent les
symptômes nerveux, tandis que chez 10 lapins diversement
traités, mais non inoculés de la rage, et examinés pendant
20 jours de la même manière, c'est-à-dire en somme 400 fois, il
n'y a eu que deux fois une élévation de température, comparable
à la fièvre prémonitoire.

Ce phénomène est donc assez régulier et évidemment lié à
l’action du virus. Son importance s'accroît quand on songe qu'il
se manifeste pendant une période où il n’y a pas d’autres sym-
ptômes de la rage. Cette fièvre prémonitoire est sans doute l’ex-
pression de l’action du virus rabique dans la période d’incuba-
üon, longtemps avant la manifestation de la maladie.

REVUES ET ANALYSES

DES HÉMATOZOAIRES DU PALUDISME.
REVUE CRITIQUE

J'ai résumé l’an dernier dans ces Annales l'état de nos connaissances
relativement aux hématozoaires du paludisme (4 an. de l'Institut Pasteur 1887,
p. 266). Je ne reviendrai pas sur la description générale de ces parasites,
non plus que sur les travaux analysés dans le précédent article: je m'oc-
cuperai spécialement des publications les plus récentes ayant trait à
cette question.

MM. Councilman et W. Osler, dont j'ai analysé déjà l'an dernier les
importants travaux, ont fait de nouvelles et très intéressantes communi-
cations sur les hématozoaires du paludisme à la dernière réunion de la
Société pathologique de Philadelphie. (Councilman. Recherches complé-
mentaires sur le germe de lu maluria de Laveran. Communic. à la réunion
annuelle de la sociélé pathol. de Philadelphie, 18S7, et Fortschrilte der Medicin
1588; Osler. Communic. sur le même sujet à la mème réunion. Compte rendu
in Bulletin médical 1888, p. 220.)

Councilman a réussi à trouver les hématozoaires du paludisme chez
tous les paludiques qu'il a eu l’occasion d'examiner; il décrit avec soin
les différents aspects sous lesquels ces hématozoaires se présentent à l'ob-
servation, et il cherche à déterminer dans quelles conditions on rencontre
plus spécialement telle ou telle forme.

D’après Councilman, les formes sous lesquelles les hématozoaires du pa-
ludisme se rencontrent dans le sang peuvent être rapportées aux types
suivants :

4 Petits corpuscules amiboïdes à l'intérieur des globules rouges, non
pigmentés.

% Corpuscules pigmentés plus grands que les précédents, situés aussi
dans les globules rouges.

3° Corpuscules pigmentés ayant les dimensions des globules rouges.

4 Formes en voie de segmentation.

5° Petits corpuscules hyalins provenant de cette segmentation.

G° Corps en croissant pigmentés au centre.

7° Corps de forme ronde ou ovalaire dérivant des précédents.

8 Corps pigmentés garnis de filaments mobiles ou flagella.

9 Les flagella à l’état libre animés de mouvements très vifs.

100 Corps pigmentés animés d'un mouvement ondulatoire de leur
périphérie.

Couneilman a reproduit ces différents aspects dans les planches annexées
à son mémoire (Fortschritle der Medicin 188$, n° 12, planches V et VI).

378 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Les corps en croissant et les corps ovalaires qui en dérivent directe-
ment ne se trouvent, d'après Councilman, que dans les cas de cachexie pa-
lustre.

Les formes sewmentées, sur la description desquelles Golgi a insisté, ne
se rencontrent dans le sang, d’après le même observateur, que pendant la
période de frisson des accès de fièvre intermittente.

Councilman admet avec moi que les flagella représentent les formes les
plus intéressantes des hématozoaires du paludisme, celles dont la nature
parasitaire ne saurait être sérieusement contestée; les flagella ont élé
trouvés par lui seize fois sur vingt et un cas dans lesquels l'examen a porté
sur le sang de la rate.

Councilman a constaté enfin que l’action des sels de quinine, très nette
sur les éléments sphériques et sur les flagella, était beaucoup moins efficace
sur les corps en croissant ; ce fait avait déjà attiré mon attention (Traité
des fièvres palustres, p. 201).

W. Osler, au début de sa communication, appelle l'attention sur la
concordance remarquable qui existe entre les descriptions des auteurs qui
ont étudié les hématozoaires du paludisme, et il donne ensuite les résultats
de ses dernières recherches.

W. Osler a rencontré moins souvent que Councilman les flagella dans
le sang des paludiques, mais il n’a pas examiné le sang de la rate, comme
l’a fait ce dernier observateur.

Il a vu les éléments sphériques, qui se rencontrent le plus souvent
accolés à des hématies, se détacher des hématies et devenir libres dans le
sang; l'existence d'éléments sphériques à l’état de liberté dans le plasma
sanguin est très commune, et c'est là un des faits sur lesquels je me suis
appuyé pour soutenir que les corps sphériques étaient accolés aux hématies
et non inclus dans ces éléments.

Avec Councilman, W. Osler pense que les corps en croissant sont par-
ticuliers à la cachexie palustre.

W. Osler a fait des recherches sur le sang des oiseaux et des poissons
dans le but d’y découvrir des hématozoaires; il a examiné le sang de quarante
cinq carpes sans y découvrir aucun de ces parasites.

Dans le sang d’une oie qui lui avait été envoyée de Ontario et signalée
comme atteinte de paludisme, il a trouvé des corpuscules pigmentés mais
en très petit nombre.

W. Osler insiste enfin sur le grand parti que la clinique peut tirer de
l'examen du sang dans les cas où la nature paludéenne d’une maladie
est douteuse.

Dans un travail lu à la Société de Pathologie de New-York au mois de
janvier 1888 (The microorganisms of malaria. The Medic. Record, 1888,
p. 269), le D' James annonce qu'il a constaté l'existence des hématozoaires
trente-quatre fois sur trente-cinq paludiques qu'il a eu l’occasion d'exami-
ner; il a toujours rencontré les formes segmentées pendant les paroxysmes
fébriles et les corps en croissant dans les formes chroniques.

Le D' James a examiné le sang d'un grand nombre de malades non
entachés de paludisme et il n’a jamais trouvé aucun élément semblable à

REVUES ET ANALYSES. 379

ceux qui caractérisent les hématozoairés du paludisme, aussi insiste-t-il
sur l'importance considérable de la recherche des hématozoaires au point
de vue du diagnostic.

Il estime que l'hématozoaire du paludisme est un protozoaire et il
rappelle que des parasites semblables ont été observés dans le sang de
différents animaux ; d'après lui on trouve dans les plantes inférieures des
parasites qui ont de l'analogie avec l'hématozoaire du paludisme : corps
amiboïdes, flagellés à une certaine phase de leur développenrent, pigmen-
tés par la chlorophylle. Peut-être, ajoute M. le D' James, y a-t-il une rela-
tion entre ces parasites des végétaux et les hématozoaires de la malaria, qui,
en dehors de l'organisme humain, seraient les parasites d'une plante.

Le Dr James admet comme démontrées les propositions suivantes :

1° On trouve d’une facon constante dans le sang des paludiques les élé-
ments parasitaires qui ont été décrits sous le nom d'hématozoaires du
paludisme.

2 Les corps en croissant ne se rencontrent que dans les formes chro-
niques du paludisme. Fe

3° Les formes segmentées s'observent seulement avant et pendant les
paroxysmes.

4 Sous l’action de fortes doses de quinine les éléments parasitaires dis-
paraissent rapidement du sang, à l'exception des corps en croissant.

> Il est possible d’inoculer le paludisme de l’homme à l’homme par des
injections intra-veineuses de sang paludique.

On voit que Councilman, W. Osler et James sont d'accord pour attribuer
spécialement les éléments en croissant aux formes chroniques du paludisme ;
cela est conforme à mon observation, en tant que règle générale, mais
cette règle comporte quelques exceptions; c’est pour cela que je n’ai pas
voulu la formuler d'une facon aussi absolue que le font ces auteurs. Sur
107 cas dans lesquels j'ai noté l'existence des corps en croissant, il s’agis-
sait 95 fois de cachexie palustre, ou de fièvre intermittente de récidive,
40 fois d’une fièvre intermittente de première invasion, 2 fois d'accès per-
nicieux (Traité des fièvres palustres, p.196. Voir notamment l'observation
XXII, p. 255).

J'ai signalé aussi ce fait que dans les fièvres palustres de première inva-
sion on ne trouve souvent que des éléments sphériques de petit volume
(Revue scientifique du 29 avril 1882 et Traité des fièvres palustres, p. 195 et
observations XXXI, XXXII, XXXV, XXXVI, XLI et XLIT).

Le D' Vandyke Carter a constaté aux Indes l'existence des hématozoaires
dans le sang des paludiques.(Note on some aspects and relations of the Blood
organisms 1n ague. Scientific. mem. bi med. officiers of the Army of India
1888. Anal. in The Lancet 16 juin 1888 f. 1201.)

M. le D' Maurel a résumé des recherches, entreprises depuis plusicurs
années, dans uu volume qui a pour titre : Recherches microscopiques sur
l'étiologie du paludisme, Paris 1887*,

1. Voyez aussi : Maurel. Contrib. à l’étiologie du paludisme. Arch. de médecine
navale 1887 et Communic. au congrés de Toulouse pour l'avancement des sciences 1887.

380 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

M. le Dr Maurel donne d’abord un résumé très complet des recherches
antérieures aux siennes, puis il expose les résultats des nombreuses analyses
microscopiques qu'il a faites de l'air, de l’eau et du sol dans plusieurs loca-
lités marécageuses; deux chapitres sont consacrés à l'examen du sang nor-
mal dans les pays chauds et du sang de paludéens.

En lisant l’ouvrage, fort intéressant d’ailleurs, de M. Maurel on ne peut
pas se défendre de cette idée que l'auteur a adopté un plan beaucoup trop
vaste pour ses recherches. Etudier tous les êtres qui fourmillent dans l'air,
dans l’eau et dans le sol des localités marécageuses et rechercher dans e€
microcosme le parasite du paludisme, ce n’est pas là une entreprise facile »
il est bien plus simple d'étudier ce parasite dans le sang des paludiques et
de le rechercher ensuite dans le monde extérieur. A la vérité, M. le
Dr Maurel n'a pas négligé l'étude du seng des paludiques, mais son atten-
tion s’est portée principalement sur l'analyse de l’air, de l’eau et du sol.

M. le D' Maurel, auquel j'ai eu le plaisir de montrer les principales
formes des hématozoaires du paludisme dans le sang d'un malade en trai-
tement au Val-de-Grâce (Maurel, op. cit., p. 195 et 200), déclare à la fin de
son ouvrage qu'il est aujourd’hui convaincu de l'existence de ces parasites,
il exprime toutefois quelques doutes sur ia relation de cause à effet qui
existe entre les hématozoaireset le paludisme, etil cite l’exemple des anguil-
lules dont la présence a été souvent constatée chez les malades atteints de
diarrhée de Cochinchine sans que leur rôle pathogénique dans cette affec-
tion soit bien établi.

Si l'importance des anguillules stercorales et intestinales a été contestée
dans la pathogénie de la diarrhée de Cochinchine, c’est que ces parasites
ont été trouvés chez des sujets qui n'étaient pas atteints de cette maladie et
que d'autre part leur présence n’est pas constante dans la diarrhée de
Cochinchine. Les hématozoaires que j'ai décrits chez les paludiques ne
sont pas passibles des mêmes objections; jamais ces parasites n'ont été
rencontrés dans le sang d'individus sains ou atteints de maladies autres
que le paludisme, et leur présence est constante dans le sang des paludi-
ques; la mélanémie, qui de l’avis de tous les auteurs est la lésion carac-
téristique du paludisme, se rattache intimement à la présence de ces para-
sites dans le sang. Enfin en transfusant à un individu sain une petite quantité
de sang recueilli sur un paludique et renfermant des éléments parasitaires, on
provoque chez l'individu sain l'apparition des accidents caractéristiques
du paludisme.

Dans les dernières pages de son livre, M. le D' Maurel décrit et figure
(p. 202-204) des organismes munis de flagella qu'il a trouvés dans une
infusion végétale et qui lui paraissent avoir une grande analogie avec les
hématozoaires du paludisme.

Si l’on considère que cette observation a été faite sur une infusion
végétale ordinaire, ne provenant pas d’une localité palustre, et que d'autre
part les organismes décrits par M. Maurel diffèrent sensiblement de ceux
qui existent dans le sang des paludiques (il faut noter, par exemple, que
les flagella des organismes décrits par M. Maurel ne semblent pas pouvoir
devenir indépendants), on est obligé de reconnaître que l'assimilation

REVUES ET ANALYSES. 381

de ces éléments aux hématozoaires du paludisme est un peu hasardée.

Dès le début de mes recherches sur les hématozoaires du paludisme, je
me suis efforcé de retrouver dans l’eau et dans le sol des localités palustres
les formes sous lesquelles ces parasites existent dans le milieu extérieur.
J'ai fait ces recherches en Algérie, dans des localités et à des époques où la
malaria règne avec intensité, et j'ai constaté plusieurs fois dans l’eau des
marais la présence des organismes suivants :

1° Flagella libres présentant à peu près le même aspect et les mêmes
dimensions que ceux du sang des paladiques et animés de mouvements
semblables.

2 Organismes doués de mouvements amiboïdes munis d’un ou
de plusieurs flagella, semblables aux corps sphériques munis de flagella du
sang des paludiques, à cela près que la disposition des flagella était plus
régulière dans les organismes trouvés dans l’eau et qu'on ne voyait pas les
flagella se détacher. Ces organismes n'étaient pas pigmentés, mais les hé-
matozoaires du paludisme empruntant probablement leur pigment aux
hématies, il ne faut pas s'attendre à les trouver pigmentés quand ils vivent
en dehors de l'organisme.

Malgré l’analogie très grande qui existait entre les flagella trouvés dans
l’eau des marais, notamment dans les flaques d’eau du Rummel à Cons-
tantine (Traité des fièvres palustres, p. 457) et les flagella du sang paludi-
que, il m'est resté quelques doutes sur l'identité de ces organismes.

Danilewsky a continué ses très intéressants travaux sur les hématozoaires
de différentes espèces animales (Archives slaves de biologie 1886-1887), re-
cherches qui éclairent d'un jour tout nouveau l’histoire des hématozoaires
du paludisme.

Dans un ouvrage tout récent publié en langue russe sous ce titre :
Recherches sur la parasitologie comparée du sang. Zooparusites du sang des
oiseaux. Karkoff, 1888 ‘, Danilewsky a repris et complété sur plusieurs
points l'histoire des hématozoaires des oiseaux, et il a insisté longuement sur
les ressemblances nombreuses qui existent entre certaines formes des héma-
tozoaires des oiseaux et les hématozoaires du paludisme ; ces ressemblances
s'imposent d'ailleurs, comme le lecteur pourra s'en convaincre, en compa-
rant les dessins de Danilewsky, dont quelques-uns sont reproduits à la planche
X, et les dessins que j'ai donnés des hématozoaires du paludisme (voir notam-
ment dans ces Annules, p. 268, 269, 270 du tome [er).

Danilewsky à trouvé dans le sang de différentes espèces d'oiseaux des
parasites qu'il décrit sous les noms suivants : pseudovermicules, pseudovu-
cuoles, polimitus sunguinis uvium, pseudospirilles et trypunosoma. Les quatre
premières de ces formes correspondent aux différents états d’un parasite
polymorphe très voisin des hématozoaires du paludisme, Les pseudovermi-
cules (pl. X, fig. 1-5) sont représentés dans le sang des paludiques par les
corps en croissant ; les pseudovacuoles ou hémocytozoon (fig, 6-10), par les

1. M. le Dr de Maximowitch, médecin principal de l’armée russe, a bien voulu
me traduire les principaux chapitres de cet ouvrage, je lui en exprime ici toute ma
reconnaissance,

382 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

éléments sphériques libres ou accolés aux hématies; les polimitus (fig. 1#-
27), par ces mêmes éléments arrivés à leur entier développement et munis
de flagella; les pseudospirilles (fig. 28), par les flagella devenus libres.

Les pseudovacuoles où hémocytozoon du sang des oiseaux se présentent
sous les mêmes aspects que les éléments sphériques du sang des paludiques
accolés à des hématies, à ceci près que la constitution des corpuseules du
sang est très différente dans les deux cas. Danilewsky et Metschnikoff
repoussent la dénomination de plasmodes qui a été proposée pour désigner
ces corpuseules parasitaires des hématies.

Le polimitus représente la forme la plus intéressante des hématozoaires
des oiseaux : il a été découvert en 188% par Danilewsky dans le sang des
oiseaux; son aspect est celui d'un véritable infusoire (Gg. 16, 17,48); le poli-
mitus sanguinis avium a été trouvé notamment dans le sang du hibou et
de la pie.

Le polimitus se développe dans les hématies; sa forme est sphérique; à
l'intérieur se meuvent des flagella ou filaments mobiles qui impriment des
mouvements au polimitus et qui le déforment; au bout d’un certain temps
la capsule s'ouvre et les flagella s’échappent en présentant des mouvements
énergiques. Le mot polimitus a été imaginé pour exprimer la vivacité des
mouvements des flagella ‘.

Le polimitus des oiseaux excapsulé (sorti de l'hématie dans laquelle il
s’est développé) présente en moyenne 6 &. de diamètre, il atteint quelque-
fois 42 et jusqu'à 45 uw. de diamètre.

D'après Danilewsky le polimitus des oiseaux se développe toujours dans
les hématies, et le polimitus libre dans le plasma est une exception rare. Le
refroidissement que subit le sang lorsqu'il est extrait des vaisseaux pour
être soumis à l'examen histologique favoriserait l’'excapsulation. Si l’on
chauffe le sang à 40° on n'observe pas de polimitus libres, tandis que dans
des préparations semblables, mais refroidies à 25° on en rencontre beaucoup.

Danilewsky pense qu'il en est de même pour les hématozoaires du palu-
disme et que c’est sous l'influence du refroidissement du sang que les
flagella deviennent libres; à l'appui de cette opinion, il rappelle que dans
une préparation histologique de sang paludique, il est bien plus facile d’ob-
server les flagella au bout de quinze à vingt minutes que dans les premiers
instants de l’examen.

En signalant ce fait, je lui ai donné une autre interprétation que celle
qui est proposée par Danilewsky; dans une préparation de sang paludique
qui vient d'être faite, les hématies sont accolées, empilées, elles se présentent
souvent par la tranche et les hématozoaires se cachent plus facilement au
milieu des piles de globules; au bout de quelques minutes les hématies se
séparent, se mettent à plat, pour peu que la préparation soit suffisamment
mince, et il est alors beaucoup plus facile d'observer les éléments parasi-
taires; je pense aussi que si les mouvements des flagella ne s’observent pas
en général dans les premiers instants de l'examen, c'est qu'ils s'arrêtent
sous l'influence du refroidissement que subit le sang à sa sortie des vais-

1. De rov, beaucoup, et pitéw, faire vibrer.

REVUES ET ANALYSES. 383

seaux; il m'est arrivé quelquefois d'observer les mouvements des flagella
dans les premiers instants de l'examen, et cela surtout lorsque la tempé-
rature extérieure était très élevée (aux environs de 30° à 35°) et que le sang
se refroidissait peu. Cette remarque n'est pas d'accord avec l'interprétation
proposée par Danilewsky. Il n’est pas exact non plus de dire, au moins en
ce qui concerne les hématozoaires du paludisme, que l’excapsulation est:
exceptionnelle; il est au contraire très commun de trouver des éléments
parasitaires à l’état de liberté dans le sang, principalement les corps sphé-
riques qui représentent dans le sang des paludiques les pseudovacuoles ou
hémocytozoon du sang des oiseaux; c’est là une des raisons qui m'ont fait
admettre que ces organismes étaient simplement accolés aux hématies et
non inclus dans ces éléments.

Le développement des polimitus dans le sang des oiseaux entraîne sou-
vent des troubles morbides, surtout lorsque ces parasites existent en grand
nombre; on observe dé la mélanémie comme chez les paludiques.

Les pseudospirilles ne sont autres que les flagella des polimitus devenus
libres, ils correspondent aux flagella ou filaments mobiles des hématozoaires
du paludisme; Danilewsky compare les mouvements de ces pseudospirilles
à ceux des spwochæte, mais il déclare en même temps que la genèse de ces
éléments les éloigne beaucoup des spirilles.

Danilewsky n’a pas réussi à cultiver ces éléments, et il pense qu'ils ne
peuvent pas se multiplier directement, à l'état libre.

La structure protoplasmique des flagella explique la formation des ren-
flements qui a été notée sur les pseudospirilles des oiseaux comme sur les
flagella du sang des paludiques.

Danilewsky pense que le polimitus des oiseaux est identique aux héma-
tozoaires du paludisme. Nous avons vu que la présence de polimitus en
grand nombre dans le sang des oiseaux pouvait déterminer des troubles
morbides et donner lieu à la mélanémie, mais ces accidents sont bien loin
d’être constants chez les oiseaux dont le sang renferme ces parasites ; peut-
être se produit-il une accoutumance pour ces parasites, peut-être aussi la
température du sang des oiseaux, notablement plus élevée que celle du sang
de l’homme, modifie-t-elle les conditions d'existence de ces parasites; Dani -
lewsky rappelle à ce propos la célèbre expérience de Pasteur qui démontre
qu’en refroidissant une poule, on la rend susceptible de contracter la maladie
charbonneuse.

Le polimitus de Danilewsky appartient évidemment à une espèce très
voisine de celle des hématozoaires du paludisme, mais l'identité de ces
parasites ne me paraît pas démontrée; les pseudovermicules ne rappellent
que vaguement les corps en croissant, les hémocytozoon se rapprochent de
très près des éléments sphériques du sang des paludiqnes, mais ces derniers
éléments sont assez souvent à l’état de liberté dans le plasma, tandis que
les hémocytozoon sont toujours inclus dans les hématies, enfin les mouve-
ments des flagella des hématozoaires du paludisme, sont beaucoup plus
compliqués que ceux des spirilles. Il y aurait lieu d'injecter du sang de
paludique à des oiseaux appartenant aux espèces chez lesquelles on a observé
le polimitus et de voir si les hématozoaires du paludisme sont susceptibles

384 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de se développer dans le sang de ces animaux. Si, comme le pense Dani-
lewsky, le polimitus des oiseaux est identique au parasite du paludisme,
il paraît évident que du sang de paludique renfermant des hématozoaires
doit, quand on le transfuse à des oiseaux, donner lieu chez eux au développe-
ment du polimitus.

L'hémocytozoon du sang de la tortue découvert par Danilewsky présente
aussi une grande analogie avec certaines formes des hématozoaires du palu-
disme. (Danilewsky. Les hématozouires des tortues. Archives slaves de biolo-
gie, 1887, t. IL planche I.)

Metschnikoff, qui a constaté l'existence des hématozoaires dans le sang
des paludiques (Russkaia med., 1887, ne 12), a insisté sur le rôle des leucocytes
dans la destruction deces parasites (Annales de l’Institut Pasteur 1887, p.321) ;
la théorie des phagocytes trouve en effet dans l’histoire des hématozoaires
du paludisme une application importante. Ge rôle des leucocytes ne m'avait
pas échappé. J'ai constaté que les éléments parasitaires s'accolaient sou-
vent aux leucocytes (Traité des fièvres palustres, p. 180), et j'ai expliqué la
disparition des éléments parasitaires du sang, après les paroxysmes fébriles,
par la suractivité des leucocytes pendant la fièvre. « On sait que sous l’in-
fluence de la chaleur artificielle les leucocytes acquièrent une activité très
grande ; les mouvements amiboïdes s'exagèrent, etsi on met au contact des
leucocytes des grains pigmentés, on constate qu’ils s’en emparent et les
englobent très rapidement. La chaleur fébrile agit certainement comme la
chaleur artificielle dans cette expérience; chez le fébricitant, l’activité des
leucocytes s'exagère, et les éléments parasitaires deviennent plus facilement
leur proie que chez l'individu dont la température est normale. » (Traité
des fièvres palustres, p. 479.)

Une autre explication de la disparition des hématozoaires après les
paroxysmes et de l’intermittence a été proposée par MM. Roux et Cham-
berland à la fin du travail dans lequel ils ont exposé leurs très intéres-
santes recherches sur l’immunilé contre la seplicémie conférée par des substan-
ces solubles (Annales de l'institut Pasteur, 4887, p. 572) : « L’explication de
l'intermittence ne serait-elle pas en partie dans la présence dans les tissus, à
la suite de chaque culture abondante (as“cès), de substances élaborées par
le parasite et qui, par leur accumulation entravent son développement. »

Dans une publication récente (Archives italiennes de biologie, 1885)
MM. Marchiafava et Celli s'efforcent de démontrer que les éléments amiboïdes
souvent pigmentés dont il est fait mention, notamment dans leur dernier
mémoire (Atti della R. accad. méd. di Roma, 1887 et Archives Italiennes de
biologie, 1888), ne sont pas les mêmes éléments que ceux qui ont été déerits
par moi sous les noms de corps no 2 et d'éléments sphériques doués de
mouvements amiboides. C'est nier l'évidence ‘. MM. Marchiafava et CGelli
ont étudié avec soin les formes les plus petites de ces éléments auxquelles

1. Voir notamment les figures 1 et 6 du travail publié l’an dernier dans ces
Annales et comparer les éléments À, B et C, de MM. Marchiafava et Celli aux
éléments représentés dans la figure 1 (Annales de l'Institut Pasteur 1887,
p. 268 et 276). |

REVUES ET ANALYSES. 389

ils ont donné le nom impropre de plasmodes ; à cela s'est borné leur rôle ;
rôle utile assurément, mais modeste, et dont ils cherchent à tort à exagérer
l'importance; leurs surprenantes revendications n’en imposeront à personne.

MM. Marchiafava et Celli, qui ont contesté pendant longtemps l'existence
dans le sang des paludiques des éléments que j'ai décrits sous le nom de
filaments mobiles ou de flagella, veulent bien reconnaître aujourd'hui que
ces éléments existent, mais ils arguent de leur rareté dans le sang pour
essayer de diminuer leur importance.

Lesflagella ne sont pas aussi rares que voudraient lefaire croire les auteurs
italiens et, d'autre part, il est bien certain que ces éléments représentent la
forme la pluscaractéristique parmi celles que peuvent prendre les hématozoai-
res du paludisme.Toutes les fois que j'ai cherché à montrer à des confrères
les hématozoaires du paludisme, j'ai constaté ceci: l'examen des formes
sphériques ou en croissant laissait quelques doutes dans l'esprit des observa-
teurs qui n'avaient pas pu, par des recherches multipliées sur le sang des pa-
ludiques, se rendre compte de Ja fréquence et de la spécificité de ces
éléments, mais si j'étais assez heureux pour trouver dans la préparation
quelques flagella en mouvement, aussitôt leur conviction était faite, ils ne
mettaient plus en doute la nature parasitaire de ces éléments. On a vu plus
haut que les recherches de Couneilman confirmaient les miennes en ce qui
regarde l'importance des flagella. É

MM. Cattaneo et Monti ont constaié à Pavie l'existence des hématozoaires
dans le sang des paludiques; je reviendrai plus loin sur le mémoire très inté-
ressant qui a été publié par ces observateurs, mémoire qui est consacré à la
critique et à la réfutation des opinions émises par Mosso.

Les travaux dans lesquels l'existence des hématozoaires du paludisme est
contestée deviennent de plus en plus rares.

Klebs et Tommasi Crudeli défendent encore les bacilles qu'ils ont décrits
comme étant les véritables parasites du paludisme (voir notamment Klebs,
Die allgemeine Pathologie, 4"° p., Iëna, 1887), mais ils ne fournissent aucun
argument nouveau en faveur du bucillus maluriæ. Un auteur italien résume
ainsi qu'il suit, dans une revue récente sur les parasites du paludisme, l'his-
toire du bacille décrit par Klebs et Tommasi-Crudeli : « Depuis le moment où
il a été découvert, Le bacillus malariæ a été toujours en perdant du terrain
au point qu'aujourd'hui il est presque complètement abandonné. » (U. Arcan-
geli: Les Recherches modernes au sujet de l'agent de l'infection malurique,
Rivista clinica, n° 1, 1887.)

Je crois inutile de revenir,sur la critique déjà faite des recherches de
MM. Klebs et Tommasi-Crudeli; j'ai peu d'espoir de convaincre ces observa-
teurs que le bacillus mulariæ n'existe pas, 11 me suffit de constater que
déjà, malgré l'autorité de leurs noms et la notoriété de leurs travaux, ils sont
presque seuls à le défendre.

Mosso a publié en 1887 (Archives de Virchow, n° d'août 1887, p. 205 et
Rend. della Accad. dei Lincei, vol. 3, fase. 7 et 8) des expériences qui ten-
draient à démontrer que dans certaines conditions les hématies subissent

386 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

des altérations qui leur donnent l'aspect des éléments décrits sous le nom
d'hématozoaires du paludisme. D’après cet observateur, si l'on injecte du
sang de chien dans la cavité péritonéale d’un oiseau, trois ou quatre jours
après l'injection, le sang altéré renferme des éléments semblables à ceux
qui ont été décrits dans le sang des paludiques et dans les différentes
formes d'anémies.

Le Dr Maragliano va plus loin encore; il prétend qu'on obtient des
formes semblables à celles décrites dans le sang des paludiques en soumet-
tant le sang normal à différents réactifs, et même en l’abandonnant à lui-
même dans une préparation bordée à la paraffine! (Reale Accad. med. di
Genova, 21 juin 1887.)

Ces assertions ont été reconnues inexactes par tous les observateurs qui
ont cherché à les contrôler. Mosso et Maragliano n'ont certainement pas
étudié avec soin, dans le sang des paludiques, les éléments dont ils parlent
bien légèrement; s'ils avaient fait cette étude ils ne se seraient pas laissé
prendre aux ressemblances grossières qui existent parfois entre les héma-
ties altérées et certaines formes des hématozoaires du paludisme. Je me
suis souvent placé pour l'observation du sang dans les conditions indiquées
par Maragliano, et je puis affirmer que dans ces conditions on ne voit
jamais, s’il s’agit du sang d’un individu indemne de paludisme, se produire
aucun des éléments caractéristiques des hématozoaires du paludisme.

Les Drs Cattaneo et A. Monti ont fait des recherches au laboratoire de
pathologie générale et d'histologie de Pavie pour contrôler les assertions
de Mosso et de Maragliano (A. Cattaneo et A. Monti, Altérations dégénéra-
tives des globules rouges du sang et altérations des mêmes éléments produites
par le paludisme, Archivio per le scienxe mediche, vol. XIE, n° 6).

MM. Cattaneo et Monti ont injecté dix-huit fois du sang de chien dans
le péritoine d'oiseaux (poulets et pigeons), d’après la méthode de Mosso, et
ils ont examiné le contenu du péritoine a des époques variant du 4 au
15e jour après l'opération. Le sang injecté se divise en une partie liquide
et un coagulum; la partie liquide diminue et le coagulum devient plus
consistant à mesure qu'on s'éloigne du moment où l'injection a été faite.

MM. Cattaneo et Monti ont trouvé les éléments suivants dans la partie
liquide ou dans le coagulum du sang injecté :

4° Des globules rouges d'oiseau plus ou moins altérés.

2° Des globules blanes normaux.

3° Des globules blancs altérés, granuleux, présentant à un degré plus
ou moins avancé la dégénérescence granulo-graisseuse qu'on observe dans
le pus.

4° Des globules rouges du chien avec les aspects suivants :

a) Globules normaux dont le nombre va rapidement en diminuant,

b) Globules rouges mûriformes.

c) Globules rouges présentant des espaces clairs de forme et de dimen-
sions variables. -

d) Globules profondément déformés présentant des prolongements qui
d’ailleurs n’ont aucune analogie avec les flagella du sang des paludiques.

e) Enfin des globules décolorés.

REVUES ET ANALYSES. 387

à Des cellules globulifères et pigmentifères analogues à celles qui ont
été décrites par Bizzozero dans la moelle des os; il est bien probable que
les plus grandes de ces cellules dérivent de l’endothélium péritonéal; en
tous cas elles n'ont aucun rapport avec les éléments parasitaires du sang
des paludiques.

MM. Cattaneo et A. Monti sont arrivés à cette conclusion que les élé-
ments du sang en voie d'altération observés par Mosso et par Maragliano
n'ont aucun rapport avec les éléments parasitaires si caractéristiques qui
se rencontrent dans le sang des paludiques. Ces observateurs ont reproduit
dans les planches jointes à leur travail les différents aspects que prennent
les globules rouges et blanes altérés dans l'expérience de Mosso, et il suffit
d'un coup d'œil jeté sur ces figures (op. cit., fig. 1 à 32) pour s'assurer qu'il ne
s'agit pas des hématozoaires du paludisme.

MM. Marchiafava et Celli ont constaté également l'inexactitude des asser-
tions de Mosso (Bollett. della R. Accad, med. di Romu, Anno XII, fasc. 7).

EXPLICATION DE LA PLANCHE

(Figures empruntées à Danilewsky. Recherches sur la parasitologie com-
parée du sang. Kharkoff 1888). :
is, 4 à 5. Pseudovermicules.

Fig. 6, 7,8, 10. Diverses formes des pseudovacuoles (état embryonnaire),

Fig. 9. Isolement artificiel du eytozoon de l'hématie après l'action de
l'acide osmique.

Fig. 11. Grand cytozoon avecle résidu de l'hématie (m).

* Fig. 42. b. Un cytozoon libre qui se rompt et de l'intérieur duquel
s'échappent des corpuscules spirilliformes très mobiles. c. d-e. un de ces
corpuscules vu à un fort grossissement.

Fig. 13. Cytozoon (a) qui se rompt (b). Même phénomène que celui
indiqué dans la figure 12.

Fig. 14. Cytozoon dans une hématie: après 3 à 5 minutes l'hémoglo-
bine de l'hématie a disparu, on voit le cytozoon b avec le résidu de l'hé-
matie, # nucléus; après 2 à 3 minutes le cytozoon se transforme en héma-
tozoaire (c) avec des flagella très mobiles (polimitus de Danilewsky).

Fig. 145. a, cytozoon qui se transforme en polimitus (b); n nueléus de
Phématie atrophiée.

Fig. 16 à 27. Polimitus, leurs modifications et leurs changements mor-
phologiques; l'hématozoaire perd peu à peu ses flagella (fig. 21, 23).

Fig. 28. Pseudospirilles du sang ou autrement dit, flagella du polimitus
devenus libres. À. LAVERAN.

SALMONX. — Mémoires sur le Choléra Hog (choléra des porcs). Reports of the
commissioner of Agriculture, 1885 et 1886.

Les travaux de M. Salmon sur le choléra des pores ne sont guère conmus
en France, et ne semblent pas l'être beaucoup mieux du public européen,
Il y a à cela deux raisons. La première est qu'ils ont été publiés dans un

388 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

recueil officiel, qu'on ne trouve pas dans le commerce, et dont les exem-
plaires qui viennent en Europe vont en grande partie s'enfouir dans le
tombeau des archives des ministères, ou dans ces grandes nécropoles, hos-
tiles aux visiteurs, que nous nommons en France des bibliothèques publiques.
L'autre raison, plus personnelle à l’auteur, est qu'ils procèdent un peu trop
de cette méthode d'exposition qui consiste à verser sur la tête du lecteur le
contenu tout entier de son cahier d'expériences, en lui laissant à faire son
choix parmi les matériaux qui lui arrivent ainsi sans ordre et sans mesure,
Le plus souvent, ce lecteur n’a rien de plus pressé que de se secouer et de
s’enfuir, et on ne saurait lui en faire un crime. Pourquoi s'imposerait-il
une peine que l’auteur ne s'est pas donnée? et ce choix qu’on lui demande
de faire, qui, mieux que l’auteur, est en situation de le faire avec compé-
tence ?

Je sais bien qu'on dit quelquefois: « Mais si l’auteur fait un choix, s’il
intervient dans le procès et en supprime quelques pièces, c'est notre liberté
de jugement qui en souffre. » On reconnaît là la vieille querelle entre l'histoire
et les recueils de documents ou d'archives, mais elle est portée ici sur un
terrain où elle est facile à vider. L'histoire n’est pas absolument obligée de
conclure. La science y est absolument tenue. Un mémoire qui serait un
simple recueil d'expériences sans conclusion ne serait pas un mémoire
scientifique, puisqu'il laisserait dans l'ombre le seul point qu'il ait mission
d'éclairer, le déterminisme scientifique des faits qu'il énumère. Ceci est
tellement vrai qu'on peut juger de la valeur d’un travail par le degré de
concision des propositions qui le résument. Un mémoire qui tiendrait en
trois mots serait par cela seul un bon mémoire.

M. Salmon eût été d'autant mieux inspiré de coordonner un peu mieûx
et de réduire son exposé que cela lui eut été très facile. C'est en effet un bon
travail que le sien, et quand on à pris la peine de le lire, on s’apercoit que,
réduit à ses éléments essentiels, il laisse l'impression d'une question bien
étudiée. C'est ce que je voudrais montrer en le résumant. Je passerai rapi-
dement sur les faits acquis, qui ne semblent pas devoir, au moins pour le
moment, devenir matière à controverse, et j'insisterai seulement sur les
points discutables, qui ne sont pas, on le verra, parmi les moins intéressants.

La maladie étudiée par M. Salmon a été appelée par lui peste porcine
(swine plague) dans son premier mémoire, choléra des pores (choléra hog)
dans le second. Cette dernière appellation prête moins à la confusion que
l'autre, et nous la conserverons. C’est une maladie qui présente le carac-
tère infectieux et épidémique, et subit en outre de grandes variations de
virulence, qui se manifestent à la fois dansle nombre des animaux atteints
dans un temps donné, et dans la rapidité plus ou moins grande avec
laquelle ils succombent. Quand le virus est atiénué, il produit une mala-
die chronique, caractérisée par une diarrhée incoercible accompagnée de
faiblesse et d’inappétence, et, à l’autopsie, par des ulcérations de la
membrane muqueuse du gros intestin, mais l’animal peut vivre pendant
un mois ou davantage. Quand la virulence est grande, l’évolution est plus
rapide, la diarrhée devient sanguinolente, les lésions internes prennent le
caractère hémorragique, et embrassent la presque totalité des organes vitaux.

REVUES ET ANALYSES. 389

On trouve, en effet, des extravasations sanguines au-dessous de la
séreuse dans le gros intestin, à la surface et sur les bords de la rate qui
est noire et tuméfiée, sur la portion corticale et dans l'intérieur du rein, à
la surface des oreillettes du cœur, plus rarement sur les ventricules. En
revanche, les poumons sont souvent intacts, aussi bien dans les cas chro-
niques que dans les cas aigus accompagnés de larges ulcérations intesti-
nales. Parfois, pourtant, dans les périodes avancées de la maladie chro-
nique, on trouve les poumons légèrement hépatisés. Nous aurons bientôt
à nous rappeler ce fait.

Tous les ganglions sont gorgés de sang, mais c’est surtout le canal
intestinal qui présente de graves lésions. La partie déclive de l'estomac est
rougie ou noircie par des extravasations sanguines. Le duodénum et le
jéjunum sont peu atteints, l'iléon est moins indemne, mais, au delà de la
valvule iléo-cœcale, la muqueuse devient rouge, injectée, couverte de gru-
meaux noirâtres, qu'entoure une zone de tissu jaunâtre et nécrosé formant
quelquefois des ulcères d’un pouce de diamètre.

L'examen microscopique et bactériologique du sang et des organes dans
les cas chroniques est presque toujours négatif ou douteux, mais dans les
cas aigus, on trouve à peu près partout chez l'animal, et surtout dans la
rate, un petit bacille ayant la forme d’un ovale allongé qui se colore facile-
ment par les dissolutions aqueuses de violet de méthyle. Le centre est tou-
jours un peu plus pâle que le contour, mais la couleur n’est pourtant pas
localisée aux deux pôles de l’ovale, comme dans d’autres microbes. La
longueur, un peu variable suivant les milieux, est d'environ 4,2 & à 1,5 y.
Sa largeur est de 0,6 y.

Ce bacille est mobile, ce qui le différencie de suite de celui du rouget et
de ceux d'un certain nombre d'autres maladies du porc que leurs carac-
téres nosologiques pourraient permettre de confondre avec le choléra hog.
Il se développe assez péniblement sur la gélatine qu'il ne liquéfie pas. Après
quarante-huit heures, il forme à la surface des plaques des colonies visibles
à la loupe, d'aspect pâle, à bords nettement définis, mais irréguliers, et
avec une légère saillie vers le centre. Dans des tubes à gélatine ensemencés
par piqûre, il donne de petites colonies qui n’atteignent jamais, même là où
elles sont le plus écartées, la grosseur d'une tête d'épingle.

Les cultures en milieux liquides lui conviennent mieux, Il se multiplie
très vite dans les bouillons ordinaires additionnés ou non de peptene; il
préfère qu'ils soient neutres, mais s’en contente même lorsqu'ils sont légè-
rement acides. Dans le lait, il se développe sans y amener aucun change-
ment apparent. Il se multiplie même dans l’eau.

Sur la pomme de terre, il donne un enduit qui est d’abord de couleur
chocolat, et qui finit par se foncer en recouvrant presque toute la surface.

Un des côtés les plus intéressants de son histoire est son degré de résis-
tance à l’action de la chaleur. Exposé 15 ou 20 minutes à 58°, dans un
liquide nutritif peptonisé, et sans doute neutre, car l’auteur n'indique pas
ce point, il laisse l'infusion stérile. Ceci a lieu quel que soit l’âge de la
culture à laquelle on a emprunté la semence. M. Salmon paraît disposé à
conclure de cette faible résistance que le microbe ne donne pas de spores,

25

390 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

au moins dans les conditions dans lesquelles il s’est placé. L'observation
microscopique confirme cette conclusion en ne montrant dans aucune cir-
constance rien qui ressemble à une spore. Cette absence a été relevée sur des
microbes analogues, et nous aurons bientôt à revenir sur ce fait.

Relativement à la résistance à la dessiccation, les résultats sont moins
précise Les limites de résistance trouvées ont varié de 10 jours à 2 mois.
Ces variations sont peut-être dues à des différences dans la vitalité des
cultures où dans la nature des milieux d'ensemencement, peut-être aussi à
des différences dans l'intensité de la lumière qui tombait sur les semences
desséchées. Comme l’auteur ne parle pas du tout de ce qu’il a fait à ce
propos, on est autorisé à croire qu'il a méconnu cette influence.

Enfin, je passe brièvement sur les résultats relatifs à la résistance aux
antiseptiques, parce que les expériences de M.'Salmon, faites surtout en
vue de découvrir un moyen pratique de désinfection, ont, comme beaucoup
d’autres expériences sur les antiseptiques, un caractère contingent qui nous
dispense de nous y arrêter. Disons pourtant que les agents qu'il a trouvés
les plus efficaces, parmi ceux dont l'emploi peut être recommandé dans les
porcheries, sont l'acide phénique, l'acide sulfurique et le sulfate de cuivre.
D'une manière générale, la bactérie est peu résistante, et M. Salmon tire
de ce fait un nouvel argument contre l'existence de spores.

Nous arrivons maintenant à l'étude de son action sur les animaux. Sur
ce point, les expériences de M. Salmon ont été très variées, très multipliées,
et méritent d'être étudiées de près. La souris inoculée avee une culture
meurt toujours avec une légère réaction locale au point d’inoculation, où les
tissus ont pâli et sont devenus mous et friables. L’autopsie révèle le gonfle-
ment de la rate, et quelquefois une congestion intense dans le tissu médul-
laire du rein et dans les poumons. Dans presque tous les cas, on retrouve
la bactérie dans la rate, le foie, les reins, le sang du cœur et les poumons.
On peut aussi faire périr les souris en leur servant à plusieurs reprises
des repas infectés avec le bacille, qu'on peut emprunter pour cela soit à
des cultures, soit à des fragments d'animaux qu'il a tués. On relève alors
des symptômes morbides qui semblent tenir à l'absorption d’une ptomaine.
Les animaux ont l'air endormis. La mort survient avec des troubles dans le
foie et le poumon, qui subit quelquefois une nécrose de coagulation. L'au-
teur ne signale rien de particnlier du côté du canal digestif.

L'’unique lapin que M. Salmon ait soumis à l'expérience est mort quatre
jours après l’inoculation d'une culture pure, avec congestion de la rate,
hémorragies de l'estomac, et présence du bacille dans tous les organes.

Les cochons d'Inde sont très sensibles. Inoculés avec une dose infinitési-
male d’une culture, ils meurent en 8 à 10 jours, et plus tôt si la dose a été
plus considérable. Les tissus subissent une nécrose au point d’inoculation.
Les poumons sont congestionnés. Le foie et la rate sont remplis de
bacilles. Il y en à moins dans les reins et les poumons, et encore moins
dans le sang du cœur.

Le pigeon est moins susceptible. Quand on inocule dans les pectoraux
des doses de culture inférieures à 0°°,75, l'animal présente quelques-uns des
symptômes morbides du choléra des poules. fl reste immobile, les plumes

REVUES ET ANALYSES. 391

hérissées. IT n'a pourtant pas de somnolence, mais le muscle inoculé pré-
sente les caractères qu'il a dans le cas du choléra des poules, depuis la rou-
geur initiale jusqu’au séquestre terminal. L'animal se rétablit le plus
souvent, mais il meurt sûrement si on a élevé la dose. Les désordres inté-
rieurs ne sont pas constants : on a cependant relevé dans un cas une ulcé-
ration et un épaississement très marqués de la partie inférieure du gros
intestin. La contagion n'a pas lieu par le canal digestif. « Le pigeon semble
être sur la ligne marginale de la susceptibilité. Quatre poules se sont mon-
trées réfractaires, l'injection des cultures n'étant suivie chez elles que d’une
légère réaction locale. »

« Sur deux moutons et un veau, l'injection de cultures pures a donné
un abtès au point d’inoculation, avec une élévation de température. »

Le pore est évidemment le terrain d'élection du microbe et mérite de
nous arrêter davantage. Il n’est pourtant pas très sensible à l'inoculation.
Dans une nombreuse série d'expériences faites en 1886 pour essayer de
trouver un vaccin, et dans lesquelles on faisait deux injections sous-cuta-
nées, l’une avec une dose faible d’une culture virulente, l’autre avec une
dose plus forte, cinq animaux seulement ont succombé à l’inoculation. Il est
vrai que l’année précédente, des animaux inoculés aussi avec des cultures
pures étaient tous morts. Il y a là une différence sur laquelle on peut
reprocher à M. Salmon de n'avoir pas assez insisté, Il semble, à lire le
résumé de ses expériences, qu'il ait été à plusieurs reprises sur la voie qui
mène à des virus atténués et par là à la vaccination, et qu'il ait renoncé à
la suivre. Mais nous retrouverons bientôt cette face de la question. Pour le
moment, contentons-nous de savoir que l’inoculation de cultures du bacille
est rarement mortelle. L’inoculation du sang d’un animal mort du choléra
semble l'être davantage. Quand la mort survient, on relève des symptômes
voisins de ceux que donne l'infection par le canal digestif, à laquelle nous
arrivons maintenant.

Par cette voie, les liquides de culture se montrent moins actifs en
moyenne que les viscères d'animaux morts, dont l’ingestion tue environ
90 pour cent des animaux qui s’en nourrissent, avec les formes les plus
graves du choléra, et des lésions qui sont tout à fait celles de la maladie
naturelle. Ces lésions appartiennent en général à deux types. Dans l’un,
elles sont limitées au canal intestinal, embrassant l'estomac, le gros intestin,
souvent l’iléon, plus rarement le jéjunum. C'est une nécrose plus ou moins
complète de la muqueuse du côlon, avec rougeurs intenses du fond de
l'estomac. Les organes internes sont faiblement atteints, il y a peu ou pas
d'hémorragies, et la bactérie est tellement rare dans la rate et dans les
autres organes, qu'on ne peut l'y déceler que par la méthode des cultures.
Dans l’autre type morbide, on trouve au contraire des lésions hémorragi-
ques dans les organes internes, foie, reins, ganglions lymphatiques, pou-
mons, et généralement dans toutes les séreuses. En outre, il peut y avoir
congestion de la membrane muqueuse de l'estomac et des intestins, et des
lésions hémorragiques au-dessous de la muqueuse. Dans ces cas, la rate et
le sang contiennent de grandes quantités de bacilles.

Dans les deux types, la maladie se termine fatalement par la mort au bout

392 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

di

d'une période de 6 à 15 jours, et toutes ces ressemblances avec la maladie
naturelle nous autorisent à croire que c'est par la voie du canal digestif
que se fait surtout l'infection, quand la maladie éclate avec violence dans
les étables. Les conditions ordinaires de l'alimentation des pores sont en
effet très favorables à ce mode de contagion. D'après Salmon, la transmis-
sion par l'air semble ne jouer aucun rôle. Du moins deux porcs, soumis
pendant une demi-heure à la pulvérisation de 10° d’une culture du bacille
dilués dans 40°° d’eau, n’ont paru en ressentir aucune influence, et l'un
d’eux est mort quelques mois après à la suite d’un repas de matières infec-
tieuses. Mais cette conclusion n'est valable que pour des germes humides,
et pour les conditions assez imparfaites des expériences, elle ne l’est pas
pour des germes secs ou plus finement pulvérisés,

Nous n'avons pas signalé, dans ce qui précéde, de désordres particuliers
du côté du poumon. « Dans beaucoup de cas de choléra, présentant de
larges ulcérations intestinales, on trouve les poumons normaux. D'un autre
côté, des cas d'un type hémorragique aigu produits par des repas infectieux
ou des inoculations sous-cutanées, présentent parfois, dans le tissu du
poumon, de petits foyers hémorragiques embrassant un certain nombre de
lobules. À la section, on les trouve d’une couleur rouge foncée, et il y a
une extravasation dans les alvéoles, qui sont remplies de sang coagulé. Ces
foyers sont très probablement produits par des amas de bactéries croissant
dans les capillaires, et amenant la nécrose des parois et par conséquent
l'extravasation. Si on prend en considération l’état des autres organes dans
ce cas, il devient grandement probable que ces foyers ne sont pas primaires,
mais secondaires; ce ne sont pas des amas de bactéries qui proviennent de
l'air inspiré; elles ont été apportées par la circulation, et leur voie d’entrée
est le canal intestinal. »

Ces renseignements nous permettent d'aborder une question intéressante,
celle des ressemblances ou des différences du choléra hog avec d’autres
maladies du porc. Relativement à sa différence avec le rouget, il n’y a
aucun doute. La bactérie du rouget est immobile, celle du choléra mobile.
Quand, dans le choléra, il y a de la rougeur de la peau, elle est en général
bornée au voisinage des organes sexuels. Les lésions sont de nature différente;
enfin, M. Salmon a inutilement essayé le vaccin du rouget contre le choléra.

Aucun constestation non plus, du moins suivant toute vraisemblance, au
sujet de la différence entre le choléra hog et la maladie décrite par Lôffler
et étudiée par Schutz sous le nom de Schweineseuche. L'un des microbes est
mobile et l’autre non; celui du choléra se colore, comme nous l'avons dit, sur
toute sa périphérie, avec teinte plus foncée aux deux pôles, celui de la peste
porcine ne se colore qu’à ses deux extrémités. Les localisations pulmonaires
sont la règle dans la peste porcine, l'exception dans le choléra des pores.
C'est l'inverse pour les lésions du canal intestinal. Le microbe du choléra
ne tue pas les poules, l’autre les tue quand on l’emploie à larges doses. Le
premier pénètre facilement par le canal digestif chez les pores, le second
semble n'avoir aucune action par cette voie. En revanche, Schutz a réussi à
produire une pneumonie par inhalation de cultures pulvérisées.

Dans son premier mémoire, M. Salmon avait appelé swine plague la

REVUES ET ANALYSES. 393

maladie étudiée par lui. Dans le second il l'appelle, nous l'avons dit,
choléra hog, et réserve le nom de swine plaque a une maladie très probable-
ment identique à la Schweineseuche allemande. Morphologiquement, les
deux microbes sont identiques, poussent de lamême manière dans les mêmes
milieux de culture, etont les mêmes propriétés biologiques. Tous deux sont
mortels pour le porc, la souris, le lapin, et le pigeon quand on emploie de
larges doses. Tous deux respectent davantage le cobaye. Tout au plus peut-
on relever, en comparant les résultats obtenus en Allemagne et en Améri-
que, de légères différences de virulence. Le microbe allemand, inoculé
dans l'oreille d'un :apin, le tue en 3 jours d’après Schutz. Celui d'Amérique
ne tue qu'en 9 jours. Dans les inoculations sous-cutanées, mêmes diffé-
rences. Mêmes différences aussi pour les souris et les porcs. Les pores inocu-
és par Schutz sont morts de 1 à 3 jours après l'opération, avec une réaction
locale intense autour de la piqûre, et une multiplication abondante de la bac-
térie dans tous les organes intérieurs. Ceux de M. Salmon ont survécu deune
à deux semaines, et les seuls résultats constants ont été une cirrhose aiguë
du foie, suivie d’une jaunisse. En général, dans ces cas, la bactérie avait dis-
paru, et des cultures du sang et des divers tissus restaient stériles. Mais
toutes ces différences sont d'ordre secondaire: on en trouve de toutes pareil-
les entre les microbes de diverses épidémies de choléra des porcs ayant
éclaté sur différents points de l'Amérique, et qui, si on voulait les séparer
les unes des autres, nous conduiraient tout droit au bacille régional ou
départemental. Les variations peuvent très bien s'expliquer par des diffé-
rences dans la virulence des cultures ou par des questions de race des ani-
maux d'expérience, et disparaîtraient sans doute entre les mains d’un expé-
rimentateur qui, cultivant simultanément les deux microbes, les amenant à
un même degré de virulence par passages successifs au travers d’un milieu
de culture favorable ou d'une espèce appropriée, les comparerait à cet état.
Le fait de la disparition du microbe des tissus quand la maladie n'est pas
mortelle à bref délai ne doit pas non plus servir d’argument : on le constate
dans beaucoup d’autres affections microbiennes. M. Salmon l'a retrouvé
à propos du choléra des pores. Dans le cas de la swine plague, le microbe
est probablement quelque part, et ce n'est guère qu'à l’action de ptomaïines
qu'on peut attribuer la cirrhose observée dans le foie, mais il a disparu de
la masse des organes.

Nous pouvons donc considérer comme synonymes les mots sine plaque
et Schweineseuche. Pour les mêmes raisons, je crois qu'on peut identifier
aussile choléra hog et la maladie récemment décrite par MM. Rietsch et
Jobert sous le nom d’épidémie des porcs à Marseille en {887 !. cette dernière
affection est surtout intestinale : elle est caractérisée par de la diarrhée,
quelquefois par de la constipation.

« À l’autopsie, il n’est pas rare de trouver les reins, le foie, la rate et
même les poumons d'apparence tout à fait saine, mais souvent on observe
sur le foie des taches et sur le rein un piqueté hémorragique caractéristi-
-que. Quand l'affection a été de longue durée, le tube digestif est le siège

1. Comptes-rendus, t. CVI, p. 296 et 1096.

394 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

de lésions caractéristiques et sérieuses. L'estomac a ses parois ulcérées,
l'intestin grêle est piqueté. À 0m,20 ou 0m,95 de la valvule iléo-cœcale, on
trouve des ulcérations s'étendant sur tout ou partie des plaques de
Peyer, qui en sont le point de départ. La valvule est le plus souvent elle-
même ulcérée. L'appendice iléo-cœæcal, le cœcum, le côlon, présentent des
ulcérations, soit circulaires quand elles sont déjà anciennes, soit sous
forme acuminée ou furonculeuse. Ces ulcérations atteignent jusqu'à 7 et
8 centimètres de diamètre. »

On reconnaît là quelques-unes des lésions caractéristiques du choléra
hog. Il est vrai qu'ici la valvule iléo-cœcale ne sépare plus aussi nettement
que dans l'exposé de Salmon, la partie saine de la partie malade du canal
intestinal. Mais dans l'interprétation de ces différences, il faut faire entrer
les différences possibles dans la race et dans [le mode de nutrition des ani-
maux soumis à l'expérience. L'histoire du vaccin du rouget montre qu'il
y a beaucoup plus de différence dans l'espèce porcine à la surface de la
France, qu'il n'y en a dans l'espèce ovine ou dans l’espèce bovine. Ces diffé-
rences doivent encore être plus marquées de l'Europe à l'Amérique. Que
cela tienne à ce que la race n’est pas partout la même, ou que la même
race subisse et traduise de façons très variables l'influence du mode très
variable d'alimentation, le fait est constant, et nous permet de comprendre
que des pores d'Europe et des porcs américains, soumis à l'influence du
même microbe, puissent présenter des différences locales dans des symp-
tômes morbides dont la ressemblance spécifique est du reste évidente.

MM. Rietsch et Jobert, qui nient l'identité entre le choléra des pores et
la maladie qu'ils ont étudiée, avancent pour cela un autre ordre de preuves,
emprunté aux différences qu'ils ont relevées dans les cultures sur gélatine,
gélose, sérum, pomme de terre et bouillon peptonisé ou non, entre leur
bactérie et celle qu'ils ont recue de M. Salmon. La plupart de ces différences
ne me paraissent pas plus marquées que celles qu'on pourrait trouver dans
des cultures comparées d'un même microbe, à des degrés différents ou
au même degré d'atténuation. J'ai fait bien souvent de ces cemparaisons,
en vue d'établir des identifications, et je puis affirmer que rien n’est plus
difficile que d'arriver ainsi à confondre ou à séparer deux microbes, lorqu’on
n’est pas exactement renseigné sur leurs besoins nutritifs, et qu’au lieu de
les cultiver dans leur milieu le plus favorable, on leur donne à tous deux
des milieux également défectueux où mauvais. Il est d’ailleurs remarquable
que MM. Rietsch et Jobert aient omis de rechercher ce que donnait le
moyen de différentiation le plus net auquel on puisse s'adresser en l’état
actuel de la science, l'influence de la chaleur sur le microbe pathogène.

Je crois qu'il n'y à pas plus de hardiesse à identifier Le choléra hog et
une maladie observée par Selander! sur les pores de la Suède et du Dane-
mark. Ici, le microbe est un bacille mobile, donnant sur la gélatine des
colonies analogues, autant qu'on peut le voir par leur description, à celles
du microbe du choléra des pores, et mortel comme lui au pore, à la souris,
au cobaye et au lapin. Celui de Selander respecte le pigeon, mais c’est peut-

4. Centralbl. f. Bakt. u. Parasit., t. III, p. 361.

REVUES ET ANALYSES. 395

être une question de doses, car nous avons vu plus haut que le pigeon est
réfractaire dans une certaine mesure.

L'autopsie des animaux inoculés révèle les faits suivants : réaction nulle
ou faible au point d'inoculation; ecchymoses sous-pleurales ou sous-mu-
queuses dans la trachée; reins, rate et foie plus ou moins gonflés et con-
gestionnés, poumons œdémateux ou présentant une infiltration pneumo-
nique, sang du cœur épais ou faiblement coagulé; exceptionnellement,
entérite aiguë de l'intestin. Chez les animaux tués par des repas infectieux,
nombreuses lésions pathologiques dans l'intestin. Chez un lapin mort
8 jours après ee repas, la muqueuse de l'intestin était seulement par places
ramollie et épaissie, avec les follicules gonflés. Chez d’autres lapins, morts
du 2% au 4e jour, l'intestin grêle présentait une hyperémie notable, et un
gonflement gélatineux, une quasi-colliquation, avec un contenu muqueux
mélangé de sang. La maladie durait-elle plus longtemps, le mal se locali-
sait dans la partie inférieure de l'iléon et surtout dans le cæcum, où on trou-
vait tantôt de l'hyperémie ou du gonflement de la muqueuse, tantôt des
portions saillantes, larges comme une pièce de 50 centimes, avec des éro-
sions sanguinolentes, superficielles ou profondes, tantôt des taches diphté-
ritiques gangréneuses. Avec des maladies à plus longue échéance. Selander
fut sans doute arrivé aux ulcères de l'intestin. Chose singulière, il ne parle
pas, dans le travail auquel j'ai emprunté le passage ci-dessus, des détails
de l’autopsie de ses porcs, qui nous auraient été bien utiles pour en tirer des
éléments de ressemblance ou de différentiation entre les deux microbes. Tout
ce que nous savons, par une expérience du Dr Bang, c’est qu'un porc nourri
avec ce microbe est mort d'une maladie en tout semblable à celle qui avait
fourni le germe morbide. Tous ces éléments semblent pourtant suffisants pour
identifier, jusqu'à nouvel ordre, la maladie de Selander et le choléra hog.

Je suis vraiment tenté d'en dire autant pour la maladie récemment
décrite par MM. Cornil et Chantemesse! sous le nom de pneumonie conta-
gieuse du porc, tant sont grandes les ressemblances entre le bacille du
choléra hog et celui qu'ont étudié ces savants. Il est vrai que dans une pre-
mière communication, ils le donnent comme immobile, mais ils ont reconnu
depuis que c'était une erreur d'observation, et qu'il est mobile comme
l’autre. C'est aussi une petite bactérie ovale, montrant quelquefois un
espace clair à son centre, quand il est coloré par le bleu de méthylène, Il
périt aussi après un quart d'heure de chauffage à 58°. Il résiste bien à la
dessiccation. Il ne liquéfie pas la gélatine. I se reproduit dans l’eau distillée.
Il est aussi très sensible à l’action des antiseptiques, et MM. Cornil et Chan-
temesse, comme M. Salmon, ont été amenés à recommander pour le détruire,
des liquides acidulés et contenant de l'acide phénique. Comme celui de
Salmon et de Selander, il est aérobie et facultativement mais plus difficile-
ment anaérobie. Il tue en peu de jours les cobayes, les lapins et les souris,
dans le sang desquelles il pullule abondamment. Le pigeon, il est vrai, est
réfractaire, mais je tiens de M. Chantemesse qu'il n’a pas non plus réussi à
tuer des pigeons avec celui de Salmon.

Il peut être introduit par la voie digestive ou par des inoculations sous-

1. Comptes rendus, t. CV, p. 1981, et t. CVI, p. 612.

396 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

cutanées. Il est vrai que dans la forme de maladie observée par MM. Cornil
et Chantemesse, il y a surtout des localisations pulmonaires, localisations
qu'ils ont reproduites par l'expérience en inoculant directement dans le
poumon des cultures récentes. Mais ils disent eux-mêmes que « la prédo-

_ minance des symptômes pulmonaires est le résultat du mode d'introduction

du virus qui se fait souvent par la respiration ». La principale source d'in-
fection, pour les pores qu'ils ont examinés aux environs de Paris, est en
effet le marché de la Villette, où les pores ne mangent pas, mais où ils ont
à respirer un air souvent chargé de poussières et de germes infectieux.

Ajoutons enfin, pour servir de trait d'union entre tout ce qui précède, que
MM. Cornil et Chantemesse qui, avant MM. Rietsch et Jobert, avaient eu l’occa-
sion d'étudier l'épidémie de Marseille, avaient signalé une ressemblance
entre le microbe de leur pneumonie contagieuse et celui que, dans notre
interprétation des résultats de MM. Rietsch et Jobert, nous avons assimilé
au microbe du choléra ho.

Voilà pour les ressemblances; on conviendra qu'elles sont grandes. Il est
vrai qu'il y a aussi des différences. Aïnsi les cultures sur gélatine n'ont
pas le même aspect. Au lieu de donner des taches transparentes, acuminées
en leur centre, à bords irréguliers mais nettement indiqués, le bacille de
MM. Cornil et Chantemesse donne comme un fin réseau de dentelle. Mais ces
différences, dues peut-être à des actions de milieu ou de mode de chauffage,
ne pourraient être considérées comme spécifiques que si elles persistaient
entre des cultures comparatives faites par le même observateur. Je passe
rapidement sur d’autres différences également secondaires pour aborder un
sujet plus important, celui de l’atténuation, et par suite de la vaccination.

MM. Cornil et Chantemesse sont arrivés à atténuer leur microbe par un
séjour de 3 mois à la température de 43°. Après 2 mois, la culture ne tue

* plus fatalement le lapin. « Après 90 jours, le virus ne tue plus les cobayes et

ne leur donne qu’un abcès sous-cutané. Les lapins ne présentent même pas
toujours cette lésion locale... Avec ce virus atténué, il est facile de donner
au cobaye et au lapin l’immunité contre le virus virulent. »

M. Salmon a échoué dans ses tentatives pour atténuer son bacille, et
on pourrait être tenté de faire de cette circonstance un caractère distinctif.
Mais, en y regardant de près, on voit qu'il perd toute sa valeur. D'abord
M. Salmon s’est proposé de vacciner le porc contre les périls de l’introduc-
tion du microbe par les voies digestives, ce qui, à raison de la sensibilité
du porc, superposée à la sensibilité de son canal intestinal, est évidemment
un problème très difficile. De plus, en étudiant de près ses expériences, on
voit qu'à plusieurs reprises, comme nous l'avons signalé plus haut, il à eu
des commencements de vaccination, ouvrant la porte à des tentatives nou-
velles qu'il a négligé ou qu’il n’a pas eu le temps de faire. Enfin, il ne s'est
pas adressé à la chaleur longuement continuée comme agent d'atténuation.
Il a surtout étudié l'influence des petites doses, ou bien une action toute diffé-
rente, dont il nous reste à parler en terminant, celle des produits solubles.

Sans entrer dans le détail de ses expériences, on peut les résumer en
ceci. Des pigeons, inoculés au préalable avec des doses faibles d’une culture
chauffée à 58°, peuvent, après quelques jours, résister à des inoculations du

REVUES ET ANALYSES. 397

microbe virulent qui tuez+ les pigeons non vacecinés. Ces résultats, publiés
en 1885 et 1886, postérieurement aux travaux de M, Chauveau, mais anté-
rieurement à ceux de MM. Charrin, Roux, Chamberland, Chantemesse et
Widal, ont évidemment une grande importance. Comme je le disais en com-
mençant, ils n’ont pas été comus en Europe, où ils n'ont guère figuré dans
les journaux qu'après la communication tardive qui en a été faite en 1887, par
MM. Salmon et Smith, au Congrès de Washington. Mais eussent-ils été
connus plus tôt qu'ils n'auraient pas suffi à rallier l'opinion hésitante alors
au sujet de la vaccination par des substances solubles. Ils prêtaient trop le
flanc à des objections très légitimes.

C'était d'abord l'emploi, pour stériliser la culture vaccinale, d'une tem-
pérature aussi voisine de la température limite à laquelle meurt le microbe,
Il est vrai que pour éviter cette objection, et prouver qu'il n’y avait rien de
vivant dans la culture vaceinale, ce qui aurait ramené le fait observé aux
proportions d'un cas de vaccination par un microbe atténué par la chaleur,
M. Salmon ensemencçait avec cette culture un milieu nutritif qui restait
stérile. Mais cette preuve ne prouve rien. On savait alors, et on sait encore
mieux maintenant, que les microbes qui habitent une culture ne sont pas
identiques et ont des degrés divers de résistance aux agents extérieurs,
degrés très rapprochés, d'autant plus rapprochés que la culture est plus
homogène, mais non identiques. Rien ne prouvait alors, et rien ne prouve
encore que {ous les microbes aient été tués à cette température limite
de 58°-60°. La stérilité du milieu nutritif où on les ensemençait n’eût été
probante que si on y avait ensemencé une quantité de culture vaccinale
égale à celle qu'on inoculait au pigeon d'expérience. Ce sont précisément
des difficultés de cet ordre qui ont longtemps empêché MM. Chamberland
et Roux de publier leurs essais sur la vaccination du charbon par des sub-
stances solubles. Ils obtenaient l'immunité par l’inoculation de cultures
chauffées qui se montraient stériles quand on en ensemencçait quelques
gouttes, mais qui peuplaient les liqueurs quand on en introduisait 10, 20,
30 centimètres cubes,

Ce qui eût poussé encore à croire que quelques bacilles étaient restés
vivants dans les cultures vaccinales de M. Salmon, c’est qu'il suffisait de
très faibles quantités de ces cultures pour produire l'immunité. Ainsi dans
la première des expériences publiées dans le rapport de 1885, une dose de
06,5 de culture vaccinale avait suffi à conférer à un pigeon une immunité
presque complète. Ces doses s’éloignent beaucoup de celles qui sont néces-
saires pour conférer l’immunité dans d’autres maladies.

Enfin, en voyant, dans le rapport de 1886, que ce mode de vaccination
avait échoué sur des espèces animales plus susceptibles, qu'il ne réussis-
sait que sur le pigeon, espèce placée, de l’aveu même de M. Salmon, sur la
ligne marginale de l'immunité, en constatant aussi que ce mode de vaeci-
nation réussit mieux en hiver qu'en été, que même en hiver, il y a des
insuccès, on conclura, je pense, qu'il n’y avait dans cet ensemble de
faits, si intéressants qu'ils fussent, rien qui fût capable d’emporter les
convictions. Aussi ne puis-je accepter le jugement de M. Hueppe, qui
dans un article critique sur l’histoire de la vaccination par produits solu-

398 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

bles, dit que sur ce sujet M. Chauveau n'a apporté que des preuves de
vraisemblance (Wahrscheinlichkeïtsbeweis), Salmon et Smith des preuves
expérimentales directes, tandis que Roux et Chamberland n'ont fait que
trouver un exemple nouveau d'un fait découvert avant eux. Il me semble

que ce jugement est sujet à révision, et ne met personne à sa place.
Dx.

LE CHARBON ET SA VACCINATION PRÉVENTIVE. — Expériences comparatives
faites à Melun et à Pouilly-le-Fort, avec les virus-vaccins Pasteur et
Chauveau, leurs résultats. Rapport sommaire par M. Rossignol. (La
Presse vétérinaire, 30 juin 1888, n° 6.)

Depuis les communications de MM. Pasteur, Chamberland et Roux sur les
virus charbonneux atténués, plusieurs procédés ont été proposés pour obte-
nir l’atténuation de la bactéridie du charbon. Aujourd’hui il n’y a donc
pas de difficulté à préparer un virus diminué de virulence capable de con-
férer l’immunité à quelques animaux d'expérience. Il n’en est plus ainsi
lorsqu'il s'agit d'obtenir des virus gradués de facon à fournir à la grande
pratique agricole des vaccins charbonneux efficaces et inoffensifs. M. Chau-
veau ést l'inventeur d'un procédé d'atténuation, par l'oxygène comprimé, qui
fournirait facilement un vaccin du charbon doué de propriétés tout à fait
précieuses pour la pratique. Avec ce nouveau vaccin deux inoculations
préventives sont inutiles, une seule suffit ; de plus ce virus peut être con-
servé pendant plusieurs mois sans perdre son efficacité.

C’est pour vérifier ces remarquables propriétés du vaccin préparé par
l'oxygène comprimé que la Société d'Agriculture de Seine-et-Marne et la
Société de médecine vétérinaire pratique ont entrepris, sur la proposition
de M. Rossignol, des expériences qui ont été faites à Melun. Voici, d’après
le rapport de M. Rossignol, les conditions dans lesquelles ces essais ont été
faits et les résultats qu'ils ont donnés :

« Programme des expériences sur la vaccination préventive avec le virus
charbonneux atténué par l'oxygène comprimé.

« Dans le but de vérifier la valeur prophylactique du vacein préparé par
l'oxygène comprimé, la Société d'agriculture de Melun et la Société de méde-
cine vétérinaire pratique arrêtent, d'accord avec M. Chauveau, de l'Institut,
les dispositions suivantes :

« 1° 50 moutons vierges de toute inoculation seront achetés pour servir
aux expériences ;

« 20 10 moutons seront inoculés une première fois le 5 mai, avec le
virus atténué par l’oxygène comprimé, une seconde fois, 10 ou 12 jours après;

« 3° 10 autres moutons seront inoculés une seule fois avec le même
virus, le jour où les moutons du premier lot subiront leur seconde vaccination;

« 4° 20 moutons subiront, à 10 ou 12 jours d'intervalle, les deux vac-
cinations classiques du vaccin Pasteur. L’inoculation du premier vaccin aura
lieu le 5 mai, la seconde se fera en même temps que celle qui doit être
effectuée sur les deux lots de M. Chauveau ;

4. Forlschrille der medium, 15 avril 1888.

REVUES ET ANALYSES. 399

« 0° 10 ou 12 jours plus tard, les 40 moutons des lots Chauveau et
Pasteur subiront une inocnlation d'épreuve avec du charbon très virulent ;

« 6° 10 témoins, vierges de toute inoculation, seront également inoculés
le même jour avec le virus très virulent. »

La première séance d'inoculation eut lieu le 5 maï; les vaccins pasto-
riens n'avaient point été préparés spécialement pour cette expérience, la
commission de Melun a employé ceux qui se trouvent dans le commerce.
Le troisième jour après l’inoculation, un mouton du lot Chauveau mourait
des suites de l'opération.

La seconde inoculation fut pratiquée, d’après les conditions du programme,
le 49 mai. Un mouton du deuxième lot Chauveau mourut des suites de
cette inoculation le 27 mai.

Le 31 mai, les 18 moutons restant du lot Chauveau et les 20 moutons du
lot Pasteur, furent inoculés avec le virus virulent en même temps que les
10 moutons témoins.

Tous les animaux vaccinés, ceux du lot Chauveau et ceux du lot Pas-
teur, restèrent bien portants; T des moutons témoins succombèrent au
charbon, les trois autres, après avoir été très malades, finirent par se rétablir.

En résumé, les vaccins par l'oxygène comprimé ont donné une morta-
lité de 10 0/0 ; les vaccins pastoriens n’ont amené aucune mort; l'immu-
nité conférée aux animaux dans les deux cas a été suffisante pour qu'ils aient
résisté à l'inoculation du charbon virulent.

L'exposé de ces expériences se termine par les huit conclusions suivantes
que M. Rossignol se croit autorisé à poser :

« Conclusions : 19 Les expériences qui viennent d’avoir lieu à Melun et
à Pouilly-le-Fort sont un nouveau triomphe pour la méthode Pasteur ;

« 2 Il est regrettable à tous égards que nos cultivateurs se trouvent dans
l'impossibilité absolue de profiter des bénéfices de cette vaccination pen-
dant plus de deux moiset demi‘;

« 3° Le vaccin préparé par l'oxygène comprimé (procédé Chauveau), pos-
sède des propriétés prophylactiques incontestables. L'immunité conférée
par ce vaccin est tout aussi solide que celle dont sont investis les animaux
yaccinés par les vaccins Pasteur;

« 4° Le vaccin Chauveau possède, entre autres avantages précieux, ceux
de se conserver intact pendant plusieurs mois, de conférer l’immunité
après une Seule vaccination, de permettre son transport au loin et de four-
nir à nos cultivateurs le moyen de vacciner leurs animaux en tout tempset
sans interruption ;

« »° Les deux insuccès constatés dans l'expérience qui vient d’avoir lieu,
démontrent l'utilité d’une nouvelle expérience faite cette fois avec un
vaccin dont la préparation remonterait à un mois. Si, comme l’affirme
M. Chauveau, la virulence est atténuée d’une facon précise et invariable
dansles deux premiers mois de la fabrication de ce vaccin, ilen résulterait
un avantage qui est considérable et c’est celui-ci :

1. Le laboratoire de préparation des vaccins est fermé pendant les vacances,
parce que, en général, les agriculteurs font vacciner leurs troupeaux au prin-
temps, avant l’époque où le charbon devient fréquent.

400 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

« M. Pasteur reconnaît que son deuxième vaccin peut, quand il est ino-
culé d'emblée, faire succomber les animaux dans la proportion de 50 0/0 :
il s'ensuit que les vétérinaires courent des risques réels qui seraient évités
avec le vaccin Chauveau.

« 6° Le vaccin obtenu à l’aide de l'oxygène comprimé n'occasionnant
pas chez les bovidés et les équidés les œdèmes qu’on constate trop souvent
à la suite de Ia vaccination Pastorienne, il y a lieu de provoquer des expé-
riences sur le cheval, car si elles réussissaient, elles permettraient de recou-
rir à l'emploi de ce vaccin de préférence à celui de M. Pasteur qui est
l'objet d’une certaine méfiance, parce qu'il détermine assez souvent des
œædèmes considérables qui sont parfois suivis de mort.

€ 7° Le vaccin Chauveau, quand il s’agit de pratiquer une vaccination de
nécessité sur un troupeau envahi par le sang de rate, offre le précieux
avantage d'investir les animaux d'une immunité complè{e, 12 à 15 jours
plus tôt que le vaccin Pasteur. En effet, avec ce dernier vaccin, l'immunité
ne peut être considérée comme complète que 12 ou 15 jours après la
deuxième vaccination.

«8° Les doses de virus Chauveau ont été trop fortes, il y a lieu de ne
pas s'écarter de la dose d'une goutte pour le mouton, et de deux à
quatre gouttes pour les bœufs et les chevaux. »

S'il est de règle absolue que les conclusions à tirer d'expériences ne
doivent rien contenir qui ne découle rigoureusement des expériences elles-
mêmes, il faut convenir que la plupart des citations que nous venons de
faire ne devraient pas porter le titre de conclusions, mais bien celui de
réflexions. La conclusion 2, par exemple, exprime le regret que les agri-
culteurs soient privés du vaccin pastorien pendant deux mois et demi de
l'année; elle ne ressort pas nécessairement des expériences qui précèdent.
Il en est de même du second paragraphe de la conclusion 5 sur la morta-
lité que pourrait causer l'emploi direct du second vaccin Pasteur, emploi
que personne n'a proposé. La conclusion 6 a trait à la vaccination chez les
bovidés et les équidés; or, aucune des expériences, qui font l’objet du
rapport de M. Rossignol, n’a été faite sur les bœufs ou sur les chevaux.
Cette conclusion 6 et la conclusion 7 visent des expériences à faire, et
énumèrent les précieux avantages d'un vaccin non encore essayé, elles
devraient porter le titre de propositions. On est surpris, après l'exposé
des expériences que vient de faire M. Rossignol, de lire dans ses conclusions
des paragraphes entiers sur les risques et les inconvénients de la vaccina-
tion pastorienne, ils ne semblent pas être à leur place, et l'on se demande
ce que serait le rapport du vétérinaire de Melun, si les résultats de cette
comparaison de vaccins étaient inverses de ce qu'ils ont été?

D'ailleurs plusieurs des assertions contenues dans le document que nous
analysons sont inexactes : Ainsi, nous y lisons (p. 129) que le virus vaccin
Chauveau « se conserve à peu près intact pendant plusieurs mois, chose que
l'on ne peut obtenir avec le vaccin Pasteur, dont la durée de conservalion est
absolument éphémère ». La durée de conservation des vaccins préparés par
les méthodes de MM. Pasteur, Chamberland et Roux est si peu éphémère
que les semences employées à la préparation des virus, qui sont livrés

REVUES ET ANALYSES. 401

journellement à l’agriculture, datent de plus de quatre ans. Ces semences
sont envoyées à l'étranger, jusque dans l'Amérique du Sud et dans l'Inde, où
elles servent, après plusieurs mois, à préparer des cultures parfaitement
efficaces. Si nous relevons ici cette expression de conservation éphémère,
ce n'est pas seulement pour montrer qu'elle est inexacte, mais pour exposer
ce qu'il serait exact de mettre à sa place.

Il serait exact de dire que les résultats sont moins réguliers et moins
coastants, quand on inocule « directement » les vaccins conservés qui ne
contiennent plus que des spores anciennes. En effet, lorsqu'on introduit ces
vieilles spores sous la peau d'un grand nombre d'animaux, plusieurs d’entre
eux n'acquièrent pas l’immunité, et le nombre de ceux-ci est d'autant plus
grand que le virus inoculé était plus ancien. Cependant, la virulence de ces
spores n'a point sensiblement changé en quelques mois, il suffit de les
rajeunir par la culture pour obtenir un vaccin efficace et constant dans ses
effets. Les vieilles spores germent plus lentement que les spores récentes;
introduites sous la peau des animaux, elles sont, en grand nombre, digérées
sur place ou croissent trop lentement pour surmonter la résistance des
cellules de l'animal, donner une culture suffisante, et conférer l’immunité.
Les cultures récentes de ces spores, renfermant un grand nombre de bacilles
jeunes, tout prêts à pulluler, vaccinent, au contraire, d’une façon constante
et efficace. Telle est la véritable interprétation de cette diminution appa-
rente de la virulence des vaccins charbonneux conservés pendant quelques
mois. Ces modifications ne sont pas particulières aux vaccins charbonneux,
elles se produisent chez les germes de tous les microbes connus, plus rapi-
dement sans doute, pour les virus atténués que pour le virus virulent, mais
absolument chez celui-ci comme chez ceux-là.

Les spores du vaccin préparé à l'oxygène comprimé seraient à l'abri de
ces variations, de sorte que, anciennes ou récentes, elles donneraient des
résultats sûrs et fidèles. IL faut avouer que cette qualité, inconnue aux
autres germes, ferait la véritable originalité du nouveau vaccin charbonneux.
Bien plus, les germes de ce vaccin, loin de subir cette influence du temps
qui rend les autres germes plus lents dans leur croissance, et les fait
paraître moins actifs, « récupèrent après le deuxième mois une certaine
activité, el ce retour à la virulence peut occasionner des accidents. » C'est
là véritablement un fait bien remarquable que ce retour à la virulence chez
des spores conservées inertes. Ce fait est pour nous absolument inattendu,
et nous n'en connaissons aucun autre en microbiologie qui puisse en être
rapproché. À quel moment précis s’opère ce retour à la virulence? Est-ce
toujours après le deuxième mois? Ne survient-il jamais après un mois ou
six semaines? Ce vaccin étant destiné à être conservé en provision, les
questions que nous venons de poser sont aussi importantes pour le vétéri-
naire qu'il serait intéressant pour le microbiologiste de savoir dans quelles
conditions s'opère ce retour spontané à la virulence,

Nous n'avons aucune expérience particulière du vaccin charbonneux
préparé à l'oxygène comprimé, et par conséquent nous n'avons jamais été à
même de constater cette récupération d'une certaine activité après le
deuxième mois; cependant nous allons proposer une explication de ce sin-

402 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

gulier phénomène, auquel est attribuée la mort de deux des vaccinés des
expériences de Melun. Les spores, qui composent ce vaccin, bien qu'atténuées,
auraient des virulentes diverses (ce qui se comprend d’après le mode de
préparation du vaccin); à mesure qu'elles vieillissent, elles perdent, comme
outes les spores, de leur facilité à germer. Gette modification se manifeste
d'abord chez les plus atténuées, et n’atteint que plus tard celles qui sont
plus actives. Après l'inoculation, ces dernières pullulent, alors que les pre-
mières n’ont pas encore végété ; de là ce retour de virulence qui peut
occasionner des accidents.

On conçoit que s’il en est ainsi, il ne suffira pas, comme le propose
M. Rossignol dans sa 8° conclusion, de diminuer la dose du virus inoculé, et
de n’en donner qu'une goutte aux moutons, et deux à quatre gouttes aux
bœufs et aux chevaux. Si le virus n’est pas homogène, il y aura toujours
des animaux qui recevront des spores trop virulentes. Dans tous les cas, la
nécessité de doser le vaccin d’une facon aussi précise doit faire réfléchir.
Un oubli, dans le maniement du curseur de la seringue à injection, peut
devenir grave; et d’ailleurs croit-on que les agents actifs soient si également
répartis dans un virus, que toutes les gouttes en contiennent le même
nombre, et aient la même valeur?

M. Rossignol semble croire que les procédés, employés au laboratoire
de M. Pasteur, ne permettent pas d'obtenir des virus capables de donner
l’immunité en une seule fois. Dans leurs premières expériences de
laboratoire, qui sont le fondement de la vaccination contre le charbon,
MM. Pasteur, Chamberland et Roux n’employaient qu'un seul virus.
L'emploi de deux vaccins, de virulence graduée, a été un perfectionnement
apporté à la méthode primitive en vue de l’inoculation des troupeaux sur
une grande échelle, Pour conférer aux animaux une immunité solide, il
faut leur inoculer un virus assez actif. Or la réceptivité pour le charbon est
très variable chez les sujets d'une même espèce animale, les uns supportent,
sans en souffrir, l'injection d'un virüs qui rend les autres très malades, et
même amène la mort de quelques-uns. C’est pour parer aux accidents que
pourrait causer cette différence dans la réceptivité des animaux, que l’on a
imaginé l'emploi sucecessif de deux vaccins. Il est évident que si l’on voulait
obtenir une vaccination d'emblée, par une seule inoculation, on n’emploie-
rait pas le deuxième vaccin ordinaire, qui ne doit être donné qu'après le
premier; on se servirait d'un vaccin doué d’une virulence intermédiaire
entre celle du premier et celle du deuxième vaccin charbonneux de la
pratique courante.

Du reste, la démonstration publique, que l’on peut conférer l'immunité
par une seule inceculation, a élé faite par MM. Chamberland et Roux, dès
l’année 1881, à Fresnes, près Pithiviers (Loiret). Dix moutons qui n'avaient
reçu qu'une seule inoculation de second vaccin, sans en souffrir, résistèrent
très bien à l’inoculation du virus virulent. Plus tard, en février 1882, dans
une expérience faite à l'École vétérinaire de Toulouse par MM. Baillet,
Peuch et Labat, avec des vaccins préparés au laboratoire de M. Pasteur,
deux brebis, qui n'avaient recu qu'une inoculation de deuxième vaccin,
supportèrent l’inoculation d'épreuve, aussi bien que neuf autres bêtes ovines

INSTITUT PASTEUR. 403

vaccinées trois fois préventivement. Enfin, dans une expérience faite à la
ferme de la Faisanderie, sur le troupeau de l'Ecole d’Alfort, 75 moutons
reçurent, le 2 juin 1882, une seule inoculation d'un premier vaccin, en
présence de MM. Bouley, Goubeaux, Nocard, et d’un grand nombre d'élèves
de l'Ecole d’Alfort. Neuf mois après cette vaccination, sur 12 de ces mou-
tons qui furent inoculés avec du virus virulent, 41 résistèrenttf,

Les nouvelles expériences que viennent de faire la Société d'agriculture
de Seine-et-Marne et la Société de médecine vétérinaire pratique n'ont
évidemment pas l'émouvant intérêt de celles de Pouilly-le-Port, faites
en 1881; elles sont néanmoins importantes, parce qu'elles témoignent que
les agriculteurs apprécient si bien les résultats de la vaccination préventive
du charbon qu'ils cherchent à se rendre compte de la valeur des perfec-
tionnements que l’on propose aux méthodes actuelles. Il est certain
que ce serait un progrès de substituer, aux deux inoculations courantes,
l'inoculation d’un seul vaccin efficace et inoffensif, en même temps que
capable de se conserver pendant des mois sans altération. Dans ces essais,
il ne faut pas oublier qu'autre chose est de vacciner vingt moutons dans une
expérience ou de vacciner suivant les besoins de l’agriculture des centaines
de milliers d'animaux de tous les âges, de races et de réceptivités diverses.
C'est cette grande pratique qui est la véritable épreuve des vaccins
charbonneux.

Le rapport de M. Rossignol n’est qu'un rapport préliminaire, des expé-
riences nouvelles vont être entreprises avec un virus âgé d’un mois seule-
ment, parce que « la virulence est atténuée d'une façon précise et invariable
dans les deux premiers mois qui suivent la fabrication du vaccin préparé
à l'oxygène comprimé ». Nous rendrons compte dans ces Annules des résul-
tats qui seront obtenus; nous avons cru que ceux qui sont déjà consignés
dans ce rapport préliminaire étaient assez intéressants pour être présentés
à nos lecteurs, avec les commentaires que comportent quelques-unes des

assertions qui les accompagnent.
Roux et CHAMBERLAND.

En —

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES A L'INSTITUT
PASTEUR DU 1° AU 30 ruIN 1888.

Personnes traitées mortes de rage.

Oun (Eugène), 36 ans, charcutier à Paris. Mordu le 23 avril,
par son chien, à la main droite sur la face dorsale. Deux mor-
sures dont une profonde qui a bien saigné. Au pouce droit
7 morsures ayant saigné. Deux sont très profondes. Les plaies
sont cautérisées à l'alcool et à l’eau phéniquée chez un pharma-
cien, une demi-heure après la morsure. Le 26 avril, les plaies
sont encore béantes, sans aucune trace d’eschares.

1. CaameerLaxo, Clarbon et vaccination charbonneuse, p. 261

404 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Le chien mordeur a été reconnu enragé par M. Bourrel,
vétérinaire, qui l’a vu vivant. Ce chien avait été mordu quelques
semaines avant par un chien reconnu enragé et qui appartenait
à un voisin.

Olin a été traité du 26 avril au 12 mai. Il a éprouvé des douleurs
très vives dans le bras droit à la fin de mai; pris de rage le
1% juin ; mort le 17 juin à la Maison municipale de santé.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — JUIN 1888
A B C
Morsures à la tête ( simples ..... TE | 3 SPelbns
et à la figure (multiples. #|ca12210 6 NE A
Cautérisations efficaces. ........... LR Pan en LI RAS » | 4! » l'>
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orsures aux mains : 5
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Morsures aux mem-{ simples......| »| 4} 9! ? EE, 3® | 2110
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Cautérisations efficaces... .......... 27 ne 2 a VPN DE RE RE AE APTE NE
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Morsures multiples en divers points
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Totaux. | < (23 99 22
(MEÉTANTETS ere 10\ 6\ 1 0\
A B C
—_—— CE me
TOTAL GÉNÉRAL LL RS dur 46e EAS

4. La colonne A comprend les personnes mordues par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement ; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; La colonne C les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Q 12 r
Les animaux mordeurs ont été :

Chiens, 132 fois; chats, 15 fois ; cheval, 1 fois.
Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

9me ANNÉE. AOÛT 1888. N8

ANNALES

D

L'INSTITUT PASTEUR

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON
CONFÉRÉE PAR DES SUBSTANCES CHIMIQUES,

Par MM. ROUX et CHAMBERLAND.

I

Quelque temps après que M. Pasteur eut fait connaître qu’il
est possible de donner aux poules l’immunité contre la maladie
appelée choléra des poules", M. Toussaint publia son procédé de
« vaccination du charbon’ ». La matière vaccinale employée par
M. Toussaint était le sang d’un animal qui vient de succomber
à la fièvre charbonneuse. Ce sang était maintenu pendant dix
minutes, à la température de 55° qui, d’aprèsl'auteur, tuait toutes
les bactéridies qu'il renferme. Il suffisait ensuite d’injecter 3 à
6 centimètres cubes de ce sang chauffé sous la peau des mou-
tons, pour que, 12 jours après l'injection, ces animaux aient
acquis l’immunité contre le charbon.

Pour donner l’immunité contre le choléra des poules, M. Pas-
teur inocule aux volailles le microbe même du choléra modifié
dans sa virulence, mais vivant et capable de pulluler dans le corps
des animaux et dans les bouillons de culture. Ce virus atténué
est une variété du virus fort, variété qui peut se perpétuer avec
ses qualités nouvelles. Dans son procédé de vaccination du char-

1. Avril 14880, Bulletin Acad, de méd.

9, Août 1880, Bulletin Acad. de méd.
26

406 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

bon, M. Toussaint, au contraire, s'efforce de n'’injecter aucun
microbe vivant, il tâche de débarrasser le sang charbonneux des
bactéridies, afin d'employer seules les substances chimiques con-
tenues dans le sang et telles que les bacilles du charbon les ont
préparées. A côté de la vaccination par virus atténués, M. Tous-
saint essayait done d'établir la vaccination par produits chimi-
ques.

L'idée que l’état réfractaire à une maladie est dû à une mo-
dification chimique produite dans le corps par le développement
du virus de cette maladie, avait déjà été formulée dans la science.
Mais ce n'était là qu’une vue de l’esprit, et la nature des change-
ments chimiques accomplis dans l’être qui a acquis l'immunité
restait tout à fait mystérieuse. L'expérience de M. Toussaint,
telle qu’il la présentait, montrait que l’immunité peut être pro-
duite, en dehors de l’action directe des microbes vivants, par
l'introduction dans le corps de substances chimiques élaborées
par 6es mêmes microbes, cause de la maladie virulente. Elle
paraissait donner un point d'appui solide à une théorie de l’immu-
nité qui jusqu'alors ne reposait que sur des hypothèses ; aussi elle
souleva une vive émotion dans le monde scientifique.

On sait comment l'interprétation que M. Toussaint donnait
à son expérience fut contredite. Il fut démontré que le chauf-
fage à 55°, pendant dix minutes, ne tuait pas toutes les bactéridies
du sang charbonneux. Celles qui avaient résisté, modifiées dans
leur vitalité, ne tuaient plus les animaux auxquels on les inocu-
lait mais leur conféraient l’immunité à la manière d’un virus
atténué‘. L'expérience de M. Toussaint n’avait donc pas la portée

4. Voir Comptes rendus, Acad. des sciences, MM. Pasteur, Chamberland et Roux,
mars 14881. D'ailleurs, le procédé de M. Toussaint était loin de donner des résul-
tats constants; son auteur met en garde les expérimentateurs contre la difficulté
qu'il y a de préparer ce vaccin. Des accidents survenaient assez fréquemment.
Après l’inoculation du vaccin, soi-disant privé de bactéridies, il arrivait que des
animaux succombaient au charbon typique. M. Toussaint expliquait ces accidents,
qui montraient cependant la véritable interprétation à donner à son expérience,
en supposant que dans le cadavre de l'animal la bactéridie peut donner des spores
si on attend trop longtemps pour recueillir le sang après la mort. Or, il ne se
forme jamais de spores dans l’intérieur des vaisseaux d'un animal qui a succombé
au charbon parce qu’il n’y a pas d'oxygène libre. C'est cette erreur sur la formation
des spores qui a empêché M. Toussaint de reconnaître la vérité, et probablement
de modifier les conditions de son expérience de façon à atteindre le but qu'il pour-

suivait.

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 407

qu'illuiavaitattribuéeet sa vaccination du charbon, parsubstances
chimiques, n’était plus qu'une vaccination par microbes modi-
fiés *.

En répétant les expériences de M. Toussaint sur le sang
charbonneux chauffé, nous avons eu l’occasion de faire plusieurs
observations qui nous ont convaincu qu'il était possible, cepen-
dant, de conférer aux moutons l’immunité contre le charbon, en
leur injectant sous la peau du sang charbonneux dépourvu de
bactéridies vivantes. Nous rapporterons ici une de nos expé-
riences qui remonte au mois de novembre 1881 :

ExPÉRIENCE — Le 16 novembre 1881, on recueille avec pureté, dans des
tubes à deux effilures de {x de diamètre intérieur, du sang d’un mouton
qui vient de succomber au charbon. Chaque tube contient environ 15 cen-
timètres cubes de sang et n’est rempli qu’au tiers. On plonge ces tubes dans
un grand bain d'eau exactement réglé à 55° 1/2, on les retire les uns après
5 minutes, les autres après 10, 15, 18, 20, 21, 95, 30 et 40 minutes de chauf-
fage. On les met ensuite à l’étuve à 30 degrés en les inclinant, de facon que
le sang s'étale sur la paroi, en petite épaisseur; il est ainsi largement au
contact de l'air, et, s’il reste quelques bactéridies vivantes après le chauffage,
elles pourront pulluler.

Le 19 novembre, on fait une prise de sang, dans chacun des tubes, pour
l’ensemencer dans du bouillon et l’'examiner au microscope. Dans tous les
tubes, excepté dans celui chauffé pendant 40 minutes, les bactéridies étaient
restées vivantes et donnèrent de belles cultures; ce qui montrait combien
le chauffage pendant dix minutes, proposé par M. Toussaint, était insuffisant
pour tuer tous les bacilles du sang charbonneux.

Afin d'être bien assurés qu'il n'y avait aucun miecrobe vivant dans le
tube de sang chauffé à 55° 1/2 pendant quarante minutes, nous l'avons
laissé à l’étuve jusqu'au 23 novembre. A cette date l'examen microscopique
ne montra aucun développement et l’ensemencement d’une quantité notable
de ce sang dans du bouillon ne donna aucune culture.

Les bactéridies étaient donc bien mortes dans ce sang chauffé. Le 98 no-
vembre, après un nouvel examen microscopique, et un nouvel ensemence-
ment qui est resté stérile, on injecte ce sang à deux moutons, sous la peau,
à la dose de trois centimètres cubes pour chacun. La température de ces
animaux est prise régulièrement les jours suivants sans qu'on remarque
aucune fièvre. Le 13 décembre, on inocule à un de ces moutons une culture
virulente de charbon. Il a une forte élévation de la température le 14 et le
15 décembre. Puis il revient à la santé. Le 16 décembre, le second mouton

4. Voir Comptes rendus, Académie des sciences. M. Chauveau a repris les expé-
riences de M. Toussaint et indiqué les conditions de chauffage nécessaire pour pré-
parer, avec le sang charbonneux, un vaccin du charbon plus constant que celui de
M. Toussaint.

408 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

est inoculé, avec du sang de cobaye mort du charbon, en même temps qu'un
mouton neuf. Soixante heures après, le mouton témoin a suecombé au char-
bon, le mouton qui a reçu du sang chauffé éprouve une forte fièvre le 17 et
le 48 décembre; les jours suivants il redevient bien portant.

Dans cette expérience on a pris toutes les précautions pour
s'assurer que les bactéries étaient tuées et qu'aucun organisme
vivant n’était contenu dans le sang injecté. Après 12 jours de
séjour à l’étuve, l'examen microscopique n'y a montré aucun
bacille du charbon en voie de développement, et tous les ense-
mencements sont restés stériles. On est donc autorisé à conclure
qu'il ya dans le sang d’un animal mort du charbon des sub-
stances chimiques capables de donner l’immunité aux moutons
auxquelles on les injecte en quantité suffisantes.

