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TOME VINGT-HUITIÈME 1914 AVEC 20 PLANCHES PARIS MASSON ET C':°, EDITEURS LIBRAIRES DE L'ACADÉMIE DE MÉDECINE 120, Boulevard Saint-Germain (6°). AB 4 PA s a #20 500 74 à latde y aa re JA 28° ANNÉE JANVIER 1914 N° ANNALES DE BINSTEEUT. PASTEUR ACTIVATION DE LA TOXINE TÉTANIQUE par A. MARIE. Nous avons montré (1) qu'un produit normal de l'organisme, l’'adrénaline, exerce 7x vitro une action puissante sur la loxine tétanique dont plusieurs millions de doses mortelles peuvent être neutralisées par un gramme de cet alcaloïde. En outre, nous avons vu que si on remplace celui-ci par de la poudre de sur- rénale, le nouveau mélange conserve toutes ses propriétés téta- nisantes, même avec des quantités de glande desséchée repré- sentant une dose notable d'adrénaline. Bien plus, il suffit d'ajouter cette poudre de capsule ou bien d'autres prépara- tions de l'organe au mélange toxine-adrénaline pour empêcher l'action antitélanique d'un échantillon de suprarénine, naturelle ou synthélique. Ce fait que la tétanotoxine n'est plus neutralisée par l'alea- loïde en présence des autres substances contenues dans la glande surrénale n’est pas spécilique : des extraits de lissu hépatique, des filtrats de matière nerveuse, enfin des corps délinis tels que la lécithine présentent un pouvoir analogue et il est pos- sible qu'il soit dù en partie à un composé comme la lécithine, si répandu dans les éléments cellulaires des glandes surrénales en particulier, ou bien à l’une de ses combinaisons. En tout cas, c'est Ià un phénomène intéressant et que l’on pourrait interpréter dans le sens d'une action favorisante exercée sur la loxine tétanique par certaines substances de l'orga- nisme. Cette hypothèse nous à fait rechercher ce qui se passe- (1) Ces’ Annales, L. XXVIT, p. 29:. 2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR rait si l’on faisait agir différents composés organiques sur des doses de tétanotoxine qui, administrées seules en injection sous-cutanée à des mammifères, ne provoquent plus chez eux la moindre trace de tétanos local. Nos premiers essais ont porté sur l'action de diverses prépa- rations de glandes surrénales, de lécithine et de cholestérine. Voici quelques-unes de ces expériences. (Tableau I.) TABLEAU I. Action de quelques préparations sur des doses subtétanisantes de toxine. MÉLANGES INJECTÉS après une exposition de 20 heures à 31 degrés. a —_——— Souris 4. TT. 0,005 c.c. + V gouttes de glycérine pure. Souris 2. TT. 0,0001 c.c. + V gouttes de glycérine . . Souris 3. TT. 0,0001 c.c. + V gouttes de glycérolé Mereurrenale ne EMEA RENE CRC EE CRC Souris 4. TT. 0,00001 c.c. + V gouttes de glycérine. Souris 3. TT. 0,00001 c.c. + V gouttes de glycérolé He éurrenale En DEAN RENE CEE ER Souris 6. TT. 0,000001 c.c. additionné de traces d'une émulsion de lécithine Ainsi, il résulte de cette première série d'essais que, dans certains cas, des préparations de glande surrénale, de lécithine, ont paru se comporter 2 vitro comme des substances favori- sant l’action tétanigène de la toxine, puisqu'une quantité de ce poison cinq mille fois plus faible que la dose mortelle a, par suite de son mélange avec elles, provoqué des signes de tétanos intense chez la souris. L'action de la glande surrénale était particulièrement suggestive, car malgré sa teneur en adréna- line, des doses aussi minimes de toxine se trouvaient en quel- que sorte mises en valeur par d’autres substances contenues dans la surrénale. Toutefois c’est l'impossibilité de les séparer de l’adrénaline sans les altérer elles-mêmes qui nous à fait essayer d’autres ACTIVATION DE LA TOXINE TÉTANIQUE 3 composés, comme la lécithine. Là encore, l'inconstance des résultats fut manifeste avec plusieurs échantillons d'un produit dont la fabrication pouvait avoir modifié quelques-unes des propriétés ; aussi, dans les autres expériences, avons-nous opéré avec le vitellus (1) de l'œuf de poule, qui nous a donné des résul- lats constants et particulièrement intéressants. (Tableau IT.) TABLEAU II. Action du vitellus de l'œuf de poule sur des doses subtétanisantes de toxine. MÉLANGES INJECTÉS 20 heures après leur préparation. en A RM ce Eten SOURIS AE 705005 €-c.. LON/IRS +. + à + «| — == =)L |» |» | » POURISE SE 40 00ec CL CE ML NICE: 010/0/0/0!01010 Souris 3. TT. 0,000001 c. ce. + VIII gouttes de vitellus. | 0 | —|= —=|=|=ItI% Souris 4. TT. 0,0000001 c.c. + VIII gouttes de vi- DÉMOS RE RUE A CORSA pan fine - + [0 == === |+|» Souris 5. TT. 0,00000001 c.c. + VII gouttes de vi- EST A PT ER Ne NE RIRE AC LE Souris 6. TT. 0,000000001 c.c. + VIII gouttes de VUGITÉS EMMA RER Re = OO EE Souris 7. Vitellus X gouttes. . . .. a NO ON RON ONF ONNONE OO L'action de ce vitellus sur la tétanine s’est montrée d'une puissance très grande : des quantités de toxine cent mille fois inférieures à la dose qui par elle seule ne donne pas la moindre roideur de la patte inoculée, provoquent un tétanos local tout à fait net quand elles ont été mélangées avec une minime quan- lité de jaune d'œuf; un cent-millionième de centimètre cube de toxine additionné de cette substance suffit encore pour donner à une souris de 15 grammes un létanos mortel en huit Jours, alors que le témoin n éprouve aucun trouble apparent avec un dix-millième de centimètre cube de toxine, c'est-à-dire avec une dose dix mille fois plus forte. (1) Le jaune d'œuf était émulsionné dans son volume d’eau physiologique. 4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Dans le contenu de l'œuf, le blanc n'a aucun pouvoir favo- risant sur la toxine; seul le vitellus se montre aclif. Si l’on se demande auquel de ses composants il doit cette propriété, il semble qu’on puisse l’attribuer surtout à ses com- binaisons phosphorées organiques, c’est-à-dire aux lécithines. En effet, au moyen de solutions salines étendues, on ne parvient pas à extraire dans le jaune d'œuf, de substance activante pour la Loxine, ce qui élimine l’ovovitelline ; de plus le chauffage du vitellus à 56 degrés pendant vingt minutes n'altère pas sensi- blement son action sur la toxine. Si, d'autre part, on se rappelle le pouvoir favorisant que nous avons déjà constaté avec cer- taines lécithines du commerce, ainsi que l'exemple des venins, on ne peut s'empêcher d'attribuer à une lécithine ou à l’une de ses combinaisons une part importante dans le phénomène que nous étudions et dont l'intensité semble due à l'état naturel sous lequel se trouve la substance activante (1). Mais, sic'est une lécithine quiintervient pour mettre en valeur des quantités aussi faibles de toxine tétanique. il n'en résulte pas une combinaison analogue aux lécithides. Il se fait cepen- dant une fixation du poison sur la substance activante, cela plus rapidement à 37 degrés qu'à la température de la chambre et la filtration des mélanges vitellus-toxine rend un liquide dépouillé des propriétés télanisantes qu'ils présentaient avant cette opération. L'aclivation de la toxine tétanique par le vitellus de l'œuf de poule réussit surtout chez les espèces très sensibles à ce poison, comme la souris, le cobaye. Chez le lapin, qui jouit d'un état d'immunité naturelle assez marqué vis-à-vis de la télanotoxine, on ne parvient pas à rendre actives des doses du poison très inférieures à celles qui lui donnent un tétanos par injection intramusculaire. (Tableau HE) D'ailleurs, chez Ta souris, une injeclion de vitellus n'a pas pour effet d'activer une dose subtétanisante de loxine inocvlée séparément et à distance du premier. Nous ajouterons que le pouvoir activant du jaune d'œuf sur la tétanine se manifeste uniquement en mettant en valeur des (1) Une préparation comme l'huile d'œufs, obtenue en traitant les jaunes durcis par l'éther, se montre tout à fait inactive vis-à-vis de doses subtétani- santes de toxine, malgré la lécithine que contient cette préparation du Codex. ACTIVATION DE LA TOXINE TÉTANIQUE Ta8LEAu III. Doses subtétanisantes de toxine, JOURS MÉLANGES INJECTÉS 20 heures après leur préparation. un [Ra Souris1.TT.0,0000001 c. €. + VIII gouttes blancd'œuf.| 0/0/0!0!0 10 0 0 Souris 2. TT. 0,00000001 c.c. + VITT gouttes jaune d'œuf. Done EEE Souris 3. TT. 0,00000004 c.c. + VIII gouttes jaune | d'œuf préalablement chauffé à 56 degrés pendant | VINS DINUteS es re Ci CINE EE=Z=E=r= Souris 4. TT. 0,00000001 c.c. + XX gouttes huile | | d'œufs. A 5 CE LAN LES SRE ER Souris 5. TT. 0,0000001 c.c. + VIIT gouttes jaune d'œuf . 0 0 —— == ==+ | Souris 6. TT. 0,0000001 c.c. dans une patte, et VIII re gouttes jaune d'œuf dans l’autre . . . . . . . . .|0[0/010101010! 0 Lapin 50 (1.580 grammes). TT. 0,001 c.c. + VIIT souttes jaune d'œuf ET doses inactives par elles seules, non en diminuant la période d’incubation ou en changeant l’évolution de l’intoxication téta- nique. Il suffit, pour s’en assurer, d’injecter à un cobaye Île mélange vitellus-toxine directement dans le cerveau : le mème espace de temps s'écoulera avant l'apparition des premiers signes du tétanos cérébral que chez l'animal témoin. On n'observe pas non plus de changement dans l’évolution de la maladie, suivant qu’une dose forte de toxine tétanique à élé injectée, mélangée ou non avec le vitellus d’œuf. Les faits que nous venons d'étudier montrent que la quan- lité de toxine lélanique agissant sur le neurone doit être extrè- mement petite, la majeure partie étant neutralisée dans l'or- ganisme, peut-être par l’adrénaline (1), au niveau des capsules surrénales. De plus, ces faits autorisent à penser que des composés lécithiniques ne sont pas étrangers au mécanisme de l’action du poison sur la cellule nerveuse. 29 octobre 1913. (1) Ces Annales, t. XXVII, p. 294. ACTION DES ABCÈS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE EXPÉRIMENTALE DU COBAYE ET SUR SON TRAITEMENT PAR L'ATOXYL par A. CIUCA (de Bucarest). (Travail du laboratoire de M. le professeur F. Mesnil.) Les abcès de fixations produits par les substances chimiques, et spécialement par l'essence de térébenthine, sont employés depuis longtemps dans le traitement de diverses maladies infectieuses, dans le but d'aider l’action d’autres substances médicamenteuses ou d'obtenir par celles-ci une amélioration et quelquefois une guérison complète de ces maladies. Ce dernier effet a été souvent obtenu dans les maladies en imminence de suppuration. «En ce qui concerne les maladies à protozoaires, l’action améliorante de ces abcès à été remarquée d’abord dans des cas de malaria, chez des individus ayant des abcès à la suite des injections sous-cutanées de sulfate de quinine. » (4. Carles) (1). On a constaté plus tard des effets semblables dans la piroplasmose canine. Depuis ces premières observations, les abcès térébenthinés ont été utilisés par Memmo, Adani et Martaglio (2) dans le trai- tement de la piroplasmose bovine. Le D’ L. Martin (3) a remarqué, le premier, une amélioration considérable de Ia maladie du sommeil chez un homme de (1) Les abcès de fixation dans les maladies infectieuses et Les intoxications, p. 10, 1913. J.-B. Baillière et fils. (2) Annal. d'Ig. Experimenti, 1905, p. 146 (Laboratoire séro-vaccinogène d'Erythrée). (3) Les troubles cérébraux de la maladie du sommeil, leur traitement. Bul- letin médical, p. 405, 10 mai 1911. ACTION DES ABCÈS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 7 race blanche à la suite d'un abcès provoqué accidentellement par une injection sous-culanée. Plus tard, le même auteur eut des résultats inattendus dans un autre cas très grave, avec phénomènes cérébraux, en asso- ciant le traitement par l'atoxyl (à fortes doses), avec un abcès de fixation provoqué par l'essence de térébenthine. La question n'étant pas étudiée au point de vue expérimental et étant donné, d'autre part, l'importance pratique de ces recherches, nous nous sommes décidés, à la suite des conseils de M. le professeur Mesnil, à entreprendre une série d’expé- riences dans cette direction. Nous avions à répondre à ces deux questions : 1° L’essence de térébenthine, par l’abcès de fixation qu'elle provoque, peut-elle avoir une action antitrypanosomique et par conséquent être employée avec succès dans le traitement de la trypanosomiase expérimentale chez le cobaye ? 2° L'association du même abcès (provoqué toujours par la même substance) avec le traitement par l’atoxyl possède-t-elle un pouvoir curalif, dans la même trypanosomiase et chez le même animal ? Nous avons choisi comme animal d'expérience le cobaye infecté avec le trypanosome du Surra ou avec celui de l'Ou- ganda (variété de Nagana). Mais pour mieux suivre l’action de ces deux substances sur les trypanosomes 27 v1v0, il fallait obtenir chez le cobaye une trypanosomiase très régulière comme évolution,avec beaucoup de trypanosomes dans le sang pendant la durée de la maladie et qui ne pourrait être guérie par l'atoxyl seul. Ces conditions étaient réalisées chez les cobayes infectés avec le trypanosome de l'Ouganda. Les parasites, une fois apparus dans le sang, se maintenaient jusqu'à la mort en se multipliant progressivement; de plus, d’aprèsles recherches de MM. Laveran et Thiroux (1), cette trypanosomiase ou une voisine est ingué- rissable par l'atoxyl seul. La trypanosomiase produite par le Surra étant très irrégu- lière comme évolution, nous l'avons abandonnée. 4} Recherches sur le traitement des trypanosomiases. Annales de l'Institut Pasteur, t. XXII, p. 97, 1908. 5 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR TECHNIQUE Les trypanosomes employés sont depuis longtemps entre- tenus au laboratoire par des passages chez les souris. Les passages par les cobayes n'exagèrent pas la virulence ni pour cette espèce, n1 pour la souris. Nous injections nos animaux par la voie péritonéale et ensuite on leur examinait journellement le sang. Dans les cas douteux, on notait les résultats après un examen de plusieurs préparalions. L'essence de térébenthine était employée telle qu'elle se trouve dans le commerce. Nous pravoquions la formation des abcès en injectant la téré- benthine sous la peau de la fesse du côté externe et le plus haut possible pour éviter la gangrène de l'extrémité du pied, la diffusion du pus pendant la formation de l’abcès, et l'infection de celui-ci après l'ouverture. Les cobayes injectés avec de la térébenthine sont extrème- ment agités pendant une demi-heure. Après vingt-quatre heures, la région est chaude, très sensible et l’inflammation est assez forte; elle est au maximum à la soixante-douzième heure. L'abcès se forme au bout de quatre où cinq jours et il n'est pas toujours nécessaire de l'ouvrir. Le pus est épais, d'une coloration blanc sale etilaune odeur forte de térébenthine, même quand on ouvre les abcès dix Jours après l'injection. Un abcès bien soigné est guéri en dix jours. D'ailleurs, on ne peut pas les entretenir longtemps parce qu'ils provoquent une forte cachexie des cobayes. Parmi les cobayes, il ÿ en à qui sup- porlent bien ces abcès, d’autres qui ne les supportent pas et d'autres chez lesquels on ne peut obtenir aucune inflammation locale. La quantité d'essence de térébenthine injectée variait entre L'2 et" eent cube! La solution d’atoxyl était faite ‘quelques minutes avant l'in- Jection au 100°, dans de l’eau distillée stérilisée. On injecte l’atoxyl sous la peau et à la dose de 1 1/2- ACTION DES ABCÈS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 9 2 cent. cubes; donc, les animaux reçoivent 0,015-0,020 cr. d'atoxyl. L'efficacité thérapeutique de cette méthode était vérifiée par l'examen du sang avant et après les injections d'atoxylet d’es- sence de térébenthine. La disparition des trypanosomes de la cireulalion pendant le traitement était souvent contrôlée par l'inoculation à des souris neuves du sang des animaux soumis au traitement. EXPÉRIENCES Nos expériences ont porté sur 42 cobayes infectés avec le trypanosome de l'Ouganda et sur 10 cobayes infectés avec le trvpanosome du Surra. Sur les 42 premiers cobayes, 11 ont servi de témoins, les 31 autres ont été traités soit uniquement par l'essence de léré- benthine, soit par l'association de cette substance et de l'atoxyl, Sur les 10 derniers, # ont servi de lémoins et les 6 autres ont été traités seulement par la térébenthine. Chez les 11 témoins inoculés avec le trypanosome de FOu- ganda, la durée de la maladie a varié entre 11 et 56 Jours, la moyenne étant de 30 jours. Les trypanosomes apparaissent dans le sang entre 3 et 8 jours. Très rares au commencement, ils se multiplient progressive- ment jusqu'à la mort des animaux, qui présentent vers le 12'- 14° jour des quantités considérables de parasites dans le sang. I n'y a pas de vraie crise trypanolytique et mème ia diminu- lion du nombre des trypanosomes est rare. Chez les témoins inoculés avec le Surra, la durée dela maladie a varié entre 17 et 4 jours. Les trypanosomes apparaissent dans le sang du 5° au 9° jour après l'inoculation; ils se maintiennent jusqu'à la mort, présentant plusieurs périodes de diminution allant jusqu'à la disparition complète. Chez les cobayes Surra, les trypanosomes ne sont jamais aussi nombreux que chez les cobayes Ouganda. Les témoins ont toujours été choisis parmi les cobaves les plus forts de la série. Les 37 autres cobayes soumis au traitement ont été groupés en deux catégories. 10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR CATÉGORIE A. Cobayes traités seulement par l'essence de térébenthine. Pour cette catégorie, nous avons deux séries d'expériences et deux trypanosomiases différentes. Première série. — Les cobayes ont recu une ou plusieurs injections de térébenthine. La première injection était toujours faite en même temps que le trypanosome pour voir d’abord l'influence de l’abcès sur la période d’incubation de la maladie, et ensuite son rôle curatif. Voici les observations des cobayes injectés avec le /rypa- nosome d'Ouganda. Cobaye n° 1, 420 grammes, infecté le 4 juin et injeclé en méme lemps avec 1 cent. cube de térébenthine. Le 4 juin, il avait déjà un gros abcès. Les trypan. ont apparu dans le sang le 14 juin (après 14 jours), et 5 jours après, les para- sites élant assez nombreux, on fait la deuxième injection d'essence de téré- benthine (1 cent. cube). Vingt-quatre heures après, les trypan. deviennent plus rares: le 11 juillet, ils recommencent à augmenter jusqu'à la mort, survenue le 25 juillet (14 jours). L'évolution totale de la maladie fut de 55 jours. Aulopsie : Péritonite purulente. Cobaye n° 2, 400 grammes, infecté le $ juillet et injecté simultanément avec 1 cent. cube de térébenthine. Les 18 et 19 juillet (8 jours après), l'examen du sang montre de rares trypan. L’abcès est bien formé. Le 21 juillet, les trypan. disparaissent du sang circulant; le 2$ juillet, ils réapparaissent pour augmenter progressivement jusqu’à la mort, survenue le 5 août. L'évolution complète de la maladie fut de 26 jours. A l’autopsie, on trouve une conges- tion intense de tous les organes. Hypertrophie de la rate. Cobrye n° 3, 480 grammes. infecté le 25 juillet et injecté en même temps avec 1 cent. cube de térébenthine. Le 5 août, les trypan. apparaissent dans le sang en très petit nombre. Le 7 août, il succombe. Autopsie : Hémorragie intrapéritonéale déterminée par la rupture du foie. Cobaye n° 4, 580 grammes, infecté le 25 juillet et injecté avec 1 cent. cube de térébenthine le même jour. Les 4 et 5 août, les parasites sont très rares; deux jours après, ils disparaissent. Ils réapparaissent le 11 août en petit nombre. Le lendemain, on fait une seconde injection de térébenthine. Pas de réaction locale. Le 14 août, mort. Evolution de la maladie, 20 jours. Aulopsie : Pleurésie avec adhérences pulmonaires. Congestion du poumon. On répète ces expériences avec des cobayes inoculés avec le trypanosome du Surra. Cobaye n° 5, 52% grammes, infecté le 4e juin et injecté avec 1 cent. cube d'essence de térébenthine. L'abcès se forme quatre jours après. Le 17 juin, les trypan. apparaissent dans le sang et ils s'y maintiennent en nombre variable jusqu'à la mort, survenue le 28 juillet. Evolution de la maladie 56 jours. Aulopsie : Congestion des organes. Hypertrophie de la rate. ACTION DES ABCÉS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 11 Cobaye n° 6, 430 grammes, infecté le 1er juin et injecté simultanément avec 1 cent. cube de térébenthine. Cinq jours après, il avait un énorme abcès local. Le 11 juin, on le trouve mort. Pendant ces 10 jours, l'examen du sang a toujours été négatif. Aulopsie : Congestion intense des organes. Cobaye n° 7, 415 grammes, infecté et injecté en même temps avec 1 cent. cube de térébenthine le 8 juillet. 10 jours après, les trypan. apparaissent. Le 25, ils sont très nombreux; on pratique la deuxième injection de téré- benthine (1 cent. cube). Le 30 juillet, à l'examen du sang, on n'observe plus de parasites. Le ier août, ils réapparaissent et se multiplient jusqu'au 11 août. On pratique une troisième injection de térébenthine (1 cent. cube). Tout de suite après, et durant 5 jours encore, l'examen du sang reste négatif. Après cet intervalle, les parasites font de rares apparitions. Le cobaye maigrit de plus en plus à cause de ses abcès et, le 23 septembre, il est trouvé mort. Evolution de la maladie, 76 jours. Awlopsie : Les organes sont très pâles. Phlegmon diffus de la fesse gauche. Deuxième série. — Les cobayes en pleine évolution de la maladie reçoivent une seule injection de térébenthine. Le but de ces expériences était de voir le rôle exclusivement curatif des abcès de fixation. Les cobayes sont infectés avec le /rypanosome de l'Ouganda. No 8, 480 grammes, infecté le 1er juin. Les trypan. apparaissent 4 jours après. Le 19 juin, l'infection est au maximum; on pratique l'injection de térébenthine. Quatre jours après, ils diminuent considérablement pour augmenter de nouveau les jours suivants jusqu'à la mort, survenue le 1 juillet. Evolution de la maladie, 36 jours. Autopsie : Congestion viscérale. N° 9, 450 grammes, infecté le 8 juillet. L'examen du sang est positif après 1 jours et, au bout de 17 jours, les parasites sont innombrables. On pratique à ce moment l'injection de 1 cent. cube de térébenthine. Les parasites commencent à diminuer le troisième jour après l'injection de térébenthine, sans toutefois disparaitre complètement. L'animal succombe le 5 août. Evolution de la maladie, 28 jours. A l'autopsie, congestion intense de tous les organes. N° 10, 290 grammes, infecté le 15 septembre: 6 jours après, apparition des parasites dans le sang et, le 14 octobre, ils sont en quantité énorme. On pratique le lendemain l'injection de térébenthine (1 cent. cube). Le nombre des trypanosomes diminue même après 24 heures. Les 4 jours suivants, les trypanosomes ont presque disparu. À partir du 20 octobre, ils commencent à augmenter jusqu'à la mort, survenue le 3 novembre. Durée de la maladie, 53 jours. Autopsie : Congestion pulmonaire intense. Rate hypertrophiée. On fait les mêmes expériences avec des cobayes infectés par les trypanosomes du Surra. N° 11, 500 grammes, infecté le 8 juillet; 4 jours après, l'examen du sang est posilif; les parasites sont au maximum le 25 juillet. A cette date, il reçoit une injection de 1 cent. cube de térébenthine, sans qu'il s'ensuive 12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR aucune réaction locale ou générale. On le trouve mort le 15 août. Evolution de la maladie, 38 jours. Aulopsie : Congestion intense et hypertrophie de la rate et des capsules surrénales. N° 12, 400 grammes, infecté le 25 juillet, présente des parasites après 3 jours; ils deviennent assez nombreux après 15 jours. Le 9 août, il reçoit une injection de térébenthine (1 cent. cube). Les parasites disparaissent entièrement pendant les 5 premiers jours qui suivent l'injection; ils réappa- raissent de temps en Lemps et en très pelit nombre jusqu’à la mort, survenue le 26 septembre. Evolution de la maladie, 63 jours. Autopsie : Congestion intense du poumon. N° 13, 3$0 grammes, infecté le 11 août, l'examen du sang est posilif 1 jours après. Après trente-quatre jours seulement, les parasites sont en assez grand nombre. Le 14 septembre, on lui injecte 1 cent. cube de tére- benthine. Les trypan. étaient déjà très rares après vingt-quatre heures et. pendant les 5 jours qui suivent, on trouve à peine un trypan. pour 4 ou 5 champs microscopiques. Le 15 octobre, le cobaye est trouvé mort. Evolu- tion de la maladie, 65 jours. Aulopsie : Congestion intense des organes parenchymateux. Les témoins de ces deux séries sont au nombre de 9 : 5 pour les cobayes infectés avec le trypanosome de l’Ouganda et % pour ceux infectés avec le {rypanosome du Surra. a) Témoins avec Ouganda : N° 14, 540 grammes, infecté le 25 juillet. Après 8 jours, les trypan. appa- raissent dans le sang. et ils se multiplient progressivement jusqu'à la mort de l'animal (le 2 août). Evolution de la maladie, 17 jours. Autopsie : Congestion des organes parenchymateux avec hypertrophie de la rate. N° 15, 500 grammes, infecté le 1" juin. L'examen du sang est positif 5 jours après l’inoculation. Pendant toute la durée de la maladie, les trypan. ont été très nombreux jusqu'à la mort (le 26 juillet). Evolution de la maladie, 16 jours. Autopsie : Congestion intense des organes. N° 16, 513 grammes, infecté le 1er juin. Les trypan. apparaissent dans le sang en graad nombre 6 jours après l'inoculation et ils se maintiennent jusqu'à la mort de l'animal (le 25 juin). Evolution de la maladie : 24 jours. Aulopsie : Congestion des organes ; hypertrophie de la rate. N° 17, 480 grammes, infecté le 17 août. Les parasites ont apparu #4 jours après l’inoculation. Ils sont très nombreux et le restent jusqu'à la mort. survenue le 9 septembre. Evolution de la maladie : 23 jours. Aulopsie : Congestion intense du poumon. No 18, 410 grammes, infecté le 25 septembre. Les trypan. ont apparu en grand nombre 6 jours après l’inoculation. Evolution de la maladie : 39 jours. Autopsie : Rate hypertrophiée. b) Témoins avec Surra : N° 19, 550 grammes, iafecté le 1er juin. Après 9 jours, les tryvpan. ont apparu dans le sang et ils se sont maintenus (quelquefois extrêmement rares) jusqu'à la mortfle 4 juillet). Evolution de la maladie : 32 jours. Aulopsie : Congestion des viscères abdominaux. No 20, 560 grammes, infecté le $ juillet; après 5 jours, il avait dans le sang des parasites nombreux, qui se sont maintenus jusqu'à la mort, le 19 août. Pendant l'évolution de la maladie, 5 jours avant la mort, il a fait une crise ACTION DES ABCÉS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 13 après laquelle, pendant 2 jours. l'examen du sang fut négatif. Evolution de la maladie : 39 jours. Autopsie : Congestion des organes. N° 21, 390 grammes, infecté le 25 juillet; 6 Jours après, l'examen du sang est positif jusqu'au 7 août. À partir de cette date, les parasites deviennent très rares et plusieurs jours’ de suite l'examen est même complètement négatif. L'animal est mort sans avoir de trypan. dans le sang (le 22 août). Evolution de la maladie : 27 jours. Aulopsie : Congestion du poumon et pleurésie séro-fibrineuse. N° 22, 450 grammes, infecté le 26 juillet; après trois jours, il avait des trvpan., qui se sont maintenus jusqu'à la mort, le plus souvent en très petit nombre. L'animal succomba le 10 septembre. Evolution de la maladie : 45 jours. Aulopsie : Congestion intense des organes. Il résulte de ces expériences que : 1° L'essence de térébenthine, injectée au moment de l'infec- tion, par l'abcès de fixation qu'elle détermine, retarde de quelques jours l'apparition des {rypan. dans le sang chez les cobayes infectés avec le trypanosome de l'Ouganda ou celui du Surra ; 2° Injectée chez les cobayes en pleine infection, c'est-à-dire quand ils présentent dans le sang le maximum de trypan., elle en diminue le nombre. En général, cette diminution se présente au bout de vingt-quatre ou quarante-huit heures et elle aboutit le plus souvent à leur disparition complète; pen- dant quatre ou cinq jours, le sang ne présente plus de parasites. Cette disparition n'est que momentanée el on voit ensuite Les trypan. réapparaître progressivement; 3° Malgré les sévères conditions d'expérimentalion (surtout pour les cobayes de la deuxième série, chez lesquels le traite- ment élait commencé après 12 ou 15 jours de maladie), il y a souvent une survie nolable des animaux traités par rapport aux témoins; 4° Toute injection de térébenthine entrainant une réaction locale inflammatoire suffisamment intense, provoque inévita- blement la régression ou la disparition passagère des trypa- nosomes. CATÉGORIE B. Les cobayes de celte catégorie ont toujours été infectés par la voie péritonéale avec le trypanosome de l'Ouganda et soumis ensuite au traitement par l'afoxyl et l'essence de térébenthine. 14 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Première série. — Ces cobayes ont reçu chacun deux injec- tions de térébenthine et d’atoxyl. Lot a. — Les animaux de ce lot ont toujours ‘recu la pre- mière injection de térébenthine en mème temps que l'inocu- lation du trypanosome et la première injection d’atoxyl quand les parasites étaient très nombreux dans le sang. N° 23, 400 grammes, infecté le 20 octobre et injecté le même jour avec 1 cent. cube d'essence de térébenthine.Les trypan. ont apparu dansle sang $S jours après et deviennent très nombreux 6 jours plus tard. Le 7 novembre, on lui injecte 0,015 gr. d’atoxyl. Le 14 novembre, il recoit de nouveau, simultanément et en quantités égales, de l'essence de térébenthine et de l’atoxyl. Il n'y a pas de réaction locale ; les trypan. pendant #4 jours sont très rares. Après cet intervalle ils se multiplient progressivement jusqu'à la mort (le 28 novembre). Évolution de la maladie : 38 jours. Aulopsie : Congestion intense des organes; nécrose des muscles de la cuisse gauche. N° 24, 430 grammes, infecté et injecté avec térébenthine le 20 octobre. Les parasites ont apparu dans le sang 9 jours après et pendant 7 jours ils sont en petit nombre. Le 7 novembre, il recoit la première injection d'atoxyl (0,015 gr.); les trypan. se maintiennent très nombreux. Le 13 novembre, il recoit la deuxième injection de térébenthine et d’atoxyl. 48 heures après l'examen du sang est négatif. Le 22 novembre, l'animal succombe. Evolution de la maladie : 32 jours. Au/opsie : hémorragie abdominale consécutive à la rupture du foie. Lot b. — Ces cobayes recevaient simultanément les inJec- tions de térébenthine et d’atoxyl. Les deux premières étaient toujours faites à l’acmé de la maladie. Voici trois observations : N° 25, 390 grammes, infecté le 20 octobre. Après 5 jours, les trypan. appa- raissent dans le sang. Le T novembre, ils étaient extrèmement nombreux. Le cobaye reçoit la première inoculation de lérébenthine (1 cent. cube) et d'atoxyl (0,020 g.) Les trypan. ont complètement disparu, et ce n'est qu'après 6 jours que nous avons trouvé un parasite dans la préparation. Le 13 novembre, deuxième injection de térébenthine et d’atoxyl (mêmes quan- tités), après laquelle, pendant encore 5 jours, disparition des parasites. Après cet intervalle, ils ont réapparu, au commencement moins nombreux, au bout de 5 jours et jusqu'à la mort très nombreux. Evolution de la maladie : 37 jours. Aulopsie : Les organes de la cavité abdominale un peu conges- tionnés, un abcès dans la fesse gauche. No 26,390 grammes, infecté le 20 octobre: 6 jours après, les trypan. appa raissent dans le sang et se multiplient très vite. Le T novembre, première injection de térébenthine et d’atoxyl (les mêmes doses). Pendant les 6 jours suivants, une seule fois nous avons eu un examen positif. Le 13 novembre, il reçoil la deuxième injection de ces deux substances (les mêmes doses); pen- dant 5 jours les parasites disparaissent de nouveau. A lafinils ont réapparu etils se sont maintenus dans le sang jusqu'à la mort (le 11 décembre). Évo- ACTION DES ABCÈS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 15 Aution de la maladie : 52 jours. Aufopsie : Congestion intense des organes, rate hypertrophiée. No 27, 390 grammes, infecté le 20 octobre. Les parasites ont apparu après 6 jours; ils deviennent vite très nombreux. Le T novembre, recoit la première injection de térébenthine et d’atoxyl (mêmes doses). Les trypan., sans dispa- raître complètement pendant 4 jours, deviennent très rares. Le 13 novembre, deuxième injection, après laquelle pendant 7 jours l'examen du sang reste négatif. Les trypan. réapparaissent ensuite; très rares au commencement, ils augmentent de plus en plus jusqu'à la mort (le 30 novembre). Évolution de la maladie : 40 jours. Autopsie : Congestion et hypertrophie de la rate, Pour cette série d'expériences, nous avons deux sortes de témoins. 1° Témoins infectés avec le trypanosome de lOuganda et injectés avec de l’atoxyl. La première injection a toujours été faite quand le cobaye était en pleine maladie, Voici deux observations : N° 58, 390 grammes, infecté le 20 octobre; 6 jours après il avait des trypan. dans le sang. Le 7T novembre, il reçoit la première injection d'atoxyl (0,020 gr.) et, le 13 novembre, la deuxième. L'examen du sang est négatif pendant 4 jours seulement après la deuxième injection; les Ua devien- nent très vite nombreux et augmentent jusqu'à la mort (le 2 décembre). Évolution de la maladie : 52 jours. Autopsie : Rate très grosse et conges- tionnée. N° 29, 310 grammes, infecté le 20 octobre ; 5 jours après il avait des para- sites. Le 7 novembre, il recoit la première injection d’atoxyl (0,015 gr.), et le 13 novembre la deuxième. Les trypan. disparaissent pendant 4 jours après Aa première injection, ils réapparaissent, ne sont pas influencés par la deuxième injection d'atoxyl et augmentent jusqu'à la mort de l'animal (le 15 novembre). Évolution de la maladie : 25 jours. Æ{utopsie : Cachexie très prononcée et hyperémie des viscères abdominaux. 2° Témoins qui ont été infectés avec le trypanosome de l’Ouganda et n'ont pas été soumis au traitement par l’atoxyl. Voici deux observations : N° 30, 480 grammes, infecté le 20 octobre; 7 jours après, les trypan. appa- raissent dans le sang ; ils deviennent vite nombreux et le restent jusqu'à la mort (le 15 décembre) de l'animal. Évolution de la maladie : 45 jours. Autopsie : Hypertrophie énorme de la rate. No 31, 450 grammes, infecté le 20 octobre; 6 jours après,les parasites appa- raissent dans le sang. Ils deviennent vite extrèmement nombreux et se main- tiennent toujours très nombreux jusqu à la mort (le 13 décembre). Évolution 4e la maladie : 42 jours. Autopsie : Congestion intense du poumon. Deuxième série. — Les cobayes de celte série ont reçu plu- sieurs injections d'essence de térébenthine et d'atoxyl. 16 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR La quantité de térébenthine injectée a été toujours de 1 cent. cube et une nouvelle injection était faile seulement quand l'abeès, produit par l'injection précédente, était ouvert. Les injections d’aloxyl ont été faites pour un premier lot de huit en huit Jours, et pour un deuxième lot de cinq jours en cinq jours, sans tenir compte si les trypanosomes existaient ou non dans le sang. La quantité d’atoxyl par cobaye était de 0,035 grammes en deux injections de 0,015 — 0,020 grammes à intervalle de vingt-quatre heures. Le traitement était com- mencé deux ou trois jours après l'apparition des trypano- somes dans le sang. Lot a. — Les cobayes ont recu, d’après la technique indi- quée, les injections de térébenthine et celles d’atoxyl de huit en huit jours. N° 32, 560 grammes, infecté le 22 février: 6 jours après les parasites appa- raissent dans le sang. Le 1° mars il a reçu la première injection d'atoxyl et de térébenthine. Les injections ont été répétées régulièrement tous les S jours (12 injections d’atoxyl et 5 de térébenthine). Les 14 premiers jours les parasites disparaissent complètement. Ensuite ils disparaissent seulement pendant les 4 ou ÿ jours qui suivent chaque injection et ils disparaissent également vers la fin de la maladie. Les trypan. étaient toujours en très petit nombre. Le 30 avril, l'animal succombe. Évolution de la maladie : 68 jours. -lulopsie : Pleurésie, péritonite purulente, foie couvert d'une membrane fibri- neuse. N° 33, 650 grammes, infecté le 22 février. Les parasites apparaissent dans le sang 5 jours après, on commence le traitement le 1° mars. Il recoit dans les mêmes conditions, jusqu'au 13 avril, 10 injections d’atoxyl et 5 d'essence de térébenthine. Il n’a présenté que de très rares trypanosomes dans le sang vers la fin de la maladie. On le trouve mort le 14 avril, sans présenter de parasites, mais avec deux grands abeès. Evolution de la maladie : 52 jours. lutopsie : Le cadavre présente un abcès à chaque fesse. Congestion intense du foie et des reins. No 3%, 415 grammes, infecté le 22 février. Les parasites ont apparu dans le sang 5 jours après. On commence le traitement le 29 février. Pendant 10 jours, l'animal reçoit 12 injections d'atoxyl et 5 injections de térébenthine. Les trypan. disparaissent complètement 48 heures après les deux premières injections, réapparaissent seulement le 5 avril, 31 jours après. Une nouvelle injection d'atoxyl et de térébenthine provoque ‘de nouveau la disparition jusqu’au 5 mai (21 jours). Le 6 mai, mort. Evolution de la maladie : 74 jours. tulopsie : Muscles de la cuisse droite complètement atrophiés; un abcès à la cuisse gauche: cadavre complètement cachectique : congestion et œdème du poumon. Lot h. — Les cobayes recoivent tous des injections d’atoxyl de 5 en 5 Jours. On ne répète plus les injections de térébenthine avant que l’abcès soit guéri. On commencait le traitement ACTION DES ABCÈS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 17 quand le nombre des trypanosomes dans le sang était extrè- mement grand. IVe 35, 660 grammes, infecté le 15 mars; 4 jours après, présente des trypan. dans le sang. On commence le traitement le 22 mars. L'animal reçoit 4 injec- Lions d’atoxyl et une seule de térébenthine. Cette dernière injection a déter- miné chez lui une grosse inflammation du pied droit. Les parasites ont disparu 24 heures après le traitement, et ils n’ont plus réapparu jusqu'à la mort (le 4 avril), qui a été provoquée par la gangrène du pied droit. Evolution de la maladie : 20 jours. Aulopsie : Gangrène du membre postérieur droit. Du même côté, un gros abcès dans la cuisse. Congestion des organes. N° 36, 150 grammes, infecté le 15 mars. Les trypan. apparaissent 3 jours après dans le sang. Le 23 mars, l'animal recoit une injection de térébenthine et trois d'atoxyl. Les parasites ont disparu complètement après la première injection. Le 6 avril, l'animal est tué par suite d'un accident. Evolution de la maladie : 22 jours. No 37, 520 grammes, infecté le 15 mars. Les trypan. apparaissent 5 jours après dans le sang. Le 23 mars, on commence le traitement. L'animal recoit jusqu'au 26 avril 10 injections d'atoxyl et 3 de térébenthine. Les trypan. disparaissent complètement après la première injection. La dernière injec- tion a été faile 24 jours avant la mort. Evolution de la maladie : 67 jours. Autlopsie : Congestion des organes de la cavité abdominale. No 38, 350 grammes, infecté le 18 octobre 1912. 13 jours après, les trypan. apparaissent dans le sang. On commence le traitement le 4 novembre, et jusqu'au 3 décembre, il a reçu 10 injections d'atoxyl et 4 de térébenthine. Les parasites disparus 48 heures après le commencement du traitement, ne sont plus réapparus. L'animal est mort accidentellement le 29 janvier. Evolution de la maladie, 101 jours. Awlopsie : Hémorragie abdominale consécutive à la rupture du foie. No 39, 416 grammes, infecté le 18 octobre 1912. 5 jours après, les trypan. apparaissent dans le sang. Le traitement, commencé le 4 novembre, l'animal reçoit jusqu'au 1°r février 1915, 10 injections d’atoxyl et 4 de térébenthine; la dernière étant faite 58 jours avant la mort. Les trypan. disparaissent complètement après la première injection, 62 jours de suite. Réapparus 11 jours après la dernière injection, ils s’y sont maintenus jusqu'à la mort. Evolution de la maladie, 104 jours. Aulopsie : La rate hypertrophiée, le foie congestionné et plein de nodules blancs. No 40, 440 grammes, infecté le 18 octobre 1912. Présente 4 jours après des trypan. dans le sang. On commence le traitement le 4 novembre. L'animal recoit 10 injections d'atoxyl et 4 de térébenthine; la dernière étant faite 67 jours avant la mort. Les trypan., disparus 2 jours après le traitement, sont réapparus 26 jours avant la mort (le 10 février), Evolution de la maladie, 113 jours. Aulopsie : Cachexie, congestion des organes. N° 41, 650 grammes, infecté le 2 novembre 1912. Présente 3 jours après des trypan. dans le sang. On commence le traitement le 11 nuvembre, l'animal recevant dans un intervalle de 21 jours, 8 injections d'atoxyl et 2 de téré- benthine. Les parasites ont disparu du sang 24 heures après la première injection et ils n'y sont plus réapparus jusqu'à la mort. Le 13 décembre (4 jours avant la mort,, le cobaye a fait une paraplégie. Une souris inoculée dans le péritoine avec le sang de l'animal n'a rien donné. Evolution de la maladie, 47 jours. Autopsie : Congestion des organes. 19 18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Nous avons fait également deux séries différentes de témoins : 1° Dans la première série, les témoins infectés avec le trypa- nosome d'Ouganda étaient soumis au traitement exclusif par l'atoxyl. Les injections étaient faites tous les 8 ou tous les 5 jours. No 42, 585 grammes, infecté le 22 février, présente des trypan. dans le sang ; jours après. On commençait le traitement le 17 mars et avec un total de 12 injections d'atoxyl. Après les deux premières injections, les trypan. ne disparaissent que pendant 4 ou 5 jours. On trouve l'animal mort le 18 mai; évolution de 86 jours; parasites en quantité pendant 2 mois dans le sang. Autopsie : Rate hypertrophiée et congestionnée; œdème du poumon. No 43, 710 grammes, infecté le 22 février, présente 5 jours après des trypan. dans le sang. Le traitement, commencé le 29 mars (jusqu'au 26 avril), consiste en 13 injections d'atoxyl. Les trypan. ne disparaissent que vers la fin de la maladie, 4 ou 5 jours après chaque injection. L'animal succombe le 1er mai après une évolution de la maladie de 68 jours. Aulopsie : Congestion et hyper trophie de la rate; congestion des reins. No 4%, 560 grammes, infecté le 15 mars, présente 3 jours après des trypan. dans le sang. Le traitement, commencé le 22 mars, consistait en 8 injections d'atoxyl Après chaque injection. les parasites devenaient un peu moins nombreux; une fois seulement ils ont disparu pendant # jours. L'animal suc- combe le 28 avril après une évolution de 44 jours. Aulopsie : cachexie intense: congestion du foie. No 45, 600 grammes, infecté le 15 mars, présentait 4 jours après des trypan. dans le sang. Le traitement commencé le 22 mars, consistait en 6 injections d'atoxyl. Les parasites ne disparaissent que pendant 4 ou 5 jours après les trois dernières injections. L'animal succombe le 24 avril, après 40 jours de maladie. Aulopsie : Congestion intense du poumon. Ne 46, 460 grammes, infecté le 18 octobre 1912. Les parasites apparaissent dans le sang 9 jours après. Le traitement, commencé le 5 novembre, l'animal recoit jusqu’au 3 décembre 10 injections d’atoxyl. Après la première injec- lion, les trypan. ont disparu et ils ne réapparaissent que le 7 janvier (35 jours après la dernière injection). Evolution de la maladie, 108 jours. Autopsie : Hypertrophie énorme de la rate. Congestion du foie et des capsules. No 47, 350 grammes, infecté le 18 octobre 1912. Les trypan. apparaissent dans le sang 4 jours après. Le # novembre, on commence le traitement. L'animal a recu 10 doses d'atoxyl. Les parasites, disparus après la pre- mière injection, n'apparaissent plus que le 24 décembre (21 jours après la dernière injection). Le cobaye est mort le 20 janvier, ayant nombreux trypan. Evolution de la maladie 92 jours. No 48, 700 grammes, infecté le 2 novembre. Les parasites apparaissent dans le sang 7 jours après. Le traitement a commencé le 12 novembre, et jusqu'au 2 décembre le cobaye à reçu 8 injections d’'atoxyl. Les trypan. ont disparu seulement les 10 jours qui suivaient les 4 premières injections. Réapparus, ils se sont maintenus dans le sang jusqu à la fin, 19 décembre. Evolution de la maladie, 47 jours. Aulopsie : Congestion des organes. 2° Témoins qui ont été infectés avec le trypanosome de l'Ou- sanda, sans êlre soumis ensuite au traitement par l’aloxyl. ACTION DES ABCÈS DE FIXATION SUR LA TRYPANOSOMIASE 19 N° 49, 620 grammes, infecté le 22 février; 3 jours après, il avait des trypan. dans le sang. En deux jours, ils deviennent innombrables et ils se main- tiennent jusqu'à la mort (le 5 mars) Evolution de la maladie : 12 jours. Autops’e : Congestion intense des organes. N° 50, 580 grammes, injecté le 22 février. Après 5 jours, les trypan. ont apparu dans le sang et ils se sont maintenus jusqu'à la mort (le 26 mars) en très grand nombre. Evolution de la maladie : 32 jours. Aulopsie : Conges- tion et hypertrophie de la rate et congestion intense du foie. N° 51, 450 grammes, infecté le 15 mars. Les trypan. ont apparu dans le sang 5 jours après, et 4 jours plus tard ils étaient innombrables : ils se sont main- tenus ainsi jusqu'à la mort, le 26 avril. Evolution de la maladie 41 jours. Autopsie : Congesiion intense de tous les organes de la cavité abdominale. N° 52, 255 grammes, a élé infecté le 22 février. Les parasites ont apparu dans le sang après cinq jours. Pendant 20 jours, leur nombre élait très variable, mais après cet intervalle ils sont devenus innombrables et ils se sont maintenus jusqu'à la mort (le 49 avril). Evolution de la maladie : 51 jours. Autopsie: Congestion et hypertrophie de la rate; congestion du poumon. IL résulte de ces expériences que : 1° Chez les cobayes infectés avec le trypanosome de l'Ou- ganda, la disparition de celui-ci après les injections répétées d’atoxyl n'est pas constante. Elle est généralement passagère ; ce- pendant, dans certains cas, on n'observe aucune diminution du nombre des trypan., malgré les injections répétées d'atoxyl. On constate exceptionnellement une disparition de longue durée: 2° Chez les cobayes infectés avec le mème trypan., les injec- tons d'atoxyl associées avec les abcès de fixation (produits par l'essence de térébenthine) font toujours disparaître et pour plu- sieurs jours les trypan. du sang ; 3° Quand on combine avec les abcès de fixation les injections d'atoxyl souvent répétées, on arrive presque toujours à faire disparaître complètement les trypan. pour longtemps; parfois on constate même une survie notable de l'animal, mais on ne peut obtenir la guérison complète et définitive; Lk° Les cobayes de 400 et 600 grammes peuvent bien sup- porter jusqu'à 12-13 injections d’atoxyl et peut-être davan- tage (chaque injection étant entre 0,015 à 0,020 grammes). Quant aux abcès de fixation, il ne faut pas dépasser la dose de 4 cent. cube d’essence de térébenthine, le nombre des injec- tions possibles se trouve limité du fait de l’amaigrissement qu'elles entraînent chez les animaux gardés longtemps en observalion. C'est à cette cause que l’on peut rapporter la mort de certains animaux avant les témoins; 20 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 5° Le traitement mixte apparaît supérieur au traitement par l'atoxyl seul. L'essence de térébenthine, par elle-même ou par l’abcès de fixation qu'elle provoque, facilite probablement la formation de trypanotoxyl, véritable substance active de l’atoxyl sur les trypanosomes dans les organismes infectés ; 6° En somme, il est évident que le traitement par l'es- sence de térébenthine seule, ou mieux le traitement com- biné, est un obstacle momentané à la multiplication des trypan. dans le sang. Pour cette raison, on doit l'ajouter au traitement des trypanosomiases chez les animaux résistants aux arseni- caux, pour faciliter l’action de ces dernières substances sur les trypan. abrités dans les capillaires de divers organes; 1° 1i nous semble que cette question mérite d’être reprise en pratique, pour traiter les grands animaux qui sont plus forts et chez lesquels on peut entretenir des abcès de fixation avec forte réaction locale sans débiliter beaucoup l'organisme. En terminant ce travail, nous tenons à adresser nos sincères remerciments à M. le professeur Mesnil pour l'accueil cordial que nous avons reçu dans son laboratoire. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE (QUATRIÈME MÉMOIRE ) INFLUENCES RESPECTIVES DES ÉLÉMENTS DE LA SOLUTION MINÉRALE SUR LE DÉVELOPPEMENT DU MAIS par P. MAZE. (Avec les planches I, II, III, IV. Il résulte des conclusions des trois mémoires précédents que le maïs peut être considéré maintenant comme une plante docile à toute sollicitation expérimentale. Il est donc possible d'entreprendre l’étude des influences qu'exerce sur son développement chacun des éléments qui entrent dans la composition de la solution minérale. Tous les corps que j'y ai introduils ne sont pas nécessaires de prime abord : on ne voit pas bien, par exemple, le bénéfice que la plante retire, dans tous les cas, du carbonate de calcium en excès, surtout si le calcium entre déjà dans un autre composé présent dans la solution. I s’agit d’en démontrer l'utilité. Je n'ai pas établi non plus que les solutions constituées par tous les éléments que j'ai employés sont capables d'assurer la fructification du maïs, lorsqu'on fait usage d’eau distillée chimi quement pure. Chaque fois que je me suis proposé d'atteindre ce but, J'ai eu recours à l’eau de source afin d'éviter les tâton- nements indéfinis qu'une solulion mal équilibrée et privée d’un ou de plusieurs éléments nécessaires m'aurait forcément imposés. | L'expérience démontrera qu'une solution faite avec de l’eau distillée pure additionnée de tous les éléments que j'ai mis en œuvre ne permet pas l'évolution complète du maïs. Comme je ne connais pas encore ceux qui lui manquent, l'étude des autres éléments peut paraître prématurée. Il n’en est rien ; on peut, en effet, négliger ce détail parce que les solutions que j'ai employées satisfont, on le sait, à la 22 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR loi des rapports physiologiques. Une solution qui ne rempliräit pas cette condition serait impropre à l'étude des questions que Je vais aborder. Elle ne permet pas, en effet, d'affirmer si le retard ou l’arrèt de la végétalion provoqué par la suppression d’un élément est dû à son absence, ou s'il doit être attribué à une cause d’ordre physiologique dont l'origine réside dans une modification de la solution survenue au cours de la végétation. Toutes les tentatives faites jusqu'ici dans le but de démon- trer l'utilité encore contestée de tel ou tel élément ne lèvent pas ce doute, pour la raison que je viens d'indiquer. Je n’aurai donc pas à me prononcer entre les diverses opinions qui admeltent que le fluor, l’iode, l'aluminium, le bore, etc., peuvent exercer une influence heureuse sur le développement des végétaux supérieurs. Je ne conclurai pas davantage à la nécessité d'employer l’un des éléments qui entrent dans mes solutions, si sa suppression n'aboulit pas à la mort de la plante ou à un arrêt très net de la végétalion. C’est le cas du silicium. Les plantes privées de silicales, autres que ceux qui entrent dans la composition du verre des flacons de culture, m'ont fourni des retards de déve- loppement ; mais, comme mes résultats, trop peu nombreux, ne me permettent pas de donner des symptômes plus caracté- ristiques de la privation de silicium, je les passerai provisoi- rement sous silence. Considérons donc une solution à base d’eau distillée pure, conslituée par les divers éléments que j'ai employés et salisfai- sant à la loi des rapports physiologiques. On pourra légitime- ment se prononcer sur l’ulilité de l’un quelconque de ses composants, si sa suppression provoque l’arrèt de la végétation bien avant que ce symptôme ne devienne évident chez les plantes témoins qui poussent dans la solution complète. On aura aussi le droit d'affirmer qu'un ou plusieurs éléments manquent dans la solution complète, si une liqueur témoin préparée avec de l’eau de source permet à la plante de former et de mürir ses graines, pendant que la première entraîne sa mort avant ou pendant la floraison. Il est superflu d'ajouter que je ne me suis pas astreint à remettre à l'étude l'utilité de tous les éléments de la solution RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 23 considérés, bien entendu, individuellement. On est suffisam- ment fixé sur le rèle de l'azote, du phosphore, du potassium, du calcium, du magnésium, du chlore. Je ferai remarquer simple- ment que la suppression de l’un de ces corps n'entraine pas la décoloration des organes aériens du maïs. La chlorophylle est moins abondante, mais elle persiste toujours dans les feuilles qui continuent de végéter péniblement, à mesure qu'elles reçoivent de celles qui se fanent des portions de plus en plus faibles de l'élément qui manque. J'aurais pu joindre à la liste précédente le soufre et le fer, dont la privation affecte bien plus le développement du maïs que l'absence du chlore. Mais comme c’est leur étude qui a été la plus féconde en résultats nouveaux, je l’exposerai longuement, Cette ventilation faite, j'examinerai done l'influence du earbo- nate de calcium, du soufre, du fer, du manganèse et du zinc sur le développement du maïs. INFLUENCE DU CARBONATE' DE CALCIUM. L’addition de carbonate de calcium à la solution nutritive est une précaution dont l'utilité n’est pas évidente. Le calcium a été employé rarement sous cel état en pareille occurrence, et l'on s’étonnera peut-être de me voir affirmer que c'est grâce à lui que j'ai pu réussir à assurer la fruclification du maïs. Mais comme on a saisi toute l'importance des échanges qui se font entre la plante et la liqueur nutritive, il n’est pas excessif d'avancer une affirmation aussi catégorique. Je n’ai pas hésité à lui attribuer la fructification du maïs alimenté avec du chlorure d’ammonium (2° mémoire) (1). Pour donner plus de force à celle conclusion, j'ai placé une série de six plantules de maïs dans des solutions P X 1 prépa- rées avec de l’eau distillée et pourvues de chlorure d'ammo- nium comme aliment azoté. Un lot se développait en présence de carbonate de calcium; l’autre en était privé; mais on avait pris la précaution d'offrir à ce dernier le calcium à l’état de chlorure, à raison de 0,2 p. 1.000. (1) Ces Annales, août 1913, p. 663, & XXVII. 24 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Le résultat est inscrit dans la figure 1 : Il est très probant, comme on peut le constater, et Je consi- dère qu'il est tout à fait superflu de le traduire par des chiffres dont l'écart peut atteindre facilement 50 grammes. Les plantes qui ont végété dans la solution privée de carbo- RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 25 nate se sont développées comme les témoins pendant quelques jours; on peut vérifier sur la photographie que les premières racines sont longues et ramifiées ; mais elles ne sont pas nom- breuses; celles qui se sont formées par la suite cessent de s’allonger dès qu'elles atteignent le liquide; leur nombre s'esl accru jusqu'à la mort de la plante, survenue quatre ou cinq Jours avant la date de la photographie. Elles forment une sorte de cône dont la pointe est placée au niveau du goulot et dont la base est constituée par la surface libre du liquide. Ces particularités laissent entendre que la solution s’est modifiée profondément au cours de la végétation; mais on conçoit difficilement que l’acidification, presque négligeable en raison de la faible quantité de chlorure d’ammonium mis en œuvre dans 4 litres et demi de solution nutritive, constitue là cause unique d’un effet aussi considérable (1). I est vraisemblable qu’elle n'a été qu'un facteur prédis- posant vis-à-vis d'une autre influence que nous allons découvrir dans la solubilisation des éléments rares ou catalytiques si l’on préfère. Si, en effet, e carbonate de calcium agit uniquement comme régulateur de l'acidification, on doit noter une différence d'action faible ou inappréciable entre les solutions pourvues ou privées de carbonate de calcium lorsque l'aliment azoté est le nitrate d'ammonium. J'ai montré, en effet, que le nitrate d'ammonium, assimilable sans résidu, influe peu sur la réaction de la solution nutritive: mais elle s'acidifie cependant pour les raisons que j'ai indi- quées (2). La figure 2 montre que les maïs privés de carbonate accu- sent un retard considérable sur les plantes témoins. Leurs racines traduisent l’action nocive de la solution; elles n atteignent pas le fond des flacons ; leur aspect est très diffé- rent de celui que présentent les racines des plantes témoins. Les organes aériens dénotent aussi des symptômes d'in- toxication : les feuilles sont striées de bandes longitudinales de (1) Quand l'aliment azoté est le sulfate d'ammonium, les résultats sont de même ordre, 12) Ces Annales. n° 8, 1913, page 661, t. XXV 26 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR parenchyme parcheminé, privé de chlorophylle; les cellules qui les constituent se gélifient dans le bourgeon même, et les feuilies restent enroulées, au lieu de s'épanouir, fortement atta- chées par cette gelée qui fait office de colle. Les résullats sont de tout point semblables aux précédents lorsqu'on fait usage de nitrate de sodium comme aliment azoté; cependant les racines s’allongent davantage. Cette fois c'est l’alcalinité qu'il faut incriminer; mais pas RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 27 EN plus que dans les deux séries précédentes son influence ne suffit seule à expliquer les effets observés; le carbonate de calcium n'atténue pas l’alcalinité de la solution nutritive pour- vue de nitrate de sodium; malgré cela, les racines présentent un aspect normal dans les liqueurs ainsi alcalinisées jusqu’au moment où survient l'arrêt de la végétation qui n'est jamais définitif avant la floraison, dans les solutions de concentration PLUS Il faut donc recourir ici encore à une influence due à une modification de composition de la solution. Les éléments rares insolubilisés en grande partie à l’état de phosphates se dissol- vent à la faveur de l’alcalinité; l’oxyde de zinc en particulier est très soluble en présence de carbonate de sodium et de très petites quantités d'acides organiques. 28 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Nous voici donc amenés par les faits à vérifier la tolérance du maïs pour les composés minéraux solubles du fer, du man- ganèse et du zinc. Cette vérilication a été faite de la façon suivante : Les plan- tules développées à l’abri des microbes dans l’eau distillée sont transvasées dans des flacons de 2 litres de capacité, renfermant des solutions de nitrate de fer, de nitrate de manganèse, de nitrate de zinc à des concentrations variant de 1/10.000 à 1/200.000, stérilisées préalablement. Ces solutions ont été préparées avec de l’eau distillée pure: J'ai donné la préférence aux nitrates parce que l'acide nitrique est mieux utilisé que les autres acides minéraux. Les résultats montrent que l'action nocive exercée par le nitrate de zinc et le nitrate de manganèse se traduit encore par l'aspect des racines jusqu’à la concentralion de 1/160.000; elle reste perceptible pour le fer jusqu'à la dose de 1/100.000; mais ces conditions de dilution extrème ne nuisent pas à la longévité des plantules, qui n'offrent du côté des organes aériens que très peu de différences avec les plantes qui végètent dans l’eau distillée pure. En decà de ces limites de dilution, l'influence nuisible des éléments considérés augmente rapidement. La dose 1/40.000 de nitrate de manganèse ou de nitrate de zinc empêche le développement des racines, et entraine en moins d’un mois la mort des plantules; la richesse de la solution en zinc et en munganèse est cependant bien inférieure à celle des solutions complètes de concentration P X 1, où leur présence est indispensable. Avec le nitrate defer, la dose paralysante atteint 4/10.000 et, chose assez curieuse, ses effets ne sont pas plus sensibles à 4/5.000 et à 1/4.000; cette particularité s'explique par ce fait que les racines, qui ne se développent pas, peuvent cependant s'adapter et s'opposer à l'absorption du fer. Ces faits démontrent que le fer, le manganèse et le zimc sont très toxiques pour le maïs, à la concentration que J'ai adaptée pour les milieux complets, lorsqu'ils sont maintenus en solution. Si leur influence nuisible ne s'est pas fait sentir sur le déve- loppement de la plante, c'est parce que le carbonate de cal- RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 29 cium les insolubilise. On s'explique ainsi que la suppression du carbonate de calcium, qui rend leur solubilisation possible par l’acidification et même par l’alcalinisation progressives de la liqueur, entraine l’arrèt de la végétation et gène dès les premiers jours le développement des racines. Le carbonate de calcium exerce donc une influence double- ment utile sur le développement du maïs dans les milieux minéraux : Il atténue l'acidité des solutions de sulfate et de chlorure d'ammonium; il précipite les éléments terreux et les rend inoffensifs; mais comme ils sont indispensables, la plante les absorbe, bien qu'ils soient insolubles, avec le concours des excrétions de ses racines; elle peut ainsi régler exactement leur absorption sur la consommation qu'elle en fait, et éviter d'introduire dans la sève des éléments qui deviennent toxiques dès qu'ils s’y accumulent. Le rôle du carbonate de calcium méritait, comme on le vou, d'être examiné de près; il est évident qu'il ne se comporte pas autrement dans la terre. J’en avais le pressentiment déjà en 1897, lorsque je l’ai introduit pour la première fois dans les solutions dont je me servais; on peut d’ailleurs constater que mes solutions n’ont pas varié depuis, dans leur nature (1). Mais à cette époque, le carbonate de calcium devait y remplir une des conditions que les sols fertiles réalisent invariable- ment. L'expérience prouve que la mesure était fortement jus- üfiée. L'introduction du fer, du manganèse et du zinc dans ces solutions, conformément aux indications tirées de la com- position des cendres végétales, et du mémorable travail de Raulin sur lAspergillus niger, n'était pas moins heureux, comme on va le voir. Il convient en effet de justifier leur emploi; si je ne l'ai pas discuté jusqu'ici, c'est parce que Je n'avais pas à ma dispo- sition le critérium indispensable : la connaissance précise des conditions de la fructification. (1) Annales de l'Institut Pasteur, t. XIV, p. 30, 1900. 30 ; ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR INFLUENCE DU SOUFRE ET DU FER SUR LE DÉVELOPPEMENT DU MAÏS- Le soufre et le fer figurent parmi les éléments nécessaires aux végétaux supérieurs. Il s’agit donc moins d’insister sur leur utilité que d'examiner leur rôle avec les moyens que nous pouvons meltre en œuvre. Leur influence sur la couleur verte des végétaux supérieurs a été également mise en évidence, celle du soufre dans le sul- fatage des légumineuses, qui prennent une couleur plus foncée après le traitement; celle du fer dans la production de la chlorophylle. Mais ni: l’un ni l'autre élément n'entre dans la compo- sition de la matière verte des végétaux; l’étude de leur rôle dans la végétation ne perd pas pour cela de son intérêt, bien au contraire. J'ai donc préparé des solutions minérales privées de soufre ou de fer avec de l’eau distillée pure. Pour supprimer le soufre, jai remplacé le sulfate de magnésium par du chlorure et le sulfate ferreux par du nitrate ; le fer a été éliminé par la sup- pression du sulfate ferreux. Les cultures, poursuivies pendant trois années consécutives à partir de 1910, ont porté sur plusieurs milieux différant par la nature de l'aliment azolé; j'ai employé parallèlement ou successivement les nitrates de sodium, d'’ammonium et de 15 2 cette précaution avait pour but de réduire autant que possible les impuretés chimiques que les divers sels employés intro- duisent dans la solution. Les culfures ont été faites dans des flacons de 2 litres de capacité (1). Les plantes privées de soufre ou de fer évoluent exactement de la même manière. L'apparition de la chlorose est quel- quefois plus précoce, quelquefois plus tardive chez les maïs privés de soufre que chez ceux qui sont privés de fer; mais l'écart ne dépasse jamais plus de trois où quatre jours. C'est calcium. La concentration des solutions a toujours été P X 1) Les plantes qui sont représentées dans les figures 4, 5, 6, Tet 8 ont É Le 0e végété dans des solutions P X = NOSNHE, RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 31 pour celte raison que je ne me suis pas astreint à exposer les deux séries d'expériences dans deux chapitres séparés; jy trouve l'avantage d'éviter les répétitions. L'évolution des plantes soumises à l'expérience ne diffère pas, pendant quelques jours, de celle des maïs placés dans des solutions complètes. , La figure #, qui reproduit une série de plantes âgées de 20 jours, vient à l'appui de cette assertion. Quelques jours plus tard, les conditions changent; la chlo- rose apparaît brusquement chez les plantes privées de soufre ou de fer (fig. 5), elle se manifeste par la décoloration gra- ES FrG. De gauche à droite : 2 plantes privées de CL 2 plantes privées de $S. 4 plante privée de Fe. LU] plantes privées de Zn. plantes témoins. 2 plantes privées de Mn. 19 duelle de la première feuille atteinte, qui est presque toujours la quatrième formée après le {ransvasement des plantules. Les suivantes sont entièrement décolorées, Ÿ compris les cellules qui avoisinent les faisceaux vasculaires, lesquelles conservent généralement leur teinte verte dans la chlorose naturelle, et font ressortir ainsi d'une façon très nette les parcours sinueux des nervures les plus fines. (V. PL 1. À partir de ce moment, la végétation se ralentit, les pre- mières feuilles chlorotiques atteignent cependant une taille peu différente de celles qui les précèdent. Les suivantes sont de plus en plus réduites. Cet aspect persiste pendant plusieurs semaines: puis les 32 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR feuilles inférieures vertes se dessèchent. La tige reprend alors sa croissance et la chlorophylle apparaît sur les dernières feuilles très réduites qui se forment pendant cette deuxième phase du développement. Le fer ou le soufre libérés par la mort des feuilles vertes a provoqué vraisemblablement cette reprise d'activité qui aboutit à la formalion d’une plante naine où l'épis femelle fait toujours défaut, et l'épi mâle est réduit à un pinceau minuscule d'axes avortés et privés de toute formation De gauche à droite : 1 plante témoin. 1 plante privée de S, chlorotique. 1 plante privée de Mn. 1 plante privée de Fe, chlorotique. 1 plante privée de Zn. | 1 plante privée de CI. florale. Le poids moyen des plantes varie de 4 à 6 grammes. Le parenchyme des cellules décolorées est transparent sur beaucoup de points: on constate, à l'œil nu, que ces cellules sont dépourvues de toute trace de réserve et presque de ma- bières protoplasmiques ; elles diffèrent en cela des cellules déco- lorées du maïs panaché qui forment un tissu opaque et dense. Pour faire apparaître la chlorophylle, il suffit de déposer sur les feuilles des gouttelettes de sulfate d’ammonium ou d’azotate de fer en solution à 2 ou 4 décigrammes par litre. Au bout de 3 jours après le traitement, les cellules qui ont recu les traces RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 33 de sulfate ou de nitrate de fer abandonnés par l'évaporation des gouttelettes, tranchent nettement par leur couieur verte sur le parenchyme environnant. La couleur s accentue avec le temps, et les cellules, ainsi alimentées directement en soufre ou en fer, reprennent leur activité fonclionnelle. Maintenant que nous savons que la transpiration constitue un moyen de contrôle et de mesure de cette activité, il nous FIG. 6: De gauche à droite : plantes privées de Zn. ? plantes privées de Zn + Mn. plantes privées defMn. Voir pour le témoin la fige. 5. 2 > est facile de démontrer cette dernière proposition par l'expé- rience aussi bien que par la recherche de l’amidon dans les corps chlorophylliens. Si, en effet, on coupe les feuilles qui présentent des taches vertes bien formées, et qu'on les place entre deux plaques de verre pour les exposer au soleil, la vapeur d'eau exhalée par les cellules vertes forme une buée sur les parties correspon- dantes du verre, au bout de quelques minutes. Les gouttelettes grossissent vite et se résolvent en gouttes d'eau, faciles à obser- ver. Partout ailleurs, le verre reste sec. Tous les sulfates, ou les sels de fer solubles employés en 3 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 34 solution très étendue produisent le même résultat que le sul- fate d'ammonium ou le nitrate de fer. En traitant les feuilles chlorotiques par tout autre composé minéral alimentaire que l'élément qui fait défaut à la plante, on n’observe pas de formation de matière verte; par contre, Si on veut vérifier la présence d'un composé soluble du fer ou du soufre dans un liquide, il suffit d'en déposer quelques gouttes ErG'E De gauche à droile : 3 plantes privées de Mn. 2 plantes privées de manganèse 2 plantes privées de Zn. et de zinc. a plante indique leur présence sur les feuilles chlorotiques; | ours d'insolation. en formant de la chlorophylle au bout de 3 ] hes déposent de préférence leurs exCrÉ- ments sur les objets blancs, la nuit tout au moins. Les feuilles chlorotiques se signalent donc à leur attention. Celles qui sont hasard, dans la véranda, n'ont pas manqué d'obéir ctive. Les petites taches brunes carac- ées avec le temps d’une couronne verle On sait que les mouc entrées, par à cette impulsion instin téristiques se sont auréol très visible. L'hémoglobine est inactive; les feuilles ne l’absorbent pas. Les taches de chlorophylle (voir planche IV) obtenues par RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 39 QE] le moyen que j'ai indiqué s'étendent peu au delà du cercle formé par le dépôt abandonné par les gouttelettes de solution : le fait est très net avec les sels de fer; mais la démarcation est moins tranchée avec les sulfates ; il semble que les cellules végétales retiennent moins bien ces derniers sels; il en résulte que les bords des taches vertes se dégradent et s'estompent en empiétant sur le parenchyme avoisinant. eee va De gauche à droite : | : 3 plantes témoins P X 5 NO°NH: 3 plantes même solution, privées de manganèse. tæ] Le soufre et le fer nécessaires aux fonctions cénérales de la cellule vivante touchent done de près au mécanisme intime de la fonction spéciale aux végélaux supérieurs puisque, en leur absence, la chlorophylle disparait entièrement S'ils n’entrent pas dans la constitution de la matière verte. ils font vraisemblablement partie des corps chlorophylliens, el c’est surtout cette conclusion qui se dégage des faits que je viens d'exposer. On doit considérer en effet les chloroleucites comme des 36 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Jormations protoplasmiques qui se nourrissent des substances qu'elles trouvent dans le suc céllulaire; ils mènent, en quelque sorte. une existence symbiotique; leur activité fonctionnelle dépend done en premier lieu de l'état physiologique de la cellule: à ce titre, tout élément nécessaire à cette dernière influe nécessairement sur la fonction spéciale des chloroleu- cites: sa suppression entraine done une diminution de leur activité et par conséquent une décoloration sensible de la feuille. Mais le travail d’assimilation carbonique est lié aussi à la présence, dans les corps chlorophylliens, d'éléments nécessaires à sa réalisation; c’est parmi ces derniers que figurent le soufre et le fer. INFLUENCE DU MANGANÈSE SUR LE DÉVELOPPEMENT DU MAIS. M. G. Bertrand à montré que le manganèse est indispensable au développement de l'Aspergillus niger; il admet avec un grand nombre d'autres expérimentateurs qu'il est nécessaire également aux végétaux supérieurs. J'ai cherché de mon côté à vérifier l'emploi que jen ai fail dans mes liqueurs nutrilives. Mes prémiers essais datent de 1910: ils ne m'ont pas donné de résultats: ceux de 1911 ne sont guère plus probants; les igures 4, 5, 6, Tel 8 donnent une idée du développement du maïs dans la solution P 4/2 NO:NH: privée de manganèse. Les deux premiers mais de là planche XVI, 5° mémoire, appar- tiennent à cette série. Leurs épis ont avorté comme Ceux des témoins constitués par la série P 1/2 NO:NH: du tableau I, 3e mémoire, décembre 1913, t. XX VII. TABLEAU [. Nos AGE POIDS SEC POIDS DE L'EAU Horaire en des plantes évaporée par kilogr. À jours. en grammes. de poids sec, en kilogr \ 1 101 68,53 192,5 Témoins. : 2 101 46,08 211,8 (rase 56 19,08 188.9 fe 401 42,3 224 ,4 Sans manganèse. 5 101 34,56 26108 6 56 17.718 216,7 RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE an Le tableau ! donne d’ailleurs les résultats comparatifs des poids des témoins el des plantes privées de manganèse ainsi que les volumes d'eau évaporée par les unes et les autres. La différence de poids est sensible, comme on le voit; elle suffit jusqu'à un certain point à justifier l'utilité du manganèse : mais ce n'est pas, à mon avis, un résultat satisfaisant; tous les autres éléments envisagés jusqu'ici en ont fourni de plus probants et surtout de plus démonstratifs au point de vue de la spécialisation de leurs fonctions: et l'on peut de mème constater sur les photographies #, 6 et 7 que la privation de zinc que Je vais examiner plus loin a des conséquences autre- ment frappantes. Mais en 1912 j'ai réussi à obtenir les résultats cherchés. Ceux des deux années précédentes ont laissé à désirer pour deux raisons. La première tient en partie sans doute au verre des flacons qui cédait une dose sensible de ce métal à la solution, surtout pendant la stérilisation. La seconde réside vraisemblablement dans le défaut de pureté des substances minérales utilisées et peut-être aussi de l'eau ; je n'avais en effet ni les moyens ni le temps de préparer des quantités aussi considérables d’eau et de sels minéraux purs. D'un autre côté, l'emploi d'un vernis insoluble, destiné à isoler les parois des flacons, ne présente pas non plus toutes les garanties désirables, car les racines réussissent toujours à trouver les points faibles de l’enduit isolant, et s’il se trouve un endroit où son adhérence n'est pas assez forte, elles passent entre le verre et la membrane de paraffine ou de caoutchouc. Les réserves d'éléments rares apportées par la graine ne sont pas négligeables non plus: il est done vraisemblable qu'on pourrait réussir à oblenir, par la suppression du manganèse, des résultats comparables à ceux que m'a donnés la privation de soufre et de fer, si l'on ne considère que le poids sec des plantes. Cette induction est parfaitement Justiliée par la loi des rap- ports physiologiques étendue à l’eau de végétation. Tous les éléments terreux étant insolubles en présence de carbonate de calcium, la plante les prend suivant ses besoins, dans les con- ditions normales d'un sol fertile. Théoriquement, il n'y à donc 38 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR pas de raison pour que la suppression d’un élément quel- conque, indispensable à la plante, ne provoque pas l'arrêt de la végétation au même point de son développement, comme le soufre et le fer. Mais, pratiquement, ce résultat ne peut être atteint qu'autant que l'élément supprimé est abondant dans la graine. La petite quantité de cet élément qui figure dans la solution comme impureté apportée par les sels minéraux, l'eau ou le verre, est alors négligeable par rapport à celle qui est tenue en réserve dans la semence; on peut négliger par exemple l'azote, le phos- phore, le polassium, le magnésium, etc..., qui figurent comme impuretés dans une solution nutritive où on à supprimé l'un de ces éléments, si on met cette impurelé en regard de la réserve disponible dans la graine. Mais s’il s’agit d'un corps tel que le fer, le manganèse ou le zinc, l'impureté compte vis-à-vis de la réserve; il faudra donc prendre beaucoup de précautions pour atteindre le point théo- rique de l'arrêt de la végétation par la suppression des éléments rares ou catalytiques. Les résultats que j'ai obtenus en 1912 approchent cette limite; mais les plantes atteignent encore un poids sec moyen voisin de 12 grammes. C'est un chiffre élevé, comme on le voit, et la disette de manganèse se fait sentir bien plus tard, relati- vement, que le manque de fer ou de soufre. Les expériences de 1912 ont été faites avec les flacons qui avaient servi dans les mêmes conditions les années précé- dentes. Les décapages successifs qu ils avaient subis par la stérilisation à l'autoclave, leur avaient fait perdre une grande partie des éléments qu'ils pouvaient céder aux solutions. J'avais fait faire en outre quelques flacons en verre de Bohême de 4-5 litres de capacité, qui, après un décapage par l'eau aci- dulée portée une heure à 120 degrés, m'ont donné des résultats aussi probants que les anciens flacons. La solution qui a servi pour ces expériences est la solution P4/2 NO:NH:: Les plantes ont présenté dès les premières semaines un retard marqué sur les témoins, qui n'étaient aulres, en 1912, que les plantes dont j'ai donné l'histoire dans le troisième mémoire, tableau I. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 39 L'aspect des feuilles devient caractéristique au bout de quinze jours; elles sont étroites, longues, peu turgescentes et tom- bantes. Les deux bords du limbe sont régulièrement ondulés. La couleur verte, moins foncée que chez les plantes témoins, s’atténue à mesure que le nombre de feuilles augmente. L'épuisement complet du manganèse peut être considéré comme certain quand la sudation nocturne cesse. À partir de ce moment, les feuilles diminuent de surface et de longueur ; la végétation devient languissante : c'est le même ralentissement que celui qui a été observé chez les plantes pri- vées de soufre et de fer. On observe également une reprise de l'activité végétative à la suite du dépérissement des feuilles inférieures et pour les mêmes raisons que celles que j'ai données à la page 31. La plante parvenue au terme de la végétation présente un port qui rappelle une pelite lige de bambou, surtout par la forme des feuilles supérieures. Pas de fleurs mäles fécondes, mais une petite ébauche d’épi femelle à l’aisselle d'une feuille. À aucun moment, les feuilles n'ont été privées de chloro- phylle. Malgré cela, la plante est atteinte d'une chlorose visible dont l'étude m'a révélé des faits aussi intéressants qu'imprévus. Si l’on dépose sur les feuilles formées après la disparition de la sudation nocturne une goutte de liquide exhalé par les feuilles de maïs qui végètent dans une solution complète, il se forme à l'emplacement de la goutte, au bout de vingt-quatre heures d'insolation, une tache verte due à la production de chlorophylle. La tache prend une teinte très foncée au bout de quelques jours, et gagne de proche en proche les cellules voisines. L’em- piétement se fait surtout dans le sens de la sève ascendante, c'est-à-dire vers l'extrémité de la feuille. Les taches s’étalent en coup de pinceau en suivant les faisceaux vasculaires. Elles durent aussi longtemps que les feuilles elles-mêmes, et erandissent jusqu'à leur dépérissement. Celles qui sont repré- sentées dans la planche IV, sur les deux feuilles de droite, ont été obtenues par le moyen que je viens d'indiquer. Mais, contrairement à ce qui se passe pour les chloroses sulfu- rique et ferrique, les sels solubles de manganèse sont sans 40 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR action sur les feuilles rendues chlorotiques par privation de manganèse. L'exsudat de maïs exerce sur la chlorose manganique une action spécifique; l’exsudat de chou, de millet, de pavot ne produit rien de semblable, bien qu'il contienne vraisemblable- ment du manganèse. Si l’on décolore des feuilles de maïs normal par un mélange à volume égal d'éther et d'alcool, qu'on dessèche, qu'on réduise en poudre les feuilles traitées, et qu'on en fasse une macération à froid dans l'eau distillée pendant deux ou trois heures, le liquide ainsi oblenu agit exactement comme lexsudat. Les macéralions préparées de la mème manière avec des feuilles d'autres espèces végétales sont inactives. | Le maïs renferme donc une substance spécilique capable de guérir la chlorose manganique; cette substance résiste à un chauffage de quelques minutes à 100 degrés; elle est soluble dans l'alcool et insoluble dans l'éther; elle est de nature orga- nique, car les cendres de l'extrait d'exsudat ou de macération de feuilles sont inactives, de même que la solution minérale com- plète qui convient le mieux au développement du maïs. L'allure envahissante des taches vertes formées par l'exsudat s'explique dès lors très facilement. Les cellules malades, guéries par cette méthode imprévue « d'opothérapie », reprennent toute leur activité et deviennent capables de produire la substance spécifique; comme sa formation dépasse les besoins de la cellule normale, elle se diffuse dans la sève, qui la porte aux cellules voisines en empruntant de préférence la voie vascu- laire. La propagalion des taches dans le sens de la circulation de la sève ascendante est done tout à fait logique. Les cellules guéries reprennent toute leur aclivilé fonetion- nelle: on peut le constater par l'intensité de la transpiralion. Plus que la réduction du poids des plantes privées de man- sanèse, cette réaction physiologique met en évidence l'utilité du manganèse pour les végétaux supérieurs; elle démontre pour la première fois la formation chez les végétaux de composés organiques doués de propriétés physiologiques spéciales. On peut les rapprocher des substances spécifiques sécrétées par les glandes ou les tissus animaux en vue des fonctions perma- nentes ou intermittentes, tels les composés élaborés par les RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE #1 capsules surrénales, le thymus, le corps piluitaire, le pla- centa, etc. Il est vraisemblable que ces substances spécitiques inter viennent dans bon nombre de phénomènes physiologiques, et je ne serais pas surpris de constater que les affinités des espèces relèvent de leur présence, que les rapports du greffon avec le sujet en dépendent. Les exsudats de maïs panaché qui ont été filtrés par les issus décolorés sont actifs au même litre que les exsudats de feuilles normales: les cellules privées de corps chlorophylliens ne fixent pas la substance en question. Son influence s'exerce donc sur l’assimilation carbonique, et en cela elle collabore avec le soufre et le fer à la fonction assi- milatrice des corps chlorophylliens. Il est possible qu'elle renferme du manganèse; mais il esl plus vraisemblable que ce dernier, nécessaire à la cellule consi- dérée dans ses fonctions générales, favorise, comme tous les éléments qui lui sont indispensables, l'élaboration de la sub- stance visée, puisque le manganèse minéral est sans influence sur les corps chlorophylliens. INFLUENCE DU ZINC SUR LE DÉVELOPPEMENT DU MAIS. Le rôle du zinc chez les végétaux supérieurs à été étudié par M. Javillier; il a déduit de ses expériences que ce corps doit figurer au nombre des éléments indispensables aux plantes vertes (1). J'ai examiné son action sur le maïs parallèlement à celle du manganèse, en utilisant la solution P x 1/2 NOENH:: les résul- tats que j'ai obtenus sont devenus plus probants d'année en année, comme ceux qui découlent de l'étude du manganèse, mais plus vite que ces derniers, comme le prouve la photo- graphie (fig. 5) qui est du 3 juin 1911. Les résultats de 1910 ne sont pas concluants. J'ai noté sim- plement la formation d’un dépôt léger, de couleur rouille, sur les racines. Le même symptôme s'est manifesté en 1911, avec une intensité moindre; il a fait défaut en 1912, où J'ai réussi à (1) Annales de l'Institut Pasteur, 1. XXIT, p. 720. 42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR obtenir des résultats voisins de ceux que la théorie permet de prévoir. Les cendres des racines qui portent un dépôt ocreux renferment des sulfures. La présence de sulfure dans les cendres est corrélative de la privation de zinc; c’est un résultat que je n'ai pas observé dans d’autres circonstances (1). Mais ce carac- tère disparait lorsque la privation de zinc est à peu près com- plète. Dans ces conditions, la plante meurt en quelques jours, après l’apparition des premiers troubles de végétation. Lorsque la dose de zine, insuffisante, mais relativement élevée, permet à la plante de se développer, elle se défend; et la formation de: corps sulfurés en abondance apparaît comme une phase d’une intoxication lente : quand celle-ci est brutale, les corps sulfurés- manquent. L'aspect de la végétation change suivant l'importance de la dose de zinc qui reste comme impureté dans les solutions nutri- tives. Les résultats de 1910 ne présentent rien de parüiculier- du côté des organes aériens. Ceux de 1911 (fig. 4, 5, 6 et 7) montrent que la tige principale meurt assez vite; quelques bourgeons axillaires partent de la base des feuilles inférieures, donnent naissance à des liges secondaires qui périssent avant d'avoir atteint le développement de l'axe principal. Les plantes. de la figure # présentent ces caractères ; elles étaient mortes ‘au moment où on les a photographiées. Les résultats de 1912 sont plus caractéristiques. La végéla- tion débute normalement; les plantes ne présentent aucune différence avec les témoins. Puis, brusquement, la couleur des feuilles se fonce et prend un reflet métallique ; la sudation nocturne devient très abondante; elle laisse un dépôt visible- ment anormal. On trouve dans ce dépôt tous les sels solubles. de la solution nutritive. Ce symptôme précède la mort de la plante de trois à cinq jours; il est évident qu'elle a été tuée par intoxication; autant qu'on peut interpréler son mécanisme, il est possible d'avancer que l'intoxication débute par la région des poils absorbants ; on constate en effet que la plante ne peut plus régler l'absorption des éléments de la solution; les organes aériens deviennent de 1) Les mêmes caractères s’observent lorsqu'on supprime en même temps. le manganèse et le zinc (photographies 4, 5 et 6). On peut mème constater que la suppression de ces deux corps précipite la mort des plantes. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 43 simples agents d'évaporation et périssent par incrustation, Les feuilles se dessèchent par places, et en deux ou trois Jours la plante entière se fane. Trois séries successives de plantes mises en expérience en 1912 ont présenté ces caractères avec une concordance par- faite. La première série, commencée Le 16 avril, prenait fin avec la mort des plantes, le 25 mai; la seconde a duré du 13 mai au 26 juin; la troisième, du 14 juin au 20 juillet. J'ai réuni dans le tableau Il quelques renseignements relatifs aux plantes de la seconde série. TABLEAU II. Numéros d'ordre LOC Een 1 2 3 k Poids sec des plantes en grammes. 3,600 Re DAMON 5,610 (1 HeUIILES PE MO 0215 ANT) 19,45 155 D0 Cendres p. 100 . | NS eSCE NC EME 55 14P 05 12,04 10,75 Racines. . . . . 16,85 14,08 16,92 17,74 Alcalinité Feuilles. . DA 6,06 3,817 5,61 des cendres INT CSN 772 12,97 9,31 12,89 enINADEEp AIM ORACINES 008 8/1 10,34 7,21 8,58 On voit que la richesse des feuilles en matières minérales atteint un chiffre anormal. On ne peut pas lattribuer au phé- nomène d'autophagie ordinaire, qui augmente la proportion relalive des cendres dans les feuilles dont la mort est due à l’âge ou à une alimentation insuffisante. (V. 2° mémoire, p. 659.) Les feuilles des plantes privées de zine se sont incrustées par évaporalion, puisque les tiges qui ne sont pas soumises à une transpiralion aussi active conservent une leneur normale en matières minérales. L'alcalinité des cendres ne correspond pas non plus à celle que l’on observe chez les organes aériens des plantes qui se sont développées dans Les solutions complètes pourvues de zinc. L'eau d'exsudation éliminée en abondance, à l'obscurité, déposée sur les feuilles de plantes normales, est sans action sur la couleur du parenchyme. L'exsudat des feuilles normales n'exerce non plus aucun effet sur les feuilles des maïs privés de zinc. (1) Les nos 1 et 2 ont végété dans des flacons en verre vert ayant déjà servi plusieurs fois pour des cultures en solution privée de zinc; les n°5 3 et 4 étaient placés dans des flacons neufs en verre de Bohème. ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR = Æ Le rôle du zine revêt donc un caractère spécial: aliment de la cellule, il semble que son action physiologique soit liée aux migrations du soufre. C'est un côté particulier du rôle des éléments rares dont l'explication n’échappera pas, je pense, à la méthode de recher- ches que j'utilise : EXISTE-T-IL D'AUTRES ÉLÉMENTS MINÉRAUX NÉCESSAIRES AU DÉVELOPPEMENT DU MAÏS? J'ai annoncé au début de ce mémoire que la solution nutri- tive utilisée n’est pas suffisante pour assurer le développement complet du maïs, lorsqu'on fail usage de produits purs et d’eau distillée chimiquement pure. Les plantes cultivées dans la solution P X 1 NO:NI, pré- parée dans ces conditions, se développent jusqu'à la floraison comme celles qui sont alimentées par la mème solution faite avec de l'eau de source; mais leur évolution s'arrête assez brusquement dès que l’épi mâle commence à se dégager de la gaine de la dernière feuille. Le phénomène de la trans- piration diurne, jusque-là très actif, s'arrèle aussi. La plante reste stationnaire pendant quelques jours sans modification apparente, puis les feuilles se dessèchent par places et la plante périt. La plante la plus développée de la figure 2 (p. 26), appartient à une série de maïs cultivés dans le but de suivre la végétation dans les conditions que je viens de définir. On peut constater que l'épi mâle n'est pas entièrement dégagé; tous les épillets sont garnis d'enveloppes florales ; mais les étamines ne se sont pas formées. Les fleurs femelles, dont l’évolution a très bien commencé en apparence, sont représentées uniquement par les feuilles ou bractées qui enveloppent l'inflorescence, et on constale sur une coupe longitudinale que l’épi se résout en pousse feuillée. Cette plante est dans un état de dépérissement avancé, les feuilles sont desséchées en partie. L'exsudat des plantes normales, les solutions diluées au 1/10.000 de fluorure de sodium, de borate de sodium, de sulfate d’alumine, d'iodure de potassium, etc., déposés en goutteleltes sur le limbe des feuilles saines, n’ont aucune action sur leur RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 45 couleur. Le fluorure de sodium détruit cependant les cellules sur une étendue de parenchyme correspondant à la largeur de la goutte de solution et s'étendant de l'endroit où elle à été déposée jusqu’à l'extrémité de la feuille. Il résulte de ces faits que la solution ne renferme pas tous les éléments nécessaires au développement du maïs, et celui ou ceux qui font défaut semblent exercer une influence qui rappelle jusqu'à un certain point celle que j'ai attribuée au zinc. La recherche des éléments complémentaires de la solution est une question qui doit aboutir sans peine à des résultats positifs. AUTRES CHLOROSES EXPÉRIMENTALES DU MAÏS. Si l’on transporte des plantules de maïs obtenues par germi- nalion en présence d’eau distillée et à l’abri des microbes, dans des solutions pourvues d'un seul composé minéral ali- mentaire, on observe, entre autres faits intéressants, une chlo- rose très prononcée, qui se déclare au bout de deux ou trois semaines de végétation. Pour suivre l'influence des divers sels minéraux susceptibles d'être employés comme aliments des plantes et même comme engrais chimiques, je les ai utilisés à la concentration de { p. 1.000 et de 0,5 p. 1.000 dans l’eau distillée pure ; les solu- tions étaient réparties dans des flacons de 2 litres. Les nitrates, phosphates, sulfates et chlorures de potassium, de sodium et de calcium peuvent être employés indifférem- ment à la concentration de 1 ou de 0,5 p. 1.000; les sels ammo- niacaux des mêmes acides ne sont pas tolérés au delà de 0,5 p. 1.000 au début. La végélation évolue au début dans toutes les solutions ainsi constituées exactement comme dans l’eau distillée con- sidérée comme milieu témoin. Mais au bout de quinze jours environ, on constate la déco- loration progressive des feuilles qui se forment par la suite. La décoloration est plus rapide en présence des nitrales; ce sont généralement les nilrates de potassium et de calcium 46 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR qui devancent le nitrate d'ammonium et de sodium; les sul- fates et les chlorures sont moins rapides dans leurs effets, les phosphates viennent enfin avec une action plus lente et moins complète. Les plantes qui végètent dans l’eau distillée ne se décolorent pas, même au bout de trois et quatre mois. La chlorose observée dans ces conditions est due au manque de fer, car des gouttes d'azotate de fer en solution à 0,2 et 0,1 p. 1.000 provoquent la formation de la chlorophyile au bout de trois à quatre jours, à l'endroit où on les a déposées sur les feuilles décolorées. (V. planche IV, feuilles de gauche.) Le fer a donc été soustrait à la plante par la solution incom- plète, ce qui n'a rien d'étonnant ; il est certain, en effet, que la réserve de fer de la graine est assez grande pour alimenter un poids de plantes qui atteint plusieurs fois le poids de la graine. C'est ainsi que les choses se passent lorsque le mais est placé dans une solution complète privée de fer ; la chlorose apparaît lorsque la plante a atteint un poids see voisin de 3 grammes. Dans les solutions incomplètes, le poids des plantules les plus lourdes ne dépasse pas sensiblement celui de la graine; ce sont celles qui végètent dans le nitrate de potassium et de cal- cium, qui atteignent les poids les plus élevés, en raison du développement énorme que prennent les racines (2 m. 20 en présence du nitrate de calcium). Ce développement dépasse de beaucoup celui que l'on observe dans l’eau distillée, bien que la plantule y reste constamment verle. Les sels ammoniacaux restreignent aussi, comme dans les solutions complètes, la surface du système radiculaire. Ces observations prouvent que la réserve azotée de la graine peut être complétée avantageusement par le nitrate de calcium de préférence. C'est une indication pratique assez intéres- sante, surtout si l’on songe qu'une légère dose de nitrate de calcium donnée au moment des semailles favorise en même temps l'allongement des racines et permet à la plante d'explorer un volume de terre bien plus élevé. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE #7 ÉTUDE DE LA CHLOROSE DES VÉGÉTAUX SUPÉRIEURS ATTRIBUÉE A LA RICHESSE EXCESSIVE DES SOLS EN CALCAIRE En collaboration avec M. RUOT et M. LEMOIGNE. Les terrains calcaires ne conviennent pas à la culture d'un grand nombre d'espèces végétales, et, d’une manière générale, ces sols sont peu favorables à la culture intensive pour des raisons qu'on à mises en lumière, 2° mémoire, p. 678. On connaît l'allure de la végétation chez des plantes calci- fuges qu'on cherche à acclimater aux terrains riches en cal- Caire. Parmi les plantes annuelles, c’est le lupin blanc qui offre le plus de résistance à celte accoulumance. Sa germination s’accomplit cependant à peu près régulièrement, et les pre- mières feuilles qui se forment aux dépens des réserves sémi- nales ne présentent rien d'anormal; mais quand la plantule a épuisé ces réserves, la végétation devient languissante; la plante périt avant d'avoir formé quelques fleurs. le calcaire serait donc toxique vis-à-vis des plantes calcifuges. La reconstitution d’une grande partie du vignoble français, à la suite du désastre causé par l'invasion phylloxérique, s'est heurtée à des obstacles de même nature. Les cépages américains utilisés comme porte-greffes ou comme producteurs directs ne pouvaient pas prospérer en ter- rain calcaire: ils périssaient plus ou moins vile après avoir présenté les symptômes d’une chlorose intense. Le mal ne pouvait être attribué qu'à l'absorption d’un excès de calcaire, et, ce qui le prouvait, c’est que les pousses et les feuilles chlorotiques étaient remplies de cristaux d’oxalate de calcium. | Cependant cette interprétalion ne cadre pas avec d'autres faits d'observation courante. Le sulfate de fer en cristaux, déposé au pied des ceps, pré- vient fréquemment la chlorose, mais seulement pendant un temps limité ; il la fait disparaitre plus sûrement si on l'intro- duit directement dans les tissus de la plante en badigeonnant £$ ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ; les sections des sarments au moment de la taille d'hiver avec une solution de sulfate de fer. Entre la cause présumée du mal et le remède certain, les relations ne sont pas évidentes. L'analyse des sols a montré aussi qu'il n'existe pas un rap- port constant entre leur richesse en calcaire et leur aptitude à provoquer la chlorose. Il y a donc calcaire et calcaire. On a expliqué ces divergences par l'état de division plus ou moins orande des éléments du sol. Nous n'insisterons pas sur ces interprétations, dans lesquelles on peut découvrir une part de vérité comme il s'en rencontre dans toutes celles qui doivent se borner à rapprocher les faits, faute de pouvoir en saisir la liaison. On conçoit qu'après tout ce que l’un de nous a établi avec le concours d'une méthode souple et rigoureuse, nous pouvons aborder l'étude du rôle du calcaire dans la production de Ta chlo- rose, en tirant parti des fails acquis et des movens de diagnostic des différentes chloroses végétales expérimentales ou naturelles. Nous avons donc entrepris des recherches sur plusieurs espèces végétales simultanément, afin de mieux saisir les réac- lions spécifiques des plantes soumises aux mêmes conditions atmosphériques. LE MAÏS RÉSISTE A LA CHLOROSE & CALCAIRE ». Si la richesse excessive de la sève en composés calciques est une cause de chlorose, il est facile de la provoquer chez une plante quelconque cultivée en solution minérale aseplique. Il suffit de pousser jusqu'à la limite compatible avec Île développement de la plante, la concentration de Ia liqueur nutrilive en composés solubles du calcium. Nous avons adopté pour le maïs la solution suivante : NitratedercaleuniE +. REMERCIER Phosphate de potassium neutre à la phénolphtaléine. 0,5 SUuIlAte TeSMACNÉSIENE CE RE CT CS RUPT Sulfate ferreux ment. Le ONE) RAS REA DA OS Sulfate :deéZincrRvenss. Te MÉMORIAL Ne DO Chlorure dé mansanese RER Cr D 01 Silicate de POtASSIUME-L 0 PE e. cUN U 01 Garbonate ‘deRcalciun. Een PCR ERREUR aude source MAS UE LT PER NS CESSE CREME D DD RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 49 Cette solution a été addilionnée en outre de chlorure de calcium de facon à constituer quatre milieux nutrilifs différents, pourvus respectivement de 0,5, 1, 1,5 et 2 p. 1.000 de CaCPr. Comme plantes témoins, nous disposions des séries cullivées simultanément en 1912, dans les solutions de concentration variable en vue de la fructification. (Voir 3° mémoire, dé- cembre 1913.) Mises en flacon le 1° avril 1912, les plantes présentent dès les premiers Jours un retard visible sur la série P>xX<1/2 NO:NH, du 2 avril 1912. Mais, fait inattendu, on ne note pas de différence sensible entre les divers lots de plantes qui ont reçu des doses variables de chlorure de calcium. La photographie (PI. D) prise le 9 mai montre l’état de la végé- tation comparée à un témoin, PX 1/2 NONH:. Les organes aériens sont moins colorés que chez les témoins ; par contre, les racines sont sensiblement plus développées. Un caractère commun aux maïs placés dans les solutions calciques, c’est la coloration rouge violacée des gaines, de la tige et même des racines; sur celles-ci, le détail est visible dans la photographie ; cette teinte indique l'alcalinisation progressive de la liqueur nutritive. La photographie (PI. IT) du système radiculaire de deux plantes met en évidence un détail intéressant. On peut constater que les racines manifestent une chimio- taxie négalive pour le dépôt insoluble du fond, constitué par du carbonate et du phosphate de calcium. Malgré cela, elles absorbent assez de fer pour conserver leur couleur verte. Celles qui parviennent jusqu'au dépôt en retiennent, par adhérence, des particules qu'elles en- traînent vers la surface du liquide où elles viennent se ranger. C'est dans l'extrait insoluble ainsi suspendu que les poils absorbants puisent les petites quantités de fer et d’oxydes rares nécessaires à la plante. Quand toute la place disponible est prise par les racines, Les dernières formées se développent nécessairement dans la masse du dépôt; mais la chimiotaxie négative se traduit alors d’une autre facon ; les ramifications des axes principaux s’orientent vers la surface du liquide et s'allongent dans ce sens. Æ 50 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Le calcium soluble étant déjà trop abondant, les racines fuient les régions où elles trouvent encore un surcroît de cal- caire. On voit done que les racines trahissent loujours mieux que les organes aériens les défauts des solutions nutritives, quelle qu'en soit la nature. Du côté des organes aériens, on n'observe pas de chlorose: la végétation progresse lentement et semble s'arrêter; mais elle reprend son évolution à partir du jour où on donne des solutions d'entretien; les épis mâles fournissent une pollini- sation abondante: les épis femelles émettent des panaches de stigmates bien développés. Une plante a formé 7 graines: elle appartient au lot qui a recu 0,5 p. 4.000 de chlorure de calcium (n° 4 du tableau IH). Deux faits indiquent que la végétation a élé gènée : la chute précoce des feuilles inférieures et le développement exagéré du système radiculaire. Ce sont là des symptômes qui trahissent une disette d’un ou de plusieurs éléments nécessaires à [a plante. Nous sommes en mesure d'affirmer (3° mémoire) que l'eau est un de ces éléments ; la richesse exagérée des solu- tions en sels de calcium solubles justifie cette assertion; nous pouvons ajouter que les éléments rares sont difficilement absor- bables, comme on le verra plus loin, pour les mêmes raisons, ageravées encore par la présence du carbonate de calcium. Le tableau IE montre jusqu'à quel point le calcium soluble a nui à la végétation. TaBLEAU III. BR à POIDS CN UE ne POIDS SEC POIDS SEC des racines Es e , Ta des plantes des racines rapporté à ma CO? SRE en gr. en gr. 100 parties COLE de plantes. 0 Sp M000 RE 1 39, 914 12,061 30,2 \ 2 97,528 7,804 28.3 : HoLs 28,120 8,103 30 » £ (os 35,683 10,453 29.3 Fe er 18.628 4,130 25,4 ; 6 26,453 8,187 34,3 = ÿ 7 30,167 JUS 3259 Comme on le voit, le poids du n° 1 est le plus élevé; dans les autres lots, les écarts ne sont pas en rapport avec la concen- tration de la solution nutritive en CaCF ; les plantes atteignent RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 51 sensiblement le même poids ; le maïs présente donc une tolé- rance très grande pour des éléments très répandus dans le sol, et en absorbe des quantités bien supérieures à celles qu'il utilise réellement; l'analyse des cendres montre que le chlore repré- sente 15 p. 100 du poids des cendres de la tige, la chaux atteint le chiffre de 40 p. 100 des cendres des feuilles ; l'acide oxalique est abondant dans les tiges ; cette teneur anormale en chlore et en chaux ralentit nécessairement le développement de la plante et diminue le poids de matière végétale; on pouvait escompter a priori l'arrêt de la végétation par la concentration des solu- tions nutritives en chlorure de calcium; c’est bien le résultat qu'on aurait observé si on n'avait pas introduit dans les flacons des solutions d’entrelien qui ont dilué la liqueur résiduelle; ces solutions avaient la mème richesse en calcium soluble que les liqueurs nutritives correspondantes. CUHLOROSE « CALCAIRE » DU LUPIN BLANC (Lupinus albus). Le lupin blanc est la plante calcifuge par excellence ; il est très sensible à la chlorose « calcaire ». Nous l'avons donc utilisé d'abord de préférence à toute autre espèce végétale ; malheureusement, le lupin blanc se développe très mal dans les solutions minérales; il ne réussit pas mieux lorsqu'on le cultive dans du sable blanc de Fontainebleau, imbibé d'une liqueur nutritive. Nous ne connaissons pas encore la compo- sition d'un milieu artiliciel qui conviendrait à la culture de cette plante; et comme sa recherche exigera quelques années de travail, nous nous sommes bornés à faire quelques obser- vations provisoires qui nous ont montré que le lupin ne devient chlorotique qu'en présence de carbonate de calcium. Les sels de calcium solubles, et par conséquent absorbables, ne pro- duisent pas de chlorose : c'est done le calcaire qui semble être l'agent plus ou moins médiat de cette maladie physiologique. Comme le lupin ne nous permettait pas de formuler de conclu- sions définitives, nous nous sommes adressés à la vesce de Narbonne (Viscia narbonensts). ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR CHLOROSE « CALCAIRE » DE LA VESCE DE NARBONNE (Viscia narbonensis). Cette plante se développe bien dans les solutions minérales que nous avons préparées en vue de nos recherches; son évolu- tion rapide et luxuriante va jusqu'à la production de fleurs ei de fruits: nous devons cependant ajouter que la concentration de la liqueur nutritive lui devient fatale à bref délai; la plante ne meurt pas; mais son développement s'arrête; l'apparition de ce moment critique se signale par l'aspect du bourgeon terminal qui dégénère en « tète de chou », dont les feuilles saufrées et recroquevillées restent stationnaires pendant des semaines. L'accident est d'autant plus précoce que le volume initial de la solution nutritive est plus réduit; quand on emploie des flacons de 2 litres de capacité, la plante peut former des fleurs et des gousses normales avant l'arrêt de la végétation. Si on dilue la liqueur résiduelle avec de l’eau distillée, la végé- tation ne reprend pas son activité; il s’agit donc en réalité d'un défaut de constitution de la solution nutritive dû à l'ab- sence d'un élément indispensable à la plante ou, plus vraisem- blablement, à la non-observation de la loi des rapports physio- logiques, car l'accident se produit aussi lorsque la solution est préparée avec de l’eau de source (1). La solution nutritive que nous avons employée possède la composition suivante : = C2 Nitrate de calcium. . etes HE D: à Pet LT SE Phosphate de potassium ramené au voisinage de la neutralité à la phénolphtaléine. 0,250 Sulfate dammMonium, 2-1 UPPER TD ES ENT EEEAOES Sulfate de magnésium. . 0,05 Sulfate FEFReUX 0,025 Chlorure decalClUm PC AD) Sulfate de potassium. 0,025 Sulfate d'alumMENUM. HP ER ER Cr CO DAU2D Chlorure de MANSANÈSE CR 00) Chlorure de ZMC ER LR ET UTACeS au de.source Ur COMMERCE It. LAURE EEE 10 00 1) Nous n'avons jusqu'ici aucune raison d'attribuer l'arrêt brusque de la végétation à l'accumulation de produits toxiques excrétés par les racines. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 53 Dans ce milieu préalablement stérilisé à 120 degrés, les plantes atteignent un poids sec de 3 grammes. Quelques pieds pro- duisent des graines qui ne parviennent pas à la maluration par suite de l'arrêt brusque de la végétation : mais la chlorose que nous cherchons à provoquer se déclare toujours bien avant que cet accident ne survienne. L'influence du carbonate de calcium dans la production de la chlorose est encore décisive. Dans les solutions privées de carbonate, la vesce de Narbonne ne devient jamais chlorotique : la décoloration des feuilles s'observe régulièrement en présence de carbonate de calcium. Les plantes malades perdent leurs feuilles inférieures ; les témoins les conservent jusqu à la fin de l'expérience. Pour déterminer la nature de la chlorose, nous avons eu recours au procédé ordinaire, qui consiste, on se le rappelle, à déposer des gouttes de sulfate d’ammonium ou de nitrate de fer à 0,1 p. 1000 sur les feuilles décolorées. Le fer seul fait reverdir le parenchyme à l'endroit où la goutte a abandonné des traces de fer, en s'évaporant. Deux séries de cultures faites avec la vesce au cours du prin- temps et de l'été de 1912 nous ont donné des résultats concor- dants. Nous avons étendu nos observations au carbonate de magné- sium, qui provoque les mèmes accidents que le carbonate de calcium; ilen est de mème du carbonate de baryum; mais nous n'avons pas fait le départ entre la toxicité de ce dernier pour la vesce et son action purement chimique: pour cette raison, nous ne tiendrons pas compte des résultats qu'il nous a fournis. La conclusion qui se dégage de ces faits est simple : le car- bonate de calcium rend la vesce chlorotique en la privant de fer. Dans une solution pourvue de carbonate de calcium ou de magnésium, le fer est insolubilisé; le maïs est capable de le dissoudre et de l'absorber, la vesce ne peut pas l'incorporer sous cet état; il est légitime de mettre ce résultat sur le compte des sécrétions des racines; celles du maïs restent acides et dissolvent le fer à l'endroit précis où il doit être assimilé: si la vesce devient chlorotique, c’est que ces sécrétions radicu- laires sont alcalines. ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR e rss Ces faits prouvent en outre que l'absorption d'un excès de calcaire par la plante n’est pas la cause de la chlorose: dans les solutions privées de carbonate, le calcium soluble est aussi abondant que dans celles qui en sont pourvues; l'analyse per- mettra facilement de vérifier la richesse des deux séries de plantes en calcium. Notre but pour le moment est de définir les conditions, les causes et la nature de la chlorose calcaire. Le lupin, plante calcifuge, ne nous a pas permis de pousser assez loin notre démonstration ; c'est la vesce, plante calcicole, qui nous permet d'aboutir au résultat; le fait peut paraitre surprenant, si l’on ne remarque pas que les conditions imposées à la plante sont plus sévères que celles que réalisent les sols les plus riches en calcaires. La solution est saturée de bicarbonate de calcium; elle ren- ferme pius de nitrate, de chlorure et de sulfate de calcium que les sols crayeux, dont les eaux d’imbibition sont peu riches en sels solubles de calcium, le bicarbonate mis à part. CHLOROSE CALCAIRE DU pois (Pisum sativum). INFLUENCE DES EXCRÉTIONS DES RACINES SUR L'ABSORPTION DU FER EN PRÉSENCE DU CARBONATE DE CALCIUM. Nous avons attribué aux excrétions des racines une influence prépondérante dans « l’étiologie » de la chlorose calcaire; rien n'est plus aisé que d'en donner la preuve expérimen- tale. Pour cela, nous avons utilisé la vesce et le pois (variété carac- tacus). Il convient donc d'exposer tout d'abord les conditions dans lesquelles ce dernier devient chlorotique. Nous l'avons cultivé dans les solutions nutritives suivantes, en flacons de 2 litres. La solution IL est celle que E. Laurent a utilisée pour la culture du pois diluée à 1/2 (1). Additionnées de carbonate de calcium à 2 p. 1.000, ces solutions devaient produire la chlorose des pois conformément aux obser- vations que nous avons faites sur la vesce et le lupin; les solu- (1) Annales de l'Institut Pasleur, t. V, p. 105. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 55 tions privées de carbonate constituaient ainsi des milieux témoins. I II III IN Niiraten de ncaleiurn- 4-0. 0,5 0,5 0,5 0,5 Phosphate de potassium (1). . 0,125 Ù » 0,25 Sulfate d'ammonium. . . 0,10 » 0,1 0,2 Sulfate de magnésium. PATES 05025 0,25 0,2 0,1 SUHAleTeRTeUx se 10 0:0125 0,005 0,1025 0,025 Chlorure dercalcmmeee 0,05 ) 0,1 0,1 Silicate de potassium. 0,0125 » » 0,025 Sulfate d'aluminium. . : 0,0125 » » » Chlorure de manganèse. . . . . 0,012ÿ » 0,025 0,025 Ciloruredewzinc ere er Hronntraces » » traces Fauidersource "ere Se te den le 0 00 1.000 1.000 1.000 Sulfate de potassium. . . . . LE » 0,25 0,2 » Sulfate decalcium’: 1.2. » 0,25 » » Phosphate tricalcique. . . . . . . » 0,25 0,5 Chlorure de sodium. . . . . . . . » 0,25 Ù D Mais les résultats n'ont pas été conformes à nos prévisions; la chlorose a sévi sur tous les lots de plantes. Celles qui étaient alimentées par la solution IT ont présenté les symptômes de la chlorose avec un relard de cinq jours sur les autres ; et leurs feuilles n’ont pas élé aussi complètement décolorées. Le carbonate de calcium hâte l'apparition de la maladie de un à dix jours; en sa présence la chlorose est plus intense; la mort de la plante survient plus tôt. Nos cultures, faites sous un abri vitré ouvert sur les quatre faces, ont été favorisées par le beau temps. Commencées le 8 août 1913, elles se sont poursuivies jusqu'à la dernière quinzaine de septembre. Les conditions atmosphériques exercent une influence très grande sur la marche de la maladie. Plus la végétation est rapide, plus vite elle apparait. Dans nos derniers essais, les premiers symptômes se sont montrés le dixième jour qui a suivi la mise en flacons. Peu de temps après, les premières fleurs se sont formées: toutes les plantes ont fleuri, bien que les feuilles fussent entièrement décolorées; les quatre ou cinq premières feuilles normales et (1) Le phosphate de potassium est ramené à une réaction faiblement acide à la phénolphtalénie. 56 ANNALES DE L'INSTITUT, PASTEUR très vertes suffisaient à l'entretien des organes chlorotiques. Les racines permettent de prévoir l’éclosion de la maladie deux ou trois jours avant qu'elle ne se manifeste du côté des organes aériens. Elles prennent une teinte rosée qui affecte aussi la solution. Cette teinte s'accentue avec les progrès du mal ; le même symptôme s’observe chez la vesce. À partir du moment où la chlorose peut être considérée comme définitive, les racines cessent de s’allonger. Les organes aériens se développent plus longtemps; mais les feuilles se réduisent de plus en plus; la végétation s'arrête, et quelques jours après les plantes périssent. Nous avons vérifié l'efficacité de l’azotate de fer comme remède à la maladie, aussi bien sur les plantes qui végétaient dans les solutions privées de carbonate de calcium, que sur celles qui se développaient dans les milieux additionnés de carbonate. Le sulfate d'ammonium reste dans tous les cas sans action sur la maladie ; les solutions sont en effet très riches en sulfates. La généralisation de la chlorose chez les plantes qui sont cultivées dans les solutions privées de carbonate de calcium est un fait qui doit être discuté. Nous avons constaté en effet que le lupin blanc et la vesce ne deviennent chlorotiques qu'en présence de carbonate de cal- cium; les nitrate et chlorure de calcium sont inoffensifs. La conclusion ne s'accorde plus avec les faits observés sur le pois, du moins en apparence. Il semble pourtant que les excrétions radiculaires du pois possèdent la propriété d’insolubiliser le fer, puisque la chlo- rose est due à la pénurie de fer; et, d'autre part, les symptômes relevés du côté de l'appareil radiculaire sont communs à toutes les plantes malades. Il est donc vraisemblable que la chaux absorbée à l’état de nitrate est éliminée dans la région des poils absorbants à l’état de carbonate, qui insolubilise le fer à l'endroit même où il doit ètre absorbé. L'expérience justifie cette interprétation comme on va le voir. Il s’agit de vérifier maintenant l'influence des acides orga- niques excrétés par les racines sur l'absorption du fer. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 57 L'un de nous a montré que le maïs laisse diffuser de l'acide malique dans les so aitions nutritives. Il est probable que chaque espèce végétale excrète ainsi les acides organiques qui circulent dans sa sève; nous n'avons pas déterminé la nature des acides du pois et de la vesce: nous nous sommes bornés à introduire dans les liqueurs nutritives de pelites quantités d'acide tartrique ou citrique parce que ces deux acides sont très répandus aussi chez les végétaux supérieurs; ils possèdent comme l'acide malique la propriété de dissoudre le fer en pré- sence de carbonate de calcium. Nous avons donc introduit dans les solutions minérales, au moment où la chlorose était bien prononcée, l'une des solutions suivantes : a) Tartrate double de potassium el sodium. . . . . . 10 gr. ACITOeRTAILIQUE SES Ne ee le l gr. HAURdIS TUE ME RTE EEE NE OS 00 "er. D} Cite Ce EDEN LPC ES PO EN EEE MINES AGIdeRTANtTIQUÉ Re CE Re LU AMEL 1 gr. AUS UNÉ CR ER EN EN NO Er en quantité suffisante pour obtenir une concentration de 0,1 p. 1.000 en sel et 0,01 p. 1.000 en acide, par litre de solution nutritive. Le même traitement a été réalisé sur des vesces en même temps que sur les pois: son résultat ne s’est pas fait attendre. Les vesces chlorotiques reprennent leur couleur verte au bout de trois jours environ; les conditions atmosphériques particulièrement favorables ont exercé une influence très heureuse sur la rapidité de la guérison. Les symptômes de la chlorose disparaissent en même temps sur les feuilles et les racines; la solution nutritive redevient incolore et de nouvelles racines se forment sur les anciennes. Les plantes traitées continuent de se développer comme les témoins jusqu'au moment où la végétation s'arrête pour les raisons que nous avons indiquées. Les plantes non traitées perdent leurs feuilles et succom- bent. L'influence du traitement se traduit de la mème manière sur les pois ; toutes les plantes trailées reverdissent au bout de trois, quatre Jours; la solulion se décolore et les racines forment de nouvelles ramifications. Les plantes guéries atteignent des 8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Q poids plus élevés que celles dont les solutions n'ont pas recu d'acide organique. Quelques-unes parmi les premières portent deux gousses renfermant deux ou trois graines bien développées: le poids sec maximum observé est de 1,962 grammes. La guérison est aussi rapide chez les plantes dont les solu- tions sont privées de carbonate de calcium que chez celles qui végètent en présence de ce corps; mais les poids secs de ces dernières sont plus faibles. Pourvues ou non de carbonate de calcium, les quatre solu- tions utilisées ont donc provoqué l’étiolement du pois suivant des processus identiques, puisque la maladie se présente partout avec les mêmes symptômes et cède au même traitement. L'acidée tartrique et l'acide citrique se sont montrés égale- ment efficaces ; ils ont dissous de petites quantités de fer mème en présence de carbonate de calcium, et l’ont mis à la disposi- tion de la plante sous un état absorbable. Nous avons donc empêché la plante de dissoudre le fer en la plaçant dans des solutions qui rendent ses excrétions radicu- laires alcalines ; mais nous avons corrigé les effets de cette mesure en introduisant dans les solutions les acides libres que la plante ne pouvait plus y déverser. L'excrétion d'acides organiques est donc le moyen que les racines emploient pour emprunter aux sols calcaires les éléments terreux qui ne peuvent y exister qu'à l’état inso- luble. Nous pouvons donc prévoir théoriquement l'existence de divers accidents de végétation autres que ceux qui découlent de la pénurie de fer. La chlorose « calcaire » peut ètre com- pliquée de disette de manganèse, autre cause d’étiolement dont l’un de nous à précisé le mécanisme (p. 36), de disette de zinc qui se manifeste par la mort rapide des plantules et vraisemblablement de pénurie d’autres éléments qui restent encore à déterminer. Une chlorose réfractaire au traitement ferrique ou sulfurique peut céder à d’autres interventions visant le manganèse, le zinc ou les éléments provisoirement inconnus. Nous devons ouvrir maintenant une parenthèse au sujet de la résistance absolue du maïs à la chlorose. Le maïs alcalinise RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 59 aussi ses solutions nutritives; on ne conçoit done pas qu'il se montre réfractaire aux conditions sévères que nous fui avons imposées. Nous savons qu'à côté du carbonate de calcium ou de sodium ses racines éliminent des malates ; la présence de ces derniers suffit pour former des sels doubles avec les éléments terreux. Nous ne voyons pas, en outre, pour quelle raison l'acide malique libre ne suivrait pas le même chemin que les malates, pour se combiner aussitôt à l'oxyde de fer qui est directement en contact avec les poils absorbants. Rien ne s’y oppose, et c’est vraisemblablement dans cette combustion incomplète des acides organiques par les racines que réside le mécanisme ultime de la résistance absolue à la chlorose. Par analogie, nous sommes conduits à émettre l'hypothèse que les excrétions des plantes calcifuges sont faiblement alcalines. L’asserlion est téméraire si on considère que la sève de l’'Oxalis corniculata, des Rumex acetosa et acetosella est forte- ment acide; mais il s’agit ici d'acide oxalique dont l’action est neutralisée par le carbonate de calcium, en admettant qu'il se diffuse à travers les membranes des poils absorbants. Les faits tendent plutôt à prouver que l'acide oxalique est brûlé entièrement par les racines. Les trois espèces que nous avons citées végètent dans les « terres de bruvère » ou dans les sols humides privés de calcaire: elles s'adaptent vraisembla- blement à l'absorption de l’humus, qui est un aliment carboné des végétaux supérieurs capables de le dissoudre par /eurs excrélions alcalines. Le mécanisme de l’accoutumance au sol s’expliquerait ainsi très simplement. Dans les terrains calcaires prospèrent les plantes à excrétions radiculaires acides, tandis que les sols acides ou tourbeux ne peuvent convenir qu'aux végétaux dont les racines laissent diffuser du carbonate de sodium. Si nous revenons maintenant à la chlorose de la vigne que nous avons surtout visée, quoique par des moyens détournés, nous pouvons assimiler la résistance des cépages français à celle que nous avons constatée chez le maïs; les cépages amé- ricains se rapprochent au contraire des plantes calcifuges, ou 60 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR plus exactement peut-être du pois et de la vesce ; nous avons aussi le droit de conclure que la résistance absolue ou « immu- nité naturelle » et la réceptivité plus ou moins grande à la chlorose « calcaire » relèvent simplement de la réaction des excrétions radiculaires. CONCLUSIONS GÉNÉRALES Les conclusions qui se dégagent des faits exposés dans ce mémoire, se rattachenc à la physiologie générale; elles sont donc d'ordre théorique; mais une étude complète de la nutri- tion des végétaux supérieurs, bien qu'abordée par son côté théorique, aboutit en dernier ressort à des principes destinés à servir de base aux règles de la pratique agricole. Ce sont ces principes que je résume d'abord. J'ai montré que le calcaire joue un rôle nuisible sur la végé- lation, lorsqu'il est assez abondant dans le sol pour troubler la loi des rapports physiologiques (1). Mais il constitue un ali- ment de la plante, et il exerce une influence heureuse sur son développement en assurant l’insolubilité des oxydes rares, indispensables ou non aux végétaux supérieurs, toujours toxiques lorsque l’eau d'imbibition du sol en dissout des traces sensibles. Cette dernière propriété comporte cependant une action défavorable lorsqu'elle va jusqu'à priver la plante d'éléments comme le fer, le manganèse, le zinc. Telles sont les fonctions nombreuses qui sont dévolues au calcaire dans les relations de la plante avec le sol, indépen- damment de son action sur la combustion des matières orga- niques par les microbes. Son utilité est plutôt liée à sa rareté relative. Un sol qui renferme 1 p. 100 de calcaire en est suffisamment pourvu; mais il peut en contenir bien plus sans accuser une diminution de fertilité, au contraire; tout dépend des propor- ions relatives des autres éléments qui entrent dans sa com- position. Mais ces proportions commandent les propriétés physiques 1. Deuxième mémoire, p. 678. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 61 du sol que je n'ai pas à envisager ici; il suffit, pour le moment, que le calcaire puisse remplir largement les fonctions utiles que je viens de résumer. Celles-ci tendent dans tous les cas à placer la plante dans la nécessité d'emprunter un grand nombre de ses éléments miné- raux à des composés insolubles. En présence de calcaire, l'acide phosphorique, Le fer, le man- ganèse, le zine, la silice ne peuvent être absorbés qu'à la suite d’une action dissolvante due aux excrétions radiculaires. Ces excrétions sont acides ou alcalines; la réaction basique est la plus fréquente dans les conditions naturelles parce que la plus grande partie de lazote utilisé se trouve à l'état de nitrate. Un excès de calcaire augmente la présence de carbonate de calcium dans les excrétions radiculaires et réduit nécessai- rement leur pouvoir dissolvant; l'absorption d'acide phospho- rique, de fer, de manganèse, de zinc devient alors impossible (lupin, pois, vesce) ou difficile (maïs). On peut atténuer ces conséquences par les labours : les sols bien divisés sont ceux qui présentent aux racines la plus grande surface de contact non colmatée; par l'emploi des superphosphates qui dans les terrains calcaires commencent par enrober le carbonate de calcium d’une couche de phos- phate tribasique, lequel se laisse, sans doute, immobiliser à son tour, comme l'ont montré MM. Müntz et Gaudechon, par le travail d'incrustation des eaux d'infiltration (1). Il existe enfin un autre correctif efficace des terrains cal- caires : ce sont les fumures organiques. L'humus est un agent d'enrobage aussi efficace que le cal- caire et il possède précisément la propriété de se fixer sur ce dernier; mais la combinaison de lhumus et de la chaux est facilement attaquée par les microbes; les acides organiques sont des produits constants de la décomposition de lhumus, et comme ces fermentalions sont favorisées par le calcaire même, la solubilisation des oxydes terreux est possible en pré- sence de carbonate de calcium. Ce sont là des faits dont la pratique a toujours Giré un parti 1. Annales de la Science agronomique, 1912, 2e semestre, n° 3, p. 200. 62 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR avantageux bien qu'ils n'aient pas été mis en lumière dans toute leur étendue par la science. Si l'on considère maintenant les autres éléments indispen- sables aux végétaux supérieurs, nous savons que l'azote, le potassium, le soufre, le calcium, le magnésium, le chlore se rencontrent à l’état soluble dans tous les sols arables. Mais la richesse de la solution qu'ils constituent, avec l'eau d'imbibition retenue par la terre, est bien inférieure à celle que j'ai réalisée dans mes solutions nutritives. Il faut donc admeitre que la plante solubilise une fraction importante des substances qu'elle emprunte au sol, puisque la quantité d'eau évaporée pour produire 4 kilogramme de matière végétale est constante pour une espèce donnée. Nous connaissons les moyens qu'elle met en œuvre pour atteindre ce résultat, et nous savons aussi que le travail de solubilisation accompli par les excrétions des racines est con- sidérablement augmenté par la présence de composés solubles, qui laissent un résidu acide ou alcalin. Des sels tels que le chlorure de sodium peuvent même remplir ce rôle (2° mé- moire, p. 619). Pour se conformer à ces principes, les praticiens doivent chercher avant tout à favoriser l’action dissolvante des racines, en leur fournissant les engrais appropriés et en étendant le plus. possible leur rayon d’action. La réaction des excrétions est fixée par la nature des résidus inutilisables pour la plante; mais dans la terre cette réaction a beaucoup moins d'importance que dans les milieux artificiels, à moins que le calcaire fasse défaut; les sels ammoniacaux sont alors contre-indiques. Cette condition mise à part, tous les engrais azotés minéraux se valent, à dose égale d'azote. Mais si on envisage l'autre face du problème, qui comporte un développement vigoureux des organes souterrains, il est nécessaire de faire un choix entre les divers engrais azotés. Ce sont les nitrates qui influencent le plus favorablement l'allongement et la ramification des racines, et parmi eux c'est le nitrate de calcium qui se place au premier rang. Les sels ammoniacaux réduisent au contraire le développement des organes souterrains. Le fait a été mis en évidence depuis long- RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 63 temps par les remarquables travaux de Lawes et Gilbert, qui ont très judicieusement attribué à celte particularité l’abaisse- ment considérable des récoltes qui recoivent du sulfate d'am- monium pendant les années de sécheresse persistante. Il faut pourtant se garder d'employer de fortes doses de nitrates dès la germination; le développement des racines est en raison inverse de la fertilité du sol. Une faible fumure azotée suffit, lorsque le sol est pauvre en substances nitriliables : les terres bien entretenues peuvent s'en passer. Il est superflu d'ajouter que la profondeur des labours et l'émiettement des particules terreuses sont des conditions indis- pensables à la pénétration des racines. Le développement vigoureux de ces organes étant assuré dès la germination, il faut leur constituer un milieu nutritif en tenant compte de la loi des rapports physiologiques; la chose est malaisée (voir 2° mémoire, p. 677). Il faut compter avec les réserves minérales et surtout organiques, avec la richesse du sol en calcaire. La théorie n'a pas orienté jusqu'ici la pratique dans cette voie. Elle s’est crue autorisée à insister sur le pouvoir absorbant du sol; son insistance est légitime puisque ce pouvoir absor- bant permet de constituer des réserves d'éléments fertilisants. Mais les réserves ne peuvent être mises en œuvre qu'avec le concours d’un certain nombre d'éléments solubles qui consti- tuent ce qu'on est convenu d'appeler un engrais complet. Ce méiange doit remplir un double but : apporter un complé- ment d'aliments minéraux et assurer, par voie de conséquence, l'absorption des substances insolubles, de façon à mettre à la disposition de la plante, à un moment quelconque de son évo- lution, tous les éléments indispensables, dans les proportions délinies par la loi des rapports physiologiques. Cette fumure complémentaire est, en somme, une /umure active ; si elle fait défaut, le sol Le plus riche en réserves inso- lubles demeure improductif, car la plante ne peut pas attaquer ces réserves. L’inanité des déductions analytiques devient évidente à la lumière de ces résultats. Ils condamnent aussi l'usage d’un seul engrais chimique toutes les fois qu'il ne vise pas uniquement la loi des rapports 6% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR physiologiques, condition sur laquelle une connaissance appro- fondie du terrain, basée sur une longue observation, permet seule de se renseigner. Toute la science du cultivateur consiste à lirer parti de ces observations délicates. La fumure active Varie avec l'espèce végétale; c’est la quan- tité d'eau nécessaire à l'élaboration d’un kilogramme de matière végélale qui fixe son importance; plus elle est élevée, moins là solution nutritive du sol doit être concentrée. Les cultures qui évaporeut le plus d'eau s'accommodent le mieux des sols pauvres, et des faibles fumures:; sous ce rapport, les légumi- neuses sont moins exigeantes que les graminées, si l’eau est offerte à discrétion. C’est une notion aussi ancienne que celle de l’assolément. Dans l'ordre théorique, les résultats obtenus montrent, comme ceux que J'ai déà exposés dans les mémoires précé- dents, tout le parti que l’on peut tirer de la méthode que j'ai mise en œuvre. On conçoit, en eltet, qu'elle s'est bornée jusqu'ici à montrer la voie et à multiplier les procédés d’inves- tigalion qui permettront d'aborder toutes les questions que soulèvent l'agriculture générale et la physiologie. Nous savons, en effet, que chaque espèce végétale exige une solution nutritive spéciale, par les proportions d'éléments qui la composent plus que par le nombre de corps qui y entrent. La détermination de ces rapports et la fixation du nombre de corps simples indispensables à une plante sont une besogne délicate, mais non impossible, comme on a pu s'en rendre compte. Elle deviendra aussi simple dans sa réalisation que la recherche d’une espèce chimique par la voie dichotomique, lorsqu'on aura déterminé les caractères physiologiques qui dénotent la présence ou l'absence d'un élément utile dans la solution. Le manque de soufre, de fer, de manganèse, se reconnait à des aspects bien définis de la végétation et se vérifie par des procédés aussi simples que précis. La privation de zinc se traduit autrement, mais elle se mani- feste par des caractères aussi constants el aussi évidents. Il est vraisemblable que l'absence des autres éléments de la RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 65 solution nutrilive pourra se reconnaître par des moyens spéci- fiques. Si je n'ai pas réussi à les découvrir Jusqu'à présent, c'est parce que la suppression des éléments qui interviennent! à dose massive condamne les organes aériens à une exislence éphémère. Le rôle du soufre, du fer et du manganèse dans la production de la chlorophylle est un fait sur lequel je dois insister. Il montre que les éléments minéraux des végétaux supé- rieurs doivent être classés en deux catégories : ceux qui sont nécessaires à la vie végétative, et ceux qui interviennent en même temps, d'une manière directe, dans l'assimilation carbo- nique. Le soufre et le fer appartiennent à cette dernière catégorie ; le manganèse doit être rangé dans le premier groupe, bien que Sa Suppression, dans la liqueur minérale, provoque une chlo- rose prononcée du végétal; mais elle n’est pas identique à celle qui résulte de la privation de fer et de soufre et elle est suscep- tible d'être guérie par une substance organique qui existe dans l'exsudat des feuilles normales ou dans leur macération aqueuse, mais non pas directement par les composés minéraux du manganèse, Il est vraisemblable, je le répète, que la privation d'un élé- ment minéral quelconque, nécessaire à la vie végétative de la cellule, conduirait au même résultat si l'existence des feuilles n en devenail trop précaire. La matière organique chlorogène que J'ai mise en évidence est une substance élaborée par la cellule. Cela montre que les corps chlorophylliens forment avec cette dernière une symbiose très étroite, qui d’ailleurs est évidente, et c’est ainsi qu'il faut interpréter l'opinion suivant laquelle tous les éléments miné- raux nécessaires à la plante ont un rôle à Jouer dans l'assimi- lation carbonique. On sait depuis longtemps que le manque de fer entraîne la disparition de la chlorophylle et on en a d’abord conclu que la chlorophylle renferme du fer. L'analyse a montré que cette déduction est inexacte; je n'affirmerai donc pas non plus que la chlorophylle renferme du soufre puisque l'analyse ne l'y à pas découvert, ni qu'elle contient dans sa molécule la sub- stance chlorogène élaborée ; mais je déduirai de mes observa- 5 66 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lions que le soufre, Île fer, la matière organique élaborée sont des aliments des leucites; j'ajouterai qu'il n'y a jusqu'ici aucune raison de considérer la chlorophylle comme un facteur déterminant de l'assimilation carbonique à la lumière, puis- qu'elle ne se forme pas en l'absence de corps qui n’entrent pas dans sa composition. Cette dernière particularité suffirait au contraire à la faire considérer comme un produit résullant de l’activité des corps chlorophylliens, si un nombre énorme de travaux ne lui avaient attribué une place que des coïncidences, des rapproche- ments aidés d'hypothèses, justifient seuls. Pour appuyer cette conception, qui n'est pas neuve, il faut des faits plus probants, car elle n’a pas été bien accueillie par les physiologistes. La décomposition du gaz carbonique par les végétaux supé- rieurs exposés à la lumière se présente donc comme une fonction complexe puisqu'elle dépend de la vie végétative et qu'elle exige en outre des éléments minéraux. Il en est de mème de toutes les grandes fonctions de la cellule vivante. C'est le moment de rappeler que la production d'acides organiques par voie de désassimilation, ou, ce qui revient au mème, par voie de combustion respiratoire limitée, peut être provoquée par la suppression d’un élément quelconque indis- pensable à la cellule. Si l’on supprime, ou si l’on réduit l’un des corps qui forment la solution de Raulin, en maintenant constante la dose de sucre, on observe la production d'acide citrique par un cifromyces cultivé sur le milieu ainsi modifié, alors que sur la liqueur normale il n'en produit pas de trace. L'acide prend naissance au moment où l'élément réduit ou supprimé fait complètement défaut. Pour continuer leur évolu- lion, les parties jeunes du mycélium empruntent le corps qui manque aux vieilles cellules, et c'est alors seulement que l’acide citrique s’accumule dans la liqueur nutritive en pré- sence d’un excès de sucres, aliments carbonés supérieurs à l’acide citrique. De même, si on place comme l’a fait F. Ehrlich(1), un poids (1) Biochemische Zeitschrift, t. XVIII, fasc. 3, 4 et 5, 1909. RECHERCHES DE PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE 67 relativement élevé de cellules de levure Jeunes et vigoureuses dans une solution sucrée qui renferme un acide aminé comme aliment azoté, la levure emprunte son azote à l'acide aminé et laisse le résidu correspondant, alcool ou acide, parce que ce résidu est un aliment carboné inférieur aux sucres. Mais quand on cherche à reproduire par les sues cellulaires ces séries d'actions chimiques complexes, on n'obtient pas de résultats. Lorsqu'on détruit l'édifice cellulaire, on anéantit en même temps ses fonctions essentielles. Quelques-unes persistent cependant: ce sont celles qui relèvent d'un travail de digestion. Mais là encore le déterminisme du phénomène n'est pas simple. On sait qu'il exige des substances albuminoïdes des éléments minéraux, sous un état chimique convenable, et une réaction délerminée en grandeur et en nature: en un mol, c'est tout le suc cellulaire qui y participe. Plus on pénètre le mécanisme des actions diastasiques les plus simples, plus le nombre d'éléments qui y concourent ap- paraîl plus grand, et si on parvenait à séparer successivement tous les corps définis du suc cellulaire, on constaterait que les sensibilisatrices, les compléments, les kinases, etc., qui inter- viennent dans une réaction diastasique sont multiples. Les actions diastasiques ont été assimilées aux actions catalytiques simples de la chimie générale; il y a entre ces deux ordres de phénomènes des analogies frappantes. Mais Ja chimie de la cellule est une chimie à déterminants mulliples: ses réactions les plus simples exigent le concours de plusieurs facteurs, et, si l’on veut observer toutes les transformations qui relèvent de ses lois, il est nécessaire de recourir de préférence à la dissociation des fonctions en faisant vivre la cellule dans des conditions appropriées. GE ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR EXPLICATION DES PLANCHES. — 4° MÉMOIRE. PLANCHE Î. Cullure du maïs en présence d'un excès de composés calciques solubles. De gauche à droite : Solution INO*}*Ca 4 p. 1.000 + 2 p. 1.000 de CaCF. Solution (NO:}Ca 1 p. 1.000 +4,5 p. 1.000 de Cac. Solution P X1/2 NOSNH* sans ÇGaCl? Plante témoin. Solution‘ (NO:)*Ca 1 p. 1.0004+1 p 1.000 CaCl. Solution (NO*}Ca 1 p. 1.000 + 0,5 p. 1.000 CaCE. PLANCHE Il. Fiqure montrant la disposition des racènes dans les solutions pourvues de 1 p.1.000 {(à gauche) et de 0,5 p. 1.000 de CaCl* (à droule). Leur tassement dans les régions supérieures du liquide est dû à une chi- miotaxie négative pour le dépôt insoluble riche en composés calciques. PLancsae HI. Chlorose expérimentale du maïs, d'après des photographies en couleurs. De gauche à droite. 1. Plante en milieu privé de fer. 9. Plante témoin très verte bien qu'elle soit privée de chlore. + Plante cultivée dans une solution à 0,5 p. 1.000 de nitrate de potassium dans l’eau distillée pure. 4. Plante en milieu privé de soufre. PLancE IV. De gauche à droite. 1 et 2. Deux feuilles chlorotiques d'une plante cultivée en solution incom- plète à 0,5 p. 4.000 de NOK. montrant les taches vertes produites par des gouttes de solution d'azolate de fer à 0,4 p. 1.000. Les taches sont à peu près limitées aux cellules qui ont reçu les traces de fer; les cellules détruites ont été lésées par la pointe de la pipette. 2 et 3. Deux feuilles chlorotiques d'une plante privée de manganèse mon- trant les taches vertes produiles par l'eau d’exsudation des plantes normales ; les taches récentes sont circulaires ;Jles taches anciennes se sont étendues dans le sens de la circulation de la sève. : SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES par M. L. CAZALBOU Si les remarquables iravaux de Grüby ont fait connaître la nature réelle des Teignes, il a fallu l’apparition des méthodes pastoriennes pour isoler et différencier les agents de ces affec- tions. À l'heure actuelle, la diagnose de ces champignons a pour base essentielle les caractères objectifs fournis par les cultures; mais, au point de vue bolanique, nos connaissances sont encore imparfaites et les travaux de Matruchot et Dasson- ville sur le rattachement des Dermatophytes aux Gymnoascées, n'ont pas entraîné la conviction générale. Nous nous proposons de donner ici quelques vues nouvelles sur la question et de faire connaître les premiers résultats obtenus; ces résultats sont, croyons-nous, de nature à ouvrir la voie vers la solulion du problème posé par la systématique des Teignes. CARACTÈRES GÉNÉRAUX DES CULTURES. Sur les milieux d’épreuve formulés par Sabouraud, les para- sites dont nous nous occupons se présentent généralement sous l'aspect d’un tapis de duvet blanc. Cependant la produc- tion de ce duvet offre les modalités suivantes : 1° Certaines espèces acquièrent immédiatement tout leur développement. Exemple : Trichophyton equinum, — Microsporon tomento- sum, — Achorion Quinckeanum. 2° D’autres Dermatophytes montrent tout d’abord un pre- mier duvet assez court auquel se substitue une forme plus longue, désignée par les dermatologisles sous le nom de cul- ture secondaire ou pléomorphique. Exemple : Tr. crateriforme, — M. Audouïni. 3° Un certain nombre d'espèces, primitivement plâtreuses 70 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ou granuleuses, se recouvrent ensuite de la culture duveteuse définitive. Exemple : les 77. gypseum. 4° Chez quelques parasites enfin, la culture est tout d'abord glabre; le duvet final peut survenir tout de suite après, comme chez Tr. violaceum, — A. Schünleinii, ou être précédé de l'apparition d’un duvet plus court et plus rare, comme chez M. equinum. De ces premières constatations, il semble ressortir que, si les espèces de la première série acquièrent, dès leur naissance, tout le développement duveteux dont elles sont susceptbles sur nos milieux, les autres, dont le début est d'apparence variable, s'y acheminent et s’y achèvent très généralement, dans un délai plus ou moins long. Et, bien que toutes les espèces dermatophytiques connues n'aient pas encore produit la forme dite pléomorphique, ce qui pourrait ètre mis sur le compte du milieu utilisé, il n'en appa- rait pas moins que cette forme duveteuse se présente comme l’aboutissant normal de nos cultures. Cependant les dermatologistes lui assignent un lout autre caractère et ils l’envisagent comme une régression du végétal. Cette hypothèse s'appuie sur deux ordres de faits. Le premier et le plus important est la non-r ‘versibilité de la forme secon- daire à la culture de naissance. On peut trouver singulier qu'un végétal dégénéré ne puisse plus offrir son aspect de jeunesse, quel que soit le nombre de milieux neufs qu'on lui présente. Par contre, on doit admettre que la cause du phénomène n'est pas imputable au milieu, mais bien qu'elle giît dans le parasite lui-même. Cela n'implique pas fatalement une régression, car l'hypothèse suivante, par exemple, expliquerait l'apparition pléomorphique : la formation ,'dans la première période végéta- tive, d'organes incapables de reproduire le développement mycosique antérieur à ces organes. Le deuxième fait invoqué par les dermatologistes et moins constant que le premier, est la tendance de la forme secondaire à se dégarnir de plus en plus des organes primitifs de différen- ciation. Nous montrerons ici qu'on peut faire de grandes réserves sur la signification de la plupart de ces organes, que SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 71 la forme pléomorphique est loin d’être l'indice d’un mouve- ment dégénératif et que, si les dermalophytes s'arrêtent à cette période de leur végétation, c'est que leurs cultures ne sont pas placées dans des conditions convenables d’espace et de temps. SUR LES ORGANES DIFFÉRENCIÉS DES DERMATOPHYTES, Spores. — Les spores, associées en grappes simples ou com- posées, ont été le premier organe signalé. Elles existent dan: toute la série dermatophylique et elles se prolongent dans la forme culturale secondaire. Tout d'abord, Bouchard avait cru que les Trichophylon pré- sentent leur vie végétative dans l’épiderme, sous l'aspect de filaments rayonnés et qu'ils se reproduisent dans le cheveu au moyen des éléments arrondis, agminés en chapelets, qui con- stituent d’ailleurs la caractéristique du genre. C’est Duclaux (1886) et Verujsky (1887) qui apercoivent, les premiers, les hyphes garnies de spores, dans les cultures en milieu artificiel. Depuis cette époque, l'interprétation de la valeur de ces organes n’a pas subi de modifications dans le langage dermatologique; et les expressions de conidies ou de chlamydospores, survenues plus tard, ont laissé la question entière. En 1899, Matruchot et Dassonville, étudiant le développe- ment du Tr. equinum, attribuent à l'hyphe sporifère un degré très marqué de différenciation et donnent aux éléments sporu- laires la valeur d'une forme reproductrice normale. Ces auteurs font même un rapprochement étroit entre ces organes et les formes secondaires de reproduction chez les champignons du genre Ctenomyces, à la suite duquel la filiation des parasites des Teignes aux Gymnoascées leur paraît devoir s'imposer. Sabouraud (1910), à propos de l'étude mycologique du 77. crateriforme, observe que « si les spores externes semblent bien jouer dans ce mode de fructification inférieure un rôle de graine, néanmoins l'appareil sporifère manque de régula- rité. Quand on examine, après ces préparations, d’autres mon- trant le même organe du Botrytis Bassiana, par exemple, les appareils sporifères de celui-ci apparaissent beaucoup mieux différenciés et plus constants en leur forme que ceux du Tri- 72 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR chophyton qu'on leur compare ». Il semble qu'un léger doute subsiste dans l'esprit de l’auteur sur la nature réelle de ces éléments. Nous ferons, à notre tour, les remarques suivantes. D'après les dessins qui en ont élé publiés et d'après nos observations, les spores des grappes simples ne sont pas insérées latéralement sur l'hyphe, comme on l'écrit d'habitude; ces éléments sont disposés tout autour du mycélium, sur une ligne spirale plus ou moins régulière, à la façon des feuilles d’un grand nombre de végétaux supérieurs. — Les spores, de lon- gueur variable, ont généralement une largeur égale à l’épais- seur de l'hyphe dont elles dérivent: — Chez certaines espèces, comme 77. effractum, Tr. umbilicatum, Tr. phcarile, M. Au- douini, M. tardum, M. equinum, M. simplex (1), les spores deviennent assez souvent filamenteuses et donnent plutôt à l'hyphe l’apparence d'une branche mycélienne qui commence- rait à se ramifier. Bien que, sur milieux gélosés de même qu’en goutte suspen- due, ces organes se reprodui-ent invariablement, nous ne pouvons nous empêcher de sigualer le fait suivant. Les cultures microsporiques et lrichophytiques, observées dans les condi- tions dont il est parlé plus loin, ne nous ont jamais donné d'organes analogues; si, au contraire, nous plaçons dans ces mêmes conditions des spores d’Asprrgillus évolué spontané- ment dans un lube de gélose, nous constatons, après plusieurs semaines de végétalion mycélienne, la formation, à l'extrémité des filaments, des chapelets de spores caractéristiques. Nous eslimons donc que la question de la spore, chez les Dermato- phytes, appelle des recherches complémentaires. Organes pectinés. — Présentes ch" les Microsporon et quel- ques Achorion, les hyphes peclinées élabliraient un rapproche- ment très net avec un groupe de champignons supérieurs des plus dégradés parmi les Périsporiacées On les observe, d’après Matruchot et Dassonville, normalement chez les Cienomyces, où « elles se présentent, soit simples, soit avec denticules d'un seul côté, soit ramifiées comme si quelques-uns des den- (4) Nous avons fait connaître cette espèce à la Société centrale de Méde- cine vétérinaire dans la séance du 5 juin 1913. SUR L'ÉVOLITION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 73 ticules s'étaient allongés végétativement »; en outre, chez Îles Ctenomyces, elles ne sont jamais sporiferes. Or, nous avons constaté dans les cullures de l’Achorion Serisei, observées comme il sera dit plus loin, que ces denticulations dessinent d’abord des hyphes pectinées remarquables, mais qu'elles s’allongent plus lard en simples hyphes et, qu'en conséquence, il est diflicile de leur reconnaître une valeur spéciale quel- conque. Fuseaux. — Les fuseaux existent avec une abondance variable dans les diverses espèces de cultures dermalophytiques. Vus d’abord par Neebe et Furthmann (1891), ils ont été retrouvés par Sabouraud (1894) et par Fox et Blaxall (1896). A leur sujet, Matruchot et Dassonville écrivent en 1899 : « Ces organes énigmatique*, cons dérés par les dermatolo- gistes comme ayant une valeur morphologique supérieure à celle des conidies, sont pour nous des chlamydospores de mème nature et de même origine que les chlamydospores latérales dites conidies. On trouve, en effet, tous les intermédiaires entre les conidies et les fuseaux ». En 1910, Sabourauil, après avoir dit que, chez les Microsporon nolamment., les fuseaux présentent un haut degré de signification, se demande si Ma- truchot et Dassonville ont eu l’occasion d'observer des Miero- sporon animaux, qui présentent des fuseaux en quantilé consi- dérable et dont plusieurs e-pèces étaient connues au moment où ces auteurs écrivaient. Depuis, l'A. gypseum et l'A. Serisei ont été décrits et, chez ces espèces tout au moins, il paraît difficile, conformément à lopision de Sabouraud, de ne pas accorder au fuseau un caractère certain de dillérencia- tion. Quelle est la fonction de cet organe? A notre connaissance, Bodin seul a donné quelques renseignements à ce sujet. Dans la description de son A. gypsrum, Bodin dit expressément: «… pour les conidies pluriseplées il peul y avoir plusieurs boyaux (mycéliens), chacune des loges de ces conidies étant capable de germer simullanément ». A l'appui de cette asser- tion, l'auteur figure trois fuseaux de chacun desquels émergent une ou deux hyphes de nouvelle formalion. Chose curieuse, dans son derni-r ouvrage, Sabouraud ne mentionne nulle part cetle particularité intéressante. Nous verrons plus loin que les 74 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR faits signalés par Bodin ont une imporlance qu’on ne peut plus négliger. Spirales et pelotons mycéliens. — Nous ne dirons actuelle- ment que peu de chose des autres organes signalés dans les cultures, tels que les spirales ou vrilles, qui ne paraissent être que des hyphes sous une forme spéciale, lels aussi que les organes nodulaires et les pelotons mycéliens. La vraie signifi- cation de ces éléments ne pourra sans doute être élablie que lorsque nous connaitrons le cycle évolutif complet des végé- taux producteurs de Teignes. Les observations qui précèdent nous conduisent à penser que, hormis les fuseaux, nous ne trouvons nulle part d'organes dont la significalion soit nettement établie. Ceite conclusion énoncée,: il devient évident que la technique mycologique actuelle est insuffisante pour obtenir des renseignements bota- niques valables. Rappelons donc en quoi consiste celte technique et cherchons à formuler ses desiderata. TECHNIQUE ACTUELLE ET TECHNIQUE NÉCESSAIRE. La méthode qui consiste à examin r une culiure dermato- phytique par l'inspection directe ne peut donner d'indications que sur des fragments du parasite, et l'examen est d'autant plus net que la parcelle prélevée est plus petite. Ceci indique qu'il est très malaisé de constater les rapports des diverses partes. La méthode de la goutte suspendue en cellule est, sans con teste, de beaucoup préférable. mais elle réclame un ensemble d'opérations qui sont assez délicates et a-sez minutieuses pour arriver à rebuter les observateurs les plus patients. De plus, la manière dont {a cellule est confectionnée oblise à suivre Île développement cultural par le de-sous, condition défectueuse pour cet examen. Enfin, quand la végétation est estimée sutfi- samment avancée (de quelques Jours à trois semaines), les dernières opérations (dessiccation à l'étuve. action des réactifs el des lavages), aplatissent sur la lame les diverses parties du végétal obtenu. Si l'on ajoute à ces raisons la valeur toute relative que nous attribuons aux organes ainsi observés, nous aurons suflisam- SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 75 ment montré le besoin qui se fait sentir d'une technique diffé- rente. Il nous à paru que le développement végétatif serait plus normal en renversant le système cellulaire de la goutte et en donnant au parasite lout le temps nécessaire à son évolution, La réalisation du premier point devait permeltre l'examen par le dessus. Quant à la question de temps, nous savons qu'un assez grand nombre de champignons, parasites des végétaux et actuellement bien connus, réclament, dans la nature, des mois entiers pour parcourir leur cycle intégral. Il était donc possible qu'en arrètant une culture en goutte suspendue au bout de quelques jours ou de quelques semaines, l'opération fût prématurée. | Peut-on laisser en cellule une culture de Teigne pendant un temps plus considérable que celui qui lui est habituellement réservé? On peut répondre positivement à cette question, si l’on remarque que les Dermatophytes, étant dépourvus de chlorophylle, empruntent tous leurs éléments, le carbone v compris, au milieu mis à leur disposition. Quant au faible volume d’air qui leur est dispensé, il doit pouvoir suffire pen- dant un temps assez long, ces parasites végélant abondam- ment au sein du bouillon nutritif. C'est à la suite de ces considéralions que nous avons été con- duit à employer la méthode de la cellule directe. Sur une lame à concavité centrale, une goutte de bouillon glucosé Sabou- raud est déposée et une petite parcelle de la culture à étudier. portée au centre de la goulte. On recouvre d'une lamelle de dimensions plus grandes que celles de la concavité et on lute à la paraftine. Disons lout de suile que ce procédé, d’ailleurs déjà connu, qui nous a donné nos premiers résultats, doit être amélioré, notamment par l'augmentation de la hauteur de la cellule et par la possibilité, sans destruction du système, de redonner au parasite, s’il en est besoin, de nouveaux éléments nutritifs quand la première goutte a été utilisée en entier. Pour se mettre à peu près sûrement à l'abri de la contami- nation qui se produirait falalement en opérant à découvert. nous avons confectionné une boîte à parois de verre dont les faces supérieure et inférieure ont les dimensions des plaque photographiques 13 X 18 et sont séparées par une hauteur de 76 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 5 centimètres environ. Des quatre faces latérales ainsi déter- minées, l’antérieure et celle de droite sont mobiles dans leur plan et, comme elles peuvent ainsi glisser aisément, la dispo- sition permet de flamber l'intérieur du système et se prête aux diverses manipulations requises. Les opérations sont ainsi rapides et faciles. PREMIERS RÉSULTATS OBTENUS a) Achorion Seriser. Nous avons fait connaître récemment (1) un Achorion relevé à Madagascar, sur le cheval, par M. le vétérinaire Sérisé. Ce parasite, qui présente des ressemblances avec l’A. gypseum de Bodin, offre, comme ce dernier et comme les Microsporon ani- maux, des fuseaux très nombreux dont nous avons pu suivre le développement. Cultivé sur les milieux d’épreuve gélosés, cet Achorion naît sous forme d'une lache blanchâtre qui s'agrandit assez vite et dont le cenire prend rapidement une teinte café au lait; il existe une marge périphérique étroile qui conserve la couleur du début. Déjà, par l'examen direct, on peut se rendre compte que le pourtour est composé d’hyphes de diamètre à peu près régulier, garnies de fuseaux à diverses phases de leur dévelop- pement. Au fur el à mesure que ces fuseaux augmentent de dimensions, ils prennent la teinte de la zone culturale centrale; celle-ci doit en effet sa couleur et son aspect plâtreux à la pré- sence de ces organes qui la constiluent à peu près en entier. Quand les fuseaux naissent sur les hyphes, ils donnent à celles-ci l'apparence de ce qui est désigné communément sous le nom d'hyphes sporifères ou de grappes simples. Et le phéno- mène évolutif est représenté par la figure 4 (en 4, 6, c, d,e, f, 9). Dans les tubes d'isolement placés à 20-25 degrés, on cons- late d'autre part que le poil ensemencé a déjà donné des fuseaux au bout de trente-six heures. On peut voir que chacun des éléments parasitaires de ce poil s'allonge en un filament (4) Bulletin de la Sociélé de Pathologie exotique, mai 1913. SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES Fc: ‘e ile 1 78 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR mycélien qui aboutit à la formation d'un fuseau terminal. De ce fuseau ne tardent pas à sortir des hyphes fusifères qui se développent à leur tour et qui, par le même processus, finissent par envahir toute la surface du milieu gélosé. Le fuseau apparaît donc comme un organe de propagation en surface, d'importance capitale. Prélevé pour l'examen direct dans la zone culturale plä- treuse, le fuseau adulte présente une longueur de 60 y et une largeur de 12 4, pouvant aller à 15 w. Il est divisé en six loges par cinq cloisons; le nombre des sepla n’est souvent que de quatre ou de trois; mais, dans ces deux cas, comme les dimen- sions de l’organe sont généralement inférieures à celles qu'il offre dans le premier, il est possible que le développement de ces fuseaux ne soit pas complet, le nombre infini de ces organes élant certainement une entrave à l'évolution normale de la plupart d’entre eux. Les loges sont formées d'un proto- plasma granuleux; les septa qui les limitent sont d'une teinte plus claire qui fait penser autant à un vide de rétraction qu'à la présence d’une cloison vraie. Au niveau de ces cloisons, le fuseau est légèrement étranglé; sa surface porte fréquemment des grains disséminés sans ordre apparent et de la même cou- leur générale café au lait que l'organe fuselé (fig. 1, ). Quand on place en cellule directe un certain nombre de ces fuseaux (à 20-25 degrés), on en constate d'habitude la multi- plication rapide. La figure 2 montre en 2? un fuseau à cinq loges qui, au bout de vingt-quatre heures, à donné non seu- lement un filament mycélien à chacune de ses extrémités, mais encore neuf hyphes semblables qui naissent sur la sur- face, en des points ne paraissant avoir aucun rapport avec les loges de l'organe. En #, est un fuseau après quatre jours de cellule ; il a poussé surtout une hyphe allongée en spirale irré- oulière et deux jeunes filaments. En 7, on voit un fuseau de même époque qui a produit un certain nombre de branches plus ou moins ramifiées. En /, enfin sont représentés deux organes fuselés, au cinquième jour, sur les ramificalions laté- rales desquels existent déjà des fuseaux de nouvelle formation. Ces phénomènes se produisent dans la partie inférieure de la soutte de bouillon ensemencée. En mème {emps, dans la partie supérieure, se multiplient en SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 79 grand nombre les hyphes fusifères représentées par la figure 1. L'apparition du duvet sur les milieux gélosés est assez inconstante dans l'Achorion Serisei. Quand elle se manifeste, on voit naître, le plus souvent au centre, des tiges dressées, SO ANNALES DE L'INSTITUT. PASTEUR blanches et très délicates, peu denses, qui paraissent s'être glissées au travers de la masse de fus-aux, des parties pro- fondes de la culture. IT est assez fréquent de voir ce duvet se répandre sur toute la surface, en devenant plus serré. Quand on ensemence ce duvet sur milieu gélosé et en tubes, il ne tarde guère à se propager sur les parois de verre, ainsi que la chose est courante avec les cultures ua Si l’on examine au microscope ce duvel à travers les parois du tube, on le voit formé de branches mycéliennes plus ou moins ramifiées, tout à fait semblables à celles produites, dans la cellule directe, par les fuseaux du plan inférieur. De plus, quand on pratique l'examen direct, entre lame et lamelle, d’un fragment duveteux, il est rare de ne pas constater, au ion du mycélium, des fuseaux en plus ou moins grand nombre. Et, en repiquant cette forme secondaire tous les dix jours, par exemple, nous avons constalé, au dixième passage, la pré- sence des fuseaux ! Chose encore plus intéressante. Une parcelle de culture duveteuse de l’un quelconque de ces passages en tube de gélose, placée en cellule directe, montre les mêmes détails de développement que lorsqu'on s'adresse aux fuseaux adultes de la culture plâtreuse, à savoir : formalion d'hyphes fusifères en haut, production de mycélium ramifié en bas. Nous pouvons done nous expliquer aisément l'apparition du duvet, chez l'A. Serisei, en milieu gélosé. En même temps que la végétation se propage en surface par la multiplication des hyphes fusifères, proluctrices de la couche plâtreuse, il se forme, au contact du milieu, des fuseaux qui produisent du mycélium. C’est ce mycélium qui arrive à se glisser parmi les éléments de la couche supérieure et qui constitue le duvet dit pléomorphique. On voit également, par ce fait, pourquoi le pléomorphisme, qui se comporte en cellule directe comme dans la culture primaire, ne peut être l'indice d’une régres- sion. Il se constitue, dès le début, sous la couche eut Quand on laisse la cellule directe abandonnée à elle-même, on observe d’autres faits dignes également d'ètre mentionnés. Il arrive assez vite que le développement des fuseaux supé- rieurs s'arrête; par contre, les branches mycéliennes des par- ties profondes continuent à végéter. Fréquemment, ces bran- SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 81 ches forment des dessins pectinés aussi nettement accusés que ceux de l’Achorion Schünleinii:; des hyphes latérales se forment, le plus souvent d’un seul côté des rameaux; elles restent pen- dant plusieurs semaines en l’état, puis ces denticulations s’al- longent, mais elles s'infléchissent dans l'espace limité par le rameau voisin, en restant sensiblement parallèles. D'une manière générale, le mycélium se répand sur le plan- cher de la cellule; au microscope il paraît hyalin; sa mem- brane d'enveloppe est légèrement indiquée et il s’anastomose souvent avec les filaments voisins. Au bout de plusieurs semaines, on voit apparaître des rameaux aériens dont la paroi, plus dessinée, est brunâtre: cela tient sans doute à ce que ces formations sont observées dans l'air et n'ont aucun contact avec le verre, car elles rede- viennent hyalines dès qu'elles atteignent la face inférieure de la lamelle sur laquelle elles courent. Après un mois de culture on commence d apercevoir à la périphérie un certain nombre de ces rameaux, porteurs de nouveaux organes, représentés par la figure 3. Ces organes sont à peu près sphériques et disposés en cha- pelels sur des rameaux laléraux d'épaisseur moindre. Ils offrent des dispositions variées, dans les conditions, peut-être encore insuffisantes, de nos observations. Ils sont tantôt en petit nombre à l’extrémité du stérigmate; parfois, une courte portion de ce dernier sépare deux éléments voisins; tantôt la chaîne paraît sessile, ce qui peut être dù à sa direction oblique par rapport à la direction du rameau central. Vus à 1.000 D., ces éléments sont sphériques ou légèrement allongés et, dans ce cas, de # p X 3u; ils ne sont pas exactement tangents, mais séparés par un disque plus ou moins épais. Ces formations se développent aussi sur le mycélium rampant. Quelle est la valeur botanique de ces productions? Il semble que la réponse à celte question ne pourra êlre donnée que lorsque nous connaîtrons en entier le développement de l'A. Serisei. À ce moment seulement, il sera légitime d'attribuer à chaque organe son rôle physiologique et, en mème temps, de déterminer et de classer l'espèce. ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ic. 3: SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 83 b) Microsporon equinum. . D’après la description des cultures du M. equinum donnée par Bodin et d’après nos observations, le champignon présente, en dehors de ses hyphes normales, c'est-à-dire de diamètre régulier, des filaments pourvus de renflements divers qui lui donnent l’apparence de mycélium en raquette ou bien monili- forme. Ce parasite est pourvu, sur les mêmes milieux gélosés, d'organes peclinés assez rares, de grappes simples et de fuseaux uni-ou pluriloculaires, souvent échinulés. Il était intéressant d'observer ce que deviendraient ces divers organes en cellule directe. | Nous savions déjà que le M. equinum, ainsi que d'autres champignons du même genre, cultivé en ballons, dans du bouillon maltosé ou glucosé, ne donne que des filaments de diamètre régulier et que, par conséquent, la plus grande partie des organes signalés ci-dessus disparaissent. Cette particularité nous avait même fait soupçonner la présence de la gélose, dans les milieux d’épreuve, d'apporter une certaine gène dans l'évolution normale du parasite et d’être ainsi la cause de la formation, dans les cultures, de ces organes de différenciation qu'on s'attache à décrire en dermatologie. Quoi qu'il en soit de cette hypothèse; le M. equinum, placé en cellule directe, ne montre ni grappes, ni chlamydospores, ni filaments pectinés. De lous les organes signalés, le fuseau seul persiste, et c'est surtout grâce à lui que la végétalion se pour- suit et s’élend. La figure 4 reproduit la partie centrale de la culture fournie par un fuseau. On peut y voir que ce sont sur- tout les extrémités de l'organe qui donnent les branches du mycélium primitives, lesquelles ne tardent pas à se multiplier en tous sens. Comme nous l’avons indiqué à propos de l'A. Seriser, le développement mycélien s'opère d'abord sur le fond de la cel- lule, par la formation intercurrente de nouveaux fuseaux. Au bout de deux mois environ, et alors que le bouillon paraît avoir élé utilisé en totalité, apparaissent des rameaux aériens portant des chapelets semblables à ceux de l'A. Seriser et garnis d'éléments plus petits et moins nombreux (fig. V,#). Ces nou- 8% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR veaux organes se forment aussi sur le mycélium rampant. Il devient, dès lors, très vraisemblable que le duvet pléomor- phique chez le M. equinum est fonction du fuseau et que cette espèce possède une affinité botanique marquée avec l'A. Serisei. SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 85 c) Achorion Sp. (?). Dans une espèce d'Achorion d’origine malgache et doni l'étude n'est point achevée, nous avons obtenu, par la même méthode, des conidiophores insérés à la surface de productions sclérotiques sphériques comme cela se voit, par exemple, chez une Hémobasidée, le Polyporus annosus. Nous ne tirerons de celte ressemblance aucun argument prématuré sur la position de ce parasite. (fig. 5, n.). d) Trichophyton equinum. Matruchot et Dassonville, qui ont fait connaître ce cham- pignon, producteur fréquent de Teignes régimentaires, recon- naissent dans ses cultures sur milieux gélosés : des rameaux sporifères naissant à angle droit sur le mycélium, des spores solitaires ovales, comme tronquées à la base, naissant latéra- lement et irrégulièrement sur les filaments rampants, des enkystements intercalaires donnant naissance à des chlamydos- pores, des phénomènes d’émigration du protoplasme dans les spores. Or, si nous placçons en cellule directe une parcelle de culture trichophytique, nous ne voyons plus se former ces diverses par- ticularités organiques. Mais les hyphes se multiplient, se ramifient, s'anastomosent et finissent par constituer un stroma à mailles plus ou moins serrées; des cordonnets, qui en émer- gent pour devenir aériens, aboutissent à la formation de sclé- rotes dont la fig. 5, enr, peut donner une idée. Tels sont les divers résultats obtenus après quelques mois d'observation en cellule directe. CONCLUSIONS. Nous avons déjà fait remarquer qu'il est impossible de con- sidérer comme complets les renseignements nouveaux apportés. Ces notions sont encore insuffisantes pour assurer la détermi- nation botanique des Dermatophytes. 86 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 2 SUR L'ÉVOLUTION CULTURALE DES DERMATOPHYTES 87 Cependant, nous avons cru intéressant de les faire connaître pour orienter les recherches vers une voie nouvelle, et nous formulerons les premières conclusions suivantes : 1° Dans les cultures dermatophytiques en milieux gélosés, les parasites ont une tendance normale à s'achever en duvet: 2° Si, au point de vue dermatologique, l'expression de pléo- morphisme, qui ne renferme pas d'indication sur la nature du phénomène, peut sans inconvénient être admise, le mycologue ne doit voir dans le duvet ainsi nommé que l'expression d’un mycélium entravé dans son évolution ; 3° Les cultures réalisées jusqu’à ce jour en milieux d’épreuve gélosés, ne donnent pas d'organes valables pour la classifica- tion (le fuseau étant mis à part); 4° Le problème de la position systématique des agents para- sitaires des Teignes ne peut être résolu qu'en donnant aux cultures l’espace et le temps nécessaires. Ce dernier principe admis, il convient de rechercher la meilleure technique pour aboutir. À cette œuvre, nous convions les dermatologistes et les mycologues. Le Gérant : G. Masson. ————_—_—_—_—_—_—_—_—_— ee — Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. CN D'LINUPOT ENS 2404 TA QUE ANNE HA _ ; NT CUITE " 4 mat OA 20100 2 ON Fa | ‘1 duos aflnuicreaide gr ap end ie d4l 10H fT rater 04 > : a UEÈTE MD EUENTT nu: He 2al HOT sin nan é COPIE T0 super ii D TTDE si trn0 *E | out on enie N sSbE 9: MEUTE 12 Aout: dar HET Eu “a 02H al brotasotqeà pin TOUT HET Mar EE 20), 2 | Te TNT sie dé 8x4 rt En Fig nr uote ge -4l Sin bg, gd ire DAFT LICE LUTTE RME CE ua 6 LOTUS Sp dr ere ete 1340 ALetEMENT Lui ae _ Le . 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PREUVES EXPÉRIMENTALES DE LA NATURE INFECTIEUSE DU CHOLÉRA DES NOURRISSONS Parmi les problèmes qui ont provoqué des batailles entre l'ancienne et la nouvelle médecine, lun des plus impor- tants, celui de la diarrhée des nourrissons, est aussi l’un des moins éclaireis. Il semble échapper aux prises de la microbio- logie et résister comme une dernière redoute où s’est réfugié l'esprit qui régnait avant l'époque pastorienne. Après une période où l’on a pensé résoudre le problème par la méthode qui a donné de si brillants résultats dans l'étude du choléra asiatique, on s'est rejeté dans la clinique pure, et c’est elle qui fait la loi dans la pédiatrie actuelle. Il suffit de jeter un coup d'œil sur les traités les plus récents pour s’en assurer. Ce sont les pédiâtres allemands qui ont donné le mot d'ordre dans cette question. Ils pensent que la bactériologie a fait faillite dans la recherche étiologique des diarrhées infantiles et que ce Ll 90 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR n’est pas dans la voie des maladies infectieuses qu'il faut cher- cher la solution du problème. Le médecin d'enfants bien connu, Finkelstein (1), résume de la façon suivante l’opiaion devenue courante parmi ses confrères. Il n'y aurait que très peu de diarrhées des nourrissons qui auraient pour cause quelque influence microbienne. La majorité des cas de cette maladie « présentent des accidents de fièvre et d'intoxication, devant lesquels le bactériologiste, de même que l’anatomo-pathologiste, restent impuissants à expliquer la maladie et la mort. L'absence de toute lésion des tissus, ainsi que des bactéries particulières, ne permet pas de rattacher le mal à quelque état inflammatoire des intestins » (p. 260). En cet état de choses, l'explication de la cause des intoxica- tions « doit être cherchée dans une autre voie que celle de l’empoisonnement bactérien » (p. 262). « La supposition que la fièvre alimentaire et sa conséquence — l’intoxication — sur- viennent à la suite d’un trouble général des échanges nutritifs intermédiaires, a été pendant ces dernières années démontrée comme un fait réel » (p. 263). Etant donné que ce trouble se manifeste surtout pendant la saison chaude, on à admis que la chaleur constitue la cause primaire et la plus essentielle des diarrhées des nourrissons. On à même exprimé l'avis que cette maladie est un « coup de chaleur » (Hitzschlag) comparable à celui auquel sont sujettes les personnes adultes pendant les fortes chaleurs. Ritschel (2), qui est un des initiateurs de cette théorie, se défend d'identifier le choléra des nourrissons avec le coup de chaleur, mais il affirme tout de même que « l’action de la chaleur est le facteur principal » dans cette maladie des enfants. Pour lui, « la diar- rhée est intimement liée avec le mal causé par la chaleur et peut bien être interprétée comme la conséquence de cette der- nière » (p. 340). L'idée que la plupart des diarrhées infantiles ne sont pas de nature infectieuse a trouvé bon accueil parmi les pédiatres d’autres pays. Ainsi Combe, dans un traité tout récent sur « les maladies gastro-intestinales aiguës des nourrissons (3) », va (1) Lehrbuch der Süuglingskrankheiten, XI, Berlin, 1911. (2) Jahrbuch fir Kinderheilkunde, 1er septembre 1913, p. 312. (3) Paris, 1913, Baillière et fils, édit. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 91 jusqu’à dire que « la plus minime partie » seulement de ces affections peut être attribuée aux microbes. « Les autres, et voilà sur quoi il faut insister dans notre enseignement, les prin- cipales parmi les maladies gastro-intestinales du nourrisson, ne sont en effet pas d'origine infectieuse. Elles sont causées par l'alimentation et les méthodes alimentaires; elles n'ont rien à voir avec les microbes, qui n’agissent dans ces cas que secon- dairement (p. 5). » Nous trouvons la défense de la même théorie dans le Précis de Nobécourt (1). « Les états bactériens des fèces » — affirme- t-il — « sont /a conséquence des facteurs précédents (fonction- nement défectueux des intestins, etc.); rien ne permet de les considérer comme le primum movens des troubles digestifs. » « Les microbes ne sont pas les agents nécessaires de toutes les affections gastro-intestinales, même graves (p. 136). » Ce qui est particulièrement étonnant, c’est que ces idées, qui sont en flagrante contradiction avec les principes si féconds de la médecine pastorienne, ont pu être acceptées même par quelques microbiologistes. C’est ainsi que Mazé (2) affirme que « la diarrhée infantile » « n’affecte pas l'allure d’une maladie contagieuse ». La théorie que les microbes ne jouent pas le rôle prépondé- rant dans les diarrhées des nourrissons a pour base le fait bien établi que cette maladie n'épargne même pas les enfants nourris avec du lait parfaitement stérile. Or, depuis longtemps, on est fermement persuadé qu'il n'y a que le lait qui soit capable d'apporter aux nourrissons la source de contagion. Celte idée est cependant erronée, de mème que cette autre, que le choléra (ou gastro-entérite) des nourrissons n’est pas une maladie infectieuse. De même que dans la fièvre typhoïde (que l’on attribua pen- dant longtemps exclusivement à la contamination de l’eau de boisson), un grand rôle est joué par les « porteurs de bacilles », capables d'apporter le virus, de même dans les diarrhées des nour- rissons les enfants peuvent être infectés par d’autres facteurs que Île lait, notamment par les porteurs de germes morbides. (1) Précis de médecine infantile, 2e édition. Paris, 1912, Massor et Cie, édit, (2) Revue scientifique, 23 août 1913, p. 240. 92 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Il y a déjà quatre ans que j'ai apporté dans une communi- calion à l'Académie de Médecine (1) la preuve que la gastro- entérite estivale des nourrissons est une maladie infectieuse, capable de se transmettre aux chimpanzés et aux lapins à la mamelle. J'y ai rapporté l'histoire de trois chimpanzés ayant pris cette maladie à la suite d’ingestion de matières fécales. Deux de ces anthropoïdes (n° Let I) avalèrent un peu de ma- tières fécales d’une fillette atteinte de « gastro-entérite aiguë », d'après le diagnostic du service de la crèche de l'hôpital des Enfants-Malades. Atteinte depuis un mois de diarrhée et de vomissements, cette enfant émettait des matières muqueuses jaune vert, très riches en leucocytes polynucléaires (fig. 1). Chez les deux chimpanzés, auparavant bien portants, la diar- rhée se déclara le lendemain après l'absorption par la bouche des matières fécales et continua pendant un mois chez le pre- mier et dix jours chez le second de ces animaux. Un troisième chimpanzé (n° IT), après avoir avalé un peu de matières fécales du premier chimpanzé atteint de diarrhée infantile (n° 1), fut pris le lendemain de diarrhée liquide qui dura pendant une semaine. Bien que ces trois expériences nous fournissent déjà la preuve de la nature infectieuse de la gastro-entérite des nourrissons, nous crûmes utile de les multiplier dans la suite. Aussi, en août 1910, nous fimes avaler par un jeune chimpanzé (n° IV) un peu de déjections muqueuses vertes d'un garcon de deux mois atteint de gastro-entérite mortelle et, trois jours après, une petite quantité de matières fécales du même enfant, mélan- gées aux déjections diarrhéiques de deux autres nourrissons malades. Le cinquième jour après la première prise, le chim- panzé fut pris de diarrhée liquide qui dura pendant trois Jours. Après nous être assuré de la santé parfaite d’un jeune chim- panzé (n° V) qui émettait des selles moulées, nous lui avons donné à avaler, le 20 août 1913, un peu de matières très vertes et très félides d’un nourrisson âgé de un mois, atteint de diarrhée et de vomissements. Le lendemain, les déjections de l’anthropoïde devinrent plus molles et, à partir du quatrième jour de l'expérience, elles présentèrent le caractère franchement (1) Bullelin de l'Académie de Médecine, 1909, p. 326. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 93 diarrhéique. Au cinquième jour, les matières prirent une teinte verdâtre et accusèrent, après un séjour de vingt-quatre heures, une coloration très verte, caractéristique de la diarrhée verte des nourrissons. La diarrhée du chimpanzé, ayant présenté des rémissions et des exacerbations, a duré pendant deux semaines. Elle avait fini par affecter l'animal au point qu'il refusa de prendre la nourriture et s’affaiblit au plus haut degré. Les derniers Jours de sa vie, il n’émit qu'un peu de mucus rectal et mourut vingt- trois jours après le début de l’expérience. A l’autopsie, prati- quée par le D Salimbeni, on a pu constater des tubereules disséminés, non caséifiés, dans le lobe moyen du poumon droil. Les lésions principales, ayant causé la mort, se trouvaient dans les intestins; la muqueuse de liléon et du gros intestin était congestionnée, et, au niveau du Jéjunum, légèrement œdématiée; les plaques de Peyer étaient nettement hypertrophiées et la muqueuse de la dernière partie du gros intestin et du rectum présentait des érosions assez nombreuses. M. Salimbeni trouva une grande ressemblance entre les lésions du chimpanzé et celles que l’on constate chez les nourrissons morts de gastro- entérile. Dans l'intention d'établir si les anthropoides autres que le chimpanzé sont sensibles à la diarrhée des nourrissons, nous avons donné (en décembre 1911) à avaler à un jeune orang-ou- tang un peu de matières fécales provenant de deux nourrissons atteints de diarrhée à la crèche de l'hôpital Trousseau. De même qu'avant le début de l'expérience, les deux premiers jours qui suivirent, les matières fécales de l'animal étaient dures, mais à partir du quatrième jour s'établit une diarrhée liquide qui amena la mort après quatre jours de maladie. À l’autopsie, les poumons et le cœur ont été trouvés intacts, la rate hypertro- phiée, le foie gras par endroits. Le siège du mal était localisé dans les intestins. L’estomac contenait un peu de mueus; la muqueuse de l'intestin grèle, légèrement hypérémiée, renfer- mait un liquide grisätre ; le cæcum et le côlon étaient remplis du même liquide diarrhéique. Bien que les six expériences que nous venons de relater démontrent la sensibilité des anthropoïdes pour la gastro-entérite des nourrissons, il ne faut pas en conclure que tous ces animaux 9% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sans exception soient susceptibles de prendre la maladie. Ainsi, chez un chimpanzé (n° VI) auquel nous avons administré un peu de matières fécales du même nourrisson qui a servi pour le chimpanzé n° |, une diarrhée passagère ne se déclara que dix jours plus tard. Il est probable que dans cette expérience il ne s'agit pas de gastro-entérite provoquée par l'ingestion des fèces, mais d’une diarrhée due à quelque autre cause. Nous avons observé enfin un chimpanzé chez lequel l'in- gestion de matières fécales diarrhéiques de nourrisson n'a pas provoqué le moindre trouble. _ En somme, sur huit anthropoïdes, six ont manifesté des accidents très nets de diarrhée expérimentale. Etant donné que leur nourriture, composée de bananes et de pain blanc, ne se distinguail'en rien de leur alimentation normale, ce n’est pas dans le régime qu'il faut chercher la cause de la maladie. On ne peut pas non plus incriminer le rôle direct de la chaleur, d'abord parce que les anthropoïdes sont habitués à supporter des chaleurs beaucoup plus grandes que celles de nos climats, et ensuite parce que nous avons obtenu la diarrhée expéri- mentale même pendant la saison froide. Les singes inférieurs, macaques et cynocéphales, se sont montrés réfractaires à la diarrhée des nourrissons. Plusieurs de ces animaux, les plus jeunes que nous ayons pu nous pro- curer, ont supporté l’ingestion des matières diarrhéiques sans aucune conséquence. Mème un petit macaque (M. cynomolqus), né dans notre ménagerie, a accusé une grande insensibilité pour ces matières. Deux semaines après sa naissance (le 22 août 1911), nous lui avons administré un peu de selles d’un garçconnet de six mois atteint de diarrhée mortelle. Le lende- main et le surlendemain, nous lui avons donné encore à avaler un peu de matières provenant de six autres nourrissons atteints de gastro-entérite. Le seul résultat que nous ayons pu obtenir a été la coloration verte des matières fécales molles, mais bien moulées, pendant plusieurs jours, à partir de la sixième journée après la première ingestion. D'assez nombreuses souris, auxquelles nous avons donné à manger des matières fécales diarrhéiques des nourrissons, ne nous ont jamais donné de résultats positifs. Devant l'impossibilité d'employer les singes inférieurs et les ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 95 souris pour l'étude des diarrhées des nourrissons, et en pré- sence des difficuités qu’il y a à se procurer toujours des singes anthropoïdes, encouragé par le succès de nos recherches sur le choléra asiatique, nous nous sommes adressé aux lapins à la mamelle. Dans notre première expérience, six lapins, âgés de cinquante heures environ, avalèrent un peu de déjections diarrhéiques vertes d’un nourrisson de quatre mois, atteint de choléra infantile mortel (en septembre 1909). Cinq jours après, tous les six furent pris de diarrhée liquide à laquelle trois lapins ne tardèrent pas à succomber. Deux autres lapins gué- rirent quelques jours après, tandis que le dernier continua à avoir la diarrhée encore assez longtemps. Dans une seconde expérience, dans laquelle huit lapins âgés de trois jours avalèrent le dépôt centrifugé de matières vert brun d’un nourrisson atteint de diarrhée verte (en octobre 1910), un seul fut pris de choléra typique mortel, tandis que les autres restèrent bien portants. La troisième expérience a été faite avec six lapins âgés de onze jours, qui avalèrent d’abord un peu de selle muqueuse, de couleur vert sale, provenant d'un nourrisson atteint de gastro-entérite mortelle. Trois jours après, je leur administrai par la bouche une petite quantité de matières fécales du même nourrisson, ainsi qu'un peu de aéjections de deux autres nourrissons atteints de diarrhée. (Les mêmes déjections avaient servi pour un de nos chimpanzés, n° IV). Quatre jours après le début de l'expérience, deux lapins furent pris de diarrhée liquide qui dura plusieurs jours. Un de ces lapins mourut trois jours après le début de la maladie, tandis que le second guérit définitivement. Les quatre autres de la même nichée ne manifestèrent aucun trouble. Un peu des matières diarrhéiques du même nourrisson, qui avaient servi aux lapins de l'expérience précédente, a été avalé en une seule prise dans une autre expérience par cinq lapins âgés de trois jours. Un de ces animaux mourut préma- turément le surlendemain. Mais les quatre restants furent pris de diarrhée liquide, à laquelle ils saccombèrent tous dans l’espace de quatre jours. Dans une autre expérience, trois lapins âgés de cinq jours avalèrent un peu de matières verdâtres d’un nourrisson atteint de diarrhée verte. Un de ces lapins contracta une forte diarrhée, 96 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR à laquelle il succomba douze jours après la prise des déjec- tions. Les deux autres lapins demeurèrent bien portants. Mais deux lapins de la même nichée, qui n'avaient pas reçu de matières fécales, manifestèrent une diarrhée mortelle caracté- ristique pour le choléra des nourrissons. 11 faut admettre qu'ils s'étaient infectés en tétant leur mère, dont les mamelles étaient souillées par le contenu infectieux de la bouche des trois pre- miers lapins. Un phénomène analogue a été souvent observé dans le choléra asiatique expérimental des lapins à la mamelle. Une sixième expérience, dans laquelle trois lapins âgés de trois Jours avalèrent un peu de matières diarrhéiques d’un nourrisson, n'amena pas de suites, et les animaux ont continué à se bien porter. Est-ce la saison trop avancée (l'expérience a été faite en octobre 1910) qui à amené cet échec, ou bien une autre cause quelconque, nous n’avons pu l’établir. Mais il est à signaler que, sur six expériences, cinq nous ont donné un résultat positif (1). L'analogie du choléra infantile des petits lapins avec le choléra asiatique expérimental de ces animaux (2) est vraiment remarquable. Pendant la vie, les lapins malades excrètent des matières très liquides qui salissent le train de derrière; les uns s'affaiblissent progressivement jusqu’à la mort, tandis que les autres guérissent au bout de quelques jours. La sensibilité individuelle des petits lapins est semblable dans les deux choléras. On observe des nichées dans lesquelles un certain nombre de ces animaux contractent la maladie mortelle, à côté d’autres qui ne manifestent aucun trouble. Des nichées entières réfractaires vis-à-vis des deux choléras se rencontrent quelque- fois, ainsi que le démontre, entre autres, notre cinquième expé- rience sur le choléra infantile. En général, le choléra infantile des petits lapins est moins grave que le choléra asiatique, car il y a beaucoup plus de cas de guérison dans le premier. L'autopsie des petits lapins morts à la suite des deux cho- léras révèle un tableau identique. Le cœur, les poumons, la (1) Quelques expériences avec le liquide provenant de la filtration des déjections des nourrissons malades ont été faites sur des petits lapins, mais on doit les continuer avant d'en tirer une conclusion définitive. (2) Ces Annales, 1894, p. 557. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 9% rate et le foie ne présentent le plus souvent aucune lésion. L'estomac est presque toujours rempli d’une quantité de lait coagulé, de réaction acide; l'intestin grèle est plus ou moins congeslionné, parfois avec la couleur hortensia typique. Le cæcum, non hyperémié, est rempli de liquide alcalin abondant, transparent ou légèrement trouble, dans lequel nagent de petits grumeaux de couleur jaune ou verdâtre. Le côlon et le rectum contiennent le mème liquide que le cæcum, mais en plus petite quantité. La vessie est vide, à quelques exceptions près. À l'examen macroscopique des lapins morts, il est impossible de distinguer le choléra infantile du choléra asiatique. Dans les conditions que nous venons d'exposer, il ne peut plus y avoir de doute sur la nature infectieuse des diarrhées des nourrissons. Si parfois la nourriture et la température ambiante exercent leur influence sur cette maladie, il en est de même pour le choléra asiatique de l'homme, dont les rapports avec les écarts de régime et la chaleur sont connus de tout le monde, sans que, pour cela, on en nie le caractère purement infectieux. I BACTÉRIOLOGIE DU CHOLÉRA INFANTILE DES NOURRISSONS Un grand nombre de travaux ont été faits sur ce sujet, depuis les premières lentatives d'Escherich et de ses élèves. Éncouragés par les résultats si brillants obtenus par Koch dans le choléra asiatique, les chercheurs espéraient trouver dans les diarrhées des nourrissons quelque microbe spécifique, de même que le vibrion cholérique est spécifique pour le choléra asiatique. Ces espérances furent déçues. Dans le contenu intestinal et dans les matières fécales des nourrissons atteints de choléra infantile. on rencontrait toujours en plus ou moins grande quantité les mêmes bactéries qu'à l'état normal, ce qui amena la supposition que la cause de la maladie résidait dans le renforcement de la virulence des microbes banaux ou bien dans une production toxique exagérée. Nous croyons inutile de citer ici le grand nombre de mémoires publiés sur la question, d'autant plus que le lecteur en trouvera 98 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR un aperçu complet dans le travail de Babr (1) sur l’étiologie du choléra infantile. La plupart des chercheurs se contentaient de préparer des cultures de microbes intestinaux dans quelques-uns des milieux nutritifs et d'indiquer les plus fréquents. Il en est résulté que les uns incriminaient des streptocoques, d’autres le bacille pyocyanique ou les bacilles acido-résistants ( « blaue Bacillose » de Escherich) ; quelquefois (comme Booker (2) en 1897) le bacille Proteus ou le bacille de Welch (perfringens). Mais c’est surtout le colibacille, ce microbe constant de la flore intestinale, que l'on invoquait comme agent du choléra infantile. Tout récemment encore, Bahr et Thomsen (3), à Copenhague, ont soutenu cette thèse, s'appuyant sur leurs recherches nombreuses. Pour Bahr, «les formes du groupe coli-typhique jouent le rôle principal dans la plupart des cas » de choléra des nourrissons (p. 349). Il distingue dans ce groupe plusieurs catégories, définies surtout par le pouvoir de faire fermenter divers sucres. Parmi ces microbes, c’est Le bacille metacoli, capable de n'atta- quer parmi les sucres que le glucose, qui a attiré le plus l’attention de l’auteur. Bien que ses tentatives pour obtenir la diarrhée expérimentale chez les animaux (notamment les souris) ne lui aient pas donné de résultats précis, Bahr s'appuie sur l'analogie du choléra des nourrissons avec la diarrhée des jeunes veaux, dans laquelle Jensen attribue Le rôle prépondérant juste- ment aux bacilles du groupe coli. Dans un autre travail récent, Gildemeister et Baerthlein (4) rapportent le résultat de leurs recherches sur 70 cas de diarrhée estivale des nourrissons à Berlin en 1912. Ils ont été frappés par la fréquence relative de bacilles dysentériques du type Flexner qu'ils ont trouvés dans 9 cas. Beaucoup plus fréquents parmi les microbes isolés par eux étaient cependant : une variété du colibacille (Bacterium coli mutabile), constatée dans 31 p. 100; le Proteus, dans 31 p. 100, et une race de Bacterium suipestifer qu'ils désignent sous le nom de « race de Dahlem ». (4) Centralbl. f. Baktleriologie, Abt. I, Originale. Vol. LXVI, 1912, p. 335. ) ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 99 Dans mes recherches, commencées en l'été 1909, je me suis guidé d’abord sur la supposition que le choléra des nourrissons pourrait bien être une infection due à l'un des bacilles para- typhiques. Etant donné d'un côté que les pédiatres avaient été dissuadés de l’origine infectieuse de cette maladie par le fait qu'elle n’est point empêchée par la stérilisation du lait, et, de l'autre, qu’un grand nombre de sujets sont porteurs de bacilles paratyphiques capables de contaminer les nourrissons indé- pendamment du lait, je me suis demandé si ce microbe ne serait pas la cause du mal. Celte supposition trouvait un appui dans la constatalion faite souvent que les matières fécales des nourrissons atteints de diarrhée se distinguent par la prédominance des bactéries ne prenant pas le Gram. Malgré toute sa vraisemblance, cette hypothèse n'a pas tardé à être renversée par des faits précis. D'abord la résistance des souris, si sensibles aux paratyphiques, à la diarrhée des nourrissons, se trouvait en contradiction avec elle, et puis, surtout, le fait que les microbes poussant en colonies bleues sur les plaques de Conradi-Drigalski étaient rares après l’ensemencement avec des matières diarrhéiques. Dès mes premières recherches, j'ai été frappé par la fréquence du Proteus dans ces matières, ce qui ma amené à penser que ce ne sont pas lés bacilles paratyphiques, mais plutôt les Proteus qui jouent le rôle pré- dominant. Dans le résumé de mes recherches de la première année, Je me suis exprimé de la facon suivante: « Il reste encore à élucider plus d’un point important dans l'étude des diarrhées infantiles. Le Proteus est-il l’agent important dans toutes les épidémies de celte maladie ? Quels sont les microbes qui favorisent l’action pathogène du Proteus » (1)? Dans l'intention de répondre à ces questions, j'ai continué mes recherches pendant les quatre années suivantes (1910-1913), me servant du matériel fourni surtout par la crèche de l'hôpital des Enfants- Malades, en partie par celle de l'hôpital Trousseau, et aussi par l'hôpital Pasteur. J’adresse mes sincères remerciements au personnel de ces établissements. (1) Bulletin de l'Acad. de Méd., 1909, p. 332. 100 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR J'ai pu étudier en tout 218 cas de diarrhées des nourrissons, répartis de la facon suivante : 36-CA8 LP ONE EE enr 41009 BATCAS AE LAN ILE MERE fr Len. 19110 SA CAS Le ec Te CORRE En) 4911 AT CASE a ete US NE RE GT) 14049 20 CASE NES ES TN SP en 11012 En tout : 218 cas. Les matières fécales, recueillies dans les meilleures conditions possibles (sur des couches stérilisées ou lavées à l’eau bouil- lante), étaient examinées le jour même (1). Les frottis des matières étaient uniformément colorés par la méthode de Gram avec coloration supplémentaire par le Ziehl dilué. Les matières étaient ensemencées simultanément dans plusieurs milieux nutritifs, parmi lesquels jJ'employais de préférence les tubes de gélatine, la gélose glucosée inclinée, les grandes boîtes du milieu Conradi-Drigalski, ie lait, le bouillon additionné de morceaux de blanc d'œuf coagulé (milieu d'Achalme). L'iso- lement des colonies se faisait sur des plaques de gélatine. Dans certains cas, les matières furent ensemencées dans des tubes de gélose profonde (méthode Liborius-Veillon) ou dans des milieux spéciaux, tels que les solutions de tryptophane, de tyrosine, etc. À quelques rares exceptions près, les déjections provenaient d'enfants nourris au biberon exelusivement ou bien au biberon et au sein. Le plus souvent les fèces examinées étaient nettement diar- rhéiques, de couleur verte franche ou mélangée de jaune et de brun. Rarement elles étaient plus épaisses, grises ou blan- châtres, de consistance pâteuse. Deux fois seulement elles étaient légèrement sanglantes. Sur 134 cas, la réaction acide a été observée 70 fois (52,5 p. 100), la réaction alcaline 49 fois (36,5 p. 100), la réaction neutre ou amphotère 15 fois (11 p.100). Au microscope, on pouvait constater, ainsi que nous l'avons déjà mentionné, une grande prédominance de bactéries ne prenant pas le Gram, parmi lesquelles les coccobacilles de (1) Plusieurs de ces couches lavées, ainsi que le tale avec lequel on sau- poudre les nourrissons, ont été étudiés par moi au point de vue bactériolo- gique. Jamais je n’y ai trouvé du Prateus. Outre des bacilles à spores, ce sont les staphylocoques qui y prédominaient. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 101 diverses dimensions étaient les plus nombreux (fig. 2). Dans un certain nombre de cas, nous avons observé des amas de tout petits cocci (voisins du Sfaphylococcus parvulus) isolés et étudiés par Wollman. Des spirilles (Spirochæte) très minces n'étaient pas rares. Parmi les bactéries retenant le Gram, le bifidus était Le plus fréquent. Ce n'est que tout à fait exception- nellement qu'il se trouvait en abondance. Le plus souvent il était en quantité réduite et dans un certain nombre de cas il étonnait par son absence complète. Après le bi/idus, ce sont les sarcines prenant le Gram qui étaient les plus fréquentes. A côté d'elles on remarquait des staphylo-, diplo et des streptocoques, présentant souvent l'aspect d'entérocoques. Les bacilles sporulés ne se rencontraient que rarement. Plus fréquents étaient les bacilles sans spores prenant le Gram, parmi lesquels les acido- philes, le bacille de Welch (perfringens) et les mesentericus. Dans 149 cas, notés parmi les microbes résistant au Gram, nous avons compté 51 fois les sarcines, 13 fois Le B#. We/chii, 9 fois les bacilles sporulés (Sporogenes, ete.), 4 fois les bacilles mésen- tériques, 2 fois les acidophiles, 2 fois le Clostridium butyricum, 4 fois les Oïdium et une fois les levures. Les hifidus et les cocci étaient fréquents. Dans la flore négative au Gram, nous avons rencontré 12 fois des spirochètes et des formes vibrioniennes, 9 fois le pyocyanique. Les coccobacilles ne pouvaient être dis- lingués qu'à l’aide de cultures. Sur le milieu Conradi-Drigalski, les colibacilles poussaient dans tous les cas sous forme de colonies rouges isolées ou bien en nappe rose uniforme, entourée de colonies éparses. Moins fréquent était le B. lactis aerogenes avec ses colonies en tête de clou, blanches, avec un fond rouge vif et les cocci avec leurs petites colonies rouges. Les colonies bleues étaient beaucoup moins fréquentes ; le paratyphique B n'a été isolé que dans quatre cas. Le bacille dysentérique n'a été trouvé qu'une seule fois, dans des selles tachées de sang. Dans le second exemple de matières sanglantes, sa présence n'a pas pu être démontrée. Beaucoup plus fréquent sur le même milieu était le Proteus, qui apparaissait sous forme de voile mince de couleur bleu clair; se répandant sur la périphérie, il présentait un aspect rayé très caractéristique. Par contre, les colonies isolées du Proteus étaient rares. Seulement, pour obtenir cette bactérie, 102 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR le milieu Conradi-Drigalski n'est point favorable. Dans ce but, les cultures sur gélose inclinée, sur gélatine par piqûre ou en bouillon avec blanc d'œuf coagulé, sont de beaucoup préférables. En ensemençant (d’après la méthode de Choukevitch) (1) un peu de matières dans la profondeur de tubes de gélose inclinée, on observe le lendemain un développement abondant de Proteus sous forme d'un enduit montant Jusqu'au sommet de la gélose souvent avec des stries parallèles (fig. 3). Cette méthode suffit dans la plus grande majorité des cas pour établir l’existence du Proteus dans les fèces. Mais les exemples ne sont pas très rares où il faut recourir à d’autres procédés. Le meilleur, dans ces Cas, consiste dans l’ensemen- cement par piqûre d’un peu de déjections dans la gélatine. Avec les. déjections des nourrissons, cette dernière se liquéfie toujours peu de temps après, ce qui dépend soit du Proteus, soit d’autres microbes, tels que sarcines, staphylocoques, me- sentericus où moisissures. Il faut donc ensemencer des plaques de gélatine avec la partie liquéfiée de la gélatine du premier tnsemencement en tubes. La même méthode doit être employée pour l'isolement de bacilles du groupe du Proteus qui ne mon- tent pas sur la surface de la gélose (fig. 4). Ces derniers bacilles, sans être fréquents, se rencontrent quelquefois dans la diarrhée des nourrissons (2). En examinant les plaques il faut tenir compte de la très grande variabilité des colonies du Proteus. A côté de colonies classiques, munies de leurs prolongements, il ÿ en à qui ne donnent pas du tout d'appendices et d’autres qui, au début, présentent une grande analogie avec les colonies du colibacille. Ce n’est qu'au moment de la liquéfaction de la géla- tüine que la différenciation peut se faire sans difficulté (fig. 5-7). Voici le relevé des cas dans lesquels j'ai isolé les Proteus : En 1909 sur 36 cas. . .. +: + + «+ 32 avec proteus. En1910/Sur834icas 204000 - + - 32 avec proleus. En 19118S0ni8l cas. CNRS - + 18 avec proteus. En 1912 /eur/%7 cas OR 44 avec proteus. En 1913 sur 20 cas. . 18 avec proteus. LI CAS EC | 204 avec proteus. (1) Ces Annales. 1911, p. 255. (2) Sur 204 cas de Proteus, la variété qui ne monte pas sur la gélose inclinée n'a été rencontrée que cinq fois ou environ 2,5 P. 100. Mi: Rivkind en va faire une description détaillée. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 103 C’est donc dans la presque totalité des cas, soit dans 93,6 p. 100, que le Proteus se rencontre dans les diarrhées des nourrissons. Nous l'avons trouvé dans toutes les épidé- mies estivales de ces cinq dernières années, et nous l'avons isolé dans des cas de gastro-entérite en d'autres saisons. Ainsi, en 1910, nous avons rencontré ce microbe 4 fois sur 5 cas de diarrhée hivernale, 8 fois sur 9 cas de diarrhée printanière, 16 fois sur 16 cas de diarrhée estivale et 4 fois sur 4 cas de diarrhée automnale. En dehors des déjections des nourrissons atteints de choléra infantile, nous avons examiné quatre cadavres provenant de cette maladie. Deux cas ont été fournis par la grande épidémie de 1914 et se rapportent aux cadavres autopsiés à l'hôpital des Enfants-Malades, par le D' Tixier. Un de ces nourrissons, un varçon de treize jours, avait dans ses intestins, grèles et gros, du liquide rempli de coccobacilles Gram-négatifs (fig. 8). Un autre, une fillette de trois mois, présentait à l’autopsie un peu d'épanchement péritonéal jaunâtre et du liquide dans l'intestin grêle. Le côlon renfermait du mucus. Dans l’exsudat péritonéal dominaient des gros coccobacilles Gram négatifs et dans le contenu des intestins des coccobacilles ne prenant pas le Gram, de dimensions moyennes et petites (fig. D AE Les deux autres cadavres provenaient de l'hôpital Pasteur. Le premier, garçon de huit mois, mort de « gastro-entérite aiguë », a présenté à l’autopsie une infiltration tuberculeuse du poumon droit et, en plus, des lésions intestinales typiques. L'intestin grèle et le côlon étaient remplis de liquide dans lequel pullulaient les coccobacilles Gram-négatifs. Le dernier de nos cas se rapporte à un garcon de treize mois et demi. Les seules lésions constatées à l'autopsie concernent l'intestin grêle avec sa muqueuse légèrement œdématiée et les plaques de Peyer un peu tuméfiées. M. Salimbeni, qui à fail cette autopsie, a été frappé par l'analogie de ces lésions avec celles qu'il a récemment trouvées chez le chimpanzé n° V de nos expériences. Au point de vue bactériologique nous devons signaler la pré- sence du Proteus dans Le contenu des intestins grèles et gros de ces quatre cadavres, confirmée par les cultures sur les milieux appropriés. 104 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Il est intéressant à noter que, bien que Bahr (/oc. cit.) ne soit point partisan du rôle du Proteus dans le choléra infantile, il décrit un cas dans lequel le contenu intestinal d’un nour- risson de trois mois mort de diarrhée n'a donné que des colo- nies de ce microbe. De tous les cas de diarrhée des nourrissons que nous avons étudiés, il en est resté quatorze dans lesquels nous n'avons pu isoler aucune race de Proteus. Dans quelques-uns de ces exemples nous avons essayé, sans succès, tous nos procédés, même les plus perfectionnés. Dans plusieurs de ces cas négalifs il s’est agi d'enfants alteints de broncho-pneumonie, de bron- chite et de varicelle, accompagnées pour la plupart de diarrhée verte. Ces exemples suffisent à démontrer que les Proteus ne font pas partie de la flore constante du nourrisson comme le bifidus ou le colibacille. L'étude des microbes intestinaux des nourrissons bien portants confirment cette conclusion. Il n’est pas possible d'accepter l'opinion de Schmidt et Strasburger (1), d'après laquelle « le Bacillus Proteus vulgaris ne se trouve jamais chez les nourrissons normaux », à moins que l’on ne restreigne l'idée qu'on se fait d'un nourrisson normal. Chez des nourrissons bien soignés, au sein, au biberon ou au régime mixte, on ne trouve pas de Proteus en règle géné- rale, bien que leurs matières fécales liquéfient la gélatine d'une facon plus ou moins rapide et abondante. Chez une fillette âgée de quelques semaines, bien portante, les fèces obtenues à plusieurs reprises, normales, de couleur dorée, qui renfermaient peu de hifidus mais beaucoup de Bacillus aci- dophilus, n'ont pas permis l'isolement du Proteus malgré les eforts les plus assidus. La liquéfaction très modérée de la géla- tine avait pour cause la présence d’un Glycobacter proteoly- ticus, décrit par Wollman (2). Chez une fillette nourrie au sein et chez deux autres enfants nourris au sein et au biberon, et élevés avec le plus grand soin, des recherches très prolongées n'aboutirent jamais à l'isolement du Proteus. Un de ces nourrissons présentait de temps en temps des poussées de (1) Die Füces des Menschen, 3 édition. 1910, p. 363. 2) Ces Annales, 1912, p. 610. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 105 diarrhée jaune ou verte, sans que pour cela le Proteus fit son apparition. Le médecin traitant expliquait cette diarrhée par l'extrême nervosité et l'inquiétude de la mère. Chez l’autre nourrisson de cette série, sept selles d'aspect normal, prises dans l’espace de six mois, ne laissèrent jamais apercevoir le vrai Proteus, liquéfiant la gélatine. Quelquefois seulement, après plusieurs jours de développement, on pouvait remarquer quelques prolongements caractéristiques, dus au Proteus Zenkeri, non protéolytique. La liquéfaction abondante de la gélatine chez cet enfant était due au développement de Sarcines et de Staphylocoques. Par contre, chez une fillette nourrie au sein, dans les déjec- tions de couleur dorée, quoique liquides, déjà six semaines après la naissance, J'ai pu observer facilement sur des tubes de gélose inclinée le développement typique du vrai Proteus vulgaris, et cela malgré une grande abondance de bifidus (fig. 10). Cette enfant, prise de temps en temps de poussées diarrhéiques, s’est développée d'une facon normale. Chez un autre enfant qui m'avait élé apporté comme bien portant et qui dès la naissance était nourri au biberon, les matières, tantôt acides, tantot alcalines, toujours fétides, con- tenaient une flore apparemment anormale. Au lieu du bifidus, elles renfermaient du Bacillus sporogenes, des bacilles avec spores du type Rodella II, et surtout beaucoup de cocco- bacilles ne prenant pas le Gram, parmi lesquels du vrai Proteus vulgaris. Gette flore n'a pas empêché l'enfant de se développer, bien qu'il soit pàle et présente une apparence chétive. Sur les six enfants « normaux » que je viens de men- tionner, deux étaient porteurs du Proteus, ce qui correspond à 33,3 p. 100. Bien plus forte était la proportion de nourrissons renfer- mant ce microbe parmi les enfants de la pouponnière de Por- chelontaine, près de Versailles (1). Ces nourrissons au régime mixte (sein et biberon avec du lait cru pendant la saison froide) nous ont fourni des malières fécales pour la grande part fétides et de mauvais aspect : parfois diarrhéiques, souvent (1) Nous adressons nos meilleurs remerciements au Dr Pajon, qui nous a fourni les matériaux de recherches de la pouponnière. 