Dans le cours de ces expériences avec le sang chauffé, nous
avons reconnu que les matières vaccinales du sang charbonneux
sont altérées à la température à laquelle on le soumet pour tuer
les bactéridies, et cela d’autant plus que la chaleur est plus élevée
et plus longtemps prolongée. De sorte que l’on est enfermé
entre deux difficultés: ou l’on détruit sûrement la bactéridie et
les matières qui l’accompagnent sont atteintes du même coup, ou
bien on conserve à celles-ci leur activité et l’on n’a plus la certi-
tude d’avoir fait périr tous les microbes ? C’est évidemment pour
altérer aussi peu que possible la composition du sang charbon-
neux que M. Toussaint se contentait de le chauffer à une
température de 55° pendant un temps très court. Nous savons
maintenant que, dans ces conditions, le résultat que l’on se pro-
pose n’est pas atteint, il reste des baccilles vivants. Mais, d'autre
part, du sang charbonneux chauffé, pendant 10 minutes, à 100°
et 115°, a presque perdu ses propriétés vaccinales, ainsi que le
montrent les expériences suivantes :

EXPÉRIENCE. 1. — On met à macérer pendant 3 heures, dans la moitié de
son poids d’eau distillée, 200 gr. de pulpe de rate d'un mouton charbonneux,
on ajoute à cette macération 200 gr. de sang charbonneux et le tout est
porté lentement à l'ébullition et jeté sur un filtre de papier buvard. On
chauffe à 115° le liquide qui vient de filtrer : il se produit à cette tempé-
rature un abondant précipité que l’on délaye par agitation, et on injecte
80c de ce liquide trouble dans le tissu cellulaire sous-cutané d’un mouton,
en deux fois, à deux jours d'intervalle. Quatre à six heures après l'injection,
on note une élévation de température de 4°.

Dix jours après, ce mouton est inoculé avec 1/5 de centimètre cube de

SUR L’IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 409

culture récente de charbon virulent en même temps qu'un mouton témoin,
Ils meurent tous deux du charbon, le mouton témoin après 42 heures,
l’autre mouton après 48 heures.

EXPÉRIENCE Il. — Avec la rate d'un mouton, qui vient de succomber au
charbon quatre jours après avoir été inoculé avec du second vaccin char-
bonneux, on prépare, comme il vient d’être dit dansl'expérience précédente,
un liquide chauffé à 115°, et que l’on injecte sous la peau des aisselles de
deux moutons. L'un recoit 22cc, l’autre 11e, La rate qui a servi dans cette
expérience contenait des quantités prodigieuses de bactéridies.

Douze jours après, ces deux moutons sont inoculés avec du charbon
virulent à la face interne de la cuisse droite. On inocule, de la même façon
avec le même virus, deux moutons neufs. Quarante-huit heures après on
trouve morts les deux témoins. Le mouton qui a reçu 22e de liquide chauffé
meurt 96 heures après l’inoculation, et celui qui a recu 11% est très
malade pendant trois jours, puis se rétablit.

Dans l'expérience suivante on chauffe le sang charbonneux
et la macération de rate à 100°, on jette le coagulum sur un filtre,
et on injecte ce liquide filtré, dans la veine du jarret, à des mou-
tons qui peuvent recevoir ainsi des quantités de liquide beaucoup
plus considérables que sous la peau.

\
ExPÉRIENCE II. — Dans la veine du jarret droit de deux moutons, on
injecte 200 et 220°° du liquide préparé comme nous venons de le dire, et
correspondant à 195 et à 137 grammes de sang et de pulpe de rate pures,

Température Température après l'injection.
AU MOMENT | ——
de lPinjection.| 4 h. | 2h. 19! h:122 "h.

Mouton n°1I.
200cc ï 1,6141,3140,6
Mouton n° II.
990cc à ë 1,2,41,5/41,5

40 heures après l'injection, la température des 2 moutons est normale.

Un mouton (n° I) recoit dans une veine le liquide obtenu en chauffant à
100° du sang charbonneux additionné de son volume d’eau, puis en recueil-
lant le liquide qui s'écoule du filtre sur lequel on a jeté le coagulum. On
fait une première injection de 480 de ce liquide dans la veine du jarret
droit, puis une seconde de 120ce dans la veine du jarret gauche, deux jours
après, soit 300% en deux fois. Trois heures après chaque opération, on note une
élévation de 4° dans la température, que l’on suit pendant six heures; le len-
demain la température est normale.

Enfin, on fait pénétrer dans les veines d’un mouton (n° IV) 200°° d'un

410 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

liquide préparé de la même façon, mais avec du sang et des rates de mou-
tons sains.

| Température Température après Pinjection.
au moment
de l’injection.| 9 h. | 5 h. | 8 h. |10 h.|12 h.|26 h.

Mouton n° IV

200cc 40,0 |40,6/40,3140,0/10, 0/40,0139, 7
(sang et rate sains.)

Lorsqu'on injecte le liquide obtenu, par décoction, de rate et de sang
de mouton sain, on ne constate plus l'élévation. de température que nous
ayons relevée lorsqu'on emploie les rates et le sang charbonneux.

Sept jours après ces injections intraveineuses, on inocule ces 4 moutons
à la cuisse droite avec du charbon virulent, en même temps que deux mou-
tons neufs. Ces deux derniers sont trouvés morts du charbon 39 heures
après. Le mouton n° I (200€) meurt après 38 heures; le mouton n° IT (2206)
après 56 heures, la mouton n° HI (300) après 54 heures. Le mouton n° IV
(rate saine) a succombé aussi promptement que les moutons neufs.

On voit donc qu'avec la rate et le sang charbonneux chauftés
à 100° et 115° on n'obtient pas de résultats suffisamment nets. Les
moutons qui ont reçu les décoctions charbonneuses ont vécu
plus longtemps que les témoins, après l’inoculation virulente ?,
mais il ont tous succombé au charbon, excepté dans un cas. Les
propriétés vaccinales du sang charbonneux sont donc très altérées
dans ces conditions, et il n’est pas possible d’avoir recours aux
températures élevées qui, stérilisent à coup sûr et qui, précisé-
ment parce qu’elles sont plus que suffisantes, donneraient à la
démonstration de la vaccination par subtances chimiques une
parfaite rigueur.

Il faut donc employer une chaleur moins forte, capable de
tuer la bactéridie et cependant pas trop désorganisatrice pour
les subtances vaccinales; c’est-à-dire qu'il faut rester entre 55° et
58°. Dans le sang chauffé à cette température, les bacilles du
charbon ne périssent pas tous en même temps; la plupart
meurent dans les premiers instants du chauffage, mais quelques-
uns résistent beaucoup plus longtemps. Certaines portions ne
4. Dans le cas de l'Exp. IT, la rate qui a été employée venait d’un animal qui avait
vécu 4 jours après l’inoculation du second vaccin; elle était particulièrement

chargée de bactéridies, et peut-être à cause de la longueur de la maladie contenait-
elle davantage de matières actives.

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. A1

contiendront aucune bactéridie vivante après 20 minutes de
séjour à 55°, tandis que d’autres en renfermeront qui ne seront
pas mortes après une heure et plus. Il est donc toujours difficile
de savoir si iln’ya plus rien de vivant dans le sang ainsi chauffé.
Dans une expérience, du sang charbonneux chauffé au bain d’eau
à 55°, pendant une heure etdemie, dans des tubes de 1 centimètre
de diamètre intérieur, fut ensemencé dans 10 flacons de bouillon
à la dose de un centimètre cube par flacon, et injecté sous la
peau de trois moutons à celle de 50 centimètres cubes par
animal; les moutons restèrent bien portants et les bouillons
ne se peuplèrent pas. Mais un lapin, qui avaitreçu en 4 injections
sous-cutanées 16 centimètres cubes du même sang, mourut le sep-
tüème jour et mourut du charbon; ce qui prouve qu'après une
heure et demie de chauffage, ily avait encore des bacilles vivants.
Is étaient très rares sans doute et d'autant plus difficiles à mettre
en évidence. En effet, l’inoculation, même en grande quantité,
de ce sang chauffé, est insuffisante à montrer qu'il est stérile : les
microbes encore vivants, s'il en contient, sont en si petit nombre
et si modifiés par la chaleur qu’ils pourront ne pas donner la
mort aux animaux. Les ensemencements nous renseigneront plus
sûrement si ils sont faits avec de très grandes quantités de sang,
mais quelque multipliés qu'on les suppose, on peut toujours avoir
le soupçon que c’est précisément dans les portions de sang non
semées, dans celles qui ont été injectées aux animaux que se
trouvait la bactéridie, peut-être unique, mais encore vivante,
qui va vicier l'interprétation de l'expérience. Tels sont, pour le
cas qui nous occupe, les inconvénients de l'emploi des tempéra-
tures trop peu élevées ; on ne saurait trop les exagérer quand il
s’agit d'établir une question de doctrine, qui doit être fondée
sur des expériences si nettes qu'il n’est pas besoin d'en com-
menter ou d’en interpréter les résultats.

D'autres procédés que le chauffage peuvent être mis en œuvre
pour tuer la bactéridie dans un sang charbonneux sans altérer
trop les substances qui l’accompagnent. Le bacille du charbon
meurt à la longue dans le sang conservé à l'abri de l’air, car non
seulement il ne pullule pas dans ces conditions, mais il ne forme
pas de spores et se désagrège en granulations privées de vie.
Faisons donc pénétrer à travers la paroi du cœur d’un mouton
qui vient de succomber au charbon, un tube de verre stérilisé

412 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

et étiré à ses deux extrémités, et aspirons le sang dans ce tube
de façon qu'il s'élève jusque dans l’effilure supérieure. Fermons
ensuite les deux extrémités du tube à la lampe, aussi près que
possible du niveau du liquide. Nous aurons ainsi, dans un tube
parfaitement clos, du sang charbonneux dans lequel la bactéridie
périra d'autant plus vite qu'elle sera exposée à une température :
plus élevée. Toute croissanceest, en effet, impossible pour elle,
elle est privée d'oxygène libre, et si dans la manœuvre que nous
venons de décrire un peu d'air s’est dissous dans le sang, il est
aussitôt absorbé par l’hémoglobine réduite et ensuite par la bac-
téridie elle-même. A une température inférieure à 47, la
vie se conserve dans ces tubes pendant plus d’un mois. L’exa-
men microscopique montre que les bâtonnets sont désagrégés
et cependant l’ensemencement fait voir qu’il y en a encore de
vivants. À une température plus haute, à 45° par exemple, la mort
des bacilles survient plus tôt, en une dizaine de jours environ ‘.

Avec ces procédés nous retombons dans les difficultés dont
nous parlions tout à l'heure. À quel moment toute vie est-elle
éteinte dans les tubes clos? Les bactéridies filamenteuses * ne
périssent pas toutes à la fois, quelques-unes vivent encore, alors
que toutes les autres ont succombé depuis longtemps, et voici
qu'avec les ensemencement et lesinoculations, nous retrouvons
toutes nos incertitudes précédentes. C'est pourquoi nous avons
pensé que des procédés où l’erreur peut être si facile ne conve-
naient guère pour établir la vaccination chimique. Nous avons
alors cherché une maladie autre que le charbon, qui permettrait
l'emploi des procédés brutaux de chauffage, et l'usage de ces
méthodes de stérilisation qui ont si bien fait leurs preuves qu'elles
sont la base de la préparation des milieux de culture employés
en microbiologie. C’est pour cette raison que la publication de
nos expériences sur la septicémie * a précédé celle des expérien-
ces contenues dans ce mémoire, bien que ces dernières soient
pour la plupart de beaucoup antérieures.

1. C’est ce procédé qui a été employé par M. Pasteur, pour donner l’immunité
aux lapins contre le charbon, en dehors de l'action des bactéridies vivantes. Ces
expériences, que M. Pasteur n’a pas pu rendre aussi complètes qu'il l’aurait désiré,

ont été entreprises en 1886 et publiées dans les Comptes rendus de l'Académie
des sciences du 30 janvier 4888.

2. Voir Annales de l'Institut Pasteur, août 1887 : Action de ta chaleur el de L'air
sur les spores de la bactéridie du charbon.

3. Annales de l'Institut Pasteur, décembre 1887.

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. A3

Il

Dans les expériences que nous allons exposer maintenant, le
sang était recueilli avec pureté dans le cœur d'un mouton qui
venait de succomber au charbon. Il était aspiré dans des tubes à
deux effilures, de façon que les branches de ceux-ci soient rem-
plies. Les tubes étaient aussitôt fermés à la lampe et plongés
entièrement dans un bain d’eau bien réglé à 58°. Le chauffage
avait donc lieu en présence d’une très petite quantité d'air pour
éviter l’action de l'oxygène sur les substances contenues dans
le sang charbonneux. Les tubes restaient ainsi une heure dans
le bain d’eau, puis ils étaient retirés et chauffés de vouveau pen-
dant une heure ; cette opération était répétée pendant cinq jours
consécutifs. La température de 58°, que nous avons employée
dans ces essais, tue plus rapidement la bactéridie que celle de
5950, sans cependant coaguler l’albumine du sang. Pour plus de
sûreté, nous avons pratiqué des chauffages successifs comme
pour la stérilisation du sérum destiné aux cultures.

Chaque fois qu'un tube était ouvert pour l'usage, nous ense-
mencions dans du bouillon une partie de son contenu, nous
semions ainsi 2 centimètres cubes sur 10 centimètres cubes
environ de sang employé. Le sang ainsi chauffé ne nous à
jamais donné de cultures. D'après ce que nous avons dit précé-
demment, les propriétés vaccinales du sang charbonneux traité
par des chauffages successifs à 58° sont affaiblies ; aussi avons-
nous été obligés, pour compenser cet affaiblissement, d'en injec-
ter beaucoup plus que nous l’avions fait dans nos premiers
essais. Îl est important que toutesles manipulations soient faites
avec autant de pureté que possible,carl’introduction d’un microbe
étranger dans le sang injecté, pourrait non seulement compro-
mettre la vie des animaux en expérience, mais aussi faire attri-
buer à l'injection de substances chimiques les effets de l’inocula-
tion d’un microbe. Pour préparer le liquide à injecter, on coupe
la partie supérieure des branches des tubes, on fait tomber le
caillot peu consistant sur un panier en toile métallique serrée,
placé sur un verre flambé, et on le dissocie avec une spatule de
platine. La spatule et le panier de toile métallique ont été préa-
lablement portés au rouge dans une flamme de gaz. Le liquide
qui s'écoule du caillot est injecté sous la peau au moyen d’un

414 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

trocart dont la canule n’est pas trop fine, afin d'éviter les obstruc-
tions ‘. Toutes les expériences qui suivent ont été faites sur des
moutons, parce que ces animaux, tout en prenant très facilement
le charbon, se vaccinent beaucoup plus aisément contre cette
maladie queles lapins. Après l'injection préservatrice, nous avons
éprouvé les animaux avec un virus très virulent, de façon qu'il
n'y ait point de doutes sur leur état réfractaire. Il est vrai qu’en
agissant ainsi nous nous exposions à ne pas mettre en évidence
une immunité légère, qui aurait pu leur ètre donnée, et qui enles
protégeant contre un virus moins fort, aurait cependant suffi à
montrer le sens des phénomènes. Nous avons préféré agir ainsi
pour avoir des résultats nets, et pourne pas être obligés d'employer
un grandnombre d'animaux, ce quiest toujours nécessaire lorsque
l'épreuve de l’immunité n’est pas assez sévère. L’inoculation
d’épreuve a toujours été pratiquée dans une région du corps
éloignée de celle où on avait fait les injections préservatrices, afin
que l’on ne puisse pas invoquer que le développement de la bac-
téridie virulente a été entravé par une modification locale des
tissus.

Les explications qui précèdent se rapportent à toutes les
expériences qui suivent.

Sang charbonneux chauffé à 58°; injections sous la peau.

EXPÉRIENCE. — Oninjecte, dans le tissu cellulaire sous-cutané des épaules
et du flanc de deux moutons, du sang charbonneux chauffé pendant 5 jours
(une heure chaque jonr) à 58. Un de ces moutons reçoit ainsi 90“, l'autre
70“ introduits en 6 injections pratiquées dans l’espace d’une semaine. Après
chaque injection, on note une élévation de température de 1° environ, qui ne
persiste pas plus de 24 heures.

Douze jours après, ces 2 moutons sont À valse sous la peau de la cuisse
droite avec 1/5 de centimètre cube d’une culture fraîche de charbon virulent,
enmême temps que deux moutons neufs. Ces derniers succombent au charbon
en 30 heures, les 2 moutons qui ont recu le sang chauffé ont une forte fièvre
pendant deux jours; le quatrième jour après l’inoculation, leur température
est devenue normale et ils restent bien portants dans la suite.

ExPÉRIENCE. — Neuf moutons reçoivent dans le tissu cellulaire sous-
cutané dusang charbonneux porté 4 fois à 58, pendant une heure chaque fois
és un jour d'intervalle. Le no 1 reçoit 8", Le n° 2, 16“, le n° 3, 42“, le n° 4

, le n°5, 80°, le n° 6, 80, le n° 7, 90, le n° 8, 100, le no 9, 104%. Après

1. Ce liquide contient les cadavres des bactéridies qui jouent peut-être un rôle
comme substance chimique.

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 415

la première injection, qui a été de 8" pour le premier mouton et de 46e pour
tous les autres, on note une élévation de température qui varie selon les
animaux de 4° à 40,5. Cette élévation de température se renouvelle à chaque
injection, mais elle n'est que passagère et dès le lendemain la température
redevient normale. Lorsque les injections sont faites avec soin, il n’y a que
très peu de réaction locale dans les points où elles sont pratiquées; il se
produit un petit œdème qui s'indure et disparaît les jours suivants.

Onze jours après la deraière injection, on inocule tous ces moutons avec
une culture récente de charbon virulent, en même temps que deux moutons
neufs et un mouton auquel on a injecté, sous la peau, 80 de sang de mou-
ton sain chauffé à 58°, en même temps que le sang charbonneux.

Les moutons neufs ontsuccombé en 32 et 34 heures, le mouton qui a recu
le sang sain meurt en 36 heures. Parmi les moutons auxquels on a fait les
injections préservatrices, deux sont morts, le no 2 et le n° 3. Le n° 2 qui
avait recu 16° de sang chauffé a péri entre la 30€ et la 36° heure qui a suivi
l'inoculation. Le n° 3 qui avait recu 32° est mort entre la 52% et la
60° heure. Tous les autres ont résisté, après avoir été malades pendant
2 jours et éprouvé une très forte fièvre.

Nous nous bornerons à citer ces deux expériences : toutes
celles que nous pourrions ajouter donnent ce même résultat, à
savoir que les moutons qui ont reçu du sang charbonneux chauffé
à 58° dans le tissu cellulaire, en quantité suffisante, résistent à
linoculation du charbon virulent. Il est à remarquer qu’à
l'épreuve, ces moutons, mème ceux qui avaient reçu les plus
fortes doses, ont été très malades et que l’immunité qui leur
est conférée parles injections de sang chauffé paraît moins solide
que celle qui leur est donnée par l’inoculation successive des deux
vaccins charbonneux. Les quantités de sang chauffé nécessaires
pour donner une résistance suffisante aux animaux sont très
variables, puisque nous voyons dans cette expérience qu’un mou-
ton qui n'avait reçu que 8° a survécu, tandis que d’autres sont
morts qui avait reçu 16% et 32%. Ces différences tiennent sans
doute aux résistances individuelles des divers animaux, mais on
peut dire que les moutons se montrent d'autant plus réfractaires
qu'on à introduit dans leur corps plus de sang charbonneux
chauffé. Il est probable aussi que tous les sang charbonneux
n'ont pas la même activité, car les conditions de la culture de la
bactéridie ne sauraient être les mêmes chez tous les animaux.
Quelle est la durée de l’immunité ainsi conférée? Est-elle compa-
rable à celle que donne aux bêtes ovines la vaccination charbon-
neuse telle qu’elle se fait dans la pratique? Nous n’avons pas

416 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

d'expériences suffisantes pour résoudre celte question, nous
citerons simplement l'observation suivante :

Expérience. — Le 16 novembre 1881, on chauffe à 55° pendant 15, 35 et
30 minutes du sang charbonneux que l’on conserve ensuile à la glacière
jusqu'au 28 novembre. Le jour même, on puise dans chacun de ces échan-
tillons 9“ de sang que l’on injecte à 3 moutons à la dose de 3° par animal.
On ajoute du bouillon au sang qui reste dans les tubes, et on les mel à l'é-
tuve, Ils y restent jusqu’au 16 décembre sans donner de culture. On les a
examinés au microscope sans voir de développement, et une partie de
leur contenu a été semée plusieurs fois sans succès. 11 semble donc certain
que toutes les bactéridies ont été tuées dans ce sang.

Le 13 décembre, on inocule avec du charbon virulent un mouton de
chacun deces lots: durantles 4 jours qui suivent, ils ont une forte fièvre, mais
aucun d'eux ne succombe.

Le 16 décembre, on inocule avec du sang d’un cobaye mort du charbon
un second mouton de chacun des 3 lots en même temps qu’un mouton neuf;
ce dernier meurt dans la nuit du 47 décembre. Le 17, le 18, le 19, le 20,
le 21 décembre, les trois moutons ont une forte fièvre, mais ils se rétablis-
sent les jours suivants.

Il reste encore un mouton dans chacun des trois lots. Ces animaux sont
inoculés le 22 décembre avec du sang d'un cobaye charbonneux, en même
temps que 6 moutons neufs. Le 24 décembre au matin,les 6 moutons témoins
sont trouvés morts, ainsi que deux des moutons qui ont reçu le sang chauffé.
Le 3° est très malade. Mais il se guérit dans la suite.

Cette expérience montre que 14 jours après l'injection du sang
chauffé, les moutons résistent au charbon virulent ; que 17 jours
après, ils survivent aussi à l’inoculation d’épreuve; mais que
celle-ci les rend très malades ; qu’enfin après 24 jours un seul
mouton sur 3 est encore réfractaire au charbon. Cette faible
durée de l’immunité est une preuve nouvelle qu'il n’y avait pas
de bactéridies vivantes dans le sang injecté, car une immunité
due à la culture de bactéridies modifiées dans le corps des animaux
aurait été plus durable. Les doses de sang chauffé employées
dans cette expérience sont très faibles, elles se sont cependant
montrées actives parce que le sang n'avait été chauffé qu’une fois
à Siet qu'il n'avaitpas été altéré par une température plusieurs
fois répétée de 580.

Injections du sang chauffé dans les veines des moutons. — Au
lieu d’injecter en plusieurs fois du sang charbonneux chauffé,
sous la peau des moutons, nous en avons introduit en une seule
fois de grandes quantités dans les veines. Pour éviter les embolies,

SUR L’'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 17

le sang était soigneusement passé sur une loile de batiste fine
stérilisée à l’autoctave. L'injection était poussée lentement dans
une veine du jarret ‘.

EXPÉRIENCE. — On injecte dans la veine du jarret droit de 3 moutons
(4, 2, 3) du sang charbonneux chauffé 4 fois à 580, Le n° 4 reçoit 80cc; le
no 2, 92e le n° 3, S0ce, Après l'opération, on ne remarque aucun essouffle-
ment ; les températures prises plusieurs fois dans la journée sont inscrites
dans le tableau suivant

Température Température après lPinjection.
AU MOMENT |
de l'injection.| 3 h. 6 h. 9h: 20 h.

Mouton n° I.

80° 40,0 OS SEM SA OT
Mouton n° IL.
99° 40,3 40,3 | 41,3 | 41,0 | 39,8

Température Température après l'injection.
au moment
de linjection.| { h.

Mouton ne III.
S0ce 40,1 40,0!40, 6/41 3/42

0] 9

Un mouton neuf recoit dans la veine du jarret droit 90: de sang d’un
mouton sain, ce sang à été chauffé comme le sang charbonneux.

Température Température après Pinjection.
au moment —_———_— — —
de Pinjection.| 3 h. 6 h. 9 h. 2%

Mouton n° IV.
90cc 40,0 40,0 40,5 40,5 40,3
(sang sain.)

Ces 4 moutons sont inoculés, 8 jours après l'injection intraveineuse, avec
une culture récente de charbon virulent.

1. M. Chauveau a injecté dans les veines des moutons pour leur donner
l'immunité de grandes quantités de sang charbonneux défibriné, privé de bacté-
ridies par le chauffage. Il ne faut pas, dit-il, compter sur ce moyen parce que
« les traitements que le sang infectieux doit subir agissent peut-être non seule-
ment sur Ja vitalité des bacilles, mais encore sur les propriétés du poison soluble,
qu'on a quelques raisons de croire très altérable. (Chauveau, Revue scientifique,
1885, t. II, page 358.)

A18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Le mouton n° TJ à une forte fièvre pendant trois jours, puis il se rétablit.
Le mouton n° II meurt 96 h. après l’inoculation.

Le mouton n° IT meurt 69 h. après l’inoculation.

Le mouton n° IV meurt 50 h. après l’inoculation.

Les deux moutons neufs avaient succombé en 48 heures.

Il faut d'abord noter, dans cette expérience, que de grandes
quantités de saug charbonneux sans bactéridies vivantes,
peuvent être introduites dans les veines sans produire les phé-
nomènes toxiques immédiats que M. Chauveau a signalés à la
suite d’injections de sang charbonneux non chauffé dans la circu-
lation des moutons réfractaires’, Le seul symptôme qui suit
ces injections de sang chauffé, c’est une élévation de la tempéra-
ture quine s’est pas produite avec le sang d’un animal sain. Pour
ce qui est de l’immunité conférée par ces injections, on voit
qu'elle est très faible. Les moutons qui ont reçu le sang charbon-
neux ont résisté plus longtemps que les témoins et que celui qui
avait reçu le sang sain; l’un d'eux a même survécu. Mais ils se
sont montrés bien moins résistants que les animaux de nos
expériences précédentes, auxquels on avait donné les mêmes
doses de sang chauffé sous la peau au lieu de les verser direc-
tement dans les veines. Les substances vaccinales sont sans doute
détruites en partie par l'oxydation ou éliminées par les reins? ou
par une autre voie. Il n’est donc pas indifférent de les injecter
sous la peau ou de les meitre d'emblée dans la circulation san-
guine.

Filtration dusang charbonneux. — Dans les essais qu'il a faits
pour séparer les bactéridies du charbon de la partie liquide
du sang charbonneux, M. Toussaint a eu recours à là filtration
sur plusieurs doubles de papier buvard. Ce procédé est très
imparfait, il laisse passer la bactéridie, et ne peut donner, comme
Toussaint l’a reconnu lui-même, aucun résultat précis. Nous
avons essayé de filtrer du sang charbonneux sur la porcelaine,
qui retient sûrement toutes les particules en suspension dans le
sang. La filtration de ce sang visqueux est longue, mais en
ayant soin d'opérer à basse température on peut recueillir des
quantités considérables de liquide avant quele sang charbonneux

1. Chauveau, Comptes rendus Académie des sciences. t. IX, p. 680, 1880.
2. Bouchard, Comptes rendus Académie des sciences, 4 juin 1888.

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 419

ait pu s’altérer. Nous ne rapporterons pas ces essais en détail
parce que l'injection de ce sang filtré n’a pas donné l’immunité
aux moutons qui l'on recue et aussi parce que l'injection a été faite
seulement dans les veines, ce qui, d’après ce que nous venons de
dire, est une condition défavorable.

La facon dont les substances vaccinales du sang charbon-
neux se comportent à la chaleur et à la filtration sur porcelaine,
nous à fait penser qu'elles étaient peut-être de nature diatasique
et nous avons essayé de les isoler par précipitation par l'alcool
et redissolution dans l’eau. M. Gamaleïa, en traitant la rate
d'animaux charbonneux par de l'alcool fort, puis en épuisant le
coagulum par l’eau, a obtenu un liquide qui cause aux lapins
auxquels on l'injecte dans les veines une fort fièvre ( V.
Annales de l'Institut Pasteur, mai 1888), maisil n’a pas recherché
si les animaux qui avaient reçu cette substance extraite des rates
charbonneuses avaient acquis l’immunité pour le charbon.

EXPÉRIENCE. — On réduit en pulpe des rates charbonneuses et on fait
tomber cette pulpe dans trois fois son poids d’alcool à 95, de façon qu'il
n'y ait pas de projection sur les parois du vase, et que toutes les bactéridies
soient tuées par leur contact avec l'alcool fort. On laisse la pulpe de rate en
contact avec l'alcool pendant 4 jours. Puis on jette le coagulum sur un
filtre, on le dessèche rapidement dans le vide, et on épuise par l’eau stéri-
lisée le résidu sec. On obtient ainsi un liquide alealin, un peu louche, qui
précipite par l'alcool et par l'acide nitrique.

65 grammes de rate sèche ont été épuisées par 128c° de liquide qui est in-
jecté sous la peau des flancs de deux moutons, chacun recoit 32° une pre-
mière fois et deux jours après 32 nouveaux centimètres cubes,

Température Température après la 1°° injection.
au moment
|de la 1°° injection.

Mouton n° I.
g2ce + 39cc

Mouton n° IT. |
32ce + 39cc |

1. M. Arloing a étudié récemment une substance phlogogène formée par
un microbe dans les bouillons de culture, cette substance ne passe pas à travers le
filtre de porcelaine, elle se comporte comme une diastase, elle perd ses propriétés
phlogogènes à 88, et est précipitée de ses solutions aqueuses par l'alcool.

420 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

A un mouton n° IT on injecte de même en deux fois 64 de liquide qui
ont servi à épuiser 38 grammes de rate saine, sèche et traitée en tout
comme les rates charbonneuses.

Température Température après la {r° injection.
au moment
de la {re injection.

Mouton n° III.
39cc + 32cc
(Rate saine).

L'elévation de la température a été aussi forte chez ce mouton témoin
que chez les moutons I et IL.

Sept jours après la seconde injection, on inocule ces trois moutons avec
4/5 de centimètre cube de culture de charbon virulent.

Le mouton n° IITet le témoin sont morts après 43 heures; le mouton
n° II après 44 heures et le mouton n° I après 50 heures.

Pour savoir si les substances actives ne seraient pas restées en solution
dans l'alcool qui a servi à coaguler la pulpe des rates charbonneuses, on l'é-
vapore par distillation dans le vide. On dissout le résidu sec, complètement
cristallisé, dans un peu d’eau. La solution n’est pas complète, il y a des ma-
tières grasses qui sont en suspension dans le liquide; on injecte ce liquide
trouble à un mouton sous la peau.

L'alcool qui a servi à coaguler les rates saines est distillé de la même
manière, le résidu se comporte comme celui des rates charbonneuses, ilne
se dissout pas entièrement, il est injecté sous la peau d'un second mouton.

Dix jours après, ces deux moutons sont inoculés a la face interne de la
cuisse droite, avec du sang d'un lapin charbonneux, en même temps qu’un
mouton neuf, Ces trois moutons ont succombé entre la 48e et la 52° heure
après l'inoculation.

La conclusion de toutes les expériences que nous venons de
rapporter sera que le charbon ne se prête pas facilement à une
démonstration décisive et éclatante de la vaccination par subs-
tances chimiques. Les matières vaccinales que contiennent la
rate et le sang charbonneux sont trop altérables par la chaleur
et les réactifs ; aussi on comprendra qu'après tous ces essais,
nous avons cherché en dehors du charbon une maladie pour
laquelle la preuve de la vaccination chimique soit plus facile à
donner. Nous l’avons trouvée dans la septicémie expérimentale,
qui ne présente pas les difficultés que nous avons rencontrées
pour le charbon. Cependant, des expériences que nous avons
faites, 1l se dégage la preuve que l’on peut donner l’immunité
contre. le charbon avec du sang charbonneux privé de bac-

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 421

téridies vivantes. C’est le procédé de chauffage, proposé par
M. Toussaint, qui donne les meilleurs résultats. Il a suffi de
modifier la méthode mème de M. Toussaint pour donner cette
démonstration qui lui a échappé, mais dont il convient cepen-
dant de lui rapporter en grande‘partie l'honneur.

Ces substances vaccinales que l’on trouve dans le sang des
moutons charbonneux se forment-elles dans les cultures artifi-
cielles de bactéridies? D’après ce que nous savons maintenant
sur l’altérabilité de ces substances, il est clair qu'il ne sera pas
facile de les mettre en évidence dans les milieux où la bactéridie
du charbon donne des spores. Pour se débarrasser des germes, il
faut avoir recours à des agents qui détruiront les matières dont
on veut prouver l'existence. D'ailleurs, le milieu que le bacille
du charbon trouve dans un animal vivant est si différent de
celui que lui offrent nos liquides de culture qu'il n’est pas étonnant
que les produits qu'il forme ne soient pas les mêmesdans les deux
cas. Pour n'insister que sur un point, rappelons ce qui se passe
quand on cultive la bactéridie dans le bouillon et dans le sérum.
Comme l’a montré récemment M. Perdrix (Annales de l'Institut
Pasteur, juillet 1888), la matière azotée est oxydée par la bacté-
ridie qui en forme de l’ammoniaque ; dans ces conditions de
culture à l'air libre on comprend que le procès chimique soit
bien différent de ce qu'il est dans le sang où le bacille du charbon
ne trouve que de l'oxygène combiné aux globules ; aussi ne se
produit-il plus dans le sang ces combustions profondes de la
matière azotée que M. Perdrix a signalées dans les cultures. Nous
pensons pourtant qu'il n’est pas impossible de réaliser, en dehors
de l'organisme, des conditions de culture dans lesquelles la bac-
téridie élaborera des produits chimiques semblables à ceux qu’elle
fabrique dans le corps des animaux.

L’exposé de nos expériences sur le sang charbonneux privé
de bacilles vivants, nous amène à parler de celles que M. Chau-
veau a publiées il y a longtemps ‘ et qu’il regarde comme tout à
fait démonsiratives de la vaccination par produits chimiques.
Récemment M. Chauveau est revenu sur ce sujet. Dans une
note à l'Académie des sciences?, il déclare que, dans notre

1. Comptes rendus Acad. des Sc., 19 juillet 4880.
2. Comptes rendus Acad. des’ Sc., février 1888. Annales de l’Institut Pasteur,
fevrier 4888.
27

422 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

mémoire sur la Septicémie ‘, nous avons méconnu le caractère
de ses propres travaux, quard nous avons écrit qu'il avait sou-
tenu cette opinion parce qu'elle rend mieux compte des faits.

Depuis 1879, M. Chauveau s’est occupé des substances qui
sont contenues dans le sang charbonneux; il a montré d’abord
que l'injection de sang charbonneux dans les veines de moutons
réfractaires leur cause un malaise très grave en même temps
que très fugitif. Pour lui, ces troubles physiologiques sont dus
au poison soluble que renferme ce sang ?. M. Chauveau a fait
voir ensuile que les agneaux qui naissent des brebis inoculées
du sang de rate dans les derniers mois de leur gestation, sont
réfractaires au charbon. « Le placenta, dit-il, arrête les bacilles
contenus dans le sang maternel; comme le ferait un filtre il n’y
a que les matières solubles du sang qui puissent le traverser. »
C'est donc à l’action de celles-ci qu'est due l’immunité dont les
agneaux sont doués à leur naissance. M. Chauveau estime que
ces expériences constituent une démonstration directe, absolu-
ment probante. Cependant, même en admettant comme cer-
_tains qu'aucune bactéridie ne passe aux fœtus, les échanges qui
s'accomplissent entre ceux-ci et leurs mères ne sont pas si simples
que l'expérience de M. Chauveau ne puisse avoir plusieurs inter-
prétalions. On pourrait soutenir, par exemple, que le fœtus est
vacciné, parce qu'il est passé de son corps dans celui de la mère,
des substances nécessaires à la vie de la bactéridie, et qui ont
été consommées par elle. On peut donc tirer, de l'expérience
sur les agneaux, un argument en faveur de la théorie de l’épuise-
ment aussi bien qu’en faveur de la théorie de la substance ajoutée;
à elle seule elle n’est donc pas démonstrative.

A cette objection de principe s’ajoute une objection de fait
qui a été apportée par les travaux de MM. Straus et Chamber-
land sur le passage de la bactéridie de la mère au fœtus. Ces
expérimentateurs ont établi, contrairement à l'opinion de Brauel
et de Davaine, que le bacille du charbon passe de la mère
cobaye à ses petits. Leurs observations ont été confirmées de-
puis sur les lapines, par M. Malvoz *; on a même cité des cas de

4. Annales de l'Institut Pasteur, déc. 1887.

2, Dans le n° de juillet 4888 de la Revue de médecine, M. Bouchard dit que « dans
cette expérience la complexité des phénomènes est trop grande, qu'on ne peut
apprécier les effets vraiment imputables à la matière toxique puisqu'elle n'a pas
été isolée de son cortège immense d'agents infectieux. » Leçon sur la virulence.

3, Annales de l'institut Pasteur, mars 1888.

SUR L’'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 423

passage du charbon de la mère à l’enfant, dans l'espèce humaine.
M. Chauveau ne conteste pas les résultats de MM. Straus et
Chamberland et iln'amoindrit pas la valeur de l'objection qu’on
peut en tirer contre ses expériences. Mais il soutient que l'on ne
saurait conclure ce qui se passe chez la brebis de ce qu’on observe
sur la cobaye et la lapine.

Toute la valeur de l'expérience de M. Chauveau étant dans
l'absence de passage du bacille du charbon de la brebis à son
fœtus, 1l faut que ce non-passage soit absolument démontré.
Chez le mouton le sang de rate donne lieu à des hémorragies
capillaires dans l’intestin, le péritoine et les reins; le placenta
serait-il seul à l'abri de ces ruptures vasculaires? Non, car
M. Chauveau nous fait connaître que sur onze fœtus de brebis
charbonneuses qu'il a examinés, deux contenaient des bacilles
du charbon. Il n'y a donc pas impossibilité absolue au passage
de la bactéridie à travers le placenta de la brebis. L'expérience
ne donnant pas une preuve sans réplique, M. Chauveau,
pour établir ce qu’il soutient, fait le calcul suivant : Sur qua-
rante agneaux nés de mères inoculées pendant la gestation,
quarante se sont montrés réfractaires au charbon; sur onze
fœtus de brebis mortes du charbon, deux seulement contenaient
des bactéridies ; donc sur les quarante agneaux, sept au plus,
« c’est-à-dire moins du cinquième, ont été exposés à êlre péné-
trés par les bacilles venant de la mère ».

L'appareil mathématique de ce raisonnement ne le rend
pas, croyons-nous, beaucoup plus rigoureux. En effet, la con-
clusion n’est bonne qu'autant que les moyens employés pour
déceler la bactéridie dans le fœtus, donnent la certitude absolue
qu’elle n’y était que deux fois sur onze. Pour cette recherche,
M. Chauveau s’est borné à inoculer un centimètre cube de sang
fœtal pris dans le cœur. Comme M. Malvoz l’a fait remarquer,
ce n’est pas dans le sang du cœur qu'il faut chercher les bacté-
ridies, mais dans le foie qui reçoit le sang placentaire, ainsi que
l'ont fait MM. Straus et Chamberland.

Les bacilles qui peuventpasser, à la fin dela vie dela mère, dans
les vaisseaux du fœtus, s'arrêtent dans les capillaires des organes :
et n’ont pas le temps d'y pulluler parce que la mort survient

1. Voyez Wyssokowitsch (R. Koch’s u, Flugge’s Zeitschrift f, hygiene, 1886,
Bd I).

424 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

bientôt ‘. Il ne faut donc pas s'étonner de ne pas trouver, chez
ces agneaux, le gonflement de la rate et l'abondance des bactéri-
dies. Celles-ci ne peuvent qu'être rares et difficiles à mettre en
évidence *. Nous dirons même qu'il est impossible, dans ces
conditions, de dire qu'un fœtus ne contient aucune bactéridie
charbonneuse. Il faudrait en effet l’avoir ensemencé tout entier
pour avancer une pareille affirmation. On aura beau multiplier
les ensemencements, on pourra toujours soupconner que la
bactéridie cherchée est justement dans les portions non semées.
Une expérience qui laisse ainsi des doutes dans l'esprit ne peut
servir à établir définitivement une doctrine. C’est ce que semble
reconnaitre M. Chauveau, lorsqu’après avoir rapporté ses expé-
riences, il écrit: « Il est probable, sinon absolument certain,
que l’immunité a été créée chez tous ces agneaux sans qu'un
seul bacille de la mère ait pénétré dans le sang d'aucun d’eux *. »

Nous sommes d'accord avec M. Chauveau dès qu'il ne parle
plus de preuve définitive. Ses expériences, sans donner la
démonstration de l'idée dont il s’est fait le champion, ont
puissamment contribué à la répandre ; c’est ce que nous ne pen-
sions pas avoir méconnu en écrivant que M. Chauveau a sou-
tenu l'opinion de la vaccination par produits chimiques « parce
qu'elle rend mieux compte des faits ».

Dans cette même note àl'Académie dessciences, M. Chauveau
s'étonne que dans notre mémoire sur la septicémie, nous
n’ayons pas signalé le travail qu'il a fait sur cette maladie en
commun avec M. Arloing. MM. Chauveau et Arloing sont en
effet les premiers qui aient donné l’immunité contre la septi-
mie (qu'ils appellent gangrène gazeuse), par des virus vi-
vants. Ils ont aussi montré que le liquide septique débarrassé
des microbes vivants ne causait pas l'infection : « I] ne nous a
manqué, ajoute M. Chauveau, que de rechercher si les sujets

4. Il ne faut pas oublier que M. Chauveau a annoncé que l'immunité pouvait
être conféré par de très petites quantités d'éléments virulents, il ne faut donc pas
négliger l'action de quelques bacilles erratiques.

2. Lorsqu'on se borne à inoculer ou à ensemencer le sang du cœur ou des par=
celles du foie de fœtus pris sur des lapines qui viennent de succomber au charbon,
on trouve que la bactéridie passe très rarement au fœtus. Il n'en est plus de même
quand on inocule ou qu'on ensemence le foie presque tout entier. Dans des expé-
riences faites sur 17 fœtus de lapines, en utilisant presque tonte la masse du foie
de chacun d'eux, on a vu que fois il y avait des bacilles dans cette organe.

8. Annales de l'Institut Pasteur, 25 février 1888.

SUR L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 425

ainsi inoculés élaient devenus réfractaires à l’action du vibrion
lui-même. » Ce qui a manqué au travail de MM. Chauveau et
Arloing est justement le sujet du nôtre.

L'idée de l’immunité, due à des produits chimiques élaborés
par des microbes, est déjà ancienne dans la science. Nous la
trouvons exprimée avec une netteté parfaite dans la note de
M. Pasteur sur le choléra des poules. « On peut, dit M. Pasteur,
se rendre compte des faits de non récidive en admettant que la
vie du microbe, au lieu d'enlever ou de détruire certaines mu-
tières dans le corps des animaux, en ajoute, au contraire, qui
seraient pour ce microbe un obstacle à son développement. Les
excrélions nées d’un fonctionnement vital peuvent s'opposer à
un fonctionnement vital de même nature. »

C’est au mois d'avril 1880 que M. Pasteur écrivait ces lignes.
La même année, en juillet 1880, M. Chauveau faisait connaître
l'influence de l’inoculation de la mère sur la réceptivité du fœtus
et se prononçait en faveur de la seconde hypothèse émise par
M. Pasteur. Le mois suivant, M. Toussaint publiait sa méthode
de vaccination du charbon.

M. Pasteur, que ses expériences sur le choléra des poules
avaient conduit à adopter la théorie de l'épuisement, revint à
celle de la substance ajoutée dans ses travaux sur la rage en 1885.
Depuis, cette question de l’immunité par produits chimiques
était à l'étude dans tous les laboratoires, chacun s’efforçait de
trouver la démonstration définitive qui manquait. On sait quels
travaux ont été publiés sur ce sujet depuis 1886, par Salmon,
Woolridge, Beumer, Charrin, Chantemesse et Widal. Nous
pensons, qu’en prouvant quel’on peut donner, avec des substances
solubles, l’immunité contre la septicémie aux cobayes qui sont
si sensibles à cette maladie, nous avons écarté toutes les objec-

tions que l’on pouvait encore faire aux travaux qui ont précédé
le nôtre.

RECHERCHES MICROBIOLOGIQUES
SUR L'UTÉRUS APRÈS LA PARTURITION PHYSIOLOGIQUE

Par MM. I. STRAUS er D. SANCHEZ-TOLEDO !.

J. — Nous savons aujourd'hui que la plupart des infections
puerpérales sont d’origine micro-parasitaire et reconnaissent
comme porte d'entrée les voies génitales et surtout l'utérus : il
y a donc un intérêt réel à rechercher, à l’aide des méthodes
d'investigation actuelles, dans quelle mesure, après l’accou-
chement physiologique, des micro-organismes, pathogènes ou
non, peuvent se rencontrer dans la cavité utérine.

Les recherches précises instiluées dans cette direction sont
encore très peu nombreuses.

Presque tous ceux qui, en vue d’élucider l’éliologie de l’infec-
tion puerpérale, ont étudié les lochies des femmes en couches
{Scherer, Mayerhofer, Rokitansky, Kehrer, Karewski) recueil-
laient les lochies à l'ouverture vulvaire ou dans le vagin, c’est-
à-dire alors que le liquide avait eu le temps d’être contaminé
par les nombreux microbes qui, à l’état normal, existent dans le
vagin; aussi la plupart d’entre eux arrivèrent-ils à cette conclu-
sion que les lochies, chez les femmes saines aussi bien que chez
la femme atteinte d'infection puerpérale, renferment des micro-
organismes, et que l'injection de ces lochies sous la peau ou dans
le sang des animaux provoque des accidents septicémiques.

M. Pasteur * fut le premier qui examina les lochies des
femmes en couches et trouva que celles des femmes saines
sontexemples de microbes tandis que celles des femmes malades
en pullulent.

1. Les principaux résultats de nos recherches ont été communiqués dans une
note à la Société de Biologie le 14 avril et à l’Académie des sciences le 16 avril
1888.

2. Cité par Doleris : Essai sur la pathogénie et la thérapeutique des accidents
infecheux des suiles de couches. (Thèse, Paris, 1880, p. 95.)

RECHERCHES SUR L'UTÉRUS APRÈS LE PART. 427

M. Doléris, dans sa remarquable Thèse inaugurale, a pratiqué
l'examen bactériologique d'un grand nombre d’accouchées
saines ou atteintes de fièvre; mais les lochies étaient puisées
dans le vagin et non dans l'utérus; elles étaient recueillies sur des
femmes soumises toutes, dans un but prophylactique ou théra-
peutique, à des injections désinfectantes. Ces recherches, quelque
instruclives qu'elles soient au point de vue de la pathologie où
s’est presque exclusivement placé M. Doléris, ne peuvent pas
beaucoup servir à l’élucidation du problème physiologique qui
est visé dans ce travail.

Dans un récent mémoire, M. Düderlein : s’est attaché à éviter
ces causes d'erreur. A l’aide d’une pipette stérilisée introduite à
travers un spéculum dans la cavité du col utérin, il a recueilli
avec pureté les lochies, utérines chez les femmes en couches. II
constata que ces lochies chez les accouchées saines (exemptes de
fièvre) ne contiennent pas demicro-organismesetqu’elles peuvent
être injectées impunément sous la peau ou dans les veines des
lapins. Les lochies vaginales, au contraire, chez les accouchées
saines, contiennent de nombreux microbes dont l'injection aux
animaux est suivie d'effet pathogène. Chez les accouchées
atteintes de fièvre, les lochies wtérines renferment toujours des
germes, notamment le séreptococcus pyogenes, et leur inoculation
aux animaux est suivie d'effet pathogène.

Il. — Aôsence de germes dans la cavité utérine des rongeurs
après la parturition. — Nous avons pensé qu'il y avait intérêt
à faire des recherches de cette nature chez les femelles des ani-
maux après le part. L'examen bactériologique de la muqueuse
utérine peul ainsi être pratiqué bien plus commodément et plus
sûrement que chez la femme, les animaux pouvant être sacrifiés
à un moment quelconque après la mise bas, et les produits de
sécrétion à examiner pouvant être prélevés in situ dans l'utérus
et les cornes.

Nos recherches ont porté sur dix femelles (lapines, femelles
de cobayes, de souris et de rats); les animaux étaient sacrifiés
dans un espace de temps après la mise bas variant entre trois

1. Untersuchungen ueber das Vorkommen von Spallpilzen in den Lochien der Uterus
und der Vagina gesunder und kranker Wæchnerinnen (Archiv für Gynaekologie, Bd.
XXXI, p. 419, 4887).

428 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

heures et trois jours. Immédiatement après la mort, le vagin,
l'utérus et les cornes étaient ouverts avec toutes les précautions
voulues pour éviter l'introduction de germes étrangers.

Chez ces animaux, après l’expulsion du fœtus, l’utérus et les
cornes reviennent très rapidement sur eux mêmes ; la muqueuse
est d'un rouge foncé, vivement congestionnée et fortement
plissée; la cavité est remplie d’un liquide filant, muco-sangui-
nolent; ce caractère sanguinolent de l’exsudat se retrouve encore
trois jours après le part; à l'examen histologique, ce liquide se
montre constitué par des leucocytes, des globules rouges du sang
et quelques débris épithéliaux.

Cette sécrétion prélevée, soit dans les cornes, soit dans l’uté-
rus à différentes hauteurs, fut étalée à l’aide de l’anse du fil de
platine sur des lamelles à couvrir. Ces lamelles séchées, passées
à la flamme furent soumises à l’action de diverses solutions
aqueuses de couleurs d’aniline (violet de gentiane, bleu de
méthylène, fuchsine, etc.). Dans aucun cas nous n'y pümes
constater la présence de micro-organismes.

Nous eûmes soin aussi de détacher à l'aide du fil de platine
des parcelles de la muqueuse en divers points de l’utérus et des
cornes : ces parcelles furent étalées par frottement à la surface
de lamelles et colorées de la même façon : le résultat fut égale-
ment négatif.

Des parcelles de la sécrétion furent semées par piqûre dans
des tubes de gélatine droits, ou en traînée sur la surface de tubes
de gélatine inclinés ; d’autres furent ensemencées de la même
façon dans des tubes contenant du bouillon additionné de gé-
lose ; d’autres échantillons du produit de sécrétion furent semés
dans des tubes d'Esmarch; d’autres enfin furent ensemencés
dans du bouillon de veau alcalinisé. Les tubes et les ballons furent
maintenus, les uns à la température du laboratoire, les autres
à l'étuve à 37°. Chaque animal servit à faire une dizaine d’ense-
mencements. Sur plus de cent tubes et ballons ainsi obtenus,
six seulement donnèrent naissance à un développement d’orga-
nismes ; il s'agissait dans ces cas de bacilles et de microcoques
banals, tels qu'ils se rencontrent dans les cultures contaminées.
Il n’est pas douteux que les germes développés dans ces tubes
n’existaient pas dans le produit de sécrétion semé, mais ont été
introduits pendant les manipulations. Il est à remarquer, en effet,

RECHERCHES SUR L’UTÉRUS APRÈS LE PART. 429

que trois de ces tubes altérés provenaient des liquides puisés
dans l'utérus d’une souris, animal chez lequel la petitesse des
organes rend les opérations plus difficiles.

Enfin, des fragments d'utérus et des cornes utérines ont été
durcis par l'alcool absolu; les coupes, colorées par différentes
méthodes, ne révélèrent la présence d'aucune bactérie.

Voici le résumé de quelques-unes de nos expériences :

EXPÉRIENCE I. — Femelle de cobaye ayant mis bas un seul petit dans la
nuit du 4 mars 1888, sacrifiée le 5 à 5 heures du soir par piqûre du bulbe. Le
petit provenait de la corne droite; celle-ci présentait une longueur d'environ
6 centimètres et un diamètre transversal de 4 centimètre; la muqueuse est
fortement congestionnée et plissée ainsi que celle du col de l'utérus; la corne
droite et le corps de l'utérus sont remplis par un liquide rouge, muco-sangui-
nolent; la corne gauche (qui était vide) est cependant notablement augmen-
tée de volume, distendue par un liquide clair, filant, muqueux. On sème du
liquide remplissant les cornes et la cavité de l'utérus dans six tubes de géla-
tine, de gélose, et dans quatre ballons Pasteur contenant du bouillon de veau
neutralisé. Aucun de ces tubes et de ces ballons, placés les uns à la tempé-
rature ordinaire, les autres à l'étuve à 37°, et observés pendant plus de
trois semaines, ne donna naissance à une culture.

De nombreuses lamelles faites avec ce liquide et colorées par les diffé-
rentes couleurs basiques d’aniline ne révélèrent la présence d'aucun micro-
organisme. Le même résultat négatif est obtenu sur les coupes, colorées,
des cornes et de l'utérus.

* EXPÉRIENCE II. — Femelle de cobaye ayant mis bas dans la nuit du 41
au 12 mars, sacrifiée par piqûre du bulbe le 15 mars, à 4 heures du
soir. Les deux cornes utérines ont le diamètre d’une grosse plume d'oie,
et le corps ne présente plus qu’une cavité presque virtuelle. Les cornes
étaient remplies d’un liquide filant, d'apparence sanguinolente. On fait avec
ce liquide des ensemencements dans six tubes du gélatine, quatre tubes de gé-
lose et quatre ballons de bouillon. La gélatine de deux tubes est étalée à l’inté-
rieur de ces tubes à la manière d'Esmarch. Les tubes et les ballons mainte-
nus à la température du laboratoire ou à l’étuve à 37° pendant près d'un
mois ne donnèrent naissance à aucun développement.

Les essais de coloration sur lamelles et sur des coupes ne donnèrent
aussi que des résultats négatifs.

ExPÉRIENCE IV. — Lapine ayant mis bas six petits dans la nuit du 17 mars,
sacrifiée par piqûre du bulbe, le 49 mars à 3 heures du soir. Les deux
utérus présentent un diamètre d'environ un centimètre et demi; la mu-
queuse est d’un rouge hémorrhagique et la cavité renferme un liquide
fortement sanguinolent; ce liquide ainsi que des parcelles détachées àl’aide
de l’anse de platine à la surface de la muqueuse elle-même sont ensemencés
dans six tubes de gélatine, quatre tubes de gélose et quatre ballons Pas-

430 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

teur contenant du bouillon légèrement alcalin. Aucun développement d'or-
ganismes dans ces tubes et ces ballons, après un mois de séjour à la tem-
pérature du laboratoire ou à l'étuve à 370. à

Les tentatives de coloration sur lamelles et sur les coupes ne donnèrent
également aucun résultat.

ExPpÉRIENCE X. — Souris sacrifiée trois heures, après la mise bas. On
fait des ensemencements avec du liquide puisé dans les cornes et le corps
de l'utérus dans dix tubes de gélatine et de gélose et dans quatre ballons de
bouillon neutralisé; aucun développement dans ces tubes et ballons après
trois semaines de séjour à la température du laboratoire ou à l’étuve.

Le liquide contenu dans la cavité des cornes et des parcelles de Ia
muqueuse sont étalées par frottement sur des lamelles et colorées par les
diverses couleurs basiques d’aniline : on n’y constate aucun micro-organisme.
Même résultat négatif avec les (tentatives de coloration des coupes de l'utérus
et des cornes.

Les expériences qui précèdent permettent donc de conclure
que chez les animaux qui nous ont servi (lapines, femelles de
cobayes, de souris et de rats) les cornes utérines, l'utérus, ainsi
que la sécrétion qui y est contenue, ne renferment pas de micro-
organismes après la parturition.

Les microbes si nombreux et si variés qui existent dans les
premières voies génitales ne pénètrent donc pas à l’intérieur de
l'utérus ou, si quelques-uns y pénètrent, ils y sont rapidement
détruits ou éliminés ’.

4. Peu de temps après la communication de notre note, a paru un travail de
M. Winter : les micro-organismes du canal genital de la femme a l’état sain (Zeitsch. f.
Geburtshülfe und Gynælkologie, 1888, Heft IT, p. 443). Il a pratiqué l'examen bacté-
riologique de 40 trompes utérines normales enlevées dans des opérations d'ova-
riotomie ou de myomotomie. De ses recherches il conclut que «la trompe normale
dans toute son étendue ne renferme pas de micro-organismes ». Il a examiné de
même 30 utérus, obtenus en grande partie de la même façon, et il conclut de
même « que la cavité utérine normale ne contient pas de micro-organismes ».

En revanche « le produit de sécrétion du col utérin prélevé chez les femmes
bien portantes, à l'état de gestation ou non, contient toujours de nombreux micro-
organismes: toutefois ceux-ci sont plus abondants pendant la grossesse ».

En résumé, d'après ces recherches, le canal génital de la femme, à l'état phy-
siologique, contient des microbes dans le vagin et la cavité cervicale, tandis que
l'utérus et les trompes n’en contiennent pas. La limite supérieure où s’'arrétent
les bactéries correspond à peu près à l'orifice interne du col.

Parmi les microbes qui existent à l'état physiologique dans le canal génital
de la femme, il yen aurait, d'après M. Winter, de pathogènes (Staphylococcus pyo-
genes albus et aureus), sans parler de streptocoques dont la détermination plus
précise n’a pas été faite.

Ces résultats vont à l'encoutre de ceux obtenus par M. Gœnner, (Centralbl. fur

RECHERCHES SUR L'UTÉRUS APRÈS LE PART. 431

HT. — JZnnocuité de l'introduction de microbes pathogènes dans
la cavité utérine des rongeurs, après la parturition. — L'absence
complète de micro-organismes dans la cavité de l'utérus et des
cornes, à nimporte quel moment après le part, ayant été
établie par les recherches qui viennent d'être exposées, nous
fûmes conduits à instituer une autre série d'expériences. Si, à
divers moments après la parturition, on introduit systématique-
ment des microbes pathogènes dans l'intérieur de cette cavité,
quelles seront les suites de cette introduction ? Sera-t-il possible
de développer, chez les femelles soumises à ces expériences, des
états comparables aux accidents puerpéraux chez la femme? Ce
sont les résultats de ces expériences que nous allons exposer
maintenant.

Nos expériences ont porté sur des femelles de cobayes et des
lapines ayant mis bas, depuis un espace de temps variant entre
quelques instants seulement et trois jours.

Pour introduire les cultures virulentes dans les cornes uté-
rines, on procédait de la façon suivante. L'animal, couché sur le
dos, était solidement fixé sur la planchette ; puis on introduisait
dans le vagin, extrêmement long chez ces animaux, un tube de
verre de 1° de diamètre et de 10° de longueur environ, à la facon
d’un spéculum. A l’aide du petit miroir concave, percé d’un
trou dans son centre, dont se servent les oculistes pour éclairer le
fond de l'œil, on dirigeait un rayon lumineux sur le fond du
vagin, de facon à éclaire, l’orifice de l'utérus. Chez les femelles
de cobayes on arrive avec assez de facilité à introduire par cet
orifice une sonde de gomme élastique qui s'engage ensuite aussi
profondément que l’on veut dans une des cornes utérines.

Chez la lapine, à cause de l’obliquité d'insertion de l'utérus sur
le vagin, l'introduction de la sonde était beaucoup pluslaborieuse".

Gynaekologie 1887, n° 98), qui a pratiqué, sur des femmes enceintes bien portantes,
l'examen microbiologique du produit de sécrétion du canal cervical, et y a trouvé
des variétés nombreuses de microbes; mais aucun de ces microbes inoculés aux
animaux ne s'est montré pathogène, d'où M. Gœnner conclut qu'à l’état physiolo-
gique le canal génital de la femme en gestation n’héberge pas de microbes patho-
gènes, et que « les infections puerpérales ne sont pas des auto-infections ».

1. On sait que chez les lapines, il n’existe pas de corps de l'utérus et que les
deux cornes utérines s'ouvrent séparément, par des orifices distincts, au fond du
vagin. Il en résulte que tandis que chez les femelles de cobaye, nous étions abso-
lument sûrs de toujours pénétrer dans la cavité des cornes, cette certitude était =
beaucoup moins grande quand nous opérions chez la lapine, PC LU

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432 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

La sonde une fois introduite, on injectait une, deux et jusqu’à
trois seringues de Pravaz de la culture virulente. L’injection
faite, on s'assurait que le liquide ne refluait point dans le vagin.
Ce liquide trouvait toujours aisément à se loger dans la cavité de
la corne, ainsi que nous avons pu nous en assurer dans quelques
cas où la femelle (cobaye) fut sacrifiée dix minutes après l'in-
jection.

Il est inutile de dire que toutes ces opérations doivent être

faites avec beaucoup de précaution de façon à éviter les éraillures
de la muqueuse.

Voici le résumé de quelques-unes de nos expériences :

EXPÉRIENCE 1. — Femelle de cobaye ayant mis bas quatre petits dans la
nuit du 17 mars 1888. Le lendemain, à 3 heures, on injecte dans l'utérus
une seringue de Pravaz de culture de charbon virulent. Les jours suivants,
l'animal ne paraît rien ressentir et continue à allaiter ses petits; trois mois
après il vit encore.

Un cobaye témoin, inoculé sous la peau avec une goutte de la même
culture, meurt au bout de 36 heures du charbon type.

EXPÉRIENCE IL. — Cobaye ayant mis bas trois petits dans la nuit du
18 mars. Le 21, on lui injecte dans l'utérus une seringue de Pravaz de cul-
ture de staphylococcus pyogenes aureus : l'animal continue à allaiter ses petits
et ne présente rien d’anormal.

EXPÉRIENCE IL. — Cobaye ayant mis bas trois petits dans la matinée du
22 mars à 7 heures ; à 2 heures, on lui injecte dans l’utérus deux pleines
seringues de Pravaz d’une culture de charbon dans de la gélatine datant
de 12 jours et très riche en spores ; en même temps on injecte sous la peau
d'un des petits quelques gouttes de la mème culture : il meurt le lendemain
du charbon ; quant à la mète, elle n’a pas cessé de se bien porter.

ExpéRrexce IV. — Cobaye ayant mis bas quatre petits dans la matinée
du 28 mars; le soir à 4 heures on lui injecte dans l'utérus une seringue de
Pravaz de culture sur gélatine-glycose, faite dans le vide, de vibrion septi-
que (œdème malin) ; en même temps un cobaye recoit sous la peau quelques
gouttes de la même culture : il est trouvé mort le lendemain, présentant
toutes les lésions de la septicémie expérimentale aiguë de M. Pasteur;
Quant à la mère, elle ne manifeste pas le moindre trouble et peut servir
quelque temps après à d'autres expériences.

EXPÉRIENCE V. — Cobaye ayant mis bas quatre petits dans la matinée
du 2 avril; le soir à 2 heures, on lui injecte dans l'utérus une seringue de
Pravaz de culture virulente de charbon ; un cobaye témoin, inoculé sous la
peau, meurt le lendemain du charbon ; quant à la femelle, elle n’éprouva
aucun mal.

RECHERCIIES SUR L’UTÉRUS APRÈS LE PART. 433

EXPÉRIENCE VE. — Lapine ayant mis bas trois petits dans la nuit du
9 avril ; le 6 avril à 2 heures, on lui injecte dans l’une des cornes utérines
une seringue de Pravaz d'une culture du bacille du choléra des poules ; le
8 au matin, la lapine est trouvée morte et son sang est rempli du microbe
caractéristique.

EXPÉRIENCE VII. — Le 7 avril, à 2 heures, on injecte une seringue de Pra-
vaz d'une culture de choléra des poules dans l'utérus d’une lapine ayant
mis bas dans la matinée. Elle meurt le 9, à midi, avec le sang rempli du
microbe caractéristique.

ExpÉRIENCE VIII. — Le 9 avril, à 4 heures du soir, chez une lapineayant
mis bas la veille, on injecte dans une des cornes utérines frois seringues
de Pravaz d'une culture virulente de charbon dans du bouillon. On inocule
en même temps sous la peau un lapin témoin, qui succombe au charbon
deux jours après. La lapine va bien et continue à allaiter ses petits.

EXxPÉRIENCE IX. — Un cobaye, ayant mis bas deux petits dans la mati-
née, reçoit à { heure dans l'utérus deux seringues de Pravaz d’une culture
virulente de charbon. Cette injection n’est suivie d'aucun effet.

EXPÉRIENCE X. — Un cobaye ayant mis bas dans la matinée du 10 mai
reçoit, quatre heures après, dans l'utérus, une injection de deux seringues
de Pravaz du liquide obtenu de la façon suivante : un cobaye ayant suc-
combé une heure auparavant des suites de l’inoculation du vibrion septique,
on prélève chez lui des fragments des muscles abdominaux, très rouges et
infiltrés, et on les triture dans un mortier avec de l’eau distillée stérilisée ;
on filtre à travers un linge fin le liquide qui pullule de vibrions septiques.

L'animal n’éprouve aucun mal et continue à se bien porter.

Un cobaye témoin avait reçu sous la peau du ventre quelques gouttes du
même liquide ; huit heures après il était mort, présentant dans la sérosité
péritonéale et dans l’œdème des muscles du ventre le micro-organisme
caractéristique.

ExPÉRIENCE XVI. — Une lapine, ayant mis bas dans la nuit du 16 mai,
reçoit le 18 dans l’une des cornes utérines une seringue de Pravaz de sang
charbonneux provenant d’un cobaye, et dilué dans du bouillon, —
Cinq jours après, le 23 mai, la lapine est trouvée morte; à l’autopsie on
constate que l'animal est mort du charbon (sang du cœur plein de bacté-
ridies, rate grosse et noire, ete.). On dissèque aves soin les organes génitaux
et on s'assure que les deux utérus sont pâles, revenus sur eux-mêmes; leur
muqueuse présente son aspect normal; la muqueuse vaginale est égale-
ment saine, mais à la jonction de la vulve et du vagin, il existe une
tuméfaction avee œdème sanguinolent; le liquide de cet œdème est rempli
de bactéridies. — C’est sans doute à ce niveau que l'inoculation s'est faite.

ExpÉRIENCE XVIIT. — Une femelle de cobaye, ayant mis bas deux petits
dans la nuit du 9 juin, recoit le 40 juin à 4 heure dans l'utérus trois serin-
gues de Pravaz de culture pure, faite dans le vide, du Bacterium Chauvæi

434 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

(charbon symptomatique). L'animal n'éprouve aucun mal et continue à se
bien porter, tandis qu'un cobaye témoin, inoculé dans les muscles de la cuisse
avec quelques gouttes de la même culture, périt au bout de 48 heures avec
toutes les lésions du charbon symptomatique.

ExpéRIENCE XIX. — Une femelle de cobaye, immédiatement après la mise
bas de trois petits, vecoit dans l'utérus deux seringues de Pravaz d’une cul-
ture virulente de charbon. Elle n’en éprouve aucun mal et continue à bien
se porter.

Ces expériences, comme on le voit, conduisent à des données
très inattendues. Elles montrent que l’on peut impunément
introduire dans la cavité utérine des femelles de rongeurs qui
viennent de mettre bas des quantités énormes de microbes
éminemment pathogènes pour ces animaux (bacillus anthracis,
vibrion septique, bactérie du charbon symptomatique, staphylo-
coccus aureus) sans provoquer aucune infection.

Un seul micro-organisme a fait exception, celui du choléra
des poules ; mais on sait combien Île lapin est sensible à son action
et avec quelle facilité 1l s’infecte par toutes les voies naturelles,
par le tube digestif notamment.

Cette singulière résistance de la plaie utérine, après la par-
turition, chez les rongeurs, contraste avec la vulnérabilité si
grande à l'égard des microbes pathogènes, que présente cette
mème plaie utérine chez la femme en couches.

C'est dans les conditions anatomiques spéciales que présente
la muqueuse utérine des rongeurs au moment et après la partu-
rition, qu'il faut, croyons-nous, chercher l'explication de cette
résistance en apparence si paradoxale.

Nous avons pratiqué l'examen histologique des cornes
utérines de nombreuses femelles de cobayes et de lapines,
sacrifiées immédiatement ou peu d'heures après la mise bas, et
nous avons toujours été frappés de trouver la muqueuse revêtue
de son épithélium absolument normal, dans toute son étendue,
si ce n’est dans les points extrêmement circonscrits des inserlions
placentaires.

Les recherches embryologiques modernes, dues surtout à
Selenka et à M. Mathias-Duval, ont du reste établi les particu-
larités remarquables que présente, à ce point de vue, la muqueuse
utérine chez la femelle de cobaye.

RECHERCHES SUR L'UTÉRUS APRÈS LE PART. 135

M. le professeur Mathias-Duval a bien voulu nous commu-
niquer la note suivante qui résume sur cette matière les travaux
de Selenka et les siens propres, encore en partie inédits.

« La disposition de ce qu’on peut appeler caduque chez le
cochon d'Inde est toute particulière, et elle esttelle qu’à la fin de
la gestation toute la surface de la muqueuse utérine est complè-
tement restaurée, sauf le point très circonscrit où adhère le pla-
centa. À cette époque, en elfet, tout ce que l’on peut appeler
membrane caduque a disparu par résorption.

« Voici une indication sommaire de la façon dontse passentles
choses : quand l'œuf arrive dans la corne utérine,il se loge dans
une dépression circonscerite par une notable hypertrophie de la
muqueuse (chorivn de la muqueuse), et cela toujours sur un point
opposé à l'insertion des vaisseaux de la corne (bord méso-
métrique). Cette hypertrophie s’exagère et donne naissance à
une saillie considérable qui s’avance dans la cavité de la corne
(fig. 1, B) et va rejoindre la face opposée. A ce moment la portion

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Fig. 4. — Pour cette figure et les suivantes :

V, vaisseaux.

BM, bord mésométrique.

BN, bord non mésométrique.

En A, arrêt de l'ovule dans la corne et sa position dans une fossette à
l'opposé du bord mésométrique.

En B, développement de la muqueuse qui supporte l'œuf et va l’inclure.

hypertrophiée de muqueuse utérine qui renferme l’œuf en voie de
développement forme un septum (fig. 2, B) qui sépare complète-

436 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ment l’une de l’autre les deux portions de cavité utérine situées
au-dessous et au-dessus de Jui. Mais la continuité de la cavité de

Fig. 2. — De À en B, formation du septum.

la corne va se reproduire par un processus extrêmement remar-
quable et qui va nous expliquer le mode de restauration de la
muqueuse utérine à la fin de la gestation.

« En effet, la portion de la cloison sus-indiquée, largement
insérée à la face non meso-métrique (fig. 2, B), ne tarde pas à se
pédiculiser de plus en plus au niveau de cette face (fig. 3); il arrive

Fig. 3. — Rétablissement de la continuité de la cavité utérine du côté du
bord non mésométrique.

un moment où le pédicule se rompt (fig. 4) et à ce niveau
l’'épithélium se reforme, se continuant sur toute la face non méso-
métrique de la cavité de la corne.

« Dès ce moment la « formation utérine » qui renferme l'œuf

RECHERCHES SUR L’UTÉRUS APRÈS LE PART. 437

en voie de développement n’adhère plus à l'utérus que sur la
région méso-métrique ; il est facile de comprendre que cette for-

Fig. 4. — L'œuf et sa caduque n'adhèrent plus que sur le bord méso-métrique.

mation utérine correspond à ce qu'on appelle dans l'espèce
humaine la caduque réfléchie. Il est également facile de com-
prendre qu'à ce moment il n'existe rien de comparable à ce qu’on
appelle chez la femme la caduque utérine, ou caduque vraie. En
un mot, et c’est là le fait important pour le sujet traité dans ce
mémoire, la muqueuse utérine (chorion, épithélium, et glandes)
présente à ce moment(dès le 25° jour de la gestation) sa structure
normale, telle qu'elle existe à l’état de repos, dans toute son
étendue, sauf au niveau de l'insertion de la masse que nous avons
identifiée à la caduque réfléchie.

«Cette masse forme une sphère à parois épaisses qui renferme
l’œuf, et au niveau de son insertion se développe le placenta par
un processus que nous n’avons pas à étudier ici. Mais dès le
deuxième mois de la gestation l'œuf grandit considérablement;
en même temps les parois de la poche formée par la caduque
diminuent de plus en plus (fig. 5), si bien qu'à un moment donné
on netrouve plus autour de l’œuf aucune trace de cette caduque ;
elle a été résorbée.

« A ce moment l’œuf est à nu dans la cavité utérine (fig. 6), à
laquelle il adhère seulement par le pédicule étroit du placenta;
l'épithélium utérin arrive jusqu'au pourtour du pédicule, et
s'arrête à ce niveau. Get état dure jusqu'à la fin de la gestation.

«On peut maintenant aisément se rendre compte de ce qui doit
se passer durant et aussitôt après la parturition; le placenta

23

438 : ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

se détache ; il n’y a comme blessure que l’endroit très restreint où
s'insérait le placenta; celte blessure doit se restaurer très rapide-

Fig. 5. — Progrès de la résorption de la caduque.

ment, surtout aux dépens des glandes très nombreuses ethypertro-
phiées qui existent autour d’elle et se prolongent obliquement au-
dessous d’elle. Tous les éléments d’une prompte régénération sont

Fig. 6. — L'œuf au terme de la gestation.

donclà. Quantau reste de lamuqueuse, elle estcomplètementsaine
et dans les conditions d’une muqueuse au repos. Cette restau-
ration si complète et si rapide de la muqueuse est du reste en
rapport avec le fait bien connu, qu'une nouvelle gestation com-
mence presque aussitôt après la parturition, puisque chez tous
les rongeurs, la fécondation se fait dans les quelques heures qui
suivent la mise-bas. »

On voit donc qu'au moment de la parturition la cavité des

RECHERCHES SUR L’UTÉRUS APRÈS LE PART. 139

cornes utérines des rongeurs est, dans la presque totalité de son
étendue, revètue de son épithélium »ormal ; la réparation de la
petite plaie résultant de l'insertion placentaire doit être extrème-
ment rapide. Il y a donc là, dès l'instant de la parturition, un
épithélium intact et prèt à remplir son rôle protecteur. Nos expé-
riences montrent dans quelle mesure il accomplit ce rôle. Toutes
différentes sont les conditions anatomiques que présente l'utérus
de la femme au moment de l’accouchement ; chez elle la chute de
la caduque entraine l’exfoliation épithéliale de la muqueuse
utérine tout entière et mème celle d’une partie du chorion de la
muqueuse ; il y a plaie véritable et très étendue. Il ne faut donc
pas s'étonner si l'utérus offre alors à l'égard des microbes pa-
thogènes une vulnérabilité extrème, dont témoignent la fré-
quence et la gravité des affections puerpérales.

Après les expériences que nous venons de relater, il ne faut
pas s'étonner non plus que les tentatives, faites jusqu’à présent
par divers auteurs, pour reproduire chez la lapine et la femelle de
cobaye des états analogues aux infections puerpérales de la
femme, n'aient presque jamais donné de résultats. En réalité,
quoique les rongeurs soient des réactifs extrèmement précieux
à l'égard de la plupart des virus, ils ne se prêtent guère à
l'étude des infections d’origine utérine, à cause des particu-
larités anatomiques qui viennent d’être exposées.

SUR L'EÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE
CHEZ L'HOMME.

Par M. N. GAMALÉIA.

I.

APERCU HISTORIQUE.

C’est au laboratoire de M. Pasteur qu'a été découvert en 1881
le microbe qui s’est trouvé être celui de la pneumonie fibrineuse.
M. Pasteuretses collaborateurs l’ontrencontré dans la salive d’un
enfant mort de rage, l'ont isolé. cultivé dans l'excellent milieu
nutritif que donne le mélange de bouillon de veau et de sang de
lapin; ils ontdécrit saforme caractéristique de diplococcus entouré
par une auréole claire. Ils ont montré aussi que ce microbe est
inoffensif pour les oiseaux et provoque chez le lapin une septi-
cémie suraiguë, au cours de laquelle on le voit apparaître dans
le sang des animaux malades, en même temps que la fièvre,
déjà 9 heures après l’inoculation sous-cutanée. La mort survient
en moins de 36 heures. A l’autopsie, on ne trouve presque rien
à l'endroit de l’inoculation, mais il y a de l’œdème des poumons,
de l’hyperémie de la trachée et une masse de microbes dans le
sang.

On a constaté aussi que ce microbe est très facilement arrèté
dans son développement et périt dans les cultures sousl'influence
de l’oxygène de l’air; qu'avant de mourir il s’atténue; que les
lapins inoculés par le microbe atténué ne meurent pas et de-
viennent réfractaires vis-à-vis du virus virulent. Après cela ont
été établis les procédés pratiques de la préparation des vaccins.

M. Pasteur avait trouvé, pour la première fois, ce microbe
dans la salive d'enfants morts de rage, puis dans celle d'enfants
morts de broncho-pneumonie, et enfin dans la salive de per-
sonnes bien portantes. Ce dernier fait fut confirmé par M. Vul-
plan, ainsi a élé supprimée toute connexité possible entre ce
microbe et l'hydrophobie. Du reste, c’est aussi de 1881 que datent
les recherches de Sternberg, qui trouvait le même microbe

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 4

dans la salive de personnes en bonne santé, mais le rencontrait
plus fréquemment dans les crachats et dans l’exsudation pulmo-
naire des pneumoniques. M. Sternberg crut par conséquent que
le microbe de M. Pasteur n’était qu'une variété du preumococ-
cus de Friedlaender, et qu’il jouait un rôle dans l’étiologie de
la pneumonie croupeuse.

En 1883, M. Talamon a fait connaître les résultats des
recherches qu'il a faites dans la clinique de M. le P' G. Sée. Dans
tous les cas de pneumonie fibrineuse mortelle, il a trouvé à
l’autopsie, dans le poumon infiltré, un diplococeus lancéolé. Il
trouva le même microbe dans l’exsudation aspirée du poumon
malade, et mème il a réussi à le retrouver une fois dans le sang
d’une malade agonisante. M. Ta/amon a isolé ce diplococcus lan-
céolé, et en a fait des cultures dont l’inoculation provoquait chez
les lapins une septicémie aiguë et parfois une pleurésie et une
péritonite séro-fibrineuses : les chiens et les cobayes lui ont paru
réfractaires.

En 1884, M. Salvioli a aussi trouvé des diplococcus lancéolés
et capsulés dans les exsudations des poumons pneumoniques.Ila
réussi à provoquer, au moyen de celiquide virulent, une septicé-
mie aiguë chez les lapins ainsi qu’une hépatisation pneumonique
rouge chez les cobayes inoculés par la trachée. La même année,
M. Ælein (de Londres) a confirmé ce fait que les crachats pneu-
moniques provoquent chez les lapins une septicémie caracté-
risée par la présence des diplococcus capsulés dans le sang.
Mais comme la même maladie expérimentale était parfois causée
par la salive des hommes sains, M. X/ein a cru pouvoir nier le
rôle étiologique de ces microbes.

En 1885, M. Fraenkel a rassemblé tousles résultats précités et
affirmé l'identité du microbe de la « maladie nouvelle » de Pas-
teur avec le diplococcus lancéolé de Talamon. I a confirmé cette
identité par ses propres expériences, en isolant les microbes de
la salive septique et de la pneumonie dans des cultures sur
gélose, et en décrivant leurs propriétés morphologiques et biolo-
giques essentielles. M. Fraenkel a trouvé que les cultures de ces
diplococeus, affaiblies par la vieillesse ou la chaleur, provoquent
parfois chez les lapins des pleurésies séro-fibrineuses avec une
hépatisation des poumons et des péritonites.

_ Enfin, en 1886, a paru un grandtravail de M. Weichselbaum

342 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

qui a étudié 129 cas de pneumonie. Dans 94 de ces cas, il a
trouvé le microbe de Pasteur, diplococcus pneumoniæ, comme
M. Weichselbaum l'appelle ; dans 21 ,un séreptococcus; dans 9 cas,
le microbe de Friedlaender; dans 5 cas, les staphylococcus
aureus et albus. M. Weichselbaum en conclut que les trois pre-
mières formes peuvent causer la pneumonie lobaire.

Toutes les recherches postérieures, comme celles de Foa et
Bordoni-Uffreduzzi, Petit, ete., n’ont fait que confirmer les don-
nées principales de MM. Fraenkel et Weichselbaum

Ainsi M. Netter a découvert le coccus lancéolé dans 75 ?/,
des pneumoniques pendant leur maladie; dans la salive des
malades rétablis, ce microbe existait dans 66 cas sur 100; dans
45 0/,, chez les hommes bien portants. M. Netter a trouvé en ou-
tre qu'immédiatement après la guérison la salive est moins viru-
lente que quelque temps après; enfin, il a montré que la salive
inoffensive des premières semaines après la crise donne parfois
limmunité aux lapins inoculés.

De tout ce qui précède on doit conclure que la pneumonie
fibrineuse lobaire est très fréquemment accompagnée d’un mi-
crobe, dont les propriétés principales sont les suivantes. Il a la
forme typique d’un grain d'orge (lancéolé) et est entouré d’une
auréole claire; il se groupe par paires et souvent en petites
chaînes, faites de 2, 3, ou 4 paires; il n’a pas de spores; il ne se
cultive pas ordinairement sur la gélatine, et ne pousse que très
médiocrement sur la gélose; il trouble les bouillons de culture.
Son inoculation provoque une maladie septique rapidement
mortelle chez les lapins. Sa virulence est d’ailleurs sujette à une
atténuation facile. Il retient la couleur violette après coloration
par le procédé de Gram. En sorte que, d’après ces caractéristi-
ques, ce microbe doit être rangé dans le genre Streptococcus, et
je propose de l’appeler Streptococcus lanceolatus Pasteuri.

1. Les auteurs que nous avons principalement consultés :

Pasteur. — Sur l'atténuation du virus. Discours au Congres de Gencve, 1883.

SÉE. — Des maladies spécifiques (non tuberculeuses) des poumons. Exposition
des recherches de M. Talamon. Paris 1885.

A. FRAENKEL. — Zeilschrift fur klinische Medicin., Bd. X., XI.

WEICHSELBAUM. — Medicin. lahrbucher 1886, Heft 8, et Centrablatt f. Bacter,
4887, nos 19 et 20.

Wozr. — Wiener Medic. Blalter, A887, nos 11-14.

BAUMGARTEN. — Lehrbuch des palhol. Mykologie, Ie p. Ueberdie Fortschrilte in der
Lehre von path. Microorgan. lahresbericht. Bd. I, n. II.

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 443

En faveur du rôle étiologique de ce Streptococcus lanceolatus
on ne pouvait invoquer jusqu'ici qu'un seul argument ayant
beaucoup de valeur : le microbe accompagne presque cons-
tamment la pneumonie fibrineuse ; on le retrouve non seulement
dans les crachats pneumoniques, mais aussi dans les poumons
malades, et même dans le sang après la mort.

Contre ce rôle, au contraire, ily avait les objections suivantes :

1° Le microbe de Pasteur n'a pu être trouvé dans tous les
cas de pneumonie fibrineuse.

2° Dans un grand nombre de cas de pneumonie franche, on a
trouvé dans les crachats, isolé par culture, et retrouvé dans les
coupes du poumon hépatisé un autre microbe, celui de Fried-
laender. Faut-il nier l’unité de la pneumonie eten admettre plu-
sieurs causes, comme l'a fait Werichsel/baum ?

3° Tandis que le microbe de Friedlaender, inoculé dans le
poumon d’une souris, y produit l’hépatisation pneumonique, le
microbe de Pasteur produit chez les animaux susceptibles — les
lapins — une septicémie aiguë sans localisation pulmonaire. I
est vrai que M. Fraenkel a pu reproduire chez les lapins la pneu-
monie avec des cultures atténuées, mais cette pneumonie appa-
raissait avec un cortège des symptôme (péritonite, etc.) qui lui
faisait dépasser le tableau typique de la pneumouie croupale de
l’homme. Comment expliquer alors la pathogénie de cette mala-
die, si elle est causée par un microbe qui n’a pas de prédilection
pour le tissu pulmonaire ?

4° Le microbe de Pasteur se trouve aussi dans la salive de
personnes non atteintes de la pneumonie fibrineuse. Comment
admettre que la pneumonie résulte de l'infection par un microbe
qui peut séjourner sans influence nocive dans les organes respi-
ratoires des personnes bien portantes ?

Il y a quelque temps que j’ai entrepris sur la pneumonie des
recherches dont les premiers résultats permettent d’enlever leur
force aux objections précédentes.

IL. — PRÉSENCE CONSTANTE DU STREPTOCOCCUS LANCEOLATUS
DANS LA PNEUMONIE.

A la première question que soulève l’étiologie de la pneumo-
nie, à savoir l'existence constante du même microbe dans tous

414 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

les cas, mes recherches me conduisent à répondre par l’affirma
tive. C’est à quoi j'arrive, non seulement par mes résultats tou-
jours positifs, mais encore par l'analyse critique des échecs des
autres observateurs.

La base clinique de mes travaux est faite de douze autopsies
que j'ai pratiquées grâce à l'obligeance de MM. les D" Stroganof,
Chenzinsky et Michalevitch. J'ai étudié les cadavres sans aucun
choix, et dans l’ordre où ils se présentaient sur la table de dis-
section. Quelques cas avaient porté les diagnostics erronés de
fièvre typhoïde ou de tuberculose miliaire rapide. Mais je n'ai
accepté que le diagnostic donné par le cadavre. C’est ainsi que
j'ai rassemblé des formes pneumoniques très variées : pneumo-
nie franche d’un seul lobe, pneumonie double, pneumonie com-
pliquée de méningite cérébrospinale et d’endocardite. La durée
de la maladie avait aussi été très variable, et j'ai eu ainsi sousles
yeux les différentes formes anatomiques du poumon malade :
l'hyperémie initiale, l’hépatisation rouge, l’hépatisation grise et
l'abcès.

Chaque cas m'a servi :

a) à faire des cultures sur gélose ;

b) à faire des préparations colorées avec le suc de divers
organes;

c) à inoculer des animaux sensibles au virus pneumonique.

Le premier mode de recherches ne m'a conduit au but que
très rarement, parce que les autopsies se faisaient assez tard après
la mort et que la culture de notre microbe sur les milieux solides
est très pénible. Il suffit d’une très faible proportion de germes
étrangers pour empêcher la culture spécifique.

Le deuxième procédé m'a au contraire toujours donné des
résultats positifs, et j'ai toujours pu reconnaître comme cause
du mal le Streptococcus lanceolatus, c’est-à-dire le double coccus
lancéolé entouré d’une capsule claire ou colorée, retenant la
coloration violette de Gram. J'ai pourtant à faire à ce sujet quel-
ques remarques importantes.

Tout d’abord il faut observer que dans le cadavre humain,
comme chez les animaux d'expérience, le coccus lancéolé n’a
pas toujours sa forme et son aspect typiques. Il arrive parfois que
dans un lapin ou une souris, morts de septicémie pneumonique,
les microbes du sang et même de la rate se présentent sous

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 445

forme de simples coccus sans capsule, tandis que le foie et les
reins sont remplis des diplococcus typiques. De même il m'est
arrivé de ne pas trouver les formes typiques dans trois poumons
malades sur les douze autopsies que j'ai mentionnées plus haut.
Mais le microbe spécifique a apparu avec tous ses caractères
différentiels dans les autres parties du même cadavre (exsudation
fibrineuse pleurétique, rate, dure-mère de la moelle).

En outre, dans le poumon humain, comme nous verrons plus
tard que cela a lieu pour la brebis, le coccus pneumonique a
souvent sa capsule colorée ‘; et comme cette capsule colorée
peut être allongée et tortueuse, cela défigure singulièrement
l'apparence du microbe.

Par contre, les coccus qui sont absorbés par les leucocytes,
comme c’est la règle dans la première période de l'affection
pueumonique chez l’homme et chez le chien, restent souvent
incolores ainsi que leurs capsules, et l’on ne les distingue que
comme des petites vacuoles régulières dans le corps des cellules.

Enfin, il peut arriver ce qu’on observe aussi dans la rate
charbonneuse et surtout dans l’æœdème charbonneux, c’est que
les produits solubles excrétés par les microbes virulents rendent
toute la préparation trop confuse pour qu’on puisse distinguer
la forme typique des microbes. On peut se débarrasser de cet
obstacle en lavant à l’alcool les lamelles passées à la flamme.

Ces réserves faites, j’afflirme que j’ai toujours pu réussir à
voir le microbe de Pasteur dans le cadavre pneumonique.

Reste maintenant le troisième moyen de recherches qui est
incontestabiement ie plus sûr et qui nous a toujours donné des
résultats positifs. Je parle de l’inoculation d’un lapin ou plutôt
d’une souris. L'animal succombe toujours à une septicémie
paeumonique et on rencontre dans ses organes intérieurs le
coccus de la pneumonie. Ce moyen me paraît être, d'après mes
résultats actuels, excellent, puisqu'il démontre infailliblement la
présence du microbe pneumonique non seulement sur le cada-
vre, mais aussi dans les crachats pneumoniques. Ainsi, M. le
D: Goldenberg, quia adopté chez nous cette méthode de recherche,
a déjà trouvé le coccus dans les crachats de quarante pneumo-
niques, étudiés à la file sans aucune exception.

1. Ce fait a été observé déjà par M. Talamon, et retrouvé par M. Fraenkel dans
le sang de cobaye.

446 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

J'ai choisi pour l’expérimentation la souris, parce qu’elle est
encore plus sensible au virus pneumonique que le lapin ‘. Ino-
culée sous la peau avec une émulsion de crachats pneumoniques,
elle meurt dans un délai de 22 heures et présente à l’autopsie une
masse de microbes typiques dans le sang et les organes?. Le
lapin, au contraire, peut ne pas toujours donner des résultats
positifs. Ainsi il m'est arrivé d’échouer avec le lapin et d’être
obligé, pour arriver à une conviction, de réinoculer les mêmes
crachats à une souris.

On peut ajouter qu’en général, pour la recherche d'une petite
quantité d’un virus quelconque, la méthode par inoculation, à
cause des grandes quantités qu’on peut inoculer, est souvent
plus féconde que les deux autres méthodes signalées plus haut.
Ainsi il m'est arrivé de ne trouver ni par l'examen microscopi-
que, ni par la culture, la moindre trace du bacillus anthracis Ly-
pique dans le poumon d’un chien affecté de pneumonie charbon-
neuse ; tandis qu’une souris, inoculée par le suc de ce poumon,
est morte du charbon. Ces considérations s'appliquent surtout
au microbe pneumonique, qui ne végète que misérablement sur
les milieux solides et qui n'apparaît pas toujours sous sa forme
caractéristique.

Or l’auteur qui a fait le plus vaste travail sur l’étiologie de
la pneumonie, et qui conclut à l'origine multiple de cette maladie,
M. Weichselbaum, a usé pour ses recherches de la méthode de
culture sur la gélose. Aussi nous ne pouvons qu'adopter l’opi-
nion de M. Baumgarten, qui n’accorde aucune valeur décisive aux
résultats négatifs de M. Weichselbaum quant à la présence
constante du Streptococcus Pasteuri. M. Netter, qui a adopté la

1. Cette susceptibilité si grande des souris fait qu'on peut se demander si elles
ne jouent pas un rôle dans la propagation du mal. La pneumonie est en effet une
maladie persistante et tenace dans certaines maisons, et cela ne peut pas s’expli-
quer par la ténacité du Streptococcus Pasteuri, qui n'a pas de spores et périt très
vite hors de l’économie animale. On pourrait ainsi croire que la contagion est
maintenue dans sa virulence grâce à la propagation parmi les souris. Cette expli-
cation s’accorderait bien avec l'influence des saisons sur la pneumonie, puisque
les saisons régissent aussi la vie des souris. Mais cette hypothèse est réfutée par
le fait de la non contamination des souris par des repas infectieux.

Ainsi nous avons nourri une souris grise pendant plusieurs jours de suite,
avec des rates pneumoniques de lapins. La souris resta en pleine santé et suc-
comba plus tard à l'inoculation sous-cutanée virulente.

2, M. Goldenberg va bientôt publier in extenso ses résultats instructifs.

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 447

méthode de l'inoculation des crachats pneumoniques aux lapins,
et qui n'a trouvé le microbe de Pasteur que dans 75 0/0 des
cas, a eu le tort, selon nous, de prendre un animal trop résis-
tant pour pouvoir déceler de petites quantités de virus. Cette
opinion est confirmée par ce fait que M. Netter a rendu quelques
lapins réfractaires par les crachats, dans lesquels il n’a pas trouvé
de microbe spécifique.

En résumé, nous fondant sur nos résultats toujours positifs,
ainsi que sur la supériorité de la méthode de recherche (inocu-
lation d’une souris) que nous avons adoptée, nous nous croyons
autorisés à conclure que la pneumonie fibrineuse est toujours liée
au microbe de Pasteur.

III. — ROLE SAPROPHYTIQUE DU MICROBE DE FRIEDLAENDER.

Nous pouvons être brefs au sujet de la seconde objection
faite contre l'unité étiologique de la pneumonie fibrineuse, à
savoir au sujet des droits étiologiques du microbe de Friedlaender.
Ce dernier microbe se trouve dans la salive normale; il est un
bon saprophyte, et pourrait envahir parfois le poumon malade
ou mort. . Weichselbaum ne l’a d’ailleurs trouvé que dans 7 0/0
de ses cas, et encore presque toujours mélangé à d’autres
microbes, car ce n’est que dans trois cas qu’il l’a rencontré pur.
Quant aux recherches des auteurs qui ont précédé Fraenkel, il est
sûr que le microbe qu’ils ont souvent trouvé sur les coupes des
poumons malades, et qu'ils ont appelé microbe de Friedlaender,
n’était autre que le microbe de Pasteur, puisqu'il se colorait par
le procédé de Gram, qui décolore le bacille de Friedlaender. Beau-
coup de résultats positifs relatifs à ce dernier doivent donc être
mis au compte de l’autre.

Enfin, quant à la production expérimentale de la pneumonie
fibrineuse par les cultures du microbe de Friedlaender, À n'est pas
douteux que plusieurs bactéries ne jouissent de la propriété de
pouvoir reproduire cette forme pathologique. Tels sont, d'après
mes recherches, les microbes qui déterminent au point d'inocu-
lation une exsudation sérofibrineuse. Ainsi, le microbe du
choléra des poules (coccobacillus avicidus), qui amène un æœdème
gélatineux sous-cutané chez les poules, leur donne souvent, ainsi
qu'aux corbeaux, une pneumonie fibrineuse.

418 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

De même, la bacléridie charbonneuse, dont l’æœdème sous-
cutané est si typique, produit, d'après mes recherches, une pneu-
monie croupale à la suite de l’inoculation intrapulmonaire chez
le chien.

Ainsi, le 26 mars, trois chiens sont inoculés dans le poumon
droit par une culture charbonneuse. L'un d'eux meurt le 28 avec
les lésions du charbon généralisé. Les deux autres guérissent
après une fièvre modérée. Le 29, l’un des deux est sacrifié. On
trouve chez lui une hépatisation grise du lobe supérieur du pou-
mon droit. À l'examen microscopique du poumon malade, on
voitune infiltration du tissu par des macrophages et microphages,
et des formes digérées de bactéries (coccus et fins bâtonnets aux
bouts arrondis). Une souris inoculée avec le poumon malade a
succombé le 31 mars au charbon.

On peut affirmer, par conséquent, que ce n’est pas la forme
anatomique seule qui peut caractériser une maladie spécifique,
puisque les mêmes lésions peuvent être produites par plusieurs
microbes. Une maladie spécifique, comme la pneumonie fibri-
neuse chez l’homme, comprend tout un ensemble de caractères
étiologiques, anatomiques et cliniques.

L'expérience suivante est instructive sous le rapport de l'in-
fection secondaire qu'on y a trouvée. Le 22 février, deux chiens
sont inoculés dans le poumon droit par 2° d’une culture pure de
charbon qui est inoculée aussi sous la peau d’un lapin. Celui-ci
meurt du charbon le 24 février.

L'un des deux chiens succombe le 6 mars en présentant une
hépatisation grise de tout le poumon droit et une hépatisation
rouge du lobe supérieur gauche. A l'examen microscopique, on
trouve dans les poumons malades des petits bâtonnets à bouts
arrondis qui n'ont aucune ressemblance avec la bactéridie char-
bonneuse. Une souris, infectée par cette matière, est restée
vivante. La pneumonie fibrineuse a été produite ici par la bacté-
ridie charbonneuse, qui a été détruite ensuite et remplacée par
un autre microbe.

Il est très probable que le même fait se passe dans tous les
cas où on retrouve le bacille de Friedlaender dans les poumons
hépatisés. à

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 449
IV. — ROLE PATHOGÉNIQUE DU STREPTOCOCCUS LANCEOLATUS.

Beaucoup plus intéressante est la question de savoir si le
microbe de Pasteur est incapable comme on l’a dit, de produire
la pneumonie, chez certains animaux.

Nous avons trouvé, au contraire de ce qu'on croit sur ce
sujet, que ce microbe détermine la pneumonie fibrineuse typique
chez le chien etle mouton. Les expériences qui vont suivre ontété
faites avec le virus pneumonique très virulent, c’est-à-dire, avec
le microbe de Pasteur pris sur le cadavre humain ou isolé des
crachats pneumoniques, et renforcé par plusieurs passages par
les lapins.

Le passage successif à travers l'organisme du lapin, surtout
si l'inoculation est faite par la voie intraveineuse, augmente
manifestement la virulence du streptococcus pneumonique.
Cette augmentation dans la virulence se traduit d'abord par la
mort de plus en plus rapide des lapins inoculés. Le temps qui
s'écoule entre l'infection et la mort, qui est de 48 et 36 heures
pour le virus ordinaire, devient successivement de 2%, 12 et
même 5 heures.

Le caractère de la maladie est aussi changé : au lieu de laf-
fection fébrile prolongée avec des accidents méningiliques, pro-
duite par le virus ordinaire, apparaît une sorte d'intoxication
qui commence avec l'infection et qui mène à une mort tran-
quille, précédée d’une perte progressive et continue des forces.
Le virus très virulent ne laisse pas non plus sur le cadavre
cette hyperémie et cette hypertrophie indurée de la rate qui sont
typiques pour le virus ordinaire; l'animal succombe sans résis-
ter‘. Le sang du cœur est rempli de streptococcus qui ont
souvent dans ce cas leurs capsules colorées. C’est avec ce sang
ou les cultures provenant du sang (bouillon de poule avec du
blanc d'œufs), que nous avons fait des expériences sur les
pigeons, rats blancs ou gris, spermophiles, moutons, chiens et
chats.

Ces animaux peuvent être placés, au point de vue de leur
résistance au virus pneumonique, sur une échelle dont la marche
inférieure est occupée par le pigeon avec sa résistance absolue

1. Voir mon article sur la destruction des microbes dans ces Annales, mai 1888.

450 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

et les étages successifs par le chien, le mouton et le rat; le
dessus appartient au lapin et à la souris.