106 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR pâteuses et grisätres, en grande quantité alcalines (20 alcalines contre 13 acides). Eh bien, sur ce nombre de 33 nourrissons, 18, c'est-à-dire 57,5 p.100, étaient porteurs du Proteus vulgaris, proportion beaucoup plus forte que celle que nous avons constatée chez les nourrissons dans leurs familles. D'après l'attestation du médecin de la pouponnière, les enfants se. développaient de façon normale. Beaucoup de leurs matières renfermaient une grande quantité de hifidus avec un nombre restreint de coccobacilles se décolorant par le Gram (fig. 11): mais un assez grand nombre d'enfants avaient une flore rem- plie de ces coccobacilles et anormale sous bien d’autres rap- ports (fig. 12). Il est important d'ajouter qu’à la pouponnière en question les enfants se trouvent réunis par 40 dans la même salle. Malgré la facilité de la contagion dans ces conditions, la quantité de porteurs de Proteus (57,5 pour 100) était beaucoup moins forte que parmi les nourrissons atteints de gastro- entérite (93,6 p. 100). Etant donné que l'agent étiologique de cette maladie doit se trouver parmi les bactéries se décolorant par le Gram et dans l'impossibilité d'attribuer ce rôle aux paratyphiques ni aux dysentériques, c’est surtout les Proteus qui doivent altirer notre attention. Voyons pour cela les résultats de nos recher- ches expérimentales sur le choléra des nourrissons. III BACTÉRIOLOGIE DU CHOLÉRA INFANTILE EXPÉRIMENTAL VIRULENCE DU PROTEUS ADMINISTRÉ PAR LA BOUCHE L'alimentation des animaux ayant pris, dans nos expériences, le choléra des nourrissons, était très diverse. Les anthropoides étaient soumis au régime végétal, composé de bananes et de pain, tandis que les petits lapins ne se nourrissaient que du lait de leurs mères. Il est naturel que, dans ces conditions, leur flore intestinale ait présenté des différences très grandes. Les déjections tout à fait normales du premier de nos chimpanzés (1), prélevées avant l'expérience (fig. 13), accusaient une notable quantité de bacilles, de diplo- et streptocoques, prenant la coloration de Gram. Parmi les bactéries négatives au ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 107 Gram, on remarquait quelques bacilles, un nombre considé- rable de spirilles et de coccobacilles. Avec la diarrhée, l'aspect du contenu intestinal changea dans de fortes proportions. Les déjections devinrent liquides et glaireuses, mélangées de résidus de bananes. Il est remarquable qu'elles renfermaient une très grande quantité de leucocytes, parmi lesquels prédo- minatient les polynucléés, c'est-à-dire qu'elles présentaient Les mêmes particularités que les selles du nourrisson ayant servi pour l'expérience (fig. 14). Quant à la flore, sa modification fondamentale sautait aux yeux. Tandis que les spirilles avaient totalement disparu, les coccobacilles négatifs au Gram avaient augmenté en forte proportion. Les plaques de gélatine ense- mencées avec les déjections normales (fig. 15) et diarrhéiques (fig. 16) de chimpanzé ont révélé que cette augmentation de coccobacilles était due aux bactéries liquéfiantes, qui n'étaient autres que les Proteus. Ce microbe, absent des matières nor- males, s'est trouvé en quantité dans les matières diarrhéiques. Chez un autre chimpanzé (I) ayant pris la diarrhée à la suite de l’ingestion des fèces du premier, la modification de la flore était semblable. Le mème phénomène s’est reproduit chez un troisième chimpanzé (IV) de nos expériences. Absent dans les déjections normales, le Proteus s'est montré abondant dans les matières diarrhéiques. Le dernier de nos chimpanzés (V), qui ait contracté le choléra des nourrissons expérimental, a été étudié avec beaucoup de précision au point de vue de sa flore intestinale. Ses déjections normales (fig. 17) se distinguaient par l'abondance de bacilles prenant le Gram, ainsi que par une masse de spirilles très fins, réfractaires à celte méthode: les coccobacilles Gram-négatifs étaient particulièrement rares. Sur les milieux de culture, ces derniers se révélèrent comme des colibacilles et des lactis aerogenes. Quant aux Proteus, il nous a été impossible de Les trouver, malgré l'emploi de toutes les méthodes à notre dispo- sition. Tout différent était le résultat de l'examen des matières diarrhéiques du même animal. Au microscope ‘fig. 18), celles-ci se présentèrent constituées. surtout de microbes Gram-négatifs. Les spirilles étaient devenus rares et modifiés dans leur apparence, tandis que les coccobacilles occupaient la plus grande partie de la préparation. Sur des milieux de 108 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR cultures, le Proteus vulgaris se développait abondamment. Dans le courant de la maladie, ce microbe poussa toujours en quantité dès que les matières devinrent de nouveaux diar- rhéiques. A l’autopsie, le contenu du Jéjunum, de l’ileum et du cæcum nous à donné des cultures abondantes et absolument caractéristiques du mème Proteus. Chez l'orang-outang qui a servi à nos expériences et qui à contracté la diarrhée mortelle, les modilications de la flore étaient comparables à celle des chimpanzés. Dans les déjections normales prélevées avant l'administration des selles de nour- risson malade, le nombre des coccobacilles Gram-négatifs était restreint, bien inférieur à celui des bactéries prenant le Gram, surtout du bifidus (fig. 19). Les tentatives pour obtenir des cultures du Proteus n'amenèrent que tardivement un très faible développement de cemicrobe. Pendant la diarrhée et à l'autopsie, par contre, le Proteus vulgaris poussait rapidement jusqu'au sommet de la gélose inclinée. Sur des frottis du contenu de l'intestin grèle (fig. 20) et du cæcum,les coccobacilles Gram négatifs élaient prépondérants. ]lestintéressant de comparer les cultures en gélatine du Proteus chétif isolé des matières normales avec celui qui s'est développé à partir des selles diarrhéiques du mème erang-outang (photogr., fig. 21). Chez les petits lapins qui ont pris le choléra infantile à la suite de l'ingestion de matières diarrhéiques des nourrissons, les intestins renfermaient des masses de coccobacilles négatifs au Gram (fig. 22) qui se révélèrent en culture comme de vrais Proteus. én présence de tous ces faits confirmant le rôle important du Proteus, rôle qui s'imposait déjà à la suite des recherches sur la flore des nourrissons, il a été très important d'étudier l'influence des cultures pures de ce microbe d’abord sur Îles anthropoiïdes. | On savait déjà que le Proteus est pathogène après ingeslion. Schumburg (4) a obtenu une infection mortelle des souris et des rats à l’aide de cultures du Proteussur viande. Dieudonné (2) a tué des souris avec des’cultures pures du même microbe sur (1) Zeitschrift f. Hygiene, 1902, vol. XLI, p. 154. (2) Deutsche militürärztliche Zeitschrift, 1904, p. 18# et Würzbhurger Abhand- lungen, 1908, p. 59. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 109 des tranches de pomme de terre. Par contre, ses rats, cobayes et lapins se sont montrés réfractaires. Dans ses études très intéressantes sur la diarrhée des jeunes veaux, Jensen (1) a rencontré dans un certain nombre de cas du Proteus qui provoqua la maladie de ces animaux par intro- duction des cultures pures.dans la bouche. Un de nos jeunes chimpanzés, bien portant et déposant des déjections normales, a reçu à deux reprises, par la bouche. plusieurs échantillons de cullures du Proteus, isolées d'enfants atteints de diarrhée et de chimpanzé ayant contracté la gastro- entérite expérimentale des nourrissons. Quatre jours après la première absorption de microbes, l'animal, sans présenter de diarrhée, a été subitement pris de coma et est entré en agonie avec une température rectale de 35 degrés. À l’autopsie, prati- quée par le D’ Salimbeni, le cœur et Les poumons se sont mon- trés normaux. L’estomac renfermait un liquide jaunàâtre dans lequel nageaient des grumeaux de mucus. L'intestin grèle a pré- senté une forte congestion de couleur rappelant celle d'horten- sia. Quelques plaques de Peyer, pâles, étaient entourées d’un halo rose. L'intestin grêle renfermait un liquide jaunâtre muqueux avec des grumeaux. Le cæcum était légèrement hyperémié, avec un contenu semi-liquide couleur ocre jaune. Tout le côlon était rempli de matières de même couleur, de consistance molle. Le rectum contenait des matières dures. D’après M. Salimbeni le tableau rappelait celui du choléra asiatique sec de l'homme. Toutes les parties du tube digestif renfermaient des quantités de bacilles Proteus. Un second chimpanzé jeune, auquel nous avons donné à plusieurs reprises à absorber de la gélatine liquéfiée ense- mencée avec des déjections de nourrissons atteints de gastro- entérite, présenta de la constipation et ne mourut que douze jours après le début de l'expérience. A l’autopsie, il présenta des lésions tuberculeuses du poumon gauche et plusieurs gros Ascaris. Le résultat de cette expérience reste donc douteux, mais celui de la première indique bien le rôle pathogène du Proteus. (1) Kolie und Wassermann. Handbuch d. pathog. Mikroorganismen, 2e édition. 1913, vol. VI, p. 138. 110 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Étant donnée la sensibilité des lapins à la mamelle au choléra des nourrissons, nous avons continué nos expériences sur ces animaux, beaucoup plus faciles à se procurer que les anthro- poïdes. Six nichées de lapins, âgés de deux et trois jours, ont reçu dans la boxche le produit de la centrifugation de cultures du Proteus vu/qaris dans du bouillon peptoné, additionné de morceaux de blanc d'œuf coagulé. Deux lapins d'une nichée ont supporté l'épreuve sans conséquences, tandis que les cinq autres ont présenté des phénomènes d'infection mortelle. Dans trois nichées, tous les lapins (7, 3 et 6) sont morts deux à trois Jours après avoir absorbé du Proteus, tandis que dans deux autres, une partie seulement des petits lapins ont contracté la maladie mortelle (6 morts sur 20 lapins). En somme, sur 37 petits lapins, 22 sont morts infectés par le Proteus. À l'autopsie, presque tous accusèrent une hyperémie de l'intestin grêle, sans présenter les autres signes du choléra expérimental. L'estomac était vide de lait, au lieu duquel il ne renfermait que du mucus. Le cæcum n'était distendu que dans des cas rares. Un lapin seulement donna des signes de diarrhée. Bien que ces expériences constatent le pouvoir infectieux des cullures pures du Proteus, elles montrent d’un autre côté que la maladie causée par ce microbe n’est pas pareille à celle que l’on donne aux lapins à la mamelle avec des déjections de nourrissons, pris decholérainfantile. Ce fait nousa fait supposer que, dans ce dernier cas, l'action pathogène du Proteus était secondée par celle de quelque autre microbe. Une de nos expériences nous avait fourni une indication dans ce sens. Parmi nos petits lapins infectés par des cultures pures du Proteus, il s'en est trouvé un qui présenta à l’autopsie une analogie frappante avec le choléra expérimental : l'estomac était rempli d’une quantité de lait coagulé très acide ; l'intestin grêle très hyperémié par endroit était rempli de mucosité liquide, en partie sanguinolente ; le cæcum était très distendu par un liquide clair renfermant des grumeaux jaunes ; la vessie était vide : bref, le tableau typique du choléra asiatique et du choléra des nourrissons chez les petits lapins. Eh bien, sur des préparations et sur des cultures, à côté d’une quantité de Proteus, on pouvait apercevoir un grand nombre de bacilles de Welch (perfringens). ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 111 Guidé par ce résultat, nous avons administré par la bouche, à deux nichées de petits lapins âgés de deux et quatre jours, des cultures du Proteus mélangées à celles du Bacillus Welchii. Les douze lapins de ces deux expériences sont tous morts d'infection. Tandis que les animaux dans une nichée présentaient les signes typiques du choléra expérimental (diarrhée, hyperémie de l'intestin grèle, cæcum distendu par le liquide diarrhéique), ceux de l’autre étaient moins caractéristiques sous ce rapport: mais, chez eux aussi, l’autopsie révéla une analogie beaucoup plus grande avec le choléra que chez les lapins morts à la suite de l’ingestlion de Proteus seul. Un résultat semblable nous a été donné par une expérience avec deux lapins à la mamelle auxquels nous avons adminis- tré par la bouche des cultures de Proteus, de B. Welchu et de colibacilles. Tous les deux sont morts, mais un seul parmi eux accusa les caractères très prononcés du choléra. Dans une autre expérience, dans laquelle neuflapins âgés de cinq jours avalè- rent des cultures du Proteus, de B. Welchri et d’une sarcine jaune isolée d’un nourrisson malade, trois moururent dans l’espace de trois jours. Deux surtout présentèrent des signes des plus typiques du choléra avec diarrhée, congestion de l'in- teslin grêle et aspect du cæcum rempli de liquide diarrhéique. Sans entrer dans plus de détails sur ces expériences, nous pouvons formuler la conclusion que le Proteus seul, capable d'amener l'infection mortelle chez les lapins à la mamelle, provoque une infection typique du choléra lorsqu'il est associé à d'autres microbes, notamment au bacille de Welck. Or, ainsi que nous l’avons mentionné dans le second chapitre, ce microbe se rencontre quelquefois (13 fois sur 149 de nos cas) dans ‘le choléra infantile, mais il est loin d'accompagner toujours ce dernier. Les sarcines se rencontrant beaucoup plus souvent dans cette maladie (51 fois sur 149 cas), nous pensons qu'elles peuvent exercer une action favorable sur l’in- fection protéique, et cela d'autant plus que nous avons constaté leur rôle dans le choléra asiatique des petits lapins (1). Cepen- (1) Ces Annales, 189%, p. 359. Dans un-aperçu de ce travail rapporté d'une façon inexacte par Kolle et Schürmann (Kolle und Wassermann, Handbuch d. palthogenen Mikrooganismen, 2° éd., t. IV, 1913, p, 39), ces auteurs supposent que j'ai abandonné mon opinion sur le rôle des microbes favorisants dans le 112 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dant, dans une expérience où ces animaux avalèrent un mé- lange de Proteus et de sarcines, le résultat a été nul. Il en a été de même dans une autre expérience où plusieurs lapins à la mamelle reçurent par la bouche un mélange de Proteus, de sarcines, de colibacilles et de /actis aerogenes, provenant de nourrissons atteints de gastro-entérite. Le meilleur résultat dans nos recherches a été obtenu par l'association du Proteus avec le bacille de Welch. Ce dernier, administré seul aux petits lapins, s'est montré inefficace. Et pourtant cette combinaison n’est évidemment pas la seule capable de favoriser le Proteus. Sous ce rapport, je dois citer les très intéressantes recherches d’Alb. Berthelot (1), chimiste de notre service, sur l'association des Proteus vulgaris avec un bacille du groupe du /actis aerogenes, B. aminophilus, isolé par lui en collaboration avec D. Bertrand, dans quelques cas de troubles intestinaux chez l’homme adulte. Il a démontré que ces deux microbes, administrés séparément par la bouche à des rats jeunes et adultes, ne leur causaient pas de troubles, par contre provoquaient une entérite grave et souvent mor- telle lorsque les rats les avalaient tous les deux à la fois. Si c'est le Proteus qui est l'agent du choléra infantile, com- ment peut-on expliquer le fait que, dans un grand nombre de cas, parmi lesquels il faut compter ceux des dernières épidé- mies étudiées par Bahr, Gildemeister et Baerthlein, il n’a pu être constaté ? Étant donné que, pendant cinq ans, ce microbe a été trouvé dans l'immense majorité des cas parisiens, il est bien improbable qu'il fût réellement absent dans les épidémies antérieures, étudiées par des bactériologistes de la plus grande valeur. 11 faut plutôt admettre que leurs résultats négatifs dépendaient de leurs méthodes de recherches. Les tubes de gélose par le procédé de Veillon sont très utiles pour l'étude des anaérobies, surtout du bifidus, mais ils sont tout à fait choléra asiatique. Cette supposition sans base est absolument contraire à la vérité, car je reste persuadé du rôle des plus importants des microbes empêchant et favorisant le vibrion de Koch. Mes expériences sur le choléra des nourrissons fournissent une nouvelle preuve de l'importance des microbes favorisants dans les maladies du tube digestif. Me Horowitz (Centralh. f. Bakteriologie, 1911, t. LVIIT, p. 19) a confirmé par des recherches très intéressantes le rôle favorisant des sarcines dans le choléra asiatique. (1) Recherches sur quelques caractères du Proteus vulgaris. Thèse pour le doctorat en médecine. Laval, 1913, p. 69. Ces Annales, 1914, p.132, ci-dessous ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 113 insuffisants pour l'isolement du Proteus. C'est évidemment pour cela que Tissier (1), qui se servait surtout de celte méthode, ne rencontrait pas le Proteus. La même remarque s'applique à Nobécourt, dont la méthode était applicable sur- tout à la recherche des colibacilles; ainsi qu'à Bahr, Gilde- meister et Baerthlein et à tant d’autres bactériologistes. Leurs milieux de culture (gélose lactosée au tournesol, plaques de Conradi-Drigalski etc.), excellents pour l'isolement des coli- bacilles et des paratyphiques, ne peuvent servir que rarement pour l'étude des Proteus. Que de fois ces milieux se présen- taient dans mes études exempts de ce microbe qui, cependant, poussait très bien en tubes de gélose inclinée ou en gélatine ! Lorsque D. M. Bertrand (2), de notre service, alla à Londres, muni de bonnes méthodes, pour étudier le choléra des nourrissons, il constata le Proteus vulgaris dans tous les 55 cas de cette maladie, tandis qu'il n’en trouva que deux fois chez 24 nourrissons bien portants, ayant servi de témoins. De mème M'° Tsiklinsky, qui s'est chargée d'étudier le choléra infantile à Moscou, constala la présence du Proteus dans 65 p. 100 des cas de cette maladie. Puisque, à Londres, à Paris et à Moscou, c'est ke Proteus qui se rencontre abondamment dans les diarrhées infantiles, il faut croire qu'avec de bonnes méthodes on le retrouvera aussi dans les pays intermédiaires tels que le Danemark et l'Alle- magne. Malgré l'emploi de milieux insuffisants, Gildemeister et Baerthlein ont rencontré le Proteus chez 31 p. 100 de leurs enfants malades à Berlin. L'application des méthodes plus appropriées relèvera considérablement ce chiffre, d'autant plus que Baginsky (3) a trouvé chez presque tous les nourrissons atteints de diarrhée, dans son service, à Berlin, un bacille liqué- fiant la gélatine qui n’était autre que le Proteus. De l’ensemble des faits que nous avons réunis dans ce mémoire, il résulte que le principal microbe dans les diarrhées des nourrissons est le Proteus. Sa présence quasi constante dans (1) Recherches sur la flore intestinale des nourrissons. Paris, 1900, et ces Annales, 1908, p. 189. La même remarque s'applique au travail de Sittler, dans le Centralb. f. Bacteriologie., T, section, Originale, 1908, t. XLVIT, p.1#et 145. (2) V. cette même livraison de ces Annales, p. 121, ci-dessous. (3) Deutsche med. Wochenschr., 1888, n° 20. 114 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR nos cas de celte maladie, ainsi que son rôle pathogène lorsqu'il est administré par la voie buccale, soit seul, soit associé à d'autres nacrobes, démontrent son importance prépondérante. IV ANALOGIE ENTRE LE CHOLÉRA DES NOURRISSONS ET LE CHOLÉRA ASIATIQUE MESURES PROPHYLACTIQUES, BASÉES SUR LA BACTÉRIOLOGIE DU CHOLÉRA INFANTILE Dans le cours de ces études, nous avons à plusieurs reprises insisté sur la grande analogie du choléra des nourrissons avec le choléra asiatique. Dans les deux cas, il s'agit d’un microbe principal (vibrion de Koch et Proteus), favorisé par des bacté- ries secondaires associées. Les deux maladies sont incontesta- blement contagieuses et capables de provoquer l'infection des lapins à la mamelle. Il est vrai que l’on n'a pas encore repro- duit le choléra asiatique chez les anthropoïdes, mais il faut bien dire que les tentatives dans cette voie n'ont pas été suffisantes. Nous avons vainement essayé de provoquer le choléra chez deux jeunes chimpanzés auxquels nous avons administré par la bouche des cultures pures de vibrions de Koch. Par contre, on n’a jamais essayé de produire le choléra asiatique en donnant à avaler aux anthropoïdes des matières fécales de cholériques. Dans le choléra infantile, la sensibilité des anthro- poides a été suffisamment démontrée par nos expériences. En revanche, on n’a pas expérimenté la virulence des Proteus sur l’homme pour lequel cependant ce microbe n’est point moffensif. On a enregistré plusieurs cas d’ « intoxications alimentaires » dans lesquels les aliments incriminés (sau- cisson, salade de pomme de terre, etc.) étaient remplis de Proteus (1). On connaît des exemples de choléra nostras dans lesquels l'examen bactériologique a démontré la présence du (1) Ces cas ont été résumés par Dieudonné dans Wärzhurger Abhandlungen (loc. cit.). ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE ls même microbe en grande quantité. Emmerich (1) attribue mème le choléra nostras, en général, à l'infection par le Proteus. L'expérimentation avec ce microbe chez les enfants est natu- rellement impossible, car personne ne se risquera jamais à leur administrer du Proteus noloirement pathogène. Cette lacune, impossible à combler, ne peut être atténuée que par la comparaison avec le choléra asiatique, au sujet duquel un erand nombre d'expériences ont été effectuées sur l'homme. Grâce à ces expériences, le choléra morbus est devenu un des chapitres les mieux connus de toute la médecine. Elles ont démontré d’une facon définitive que l'absorption par la bouche des cultures pures du vibrion de Koch est capable de provo- quer dans certains cas le vrai choléra chez l'homme, tandis que dans la majorité des autres cas la pénétration des vibrions dans les voies digestives reste sans effet ou ne produit que des troubles sans gravité. Ces expériences expliquent pourquoi des sujets bien portants ou atteints seulement de dérangement du corps insignifiant, peuvent renfermer dans leurs intestins des quantütés de vibrions cholériques. Ces résultats fondamentaux, bien établis pour le choléra asiatique, sont capables de projeter de la lumière sur le cho- léra infantile. Quoi d'étonnant qu'un certain nombre de nour- rissons bien portants ou à peine malades renferment dans leurs déjections des Proteus, lorsque sur seize sujets ayant absorbé des vibrions cholériques, quatorze n'ont présenté que des troubles tout à fait légers ou même aucun trouble du tout (2)? De même qu’à côté des sujets cholériques on observe des porteurs de vibrions de Koch, de mème, à côté des nourrissons malades on rencontre des porteurs de Proteus. L'influence de ja flore intestinale sur l’action pathogène du vibion cholérique et du Proteus étant certaine, on conçoit facilement la présence de ces deux microbes dans les intestins sans que pour cela les porteurs manifestent le mal. Il est vrai que les porteurs sains des vibrions cholériques sont beaucoup plus rares que les porteurs du Proteus ; mais il ne faut pas perdre de vue que le choléra asiatique, en Europe, est une maladie importée qui ne (1) The Journal of Stale Medicine, Londres, octobre 1913. (2) Ces Annales, 1893 et 1894. 116 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dure que relativement peu de temps, tandis que le choléra infantile est une maladie endémique, persistante. À ce point de vue, il serait intéressant d'étudier la fréquence des porteurs du vibrion dans les pays où le choléra asiatique est endémique au même titre que le choléra infantile et le choléra nostras en Europe. Après avoir démontré le rôle du vibrion cholérique et du bacille typhique, ainsi que leur présence dans l’eau, on a admis que l'infection dans ces maladies ne pouvait se produire que par l'intermédiaire de l’eau de boisson. Lorsqu'on eut démontré plus tard qu'à côté de cette source d'infection les porteurs de vibrions et de bacilles en constituent une autre, très importante, on s’est trouvé à même d'expliquer un &rand nombre de cas d'infection dans lesquels l’eau ne pouvait être incriminée. En pédiatrie, à l'époque où l’on comptait encore avec les microbes comme cause des diarrhées des nourrissons, on attri- buait tout le mal au lait. Le fait que les enfants nourris au lait bien stérilisé ne sont pas exempts de diarrhée a détourné les praticiens des microbes et leur a fait croire que ce sont les produits des échanges nutritifs ou bien la chaleur excessive qui constituent la vraie cause du mal. La constatation définitive du caractère infectieux du choléra infantile permet facilement de concilier certaines contradictions apparentes. Le virus pro- téique peut être transmis aux nourrissons par l'intermédiaire des porteurs humains ou par les mouches. Sans être l'hôte constant de la flore intestinale humaine, le Proteus S'Y ren- contre assez fréquemment. Cantu (1), dans un travail exécuté dans notre service, l’a trouvé dans 30 p.100 de selles humaines normales et dans 40 p. 100 de selles diarrhéiques. Souvent ce microbe se trouve dans les intestins du cheval (2), des bovidés et du mouton (3). Cantu l’a rencontré dans 80 p. 100 d'échan- tillons de crottin de cheval et dans 44 p. 100 de prises de terre de jardin. Voilà donc plusieurs sources abondantes du Proteus. Les mouches qui fréquentent loutes sortes d’excréments dans la (1) Ces Annales, 1911, p. 255. (2) Ibid., 1911, p. 255. (3) Tbid., 1913, p. 250, 259. ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 117 rue, dans les cours et les latrines, transportent facilemeutavec leurs pattes des Proteus de ces différents endroits sur les ali- ments. Nous avons isolé le Proteus de pain saupoudré de sucre et de raisin très mür, qui, tous Îles deux, étaient couverts de mouches friandes. Les fromages, surtout les fromages à pate molle, contiennent à leur surface du Proteus en abondance. Par contre, le lait du commerce, malgré l'affirmation de Mazé qu'il «renferme presque toujours » du Proteus (loc. cit., p. 240) n’en contient que rarement. Nous ne l'avons rencontré que dans 40 p. 100 de cas, tandis que Cantu ne l’a trouvé que T fois sur 200 échantillons provenant des diverses crémeries de Paris. En dehors du lait, le Proteus, si répandu dans l'entourage de l’homme, trouve facilement moyen de pénétrer dans la bouche du nourrisson. Ce sont les mouches, et surtout les per- sonnes qui donnent leurs soins aux enfants, qui véhiculent le microbe malfaisant. Lorsque Ritschel (/oc. cit.), dans sa plai- doirie en faveur du rôle direct de la chaleur, s'étonne que l’on puisse penser aux porteurs de virus et insiste sur l'identité des conditions dans lesquelles se trouve le personnel qui entoure les enfants pendant la saison froide et la saison chaude, il oublie qu'en été l'occasion de transmettre des microbes patho- sènes est beaucoup plus fréquente qu'en hiver. Les aliments consommés par ce personnel sont beaucoup plus souillés par les mouches pendant la chaleur. Aussi a-t-on souvent observé la corrélation entre la période de Ja diarrhée des nourrissons et la pullulation des mouches. Les faits établis dans ce mémoire doivent servir de base à la prophylaxie du choléra infantile. Il serait très important, dans ce but, de tenir les rues, les cours et les latrines aussi propres que possible par l'enlèvement du crottin de cheval et des fumiers de toute sorte, et de détruire les mouches par tous les moyens disponibles. Il est vrai qu'il n’est pas facile d'arriver à la propreté idéale, mais déjà la propreté relative, que l’on peut obtenir sans beaucoup de difficulté, doit agir d’une facon efli- eace contre la propagation des diarrhées des nourrissons. Il ne faut pas perdre de vue que, dans la contamination par le Proteus, le nombre de germes Joue un rôle important. Ainsi, dans les expériences de Berthelot et les nôtres sur la virulence 118 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de ce microbe, avons-nous dû en employer souvent de grandes quantités. Même l'association si meurtrière pour les rats du Proteus avec l'aminophilus n'était efficace que lorsqu'on admi- nistrait des doses répétées et abondantes. Tout ce qui peut diminuer la quantité de virus infectieux doit donc être appliqué avec persévérance. Etant donné que les mesures d'hygiène, dirigées jusqu'à présent Contre le lait et les biberons ont amené déjà une notable diminution de la mortalité infantile, il faut espérer que les précautions contre la saleté des rues, des cours et des maisons donneront des résultats encore meilleurs. V CONCLUSIONS [ — La diarrhée des nourrissons, dont la plus grande partie peut être désignée sous le nom de « choléra des nour- rissons », est une maladie infectieuse au même litre que le choléra asiatique, les fièvres typhoïdes et paralyphoïdes, la dysenterie, etc. Le choléra infantile expérimental des animaux en fournit la preuve définitive. Il — Le choléra infantile présente une très grande analogie avec le choléra asiatique. Ces deux maladies, d'origine micro- bienne, dépendent beaucoup des conditions externes et internes, telles que la forte chaleur de l'atmosphère, les écarts de régime et les troubles de la digestion. UE. — De même que le choléra asiatique, le choléra des nourrissons présente les formes cliniques les plus variées, commençant par des troubles intestinaux des plus insignifiants et finissant par une maladie meurtrière à bref délai. Il est de toute évidence que, de même que pendant une épidémie de choléra asiatique d’autres diarrhées infectieuses, telles que la fièvre typhoïde, la dysenterie, etc., peuvent coexister en même temps, de mème, à côté du choléra infantile, certains nourrissons peuvent être pris de diarrhée d’une autre origine. IV. — Le choléra infantile expérimental des lapins à la mamelle accuse la plus grande ressemblance avec le choléra asiatique expérimental des mêmes animaux. A l'autopsie, Les ÉTUDES SUR LA FLORE INTESTINALE 119 deux maladies ne peuvent être distinguées que par lPexamen bactériologique. V.— De même que, dans le choléra asiatique, l'agent étio- logique est représenté par le vibrion de Koch, de même, dans le choléra infantile, c’est le Proteus avec ses diverses variétés qui est le facteur primaire. Dans les deux choléras, l’action de ces bactéries subit l'influence de la flore du tube digestif. Aussi les cas sont nombreux où l'organisme humain résiste, malgré la présence dans les intestins du vibrion cholérique ou du Proteus, ce qui fait qu'il existe beaucoup de porteurs de germes des deux choléras. VI. — Le mécanisme intime de l’action pathogène du Proteus et des microbes qui le favorisent reste encore à étudier. Si, dans l’avenir, on réussissait à démoutrer la participation de quelque microbe filtrant dans le choléra des nourrissons, il n’en resterait pas moins vrai que cette maladie est une maladie infectieuse dans laquelle le Proteus joue un rôle des plus importants. Les mesures prophylactiques que l’on peut recom- mander dès à présent conserveraient toute leur valeur. NIE Sans attendre le moment où l’on trouvera quelque remède direct contre le choléra infantile (vaccin, sérum curatif ou quelque médicament chimique), toutes les mesures contre la pullulation du Proteus (propreté des rues, des cours, des latrines, des personnes qui soignent les nourrissons) doivent ètre mises en vigueur sans retard. VIII — Le choléra infantile des nourrissons présente un type des moins compliqués de maladie intestinale d’origine microbienne. Son étude doit servir d'introduction à la recherche des maladies du tube digestif des enfants âgés et des adultes, maladies dans lesquelles l'action microbienne est beaucoup plus complexe et partant plus difficile à élucider. EXPLICATION DES FIGURES F16. 1. — Frottis de déjections d'un nourrisson atteint depuis un mois de diarrhée et vomissements. — $S, Sarcines; w, Bacillus Welchii; b, bifidus. Fi. 2. — Frottis de matières fécales d'un nourrisson de cinq mois, depuis trois jours malade de diarrhée et de vomissements. — $, Sarcines: w, B. Welchii; b, bifidus. FiG. 3. — Culture du Proleus montant sur la gélose. 120 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Fic. 4. — Culture d'une race de Proteus qui ne monte pas sur gélose. Les deux cultures sont âgées de vingt-quatre heures. Fic. 5. — Colonies du Proteus sur une plaque de gélatine à 10 p.100, avant la liquéfaction. Fic. 6. — Quatre autres colonies de Proteus, isolées d'un nourrisson atteint d' « entérite catarrhale ». Fi6. 7. — Colonie sur gélose plus âgée, isolée du même nourrisson. — g, gélatine liquéfiée. Fi6. 8. — Frottis du contenu liquide de l'iléum d'un nourrisson de treize jours mort de cholera infantile. — {. a. Bact. laclis aerogenes. FiG. 9. — Frottis du contenu liquide de l'iléum d'un nourrisson àgé de trois mois, mort de choléra infantile. — /. a, Bact. laclis aerogenes. F16. 10. — Frottis de déjections liquides, de couleur jaune d’or, d'une fillette âgée de six semaines. Ces matières ont donné en culture du Proteus. — S, Sarcines; b, bifidus. H16. 11. — Frottis de déjections d'un nourrisson de la pouponnière de Porchefontaine, âgé de deux mois, nourri au sein et au lait cru, et ne renfer- mant pas de Proteus. F16. 12. — Frottis de déjections très fétides et très alcalines d’un nour- risson ayant eu la fièvre (39 degrés) sept jours auparavant. Nourri au lait bouilli à la pouponnière de Porchefontaine. Abondance de Proteus dans les matières. F16. 13. — Frottis de matières fécales normales d'un jeune CRE avant l’expérience. Pas de Proteus dans les déjections. FiG. 14. — Frottis de déjections diarrhéiques du même chimpanzé I, remarquables par l'abondance des leucocytes et de Proteus. F16. 15. — Photographie d'une plaque de gélatine ensemencée avec des déjections normales du chimpanzé I. F16. 16. — Photographie d’une plaque de gélatine ensemencée avec des déjections diarrhéiques riches en Proteus du même chimpanzé. F16.17. — Frottis de déjections normales du chimpanzé V avant le début de l'expérience. Pas de Proteus. F1c. 18. — Frottis des déjections diarrhéiques du même chimpanzé V, avec abondance de Proteus. Fi6. 19. — Frottis de déjections normales d'un jeune orang-outang avant je début de l'expérience, — b. bifidus. FiG. 20. — Frottis du contenu de l'intestin grêle du même animal. Prédo- minance des coccobacilles négatifs au Gram. Fi6. 21. — Photographie d’une culture en gélatine du Proteus isolé des selles normales du même orang-outang. Fic. 22. — Photographie d'une culture en gélatine du Proteus isolé des déjections diarrhéiques du même animal. Les cultures des fig. 21 et 22 ont été ensemencées en même temps. Fia. 23. — Frottis du contenu du cæcum d’un lapin à la mamelle mort de choléra infantile expérimental. RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE DANS LA DIARRHÉE DES NOURRISSONS par D.-M. BERTRAND. (Laboratoire du Professeur Metchnikoff.) Pendant une partie de l'été 1912, j'ai eu l’occasion de faire à Londres quelques recherches sur la flore intestinale dans la diarrhée des nourrissons. Cette affection, si fréquente et si meurtrière chez les très jeunes enfants, présente, en général, au cours de l'été, un véri- table caractère épidémique. En effet, il est manifeste que l'influence de la chaleur joue un rôle important sur cette maladie, qui sévit plus souvent et avec une gravité plus grande pendant les mois chauds. Cependant, il n'en existe pas moins des formes généralement plus bénignes, mais ayant, d’une facon atténuée, les mêmes symplômes pendant presque toute l’année, même en hiver. D'ailleurs, au cours de l’été 1912, les cas furent relative- ment rares à Londres, sauf à la fin de juillet; le mois d'août, humide et froid, ne présenta qu'un nombre assez faible de malades et presque tous atteints d’une affection plutôt bé- nigne. De nombreuses recherches ont été entreprises depuis long- temps pour essayer d'éclairer l'étiologie de cette maladie. Les divers auteurs qui ont fait des études sur ce sujet n'ont pu jusqu'ici se mettre d'accord sur l'agent infectieux qui pouvait en être la cause. Les premières recherches faites autrefois, à une époque où la flore intestinale était à peine connue, n’ont guère permis de trouver autre chose que le Bacillus col. Cependant Booker (1), en Amérique, étudia cette affection el, dans les cas les plus graves, à côté du colibacille, il isola cons- tamment le Bacillus Proteus vulgaris, qu'il ne put obtenir dans 9 122 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR les autres cas. Depuis cette époque, de nombreux bactério- logistes américains (2) ont continué ces recherches, et dans toutes les épidémies ils ont trouvé de façon pour ainsi dire unanime le bacille dysentérique du type Flexner. Il semble bien qu'en Amérique, tout au moins si l’on s’en rapporte aux recherches bactériologiques, il existe une forme de choléra infantile très différente de ce que nous avons en Europe, car dans les diverses parties du vieux continent où l'on a étudié cette maladie au point de vue bactériologique, le bacille dysentérique a été si exceptionnellement trouvé que personne n'a Jusqu'ici été tenté d'en faire l'agent causal de l'infection. Par contre, de très nombreuses bactéries ont été isolées et chacun a voulu en voir l'agent spécifique. Baginsky a pensé que l'infection était due au Bacillus pyocyaneus, que Poels (3) croit être la cause de la diarrhée des veaux. Certains ont cru que les paratyphiques ou le Bacillus enteritidis devaient être incriminés. Morgan (4), puis Morgan et Ledingham (5) ont constamment isolé un Bacillus metacolh I, qui ne fait pas fermenter le lactose, qui est toxique, et, de plus, serait capable de reproduire la maladie par ingestion chez le rat et le chat. Enfin, Metchnikoff (6) montra la présence presque constante du Bacillus Proteus vulgaris (Hauser) dans cette affection. Certains auteurs, comme Nobécourt (7), pensent, au contraire, que l'affection est liée primitivement à une lésion ou à un mau- vais fonctionnement du tube digestif de l'enfant par insuffisance glandulaire, et que l’action de ces différents microbes ne vient que se surajouter à cette cause véritable. Ces espèces bactériennes peuvent alors, mais secondairement, jouer un rôle important dans les différents phénomènes de la maladie, soit au moyen des putréfactions qu’elles donnent au niveau du tube digestif déjà malade, soit par leurs produits sécrétés, soit enfin par leur pénétration dans le système vasculaire, bien que ce cas semble être très rare. Les cas que j'ai pu examiner furent au nombre de cinquante- cinq; ils provenaient du Queen's Hospital, de Saint-Bartho- lomew’s Hospital et quelques-uns de Great Ormond street Hospital. À cause des conditions climatériques vraiment mau- FLORE INTESTINALE DANS LA DIARRHÉE DES NOURRISSONS 123 vaises cet été pour l’étude de la diarrhée des nourrissons, les cas que j'ai pu observer, sauf ceux de la fin du mois de juillet qui eut une température assez élevée, ne furent pas des cas typiques de diarrhée verte. Très souvent, les selles des enfants atteints de ces troubles dyspeptiques, au lieu d’être très liquides, étaient soit à l’état de bouillie plus ou moins verdätre, soit à l’état de selles à peine formées, blanches ou grises, se colorant plus tard d'une teinte verdâtre. En général, les matières fécales des enfants étaient recueillies dans des tubes stériles et portées au laboratoire où avaient lieu les ensemencements. Les milieux les plus usuels étaient le milieu de Conradi-Drigalsky et la gélatine. En effet, en suivant le procédé de Choutkevitch (8), employé couramment par Metch- nikoff, il est très aisé d'isoler le Bacillus Proteus vulgaris, mème quand il existe en faible quantité. On ensemence un tube de gélatine avec un peu de matières, on porte à l’étuve à 22 degrés, et un jour après le milieu présente une liquéfaction en doigt de gant sous l'influence de cette bactérie, qui est très pro- téolytique. Comme parfois il existe du staphylocoque ou d’autres microbes liquéfiant la gélatine, on prend une anse de platine de ce milieu liquéfié et on le porte dans l’eau de condensation d’un tube de gélose inclinée. Si cette liquéfaction est due au Bacillus Proteus vulgaris, très rapidement celui-ci envahit la surface du milieu et, à la partie supérieure du tube, on obtient, en vingt-quatre heures, une culture pure de cette bactérie. IlLest très important, pour ces recherches, d'employer cette méthode, car, assez souvent, alors que j'avais isolé de cette facon le Proteus vulgaris existant dans une selle, je n’en trouvais aucune colonie sur le milieu de Conradi-Drigalsky. Aussitôt les ensemencements faits de la façon que je viens de décrire, je prenais la réaction des matières fécales. Dans trente-deux cas, la réaction, prise avec du papier de tournesol neutre, fut neutre; dans dix-neuf cas, elle fut légèrement acide, et enfin, dans quatre cas, alcaline. Une parcelle de ces matières était ensuite diluée avec une goutte d’eau sur une lame, puis colorée par la méthode de Gram-Nicolle. Dans tous ces cas, la prédominance de la flore ne prenant pas le Gram était très marquée, toujours dans la 124 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR proportion de - à > et, parmi ces espèces colorées par la fuchsine de Ziehl diluée, à côté d'un certain nombre de formes cocco-bacillaires, la plus grande partie était souvent formée de bacilles de taille variable, rappelant le Bacillus Proteus vulgaris. Un fait intéressant à noter est que, dans toutes ces prépa- rations, le Bacillus Bifidus avait presque complètement dis- paru. Aucun des enfants malades n’était nourri au lait de femme; tous les plus jeunes, c'est-à-dire de un à quatre mois, prenaient du lait de vache; les autres, de huit à douze mois, avaient fréquemment un régime mixte, farines lactées et lait de vache. Dans aucun cas, je n'ai pu faire l’ensemencement du sang des petits malades, la quantité à retirer étant beaucoup trop considérable pour des enfants affaiblis. En outre, comme aucun des cas traités dans les hôpitaux ne fut mortel, la recherche fut impossible dans les organes. Jusqu'à présent, tous les essais d’agelutination faits avec le sang des enfants atteints de choléra infantile vis-à-vis des différents microbes trouvés dans leurs selles et considérés à tour de rôle, comme jouant un rôle dans l'étiologie de cette maladie par les différents auteurs qui les avaient isolés, ont été négatifs. Seul, Morgan dit avoir obtenu trente fois l’agglutina- tion avec son bacillus Métacoli I, qu'il pense être l'agent de cette diarrhée. J'ai, dans les cas qui étaient, au point de vue clinique, les plus typiques de la diarrhée des nourrissons, cherché le pouvoir agglutinant du sérum vis-à-vis des différents micro- organismes que j'avais pu trouver dans ces cas. Le sang étant toujours pris par piqûre de l'oreille, je n'ai jamais pu obtenir, 1 20 avec le Bacillus Proteus vulgaris, el jamais le moindre pouvoir agglulinant vis-à-vis des autres bactéries. Dans les cinquante-cinq cas que j'ai pu examiner, j'ai trouvé constamment, en plus ou moins grande abondance, le Bacillus Proteus vulgaris (Mauser). Chacune de ces selles, sauf quatre, montra, après vingt-quatre heures d'étuve à 22 degrés dans et encore très irrégulièrement, plus qu'une agglutination à FLORE INTESTINALE DANS LA DIARRHÉE DES NOURRISSONS 125 la gélatine, une liquéfaction abondante du milieu, puis l’ense- mencement fait en gélose de la facon décrite précédemment donnait, au bout de vingt-quatre heures à 37 degrés, une culture pure de cette bactérie à la partie supérieure de la gélose inclinée. Dans les quatre autres cas, soit que le Bacillus Proteus fût moins abondant, soit qu'il appartint à des races moins protéo- lytiques, ce qui se trouve quelquefois, la digestion de la gélatine ne se produisait que quarante-huit heures après l’ense- mencement, pour donner d'ailleurs, dans les mêmes conditions, une culture pure du microbe. À côté de ce Bacillus Proteus vulgaris, j'ai pu, dans trois cas seulement, isoler le Bacillus Pyocyaneus qui fut déjà trouvé par Baginsky et par certains autres auteurs, et que Poels décela très fréquemment dans la diarrhée des veaux, au point qu'il le considère comme l'agent de cette maladie. Les ensemencements faits sur le milieu de Drigalsky- Conradi me permirent, dans quinze cas, de trouver des microbes n’attaquant pas le lactose, non mobiles ou ayant seulement des mouvements giratoires, et que leurs caractères permettaient de les rattacher au groupe des dysentériques. Enfin, dans huit cas seulement, j'ai pu obtenir une culture de Streptococcus intestinalis (entérocoque), qui à parfois été considéré par certains auteurs comme un agent pathogène. IL semble bien, au contraire, être un hôte normal de la flore intestinale que l’on peut trouver dans tous les cas ou presque. lei, je ne l'ai cherché que sur le milieu de Drigalski quand il en existait quelques colonies. Quand on désire l'obtenir, le meilleur moyen est d'ensemencer un peu des matières dans du bouillon acide; le deuxième jour ou îe troisième, on ne trouve plus dans ce milieu que cet entérocoque et les acidophiles. Plus tard, il disparaît pour laisser ces microbes acidophiles exister seuls dans la culture. Je vais ici donner le tableau des malades observés, l’aspecl des matières, leur réaction et les bactéries isolées à l'examen cultural. D'abord celles à réaction plus ou moins acide au tour- nesol. 126 AGE HOME (en mois) BAHAIN 2 SAP: 3 PAK ñ HADAIRES F. 4 Se 8 W.M.| 8 H. M. 3 W.F.l'24 Se , W.M.| 5 GA 9 NA: 9 NV KO INT NACRE) SRE 1 E. N.| 16 W.S.| & CRIS 7 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR COULEUR verte. verte. verte. verte. verte. jaune et verte. verte. verte. verte. verte. verdâtre. blanc-verdâtre. jaune et verte. verte. verte. jaune et verte. blanc-verdâtre. verte. verte. A SPECT liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. semi-fluide. semi fluide. liquide. semi-fluide. liquide. semi-fluide. liquide. liquide. semi-fluide. BACTÉRIES Proteus. Proteus. Proteus. Proteus. Proteus. entérocoque. Proteus. Proteus. entérocoque. Proteus. Proteus. . entérocoque. Proteus. . entérocoque. . entérocoque. Proteus. Proteus. . entérocoque. Proteus. RÉGIME vache. vache. vache. vache. Lait de Lait de Lait de Lait de Lait de vache. Lait de vache. Lait, far. lact. IBEYUS Part. Lait. Lait. ait Mar. ait, san Eat Lait. ait Tara ct lact. lacte late Lait. IBEtiS Voici ensuite le tableau des différents malades dont les ma- tières avaient une réaction neutre, c'était la majorité des cas. AGE NOMS ns) COULEUR H. C. | #4 crise et verte. S. W.1 3 blanc-verdätre. E°K11N2 gris-verdâtre. V8 gris-verdâtre. W.B./12 verte. ACOIIRS gris-verdâtre. O. 6 verte. A. S. | 6 gris-verdâtre. H: | 44/2 verte. B. | 51/2] blanc-verdâtre. DACGAIRS verte. JC HA blanc-verdâtre. Se 3 verte. M 5 verte. Fe blanc-verdâtre. PB verte. FHNVe lo verte. W CG.|9 blanc-verdâtre. S. L. |10 grise et verte. E. W.| 4 jaune et verte. JB IS verte. A. O. 10 verte. NAPAIRS verte. RARE blanc-verdâtre. AK verte. W.W.]| 2 verte. W.K.| 6 eris-verdâtre. TNA verte. A. B. | 4 gris-verdâtre. W S.| 41/2 verte. W. 13 verte. CHAINE blanc-verdâtre. ASPECT semi-fluide. liquide. liquide. semi-fluide. liquide. semi-fluide. liquide. semi-fluide. liquide. semi-fluide. liquide. semi-fluide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. semi-fluide. liquide. liquide. liquide. liquide. semi-fluide. semi-fluide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide. liquide Semi-fluide. Pr Pr.,entérocoque. Pr., dysenter. Pr Pr.,entérocoque. Pr BACTÉRIES ., dysentér. Proteus. Proteus. ., dysentér. Proteus. Proleus. Proteus. ., dysentér. Proteus. ., dysentér. Proteus. ., dysentér. r., pyoCyan. Proteus. Proteus. ., dysentér. , dysentér. Proteus. . dysentér. Proteus. , dysentér. ., pyocyan. . dysentér. Proteus. Proteus. ., dysentér. ., dysentér. Proteus. ., dysentér. RÉGIME Lait. [Pat Lait. far. lact. far. lact. Lait. Part. Lait. Part: At Lait. far. lact. ait: Lait. far. lact. Lait. IBETS far. lact. far late ait: Lait. far. lact. ait Lait. far. lact. Lait. Lait. Fait: Lait. Lait. Lait. Tait: Lait, Lait, FLORE INTESTINALE DANS LA DIARRHÉE DES NOURRISSONS 127 Maintenant voici les quelques cas ayant une réaction nelte- ment alcaline. NOUS COULEUR ASPECT BACTÉRIES RÉGIME W.H. î verte. liquide. Proteus, Lait. semaines. pyocyanique. 1 blanc-verdâtre.|semi-fluide. Proteus. Lait. mois. . 11 blanc-verdätre.| liquide. Proteus, | Lait, mois. pyocyanique, | farine lactée. dysentérique. 6 verte. liquide. Proteus, Lait. mois. pyocyanique. Voici relatées quelques-unes des observations les plus Lypiques : I. — $S. B..., âgé de trois mois, entre à l'hôpital à la fin de juillet 1912. Depuis plus d'une semaine, il est pris de diarrhée profuse qui n'a pas été améliorée par la diète hydrique, il a une très légère augmentation de la température. Au moment où je l’examine à l'hôpital, l'enfant est absolument prostré dans son lit, les yeux sont excavés et les extrémités froides et cyanosées, le ventre est mou et flasque, la peau a complètement perdu son élasticité ; le pouls s’est ralenti à 58 pulsations par minute. L'examen des matières fécales montre une réaction très légèrement acide au tournesol et la présence du Bacillus Proteus en très grande abondance. Malgré la faiblesse du sujet, par piqüre de l'oreille je pris un peu de sang afin d'essayer l’agglu- tination, qui fut négative. II. — J. K..., âgé de sept mois. Le tableau clinique était assez semblable au précédent, mais avec des phénomènes moins graves; néanmoins l’algidité est très marquée, le nez effilé et cyanosé, même disparition de l’élasticité de la peau. Les selles liquides ont une réaction alcaline au tournesol, les ense- mencements montrent la présence du Bacillus Proteus et du Bacillus Pyo- cyaneus. Les essais d’agglutination donnèrent un résultat positif à 1/20 avec le Proteus, négatif avec le pyocyanique. III. — W. C..., neuf mois. Cet enfant, nourri de lait de vache et de farine lactée, a été pris assez brusquement de vomissements alimentaires qui n’ont pas cessé avec le citrate de sodium. Le pouls est à 95,la température s'élève à 39 degrés. Les selles semi-liquides, de réaction légèrement acide, provoquent des douleurs vives à l'émission, qui est fréquente. L'enfant est très agité. L'examen des cultures montre la présence du Bacillus Proteus et de nombreux Sfreptococcus inteslinalis. L'agglutination fut négative avec les deux bactéries. IV. — S. L.., âgée de dix mois, nourrie de lait et de farine lactée. Depuis déjà deux semaines avant son entrée à l'hôpital, elle présenta des alternatives 128 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de diarrhée et de constipation avec des vomissements fréquents et manque d'appétit. L'enfant est pâle, le visage maigre, elle est indifférente à tout. Le ventre est mou, flasque, et à la palpation on entend des gargouillements tout le long du gros intestin. Les selles sont très diarrhéiques, grises, striées de vert; la réaction en est neutre au papier de tournesol. J'ai isolé, dans ce cas encore, le Bacillus Proteus et un dysentériforme. L'agglutination fut négative. En même temps que je me livrais à ces recherches sur la flore des enfants atteints de la diarrhée des nourrissons, je me suis procuré dans les différents services des hôpitaux, ou bien dans les consultations, des matières fécales d'enfants atteints d'autres affections que celles du tube digestif: broncho- pneumonies, eczémas, infections à staphylocoques, tuberculose osseuse, tuberculose pleuro-péritonéale, paralysies, etc., en tout 24 cas. Naturellement le matériel était prélevé de la même facon que dans les cas de diarrhée et ensemencé sur les mêmes milieux. Ici, fréquemment la flore ne prenant pas le Gram était très réduite; à première vue, les formes violettes étaient de beaucoup prédominantes. La réaction était généralement neutre dans 18 cas et dans 6 légèrement acide. Dans ces 24 cas, il n’y eut que deux fois où je pus isoler le Bacillus Proteus vulgaris, et l'un de ces deux cas était un enfant qui, trois semaines auparavant, pendant les chaudes journées de Juillet, avait été atteint du choléra infantile et qui, au moment où Je l’examinai, n'avait plus aucun trouble du tube digestif mais venait à l'hôpital pour de l’impétigo. Les autres bactéries isolées furent le Streptococcus fæcalis dans 11 cas, le Bacillus pyocyaneus dans 1 cas, et dans 4 cas les mêmes microbes du groupe dysentérique que j'ai déjà signalés dans la diarrhée. L'examen direct montrait manifeste- ment, dans 18 de ces cas, la présence du Bacillus bifidus, qui avait presque ou même complètement disparu au cours de la diarrhée. Naturellement, j'avais eu soin de prendre des échantillons de matières d'enfants qui avaient le même âge que ceux atteints du choléra infantile, c’est-à-dire entre un mois et un an. FLORE INTESTINALE DANS LA DIARRHÉE DES NOURRISSONS 129 NOMS ee MALADIE RÉACTION BACTÉRIES RÉGIME H.W.| 7 |Tuber. osseuse.| neutre. | S{reptococcus fæculis. Lait. HT: 8112 Eczéma. neutre. Bifidus. Lait, far. lac. D \12 Dyspepsie. neutre. Dysentérique. Lait, far. lac. A. 2 |Broncho-pneum.| neutre. Bifidus. Lait. J. S. [10 |Broncho-pneum.|lég.acide.[Streptocoque, hifidus. Lait. E.W.|19 |guber. osseuse.| neutre. Bifidus. Lait. W.W.| 7 Pneumonie. f[lég acide. Bifidus. Lait. RS KART Bronchite. neutre. |Bifidus, streptocoque. Lait. W.C.| 9 |Broncho-pneum | neutre. Dysentérique. Dait. J. F. |10 [MaladiedeLittle.| neutre. Streptocoque. Bait, far. lac. W.H./11 Staphylococcie. [lég. acide.|Streptocoque, bifidus.|Lait, far. lac. HACA|ReU? Paralysie. neutre. Bifidus. Lait. SALE Et Impétigo. neutre. Proteus. Lait, far. lac. G.M | 9 |Broncho-pneum | neutre. Dysentérique. Lait. R.N. | 9 Staphylococcie. [lég.acide.[Streptocoque, hifidus.|Lait, far. lac. W. 11 [Broncho-pneum:| neutre. Proleus. Lait. far. lac. CESR Syphilis. lég.acide.|Streptocoque, bifidus Lait. ISA 12 Pneumonie. neutre. |[Streptocoque, bifidus.|Lait, far. lac. EAGAIE6 Paralysie. neutre. [Streptocoque, bifidus. Lait. D.H. | 8 |Broncho-pneum.| neutre. Bifidus. Lait. 1 SA Conjonctivite. | neutre. Streptocoque. Lait, far. lac. W. |10 Eczéma. lég. acide. Bifidus. Lait. AA Pneumonie. neutre. |[Pyocyanique dysenté. Lait. E.W. | 6 Paralysie. neutre. |[Streptocoque, bifidus. Lait. CONCLUSIONS. Dans 55 cas de” diarrhée infantile examinés à Londres, en juillet et août 1912, il me fut possible de trouver 55 fois le Bacillus Proteus vulgaris (Hauser), alors que les autres bactéries considérées à tour de rôle par les différents auteurs comme l'agent causal de cette maladie ne furent isolées que très rare- ment : 3 fois pour le pyocyanique, 15 fois pour des dysentéri- formes et8 fois pour l’entérocoque, les paratyphiques étant toujours absents. Le B. metacoli de Morgan ne fut pas isolé, car les quelques bactéries n'attaquant pas le lactose rentraient, ainsi que je l'ai dit déjà, dans le groupe des dysentériques; ils n'avaient pas la grande mobilité du bacille de Morgan. Au contraire, dans la flore intestinale de 2% enfants qui, au point de vue du tube digestif, pouvaient être considérés comme parfaitement sains, je n'ai oblenu le Bacillus Proteus que dans deux cas, le Bacillus pyocyaneus dans un seul, et quatre fois des dysentériformes, l’entérocoque étant plus fré- quent que dans les selles pathologiques. Ces résultats diffèrent 130 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sensiblement de ceux obtenus par Bahr (9), à Copenhague, au cours des recherches qu'il fit en 1910 et 1911. Peut-on dire que ces différents microbes soient les causes de l'infection ? 11 semble vraisemblable qu'à l’état pur ils ne pro- duisent qu'une action faible ou nulle, ainsi qu'ont pu le mon- trer les différents essais d'infestation expérimentale, sauf les cas de Morgan et Ledingham qui ont pu donner la diarrhée à quelques animaux ‘de laboratoire. Metchnikoff (10), dans ses essais sur le choléra expérimental, avait montré l'importance de la flore favorisante. A. Berthelot (11) récemment a jeté un jour nouveau sur la question. Dans un milieu aussi complexe que l'intestin, où les espèces microbiennes sont très abondantes, il était fort vraisemblable que ces bactéries, ou au moins cer- taines d’entre elles, pouvaient, dans une véritable symbiose, agir comme agents infeclants. Ses expériences avec le Bacillus Proteus vulgaris isolé de différents cas de diarrhée infantile, incapable à lui seul de déterminer une diarrhée chez des rats blancs, ont montré que si on lui adjoint le Bacillus aminophilus intestinalis (12) isolé de cas de colites muqueuses à selles acides, très rapidement les animaux sont pris de diarrhée muqueuse, les matières sont très acides et des phénomènes graves apparaissent entraînant rapidement la mort. Il est très regrettable que je n’aie pas porté mon atlention sur les microbes du groupe du Bacillus aminophilus intestinalis 5 très voisin du Bacillus lactis aerogenes, qui est assez fréquem- ment trouvé dans les selles des nourrissons et que l’on devrait étudier avec plus de soin, désormais, à cause de son rôle possible en symbiose avec le Proteus dans le choléra infantile. BIBLIOGRAPHIE (1) Booker, Transactions internat. Medical Congress, Washington, 1887, p. 598. John Hopkins Hospital Reports, 1897, VI, p. 159. (2) WoLLstEIx, J. of med. research., Boston, 1903.— Pack,Cozzins et Goopwix, New York Path. Society, vol. IT, 1903, p.148. — Duvaz et Snorer. 1bid., 1903, vol. III, p. 144. ‘ (3) Porcs, Rapport over de Kalverziekte in Nederland, Gravenhage, 1899. FLORE INTESTINALE DANS LA DIARRHÉE DES NOURRISSONS 131 (4) MorGax, British medical Journal,. vol. I, 1906, p. 908, et vol. II, 1907, 10. } MorGax et LeniNGHAM, Proceedings Royal Soc. Medecine, mars 1909. ) Mercanikorr, Bullelin de l'Acad. de Médecine, t. LXII, 1909. ) Nogécourr, Précis de maladies infantiles. Masson, 1911. ) 9) L. Basr, Centralbl. f. Bakt., 1. Abt. Orig. Bd LXVI, 12 octobre 1912, p. 335. — L. Banr et THOMSsEx, Centralb. f. Bakt., 1 Abt. Orig. Bd. LXVI, 12 octobre 1912, p. 365. (10) Mercanixorr, Annales de l'Institul Pasteur, 1894. (11) A. BErRTHELOT, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 18 mai 1913. Thèse de la Faculté de Médecine, 1913. (12) A. BERTHELOT et D.-M. BERTRAND, Comptes rendus de l’Acad. des Sciences, 10 juin et 24 juin 1912. — Lancet, février 1913. RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE NOUVELLES DONNÉES EXPÉRIMENTALES SUR LE ROLE PATHOGÈNE DE CERTAINES ASSOCIATIONS MICROBIENNES par ALB8ErT BERTHELOT, (Laboratoire de M. Metchnikoff.) Si l’on veut que les recherches sur la flore intestinale, consi- dérée comme facteur d'infection ou d’auto-intoxication, aient quelques chances d'aboutir à un résultat utile, il est indispen- sable d’avoir sans cesse présente à l'esprit l'extrême diversité des espèces qui la constituent. On évite ainsi de s’attarder trop longtemps à l'étude individuelle de celles-ci, et l'on est amené, au contraire, à examiner avec soin les nombreuses symbioses quelles permettent de réaliser. De plus, dans l'étude même de ces associations microbiennes au point de vue de leur action pathogène, il ne faut pas seule- ment envisager les propriétés toxiques des cultures symbio- tiques obtenues ?n vitro, et il est nécessaire de déterminer quels sont les effets produits chez l'animal par l’ensemencement massif du tube digestif avec les microbes considérés. Mieux encore, ces effets doivent être étudiés sur des animaux soumis à une alimentation convenablement choisie, d’après les pro- priétés biochimiques particulières aux espèces ‘qui composent l'association bactérienne utilisée. Pour montrer la nécessité d’une telle méthode dans l'étude de la flore intestinale, je pourrais m'appuyer sur des considé- rations théoriques se prêtant à de longs développements, mais comme, à cet égard, rien ne vaut les faits, je préfère m'en tenir au simple exposé de ce que j'ai eu l’occasion d'observer en étudiant la symbiose du Proteus vulgaris et du Bacillus aminoplhalus intestinalis. RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE 133 Tout d'abord, je dois rappeler qu'en collaboration avec M. D.-M. Bertrand (1), nous avons isolé cette dernière bactérie, des matières fécales acides d’un sujet atteint de troubles intes- tinaux persistants. Pour cet isolement, nous avions employé la méthode générale que j'ai préconisée (2) pour séparer faci- lement certaines espèces de la flore intestinale, que j'ai quali- fiées d’acidaminolytiques, parce qu'elles présentent une affinité spéciale à l'égard des acides aminés. En étudiant ce microbe, nous avons constaté qu'il appartient au même groupe que le pneumobacille et le B. lactis aero- genes; il est très voisin de ce dernier, possède à peu près les mêmes propriétés saccharolytiques et acidogènes, mais il s'en distingue par quelques ‘points de sa morphologie, l’agglutina- tion, et surtout l'énergie avec laquelle il attaque les aminoïques, aux dépens desquels il donne, suivant les aliments qui sont à sa disposilion, des produits très variés, parmi lesquels se trouvent notamment des amines toxiques. Le B. aminophilus intestinalis est, en somme, un microbe voisin du PB. {actis aerogenes, capable de produire dans l'intestin soit d'assez grandes quantités d'acides où domine l'acide lactique, soit une proportion notable de ptomaines, dont cer- taines, comme l’imidazoléthylamine, présentent une très grande toxicité. Cette production d'acide lactique et d’amines nocives peut d’ailleurs être simultanée; dès le début de nos recherches, nous avons vu que le B. aminophilus peut donner de l’imidazoléthylamine dans un milieu à base d'histidine non sucré et contenant une faible proportion d'acide lactique (3), mais, depuis que nous avons publié ce fait, nous avons isolé (1) ALBERT BERTHELOT et D.-M. Berrran», Recherches sur la flore intestinale. Isolement d'un microbe capable de produire de l’imidazoléthylamine aux dépens de l'histidine. Comptes rendus de l’Acad. des Sciences, 10 juin 1912, t. CLIV, p. 1643. ALBERT BERTHELOT et D.-M. BERTRAND, Sur quelques propriétés biochimiques du Bacillus aminophilus intestinalis. Comptes rendus de l’'Acad. des Sciences, 23 juin 1919, t. CLIV, p. 1826. (2) ALBERT BErTHELOT, Recherches sur la flore intestinale. Isolement des microbes qui attaquent spécialement les produits ultimes de la digestion des protéiques. Comptes rendus de l’Acad. des Sciences, 2% juillet 1944, t. CLITI, p. 306. -(3) Azsert Berraecor et D.-M. BEentrrano, Sur la production possible des ptomaïnes en milieux acides. Comples rendus de l’Acad. des Sciences, 31 mars 1913 "1 1CLVI °p-14027: 134 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR une race du même microbe qui peut, dans une solution nutri- tive renfermant cette fois du glucose et de l’histidine, produire en même temps de l'acide lactique et de l’imidazoléthylamine. C’est en considérant les propriétés biochimiques du Proteus et du B. aminophilus que l’idée m'est venue d'étudier leur symbiose. Je me suis tout d’abord demandé si, en ensemencant du lait avec le Proteus, puis en faisant intervenir le Bacillus aminophilus dès le début de la protéolyse, il n'y aurait pas formation de bases toxiques par décarboxylation des acides aminés mis en liberté par l'hydrolyse microbienne de la caséine. Je me rendais bien compte qu'il y avait peu de chances pour qu'il en soit ainsi, étant donné le pouvoir désaminant du pre- mier et l’activité acidogène du second de ces microbes; mais, malgré cela, j'ai tenté quelques expériences. J'ai ensemencé deux ballons de lait stérilisé avec un Proteus isolé d’une diarrhée infantile, puis, après quarante-huit heures de séjour à 37 degrés, alors que l'attaque du caséum était à peine commencée, J'ai introduit dans l’un des ballons une forte dose de jeunes corps microbiens de B. aminophilus. J'ai replacé les deux ballons à l’étuve et, au bout de huit jours, j'ai centri- fugé les deux cultures, filtré sur bougie Chamberland les parties liquides et comparé leurs toxicités pour le cobaye. J'ai constaté que le filtrat obtenu avec la culture de Proteus seul était nota- blement plus toxique que celui préparé avec la culture mixte. En présence de ce résultat, je fis alors l’expérience suivante : j'ensemencai avec du Proteus, du B.aminophilus ou un mélange des deux microbes, des ballons renfermant, les uns une solu- tion de peptone pancréatique de caséine, les autres la même solution additionnée de 4 p. 100 de lactose ou de glucose. Cette fois encore, les cultures furent liltrées au bout de huit jours et les filtrats éprouvés sur des cobayes. Dans ces conditions, j'ai observé que les cultures de B. aminophilus, que le milieu soit sucré ou non, ne présentaient qu'une toxicité pratiquement insignifiante ; les cultures de Proteus avaient leur toxicité habi- tuelle dans l’eau peptonée simple ou lactosée et une toxicité négligeable avec le milieu glucosé; les cultures mixtes obtenues avec l’eau peptonée simple présentaient exactement la même toxicité que celles du Proteus seul, tandis que les cultures réalisées en présence de lactose ou de glucose étaient RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE 135 pratiquement sans influence nocive sur les cobayes, Enfin j'ai constaté que, sur les milieux solides non sucrés, les deux microbes se développent à côté l’un de l’autre sans qu'il se manifeste une action empêchante ou favorisante quelconque. Si je m'en étais tenu aux résultats de ces expériences ?2n vitro, J'aurais dû conclure que, dans l'intestin, le B. aminophilus, toutes les fois qu'il a des sucres à sa disposition, doit se com- porter comme un véritable ferment lactique et jouer, par conséquent, un rôle bienfaisant en gênant les microbes pro- téolytiques, mais en expérimentant ?n vivo, j'ai pu rapidement me convaincre combien il aurait été imprudent d'adopter de telles conclusions. En effet, si l’on nourrit de gros rats blancs exclusivement avéc du lait stérilisé, partiellement coagulé par la présure, el qu'avec cet unique aliment on administre, chaque jour, à certains d’entre eux, une quantité de Proteus ou de B. amino- philus correspondant à une demi-culture sur gélose, à d’autres la quantité équivalente d'un mélange à parties égales des deux microbes, on peut faire une série de constatations dont voici les principales (1) : 1° Le Proteus seul, même à ces fortes doses, est sans influence apparente sur les rats, ce qui n’est guère étonnant d’ailleurs, puisque ce microbe est l'hôte habituel de leur intestin. 2° La plupart des animaux qui ne recoivent que du B. ami- nophilus n’en souffrent pas et se maintiennent à peu près à leur poids primitif; cependant, quelques-uns d’entre eux, et ce sont toujours les plus jeunes, succombent après un délai de huit à dix Jours. 3° Tous les rats qui absorbent à la fois les deux microbes présentent au bout de six à huit jours une diarrhée très accen- tuée; les matières qu'ils expulsent sont riches en mucus filant et très acides. Ces animaux maigrissent rapidement et, presque tous, finissent par succomber du dixième au vingtième jour. 4° Si l'on donne à des rats du lait auquel on ajoute une assez forte proportion de caséine sèche, ou, mieux encore, si l’on (4) Azserrt Berraecor, Recherches sur la flore intestinale. Sur l'action patho- gène d'une association microbienne : Proteus vulgaris et Bacillus aminophilus inteslinaiis. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLVI, 19 mai 1915, p. 1567. 136 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR augmente Ja dose journalière du mélange de microbes, on observe que les animaux meurent très vite, en quatre à huit jours; la phase de diarrhée muqueuse et acide est alors extrè- mement réduite, et la mort est déterminée par une enlérite aiguë à forme hémorragique. Les expériences qui m'ont permis d'établir ces faits ont porté sur 150 rats. Je n’en donnerai pas ici la relation détaillée, car je lai publiée récemment dans un travail d'ensemble sur le Proteus vulgaris (1); toutefois, il me semble indispensable de rapporter les observations que j'ai faites en autopsiant les animaux morts au cours de mes essais; en voici l'exposé sommaire : 1° Rats ayant présenté pendant au moins six jours une diar- rhée muqueuse el acide. — Foie et reins pâles; intestin et sur- rénales congestionnés. L'inteslin grêle, souvent distendu par des gaz, contenait des flocons de caséine incomplètement attaquée mêlés à du mueus; celui-ci, très abondant, était vis- queux, filant et acide. Le cæcum était rempli d’une bouillie erisâtre très acide. En ouvrant l'intestin grêle et le cæcum et en lavant la muqueuse, on voyait de place en place de petites ponctuations hémorragiques. Dans les autopsies faites alors que le cadavre était encore chaud, on ne trouvait le Proteus, dans le sang du cœur, que quatre fois sur dix. 2 Rats ayant succombé dès les trois premiers jours de la diarrhée acide. — Hyperémie marquée de tous les organes abdominaux. Grosse rate; gros intestin rempli de matières grisätres riches en mucus, mais beaucoup moins acides que dans le cas des rats malades depuis longtemps; intestin grêle parfois distendu et très congestionné par places, mais le plus souvent formant une masse dans laquelle il était très difficile d'isoler les anses intestinales agglutinées entre elles et remplies tantôt d’une matière visqueuse et brunâtre, tantôt de caséine incomplètement attaquée mêlée à du mucus. À l'ouverture de l'intestin, dans certaines anses grèles, la muqueuse se déta- chait en lambeaux grisâtres, dans d’autres on trouvait des pla- cards ecchymotiques: la muqueuse cæcale présentait souvent (1) ALgert BerTrueLor, Recherches sur quelques caractères du Proteus vulgaris. Thèse de Médecine). Paris, 1913. ini RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE 137 un piqueté brunâtre qui paraissait être de nature hémorrs- sique. Dans le sang du cœur, présence du Proteus sept fois sur dix. 3° Rats ayant succombé très rapidement, parfois après avoir présenté une courte période de diarrhée. — Yntestin grèle agglu- liné en une masse informe, de laquelle il est très difficile d'isoler les anses qui sont remplies d’une matière noirätre, visqueuse, alcaline, plus ou moins fluide et d’odeur infecte. Cette matière était constituée par un mélange de mueus et de sang altéré; on la retrouvait dans le cæcum mêlée à de rares masses grisâtres. Les excréments contenus dans Île reste du côlon affectaient parfois leur forme ovillée habituelle, mais le plus souvent ils étaient constitués par la même substance alca- line, visqueuse et noirâtre qui remplissait l'intestin grêle. Le foie, la rate, Les reins et les surrénales étaient en général très congestionnés; les deux premiers de ces organes élaient même parfois noirâtres. À l'ouverture de l'intestin, mèmes observa- lions que ci-dessus, mais avec phénomènes destructifs et hémor- ‘agiques incomparablement plus marqués. Dans le sang du cœur, présence du Proteus douze fois sur quinze. Je n'ai jamais pu déceler Le B. aminophilus dans le sang des rats que j'ai autopsiés. En un mot, il résulte bien de mes expériences que si l'on soumet des rats au régime lacté exclusif et à l’ingestion répétée d'un mélange de Proteus vulgaris el de B. aminophilus intes- linalis, on provoque chez eux une entérite qui peut revèêlir soil une forme subaiguë caractérisée par une diarrhée muqueuse et acide, soit une forme aiguë hémorragique rapidement mortelle. Ce point étant bien établi, j'ai cherché S'il était possible d'en traver la marche des phénomènes entéritiques. Pour cela j'ai mis en expérience. 4 lots de 6 rats: deux de ces lots À et B ont été traités de manière à déterminer la forme aiguë; les deux autres C et D ont élé alimentés et infectés de façon à leur donner simplement la diarrhée caractéristique de 4 forme à évolution lente. Au troisième jour du régime les animaux des lots À et élaient déjà manifestement malades, J'ai cesssé de donner des microbes au lot B Lout en continuant le régime lacté: Malgré cela tous les rats de ce lot sont morts entre Le quatrième et le 0 L | 138 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR neuvième jour; ceux du lot À ont tous succombé du quatrième au seplième. Pour les lots CG et D j'ai attendu l'apparition de la diarrhée aeide et muqueuse; le lendemain du jour où je l'ai constatée chez tous les rats, c'est-à-dire le neuvième jour, j'ai supprimé les microbes au lot D, tout en continuant l'alimentation lactée. Les rats du lot témoin C ont commencé à succomber le onzième jour, tous étaient morts au vingt-deuxième; sur les six ani- maux du lot D je n'ai pu en conserver qu’un seul qui s’est définitivement rétabli, les cinq autres ont succombé du dixième au vingt-seplième Jour. J'ai alors répété cette expérience dans des conditions abso- lument identiques quant aux doses de microbes et au nombre d'animaux formant également quatre lots A! B! C' et D'; mais au lieu de supprimer ere les microbes aux lots B et D’ j'ai de plus remplacé le lait par le régime habituel des rats (carottes, pain et blé). Les résultats ont été les suivants : 1° Lots A! et B': douze animaux en expérience sont morts du quatrième au huitième jour; je n’ai observé aucun retard pour les rats du lot B'. 2° Lots Cet D': Cinq des rats du lot C' sont morts du dou- zième au vinglième jour : le sixième s’est complètement rétabli malgré l'absorption du lait et de microbes jusqu'au trentième . jour. Sur les six animaux du lot D' un seul est mort le dou- ième jour, tous les autres ont survécu... En présence de ce fait, j'ai tenu à le vérilier sur un lot de 12 rats. J'ai donné à ces animaux du lait contaminé par les deux microbes de telle manière que la diarrhée a commencé à se manifester le sixième jour: le lendemain tous rejetaient des mucosités acides. Le huitième jour j'ai supprimé le lait ainsi que le mélange infectant et donné le régime végétarien habi- tuel; malgré 1 deux rats sont morts le ee c'élaient ur les deux plus petits du lot et ils ne pesaient que 135 grammes. Tous les autres ont survécu ; quatre jours après la suppression du régime nocif la diarrhée avait disparu et les malières présentaient leur aspect normal. Par un régime convenable, et en cessant de leur donner des microbes, on peut donc guérir les animaux présentant depuis un où deux jours une diarrhée légère, mais on ne peut empê- RECHERCHES SUR LA FLORE [INTESTINALE 139 cher la mort des rats présentant les symptômes de début de là forme aiguë. D'autre part j'ai constaté que la guérison des animaux légè- rement malades peut ètre obtenue, sans qu'il soit nécessaire de cesser le régime infectant, à l'aide d’un vacein préparé avec un mélange des deux microbes Lués par l'éther. Dans une première expérience portant sur un lot de dix gros rats présentant tous un début de diarrhée après cinq jours de régime, j'ai pratiqué trois injections sous-cutanées d’une émul- sion microbienne traitée par l'éther, à la manière de Vincent, et correspondant à la dilution de deux cultures de Proteusetde deux cultures de B. aminophilus dans 80 cent. cubes d’eau phy- siologique. Ayant préalablement déterminé sur des rats de mème poids la dose de vaccin qu'ils pourraient supporter, jai fait à chaque animal, le lendemain du début de la diarrhée, une première injection de 3 cent. cubes. Bien que j'aie continué à leur donner lait et microbes, dès le lendemain ils rendaient des matières moulées, mais un jour après la diarrhée reprenait peu intense, quoique persistante. Au onzième jour de lexpé- rience j'ai fait une seconde injection de # cent. cubes: vingt- quatre heures après la diarrhée s’atténuait; le lendemain ils expulsaient des matières encore molles, mais quatre jours après l'injection celles-ci avaient repris leur apparence nor- male. Craignant une rechute, le dix-septième jour j'ai encore injecté 4 cent. cubes de vaccin sans observer aucune modili- cation dans l’état des animaux qui n'a plus cessé d'être excel- lent. À la fin du deuxième mois tous étaient encore vivants bien qu'ils n'aient pas cessé d’absorber tous les jours leur dose habituelle de lait et de microbes, tandis que les dix rats d'un lot témoin élaient tous morts avant le vingtième jour. J'ai répété cette expérience dans des conditions identiques: les résultats ont été aussi bons, car 11 me semble ne pas avoir à tenir compte de la mort d’un des rats :vaccinés survenue au trente-sixième jour, cet animal étant comme tous les autres guéri depuis longtemps de sa diarrhée. Son cadavre ayant élé presque complètement dévoré, je n'ai pu établir les causes de sa mort. Lorsqu'on intervient tout à fait au début de la forme subaiguë de l’entérite expérimentale, c'est-à-dire lorsque les 140 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR animaux ont la diarrhée depuis seulement un ou deux jours, le vaccin mixte possède donc une action curative incontes- table; mais celle-ci ne se manifeste pas dans la forme aiguë ou lorsqu'on intervient trop tard dans la forme simplement diarrhéique. Toutefois, dans ce dernier cas un certain nombre des rats traités succombent quinze à vingt-cinq jours plus tard que les témoins. Dans la forme aiguë hémorragique la vaccination précipite même la marche des accidents, absolument comme le font d'ailleurs de trop fortes doses de vaccin (6 cent. cubes) injec- iées au début de la diarrhée. Plusieurs expériences m'ont montré que dans l'infection intense la mort survient dans les vingt-quatre heures qui suivent l'injection vaccinante ; les doses trop fortes dans la forme légère font mourir les animaux trois ou quatre jours avant les témoins. Si les conditions dans lesquelles le vaccin est utilisable comme moyen de traitement sont assez étroiles, son action préventive se manifeste avec beaucoup plus de netteté. En effet, j'ai traité douze rats, d’un poids moyen de 170 grammes, par trois injections de #, 5 et 6 cent. cubes d’émulsion micro- bienne ; les injections étant faites de huit jours en huit jours, j'ai pu, quatre jours après la dernière, soumeltre impunément les animaux ainsi traités au régime qui donne à coup sûr l’en- térite muqueuse. J'ai prolongé pendant deux mois l'influence du lait et des microbes ; pendant tout ce temps l'état général des rats vaccinés m'a toujours paru excellent et leurs matières n'ont pas cessé de présenter leur aspect normal, tandis que tous les animaux d’un lot témoin avaient succombé entre le dixième et le vingtième jour, après avoir présenté la diarrhée muqueuse el acide caractéristique. Bien entendu, au cours de toutes ces expériences sur les rats, j'ai examiné les matières fécales au point de vue bactério- logique ; toutefois J'ai négligé celles qui provenaient d'animaux succombant rapidement à la forme aiguë hémorragique et j'ai porté toute mon attention sur celles des animaux présentant la forme diarrhéique à évolution plus lente. Jai remarqué qu'au début de la diarrhée, les déjections blané jaunâtre étaient peu acides; quelquefois même les ani- maux avaient quelques selles neutres après en avoir eu de net- RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE 141 tement acides. À partir du deuxième jour l'acidité allait sans cesse en augmentant pour atteindre en général son maximun vers le cinquième, en même temps que s’accroissait la teneur en mueus et que les selles devenaient plus fluides. À ce momeni elles fprésentaient une odeur fade, extrèmement désagréable; elles conservaient ce caractère, ainsi que leur grande acidité et leur aspect glaireux, jusqu'à la mort de l'animal. Parallèlement à ces modifications, j'ai observé dans Îles matières la prédominance croissante du Proteus et du B. ami- nophilus, puis la multiplication de deux bacilles prenant le Gram dont l'un ne lardait pas à devenir prépondérant. J'ai isolé ces deux microbes; le moins abondant était le B. perfrin- gens, il n'était d’ailleurs pas absolument constant dans les selles très acides. L'autre, qui se développait admirablement dans le bouillon lactique, coagulait le lait sans modifier Île caillot, acidifiait les milieux contenant du lactose, du ‘saccharose, du galactose ou du glucose et ne donnait pas d'indol, était très vraisemblablement identique au B. acidophilus de Moro, car il en présentait également tous les caractères morphologiques et biologiques. Au moment où les selles diarrhéiques étaient à leur maxi- mum d'acidité et jusqu’à la mort ou à la guérison des animaux, la flore était presque uniquement constituée par le Proteus, le B. aminophilus et le B. acidophilus (1), ce dernier en très grande abondance. Quant aux matières des rats normaux, ainsi que je l'ai déjà dit, j'y ai presque toujours trouvé le Proteus vulgaris, mais je n’y ai jamais rencontré le B. aminophilus. Les Proteus isolés chez des rats bien portants ne différaient en aucune facon du Proteus de diarrhée infantile que j'ai employé pour mes expé- riences. J'ai fait notamment une expérience sur un lot de dix rats que j'alimentais avec du lait infecté avec du B. amino- philus et un Proteus isolé par M. Metchnikoff dans les déjec- tions de tout jeunes rats; les résultats que j'ai obtenus (diarrhée (1) Dans les derniers jours de la maladie, le Bacille acidophile joue peut- être un rôle important qu'il sera nécessaire de préciser. Ce microbe à d'ail leurs été signalé, par Finkelstein, Escherich et Salge, comme très abondant dans les matières des nourrissons atteints de certaines gastro-entérites aiguës. 142 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR muqueuse et acide, mort en huit à treize jours) ont été ceux que m'auraient donnés mon Proteus d'origine infantile, Enfin, j'ai complété mes expériences en recherchant si les matières contenues dans l'intestin des rats malades contenaient une quantité appréciable de substances toxiques. Pour cela J'épuisais la masse recueillie dans l'intestin par l'alcool à90 degrés additionné de 1 cent. cube pour 100 d'acide chlorhydrique con- centré ; J'évaporais à sec, au bain-marie, la liqueur alcoolique obtenue elaire par centrifugation. Je reprenais par l'eau le résidu de cette évaporation, je faisais bouillir cette solution quelques instants avec du noir animal, je la filtrais et je la con- centrais au bain-marie. Quand il ne restait plus que 2 ou 3 cent. cubes de liquide légèrement acide, je neutralisais exactement avec quelques gouttes d’une solution de carbonate de sodium à 5 p. 100 et je complétais à 10 cent. cubes avec de l'eau phy- siologique à 7,5 p. 1000. Comme j'opérais toujours sur le con- tenu intestinal de deux rats, je savais à quoi correspondait ce volume de liquide, que j'éprouvais en l’injeetant dans la jugu- laire de gros cobayes de 600 à 650 grammes. Dans ces conditions, avec 5 cent. cubes de liqueur, j'ai cons- taté que l'extrait du contenu intestinal d’un rat bien portant alimenté avec du lait sans microbes était sans action nocive pour le cobaye; lorsque l'extrait provenait d'un animal venant de succomber à la forme diarrhéique subaiguë les cobayes étaient malades, mais se rétablissaient vite et ne présentaient plus aucun signe d'intoxication une heure après l'injection. Avec la solution obtenue en traitant le contenu intestinal d’un rat venant de mourir après quatre Jours du régime hyperazoté et très riche en microbes, j'ai noté, au contraire, une toxicité élevée. En effet, 5 cent. cubes d'extrait tuaient l'animal sur l'appareil à contention et 3 cent. cubes déterminaient sa mort en quatre ou cinq minutes avec dyspnée violente, contractions très fortes du diaphragme, péristaltisme exagéré, distension extrême des poumons et persistance des battements cardiaques quelques instants encore après la cessalion des mouvements respiratoires. Ces symptômes rappelant singulièrement ceux que l’on observe chez les cobayes succombant à l'injection intravei- neuse de 1/2 milligramme d'imidazoléthylamine, il est bien RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE t43 possible que la toxicité du contenu intestinal des rals profon- déments infectés et intoxiqués soit due à cette même base, Celle-ci proviendrait tout naturellement de l’action du B. ami- nophilus sur l’histidine libérée par l'hydrolyse diastasique de la: caséine alimentaire et de l’hémoglobine du sang des hémor- ragies intestinales. En même temps que je faisais avec des rats blanes toutes les expériences que Je viens de rapporter, j'ai fait quelques essais sur d’autres animaux. Avec les souris blanches il m'a été facile de reproduire les recherches que j'avais faites avec Les rats, car elles toléraient bien le régime lacté et l'infection massive par le B. aminophilus ou le Proteus; avec le mélange des deux microbes elles avaient, comme les rats, une diarrhée acide et muqueuse, mais celle-ci était de peu de durée, car la mort sur- venait toujours avant le onzième jour; certaines souris succom- baient même entre le cinquième et le septième jour après vingt- quatre heures de diarrhée. J'ai également essayé de provoquer l’entérite chez des lapins et des singes (macaque, chimpanzé), mais je n'ai rien obtenu de bien net (1). Parmi les animaux avec lesquels j'ai expéri- menté, il n'y a donc que les rats et les souris qui m'aient cons- tamment donné des résultats permettant d'affirmer la nocivité de l’association du Proteus vulgaris et du B. aminophilus pour les sujets soumis au régime lacté exclusif. Depuis que M. Metchnikoff, dans ses recherches sur le cho- léra (2), a montré l’importance du rôle des associations micro- biennes en pathologie, bien des auteurs ont fait dans le mème ordre d'idées des constatations très intéressantes; il y a quelques années, M. H. Vincent a montré notamment que le Proteus donne avec le bacille d'Eberth une symbiose particulièrement nocive (3). Malgré tous ces travaux, certains bactériologistes s’obstinent à considérer individuellement les nombreusesespèces 1) Pour le détail de ces expériences voir : Recherches sur quelques carac- tères du Proteus vulgaris, loc. cil., page 82. (2) Mercaxixorr, Recherches sur le choléra et les vibrions (42 mémoire), Sui l'immunité et la réceptivité vis-à-vis du choléra intestinal, Annales de l'Ims- liltut Pasteur, t. VIIF, 1894, p. 529. 3) Vincent, Rôle pathogène du Proteus dans les infections alimentaires Association microbienne protéo-tvphique, Bull. de l’Acad. de Médecine, t. LXH, scuSérie, 1909 p388. 14% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de la flore intestinale et ne semblent pas avoir saisi l’intérèt qu'il y a d'étudier également l’action pathogène des cultures symbiotiques des microbes intestinaux, ainsi que les phéno- mènes morbides que l’on peut provoquer chez les animaux en réalisant, dans leur tube digestif, la prépondérance de ces mêmes symbioses. Les faits que je viens de rapporter contri- bueront peut-être à les convaincre. Pour ma part, je compte poursuivre mes recherches sur le rèle des associations micro- biennes en utilisant beaucoup d'autres microbes, pris aussi bien dans la flore intestinale de l’homme que dans celle des Jeunes animaux domestiques. Ce n'est d’ailleurs pas seulement en précisant l’action patho- gène des associations de deux ou plusieurs espèces, préalable- ment étudiées une à une, que l’on étendra nos connaissances sur le rôle de la flore intestinale, mais aussi en examinant avec soin leur action biochimique, ainsi que je l'ai déjà recom- mandé lors de mes premières recherches sur les microbes aci- daminolytiques. Dans le cas particulier de la symbiose du Proteus avec le B. aminophilus 1 est mème indispensable que j'entreprenne cette étude pour essayer d'expliquer le méca- nisme des phénomènes pathologiques que j'ai observés, méca- nisme à l'égard duquel je suis, pour le moment, réduit aux hypothèses. En dehors des idées qu’elles suggèrent sur l’ulilité de l'étude des associations bactériennes, les constatations que j'ai eu l’occasion de faire au cours de mes expériences se prètent encore à des considérations intéressantes à divers autres points de vue. Tout d’abord il me semble bon de rappeler le rôle très impor- tant que paraît jouer le Proteus vulgaris dans l’étiologie de certaines gastro-entérites des nourrissons, rôle entrevu par Booker (1), mais nettement établi par les recherches de M. Met- chnikoff (2). Or, dans ces entérites, la flore intestinale ren- ferme très fréquemment, à côté du Proteus, une forte proportion (1) Booker, Trans. of the Ninth Internat. Congr., 1887, t. III. A study of some bacteria in the fæces of infants affected with summer diarrhæa, Trans. of lhe Amer. Pediat. Soc., 1889; même sujet ; John Hopkins Hosp. Rep., t. IV, 1896-97, p. 159. (2) Mercanixorr, Recherches sur les diarrhées des nourrissons, Bull. de l’Acad. de Médecine, t. LXII, 29 novembre 1909, p. 326. RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE 145 de microbes voisins du P. aminophilus et appartenant comme lui au groupe du B. lactis aerogenes. On sait d'autre part, que dans ces affections, qui présentent des formes aiguës et subai- guës, les matières sont souvent riches en mucus et très acides; parfois aussi, dans ces mèmes diarrhées le lait est mal toléré, tandis qu'on retire grand avantage de la suppression de cel aliment. Comme on le voit, certaines gastro-entérites des nourrissons présentent de nombreux points communs avec l'affection intes- tinale que détermine, chez le rat, le régime lacté exelusif et l'infection mixte du tube digestif par le Proteus et le B. ami- nophilus intestinalis. Je ne voudrais pas que l’on me fit dire que toutes les diarrhées muqueuses et acides des jeunes enfants sont dues à l'association du Proteus avec un microbe du genre Lactis aerogenes, car je n'ai jamais eu cette pensée. J'ai simple- ment voulu attirer l’altention sur la ressemblance évidente des formes d’entérite expérimentale que j'ai réalisées et certaines sastro-entérites infantiles, ressemblance qui me conduit à rechercher notamment si les unes et les autres ne sont pas déterminées par une même cause : l'association du Proteus avec le B. aminophilus ou une espèce voisine. A ce propos il me paraît intéressant de signaler que Jai justement utilisé pour toutes mes expériences un Proteus isolé par M. Metchnikoff des matières fécales d'un nourrisson mor- tellement atteint d’une gastro-entérite; ces matières étaient acides et avaient donné sur milieu de Drigalsky-Conradi de nombreuses colonies semblables à celles de B. lactis aerogenes. Pour moi, dans les cas de diarrhée infantile où il intervient, le Proteus ne manifeste son action que grâce à la présence d'un ou de plusieurs microbes favorisants. Celui-ci ou ceux-ci doivent-ils nécessairement appartenir au groupe acidogène du Pneumobacille et du Lactis aerogenes? Je ne le pense pas, Je suis persuadé, au contraire, qu'un grand nombre d'espèces microbiennes peuvent jouer ce rôle, particulièrement dans la catégorie des acidaminolytiques. Si je crois à l'importance de ces dernières, c’est parce que ce sont elles qui produisent dans notre intestin les poisons chimiques les plus actifs; les unes, qui sont en même temps saccharolytiques, déterminent vrai- semblablement les diarrhées fortement acides et muqueuses, 146 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR tandis que les autres n’attaquant pas les sucres, conditionnent probablement les diarrhées alcalines (1). Je ne m'arrèêterai pas davantage aux nombreuses hypothèses que l’on pourrait faire dans cet ordre d'idées; 11 y a souvent bien loin de ce que nous observons 77 vitro à ce qui se passe dans l'intestin et, dans l'interprétation des faits qui m'oc- cupent, il serait singulièrement imprudent d'oublier la part importante qui doit revenir aux phénomènes digestifs et aux défenses de l'organisme. Quels que soient la nature et le mode d'action des microbes dont l'on établira les propriélés favorisantes, on peut déjà, dans ce que j'ai observé, trouver quelques indications sur la pathogénie probable des gastro-entérites à Proteus. Il doit y avoir, en effet, des nourrissons porteurs de ce microbe, qui restent bien portants jusqu’au moment où ils sont infectés par une espèce favorisante; il doit y avoir également, des enfants dont la flore comporte les éléments d’une association patho- sène et qui ne présentent des symptômes entéritiques que le jour ‘où la composition chimique de leur milieu intestinal se trouve profondément modifiée, soit par des troubles fonction- nels des glandes digestives, soit par un changement de régime (par exemple : remplacement du lait maternel par le lait de vache). Enfin, quand on se souvient de l'influence que pos- sèdent sur l’évolution de l’entérite expérimentale les varia- tons de la dose de bactéries infectantes, lon ne peut s'étonner de voir les nourrissons contracter Les formes graves de gastro- entérite pendant la saison chaude, c’est-à-dire lorsque le lail contient la plus forte proportion de microbes. Si artificielles que soient les conditions dans lesquelles je l'ai réalisée, l’entérite expérimentale du rat n'est pas seule- ment intéressante à cause de sa ressemblance avec certaines (1) Il ne faut pas oublier cependant, que la désamination microbienne des molécules aminoïques fournit des acides, qui interviennent peut-être pour une part notable dans la genèse des phénomènes pathogènes attribués aux acides provenant de l'attaque des hydrates de carbone. Je répète que par microbes acidaminolytiques j'entends ceux pour lesquels les acides aminés constituent de véritables aliments d élechon; certains de ces microbes manifestent même pour tel ou tel aminoïque une affinité si grande qu'elle peut être considérée comme un caractère distinctif. C'est d’ailleurs sur ce fait qu'est basée la méthode d'étude de la flore intestinale que j'ai proposée en 1911 (loc. cit.). RECHERCHES SUR LA FLORE INTESTINALE 147 entérites des nourrissons et des (rès jeunes animaux domes- tiques; elle l’est aussi, à un point de vue plus général, par les idées qu'elle suggère sur létiologie et la pathogénie de certaines affections de Fintestin. Elle montre, en effet, combien il importe, dans certains cas, de ne pas attribuer un état pathologique donné à un seul microbe, mais plutôt à l'action combinée d'une association microbienne et d'une alimentation défectueuse. Elle attire l'attention sur le rôle que doivent avoir les espèces acidaminolytiques dans la genèse de certaines infections du tube digestif, soit par elles-mêmes, soit surtout lorsqu'elles se trouvent associées à cerlaines espèces protéolytiques ; au début de mes recherches sur les microbes de ce groupe, je ne voyais en eux que des facteurs importants d'äuto-intoxication, mais depuis mes expériences avec le B. aminophilus et le Proteus, je suis persuadé que parfois ils sont aussi des facteurs directs ou indirects d infection locale (1). Eufin, lentérite du rat, avec sa forme subaiguë à diarrhée muqueuse et acide, fait voir également l'intérêt quil y à d'étu- dier à part les entériles au cours desquelles les matières sonl constamment acides; elles nous confirment, M. D.-M. Bertrand et moi, dans les idées que nous ont données, sur létiologie de certaines colites muqueuses persistantes, les recherches que nous poursuivons depuis plus de deux ans et qui nous ont déjà conduits à établir que la production de plomaïnes par cer- tains acidaminolytiques peut s'effectuer en milieu nettement acide. Dans un autre ordre d'idées les résultats que j'ai obtenus avec un vaccin mixte me semblent aussi présenter quelque intérêt. Si sommaires qu'aient élé mes expériences. Il est incontestable, qu'au point de vue préventif, elles donnent le droit de penser qu'il sera peut-ère possible de vacciner les nourrissons contre certaines gastro-entériles, dès que nos con- naissances étiologiques seront un peu plus complèles. Pour essayer de réaliser une telle vaccination, 1l est tout indiqué de faire d'abord, ainsi que je me le propose, de nom- 4) Sans oublier bien entendu qu'ils peuvent être parfois des facteurs d'in- fection générale, comme un grand nombre d'autres microbes de Fintestin. 148 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR breux essais sur de très jeunes animaux domestiques, si sen- sibles, eux aussi, aux infections gastro-intestinales: ces essais devront porter, bien entendu, sur divers modes d'immu- nisation, mais auparavant il faudra préciser s’il est nécessaire que les vaccins soient mixtes ou s’il suffit, au contraire, d’uti- liser un seul microbe : celui qui constitue l'élément virulentde l'association bactérienne dont on a établi le rôle pathogène. :; Les faits que j'ai observés relativement à l'action curative des injections vaccinantes sont moins nets que les précédents; ils donnent néanmoins une base expérimentale à la vaccino- thérapie des affections inflammatoires de l'intestin. Il y à un certain temps déjà que les médecins anglais, à la suite des travaux de Wright, traitent par des auto-vaccins certaines infections chroniques de l'intestin (1), mais chez nous on a généralement mis en doute les résultats qu’ils ont obtenus. Mes expériences, en éliminant le facteur psychique auquel on attribue souvent les succès de la vaccinothérapie, restrein- dront, peut-être, le nombre des sceptiques, déjà diminué par les conslatalions faites récemment fsur l'effet favorable des vaccins de Chantemesse, de Vincent ou de Besredka dans le traitement de la fièvre typhoïde. Elles montrent nettement en tout cas, qu'avec des vaccins appropriés, l’on peut essayer, si paradoxal que cela paraisse, de traiter avec des chances de succès certaines entérites; elles font mème voir combien à faut être prudent dans les essais de ce genre, aussi bien au point de vue de l'opportunité même de la vaccination, qu'au sujet de la composition des vaccins et du choix de la dose à injecter. 30 juin 1913. (L) R. W. ALLEN, Vaccine therapy its theo y and practice, p.226, 4e édit., 1912, H. K. Lewis. Londres. ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES par GEORGES ABT A la demande du Syndicat général des cuirs el peaux de France, j'ai étudié l'action de quelques antiseptiques sur les peaux charbonneuses, au point de vue de la stérilisation des spores et de la répercussion sur la valeur des peaux. Ces recherches ont été exposées ailleurs (1). Je voudrais seulement faire part ici d'expériences dont les résultats peuvent ètre ulilisés pour d’autres problèmes de désinfection. RÉSISTANCE DES SPORES A 100 DEGRÉS. Pour apprécier la valeur d'un antiseptique, il faut le faire agir sur un test-objet dont la résistance relative soit connue. Pour la spore du charbon, le chautlage à 100 degrés m'a paru le moyen le plus simple et le mieux approprié de mesurer et de comparer les résistances des divers échantillons. C'est, d’ail- leurs, le plus employé. Cependant, Krünig et Paul (2) ont préféré se servir d’une solution de sublimé à 1,69 p. 100 (n/16), et compter le nombre de germes survivants après un certain temps de contact. Ce procédé a le désavantage de con- duire à une échelle de résistances très étendue, puisqu on obtient pour trois minutes, par exemple, de 0 à 1000 colonies, sans qu'il soit facile d'apprécier la valeur des écarts. De plus, nous verrons que le sublimé est un mauvais critérium, parce que des facteurs trop instables interviennent dans la stérili- salion apparemment obtenue. Les auteurs allemands exposent généralement à un courant de vapeur à 100 degrés, sans pression, les spores séchées sur 150 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR des fils de soie. Dans ces conditions, von Esmarch (3) trouve des diflérences de une à douze minutes: les chiffres les plus fréquents sont deux et trois minutes. Dannapel (4), Otsuki (5) signalent des spores beaucoup moins résistantes (quinze secondes), le second, en particulier, lorsqu'elles sont séchées sur du cuir ou sur des grenats de Bohème. Mais déjà Gep pert (6) avait reproché à la vapeur de mouiller les spores plus où moins rapidement, ce qui introduit une cause d'erreur. Il se conftentait de faire bouillir à feu nu, dans une capsule de porcelaine, les spores en suspension dans l'eau ou séchées d'abord sur des fils de soie. J'ai adopté la technique suivante, qui m'a paru préférable. Les spores, mises en suspension dans l'eau physiologique, sont aspirées dans une pipette étirée en olives. On sépare ensuite les olives en chauffant les étrangle- ments et scellant sur une pelite flamme, et l’on obtient ainsi une série d'ampoules remplies de liquide, sauf une bulle d'air à l'extrémité. Ces ampoules, disposées sur de petits supports, sont plongées dans l’eau, que l’on fait bouillir dans une bassine munie d’un couvercle (précaution sans laquelle le thermomètre ne monte pas à 100 degrés); après le temps voulu, on les relire et on les immerge dans l’eau froide. On ouvre ensuite les ampoules et ensemence avec une pipetle. Pour mesurer la durée du chauffage à 100 degrés, il faut déduire le temps nécessaire pour élever la température du liquide intérieur. Je me suis servi comme indice d'une substance insoluble dans l’eau, cristallisée en grandes tablettes blanches et fondant au voisinage de 100 degrés, le rétène (méthylisopropylphénan- thrène). L’échantillon que je me suis procuré fondait à 90 de- grés; après deux cristallisations dans l'alcool, il fondait à 96 degrés (au bloc Maquenne); les tables donnent même le chiffre de 98°5. Dans l'ampoule pleine de liquide et plongée dans l’eau bouillante, les cristaux fondaient au bout de douze secondes; j'ai déduit chaque fois dix secondes des temps de chauffage. Dans d’autres essais, où je chauffais dans 10 cent. cubes de liquide, en tube scellé, des morceaux de peau infectés, la fusion se produisait après quarante secondes : l'écart montre l'utilité de cette petite épreuve. On ignore jusqu’à présent à quoi tiennent les variations de résistance des spores, et surtout on ne sail pas préparer à ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 151 volonté des spores résistantes. Von Esmarch, comparant celles qu'il oblenait sur gélose el sur pomme de terre, concluait que le choix du milieu n’a pas d'influence. Krünig et Paul n'ont pas réussi à augmenter la résistance ni en sélectionnant les germes, ni en multipliant les passages sur l'animal. Weil (7 a échoué dans d’autres tentatives. Je n'ai pas été plus heureux: mais j'ai pu faire quelques observations sur l'atténuation de la résistance. Les expériences ont porté sur 8 races de charbon, dont 5 étaient conservées dans les collections de l'Institut Pasteur : une (n° II) venait d'être isolée d’une épidémie bovine; deux étaient des charbons algériens, envoyés par l'Institut Pasteur d'Alger. Suivant une opinion classique, j'avais, pour obtenir rapidement des spores, employé un milieu pauvre qui conte- nait par lire : Peptone Ghapoteaut "EN en2Srammes: SedéCUISINe er 24 eme reiee USD — GIUCOSE MR A TE EC 2 — GREAT AM EME PE RE RER 20 — (RÉLOS ENCRES CAEN ME ET ET TEL — D'après Osborne (S), la richesse en spores est proportionnelle à l'abondance des cultures, et par suite moindre sur les milieux pauvres. Mes observations ne contredisent pas directement celte opinion, car les cultures sur le milieu pauvre étaient moins riches que les cultures sur les milieux ordinaires. Mais le milieu pauvre permettait d'éliminer plus rapidement Îles germes non sporulés. La sporulation commencait après qua- rante-huit heures; en trois jours, 3/4 des germes environ étaient sporulés ; après six à sept jours, on ne trouvait plus, si la sporulation avait été régulière, de formes végétalives que dans la partie inférieure de la culture. Sur le même milieu plus riche en peptone (20 grammes), les spores apparaissaient dès le second jour; 1/4 environ des germes étaient spo- rulés après 3 jours, 1/3 à 1/2 seulement après sept Jours. Nous verrons que la résistance des spores était également moindre. La résistance des spores de la première culture, pour 152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR chacune des 8 races, est indiquée dans le tableau sui- vant : Tableau I. N°S RACE : . 2 t | 30 10 1 minutes. | minutes. | minutes. | minute. |secondes.|secondes.| seconde. ! If ; — Je 1 a 2 IH TERRES — + + + RATES = “ + cu | 4 IV ee — + + | - SAVE ASE = “e 1 6 NV] RO RER — == er a ou. LE Elle a varié de une seconde à trois minutes. Les charbons algériens se distinguaient par leur fragilité; J'ai pu constater, sur des préparalions, qu'elle coïncidait avec une mauvaise sporulation; les formes d’involution étaient nombreuses; les préparations colorées par la méthode de Müller montraient des granulations rouges, plus petites que des spores. Cependant, j'ai trouvé, sur des cultures repiquées à partir de cette pre- mière série, des spores pures et très bien colorables, qui ne supportaient pas plus d’une minute de chauffage. Parmi les autres races, la dernière (n° VI) différait seule notablement du reste du groupe. La comparaison des huit échantillons permet de considérer la race comme un des facteurs de la résistance ; mais leur histoire antérieure, que je ne possédais pas, pouvait aussi être responsable des écarts. J'ai cru remarquer que les milieux plus secs fournissaient des spores moins sensibles, par exemple lorsque la gélose a été un peu desséchée à l’étuve avant d’ensemencer, ou que les tubes ne sont pas capuchonnés. Mais une expérience comparative avec deux tubes, dont l'un était capuchonné avec du papier et l’autre avec du caoutchouc (charbon IV), à donné respectivement des résistances de vingt secondes et une minute; d'après cet essai, la dessiceation du milieu ne serait pas une circonstance suffisante. Par contre, diverses causes de fragilité des spores se dégagent des tableaux suivants : ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 153 1° L'âge de la culture entraine une résistance légèrement croissante au début, stable pendant quelque temps, puis décroissante. J'ai rassemblé, dans la partie À du tableau [1 des résistances décroissantes ; dans la partie B, des résistances fixes ou croissantes. On y trouve des chiffres en baisse à partir du dix-septième et du vingt-deuxième jour; stationnaires entre le septième-huitième et le dix-neuvième-vingt-troisième; en hausse après le cinquième, huitième et quinzième Jour. L'optimum paraît variable, selon les cas, entre le huitième et le quinzième jour environ. TABLEAU II. — A. = en D HACE [IL (BOUILLON) (1) Aer 20 jours. 60 j. 19 J. | COMTE LOT 49 j. |10 mois. Résistance.| 1 min. |< 10 sec.| 1 min. | 30 s.| 3 m. | 1 min. |30sec. RACE | [, IT, Als. IT, IV; Age. 193jours.| Tmois. |). 16 mois. |15j: 22jours.|9 j. |17)j. Résistance | 3min. |1min |3min.|i min. 1 min.[30 sec. |3 min.| 2 min. (1) Les indices (1,, I,) désignent le numéro de la génération TABLEAU Il. —B. III, NA III, RP UE) | 93 S 19 8 15 » DRUID A1 | 15 07 jours. jours. | jours. jours.|jours.|jours.| jours. 'jours.|jours.|jours.ljours. l 2 2 3 3,30 2 | 3 30 [ta : : ; 9 1 c | min. min. min. min. In. min. min. | sec. | min. 2° L'influence de la nature et la composition du milieu MID. |3 Min. 3 min.|k[ 10 s. 30 sec. (15 j.). culture.| (5 jours. 6%) 2Emin- 18) SA Et) [1 min. (21 14 3 min. 2e 3 Hum. (23 j.).| 3 min. [1 min. ( 7 j.).|3 min.||59 sec. L minute culture.|1 min. (16 j.}.| (11 j.). | (SAN EN ES BE 15 jours. 3e 1 minute 2 m.45 |10/s: (4% )j-)-Mmin:||L min: |°:2 minutes culture.| (8 jours). (Ha) MI 0 S (22070 ET) LA ©) 12 jours. IE 2 m0) 4° 30 secondes | | {Umin.|| L inin. |, 1 minute culture.| (8 jours). | NT) (AO JM ONOUrS). D are rare rmmans uen 2e Le dope se em mie 0 ASE AN cena CARRE: RE AS De SMS RITONER Mo nc nome ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 15: 1° Les préparations de spores destinées aux essais ont été considérées comme stables par les uns [von Esmarch (3 comme sujettes à baisser par les autres [Weil (7), Krünig ei Paul (2)}. Mes émulsions de spores se conservaient sans chan- sement pendant un ou deux jours. Pour les spores séchées sur des lamelles de verre, j'ai remarqué qu'à quelques.jours d’'in- tervalle, deux expériences identiques donnaient des résultats différents ; en voici des exemples : Tableau V. — Spores traitées par le sublimé en présence d'acide et quelquefois de sérum de cheval. (VS) SPORES | n| SPORES || SPORES | | SPORES | x | SPORES | w CONCENTRATIONS 3 min. SR 2mINe 2 min. 2 min. |: 30 sec. du sublimé. IS LUN ITL, 5 = algér. E fraîches. | | fraîches. | | fraîches |: > | fraîches. Il est arrivé aussi que, dans les mêmes délais, la sensibilité des spores ne changeait pas. Il EMPLOI DES SPORES SÉCHÉES SUR DES LAMELLES DE VERRE. On admet aujourd'hui que la méthode la plus précise pour étudier l’action des antiseptiques consiste à mettre les spores en suspension dans le désinfectant, puis à les transporter après neutralisation dans le milieu nutritif, Mais cette tech- nique, excellente lorsqu'il s'agit d'établir les propriétés géné- rales d'un antiseptique, comporte des conditions très différentes de celles que l’on rencontre dans là pratique de la désinfection, Je désirais, au contraire, opérer sur des spores séchées et 156 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR représenter par quelque chose les difficultés qui s'opposent presque toujours à la pénétration des antiseptiques. Il était facile de satisfaire à ces exigences en s'inspirant du dispositif employé par Chamberland et Fernbach (9). On laisse tomber d'une pipette effilée IT gouttes de la suspension des spores sur une lamelle de verre placée au fond d’un tube de 8 centi- mètres bouché au coton; puis on sèche rapidement dans le vide. Après dessiccalion on peut recouvrir la lamelle de sérum de cheval, que l’on dessèche à son tour. Il est très facile de retirer ces lamelles avec une pince flambée, de les faire passer dans les liquides de lavage et de les ensemencer en bouillon, tout cela avec une asepsie parfaite. Krünig et Paul reprochent au verre de se mouiller inégalement; la critique, valable peut- ôtre pour des expériences de quelques minutes, comme les leurs, ne m'a pas arrêté pour des essais qui devaient durer vingt-quatre heures. Le procédé, resté classique depuis Koch, des spores séchées sur des fils de soie est d'une manipulation très incommode. De plus, Geppert (6a) a montré que la pénétration soit du désinfectant, soit de l'agent destiné à le neutraliser, est très irrégulière. Les essais comportent donc un facteur variable, dont l'influence pour chaque cas particulier ne peut pas êlre appréciée. La méthode de Krünig et Paul (2) a les apparences d’une rigueur parfaite; mais ce n’est pas sans motifs que jy ai renoncé. Krünig et Paul chargent de spores des grenats de Bohème de diamètre uniforme. Ces grenats, après avoir passé par la solution antiseptique et les lavages appropriés, sont vigoureusement agilés dans l’eau stérile. Une quantité mesurée de cette eau est délayée dans la gélose liquide, que l’on coule ensuile dans une boîte de Pétri. L'expérience montre que le nombre de germes détachés pendant l'agitation est sensible- ment constant et, par suite, que l’état de ces germes repré- sente exactement l'effet moyen de la désinfection. L'avantage est alors que l’on peut compter les germes survivants, avoir des données numériques sur une stérilisation incomplète, et surtout éviler que les résultats, faussés par la présence d'un seul germe exceptionnellement résistant, ne fassent illusion. Si ce dernier inconvénient est sérieux lorsqu'on fait des recherches théoriques sur les propriétés des antiseptiques, il ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 157 semble que la valeur pratique d'un désinfectant ne puisse être mesurée qu'à la stérilisation complète. L'hypothèse de germes exceptionnels à plus de portée lorsqu'on opère sur un petit nombre; une première agitation, sur laquelle on fait la numé- ration, n’en détache que 6000 à 10000 environ. En déposant [IT gouttes de la suspension de spores sur une lamelle, J'avais, d'après deux numérations, 8 millions et 30 millions de germes. Autre critique : il est très difficile de se faire une idée d’une stérilisation relative par le nombre des germes survivants; ce nombre peut aller de 1 à 2000 et 3000. Pour iles mêmes conditions de concentration et de durée, on trouve des écarts, avec le sublimé, de 2 à 32. D'ailleurs, lorsqu'un antiseptique laisse subsister 5 colonies, et un autre 1000, le premier ne peut pas être considéré comme 200 fois plus actif que le second. L'ordre des nombres est seul à considérer; la précision des chiffres, elle-mème, est illusoire. Enfin, d’une préparation de grenats à l’autre, les chiffres obtenus peuvent être différents parce que la richesse en spores de la suspension qui à servi à charger ces grenats était diflérente. Pour toutes ces raisons, J'ai préféré poursuivre la stérilisation totale, en faisant varier la concentration surtout et, à l’occasion, le temps. Le seul désavantage du procédé des lamelles est la difficulté d’'ense- mencer après la désinfection sur un milieu solide. Cet ense- mencement ne présenterait de garanties que si l’on pouvait détacher toutes les spores de la lamelle et les répartir dans le milieu, ce qui est impraticable. Je me suis contenté des cultures en bouillon ; la différence n’est d'ailleurs sensible’ qu'à la limite et, sans doute, pour des temps courts ou des doses faibles. III LA NEUTRALISATION DU SUBLIMÉ. Parmi les agents que l’on pourrait employer à la désinfection des peaux figure le sublimé. M. Seymour-Jones, qui possède une longue pratique de la tannerie, a proposé de tremper les peaux sèches pendant vingt-quatre à quarante-huit heures dans un bain qui contient 4 : 5000 de sublimé, et pour les grosses peaux 1 p. 100, pour les petites 0,2 à 0,3 p. 100 d'acide for- 158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR mique. L'efficacité du sublimé à cette faible concentration est-elle suffisante? Depuis Geppert (6b), on sait que l'effet apparent du sublimé est très variable selon que l’on neutralise ou non le mercure avec un sulfure aicalin ou avec l'hydrogène sulfuré. Mais il ne s’agit pas seulement de détruire l'excès de sublimé. Entre la quantité de sulfure ou d'hydrogène sulfuré suffisante pour précipiter tout le sublimé, et celle qui fait apparaître la plus grande vitalité chez les spores, il y a une marge très étendue. Si l’on emplovait une solution relativement concentrée de sublimé, il faudra neutraliser avec cinq fois la quantité suffi- sante; mais après le contact avec une solution faible ou en présence de traces, la quantité absolue d'hydrogène sulfuré, par exemple, devra rester à peu de chose près la même et atteindra jusqu’à 400 fois celle qui transformerait tout le mer- cure en sulfure [Croner et Neumann (10). Il semble que le sublimé adhère à la spore de telle manière qu'il ne l’abandonne qu'en présence d'un énorme excès de sulfure ou d'hydrogène sulfuré. À ce moment, la spore paraît avoir très peu souffert du contact avec le sel de mercure. Geppert avait trouvé qu'après un traitement de vingt heures par le sublimé à 1 p. 1000, elle n'infectait plus la souris; mais il fallait trois jours de contact avant qu'elle cessät de donner des cultures. Ces délais et cette concentration sont bien loin de réaliser la stérilisation, d’après Ottolenghi (11), si l’on a soin, après une neulralisation bien conduite, d’ensemencer dans du bouillon additionné de son volume de sérum, puis de repiquer du bouillon, où la culture n’est pas visible, sur une plaque de gélose. Dans ces conditions, on obtient encore des cultures après neuf jours de contact avec le sublimé à 2,70 p. 100. Ce résultat extraordinaire a été plei- nement confirmé par Croner et Neumann. Il faut donc en venir à l'opinion que le sublimé ne tue la spore charbonneuse qu'à une limite que l’on n'atteint jamais dans la pratique. La mort apparente est liée à l'insuffisance de neutralisation, puis à l’absence de conditions très favorables au développement des germes. Ces expériences n’ont cependant qu'une portée pra- tique relative, car, bien avant d'être tuées, les spores sont, en réalité, inoffensives. Mais alors, quel sera le degré de stérilisa- tion qui donnera une sécurité suffisante? cébbont ié done alto ne SE né out nt) dut dé nt à ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 159 Les peaux, après le traitement par le sublimé, seraient seu- lement lavées à l’eau salée. Elles ne courent le risque d'être neutralisées pendant les opérations du tannage que dans un cas : si l'on emploie un sulfure pour l’épilage. Parmi les auteurs qui ont déjà soumis le procédé de Seymour-Jones à un contrôle expérimental, les uns uns ont obtenu des résultats bons [Schnuerrer (12) et Sevcik (13)], et même parfaits [Moegle (14), parce qu'ils ne neutralisaient pas les peaux; les autres ont constamment échoué, parce qu'ils neutralisaient [Hilgermann et Marmann (15), Schnuerrer (12b), Sevcik (13)]. La véritable question n'a été soulevée ni par les premiers, ni par les seconds : dans quelle mesure les préparations de sulfure en usage dans les tanneries sont-elles capables de neutraliser Île sublimé? L'écart des doses stérilisantes, avec ou sans neultrali- salion, est très grand. En voici deux exemples : TaBLeau VI. Spores séchées sur des lamelles recouvertes de sérum sec. Acide formique 0,5 p. 100; 24 heures. SPORES, 2 MINUTES ([V;) SPORES, 2 MINUTES (IV.) CONCENTRATION du sublimé. Sans NHSHS Sans NH°HS neutralisalion. 1.6 p. 100. neutralisalion. 1.6 p. 100. REASON pe == 410000 . . . 2 RER — SO CO Re Pr nan [lanefe nier ciae — 6000 . FOOD 007 CETTE TUUE MEET PRE RES | RE UE CE CUT EN RER LR ENRPEE de NT Ir La limite passe de 1: 15000 et 1:10000 à 14: 300. IL est évident qu'on se rapprochera de l’un ou l’autre de ces extrèmes selon que la neutralisalion sera plus ou moins parfaite. On peut, d'autre part, dépasser la jimite et atieindre une concen- tralion en sulfure qui devient toxique à son tour. Geppert à montré, par des essais en série, qu'au delà d'une quantité 160 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR oplima de sulfure, la toxicité se met à jouer; le nombre de colonies qu'on obtient avec la même dose de sublimé va en diminuant. J'ai fait l'essai des préparations suivantes : 1° Sulfure de sodium (1) à 2:1000 pendant vingt-quatre heures, cinq jours et dix jours; 2° sulfure de sodium à 1:100 pendant deux et cinq jours ; 3° sulfure de sodium à 5 : 100 pendant un et trois jours ; 4° chaux (30 grammes par litre) additionnée de 2 : 1000 de sulfure de sodium pendant cinq et dix jours ; 5° pâte composée de : chaux vive, 10 grammes ; arsenic rouge (réalgar, orpin des lanneurs), 1 gramme; eau, 20 grammes, pendant un jour; 6° chaux à 30 grammes par litre additionnée de 1 gr. 5 de réal- gar par litre, pendant dix jours. Ces dernières préparations sont faites en mélangeant la chaux vive fraîchement calcinée avec le réalgar, puis éteignant avec un peu d’eau et ajoutant ensuite le reste lorsque la réaction est terminée. Le tableau VIT donne les résultats obtenus avec ces divers traitements. Le sulfure de sodium à 2: 1000 neutralise le sublimé. Mais si l’on augmente la concentration et prolonge le contact suffi- samment, l’action toxique achève la destruction de la spore commencée par le sublimé. Cette influence ne se manifeste pas encore avec À p. 100 de sulfure pendant deux jours. Mais, au moins pour les échantillons qui ont servi à ces expériences, la concentration de 3 p. 100 pendant un jour et à une exception près de 1 p. 100 pendant cinq jours, a empèché le développe- ment des cultures. (Avant de transporter les lamelles des sul- fures concentrés dans le bouillon, elles passaient cinq minutes dans l'acide chlorhydrique à 1 : 1000, et einq minutes dans l'eau. La même précaution était prise après les traitements par la chaux, qui laisse du carbonate adhérent aux lamelles, et par suite après les sulfures arsenicaux.) Il semble que le sublimé et le sulfure aient dans ces cas combiné leur action ; le sulfure seul, d'après Hilgermann et Marmann (15), tue les spores en quelques jours à 5 p. 100. Quant à la chaux, elle les tuerait en vingt-cinq jours d’après Ponder (15 2s), en plus de trois mois d'après Hilgermann et Marmann. Le mélange de chaux et de sulfure de sodium à 2 : 1000 paraît plus favorable à la stérili- 1) Sulfure de sodium cristallisé avec 9 mol. d'eau = 32,5 p. 100 de Nas. ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 164 sation que le sulfure sans chaux; mais il est encore capable de neutraliser l'effet du sublimé à 1 : 500 (n° 3). NUMÉROS 3|Sp. 1 min. 5[Sp. 1 min. (VI). 2|Sp. 1 min. (IVS). (IV4). Sp. { min. (VIN). (V®). Sp. 2 min. (V9). Sp. 2 min. (EV:). Sp. 10 sec. en sublimé CONCENTRATION 16Q NH HS 110 min. Na°s . 1000. l p.100. p.100. CHAUX + Na°S 2 p. 1000. TABLEAU VII. — Sérum: acide formique 0,25 ou HC1 0,11 p. 100. CHAUX! PATE de —+orpin| chaux —+ L dilués. | orpin. 4 jour. Les préparations arsenicales sont plus intéressantes ; il se forme probablement dans la réaction très complexe entre la chaux et le sulfure d'arsenic, et à la faveur de la température, de l’arsénite, du sulf-arsénite, et du sulfure de calcium. La concentration en sulfure soluble et son pouvoir de réaction avec le sublimé sont suffisants pour neutraliser lorsqu'on emploie 162 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR la pâte; avec les préparations diluées, qui sont d’un usage courant, la neutralisation ne paraît pas obtenue. Il n’est guère possible que la toxicité des sels arsenicaux intervienne ; elle serait plus sensible avec la pâte. D'ailleurs, d’après Hilgermann et Marmann, une pâte à 20 p. 100 de chaux et 1 p. 100 de réalgar ne tue pas les spores en neuf jours. C'est donc bien une neu- tralisation incomplète qui assure l'efficacité de la désinfection. Expériences sur des peaux. — Bien que ces exp‘riences sur des préparations de spores aient lieu dans des conditions beau- coup mieux définies que les essais sur des peaux infectées ne peuvent l'être, il fallait évidemment appliquer à des peaux les résultats. Je n'ai disposé que de peaux de cobayes tués par ino- culation du charbon: ces peaux, séchées dans des conditions convenables, contenaient des spores. La répartition en était assez régulière pour que, sur 20 inoculations au cobaye, et même sur 40 (en comprenant des peaux traitées par des méthoiles imparfaites de stérilisation), 2 seulement n'aient pas infecté l'animal. Après le traitement par le sublimé, la stérilisation de ces peaux élait contrôlée par inoculalion à 3 cobayes pour chacune, et par culture en bouillon. La première épreuve seule était con- sidérée comme démonstrative, puisqu'elle témoignait du pou- voir infectant des spores survivantes; d’ailleurs, dans les épreuves sans neutralisalion, la réaction avec les tissus débar- rassait probablement la peau de l’excès de sublimé. D'autre part, la formation d'une fausse membrane autour du fragment inséré diminuait sans doute les chances de septicémie char- bonneuse ; mais dans les contaminations spontanées il faut aussi compter avec les défenses de l'organisme. Quant à l'épreuve par la culture, elle p rd beaucoup de sa valeur, au moins dans les cas négatifs, du fait que le développement du charbon était gèné par la pullulation d’autres microbes, mesentericus et subtilis ; ils rendaient la recherche du charbon extrèmement hasardeuse. Le table:iu VIIL indique les résultats obtenus. Sur 11 expé- riences (4 peaux différentes), avec 1 : 5000 à 1: 3000 de sublimé, et 0,60 à 0,25 p.100 d’aci le formique, toutes les inoculations (31; ont été n:galives ; le charbon a été isolé une seule fois des cul- tures. 163 SPORES CHARBONNEUSES DES )N ESSAIS DE STÉRILISATH « *SO[H9]S S24N/[N) «€ ‘S9[L19)S S94nNJ[N) *‘JAIJISO o1nJpno | S4AHALTNN NON EN IN 10 = n DURE LUTTE on SLVLTASAUH : 9p fnoq ne 4'IANDONI ‘sanof pp ‘snpuoo urdio 7 9 XNBU9 EI SUBP PSITEATNON ‘I 0 ‘uduo,p Jo xXneqo 9p 97ed oun 9948 9SITB4NoN “sanoOl 01 ‘0007 : & SEEN 19 HO)PN 9SITEINON “SAMOÛ 07 ‘000 : & SEEN 19 : HO)E) PSHBAINON ‘007 A 01 ‘DEN SUPP o4na F ‘OUUOEU ET R 916 *“SOINOU F8 ‘000! : SEEN PSIRINON “001 ‘A OT JDN SUEP 24NoU F OUTORUT ET À POV « *00E ‘A OT L')EN SUBP 9MOU FE ‘UHR ET R 9NGV « NOLLVSTTUHLS VTT SHHAV LNANALIVHT ‘007 ‘d ‘onbiuuioj| AKIIANS | HOVA | oN AG) V 0006 0006 0006 0:06 0006 0006 000€ 0006 000€ 000€ 000€ 100$ 000€ “eprubtiy 2p soqno ‘Jju99 06 ‘d ey0es néed op ‘16 £ 40 7 ‘selneu %2 : sdua], Ss416ap 0% : eingezodiwuer ‘IIIA AVATANVTI, 16% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR J'ai fait de plus 7 essais (4 peaux différentes) avec les mêmes doses sans addition d’acide, et obtenu la stérilisation apparente six fois: la septième, 2 cobayes sur 3 sont morts. Les spores de cette peau résistaient deux minutes au chauffage à 100 degrés, celles des autres une minute à 100 degrés, ou seulement cinq minutes à 90 degrés. Au contraire, les peaux neutralisées au sulfure de sodium à 2:1000 pendant vingt- quatre heures (n° 18, 19) étaient restées virulentes. De mème après un traitement de quarante heures par la pâte de chaux et d'orpin (arsenic rouge) étendue sur le côlé chair (n° 23). Quant au mélange de chaux étendue et de sulfure de sodium à 2 :1000, il n'a pas fait réapparaître la vitalité des spores (n° 22): on ne peut en effet pas tirer argument de la peau n° 21, car elle était traitée par le sublimé sans acide, et déjà virulente avant la neutralisation (n° 20). Ainsi, la peau s'est comportée comme les spores sur lamelles dans les cas les plus favorables ; est-ce un hasard qui ne se reproduirait pas? ou l’inoculation à l'animal est-elle moins sensible que la culture, les spores se trouvant au stade d'atténuation décrit par Geppert? Il faudrait de nouveaux essais pour porter un jugement. Enfin, comme dans le cas des spores sur lamelles, la chaux étendue, additionnée d'arsenic rouge, n'a pas neutralisé le sublimé. Les cultures mêmes sont restées stériles : avant d’ensemencer, la peau avait été d’abord soigneusement lavée à l’eau stérile, maintenue quelques heures dans une solution d'acide chlorhydrique à 4 : 1000, et lavée à nouveau. Une conclusion se dégage de ces expériences : c’est que les pelains aiguisés à l’arsenice sont les moins dangereux pour l’épilage des peaux stérilisées au sublimé. Je n'ai pas fait l'essai du sulfure de sodium à 3 p. 100 pendant vingt-quatre heures ou à 1 p. 100 pendant cinq jours, dans la crainte que des concentralions aussi fortes ne soient pas supportées par les peaux pendant ces délais. On utilise quelquelois, pour des cuirs inférieurs, des solutions encore plus concentrées, mais pendant quelques heures seulement. Il se peut que les titres de 3 p. 100 pendant vingt-quatre heures et 1 p. 100 pendant cinq Jours ne soient pas impraticables. Je n'ai malheureusement pas pu étendre mes expériences à des peaux de chèvre, de mouton, de bœuf naturellement infectées. Cette lacune dans la critique de la méthode de ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 163 Seymour-Jones est comblée par les résultats qui viennent d’être publiés par Moegle (14), par Sevcik (13). Moegle à traité par le sublimé à 1: 5000 ou 1: 10000 et l'acide formique à 4 p. 100 une dizaine de peaux de bœuf; aucune n’a fourni de cultures, après lavage au carbonate de soude. Sevcik, employant sur des peaux de bœuf, de cheval et de mouton 1:5.000 de sublimé et 4 p. 100 ou 0,5 p. 100 d'acide formique, n'a eu que # insuccès sur 58 expériences; avec des doses plus élevées, 1 : 3000 à 1 : 500, la stérilisation a toujours été eflicace, dans 63 essais : enfin avec 1 : 10000 et 1 : 20000 de sublimé, elle a encore réussi 19 fois sur 24. Le danger de contamina- lion, sil n'est pas totalement supprimé, peut donc être consi- déré comme très faible, aussi longtemps que les peaux ne sont pas exposées à la neutralisation du sublimé. Et ce danger ne réapparaitrait jamais, si l’on avait soin d'épiler à la chaux aiguisée avec le sulfure d’arsenic, et peut-être au sulfure de sodium très concentré. LV LE POUVOIR ANTISEPTIQUE DU SUBLIMÉ EN’ PRÉSENCE D'ACIDE ET DE MATIÈRE PROTÉIQUE. On à remarqué depuis longtemps que la présence de protéines diminue le pouvoir antiseptique du sublimé. Elles sont coagu- lées, et le coagulum entraine une partie du sel de mercure, ce qui abaisse le titre de la solution. Mais la combinaison inso- luble, d'ailleurs mal définie, de matière protéique et de sel de mercure se dissout dans certains acides, si les concentrations respectives sont convenables, et aussi dans le chlorure de sodium en milieu neutre. C'est ainsi que Behring tuait la spore charbonneuse dans le sérum avec 1 : 1000 de sublimé et 9 : 1000 de SO:HE, en seize heures (16). La préparation de sublimé de la pharmacopée allemande associe le sublimé au chlorure de sodium. Dans la méthode de Seymour-Jones, on fait agir l'acide formique à côté du sublimé. L'addition d'acide est indispen- sable, parce que la plupart des peaux à désinfecter ont été séchées à fond, dans des pays chauds; il serait impossible de 166 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR les mouiller convenablement si on ne leur faisail pas subir un reverdissage, opération pour laquelle l'acide formique convient parfaitement. Mais le résultat désiré peut être obtenu avec des concentrations de 0,20 à 0,25 p. 100. Le taux de 1 p. 100, indiqué au début par Seymour-Jones, ne serait utile que si la présence d'acide augmentait le pouvoir antiseptique. C'est ce qui ma conduit à examiner : 1° l'influence des acides sur l'activité du sublimé en général: 2 leur rôle en présence de sérum séché sur les lamelles souillées de spores; 3° l’effet du sérum lui-même. Jai neutralisé le sublimé, après vingt-quatre heures de con- act, par le sulfhydrate d'ammoniaque, sans viser à atteindre les limites d’Ottolenghi et de Croner et Neumann. Ce sulfhy- drate était fraîchement préparé, pour quelques jours au plus, en saturant de FES la solution d'ammoniaque du laboratoire. diluée à 1:35; d’après le poids de sulfate obtenu à partir du sulfure de plomb précipité par 4 cent. cube, il contenait 9,41 p.100 de NHSHS. Je l'ai employé à deux dilutions diffé- rentes, dont les titres approximatifs étaient 2 : 1000 et 16 : 1000. Les lamelles y séjournaient pour des raisons de commodité, seulement cinq minutes, puis étaient lavées cinq minutes dans l'eau distillée. La concentration la plus forte favorisait beau- coup plus le développement des spores, comme le montre l'essai suivant : Spores résistant 10 secondes à 100 degrés: acide formique 0.5 p. 100. CONCENTRATION DU SUBLIMÉ Æ nn 7 — — 1: 6000 1 : 5000 1 : 4000 1 : 3000 Solution faible de NHHS. . . . — = = = Solution forte de NH'HS . . .. _ + == je Cest la solution forte qui m'a servi le plus souvent : on verra par quelques exemples que l'emploi de l’autre, c'est-à-dire qu'une neutralisation moins complète, rend plus sensible lin- fluence des facteurs accessoires susceptibles de modifier les résultats. D'après Rohrkoff (17), l'acide tartrique ou chlorhydrique à 0,5 p. 100 affaiblissent le pouvoir antiseptique du sublimé. La raison en est donnée par Krünig et Paul (2) : l'ion Hg est le ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 167 principal agent de la désinfection (mais non le seul); si l'on ajoute soit un acide dont le sel de mercure est moins dissocié que le bichlorure, soit même l'acide chlorhydrique, qui pos- sède avec lui un ion commun, on ne peut qu'affaiblir le pouvoir antiseptique, car on diminue l'ionisation. Cependant Paul, Birstein et Reuss (18) ont reconnu plus tard que l'addition du sel de soude à l'acide correspondant, bien que diminuant l’ionisation de l'acide, augmentail un peu son action; Gegen- bauer et Reichel (19) confirment le fait pour l'acide chlorhy- drique et le chlorure de sodium. L'interprétation de Krünig et Paul n’est donc bonne que lorsque l'expérience ne vient pas la contredire. Les tableaux suivants montrent dans quelle mesure la stéri- lisation est gènée par l'addition d'acide : 1° pour les spores sans sérum {tableau IX); 2° pour les spores en présence de sérum (tableau X). TaBceau IX. — Sublimé sans acide et avec acide, sans sérum. A. — Neurrausé NHSHS [| B. — Neurrauisé NH“HS 1,6 p. 100. 0,2 p. 100 CONCENTRATION spores spores spores spores Spores spores 30 secondes 1 minute 2 minutes ID sec. 1 min. 3 min. du CNTENS (Alg, I). (IV). CN NC LETS) (IIL,). sublime. ; { ! Ac. Ac. Ac. | NCA Ac. AC. | form. form. form. form. form. form. 160725 0,25 0,25 0,50 0,50 | | 0.50 p. 100 p. 100 |p. 100 p. 100 p- 100 | p. 100 [l | | | | | (Ru | — | | ——— | — | ——— | — | —| — | # = [=] [==] (=) | . er slelelie ie + allie rteenellle met, : slots ets e)lletsiettete | Penn e)e elle leheret see . . . 168 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Dans quelques cas, l'acide chlorhydrique est substitué à l'acide formique: je me suis assuré par d’autres expériences que les résultats étaient équivalents. Dans le tableau IX (sans sérum), lorsque la stérilisation est obtenue avec des doses faibles de sublimé, soit parce que les spores sont peu résistantes, soit parce que la neutralisation est imparfaite, la présence d'acide entraine une baisse du pouvoir désinfectant (de 1 : 5600 à 1 : 2000 et 1: 4000; de 1 : 50000 ou 1: 20000 à moins de 1 : 15000 ou 1 : 10000). Au contraire, lors- qu'il faut aller jusqu'aux doses de 1:1000 et 1:500 sans acide, l'équilibre s'établit entre les deux séries. C'est le cas oénéral dans le tableau X (avec sérum) où, à une exception près, la dose nécessaire est au moins de 1 : 1000. Tagreau X. — Sublimé sans acide et avec acide, avec sérum. A. — NEUTRALISÉ 1, B. — NEUTRALISÉ NHÉHS 156 p.400 | NHSHS 0,2 p. 100 _ | SE || = É Spores Spores Spores Spores Spores Spores Ah CE { minute | 3 minutes | 3 minutes 3 minutes 2 minutes 3 minutes Se (Alg. I.). 2). (IV V.). (IIT,). GES) A 6 | | Acide Acide Acide ; | Acide He form. form. form Fes | DRE form 12 EE | 0,5 0,5 2 2 0,6 FOLIE p. 100.| |p. 100 p2100 PROD NES NEEANOS p. 100 La différence apparaît ici dans l’ensemble comme peu impor- tante. Du moins, l'acide n'a-t-1il pas une seule fois une influence favorable. En présence de sérum, ce résultat est surprenant, car le sublimé seul coagulait toujours le sérum qui, avec l'acide formique, restait au contraire dissous. Avec l'acide chlorhy- drique, j'ai constaté que la coagulation persistait quelquefois, ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 169 surtout pour les concentrations fortes en sublimé: la stérilisa- lion n'en paraissait d'ailleurs pas affectée. Pour voir si la présence de sérum était indifférente, j'ai comparé dans un nouveau tableau (XT) des expériences faites avec les mêmes spores, les unes nues, les autres recouvertes de sérum, en présence d'acide; ces spores étaient toutes relatr. vement peu résistantes. TaBceau XI. — Sublimé avec acide, sans et avec sérum. Neutralisé NH'‘HS 1,6 p. 100. SPORES, 30 SEC.|SPORES,30 SEC.|SP., 1 MIN.|SPORES, 2 MIN.|SPORES, 2 MIN.| (IIL;). (Alg Il). |(Alg. L) (IL). (III: ): CONCENTRATION ; Ac. formique | Ac. formique | Ac. form. HCI Ac. formique. du sublimé. 0,5 p. 100. 0,25 p. 100, [0,25 p.100.| 0,185 p. 100. 0,5 p. 100. | | | Sérum. Sérum. | Sér Sér. sérurr HS000 ANR et Re AMP M dE Eh GUOOPNIER PIERRE EAN LR ET À + — 5000 |... RARE AI PRE RARES 18 — 2000222 Æ Re DUO ET ESS = ti Msnne tel | 2000 +++ —) — —n— |n,. Li _ Ne re | AOOO RS ER ER le Dares Me Se A EE EE Sa EN A ORNE | PAR + ER Pour les trois premières séries, il n'y a pas de différence sensible; la dernière est franchement et l’avant-dernière lége- rement meilleure sans sérum. Le résultat n’est donc pas entièrement négatif; mais l'écart est inférieur à celui qu'on attendrait. L'explication en est sans doute que la quantité de sérum employée d’une part, et l'acide ajouté de l’autre, atté- nuent dans des proportions à peu près égales l’action du sublimé: les deux facteurs ne s'additionnent pas. Si cela est vrai, la diflérence entre les spores nues el recouvertes de sérum doit ètre plus nette lorsqu'on n'ajoute pas d'acide, Je ne possède pas de séries parallèles, avec ou sans sérum, sans addition d'acide. Dans les exemples suivants, les lamelles ont été 12 seu- 170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR l lement lavées dix minutes à l’eau, sans neutralisation au sulfure : Tarzeau XII. — Sérum acide et sans acide. sans neutraliser. SPORES SPORES 3 minutes (IV,). 2 minutes (IV,). CONCENTRATION du sublimé,. ere Ac. formique. 0,5 p. 100 Sans acide. Sans acide, Ac. formique. 0,5 p. 100 L'écart est manifeste, et repose surtout sur le fait que les spores non neutralisées sont en apparence tuées par des con- centrations très faibles. En présence de sérum et sans acide, le bénéfice du défaut de neutralisation disparaît, ou le sérum ait comme la neutralisation. Une fois atteinte la dose élevée qu'il rend nécessaire, la neutralisation au sulfhydrate d'am- . monium n'aurait à son tour plus beaucoup d'influence; elle n'obligerait pas à forcer sensiblement la concentration, Ainsi l'addition d'acide, si elle n'améliore pas sensiblement les résultats, ne peut cependant pas être défavorable. Mais est-il nécessaire d'atteindre la dose élevée de 1 p. 100? La ques- tion a une importance pratique. Une usine francaise a traité avec 1 p. 100 d'acide formique environ 3.000 peaux; il s'est formé un grain qui dépréciait totalement le cuir, de sorte que l'opération fut jugée désastreuse. Il n’en aurait pas été amsi avec des concentrations plus faibles. Au point de vue de là stérilisation, y a-t-il une dose optima? Dans les tableaux XIII et XIV, j'ai comparé diverses concentrations en acide formique, à partir et au-dessous de 0,50 pour 100, sur les spores sans et avec sérum. Sans sérum (XIII), on n'apercoit pas de différence entre les doses de 0,5 à 0,1 p. 100. Avec sérum (XIV), 0,12 et 0,05 p. 100 se sont montrés inférieurs à 0,25 et 0,5 une fois, et 0,20 à 0,50 une fois. Les concentrations de 0,50 à 0,10 étaient équivalentes ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 171 dans les trois autres séries. Le pouvoir antiseptique propre de l'acide ne paraît pas intervenir, et son action dissolvante à l'égard des combinaisons insolubles du mercure être suffisam- ment assurée avec 0,20 à 0,25 p. 100. Tasceau XIII, — Sans sérum. Doses d'acide formique p. 100. SPORES SPORES 2? minutes 3 minutes CONCENTRATION IV,). (IV,). du sublimé. TT | ———— TagcEeau XIV. — Avec sérum. Doses d'acide formique p. 400. SPORES SPORES SPORES SPORES SPORES CONCENTRATION 30 secondes 2 min, 2? min. 3 min. 3 min. (Alg. IL). (IL). (II). (IV). IV.) du : Ç 0,51 0.25 | 0,12 ,0.05| 0.5 |0,25 | 0,5 | 0,2} 0.110,5 | 0.2 | 0,1) 0,5 | 0.2 | 0,1 sublimé. 1H PE Mme] ME 0 RUE LEE DEN) | 2000 de EE | Din LE PAM PEN ES PER PES ne | Na ROODR e . DS ORAN | En résumé, dans toutes ces expériences, le sublimé, neutra- lisé cinq minutes dans le sulfhydrate d'ammoniaque à 1,6 p. 400, ne tue pas les spores résistantes à moins de 1 : 300. En pré- sence de concentrations voisines de cette limite, l'addition d’acide ou de sérum est presque indifférente au résultat. Au contraire, lorsque la stérilisation est obtenue avec des concen- tralions faibles, — que les spores soient particulièrement sen- 172 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sibles ou que la neutralisation soit insuffisante, — ces mêmes facteurs jouent un rôle nettement défavorable, la présence d'acide corrigeant pourtant celle de sérum, qui est la plus nuisible des deux. Si, au voisinage de la dose mortelle, l’action du sublimé n’est pas contrariée par la présence d'acide ou de sérum, cela tient apparemment à ce que la quantité qu'ils inactivent est minime; la soustraction n'est sensible que pour les concentrations faibles. Ces curieuses relations illustrent le fait dominant : la mort apparente est produite par des traces de sublimé qui adhèrent énergiquement à la spore ; leur affinité n'est balancée que par un excès énorme de sulfure ou d'hydro- gène sulfuré, ou par une proportion très élevée d'acide ou de sérum. Mais la mort réelle exigerait des doses véritablement massives. v ACTION DU CHLORE EN PRÉSENCE DE MATIÈRES PROTÉIQUES. Le chlore est Le plus puissant des antiseptiques, et son action sur la peau à dose raisonnable n'est nullement à craindre (Meunier et Seyewelz) (20). Son emploi pour la désinfection des peaux charbonneuses paraissait indiqué. Le chlorure de chaux, dont le pouvoir désinfectant est dû à l'hypochlorite, à côté d’un peu de chlore libre, a donné de bons résultats à Woronzoff, Winogradoff et Kolesnikoff (21), à Nissen (22), Chamberland et Fernbach (29), Geppert (6). Hil- sermann et Marmann (15) viennent d'en faire l'essai pour la stérilisation des boues et des eaux résiduaires de tannerie. Ces derniers auteurs ont constaté une grande irrégularité dans les résultats, parfois bons avec 0,3 p. 100 de chlorure de chaux, parfois mauvais avec 4 p. 100. Ils ignoraient l'observation de Chamberland et Fernbach, que la solution à 1:120 est plus active que la solution à 1:12 ou 1:60. Mais si l'on ne craint pas l'odeur du chlore, qui n’en permettrait pas l'emploi lors- qu'il s’agit de laver des objets ou des murs, on obtient une bien meilleure désinfection avec le chlorure de chaux acidulé, c'est- à-dire que le chlore est beaucoup plus actif que l'hypochlorite correspondant. Ce fait a été déjà constaté par Nissen, Geppert: ESSAIS DE STERILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 153 dans un essai préliminaire, j'ai vu les mêmes spores résister six heures et vingt-quatre heures à la solution qui, acidulée, les tuait respectivement en dix minutes et deux heures. Je me suis donc borné à essayer le chlore libre. Les chiffres connus sur l'efficacité du chlore visent tous des désinfections dans un temps très court, et par suite ne ren- seignent pas sur un traitement de vingt-quatre heures. Ils révèlent du moins une très grande activité. Les spores seraient tuées en deux minutes, avec 0,3 :1000 (Krôünig et Paul) (2); en une minute avec 0,630 :1000 (Chamberland et Fernbach). Avec 2:1000, elles n infecteraient plus le cobaye après quinze secondes, ni le lapin après cinq secondes (Geppert) (6). Mais Geppert signalait déjà que la pénétration du chlore est faible, et que la présence d’albumine diminue beaucoup son efficacité. Le moyen le plus pratique de préparer une solution de chlore est d’aciduler la solution de chlorure de chaux, ou celle d'hypochlorite de soude ou de potasse de titre correspondant. Parmi les autres procédés, Graebe a étudié le mélange de chlo- rate de soude et d'acide chlorhydrique (23 a), et celui de per- manganate de potasse et d'acide chlorhydrique (23 6). Mais les rendements ne sont intéressants que si l’on opère avec l’acide concentré, et les sels solides ou en solution très con- centrée. Dans les proportions qui, d’après les chiffres de Graebe, devraient donner 1 gramme de chlore par litre, on n'obtient en diluant les réactifs que le dixième du rendement, et l'acidité nécessaire est encore trop forte pour la pratique. Comme le chlorate de soude n’a qu’un faibie pouvoir anti- septique propre (Krônig et Paul), il ne donnait aucune chance de succès, ce que j'ai vérifié. Mais le permanganate de potasse est un désinfectant énergique. Selon Krünig et Paul un mélange de 0,99 p. 100 de MnOï'K et 0,91 p. 100 de HCI tue les spores en deux minutes. Pour la désinfection des mains, une solution à 1 p. 100 de MnO:K et 0,5 p. 100 de HCI serait supé- rieure au sublimé à 5 p. 100. Ces concentrations ne pourraient ètre appliquées aux peaux sans dommage. J’en ai essayé de plus faibles, soit de 0,4 à 5 : 1000 de MnOï“K, avec 0,2 à 2,5: 1000 de HCI. Les spores, qui résistaient une minute au chauffage, n’ont jamais été tuées. Il ne restait donc à retenir que les hypochlorites; je les ai acidulés avec un léger excès 17% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR d'acide formique, dont l'emploi était avantageux pour lappli- cation de la méthode aux peaux. L’hypochlorite de soude et le chlorure de chaux, pour la même teneur en chlore, sont équi- valents, comme l’indiquent les exemples suivants : l'agzeau XV. — Spores sèches, en présence de sérum. Chloren.Æ1D0ODP SEP 0,2 0,3 0,4 Sp. { min, [Chlorure de chaux. (IV*). Eau de Javel. Sp. 2 min. Chlorure de chaux FPE" (V1). Eau de Javel. On voit qu'il n'y a pas d'écart notable entre les deux sources de chlore; je les ai confondues dans le tableau XVI, qui con- tient les résultats obtenus sur des lamelles de verre, pour des expériences de vingt-quatre heures (à 20 degrés). Tableau XVI. — Concentrations en chlore p. 1000. 0,05 | 0,08 | 0,1 | 0,2 Spores 113 min. 2|{ min. [2 min. S|3 min. ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 155 La différence entre les spores nues et recouvertes de sérum était telle que j'ai abandonné le premier groupe, qui ne pouvait conduire à aucune donnée pratique. Dans les essais en pré- sence de sérum, les séries irrégulières sont fréquentes; Je les ai fait figurer intégralement dans le tableau; elles relèvent probablement de variations imprévues du titre en chlore, variations sur lesquelles je reviendrai plus loin. La limite à laquelle la stérilisation est atteinte oscille également, même pour des spores de résistance au chauffage comparable (deux ei trois minutes), entre 0,3 et 1:1000. Ce dernier chiffre me paraissant élevé, j'ai cherché si en abrégeant le temps d'action, pour la même concentration initiale, la désinfection serait moins énergique. La durée des expériences groupées dans le tableau XVII varie de six à vingt-quatre heures. J'avais essayé aussi de mouiller d’abord les spores avec la solution alcaline d’hypochlorite de soude, puis d’aciduler après un cer- tain temps de contact. Ce procédé n’a présenté aucun avan- lage. Tableau XVII. SP: 11 SEC: SP. À mix. SP. 2 MIN. CONCENTRATIONS (VI) (VIN) 4 EN CHLORE Done 8h. 146h.{2%n.|6n.|8n.|l68n.:| 24h. |[g8n.| 16h | %h. — | + — | + 1,6 8 * 2h. dans l’eau de Javel, non acidulée; 6 h. dans l’eau acidulée. Les temps choisis sont lous suffisants pour des spores extrèmement fragiles (une seconde à 100 degrés). Pour les 176 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR autres, 1] y a une légère différence entre huit et seize ou vingt- quatre heures; l’écart entre ces deux dernières durées est masqué par l'irrégularité des résultats; il paraît minime. D'après ces quelques données, les limites de doses et de temps n'élaient pas convenablement choisies pour faire apparaître une relation telle que celle que Gegenbauer et Reichel (19) ont mise en lumière pour l'acide chlorhydrique. Il est probable que. si cette relation existe, elle ne se vérifierait que pour des temps très courts et des doses très élevées; les pertes en chlore jouent un trop grand rôle dès que l'expérience se prolonge. La neutralisation du chlore à l’hyposulfite de soude n’a pas d'influence bien nette, fait déjà constaté par Geppert. Les pro- priétés du sublimé à cet égard ont un caractère tout à fait exceptionnel. Dans l'expérience suivante, la plus grande efficacité se manifeste après la neutralisation : CI P. 1000 ee Pi Me 0. 9800 pe Neutralsés ee — ns Ne &nor ) : TT.) À “pos uAUnR Sans neutraliser ee Us CROSS Expériences sur des peaux. — La diminution considérable du pouvoir antiseptique du chlore en présence de sérum faisait prévoir que la désinfection des peaux de cobaye ne serait possible qu'avec des concentrations élevées. En effet, tous les essais sont restés négatifs, pour l’inoculation comme pour les cultures, au-dessous de la dose de 1 :1000. D’après les indications des expériences sur les lamelles, j'ai cherché alors à diminuer le temps d'action. En huit heures, la peau n'était pas désinfectée. Dans une expérience, elle l'était en seize heures; mais dans deux autres essais, J'ai obtenu après seize heures, une inoculation positive sur trois. Ainsi la concentra- üon de 1:1000 pendant vingt-quatre heures est une limite au-dessous de laquelle on ne peut guère descendre. Les résul- ats sont réunis dans le tableau XVII. Comment faut-il interpréter ces données? D'après Meunier et Seyewetz (20), la gélatine fixe environ 0,25 à 0,40 p. 100 de son poids sec de chlore; la peau doit se comporter à peu près de la mème facon. En immergeant 1 kilogramme de peau séchée (contenant encore 25 p. 100 d’eau par exemple) dans ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 177 cinq litres de liquide, elle fixerait 1,80 à 3 grammes de chlore; sur une solution à 1:1000, il en resterait 0,640 à 0,400 : 1000. Mais il faut tenir compte aussi de la déperdition très rapide du chlore. Dans un vase à large ouverture, le titre d’un litre de solution de chlore à 1 : 1000 tombe à 0,150 — 0,700 en deux ou trois minutes, 0,650 — 0,500 en cinq minutes, 0,250 en dix minutes. TagLeau XVIII. un C] & 2 |INOCULÉ| RÉSULTATS | N°5 |PEAU & © | au bout |" ww’ | CULTURES p. 1000. ro CE CHE l'OM 4 FO | 5 | 1AIRTCA|R030 Chlorure de chaux. 2% | 6 jours.| + —+ 13 cultures positives. DR IREC A R0ESS Chlorure de chaux. JANINE EN ECC EE 5 cultures positives. 3, |N1a. 110.40 Chlorure de chaux. PM ER INOENCE 3cultures positives. 4 | Ia. | 0,60 Chlorure de chaux. 24 | 3 — | + + 3 cultures posilives. 5 | Ia. | 0,80 Chlorure de chaux. 24 [3 — | + + 3 cultures positives. GRIMTA te) Chlorure de chaux. DIN | » ARIANE) Eau de Javel, 816 — | + + + |1culture positive. FSI ou Ie Eau de Javel. 1612 — | — — — » GPA ENS ER TES Eau de Javel, 24 h., 1612 — | + — — » puis acidulé. 10 | IV.| 1 » | Ac. formique, 24 h., | 16 2 — | + — — !1.culture puis eau de Javel. | positive. ] La présence de peau (250 grammes de peau humide pour un litre) provoque une chute un peu plus rapide, par exem- ple 0,600-0, 450 en deux minutes: mais après dix minutes, J'ai trouvé des chiffres de 0,225-215, presque les mêmes que dans les vases sans peau. Il est clair que ces dosages ne peuvent être qu'approximatifs, la déperdition variant beaucoup d'un essai à l’autre. Après vingt-quatre heures, il restait, en pré- sence de peau, de 0,017 à 0,035 : 1000. En augmentant la con- centration initiale jusqu'à 2: 1000, la perte est proportionnel- lement plus forte; le titre après quelque temps n'est guère différent de celui qu'on obtient avec 1:1000. Ainsi deux fac- teurs, fixation du chlore sur les matières protéiques, et déper- dition par diffusion du gaz, concourent à abaisser le titre des 158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR solutions, et l'importance du second paraît dépasser celle du premier. Il serait donc légitime de viser à des désinfections rapides, et par suite d'augmenter les doses plutôt que les temps de contact. On à vu cependant que pour la même con- centration la différence entre six, huit et seize heures, était appréciable ; au delà l'influence de la durée est moins sensible. La conclusion de ces expériences est. que la dose de chlore libre ou actif qui est nécessaire pour stériliser est très faible, peut-être 0,2 ou 0,1:1000, en prolongeant l'action. Mais il est difficile de fixer à l'avance les conditions qui permetiront de réaliser cette concentration. Serait-il donc possible de stéri- liser de grosses peaux par le chlore? On ne saurait en douter a priori. L'expérience pourrait seule trancher la question ; elle vaudrait d’être tentée si l'occasion de traiter de grosses peaux naturellement infectées se présentait. J'ai indiqué ailleurs comment l'opération devrait être conduite. Conclusions. — Une autre méthode, proposée par Schatten- froh (2%) et soigneusement étudiée par Gegenbauer et Rei- chel (19) repose sur l'emploi de l’acide chlorhydrique, avec addilion de chlorure de sodium, qui préserve les peaux d'une attaque sérieuse par l'acide. On obtient une désinfection effi- cace à condition de pousser suffisamment soit la concentration soit le temps de contacl: les combinaisons les plus pratiques sont : 2 p. 100 d'acide (titre réel) avec 10 p. 100 de sel, et qua- rante-huit heures, à la température de 15 degrés à 20 degrés; ou 1 p. 100 d’acide avec 10 p. 100 de sel, et six heures, à 40 degrés. Malheureusement les peaux auraient peine à sortir indemnes de ce traitement. Si l’on réduit l’un des facteurs, la méthode, sans être dépourvue de valeur, donne moins de sécu- rité que l’emploi du chlore ou du sublimé. Avec le chlore on réussit à stériliser des peaux de cobaye dans des conditions parfaitement acceptables pour la pratique; les résultats seraient-ils les mêmes avec des peaux plus épaisses? Une cerlaine irrégularilé dans la désinfection est à craindre; l'odeur aussi peut êlre un inconvénient, lorsqu'on opérerait en grand. Enfin, la méthode au sublimé-acide formique est très satisfai- sante au point de vue de la tannerie, si l’on abaisse à 2 : 1000 la dose d'acide formique. Mais en dépassant la concentration de À: ESSAIS DE STÉRILISATION DES SPORES CHARBONNEUSES 179 5000 de sublimé, on risquerait de voir apparaître sur les peaux des laches persistantes de sulfure de mercure. Il faudrait donc se contenter d’une concentration qui, sans tuer les spores, les rendit presque toutes inoffensives, à la condition d'éviter les préparations de sulfures susceptibles de neutraliser le sublimé. Le nombre des cas annuels de charbon dans l'indus- trie des cuirs et peaux en France peut être estimé à 40 ou 50 environ. L'expérience nous dirait à quel chiffre, sans doute très bas, il serait abaissé par la pratique d'une semblable désinfec- lion. 10 rs INDEX BIBLIOGRAPHIQUE . G. AgT. — Bull. de la Soc. d'Encouragement pour l'Industrie nationale, août-octobre 1913, p. 248. . KkôNIG et Pau. — Zeitschr. f. Hygiene, t. 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Les cliniciens ont observé depuis longtemps un certain nombre de symptômes nerveux, parfois très graves, chez des sujets infectés par les helminthes; il n'existe cependant pas de description anatomo-pathologique des lésions nerveuses chez l’homme ou les animaux ayant succombé à une helminthiase. D'ailleurs, on à très rarement l’occasion de faire l’autopsie d'un sujet dont la mort serait uniquement due à une intoxication vermineuse ; le plus souvent, cette dernière se complique d'une infection secondaire. Dans ces conditions, il est difficile, lors de l'interprétation des lésions observées, de faire la part de chacun des facteurs morbides. Nous avons pensé que, seule, l'étude du système nerveux dans l’intoxication vermineuse expérimentale pourrait déter- miner si les toxines sécrétées par Les helminthes sont vraiment capables de provoquer la formation de lésions nerveuses, et Jusqu'à quel point les symplômes nerveux, observés chez l'homme et les animaux porteurs d'helminthes, peuvent êtr mis sur le compte de l’action de ces derniers. Nous avons fait trois séries d'expériences. Dans la première, nous avons examiné le système nerveux central dans l’intoxi- cation directe ; la deuxième a trait à l'intoxication vermineuse indirecte, c'est-à-dire à l’anaphylaxie vermineuse; enfin, la troisième partie de nos expériences se rapporte à l’état du système nerveux dans l’anaphylaxie sérique. Nous avons pra- liqué ces dernières recherches, afin de voir si les lésions observées dans l’anaphvlaxie vermineuse ont un caractère spécial ou bien si elles se retrouvent également chez les 182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR animaux ayant présenté des accidents anaphylactiques ana- logues, mais après sensibilisation par d’autres substances. Avant d'aborder l'exposé de nos recherches, remarquons que la seule indication de lésions nerveuses dues aux toxines vermineuses, que nous ayons trouvée dans là littérature, se trouve dans le travail de Messineo (1). La constatation de cet auteur n'a cependant, nous semble-t-il, aucune valeur, car elle a été faite à la suite d'injection sous-dure-mérienne de liquide ascaridien, c’est-à-dire dans des conditions qui ne peuvent se présenter dans la réalité que d’une façon tout à fait excep- tionnelle. LÉSIONS DU CERVEAU ET DE LA MOELLE ÉPINIÈRE DANS L'INTOXICATION VERMINEUSE DIRECTE Dans cette première parlie du travail, nous avons étudié 13 cobayes dont 6 ont été intoxiqués par le liquide péri-entérique de l’Ascaris megalocephala, 5 par l'extrait de Tænia plicata du cheval et 2 par l'extrait de selérostomes (cheval). a) Les injections de toxine ascaridienne étaient sous-cutanées et quoti- diennes. Le cobaye 4 a recu deux injections de 1 cent. cube d’une dilution de toxine à 1/20. Il a présenté, dès le lendemain de la première injection, de la parésie du train postérieur et est mort en 36 heures. Le cobaye 2 a été injecté 6 fois avec 0,5 cent. cube d’une dilution de toxine à 1/50 ; il n'a présenté, comme signe clinique, que de l'abattement. Le même symptôme a été trouvé chez les cobayes 3, 4 et 6, auxquels on a fait 20, 29 et 80 injections. On n’a observé rien de pathologique chez le cobaye 5, qui a été cependant injecté 70 fois. Tous ces cobayes ont été sacrifiés, excepté ie premier, dont les organes ont été fixés aussitôt après sa mort. b) Les injections de téniotoxine ont été également quotidiennes, mais les voies d'injection et les doses étaient variables. Le cobaye 7 a reçu en injection intraveineuse 4”cent. cubes d’une dilution à 1/25 d'extrait de lænia plicata; mort en 15 heures. Les cobayes 8 et 9 qui ont été traités de la même facon et ont présenté de la parésie du train postérieur comme le cobaye 7, ont survécu et ont été sacrifiés le lendemain. un 17 et l’autre 24 heures après l'injection. Le cobaye 40 a recu 29 injections sous-cutanées et quotidiennes de 0,5 cent. (1) Giornale med. del. R. Esercilo, avril 1805. LÉSIONS DU SYSTÈME NERVEUX 183 cube d’une dilution à 1/5 de téniotoxine ; cet animal supportait mal les injections ; son poids est tombé de 420 à 320 grammes. Le cobaye 41 a bien supporté les 30 premières injections (0,5 cent. cube d’une dilution à 1/25); mais il est devenu très faible et a beaucoup maigri, lorsqu'on a commencé à lui injecter des doses croissantes de toxine (de 1/2 cent. cube d'une dilution à 1/25 à 3 cent. cubes d'extrait pur). On lui a fait en tout 68 injections quotidiennes. e) Les cobayes 12 et 43 ont recu en injection intraveineuse 0,5 cent. cube d'extrait de sclérostomes dilué de moitié dans l'eau physiologique. L'un a été sacrifié au moment de l’agonie, 5 heures après l'injection ; il a été paralysé pendant les deux dernières heures. Le deuxième a présenté de la parésie du train postérieur ; il a été sacrifié également 5 heures après l'injection. Technique histologique. — Les morceaux prélevés au niveau de la région motrice du cerveau et à différentes hauteurs de la moelle épinière ont été fixés, les uns par l'alcool à 96 degrés, les autres par le liquide de Weigerl pour la neuroglie et, enfin, par le formol à 10 p. 100. Les coupes, provenant des morceaux fixés par l'alcool et inclus dans la celloïdine, ont élé colorées par le bleu de méthylène d'Unna pour la mise en évidence des corpuscules de Nissl, et par la méthode de Rachmanow à l'argent réduit pour l'étude des neurofibrilles. Les morceaux fixés par le Weigert ont été coupés par le procédé de la congélation ; les coupes ont été colorées par l'hématoxyline phospho molyhb- dique de Mallory (Alzheimer), ou bien par le mélange bleu d’aniline-orange de Mallory (Alzheimer-lakob). Les pièces fixées au formol ont élé également coupées au microtome à congélation ; les coupes ont été colorées au Sudan III, au rouge Scharlach ou bien à l'argent réduit de Bielschowsky. CARRE Les cobayes se comportent d’une façon bien différente vis- à-vis de la toxine vermineuse : les uns supportent très bien de nombreuses injections, sans présenter le moindre symptôme clinique; d’autres, comme nous venons de le voir, s’affai- blissent, maigrissent et sont pris d’une grande faiblesse qui les empêche parfois de faire le moindre mouvement. Nous n'avons trouvé de lésions du système nerveux central que chez les cobayes ayant mal supporté l'absorption de toxine vermi- neuse. Ces lésions sont d'autant plus marquées, que la durée des symptômes a été plus longue. Nous trouvons inutile de décrire les constatations histolo- giques faites lors de l'analyse de chaque cas ; cela nous entrai- nerait à des répétitions inutiles. Nous donnerons done une des- cription générale des lésions observées. Examinées à un faible grossissement, les coupes de moelle et de cerveau montrent presque toujours une congestion, surtout marquée au niveau des méninges. Lorsque les lésions sont très 18% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR intenses, on peut aussi constater à ce grossissement un certain degré de neurophagie. Mais les lésions vraiment nettes ne sont observées qu'à l'immersion. En général, lorsqu'on trouve deslésions, ces dernières ne sont pas localisées à un point quelconque de la moelle épinière, mais se retrouvent sur toute la hauteur de cet organe; il en est de mème pour toute l'épaisseur de la région motrice de l'écorce cérébrale (1). Nous allons décrire successivement les lésions de la cellule nerveuse, de la cellule neuroglique et de la fibre de la sub- stance blanche. Lorsque les lésions sont légères, la cellule nerveuse montre seulement un début de chromatolyse; les corpuscules de Nissl sont encore reconnaissables, mais leurs contours sont moins nets et l’on trouve déjà un grand nombre de granula- tions bleuâtres, fines, qui viennent s'interposer entre ces cor- puscules. Dans ïes cas plus graves, ces granulalions remplis- sent uniformément tout le protoplasma de la cellule nerveuse, dans laquelle on ne voit plus de corpuscules de Nissl. Quelque- fois, ces granulations sont tellement serrées qu'elles rendent la cellule très opaque. Dans d’autres cas, elles se groupent de facon à former un vaste reticulum enserrant toute la cellule. Au fur et à mesure que les corpuscules de Niss! s’altèrent et se détruisent, on voit apparaître dans le protoplasma des cel- lules nerveuses, aussi bien dans la moelle épinière que dans le cerveau, des canaux sinueux, comme ceux que montre la figure 1. Ces canaux sont tantôt limités à un coin de proto- plasma, {antôt disséminés dans toute son épaisseur. Dans cer- taines préparations il nous a semblé voir que ces canaux débouchent à l'extérieur de la cellule, comme on peut très bien s'en rendre compte d'après le dessin 4 de notre planche en couleur. Il n'est pas douteux que la présence de ces canaux n'est pas due à un artifice de préparation ; on les voit sur les coupes provenant de morceaux fixés par différents liquides fixateurs, et colorées aussi bien par le bleu d'Unna que par l'hématoxyline de Mallorv. (1) Nous n'avons recherché des lésions que dans la partie motrice du cerveau. LÉSIONS DU SYSTÈME NERVEUX 185 Il nous est impossible de dire si ces canaux, qui ressemblent beaucoup à ceux connus sous le nom de canaux d’Holmgren, sont des formations pathologiques, ou si leur existence dans la cellule normale est masquée par les corpuscules de Nissl. Quoi qu'il en soit, leur présence témoigne d'un état patholo- gique de la cellule nerveuse. Cela est d'autant plus vraisembiable qu'une altération ana- ÿ 1 =) F16. 1. — Cellule nerveuse de la corne antérieure de la moelle épinière d'un cobaye intoxiqué par l'extrait de sclérostomes. Coloré par l'hématoxy- line phospho-molybdique de Mallory ; objectif à immersion 1/12 de Zeiss, oculaire 2. La cellule montre des canaux sinueux disséminés dans différents points de son protoplasma. _ Fi6. 2. — Mèmes détails dans une cellule pyramidale de l'écorce cérébrale d'un cobaye mort en crise d'anaphylaxie hydatique. Même coloration: objectif à immersion 1/12, oculaire #. logue de la cellule nerveuse a été décrite déjà en 1908 par Nageotte et Ettlinger (1) dans les diverses intoxications et auto- intoxications expérimentales, en particulier chez les chiens ayant subi une extirpation double des capsules surrénales ou des reins, et chez le cobaye intoxiqué par le venin de la vipère, la toxine tétanique ou l'iodure de potassium. Les dessins que (1) NaGeotre et ÉTrruinGer, Lésions des cellules nerveuses au cours de diverses intoxications et auto-intoxications. Presse médicale, 23 mars iS98. n° 25. 13 186 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR nous trouvons dans leur travail montrent l'identité des lésions observées par eux avec celles que nous venons de déerire et que Nageotte et Ettlinger désignent sous le nom de fissuration de la cellule nerveuse. Des lésions semblables ont été égale- ment décrites par Marchand et Vurpas {1) sous le nom de lésions « en coup d’ongle » dans un cas de méningomyélite expérimentale chez un chat. ; Les neurofibrilles restent intactes tant que la cellule nerveuse est légèrement atteinte; on peut encore les reconnaître, même lorsque les corpuscules de Niss! ont disparu et que les fines eranulations bleuâtres forment un reticulum dans le proto- plasma. Cependant, dans ces cas, les neurofibrilles sont beau- coup plus fines que dans la cellule normale (procédé de Rach- manow). Les neurofibrilles disparaissent complètement dans les cas d'intoxication grave. Dans ces conditions, on voit aussi des modifications notables du noyau, qui se déplace à la péri- phérie de la cellule, se ratatine et montre quelquefois un nu- cléole déformé. La déformation du noyau peut coïncider avec la déformation du protoplasma, comme le montre la figure 3 de la planche qui représente une grande cellule pyramidale de l'écorce cérébrale dans un cas d'intoxication chronique par la léniotoxine, On voit que la cellule est ratatinée et qu’un de ses prolongements est tortueux, en lire-bouchon. Lorsqu'on examine une préparation de moelle ou de cerveau d’un cobaye intoxiqué, colorée par le bleu d'Unna, on constate que les noyaux des cellules neurogliques sont beaucoup plus apparents que dans les coupes de cerveau ou de moelle nor= maux, Cela tient à l’altération d'un grand nombre de ces cel- lules dont les noyaux sont devenus pyenotiques. Mais la pyc- nose du noyau n’est que le premier pas vers la transformation «amiboïde » de la cellule neuroglique, comme l'ont déjà cons- taté Alzheimer et plus récemment Rosental. On trouve la pyc-, nose des. noyaux neurogliques dans toutes les intoxications, légères ou intenses. Le stade « amiboïde » typique ne s’observe que dans les cas graves. Les figures 3 à 6 montrent les diffé- rents aspects de la cellule neuroglique ayant pris la forme (4) Mancuax» et Vunras, Lésions de la moelle dans un cas de méningo- myélite expérimentale chez un chat. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 9 mars 19041. LÉSIONS DU SYSTÈME NERVEUX 187 « amiboïde », telle que l’a décrite Alzheimer et telle que nous l'avons retrouvée dans différents cas d'intoxication directe, ainsi que dans l’anaphylaxie. Le plus souvent, son noyau esl transparent et le proloplasma renferme une ou plusieurs vacuoles et présente de nombreux prolongements rappelant ceux des cellules amiboïdes. Les FIGURES 3, 4, 5 et 6 montrent les différents aspecls sous lesquels se présentent les cellules neurogliques ayant subi la transformation amiboïde. Dans le dessin 3, on voit deux cellules neurogliques, dont une appliquée sur les parois d'un capillaire sanguin, e une cellule neuroglique normale, Comme la figure précédente, la riGurE 4 montre une cellule neuroglique amiboïde de la substance blanche de la moelle épinière d'un cobaye mort d'anaphylaxie hydatique aiguë. La riGure 5 montre une cellule neuroglique amiboïde de la substance grise de la moelle épinière du même cobaye. La ricvre 6 montre une cellule neuroglique amiboïde de la substance blanche (région sous-corticale d’un cobaye mort en crise doRspay Se hydatique. Toutes ces figures sont dessinées d'après les préparations Ia es à l'hématoxyline phospho-molybdique de Mallory (Alzheimer) ; objectif à immersion 1/12 de Zeiss. oculaire 4. Dans certains cas, on constate une accumulation de cellules neurogliques autour des cellules nerveuses, ce qu’on interprète habituellement comme phénomène de neurophagie. Nous n'avons cependant jamais observé de substances lipoïdes dans le protoplasma de ces cellules neurogliques, ni dans la paroi des vaisseaux. 188 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR On trouve également des modifications très nettes des fibres de la substance blanche: elles sont tuméfiées et montrent au niveau de leur cylindraxe, sur les coupes colorées par la mé- thode de Mallory, des granulations tantôt roses, tantôt bleuâtres. ‘Remarquons enfin que nous n'avons jamais trouvé de lésions appréciables au niveau de la pie-mère. II LÉSIONS DU SYSTÈME NERVEUX CENTRAL DANS L'ANAPHYLAXIE VERMINEUSE Nous avons voulu nous rendre compte si les accidents d’ana- phylaxie vermineuse provoquent également des lésions du système nerveux; le tableau I résume les 19 cas que nous avons étudiés. Cette étude nous à permis de constaler tout d’ ot qu'il est le plus souvent impossible de déceler, dans le cerveau ou dans la moelle, la moindre lésion (par la technique histologique moderne) chez les animaux n’ayant présenté que des phéno- mènes anaphylactiques très légers ou bien, au contraire, ayant succombé au choc anaphylactique mortel, mais d'une très courte durée (trois à dix minutes). “Les lésions nerveuses sont, par contre, très marquées, lorsque l'animal a présenté des accidents anaphylactiques graves, pendant au moins une demi-heure. L'intensité de ces lésions est d'autant plus grande que la durée des accidents graves (convulsions, re sie, parésie du train postérieur, d. a été plus joua Les figures en noir (2, #4, 5, 6) et certaines figures (12225) de ne en couleur montrent très nettement que les Ten des cellules nerveuses, des cellules neurogliques et des fibres nerveuses, dans l'anaphylaxie vermineuse, présentent les mêmes caractères que dans les cas où l’intoxication directe par les produits parasitaires était d'une certaine gravité. IL'està noter que la nature des lésions ne dépend nullement de l'espèce parasitaire à laquelle appartient l'helminthe qui a fourni la toxine ; les lésions sont les mêmes dans l’anaphylaxie hydalique et dans l'anaphylaxie ascaridienne. Nous avons même NUMÉRO des expériences > (JO 0) 10 11 1% 15 16 4 gl 18 19 NUMÉRO des cobayes 10 res 29 28 13 1% 45 16 = 11 Tagceau 1. — Observations d’anaphylaxie vermineuse. DATE de l'injection sensi- bilisante 30 juin 1913 Id. Id. PRODUITS vermineux injectés l'inje Liquide | Toxine | déchaïi- hyda- tique asca- | ridienne CC: | 2 cc. 18, 2. [3 inject.l 26 avrillde 2 cc. 1913 25 quil. 1913 Id. Id. 30 juin 1913 25 juil. 1915 à 4 jours d'inter- | valle. 31GC: 3 injecL. de 2? cc. | à jours d'inter- | valle. | Id. 20CC: | | | il 26 avrills inject.! 1913 25 juil. 1913 Id. Id. 21 juin 3 inject. de 2 cc. 1913 25 juil. 1913 Id. 28 avril 1913 Id. Id. quoti- diennes de 1/4 cc. | NGC: 3. CC: | à4jours d'inter- valle. J CC: CC: 0,5 cc. au 1/50 Id. ASNCC: au 1/50 DATE de ction nante Id. Id. 25 juil. 1913 4 sept. 1913 Id. er juin 1913 Id. Id. DOSE de l'épreuve déchaï- nante 2NCC. CC. ce 19 CC. 19 CC. 19 cc, 5 CC. péri- tone. 21CC: 2RGC 2LCC: 0:5%cc: 0,5*0c: 2 CC: à 1/50 PHÉNOMÈNES ANAPHYLACTIQUES observés Très légers. Très légers. Toux, convulsions, mort en 4 min. Toux, convulsions, mort en 3 min. Tremblements, tombé au bout de 5 min., mort en 10 min. Toux, convulsions, paralysie du | train postérieur pendant 15 min.: s’est remis ensuite, sacrifié au bout de 8 heures. Mêmes phénomènes que dans le cas précédent pendant 10 min.; rémission, sacrifié au bout de 2 heures. Toux, convulsions, paralysie du train postérieur pendant 45 min.: sacrifié au bout d’une heure. Dyspnée, abattement pendant 36 min.; sacrifié au bout de 3 heures. : Malade au bout de 3 heures, abattement et paralysie des mem- bres pendant 1 heure; sacrifié en pleine crise. Toux, convulsions au bout de 3 min.; mort après 36 min. Hoquets, tombe au bout de 5 min., paralysie du train posté- rieur ; reste couché pendant l heure; sacrifié 2 heures après, au moment de la rémission. Dyspnée, toux, hoquets pendant 5 min., reste abattu et immobile pendant 50 min. au bout desquel- les il est sacrifié. Abattement, secousses convul- k sives pendant 1 heure. Id. Id. Mort en 3 min. Mort en 3 min. Mort en 5 min. 190 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR constaté que les lésions de l’anaphylaxie vermineuse n'ont rien de spécial et qu’elles sont absolument superposables à celles qu'on trouve dans l’anaphylaxie sérique. Le tableau II résume les observations de nos cobayes sensibilisés par le sérum de cheval, et chez lesquels nous avons provoqué des accidents graves d'une certaine durée. Lorsque le cobaye est sacrifié quelques heures après s'être rétabli d’une crise d'anaphylaxie grave, on trouve chez lui des lésions beaucoup moins impor- tantes que chez les sujets sacrifiés pendant une crise d’inten- silé semblable. Ce fait nous permet de penser que la cellule nerveuse se répare rapidement, lorsque l'animal a supporté le choc anaphylactique. TaBLEAU IT. — Observations d'anaphylaxie sérique. (7,1 8 8 DOSE o8|[0> ra à DATE AR Sr elr n DE de Re PHÉNOMÈNES see SIMEnecHon &e | l'injection | 'MJectée o “| > sensi- inject JE : tactas es er ch de ee ES ANR ÉPOTNTERTE (veine) anaphylactiques observés 3 —— a 1nIN52h M 9ISeptr 4 cc. 4 sept. |1/40 cc. Toux, dyspnée, secous- 1913 à 1/50 1913 ses violentes pendant 8 min.. remis en 10 min.: sacrifié au bout de 15 min. 2 | 31 Id. À cc. Id. 1/40 cc. Démangeaisons, convul- à 1/50 sions au bout de 5 min., pa'ésie du train postérieur pendant 5 min.; sacrifié au bout de 13 min. 3 | 30 Id. À cc. 2 sept. |1/16 ce.| Toux, parésie du train à 1/50 1913 postérieur pendant30 min., reste abattu; sacrifié au bout de 1 heure. 4 | 39 Id. 1 ce. |8 oct. 1913] 1/8 cc.| Dyspnée, secousses, pa- à 1/50 ralysie du train postérieur, abattement : sacrifié au bout de 25 min. ÿ | 40 Id. 1 cc. Id. 1/8 cc. | Convulsions, puis paré- à 1/50 sie du train postérieur pendant 15 min., très ma- lade pendant 40 min., sa- crifié au bout de 40 min. Dans un mémoire tout récent, paru au moment où notre travail était presque terminé, Rosental a décrit des lésions LÉSIONS DU SYSTÈME NERVEUX 191 qu'il a observées dans quelques cas d'anaphylaxie sérique. À quelques détails près, les résultats de ses recherches concordent avec les nôtres (1). CONCLUSIONS. 1° Le système nerveux central du cobaye ne réagit pas tou- jours à l’intoxication vermineuse. On ne trouve chez cet animal de lésions nerveuses que dans le cas où il a présenté de son vivant des symptômes cliniques plus ou moins graves. Cer- tains individus peuvent résorber des quantités considérables de produits vermineux, sans donner lieu à une réaclion ner- veuse tant soit peu marquée. 90 Les lésions qu'on observe dans l'intoxication aiguë ou subaiguë portent sur la cellule nerveuse, la cellule neuroglique et sur la fibre de la substance blanche. En dehors des ditlérents degrés de chromatolyse, la cellule nerveuse présente souvent un nombre considérable de canaux sinueux creusés dans loute l'épaisseur ou dans une partie de son protoplasme. Dans les cas graves, le noyau se déplace à la périphérie de la cellule et moutre un nucléole déformé. Les neurofbrilles sont conservées dans les formes légères d'intoxication, mais disparaissent dans les cas graves. La cellule neuroglique présente les différents stades de la transformaion « amiboïle » : ou bien elle conserve sa forme, mais son noyau devient pycnotique, où bien elle prend l'aspect de la cellule amiboïde d'Alzheimer. On trouve également, sur- tout dans certains cas d’intoxicalion chronique, une accumu- lation anormale d'éléments neurogliques autour des cellules nerveuses (phénomène de la « neurophagie »). Dans les mêmes conditions, les fibres de la substance blanche sont également altérées : elles sont tuméfiées, mais de facon irrégulière. 3% Les lé-ions du cerveau et de la moelle épinière dans l'anaphylaxie vermineuse sont nullrs ou à peine marquées, Si le cobave meurt de choc anaphy actique suraigu, en 3-10 mi- nutes. Elles sont, par contre, très accusées, si les phénomènes {(1\ S. Rosexraz, Experimentelle Studien über amüboide Umwandlung der Neuroglia. Histologische und histopathologische Arbeilen über die Grosshirn- rinde. Nissl-Alzheimer. Vol. VI, fase. 1, p. 89-160. 192 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR anaphylactiques graves ont été d'une certaine durée (une demi- heure ou plus). Elles présentent les mêmes caractères que dans le cas d'intoxication subaiguë ou chronique. Il existe presque toujours un parallélisme entre la durée des accidents graves et l'intensité des lésions de la cellule nerveuse. 4° Les lésions du système nerveux central, observées chez les animaux anaphylactisés avec le sérum de cheval, sont tout à fait superposables à celles trouvées dans l’anaphylaxie vermi- neuse. »° Comme les lésions du système nerveux sont beaucoup plus marquées et de beaucoup plus fréquentes dans l’anaphylaxie vermineuse que dans l'intoxication directe par les toxines para- sitaires, 11 nous paraît probable que les phénomènes nerveux, parfois très intenses, comme par exemple les symptômes de méningisme que l’on observe quelquefois chez certains porteurs d'helminthes, doivent être considérés comme étant de nature anaphylactique. EXPLICATION DE LA PLANCHE Toutes les figures sont dessinées à la chambre claire de Zeiss ; objectif à immersion de Zeiss 1/12; pour les dessins 1 et 2, on s'est servi de l'oculaire 2; pour les dessins 3, 4, 5 et 6, de l'oculaire 4. Les coupes ont été colorées au bleu de méthylène d'Unna. 1° Groupe de cellules nerveuses de la corne antérieure de la moelle épi- nière provenant d'un cobaye sacrifié en pleine crise d’anaphylaxie hydatique obs. n° 15). On y voit trois cellules nerveuses, dont une entourée par des cellules neurogliques. Les cellules nerveuses sont en « chromatolyse »; le protoplasme ne montre plus de corpuscules de Nissi, mais il est parsemé de fines granulations prenant une teinte bleuâtre au bleu d'Unna. En »#a, on voit les cellules neurogliques dont les noyaux sont en pycnose; le proto plasma de ces cellules montre, de plus, des granulations groupées sous forme de rayons partant du noyau. Ces figures correspondent à l'état pré- amiboïde de la cellule neuroglique. Les autres cellules neurogliques, qui se trouvent entre les cellules nerveuses, paraissent normales. En c, deux capil- laires coupées transversalement. 2° Cellule nerveuse de la corne antérieure de la moelle épinière d'un cobaye sacrifié en pleine crise d’anaphylaxie hydatique (obs. 10). On y voit, en outre de la chromatolyse, un certain nombre de canaux sinueux limités à un coin du protoplasma. 3° Grande cellule pyramidale de la région motrice de l'écorce cérébrale (cellule.de Betz) d'un cobaye sacrifié après avoir reçu 29 injections quoti- diennes d'extrait de Tænia plicata. Elle est ratatinée, en tire-bouchon, en LÉSIONS DU SYSTÈME NERVEUX 193 chromatolyse ; de plus, son noyau est irrégulier, déformé et le karyoplasme a pris upe leinte légèrement bleuâtre. 4 Cellule nerveuse de la corne antérieure de la moelle épinière d'un cobaye en agonie, sacrifié 5 heures après l'injection d'extrait de sclérostomes. Cette cellule est surtout intéressante par un nombre considérable de canaux creusés dans un coin du protoplasma; en outre, elle présente un début de chromatolyse. 50 Cellule pyramidale de l'écorce cérébrale d’un cobaye sacrifié en pleine crise d’anaphylaxie hydatique (obs. 15). Etat réticulé du protoplasma, chro- matolyse, canaux. 6° Deux cellules pyramidales de l'écorce cérébrale d'un cobaye mort après avoir reçu 20 injections de toxine ascaridienne. n@, cellules neurogliques avec noyaux pyenotiques ; n, cellule neuroglique normale. INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES SUR MILIEUX ARTIFICIELS ET NATURELS par Juces VENTRE. AVANT-PROPOS La question des levures et des ferments purs mise à l'ordre du jour par les travaux mémorables de Pasteur était restée stationnaire en ce qui concerne l'œnologie. Seules, les indus- tries de la brasserie et les industries de fermentation y faisaient appel. Si l'industrie de la vinification n'avait pas profité des découvertes biologiques qui donnaient d'aussi bons résultats ailleurs, c'est que le milieu plus complexe qu'est le moût de raisin se prête moins bien au développement des ferments purs. Qu'on ait affaire à du moût d'orge ou à un milieu inerte comme la pâte, on n'a pas à craindre que des germes naturels viennent contre-balancer l'action des ferments sélectionnés qu'on y a introduits. La notion de purification du milieu, avant tout ensemence- ment, était trop simple pour qu'on n'ait pas songé à appliquer à la vinilication ce qui réussissait si bien partout ailleurs. Depuis que Pasteur, introduisant dans un moût d'orge une levure tirée d’un vin de Champagne. avait obtenu un produit à bouquet vinique, la plupart des wnologues avaient été hantés par l'idée de faire avec des moûts de qualité inférieure des vins de grands crus. Rommier, Marx, Martinand et Rietsch. Jacquemin avaient essayé de trouver une formule pratique de l'emploi des levures à la vinilication, mais n'avaient jamais oblenu de résultats constan's. Il faut arriver aux travaux de Kayser pour trouver une étude systématique des principales levures indigènes ou sélectionnées pouvant être employées dans le Midi. Au profes- INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 195 seur Rosenstiehl revient l'honneur d’avoir pensé à appliquer au moûüt de raisin les procédés de stérilisation par la chaleur en usage en brasserie notamment. Cependant ces moyens, néces- sitant des dépenses assez considérables, ne devaient pas prendre une grande extension et devaient, au contraire, rester l'apa- nage de quelques propriétaires. Même, maleré la réalisation d’une stérilisation, les résultats obtenus avec les diverses variétés de ferments ne pouvaient ètre donnés comme constants. En effet, l’action de la chaleur n'est pas durable et difficilement applicable à une grande masse de vendange; pour peu que l'atmosphère ambiante soit contaminée, les produits stérilisés seront susceptibles de redevenir la proie de mauvais ferments. Dans ces dernières années, l'emploi des levures parait s'être généralisé avec la pratique du sulfitage. L’acide sulfureux, étant un puissant antiseptique, joue le rôle de stérilisateur et per- siste dans le milieu à l’état actif pendant un temps suffisam- ment long pour permettre aux ferments introduits dans la vendange de se développer à l'exclusion des autres. Ce qu'il importe donc de connaître, c’est la manière dont se comportent les diverses sortes de levures placées dans le même milieu. Le but du travail que j'ai entrepris est étude de l'influence de certains ferments ellipsoidaux sur différents milieux de uature et de composition variables (moût de raisins rouges où blancs, de richesse saccharine élevée ou faible, etc.). Sur les conseils de M. le professeur G. Bertrand, j'ai mis en œuvre les quatre principales levures le plus généralement utilisées dans la région méridionale. De manière à me rendre compte de la fixation des espèces étudiées, je les ai fait agir comparativement sur des liquides fermentescibles naturels (moût de raisin chauffé, sulfité, enfin stérilisé par filtration à la bougie Chamberland) et artificiels (sucre, touraillons, maltopeptone, cendre de levure, phosphate d’ammoniaque) traités de la même manière que les précédents. Afin de contrôler, dans ces essais préalables, la marche des fermentations et de connaître la façon dont chaque levure se comporte, J'ai suivi leur évolution en faisant le dosage de certains éléments qu'à juste titre on considère comme spéci- fiques de l'état biologique des ferments, notamment l'alcool et 196 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR l'acidité volatile. Le dosage de l'extrait qui, dans certains cas, peut donner de précieuses indications, n’a été effectué que subsidiairement ainsi que le dosage de l'acidité totale. Ce sont ces levures, dont j'avais ainsi vérifié les caractères, qui m'ont servi à effectuer les essais dont j'ai montré précé- demment le but. Dans les produits de fermentation, j'ai dosé tous les éléments que des méthodes sûres me permettaient de rechercher : alcool, acidité fixe et volatile, extrait sec et ses constiluants principaux (glycérine, acide succinique etc.). On retrouvera, au cours du travail, et au fur et à mesure des besoins, la description des méthodes d'analyses que j'ai adoptées. Afin de me rendre compte de l'influence des ferments sur l'acidité, J'ai égale- ment effectué certaines recherches sur la constitution de l’aci- dité fixe. C'est l’ensemble de ces résultats partiels qui m'a permis de dégager des conclusions montrant à quel point la levure pouvait influencer le milieu dans lequel elle se déve- loppe et lui donner un caractère spécial et variable avec l'espèce étudiée. Avant de rentrer dans le détail de mes recherches, je dirai quelques mots sur l'historique de la question. HisTORIQUE CRITIQUE DE NOS CONNAISSANCES SUR L'INFLUENCE DES FERMENTS SUR MILIEU FERMENTESCIBLE Indépendamment des travaux de Pasteur qui, le premier, ayant ajouté des levures de champagne à du moût d'orge trouva dans le produit obtenu le bouquet vinique, nous devons signaler les recherches de Marx qui, en 1888, étudia les levures de vin non seulement au point de vue biologique et botanique, mais encore au point de vue chimique. Son étude porta surtout sur leur faculté de produire des substances volatiles, leur force de résistance contre certains acides et les hautes températures. Il insiste également sur les différences de goût que donnaient certaines variétés de ferments. Carl Amthor, un peu plus tard, a également étudié les levures de vin en se plaçant au point de vue de la sporulation et du temps employé à la fermentation. Dans la même période, Jacquemin, Martinand et Rietsch, Muller-Thurgau, Wortmann, Forti, Mach et Port INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCE DE SACCHAROMYCES 197 firent des essais analogues, soit au laboratoire, soit en grande pratique. Cependant, entre tous, Wortmann établit d'une manière précise que les différences qui peuvent exister entre les di- verses levures sont déjà perceptibles à l'analyse chimique des produits de la distillation. Chaque race de levure, dit-il, à d'ailleurs, plus ou moins, quelque chose de particulier dans l’action qu'elle exerce dans chaque moût, quelles qu’en soient la provenance ou la composition. L'étude de l'extrait sec lui donna des renseignements intéressants : c'est ainsi que, dans une expérience, la levure de Würtzbourg consomma beaucoup moins d'extrait que la levure de Johannisberg, aquelle, à son jour, se montra moins exigeante que celle d'Abrweiler. Il remarqua surtout que la quantité de olycérine produite était toujours plus importante dans la levure de Würtzbourg. Kayser, comparant différentes espèces de levures, constata que la quantité d'acidité volatile variait avec l'espèce. Cepen- dant les expériences entreprises par cet auteur ne donnent pas toujours la précision voulue, car les quantités d'acides volatils trouvées sont très souvent judiciables d'un état patholo- sique spécial du milieu. En outre, dans la plupart des essais, il reste dans le produit fermenté des quantités appréciables de sucre résiduel qui entache d'erreurs la détermination de l'alcool et de l'extrait sec. Forti s'occupe seulement de recher- cher les exigences de certaines levures eu égard aux matières azotées, et leur plus ou moins grande résistance aux hautes températures. Jôrgensen remarque que les espèces peuvent sarder, pendant leur conservation, les parlicularités qui les caractérisent. Ses expériences démontrent que des caractères mème faiblement marqués tels que les caractères organolep: tiques purent être retrouvés après plusieurs années de conser- vation et après une nouvelle culture pure. Au point de vue goût, notamment, on peu citer les hypo- thèses si intéressantes de M. le professeur Rosenstiehl: celui-ci, en effet, admet que toutes les levures ne sont pas susceptibles de donner dans tous les milieux des produits simi- laires quant au goût. D'après lui, il existerait dans le moût une substance qu'il appelle anthophore : les levures, par contre, contiendraient une autre substance pouvant mettre en valeur 198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR la première. Autrement dit, il faudra que la matière anthogène contenue dans la levure convienne à la matière renfermée en puissance dans le moût, pour qu'il y ait développement du bouquet caractéristique du cru dont la levure provient. Il se se passerait là un phénomène analogue à ce qui se passe dans la transformation de l’amygdaline en acide cyanhydrique, glucose, essence d'amande amère, sous l’action de l’émul- sine. Il semblerait que, pratiquement, cette hypothèse si élégante recoit un commencement d'application. En effet, il m'a été donné de remarquer, au cours des dernières vendanges, que les mêmes levures donnaient des produits différents selon la nature des moûts de raisin dans lesquels elles se développaient. C'est ainsi que, dans un moût à base de Carignan, les ferments qui donnaient de bons résultats dans les moûts d'Aramon ne don- naient que des produits souvent inférieurs au témoin non traité; le contraire était vrai quand on cultivait sur moût d'Aramon des ferments donnant d'excellents résultats avec des moûts de Carignan. Dans les expériences que j'ai entreprises, j'ai justement voulu me rendre compte de l'influence plus ou moins grande que pouvait avoir l'espèce de ferment adopté. CHOIX DES MILIEUX. Il était avant tout important de choisir des milieux de culture divers susceptibles de mettre en valeur les diverses caractéristiques des ferments à étudier. J'ai pensé bien opérer en faisant porter mes expériences sur deux milieux artificiels, l’un neutre, l’autre acide, ainsi que sur un milieu naturel. Les milieux artificiels avaient la composi- tion suivante : SUCre(SlUCOSC) PEN PR ARE Le lT0 or 2pardlitre: Extrait de Touralon te NRA 2 gr. » par litre. PBepione (maltopepione) ee ER 0 gr. 5 par litre. Ceéndre de leVUTeRRRNE RER 0 gr. à par litre. MPhosphate biammonique:.t"..1" 0... 1 gr. » par litre. Dans le milieu acide, de composition générale identique au INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 199 précédent, l'acidité était de 5 gr. 3 par litre exprimé en acide sulfurique et était constituée de la manière suivante : Noide are RE 2 SENTE 2 par litre. Acide Male PP Tente ice (A MONS UPAT litre. Acide citrique RE ) gr. 5 par litre. Carbonate de potasse. . . . . . . - . . . 1 gr. 85 par litre. Le milieu naturel sur lequel j'ai opéré est du moût de raisin conservé depuis la récolte précédente par chauffage au bain- marie à 100 degrés en bouteilles hermétiquement closes. Tous ces échantillons ont été divisés en trois parties égales ; l'une a été chauffée à l’autoclave à 120 degrés, l’autre stéri- lisée par filtration à la bougie, enfin la troisième traitée à l'acide sulfureux. La quantité de liquide était telle que jaipu en faire trois lots destinés à ètre ensemencés à des époques déterminées à l'avance (janvier, avril, fin juin). Les échantil- lons non utilisés immédiatement étaient conservés dans un endroit frais et en bouteilles absolument pleines; il fallait éviter en effet, autant que possible, l'oxydation par Part surtout un contact trop prolongé de ces milieux éminemment fermentescibles avec l'air qui renferme toujours des quantités plus ou moins considérables de germes. Ces derniers trouvant un milieu propice, se développeraient avec vigueur et empêche- raient ainsi toute expérience de contrôle. CHoIX DES LEVURES A EXPÉRIMENTER. Comme je l'ai déjà dit précédemment, j'ai voulu opérer sur les levures les plus communément employées dans Le midi de la France. Parmi celles-là, je me suis adressé, pour les vins rouges : A de la levure de Beaujolais provenant du cru de Moulin ävent: A de la levure de Bourgogne, provenant du cru de Romanée- Conti; A de la levure de Médoc, provenant du cru de Margaur. et pour les vins blancs : A de la levure de Champagne Verzenay, provenant de la maison Chandon., A propos de ces levures, je Suis heureux de remercier l'ad- ministration de l’Institut zymotechnique de Montpellier, qui à 200 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR bien voulu mettre à ma disposition toutes les levures dont je pouvais avoir besoin, tant au point de vue de mes expériences à la propriété que de mes recherches de laboratoire. Recherches sur la fixation des espèces de levures employées. — il aurait été très imprudent de se livrer à l'étude des fer- ments sans s'être au préalable assuré que les caractères bio- logiques des diverses levures employées étaient parfaitement bien fixés. Dans ce but, j'ai entrepris une série de recherches et voici comment ]'al organisé mes expériences : 1° J'ai commencé par obtenir une culture pure de lie sur gélatine puis dans un moût de raisin stérilisé. Ceci fait, j'ai conservé les divers ferments dans une solution sucrée (saccha- rose) à 10 p. 100. Etant certain de la pureté de la cellule ini- tiale, j'ai étudié l’action biologique des diverses levures de la manière suivante : J'ai ensemencé chacune des espèces à étudier, dans le même milieu, neutre ou acide, dont il a été question précédemment. J'ai étudié d’abord le temps mis par chaque levure pour trans- former complètement le sucre en alcool. Je dirai d’abord, et une fois pour toutes, que dans tous les essais j'ai eu des fer- mentations excessivement régulières et que leur durée a été sensiblement la même partout. L'étude chimique a été entre- prise pour tous les échantillons. Les lies ont été examinées au microscope de manière à con- trôler leur pureté, puis conservées exactement de la même manière que les cellules initiales. Ce premier essai ayant eu lieu en janvier 1911, on en a fait un second en avril de la même année, mais en utilisant alors comme germes ceux qui prove- naient des lies de la première fermentation. L’allure générale du phénomène a été la même que précédemment. Les produits obtenus ont été soumis à l'examen chimique et ont donné, ainsi qu'on pourra le constater dans les tableaux qui suivent, des résultats identiques; 2° De manière à être assuré définitivement de la constance des données biologiques, j'ai fait, en opérant comme précé- demment, un troisième essai, c'est-à-dire que, le milieu res- tant le même, je me suis servi comme germes de ceux prove- nant de la précédente fermentation. Voici les résultats obtenus : INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES Tageau |. — Milieu neutre. Beaujolais Médoc Essai. Janvier 1911. — = AICOOL ERNST , £ 9085 906 gT. gr. Acidité totale en acide sulfurique.. . . . . 1,985 2,254 Aeidité volatile en acide sulfurique, . . 0,184 0,252 Essai. Avril 1911. AICOO AMENER EE: PET EN NT ES RS FRE 908 906 , gr. gr. Acidité totale en acide sulfurique . . 1,954 2,24 Acidité volatile en acide sulfurique . 0,190 0,28 Essai. Juin 1911. ATCOOÏR RE A MR RR ER SRE NE en 908 9055 ; gr. gr. Acidité totale en acide sulfurique . . . . 1,960 2,25 Acidité volatile en acide sulfurique . 0,187 0,278 TaBLEAu Il. — Milieu artificiel acide. Beaujolais Médoc Essai. Janvier 1911. — — AMCOONMDAADO MARAIS E APR ET RE 909 906 gr. gr. Acidité totale en acide sulfurique . . . . . 4,3 4,6 Acidité volatile en acide sulfurique 0,218 0,307 Crémerde tartre #51 : 4,24 4,59 Acide tartrique total en tartre. . . . . . . 4,5 4,5 Essai. Avril 1911. AUCOOMEAAOON TETE NT UT Re, 908 906 gr. gr. Acidité totale en acide sulfurique . . . . 4,2 4,15 Acidité volatile en acide sulfurique . . . 0,21 0,32 Crémerdéstantre rt. 0. 4,24 4,5 Acide tartrique total en tartre. . . 4,31 4,56 Essai. Juin 1911. AICOOISD LOMME RENNC M a rs 908 906 gr gr. Acidité totale en acide sulfurique . . . . 4,4 4,8 Acidité volatile en acide sulfurique . . . 0,23 0,334 (CRETE MAIRES 6 PO UENAIEN PRENONS : 4,51 4,16 ACIHÉNOLAIeLENMAIArITE. = nn... . Lu. 4,6 4,18 TaBLEAU IT. — Moût de raisin pasteurisé. Beaujolais Médoc Essai. Janvier 1911. = — AICOODPMO ER ET... : 806 803 gr. Fa He Acidité totale en acide sulfurique . . . . . 5,3 5,3 Acidité volatile en acide sulfurique . , . . 0,242 0,38 Creme Jean ITe RER D. 0: | LU 3,92 3,83 Acide tartrique total en tartre. . . . . . . 3,09 3,11 Extraitisec 410)degrés. "1... 4 1: 19,20 19,80 Romanée Romanée 8055 gr. 5,1 0,210 5,10 3,91 19,73 14 201 Verzenay 9085 gr. 1,981 0,198 Verzenay 929 Verzenay 8065 gr. 5,1 0,291 4,04 9:00 17,50 202 1 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Beaujolais Médoc Romanée Verzenay Essai. Avril 1911. = = LE Ces AICODIIDAMOO MEN OCR RTE EC CS 00 802 805 806 gr. or. gr. gr. Acidité totale en acide sulfurique . . . . . 5,3 D52 5,0 4,95 Acidité volatile en acide sulfurique . . . . 0,272 0,394 0,234 0,278 Extrait sec aMl0 desrés me CE Ce. 19,32 19,87 19,44 17,80 Crème deflarire AE AN EN. HU 3,74 3,71 3,87 3,96 Acide tartrique total en tartre. . . . . . . 3,14 3,68. 3,18 3,87 Essai. Juin 1911. AICOOMpP AIDE EE rE Se Dan 7 Dati an Orne 805 -803 805 8055 gr. gr. gr. gr. Acidité totale en acide sulfurique. . . . . 5,3 5,3 SA 5,45 Acidité volatile en acide sulfurique . . . . 0,264 0,396 0,218 0,298 ExtraitsechamMODDIdeeré Pr NE 19/42 19,84 19,20 17,60 Créme ttderlairire rs eee Dance ne de me 3,87 3,83 4,04 3,91 Acide’tartrique total en tartre. . - . … . . 3,91 3,10 3,87 3,87 Si nous examinons les chiffres représentatifs de l'acidité volatile pour les essais opérés en moût artificiel neutre ou acide, nous nous apercevons que chaque levure imprime au milieu un cachet chimique spécial. En effet, la quantité de produits. volatils est à peu de chose près la même pour chaque levure et dans chaque milieu. Pour ce qui est de la teneur en extrait sec, on voit également dans le milieu naturel que chaque levure agit différemment. Il ressort de ces essais que les variétés de ferments sur les- quels j'ai opéré peuvent être considérées comme parfaitement fixées. En effet, d'un essai à l’autre, on retrouve exactement les mêmes caractères; quant aux différences que l’on rencontre dans les dosages, elles sont de l'ordre des erreurs d'analyse. On peut donc admettre que les levures de Beaujolais, Médoc, Romanée, Verzenay, sur lesquelles j'ai opéré, sont fixées. De manière à me rendre compte si les caractères que j'avais observés étaient le fait d'espèces spéciales ou si elles étaient sénérales, j'ai recommencé mes expériences avec d’autres levures des mêmes crus, ou plutôt vendues comme Beaujolais, Médoc, Romanée et Verzenay, et provenant de l'Institut Pas- teur de Paris. Les résultats analytiques que j'ai obtenus sont identiquement les mêmes, ou plus exactement du même ordre que les précédents. On peut donc admettre que chaque levure a une somme de caractères qui permettent de la différencier d'avec d’autres. Ces caractères chimiques pourraient, par con- séquent, servir au classement des espèces, et peut-être plus sû- INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 203 rement que les méthodes basées sur les caractères botaniques ou morphologiques. Les caractères de chaque levure étudiée étant parfaitement fixés, je me suis proposé de rechercher comment elles se com- porteraient en présence de moût de raisin frais. Je pensais, en même temps, faire servir ces expériences à contrôler lhypo- thèse de M. le professeur Rosentiehl, sur les qualités antho- gènes des ferments. À cet effet j'ai ensemencé les quatre levures en question, simultanément dans du moût de raisin blanc et dans du moût de raisin rouge, c’est-à-dire dans des substances antophores différentes. Choix des cépages à expérimenter. — J'ai fait porter mes essais sur deux variétés de cépages aussi différentes que pos- sible {ant au point de vue de la constitution chimique de leurs vins que de leurs qualités organoleptiques. Pour les essais rouges, j'ai employé l’Aramon; pour les essais en blanc, la Clairette, dont le vin présente des caractères spéciaux organo- leptiques facilement reconnaissables. Dans ces conditions, les essais devenaient d'autant plus intéressants que le ferment employé pouvait être susceptible d'annihiler un cachet parti- culier et d'en imprimer un nouveau très différent. L’Aramon, sans personnalité propre, puisque complètement neutre, pou- vait permettre .de recueillir également d'excellentes obser- vations. Les expériences ont été poursuivies au cours de deux ven- danges successives et ont toujours porté sur des raisins sains; il fallait, en effet, qu'aucun facteur étranger ne vienne apporter de perturbations dans les résultats, afin de pouvoir être certain que les caractères particuliers relevés dans les différents échan- tillons provenaient bien uniquement des conditions de fermen- tation réalisées. Voici la manière dont on à préparé les échantillons. Opérant pour chaque cépage sur environ 125 à 130 kilo- grammes de vendange aussi saine que possible, je procédais, avant tout foulage, à un lavage grossier des raisins pour éli- miner la plus grande partie des ferments indigènes qu'apporte avec elle la vendange. Ceci fait, on procédait à un foulage aussi parfait que le permettaient les instruments employés, et cela de manière à obtenir le maximum de moût; la quantité 204 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de liquide recueilli variait, dans ces conditions, entre 90 et 100 litres. Sur ce volume, on prélevait d’abord environ 5 litres de moût qu'on stérilisait par la chaleur et qui devait servir ultérieurement à constater la richesse initiale du milieu. Cet échantillonnage une fois effectué, Île restant du moût était divisé en trois lots égaux qui étaient traités de la même manière que les milieux artificiels dont il a été question précédemment, c'est-à-dire : 1° Par filtration ; 92 Par chauffages répétés trois fois à vingt-quatre heures d'intervalle et à 70 degrés environ (Tyndallisation); 3 Par sulfitage à raison de 250 milligrammes d'acide sulfu- reux par litre. De toutes ces opérations, celle qui m'a donné le plus de peine à réaliser d’une manière parfaite est, sans contredit, la stérili- sation par filtration à la bougie Chamberland; cela est si vrai que, lors de mes essais de 1944, il m'a été matériellement impossible d'empècher la fermentation de se déclarer sponta- nément dans les lots blancs ou rouges. Cet échec dans la filtration est facilement explicable. En effet, si, dans le courant de l’année et au laboratoire, il est facile de se mettre à l'abri des contaminations possibles par les germes étrangers, il n'en est plus de même au moment des vendanges, car la quantité de levures et de bactéries qui se trouve dans l'air est considé- rable et il est très difficile de s'en préserver. Cependant, si on S'en tient à une stérilisation relative, et j'entends par stérilisa- tion relative celle qui permet de conserver les échantillons ainsi traités, au moins quarante-huit heures, muets, on arrive assez facilement à de bons résultats. C'est pour avoir voulu, en 1914, demander l'impossible, que je n'ai pu conserver l'essai filtré. Aussi, dans le compte rendu des analyses, ne trou- vera-t-on rien de relatif à cet essai. 11 est bien évident que les essais filtrés de 1912 et ensemencés ensuite avec les levures à expérimenter peuvent ètre considérés comme normaux, puisque la fermentation s’y est déclarée six à huit heures après l’'ensemencement, tandis que l'échantillon conservé comme témoin n'a fermenté que cinq jours après. Préparation des échantillons filtrés. — Le moût de raisin, de consistance relativement épaisse, passerait très difficilement à INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 205 la bougie de Chamberland, si on ne prenait la précaution de le dégrossir, c'est-à-dire de le séparer de tous les débris de peau, de pulpe, par une filtration grossière à travers une manche en tissu molletonneux du modèle ordinaire employé dans les celliers. Pour parfaire le travail et le rendre plus facile, je me suis adressé, après comparaison avec les résultats obtenus avec la bougie, à la filtration sur amiante ou sur papier, en me ser- vant du filtre petit modèle « Simplez » adopté dans certaines villes pour la filtration des eaux. J'ai eu de cette facon des échantillons que j'ai pu conserver pendant tout le temps néces- saire à l'opération. Avant de passer à l'examen des résultats analytiques, je dirai quelques mots sur l'allure générale des fermentations dans chacun des essais. Allure et rapidité de la fermentation. — La connaissance de ce facteur est très importante car on sait que c’est sur lui que certains expérimentateurs s'appuient, et avec assez de raison, pour expliquer les plus ou les moins grandes quantités de pro- duits secondaires (glycérine, acide succinique) que l’on ren- contre dans les fermentations. D'une facon générale, toutes les fermentations ont été également rapides et se sont terminées dans un laps de temps variant entre cinq et six Jours. La tem- pérature s’est maintenue dans tous les essais entre 24-26 de- grés centigrades, et cela d'autant mieux qu'ils étaient placés dans une salle où la température n'est jamais montée au-dessus de 23 degrés. Facies général des liquides en fermentation. — À part les essais ensemencés avec la levure de Médoc qui sont restés, pen- dant un temps relativement long, troubles et difficiles à clari- lier, les autres n’ont guère perdu de leur limpidité, même au cours de fermentation. Craignant que, au moins pour les essais Médoc filtrés, ce trouble ne soit dû au développement de bacté- ries, J'en ai fait régulièrement l'examen microscopique, et Je n'ai jamais observé, dans les dépôts, la moindre bactérie de tourne, d’amer ou de ferment visqueux. Le dépôt formé par les levures présente également des caractères différentiels, selon la levure employée. C’est ainsi que le Verzenay donne des masses restant en suspension el affectant une forme floconneuse; les autres, et plus particulié- 206 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR rement celle de Romanée a, au contraire, l’aspect lourd. Ces caractères paraissent être bien fixés et n’appartenir qu'à une espèce déterminée. Composition des milieux naturels dans lesquels les levures ont été expérimentées. — J'ai effectué les divers dosages qui devaient me servir de base d'appréciation dans les analyses des produits obtenus après fermentation. Voici les données analytiques auxquelles je suis arrivé : SUCRE ACIDIIE TOTALE ACIDE D D Moûüt de Clairetle, 1911. —.. — — gr. or. ST. Moût chauffé. . . . . 16,95 4,9 » MOUL SUITE EN PRE UT 6595 5,15 0,173 Moût d'Aramon, AO Moutichautté CMP 18,00 5,6 » Moutsulfité. 40e 47,90 5,8 0,170 Moüé de Clairette, 1912. MOUt HIErÉE CRTC 21,00 5.53 » Moût chauffé . . . . . 21,00 5:53 » MOUtISulH té MM EE 21700 5,15 0,186 Moût d'Aramon, 1912. MOULENITTÉR EP NE 16,65 8,86 » Mot chatte "16,65 8,9 » Moüt SulfIté en 1€ 16,65 9,07 0,172 Chaque échantillon de moût a été prélevé en triple exem- plaire de manière à pouvoir, le cas échéant, faire des analyses de contrôle. RÉSULTATS ANALYTIQUES OBTENUS SUR LES VINS Année 1911. Beaujolais Médoc Romance Verzenay VINS BLANCS CHAUFFÉS Ti a SE T= Alcool en volume dist. p. 100 . . . . . . . 9085 905 9085 908 gr. gr RE gr. Acidité totale en acide sulfurique p. 1.000. 3,95 4,5 Fu 4,15 Acidité volatile en acide sulfurique . : . . 0,24 0,35 0,252 0,32 Acidité fixe en acide sulfurique . . . . . OS TA 4,15 3,848 3,83 Extratiamodesrés LME EENERE 13,875 14,95 13:05 1081290 Gendres#iotales ti. 4 CORNE 2,24 2,48 2,36 2,16 Alcalinité en crème de tartre. : . . . . . . 4,88 4,92 5.00 4,83 Crémerdetarnren tin..." Lee 4,10 4,75 4,82 4,14 Acide tartrique total en crème. . . . . . .- 6,35 6,177 6,111-0 16,39 INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES Beaujolais VINS BLANCS SULFITÉS — Alcool en volume dist. p.100 . . . . : . 908 gr. Acidité totale en acide sulfurique p. 4.000 . 4,75 Acidité volatile en acide sulfurique . 0,309 Acidité fixe en acide sulfurique . 4,991 Extrait sec à 100 degrés . 16,20 Cendres totales 2,20 Alcalinité en crème de tie 4,818 Crème de tartre . . . . RTS RE VEN Acide tartrique total en nues 5,14 Medoc Romanée NN © = œ re à © NO © + [+ 14 [ee] nee 207 Verzenay 908 or. DA 0,268 4,832 15,95 2,06 4,818 Nous voyons d'ores et déjà que l'acide sulfureux à une action bien marquée sur la manière dont se comportent de. levures vis-à-vis des milieux naturels. On se rend compte, & effet, que la quantité d'extrait qui, dans les milieux Doi varie avec chaque ferment, est sensiblement la même dans 1 milieux sulfités. mêmes caractères. Beaujolais VINS ROUGES CHAUFFÉS GE Alcocken volume disttp. 