Comme nous avons dit, la souris (grise ou blanche) est l’ani-
mal le plus sensible à la pneumonie: elle meurt toujours sans
exception après l'infection sous-cutanée ; quelques gouttes
d'une culture virulente suffisent pour la tuer dans un délai de
12 à 24 heures, et avec tous les symptômes d’une septicémie
suraiguë. À l’autopsie, on trouve un œdème gélatineux peu con-
sidérable à l'endroit de l’inoculation, une rate plus ou moins
hyperémiée, etune quantité énorme de microbes dans le sang et
dans tous les organes. La virulence du microbe s'accroît par
passage dans le corps de l'animal. Nos expériences portent sur
plus de 30 souris.

Chez le lapin, la maladie a les mêmes caractères. Le plus
typique pour le virus ordinaire, non renforcé par passage sur le
lapin, c’est une rate grande, foncée et très dure, donnant une
coupe lisse et unie comme celle d’un poumon hépatisé. Le.virus
atténué produit une infiltration fibrinogranuleuse à l'endroit de
l’inoculation, une pneumonie et une pleurésie sérofibrineuses, de
la péritonite fibrineuse'. Le virus mort (stérilisé à 120°) produit
une tumeur granuleuse, persistante, qui n’a pas tendance à
abcéder. La même tumeur est produite par le virus virulent
chez le lapin réfractaire’. La virulence est considérablement
accrue par passages sur le lapin. J’en ai fait plusieurs séries,
dont une portant sur 42 passages. Le nombre de mes lapins
rendus pneumoniques est d'environ 200.

Le rat blanc et le rat gris sont aussi très sensibles au virus
paeumonique. [ls meurent aussi très régulièrement et sans
exception par l'effet de l’inoculation virulente, mais les doses
mortelles sont beaucoup plus fortes que pour les animaux précé-
dents. On doit, par exemple, inoculer sous la peau du rat blanc
Occ,5 d’une émulsion du sang de lapin de passage. Des doses
plus petites sont souvent inefficaces. On trouve à l'autopsie une
réaction locale intense, un œdème fibrineux qui s'étend parfois
sous la peau de tout le ventre et de la poitrine. La rate est très

1. Ce fait a été noté par plusieurs expérimentateurs et plus particulièrement
par M. Fraenkel.

2. Nos expériences sur l’immunité pneumonique feront l’objet d'un autre
article.

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 451

grande, les intestins remplis d'un liquide jaune d'œuf. Dans le
sang, le microbe pneumonique est souvent peu abondant et par
coceus isolés. On réussit pourtant à faire des passages successifs
sur des rats et la virulence du microbe ne paraît pas subir de
changements par ces passages. On voit que les symptômes
locaux apparaissent ici chez le rat, animal plus résistant que les
précédents. Les mêmes lésions locales sont produites par l’ino-
culation intra-pulmonaire, à travers la paroi thoracique. Quel-
ques gouttes suflisent alors pour tuer le rat en 20-2% heures.
L'autopsie révèle une pleurésie séreuse et sérofibrineuse double,
et une hépatisation rouge du poumon inoculé qui envahit plus
ou moins l'autre poumon. Une péricardite sérofibrineuse est
un phénomène fréquent. Nos expériences portent sur 32 rats.
Le mouton est beaucoup plus réfractaire que les animaux pré-

cédents. Les doses mortelles sont pour lui encore plus fortes : 5ee
de la même émulsion que plus haut. Les phénomènes locaux
sont encore plus considérables. L’inoculation sous-cutanée con-
duit à la formation d'un œdème volumineux, composé de parties
fibrineuses ou gélatineuses et de granulations dures, et occupant
parfois tout l'abdomen. Le microbe est très rare dans le sang,
et les passages successifs par des moutons échouent. L'inocula-
tion intra-pulmonaire est toujours suivie d’une pneumonie fibri-
neuse typique, mortelle dans la grande majorité des cas. Gette
pneumonie, ordinairement lobaire , est accompagnée d’une
exsudation fibrineuse abondante. Les microbes pathogènes sont
très nombreux dans Le tissu pulmonaire emalade et surtout sur
la fibrine exsudée. La mort survient le 3e, 4° ou le 5° jour de la
maladie .

Le total des moutons que nous avons expérimentés est de 50.

Le chien est encore plus réfractaire à l'infection . pneumo-
nique.

1. Le 15 janvier, un mouton est inoculé dans le poumon droit par 4 ce, d’une
émulsion du lapin de passage.

Le mouton meurt le 17. A l’autopsie on trouve : le péritoine normal; lesreins
très hyperémiés, particulièrement dans leur substance médullaire. La rate et le
foie sont hyperémiés. Le poumon gauche n'offre rien de particulier. Le poumon
droit présente les phénomènes d’hépatisation rouge dans son lobe supérieur (sur-
face de la coupe rouge, luisante et convexe; absence d'air); la plèvre droite est
couverte par une épaisse couche jaune de fibrine coagulée. Les streptococcus
ont été trouvés dans tous les organes ainsi que dans le sang.

452 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Après l'infection par de fortes doses de virus très virulent,
on trouve un œdème fibrinogranuleux très considérable occu-
pant non seulement l'endroit de l’inoculation sous-cutanée, mais
pénétrant dans le tissu conjonctif intra-musculaire, et s'étendant
sur toute la poitrine et l'abdomen. Les microbes dans le sang
sont toujours très peu nombreux, et le passage successif d’un
chien à l’autre est impossible.

L'infection intra-thoracique conduit toujours au développe-
ment d’une pneumonie franche fibrineuse qui est rarement
mortelle : elle se guérit ordinairement dans un espace de 10 à
15 jours, après avoir passé par toutes les phases de l'hépatisa-
tion rouge et grise, caractéristique pour cette affection chez
l'homme. Nous possédons des expériences sur 12 chiens.

Le spermophile et le chat, sur lesquels nos expériences sont
peu nombreuses, occupent, d’après leur résistance au virus pneu-
monique, la place intermédiaire entre le /apin et le rat.

Tous ces faits autorisent les conclusions suivantes :

1° Ilexiste des réceptivités variables par rapport au virus
pneumonique. Ces réceptivités sont accusées par l'abondance
des microbes dans le sang et par l’étendue des phénomènes
réactifs locaux.

Moins un animal est résistant au virus pneumonique, moins
sont accusés les phénomènes inflammatoires à l’endroit de l’ino-
culation, plus est grande l'abondance des microbes dans le sang
du cadavre. Le type de la réaction locale est aussi variable
d’après le degré de réceptivité d’un animal. Nulle chez la souris,
la réaction locale devient un œdème hémorragique restreint
chez le lapin; le rat nous présente déjà un œdème étendu, séro-
fibrineux, d'une teinte jaune d'ambre et d’une consistance géla-
tineuse ; chez le mouton et chez le chien, cet œdème est encore
plus grand et se compose de parties sérofibrineuses mêlées
avec d’autres granuleuses beaucoup plus dures, ayant la teinte

1. Nous donnons comme exemple l’autopsie d’un chien tué le cinquième jour
de la maladie. Les organes de l'abdomen n'offrent rien de particulier à noter.
Tout le lobe inférieur du poumon droit est augmenté de volume, de couleur rouge-
grisätre avec des ilots rouges; le tissu est dur sous la coupe et totalement privé
d'air; la surface de la coupe est homogène et solide. L'examen microscopique du
poumon hépatisé révèle l’infiltration par des macrophages contenant des leuco-
cocytes polynucléaires et des streptococcus. Dans la rate, le foie et les reins, les
microbes sont moins nombreux et le plus souvent dans les macrophages.

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 453

grise, constituées par une abondante infiltration cellulaire
(æœdème granulé). Que cette réaction locale diverse traduise la
résistance diverse des animaux au virus pneumonique, c'est ce
qu'on peut prouver par d’autres faits encore. Le virus atténué,
par exemple , reproduit même chez le lapin les formes de
l’œdème dur, cellulaire. Le virus virulent chez le lapin réfractaire
donne aussi une abondante infiltration cellulaire de l’endroit de
l'inoculation. Les mêmes faits nous apparaissent aussi pour
l'infection charbonneuse. Aïnsi, dans une série de quinze mou-
tons inoculés par le même virus virulent, le 17 mai 1888, les
premiers morts ont présenté un œdème charbonneux hémorra-
gique, les suivants un œdème gélatineux ; ceux qui sont morts
les derniers ont eu l’æœdème dur grisätre, et les deux survivants
ont longtemps porté des tumeurs très dures à l'endroit de l’ino-
culation.

2 Les animaux peu sensibles au virus pneumonique, offrant
une résistance locale traduite par des phénomènes réactifs très
prononcés (ædème fibrinogranuleux étendu), subissent par suite
de l'infection intra-pulmonaire la pneumonie fibrineuse typique.
Tels sont le chien et le mouton.

La pneumonie n’est done pas une infection générale se loca-
lisant dans le poumon comme dans son lieu de prédilection,
mais la réaction locale à l’endroit de l’inoculation virulente. Il
est vrai que le streptococcus pneumonique peut être retrouvé
dans la rate, le foie, les reins, la moelle des os, mais il n’y arrive
qu'en quantités très petites, apporté du poumon pour être
détruit dans les macrophages des organes intérieurs.

Les animaux trop susceptibles, comme le lapin et la souris,
n'ont pas de pneumonie, parce qu'ils n’offrent pas de réaction
locale etle virus se généralise chez eux enles tuant par une sep-
ticémie aiguë.

30 L'homme appartient, par rapport au virus pneumonique, à
la catégorie des animaux résistants. Cela résulte de la mortalité
pneumonique faible (10,8 °/,), de la réaction locale étendue qu'il
présente dans la forme de l’inflammation des poumons, de la
rarelé des microbes dans son sang. Il est clair, dès lors, que ce
sont les résultats obtenus chez le chien et le mouton, animaux

1. Voir le rapport de la Commission du charbon, d'Odessa, Journal de la

Socièté d’agronomie, etc., mai 1888.
29

454 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

peu susceptibles, qui sont surtout applicables à la pathologie
humaine. Or, on peut affirmer qu'inoculé dans le tissu pulmo-
üaire des animaux partiellement réfractaires (chien, mouton),
le streptococcus lanceolatus donne une pneumonie fibrineuse
typique. Ainsi se trouve supprimée la principale objection contre
le rôle étiologique de ce microbe.

V. — STREPTOCOCCUS LANCEOLATUS CHEZ LES PERSONNES
BIEN PORTANTES.

Comment expliquer maintenant ce fait que le streptococcus
lanceolatus se trouve dans la salive de personnes en pleine
santé ? ù

D'abord, il faut bien admettre sa présence fréquente dans la
salive normale. Nos observations nous empêchent même de
souscrire à l'opinion émise par plusieurs auteurs‘ que, dans la
salive normale, le streptococcus Pasteuri est toujours moins
abondant que dans les crachats pneumoniques. Au contraire,
les deux cas dans lesquels nous avons vu le plus grand nombre
de ces microbes dans les crachats appartenaient à des personnes
non pneumoniques. M. Goldenberg, qui a appliqué une méthode
expérimentale rigoureuse à la solution de cette question, a
retrouvé le microbe de Pasteur dans plus de la moitié des salives
normales. L’exploration bactériologique des crachats n’a donc
aucun rôle à jouer dans le diagnostic, et la présence du strepto-
coccus lanceolatus ne permet aucunement d'affirmer la pneu-
monie du sujet. Reste à savoir si son absence exclut le dia-
gnostic de la pneumonie. Mais revenons à notre sujet, le rôle
du streptococcus Pasteuri.

M. Pasteur nous a déjà depuis longtemps montré une maladie
des vers à sole, la flächerie, qui est causée par un microbe banal
se trouvant partout dans la nourriture des vers, restant inof-
fensif pour ceux qui ont une bonne digestion, et tuant ceux qui
sont affaiblis dans leur santé générale ou leurs organes digestifs.

M. Pasteur à fait voir aussi que le vibrion septique, microbe
très virulent, existe toujours dans les intestins des mammifères
sans troubler aucunement leur santé.

1. Par exemple MM. Weichselbaum et Wolf

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 455

J'ai trouvé, de mon côté, que le microbe du choléra des
poules, maladie si terrible pour les oiseaux, se trouve constam-
ment, quoique faible et peu nombreux, dans leurs entrailles, et
qu'une intoxication par des bactéries non pathogènes suffit pour
lui ouvrir l'entrée dans le sang".

On peut croire de même que, dans les organes des personnes
bien portantes, le streptococcus lanceolatus a trouvé des condi-
tions qui s’opposent à son action nocive.

Ces conditions se réalisent seulement chez les animaux peu
susceptibles, comme l’homme, le mouton et le chien, puisque
les autres, comme les lapins et les souris, succombent à l'inha-
lation virulente.

Nousavons, du reste, institué des expériences directes sur ce
sujet.

Tandis que le streptococcus virulent, introduit dans le paren-
chyme pulmonaire des moutons, y développe toujours la pneu-
monie fibrineuse qui conduit à la mort, le même virus, injecté
par la trachée, ne cause jamais la mort.

Ainsi, sur plus de vingt moutons, auxquels nous avons
injecté par la lrachée le virus pneumonique virulent en quantité
de 10 centimètres cubes, pas un seul n’est mort. On peut con-
clure de ces expériences qu’une lésion du parenchyme pulmo-
naire, et une introduction du virus pneumonique dans ce
parenchyme lésé, sont nécessaires à la production de la pneu-
monie chez les moutons.

Il était intéressant de connaître les faits plus intimes qui se
passent après l'injection intrabronchiale. Nous avons fait à cet
égard l'expérience suivante :

Le 11 mai, à9 heures du matin, trois moutons sont inoculés
par injection intratrachéale avec ile strepltococcus virulent. Leur
température avant l'infection : 4008 — 4001 — 40°. A 7 heures
du soir, ils ontrespectivement 40°5 — 39°7 — 40°2. Le premier
est sacrifié.

On trouve à l’autopsie : rate très hyperémiée et molle; dans
les deux poumons, et particulièrement au sommet du poumon
droit, des régions très hypérémiées. L'examen microscopique
révéle dans ces régions la présence de streptococcus, ainsi qu’une

4. Voir Centralblatt fur Bacteriologie, t. LV, p. 161.

456 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

infiltration par des cellules Iymphoïdes mononucléaires et spé-
cialement polynucléaires. Ces deux variétés de phagocytes con-
tenaient des amas de microbes de Pasteur. Les streptococcus
libres étaient comparativement rares. Pourtant une souris, ino-
culée par le suc du poumon hyperémié, succomba le lendemain
à la septicémie pneumonique; des streptococcus ont été trouvés
dans la rate, et à l’état digéré dans le foie et particulièrement
dans les reins.

Le 12 mai, à 3 heures de l'après-midi, les moutons survivants
ont des températures de 3906 et 39°2.

Le premier est tué. On lui trouve : état catarrhal des bronches,
dont les parois sont hyperémiées et couvertes par un mucus
couleur de brique (l'infection était faite par le sang d’un lapin
de passage). Quelques endroits hyperémiés du poumon droit.
Point d’autres particularités à noter.

L'examen microscopique révèle l’absence des streptococcus
typiques dans les poumons. Un spermophile inoculé par le suc
pulmonaire n’a pas eu la pneumonie. Les streptococeus sont au
contraire en grande quantité dans le mucus bronchial, mêlés
pourtant à d’autres microbes, comme par exemple à un bâtonnet
encapsulé ayant tout à fait l’aspect du microbe de Friedlaender ;
on trouve quelques rares streptococcus dans les macrophages de
la rate, et une grande quantité de débris de microbes dans le
foie et les reins.

On voit ainsi que le virus pneumonique, introduit par la
trachée, ne détermine pas dans le poumon sain les lésions
pneumoniques. Îl provoque une hyperémie pulmonaire et
l’afflux de phagocytes qui détruisent le streptococcus. Quelques
microbes passent dans le sang, d'où ils sont éliminés par le
mode ordinaire ‘. Mais, ni dans les alvéoles pulmonaires,
ni dans les capillaires, ils ne trouvent des conditions suffisantes
pour la production de l’exsudation pneumonique.

Pourtant, les microbes quisont digérés dans les alvéoles pul-
monaires etdans le sang, restent au contraire vivants dans le mu-
cus bronchique, et peuvent, dans des conditions favorables, con-
duire au développement d’une pneumonie. C’est ce qui est arrivé
à notre troisième mouton de l'expérience précédente. Après être

4. Voir mon article, cité plus haut, sur la destruction des microbes.

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 457

resté tout à fait bien portant pendant cette expérience, il a été ino-
culé ensuite dans l'œil par le virus rabique et a succombé le 4 juin.

A l’autopsie il présenta des lésions typiques d’une pneumonie
croupale. Le poumon gauche est augmenté de volume et couvert
d'une couche fibrineuse épaisse de couleur grisâtre. Dans toute
son étendue, il a la couleur grise avec quelaues îlots de couleur
rouge foncé. La coupe est lisse, ayant la consistance et l'aspect
du tissu hépatique. Le poumon ne contient pas d’air et coule au
fond d’un vase rempli d’eau. Le poumon droit, dans son lobe
supérieur, a la couleur d’un rouge foncé, la consistance et l’as-
pect du foie; il ne contient pas d’air; son lobe inférieur est
hyperémié parilots. Le sac pleural contient une grande quantité
d’un liquide séreux rougeâtre. Les autres organes n’ont présenté
aucune particularité à noter. Les streptococcus pneumoniques
ont été trouvés en quantité énorme dans l’exsudation fibrineuse,
ils étaient moins nombreux dans les poumons hépatisés rouges et
gris, et beaucoup plus rares dans la rate et le foie.

Pour mieux étudier le mécanisme de l’immunité des pou-
mons sains vis-à-vis des sétreptococcus Pasteuri, nous avons fait
l'analyse microscopique des crachats d’un sujet qui a fait sous
nos yeux, au mois de décembre 1887, une pneumonie fibrineuse,
quicontinue d’avoir depuis une bronchite chronique, et expectore
toujours une masse de microbes pneumoniques, virulents pour
les lapins.

Ces crachats sont muqueux et adhérents au vase; sous le
microscope ils présentent une culture presque pure des strepto-
coccus spécifiques, des globules polynucléaires et de grandes
cellules dites endothéliales (Staubzellen), ayant un grand noyau
rond et remplies de granulations. L'examen attentif ne laisse pas
de montrer que ces dernières cellules, qui ont tout à fait les
caractères des macrophages, contiennent des quantités énormes
destreptococcus Pasteuridans leurs phases diverses de dégradation.
On peut trouver dans la même cellule les diplococeus typiques
mêlés à des formes amincies et anguleuses que la comparaison
seule rattache à des microbes spécifiques. On peut se convaincre
de cette manière que les débris, contenus dans les macrophages,
sont les restes de microbes pneumoniques. Les leucocytes
polynucléaires contiennent aussi des s{replococcus linceolins
mais en quantité beaucoup plus petite.

458 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Ces phénomènes nous donnent, il me semble, l'explication
cherchée de l’immunité du tissu pulmonaire : les microbes
pathogènes, même dans les cas où il existent en quantité très
grande dans le mucus bronchique et arrivent jusqu'aux alvéoles
pulmonaires, y sont arrêtés dans leur développement par les
macrophages (Staubzellen), qui s'en emparent et les digèrent.
Dans cette lutte, les cellules endothéliales peuvent aussi mourir
et être rejetées dans les crachats. Il est clair que dans ces cas la
production de lapneumonie ou le maintien de la santé dépendent
de l’activité relative de ces deux ordres de combattants. Et on
comprend aussi que l'issue de la lutte peut ètre décidée par des
causes minimes dites prédisposantes, comme le refroidissement,
la bronchite, une chute, la contusion de la poitrine, l’'inhalation
de vapeurs irrilantes, etc‘.

De cette manière on s'explique pourquoi l’étiologie de la
pneumonie fibrineuse est composée de deux facteurs : la conta-
gion et l'influence des saisons avec leur action sur les cellules
pulmonaires.

Pour vérifier notre manière de voir, nous avons entrepris
quelques expériences sur l'infection pneumonique avec injection
préalable de substances qui puissent tuer les macrophages pul-
monaires.

Six moutons ont subi une injection trachéale de tartre stibié.
Quatre d’entre eux out été inoculés, aussi par la trachée, avec du
virus pneumonique. L'un est mort le lendemain de l’inoculation,
en présentant à l’autopsie l’hépatisalion rouge dans plusieurs
endroits du poumon droit ; un autre à fait une pneumonie typi-
que, comme on pouvait en juger d’après la marche de sa tem-
pérature ; les deux autres ont eu des mouvements fébriles pro-
noncés. Les moutons de contrôle, ceux qui ont subi seulement
l'injection pneumonique ou celle du tartre stibié, sont restés
bien portants.

Ainsi, nous pouvons conclure que les influences nocives aux
cellules pulmonaires prédisposent au développement du strepto-
coccus qui se trouve dans les poumons. Par conséquent, notre

1. Cette lutte expliquerait aussi les longs délais qui séparent les cas de
pneumonie infectieuse qui proviennent les uns des autres et se succèdent. Elle
expliquerait aussi les prodromes prolongés qu’on a retrouvés dans les épidémies
pneumoniques. (V. Aréigalas, les Microbes pathogènes.)

ÉTIOLOGIE DE LA PNEUMONIE FIBRINEUSE. 459

idée sur l'opposition faite par les macrophages alvéolaires à la
production de la pneumonie par les microbes de Pasteur se
trouve confirmée par l’expérimentation.

Ainsi se trouve détruite la dernière objection au rôle étiolo-
gique du streptococcus lanceolutus : il peut se trouver dans le
mucus pharyngique et bronchique des hommes sains, et ne pas
produire la pneumonie, si les phagocytes pulmonaires suffisent
chez les personnes bien portantes à la tâche qui leur est imposée.

Il nous reste quelques conséquences cliniques à tirer des
faits précédents.

Le streptococcus pneumonique, quand il a pénétré en grande
quantité dans les bronchioles et alvéoles, comme dans le cas que
nous avons cité, n'est pas indifférent pour l'organisme humain.
Peut-être est-ce lui qui est la cause de la bronchite rebelle chez
notre sujet mentionné plus haut; en tout cas il exige une lutte
active des cellules. D'un autre côté son existence crée une prédis-
position pour le développement de la pneumonie fibrineuse.

Il serait important, par conséquent, de pouvoir débarrasser
l'organisme de sa présence. Comme le streptococeus dans le
mucus bronchique est pour ainsi dire en dehors del’organisation,
hors des tissus vivants, il serait peut-être possible de réaliser
une désinfection spécifique, une stérilisation des microbes
pneumoniques. Nous avons, du reste, entrepris quelques essais
dans cette direction.

VE. — CONCLUSION.

Nous croyons avoir prouvé dans ce mémoire :

Que le streptococcus lanceolatus Pasteuri se trouve toujours
dans la pneumonie fibrineuse de l'homme, et qu'il y peut être
décelé expérimentalement ;

Que ce streptococcus produit chez les animaux partiellement
réfractaires une inflammation fibrineuse du poumon ;

Que son influence pathogène est tenue en échec chez les
hommes bien portants par l’activité des phagocytes pulmonaires;

Nous croyons avoir contribué de cette manière à faire consi-
dérer la pneumonie fibrineuse chez l'homme comme toujours
causée par le microbe de Pasteur.

REVUES ET ANALYSES

E. Voir. Recherches sur la formation du gras de cadavre. Munch. med.
Wochenschr., 1888, p d18,

Les cadavres ensevelis dans un sol humide ou noyés dans une eau
courante se transforment, comme on sait, au bout de quelques mois, en
une masse blanche et molle, conservant souvent la forme et le volume du
cadavre, mais non son poids, qui a notablement diminué. Cette matière,
qui a l’aspect de la cire, est surtout formée de savons et d'acides gras fixes,
l'acide palmitique et l'acide stéarique. Mais par quel mécanisme se forme-t-
elle? C'est ce qu’on ignore encore, malgré le nombre et la valeur des savants
qui ont étudié cette question.

En voyant conservées les formes générales du corps, en constatant que
chaque musele est quelquefois remplacé par une masse d’adipocire moulée
sur ses contours, en trouvant même encore, comme l'ont fait Kratter! et
Kuppfer ?, des traces de striation longitudinale et transversale dans cette
masse, on est tout naturellement conduit à penser que la matière grasse
résulte d'une transformation sur place de la matière du muscle. Mais il y
a des objections à cette manière de voir. En premier lieu, on ne connaît
aucun phénomène chimique ou microbien, dans lequel la fibrine ou une
autre matière azotée devienne de la matière grasse. Personne ne croit plus
aux résultats du travail de Blondeau, qui avait conclu dans ce sens pour la
caséine du fromage. De plus, on trouve souvent de l'adipocire dans des
cavités où il n'existe pas de fibrine ou d’albumine qui puisse en expliquer la
formation, par exemple dans le sac pleural, le péricarde ou la boîte crânienne.
L'argument de la persistance des deux striations des muscles, qui semble
au premier abord si pertinent, se retourne, quand on l’examine d'un peu
près, contre la théorie qu'il soutient, car s'il y a transformation chimique
avec notable diminution de poids, on ne comprend pas la conservation de
la structure. Je sais bien que cette diminution de poids a été attribuée à la
perte en eau, car ces cadavres de consistance grasse sont à peine imprégnés
d'eau, et ne diminuent presque pas de poids à l’air. Mais je ne sache aucune
expérience prouvant que la perte de poids pendant la formation de l'adipo-
cire soit uniquement due à l'élimination de l’eau.

Aussi Zillner # et d’autres savants croient-ils de préférence à une migra-
tion de la matière grasse primitivement existant chez la cadavre. Il ne s'en
formerait pas de nouvelle : celle qui y existe se distribuerait autrement.

Les expériences de Kraus‘ ont paru, à leur origine, confirmer cette

4. Zeitschr. f. Biologie, t. XVI.

2, Munch. med. Woch. 1888, p. 527.

3, Vüierteljaschr. f. ger. Medicin. N. S :42.
4. Archiv. f. exp. Pathol., t, XXIT.

REVUES ET ANALYSES. 461

manière de voir. En dosant comparativement la matière grasse dans des
muscles sains et dans des muscles conservés aseptiquement sous l’eau, il
n’a trouvé entre les deux aucune différence sensible.

Mais M. E. Voit fait observer que ces expériences ont été de bien courte
durée. La formation de gras de cadavre ne commence qu'après 4 mois et
ne se termine qu'en 10 ou 42 mois environ. Il a donc cru devoir reprendre
cette comparaison, de concert avec le D" Bergeat. Deux méthodes ont servi
pour cela.

Le D' Bergeat a conservé des fragments de muscle dans de l’eau cou-
rante. Quand tout phénomène de putréfaction a eu disparu, il a comparé
la quantité totale de matière grasse du résidu à celle que contenait le tissu
musculaire à l'origine, et ila constaté de petites augmentations, trop variables
et trop faibles pour être probantes. M. E. Voit a procédé de la même façon,
mais il a évité l'intervention des microbes en conservant les tissus dans un
lait de chaux, où le musele se dissout avec formation d'ammoniaque. Nous
ne sommes plus évidemment là dans les conditions ordinaires de la forma-
tion du gras de cadavre, mais s’il y a dans ces circonstances transformation
de la fibrine en graisse, on pourrait arguer des ressemblances qui existent
entre les décompositions produites par les alcalis et celles que produisent les
microbes pour conclure que la transformation, bien démontrée dans un cas,
peut se produire dans l’autre.

Les résultats de M. E. Voit semblent au premier abord plus concluants
que ceux de M. Bergeat, car en opérant sur 2258 de musele frais, la quan-
tité de matière grasse extraite par l’éther s'élevait après macération à 15,544
après avoir été à l’origine seulement de 08r,683. Il s'était donc formé 08,861
d'acides gras supérieurs aux dépens des 43 de fibrine que contenait le
muscle,

Mais en l’absence de tout détail, on peut se demander si M. E. Voit ne
s'est pas trompé dans l'évaluation de la matière grasse contenue à l’origine
dans la chair musculaire qu'il a employée. Il ne suffit pas de traiter du
muscle desséché par l’éther pour l’épuiser de sa matière grasse. Si on ne
sépare pas et si on ne brise pas ses fibres, en le broyant très finement soit
à la molette, soit dans un mortier avec du sable fin, on n'atteint pas, ou on
n’atteint qu'imparfaitement la matière grasse contenue à l’intérieur de la
fibre, celle qui fait partie de son tissu solide ou de son protoplasma. M.E. Voit
semble n'avoir pas fait attention à cette cause d'erreur, ou du moins il n’en
parle pas, et cela est fâcheux, car cette omission suffit pour qu'on conserve
des doutes sérieux sur la conclusion qu’il tire de ses expériences.

Je crois donc que rien ne prouve encore la transformation par voie chi-
mique ou microbienne de la matière albnminoïde en matière grasse. Il se
forme pourtant des acides gras dans divers phénomènes de putréfaction,
mais ces acides sont les premiers de la série. M. Buisine est le premier, à ma
connaissance, qui ait nettement constaté la production pendant une fermen-
tation, celles des eaux de suint, d’un acide voisin de l'acide caproique. Mais
de là à l’acide palmitique ou à l'acide stéarique il y a encore loin, et le pas
n'est pas franchi.

Cumment done expliquer alors la formation du gras de cadavre? L'ex-

462 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

plication la plus acceptable que je connaisse encore est celle que j'ai indiquée
dans ma Microbiologie, et qui a pour base les faits analogues que j'ai cons-
tatés à propos. du fromage. La putréfaction des matières azotées donne de
l’'ammoniaque qui saponifie la matière grasse. S'il y a de l'air, ces savons
alcalins se résinifient, deviennent noirs et solubles dans l’eau. Si le sol est
humide, s’il n'y pas d'oxydation possible, s'ils sont protégés, comme cela a
souvent été observé sur les cadavres tournés au gras, par un épiderme et
même des muqueuses à peu près intactes, ce qui n’est pas plus surprenant
que de voir, dans une pomme de terre qui se pourrit, l'amidon détruit dans
des cellules intactes, ce savon reste en place, ou subit, suivant les hasards,
suivant qu'il est plus ou moins bien défendu contre l’action dissolvante de
l'eau par la matière grasse qu'il contient toujours en excès, ou par ses
acides gras insolubles des migrations à courte distance qui peuvent le
porter dans des régions comme le péricarde, où il n'y a pas à l’origine de
matière grasse.

A mesure que la putréfaction tire vers sa fin et que l’ammoniaque dis-
paraît, combinée ou éliminée, l’accalinité du milieu devient de plus en
plus faible et fait de plus en plus place à l'acidité, dans laquelle l'acide
carbonique joue le principal rôle. Cet acide décompose à son tour les savons
alcalins et laisse des acides gras. Le savon ayant absorbé de l’eau, les aci-
des gras qui le remplacent foisonnent beaucoup en l'éliminant, et occupent
un volume considérable pour leur poids. On s'explique ainsi que le corps
gras que contiennent à l'état normal les masses musculaires, soit dans
le tissu interfibrillairé, soit, comme nous l'avons vu plus haut, dans les
librilles elles-mêmes, puisse conserver le volume du muscle et même tra-
duire sa structure, car l'acide gras qui provient de la fibre se formant sur
place, doit présenter une distribution en rapport avec l'anatomie du musele.
On s’explique tout aussi facilement beaucoup d’autres particularités curieuses
qu'il serait trop long de détailler ici. b

*:

M. ProTopororr. Sur l’immunité des chiens contre la rage.
Centralbl., f. Bakt., t. IV, 1888, p. 85.

Dans ce Mémoire, consacré à la vaccination des chiens contre la rage,
M. Protopopoff est d'accord avec M. Pasteur sur quelques points, en désac-
cord sur quelques autres qui sont naturellement les plus intéressants, et
ceux qui donnent le plus de valeur au travail que nous analysons.

L'accord a lieu sur la possibilité de vacciner les chiens contre le danger
de l’inoculation du virus rabique par trépanation, au moyen de l'injection
sous-cutanée d'une série de virus rabiques gradués. M. Protopopoff trouve
seulement la série trop longue, et voudrait la réduire à l'inoculation des
moelles de 8 jours, ou même de celles de 6 jours à { jour. D’après ses
expériences, en effet, les moelles plus âgées ont une virulence nulle ou
presque nulle. Mais ce résultat n’est probant, comme il le fait remarquer
lui-même, que pour les conditions de ces expériences. Les lapins qui ont

REVUES ET ANALYSES. 163

servi à ses travaux étaient d'un poids très inférieur à celui de nos lapins de
France. Leurs moelles doivent se dessécher plus vite, et leur virulence dis-
paraître beaucoup plus rapidement. Ce n’est d'ailleurs là qu'une question
de détail sans grande importance.

Beaucoup plus curieux sont les résultats de M. Protopopoff relatifs à l'in-
jection intra-veineuse du virus rabique. Le Mémoire de MM. Roux et
Nocard, inséré dans notre dernier numéro, et qui a paru simultanément
avec celui de M. Protopopoff, indique bien l'état de la question : d’un côté,
l'issue toujours funeste, constatée par M. Pasteur et ses élèves, de l'inocu-
lation du virus rabique virulent dans les veines du chien; de l’autre le fait
curieux constaté par M. Galtier, que cette même inoculation intra-veineuse
non seulement ne donne pas la rage au mouton, à la chèvre et au lapin,
mais encore leur confère l’immunité. M. Protopopoff étab:it une transition
curieuse entre des actions en apparence aussi dissemblables, en montrant
que l'injection intra-veineuse de virus gradués ne tue pas les chiens et les
vaccine. La pratique est encore un peu indécise, et le succès n’est pas cons-
tant Mais voici parmi les expériences rapportées par M. Protopopoff celle qui
est la plus probante, parce qu'elle est la mieux réussie.

Quatre chiens reçoivent, les 4, T et 10 février, chaque jour 1 centimètre
cube d'émulsion faite avec des moelles de 6,3 et 1 jour. Les deux premières
inoeulations ont lieu dans la veine fémorale gauche, la dernière dans la
veine fémorale droite.

« Le 14 février, on réinocule {ous ces chiens avec du virus fixe, deux dans
la veine fémorale droite, les deux autres dans la veine jugulaire gauche. Ils
restent en bonne santé jusqu'au 15 mars. Ce jour-là, on leur inocule par tré-
panation du virus fixe, eten même temps, avec le même virus, un chien de
contrôle. Ce dernier tombe malade le 24 mars... et meurt de la rage le 26.
Tous les autres sont encore bien portants. »

Voilà le point capital du Mémoire de M. Protopopoff. La possibilité du
fait de la vaccination rapide du chien, par voie intra-veineuse, étant ainsi
démontrée, il reste à chercher si cette opération peut acquérir la sûreté et la
simplicité qui lui sont nécessaires pour qu'elle devienne pratique. Il y a sur-
tout un point sur lequel nous attirons l'attention la plus sérieuse de M. Pro-
topopoff. C’est le cas possible de l’évolution de la rage à très longue échéance
chez l'animal vacciné, cas qui n’est pas extrêmement rare et qui est très
grave, parce que l'animal devient d'autant plus dangereux qu’on s’en méfie

moins, puisqu'on le suppose incapable de contracter la rage.
Dx.

D. Dar Pozzo. L'albumine des œufs de vanneau comme milieu de culture,
Med. Jahrbucher, 1887.

F. Hugepe. Sur l'emploi des œufs comme milieu de culture.
Centralbl. f. Bakt., t. V, 1888, p. 80.

Les microbiologistes sont toujours en quête de nouveaux terrains de
culture M. Dal Pozzo habite un pays fortuné où les œufs de vanneau ne sont

464 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

sans doute pas rares, puisqu'il en recommande délibérement l'emploi. Ces
œufs, comme ceux d’autres oiseaux aquatiques, renferment une albumine qui
se coagule en une masse opalescente et peut servir à des cultures sur milieux
solides. On lave avec soin l'œuf, on l’ouvre,et on recueille dans un vase stéri-
lisé l’albumine qui s’en écoule, on y ajoute un quart d’eau, ou d’un bouillon
approprié, et on verse le mélange dans des tubes qu’on soumet à la stérili-
sation discontinue.

M. Hueppe reste plus pratique en recommandant l'emploi dos œufs de
poule. On les lave, on nettoie la coque avec une solution de sublimé, puis
avec de l’eau stérilisée, on dessèche avec de la ouate stérilisée, on fait un trou
à une extrémité et on ensemence le microbe. Peut-être M. Hueppe oublie-
t-il un peu trop ici les expériences de M. Gayon, qui ont fait voir que tous les
œufs ne sont pas purs de germes, el que par conséquent on est exposé à
voirse développer un autre être que celui qu'on a ensemencé. Peut-être aussi
ne tient-il pas assez compte de ce fait que l’albumine pure est pour nombre
de microbes un très mauvais terrain de culture, ainsi que beaucoup de
liquides albumineux. J'ai eu entre les mains un liquide de ponction prove-
nant de l'abdomen d'une femme cancéreuse, dans lequel au microscope on
voyait des micrococcus, qui restait limpide et stérile à l’étuve, et dont une
goutte peuplait sûrement le bouillon de veau dans laquelle on l'ensemençait.
Il y a donc à tenir compte dans certains cas de la mauvaise qualité du
terrain constitué par l'albumine d'œuf.

Quoi qu'il en soit, il y a des microbes qui y prospèrent. Celui du choléra
en particulier y mène très aisément une vie anaérobie, pendant laquelle les
albuminates se décomposent très vite, avec formation beaucoup plus rapide
de toxines qu’au contact de l'air. Les toxines, ptomaïnes, leucomaines, sem-
blent en effet être dans la décomposition des matières azotées l'équivalent
exact de ce que sont, dans la décomposition des matières ternaires, les corps
comme l'acide butyrique, produits de destruction incomplète, doués d’une
certaine stabilité, auxquels s'arrête l'effort de la vie anaérobie parce qu'ils
ne sont plus ou presque plus endothermiques, mais qui peuvent être décom-
posés par l’action de l'oxygène de l'air dans une vie aérobie. Ces premiers
résultats sont donc très encourageants, et on ne peut que souhaiter de voir
M. Hueppe et ses élèves persévérer dans cette étude. Dx.

H. Bucuxer. Nouvelle méthode pour la culture des organismes anaérobies.
Centralbl. f. Bakt., t. IV, 1888, p. 149.

La méthode consiste à introduire le tube à culture sur gélatine ou gélose
dans un tube plus large, fermé par un bon bouchon, et contenant du pyro-
gallate de potasse. Le tube intérieur est maintenu hors du liquide par un
petit support en fil de fer, et comme il n’est fermé que par une bour:e de
coton, la diffusion le débarrasse peu à peu de son oxygène. Toutefois, l'ab-
sorption est lente, à cause de la difficulté qu'il y a à l'accélérer par l’agita-
tion du pyrogallate. Elle n’est complète qu'au bout de 24 heures à 37°, et
de 48 heures à 20°. Peut-être les couches profondes du milieu gélatinisé
mettent-elles plus longtemps encore à se débarrasser de l'oxygène dissous:

INSTITUT PASTEUR. 465

ou faiblement combiné qu’elles contiennent. C’est un point que l’auteur ne
vise pas. Et cette lenteur dans la disparition de l'oxygène peut être fâcheuse
pour la culture de certains anaérobies qui, comme certains ferments des
matières azotées, ont besoin de passer immédiatement d'une fermentation
à une autre, et redoutent même un séjour de quelques heures à l'air. Mais
cette méthode de culture peut rendre des services dans quelques cas, lors-
qu'on à un laboratoire mal outillé, ou qu'on n’a pas de laboratoire, et c’est
pour cela que nous la publions à côté des méthodes de Gruber, Fraenkel et
autres savants, dont nous avons parlé p. 333 de ce volume. F
x

= S B——

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES A L'INSTITUT
PASTEUR DU 1° AU 31 JuriLLer 1888.

Personnes mortes de rage dans le cours du traitement.
Me Sarasix (Julie), de Saint-Maurice, Valais, Suisse, 44ans.

— Mordue le 1% juillet 1888. Région temporale droite :
2 fortes morsures. Une autre morsure, siégeant plus haut sur
le crâne, soulève la peau sur une étendue de 6 centimètres en
longueur sur 5 centimètres de largeur, le lambeau ainsi séparé
est sphacélé ; il fallut l’exciser le 8 juillet. L’os est à nu. Les bles-
sures ont été pansées à l’acide phénique. Au poignet droit, deux
morsures ayant saigné. Ces deux morsures ont été cautérisées
au crayon de nitrate d'argent.

La tête du chien mordeur a été remise au laboratoire, le
6 juillet, avec la matière nerveuse; on a inoculé un cobaye dans
la chambre antérieure de l’æœil et deux cobayes sous la peau. Le
premier à été pris de rage le 18 juillet. Les deux autres le
27 juillet. M°° Sarasin a été mise en traitement le 4 juillet. Le
24 juillet, elle est énervée et son attitude est changée. Le
25, elle éprouve des palpitations de cœur et des douleurs à la
tête. Le 26 et le 27, elle a des vertiges, des maux de tête et des
envies de vomir. Le 31 juillet, oppression et vomissements. Le
4% août, élancements douloureux dans les morsures, légère
hydrophobie. Le 2 août, rage caractérisée, hydrophobie, aéropho-
bie, exaltation. Le moindre contact à la figure cause des spas-
mes. Parésie des membres supérieurs. La malade meurt à l'hô-
pital Broussais, dans la nuit du 3 au #4 août.

Le bulbe est inoculé par trépanation à deux lapins qui sont
pris de rage le 18 août, 14 jours après l’inoculation.

466 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Guers (Joseph), 27ans, de Chelles (Seine-et-Marne). — Mordu
le 13 juillet 1888, à la lèvre supérieure, côté gauche. 4 morsures
dont une très forte à l’union de la peau et de la muqueuse, trois
autres pénétrantes, au-dessus de celle-ci, ont beaucoup saigné;
elles ont été lavées à l’eau phéniquée, quatre heures après. La
tête du chien mordeur à été remise au laboratoire le 16 juillet.
Un cobaye inoculé dans la chambre antérieure de l'œil a été
pris de rage, le 3 août.

Guers a été en traitement le 16 juillet. Dans les derniers
jours de juillet, la famille de Guers remarqua un changement
profond en lui; il est triste, il a des maux de tête et fréquem-
ment il frotte la lèvre mordue avec ses mains. Il a peu d’appétit.
Le 4 août, Guers a des nausées. Le 5 août, il vomit, se plaint de
douleurs à la tête. Le 6 août, hydrophobie et excitation, Le
7 août, il est transporté à l'hôpital Necker, il présente une rage
convulsive caractéristique ; il est mort le 8 août.

LaBEAUME (Ferdinand), 37 aus, ouvrier agricole, Châtenay
(Seine), mordu le 29 mai, par un chat inconnu, dans la pulpe de
la deuxième phalange du médius droit, 2 morsures fortes : La-
beaume ne pouvait pas faire lâcher prise au chat qui a été tué
aussitôt. Ces morsures ont saigné, elles sont profondes. Elles
n'ont pas été cautérisées. Le chat mordeur est apporté au labo-
ratoire : avec sa matière du bulbe ou inocule un cobaye dans la
chambre antérieure de l'œil, ce cobaye est pris de rage 12 jours
après. Labeaume, mis en traitement le 30 maï, quitte l'Institut
le 2 juin sans prévenir. Il revient le 44 juin, parce qu'il éprouve
de vives douleurs dans le bras mordu et qu'il a des maux de
tête. On reprend les inoculations, mais malgré elles, Labeaume
continue à souffrir dans le bras mordu et dans la tête. Les élan-
cements partent de la blessure, il n’a pas de sommeil, son atti-
tude est modifiée, 1l écrit sans cesse des notes sur ce qu'il ressent.
Il part le 29 juin, et on apprend qu'il a succombé à la rage
convulsive dans les premiers jours de juillet, à l’hôpital de

Versailles.
Personnes traitées mortes de rage.

Vizzeman (Pierre), 31 mois, Marseille, mordu le 9 mai : 4° à
la lèvre supérieure, sur la muqueuse, une morsure ; 2° à la lèvre
inférieure, sur la muqueuse,une morsure ; 3° à la narine gauche,
une morsure, la dent a pénétré dans la cavité nasale; 4° à la joue

INSTITUT PASTEUR. 467

gauche, deux morsures. Toutes ces blessures sont pénétrantes
et ont saigné, elles ont été lavées à l’arnica un quart d’heure
après. D'après les renseignements recueillis par le docteur
Livon, le chien mordeur était enragé.

Villemain a été traité du 14 mai au 9 juin. 11 serait mort de
rage le 23 juin. Les accidents rabiques auraient commencé
le 18 juin (neuf jours après la fin du traitement), par de l'anxiété,
une difficulté pour boire et de l’insomnie. Les renseignements
ont été recueillis près de la famille par le docteur Livon.

Ducos (Mathieu), 28 ans, mineur à Saint-Jean-Bonnefond
(Loire), mordu le 16 juin 1888 par un chat à l'extrémité de l’an-
nulaire droit, dans la pulpe: et en arrière de l’ongle, trois mor-
sures ayant saigné ; elles ont été cautérisées à l’alcali une heure
après. Le chat a été reconnu enragé par un vétérinaire. Ducos a
été traité du 20 juin au 7 juillet. Le 16 juillet, après avoir
été exposé à la pluie, il ressent de l’engourdissement dans le
bras mordu. Les douleurs sont surtout vives au niveau du poi-
gnet et du deltoïde. Le malaise général augmente dans la nuit
du 19 au 20, après voir éprouvé une rémission le 19. Entré à
l'hôpital de Saint-Étienne le 20 juillet, on observe de la gène
respiratoire, le bras est toujours engourdi, sa force musculaire
est affaiblie. La sensibilité est normale, hydrophobie, aérophobie,
crises de fureur. hallucinations, sputation. Mort le 3 juillet.
(Observation du docteur Cénas et de M. Perré, interne du service.)

Des lapins inoculés par trépanation avec le bulbe de Ducos
sont pris de rage le 16e jour.

Mesxiz (Lucien), #4 ans, de Châtenay (Seine), mordu le
25 mars 1888, par un chat, à l'index droit qui porte sept morsures,
dont cinq profondes. Elles ont été cautérisées au fer rouge six
heures et demie après par un médecin. Le chatmordeur appartenait
à Mesnil, ilne mangeait plus depuis le 22, se jetait sur les chiens
et les volailles. À l’autopsie, l'estomac contenait de la paille.

Mesnil a été traité du 26 mars au 12 avril.

Dans le mois de juillet, douleurs au niveau des morsures.

Le 24 juillet, engourdissement dans le bras mordu et dans le
bras sain, avec sensation de froid. Le 26 juillet, insomnie, ma-
laise général. Le 27, gène de la respiration, difficulté d'avaler.
Le 28, hydrophobie et spasmes respiratoires, agitation. Mort
le 30 juillet. Soigné par le docteur Dauzats.

468 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — JUILLET 1888
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TOTATICENERALENE TE RARE AuE

4. La colonne À comprend les personnes mordues par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; La colonne C les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 97 fois; chats, 11 fois ; vache, 1 fois; cheval, 1 fois:
porc, 1 fois.

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

Qme ANNÉE. SEPTEMBRE 1888. N 9

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LA SUPPURATION,

Par M. J. DE CHRISTMAS.

Il y a déjà longtemps qu’on fait des recherches sur les
causes de la suppuration, et les théories qui se sont suivies ont
été bien divergentes.

Avant l’époque microbienne, on admettait généralement qu’il
suffisait d'introduire une substance irritante sous la peau pour
produire une suppuration, et que la suppuration était due seule-
ment à l’irritation provoquée par la substance employée dans
le tissu sous-cutané. Depuis, les opinions ont subi un change-
ment profond. Les grandes découvertes qui ont démontré
l’origine bactériologique de tant de maladies infectieuses ont
eu pour conséquence naturelle de faire entrer les recherches sur
l’étiologie de la suppuration dans des voies nouvelles. De nom-
breux travaux, parmi lesquels il faut surtout citer celui de
Rosenbach, ont démontré que toutes les suppurations aiguës
chez l’homme sont dues aux microbes, que ces microbes sont
toujours les mêmes et qu'ils appartiennent toujours à quelques
formes bien caractérisées. De plus, ces microbes inoculés sur
les animaux ou sur l’homme produisent toujours de la sup-
puraton.

Telles sont les notions auxquelles se sont ralliés la plupart
des auteurs. La conclusion était facile à tirer; on l’a érigée en

30

.470 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

principe qui avait force de loi : /a suppuration est due aux mi-
crobes; sans microbes, pas de suppuration.

Cette théorie a été admise sans réserve non seulement par
les chirurgiens, mais aussi par les bactériologistes. Et, en effet, les
expériences qui ont servi de contre-épreuve la rendaient parfai-
tement acceptable. On a injecté sur des animaux des substances
irriltantes, en s’entourant des précautions antiseptiques les plus
strictes, et elles n’ont pas produit de suppuration. C’est ainsi que
Ruys' atroûvé qu'on peut injecter des substances très irritantes
dans la chambre antérieure de l'œil du lapin sans produire aucune
suppuration, à la condition, bien entendu, que la seringue et la
solution employées soient stérilisées. Il à fait ses expériences
avec l'essence de lérébenthine, le pétrole et l'huile d'olive en
parties égales. Dans un cas seulement, il s’est formé du pus dans
lequel se trouvaient des microbes; dans tous les autres cas il a
vu se produire, dans la chambre antérieure, une petite exsudation
fibrineuse qui était toujours résorbée quelque temps après.

Scheuerlen® a obtenu un résultat tout à fait semblable en
employant un procédé différent. Les substances chimiques dont
il désirait étudier les effets pyogènes étaient d’abord introduites
dans des tubes capillaires ; ces tubes fermés et stérilisés étaient
ensuite placés avec des précautions antiseptiques sous la peau
de l’animal {le lapin). On ne les brisait qu'au moment où la plaie
cutanée était tout à fait guérie. Scheuerlen a introduit par ce
procédé de l'huile de croton, de l'essence de térébenthine, de
l'ipéca, du tartre sübié, etc., sous la peau du lapin. Dans aucun
cas il ne s’est produit de la suppuration, et l’auteur se croit
autorisé à conclure que la suppuration ne peut être produite que
par des microbes.

En France, Straus® à fait un grand nombre d'expériences
dans le but de résoudre le même problème. Elles ont été faites
sur des lapins, des rats, des cobayes qu'il a inoculés avec l'essence
de térébenthine, l'huile de croton, l’eau chaude, différentes
substancessolides, etc. [lest arrivé aux mêmes résultats. Dans dix-
huit expériences faites avec l'essence de térébenthine, M. Straus
n’a vu que cinq cas de suppuration, et toujours il a trouvé le pus

1. Deutsche med. Wochenschrift, 1885, n° 48.

2. Archives de Langenbeck, vol. XXXII.
3. Bulletin de la Societé de biologie, 1883, p. 651.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LA SUPPURATION. ATI

plein de microbes. Sur cinq expériences faites avec l'huile de
croton, quatre ont donné un résultat négatif; dans la cinquième,
il s'est produit une suppuration, mais le pus contenait des
microbes. Enfin dans cinq expériences d'injection sous-cutanée
de 10 grammes de mercure sur le cobaye, on n’a pas vu survenir
de suppuration.

La question semblait donc résolue. Le nombre et la variété
des expériences, l’autorité de ceux qui les ontfaites ne laissaient
aucun doute sur la loi générale qui devait être établie. Les con-
clusions du reste s’imposaient d'elles-mèmes. Aussi ont-elles
été formulées nettement : la suppuration est le résultat d’une
action microbienne; il ne se produit pas de suppuration si les
microbes ne trouvent aucune voie pour entrer dans les tissus
soumis à l'influence de la substance irritante. L’inflammation
plus ou moins forte que ces substances irritantes développent
par elles-mêmes n’aboutit jamais à une formation de pus.

Si bien fondés que puissent paraître ces résultats, ils ont
pourtant été l’objet de discussions nombreuses. D’autres expéri-
mentateurs, en employant les mêmes substances, sont arrivés à
des résultats opposés. Ils ont trouvé que certaines substances
chimiques peuvent produire une vraie suppuration dans laquelle
il est impossible de découvrir la présence de microorganismes,
même en employant toutes les méthodes qui sont maintenant à
notre disposition pour la démonstration de la présence des fer-
ments. Parmi ces investigateurs, nous citerons M. Counci/mann",
qui introduisait des petites capsules en verre stérilisées, remplies
d'huile de croton, sous la peau des animaux en expérience. Après
la guérison complète de la plaie cutanée, ces capsules étaient bri-
sées pour que l'huile de croton pût agir sur le tissu. I remarquait
alors la formation de petits abcès autour de la capsule brisée. Le
pus ne renfermait pas de microbes.

Orthmann*® et Uskoff* ont également démontré que l'essence
de térébenthine et le mercure inoculés sous la peau du chien
produisaient une suppuration abondante, et que le pus ne conte-
nait pas de microbes.

Gravitz et de Bary * ont obtenu les mêmes résultats. Ces
4. Archives de Virchow, vol. XCIT, p. 217.
JAI VOL EXC p2519

3. Id., vol. LXXXVE p. 510.
4. Id., vol. CVIII, p. 67.

472 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

savants, qui ont étudié la question avec beaucoup de soin, ont
trouvé que le sublimé, l'alcool, les acides et les alcalis ne
peuvent pas produire d’abcès, mais qu'une injection d’une forte
dose de nitrate d’argent ou d’essence de térébenthine dans le
tissu sous-cutané du chien donnait lieu à une suppuration, sans
qu'on püt arriver à découvrir des microbes dans le pus. Grawitz
vient de publier (Archives de Virchow, vol. CX) quelques expé-
riences faites avec la cadavérine, une ptomaïne isolée par
Brieger, et avec laquelle on peut produire des abcès sans mi-
crobes chez le chien.

On voit donc que la question est loin d’être résolue. Bien que
basée sur des données sérieuses, l’opinion prédominante de l’ori-
gine bactérienne de la suppuration est moins sûrement prouvée
qu'on ue le croit généralement. Mais d'où viennent les contra-
dictions ? En se plaçant sur le même terrain, les expérimentateurs
ont obtenu des résultats différents. Les moyens employés par
les uns et les autres ont la même valeur. Aussi n'est-ce pas dans
un défaut de méthode qu'il faut chercher la cause de ces résul-
tats si profondément tranchés. Telle substance chimique peut
agir sur un animal alors que sur d’autres espèces elle n’a aucun
pouvoir irritant.

Désireux d'obtenir une solution du problème, nous avons
fait un grand nombre d’injections de différentes substances chi-
miques sur des chiens et des lapins. Les expériences ont donné
un résultat, en partie négalif, en partie posilif. Nous donnerons
d’abord la relation des premières, pensant qu’elles présentent
un cerlain intérêt par leur contraste avec les résultats que nous
avons obtenus plus tard et qui sont conformes à la théorie que
nous soulenons. Ceux-ci permettent du reste d'expliquer d’une
manière satisfaisante les différentes solutions auxquelles ont
abouti les expériences faites jusqu'ici.

Les substances suivantes ont été inoculées sous la peau des
lapins avec un résultat négatif : l'essence de térébenthine, le
mercure, le pétrole, le chlorure de zinc à 10 0/0, la glycé-
rine, le nitrate d'argent à 5 0/0. Les inoculations ont été faites
avec une seringue stérilisée avec soin; la peau, à l'endroit de
l'injection, avait été rasée, et désinfectée avec de l’eau phé-
niquée ou au sublimé. La solution inoculée avait été d’abord
stérilisée, et la piqüre de l’aiguille cautérisée ensuite au thermo-

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LA SUPPURATION. 473

cautère. La dose injectée était d’un demi-centimètre cube.

Nous n'avons vu qu’une seule fois une suppuration abondante,
après l’inoculation de l'essence de térébenthine ; le pus était plein
de staphylococcus aureus. Dans toutes les autres expériences
dont le nombre s'élève à trente, nous n'avons vu aucune trace
de suppuration. Les substances étaient résorhées, mais en s’ac-
compagnant de phénomènes dillérents. La glycérine, le chlorure
de zinc, le nitrate d'argent n'ont donné lieu à aucune irritation
remarquable du tissu sous-culané, tandis qu'avec le mercure,
l'essence de térébenthine, le pétrole, il s’est produit autour de
l'endroit de l’inoculation une petite infiltration qui jamais n'a
donné lieu à une vraie formation du pus.

La même série de substances a été injectée dans la chambre
antérieure de l'œil du lapin. Le résultat a été le même pour
toutesles substances employées, excepté pour le mercure. Inutile
d'ajouter que les mêmes précautions ont été prises que pour les
injections sous-cutanées. Il y a toutefois un accident qu'il faut
absolument éviter, c’est la piqüre de l'iris. On comprend toute
l'utilité de cette recommandation. L'iris blessé s’enflamme avec
la plus grande facilité. Mais il est facile d'éviter cette complica-
tion si l’on a soin de fixer le globe de l’œil pendant la pénétra-
tion de l'aiguille dans la chambre. La quantité de liquide ino-
culé était de deux gouttes. Siles substances étaient lentes à se
résorber (pétrole, térébenthine) on apercevait pendant plusieurs
semaines les gouttes inoculées derrière la cornée. Pas d’acci-
dent inflammatoire, aucun signe d'irritation, si ce n’est une très
petite formation de fibrine autour d’elles. Jamais nous n'avons vu
se produire une vraie suppuration, el nos expériences ont été
faites plus de quarante fois. Le chlorure de zine, le nitrate d’ar-
gent et la glycérine produisaient une petite cautérisation de la
cornée, mais jamais de suppuration.

L'inoculation du mercure a donné des résultats tout différents.
Le mercure a une action très énergique sur l'œil. Il produit une
suppuration considérable qui ressemble beaucoup à celle occa-
sionnée par les microbes. Le produit de cette suppuration — le
pus — est aussi vrai que le pus d’origine bactérienne. Si on
inocule une très pelite quantité (5 centigrammes environ) de
mercure stérilisé à 160° dans la chambre antérieure de l'œil d’un
lapin, on voit survenir dans les 24 heures qui suivent l'opération

474 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

un nuage jaune-gris de pus autour de la goutte de mercure. En
même temps, la muqueuse conjonctivale devient un peu rouge et
gonflée. Le pus continue à se former les jours suivants et il
arrive quelquefois à remplir la moitié de la chambre antérieure,
et même plus, tandis que la gouttelette de mercure reste toujours
dans le fond de la chambre. Quand on oavre l'œil après avoir
sacrifié le lapin, on trouve dans la chambre antérieure une masse
jaune, visqueuse, qui sous le microscope se montre composée de
fibrine et de globules blanes. On n’y rencontre aucun microbe,
ni en colorant le pus d’après les méthodes usuelles, ni en ense-
mençant le pus dans du bouillon nutritif ou sur la gélose.
L’ensemencement a été fait quelquefois le lendemain de l’in-
troduction du mercure, à une époque où on ne pouvait pas, mème
en acceptant la théorie de la phagocytose, supposer faite l’absorp-
tion des microbes hypothétiques par les globules blancs. Il à été
fait également trois ou quatre jours plus tard, pendant que la
production du pus était en pleine activité.
Cette expérience, que j'ai renouvelée maintes fois toujours
avec le même résultat, me paraît assez concluante pour démontrer
Ja possibilité d’une formation de pus sans microbes; dureste, le
développement très régulier de la suppuration autour du mer-
cure, l'augmentation lente du pus, l’inflammation aiguë de la
conjonctive, l'arrêt de la suppuration, qui devient stationnaire
quand le mercure est tellement enveloppé de pus qu'il a perdu
son action pyogénique, tout cela démontre assez nettement l’ori-
gine non bactérienne de cette suppuration.

Tandis que les expériences sur les lapins ont fourni des don-
nées qui — excepté pour le mercure — concordent avec la théorie
généralement adoptée de l’origine bactérienne de la suppuration,
les inoculations sur les chiens ont donné des résultats qui prou-
vent d’une manière évidente que la théorie n’est pas applicable
dans sa généralité. Les chiens conviennent très bien à ce genre
d'expériences. Le tissu sous-cutané est rapidement influencé
par les substances irritantes et suppure avec une grande facilité.
Les causes de ce phénomène nous échappent. Cette tendance à
la suppuration est-elle due à ce que la résorption se fait plus
difficilement dans le tissu sous-cutané du chien que dans celui
du lapin, ce qui l’exposerait à une irritation plus longue, ou

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LA SUPPURATION. 475

faut-il faire intervenir d’autres éléments ? Pour résoudre cette
question des recherches sont nécessaires. Pour le moment nous
nous contentons d'un point qui est acquis au débat. Des sub-
stances qui ne produisent aucun effet appréciable chez le lapin,
occasionnent chez le chien des suppurations considérables.

Nous avons réussi à produire des suppurations sans micro-
bes chez le chien en inoculant les substances suivantes : le nitrate
d'argent, l’essence de térébenthine et le mercure. 11 ne serait
probablement pas difficile d'augmenter la liste des substances
pyogènes. Nous nous sommes bornés à ces trois, parce que c’est
à l’occasion de ces trois substances que se sont élevées de nom-
breuses discussions, et parce que la pensée qui nous a guidé dans
ces expériences était plutôt celle de démontrer l’origine chimique
de la suppuralion que de donner une énumération toujours
incomplète des moyens avec lesquels elle peut se produire.

Les inoculations ont été faites en appliquant l’antisepsie la
plus stricte. La seringue employée, contenant 1 centimètre cube,
était stérilisée soigneusement, et l'aiguille placée dans l’eau
phéniquée à 4 0/0 jusqu’au moment de son emploi. A l'endroit
où devait être faite la piqûre, un peu à côté de l’épine dorsale, le
chien était rasé sur une grande étendue, puis savonné et lavé à
l’eau phéniquée à 4 0/0. Après l'injection, la plaie était cauté-
risée avec une baguette en verre rougie. Un pansement antisep-
tique était ensuite appliqué et fixé par des bandes amidonnées
destinées à empêcher complètement le chien de gratter ou de
déchirer le pansement. Au moment de l'examen du pus, le chien
était fixé sur la table d'opération, et, le bandage ôté, l’abcès ouvert
avec un bistouri flambé, le pus était aspiré dans des pipettes sté-
rilisées et ensemencé dans de la gélose ou dans du bouillon de
veau dont on avait auparavant éprouvé la valeur nutritive. Des
échantillons du pus étaient étalés sur des lamelles pour être
soumis à l'examen microscopique. On ne nous fera pas le
reproche d'avoir omis une seule précaution pour que l’opération
fût complètement antiseptique. D'autre part, si les microbes
avaient existé dans le pus, ils n'auraient pas pu échapper à notre
attention, attendu qu'ils auraient été susceptibles d’être colorés
et cultivés d'après les procédés usuels.

Nous nous sommes convaincu de la manière suivante de la
stérilisation complète de la seringue employée. Après l'avoir net-

476 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

toyée et stérilisée comme si! s'agissait d’une inoculation sous-
cutanée, on la remplissait avec de l’eau stérilisée. Cette eau était
ensuite ensemencée à l’aide de la seringue dans du bouillon.
Cette expérience a été renouvelée 25 fois. Dans aucun cas le
bouillon ne s’est troublé. Nous avions donc le droit de supposer
suffisant le procédé de stérilisation de la seringue.

Le nitrate d'argent etl’essence de térébenthine ont été portés
à l'ébullition, et le mercure chauffé à 160°, avant leur emploi.
Toutes les règles de l’antisepsie ont donc été strictement appli-
quées.

Dès lors, il nous semble difficile de ne pas admettre les con-
séquences qui découlent forcément de nos essais. Elles se mon-
trent avec une évidence incontestable. Puisque l’inoculation a
été suivie d’une suppuration abondante, celle-ci ne peut avoir été
produite que par l’action des substances inoculées dans le tissu
sous-cutané.

Les phénomènes qui ont suivi l'injection ont été à peu près
les mêmes pour l’essence de térébenthine et le nitrate d'argent.
L'effet du mercure a été un peu différent, eu égard à la rapidité
avec laquelle la suppuration est survenue. 24 heures après l'in-
jection d’un demi-centimètre cube d'essence de térébenthine pure
ou d’une dose égale d’une solution à 10 °/, de nitrate d’argent
dans le tissu sous-cutané d’un jeune chien, il s’est formé à l’en-
droit de l’inoculation une tumeur molle de la grandeur d'une
pièce de dix centimes. La peau était un peu plus rouge et plus
chaude qu’à l’état normal. En incisant la tumeur à cette époque,
on voit qu'elle est constituée par du tissu œdémateux contenant
beaucoup de sérosité et de nombreux globules blancs, mais on
n'y trouve pas du vrai pus. Dans les injections faites avec de la
térébenthine, on constatait la présence de gouttes nombreuses
de cette substance dans le liquide, qui en conservait l'odeur
caractéristique.

En faisant l’incision 48 heures après l'injection, on trouve du
vrai pus en abondance dans l’abcès.

La quantité de pus augmente encore les 24 heures suivantes,
et celui-ci se montre absolument dépourvu de microbes, aussi
bien par l'épreuve sous le microscope que dans le bouillon nutritif.

L’injection du mercure produit une suppuration qui se dé-
veloppe un peu plus lentement. La quantité injectée a été de

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LA SUPPURATION. 477

0c°,2. 48 heures après, il se forme une infiltration de la grandeur
d’une pièce d’un franc. Elle contient déjà du pus en petite quan-
tité, mais ce n’est qu'après quatre ou cinq jours qu'on trouve la
tumeur transformée en un véritable abcès qui contient du pus
jaune en quantité considérable. Ajoutons que le pus ensemencé
dans du bouillon se montre stérile.

En faisant agir sur les tissus des substances irritantes, on peut
donc produire une suppuration sans microbes, et non seulement
de petites infiltrations de pus, mais de vrais abcès aigus, difficiles
à distinguer de ceux occasionnés par les ferments. Tout nous
porte donc à croire que les microbes produisent la suppuration
en amenant des altérations chimiques sous l'influence directe ou
indirecte de certaines substances qu'ils engendrent.

Les expériences qui tendent à prouver ce lait sont loin d’être
terminées, et je n’en dirai pour aujourd’hui qu'un mot, mais elles
ont déjà donné des résultats suffisants pour démontrer l'existence
dans les bouillons de culture du Staphylococcus aureus d’une
substance pyogénique. Les faits observés sont les suivants. Une
culture dans du bouillon de veau du Staph. aureus, chauffée à
100°, température qui tue sûrement ce microbe, peut produire
un abcès sous-cutané chez le chien. Injectée dans la chambre
antérieure de l'œil du lapin, elle produit l’œdème de la conjonctive,
la décoloration de l'iris et la formation de pus dans la chambre
antérieure. L'inflammation disparaît assez vite, et une fois guérie
ne laisse aucune trace dans le tissu de l'œil. La stérilité de la
cullure chauffée a été démontrée par l’ensemencement négatif
dans du bouillon, la stérilité du pus par l’inoculation dans l'œil
d'un autre lapin. Le pus inoculé a été résorbé sans donner lieu à
aucune inflammation.

Le chauffage de la culture dans l’autoclave à 120° détruit
tout à fait les facultés pyogènes du microbe.

En filtrant la culture dans le bouillon à travers le filtre Pas-
teur, on obtient un liquide qui produit un ædème de la conjonc-
tive et une suppuration légère dans la chambre antérieure de
l'œil du lapin.

En précipitaut le liquide filtré avec de l'alcool, il se forme un
précipité assez abondant de substances albumineuses. Après
filtration et lavage avec de l'alcool, une solution dans de l’eau
slérilisée de ce précipité produit les mêmes effets que la culture

478 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

filtrée : œdème de la conjonctive, décoloration de iris, suppura
tion légère dans la chambre antérieure de l’æil du lapin. Cette sub-
stance, qui est probablement une diastase ressemblant à la sub-
stance pyogène que M. Arloing' vient de trouver dans des cultures
du microbe de la péripneumonie contagieuse, est tout à fait diffé-
rente de la substance cristalline que M. Leber? dit avoir extraite
des cultures du Staphyl. aureus au moyen de l'alcool, et avec
laquelle il a produit une inflammation dans l'œil du lapin.

Si la découverte de M. Leber se confirme, il y aura donc lieu
de supposer que le microbe de la suppuration peut produire
plusieurs substances pyogènes, et que c’est par leur intermédiaire
qu'il agit sur les tissus en produisant la suppuration.

La suppuration doit donc être considérée comme l'effet d’une
réaction des issus contre certains substances chimiques, qu'elles
soient produites par des êtres vivants ou de nature purement
chimique.

Nous ne voulons pas terminer ce travail sans adresser à
MM. Cornil et Duclaux nos remerciements pour l'extrême bien-
veillance avec laquelle ils nous ont admis dans leurs labora-
toires.

1. Voy. les deux communications intéressantes de M. Arloing dans les Comptes
rendus de l’Académie des sciences, 1888, nos 49 et 925.
2. Fortschritte der Medicin, vol. VI, 15 juin 1888.

NOTES DE LABORATOIRE SUR L'IMMUNITÉ CONFÉRÉE AUX CHIENS
CONTRE LA RAGE, PAR INJECTIONS INTRA-VEINEUNES,

Par EE. ROUX.

Dans un mémoire paru récemment, M. Protopopoif ‘ a fait
connaître qu'il était possible de vacciner rapidemeni des chiens
contre la rage, en leur injectant dans les veines des émulsions
de moelles rabiques de virulence graduée. Ainsi quatre chiens
qui ont reçu dans les veines, à 3 jours d'intervalle, un centi-
mètre cube d’émulsion des moelles de 6, de 3 et de 1 jour, ont
résisté ensuite à l'introduction du virus fixe dans le sang et enfin
à Ja trépanation. Ces expériences de M. Protopopolf nous rap-
pellent des essais déjà anciens, qui prouvent qu'il est possible
de rendre des chiens réfractaires à la rage par une seule injec-
tion intra-veineuse de virus rabique affaibli, à la condition d'en
injecter des quantités suffisantes.

EXPÉRIENCES. — Le 22 décembre 1886, un chien neuf recoit dans la veine
du jarret droit 35° d’une émulsion très fine, préparée avec une moelle
entière de lapin de passage desséchée depuis 5 jours à 23°. Ce chien reste
bien portant les jours suivants. Le 5 février 1887, il est inoculé, par trépa-
nation, avec du virus de rage des rues; ilest pris de rage le 15 mars (38 jours
après la trépanation).

Le 21 décembre 1886, un chien neuf recoit dans la veine du jarret droit
3oce d’une émulsion préparée avec une moelle entière desséchée depuis
6 jours. En même temps, un lapin est inoculé, par trépanation, avec
la même émulsion. Le chien et le lapin sont restés bien portants. Le 1° février
1887; le chien est inoculé par trépanation, avec du virus de rage des rues.
Il n’éprouve aucun effet et est encore bien portant un an après.

Le 23 décembre 1886, un chien neuf recoit, dans les mêmes conditions
que les précédentes, 85ce d’émulsion préparée avec une moelle entière âgée
de 7 jours. Un lapin est inoculé, sous la dure-mère, avee la même émulsion.
Le lapin ne prend pas la rage, mais le chien est pris de rage paralytique le
25 janvier (33 jours après l'injection intra-veineuse).

4. Centralbl. f., Bakt. t. IV, p. 85, 1888. Voir ces Annales, n° 8, 1888.

480 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Le 2% décembre 1886, un chien neuf reçoit dans les veines 35e d’émul-
sion préparée avec une moelle de 8 jours. Un lapin est inoculé, par trépa-
nation, avec la même moelle. Le 22 janvier (29 jours après), le lapin est
pris de rage. Le 18 avril 1887, le chien est trépané et inoculé avec du virus
de rage des rues. Il reste bien portant et est sacrifié plus d’un an après.

L

Le 29 décembre 1886, un chien neuf recoit dans les veines 35° d'émul-
sion de moelle de 9 jours. Un lapin est inoculé sous la dure-mère avec la
même émulsion. Ce lapin n'a pas pris la rage. Le 18 avril, le chien est ino-
culé dans la cavité arachnoïdienne avec du virus de rage des rues. Il prend
la rage mue le 2 mai 1887 (15 jours après la trépanation).

Le 39 décembre 1886, un chien neuf recoit dans les veines 35ce d’émul-
sion de moelle de 10 jours. Un lapin est inoculé, par trépanation, avec la
même moelle: il reste bien portant. Le 28 mars 1887, le chien est inoculé
sous la dure-mère par le virus de rage des rues, Il est pris de rage mue le
9 avril (12 jours après la trépanation).

Le 30 décembre 1886, un chien neuf reçoit dans les veines 35° d'émul-
sion de moelle de {1 jours. Un lapin est inoculé sous la dure-mère, par la
même émulsion; ce lapin n’a pas pris la rage. Le 4° février 1887, le chien
est inoculé, dans la cavité arachnoïdienne, avec du virus des rues. Il est bien
portant plus d’un an après, époque à laquelle il est sacrifié.

Le 31 décembre 1886, un chien neuf recoit dans les veines 35cc d'émul-
sion de moelle de 42 jours. Un lapin est inoculé par trépanation avec la
même émulsion, il est pris de rage le 12 janvier 1887, et le chien est égale-
ment devenu enragé le 17 janvier.

Le poids de moelle desséchée employée pour faire les émulsions qui ont
servi dans ces expériences était de cinquante centigrammes environ.

Ces expériences montrent qu’il est possible de rendre rapi-
dement des chiens réfractaires à la rage, par une seule injection
intra-veineuse de moelles rabiques dont la virulence est très
faible, comme celles de 8 et de 11 jours. Cependant, le résultat
n’est pas constant, et si parfois l’immuanité est acquise après une
seule injection de moelle de 11 jours, on voit que des injections
de moelles plus fortes, faites aux mêmes doses, ne vaccinent pas
à coup sûr. Ces irrégularités disparaîtraient, sans doute, si
l’on employait des doses plus faibles et si l’on faisait 3 ou 4 in-
jections successives d’émulsions de virulence graduées. C'est ce
qu'a fait M. Protopopolif.

On peut aussi tirer d’autres enseignements des expériences

1. Voir, Annales de l'Institut Pasteur, t. IT, p. 9, les expériences de M. Bardach
sur la vaccination des chiens par injection de moelles faibles sous la peau.

L'IMMUNITÉ CONFÉRÉE AUX CHIENS CONTRE LA RAGE. 481

qui précèdent; à savoir: que la virulence des moelles ne corres-
pond pas toujours à leur âge. Nous avons vu, en effet, que des
moelles de 12 jours et de 7 jours ont donné larage quandon les
a injectées à grandes doses dans les veines des chiens, tandis
que les moelles de 5, de 6, de 8 jours se sont montrées inoften-
sives. On conçoit, en effet, que pendant la dessiccation le virus
rabique n’est pas atteint en même temps dans tous les points de
la moelle; des îlots peuvent rester vivants et virulents dans le
centre quand déjà tout le reste aura été modifié. On pourra donc
trouver dans les moelles des portions notables de substance
dépourvues de virus vivant. C’est une des raisons pour les-
quelles, dans la pratique, on multiplie les injections pour donner
sûrement l'immunité.

Dans les expériences que nous venons de rapporter, comment
l’immunité a-t-elle été donnée aux animaux qui ont reçu des doses
considérables d’émulsion de moelles de 11 jours et de 8 jours?
Est-ce par l’action de la substance chimique qui, d’après M. Pas-
teur, accompagne le virus rabique? est-ce par celle du virus
resté actif dans les moelles injectées? Les moelles, qui ont
donné l’immunité aux chiens, n’ont pas causé la rage chez les
lapins auxquels elles ont été inoculées sous la dure-mère. Il
semble donc qu’elles ne renfermaient pas de virus actif. Mais
cette épreuve de la virulence des moelles est tout à fait insuffi-
sante. Nous avons vu, en effet, qu’une émulsion de moelle de
1 jours, injectée dans la cavité arachnoïdienne des lapins, ne leur
a pas donné la rage, tandis que la même émulsion injectée à
fortes doses dans les veines d’un chien l’a rendu enragé. L’in-
jection sous la dure-mère ne permet d'introduire que très peu
de matière, dépourvue peut-être de virus vivant, tandis qu'une
parcelle de substance nerveuse prise à côté en contient
au contraire une quantité notable. Il faudrait pouvoir inoculer,
par trépanation, des doses égales à celles que l’on fait pénétrer
sous la peau ou dansles veines. L'action de la substance vacci-
nale non vivante ne peut être mise en évidence qu'en soumettant
les moelles rabiques à des actions qui tuent sûrement le virus: le
point délicat est de trouver des moyens de faire périr celui-ci
sans que celle-làsoit détruite en même temps :.

4. Voir les expériences de M. Pasteur sur ce sujet, Comptes rendus Acad.
des sc., août 1888.

VIBRIO METSCHNIKO VI «. sp)
ET SES RAPPORTS AVEC LE MICROBE DU CHOLÉRA ASIATIQUE,

Par M. N. GAMALÉIA.

En étudiant l’état sanitaire du marché aux oiseaux d’Odessa,
nous avons découvert une nouvelle maladie infectieuse des
poules qui présente, sous plusieurs rapports, un intérèt parli-
culier.

Cette maladie est plus fréquente chez nous pendant l'été que
le choléra des poules (septicémie des oiseaux) et ses cas paraissent
se multiplier à mesure qu'’augmente la chaleur de l’air et plus
particulièrement du sol. Ce sont les jeunes individus qui sont
principalement frappés de cette maladie; cependant nous l'avons
rencontrée aussi chez les poules adultes.

Par ses symptômes extérieurs, cette maladie, que nous propo-
sons d'appeler la gastroentérite cholérique des oiseaux (gastroente-
ritis cholerica), ne diffère pas beaucoup de la septicémie (choléra des
poules). Les oiseaux malades sont immobiles et comme endormis,
avecle plumage hérissé ; ils ont la diarrhée.Cependant, la maladie
confirmée a une durée plus longue que la septicémie; les poules
adultes peuvent rester dans cetétat de sommeil jusqu'à 48 heures
et davantage, Une différence clinique très nette entre ces deux
maladies est donnée par la marche de la température:tandis que
le choléra des poules présente jusqu’à la mort une fièvre intense
(43-440), notre maladie nouvelle est caractérisée par une tempé-
rature voisine de la normale (41-38°).

A l’autopsie, le phénomène le plus constantest une hyperémie
de tout le canal digestif, depuis le gosier, qui est rempli d'un
liquide séreux. Les intestins grêles contiennent un liquide abou-
dant, d’une couleur gris jaunâtre, avec une quantité plus ou
moins grande de sang. Les autres organes ont l'aspect normal.
Très intéressante, comme signe différentiel avec la septicémie,
est l'absence complète de l’hyperémie de la rate, qui reste tou-
jours petite et pâle.

L'examen microscopique ne révèle ordinairement rien dans
le sang. Du reste, le sang des oiseaux adultes est stérile et non

VIBRIO METSCHNIKOVI. 483

infectieux. Mais, chez les poulets, on peut expérimentalement
constater la présence de bactéries spécifiques dans le sang. Les
pigeons, notamment, inoculés par une grande quantité de ce
sang (2 à 4% d'une émulsion assez dense) périssent en 12 ou
20 heures. Chez ces pigeons on retrouve à l’autopsie les mêmes
lésions que ci-dessus : rate exsangue, intestins remplis d'un con-
tenu séro-purulent, coloré par du sang. Dans le sang du cœur,
on trouve ordinairement, en quantité énorme, des bactéries carac-
téristiques qui ont l'aspect du bacille-virgule de Koch. Les
mêmes bactéries se retrouvent mêlées à d’autres dans le contenu
du gosier et dans les intestins des pigeons et des poules qui sont
mortes de la gastroentérite cholérique. Le sang des pigeons les
contient à l'état de pureté et en donne immédiatement des cul-
tures pures.

Les virgules que nous décrivons ont ordinairement dans le
sang des pigeons la forme de bacilles larges, courts et courbés.
avec les bouts arrondis. Elles se trouvent parfois réunies en spi-
rales avec 5-10 tours plus onu moins rapprochés. Quelquefois on
rencontre des spirales doubles contournées à la facon d’une
corde lâchement enroulée sur elle-même. Leur grandeur n’est
pas constante : dans le saug d’un pigeon elles n'ont que le dia-
mètre ordinaire des virgules cholériques de Koch, tandis que
chez le pigeon du passage suivant elles deviennent deux fois
plus fortes. Ces bactéries se laissent facilement cultiver dans
les milieux nutritifs ordinaires.

Dans le bouillon de veau légèrement alcalin (avec ou sans
peptone), elles se multiplient très vite, et, 6-7 heures après l’en-
semencement, on peut déjà voir à l'œil nu un trouble uniforme
qui se résout en ondes soyeuses quand on agite. Le lendemain
la surface du liquide se couvre d’un mince voile blanc. Ce
voile reste mince et fragile les jours suivants, où il se forme
au-dessous de lui une couche dense opaque et grise. L'examen
microscopique révèle dans ces cultures l’existence des mêmes
bactéries recourbées, qui se réunissent parfois en spirales très
longues. En gouttes pendantes, on constate que les bactéries
vivantes sont douées d'un rapide mouvement spontané. Ces
cultures, dans le bouillon ordinaire, n’ont aucune odeur pro-
noncée.

Laréaction avec l’acide sulfurique donne une coloration oran-

484 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

gée à la culture de ces bactéries, faite dans le bouillon peptonisé.

Après une piqüre dans la gélatine nutritive (à 5 0/0), nos bac-
téries se développent assez lentement. Le 2° ou le 3° jour, on y
voit une bulle de gaz qui devient plus grande les jours suivants,
et qui se prolonge en bas par un cylindre de gélatine liquéfiée,
dont l'axe central est occupé par une bandelette blanche con-
tournée en spirale. Plus tard la bulle disparaît en s’ouvrant de
plus en plus au sommet, le cylindre liquéfié s’élargit pour occuper
toute la largeur de l’éprouvette ; il se termine en bas par une
surface horizontale, et son fond est occupé par des masses gra-
nuleuses et blanches. Dans les cultures sur plaques de gélatine,
on troùve le 3° jour un aspect typique et saisissable à l’œil nu.
Les colonies isolées ont la forme d’une rondelle liquéfiée trans-
parente, munie d'un point blanc au centre. Examinées au micro-
scope, ces colonies se divisent en trois zones, dont l’extérieure,
figurée par la gélatine liquéfiée, est très pâle avec une structure
homogène, l'intermédiaire a des contours oudulés et un aspect
granuleux, tandis que le centre est brun et opaque.

Les cultures sur la gélose prennent souvent un aspect carac-
téristique : elles sont composées de couches blanches, plus
fortes au centre, où elles prennent une teinte jaunâtre et où elles
se couvrent d’un voile brillant.

Sur les pommes de terre, nos bactéries croissent, au-dessus de
250, en masses d’une couleur brune pâle (café au lait), plus
foncée (couleur de bière brune) au centre.

Les bactéries se développent très bien dans le lait. Celui-ci
ne change pas d’aspect les premiers jours, mais une semaine
environ plus tard il est coagulé (à 35°) : la caséine se précipite
au fond en masses irrégulières qui ne se redissolvent plus. Le
lait acquiert en même temps une forte réaction acide et les bac-
téries y périssent dans un temps assez court.

Les cultures dans les œufs sont typiques. Dix jours après
l'ensemencement, on trouve, en brisant la coque, que le blanc
d'œuf est tout à fait dissous et transformé en un liquide jaunâtre
et louche, tandis que le jaune, qui conserve sa forme et sa consis-
tance, est devenu d’un noir parfait. Nos bactéries sont très sen-
sibles à l’action des températures élevées. Chauffées 5 minutes
à 50°, elles sont tuées. Une et deux minutes à 50° les laissent
absolument vivantes, de même que dix minutes à 450.

VIBRIO METSCHNIKO VI. 485

Dans quelques conditions spéciales, nos bactéries forment
de véritables germes (endospores) caractérisés par la double
coloration. Mais nous remettons à une autre fois l'exposition
plus complète de ce fait.

Caractérisées de cette manière, nos bactéries seplacent par
leur mode de sporulation dans le genre Vibrion. Par conséquent,
nous proposons de les appeler, Vibrio Metschnikovi, pour les dis-
tinguer des vibrions semblables (vibrio choleræ asiaticæ, Finkler
et Prior, Denecke).

Il est incontestable que les vibrions de Metschnikoff cons-
tituent la cause unique de la gastroentérite cholérique. [ls sont,
d’après nos expériences, pathogènes pour les pigeons, les poules
et les cobayes.

Les pigeons sont très susceptibles à l’action de nos bactéries.
Quelques gouttes de la culture, inoculées sous la peau ou dans
les muscles, suffisent pour les tuer en 8 à 12 heures. Il faut,
pourtant, remarquer que les bactéries retirées du corps des pou-
letsn’ont pas toujours cette virulence extrême, qu'elles acquièrent
dans tous les cas par le passage successif à travers les pigeons.

Ainsi, par exemple, le 20 juin, le sang d’un pigeon (deuxième
passage après un poulet) est inoculé, en quantité de 1°, à deux
pigeons. Un seul de ceux-ci est mort, tandis que l’autre se réla-
blit et devint réfractaire au virus virulent. Le 9 juillet, les mêmes
bactéries, après des passages quotidiens par les pigeons, sont
devenues absolument mortelles pour ces derniers à la dose de
un huitième de centimètre cube.

Avec cette virulence croissante, survient un changement
intéressant dans le contenu de l'intestin enflammé des pigeons
qui ont succombé. Ce contenu consiste toujours en un liquide
rosé avec de petits flocons gris. Maïs avec le virus faible, ces flo-
cons, à l'examen microscopique, se composent principalement
de leucocytes, tandis qu’avec le virus le plus virulent, on ne
trouve dans ces flocons qué des cellules épithéliales exfoliées.

Nos bactéries n’ont aucune action sur les pigeons, si elles
leur sont données à manger même en quantités très grandes. Les
poulets, au contraire, qui sont plus réfractaires au vibrion de
Metschnikoff, qui exigent des doses beaucoup plus fortes pour
être tués par l’inoculation sous-cutanée ou intra-musculaire,

succombent facilement à l'infection par la nourriture.
31

486 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Ainsi, le 27 juillet, un poulet a bu du sang d’un pigeon,
mort de gastro-entérite cholérique (deuxième passage d’un pou-
let qui a succombé à la maladie spontanée). Ce poulet meurt dans
la nuit du 29 au 30 juillet. Les intestins sont très hypérémiés et
remplis d’un liquide contenant des flocons gris. Dans son sang
on trouve et on isole en cultures les vibrions de Metschnikoff.
Évidemment, ce poulet s'est infecté par les voies digestives. Je
ne veux pourtant rien préjuger sur le mode d'infection naturelle
qui fait l’objet de nos recherches actuelles.

Les lapins et les spermophiles sont très réfractaires à nos
bactéries, quoiqu'ils puissent être tués par de fortes quan-
tités.

Les cobayes, au contraire, sont des plus susceptibles. [ls ne
résistent à aucun mode d’inoculation virulente, et succombent
aussi par suite de l'infection par l'estomac. Il n’est même pas
nécessaire, pour cela, de neutraliser le suc gastrique par la
soude, ou d'employer pour l’intoxication de l'animal la teinture
d’opium, etc. ; il suffit tout simplement de faire avaler au cobaye
quelques centimètres cubes d’une cullure virulente. Ainsi, le
13 août, deux cobayes ont avalé 4 centimètres cubes d’une cul-
ture dans du bouillon datant du 11 août. Le lendemain, tous les
deux étaient morts. A l’autopsie, ils ont présenté des rates ané-
miques ; les intestins étaient remplis d’un liquide contenant des
flocons d’épithélium exfolié. Un d’eux avait en outre une
exsudation pleurétique séreuse. Les vibrions ont été trouvés dans
le sang du cœur et dans le liquide intestinal.

En résumant, on peul conclure, au sujet de l’action pathogène
de nos microbes, qu'ils ont une prédilection pour la localisation
dans le canal intestinal, où ils produisent la desquammation de
l'épithélium ; que cette localisation se fait aussi après l’inocula-
tion sous-cutanée, intramusculaire ou intrapéritonéale; que les
animaux résistants ne sont tués que par la multiplication locale
des microbes. probablement par suite des ptomaïnes qu'ils
forment ; que chez les animaux susceptibles (poulets, pigeons,
cobayes), les microbes passent dans le sang en y acquérant une
augmentation de leur virulence.

Maintenant, si on compare toutes les connaissances que nous
avons acquises jusqu'ici sur les propriétés de nos microbes, aux
faits bien établis qui concernent le microbe du choléra asiatique

VIBRIO METSCHNIKO VI. 487

de Koch, on est frappé de la grande ressemblance de ces deux
formes. Même aspect morphologique, aucune différence sérieuse
dans les cultures, mêmes propriétés pathogènes.

Conduits par ces analogies, nous avons recherché s'il n'existe
pas entre ces deux formes une parenté plus étroite. En effet,
nous avons trouvé qu'on peut vacciner pour l’une des maladies
avec le microbe spécifique de l’autre.

Ainsi, le pigeon réfractaire aux vibrions de Metschnikoff, dont
nous avons parlé plus haut, s’est montré indemne aussi par
rapport au virus du choléra asiatique.

D'un autre côté, tous les pigeons que nous avons vaccinés
contre le choléra, sont devenus en mème temps réfractaires à nos
vibrions. Voici une expérience qui le prouve.

Le 26 août, dix pigeons vaccinés contre le choléra‘ sont
inoculés, avec un pigeon de contrôle, par un quart de centimètre
cube d’une émulsion faite avec du sang de pigeon mort de
gastroentérite. Le pigeon témoin est mort le même jour. Deux
pigeons vaccinés ont succombé pendant la nuit. Les huit
autres sont restés complètement bien portants. Ainsi, nous
devons conclure que nos microbes sont très étroitement liés
aux vibrions du choléra asiatique. Nous ne pouvons
imaginer d'explication plus naturelle de toutes leurs propriétés
communes que celle qui les considérerait comme deux variétés
physiologiques du mème microbe*. L'une, plus particulière à
l'homme, ne se produirait que dans l’Inde, grâce peut-être au
passage par quelque animal indigène ; l’autre existerait dans les
pays européens.

D'un autre côté, il est possible que nos microbes soient liés
aux maladies humaines telles que le choléra nostras et la
diarrhée estivale des enfants Voici un fait qui parle décidément
en faveur de cette connexité.

Le 16 août, M. le D' Silouianoff a eu l'obligeance de nous
remettre les déjections d'un homme malade du choléra européen.
Les déjections consistaient en un liquide grisàtre rempli de
flocons riziformes, formés par les épithéliums exfoliés. Nous
avons nourri avec ce liquide un petit poulet tout jeune, qui a

1. Voir Comptes rendus de l’Académie des sciences, 20 août 1888.
9, Le vibrion du choléra asiatique se distinguerait, par exemple, par sa faculté
plus grande de former les spores.

488 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

succombé trois jours plus tard, le 20 août, avec tous les symp-
tômes de la gastro-entérite cholérique. Dans son gosier, dans
son intestin, ainsi que dans son sang, ont été trouvés les vibrions
caractéristiques de cette maladie. Ces vibrions pourtant n'avaient
qu'une virulence très faible, puisque le sang du poulet, inoculé
dans les muscles pectoraux d’un pigeon et dans le péritoine d'un
cobaye, ne leur a donné qu'un malaise passager (chez le cobaye
la température tomba jusqu'à 33 degrés) : mais ce malaise a été
suivi d'une 2#munité complète vis-à-vis du virus virulent emprunté
à du sang de pigeon de passage le 25 août.

Ce fait positif aurait, d’après nous, beaucoup plus de valeur
que les résultats négatifs des recherches de MM. Koch et Franck,
qui n’ont trouvé aucun organisme spécifique dans plusieurs cas
du choléra européen. Et cela pour deux raisons principales :

1° Tous ces auteurs se sont servis pour la recherche de la
méthode des cultures, qui est incontestablement inférieure à la
méthode par infection quand il s’agit de déceler un organisme
pathogène perdu entre les bactéries banales. Nous avons déjà
prouvé cette infériorité pour plusieurs maladies, comme la
pneumonie fibrineuse, le choléra des poules, le charbon ‘.

Or, nous avons toute raison de croire qu'en utilisant notre
méthode expérimentale de l’infection d’un jeune poulet, on arri-
verait à de meilleurs résultats.

2° Nous avons aussi montré. dans notre article sur la pneu-
monie, que les microbes pathogènes, après avoir produit la lésion
spécifique, peuvent disparaître pour être remplacés par des
bactéries saprophytiques banales. Pour le choléra européen, qui
est une maladie bénigne, cette disparition des vibrions patho-
gènes est bien probable, vu l’'émigration leucocytaire formidable
que nous avons constatée dans le canal intestinal après l’infec-
tion des pigeons et des cobayes par des vibrions de Metschnikoff
peu virulents.

Ces deux ordres de considérations nous forcent à conclure
que toute l’étiologie du choléra nostras est à refaire d’après nos
données expérimentales.

4. Voir nos articles sur l’étiologie de la pneumonie fibrineuse chez l'homme (les

Annales, n° 8) et sur l’étiologie du choléra des poules (Centralblatt f. bacteriologte,
OA EU TON (SE)

SUR LA RECHERCHE DES ALCOOLS DE DEGRÉ SUPÉRIEUR

Par M. E. DUCLAUX.

La découverte dans un liquide des alcools de degré supérieur
mélangés en faible quantité à l’alcool ordinaire est un problème
plein d'intérêt. Au point de vue de l'hygiène, sa solution
permettrait de n’admettre dans la consommation que des alcools
purs, ou du moins à peu près purs, car toutes les fermentations
industrielles, même celles quifournissentles vins les plus délicats,
n'étant jamais, au sens absolu du mot, des fermentations pures,
laissent presque toujours, sinon toujours, dans les liquides
qu’elles ont produits, des traces d’alcools supérieurs. On n’a
donc pas le droit de considérer comme synonymes les mots alcool
pur et alcool de vin, et comme l'usage, modéré ou abusif, de
cette boisson n’a jamais donné lieu aux plaintes dont on poursuit
la consommation modérée ou abusive des eaux-de-vie de mau-
vaise qualité, il faut en conclure que l'organisme humain peut
très bien s’accommoder de l’absorption, en quantités très faibles,
d’alcools toxiques, et que la seule chose qu'il redoute, c'est
l'excès de ces substances, soit qu'il y en ait trop dans le liquide
ingéré, soit que ce liquide soit ingéré en quantités trop grandes.
Dans les deux cas, on diminuerait évidemment beaucoup le mal
possible si seulement on arrivait à mettre facilement en évi-
dence, je ne dis pas à doser cet excès d’alcools dangereux.

Au point de vue de la microbiologie, la question a aussi de
plus l’importance. Plus nous pénétrons dans l'étude des micro-
bes, elle se complique, plus nous sommes conduits à distinguer
des genres et des espèces qu’on confondait autrefois. A cela, la
morphologie ne suffit plus, pas mème celle des cultures sur
milieux divers, pourtant plus variée que la morphologie du
microbe, pas même la culture sur des milieux vivants. Il faut
de toute nécessité en arriver à l'étude de la biologie du microbe,

490 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

et en particulier à celle de ses aliments nutritifs et des transfor-
mations qu'il leur fait subir.

Pour toutes les cellules qui produisent de l'alcool, et on sait
si elles sont nombreuses, il est du plus haut intérêt, au point de
vue de la classification, de savoir si cet alcool est pur ou mélangé
d'alcools supérieurs, parmi lesquels dominent presque toujours
les alcools butylique et amylique. Je décrirai pourtant bientôt
une bactérie qui donne de l’alcool propylique, mais, lorsque cet
alcool se forme, il est en général produit en quantités assez
grandes, parce qu'il n’est pas toxique au degré des autres. L’être
qui le produit peut donc en faire beaucoup: il n’en est pas de
même pour les alcools butylique et amylique, beaucoup plus
redoutables pour les cellules vivantes, même pour celles des mi-
crobes, et qui dès lors ne peuvent d'ordinaire être produits qu’en
faible quantité; c'est leur rareté quirend leur recherche difficile ;
c’est leur nature qui rend celte recherche importante, et leur
rareté dépend de leur nature.

Dans mes Études sur les vins, publiées en 1874 dans les
Annales de Chimie et de Physique, j ai donné une méthode capable
de déceler le mélange à l'alcool ordinaire de faibles quantités
d'alcools supérieurs. Cette méthode consiste à comparer le titre
alcoolique du liquide, mesuré par le flacon à densité, avec le
nombre de gouttes fourni par l'écoulement d'un volume déter-
miué du liquide, mesuré dans un compte-gouttes convenable-
ment gradué. Si l'alcool est pur, 1l y a une corrélation constante,
fournie par mes tables, entre le nombre de gouttes et la densité.
La présence d’une faible quantité d’'alcools supérieurs ne
change rien à la densité, ces alcools ayant à peu près celle
de l'alcool ordinaire, mais elle diminue beaucoup la cons-
tante capillaire, la tension superficielle de l'alcool étudié, et
augmente par là le nombre de goultes qu'il peut fournir sous
un volume donné. L'écart avec le nombre de gouttes corres-
pondant à la même densité pour l'alcool vinique est donc d'autant
plus grand que la quantité d’alcools supérieurs mélangés est
plus considérable, et cet écart peut servir à se faire une idée, en
général suffisante dans la pratique, de leur proportion par rap-
port à l'alcool ordinaire.

Toutefois, comme cette proportion est toujours très faible, il
restait à chercher dans quelles conditions ce procédé a son

RECHERCHE DES ALCOOLS DE DEGRÉ SUPERIEUR. 491

maximum de sensibilité. Faut-il, par des distillations succes-
sives, concentrer sous le plus petit volume possible l'alcool à
étudier, ou faut-il le diluer beaucoup ? Dans ce dernier cas, on
s'expose, en étendant outre mesure les alcools formant impureté,
à rendre leur effet insensible ou nul. Si on concentre beaucoup,
on risque d'arriver au même résultat, parce que tous les alcools,
à l’état concentré, donnent à peu près le même nombre de gouttes,
et qu'il n’y a plus rien alors pour traduire l’effet de leur mé-
lange. Il faut donc opérer sur des mélanges dilués, mais à
queldegré? c’est-ce que l’expérience seule pouvait dire.