100 PEN ON 1008 gr. Acidité totale en acide sulfurique p. 1.000. 4,11 Acidité volatile en acide sulfurique . 0,307 Acidité fixe en acide sulfurique . . . . . . 4,463 Extrait sec à 100 degrés eo 14,32 Cendres totales REA 2,06 Alcalinité des cendres en rie MERS = 5,04 Crémerdertartrenw" ENT ROUEUr 4,85 Acide tartrique total en nee 6,09 VINS ROUGES SULFITÉS Alcool en volume dist. p. 100 . 1008 or. Acidité totale en acide sulfurique p. 1.000 . 5,6 Acidité volatile en acide sulfurique . 0,375 Acidité fixe en acide sulfurique : - . . . . 5,225 Extrait sec à 100 degrés. 17,30 Cendres totales 2,260 Alcalinité des cendres en re e 5,086 Crème de tartre . ME 1,92 Acide tartrique total en ae Ses RS 1 SN Médoc 1006 2 5,00 0,505 2,320 5,128 4,96 5,88 Romanée 10085 0,322 4,178 14,85 2,09 5412 4,96 6.22 ,24 1008 gr. 5,50 0,331 5,169 17,65 2,310 5,044 4,92 5,88 Dans les essais rouges, on retrouvera Îles Verzenay DE ï. 0, k 13; & La 578 1008 or. 5.65 0,357 5293 17,40 2,260 5.044 4,90 5,95 De ces premières analyses, il ressort clairement que l'acide sulfureux a une action absolument nette sur la biochimie des (4) Je rappelle que les essais rouges ont porté uniquement sur des monts et non sur la vendange entière : ceci pour répondre aux objections qu'on ne ne manquerait pas de me faire, en considérant la faiblesse de ces vins en matière extractive. 208 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ferments. Cette constatation jette donc un jour nouveau sur l'influence de ce puissant agent antiseptique. Cela explique, en effet, comment des vins, paraissant relativement pauvres en extrait sec, voient cet élément augmenter dans de notables proportions et deviennent normaux. On verra dans les recher- ches biochimiques auxquelles je me suis livré, à quoi est dû l’appauvrissement ou l’enrichissement des produits en matières exlractives. Essais 1912. VINS BLANCS FILTRÉS Alcool! en volume dist. p. 100. Acidité tot. en ac. sulfur. p.1.000. Ac. volatile en ac. sulfurique. . Acidité fixe en ac. sulfurique. . Extrait sec à 100 degrés . Extrait sec dans le vide . Cendres totales : Alcalinité des cendres en tartre : Crème de tartre : Acide tartrique Lotal en De VINS BLANCS CHAUFFÉS Alcool en volume dist. p. 100. Acidité tot. en ac. sulfur. p. 1.000. Ac. volatile en ac. sulfurique. Acidité fixe en ac. sulfurique . Extrait sec à 100 degrés. Extrait sec dans le vide Cendres totales. Alcalinité des cendres en terre. Crème de tartre. Ac. tartrique total en tartre, VINS BLANCS SULFITÉS Alcool en volume dist. p. 100. Acidité tot. en ac. sulfur. p. 1.000. Acidité volatile en ac. sulfurique. Acidité fixe en acidité sulfurique. Extrait sec à 100 degrés. Extrait sec dans le vide Cendres totales Alcalinité des DA en FE Crème de tartre Acide tartrique total en Pres + DS 110 es [= Æ S À tr = Témoin oo À D] & ©0 Gt CONOE e EE Beaujolais a = ke & D & N 1 © ” G I © = © D à 12000 or. 5,05 0,469 4,581 16,20 17,85 1,98 3,345 3,29 3,87 Médoc 11085 gr 4,90 0,615 4,985 16,85 18,45 1,81 3,14 2,80 3,10 1109 gr. 5:3 0,438 3,862 18,80 19,95 2,22 417 3.043 4,75 11053 gr. 5,25 0,589 2,661 16,10 19,25 2.00 3,345 3,11 3,18 Romanée Verzenay 12015 12025 gr. 5,00 0,334 2,666 18,20 18,33 2.93 2,045 3,87 1,59 12005 gr. 5,0Ù 0,456 4,594 16,10 18,05 2,02 3,26 3,20 3,18 12035 gr. 4,57 0,417 4,153 15,30 16,40 1,7 3,49 3,06 3,95 12095 gr. 5,1 0,326 4,114 14,30 17,60 2,19 3,96 3,94 4,76 12010 gr. 5 10 0,467 2,633 45,95 47,75 2,14 3,47 3,29 3,87 INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 209 Témoin Beaujolais Médoc Romanée Versenay VINS ROUGES FILTRÉS Fe Sr ar er n- Alcool en volume dist. p. 100 . . 907 "go9 906 9295 908 gr. cr. or. er gr. Acidité tot. en’ac. sulfur. p. 1.000. 7,95 7,05 1,45 1,9 7,15 Acidité volatile en ac. sulfurique. 0,283 0,248 0,349 0,329 0,308 Acidité fixe en acide sulfurique. 1,667 6,803 7.101 1,511 7,442 Extrait sec à 100 degrés. . . . .! 20,42 20,2 20,45 20,45 19,5 Extrait sec dans le vide. . . - . 21,50 21,20 22,35 21,20 20,60 Gendreso tale Eee Nu 2,00 2,00 1,86 1,96 1,92 Alcalinité des cendres en tartre. 4,543 4,50 4,253 4,543 4,253 Crèmerde tarire "0 : 4,07 3,94 3,14 4,07 SA Acide tartrique total en Fe ne. : 5,89 Dao 5,18 ),48 4,99 VINS ROUGES SULFITÉS Alcool, en volume dist. p. 100. . 907 9085 9055 907 908$ gr gr. gr gr. gr Acidité tot. en ac. sulfur. p. 1.000. 8,00 8,00 8,15 7,85 8,00 Acidité volatile en ac. sulfurique. 0,291 0,349 0,384 0,351 0,315 Acidité fixe en ac. sulfurique . . 1,209 7,651 1,166 1,493 7,685 Extrait sec à 100 degrés . . . . 20,67 20,30 20,50 20,15 20,17 Extrait sec dans le vide . . . .. 22,10 21,60 22,45 21,50 21,50 Gendres Hole ere k 2,22 221 2,26 2,26 2,2 Alcalinité des cendres en tartre. 3,97 4,012 3,97 4,094 3,97 Crémerde tarire.. "2" : 31911 3,31 3,21 311 3,22 Acide tartrique total en re : 4,60 4,56 4,42 4,47 4,42 VINS ROUGES CHAUFFÉS Alcool en volume dist. p. 100. . 907 908 905 9065 907 OT. or or. ca gI Acidité tot. en ac. sulfur. p. 1.000. 1,8 Te 120 sir 126 Acidité volatile en ac. sulfurique. 0,320 0.299 0,387 0,347 0,360 Acidité fixe en ac. sulfurique . 7.480 7,301 7,513 1,363 7,240 Extrait sec à 100 degrés 2077 16.95 19,85 15,55 45,90 Extrait sec dans le vide. . . . . 21,10 20,55 22,30 2415822055 (COTTIROS COELES OEM MEN NEC 212 4,06 2,04 2,04 2,05 Alcalinité des cendres en tartre. 4,15 4,42 4,06 4,42 4,06 Crémerdeltarire ; 3:99 3,62 3,40 3,58 3,40 Acide tartrique total en tartre . 5,67 5,10 4,65 4,13 4,69 De manière à me rendre compte si les effets produits par les ferments étaient temporaires ou véritablement acquis, j'ai recommencé, en janvier 1913, les analyses des essais effectués en 1911, c’est-à-dire pour des vins ayant quinze mois de conser- valion. J'ai, ainsi qu'on pourra s’en convaincre par l'examen .du tableau suivant, retrouvé exactement les mêmes caractèrés et surtout des chiffres correspondant aux premiers, déduction faite des matières précipitées (crème de tartre, matière colo- rante, etc.). 210 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Analyses effectuées en janvier 1913. Beaujolais VINS BLANCS CHAUFFÉS —— Alcool en volume dist. p. 100. . . . . 908 gr. Acidité totale en acide sulfurique p. 1.000 . 3,81 Acidité volatile en acide sulfurique. . . . 0,313 Acidité fixe en acide sulfurique. . . .. 3,497 HxtraitisecaMO0DIdeorés 12,55 Cendres totales vue PR ER Ie 1,88 Alcalimité des cendres'entartre 7"... 3,78 CGrémeide arire PER EE CT 3,11 Acidité tartrique total en tartre . . . . . . 5,10 VINS BLANCS SULFITÉS Alcool en volume dist. p. 100 . . . . . . . 9°75 gr Acidité totale en acide sulfurique p. 1.000 . 4,059 Acidité volatile en acide sulfurique . . . . 0,319 Acidité fixecentacide sulfurique "0. 3,140 Pxtraitisec aMOIIdesréS ER 14,55 Céndrésiiotales trie rene ter Re RSR 1,63 Alcälinité des’cendres en tartre 3,035 Grémede Lan tre CR RTE coeur 2,85 Acide tartrique total en lartre . . . ... . . 4,3 Beaujolais VINS ROUGES CHAUFFÉS — Alcool en volume dist. p. 400. . . . . . 1009 gr. Acidité Lotale en acide sulfurique p. 1.000 . 3,96 Acidité volatile en acide sulfurique. . . . 0,434 Acidité fixe totale en acide sulfurique. . . 3,526 Exlraisec aMIONdeSrES RE 12,40 Gendres totales re CN NS EE Le 1,62 Alcalinité des cendres en tartre. . . . . . 3,24 Crémesdeitarires2i nt CAUSE CNET 5 15 Acide tartrique total en tartre . . . . . . 5e) VINS ROUGES SULFITÉS Aïlcool:en volume dist-p. A00 7. 10075 gr. Acidité totale en acide sulfurique p. 1.000. 4,90 Acidité volatile en acide sulfurique . . . . 0,378 Acidité fixe en acide sulfurique . . . . . . 4,522 Extraitisec àaM00Idenre SPENCER 1560 Gendres totales: 1144 SUP TR NE 1,80 Alcalinité des cendres en tartre. . . . . . 3,35 Cremerdeniarntre-t; 7. MCE 3,21 Acide tartrique totalken tarire, . 4,85 Médoc QT'e 4,306 0,583 de 129 13,85 1,90 3,78 lil 5,90 9055 gr. 2,257 0,370 3,887 14,50 1,65 3,035 2295 4,20 Médoc 1007 Romanée 9085 er: 3,76 0,364 3.396 12.025 1,68 3,36 3,15 5,23 9075 gr. 4,65 0,309 4,341 414,55 1,70 2,898 2,715 4,665 Romanée Verzenay 9085 gr. 3,96 0,434 3,526 11,40 1,54 3,20 2,90 4,76 Verzenay 10085 gr. 4,059 0,429 3,630 11,65 1,66 3,43 3,21 4,60 10,70 gr. %,80 0,382 4,418 15,7 1,82 3,39 3,23 2,16 INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 211 EXAMEN ORGANOLEPTIQUE DES DIVERS ÉCHANTILLONS. Afin de voir l'effet produit par les levures dans chacun des milieux étudiés, J'ai soumis les produits entièrement fermentés à l'appréciation de dégustateurs consciencieux et très éclairés. De manière à éviter tout phénomène de suggestion, les échan- tillons ont été présentés à la dégustation sans autre indication extérieure qu’un numéro d'ordre. Voici le classement auquel se sont arrêtés les différents dégustateurs opérant séparément. | vins 1911. Ces vins ont été dégustés en janvier 1912 et en janvier 1913 ; comme on peut s’en te compte, les caractères crea olepti. ques, loin de perdre en intensité, paraissent, au contraire, s'exagérer. Pour tous les échantillons, les numéros d ordre étaient les suivants : 1° levuré Beaujolais, 2° levuré Médoc, 3° levuré Ro- manée-Conti, 4° levuré Verzenay. Classement des vins chauffés (blancs). 1° Verzenay. — Très bon, infiniment supérieur aux autres; présente une fraicheur et une acidité qui se maintiennent mème après un an de conservation. Cette acidité n’est point mordante et n'impressionne le palais qu'agréablement. 2° Médoc. — Le produit levuré médoc est inférieur au précé- dent, mais cependant supérieur aux deux derniers. Il est égale- ment d’une verdeur assez agréable qui se rapproche de celle du Verzenay. 3° Romance. — De beaucoup inférieur au premier, mais cependant très bien conservé. Au point de vue gustatif, pré- sente peut-être un peu plus de mâche que les autres; il serait également moins acide et, par conséquent, moins frais au palais. 4° Beaujolais. — Le moins bon de la série; il est très plat et présente des caractères de neutralité qui permettraient de le confondre avec des vins non traités. Ce manque de verdeur est si marqué qu ‘à la dégustation on ne le croirait pas de la même origine que les Dents Dans la série des vins provenant de moûts sulfités, on retrouve les mêmes caractères que dans les vins chauffés, mais cepen- dant avec moins d'intensité. 212 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Classement des vins rouges (AI). lei, on pourra tirer de la dégustation des renseignements inté- ressants. Les numéros d’ordre sont les mêmes que pour les pré- cédents échantillons. Voici l'ordre dans lequel ils ont été classés : 1° Beaujolais. — Le meilleur, fin, fruité, donnant à la dégus- tation l'impression de ne pas appartenir à la catégorie des vins d'Aramon. La fraîcheur qui caractérise les échantillons levurés beaujolais, ne se retrouve dans aucun autre produit; 2° Romanée-Conti. — Cet échantillon est très bon, peut-être moins acide que le précédent, mais en même temps moins parfumé ; 3° Médoc. — Le produit levuré médoc est inférieur aux pré- cédents: la levure paraît donner au produit un caractère de vieillesse qu'on retrouvera d’ailleurs dans tous les échantillons rouges levurés médoc: 4° Verzenay. — Produit infiniment moins bon que tous les précédents ; cependant, on ne peut pas relever contre lui de défaut capital. Il est très bien conservé et ne présente absolu- ment pas de vices pouvant le faire rejeter comme trop mauvais. Il n'a, en tout cas, aucune des qualités qui avaient placé cette levure en tête du classement des vins blancs. Vins 1912. Les vins de l’année 1912, tout au moins les vins rouges, sont très acides. Il y a, comme on l’a vu, trois essais au lieu de deux. Tout d’abord, les dégustateurs admettent que les vins liltrés, quoique très bons, sont inférieurs comme qualité aux essais chauffés. Le classement est absolument le même que pour les vins de 1911. En général, pour /es vins blancs, les levures de Verzenar et de Médoc donnent les meilleurs résultats ; pour /es rouges, par contre, les levures Beaujolais et Romanée triomphent. On doit retenir également que les deux premières donnent des produits infiniment plus acides au palais que ceux donnés par les secondes, et, cependant, cette impression d’acidité n’est pas en rapport avec les chiffres que l’on obtient quand on procède à [a détermination quantitative de cet élément. (A suivre.) Le Gérant : G. Masson. Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. Lo 98° ANNÉE MARS 1914 N° ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS I. — PARALLÈLE ENTRE DIVERS STAPHYLOCOQUES DORÉS D'ORIGINE HUMAINE ET ANIMALE par M. J. DUMAS Parmi les germes que nous avons étudiés, se trouvent six échantillons isolés de cas de botryomycose, des « botryocoques » par conséquent. On se convaincra, à la lecture de ce travail et du suivant, que de tels échantillons ne diffèrent en rien des staphylocoques dorés et ne méritent pas de conserver, doréna- vant, un nom spécial. ORIGINE DES GERMES ÉTUDIÉS. Echantillons humains. 1. Abcès superficiel du doigt (tourniole). 2. Panaris profond. 3. Plaie suppurée du médius. L. Abcès de la cuisse. 5. Abcès de la paroi abdominale (dû à l'obligeance de M. Mas- son; origine Gosset). 6. Abcès du sein, post partum. 7. Abcès du sein, chez une nourrice atteinte de scarlatine. $. Sang d'un individu mort de furonculose, au décours d’une fièvre typhoiïde (observation Mosny et Dumont — dû à l'obli- seance de M. Dumont). 15 21% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 9. Ostéomyélite (staphylocoque isolé par M. Veillon, en 1896, et conservé dans la collection de l'Institut Pasteur). 9 bis. Même échantillon, conservé, depuis 1896, par M. M. Nicolle (identique, à tous égards, au précédent). Échantillons animaux. 10. Mammite de la chèvre! (dù à l’obligeance de M. Bridré). 114. Mammite de la brebis (dû à l’obligeance de M. Bridré). 12, 13, 14, 15. Champignons de castration du cheval (origine Césari). 16. Botryomycose pulmonaire du cheval (origine Césari). {7. Botryomycose généralisée du cheval (dù à l’obligeance de M. Borrel ; origine Césari). Avec chacun de ces échantillons, il a été fait des séparations et on a prélevé, dans tous les cas, /rois colonies, dont les carac- tères ont été étudiés parallèlement. Pour ne pas prolonger nos recherches au delà des limites indispensables, nous avons com- paré entre eux nos 17 staphylocoques (soit 17 X3— 51 origines), en choisissant les critériums suivants : forme (dans les pro- duits pathologiques et en culture), caractères des cultures, fonction gélatinolytique, fonction saccharolytique, production d'hémolysine, virulence pour la souris. FoRME. Dans les produits pathologiques. Sauf pour ce qui concerne les cas de botryomycose, il s’agis- sait toujours de cocci, régulièrement arrondis, disposés en amas, en diplos ou en chaînettes très courtes (3-4 éléments au maximum). Les grains botryomycotiques offraient, histologi- quement, l'aspect bien connu (voir, à ce sujet, les travaux de M. Magrou). Dans les cultures. Milieu T (vide infra). Amas de 8-10 éléments en « grappe de raisin » ou chainettes très courtes. Exceptionnellement, amas ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 215 de 3-4 cocci (n° #) ou de 15-20 {n° 15). — Gélose au milieu T. Amas ou diplos. Dans les cultures, on n’observe aucune différence entre les staphylocoques isolés de lésions botryomycotiques et ceux d’au- tres provenances. Dans les produits et les cultures, les cocci prennent loujours très bien le Gram. CARACTÈRES DES CULTURES. Milieu T. Employé par MM. Truche et Cotoni, dans leurs recherches sur le pneumocoque et ainsi formulé : peptone Chapoteaut k p. 100, sel marin 0,5 p. 100, glucose 0,2 p. 100 (alcaliniser légèrement). | Après 24 heures à 37 degrés, on observe, dans tous les cas, un trouble uniforme du liquide, avec présence d’un dépôt glai- reux, filant, à odeur de colle. Après 2-3 jours, ce dépôt se montre plus abondant et l’on chserve, d'autre part, à la surface du milieu, une collerette d'épaisseur et de teinte variables, parfois mème un voile pelliculaire et discontinu. Mêmes diffé- rences de pigmentation que pour la gélose T. Gélose T. Après 24 heures d’étuve, on aperçoit des colonies arrondies, surélevées, à bords nets, opaques, grasses, d’un blanc-grisâtre, qui se teintent peu à peu quand on met le {tube à la tempéra- ture ordinaire. Au point de vue de l'intensité de la pigmenta- lion, nos échantillons se classent en trois catégories. (1) Staphylocoques produisant une couleur jaune-doré très vive : n° 2, 6 1, 9, 9 bis, 19, 44,15. (2) Staphylocoques produisant une couleur moins intense et terne : nos 1, 3, 5, 6, 8, 11, 16, 11. (3) Staphylocoques à teinte encore plus faible et plus terne : nos 4, 43. n Lait. Tous les échantillons le coaqulent en 24 heures, à 37 degrés, avec acidification. 216 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR FONCTION GÉLATINOLYTIQUE. Nous avons employé la gélatine, à 10 p. 100, au milieu T. Les cultures ont été faites par piqûre et laissées à la tempéra- ture ordinaire. On voit d'abord apparaître, le long de la strie d’ensemence- ment, un trait plus ou moins coloré, qui s’accroit lentement. Après 3-4 jours, commence la liquéfaction, laquelle aboutit à la fonte de tout le tube ou demeure incomplète, selon les cas. Lors de liquéfaction incomplète, nous n'avons jamais vu se fluidifier plus du tiers environ du milieu ensemencé. Au bout de 8 jours, ont liquéfié tout le tube : les n°° 1, 3, 4, 5, 8, 10, 11, 14, 16; n'en ont liquéfié que le tiers : les n°5 2, 6, 9,9 bis, 12, 13, 15, 17. En somme, pouvoir gélatinolytique constant, mais d'intensité variable, chez tous les staphylocoques étudiés. Notons en passant qu'on à eu tort de dire que les staphylocoques isolés des lésions botryomycotiques se caractérisaient par une faible liquéfaction de la gélatine. Foxcriox SACCHAROLYTIQUE. Milieu employé : peptone 2 p. 100, sel marin 0,5 p. 100, sucre 0,5 p. 100. Tous les échantillons fermentent : la mannite, le glucose, le saccharose et le maltose — tous fermentent, également, le lactose (comme l'indique, d’ailleurs, la coagulation du lait avec acidi- fication — vide supra); les n°1 et 14, cependant, moins que les autres — deux, seulement, aftaquent la glycérine et encore avec peu d'énergie, les n°° 2 et 5. PRODUCTION D'HÉMOLYSINE. A 1 cent. cube d’une culture en milieu T, demeurée 5 jours à l’étuve, on ajoutait 1 cent. cube d'une émulsion globulaire (hématies de lapin, bien lavées avec l'eau physiologique et émulsionnées, à 5 p. 100, dans ce même véhicule). Puis, on portait à 37 degrés, pour 1, 2, 3..., el jusqu'à 24 heures. ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 217 Certains échantillons n'ont jamais hémolysé, d'autres laquaient les globules plus où moins rapidement, comme le montre le résumé suivant : Hémolyse complète en quelques minutes : n° 16. Hémolyse complète en 1 heure : n° 15. Hémolyse complète en 2 heures : n°3, 4, 7. Hémolyse complète en 5 heures : n°° 6, 11, 15. Hémolyse complète en plus de 5 heures : n°° 1, 2, 8, 10. Hémolyse nulle après 24 heures : n°° 7, 9, 9 bis, 14. Plusieurs auteurs disent que le pouvoir hémolytique s’atténue avec les années, au point même de disparaître entièrement. Il a pu en être ainsi pour les échantillons 9 et 9 ÿis, mais non pour les staphylocoques 7 et 14. VIRULENCE POUR LA SOURIS. On injectait, sous la peau d'animaux de 20 grammes, des cul- tures en milieu T (24 heures d'étuve) aux doses décroissantes dentircent cube, 10-#centréube 410) 10% =241/100) 11154 1m Tantôt les sujets mouraient dans un temps variable (12 heures à quelques jours), tantôt ils offraient simplement une lésion suppurative locale, avec vaste escharification des téguments. Dans les cas mortels, on n'observait, à l’autopsie, que de la congestion pulmonaire (sans doute agonique); l'examen micro- scopique du sang ne montrait jamais de cocci, il fallait la cul- ture pour les révéler. Classant nos staphylocoques par virulence décroissante, nous pouvons caractériser brièvement leur activité comme il suit : N° 11. — Une colonie tue à 10—1 cent. cube, la 2e à 10—3, la 3° à 10—2. No 13. — 2 colonies tuent à 10-3, la 3° à 10—2. Nos 6 et 10. — 2 colonies tuent à 10—2, la 3° à 10—1. N° 16. — 2 colonies tuent à 10—?, la 3° à 1 cent. cube. Nes 7,8 et 15. — Une colonie tue à 10—?, les 2 autres à 101, N°°1et 5. — 2 colonies tuent à 10—1, la 3° à 1 cent. cube. N° 17, — 2 colonies tuent à 10—1, la 3° donne un abcès,. Nos 4 et 14. — Une colonie tue à 10—!, les 2 autres à 1 cent. cube. NoS 9, 9 bis et 12. — Les 3 colonies tuent à 1 cent. cube. N° 2. — Une colonie tue à 1 cent. cube, les 2 autres donnent un abcès. N° 3. — Abcès, à 1 cent. cube, avec les 3 colonies. 218 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Jusqu'ici, nous n'avions noté aucune différence appréciable entre les trois colonies d'un même staphylocoque. En ce qui concerne la virulence, il ne faudrait pas s'exagérer l'importance des écarts observés. Ceux-ci, à tout prendre, ne sont pas consi- dérables; d'autre part, in vivo, nous rencontrons un facteur variable, la résistance des animaux. Si nous avions inoculé, chaque fois, cent souris, les résultats moyens, obtenus avec les trois colonies d’un même germe, auraient peut-être été moins divergents. L'étude de la virulence nous permet d'affirmer, contraire- ment à l'opinion de certains auteurs, que /a souris est parfai- tement (voire remarquablement) sensible au staphylocoque, dont elle constitue le réactif vivant le meilleur et le moins coûteux. Elle nous montre aussi que les échantillons, isolés des mammites humaines ou animales, semblent se distinguer par une grande activité; il en va de même pour certains staphylocoques de botryomycose. CoxcLuüsioNs. Les staphylocoques dorés constituent une « bonne espèce ». Les caractères communs font rarement défaut (production d'hémolysine) et des caractères particuliers apparaissent rare- ment (fermentation de la glycérine). Les variations demeurent presque toujours quantitatives et leurs limites peu étendues. Il ne parait pas y avoir parallélisme entre le développement plus ou moins grand de tel caractère et celui de tel autre. Les sta- phylocoques de botryomycose ne diffèrent nullement des autres: des preuves irréfutables de cette identité seront d'ailleurs don- nées dans le travail suivant, de M. Nicolle et Césari. ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS Il. — TOXICITÉ DES ÉCHANTILLONS ÉTUDIÉS DANS LE TRAVAIL PRÉCÉDENT. VUE D'ENSEMBLE SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS par M. NICOLLE et E. CÉSARI En 1896-1897, l'un de nous à fait de nombreuses expériences sur la toxine des staphylocoques dorés, avec le D'° Réfik-bey. L'échantillon, principalement étudié, nous avait été obligeam- ment fourni par le D' Veillon (échantillon 9 #s du travail pré- cédent) ; il tuait les lapins d'un kilogramme, dans la plèvre, sous le volume de 10 cent. cube (culture de 24 heures ; bouillon-ascite) et donnait des filtrats susceptibles d'amener la mort des lapins de 500 grammes, sous la peau, en 3-6 jours. Le staphylocoque Veillon est devenu avirulent pour le lapin (et le cobaye), peu pathogène pour la souris et pratiquement atoxique. Depuis cette époque, les recherches de Borrel et Bridré (mammites des brebis laitières) ont révélé l'existence de germes très actifs et permis d'obtenir des sérums, dont nous analy- serons ici les propriétés. On connait, également, le mémoire de Kraus et Pribram sur la toxine et l’antitoxine staphylococ- ciques. Il n'y avait, cependant, aucun document concernant la toxine et l’antitoxine des botryocoques ; nous espérons pouvoir combler, aujourd’hui, cette lacune. Notre travail comprend 5 parties : toxicité des filtrats (staphy- lococciques et botryococciques) ; oxicité (et, du même coup, virulence) des germes vivants ; action du sérum Bridré (toxine el microbes); identité des staphylocoques et des botryocoques ; vue d'ensemble sur les staphylocoques dorés. Nous avons utilisé les 17 échantillons minutieusement étudiés par Dumas (ainsi que quelques autres staphylocoques 220 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et botryocoques). Afin d'éviter tout fléchissement de leur viru- lence et de leur toxicité, nous conservions, à la glacière, une grande provision de cultures (bouillon-ascite) de chaque germe, qui étaient repiquées le plus rarement possible. Pour obtenir les fi/{rats, on ensemencçait dans le bouillon- Martin glucosé (0,2 p. 100) et on passait sur Berkefeld après 5 jours d'étuve (37 degrés); pour obtenir les microbes vivants, on ensemençait des boîtes de Pinoy contenant de la gélose à la pomme de terre et on récoltait, le lendemain, la couche bacté- rienne. Comme animaux d'expérience, nous avons choisi des lapins de 2.000-2.500 grammes et des cobayes (mäles) de 500-600 grammes. Les sérums, que M. Bridré nous a obligeamment fournis, provenaient de moutons traités par les filtrats ou les germes vivants (mammites des brebis). Ils possédaient une activité quasi constante, quel que fût le staphylocoque ou le filtrat employé dans l’immunisation. Disons, de suite, qu'ils se sont montrés antitoxiques, mais non antimicrobiens. Notons, également, que toxicité et virulence représentent des propriétés distinctes, bien que les échantillons toxigènes se rencontrent toujours chez les types virulents. Ajoutons, enfin, que, sur deux races incapables de donner de l'hémolysine, l’une sécrétait un poison très actif, l’autre n’en produisait pas du tout. (Nous emplotierons, presque constamment, le terme staphylo- coque, pour désigner et staphylocoques proprement dûüts el botryocoques.) TOXINE SOLUBLE Nous prendrons, comme type de poison staphylococcique, celui que fournit l’échantillon le plus actif (mammite de la chèvre; origine Bridré). Il s’agit, avons-nous dit, de cultures en bouillon-Martin glucosé (0,2 p. 100), filtrées après 5 Jours d’étuve. La toxine ainsi obtenue a été injectée aux cobayes et aux lapins, dans les veines et sous la peau. 19 to ee UDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS EXPÉRIENCES SUR LES COBAYES. Injections intraveineuses. 2 cent. cubes tuent en 3-10 minutes, 1 cent. cube en 1/2 heure- 2 heures ; 1/2 cent. cube amène la mort après 1/2 journée ou demeure inefficace (dose limite). Nous distinguerons les 3 types suivants : Mort en 3-30 minutes. — Cliniquement. Stupeur, exorbitisme, dyspnée, souvent paralysie du train postérieur. Puis, chute sur le côté, pauses respi- ratoires, convulsions, perte du réflexe cornéen, soif d'air, mort. — À l'autopsie : cœur généralement arrêté, d'habitude sans caillots ; congestion des viscères abdominaux; poumons pâles ; sang se coagulant plus ou moins lentement (caillot mou, peu ou pas rétractile). Mort en 2 heures. — Cliniquement. Hébétude, dyspnée, quelquefois parésie du train postérieur. L'animal reste couché sur le ventre, lequel est gros, tendu, sensible. Finalement, mort par arrêt respiratoire. — À l'aulopsie : mèmes lésions que précédemment; en plus : taches ecchymotiques habituelles au niveau de l'estomac et du gros intestin. Mort en 6-12 heures. — Cliniquement. Poil piqué, stupeur croissante, ventre gros, sensibilité thoraco-abdominale. Puis, coma progressif, chute sur le côté, respiration d'abord intermittente, ensuite arrêtée. — À l’aulopsie : con- gestion modérée des viscères abdominaux, taches nécrotiques des reins et surtout du foie {grisätres, en jeu de patience). Les autres échantillons de staphylocoques offrent une toxicité très diverse ; tantôt leurs filtrats tuent à peu près comme notre « poison-type », tantôt la dose limite s'élève vers 2 cent. cubes, ailleurs 2 cent. cubes ne déterminent que des accidents transi- toires, ailleurs enfin plusieurs centimètres cubes se montrent inoffensifs. Injections sous-cutanées. La mort n'arrive jamais, mème avec 3 cent. cubes (sauf dans le cas, assez rare, de complications — pneumocoque, pasteu- rella); 3 cent. cubes, 2 cent. cubes, 1 cent. cube et aussi 1/2 cent. cube engendrent une eschare humide. 10! cent. cube produit une lésion moins humide (passage au « type V »). 10-? cent. cube ne détermine qu'un œædème peu durable. Nous décrirons successivement : l’eschare humide, la forme de transition avec le type V et ce mème type V (réalisé par les € 12 22 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR filtrats moins actifs ou par la toxine forte chauffée à 100 degrés — voir plus loin). Eschare humide. — Dans la journée : œdème mou, pouvant acquérir le volume d'un œuf; tache humide étendue, atteignant et dépassant même (suivant la dose) la surface d’une pièce de 5 francs, offrant un ton varié (bleu pâle, violet, vert pâle, mélangé) et cerclée de rouge-brun ou de lie de vin. — Le lendemain : empâtement plus marqué; tache revêtant l'aspect d'une « peau morte », de nuance différente selon les cas (ivoire sale, saumon terne, vert-grisâtre). — Le surlendemain : tuméfaction stationnaire ou en décroissance ; eschare moins humide (parchemin mouillé). — Le 4 jour : ædème aplati et consistant ; eschare brune et élastique. — Puis : formation d'un disque qui enchâsse la partie nécrosée ; celle-ci, noir de jais, se sou- lève et tombe ; ulcus atone, qui guérit 3 semaines après l'injection. Les ani- maux maigrissent plus ou moins. Passage au type V. — Dans la journée : œdème mou, pouvant atteindre le volume d’un œuf de pigeon ; tache bleue ou violette, bordée de rouge-brun, luisante (surface : 2 fr. et davantage). — Le lendemain : empâätement station- naire ; tache plus foncée et un peu humide. — Le surlendemain, la tuméfac- tion diminue, l’eschare brunit. — Puis : disque ferme, entourant la partie mor- tifiée sèche et noire; chute de celle-ci; ulcus, cicatrisé 15 jours après l'injection. Les animaux maigrissent peu. Type V (V — tache violette). — Dans la journée : œdème mou, ne dépassant pas le volume d'une noix; tache de nuance variée (rose, violette, lie de vin. brunâtre, mélangée), sans humidité (surface : 1-2 fr.). — Le lendemain : empà- tement stationnaire ; tache brune.— Le surlendemain, la tuméfaction diminue. l'eschare noircit. — Puis : disque dur, enchâssant la portion nécrosée; chute de celle-ci; ulcus, qui guérit une dizaine de jours après l'injection. Emacia- tion nulle ou négligeable. Les autres échantillons fournissent des filtrats d'une activité fort variable ; on rencontre, en les étudiant, toute la gamme des lésions possibles, allant de l'eschare humide étendue à l’ædème transitoire discret. EXPÉRIENCES SUR LES LAPINS. Injections intraveineuses. Nous ne décrirons que les effets de la « toxine-type ». 2 cent. cubes tuent en 5-10 minutes, 1 cent. cube en 1/4 d'h.-1/2 heure (rarement davantage); 1/2 cent. cube amène la mort en 12-20 heures ou demeure inoffensif (dose limite). — C/inique- ment : mort par arrêt respiratoire, comme chez les cobayes ; quelquefois diarrhée, 1 heure-1 h. 1/2 après l'injection. — A l'autopsie : congestion des viscères abdominaux, souvent ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 223 limitée au foie et à l'intestin grêle ; caillots intracardiaques plus fréquents que chez les cobaves. Injections sous-cutanées. [Toxine-type, ici encore.] Avec 1-2 cent. cubes, eschare humide très étendue ; mort habituelle (2 jours 1/2-7 jours) par infection pneumococcique ou pasteurellique. Avec 107! cent. cube, eschare humide moins marquée (et guérison) ou type V ou ædème transitoire (accompagné de rougeur cutanée). Nous décrirons brièvement l’eschare humide et Le type V (entre lesquels se trouvent des formes de passage). Eschare humide. -— ans lu journée : œdème nul ou peu accentué; tache étendue, pouvant couvrir une surface de 10 cent. sur 5 {et davantage), verdâtre ou $aumonée, luisante, cerclée de rouge-brun ou de lie de vin. — Le lendemain : empâtement notable, le plus souvent: tache verte, humide, tantôt bordée de rouge brun ou de violet sombre, tantôt reposant sur un fond rouge vif ou livide.— Le surlendemain : tuméfaction énorzne, d'habitude: eschare offrant l'aspect d'un parchemin mouillé. — Le 4 jour (quand l'animal résiste), leschare commence à sécher. — Puis — Cas mortels : à l'autopsie, exsudat jaune sale, infiltré de sérosité roussâlre (avec pneumocoque, pas- teurella ou les deux, qui se retrouvent dans le sang du cœur). — Cas curables : l’'eschare fonce ; l'empâtement se limite, durcit et devient discoïde : la partie mortifiée « saute », laissant à sa place un ulcus qui guérit lentement (après plusieurs semaines, d'habitude ; toujours forte émaciation). Type V. — Dans la journée: œdème mou, ne dépassant pas le volume d'un œuf; tache rouge brique (surface : 2 fr. et davantage), sans humidité. — Le lendemain, Yempâtement s’aplatit et devient rénitent; la tache brunit. — Puis : eschare noire, enchâssée par un disque ferme; ulcus.… guérison 15 jours après l'injection. Les animaux maigrissent peu. Le chauffage à 55 degrés (1/2 heure) diminue l’activité de la toxine. Ce fléchissement, peu appréciable lors des injections sous-cutanées, devient évident lors des injections intravei- neuses (mort plus lente, pour une même dose). Le chauffage à 100 degrés (5 minutes) altère notablement le poison. 3 cent. cubes ne luent pas dans la veine et ne donnent que le type V sous la peau. 1 12 = ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR GERMES VIVANTS Pour comparer la toxicité des microbes vivants avec celle des filtrats, nous avons injecté des quantités variables de cultures sur gélose à la pomme de terre (24 heures-37 degrés), émul- sionnées dans l’eau physiologique. EXPÉRIENCES SUR LES COBAYES. Imjections intraveineuses. Les germes très virulents tuent en 3-6 jours à la dose de 10-10 centigramme. Cliniquement. Emaciation progressive. Le lendemain ou le surlendemain de l'inoculation, mauvais état général, sensibilité thoracique et abdominale. Puis, affaiblissement croissant et, quelquefois, paraplégie. — À l'autopsie: nécroses du foie et des reins; abcès des reins et, rarement, du myocarde et du testicule; colonies nulles ou peu abondantes sur la gélose ensemencée avec le sang du cœur. 101 centigramme amène la mort après 2 jours environ (mêmes symptômes et lésions). Avec 1-2 centigrammes appa- raissent les phénomènes toxiques aigus (les animaux succombent en 12-20 heures; staphylocoques plus ou moins abondants dans le sang du cœur). Les germes moins virulents ne tuent qu'à des doses de plus en plus fortes ; la survie peut atteindre 8-10 jours; les symp- tômes et lésions demeurent les mêmes. — Les germes aviru- lents sont impunément supportés (plusieurs centigrammes). Injections sous-cutanées. Les divers échantillons offrent une foricité très variable, que traduisent les différences de réaction locale, pour la dose de { centigramme prise comme unité. À la limite, c'est un simple ædème transitoire; puis, un bourbillon, parfois minime; ensuite, un bourbillon compliqué d’eschare à type V; enfin, un bourbillon étendu et de plus en plus complètement recouvert par une eschare humide. ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 225 La virulence peut être affirmée (et mesurée) lorsque, vers le 3°-4e jour, on voit l’eschare initiale progresser excentriquement et doubler même dans certains cas. L'activité des germes devient alors frappante quand la dose inoculée était faible (10? centi- gramme). Nous décrirons les 3 fypes suivants : Bourbillon. — Dans la journée : œdème mou, pouvant acquérir le volume d'un œuf de pigeon ; peau normale. — Le lendemain, la tuméfaction augmente habituellement d’étendue. — Le surlendemain, l'empâtement commence à diminuer et à durcir. — Puis : fluctuation, petite eschare (secondaire), ouver- ture, quelques gouttes de pus entourant un bourbillon jaunâtre qui s'éli- mine vite; ulcus, cicatrisé 10-15 jours après l'injection virulente. Emaciation nulle ou négligeable. Parfois, pneumocoque ou pasteurella accompagnant le staphylocoque dans la lésion. Bourbillon avec eschare à type V. — Dans la journée : œdème mou (ut supra) ; tache violette de nuance variable (surface : O0 fr. 20-14 fr.). — Le lendemain, l'empâtement augmente et la tache brunit. — Le surlendemain, la tuméfaction rétrocède, l’eschare prend une teinte noire. — Puis : disque dur, enchàssant la partie mortifiée qui se soulève et tombe ; ulcus, avec bourbillon dépas- sant les limites de l’eschare ; guérison 15-20 jours après l'inoculation. Les animaux maigrissent un peu. Bourbillon de plus en plus recouvert par une eschare humide. — Dans la Journée : œdème mou, dépassant souvent le volume d’un œuf de pigeon; tache violette (de nuance variée) ou verdâtre ou brune et verte, toujours humide (surface : 2 fr. et davantage). — Le lendemain : empâtement plus étendu, quelquefois énorme ; tache humide, d'aspect différent suivant les cas (saumon sale, ivoire terne, parchemin mouillé), entourée d'un anneau brun-violet ou noirâtre. — Le surlendemain : tuméfaction stationnaire; eschare brune ou « peau morte » cerclée de noir. — Le 4° jour, l'œdème diminue et durcit ; l’eschare est toujours sèche à ce moment. — Puis : formation d'un disque qui entoure la partie nécrosée; chute de celle-ci; ulcus bourbillon- neux... guérison 20-25 jours après l'injection. Les animaux maigrissent parfois beaucoup. — Les complicalions ne sont pas rares; dans le cas le plus habituel, on voit l’œdème augmenter vers le 4 jour èt la peau se couvrir de lividités; l’eschare reste molle; les sujets meurent presque toujours (pasteurella). k Quand on inocule des échantillons très toxiques, l'eschare, plombée et suin- tante, peut envahir toute la face antérieure de l'abdomen. La mort est presque fatale et survient rapidement, quelquefois en 24 heures (à l’autopsie : nécroses du foie et du rein). Ces échantillons sont généralement très viru- lents, d’où la présence ordinaire de staphylocoques dans le sang. 12 t [er] ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUP EXPÉRIENCES SUR LES LAPINS. Injections intraveineuses. Les germes très virulents Luent en 1-2 jours, à la dose de 10-1 centigramme et en 1/2 journée à la dose de 1-2 centi- grammes. Mort en 1-2 jours. — Cliniquement. Dans la journée, rien de spécial. Le lendemain, miction par regorgement; troubles mortels subits (dyspnée, convulsions, chute sur le flanc, arrêt de la respiration) ou bien stupeur, immobilité (sur le ventre), affaissement progressif et asphyxie lente. — A lautopsie : distension énorme de la vessie ; épanchements pleuraux et péri- cardique habituels; nécroses hépatiques et rénales; abcès des reins, du myocarde, des adducteurs de la cuisse: sang stérile le plus souvent. Mort en 1/2 journée. — Mort par arrêt respiratoire. — Epanchement péri- cardique ; liquide diarrhéique dans l'intestin grêle ; foie pâle; congestion inconstante de la rate et du tube digestif; colonies plus ou moins abon- dantes sur la gélose ensemencée avec le sang du cœur. Les germes moins virulents….. les germes avirulents….. (mèmes réflexions que pour les cobayes). Injections sous-cutanées. Mèmes types que chez les cobayes; nous nous bornerons donc à les décrire sommairement. Bourbillon. — Empâtement, qui se limite et durcit; érythème passager des téguments. Peu de tendance à l'ouverture spontanée, d'où marche traînante. Staphylocoques dans les lésions jusqu’à la fin. Peu ou pas d'émaciation. Bourbillon avec eschare du type V. — OEdème, tache rouge brique. Celle tache brunit, puis noircit; la tuméfaction devient plate et ferme. Chute de l’eschare, ulcus, exsudat jaune... cicatrisation assez lente. Les animaux mai- grissent légèrement. Bourbillon de plus en plus recouvert par une eschare humide. — Dans la journée : œdème généralement nul: tache violette ou verte atteignant l’éten- due de 8 centimètres sur 2 (et davantage). — Le lendeïnain : empâtement plat et peu marqué; tache verte, humide, cerclée de lie de vin {surface : 20 centi- mètres sur 3 et davantage). — Le surlendemain, tuméfaction notable et réni- tente, eschare offrant l'aspect du parchemin mouillé. — Le 4° jour, l'empà- tement commence à diminuer, l'eschare sèche et brunit. — Puis : disque ferme enchässant la partie nécrosée ; chute de celle-ci, uleus, exsudat jaune... guérison progressive. Emaciation forte. ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 227 Les germes vivants n'apportent avec eux que peu de toxine disponible, comme va nous le montrer l'action de la chaleur. Le chauffage à 55 degrés (1/2 heure) rend inoffensive l'injec- lion intraveineuse de 1-2 centigrammes: sous la peau, on n'obtient plus que le type V. Le chauffage à 100 degrés (5 minutes) détermine exactement les mémes effets. I persiste donc, au sein des corps microbiens, des traces de poison que leur siège profond rend quasi indiffé- rentes à l'influence thermique. ACTION DU SÉRUM BRIDRÉ SUR LA TOXINE ET LES GERMES VIVANTS ToxiNxE. Sérum préventif (la veille, dans les muscles gastrocnémiens). Contre l'injection intraveineuse. — 2 cent. cubes de sérum rendent absolument inoffensif 4 cent. cube de toxine. Contre l'injechion sous-cutanée. — 4 cent. cubes de sérum ramènent au type V l’eschare engendrée par 1/2 cent. cube de toxine et en diminuent la surface; ils ramènent au type, inter- médiaire entre l’eschare humide et la forme V, la nécrose pro- duite par { centimètre cube de toxine et en diminuent la surface. — 2 cent. cubes de sérum se comportent, vis-à-vis de 1/2 cent. cube de poison, comme 4 cent. cubes de sérum vis-à-vis de | cent. cube. Sérum par mélange (1/2 heure de contact, température ordinaire). Contre l'injection intraveineuse. — 1/2 cent. cube de séram neutralise complètement 2 cent. cubes de toxine. Contre l'injection sous-cutanée. — De mème. Sérum simultané (dans la veine — sous la peau le sérum demeure inefficace). Contre l'injection sous-cutanée. — 2 cent. cubes de sérum ramènent au type V l’eschare engendrée par 1 cent. cube de toxine et en diminuent la surface. 228 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Le sérum Bridré jouit donc de propriétés antitoriques inde- niables. Comme il fallait s'y attendre, il se montre plus actif par mélange que préventivement ou simultanément. Pourquoi, administré la veille, rend-il l'animal tout à fait réfractaire contre l'injection intraveineuse, si sévère et incomplètement contre l'injection sous-cutanée, bénigne en soi ? Il est facile de le com- prendre. Lors de l'injection intraveineuse, on oppose un anti- corps déjà « dilué » dans la masse de l’organisme à une toxine qui sera rapidement « diluée », elle aussi; tandis que, lors de l'injection sous-cutanée, on oppose le même anticorps « dilué » à la toxine « concentrée » sur une faible étendue — toxine peu résorbable, car elle ne tue pas. Nous avons trouvé jadis, avec Loiseau et Forgeot, que l’administration préventive de sérum spécifique empêche toujours la mort des cobayes chez lesquels on introduit, par la voie hypodermique, le poison (#rés résor- hable) du bacille Preisz-Nocard, mais ne neutralise point aussi aisément l'eschare locale. Dans ce cas, l'antitoxine diluée agit sans peine sur la toxine résorbée et diluée, difficilement et incomplètement sur la toxine demeurée ?# situ et plus concen- trée. L'un de nous, avec Loiseau, a publié des faits de même ordre concernant le poison diphtérique; ils s'expliquent pa- retllement. GERMES VIVANTS. Sérum préventif. Contre l'injection intraveineuse (101 centigramme). — 2 cent. cubes de sérum demeurent ineflicaces. Contre l'injection sous-cutanée. — 2 cent cubes de sérum réduisent les dimensions de l’eschare (humide) qui succède à l'inoculation de 1/2 centigramme de germes. Sérum par mélange. Contre l'injection intraveineuse (10 centigramme). — | cent. cube de sérum reste sans effet. Contre l'injection sous-cutanée. — À cent. cube de sérum ramène au type V l’eschare engendrée par 1 centigramme, - ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 229 mais n empèche pas la formation du bourbillon ; l'eschare peut même « repartir » le lendemain de l'injection et s’accroître légè- rement. Sérum simultané (dans la veine). Contre l'injection sous-cutanée. — 1 cent. cube de sérum agit comme 2.cent. cubes, préventivement, pour 1/2 centi- gramme de germes; 2 cent. cubes, comme 1! cent. cube, par mélange, pour 1 centigramme. Le sérum Bridré ne jouit donc pas de propriétés antivirulentes, au moins chez le cobaye et le lapin. Quand on inocule des germes vivants, il neutralise la toxine disponible et une fraction variable (selon les conditions expérimentales) de celle qui se trouve produite 2x vivo; rien de plus. IDENTITÉ DES STAPHYLOCOQUES ET DES BOTRYOCOQUES Elle est éfablie par trois ordres de faits. (1) Identité des caractères morphologiques, culturels et biolo- giques ; identité des résultats obtenus ?n vivo, chez la souris (Dumas). (2) Présence de grains types, dans les abcès du rein de nos cobayes, inoculés avec divers staphylocoques et botryocoques (voie intraveineuse); présence de grains types, dans le testicule des cobayes inoculés (localement) avec divers staphylocoques et botryocoques (Magrou). (3) Identité des effets déterminés, chez le cobaye et le lapin, par l’injection des staphylocoques et des botryocoques ou de leurs toxines. Neutralisation de toutes ces toxines par le sérum Bridré et par le sérum des chevaux atteints de botryomycose. Nous avons pu nous convaincre, en effet, que le sérum de deux chevaux, pris au hasard (champignon de castration et botryomycose généralisée), se comportait absolument comme le sérum Bridré:; il n’était pas antimicrobien non plus. C'est le second exemple connu d'un pouvoir antitoxique, chez les sujets affectés de maladies bactériennes chroniques. Le premier, fourni également par nous (avec Loiseau et Forgeot), concernait les chevaux atteints d'infec- tions à bacilles de Preisz-Nocard. 16 230 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Nous venons de parler de l'inoculation intratesticulaire des staphylocoques ou botryocoques. Elle permet de reproduire, avec la toxine introduite à l’état de germes vivants, la série en- tière des réactions possibles, depuis l’empoisonnement rapide et l'escharification massive (réalisés aussi par la loxine soluble) jusqu'au bourbillon et au granulome (inconnus pour les filtrats). La toxine « soluble » diffuse très vite et tout se Joue presque immédiatement ; la toxine « solide », émise pendant une durée variable et en quantité variable dans l'unité de temps, peut déterminer non seulement des effets brutaux, mais encore des effets de plus en plus ménagés, comme nous allons Ye voir: Quand on injecte, par la voie intratesticulaire (cobaye), des dilutions de richesse décroissante (staphylocoques ou botryo- coques), l'animal qui reçoit la dose maxima meurt après quelques heures ; le second fait une eschare humide (orchite « gangréneuse », si l'on veut employer la dénomination fautive servant à caractériser les mammites correspondantes); le troi- sième, un abcès (plus exactement, un bourbillon); le quatrième, un abeès (bourbillon) avec des grains; le cinquième, un granu- lôme (cellules épithélioïdes et géantes). Nous avons schéma- tisé quelque peu les résultats, mais les choses se passent ainsi, grosso modo (expériences de Magrou). On saisit bien l'impor- lance de la vitesse de réaction, au regard d'une toxine toujours la mime. VUE D'ENSEMBLE SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS Voici, d'après les recherches des auteurs, celles de Dumas etles nôtres, l'idée qu'on peut se faire actuellement du groupe des staphylocoques dorés. Les staphylocoques dorés jouissent d'une grande ubiquité. On les rencontre dans le milieu extérieur et à la surface de la peau et des muqueuses (de l'homme el des animaux sains). Is occasionnent, chez l'homme : le furoncle, l’antbrax, l'im- pétigo, l'ecthyma, divers types de folliculites; des abcès super- ficiels, profonds et viscéraux; des catarrhes purulents des muqueuses et des épanchements purulents des séreuses; l'ostéo- myélite classique; la pyohémie (presque inconnue aujourd hui). IS déterminent, chez les animaux : des suppurations variées; ÉTUDES SUR LES STAPHYLOCOQUES DORÉS 231 des mammites « gangréneuses » (brebis, chèvre): la botryomy- cose (cheval — les cas authentiques de botryomycose humaine semblent bien rares). Suivant les conditions de l'infection natu- relle, ils produisent localement des nécroses, des suppurations ou des granulomes. Ils peuvent aller former au loin des foyers mélastaliques, mais ne provoquent jamais de septicémie vraie. Par leurs propriétés toxigènes, ils engendrent diverses a/{éru- lions viscérales, aiguës ou chroniques (parmi ces dernières, la dégénérescence amyloïde). Ce sont, d'ordinaire, des cocci, régulièrement arrondis et prenant le Gram. Dans les grains botryomycotiques, ils s'élèvent en organisalion, grâce à une symbiose avec les élé- ments des lissus, perdent leur caractère univoque et revêltent l'aspect de #ryrobactéries véritables, comme cela se voit, d'ail- leurs, pour tous les grains, quei que soit le microbe causal. (Les recherches de Pinoy et de Magrou imposent la conception précédente.) Ils se développent abondamment 27 vi/ro, produisant un pigment d'intensité variable. Ils liquéfient la gélatine, coagulent le lait, fermentent divers sucres et sécrètent habituellement de lhémolysine. Is tuent presque toujours la souris sous la peau (cultures du sang positives), assez souvent le cobaye et Le lapin dans les veines (affaire de dose et, surtout, de virulence). Chez le cobaye et le lapin, l'injection hypodermique peut déterminer les lésions suivantes (gamme montante) : simple œdème: bourbillon; bourbillon, avec eschare du type V; bourbillon, avec eschare humide (celle-ci susceptible, parfois, de progresser momenta- nément) — l'enjection intraveineuse peut amener la mort plus ou moins vile (abcès du rein, du myocarde, des muscles: nécroses rénales et hépatiques ; cultures du sang positives dans le cas d'issue précoce). Suivant son activité, la /orine Staphylococcique engendre, sous la peau : l'œdème, l’eschare du type V, l'eschare humide: dans les veines, les bons filtrats font périr rapidement les ani- maux, par un mécanisme que nous étudierons ailleurs. Le poison fléchit déja vers 55 degrés et s'altère beaucoup vers 100 degrés. Quand on l'administre à l’état de germes vivants, on peut voir apparaître, lors des injections hypodermiques, la 232 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lésion bourbillon, caractéristique des toxines « solides » et in- connue avec les toxines « solubles » — on peut voir apparaître, lors des injections intraveineuses, les foyers métastatiques, ana- logues, eux aussi, aux bourbillons — on peut voir apparaître, enfin, lors des injections intralesticulaires, bourbillons ou gra- nulomes, selon la vitesse réactionnelle. Le sérum Bridré et celui des chevaux atteints de botryomycose n'offrent que des propriétés antitoxiques. I] n'existe point, actuel- lement, de sérums antimicrobiens correspondants (du moins, que nous sachions). Quelle idée doit-on se faire des staphylocoques blancs? Ce sont des germes chez lesquels la disparition de la fonction chromogène va souvent, mais non forcément, de pair avec le fléchissement de la toxicité et de la virulence. M'° Raphaël (recherches inédites), comparant des staphylocoques dorés et blancs, qui coexistaient dans les mêmes pus (abcès du sein, infections ombilicales des nouveau-nés; origine Durante), a toujours vu les seconds rester bien au-dessous des premiers comme pouvoirs toxigène et pathogène. Par contre, Bürgi a isolé des a/b1 très actifs chez des lièvres naturellement infectés. Le staphylocoque citrin ne semble différer de l'aureus que par la nuance des colonies (recherches inédites de M"° Raphaël). Le staphylocoque hémorragique de Klein, c’est le staphylo- coque de Borrel et Bridré occasionnant, non plus la mammite, mais la vulvite « gangréneuse » des brebis (post partum); il détermine, chez les individus qui dépècent les animaux infectés, des panaris phlycténulaires très étendus. La question des staphylocoques, déjà fort avancée, le sera encore beaucoup plus quand on aura approfondi l'étude des tétragènes. On souhaite vivement de savoir s’il s'agit de germes identiques ou différents. RECHERCHES HISTOLOGIQUES SUR LES GLANDES SALIVAIRES DANS LA RAGE par Y. MANOUÉLIAN (de l'Institut Pasteur.) (Avec les planches X et XI.) DE L'EXISTENCE DES CORPUSCULES DE NEGRI DANS LES GANGLIONS NERVEUX DES GLANDES SALIVAIRES. Depuis Negri, on sait qu'il existe, dans le système nerveux central — dans la corne d’'Ammon notamment — des animaux atteints de rage, des corpuscules spécifiques, souvent müri- formes, siégeant dans le cytoplasme des cellules nerveuses. Ces corpuscules étant presque constants présentent une grande valeur pour le diagnostic de cette maladie. Nous nous sommes demandé si ces corpuscules existaient dans les glandes salivaires des animaux enragés ; nous avons examiné à cet effet la glande sous-maxillaire et la parotide chez un assez grand nombre de sujets. Nous relaterons pour le moment nos recherches faites chez une vingtaine de chiens dans le cours de la rage des rues (1). Nous affirmons qu'il n'existe pas de corpuscules dans le parenchyme glandulaire : cellules des acini et des canaux excréteurs; mais on en trouve toujours et en grand nombre dans le cytoplasme des cellules nerveuses des ganglions qu'on rencontre constamment dans le tissu interstitiel de ces glandes (planche X, fig. 1). Il y a pourtant des causes d'erreur sur lesquelles nous tenons à insister : la confusion possible, par les chercheurs peu (4) Y. MANOUÉLIAN, Comples rendus de l’Acad. des Sciences, 10 novembre 1913, p. 866 et ler décembre 1913, p. 1089. Pour la technique employée, voir notre travail dans les Annales de l'Institut Pasteur, décembre 1912, p. 974. Par suite d'un mauvais repérage, les figures qui accompagnent ce mémoire ne donnent qu'une idée incomplète et même inexaete des beaux dessins exécutés par M. Constantin, l'artiste dessinateur. 234 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR averlis, des corpuscules d'origine leucocytaire et de débris de cellules glandulaires avec les corps de Negri. En effet, chez les chiens atteints de rage des rues on constate une invasion considérable de leucocytes polynucléaires dans les acini et les canaux excréteurs. Ces éléments se détruisent vite : leur noyau se fragmente en granulations qui présentent des vacuoles et des sphérules dans leur intérieur et, de baso- philes qu'ellesétaient, deviennent acidophiles (planches X et XT, lig. 3 et 9). La méthode de Mann les colore alors en rouge; puis ces granulations deviennent de plus en plus päles. Nous suivrons bientôt toutes les phases du processus qui aboutit en certaines régions à la transformation complète du parenchyme elandulaire. Pour le moment, mettons en garde les auteurs qui, après un examen superficiel, pourraient prendre ces débris d'origine nucléaire pour des corpuseules de Negri. Il existe aussi d’autres formations plus rares, de volume plus considérable, qui pourraient donner le change. [1 s'agit de résidus de cellules glandulaires ayant subi la dégénérescence hyaline. On y constate l'existence d’inclusions rappelant celles des corpuscules de Negri. Comme nous l'avons dit, dans les glandes salivaires il existe de nombreux centres nerveux : les uns microscopiques, les autres visibles à l'œil nu sur des coupes colorées; tous ces ganglions sont composés de cellules à type sympathique. Or, nous savons que dans la rage, les ganglions sympathiques présentent comme les ganglions cérébro-spinaux — à un degré moins marqué toutefois — diverses lésions dégénératives des cellules nerveuses, et surtout les lésions décrites pour la pre- mière fois par van Gehuchten et Nélis. Il s’agit d’une invasion de mononucléaires qui finissent par détruire et faire dis- paraître la cellule nerveuse allérée sous l'influence du virus rabique et s'installent à sa place; dans les ganglions nerveux des glandes salivaires, on peut rencontrer ces lésions. De plus, nous savons qu'il existe des corpuscules de Negri dans les ganglions spinaux ainsi que dans les ganglions sympa- thiques. Dans nos coupes de glandes salivaires rabiques le cytoplasme des cellules nerveuses renfermait un grand nombre de corpuscules de Negri, alors que nous n'en avons jamais LES GLANDES SALIVAIRES DANS LA RAGE 255 observé dans les cellules glandulaires, ni dans la lumière des acini, ni dans celle des canaux excréteurs. Nous ferons remarquer un fait qui montre combien ces corpuscules sont particuliers aux cellules nerveuses. Dans les troncs nerveux qui accompagnent les vaisseaux des glandes, on trouve par places de petits amas de cellules nerveuses et mème une cellule nerveuse unique; le cytoplasme seul de l'élément nerveux contient des corpuscules de Negri à l'exelu- sion de tous les tissus constituants de ces glandes (planche X, fig. 27. / ÉTUDE DE LA DESTRUCTION DES ACINI. Les acini sont le siège de modifications profondes et très importantes ; nous allons en étudier en détail le mécanisme. Invasion des polynucléaires, leur destruction, et phagocytose par des macrophages de tout le contenu acinien : voilà les différentes phases du processus qui aboutit à la transformation complète des acini en un amas de macrophages. En effet, dans une première phase, on constate la pénétra- tion de leucocytes polynucléaires dans les cellules des acini. L'existence de ces leucocytes est bien éphémère ; probablement sous l'influence du virus rabique ils se désagrègent vite, leur noyau se fragmente et se réduit en quelques granulations. Cette destruction de polynueléaires paraît un fait important, indispensable pour l’accomplissement du cycle complet de la phagocylose. Il semble que, pour être phagocytées par les macrophages, les cellules des acini ont besoin d’être fortement touchées et sensibilisées par la ou les substances que la poly- nucléolyse meltrait en liberté. Car c'est juste en ce moment que ces cellules, qui généralement jusqu'alors présentaient des altérations relativement peu considérables, accusent des lésions graves; à la suite de la destruction de leur noyau, elles se trouvent réduites à des masses parsemées de granulations (pl. X, fig. 3). On assiste alors à l'un des plus remarquables exemples de phagocytose. Certains éléments mononucléaires des macrophages d’une plasticité très grande dont le cytoplasme contient de fines et nombreuses granulations basophiles, s'attaquent aux éléments 236 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR qui s’y trouvent, restes de cellules aciniennes et débris de polynucléaires, les incorporent et les digèrent (pl. X et XI, lig. 6, 8 et 9). Pendant cette période d'activité, il n’est point rare de rencontrer dans les acini des macrophages en division mitotique (pl. X, fig. 4). La voracité de ces éléments est telle qu'ils ne s'attaquent pas seulement aux débris cellulaires, mais même aux polynucléaires peu modifiés quant à leur forme. Pendant cette phagocytose, l'aspect des macrophages est frappant: chez un grand nombre, le noyau est refoulé tout à fait vers la périphérie, une mince bande de cytoplasme entourant le corps englobé ; il en est qui présentent des cloisons cyto- plasmiques, formant ainsi des cavités où se trouvent ces corps. Toutes les cellules des acini finissent par subir le même sort; il arrive ainsi un moment où on ne trouve dans les acini que des macrophages en train de digérer les éléments englobés. Une fois l'acte de phagocytose terminé, le cytoplasme se condensant autour du noyau, ces macrophages deviennent plus ou moins ovoides: c’est leur forme de repos. Il existe des acini où on ne trouve que de pareilles cellules groupées ensemble. La transformation est complète; de l’acinus glandulaire il n'existe nulle trace, les macrophages y ayant pris droit de cité. Il ya des régions où, à la suite de la destruction du tissu conjonctif périacineux, un grand nombre d’acini ainsi trans- formés se confondent ensemble, et on se trouve en présence de zones où l’histologiste le plus compétent dans la matière ne pourrait soupconner qu'il a sous les yeux une coupe de glande salivaire (pl. XI, fig. 9, partie centrale). Quelles sont les modifications des canaux excréteurs ? Comme dans les acini, les leucocytes polynucléaires pénè- trent dans les cellules épithéliales des canaux excréteurs en creusant des vacuoles dans le cytoplasme ; il existe à ce niveau un certain degré de polynucléolyse, mais ici le processus est beaucoup plus discret. Ce qu'il y a de remarquable, c’est le passage des polynueléaires en très grand nombre dans la lumière du canal où la polynucléolyse devient plus intense. Un fait important et fréquent aussi, c’est la chute des cellules glan- dulaires dans la lumière ; on y rencontre un certain nombre de LES GLANDES SALIVAIRES DANS LA RAGE 237 cellules aciniennes facilement reconnaissables à leur structure aréolaire, et surtout des cellules propres des canaux (pl. X, lig. 5). Cellules aciniennes, cellules des canaux excréteurs, #n nombre fort considérable de polynucléaires, quelques macrophages et des masses amorphes se colorant fortement en bleu par le bleu polychrome de Unna, en violet par la méthode de Mann, voilà ce qui constitue les éléments figurés de la bave chez lechien atteint de rage des rues. ConcLusIoNs. De l’ensemble de nos recherches sur les glandes salivaires chez le chien dans la rage des rues, il résulte : 1° Qu'il existe des corpuscules de Negri, et en grand nombre, seulement dans le cytoplasme des cellules nerveuses des ganglions intraglandulaires, et jamais dans les cellules épithé- liales des acini, ni dans celles des canaux excréteurs : 2° Les cellules aciniennes sont le siège d’altérations profondes, leur débris sont phagocytés par les macrophages qui s'installent à leur place, de sorte que, finalement, les acini ne sont repré- sentés que par des amas de macrophages ; 3° Quant à la bave, nous venons de voir quels en sont les éléments figurés. 15 Décembre 1913. EXPLICATION DES PLANCHES X et XI Sauf la figure 7, qui représente une coupe de glande sous-maxillaire dans la rage humaine, tous les autres dessins proviennent des coupes de glandes salivaires rabiques de chien. Les figures 6, 7 et 8 se rapportent à des prépa- rations colorées au bleu polychrome de Unna; quant aux autres figures, elles représentent des coupes traitées avec la méthode de Mann. FiG. 1. — Portion de ganglion nerveux intraparotidien. Grossissement 100 diamètres. On voit des corps de Negri dans le cytoplasme des cellules nerveuses. F16. 2. — Coupe de la parotide. 600 diamètres. Acini normaux et altérés. Il existe aussi deux cellules nerveuses contenant des corps de Negri; l’une des cellules se trouve immédiatement à côté d'un tronc nerveux. F16. 3. — Polynucléolyse au niveau des acini. 720 diamètres. F16. 5. — Coupe de canal excréteur. 800 diamètres. Fi6. 7. — Coupe de glande sous-maxillaire dans la rage humaine. 110 dia- mètres. FiG. 4. — 100 diamètres, figures 6 et 8, 900 diamètres ; figure 9, 800 diamè- tres. Phénomènes phagocytaires dans les acini. On voit en outre à gauche de la figure 9 un certain degré de polynucléolyse dans les acini. ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE COMBINAISONS DES SELS D ARGENT ET DES COMPOSÉS ARSENICAUX DANS LE TRAITEMENT DES TRYPANOSOMIASES EXPÉRIMENTALES ET DE LA SYPHILIS CHEZ L'HOMME par J. DANYSZ Une série d’études sur les propriétés antiseptiques de diffé- rents sels métalliques, et ensuite sur l’action de ces sels sur le sang normal et les sérums spécifiques m'ont amené à conclure que de tous ces produits, les sels d'argent possèdent la plus orande puissance microbicide par rapport à leur toxicité et modifient le moins les propriétés normales du sang et des sérums spécifiques, antitoxiques ou antimicrobiens. Ainsi, j'ai pu constater que les dilutions à 1/10.000 ne modi- lient en rien les propriétés des sérums antidiphtérique, anti- pesteux ou antityphique, que les dilutions à 1/1.000 n'exercent aucune action appréciable sur les éléments du sang. Orfila donnait aux chiens 4,38 grammes (un drachme) de nitrate d'argent en pilules, par jour, pendant quatre jours de suite sans observer d'accidents appréciables. Charcot, qui a fait en même temps que Vulpian, Cruveilhier et d'autres de nom- breux essais sur l’action physiologique et thérapeutique des sels d'argent sur l’homme, écrit à ce sujet (1): « Le fait capital qui ressort de nos observations sur ce point, c'est la tolérance de l’économie pour cet agent médicamen- teux. » Ces savants n’ont jamais observé de cas d'empoisonnement proprement dits et les cas d’argyrie n'étaient observés qu'après l'absorption de 30 grammes de nitrate d'argent. Ils ont noté, par contre, qu'un traitement prolongé par ce produit peut très favorablement influencer certaines affections nervenses qui, 1) Cnarcor et BALL. Encyclopédie «les sciences médicales de A. DECHANBRE, . VIT Sp ro ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 239 nous le savons aujourd'hui, sont dus à l'infection par les spiro- chètes. Je me suis donc attaché avant tout à l'étude des propriétés thérapeutiques des sels d'argent et notamment de l’azotate, mais j'ai reconnu bien vite que, sous cette forme, c'est-à-dire à l'état de sel pur, l’argent ne pouvait donner que des résultats peu appréciables. En effet, introduit dans l'organisme en so- lutions très élendues (1/80.000 à 1/100.000), il n'influence pas sensiblement les infections microbiennes, et en solulions plus concentrées il se fixe sur les tissus avec plus d'énergie, de sorte que le résultat est le mème, avec cette aggravalion dans le dernier cas que, employé en injections intraveineuses, le nitrate d'argent produit des durcissements des veines sur une assez grande étendue à partir du point d'introduction el parfois des accidents plus graves pouvant amener à la longue l'atrophie complète de ces vaisseaux. J'ai alors cherché à combiner l'argent à d'autres substances possédant des affinités spéciales pour certains micro-organismes et à l'obtenir sous forme dissimulée de façon à diminuer son affinité pour les tissus. Tout d’abord, j'ai cherché à combiner l'argent avec des cou- leurs d’aniline et j'ai constalé qu'en ajoutant une solution de nitrate d'argent à une solution d’éosine, on obtient un précipité qui se redissout par l'addition de chlorure de sodium. La quan- tité de NaCI qu'il faut ajouter pour dissoudre le précipité est proportionnelle à la quantité d'argent fixé. L'argent est donc dissimulé dans ce composé, mais sa fixa- tion n’est pas très solide, ni très stable. Le précipité séché ne se redissout plus dans l’eau salée. En solution très étendue (1/50.000 à 1/100.000), ce composé m'a permis de traiter avec succès le chancre syphilitique de quatre lapins qui m'ont été obligeamment cédés par M. Leva- diti. Deux ou trois injections dans les veines, de 0,20 milli- sramme (10 à 20 cent. cubes de liquide) chacune, guérissaient en trois semaines de très gros chancres syphilitiques. Les trépo- nèmes disparassaient quatre ou cinq Jours après le début du traitement et on constatait en même temps un ramollissement du pourtour induré du chancre. J'ai obtenu des résultats analogues chez quatre singes (rhesus) 240 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR chez lesquels on a provoqué la formation de chancres syphili- tiques sur l’arcade sourcilière avec le virus humain. Essayé dans la paralysie générale d’origine syphilitique, par le D' Auguste Marie et moi, le même composé nous à donné les résultats suivants : Trois malades de l'asile de Villejuif ayant donné une réaction de Wassermann positive ont reçu trois injections de 5 milli- grammes chacune dans 250 cent. cubes d’eau distillée à huit jours d'intervalle. Un quatrième malade a reçu quatre de ces injections dans les mêmes conditions. Donc les trois premiers ont reçu 45 milli- grammes, le dernier 20 milligrammes d’éosinate d'argent en tout. Trois mois après ce traitement, on a essayé sur tous les malades de l'asile atteints de paralysie générale, la réaction à la luétine et on a constaté une différence bien marquée en faveur de tous les malades traités par nous. Les trois premiers ont montré une réaction fortement atténuée, le quatrième, une réaction négative. Essayés au Wassermann, le sérum des premiers était encore positif, celui du dernier négatif. L'état général n’a pas été modifié d’une façon appréciable. Ce même composé m'a donné aussi des résultats intéressants à noter dans l’orchite tuberculeuse des lapins. Expr. I. — En injectant dans les testicules des lapins une émulsion très épaisse (environ 1 milligramme) d'une culture de tuberculose peu virulente (culture Test, de l'Institut Pasteur;, on voit apparaître, après 7 à 10 jours, des nodules qui deviennent de plus en plus volumineux, de sorte que bientôt l'animal ne peut plus rentrer ses testicules. Chez un de ces lapins (n° 56, poids 2 kilogr. 890), on commence le traitement 7 jours après l'inoculation et il reçoit d’abord tous les deux jours dans les veines des oreilles 3 injections de 0,25 milligramme d’éosinate d'argent dans 10 cent. cubes d’eau physiologique et, 20 jours après, 5 autres injections de 0,25 à 0,5 milligramme tous les 8 à 10 jours. Au début, jusqu'au 20: jour après l'inoculation, les testicules augmentaient de volume. À partir du 23° jour, on constate une diminution sensible qui s'accentue après chaque injection, de sorte que deux mois après l'inocula- tion, l'animal peut de nouveau rentrer ses testicules et on ne sent au toucher que quelques très pelits nodules dans un épididyme. L'autre testicule ainsi que l’épididyme semblent revenus à l’état normal. On cesse alors les injections, et deux mois plus tard on voit l'orchite réapparaître de nouveau sous la même forme. Cinq mois et demi après l'inoculation, le lapin pèse 3 kilogr. 270, il y a ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 241 donc augmentation de poids de près de 500 grammes, il est alors sacrifié et on ne trouve de lésions tuberculeuses nulle part ailleurs que dans un testi- cule. La tuberculose ne s’est pas généralisée. Le lapin n° 57 (2 kilogr. 570) a élé traité de la mème façon, mais le traite- ment n’a commencé qu'un mois après l'inoculation, et il n'a reçu que 5 injec- tions en tout. Il est mort deux mois après, de la pasteurellose. Trois jours avant la mort, il pesait 2 kilogr. 820. A l’autopsie, on n’a trouvé que quelques tubercules dans les poumons et dans les testicules, rien dans les autres organes. Le témoin n° 54 (2 kilogr. 920) est mort en 4 mois avee des testicules énormes et tnberculose généralisée après avoir perdu plus de la moitié de son poids (1 kilogr. 760). Un autre témoin (le n° 55) (2 kilogr. S60) est mort en 6 semaines. Testicules très volumineux caséifiés, tuberculose généralisée. Dans tous ces cas, les veines injectées ont encore été grave- ment atteintes, mais les résultats obtenus élaient assez encou- rageants pour justifier la recherche d’un composé dans lequel l'argent serait encore mieux dissimulé que dans sa combinaison avec l’éosine. Ces recherches, dans lesquelles J'ai mis à profit les entretiens que j'ai eus sur ce sujet avec M. Louis Fournier et ses collaborateurs MM. Dalimier, Guenot, Lancereaux et Lesage, devaient tout naturellement conduire à l’idée d'associer l'argent à des composés qui ont déjà fait leurs preuves comme agents thérapeutiques puissants. J'ai pensé tout d'abord à la série des arsenicaux, le cacody- late de soude, l’atoxyl et enfin le dioxydiaminoarsénobenzol mis en valeur par les travaux d'Armand Gautier, Laveran, Thomas, Kopke, Louis Martin, R. Koch, Salmon et dans ces derniers temps surtout par Ehrlich et ses nombreux élèves et collaborateurs. I] serait sans intérêt de décrire ici les détails de toutes ces combinaisons et des essais que j'ai été amené à faire, parce que les dernières de cette série, les combinaisons des sels d'argent et de dioxydiaminoarsénobenzol, m'ont donné des résultats supérieurs à toutes les autres. Je me bornerai donc à signaler qu'en ajoutant une solution d’éosinate d'argent à une solution d’atoxyl, on obtient un pro- duit qui reste soluble dans l’eau et dans lequel par conséquent l'argent et l’arsenic sont dissimulés, tandis que l'atoxylate d'argent est un simple sel insoluble dans l’eau et qu’on ne peut employer qu'en émulsion huileuse, et je passerai de suite à la 242 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR description des composés de sels d'argent et de dioxydiamino- arsénobenzol. COMPOSÉS DE CHLORURE, BROMURE OU IODURE D ARGENT ET DE DIOXYDIAMINOARSÉNOBENZOL. Pour combiner l'argent au dioxydiaminoarsénobenzol, le plus simple était de mélanger une solution de nitrate d'argent avec une solution aqueuse de chlorhydrale de dioxydiamino- arsénobenzol. En opérant ainsi, j'ai obtenu une liqueur limpide plus ou moins foncée, suivant la quantité d'argent introduite, dans laquelle l'argent était évidemment dissimulé. En traitant ce liquide par le chlorure de sodium ou un autre électrolyte, on obtient un précipité floconneux et, en dosant l'acidité du liquide surnageant, on constate que la réaction n a subi aucune modification appréciable. Quand on traite ce composé par l'acide sullurique, on obtient un précipité jaune clair très abondant et le liquide qui surnage ne contient que des traces d’arsenic et d'argent. Ces faits tendent à prouver que l'argent et le chlore ont été fixés par le dioxydiaminoarsénobenzol. Cette fixation du chlore, qui par lui-même ne joue aucun rôle dans la thérapeutique, m'a alors donné l’idée de le remplacer par le brome ou par l'iode, qui possèdent l’un et l’autre des propriétés spécifiques très prononcées, et j'ai reconnu qu'en mélangeant des solutions de bromure et d'iodure d'argent dans le cyanure de potassium avec une solulion de dioxydiamino- arsénobenzol, on oblenait des composés analogues aux précé- dents dans lesquels, par conséquent, l'argent, le brome et l'iode étaient fixés et dissimulés. La préparation de ces produits a été décrite dans les Comptes rendus de l'Académie des Sciences du 19 janvier 191%. L'analyse des produits obtenus à l'état sec a donné : Produit bromé : Ag, 10,06; Br, 8.14; As, 26,99; SO“H*, 16,10 p. 100. Produitniodé : Ag, 10,50 ; I, 11,47; :As,126,80 :: SO'‘H®, 15,97 p. 100. Dans toutes ces préparations, j'avais été très utilement aidé ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 24 Co x par M. Ch. Digaut, ingénieur-chimiste, attaché à mon labora- toire. J'ai cherché avant tout à en étudier et déterminer les propriétés anlisepliques et thérapeutiques, laissant pour plus lard l'étude de la nature chimique de ses composés, qui parail ètre très particulière. Cette étude a été entreprise dans mon laboratoire par le D' Kozniewski, privat-docent de l'Université de Cracovie. Mes premières expériences avec les composés arséno-argen- liques étaient déjà faites quand J'ai eu connaissance de la con- férence faite par M. Ehrlich au Congrès de médecine de Londres (8 août 1913). M. Ehrlich dit dans cette conférence, entre autres choses, ce qui suit : « Les indigènes de quelques pays sauvages avaient lhabi- tude, pour mieux tuer leurs ennemis, d’enduire les fers de leurs flèches, non pas avec un seul, mais avec deux ou trois poisons différents, et il nous a semblé utile d'imiter ce procédé dans la lulle avec les parasites et d’empoisonner nos flèches synthé- tiques non pas une seule, mais deux fois. En collaboration avec le D' Karrer, J'ai réussi à fixer encore des métaux sur les arsenicaux réduits (par exempie le salvarsan) et à obtenir ainsi des médicaments qui se sont montrés dans les expériences de laboratoire d'une valeur thérapeutique plus élevée. » Ilest donc certain, et je le reconnais volontiers, qu'Ehrlich avait eu l’idée de ces combinaisons bien avant moi et j'en ai eu la preuve quand j'ai appris (en novembre 1913) par mon collègue M. Fourneau, auquel je dois quelques conseils très utiles pour mes préparations, qu'Ebrlich a fait breveter un composé de dioxydiaminoarsénobenzol et d'azotate d'argent. Ce brevet avait été déposé déjà en 1912 et affiché à la fin de septembre 1913. Deux moisaprès la publicationde ma première note (1) sur ce sujet, M. Ehrlich a eu l'amabilité de m'écrire que le D'Karrer, qui s'est plus spécialement occupé des combinaisons des arse- nicaux avec les métaux, a pu démontrer que dans le dioxydia- minoarsénobenzol, les métaux se fixaient sur l’arsenic, et dans » une deuxième lettre datée du 3 janvier 1914, qu'il a fait bre- (1) Comples rendus de l'Acad. des Sciences. Séance du 20 octobre 1913. 19 44 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR veter également les combinaisons de ses arsenicaux avec l'or, le platine, l’iridium, le cuivre, etc. Le grand savant m’annonce en même temps que M” Leupold a fait des essais de son composé cuprique dans une trypanoso- miase (race de Morgenroth) et qu’elle a pu guérir des souris de 20 grammes par des doses de 0,02 milligramme et en injectant simultanément 1/400 à 1/600 de trypanobleu, par les doses 0,007 à 0,008 milligramme par kilogramme. Entre temps (en décembre 1913), j'ai recu aussi « une com- munication préliminaire » de M. F. van den Branden, qui à traité avec succès à Léopoldville quelques cas de maladie du sommeil par le même composé cuprique, mais M. van den Branden dit en même temps que ce composé s’est montré quel- quefois instable au moment de sa préparation et qu'une injec- tion de 2 décigrammes a causé la mort d’un malade de 45 kilogrammes sur 35 cas traités. Le cas de mort était dù à l'intoxication arsenicale. Pour résumer l'historique de cette question, je puis donc dire que — m'inspirant des anciens {ravaux sur les propriétés physiologiques, thérapeutiques et surtout antiseptiques des sels d'argent et des travaux plus récents de Laveran, Mesnil et Nicolle, Ehrlich, Morgenroth, etc., sur les effets de l'association de différents médicaments dans le traitement des trypanosomiases, et mettant largement à profit les tra- vaux d'Ebrlich et de ses élèves sur la chimiothérapie mo- derne — j'ai eu l'idée des mêmes combinaisons que le grand savant allemand indépendamment de lui, et tout en suivant une voie différente de celle qu'il a suivie lui- même. | En outre, habitué à expérimenter avec des produits biolo- giques dont la composition nous est complètement inconnue, mais dont nous constatons très bien les effets, je ne me préoccupais pas tout d'abord de connaître la nature chimique exacte de mes composés. Je cherchais avant tout à établir leur valeur au point de vue thérapeutique, et j'ai pu publier les premiers résultats de mes recherches avant toute autre publication scientifique de ce genre. Les essais que j'ai pu faire avec les composés des arsenicaux d'Ehrlich et d’autres métaux, tels que le mercure, l'or et le ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 245 platine, me permettent de supposer, ainsi que je l'ai déjà indiqué ailleurs (1), que ce sont les composés arséno-argen- tiques qui donnent les produits les plus stables et les plus actifs par rapport à leur faible toxicité. Je dois ajouter que les composés arséno-argentiques peuvent encore. être associés, de même que le composé cuprique d'Ehrlich, au trypanobleu, trypanorouge (2) ou tryparosan et que cette association augmente beaucoup leur activité théra- peutique dans certaines trypanosomiases. ESSAIS THÉRAPEUTIQUES J'ai essayé les composés arséno-argentiques dans les maladies suivantes : 1° TrypanosomrAsEs ét notamment le Surra (du laboratoire de Mesnil), le Tr. rhodersiense et dimorphosn (du laboratoire de Laveran ); 2° SPrRILLOSES, Spir. des poules (du laboratoire de Marchoux); Spir. de la fièvre récurrente (du laboratoire de Mesnil) ; Syphilis expérimentale des lapins (du laboratoire de Levaditi et du laboratoire de L. Fournier, de l'hôpital Cochin); Syphilis de l'homme (service de L. Fournier, à l'hôpital Cochin); Pour éviter les longues dénominations, j'appellerai : A CA, le dioxydiaminoarsénobenzol chloroargent-argen- tique ; A B A, le dioxydiaminoarsénobenzol bromo-argentique : A TA,le dioxydiaminoarsénobenzol iodo-argentique. La proportion de chlorure, de bromure ou d’iodure d'argent combiné sera désignée par un chiffre. Ainsi, par exemple, la combinaison d’une molécule de chlorure d'argent pour trois (4) Comples rendus de l'Acad. des Sciences. Séance du 19 janvier 1914. (2) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences. Séance du 20 octobre 1913. 11 246 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR molécules de dioxydiaminoarsénobenzol sera désignée par A C Aï. Le dioxydiaminoarsenobenzol sera désigné par : ddab. La toxicité de nos trois produits est à peu près la même. Les lapins de 2 kil. 500 à 3 kilogrammes supportent sans réaction immédiale et sans lésions consécutives apparentes une injection dans la veine de l'oreille de 20 centigrammes dis- sous dans 20 cent. cubes d’eau. Les cobayes de 350 à 500 grammes supportent bien une injeclion de 3 cenligrammes dans 3 cent. cubes d’eau, dans les muscles des cuisses. Les souris de 16 à 22 grammes supportent une injection de 2,5 milligrammes dans 1 cent. cube sous la peau. Une injection de 11 centigrammes par kilogramme a tué un lapin sur trois. Une injection de 10 centigrammes par kilogramme à tué deux cobayes sur quatre. Une injection de 3 milligrammes a tué une souris de 20 grammes sur trois. On peut donc admettre les données suivantes : Dose toxique, 10 centigrammes par kilogramme : Dose tolérée, T à 8 centigrammes par kilogramme. TRYPANOSOMIASES. Pour essayer l’action de mes différents produits et comparer leur action à celle de latoxyl et du dioxydiaminoarséno- benzol, je me suis servi principalement de souris infectées de Surra. Inoculées par piqûres sous la peau, les souris non traitées succombaient généralement quatre à cinq jours après. Exp. 1. — (Surra). Toutes les souris sont injectées une seule fois, le troi- sieme jour après l'infection, quand les lrypanosomes sont déjà nombreux. ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 247 A. — ATOXYL. C. — acaî (suile). doses. Souris. résultats. doses. Souris. résultats. 2/10 mgr. 41 —+ 5 jours. #/100 mgr. 7 R. après 13 jours. A. ta _ S R. après 22 jours. PMOSmMEr UNE = CHRTEEAUET ES Guérie. 22 1 — UE E PRIT 5/10 mgr. 141 + — ARS RENE _ no apres 10): 6/100 mgr. 1 KR. après 12 jours. 2.. R. après 9 — 2 R. après 13 — 2 mgr. 1 KR. après 11 — 3 R. après 15 — 2 R. après 12 — | RAR MORE M EUÉTIE. B. — ddab. CANNES MERE de Eee EE doses. Souris. résultats. SR ENG += Es = EN: 1/100 mgr. 1 = 2/100 mgr. 41 + 4 jours. 2 _ 3/100 mgr. 1 +71 — £ 3 PA RENE 23) BANG TES RS ARE CRETE 8/100 mgr. 1 R. après 30 jours. = CE — ONE AAA NE R EM — — NE CN 2 es 5/100 mgr. 4 +5 — 3 an TAOOEMEr UT ÿ — DR Hot ss : UNE doses. Souris. résultats. 2 HT — ne 1 = 3 KR. après 13 ;. #/100 mgr. 1 KR. après 13 jours. CVS A cat 2 KR. après 13 — doses. Souris. résultats. - UT 110) JGUéTIE: 1/100 mgr. 1 + 6 jours. SM RP ENT TUE S A 2/100 mgr. 1 +6 — (ERP MENT IE —= 2 +5 — 1 — D — 8 QUE AN DRE RP Re eh à = CHENE Er 6/100 mgr. 1 R. après 9 jours. ANA EST 0 DRE nait rus GUérIe ee fé NAS 3 De 4/100 mgr. 41 R. après 8 j. CEE Tr rie Mie — 2 KR. après 7 — ÿ Da 3 KR. après 8 — 6 r ; R. aprés 9 — due bn MR après 13 — Es . S à doses, Souris. résultats. CEA AAapres 2 ED ‘dk ia 4/100 mgr. 1 KR. après 6 jours. 2 R. après 7 — 8/100 mgr. 1 KR. après 16 — 2 KR. aprés 17 — Le signe + indique la mort de l'animal, la lettre R la récidive. Il résulte de cette expérience que, pour le Surra, le produit bromé est sensiblement plus actif que les deux autres. On peut évaluer à 7/100 de milligramme la dose qui guérira les souris 248 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR par une seule injection sous la peau, faite 60 heures environ après l’inoculalion. La dose tolérée étant de 2,5 milligrammes, le rapport entre cette dose et la dose qui guérit serait de 36/1. Ce produit est au moins 3 fois plus actif que le ddab et 35 fois plus actif que l’atoxyl. C’est donc surtout avec le produit ABA: que j'ai continué les expériences, qui avaient pour but d'établir : J 1° Les effets d'un traitement commencé plus où moins tard après l'infection; 2° Les effets d'un trailement consistant en injections répé- tées de petites doses qui, injectées une seule fois, n’empéchent pas les récidives; 30 Le traitement des récidives. Exr. 3. — Deux souris sont injectées le lendemain de l'infection avec 1/100 de milligramme de A B A* et ces mêmes doses sont injectées encore deux fois les deux jours suivants. Chez les 2 souris traitées, il n’y avait pas encore de trypanosomes dans lé sang au moment de la 1r° injection et ces deux souris ne sont jamais devenues malades. Le témoin est mort le cinquième jour. Exr. 4. — Six souris reçoivent 4 injections de 1/100 de milligramme du même produit pendant quatre jours de suite, mais la première injection a été faite quarante-huit heures après l'infection. Il y avait au moment de la ire injection des trypanosomes peu nombreux dans le sang. De ces six souris, deux ont des rechutes après treize et vingt-deux jours; les quatre autres sont guéries. Exr. 3. — Deux souris recoivent quarante-huit heures après l'infection une jre injection de 2/100 de milligramme et, de deux jours en deux jours, deux autres injections de 2/100 de milligramme. Les deux souris n’ont pas de rechutes. Exr* 6. — Deux souris sont traitées de la même façon, mais ne reçoivent que 2 injections de 2/100 de milligramme. Guérison. Il semble donc résulter des expériences 3, #4, 5 et 6 : 1° Que l’on peut obtenir des guérisons d'autant plus sûre- ment et avec des doses d'autant plus faibles que le traitement est commencé plus tôt après l'infection, ce qui confirme les résultats obtenus déjà avec d’autres médicaments ; 20 Que desinjections à petites doses souvent répétées dunnent des résultats meilleurs qu'une injection de la même quantité du médicament en une seule fois. Exp. 7. — On commence le traitement le quatrième jour après l'infection, au moment où les trypanosomes sont très nombreux dans le sang. Le traitement et les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau suivant : 5 . | | ——_—_ I TT“ 2e injection de 5/100 mgr. CARPE MERS 24 vx | + | ZE 3e injection de 5/100 mgr. Ti 00 PRADA EE (] (D Ô 0 A Ans | US Re Ra 0 0 0 0 AA ON SR SR) PÉRST en 0 0 0 0 AO eee ee 0 0 0 0 MNT em SERRES 0 —. ——— ze inj. 6/100 mgr. Ne Enter Re AUS : : 1). t QE Re RE EC PR (] 0 ARR Re en 2 0 0 (l 0 EE D. | “ in). 6/100 mer. TT ÿe inj. 6/100 mgr. TR ALES ERP RSR : : | Ô Ô de inj. 6/100 mer. OA EE EU AE) ER SENTE RE) PORN PR 0 0 | 0 û 6e in]. 6/100 mgr. LR ER Le De 4 () 0 HSNRER | PER Re eme ne + RE 0 (] LIGNE AR NEE 7 FRET TRES a. | PORTANT û 0 Le nombre plus ou moins grand de points (. grand de trypanosomes dans le sang. ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE ..) indiquera le nombre plus ou moins ire injection de 5/100 mgr. ABA%. L'expérience 7 montre tout d'abord qu'en commençant le traitement au moment où les trypanosomes sont très nombreux on n'obtient pas de guérison avec des doses cinq à six fois plus fortes que dans l'expérience 3 (1"° injection vingt heures après l'infection ). 250 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ce fait donne une indication très importante pour le traite- ment des rechutes. Les souris # et 5 de l'expérience 7 n'ont pas pu être sauvées malgré trois injections faites après la réapparition des trypa- nosomes dans le sang, tandis que deux injections de la même importance, mais faites avant la réapparition des trypano- somes, ont pu empêcher la rechute et guérir les souris définiti- vement. On observe donc dans le traitement des rechutes les mêmes faits que dans le traitement des infections primaires, — à cette différence près que, dans les rechutes on a affaire à des para- sites déjà plus ou moins immunisés et contre l’action du médi- cament et contre celle de l'organisme. On sait en efler que les trypanosomes, ainsi que d'autres microbes (1), peuvent être immunisés contre l’action des anti- septiques et contre celle des sérums microbicides et que dans un organisme infecté et traité par des doses incomplètement stérilisantes, les lrypanosomes doivent acquérir cette immu- nité. Dans les maladies à rechutes, dans lesquelles on ne peut pas avoir la certitude absolue d'obtenir une guérison définitive par une seule injection, il serait donc tout indiqué de faire plu- sieurs injections à des intervalles de temps assez rapprochés. Si en effet, la 1" injection est déjà assez active pour faire disparaitre les parasites du sang circulant pendant quelques jours, la 2° injection, faite avant la réapparition des parasites, mettra le malade dans le cas de notre expérience 3; une 3° injection aura encore plus d'effet, et si les quantités de médicament employées ne dépassent pas les doses excitantes, c'est-à-dire curatives pour l'organisme, on mettra ce dernier dans les meilleures conditions de défense. Il est impossible, en effet, d’assimiler complètement la stéri- lisation par un antiseptique d’une culture dans un lube à la destruction par ce même antiseptique des microbes dans un organisme malade. Dans ce dernier cas, le problème à résoudre est infiniment plus compliqué. (1) J. Danysz, Immunisation de la bactéridie charbonneuse contre le sérum Je rat et les arsenicaux. Annales de l'institut Pasteur, t. XIV, p. 641. ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 254 On sait que les sérums antimicrobiens, par exemple le ‘sérum antipesteux ou antityphique, qui sont très peu ou pas du tout microbicides #n vitro, peuvent guérir les souris infec- tées par la peste ou la périlonite {yphique des cobayes. Dans ce Cas, ainsi que cela a été établi par l'œuvre de Metchnikolf et les travaux de ses nombreux collaborateurs et élèves, la colla- boration de l'organisme est évidente et même on peut dire que son rôle dans la destruction des microbes est prépondérant. Le rôle du médicament est indirect, sinon secondaire, parce qu'il rend l’organisme capable de détruire les parasites sans pouvoir les détruire lui-même, — et la quantité du sérum injecté peut (dans certaines limites, bien entendu) dépasser sans inconvénient la dose nécessaire à la guérison, parce que les sérums spécifiques sont, selon l'expression d'Ebrlich, exclusivement parasilotropes. En ce qui concerne les médicaments chimiques, on n'en connaît pas encore qui auraient cette affinité exclusive pour les parasites. Ces produils ne sont jamais exclusivement spéci- fiques, ils se fixent sur certains tissus, sur certains organes et produisent, à certaines doses, des troubles plus ou moins apparents et plus ou moins graves. [ls ont, par contre, un avantage que ne possèdent pas les sérums, c'est celui d'aug- menter, à cerlaines autres doses, les moyens de défense de l'organisme en excitant l'activité des phagocytes ou de certaines glandes. Cette action nocive ou excitante dépend de la dose injectée, de sorte que l'effet d'un antiseptique sur un organisme malade peut être figuré par une courbe présentant un optimum d'action curative qui correspond à une dose déterminée. Au- dessous de cette dose, la dilution de l’antiseplique sera trop erande pour atteindre utilement les microbes: au-dessus, l'anti- septique diminuera les moyens de défense naturels de l'orga- nisme el, dans les deux cas, le résultat sera le même. Dans ses lecons sur la diphtérie, M. E. Roux nous à fait voir les dangers qui peuvent résulter de lPemploi des antisep- tiques trop concentrés ou trop irritants pour la gorge des petits malades. Ces badigeonnages ne pouvaient jamais détruire tous les microbes et ceux qui restaient trouvaient un excellent milieu de culture sur les muqueuses meurtries et mises à vif. 202 . ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ces mêmes antiseptiques, employés à doses non irritantés, produisaient des effets bien meilleurs. C’est dans cet enseignement que j'ai puisé les idées pour l'étude de l’action des antiseptiques et j'ai constaté que les faits signalés par Roux pour les infections localisées se retrouvent aussi dans les septicémies. Ainsi, quand on infecte des souris par la bouche avec le bacille typhi murium, quand on leur injecte le lendemain de l'infection 1/10, 1/2 et 1 milligramme de ABA° et quand on fait l'examen bactériologique de leur sang les jours qui suivent, on constate que ce sont les souris qui ont reçu les plus fortes doses qui sont envahies par les microbes le plus.tôt et que ce sont elles qui meurent les premières et avant les témoins. On peut donc affirmer que les antiseptiques ne sont pas capables de détruire à eux seuls tous les microbes d'un organisme malade, que l'intervention de l'organisme est indispensable et que cette intervention sera d'autant plus utile que la quantité du médicament employé sera plus éloignée de la dose toxique. L'expérience T nous donne encore une indication intéres- sante. On constate que les souris #4 et 5 ont vécu deux fois plus longtemps (six jours), après l'apparition des trypanosomes et malgré la présence de très nombreux trypanosomes dans leur sang, que les souris 1 et 2 (trois Jours) ce qui prouverait que si les trypanosomes peuvent s'immuniser contre l’action destruc- tive de l'organisme et des antiseptiques, l'organisme peut à son tour s’habituer aux trypanosomes. Il s’établirait dans ce cas une sorte de symbiose qui pourrait conduire, à la longue, à la création de ces races non pathogènes que l’on rencontre chez beaucoup de mammifères et chez les vertébrés inférieurs ; ces trypanosomes non pathogènes sont généralement beaucoup plus résistants (1) à l'action des antiseptiques probablement parce qu'ils sont naturellement immunisés contre laction destructive des phagocytes et des humeurs de l'organisme. L'exemple que je viens de citer n'est peul-être pas assez convaincant parce que, chez les souris, la maladie évolue trop vite, mais j'ai un cobaye qui a élé infecté en même temps qu'une série d'autres et qui reçoit tous les quinze ou vingt (4) Laveran et Mesxiz, Trypanosomes et trypanosomiases, p. 302. ESSAIS DE CHIMIOTHÉRAPIE 253 jours une petite dose (1 à 4 milligrammes) d'un de mes pro- duits. Ce cobaye, traité ainsi depuis six mois, à toujours des trypanosomes dans le sang et, malgré cela, son poids augmente régulièrement et il semble très bien portant. Les témoins sont morls en quarante-cinq et quatre-vingt-dix jours et, d'après Laveran et Mesnil (1), sur 199 cobayes infestés par le Tr. du surra, la survie la plus longue était de cent quatre jours. LES TRYPANOSOMES RHODESIENSE, (GAMBIENSE ET DimMorPHON. Quelques expériences comparatives m'ont permis de constater que le produit ABA* est à peu près aussi aclif pour le trypa- nosome A/odesiense (du laboratoire de Laveran) et le trypano- some (ambiense (du laboratoire de Mesnil) que pour le Surra (du laboratoire de Mesnil). J'ai pu guérir des souris infectées avec le trypanosome Rho- desiense par une seule injection de 1/10 de milligramme de ABA: seul et de 4/100 de milligramme quand on combine le ABA* avec du trypanorouge. Par contre, des doses de 1 et même de 2 milligrammes de ABA: ne font que retarder de quelques jours la mort des souris infectées par le Tr. Dimorphon. J'ai réussi pourtant à guérir quelques souris infectées avec le Tr. Dimorphon par un mélange de 3 milligrammes ACA° et avec 2 milligrammes de ABA additionné de 1 milligranme de Trypanorouge et une autre par un mélange de 1 milli- gramme de ABA* et de 1 milligramme de Tryparosan. Spirilloses. Dans la spirillose des poules (du laboratoire de Marchoux), le produit ACA* s'est montré beaucoup plus actif que Le 606. ExP. 8. — Trois poules sont injectées le lendemain de l'infection dans le muscle pectoral. Au moment de l'injection les spirilles sont nombreux. Poule n° 1, 3 mgr. ddab. 1e injection. $ Poule n° 2, 3 mgr. ACAS. Poule n° 3,3 mgr. 11 (2). le lendemain les spirilles sont encore nombreux. (1) Trypanosomes el trypanosomiases, p. 364. (2) Composé de dioxydiaminoarsénobenzol et de eyanure d'or et de potas- sium. 25% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR \ Poule n° 1, 5 mgr. ddab. Le lendemain + 2e injection. $ Poule n° 2, 3 mgr. ACA*. } Disparition des spirilles ( Poule n° 3, » mgr. 11. . À et guérison. Cette expérience à été répétée avec cette différence que les 3 poules avaient été injectées une seule fois avec 5 milli- grammes des mêmes produits. Le résultat avait été le mème que dans le cas précédent. CHANCRE SYPHILITIQUE DES LAPINS. Deux lapins (du laboratoire de M. Levaditi) présentant des chancres syphilitiques au même degré de développement et riches en spirochètes ont reçu : Le premier (poids 2 kilogr. 700): 15 centigrammes d’un com- posé de ddab et d'éosinate d'argent. Les trypanosomes ont disparu en vingt-quatre heures : Le deuxième (poids : 2 kilogr. 800), 15 cenligrammes de dioxydiaminoarsénobenzol seul. Après vingt-quatre heures, il y avait encore quelques tréponèmes vivants; après quarante- huit heures, il n’y en avait plus. Les deux lapins ont guéri à peu près en mème temps. J'ai reconnu plus tard que le composé à l’éosinate d'argent était moins actif que le composé bromé. Ce dernier composé essayé à la dose de 10 milligrammes sur un -lapin de 2 kilogr. 500 infecté par M. Lancereaux au laboratoire de M. Louis Fournier et présentant un beau chancre du serotum très riche en spirochètes, a fait disparaître ces derniers en quinze heures. Le chancre a été guéri en douze jours. SYPHILIS DE L HOMME. M. Fournier a donc voulu essayer ce produit (ABA4°) dans la syphilis de l’homme, et voici quelques résullats de ces traite- ments tels qu'ils m'ont été communiqués par M. Lesage, interne du service : Malade 2245. — Syphilis d'un an. Plaques muqueuses hypertrophiques suin- tantes de l'anus. Wassermann posilif. A reçu, du 11 au 18 décemhre, # injections de 15, 20, 15, 25 centigrammes En tout : 75 centierammes. ESSAIS DE CHIMIOTHERAPIE 255 Le 18 décembre, plaques muqueuses aplaties, mais encore légèrement suintantes. Le 20 décembre. Wassermann positif. Malade 2219. — Chancre phagédénique datant de trois semaines. Wasser- mann positif. Injections du 11 au 18 décembre, 15, 20, 15, 25 centigrammes. En tout : 15 centigrammes de ABA. Le 20 décembre, chancre presque cicalrisé, avec encore une petite ulcéra- ion dans le fond. Le 28 décembre, chancre complètement cicatrisé. Le 13 janvier, pas d'accidents secondaires. Wassermann positif. Malade 2283. — Chancre diphtéroïde du méat datant de quatre semaines, grosse induration, adénite bi-inguinale marquée. Wassermann positif. A reçu, du 25 décembre au 5 janvier, 20, 20, 15, 20 centigcrammes. En tout : 75 centigrammes de ABA. Le 3 janvier, chancre presque guéri. Le 8 janvier, complètement guéri, adénite bien diminuée. Le 26 janvier, pas d'accidents secondaires. Wassermann négulif. Malade 2285. — Chancre de la face interne du prépuce datant de quinze jours. Wassermann positif. A reçu, du 25 décembre au 3 janvier, 20, 15, 20 centigrammes. En tout 5 centigrammes de ABA. Le 3 janvier, chancre complètement cicatrisé. Le 18 janvier. Wassermann positif. Malade 2289. — Syphilis de quatre mois. Plaques muqueuses du scrotum et de l’anus. Roséole érythémateuse du tronc. Angine. Plaques hypertro- phiques de la langue. A reçu, du 27 décembre au 3 janvier, 20, 15, 20 centigrammes. En tout : 55 centigrammes de ABA. Le 3 janvier, amélioration très nette de toutes les lésions. Le 10 janvier, le malade va très bien, toutes les lésions ont disparu. Malade 1882, — 1 août 1913. Chancre syphilitique du prépuce cicatrisé depuis trois mois, adénite, roséole, plaques muqueuses. Wassermann posilif. Recoit du 4 au 13 août trois injections de 50 centigrammes de 606. Le 14 août. Amélioration sensible. Le 15 septembre, à la place du chancre, il y a une ulcération chancriforme et ulcération au niveau du méat. Le 25 septembre, les bords du chancre sont plus nets qu'au début. Injection de 50 centigrammes de 606. Wassermann légèrement atténué. Le 24 octobre, le chancre n'est pas guéri. Wassermann positif. Le 5 novembre, chancre incomplètement cicatrisé. Injection de 50 centi- grammes de 606. Le 4 janvier 1914, l'ulcération du limbe persiste, ne s'est jamais cicatrisé omplètement. Wassermann posilif. Le 8 janvier, en plus de l’ulcération du limbe, il existe trois autres ulcéra- tions ressemblant tout à faità des accidents primitifs. Syphilis chancriforme. Le 10 janvier, injection de 18 centigrammes de produit bromo-arséno- argentique (ABA). Le 13 janvier, amélioration très nette de toutes les lésions. Du 13 au 20 janvier, trois injections de 0,20 centigramme de ABA*. Le 20 janvier, toutes les lésions sont cicatrisées. 