Pour le savoir, j'ai mélangé 10 parties d’alcool amylique avec
90 d'alcool ordinaire très pur, titrant 92°, et obtenu par une fer-
menlation pure de sucre avec de la levure de vin de Champagne.
L'alcool amylique venait du commerce, mais il avait été très
soigneusement rectifié dans un appareil Henninger à 5 boules,
et bouillait à 129°-130°,5. J'ai fait avec le tout un mélange à 929,
que j'ai étudié au densimètre et au comple-gouttes, et que j'ai
ensuite étendu avec des quantités d’eau régulièrement croissan-
tes, de facon à obtenir des mélanges à divers titres que j'ai étudiés
comme le premier. Le tableau suivant donne pour chacun d'eux,
sa densité à 15°, D; son ütre alcoolique correspondant A, calculé
d’après les tables de Gay-Lussac comme si c'était de l'alcool pur,
et enfin, en d, la différence à 15° entre le nombre de gouttes
qu'ii fournit et celui de l'alcool pur au même degré, pour le
compte-gouttes ordinaire, dans lequel 5° d’eau à 15° donnent
exactement 100 gouttes.

L> A da
1 0,8270 92 0
2 0,9403 46,8 32
91007989 39,9 39,5
4. (0,9692 96,5 69
D, 00:971602 20 71
6 0,981! 15 51
7 0,9853 il 44
8 .10,9944 6 33
Je0;9957 3 2

La différence est nulle, comme nous l’avions prévu, pour des
alcools concentrés, et très faible pour des alcools étendus.
Elle est pourtant encore appréciable pour un liquide, le dernier,

492 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

qui ne contient que 3 p. 1.000 d'alcool amylique. Elle est au
maximum pour les alcools voisins de 25°, pour lesquels l’aug-
mentation est telle que le nombre des gouttes se trouve accru,
en moyenne, dans le rapport de 4 à 3.

Cette augmentation persiste-t-elle, et dans quelles proportions,
quand on diminue la dose initiale d'alcool amylique ? Pour le
savoir, j'ai fait, dans les mêmes conditions et avec les mêmes
matériaux que précédemment, une solution initiale à 2 d'alcool
amylique pour 98 d'alcool ordinaire. Son étude et celle de ses
dilutions se trouvent résumées dans le tableau suivant, construit
comme celui qui précède.

D A da
1 0,8271 92 0
2 0,9408 46,7 10
3 0,9374 36,3 16
4 0,9691 26,7 17
5 0,9759 20,2 18
6 0,9841 13 17
T _0,9846 12 14
8 0,9914 6 8

Les différences persistent et sont même proportionnellement
plus fortes que tout à l'heure, si bien qu’elles permettent d'évaluer
= environ d'alcool amylique dans l'alcool ordinaire. On voit en
outre que c'est encore au voisinage de 20°-25°, qu'elles présen-
tent leur maximum.

Il restait à faire les mêmes essais pour l'alcool butylique. Je
me suis servi d'un alcool purifié à Pappareil à boules, bouillant
à la température normale, et j’en ai fait une solution à 10 p. 100
dans l'alcool ordinaire. L'étude de cette solution initiale et de
ses dilutions m'a donné les résultats suivants :

- D A da
1 0,8269 92 0
2 0,9407 46,5 21
3 0,9572 39 33
n 0,9696 96,2 38
ds) 0,9764 19,6 97
6 0,9828 199 96
7 0,9850 11 9)

C’est encore au voisinage de 25° qu'a lieu le maximum, de
sorte qu’on peut tirer des tableaux qui précèdent une conclusion

RECHERCHE DES ALCOOLS DE DEGRÉ SUPÉRIEUR. 493

commune à l'alcool butylique et à l'alcool amylique, c’est
que pour déceler leur mélange possible avec l'alcool ordinaire, il
faut amener le titre à 25° environ, pour faire l'étude au compte-
gouttes. Comme le volume sur lequel on opère n’est que de 5°,
on n’a besoin, pour une expérience, que de 1°,5 environ du
mélange d’alcools, pris à l’état concentré, et on peut y déceler la
présence d'environ deux millièmes d'alcool amylique et cinq
millièmes d'alcool butylique.

J'ai souvent appliqué cette méthode à l'étude de l'alcool
produit par divers microbes, et je reviendrai sur les résultats
qu'elle m'a fournis. Je me borne pour aujourd’hui à ceux de
l'étude de deux alcools commerciaux, une eau-de-vie provenant
de la fermentation de mélasses de sucre de canne, et des flegmes
de betterave bruts provenant d’une distillerie du Nord. i

L’eau-de-vie, amenée à 30°, a donné 9 gouttes de différence
avec de l'alcool pur au même titre. Les flegmes, qui marquaient
36°, ont donné une différence de 6 gouttes. Ni l’une ni les autres
ne renfermaient donc d'alcool pur, et l’eau-de-vie préparée pour
la consommation était plus impure que les flegmes bruts de
betteraves.

REVUES ET ANALYSES

SUR LES THÉORIES DE L'IMMUNITÉ.
REVUE CRITIQUE.

Ever. Études sur l’atténuation des bactéries virulentes et limmunité
acquise. Zeitschr. f. Hyg.,t.1V, p. 208. - Smirxow.Surlanature del’atténuation
des bactéries pathogènes Jbid., p. 231. — Sirorinix. Sur les produits vitaux des
bactéries arrêtant leur développement, et l'hypothèse dite de rétention.
Ibid, p. 262. — Brrrer. Survient-il un épuisement des matériaux nutritifs
des bactéries à la suite de leur développement dans un être vivant ? Ibid.,
p. 291. — Brrrer. Sur l'extension du vaccin, et l'expansion de la vaccination
dans le corps de l'animal vacciné. 1bid., p. 299. — Birrer. Remarques eri-
tiques sur la théorie des phagocytes de Metchnikoff. 1bid., p. 318. — Nurrazs.
Expériences sur les influences hostiles aux bactéries dans le corps des
animaux. 1bid., p. 353.

Le quatrième volume du Zeitschrift fur Hygiene est presque entièrement
rempli par des études sur la théorie de l’immunité, ioutes faites dans le
laboratoire de M. Flugge qui les a inspirées et contrôlées, et en expose, dans
un mémoire spécial, l’idée directrice. La théorie contre laquelle il à groupé
ses efforts et ceux de ses élèves, c’est que la virulence n’est pas une mani-
festation vitale isolée, une propriété qui peut varier seule, indépendamment
des autres, mais une modification à laquelle prend part tout le protoplasma,
et qui doit se traduire par une augmentation dans la puissance de prolifé-
ration et par d’autres caractères extérieurs.

Si c’est là le but poursuivi par M. Flugge, on peut dire qu'il est complè-
tement atteint. M Smirnow étudie de près, et précise par des chiffres ce fait,
familier à tous ceux qui se sont occupés de la culture des vaccins vivants,
qu'une bactérie se développe d'autant plus péniblement dans un même milieu
qu'elle est plus atténuée. Il montre aussi que la bactérie virulente résiste
mieux aux antiseptiques que la bactérie atténuée. MM. Bitter, Nuttall, font
voir de leur côté que, dans les questions de vaccination ou d'immunité,
qui ne sont que la question de virulence examinée par l’autre bout, les bac-
téridies atténuées se comportent dans les tissus tout autrement que les bac-
téridies virulentes. Mais on a le droit de se demander, après avoir constaté
le suecès de ces études, si une idée aussi fruste de la virulence que celle que
nous avons indiquée plus haut méritait un pareil déploiement de forces.
Il n'y a guère, croyons-nous, de savants qui en soient restés à une notion
aussi incomplète, Si, au contraire, on admet que le mot virulence n’a

REVUES ET ANALYSES. 495
aucun sens par lui-même et n’est que le vocable abréviatif d'un grand nombre
de conditions, si on se rappelle les expériences bien connues qui obligent à
faire figurer dans sa définition, non seulement les qualités héréditaires ou
acquises du mierobe, mais encore l'espèce et la race de l'être vivant auquel
on l'inocule, les qualités héréditaires ou acquises de cet être, le lieu et la
dose de l'inoculation, la température, ele. ; si, pour donner une image gros-
sière de l'ensemble d’influences qui y entrent en jeu, on se représente la
virulence comme la différence variable de poids entre les deux plateaux
d’une balance dans laquelle on a mis, d'un côté, le microbe avec toutes ses
puissances d'attaque, connues et ‘inconnues, de l'autre l'être vivant avec
toutes ses forces visibles et mystérieuses de résistance, on conelura tout de
suite qu'une question aussi complexe n’est pas de celles qui se résolvent,
comme on a essayé de le faire au laboratoire de M. Flugge, par des cultures
en tubes et en plaques. Ces méthodes simplificatrices ont servi et serviront
longtemps encore à étudier le gros des phénomènes, à se faire des idées que
l’on qualifiera ambitieusement du nom de théories, et à se tracer des pro-
grammes d'expérience, mais, quand on en arrivera à l'être vivant, on s’aper-
cevra bien vite, comme le dit excellemment un des élèves de M. Flugge, que
« les résultats obtenus dans les cultures de laboratoire ne peuvent pas être
étendues sans autre forme de procès aux actions dans les êtres vivants », et
qu'il y a chez ceux-ci une délicatesse de mécanisme qui rend caduques
toutes les conclusions de nos méthodes grossières.

De ce que M. Sirotinin, par exemple, trouve et montre qu'on ne perd
pas grand’chose et qu'on gagne même quelquefois à cultiver une bactérie
dans un milieu nutritif dans lequel on a fait entrer, pour moitié ou pour la
totalité, un liquide antérieur de culture du même microbe, surtout si on à
pris soin de neutraliser l'excès d'acide ou d’alcali produit par la première
culture, a-t-on le droit de conclure que l'immunité conférée à un être
vivant par une première vaccination n’a rien à faire avec les produits laissés
dans le corps par l'inoculation et la maladie préservatrice? Évidemment
non. [l faudrait d'abord avoir démontré que les produits formés dans le corps
sont les mêmes que dans nos bouillons ou nos gélatines, que, s'ils sont les
mêmes au moment où ils ont sécrétés ou excrétés par les microbes, ils restent
les mêmes et ne sont pas modifiés, ou le sont également, soit par oxydation,
soit autrement, dans les milieux si divers où ils sont sécrétés; il aurait enfin
fallu savoir (et ici, comme nous rentrons dans le cadre expérimental de
M. Sirotinin, l'objection sera plus directe) si on avait bien le droit de
demander à ces produits d’une première culture d'arrêter ou de retarder
beaucoup la seconde, surtout lorsqu'on les mélangeait à des matériaux nu-
tritifs nouveaux. La plus légère différence, le plus léger retard, la résistance
la plus faible doivent suffire en pareil cas, car en vertu de l’exacte pondéra-
tion des forces à l’origine d’une maladie microbienne, la moindre influence
suffit à porter la victoire de l’un ou l’autre côté.

Or, ces différences, M. Sirotinin les a rencontrées quelquefois (p. 273,
274, 280). Il n'y à pas fait attention, parce qu'il les jugeait trop faibles et
s'attendait à mieux, ou bien il les a rapportées à d’autres causes que la pré-
sence de produits nocifs déposés par la première culture, par exemple à

496 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

l'épuisement des matériaux nutritifs qu’elle aurait amené, sans songer qu'il
suffit que ces différences existent, que la cause nous en est au fond indifré-
rente, lorsqu'elle est dans la nature des choses et ne dépend pas d’un artifice
expérimental. La nature se moque bien de nos classifications et de nos
théories! Les élèves de M. Flugge lui ont demandé, l’un si elle opérait, dans
la vaccination, par addition d’une substance nuisible, l'autre par soustrac-
tion d'une substance utile, le troisième par phagocytose. Il est probable
que si elle n'était pas aussi silencieuse, elle nous répondrait qu’elle ne
comprend rien à des questions posées d'une façon aussi exclusive, qu'elle
emploie à la fois tous ces moyens et beaucoup d’autres, et qu'elle fait de
son mieux.

En résumé, M. Sirotinin a montré, et ceci est intéressant, que les diffi-
cultés qu'on trouvait quelquefois à faire se développer à nouveau un microbe
dans un milieu dans lequel il avait déjà vécu tenaient en partie à l'excès
d'acide ou d’alcali produit par la première culture. mais, quoi qu'il en
pense, ses conclusions restent en harmonie avec ce fait qu'un microbe n'aime
pas à habiter à nouveau un milieu où il a déjà vécu, et elles ne démontrent
nullement, en tout cas, qu'une première culture vaccinale ne dépose pas dans
l'être vivant des substances pouvant, avec l'appoint des autres forces de résis-
tance de l'organisme, arrêter le développement de la culture virulente.

Nous pouvons en dire autant de M. Bitter qui a cherché à voir si la stéri-
lité du second ensemencement tenait à ce que la première culture avait
épuisé les tissus d’un élément utile. Il montre pour cela que la bactéridie
charbonneuse pousse parfaitement dans le sang d’un animal mort du charbon,
et qu’elle se multiplie aussi vite dans le sang et le sérum d'un mouton vac-
ciné contre le charbon que dans le sang et le sérum d’un mouton non
vacciné. Contrairement à une observation de Schottelius, qui avait vu, dans
deux cas, le bacille du rouget pousse moins bien sur un bouillon gélatinisé
préparé avec des muscles de porc mort du rouget, qu'avec des museles de pore
sain, M. Bitter ne retrouve plus le même résultat en comparant le bouillon de
pigeon mort du rouget avec le bouillon de pigeon sain. Il ne le retrouve pas
non plus avec le bouillon de lapin et de mouton vacciné contre le charbon,
par comparaison avec celui des mêmes animaux dans leur état normal, et,
de ces expériences, il se croit en droit de conclure, « avec une entière assu-
rance, que l'immunité contre le charbon, le rouget et le choléra des poules,
n’est pas due à l'épuisement, d'une matière nutritive quelconque dans les
liquides du corps ». C’est, croyons-nous, aller un peu vite. Si cette démons-
tration résultait du simple fait que la bactéridie du charbon peut se multiplier
dans le sang après la mort, il y a longtemps qu’elle serait faite, car cette
observation est ancienne. Mais qui est-ce qui assure à M. Bitter que la mort
de l'animal ne précède pas de beaucoup l'épuisement de la substance nutri-
tive par le microbe? et, s’il n’en sait rien, que devient, non son expé-
rience, mais sa conclusion? Quant à la comparaison entre les puissances
nutritives des bouillons d'un animal vacciné et d'un animal normal,
nous n'avons pas à choisir entre M. Schottelius qui dit qu’il y en a une, et
M. Bitter qui n'en trouve pas. Nous nous en référons à ce qui a été dit

REVUES ET ANALYSES. 497

plus haut, c'est que du moment qu'il suffit pour le résultat qu'il existe
une très petite différence, il faut se mettre dans des conditions qui puissent
manifester ces très petites différences, ce qu'une comparaison, nécessairement
orossière, de la rapidité et de l'aspect de la culture, ne permet évidemment
pas. Il faudrait, par exemple, au lieu d'opérer sur des liquides très nutritifs,
- opérer avec des liquides médiocres dans lesquels l'influence d’une cause alté-
rante apparaîtrait mieux. On pourrait encore essayer de mesurer le poids
de plante produite, ou la quantité d'oxygène consommé dans les premières
heures pour des quantités égales de semence dans chacun des deux bouil-
lons vacciné, et non vacciné. Peut-être tirerait-on de là quelque induction,
mais avant de l’étendre à l'organisme il faudrait encore tenir compte de la
difficulté, reconnue par M. Bitter lui-même dans la phrase que nous citions
plus haut, « d'étendre sans autres formes de procès, aux actions dans les
êtres vivants, les résultats de cultures de laboratoire ».

Nous nous croyons donc autorisés à ne pas insister plus longtemps sur
tous les procédés de démonstration qui, dans les travaux que nous analysons,
concluent du vase de verre aux tissus vivants. Nous passerons brièvement
aussi sur le travail dans lequel M. Bitter constate que le vaccin qu’on
inocule à un animal ne s'étend pas loin autour du point piqué, que sa
multiplication est en outre très limitée, qu'il manque dans le sang et les
divers organes, et que, malgré cela, l’immunité qu’il confère s'étend à des
régions qu'il n’a pas visitées et est tout à fait générale. Il tire de ces faits,
qui ne sont pas tous de lui, et dont quelques-uns seront contestés dans
un prochain numéro des Annales, mais qu'il groupe dans son argumenta-
tion, la conclusion que cette disproportion entre le développement maigre
et limité du microbe vaceinal, et le caractère général de l’immunité produite,
ne sont en harmonie, ni avec la théorie de l’épuisement d’une substance
utile, ni avec celle de l’adjonction d’une substance nuisible. M. Bitter aurait
pu ajouter qu'elle plaide aussi contre la phagocytose et presque toutes les
théories de l’immunité. La vérité, croyons-nous, est qu'elle ne plaide sérieu-
sement contre aucune, ne serait-ce qu'à cause du sang, qui allant inces-
samment de la région colonisée par le microbe à celle qui en est exempte,
peut envoyer de l’une à l’autre la substance active, s'il y en a une, quele
microbe absorbe ou dépose dans le tissu où il s'implante. La fièvre vaccinale
est un indice de cette activité dans les mutations des tissus et la vie cellu-
laire. Il est clair maintenant que si le développement du vaccin est médiocre,
son action sera faible, mais alors la fièvre sera modérée et l’immunité
incertaine et passagère!. En somme, un être vivant n’est pas un milieu
vélatinisé, et toute modification sur un point retentit bientôt sur l’ensemble.

On voit que nous revenons toujours à la même objection. Hätons-nous
de dire pourtant qu'elle ne s'applique pas à tous les mémoires du recueil
que nous analysons, et que même dans ceux qui en relèvent, il y a de

A. Voir à ce sujet, dans ce volume des Annales, les intéressants mémoires de
M. Gamaleïa.

498 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

nombreux faits intéressants que nous avons maintenant le devoir plus
agréable de mettre en lumière.

Voici d'abord le mémoire de M. Nuttall, dans lequel l'étude de la phago-
cylose se trouve abordée par des moyens plus adéquats à la nature du
problème, et analogues, du reste, à ceux qu'avait employés M. Metchnikoff,
Dans ses expériences sur les grenouilles, ce savant avait vu des fragments
d'organes charbonneux, introduits sous la peau de grenouilles vivantes, s'y
entourer d’une couverture de leucocytes, dans lesquels on trouvait les
bacilles charbonneux dégénérés et morts, si bien que le fragment introduit
perdait bientôt toute virulence. Avec les lapins, on leur insinuait, sous la
peau de l'oreille, un tube mince fermé aux deux bouts, renfermant une
culture du bacille atténué, qu'on brisait quand la blessure était refermée, et
avec lequel on retrouvait le même mécanisme de l'intervention des leu-
cocytes faisant disparaître les bacilles. M. Nuttall reprend ces méthodes,
mais en les modifiant sur plusieurs points. Son idée est de chercher si
« les phagocytes absorbent réellement les bacilles vivants, et s'ils sont les
seuls à pouvoir les détruire, car si on trouve que cette absorption est limitée
à une partie des bacilles tandis qu'une autre partie est tuée, sans inter-
vention des leucocytes, par une autre influence quelconque du corps vivant,
alers l'importance fonctionnelle des phagocytes devient douteuse, et il
devient possible qu'ils ne soient plus capables que d’absorber des bacilles
dégénérés par ailleurs et sous d’autres influences ».

Il fallait, pour établir cette thèse, une étude soigneuse que M. Nuttall
conduisait de la façon suivante. Le morceau d’organe charbonneux, après
avoir séjourné un temps variable sous la peau de la grenouille, ressortait
entouré et pénétré d'un exsudat gélatineux et jaune grisâtre. Une partie
était diluée dans la solution physiologique de sel marin et soumise à l'ob-
servation microscopique sous une lamelle paraffinée. Dans cette préparation
on pouvait, comme M. Metchnikoff l'avait fait, observer les mouvements des
leucocytes, et éventuellement l'absorption qu'ils faisaient des bacilles. Une
autre portion de l'exsudat servait à faire des préparations sèches, pour la
coloration desquelles M. Nuttall préfère à la vésuvine employée par
M. Metchnikoff, et qui dit seulement si les bacilles sont vivants ou morts,
le bleu de méthylène qui manifeste par des colorations différentes, allant
du bleu franc au rouge violacé, les degrés divers de dégénérescence de la
bactéridie. De plus, il à essayé d'arriver à une plus exacte appréciation du
pouvoir absorbant des leucocytes, en comptant sur chaque préparation le
nombre de bacilles qu'il voyait libres et ceux qu'il trouvait inclus dans les
cellules. Il faisait les numérations sur plusieurs champs et prenait la
moyenne.

Ce n'est pas tout. Pour voir si le morceau extrait contenait encore des
bacilles et sices bacilles étaient virulents ou atténués, M. Nuttall employait
ce qui lui en restait à faire des cultures sur plaques et à inoculer des souris.
Il pouvait ainsi faire marcher de pair l'étude de l'absorption des leucocytes,
de la dégénérescence du bacille, de sa diminution de virulence et de sa dispa-
rition graduelle.

Il à ainsi confirmé entièrement les résultats de Metchnikofï, en ce qui

REVUES ET ANALYSES. _ 499

concerne le rassemblement des leucocytes autour du morceau à digérer,
leur avidité pour les bacilles charbonneux, et la mort de ceux qu'ils con-
tiennent. L'absorption lui à paru dans tous les cas moins rapide qu'à
M. Metchnikoff. Elle est en outre de durée très variable. Ce qu'il y a de plus
important, c'est qu'elle n'est jamais complète, c’est-à-dire qu’on trouve
toujours en dehors des leucocytes autant, sinon plus de bacilles qu'il n'y en
a d’absorbés, et que la dégénérescence semble marcher aussi vite pour les
uns que pour les autres. Les formes dégénérées devenant invisibles, le
nombre des bacilles diminue plus ou moins vite, mais, contrairement
encore à M. Metchnikoff qui avait vu la virulence disparaître entre 3 et 5 jours,
contrairement aussi à Lubbarsch, dont le travail a été analysé ici même,
M. Nuttall a trouvé la vie etla virulence très persistantes dans le morceau
inoculé, car il a pu, après 16 à 17 jours, en retirer de quoi tuer des souris
dans le temps normal du microbe le plus virulent, à la condition de faire
avec ce morceau une émulsion fine qui y mette en liberté tous les bacilles.

Toutes ces expériences ont été faites de 100 à 16°. En élevant la tempéra-
ture à 23°, l’activité des phagocytes croît. Mais le nombre des bacilles croit
aussi, Car il y a une multiplication très notable dans les premiers jours.
La proportion des bacilles libres et des bacilles absorbés ne s'éloigne donc
pas beaucoup de ce qu’elle était à plus basse température. Puis, lorsque la
grenouille ne meurt pas par suite de ce séjour à la chaleur, le nombre des
bacilles libres et absorbés diminue peu à peu. Mais ceux qui restent vivants
conservent leur virulence, car après 7 jours, on à pu retirer du morceau
inoculé de quoi tuer une souris en 25 heures. Au bout de 9 jours, les bacilles
semblaient avoir disparu, car inoculations et cultures sont restées absolu-
ment stériles.

En voyant dans cette expérience les bacilles se multiplier d'abord, puis
s'arrêter dans leur développement, et finalement disparaître plus vite qu’à
plus basse température, on peut se demander si cet arrêt n'est pas dû aux
leucocytes. M. Nuttall, emporté par sa thèse, est disposé à restreindre leur
influence, en faisant observer que tous les bacilles ne sont encore pas ici
inclus dans les cellules, et que ceux qui sont libres périssent aussi vite que
les autres. Mais comme nous l'avons fait observer plus haut, il ne faut pas
apporter dans l'étude de ia nature des vues absolues. Il doit nous suffire de
constater, à la suite de M. Nuttall, que l’action des leucocytes augmente
selon les besoins, pour que nous soyons autorisés à penser qu'ils servent à
quelque chose.

Au delà de 2%, les expériences deviennent de plus en plus difficiles, car
les grenouilles périssent vite, et ne réagissent presque plus. On ne peut plus
constater chez elles que la période de multiplication initiale des bacilles, qui
peuvent même apparaître dans le sang du cœur, sans qu'il soit par cela bien
démontré qu'elles sont mortes plutôt du charbon que de la chaleur.

Avec le lapin, sur lequel M. Nuttall a recommencé les expériences de
M Metchnikoff, les résultats ont été du même ordre que ceux qui précèdent.
Avec des bacilles atténués, réaction locale active, absorption phagocytaire,

4. Annales, t. I. :

500 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

mais aussi bacilles libres dont la dégénérescence marchait du même pas
que chez les bacilles absorbés. Avec des bacilles virulents, réaction locale
d'autant plus faible que le contenu du tube insinué sous l'oreille du lapin
était plus grand. L'absorption leucocytaire est nulle ou à peu près, les
bacilles se multiplient, ce qui confirme d’une manière générale les rela-
tions établies par M. Metchnikoff, confirmées depuis par MM. de Christmas
et Gamaleia, entre la virulence du microbe et le degré de réaction locale au
point d'inoculation. Mais ici encore, on trouve des formes dégénérées dans
les exsudats séreux, en dehors de toute influence des leucocytes.

Tout n’est pas également probant dans les faits que nous veuons de citer.
Ainsi le choix de la souris est défectueux pour juger de l’atténuation des
bacilles, parce que cet animal est encore très sensible aux virus très atté-
nués. Il aurait fallu prendre des animaux plus résistants, et peut-être alors,
M. Nuttall aurait-il vu apparaître des preuves de celte atténuation qu'il
nie. Mais, dans leur ensemble, les observations qui précèdent paraissent
bien indiquer que la destruction des bactéries chez les êtres vivants ne
semble pas être l’œuvre exclusive des phagocytes, et n’appuient pas la thèse
établie par M. Metchnikoff. On s'explique mal que des faits si apparents
pour M. Nuttall aient échappé à un autreobservateur qui ne passe pas pour
malhabile, et qui nous dira certainement ce qu'il en pense. En attendant,
nous ne pouvons qu'en prendre acte.

M. Metchnikoff avait aussi employé une autre méthode. En observant
avec soin, sut une platine chauffées, les relations des bacilles ensemencés
dans une goutte de lymphe de grenouille avec les leucocytes de cette
lymphe, il avait vu que les leucocytes englobaient les bacilles, que seuls, les
bacilles absorbés montraient des formes dégénérées, et que les leucocytes
des animaux jouissant d’un immunité naturelle ou acquise avaient à ce
double point de vue une activité plus grande que chez les animaux
à grande réceptivité.

M. Nuttall a tenu à reprendre ces recherches, qui se sont beaucoup
étendues, et dont les résultats sont peut-être la chose la plus originale de
son mémoire, s'il ne s’y est pas glissé de causes d'erreurs. Ils reviennent,
en effet, comme on va le voir, à trouver dans le sang des animaux divers,
extrait de l'organisme, des différences en rapport général avec le degré de
susceptibilité que manifestent ces animaux vis-à-vis de la maladie charbon-
neuse.Ïl s’est servi pour cela, non d’une platine chauffante, mais d’une sorte de
boîte à double paroi, entourant tout le microscope, remplie d'eau dans ses
parties fixes, d'amiante sur ses parois mobiles et chauffée par une petite
lampe. Pour se procurer de la lymphe, il insérait sous la peau d’une gre-
nouille de la ouate stérilisée, autour de laquelle il se réunissait en 24 heures
assez de liquide pour qu'on puisse en faire plusieurs gouttes pendantes,
qu'on ensemençait sur leurs bords avec des bacilles charbonneux, et qu'on
soumetlait à une observation attentive.

« Sur ces préparations, on voyait, dès le commencement de la recherche,
l'absorption des bacilles par les leucocytes en actif mouvement. De longs

REVUES ET ANALYSES. 901

fils étaient quelquefois tellement happés par de nombreux leucocytes que
le tout avait l'aspect d'un chapelet. » Il semble que cette observation suffise à
montrer que les leucocytes ne prennent pas seulement des bacilles morts
ou même un peu dégénérés.

« Les procès de dégénérescence étaient visibles après quelques heures,
aussi bien sur les bacilles libres que sur les bacilles absorbés, mais ils étaient
surtout marqués et prompts aux températures comprise entre 45° et 48. »
Tantôt le protoplasma des bacilles devient de plus en plus granuleux, si bien
que le bacille semble tomber en morceaux. Tantôt le caractère granuleux
fait place à une sorte d'état muqueux, qui pâlit et élargit le bacille et le rend
presque invisible. Lä coloration qu'il prend sous l'action d'une dissolution
alcaline de bleu de méthylène vire d'autant plus au rouge que la dégéné-
rescence est poussée plus loin.

« Plus d’une fois on a vu que les leucocytes saisissaient de longs bacilles,
et les courbaient et les brisaient de toutes facons. Dans quelques cas on
a observé autour des bacilles absorbés la formation de vacuoles, ce que
M. Metchnikoff interprète comme un symptôme de digestion intracellulaire
des bacilles, par analogie avec ce qui se passe chez les amibes. Mes observations
m'éloignent de cette idée, car la production des vacuoles est très irrégulière.
On en trouve parfois dans des cellules ne contenant aucun bacille : d’autres
fois, et ce n’est pas rare, il s'en forme autour des bacilles dès qu’ils sont
absorbés: enfin on n'en trouve pas toujours dans des celiules pleines de,
bacilles. »

Les résultats ont été les mêmes avec du sang de grenouille et du sang de
crapaud. M. Nuttall a aussi étudié le sang de divers animaux à sang chaud :
hommes, chien, mouton vacciné et non vacciné, lapin, souris, poule, pigeon.
Le sang était observé en goutte pendante, et ensemencé avec des bactéridies
sur son bord extrème, de facon qu'après coagulation et expulsion du sérum
la bactéridie fût toujours entourée de liquide. On notait dans chaque eas le
temps moyen de la dégénérescence maximum, c’est-à-dire celui après lequel
il n'y avait plus de modifications dans l'aspect des bacilles. Il y avait alors
une période stationnaire après laquelle les bacilles restés vivants se multi-
pliaient à nouveau et remplissaient la goutte pendante de leurs filaments.
C'est cette période qui précède la multiplication qui est la plus curieuse à
étudier dans le mémoire de M. Nuttall, car il n'y a rien de pareil quand on
ensemence la bactéridie dans du bouillon, où le développement commence
de suite.

C'est dans le sang de l’homme que la dégénérescence marche le plus
vite. Elle est d'ordinaire terminée en moins de 2 heures, et après 4 heures
les bacilles sont en voie de développement. Elle est presque aussi rapide
dans le sang de mouton vacciné, un peu plus lente dans le sang de mouton
non vacciné. Là aussi, après une période stationnaire plus longue que chez
l'homme, il y avait à nouveau multiplication. L'un des chiens sur lequel
on a opéré avait été tué par le chloroforme. La dégénérescence dans son
sang a été presque nulle et la multiplication a commencé de suite. Dans le
sang d’un autre chien, recueilli sur Le vivant, le procès a été à peu près
eomme dans le sang de l'homme.

32

502 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Dans le sang des oiseaux, la dégénérescence commence vite, mais elle
n’atteint qu'un nombre restreint de bacilles, sans doute parce que le coagulum
est très compact, et ne laisse exsuder que très peu de liquide. Nous verrons
tout à l'heure que défibriné, ce sang a, au contraire, un pouvoir destructeur
très énergique.

Dans le sang de lapin, la destruction des bacilles est plus complète que
dans les cas qui précèdent. Dans un cas, elle a même été absolue, ear
l’'ensemencement est resté stérile. En moyenne, presque tous les bacilles
sont dégénérés après » heures; c’est après 28 heures qu'il y a de nouveau
développement. Enfin, il n'y à pas de dégénérescence avec le sang de souris,
la multiplication commence de suite.

Dans toutes ces expériences, il y avait en absorption plus ou moins rapide
des bacilles par les leucocytes, mais la dégénérescence s'était produite en
dehors des cellules, comme dans leur intérieur. Elle marche, du reste, à peu
près du même pas dans l'humeur aqueuse ou dans la sérosité péricardique,
qui contiennent très peu de leucoeytes. «Nous sommes done conduits à présu-
mer que les bacilles pris par les leucocytes n'étaient déjà plus normaux, el
que c'est dans le liquide qui entoure les cellules qu'il faut chercher les causes
de destruction. Le parallélisme qui s’est manifesté dans la plupart de mes
recherches entre la rapidité d'apparition du procès destructeur des bactéries
et leur saisie par les leucocytes, parle nettement en faveur de cette idée.
Plus la dégénérescence des bacilles libres marche vite, plus nous en trou-
vons dans les leucocytes. Si elle est lente, l'activité vitale des leucocytes
s'affaiblit ou s'éteint, et l'absorption reste faible. »

Cette influence nocive, attribuée par l'expérience aux liquides de l’or-
ganisme, est d'accord avec quelques-uns des résultats de Fodor (Deutsch.
med. Wochenschr.,1887). Elle est d'autant plus curieuse a étudier qu'elle semble
n'être pas persistante. Quand on recommence avec du sang extrait depuis
longtemps, on trouve qu'après 4 à 16 heures, il n'y a plus de dégénéres-
cence. La prolifération commence de suite,

Les bacilles qui se montrent dégénérés après un court séjour dans le
sang frais sont-ils réellement morts, ou seulement modifiés dans leur
grosseur et leur aspect? Pour le savoir, il n'y a qu'à faire des cultures dans
lesquelles, après avoir ensemencé dans du sang un nombre déterminé de
bacilles, mesuré au moyen d’une culture sur plaques, on mesure par le
même moyen, à divers intervalles, le nombre de ceux qui restent capables
de se développer dans la gélatine nutritive. Il faut évidemment, pour
pouvoir faire ces essais, opérer sur du sang défibriné. M. Nuttall le recevait,
au sortir de l'artère ou de la veine, sur du sable stérilisé, contenu dans un
flacon stérilisé et sortant de l'étuve à 35°, agitait pendant quelques secondes,
et le répartissait ensuite dans des tubes à essai, dans lesquels se faisaient
l'ensemencement et les prises d’essai à divers intervalles.

On a trouvé ainsi que tous les sangs détruisaient en partie les bactéries
nises à leur contact, mais qu'ils avaient à ce point de vue des activités très
diverses, ‘

Par exemple, « dans le sang d’un mouton vacciné, le nombre des

REVUES ET ANALYSES. 003

bacilles est tombé, en 3 heures 4,2, dans la prise d'essai, de 4578 et 4872 à 185
et 253, dans un autre cas, de 11046 et9245 à 427 et 665, tandis que dans un
mouton non vacciné, le nombre était tombé seulement en 3 heures, de 7938
et 8330 à 6664 et 4872. De nouvelles expériences diront si cette différence est
constante entre le sang des moutons vaceinés et non vaccinés. Il peut y avoir
eu des erreurs dans mes résultats, parce que, dans d’autres cas, on a observé
des variations analogues dans la puissance destructrice du même sang».

Ceci prouve que M. Nuttall n'est pas maître de ses expériences, et on
est dès lors fondé à y suspecter des causes d'erreur. A priori, on peut en
relever deux,

D'abord, l'origine diverse des semences. Des bactéridies atténuées ne se
comporteront pas dans le sang, qui est un milieu médiocre pour l'espèce,
comme des bactéridies virulentes, et il y a peut-être là une explication des
contradictions observées.

En second lieu, M. Nuttall ne semble pas s'être assez méfié de la priva-
tion d'oxygène que les bactéridies subissent dans les premiers moments de
leur séjour dans le sang jusqu'au moment où la vie des éléments organiques
y est tout à fait éteinte, et les phénomènes d'oxydation terminés. Il y a là
dé quoi nuire aux bactéridies, surtout aux plus atténuées. On pense à chaque
instant à cetle cause d'erreur, en voyant M. Nuttall trouver les résultats
qui suivent.

Le nombre des bacilles diminue d'ordinaire dans tous les sangs, en
particulier dans celui des oiseaux, à propos duquel nous étions tout à l'heure
restés hésitants : puis, au bout d'un temps variable, il augmente, parce que la
multiplication entre en jeu. Tel n’est pas toujours le cas. Il arrive quelquefois,
surtout lorsque l'ensemencement est faible, que tous les bacilles périssent. En
revanche, encore ici dans le sang de la souris, il n’y a pas de dégénérescence
sensible, et la multiplication commence dès l'ensemencement. Enfin (el est
presque toujours le cas quand on laisse quelques heures le sang au sortir
de la veine sans l’ensemencer. Les bactéries qu'on y apporte ensuite se
multiplient dès les premiers moments.

Le sang est donc un milieu nutritif, puisqu'il laisse le développement
des bacilles se faire après quelques heures, et l'action bactéricide qu'il
manifeste dans les premiers moments, et qui disparaît alors même qu’il n'y
a pas eu d'ensemencement, ne peut être due que «soit à une substance très
volatile ou très instable, soit, ce qui est plus vraisemblable, à une action de
diastase ». Ce qui confirme M. Nuttall dans cette opinion, c'est que le sang
perd cette faculté quand il a été chauffé de 50 à 55°.

Ajoutons, pour terminer, que l'humeur aqueuse et la sérosité péricardique
se comportent encore à ce point de vue comme le sang, et que ce ne sont
pas seulement les bactéridies charbonneuses qui éprouvent ces iufluences,
Les bacillus subtilis et megaterium sont dans le même cas. Le Staphylococcus
pyogenes aureus parait au contraire résister à l’action du sang, et sa multi-
plication commence de suite.

La plupart de ces résultats, on le voit, pourraient être mis au compte
des variations naturelles ou provoquées dans la puissance d'absorption du
sang pour l'oxygène, mais nous n'avons pas le droit de substituer cette in-

204 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

terprétation à celle de M. Nuttall. Bornons-nous à faire remarquer que s'il
y a réellement, comme il le pense, action de diastases, et si ces diastases
existent dans le sang et dans les humeurs, elles doivent, suivant tout ce
qu'on sait de leurs propriétés, être fixées en abondance encore plus grande
sur les éléments figurés de ces liquides organiques, et en particulier sur les
leucocytes, de sorte que M. Metchnikoff aurait raison de même que M. Nut-
tall. Au reste, bien que dans le travail que nous analysons, et surtout dans
la critique de M. Bitter sur la phagocytose, on parle toujours du caractère
absolu que M. Metchnikoff a donné à ses opinions et à sa théorie, il nous
paraît que ce savant n’a jamais pensé ni dit que la phagocytose expliquât
tout, et fût le seuil moyen de protection à la disposition de l'organisme. Fût-
elle même le seul rouage moteur, il resterait encore à chercher ce qu'il y a
dans le mot phagocytose, et de quel mécanisme elle dépend elle-même,

Si les idées de M. Nuttall sont exactes, l’action dépend d'un phénomène
d'action de diastases ou de digestion. Peut-être faut-il faire à ce sujet quelques
réserves. On comprend avec cette hypothèse que le sang perde son activité à
l'air et à la chaleur. Il y a oxydation ou insolubilisation de la diastase. On
comprend qu'il ne tue pas tous les bacilles qui, au moment où on les
introduit dans le sang, sont d’âges divers, et inégalement résistants, mais
on pe comprend pas qu'il ne laisse pas germer de suite ceux qu'il n'attaque
pas. On comprend, à la rigueur, qu'il puisse agir différemment sur les
bacilles atténués et les bacilles virulents, qu'il digère les uns et se laisse
envahir par les autres, mais si l'immunité est due à une destruction des
microbes virulents, on ne s'explique ni comment M. Smirnow a pu trouver
des spores atténuées vivantes encore après plusieurs semaines dans le
corps du lapin, ni surtout une observation curieuse de M. Bitter, qui ayant
injecté (p. 315) à deux moutons vaccinés de grandes quantités de spores
charbonneuses virulentes dans une veine de l'oreille, et les ayant tués au
bout de 6 et 9 jours, a trouvé encore au bout de ce temps, dans leur rate
et surtout dans leur foie, de grandes quantités de bactéridies encore yviru-
lentes, et en nombre à peu près égal dans les deux expériences, ce qui
semble prouver que la destruction des germes était lente et aurait encore
demandé longtemps pour être complète. Quelle peut bien être la cause de
cette inertie curieuse de germes très virulents dans le corps d’un animal
vacciné, cause qui est sans doute la même dans le corps d'un animal natu-
rellement indemne ? Il faut avouer que toutes les théories restent un peu
muettes à cette question, et celle de la phagocytose encore plus que les
autres, Nous n'avons done pas envisagé toutes les faces du problème, ni
effleuré toutes les solutions. Il est donc bien inutile de discuter sur le carac-
tère plus ou moins absolu d'une théorie. Aucune de celles qui ont été émises
n'est à elle seule toute la vérité. Mais il suffit qu'elles en contiennent
chacune une part, et nous croyons qu'on peut résumer ce qui précède en
disant que cette part de vérité des théories actuelles, les expériences très
soigneuses, du reste, des élèves de M. Flugge n’ont pas réussi à la mettre
en état de suspicion légitime.

D

REVUES ET ANALYSES. D05

E. Mercanikorr. Sur le rûle phagocytaire des cellules géantes du tubercule,
Virchow's Archiv, t. CXILT, 1888.

M. Metchnikoff vient de publier, sur le rôle phagocytaire des cellules
géantes du tubereule, un mémoire qui mérite d’être étudié de près, tant à
cause des faits nouveaux qu'il apporte, que parce qu’il se trouve en contra-
diction avec la plupart des travaux publiés jusqu'ici sur le même sujet.
Poursuivant ses études sur le rôle des divers éléments cellulaires de l'orga-
nisme dans la lutte contre les microbes, M. Metchnikoff devait arriver à la
cellule-géante dans les cas de tuberculose. Koch avait déjà vu, dans ces
cellules, des bacilles moins facilement ou moins fortement colorables que
les bacilles normaux, et avait attribué ce fait à ce que la cellule géante est
une forme durable, tandis que le bacille a une durée de vie plus courte, et
ne peut se conserver dans la cellule géante qu’à la condition d'y mourir
pour faire place à une génération nouvelle. M. Metchnikoff avait au con-
traire interprété le fait comme une preuve du rôle phagocytaire des cellules
séantes. Ce sont les preuves de cette action qu’il apporte aujourd'hui.

Il débute par des renseignements curieux au sujet du bacille tubercu-
leux. On le connaît dans les tissus sous forme de bâtonnets. On le trouve
aussi, dans les crachats de phtisiques et dans la rate du moineau tubercu-
leux, sous la forme de fils plus ou moins longs. MM, Roux et Nocard ont
observé dans de vieilles cellules des formes allongées et gonflées, sur les-
quelles on trouvait quelquefois des bourgeons latéraux épaissis, insérés à
angle droit sur le bacille. En faisant des cultures à haute température,
à 43°,6 par exemple, M. Metchnikoff a vu ces formes anormales se multi-
plier. Après 20 jours, on voit beaucoup de bacilles s'allonger et s'élargir
en massue à leurs deux extrémités. Puis ils se garnissent sur leur longueur
de bourgeons plus ou moins nombreux qui grandissent, s'allongent quel-
quefois à la facon du bacille initial, en restant renflés à leur extrémité
libre, d'autres fois s'étranglent en leur point de jonction et se détachent.
Les ensembles irréguliers et complexes formés ainsi peuvent aussi se dis-
loquer et donner lieu aux figures dichotomisées les plus variables. Aucun
doute ne peut exister sur l'identité d’origine de ces diverses formes qu'on
voit passer de l’une à l’autre, et dont l'apparition ne change rien ni à l'as-
pect macroscopique de la culture ni à ses réactions en présence des diverses
matières colorantes. Par exemple, quand on traite successivement par la
fuchsine et le bleu de méthylène, toutes ces formes si diverses conservent
la première couleur sans se laisser influencer par la seconde.

De cette formation de bourgeons, M. Metchnikoff conclut qu'on peut
bien voir là des formes d'involution, mais qu'il est impossible d'y voir des
formes dégénérées, et de parler à ce propos de métamorphose régressive.
J'ai de la peine à être de son avis. Le mot forme d'involution, que nous
pourrions traduire en français par forme anormale, est commode à
employer, car il ne préjuge rien. Le mot forme dégénérée est plus précis.
Mais M. Metchnikoff conteste qu'il y ait dégénérescence. Son argument, à
savoir la production de prolongements latéraux analogues à des bourgeons,

506 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ne serait probant que s'il avait démontré que ces prolongements sont vrai-
ment des bourgeons, c'est-à-dire des corps doués d’une vitalité nouvelle.
Jusque-là on a le droit de les prendre pour des expansions dont la forma-
tion ne prouve qu'une chose, c’est que le bacille n'est pas mort et traduit
les vicieuses conditions d'existence qu'on lui fait par des formes bizarres et
tourmentées, ou la symétrie de son aspect, et l’homogénéité de sa consti-
tution ordinaire ont plus ou moins disparu. Comment ne pas croire d’ailleurs
à une dégénérescence véritable à ces hautes températures quand on voit
que les bacilles tuberculeux y perdent plus tôt leur virulence et y meurent
plus vite que dans les conditions ordinaires ?

Au sujet de la structure du bacille tuberculeux, M. Metchnikoff admet
l'existence d’une membrane résistante qu'on ne peut, il est vrai, découvrir
au microscope même dans les bacilles très épaissis dont nous parlions plus
haut, mais dont l'existence est révélée par l'analogie que présentent, dans
leur action sur les matières colorantes, les bacilles tuberculeux avec les
cellules qu’on sait entourées d'une membrane épaisse, les spores des bac-
téries, des mucédinées, les coccidies du foie du lapin, les œufs de divers
helminthes.

Dans aucun cas, le bacille ne se présente comme une chaîne de coccus.
Le protoplasma apparaît quelquefois spongieux et rempli de vacuoles dans
les formes renflées que nous avons décrites. On y trouve aussi parfois, cà
et là, des granulations plus foncées, à contours irréguliers; mais il n'y a
aucun indice de segmentation régulière. Les intervalles alternativement
clairs et colorés, qu'on relève parfois sur les bacilles des erachats, sont sans
doute dus à des dépôts sur certains points de matériaux de réserve, qui,
pas plus là que chez d’autres bactéries, ne prennent la matière colorante.
A plus forte raison ne pourrait-on voir des spores dans ces espaces clairs,
qui ne se colorent jamais, alors que les spores du bacille charbonneux,
pourtant plus résistantes et à membrane plus épaisse, s’il faut en juger par
leur vitalité plus grande, finissent par se colorer après une longue ébullition.

On a bien plus le droit de voir des spores dans ces granulations forte-
ment colorées qu’on trouve dans les cultures et aussi dans les erachats, et
que leur position régulière et la netteté de leurs contours rapprochent des
spores des autres bacilles. Toutefois, M. Metchnikoff ne se prononce pas
nettement sur ce point délicat.

En revanche il s'élève contre la dénomination de bacillus tuberculosis,
en faisant observer que le mot bacille ne peut servir qu'à caractériser une
période de développement d’un grand nombre d'êtres divers, mais ne saurait
à aucun degré devenir un nom générique. C’est depuis longtemps mon avis
et c’est pour cela que j'ai appelé Tyrothrix tous les bacilles filamenteux que
J'ai trouvés dans le fromage. M. Metchnikoff, après avoir reconnu que le
bacille tuberculeux s'allonge aussi en fils, et qu’il a sans doute des parois
très épaisses, propose le nom de Sclerothrix pour le genre et celui de
Sclerothrix Kochii pour l'espèce. Il y a dans ce nom un hommage auquel
nous nous associons volontiers.

Tournons-nous maintenant du côté des éléments de résistance de l'or

REVUES ET ANALYSES. 307

ganisme, représentés surtout, mais non exclusivement, dans les procès tuber-
euleux, par les cellules géantes. Pour bien étudier les phénomènes dont elles
sont le siège, il faut dureir les tissus dans l'acide chromique ou l'alcool, faire
des coupes très fines, et les colorer de préférence par une méthode due à
Kühne, qui a permis à M. Metchnikoff de la publier. C'est une combinaison
de la coloration par la fuchsine avec l’hématoxyline et l'auramine, qui
colore le protoplasme cellulaire en gris jaunâtre, les noyaux en violet, et
les bacilles tuberculeux en rouge. « La coupe est d'abord plongée dans une
solution forte d'hématoxyline ou dans une solution plus faible d'extrait de
campèche traitée par l’alun comme le fait Klein. L'excédent de couleur est
enlevé par une plus ou moins longue digestion dans l'eau, et l’eau elle-
même par un court séjour dans l'alcool absolu. Les fragments bleu violacés
sont alors laissés deux heures dans de la fuchsine, préparée en mélangeant
une solution alcoolique concentrée de fuchsine avec un mélange de parties
égales de solution à 1 0/0 de carbonate d'ammoniaque ct d'eau de Tymol.
Après avoir lavé à l'eau, et déshydraté à l'alcool les morceaux fortement
colorés, on les laisse quelques minutes dans l'huile d'aniline, puis dans
la térébenthine, puis un couple de minutes dans le xylol, puis on les reporte
un instant dans l'huile d'aniline pure. Elles passent ensuite dans une
solution concentrée d'auramine dans l'aniline, où elles séjournent de
10 à 43 minutes : on les fait repasser alors de nouveau dans l’aniline, dans
la térébenthine et dans le xylol, et on les monte enfin dans une solution
de résine de Dammar dans le xylol. »

Ce n'est pas tout que cette méthode, si bonne qu'elle soit. M. Metchnikoff
a eu encore la bonne fortune de trouver un sujet exceptionnel d'expériences
dans un rongeur des environs d’Odessa, le Spermophilus quttatus de Tem-
minck, qui est une des plaies de l’agriculture locale. Cet animal est très
résistant vis-à-vis du bacille tuberculeux et il faut une injection, dans la
cavité abdominale, de 1 centimètce cube d'une émulsion épaisse de bacilles
tubereuleux très virulents pour le tuer en quelques semaines. Dans l'animal
mort, on ne trouve de formations tuberculeuses dans aucun organe, mais
l'examen microscopique du foie, de la rate, des ganglions lymphatiques y
montre de nombreuses cellules géantes, dont il est facile de suivre le déve-
loppement qui est à peu près le même partout. Les cellules géantes y naissent
du développement de cellules épithélioides isolées par une multiplication
particulière du noyau, dont les formes karyokinétiques sont des étoiles
simples à rayons multiples. Chacun de ces rayons est destiné à former un
des noyaux de la cellule géante. Il subit pour cela à son extrémité libre un
renflement, qui grossit et semble d'abord homogène, mais qui plus tard se
remplit d'une masse transparente dont les contours deviennent irréguliers;
et qui ressemble d5jà à un nouveau noyau. La chromatine se partage peu
à peu en une partie périphérique et une partie centrale, et on à ainsi un ou
plusieurs noyaux rattachés par un filament au reste de l’ancien noyau étoilé.
Ces noyaux, d’abord très irréguliers de forme et de contours, finissent par
prendre la forme ronde ou ovale des noyaux ordinaires. Pendant qu'ils sesont
formés, le protoplasma de la cellule épithélioide a beaucoup augmenté, et
a pris les dimensions caractéristiques des cellules géantes.

508 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Voilà le mode le plus général de formation de ces cellules. Il peut bien
y avoir aussi multiplication du noyau par division, mais M. Metehnikoff
n'a jamais observé sûrement de formation de cellules géantes par fusion
de plusieurs cellules épithélioïdes.

Ces cellules géantes émettent des expansions protoplasmiques tout à
fait analogues aux pseudopodes des Rhizopodes, et ont l'air d’être bien
vivantes. Elles se divisent en 2 ou 3 parties à la suite de la formation en
deux ou trois groupes de leurs nombreux noyaux qui se partagent ainsi
entre les cellules-filles. Elles paraissent aussi poavoir se fusionner en masses
complexes qui couvrent quelquefois tout le champ du microscope.

Quant à leur structure, on peut y distinguer deux couches protoplasmi-
ques, un entoplasme et un ectoplasme, le premier se colorant en général
assez bien, le second restant pâle ou incolore. C'est à la limite des deux
couches que sont placés les noyaux, en rangée circulaire plus ou moins
régulière.

Nous arrivons maintenant à la fonction de ces cellules géantes. Elles
sont des phagocytes tout aussi bien que les cellules épithélioïdes dont elles
proviennent. C’est ce que démontrent leurs propriétés amiboïdes, les corps
étrangers et les bacilles tubereuleux qu'on y rencontre. « Dans plusieurs
cellules épithélioïides en train de se transformer en cellules géantes, j'ai
trouvé un ou plusieurs bacilles tuberculeux. Mais J'ai aussi pu, assez souvent,
observer les stades du développement de cellules géantes qui ne contenaient
aucun bacille, ce qui empêche de rattacher la transformation de la cellule
épithélioïide aux bacilles qu’elle contient. »

On trouve bien, dans les cellules épithélioïdes, des bacilles à formes
irrégulières, épaissis ou se colorant mal. Mais c’est le petit nombre. Presque
tous ont la forme et l'aspect typiques. Dans les cellules géantes, au contraire,
la lutte est plus active, et les aspects de dégradation plus prononcés. On
trouve des bacilles déformés, qui, traités par double coloration avec la
fuchsine et le bleu de méthylène, se colorent en rose faible ou restent inco-
lores, ou même se colorent en bleu. On peut trouver ces preuves insuffi-
santes et dire que puisqu'on observe, dans les cultures artificielles, de ces
colorations anormales, ces bacilles violets ou bleus que l’on rencontre dans
les cellules géantes sont les bacilles inoculés en grande quantité à l'animal
qui à fourni les préparations. Mais voici d’autres transformations qui sem-
bleront plus topiques.

Beaucoup des bacilles contenus dans le tubercule paraissent entourés
d'une auréole comme celle du bacille de Friedlænder. Ils sont alors plus
pâles, moins colorés; ils peuvent même être incolores et ont alors des
contours nets. Dans un état plus avancé de dégradation, le bacille semble
disparaître, pendant que la capsule qui l'entoure prend des contours plus
nets et une teinte jaunâtre. « On rencontre ainsi dans la cellule géante une
suite de formes en saucisson, tout à fait caractéristiques, dont la configura-
tion générale rappelle seule le bacille originaire, qu'on y retrouve quelque-
fois sous la forme d'un trait à peine apparent.» Ces boudins se réunissent,
se fondent, perdent leurs formes, et finissent par former une masse com-

REVUES ET ANALYSES. 209

patte, d'une couleur ambrée naturelle, qui ne doit rien aux méthodes de
coloration.

Voilà une transformation qu'on n’observe jamais dans les cultures, ni
dans les tissus en dehors des cellales, qu'on ne peut pas rattacher à la mort
naturelle du bacille dans la cellule géante, comme le pensait Koch, parce
que tous ces bacilles meurent quelquefois simultanément dans une cellule
sans laisser trace de spores ni de générations nouvelles, et dans lequel il
faut voir le résultat d'une action de la cellule elle-même. Cette action, dit
M. Metchnikoff, n'est pas une action digestive, au sens propre du mot,
puisqu’au lieu de liquéfier la matière nutritive, elle en fait une masse résis-
tante et solide que ni les acides ni lesalcalis ne peuvent entamer. Il est
certain qu'elle se rapproche beaucoup plus de ces phénomènes d’enkystement
si souvent observés chez les infusoires, et qui sont des moyens de protection
temporaire vis-à-vis d'influences nocives. Mais que cette action ne finisse
par être destructive, c’est ce dont on ne saurait douter.

Avec le spermophile, ces témoignages de la victoire des cellules sur les
bacilles sont les plus fréquents. On rencontre pourtant aussi des cellules qui
continuent à vivre et à émettre leurs pseudopodes, tout en étant pleines de
bacilles en apparence intacts, d’autres qui, pleines de bacilles morts en leur
centre, en contenaient de normaux à leur periphérie. Mais les cellules
géantes mortes sous l'influence des bacilles sont très rares et on ne trouve
pas de masses caséeuses, même chez les spermophiles morts après une
longue incubation.

Les phénomènes de dégradation bacillaire sont d'autant plus marqués
que l'infection de l'animal est plus ancienne. D’après Baumgarten, avec le
lapin, animal très peu résistant à l'infection tuberculeuse, on ne trouve
traces de cette dégradation dans aucun des éléments des tubercules, pas
même dans les cellules géantes. Mais en étudiant la question de près,
M. Metchnikoff a retrouvé chez le lapin des faits tout à fait analogues à
ceux qu'il avait rencontrés chez le spermophile, toutes les fois que l'incu-
bation avait ét longue, par exemple à la suite de l'inoculation dans la
chambre antérieure de l'œil. Les formes de dégradation dans les cellules
géantes sont alors celles que nous avons décrites. Elles sont seulement moins
nombreuses que chez le spermophile.

Les cellules géantes du lapin sont donc aussi des phagocytes. Elles n’ont
pourtant pas le même développement que celles du spermophile. Elles pro-
viennent plutôt de la fusion de deux ou plusieurs cellules épithélioides sans
transformation apparente dans les noyaux. M. Yersin avait déjà décrit dans
ces Annales ce mode de production.

M. Metchnikoff termine cet intéressant mémoire en discutant les points
sur lesquels il est en contradiction avec les opinions et les résultats de
MM. Weigert, Baumgarten, de Christmas, etc. Il serait trop long d'entrer
dans cette discussion. Ce qui précède suffit à donner une idée des faits
nouveaux et curieux apportés par M. Metchnikoff dans cette question dou-

blement délicate de la phagocytose dans ce tubercule,
Dx.

510 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

N. GamazelA. Sur l'étiologie du choléra des poules. Centralbl. f. Bact., t. IV,
p. 161, 1888.

« Deux fois déjà, pendant un été chaud, j'ai rencontré sur des cadavres
de pigeons morts par intoxication avec des bactéries non pathogènes, des
bactéries dont l'apparition était pour ainsi dire spontanée, et qui manifes-
aient une telle virulence que l'inoculation sous-cutanée d’une seule goutte
du sang d'un pigeon mort tuait en quelques heures un nouveau pigeon.
Sur les cadavres, on relevait les signes d’une septicémie suraiguë : point
de réaction au point d'inoculation, kyperémie du canal intestinal, et masse
de bactéries dans le sang. »

Ces bactéries étaient de fins bàätonnets dont les extrémités se coloraient
beaucoup plus que le centre, et ressemblaient tout à fait aux microbes du
choléra des poules, pour leur forme et leur mode de croissance dans le
bouillon, la gélatine et la gélose.

D'où pouvaient provenir ces bactéries? En songeant combien le microbe
du choléra des poules est sensible à l'influence de la dessiccation, de l'air
et de la lumière, il semble difficile d'admettre qu'il soit largement répandu
dans la nature et dans le milieu ambiant, M. Gamaleïa s’est alors demandé
S'il n'existait pas normalement à l'état de parasites dans l'intestin de
quelques oiseaux, et il prouve de la facon la plus nette la réalité de cette
hypothèse.

En inoculant à un lapin, par voie d’injections sous-cutanées, un peu du
contenu de l'estomac, du gros et du petit intestin d’un pigeon sain tué à cet
effet, le tout mélangé à du bouillon stérilisé, il l'a vu mourir en 36 heures
environ, avec les symptômes ordinaires de la septicémie des lapins, et une
goutte de son sang, remplie de microbes analogues à ceux du choléra des
poules, a servi d'abord à inoculer un autre lapin qui mourut en quelques
heures, puis à faire des cultures. Il a transporté ainsi de lapin à pigeon, et de
pigeon à pigeon, ce microbe, qui partout a donné les lésions caractéristi-
ques de la bactérie du choléra des poules, et lui ressemblait aussi pour
son mode de développement dans différents milieux.

Les résultats de l'inoculation de la matière intestinale d’un second
pigeon sain ont été les mêmes.

Une preuve plus complète de l'identité entre le microbe étudié par
M. Gamaleia et celui du choléra des poules est que le premier peut servir de
vaccin au second. En inoculant à une poule, d'abord 0°,95 d'un mélange
de bouillon et d'un sang très virulent de pigeon tué par le microbe, puis
0,5 du sang d'un autre pigeon, tué de même, on lui communique deux
maladies passagères ! qui lui permettent de résister à l'inoculation du sang
du cœur d’une poule morte du choléra, inoculation mertelle pour une poule
de contrôle.

I y à donc identité entre les deux microbes, que M. Gamaleïa appelle du

1. M. Gamaleïa ajoute à ces faits, et au sujet des conditions d'efficacité de la
vaccination, des considérations sur lesquelles nous reviendrons.

REVUES ET ANALYSES. o11

nom commun de coccobacillus avisepticus. Mais dès lors se pose la question
suivante. Dans quelles conditions ce microbe devient-il dangereux pour
l'animal qui le porte ? Dans les expériences de M. Gamaleïa, il l'est devenu
chez des animaux inoculés par ailleurs avec des microbes inoffensifs. « Son
entrée en scène, ajoute ce savant, peut être expliquée soit : 4° par une intoxi-
cation générale produite par les produits vitaux des microbes non patho-
gènes, soit: 2 par la gastro-entérile que ces microbes ont la faculté de
produire, soit: 3° par l'éloignement de tous les phagocytes mésodermiques du
canal intestinal, occupés à la digestion des microbes saprophytiques non
pathogènes introduits en grande quantité. »

… Desexpériences directes ayant paru démontrer l'inanité des deux premières
hypothèses, M. Gamaleïa accepte la dernière, mais il est trop perspicace pour
ne pas voir que celle conclusion, assise sur des faits négatifs, n’a aucune
solidité, et qu'il se doit à lui-même de ne pas abandonner ce sujet sans le
creuser davantage. Dx.

Loir, GERMOND ET Hinps. Le Cumberland disease des moutons. Rapport
officiel au ministre des mines. Sydney, 1888.

Les savants envoyés en Australie par M. Pasteur, pour y étudier la ques-
tion de la destruction des lapins par le microbe du choléra des poules, ont
rencontré dans ces régions neuves une maladie épidémique des moutons
sur la vraie nature de laquelle on ne savait encore rien, bien qu'elle tuât
par an plus de 300,000 animaux. On la nommait Cumberland disease. Dès
qu'ils ont élé mis à même de s'en occuper, les savants francais n'ont pas
tardé à reconnaître que cette maladie n'était autre que le charbon, et voici
les points essentiels du rapport sommaire qu'ils ont adressé à l’administra-
tion de qui ils tenaient leur mandat :

« Le {7 mai, nous avons inoculé, à la face interne de la cuisse, deux
jeunes brebis avecle sang d'un animal mort de la maladie que MM. Stanley
(vétérinaire du gouvernement) et Devlin avaient dit être le Cumberlund
disease. L'un des animaux mourut en 40 heures avec les lésions ordi-
naires du sang de rate où charbon. OEdème gélatineux au point d'inocula-
tion, foie élargi, noir et mou, sang noir et coagulé, hémorrhagies sous-
cutanées, urine sanglante, ete. Le 3 mai, avec le sang de cet animal, on
inotule 4 souris, dont 3 moururent en moins de 18 heures. L'examen
microscopique révèle chez toutes la présence du bacillus anthracis. Avec le
sang de l’une d’entre elles, on fait uneculture dans du bouillon de bœuf, dans
lequel les bactéridies se multiplièrent avec leur aspect caractéristique. Le
7 mai, avec une de ces cultures, on inocule un lapin qui meurt en 2) heures,
charbonneux..… Ces expériences et ces cultures nous permettent donc
d'établir : 4° que les lésions anatomiques du Cumberland disease sont les
mêmes que celles du charbon... ; 2 que cette maladie est due à un microbe
dont les apparences en culture, et les propriétés physiologiques sont les
mêmes que celles du bacillus anthracis ; 3° que, par conséquent le Cumber-
land disease et le charbon sont une seule et même chose. »

12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

La conclusion pratique de cette découverte est qu'il y a lieu de recou-
rir à la vaccination charbonneuse. La pratique de cette vaccination se
heurte en Angleterre à une loi protectrice des animaux qui défend de les
protéger contre le charbon et les autres maladies virulentes contre lesquelles
il existe des vaccins. En Australie, les scrupules ne sont pas les mêmes,
paraît-il, car l'autorité compétente s’est tout de suite mise en quête des
moyens d'assurer aux propriétaires et à leurs animaux les bienfaits de la
vaccination charbonneuse. Dx.

S. MALERBA ET G. Sanxa-SaLanis. Recherches sur la gliscrobactérie. Rendi-
conto d. R. Accad. di Sc. de Naples, juin 1888.

Les auteurs ont appelé du nom de gliscrobactérie une bactérie qu'ils ont
rencontrée dans l'urine d’un malade, et qui la rendait filante. Elle rend
aussi filants le plupart des milieux où on l’ensemence, et en particulier la
colle d'amidon, qui sous son influence se laisse tirer en fils de plus de un
mètre de long. Mais ce caractère, si intéressant qu'il soit, semble mal
choisi pour fournir un nom spécifique, car beaucoup d’autres bactéries le
possèdent aussi, et à un degré au moins aussi marqué. Il serait sage, en
présence de la confusion qui règne dans la classification des microbes et
surtout en présence de celle qui se prépare, de choisir, pour former le nom
de chaque bactérie, l’un de ses caractères spécifiques.

Les considérations de forme ne suffisent que rarement pour cela
MM. Malerba et Sanna-Salaris décrivent leur microbe comme un micro-
coque un peu allongé ayant 0,4 4 de largeur, et une longueur variable de
0,6 à 1,15, souvent un peu étranglé en son milieu, tantôt isolé, tantôt en
chaînes de deux ou plusieurs, animé de mouvements faibles. Ils indiquent
avec soin les divers aspects que prend la culture dans divers milieux, géla-
tine en plaques ou en tubes, gélose, pommes de terre, urine, lait, salive,
sérum de sang, blanc d'œuf, bouillon. Toute cette partie du mémoire n'est
pas susceptible d'analyse ; il faudrait la reproduire tout entière, et encore
sommes-nous convaincus que les savants italiens ont désespéré de rendre
par des mots les divers aspects qu'ils avaient à cœur de peindre. C'est que
celte morphologie des cultures devient à son tour quelque chose de très
encombré, où chacun cherche à tort à compenser le vague des détails par
leur multiplicité, leur qualité par leur quantité. Quelques faits précis vau-
draient beaucoup mieux, et on ne saurait nier que le mémoire que nous
analysons en soit pauvre. Ainsi la gliscrobactérie est facultativement
aérobie et anaérobie, et donne des dégagements gazeux dans divers milieux.
Il eût été intéressant d'analyser ces gaz, et c'est ce qui n’a pas été fait. La
bactérie paraît vivre très bien dans l’empois d’amidon, sans y faire de glu-
cose, mais qu'y fait-elle? C’est ce que les auteurs ne nous disent pas. Elle
rend le lait acide en même temps que filant, mais sur quoi agit-elle, et quel
est l’acide produit ? Nous n’en savons rien. Nous sommes un peu mieux ren-
seignés sur l'influence de la température. Gelie qui est la plus favorable est
de 35-380 avec une limite supérieure de 40°-41°, et une limite inférieure de

REVUES ET ANALYSES. 13

10 à 5°. En dehors de ces limites, le développement s'arrête, mais la vie des
bactéries persiste, elle s'éteint seulement après 8! à 50°.

Les expériences d’inoculation à des animaux sont encore {trop peu nom-
breuses pour que les auteurs croient pouvoir en tirer des conclusions, et ils
en annoncent de nouvelles. Dx.

A. J. Browx. Actions chimiques produites par le Bacterium aceti. — Sur un
ferment acétique producteur de cellulose. Journal of the chemical Society,
1886, t.-XLIX, p. 112 et 432; 1887, t. LI, p. 638.

Après avoir observé que le mycoderma aceti peut oxyder le glucose et
transformer ce corps en acide gluconique, M. Boutroux a montré dernière-
ment dans ces Annules (t. If, p. 309) que cette transformation peut être
produite également parle micrococeus oblongus, et qu'un autre être, morpho-
logiquement identique, peut même pousser l'oxydation plus loin, et fournir
un acide oxygluconique. M. A. J. Brown, reprenant l'étude des oxydations
provoquées par le mycoderme du vinaigre, a ajouté aux résultats obtenus
par M. Boutroux quelques faits nouveaux, intéressants au double point de
vue chimique et microbiologique.

Le rôle le plus important du mycoderma aceti étant de transformer par
oxydation l'alcool en acide acétique, M. Brown a été tout naturellement con-
duit à rechercher s'il peut oxyder les alcools homologues de l'alcool éthyli-
que. Il a échoue avec les alcools méthylique et amylique, qui ne subissent, en
présence du mycoderme, aucune altération; mais en cultivant le ferment
acétique sur de l’eau de levure renfermant 3 0/0 d'alcool propylique
normal, il a obtenu de l'acide propionique.

Cultivé sur de l’eau de levure renfermant soit du glycol, soit de la glycé-
rine, avec un excès de craie, le mycoderme du vinaigre transforme ces
corps en acide glycolique et acide glycérique, qu'on retrouve à l'état de sels
de chaux; avec la glycérine on ne retrouve que de faibles quantités d'acide
glycérique, parce que ce corps est oxydé à l’état d'eau et d'acide carbonique
au fur et à mesure qu'il se forme.

Le ferment acétique n'exerce aucune action sur le saccharose, ou sur
l'érythrite, mais son action sur la mannite est des plus intéressantes. Il ne
se forme aucun acide, ni volatil, ni fixe, comme avec le dextrose (glucose);
le liquide de culture (eau de levure avec 2, 5 0/0 de mannite) acquiert un
goût très sucré et réduit fortement la liqueur de Fehling : par un traite-
ment convenable on arrive à en isoler un sucre présentant toutes les pro-
priétés du lévulose. Chose curieuse, le mycoderme respecte ce lévulose une
fois formé ; il est incapable de l'oxyder, et manifeste également cette pro-
priété avec le lévulose préparé au moyen de l'inuline. Voilà donc deux
sucres, le dextrose et le lévulose, que les récents progrès de la chimie des
hydrates de carbone nous montrent comme ayant une constitution très peu
diflérente, et qui cependant sont très différents comme aliments du myco-
derme du vinaigre, cet être consommant l'un et laissant l’autre inaltéré.
Peut-être faut-il voir dans des faits analogues l'explication des divergences

D14 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

qu'on rencontre quelquefois chez les auteurs au sujet de lalimentation
hydrocarbonée des microbes : le terme glucose et le terme sucre interverti
sont souvent employés indistinctement l'un pour l'autre, alors que le sucre
interverti, mélange à poids égaux de glucose et de lévulose, peut fort bien
n'avoir pas la même valeur alimentaire que le glucose pur.

Le lévulose obtenu par l’action du mycoderma aceti sur la mannite peut
facilement être ramené à l'état de mannite par réduction au moyen de
l'amalgame de sodium. M. Brown s'est assuré que cette mannite est iden-
tique à celle qu'on tire de la manne, et comme on peut également préparer
cette mannite en traitant le dextrose par l’amalgame de sodium, il s'ensuit
qu'avec l’aide du mycoderma aceti, et en passant par la mannite comme
terme intermédiaire, on peut produire une transformation qui n'a été
realisée que tout récemment par des moyens chimiques seuls, celle du
dextrose en lévulose.

La transformation inverse peut être réalisée en prenant comme auxiliaire
un ferment acétique que M. Brown décrit longuement et qu'il appelle Bacte-
rium æylinum, à cause de la curieuse propriété qu'il a de former de la
cellulose. Cet être présente, au point de vue chimique, les mêmes propriétés
que le ferment acétique dont il à été question es Il en diffère par
les caractères suivants.

Ce ferment forme à la surface des liquides de culture une membrane géla-
tineuse transparente, pouvant atteindre jusqu'à 25 m. m. d'épaisseur; celte
membrane est plus dense que l’eau ; si on l’agite, elle s'immerge, et est rem-
placée par une couche de nouvelle formation, de sorte qu'on peut obtenir une
masse formée de couches superposées, d'apparence stratifiée. La membrane
formée dans un liquide incolore est blanche et transparente; elle est douce
au toucher, très résistante, et ne se laisse facilement diviser que dans le sens
de la superposition des couches. Quel que soit le milieu de culture employé,
on n'obtient jamais quecette forme membraneuse, caractère que ne présente
jamais le myecoderma aceti pur. De plus, la pellicule de mycoderma aceti
est désagrévée par la potasse à froid, tandis que la membrane décrite plus
haut résiste à une ébullition de plusieurs heures avec ce réactif; l'action de
l’acide sulfurique concentré et de l'iode la colorent en bleu foncé.

Au microscope, on voit des bactéries de 2 y de longueur, souvent
en chaînes de plusieurs articles, se colorant bien par le violet de méthyle,
et noyées dans une masse homogène, transparente, présentant l'apparence
d’une gelée. Dans les cultures vieilles, on voit souvent des formes de coccus
de 0 w à, de diamètre, qui semblent être les spores du bacille. Dans les
milieux défavorables comme l’eau de levure on trouve, dans la membrane,
des bacilles en filaments très longs (10 à 30 y). Sur le moût de bière
vélatinisé on obtient des colonies sphériques à la surface ou au voisinage de
la surface; la gélatine n’est pas liquéfiée.

Ce ferment se développe très bien dans l'eau de levure additionnée de
lévulose; ce liquide constitue son meilleur milieu de culture. La tempéra-
ture optima est 250.

I se développe également bien sur la mannite, qu’il transforme comme
le mycoderma aceti, en lévulose ; sur le dextrose, qu'il transforme en acide

INSTITUT PASTEUR. D15

gluconique ; il se développe péniblement sur l'eau de levure seule, et ne vit
pas aux dépens du saccharose ou de l’amidon. Il acétifie l'alcool. Son action
chimique est done la même que celle du mycoderme du vinaigre; mais il
s'en distingue par la formation de la membrane décrite plus haut, membrane
dont M. Brown a extrait un corps présentant toutes les propriétés de la
cellulose qu’on peut extraire du coton, et répondant par sa composition à
la formule de la cellülose.

Comme le mycoderma aceti, ce ferment acétique transforme done la
mannite enlévulose, mais il est capable de consommer à son tour ce lévulose
pour en faire de la cellulose. M. Brown s'est assuré que le traitement de
cette cellulose par l'acide sulfurique fournit un sucre présentant toutes les
propriétés du dextrose ; il a, pour cette expérience, employé du lévulose
pur, préparé au moyen de l’inuline, et à fait vivre le B. xylinum sur ce
lévulose en solution dans l'eau de levure ; l'absence de dextrose a été
prouvée par ce fait que le liquide est resté neutre : en présence du glucose
il fût devenu acide, par suite de la formation d'acide gluconique. La cellu-
lose obtenue, convenablement purifiée et bouillie avec de l'acide sulfuri-
que, a fourni du dextrose.

Le Bacterium xyilnum fournit done un moyen de transformer un sucre
lévogyre, le lévulose, en un sucre dextrogyre, le dextrose.

A. FERNBACH.

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES SUR LES PERSONNES TRAITÉES A L'INSTITUT
PASTEUR DU 1° AU 31 aouT 1888.

Personnes traitées mortes de rage.

Sixarper (Alphonse). 26 ans, cultivateur à Polliot (Ain),
mordu le 26 avril 1886 au petit doigt de la main droite; trois
blessures sur le bord externe. Le chien mordeur à attaqué des
chiens et un enfant, puis a disparu. Les morsures ont élé cau-
térisées au fer rouge 2 jours après. Sinardet a été traité du 3 mai
au 12 mai 1886. Le 24 juillet 1888 (27 mois après la morsure), à
la suite d’un refroidissement, il ressent dans le bras mordu ure
douleur qui part du petit doigt et s'étend à l'épaule et au côté
droits. Le lendemain, impossibilité d’avaler. Le 27, il est trans-
porté à l'Hôtel-Dieu de Bourg en proie à la rage convulsive ; il
meurt le 28 juillet. Il a été observé par le D' Passerot, de Bourg.

Sinardet fait partie de la statistique de 1886.

ANNALES DE L'INSTITUT ;PASTEUR.

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INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — AOUT 1888
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4. La colonne À comprend les personnes mordues par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement ; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; La colonne C les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Les animaux mordeurs ont été :

Chiens, 119 fois; chats, 6 fois.

‘

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

9me ANNÉE. OCTOBRE 1888. N° 40

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE,

Par M. N. GAMALÉIA.

Grâce à l’obligeance de M. Pasteur et de M. Roux, j'ai pu,
lors de mon séjour à Paris, étudier au laboratoire de la rue d'Ulm
les principes fondamentaux de l’atténuation de la bactéridie
charbonneuse, ainsi que les propriétés pathogènes des vaccins
qui servent pour la vaccination charbonneuse en France.
J'ai poursuivi à Odessa ces études, dont quelques résultats
ont déjà été publiés ailleurs *?.

PES VACCINS.

Pour la préparation des vaccins, j'ai adopté la méthode des
antiseptiques de MM. Ghamberland et Roux *. Si l’on ajoute au
bouillon de culture une solution stérilisée de bichromate de
potasse, de manière à avoir une concentration de 2 à 4 millièmes
de cette substance, on äura un développement de la bactéridie

1. La technique de la fabrication des vaccins pour la pratique, telle qu’elle est
employée à la rue Vauquelin par M. Chamberland, n’a pas fait l'objet de mes
études.

2, Sur la vaccination charbonneuse. — Sur les vaccins charbonneux. Février et
mai 1888. Journ. de La société d’Économie rucale. Voir aussi: Sur la destruction
des microbes dans ces Annales n° 5, 1888.

3. Comptes rendus, 1883, t. 96, p. 1088 et 1410.

D18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

charbonneuse ensemencée, mais ce développement n’aboutira
pas à la formation des spores, comme l’ont démontré ces savants.

Ces cultures au bichromate présentent en outre des particu-
larités qui méritent une étude attentive.

L'aspect macroscopique a la forme habituelle, surtout les
premiers jours ; on remarque seulement un retard plus ou moins
grand, en rapport avec la quantité de bichromate ajouté. L’exa-
men microscopique révèle, au contraire, des formes insolites.

Outre les formes connues, dites involutives, qu'on trouve dans
chaque culture charbonneuse, on y décèle les suivantes.

Les plus nombreuses et constantes sont les formes diminuées
dans toutes leurs dimensions. Le bacille charbonneux devient
deux à trois fois plus court, les interstices qui séparent les petits
articles d’un filament s’agrandissent ; mais c’est surtout l’épais-
seur des bacilles qui s’amoindrit manifestement, et qui peut n'être
plus que le tiers de l'épaisseur de la forme virulente semée.
Souvent aussi les bouts des bacilles présentent des changements
pathologiques : ils ne sont pas coupés à angle droit, mais den-
telés ou pointus.

Cet amincissement de labactéridie virulente dans les cultures
au bichromate doit être considéré comme le phénomène mor-
phologique principal, puisque, ainsi que nous allons le voir, il
marche de pair avec la qualité physiologique de l’atténuation. II
se retrouve dans les cultures en milieux acides, et aussi dans
certaines conditions spéciales qui seront exposées plus loin.

Une autre variété qui naît dans le bouillon au bichromate
est celle que j'ai décrite sous le nom de digérée * dans un autre
article. Le bacille charbonneux se divise en petits tronçons
transversaux qui se gonflent, acquièrent l’aspect de gros coccus,
pâlissent, et ne présentent plus à la fin qu’une pâle enveloppe
privée de contenu. Ce phénomène, qu'il est facile de reproduire
en quelques minutes par le suc gastrique naturel ou artificiel,
agissant sur la bactéridie normale, pourrait être appelée disso-
lution.

Il me reste à décrire encore une forme beaucoup plus rare,
c’est la bactéridie à fourreau. On trouve parfois dans les cultures
chaque bactéridie entourée par une large enveloppe qui dépasse

4. Ce recueil, n° 5, 1888.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 519

deux ou trois fois la largeur du bacille normal, et qui se co-
lore fortement par des couieurs d’aniline, ne laissant que rare-
ment apercevoir le bacille situé à l’intérieur ‘.

On saisit l'importance de toutes ces modifications subies par
les cultures charbonneuses au bichromate, quand on ensemence
avec elles un bouillon normal. Alors on trouve, avec les auteurs
de la méthode, que toutes ces nouvelles cultures sont plus ou
moins atténuées. Quant à leur aspect macroscopique, quand
elles sont faites à 35°, on trouve souvent non seulement que
les flocons typiques du charbon sont plus ténus et fragiles,
mais on remarque aussi dans les cultures les plus atténuées
l'absence complète de flocons au fond du vase; le trouble du
bouillon est presque uniforme. Au contraire, à la température
ordinaire, le développement est lent, mais toujours en flocons
nageant dans un bouillon limpide. L'examen microscopique
continue à donner des détails intéressants. Les formes à /ouwr-
reaux et dissoutes ne se rencontrent plus dans les cultures frai-
ches, mais ce sont les formes amoindries qui se développent.
Outre leurs dimensions, les baguettes du charbon atténué se
distinguent de la bactéridie virulente par leurs bouts souvent
arrondis. Quant à la grandeur de ces bacilles, il est incontestable
que leur diminution marche tout à fait parallèlement avec l'atté-
nuation de la virulence. Si on prend la précaution de ne com-
parer entre elles que les cultures fraiches et non en involution,
on pourra facilement se convaincre que plus une culture est at-
ténuée, plus sont petits les bacilles qui la composent.

Entre toutes ces cultures atténuées, nous en avons choisi
deux, le premier et le deuxième vaccin, pour la vaccination des
moutons.

Notre premier vaccin a les propriétés suivantes : ce sont de
petits bacilles ayant souvent des bouts arrondis. Les premières
cultures, issues du bouillon bichromaté, ne poussent que mé-

4. Ces enveloppes ne doivent pas être confondues avec les capsules trans-
parentes qui se forment parfois autour de la bactéridie virulente, comme M. Metch-
nikoff l'a vu dans le sang des lézards, et comme nous l’avons observé dans un.
cas de charbon intestinal chez un mouton. Ces capsules sont constantes dans les
cultures charbonneuses faites dans le lait. Nos enveloppes ou fourreaux corres-
pondent plutôt à celles que Metchnikoff a décrites pour les bacilles tuberculeux.
Voir Virchow’s Archiv, 1888, et ces Annales, tome II, p. 505.

520 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

divcrement sur la gélose et ont une tendance à produire dans le
bouillon de culture, le deuxième et le troisième jour, des formes
involutives, etles pseudosporesdites microspores etarthrospores.

Les formes involutives sont tout à fait semblables à celles
qui sont décrites pour la bactéridie virulente par beaucoup
d'auteurs; elles sont contournées en hélice et diversement élar-
gies. Les microspores sont de petits grains brillants qui se
forment à l'intérieur d’une baguette et n’occupent pas toute sa
largeur. Les arthrospores sont tout un tronçon du bacille, qui
acquiert la réfringence brillante sans changer sa forme prisma-
tique. Les arthrospores et microspores ne retiennent pas la
double coloration. Les endospores typiques ne se forment pas
dans ces conditions. :

Après avoir fait quelques passages (10 à 15) par le corps des
souris, j'ai vu un grand changement survenir dans mon premier
vaccin. Îl a commencé à se cultiver abondamment sur la gélose,
en y produisant de véritables endospores au bout de deux jours.
C'est de ce vaccin fortifié ou rafraichi que nous allons décrire
les principales propriétés morphologiques et physiologiques.

Notre premier vaccin, inoculé en quantité de 1/8 %: sous la peau
du mouton, détermine chez lui une fièvre vaccinale d’un ou de
deux jours de durée. Inoculé dans la chambre antérieure de l'œil,
il lui donne une fièvre intense (jusqu’à 42°) pendant #4 et 5 jours.

Le premier vaccin tue, en quantité de 1/8, la souris grise
en 30 à 40 heures, la souris blanche en 48 à 60 heures. En
quantité plus forte il tue aussi les cobayes, tandis que les lapins
lui sont absolument réfractaires : l’inoculation de 50 à 100 °°
d’une culture dans du bouillon ne leur donne que la fièvre vac-
cinale allant jusqu’à 410 5 1.

Le deuxième vaccin contient des bacilles manifestement plus
vrands que ceux du premier, quoique plus petits que la bactérie
virulente. Les endospores se forment sur la gélose au bout de
30 à 40 heures.

Le deuxième vaccin tue plus de 50 0/0 des moutons frais
inoculés par f/8° sous la peau. Chez les moutons déjà ino-
culés par le premier vaccin, le deuxième produit une forte fièvre
vaccinale de 4195 — 42°.

1. Voir ces Annales, t. IT, ne 5.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 521

Le deuxième vaccin tue tous les animaux qui succombent au
premier vaccin, et outre cela les lapins et les rats blancs,

Inoculé sous la peau du lapin en quantité de 1/8, il le
tue en 48 ou 60 heures. Le rat blanc ne succombe qu'à l’ino-
culation de un centimètre cube.

Ces propriétés physiologiques des vaccins se rapportent à des
cultures fraiches de deux jours dans le bouillon. Les vieilles
cultures, surtout celles qui ont été faites dans la gélatine nutri-
tive, ont leur virulence considérablement atténuée.

Pour la conserver, nous avons adopté la méthode suivante.
On fait avec des germes, formés sur la gélose, et du bouillon
stérilisé, une émulsion dense dont on imbibe de petits fils de
soie, qui sont ensuite séchés et mis à la cave.

Cette méthode indiquée par M. Kitt' nous a donné de bons
résultats, en ce sens que la virulence des vaccins n’a pas sensible-
ment changé pendant six mois.

Pour ramener les vaccins affaiblis à leur virulence normale,
nous employons la méthode indiquée par MM. Pasteur, Cham-
berland et Roux *.

Revenant maintenant à la comparaison entre ces deux vaccins
et le virus charbonneux, nous trouvons que les bactéridies
atténuées se distinguent de la bactéridie virulente par un nombre
considérable de caractères morphologiques et physiologiques.

Le plus important parmi les premiers est la diminution
de grandeur. En faisant des mensurations exactes, nous avons pu
constater que le premier vaccin est deux fois plus mince que
la bactéridie virulente (dans des cultures faites dans les mêmes con-
ditions dans le bouillon). Le deuxième vaccin occupe une place
intermédiaire, ilaen moyenne les ?/, dela largeur du bacillenormal
virulent. Il était encore intéressant de rechercher si on ne pourrait
pas réussir à trouver des différences spécifiques dans les cultures
comparatives de ces trois formes. En comparant les cultures
fraiches, faites avec des semences récemment issues du corps de
l'animal, nous n'avons pas remarqué ces différences dansla vitesse

4. Ta. Kurr, Werth und Unwerth der Schutzimpfungen gegen Thierseuchen,
1886, p. 105.

2. PasrEUR, CHAMBERLAND ET Roux, De l’atténuation des virus et de leur
retour à la virulence. Comptes rendus, 1881, p. 429.

522 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

du développement qui ont été indiquées par M. Smirnoff !.

En revanche, les cultures dans le lait stérilisé nous ont donné
des différences marquées. Toutes les formes, les deux vaccins et
le virus, se développent très bien dans le lait. Comme particu-
larité intéressante de ces cultures, il faut noter les capsules
transparentes autour des bacilles. Ces capsules existent autour
de la bactéridie du premier vaccin aussi bien qu'autour de la
virulente, ce qui exclut leur connexité avec la virulence : elles
sont peut-être en relation avec une formation d’acide lactique,
qui pourrait décolorer le fond des lamelles colorées par le bleu
de méthylène.

La culture virulente coagule le lait vers le 3° jour à 35°.
La caséine coagulée se rassemble lentement au fond des ma-
tras de culture, mais n’y reste pas longtemps : au bout de
1 à 10 jours elle est de nouveau complètement dissoute. On a
alors deux couches seulement dans les cultures : la crème
surnage un liquide jaune. Les vaccins ne coagulent pas du tout
le lait. À peine si au bout de 10 à 15 jours on remarque dans les
cultures du deuxième vaccin une mince couche plus transparente
au-dessous de la crème. Les cultures du premier vaccin ne
changent nullement l'aspect du lait pendant les deux premières
semaines, après quoi elles dissolvent lentement la caséine sans
la précipiter. Quant à l'explication de ces différences, nous
croyons pouvoir la trouver dans la susceptibilité diverse du
virus et des vaccins par rapport à l’action de l’acide lactique. La
réaction est manifestement acide dans les trois cultures, mais
elle est plus prononcée avec la bactéridie virulente qui est aussi
celle qui donne les cultures les plus abondantes. Il est clair
dès lors que le développement et, par conséquent, l'acidité crois-
sante des cultures est arrêtée dans les cultures vaccinales par
l’acide déjà formé. En d’autres termes, les vaccins sont plus
sensibles que la caséine à l'égard de l’acide.

Si nous nous sommes autant arrêlés sur la question des
différences entre le charbon virulent et le charbon vaccinal,
c'est pour les motifs suivants. Premièrement, nous avons
montré, entre les trois formes que nous avons étudiées, des
différences tout aussi grandes que celles, par exemple. qui ser-

1. Smirnorr, Sur la nature de l’atténuation des bactéries pathogènes. Zeischr. f.
Hygiene, t. IV, p. 231. |

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D23

vent à distinguer les espèces vibrioniennes du choléra, de Koch,
de Denecke et de Prior et Finkler. Ceci peut rendre plus circons-
pect dans la création de nouvelles espèces fondées sur des
caractères aussi fugitifs que la lenteur de développement, la
modification de l’aspect du lait, etc.

Deuxièmement, cet arrêt dans le développement des vaccins
dans le lait pourra peut-être nous servir à comprendre le rôle
des vaccins dans le corps de l’animal'.

IT. — FIÈVRE VACCINALE.

Dans la célèbre expérience de Pouilly-le-Fort, aucun chan-
sement n’a élé remarqué dans l’état de santé des moutons après
leur inoculation par les vaccins. Pourtant on peut lire dans les
tableaux de température, contenus dans le rapport de M. Rossi-
gnol. que plusieurs moutons ont eu une élévation de tempéra-
ture, surtout très prononcée (de 2 degrés au maximum) après le
deuxième vaccin. D'un autre côté, il faut remarquer que la vac-
cination à Pouilly-le-Fort n’était pas faite au maximum, c’est-à-
dire de façon à empêcher tout développement du virus dans le
corps des vaccinés : au contraire, après l’inoculation virulente,
plusieurs moutons ont eu la fièvre, des nodosités à l'endroit de
l’inoculation ; une brebis est morte du charbon.

Dans le rapport de M. Muller” sur les expériences faites
par Thuillier en Allemagne, il est noté que le deuxième
vaccin produit une affection violente quoique rarement dange-
reuse, et surtout une forte élévation de la température. Au
congrès de Genève, M. Sormanni * araconté que dans l'expérience
malheureuse de Bologne, où sur six brebis vaccinées quatre
sont mortes dans l'expérience de contrôle, les deux brebis qui ont
survécu ont eu une forte fièvre (au delà de 41°) après les
vaccins. Et M. Sormanni, s'appuyant sur l'opinion de M. Pasteur,
conclut que la manifestation fébrile vaccinale est indispensable
à la réussite des vaccinations. Les autres expérimentateurs
comme Koch, Gaffky et Læffler, Kitt, etc., n’ont enregistré

4. Nos vaccins ont été approuvés pour la pratique par une commission spéciale,
nommée parla Société impériale d'agriculture de la Russie Nouvelle. La pratique de la
vaccination charbonneuse estentièrement confiée à l’Institut d'Odessa à M. Bardach.

i. Cité pas Baumler : Der derzeitige ta ndpunkt der Schutzimpfungen. 1887.

3. Quatrième congrès, etc., t. [., p. 146.

D24 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

aucun symptôme appréciable, ni général ni local, de l'influence
des vaccins sur les moutons vaccinés. Du reste, la plupart
des auteurs n’ont pas fait de mesures de température.

Nous avons pris, au contraire, très régulièrement, au moins
deux fois par jour, la température chez tous les moutons que
nous avons vaccinés ‘.

Ces recherches ont conduit à un résultat très net.

Tous les moutons qui subissent par suite de la vaccination
une élévation considérable de température acquièrent une
immunité complète vis-à-vis de l'infection sous-cutanée virulente,
qui ne produit alors aucun symptôme fébrile.

Tous ceux qui n’ont pas la fièvre vaccinale n'acquièrent pas
l'état réfractaire, non seulement par rapport au virus, mais
même vis-à-vis des vaccins, qui peuvent être réinoculés et
donner la fièvre.

Vu la grande portée de ces résultats, je me permets de donner
en détail quelques températures. .

Dans les tableaux qui suivent, on trouve, en regard de cha-
que vaccination, sa date, et pour chacun des jours qui ont suivi,
le relevé des températures. Pour simplifier, on a supposé le zéro
commun à 38°, la plus basse température observée. Les obser-
vations du matin et du soir sont, quand il y a lieu, inscrites
l’une à la suite de l’autre et séparées par un tret. Les tempéra-
tures matinales du premier jour sont toujours celles qui ont
précédé ie moment de la vaccination.

AT VAGCIN. 2° VACGCIN. VIRUS. ? OBSERVATIONS.
{re EXPÉRIENCE. 42 juillet 11 août 31 août
| 1,8 —:1,8. 1,9. — 2,9 4,4 — 1,4 Aucun
9 4,8 — 2,6 3,0 — 29 0,9 — 09 symptôme
3 29 9 12289 22 9 TS morbide,
4 4,9 — 1,9 2,2 — 9,4 1,3 — 1,4
2e EXPÉRIENCE. 20 sept. 14 oct. 30 oct.
1 4,5 — 1,5 2,0 — 2,6 0,8 — 0,8
2 2,3 — 925 9,2— 9,7 1,2 — 1,0 Id.
3 3,0 — 2,9: 31— 125, 4,0 — 411
Le 4,5 — 1,7 1,9 — 2,0 1,3 — 4,5

4. La plupart de nos expériences, sur plus de 300 moutons, ont été faites

en 1887.

2. Ce virus a toujours été inoculé à la fois aux moutons vaccinés, et à un ou
deux moutons non vaccinés qui ont toujours succombé au charbon.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 929

3° EXPÉRIENCE.

CO © =

4° EXPÉRIENCE.

R © RO

©

Se EXPÉRIENCE.

6° EXPÉRIENCE.

7e EXPERIENCE.

8e EXPÉRIENCE.

à © D =

47 YACCIN.
20 sept.

4,5 — 1,5
2,3 — 2,5
3,0 — 9,9
4,5 — 1.7

12 juillet

ta 9
DANS
CE PNA

9,7 — 23
1,9 — 2,1

12 juillet
2.0 — 2,2
1,6 — 2,2
42762120
2,92 — 9,9
3,0 — 2,8
1,3 — 1,4

12 juillet

2° VACCIN.

414 oct.
9,9 — 9,6
9,9 — 3,1
2,9 — 3,8
1,5

10 août
1,3 — 2,6
BR il
2.3 — 2,0
92,0 — 1,8
1,6 — 1,8

10 août
2,9 — 92,8
22 1:0
4,4 — 2,0
3,4 — 92,5
2,9 — 2,3
4,5 —14:7

10 août
2,0 — 2,2
4,9 — 1,7
1,4 — 1,6
1,5 — 1,6
ART
1,6 — 1,8
4 041,7

10 août

2,0 — 2,9
3,0 — 2,9

3,2 — 9,9
29 — 28
10 août
1,3 — 1,4

38 —33
23 — 921
2.0 — 1,9

= pin jp ST Ed © mn Ps
SR \

VIRUS.
30 oct.
0,7 — 0,7
4,4 — 1,9

(UE,
Fe
og
©
=
=

“

Dr

QE 1 Ro Ro 0
©
©

=
Co
w =
@
©
C>
perd

— 192
0,9
1,3

1,4

= © en
© «© Cr
IA

|

31 août
1,9 — 2,0
DES
4,9 — 41,9
1,6 — 1,8

OBSERVATIONS.

Aucun

symptôme

morbide.

Id.

Id.

Mort du
charbon.

Aucun

symptôme

morbide.

Id.

9° EXPÉRIENCE.

Lo —

Q 1 OÙ À

10° EXPÉRIENCE.
3
4

11° EXPÉRIENCE.

12° EXPÉRIENCE.

ROBE

OT me Co

13° EXPÉRIENCE.

Où C7 & © NO

14 EXPÉRIENCE.

RON

Or à

(en)

12 juillet
15 — 1,5
2,3 — 9,5
3,0 — 2,9
1,5 — 1,7

3,1
1,6

2e VACCIN.

14 oct.

1 om
47-—12;0
1,3
1,8
4,7
1,8

44 oct
2,0 — 2,6
2,9 — 91
3,1 195
2,0 22
10 juillet
4,5 — 4,5
4,4 — 1,4
5
4,0 = 46
4,5 — 14,5

25 déc.

25 déc.
1,1
99
1,8
1,9

ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

AT vVACGIN.

VIRUS.
30 oct.
0,0 — 0,0
DO USS
1 007
4,70 —=:2:0
2,01=—°5,3
3,4 — 3,4
3,2 — 3,9

3,8

30 oct.
0,8 — 0,8
1,2 — 1,0
1,0 — 1,1
1,3. —14,5

JLNOCL
1,5 "45
1,9 153
4,5 — 1,3
2,0 — 1,8
1 SEEN
4,9 — 1,5

8 janvier 1888.

1,5

AA UE
15 — 18
A
RER

S Janvier
4,9

1,4 — 1,4
1,5 — 1,5
1,3 — 1,3
4,5 — 1,4
4,5

1,9

1,6 — 1,8
4,6

1,3 — 1,6
1,7 — 1,8

OBSERVATIONS.

Mort du
charbon.

Aucun
symptôme
morbide.

Mort du
charbon.

Aucun

symptôme

morbide.

Id.

Id.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 927

Aer VACCIN. 2 vaACCIN. VIRUS. OBSERVATIONS.

15° EXPÉRIENCE. 9 déc. 25 déc. 8 janvier

! 1,5 1,9 1,9

2 2,3 3,3 1,7 — 1,8 Aucun

3 1,6 2,4 1,6 — 1,6 symptôme

4 2,8 ar 1,4 — 15 morbide.

5 404 425 1,6 — 1,4

6 4,4
16° EXPÉRIENCE.

il 0,9 2 1,8

2 HN 2,8 4,5, —11:6

3 3,9 1.6 4,7 — 1,6

4 4,6 112 4,6 — 1,0 Id

5 424 0,9 4,6 — 1.3

6 459

De ces expériences, on peut conclure que l’immunité char-
bonneuse n’est acquise qu'à la suite d'une fièvre vaccinale.