256 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR On a traité de cette façon jusqu'à présent (1 mars 1914) 80 cas, et dans tous ces cas on a constaté des résullats analogues. Le cas 1882 est plus particulièrement intéressant, parce que ses lésions ont résisté à un traitement prolongé par l’arsénobenzol, el ont été sensiblement améliorées dès la première injection de 0,18 centigramme du produit ABA*. Ainsi, avec des doses de 0,55 à 0,75 centigramme de ABA: en 3 ou 4 injections répétées tous les deux ou trois jours, on obtient des résultats au moins aussi bons et souvent meilleurs et plus rapides qu'avec 1 gr. 50 à 2 grammes de 606. Les injections de ce produit sont généralement très bien tolérées. Elle ne sont suivies ni de vomissements, ni même de nausées. Quelquefois la première injection est suivie dans les douze à vingt-quatre heures d'une légère élévation de température, qui ne se manifeste plus aux injections suivantes. Ce serait donc une réaction spécilique, c’est-à-dire une conséquence natu- relle de l’action du produit sur les spirochètes. En résumé, on peut donc affirmer que l'addition de l'argent au dioxydiaminoarsénobenzol, surtout sous la forme de bro- mure et d'iodure d'argent, ce qui permet de fixer également le brome ec l’iode, augmente considérablement les propriétés antiseptiques et curatives de chacune de ces substances prises séparément, sans en augmenter les propriétés toxiques. Les essais de traitement de certaines septicémies me donnent à penser que les produits chimiques curatifs n’agissent pas exclusivement comme antiseptiques dans les organismes infec- tés; que, dans ce cas, comme dans le cas des sérums antimi- crobiens, l'intervention de l'organisme, et en particulier des phagocytes, joue le rôle le plus important dans la destruction des microbes. INFLUENCE DES DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES SUR MILIEUX ARTIFICIELS ET NATURELS par Jures VENTRE. (DEUXIÈME PARTIE) EXAMEN DES RÉSULTATS ANALYTIQUES. Les essais dont il vient d'être question ont été contrôlés deux fois et les résultats inscrits dans les tableaux représentent la moyenne des deux dosages. Les méthodes d'analyse auxquelles j'ai eu recours sont les méthodes officielles, c'est-à-dire : pour l'alcool, la détermina- tion après distillation d'une quantité de liquide égale à environ 200 centimètres cubes et emploi de l’alcoomètre légal. De cette manière, je pouvais être sûr du dixième de degré. Pour l'acidité totale, J'ai adopté, après contrôle, la méthode volumétrique gazeuse (1); cette méthode me permettait de me rendre comple en même temps de la quantité de gaz carbo- nique que pouvaient tenir en dissolution les vins. Pour l'acidité volatile, J'ai employé uniquement la rnéthode de Duclaux en ayant soin de conduire la distillation d'une manière régulière et en évitant, autant que possible, les coups de feu. La détermination de l'extrait sec a eu lieu par la méthode à 100 degrés et par la méthode du vide. De manière à éviter . toutes causes d'erreur, j'ai, dans le cas de la méthode à 100 de- (1) Cette méthode qui, à l'heure actuelle, est employée d'une manière presque exclusive au laboratoire de technologie à l'Ecole d'Agriculture de Montpellier, est basée sur les différences proportionnelles des volumes de gaz carbonique dégagé par deux acidités dont l'une est connue, agissant sur un excès de bicarbonate alcalin. L'opération consiste donc à faire d’abord 258 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR grés, opéré par série et en intervertissant, au cours de l'évapo- ration, l’ordre des capsules ; j'avais ainsi la certitude que les mêmes causes agissaient uniformément sur toutes les capsules. La quantité de cendres totales à été obtenue à la suite de deux opérations successives, c'est-à-dire que la matière orga- nique de 50 centimètres cubes de vin, sitôt carbonisée au un tarage pour lequel on emploie la solution décinormale d'acide sulfurique, puis à répéter ensuite la même opération avec le liquide dont on doit déter-- miner l'acidité. La différence entre les deux volumes est multipliée par un « coefficient, ordinaire- ment constant pour les acidités que l'on a le plus souvent à mesurer, et le produit est ajouté ou retranché du chiffre d'acidité connue, selon que l'acidité inconnue est supérieure ou infé- rieure à celle du liquide de Larage. L'appareil dont on se sert est un tube de Scheibler pour le dosage de l'acide car- bonique dansles calcai- res, simplifié, que Ber- nard avait appliqué au dosage calcimétrique des terres et étendu à l’aci- dimétrie des vins (fig... Pratiquement, on fail réagir 20 cent. cubes de liqueur acide sur 5 cent. cubes de bicarbonate de sodium à 7 p.100 ou de potassium à 8,5 p. 100. Les résultats concor- dent parfaitement avec ceux obtenus par le dosage alcalimétrique. Le coefficient est sensi- blement constant pour des acidités comprises é entre 5 et 10 grammes d'acide sulfurique par litre et correspond à 0,115. Dans les conditions les plus générales de la pratique (15-20 degrés centigrades), on n’a pas à faire de corrections de température. Exemple : Soit V le nombre de cent. cubes de gaz’carbonique obtenu avec la liqueur sulfurique décinormale (titre — 4#*9 par litre) : soit V' le nombre de cent. cubes obtenu avec le liquide à acidité inconnue : on aura comme résultat : A = 49 + (V — V') 0,15 SiV > V' A = 4,9 — (V — V') 0,115 SIN A = 4,9 + (V' — V) 0,115 INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 259 rouge sombre, était lavée grossièrement de manière à séparer les sels susceptibles de se décomposer ou de se volatiliser (phosphates, chlorures, etc.); ce lavage effectué, le charbon restant sur le filtre était brûlé complètement. Les cendres ordinairement blanches oblenues, étaient traitées par du car- bonate d'ammonium afin de ramener à l’état de carbonate les sels de calcium décomposés par la chaleur. La crème de tartre et l'acide tartrique total, ont été déter- minés par la méthode de Berthelot et de de Fleurieu, qui est d’ailleurs la méthode officielle. De manière à avoir encore dans ce dosage le maximum de garantie, J'ai établi, pour chaque série, le coefficient de correction. Ce coeflicient, qui est fixé ordinairement à 0,2, est variable et doit être établi à chaque essai. À cel effet, je traitai 20 centimètres cubes de liquide contenant une quaniité déterminée de crème de tartre proche de la saturation, par 80 centimètres cubes d’un mélange éthéro- alcoolique à parties égales. Par différence entre l'acidité pri- mitivement dosée du milieu et l'acidité de la crème de tartre précipitée, je déterminai la valeur du coefficient à appliquer. Les méthodes employées étaienc susceptibles de donner des résultats sensibles et parfaitement comparables entre eux; jai tout lieu d'admettre que les chiffres analytiques obtenus pour- ront permettre de tirer des conclusions et donneront le moyen de différencier les diverses levures entre elles, sans que, pour cela, on puisse allribuer à un manque de sensibilité des mé- thodes les différences enregistrées. Ceci étant posé, je vais examiner chacun des éléments dosés et essayer d'en dégager des conclusions intéressantes au point de vue de [a classifica- lion des levures par leurs propriétés biochimiques. Alcool. — Au point de vue général, on observe tout d’abord que, quel que soit le milieu, naturel ou artificiel, sur lequel les ferments opèrent, la levure de Médoc donne toujours des pro- portions d'alcool inférieures à celles produites par les autres. Ki on traduit par des chiffres la valeur alcooligène de chaque levure, on verra qu alors il faut de 17 à 17,1 grammes de sucre au Beau- Jolais, Romanée, Verzenay, pour faire un degré d'alcool; la levure de Médoc en exige de 17,6 à 17,85 grammes. On peut dire que ces différences ne sont pas dues à une incomplète uti- 260 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lisation du sucre contenu dans les différents milieux puisque, ainsi qu'on à pu s’en rendre compte par ce qui a été déjà dit, il n'existe pas dans les produits fermentés de matière réduclrice résiduelle. Par conséquent, on peut admettre que les diffé- rences observées dans les quantités d'alcool produites tradui- sent une activité biologique spéciale et absolument propre à une levure déterminée. Comme toutes les fermentations ont eu lieu en milieux sté- rilisés et que des lies examinées au microscope n’ont pas décelé de contamination, on a, de ce fait, une autre preuve que la faiblesse alcoolique propre au Médoc est bien le résultat d’un processus biologique spécial. On en trouvera enfin une dernière preuve dans le fait que la diminution du titre alcoolique conserve absolument sa valeur dans les essais sulfités. Or, il est aujourd'hui classique, que, dans un milieu naturel non aseplisé, l'addilion d’acide sulfureux assure une meilleure utilisation du sucre, et partant un rendement alcoolique plus élevé. On remarque également un fait intéressant, et déjà observé en pratique courante, que la levure de Beaujolais et celle de Verzenay paraissent être les plus susceptibles de donner le maximum d'alcool, en même temps qu'elles paraissent imprimer au milieu dans lequel elles se développent un cachet spécial qui se retrouvera toujours à la dégustation. Acidité totale. — T’acidité totale en elle-même n’est pas très intéressante car, à part les produits obtenus avec l’ensemence- ment Beaujolais, qui sont généralement moins riches en acide, tous les autres essais donnent des résultats sensiblement iden- tiques. Mais on lrouvera des différences notables en ce qui con- cerne la manière dont se comportent les diverses levures vis-à-vis de l'acidité fixe et leur manière d’être au point de vue de leur production d’acidité volatile. Acidité volatile. — Cet élément, dont le dosage a été fait très soigneusement, donnera des indications intéressantes sur la vie de la levure. Si on considère le chiffre moyen des dosages effectués dans les vins blancs et les vins rouges, on arrive aux résullals suivants : INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 261 MILLIGRAMMES D'ACIDITÉ VOLATILE PAR LITRE EN ACIDE SULFURIQUE TÉMOIN BEAUJOLAIS MÉDOC ROMANÉE VERZENA\ Blancs er 442 399 547 :02 393 Rouges 298 298 313 344 327 On a vu, lors de l'étude des milieux de culture, que la quan- tité d'acide volatil trouvée était du même ordre et paraissait tenir à la levure employée. Les différences peuvent, au pre- mier abord, sembler relativement faibles et tenir aux erreurs de méthode, mais, si on considère que le titre de la liqueur de chaux adoptée est de 0,0022 gramme d'acide sulfurique par cen- timètre cube de liqueur, on se rend compte que les différences entre les chiffres les plus forts et les plus faibles correspondent à 3 cent. cubes et à 6 cent. cubes de la solution alcaline. On ne peut done imputer à des erreurs de lecture les résultats dissemblables trouvés. D'autre part, on voit que les échantillons examinés sont en parfait état de conservation, et leur teneur en acides volatils n'a rien de pathologique. Voilà donc déjà un caractère biochimique permettant de différencier les diverses levures entre elles. Acidité fire. — La détermination de l'acidité fixe donnera également des indications intéressantes sur la manière dont les différents ferments se comportent vis-à-vis des principaux acides entrant dans la constitution du vin. J'ai donc dosé simultanément l'acide tartrique total, la crème de tartre et l'acide tartrique libre, ainsi que l'acide succinique. Pour la recherche de ce dernier acide, j'ai employé la méthode de détermination des acides solubles dans l’éther, mais en m'entourant de certaines précautions que la pratique m'a révélées comme indispensables à l'obtention de résultats cons- tants. J'opérais sur l'extrait desséché dans le vide en présence de petites quantités de quartz grossièrement pulvérisé, afin d'obtenir une division aussi parfaile que possible de la masse. A l’aide d'un agitateur, le tout était mis dans un flacon d'environ 100 cent. cubes. On ajoutait alors 25 cent. cubes d'éther dis- üllé sur le sodium, à 66°. On agitait à plusieurs reprises pen- 18 262 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dant environ 10 minutes; on décantait l'éther sans entrainer de matière et on le remplaçait par une quantité égale de liquide nouveau, Après une nouvelle agitation n’excédant pas 5 mi- nutes, on décantait et on réunissait cette deuxième portion de liquide à la première. J'ai pu me rendre compte qu'à la suite de ce deuxième lavage, il était parfaitement inutile d'en faire un troisième. Les liquides acides réunis étaient évaporés à feux doux die Ps Témoin. Beaujolais. Médoc. Aomanee. Verzera, F16. 1. — Variation de l'acidité volatile (en décigrammes et milligrammes). ei en présence d'une petite quantité d’eau: quand tout l'éther avait distillé, on procédait au dosage en se servant comme base d’une liqueur alcaline de soude, sensiblement vingtième normale, Comme, indépendamment des acides tartrique et succinique, il en existe d’autres et parmi eux l'acide malique, difficilement dosable, j'ai déterminé ces acides par différences en faisant le bilan de l'acidité fixe. Comme l'acidité ne change pas dans le milieu, quand on dose soit l'acidité fixe, soit l'acidité correspondante à la crème de tartre et l'acidité qui reste dans le milieu après précipitation, j'ai fait le bilan en me servant des résultats trouvés pour l'acide tartrique total et le tartre. Comme, d'autre part, la teneur en INFLUENCE DE DIFFÉRENTES ESPÈCES DE SACCHAROMYCES 263 malière alcaline des vins de 1912 était très faible, cette dernière correspondant sensiblement à la crème de tartre précipitée, J'ai tout lieu de penser que les acides qui se trouvent dans le milieu après précipitation sont à l’état libre. Voici les résultats trouvés par ce moyen et en exprimant tous les acides non déterminés en acide malique. BILAN DE L'ACIDITÉ DES VINS DE 1942, EN ACIDE SULFURIQUE ACIDITÉ ACIDITÉ ne À ACIDITÉ DÉSIGNATION ACIDITÉ de _de ne se rein de Le des FDA l'acide l'acide laide l'acide ac. autres échantillons, Su lartrique tarlrique ns A en acide libre. Combine CLASS CRSENRE malique. BLANCS : gr: gr gr. QT or. gr. Hémoins 00 43917 0,470 0,830 » 1,270 1,647 Z\Beaujolais . 4,223 0,500 0,740 » 1,162 1,821 S4Médoc . . . 4,285 0,470 0,730 » 1,500 1,585 H/Romanée. . 4,435 0,470 0,830 » 1,300 1,835 Verzenay . 4,153 0,470 0 ,S00 » 1,120 1,763 pl Témoin. . . 4,333 0,400 0,853 ne 1,290 1,890 Æ\ Beaujolais. 4,449 0,400 0,975 D 15930 À ,744 = Médoc . . . 4,862 0,370 1,053 » 1,450 1,989 = | Romanée. 4,666 0,375 1,010 » 1,290 4,991 —[ Verzenay. a,114 0,443 1,049 ; 1,080 2,232 Témoin. . . 4,662 0,323 0,90: 0,105 1,370 1,920 &\Beaujolais. 4,581 0,302 0,857 0,105 1,370 4,957 & { Médoc . . 1,661 0,349 0,811 0,105 1,370 2,027 giRomanée.. 4,584 0,302 0,834 0,105 1,300 2,043 Verzenay. . 4,673 0,302 0,857 0,105 1,270 2,049 Témoin. - 01661 0,702 1,484 0,070 1,080 4,631 3\Beaujolais. 6,802 0,557 15175 0,070 1,120 3,882 =AMEdOC eu 01,601 0;431 1,108 0,105 1,245 4,712 = / Romanée. . 7,571 0,549 1,184 0,070 1,040 4,173 Merzenay. 1,442 0,396 1,102 0,070 0,897 3,977 nl Témoin. . . 71,480 0,480 1,238 » 0,913 4,848 ®\Beaujolais . 7,101 0,396 1,152 » 1,080 4,473 B cent. cubes. Le 43 est mort le lendemain. 24 décembre. Le Cobaye 42, éprouvé par injection intraveineuse de 2 cent. cubes de liquide de C. serialis, a été très malade une demi-heure après l'injection. 22 décembre. La réaction des précipilines est très fortement positive, plus intense que lors de l'expérience du 3 décembre. 23 décembre. La réaction de fixation est positive avec le liquide de C. serialrs et avec le liquide échinococcique; négative avec l'extrait de mem- branes de C. serialis et de Cysticercus lenuicollis. lapin n9 12. — Infesté le 10 mars 1913 avec des proglottis de Tænia serialis. Le 1er décembre 1913, l'animal était porteur de deux kystes : l’un du cou, l’autre du jarret droit. En ponctionnant le kyste du cou, on a prélevé 30 cent. ÉTUDE EXPÉRIMENTALE SUR LA CÉNUROSE DU LAPIN 383 cubes de liquide parasitaire, clair. Nous avons retiré du kyste du jarret 12 cent. cubes d'un liquide jaunätre, filant, muqueux, presque consistant. Le kyste élait en état de dégénérescence ; il renfermait quelques vésicules filles à liquide encore transparent. Nous avons prélevé au Lapin 45 cent. cubes de sang, puis nous avons extirpé les deux kystes. Pendant l'opéralion, une certaine quantité de liquide parasitaire s’est écoulée dans la plaie opératoire. 2 décembre. Nous avons injecté trois Cobayes (ns 2 F, 4 F et 5 F) dans le périloine avec du sérum (2 1/2 à 4 cent. cubes) de Lapin. 4 décembre. Les Cobayes n°s 4 et 5 sont morts avec des symptômes d'ana- phylaxie passive; le Cobaye n° 2 a été très malade pendant vingt-cintf minutes. 53 décembre. Le sérum du Lapin a donné une réaction de fixation nettement positive avec le liquide de C. serialis et nettement positive également avec le liquide échinococcique. La fixation pratiquée avec le liquide de C. serialis élait encore positive, même lorsqu'on employait le sérum dilué au 1/20. La dilution au 1/23 ne donnait plus qu'une légère fixation. Nous avons égale- ment pratiqué la réaction de fixation en employant comme antigène l'extrait aqueux de membrane parasitaire dilué au 1/320. La fixation était très faible avec 0,1 de cette dilution, nettement positive avec 0,2 et 0,3 et faiblement positive avec 0,2 et 0,3 de C. tenuicollis. La réaction des précipitines était nettement positive après une demi-heure d'étuve ; le dépôt était considérable, floconneux. Au bout de deux heures, il y avait un dépôt abondant dans le fond du tube. 20 décembre. 20 jours après l'opération, nous avons de nouveau prélevé au Lapin 35 cent. cubes de sang. 22 décembre. Nous avons préparé les Cobayes n°5 38 I et 39 Ï, en leur injectant 5 cent. cubes de sérum dans le péritoine. Le lendemain, le Cobaye n° 39 est mort. 24 décembre, le n° 38 repris, dans la veine avec 2 cent. cubes de liquide parasitaire, présente des symptômes d’anaphylaxie passive. 22 décembre. La réaction de précipilines pratiquée avec le sérum recueilli deux jours auparavant est encore positive, mais beaucoup plus faible que lors de la première réaction. 23 décembre. La réaction de fixation est nettement positive avec le liquide de C. s rialis et le liquide hydatique. Elle est négative avec l’extrail aqueux de membranes de C.serialis (dilué au 1/320). Le sérum dilué au 1/20 a donné aussi la réaction positive, comme dans l'expérience du 5 décembre. 10 janvier 1914. Le Lapin est saigné à blanc. A l’autopsie, on ne trouve pas de nouveaux kystes. 12 janvier. La réaction des précipitines est absolument négative. 15 janvier. La réaction de fixation est positive avec le liquide de C. serialis, faiblement positive avec le liquide échinococcique et négative avec le liquide de C. tenuicollis. Lapin n° 13. — Cet animal a été infecté le 10 mars 1913 avec des proglottis de Tænia serialis. Le 1er décembre 1913, il présentait quatre kystes : trois du masséter et un du membre antérieur. Ces kystes avaient la dimension d’une grosse noix. Nous avons prélevé au Lapin 40 cent. cubes de sang, puis nous l'avons opéré. Le kyste du bras a été ponclionné, puis extirpé. Il contenait 30 cent. cubes de liquide. Nous avons ponctionné et extirpé les kystes du masséter, qui étaient plus petits et qui ne contenaient en tout que 15 cent. cubes de liquide. Après l'opéralion, nous avons injecté dans le péritoine du Lapin 10 cent. cubes de liquide parasitaire. 384 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 2 décembre 1913. Nous avons injecté 2 1/2 et 4 cent. cubes de sérum dans le péritoine des Cobayes n° 11 F,12 F et 13 F. 4 décembre 1913. Les Cobayes ont été éprouvés par l'injection intravei- neuse de 2 cent. cubes de liquide de C. seralis. Le n° 11 est mort en quatre minutes en présentant des symptômes d'anaphylaxie suraiguë; le n° 12 a été, très gravement malade pendant 35 minutes ; le n° 13, pendant 30 minutes. 3 décembre. La réaction des précipitines a été légèrement positive. 5 décembre. La réaction de fixation a été nettement positive avec le liquide de C. serialis. Avec l'extrait aqueux de membranes, elle était faible- ment positive en employant 0,2 d'antigène et nettement positive avec 0,3 et 0,4. Le liquide échinococcique donnait une réaction tout à fait négative. 20 décembre. Nous avons injecté dans le péritoine des Cobayes nos 40 I et 41 I 4 cent. cubes du sérum recueilli l’avant-veille. Le Cobaye Æ est mort le lendemain de l'injection. 24 décembre. Le Cobaye n° 40 a reçu dans la veine 2 cent. cubes de liquide de C. serialis; il a été à peine malade. 22 décembre. La réaction des précipitines a été très fortement positive. 23 décembre. La réaction de fixation est nettement positive avec le liquide de C. serialis et le liquide échinococcique. Elle est négative avec l'extrait de membranes de C. serialis (dilué au 1/320). 10 janvier. Un nouveau kyste étant apparu dans la région sous-scapu- laire gauche, nous avons prélevé du sang de la veine. 16 février. Le Lapin est saigné à blanc. L’autopsie donne la surprise de cinq nouveaux kystes : un dans la région sous-scapulaire droite; un, région dorsale ; un, cuisse gauche, un, région cervicale et enfin un dernier, énorme, ‘du volume de 250 cent. cubes environ, logé dans l'abdomen et greffé aux muscles psoas. L'animal a donc présenté au total 10 Cénures. 19 février. La réaction des précipitines, avec 1/4, 1/2 et 1 cent. cube, a été nettement positive après une demi-heure à 37 degrés; après une heure et demie, il y avait au fond du tube un très abondant dépôt floconneux. La même réaction avec le liquide de C. tenuicollis n'a montré que des traces de précipité après deux heures d'étuve ; après seize heures, à la température du laboratoire, il y avait un dépôt assez abondant. La réaction de fixation est positive avec le liquide de C. serialis et le liquide de C. tenuicollis. Lapin n° 14. — Cet animal a été infecté le 10 mars 1913 avec des proglottis de. Tænia serialis. Le 1° décembre 1913, il présentait un kyste de l’aine droite, du volume d'une petite noix. Nous lui avons prélevé 35 cent. cubes de sang. Le kyste à été ponctionné, puis extirpé ; il contenait 10 cent. cubes de liquide. Une heure après l'opération, nous avons injecté dans le péritoine du Lapin 10 cent. cubes de liquide de C. serialis. 2 décembre. Nous avons injecté 4 cent. cubes de sérum dans le péritoine du Cobaye n° 20 F. 4 décembre. Le Cobaye n° 20 F, éprouvé dans la veine avec 2 cent. cubes de liquide de C. serialis, a présenté pendant cinquante minutes des symptômes anaphylactiques. 3 décembre. La réaction des précipitines a été très légère, à peine visible. 5 décembre. La réaction de fixation a été légèrement positive avec le liquide C. serialis, assez fortement positive avec le. liquide hydatique et négative avec l'extrait aqueux de membranes. 20 décembre. Nous avons prélevé 35 cent. cubes de sang. ÉTUDE EXPÉRIMENTALE SUR LA CÉNUROSE DU LAPIN 385 22 décembre. Nous avons injecté 3 cent. cubes de sérum dans le périloine des Cobayes n° 34 J et 35 J. 24 décembre. Le Cobaye n° 34 est trouvé mort; le Cobaye n° 35, éprouvé dans la veine avec 2 cent. cubes de liquide de C. serialis, a été à peine malade. 23 décembre. La réaction des précipitines est nettement positive. La réaction de fixation est fortement positive (beaucoup plus nette que le 5 décembre). Elle ést positive avec le liquide de C. serialis et le liquide échi- nococcique et négative avec l'extrait de membranes. 10 janvier. Le Lapin est saigné à blanc. 12 janvier. La réaction des précipitines est négative. La réaction de fixation est fortement positive avec le liquide de C. serialis, positive avec le liquide échinococcique, et faiblement positive avec le liquide de C. tenuicollis. CONCLUSIONS. 1° Les échecs qu'on subit souvent dans la reproduction expé- rimentale de la cénurose chez le Lapin tiennent surtout à deux causes : 1) ingestion de proglottis vides ou renfermant des œufs ineomplètement évolués ; 2) ingestion d’une trop grande quantité d'œufs qui amène une infestation trop massive faisant périr les animaux en 8 à 20 jours, c’est-à-dire avant le déve- loppement des Cénures. 2° Lorsqu'on veut reproduire la cénurose chez le Lapin, il faut suivre les indications suivantes : a) Utiliser des Lapins jeunes de six mois environ ; b) Choisir des proglottis pleins d'œufs, ce dont il est facile de s'assurer en les examinant par transparence ; c) Faire ingérer au Lapin les proglottis seuls, sans aliments, suivant la technique indiquée plus haut. 3° Les Cénures deviennent apparents vers le 18° jour; ils mesurent alors 0,7 à 3 millimètres ; ils arrivent à leur complet développement au bout de quatre mois environ et atteignent le volume d’une noix à celui d'une pomme. 4° Les Cénures produisent quelquefois, comme les Echino- coques, des vésicules filles. Les vésicules filles se développent aux dépens des scolex qui se détachent de la paroi de la vési- cule mère, deviennent hydropiques et augmentent de volume. Les vésicules filles peuvent remplir complètement la vési- cule mère, qui se montre alors cloisonnée et difficile à ponc- tionner. Il est bon de ne pas laisser vieillir les Cénures au delà de six à huit mois. 5° L'étude du sérum des Lapins porteurs de Cénures a permis 386 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de mettre en évidence l'identité absolue des réactions humo- rales de la cénurose avec celles observées par Weinberg et autres auteurs dans l’échinococcose. 6° Nous n'avons pas trouvé de précipitines dans le sérum des Lapins infestés spontanément par les Cénures. Par contre, sur quatre cas de cénurose expérimentale, deux ont donné une réaction des précipitines des plus nettes. Après l'opération ou l'injection d'une certaine quantité de liquide cénurien, le sérum devient riche en précipitine. Cette précipitine disparait assez rapidement vers le 15°-20° jour. 7° Les lysines ont été mises en évidence 2 fois sur 10 dans la cénurose spontanée, # fois sur 4 chez les Lapins infestés expérimentalement. 8° La réaction de fixalion négative obtenue avec le sérum de certains porteurs de Cénures tient à l'absence d'anticorps spécifiques. Cette dernière doit ètre expliquée, comme dans l'échinococcose, par l'intégrité de la paroi des Cénures, qui ne laisse pas filtrer l’antigène. Cette explication repose sur le fait suivant : les anticorps spécifiques apparaissent loujours chez les Lapins ayant donné une réaction négative, lorsqu'on a provoqué chez eux, par un moyen quelconque (ponction, rup- ture mécanique du kyste, injection de liquide parasitaire retiré du kyste opéré), la résorption d’antigène. 9° Le pourcentage des réactions positives plus élevé dans la cénurose expérimentale que dans la cénurose spontanée tient probablement à la multiplicité des kystes cénuriens, qu'on obtient toujours dans la cénurose expérimentale. 10° Le sérum cénurien donne parfois la réaclion posilive avec le liquide échinococcique, et très rarement avec le liquide de C. tenuicollis, c'est-à-dire une réaction de groupe; cette réaction est faible : on ne l’obtient pas avec le sérum dilué, qui donne encore une réaction positive avec l’antigène cénurien. 11° Tous les sérums de porteurs de Cénures ont conféré au Cobaye une anaphylaxie passive, parfvis mortelle, qu'ils aient donné la réaction de fixation positive ou négative. 12° On arrive sans difficulté à sensibiliser activement le Cobaye avec le liquide de Cénure. LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES par F. D'HERELLE Suite et fin.) IV RÉSULTATS OBTENUS Dans ce chapitre je résumerai d'abord ce qui a été fait jusqu à ce jour dans la République Argentine; je passerai ensuite à qui s’est fait dans d’autres pays. République Argentine. — La grande majorité des infestations ont été faites sous ma direction, les résultats ont fait l'objet de rapports des Inspecteurs de l’Agricullure (1) au directeur de ce département, ce sont ces rapports que je résumerai ici. Les premières infestations eurent lieu le 16 janvier 1912 près d'Escalada (Santa Fe) (2) sur des criquets prêts à effectuer la dernière mue el sur de jeunes sauterelles ailées qui par- couraient la région avant de gagner l'Ouest. L'épizootie s'étendit rapidement, le 25 janvier on trouve des vols mou- rants à 15 kilomètres d Escalada (3). Le 22 janvier on trouve de jeunes sauterelles mortes près de San Justo; j'isole le coccobaclle spécifique des cadavres, dis- tance de Escalada : 32 kilomètres. (1) Dans la République argentine il existe une division spéciale du minis- tère de l'Agriculture chargée de la destruction de la sauterelle, c’est la Défense agricole qui a compté plus de trois mille employés. Cette adminis- tration a à sa tête le directeur de l'Agriculture, elle comprend un inspecteur général. un sous-inspecteur général, trois inspecteurs de zone, des inspec- teurs de 1fe et de 2° classe, des commissaires et des sous-commissaires. En mai 1913, elle ne comptail pas moins de 200 employés. (2) Les expériences préliminaires ont été décrites dans une première note, Comples rendus 1cad. des Sciences, L. CLIV, p. 623, je ne les rapporterai pas ici, il en a d’ailleurs été parlé au précédent chapitre. (3) Rapport de l'inspecteur de Elia, 25 janvier 1912. 388 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 22 janvier, infestation de sauterelles jeunes à Matilde; le surlendemain très nombreux cadavres, puis elles prennent leur vol vers l'Ouest après avoir parcouru le district pendant une quinzaine de Jours, laissant des mortes de place en place. L'épizootie gagne les autres vols du district (1). 29 janvier, on trouve des sauterelles mortes avec diarrhée à Cordoba, elles provenaient d'un vol passant au-dessus de cette ville, j'isole le coccobacille des cadavres. Point infesté le plus proche: Matilde, 300 kilomètres (2). 3 février, l'inspecteur Barrosi et le commissaire Yparra- guire infestent, avec du bouillon de quatre jours reçu de Buenos Aires, des taches de criquets dans le département de Nogoya (Entre-Rios), les bandes sont totalement détruites en quelques jours (3). : Du 23 mars au 14 avril, j'infeste le département de Chamical (La Rioja), fortement envahi par les criquets, ainsi du reste que les autres départements de cette province; comme je suis seul, il m'est impossible d’infester tous les endroits envahis, la province avant près de 100.000 kilomètres carrés de superficie. Région inculle, couverte de forêts, sans voies de communica- tion: je dois me borner à infester les bandes que je rencontre à proximité des pistes, c'est-à-dire l'infime minorité; malgré cela l’épizootie gagne toutes les bandes et pratiquement aucun insecle n'arriva au stade parfait dans le département infesté ; malgré des recherches minutieuses opérées par six employés du ministère de l'Agriculture qui parcoururent la contrée pen- dant huit jours on ne put trouver de sauterelles (4). CAMPAGNE 1913. — L'invasion se réduit à trois régions : 1° Rafaela, sur un espace d'environ 80 kilomètres de long par 40 de large, dans la province de Santa Fe ; 2° fo Quarto (Cordoba), environ 50 kilomètres par 40 ayant pour centre San Pacho ; 3° Reconquista Santa Fe, une bande le long du Parana de 80 kilomètres sur 50. (1) Rapport du sous-commissaire Marchesino, 2 février 1912. 2) Rapport du sous-inspecteur général, 31 janvier 1912. (3) Rapports des 7 et 9 février 1912. (4) Rapport F. d'Herelle, 1er mai 1912. LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 389 1° Rafaela. — L'inspecteur de zone Tribodi commença les travaux en septembre sur les bandes de vieilles sauterelles arrivant du Nord, malheureusement, par suite du manque de bouillon de culture, ilne put qu’infester peu de vols : ilremarqua “A nr Ta Ecole r 26e j À arte. D | Li œ £ cel [TER ë j CH } cn MU 2 OU 74 à Rio Cousrko ie inpacho Éd CR © domquenet Jolau dahund FE au Martel a PA de Eee À à C2 Division \ CUDireccimn sp 4 se à plusieurs reprises que les vols infestés n'effectuaient pas la ponte, les œufs étant transformés dans l'abdomen en une masse noirâtre putréfiée. Les vols moururent en masse dix à quinze jours après les infestalions. Les vols non infestés effectuèrent quatre pontes successives dans la mème région, et, à mon arrivée en novembre, les bandes de jeunes criquets étaient très nom- breuses et importantes, plusieurs couvraient des centaines d'hectares; comme il s’agit d’une région agricole, tous les 390 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR champs furent entourés de barrières de zine : Les récoltes furent sauvées en totalité. J’infestai onze bandes sur toute l'étendue envahie, employant pour chaque bande une dizaine de litres de culture. L'épizootie se répandit peu à peu autour de chaque loyer ; une partie des criquets moururent avant d'avoir fini leur évolution, mais la majorité succomba pendant la dernière mue, ou dans les premiers jours de la vie ailée. Pratiquement, aucune sauterelle ne s’envola de la région (1). 2° leconquista. — Une seule infestalion eut lieu sur les sauterelles arrivant du Nord, près de Reconquista : le vol s'éleva ie lendemain matin et alla mourir quelques jours après de l'autre côté du Parana, dans la province de Corrientes (2). Comme Je l'ai dit, les jeunes sauterelles restent dans la région où elles sont nées pendant les vingt ou trente jours qui suivent la dernière mue ; c'est ce moment qui fut choisi pour infester la contrée, ce qui eut lieu dans la seconde quinzaine de janvier ; une cerlaine mortalité fut constatée, mais l’immense majorité prit le chemin de l'Ouest et s’interna dans les provinces de La Rioja et Catamarca, où l'on trouva de nombreuses bandes malades ; les pontes eurent lieu d’une manière anormale et furent extrêmement réduites : la province de La Rioja fut visitée très soigneusement, on ne put trouver qu'une vingtaine de bandes de jeunes criquets, dont la plus importante ne mesurait pas deux hectares ; dans toute la province, les inspecteurs d'agri- cultureévaluèrent l'étendue totale envahie à environ 35 hectares, c'est-à-dire que l'invasion fut nulle. Elle ne fut pas plus importante dans la province voisine de Catamarca, où l’on signala l’anéantissement complet de vols arrivant de l'Est (3). 3° Région de Rio-Quarto. — Cette région est entièrement agricole, l'observation des bandes v est donc très facile ; aucune infestation ne fut faite pour vérifier si la maladie se conservait d'une année à l’autre. Déjà, au commencement de novembre, 2. J'avais noté la présence du coccobacille dans le cadavre de saule- (1) Rapports de l'inspecteur de zone Tribodi et de l'inspecteur Barbesino, décembre et janvier 1912 et 1913. (2) Rapport de l'inspecteur de Elia, 2 novembre 1912. (3) Divers rapports, entre autres ceux de l'inspecteur de zone Tribodi et de l'inspecteur de Elia. On trouva, entre autres, un vol de quinze kilomètres de longueur anéanti au lieu dit « Meseta del Calabozo », province de Calamarca, LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 391 relles trouvées mortes sur les lieux de ponte. Sur les bandes de jeunes criquets qui naquirent en novembre, on constala la pré- sence de l’épizoolie; la mortalité s’éleva jusqu'à 60 p.100 avant l'époque de la dernière mue etse continua sur les vols constilués par les insectes qui purent achever leur évolution : on signala en elfet une mortalité souvent très forte sur les vols regagnant le Nord ; des échantillons furent envoyés de divers points des provinces traversées pendant le voyage de retour : Cordoba, Mendoza, San Luis, San Juan, Rioja, Catamarca, Salta et Jujuy : le coccobacille spécifique fut isolé de tous les échantillons, il s’ensuivit que les pontes d'automne, d'ordinaire très impor- tantes, furent extrêmement minimes : j'ai déjà cité Le cas de la province de La Rioja où, jusqu'à l'année précédente, des milliers de kilomètres carrés étaient chaque année envahis, et quine compta en 1913 que 35 hectares. CaLoptEnus. — Le Caloptenus du sud de la République Argentine, vulgo « tucura », est un insecte de petite taille d'euviron 2 centimètres de longueur ; il est sédentaire ; l’éclo- sion à lieu fin septembre, il devient insecte parfait vers la fin d'octobre, pond au commencement de février et meurt en avril. Contrairement à ce qui à lieu pour les autres espèces de saute- rell-s, les pontes ne sont pas groupées, mais disséminées sur tout l’espace envahi. Ces insectes affectionnent principalement les champs de luzerne, qu'ils dévorent avidement : dès le mois de novembre, il ne reste plus que la tige dépouillée de toutes ses feuilles; leurs ravages accomplis, les sauterelles restent : dans les mêmes champs, dévorant les jeunes bourgeons au fur et à mesure qu'ils se produisent : au bout de deux ou trois ans d’un tel traitement, les luzernières sont détruites et le sol complètement dénudé. En novembre 1912, je me rendis à Chimpay, terriloire du Rio Negro, région particulierement envahie, et je commencçai les infestalion, qui furent continuées par M. le D' Laure : les foyers durent être multipliés, les bandes ne se déplaçant pas. Un mois et demi après les premières infestations, une étendue de 50 kilomètres carrés, en fait toute la région infestée, était libre de sauterelles. 392 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Colombie (1). — L'espèce qui ravage la Colombie est, d'après le mémoire cilé, Acridium peregrinum (Syn. Schistocerca pere- grina Oliv.). L'observation est juste, car, comme nous l'avons vu précédemment, le grand acridien migrateur américain est en tout semblable à celui de l'ancien continent : pour adopter la désignation réelle, il s’agit donc de Schistocerca american. En février 1913, le Gouvernement colombien reçut de l'Institut Pasteur des cultures du coccobacille des sauterelles et chargea deux commissions de vérifier si la méthode de destruction était pratiquement applicable en Colombie. L'une des deux commissions, sous la direction du D' Zea Urribe, opéra dans la région de Tocaima. Sous ce climat essen- liellement tropical, l'exaltation de la virulence fut assez labo- rieuse, et après divers essais, le D° Zea Urribe s'arrêta à la technique déjà signalée des cultures en bouillon intercalées entre chaque passage par sauterelle. Après 30 passages (15 par sauterelles, 15 par bouillon), le coccobacille fut isolé sur gélose et 3 litres de bouillon ensemencés avec des colonies pures. Le 10 avril : après une pluie torrentielle de douze heures, à 6 heures du soir, pulvérisation des 3 litres sur une tache de criquet très clairsemée, et partant peu propre à la propagation de l’épizootie. Le 12 avril : très nombreux morts el malades ; 1% avril : l’épizootie a gagné toute la tache. Le 11 avril au soir, pulvérisation, avec 3 litres de bouillon de culture, d'une tache, également très clairsemée, de criquets. Une heure après la pulvérisation, une pluie abondante com- mence à tomber et dure toute la nuit. Le 15 avril, l'épizootie s’est étendue sur toute la tache, le sol est couvert de morts. On trouve des cadavres et des malades à une très grande distance des points infestés. À la suite de ces expériences, où les conditions pour une (1) Résumé du supplément n°1, à la Revue officielle du Ministère des Travaux Publics de la République de Colombie « Langosta. Documentos relacionados con la historia, descripcion, tratamiento bacteriologico del prof. d'Herelle y su aplicacion en Colombia para la destruccion del acridio ». Año VII, n° à Bogota, mai 1915. LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 393 propagation rapide étaient très défavorables, la Commission adopta les conclusions suivantes : 1° Le coccobacille de d'Hérelle est un microbe pathogène pour la sauterelle; convenablement exalté, il détermine dans les bandes de ces insectes l'apparition d'une épizootie qui se propage et détermine leur destruction ; 2° Le procédé du D'd'Hérelle donne de bons résultats et peut se substituer avec avantage aux méthodes actuelles pour la lutte contre la sauterelle, surtout dans des pays comme la Colombie, où la population est faible et répartie sur un terri- toire très étendu ; 3° Pour donner de bons résultats, il est nécessaire que les travaux soient conduits par un personnel lechnique composé de bactériologistes. La seconde Commission, sous la direction du professeur F. Lleras, opéra dans la région de Guarduas. Pour exalter la viru- lence du coccobacille, le D' Lleras opéra sur cinq séries d’une trentaine de sauterelles chacune ; il abandonna après quelques passages trois de ces séries, où l'exaltalion ne se produisit pas assez rapidement. Les tableaux donnés par le D' Lleras sont extrêmement intéressants en ce sens qu'ils indiquent claire- ment la nécessité absolue d’une technique minutieuse quand il s’agit d’exalter pour la première fois la virulence du cocco- bacille dans une contrée où les conditions climatériques sont différentes de celles d’où le microbe provenait originairement : quand l'acridien est de plus d’une autre espèce ou mème d'un autre genre, les difficultés peuvent être encore augmentées. Si le D' Lleras s'était arrêté aux trois premières séries, il aurait conclu à un échec : ces tableaux méritent d’être cités. Le D' Lleras appelle l'attention sur un fait que j'ai déjà cité : il existe dans l'intestin des sauterelles saines un coccobacille non pathogène qu'il faut bien se garder d'isoler au lieu et place du coccobacille spécifique : j'ai fait la même observation au Yuca- tan, dans la République Argentine, ainsi que sur des sauterelles mortes qui m'avaient été envoyées de Grèce. Toutes les infestations dans les champs ont été faites avec du bouillon stérilisé à 100 degrés (procédé décrit précédemment elensemencé avec des colonies isolées provenant de la série E. l 27 394 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Avec bouillon de 24 heu- res. 72 heures après l’ino- culation, les sauterelles ne présentent aucun symp- tôme; la série est aban- : mo | 200 on | a |S 21 NE SIIER AE EE Slalte |S12Sl6.1E88| SSP. simple ra LH ca < a © = = ® 4 OT Ca 2 EE Ex 5 T& ol E el mss| 5 a + z + BoS|lssez| OBSERVATIONS AUS E DUO a) MALE 1H SO se | DARE Æ I RE ne SN ON ES ES ot CNE N RE Æ S MES Mo I © = = m2| m© |» «= S ni Rp 4& |S = = Série À. Mars. Ï À Ileuresy Heures. | Heures. 41849 Are Pur)#22 11310242 PT 4 | 66| Bouillon de 8 jours. 2| 20 EME MPUT| 2301518412) 0030 2 66 3| 21 SMS 4|1/2| 11 13004472 2 50 4| 21 23 |4e CREVER » » » » Après 50 heures aucune ne présentant de symptô- mes de la maladie, la série est abandonnée. | donnée. Série C. 11 20 46 y4e7 | 42 Pur 28 25 5 2121 22128 5 |Pur 20 15 2 40 3| 22 20 13e 1 | 1/2 | 60 » 60 2 | 29| Tenant compte de l'irré- gularilé et de l'intervalle considérable de temps écoulé entre l'injection et les premiers symptômes, la 42] Bouillon de 40 heures. série est abandonnée. 1 © D Bouillon de 14 jours. Dm CO O0 1 On O7 be O9 NO bè DO HO NO 12 DS NO QT OE = C0 9 = © Lu ES SRwesr ro] CT CCI Chr e © ® &@ © 2 ———— a ——— EE CE GNU SCR EL © FE o ho) ST Cr ee Q9 D = I = = Te D D nn = + N9 N — : = cr 2 D IG OU HS À I " tt ne a ——_—_—_— L = + He 19 Nm 1 N9 © 1 IS O0 D ND CE pe me = Derek Q7 CES 9 9 ee de CRC TE) TT ge ee M nl amener se mms em ea mem eus a —_—_—— PRESSE CRE I D O7 Ut co Go Co Où © Co Of DOI © OO =] 42| 29 | 45 |12| 10 |Pur 42 {10 4/2] 40 [100 13] 30 | 9 |13<| 46 | 174 9 146 |100 14| 30 [19 1/2/14°| 93 | 1/5 8 23 |100 15| 34 | 81/2 /15<| 30 | 1/6 [31/2] 6 1/2 30 |100 16| 31 116 1/2/16°| 30 |1/8/21/2| 8 30 [100 17| 31 |22 1/2/47e| 95 |1/10/34/2| 41 25 |100 (2) ES Des 2 PB & «io = 1 t Cr 1 00 RO nn — = = = LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 395 | PA PATENT Ë ECHEC ARRET = SUILE = le AA LES LES 3S |= EM OBSER VATIONS S |A MEN EN ER IE AREA EE 2 CA CY CAR As a = E ë en CA = 2 |A? A © De 5 2 = = £ 1 = x = ——— | — | — | — ps] ns rs |, | | een | | Série E. Mars. | Heures. | Ieures. Heures | 1| 24 40 {1er | 30 |Pur| 10 24 17 23 16| Culture de 10 heures. 21029 10 2eNS Pur J 2 16 29 96 26 9 3e! 24 [1/2 S 11 949 22 91 26 MINS 8 10 9 11 |100 ; 6 1/2] 3 190! Du u° 13. 127 isolement. 2 5 19! 31 44 |13e| 30 |1/10| 3 12 11/2] 30 |100| Du n° 16 20! 31 22 11421 30 11/10161/2| 45 1 25 |100| Du n° 18 Avril. 21| der 9 14°! 25 |1/10141/2| , 46 10 25 |101| Du n° 19. 2e isolement. 22| 4er eo AO NS 10 S 25 |100| Du n° 20 2] 2070/2270 LU OO Mr Al 9 23 97] Du n° 21 2}4 12 102211621225 117/40|006 1 9 70/2 8 25 !100| Du n° 22 25| 2 |44 1/2/16e| 25 |1/10|ñ1/2110 1/2 8 25 1100[ Du n° 23 26| 2 |22 1/2]17e| 2% |1/10151/2|10 1/2 S 25 1100! Du n° 24 2113 | 74/2111) 25 11/10151/2| 8 1/2 { 25 1100| Du n° 25. 28| 3 44 |18e| 95 |1/10! 6 12 9 25 |100[ Du n° 26 2R ||, La DOAHSC 25 M /LOINS COQ PNR 24 96/ Du n° 27. 30! 4 9190025 2117/10 4 12 ce 23 92] Du n° 28 31| 4 40 |19e! 25 4/Lu| 6 {5 9 4/21] 25 100! Du n° 29 32| 4 22200420) 1/4 06 11 8 1/2] 12 ]100| Du n° 31 33| 4 |22 1/2|20e| 12 |1/6 L 9 6 4/2], 12 |100[ Du n° 31 34| D |14 1/2122e| 25 |1/10| 3 8 5 4/2]: 95 001 Duvn°"33 1°" avril : bouillon de dix-neuf heures ensemencé avec isole- ment au 11° passage. Quatre bouteilles sont pulvérisées le soir, sur une tache de sauterelles adultes de 2 hectares de super- ficie ; le lendemain matin, quatre autres bouteilles sur la même tache. > avril : nombreuses sauterelles mortes et malades jusqu’à l kilomètre du point d’infestation. 6 avril : la tache prend son vol et va se poser à une vingtaine 396 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de kilomètres (une demi-journée de marche) où elle laisse de très nombreux cadavres ; les survivantes sont conlaminées, car un lot en apparence sain est mis en cage et toutes meurent après quelques heures avec les symptômes caractéristiques. Le 1% avril, 8 bouteilles de bouillon sont ensemencées avec dés colonies pures provenant d'isolement du 14° passage de la série E. Le 3 avril, 4 bouteilles sont pulvérisées le soir sur une tache de sauterelles très compacte. Le lendemain matin au lever du jour, pulvérisation avec les 4 autres bouteilles sur la même lache. 6 avril : les buissons sont couverts de sauterelles mortes et agonisantes. 7 avril :‘il ne reste que très peu de survivantes, toutes malades et présentant la diarrhée caractéristique : elles ne tardent pas à mourir. La tache entière a été anéantie en cinq jours. Dans toutes les expériences, la cause de la mort a été vérifiée par isolement du coccobacille du contenu intestinal. Les conclusions du rapport de la Commission ont été les sui- vantes : 1° Les cultures du coccobacille de d'Hèrelle reçues de l’Institut Pasteur étaient vivantes et ont pu être exaltées au maximum; 2° Les caractères du coccobacille sont nets et correspondent exactement à ceux décrits dans les instructions remises par l'Institut Pasteur ; 3° Le coccobacille d'Hérelle jouit d’un pouvoir pathogène considérable pour la sauterelle ; 4° L'inoculation produit les symptômes et lésions décrits par d'Herelle ; 5° Les cultures pulvérisées développent l'épizootie de cocco- bacillose dans les bandes de saulerelles qui sont détruites dans un temps relativement court ; 6° Dans l’état actuel de nos recherches, on ne peut encore apprécier l'intensité ni l'extension de la contagion. Ces données ne pourront s'oblenir qu'après une campagne de plusieurs mois pendant lesquels les expérimentateurs suivront sans interrup- tion les bandes contaminées jusqu'à confirmation de la con- LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 397 taminalion de nouvelles bandes qui se seront mêlées aux malades : 1° D'après ce que nous avons observé, nous nous croyons autorisés à penser que, si le procédé s'implante dans le pays et si la campagne est bien dirigéé, on obtiendra des résultats infi- niment supérieurs à tout ce qui a été obienu jusqu'à ce jour dans la destruction des sauterelles. Depuis la publication de ce rapport, le Gouvernement colom- bien a créé une direction spéciale chargée d'effectuer des infes- tations sur tout le territoire de la République de Colombie ; le D' F. Lleras a été placé à la tète de ce service (1); de nom- breuses infestations ont eu lieu et toutes ont donné des résul- tats analogues aux premières, de plus la propagation de l'épi- zootie à grande distance a été vérifiée. Après une expérience de plusieurs mois, la conclusion du directeur du Service des Infes- tations de Colombie est la suivante : une campagne d’infesta- tions soutenue et bien conduite est l'unique moyen capable de détruire les sauterelles. J'ai donné quelques détails sur les résultats obtenus en Colombie, cette République étant le premier pays essentielle- ment tropical qui met en œuvre le procédé des infestations, tous les autres étant situés dans les zones tempérée ou sub- tropicale. Chypre. — La sauterelle de l'ile de Chypre appartient à l’es- pèce Séauronautus maroccanus; c'est donc un petit migrateur. Extrèmement nombreuses il y a quelques années encore, leur nombre a beaucoup diminué, grâce aux mesures prises par le Gouvernement anglais, maintenant possesseur de l’île : comme il s’agit d’une île, c'est-à-dire d'un territoire très limité, pourvu d’une population relativement dense, les moyens mécaniques ont donné d’assez bons résultats, mais, malgré tout, il reste encore quelques bandes qui font leur apparition chaque prin- temps. En février 1913, le Gouvernement de l'Ile reçut de l’Ins- titut Pasteur des tubes de culture du coccobacille des sauterelles, (1) Lettre personnelle du Dr F. Lleras, 11 septembre 1913. 398 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR qui furent remis au bactériologiste M. Harris, chargé des expé- riences. La virulence convenable fut obtenue avec l’une des cultures reçues après douze passages par jeunes sfaronautes, pour un second tube après neuf passages seulement (1). Les bandes infestées par du bouillon ensemencé avec des colonies pures provenant d'isolement du contenu intestinal de la dou- zième série se contaminèrent rapidement; cinq jours après les infestations, la mortalité s'élevait à 40 p. 100, et des saulerelles mortes et malades se rencontraient à une grande distance des points infestés. I1 ne semble pas que les bandes aient été suivies plus longtemps : tout au moins le rapport cité n'en parle pas. La conclusion est que : Le coccobacille est pathogène pour Stauronautus maroccanus : Le procédé des infestations est d’un grand secours pour la destruction des sauterelles et l'expérience prouve qu'il est effi- cace dans le cas où les autres méthodes de destruction ne donnent aucun résultat. Algérie. —- Quelques expériences ont élé faites par le D' Ser- gent (2), en avril et mai 1913, sur une bande assez clairsemée de stauronautes qui se trouvait près de Tiaret. L'épizootie se pro- pages parfaitement : on trouva de nombreux cadavres sur une grande élendue; en certains points, leur nombre était même considérable; malgré tout, l’épizootie se propagea lentement et une partie de la bande infestée put s'envoler, mêlée avec une autre bande venant de Saïda et qui s’élait réunie à elle : il fut impossible de suivre le vol; on signala bien quelque temps après qu'une bande entière était morte dans la commune du Djebel Nador, à une centaine de kilomètres de là, sans qu'il fût pos- sible de savoir s’il s'agissait bien du vol infesté, Vu le petit nombre de sauterelles qui apparurent cette année en Algérie, on ne put répéter l'expérience. (1) Rapport du « Government Analyst », à S. E. le Gouverneur de l'ile de Chypre, 21 juin 1945. (2) Voir plus loin le Mémoire déjà cité du D' Sergent. LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 399 ORGANISATION PRATIQUE DE LA LUTTE La manière d'opérer sera un peu différente suivant les régions où l’on sera appelé à opérer. Nous allons examiner successive- ment tous les cas qui pourront se présenter : application dans des régions pourvues de moyens de communications rapides et régions qui en seraient dépourvues, chacun de ces deux cas se subdivisant en contrées agricoles et contrées désertes. Régions pourvues de voies de communication. — L'organisalion doit comprendre un laboratoire central et des groupes mobiles chargés des infestations. Je n’insisterai pas sur la partie laboratoire : 11 doit être monté comme tout autre laboratoire de bactériologie. Si le pays envahi par les sauterelles est étendu, il y aurait lieu de joindre au laboratoire une installation pour produire en grande quantité les milieux de culture : en plus du bouillon employé pour la lutte contre la sauterelle, on pourra y fabriquer éventuellement tous les autres milieux de culture pour les virus destinés à l’agriculture. Les appareils nécessaires pour la fabrication en grand des bouillons doivent comprendre : Une petite chaudière à vapeur pour la stérilisation des appa- reils ; Une ou deux marmites à chauffage par double fond pour la préparation du bouillon ; Un autoclave à vapeur, du genre de ceux qui sont employés pour l’industrie des conserves ; Les ustensiles ordinaires : entonnoirs, louches, écumoirs, seaux, elc. Pour envaser le bouillon, les récipients les plus pratiques sont des bouteilles analogues à celles qui servent à contenir l'eau oxygénée Merck ou Poulenc, d'environ un litre de capacité ; il faut toutefois remarquer qu'il est préférable d'employer des bouteilles en verre spécial supportant la température de stéri- lisation (celles, par exemple, qui figurent sous le n° 3.293 du catalogue Adnet, de Paris, ou tout autre analogue). On aura soin 400 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de se procurer en même temps un lot assez considérable de rondelles de caoutchouc de rechange, car elles se détériorent rapidement. Le nombre de bouteilles variera naturellement avec l'importance des infestations. Pour le transport, il est pratique d'employer de petits coffres solides, fermés par un cadenas, pouvant contenir six litres : ils sont munis de séparations intérieures pour faciliter l'emballage et éviter la casse pendant letransport. Chaque caisse doit porter un numéro d'ordre, de manière à pouvoir tenir une compta- bilité en règle et savoir, à un moment donné, ceux qui n'ont pas retourné les caisses et bouteilles vides après emploi. Chaque litre est rempli du milieu de culture préféré, bouillon peptonisé ordinaire, solution de peptone glucosée et gélatinée simple ou à la pomme de terre : une expérience préliminaire permettra de voir le milieu -qui convient le mieux, eu égard au pays et à l'espèce de sauterelle : les formules ont été données précédemment. Le bouchon et le col sont enveloppés de coton cardé recouvert d’un capuchon de papier parcheminé maintenu par une ficelle enroulée autour du col. Les bouteilles sont stérilisées soigneusement pendant une heure à 120 degrés. La stérilisation est une opération qui doit être surveillée de très près : le bactériologiste chargé des infestations pourrait se voir dans un moment pressé en possession d’un lot de milieu de culture putréfié si la stérilisation avait été mal faite. Pour éviter un pareil contre-temps, il sera bon de placer dans une bouteille de chaque série un index qui permettra de se rendre compte de la température réellement atteinte par le liquide (1). A) Technique microbiologique, par A. Besson, 4° édition, p. 13. « Pour pou- voir contrôler les températures, on peut utiliser... des indicateurs fusibles : tubes de verre scellés, contenant des substances fondant entre 110 et 121 degrés ; le benzonaphtol fond à 110 degrés, l’antipyrine et le soufre à 113 degrés, la résorcine à 119 degrés, l'acide benzoïque à 121 degrés. Un procédé élégant (Demandre) consiste à ajouter au corps fusible pulvérisé une faible quantité d'une matière colorante, dont la présence reste masquée à l'état pulvérulent, mais qui est dissoute lors de la liquéfaction et colore le culot obtenu par refroidissement. Les deux formules suivantes corres- pondent aux besoins ordinaires : à SNS EAU eo ( Benzonaphtol . . . . 100 67.» Pour la température de 100 degrés. ) Safranine . . . .. ee 0 Sr. oi Pour la température de 121 degrés. Re Lu A 1e = oi « Une petite quantité du mélange pulvérulent est scellée dans une ampoule en verre ». LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 01 Infestations. — Dans aucun cas, les employés chargés de la lutte défensive ne doivent s'occuper des infestations : si l'on exigeait d'eux qu'ils s’occupassent à la fois de la pose des barrières, de la protection des cultures et des infestations, il en résulterait infailliblement que l’un ou l'autre travail serait négligé. Pour éviter tout contre-temps et tout aléa, toujours dangereux quand il s'agit de sauterelles, 11 y a lieu de prévoir deux organisations indépendantes : L'organisation actuelle de la plupart des régions envahies par les acridiens, qui continuera comme par le passé à s’occu- per de la défense des cultures ; L'organisation d'un personnel spécial uniquement chargé des infeslations, qui se composera, suivant l'étendue du pays, de un ou plusieurs groupes, comprenant chacun cinq à six employés sous les ordres d'un bactériologiste. Avant l’époque de l’arrivée des vols, des ordres doivent être donnés aux autorités locales, pour qu'aussitôt qu'un vol se pré- sente, il soit de suite signalé par télégraphe au laboratoire central. Aussitôt qu'une région est envahie, un groupe y est envoyé en même temps qu'un certain nombre de caisses de bouillon. Arrivé sur les lieux, le bactériologiste exalte Ia virulence du coccobacille, et, pendant les trois ou quatre jours que dure cette opération, il prend {ous les renseignements qui peuvent lui être utiles, envoie ses employés reconnaître la situation et l'impor- tance des vols, en un mot prend contact avec la région pour ètre prêt à agir aussitôt que le virus est suffisamment actif : il ensemence alors les bouillons, et envoie ses employés procéder aux infestations. Il devra avoir soin de ne pas négliger de parcourir lui-même la contrée et de surveiller attentivement les infestations : j'ai observé que les bactériologistes que j'ai eus sous mes ordres avaient lendance à se confiner dans leur labo- raloire et à considérer les pulvérisations comme un travail manuel absolument secondaire: c’estune erreur, et, pour obtenir les meilleurs résultats, il est indispensable que les infestations soient faites intelligemment et méthodiquement. Pour la campagne contre le criquet, les lieux de ponte étant connus d'avance comme importance el position, il sera facile de réunir à proximité de ces endroits un stock de bouillon suf- 402 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lisant. Le bactériologiste aura le loisir, durant le temps de l'incubation, de visiter toute la région, ce qui le mettra à même de disposer ses employés dans les endroits qu'il saura d'avance devoir être envahis ; quand les criquets seront nés, il n'aura qu'à ensemencer les bouillons qu'il remeltra aux employés ; ce travail ne lui demandant guère qu'une heure par jour, il aura également le temps de faire des lournées de surveillance. Dans le cas où, le pays étant vaste, il y aurait lieu de consti- tuer plusieurs groupes, l’organisation se compléterait par un bactériologiste chef qui dirigerait la campagne d’infestation, répartirait les divers groupes, centraliserait les informations, surveillerait la fabricalion des bouillons au laboratoire central, et au besoin irait faire les inspections nécessaires au cours de la campagne. Il devrait également maintenir le bacille con- tinuellement virulent pour parer à toute éventualité et être à même de l’expédier de suite où le besoin s'en ferait sentir, et vérifier la présence du coccobacille dans les cadavres de saute- relles qui pourraient lui être expédiés des diverses parties du pays pour vérification de la propagation de l'épizootie. Ensemencements. — La question de l’exaltation de la viru- lence et celle de l’ensemencement ont été trailées en détail, inutile d'y revenir. Pour la pratique de ces opérations en campagne, un laboratoire est inutile. Le bactériologiste devra se munir des objets suivants, qui répondront à tous les besoins : Six cages en toile métallique pour garder les sauterelles en expérience pour l’exaltation de la virulence. On peut rem- placer ces cages par des couvre-plals en toile métallique ; Une seringue à injections de un centimètre cube munie de très fines aiguilles : Quelques verres de montre ; Une lampe à alcool ; Quelques pipettes en verre : Un fil de platine pour les ensemencements : Des tubes de bouillon peptonisé gélosé ordinaire qui lui seront envoyés du laboratoire central. Si les tubes contenaient de l’eau de condensation, il faudrait avoir soin de la retirer aseptiquement avec une pipette, de manière à ce que Îles LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 403 cotons ne soient pas mouillés pendant le transport. Avoir soin de capuchonner les tubes. Les bouillons devront être ensemencés avec un virus aussi exalté que possible, et purement: il est facile de voir au moment des infestations si cette dernière condition a été remplie ; le bouillon ne doit pas avoir une mauvaise odeur, simplement une odeur forte de bouillon, dans le cas contraire il serait contaminé et devrait être rejeté. Régions agricoles. — Nous avons expliqué que la maladie se répand plus ou moins rapidement suivant que les circonstances sont favorables ou défavorables, mais en tout cas il ne faut pas espérer obtenir la disparition d’une bande dans un temps infé- rieur à une dizaine de jours; si les conditions sont défavo- rables, ce qui est assez souvent le cas pour les régions agricoles où la nourriture est abondante, la destruction pourra demander de vingt à trente Jours s’il s’agit de criquets, plus longtemps même si les insectes sont adultes. L'on comprend aisément que dans une zone cultivée les bandes auraient le temps de causer des dégâts importants avant d’être détruites. La lutte au moyen du coccobacille, j'insiste sur ce point, doit être con- sidérée comme une arme offensive, permettant d'arriver prati- quement à la disparition des invasions, mais ne doit jamais ètre employée comme moyen de lutte directe, de protection, sous peine de déboires. Il faut protéger les cultures par les moyens employés jusqu'ici, mais, indépendamment de ces moyens de défense, il faut infester le plus grand nombre de bandes possible au moyen du coccobacille. Les sauterelles qui échappent aux moyens de lutte directe, et l’on sait si elles sont nombreuses, mourront peu à peu de l’épizootie. Un autre avantage des infestations dans les régions agricoles, c'est que les bandes où l’épizootie s’est déclarée se déplacent ordinaire- ment plus lentement que les bandes saines, et de plus, elles mangent moins et commellent par conséquent moins de dégâts. Pendant la campagne dans la région de Rafaéla en 1912- 1913, comme je l'ai déjà dit, onze bandes seulement ont été infestées; cela a suffi pour que la maladie se propageàät dans tous les districts voisins avant le départ des vols, Le résultat final fut l’extermination totale des sauterelles dans la zone envahie. 404 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Régions incultes. — Ici, par suite du manque de main- d'œuvre, la lutte par les moyens mécaniques est impossible, et, si on tente de l'appliquer, les résultats sont illusoires et hors de proportion avec les fortes dépenses occasionnées; on n'arrive souvent pas à détruire la millième partie des sau- terelles présentes: ces régions sont loujours couvertes de brousses ou de forêts qui sont des abris sûrs pour les insectes. Dans les régions non agricoles, peu importe que les saute- relles meurent après dix jours ou après un mois : l’infestation est le seul procédé à employer. Il faudra, comme toujours, infester le plus grand nombre de bandes possible de manière à multiplier les foyers sur toute l'étendue de la zone envahie. Il est certain que, vu la configu- ration générale de ces contrées, bien des bandes échapperont à l'infestation directe; elles se contamineront presque certai- nement par voie naturelle, car dans un district envahi les bandes en marche auront grande chance de croiser le chemin suivi par des bandes déjà infestées, ou même de se réunir aux restes de ces bandes. Régions privées de voies de communication. — Ces régions sont toujours des régions incultes, où tout au moins les cul- tures y sont de peu d'importance, d’ailleurs, le voudrait-on, on ne pourrait pratiquer la lutte défensive; la barrière de zinc étant d’un transport difficile dans une contrée sans chemins de fer. On pourra essayer de protéger les cullures locales au moyen de fossés, qui, suivant les terrains, donnent parfois d’assez bons résultats. En tout cas l'effort principal portera sur les infestations. La réception des milieux de culture d’une fabrique centrale serait extrêmement coûteuse; il est de beaucoup préférable de fabriquer le bouillon de culture sur place par des moyens simples. Le matériel suivant, facilement transportable dans n'importe quelle région, suffira pour là fabrication d’une cinquantaine de litres par jour: f Trois marmites de fort fer battu ou en cuivre étamé, res- pectivement de 100, 80 et 60 litres, disposées pour rentrer l’une dans l’autre pour le transport; LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 405 Un récipient en forme de boîte à lait d'environ 42 litres : Un lot de papier à filtre ; Deux grands entonnoirs en métal, un écumoir et une louche ; Du papier réactif bleu et rouge : Un flacon de soude caustique (en cas de besoin on peut rem- placer par de la cendre de bois); Du sel ordinaire. Un petit hache-viande. Un lot de peptone, Chapoteaut de préférence, en quantité suffisante pour la durée de la campagne. Si ce produit venait à manquer, et si l’on ne pouvait s’en procurer sur place, il ne faudrait pas pour cela interrompre les infestalions ; le cocco- bacille pousse dans le bouillon simple, quoique moins abon- damment que dans le bouillon peptonisé ; Un lot de bouteilles semblables à celles que j'ai précédem- ment décrites; vu la difficulté qu'il y aurait à remplacer les bouteilles cassées, 1l faudrait absolument se procurer des réci- pients en verre résistant à la température de stérilisation, et les éprouver de plus avant le départ. Ne pas oublier les rondelles de caoutchouc de rechange. De plus, naturellement, les quelques appareils décrits pour l’'exaltation de la virulence: on devra se pourvoir d’un bon lot de tubes de gélose capuchonnés pour ne pas se trouver à court au milieu de la campagne. On peut employer le bouillon glycosé gélatiné qui a été décrit, il n'est pourtant pas à recommander dans ce cas parti- culier; vu la quantité élevée de peptone qu'il contient, il fau- drait se munir d'une grande quantité de ce produit, et de plus l'unique avantage de ce milieu de culture est de conserver plus longtemps la virulence, chose qui n’a ici aucune importance puisqu'il sera toujours indispensable d'employer de suite le bouillon ensemencé à cause de sa stérilisation défectueuse, qui ne permet pas la conservation. Dans la marmite de 80 litres, mettre 20 kilogrammes de viande maigre hachée (viande de bœuf, de veau, de mouton, de chèvre, de gibier ou de volaille suivant les ressources locales), 50 litres d’eau, 250 grammes de sel; laisser macérer deux ou trois heures; recueillir cinq à six litres de la partie liquide ‘que l'on conservera à part: faire bouillir le reste pen- 406 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dant une demi-heure; passer sur un linge dans la marmite de 60 litres, ajouter 250 grammes de peptone; laisser reposer quelque temps pour que la température tombe à environ 50 degrés; ajouter la quantité de liquide clair que l'on à séparé avant l’ébulliion; alcaliniser légèrement et faire bouillir une demi-heure en écumant: le bouillon est alors limpide; filtrer et répartir dans les bouteilles. Pour la stérilisation placer dans le fond de la marmite de 100 litres une couche de paille, ou mieux un vieux sac, placer les bouteilles remplies et bien bouchées verticalement les unes à côté des autres; remplir la marmite d’eau jusqu’à la hauteur des bouchons, couvrir la marmite et faire bouillir une heure à grand feu. La marmite ne contient que 25 bouteilles; deux opérations sont nécessaires pour stériliser les 50 litres. Le bouillon stérilisé le soir sera laissé à refroidir jusqu'au lendemain matin, puis ensemencé aseptiquement; on l’utili- sera le soir du même jour ou le lendemain au plus tard; le surlendemain il serait presque sûrement contaminé. En opérant comme il a été décrit, les résultats sont les mêmes qu'avec du bouillon fait au laboratoire. Avant la campagne il faudra déterminer sur la carte l'aire d'opération de chaque groupe et choisir un cerlain nombre de stations réparties sur toute l'étendue à infester. Chaque station sera visilée tour à tour; on y fabriquera le bouillon de culture, et les employés rayonneront autour de ce centre pour faire les infestations; de celte manière il sera possible d'effectuer méthodiquement l'infestation de toute la région. En règle générale il vaudra mieux diviser le pays en un assez grand nombre de districts qui seront successivement visités, et où on séJournera peu de temps, que de choi-ir seulement quelques centrés avec séjours prolongés dans chacun d'eux; dans le pre- mier cas la surveillance des employés sera plus facile, Le tra- vail de ceux-ci moins pénible à cause des distances moindres à/parcourir pour rayonner dans le district, et les infestations auront plus de chances d’être conduites méthodiquement. Quelle que soit la région où il sera appelé à opérer, le bacté- riologiste devra s'appliquer à étudier les mœurs de l’insecte contre lequel il est appelé à lutter, ce qui lui permettra de trouver les meilleures conditions possibles pour obtenir le LE COCCOBACILLE DES SAUTERELLES 407 résultat cherché dans un minimum de temps: 11 devra surtout avoir bien présent à l'esprit que, plus une espèce est séden- taire, plus les foyers devront être multipliés; pour Schisto- cerca, un foyer par 10 kilomètres carrés peut parfois suflire, pour le Caloptenus du Sud de l'Argentine, il en faudra plu- sieurs par hectare. Pour chaque espèce de sauterelle, la pro- pagation de l'épizootie aura lieu plus ou moins rapidement eu égard aux mœurs de l’insecle, et la disparition des bandes se produira après un laps de temps par conséquent très variable; trop de facteurs entrent en ligne de compte pour qu'il soit possible d'énoncer une règle qui s'appliquerait dans tous les cas. ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE PAR LE « COCCOBACILLUS ACRIDIORUM » DE D'HERELLE par Eomoxn SERGENT et Acsert LHÉRITIER. (Institut Pasteur d'Algérie.) Lorsque d'Hérelle isola, en 1910, d’une épizootie sévissant sur les Sauterelles du Mexique, un Coccobacille très patho- sène pour ces insectes, il conclut « qu'il serait peut-être intéressant d'essayer de provoquer des épizooties dans les pays qui souffrent des déprédations des Sauterelles, en utilisant le Coccobacille de l’épizootie du Yucatan (1) ». Il put lui-même pratiquer un premier essai de ce genre, en 1911-1912, dans la province de Santa-Fé, en Argentine, et constata un plein succès (2). Il était donc indiqué d’expérimenter ce virus contre les Sau- terelles dont les invasions causent, certaines années, tant de dommages à l'Algérie. Les Sauterelles dévastatrices appar- tiennent, en Algérie, à deux espèces : Schistocerca peregrina Olivier, ou Sauterelle pèlerine, dont le point de départ semble être au Soudan, et S/auronotus maroccanus Thunberg, qui est autochtone, et qui effectue ses pontes dans les steppes pierreux de l'hinterland nord-afri- Cain (3). (1) F. D'HÉRELLE, Sur une épizootie de nature bactérienne sévissant sur les Sauterelles au Mexique, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLIT, n° 21, 22 mai 1911, p. 1413. (2) F. o'Hérezce, Sur la propagation, dans la République Argentine, de l'épizootie des Sauterelles du Mexique. Comptes rendus de l’Acad. des Sciences, t. CLIN, n° 9, 26 février 4912, p. 623. (3) Voir un excellent résumé de la question dans Cn. Rivière et H. LEeco, Manuel pratique de l'Agriculteur algérien, p. 848. É Consulter pour les détails le gros ouvrage de J. KünckeLz D’ HERCULAIS, Invasions des Acridiens, vulgô Sauterelles, en Algérie, 1893-1905. ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE 409 Depuis 1908, Schistocerca peregrina n'a pas fait d'apparition notable dans le Tell algérien et nos expériences ont dû porter sur le Stauronote marocain dont les colonies nombreuses se multiplient depuis quelques années, sur les Hauts-Plateaux oranais, dans la région de Saïda-Frenda-Tiaret. Les conditions du problème en Algérie présentent les difré- rences suivantes avec celles que rencontrèrent l'observation au Yucatan et l’expérimentation en Argentine : 1° Conditions climatologiques différentes. 2° Conservation prolongée du virus 2x vitro, ce qui en atténue la virulence ; 3° En Amérique les espèces d’Acridiens infectés par le virus d'Hérelle appartenaient au genre Schistocerca : Schistocerca pallens Thunberg au Mexique, Schistocerca paranensis Burm. en Argentine, ces deux espèces n'étant d’ailleurs peut-être pas distinctes ni l’une ni l’autre de l’ubiquitaire Schistocerca pere- grina. En Algérie nous avons affaire pour le moment à Sfau- ronotus maroccanus Thunberg. Cette espèce, beaucoup plus petite que les Schistocerca, a des mœurs très différentes. Trois questions se posaient en Algérie : 1° Est-il possible de porter la virulence du Coccobacille de d'Hérelle vis-à-vis du Stauronote marocain à un degré suffi- sant? 2° Peut-on contaminer les gites ou la pàture des Stauronotes par simple pulvérisation de cultures de Coccobacilles? 3° Ce second point acquis, les Stauronotes infectés peuvent- ils contaminer leurs congénères, et créer ainsi une épizootie suffisamment meurtrière? Ce sont ces trois points que nous allons étudier. EXALTATION DE LA VIRULENCE DU COCCOBACILLE Nous avons cherché à obtenir cette exaltation de la virulence de la bactérie, comme d'Hérelle, par la méthode pastorienne du passage successif du virus par une série d’insectes de l’es- pèce dont nous voulions vaincre la résistance. 28 #10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ainsi que l'indique d'Hérelle, nous inoculions les cultures au défaut d'un des premiers anneaux de l'abdomen. Nous avons apporté à sa technique les modifications suivantes : au lieu de seringues et d'aiguilles, nous employons des pipettes Pasteur. Nous choisissons des pipettes à effilures fines, et nous réeffilons une seconde fois, dans la flamme d'une veilleuse l’effilure, en lui faisant faire un angle de 40 degrés environ avec la direction de la pipette. Avec ces effilures capillaires extrêmement fines nous arrivons à inoculer des Criquets nouveau-nés de 4 à 5 millimètres de longueur totale. Au lieu d'utiliser la gouttelette fécale pour les inoculations et ensemence- ments, nous préférons prélever l'exsudat moins impur de la cavité générale: il suffit de couper une patte de l'insecte : la pression du thorax, puis de l'abdomen, fait sourdre à la surface de section une gouttelette trouble où le Coccobacille pullule, à l'état de pureté presque toujours. Cette technique permet de rechercher le Coccobacille dans l'organisme du Criquet, même pendant la vie. Ayant fait alterner, à un moment donné, les cultures sur gélose et les ino- culations aux Acridiens, dans le but d'économiser ceux-ci et d'éviter le tra- vail de nuit, nous nous sommes aperçus que cette alternance produisait les plus heureux effets sur l'exaltation de la virulence du Coccobacille : un Acridien inoculé au milieu de la journée mourait vers le soir, une anse de son liquide de cavité générale était ensemencée par stries sur plusieurs tubes de gélose inclinée : le lendemain on choisissait une colonie isolée que l'on inoculait à de nouveaux Acridiens, etc. De ce moment data une fixité particulière de la virulence du Coccobacille. Les premières inoculations furent faites sur de très jeunes Criquets nés depuis quelques jours seulement, les dernières se poursuivent sur des adultes : il est impossible de dire si les Criquets sont plus résistants que les Sauterelles, car celles-ci recoivent un virus exalté par de nombreux passages par l'orga- nisme de ceux-là. Il semble bien que la mue constitue une période critique pendant laquelle l’insecte est moins résistant à l’infection. L'intestin des jeunes Criquets, jusqu'à l'âge de trois semaines au moins, est presque toujours dépourvu de germes, du moins d'après ce que montrent l'examen microscopique et les ense- mencements en milieux saérobies ordinaires. Nous ne trou- vâmes que rarement une {rès grosse bactérie en bâtonnet, immobile, et quelquefois un infusoire. Chez les Sauterelles adultes la flore intestinale se développe : on trouve surtout un Coccobacille court, immobile, ne prenant pas le Gram, donnant sur gélose de belles colonies porcelainées, et ne paraissant pas pathogène spontanément pour les Stauronotes. Dans le but d'obtenir le plus vite possible l’exaltation du virus, pour expérimenter celui-ci avant que les Acridiens aient ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE 411 commencé leurs ra- vages, nous avons essayé de faire éclore avant terme les œufs d'Acridiens. Le 23 fé- vrier 1913, M. l’ad- ministrateur Tondu, dont l’amicale et compétente collabo- ration nous à été d'un grand prix, nous en- voie des coques ovi- gères de Stauronotes, que nous divisons en k lots placés, le 26 fé- vrier, à 4 tempéra- tures différentes : à 37,5 degrés, à 24-26 degrés, à 19-22 degrés, à 14-18 degrés. — On peut donc hà- ter l’éclosion des œufs d'Acridiens en les exposant à une tem- 412 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR pérature de 24-26 degrés, el il sera peut-être utile de recourir à cet artifice pour se procurer, avant chaque nouvelle cam- pagne, le matériel nécessaire à l’exaltation de la virulence microbienne, atténuée par la vie hivernale in vitro. Les Siauronotes marocains se montrèrent assez résistants à l'infection par le Coccobacillus acridiorum. Parmi les premiers inoculés un certain nombre mouraient en 24-36 heures, tandis que d'autres résistaient el survivaient indéfiniment. Si on sacrifiait ces Stauronotes réfractaires au bout de quelques jours, on en trouvait qui étaient absolument amicrobiens, tandis que d’autres contenaient dans leur intestin, et même dans leur cavité générale, des Coccobacilles assez nombreux ne paraissant influer en rien sur leur état de santé. Après Île treizième passage du virus, aucun Acridien inoculé ne sur- vécut. Aux premiers passages, le virus tuait les Criquets en 23-36 heures en moyenne (survivants non comptés). Ce n'est qu'au 28° passage que Ja moyenne de la durée de la vie chez les Criquets inoculés tomba, pour ne plus remonter, à environ sept heures. On sait que d'Hérelle tuait les Schistocerca en s_7 heures dès les 5-10° passages. Le Stauronote s'est donc montré plus résistant que le Schistocerca. Au 70° passage, la moyenne de la durée de l'infection tom- bait à 6 heures, et au 100° passage, à quatre heures. Il a fallu vingt jours pour obtenir une mortalité régulière en sept heures, un mois pour l'obtenir en six heures et sept semaines pour l'obtenir en quatre heures en moyenne. Plusieurs dizaines de Criquets et de Sauterelles de tout âge furent injectés, pour servir de témoins, avec des quantités de bouillon ou d’eau physiologique égales aux quantités de cul- tures injectées aux Acridiens de passage, et suivant la même technique ; aucun de ces témoins ne mourut au cours d’une observation de plusieurs semaines. Lo ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE #1: I CONTAMINATION DIRECTE, PAR PULVÉRISATION, DES TACHES D’ACRIDIENS 1° Essais DE LABORATOIRE. En même temps que, par inoculations successives à des séries de Sauterelles, nous exaltions la virulence du Cocco- bacille américain pour les Stauronotes marocains, nous expé- rimentions les modes naturels de contamination de ces insectes : en premier lieu la contamination par ingestion. Onze Criquets recoivent per os une émulsion des Coccobacilles du 6° pas- sage (liquide de la cavité générale et gouttelette fécale). Dix survivent indé- finiment, 1 seul meurt le 9e jour, son inlestin et sa cavité générale sont remplis de Coccobacilles. Cinq Criquets recoivent de la même façon, per os, des Coccobacilles du 17e passage, 3 survivent, 2 succombent en 20 el 23 heures. Si l’on dépose le virus, non pas directement sur l’armature buccale des insectes, comme dans l'expérience précédente, mais sur les herbes qui leur servent de pâture, on obtient des résultats analogues : des déjections de Criquets du 17° passage sont déposées sur l'herbe d’un bocal où sont placés cinq Criquets. Deux de ces Criquets meurent ea 23 heures avec des Cocco- bacilles dans la cavité générale et l'intestin. Nous avons voulu voir si des Criquets pouvaient se contaminer en dévo- rant des cadavres de Criquets infectés : 9 cadavres frais de Criquets du 17 passage sont placés dans un bocal dépourvu de toute autre nourriture et contenant 10 Criquets à jeun depuis la veille. C’est seulement au bout de 24 heures que les Criquets commencent à dévorer les cadavres. Quatre d’entre eux meurent en deux jours, trois en trois jours, tous avec de très nombreux Coccobacilles dans leur intestin et leur cavité générale. Les autres moururent non infectés. En somme, les Stauronotes, Criquelts ou Sauterelles, ne paraissent pas avoir beaucoup de disposition pour le cannibalisme : nous ne les avons jamais vus se dévorer les uns les autres dans les champs, et nous n'avons pu les faire se nourrir de cadavres d’autres Slauronotes dans les cages qu'en les privant pendant au moins 48 heures de toute autre espèce de nourriture. D'autre part, nous nous sommes demandé si le contact du virus avec la surface du corps, la possibilité de l'ingestion étant écartée, pouvait conta- miner les insectes : pour le voir, nous avons frotté soigneusement l'abdomen seul de trois Criquets avec du virus du 17° passage, aucun d'eux ne s’est contaminé. En résumé les Criquets peuvent s’'infecter par ingestion de virus (cultures pures ou bien déjections de malades), bien que 41% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dans les expériences une forte proportion échappent à la conta- mination. Les Stauronotes, paraissant peu cannibales, ne semblent pas devoir s’infecter souvent par lingestion de cadavres contaminés. Enfin le contact du virus à la surface du corps ne semble pas, d’après les premières expériences, être un mode d'infection des Acridiens. Tolérance pour le parasilisme. — De très nombreux Criquets ou Sauterelles, inoculés au laboratoire, ou capturés dans la nature près des champs d’expé- riences, et possédant l'apparence d'un très bon état de santé, contenaient de nombreux Coccobacilles dans leur intestin, et parfois même dans leur cavité générale. L'examen d’une gouttelette de liquide de la cavilé générale, obtenue par l’'amputation d’un fragment de patte, permit plusieurs fois de constater l'infection de Criquets inoculés, qui survécurent. Ils semblent tolérer parfaitement leurs parasites. Immunité acquise. — Sept Criquets ayant survécu à l'inoculation de virus provenant des premiers passages, et par suite peu virulent, furent réino- culés avec des Coccobacilles plus virulents après un espace de temps variant de 3 à 7 jours : 4 succombèrent à cette nouvelle inoculation, en présentant de nombreux Coccobacilles dans leur organisme (1 en 19 heures, 1 en 24 heures, 2 en 2 jours). Les trois autres survécurent. Castration parasilaire. — Dans des vols de Sauterelles s'étantdéjà accouplées, et comprenant des porteurs de germes, nous ne trouvàämes qu'un petit nombre de femelles pleines d'œufs : beaucoup n'avaient pas d'œufs. Il est impossible, en l’absence de tout élément de comparaison, de savoir si le fait est anormal. Il a toutefois frappé M. l'administrateur Tondu, qui a eu à diriger des cam- pagnes contre les Sauterelles depuis plus de 20 ans. On peut en retenir la simple indication de recherches à poursuivre dans l'avenir pour déterminer si des insectes tolérant en apparence leurs parasites ne seraient pas cepen- dant, dans certains cas, châtrés du fait de ceux-ci. Effet du Coccobacillus acridiorum sur d’autres insectes. — Nous n'avons relevé aucun fait, au cours de nos minutieuses recherches sur le terrain. révélant une action quelconque des Coccobacilles sur d’autres insectes que les Stauronotes : les insectes les plus nombreux dans les mêmes régions étaient des Coléoptères et des Fourmis, puis d’autres Orthoptères. Rapports du Coccobacille avec les autres ennemis des Acridiens. — Nous n'avons rien relevé de saillant dans les rapports que peut présenter l’infec- tion coccobacillaire avec la lutte poursuivie contre les Acridiens par un grand nombre d'autres ennemis : Fourmis et Coléoptères se saisissent des mourants et s'en nourrissent. A ce point de vue, beaucoup d’Acridiens aux premiers stades de leur infection, qui sont simplement ralentis dans leurs mouvements (ils marchent dans ce cas sur leurs deux paires de pattes anté- rieures, la dernière paire raidie immobile au-dessus du corps), sont plus facilement capturés par leurs ennemis, les Insectes, et sans doute aussi par leurs autres grands ennemis, les Oiseaux (surtout les Passereaux). Enfin, nous avons observé parfois la présence d'Idia lunata Fabricius (Muscide) auprès des gîtes d'Acridiens. ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE #15 92° Essais EN PLEIN CHAMP. Les essais de contamination des taches de Criquets ont eu lieu dans la plaine de Tagremaret, sur les Hauts-Plateaux Oranais, en avril-juillet 1912. Les jeunes Criquets nés dans des SJ Drcction suivie par les Ecridiens. o = ; ; Fos Prermére puhérisation se Deuxième pulverisacr es Mrlable parmiles criguels - 1 Echelle au 125.000 . collines pierreuses au sud de cette plaine descendirent vers elle par petites étapes et en petites colonnes. Ils ne gagnaient sou- vent pas plus de 30 mètres par jour en avril, quelquefois 100 ou 200 mètres, se nourrissant de la végélalion spontanée, épargnant les orges, qui ne furent attaquées que par les gros Criquets et les Sauterelles adultes. Ces colonnes ne marchent que par la grosse chaleur et au grand soleil. Elles avançaient d'une façon générale vers le nord, mais changeaient parfois de direction sans cause évidente, et parfois tourbillonnaient. 416 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Lorsque les Criquets furent près de leur dernière mue, la plupart de ces colonnes se réunirent en une seule. Ce fut une de ces colonnes que nous attaquâämes à deux reprises différentes. Du 15 au 22 avril, nous pulvérisämes sur elle, sur une superficie de 20 hectares environ, 37 litres de bouillon ensemencé avec du virus des 3° et 7° passages. Les pulvérisations étaient effectuées avec l’appareil Vermorel, après le coucher du soleil, sur les touffes d'herbe (Composées, Car duacées) (1) couvertes par la tête de colonne. C'est, en effet, à la tête de colonne que les Criquets sont le plus nombreux, tassés au point de cacher complètement la terre et la végétation. On à chance d'infecter ainsi non seulement les Criquets qui vont passer. la nuit sur ce front de bandière, mais tout le reste de la colonne, qui, le lendemain, passera par le même endroit. Au coucher du soleil, les Criquets se rassemblent en taches opaques, de sorte que les gouttelettes ténues tombaient non seulement sur les herbes, mais sur la masse grouillante des Criquets, sautant verticalement à 20-30 centimètres de hauteur, et pas une goutte de bouillon n'était perdue. Dès les premiers Jours qui suivirent ces pulvérisations, nous recueillimes dans les champs de rares Criquets malades qui nous montrèrent des Coccobacilles. C'est le 30 avril que nous vimes le principal effet des pulvé- risations opérées du 15 au 22 avril : des centaines de Criquets morts en tas sous des buissons, à quelques dizaines de mètres des points pulvérisés les plus proches. Mais l'immense majorité de la colonne avait progressé sans encombre. | (1) A ‘propos des plantes dévorées par les Criquets, nous citerons un fai intéressant au point de vue botanique, et qui peut avoir une certaine impor- tance pratique. Le capitaine Bugnet a bien voulu nous signaler qu’à Djelfa, où il a assisté en 1908 à une invasion de Criquets pèlerins, l'unique arbre qu'ils respectaient était le Melia azedarach. Or, nous retrouvons dans El jardin botanico de Buenos Aires, par Carlos Thays, p. 173, que Melia aze- darach peut être considéré comme le seul arbre complètement à l'abri de la morsure des Criquets pèlerins en Argentine. Le Melia est justement un des arbres qui s’accommodent le mieux du climat algérien et dont on retrouve de belles plantations, du rivage même de la Méditerranée jusque dans les régions sahariennes. ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE 417 Une seconde attaque est opérée du 13 au 21 mai avec du virus qui a fait des passages plus nombreux (du 74° au 87° pas- sage), c'est-à-dire plus virulent. 93 litres de culture sont pul- vérisés. À ce moment, plusieurs autres colonnes de Criquets se sont jointes à la première et tous sont devenus des Sauterelles adultes. Les points de pulvérisation sont espacés sur une surface de 10 hectares environ couverte par la colonne. Les résultats constatés une semaine plus tard (le 28 mai) sont frappants. Sur ces 40 hectares il y a en moyenne 5 morts par mètre carré. Sur Le bord d'une rivière (Oued el Abd) à fort courant, qui a dû arrêter quelque temps la marche des Saute- relles, des amas de cadavres remplissent les dépressions et les rigoles. Mais de l’autre côté de ce ravin cinquante hectares de céréales sont occupés par un vol de Sauterelles qui ne montrent ni malades ni trainards. On capture au hasard plusieurs de ces Sauterelles d'appa- rence tout à fait saine, le contenu intestinal de quelques-unes donne en culture pure le Coccobacillus acridiorum. III PROPAGATION NATURELLE DE L'ÉPIZOOTIE A partir de ce moment, nous nous bornâmes à observer,sans pratiquer de nouvelles pulvérisations. Il était, en effet, intéres- sant de savoir ce que deviendrait cette tache de Sauterelles qui contenait des porteurs de germes. D'autant plus que, le 5 juin, nous assistâmes à l’arrivée d'un vol de Sauterelles provenant de la commune mixte de Saïda, où aucune pulvérisation n'avait été faite, et qui rejoignit la colonne en expériences dans la plaine dite du kilomètre 60. Ce vol de Sauterelles fut observé de près pendant plus de trois semaines, jusqu'au 1° juillet. Il s’envolait chaque matin pour se poser chaque soir, allant et venant, sans direction géné- rale, tourbillonnant et reculant les jours de vent. Il disparut enfin vers le N.-N.-E. le 1° juillet, sans qu'on pût le suivre. Chaque matin, on trouvait, sur les emplacements où le vol 418 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR avait passé la nuit, des cadavres de Sauterelles. Ces cadavres étaient surtout nombreux sous les buissons (Jujubier sauvage, Zizyphus lorus Li.) où parfois on pouvait les compter groupées par centaines. Malgré ces morts, le nombre des Sauterelles ne paraissait pas diminué. Il est évident que la contagion ne s'est pas étendue à la majorité des Sauterelles, ou bien que beaucoup avaient une immunité naturelle, ou bien qu'elles acquéraient facilement une immunité active et toléraient le parasitisme du Coccobacillus acridiorum. IV CONCLUSIONS I. — De ce premier essai, il résulte qu'on peut arriver à exalter la virulence du Coccobacillus acridiorum d'Hérelle vis- à-vis du Slauronote marocain, de façon à tuer régulièrement celui-ci en 4 heures en moyenne. IL. — On a pu infecter des taches de Stauronotes en pulvéri- sant sur leurs gîtes nocturnes des cultures microbiennes ; une forte mortalité suivit ces pulvérisations, après quelques jours d’incubation. IL. — La propagation de l’épizootie aux autres taches qui venaient se fusionner avec celle qui comptait des morts et des porteurs de germes ne s’est effectuée qu'à un faible degré,dans cette courte expérience. Les résultats constatés indiquent donc qu'il reste des ques- tions à résoudre et qu’il est nécessaire de reprendre l'an pro- chain l'expérience sur une plus grande échelle. Nous possédons actuellement un virus habitué au Stauronote et très virulent pour lui. On est en droit d'espérer qu'au printemps prochain quelques passages par Criquets suffiront à Iui rendre sa virulence actuelle que la vie hivernale ?n vitro aura sans doute alténuée. Avec ce virus très virulent d'emblée, il faudra tenter de ESSAI DE DESTRUCTION DES SAUTERELLES EN ALGÉRIE #19 créer une épizootie dans plusieurs taches de Criquets, et, pour essayer de rendre cette épizootie le plus contagieuse possible, il faudra étudier spécialement les points suivants : Quels sout les modes naturels de la contamination des Acri- diens entre eux par le Coccobacille : l'ingestion de cadavres ? l'ingestion des pâtures souillées par les déjections des malades (diarrhée jaune ou noirâtre)? Etant données les maigres cultures et la végétation clairsemée de leurs lieux habituels de ponte en Algérie, ont-ils plus de chance d'échapper à la contamination par ingestion de pälures souillées par les déjections de leurs congénères infectés? Les Stauronotes sont-ils moins cannibales que les Schisto- cerca? Et par suite sont-ils moins exposés que ceux-ei à s'infecter par ingestion de cadavres infectés ? Y a-t-il d’autres conditions, propres au milieu algérien, qui gènent ou favorisent la propagation de l’épizootie? Peut-on trouver d’autres moyens que les modes naturels d'inter-contaminalion pour propager l’épizootie? Se produit-il une castration parasitaire des femelles porteuses de germes? En admettant que l'on n'observe pas, en Algérie, les faits de diffusion rapide de l’épizootie, signalés par d’'Hérelle en Argentine, y a-t-il un intérèt économique à utiliser le Cocco- bacillus acridiorum contre les Sauterelles algériennes, soit seul, soit associé aux autres modes connus de destruction des Acridiens ? Voilà quelques-unes des nombreuses questions auxquelles seule une expérimentation bien surveillée et poursuivie pen- dant plusieurs années pourra répondre. En terminant cette Note, nous sommes heureux de remercier cordialement de leur collaboration M. l'administrateur Tondu, de Frenda; M. l’administrateur-adjoint Ivara, et MM. Porthé, du Syndicat de défense contre les Sauterelles de Frenda. Nous remercions vivement le D' F. d'Hérelle de ses bons avis, et notre fidèle collaborateur Louis Landes de son aide dévouée. RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR UNE MÉTHODE THÉRAPEUTIQUE BASÉE SUR LA STIMULATION DES PHAGOCYTES par T. YAMANOUCHI. (Travail du laboratoire de M. Metchnikoff.) Metchnikoff, par ses expériences sur la digestion intracellu- laire et sur le rôle des cellules amiboïdes du mésoderme, qu'il a nommées phagocytes, nous a donné la clé de certains phéno- mènes biologiques. Les macrophages, cellules amiboïdes mononucléées, sont les seuls phagocytes des animaux inférieurs. Chez les animaux supérieurs, ils concourent à la résorption des organes voués à l'atrophie (queue du tétard), ainsi qu'à la destruction des cel- lules affaiblies ou séniles : exceptionnellement aussi, ils entrent en jeu dans la lutte contre les microbes (maladies nn Les leucocytes polynucléés ou microphages existent chez 12e animaux supérieurs. [ls transportent les matériaux de l’assi- milation et de la désassimilation ; en outre, ils défendent l'organisme contre les poisons, les venins, les toxines et les microbes. Les phagocytes jouent ainsi à tous les instants de [a vie normale et pathologique un rôle capital. On peut résumer en quelques lignes les conclusions de M. Metchnikoff dans sa conférence Nobel, à Stockholm, le 14 mai 1909 : « Tout ce qui est capable de fortifier les phagocytes et de stimuler leur activité augmente en même temps la résistance de l'orga- nisme contre les maladies infectieuses. L'état d’immunité est caractérisé par l'intensité du processus phagocytaire : lorsque la maladie est déclarée, une phagocytose très active est d’un bon pronostic, car elle conduit à la guérison en favorisant la destruction et l'élimination des substances nocives d'origine LA STIMULATION DES PHAGOCYTES 421 pathologique... Ces constatations, termine Metchnikoff, per- mettent d'espérer la découverte prochaine d’une nouvelle méthode prophylactique et thérapeutique contre les maladies infectieuses, méthode qui serait basée sur le renforcement de la phagocytose (1). » Deux facteurs sont à considérer : l'augmentation du nombre des leucocytes et l'augmentation de leur activité phagocytaire. L'hyperleucocytose existe dans les cas de suppuration abou- tissant à la guérison; elle existe également chez les animaux traités par le séton et c'est à elle qu'il faut attribuer chez l'homme les guérisons autrefois obtenues par l’action du séton ou du cautère. On provoque artificiellement l'hyperleucocytose en injectant sous la peau ou dans le sang des solutions isotoniques de nucléinate de soude ou d'argent colloïdal. Depuis longtemps on a employé la levure de bière à l'intérieur dans le traitement de certaines infections, notamment la furon- culose. Doyen, en 1899, isola le principe actif de la levure de bière, sous la forme d'une substance albuminoïde soluble et dénuée de toute action sur les solutions sucrées. Il à présenté cette préparation à l'Académie de Médecine, Le 13 février 1900, sous la forme de paillettes jaunâtres, très hygrométriques et altérables par la chaleur au-dessus de 50 degrés. Il prépara ensuite une solution injectable qu'il expérimenta chez l’homme, contre l'infection staphylococcique ; ses premiers résultals thérapeutiques ont été communiqués à l'Académie de Médecine, le 29 juillet 1902 (2). Son liquide injectable, improprement nommé par Doyen sérum antistaphylococcique, a été employé à partir du mois de janvier 1903, dans les hôpitaux de Paris, par les D'° Toupet, Moutard-Martin et Labadie-Lagrave. Cette préparation, très riche en glycérine salycilée, était impropre à l’expérimentation sur les animaux. En 1903, M. Ed. Sergent a expérimenté, avec succès, sur les lapins infectés avec le staphylocoque, l'extrait aqueux de levure de bière, en injections sous-cutanées (3). (1) Kozce et WasserMaNN, Hand. d. path. Mikro., 2e vol., 1re partie, p. 729. (2) Revue crilique de médecine el de chirurgie, 31 juillet 1902, p. 80. ‘3) Annales de l'Instilul Pasteur, octobre 1903, p. 634. 422 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Doyen a modifié en 1905 ses premières préparations, qui élaient obtenues à froid. Les nouvelles préparations qu'il pré- conise depuis cette époque (1) supportent la stérilisalion par la chaleur. Il leur a donné le nom de « Mycolysine ». La myco- lysine s'emploie sous deux formes: solution buvable et solution injectable; ces préparations agissent, d’après Doyen, en sti- mulant à la fois la leucocytose et la phagocytose. L'organisme, sous leur influence, devient résistant à un certain nombre de microbes ; la mycolysine, selon Doyen, agit préventivement dès que l'infection est menacante; elle agit également contre la maladie déclarée et, dans ce cas, son activilé est d'autant plus rapide qu'elle est employée plus près du début de l'in- fection. La substance active de la mycolysine injectable est une matière azotée d'origine végétale, que l'analyse chimique y décèle dans la proportion d'environ 6 p. 100. Ayant observé les effels thérapeutiques de Ia mycolysine chez l’homme, dans un certain nombre de maladies infec- tieuses : staphylococcie, streptococcie, pneumococcie, gangrène gazeuse, infection par le bactérium coli, J'ai cru intéressant d'étudier sur l’homme et sur les animaux de laboratoire le mode d'action de cet agent thérapeutique. J'ai comparé les effets de la mycolvsine à ceux du nucléinate de soude et de l'argent colloïdal. J'ai employé, pour plus de précision, la méthode hypoder- mique. Les doses de mycolysine injectable ont varié chez l'homme de 10 à 50 cent. cubes. Chez les animaux de labora- toire, je l'ai injectée à la dose de 1 à 2 cent. cubes par kilogramme de poids vif. On peut répéter les injections chaque Jour, pendant plusieurs jours de suile et sans inconvénient. Le liquide se résorbe très vite après l'injection sous-cutanée. Chez les animaux, J ai fait des injeclions sous-cutanées, intrapéritonéales et intraveineuses. Je n'ai pas observé d'accidents. J'ai étudié l’action de la mycolysine sur la leucocytose et sur la phagocytose, chez l'homme et chez les animaux, dans lPétat (1) Congres intérnational de Lisbonne, avril 1906, et Revue crilique de méde- cine et de chirurgie, mai 1906, p. 53. LA STIMULATION DES PHAGOCYTES 423 normal et dans l’état pathologique. J'ai ensuite comparé à l'action de la mycolysine, chez le lapin, l’action du nucléinate de soude et de l'argent colloïdal. L'action de la pamphagine, préparalion vélérinaire, est identique à celle de la mycolysine. Celte préparalion a élé expérimentée en 1910 sur les maladies infectieuses des animaux domestiques (1). Leucocytose. — La numération des leucocytes à été faite avant l'injection immunisante et elle a été répétée ensuite à plusieurs reprises. Le coefficient de la leucocytose a été établi : A. Par rapport au chiffre primitif (ce chiffre était très élevé dans plusieurs cas pathologiques) ; B. Par rapport au chiffre normal (7.000 leucocytes par milli- mètre cube). Phagocytose. — Le coefficient de la phagocytlose a été déter- miné tn vuro après mélange des leucocytes et des microbes, soit avec de l’eau salée isotonique, soit avec des dilutions titrées de mycolysine, de nucléinate de soude et d'argent colloïdal dans l'eau salée isotonique. Hyperphagocytose. — Le produit du coefficient de la Leuco- cyluse par celui de la Phagocytose donne le coefficient de l’'Hyperphagorytose : supposons que les leucocytes se soient élevés du chiffre normal 7.000 à 21.000 (coeflicient 3) et que pour {00 leucocytes le chiffre des microbes phagouytés se soit élevé de 260 (expérience de contrôle) à 520 (coefficient 2), le coefficient de l'Hyperphagocytose sera de 3X 2—6. Après avoir vérifié l’action stimulante de la mycolysine sur lés leucocytes et sur les phagocytes, j'ai étudié son action pré- ventive et son action curative dans un certain nombre d’infec- tions expérimentales. k J'ai recherché enfin si la mycolysine agissait sur les phago- cytes seuls, ou bien si elle exerçail une action directe sur les microbes. | (1) Archives de Doyen, n° 2, 15 décembre 1910, p. 104, et numéros suivants. 424 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR I. ACTION DE LA MYCOLYSINE SUR LES LEUCOCYTES CHEZ L'HOMME. J'ai étudié l’action de la mycolysine sur les leucocytes, chez l’homme, dans un grand nombre de cas. Je citerai 16 de ces observations, où la numération des leuco- cytes a élé faite plusieurs fois par Jour. Ces cas ont été divisés en 3 séries, suivant qu'il y avait, avant l'injection de mycolysine : 1° Hypoleucocytose (au-dessous de 7.000 leucocytes) ; 2° Leucocytose à peu près normale (de 7.000 à 10.000 leuco- cytes) ; 3° Hyperleucocytose (au-dessus de 10.000 leucocytes). 1° Deux malades étaient atteints d’hypoleucocytose ; il s'agissait de vieillards cachectiques et atteints de cancer. Le premier avait 4.800 et le second 6.000 leucocytes. 2 CUhez 6 malades, la leucocytose était à peu près nor- male. 3° Chez S malades, il y avait hyperleucocylose d'origine inflammatoire. Chez les deux premiers malades, qui étaient très affaiblis, le coefficient leucocytaire s’est élevé sous l'influence de la mycolysine, par rapport au chiffre primitif, à 1,33 et a 1,4. Chez les sujets dont l'hyperleucocytose était à peu près nor- male, le coefficient leucocytaire s’est élevé, sous l'influence de la mycolysine, dans les proportions suivantes : COEFVICIENT À COEFFICIENT B par rapport par rapport au chiffre primitif au chiffre normal (7.000 par mm.) } 1 | Jeune femme atteinte de cancer de l'ovaire. 4,6 4,1 Homme de 80 ans atteint d'épithéliome . . . 1,3 1,4 Sténose fibreuse du pylore, chez un homme. 2,0 3,14 Malade atteint de lipome . . . .. 2,» 2,6 Mal perforant plantaire 2,8 3,6 Cancer du rectum . D 2,86 Chez les malades déjà atteints d'hyperleucocytose d'origine inflammatoire, j'ai obtenu les chiffres suivants : LA STIMULATION DES PHAGOCYTES 425 COEFFICIENT À COEFFICIENT l Bharyngite:Chroniques 202 APN 2. * 1,36 2,5 Suppuration intestinale . . . . . M 4: 1,4 2,12 Cancer de la langue et du ie Hd 1,86 2 Cancer de la lèvre supérieure et du maxil- ÉTÉ PAR TIQUE RHUME Re 1,5 2,6 Cancer de la lèvre inférieure et Gr PL ÉTOAE ENST AN EE STE EURE 152 2,12 Ganglions cancéreux suppurés du cou . . . 1,33 2,16 Abcesidénlaisse lle Rene RS PO “1 43 2,86 Appendicite chez une enfant de dix ans. . . 3,1 160 $ L'ensemble de ces observations démontre que l'hyperleuco- cytose produite par la mycolysine à été très accentuée chez les sujets jeunes et résistants et qu’au contraire, elle a été très peu élevée chez les sujets très âgés, cachectiques, particulière- ment chez les vieillards cancéreux et affaiblis. IT. — ACTION DE LA MYCOLYSINE, DU NUCLÉINATE DE SOUDE ET DE L'ARGENT COLLOÏDAL CHEZ LE LAPIN NORMAL. 1° Evaluation de la leucocytose et du coefficient phagocytarre après l'injection intraveineuse de mycolysine de 2 à 3 cent. cubes suivant le poids. — J'ai choisi le bacterium coh, parce que ce microbe est toujours en éléments isolés ; sa numération est ainsi plus précise que celle des microcoques, qui se trouvent souvent agglomérés en groupes de plusieurs unités. Les lencocytes ont été prélevés après centrifugation du sang défibriné et sans avoir subi de lavage. Ils étaient donc en sus- pension dans le sérum sanguin. Les microbes phagocytés ont été comptés dans 100 leuco- cytes. Le nombre des hématies, d'environ 4.500.000, n'a pas varié sensiblement d’une numération à l’autre. Exp. I. — Hyperleucocylose produile par l'injection de mycolysine. Chez les quatre premiers lapins, dont la leucocytose était normale, le coefficient de l’hyperleucocytose produite par la mycolysine a été respecti- vement de 2, de 3, de 2,9, et de 3,2; le coefficient de phagocytose a été, pour les mêmes lapins et dans le même ordre, de 6,5, de 3,5, de 1,15 et de 2,6, ce qui donne, si l’on multiplie le coefficient de l'hyperleucocytose par le coeffi- cient de la phagocytose, le coefficient de l’hyperrésistance. [A Le) 426 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ce coefficient a élé : Pour le premier lapin, de. . . . . . . . 2 X 6,5. —"13» Pour 2le Second lapin de PR PR 0 — (ES Pour/letrorsièmelapin de Peer -n 2 0GMENoR— n 0 l Pourile quatrième lapin, de ns D NU FRS Soil une moyenne : Pour 'hyperleUCOCOSS NT ER CC Pourlaiphagocviose dec mr PT PRE PME" 50 Pouralihyperrésistance de Ne TR CN CC OO Exp. Il. — Recherche du titre optimum du mélange de mycolysine injectable el d'eau salée pour la phagocytose, in vitro, par les leucocytes du sang de lapin. L'expérience a été faite avec le bactérium coli. J'ai compté, au bout de 10 minutes de séjour à l’étuve, les microbes contenus dans 100 leucocytes. Cette expérience a été répétée 5 fois. Ces 5 expériences différentes ont démontré que le titre optimum du mélange de mycolysine injectable et d'eau salée, pour favoriser la phagoeytose, était de 1 p. 600. J'ai pris pour unité des expériences de contrôle, faites en présence de l’eau salée isotonique. Le chiffre ainsi obtenu étant pris pour unité, le coefficient phagocytaire maximum de la mycolysine, à la dilution de 1 p. 600, a été ainsi varié : PremiéresexpeérienCe NE CT D Seconde expérience. . . . . . AT Troisièemetexpérience Res ME NE TEA CT 2,29 OnairiemelexpeReNCe RE Re CT 2,34 2,48 Cmaiemelexpénence RER Soit une moyenne de 2,2. Exr. LIL. — {nfluence des dilutions : 1° de mycolysine; 20 d'argent colloïdal; 30 de nucléinale de soude; et 4° de bouillon peptonisé, sur la phagocytose. A. — Des expériences analogues à la précédente ont été faites comparati- vement avec la mycolysine, avec l'argent colloïdal ou électrargol, avec le nucléinate de soude et avec le bouillon peptonisé. Tandis que la dilution optima de mycolysine pour stimuler la phagocytose est demeurée de 1 p. 600, la dilution la plué favorable pour l’électrargol, pour le nucléinate de soude et pour le bouillon peptonisé a varié de 1 p. 50 à 4 p. 100. D'autre part, tandis que le coefficient phagocytaire maximum de mycoly- sine à la dilution de 1/600 a été de 2,34 dans une expérience et de 2,48 dans une autre, soit une moyenne de 2,4, le coefficient phagocytaire maximum pour l'électrargol a été, dans une expérience, de 1,64, à la dilution de 1/50, et dans une autre expérience, de 1,5 à la dilution de 1 p. 100, soit une moyenne de 41,57. Pour le nucléinate de soude le même coefficient a été, dans une expérience, de 1.36, à la dilution de 1/50, et dans une seconde expérience. de 1,45, à la dilution de 1 p. 100. soit une moyenne de 1,4. Entin, pour le bouillon peptonisé, il a été de 1,35, à la dilution de 1/50. B. — En présence de ces chiffres, il était intéressant de rechercher si l'électrarsol et le nucléinate de soude produisaient chez le lapin, après une LA STIMULATION DES PHAGOCYTES 427 injection intraveineuse aboutissant au même degré de leucocytose, une hyperphagocytose équivalente à celle que produit la mycolysine. J'ai choisi 3 lapins chez lesquels l'injection de mycolysine pour le premier. d'électrargol pour le second, et de nucléinate de soude pour le troisième. avait produit une leucocytose identique. Le chiffre de la leucocytose était, 5 heures après l'injection : Chezie premier lapins de:25/4u: 4 "121: 11.11 1010108800 Cheziledeuxièmellapmi de. .,.::1. . : : : . +. 197000 Cheztlettraisièemerlapin, de. 7. . :. . ... ("97600 Le coefficient phagocytaire a été déterminé : d'abord avant l'injection pro- duisant l'hyperleucocytose, puis 5 heures après, au moment où l'hyperleuco- cytose avait atteint le chiffre indiqué. Ce coefficient phagocytaire a été : Pour le premier lapin, traité par la mycolysine, de. . . 4,1 Pour le second lapin, traité par l'électrargol, de. 1,15 Pour le troisième lapin, traité par le nucléinate de SOUDE AUOES AE De UT CR MAR SAR CRR LRP ER ES PSC VE Pete o Tes TILL. — ACTION DE LA MYCOLYSINE INJECTABLE CONTRE L'INFECTION PAF LE STAPHYLOCOQUE ET PAR LE STREPTOCOQUE CHEZ LE LAPIN, PAR LE PNEUMOCOQUE CHEZ LE RAT BLANC. j 1° — Infection par le staphylocoque. Culture virulente pour le lapin, provenant de l'Institut Pasteur. Injection de 5 cent. cubes d’une culture sur bouillon, datant de 24 heures, sous la peau du ventre. A. — Înjection préventive intraveineuse de 2 cent. cubes de mycolysine quelques minutes avant l'injection sous-cutanée de staphylocoques. — Cette expérience a été répétée sur 14 lapins : 1 témoins et 7 traités. Tous les témoins ont présenté une inflammation purulente sous-cutanée très étendue et la plupart ont succombé à la septicémie staphylococcique. Au contraire, chez 13 des animaux traités, on n'a observé aucune trace d’inflammation ni de suppuration; un seul lapin présenta un petit abcès localisé sans gravité, gros comme une noisette. B. — Action curative de la mycolysine injectable contre l'in- fection stuphylococcique chez le lapin. — Celte expérience a été répétée sur 16 lapins, 8 témoins et 8 traités. Tous ces lapins ont reçu sous la peau du ventre une injection sous-cutanée viru_ 428 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lente d’une culture de staphylocoques dorés de 24 heures, sur bouillon. Au bout de 7 à 8 heures, tous présentaient une inflamma- tion diftuse et de la rougeur. L'abcès a évolué chez tous Îles témoins. Chez 7 des lapins traités, infiltration et l'inflammation ont été suivies d’une résolution complète, 24 heures après l’injec- tion de mycolysine. Chez le 8, l'inflammation a disparu le premier jour et l'induration, qui était un peu plus étendue que chez les autres, s’est résolue en quelques jours. C. — Action comparative de la mycolysine, de l'électrargol et du nucléinate de soude contre l'infection staphylococcique. Exr. I. 8 lapins. — Injection préventive inlraveineuse de mycolysine de 2 cent. . >. . : / + cubes immédiatement avant l'injeclion de 1 cent. cube de la culture de staphy- locoques sous la peau du ventre. Mycolysine. 2 lapins. — Les microbes injectés disparaissent Sans la moindre apparence d’inflammation locale. Electrargol. 2 lapins. — infiltration œdémateuse et inflammation. L'abcès évolue comme chez les témoins. Nucléinale de soude. 2 lapins. — infiltration œdémateuse et inflammation. L'abcès évolue comme chez les témoins. Témoins. lapins. — Infiltration œædémateuse et grand abcès. Exp. II. — Evaluation numérique de la leucocytose et de la phagocytose (S lapins. La leucocytose et la phagocytose ont été déterminées avant l'expérience chez les 8 lapins. Elles ont été ensuite déterminées, chez les 6 lapins traités, 5 heures après l'injection immunisante. Immédiatement après cette seconde numération, les 6 lapins traités el les deux témoins ont reçu l'injection de staphylocoques sous la peau du ventre. Les injections immunisantes ont été répétées le lendemain et le surlendemain chez les 6 animaux traités. La leu- cocytose et la phagocytose ont été déterminées chez les 8 animaux pendant les 3 jours qui ont suivi l'injection de staphylocoques. Dans cette expérience, on a constaté, comme dans les expé- riences précédentes, que l'hyperleucocytose produite par la mycolysine a été supérieure à celle produite par l'électrargol et par le nucléinate de soude. Il en a été de même pour la phagocylose in vitro, 5 heures après l'injection intraveineuse de ces agents thérapeutiques. L'écart en faveur de la mycolysine a atteint le maximum 24 heures après l'injection de la culture virulente de staphylo- coques. LA STIMULATION DES PHAGOCYTES 429 L'analyse de cette expérience démontre que sur le lapin normal : 1° Les coefficients de la leucocytose et de la phagocytose sont plus élevés après les injections de mycolysine qu'après les injections d’électrargol ou de nucléinate de soude ; 2° Lorsque le lapin est infecté par le staphylocoque, la réaction défensive produite par la mycolysine augmente dans des proportions considérables : elle a atteint, pour la leucocy- tose, le chiffre de 14 par rapport aux chiffres de 3,8 pour l’élec- trargol et de 2,7 pour le nucléinate de soude; pour la phagocy- tose, elle a atteint le chiffre de 2,8 par rapport aux chiffres de 1,58 pour l’électrargol et de 1,53 pour le nucléinate de soude. Ce qui donne, en multipliant les deux coefficients, leucocy- tose et phagocytose, le coefficient de l'hyperphagocytose, qui a été de 39,2 pour la mycolysine, de 6 pour l’électrargol et de 3,2 pour le nucléinate de soude. La réaction défensive produite par la mycolysine augmente dès que l'infection se produit et elle la jugule. Immédiatement après, la leucocytose et la phagocytose diminuent et elles se rapprochent de la normale. Au contraire, l’hyperleucocytose provoquée par lélectrargol et par le nucléinate de soude n’a pas suffi pour empêcher la formation de l’abcès, qui a évolué malgré la persistance de cette leucocytose. Exp. [IL — Action préventive de l'injection intraveineuse de mycolysine contre l'injection intraveineuse de staphylocoques. 2 lapins. — Un de ces lapins reçoit 2 cent. cubes de mycolysine dans les veines. 5 heures après, les 2 lapins reçoivent une injection intraveineuse de 5 cent. cubes d’une suspension . de staphylocoques, contenant environ 50 millions de cocci. La recherche des cocci dans le sang, 15 minutes après l'injection, ne permet d'en déceler qu'un petit nombre, les uns libres dans le plasma, les autres déjà presque complètement digérés par les microphages. Or, le volume du sang d'un lapin de 2 kilogrammes étant d'environ 110 cent. cubes, chaque millimètre cube du sang examiné aurait dù contenir environ 500 cocci. D'autres expériences seront faites pour démontrer le mode de disparition si rapide des staphylocoques injectés. Le lapin {émoin est mort au bout de 24 heures. Le lapin frailé préventivement n'a présenté aucun malaise. +30 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 2°. — Action préventive de la mycolysine contre l'infection streptococcique chez le lapin. Première expérience. — Ynjection préventive de mycolysine 24 heures avant l’inoculation (2 lapins). 1 lapin /émoin. Erysipèle : mort. — 1 lapin traité. Aucune lésion. Sur l'observation que la culture pourrait n'être pas assez virulente, l'expérience à été répétée en inoculant 2 ou 3 gouttes d’une culture ultra-virulente. Deuxième expérience (2 lapins). — 1 lapin /émoin. Erysi- pèle : mort. — 1 lapin traité. Erysipèle : mort. Troisième expérience (6 Tapins\. — 3 lapins /émoins. Erysi- pèle : morts. — 5 lapins traités. Erysipèle : morts. La virulence de la culture a été vérifiée sur trois autres ani- maux. Ces 3 lapins, qui avaient déjà servi à d'autres expé- riences, sont morts au bout de 24 heures, tandis que les lapins neufs résistaient davantage et succombaient généralement au bout de 4 jours. Quatrième expérience (8 lapins). — Une seule injection pré- ventive étant insuffisante, j'ai injecté chaque jour à 4 lapins, pendant # jours consécutifs, 2 cent. cubes de mycolysine dans les veines. Le 4° jour, ces 4 lapins traités et 4 témoins ont reçu la même culture sur bouillon, sous la peau de l'oreille. & témoins : morts au bout de 4 jours. — 4 traités: 1 mort au bout de # jours; 3 n'ont présenté aucune lésion. Cette expérience prouve que les injections préventives de mycolysine, répétées pendant plusieurs jours, élèvent progres- sivement le potentiel vital du lapin et Le rendent plus résistant au streptocoque qu'une seule injection préventive de la même préparation. 3. — Action préventive de la mycolysine contre l'infection pneumococcique chez le rat blanc. Première expérience. — 4 rats blancs. Injection d’une culture de pneumocoques dans le péritoine, 2 rats recoivent en même temps sous la peau 1 cent. cube de mycolysine. LA STIMULATION DES PHAGOCYTES #31 2 témoins : morts en 24 heures. — 2 traités : morts avec un retard de 12 et de 24 heures. Deuxième expérience. — 4 rats blancs. Injection préventive de mycolysine (1 cent. cube) sous là peau. Le lendemain, nouvelle injection de mycolysine et injec- Lion intrapéritonéale de pneumocoques. 2 témoins : morts en 24 heures. — 2 traités : 1 mort, | surot. Troisième expérience. — 6 rats blancs. Mème expérience : 3 témoins : morts en 24 heures. — 3 traités : 1 mort, 2 survivent. Soit, sur 10 rats, dont 5 témoins, 100 p. 100 de mortalité chez les témoins et 40 p. 100 de mortalité chez les traités. IV. — Erupe pu PROCESSUS DE L’'IMMUNISATION PAR LA MYCOLYSINE. La mycolysine agit-elle sur les /eucocytes seuls, comme une stimuline, ou bien agit-elle aussi sur les microbes, à la manière d'une sensibilisatrice ? A. — Action dela mycolysine sur les leucocytes el sur linde.r opsonique du sérum du lapin. — Sur 6 lapins, 2 ont recu des injections sous-cutanées de mycolysine pendant 3 jours, et Je leur ai faitle 4° jour une injection intraveineuse de 2 cent. cubes. 2 ont recu le dernier Jour une seule injection intraveineuse de 2 cent. cubes. Les 2 derniers étaient des lapins témoins. Première expérience. — 2 heures après la dernière injection de mycolysine, un des lapins de chaque série à été saigné. Les leucocytes de ces lapins ont été séparés et lavés à l’eau salée isotonique et leur pouvoir phagocytaire à été mesuré en pré- sence du sérum d’un lapin normal. Pour le lapin de la 2° série (une seule injection de mycolv- sine) le coeflicient phagocytaire à été de 1,35. Pour le lapin de la 1" série (* injections de mycolysine) le coefficient phagocytaire a été de 1,87, l'unité élant la phagocy- tose chez le lapin normal. Cette expérience montre que les injections de mycolysine augmentent sensiblement l'activité phagocytaire des leuco- cytes…. 432 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Deuxième expérience. — Après avoir constaté l'hyperactivité phagocytaire des leucocytes des lapins soumis aux injections de mycolysine, comparativement à l’activité phagocytaire des leucocytes du lapin témoin, j'ai déterminé l'index opsonique du sérum de deux lapins préparés de la même manière, en présence des leucocytes d’un lapin normal. Les prélèvements de sérum chez les lapins des deux pre- mières séries ont été faits, une première fois, deux heures après, et une seconde fois, cinq heures après la dernière injec- tion de mycolysine. On à prélevé pour le contrôle le sérum d'un lapin témoin de la troisième série. L'index opsonique des sérums des lapins de l'expérience a été déterminé : 1° à l’état frais, en prenant comme base le sérum normal d’un lapin témoin ; 2° après chauffage à 56 degrés. Cette expérience a démontré que : | 1° Le chauffage à 56 degrés pendant trente minutes détruit le pouvoir opsonique du sérum aussi bien chez le lapin témoin et normal que chez les lapins ayant recu des injections de mycolysine ; 2° L'index opsonique du sérum du lapin préparé par la mycolysine est supérieur à celui du sérum du lapin témoin. Les chiffres obtenus chez le témoin étaient pris comme unité, l'index opsonique a été : pour le lapin de la seconde série (une seule injection de mycolysine), deux heures après l'injection, 1,34, et cinq heures après, 1,11; pour le lapin de la première série, qui avait reçu quatre injections de mycoly- sine : deux heures après la dernière injection, 1,63, et cinq heures après, 1,26. V. — La MyCcOLYSINE N’EXERCE AUCUNE ACTION DIRECTE SUR LES MICROBES. Première expérience. — Culture de staphylocoques de 24 heures, sur gélose inclinée, et en suspension dans 20 cent. cubes d'eau salée isotonique. 10 cent. cubes de cette solution sont centrifugés, les microbes sont mis en suspension dans 10 cent. cubes d'une solution de mycolysine à 1/100 et je LA STIMCLATION DES PHAGOCYTES 433 les laisse pendant trente minutes à l'étuve, à la température de 38 degrés. L'émulsion est alors centrifugée et lavée à l'eau salée à trois reprises. Plusieurs expériences comparatives avec le staphylocoque et le Bacterium coli ont démontré que la phagocytose était identique avant ou après le contact prolongé des microbes avec la mycolysine. Dans une autre expérience, j'ai recherché si la mycolysine, à des dilutions variant de 1/10 à 1/500, avait le pouvoir d'agelutiner des cultures de staphylocoques, de Bacterium col el de bacilles typhiques. Je n'ai constaté aucune trace d’agglu- lination de ces microbes. Quatrième expérience. — Culture des microbes dans la mycolysine à diverses dilutions. Plusieurs espèces microbiennes, notamment le staphylo- coque et le Bacterium coli, ont été ensemencées dans la myco- lysine injectable à des dilutions variant de 1/10 à 1/500. Ces microbes se développent dans la mycolysine, mème en solution concentrée. L'action stimulante de la mycolysine sur les leucocytes étant démontrée par toute la série des expériences qui précèdent, J'ai étudié son effet comparativement sur les leucocytes du sang de lapin normal et sur les leucocytes provenant du pus d'un abcès staphylococcique. Les leucocytes du pus ont été d'abord examinés à l'éclai- rage parabolique et à la lumière solaire; J'ai constaté que tous ou presque tous présentaient des mouvements actifs et qu'ils étaient vivants. Ces leucocytes, lavés à l’eau salée isotonique, se sont montrés incapables d'erglober le moindre staphylocoque aussi bien en présence de l’eau salée qu'en présence de Ia mycolysine diluée à 1/600, qui favorise au contraire puissamment la diges- lion des microbes par les leucocytes du sang. . . ConcLuUSIONS. {° La mycolvsine injectable augmente chez l'homme la leu- cocytose et la phagocytose. La leucocytose se produit dès les 494 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR premières heures qui suivent l'injection et elle dure de vingt- quatre heures à quatre ou cinq jours. Elle est plus durable lorsqu'on injecte sous la peau 50 cent. cubes que lorsqu'on injecte 20 cent. cubes ou 10 cent. cubes. La leucocytose est moins prononcée chez les sujets /rès ägés el cachectiques que chez les sujets dans la force de l’âge-et chez les enfants. Le coefficient leucocytaire, par rapport à l'unité leucocytaire de 7.000 par millimètre cube, à varié, sur 16 malades traités par la mycolysine, de 1,4 à 7. Ce même coefficient, par rapport à la numération des leuco- cytes avant l'injection de mycolysine, a varié de 1,2 à 4,6, un certain nombre des malades examinés présentant déjà de l'hyperleucocytose pathologique. 2° Chez le lapin normal, la mycolysine exerce la même action stimulante sur la leucocytose et sur la phagocytose. La moyenne de l'évaluation numérique de la leucocytose, d’une part, et de la phagocytose, d'autre part, donne les coeffi- cients de 2,77 pour la leucocytose et de 3,58 pour la phagocy- lose, soit, pour le coefficient moyen de l'hyperphagocytose : 2,71 X 3,38—9.91. 3° La mycolysine injectable à la dilution de 1/600 dans l'eau salée isotonique exerce in vitro l'action stimulante maxima sur les leucocytes du lapin. Le coefficient phagocytaire moyen a été, sur cinq expériences, de 2,2 (minimum 1,75, maximum 2,48) par rapport à l'unité (contrôle en présence de l’eau salée isotonique). 1° L'évaluation numérique de la phagocytose des leucocytes du lapin, en présence de solulions injectables normales de myco- lysine, d’électrargol, de nucléinate de soude et aussi de bouillon peptonisé, à des dilutions de 1/50 à 1/700, a donné le coefficient maximum, 2,41, pour la mycolysine, à la dilution de 1/600! Les dilutions d’électrargol, de nucléinate de soude et de bouillon peptonisé ont donné les coellicients respectifs de 1,57—1,4— 1,33, à une dilution de 1/50 à 1/100 (moyenne de 2 expériences). LA STIMULATION DES PHAGOCYTES #35 5° Pour une même hyperleucocytose de 28.000 environ, observée cinq heures après des injections de mycolysine, d'ékectrargol et de nucléinate de soude, le coefficient phagocy- taire a été : Pour l4 mycolysine, de . ONE UE Bouraiélectrars Ole RUN RP NOTES Pour le nucléinate de soude, de . 2 6° L’inpection préventive de mycolysine (2 cent. cubes dans les veines) prévient chez le lapin l'infection staphylococcique pro- duite par l'injection sous-cutanée, au ventre, de 1 à 5 cent. cubes de culture virulente sur bouillon. L'action préventive est augmentée si le lapin est préparé pendant plusieurs jours. 1° L'injection de #ycolysine provoque la résolution de l'abcès staphylococcique, si on fait l'injection intra-veineuse de la septième à la neuvième heure après l'injection des microbes, c'est-à-dire au moment précis où l'infiltration inflammatoire commence à se manifester ; 8° L'injection préventive d’électrargol où de nucléinate de soude n'empêche pas l'infection staphylococcique ; au contraire, des lapins de la même expérience, qui ont recu préventivement la mycolysine, n'ont présenté aucune lésion ; 9° La même expérience, répélée avec évaluation numérique de la leucocylose, de la phagocytose, montre que : a) Les coefficients de leucocytose et de phagocytose les plus élevés sont obtenus avec la mycolysine : COEFFICIENT LEUCOCYTOSE PIAGOCYTOSE , de l'hyperphagocytose. MYCOÏ SITE ER 14 » x 2,8 = 39,2 Électrargol . . . à D -X 1.88 — 6 » Nucléinate de soude , . 2:71 < 1,53 = 3,2 b) La courbe montre que la réaction provoquée par la myco- lysine croît très vite dès que l'infection microbienne s'établit : cette hyperphagocytose considérable amène la résolution. Au contraire, l’hyperleucocytose produite par l’électrargol 436 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et le nucléinate de soude est beaucoup moins élevée et elle n'empêche pas la formation de l’abcès. 10° L'injection préventive intraveineuse de mycolyâine a également empêché la mortalité du lapin, malgré l'injection intraveineuse de 50 millions de staphylocoques qui a tué le lapin témoin au bout de vingt-quatre heures. 11° L'action préventive de la mycolysine contre l'infection streptococcique du lapin est moins constante que son action préventive contre l'infection staphylococcique. J'ai préservé 3 lapins sur 4 en injectant préventivement chaque jour, pendant quatre jours, avant l'infection strepto- coccique, 2 cent. cubes de mycolysine dans les veines. 12° L'injection sous-cutanée préventive de mycolysine, répé- tée pendant deux jours, a préservé 3 rats blancs sur 5 contre l'infection pneumococcique dans le péritoine, tandis que les cinq témoins sont morts en vingt-quatre heures. 13° La mycolysine n'exerce pas d'action directe sur les microbes : ni agglutination, ni sensibilisation ; elle agit en augmentant le pouvoir opsonique du sérum et en stimulant la phagocytose. INFLUENCE DE LA LÉCITHINE ET DE LA CHOLESTÉRINE SUR LA TOXICITÉ DES ŒUFS ET DES OVAIRES par HENRI VIGNES (Travail du laboratoire du D' Salimbeni.) La toxicité du parenchyme ovarien a été établie par de très nombreux travaux ; elle est plus marquée que celle du testicule dans la proportion de 39 à 233 (Loisel) et elle est surtout due à la présence des ovules (Loisel). Phisalix, puis Robert Lévy, ont montré que les œufs de certaines espèces attirent au moment de l’ovogénèse des sub- stances toxiques qui sont autrement employées en d’autres moments, de même que Albo avait montré l’utilisation des alcaloïdes pour la maturation des graines. Cette affinité, d’ailleurs, existe pour un grand nombre de toxines : Metchnikoff et Matchinsky l'ont constaté les premiers pour la toxine tétanique; elle constitue une propriété fondamentale du germen. Par ailleurs, un grand nombre de travaux ont établi l’action antitoxique des lipoïdes. En ce qui concerne l’ovaire, Ciaccio a vu l’augmentation des lipoïdes ovariens en rapport avec la maturation de œuf; Mulon signale les lipoides de l'ovaire et du corps jaune dans ses recherches histochimiques sur les graisses antitoxiques. Ces substances, par leurs propriétés physico-chi- miques, ont sans doute une fonction antitoxique à l'égard des toxines qu'adsorbe l’ovule ; elles permettent peut-être même de les utiliser en sorte qu’elles seraient le substratum de la fonction dite de sécrétion interne. C’est en m'inspirant de toutes ces recherches que j'ai institué une série d'expériences sur cette action antitoxique des lipoides vis-à-vis des extraits d’ovaires et d'œufs. 438 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR J'ai employé trois sortes d'extraits : 1° Extrait d'ovaire de truie obligeamment mis à ma dispo- sition par M. Choay (ovaire desséché dans le vide et à basse température, pulvérisé, délipoïdé, mis en solution dans l’eau physiologique, telle qu'un centimètre cube corresponde à 0,10 d'extrait et à 0,60 de glande desséchée, puis porté à l’ébul- lition rapide) ; 2° Extrait d'œufs de hareng ayant subi la même préparation (0,50 d'extrait, 1 gr. 50 d'œufs); 3° Extrait d'œufs de hareng ayant subi la même préparation, sauf l'ébullition (mème titre). Les injections de ces trois extraits ont un effet analogue ; toutefois, Le troisième est plus actif que les deux autres. Comme lipoides, j'ai utilisé la cholestérine et la lécithine à l’état de pureté telles qu'on les trouve dans le commerce; je les ai mises en suspension dans les solutions d'extraits par un broyage soigneux au mortier d’agate. PREMIER GROUPE D'EXPÉRIENCES. — [INJECTION D'EXTRAIT,. — Mort. Le 19 septembre 1913, j'injecte 1 gramme d'extrait n° 3 (non chauffé) dans la veine de l'oreille d’un lapin mâle pesant 890 ; il pèse 910 le 20, 880 le 22, S70 le 23, 840 le 25, 710 le 29, et meurt le 7 octobre, pesant 640 grammes. J'ai obtenu des résultats analogues avec un cobaye femelle du poids de 310 (injection sous-cutanée de 1 gramme d'extrait n° 5) et une souris femelle injection sous-cutanée de 0,10 d'extrait n° 1). DEUXIÈME GROUPE. — INJECTION D'EXTRAIT. — Baisse de poids notable. J'injecte, le 16 avril 4913, 0 gr. 40 d’extrait ovarien à un cobaye femelle du poids de 560. [1 pèse 547 le 17, 555 le 18, 507 le 21, 433 le 23, 467 le 24. Le 23, la perte de poids est maxima, elle atteint 1/5,6 du poids initial. J'obtiens des résultats analogues dans onze cas où j'ai pratiqué soit une, soit deux, quatre, cinq et jusqu'à huit injections (sous-cutanées ou intra- veineuses) des trois extrails. Je n'ai relevé qu'une exception : c'est celle d’une souris pleine de 2; orammes à qui j'ai injecté 0,10 d'extrait ovarien et qui a augmenté. La perte moyenne de poids, déduction faite de cette exception, a été de 1/6.8. TROISIÈME GROUPE. — INJECTION D'EXTRAIT ET DE LÉCITHINE. Perte de poids minime ou nulle. Pas de mort. J'injecte 1 gramme d'extrait additionné de lécithine n° 3 à un cobaye femelle du poids de 370 grammes. Le poids du cobaye diminue d'abord, puis augmente. INFLUENCE DE LA LÉCITHINE ET DE LA CHOLESTÉRINE 439 La perte maxima est de 1/9. Pendant ce temps, un autre cobaye femelle, qui a recu de l'extrait seul, meurt. (Voir cobaye du premier groupe.) Trois expériences analogues avec les trois extraits : les pertes de poids sont respectivement de 0—1,26 et 1,12, la perte movenne est donc de 1/17,2. QUATRIÈME GROUPE. — [NJECTION D'EXTRAIT ET DE CHOLESTÉRINE. Perle de poids minime. Pas de mort. J'injecte sous la peau 1 gramme d'extrait n° 3 non chauffé, additionné de cholestérine, à un cobaye femelle de 390 grammes. Le cobaye diminue, puis augmente, la perte maxima est de 1/7,8; pendant ce temps, le cobaye qui a reçu l'extrait seul est mort el celui qui a recu la lécithine a perdu 1/9 de son poids, ainsi que nous l'avons vu. J'ai fait deux expériences analogues avec les deux autres extraits. La perte de poids moyenne a été de 1/9,4. L'extrait d'œufs de harengs, chauffé el surtout non chauffé, manifeste donc, de même que l'extrait d'ovaire de truie, une action toxique lente se traduisant par une perte de poids pro- gressive qui parfois peut aller jusqu'à la cachexie et même la mort. La lécithine et, à un moindre degré, la cholestérine diminuent celte action toxique des extrails génitaux femelles : dans certains cas, les animaux qui ont recu une injection d'extrait additionné de lipoide ont résisté, alors que les témoins mouraient, et dans les autres cas leur perte de poids relative à été moindre que celle des témoins. .. Dans une autre expérience, J'ai pratiqué à des cobayes femelles l'injection d'une seule dose (0,10 et 0,20) de lipoïdes extraits d'ovaires de truie et j'ai également obtenu une perte de poids notable (1/5,3 el 1/4,5). (Lipoïdes préparés par M. Choay.) Or, étant donné que les injections de lécithine et de choles- térine à l’état de pureté ne déterminent pas de diminution de poids appréciable, — bien au contraire, — deux hypothèses sont permises pour expliquer ce dernier résultat ; ou bien, à côté de la lécithine et de la cholestérine, existent dans l'ovaire un ou plusieurs lipoïdes toxiques, ou bien, par les moyens employés, 440 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR on ne peul séparer des lipoïdes ovariens la totalité des sub- stances toxiques et une partie reste fixée sur ces lipoïdes, pour constituer des complexes très actifs. J'ai entrepris ces expériences à l’occasion de recherches sur la menstruation. J'ai pensé en effet que, dans l’étude de ce phé- nomène, 11 y a place pour des travaux procédant par voie synthétique, et je crois que le cytoplasme ovarien et l’ovule accumulent certains produits du métabolisme général (dans l’espèce les extraits) et les utilisent pour la fécondation et la menstruation au moyen de combinaison avec divers produits (dans l'espèce les lipoïdes) amenés à l’ovaire ou créés par lui, le tout suivant un cycle bien déterminé. Il faut rapprocher de ces expériences et de ces hypothèses, les observations cliniques de Wilezinski, qui a vu la lécithine à dose quotidienne de 0 gr. 5 relarder et diminuer l'écoulement menstruel. En résumé, je crois qu'il ne faut pas parler du produit de la sécrétion interne de l'ovaire, mais de son action de présence. La chimie génitale a ses dates, comme l’histologie du tractus utéro-ovarien et comme toute la vie génitale de la femme. BIBLIOGRAPHIE ALBO. — Archives ilaliennes de Biologie, 1900, t. XXXIII, p. 73. Craccio. — Les lipoïdes intracellulaires. La Biologie médicale, 1919, p. 336. Lévy. — Relations entre l’arachnolysine et les organes génilaux femelles de l’araigaée. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, séance du 8 janvier 1913. Loisez. — Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 28 mai 1904, p. 883. et 16 juillet 1904, p. 133. Marcumwskir. — De l'atrophie des ovules, etc. Annales de l'Institut Pasteur, mars 1900, p. 113. MuLox. — Sur l'existence des graisses antitoxiques. Comples rendus de la Soc. de Biologie, 12 novembre 1910. Paisazix. — Corrélations fonctionnelles entre les glandes à venin et l'ovaire. Le Progrès médical, 9 avril 1904. Waicczinski. — Cité dans la Semaine médicale, 1909, p. 165. Le Gérant : G. MAssoN. Paris - L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. 28° ANNÉE MAI 1914 Noe5 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR SUR LA FLORE INTESTINALE DES CHAUVES-SOURIS par Mie TSIKLINSKY, De l'Institut bactériologique de l'Université de Moscou. (Avec la Planche XIII.) Depuis les travaux de Metchnikoff et de son école sur la flore intestinale de l’homme et des animaux, on ne peut plus douter du rôle important que joue ce facteur dans la pathologie et la physiologie des êtres animés. On sait que les bactéries abondent particulièrement dans le gros intestin, qui atteint son plus grand développement chez les mammifères. A mesure que l’on obtient de nouvelles données sur l'étude de la flore intestinale, on constate que celle-ci diffère chez les divers représentants de cette classe d'animaux, suivant la conformation de leur intestin, leur genre de nourriture, la rapidité de leur digestion, leur genre de vie et peut-être d’autres facteurs, qui nous sont encore inconnus. Tandis qu'on trouve une flore intestinale très riche chez les ruminants et aussi chez d’autres herbivores, par exemple, chez les chevaux {Choukewitch)|1] ou bien encore chez les omnivores, notamment les pores (Barikine) 12}, il y a d’autres mammifères qui nous frappent, au contraire, par la pauvreté de leur flore intestinale. Tel est surtout le cas des chauves-souris. Le premier travail consacré à l'étude de la population bactérienne de l'intestin de la chauve-souris, est dû à Metchnikoff et à Distaso [3]. Ils ont étudié une des grandes espèces de la chauve-souris frugivore, connue sous 30 442 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR le nom de « roussette » {Pteropus medius), dont les exemplaires avaient été importés des Indes. Ces auteurs ont remarqué ia pauvreté surprenante de la flore intestinale de ces mammifères : il n'y avait presque pas de bactéries dans les prépa- rations étalées faites de leurs excréments : on n’en trouvait que par endroits parmi les restes non digérés des fruits qui composent la nourriture des roussettes. En même temps on ne remarquait dans leurs déjections aucun processus de putréfaction, même pas d'odeur de pourriture, mais au contraire, une odeur de bananes ou de pommes, c'est-à-dire des fruits qui constituaient la nourriture de ces animaux. Metchnikoff, constatant la pauvreté de la flore intestinale des roussettes, fait observer la conformation particulière de leur intestin. On sait que, contrairement à tous les autres mammifères, la chauve-souris a le gros intestin peu développé : il n’a qu'une très petite longueur et son diamètre n'est pas plus grand que celui de l'intestin grêle. Quant au cæcum, il fait complètement défaut. Selon les observations d'Eimer[4], le gros intestin des chauves-souris diffère aussi de celui des autres mammifères par sa fonction et par sa structure histologique : il est pourvu de glandes comme l'intestin grêle et il s'y passe, mais à moindre degré, le même processus de di- gestion. , En outre, la digestion des chauves-souris se fait extrèmement vite et la défécation se produit chez elles une heure et demie ou deux heures après l'absorption de la nourriture, de sorte que les résidus de la nourriture n'y séjournent pas; les conditions favorables au développement des bactéries n'existent donc pas. C'est par cette pauvreté de la flore intestinale chez les chauves-souris que Metchnikoff s'explique leur longévité. Elles ont vécu de quinze à dix-sept ans et plus en captivité, et elles avaient été déjà prises adultes. Ceci constitue une longue période de vie comparativement à beaucoup d’autres mammifères, par exemple aux ruminants, dont le cycle vital [5] est court et dont la flore intestinale se caractérise, nous l'avons vu, par une richesse particulière. L'éléphant, qui constitue par sa longévité une exception parmi les herbivores, a relativement une flore intestinale très pauvre, si l’on juge d’après les recherches de Barikine. Les recherches de Metchnikoff et Distaso concernaient la flore intestinale des chauves-souris frugivores habitant les régions tropicales. Il nous a paru très intéressant de nous faire une idée sur la population intestinale de nos chauves-souris ordinaires ; elles se nourrissent, comme on sait, d'insectes, sont analogues par la conformation de leur intestin aux chauves- souris déjà citées et se caractérisent, par conséquent, par l'absence du cæcum et par le développement peu considérable du gros intestin. C’est dans le but d’éclaircir cette question que j'ai entrepris l'étude de la flore intestinale chez les chauves- souris habitant les régions tempérées. Dans son (ravail récemment paru, Bertarelli [6] a exposé les résultats de ses recherches sur la flore intestinale des animaux SUR LA FLORE INTESTINALE DES CHAUVES-SOURIS 443 hibernants et, entre autres, des chauves-souris insectivores. Sans étudier systématiquement la population microbienne de ces dernières, l’auteur fait observer qu'elle se distingue par sa grande pauvreté. Nous avons fait nos recherches personnelles sur quelques espèces des chauves-souris ordinaires (Vespertillo, Vesperugo, Plecotus, Myotis Daubentonia) habitant les gouvernements du centre de la Russie. Les recherches ont été faites sur les souris récemment tuées, ou, plus rarement, attrapées vivantes. Dans ce dernier cas, elles étaient mises à mort à l’aide du chloro- forme. On pratiquait immédiatement l’autopsie; on observait généralement le tube digestif tout entier, depuis l'estomac jusqu'au rectum inclusivement, et on l’enlevait, pour plus de commodité, en le transportant dans la boite stérilisée de Petri. Ce qui sautait aux veux, c'est que l'estomac et toutes les parties de l'intestin étaient trop remplis de nourriture, surtout alors que l'animal avait élé attrapé lard le soir et qu'il avait eu le temps de se rassasier. La plupart du temps, le contenu de l'intestin avait une couleur sombre, presque noire, et était de consistance dure. Les recherches furent faites suivant la méthode suivante : on faisait tout d'abord les préparations microscopiques avec le contenu de l’estomac et des différentes parties de l'intestin, ensuite les ensemencements sur des différents milieux nutritifs. Comme l'analyse microscopique des excréments manifestait soit l'absence complète de bactéries, soit une quantité très peu considérable, une ou deux bactéries, parfois mème aucune, dans le champ visuel, l’ensemencement du contenu intestinal se faisait sans dilution préalable. Des parcelles d'excréments étaient directement ensemencées dans les milieux nutritifs (gélose, pomme de terre, gélatine et autres) et, après le déve- loppement, on effectuait des cultures pures à l'aide des procédés habituels. Il est intéressant de noter que les excré- ments de la chauve-souris, récemment prélevés, ne répandaient aucune mauvaise odeur, tandis que les cultures obtenues dans des tubes, après l'ensemencement des parcelles des excréments, répandaient dans presque lous ces tubes une très forte odeur fétide. Avec ce fait s'accordent les indications de beaucoup de zoologistes, que dans les gîtes des chauves-souris, leurs excré- 44% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ments, qui s’'amassent en quantité incroyable, dégagent une très forte odeur désagréable, de sorte qu'il est plus facile parfois de découvrir l'habitation des chauves-souris par l’odorat que par la vue [7]. Ceci peut être aussi expliqué par le fait que les bactéries se développent non pas dans l'intestin des chauves- souris, où elles ne sont qu'en petite quantité, mais en dehors de lui, éliminées en même temps que les excréments. Elles n'ont pas le temps de se reproduire dans l'intestin, car les chauves-souris émettent ces déjections très souvent, grâce à quoi leur intestin est toujours nettoyé par un procédé tout mécanique. Ce dernier fait a été démontré par Metchnikoff [8] dans ses expériences sur les Pteropus medius : ayant mélangé à leur nourriture une culture de Bac. prodigiosus, Metchnikotf trouvait au bout de trois heures dans les excréments des chauves-souris ces bactéries tout à fait vivantes, mais deux ou trois heures après on ne les décelait plus : le Bac. prodigiosus disparaissait complètement des intestins. Je passe maintenant à la description du tableau microsco- pique des excréments des chauves-souris, observé par moi. Ce sont les résidus de la nourriture non digérée qui sautent tout d’abord aux yeux dans des préparations étalées : des têtes d'insectes mangés, des parties de pattes rongées, des ailes, parfois une cuisse entière, la poussière des ailes des papillons très souvent, etc. (Planche XII, fig. 1). Presque pas de bactéries; rarement quelques cocco-bacilles, qui ne se colorent pas par la méthode de Gram et rappellent le Bact. coli commune (Plan- che XIE, fig. I); on trouve également un autre bäâtonnet, ne se colorant pas non plus par le Gram, mais un peu plus gros que le Bact. coli commune. Nous parlerons plus bas de ces bâtonnets. J'ai étudié en tout 19 chauves-souris appartenant aux espèces déjà mentionnées et en outre les chauves-souris grises ordi- paires, qui se tiennent habituellement près de l’eau. Le tableau microscopique du contenu intestinal de ces diverses espèces n'offre pas de différence : partout le mème tableau, décrit ci-dessus. Dans les cultures obtenues par l’ensemencement des matières fécales,on a obtenu le Bact. coli commune dans tous les cas sans exception. On isolait en même temps habituellement le Bac. prodigiosus, ensuite uu petit bâtonnet appartenant au groupe SUR LA FLORE INTESTINALE DES CHAUVES-SOURIS 445 des bâtonnets pseudo-diphtériques ; la sarcine jaune, le coccus orangé et un pelit bâtonnet, qui sécrète un pigment vert, se rapprochant de près par ses propriétés du Bac. pyocyanique et du bacille fluorescent liquéf. ; mais il n’est pas identique : il s’en distingue par la température optima de son développement et, notamment, se développe le mieux à la température de la chambre, tandis qu'à 37 degrés il pousse très lentement el n élabore pas de pigment ; il n’est pas pathogène. Des recherches ultérieures doivent nous démontrer si cette bactérie constitue une espèce nouvelle, ou si elle n’est qu'une variété physiolo- gique des bâtonnets qui nous sont déjà connus. On à isolé aussi fréquemment, presque dans tous les cas, des moisissures habituelles : Mucor, Aspergillus. Omettant la description des bactéries isolées bien connues, je ne m'arrêterai que sur celles qui offrent un intérêt spécial. Dans le nombre des bactéries isolées, deux sont particuliè- rement intéressantes : 1° L'une d'elles, le bétonnet brun, a été obtenue d'une g rosse espèce des chauves-souris, Myotis Daub. (Fig. 1, ci-après). J'ai eu trois exemplaires de cette espèce et, à chaque ensemencement du contenu intestinal, j'ai constaté ce mème bâtonnet. Au bout de huit à dix heures, la gélose sur laquelle était fait l'ensemencement brunissait déjà dans toute son épaisseur; il se formait en outre à sa surface un enduit blanc sale, qui brunissait aussi avec le temps. C'est de cet enduit qu’on a isolé une culture pure du bâtonnet brun. Ouant aux caractères morphologiques, c'est un bâtonnet assez mince, qui, parfois, se groupe par deux, comme le diplo- bacille, parfois se dispose parallèlement en deux ou plusieurs rangées. Il s'allonge quelquefois en des filaments assez longs; il se caractérise par une motilité énergique; les bactéries s’élancent dans tous les sens du champ visuel, donnant l'impression d'un vol rapide ; il se colore bien avec les cou- leurs d’aniline habituelles, mais tous les individus ne se colorent pas unifor- mément, certains se colorent mieux aux pôles; il ne prend pas le Gram, ne forme pas de spores; c'est un anaérobie facultatif; il pousse bien dans tous les milieux nutrilifs ordinaires. Il trouble uniformément le bouillon, qui prend un aspect sale el devient foncé au bout de quelque temps. Il se forme un dépôt épais au fond, une pellicule friable à la surface; sur la gélose, il se forme le long de la strie un enduit blanc, qui brunit, le troisième, quatrième et quelquefois le second jour ; la gélose tout entière prend une teinte brune, qui devient avec le temps de plus en plus intense. Il liquéfie très rapidement et énergiquement la gélatine, d'abord en forme d'entonnoir, le long de la piqûre, et plus tard complètement dans tout le tube; on observe dans ce cas au fond un dépôt épais, tandis que la gélatine reste transparente. Sur la pomme de terre, au bout de vingt-quatre heures, ce bâtonnet forme un enduit brun-rouge ; avec le temps, il devient plus abondant et d’une couleur plus #46 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR intense. Il coagule le lait, le coagulum tombe au fond, et on voit à la surface une grande quantité de sérum de lait transparent. La culture dégage une odeur d'acide butyrique. Ce bâtonnet forme de l’indol dans l’eau peptonée et dans le bouillon; il pousse abondamment dans le bouillon additionné d'un morceau de blanc d'œuf coagulé: il peptonise énergiquement l'albumine, qui se détruit rapidement. Sur la gélatine les colonies ont une forme ronde avec les bords plats; elles se liquéfient rapidement, et,le troisième jour, la plaque entière est liquéfiée. Sur la gélose, les colonies n'offrentrien de caractéristique : elles sont rondes, à bords plats, le centre plus dense que les bords, teintées de brun. La plaque tout entière brunit. Quant à ses propriétés fermentatives par rapport aux différents hydrates de carbone, ce bâtonnet fait fermenter le glucose, le fructose, le galactose, le maltose, la mannite et la dextrine, Fic. 1. — Le bacille brun. Culture de 20 heures sur gélose. Coloration à la fuchsine diluée. Gross.1.500 fois. mais il ne décompose pas le saccharose et le lactose, ce qui prouve l'absence des ferments correspondants : l'invertine et la lactase. Au cours de son déve- loppement dans les milieux hydrocarbonés indiqués, auxquels on ajoute de la teinture de tournesol, on observe une propriété réductrice de ce bâtonnet : le tournesol se décolore douze heures après l'ensemencement; il revient ensuite à sa première couleur bleue. Le tournesol reste invariablement bleu dans les tubes de lactose et de saccharose, rouge vif dans tous les autres, la dextrine exceptée; au bout de vingt-quatre à trente-six heures, la dextrine se décompose faiblement et le milieu prend une couleur violacée. Ce bâtonnet ne forme pas de gaz, et, dans le milieu de Rothberger (gélose sucrée teintée de rouge neutre), ne change presque pas de couleur. Il possède des pro- priétés pathogènes pour les animaux : quand on inocule sous la peau d'un cobaye 1/2 cent. cube d’une culture en bouillon, l'animal est tué dans l’es- pace de dix-huit heures. On constate à l’'autopsie un fort exsudat dans la cavité abdominale. L'analyse microscopique y décèle, ainsi que dans tous les organes, la présence des bàtonnets en question; l'ensemencement du sang du cœur donne un développement abondant de ce même bâtonnet. SUR LA FLORE INTESTINALE DES CHAUVES-SOURIS 447 En examinant la littérature bactériologique dans le but d'identifier le bâtonnet qui nous occupe, on ne peut pas ne pas noter ses rapports étroits avec le bâtonnet brièvement décrit par Matchek en 1887 et isolé par lui de l’eau. L'auteur fait observer, 1l est vrai, que son bâtonnet avait de petites spores étroites, qui se coloraient faiblement, mais il est possible qu'il ne s'agissait que de la coloration inégale des bâtonnets, d'autant plus que l’auteur ne dit rien de leur résistance à une température élevée. Dans nos expériences, le chauffage des cultures de cette bactérie dans un bain-marie les tuait complè- mr Ferne PS if é n] 3 D /É%e . + 1e ; An ES PE æ— °°, - Le ce e LS és 2 RS \, (ee ° F4 % ja s l'E + ” | Sr Fi e L 2 .<* i +. *, e g: ss 14 } Ù } À - -… ä \ æ p: pa \e [7 L - ® - t % C2 4 + t \ = à ? e y e ? ‘5 La - œ LA & 8 ° F . : - gs $ [24 NN ve, s \ .* > * * 4 b : Hé °” te LS 6 de: t pd FiG. 2. — Le bacille fétide. Culture de 20 heures sur gélose. Coloration à la fuschine diluée. Gross. 1.500 fois. tement au bout d'une demi-heure à 80 degrés et au bout de deux heures à 60 degrés. De plus, en étudiant les cultures de ce bâtonnet à l’état vivant, je n'ai jamais pu voir le tableau habituel des spores vivantes non colorées sous forme de petits corps brillants, réfractant fortement la lumière. 2° Le bätonnet fétide : c'est un bâtonnet court et épais, peu mobile, se disposant par deux et en amas. On trouve quelque- lois des exemplaires plus longs (Fig. 2). Il ne forme pas de spores, ne prend pas le Gram, se développe abondam- ment dans tous les milieux nutritifs en donnant lieu à une forte odeur très désagréable, qu'on sent à distance. Il est possible que la mauvaise odeur des excréments des chauves-souris, dont parlent les travaux des zoologistes, doive son origine à la présence de ce bâtonnet. Cette odeur, très forte au 448 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR moment où l’on isole le bacille fétide de l'intestin, faiblit avec le temps. C'est un anaérobie facultatif. Sur la gélose, il forme de grosses colonies rondes, irisées au bord. Sur gélatine les colonies sont rondes aussi avec un centre nettement marqué, autour duquel se forme bientôt la zone de liquéfaction. Les bords sont plats et bien découpés. Les cultures obtenues de ces colonies se développent abondamment dans tous les milieux nutritifs : sur la gélose, en enduit abondant, friable et bril- lant; les jeunes cultures sont fortement irisées. Le bouillon se trouble unifor- mément et il se forme au fond un dépôt; la gélatine se liquéfie rapidement, mais au fond du tube il reste assez longtemps une partie de la gélatine non liquéfiée. La partie liquéfiée se trouble fortement. Le lait se coagule en formant de l'acide butyrique. Le développement sur pomme de terre prend l'aspect d'un enduit épais, blanc et brillant. Dans le milieu de Rothberger et Omeliansky, le bacille fétide dégage du gaz. Dans le bouillon auquel on a ajouté du blanc d'œuf cuit, il pousse abondamment, mais n'attaque pas le blanc d'œuf. Le bâtonnet ne possède aucune propriété pathogène et, inoculé sous la peau d’un lapin ou d’un cobaye, à la dose de 1/2 à 1 cent. cube, il ne provoque aucun phénomène local ou général. En ce qui concerne son action sur les hydrates de carbone, il fait fermenter énergiquement le glucose, le fruclose, le levulose, le galactose, le maltose et la mannite; quant au saccharose et à la dextrine, les milieux nutritifs qui en contiennent, teintés avec la teinture de tournesol, prennent une couleur violacée pendant le développement de cette bactérie. La flore intestinale anaérobie des chauves-souris, se distingue également par une pauvreté extrême. Dans certains cas l’on n’a pas trouvé du tout d'anaérobies stricts. En terminant la première partie de ce travail, concernant la population bactérienne des chauves-souris insectivores, je ne puis passer sous silence le fait suivant : comme nous l'avons déjà dit plus haut, Metchnikoff et Distaso ont constaté une grande pauvreté de la microflore intestinale des chauves- souris frugivores. Les résultats ci-dessus exposés de notre travail amènent à la conclusion que tout aussi pauvre est la population bactérienne des chauves-souris insectivores. Ce fait ressort avec plus de relief encore, si on le rapproche des recherches que j'ai faites sur quelques musaraignes (Sorex araneus, Sorex minuta) dont, contrairement aux chauves- souris, le tube digestif possède un gros intestin, bien déve- loppé, et un cæcum. Les musaraignes sont aussi au nombre des insectivores et peuvent, par conséquent, par le genre de leur nourriture, être comparées aux chauves-souris étudiées par moi. Cependant leur flore intestinale est plus abondante et plus variée. Les préparations mieroscopiques seules le prouvent déjà suffisamment. J'espère pouvoir prochainement fournir des données plus complètes sur la composition de la microflore SUR LA FLORE INTESTINALE DES CHAUVES-SOURIS 449 intestinale de ces insectivores et de certains autres. Pour le moment, je me bornerai à enregistrer ce fait incontes- table. En comparant les musaraignes aux chauves-souris au point de vue de la population microbienne de leur intestin, nous obtenons la confirmation des idées de Metchnikoff sur le rôle décisif que joue le gros intestin dans le développe- ment de la microflore intestinale. Les expériences décrites cei- dessus prouvent en outre, une fois de plus, que l’absence des bactéries dans l'intestin n'apporte aucun trouble dans la vie des êtres même aussi hautement organisés que le sont les mammifères. Les chauves-souris, ainsi que les musaraignes, dont je me suis servie pour mon travail, m'ont été obligeamment fournies par S. J. et W. J. Ogneff, auxquels j'exprime à ce sujet ma sincère reconnaissance. BIBLIOGRAPHIE . CuHoukEewiTcH. — Annales de l'Institut Pasteur, 1911 et 1912. . BARIKINE. — Journal médical de Charko/ff, février 1913 (en russe). . Mercanixorr el Disraso. — Annales de l'Institut Pasteur, 1909, n° 12. . EImEr. — Virchow's Archiv für pathologische Analomie,t. XLVIIT, f. 1, p. 151. . Metcanixorr. — Essais optimistes, p. 108-111, 1907. BERTARELLI. — Centr. f. Bakleriologie, ! Abt. Avril 1913. . Breum. — Les Vertébrés. Vol. X. Dernière édition, 1913. . MercaniKkorr. — Annales de l'Instilul Pasteur, 1909, p. 953. I OO CE À © ND — (o) EXPLICATION DE LA PLANCHE XIII F16. [. — Contenu de l'intestin grêle de la chauve-souris. Fic. II. — Contenu du gros intestin avec quelques bactéries et les restes de nourriture. INFLUENCE DU MODE DE PÉNÉTRATION CUTANÉE OU BUCCALE DU « STEPHANURUS DENTATUS » SUR LES LOCALISATIONS DE CE NÉMATODE DANS L'ORGANISME DU PORC ET SUR SON ÉVOLUTION par P. Noez BERNARD et J. BAUCHE (Travail des laboratoires de Hué et du laboratoire de M. Mesnil, à l’Institut Pasteur) (1). (Avec la planche XIV.) Depuis que l’anémie des mineurs en Europe et certaines anémies pernicieuses des pays chauds sont considérées comme des affections vermineuses provoquées par Ankylostomum duodenale (Dubini, 1843) et Necalor americanus (W. Stiles, 1902), la biologie de ces vers est l’objet de nombreuses recherches. Tout d'abord, on admet, après Perroncito, que les œufs de ces parasites évoluent dans le milieu extérieur jusqu’au stade de larve strongyloïde enkystée, et que ces larves s’introduisent par la voie buccale dans le tube digestif de leur hôte pour achever leur évolution. En 1886, Leichtenstern |7] établit, par une série d'expériences d'ingestion de larves d'ankylostome que, la contamination peul se faire par la bouche. En 1908, Looss apporte la preuve de la pénétration des larves d'Ankylostomum duodenale à travers la peau saine de l’homme et du chien. Les larves pénètrent, grâce à leurs mouvements actifs, par les points de clivage des couches épidermiques en voie de desquamation et par les follicules pileux. Elles gagnent les lymphatiques, les ganglions, le canal thoracique et les veines qui les portent au cœur droit. Arrivées dans le poumon, elles traversent les parois des alvéoles, remontent dans la (1) Nous remercions MM. Railliet et Henry de l'accueil si bienveillant qu'ils nous ont fait dans leur laboratoire et des documents qu'ils ont mis si large- ment à notre disposition. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 451 trachée et passent dans l’æsophage. Elles se rendent enfin dans l'intestin où elles atteignent l’état adulte. Looss 8] réfute (1908-1911) les objections de Leichtenstern (1898), de Sandwith, de Pieri et de Grassi (1902) qui se pro- noncent pour le mode unique de pénétration buccale. Ses expé- riences sont reprises soit sur l'homme, soit sur le chien et le cobaye avec Ankylostomum duodenale et Ankylostomum caninum. Elles sont confirmées par Bentley (1902), T. L. Bancroft (1902), De Ménézès (1904), Schaudinn (1904), Lam- binet (1905), Herman (1905), Calmette et Breton (1905), Tenholt (1905), Boycott (1905), Brunn et Müller (1905), Lief- mann (1905), Pieri (1905), Alessandrini (1905), Smith (1905), Schüffner (1905)et par Ahsford, King et Gutierrez (Commission de l’anémie de Porto-Rico) (1906) (1). Van Durme|1#4}, en 1902, obtient l'infection de singes par la voie cutanée avec des larves de Strongyloïdes parasites de cet animal. Vittorio Marzocchi [9] (1907) constate la pénétration de larves d’anguillules provenant d’un cas d’anguillulose infantile et d’anguillulose du lièvre jusqu'à la couche de Malpighi de la peau de l'oreille d’un lapin. Katsurada et Hashegawa [5] réussissent (1910) à infester du trématode Schastosomum japonicum une chatte et un chien provenant de régions où le parasite est inconnu, en les plaçant dans une eau de rizière riche en miracidia de Schistosomum. Yonegi Miyagawa [15] obtient (1913) des résultats identiques. I] constate la présence de larves de trématodes dans les espaces conjonctifs de la peau et les voies lymphatiques. La pénétralion culanée des larves de certains vers à travers la peau saine est donc considérée comme un fait définitivement acquis. Mais l'accord n'est pas établi sur l'importance relative des deux modes de pénétration par la bouche et par la peau. Un grand nombre d'auteurs pensent que l’eau de boisson, les légumes crus, les mains souillées de terre contenant des larves, les insectes qui se posent sur les aliments, l'air chargé de larves dans les galeries des mines réalisent les conditions naturelles (1) Les références bibliographiques complètes de ces divers travaux se trouvent dans l'index bibliographique de la publication de Looss [$(2)|. 452 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR les plus favorables au transport des parasites dans la bouche et le tube digestif. Looss soutient, au contraire, que la péné- tration cutanée n’est pas une simple possibilité, qu'elle est le mode d'infection le plus facile et le plus fréquent. Les larves peuvent pénétrer par toutes les parties de la surface de la peau sauf, peut-être, par la paume des mains et la plante des pieds; les œufs d’ankylostome n’éclosent que dans des condi- tions déterminées d'humidité et de température; ces conditions sont réalisées précisément aux pays chauds dans les terres de culture, en Europe dans les mines, où les travailleurs incom- plètement vêtus sont exposés au contact prolongé des boues contaminées. Nous avons étudié à Hué (Annam), le Stephanurus dentatus Diesing, 1839, parasite du porc. Ce nématode nous a donné les moyens de rechercher expérimentalement quelle est l'importance relative, pour son évolution, de la pénétration cutanée ou buccale des larves dans l'organisme de leur hôte. Le Sfephanurus dentatus siège principalement dans le tissu adipeux qui enveloppe les uretères et les reins. Il se rencontre dans le foie avec une fréquence variable suivant les pays d'élevage et dans les autres viscères tout à fait exceptionnel- lement. L — « STEPHANURUS DENTATUS » DIESING 1839 RÉSUMÉ HISTORIQUE ET MORPHOLOGIQUE Ce parasite a été l’objet de nombreuses publications. Il est décrit pour la première fois par Diesing [2] (1839) sur des échantillons prélevés par Natterer, au Brésil, sur les pores de race chinoise. Verrill (1870), ignorant les recherches antérieures, décrit, sous le nom de Sc/erostoma pinquicola, un nématode envoyé de New-Haven et de Middletown (Etats-Unis), qui n’est autre que le Stephanurus dentatus, de Diesing (1). Flechter (1871) attribue à ce nématode la mortalité considé- rable que le hog-choléra produit sur les porcs d’Indianopolis (Etats-Unis). (1) Les références bibliographiques des travaux sur le Sfephanurus dentatus Jusqu en 1899 se trouvent dans le mémoire de L. Tayler [13]. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 433 Morris, la même année, observe à Sydney (Australie) le même parasite et, sans connaître l'opinion de Flechter, lui altribue les ravages d’une « mysterious disease » qui sévit sur les porcs. A Saint-Louis (Etats-Unis), 1874, Dean précise la présence du Stephanurus, qu'il désigne sous le nom de Strongylus dentatus, dans les couches adipeuses périrénales et périurété- rales et exceptionnellement dans les autres organes. Il trouve les œufs dans le bassinet, l’uretère et l'urine. Mais il échoue dans la culture des œufs et, ne rencontrant dans les lésions que des parasites adultes ou à un degré d'évolution avancée, il admet que le développement de l'embryon doit se faire dans l'organisme d'un hôte intermédiaire. Dinwidie (1892) à Arkansas, Lutz, au Brésil, estiment que l'importance des dommages que cause ce nématode se borne à la dépréciation, pour la consommation, des organes infestés. Bancroft (1895) confirme sa présence en Australie et Maga- Ihaès (1894) à Sao-Paulo (Brésil). Louise Tayler [13] (Washington, 1899) signale la possibilité de cultiver les œufs recueillis dans l'urine et d'observer les premiers stades de l’évolution des larves. L'hypothèse de la transmission du parasite de l'animal infecté à l’animal sain, par l’eau et les aliments souillés de larves, lui parait très vraisemblable. Z. Hellmans [3] (1911) étudie le Stephanurus à Java ei Sumatra. Il confirme l’éliminalion des œufs par les urines. T. H. Johnston [4] (1912), au Queensland (Australie), n'a trouvé dans le foie que des formes immatures. Dans un mémoire (1912) sur l'élevage et les animaux domes- tiques au Dahomey, G. Pécaud [10] fait une étude clinique précise de la stéphanurose très répandue dans ce pays. En outre des lésions autour de l’uretère et des reins, il décrit la localisation constante du parasite dans le foie, et sa présence tout à fait exceptionnelle dans le poumon, la rate et les reins. Il confirme l'expulsion des œufs avec l'urine. « Les embryons, ajoute l’auteur, doivent être ingérés avec les aliments que le porc trouve dans la terre. Arrivés dans le tube digestif, ils doivent le traverser facilement et passer dans le système porte. Dans le foie, ils se logent à l'extrémité des ramifications san- 45% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR guines et subissent là une dernière mue, à la suite de laquelle ils prennent les caractères sexuels et s'enkystent. Quelques-uns arrivent cependant à percer la paroi du kyste et tombent dans la cavité abdominale où ils vont s’accoupler et se loger dans la graisse qui entoure les uretères ». G. Pécaud, sur le travail’ duquel nous reviendrons, rapporte que Roubaud a trouvé des Stephanurus sur. les pores du Congo à Brazzaville (1). Ce vers désigné sous le nom de Stephanurus dentarus Diesing, 1839, Sclerostoma pinquicole Werril 1870, Stephanurus Nat- tereri Cobold, 1879, appartient à l'ordre des Nématodes, à la famille des Strongylidés, à la sous-famille des Strongylinés. Les échantillons recueillis en Annam répondent à la descrip- tion suivante : Vers cylindrique méromyaire de consistance molle, de couleur gris bleuâtre à l’état frais, blanchâtre après conservation dans le formol, à cuticule mince, transparente, finement striée transversalement, à stries espacées de 10 à 11y. dans la partie moyenne du corps et de 8 à 9u aux extrémités. Bouche orbicu- laire large de 250 y, entourée de six papilles dont deux latérales plus grosses et submédianes. Capsule buccale cyathiforme, à bord antérieur découpé en six festons, large de 250 y environ, profonde de 210 &. Deux glandes céphaliques volumineuses s'étendent en arrière jusqu'à 14 millimètres de la bouche. OEsophage en forme de massue à peu près sembiable dans les deux sexes, long de 1.700 à 1:800v, présentant un premier segment correspondant au manche de la massue, long de 400 à 450 y, large de 200 & environ et un second segment large de 600 à 650 y dans sa partie moyenne. Intestin débutant par une région moniliforme formée de trois renflements successifs et se continuant par une partie tubulaire beaucoup plus longue que le corps et obligée de décrire de nombreuses circonvolutions (fait exceptionnel parmi les nématodes). Cet intestin ne contient pas de sang. Mae. — Long de 2 cent. 50 à 3 centimètres, épais de 1nm10 à 1mm3{, Bourse caudale formant une collerette dentelée sans membrane développée el comportant des côtes courtes et difficiles à observer: les antérieures fendues, les antérieures externes Simples, les moyennes fendues, les postérieures externes naissant isolément, les postérieures tridigitées. Deux spicules égaux, longs de 1 millimètre, cylindriques ailés et striés transversalement. Femezce. — Longue de 28 à 30 millimètres, épaisse de 1""50 à 2“#90. Extré- mité caudale munie d'un appendice digitiforme, long de 430 & et large de 270 y à sa base et de deux grosses papilles latérales hémisphériques placées un (4) Les travaux de Diesing (1839, 1845, 1851), de Dujardin (1845), de J. C. White (1858), de Molin (1861), de Carus (1863), de Werrill (1870), de Cobbold (4871-1879), de Lutz (1886), de Zurn (1882), de Leuckart (1886), de Neumann (1838), de Stiles et Hassall (1894), Magalhaëès (1896), Word (1895), analysés par Louise Tayler [13], de Railliet [14 et 12; (1886-1896) discutent les caractères morphologiques du parasite et sa place parmi les nématodes. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 455 peu en arrière du nivean de l'anus. Anus et vulve située respectivement à 300 y et 1.250 de la pointe caudale. Vagin très court, une branche de l'utérus dirigée en avant, l'autre en arrière mais ne tardant pas à décrire une boucle pour revenir en avant. OEurs. — Ovoïdes, long de 90 y, larges de 65 à 70 y (dans le formol), pondus à un stade avancé de segmentation. IT. — LÉSIONS DÉTERMINÉES PAR LA MALADIE NATURELLE Nous avons observé le Szephanurus sur 34,6 p. 100 des porcs abattus pour la consommation. Sur 100 animaux infectés, le parasite se trouve cent fois autour des uretères et des reins, quatre fois dans le parenchyme hépatique. Sa présence dans le poumon est extrêmement rare. Nous ne l'avons rencontré ni dans la rate, ni dans les autres viscères. Les animaux parasités ne se distinguent des animaux sains par aucun symptôme apparent. Les porcs sont abattus d’ordi- naire à un âge qui varie entre six mois et deux ans. A l'ouverture du cadavre, l'aspect général des muscles, de la graisse est normal. L'attention est attirée tout d’abord par l'épaississement des masses cellulo-adipeuses qui entourent les uretères et les reins, surtout du côté gauche. Au toucher, on sent à travers la graisse de petites masses plus consistantes donnant la sensation de minces cordelettes. Dans les cas d'infection massive, le tiers supérieur de l’uretère, le rein, les capsules surrénales constituent une même tumeur adipeuse, mamelonnée. Lorsqu'on incise la tumeur elle apparaît creusée de cavités irrégulièrement disséminées dans la masse. Chacune d’entre elles contient deux vers, plongés dans un liquide visqueux de couleur verdâtre. Quelques-unes sont vides. Les parasites sont groupés par couples, mâle et femelle. Les femelles sont bourrées d'œufs. Une section longitudinale depuis le bassinet jusqu’à la vessie montre que l’uretère est en quelque sorte l’axe de la masse hypertrophiée qui s’est développée aux dépens du tissu cellulo-adipeux périurétéral. La muqueuse de l’uretère est soulevée dans le tiers supérieur du conduit par de petites saillies qui présentent, en leur centre, un pertuis très fin (Fig. 1, ci-après). Un stylet introduit dans chacun d'entre eux pénètre dans une des cavités kystiques qui, toutes, commu- niquent ainsi librement par un canalicule avec la lumière de RS [2] Fic. 1. — Aspect macroscopique des lésions péri-urétérales, provoquées par S'ephanurus dentatus : a, rein; 6, tumeur incisée longitudinalement : on aperçoit sur la ligne médiane des saillies de la muqueuse, orifices des cana- licules qui font communiquer l’uretère et les cavités où sont logés les parasites ; €, urelère normal. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 457 l’uretère. Quelquelois, un parasite est à demi engagé dans ce canalicule. L’urine de la vessie contient un très grand nombre d'œufs. L'examen des urines des porcs vivants permet de faire le diagnostic de la maladie. La centrifugation de l'urine de LA animaux a donné 141 fois des œufs au stade de morula parmi lesquels se trouvaient, 3 fois, des embryons fraichement éclos. Quand le tissu cellulaire périrénal est envahi, dans les cas les plus accentués, tout autour de la capsule fibreuse l’atmo- sphère celluleuse est creusée de cavités qui contiennent des parasites el une substance crémeuse verdâtre. La capsule fibreuse reste intacte et il n'y a pas de communication entre les cavités purulentes et le parenchyme rénal. Quatre sur cent des animaux porteurs de lésions rénales présentent en même temps des lésions hépatiques. Le foie congestionné pèse parfois le double de son poids normal. La surface est marquée de nodules blanchâtres variant de la dimen- sion d'une lentille à celle d'un gros haricot. La section de ce tissu, de consistance fibreuse, met en liberté un parasite à un stade plus ou moins avancé de son évolution. Ce parasite est toujours unique. Si on pratique sur la masse de l'organe de larges incisions, la coupe montre un tissu congestionné, sillonné par endroits de bandes fibreuses. Dans les cas les plus graves, au niveau du hile du foie, la veine porte est enserrée dans un paquet de ganglions tuméfiés, ramollis. Les parasites recueillis dans le foie et la veine porte ne contiennent jamais d'œufs. L'examen des fèces n’a permis dans aucun cas de déceler la présence d'œufs dans le tube digestif. Dans le poumon nous avons, tout à fait exceptionnellement, rencontré un parasite isolé et incomplètement évolué. Les autres organes nous ont toujours paru indemnes. La viande des animaux abattus est très saine. Seuls les organes infectés sont rejetés de la consommation. La bénignité relative de la stéphanurose à Hué contraste avec la gravité de cette affection dans certains pays. Pécaud notamment insiste sur la cachexie profonde des pores du Dahomey, où les lésions hépatiques sont aussi fréquentes que les kystes péri-urétéraux. Ce pouvoir pathogène du Stephanurus paraît lié à l'importance de sa localisation dans le foie. S'il est 31 158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR vraisemblable d'admettre que les vers qui se développent très exceptionnellement dans le poumon ou la rate sont des «parasites erratiques », il semble bien que leur localisation dans le foie et autour de l’uretère doit être subordonnée à des influences précises. La reproduction expérimentale des diverses formes de l'infection pouvait seule permettre de les déterminer. III. — INFECTION EXPÉRIMENTALE A. — CULTURES DES LARVES. Les œufs sont recueillis par centrifugation de l'urine prélevée dans la vessie. [ls sont mis en incubation dans des boîtes de Petri contenant une mince couche d'urine additionnée de noir animal, suivant le principe de Looss, mais dans des conditions telles que la pâte soit très fluide. Les boîtes sont maintenues à une température oscillant entre 25 et 35 degrés. Dans la vessie, les œufs ont de 100 à 120 & de long sur 55 p de large. Quelques heures après leur immersion dans le milieu de culture, on voit dans l'œuf, qui mesure de 125 à 1284 de long sur 60 y de large, l'embryon mobile décrivant des 8 de chiffre. L'embryon sort de l'œuf en moyenne après vingt-quatre heures d'incubation. À ce moment il a une forme cylindrique, amincie à l'extrémité antérieure et effilée en alène à l'extrémité postérieure. Il mesure 500 y de long sur 324 de large. Le corps est granuleux dans ses deux tiers postérieurs et plus clair dans son tiers antérieur. La bouche est orbiculaire (4 à 5 u de diamètre). Le pharynx, cylindrique, long de 10 à 14w et large de 2 à 3u,est muni à sa partie antérieure de 2 petites dents chitineuses de forme linéaire. L'œsophage présente sur sa longueur, de 140 à 150 y, deux bulbes dont l’un a 8 à 10y de large et le second de 12 à 15 y. L'intestin, filiforme, décrit des sinuosités jusqu'à 110 à 120 y. de l'extrémité caudale où se dessine l'anus. Environ cinq jours après l'éclosion, la larve mue et se transforme en larve strongyloide enkystée. Elle mesure dans sa gaine 600 y de long et 40 y de large. La gaine dépasse l'extrémité antérieure de quelques y et l'extrémité postérieure de 50 à 70 p. La bouche, orbiculaire, infundibu- liforme, se continue par un œsophage de 435 à 140 & de long terminé par un bulbe allongé de 20 y de large. L'intestin, sinueux, se déroule dans la cavité générale bordée par des cellules granuleuses régulières jusqu’à l'anus, situé à 50p de l'extrémité postérieure. Cette extrémité ne se termine plus en alène, mais en tronc de cône allongé. Sous cette forme enkystie, la larve peut rester vivante dans le milieu de culture plus de 50 jours. Que l'enkystement soit récent ou ancien, dès que l'on dépose une goutte de culture sur la peau du porc, les larves reprennent une grande mobilité et se groupent au point d'émergence des poils. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 459 B. — DisPosiTiF DE L'EXPÉRIENCE. Pour étudier les modes de pénétration de ces larves dans l'organisme de leur hôte, trente porcelets, âgés de deux à trois mois et isolés dès l’âge de un mois, ont été soumis à l’expéri- mentalion suivante : 1° Un premier groupe de six animaux fait deux à six repas infectants composés de riz cuit additionné d’une culture riche de larves. Ces animaux sont isolés dans des cages élevées au- dessus du sol, sur litière sèche, dans des conditions telles que la contamination par la peau ne soit pas possible; 2 Un deuxième groupe de neuf porcelets est exposé à la pénétration cutanée. Des cultures âgées de douze à trente-cinq Jours sont étalées deux heures par jour pendant quatre à six jours consécutifs sur l'abdomen et les flancs de l'animal immo- bilisé. A la fin de chaque opération, la région badigeonnée est lavée largement pour que l'animal ne puisse, en aucune façon, introduire dans la cavité buccale les larves collées à la surface de la peau. Il est isolé; 3° Les quinze animaux qui restent sont conservés comme témoins. Toutes précautions sont prises pour qu'ils soient soustraits à des contaminations accidentelles. Parmi les quinze témoins, abattus après trois, six, douze mois, treize sont absolument sains. Les deux autres présentent sur l'uretère gauche un noyau de petit volume contenant quelques parasites adultes. Ces deux sujets ont été vraisembla- blement contaminés avant leur isolement. Mais leurs lésions légères contrastent avec l'importance des kystes volumineux dus à l'infection expérimentale. C. — PÉNÉTRATION PAR LA VOIE DIGESTIVE. Sur les six porcelets du premier groupe, deux sont sacrifiés un mois après l'ingestion. Reins et uretères sont indemnes. Le foie présente des lésions au début. Les quatre autres suc- combent de quatre-vinget-dix à cent jours après les repas infec- tants. Ils sont porteurs de lésions hépatiques massives. Les reins et les uretères sont absolument sains. Les caractéristiques 460 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR macroscopiques sont les mêmes que dans la maladie naturelle. Elles ont été décrites plus haut. Au point de vue microscopique, les lésions portent d’abord sur le parenchyme. Le lobule est le siège d'une hémorragie qui infiltre la masse des cellules hépatiques. Dans les lobules les moins atteints, on aperçoit encore une bande de cellules saines sur le pourtour des travées conjonctives qui limitent le lobule. Parfois l’extravasalion sanguine intéresse plusieurs lobules en même temps: Dans l'intérieur de certains d’entre eux se trouve un parasite jeune, dont la plus grande circon- férence a un diamètre de 350 à 400 w. La veine centrale du lobule n’est plus visible. Les canalicules biliaires, les vaisseaux portes, les veines sus-hépatiques, l'artère hépatique sont sains (Planche XIV, fig. 1). A un stade plus avancé, d'une part le tissu conjonctif se substitue progressivement au parenchymeé intralobulaire, d'autre part la gaine conjonctive qui entoure le lobule s’infiltre - de cellules conjonctives embryonnaires. Les deux processus évoluent parallèlement, tendant à transformer le parenchyme du lobule autour du parasite en une loge fibreuse dans laquelle le parasite sera enfermé, et à épaissir les travées conjonctives périlobulaires des lobules voisins. Dans les espaces de Kiernan, les veines et les canalicules biliaires sont entourés de cellules embryonnaires. Mais leurs tuniques restent indemnes et leur épithélium est intact. Au contraire, ces mêmes cellules infiltrent les veines sus-hépatiques. L'endothélium tombe, s'épaissit par la pénétration de leucocytes et de cellules con- jonctives hyperplasiées qui oblitèrent la lumière du vaisseau. L'épaississement inflammatoire s'étend aux tuniques du vais- seau, qui sont dissociées. Dans quelques lobules, des travées conjonctives partent de la veine centrale pour aboulir à la gaine périlobulaire. Les noyaux des cellules conjonctives, moins nombreux dans ces travées autour de la veine centrale, semblent indiquer que sur ce point le tissu de néoformation est plus ancien et que, par suite, ce vaisseau à élé le point de départ de la prolifération conjonc- tive. Le tissu fibreux prend donc à la fois les dispositions annulaire et intralobulaire. Peu à peu la cirrhose gagne les lobules MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 461 voisins. Le parenchyme et les vaisseaux disparaissent dans la masse compacte des fibres conjonctives. Des nodules embryon- naires apparaissent dans les espaces portes. Au centre des régions hépatiques le plus profondément allérées, on trouve dans la masse du tissu sclérosé, où persistent à peine quelques îlots de cellules hépatiques, des Sfephanurus incomplètement évolués, isolés les uns des autres, dans d’étroitesloges fibreuses. Le foie, augmenté de volume, est donc atteint de cirrhose hypertrophique due aux actions mécanique, irrilative et toxique exercées par le parasite (Planche XIV, fig. 2). L'examen clinique et l'étude des lésions macroscopiques et microscopiques nous permetient de donner une interprétation des faits observés : la larve du Stephanurus, qui a passé par le tube digestif et la veine porte, a suivi les ramificalions des vaisseaux portes jusqu'à leur terminaison soit dans les capil- laires des lobules hépatiques, soit dans la veine centrale. Arrèlée, peut-être mécaniquement, par le calibre de ces petits vaisseaux, elle a pénétré activement dans le parenchyme lui- même, où elle a évolué vers l’état adulte. Les réactions qu'elle provoque dans la glande hépatique ont immobilisé le parasite, l'ont isolé et le condamnent à disparaître dans Le tissu conjonctif envahissant, si l'animal parasité résiste longtemps à l'infection, à mourir avec son hôte, si celui-ci succombe. La localisation du S/éphanurus dentatus dans le foie com- promet done la vie du pore et ne permet dans aucun cas la conservation de l'espèce du parasite. D. — PÉNÉTRATION PAR LA VOIE CUTANÉE. Deux porcelets du second groupe sont abattus après deux mois d'observation. Ils n'ont pas de lésions hépatiques, mais leur uretère gauche est parasité. Les sept survivants se déve- loppent normalement. Ils sont sacrifiés onze et douze mois après les essais d'infection. Aucun d’eux n'a de lésions du foie. Tous sont porteurs de lésions massives périrénales et péri-uré- térales. À la suite de badigeonnages répétés de culture de larves, la peau, dont les poils ont été coupés et non rasés, présente des papules saillantes analogues aux formes connues de l’'anky- 462 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lostomose cutanée (fig. 2, ci-dessous). Ces papules s’affaissent et disparaissent sans avoir pris l'aspect pustuleux. Des témoins badigeonnés avec un mélange d'urine et de noir animal, conservé dans les mêmes conditions que les cultures de larves, ne présentent aucune réaction de la peau. Les ganglions inguinaux, correspondant à la région où les utanées saillantes à la suite de badigeonnages répétés de cultures de larves, d J — Papules « Fire. sur un porcelet. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 463 larves ont été appliquées, s’hypertrophient. Ils peuvent atteindre le volume d’une amande. Ils reprennent très lentement leur volume normal sans aboutir dans aucun cas à la suppuration. Très rarement une certaine induration ganglionnaire a persisté. La centrifugation de 10 cent. cubes de sang, prélevés par ponction du cœur toutes les demi-heures pendant les trois premières heures après le dépôt de cultures très riches sur la peau, ne nous à pas permis de constater la présence de larves dans la circulation générale. Nousn'avons pas pu reprendre toutes les expériences de Looss sur les modes de pénétration des larves à travers la peau, sur leur. passage dans les vaisseaux lymphatiques et sanguins et dans le canal thoracique, sur les larves égarées dans les divers tissus. Nous nous sommes bornés à faire la preuve de la péné- tration cutanée en montrant, par l'examen microscopique, la présence des larves dans les couches profondes de la peau, dans les ganglions lymphatiques correspondant à la surface cutanée badigeonnée, et en déterminant les lésions macroscopiques et microscopiques des viscères. Les biopsies pour l'examen microscopique de la peau sont faites de trois minutes à quatre heures après l'application des larves. Dans aucun cas, sur un très grand nombre de coupes en série, les larves ne se trouvent dans l’épiderme, le derme, les follicules pileux, les canalicules glandulaires. Elles ont atteint, au moment de la fixation de la pièce, la première couche musculaire au-dessous du tissu cellulaire sous-cutané (Planche XIV, fig. 3). Les diverses couches de la peau ne présentent aucune réaction inflammatoire. Il est donc vraisemblable d'admettre que la pénétration est extrêmement rapide et que les larves ne subissent aucun arrèt dans cette première étape de leur parcours. Looss est même d'avis qu'elles passent immédiatement dans le système lymphatique et que les larves retrouvées dans les couches profondes de la peau sont des larves égarées. Dans les ganglions, au contraire, elles apparaissent dans la substance folliculaire, au centre d'une zone infiltrée de nom- breux leucocytes éosinophiles. Sur des préparations colorées à l'hématéine-éosine, ce sont les amas diffus de leucocytes colorés en rose qui appellent l'attention sur [a présence des parasites (Planche XIV, fig. 4). Les larves égarées dans les ganglions sont 464 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR susceptibles d'y subir une première transformation et d’aug- menter sensiblement de volume. Elles provoquent alors une hypertrophie persistante de l'organe. Les lésions macroscopiques de l’uretère et des reins des animaux soumis à l’expérimentation sont en tous points iden- tiques aux lésions de la maladie naturelle. Nous les avons décrites plus haut. A l'examen microscopique, l’uretère normal du pore revêt, sur une coupe transversale, l’aspect d'un canal dont la lumière est étoilée. Les parois sont constituées par une muqueuse plissée dont le chorion, hérissé de huit saillies papilliformes, supporte un épithélium pavimenteux stratifié formé de huit assises cellulaires; par une musculeuse, en faisceaux discontinus et par une adventice conjonetivo-élastique et adipeuse. Le dia- mètre total du canal et de ses parois est de 5 millimètres dans son tiers supérieur et de 2 à 3 dans sa partie inférieure. Chez les animaux sains, l’uretère est appliqué en arrière sur le muscle psoas; il est dissimulé par une couche de graisse tendue sur le muscle-sous-jacent. Nous avons vu que les kystes péri-urétéraux où se trouvent les Stephanurus constituent une masse volumineuse en saillie mamelonnée sur la paroi musculaire; une coupe transversale dans cette masse a un diamètre de 2 à 4 centimètres environ. Le contour est irrégulièrement arrondi en ovale. Sur une pré- paration colorée, on aperçoit, à un faible grossissement, l’uretère situé dans l'épaisseur de Ia tumeur, en un point qui n’est pas exactement central. À quelques millimètres de lure- tère, au milieu du tissu conjonctif, se trouvent des cavités kystiques de forme irrégulièrement arrondie ou ovalaire. Sur une coupe perpendiculaire à l'axe longitudinal du kyste, la cavité arrondie, avec un léger étranglement médian, mesure de 2 à 3 millimètres dans ses divers diamètres. Elle contient deux parasites de dimensions inégales, coupés perpendiculaire- ment à leur axe longitudinal (Planche XIV, fig. 5). Celui dont la circonférence est la plus large, la femelle, mesure de 2""400 à 4""600 sur ses divers diamètres; l’utérus est plein d'œufs. Le plus petit, le mâle, a des diamètres variant entre 8004 et 1.600 . Parfois la coupe intéresse un seul des parasites dans le sens longitudinal au milieu d’une cavité d'un ovale très MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 465 allongé. Dans tous les cas, les parois du kyste suivent exacte- ment le contour des parasites qu'ils contiennent. Les incidences diverses des kystes, sur une même coupe transversale, indiquent que leurs axes ne sont pas toujours parallèles à l’axe de l’uretère. On peut en compter une dizaine sur un même plan. Sur cer- taines coupes, un canalicule de 300% de largeur environ s'ouvre à une de ses extrémités dans l’uretère et de l’autre dans une cavilé kystique, après un parcours faiblement sinueux. Cette première observation confirme les données de l'examen macroscopique. A un grossissement de 250 diamètres, la lumière de l’uretère conserve son aspect normal. Les plis de la muqueuse sont au nombre de huit. Les saillies du chorion sont intactes. Au niveau de l'abouchement des canalicules, l’'épithélium disparaît. Mais le canal conserve son calibre. Même dans les cas de parasilisme intense, aucun phénomène de sclérose oblitérante ne menace la perméabilité de l’uretère. Les couches de la musculeuse sont dissociées par l'infiltration et la prolifération conjonctives. Il en est de même pour les fibres conjonctivo-élastiques de l’adventice. Les parois des cavités où se trouvent les parasites et des canalicules sont constituées par du tissu conjonelif dense. Tous ces éléments différenciés sont englobés par de nom- breux vaisseaux. Dans les tumeurs très anciennes, certaines cavités sont oblitérées par des débris de parasites, de leucocytes dégénérés. Dans toute l'épaisseur de la tumeur, les éosinophiles sont extrêmement nombreux. Les parasites provoquent dans l'atmosphère cellulo-grais- seuse du rein des lésions comparables à celles de luretère. Dans le cas d'infection très accentuée, cette enveloppe est transformée en vastes cavités contenant des parasites, des débris cellulaires et une substance crémeuse verdâtre. Le tissu conjonctif périnéphrétique est infiltré de cellules embryon- naires et de leucocytes éosinophiles. Mais l'enveloppe fibreuse qui sépare l'atmosphère graisseuse du tissu propre n'est pas dissociée (Planche XIV, fig. 6). Elle présente seulement quelques zones inflammatoires. Au contact de ces zones, la glande est le siège d’une prolifération conjonctive qui détruit quelques glo- mérules et les tubuli avoisinants. Ces lésions de néphrite inter- stitielle, légères dans les cas d'infection périrénale les plus 466 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR accentués, sont si nettement localisées que la fonction du rein ne peut pas s’en ressentir sensiblement. Il résulte donc de l'examen clinique et des recherches expé- rimentales que la pénétration cutanée des larves, prouvée par leur présence dans le derme et la substance folliculaire des gan- glions, a pour conséquence la formation de kystes péri-urétéraux où se fait l’accouplement des adultes. Par les canalicules qui relient les kystes au canal de l’uretère, les œufs passent dans la vessie et sont expulsés au dehors. Les kystes qui se constituent autour des uretères et des reins n’entraînent pas l’oblitération du canal de l’uretère et Ia destruction du parenchyme rénal. Les lésions qui intéressent les reins et les uretères permettent aux parasites de se reproduire et de répandre leurs œufs dans le milieu extérieur ; elles n’entravent pas le développement de leur hôte. E. — FAITS CONFIRMATIFS. Nous aurions voulu réaliser une confirmation des faits que nous venons d'exposer en renouvelant nos expériences sur un nombre plus considérable d'animaux. Nous aurions alors fixé avec plus de précision la progression des lésions depuis la péné- tration des larves jusqu’à l’état adulte des Sfephanurus. Notre séjour limité en Annam ne nous a pas permis de reprendre un travail d'aussi longue durée. Cependant le nombre relativement faible des sujets soumis à l’expérimentation est compensé par la constance des résultats enregistrés. La spécificité des lésions obtenues avec chacune des voies de pénétration est d'autant mieux démontrée que nous avons toujours pratiqué des infec- tions massives, favorables à la généralisation des parasites, si elle avait dû se produire. Les résultats expérimentaux expliquent les données en appa- rence contradictoires de l'observation de la maladie naturelle dans les diverses parties du monde. Les localisations du parasite dans le foie sont liées aux conditions d'élevage qui favorisent la pénétration par la voie buccale. En Annam, les porcs sont enfermés dans des boxes étroits où ils sont constamment vautrés sur le sol dans la boue souillée de leurs excreta. La nourriture leur est portée dans des baquets MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 467 spéciaux. La putréfaction fait disparaître un grand nombre de larves de Stephanurus. Les porcs ne cherchent pas à fouiller dans leurs propres déjections. Par contre, ils présentent la plus grande partie de leur surface cutanée à la pénétration des larves qui survivent dans ce sol humide et chaud. Au moment de mettre bas, les truies sont isolées dans des boxes plus secs où les jeunes restent parqués pendant quelques semaines.34,6 p.100 des adultes sont atteints de stéphanurose; parmi eux, 100 p.160 ont des lésions péri-urétérales, # p. 100 seulement des lésions hépatiques légères. Au Dahomey, d'après Pécaud [10],les porcs errent en liberté. Au bout de deux ou trois jours, les jeunes courent avec la mère et fouillent le sol. Les œufs éliminés avec les urines sont répandus de tous côtés sur la terre, particulièrement dans les endroits où les pores reviennent régulièrement pour chercher des détritus alimentaires. Les chances de contamination buc- cale sont aussi nombreuses que les possibilités de pénétration cutanée. Sur le plateau d'Abomey, Pécaud n’a pas trouvé un seul pore indemne parmi 2.000 animaux examinés. Les uretères, les reins et le foie étaient toujours simultanément atteints. Mais cet auteur constate que: 1° les parasites trouvés dans le foie sont où embryonnaires ou jeunes (Johnston [#4] avait fait la même observation en Australie) ; 2° les nématodes des kystes péri-urétéraux sont {toujours par couple; les ovaires des femelles sont bourrés d'œufs; 3° les kystes et canaux s'ouvrent fré- quemment dans le canal de l’uretère. Et dans l'urine, on retrouve constamment des quantités d'œufs et même d’embryons libres. Ces observations, faites au Dahomey, dans des conditions de milieu tout à fait différentes de celles qui se sont présentées à nous en Annam, sur une forme de stéphanurose cliniquement différenciée, apportent une confirmation nouvelle des faits que nous avons eXpOSéS. IV. — CONCLUSIONS 1! résulte de l’ensemble de nos recherches que le S/ephanurus peut pénétrer dans l'organisme du porc : 1° par la voie cutanée ; 2° par la voie-digestive, el que des lésions spécifiques corres- pondent à chacun de ces modes de pénétration : kystes péri- 468 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR rénaux et péri-urétéraux pour le premier, cirrhose hypertro- phique du foie pour le second. L'observation de la maladie naturelle et l’expérimentation établissent nettement que la localisation péri-urétérale du Stephanurus fait partie du cycle évolutif de ce nématode. Depuis les travaux de Looss et des expérimentateurs qui ont contrôlé ses recherches, la pénétration cutanée est considérée comme un phénomène d'ordre générai dont les cas particuliers connus deviennent de plus en plus nombreux. La démons- tration de l'importance relative de ce mode d'infection et de la pénétration buccale était difficile à réaliser en utilisant comme matériel d'expérimentation les ankylostomes dont l'intestin grêle est le seul habitat. Les localisations si nettement diffé- renciées du Sfephanurus dentatus,selon son mode de pénétration, montrent que les larves suivent aussi facilement la voie buccale que la voie cutanée pour infecter leur hôte. La fréquence de chacun de ces modes d'accès est sous la dépendance des influences du milieu dans léquel vivent les animaux réceptifs et les larves du nématode. Mais la pénétration buccale est un accident qui entraîne la disparition du parasite. La pénétration cutanée est seule compatible avec la conservation de l'espèce. La connaissance plus étendue des conditions biologiques des vers parasites montrera si le cycle évolutif propre au Stepha- nurus dentatus doit être considéré comme un cas particulier d'une loi générale. MODE DE PÉNÉTRATION DU « STEPHANURUS DENTATUS » 469 INDEX BIBLIOGRAPHIQUE 1. Cazuerre et M. Breton (1). — Bull. Acad. Méd., 21 mars 1905. CALMETTE et M. BRETON (2). — L'Ankylostomiase, Paris, 1905. K. M. DresiNG. — Annalen Wien. Mus., Il, 1839, p. 219-242. . Z. HEeLLMANS. — Centralblatt f. Bakt., 1 Or., 1911, t. LVII, p. 212-235. . T. H. Jouxsron. — Notes sur quelques anthozoaires, 1912, p. 88-89. . KarTsuRADA et HASHEGAWA. — Centralblatt f. Bakt., TL Or., fév. 1910, t. LIII. . LEICHTENSTERN. — Centralblatl f. klin. Med., 1886, n° 39. . A. Looss (1). — Centralblatt f. Bakt., 1 Or., t. XXIV, n° 13, 1898. A. Looss (2). — Records of the school of medicine. Cairo, 1911, vol. IV. Cet ouvrage contient une bibliographie complète sur la pénétration cutanée et buccale des larves de nématode jusqu'en 1910. 9. V. Marzoccar. — Giorn. R. Acc. Med. Torino, t. LXX, f. 1-2, p. 3-14, 1907. 10. M.-G. PÉcaun. — Supplément au Journal officiel de l'Afrique occidentale française. Rapports et documents, année 1912. 11, A. RAILLIET (8). — Traité de zoologie médicale el agricole, 1895. 12. A. Rarzcier et A. Henry. — Bull. Soc. Path. exotique, 1911, p. 695. 13. Louise TAyLER. — Sixleenth Annual report bureau of animal industry. U. S. dep. of agriculture, Washington, 1900, p. 613-637. Ce travail contient la bibliographie du Sfephanurus dentatus jusqu'en 1899. 14. P. Van DuruE. — Thompson Yates Laboratories, Liverpool, t. VI-IT, p. 471, 1902. 15. VonEGr MivaGawa. — Centralblatt f. Bakt., I Or., t. LXVIII, 1913. OO I OE + 2 IN EXPLICATION DES FIGURES DE LA PLANCHE F1G. 1. — Réaction conjonctive du tissu ons au début du dévelop- pement du Stephanurus dentatus dans le foie; «, parasite. — Gr. : 120 d, Colo- ration : hématéine-éosine-safran (P. Masson). FiG. 2. — Terme du processus cirrhotique : le parasite est isolé dans une loge fibreuse ; 4, parasite, b, vestige du tiissu hépatique. — Gr. : 60 d. Colo- ration : hématéine-éosine-orange. F1G6. 3. — Larves dans la couche musculaire sous- que: — Gr.: 700 d. de hématéine-éosine. Fic. 4 — Larve immobilisée dans un ganglion inguinal. -— Gr.: 180 d. Colo- ration : hématéine-éosine. F1G.5.— Coupe transversale d’une tumeur péri-urétérale, montrant l’uretère «, deux kystes b, contenant des parasites mâle et femelle, un kyste c contenant un parasite sectionné à une faible distance de l'extrémité buccale, des fragments de canalicules 4 faisant communiquer les kystes avec la lumière de l'uretère. — Gr.: 12 a. Coloration: hématéine-éosine-safran (P. Masson). Fi6. 6. — Coupe longitudinale du rein, montrant les lésions périrénales a el l'intégrité du parenchyme rénal 0. RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE par M. WEINBERG et P. SÉGUIN. PREMIER MÉMOIRE (Avec les planches XV et XVI.) Par sa classification des globules blancs, Ehrlich a établi l'indépendance morphologique des éosinophiles. Mais bien que ces cellules constituent une variété leucocytaire distincte, nous ignorons encore quelles sont leurs propriétés physiologiques et si leur différenciation morphologique correspond à une fonc- tion biologique spéciale. Les travaux publiés sur les éosinophiles se rapportent presque exclusivement à l’éosinophilie sanguine. Ainsi, les cliniciens ont étudié, avec beaucoup de soin, toutes les conditions dans lesquelles cette éosinophilie apparaît chez les malades et ont précisé la valeur diagnostique de ce symptôme. D'autre part, les recherches expérimentales ont permis de comprendre le mécanisme de la production de l'éosinophilie. Nous savons qu’un grand nombre de substances toxiques, surtout celles d’origine parasitaire, une fois résorbées par l'organisme, agissent sur les centres hématopoiétiques, et spécialement sur la moelle osseuse ; ces organes réagissent par une surproduction de cellules éosi- nophiles dont un grand nombre passent dans le torrent circu- laloire. Mais, comme nous venons de l'indiquer plus haut, nous n'avons que des hypothèses sur le rôle biologique probable de l’éosinophile. Il existe cependant un fait qui permet de penser que les éosinophiles jouent un rôle dans l'immunité : c’est la formation de l'éosinophilie locale qu'on observe dans un grand nombre de lésions toxiques ou parasitaires. Une étude complète de l'éosinophilie locale était indispen- sable, parce qu'elle devait amener à déterminer les conditions qui mettent en évidence les propriétés chimiotactiques de l’éosi- nophile, mais aussi, el surtout, parce que c'était le seul moyen de trouver un procédé de rassembler en un point de l'organisme RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE #71 une quantité considérable de cellules éosinophiles. Les éosino- philes, isolés pour ainsi dire à l’état pur, c'est-à-dire non asso- clés à d’autres éléments du sang, il deviendrait alors possible de les recueillir et d'en étudier les propriétés biologiques, non seulement in vivo, mais aussi 2n vitro. Ce premier mémoire résume nos recherches sur l’éosinophilie locale, provoquée chez les animaux neufs ou immunisés avec des substances éosinotactiques. Nous avons été amenés égale- ment à étudier le rapport des éosinophilies locale et sanguine avec l’anaphylaxie. Ces observations constituent la troisième partie de ce travail. L'étude des propriétés phagocytaires des éosinophiles sera exposée dans un deuxième mémoire. I. — ÉOSINOPHILIE LOCALE EXPÉRIMENTALE Nous avons choisi, comme premier matériel d'étude, les pau- pières de chevaux instillés dans l'œil avec quelques gouttes du liquide péri-entérique de l’Ascaris megalocephala. Gette instilla- tion provoque, en effet, dans le tissu conjonctif de la paupière, à côté d'un œdème plus ou moins intense, un afflux leucocy- taire toujours marqué, et caractérisé spécialement par la pré- sence de polynucléaires éosinophiles. Les éosinophiles du cheval sont, de plus, très faciles à étudier sur les coupes, les grosses granulations qui remplissent ces cellules ne permettant aucune erreur d'interprétation. Nous avons réséqué les paupières un quart d'heure, une demi-heure,une heure et jusqu'à quatre-vingt-seize heures après l'instillation dans l'œil de liquide ascaridien, pour pouvoir suivre toutes les phases de l’éosinophilie locale (1). Dans la première heure qui suit l’instillation, les capillaires du chorion de la muqueuse palpébrable sont bourrés de poly- nucléaires de toute nature, neutrophiles, éosinophiles et mast- zellen. Le taux de cette polynucléose oscille entre 94 et 96 p. 100. Dans les réactions plus légères, l’afflux leucocytaire est moins marqué, mais la polynucléose est toujours aussi élevée. Notons (1) Les pièces ont été fixées par le liquide de Bouin, incluses dans la paraf- fine et les coupes colorées par l'hématine-éosine dilué, le Giemsa, le bleu de toluidine-éosine-orange, etc. 472 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR que la paupière de l’œil témoin reste absolument indemne. On constate une très grande variation dans le nombre relatif des différentes formes de leucocytes granuleux attirés dans les capillaires sanguins. Dans cerlains cas, l’éosinophilie capillaire est très forte (de 50-64 p. 100); dans d’autres paupières eile est moyenne, faible ou nulle. Comme nous avons rencontré ces formules leucocytaires chez des chevaux appartenant à une même série d'expériences, c’est-à-dire traités par la même toxine employée à la même dose, nous nous sommes demandé si ces résultats ne pouvaient pas s'expliquer par la teneur variable du sang circulant en éosinophiles. Nous avons alors refait nos expériences, en établissant chez tous nos chevaux à r la fois la formule leucocytaire du sang général et celle du sang des capillairés de Ia paupière malade (1). Tableau ï. RÉACTIONS DE DÉBUT k POURCENTAGE DES ÉOSINOPHILES NUMÉROS DURÉE des chevaux. de l’expérience. RErr k ) . Capillaires. Tissu conjonctif. min. min. min. min. min. min. min. ) min. min. min. min. 50 min. 5 min. min. min. min. min. min. ss H2 7 ET3r F5 F 18 HET EH5e Ce CRE 156) Eu E 6. E 10 G2 F l F C : Pas d’'éosinophiles dans la plupart des cas NOUITURERERWUNN=eooo© Æ Le tableau ci-dessus, qui résume nos observations dans les (1) Ces formules leucocytaires ont été établies en comptant 300 leucocytes. Les frottis de sang ont été colorés par la méthode de Pappenheim (May- Grünwald-Giemsa). RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 473 cas où la réaction locale était nette, montre qu'au début de la réaction, l'intensité de l’éosinophilie locale est en rapport direct avec l’éosinophilie sanguine. Nous avons constaté que, d’une part, l’on ne rencontre d'éosinophiles dans les capillaires de la paupière que dans les cas où les éosinophiles existent dans le sang général et que, d'autre part, le taux des éosinophiles attirés localement dans les capillaires est directement propor- tionnel à celui des éosinophiles du sang périphérique. Ce rapport étroit, que l’on constate entre la formule san- guine dans les capillaires et la formule leucocytaire du sang périphérique, est encore confirmé par la relation existant entre le nombre des mastleucocytes du sang et celui des mastleuco- cytes attirés dans les vaisseaux de la paupière instillée. En voici quelques exemples : | MASTZELLEN NUMÉROS DES CHEVAUX —— ——_— dans le sang. dans les capillaires. É02% 0 p. 100 0 p. 100 Hoyt de 0 — 0 — FOIE 0 — 2 — HARES 0 — 2 — EA100 0 — 3 — (Et a SRE LE 18 CNE 1 — 8 — (8 AI 2 — 12 — La formule leucocytaire établie dans les capillaires dans la première heure qui suit l'instillation est donc une image défor- mée de la formule leucocytaire du sang périphérique, et ceci, quelles que soient l'intensité de la réaction et la dilution de toxine employée (pure, dituée au 1/400 ou au 1/500). L'action chimiotactique toute spéciale qu'exerce la toxine ascaridienne sur les éosinophiles du sang est encore démontrée par les faits suivants : Dans le premier quart d'heure qui suit l'instillation, on ne constate pas encore d'infiltration diapédétique dans le tissu conjonctif de la muqueuse palpébrale. Les leucocytes granuleux sont entassés dans les capillaires (PL. XV, fig. 1). Mais déjà, sur les pièces réséquées un peu plus tardivement, au bout d'une demi-heure par exemple, on voit les éosinophiles traverser par diapédèse Les parois vasculaires, s’insinuer entre les cellules 32 4714 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR périthéliales qu'ils dissocient, et sortir ainsi les premiers des vaisseaux avant les autres variétés de leucocytes (PI. XV, fig. 2). Sur des pièces récoltées plus tardivement encore (une heure à deux heures après l’instillation), les éosinophiles sont dissé- minés dans le tissu conjonctif et souvent serrés autour des vaisseaux auxquels ils constituent comme une gaine protectrice (PI. XV, fig. 3). Notons que plus les paupières sont réséquées longlemps après l’instillation, plus le taux de la polynucléose et, par conséquent, de l’éosinophilie tend à diminuer dans les capillaires. Voici, à titre d'exemple, quelques formules leuco- cytaires établies dans les capillaires du chorion de la muqueuse palpébrale, deux heures environ après l’instillation de la toxine ascaridienne. On voit qu'à ce stade, la polynucléose n'oscille plus qu'entre 73 et 80 p. 100. FORMULE LEUCOCYTAIRE DANS LES CAPILLAIRES NUMÉROS des POLYNUCLÉAIRES LYMPHOCYTES, ; chevaux. A — — " — et F Neutrophiles. Mastzellen. Eosinophiles. MONONCCLRATEES A SRE Ve 10 2 1 27 CAGE SR ER 10 1l 5 2% \ ARO BE RRRRE 65 7 7 DA Bel rsparet 56 1 23 20 La réaction chimiotactique, intense au début, s’atténue très rapidement; nous expliquons ce fait par la diffusion rapide de la toxine dans l'organisme c@u cheval. On doit en conclure que Le maximum de l’éosinophilie locale dans le tissu conjonclif est réalisé quelques heures après l'ins- üillation. Plus il y aura d’éosinophiles dans le sang, plus l'éosi- nophilie locale sera intense dans le tissu conjonctif. Le tableau IT est particulièrement instructif à cet égard. Nous constatons que dans les paupières réséquées sept heures après l'instillation, l'abondance des éosinophiles dans le tissu con- jonctif est rigoureusement proportionnelle à l'abondance des éosinophiles dans le sang périphérique. Dans deux cas sur trois où l’éosinophilie sanguine était nulle, le tissu conjonctif ne renferme pas d'éosinophiles, alors qu'on y remarque une infil- RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 475 tration diapédétique très intense d'autres variétés leucocytaires. Au maximum de l’éosinophilie sanguine correspond l’éosino- philie maxima dans le lissu conjonctif. Ces éosinophiles ont tous les caractères morphologiques des écsinophiles du sang. L'étude cytologique attentive de ces éléments nous permet de rejeter l'hypothèse de la formation locale des éosinophiles dans l’éosinophilie conjonetive expérimentale. Ajoutons enfin qu'à ce stade, les polynucléaires ont cessé d’affluer dans les capillaires ; les éosinophiles y atteignent à peine le taux établi dans le sang périphérique; on y coustate, par contre, une mononucléose atteignant souvent 60 p. 100. Tableau Il. RÉACTIONS DE T HEURES NOMBRE DE CELLULES POURCENTAGE éosinophiles par TES | des éosinophiles : 10 champs RARE NOR microscopiques des chevaux. Sang. Capillaires. Tissu conjonctif. ES 0 » 0 0 RO 0 » 0 0 6 0 » 0 30 ER 0,3 0 4 I 10. 0,3 0 16 TRS Lo» 2 28 (4e 1,3 2 30 HS 3 » k il F2 7 8 » 4 130 L'étude des paupières réséquées plus tardivement encore nous montre la réparation des lésions produites par la toxine ascaridienne. L'œdème est en général résorbé : les leucocytes sont bien moins nombreux dans les capillaires, les mononucléaires attei- gnant toujours un pourcentage élevé. Les éosinophiles persistent longtemps dans le tissu conjonctif. Suivant que la lésion est à un stade plus ou moins avancé de réparation, l’on constate : a) Dans le cas où la réaction a été très forte, l’ædème n'es! pas toujours entièrement résorbé après douze à vingt-quatre heures. Les éosinophiles dominent mêlés aux autres polynu- 476 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR eléaires et à de nombreux mononucléaires, [ymphocytes, grands monucléaires et plasmazellen. b) Dans les cas où la réaction a été moins intense, où lorsque les paupières ont été réséquées plus tardivement encore (au bout de 60 à 96 heures), les lésions en voie de réparation se présentent avec les caratères suivants : Îles éosinophiles sont écrasés entre les fibres conjonctives qui les enserrent. Presque tous sont en pyenose. On en voit souvent d’englobés par de grands macrophages. Notons l'augmentation notable des mastzellen histiogènes qu'il n’est pas rare de rencontrer en mitose. Nous avons pu reproduire des lésions tout à fait semblables chez les cobayes en injectant à ces animaux sous la peau de l'abdomen ou dans les muscles de la cuisse d’autres produits vermineux. Le tableau III résume quelques-unes de nos nombreuses observations qui prouvent que l'injection de liquide hydatique ou d'extrait aqueux de sclérostome filtré sur Chamberland, pro- voque dans le tissu conjonctif sous-cutané ou intermusculaire du cobaye une infiltration diapédétique, qui évolue exactement comme celle que l'on provoque dans la paupière des chevaux instillés dans l'œil avec la loxine ascaridienne. Tableau III. A, SU ARROE | ÉOSINOPHILIE TOXINE te | A — des 1e REMARQUES injectée. : 1 Danses | à cobayes. Sanguine. M e Conjonctive. p. 100 p. 100 34 B DIGG: 0,3 2 Inj. dans les lig. hyd. P muscles È ù as encore 35 B Id. 3 » 20 : de la cuisse. établie. Sacrifiés 4/2 h. 36 B Id 11 » A0 Fe l'injection. 