Cette proposition, fondamentale pour toute la vaccination,
peut être confirmée par d’autres faits.

On peut, par exemple, vacciner les moutons avec un seul
vaccin, mais celui-ci doit alors provoquer une fièvre très intense,
dangereuse pour la vie de l'animal.

17° EXPÉRIENCE, 47 avril 1: mai 45 mai
il AA ALIAS 41,4 Aucun
2 1,8 — 15 1,6 12 symptôme
3 DD A OPA T AT morbide
4 PO OPA Hal après le
5 4,9 — 4:9 4,3 4,9 2% vaccin
6 DOS ed2 4,9 et le virus.
fl Sir
8 3,4 53,4
9 30252
10 3,3 — 2,6
A1 2 02220
182 EXPÉRIENCE.
il 9,93 = MAD MA 1,6
2 16221801; 1 1,8
3) DO PP OA 1,8
4 DA D EE? 1,8 Id.
5 DS RE) 1,9
6 3,4 — 3,2 15
7 3,4 —- 3,2
8 D 26
9 2,4 — 9,4
10 2

OBSERVATIONS.

VIRUS.

VACCIN.

WE)
A

AT VACCIN.

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

19° EXPÉRIENCE.

D ui
VE CRCPERS
5 <© «= mn D.

+ ©, =
3 Ru = Ed
Es SR

> À VA

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OS YO DANONE
olatel ae net

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RO PR LR OCRERCE
re es 0

NN 20 © EE D © =
— —

45 mai

3 mai

Au contraire, si le premier vaccin ne provoque pas de fièvre,
21 avril

le second en donne une très intense. Exemples :

202 EXPÉRIENCE.

Ce! GT STRESS

IT

CN LAC CIS TL OT ELEC

IGN OO = 0 res

Dm

PA

ü

21° EXPÉRIENCE.

RE RC SE TO LC

C) KoY RS. Re) Ke) Ko)

ÉAETRE EE

DMNMAM
SAS

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ST OT — TT GT

AA

CEE ED

RSR N MIN EN Me Ter Me Re nn

NM NY 20 © = 0 D © =
RS)

29° EXPÉRIENCE.

D

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nero

— ai St Qt GT

Sn © = 29
Nate 9 6

SD COCO EN ECC" 0 CN

mm mt

TNNMNHOrHAES—
+

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 529

Aïnsi, il est évident que ce ne sont pas les vaccins, mais la
fièvre qu'ils produisent, qui confère l’immunité. Quand la vaceci-
nation passe sans réaction fébrile, l'immunité n’est pas acquise.

La meilleure preuve de la valeur de ce principe est son appli-
cation à de nouveaux faits. Nous en allons citer une.

Il est connu que le vaccin des moutons ne peut pas servir,
employé d’après le mode ordinaire, à vacciner les lapins.

En effet, plusieurs expériences m'ont montré que l'inocula-
tion sous-cutanée des lapins par le premier vaccin ne provoque
aucune réaction fébrile, tandis que le deuxième vaccin les tue.

D'un autre côté j'ai montré (v. ces Annales, mai 1888) qu’en
injectant, d’après la nouvelle méthode de MM. Roux et Chamber-
land, 50 © du premier vaccin dans le sang des lapins, on détermine
une fièvre vaccinale. Elle est courte, mais elle est répétée deux
fois et n'a besoin de vacciner que contre le deuxième vaccin.

Voici un exemple :

Le 29 décembre, un lapin noir est inoculé par 50% du
premier vaccin dans la veine de l'oreille.

29 décembre 11h.1/2 m. 39% 30 décembre 9 h.m. 400,3
2h.1/2s 40,2 7 h. 40
4h. A1 10 h 39,5
5h: 39 ,8 5h: DONS
JE UT
11). 40 ,4
minuit 40 ,6

Ainsi, nous croyons avoir prouvé que la fièvre vaccinale
charbonneuse est une condition nécessaire et suffisante pour
l'acquisition de l’immunité.

Du reste, ce principe paraît s'appliquer à d’autres vaccina-
tions préventives : ainsi, nous l'avons retrouvé pour le choléra
des poules ‘.

On comprend aisément l'importance pratique de ce principe.
C’est lui qui détermine le choix entre les virus atténués : on pren-
dra pour premier vaccin celui qui donne une fièvre vaccinale
prononcée; pour le deuxième, on choisira celui qui détermine une
deuxième fièvre après le premier vaccin.

C’est ainsi que le principe de la fièvre vaccinale donne la

4. Voir Centralblatt für Bacteriologie, t. IV, 1888, et ces Annales, t. II, p. 510.

230 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

meilleure mesure de la force nécessaire du vaccin, et celle-ci
une fois trouvée, on la contrôle par une expérience sur Îles
petits animaux, plus fréquents dans les laboratoires.

L'application de ce principe à d’autres maladies pourra
facilement faire trouver des vaccins nécessaires et suffisants pour
vacciner coutre ces maladies.

IIT. — MÉCANISME DE L’ACQUISITION DE L'IMMUNITÉ.

a. — Phénomènes de l'économie générale.

Pour essayer de saisir le mécanisme de la production de la
fièvre vaccinale, nous avons étudié directement l’économie des
moutons pendant cette fièvre. Dans ce bul, nous avons sacrifié
les moutons à des périodes diverses de la vaccination.

Cette étude est délicate, parce que, en tuant un mouton, on se
prive de la possibilité de contrôler plus tard son immunité char-
bonneuse acquise ; et que, d'un autre côté, on ne peut affirmer
qu'il ne serait pas mort par l'effet de la vaccination. Pour éviter
ces incertitudes, on était obligé de vacciner à la fois un grand
nombre de moutons, dont on sacrifiait quelques-uns pour
l'étude de l'acquisition de l’immunité, et dont la majorité restait
pour le contrôle de l’innocuité de la fièvre! et de la solidité de
l’état réfractaire conféré *. L'étude des organes des moutons
sacrifiés était toujours entreprise immédiatement après leur
mort *.

Cette étude était conduite d’après les trois méthodes ordi-
naires : examen microscopique, cultures sur milieux solides,

4. Sur plus de 300 moutons, pas un seul n’a succombé à la vaccination.

2. Ces précautions ont échappé à M. Bitter, qui a répété avec des résultats
négatifs nos expériences sur la vaccination charbonneuse. (V. Brrrer, Ueber die
Verbreitung de Vaccins, etc. Zeitschrift f. Hygiene, 4 Bd., 1888.) Il a évidemment
sacrifié les moutons en dehors de la fièvre vaccinale. Il n’a pas même fourni la
preuve que les vaccins entre ses mains étaient aptes à donner aux moutons une
immunité complète, et que celle-ci n’était pas plutôt conférée par la première ino-
culation virulente.

3. Ce qui esttrès important, car nous avons constaté par des recherches directes
que les formes de destruction des bactéries sont beaucoup moins nombreuses, 6 et
22 heures après la mort, et parce que, d'un autre côté, les bactéries se multiplient
dans le cadavre.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D31

(nous avons employé d’ordinaire la gélose, qui est très propice
au développement des vaccins), et infection des animaux.

Premier groupe. — Premier vaccin chez les moutons.

ExPÉRIENCE I. — Le 12 juillet, le premier vaccin est inoculé à dix mou-
tons. Les températures de l’un d’eux sont les suivantes : Le 19, 390,5 —
400,5; le 13, 400,2 — 390,8 — 400,2; le 14, 390,6 — 400,7; le 15, 400,9; on le
sacrifie à 8 heures du soir.

A l’autopsie, on trouve : pas de changements macroscopiques à l'endroit
de l'inoculation; glande inguinale de l’aine droite hyperplasiée; rate et
reins hypérémiés. Une souris blanche inoculée avec la rate reste vivante.

L'examen microscopique donna les résultats suivants :

La glande de l’aine droite était remplie de baguettes fines et courbées
avec des bouts arrondis. Les formes de bactéridies dissoutes, gonflées, et se
brisant en morceaux quadrangulaires, se rencontrent aussi, mais plus
rares. Les poumons, la rate, les glandes mésentériques, le foie et surtout les
reins contiennent de grandes quantités de bactéries déformées.

EXPÉRIENCE IL. — Le 1* octobre, quatre moutons sont inoculés avec: le
premier vaccin. L'un d’eux, le lendemain, à 8 heures du matin, a une tem-
pérature de 410,4. Il est tué par le chloroforme, comme tous les autres. Les
organes intérieurs sont normaux. Dans le sang du cœur se retrouvent des
bactéries intactes du premier vaccin qui ont cultivé sur la gélose. Une
souris grise, pourtant, inoculée par le sang du cœur, est restée vivante.

ExPÉRIENCE IL. — Le 30 octobre, quaire moutons sont inoculés par le
vacein. L'un d’eux est tué le 1 novembre avec une température de 410,3.
Pas d’œdème à l'endroit de l’inoculation. Les organes intérieurs sont
normaux. Le sang du cœur ne révèle rien au microscope. Dans la rate, on
trouva des bactéridies déformées en petites quantités; dans le foie leur
nombre était plus considérable; dans les reins, très grande quantité de
formes détruites avec quelques bactéridies normales; dans les poumons, on
trouva aussi des bactéridies normales. Les reins, semés sur la gélose, ont
donné une culture, tandis que la rate et le foie n’ont rien donné.

Dans la rate dece mouton, on a semé une culture virulente du charbon,

qui a poussé; inoculée ensuite à un lapin, cette culture a donné l'infection
charbonneuse mortelle.

EXPÉRIENCE IV. — Le 22 novembre, le premier vaccin est inoculé à trois
moutons; le 24, l'un d'eux, qui avait le matin 390,5 et à 3 heures 400,7, est
sacrifié à ce dernier moment.

À l'endroit de l'inoculation, hypérémie et empâtement; les glandes
de l’aine droite sont hyperplasiées; la rate et les reins hypérémiés. Dans la
rate, On ne trouva que peu de bactéridies déformées dans les macrophages
ainsi qu’en dehors d'eux. Dans le sang il n’y avait rien, Le foie contenait

32 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

beaucoup plus de bactéridies, déformées en coceus, tandis que les reins les
contenaient en quantité énorme. On les trouva aussi dans les capillaires de
l'intestin et dans les glandes de laine. Les cultures n’ont pas poussé.

Deuxième groupe !. — Deuxième vaccin chez les moxtons.

EXPÉRIENCE I. — Un mouton, déjà vacciné avec le premier vacein, le
12 juillet, est inoculé le 6 août avec le second. Les relevés de température
donnent : le 6, 390,3 — 390,1; le 7, 890 — 400; le &, 410 — 400,5 — 400,1.

On le tue le 8 au soir : les formes dissoutes se trouvent principalement
dans les reins; le foie les contient en quantité moindre. On ne trouve rien
dans la rate.

EXPÉRIENCE Il. — Le 7 octobre, un mouton est vacciné par le deuxième
vaccin. Température : le 7, 390,2 — 390,9; le 8, 400,3 — 390,5; le 9, 410,8;
on le tue.

Hyperplasie des glandes lymphatiques à l'endroit de l’inoculation. Hypé-
rémie de la rate. Dans le sang du cœur, les poumons, la rate, le foie et
surtout dans les reins, on trouve des bactéries saines du deuxième vaccin
avec leurs formes détruites; avec tous ces organes on a obtenu des cultures
sur la gélose.

ExPÉRIENCE IL. — Le 10 octobre, un mouton est inoculé par le deuxième
vaccin. Température : Le 10, 390,5 — 400,1; le 41, 400,4 — 410,1; on le tue.

Glandes lymphatiques hyperplasiées; rate tuméfiée et molle; reins
hypérémiés. Dans le sang du cœur on trouve des bactéridies typiques.
Dans la rate, le foie et les reins : formes de destruction.

ExPÉRIENCE IV. — Le 10 octobre, un mouton est inoculé par le deuxième
vaccin. Il a eu une fièvre typique le lendemain. Le 12 octobre, la fièvre
tombée, il est mis à mort. Reins et rate hypérémiés. Dans tousles organes,
mais principalement le foie et les reins, on trouva de grandes quantités de
bactéridies charbonneuses détruites. Tous les ensemencements dans les
milieux nutritifs restent stériles.

EXPÉRIENCE V. — Le 14 octobre, vingt moutons sont vaccinés par le
deuxième vaccin. La température de l’un d’eux est, le 14, de 389,9 — 390,9;
le 45, à 7 h. du matin, il a 410,1 et à 9 h. 410, 9; on le tue à ce moment.

Les glandes lymphatiques sont hyperplasiées à l’aine gauche. La rate et
la couche corticale des reins sont hypérémiés. Les reins et les poumons
présentent une masse de bactéridies charbonneuses détruites, parmi
lesquelles on trouve parfois des baguettes à l'apparence normale. Les autres
organes en contiennent beaucoup moins. Les ensemencements sont restés
stériles. Une souris, inoculée par l’émulsion des poumons, est restée
vivante.

1. Tous les moutons de ce groupe ont reçu le deuxième vaccin après avoir été

vaccinés par le premier. Chacun d’eux avait plusieurs (jusqu’à 20) moutons témoins
servant à controler l’innocuité de la fièvre et la solidité de l'immunité conférée.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D33

EXPÉRIENCE VI. — Le 14 octobre, un mouton est vacciné par le deuxième
vaccin. Sa température est, le 14, de 390,5 — 409,3; le 15, il a 390,6 à
7 h. du matin et 400,9 à 9 h. du matin; on le tue à ce moment.

Induration à l'endroit de l'inoculation. Reins très hyperémiés. Les
bactéridies intactes se trouvent en grande quantité dans les poumons
(dans les macrophages), tandis que les reins les contiennent en formes
détruites.

ExPÉRIENCE VII. — Un troisième mouton, inoculé le 14 octobre, est tué
le lendemain. Température : le 14, 390,5 — 400,5; le 15, 40° — 400,3 —
400,9; il est tué.

A l'endroit de l’inoculation, hyperémie du tissu conjonctif. La rate est
molle. Tous les organes, mais surtout les reins, contiennent une grande
quantité de formes détruites; les bactéridies saines sont rares. Une émulsion
du poumon est inoculée à une souris grise, qui est restée vivante.

Expérience VII — Un mouton, inoculé par le deuxième vaccin, le
14 octobre, est tué le 15, sa température dépassant 40°. OEdème circonscerit
à l'endroit de l’inoculation; reins et rate très hyperémiés. Dans tous les
organes se trouvent les bactéridies charbonneuses en voie de destruction,
Les reins surtout en sont pleins.

ExPÉRIENCE IX. — Le 14 octobre, un mouton est inoculé par le deuxième
vaccin. Température : le 14, 39° — 39,5; le 45, 400 — 400,6 — 40°,9; le 16,
419,8; il est tué.

Rate considérablement hyperémiée. Dans tous les organes on trouve les
bactéridies en grande quantité; on pouvait suivre toutes les phases de
leur destruction.

ExPÉRIENCE X. — Un mouton est inoculé, le 44 octobre. Sa température
est, le 14, de 39, 7 — 40,1; le 15, de 390,4 — 400,4 — 40°,6. Les jours
suivants on relève successivement, du 16 au 29, jes chiffres 40° — 40°,2 —
40° — 399,8 — 390,6 — 39,7; on le tue le 22.

Les organes ont l'apparence normale. Dans le foie et les reins se
trouvent beaucoup de bactéridies détruites. Leurs formes sont plus
dégradées que dans les cas précédents. Les fragments quadrangulaires avec
angles arrondis dont se composent les bactéridies sont très pâles et se
colorent mal avec le bleu de méthylène. Les cultures sont restées stériles.

ExPÉRIENCE XI. — Le 28 octobre, un moutonest inoculé par le deuxième
vaccin. Le lendemain matin sa température monte à 40°; il est tué.

Une glande hyperplasiée à l'endroit de l’inoculation, les reins hyperémiés.
Dans tous les organes se trouvent les bactéridies déformées; celles qui con-
servent encore la forme normale, avec bouts tranchés, sont pourtant
plus fines et plus courtes. Les bactéries déformées se trouvent surtout
dans les reins.

34

D34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. À

Expérience XII. — Le 99 octobre, six moutons sont inoculés avec le
deuxième vaccin. L'un d'eux, qui avait la veille 39°,9, et le matin 39,9, est
tué le 30 octobre. Rien à l'endroit de l’inoculation ; une forte hyperémie
des reins. Dans tous les organes, mais surtout dans la rate, se trouvent
toutes les formes de dégradation et de dissolution des bactéridies. On
remarque aussi des bactéries normales, principalement dans la rate et
dans le foie. Sur deux tubes de gélose ensemencés avec chacun de ces deux
organes, un à poussé. Les reins ensemencés deux fois n’ont pas donné de
culture. Tous les organes ont été examinés pour la seconde et la troisième
fois 8 heures et 24 heures après la mort du mouton. Les préparations faites
sur des lamelles ont montré une forte diminution dans le nombre de bac-
téries déformées. Dans la rate, par exemple, on ne voyait, le 2 novembre,
que très peu de bactéries. — Deux lapins, iunoculés par des émulsions faites
avec la rate et le foie, sont restés vivants.

EXPERIENCE XIII. — Le 25 novembre, dix moutons sont inoculés par le
deuxième vaccin. L’un d'eux a le lendemain à 7h. 39,4, à 9 h. 400,5; il
est tué.

La rate est hyperémiée, ainsi que le foie et les reins. Dans la rate, le
foie et les muscles, on trouve un grand nombre de bactéries déformées; dans
les reins, beaucoup moins. Le sang ne contenait rien.

Une conclusion peut être immédiatement tirée des faits que
nous venons d'exposer. Pendant la fièvre vaccinale, les vaccins
inoculés pénètrent toujours dans les organes intérieurs des animaux
vaccinés. Rarement, et seulement au début de la fièvre, ces vac-
cins se trouvent dans le sang et les organes à l'état vivant
et normal. Ordinairement, dans l’acmé de la fièvre, on ne
trouve que des bactéries déformées et dissoutes. Vers la fin de
la fièvre et jusqu'à cinq jours après la crise, on ne trouve que des
débris des vaccins, principalement dans le foie et Les reins.

Les méthodes de recherche que nous avons suivies jus-
qu'ici. en révélant parfaitement bien la quantité de bactéries
dans les organes, ainsi que leurs formes, ne donnent aucune
idée sur la répartition des bactéries et leurs relations avec les
cellules. Ces dernières questions ne peuvent être résolues que
sur des coupes.

Ici nous avons trouvé une grande difficulté : les bactéries
détruites ne se colorent point par les méthodes ordinaires de
coloration. La seule méthode qui nous a donné des résultats
satisfaisants est celle de M. le Dr Kühne'.

4. Coloration avec deux carmins, puis par le cristal-violet, décoloration par le
liquide de Gram et l'huile d’aniline.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D35

Notre principale attention s’est portée sur la rate, où nous
cherchions le foyer de destruction des bactéries, et sur les reins,
qui se distinguaient par la masse formidable de formes détruites
qu'ils contenaient toujours.

Dans la rate, nous trouvions que les bactéridies charbon-
neuses se trouvaient libres et dans les cellules. Ces dernières
étaient toujours celles que M. Metchnikoff à nommées les ma-
crophages, c’est-à-dire les cellules de la pulpe de la rate munies
d'un gros noyau arrondi.

Dans les reins, les formes détruiles se trouvent dans la
couche médullaire, dans les capillaires qui entourent les canali-
cules tortueux. Ces bactéridies détruites sont ordinairement
libres, mais se trouvent aussi souvent dans les cellules. Ces
dernières ont le noyau oblong et irrégulier, ainsi que le corps
angulaire, et appartiennent à l’endothélium des vaisseaux capil-
laires.

Avant d'aller plus loin, nous voudrions généraliser nos
résultats. Comme nous l'avons dit dans un article précédent, la
fièvre charbonneuse est toujours accompagnée de la pénétra-
tion de la bactéridie dans les organes intérieurs et de sa destruc-
tion dans l'organisme fébricitant, non seulement chez les mou-
tons vaccinés, mais aussi chez les moutons rendus partiellement
réfractaires, chez les animaux (chiens, poules, rats, pigeons,
spermophiies) plus ou moins naturellement réfractaires, et aussi
enfin chez les animaux sensibles au charbon virulent (lapins).
Étudions donc, au même point de vue, ces divers cas d’im-
munité.

Nous allons voir que, toujours, chez lous ces animaux, pen-
dant la fièvre charbonneuse, les organes internes sont rempiis
de bactéridies détruites.

A cause de la portée théorique de cette notion, nous cite-
rons brièvement quelques exemples.

Troisième groupe. — Moutons rendus partiellement réfractaires.
g

Les moutons partiellement réfractaires sont ceux qui ont eu
une fièvre charbonneuse non mortelle et peu considérable, à la
suite de l'infection virulente.

536 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Le 30 octobre, un mouton, vacciné par le deuxième vaccin, le 14 octobre,
est infecté avec 8 autres sous la peau par le charbon virulent. Sa tempéra-
ture est, le 30, de 39°.

Le 31, on relève : 890,5 — 400,1 — 409,6 ; on le tue. Pas d’œdème à l’en-
droit de l’inoculation. Reins très hyperémiés. Rate un peu grossie. Dans les
reins un grand nombre de bactéridies se divisant en coccus; le foie en
contient moins, dans la rate se trouvent toutes les diverses formes transi-
toires entre les bactéridies saines et les coceus. Aucun organe n’a donné de
culture.

Quatrième groupe. — Animaux naturellement réfractaires.

EXPÉRIENCE 1. — Le 14% juillet, trois chiens sont inoculés par le sang
d’un lapin charbonneux dans la plèvre droite. La température du 1 est le
414 de 380,8 — 39°,1 — 390,5, il meurt dans la nuit du 14 au 15. Le second
présente aux mêmes heures 38°,1 — 409,2, et le 15, à 9 h. du matin, 382,6,
on le tue en ce moment.

A l’autopsie du second on trouve des foyers hépatisés (hépatisation rouge
et grise) à la racine du poumon droit, une hyperémie de la rate. Il n'y
avait pas de bactéridies dans le sang (les cultures sont restées stériles);
dans la rate, bactéridies en voie de destruction. Les reins sont pleins de
bactéridies divisées en coccus. Dans les foyers hépatisés rouges, infiltration
par les leucocytes avec des bactéridies déformées très rares; dans les foyers
gris, mêmes faits et, en outre, des macrophages. Les coupes des reins ont
montré les bactéridies déformées dans les capillaires et leurs endothéliums
entourant les tubes contournés.

ExpéRIENCE Il. — Le 1° janvier 1888, un lapin est tué à une tempéra-
ture de 42,7 à la suite de l'injection, en plusieurs fois, de 50e du premier
vaccin dans les veines.

Rate très hyperémiée, reins hyperémiés dans la limite des deux couches
corticale et médullaire. Dans la rate on trouve beaucoup de bactéries
dans les leucocytes et les macrophages. Dans le foie et le rein, une grande
quantité de bactéries qui ont subi la métamorphose régressive.

Les mêmes formes et aussi les bacilles normaux ont aussi été trouvés
dans l'urine prise dans la vessie avec toutes les précautions nécessaires.

Il est à remarquer que, contrairement à M. Wyssokowitch,
nous avons trouvé, comme phénomène constant consécutif à
la fièvre charbonneuse ou pneumonique bénigne, le passage des
bactéries dans l'urine. Cette contradiction, pourtant, n’est
qu'apparente, parce que M. Wyssokowitch se servait de la
méthode de culture sur gélatine, tandis que nos résultats positifs
sont obtenus par l'examen microscopique direct. Les cultures

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D37

faites avec l’urine sont restées stériles, et les animaux inoculés
restaient en vie dans nos expériences.

Nous en tirons la conclusion que les bactéries passent dans
l'urine à l’état déformé et mort. Nous n’en avons pas moins
établi ce fait d’une grande importance théorique : les bactéries
mortes sont éliminées par les reins.

Cinquième groupe. — Animaux susceptibles au charbon.

Dans notre travail sur la destruction des microbes dans les
organismes fébricitants, nous avons relaté dans les expériences
XIV, XV, XVI et XVII (V. page 236 de ce volume), que chez
les lapins, pendant la fièvre charbonneuse, se produisent les
mêmes phénomènes de destruction des bactéries, Nous ne rap-
pellerons ici qu’un seul fait; dans ces cas de fièvre charbon-
neuse chez les animaux susceptibles, on réussit toujours à
avoir des cultures fertiles en prenant la semence dans les
organes internes des animaux sacrifiés.

Tirons maintenant les conclusions.

La fièvre vaccinale, comme toute autre fièvre charbonneuse,

est liée à la présence des bactéries inoculées dans les organes
internes. Ces bactéries s’y trouvent à l’état normal et vivant,
:ussi bien qu'à l’état déformé. — Les formes vivantes se trou-
vent dans le sang du cœur et des capillaires ; les bactéries d’ap-
parence normale et dans les premiers stades de dégradation
peuvent être trouvées dans les macrophages de la rate, de la
moelle des os et d’autres organes; les formes détruites sont
rejetées dans tous les capillaires avec iocalisation principale
dans la couche médullaire des reins, où les cellules endothéliales
s’en emparent, probablement pour les rejeter dans l'urine.
_ D’après les recherches que nous venons d'exposer, toute la
différence entre une fièvre vaccinale bénigne et la fièvre rapide-
ment mortelle est purement quantitative et dépend du nombre
des bactéridies vivantes; tandis que dans la fièvre vaccinale la
plupart des cultures, ensemencées avec les organes intérieurs
reste stérile, dans la fièvre mortelle chaque culture donne des
colonies virulentes. En un mot, nous avons toute raison de dire
que les vaccins produisent une affection générale atténuée.

D38 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

IV. — MÉCANISME DE L'ACQUISITION DE L'IMMUNITÉ.

b. — Phénomènes locaux.

Les phénomènes locaux, observés pendant la vaccination,
à l'endroit de l’inoculation, sont tout à fait insignifiants.

A l'extérieur, on ne remarque ordinairement rien, sauf la
tuméfaction d'une ou de deux glandes lymphatiques inguinales,
qu’on peut reconnaître au toucher. Parfois il y a un léger empà-
tement ainsi qu’une rougeur à l'endroit inoculé. En incisant la
peau, on ne trouve que très rarement un œdème très mince et
circonscrit; généralement c’est une hyperémie du tissu cellulaire
qui se trouve à l'endroit de l’inoculation. Souvent celui-ci ne
peut même être distingué du reste des tissus !.

Pourtant, nous savons déjà que là, au point d’inoculation,
se passe un phénomène caractéristique pour la vaccination : les
vaccins qui commencent par se multiplier, avant d’infecter le sang
et tous les organes internes, s'arrêtent après un temps plus ou
moins court (24-28 heures, à juger par la fièvre vaccinale) et dis-
paraissent. Autrement dit, il se fait une culture avortée des
vaccins. Les phénomènes locaux, dus à l'introduction des vac-
cins, ont déjà été étudiés par M. Metchnikoff, qui a mis en lumière
le rôle important des leucocytes dans la destruction locale des
bactéries. Mais ses inoculations différaient des nôtres, en ce
qu’elles ne conféraient point l’immunité, puisqu'elles ne pro-
duisaient pas une fièvre vaccinale; M. Metchmikoff, en eflet,
étudiait l'immunité déjà acquise, comparée à la réceptivité
normale.

Pour nous, au contraire, il était important de connaître
comment s'arrête une culture déjà commencée, comment se
guérit une affection charbonneuse, comment, en un mot, l'état
de réceptivité se transforme en état réfractaire, et comment
cette transformation s’accuse dans l'affection locale.

D'après le parallèle que nous avons tracé au chapitre précé-
dent entre les deux fièvres vaccinales chez les moutons dans le
cours des vaccinations, entre la fièvre charbonneuse chez les

1, Pourles expériences, voir le chapitre précédent,

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 539

moutons partiellement vaccinés et la fièvre charbonneuse pro-
duite par le virus trop fort ou trop abondant chez les animaux
naturellement réfractaires, il est clair que tous ces ordres de
phénomènes sont absolument de même nature.

C'est pour cela que, désireux d'étudier leur marche générale,
nous avous porté notre principale attention sur les animaux
réfractaires se guérissant d'une affection charbonneuse, et nous
avons laissé de côté, pour le moment, les moutons vaccinés.

Notre méthode consistait à inoculer, avec le virus virulent,
des séries d'animaux, qui étaient sacrifiés l’un après l’autre dans
les phases diverses de l'affection.

EXPERIENCE [. — Le 14 octobre, à midi, quatre rats blancs sont ino-
culés par une culture charbonneuse dans du bouillon. Chacun reçoit 4°
sous la peau.

Trois heures plus tard l'un d’eux est tué. OEdème gélatineux circonserit,
dans lequel on trouve les bactéridies normales ; un petit nombre de celles-
ei est contenu dans les leucocytes. La rate est d’une couleur cramoisi-foncé
et contient une grande quantité de bactéridies déformées; le foie et les
reins contiennent aussi des bactéridies saines.

À 5 heures de l'après-midi, on tue un autre rat. Petit œdème gélatineux
dans lequel plusieurs bactéridies sont déformées. La rate contient les
formes atténuées : baguettes minces et courtes.

Le lendemain, à midi, on sacrifie un troisième rat. OEdème granuleux
au point d'inoculation, infiltration par des leucocytes et macrophages; pas
de bactéridies normales, toutes sont déformées, amincies et transformées
en coccus, La rate de même ne contient que des débris de bactéridies.

Ainsi, l'ædème typique charbonneux, gélatineux à l’origine,
se transforme en ædème granuleux grâce à l’infiltration leuco-
cytaire.

De même, chez les moutons qu’on vaccine avec un vaccin
un peu fort, il peut se produire un œdème sous-cutané qui est
d'abord mou, gélatineux, et devient progressivement toujours
plus dur. Ce phénomène, du reste, s’observe plus souvent sur
les moutons qui guérissent (et deviennent réfractaires) après
une infection charbonneuse virulente.

De l’autre côté, dans le cas contraire, quand un animal par-
tiellement réfractaire succombe au charbon, on coustate l’ordre
inverse des phénomènes : l’æœdème, assez dur au centre, devient
gélatineux vers la périphérie.

240 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

- Ainsi, le 6 novembre, quatre rats sont inoculés sous la peau par {ce du
sang charbonneux d’un lapin. Le 7 novembre, à 8 heures, un d'eux est tué.
Grand œdème sous la peau de tout l'abdomen. On y trouve beaucoup de
bactéridies libres et aussi dans les leucoeytes. Dans les organes internes,
phénomènes ordinaires de la destruction des bactéries.

À 5 heures, on tue un autre rat. Grand œdème, qui est granuleux au
centre et gélatineux à la périphérie. La minorité des bactéridies qui s’y
trouvent est contenue dans les leucocytes.

Les deux autres rats sont morts du charbon la nuit suivante.

Il n’est pas inutile de remarquer, comme cela est, du reste,
expliqué dans un autre article, que, chez le même animal avec
les bactéridies de virulences diverses, et avec le même virus
chez les animaux de réceptivité diverse, on peut reproduire
toutes les variétés de l’æœdème charbonneux, depuis l’exsuda-
tion hémorragique gélatineuse jusqu’à l'infiltration leucocy-
taire. Pour mieux étudier les phénomènes qui se passent à l’en-
droit de l'infection charbonneuse, nous avons choisi le tissu
pulmonaire du chien.

Si on inocule dans le poumon d’un chien le virus charbon-
neux, on détermine une affection très grave, menant souvent à
la mort.

Quelquefois, on ne produit de cette manière qu’une septicé-
mie charbonneuse mortelle. Mais plus souvent c'est une pneu-
monie fibrineuse qui se produit, avec les stades de l’hépa-
tisation rouge et grise. Dans ces cas, on assiste à un combat
énergique contre la bactéridie envahissante.

ExpÉRIENCE. — Le 26 mars, à 10 heures, trois chiens sont inoculés par
une culture charbonneuse virulente : 3°° dans la plèvre droite. Leur
température avant l'infection était :

nOMIAMSSLES no 2 380,5 LS RAS LU |
Le 96, à 5 h. du soir, elle devient

no 4 39°,6 no 20 390) n°3219901

Les jours suivants on trouve
8 h, m. D\hfs: S\h;1s:
Le 27 MONS O0 380,6 380,7
n° 2 39 ,0 38 ,4 39 ,1
no19 3810 38 ,3 38 ,6
Le 28 no À 38 ,0 38 ,0 38 ,4
n° 2. 38,8 38 ,9 38 ,0

Le 29 NoAMOSS
n0»2 11580) 3952

1. Ce chien avait eu une affection charbonneuse dont il était guéri.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D41

Le n° 3 est mort dans la nuit du 27 au 98. A l’autopsie, on trouve le
sang et les organes internes remplis de bactéridies normales.

Le no 1 à été sacrifié le 29, à 9 heures du matin. On a trouvé une
portion hépatisée dans le poumon droit. Les autres organes avaient l'aspect
normal.

Dans le tissu hépatisé, le microscope a révélé l'infiltration par les
cellules microphages et macrophages en grande quantité. La bactéridie
existait presque exclusivement sous les formes dégénérées de coceus et de
petites baguettes très fines. Les mêmes formes se trouvèrent dans les
autres organes. Pourtant, les cultures faites sur gélose avec le tissu hépa-
tisé et la rate, ainsi que l'infection des souris avec ces deux organes, ont
donné des résultats positifs.

ExPÉRIeNcE. — Le 14 juillet, à 10 heures du matin, deux chiens sont ino-
culés par 2% du sang charbonneux d’un lapin dans les plèvres droites.

9 h. m. DURS: DNh°ES
Températures n° 1 380,8 So 390,5
du 14. n° 2 01 38 ,9 40 ,2

a

Le 15, on trouve le no 1 mort pendant la nuit. Le n° 2 marque 380,6
9 heures du matin, il a l'air tout à fait bien portant. Il est sacrifié à
10 heures.

Autopsie du n° 1. — Pelit œdème gélatineux blanc sur les côtes à l'endroit
de l’inoculation. Une partie du lobe supérieur du poumon droit est hépatisé,
les autres organes ont l'aspect normal. Le sang du cœur ne contenait pas
de bactéries (une culture sur gélose est restée stérile). Le tissu hépatisé
est infiltré par les leucocytes en grande quantité, entre lesquels et dans
lesquels se trouvent toutes les formes de la bactéridie diminuée et segmen-
tée; on trouve aussi des bactéridies normales, mais amincies. Le tissu
pulmonaire autour de l'hépatisation contient aussi une infiltration leuco-
cytaire; les bactéries sont absentes. Dans les autres organes, on trouve les
phénomènes ordinaires de la destruction et de l'élimination des bactéries.

Autopsie du n° 2. — Hépatisation rouge avec des parties grises à la
racine du poumon droit. Rate tuméfiée et hypérémiée. Le sang du cœur ne
contient rien (les cultures restèrent stériles). Les portions à hépatisation
rouge sont infiltrées par les leucocytes, et ne contiennent que très peu de
bactéridies qui sont totalement déformées. Dans l’hépatisation grise, on
trouve aussi les macrophages. Dans la rate se rencontrent les bactéridies
en voie de destruction, les reins contiennent des bactéridies transformées
en CocCus.

On voit ainsi partout les mêmes phénomènes : l'infection
charbonneuse conduit à l'immigration des leucocytes suivis par
les macrophages.

42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

I nous resterait à répondre à une question de très grande
importance théorique. Les bactéries déformées sont-elles toutes
contenues dans les cellules phagocytaires, ou bien leur méta-
morphose régressive s’accomplit-elle en dehors du corps cellu-
laire? Malheureusement, mes recherches ne me permettent pas
de résoudre cette question d’une manière précise. Cependant,
l'histoire des œdèmes charbonneux chez les rats qui ont
présenté d’une manière typique et uniforme les changements
régressifs des bactéries nous a paru très instructive à ce point
de vue. Cette métamorphose régressive avait l’air d’avoir lieu en
dehors du corps cellulaire, puisqu'elle était survenue uniformé-
ment dans les grands amas des bactéridies. Cependant, la colo-
ration de celles-ci sur les coupes ne nous a pas réussi, ce qui
nous empêche de nous prononcer d’une manière décisive.

V. — LA THÉORIE DE LA FIÈVRE VACCINALE.

Nous avons vu dans les chapitres précédents que la vaccina-
tion consiste en une multiplication des vaccins, à l’endroit de
l’inoculation, suivie par une immigration cellulaire; en un pas-
sage des vaccins dans le sang et dans les organes internes ; en
leur destruction, qui se fait par la métamorphose régressive avec
le type principal de la dissolution; enfin, en une élimination des
formes détruites par les reins.

Il nous reste à rechercher la causalité et la signification de
ces faits.

Il n’est pas douteux que le développement local des vaccins
ne soit arrêté par l'influence leucocytaire.

Pour le prouver, nous n'avions qu’à imiter l'expérience
classique de M. Metchnikoff, qui introduisait les germes char-
bonneux dans l’œil des animaux réfractaires, et qui constatait
leur développement, suivi de l'émigration cellulaire et de phago-
cytose {.

Si ce sont les cellules leucocytaires qui, infiltrant l'endroit
de l’inoculation, arrêtent la multiplication microbienne et cou-
pent la fièvre vaccinale, on devait s'attendre alors à trouver une
fièvre beaucoup plus intense, en introduisant les mêmes vaccins

4. Voir ce Recueil, n° 7, 4887.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D43
dans la chambre antérieure de l'œil, où la leucocytose ne peut se
faire que très lentement. C’est ce que nous avons constaté, en
effet.

Le premier vaccin, introduit dans la chambre antérieure
de l'œil d’un mouton, provoque une fièvre intense qui monte à
420 et qui dure 4 à 5 jours, parfois mème toute une semaine.

De mème, chez le lapin qui est tout à fait insensible à l’action
du premier vaccin, on peut ee: produire une fièvre légère
par l’inoculation dans lœil.

Ainsi, le 17 décembre, deux lapins sont inoculés sous la peau
chacun par 1°° du premier vaccin.

Leur température resta normale les trois jours suivants, se
tenant entre 399,3 et 390,8.

Le 21 décembre, on leur inocule 1/8: du même vaccin
dans l'œil droit. Le même soir, leur température monte à 40°,
et 40°,7, pour tomber à 39°,4 et 399,5 le lendemain.

Le 31 décembre, à 10 heures du matin, un autre lapin est
inceculé par le premier vaccin dans l'œil droit. La température
est

à 10 b. LA RME A 1 4 h. hi dhie 10h s?
de r2901:2,.380:8 01390 1 380,5 1 400: Æ TA x) 39009

Chez le chien aussi, le virus charbonneux introduit dans l'œil
détermine souvent une fièvre

Nous nous croyons autorisé à tirer de ces faits la conclusion
que le développement local des vaccins pendant la vaccination est
arrêté par l'immigration leucocytaire.

De cette manière, seulement, on peuts’expliquer comment les
vaccins qui commencent à se multiplier dans un organisme sus-
ceptible, finissent par être détruits comme dans un animal réfrac-
taire.

Pour aller plus loin, il faut expliquer comment se produit cet
arrêt local des vaccins et quelles forces conduisent à leur méta-
morphose régressive ? Se ferait-il, par suite de l'immigration leu-
cocytaire, un changement, nuisible aux vaccins, dans leur liquide
de culture, ou bien sont-ce uniquement les cellules blanches elles-
mêmes qui réduisent les vaccins par une action phagocytaire?

Nous avons fait un grand nombre d'expériences de culture

44 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de la bactéridie charbonneuse dans le liquide retiré de l'œil des
moutons inoculés dans cet œil ou sous la peau. Ces recherches
nous autorisent à conclure qu’un changement nuisible à la eul-
ture bactéridienne peut être démontré expérimentalement.

Le liquide était retiré de la chambre antérieure de l'œil avec
des pipettes flambées, qui étaient ensuite fermées à la lampe à
leurs bouts effilés ; en retirant le coton de l’autre bout on y
semait les germes charbonneux ; le coton était ensuite remis à sa
place et recouvert par une coiffe de caoutchouc, afin d'éviter
l’évaporation.

Le 20 décembre, dans un liquide pris dans l'œil d’un mouton
qui, inoculé dans cet œil par le premier vaccin, venait d'avoir
une fièvre vaccinale, on sème les germes charbonneux.

Le 21,les germes ont poussé, mais au lieu d’une culture nor-
male, ils ont produit toutes les formes régressives déjà con-
nues, c'est-à-dire les bactéridies divisées en petits tronçons
gonflés et pâles, et notamment les bacilles amincis, quatre fois
moins larges, et même davantage, que la bactéridie normale *.

Dans les cultures, faites dans des conditions identiques
avec le liquide de l'œil des moutons frais, nous n’avons jamais
trouvé de formes amincies. Les formes gonflées et pâles peuvent
y être trouvées quelquefois, quoique en quantité infiniment
moindre ?.

Il résultait de cette expérience qu'il y avait dans notre
liquide un changement qualitatif nuisible à la bactéridie.

En outre, nous avons remarqué que cette modification ne se
bornait pas à l'œil inoculé : le liquide, pris dans l’autre œil du
même mouton, donnait aussi des cultures à type régressif.

4. Les expériences de M. Nuttall (Zeitschriftf. Hygiene, 1888), qui s’est occupé
d’une question semblable à la nôtre, diffèrent de nos expériences sous plusieurs
rapports : 4° M. Nuttall étudiait l’action instantanée de ses liquides de culture,
tandis que nous examinions nos cultures après 24 et 48 heures passées à 550;
2 M. Nuttall n’a pas fait d'expériences de contrôle, consistant dans l’étude de
l'action immédiate de divers bouillons ordinaires. Toutes nos expériences étaient
comparatives; 3° M. Nuttall n’a observé que les formes dissolulives, tandis que le
plus frappant phénomène dans nos expériences était la présence des formes
atlenuees.

On va voir que nos résultats sont tres différents aussi.

2. On sait, du reste, que le liquide, pris dans la chambre antérieure de l'œil, est
un des meilleurs milieux nutritifs pour la bactéridie charbonneuse.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D45

Or, par des expériences réilérées, nous avons avons réussi à
trouver les conditions de cette modification : elle se produit par
suite de la fièvre vaccinale.

Chaque fois qu’une infection sous-cutanée ou autre, par le
premier ou le deuxième vaccin ou par le virus charbonneux, dé-
termine une fièvre manifeste (de 1 ‘/; à 2 degrés), on trouve que
le liquide oculaire devient impropre, pour un certain temps, à la
culture charbonneuse. Cette modification devient d'autant plus
manifeste que la fièvre précédente était plus considérable. Voici
à titre d'exemples quelques expériences :

Le 24 février, le sang charbonneux d’un lapin est semé dans
les liquides oculaires, pris chez deux moutons qui venaient
d’avoir une fièvre vaccinale légère (au maximum de 40°,6) par
suite de l’introduction du deuxième vaccin dans les yeux. Quel-
ques formes régressives ont été trouvées le lendemain, dans
les cultures faites avec les liquides des yeux inoculés.

Le 25 février, on prélève du liquide, vers la fin de la fièvre
charbonneuse, dans l'œil d’un mouton qui a été inoculé la
veille par le virus charbonneux sous la peau. Le 25, à 8 heures
du matin, la température du mouton était de 41°,4; à 5 heures
du soir, de 41°,3. Le liquide est stérile. On y sème le charbon,
pris dans une culture faite avec la rate d’un lapin charbonneux.

Le 26 février, la culture présente tous les degrés de destruc-
tion de la bactéridie charbonneuse. Pourtant elle a conservé la
virulence, puisque inoculée à un lapin, elle l’a tué.

Le 1° mars, la même culture de la rate charbonneuse est
semée dans un liquide pris chez un autre mouton après la fin
d’une fièvre charbonneuse très forte, causée par l’inoculation
sous-cutanée. Le lendemain, cette culture n'a présenté que des
formes régressives, diminuées et dissoutes. La gélose, ense-
mencée par elle, est restée stérile et le lapin inoculé n’est pas
mort.

Le 1° mars, un chien est tué après une fièvre charbonneuse.
La culture charbonneuse est semée dans les pipettes remplies
par le liquide de la chambre antérieure de l'œil du même chien.
Des expériences comparatives m'ont montré qu'avec des chiens
frais on n'obtient que des cultures normales dans ces condi-
tions.

Ces cultures présentent le lendemain des formes régressives

546 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

avec une grande quantité des bactéries à fourreau !. Chaque
jour on les recultive dans le même liquide et, le 5 mars, on en
ensemence de la gélose. Le 5, cette dernière culture est inoculée
à un lapin qui reste en vie. Des expériences parallèles ont été
faites avec le même résultat sur le sang de ce chien.

On voit ainsi que pendant la fièvre qui accompagne la des-
truction de la bactéridie charbonneuse, il se produit une modi-
fication chimique dans les liquides de l’organisme fébricitant,
nuisible à la culture de la bactéridie.

D’après nos expériences, cette modification peut persister
jusqu'à 14 jours. Mais d'un autre côté, elle n'existe plus après
un mois, passé après la fièvre. Maintes fois, nous avons étudié
sous ce rapport le liquide oculaire, pris chez les moutons vacci-
nés un mois et davantage auparavant, et il nous a toujours
donné des cultures charbonneuses normales.

Il y a à ajouter un fait important : les animaux, morts char-
bonneux, ne nous ont pas présenté cette modification antisep-
tique, mème après une fièvre charbonneuse prolongée. Dans ces
cas, le liquide oculaire peut ne pas contenir des bactéridies,
mais, ensemencé, il donne de belles cultures. Il s'ensuit que le
développement de la bactéridie détruit cette modification anti-
septique *.

Revenant maintenant à notre question sur les relations entre
la destruction des bactéridies et l'immigration cellulaire au
point d’inoculation, nous voyons qu'elle n’a pas reçu de réponse
directe, et qu'à la place, nous avons trouvé une relation qui lie
la fièvre à une modification chimique antiseptique des liquides
de l’économie. Nous pouvions nous attendre à un pareil résultat,
car vu la diffusion rapide qui se fait dans le corps vivant, il ne
saurait y être question d’une modification chimique locale des
liquides, et notre investigation ne pouvait y déceler qu'une

4. Voir leur description dans le premier chapitre, ainsi que dans ce volume,
p- 236. ,

2. Signalons ici quelques particularités des cultures que nous venons de décrire.
D'abord, on remarque souvent macroscopiquement, avec ces liquides oculaires
ainsi modifiés chimiquement, que les cultures charbonneuses, au lieu de s’immer-
ger en flocons, s'étalent en nappe à la surface du liquide. Puis, il est étonnant
de voir avec quelle rapidité les bactéridies forment les germeS dans ces conditions :
en moins de 20 heures. Du reste, ce dernier fait se retrouve souventavec le liquide
oculaire normal.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D47

modification qui retentisse sur toute l’économie, comme le fait
la fièvre charbonneuse.

Cette fièvre elle-même et l'immigration cellulaire ne consti-
tuent du reste que deux aspects d’un seul etmème phénomène, la
réaction organique contre l’invasion des microbes, et comme on
peut croire que les mêmes armes servent aux cellules leuco-
cytaires pour le même combat sur des champs de bataille
différents, j'attribue aux leucocytes émigrés au point d’inocu-
lation, ainsi qu'àceux de la rate et de la moelle des 08, dans les
organismes fébricitants, la faculté d’excréter une substance qui
contribuerait à l’arrèt de la végétation parasitaire.

lei se présente une question importante. Pourrait-elle, cette
substance antiseptique, agir par elle seule, et arrêter l'infection
bactéridienne en dehors de l'influence leucocytaire ?

On peut rendre un mouton tellement réfractaire au charbon
qu'il n’a plus de fièvre, même après l'inoculation de quantités
considérables de virus charbonneux. Dans ce cas, l'injection
sous-cutanée virulente n’est suivie d'aucune réaction locale appré-
ciable : on ne constate aucun œdème ni aucune tumeur au point
d'inoculation. En recueillantla sérosité sur ce point, on n'y trouve
pas d'immigration cellulaire, et cinq à douze heures après
l'injection, nous y avons pourtant constaté de nombreuses
formes dissoutes des bactéridies, en dehors des leucocytes, qui
étaient très rares. Mais ces cas sont exceptionnels. Si on avait
inoculé plus de virus, ou du virus plus fort, on aurait
retrouvé la fièvre, l’æœdème granuleux au point d’inoculation, et
tous les phénomènes de la leucocytose. Concluons done que
l'antisepsie chimique que nous avons découverte, et qui est
passagère el incomplète, ne peut pas servir à elle seule à expli-
quer l’état réfractaire absolu et persistant.

Je n’ai aucune donnée précise sur la nature de cet antiseptique.
J'ai cherché vainement jusqu'ici à l’assimiler à un ferment
peptique. Comme dans un travail antérieur ‘ j'avais présenté la
fievre comme une réaction cellulaire, dirigée contre l'invasion
des microbes, et comprenant dans son mécanisme l'action d’une
substance pyrogène, on pourrait supposer que c’est la même
substance qui jouit des propriétés pyrogènes et antiseptiques.

4. Voir ces: Annales, t. II, p. 229.

D48 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Mais tout ceci est délicat et demande beaucoup de réserve. N’ou-
blions pas que l'acide carbonique qui sature les tissus pendant la
fièvre peut aussi jouer un rôle nuisible pour le développement
de la bactéridie charbonneuse, et même qu’on.peut lui attribuer
à la rigueur quelques-uns des faits relatés dans ce chapitre.

VI. — LA THÉORIE DE L'IMMUNITÉ ACQUISE.

Notre point de départ dans l'étude de la vaccination charbon-
neuse a été la théorie phagocytaire, d’après laquelle l’immunité
proviendrait de l'habitude prise par les globules blancs de
digérer les microbes pathogènes *.

Les recherches que nous venons d’exposer ne sont pas tout
à fait favorables à cette manière de voir. Les savants (Metchnikoff,
Hesse), quiont étudié le mode de réaction des organismes réfrac-
taires au charbon, attribuent aux microphages, c’est-à-dire aux
leucocytes à noyau fragmenté, le rôle actif dans la destruction
de la bactéridie. D’après nous, au contraire, ce sont toujours les
macrophages qui servent à la destruction des vaccins charbon-
neux dans les organes internes.

Il faut donc chercher l'explication de l'immunité acquise
ailleurs que dans l'habitude prise par les leucocytes de digérer
les microbes pathogènes. C'est à quelque fait dépendant de la
vie des microbes, et non de la façon dont ils sont digérés, que
nous devons nous adresser.

On a dit * que l’inoculation de quantités très grandes de
bactéridies mortes pouvait conférer l’immunité. L'expérience
prouve le contraire. Ainsi, le 6 décembre, j'inocule à 2 lapins
12ec d’une culture du second vaccin, stérilisée par un chauffage
de 20 minutes à 120°, et,le 9 décembre, à 4 autres lapins, 12 et
24cc d’une culture stérilisée de charbon virulent, remplie de flo-
cons bactéridiens. Ces six animaux, inoculés le 17 décembre
par une culture charbonneuse, succombent au charbon comme
deux lapins témoins, inoculés en même temps.

4. Voir dans ces Annales, t. I, p. 321, le Mémoire de M. Metchnikoff.

9, Voir Wyssokowircn, Vratch., 1888. Mémoire curieux, où l’auteur prétend avoir
trouvé la théorie phagocytaire avant M. Metchnikoff et la vaccination chimique
avant les élèves de M. Pasteur. Quant aux quelques expériences que contient cet
article elles sont au-dessous de toute critique. Par exemple, pour contrôler l'immu-
nité acquise des moutons, l'auteur emploie comme témoin un lapin.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. 949

De même on fait avec une culture charbonneuse stérilisée
les inoculations suivantes dans la veine de l'oreille : Le 20 dé-
cembre, un lapin reçoit 22°; trois autres, chacun 44%. Le 23,
2 lapins, chacun 50; le 24, 3 lapins, 50° chacun. Le 30, deux
de ces derniers lapins recoivent encore 30° chacun. Tous ces
lapins, inoculés plus tard à divers intervalles avec le virus char-
bonneux ou le second vaccin, ont tous succombé au charbon.

Le 22 et le 24 décembre, deux lapins reçoivent chaque jour
15° d’une culture charbonneuse stérilisée, soit, en tout, 1506.
Inocalés le 27 janvier par du virus charbonneux, en même temps
qu'un lapin témoin, les trois animaux succombent le 29 au char-
bon. La digestion de 150°° de culture de bactéridie ne confère
donc aucune immunité.

La vie de la bactéridie est donc nécessaire pour que sa des-
truction puisse conférer l’'immunité. En d’autres termes, des deux
phénomènes de la vaccination, multiplication des vaccins et leur
destruction dans les organes, c’est le premier qui est important
pour l’acquisition de l’immunité, et puisque c’est le vaccin vivant
qui agit, ce ne peut êlre que par ses produits spécifiques qui
n'existent pas dans les cultures stérilisées, puisque celles-ci sont
tolérées sans aucun symptôme morbide.

On arrive à la même conclusion en étudiant la réaction
locale. Les bactéridies mortes, injectées sous la peau des lapins,
ainsi que les bactéridies vivantes chez les animaux réfractaires,
produisent localement une immigration leucocytaire qui peut
même aboutir à un abcès, si la quantité de bactéridies injectées
est suffisante. Ce n’est donc pas dans cette immigration cellulaire
qu'il faut chercher l'explication de l’immunité, mais bien plutôt
dans le phénomène contraire, dans l’exsudation plasmatique qui
se fait chez les animaux susceptibles, dans lœædème charbonneux.

En étudiant comparativement cet œdème, avec le charbon
virulent chez les animaux diversement réfractaires et avec des
virus de virulence croissante, chez une même espèce animale,
on constate les faits suivants :

La bactéridie morte et la bactéridie atténuée chez les ani-
maux susceptibles, la bactéridie virulente chez les animaux ré-
fractaires, ne produisent que ce que j'ai nommé l'œdème granu-
leux, c'est-à-dire une infiltration leucocytaire abondante.

5)

90 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

La bactéridie virulente chez les animaux susceptibles produit
un œdème plasmatique qui est incolore ou jaunâtre avec la
bactéridie d’une virulence moyenne ‘ et hémorragique avec la
bactéridie très virulente ?.

On s’expliquerait très bien ces phénomènes en admettant que
la bactéridie virulente a la propriété, comme telle, de former un
poison produisant une exsudation plasmatique, et qui n’existe pas
dans la bactéridie tuée.

Les animaux réfractaires seraient réfractaires à ce poison et
les animaux vaccinés seraient habitués à l’intoxication. Cette
habitude se manifesterait le plus visiblement pour les cellules
endothéliales des capillaires, puisque ce sont elles qui régissent
l’exsudation, mais elle ne se bornerait pas à ces cellules.

Nous pouvons mème faire un pas de plus et essayer de pré-
ciser la nature de cet agent toxique : on a le droit de penser que
c’est un alcaloïde et qu'il est en même temps l'agent de la mortpar
le charbon.

On peut, en effet, avec un alcali quelconque, reproduire,
grosso modo, les phénomènes principaux de l'infection charbon-
ueuse, c’est-à-dire l’œdème et l’abaissement de la température”.
On peut aussi, avec des alcalis plus ou moins énergiques, repro-
duire l’ædème hémorragique jaunâtre ou incolore.

Aiïnsi, le 1° août, à 10 heures du matin, j'inocule 1 cent. cube
d’ammoniaque du commerce sous la peau d’un lapin. Voici le

4

relevé de ses températures *,

9 h. 45 m. 390,3 Durs 380,3
10 h. 399 2 h. 30 m. 38 ,2

10 h. 30 m 39 ,0 Sn Sul

il h non h. 30 m. 36 ,8

eh 080 38 ,6 4 ch 38

12%hs SON 4 h. 30 m. 91,9
12%h/#30%m:. 280 Dh 90m 31 .6

eh: 38 .6 6 h. 101
10h30 °m: 38 ,4 12h: 31 ,3 mort.

1. Le deuxième vaccin, par exemple, chez les moutons et les lapins, produit assez
constamment un œædème incolore.

2. Cet œdème hémorragique s’observe fréquemment chezle mouton, tandis que
le lapin succombe souvent avec une réaction très limitée, mais il y a toujours
une suffusion hémorragique au point d'inoculation.

3. La fièvre n’est que la réaction organique, tandis que l’abaissement de la
température est l'effet direct de l'infection. V. ces Annales, t. II, n° 5.

4. À comparer avec la température des lapins, inoculés avec l’œdème charbon-
neux. V. ces Annales, t. II, n° 5.

ÉTUDE SUR LA VACCINATION CHARBONNEUSE. D91

A l’autopsie, on trouve un œdème gélatineux hémorragique
très abondant à l'endroit de l'inoculation.

On voit donc qu'on a le droit d'attribuer à un alcaliles phéno-
mènes locaux et généraux de l’inoculation charbonneuse. Du
reste, M. Hesse a réussi à isoler un alcaloïde des cultures du char-
bon; malheureusement il n’a pas étudié son action vaccinatrice.

Nous résumerons tout ce qui est exposé dans cet article dans
les conclusions suivantes :

La vaccination charbonneuse est un effet de la vie et de la
multiplication des vaccins dans le corps des animaux. A cette
reproduction est nécessairement liée la formation de produits
toxiques, peut-être d’alcaloïdes spécifiques, et elle se traduit au
dehors par les phénomènes de la fièvre vaccinale.

Cette culture passagère des vaccins dans le corps a pour effet
l’assuétude de toute l’économie vis-à-vis de l’action nocive spé-
cifique de la bactéridie charbonneuse. Cette assuétude se fait
probablement dans toutes les cellules : nerveuses, leucocytaires
et endothéliales. Habituées à ce poison, ces cellules ne se para-
lysent plus par son action, et peuvent se comporter vis-à-vis de
la bactéridie virulente comme vis-à-vis d’une bactérie banale ou
d’un corps étranger quelconque. Aïnsi par exemple, les cellules
endothéliales des capillaires, au lieu de se contracter pour laisser
échapper l'exsudation séreuse, ne laissent passer que les leuco-
cytes, et ces derniers, au lieu d’être paralysés dans leurs fonc-
tions, détruisent énergiquement les microbes et sécrètent peut-
être une substance antiseptique.

Cette explication de l’immunité acquise me semble la seule
qui rende compte de tous les faits de la vaccination par éléments
_figurés, de celle qui a fait l’objet de notre étude, et qui soit en
accord avec l'existence de la vaccination chimique.

VIBRIO METSCHNIKOVI

SON MODE NATUREL D’INFECTION

Par M. N. GAMALÉIA

Dans un article précédent (V. ce vol., p. 482) nous avons fait
l'histoire d’une maladie naturelle des poules qui offre beaucoup
d'analogie avec le choléra asiatique. Dans sa marche clinique
on trouve comme symptôme constant l’abaissement de la tem-
pérature du corps ‘,ce qui est caractéristique aussipourle choléra
humain; on peut constater de même la diarrhée et les mouve-
ments péristaltiques de l’estomac qui font que le gosier, quia la
réaction légèrement alcaline à l’état normal, a toujours la réac-
tion fortement acide chez les poules et les pigeons morts de cette
maladie nouvelle.

L'anatomie pathologique des deux formes morbides a des
ressemblances encore plus grandes : inflammation aiguë de tout
le canal digestif, se localisant surtout dans les portions de l’intes-
tin les plus voisines de l'estomac; dans l'intestin, liquide
copieux avec flocons d’épithéliums exfoliés ; rate petite et pâle;
absence complète des bactéries dans le sang des animaux adul-
tes. De plus, parenté étroite dans la cause du mal qui, établie |

-expérimentalement pour la maladie des poules, est devenue très
probable pour la maladie humaine, car des deux côtés, ce sont des
vibrions qui ne diffèrent entre eux que par des caractères peu
importants, caractères d'adaptation que l’expérimentateur peut
souvent modifier à son gré?; enfin, comme dernier signe d’une

4. Dans mon article précédent, p. 482, il faut lire, au lieu de « température voi-
sine de la normale » : température au-dessous de la normale, comme cela est du
resté indiquée par les chiffres de 41°-380. :

2, Voir notre article sur la vaccination charbonneuse dans ce même numéro.

VIBRIO METSCIINIKOVI. 903
connexion très étroite de deux formes, elles se laissent mutuel-
lement vacciner l’une contre l’autre.

On devait conclure de toutes ces analogies qu’on pourrait
rencontrer des points semblables dans l’étiologie des deux
maladies et plus particulièrement que la maladie expérimentale
pourrait servir à la solution des nombreuses questions laissées
indécises par l'étude de la maladie humaine. <

On sait notamment que la découverte de M. Koch a conduit
à un désaccord évident entre la bactériologie et l’épidémiologie
du choléra.

L'étude épidémiologique avait conclu que le choléra n’est
pas contagieux, que pour pouvoir devenir infectieux, son germe
doit mürir dans le sol, ce qui exige chez celui-ci des propriétés
spéciales ; que du sol le germe morbide devait pénétrer dans
l'air, qui est le véhicule probable de la contagion épidé-
mique. La bactériologie au contraire n'a admis qu'un seul
mode d'existence pour la virgule cholérique, qui ne devait pas
avoir de germes, et un seul mode d'infection, l'infection par l’es-
tomac. Encore y avait-il là quelques difficultés, car les bactéries
de Koch périssent très facilement dans un milieu acide. Il avait
donc fallu admettre, pour sauver du naufrage le pouvoir patho-
gène des bacilles-virgules, que les cholériques s’infectaient seu-
lement lorsque, par indigestion ou par excès dans leur régime,
disparaissait la réaction acide de leurs estomacs. On était ainsi
conduit à une fausse interprétation des diarrhées prémonitoires
des épidémies, considérées auparavant comme les premiers
symptômes d'une infection, envisagées maintenant comme les
causes prédisposantes nécessaires.

D’après cette courte analyse, on voit facilement que l’étio-
logie du choléra est loin d’être élucidée par la découverte du
bacille-virgule.

Or, il arrive que notre maladie cholérique des poules est
très instruclive au point de vue de ces questions éliologiques.

Notre maladie n’est pas contagieuse. Maintes fois, nous avons
laissé des pigeons, des poulets et des cobayes neufs dans les
mêmes cages que les animaux malades de la gastroentérite cholé-
rique, et ils n’ont /amais contracté la maladie ; inoculés, quel-
que temps après, ils mouraient avec les lésions habituelles. D'un
autre côté, les résultats obtenus par l’inoculation sous-cutanée

554 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

et intramusculaire, plaident contre l’idée de la contagion immé-
diate. Cette inoculation, mortelle sans exception pour les pi-
geons, ne l’est plus pour les poulets et encore moins pour les
poules. Ces dernières ne sont tuées dans ce mode d'infection que
par des doses massives, impossibles à rencontrer dans la nature.

Ainsi,les jeunes poulets exigent, pour une inoculation mor-
telle, plus d’un centimètre cube d’une émulsion dans du sang
de pigeon de passage, tandis que les poules adultes supportent
impunément jusqu'à 3° injectés à la fois dans les muscles.

Il est évident que ce mode d'infection, siinefficace même avec
notre virus renforcé’, ne peut jouer aucun rôle dans la nature.

On pouvait croire que notre maladie, qui se localise exclusi-
vement dans l'intestin, a sa porte d’entrée directe dans le canal
digestif, par la bouche et le gosier.

En effet, nous avons réussi à reproduire très facilement l’in-
fection mortelle chez les poulets en leur offrant à boire des cul-
tures de vibrions ou le sang d'un pigeon de passage (V. p. 466).

Mais nous avons bientôt renoncé à attacher de l'importance
à ce mode d'infection par le gosier, car il ne peut faire mourir
que les poulets très jeunes. Les poulets un peu grandis devien-
nent manifestement malades, mais ne meurent pas, et les poules
adultes, au contraire, comme les pigeons adultes, ne sont aucu-
nement incommodées par des quantités très grandes (plusieurs
centimètres cubes) de virus mangé et bu, et n’acquièrent même
pas l’immunité par suite de cette infection.

Si donc on se bornait aux trois modes d'infection précédents :
inoculation sous-cutanée, intramusculaire, et nourriture, l’étio-
logie de notre malade resterait tout aussi obscure que celle du
choléra asiatique ; d'autant plus que, dans notre cas, on ne pou-
vait recourir à des indigestions pour avoir la réaction alcaline
des premières voies : le contenu du gosier des oiseaux est alca-
lin à l’état normal. De plus, notre virus de passage, employé pour
l'infection des poules, est plus virulent que celui qui se trouve
dans la nature, et pourtant, nous n’avons pas réussi à réaliser
l'infection mortelle des poules.

Celle-ci se rencontre cependant très souvent dans la nature,
et nous avons observé des épizooties sur les poules adultes qui

1. Voir ces expériences, page 485 de ce recueil.

VIBRIO METSCHNIKOVI. D00

en emportaient 10 0/0 dans les poulaillers. Pour expliquer ces
épizooties, il fallait donc rechercher un mode d'infection plus
efficace.

Nous avons trouvé, en effet, que l'introduction intrapulmo-
naire du virus, qu'elle soit faite par la trachée ou à travers les
parois de la poitrine, constitue un mode d'infection de beaucoup
plus dangereux que tous les autres. Introduits dans les poumons,
les vibrions de Metschnikoff tuent non seulement les pigeons,
les cobayes et les poulets, mais aussi les animaux les plus résis-
tants, comme les poules et les lapins.

Nous citerons iei quelques expériences.

Le 18 septembre, un pigeon est inoculé par la trachée avec
le sang d’un pigeon de passage (1/4 de c. c.).

Ce pigeon meurt la nuit. A l’autopsie on trouvel’intestin cho-
lérique, la rate exsangue, une hyperémie en foyers des poumons,
une exsudation pleurétique séreuse. Dans le sang, dans l’exsu-
dation pleurétique, dans le contenu intestinal, on constate l’exis-
tence des vibrions de Metschnikoff. Le contenu intestinal sert à
l'inoculation intratrachéale d’un pigeon frais qui meurt la nuit
suivante. On lui trouve à l’autopsie les mêmes lésions, sauf
celles de la cavité thoracique; les poumons ont l'apparence nor-
male. Son sang donne une culture pure des vibrions de Metsch-
nikoff.

Le 14 septembre, deux poules sout inoculées par la trachée
avec 1 de sang de pigeon de passage. Elles meurent pendant
la nuit, en présentant à l’autopsie les lésions habituelles de la
gastroentérite cholérique avec les poumons hyperémiés par îlots.

Le 30 septembre une poule et un coq sont inoculés par la
trachée avec 1° de sang de pigeon de passage. Le coq
meurt la même nuit et la poule le 2 octobre. A l'autopsie on leur
trouve les lésions habituelles de la gastro-entérite cholérique.

Le 2 octobre, deux poulets, âgés de 3 ou 4 mois, sont inocu-
lés à travers le larynx par 1° de sang de pigeon de passage.
Ts meurent la mème nuit de la gastroentérite cholérique.

On voit ainsi, que ce nouveau mode d'infection est doué
d’une gravité extrème, suffisante pour foudroyer en 20 heures
une poule adulte. Comme c’est, du reste, le seul mode d’infec-

906 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

tion qui reproduit l’affection mortelle des poules, nous sommes
obligés de conclure que c’est Tui qui a lieu dans la nature.

D'un autre côté, nos ee précitées prouvent que les
vibrions de Metschnikoff ont de la prédilection pour la localisa-
tion intestinale; quoique injectés dans les poumons, c’est dans le
contenu intestinal qu'ils vont se cultiver pour produire l'intoxi-
cation cholérique. Cette localisation de prédilection ne se fait
pas seulement à la suite de l'injection pulmonaire; elle est
l'apanage des vibrions de Metschnikoff quel que soit le mode
de leur inoculation. Nous en avons donné des preuves en ce qui
concerne l'inoculation intramusculaire et trachéale des pigeons.
Voici quelques autres exemples :

Le 22 juin, un jeune lapin est inoculé sous la peau par
2+ de sang de pigeon de passage. Il meurt le 24 juin. A l’au-
topsie, on lui trouve un œædème gélatineux jaunâtre à l'endroit
de l’inoculation, une rate hyperémiée, tout l'intestin inflammé et
rempli d’un liquide jaunâtre avec des flocons d’épithélium.
L'examen microscopique révèle des bacilles-virgules, rares dans
le sang, et très abondants daus le contenu intestinal.

Le 26 juin, un spermophile est inoculé dans le péritoine
par 1® du sang de pigeon de passage. Il meurt le lendemain
en présentant une hyperémie de l'intestin, qui est rempli d'un
liquide abondant. Dans son sang et son intestin, on trouve Îles
vibrions de Metschnikoff.

On peut donc affirmer en règle générale que le vibrion de
Metschnikoff a une prédilection pour la localisation intestinale,
quelle que soit sa porte d'entrée. Nous voyons iei nettement la
fausseté d'une des prétendues lois de Wyssokowitch qui n'ad-
mettait pas le passage des bactéries dans l'intestin *.

Ainsi se trouve résolue la question que nous nous sommes
posée au commencement de ce travail.

L'infection naturelle des poules par la gastro-entérite cho-
lérique se fait très probablement à travers les voies aériennes.
Passant par les poumons, les vibrions de Metschnikoff vont dans
l'intestin pour y produire des lésions spécifiques.

1. Disons en passant que les autres « lois » nous semblent tout aussi fausses ;

nous avons constaté, par exemple, l'élimination des bactéries charbonneuses
et pneumoniques mortes par l'urine.

VIBRIO METSCHNIKO VI. 597

Revenant maintenant aux dissentiments signalés entre la
bactériologie et l’épidémiologie du choléra asiatique, nous voyons
que l’analogie avec notre maladie des poules plaide en faveur de
la thèse épidémiologique. Dans un travail prochain, nous prou-
verons, par des recherches expérimentales directes sur l'étiologie
du choléra asiatique, que cette analogie se vérifie en tous points.

Avant de terminer, nous voudrions tirer quelques consé-
quences des faits que nous venons d'exposer. Nous avons trouvé
que l'inoculation laryngienne des pigeons est une excellente
méthode expérimentale pour la recherche des vibrions de
Metschmikoff. Nous avons cité plus haut une expérience, où une
injection, faite avec le contenu intestinal d’un pigeon cholérique,
et malgré la présence d'un grand nombre de bactéries différentes,
a reproduit néanmoins une gastro-entérite classique. Or, avec
d’autres modes d'infection, on ne réussit pas à la reproduire avec
des cultures impures.

D'un autre côté, cette sensibilité très grande de tous les ani-
maux vis-à-vis de l'introduction pulmonaire du virus nous force
à revenir sur nos expériences de l'infection des cobayes par la
nourriture. (Voir ce recueil, p. 486.) Il est bien probable, que
les cobayes morts se sont infectés par les poumons où le virus
pouvait très bien arriver par la bouche. Cela est d'autant plus
probable, que dans ces cas on constate souvent une pleurésie
séreuse.

RECHERCHES SUR LE POLYMORPHINME DU CLADOSPORIUN HERBARUM,

Par M. E. LAURENT.

Il existe parmi les champignons une foule de formes d’orga-
nisation peu compliquée, très répandues dans la nature, et qui
depuis longtemps ont attiré l'attention des botanistes. Ce sont
les Hyphomycètes ou Mucédinées. Les uns, au début des études
cryptogamiques, les considéraient comme des champignons com-
plets, autonomes, et en décrivaient les aspects si variés comme
autant d'espèces distinctes. D’autres, à une époque qui n’est pas
si lointaine, admettaient pour ces organismes un polymorphisme
presque indéfini.

Par leurs caractères souvent peu distincts, la succession de
leurs formes sur un même substratum, les Hyphomycètes sem-
blaient se prêter à merveille à ce transformisme. IL fallut les
recherches de de Bary, de M. Brefeld et de M. Van Tieghem pour
ramener les esprits à des idées plus saines. Comme il advient
souvent à la suite des controverses, l'autonomie des champi-
gnons inférieurs parut de plus en plus évidente. Quelques cas
de polymorphisme restaient cependant incontestables ; tel est le
Botrytis cinerea, forme conidienne du Peziza Sclerotiorum.

Après les récents travaux sur le développement des champi-
gnons inférieurs, les botanistes qui s’en occupaient au point de
vue systématique, reprirent la description détaillée de ces végé-
taux. Les formes considérées comme espèces devinrent de plus
en plus nombreuses. Pour s’en convaincre, il suffit de parcourir
le volume que M. Saccardo consacre aux Hyphomycètes dans
son Sylloge Fungorum et les diverses flores mycologiques pu-
bliées dans ces dernières années.

Trop rarement, ces prétendues espèces sont soumises à une
étude méthodique basée sur le développement des organes
reproducteurs. Des travaux de cette nature ont une utilité d'un
ordre plus élevé : pour beaucoup de naturalistes, toutes ces

CLADOSPORIUM HERBARUM. 299

moisissures ne seraient que des états de développement de
champignons à structure plus compliquée, qui pour la plupart
appartiennent à l’ordre des Ascomycètes, un petit nombre à celui
des Basidiomycètes. Cette hypothèse ne peut assurément être
confirmée que par de nombreuses cultures expérimentales.

Dans ces études, il importe de ne pas oublier que les milieux
liquides ne conviennent guère au plus grand nombre d'Hypho-
mycèles. Beaucoup n'y développent que des filaments mycé-
liens sans revêtir l'aspect naturel avec cellules reproductrices.
D'autre part, la méthode des cultures dans les liquides se prête
assez mal à la séparation des divers types qui peuvent se trou-
ver mélangés sur un même substratum. Des procédés de culture
plus parfaits étaient à désirer.

Une nécessité du même ordre s'était révélée dans l’étude des
Bactéries ; c'est M. R. Koch qui y répondit par la vulgarisation
de la méthode de culture sur milieux solides et particulièrement
sur gélatine.

Pendant le mois de décembre 1886, je fus amené à appliquer
ce procédé à l'étude du Cladosporium herbarum, recueilli sur
les matières végétales les plus variées. J’ai fait de ce champignon
une étude prolongée, qui m'en a fait connaître le curieux poly-
morphisme.

Le milieu de culture dont j'ai fait l'emploi le plus fréquent,
est le moût de bière additionné de 8 à 10 °/, de gélatine. Il est
excellent pour la croissance d’un très grand nombre de moisis-
sures. Les cultures ont été faites sur verres de montre placés
dans des godets en porcelaine disposés en pile. Le procédé est
très commode et permet d'observer facilement la croissance
des mycéliums sous le microscope.

Tous les résultats consignés dans ce travail ont été contrôlés
par la culture en goutte de gélatine nutritive suspendue à la
face inférieure d’une lamelle. On peut ainsi suivre d’une manière
continue, sous le microscope, le développement d'une même
spore, sans crainte d'impuretés causées par les germes de l’at-
mosphère.

560 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

I

CLADOSPORIUM HERBARUM (Link.)

Cette mucédinée est extrêmement commune dans |la nature.
Elle recouvre de taches foncées, parfois roussâtres, les tiges
des plantes mortes; elle est très répandue à l’automme et au
printemps. En été, elle abonde également sur les baies, surtout
dans les derniers temps de la maturation. Ce sont au début des
filaments irréguliers, cloisonnés, qui rampent à la surface des
tiges mourantes, et qui parfois pénètrent dans les lissus corti-
caux. Cà et là il se produit des amas de cellules brunes, d’où
s'élèvent bientôt des filaments dressés, terminés par des couidies.

Les productions appliquées sur les écorces se rapportent aux
formes décritent par Link sous les noms de Dematium nigrum
et de Zorula hérbarum. Des masses identiques peuvent cepen-
dant appartenir à d’autres champignons. La culture seule peut
renseigner exactement sur la nature des mycéliums dématioïdes
qui se rencontrent sur les débris végétaux.

Au sommet des filaments dressés naissent des conidies, à
acroissement terminal et quisont de forme extrèmement variable.
Tantôt ce sont des cellules ovoides à membrane assez épaisse et
brune ; ou bien, ces conidies se divisent et deviennent septées,
formées de deux à cinq cellules. D’autres restent unicellulaires
et conservent leurs parois hyalines; elles ont l'aspect de cellules
de Levures, surtout des formes-levures mycodermiques {Saccha-
romyces Mycoderma). Plongées dans une goutte d’eau ou d’al-
cool, ces conidies se détachent avec la plus grande vivacité et
se répandent dans le liquide.

La vigueur des filaments du Cladosporium et les dimensions
des conidies varientsuivantla nature spécifique des plantes hospi-
talières. Les exemplaires récollés sur les fruits charnus en décom-
position (courges,.…) sont beaucoup plus forts que ceux que l'on
rencontre sur les tiges sèches. Enfin les divers échanullons pla-
cés en chambre humide donnent toujours des filaments plus éle-
vés que ceux qui ont été recueillis en plein air. Ce sont là des
variations causées par la différence de milieux nutriufs et qui
disparaissent dans les cultures en milieux artificiels. Cependant
on peut admettre l'existence de plusieurs races qui semblent se

CLADOSPORIUM HERBARUM. d61

maintenir dans la suite des générations et qui se caractérisent
par l'étendue des mycéliums, le diamètre des filaments et la taille
des appareils conidifères. Des variétés de même ordre existent
aussi chez d'autres moisissures très communes (Penicillium

glaucum). I n’y a certainement pas lieu de les considérer comme
espèces.

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Fig. 1. Cladosporium herbarum, récolté sur courge : a, mycélium et fila-
ments conidifères. Gr — 200. — b, Diverses formes de conidies. Gr — 200.
— €, conidies en germination. G — 600.

La description que je viens de donner du Cladosporium her-
barum se rapporte à la forme conidifère. D'après plusieurs bota-
nistes ‘, celle-ci appartiendrail à un Ascomycète, le Pleospora
herbarum, qui se présente en petites masses noires etglobuleuses,
sur les tiges mortes des plantes herbacées. De pareils rapproche-
ments, faits sans cultures de vérificalion, sont toujours sujets à
caution. L'identité spécifique du Cladosporium et du Pleospora a
déjà été contestée par Gibelli et Griffini*?.

Dans mes nombreuses cultures de Cladosporium, je n'ai
jamais observé la production de périthèces. Ce n’est, toutefois,
pas une raison suffisante pour nier l'identité spécifique du Cla-
dosporium et du Pleospora, car il est permis de supposer que la
transformation d’une forme conidifère en forme ascomycèt
exige des conditions physiologiques particulières. |

4. Tulasne, Selecta Carpologia fung., IE, p. 261. O0. Wunsche, Flore genérale des
champignons, 1885, p. 45.

2. Sul polimorfismo della Pleospora herbarum (Arch. del laborat. di bot. critlog.
in Pavia, I, p. 53, 1875).

562 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

J'ai essayé sans plus de succès la transformation inverse par
la culture du Pleospor«.

Si la culture du Cladosporium ne m'a pas permis d’observer
la production de périthèces, elle m'a révélé la variété remarquable
des états conidifères de ce champignon.

Cultivé dans des solutions nutritives, moût de bière, infusion
de pruneaux, liquide de touraillons sucré, ete., le Cladosporium
typique en recouvre la surface d’un feutrage serré, pourvu à la
face supérieure d’appareils conidiens de couleur foncée. La
couche mycélienne est parfois gaufrée comme celle d’une cul-
ture d’Aspergillus niger dans le liquide Raulin. Si lon prend la
semence sur une écorce exposée à l'air, il arrive, mais rarement,
que la culture s’arrête à l’état mycélien. On obtient ainsi des
aspects dematium qui, en vieillissant, brunissent et forment des
croûtes noirâtres analogues à l’état fumago que l’on rencontre
sur les feuilles.

Lorsque la végétation du Cladosporium est dématioïde, il y a
production dans le liquide de cellules isolées ou groupées en très
petit nombre, absolument comparables à celle des Levures. Je les
désignerai sous lenom de cellules formes-levures de Cladosporium .
M. Cuboni, qui les a observées, les appelait cellules saccharomy-
cétiformes ‘. J'aurai l’occasion de parler de cette forme-levure.

Le Cladosporium croît assez bien dans le liquide Raulin sans
présenter de caractère particulier.

En somme, la culture du Cladosporium herbarum sur milieux
liquides, reproduit l'aspect typique, de plus, elle présente par-
fois à l’intérieur du liquide des filaments sans conidies aériennes,
mais pourvus de conidies aquatiques qui ont la forme des cellules
de Levures. J’emploie ici le mot aquatique pour caractériser ces
productions cellulaires, car, à mon avis, elles correspondent
exactement aux conidies portées par les filaments aériens.

Si, aux milieux liquides, on substitue la gélatine nutritive,
le développement du Cladosporium devient bien plus intéressant
à observer.

Quand les conidies semées proviennent d’une forme typique,
c’est-à-dire non dématioïde, on voit les filaments mycéliens
envahir la gélatine, puis atteindre la surface, se dresser dans

4. Cuboni, Salla probabile origine dei Saccaromicele, 1885.

uit

CLADOSPORIUM HARBARUM. d63

l’air et se terminer par des appareils conidifères beaucoup plus
compliqués que ceux du Cladosporium observé sur débris végé-
taux ou à la surface des liquides nutritifs. Ce sont de petites
cimes arborescentes, à rameaux nombreux, dont les cellules
diminuent progressivement de taille vers l'extrémité de chaque
ramification. La croissance est terminale comme chez le Clados-
porium ; les cellules du sommet sont donc celles qui ont été pro-
duites en dernier lieu. Au contraire, chez le Penicillium glaucum,
l'accroissement se fait à la base des chapelets de conidies.

La forme conidienne que présente le C/adosporium cultivé
sur gélatine nutritive est connue des mycologues sous le nom de
Penicillium cladosporioides Frésénius.

Pour l'obtenir à l’état le plus parfait, il ne faut semer sur
gélatine riche en matières sucrées qu’un nombre modéré de
conidies, de manière à assurer à chaque mycélium une abon-
dante alimentation. Vues au microscope, à un faible grossisse-
ment, l'aspect des taches mycéliennes recouvertes de leurs appa-
reils conidiferes est vraiment admirable. Lorsque de nombreux
mycéliums se pressent sur un petit espace, les filaments conidi-
fères restent beaucoup plus maigres et ne diffèrent pas de ceux
du Cladosporium récoltés sur tiges mortes.

JE
PENICILLIUM CLADOSPORIOIDES (Fresenius ‘).

Synonymes: P. olivaceum Corda; P. nigrovirens Frésénius; P. viride Frésénius:
P. chlorinum Frésénius; Hormodendron cladosporioïdes Saccardo.

Il est caractérisé par des filaments dressés, cloisonnés, ter-
minés par des appareils conidifères formés de rameaux disposés
en grappes plus ou moins ramifiées, portant des conidies ovoïdes
en chapelets, unicellulaires ou pluricellulaires, olivacées ou
fauves.

Au contact de l’eau, les conidies se détachent de leur support
avec la plus grande facilité; il est presque impossible d’en faire
de belles préparations microscopiques.

L'étude du Pen. cladosporioïdes a été entreprise par E. Lœw ?.

4. G. Frésénius, Beiträge zur Mykologie, 1850, p. 22.

2. E. Læœv, Zur Entwickelungsgeschichte von AN in Jahrbucher für
wissensch. Botanik, t. VII, p. 472, 1870.

64 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Comme G. Frésénius, Lœw admetla distinction de ce champignon,
mais identifie P. viride, P. nigrovirens, P. chlorinum de Frésé-
nius et le P. olvaceum de Corda avec le P. cladosporioïides. Ces
formes diffèrent par le diamètre et la couleur de leurs filaments
conidifères, ainsi que j'ai pu le constater fréquemment dans la
suite de ces recherches. Une forme naine, grèle dans tous ses
organes, est surtout commune sur la plupart des fruits sucrés
arrivés à maturité.

Arents sc

Fig. 2. Penicillium cludosporioides, cultivé sur gélatine. G — 80.

Les diverses variétés de Pen. Cladosporioides correspondent
aux races de Cladosporium herbarum dont j'ai déjà fait mention.
J'aurai l'occasion d'indiquer des variations de même nature dans
la forme dematium et la forme-levure qui dérivent du Cladosporium.

La mucédinée décrite par Frésénius n’est un vrai Penicillium
que par la disposition en pinceau plus ou moins parfait de ses
rameaux conidifères. Elle se distingue du Pen. glaucum par la
croissance terminale de ces derniers, ainsi que je l’ai déjà fait
remarquer. Pour ce motif on devrait abandonner ici le nom
générique de Penicillium. de ne le fais pas, parce que j'estime

CLADOSPORIUM HERBARUM. * 969

que pour les Hyphomycètes, la valeur des noms génériques
est trop relative pour avoir la même importance que dans la
classification des animaux et des végétaux supérieurs. Pour moi
le nom de Pen. cladosporioïdes désigne simplement et d’une façon
commode un état conidifère du Cladosporium herbarum.

Fig. 3. Penicillium cladosporioides, variété à filaments mycéliens étroits et
à filaments conidifères très courts. G — 80.

Malgré l’extrème dispersion des spores de ce champignon,
la forme Penicillium est très rarement citée dans les flores
cryptogamiques. Dans ses études sur les germes de l'air, M.E.
Hansen a observé le Pen. cladosporioides à plusieurs reprises ‘.
Avant d'entreprendre le présent travail, je l'avais trouvé sur
une solution de dextrine très concentrée, et sur ce milieu j'avais
pu conslater toutes les transitions entre la forme C/adosporium
à conidies peu abondantes et la forme Penicillium à conidies
nombreuses. Il n’y a là qu'une question de nutrition plus ou
moins favorable à une végétation vigoureuse. Les milieux sur
lesquels le Cladosporium développe son mycélium, sont ordinaire-
ment trop pauvres pour produire du Pen. cladosporioïdes.

Lorsque la gélatine qui sert à la culture se dessèche fortement,
les filaments mycéliens qui y sont plongés concentrent cà et là
leur protoplasme. Les masses ovoïdes ainsi formées semblent
constituer des chlamydospores, analogues à celles de plusieurs
Mucorinées.

Ensemencé dans des tubes de gélatine par piqüre avec un fil de
platine, le Pen. cladosporioïdes se développe exclusivement dans

1. Compte rendu du Labor. de Carlsberg, 1879, p. 59 et 66.
36

266 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

la portion superficielle. Il n'est nullement anaérobie. J’insiste
sur ce point, car d’autres formes conidiennes de Cladosporium,
que je décrirai plus loin, peuvent se développer dans la profon-
deur des liquides.

La transformation du Cladosporium en Pen. cladosporioïdes est
aisée àréaliser sur gélatine. Le contraire est-il possible? Peut-on
avec des conidies de ce dernier revenir à la forme normale des
tiges mortes ? Ce n’est pas difficile, pourvu que l’on emploie des
milieux nutritifs appropriés. J'ai bien réussi sur empois
d'amidon et surtout sur des morceaux de courge et de tiges de
topinambour qui avaient été stérilisés par la vapeur d’eau et
placés ensuite en chambre humide. J'ai obtenu des productions
identiques à celles du Cladosporium placé dansles mêmes condi-
tions.

La même transformation est aussi facile à réaliser par la
culture du Pen. cladosporioïdes sur morceaux d’aubier de peuplier
abattu au mois de juin et gorgé de matières sucrées. Enfin
M. Massart est arrivé au même résultat par l'emploi d’une géla-
tine nutritive additionnée de 60 à 70 0/0 de saccharose, de
20 0/0 de glycérine, de 10 0/0 de chlorure de sodium ou de
20 0/0 de nitrate de potassium. À pareille concentration, ces
substances sont nuisibles à l'assimilation par leur action osmo-

tique considérable.
Il n’y a doncaucundoute :le Penicillium cladosporioïdes est une

forme bien nourrie, très vigoureuse du Cladosporium herbarumr.
Mais le sujet n’est pas épuisé, et nous y reviendrons dans un

prochain article.

L

DE L'ABSENCE DES MICROBES DANS LES TISSUS VÉGÉTAUX

Par M. A. FERNBACH, préparateur à la Sorbonne.

Depuis les expériences classiques dans lesquelles M. Pasteur
a montré que du jus de raisin reste inaltéré, si on prend la pré-
caution de l’emprunter soit à l’intérieur des grains, soit à des
grappes ayant müri dans des enveloppes de coton, à l'abri des
germes de l’air, on admet, par suite d’une tendance naturelle de
l'esprit qui nous porte à généraliser, que l'organisme des végé-
taux est, comme celui des animaux, normalement fermé à la
pénétration des microbes.

Une expérimentajion plus étendue sur ce sujet paraissait
cependant utile, surtout après la publication de quelques Mé-
moires dont les conclusions, établies pour d’autres végétaux et
dans des conditions différentes de celles de M. Pasteur, étaient
en contradiction avec l'opinion la plus généralement adoptée.

Ainsi, M. A. Jorissen (Acad. royale de Belgique, 1884)a attri-
bué à la présence de bactéries dans les tissus végétaux la pro-
duction de la diastase. Ses affirmations ont été contredites par
M. E. Laurent (ibid., 1885), qui, opérant sur des graines et des
tubercules en germination, c’est-à-dire à l’époque où la produc-
tion de diastase est la plus active, n’a réussi, ni par la colo-
ration, ni par l’ensemencement dans la gélatine et dans le jus
de pruneaux, à y déceler la présence des microbes.

Le D: H. Bernheim, de Würzbourg, qui n’a pas, sans doute,
eu connaissance de ces publications, a signalé récemment, au
Congrès de Cologne, dans les céréales, les fruits à gousse et les
tubercules, la présence de microbes qui, selon lui, se multiplie-
raient abondamment pendant la germination, et auxquels il fau-
drait attribuer un rôle important dans la production de la dias-
tase. Les expériences de M. Duclaux (Comptes rendus, t. G, p. 66)
sur la germination dansun milieu stérile, avaient pourtant montré

208 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

que les graines ne contiennent pas normalement de microbes et
que la germination peut parfaitement se produire sans eux.

M. Galippe, enfin (Journal des connaissances médicales,
30 juin 1887). a publié des expériences dans lesquelles, ensemen-
çant dans des milieux de culture plus variés que ne l'avait
fait M. Laurent, et sans s'astreindre à opérer sur des plantes en
germination, des fragments de végétaux divers, il a observé
dans la plupart des cas un développement de microbes. Il en tire
la conclusion, passablement en désaccord avec tout ce que l’on
savait jusque-là, que les microbes, et en particulier ceux du sol,
pénètrent dans les tissus végétaux avec lesquels ils sont en
contact.

J'ai repris les expériences de M. Galippe, en me plaçant
dans les mêmes conditions que lui, c’est-à-dire en prenant les
végétaux tels qu'ils arrivent sur le marché, sans m'astreindre à
expérimenter sur des légumes cultivés à Gennevilliers, estimant
qu'une terre végétale quelconque est suffisamment riche en
microbes divers pour que ceux-ci pénètrent dansles végétaux, si
leur pénétration était physiologiquement possible. J'ai cru aussi
devoir m'en tenir à quelques espèces végétales, pomme de terre,
carotte, navet, betterave, tomate, jugeant inutile de prolonger
outre mesure des expériences qui jusqu'ici disent loutes que
les conclusions de M. Galippe sont erronées.

Les milieux de culture que j'ai employés, renfermés soit dans
des tubes à essai, soit dans des matras Pasteur, sont le bouillon
de veau neutre et l’eau de navets sucrée, milieu qui, naturelle-
ment, est très légèrement acide.

Voici le procédé dont je me suis servi pour faire les ensemen-
cements. Dans tous les cas, la portion de surface du végétal par
laquelle devait passer l'instrument destiné à faire la prise d’essai
était chauffée jusqu’à carbonisation légère par l’application d’un
thermo-cautère dont l'extrémité rougie était formée par un large
bouton légèrement convexe. Pour la tomate, j’aspirais la pulpe
avec une pipette à coton dont la portion étirée avait 2 à 3 milli-
mètres de diamètre; j'obtenais ainsi 3 ou 4° de pulpe que je
-répartissais entre deux matras Pasteur, renfermant chacun l’un
des milieux de culture indiqués plus haut. Pour les autres végé-
taux, j'ai employé, comme l'avait fait M. Laurent, des emporte-
pièce en laiton, qui servent généralement à percer les bouchons.

ABSENCE DES MICROBES DANS LES TISSUS VÉGÉTAUX. 569

Ces tubes, munis à leur extrémité non tranchante d’un tampon
de coton, et renfermés dans des tubes à essai bouchés avec de
la ouate, étaient préalablement chauffés à 165°. J’obtenais avec
ces tubes des cylindres de tissu végétal que je poussais peu à peu
au dehors, et que j'ensemençais au moment de leur sortie en
les sectionnant avec un scalpel flambé. J'introduisais ainsi dans
chaque tube à essai un volume de tissu végétal variant entre
Occ,5 et Acc.
Le tableau suivant indique les résultats obtenus.

Nombre de végétaux Nombre Nombre d’ensemencements
étudiés. d’ensemencements. féconds.
Tomates 26 52 2
Navets 30 199 19
Carottes 13 101 4
Betteraves 12 103 10
Pommes de terre 11 100 (l
98 D55 3)

On voit qu'il y a un certain nombre d'ensemencements féconds,
6,3 0/0. Il ne saurait guère en être autrement. Il y a, en effet,
dans des expériences aussi délicates, un certain nombre de causes
d'erreur auxquelles il est impossible de se soustraire d’une façon
absolue. La plus importante est celle qui provient des germes de
l'air, toujours abondants, bien qu’en nombre très variable, dans
un laboratoire où il y a des allées et venues et où l’on est cons-
tamment exposé aux courants d'air; la pratique presque quoti-
dienne du remplissage des matras Pasteur m'a montré que, dans
le laboratoire où j'ai fait mes expériences, sur 100 matras
remplis, il y en a toujours 4 ou 5 qui se peuplent. C’est là un
chiffre qui, lorsqu'on ne prend pas de précautions spéciales,
doit être considéré comme un minimum pour des expériences
qui exigent, comme celles qui viennent d’être décrites, l'emploi
d’un certain nombre d'instruments et une manipulation assez
longue. D'ailleurs, l'examen microscopique des tubes féconds
confirme cette manière d'interpréter les insuccès de quelques-uns
de mes ensemencements : les êtres développés sont multiples,
bacilles, micrococcus, moisissures, et en général, dans chaque
lube peuplé, on ne trouve qu’une seule espèce. Comment expli-
querait-on cette variété d'êtres, cette séparation des espèces,

570 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ainsi que la répartition très inégale des germes, si l’on n’admettait
qu'ils proviennent de l'extérieur du végétal, et non de ses tissus
intérieurs ?

Une autre cause d'erreur, plus facile à éviter, mais que j'ai
cependant rencontrée plusieurs fois, est celle qui provient de la
pénétration de germes dans l’intérieur du végétal à la suite d'un
insecte ; dans ce cas, la majeure partie des tubes ensemencés se
trouble, chaque tube peuplé présente toujours plusieurs espèces
et on aperçoit en y regardant de près, le tunnel parfois très
étroit, creusé par l’insecte.

On comprendra que, pour être bref, je n’aie pas indiqué mes
expériences par le menu. Je signalerai seulement un fait général
qui confirme encore les considérations qui précèdent. Chaque fois
que j'ai ensemencé un certaiv nombre de tubes, c’est toujours
dans la première moitié que j'ai eu à noter le plus grand nombre
d’insuccès, parce qu'on devient d’autant plus habile à faire une
opération délicate qu'on l’a déjà faite plus souvent. M. Laurent
avait déjà trouvé le même fait et l'avait expliqué de même. De
plus, et pour la même raison, à mesure que j’ai poursuivi mes
expériences, le nombre des insuccès a été constamment en dimi-
nuant, et je ne doute pas que si j'en recommençais une nou-
velle série, j'arriverais à abaisser beaucoup la proportion des
ensemencements féconds.

Concluons donc que les tissus végétaux normaux constituent
pour les microbes un filtre parfait, et qu’ils ne peuvent être
envahis par eux qu’à la suite de causes tout à fait accidentelles.

REVUES ET ANALYSES

L. Manrrent ET G. TRavERsA. Sur l’action physiologique et toxique des
produits de culture du streptococcus de l'Erysipèle. Gior. internax. 4.
Sc. Mediche, X° année, 1888.

Depuis le jour où M. Pasteur a montré que l’inoculation d’une culture
stérilisée du microbe du choléra des poules amenait une maladie passagère,
dont les symptômes étaient pourtant à peu près identiques à ceux de la
maladie mortelle produite par l'inoculation du microbe lui-même, l'attention
est restée fixée sur le rôle pathologique des substances solubles que les
microbes laissent dans leur milieu de culture, à l’état de sécrétions ou de
produits d'excrétion. On a surtout relevé ce rôle dans certaines maladies
dont la marche et le facies général réveillaient le plus l’idée d’une intoxi-
cation, le tétanos traumatique, le choléra, le typhus, et, à un degré plus
éloigné, le charbon et l'infection généralisée produite par le vibrion septique.

Par une pente toute naturelle de l'esprit, on s'est demandé aussi si ces
substances, dont l'introduction dans l'organisme produisait des désordres de
même nature que l'invasion du microbe qui les produisait, n'étaient pas
aussi des substances vaccinales, et on sait combien il s’est déjà accumulé
dans cette voie de faits et d’espérances.

Deux moyens se présentent pour débrouiller cette question et toutes
celles où entrent en jeu les produits de la vie des microbes. On peut ou bien
essayer de séparer par l'analyse chimique le mélange, en général assez com-
plexe, des substances diverses que contiennent les tissus morbides ou les
liquides de culture, et c'est ainsi que Brieger a retiré la fyphotoxine des
cultures du bacille du typhus, et la tétanine des cultures du bacille du
tétanos ; ou bien encore avoir recours pour cette séparation à l'analyse
physiologique. Le nombre des toxiques dont l’action sur les divers tissus a
été bien étudiée est en ce moment assez grand, et les réactifs, représentés
par l'arsenal instrumental de la physiologie moderne, sont assez délicats
pour qu’on puisse en espérer du secours, lorsque l'analyse chimique est
impuissante, et leur demander, sinon le nom, du moins la famille des pro-
duits toxiques microbiens dont on cherche la nature. En usant de ces deux
méthodes, en les combinant au besoin, on confondrait dans une voie unique
les deux voies, plus divergentes en apparence qu’en réalité, qui aboutissent
aux deux grands noms de CI. Bernard et de Pasteur, et on ferait sûrement,
de belles découvertes.

MM. Manfredi et Traversa, dont le travail nous inspire ces réflexions
ont eu le mérite d'aborder des premiers, sinon les premiers, une face inté-

572 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ressante du problème que nous venons de poser. Ils ont étudié soigneuse
ment au point de vue physiologique le mécanisme de l’action des cultures
stérilisées du microbe de l’érysipèle. Ils ont choisi cette maladie, d’abord
parce qu’elle s'accompagne d'ordinaire d'un procès évident d'intoxication,
et ensuite parce que Brieger avait échoué dans ses recherches d’une
ptomaïne spéciale au microbe de cette affection. L'analyse chimique étant
impuissante, c'était une bonne occasion pour l'analyse physiologique
d'essayer ses forces.

La première condition était de choisir un bon terrain de recherches et
de le bien définir. Le peu qu’on sait en effet sur les substances, toxiques ou
autres, laissées par les microbes dans les milieux de culture, c'est que leur
nature dépend de la nature du milieu, et que dans un même milicu, elles
ne sont pas toujours en même quantité. Leur nature et leur proportion
dépendent de l’âge de la culture, de la température, de la présence ou de
‘absence de l'oxygène, etc. Toutes les cultures de MM. Manfredi et Traversa
ont été faites dans du bouillon de bœuf peptonisé et neutralisé suivant les
préceptes de Koch, et maintenu à 25°-30°. On le stérilisait par filtration, et
on l’inoculait à des grenouilles, à des cobayes et à des lapins.

D'une manière générale, on peut dire que les désordres nerveux qui sui-
vent l'injection d’une certaine quantité de ce liquide de culture se rapportent
à deux formes cliniques bien déterminées, la première caractérisée essen-
tiellement par des phénomènes de paralysie, la seconde par des symptômes
convulsifs plus ou moins diffus dans les divers organes.

Notons tout de suite que cette différence dans la manifestation des
symptômes toxiques n’a aucun rapport avec l’âge ou la quantité de la culture
employée. La même culture peut, à la même dose, produire des effets essen-
tiellement différents dans des animaux de la même espèce. « Avec une culture
filtrée au 16° jour, par exemple, nous avons obtenu la forme convulsive chez
des cobayes et des grenouilles, et la forme paralytique chez les lapins. Une
seconde culture de 16 jours, préparée dans des conditions identiques, à
donné chez les grenouilles et les lapins la forme essentiellement paralytique,
et chez les cobayes la forme convulsive associée à un léger degré de parésie
des membres. Enfin, avec une culture du 8 jour, faite dans le vide, nous
avons eu chez certaines grenouilles la forme convulsive, chez d’autres la
forme paralytique. »

Ceci témoigne que l'étude est difficile, puisque le réactif n'est pas sûr,
et traduit par des phénomènes différents l'inoculation de la même substance.
Le mode d'introduction a peut-être de l'importance, peut-être aussi des dis-
positions particulières de l'animal qui font que tel de ses départements est
plus ou moins rapidement atteint. Le fait est à rapprocher des résultats de
M. Helman (V. ce volume, p. 273) qui, avec le même virus rabique, obtient
tantôt la forme furieuse, tantôt la forme paralytique.

MM. Manfredi et Traversa ont surtout rencontré la forme paralytique
_avec les grenouilles et les lapins. A la suite de l’injection de 1 à 3 centimè-
tres cubes de liquide de culture, la grenouille tombe dans une torpeur qui
passe progressivement au coma. Cet état de dépression des forces nerveuses
persiste de 20 minutes à cinq heures ; il est suivi d’une parésie des mem-

REVUES ET ANALYSES. 573

bres postérieurs, qui s'étend bientôt au train de devant, en détruisant les
mouvements volontaires, mais en laissant encore intacte l’excitabilité
réflexe, qui finit pourtant par s’éteindre à son tour. La respiration est
arrêtée, et on pourrait croire la grenouille morte, si, en découvrant son
cœur, on ne le voyait encore battre avec un rythme un peu ralenti, mais
avec une énergie suffisante.

En l'absence de troubles circulatoires, il faut donc admettre une action
toxique sur l'appareil nerveux central ou périphérique ou encore sur les
muscles. Une expérience bien simple permet de préciser. Si, immédiatement
après la perte totale du mouvement, on met à nu le nerf sciatique et le
gastro-cnémien correspondant, on trouve que nerf et muscle sont encore
très sensibles à l’action électro-faradique. La paralysie doit donc être d’ori-
gine centrale. Toutefois, tout en maintenant que les nerfs et les muscles ne
concourent pas à la genèse de la paralysie, les auteurs ne veulent pas rejeter
à priori toute action des produits de culture sur ces organes, qui perdent
aussi rapidement leurs propriétés physiologiques. Ainsi, à une période plus
avancée de l'intoxication, c'est-à-dire de 13 à 40 minutes depuis le commen-
cement de la paralysie, on constate que le nerf sciatique perd d’abord son
excitabilité, puis le muscle son irritabilité. Mais il n’en est pas moins
démontré que, dans ses traits généraux, l’intoxication frappe d'abord le cer-
veau et le bulbe, d’où le coma, la perte des mouvements volontaires et l'arrêt
de la respiration. Puis elle s'étend à la moelle épinière, d’où l'arrêt des
mouvements réflexes.

Chez les lapins, le cadre est moins complet et se borne d'ordinaire aux
phénomènes bulbaires. Le cobaye est plus sujet à présenter la forme con-
vulsive.

C'est encore la grenouille qui offre le type le plus complet de cette
seconde forme de l’intoxication. Trois ou cinq minutes après l'injection,
sous la peau ou dans le péritoine, de 4 à 2 centimètres cubes de culture âgée
de 10 à 16 jours, ou d’une culture de 8 jours dans le vide, on voit apparaître
une période de torpeur générale à laquelle succèdent bientôt des contractions
spasmodiques cloniques qui, débutant par les muscles de la tête et des mem-
bres supérieurs, s'étendent d'une manière inégale et irrégulière sur les autres
parties du corps. Elles deviennent peu à peu toniques au point de ressembler
aux crises convulsives de la strychnine. D’autres fois, les symptômes d'irri-
tation motrice se traduisent par des convulsions épileptiformes ou un spasme
tétanique.

« Quelle que soit la forme, du reste très variable, des convulsions spas-
modiques, elles diminuent graduellement d'intensité et d’étendue, 20
à 45 minutes après leur apparition, et reprennent le caractère clonique.
Elles cessent au bout de 1 à 2 heures. Il reste alors une paralysie générale
des membres, si bien que les grenouilles semblent mortes. Si on leur met
le cœur à nu, on le trouve battant plus ou moins vivement, mais avec un
certain ralentissement. A cette période de mort apparente succède la mort
réelle, ou Le retour à l’état normal. »

Dans ce dernier cas, le rétablissement diffère de celui qu’on observe dans
les cas d'intoxication par la strychnine en ce qu’il n’est pas précédé ici d’une

A

574 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

nouvelle et longue phase d'attaques convulsives. Il ressemble au contraire
beaucoup à celui qu'on observe dans les cas d’empoisonnement avec la
picrotoxine.

Pendant la durée des crises, les nerfs moteurs et les muscles restent
excitables comme dans la forme paralytique. Dans la phase terminale, les
nerfs peuvent perdre leur excitabilité, alors que les muscles sont encore
contractiles. Ils meurent à leur tour, s'il y a mort de l’animal, mais quand
il revient à la vie, les nerfs reprennent leur activité normale,

Chez le cobaye, après injection hypodermique ou intrapéritonéale de 5
à 15cc de culture filtrée, on voit apparaître d’abord la torpeur, puis des con-
vulsions violentes dans diverses régions du corps. Ces convulsions qui ont
d’abord le caractère clonique, se généralisent et prennent la forme de
paroxysmes durant lesquelles l'animal exécute de droite à gauche un mou-
vement de manège autour de son train postérieur. Bientôt il s'arrête par
abolition des mouvements volontaires, et les contractions cloniques conti-
nuent, coupées parfois par des accès spasmodiques pendant lesquels les
mouvements de manège reprennent. La respiration est manifestement trou-
blée, et le cœur bat plus lentement qu'à l'ordinaire. Dans cette forme
comme dans la forme paralytique, cet organe est à peine atteint et est le
dernier à mourir.

Deux heures après l'injection, les mouvements volontaires commencent
à reparaître, les spasmes cloniques deviennent plus rares, l'animal se relève
et revient à la santé après une période de 3 à 4 heures.

Par quel mécanisme se produit cette excitation de l'appareil moteur
dans la forme convulsive ? Est-ce par suite d’une exagération dans la sensi-
bilité de l'appareil moteur périphérique ou dans l’action du système central”?
Pour répondre à cette demande, il suffit de comparer deux grenouilles, l’une
à qui l’on a coupé le tronc du nerf sciatique en laissant la circulation se
faire dans le membre correspondant, l’autre dans laquelle on a lié l'ar-
ière iliaque ou l’un des membres inférieurs en totalité, à l'exception du
nerf sciatique correspondant. On voit que dans la première, il y a des
contractions spasmodiques partout, sauf dans le membre dont le nerf est
sectionné et qui reste parfaitement immobile. Dans les grenouilles dont l’un
des membres ne recoit plus de sang, mais a conservé ses attaches ner-
veuses, les phénomènes convulsifs apparaissent comme si ce membre était
intact. Les crises convulsives sont dues à une influence sur l'appareil mo-
teur central. Pour localiser davantage le centre d’action. MM. Manfredi et
Traversa ont coupé sur des grenouilles la moelle épinière dans la région
dorsale au dessous de l’origine apparente des nerfs brachiaux, et ont alors
pratiqué dans le ventre ou sur les membres postérieurs l’inoculation du bouil-
lon de culture. Les phénomènes convulsifs se sont alors manifestés, avec
leur physionomie caractéristique, dans la partie antérieure du tronc, et
ont manqué dans la partie privée de ses communications nerveuses. Ils
sont donc dus à une action sur les centres encéphalo-bulbaires. Cest une
nouvelle différence avec les effets de la strychnine, qui attaque surtout la
moelle épinière.

Enfin, en voyant que l'ablation des hémisphères cérébraux, faite avant

REVUES ET ANALYSES. D79

l'injection, n'empêche nullement l'apparition des symptômes convulsifs, qu’il
en est de même après la destruction des lobes optiques, des pédoncules, du
cervelet, tandis que les convulsions cessent complètement au moment où
on détruit le bulbe, on est conduit à penser que c'est sur cetorgane qu’agis-
sent surtout, au moins chez les grenouilles, les produits toxiques sécrétés
par le microbe de l’érysipèle.

Quels sont maintenant les rapports entre les caractères cliniques de
l'érysipèle et les phénomènes d'intoxication que nous venons de décrire? A
côté des lésions locales de la maladie, lésions aujourd'hui bien connues au
double point de vue clinique et bactériologique, il y a des phénomènes
généraux, fièvre, troubles nerveux sensoriels (céphalée, coma) des troubles
d’excitation motrice (sursauts tendineux, contractures, contractionscloniques
et toniques), il y a même quelquefois du délire, tous phénomènes qui se
retrouvent dans les cas d'intoxication, et dont l’origine doit dès lors être
recherchée, non dans les complications morbides que l’on accusait naguère,
mais dans l'absorption continue des produits de la culture des microbes.
Telle est au moins la thèse soutenue par MM. Manfredi et Traversa, et
qu'ils s'appliquent à justifier par des considérations diverses et par des
analogies parmi lesquelles nous ne choisirons que celles qui ont une base
expérimentale, et qui ajoutent quelques faits, bons à connaître, à ceux que
nous connaissons déjà.

C’est ainsi que le degré de toxicité d’une culture dépend moins de son
âge, dont l'influence, comme nous l’avons vu, est variable et médiocre, que
de se fécondité. En d’autres termes, ces substances produites par le microbe
dépendent plus du nombre de microbes développés dansleliquide deculture
que du séjour qu'ils y ont fait. Toutes choses égales d’ailleurs, il y en a plus
à 28°-300 qu'à 37°, parce que cette température commence à être défavorable
au coccus de l’érysipèle. On s'explique ainsi que cliniquement, les formes
les plus graves de l'érysipèle ne sont pas celles qui durent longtemps avec
des foyers circonscrits, mais celles qui présentent une large surface d’in-
vasion, Comme par exemple les érysipèles traumatiques.

La non accumulation des produits toxiques dans les cultures est sans
doute liée à leur facile oxydation.On les voit en effet disparaître assez rapi-
dement à l'air, et nous savons aussi que les cultures faites dans le vide ont
en moyenne une activité plus grande que les autres. Peut-être cet excès de
virulence tient-il en partie à ce que les cultures du microbe sont toujours
plus abondantes dans le vide qu’on contact de l'air. Quoi qu'il en soit, le
poison de l’érysipèle est instable et on comprend alors que les cas les plus
graves d'érysipèle guérissent presque aussi vite que les cas les plus bénins.

On pourrait relever d’autres analogies : celles qui précèdent suffisent.
Aussi bien les autres deviennent-elles de plus en plus flottantes, et n’ajou-
teraient rien à l'intérêt véritable que doit exciter le mémoire que nous venons
d'analyser. Dx.

576 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

D EF. M. Fixezsreix. Expériences sur la rage, faites au laboratoire
d'hygiène de Tiflis. (Comptes Rendus de la Société Impériale de Médecine
du Caucase, n° 4, 1887.)

Les expériences très nombreuses faites au laboratoire de Tiflis ont con-
firmé, une fois de plus, les travaux de M. Pasteur sur la rage.

Les résultats obtenus par l’auteur sont résumés dans les lignes suivantes :

Le virus employé venait du laboratoire de M. Pasteur; on a reconnu
qu'il se comportait, sur les chiens et les lapins, absolument comme M. Pas-
teur l’a annoncé, soit que l’on se serve de moelles fraîches ou de moelles
desséchées, soit que l'on emploie des moelles conservées à l'air ou dans
l'acide carbonique.

Avec le virus fixe, la durée de l’incubation et celle de Ha maladie étaient
très régulières. (7 jours d’incubation; 3 à 4 jours de maladie.)

A Tiflis, on s’est appliqué à suivre très exactement la température des
animaux en expérience et on y a constaté, pour la première fois, que le 4° et
le 5 jour après l’inoculation par trépanation, la température des animaux
augmentait. Après l’'inoculation sous-cutanée, on a aussi observé une
élévation de température qui précéde de quelques jours la rage confirmée,
ce qui prouve que !a durée de l’incubation est plus courte et que la durée
de la maladie est plus longue qu’on ne le croit ordinairement. Cet accrois-
sement de la température est un signe très sûr du début de la maladie.

Dans le cours de ses expériences, M. Finkelstein n'a jamais observé les
retours aux longues incubations, signalés à tort par M. Frisch. Une plus
longue durée de l'incubation tient à ce que l’on a inoculé une très petite
quantité de virus.

M. Finkelstein a reconnu, comme M. Pasteur, que l’immunité pouvait
être donnée aux chiens à la suite d’une seule inoculation sous-cutanée de
virus fixe.

Les lapins sont rendus difficilement réfractaires à la rage; lesinoculations
préventives, sous-cutanées, peuvent donner la rage à ces animaux.

Dans deux cas, l'injection intra-veineuse de virus fixe n’a été suivie
d'aucun effet. Ce mode d'inoculation n'est pas aussi sûr que celui par
trépanation.

Les inoculations de virus fixe ont toujours donné la rage paralytique.

A Tiflis, les animaux inoculés préventivement ont toujours été éprouvés
par l’inoculation du virus fixe sous la dure-mère. Cette épreuve est plus
sévère que celles où l’on fait usage du virus de rage des rues.

L'injection intra-veineuse du virus fixe n’a pas toujours donné la rage
aux chiens; l'auteur pense que ce résultat n’est pas complètement d'accord
avec ceux du laboratoire de M. Pasteur. Il faut cependant observer que les
résultats publiés pas M. Pasteur avaient été obtenus avec un virus de
passages beaucoup moins élevés que ceux dont M. Finkelstein a fait usage.
C’est probablement à cette circonstance qu’il faut rapporter cette différence.

L'inoculation sous la dure-raère des moelles de 3, 4 et 6 jours n'a pas
été suivie de maladie, dans irois cas. M. Finkelstein pense que cela est dû

Annales de l'Anstihult Pasteur

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Photetyaie À Quinsac & G Baquié, Paris.

REVUES ET ANALYSES. d77

à l’action sur les moelles de la température, qui était'alors très élevée à Tiflis.
Dans quelques autres cas, l'inoculation intra-arachnoïdienne du virus fixe
a donné la rage avec un retard qu’il n’a pas'été possible d'expliquer.

Les expériences sur l'immunité contre la rage ont porté sur les chiens et
les lapins. Deux chiens ont été rendus réfractaires à la suite d’une seule
injection de virus fixe sous la peau. Sur 4 chiens, soumis aux inoculations
préventives, un seul a résisté à l’inoculation du virus fixe sous la dure-mère.
L'auteur pense que les succès auraient été plus nombreux s'il avait multiplié
les inoculations préventives; il n’en avait fait que dix.

Les lapins, qui ont servi aux essais de vaccination, ont succombé les
uns à la suite des inoculations préventives (8, 14, 16 injections de moelles
de 5, 14 et 15 jours). Les autres ont supporté ces inoculations, mais ont pris
la rage après injection de virus fixe sous la dure-mère. Cependant, sur 11
expériences, 3 lapins étaient réfractaires après les inoculations préventives.
Deux lapins inoculés sous la dure-mère et traités ensuite ont succombé à la
rage. Ces résultats sont intéressants à cause de la grande réceptivité du
lapin pour la rage et aussi parce qu'ils ont été éprouvés d'une façon très
sévère par l'introduction à la surface du cerveau du virus de passage, plus
actif que celui de la rage des rues.

Les moelles rabiques employées dans ces expériences ont été ensemencées
dans divers milieux nutritifs et toujours sans donner de culture; elles ne
contenaient done pas de microbes étrangers, ce qui prouve le soin apporté

par l’auteur dans ces recherches.
BARTOCHEVITCH.

H. Bucaner. Sur les prétendues spores du bacille typhique. Centralbl. f.
Bakt., t. IV, p. 355.

L'existence de spores dans le bacille typhique, annoncée par Gaffky,
avait, croyons-nous, laissé un peu incrédules tous les savants qui avaient
fait des cultures de ce microbe. On y trouve, en effet, au bout de trois ou
quatre jours, lorsqu'on le cultive sur la pomme de terre à 37°, des corpus-
cules ronds et brillants, toujours placés à une extrémité du bacille, mais
qui paraissent enchatonnés dans cette extrémité, et dont l'aspect, légère-
ment rugueux, n'est pas celui des spores des autres bacilles. Gaffky avait
argué, pour leur attribuer cette nature, de l'existence, dans les préparations
colorées, de plages se refusant à la coloration et placées à l'extrémité des
bâtonnets, comme les granules brillants dans la préparation fraîche. Il
avait cité, comme seconde preuve de ce qu'il avançait, une expérience dans
laquelle il avait vu une culture riche en spores résister trois mois à la
dessiccation, mais il n'avait pas fait d'expérience comparative, ni démontré
qu’une culture sans spores, mise dans les mêmes conditions, est morte au
bout de ce temps. Sur l'existence de ces spores, on avait échafaudé une
érie de conclusions étiologiques au sujet de la fièvre typhoïde.

578 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

M. Buchner vient dône fort à propos démontrer que les conclusions un
peu hâtives de M. Gaffky sont erronées. Les granulations brillantes de l’une
des extrémités sont des concrétions protoplasmiques, qui ne se produisent
que parce que la culture sur la pomme de terre devient peu à peu acide.
Si on rend cette pomme de terre alcaline en la laissant séjourner, avant la
stérilisation, quelques minutes dans une solution de soude, on ne trouve
plus trace de ces grains brillants. Un autre moyen de les obtenir est de
réduire ou de supprimer la quantité d'oxygène dont la culture a besoin.
M. Birsch-Hirschfed a montré de son côté qu’on en trouve dans les bacilles
cultivés en présence de matières colorantes qui les pénétrent, par exemple
dans une culture en gouttes pendantes sur de la gélatine colorée avec du
rouge de phloxine. M. Birsch-Hirschfeld avait interprété le phénomène
dans le sens de M. Gaffky, en y voyant la formation de spores. M. Buthner,
rapprochant tous ces faits, y voit, avec plus juste raison, un procès de
désénérescence, sous l'influence de la présence de l'acide, de la matière
colorante, ou de la privation d'oxygène, procès qui se dénoue comme il
le fait presque toujours, par une coagulation du protoplasma.

Restent à expliquer les plages incolores des extrémités dans les prépa-
rations colorées. M. Gaffky, les trouvant à la même place que les spores,
avait conclu que e’étaient ces spores qui se refusaient à la coloration.
M. Buchner montre élégamment que les concrétions protoplasmiques et les
plages ingolores sont choses très différentes. Il lui suffit pour cela de colorer
sa préparation sous le microscope, en faisant arriver doucement la matière
colorante sous la lamelle, et d'observer. Il vôit alors que la prétendue spore
de Gaffky, au lieu de rester incolore, se colore la première, et d'une teinte
plus foncée que le reste du bacille. Ce n’est donc pas une spore, ce n’est pas
davantage de la matière grasse, c'est du protoplasma condensé. On voi
en même temps, à mesure que la coloration du baecille devient plus intense,
apparaître, quelquefois à une des ses extrémités, quelquefois aux deux, une
plage incolore, due à une rétraction du protoplasma, et qui ne se confond
pas avec les prétendues spores, car tantôt ce protoplasma qui se contracte
entraîne avec lui le petit coagulum coloré dont nous parlions tout à l'heure,
tantôt il le laisse en place. Les plages incolores sont done dues, d’après
M. Buchner, à une simple rétraction du protoplasma, qui se fait surtout
pendant la dessiccation de la lamelle dans les méthodes ordinaires de colo-
ration. M. Buchner termine cette démonstration, qui semble topique, en
prouvant que les cultures où on trouve de ces prétendues spores, au lieu
d’être plus résistantes à la dessiecation que celles ou il n’y en a pas, le sont
moins, ce qui est d'accord avec l'explication qui voit dans la concrétion:

protoplasmique une preuve de l’affaiblissement du bacille.
Dx.

INSTITUT PASTEUR. 519

V. TassivarI. Recherches expérimentales sur l’action de la fumée de tabac
sur les organismes en général, et surtout sur ceux qui sont pathogènes.
Centralbl., t. IV, p. 449.

M. Tassinari fait passer, en l’aspirant, la fumée d’un cigare ou d’une
cigarette, dans une chambre formée par deux entonnoirs abouchés, et dans
laquelle se trouve suspendue, au moyen d'un fi de platine, une bande de
tissu de lin effilochée, et imbibée d’une culture du microbe à étudier.
L'expérience terminée, qui dure 30 à 35 minutes et consomme moins de
5 grammes de tabac, on fait tomber le tissu dans un tube à gélatine où on
le traite par la méthode ordinæire. On trouve aussi que la fumée de trois
espèces de cigares ralentit le développement des microbes, et même arrête
tout à fait celui des bacilles du choléra asiatique, de Finkler et Prior,
et du typhus abdominal. La fumée de la cigarette ne donne qu'un léger
retard, qui est même en moyenne moins prononcé pour les bacilles que
tuait la fumée des cigares. Cette contradiction étonne, et on se demande s’il
n’y a pas quelque cause d'erreur. Il serait curieux de voir les fumeurs faire
de l’hygiène comme M. Jourdain faisait de ia prose, sans le savoir. DXx.

INSTITUT PASTEUR

Personnes traitées mortes de rage.

Couzinier (Jean), 65 ans. Courbevoie (Seine). — Mordu par un
chien le 12 septembre à l’arcade sourcillière droite : décollement
d’un lambeau de peau de 1 centimètre de largeur sur une étendue
de 4 centimètres. Deux autres morsures sur le front. Deux éra-
flures à l’avant-bras gauche et une autre à la jambe droite. Traité
du 12 septembre au 3 octobre. Le 6 octobre, Couzinier éprouve
des douleurs dans la cicatrice de l’arcade sourcilière. Il se plaint
de mal de tête. Le 8, il ressent des fourmillements surtout dans
la partie droite de la peau du crâne et de la figure. Il ne dort
pas et se plaint de douleurs dans les membres. Le 10, hydro-
phobie et aérophobie légères qui vont en augmentant le 11 et
s’accompagnent d'excitation. Mort le 14 à l'hôpital Broussais.

Le bulbe du chien mordeur a donné la rage en 12) ours aux
animaux auxquels il à été inoculé dans l'œil. Couzinier a été pris
de rage 3 jours après la fin du traitement.

80 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — SEPTEMBRE 1888

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4. La colonne À comprend les personnes mordues :par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement ; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; La colonne C les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 113 fois; chats, 8 fois.

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

2m ANNÉE. NOVEMBRE 1888. Ne 41
AQS\CA
ON 0258
ANNALES S

DE k
[1
\-

À

EFENS FEU PASTEUR

RECHERCHES SUR LE POLYMORPHISNE DU CLADOSPORIUN HERBARUM,

Par M. E. LAURENT.
(Suite.)

III

DEMATIUM PULLULANS (de Bary) !.

Sous ce nom, de Bary a décrit des masses mycéliennes qui
abondent dans les solutions organiques abandonnées à l'air. Ce
sont des filaments formés de cellules courtes, d’abord hyalines,
mais qui s’entourent plus tard de membranes épaissies d’un brun
olivätre ; les cellules deviennent alors renflées et paraissent arti-
culées. Jamais il n’y a formation de filaments aériens avec
conidies, mais, dans le liquide, il se produit souvent des cellules
formes-levures, qui bourgeonnent à la facon des cellules de
Levures.

Dans ses Études sur la bière (PI. IX, fig. G), M. Pasteur a
très bien figuré l'aspect du Dematium avec formes-levures, ré-
colté sur des grains de raisin plongés dans des solutions sucrées.

Cette mucédinée est extrèmement répandue; il n’est pas
possible de placer dans des solutions nutritives un fragment de
plante cueilli à l’air sans la voir apparaître. Elle est l'hôte habi-
tuel des liquides organiques préparés dans les laboratoires. Si
commune qu'elle soit, cette moisissure n'avait pourtant jusqu'ici
qu'une histoire très obscure.

1. Morphol. und Physiol. der Pilze, p. 182, 1866.
37

:
à M LE,
E y
re

982 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

E. Lœw en a fait l’objet d’une bonne étude ‘. Cet auteur a
remarqué la ressemblance du Dematium avec les filaments mycé-

K f (M del
Fig. 4. — Dematlium pullulans, sans formes-levures, observé dansune solution
d’acétate de potassium.

liens de Cladosporium, mais n’a pas cru devoir admettre une
communauté d’origine. Lœw a parfaitement observé la produc-

DA Moheue del
Fig. 5. — Dematium pullulans, avec formes-levures, G = 300.

tion de cellules formes-levures sur les filaments du Dematium.
M. Saccardo, dans son Sylloge Fungorum (vol. IV, p. 351),

1. E. Lœw, Ucber Dematium pullulans, in Jahrb. für wissensch. Botanik, t. VI,
p. 467, 1868.

CLADOSPORIUM HERBARUM. 583

indique le Dematium pullulans comme un état mycélien du Cla-
dosporium herbarum. Gette opinion n’est basée, d’après ce que
m a écrit le botaniste italien, que sur l’aspect des filaments mycé-
liens. |

M. Frank : rattache avec doute le Dematium au Pen. clado-
sporioides.

Pour M. Flügge *, le Dematium appartient vraisemblablement
au Fumago où au Pleospor«.

Enfin, tout récemment, M. Costantin * déclare identiques le
Dematium et le Cladosporium, sans en donner de preuve.

Depuis l’année 1884, j'ai eu fréquemment l’occasion de ren-
contrer le Dematium, et j'ai essayé en vain d’en obtenir des coni-
dies aériennes. En 1886, j'avais fortuitement observé, dans une
solution d’acétate de potassium, un Dematium dont les filaments
se prolongeaient par des appareils conidifères de Pen. clado-
sporioides. J'étais donc porté à admettre la mème origine pour ces
deux mucédinées, lorsque mes études sur le C/adosporium her-
barum me conduisirent à faire de nombreuses observations sur
le Dematium.

Dans les cultures du C/adosporium dans des milieux liquides,
on rencontre parfois, je l'ai déjà dit, des formes Dematium et
levures. Mais elles sont peu favorables à l'examen, car les
cellules formes-levures se séparent du filament et se répandent
dans le liquide nutritif. Il n’en est plus ainsi dans les cultures
sur milieux solides, principalement sur gélatine. On voit alors
les filaments mycéliens produire latéralement des formes-levures,
qui par bourgeonnement, constituent des colonies analogues à
celles des Levures cultivées sur gélatine. Ces colonies ne subis-
sent aucune altération tant que la gélatine reste solide.

Il s’en produit ainsi tout le long de chaque rameau ; elles sont
d'autant plus petites qu’elles sont plus rapprochées du sommet
du filament, au voisinage duquel on voit encore des formes-
levures isolées. Chacun des rameaux mycéliens est ainsi trans-
formé en un chapelet de colonies de formes-levures ; l’ensemble
du mycélium a l'aspect d’une étoile à rayons plus ou moins
nombreux fixée dans la couche de gélatine nutritive. L'examen

À. A. Frank, Synopsis der Pflanzenkunde, Band II, Kryptogamen, p. 610, 1886.
2. G. C. Flügge, traduction de F. Henrijean, les Microorganismes, p. 72, 1887.
3, J. Costantin, les Mucédinees simples, p. 144, 1888.

D84 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

microscopique à un faible grossissement en est des plus inté-
ressants. (Fig. 6.)

F (LE deb.
Fig. 6. — Un rameau d'une colonie étoilée de Dematium avec formes-
levures, cultivé sur gélatine. G = 60.

Cultivé sur gélatine, le Dematium avec cellules formes-levures
donne très rarement des filaments aériens avec conidies ; j'en

J L
LR. Je
ES + NS L

NP SE
RAS

\ 4,
SOS

Fig. T. — Six colonies de Dematium avec formes-levures, cultivé sur gélatine.
On voit toutes les transitions entre les colonies étoilées et les colonies
arrondies, analogues à celles des levures, G = 66.

CLADOSPORIUM HERBARUM. D8ù

ai cependant observé, à plusieurs reprises, qui n'étaient autres
que les appareils conidifères du Pen. cladosporioïdes. J'ai eu la
bonne fortune de constater le même fait dans des cultures de
pollen faites dans des solutions de saccharose concentrées, et avec
lesquelles il n’était presque pas possible d'éviter l’envahissement
par le Dematium des chambres humides placées sous le micros-
cope. Plusieurs mycéliums produisirent des filaments aériens
de Pen. cladosporioides.

Fig. 8. — Un rameau de Dematium avec formes-levures, terminé par un
appareil conidifère de Penicillium cladosporioiïdes, observé dans une
culture sur gélatine. G = 66.

Ces observations permettent de considérer le Dematium pul-
lulans comme une forme mycélienne, aquatique, du C/adospo-
rium herbarum.

Il convient de faire ici une remarque qui n’est pas sans im-
porlance dans cette question de polymorphisme. Le Cladosporium
donne sûrement du Pen. cladosporioïdes, mais toutes les conidies
de ces deux moisissures ne sont pas aptes à prendre l'aspect
dematium. J'ai pu le constater dans des centaines de cultures.
Il y a plus. Parmi les formes dematium, on rencontre toutes les
transitions entre des mycéliums vigoureux, dépourvus de formes-
levures, et des mycéliums réduits à quelques-unes de ces cellules.
Les premiers, cultivés sur gélatine, produisent du Pen. cladospo-
rioïdes ; ils ne sont pas encore dégénérés aussi profondément que
les formes demutium avec formes-levures, qui, elles, sont absolu-

586 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ment incapables de reprendre l'état conidifère aérien. Tous les
artifices de culture que j'ai employés : cultures sur tiges, sur
fruits stérilisés, dans les milieux organiques les plus variés, ne
m'ont jamais donné trace de retour au type originel.

J'étais donc arrivé à cette conclusion, pressentie par
MM. Frank et Saccardo, que le Dematium pullulans est un état
affaibli du Cladosporium herbarum. Une preuve expérimentale
était cependant nécessaire pour appuyer cette opinion. J’eus
recours à bien des essais sans arriver au résultat espéré. Dans
les milieux les plus pauvres (acétates..….), les spores de Clado-
sporium donnent des mycéliums avec filaments conidifères
typiques. Je n’ai pas été plus heureux avec l’emploi de la chaleur.
L'idée me vint d'essayer la lumière solaire. Des spores de Pen.
cladosporioides furent placées avec un peu de moût sucré dans des
tubes à essai couchés très obliquement sur du papier blanc. Le
tout fut exposé dans une serre, et recevait les rayons solaires,
en été, depuis 8 heures du matin jusqu’à 6 heures du soir. Des
tubes témoins se trouvaient non loin de là, sous une cloche
noire ; je me suis assuré que la température n'était pas sensible-
ment différente au voisinage immédiat de chaque série de tubes
mis en expérience. Après une insolation plus ou moins pro-
longée, les tubes furent retirés et j'y versai quelques centimètres
cubes de moût sucré stérilisé.

Voici alors ce qu'on observe. Les tubes qui n’ont été exposés
au soleil que pendant quelques heures ou durant deux ou trois
jours, ne tardent pas à présenter la couche mycélienne super-
ficielle si caractéristique du Cladosporium. Une insolation plus
longue, de quatre, cinq jours ou plus en été, de plusieurs semaines
au printemps, amène un changement bien marqué dans le déve-
loppement. Des masses mycéliennes apparaissent dans la pro-
fondeur du liquide sous forme de taches floconneuses, et l'examen
microscopique permet d'y reconnaître du dematium, encore assez
vigoureux, mais pourvu de formes-levures analogues à celles
que donne la culture du Dematium pullulans.

L'action de la lumière sur les Bactéries a été étudiée par
divers observateurs ‘, qui ont reconnu qu’elle affaiblit le pouvoir
germinatif et finit par tuer les spores de ces microbes. Mais c’est

4. Voir ces Annales, t. I, p. 88.

CLADOSPORIUM HERBARUM. 987

la première fois qu'une modification morphologique durable est
signalée parmi les champignons comme due à un agent physi-
que.

L'influence de la lumière explique suffisamment la fréquence
assez grande des formes dématioïdes dans les cultures de C/a-
dosporium recueillies sur des tiges ou des fruits exposés au soleil.

Il y a d'ailleurs un autre moyen d'arriver au même résultat.

Conservé à l'obscurité, le Cladosporium se modifie aussi avec
le temps: des cultures âgées de près de six mois ont aussi donné
des dematium avec formes-levures.

Il importe d'observer que, par suite de la modification
causée par la lumière, le champignon acquiert la propriété de se
développer dans la profondeur des liquides et même dans le
vide. Il est devenu partiellement anaérobie. Le Cladosporium
typique n’est nullement anaérobie ; ses spores refusent de germer
dans le vide.

Contrairement à ce qu’on pourrait croire, la diminution de
dimensions des conidies n’est pas un symptôme de dégénéres-
cence. Je me suis assuré que les spores les plus ténues, non affai-
blies par la lumière, donnent sur gélatine des mycéliums à fila-
ments grêles, mais néanmoins pourvus de rameaux conidifères
aériens.

Au bout de quelque temps, les cultures de Dematium sur
gélatine et sur pomme de terre changent d'aspect : elles perdent
leur teinte blanchàtre pour devenir d’un noir souvent très foncé.
Les filaments et les formes-levures cessent d’être hyalins, leur
membrane cellulaire s’épaissit, brunit fortement et le tout
rappelle les pellicules de fwmago, que l’on observe sur les
feuilles des plantes.

La même modification se produit aussi dans les cultures en
milieux liquides ; après un laps de temps de durée très variable,
on y trouve des amas de filaments et de formes-levures à mem-
brane épaissie et de couleur très foncée. C’est là, sans conteste,
un état favorable à la conservation du pouvoir germinatif, qui
correspond pour le Dematium aux spores des Bactéries. Lors de
la germination, ces kystes émettent des filaments de dematium
avec formes-levures; les plus volumineux, nés de formes affai-
blies, n’ont jamais reproduit l’état c/adosporium. Voilà donc un

588 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

champignon qui peut donner du dematium par dégénérescence,
sans que la transformation inverse paraisse possible à réaliser.

Les états dematium et fumago ne sont pas propres au Cl/ado-
sportum. Il en est de beaucoup moins répandus dans la nature,
qui appartiennent à d’autres moisissures (Al{ernaria tenus,
Penicillium glaucum, etc.). Eux aussi reviennent très difficile-
ment au type primitif, et il est souvent très difficile de déter-
miner, même par la culture, la nature spécifique de ces pro-
ductions cryptogamiques.

Une insolation prolongée complète la dégénérescence du
cladosporiun : la forme dematium diminue progressivement de
vigueur et tend à donner exclusivement des colonies de plus en
plus réduites. Des colonies étoilées très rameuses ne donnent
plus par ensemencement que des masses à un ou deux filaments
latéraux, et on arrive bientôt à des colonies arrondies comme celles
de la levure de bière (Voir fig. 7). Enfin, après une exposition
au soleil d'autant plus courte que les rayons sont plus ardents,
la plante meurt. Il n’est pas possible d'exprimer par des chiffres
la résistance du Dematium à la lumière solaire. Je l'ai vu détruit
après six jours d'insolation pendant le mois d'août 1887, tandis
qu'il a pu résister du 25 février au 7 avril 1888.

IV

FORMES-LEVURES DE CLADOSPORIUM HERBARUM ‘.

J'ai signalé la production de cellules à aspect de levures sur
les filaments mycéliens du Dematium dans les cultures sur gé-
latine et les solutions nutritives. Ces cellules se détachent rapi-
dement de leur support dans les cultures liquides. Isolées, elles
bourgeonnent à la façon des Levures ; plus rarement elles don-

1. Il y aurait peut-être lieu de réserver le terme levures aux champignons infé-
rieurs qui provoquent les fermentations alcooliques typiques (levures de bière. de
vin, etce…..). Les microbes qui leur ressemblent, mais qui sont dépourvus du carac-
tère ferment, seraient réunis sous le nom de Formes-Levures. Lorsque celles-ci
recouvrent la surface des liquides organiques, ce seraient des formes-levures my-
codermiques. Cette nomenclature empécherait de confondre des organismes, qui se
ressemblent au point de vue morphologique, mais qui sont doués de propriétés
physiologiques bien différentes.

CLADOSPORIUN HERBARUM. 589

nent des filaments germinatifs, qui ne tardent pas à prendre
l'état dematium ou fumago.

Fig. 9 — Forme-levure de cladosporium. G = 60.

Les formes-levures ont été signalées chez les champignons
par divers observateurs : par de Bary et Lœw pour le Dematium
pullulans ; par M. Cuboni pour le C/adosporium ; par M. Brefeld
pour des Ustilaginées ‘ et des Basidiomycètes ? ; par M. Duclaux
pour le Oidium lactis*. J'en ai observé chez plusieurs Ustila-
ginées non citées par M. Brefeld et chez le Tubercularia vulgaris.
Enfin, M. Massart en a obteru tout récemment dans la culture
du Lycoperdon cælatum.

Au moment de leur formation, toutes ces formes-levures sont
dépourvues du caractère ferment, mais conservent indéfiniment
cet état. 11 convient de rappeler que des Mucorinées, dont l’orga-
nisation est si distincte des champignons que je viens de citer,
ont aussi des formes-levures. Maïs la durée de l’état levure n’est
pas indéfinie.

La multiplicité des espèces qui peuvent engendrer des cel-
lules à aspect de levures, rend bien difficile à préciser l’origine
des formes-levures si répandues, surtout dans l'atmosphère.

Sous le nom de torulacées, M. Pasteur a étudié des formes-
levures rencontrées sur des grains de raisins, et qu'il rattachait
avec raison au Dematium pullulans. J'ai pu m'assurer, par la
culture, de la présence du Dematium et de ses formes-levures
sur les fruits les plus variés, principalement sur ceux de nature

4. Osc. Brefeld, Untersuchungen aus den Gesammtgebiete der Mykologie, Heft V,
Hefenpilze, Leipzig,. 1883.

2, Untersuchungen..…., Heft VIT, Basidiomyceten, 1888.

8. Duclaux, Microbiologie, p. 673, 1883.

590 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

pulpeuse. Ces productions sont aussi répandues sur les fruits
des espèces sauvages que sur les fraises, les cerises, les gro-
seilles, etc., récoltées dansles jardins et dans les serres. Toute-
fois elles sont bien plus abondantes en plein soleil que sur les
baies situées à l'ombre, où prédomine le C/adosporium typique.
Nous savons maintenant pourquoi. Les fruits protégés par un
épiderme résistant, comme les pommes, les poires, certaines
variétés de raisins. sont aussi peu favorables à la production des
formes dematiim et levures.

M. Pasteur a émis l’hypothèse que c'est parmi ces végéta-
tions superficielles que naissent les ferments alcooliques *. Il y
avait donc le plus grand intérêt à soumettre la forme-levure de
Cladosporium à une étude aussi complète que possible.

Pour obtenir une semence bien pure, je suis parti des colo-
nies plus ou moins rameuses que produit le Dematium cultivé
sur gélatine. Les cellules formes-levures sont le plus souvent
ovoïdes, mais on en voit de forme presque sphérique. Leur taille
est extrêmement variable dans la même culture : les dimensions
les plus communes sont 8 à 15 y pour le plus grand diamètre et
de # à 9 ÿ pour la largeur.

Presque toujours les cultures de forme-levure renferment un
nombre plus ou moins grand de filaments de Demattum, car le
passage de l’un à l’autre état ne cesse de se faire que dans les
races les plus affaiblies. Les renseignements qui vont suivre,
relatifs à l’histoire de la forme-levure de Cladosporium, s'appli-
quent par conséquent au Dematium pullulans, arrivé à l’état
producteur de cellules formes-levures.

Cultivée dans les solutions sucrées, moût de bière, de vin,
liquide de touraitlon sucré, etc., la forme-levure trouble bientôt
le liquide, le rend fortement visqueux et donne à la surface du
liquide une masse blanchâtre appliquée sur les parois du verre.
Dans les tubes à essai, et dans les matras Pasteur, il se produit
ainsi un anneau mycodermique assez caractéristique. À la
longue, cet anneau noircit par suite de l'épaississement et de la
subérisation des membranes. En même temps, la taille des cel-
lules devient beaucoup plus considérable ; elles se remplissent
de gouttelettes de matière grasse et revêtent l’état j'umago. Cette

A. Etudes sur la bière, p. 155, 18TG.

CLADOSPORIUM HERBARUM. )91

transformation n’a pas seulement lieu à la surface, elle se fait
aussi, mais avec plus de lenteur, dans la profondeur des solutions
sucrées.

Les cultures dans le vide ne présentent pas d'anneau myco-
dermique ; ilen est de même pour les cultures des races les plus
dégénérées.

La figure 7 représente l'aspect des colonies rameuses et non
rameuses du Dematium et de la forme-levure sur lame de géla-
tine. En tube de gélatine, après un ensemencement par piqüre
dans la masse, le développement est curieux à observer. A la
surface, c’est une colonie épaisse, blanchâtre, qui s'accroît
lentement et qui plus tard liquéfiera la gélatine. Tout le long de
la piqûre, il se produit des rameaux qui rayonnent vers la paroi
du tube. On ne peut mieux comparer l'aspect de la culture qu'à
une jeune racine de maïs développée dans une chambre humide
et couverte de poils radicaux.

Au sein de la gélatine, la pénétration de l'oxygène extérieur
esL fort difficile. 11 faut donc que la forme-levure possède le
pouvoir de croitre en l’absence d'air. Le Cladosporium typique,
dont elle provient, est au contraire, nettement aérobie. Les
produits de dégénérescence de ce champignon sont donc mieux
doués que le type originel pour ce qui est de la nutrition dans
la profondeur des liquides sucrés.

La forme-levure liquéfie la gélatine assez rapidement à la
température ordinaire : du sixième au huitième jour, la culture
a pris la consistance d'une matière extrèmement visqueuse. Je
me suis assuré que cette viscosité n'est point due à des gaines
gélatineuses analogues à celles qui sont si fréquentes chez beau-
coup d'organismes inférieurs.

Lorsque les cultures sur gélatine se dessèchent, les cellules
noircissent, se gonflent et forment des masses à aspect de
fumago. Gette modification se fait aussi bien à l’obscurité qu’à
la lumière.

J'ai fait aussi des cultures sur tranches, stérilisées à la
vapeur, de pomme de terre, de carotte, de navet, placées dans
de larges tubes à essais fermés par un tampon d’ouate.

Dans ces conditions, il se produit des pellicules visqueuses,
d'un blanc de crème, sur lesquelles on aperçoit çà et là un léger
duvet. dû aux productions filamenteuses de nature dématioïde.

592 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Ces pellicules noircissent aussi avec le temps; mais auparavant,
si on les expose à la lumière, même diffuse, elles acquièrent
une teinte rose assez marquée. J'ai fait des cultures compara-
tives à l'obscurité, à la lumière diffuse et en plein soleil. La
différence de coloration a toujours été des plus frappantes.
J’exposerai plus loin les résultats auxquels je suis parvenu par
la culture des formes devenues rouges à la lumière.

Pour ce qui est de la nutrition, la forme-levure de C/ados-
porium (et il en est de même du C/adosporium et du Dematium)
a des aptitudes extrêmement variées. Elle se nourrit avec facilité
des diverses matières sucrées, des peptones, de la gélatine pure,
des citrates, tartrates, malates, succinates, lactates et acétates ;
elle végète dans des solutions minérales appropriées additionnées
de glycérine, de divers glycosides et même de certains alcaloïdes
(colchicine, atropine). |

Le Cladosporium et ses formes réduites intervertissent la
saccharose, attaquent jusqu’à un certain point les albuminoïdes
et peuvent même se nourrir de matière amylacée à l’état d’em-
pois.

La forme-levure préfère les milieux acides; elle résiste à
15 millièmes d'acide tartrique, à 25 millièmes d'acide lactique.
Toutefois, elle parvient à croître dans des moûts udditionnés de
5 millièmes de soude caustique ; une proportion de 1 0/0 de cet
alcali entrave la croissance.

J'ai remarqué que la liquéfaction de la gélatine est un peu
plus rapide dans les cullures en gélatine alcaline ; il y apparait
aussi de bonne heure des formes fwmago, qui trahissent un état
de souffrance.

Les grosses cellules noires ainsi produites peuvent, à la ger-
mination, donner des filaments dématioïdes. Le retour de la
forme-levure ordinaire à l’état dematium est donc aussi facile à
réaliser que la transformation inverse.

Comme pouvoir d'assimilation pour les substances organi-
ques, il n’y a guère que le Penicillium glaucum et la Levure de
bière! qui puissent rivaliser avec le C/adosporium et ses états
polymorphes. Ceux-ci se laissent cultiver sans difficulté dans
les solutions minérales qui renferment, outre un aliment azoté,

1. E. Laurent, Sur les aliments organiques de la Levure de bière, in Bull. Soc.
bot. de Belgique, t. XXVII, 1888.

CLADOSPORIUM HERBARUM. 293

un peu de phosphate de potassium et de sulfate de magnésium
associé à l’une des matières combustibles dont je viens de faire
l'énumération ‘. La nature ammoniacale ou nitrique de l’engrais
n'est pas indifférente.

Le Cladosporium préfère les nitrates : il pousse moins bien
dans les solutions qui contiennent du sulfate d’ammoniaque.
Voici les résultats de cultures comparatives faites dans des
solutions renfermant des quantités équivalentes d'azote, de
nitrate de sodium et de sulfate d'ammoniaque et une proportion
de saccharose égale à 2,5 0/0.

Matière sèche produite pour 20 centimètres cubes du mélange
après vingt jours de végétation à la température de 20 à 22° :

l Il
Avec le nitrate de sodium . . .. 0,203 gr. ‘: 0,1895 gr.
Avec le sulfate d’ammoniaque . . 0,164 0,120

11 n’en est pas de même de la forme-levure, qui donne un
poids de cellules toujours plus élevé dans la solution ammonie-
cale. Trois races différentes ont été cultivées dans les mêmes
conditions que ie Cladosporium :

I Il III
Avec le nitrate de sodium . . 0,0795 gr. 0,078 gr. 0,035 cr.
Avec le sulfate d’ammoniaque. 0,090 0,0895 0,058

L'addition de sulfate de sodium à 1 p. 100 aux deux solu-
tons ne modifie en rien les résultats ; ils sont donc bien l’effet
de l’action différente des nitrates et des sels ammoniacaux.

Un examen attentif des cultures montre que dans la solution
ammoniacale, il y a l'anneau mycodermique habituel, et que le
liquide est devenu très visqueux. Dans le mélange nitrique, ni

1. Voici la composition du mélange salin que j'emploie le plus fréquemment
dans la culture des microbes ; il a été calculé d’après la composition de la levure
de bière et convient à une foule d'organismes :

EAU TS NET MS NC UNI EE : 4000 cc.
Nitrate de sodium Fee 6,07 gr.
ou sulfate d'ammoniaque. . . ... 4,71
Phosphate de potassium ...... 0,75
Sulfate de magnésium. . ...... 0,10

Une matière organique

Pour les champignons, il est utile d'ajouter un millième d'acide tartrique ; le
liquide doit être légèrement alcalinisé s’il est destiné aux Bactéries.

094 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

anneau mycodermique ni viscosité. Ce n'est pas tout. Le
microscope révèle une différence d'un autre ordre. La solution
nitrique favorise le développement de filaments dématioïdes
(fig. 10), tandis que dans la solution ammoniacale, ce sont les

£ Mehei del
Fig. 40. — Forme-levure cultivée dans la solution nitrique. G = 200.

cellules formes-levures qui prédominent à l'exclusion presque
complète de productions filamenteuses (fig. 11).

Fig. 41. — Forme-levure cultivée dans la solution ammoniacale. G = 180.

Une relation paraît exister entre cette influence du nitrate
de sodium sur la forme-levure et la préférence du C/adosporium
pour le même sel. Il n’est pas non plus impossible que l’obser-
vation actuelle puisse être rapprochée de l’action presque nulle
des nitrates sur le développement de la Levure de bière.

La forme-levure, et il en est de même du C/adosporium, réduit
les nitrates en nitrites. La réaction qui nous a servi à vérifier ce
fait est celle du chlorure de naphtylamine et de l’acide sulfo-
anilique.

CLADOSPORIUM HERBARUN. 295

Dans les milieux peu nutritifs, la forme-levure passe
rapidement à l'état fusnago, et souvent aussi ses cellules se
remplisssent de nombreux globules gras, de dimensions parfois
considérables.

Comme dans la grande majorité des champignons, le C/ados-
porium, et surtout ses formes-levures, se prêtent très bien à la
formation de réserves hydrocarbonées, qui s'accumulent dans
les cellules à l’état de glycogène, et que l’iode colore en rouge
brun plus ou moins foncé. La réaction est surtout bien visible
dans les cultures sur gélatine, avant le moment de la liquéfac-
tion. Dès que les cellules peuvent reprendre leur croissance
sans obstacle, comme dans les liquides, la réserve ne tarde pas
à disparaitre.

Cultivée dans les solutions sucrées, de maltose, de glycose
ou de sucre interverti, la forme-levure normale est dépourvue
du caractère ferment. Cependant il se produit un peu d’alcool
par suite de la continuation de la vie dans la profondeur des
liquides. La proportion d'alcool ainsi formée est toujours très
faible ; à diverses reprises, j'ai trouvé, dans des moûts sucrés à
5 0/0, de 0,6 à 1 0/0 d'alcool après un mois de végétation.

La forme-levure se distingue en outre des vraies Levures par
l'absence d’endospores. J'ai fait de très nombreux essais, à des
températures variées, surtout sur le plâtre, en vue d'observer la
production de spores internes. Jamais la forme normale ne m’en
a donné, tandis que des cultures simultanées de Levures de
bière et de vin m’en produisaient en abondance. Plusieurs fois,
cependant, j'avais cru en avoir observé ; mais ce n'étaient que des
corps gras réunis par deux, trois ou quatre dans chaque cellule.
Le contact prolongé de l’éther les faisait disparaître et enlevait
toute illusion.

Je me suis assuré par la culture que la forme-levure ne
peut pas non plus produire de végétations mycodermiques à la
surface des liquides alcooliques (vin et bière).

Il semble donc que les cellules bourgeonnantes de dema-
tium soient absolument différentes des Levures. Néanmoins,
j'estime que rien ne nous autorise à abandonner l'hypothèse
de M. Pasteur sur l’origine des ferments alcooliques, et j'indi-
querai bientôt des faits probants dans cet ordre d'idées.

296 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Je ne veux insister pour le moment que sur la production
de races de formes-levures de Cladosporium à colonies roses sur
pomme de terre. J'avais eu l’occasion de l’observer pendant le
mois de décembre 1887, mais je n’y avais pas attaché grande
importance parce que cette variation ne m’avait pas paru per-
sister dans des cultures successives. Pendant le mois de sep-
tembre dernier, une petite forme-levure de Cladosporium, trou-
vée sur des groseilles desséchées, fut exposée au soleil, et compa-
rativement à l'obscurité, afin d’en étudier les modifications. Je
fus très surpris de trouver, au bout de quelque temps, dans les
tubes exposés au soleil, non seulement la dégradation morpho-
logique dont j'ai déjà parlé, mais encore la formation d’un an-
neau rose au niveau du liquide. Des cultures faites sur gélatine
avec des cellules contenues dans les tubes insolés et non insolés,
m'ont fourni des résultats bien différents. Celles qui provenaient
de tubes conservés à l'obscurité ont produit des colonies pour la
plupart étoilées et blanches comme d'habitude. Elles liquéfiaient
la gélatine au bout de six ou sept jours. Les cultures provenant
d’une semence exposée au seleil pendant deux jours ne diffé-
raient guère des premières. Quatre jours d’insolation avaient
provoqué la production de colonies à contour arrondi, carac-
tère du à l’action débilitante des radiations solaires. Les plus
superficielles présentèrent, dès le troisième jour, une nuance
rose qui s’accentua au point de donner des productions absolu-
ment semblables à la forme-levure rose, si répandue dans les
eaux et l'atmosphère. J’en avais en culture au moment de ces
expériences. La ressemblance des colonies et des cellules n’au-
rait permis aucune distinction pour l'œil le plus exercé. Les cel-
lules, assez allongées sur la gélatine (fig. 12), devenaient fplus
arrondies sur tranches de pommes de terre (fig. 13).

A O ©}
N D) PACS EE) 9 0
ERA TC CEE ,
4 )
p AN D ne .
Fig. 12. — Forme-levure deCla- Fig. 13. — La même, cultivée
dosporium rose, cultivé sur gé- sur pomme de terre. G —600,

latine. G = 600.

CLADOSPORIUM HERBARUM. 597

La forme-levure rose de l'air (Saccharomyces ou Crypto-
coccus glutinis de Frésénius et de Cohn, Rosahefe des auteurs
allemands modernes) a été l’objet de nombreuses observations.
M. Hansen : croit qu'il en existe plusieurs espèces ?, les unes à
cellules arrondies, une autre à rameaux germinatifs *.

La forme-levure rose de C/adosporium diffère, 1l est vrai,
quelque peu de la forme-levure rose de l’air : dans les liquides
sucrés, la coloration est moins nette ; elle liquéfie aussi la gélatine
plus tôt, el il y a plus souvent qu'avec ia forme-levure rose de
l'air développement dans les cultures de rameaux latéraux sem-
blables à ceux du dematium cultivé sur gélatine. Il se produit
ainsi des formes dematium roses. Cette diversité d'aspect
montre que l'insolation n’avait pas encore affaibli la descendance
d'une façon égale pour tous les individus d'une même race. Il y
en avait de plus atteints les uns que les autres. Dès lors, il nous
est possible de comprendre et d'expliquer l'existence dans l'air
de plusieurs races de forme-levure rose, comme l'avait observé
M. Hansen. Rien ne nous dit, d’ailleurs, que d’autres champi-
gnons ne puissent donner des formes-levures analogues.

Il me paraît, en effet, assez probable que les mycéliums roses
que l’on trouve souvent sur les lames de gélatine exposées à
l’air, dérivent aussi de spores influencées par la lumière solaire,
Beaucoup de ces mycéliums appartiennent au Peziza Sclerotio-
rum (Botrytis cinerea). Daus les cultures, ils perdent aisément
leur matière colorante et retournent aux types spécifiques, tan-
dis que la forme-levure rose de l’air ne m'a jamais présenté de
variation incolore, et semble par conséquent plus stable.

Action de la chaleur. — Comme la plupart des microbes
ubiquistes, la forme-levure de Cladosporium se montre peu dif-
ficile au point de vue de la température. A 6°, le développement
en est bien marqué: il ne cesse qu'à 38°; l’optimum de crois-
sance est compris entre 26° et 30°.

Le chauffage dans l’eau à 45°, pendant cinq minutes, des

1. Compte rendu du laboratoire de Carlsberg, 1879, p. 81.

2, Il vaudrait mieux employer le mot races.

3. Pour l’une d'elles, cet auteur dit avoir observé des endospores. Bien sou-
vent, j'ai voulu vérifier ce fait : tout ce que j'ai obtenu, c'était des corps gras qui
simulaient des spores de la manière la plus parfaite, mais disparaissaient à la
longue dans l’éther.

38

598 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

cellules de la forme-levure et des conidies de C/adosporium, at-
faiblit fortement le pouvoir germinatif; pour la première, les
cellules courtes prédominent au détriment des formes fila-
menteuses. La température de 48° pendant cinq minutes est
mortelle.

Si le chauffage se fait à sec, il faut élever la température à
100° pendant le temps indiqué pour détruire la vitalité des
germes.

Je n'ai pas indiqué la production de formes dégénérées dans
le chauffage des spores du Cladosporium ; on y parviendrait peut-
être par une action plus longue de la chaleur, plus favorable à
une oxydation lente du protoplasme.

Action du temps. — La forme-levure de Cladosporium et ses
variétés sont extrêmement répandues dans l’air et même dans
les couches superficielles du sol. Des centaines de lames ont
depuis deux ans été exposées à l'air dans des localités diverses.
Toujours j'ai rencontré des colonies éloilées ou arrondies de
dématium et de forme-levure, que la culture m’a permis de rap-
porter au Cladosporium. ne faut donc pas s'étonner si les fruits
charnus portent des légions de cellules, tant à l’état de Cladospo-
rium que sous l'aspect de dematium et de formes-levures. J’en ai
compté des milliers sur des fraises, des cerises et des raisins de
moyenne grosseur, récoltés avec toutes les précautions exigées
en pareille circonstance.

Cette abondance de germes d'une même espèce s'explique
beaucoup mieux par la facilité avec laquelle ces moisissures se
nourrissent des substances les plus variées que par la durée du
pouvoir germinatif des spores. Les conidies du Cladosporium et
du Pen. cladosporioides, ainsi que les cellules hyalines ou noires
de dematium et de forme-levure, ne tardent pas à s’altérer, surtout
au contact de l’air. Après six mois, des conidies de Pen. clados-
porioïdes cultivé sur gélatine en tubes à essais et conservé à l’obs-
curité, sont restées inertes sur gélatine comme dans les moûls
sucrés. J'en ai vu d’autres se développer après trois, quatre ou
cinq mois de conservation dans les mêmes conditions. Les cel-
lules hyalines de la forme-levure ne résistent pas pendant un
temps plus long; même dans des ampoules de verre, elles ont
été trouvées mortes après neuf mois, malgré l'absence d’air. Par
contre, les cellules qui ont pris l'aspect fumago sont plus résis-

CLADOSPORIUM HERBARUM. 599

tantes ; j'en ai vu se développer vigoureusement après dix mois
de séjour dans un matras Pasteur placé à l'obscurité.

D'après M. Duclaux !, les conidies de Penicillium glaucum
sont encore vivantes après six années de conservation à sec. Le
Cladosporium, quoique très répandu comme le Pen. glaucum, est
donc moins bien doué pour ce qui est de la longévité des germes.
Par contre, il résiste beaucoup mieux que celui-ci à l'influence
de la lumière solaire, qui est rapidement mortelle pour les spores
de Penicillium glaucum. Ainsi s'explique la prépondérance du
Cladosporium dans la nature.

N?
FuMAGo DE CLADOSPORIUM HERBARUM.

Les botanistes s'accordent généralement à appeler fumago
des productions noirâtres qui recouvrent les feuilles de plantes,
surtout des espèces atteintes de la miellée. M. Zopf* a montré la
variété des aspects que présente le Fumago, surtout en ce qui
concerne la production des conidies. Il en a également signalé
la forme-levure.

J'ai été amené, dans le cours de ces recherches, à faire un
grand nombre de cultures sur gélatine de fumayos récoltés sur
des plantes très variées dans les diverses régions de l'Europe et
mème dans les pays tropicaux. Il résulte de ces essais que ces
productions se rapportent à plusieurs types, au moins à deux ou
trois que je crois bien distincts, mais parmi lesquels le Clados-
porium herbarum est le plus commun. Bien souvent les cultures
sur gélatine de fumugo recueilli sur des plantes de pleine terre
et de serres, surtout sur oranger, m'ont donné du Pen. cludospo-
rioides, du Dematium pullulans et la forme-levure de Cladosporium.
Comme ou le voit, l’action solaire a pu dans ce cas modifier
profondément les cellules du Cladosporium. J'aurais voulu réa-
liser expérimentalement la transformation de ces derniers en
fumago sur les feuilles des plantes les plus sujettes à ce dévelop-
pement cryptogamique. Il n'est pas possible de les stériliser
sûrement sans les tuer, ce qui modifie les conditions de vie des

4. E. Duclaux, Sur la durée de la vie chez les germes des microbes, In Ann.
de chimie et de physique, 6e série, t. V, 1885.
2. Zopf, Die Conidien fruchte von Fumago, in Nova asta der Leop. Carol.,t XL, p.157:

600 ANNALES. DE L'INSTITUT PASTEUR.

champignons superficiels. Mais, sur gélatine et surtout sur
pomme de terre, j'ai observé bien souvent la formation d'états
fumago dérivés de cultures de dematium et de Cladosporium. Il
n’y a donc aucune raison pour laquelle les conidies de ce cham-
pignon et de ses formes végétatives ne puissent se développer
sur les feuilles recouvertes de matières sucrées.

Fig. 15. — Fumago produit par la forme-levure cultivée dans une solution
minérale additionnée de colchicine. G = 200.

Fig. 16.— Fumago de forme-levure cultivée dans un liquide sucré. G = 200.

Il convient de remarquer que je réunis sous le nom de fumago
de Cladosporium des productions dérivées d'états très différents
de ce champignon. Ainsi les conidies de Cladosporium typique et

CLADOSPORIUM HERBARUM, 601

de Pen. cladosporioïdes, les cellules de dematium et de forme-
levure blanche peuvent revêtir l’aspect de grosses cellules, vérita-
bles kystes à membranes épaisses et brunes. Ce ne sont là que des
états plus résistants, auxquels on ne peut accorder, au point de
vue du polymorphisme, l'importance des formes dematium et
levure. J'ai déjà fait remarquer que celle-ci retourne à celle-
là par l'intermédiaire d’un état fumago, dans lequel on pourrait
voir une forme de retour vers le type immédiatement supérieur,
le Dematium. C’est là un exemple d'évolution progressive qui
se manifeste dans le développement des formes très dégénérées
de Cladosporium.

Quand il vit à l’état de fumago sur les feuilles des Fe
le Cladosporium n'est pas un vrai parasite : il se nourrit des
matières sucrées diffusées au travers de l'épiderme par suite d'un
état maladif des tissus foliaires. Il est cependant des cas où le
Cladosporium prend des allures parasitiques plus nettes. C'est ce
que j'ai pu constater en Belgique sur des ananas magnifiques,
cultivés dans des conditions d'humidité telles que les fruits
étaient atteints de gommose, etse laissaient pénétrer par des fila-
ments mycélieus. Ceux-ci appartenaient à une race grêle de
Cladosporium avec formes dematium et levure. Le mycélium pro-
voquait une rapide décomposition des tissus atteints. La maladie
disparut avec la cessation de l'humidité excessive dont on entou-
rait les plantes.

J'ai pu me convaincre également que certaines affections da
plantes de grande culture (pourriture des feuilles de betteraves,
caroltes…,) sont également dues à des races de Cladosporium.

I n'y a pour moi pas le moindre doute que des états de déve-
loppement du Cladosporium ont été à diverses reprises décrits par
des botanistes trop désireux de créer des noms nouveaux. C’est
ce qui ressort de l’examen des travaux des anciens mycologues.
Mais le laconisme des descriptions ne permet guère de faire des
identifications certaines.

VI
Resireint aux résultats obtenus dans le cours des présentes
recherches, le polymorphisme du Cladosporium herbarum peut

suggérer quelques réflexions sur la nomenclature des Hypho-
mycèles.

602 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

D'après mes observations, ce champignon peut présenter les
états suivants :

1. Cladosporium herbarum {type naturel) ;

2. Penicillium cladosporioïdes :

3. Dematium (pullulans) sans cellules formes-levures ;

4. _— — avec cellules formes-levures ;
5. Forme-levure blanche ou torulacée de M. Pasteur.
6. — NÉLOSEE

7. Fumago ou état d’enkystement commun aux cinq pre-
mières formes.

En laissant de côté les Fumago, on peut classer ces états de
développement en deux groupes : Le premier comprend les
numéros { et 2 et on peut y réunir le n° 3 dépourvu de conidies
aquatiques, mais capable de produire des conidies aériennes. Le
second groupe est formé des n° 4, 5 et 6, à conidies unique-
ment aquatiques. Les formes du premier groupe ne peuvent
donner celles du second sans l'intervention de causes qui affai-
blissent l'organisme. Et les races suffisamment affaiblies n’ont
jamais repris l’état dont elles ne sont que des produits dégé-
nérés,

On se trouve daus la nécessité de désigner ces formes sous
des noms différents pour éviler des descriptions sommaires.

Comme on le voit, la nomenclature des organismes inférieurs
n'aura jamais la précision qui en fait le mérite chez les êtres
supérieurs à développement défini.

Néanmoins une réforme complète du langage botanique
appliqué aux Hyphomycètes serait à souhaiter et pourrait être
réalisée au fur et à mesure des progrès des études. En admettant,
ce quejenecroispas, que le C/adosporium herbarum ne se rapporte
à aucun champignon d'organisation plus élevée, il y aurait avan-
tage à en désigner les états végétatifs de la manière suivante :
forme penicillium, forme dematium, forme-levure blanche,
forme-levure rose, fumago.

Cette réforme, toute radicale qu'elle puisse paraître, s’impo-
sera tôt ou tard; elle sera le corollaire nécessaire de l'étude
expérimentale des Hyphomycètes.

Jusqu'ici, je me suis abstenu d'émettre une hypothèse sur
l'état ascomycète du Cladosporium herbarum. Ce n'est pas le
Pleospora herbarum, dont j'ai obtenu les périthèces dans la cul-

CLADOSPORIUM HERBARUM, 603

ture de l'A/{ernaria tenuis. semble même, d'après mes observa-
tions, ne pas exister d'affinité très grande entre le C/adosporium
et l’Alfernaria. X est très vraisemblable que la forme ascospore
du premier n’est autre que le Capnodium salicinum, auquel jus-
qu'ici les mycologues ont attribué exclusivement les fumago
folaires. J'aurais voulu vérifier cette hypothèse par la culture
des ascopores de Capnodium, mais je n’en ai jamais rencontré
pendant la durée de ces recherches.

Il n'est pas inutile, pour la compréhension du polymorphisme
des êtres inférieurs, de mettre en relief l’idée générale à déduire
des recherches actuelles.

Le Cladosporium est un exemple d'organisme capable de
conserver indéfiniment son état végétatif avec conidies aérien-
nes. L'influence de la lumière, ainsi que du temps, modifie
l'organisation de ce champignon au point de lui faire prendre
des états absolument distincts, aussi persistants que la forme
typique (dematium, formes-levures blanche et rose).

Ua tel polymorphisme n’est nullement comparable à la suc-
cession des états conidiens et ascomycètes (Botrytis et Peziza
Sclerotiorum), ni à l'alternance des appareils sporifères des
champignons parasites qui vivent sur des plantes d'espèces dif-
férentes (des Urédinées).

Dans un prochain travail, je démontrerai que les variations
morphologiques et surtout physiologiques sont chez les Bacté-
ries encore bien plus remarquables ‘,

4. Travail fait au laboratoire de physiologie végétale de l'Université de Bruxelles,
et au laboratoire de microbiologie de la Sorbonne, à Paris.

RÉPONSE À LA CRITIQUE DE M. WEIGERT

AU SUJET DES CELLULES GÉANTES DE LA TUBERCULOSE,

Par M. EL. METCHNIKOFF.

Dans une publication récente (Fortschritte der Medicin,
4e nov. 1888) M. Weigert fait une critique détaillée de mes vues !
sur les cellules géantes et sur leur rôle phagocytaire dans la
tuberculose, critique qui, à son avis, l’autorise à maintenir sa
théorie bien connue des cellules géantes et à rejeter la mienne.

Les principaux arguments de mon savant adversaire se
résument comme il suit :

1° Le pouvoir digestif des phagocytes envers les microbes
serait fort douteux, à raison de ce que les diastases secrétées
dans l'intestin et notamment la trypsine sont inoffensives même
pour les bactéries non pathogènes.

2° Les phénomènes décrits comme montrantla dégénérescence
des bacilles dans l’intérieur des cellules géantes seraient inter-
prétés par moi d’une façon arbitraire, et pourraient aussi bien
être interprétés comme prouvant une dégénérescence du proto-
plasma entourant les bacilles.

3° Même en admettant que les corps jaunes en forme de sau-
cissons, que j'ai décrits, soient des bacilles dégénérés, on ne
saurait y voir, comme je le fais, le résultat de l’action des cellules
géantes sur les bacilles vivants. M. Weigert trouve tout aussi
probable que cette action se manifeste justement sur les bacilles
« morts auparavant sous l’action d’autres facteurs » non déter-
minés.

4° Les faits d'anatomie pathologique parleraient, d’après
M. Weigert, contre ma théorie, d’abord en nous disant que les
individus jeunes sont plus sensibles à la tuberculose que les
vieux, et ensuite par ce que c’est dans les organes riches en
cellules, et notamment dans les follicules intestinaux, que les

1. Virchow’s Archiv., t. CXIIT. Voir aussi Annales, t. II, p. 503.

RÉPONSE À M. WEIGERT. 605

tubercules se développent le plus aisément. Dans les follicules
à l'état paystologique, les leucocytes pénètrent jusqu’à la surface
même. Ils devraient donc protéger les follicules contre l’agres-
sion des bacilles tuberculeux; mais en réalité c'est justement
l'inverse qui a lieu. Enfin, « l’inflammation n’est pas non plus
en état d’entraver la marche progressive des bacilles, quoique
une grande quantité de phagocytes apparaisse sur le champ de
bataille. »

5° Le rôle phagocytaire des cellules géantes de la tuberculose
ne serait point prouvé pour M. Weigert, parce que leurs mou-
vements amiboïdes n’ont pas été observés directement, et que les
corps étrangers contenus dans ces cellules avaient peut-être déjà
été englobés pendant l’état mononucléaire de la cellule, état
précédant sa transformation en cellule géante. M, Weigert, s’ap-
puyant sur le fait que, sur les préparations faites d'après les
méthodes usuelles, les véritables pseu lopodes des leucocytes
disparaissent complètement, tandis que les prolongements si
nombreux des cellules géantes persistent, admet que ces der-
niers sont immobiles.

6° La division des cellules géantes, décrite dans mon
Mémoire, ne serait pas prouvée pour M. Weigert, ce qui lui
permet d'insister sur sa théorie, d'après laquelle la production
de ces cellules serait précisément due à l'impossibilité de division
du protoplasma. M. Weigert cite en faveur de cette opinion les
expériences de M. Chabry qui a réussi à entraver la division de
l'œuf des ascidies à l’aide d’une pression exercée sur son
contenu, pression qui n'était pas assez forte pour empêcher la
division des noyaux.

En résumant la critique de M. Weigert, j'ai omis sa discussion
sur la signification des différentes colorations des bacilles, parce
que cette partie de son Mémoire n’a qu’une relation d'ordre
secondaire avec la question principale qui nous occupe.

Il va sans dire que les objections d’un savant aussi éminent
que M. Weigert devaient attirer mon attention d'une façon
toute particulière, d'autant plus que, n'étant pas médecin, c’est
justement des pathologistes que j'aurais le plus à apprendre, et
voici ce que j'ai à répondre aux criliques résumées dans les six
paragraphes précédents.

1. D'abord, le pouvoir digestif des phagocytes doit être

606 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

comparé, non à la digestion intestinale des animaux supérieurs,
mais de préférence à la digestion intracellulaire indubitable des
protozoaires. Or nous observons chez les Rhizopodes et les
Infusoires des phénomènes de digestion des bactéridies, qui sont
tout à fait semblables à la destruction ordinaire des bactéridies
et de divers autres microbes par les phagocytes. Nos connais-
sances, il est vrai, ne sont pas encore assez avancées pour déter-
miner le rôle des diastases et d’autres substances qui les accom-
pagnent dans la digestion intracellulaire des protozoaires et des
phagocytes, mais on peut pourtant exprimer la supposition
qu'il s’agit là aussi d’une action zymotique intracellulaire, comme
je tâcherai de le démontrer dans un travail prochain. En tout cas,
je dois rappeler que beaucoup de Protozoaires, incapables de
digérer même l’albumine coagulée, dissolvent parfaitement la
cellulose, qui pourtant reste intacte sous l'influence des diastases
intestinales des animaux supérieurs. Voilà donc un cas dans
lequel l’objection, d'ordre général, de M. Weigert, ne s'applique
pas.

2. Après avoir maintes fois observé la dégénérescence jaune
des bacilles tuberculeux dans les cellules géantes’, je déclare
comme absolument inadmissible la supposition d’une transfor-
mation du protoplasma entourant les bacilles. Les contours de
ces derniers dans tous les stades de dégénéralion sont tellement
nets et précis qu'il ne peut rester le moindre doute sur ce point
capital de la question.

3. L'objection principale formulée par M. Weigert est celle
où il admet que la dégénéralion jaune, quoique produite par l'in-
fluence des cellules géantes, s'opère non sur les bacilles vivants,
mais sur les cadavres de ces bacilles morts d'avance sous l’action
des facteurs étrangers aux cellules. C'est déjà quelque chose que
M. Weigert accepte l'idée d'une action cellulaire spécifique sur
les bacilles, et qu'il ne nous réduise plus qu’à discuter la question
de savoir si cette action s'exerce sur les bacilles vivants ou sur
les bacilles morts. À ce sujet il faut remarquer d’abord que les
bacilles tuberculeux sont dans tous les cas englobés par les
cellules dans un bref délai de quelques heures, et ne restent en

1. Au printemps de l'année courante, j'ai répété encore une fois mes expériences

sur Ja tuberculose des spermophiles, et le résultat que j'ai obtenu a été absolu-
ment conforme à mes recherches antérieures.

RÉPONSE A M. WEIGERT. 607
général libres que très peu de temps, de sorte qu'à partir de ce
temps ils ne subissent plus que l'influence directe intracellu-
laire. Comment se fait-il alors, qu’on puisse constater encore les
premiers stades de la dégénérescence, trois mois après l'inocu-
lation, c'est-à-dire, si les idées de M. Weigert sont exactes, trois
mois après la pénétration post mortem des bacilles dans les
cellules? Du reste M. Weigert n’indique pas, même sous forme
d'hypothèse, en quoi pourrait consister cette influence extracel-
lulaire, nuisible en si peu de temps aux bactéries pourtant si
résistantes de la tuberculose.

En injectant dans la veine de l'oreille d'un lapin 1° de
culture de ces bacilles, après les avoir tués par l’ébullition,
je n’ai pu les retrouver ni dans la rate, ni dans le foie, en
sacrifiant l'animal vingt jours après l'expérience. Il ne s'était
donc pas produit de ces corps jaunes si caractéristiques pour
les bacilles détruits par les cellules géantes. En injectant la
méme culture stérilisée dans la chambre antérieure de l'œil du
lapin, j'ai trouvé, vingt jours après, dans l’intérieur des macro-
phages, un certain nombre de bacilles tuberculeux colorés pour
la plupart en rose (coloration double par la fuchsine et le bleu
de méthylène); quelques bacilles étaient d’une couleur très pâle
rose bleuâtre. Ainsi les bacilles morts par une cause étrangère
aux phagocytes ne présentaient pas la transformation qui nous
intéresse.

A mes expériences antérieures sur les spermophiles, auxquels
jinoculais des émulsions de cultures qui pouvaient contenir
beaucoup de bacilles morts par eux-mêmes, on pouvait objecter
(ce que M. Weigert n'a d’ailleurs pas fait), que ces bacilles
étaient précisément les matériaux de formation des corps jaunes.
Contre cette objection, je peux citer le fait suivant. Après avoir
injecté, dans la cavité abdominale d’un cobaye, une émulsion
de rate d'un lapin tuberculeux ! , j'ai observé, 36 jours après,
ces mêmes stades de transformation des bacilles en corps jaunes
en forme de saucisson, seulement dans un degré beaucoup
moindre que chez les spermophiles. Ainsi donc les bacilles
provenant non de cultures, mais d'organes tuberculeux, présen-
tent les mêmes phénomènes de dégénérescence.

1. Ce lapin était mort dix-sept jours après une injection intraveineuse d'une
culture virulente de bacilles tuberculeux.

608 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Si on me répliquait que, malgré tous ces faits, on peut tout
de même admettre une influence hypothétique extracellulaire qui
se manifesterait sur les bacilles pendant le temps très court de

leur séjour hors des cellules, je demanderais au moins des
preuves d’analogie et des renseignements plus précis sur la
nature possible de cette influence. Je rappellerais aussi qu'il est
absolument impossible d'observer les mêmes individus bacillaires
dans leur état transformé et dans leur état antérieur, vu que les
bacilles ne peuvent être montrés dans les tissus qu'après avoir
été tués et colorés.

4. I n’est nullement nécessaire que les phénomènes intracel-
lulaires, servant à détruire les bacilles tuberculeux, soient plus
développés chez les individus jeunes que chez les adultes ou les
vieillards. La propriété bactéricide des cellules géantes peut très
bien être moins active chez l'enfant, et se comporter comme le
pouvoir digestif envers différents aliments, qui sont supportés par
l'enfant moins facilement que par les personnes âgées.

Enfin, les leucocytes parvenus à la surface de l'intestin, ainsi
que les cellules émigrées pendant l'inflammation, ne sont ordi-
nairement pas en état de détruire les bacilles tuberculeux, parce
que ces cellules sont, en grande majorité, des microphages
qui, comme je l’ai mentionné plusieurs fois, ne sont pas capables
de tuer ces bacilles, quoi qu’elles les englobent facilement. Les
cellules géantes appropriées à cette destruction sont précisément
des macrophages.

5. La remarque de M. Weigert. que les corpuscules étrangers
dépourvus de vie qu'on trouve dansles cellules géantes avaient pu
être englobés dans leur état mononucléaire, me paraît très juste.
Mais la propriété phagocytaire de ces cellules résulte d'un si
grand nombre de faits différents’ que cette objection n’est
nullement capable de la renverser. Quant à la nature mobile des
prolongements protoplasmatiques, la réflexion de M. Weigert ne
me semble pas bien fondée, parce que les pseudopodes se con-

l. Dans la séance de la Société médicale de Kief du 2% septembre dernier,
M. Soudakewitch a fait une communication fort intéressante, dans laquelle il a
prouvé que les cellules géantes des néoplasmes cutanés et notamment du lupus
englobent et digèrent les fibres élastiques. Cela démontre une fois de plus la
propriété phagocytaire considérable de ces cellules. Le travail de M. Soudakewitch
sera publié prochainement,

RÉPONSE A M. WEIGERT. 609

servent très bien dans les préparations de leucocytes, pourvu
que ces derniers se retrouvent dans des endroits où ils étaient
mobiles pendant leur vie. Ainsi, dans les tissus fixés par l'alcool,
on voit très bien des leucocytes sous forme de cellules migra-
trices (Wanderzellen) avec leurs prolongements arrondis, tandis
que dans le sang on les retrouve ordinairement sous forme de
corps sphériques plus ou moins réguliers. Les mouvements des
cellules géantes pourraient du reste être observés dans des con-
ditions favorables, et il faut espérer que des observations directes
ne manqueront pas de décider cette question d’une manière
définitive.

6. La division des cellules géantes des spermophiles tuber-
culeux est tellement fréquente et si facile à observer pour
quiconque a fait des recherches embryogéniques que je ne trouve
pas possible d'admettre l'opinion contraire de M. Weigert. Son
assertion sur l’état du protoplasma de ces cellules n’est d’ailleurs
pas d'accord avec le fait d'une croissance considérable de ce
protoplasma pendant la période de formation de la cellule géante.
Quant à la faible coloration d’une partie du contenu de celle-ci,
elle ne peut nullement suffire à prouver l’état de mort du proto-
plasma. Je dois enfin remarquer, contre l’analogie avec les faits
très intéressants recueillis par M. Chabry, que justement dans
les œufs des ascidies soumis à l'expérience, il ne s’opérait pas de
division du protoplasma, tandis que les cellules géantes se divi-
sent parfaitement. Il ne faut pas non plus négliger le fait que dans
ces cellules, la multiplicité des noyaux résulte d’un acte tout à
fait particulier de bourgeonnement du noyau, ou bien de la
fusion de plusieurs cellules, tandis que dans les œufs observés
par M. Chabry, les noyaux se multipliaient à la façon ordinaire.
Il n’y a donc qu'une analogie tout à fait secondaire entre les deux
catégories de phénomènes.

LETTRE DE M. METCHNIKOFF À M. DUCLAUX.

« Très cher collègue,

« Dans votre revue sur le travail de M. Nuttall du n° 9 des
Annales de cette année, vous vous demandez comment il se fait
que l'étude du même sujet nous ait conduits, ce savant et moi,
à des conclusions tout opposées. Vous marquez l'assurance
d'avoir là-dessus une explication de ma part.

« Comme votre avis peut être partagé par plus d'un de vos
lecteurs, je m'empresse de vous communiquer ma réponse à
M. Nuttall, en vous priant de la publier dans vos Annales.

« La thèse principale de M. Nuttall, à savoir que les bactéri-
dies sont surtout détruites hors des cellules, est basée sur l'étude
de préparations faites, pour la plupart, par une méthode qui
détruit très fréquemment les leucocytes, surtout ceux qui sont
remplies de bactéridies, et laisse par suite celles-ci s'échapper et
se répandre à l’extérieur. Quoique ce fait (qui est pourtant tou-
jours si facile à constater) soit nié par MM. Nuttall et Bitter, son
évidence ressort des recherches de M. Nuttall lui-même, et,
avant tout, des figures données par lui. Vous n'avez qu'à jeter
un coup d'œil sur la planche jointe à son Mémoire (Zeitschrift f.
Hygiene, 1888, t. IV, pl. IV) pour vous assurer qu elle représente
beaucoup plus de leucocytes plus ou moins endommagés que de
leucocytes intacts. Cela est bien naturel avec une manipulation
qui consiste à étaler le liquide contenant des cellules en une
mince couche que l’on fait sécher ensuite, etc. J'ai vu maintes
fois des leucocytes pleins éclater sous mes yeux en laissant
échapper les bactéridies qu'ils contenaient. Quand on fait avec
la même matière deux préparations, l’une avec mon procédé à la
Vésuvine, l’autre par la méthode employée par M. Nuttall, on
voit que dans la première le nombre des bacilles contenus dans

LETTRE DE M. METCHNIKOFF, 611

les leucocytes est considérablement plus grand que dans la
seconde.

« Une autre source des conclusions erronées de M. Nuttall
est à mon avis celle-ci : ayant introduit des morceaux d'organes
charbonneux sous la peau de grenouilles, il enlevait ensuite ces
morceaux, les émiettait et y trouvait de nombreuses bactéridies
restées libres. Il comptait naturellement comme telles toutes
celles qui, placées à l’intérieur du morceau qui n'était attaqué
que par l'extérieur, étaient restées longtemps à l’abri des leu-
cocytes pendant la durée du séjour du morceau charbonneux
sous la peau de la grenouille. Ayant de plus trouvé que des
souris inoculées par des fragments de ce morceau ne succom-
baient que tardivement (ce qui n’était point d'accord avec sa
théorie de la persistance de la virulence chez les bacilles),
M. Nuttall changea la méthode d’expérimentation : au lieu d’in-
troduire le fragment entier sous la peau des souris, il en fit une
émulsion qu'il injectait. Mais il aurait alors fallu faire le mème
changement relatif dans la méthode pour évaluer la quantité de
bactéridies trouvées libres, et injecter sous la peau des grenouilles
des émulsions d'organes charbonneux, au lieu d'y introduire
des fragments entiers. On aurait assisté alors à une destruction
plus rapide des bacilles.

« La troisième source des conclusions erronées de M. Nuttall
consiste en ce qu'ayant employé des cultures charbonneuses,
il ne tient pas compte de ce qu’on trouve dans toute culture un
nombre plus ou moins grand de bactéridies mortes, bactéridies
qui ont pu rester libres sur ses préparations. Cela est d'autant
plus vraisemblable que, d’après les intéressantes recherches de
M. Lubarsch ‘, les bactéridies mortes sont englobées par les
leucocytes plus tard que les vivantes.

« Enfin, en ce qui concerne le choix des animaux à expéri-
menter, vous êtes vous-même d'avis que M. Nuttall a eu tort de
choisir des souris pour éprouver la force du virus charbonneux,
mais vous n’avez pas remarqué, je crois, qu'il cherche à démon-
trer l’inexactitude de mes résultats sur la perte de virulence
pour les lapins par des expériences sur des souris.

« Ainsi j'affirme, en résumé, que les méthodes employées

1. Forlschrille d. Medicin, 1887, n° #, p. 126

612 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

par M. Nuttall ne sont point capables de donner des conclusions
précises, el que par suite ses statistiques sur la proportion de
bacilles non englobés parles leucocytes, ne peuvent être acceptées
comme Justes.

« Ses autres recherches, faites à la chambre humide, et ses
expériences sur les liquides éloignés de l'organisme, ne peuvent
avoir de signification notable dans la question de l’immunité
nalurelle ou acquise dans un organisme vivant. On est d’autant
plus autorisé à se tenir en garde contre cet ordre de déductions
que M. Nuttall trouve le sang et l'humeur aqueuse des lapins,
qui ne sont pas réfractaires, plus nuisibles aux bactéridies que
le sang des chiens qui le sont naturellement. Il est ainsi hors de
doute que ces expériences de M. Nuttall n’ont qu’une faible rela-
tion avec la question de l'immunité naturelle ou acquise.

« Je dois encore attirer votre attention sur le fait que
M. Nuttall base uniquement sa critique sur la répétition de mes
expériences de l’année 1884, et qu'il ignore complètement celles
que j'ai faites en 1887, sur la croissance des bactéridies dans la
chambre antérieure de l’œil et dans les sacs en moelle de roseau;
ces expériences ont pourtant, il me semble, dans la question de
limmunité, une autre importance que les siennes, faites sur la
platine chauffante et avec le sang éloigné de l'organisme.

« Je crois pouvoir dans cette lettre me borner à ces explica-
tions aux lecteurs de votre compte rendu. Je répondrai au
Mémoire original dans une note plus étendue contenant la des-
criplion de quelques nouvelles expériences, et qui paraîtra en
décembre dans les Archives de M. Virchow.

« Veuillez agréer, etc.,

« EL. METCHNIKOFF.

« Paris, le 7 novembre 1888. »

REVUES ET ANALYSES

SUR LES DIASTASES DIGESTIVES — SUCRASE.

REVUE CRITIQUE.

BourquELor. Sur le rôle physiologique du maltose. Comptes rendus, t. XCVI,
et Archives de physiologie, 1886. — Dasrre. Physiologie du foie. Recher-
ches sur les ferments hépatiques. Archives de physiologie, 1888, p. 69. —
— MaxrReni, Boccarpr ET JapPezLr. Sur le ferment inversif dans l’orga-
nisme animal. Mém. d. Soc. Italiana de scienxe, t. VIs 4888.

Depuis qu'on a trouvé, dans le monde des microbes, des diastases en
tout pareilles à celles qui donnent leur activité aux divers liquides digestifs,
on à été obligé de considérer comme non avenues, et de recommencer toutes
les expériences sur lesquelles était basée la théorie actuelle de la digestion,
Ces expériences étaient de deux sortes. Dans les unes, on avait cherché à
suivre, soit au microscope, soit au moyen des réactifs, une substance ali-
mentaire le long du canal intestinal, et à trouver le point où elle prenait
cette solubilité qui n'est pas à proprement parler l’action digestive elle-
même, mais qui la précède et la prépare. Dans les autres, on avait isolé de
l'organisme ses liquides digestifs, et on avait essayé, dans des digestions
artificielles, leur action sur les diverses substances alimentaires, Dans les
deux cas, on avait superposé, sans en avoir conscience, une action micro-
bienne variable à l’action des diastases normales de l'être vivant, et il était
résulté de ce mélange une complication et une confusion telles que la science
n'avait aucune réponse précise à ces questions pourtant très simples : où
sont digérés le sucre, l'amidon, la fibrine, la caséine, etc.?

De nombreux savants se sont attachés depuis quelques années à faire
disparaître ces incertitudes. J'ai essayé de préciser dans ma Microbiologie
le point où en était la question en 1883; elle a marché depuis, et les Annales
se doivent de tenir leurs lecteurs au courant de ses progrès. Nous publierons
sur ce sujet un certain nombre de Revues critiques, au fur et à mesure que
paraîtront, sur les diastases, des travaux qui nous sembleront intéressants,
et nous commencerons aujourd'hui par l'étude de la diastase qui transforme
le sucre cristallisable en glucose, diastase que nous continuerons à appeler
sucrase, parce que le mot invertine, dont on se sert d'ordinaire, est décidé-
ment mauvais. Je ferai voir en effet, bientôt, qu'il peut y avoir hydratation
et dédoublement du sucre sans interversion véritable, avec production d’un
sucre dont le pouvoir rotatoire est zéro.

614 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Cette étude de la sucrase mérite d’ailleurs d’être faite la première, parce
qu'on y voit, plus nettement que dans les autres, toute la difficulté du sujet
et toutes les causes d'erreur qui menacent le savant qui s'en occupe. Le
problème est Le suivant : quel est le liquide digestif chargé de transformer le
saccharose en sucre assimilable, capable de réduire la liqueur de Fehling?
Nous simplifions cet énoncé le plus possible, de facon à laisser de côté tout
ce qui est relatif à l’action du foie sur son glycogène:; nous laissons aussi de
côté tout ce qui touche à la transformation du saccharose en maltose. Mais
ainsi réduite, la question n'en est pas moins difficile, Cherchons, pour nous
en convaincre, les causes d'erreur qu'y ont rencontrées les savants qui l’ont
étudiée.

Une des plus fréquentes est venue de la solution de saccharose sur
laquelle on essayait l’action des liquides digestifs. Lorsqu'on la fait sans
précaution, avec un sucre du commerce même très blanc et bien cristallisé,
il arrive très souvent qu'elle réduit la liqueur de Fehling par elle-même,
avant tout traitement, et qu'on est exposé, dès lors, à attribuer aux liquides
digestifs une transformation déjà faite avant leur intervention. Quard elle
ne réduit pas d'emblée la liqueur de Fehling, elle acquiert cette propriété
au bout de quelques jours, et même quelquefois de quelques heures, grâce
au développement des microbes dont les germes se trouvent dans l’eau,
ou ont été apportés par le sucre lui-même, des cuves très peuplées dans
lesquelles il a été fabriqué. Parmi ces microbes, surtout parmi ceux qui pro-
viennent des cuves de cristallisation, il y-a toujours des êtres vivant aux
dépens du sucre et capables de sécréter la diastase qui le rend nutritif. Il faut
donc, comme point de départ, avoir une solution neutre sur la liqueur de Feh-
ling, et qu’on stérilise soit par la chaleur, soit par une filtration sur la porce-
laine. MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli insistent beaucoup, peut-être même
un peu trop, sur cette cause d'erreur bien connue théoriquement, mais
contre laquelle ceux mêmes qui la connaissent ne se mettent pas toujours assez
en garde dans la pratique. On croit, en général, qu'une solution de sucre
se conserve inaltérée tant qu'elle reste limpide : c’est une erreur. Il y a des
microbes très actifs qui y produisent du glucose sans la troubler.

Voici maintenant cette solution pure de saccharose mise en contact, en
dedans ou en dehors de l'organisme, avec le liquide digestif dont il s’agit
d'étudier l’action. Après une période de contact plus ou moins prolongée,
en général à une température voisine de celle des êtres vivants, sous pré-
texte de se mettre dans des conditions plus physiologiques, on essaie
l'effet sur la liqueur de Fehling, et alors, de deux choses l'une, ou on ne
trouve rien, ou il y a réduction.

Si on ne trouve rien, on est tenté de conclure à l'absence d’une action
digestive. Rien n’est plus imprudent. Il peut y avoir de la diastase dans le
liquide étudié, mais en quantité trop faible pour devenir saisissable dans les
conditions où se fait l'expérience ou avec la durée qu'on lui a donnée. Il
faut faire varier cette durée et ces conditions, et surtout veiller à ce que la
réaction iniliale, acide ou alcaline, qu’on a donnée au liquide, ne change
pas en route, par suite de l'intervention des infiniment petits.

Si on trouve une réduction avec la liqueur de Fehling, le cas devient encore

dote à‘:

REVUES ET ANALYSES. 615

plus embarrassant, Il faut d’abord s'assurer que c’est une réduction véritable
avec formation de protoxyde de cuivre, et non une de ces décolorations
incertaines comme en produisent quelquefois les liquides organiques, sur-
tout ceux dans lesquels ont vécu les microbes. Il fau aussi prendre garde
à l'intervention de la réaction dite du biuret, et avec les liquides qui la pré-
sentent, recourir à la réaction de Fischer, qui est plus sûre.

Quand la réaction est bien celle que donnent les sucres, la question qui
se pose est de savoir d'où elle provient. Si on a opéré sur un liquide digestif,
il faut tout de suite se méfier des résidus alimentaires avec lesquels il se
trouve nécessairement mêlé, résidus dont la digestion est commencée, mais
non encore finie, et qui, intervenant à l'insu de l'observateur et continuant à
se transformer pendant la durée de l'expérience, peuvent troubler l’interpré-
tation des résultats. Par exemple, quand ïl s’agit d’études sur la sucrase,
et si on opère sur des liquides digestifs emportant avec eux des débris
d'aliments féculents, on est exposé à voir leur amidon se transformer en
sucre, et donner, à la fin de l'opération, une réduction qui peut faire croire
à la présence de la sucrase, alors qu'il n'y en a réellement pas. Je laisse
bien entendu de côté le cas où le liquide organique étudié renfermerait
lui-même, dès l'origine, du sucre réducteur qu’on auraitnégligé d'y rechercher.
Cette cause d'erreur, si grossière qu'elle soit, a certainement été commise,
et dans l’histoire des travaux faits sur la digestion, on rencontre des asser-
tions tellement contraires à toutes les vérifications expérimentales qui en
ont été faites depuis, qu'on ne peut les expliquer que par la cause d'erreur
que nous signalons. Quand elle est à craindre, quand la sécrétion digestive
sur laquelle on opère est déjà mélangée de sucre dont ne peut se débarrasser,
il faut absolument faire un dosage de sucre au commencement et à la fin de
l'expérience, et ne pas se contenter d’un essai qualitatif, à moins qu'il n’y
ait une disproportion notable entre le sucre réducteur au commencement et
à la fin.

Supposons maintenant que la réaction soit authentique et non douteuse :
la question se pose de savoir à quoi il faut l’attribuer. La sucrase existait-
elle à l’origine dans le liquide digestif soumis à l'expérience, ou s’est-elle
produite pendant l'opération sous l’action des microbes présents et pullu-
lant dans le mélange soumis à la digestion naturelle ou artificielle ?

il y a plusieurs manières de résoudre cette question préjudicielle et
d'échapper aux erreurs d'interprétation qui en naissent. On peut d’abord
filtrer sur de la porcelaine le liquide digestif à étudier, filtrer aussi, ou
stériliser par la chaleur la solution sucrée et, en opérant dans des vases
stériles, se mettre à l’abri de l'intervention éventuelle des microbes qui
pourraient fausser les conclusions. Si le liquide digestif renferme de la su-
crase, cette sucrase passe à travers ie filtre. MM. Manfredi, Boccardi et
Jappelli insistent avec raison sur ce fait: On s'est, en effet, beaucoup exa-
géré l’effet des filtres poreux sur les substances organiques en solution dans
les liquides qui les traversent. Une partie de ces substances est, en effet,
retenue et reste adhérente aux parois capillaires du filtre, et les diastases,
dont on connaît la puissance générale d'adhésion vis-à-vis des corps so-
lides, sont surtout dans ce cas. Mais, presque toujours, la saturation sur-

616 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

vient vite, et quand la paroi capillaire s'est tapissée d’une couche liquide
de composition variable avec la nature de la paroi et la nature du liquide,
le liquide filtre sans variation appréciable de composition. Il ne s'agit donc
que d'opérer sur un volume de liquide digestif assez grand pour que l'effet
de la paroi soit négligeable, et on peut d’ailleurs toujours compenser, par
une plus longue durée de la digestion artificielle, la diminution de quan-
tité qui peut avoir été produite par la filtration.

Un autre moyen de se mettre à l'abri de l'intervention des microbes
pendant l'expérience est d'ajouter au mélange soumis à la digestion artifi-
cielle une dose d’antiseptique telle que les microbes y soient paralysés.
Quelques-uns de ces antiseptiques, loin d’entraver l’action des diastases,
peuvent au contraire la favoriser, comme je l’ai montré. Malheureusement,
leur action sur les microbes est plus équivoque, et dépend des doses, de
la nature et du nombre des microbes présents, de la température, etc.
La confiance qu’on accorde aux antiseptiques dans ces expériences est un
vieux reste de superstition qui disparaît peu à peu.

Le dernier moyen, fréquemment employé par M. Dastre, est aussi
malheureusement d’une interprétation un peu douteuse. C'est l’action
du froid. En exposant au voisinage de zéro, ou même à température
plus basse, des mélanges digestifs, ce savant a vu que l’action des dias-
tases n’était guère entravée, tandis qu'il a la confiance que celle des mi-
crobes est annulée. Il faut ici s'entendre : ce qui est surtout gêné à ces
basses températures, c’est l’éclosion des germes et la multiplication des
microbes. Par conséquent, un mélange stérile ou faiblement peuplé, mis
à la glacière, pourra y subir avec le temps des actions de diastases
sans redouter beaucoup les actions de microbes. Mais s’il est peuplé d'avance
et surtout fortement peuplé, comme le sont les liquides digestifs orga-
niques, il y aura toujours à redouter que le froid n’entrave pas d’une
facon absolue la sécrétion des diastases par les microbes présents dans
le liquide. Je me hâte de dire que cette objection est une objection de
principe; car, dans la plupart de ses expériences, comme nous le verrons
dans la suite de ces études, M. Dastre n’a opéré que sur des mélanges sté-
siles ou faiblement peuplés. Mais elle n’en était pas moins utile à faire

En somme, par l'emploi d'un ou plusieurs de ces trois moyens contrôlés
l'un par lPautre, on peut bien voir, presque toujours, si la diastase qu'on
recherche préexiste ou non dans la sécrétion organique étudiée, et on arrive
alors à la question vraiment fondamentale. Quelle est l'origine de cette
diastase dont on a démontré la présence ? Est-elle un produit normal des
cellules ou des glandes de l'organe digestif étudié? ou bien a-t-elle été
produite par les microbes qui habitent constamment toute la longueur du
canal digestif et mêlent plus ou moins abondamment leurs diastases propres
aux diastases normales de l'organisme”? Mais, pour aborder cette question,
il faut sortir des généralités dans lesquelles nous nous sommes tenus
jusqu'ici, et nous allons prendre le cas particulier de l'étude de la sucrase
dans les divers liquides digestifs de l'organisme.

Nous allons même prendre celui de ces liquides dont l'examen est le
plus difficile, à raison de l'existence simultanée de toutes les causes d'erreur

REVUES ET ANALYSES. 617

que nous avons signalées plus haut, le suc intestinal. Y a-t-il des glandes
intestinales sécrétant de la sucrase, et celle qu'on rencontre dans l'intestin,
celle qui, dans l'expérience devenue classique de CL. Bernard, rend active
sur la liqueur de Fehling une solution de saccharose maintenue entre deux
ligatures dans une anse intestinale, appartient-elle à la paroi de la
muqueuse, ou est-elle produite par les microbes qui habitent le canal?
L'expérience la plus récente faite sur ce sujet, et la seule, à ma connaissance,
qui ait été faite avec la préoccupation d'échapper aux causes d'erreur que
nous avons signalées, était une expérience de M. Bourquelot qui, donnant
un repas à un lapin tenu à jeun pendant 24 heures, le tuant 95 minutes
après, en séparait une anse intestinale qu'il lavait bien, et dont il mettait
la muqueuse en macération dans l’eau distillée. Il partageait ensuite la
macération en deux parties, dont l’une était filtrée sur un diaphragme de
porcelaine, IT ajoutait aux deux portions une solution de saccharose, laissait
le mélange pendant 24 heures à l’étuve, à 87°, et constatait ensuite que le
liquide filtré était sans action sur la liqueur de Fehling, tandis que l’autre
la réduisait abondamment. Envisagée en gros, cette expérience semble
bien prouver qu'il n'y à pas de sucrase dans l'intestin du lapin. M. Bour-
quelot n’a pourtant pas voulu en tirer cette conclusion d’une manière
absolue. Il y a, en effet, à tenir compte de l'effet du filtre qui peut retenir
la diastase, s'il y en à très peu, et si, pour en augmenter éventuellement la
dose, on prolonge la durée de la macération de la muqueuse; on arrive,
comme le montrent MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli, à trouver, dans
l'infusion filtrée, de la sucrase, précisément celle qu'y ont développée les
microbes qui l'ont habitée pendant la macération.

C'est iei qu'on peut faire intervenir utilement l'emploi du froid ou des
antiseptiques. On peut alors prolonger la macération de la muqueuse lavée,
sans craindre que les microbes, qui y sont rares à l’origine, en prennent
possession, et on trouve alors, comme le montrent les savants italiens,
qu'il n’y a pas de sucrase dans l'intestin du lapin.

Ce résultat est en contradiction complète avec celui d’une expérience
dans laquelle M. Dastre, faisant aussi infuser, à basse température, la mu-
queuse intestinale d’un lapin, y a trouvé, très abondante, une diastase
indépendante de l'intervention des germes. Comment expliquer cette con-
tradiction, non seulement avec les résultats de MM. Manfredi, Boccardi
et Jappelli, mais encore avec ceux de MM. Bourquelot et Roberts? Peut-être
par une de ces erreurs d'expérience, si faciles en un pareil sujet. Peut-être
aussi par des différences dans le mode d'alimentation des animaux étu-
diés. Des expériences, encore inédites, m'ont en effet montré que la
sécrétion des diastases, chez les animaux supérieurs comme dans le monde
des infiniment petits, était, dans une certaine mesure, sous l'influence de
la nature des aliments consommés. De plus, nous allons voir intervenir une
autre cause de variation dans les résultats d'expériences également bien con-
duites. Cette cause, c'est l'imprégnation possible de la muqueuse du canal
intestinal par les diastases que sécrètent les microbes dans le canal lui-
même, ces microbes et ces diastases étant dans un rapport étroit avec la
nature de l'aliment consommé.

618 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

En recommencant, en effet, sur le chien les mêmes expériences que sur
le lapin, MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli trouvent constamment de la
sucrase dans la muqueuse, lavée et macérée dans des conditions qui n’au-
torisent pas à redouter la présence des microbes. Comment expliquer cette
différence entre deux animaux qui, tous deux, digèrent le sucre de canne
et le transforment en glucose, lorsqu'on le mélange avec leur sue intestinal,
soit ea dedans, soit en dehors de l'organisme? En songeant que la mu-
queuse intestinale est très épaisse chez le chien, très fine et très lisse chez
le lapin, MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli se sont demandé s'il n’y avait
pas là un phénomène d'imprégnation de cette muqueuse, de l'extérieur vers
l'intérieur, par les diastases sans cesse produites dans le canal intestinal
par les microbes qui l'habitent : « Si cette hypothèse est vraie, l'inoculation,
dans une anse intestinale séquestrée chez un animal vivant, d'une grande
quantité d’invertine obtenue par culture d’un microbe inversif, devra
déterminer dans la muqueuse de cette anse une imprégnation de diastase
supérieure à celle qu'on peut rencontrer dans une autre anse semblable
servant de contrôle, » C’est ce prouve l'expérience suivante.

« Sur un chien nourri d'os pendant trois jours, on ouvre l'abdomen et
on extrait une anse de l'intestin grêle. L’anse, longue de 40 centimètres, est
isolée par deux ligatures, lavée d'un bout à l'autre par deux petites ouver-
tures qu'on y pratique, jusqu'à disparition de tout glucose dans l'eau de
lavage, et finalement serrée au milieu par une troisième ligature, qui la
partage en deux anses d’égale longueur.

«Dans l’une on injecte de l’eau distillée, dans l’autre une infusion aqueuse
d’une culture de levure de bière, ayant un fort pouvoir inversif, et on réin-
troduit le tout dans l'abdomen de l'animal qu'on abandonne à lui-même
pendant deux heures.

« On extrait alors les deux anses, qu'on lave avec de l’eau à O0 — 40; on
racle avec un rasoir parties égales des deux muqueuses, on en fait une in-
fusion dans l’eau froide, et on porte à la glacière. Huit heures après, on
ajoute aux deux infusions un volume égal de solution de saccharose. Deux
heures après, l'infusion de la muqueuse de l’anse où avait été inoculée
l'invertine avait interverti environ deux fois plus de saccharose que l’in-
fusion de contrôle. »

Cette expérience n'est pas, il est vrai, irréprochable. Il aurait mieux
valu, croyons-nous, laisser vide l'anse dans laquelle on n'injectait pas de
solution d'invertine, plutôt que d'y mettre de l’eau, qui a pu en tirer,,pen-
dant deux heures de contact, la sucrase qui pouvait y être, tandis que dans
l'autre anse, à raison de la richesse en diastase du liquide introduit, l’ab-
sorption se faisait en sens inverse. Mais, comme l’expérienee a réussi plu-
sieurs fois, qu'elle réussit aussi avec la muqueuse gastrique, qui, comme
nous allons le voir tout à l'heure, ne sécrète pas non plus normalement de
la sucrase, comme d’ailleurs sa conclusion est en parfait accord avec ce
que nous savons sur la tendance qu'ont les diastases à se fixer sur les corps
solides, elle à droit de cité dans la science, et peut servir à expliquer
quelques-unes des contradictions nombreuses de cette étude des diastases
digestives.

REVUES ET ANALYSES. 619

Ces contradictions ne sont pas moindres au sujet de l'estomac qu’au sujet
de l'intestin, elles sont même plus grandes; car, ici, outre l’action de la
diastase, il y à à envisager celle de l'acide du suc gastrique. Aussi, sur la
question de savoir si le sucre de canne se transforme dans l'estomac, les
physiologistes se partagent en deux camps, qu'on pourrait appeler sur ce
point, comme sur beaucoup d’autres, le camp Bernard et le camp Longet,
et dont l’un dit oui pendant que l’autre dit non. Parmi ceux qui disent oui,
il y ceux qui attribuent l’action à une diastase, d’autres à l'acide du sue
astrique, d’autres, qui ont l'esprit conciliant, au mélange des deux.

Avant d'entrer dans le détail des partis, il y a évidemment à se deman-
der lequel des deux a raison, ou s'ils ne peuvent pas, suivant les cas, être
dans. le vrai tous les deux. S'il faut croire MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli,
la vérité serait tout entière du côté de ceux qui nient l'existence de la sucrase
dans l'estomac. Des infusions de muqueuse gastrique n’ont en effet aucune
action sur le saccharose, disent-ils, même lorsqu'elles sont acides. Il en est
de même pour le sue gastrique extrait, au moyen d'une fistule, de l'estomac
excité soit par un repas d'os, soit par un courant électrique. Il est vrai qu’en
introduisant par une fistule, dans l'estomac de l'animal, une solution de
saccharose, on trouve qu'elle y a acquis, au bout de quelques minutes, la
propriété de réduire la liqueur de Fehling, mais cela tient à ce que, dans
l'estomac du chien d'expérience, même après qu’on lui a fait subir à l'avance
un jeûne de 24 heures, il y a, adhérentes aux parois, des débris d'aliments
féculents qui résistent au lavage et qui, continuant à se saccharifier sous
l'influence du suc gastrique que l’on sait capable d'agir sur eux, donnent avec
la liqueur de Fehling un précipité que l’on attribue tout naturellement à
l'interversion de la solution de saccharose, alors que celle-ci est restée
intacte.

Pour éviter cette cause d'erreur, MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli sou-
mettent l'animal d'expérience à un régime rigoureux d'alimentation par
des os seuls pendant les 3 ou 4 jours qui précèdent l'expérience, puis les
font jeûner un jour. Voici alors un de leurs résultats: « Sur un chien muni
d'une fistule gastrique permanente et traité comme nous venons de le dire,
on introduit dans l'estomac une solution concentrée de saccharose, et on
l'essaie de 10 en 10 minutes pendant une heure avec la liqueur de Fehling,

_Le résultat de tous ces essais a été constamment négatif, »

Voilà évidemment une cause d'erreur à laquelle on n'avait pas encore
accordé l'attention qu’elle mérite, et qui peut bien expliquer quelques-unes
des contradictions que nous signalions plus haut. Je crois pourtant qu'on a
le droit de trouver trop absolue la conelusion des savants italiens, qui
croient à l'absence de toute fonction inversive dans le suc gastrique. Je laisse
de côté l'influence possible de l'acidité de ce suc. Il est certain que des acides
organiques faibles, l'acide tartrique par exemple ou l'acide lactique, peuvent,
avec le temps, transformer le saccharose en glucose; cela est même vrai
pour l'acide carbonique sous la pression ordinaire, comme l’a montré
M. Bourquelot. Mais cette action est lente vis-à-vis de celle des diastases
auxquelles je m'attache exclusivement; or, pour celles-ci, leur absence ne
me semble pasressortir des résultats de MM, Manfredi, Boccardi et Jappelli.

oœ
Ce]

620 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Il y a d’abord celles qui sont produites par les microbes de l'estomac. Les
savants italiens n’admettent pas leur intervention. Il manque en effet dans
l'estomac tous ceux, et ils sont nombreux, qui ne s’accommodent pas des
milieux acides, mais 1l y a, surtout dans le monde des levures et des
micrococcus,nn grand nombre d'espèces quis’accommodent très bien de l’aci-
dité du suc gastrique, surtout de celle du chyme, et doivent, pendant le
séjour des aliments dans l'estomac, sécréter des diastases qui, absorbées ou
arrêtées par la muqueuse, peuvent s’y retrouver la digestion finie. Puis il
faudrait savoir si l'alimentation avec des os, que MM. Manfredi, Boccardi et
Jappelli imposent pendant quelques jours à leurs animaux d'expérience, a
pour unique effet de permettre à l'estomac de digérer tous ses résidus fécu-
lents, et s’il n’y a pas là un de ces changements d'alimentation dont je parlais
plus haut, qui provoquent un changement correspondant dans la sécrétion
des diastases, et en font disparaître quelques-unes pour leur en substituer
d’autres. Les glandes de l'estomac pourraient sécréter de la sucrase quand
l'animal consomme du pain, etn'en plus sécréter quand il consomme des os.

En passant maintenant à l'étude du foie, nous allons trouver des diffi-
cultés et des contradictions analogues. L'existence dans le foie d’une diastase
agissant sur le saccharose, distincte de celle qui agitsur le glycogène, a surtout
été affirmée par M. Dastre. Ce savant lave légèrement le foie par hydroto -
mie, de facon a en éliminer les diastases qui ont pu arriver avec le sang
par la veine porte, le porte ensuite à la glacière, où il le broie et le mélange
ensuite à une solution de saccharose. Il reste un peu de sucre réducteur
dans le mélange ainsi obtenu, mais, sans faire de dosages, on constate que
la quantité en augmente beaucoup après deux heures de contact.

MM. Manfredi, Boccardi et Jappelli font l'expérience dans les mêmes con-
ditions, sauf qu'ils y introduisent un dosage, et renoncent au lavage hépa-
tique. Après avoir coupé le foie en morceaux assez petits, ils les lavent
dans un courant d’eau froide, en pèsent deux poids égaux qu'ils triturent
séparément dans la glacière, et qu’ils mélangent l’un avec 30°° d’eau froide,
l’autre avec 30°° d’une solution froide de saccharose. Après un contact qui a
été souvent de 48 heures, on filtre séparément les deux liquides, et on
détermine le sucre qui y est contenu.

En conduisant ainsi l'expérience, ils trouvent des quantités presque tou-
jours égales de sucre réducteur dans les deux mélanges, ce qui revient à
dire, contrairement à la conclusion de M. Dastre, qu’il n’y a pas de sucrase
dans les cellules du foie. D’autres expériences, faites en remplaçant le froid
par l’action de l'acide phénique, amènent à la même conclusion. Nous reve-
nons dès lors à la question de plus haut : qui croire? Mais nous y ferons la
même réponse, c'est qu'il est inutile de chercher à la résoudre tant qu'ilne
_ sera pas démontré qu'il faut absolument choisir entre ses deux solutions
contradictoires, et qu’un foie de lapin ou de chien a toujours les mêmes
propriétés, quel que soit le mode d'alimentation de l'animal qui le possède.

Disons enfin, pour terminer ce qui est relatif à ce sujet, que MM. Man-
fredi, Boccardi et Jappelli n’ont pas non plus trouvé de sucrase dans la
rate, le foie, le cœur, le poumon, les reins, les muscles d’un cobaye, ces

REVUES ET ANALYSES. | 621

organes étant mis à l'état de pulpe ou d’infusion en contact avec une solu-
tion de saccharose. Il en est de même pour la salive humaine, mais le fait
était déjà connu.

Cette absence de sucrase dans tous les organes autres que l'intestin, dans
lequel cette diastase est produite par les microbes, amène les savants
italiens à conclure que la digestion de la saccharose est uniquement le fait
des infiniment petits. Quelque plaisir que je puisse trouver à voir étendre à
la saccharose une conclusion que j'avais déjà formulée pour la cellulose, je
dois faire une réserve au sujet de la tendance générale qu'on a à croire
qu'une cellule ne produit pas de diastase, uniquement parte qu'on n'en
trouve pas dans le milieu où cette cellule a véeu ou a macéré. Aïnsi on
trouve souvent affirmée, à propos de la levure de bière, par exemple, cette
conclusion que de la saccharose peut être consommée en nature, et sans
transformation préalable en glucose, par quelques races de levures, en se
basant sur ce que le liquide de culture de ces levures, filtré, est inactif sur
la saccharose. Ce raisonnement me semble tout à fait inexact. On rencontre,
dans le monde des infiniment petits, toutes les transitions entre les cellules
qui laissent se diffuser autour d'elles une grande quantité de diastase et
celles qui n’en abandonnent au liquide que très peu. Faut-il couper la
chaîne entre celles qui n’en donnent que très peu, et celles qui n’en don-
nent plus du tout, et conclure que celles-ci n’en fabriquent pas? Je ne vois
pas d’argument qui en donne le droit. Le sucre, différant en cela de la
cellulose, est soluble et diffusible. IT peut pénétrer dans le protoplasme de
la cellule et y être transformé, et rien ne nous autorise à croire que les
espèces de levures non inversives consomment de la saccharose en nature,
alors que les autres consomment du glucose. De même, de ce que nous ne
trouvons pas de sucrase dans les macérations du foie ou des autres organes
d'un être vivant, nous n'avons pas le droit de conclure que les cellules de
ces organes, quand elles sont imprégnées de saccharose, l'utilisent en nature.
Il y a là une question qui n'est pas, comme on voit, résolue d'avance, et qui
serait intéressante à étudier. :

x

H. Berne. Les bactéries parasitaires des céréales. Munch.med. Wochenschr.,
1888, p. 743 et 767.

La question de la présence possible des microbes dans les végétaux cul-
tivés n’est pas de celles qu’on peut négliger, à une époque et dans un pays
où le problème de l’utilisation agricole des eaux d'égout est à l'ordre du
jour. Ce problème changerait de face, s'il était démontré que les végétaux
peuvent se laisser pénétrer par les microbes présents dans le sol. On peut
passer condamnation au sujet de ceux qui y existent normalement. Les
microbes du sol qui ne sont pas pathogènes ne sont pas dangereux; ceux
qui pourraient le devenir, comme par exemple le vibrion septique, sont
devenus inoffensifs pour le canal intestinal et les voies qu'ils parcourent
d'ordinaire, par suite d'une disposition innée ou acquise salutaire, car sans
elle l'espèce humaine, sans cesse habitée par ce vibrion, n'existerait plus.

622 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Mais nous n'avons pas la même résistance vis-à-vis des autres maladies dont
les germes existent certainement dans les eaux d’égout, par exemple vis-
à-vis de la fièvre typhoïde, et on peut se demander ce que deviendrait la
santé d'une ville condamnée à retrouver, dans ses aliments lavés, nettoyés
ou même cuits, des germes morbides.

C'est cette raison qui nous amène à insister un peu sur le travail de
M. H. Bernheim, visé tout récemment dans ces Annales par M. Fernbach
(V. I, p. 567), qui en contredit les conclusions, mais laisse de côté le tra-
vail lui-même. Ce travail soulève des observations qui sont à la fois d'ordre
général et d'ordre particulier. Je commencerai par les premières.

Cette question de la présence possible de bactéries dans les céréales n’est
pas aussi neuve que semble le croire M. Bernheim, qui ne cite que les
observations de Bakker sur le rôle d’une bactérie dans la maladie jaune
des Jacinthes, et les travaux de Marcano et de Galippe. En 1876, M. Fremy !
avait publié des faits qui lui semblaient prouver l'existence, à l’intérieur du
grain d'orge introduit dans de l’eau sucrée, de ferments non apportés par le
liquide ambiant ou par l'air atmosphérique. En 1879, M. Chamberland ?
avait repris ces expériences, et après les avoir débarrassées d'un certain
nombre de causes d'erreur, les avait à la fois confirmées et contredites. Il
les avait confirmées en montrant qu’en effet un grain de blé ou de préférence
un haricot, dont la surface est plus lisse, flambé et introduit de suite dans
de l'eau stérilisée, la peuplait presque toujours d'espèces microscopiques, ce
qui semblait prouver que ces graines apportaient avec elles, dans leur inté-
rieur, des germes vivants. C’est, comme nous allons le voir, la thèse soutenue
par M. Bernheim. Mais on change complètement le résultat, et la majorité
des tubes ensementcés reste au contraire stérile quand le haricot a été pris au
moyen d’une pince flambée dans sa cosse qu'on vient d'ouvrir; on peut même
alors se dispenser de le flamber. Il est donc clair que l'interprétation qui
précède est renversée du coup et qu'il n’y a qu'une chose à conclure, c'est
que la stérilisation de la graine a été insuffisante dans le premier cas.

M. Bernheim, revenant sur cette question, avait un premier progrès à
lui faire faire, c'était d'expliquer comment un flambage pouvait être insuf-
fisant à débarrasser cette graine de haricot de ses germes venus de l’ex-
térieur. Il est certain que cette stérilisation n’est pas facile. Dans mes
expériences sur la germination dans un sol riche en matières organiques,
mais exempt de microbes (Comptes rendus, t. C, 1885, p. 66), j'ai dû recourir,
pour la réaliser à peu près à coup sûr, à un nettoyage soigneux de la sur-
face du grain avec une solution de bichlorure de mercure, suivi d'un passage
rapide dans de l'eau distillée bouillante : ces graines, introduites ensuite
dans un sol de pierre ponce imbibée de liquide nutritif, le tout stérilisé, y
germent, se développent, sans qu’on puisse voir, à aucun moment, à l'extérieur
de la graine ou à son intérieur, d'êtres microscopiques. Pendant ce temps,
la plante épuise ses réserves, sa graine se vide de son amidon ou de sa

À Sur la génération des ferments, Paris, 1876.
2. Recherches sur l’origine et sur le développement des organismes micros-
copiques. Ann. de l'Ecole norm. sup., 1879.

REVUES ET ANALYSES. 623

matière grasse, ce qui prouve que la diastase n'a pas d'autre source que la
plante elle-même, et n'exige nullement, comme on l'avait dit, le concours
des infiniment petits qut accompagnent, dans la nature ordinaire, tout phé-
nomène végétatif. J'ai fait plus, j'ai montré que cette sécrétion de diastase,
chezcertaines plantes, était un phénomènecellulaire individuel, que chaque cel-
lule étaitchargée de sécréter la diastase dont elle avait besoin, qu'il y en avait
qui en étaient incapables, et restaient sonflées d’amidon auprès de leurs
voisines vides, dont les liquides diastasiques n'étaient sans doute pas assez
abondants ou pas assez diffusibles pour arriver jusqu'à elles. M. Brasse!, en
4885, avait confirmé d'une manière générale mes résultats en stérilisant au
préalable ses graines par un séjour dans l’eau de chlore.

M. Bernheim, étudiant le même sujet en 1888, devait évidemment tenir
compte de ces résultats, les accepter ou les contredire. Il les ignore, et
publie un travail dont voici le résumé.

Il existe en grandes quantités, dans l’endosperme du grain de maïs et
d’autres céréales, des germes microscopiques dans lesquels on peut distin-
guer des bacilles, des coceus et même des grains de levure. Dans le maïs,
ces microbes sont logés surtout dans les espaces intercellu'aires, mais on
en trouve aussi quelques-uns à l'intérieur des cellules. Il y en a même qui
paraissent être à l’intérieur des grains d'amidon.

Ces bactéries parasitaires des céréales et autres graines se multiplient
beaucoup pendant la germination, et comme elles produisent physiologique-
ment des diastases qui dissolvent l’amidon ou le gluten, il y a à se demander,
dit M. Bernheiïm, si « la germination ou au moins l'apparition des diastases
dans la germination, n'a aucune relation de causalité avec l’évolution des
bactéries que j'ai découvertes. On ne pourrait donner une réponse définitive
à cette question que si on réussissait à faire germer des graines sans aucun
développement de bactéries, et à y voir se former des diastases. Mais ces
expériences se heurtent contre l'impossibilité de les faire ». En attendant,
M. Bernheim montre que ses bactéries intervertissent le saccharose, dis-
solvent l'amidon, peptonisent la caséine, et même, ce qui paraîtra un peu
plus surprenant, intervertissent le lactose pour le préparer à la fermenta-
tion alcoolique.

Enfin, comme on trouve dans le sol des coccus et des bacilles doués
des mêmes propriétés, on est autorisé à croire « que ces parasites des grains
viennent du sol, passent par les racines dans la plante, remontent dans la
tige, traversent l’'épiderme mince du fruit jeune, restent dans son intérieur
jusqu'à la maturation, et rapportées dans le sol avec le fruit mûr, en
émigrent pendant la germination et accomplissent ainsi leur eyele vital ».

M. Bernheim néglige de nous dire pourquoi ils restent inertes en traver-
sant ainsi de bas en haut la plante gonflée de sucs, pourquoi ils ne détrui-
sent pas le tissu fragile des radicelles et ne font pas fermenter, en passant,
le jus de la tige de canne à sucre ou le jus de raisin. Mais nous ne sommes
pas autorisés à réclamer de son mémoire ce qu'il ne nous donne pas; nous
n'ayons qu'à examiner ce qu'il nous donne, et à nous demander si une

1. Comptes rendus, Soc. de Biologie, 1885, p. 196.

624 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

théorie aussi harmonieuse et aussi séduisante est bien justifiée par les faits.

Elle est, nous l'avons vu, en désaccord avec les conclusions de M. Cham-
berland, de M. Brasse et les miennes. Mais M. Bernheim pourrait nous
répondre, avec juste raison, que nous n'avons pas opéré sur les mêmes
graines, et que, d’ailleurs, il n’y a pas de faits contradictoires. Chaque fait
nouveau doit être envisagé en lui-même, car il ne ressemble jamais, d'une
facon complète, à ceux qui l'ont précédé.

Envisagé à ce point de vue, le mémoire de M. Bernheim paraît, au premier
abord, inspirer toute confiance. L'auteur semble bien au courant de la tech-
nique, il lave les graines dans des solutions de sublimé corrosif, illes passe
ensuite dans la flamme, même de facon à les charbonner, il les coupe en mor-
ceaux avec des ciseaux flambés, en sème les fragments dans de la gélatine
nutritive, et voit, au bout de quelques heures, chacun de ces fragments
entouré d’une auréole fourmillante de bactéries.

Si c'est vrai, c'est une belle découverte; mais il semble que l'importance
du fait aurait dû conduire M. Bernheim à ouvrir l'œil et à se demanders’il ne
rencontrait pas quelque part une grosse cause d'erreur. C’est au moins ce
que le lecteur se demande et ce à quoi il ne trouve pas de réponse. Je me
trompe: il y a dans le mémoire de M. Bernheim, précisément à propos de
ces causes d'erreur, une phrase qui fait penser. Parlant de ses premières
expériences sur le grain de maïs, ce savant dit qu'il les prenait tels qu'il
les trouvait dans le commerce : il les laissait séjourner quelques instants
dans une forte solution de sublimé, les lavait ensuite à l’eau stérilisée, et
les promenait, à l’aide d'une pince flambée, dans un bec de Bunsen, de façon
à éliminer tous les germes extérieurs. Leur ensemencement n'en était pas
moins fécond. Plus tard, il a vu, dit-il, que ces précautions étaient inutiles, at-
tendu qu'on arrivait au même résultat en lavant rapidement le grain à l’eau
stérilisée. Mais on y serait arrivé encore plus sûrement en ne le lavant pas du
tout! Car, ce qui fait la difficulté de cette étude, c'est que toutes les causes
d'erreur agissent dans un sens favorable à la thèse. La logique du raisonne-
ment de M, Bernheim le conduisait done tout droit à ne prendre aucune
précaution : c’est donc que le raisonnement est inexact. Il n'y avait qu'une
chose à conclure de cette constatation de l’uniformité des résultats, qu'on
prenne des précautions, ou qu'on en prenne peu, c'est que les premières
précautions employées par M. Bernheim étaient insuffisantes, et non pas
qu'elles étaient inutiles.

Dés lors, voilà toute la confiance du lecteur à vau l’eau. Il songe malgré
lui qu'un savant aussi convaincu de l'inutilité des précautions ne doit pas
les prendre d'une facon sérieuse, que la technique la plus parfaite n’est
qu'un vain formulaire quand la foi manque, et que la fécondité des cul-
tures de M. Bernheim, la variété des espèces qu’on y trouve peut avoir une
autre origine que celle que leur a attribuée ce savant. Il ne chicanerait pas
ainsi s’il s'agissait d’une découverte banale, de la découverte d’un nouveau
microbe dans un fruit pourri, par exemple, ou de quelque chose d’analogue ;
mais il a le droit et le devoir d’être plus difficile vis-à-vis des thèses d’une
aussi grande portée que celle de M. Bernheim, et d'attendre pour y croire
qu’on lui ait donné des raisons sans réplique. Dx.

REVUES ET ANALYSES. 625

€
Tu. Jaxowski. Sur la richesse de la neige en bactéries. Centralbl. f. Bakt.,
IV, p.047.

Nous avons tenu nos lecteurs au courant (V. t. I, pp. 136, 409, 557) des
résultats assez peu concordants trouvés successivement par MM. Fränkel,
Prudden, Bordoni-Uffreduzzi, sur le nombre des bactéries contenues dans la
glace et les variations qu'il pouvait subir avec le temps. Le nouveau travail
de M. Janowski, qui se rapporte, il est vrai, à la neige, non à la glace,
n'est pas fait pour lever nos indécisions, mais il apporte an résultats
nouveaux qui méritent d'être signalés.

Ce savant a d'abord étudié la neige récemment tombée, c’est-à-dire les
parties superficielles du tapis de neige qu'on peut enlever de la surface du
sol pendant une chute de neige. Il opérait dans une région où on n'avait
guère à craindre les impuretés accidentelles, et il a trouvé, par centimètre
cube d'eau provenant de la fusion de la neige :

Le 2 fév. 1888. Temp. de l’air —— 10,2 38 et 34 colonies
90 — — — 14,1 203 et 354 —
28 — — — 12%,9 140 et 165 —

Le 19 fév. pendant une tourmente, T — — 3°,9, 439 et 463 —-

Ces nombres sont très inférieurs à ceux qui avaient été trouvés dans la
ulace, très inférieurs aussi à ceux que M. Miquel a relevés dans la pluie de
Paris. Peut-être faut-il tenir compte, pour expliquer ces faits, du caractère
désert et froid des régions dans lesquelles opérait M. Janowski.

Ce savant a aussi étudié la neige ancienne tombée depuis quelques
jours, et qu'il enlevait en raclant la ue sur une profondeur de un
demi-centimètre, avec une plaque de verre stérilisée. Il à ainsi trouvé, par
centimètre cube d'eau de fusion :

Le 11février, neige d’un jour 2 et 4 colonies
15 — de 4 jours 18 et 20 —
24 — 3 jours, froid intense 298 —
2 mars 3 - 145 et 212 —

Ces nombres sont du même ordre et subissent les mêmes variations que
ceux qui se rapportent à la neige récente. IL ne semble done pas qu'un
séjour prolongé au froid diminue le nombre des germes. Cette conclusion
n’est en désaccord ni avec celles de M. Prudden, ni avec celles de M. Bordoni-
Uffreduzzi, qui ne sont pourtant pas d'accord les unes avec les autres.
M. Prudden a montré que le froid diminuait le nombre des germes vivants,
mais il faut pour cela un froid prolongé de plus longue durée que ceux des
expériences de M. Janowski. D'un autre côté, M. Bordoni-Uffreduzzi n'a
pas constaté cette diminution avec le temps du nombre de germes contenus
dans la glace, et se trouve ainsi d'accord avec M. Janowski; mais la glace
n'est pas de la neige et on ne peut pas conclure de l’une à l’autre. A tout
prendre, du reste, M. Janowski avait le droit de ne pas s'attendre à voir
diminuer, après 3 ou 4 jours, le nombre de germes contenus dans la neige,
car le froid qui agissait sur eux ne datait pas du jour où ils avaient été
entraînés sur le sol par des flocons neigeux. La question de l'influence du
froid sur les germes reste donc entière, et pour la résoudre, il sera prudent

626 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de s'adresser ndn aux mélanges variables de microbes inconnus que fournit
l'étude de la neige ou de la glace naturelle, mais à la congélation de cultures
ou de liquides renfermant des spores ou des adultes d'espèces bien connues.
Tant qu'on n'a pas employé ce moyen pour faire l'étude de la chaleur sur
les microbes, on n'est arrivé qu'à des résultats confus et contradictoires.
Il en sera sans doute de même pour l'étude de l’action du froid. Dx.

L. ScumeLck. Une bactérie de glacier. Centralbl. f. Bakt., &.IV, p.545.

Dans un voyage en Norvège, l'auteur a eu l'occasion de visiter le plus
crand glacier de l’Europe, le Jostedalsbrä, qui occupe une surface de
1,600 kilomètres carrés, et commence à une centaine de mètres au-dessus
du niveau de la mer pour s'élever à près de 2,000 mètres. Des prises d'essai
ont été faites à diverses altitudes, soit sur la neige superficielle du glacier,
soit dans les ruisseaux qui en découlent, et la richesse en bactéries a été
étudiée par la méthode d'Esmarch. Voici, rapportés à 1 centimètre cube
d'eau, les nombres de colonies bactériennes fournies par les divers essais :

1. Ruisseau à 3 kilom. du glacier. . . . . . . 170 et 200 col.

9, Ruisseau à 50 m. du glacier. eur À LAeLINONEE
3. Neige du glacier 1,800- =, 000m d' altitude. 6 9 —
%. Autre neige - 2 —
5. Ruisseau — 9 et 45 —

Dans l'essai n°9, il y avait en outre de nombreux développements de
mycéliums. Il y en avait deux, avec les deux colonies bactériennes, dans
l'expérience n° 3. Cette neige et son eau de fusion étaient donc extrême-
ment pauvres en germes, et on se demande pourquoi, car « à l'œil nu, dit
M. Schmelck, la surface de la neige n'apparaissait pas tout à fait pure. On
y trouvait, au microscope, des restes de plantes et d'insectes mélangés à de
la neige rouge, à des mucedinées et à des formes de levures.» Faut-il voir là
cette action prolongée du froid dont nous discutions tout à l'heure l'influence ?

Ce qu'il faut encore signaler, c’est que dans tous les essais, la plupart
des colonies étaient formées par un bacille très semblable au bacillus fluo-
rescens liquefaciens. Ce bacille avait surtout été rencontré jusqu'ici dans
les eaux les moins pures etles substances en putréfaction, et beaucoup plus
rarement dans l’eau des grands fleuves et des mers. M. Schmelck l’a trouvé
si souvent dans l’eau de fusion des glaciers de la Norvège qu'il se demande
si ce bacille ne joue pas un rôle dans la production de la teinte verte de
ces glaciers.

Ajoutons une dernière observation. L'eau de l'expérience n° 3, qui ne
donnait que deux colonies bactériennes lorsqu'on l'étudiait de suite après la
fusion, en contenait 70 et 80 après un séjour de 6 heures dans une chambre
chauffée, Il y avait donc eu multiplication des bactéries dans une eau sans
doute très pure. Dx.

Ovo Burwin. Le sucre de raisin comme cause de la purulence par le Staphy-
lococcus aureus. Centralbl. f. Bakt, t. IV, p. 577.

On sait la gravité que prennent chez les glycosuriques une foule d’affec-

INSTITUT PASTEUR. 627

tions qui restent bénignes ou passent inaperçues chez les personnes bien
portantes. À propos d'un diabétique qu'il soignait, et chez lequel il avait eu
à lutter contre des abcès nombreux focmés par le Staphylococcus aureus,
M. Bujwid s'est demandé si le sucre n’agissait pas en diminuant la force de
résistance des éléments des tissus.

Il a cherché pour cela quelle quantité de Staphyloccus on pouvait inoculer
à un lapin sans dommage pour lui. Au moyen de numérations sur des
plaques de gélatine, il a vu qu'un lapin peut supporter un billion, un rat de
100 millions à un billion, et une souris jusqu’à 100 millions de coccus
inoculés sous la peau sans qu'il y ait formation d'abcès. Mais ces quantités,
inoffensives quand il n'y a pas autre chose, deviennent dangereuses quand
au lieu de les délayer dans de l'eau distillée, on les délaye dans une solution
à 25 p. 100 de glucose, laquelle, seule, ne donne rien. Avec des solutions plus
faibles, il faut réitérer les injections pour avoir un abcès en présence du mi-
crobe. Si on ne commence à irriter les tissus par ces injections répétées de
sucre, qu’au moment où le Staphylococcus y a déjà séjourné quelques jours,
on n'a aucun résultat. Enfin en injectant dans une veine de l'oreille d’un fort
lapin 10°° d’une solution de glucose à 10 p. 100, et en lui inoculant ensuite
sous la peau environ un billion de cellules du coccus, on a vu apparaître le
lendemain, au point d'inoculation, un œdème qui à conduit au bout de
quelques jours à une morlification locale, suivie d'escarre, analogue à celles
qu’on observe parfois dans les ulcères des diabétiques.

On obtient des résultats analogues avec une solution de 1 p. 4,000 de
sublimé corrosif ou de 2 p. 100 d'acide phénique. Tous ces faits sont à rap-
procher des faits de même ordre découverts par M. Roux, et se rattachent
comme eux à la grande question de la variation de virulence. L’accroisse-
ment de la virulence n’est pas dû à une augmentation de vitalité du coccus
sous l'influence du sucre, car, en cultures artificielles, il semble redouter
cette substance, C’est surtout en diminuant la force de résistance des tissus
que le sucre agit. Dx,

INSTITUT PASTEUR

RENSEIGNEMENTS STATISTIQUES,

Personnes traitées mortes de rage.

Bourezzy (Léon), 14 ans, de Marseille. Mordu le 29 mai à
la partie moyenne du front par le chien d'un voisin. L'enfant
porte deux morsures qui ont saigné. Aucune cautérisation n'a
été faite. Le chien mordeur a été reconnu enragé par M. le
D: Livon qui a inoculé le bulbe à des lapins qui ont pris la rage.

Bourelly a été traité du 7 juin au 1° juillet.

Il a été pris de rage convulsive le 31 octobre et a succombhé
le 2 novembre.

628 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — OCTOBRE 1888

A B C

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= IRC NCACES RE LE D LU 2 Des 2e » » NO Le
Pas de cautérisation......... AE eee LE RE MEN » » | A4 » |»
Habits Pdéchirés EURE RER RE 11 DE CHR DE » 42 PRS EI
MOrSUReSSUNUS PR ue 1 M DR LA) eo »4 al TS
as | mms | coms | Ge | RS | cu | que | RS | mme
Français et Algériens..|..| 29,,,1..| 52, -,\..118)
Totaux. ; Étapes UE AMCIUES ee s NAME
A B C
©"
TOMATE INVULENRE dhsowo 0 aboe be 106

4. La colonne A comprend les personnes mordues par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement ; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; La colonneC les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Les animaux mordeurs ont été :

Chiens, 100 fois; chats, 6 fois.

Le Gérant : G. MiAssox.

Ca EE AT 2 RÉ
Sceaux, — Imprimerie Charaire et fils.

9me ANNÉE. DÉCEMBRE 1888. N° 142

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE

Par E. ROUX er A. YERSIN.

Depuis Bretonneau, la diphthérie est regardée comme une
maladie spécifique et contagieuse ; aussi dans ces dernières
années a-t-on entrepris son étude au moyen des méthodes
microbiennes qui ont déjà permis de trouver la cause de beau-
coup d’autres maladies infectieuses. Nous ne rappellerons pas
ici tous les microcoques el tous les bacilles que l’on a retirés des
fausses membranes diphthéritiques, et qui tour à tour ont été
regardés comme spécifiques par ceux qui les ont isolés et décrits.
Nous parlerons surtout des travaux de M. Klebs et de M. Læffler
qui ont fourni des données exactes sur la nature de la diphthérie.

M. Klebs', le premier, a signalé un bacille spécial à la
diphthérie, il a décrit sa disposition dans les fausses membranes
à la surface des muqueuses malades ; mais c’est à M. Lœffler *
que l’on doit le travail le plus considérable qui ait été fait sur la
question. M. Lœffler a étudié 25 cas de diphthérie : dans la
plupart d'entre eux il a trouvé, à l'examen microscopique, le
bacille de M. Klebs ; dans 6 cas il a isolé et cultivé ce bacille à
l'état de pureté. Il a pu reproduire sur les pigeons, les poules,
les lapins et les cobayes la fausse membrane diphthéritique, en

1. Congrès de Wiesbadeu 1883.

2. Miltheilungen aus den Kaïserl. Gesundheitsamte, vol. 1], 4884, p. 421.
J
40

630 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

badigeonnant avec des cultures pures la muqueuse excoriée de la
conjonctive, de la trachée, du pharynx et du vagin. Il a étudié,
en outre, sur un Certain nombre d’espèces animales, les effets
de l’inoculation sous-cutanée ou intra-veineuse de ce bacille.
Malgré les résultats très intéressants qu'il a obtenus, M. Læffler
ne s’est pas cru autorisé à affirmer que le bacille de M. Klebs
est le bacille de la diphthérie, et à la fin de son mémoire il
expose les raisons qui sont pour ou contre la spécificité du
microbe qu'il vient d'étudier. Parmi les arguments opposés à
cette spécificité, il faut signaler : l'absence de paralysie chez Îles
animaux qui ont résisté aux inoculations, la présence d’un bacille
identique à celui de la diphthérie dans la bouche d’un enfant
sain, et enfin l’insuccès de la recherche du bacille dans certains
cas typiques de diphthérie.

Dans une seconde communication ‘, M. Lœffler rapporte
qu'il a trouvé ie bacille de Klebs dans dix nouveaux cas de
diphthérie, et il fait connaître en outre que, dans les fausses
membranes, il existe un microbe très voisin de celui de Klebs,
mais qui en diffère surtout en ce qu'il n’a aucune action nocive
sur les animaux.

Récemment M. G. Hoffmann ? a publié un mémoire sur la
diphthérie; il y confirme en partie les résultats que nous venons
de citer et déclare qu'il ne lui a pas été possible de lever le
doute qui existe encore au sujet de la spécificité du microbe
étudié par M. Læffler. M. Hoffmann a rencontré dans les fausses
membranes, à côté du bacille de Klebs, un autre bacille qui lui
ressemble, mais qui est dénué de virulence. Il a retrouvé le même
microbe dans des cas d’angines scarlatineuses et rubéoliques.
M. Hoffmann insiste sur les variations qu’il a constatées dans la
virulence du bacille supposé spécifique. Dans certains cas de
diphthérie, le bacille isolé s’est montré inoffensif pour les cobayes,
tandis que dans d’autres cas il tuait ces animaux comme l’a
décrit M. Læffler; d’autres fois il faisait mourir Les jeunes cobayes
et était sans effet sur les cobayes plus âgés. Enfin, M. Hoffmann
-a observé que dans les vieilles cultures l'organisme était moins

4. Socièlé des médecine de Berlin, séance du 21 avril 4887. V. Centralbatt für Bakt.,
vol. If, p. 105, 1887.

2. Recherches sur le bacille diphtherilique de Klebs et de Lœffjer eb sur son impor-
tance pathogene, par Georg. von Hoffmann. Wiener med. Wochenschrift, n°53 et 4, 1855.

CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 631

virulent, et que des cobayes inoculés avec les cultures anciennes
résistaient à l’inoculation d’une culture fraîche.

Il faut reconnaître que si le travail de M. Lœæffler n’a pas
résolu la question de l’étiologie de la diphthérie, il a très bien
préparé l'étude de cette maladie. Il nous a servi de point de
départ dans les recherches que nous publions aujourd’hui et qui
nous permettent d'affirmer que le bacille de MM. Klebs et Læffler
est le bacille spécifique de la diphthérie. En effet, nous l’avons
trouvé dans tous les cas (15) de diphthérie que nous avons exa-
minés ; avec les cultures pures de ce bacille nous avons, comme
M. LϾffler, reproduit les fausses membranes chez les animaux ;
mais, plus heureux que lui, nous avons pu leur donner des para-
lysies analogues à celles que l’on observe chez l'homme à la
suite dela diphthérie. Enfin nous avons démontré queles cultures
de ce bacille contiennent un poison qui, selon les doses aux-
quelles on l’injecte, tue rapidement les animaux ou leur donne
des paralysies sans l'intervention de microbes vivants.

ÎÏ. — BACILLE DE LA DIPHTHÉRIE.
Sa séparation. — Ses caractères. — Sa culture.

M. Klebs et après lui M. Læffler ont très bien décrit l'aspect
que présente au microscope la coupe d’une fausse membrane
diphthéritique et de la muqueuse à laquelle elle est adhérente *.
Dans les cas de diphthérie à marche rapide, après coloration des
coupes au bleu de méthylène, on voit que les parties superficielles
de la fausse membrane sont formées par une couche de petits
bacilles presque à l’état de pureté. Ce sont les bacilles de Klebs.
Ils sont séparés de la muqueuse, dépouillée de son épithélium,
par une couche de fibrine granuleuse et par un réseau fibrineux
adhérent au tissu muqueux, dont les vaisseaux très dilatés ont
laissé échapper des globules rouges. Souvent aussi la zone la
plus superficielle de la fausse membrane contient des microbes
divers, bâtonnets, microcoques et chainettes, mélangés aux
amas de bacilles de Klebs qui sont au contraire prédominants
immédiatement au-dessous. Ces petits bacilles, disposés comme
nous venons de le dire, sont seuls caractéristiques de la diphthé-

1. Voir aussi le bel ouvrage de M. Œrtel sur l'anatomie pathologique de la

diphthérie.

632 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

rie. {ls sont surtout nombreux dans les cas très infectieux,
tandis que les autres microbes se rencontrent dans beaucoup
d’angines qui n’ont rien de commun avec la diphthérie.

Pour extraire de ces fausses membranes le bacille spécifique
à l’état de pureté, voici le procédé que nous avons suivi; il
diffère très peu de celui mis en œuvre par M. Læffler. Avec un
fil de platine, on étale à la surface d’un tube de sérum coagulé
une petite parcelle de la fausse membrane. Avec le même fil,
sans le recharger de semence, on fait plusieurs stries sur diffé-
rents tubes de sérum. Dans les tubes ensemencés ies premiers il
se développe, à la température de 33°, le long des stries, un
grand nombre de colonies variées trop rapprochées pour être
reconnues, mais dans les tubes semés en dernier lieu les colonies
sont assez nettement séparées pour que l’on puisse distinguer
parmi elles celles du bacille spécifique. Elles se présentent sous
forme de petites taches arrondies, blanc grisâtre, dont le centre
est plus opaque que la périphérie. Elles poussent énergique-
ment sur le sérum et forment bientôt de petites plaques rondes,
grisâtres et saillantes. La rapidité du développement sur le
sérum fait que les colonies de ce bacille sont déjà très apparentes
avant que les organismes d’impureté aient pullulé. Lorsqu'on
a reconnu, au microscope, qu'une colonie est formée de bacilles
purs, on la sème de la mème façon sur plusieurs tubes de sérum
et on obtient ainsi rapidement des cultures pures.

Les colonies du bacille de la diphthérie croissent plus lente-
ment sur la gélose nutritive que sur le sérum, mais elles pren-
nent sur ce terrain un aspect très caractéristique. Au lieu de
faire des plaques à la façon ordinaire pour séparer les microbes
des fausses membranes, nous faisons à la surface de tubes de
gélose des ensemencements successifs au moyen du fil de pla-
tine, absolument comme nous l’avons décrit pour les tubes de
sérum. Le développement sur la gélose se fait bien à 33°. Au
bout de 30 à 48 heures, sur les tubes semés en dernier lieu, on
distingue de petites taches blanches plus épaisses au centre,
qui sont des colonies du bacille diphthérilique.

Le microbe de la diphthérie, ainsi isolé, et coloré au bleu
alcalin, comme l’a indiqué M. Læffler, paraît plus petit que dans
les fausses membranes. IL est à peu près de la longueur du
bacille de la tuberculose, mais plus épais; ses extrémités arron-

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 633

dies prennent plus fortement la couleur que la partie moyenne.
Lorsque la culture est plus âgée, les bâtonnets ne se colorent
plus uniformément; on voit dans l'intérieur des grains très
foncés qui donnent l'illusion de spores. Le milieu solide qui
parait lui convenir le mieux est le sérum solidifié de bœuf, de
mouton ou de cheval, après addition d’un peu de peptone.

Le bacille de la diphthérie est immobile. Il pousse abondam-
ment dans les milieux liquides; le bouillon de veau légèrement
alcalin préparé avec une partie de viande pour deux parties
d'eau nous a surtout servi dans ces recherches. Après quelques
jours de culture, le bouillon primitivement alcalin est devenu
acide; cette acidité persiste assez longtemps, puis elle est rem-
placée par une réaction alcaline si l’air a libre accès dans la
culture. Le développement dans le bouillon se fait sous forme
de petits grumeaux qui se fixent sur la paroi des vases. A l'abri
de l’air, dans le vide, le bacille se cultive facilement, mais moins
énergiquement cependant qu'à l'air; dans ce cas le bouillon
devient également acide et conserve cette réaction.

L'acidité est plus prononcée dans les cultures faites dans le
bouillon glycériné que dans le bouillon simple; dans ce milieu,
qui devient bientôt d'une acidité exagérée, le bacille perd sa
vitalité. Il en est de même quand il croît sur le sérum glycé-
riné, qui prend alors une réaction acide, ce qui ne s’observe
pas avec le sérum ordinaire. Le bacille se conserve longtemps sur
le sérum et dans les bouillons soit à l’étuve, soit à la tempé-
rature ordinaire. Nous avons gardé pendant plus de six mois
une culture faite dans le bouillon et enfermée dans des tubes
scellés à la lampe. Semée après ce long temps, elle a donné un
beau développement et s'est montrée très active sur le cobaye
et le lapin.

Dans les cultures anciennes, soit sur milieu solide, soit dans
milieu liquide, les bacilles ont presque tous perdu la propriété
de prendre les matières colorantes. Quelques-uns, qui pré-
sentent des formes renflées, arrondies ou en poires, se teignent
encore fortement. Ces variétés de formes sont bien connues de
tous ceux qui ont fait des cultures de ce microbe.

IT. -— ACTION SUR LES ANIMAUX.

inoculation sur les muqueuses. — Pour mettre en évidence le

634 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

rôle du bacille de Klebs dans la diphthérie, on devait tout d’a-
bord essayer de reproduire, avec les cultures pures, les fausses
membranes diphthéritiques. M. Læffler y a parfaitement réussi
sur les lapins, les pigeons et les poules, en excoriant, avec un
fil de platine chargé de culture, soit la muqueuse du pharynx,
soit celle de la conjonctive ou même celle de la vulve chez le
cobayes. En inoculant de la même façon le bacille de Klebs
dans la trachée des lapins et des pigeons, après trachéotomie, il
a souvent amené la mort de ces animaux. Il est nécessaire
pour donner la maladie de léser la muqueuse : un simple badi-
geonnage sur une muqueuse saine ne suffit pas à produire les
Fr croupales.

Nous ne pouvons que confirmer les résultats de M. Læffler;
les animaux de nos expériences se sont comportés comme
ceux des siennes, avec celte différence toutefois que l'issue
fatale est pour ainsi dire larègle pour nos inoculés après trachéo-
tomie. L'affection que l’on produit ainsi chez le lapin rappelle
le croup chez l'homme. La difficulté que l'animal éprouve à
respirer; le bruit que fait l'air en passant par la trachée obstruée ;
l'aspect de la trachée congestionnée et tapissée de fausses
membranes, le gonflement œdémateux des tissus et des gan-
glions du cou, rendent cette ressemblance absolument frap-
pante.

Inoculations sous-cutanées. — M. Læffler a trouvé que chez
le lapin et le pigeon l’inoculation sous-cutanée était loin d’être
aussi meurtrière que l’inoculation dans la trachée. L’injection
sous la peau des pigeons et des lapins ne faisait pas mourir ces
animaux, mais produisait simplement une nécrose des tissus. Les
cultures que nous avons obtenues sont beaucoup plus actives que
celles de M. LϾffler, puisqu'elles tuent les pigeons et les lapins
qui les reçoivent sous la peau. L'introduction, dans le muscle
pectoral et le tissu sous-cutané des pigeons, de un centimètre cube
d'une 13° culture de diphthérie, a causé leur mort en moins de
60 heures. Ils succombhent encore avec des doses inférieures à
1/2 centimètre cube, mais ils se rétablissent le plus souvent
lorsqu'ils sont inoculés avec un cinquième de centimètre cube.
A l’autopsie, on trouvé au point d'inoculation, sous la peau et
dans le muscle, un petit enduit grisâtre et un œdème gélatineux.
Le muscle qui a reçu une partie du liquide est gonflé et ses fibres

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 635

ont une teinte jaune. On ne rencontre aucune lésion apparente
des organes internes, si ce n’est de la congestion. Les vaisseaux
sont dilatés et contiennent un sang noir et mal coagulé.

Les lapins meurent aussi après une inoculation sous-cutanée,
si celle-ci a été faite avec une dose de culture suffisante. Un lapin
qui avait reçu sous la peau, 4° d’une 13° culture dans le bouillon,
succomba en moins de #4 jours ; un autre qui avait été inoculé de
la mème manière, avec 2°, mourut le 5° jour, tandis qu'un troi-
sième, auquel on avait injecté seulement 1°° de la même culture,
finit par se rétablir. Après l'introduction du bacille de la diphthérie
sous la peau d’un lapin, on observe bientôt un œdème consi-
dérable: l’animal devient triste, ne mange plus et meurt sans
convulsions, dans l'attitude où il se trouve. L’autopsie montre
au point d’inoculation un œdème étendu infiltrant un tissu induré
avec piqueté hémorrhagique. un gonflement des ganglions de
l’aine et de l’aisselle, une congestion de l’épiploon et du mésentère
avec de petites ecchymoses le long des vaisseaux. Le foie friable
présente une teinte jaune, etilest le siège d’une dégénérescence
graisseuse. L’épanchement pleurétique est exceptionnel et les
poumons sont presque toujours sains.

Les cobayes sont plus sensibles que les lapins à l’action du
bacille de la diphthérie. L'introduction sous leur peau d’une petite
quantité de culture amène toujours la mort, souvent en moins
de 36 heures, avec des lésions typiques que M. Læffler a bien dé-
crites. Ces lésions consistent en un enduit membraneux grisâtre
limité au point d'inoculation, en un œdème gélatineux plus ou
moins étendu, et en une dilatation générale des vaisseaux
qui se traduit par la congestion des ganglions et des organes
internes, principalement des capsules surrénales. Le plus sou-
vent un épanchement séreux remplit les plèvres, et parfois le
tissu pulmonaire est splénisé. Il est remarquable que la pleuré-
sie, qui est la règle chez le cobaye après l’inoculation de la diph-
thérie, ne se rencontre que très rarement chez le lapin; au cen-
traire, la dégénérescence du foie qui est fréquente chez le lapin
manque chez le cobaye.

Injections intra-veineuses. —L'injectionintra-veineuse de nos
cultures pures sur sérum ou dans bouillon, nous a donné
chez les lapins des résultats différents de ceux qu’a obtenus
M. Læffler. Cet auteur n’a jamais vu mourir les lapins à la suite

636 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de ces inoculations ; au contraire, leur mort est la règle après
l'injection intra-veineuse de nos cultures. A la fin de ce mémoire.
on trouvera le récit de plusieurs expériences faites sur ce point;
nous nous bornerons à dire qu'à la suite de l'introduction dans
leurs veines de 1° de culture, les lapins meurent en général en
moins de 60 heures. Les lésions que l’on trouve à l’autopsie
sont une congestion générale des organes abdominaux, une
dilatation des vaisseaux, le gonflement des ganglions, une né-
phrite aiguë et très souvent une dégénérescence graisseuse
du foie qui présente cette teinte jaune dont nous avons déjà parlé.
Chez les animaux qui ne succombent pas dans un aussi court
délai, il survient au bout de quelques jours des paralysies
typiques sur lesquelles nous reviendrons plus tard.

Inoculations dans le péritoine. — L'inoculation du bacille de
la diphthérie dans le péritoire tue les cobayes moins rapidement
que l’inoculation sous-cutanée. Des cobayes inoculés, dans la
cavité abdominale, avec 1° et 2° de culture, mouraient le 3° et
le 4° jour, tandis que des cobayes témoins inoculés sous la peau,
avec les mêmes doses, succombaient en moins de 24 heures.
Dans une autre expérience, un cobaye inoculé dans le péritoine
a vécu quatre jours de plus qu'un autre inoculé dans le tissu
sous-cutané.

Virulence des cultures anciennes. — Lorsque les cultures
inoculées sont anciennes, la mort est moins rapide, mais il
suffit de les renouveler pour qu’elles reprennent toute leur acti-
vilé. Une culture sur sérum conservée à l'air, pendant cinq mois,
à la température ordinaire mais à l'abri de la lumière, inoculée
directement à un cobaye, l’a tué en 5 jours; après avoir été
rajeunie elle a fait périr un second cobaye en 24 heures. Il n’y
avait donc pas à proprement parler d'alténuation de Ja culture
ancienne. Les bacilles qui ont été isolés des divers cas de
diphthérie qui nous ont servi dans cette étude se sont toujours
montrés virulents. Pour les cobayes nous n'avons jamais ren-
contré les différences dans la virulence signalées par M. Hoff-
-mann. De même nos cultures dans le bouillon se sont montrées
actives sur les cochons d'Inde après 23 jours et plus de séjour à
l'étuve. Il ne paraît done pas que la virulence du bacille de
Klebs soil aussi fragile que quelques auteurs l’ont prétendu.

Les variations de la virulence s’accusent quand on expéri-

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 637

mente sur des animaux moins sensibles que les cobayes à l’action
du virus diphthéritique. Les inoculations de cultures un peu
anciennes sous la peau des pigeons et dans les veines des lapins
ne tuent pas ces animaux, elles peuventamener chez eux des para-
lysies tardives ou ne produire aucun effet. Ces cultures renou-
velées reprennent toute leur activité. Cependant, on obtient
quelquefois des cultures récentes qui tuent les cobayes à tout
coup et qui agissent d’une manière inconstante sur le pigeon et
le lapin ‘. Mais il ne s’agit pas là d’une atténualion régulière
obtenue dans des conditions de culture bien déterminées.

Le bacille de la diphthérie est-il plus virulent pour Îles
animaux quand il vient d’une diphthérie humaine très infec-
tieuse ou quand il a été reliré d'une diphthérie bénigne? Sans
pouvoir nous prononcer définitivement sur celle question, nous
disons que, des fausses membranes d’un cas très bénin, nous
avons isolé un bacille diphthéritique dont les cultures étaient
très actives sur les lapins.

Recherche du bacille de la diphthérie dans les organes. — Un
des points les plus intéressants dans l'histoire de la diphthérie est
le suivant : à savoir que l’on ne trouve l'organisme pathogène
que dans les fausses membranes et qu’il est absent des organes et
du sang des personnes qui ont succombé à cette maladie. Ilen est
de mème chez les animaux qui meurent à la suite d’une infection
expérimentale. M. Læffler n’a jamais trouvé le bacille de Klebs
qu'au point de l’inoculation. Nous avons fait un grand nombre
d'expériences pour savoir si avant la mort il ne se fait pas en quel-
que point du corps de l'animal une culture plus ou moius abon-
dante, mais de courte durée. Nous avons inoculé une série de:
cobayes sous la peau et nous les avons sacrifiés de deux heures
en deux heures à partir du moment de l'inoculation. Déjà après
4 heures, l'œdème est manifeste au point de l'inoculation; les
bacilles augmentent dans cet œdème local jusqu'à la 6° ou la
8e heure, un certain nombre sont enfermés dans les cellules, mais
bientôt leur nombre va en décroissant, et au moment de la
mort de l'animal il y a moins de microbes au lieu de l'injection
qu'il n’y en avait 6 ou 8 heures après qu’elle venait d'être faite.
L'ensemencement du sang et de la pulpe des organes des cobayes

1. Les animaux qui ont résisté à l'inoculation de ces cultures ont toujours suc-
combé quand ils ont été éprouvés avec des cultures très actives.

038 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ainsi sacrifiés reste stérile. Une seule fois, chez un cobaye pendu
après la 6° heure, la pulpe du foie à donné une culture. Le
liquide péritonéal, quand l’inoculation est faite sous la peau du
ventre, etl’ædèmelocalontseuls donné constammentdes cultures.
Le liquide pleurétique de cobayes morts de diphthérie, injecté
à la dose de plusieurs centimètres cubes à d’autres cobayes, ne
leur a causé aucun ‘malaise. Le sang et les organes ne renfer-
ment donc que très accidentellement le bacille de la diphthérie,
il n’y pullule pas. Il semble même qu’au point d’inoculation
son développement soit bientôt entravé'. Cette particularité rend
très difficile la transmission de la maladie d’un animal à un
autre au moyen des produits recueillis à l’autopsie. Quand on
inocule un second cobaye avec la fausse membrane ou l’ædème
d'un premier qui vient de succomber, ce second cobaye meurt
avec un retard considérable, et un troisième inoculé avec les
matières prises à l’autopsie du second ne meurt pas. Il est donc
impossible de faire des passages successifs.

On ne trouve pas non plus, à l'examen au microscope, de
microbes dans le sang ni dans les organes des lapins qui ont
succombé à l'injection intra-veineuse de culture de diphthérie. El
faut semer de grandes quantités de sang ou de pulpe de rate pour
obtenir de temps en temps une culture. À aucun moment, avant
la mort de l’animal, on ne peut surprendre une culture notable
dans le sang ou les organes. La rate d’un lapin, sacrifié par
pendaison 24 heures après avoir recu un centimètre cube de cul-
ture dans les veines, est enlevée, avec pureté, et introduite
tout entière dans un tube stérilisé. Après plusieurs jours passés
à l'étuve à 33°, aucun organisme ne s’est développé dans
cette rate. Si l'animal a été sacrifié seulement 5 ou 6 heures
après l'injection, on ne trouve que très difficilement des
bacilles au microscope, mais la rate mise à l’étuve avec les pré-
cautions que nous venons de dire pullule de microbes de la
diphthérie après 12 ou 2% heures ?. Cependant, ces lapins,
chez lesquels il n’y a plus de microbes diphthéritiques 16 heures

4. Dans les fausses membranes produites chez le lapin par inoculation dans la
trachée, ou chez le cobaye par injection sous-cutanée, les microbes sout beaucoup
moins abondants que dans les membranes de diphthérie humaine.

2. Ce moyen est très commode pour s'assurer que certains microbes se sont
arrètés dans les organes après avoir été injectés dans le sang. I indique, beaucoup

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 639

après leur introduction dans le sang, succombent vers la 30° ou
la 36° heure. La maladie poursuit son cours malgré la dispari-
tion du bacille qui la cause. Nous verrons plus tard l'explication
de ces faits qui paraissent si différents de ceux que l’on observe
d'ordinaire dans le cours des autres maladies infectieuses.

ITT. — DES PARALYSIES DIPHTHÉRITIQUES EXPÉRIMENTALES,

Dans son Mémoire que nous avons déjà si souvent cité,
M. Lœffler écrit qu'il n’a pas vu de paralysie diphthéritique sur-
venir chez les animaux qui avaient résisté à l’inoculation du
bacille de Klebs. Pourmettresurleurs gardesles expérimentateurs
qui croiraient avoir produit des paralysies diphthéritiques, il
rapporte l’histoire d’un pigeon qui guérit après une inoculation
dans la bouche et au muscle pectoral. Quatre semaines après, le
pigeon présentait de la faiblesse des jambes et des ailes, au point
que les mouvements étaient impossibles. Après une durée de
quinze jours, cet état s’améliora et l'animal revint à la santé.
Inoculé une seconde fois, il fut pris de nouveau de troubles mo-
teurs et mourut. À l'autopsie, M. Læffler trouva des dépôts
d'acide urique dans les articulations et sur les tendons : il en con-
clut que le pigeon avait souffert d'une arthrite urique récidivée
après la seconde inoculation. De même, une poule inoculée dans
la trachée ne pouvait se tenir debout que les jambes écartées,
elle présentait de l’incoordination des mouvements et était dans
l'impossibilité de voler, et cela quatre semaines après l’inocula-
tion. Cette poule fut sacrifiée, et l’autopsie montra une déviation
du sternum et des côtes avec atrophie des muscles et ramollis-
sement des vertèbres. L'auteur conclut à du rachitisme. Un

plus sûrement que l'examen des coupes, et même que les ensemencements, tels
qu’on les pratique d'ordinaire, si un organe contient un microorganisme vivant.
Il peut s'appliquer non seulement à la rate, mais aussi au foie et aux reins. Il
suffit, en effet, de retirer avec soin l'estomac et les intestins de l'animal, de remplir
la cavité abdominale avec du papier flambé pour que le cadavre puisse être
- conservé quelques heures à l'étuve, sans être envahi par des organismes étrangers.
Dans ces conditions on constate bientôt que le foie et le poumon contiennent
comme la rate beaucoup de bacilles diphthéritiques. De plus il est très intéressant
d'étudier la virulence des microbes qui ont ainsi vécu pendant des temps varia-
bles dans un organisme vivant. Le fait même de leur culture dans le foie ou la
rate dun animal sacrifié n’est pas sans influence sur leurs qualités virulentes;
c’est un sujet sur lequel nous reviendrons plus tard.

ES

640 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

autre pigeon, inoculé de la diphthérie, fut pris aussi de troubles
moteurs : M. Læffler les attribue à un myxôme qu'il trouva dans
le canal rachidien.

Comme il est possible, avec des microbes divers, de provo-
quer sur les muqueuses des animaux des fausses membranes
semblables à celles de la diphthérie ‘, cette absence constante
d'un phénomène aussi caractéristique que la paralysie était bien
faite pour faire douter que le bacille de MM. Klebs et Lœffler
füt la cause de la diphthérie.

Des paralysies s’observent cependant chez les animaux ino-
culés de la diphthérie, soit dans la trachée, soit sous la peau.
C’est même un phénomène très fréquent lorsque les animaux ne
succombent pas à une intoxication trop rapide.

19 Paralysie à la suite de l'inoculation dans le pharynx et
dans la trachée. — Le premier exemple de paralysie diphthé-
rique expérimentale que nous ayons observé nous a été donné
par un pigeon inoculé dans le pharynx avec une culture pure du
bacille de M. Klebs. Après avoir eu de belles fausses mem-
branes, ce pigeon paraissait guéri lorsque après trois semaines
il devint faible, au point qu'il se tenait difficilement debout et
que, quand on l’obligeait à marcher, il avançait à peine de quel-
ques pas, les paltes écartées, puis tombait en avant. Il ne pou-
vait se relever quand on le mettait sur le dos, et n'avait aucune
force dans les ailes. Cet état de faiblesse musculaire dura une
semaine, il survint alors une amélioration dans les mouvements
des pattes. Cependant l'animal finit par mourir cinq semaines
après l'inoculation. À l’autopsie, on constata une grande mai-
greur généralé, mais aucune lésion des articulations ou du
système nerveux qui püt expliquer les troubles moteurs. N'est-ce
pas là uu exemple de paralysie diphthéritique caractéristique
succédant à une angine provoquée ?

Lorsque les lapins résistent aux accidents immédiats que pro-
voque l'inoculation de la diphthérie dans la trachée, ils présen-
tent le plus souvent des symptômes paralytiques. En voici un
-exemple : un lapin inoculé dans la trachée, après la trachéo-
tomie, présenta dès le second jour de la dyspnée, avec respira-
tion bruyante, et parfois dans la gorge comme un bruit de
drapeau. Les symptômes s’amendèrent, mais le sixième jour, on

L. Talamon, Progrés médical, 1881, p. 112 et 498.

CONTRIBUTION À L’ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE, 641
remarqua que les paltes de derrière élaient paralysées, elles
ne se détendaient plus dans la marche et l'animal ñ’avançait
plus qu’à pas petits et incomplets. Cette paralysie devint rapide-
ment progressive et le lapin mourut. Les ganglions du cou
étaient gros et œdémateux, la trachée congestionnée ne contenait
plus de fausses membranes, le poumon était œdématié.

29 Paralysies à la suite d'injections intra-veineuses. — Nous
avons dit qu'à la suite de l'injection de 1* de culture de diphthérie
dans les veines les lapins mouraient fréquemment en moins de
4 jours. Le plus souvent la maladie se termine par une paralysie qui
s'étend à tout le corps et qui ne précède la mort que de quelques
heures. Lorsque la mortne survient pas dans un délai aussi court,
la paralysie est plus facile à observer. Elle débute d'ordinaire par
le train postérieur, et parfois elle est si rapidement progressive
qu'en un ou deux jours elle a envahi tout le corps, etque l’animal
meurt par arrêt de la respiration et du cœur. D’autres fois, la para-
lysie reste limitée pendant un certain temps aux pattes posté-
rieures ; elle commence par une faiblesse des muscles qui donne
à la démarche une allure particulière, puis elle devient plus com-
plète,et les mouvements du train antérieur sont seuls conservés.
La maladie est presque toujours envahissante ; la paralysie gagne
le cou et les membres antérieurs. Il n'est pas rare de voir la
mort survenir subitement sans convulsions, surprenant l’ani-
mal dans l'attitude dans laquelle on venait de le voir quelques
instants auparavant. Un groupe de muscles peut être frappé tout
d’abord; ainsi, on voit des lapins dont les pattes de derrière sont
écartées du corps, comme si l’action des adducteurs était suppri-
mée. Quand ils marchent, leurs membres postérieurs ne se
détendent plus, ils avancent l’un après l’autre sans se détacher
du sol. Lorsque les pattes de devant sont atteintes à leur tour,
l'allure devient comme rampante. Bien que la paraplégie soit le
début le plus fréquent, la paralysie peut aussi porter sur les
muscles du cou, de façon que la tète ne peut se soulever du sol,
et aussi sur les muscles du larynx, ce qui donne de la raucité à
la voix.

A l’autopsie de ces lapins paralytiques, on tiouve, quand la
maladie n’a pas trop duré, de la congestion des ganglions et des
divers organes, un état graisseux du foie. Quelquefois la consis-
tance de la moelle épinière a paru diminuée.

642 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR.

Les pigeons guérissent de ces paralysies bien plus fréquem-
ment que les lapins, chez lesquels elles sont presque toujours
mortelles.

L'existence de ces paralysies, à la suite de l’inoculation du
microbe de MM. Klebs et Lœæffler, complète la ressemblance de
la maladie expérimentale avec la maladie naturelle, et établit
d’une façon certaine le rôle spécifique de ce bacille.

LV. — LE Poison DIPHTHÉRITIQUE.

Nous avons vu que le bacille de la diphthérie ne pullule pas
dans les organes des personnes ou des animaux alteints de cette
maladie, qu'on ne le trouve que dans les fausses membranes
ou au point d'inoculation. Comment une culture en un point si
restreint du corps donne-t-elle lieu à une infection générale et
à des lésions vasculaires de tous les organes? On a pensé
qu’au lieu de la culture un poison très actif était élaboré, el que
de là il se répandait dans tout l'organisme. MM. Læffler et
Œrtel, entre autres, croient à l'existence de ce poison: M. Baum-
garten, au contraire, pense qu'il est inutile d'invoquer l’action
d'un produit chimique hypothétique, et il admet, par erreur, que
les microbes de la diphtérie peuvent envahir les organes.

Le poison diphtéritique existe cependant et on peut le mettre
en évidence dans les cultures du bacille de Klebs.

Filtrons sur porcelaine une culture dans du bouillon de veau,
après qu’elle est restée sept jours à l’étuve; tous les microbes .
sont retenus par le filtre, et le liquide obtenu est parfaitement
limpide et légèrement acide. Il ne contient aucun organisme
vivant; laissé à l’étuve il ne se trouble point; ajouté à du bouillon
alcalin il ne donne pas de culture; introduit aux doses de
2 à 4e sous la peau des animaux, il ne les rend pas malades. Il
n'en est plus ainsi si on emploie des doses plus fortes, si l’on
injecte, par exemple, 35° dans la cavité péritonéale d’un cobaye
ou dans les veines d’un lapin". Immédiatement après l'opération
le cobaye paraît bien portant, mais après deux ou trois jours,
son poil se hérisse, il ne mange plus, un écoulement sangui-
nolent se produit quelquefois par lurèthre, la faiblesse de

1. Une semblable quantité de bouillon pur peut être injectée dans la cavité abdo-

minale d'un cobaye ou dans les veines d'un lapin, et cela à plusieurs reprises,
sans leur causer le moindre malaise.

‘

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 643

l'animal va en augmentant, sa respiration devient irrégulière,
et il meurt le 5° ou le 6° jour après l'injection. A l’autopsie, les
ganglions des aisselles et des aines son congestionnés, tous les
vaisseaux sont dilatés, surtout ceux des reins et des capsules
surrénales, l'urine est parfois sanglante ; il y a des ecchymoses
le long des vaisseaux, et les plèvres contiennent un épanchement
séreux. :

Les accidents qui suivent l'injection de ces produits diphté-
riques solubles varient en intensité selon la dose du poison con-
tenu dans la culture. Nous avons vu, chez un cobaye, de la dys-
pnée survenir le 5° jour après l'injection et persister pendant
toute une semaine. La respiration était seulement diaphragma-
tique et saccadée; lorsqu'on obligeait l’animal à courir, l’oppres-
sion devenait si forte qu’il tombait presque asphyxié. Ces symp-
tômes s’amendèrent peu à peu et le cobaye guérit. Plus tard, il
succomba à une inoculation sous-cutanée de bacille de la diphté-
rie. Cette observation n’a-t-elle pas la plus grande analogie avec
celles recueillies chez l’homme, et où on signale, après la diph-
thérie, la paralysies de certains muscles respiratoires?

Les symptômes de paralysie ne tardent pas à se montrer
chez les lapins qui ont reçu cette mème dose de 35cc de liquide
filtré dans les veines. Le 4° ou le 5° jour, quelquefois plus tard,
de la faiblesse musculaire survient dans le train postérieur, elle
s'étend bientôt à tout le corps, et l’animal, devenu complètement
paralysé, succombe rapidement. Lorsque l’intoxication est moins
aiguë, la paralysie peut rester quelque temps limitée à un
groupe de muscles. Dans un cas, les muscles extenseurs des
pattes de derrière ne fonctionnaient plus qu'avec une extrème
difficulté; cet état était accompagné de raucité de la voix; il
dura deux jours, puis parut s'améliorer, mais une rechute se
produisit avec extension de la paralysie à tout le corps, et la mort
survint par arrêt de la respiration.

Dans les cultures plus anciennes, le poison diphtéritique est
plus abondant et les effets de l'injection du liquide filtré sont
plus rapides. Un lapin qui reçoit dans les veines 35° du liquide
préparé avec une culture âgée de 42 jours, ne paraït éprouver
aucun malaise pendant les deux premières heures qui sui-
vent l'opération. Plus tard il devient inquiet; les muscles de
son abdomen semblent relâchés, il se couche fréquemment, le

64% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ventre appliqué sur le sol de la cage, pour se relever bientôt ; il
rend desexcréments mous et parfois est pris d’une diarrhée pro-
fuse. Larespiration devient anxiense, irrégulière. L'animal est
faible, il tremble sur ses pattes, ne peut plus se mouvoiræet meurt
sans convulsions après quelques hoquets. Toute la scène s’est
déroulée en cinq ou six heures. À l’autopsie on trouve que le
sang est mal coagulé et que les intestins sont distendus par un
iiquide diarrhéique. Un cobaye qui reçoit 35e du même liquide
dans le péritoine meurt dans une dizaine d'heures, après avoir
éprouvé une grande gène à respirer. L’autopsie montre la con-
gestion caractéristique des viscères, surtout des reins et des
capsules surrénales, et souventun épanchement dans les plèvres.

Avec les cultures anciennes dépouillées de microbes, nous
avons donc produit une diphthérie toxique, suraiguë, évoluant
en quelques heures.

L'existence de la diarrhée que nous venons de signaler chez
les lapins qui ont reçu de grandes doses de poison diphthéritique
nous a donné l’idée de rechercher si le même symptôme ne se
rencontrait pas chez l'homme dans les formes toxiques de la
diphthérie. Bien que le fait soit à peine signalé, la diarrhée est
très commune dans la diphthérie infectieuse. Nous tenons ce
renseignement de Mie Daussoir, surveillante du pavillon des
diphthériques et qui est mieux placée que personne pour être
bien renseignée sur ce point. La diarrhée ne manque guère dans
les formes toxiques et elle est un signe pronostique fâcheux.

Quand les cultures du bacille de la diphthérie sont aussi
chargées en produits toxiques, il n’est pas besoin, pour observer
ses effets sur les animaux, d'employer de si fortes doses et de
recourir aux injections dans les veines ou dans le périloine.
Introduisons sous la peau d’une série de cobayes des quantités
de liquide toxique débarrassé de microbes, variant de 1/5 de
centimètre cube à 2 centimètres cubes, et comparons les effels
de ces injections à ceux de l’inoculation d’une culture fraîche
de bacilles de Klebs pratiquée sur des cobayes témoins. Tous
les animaux qui ont reçu le liquide filtré présentent bientôt un
ædème au point d'injection, tout comme les témoins en ont
un au lieu d’inoculation; ils sont bientôt hérissés et ont la
respiration haletante comme ceux qui ont reçu la culture vivante.
Ils meurent comme eux sans que pendant tout le temps de

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 645

l'expérience on puisse saisir une différence dans l'attitude des
uns et des autres. Les cobayes auxquels on a donné le plus
de liquide toxique meurent en moins de 24 heures, les auires
en 48 heures ou en 3 jours selon les doses reçues. Les lésions
sont identiques, qu'ils aient succombé à l'injection du poison
diphthéritique ou à l’inoculation du bacille de la diphthérie.
Même œdème, même tissu induré au point d'injection; seule la
fausse membrane manque chez les premiers. Chez tous, même
congestion hémorragique des organes, surtout des reins et des
capsules surrénales ; même épanchement dans les plèvres. La
maladie, symptômes et lésions, est donnée aussi sûrement par
l'injection du poison que par l’inoculation du bacille.

Pour que les cobayes résistent à ces substances toxiques, il
faut les leur injecter à doses très petites. Des cobayes qui avaient
reçu sous Ja peau 1/15 de centimètre cube de liquide filtré
eurent de l’ædème et une nécrose assez étendue de la peau.

Les lapins meurent comme les cobayes à la suite de l’injec-
tion sous la peau des produits diphthéritiques solubles. Avec des
doses de 4°, de 2 et de 1cc la mort survint en 48 heures, en 60et
en 80 heures, avec de l’œdème au point d'injection, de la dilata-
tion des vaisseaux, des hémorrhagies, et cet état jaune du foie
sur lequel nous avons déjà insisté. Les pigeons succombent
après l'introduction de moins de un centimètre cube dans le
muscle pectoral.

Il suffit d'introduire trois à quatre gouttes du même liquide
sous la peau pour tuer en quelques heures les petits oiseaux, qui
de tous les animaux sont les plus sensibles à l’action du microbe
de la diphthérie.

Quant aux animaux, comme les souris et les rats, qui ne de-
viennent pas malades, quand on leur inocule sous la peau de
grandes quantités de bacilles de Klebs, ils montrent aussi une
remarquable résistance vis-à-vis du poison diphthéritique. Une
dose de 2e, qui fait périr un lapin de 3 kilogrammes en 60 heures,
est sans effet sur une souris du poids de 10 grammes. Chose
plus surprenante encore, on n’observe aucune nécrose de la
peau, chez la souris, au point d'injection, tandis que l'injection
des doses les plus faibles (1/15 de centimètre cube) amène
une mortification étendue de la peau des cobayes. Il est cepen-
dant possible de faire périr une souris avec le poison diphthé-

41

646 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ritique en concentrant le liquide dans le vide et en injec-
tant une très forte dose sous un petit volume. Nous avons
ainsi tué une souris en faisant pénétrer sous sa peau 1°% de
liquide concentré correspondant à 17: de liquide toxique, quantité
suffisante pour faire périr plus de 80 cobayes.

L’injection aux animaux de doses variables du poison soluble
de la diphthérie, nous a montré les diverses formes de l'intoxi-
cation diphthéritique, depuis celles qui amènent la mort en quel-
ques heures jusqu à celles qui, au bout d’un temps plus ou moins
long, se traduisent par des paralysies mortelles ou susceptibles
de guérison. Ges manifestations tardives sont très intéressantes,
et si quelque jour on est conduit à un emploi des matières solu-
bles élaborées par les microbes dans un but prophylactique, il
ne faudra pas perdre de vue cette possibilité d’une action dont
les effets ne se verront que plus tard. Pour l'emploi de ces
substances, il ne sera pas suffisant d'établir quelle est la tolérance
immédiate du sujet auquel on les administre, mais il faudra
aussi songer aux eflets à longue échéance. L’innocuité de la
vaccination chimique devra être prouvée dans chaque cas, avec
autant de précision que la vaccination par les virus vivants.
Les essais faits par l’un de nous semblent montrer que, même
après un temps très long, les produits solubles du charbon, de
la septicémie et du charbon symptomatique ne causent aucune
affection aux animaux qui les ont reçus. Il n'en est pas ainsi
pour la diphthérie et la maladie causée par le bacille pyocya-
nique‘. L'avenir nous montrera sans doute que nombre d’affec-
ions organiques dont nous ne voyons pas clairement la cause
sont dues à des actions tardives de ce genre. Beaucoup de né-
phrites ou de maladies nerveuses dont on ignore l’origine ou que
l'on rapporte à des causes banales sont peut-être la suite d’une
infection microbieune qui a passé inaperçue.

Quelle est la nature du poison diphthéritique ? Est-ce un
aicaloïde ou une diastase ? Nous sommes encore trop peu avan-
cés pour répondre à cette question, nous nous contenterons de
rapporter quelques faits qui tendent à l’éclaircir. L'activité de la
matière toxique est très diminuée par la chaleur. Un liquide,
dont 2e, injectés sous la peau tuent un lapin, ne cause plus

aucun mal, même injecté dans les veines à la dose de 35°,

1. Charrin, Société de biologie,

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 647

s’il a été chauffé préalablement à 100° pendant 10 minutes.
Et cependant l'injection intra-veineuse est un mode d’intoxica-
tion plus meurtrier que l'injection sous la peau. Après un
chauffage de deux heures. en tube clos, à la température de 58°,
un liquide de culture filtré tuait avec un long retard un cobaye
auquel on en injectait un centimètre cube. Après deux heures
de chauffe, il causait, à la mème dose, un peu d'oedème au point
d'injection sans: amener la mort. Le même liquide non chauffé
tuait. les cobayes à la dose de 1/5 de centimètre cube. Conservé
à l’air, le poison diphthéritique paraît perdre assez vite ses
propriétés toxiques, il les garde plus longtemps au contraire s’il
est placé dans des tubes clos à labri de l’air et de la lumière. La
filtration sur porcelaine est le procédé qui permet le mieux de
séparer le liquide de culture du bacille et qui altère le moins ses
propriétés toxiques. Bien que nous n’ayons pas isolé la substance
active des cultures de diphthérie, il nous semble que la manière
dont elle se comporte à la chaleur et à 2 nous parait la
rapprocher des diastases. :

Est-il possible d’accoutumer les animaux au poison diphthé-
ritique et de produire chez eux, par ce moyen, l'immunité contre
la diphthérie? L'étude de cette question fera l’objet d'un pro-
chain mémoire. Nous croyons qu’on peut déjà se faire une idée
assez juste de ce qu'il serait possible de faire pour diminuer
le nombre des cas de diphthérie. Toutes les expériences sur les
animaux tendent à prouver que le microbe de la diphthérie ne
se développe que sur une muqueuse déjà malade ; il est probable
que le plus souvent il en est ainsi chez l’homme. Aussi voit-on
que la diphthérie est surlout fréquente à la suite de la rougeole
et de la scarlatine. On ne doit donc jamais négliger l’angine dé
ces deux maladies, il faut pratiquer fréquemment des lavages
phéniqués de la bouche et du pharynx chez les enfants atteints
de rougeole et de scarlatine, puisque l'acide phéniquè paraît être
l’antiseptique le plus efficace même dans le cas de diphthérie
confirmée. Cette précaution devrait être suivie systématiquement,
surtout dans les hôpitaux d'enfants, où l’on voit si souvent la
rougeole et la scarlatine se compliquer dediphthérie. Les angines
les plus simples chez les enfants exigent les mêmes attentions:
M. Lœffler a observé le bacille de la diphthérie dans la bouche
d'un enfant qui n'avait pas cetté maladie. Peut-être ce bâcille

648 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

est-il très répandu ? Peut-être est-il l'hôte fréquent et inoffensif
de la bouche et du pharynx? Dépourvu de virulence, et impuis-
sant devant une muqueuse saine, il se développera si la muqueuse
s'enflamme ou se dépouille de son revêtement d’épithélium. Sur
ce milieu favorable il reprendra sa virulence et élaborera son
poison qui va pénétrer l'organisme ; lui-même sera prêt pour de
nouvelles contagions.

Ce sont là des hypothèses, mais elles ne sont pas en contra-
diction avec les expériences faites et elles en suggèrent de
nouvelles.

A l’appui de ce qui précède, nous croyons utile de donner un
résumé des observations * des cas de diphthérie qui nous ont
surtout fourni la matière de notre travail, ainsi que le récit
succint de quelques-unes des expériences qui se rapportent aux
points principaux abordés dans notre mémoire.

Cas I. — B... G..., âgé de 10 ans, entre à l'hôpital le 27 mai 1887 (au
3° jour de sa maladie). Il a une angine diphtéritique très intense, à forme
toxique; les ganglions du cou sont très tuméfiés. L'enfant meurt le jour
même de son entrée à l'hôpital.

L'autopsie est faite 24 heures après la mort. On trouve les 2 amygdales
très grosses (comme des œufs de pigeon). Elles sont recouvertes de fausses
membranes grisâtres, peu adhérentes. La muqueuse du larynx est tapis-
sée par places de minces fausses membranes. La trachée est très conges-
tionnée. Les poumons sont un peu congestionnés; surtout le droit dans
son lobe inférieur. La rate est grosse, ferme. Les reins sont congestionnés.
Sur le foie on note plusieurs taches blanches qui, à la coupe, s’étendentpeu
profondément.

Des préparations colorées, faites avec le suc de la fausse membrane des
amygdales, montrent des bacilles de Klebs nombreux et peu d’impuretés.
On ensemence des tubes qui donnent des cultures pures du bacille spé-
cifique.

Gas II. — À... L..., âgé de 40 ans, tombe malade le 20 mai 1887; le 30, il
entre à l'hôpital, et présente alors de grandes plaques blanches sur les 2 amyg-
dales et le voile du palais. Son urine contient de l’albumine en assez grande
quantité. Le {27 juin, on note un peu de paralysie du voile du palais (voix
nasillarde, les liquides ressortent par le nez). Les 2, 3 et 4 juin, l’état local
de la gorge s'améliore, mais l’albuminurie persiste. Le 6 juin, dans l’après-
midi, l'enfant est subitement pris d'angoisse et meurt en quelques instants.

1. Ces observations ont été prises à l'hôpital des Enfants Malades, où les chefs
du service de la diphthérie accueillent si libéralement les travailleurs.

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 649

Pendant son séjour à l'hôpital, la température moyenne de l'enfant était
de 38,

L'aulopsie a lieu 24 heures après la mort. On trouve 1/2 litre de sérosité
environ dans les plèvres. Les poumons sont congestionnés avec quelques
points hépatisés. Les amygdales, de la grosseur d’une amande, sont profon-
dément ulcérées. Elles ne présentent aucun dépôt membraneux. La muscu-
lature du voile du palais est pâle, avec des îlots jaunâtres. Le larynx est
normal, la trachée congestionnée. L'intestin est congestionné; son contenu
est liquide. La rate est de volume normal, ferme. Les reins ne sont pas
hypertrophiés. Ils se laissent facilement décortiquer; la substance corticale
en est pâle, un peu jaunâtre.

Le cerveau est normal à la coupe. On ensemence avec le bulbe plusieurs
tubes de gélose qui restent stériles. De l'urine on a retiré un bacille très
semblable à celui de la diphthérie, mais dépourvu de virulence. Ce bacille
était contenu dans les cellules.

Cas III. — E...Ch..., àgé de 5 ans, entre à l'hôpital pour une conjonctivite.
Il y prend la diphthérie; le 19 janvier 1888, on le passe dans le pavillon
d'isolement où il meurt 24 heures après. L'autopsie est faite le 21 janvier.
On trouve les poumons sains, les amygdales sont peu hypertrophiées; leur
surface est grisâtre; elles sont recouvertes, ainsi que le voile du palais, la
luette, le pharynx, de fausses membranes peu épaisses. Le larynx et la tra-
chée sont également tapissés de minces fausses membranes. Sur des prépa-
rations colorées faites avec la fausse membrane amygdalienne et laryngée,
on voit des bacilles spécifiques nombreux et peu d’impuretés. On ensemence
des tubes de sérum qui donnent des colonies pures.

Cas IV. — V... Ch..., âgé de 3 ans, entre lé 4 février 1888 au pavillon d'i-
solement. Il présentait alors quelques plaques diphthéritiques peu étendues
sur les amygdales et un peu de tirage. Ces symptômes avaient disparu le 8 fé-
vrier. Dès le 9, perte d'appétit, soif intense, vomissements, toux aiguë. L’en-
fant pälit, devient de plus en plus faible et meurt le 12 février. Le 43 février,
on fait l’autopsie. La muqueuse du larynx et la trachée sont un peu conges-
tionnées, Les amygdales sont de volume normal. Nulle part de fausses
membranes. Congestion des lobes infécieurs des deux poumons. Rate petite;
foie et reins normaux.

On ensemence des tubes de gélose avec la portion congestionnée des
poumons. Rien ne pousse. Nous rapportons ce cas de l'enfant V..., comme
un exemple de mort subite dans la diphthérie. On trouvera dans plusieurs
de nos expériences sur les animaux des cas de mort soudaine tout à fait
analogues.

Cas V. — E... C..…., âgé de 2 ans, entre, le 10 février 1888, au pavillon
d'isolement, pour angine et croup. La gorge est couverte de fausses mem-
branes. On opère de suite l'enfant. 11 meurt le 12 février. 24 heures après
on fait l'autopsie. Les amygdales sont grosses comme des noisettes et
recouvertes de fausses membranes très adhérentes. Il y en a également
sur le voile du palais, la luette, l'épiglotte. Le larynx et la trachée en sont

650 : ANNALES DE L'INSTELUT PASTEUR.

tapissés jusqu'à la naissance des bronches. Le poumon droit est un peu
hépatisé dans son lobe inférieur. La rate est petite, le foie et les reins sont
normaux.

Sur une préparation colorée faite avec la fausse membrane amygda-
lienne, on ne voit que des bâtonnets. On ensemence des tubes de gélose et
de sérum qui donnent dès la première génération une culture pure.

7

Cas VI, — F.. F.., âgé de 5 ans, entre, le 7 mars 1888, au pavillon
d'isolement, avec une forte angine diphthéritique à forme toxique. Le cou
est énorme, l'enfant est dans le coma. Mort le 11 mars. À l’autopsie, que
nous faisons 24 heures après la mort, on ne trouve que peu de lésions :
les amygdales sont un peu grossies, le larynx et là trachée très conges-
ionnés. Il n'y à que deux petites fausses membranes arrondies à la base
de la langue. Les autres organes sont sains. On ensemence des tubes de
gélose et dé sérum avec la petite fausse membrane de la base de la langue,
etici, comme dans le cas précédent, on obtient du premier coup une eul-
ture pure de bâtonnets spécifiques.

Cas VII. — D... L.…., âgé de 3 ans, entre, le 12 mars 4888, au pavillon
d'isolement. A la suite d'une rougeole il était resté un peu malade; depuis
8 jours, il se plaignait de la gorge. A son entrée à l'hôpital l'enfant est
asphyxiant. On l'opère de suite; pendant l'opération, il rend une grosse
fausse membrane. Mort quelques heures plus tard. L'autopsie est faite le
43 mars. On trouve de nombreux îlots diphthéritiques sur les amygdales,
Des fausses membranes épaisses tapissent le larynx. La trachée, très con-
gestionnée, présente cà et là de fins dépôts membraneux.

On ensemence des tubes de gélose et sérum après s'être préalablement
assuré par une préparation colorée, de la présence. du bacille spécifique.
Les jours suivants, on fait de nouvelles semences avec les colonies qui se
sont développées, onobtient ainsi des bacilles purs.

Cus VIII. — M... M.., âgée de 2 ans, prend sa diphthérie dans un
des services de l'hôpital. Le 8 avril 1888, on la transporte au pavillon
d'isolement, avec une angine toxique et du eroup. Le 9, l'enfant meurt.
A l’autopsie, le {1 avril, nous notons : un peu de congestion pulmonaire,
quelques ecchymoses de la plèvre pariétale. De nombreuses fausses mem-
branes adhérentes tapissent les amygdales, la base de la langue, le voile du
palais, le larynx et la trachée. Adénopathie habituelle des ganglions du cou.
Sur des préparations colorées, on note la présence de bacilles très nom-
breux. Les tubes ensemencés donnent beaucoup de colonies spécifiques.

Cas IX. — D... J,.., âgé de 4 ans, entre au pavillon d'isolement, le 16 sep-
tembre, pour mourir le 17. Le 19, nous faisons l’autopsie. Il y a quel-
‘ques points diphthéritiques sur les amygdales. Des fausses membranes
minces tapissent le larynx et la trachée. Les organes sont d'apparence nor-
male. Nous ensemencons des tubes de gélose et des tubes de sérum : on
obtient facilement de nombreuses colonies du bacille diphthéritique.

Cas X,— P.. L.,., âgé de 10 ans et demi, a vu, en l'espace de8 jours,

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 651

son père et sa mère mourir de diphthérie; lui-même entre à lhôpital le
3 novembre avec une forte angine à forme toxique. Il meurt 36 heures
après. Le 5 novembre, à l’autopsie, on trouve une grosse rate, des reins
congestionnés, un peu de congestion pulmonaire. Les amygdales et le voile
du palais sont recouverts de très épaisses fausses membranes, tandis que
celle qui tapisse la trachée est au contraire fort mince. On ensemence des
tubes, et les jours suivants on isole sans difficulté des colonies pures.

Cas XI.— A... J..., âgé de 8 ans, est un petit Breton, en séjour à Paris pour
se faire traiter à l'Institut Pasteur. Arrivé le 25 octobre à Paris, le T novembre,
il se plaint de la gorge. On constate que les amygdales sont recouvertes de
fausses membranes diphthériques, et on envoie l'enfant à l'hôpital. Nous
faisons nos cultures avec les fausses membranes qu'on lui enlève lors de son
entrée au pavillon d'isolement. L'enfant n’a ni fièvre ni symptômes d’infec-
tion générale ou d’intoxication. La cou n’est que peu gonflé. Les jours sui-
vants, l’état local s'améliore rapidement, et 8 jours après l’enfant sort
guéri.

Cas de mort subite. — M... M..., 4 ans, entre le 98 janvier 1888 au pavillon
d'isolement avec une angine peu marquée qui disparaît rapidement sous
l'influence du traite ment (nettoyage à l'éponge, puis lavages d'eau bori-
quée). Le 1° février, subitement, l'enfant pâlit, s’affaiblit rapidement et
meurt en quelques heures.

Cas de récidive. —F... M..., 3 ans, entre à l'hôpital le 13 novembre 1887
avec angine et croup. Vers le 26 novembre tout a disparu. Le 10 décembre,
l'enfant, restée dans le service, prend la rougeole. Le 12 décembre, les
amygdales sont de nouveau recouvertes de fausses membranes diphthé-
riques. Mais cette deuxième poussée est moins intense que la première et
l'enfant sort guérie le 22 décembre.

æ

Contagion. — E... G..…., âgé de 7 ans 1/2, entré le 11 février à la salle
S...-T. pour eczéma. Le 920 février l'enfant à une angine fébrile
pour laquelle on le passe à la dipthérie où il reste 4 jours. Son angine
ayant été reconnue non diphthéritique, on le fait rentrer dans la salle
S...-T... Là, il reste couché jusqu'au 10 mars, puis on lui permet de
se lever. Il va alors jouer de préférence avec deux petits camarades : Ch... G...
âgé de 4 ans,1/2, entré le 12 janvier pour coqueluche, et P... J... dans la
salle depuis le 14 février pour fièvre typhoïde. Le 16 mars, ces deux enfants
sont pris simultanément de diphthérie vraie, pour laquelle on les passe au
pavillon. Ils ont guéri tous deux, mais Ch... a eu, un mois environ après
sa sortie de l'hôpital, des paralysies. diphtéritiques qui ont persisté long-
temps. ;

EXPÉRIENCES.

. ° LES PIGEONS ET LES LAPINS PEUVENT SUCCOMBER A L'INJECTION SOUS-CUTANÉE
DES BACILLES DE LA DIPHTHÉRIE.

ExPÉRIENCE 1. -— Le 5 décembre 1887, ou inocule, dans le muscle pectoral
de deux jeunes pigeons, une 13° culture de diphthérie dans du bouillon de

652 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

veau. La culture est âgée de 48 heures. Le pigeon no 1 recoit 1/4 de centi-
mètre cube. Le pigeon n° 2 reçoit 3/4 de centimètre cube. Le 6 décembre,
les pigeons sont en boule et ne mangent pas. Le 7 décembre, le pigeon n° 2
est trouvé mort le matin. A l’autopsie, œdème gélatineux sous-cutané,
gonflement du musele inoculé et teinte jaune des fibres, dilatation des
vaisseaux de la peau. Sang fluide; pas de lésions apparentes des organes.
Le sang du cœur est ensemencé : il ne donne pas de culture. On trouve
quelques rares bacilles, à l'examen microscopique et après coloration, dans
l'ædème; on n’en voit pas dans les organes.

Le 7 décembre, le pigeon I paraît aller mieux. Le 8 décembre, il mange
bien et revient à la santé les jours suivants.

EXPÉRIENCE 2. — Le 4 décembre 1887, on inocule 3 lapins, sous la peau du
ventre, avec une 13° culture de diphthérie dans du bouillon de veau; la cul-
ture est âgée de 30 heures. Le lapin n° I recoit 1 centimètre cube. Le lapin
n° II, en recoit 2. Le lapin no III recoit 4 centimètres cubes.

Le 5 décembre, tous les lapins ont un œdème assez étendu au point
d’inoculation. Ils mangent de bon appétit.

Le 7 décembre, le lapin n° IT a le poil hérissé et ne mange pas; les
autres lapins vont bien.

Le 8 décembre, le lapin n° IE est trouvé mort.

Autopsie : OŒEdème étendu et tissu induré avec piqueté hémorrhagique au
lieu d’inoculation. Congestion intense du grand épiploon qui porte un grand
nombre de petites hémorrhagies. Foie jaune. Pas d’épanchement pleuréti-
que. Poumons sains, capsules surrénales congestionnées. Les reins parais-
sent sains. À l'examen microscopique, quelques très rares bacilles dans
l’ædème., On n’en trouve aucun dans le sang ni dans les organes qui, semés,
ne donnent pas de culture.

Le lapin IT meurt le 9 décembre. Autopsie : OEdème considérable au
point d’inoculation. Nécrose commencçante de la peau, gonflement des gan-
glions des aines. Pas de lésions apparentes des organes internes. Au micro-
scope, on ne trouve aucun bacille dans l’œdème, ni dans les organes. Le
lapin Iest très malade le 9 et le 40 décembre; le 19, il se remet, une escharre
se forme au point d’inoculation.

20 INJECTION INTRA-VEINEUSE DE CULTURES DU BACILLE DE LA
DIPHTHÉRIE SUR LES LAPINS.

EXPÉRIENCE 3. — Le 5 mars 1888, on injecte dans la veine de l'oreille
d’un lapin, une 6° culture sur sérum (du cas V), vieille de 20 heuvres et dé-
layée dans du bouillon stérilisé. Le 7 mars, le lapin mange peu. Le 8 mars,
il paraît malade; son poil est hérissé, il ne mange pas. Il est trouvé mort,
le 9 au matin. A l’autopsie, on ne trouve aucune lésion, si ce n'est dé la di-
latation des vaisseaux. La rate est ensemencée sur sérum, elle ne donne
pas de culture.

ExPÉRIENCE 4. — Le 15 mars 1888, on injecte dans les veines de deux
lapins À etB, un centimètre cube d'une 3° culture sur sérum (cas VI) délayée
dans du bouillon stérilisé,

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE, 653

Le 16 mars, les lapins n'ont rien mangé; le lapin À meurt dans l’après-
midi, 22 heures après l'inoculation. A l’autopsie, on trouve une dilatation
générale des vaisseaux, un peu d’épanchement sanglant dans le péritoine.
Le foie est jaunâtre et très friable. Les reins très congestionnés ont une
teinte presque noire. Le sang est mal coagulé. Les poumons sont sains. Le
lapin B meurt le 17 mars dans la matinée; à l’autopsie, on trouve les
mêmes lésions que chez le lapin précédent.

ExPÉRIENCE D. — Le 16 mars 1888, on inocule, dans les veines de l'oreille,
deux lapins A et B, avec une 2, culture sur sérum (cas VII) délayée dans du
bouillon stérilisé.

Le 17 mars, les deux lapins sont malades.

Le 19 mars, le lapin À meurt dans la matinée. On trouve, à l’autopsie,
que le foie est jaune et friable; les reins ne sont pas congestionnés.

Le 20 mars, le lapin B est mort dans la nuit du 19 au 20. Même état du
foie que chez le lapin A.

30 PARALYSIES DIPHTHÉRITIQUES EXPÉRIMENTA LES.
4° Après l'inoculution du buacille dans la trachée.

ExPÉRIENCE 6. — Le 10 juillet 1887, on frotte, avec un pinceau chargé
d'une culture de bacille de la diphthérie sur sérum, l'arrière-gorge d'un
pigeon après avoir excorié la muqueuse en divers points avec un fil de pla-
tine. ;

Le 43 juillet, le pigeon est triste et ne mange pas; il a dans le pharynx
de petites fausses membranes grisâtres ; elles s'étendent les jours suivants
et l'animal paraît malade.

Le 17 juillet, les fausses membranes ont disparu presque complète-
ment.

Le 19 juillet, le pigeon se remet à bien manger. Dans les premiers jours :
d'août, le pigeon, qui est très maigre, se tient presque toujours couché ;
quand on le force à se relever il se tient les jambes écartées ; on peut le
sortir de sa cage et le laisser en liberté sans qu’il cherche à fuir; il tombe
sur le bec si on loblige à marcher. Lui qui, les jours précédents, se
défendait à coups d’aile quand on approchait la main, a maintenant les
ailes un peu pendantes et inertes. Mis sur le dos, il ne peut se relever.
Il mange cependant assez bien. Vers le 8 août, la faiblesse paraît plus
grande, le pigeon ne se lève plus, il picore couché. Le 22 août, on le
trouve mort. A l’autopsie, on ne trouve aucune lésion des articulations, ni
de la moelle, ni du cerveau. La maigreur est très grande.

ExPÉRIENCE 7. — Le 4 décembre 1887, on trachéotomise deux lapins A
et B, et on leur passe un fil de platine dans la trachée à plusieurs reprises,
puis on fait tomber dans la trachée quelques gouttes d’une culture de diph-
thérie dans du bouillon de veau (13e culture).

Le 5 décembre, les lapins mangent bien. Le soir, le lapin B est essoufflé;
sa respiration devient bruyante le lendemain, et le 8 décembre on le trouve

654 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.
mort. L'autopsie montre une superbe diphthérie de la trachée avec œdème
du cou et gonflement des ganglions.

Le lapin A paraît peu malade jusqu'au 8 décembre, où sa respiration de-
vient bruyante et très gènée; le soir, le bruit de sa gorge est très fort: on
dirait un bruit de drapeau. Il se meut cependant aisément et mange un peu.
Le 9 décembre la respiration est silencieuse. Le soir, un peu de dyspnée. Le
10 décembre, on remarque qu'il a de la paralysie des pattés de derrière, qui
ne peuvent plus se détendre quand il marche, ce qui lui donne.uue démarche
tout à fait particulière. Dans la journée du 10 décembre, la paraplégie devient
de plus en plus forte, et elle s'étend aux membres supérieurs; il meurt
dans la nuit du 10 au 11. A l’autopsie, on ne trouve plus de fausses mem-

branes dans la trachée, la muqueuse est violette, les ganglions du cou
œdémateux, le foie jaunâtre et friable.

2 Paralysies après injection du bucille de lu diphthérie dans les veines.

ExPÉRIENCE 8. — Le 5 mars, on injecte dans la veine de l'oreille d'un
lapin, 4° d’une 6° culture sur sérum, délayée dans du bouillon stérilisé,

Le 10 mars, le lapin est paraplégique, ses pattes de derrière sont écar-
tées du corps comme si les adducteurs ne fonctionnaient plus ; lorsqu'on le
couche sur le côté, il a beaucoup de peine à se relever, bien que les pattes
antérieures soient très actives. Dans la journée, la paralysie du train de
derrière devient complète, elle s'étend aux pattes antérieures et au cou. Le
A1 mars, il est mort. A l'autopsie, on trouve le foie jaune. L'examen mi-

croscopique ne montre pas de bacilles dans le sang, qui contient beaucoup
de leucocytes.

Expérience 9. — Le 27 avril 4888, on injecte dans les veines d'un lapin
Lee d'une culture de diphthérie dans le bouillon de veau et faite dans le vide.
Cette culture est âgée de 12 jours.

Le 4% mai, le lapin est paraplégique, il meut les pattes de henièee l’une
après l’autre et sans pouvoir les détacher du sol. Cet état persiste jusqu’au
3 mai où la paraplégie devient complète ; les pattes antérieures seules sont
capables de se mouvoir, puis elles se paralysent aussi, et l'animal succombe
le 10 mai, sans que l’on trouve de lésions à l'autopsie.

Expérience 10. — Le 27 avril 1888, un lapin recoit dans les veines {ec de
culture de diphthérie dans le bouillon de veau et faite à l'air. Cette culture
est âgée de 12 jours.

Le 3 mai, le lapin est paraplégique. Il meurt dans la nuit du
3 au #4 mai.

ExPÉRIENCE 11. — Le {novembre 1888, on injecte dans les veines de deux
lapins A et B, {cc d’une 45° culture dans du bouillon de veau (cas VII). Cette
culture est vieille de 24 heures. Le 3 novembre, le lapin A est paraplégique:
dans la journée, la paralysie s'étend à tout le corps, le lapin ne peut plus
soutenir sa tête. Le 4 novembre, il est tout à fait inerte, les mouvements
respiratoires sont seuls conservés. Il meurt dans la soirée. — Le lapin B est
bien portant jusqu'au 4 novembre. Le 5 novembre, il est paraplégique. Le

CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE, 655

6 novembre, la paralysie Prüpressé rapidement, et la mort survient subite:
ment dans la soirée. dk -

EXPERIENCE 12. — Le 13 novembre 1888, un lapin recoit dans les veines
1e d'une 3° culture de diphthérie dans le bouillon de veau (cas XI). Le 45 no-
vembre, on note un début très net de paraplégie qui s'accentue le 16 et le 17,
Le 18 novembre, le lapin meurt très subitement.

Expérience 43. — Le 143 novembre 1888, on injecte dans les veines d’ un
lapin, {ce d'une culture âgée de 24 heures et faite dans le bouillon de
veau. |

Le 22 novembre, le lapin montre de la parésie dansles pattes de derrière:
Le 25 novembre, la paraplégie est complète, Le même état persiste jusqu'au
28 novembre, puis les pattes antérieures se paralysent et la mort survient
le 29 novembre.

49 PARALYSIES DIPHTHERITIQUES PRODUITES PAR LES MATIÈRES
SOLUBLES. CULTURES FILTRÉES SUR PORCELAINE.

.. ExpéRIENCE 14. — Le 1°" mars 1888, on injecte dans la cavité péritonéale
d'un cobaye, 35c d’une culture de diphthérie dans le bouillon de veau,
âgée de 4 jours, et filtrée sur porcelaine; la réaction du liquide filtré est
légèrement acide.

Le 2 mars, le cobaye est bien portant.

Le 3 mars, le cobaye paraît malade, il se tient immobile dans sa cage,
Le 4 mars, il a les flancs rentrés, le poil hérissé ; on constate un suintement
sanguinolent par l’urèthre. Le 5 mars, le cobaye est très faible, a du trem-
blement et meurt à une heure après-midi. — Autopsie : Gros ganglions in-
guinaux et axillaires, congestion des parois abdominales, de l'intestin, des
capsules surrénales et des reins. Il n’y a pas de pleurésie. Les ensemence-
ments faits avec le sang et la pulpe des divers organes sont restés
stériles.

ExPÉRIENCE 45. — Le 2 mars 1888, on injecte dans la cavité abdomi-
nale d'un cobaye 35cc d'une culture dans bouillon de veau, vieille de 7 jours
et filtrée sur porcelaine.

Le 3 mars, le cobaye va bien.

Le 4 mars, les flanes du cobaye sont rentrés, le poil hérissé.

Le 5 mars, le cobaye est très faible, n’a plus de voix. Il meurt le 6 mars
au matin. Autopsie : Les ganglions inguinaux et axillaires sont congestion-
nés. La congestion des organes abdominaux, intestin, capsules surrénales,
reins est intense; ily a un peu de sang dans le péritoine. Les plèvres
contiennent un épanchement séreux abondant; ni le sang, ni les organes
ensemencés ne donnent de culture.

Expérience 16. — Le liquide filtré de l'expérience précédente est in-
jecté, le 5 mars 1888, dans les veines de deux lapins A et B. Les deux ani-
maux restent en parfaite santé jusqu’au 9 mars. Ce jour on remarque que
A est paraplégique, la paralysie s'étend rapidement, et bientôt il ne peut

656 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

plus relever la tête, Il meurt dans l'après-midi. L’autopsie montre de la
congestion des organes abdominaux, une petite hémorragie à la base du
poumon.

Le lapin B commence à être paralysé du train de derrière dans l’après-
midi du 9 mars. Il tient les jambes écartées et se meut difficilement. Le
10 mars, il y a une paralysie manifeste des muscles extenseurs des pattes
de derrière et des pattes de devant. Le 11 mars, le lapin a la voix rauque,
mais la marche est plus facile. Le 12 mars la paralysie augmente ; entre
onze heures et minuit elle fait des progrès rapides et immobilise comple-
tement le corps. Le 13 mars l’animal est inerte; il meurt dans la soirée. A
l'autopsie on trouve que la moelle épinière est ramollie; la vessie est dis-
tendue, l'urine ne contient ni sucre ni albumine.

\

ExpÉRIENCE 17. — Le 7 mars 1888, on introduit dans la cavité péritonéale
de deux cobayes À et B, 35° du liquide filtré de l'expérience 14. Le 9 mars
ils vont très bien. Le 10 mars ils ont le poil hérissé et un suintement de
liquide par l’urèthre. Le 11 mars, le cobaye B est très malade. Le cobaye A
paraît aller mieux qu'hier. Le 12 mars le cobaye B est mort. Autopsie :
Gros ganglions très congestionnés aux aisselles, aux aines; congestion
intense des reins et des capsules surrénales. Pleurésie double. Sang noir et
fluide. Rien aux poumons.

42 mars. — Le cobaye A est dyspnéique, il respire uniquement avec le dia-
phragme, les côtes ne se soulèvent plus; il est cependant assez vif; si on le
force à courir, l'oppression devient si intense qu'il ne peut bientôt plus
avancer et qu'il tombe. Cet état persiste encore le 17 mars. Le 22, la respi-
ration paraît meilleure. Le 1% avril, la dyspnée est encore très marquée, il
y a aussi de la paraplégie, Le 14 mai, le cobaye, qui a beaucoup engraissé,
n’a plus de dyspnée, il a toujours un peu de faiblesse du train de derrière.
Le 17 mai on le considère comme tout à fait guéri et on l’inocule sous la
peau avec une culture de diphthérie sur sérum en même temps qu'un cobaye
neuf. Le cobaye témoin meurt dans la nuit du 18 au 19, le cobaye B résiste
jusqu’au 23 mai, jour où il meurt avec les lésions congestives ordinaires et
avec de la pleurésie double.

ExPÉRIENCE 18. — Le 21 mars deux cobayes a et b recoivent 35° d’une
culture filtcée sur porcelaine et âgée de 7 jours (cas VI). Deux lapins A et
B recoivent la même dose dans les veines.

Le 31 mars le cobaye « meurt; ilest très amaigri, les reins portent des
ecchymoses, les capsules surrénales sont augmentées de volunie. Le cobaye b
a de la dyspnée, il meurt le 3 avril avec les mêmes lésions que a.

Le 21 mars le lapin A est paralysé du train postérieur. Il meurt le
30 mars, avec une congestion intense des reins, du mésentère, et de petites
hémorragies dans les poumons. Le lapin B reste bien portant dans la suite.

ExPÉRIENCE 19. — Le 22 novembre 1888, on injecte à un cobaye dans le
péritoine, et à un lapin dans les veines, 35“ d'une culture filtrée (âgée de
4 jours), 5° culture dans bouillon (cas XI).

Le cobaye meurt le 24 novembre avec les lésions congestives ordinaires.
Le lapin devient paraplégique le 27 novembre, Le 28 novembre la paralysie

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 657

s'étend à tous les membres. Le 30 novembre, il y a une amélioration dans
l'état du lapin qui mange volontiers ce qui est à sa portée. Le 4° décembre,
le lapin, incapable de se mouvoir, mange bien ce qu'on met à portée de sa
bouche. Dans la soirée, la paralysie devient absolue, et il meurt pendant la
nuit dans l'attitude où on l'a laissé le soir. A l’autopsie on voit qu'il y
avait une paralysie du rectum, qui ne se vidait plus. Sur une étendue de
12 centimètres à partir de l'anus, le rectum forme un boudin de deux cen-
timètres d'épaisseur, sa paroi est violacée. L'intérieur est bourré de crottins
qui n’ont pu être évacués. La vessie est pleine d'urine.

D9 LE POISON DIPHTBÉRITIQUE SE FORME DANS LES CULTURES FAITES DANS LE VIDE
COMME DANS LES CULTURES À L'AIR.

ExPÉRIENCE 20. — Le 15 avril 1888, on injecte dans le péritoine d’un
cobaye «a et dans les veines d'un lapin À 35° d’une culture filtrée, âgée de
45 jours et faite à l'air; comparativement, à un autre cobaye b, et à un autre
lapin B, on introduit dans la cavité abdominale et dans les veines 33° d’une
culture filtrée âgée de 15 jours et faite dans le vide.

Le 17 avril, le cobaye b meurt dans la journée et le lapin B dans la
soirée. Autopsie du cobaye b : Ganglions inguinaux congestionnés, exsudat
fibrineux rosé dans le péritoine, formé d’un réseau de fibrine, de globules
blancs et de quelques globules rouges, ne contenant aucun microbe. Les
reins et les capsules surrénales sont gorgés de sang ; il y a un petit caillot”
sanguin dans la vessie. Chez le lapin, on ne trouve que de la congestion
des reins.

Le 17 avril, le cobaye « et le lapin A sont malades. Le cobaye rend de
l'urine sanglante. Le lapin est très faible. Le cobaye « meurt dans la nuit
du 17 au 18. Autopsie : Hémorragie du péritoine pariétal, hémorragie de
la paroi du cœur, un peu d’épanchement dans les plèvres. Dilatation de
tous les vaisseaux, et congéstion intense des ganglions inguinaux des
capsules surrénales. Le sang est noir et fluide.

Le lapin À meurt le 20 avril.

ExPéRIENCE 21. — Le 27 avril, on répète l'expérience précédente avec une
culture filtrée âgée de 12 jours et qui a été faite d’une part à l'air, de l’autre
dans le vide.

Le cobaye «a et le lapin A recoivent 35°° du liquide filtré de la culture
à l'air dans le péritoine et dans les veines. Le cobaye b et le lapin B.
reçoivent la culture dans le vide.

Le 3 mai, le cobaye a, meurt amaigri sans que l'on trouve de lésions à
l’autopsie. Le lapin À est paraplégique dès le 3 mai, il meurt le 4 mai
avec une congestion intense des reins.

Le cobaye b meurt le 3 mai avec lésions congestives ordinaires. A la
même date, le lapin B devient paralysé des pattes de derrière. La para-
lysie persiste les jours suivants, puis va en diminuant; le 14 mai le lapin est
maigre, mais la paralysie a presque disparu. Le 17 mai, le lapin est inoculé
dans les veines avec un centimètre cube de culture de diphthérie en même
temps qu'un lapin neuf. Celui-ci meurt le 20 mai, et le lapin B le 21 mai.

658 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Les cultures anciennes ont une action toxique beaucoup plus intense que les .
cultures récentes.

Expérience 22, — Le 2 octobre 1888, on filtre Sur porcelaine une 38° cul-
ture dans bouillon de veau âgée de 23 jours. La réaction du liquide filtré
est légèrement alcaline !. On introduit 35° de ce liquide dans les veines
d’un lapin. Le 3 décembre le lapin mange peu. Le 4 décembre il est chan-
celant, se tient à peine sur ses pattes et meurt à 8 heures du soir. Aultopsie :
L'intestin contient beaucoup de matières semi-liquides. Le foie est jaune
et friable, petites hémorrhagies le long des vaisseaux du grand épiploon,
congestion des reins.

ExPÉRIENCE 23. — Le 93 octobre, on Jette dans la cavité péritonéale d’un
éébaye 30°° d’une culture âgée de 42 jours ?. Le liquide filtré a une réaction
alcaline. L'injection est faite à 10 heures du matin. Le cobaye est maladé
dès midi, il meurt dans la soirée en moins de 10 heures avec de la dyspnée.
A l’autopsie, on trouve du liquide dans le péritoine, une congestion intense
des reins et des capsules surrénales, un peu d'épanchement dans les plèvres.

EXPÉRIENCE 24. — Le 23 octobre, on injecte dans les veines d'un lapin
33cc du liquide filtré de l'expérience précédente. L'opération est faite à
5 heures du soir. Dès 6 heures, le lapin se couche le ventre contre le sol de
la cage. Il rend beaucoup d’excréments mous. Sa respiration devient
anxieuse, il meurt à 40 heures du soir. A l’autopsie, on trouve que l'intestin
est distendu par des liquides et des gaz. La mortest survenue en 5 heures,

Exeérience 25. — Le 96 octobre 4888, à 2 h. 30 de l'après-midi, on
injecte, dans les veines d'un lapin de plus de 3 kilogramnies, 35° du liquide
filtré, préparé avéc une culture de 42 jours. Aussitôt après l'opération
l'animal mange et paraît très vif, À 6 heures, diarrhée profuse et accélération
de la respiration, l'animal se couche le ventre appliqué sur le plancher de sa
cage. Les museles de la paroi abdominale paraissent relachés, et l'abdomen
semble flasque et volumineux. Le lapin change fréquemment de place et se
couche aussitôt. Vers 9 heures, la respiration devient-plus rapide, l'anxiété
augmente. Il s'affaiblit rapidement, se meut avec difficulté et meurt à
10 h. 30, sans convulsions, après quelques hoquets, dans l'attitude où il se
trouvait. La mort est survenue en 8 heures.

Expérience 926. — Le 24 octobre, un lapin reçoit à 8 heures de l'après-
midi 35° de liquide filtré de l'expérience n° 23. À 5 heures, il a de l'accé-
lération de la respiration, il se couche sur le ventre; puis il s'affaiblit. A

4. La celture est abondante et beaucoup de bacilles se colorent très bien. Un
cobaye inoculé sous la peau avec fe dépôt de cette culture meurt en moins de
30 heures avec les lésions ordinaires.

2, Les bacilles formant le dépôt de cette culture de 42 jours sont inoculés, après
lavage à l'eau pure, pour enlever les produits solubles, à: un lapin, dans les veines,
et à un cobaye sous la peau. Le cobaye meurt en 2 jours le lapin-en 4 Jours,
avec les lésions caractéristiqnes.

CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 659

8 heures quelques hoquets, et mort sans convulsions, à. heures après l'in-
jection.

Expérience 97. — Le 24 octobre 1888, on dessèche dans le vide, à la
température de 300, 75° du liquide filtré de l'expériencé n° 93. Le 25 no-
vembre, le résidu est dissous dans 2° d’eau distillée.

On injecte 4° de cette solution concentrée à un lapin, dans lés veines
(cette quantité correspond à 35° environ dé liquide).

Un cobaye recoit sous la peau 4/2°° (qui correspond à 17 de liquide
filtré).

Une souris recoit sous la peau du dos 2/5 de centimètre cube (qui
correspondent à 44° de liquide filtré). DLL

Un chardonneret recoit dans le musele pectoral 15 de centimètre cube
(qui correspond à 7® de liquide filtré).

Le petit oiseau meurt en 7 heures. La souris en 9 heures. Le lapin en
moins de 12 heures. Le cobaye en 23 heures.

ExPgRtENCE 28. — Le 26 octobre, on inocule sous la peau de 6 cobayes
un peu du liquide filtré de l'expérience n° 95. |

Les cobayes 4, 2, 3, recoivent 1/3 de centimètre cube.

Le cobaye 4, 2/5 de centimètre cube.

Lé cobaye 5, 3/5 de centimètre cube.

Le cobaye 6, & centimètre cube. ;

Le 27. — Le cobaye 6 est très malade; tous les autres ont peu mangé:
de cobaye 5 est très hérissé et peu vif. Le cobaye 6 meurt'au bout de
28 heures, après avoir été très dyspnéique. Au point d'injection on trouve
de l’ædème dans un tissu induré et criblé de taches hémorrhagiques;
les capsules surrénales sont congestionnées ; les plèvres contiennent un
épanchement séreux. Ce cobaye pesait 350 grammes.

Le cobaye 5 meurt après 30 heures. Il présente des lésions identiques au
précédent : œdème, congestion des organes, peur double. Il pesait
230 grammes.

28 octobre. — Le cobaye 4 est trouvé mort le matin. Mêmes lésions que
es précédents : œdème, congestion des organes, pleurésie double.

Les cobayes 1, 2, 3, sont très malades, leur attitude est tout à fait sem-
blable à celles des cobayes inoculés avec le virus vivant. IIS sont hérissés,
serrés les uns contre les autres, et us beaucoup de difficulté à respirer.

Le 29 octobre, les cobayes 14, 2, 3, sont de plus en plus dyspnéiques.
Le no 4 est complètement LE à meurt subitement à 9 h. 30. Le no 2
meurt à 3 h. 20; le n° 3 à 4 h. 50. Tous ont de l’æœdème avec tissu induré
et piqueté hémorrhagique au point d'injection, gonflement et congestion
des ganglions. Congestion intense des reins et des capsules surrénales ;
pleurésie double, sér euse.

Quatre cobayes, qui ont recu sous la peau 1/15 de centimètre cube du
même liquide filtré, ont eu une escarre assez étendue au point d'injection
et ont été malades pendant plusieurs jours, puis se sont rétablis.

Expériexce 29, — Le 29 octobre 188$, on injecte à 3 lapins. sous la peau,
du liquide filtré de l'expérience n° 23.

660 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Le lapin 4 reçoit 1°, il pèse 2 kilog. 700.

Le lapin 2 recoit 2°.

Ee lapin 3 recoit 4°.

Le 30 octobre, le lapin 1 est un peu triste, il a cependant bien mangé;
tous les autres vont bien. Tous ont un léger œdème au point de l'injection.

Le 31 octobre, le lapin 3 est trouvé mort. Sa cage est souillée par
beaucoup d'excréments mous. Au point de l'injection, petit œdème diffus.
Autour, dilatation des vaisseaux sous-cutanés ; ganglions des aines conges-
tionnés. Liquide diarrhéique dans l'intestin. Quelques anses du petit intes-
tin sont très vascularisées ; capsules surrénales congestionnées; foie jaune et
friable; pas d’épanchement däns les plèvres; poumons de belle apparence;
sang mal coagulé.

Le lapin 4 est vif. Le lapin 2 est triste ; à 5 heures 1/2 du soir le lapin 2
est très malade, il meurt à 9 heures du soir. A l’autopsie on trouve les
mêmes lésions que chez le lapin 3, maïs plus intenses. Il y a des ecchymoses
le long des vaisseaux, dans le petit bassin et le grand épiploon. Le foie est:
jaune.

Le 1 novembre, le lapin À meurt à 6 heures du soir avec les mêmes
lésions à l’autopsie que les précédents.

Expérience 30. — Le 29 octobre, 2 chardonnerets reçoivent : le n° 4, 1/5
de centimètre cube, le no 9, 2/5 de centimètre cube du liquide filtré de
l'expérience 23. Les 2 oisillons meurent : le no 4 en 6 heures, le n° 2 en
moins de 5 heures après l'injection.

Expérience 31. — Le même liquide filtré est injecté dans le muscle
pectoral droit de deux pigeons le 31 octobre.

Le n° 4 pèse 275 grammes. Il recoit 3/5 de centimètre cube.

Le n° 2 pèse 270 grammes. Il reçoit 1/5 de centimètre cube.

Le 4% novembre, les pigeons ne mangent pas; le n° 4 est le plus
malade.

Le 2 novembre le pigeon 4 meurt à 9 heures du matin. Autopsie : ŒEdème
gélatineux sous la peau, teinte jaune des fibres du muscle qui a reçu l'in-
jection. Sang mal coagulé. Pas d’autres lésions. Le pigeon 1 picore et paraît
aller mieux. |

Le 3 novembre le pigeon 2 meurt à 11 heures du soir. Il a commencé à
devenir très malade vers 6 heures du soir; pendant la journée il se tenait
perché et picorait. La mort a été rapide et sans convulsions. Même lésions
que le pigeon 1.

Le poison diphthéritique agit plus rapidement en injection intra-veineuse
qu'en injection sous-cutanée.

Expérience 32. — Le 1% novembre 1888, on injecte à deux lapins le
liquide filtré de l'expérience 93.

Le n° 1 reçoit 4° sous les veines.

Le n° 2 recoit 4° sous la peau.

Le 2 novembre, le lapin 1 est trouvé mort. Autopsie : Congestion intense
des reins, des capsules surrénales, petites hémorrhagies le long des vais-

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE LA DIPHTHÉRIE. 661

eaux du mésentère et de l’épiploon; foie jaune. Les plèvres contiennent
quelques gouttes de liquide. Les poumons sont sains, le sang noir et fluide.

Le lapin 2 est vif, il a un œdème assez étendu au point d'injection, il
mange peu.

Le 3 novembre, le lapin 2 ne mange pas, son poil est hérissé.

Le 4 novembre, on le trouve mort le matin. Les lésions que montre
l’autopsie sont les mêmes que celles trouvées chez le lapin 1. Il y a un petit
épanchement séreux dans les deux plèvres.

Résistance des souris et des rats au poison diphthéritique.

ExPÉRIENCE 33. — Le 28 octobre, une souris recoit sous la peau du dos
1/3 ‘de centimètre cube et deux autres 2% du liquide filtré qui tue
un cobaye de 350 grammes à la dose 1/5 de centimètre cube injecté sous
la peau, et un lapin de 2 kilog. 700 à la dose de 1°° sous la peau. Elles restent
bien portantes les jours suivants, les tissus ne se nécrosent pas au point
d'inoculation.

EXPÉRIENCE 34. — Le 30 octobre, une souris recoit sous la peau du dos
Ace du liquide filtré de l'expérience précédente; elle reste bien portante.

Un jeune rat blanc et noir recoit sous la peau du dos 2° du même
liquide; il n’en éprouve aucun effet.

Le poison diphthéritique est modifié par la chaleur.

EXPÉRIENCE 35. — Ee 26 octobre, on injecte dans les veines d’un lapin
3oce du liquide filtré de l'expérience n° 23, après l'avoir chauffé pendant
20 minutes à 100°,

Ce lapin reste bien portant les jours suivants, tandis qu’un autre lapin,
qui a reçu le même liquide non chauffé dans le sang, de la même facon,
meurt en 8 heures.

EXPÉRIENCE 36. — Le 30 octobre, on injecte à un cobaye n° 1, sous la
peau, {ce du liquide filtré, chauffé une heure à 58° à l'abri de l'air; à un
cobaye n° 2, 2 du même liquide chauffé 2 heures à 58°; un cobaye n03
recoit sous la peau 1/5 de c. c. du liquide non chauffé et sert de témoin.

Le 7 novembre, le cobaye 3 est malade, il est hérissé et respire mal, i]
a de l'œdème au point d'injection.

Les cobayes 1 et 2 sont vifs, ils ont un peu d'œdème au point de l'in-
jection.

Le 2 novembre, le cobaye 8 est très malade.

Le 3 novembre, le cobaye 3 est mort avec les lésions ordinaires; de plus
les reins paraissent dégénérés. Les cobayes 1 et 2 vont bien.

Le 4 novembre, les cobayes 1 et 2 ont une petite escharre au point
d'injection.

Le 5 novembré, le cobaye 1 est trouvé mort. Il est amaigri. Le petit
intestin contient du liquide diarrhéique. On ne trouve pas d’autres lésions.

Le cobaye 2 reste en bonne santé dans la suite.

CS]
1©

DE LA RECHERCHE DES MICROORGANISMES DANS LES ÉPANCHEMENTS
PLEURAUX,

Par MM, A. GILBERT gr G LION.

Depuis que la pleurésie franche aiguë a été suspectée de
tuberculose, différents travaux ont été entrepris, dans le but de
déterminer la nature vraie d’une affection aussi fréquente et dont
le pronostic intéresse à un si haut point le praticien.

Les données les plus précises que nous possédions nous ont
élé fournies par les cas de pleurésies suivies de mort subite,
dans lesquels on a pu pratiquer un examen histologique complet
des différents viscères et des plèvres. Mais les résultats positifs .
ainsi obtenus n’ont pas entraîné la conviction générale, et nom-
bre de cliniciens se refusent à admettre encore aujourd’hui
l'origine tuberculeuse des épanchements séro-fibrineux, dits
primitifs ou 4 frigore, qui, sous l'influence d’un traitement appro-
prié, semblent guérir d’une façon définitive.

On a espéré. pendant un moment, pouvoir étendre le champ
des investigations à toutes les pleurésies, et on s’est cru à même
de déceler dans les liquides de ponction la preuve de la spécifi-
cité ou de la non spécificité de la maladie.

MM. Gombault et Chauffard ‘ les premiers, puis MM. Kelsch:
et Vaillard * ont essayé ces liquides en lesinoculant aux cobayes.
Les résultats ont été très inégaux, et, tandis que MM. Gombault
et Chauffard tendent à admettre que chez ceux de leurs malades
qui ont donné des liquides inactifs « la tuberculose était peu
probable ou certainement absente », MM. Kelsch et Vaillard

1. Étude expérimentale sur la virulence tuberculeuse de certains épanchements
de Li Me et du péritoine. Soc. ned. des hôpit. 1884.
. Recherches sur les lésions anatomo-pathologiques et la nature de la pleu-
résie. Arch. de phys., 15 août 1886.

RECHERCHE DES MICROORGANISMES. 663

4

croient ne pas devoir attacher d'importance à leurs insuccès :
« les inoculations stériles n'impliquent nullement l’absence de
lésions spécifiques. Nos séries négatives contiennent, en effet,
deux cas où le liquide inoculé a été recueilli à l’autopsie de deux
sujets dont les plèvres étaient littéralement criblées de granula-
tions ».

Devant ces faits contradictoires, il nous a semblé uule de
reprendre, en appliquant dans toute leur rigueur les méthodes
actuellement en usage, l'étude bactériologique des épanchements
pleuraux.

La première chose à faire était de chercher le moyen de
recueillir le liquide de ponction en qualité suffisante pour pra-
tiquer largement les ensemencements, et cela sans y intro-
duire de germes étrangers. Voici le dispositif que nous avons
adopté :

On remplace l'index en verre 2 (fig. 1) de l'appareil Potain par
un tube en Y dont la troisième branche est reliée à l’aide d’un tube
en caoutchouc à un ballon 4. Avant d'adapter ce dernier à l’ins-
trument, on effile son col de manière à pouvoir le fermer facile-
ment sur la flamme d’une lampe à alcool, et on le stérilise au
chauffoir à 160°. Enfin on entoure le robinet et les jointures
d’ouate destinée à filtrer l'air qui pourrait être aspiré pen-
dant la ponclion.

Le trocart, le tube qui unit le trocart au double robinet 7 r”
et le ballon b, séparés du reste de l’appareil, sont enveloppés dans
une double feuille de papier-filtre et portés à l’autoclave à 120°
pendant 10 minutes.

Au sortir de l’autoclave, ils sont entourés d'une feuille de
papier sec et stérilisé pour être transportés auprès du malade.

Au moment d'opérer, on dispose l'appareil comme à l'ordi-
naire ; mais avant de faire jouer la pompe, on place une pince à
forcipressure en p,, et on laisse le robinet > ouvert. On fait ainsi
le vide dans le ballon b et dans la bouteille €. Le vide fait, on
met la pince p,, on fait la ponction et on enlève la pince p,. Le
liquide se précipite en c. Au moment que l'on juge convenable,
on pose la pince p, et on retire la pince p,. Le ballon à se
remplit aussitôt. Souvent on doit faire le vide à plusieurs reprises
pour remplir ce ballon. À cet effet, on replace la pince p,, on
enlève la pince p, puis on agit comme précédemment. La quan-

664 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

tité de liquide écoulé une fois suffisante, on met la pince p, et
on continue la thoracenthèse dans la bouteille c. Le ballon à est
détaché, son extrémité effilée est fermée à la lampe.

Cette manière de procéder donne un volume considérable de
liquide, qui est ensemencé largement, ou qui, réparti dans
des matras Pasteur et des tubes à essai, peut servir de milieu
de culture, soit liquide, soit solide après gélatinisation par la
chaleur.

Nous avons eu soin, chaque fois que les épanchements con-
tenaient des matières en suspension, de laisser reposer ces
matières au fond des ballons, et de les recueillir pour les ense-
: mencer abondamment dans les matras et les tubes.

Nous avons recueilli ainsi le liquide de vingt épanchements
de diverses.natures, qui tous ont été ensemencés sur la gélose
et dans le bouillon glycérinés et maintenus à l’étuve, à la tem-
pérature de 39-402,

RECHERCHE DES MICROORGANISMES-: 665

Ces 20 cas se répartissent comme il suit.

4. H..., 58 ans, Hôtel-Dieu, Saint-Augustin, n° 12, février 1887. Pleurésie

aiguë séro-fibrineuse. — Aucun développement.
9, T..., 27 ans, Hôtel-Dieu, Saint-Denis, n° 3, avril 1887. Pleurésie aiguë
séro-fibrineuse. — Un microcoque.

3. M..., 34 ans, Pitié, Serres, n° 33, septembre 1887. Pleurésie franche
séro-fibrineuse. Père mort de tuberculose pulmonaire. — Aucun développe-
ment.

4. M..., 4% ans, Pitié, Serres, n° 36, janvier 1888. Pleurésie franche séro-
fibrineuse. — Aucun développement.

5. M..., 57 ans, Laënnec, Grisolle, n° 8, février 1888. Pleurésie franche
séro-fibrineuse. — Aucun développement,

6. H..., Hôtel-Dieu, 1888. Pleurésie aiguë séro-fibrineuse, Aucun dévelop-

pement.
7. V..., 48 ans, Laënnec, Claude Bernard, n° 1, mai 1888. Pleurésie aigue
séro-fibrineuse. — Aucun développement.

8. M..., 16 ans, Laënnec, Grisolle, n°9, juin 1888.P leurésie franche, séro-
fibrineuse. Un microcoque en chaînettes.

9. P.., 61 ans, Hôtel-Dieu, Saint-Denis, n° 41, avril 1887. Épanchement
pleural séro-hématique ancien. Mort. Autopsie. Examen histologique : Pas
de tuberculose ni des poumons, ni des plèvres. — Aucun développement.

10. J...,28 ans, Laënnec, Grisolle, n° A, octobre 1888. Pleurésie insidieuse,

épanchement séro-fibrineux. — Aucun développement.
11. L..., 31 ans, Laënnec, Claude Bernard, n° 20. Pleurésie insidieuse,
épanchement séro-fibrineux. — Aucun développement.

19. V..., 29 ans, Hôtel-Dieu, Saint-Denis, n° 15. Pleurésie insidieuse.
Epanchement séro-fibrineux très peu abondant. Respiration soufflante et
quelques râles dans la fosse sous-épineuse du côté malade. — Aucun dévelop-

pement.

43. C.., 40 ans, Hôtel-Dieu, Saint-Denis, n° 13,novembre 1887. Père mort
de la poitrine. Vénitien. Pleurésie séro-fibrineuse. — Aucun développe-
ment.

14. D... A ans, Saint-Antoine, Broussais, n° 12, juillet 1888. Pleurésie
droite guérie il y a { an. Pleurésie gauche insidieuse. Épanchement séro-
fibrineux. — Aucun développement.

15. D..., 28 ans, Pitié, juillet 1888 (du à l'obligeance de notre collègue
et ami, M. le D' Girode). Antécédents héréditaires. Phthisie aiguë pleu-
rale et consécutivement péritonite tuberculeuse avec ascite. Signes de
tuberculose au sommet du côté malade. Pas de micro-organismes ni dans le
liquide pleural, ni dans le liquide péritonéal,

16. D.., 48 ans, Pitié, Serres, n° 12, février 1887, Pleurésie insidieuse
post-traumatique, séro-fibrineuse. A l’autopsie, tuberculose des poumons,
pleurésie double. — Aucun développement.

17. P..., 45 ans, Pitié, Serres, n° 29, octobre 1887. Pleurésie insidieuse,
séro-fibrineuse. Tuberculose pulmonaire. Pas de tuberculose pleurale appa-
rente. — Aucun développement.

666 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR:

IS. S..., 25 ans, Laënnec, Larochefoucauld, n° 3, février 1888. Pleurésie
purulente. — Microcoque.

19. D... 50 ans, Pitié, Serres, n° 50, avril 1887. Pleurésie rhumatismale.
— Pas de micro-organismes.

20. …, Hôtel-Dieu, Saint-Denis, n° 18, mars 1887. Pleurésie rhumatismale.
Autopsie. Dans le liquide de péricardite, le sang du cœur, le liquide pleural
et la synovie : Microcoque.

Si nous considérons les 17 premiers cas de ce tableau, qui ont
trait à des pleurésies séro-fibrineuses, nous voyons que dans
tous ces cas, la recherche du bacille de la tuberculose est restée
vaine. Deux fois seulement les ensemencements ont donné
naissance à des cultures de microorganismes dont nous par-
lerous plus loin; les liquides qui les contenaient ont été portés
pendant dix minutes à la température de 60°, comme le conseille
M. Yersin, pour séparer le bacille de Koch.

Nous avons eu sans aucun doute affaire, au moins dans un
certain nombre de cas, à des pleurésies tuberculeuses. Sept
fois, en effet, l'affection a présenté une marche insidieuse, une
fois elle a revètu la forme de phtisie aiguë pleurale avec enva-
hissement consécutif du péritoine, et deux fois elle s’est accom-
pagnée de tuberculose pulmonaire constatée à l’autopsie.

Ces essais de culture du germe tuberculeux ne sont pas
restés seulement infructeux dans le cas d’épanchements pleu-
raux. Notre collègue et ami, M. Girode, a eu deux fois l’oc-
casion d'ensemencer, et sans résultat, le liquide de péritonites
tuberculeuses. Dans un premier cas (obs..15 de notre tableau),
il s'agissait d’une femme atteinte de tuberculose pleuro-pulmo-
naire et péritonéale; dans un second cas, on se trouvait en pré-
sence d’un homme ayant eu une pleurésie gauche quatre mois
auparavant, entrant de nouveau à l'hôpital avec une pleurésie
sèche du mème côté et une péritonite tuberculeuse. A l’autopsie
de ce dernier malade, on trouva une tuberculose généralisée aux
poumons, aux plèvres, au péritoine, avec prédominance sur les
séreuses.

Comment expliquer dans de telles conditions des insuecès
aussi constants ?

Le bacille de la tuberculose a besoin d’une certaine accou-
tumance pour se développer sur les milieux artificiels. Trans-
porté de l'organisme d’un être vivant dans un bouillon ou sur

RECHERCHE DES MICROORGANISMES. 667

de la gélose glycérinés, il ne donne une première culture que s’il
a été largement ensemencé à l'aide de matière tuberculeuse bien
divisée, et s’il se trouve dans un état de vitalité convenable et
probablement en rapport avec une certaine phase de son déve-
loppement.

Or, dans les épanchements pleuraux, les bacilles, s'ils exis-
tent, sont disséminés dans une grande masse de liquide et ne
se rencontrent le plus souvent qu’en petit nombre, puisque ex-
ceptionnels sont les cas dans lesquels on à pu les découvrir à
l’aide des matières colorantes et du microscope. De plus, ils ne
doivent pas posséder les qualités vitales requises pour fournir un
développement facile. Renfermés dans la cavité pleurale, ils
vivent en effet au contact de l’épanchement, et cet épanchement
constitue pour eux un mauvais milieu de culture. Il suffit
pour le démontrer, d'ensemencer, même largement, du liquide
de pleurésie recueilli dans des matras Pasteur, ou encore dis-
tribué dans des éprouvettes et gélatinisé par la chaleur, avec
une culture bien vivace de bacilles tuberculeux : on n’observe,
le plus souvent, qu’un développement insignifiant ou nul. Addi-
tionne-t-on le milieu de son poids de bouillon de veau glycériné,
la scène change aussitôt et la prolifération se fait d’une façon
luxuriante.

Les conditions qui doivent se trouver réunies pour permettre
au bacille de Koch de se développer sur un terrain nouveau
pour lui, ne sont plus nécessaires quand on le transporte direc-
tement d'un organisme vivant dans un autre. C’est ainsi que
s'expliquent les résultats souvent positifs obtenus par les inocu-
lations aux animaux. Ces résultats, nous l’avons déjà fait remar-
quer, ont été très inégaux, et tandis que MM. Gombault et
Chauffard ont obtenu dix fois la tuberculose sur 19 cas expéri-
mentés, MM. Kelsh et Vaillard ne l’ont obtenu qu'une fois
sur dix,

Les épanchements de trois pleurésies suspectes (obs. 10, 14,
14), d’une pleurésie franchement tuberculeuse (obs. 15) et le
liquide péritonéal du deuxième malade de M. Girode ont été
essayés sur les cobayes. Toutes les fois ces essais ont été néga-
tifs. Nous avions pourtant eu soin dans les trois premiers cas de
Jaisser reposer le liquide recueilli par la thoracenthèse jusqu’à
ce que toutes les matières tenues en suspension se soient réunies

668 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

au fond du ballon, puis nous l’avions décanté, et nous avions
injecté les couches inférieures chargées de dépôt à la dose de
2 ou 3 centimètres cubes dans le péritoine de cobayes.

Ces expériences tendent donc à prouver que si le bacille de
la tuberculose se rencontre dans certains épanchements pleuraux,
il ne se rencontre pas dans tous, et que même, il peut faire tota-
lement défaut dans le liquide de pleurésies franchementtubercu-
leuses.

Ces faits sont parfaitement d'accord avecles recherches micro-
scopiques de MM. Kelsch et Vaillard qui ont montré que, dans la
pleurésie simple, les nodules tubercuieux s’entourent de capsules
fibreuses et n’évoluent pas, en général, vers le ramollissement.

Mais si ces auteurs reconnaissent à la forme séreuse de laf-
feclion une tendance à l’organisation fibreuse et à la cicatrisa-
tion, ils regardent au contraire la nécrose des fausses mem-
branes tuberculeuses, leur ramollissement successif, comme la
caractéristique des pleurésies purulentes. Sur quatre cas d’em-
pyème inoculés aux cobayes, ils ont obtenu deux fois du tuber-
cule. C’est probablement dans les faits de cette nature, quand la
malière tuberculeuse caséifiée tombe en grande quantité dans
la cavité pleurale, que les ensemencements devront donner des
résultats positifs. ;

Dans le seul cas de pleurésie purulente que nous ayons
observé, nous n’avons pas recherché le bacille de Koch, mais
nous avons constaté la présence d’un microcoque, très petit,
réuni en zooglées peu volumineuses, ne se développant pas à
une température inférieure à 20 ou 22°, donnant dans le bouillon
de veau des cultures à peine développées, constituées par une
fine poussière, et sur la gélose glycérinée des colonies de un
ou deux millimètres de diamètre et d’une minceur extrême.

Nous avons déjà dit que deux de nos épanchements séro-
fibrineux avaient donné des cultures pures de microcoques par-
ticuliers. Dans l’'épanchement du n° 9 Grisolle (obs. 8) existait
un microcoque assez petit, disposé en chaines de 2, 3 ou 4 élé-
ments, ne liquéfiant pas la gélatine, donnant à sa surface ou sur
la gélose une couche blanche, épaisse, d’aspect vernissé, de con-
sistance visqueuse. L’'épanchement du n° 3 Saint-Denis (obs. 2)
contenait également un microcoque, mais un microcoque très
volumineux, en zooglées, et dont les cultures blanches et épaisses

RECHERCHE DES MICROORGANISMES, 669

s'étalaient sur toute la surface de la gélose. Ajoutons que ces
deux pleurésies ont guéri sans suppurer.

Des deux observations de pleurésie rhumatismale qui fer-
ment la liste insérée plus haut (obs. 19 et 20). une seule, la der-
nière, nous a donné un liquide contenant des micro-organismes.
Chez un homme mort de rhumatisme articulaire aigu compliqué
de péricardite etde pleurésie double, les épanchements pleuraux,
le sang du cœur gauche et la synovie du genou gauche renfer-
maient un microcoque en chaînettes contournées, irrégulières,
constituées par des points assez petits. Ce microcoque cultivé
au sortir de l’organisme dans du bouillon de veau s'était déve-
loppé sous forme d’un fin nuage composé de petits grains
arrondis. Ensemencé le lendemain et le surlendemain dans le
même milieu, ainsi que sur la gélatine et sur la gélose, il n’a
plus fourni aucun développement.

De même, dans deux autres cas de rhumatisme articulaire
aigu, nous avons obtenu par culture, soit du sang pris à l’extré-
mité du doigt, soit de l'urine recueillie à l'émission avec toutes
les précautions voulues, un microorganisme en chaînettes con-
tournées, irrégulières, en tout semblable au précédent et dont il
nous a été impossible de produire une deuxième généralion.

DE L'ABSENCE DES MICROBES DANS LES TISSUS
VÉGÉTAUX,

Par M; A: DI VESTEA.

Aù laboratoire de la clinique Cantani, à Naples.

Le Bulletin médical m'ayant appris les résultats de M. Ga-
lippe sur la présence des microbes dans la substance des végé-
taux, j'ai eu l’idée de contrôler ces expériences, en désaccordavec
tout ce qu'on croyait savoir jusque-là, et j’ai commencé sur ce
sujet un travail que la maladie m'a forcé d'interrompre, mais
dont je crois bon d'ajouter les résultats à ceux que M. Hernhass
a publiés dans le tome IT de ces Annales.

Je me suis mis dans les mêmes conditions que M. Galippe,
c'est-à-dire que j'ai opéré sur des plantes maraïchères cultivées
dans les environs de Naples, sur des terrains bas où se réunis-
sent les vidanges de la ville. Je me suis surtout servi des tro-
gnons d’une variété de laitue que nous nommons /aitue romaine.

Pour faire des prises d’essai, je me suis servi, comme
MM. Laurent et Fernbach, d’un emporte-pièce, mais il était en
verre et présentait des dispositions particulières. Dans le tube
à paroi mince qui servait d’emporte-pièce, pouvait glisser un
autre tube à paroi épaisse, plus long que le premier, fermé à la :
ouate à son extrémité libre, et glissant dans un bouchon d'ouate
à l’intérieur ‘du premier tube. Le tout était chauffé à 150° après
avoir été introduit à moitié dans un tube à essai, fermé par un
tampon d’'ouate. On coupe alors le végétal avec un couteau
flambé, on enfonce dans la coupure fraîche l'extrémité tran-
chante du tube à paroi mince, qui emporte un cylindre du tissu
végélal, et on replace l’emporte-pièce dans l’éprouvette protec-
trice. À l’aide du tube à paroi épaisse, on pousse dans le tube à
essai le bouchon végétal, qu'on écrase et qu’on broie avec le
même tube servant de pilon. On aspire ensuite, par son
extrémité libre, une partie du liquide exprimé du tissu, et on s’en

“

ABSENCE DES MICROBES DANS LES TISSUS VÉGÉTAUX, 671

sert pour ensemencer du bouillon de veau stérilisé, pendant que,
d’un autre côté, on fait arriver avec pureté, dans l’éprouvette
contenant les débris végétaux, un peu du même bouillon. On
ferme ensuite à la ouate, et on a ainsi deux séries de cultures
pour chaque essai. J’ai fait aussi des cultures dans le vide, en
meltant le bouillon ensemencé dans des vases disposés pour cela.

De nombreuses expériences m'ont conduit aux conclusions
suivantes :

1° Les cultures dans le vide ou à l’air, faites avec des plan-
tes que j'avais recueillies moi-même ou qu'on apportait fraîches
de la campagne au laboratoire, sont demeurées régulière-
ment stériles.

2° Si on abandonnait au préalable les mêmes végétaux à l’air
pendant 24 heures el au-dessus, une nouvelle prise d'essai dans
le trognon donnait très souvent des ensemencements féconds.

3° Enfin, chaque fois que j'ai opéré sur des végétaux achetés
au marché, j'ai, comme M. Galippe, obtenu des cultures, qui chez
moi étaient même toajours fécondes.

Ce dernier résultat s'explique, je crois, surtout par ce fait que
les jardiniers et les marchands arrosent leur marchandise, pour
lui conserver sa fraîcheur naturelle, avec de l'eau en général très
chargée de microbes.

Mes expériences me semblent donc expliquer les résultats de
M. Galippe, mais sont d'accord avec celles de M. Fernbach pour
montrer qu'il n’y a pas là de dérogation à la loi de M. Pasteur,
selon laquelle les tissus végétaux normaux sont impénétrables
pour les microbes.

Je ne voudrais pourtant pas conclure, au point de vue hygiéni-
que, qu'ilne faut pas se méfier de l’emploi des végétaux provenant
de champs irrigués à l’eau d'égout. Il est clair que ces végétaux
peuvent emporter avec eux des germes pathogènes déposés natu-
rellement à leur surface, comme M. Pasteur l’a démontré pour le
charbon, ou ayant pénétré accidentellement dans leur intérieur,
par exemple avec les insectes souvent imperceptibles qui les
‘rongent. Par conséquent l’hygiène aura toujours à conseiller,
surtout en temps d'épidémie, l'usage de végétaux conv enable-
ment cuits.

REVUES ET ANALYSES

C.FragnkeL. Action de l’acide carbonique sur la vitalité des microorganismes.
Zeitschr. [. Hyg., t. N, p. 332.

Il y a longtemps qu’on s’est préoccupé de rechercher l’action de divers
gaz et surtout de l'acide carbonique sur la vitalité des microbes. Mais on
ne peut pas dire que la question ait beaucoup progressé. Il en a été pour
elle comme pour celle de l’action de la chaleur ou des antiseptiques : plus
on l’a étudiée, plus on a reconnu qu'elle était complexe, et devait se diviser
en une série de questions particulières, dont chacune demandait une étude
et avait chance de recevoir une solution spéciale. Rien ne prouve, en effet,
que l’action de l'acide carbonique sur un même microbe soit indépen-
dante de son âge, de son milieu de culture, de ses conditions héréditaires,
de la température, etc. Les expériences de M. Fraenkel ont le mérite d'être
faites dans des conditions déterminées, pour lesquelles seulement elles sont
probantes. Des microbes divers étant soumis ensemble, dans un milieu à la
gélatine peptone, et dans les mêmes conditions, à l'action d'un même
courant d’acide carbonique, on cherche ceux qui poussent en présence de
ce gaz, ceux que l'acide carbonique arrête sans les tuer, ceux qu'il tue.

Dans une pareille question le procédé expérimental a de l'importance.
Nombreux sont les travaux dans lesquels on se contentait innocemment,
quand on voulait étudier l’action de l'acide carbonique sur des microbes,
de remplir de ce gaz une cloche qui contenait la culture, ou le flacon dans
laquelle elle était faite, sans se préoccuper de savoir si on avait totalement
éliminé l'air de la cloche ou celui du liquide nutritif. M. Fraenkel es.
plus sévère, et nous avons donné dans un article précédent (voir ces
Annules, t. I, p. 333) l'indication de son mode opératoire. Après avoir
ensemencé la gélatine nutritive, il la répartit en couche à la surface du
tube à essai, suivant la méthode d’Esmarch, et fait passer dans le tube,
au moyen de deux tubes recourbés, un courant d'acide carbonique qui
dure tout le temps du séjour des tubes à l'étuve. Les résultats enregistrés, il
remplace par de l’air le gaz des tubes où rien n'a poussé, et distingue ainsi
ceux où les germes étaient absolument morts de ceux où ils n'étaient qu'en-
dormis. IL pousse même le scrupule jusqu'à se méfier de la pénétration
de l'acide carbonique dans les profondeurs de la couche de gélatine,
pourtant très mince, exposée à son action, etil exécute à la suite une autre
série d'expériences dans lesquelles il fait barboter le gaz dans la gélatine

‘

REVUES ET ANALYSES. 673

liquéfiée. IL ferme alors hermétiquement le tube, disposé pour cela comme
on le verra dans l’article cité, refroidit la gélatine qui a été ensemencée
à l'avance, et la répartit en rouleau sur les parois du tube.

Comme on pouvait le prévoir, par les faits isolés que possédait déjà la
science, tous les cas sont réalisés dans l’action de l'acide carbonique sur les
germes des microbes.

« Un nombre limité de microbes peut se développer aussi bien et à
très peu près aussi vite dans un courant d'acide carbonique que dans l'air ;
tels sont le bacille du typhus abdominal, les bacilles d'Emmerich et de
Brieger, le pneumococcus de Friedlaender, le bacille de la fermentation
lactique de Hueppe, et de la levure authentique.

« Beaucoup d'autres sont en état de pousser dans l'acide carbonique,
mais avec plus ou moins de difficulté et plus ou moins de retard.…, tels sont
le M. prodigiosus, le Bacillus indicus, le Proteus vulgaris, le Bacillus phos-
phorescens.

« D’autres ne peuvent triompher de la résistance que leur oppose
l'acide carbonique que si on les expose à haute température : tels sont le
Mic. tetragenus, qui ne subit, à la température ordinaire, qu'un développe-
ment à peine sensible; les bactéries du choléra des poules, de la peste
porcine, de la septicémie des lapins, du rouget, de la septicémie des souris,
le Streptococcus pyogenes et celui de l’érysipèle, enfin les Staphyl. aureus et
albus. »

Remarquons en passant que presque tous ces microbes sont pathogènes,
habitués à vivre, par conséquent, à des températures voisines de celle
du corps des animaux, et dans des milieux où il y a de l'oxygène libre, ou
du moins faiblement combiné, et saisissable pour la majorité de ces
microbes, sinon pour tous. Il est intéressant de constater que la suppres-
sion de cet oxygène ne les empêche pas de se développer, quand on leur
laisse par ailleurs leurs conditions de température.

« Enfin, continue M. Fraenkel, pour tous les autres microbes, c’est-à-dire
pour le plus grand nombre des espèces saprophytiques et pathogènes,
en particulier pour les bacilles du charbon et du choléra asiatique, l’acide
carbonique amène un arrêt absolu de développement. »

Ici la question se complique un peu, car il y a à se demander si cet arrêt
de développement est définitif ou momentané. On peut le voir assez facile-
ment en ramenant de l'air dans le tube, à la place de l'acide carbonique.
Ontrouve alors que si quelques espèces ne poussent plus, et se montrent défi-
nitivement mortes, d'autres se développent, et avaient résisté sans en
mourir à l’action de l'acide carbonique. Mais le nombre des colonies semble
toujours beaucoup plus faible que celui des germes ensemencés, et en cher-
chant, en effet, par la méthode des plaques de gélatine, ce que devient le
nombre de germes dans une culture parcourue par un courant continu
d'acide carbonique, M. Fraenkel a vu que ce gaz tuait toujours un
nombre plus ou moins grand de germes.

« La moins sensible des espèces étudiées a été le bacille de Finkler,
qui après 8 à 10 jours passés dans l'acide carbonique renfermait encore
beaucoup de germes vivants. Les bacilles du charbon donnaient des colonies

674 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

de moins en moins nombreuses, mais on ne les a pas vus mourir complète-
ment, Le Slaphyl. aureus se comporte de même, mais la diminution du
nombre des germes y est un peu plus rapide. Les bacilles du choléra
périssent vite et presque en totalité dans l'acide carbonique ; quelques
individus ont pourtant persisté jusqu’à la fin des recherhes. Le bacille de
Deneke périt d'ordinaire au bout de 3 à 4 jours, et ce n’est qu’exception-
nellement qu'il dépasse ces limites. »

Il y a dans ces résultats un fait curieux et que M. Fraenkel laisse
inexpliqué, c'est la persistance de la vie chez quelques individus d'une
espèce dont tous les autres ont rapidement péri sous l'influence de l'acide
carbonique, et cela avec des espèces chez lesquelles on ne connaît ni spores,
ni rien qui y ressemble. Mais il y a un autre point qui mériterait aussi
d'être étudié de plus près, et au sujet duquel on aurait aimé à connaître
l'opinion raisonnée de M. Fraenkel, c’est la nature de l'action exercée par
l'acide carbonique.

Agit-il uniquement comme moyen d'élimination de l'oxygène ou a-t-il
sur les microbes une action propre, antiseptique ou toxique; Ce qui revient
à dire, pour faire sortir du vague la question, et la poser de suite sur le
terrain expérimental : l’acide carbonique pourrait-il être remplacé, dans les
expériences de M. Fraenkel, par un autre gaz inerte, tel que l'hydrogène ou
l'azote, ou encore par le vide? Ou bien, la substitution de l'azote à l'acide
carbonique changerait-elle Les résultats?

M. Fraenkel eroit que l’action de l'acide carbonique sur les cultures de
bactéries ne se résume pas seulement en une élimination de l'oxygène, et
il se base pour cela, d’abord sur un argument tiré d’une classification de
Liborius à laquelle nous ne pouvons ajouter confiance (V. ces Annales, t.1,
p. 311), ensuite sur deux séries d'expériences dans lesquelles deux microbes
anaérobies, celui du charbon symptomatique et celui de l’œdème malin
(vibrion septique de M. Pasteur), n'ont pas poussé dans l'acide carbonique,
tandis qu'ils se développent dans l'hydrogène.

Il faut accepter ce résultat, si l'expérience le fournit, s’il n'y a pas eu
de causes d'erreur dans l'expérience de Fraenkel, et si l'hydrogène qu'il avait
enfermé dans son tube à essais, fermé par un bouchon de caoutchouc paraf-
finé, a consenti à y rester pendant la durée de l'expérience, et n’a pas
donné lieu à une faible rentrée d'oxygène, peut-être suffisante à des êtres
qui ne sont pas absolument anaérobies, mais peuvent se développer dans
un milieu faiblement aéré. J'incline, pour ma part, à accepter la conclusion
de M. Fraenkel, qui est en parfait accord avec ce que l’on sait de l’action de
l'acide carbonique sur d'autres cellules végétales, mais je suis un peu surpris
de voir que cette action se soit manifestée surtout, ou ait été étudiée de pré-
férence, sur des cellules déjà très anaérobies, c'est-à-dire habituées au contact
de doses considérables d'acide carbonique. Il me semble que si ce gaz a une
action, il devrait surtout la manifester sur des cellules aérobies, et qu'il y
aurait par exemple intérêt à chercher ce que donneraient des eultures
comparatives de ces êtres dans des mélanges variés d'oxygène avec de
l'azote ou de l'acide carbonique. C’est un sujet d'études tout neuf, que quelque
savant voudra peut-être entreprendre. Dx,

REVUES ET ANALYSES. 678

Corxer. Sur la manière d'être des bacilles de la tuberculose dans l’or-

_ ganisme animal sous l'influence de substance entravant leur développe-
ment. Zeitschr. f. Hyg., t. V, 1888, p. 98. — La distribution des bacilles
tubereuleux en dehors du corps. /d., p. 191.

Dans deux articles très intéressants, M. Cornel expose les résultats de
ses expériences, faites à l'Institut de M. Koch à Berlin, au sujet de l'influence
de différents agents antiseptiques sur les bacilles tuberculeux contenus dans
le corps des animaux et au sujet de la distribution de ces bacilles en dehors
de l'organisme.

Pour résoudre la première question, M, Cornet inocule les cultures tuber-
culeuses à de petits animaux (surtout à des cobayes) et les traite ensuite
par des doses maxima de différentes substances considérées comme des
remèdes plus ou moins efficaces contre la tuberculose : tannin, acétate de
plomb, suc d'ail, pinguin (alantol et acide alantique), sulfure d'hydrogène,
menthol, sublimé mélangé avec l’acide hydrochlorique, créoline et créosote.
Dans toutes les expériences, le traitement le plus intensif, à l'aide de ces
différentes substances, n’a donné que des résultats absolument négatifs, en
ce sens que les bacilles continuaient à se développer chez les animaux
traités comme chez les animaux de contrôle, qui n'étaient soumis à aucun
traitement.

Outre l’action de ces différents médicaments, M. Cornet étudia encore
l'influence de l'altitude sur la marche de la tuberculose. Il inocula dans ce
but douze cobayes, dont six furent transportés à Davos, tandis que six
“autres furent conservés à Berlin. Les deux groupes d'animaux manifestèrent
absolument les mêmes phénomènes de tuberculose, et la mort survint
presque simultanément chez les uns et les autres.

M. Cornet est loin d'étendre ces résultats des cobayes à l'homme, bien
qu'il passe facilement de l’un à l’autre, quand il s’agit de calculer ce que
devraient être pour l'homme les doses de médicaments, en partant des doses
restées sans action sur les cobayes. Il ne faut pas oublier, en effet, que les
bacilles de la tuberculose peuvent se comporter envers les désinfectants
d'une manière bien différente, suivant le milieu de culture de ces microbes.
Si l'organisme de l’homme est par lui-même moins favorable aux bacilles
que celui des cobayes, s'il devient le siège de quelque influence tendant à
affaiblir les bactéries, il est évident que pour tuer ces bacilles affaiblis il
faudra une moindre quantité d'antisepliques que pour les bacilles plus
vigoureux des cobayes. IL se produirait là quelque chose d analogue à
l'influence d’une même dose d'antiseptiques sur le virus et les vaccins char-
bonneux. M. Cornet admet, du reste, lui-même l'action favorable de la
créosote sur les phtisiques, quoiqu'il l'attribue, non à une influence directe
sur les bacilles, mais uniquement à ce que la créosote diminue l'abondance
de la sécrétion.

Dans son second mémoire; M. Cornet expose ses nombreuses expériences
ur la distribution des bacilles de la tuberculose .en dehors de l'organisme,

676 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Pour obtenir des résultats précis, il recueillait la poussière de différentes
localités et l’introduisait dans la cavité abdominale des cobayes. La con-
clusion générale de M. Cornet est que le virus tuberculeux, loin d'être ubi-
quitaire comme on le prétend souvent, est réparti d'après des règles fixes.
Le plus souvent il a pu être retrouvé dans la poussière des habitations des
phtisiques, et notamment de ceux qui crachaient sur le plancher ou dans
des mouchoirs. Sur 21 salles d’hôpitaux contenant des phtisiques, 15 ont
présenté le virus tuberculeux. Il à été retrouvé aussi dans trois salles
d’aliénés, dans lesquelles séjournaient des malades atteints par la phtisie.
Un résultat positif a été encore obtenu par M. Cornet dans la pièce de
l'Institut hygiénique, qui servait pour ses expériences d’inhalation des
matières tuberculeuses.

Des recherches nombreuses pratiquées par le même expérimentateur
avec la poussière de deux prisons cellulaires, de deux polycliniques, d'une
salle d'inhalation pour les poitrinaires, dans un établissement sanitaire
contenant des malades du lupus, la poussière d'un orphelinat avec beau-
coup d'enfants scrofuleux, celle de l'Institut pathologique, de trois salles
chirurgicales et de plusieurs rues à Berlin, ont toujours donné des résultats
absolument négatifs.

Après avoir ainsi établi que le virus tuberculeux, loin d’être uniformé-
ment réparti partout, se retrouve surtout dans le voisinage des phti-
siques, M. Cornet cherche à utiliser ce résultat général pour résoudre la
grande question de la prédisposition tuberculeuse. Il croit possible de
réfuter toute cette théorie de la prédisposition, et de faire de tout dévelop-
pement de la phtisie une pure affaire de contagion. Quant aux cas nom-
breux où des personnes, mises souvent en contact avec le virus tuberculeux,
ne prennent pas la maladie, ce sont pour M. Cornet de simples « éventua-
lités ». Pour justifier sa théorie, il se rapporte à des faits nombreux
observés sur les petits mammifères. « Ainsi les cobayes, quoique très peu
sujets à acquérir spontanément la tuberculose et pour cette raison beaucoup
moins disposés que l’homme, prennent pourtant sûrement celte maladie, à
la suite de chaque inoculation ou de chaque inhalation du virus. » (Second
mémoire, p. 196.) M. Cornet, en interprétant ce fait bien connu par beaucoup
d’expérimentateurs, oublie que cette constante réceptivité pour le virus
tuberculeux constitue une propriété spéciale des cobayes. Les autres espèces
de mammifères, même les lapins, sont loin d'être aussi bien disposées, et
M. Cornet mentionne lui-même, à diverses reprises, que ces rongeurs « ne
cèdent pas d’une manière absolue à une infection par le virus tuberbuleux »
(L. c., p. 196). Après une injection de ce virus sous la peau de trois lapins
égaux d'apparence, il se développe, par exemple, chez l’un une tuberculose
générale au bout de quelques semaines, chez un autre seulement après
plusieurs mois !, tandis que le troisième résiste définitivement à l'infection.
C'est donc que les lapins ont une prédisposition différente pour la tuberculose.

1. M. Cornet mentionne lui-méme, dans son premier mémoire (p. 405), un lapin
mort le cinquième mois après une inhalation répétée du virus tuberculeux.

REVUES ET ANALYSES. 677

On ne peut admettre ici d'éventualité diverses .au sujet de l'infection
par le virus tuberculeux.

Il existe donc des espèces chez lesquelles la disposition individuelle est
absolue et d'autres où elle est beaucoup moindre et en même temps fort
variable. Il est évident que l'homme appartient à la dernière catégorie. Des
faits d'une valeur générale, comme par exemple la rareté extraordinaire de
la phtisie acquise à Madère par les Européens émigrés dans cette île, où le
virus tuberculeux est tellement abondant (fait établi par feu le professeur
Langerhuns), et piusieurs autres exemples analogues (entre autre le célèbre
fait du Brompton Hospital) ne peuvent être expliqués par de simples « éven-
tualités », mais concordent parfaitement avec la prédisposition individuelle
des tissus de l'organisme à acquérir la tuberculose.

A la fin de son mémoire M. Cornet énumère les mesures prophylactiques
qu'on devrait accepter partout contre la propagation de la tuberculose. La
première condition serait de ne jamais cracher sur le plancher ou dans les
mouchoirs, mais dans des crachoirs, au fond desquelles on pourrait verser
une mince goutte d'eau ordinaire. Les personnes phtisiques ne doivent pas
embrasser des personnes bien portantes. Les verres et les cuillères em-
ployés par les malades ne doivent servir à d’autres personnes qu'après avoir
élé lavésavec de l’eau chaude. Le linge des phtisiques doit être lavé séparé-
ment, et notamment les mouchoirs et les chemises doivent être bouillis très
soigneusement. Il serait désirable de les désinfecter pendant une heure à
l'aide d'un appareil à vapeur. Il est nécessaire aussi de désinfecter les
vêtements et d’autres objets qui appartenaient à des personnes mortes de
la tuberculose. Les murs des appartements doivent être désinfectés avec la
croûte de pain, d’après le procédé d'Esmarch.

M. Cornet propose des mesures analogues pour les familles, les écoles et
les fabriques contre l'infection des personnes bien portantes par le virus
tuberculeux. Après avoir constaté que le petit miroir du laryngoscope est
souvent infecté dans le larynx des phtisiques, et se laisse difficilement désin-
fecter, M. Cornet propose de n'observer les malades qu'avec leur propre
miroir. E. METCHNIKOrF.

ERRATUM

À la page 506 de ce volume, ligne 4, dans l'article de M. Metchnikof”,
lire bactéries au lieu de bactéridies,

43

678 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

INSTITUT PASTEUR

STATISTIQUE ‘ DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — NOVEMBRE 1888

Morsures à la tête ( simples .....
et à la figure | multiples...
Cautérisations efficaces. ...........
— INnefRCACES ETC

Pas decadtèmsations. Ten

simples......
multiples...
Cuutérisations effiraces............

— ineffiCACes.. Ne
Pas de cautérisahon./.. 0.102.

r

Morsures aux mem-{ simples......
bres et au tronc multiples...
Cautérisations efficaces ............
— inefficaces. . :.......

Pas de cautérisation............:.
HUD HS ECRATES EE RE EN ERE RESE
MOTSUTES RTL ER ee or -rece

Morsures multiples en divers points
AU ICOLDS EE re Pa se AERES
Cautérisations efficaces.........:..
— InefNCRCES ee

Pas de cautérisahon..".:.....,. 1.1.
HUDAES AR ATES ER RDTINNNE
MON SANES AU RALENTIR ANSE

Morsures aux mains)

Français et Algériens..|..

Totaux. Etrangers. .....:2..0l.e

TOTALÉCENERADUMACE PEN AE 107

4. La colonne À comprend les personnes mordues par des animaux dont la
rage est reconnue expérimentalement ; La colonne B celles mordues par des ani-
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; La colonne C les personnes mordues
par des animaux suspects de rage.

Les animaux mordeurs ont été :
Chiens, 404 fois; chats, 6 fois.

Aucune nouvelle de décès n’est parvenue à l’Institut Pasteur.

TABLE DES MATIÈRES.

Sur la destruction des lapins en Australie et dans la Nou-
velle-Zélande, par M. Pasreur. . . .. .. ..... HER
Nouvelles recherches sur la rage, par M. Banpacn. . . ..
Notes de laboratoire sur la présence du virus rabique
dans les nerfs: par M. Roux. . 2, 4 FERA
De la culture sur pomme de terre, par M. Roux. . ... ..
Note sur la réaction chimique des bacilles du choléra, par
AT NOT ST RP AE A SR NE RE

Sur Lopnon par inhalation des germes morbides, revue cri-

Sur la résistance des bacilles tuberculeux, par M. Max VorLscx.
Recherches sur le rouget des pores et son inoculation, par M. Krrr.
Les microcoques du coryza contagiosa des chevaux, par M. J.
LANCER LP SRE AD LE TU CRUE CAS M ON PCT NE UE
Sur la connaissance du rouge du choléra, par M. J. JADAssoHN. .
Quelques-unes des propriétés du virus rabique, par M. A CELr.

Statistique de l’Institut Pasteur (décembre 1887). . . . ..
Immunité contre le charbon symptomatique conférée par
des substances solubles, par M. Roux. . ........
Immunité contre le virus de la fièvre typhoïde conférée
par des substances solubles, par MM. Cnanremesse et
VD RAR AR EN EPA Re Su se à
Action de quelques ne et de la chaleur sur le
bacille de la tuberculose, par M. YErRsiN. . ... ...
Sur le mécanisme de l’immunité, par M. Caauveau. . . . .
Variations de forme chez les bactéries, par M. Wasserzuc.

Carcinome et sarcome, revue crilique . . . . . . . . . . OS
Sur la culture des bacilles de la lèpre, par M. BorponI- Ur
DEAR NON Ro sn CR EE VA a NA Det

Transmission de la rage de la mère au fœtus, par M. G. ZAGaRr
Nouvelle méthode pour prévenir la rage avant l'infection, par

MOV ES NE US RULES MIE RE Near EAP
Sur la vaccination antirabique de l'homme, par M. FERRAN . . .

92

94

680 . ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Persistance de la virulence rabique dans les cadavres enfouis, par

ML AGALTIER, 25422 2 0 DORE RENE AR RER
Sur un nouveau bacille lumineux, par M. B. FISCHER. . . . . . .
Le micrococus ochroleuccus, nouvelle bactérie chromogène, par. .

M: PROVE 2 SR PRAIRIE ER PEER SERRE RER ARE
Sur le développement des bactéries entre 50° et 70° par M. GLoBrG.
Culture des bactéries sur des milieux colorés;par M. NOEGGERATH.
Sur le sublimé corrosif dans les liquides albumineux, par . . . .

MANBERRING RENNES EN AU MONCTON EN EN LAN PAPERS REA EN € .
Le tribromophénol comme antiseptique, par. M. GRIMM . . . . .
L’acide oxynaphtoïque, par M. LuBBERT . . . . . . . . . . . be

Statistique de l’Institut Pasteur (janvier 1888). . . . . ..
Lettre de M>PasteurMDuclanx 00e See
Sur la transmission intraplacentaire des microorganismes,
par DLL MNMALVOZ SANS DRE rn PETER
Le virus rabique des chiens de rue dans ses passages de
lapinadapio par M HoGvEs ee Pen Eee "RER
Variations durables de la forme et de la fonction chez les
bactéries, par MY WASoERzUG VE MIA PERS TS

Rapport sur une épidémie de rage parmi les daims du parc .
de Richmond pendant les années 1886-1887, par MM. Core et

HORSLENS ENIOSELAS DES PNEUS AIR SENS ARR SEEN ASE RSA
Sur l’atténuation du bacille charbonneux dans le corps de la .
grenouille, par LUBARSCOR 009 ARPRARER NATER MEN ER

Statistique de l’Institut Pasteur (février 1888)... . ....
Pasteuria ramosa, un représentant des bactéries à division
longitudinale, par M. E. Mercuanixorr . . . . . . . . ..
Sur un procédé perfectionné d’analyse bactériologique de
PairparMSTRAUS et. Ware la TA Se Rene
Sur l'absence de microbes dans l'air expiré, par M. Srraus.
Contribution à l'étude séméiologique et pathogénique de
la rage par MÉFERRE. 01 DURS ARE PO PER Lire à
De l’antagonisme des bactéries et de Mens qu’il con-
fère aux milieux de culture, par M. pe FREUDENREICH. . .
Recherches morphologiques et physiologiques sur un
hyphomycète, par M: /WaAsseRzue, . 0 CONS

Sur les antagonismes entre les bactéries, par M. GARRÉ . . . . .
Gangrène septique suraiguë après une lésion sous-cutanée, par
M:OSEYDEL Lo ne NAN RIRE PES

218

220

TABLE DES MATIÈRES.

Les microorganismes d’une inflammation enzoolique du foie chez

les'porcelets, par M: NoNEWirscn. ("0 LOU: À 4
Un cas de carcinome du sein (récidive), traité par une LE
Gion:d'erysipéle; par MS'AXEC HoLST, 2 PRO CET

Des propriétés antiseptiques du naphtol 4, par M. Maxrmovirex.

Statistique de l’Institut Pasteur (mars 1888). . .......
Sur la destruction des microbes dans les organismes fébri-
Gihantes pat M CAMALENA SES SR RES RNA E
Étude sur le développement du tubercule METRE
DR A RO ER SEEN LL ed Lo cat de Ur : LOTS"
Influence des vapeurs d'acide RU LR sur e bacilles
tuberculeux, par MM. Graxcuer et CHaurarp. . . . . ..
Étude sur les formes furieuse et paralytique de la rage

chez le lapin, par M. Hezman... .. RATER
De l’absence des germes vivants dans les conserves, par
M. FERNBACH. . . . RTS TES TR EEe RS AC EN

Sur la preuve expérimentale de l’absorption des microbes infec-
tieux par les voies respiratoires, par M. BUCHNER . . . . . . .
De l'incubation de la rage, par trépanation, et d'un nouveau
moyen de produire cette maladie chez les lapins, par M. Fer-
CN ERA AL RE MS QE RENE ER Me EP QPEEEE FACE Fete AE EAN SE
Sur la question de la formation des spores dans le bacille de la,
digrve; pa M-BAUMGARTEN. 72228 NEA CRAN
Recherche du bacille typhique dans les eaux potables de Coïmbre,
par MM. pa Camara MELLo-CABRAL et DA RocHA . . . . . . . .
Sur un bacille venu sur la pomme de terre et dont les spores.
offrent une résistance considérable à la vapeur d’eau sur-

chautee par MGEUBIE se MOMENT RENE TERRE :
Traité pratique d'antisepsie, par MM. LE GENDRE, BARETTE “
LÉPAGES UPS AE RS SUR MST LES Rare mA US ARE SSSR
Sur la technique de coloration des bacilles de la lèpre et de la tu-
berculose, par M. LuBIMorr.. . . . . LOT MEN Lt ARE des

Sur l’atténuation du microbe du charbon symptomatique par.
la vapeur d’eau bouillante, par M. KiTT. . . . .-. . . . . . . .
Statistique de l’Institut Pasteur (avril 1888). . . . . .. se
Note sur la maladie des bœufs de la Guadeloupe connue
sous le nom de Farcin, par M. Nocann. . ..,......
Culture des bacilles de la tuberculose sur pomme de terre,
par M. PawLowskr.. ... NUIT IE MEET PA LA 2

Sur l'oxydation du glucose par les microbes, par
M:rBocmoux: . 4. "0: EN en e LOER ST PEAR

281

682 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Sur la transmission par hérédité des maladies infectieuses, par

M MWOLFES 50 NE RER Ste Lie ee
Sur les bactéries ferrugineuses, par M. WINOGRADSKY . . . . . .
Sur la destruction des bactéries dans l’organisme, par M. Banri.
Sur la concurrence des microbes dela fièvre typhoïde et du char-

bon;1par M" PAVONR CREER ER EE a Teen ÉRe

Sur la culture des microbes anaérobies, par M. C. FRANKEL, . .

Bactérie du furet, par MM. EBERTH et SCHIMMELBUSCH. . . . « + .
Statistique de l’Institut Pasteur (mai 1888). . RUN

Expériences sur la vaccination des Stat date la
rage par injections intra-veineuses de virus rabique, par
MMESNocaRD el ROUX NAS CAR RER EE

Sur la transformation des matières azotées dans les cultu-
res de bactéridie charbonneuse, par M, PERDRIX. . . . .

Des procédés usités pour le dosage des bactéries atmo-

sphériques, par. M. MiQuez . . . . . .. RS RAR 1e
Sur une élévation de température dans la période d’incu-
bation de la rage, par M. Bases. . . .. RENE PNEU

Des hématozoaires du paludisme, revue critique, par M. LAVERAN:
Mémoire sur le choléra des porcs, par M. SALMON . . . . . . . .
Le charbon et sa vaccination préventive, par M. Rossr@noL . . .

Statistique de l’Institut Pasteur (juin 1888). . . . . . . ..
Sur l’immunité contre le charbon, conférée par des sub-
stances solubles, par MM. Roux et CHAMBERLAND. . . . .
Recherches physiologiques sur l'utérus après la parturi-
tion physiologique, par MM. I. Srraus et SANCHEZz-
LOLEDO 28. RS, ne LUPRNRE NE ARE AOL
Sur l’étiologie de la nie fbiitehee chez l’homme,
par ME CAMALETS 200 SR ER RIRE

Recherches sur la formation du gras de cadavre, par M. ERWN .

Sur l'immunité des chiens contre la rage, par M. PROTOPOPOrr .
L'albumine des œufs de vanneau comme milieu de culture, par.
M:SDAL POZZ0 RER Te ce MERE EC
Sur l'emploi des œufs comme milieu de culture, par M. Hugppe.
Nouvelle méthode pour la culture des organismes anaérobies,
par:M; BucRNER, 456,002 NS AO MER RENE RES

Statistique de l’Institut Pasteur (juillet 1888). . . . . . ..

317
321
324

330
333
337

338

341

394

30%

314

371
387
398

403

405

426

TABLE DES MATIÈRES.

Recherches expérimentales sur la suppuration, pie DE
CHRISTMAS RAT RS Ee ANOEE LUS PP PT eu
Notes de laboratoire sur l’immunité conférée aux chiens
contre la rage, par injections intra-veineuses, par
MMROUX ACER EN FAT Pie Lo CARO RTS TES
Vibrio Metschnikovi et ses rapports avec le microbe du
choléra asiatique, par M. Gamwarria. . . . . . . . . . ..
Sur la recherche des alcools de degré supérieur, par

111 PB LOT IPNTS PORSERRIRRERS TRES 1 ÉNÉDA E D ÉE 7
Sur les théories de l'immunité, revue critiques . . ..... . . . ..
Sur le rôle phagocytaire des cellules géantes du tubereule, par.

MES METORNIROR ESS. dre ee TP ENS A el As

Sur l'étiologie du choléra des poules, par M. GAMALEIA. . . . . .
Le Cumberland disease des moutons, par MM. Loir, GERMOND et.

NDS PR eee Prec ea DEN Or Pine ne Or OU
Recherches sur la gliscro-bactérie, par MM. MaLerBa et SANNA-
SE CAS CO le ET A Er EC PU CA NE ES A CORTE
Actions chimiques produites, par le Bacterium aceti, par . . . .
MDROWN TS 11 + Mate SR re EL HE nd VE ‘

Statistique de l’Institut Pasteur (août 1888). . . ... . ..
. Étude sur la vaccination charbonneuse, par M. Gamarera.
Vibrio Metschnikovi, son mode naturel d'infection, par
MER CAM ADR LAC A rer RTE NE Pr ee
Recherches sur le polymorphisme du Cladosporium herba-
Run pan MP CE ÉURENT US SUR NOR ER A AAC
De l'absence des microbes dans les tissus végétaux, par
NES ERNBAGEEN EU CARS CCR RAP e ME ENS

De l'action physiologique et toxique des produits de culture du
streptococcus de l'érysipèle, par MM. MAnrREpr et TRAVERSA. .
Expériences sur la rage, par M. FINKELSTEIN . . . . . . . . . .
Sur les prétendues spores du bacille typhique, par M. BucHNER .
Recherches sur l’action de la famée de tabac sur les microbes en
général, et surtout sur ceux qui sont pathogènes, par M. Tas-
DINAN Se ee aie Pie cie Seau rc

Statistique de l’Institut Pasteur (septembre 1888).

Recherches sur le polymorphisme du C/adosporium her-
bot San MES LAURENTE RES E SEENS ARCNTRERS

Hé le critique de M. W Han au sujet des cellules
géantes de la tuberculose, par M. MEercaNIKorr, . . . .

683

469

684 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Lettre de M. Metchnikoff à M. Duclaux. . . . ... .. ..

Sur les diastases digestives; sucrase, revue crilique . . . . . . C

Les bactéries parasitaires des céréales, par M. BERNHEIM. . . . ,

Sur'la richesse de la neige en bactéries, par M. IANOwSkY . . . .

Une. bactérie de glacier, par M. ScameLcx . + AU NON RUN se

Le sucre de raisin comme cause de la virulence par le Staphylo-

Coccus aureus par M BUT WID NEA TRS AE EN RErAERS

Statistique de l’Institut Pasteur (octobre 1888). . . . . ..

Contribution à l'étude de la diphthérie, par MM. Roux

et VERSIN RE ARE RANNER CR JANAE LE as EE ee en

De la recherche des microorganismes dans les épanche-

ments pleuraux, par MM. Gisserr et LioN. . . . . . ..

De l’absence des microbes dans les tissus végétaux, par
M2 di NESDEA SR 0e NL ENT ee re

Action de l'acide carbonique sur la vitalité des microorganismes,

par MYPFRAENREL EIRE SN CU OR AE EURE ERENE

Sur les bacilles tuberculeux en dedans et en dehors de l'organisme,

Dar M CORNET EE LUS EN RE Re TEE

Statistique de l’Institut Pasteur (novembre 1888). . ..

FIN DE LA TABLE DES MATIÈRES.

TABLE ALPHABÉTIQUE PAR NOMS D'AUTEURS

BABES. .
BARDACH

Ferré.

FREUDENREICH (DE

BouTRoUx.
BÜWIDT LL.
CHAMBERLAND .
CHANTEMESSE et due Immunité contre la Fe typhoïde.
CHAUTARD. . , -.
CHAUVEAU. .
CHRISTMAS (DE) .
DucLaux . .
RERNBA CHEN Re

GAMALEÏA .

GILBERT

HELMAN .

.

)

et Lion :
GRANCHER et ChaAUTARD. Action de HFÆI sur le bacille tuberculeux . .

HOGYESs". .
LAURENT .

Mazvoz.

METCHNIKOFF

MIQUEL .
NocaRD.

PASTEUR.

Nocarp et Roux .

PAWLOWSKY.
ERDRIX, .

MÉMOIRES ORIGINAUX.

incubationvdetlatrage DNA AMEL ES LATE
Nouvelles recherches sur la rage . .
Oxydation du glucose par les microbes .
Réaction chimique des bacilles du choléra ,
MR ODS AS Sur ACTA ARE EN SU A CURE
+ GRANCHERW US." A COST RO D
a le mécanisme de Panne ARS
Recherches sur la suppuration, . . . . . .
Recherche des alcools de degré supérieur. .

Absence de germes vivants dans les conserves.
Absence des microbes dans les végétaux . . . .

Séméiologie et pathogénie de la rage. .

Antagonisme des bactéries et immunité, . .
Destruction des microbes pendant la fièvre.
Étiologie de la pneumonie fibrineuse . , . .
Vibrio metchnikovi. . . . . . . . ne
Mode d'infection par le vibrio D :
Vaccination charbonneuse .:. . . . . . : , .
Étude des épanchements pleuraux . . . . ..

Formes furieuse et paralytique de la rage .

.

Virus de la rage des rues passant de lapin à lapin.

Polymorphisme du Cladosporium herbarum .
Mémibisuets (Suite) ML pire

Transmission placentaire des organismes , .
Pasleuridramosai "CLS

eo ete

Réponse à Me Welgertt. men CRE tits

Lettre MA Die PA Te
Dosage des bactéries VENTRE LME

Maladie des bœufs de la Guadeloupe. . . . ..
Vaccination des ruminants contre la rage . .

Destruction des lapins en Australie , . . .
Lettre à M. Duclaux,

CAT

Bacille tuberculeux cultivé sur pommes de terre,
Action de la bactéridie sur les matières azotées.

686 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

ROUX EN PRE Virus rabique dans-les-nerts-2 0 Re

— Cultures sur pomme de terre PE CR

Immunité contre le charbon symptomatique . .

— Immunité contre larrdge 2.2 Near MU RRMRcE

Roux et CHAMBERLAND. Immunité contre le charbon . . . . . . . . ..

— et YErsiN. . , Contribution à l'étude de la diphthérie. . . . ..

SANCHEZ-TOLEDO 0 VE STRAUS PS REV PONS NE AIS me

Srraus et Wur1z. . Analyse bactériologique de l'air. . . . . . +. .

STRAUS IE SE PTE . Absence de microbes dans l'air expiré. . . . . .

Srraus et SancHez-ToLeno. L'utérus après le part physiologique . . . .
Yesreat(Dn) Re Absences des microbes dans les végétaux . . .

WASSERZUG. . + . : Variation de forme chez les bactéries. . . . . .

— Variations durables de la forme et de la fonction.

— Recherches sur un hyphomycète . . . . . . . ..

WIDALS PO EN GIE VOBANTEMESSR ARE MORIN RP IEEE

AVUREZS MR RIRE NOIT: STRAES ASS EE AR PE RSR

VÉRSINR UT Action de la chaleur sur le bacille tuberculeux.

— Développement du tubercule expérimental. . . .

REVUES ET ANALYSES.

BANDE RCI Ta Destruction des bactéries dans l'organisme. . .
BAUMGARTEN . . . . Spores dans le bacille de la morve. . . . . . ..
BAREDTRE 0 MSC Voir LEGENDRE.
BERRING- 2 ee LUE Sublimé corrosif dans les liquides albumineux.
BERNHEIM 20 Bactéries parasitaires des céréales. . . . . . . .
Borponi-UrrREDUZZI. Culture des baetéries de la lèpre. . . . . . . . 5
BUCHNER. . . . . . . Absorption des microbes par les poumons. . . .
— Culture des organismes anaérobies. . . . . . ..
— Spores ‘du bacille typlique.:.# "7400 ere
HUMIDE ASUS Virulence du Staphylococcus aureus . . . . . . .
BROMWNE Lee a Actions chimiques du Bacterium aceti. . . . . .
Camara MELLO-CABRaL et ba Roca. Bacille typhique dans les eaux de
COMPTE LS ERP EN AE DE ee DRE:
CRT Re ee Quelques propriétés du virus rabique . . . . . .
Cor et HorsLey . . Épidémie de rage sur les daims. . . . . . . ..
CORNE. nee Recherches sur le bacille tuberculeux . . . . . .
DARUPOZZ0 EE TRE Cultures dans les œufs de vanneau. . ., . . . . .
DAROCHAE EN REEE Voir CAMArA MELLO-CABRAL.
EgBErTx et SCHIMMELBUSCH. Bactérie du furet. . ... . : . . . . . . . .
FERRAN ENV Ne Vaccination antirabique de l’homme . . . . ..
— Inoculation de la rage aux lapins . . . . . . . .
FINKELSTEIN. « . . . Expériences sur la ragbeus MINES PES
ÉISCHER? ROME Nouveau bacille lumineux 10e
FRAENREL ele Culture des anaérobiés à 20, ee Ce
— Action du:GO0?;sur les/microbes te rIENRRrS
GAUTIER Gene Persistance de la virulence rabique . . . . . . .

GAMALEIA . . : . . . Étiologie du choléra des poules... 2,252" Ne

TABLE ALPHABÉTIQUE PAR NOMS D'AUTEURS.

GARRÉ. . . .. . . . Antagonisme entre les bactéries . . . . .. . ..
GERMOND . . . . . . Voir Loir.

GLOBIG . . . . . . . Bactéries se développant entre 509 et 700. , ..
— Bacille très résistant à la chaleur . . . . . . ..
GAMME MU Tribromophénol comme antiseptique . . . . ..
HORS AR en. Erévention- de la rage "154.080 APE
LL MONET Cancer récidivé traité par une inoculation
RÉRYSIMÉlE Ne PRIT MN ANNE EC TSRSRRE
MARS ER SV GTR GRR. LS 2 & DV sn a be MS
HURPPRE NS 2e ie Emploi des œufs comme milieu de culture . . .
JADASSOHN. . . . . . Sur le rouge de choléra . . . . . .. RAR
Janowsr....... Richesse de la neige en bactéries . . .
TTL ha TROUPE HES" DORES TS) 2720 PE More en ee Re MNT TR NES
= Atténuation du microbe du charbon sympto-
DAT UE LAN Re PUMA NERENS CAEN ARE
LEGENDRE, BARETTE et LEPAGE. Traité pratique d’antisepsie . ... . . .
RRPAGR cou, MOit DRGENDRE SN. RQ RATE er sn,
Loir, GERMoOND et Hixps. Le Cumberland disease des moutons . . . ..
. LUBBARSCH. . . . . . Atténuation de la bactéridie dans la grenouille.
LéBBenm.ce ie". l'acide oxynaphtoique. 9 PEe peer
DUBIMOFr . : .).:. Coloration des bacilles de la lèpre et de la tuber-
ÉUIOSORT NT de RAR PAS UE Re
MALERBA . . . .. Recherches sur la gliscrobactérie . . . . . . . .
MANFREDI. . , . .. Produits de culture du microbe de lérysipéle. .
MAXTMOWITCH=. 2... Propriétés du naphiol.2:2:0. #4 "#60.
METCHNIKOFF . . . . Rôle phagocytaire des cellules géantes du tuber-
CHIC RU TR ES ES RE 2e A
NorG@rRaTHe. ..... Cultures sur milieux colorés £.4: .", ..: : 1.
NONEWITSCH. . . . . Microbes d'une inflammation du foie chez les
Dane Ble IS PME ee te dead Re
PAVONE RE 04 Concurrence vitale entre les bacilles . . . . ...
Pos tee Microcoques du coryxa contagiosa . . . . . . . .
PROTOPOPOFF . . . . Immunité des chiens contre la rage . . . , . ..
EnOVRs ser ue Micrococcus ochroleucus. + . +. . . . . . . . . .
ROSSIGNOL. . . . . . Le charbon et la vaccination préventive . .
SALON LR ane Mémoire sur le choléra-Hog ... . . . : . . . . .
DANNATDALARIS". >, V-OMALERRAS TAN PE ETES Ps se Lee
SCHMELORS 0. ner Une:bactérie de glacier: :....0, DIR ER
SEYDRL EN 4 702 -. Gangrène septique après lésion sous-cutanée . .
ÉASSINARE 51e 0e Action de la fumée de tabac sur les microbes .
TRANVERSA Je 7e seit MEMANPAEDEN APPART ERP A SL RAP tan
VOELSCHE eh tte pe Résistance des bacilles tuberculeux . . . . . ..
MORE RNA NE Formation du gras de cadavre. . . . .. . . . .
WinoGRADSKY. . . . Sur les bactéries ferrugineuses. . . . . . . . ...
VOL rs ENT + Transmission héréditaire des maladies infec-
LUGUSES:5E es nee à Pelle Se RES EE

683 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR.

REVUES CRITIQUES.

Sur l'absorption par inhalation des germes morbides . . . . . . ... 32
Carcinome-et sarcome’220 0e RME RUE ER EN PRES 84
Des'hématozoaires: dupaludisme" het SEA EE MR 377
Sur-les-:théories de lHamunité Fous ARE Ne NE NCA 494
Sur les diastases difestives. LUE AU RE RTE AR OR RENE 613

- STATISTIQUES DE L'INSTITUT PASTEUR.

Décembre-1887%. 2552yte MINOR LAS TER DE A A A Es 47
Janvier: 41888750 ANR RE ER EN A Se A ati
Février A ie RU 2 RSR e à LME PNA AT) SRE DER 2 REC SE Eee 163
Mars RU A DRE CONS PAT EP à LE EST ELA RER ER D 7 tr 226
Avril SR AREA OS Deere RAR R M TE ER IEne LE ER NP 291
Mäi En EL DUR TR EE TOR EPS ER 338
Juin D Sa re RE RES EE A ES M ER ARTE 403
Juillet RE EN BU SRE RE CP AR EE 466
Août REA DEL OR ES A Le AE En STE On D rs LAS ER 515
Septembre "hs 0e RS REIN AN Ar RAR TES 919
CO LES 0) 03 19e ARR ER RAS EN SRE SANT DEEE LR DR ET AE RE RES 627
Novembre" Une EL AE Den ERESR NAES Ne pe OUT et 678

PLANCHES HORS TEXTE.

Planchel. . . Pasteuria ramosa. Mémoire de M. MercaniKorr . . . . 165
Planche IF, I, IV, V et VI. Développement du tubercule expérimental.

Mémoire de M: NERSIN EVENE PR ENS 249
Planche VIT. Bœuf de la Guadeloupe et cultures du microbe du farcin.
Planche VIII. Aspect macroscopique des cultures. Mémoire de M. No-

CARD 2. sas ER SM MR RAI den I ANR 293
Planche IX. . Micrococcus oblongus. Mémoire de M. Bourroux. . . . 309
Planche X. . Parasites du sang. Mémoire de M. LAVERAN . . . . . . 311

FIN DE LA TABLE ALPHABÉTIQUE.

Le Gérant : G. Masson.

Sceaux. — Imprimerie Charaire et fils.

NT ARE ET EP ONE