31 B Id. 4 » 9 )Nomb. ph? Inj. dans les { dans le l muscles de la 38.BA 0 CC die 4 » ü \ tissu conjonctif CS Sacr 3h: selérostomes. intermusculaire. bé. l'injection. 93 B 102C:"C: k » : | hq. hyd. | « /Nomb. Se nopne Injectés 65 C HE Te : dans le sous la peau. ; | tissu conjonctif Sacrifiés 7 h. 11 À di LORS . sous-cutané. \après l'injection. DRE SRE EE BR CRC SEEN SSSR EME EURE 9 ESSENCE RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 477 Ainsi, que les expériences portent sur le tissu conjonctif de la paupière, sur le tissw conjonctif sous-cutané ou intermuscu- laire, la loi reste toujours la même : la résorption de toxines vermineuses détermine un afflux intense de leucocytes éosino- philes qui arrivent dans le tissu conjonctif en nombre d'autant plus considérable qu'ils sont plus abondants dans le sang circu- lant. Il est donc bien établi que l’éosinophilie locale provoquée expérimentalement s'alimente aux dépens des éosinophiles du sang. Lorsque ceux-ci font défaut, ce sont les polynucléaires neu- trophiles {ou pseudo-éosinophiles du cobaye) qui répondent à l'appel de la toxine injectée, ce qui montre que les substances « éosinotactiques » n’agissent pas uniquement, mais seulement de préférence (d’une façon plus intense) sur les éosinophiles du sang (PI. XV, fig. 4). Notons ici que Grosso (1) a cru pouvoir affirmer que l'extrait de selérostome n'était pas éosinotactique et attirait seulement les polynucléaires pseudo-éosinophiles. Il contredit sur ce point les observations de Valillo (2) et celles de Panizza (3). Pour Grosso, seules les substances riches en albumines sont éosino- tactiques. Nos observations nous permettent de penser que les résultats contradictoires obtenus par ces auteurs s'expliquent parce qu'ils ont utilisé dans leurs différentes expériences des cobayes ayant des formules leucocytaires différentes, dont le sang'était tantôt pauvre, tantôt riche en éosinophiles. Le maximum de l’éosinophilie locale est réalisé en quelques heures. L'éosinophilie locale persiste encore longtemps après l'injec- tion de produits vermineux. Cette persistance permet d'expli- quer qu'on puisse la retrouver, alors même que l’éosinophilie sanguine aurait eu le temps de disparaître pour une cause quelconque. Si l’on n'avait pas suivi en pareil cas toutes les phases de l’évolution de l’éosinophilie locale, on aurait pu con- clure à tort que celle-ci s'est installée aux dépens d'éléments (1) Grosso. Die chimiotaktische Wirkung der Sclerostomen Extracten. Folia Hæmat:, 1912, B. XIV, H. 1, p. 18. \ (2) VaziLzo. Die positive chem. Wirkung der Extracten von Sclerost. Arch. [. wissensch. und prakt. Tierheitkunde, Ba XXXIV. (3) Paxrzza. Ricerche sull origine dell’ eosinof. Clin. vel. (Sez. prat.), p. 206 (d'après Grosso). 478 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR formés sur place. On comprend alors pourquoi quelques obser- vateurs affirment que non seulement l’éosinophilie locale n’est pas en rapport avec l'éosinophilie sanguine, mais que c’est encore l’éosinophilie locale qui est la source des éosinophiles du sang. Nous avons voulu vérifier si Les lois établies pour l’éosino- philie locale provoquée expérimentalement dans le tissu con- jonctif trouvaient leur application lorsque l’on injecte dans le péritoine des cobayes neufs des produits parasitaires. Mais avant de noter nos résultats, nous devons aborder la question de l’éosinophilie péritonéale spontanée que l’on rencontre fré- quemment chez le cobaye, ainsi que l'avaient constaté Stäubli et Weidenreich (1). Pour donner une idée de la fréquence de cette éosinophilie spontanée, notons que, sur 150 cobayes examinés (2), nous n'en avons trouvé que 7 à exsudat péritonéal dépourvu d’éosi- nophiles. Parmi les autres, chez 18 cobayes l’éosinophilie péri- tonéale dépassait 30 p. 100. Nous donnons ci-dessous les chiffres exacts. Nos TAUX Nos TAUX des de l'éosinophilie périlonéale des de l’éosinophilie péritonéale cobayes spontanée cobayes spontanée 49 E 32 p. 100 83 E 33 p. 100 2,H 3 ._— 50 H 39 — 58 D 5 1 = 54 H 40 — 69 E 39 — 92 E 40 — 19 H 35 — 36 E 42 — 1H 39 — 18 H 44 — 84 E 37 — 417 H 46 — 92 H 31 — 4 H O1 — 65 H 38 — WE 65 — Szecsi et Ewald (3), qui se sont occupés, en même temps que nous, de la question de l’éosinophilie péritonéale spontanée du cobaye, ont publié tout récemment des chiffres aussi élevés. (1) On trouvera l'historique de cette question dans le travail de Szecsr : Experimentelle Studien über Serosa Exsudatzellen. Folia Hæmat., vol. XIII, Fasc. 1, 4912, p. 1. (2) Les frottis d’exsudat sont desséchés rapidement par agitation et colorés suivant la méthode de Pappenheim (May-Grünwald-Giemsa) avec la modification suivante : Nous ne laissons les frottis que trois à quatre minutes dans la solution de Giemsa pour éviter la surcoloration. (3) Szecsr et Ewarn. Zur Kenntnis der Peritonealexsudatzellen des Meer- schweinchens. Folia Hæmat., Bd XVII, 1943, p. 167. ; RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 479 Nous avons voulu nous rendre compte si cette éosinophilie spontanée était en rapport avec l'éosinophilie sanguine. Le tableau IV résume ces observations. D Tableau IV. N°S ÉOSINOPHILIE ÉOSINOPHILIE N°5 ÉOSINOPHILIE ÉOSINOPHILIE des cobayes sanguine péritonéale des cobayes sanguine péritonéale 65 A 0 p. 100 3 p. 100 23 M 1 p. 100 5 p. 100 83 M 0 — L — 33 M à — 10 — 80 M 0: — 3AÙ 92 D 2 — 3 — 89 M 0 — TN 83 M 3 — 15 — 93 M 0 — 0 — 28 M 4 — 16 — T2 MD 0 — 2 — 96 D 4 — 22 — 80 D 0 — 0 — $6 A it 33, — 89 D (LE 0 — 84 D NS — 24 — 93 D 0 — 5 — 85 D 9 — 28 — 70 D TO 0 — 98 D 10 — 2) — 16 D JR 10 — HD) LE 42. — 19 D 1 — 4 — 64 A 4 EE 21 — 95 AD À — 2 "— ATMLE 20 — 65 — 999D il 0 — Il montre qu'en règle générale il existe un parallélisme entre l'intensité de ces deux phénomènes. Nous ne pouvons cependant pas conclure que l’éosinophilie péritonéale spontanée s’alimente exclusivement aux dépens des éosinophiles du sang. Tous les auteurs qui ont étudié cette éosinophilie ont, en effet, constaté dans l’exsudat péritonéal du cobaye la présence d'une quantité plus ou moins considérable d’éosinophiles mononucléaires et de cellules à noyau incisé ou bilobé qui en dérivent. D’après les dernières recherches de Pappenheim (1), ces éléments proviendraient des taches lai- teuses de l’épiploon. Nous avons fréquemment rencontré ces cellules dans lexsudat du cobaye, mais toujours en proportions variables, associées à des éosinophiles polynucléaires typiques ayant tous les carac- tères des éosinophiies du sang. Aussi ne doutons-nous pas que l'éosinophilie péritonéale spontanée ne s'alimente au moins partiellement aux dépens de l’éosinophilie sanguine. Le parallélisme de l’éosinophilie péritonéale spontanée et de l'éosinophilie sanguine n’est donc pas pour nous une simple coïncidence. Si ces deux phénomènes sont quelquefois dis- (1) PaPPreNREIM. Centralblatt f. Path. Anat., 30 nov. 1913, p. 997. 480 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sociés, on peut facilement l’expliquer par la persistance très prolongée de l’éosinophilie péritonéale une fois établie. Aïnsi, chez un de nos cobayes dont l’exsudat péritonéal renfermait, le 2 mai, #4 p. 100 de cellules éosinophiles et qui présentait une forte éosinophilie sanguine, nous avons encore compté 39 p. 100 d'éosinophiles dans le péritoine, le 5 novembre, c’est-à-dire six mois après le premier examen. A ce moment, l'éosinophilie sanguine était nulle. Nous avons essayé de provoquer dans l’exsudat péritonéal du cobaye un afflux d’éosinophiles. Les formules leucocytaires du sang et de l’exsudat étaient soigneusement établies avant l'expérience. Nous avons injecté dans la cavité péritonéale du cobaye du liquide hydatique et de l'extrait aqueux de scléros- tome, filtré sur Chamberland. Les ponctions du péritoine ont élé pratiquées, quatre heures, huit heures et vingt-quatre heures après l'injection. Dans ces conditions, il nous à été impossible de provoquer une éosino- philie péritonéale tant soit peu marquée, même chez lés cobayes à forte éosinophilie sanguine. Le tableau V indique exactement les conditions et les résultats de l’expérience. En étudiant ce tableau, nous constatons que l’éosinophilie péritonéale, loin d'augmenter, diminue après l'injection. Cette diminution du taux des éosinophiles de l’exsudat n'est, à la vérité, qu'apparente. Elle est due à l’afflux, dans le péritoine, d'un nombre considérable de polynucléaires pseudo-éosino- philes du sang, ce qui fait baisser dans l'exsudat le nombre relatif des éosinophiles, pour le même nombre de cellules comptées. Au bout de vingt-quatre heures, l'exsudat devient peu abon- dant, louche, riche en cellules; on constate de nombreuses figures de phagocytose des polynucléaires par les macrophages, des monocytes en karyokinèse ; en même temps, le taux des éosinophiles tend à revenir au chiffre constaté avant l'injection. Nos expériences prouvent que l'injection d’une substance éosi- notactique ne peut provoquer-dans le péritoine ni éosinophilie, ni hausse de l’éosinophilie préexistante, mème chez les cobayes à forte éosinophilie sanguine; ce fait n'indique nullement que l'injection est restée sans action sur les é6osinophiles du 481 RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE LVANSXA/I AA AUIVLAIONDNAT J'IANHOA « « « 0 LI £g « « « — 0 y 89 SG G 8T 0$ | « « ( mn G "JUUDES « « « 0 0€ 0L « ( « — y « « « 0 ST GS « « « — GG « « « G SI 0$ « | « « _—— G | | 8 &s ol à Ge € Cale : EE « « « 0 0€ 0L ré ££ (9 — G "JUUDES « « « 0 c£ 89 « « « — 0 JUTOES OT 66 re 07 GG 89 ra! ST 0L ICO "JUUIES SS « « g SI YL « « « 001 ‘d 8? s À s h -opnosd |, Ve: 5 £ -opnosd |, ve 2 De -opnasd douts0 2J0u0J\ *ÂTOC] dourso JouoN *ÂLOd doutsoÿf DOUOJN 04 ES, PR SP uoroo{ur,| soide uoroolui, soade uoryoo{ut. soide uonoefur à SHYNE 45 SAHQHH JUbAB SANdHVRAN SERRE PASAARES u oreeuoqrod - al'11Hd -ONISOH ‘A nNESIAEL “ourmasues ATTIHd4 —ONISOY ‘207$ -O1919S 2p JCA/X9 P are ‘jepAu 9pInPIT op 29 6 ‘JepÂq opinbt] 9p ‘29 OI -sagJoo[ut sasoa ‘S9484{09 SOp SOYANAN 482 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sang. En effet, l'examen histologique de la paroi abdominale et du mésentère des cobayes sacrifiés, huit heures et vingt- quatre heures après l'injection, montre l'existence, dans les tissus, d’une infiltration éosinophilique d'autant plus intense que le taux des éosinophiles du sang périphérique est plus élevé. Notre insuccès à provoquer l’afflux des éosinophiles du sang dans la cavité péritonéale n'implique pas que les lois de l'éosinophilie locale expérimentale ne peuvent pas trouver là encore leur application. Ces expériences montrent que les substances liquides injectées diffusent rapidement à travers la paroi abdominale où s'arrêtent les éosinophiles qu'elles attirent. L'éosinophilie locale s'établit dans ces conditions, non pas dans la cavité péritonéale, mais dans le tissu du voisi- nage. | Nous avons observé un certain nombre de faits qui ont trait à l’éosinophilie locale provoquée dans la muqueuse intestinale par la fixation de divers parasites dans le gros intestin du cheval. Ces observations d'éosinophilie locale parasitaire sont entièrement d'accord avec les lois que nous avons établies dans la partie expérimentale de notre travail. Le tableau VI est très démonstratif à cet égard. Il se rapporte à 12 chevaux dont nous avons examiné le sang quelques minutes après l’abatage, et chez lesquels nous avons trouvé de nombreux sclérostomes fixés sur la muqueuse du gros intestin. Tableau VI. ne NOMBRE He ÉOSINOPHILIE ÉOSINOPHILIE de sclérostomes REMARQUES Cheat sanguine. locale. étudiés chez chaque cheval. 8 0 p. 1090 Nulle. 2 18 D Très faible. 3 7 3 — Faible. 3 ER RS Faible. 2 16 4 — Peu marquée. 4. 1 cas d'éosinophilie 5 un — Nette. 6 locale au début. 1% 4 — Nette. 1 10 5, — Nette. l 6 Br = Nette. 2 19 Bon = Intense. 1 12 9 — Nette. 7 15 9 —. Très intense. 2 1 cas d'éosinophilie ‘ locale au début. RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 483 Le sclérostome s'attache sur l'intestin du cheval en aspirant, à l'intérieur de sa capsule buccale, qui fonctionne comme une ventouse, le chorion et la sous-muqueuse de l'intestin. C’est en pratiquant des coupes en série intéressant les boutons de fixa- tion aspirés par les selérostomes que nous avons étudié l'éosi- nophilie locale parasitaire. Nous avons ainsi constaté l'existence d'une éosinophilie locale aux points de fixation des sclérostomes, dans l'intestin de tous les chevaux dont le sang était plus ou moins riche en éosinophiles. , Dans les cas où l’éosinophilie sanguine est nulle ou très faible, le bouton de fixation est surtout infiltré de polynucléaires neutrophiles. Lorsque l’éosinophilie locale est faible, les éosi- nophiles sont disséminés dans le chorion et la sous-muqueuse du bouton de fixation. Ces cellules ne se disposent en amas qu'au voisinage du pédicule du bouton de fixalion, point d’élec- tion de cette éosinophilie parasitaire. Quand l’éosinophilie locale est nette, on rencontre des amas d’éosinophiles dispersés de place en place dans le bouton de fixation. Dans Les cas où l’éosi- nophilie est intense, les amas sont confluents {PI XVI, fig. 6). Notons enfin que nous avons surpris le mécanisme de l’éta- blissement de cette éosinophilie dans quelques cas où le para- site venait de se fixer sur la muqueuse. Ce stade est facile à reconnaître, le parasite n'ayant alors pas encore entamé l’épi- thélium de revêtement de la muqueuse dont il se nourrit, avant de sucer le sang de l'hôte. Dans ces conditions, nous avons observé plusieurs fois les éosinophiles tassés dans les capillaires dilatés et prêts à sortir des vaisseaux. On peut reconnaître ici le premier stade de l’éosinophilie locale parasitaire tout à fait semblable au premier stade de l’éosinophilie locale expérimentale. Nous avons fait des obser- vations analogues aux points de fixation de différents ténias du gros Intestin du cheval. Il. — ÉOSINOPHILIE LOCALE PROVOQUÉE CHEZ LES COBAYES PRÉPARÉS PAR DES INJECTIONS RÉPÉTÉES Après avoir étudié les lois de l’éosinophilie locale qui s'éta- blit chez les cobayes neufs à la suite d’une injection de pro- 484 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR duits vermineux, nous avons voulu nous rendre compte de la facon dont se comportaient les éosinophiles, lors de l’immuni- sation provoquée par des injections répétées de substances éosinolactiques. Nous avons fait deux séries d'expériences : Tableau VII. | COBAYES PRÉPARÉS PAR DES INJECTIONS SOUS-CUTANÉES RÉPÉTÉES DE LIQUIDE HYDATIQUE N°S DOSES ARE tea des injectées PS Rs Vans ag EXAMEN HISTOLOGIQUE cobayes | sous la peau. SRE DT PESÈrE ) Éosinophilie locale dans les ca- 83 5 c. 28 p.100 ( 1/4 pillaires du derme, de l'hypoderme GRAVE et du tissu conjonctif intermuscu- 41 DC 2 p. 100 laire œdématiés. 99 EN 12 p. 100 l Éosinophilie locale en voie d'éta- heure. |tablissement, œdème. 64 1DRGANE: DEN A10US) Éosinophilie locale établie con- { | sidérable ; mononucléose dans les 86 lDACAC 8 p. 100 (heures. vaisseaux ; œdème très étendu dis- ) sociant les faisceaux musculaires. COBAYES PRÉPARÉS PAR DES INJECTIONS INTRAPÉRITONÉALES RÉPÉTÉES D'EXTRAIT DE SCLÉROSTOME N° DOSES 2 ; Q des injectées FOSNOETRES SACRIES EXAMEN HISTOLOGIQUE cobayes. | sous la peau. sanguine. après : 69; 12 p. 100 1/2 Éosinophilie locale intense en / heure. |voie d'établissement dans le tissu LDLC IC: sous-cutané et intermusculaire. \ OEdème. 90 Sib- 4000) Men I l Dans la première, un lot de cobayes a été préparé par trois ou quatre injections sous-cutanées de 5 à 10 cent. cubes de liquide hydatique, espacées à huit jours d'intervalle. Une semaine après la dernière injection, on a injecté sous la peau de ces animaux 5-10 cent. cubes de liquide hydatique. Les cobayes ont été sacrifiés un quart d'heure, une heure, sept heures après l'injection. L'examen histologique à démontré RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 485 l'existence d’une éosinophilie locale très intense et très étendue, infiltrant non seulement le tissu cellulaire sous-cutané, mais aussi toute l'épaisseur du tissu conjonctif intermusculaire, jusqu’au péritoine. Tous ces cobayes accusaient au moment de l'injection une éosinophilie sanguine plus où moins mar- quée. Les cobayes du deuxième lot ont été préparés par 5 injec- tions intrapéritonéales d'extrait aqueux de sclérostome, filtré sur Chamberland. Les animaux ont été sacrifiés une demi- heure et une heure et demie après une 6° injection de 5 cent. cubes d'extrait, pratiquée cette fois sous la peau. L'examen histologique de la peau et de la paroi abdominale a donné des résultats comparables à ceux cités plus haut. Ces observations sont résumées dans le tableau VIT Dans la deuxième série d'expériences, les cobayes ont été préparés, soit par des injections sous-cutanées, soit par des injections intrapéritonéales. Mais, cette fois-ci, la dernière injection a été pratiquée dans le péritoine. Cette expérience comporte trois lots de cobayes préparés soit par le liquide hydatique, soit par l'extrait aqueux de scléros- tome, soit enfin par le sérum de cheval filtré sur Chamber- land. Nous avons consigné dans le tableau VII les conditions et les résultats de ces expériences. Il résulte de l'étude de ce tableau cette première notion que l'on ne peut provoquer d'éosinophilie péritonéale que chez les animaux en voie d'immunisation présentant avant l'injection une éosinophilie sanguine. De plus, alors que la première injection de substance éosinotactique ne provoque pas d'éosi- nophilie dans l'exsudat, même chez les cobayes à éosinophilie sanguine très marquée, les éosinophiles du sang arrivent au contraire en masse et très rapidement dans la cavité péritonéale, iorsque l'animal est préparé au moins par 2, et surtout par 5 ou # injections préalables, espacées à quelques jours d'inter- valle. La hausse de l’éosinophilie, déjà très nette quatre heures après l'injection, s’accentue encore après huit heures et persiste le lendemain. Si l'on suit la formule leucocytaire de l’exsudat, ‘0'9 & op sajueedgud suoroolut # n591 V | « « « za | ge 98 cy TZ VE OZ YI 86 00 ç op soquesedgud suoroofur g nôo1 V | 06 | Gr | & |g8g| es | 65 | 08 |9'8r | 1€ 8t 0Z 76 | È | ‘ç6 auumon À) | x . 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Ces cellules diminuent de nombre dès le lendemain de l'expé- rience. Beaucoup présentent un noyau très segmenté ou en voie de pycnose, ou sont phagocytées par les macrophages. Ces expériences comportent une conclusion générale. Elles montrent à l'évidence que, lors de l’immunisation de l'animal par une substance éosinotactique, les propriétés chimiotactiques de l’éosinophile s'accroissent. Les éosinophiies deviennent beaucoup plus sensibles à l’action de la substance injectée, à l'appel de laquelle elles répondent avec une rapidité plus grande et en nombre beaucoup plus considérable. Dans ces con- ditions, étant donnés des cobayes accusant la mème éosino- philie sanguine, on obtient une éosinophilie locale beaucoup plus intense chez les cobayes préparés que chez des cobayes neufs. L'examen comparé des tissus infiltrés ou de l’exsudat péri- tonéal ne laisse aucun doute à cet égard. Mais il y a plus, une nouvelle série d'expériences nous à prouvé qu'il existe une véritable spécilicité de la réaction éosi- nofactique. Ainsi, des cobayes préparés par des injections répétées d'une substance éosinotactique donnée, réagissent incontestablement de façon beaucoup plus intense à l'injection de cette substance qu'à l'injection de toute autre substance éosinotactique. Le tableau IX ci-dessous résume cette série d'expériences. Il s’agit d'abord de trois cobayes préparés par trois injections sous-cutanées (10 cent. cubes d'extrait aqueux de Tænmia pli- cata, filtré sur Chamberland et dilué au tiers) espacées de huit jours en huit jours. Chacun d'eux a reçu simultanément, en trois points aussi espacés que possibie de l'abdomen, trois injections sous-cutanées de 1 cent. cube de substances parasitaires diffé- rentes : extrait de ténia, liquide hydatique et extrait de seléro- stome. Ces animaux ont été sacrifiés un quart d'heure après les injeclions. Or nous avons constaté, en pratiquant l'examen histolo- gique, que le maximum des lésions (œdème très prononcé, RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 489 afflux leucocytaire dans les vaisseaux) et que le pourcentage le plus élevé des éosinophiles dans les capillaires s’observent justement au point où a été injecté l'extrait de ténia, c'est-à- dire la substance qui a servi à l’immunisalion. Les 1% autres observations résumées dans le même tableau vérilient, d'une façon plus remarquable encore, la loi énoncée plus haut de la spécificité de l'adaptation des cellules éosino- philes aux substances qui ont servi à l'immunisation. Ainsi, chez les animaux préparés avec une des trois sub- stances vermineuses indiquées plus haut, on ne peut produire l'afflux des éosinophiles du sang dans la cavité péritonéale qu'en y injeclant la toxine spécifique qui a servi à l’immuni- sation. Dans tous les autres £as, les cobayes se comportent comme des cobayes neufs, c’est-à-dire que linjection de la substance éosinotactique non spécifique est suivie d’un afflux de polynucléaires pseudo-éosinophiles dans l’exsudat et d’une chute apparente de l’éosinophilie locale préexistante. Seul le cobaye 83 F fait exception à cette règle. Préparé par des injections d'extrait de ténia, il a présenté une hausse de l’éosinophilie locale après l'injection de liquide hydatique. Nous pensons qu'il s'agit là d’une réaction de groupe explicable par la parenté du Tænia plicata et du Tænia echinococcus. MopIFICATIONS DE L'ÉOSINOPHILIE SANGUINE A LA SUITE D'UNE INJEC- TION DE SUBSTANCE ÉOSINOTACTIQUE CHEZ LES COBAYES EN VOIE D IMMUNISATION. Nous avons suivi l'évolution de l'éosinophilie sanguine chez des cobayes préparés par des injections répétées de produits vermineux, et chez lesquels nous avions provoqué une éosino- philie locale par une injection sous-cutanée ou intra-péritonéale de la substance immunisante. Déjà, dans nos recherches précédentes, nous avions eu l'occa- sion de constater que l’éosinophilie sanguine baisse, et parfois d'une facon considérable, à la suite d’une première injection _sous-cutanée ou intrapéritonéale de liquide hydatique. 33 “owoso19[0s op xnonbe qeuxe ‘0$ ‘enbrep£q opmbry ‘pAy "I ‘eru97 op xnonbe qrexxe y (y ) Re Pi | 3 : ; à ; 3 Ro RAR LEA LE 4 ‘1S049[0s " S ; s su 2 LD Ce C] 0 aUI07S019[9S 9p Jeaxo p saquesedord suornoolur £ | 9 t 09 | ££ ÿ 0 ee ta I 144 LAS Ne) L'IES (d ; ‘&IU)} 2p ( I Ÿ8 “eIU9) op Jaxo,p saquesedoid suoroolur € nan 7 CN ATEN EEE RAR SRE $ )4es onbnepAq epmbr op soquesedoid suonoolur £& | 6r | « Ce 5 CRC) ES EE 9 I | A &L . $ ' (S S 8 & {y ‘bry ‘90 ç -neod e snos onbrep£q opmbr op 7 pa) RTE s & | ‘PAU ‘D A 1# ‘09 € op Souepemuopqoy suoroolut g Jed sgedaid Sa48q0n re NE Re ras er l#c g e] Fe —————_—_—_—p—Z2Z2 | | | | | | | | | — | — ae ls ln eee : 7 a 3 cas 2 = S 4 | © : S à ; CR = ° D D a À c 5 tm |5 Ô soojoolut Oo = SNUILVAUASAO rsélte 2 -soinou g seide ‘soinouy p saide er SON EN sasoa 5 2 jepnsxo,] 9p ‘14909n9][|jepnsxo,| op ‘J4009n01 Le © ea 2 mn © NE dans 24-4 | 0 » (Din) TO MATE C2] AO 0187-23 1/20.c.1. 1073 » la nuit. | ] 81-3 0,3 0 100,3 Id. (| » 0 » » » » » | » ï sacrifié 82-4 | 2 »| faible. | 42,4 Id. 4, »-Inette.l 12-4 | Id. | 14,3 | 45,6 | faible. K'ap:42 à 20-4 2 » 0 oil Id. 0 ») ( » » » » » |: 18-4 | 3 » 0 41,4 | Id. 0,3 |faiblel 4-4 | c.c| 0,6 1 0 sacrifiés 51-4 | 3 »| faible. | 27,4 Id. 4 » | faible » » » » » après a HEURE. 45-4 | 8,5| nette. | 61,3 Id. 8,6 |nette.| 52-4 Id. 0 » | 47 » | forte. 44-4 11 ; 6 nette 4 » » » » » » » » » | » 66-53 15 » forte. » » » » » » » > » tré es malades 51-83 |30,6| forte. | 51 » M/3c.c.| 12,3 |nette.| 42 » M/8c.c.| 1 » » 0 sacrifiés, \ on » » 82 » Id. (6 0 88 » | Id. 88) » 0 heures! Nous avons également étudié Les poumons des cobayes, chez lesquels la crise anaphylactique avait été provoquée par l’injec- tion intraveineuse. Sur 15 cobayes, 9 sont morts en quelques minutes d'accidents suraigus. Sur ce nombre, 3 ont présenté une infiltration éosinophi- lique pulmonaire intense, qui ne peut évidemment pas être mise sur le compte de l’anaphylaxie, puisque, dans ces con- ditions, même d'après Schlecht et Schwenker, une infiltration du tissu péribronchique par les éosinophiles n'aurait pas le temps de s'établir. RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 499 et éosinophilie pulmonaire. COBAYES INJECTÉS DANS LE PÉRITOINE SACRIFIÉS APRÈS {2 HEURES SACRIFIÉS APRÈS 24 HEURES Numéros des cobayes Éosinophilie sanguine Éosinophilie sanguine 12h après le choc. Eosinophilie pulmonaire Observations. des cobayes Eosinophilic sanguine avant le choc. Eosinophilie Éosinophilie pulmonaire Observations. 24) après le choc. avant le choc. | | très malade Ü (=) Co » faible très très malade faible malade. très malade RCA CG: se 5,6 = (1 » très très faible | malade PACS Dee 0 malade. NS ÿ co faible » ,9,3 | faible | nette. » 4 (l ) 127 nette » très | très : forte malade : PÈE nette | malade. très forte » 94-3 |2 c.c. 16530] () malade. forte forte 1 heure nette Jap. le choc 2,6 (Fosinoph. 1 heure ap. le choc 0,3 (Bosinoph.) | Si nous ajoutons maintenant à tous ces faits, qu'il nous élait le plus souvent impossible de trouver une différence quelconque entre l'intensité de l’éosinophilie pulmonaire observée soit chez les cobayes témoins, soit chez ceux morts d’anaphylaxie i suraiguë, soit enfin chez ceux sacrifiés dans les conditions établies par Schlecht et Schwenker, nous sommes obligés de conclure que l’éosinophilie pulmonaire constatée par ces auteurs n’est pas une éosinophilie locale provoquée par la toxine anaphylactique, mais qu'il s’agit là d’une éosinophilie chronique spontanée. 000 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ÉOSINOPHILIE SANGUINE ET ANAPHYLAXIE. Schlecht (1) a fait cette constatation intéressante que le pour- centage des éosinophiles du sang s'élève chez les animaux qui ont subi des injections de sérum répétées el espacées à quel- ques jours d'intervalle. Dans des travaux ultérieurs, publiés avee Schwenker, il a montré que le même phénomène se pro- duit chez les cobayes sensibilisés avec du sérum, vingt-quatre à soixante-douze heures après l'injection déchainante pratiquée dans le péritoine. Il attribue cette hausse de l’éosinophilie sanguine à l'action de l'anaphylotoxine. L'observation de Schlecht a été confirmée par Herrick (2) dans l’anaphylaxie ascaridienne. Le phénomène noté par Schlecht est absolument exact; nous avons pu le reproduire chez les animaux sensibilisés avec du sérum et avec différents produits vermineux. Mais, si l’exis- tence de ce phénomène est indiscutable, l'interprétation donnée par Schlecht nous parait erronée. Quatre ordres de faitsnous permettentdelaffirmer : 1° D'abord, la hausse de l'éosinophilie n’est nullement en rapport avec la gravité des phénomènes anaphylactiques provoqués, comme l'avait déjà remarqué Herrick. Nous avons indiqué, dans le tableau XIIT, quels étaient parmi les cobayes éprouvés par la voie péritonéale, ceux qui avaient subi une crise anaphylactique très grave, avec tremblements, contractures, paralysies, etc. Nous voyons que la hausse de l’éosinophilie n'est pas plus accusée chez ces animaux que chez ceux n'ayant présenté que des accidents anaphylactiques insignifiants; 2° les éosinophiles augmentent de nombre dans le sang des cobayes sensibilisés, lorsque l'injection d'épreuve est faite sous la peau, sans donner lieu au moindre symptôme morbide. En se reportant au tableau XIII, on voit que, chez 10 cobayes ainsi éprouvés, le (1) Scurecar, Uber die Einwirkung von Seruminjectionen auf die Eosino- philen, etc... Deutsch. Arch. f. klin. Med., vol. XCVIIL, p. 308, 1910. (2) Herrick, Experimental eosinophilia with an extract of an animal para- site. Arch. of. internal Med. t. XI, p. 165, 1913. RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 501 taux de l’éosinophilie sanguine s’est fortement élevé chez tous les cobayes sans exception, vingt-quatre heures après l'injection sous-cutanée de 2 cent. cubes de sérum; 3° La crise anaphy- lactique, quelle que soit son intensité, n’est généralement pas suivie d'une hausse de l’éosinophilie, lorsqué l'injection déchai- nante à été pratiquée dans la veine (voir le tableau XII) ; 4° nous avons enfin provoqué les phénomènes anaphylactiques chez les cobayes préparés avec du sérum de cobayes sensibilisés par le sérum de cheval. Dans ces conditions, l'injection dans le péritoine des cobayes de 2 cent. cubes de sérum de cheval a provoqué des symptômes d’anaphylaxie passive sans que, pour cela, le pourcentage des éosinophiles du sang ait accusé la moindre hausse. Cet ensemble de faits nous permet d'affirmer qu'il n'existe pas de relalion de cause à effet entre la hausse de l’éosinophilie sanguine survenant dans certaines conditions après l'injection déchaînante et la production dans l'organisme de toxine ana- phylactique. Quand les éosinophiles augmentent de nombre dans le sang après la crise anaphylactique, il s’agit là, pen- sons-nous, d'une coïncidence. La hausse de l’éosinophilie est un phénomène d'immunité qui s'explique par l’action qu’exerce l’antigène sur les centres hématopoiétiques, et spécialement sur la moelle osseuse, préparés à réagir à la suite de la pre- mière injection. Elle à la même signification que celle que l’on observe à la suite d’injections répétées et rapprochées à de courts intervalles d’une substance éosinotactique quelconque. Ajoutons, avant de terminer ce chapitre, un fait intéressant constalé au cours de notre travail. Les injections répétées de certaines substances éosinotactiques, comme le sérum de cheval par exemple, provoquent, en même temps qu'une hausse de l’éosinophilie sanguine, une augmentation notable du nombre des mastzellen dans le sang. Ce fait déjà signalé par Schlecht (1) a été également noté par Ahl et Schittenhelm (2) à la suite d’injections d'albumines variées. Le tableau XIV que nous donnons ici à titre de document, résume quelques-unes (1) Scazecar, loc. cit. (2) Auz et ScurrTENHELM. Ueber experimentelle Eosinophilie, etc., Zeitsch. f. die gesam. exp. Med., 1913, t. I, fase. 1 et 2, p. 111. TagLkau XIII. — Éosinophilie sanguine DRASS DESDITS LI TELE PER CCI RE MER DR EE UNE 2 2 AI De PEER 4 COBAYES NEUFS COBAYES ÉTUDIÉS 24 HEURES ÉPROUVÉS DANS LE PÉRITOINE après l'injection de sérum. INJECTÉS SOUS LA PEAU ÉTUDIÉS APRÈS 12 HEURES | : : é eo , . CES 3 © Fe ; © | so D S | 28 ñ 5 2 AE ä : ASE à ! n © BRIE a n © Si AMIENS = n © He te aq D ONE 2 © >» - 2 Cy eo oO Pt ME [20 © œ 2 | Lo | pe] ES a | &@% | 20 = ss] w | SE = a CA DEEE 5 £a) à |sve|s— > Den En EC ESRINEES S (=) = A7 | n © a ES A FIN MEN CE = 26 = D | G— Ê È SNA ® = ee ® =: seule 5 D | Sala Z A 8 8212 2 2 8 Elus 2 | as |Ss © T Re |n< © S Aa>lMme © s | À F à 5 & 26 I 0 »| 0,3 67-D|\2e.c.| 0 »| 2,6 16-411 e.c.| 0 »| 0 »|tr. malade 2 ) » | 0 » 0 » » » » » E. » » » » » 5 2B11 D 0 »| 0,3 32 9| Id. | 0 »| 4,3 RSA 10-4| Id. | 0.6! 0 » » : © © D'AM)) 0 ; 3| 0 » = » » » » æ » » » » » | = = très 22 » 0,6! O » = 40-9| Id. | 0,31 3 » = 93-4| Id. | 0 »| 0,6| malade. ' : [= & mn ADS) 0.3| 0 » Le) » » » » T » » » » » | ; S = très 38 » | 0,6| 0,3 = 34-9|MTd: 1" 0,61#353 = 86-4| Id. | 0,6| 1,6| malade. | e ‘o 99e» | ll 1 » = » » » » 2 » » » » » "2 ge ee = très An rli2r» |A L 51-9|\1d..| M4 »119,6 5 32-4| Id. | 0 »| 2 »| malade. ! 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L SENSIBILISÉS ANAPHYLAXIE PASSIVE pre ÉPROUVÉS DANS LE PÉRITOINE : 5 : É VÉS P2 J VEINEUSE ÉTUDIÉS APRÈS 24 HEURES EREOUMESERESEMOTE EUR = : : . | CA : : £ lee À ë IE 3 al ASE EC in © ml <5s = NS HIS a IT ANEERS ns s|ss [=] CES = Bo|F0o = Oo & NES .2 © > NN ln EN ONIRENS e Hi & A = | A Ée) UE A = | br 22 nelrel WI A2» | 0x | En Le! © A © IE S © à ® ERIC S 29|2S%|2.|25|<2|4€ & ES| $ |aelee £ É © £ He £ ESS EI EEE 7 el , + CE © el 24 mn IA E 5 Z 2 dp|us FE Cr: aEl|a£ ui Zal 2lüe] 2laslas A = S2Ss|S% © E CU Oo = SE NE © Li MM-4| 1 ce.| 0 »| 2,3] très malade |12-3/1/2c.c.|14,3 15,6) sacrifié 88-I 0 » 0,3| 1 » » très après 5-4 Id. 0 »| à 3 malade » » » » \ 42 h. » » » » » | 5 86-4| Id. | 0 »| 9,3 » 4-4|1 c.c.| 0,6! 1 » 802» 2710: s 10/0» » 4-5 Id. 0 » 12;3 » » » » » » S » ‘5 » » » — : EE 1 = 14-4| Id. 0,3] 2 » » 52-4| Id. |50 »|47 »| 86 » = 0,3] © | 0 »| 0 » » | nl | un 50-6| Id. 0,3| 2 » » » » » » I MES Do | » » » 1/4 je 2) Dal Id. |1 12») » [22 c.c. | 1/|4» 85 »| = | 0,6| & |2,3l 4») » ; très sacrifiés a TS 38-4| Id. 15,6114,5| malade » » » » n» LE Di » » » | après a < "3-4 Id. |17,6/29 » » 51-9) 1/100 | 0 | 0 » 95 »| © | 0,6] & | 2,6] 2 » » ) C.C. 24 Et = 99-E Id. 14,6 21 6 » » » » » » ee » d » » » ; © TD heures. © » » SUE SORT D | Tdi 0 |0,3 91»| & |1» £ 0h06 ) très = 49-912 c. c. 0,3 1 »| malade n » » » » E » a » » » | =) | = co] = | a 43-4| Id. 0,3| 5,6 » 55-11 Jd. 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Tableau XIV. — AUGMENTATION DES MASTZELLEN DU SANG CHEZ LES ANIMAUX AYANT RECU DES INJECTIONS RÉPÉTÉES DE SÉRUM DE CHEVAL COBAYES SENSIBILISÉS COBAYES AYANT RECU SOUS LA PEAU, re | injections ide 2 cc tdeséruin ÉPROUVÉS DANS LE PÉRITOINE] INJECTÉS SOUS LA PEAU à 4 jours d'intervalle. N°5 Mast. Mast. N° Mast. Mast Nos Mast. 24 h.|Mast. 24 h. des avant après des avant après des après après cobayes.|épreuve| épreuvelcobayes.| épreuve| épreuvelcobayes.| la {re inj. la 3° inj. p. 100 | p. 110 p. 100 | p. 100 p. 100 p. 100. 61-9 2 » 31 » 1980 3 359 62 F. 1 7 82-9 2 » D » 81,8 0,3 2, DOR 2 6 11-9 2 » 3 » 32,9 L» 0 » 30 l 112 81-9 L » 2 » 59, 00 9,6 4 » 2 î 16-9 À » 0 » 16,0 3 » 279 3 ) il il 49-9 15) D » 34,9 0,3 0,6 38 » il 4 413-4 0,6 0,3 40,9 0,6 3,6 65 » il 7 50-6 2 » 4,3 51,9 2 » Ban 43-4 0,6 3 » 1159 ln L» 94-53 0 » 10 » 95,8 A) 4,6 86-4 0,6 2,6 14-4 08 3) 4-5 0,3 4 » 11-3 0,3 3,6 CONCLUSIONS. 1° Les éosinophiles possèdent, comme tous les globules blancs, des propriétés chimiotactiques. Ils sont beaucoup plus sensibles que les autres variétés de leucocytes à l’action attrac- tive qu'exercent sur eux certaines substances toxiques, surtout celles d’origine parasitaire. Lorsque ces substances « éosinotactiques » sont résorbées dans les tissus malades ou infectés, elles y provoquent un appel plus ou moins considérable d’éosinophiles, et déterminent ainsi la formation d’une éosinophilie locale. 2° L'étude expérimentale des conditions dans lesquelles on peut reproduire l’éosinophilie locale permet de dégager la loi RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 505 suivante : on ne peut provoquer une éosinophilie locale que chez des animaux présentant une éosinophilie sanguine. L'intensité de cette éosinophilie locale ne dépend pas seulement du pouvoir éosinotactique différent, propre à chaque substance toxique ou parasitaire, mais encore, et surtout, de l’abondance des éosinophiles dans le sang de l'animal en expérience. Lorsque les éosinophiles font défaut ou sont très peu nombreux dans le sang, les substances « éosinotactiques » provoquent un afflux local considérable de polynucléaires neutrophiles. Ces substances agissent donc seulement de préférence, mais non exclusivement sur l’éosinophile. Nous ne connaissons pas de substances qui soient exclusivement éosinotactiques. 3° Nous avons dégagé cette loi, en provoquant avec divers produits vermineux une éosinophilie locale dans le tissu con- jonctif de la paupière du cheval, sous la peau et dans les muscles du cobaye. Les mêmes substances, facilement diffu- sibles, injectées dans la cavité péritonéale des cobayes neufs, n'ont pas provoqué l’afflux des éosinophiles du sang dans l’exsudat péritonéal. Dans ces conditions, les éosinophiles s'arrêtent dans les tissus au voisinage du péritoine, et c’est là que l’éosinophilie locale se constitue. Ajoutons que, pour pouvoir interpréter ces expériences, il est nécessaire de tenir compte de l’éosinophilie péritonéale spontanée, si fréquente et parfois si intense chez les cobayes neufs. 4° L'éosinophilie locale expérimentale s'établit en quelques heures. Une fois arrivés dans le tissu conjonctif, les éosino- philes y restent très longtemps; si, pendant ce temps, pour une cause quelconque, l'éosinophilie sanguine vient à dispa- raître, et si l’on étudie, à ce moment-là, à la fois l’'éosinophilie sanguine et l’éosinophilie locale, on note fatalement une dis- cordance entre ces deux phénomènes. Des résultats contradic- toires ont ainsi pu être obtenus par quelques auteurs qui ont étudié les rapports de l'éosinophilie sanguine et de l’éosino- philie locale, surtout dans certaines affections de la peau. 5° L'étude de l’éosinophilie localé, qui se produit aux points de fixation de différentes espèces parasitaires sur la muqueuse intestinale du cheval, confirme entièrement la loi générale que nous venons d'énoncer. 506 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR J 6° Dans l’éosinophilie locale expérimentale, et dans l’éosino- philie locale observée aux points de fixation de divers parasites, nous n'avons rencontré que des éosinophiles du sang à noyau bilobé ou segmenté. Jamais nous n’avons observé la transfor- mation sur place d'éléments cellulaires quelconques en cellules éosinophiles. Pour ce qui est des éosinophiles mononueléaires, que nous avons observés dans l’exsudat péritonéal des cobayes neufs, nous pensons que leur formation doit avoir la même cause que celle qui détermine l'apparition d'éléments semblables signalés dans d’autres exsudats de l'organisme (exsudat pleural, liquide céphalo-rachidien, etc.). Comme a présence de ces éléments est liée, d'après nous, non pas à un processus aigu, mais à un processus chronique, nous réservons l'étude complète de cette question pour un prochain mémoire, qui traitera de l’éosino- philie chronique. 1° Lorsqu'on immunise des cobayes par des injections répétées d'une substance éosinotactique, on constate que, chez un animal préparé, l'injection sous la peau ou dans le péritoine de la toxine immunisante provoque, beaucoup plus rapidement que chez les animaux neufs, une éosinophilie locale, beaucoup plus intense. Ceci est démontré, entre autres, par la possibilité qu'il y a d'obtenir un afflux des éosinophiles du sang dans la cavité péritonéale des cobayes préparés, ce qui, comme nous le savons, n’est pas possible chez les cobayes neufs. Nous avons ainsi trouvé un procédé pour obtenir un exsudat péritonéal très riche en leucocytes éosinophiles (jusqu’à 70 p. 100), ce qui facilite l'étude de leurs propriétés biologiques. 8° Au cours de l’immunisation, la sensibilité chimiotactique de l'éosinophile est très fortement accrue. C'est là certainement une preuve du rôle que jouent les éosinophiles dans l’immunité vis-à-vis de certaines substances toxiques, d’origine micro- bienne ou parasitaire, d'autant plus que nous avons pu prouver que cette adaptation fonctionnelle de l’éosinophile était étroi- tement spécifique. 9° Comme l’éosinophilie locale aiguë s’alimente aux dépens de l’éosinophilie sanguine, elle provoque nécessairement un appauvrissement momentané du sang circulant en éosinophiles. Cette baisse de l’éosinophilie sanguine est d'autant plus RECHERCHES BIOLOGIQUES SUR L'ÉOSINOPHILIE 507 marquée que la lésion locale est provoquée sur une plus grande étendue, et que l'animal chez lequel on l’observe est plus fortement immunisé contre la toxine qui a servi à l'injection locale. Ce fait permet d'expliquer l'abaissement du taux de l’éosino- philie sanguine, observé après l'opération de kyste hydatique. Nous savons, en effet, que l'intervention chirurgicale s’accom- pagne presque toujours d'une résorption locale étendue de liquide hydatique. 10° L'éosinophilie locale parfois intense, observée dans le phénomène d’Arthus, a été attribuée par quelques auteurs à l’action chimiotactique de l’anaphylotoxine. Deux arguments principaux sont invoqués pour démontrer les rapports directs qui existeraient entre l’éosinophilie et l'état anaphylactique. De ces deux faits, Le premier est inexact, l’autre : nous paraît mal interprété. L'injection d'épreuve pratiquée dans le péritoine ne déter- mine pas d’éosinophilie locale dans les poumons des animaux qui ont survécu au choc anaphylactique. L’éosinophilie pulmo- naire, signalée par quelques auteurs et considérée par eux comme une lésion caractéristique de l’anaphylaxie non mortelle, préexiste chez la plupart des cobayes à éosinophilie sanguine un peu marquée. Quant à la hausse de l’éosinophilie sanguine, qui survient vingt-quatre heures après l'injection d’épreuve pratiquée dans le péritoine des cobayes sensibilisés, elle ne peut pas ètre non plus considérée comme une conséquence de l’anaphylaxie. Nous l’expliquons par l'action directe de l’antigène sur les centres hématopoiétiques, déjà préparés à réagir à la suite de l'injection sensibilisante. 508 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR PLANCHE XV Fic. 1. — Paupière d'un cheval instillé dans l'œil avec du liquide asca- ridien. Fixée par le liquide de Bouin. Coloration par l'hématéine-éosine diluée. Grossissement 360/1. Le cheval avait une forte éosinophilie sanguine. La paupière a été réséquée dix minutes après l'instillation, les capillaires sont bourrés d’éosinophiles. On n'observe pas encore de diapédèse. Ép., épithélium de la muqueuse palpébrale; Te, tissu conjonctif du cho- rion non infiltré; c, capillaires bourrées d'éosinophiles. F1G. 2. — Même matériel. Le cheval avait une forte éosinophilie sanguine. La paupière a été réséquée une demi-heure après l'instillation. On voit les éosinophiles sortir des capillaires par diapédèse, avant les autres variétés de leucocytes. Pol., polynueléaires neutrophiles; éos. a, éosinophile en diapédèse; é0s. b, éosinophiles sortis du capillaire. F1G. 3. — Même matériel. Le cheval avait une forte éosinophilie sanguine. La paupière a été réséquée deux heures après l'instillation. L'éosinophilie est établie. On voit dans le tissu conjonctif de nombreux éosinophiles du sang associés à d’autres leucocytes. Les éosinophiles forment un manchon autour du capillaire, dont ils dissocient les cellules périthéliales. Pol., polynucléaire neutrophile ; éos., éosinophile; G, gaine éosinophilique périvasculaire. F1G. 4. — Même matériel. Le cheval n'avait pas d'éosinophiles dans le sang. La paupière a été réséquée un quart d'heure après l'instillation. Le capillaire est bourré de polynucléaires neutrophiles. Pol., polynucléaire neutrophile sorti du vaisseau; c, capillaire bourré de neutrophiles. PLANCHE XVI F16. 5, — Poumon d’un cobaye sacrifié sans avoir reçu l'injection d'épreuve. Même technique. Grossissement 300/1. Le cobaye présentait une forte éosi- nophilie sanguine. On voit une infiltration du poumon par les éosinophiles, localisée surtout autour de la bronchiole. Br., bronchiole ; éos. a, éosinophile. s'insinuant entre les cellules épithé- liales de la bronchiole : eos. b, amas d’éosinophiles péribronchique. Fi6. 6. — Bouton de fixation d’un sclérostome sur la muqueuse du gros inteslin du cheval. Même technique. Grossissement 80/1. La muqueuse est aspirée dans la capsule buccale du parasite. Les glandes de Lieberkühn sont presque complètement détruites. Le cheval avait une forte éosinophilie sanguine. Le bouton de fixation est infiltré par des éosino- philes du’sang qui se disposent en amas confluents. Caps., capsule buccale du sclérostome; ch., chorion de la muqueuse détruite en partie par le parasite; Mus., muscularis mucosæ; $S. m., sous- muqueuse; éos., amas d'éosinophiles; ch., chorion de la muqueuse intact. LA NEURONOPHAGIE DANS LA POLIOMYÉLITE par C: LEVADITI et J. PIGNOT (Avec la planche XVII.) L'existence du phénomène de la neuronophagie dans la poliomyélite aiguë a été signalée par la plupart des auteurs qui ont étudié l’anatomie pathologique de cette infection chez l’homme. Les détaiis du processus phagocylaire qui préside à la destruction des neurones moteurs de la moelle et des centres buibo-protubérantiels ont été précisés surtout par Forsner et Sjüvall (4) et par Wickman (2). Mais, avant l'ère toute récente de l’expérimentation, il était impossible de suivre pas à pas l’évolution de la neuronephagie, les matériaux humains se prêtant mal à ce genre de recherches. Il en fut autrement lorsque la transmission de la paralysie infantile au singe permit le prélèvement des pièces à tous les moments de l'infection ; la neuronophagie fut alors suivie depuis le stade initial jusqu’à sa phase terminale, marquée par l’anéantissement total de la cellule nerveuse. En procédant de la sorte, nous avons montré, avec Land- steiner (3), que le processus évolue en deux temps. Le neurone commence par présenter des signes nets de dégénérescence, se traduisant par des altérations à la fois nucléaires et protoplas- miques. Ensuite, il est envahi par des cellules migratrices, la plupart d'origine sanguine, polynucléaires et macrophages. Ces éléments achèvent la destruction de la cellule nerveuse. Les polynucléaires, qui arrivent les premiers, s’insinuent dans le cytoplasma, y creusent des cavités et s’entourent d'une zone claire, paraissant dénoter une action lytique (1) Forsner et SJüvALL, Zeilschr. f. klin. Med., 1907. (2) Wickmax, Deutsche Zeitschr. für Nervenheilkunde, 1910, t. XXX VIII, p. 396. (3) Lanpsrener et Levaorrr, Annales de l'Instilut Pasteur, novembre 1910, AA D A0 j 510 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR exercée par les ferments leucocytaires sur le protoplasma. Les macrophages apparaissent le plus souvent vers la fin du pro- cessus; ils semblent parfaire l’œuvre destructrice des polynu- cléaires, en réalisant la résorption des détritus nucléo-protoplas- miques. Ces données nous ont fait admettre que la pullulation du virus dans la cellule nerveuse, cause première de la dégénérescence du neurone, détermine un appel chimio- taxique sur les polynucléaires. Ceux-ci doivent exercer une double fonction : l’englobement phagocytaire du microbe et l'histolyse de la cellule nerveuse. Par contre, les macrophages, dont le rôle dans la résorption des tissus est bien connu, arrivent vers la phase terminale du processus pour achever la résorption de ce qui fut le neurone moteur. Cette résorption des détritus nucléo-protoplasmiques par les cellules migratrices, nous l’admettions comme tous les auteurs qui ont eu à s'occuper de la neuronophagie; mais, comme la plupart d'entre eux, nous n'apportions aucune preuve directe. En effet, pour désigner le phénomène par le terme « neuronophagie », pris à la lettre, il faut déceler, dans le protoplasma des polynucléaires ou des macrophages qui envahissent le neurone, des produits bien définis, ayant fait partie intégrante de ce neurone. Or, par les méthodes employées alors, il nous était impossible de faire une telle constata- tion. C’est là une question d'ordre général qui intéresse le problème de la neuronophagie dans son ensemble. Nous l'avons traitée dans une note présentée récemment à la Société de Biologie(1). Nous avons insisté, d’une part, sur ce que le terme de neurono- phagie contient de vague, tant qu'on n'aura pas décelé dans les neuronophages des parties intégrantes de la cellule ner- veuse et, d'autre part, sur la tendance que l’on montre à englo- ber dans Ta neuronophagie proprement dite des phénomènes qui nous paraissent comporter une tout autre interprétation. Nous en avons ainsi dégagé le processus de la newrathrepsie, atrophie primaire du neurone, par suite d’une assimilation dé- fectueuse, et hyperplasie consécutive des cellules satellites, sans phagocytose proprement dite. Ce phénomène est à rapprocher (1) Levaniri, Comples rendus de la Soc. de Biologie, 1914, t. LXXVI, p. 474. LA NEURONOPHAGIE DANS LA POLIOMYÉLITE 511 de ce que l’on voit dans la vieillesse [Pugnat, Metchnikoff (1) et existe fréquemment dans les ganglions spinaux cultivés 27 vitro [Marinesco et Minea (2), Levaditi (3,]. Parmi les auteurs qui ont soutenu la réalité de la neurono- phagie, englobement proprement dit des débris du neurone par les éléments migrateurs, nous avons cité, en premier lieu, Manouélian (4). Ce chercheur S$'est servi, comme ma- tériel d'étude, de tissu nerveux rabique et y a découvert des processus qui, à notre avis, ne laissent aucun doute sur cette phagocytose de la cellule nerveuse. En effet, plus d’une fois, il a décelé, par une technique spéciale, des granulations pigmen- taires dans les éléments migrateurs et les cellules satellites, granulations qui avaient appartenu à la cellule nerveuse. Il n'en est pas moins vrai, cependant, que cette preuve en faveur de la réalité de la neuronophagie pourrait, à la rigueur, être discutée, attendu que Les particules, supposées phagocytées, étaient de nature pigmentaire. Or le pigment, étant un produit assez généralisé dans l'organisme, peut apparaître à la fois dans le neurone et dans les cellules satellites. De fait, une telle objec- tion à été formulée par Marinesco. Dans sa monographie sur La cellule nerveuse (5), cet auteur s'exprime ainsi à ce propos : « Il est vrai que M. Manouélian a soutenu dernièrement que la présence du pigment à l’intérieur des cellules satellites proliférées autour des cellules des ganglions spinaux serait une preuve indiscutable en faveur de la neuronophagie exercée par ces cellules. À cette constatation de M. Manouélian, qui est exacte, je pourrais faire observer qu'on rencontre du pigment dans les cellules satellites dans Les états pathologiques les plus divers. Puis, Castelli a montré que les cellules satellites peuvent absorber des granulations d’encre de Chine tout comme les cellules nerveuses, du reste. De son côté, Alzheimer a soutenu aussi la même opinion pour le pigment. Il en résulte que l'existence du pigment dans les cellules satellites, soit dans la (1) Mercanikorr, MEsniz et WEeINBErG, Annales de l’Institut Pasteur, 1902, n° 12, p. 912. (2) Marinesco et Mixea, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1913, t. LXXV, p. 202. (3) Levanrrr. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1913. 4) MANOUÉLIAN, Annales de l'Institut Pasteur, 1906, t. XX, p. 859. (5) Maxwesco, La cellule nerveuse, t. Il, p. 483, Paris, Doin. 912 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR rage, soit dans d'autres maladies, ne constitue pas une preuve ‘indéniable que ce pigment provient de la digestion des cel- lules nerveuses. » Pareille objection ne saurait ètre adressée aux constatations que nous désirons exposer dans ce mémoire. Nos études sur l'histologie pathologique de la poliomyélite expérimentale du singe, faites, au début, en collaboration avec M"° Léoneano (1), nous ont permis de saisir sur le fait l’englobement des parties intégrantes des neurones par les phagocytes, dans des condi- tions appelées à entraîner la conviction des plus sceptiques. Il s’agit de /a phagocytose des granulations oxyphiles des cellules nerveuses des ganglions spinaux par les polynucléaires et les ma- crophages qui envahissent le protoplasma de ces cellules. Un mot, tout d’abord, sur les caractères et la distribution de ces granulations. D'après Marinesco (2), les granulations en question ont été vues, par Lévi (3) dans les cellules des ganglions lombaires du lapin. Sur des préparations colorées par la fuchsine acide et le vert de méthyle, les granulalions fuchsi- nophiles de Lévi apparaissent teintes en rouge et sont agglomérées en amas vers un des pôles de la cellule. Le repos ou l'activité de ces cellules paraissent exercer une influence manifeste sur la quantité, le volume et la distribution de ces granulations. Held (4) décèle des grains analogues dans les cellules de Purkinje. les cellules radiculaires motrices et pyramidales, grains disposés dans le réticulum du FPRsIoPIÈsre ou dans ses mailles ; il les appelle neurosomes. En 1899, Marinesco (5) colore des coupes de ganglions spinaux humains par le procédé de Romanowski et découvre dans les cellules ganglionnaires des granulations teintes en rouge-rubis ; ces constatations sont confirmées par Marburg (6) et par Bruckner (7) (ganglions sympathiques). Enfin, Olmer (8) décrit des formations analogues dans les cellules du locus cæruleus, se colo- rant par les couleurs basiques, mais retenant aussi la fuchsine acide. Dans sa monographie déjà citée, Marinesco décrit en détail ces formations granulaires oxyphiles, ou plutôt oxyneutrophales, comme il les appelle. Elles apparaissent en pius grand nombre | Ces constatations ont été mentionnées en 1912 par Levapirt (Biologica). } Cf. pour la bibliographie, Marinesco, La cellule nerveuse, t. I, loc. cit. x ) Lévi, Riv di Patholog. nerv. et mentale, 1896, n° 5 (4) He, Arch. für Anat. und Physiolog., 1897. 5) Marinesco, Revue neurologique, 1899, n° 20. ) MarBurG, Arb. aus dem Neurolog. Institut, 1902. ) BruckNEr, Sfructura simpaticului, thèse de Bucarest, 1901. ) OLMER, Rech. sur les granulations de la cellule nerveuse, Lyon, 1901. LA NEURONOPHAGIE DANS LA POLIOMYIÉLITE 513 dans les cellules des ganglions lombaires, se colorent par les colorants acides et neutres (Ehrlich, Biondi) et se montrent de préférence dans les éléments cellulaires les plus volumineux. Parfois, surtout dans les cellules en état de chromatolyse, les granulations oxyneutrophiles apparaissent disposées le long des filaments du réseau achromatique. Le plus souvent elles forment des colonies à l'un des pôles de la cellule et sont mélangées à des grains pigmentaires. D'après nos constatations, les ganglions rachidiens du singe (Mac. cynomolqus et surtout M. rhesus) abondent en cellules renfermant des granulations oxyphiles. On peut les mettre en évidence en colorant les coupes par le procédé suivant, méthode de Mann, légèrement modifiée : Méthode. — Pièces fixées au formol (10 : 100), coupes à la paraffine. Xylol, alcool absolu, eau. On place les coupes dans le bain suivant : Bleuideimeéthyle arte ete 1 p. 100 20 cent. cubes. HOSINE TA Re NE ce D Ai00 20 — FauRdiSEHIéee PS AU en. 50 — Séjour pendant deux à trois heures à 38 degrés. Lavage rapide à l’eau. Les coupes sont maintenues jusqu'à ce qu'elles prennent une teinte rubis, dans le bain suivant : AICOOADSOIUEN A EMA MEME TE. ele 30 cent. cubes. Solution aqueuse de soude, à. . 1 p. 100 20 gouttes. Lavage rapide à l'alcool absolu. On plonge les coupes, jusqu'à ce qu’elles deviennent nettement bleues, dans le bain suivant : AICLOAbS OU MER SE SUD NE EPST 30 cent. cnbes. Acide acétique cristallisable . . . . . . 1 petite goutte. Lavage à l'alcool absolu, xylol, baume. ConsrarTarions (v. planche X VIT). A l’état normal, un grand nombre de cellules nerveuses des ganglions rachidiens (de préférence lombaires) renferment, chez le singe, des granulations qui se colorent en rouge vif par cette méthode. Les figures 1 et 3 représentent deux cellules de type différent au point de vue de la répartilion des granu- lations. F 514 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Fic. 1. — Le noyau (») est au centre du neurone; s, cellules satellites, 4, hématie. Le cytoplasma, c, renferme un grand nombre de granulations rouges, de volume égal, rondes ou légèrement ovalaires; ces granulations sont accumulées en amas, en haut et à droite de la cellule. Fig. 3. — s, cellule satellite ; c, cytoplasma. Les granulations (r) ont une disposition «en rosace ». Elles forment des groupes de 4 à 6, sont disposées en cercle et.occupent le centre d’une vacuole claire. Au début du processus de la neuronophagie, les éléments migrateurs, en nombre relativement restreint, envahissent le protoplasma de la cellule. La figure 5 montre le cyloplasma (p) contenant des granulations oxyphiles, et en /, /'et /' des leuco- cytes à noyau lobéayant pénétré dans ce cytoplasma. Ces leuco- cytes sont entourés d'un espace clair et renferment des granu- lations oxyphiles ayant appartenu à la cellule nerveuse. Une cellule satellite (à gauche et en bas du vaisseau À) renferme également quelques granulations. La dégénérescence primitive du neurone se traduit, dans cer- taines cellules, par un enrichissement du cytoplasma en grains oxyphiles etune affinité marquée du réticulum pour les couleurs acides. La /igure 4 est un exemple de cette modification parti- culière (n, noyau dégénéré ; p, cytoplasma avec réticulum oxy- phile et pénétration des macrophages dans la périphérie du cytoplasma). La figure 2 est une belle illustration de la phagocytose des grains oxyphiles par les leucocytes à noyau polymorphe et les mononucléaires ; €, capsule; /, /!, phagocytes ayant englobé des grains acidophiles; », fragment de polynucléaire contenant les mêmes grains. La figure 6 représente un stade plus avancé du processus. Toute la capsule est remplie de cellules migratrices, en grande majorité des polynucléaires. Certaines de ces cellules ont phagocyté des grains acidophiles. Elles sont emprisonnées dans un réseau à larges mailles, vestige du cyloplasma du neu- rone ; €, mononucléaire sans granulations; /, /', /" polynucléaires ayant englobé des granulations oxyphiles. La phagocytose de ces granulations est exercée surtout par les mononucléaires dans la cellule représentée par la figure 7. LA NEURONOPHAGIE DANS LA POLIOMYÉLITE 515 d, reste du cytoplasma avec granulations; s, cellule satellite sans granulations ; », m/!,m",macrophages ayant phagocyté des grains oxyphiles. Des stades plus ou moins avancés de la neuronophagie sont représentés par les figures 8, 9 et 10. Fic. 8. — p, reste du cytoplasma neuronique, avec grains oxyphiles ; », #1, macrophages ayant phagocyté ces grains. Fig. 9. — n, hématies; /, /',[", polynucléaires ayant englobé des granulations acidophiles ayant appartenu à la cellule ner- veuse. Fi. 10. — c, capsule ; », m, paquets de grains oxyphiles dans certains des leucocytes qui ont remplacé complètement la cellule nerveuse. Toutes ces figures montrent de la façon la plus évidente que dans la destruction de la cellule nerveuse, au niveau des qan- glions spinaux, chez le singe atteint de poliomyélite, la véritable neuronophagie intervient aclivement. Ce qui prouve qu'il s'agit bien là d’un englobement phagocytaire de particules ayant appartenu à la cellule nerveuse, c'est la présence de granula- tions oxyphiles dans le protoplasma des phagocytes. Ces granu- lalions appartiennent en propre à la cellule nerveuse et ne sau- raient être confondues ni avec les grains éosinophiles, ni avec les granulations neutrophiles des leucocytes. Les premiers sont plus volumineux, les secondes plus fines et plus difficilement colorables. Si donc on décèle de nombreux grains oxyphiles dans les phagocytes qui envahissent le cytoplasma du neurone, c'est que ces grains proviennent de ce cytoplasma et qu'ils ont été englobés par ces phagocytes. y à neuronophagie véritable, tout tend à le prouver. Un point reste à élucider, cependant. Si l’origine vasculaire et diapédétique des polynucléaires qui prennent part au pro- cessus de la neuronophagie ne laisse aucun doute, il est plus difficile de préciser la nature des macrophages qui interviennent dans ce processus. S'agit-il de mononucléaires du sang, ou de cellules satellites, ou des deux espèces d'éléments cellulaires à la fois? La quantité parfois considérable de macrophages que l'on observe à l’intérieur de la capsule, véritables nids de mono- nucléaires ayant remplacé la totalité du neurone (figures 6, 9 516 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et 10, par exemple), nous fait pencher vers cette dernière hypo- thèse. Certains aspects du processus, tel celui représenté par la figure 7, plaident en faveur de l'intervention des cellules capsu- laires (satellites) dans l'acte de la neuronophagie. Mais quelle que soit la force proliférative de ces cellules satellites, il nous semble peu probable qu'elles puissent assurer à elles seules la destruction phagocytaire du neurone. Les macrophages du sang doivent prendre une part active à ce processus de destruction. LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE par L. LAUNOY et M. LÉVY BRUHL (Avec la planche XVIII.) Quelques-unes des modifications sanguines que l’on observe au cours de la spirillose des poules ont été signalées par les premiers auteurs qui ont étudié cette affection : Marcoux et SALIMBENI [1], Levaniti [2], mais il n’en a pas encore été fait, du moins à notre connaissance, d'étude systématique et dé- taillée. C'est cette étude que nous présentons ici. CONDITIONS EXPÉRIMENTALES. Nous nous sommes servis pour nos expériences de poules adultes du poids de 1 à 2 kilogrammes, en bonne santé appa- rente. Dans une première série d'expériences — dont nous donnons d'abord les résultats — nous avons réalisé l'infection au moyen d'un virus provenant du laboratoire de M. Levanimi. Nous injec- tions dans l'épaisseur des muscles pectoraux 0 c. ce. 1 à 0 €. c. 5 de sang d’une poule infectée, sang frais ou défibriné et con- servé quelques jours à la glacière. Cette quantité s’est toujours montrée suffisante. Ce virus a évidemment pour origine une infection par l'Argas du Brésil, mais nous ignorons le nombre de passages sur poules qu'il a subis. Quoi qu'il en soit, il produit chez l'animal injecté une affection qui est bénigne, puisque le pourcentage des cas mortels n'a pas dépassé 4 p. 100, et qui présente une constance assez remarquable dans la gravité et l'évolution des phéno- mènes cliniques et bactériologiques. Le virus est donc d’une part relativement atténué, et d'autre part il peut être considéré comme un virus fixe. o18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR La maladie réalisée dans ces conditions présente les carac- tères suivants : Période d’incubation de 48 heures, puis apparition des spirilles dans le sang périphérique. C'est le début de la période de septicémie qui dure 3 à 4 jours. Elle se marque clinique- ment par une forte diarrhée, de l'abattement, de l'inappé-_ tence, une pàleur marquée de la crête qui est terne et flasque, et une parésie plus ou moins accentuée du train postérieur. Vers le 5° ou 6° Jour, les spirilles, dont le nombre a augmenté progressivement dans le sang périphérique, se présentent grou- pés en agglutinats, plus où moins volumineux, puis dispa- raissent brusquement : c’est la crise. L'animal se rétablit rapi- dement et revient en quelques jours à un état tout à fait normal. Il se trouve immunisé contre un essai de réinfection, comme nous l'avons vérifié souvent. Nous avons essayé de renforcer ce virus par des passages, mais nos conclusions sont analogues sur ce point à celles de M. Marcnoux [3]; les passages successifs ne renforcent pas le virus; le séjour à la glacière est une cause d’affaiblissement quand on conserve dans le sang le gros amas de fibrine qui se forme au cours de la défibrination. En enlevant cet amas par décantation du sang aussitôt après la défibrination, on obtient un virus dont la virulence se conserve à la glacière pendant au moins un mois. En somme, par une série de passages et de con- servation à la glacière, nous avons eu pendant dix-huit mois un virus qui n’a pas sensiblement varié (1). TECHNIQUE DE L'EXAMEN DU SANG. Les numérations des éléments fiqurés étaient faites sur une goutte de sang prélevée à la crête; nous nous sommes servis de l’hématimètre de Marassez, et comme liquide de dilution du liquide de Marcano. Le dosage du fer était pratiqué sur 5 cent. cubes de sang carotidien ; en même temps on faisait une numération des hématies dans le mème échantillon de sang artériel; nous (t) L. Lauxoy et F.:Deraix ont vu, depuis la rédaction de ce mémoire, que le Sp. gallinarum peut être conservé à la glacière, dans certaines conditions, pendant quatre mois au moins, sans perdre sa virulence. LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 519 avons obtenu chaque fois un chiffre très voisin de celui que nous avions trouvé à la crête quelques minutes avant la salgnée. a) Récolle du sang. — Incision de 2 à 3 centimètres à la partie supérieure du cou; mise à nu d'une carotide ; isolement de celle-ci, ponction avec les précautions aseptiques d'usage au moyen d’un tube effilé: on prélève 6 à 7 cent. cubes de sang; le liquide est transvasé dans un verre à précipité, sté- rile. Avec une pipette de 1 cent. cube, on transporte 5 cent. cubes de ce sang, dans un matras à destruction; la pipette est ensuite lavée soigneusement avec 2 à 3 cent. cubes d’eau redistillée, de façon à entrainer par hémolyse la matière colorante des globules fixés sur la paroi de la pipette. Le sang de poule bien prélevé ne coagule dans ces conditions que très lentement, on a donc tout le temps voulu pour faire cette petite manipulation; si la prise est mal faite, le sang coagule très vite au contraire, même avant d'être trans- vasé, la coagulation se faisant en bloc ou bien sous forme de petits caillots mous. Tout sang qui nous a présenté des caillots, même très petits, n’a pas été employé. C’est donc sur le sang total, bien liquide, n'ayant subi aucun début de coagulation que nos dosages ont été effectués. b) Dosage du fer. — Le sang est additionné de 8 cent. cubes d'SO“H®? chimi- quement pur à 66 degrés (procédé Bertrand); la destruction est faite à chaud sans addition d'acide nitrique; la liqueur claire obtenue est égale à 2 ou 3 cent. cubes; on l’'additionne de 30 à 40 cent. cubes d’eau distillée bouillie. Le sel ferrique est réduit par H?S au bain-marie à l’ébullition. Quand la réduc- tion est totale on chasse H?S en excès par un fort courant d'acide carbonique, à chaud. On laisse refroidir dans un courant de CO?, on titre dans le matras même par une solulion de permanganate N/100 titrée par l'acide oxalique. Le titre de notre solution de permanganate était vérifié fréquemment. Une précaution à prendre pour la chasse rapide de H?S en excès, consiste dans le remplacement de tout le système : bouchon de caoutchouc et tubes abducteur et adducteur des gaz quand on passe de HS à CO*. L'opération est donc conduite depuis la prise de sang jusques et y compris la titration dans un seul récipient. La résistance globulaire des hématies était recherchée en laissant tomber une goutte de sang dans 4 cent. cubes de solution chlorurée sodique à taux décroissant. L'examen morphologique des éléments et l'étude de la formule leucocytaire était fait sur des lames colorées au May-Grünwald-Giemsa, d’après la technique indiquée par Pappenheim : May-GruNwaAL» trois minutes, plus eau distillée trente secondes, laver, plonger dans Giemsa (I goutte pour 1 cent. cube) douze à quinze minutes, laver, sécher. Des colorations de contrôle étaient faites avec May-Grünwald simple, héma téine et éosine, triacide, etc. x 1 © ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR IT Le sang de la poule à l’état normal. On trouve à l’état normal des chiffres assez constants. Nous croyons utile de donner ici avec quelques détails les résultats de nos examens personnels. Hémaries. 1° Nombre. — Nous avons trouvé des chiffres de globules rouges variant de 2.180.000 à 3.200.000. Le taux moyen est gé- néralement compris entre 2.300.000 et 2.900.000, en moyenne 2.600.000. Ces chiffres sont relativement faibles, comparés à ceux qui ont été donnés par quelques auteurs, en particulier par Burckuarpr |[4}. Cet auteur trouve comme moyenne 3.288.000. Ilest possible que cette différence tienne, au moins en partie, à ce fait qu'avant de prélever le sang, il produisait l'hyperémie de la crête en la frictionnant avec de l’éther. 2° Dosage du fer. FER GLOBULES ROUGES POULES pour 100 cent. cubes par de sang. millimètre cube. Ai 0,046 » 2 0,049 » SÙ 0, À OT ri 0,046 » L QAR. AE RE 0,038 » 4 b (8 jours. après 4 a). . . 0,039 » CRT EEE VON Ten E ; 0,038 » 5 b (8 jours, après 5 a). . . 0,042 » GR EN EMEA TEE RUE 0,047 2.640.000 1 0,043 2.520.000 D serie Le MEME EP RENE 0,044 2.640.000 D MOULE QUI RENE ; 0,056 2.920.000 Ces chiffres indiquent donc une grande stabilité dans la teneur en fer du sang de poule. En effet, à part les cas 4 et 9 qui sont un peu aberrants, la teneur pour les sept autres cas est com- prise dans Îles limites très étroites de : 0,042-0,047; pour ces neuf exemples, la moyenne est de 0,045. LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 521 Nous ne connaissons qu'un seul document publié à ce sujet ; c'est une analyse de PELOUZE, cité par ArmaxD GauTIER [5]. Pour Pecouze (1 seul chiffre) le fer serait égal à 0,036 p. 100, donc résultat un peu plus faible que celui que nous avons obtenu. 3° Résistance globulaire. — Elle est très élevée chez la poule, par comparaison avec les autres animaux de laboratoire. Nous avons trouvé : début de l'hémolyse à 0,40, hémolyse totale à 0,35. D'après Cosra et Faver [6], début à 0,46, hémolyse totale à 0,34. L° Aspect morphologique. — Les hématies après étalement sur lame et coloration, se présentent comme des éléments, tous semblables d'aspect et de dimensions, de forme ovale, à noyau central ovalaire, assez volumineux, fortement coloré en violet, à protoplasma homogène, nettement coloré en rose. LEuUcocYTEs. Nombre. — Nous avons trouvé des chiffres variant entre 25.200 et 56.400, en général compris entre 30.000 et 45.000. Burckaarpr trouve en moyenne 23.500 (12.000 à 46.000). KLiexeserGEr et CarL [7], 35.000 à 60.000. Aspect morphologique. — Les différentes variétés de globules blancs sont en proportion assez constante ; la formule leucocy- taire est relativement fixe. Ces variétés sont : A. — Des mononucléaires qu'on peut distinguer d’après leurs dimensions en : a) Lymphocvtes (30 à 50 pour 100 leucocytes), petits éléments arrondis, à gros noyau central fortement coloré, entouré d'une mince bande de proto- plasma homogène très légèrement basophile. b) Des moyens mononucléaires (1 à 23 p.100), analogues aux lymphocytes, mais un peu plus volumineux. c) Des grands mononucléaires (0 à 3 p. 100), éléments analogues de plus grandes dimensions, rares à l’état normal. En outre, on observe des mononucléaires à granulations basophiles (1 à 8 p.100), à gros noyau arrondi, à granulations rondes très nettement colorées en bleu violacé (Mastzellen, de BurcknarnT, KLIENEBERGER et CARL). B. — Des polynucléaires. Ils contiennent tous des inclusions ; ils se divisent en deux variétés nettement distinctes par la forme de celles-ci. Nous distin- guerons done : a) Les polynucléaires à bâtonnets, ou à cristalloïdes, suivant plusieurs auteurs (20 à 45 p.100). Leur noyau, fortement coloré en violet, est divisé en : 35 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 52€ A RE plusieurs lobes; le corps protoplasmique est rempli de formations ovales, cristalloïdes, fortement colorées en rouge. Le nombre de ces inelusions est considérable ; elles remplissent la cellule, recouvrant souvent les noyaux; la plupart du temps elles semblent groupées en deux amas comme suspendues à deux pôles opposés de la cellule. b) Des polynucléaires à grains ronds (1 à 18 p.100). Leur noyau présente à peu près les mêmes caractères que celui des polynucléaires à bâtonnets. Le pro- toplasma contient de petits grains parfaitement arrondis ; il se colore par le Mayx-GruxwaLv, en rouge moins intense que les bâtonnets. Les grains sont habituellement peu nombreux dans la cellule, ils sont espacés les uns des autres et répartis uniformément. Ces deux variétés de polynucléaires ont été décrites par Kasa- rinorr [8] sous le nom de polynucléaires pseudo-éosinophiles pour les polynucléaires à bâtonnets, et de polynucléaires éosi- nophiles vrais pour les polynucléaires à grains ronds. Cet auteur s'appuie sur certains caractères du noyau et des granulations, Nous avons cherché à préciser l'exactitude de ces qualifi- catifs. 1° Affinités chromatiques des inclusions. — Quand on fait agir sur un frottis non fixé les solutions suivantes : éosine dans alcool méthylique (1/100) deux minutes, puis hématoxyline pendant une minute, on obtient une coloration rouge des bâton- nets et des grains. La coloration est rapide, mais l'intensité est inégale pour les deux variétés d’inclusions : les bâtonnets sont nettement plus colorés que les grains: le plasma des éléments reste tout à fait incolore ; les grains en particulier se détachent nettement sur le fond grisâtre de la cellule. Par comparaison, des leucocytes humains traités de la même facon donnent les résultats suivants : Les polynucléaires à gra- nulations neutrophiles se colorent en rose très faible. Les poly- nucléaires à grains éosinophiles vrais, ont une teinte rouge intense à celle des bétonntts des polynucléaires in sang de la Fe La coloration par le May-Gruxwarn simple, pratiquée de même sur les lames de sang de poule non fixées, donne aux bâtonnets et aux grains une teinte rouge très forte et égale, ‘de mème qu'aux granulations des polynucléaires éosinophiles de l’homme. Après fixation par l’alcool-éther, puis coloration par l’éosine en solution aqueuse à 1/100, les bàtonnets et les grains sont LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 523 faiblement colorés en rose alors que les hématies sont forte- ment colorées par l'éosine. La même solulion d’éosine aqueuse donne les mêmes colo- rations, mais plus marquées après fixation des éléments par l'alcool méthylique. ; La coloration par le triacide d'Enrricu, après fixation à 110 degrés pendant dix minutes montre les bâtonnets fortement colorés en rose violet et les grains colorés en rose pâle; le plasma des éléments est incolore. En résumé, les inclusions cristalloïdes après l'application de ces différentes méthodes de fixation et de coloration se montrent nettement éosinophiles. Au contraire, les granulations rondes sont loujours moins fortement colorées que les bätonnets ; donc leur affinité pour l'éosine est moins intense que celle de ces derniers. On ne peut donc conclure de l'étude chromatique à l'éosinophilie vraie de ces grains si l’on considère les bâtonnets comme pseudo-éosinophiles. Restent les caractères du noyau. KasariNorr s'était fondé sur la forme particulière du noyau des éléments à grains ronds pour les rapprocher des éosinophiles de l’homme; il y retrouvait en effet l'aspect caractéristique des deux lobes réunis par un mince filament, signalé chez l’homme par Joczy. Celte disposi- ton se rencontre, en effet, mais elle est loin d'être la règle: nous l'avons retrouvée dans un élément sur vingt environ, les autres sont formés de deux lobes tout à fait séparés. Dans les polyaucléaires à bâtonnets, on trouve à peu près un élément sur dix ayant un noyau trilobé ; les autres bilobés. Il est difficile, dans ces conditions, de qualifier l’une de ces deux variétés d’éosinophile vraie et l’autre de pseudo-éosino- phile. À notre avis, ces deux sortes d'inclusions sont pseudo- éosinophiles, puisque la méthode d'Ehrlich les colore en rose- violet. D'ailleurs, ces dénominations ont peu d'importance, car les deux variétés d'éléments sont, en fait, très nettement dis- unctes, et 1l est impossible de les confondre. On ne trouve d’ail- leurs pas d'éléments intermédiaires pouvant créer une confu- sion. Pour ces raisons, nous parlerons ici de polynucléaires pseudo-éosinophiles à bâtonnets et de polynucléaires pseudo- éosinophiles à granulations sphériques. 524 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Nous trouvons comme formule leucocytaire moyenne : Lymphocytes "PA RReE 44 À Moyens MONO EEE 16,5 / 62 mononucléaires. Grands MODO PP EEE RENE CT RES Polynucléaires à bâtonnels . . 28,6 38 pol ea Polynucléaires à grains ronds . . . 6,6 POSRISEANCSe BASODHIIE SERRE RE 2,8 Ces chiffres concordent avec ceux que donnent les auteurs : ELLERMANN €l BANG KLIENEBERGER @L CARL BURCKHARDT Polynucléaires . . . 37|Petits lympho. . . 51,5|Petits lympho. . . 48,5 Lymphocytes . . . . 40|Grands Iympho. . . 12,3|Grands lympho. . 12,8 Grands mono . . . . 23|Bâtonnets . . . . . 29,5|Pseudo-éosinoph. . 27,9 È Eosinophiles vrais. 4,5 Eosinoph. vrais . . 7,9 Mastzellen "47 22|Mastzellen 26000270 Signalons enfin des /hrombocytes, éléments ovalaires à noyau fortement coloré, à protoplasma vacuolaire. Nous avons laissé de côté dans cette étude les variations numériques et morpho- logiques de ces éléments. III Le sang de la poule au cours de la spirillose. GLOBULES ROUGES. Nombre. — Si l'on suit les variations du nombre des globules rouges au cours de la maladie, on constate un abaissement progressif extrêmement précoce, puisqu'il est déjà très net au bout de quarante-huit heures (au moment où apparaissent les spirilles dans le sang périphérique). Vers le 5° ou le 6° jour (au moment de la crise), le nombre des globules est tombé à la moilié environ du chiffre primitif. C'est là le point d’anémie mazima, et cette chute est suivie d’une augmentation progres- sive tout aussi rapide, en sorte que le chiffre normal se retrouve entre le 12° et le 15° jour. LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 525 Globules rouges. JOURS de la M Z 1! JÉ L: M: O! maladie. Avant l'infection. |2.886.000/2.890.000/2.740.000/2.S881.000/2.520.000/2.640.000/2.920.000 Après 2 Jours.|[2.200.000/2.540.000/2.135.000/2.435.000 » » ) 3 Jours.|1.150.000/2.280.000/1.950.000/2.250.000 » 2.270.000/2 140.000 5 Jours.|1.800.000!1.470.000!1.800.000/1.340.090!1.445.000 1.995.000/1.800 000 6 jours.[2.420 ,000/1.260.000/Saignée.|Saignée.|1.330.000 » 1.820.000 8 jours.|2.830.000|1.530.000 » » 1.680.000/1.722.000/Saignée. 11 jours. » 2.130.000 » » 2.040.000[Saignée. » 15 Jours. » 2.560.000 » » 2.420.000 » » Dosage du fer — Pratiqué quand l'anémie est à son maxi- mum, il donne des chiffres notablement diminués, mais propor- tionnellement moins que le nombre des globules. Alors que ce nombre a baissé de près de moitié, la teneur en fer a diminué de 25 à 30 p. 100. Exemples : AVANT L'INFECTION AU 5° JOUR POULES Globules. rer. Globules. .140.000 .890.000 .520.000 0,043 .920.000 0,056 © D (9 D # Si l’on admet que tout le fer du sang est fixé sur les hématies, on trouve pendant l’anémie une valeur globulaire nettement augmentée. Ce fait rapproche l'anémie spirillaire des anémies dites pernicieuses. Le dosage du fer pratiqué quinze jours après l'infection, montre le retour à la normale. Résistance globulaire. — Nous n'avons trouvé en pleine anémie qu’une très légère diminution de la résistance globu- laire : le début de l’hémolyse se faisait à 0,40 au lieu de 0,35, chiffre normal. 526 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR Variations morphologiques. — L'examen du sang à l’état frais, après dilution dans le liquide de Marcano, permet déjà de constater l'apparition d'hématies anormales. On voit en effet à côté des globules rouges normaux, d’autres éléments qui en diffèrent par leurs formes et leurs dimensions. Les uns sont petits et arrondis; d’autres très grands (à peu près le double d’une hématie ordinaire); ün certain nombre d’entre eux se présentent avec un gros noyau très réfringent entouré d'un mince protoplasma qui semble très fragile. L'examen sur lames colorées montre à côlé de ces variations de formes et de dimensions une grande diversité dans les réac- ‘ tions colorantes, d’où un aspect très polymorphe (polychroma- tophilie) surtout marqué du 5° au 8° jour. On trouve alors à côté des globules normaux un petit nombre de globules altérés, nécrotiques, et — en plus grand nombre — de grands éléments ovalaires, faiblement colorés par l'éosine, d’autres analogues, mais tout à fait incolores, enfin des héma- ties franchement basophiles, généralement de forme arrondie. Notons également, à ce moment, la présence d’assez nombreux globules un peu plus volumineux que les hématies normales et dont le protoplasma est très fortement éosinophile. Les élé- ments pauvres en hémoglobine (faiblement acidophiles ou même basophiles) sont des formes jeunes qui marquent les premiers stades de la réparation sanguine. On les rencontre du 3° au 10° jour de la maladie; ils font place progressivement aux éléments normaux et le sang a repris vers le 15° jour son aspect habituel. Cette polychromatophilie, de même que l’augmen- tation de la valeur globulaire, rapproche l’anémie spirillaire des anémies dites pernicieuses. Mais elle s’en distingue comme nous l'avons démontré par la réparalion rapide et complète qui s'établit. GLOBULES BLANCS. Au cours de la maladie, les variations des leucocytes suivent toujours la même marche, fait que l'on peut rapprocher de l'évolution cyclique de l'affection au point de vue bactériolo- gique et clinique (incubation, septicémie, crise). Nous décrirons ces variations en suivant l’ordre chronologique des faits, tels LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 527 qu'on les constate par un examen journalier d’une poule infectée. Dès le début, avant même que les spirilles soient apparus dans le sang périphérique, on note une augmentation du nombre des leucocytes, marquant la réaction précoce des organes hémo- poiétiques. Cette leucocytose, qui est numériquement peu élevée (50 à 60.000 leucocytes au lieu de 25 à 35.000, chiffre normal), est due à l'augmentation des polynucléaires à bâtonnets, dont le pourcentage atteint 60 à 65 p. 100 au lieu du chiffre normal 35 p. 100 ; ces éléments présentent leur aspect morphologique habituel. Vers le 2° et 3° jour, au moment où les spirilles apparaissent, la leucocytose polynucléaire continue, mais l'aspect morpho- logique des éléments s’est modifié. Les bâtonnets sont remplacés par des grains arrondis, volumineux, souvent inégaux dans une même cellule. Ces inclusions présentent exactement Îles mêmes réactions colorantes que les bàâtonnets des polynu- cléaires normaux et sont nettement distinctes des polynu- cléaires à grains ronds de la poule normale. Ces leucocytes sont des éléments jeunes de nouvelle formation analogues à ceux qu'on rencontre dans la mcelle osseuse de l'embryon (Jocrx); Kasarinorr les a signalés au cours de certaines intoxications expérimentales de la poule. Nous les désignons sous le nom de néopolynucléaires, terme commode qui évite toute confusion. Ces éléments ne persistent sous cet aspect que durant deux ou trois jours; peu à peu, les inclusions des polynucléaires reprennent leur aspect cristalloïde normal. On peut voir, durant cette période, d'assez nombreux éléments, contenant à la fois des grains el des formations cristalloïdes. Ce sont les formes de passage de l'élément jeune à l'élément adulte. Ces formes de passage elles-mêmes disparaissent en quelques jours et on ne retrouve que des polynucléaires d'aspect normal. Après la poussée de leucocytose polynucléaire, on observe une courte période de leucopénie relative (le nombre des leu- cocytes retombe à la normale où même un peu au-dessous); elle coïncide habituellement avec les débuts de la erise (spirilles groupés en gros agglutinats) et se place vers le 6° Jour de la maladie. Aussitôt après commence une seconde poussée de leucocylose, mais cette fois c'est une leucocytose mononu- 60.000 50.000. || LT} En LE TA FERME tRERE vas eue 19.000 js RE [ A PA PC ES % 528 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR cléaire. Numériquement, elle est plus considérable que la leu- cocylose polynucléaire du début; le nombre des leucocytes s'élève à 70.000 environ, et sa durée est sensiblement plus longue puisqu'on peut la retrouver dans certains cas quinze NES PRE PR RE JR CNTERBRNRELEL HAE JE Le Ji Æ . HE LEUCOCYTOSE TOTAL ÉRLENSLEEE \ DÉS aù LE : BEA A FFF TOTALIT GERS DEMEE CERN 0-POLYNUCLEAIRES CEE ET | Éd ee 24 25 26 . 28 29 30 de 2 3 4 5 6 Z 8 AVRIL MAI Poule Y. — Spirillose. jours ou même trois semaines après la disparition des spirilles. La mononucléose est surtout marquée dans les jours qui suivent la crise ; l'établissement de la formule leucocytaire montre un pourcentage de mononucléaires atteignant 85 ou 90 p. 100 au lieu de 50 à 60 p. 100, chiffre normal. D'une facon générale, c'est une mononucléose à éléments moyens, on trouve égale- ment de nombreux lymphocytes reliés aux précédents par tous les intermédiaires, et en outre de grands éléments à proto- LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE © 529 JE TTTa En : TOTALITÉ DES NONUCLÉAIRIES F En 5 LATE dBé ie HE sl vRrRTeRE BLSIbE 19 à | || 3 es EE Es || ae 17 11 10 1 ÉAIRES Poule Z. — Spirillose. | "T4 NÉopotrader 29 o FTS CUISESREMReNtE BIEN a name cet Meet Li HAT De RE ATEN EE Ti sremem eee +++ +4+++ 26 AVRIL ++ base ME Be ECO mnno ec nu ie mie LHÉPe Eee) | Go Es o || 40.000 É / F5 LIU Li | | dsl - El is 24 — ! 530 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR plasma homogène plus ou moins basophile. On trouve en outre quelques rares mononucléaires à granulations pseudo-6osino- philes (myélocytes et promyélocytes des élèves de Pappenheim). Les variations des leucocytes basophiles sont faibles et incons- tantes. Comme résultats éloignés, on trouve soit le retour à des chiffres tout à fait normaux, soit un état de leucocytose numé- riquement assez faible, avec une formule tantôt normale tantôt: nettement mononucléaire. Ces modifications Icucocytaires peuvent être rapprochées, dans leur évolution, de celles décrites par Lécer, dans le surra expérimental de la souris blanche [91. IV Etude d’un virus de premier passage (virus argas). Nous avons recherché si le syndrome hématologique, d’une constance el d'une régularité frappantes dans les conditions expérimentales que nous avons définies, se retrouvait avec les mêmes caractères quand on réalisait chez des animaux tout à fait comparables une maladie plus grave au moyen d'un virus plus actif. Nous avons eu, grâce à l’obligeance de M. Marcaoux, un virus provenant d’une poule infectée avec le sang d’un animal piqué par un argas spirillifère. C’est donc un virus de premier passage; nous le désignons sous le nom de « virus aTgas ». Ce virus s’est montré sensiblement plus actif que le premier : le pourcentage des cas mortels s’est élevé à 30 p. 100 pour les poules adultes. Cette virulence n’est pas en rapport avec une seplicémie numériquement plus forte. Souvent mème, au con- traire, la septicémie est relativement peu marquée. Clinique- ment, on observe les mêmes symptômes qu'avec le premier virus : diarrhée, abattement et parésie, pàleur de la crête : mais ces phénomènes sont plus marqués et l’état général paraît plus atteint. Il semble qu'il se produise une intoxication grave qui caractérise l’évolution clinique, et qui est marquée dès le début. Quand l'animal succombe, c'est vers le 6° jour, après LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 531 110.000 ee ee MAATONTeSAI ARRET NUE MSN Mar ENT ENSE Dune En REC ERRRERRRRE 100.000 BRAS ARTE EEE REEE SAManREs + — SUR eee ARR A)INIeRSRRMEr | RENE el | 90.000 SRRRRO RSR RER RE USE SMS InEl QUE CORPS TERNARENARRBTIENMSENA) 1e ER EEOREEEEA FAI 80.000 CES A EE A EE PO AE 60.000 aa Ë Rite 50.000 ] 1e _ RE nus fi ME Dan ss tea RIRE EE ESRDMRRE LNUGLÉRIRE SA 20 21 22 23 24 25 26 30 En, 79 3 4 LE 7 JUIN JUILLET => ++ ++ 0 Poule R'. — Spirillose (Virus argas). (Et 532 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR disparition des spirilles; mais habituellement, la crise, carac- térisée par une agglutination nette des spirilles, est suivie d’une convalescence rapide et d’un retour en quelques jours à l’état normal. L'immunité complète est établie contre un nouvel essai d'infection. Au point de vue hématologique, nous retrouvons, au cours de l'infection ainsi réalisée, une anémie de même allure que dans notre première série d'expériences, mais d'apparition encore plus précoce et de grande intensité. Malgré l'atteinte grave de l’état général, la réparation sanguine se fait très rapidement; elle se marque par la même apparition d'éléments jeunes, d’où le mème aspect polymorphe du sang étalé sur lames et coloré. Exemples : AVANT FC : € JOU es 1 e I ù e ; = l'infection. JOUR 5° JOUR 6e jour 42° Jour 2.210.009 | 1.960.000 | 2.235.000 | 2.700.000 | 2.950.000 » » 1.310.000 » 2.280.000 Quant aux variations leucocytaires, elles sont analogues à celles que nous avons observées au cours de notre première série d'expériences, mais la leucocytose mononucléaire post- infectieuse est plus prononcée (80.000), elle peut être légè- rement prolongée. Dans d’autres cas, elle est masquée par une leucocytose polynucléaire concomitante, en sorte que le pourcentage des mononuceléaires ne dépasse pas 60 p. 100 au lieu de 80 à 90 p. 100, chiffre que l’on trouve habituellement après la crise. Ÿ Poules splénectomisées. Au cours de recherches sur le rôle de la rate, dans la résis- tance à l'infection et l'établissement de l’immunité dans la spi- rillose, nous avons étudié les réactions sanguines de quelques LE SANG DE LA POULE DANS LA SPIRILLOSE EXPÉRIMENTALE 533 poules dératées, comparées à des poules normales infectées dans les mêmes conditions. Nous nous sommes assurés d’abord que la splénectomie ne produisait pas par elle-même de modifications sensibles de l’état du sang. POULE A° POULE B° ESPÈCES GLOBULAIRES Avant $S jours Avant 8 jours splénectomie. après. splénectomie. après. Hématies 1129300006 112:880:0004102:510:0001 "2430-0000 OUCOCYLES RE Ce MAT. 37.000 33.400 40.800 39.400 Eymphocytes. . - . - . 36 3145 27 38,5 Moyens mononucléaires 14 15 » 15 10 » Grands mononucléaires. . (] 0 » 0 0 » Polynucléaires à bâtonnets. 40 36 » 49 20 » Polynucl. à grains ronds. S 15 » T T5 Basophiles . Deus > 2 DRE 2 4,5 I ne se produit pas non plus de modifications appréciables au bout d’un temps plus long (six semaines). Exemples : poule K 2, splénectomisée le 13 octobre. n un do n = A mn : : 2 SNS HE NINIEQQ NE = el Et = NES an ,< = © = = al Ü é = a ‘2 L Æ = z = 5 = Q Z a = ZI = < à = mn © © eZ n e = = D = © = SU) © Z = < 2] D = = 2 Us = 4 n D ca A = 5 © NE sur 38 cobayes traités par des injections préparantes de cris- tallins de cheval, de bœuf ou de mouton, l'injection déchai- nante intraveineuse de la même substance a provoqué 30 fois une réaction anaphylactique positive, le plus souvent: mor- telle. L’anaphylaxie par les substances albuminoïdes du cris- tallin existe donc dans la très grande majorité des cas. Mais est-elle spécifique pour l'organe étudié, pour le cristallin ? La deuxième série d'expériences répondra sur ce point, Deuxième série d'expériences. — Un animal préparé par une injection de substances albuminoïdes cristalliniennes, provenant d'une espèce étrangère donnée, présente-t-il des troubles anaphylactiques à l'injection déchainante du sérum de cette méme espèce, ou inversement ? Pour étudier cette question nous avons d'abord recherché si les cobayes préparés par l'injection de cristallin réagissaient ensuite à l'injection de sérum de la même espèce. 2 cobayes furent ainsi soumis à l'injection extrapérito- néale de 2 grammes et de 0 gr. 025 de cristallin de cheval. L'injection déchainante, trois semaines après, de 1 cent. cube de sérum de cheval ne fut suivie d'aucun trouble. 2 autres cobayes furent de même traités par une injection préparante de cristallin de bœuf. L'injection déchaînanie de sérum de bœuf ne détermina aucun symptôme chez l'un; l'autre présenta au contraire du malaise, et un peu d'hypothermie. Notons d'ailleurs ici qu'injectés en quantités égales les extraits bovins semblent être plus toxiques pour le cobaye que ceux du cheval. 3 cobayes, enfin, furent préparés par une injection intrapéritonéale de 0 gr. 025 ou 1 gramme de cristallin de moulon, puis soumis trois semaines plus tard à l'injection intraveineuse de 1 cent. cube de sérum de mouton. Deux des animaux furent absolument indemnes. L'un présenta un peu de dyspnée el une chute de la température de trois degrés. Nous avons, d'autre part, soumis 6 cobayes à une injection préparante de 1 cent. cube de sérum de cheval, puis ultérieurement à une injection intra- veineuse de cristallin de cheval (0 gr. 05 à 0 gr. 10). Aucun de ces animaux ne fut malade. Quatre témoins avaient été injectés : deux cobayes neufs injectés au cristallin de cheval et deux cobayes préparés par le sérum de cheval et injectés au cristallin de mouton : aucun ne présenta de troubles. De cette deuxième série d'expériences on peut donc conclure, en résumant, que sur 7 cobayes injectés avec du cristallin d’une espèce étrangère donnée, puis ultérieurement avec le sérum de cette même espèce, 2 seulement présentèrent des 632 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR symptômes d'anaphylaxie moyenne. Sur 6 cobayes préparés inversement par du sérum, aucun ne réagit à l'injection déchaînante de cristallin de même espèce. L'anaphylaxie sérique semble donc différer absolument de l’'anaphylaxie cristallinienne ; en d’autres termes, il semble y avoir une véritable spécificité d’organe pour le cristallin. Mais celte spécificité d’organe est-elle limitée à l'espèce d’où pro- vient le cristallin ou au contraire existe-t-elle vis-à-vis de cristallins d'espèces différentes ? Troisième série d'expériences. — Elle eut donc pour but de rechercher si un animal préparé avec le cristallin d’une espèce étrangère donnée peut réagir à l’injection déchaïînante de cristallin d'une espèce différente. A un premier lot de 8 cobayes, nous injectâämes dans le péritoine du cris- tallin de cheval (0 gr. 025 à 2 grammes). Trois semaines plus tard, 4 furent soumis à une injection intraveineuse de cristallin de bœuf (0 gr. 05) : 2 présentèrent des symptômes d'anaphylaxie, l'une mortelle en trois minutes, l’autre légère ; 2 autres furent absolument indemnes. Les 4 autres cobayes de ce lot furent injectés, d'autre part, avec du cris- tallin de mouton (0 gr. 05): l’un ne présenta aucun trouble, les 3 autres eurent des signes nets d’anaphylaxie, dont un cas mortel. Un deuxième lot de 11 cobayes fut soumis à une injection intrapéritonéale de cristallin de bœuf (0 gr. 05). 7 d’entre eux furent plus tard injectés dans la veine avec du cristallin de cheval (0 gr. 02 à 0 gr. 05): parmi ceux-ci, 3 furent indemnes, 2 moururent d'anaphylaxie grave en quelques minutes, et 2 présentèrent une réaction anaphylactique très nette. Les 4 autres cobayes furent soumis à une injection intraveineuse de cris- tallin de mouton dans la veine : 3 d’entre eux moururent en trois à quatre minutes avec les symptômes de l’'anaphylaxie suraiguë; le quatrième ne réagit pas, mais l'injection avait été défectueuse chez lui. Un troisième lot de 12 cobayes ful enfin traité par une injection prépa- rante intrapéritonéale de cristallin de mouton (0 gr. 025 et 0 gr. 05 centi- grammes). L'un fut trois semaines plus tard soumis à une injection intra- veineuse de 0 gr.05 de cristallin de bœuf : il mourut en trois minutes d’ana- phylaxie grave. Les 11 autres furent, à des époques différemment éloignées de la première injection, traités par une seconde injection de cristallin de cheval : 4 d’entre eux ne montrèrent aucune réaction; 5 présentèrent des symptômes moyens d’anaphylaxie avec hypothermie atteignant 5 degrés chez l’un et 3 degrés en moyenne chez les autres: 2 enfin moururent en quelques minutes. En examinant l’ensemble des résultats de cette troisième série d'expériences, on voit done que : sur 8 cobayes préparés RECHERCHES SUR LES RÉACTIONS ANAPHYLACTIQUES 633 par du cristallin de cheval et injectés secondairement avec du cristallin d'espèces différentes, 5 ont montré une anaphylaxie positive ; sur 11 cobayes préparés au cristallin de bœuf, puis soumis à l'injection de cristallins d'autres espèces, T ont réagi d'une façon positive; sur 12 cobayes préparés au cristallin de mouton, 8 montrèrent une réaction anaphylactique positive à l'injection déchaiînante de cristallins d'espèces différentes. Dans l’ensemble, sur 31 cobayes soumis à des injections pré- parantes et déchainantes de cristallins d'espèces différentes, 20 ont eu une réaction anaphylactique positive. On en peut donc conclure que l'injection du cristallin d'une espèce donnée anaphylactise, en général, le cobaye pour le cristallin d’autres espèces. Ce fait est important, car il montre que la réaction anaphylactique cristallinienne n’est pas limitée à l'espèce. Ceci est absolument contraire à ce qui se passe pour le sérum et les autres organes, ainsi que l’admettent Rosenau et Anderson. De l’ensemble des résultats de la deuxième série d’expé- riences, nous pouvions done conclure d’une part à la spécifi- cité d'organe; d'autre part, des résultats de cette troisième série d'expériences semble résulter, au contraire, la non- spécificité d'espèce des réactions anaphylactiques cristalli- niennes. On pouvait donc arriver à considérer l’albumine cristalli- nienne comme se comportant vis-à-vis de l'organisme dont elle provient comme une substance étrangère; il n'élait même pas irrationnel de penser qu'on pourrait parvenir à anaphylactiser le cobaye, par exemple, pour son propre cristallin. C’est ce point que nous avons cherché à élucider dans la série d’expé- riences suivantes. Quatrième série d'expériences. — Un animal préparé par une injection de substances albuminoïdes cristalliniennes prove- nant de sa propre espèce peut-il réagir à l'injection déchaïnante de ces mêmes substances? Douze cobayes furent, pour répondre à cette question, soumis à une injec- tion sous-cutanée ou intrapéritonéale de 0 gr. 025 ou 0 gr. 05 de cristallin de cobaye en émulsion. Seize jours plus tard, nous leur injectâmes à chacun 0 gr. 05 de cette même émulsion dans la veine. Aucun ne présenta le moindre trouble, ni de variation thermique. Deux témoins ne montrèrent à plus forte raison aucune réaction. 42 63% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Nous soumimes, quinze jours plus lard, six de ces mêmes cobayes à une seconde injection déchaïnante de 0 gr. 05, qui ne fut non plus suivie d'aucun trouble. Cette expérience très nette montre donc qu'il est impossible chez un animal d'obtenir des phénomènes anaphylactiques par l'injection préparante et par l'injection déchaînante de cris- tallin de sa propre espèce. Il semble donc bien difficile de souscrire à l'opinion de certains auteurs (Krusius) qui, non seulement admettent ces phénomènes d’auto-anaphylaxie, mais encore affirment qu'on peut les obtenir chez un cobaye pré- paré par une simple discision de la capsule de son cristallin. Mais peut-être est-il possible de provoquer dans certaines con- ditions chez le cobaye le choc anaphylactique par l'injection de cristallin de cobaye. La cinquième série de nos expériences a été faite pour répondre à cette question. Cinquième série d'expériences. — Un animal préparé par une injection de substances albuminoïdes cristalliniennes prove- nant d'une espèce étrangère peut-il ensuite réagir à l'injection déchainante de substances cristalliniennes de sa propre espèce? Nous préparâmes dans ce but un lot de 10 cobayes par une injection intrapéritonéale d'extraits de cristallin : 4 furent traités par le cristallin de cheval (0 gr. 025), 3 par le cristallin de bœuf (0 gr. 025), 3 par le cristallin de mouton (0 gr. 025). Puis, après un temps moyen de quatre semaines, tous furent soumis à l'injection intraveineuse de cristallin de cobaye (0 gr. 025). Des 4 cobayes traités par le cristallin de cheval, 2 ne présentèrent aucun trouble, et 2 eurent des signes d'anaphylaxie moyenne avec hypothermie. Sur les 3 cobayes traités par le cristallin de bœuf,1 ne réagit pas, 1 présenta des symptômes anaphylactiques assez graves et le dernier mourut de choc typique en quelques minutes. Quant aux 3 cobayes traités par le cristallin de mouton, ils présentèrent tous des signes d'anaphylaxie très nets, deux avec mort en quatre à cinq minutes et le troisième avec une hypothermie de 4 degrés. Dans l’ensemble, sur 10 animaux, 7 ont donc présenté une réaction anaphylactique positive à l'injection de cristallin de leur propre espèce. I est donc possible par l'injection préparante de cristallin d’une espèce étrangère de sensibiliser le cobaye pour son propre cristallin. RECHERCHES SUR LES RÉACTIONS ANAPHYLACTIQUES 635 CONCLUSIONS. De l’ensemble de ces diverses expériences, résumées dans le tableau ci-joint, il semble qu'on puisse tirer les conclusions suivantes : NATURE NATURE CAS D'ANAPHYLAXIE POSITIVE CAS de l'injection de l'injection ne) ANDY IA IC préparante. déchaînante. forte. |moyenne.| Total. négaiive. | EXPÉRIENCES me eme ane een ne eee Ceres me Cristallin Cristallin de cheval. de cheval. Cr. de bœuf. Cr. de bœuf. Cr. de mouton.|Cr. de mouton. Série 1 Hotal:e: Cr: de, cheval. Sér. de cheval. Sér. de cheval.| Cr. de cheval. Cr. de bœuf. Sér. de bœuf. Cr. de mouton.|Sér. de mouton. Total... Cr. de cheval. Cr. de bœuf. Cr. de cheval. |Cr. de mouton. Cr. de bœuf. Cr. de cheval. Cr. de bœuf. |Cr. de mouton. Cr. de mouton.| Cr. de cheval. Cr. de mouton.| Cr. de bœuf. ND YO NF Me mi} 09 & © DO See re ND F Cr © LE IN Motal LO] =] Cr. de cobaye. | Cr. de cobaye. Total:. Cr. de cheval. re. de cobaye. _ Cr. de bœuf. . de cobaye. Cr. de mouton.| Cr. de cobaye. Lotale- 1° Un animal préparé par une injection de substances albu- minoïdes cristalliniennes provenant d'une espèce étrangère donnée réagit presque toujours à l'injection déchaïnante de cristallin de eette mème espèce, le plus souvent à l'injection 636 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR déchaïnante de cristallin d'espèces différentes, et presque jamais à l'injection déchaînante de sérum de la même espèce ; 2 Un animal ne peut réagir à l'injection déchaïînante de cristallin de sa propre espèce que s’il a été préparé par une injection de cristallin d'espèce différente. Le cristallin semble donc au point de vue des réactions anaphylactiques jouir de propriétés spéciales, paraissant diffé- rentes de celles de tous les autres organes et du sérum. Il est doué d’une véritable spécificité d’organe, puisque les animaux préparés par le cristallin d’une espèce quelconque ne réagissent pas au sérum de même espèce, et est au contraire dénué de toute spécificité d'espèce puisque ces animaux réagissent au cristallin, de quelque espèce qu'il provienne. Ces faits semblent absolument contraires à ce qu'on observe dans l’anaphylaxie au sérum et aux extraits des autres arganes. La spécilicité des sérums est en effet presque absolue pour l'espèce. Ranzi a, d'autre part, montré que les animaux pré- parés par un extrait d'organe d’une espèce donnée réagissaient indistinctement aux extraits des différents organes et au sérum de la même espèce, mais jamais aux mêmes substances d’une espèce différente. Il est possible d'admettre que ces propriétés des extraits d'organes sont dues au sérum qui y est toujours contenu. Des expériences de Minet et Bruyant semblent le prouver : en sen- sibilisant des cobayes par des extraits d'organes et en les anti- anaphylactisant ensuite par le sérum, ces auteurs ont obtenu des réactions anaphylactiques par injection d'extraits d'organes correspondants, qui semblent jouir d’une spécificité pour chaque organe; Pfeiffer va plus loin et nie presque la spécificité d'espèce. Ces derniers faits nous rapprochent de ce que l’on observe pour le cristallin, Cet organe avasculaire, placé dans des condi- tions de nutrition très spéciales et uniques dans l’économie, jouirait de propriétés biologiques différentes de celles du sérum et par conséquent des autres organes qui en contiennent tous. Ce qui semble justifier cette hypothèse, c'est que le cristallin de l'embryon, organe encore vasculaire, possède une action RECHERCHES SUR LES RÉACTIONS ANAPHYLACTIQUES 637 analogue à celle du sérum d'animaux de mème espèce et que cette spécificité pour l'espèce, très nette au début, disparait progressivement au cours du développement (von Szily). La spécificité d'organe du cristallin n'est donc qu'un état secondaire, et semble liée aux conditions biologiques spéciales de cet organe chez l'adulte. On peut, d'autre part, supposer que, si l’on parvenait à disso- cier pour les autres extraits d'organes les propriétés anaphy- lactiques de ceux-ci et celles du sérum qu'ils contiennent, on obtiendrait dans leurs réactions anaphylactiques des résultats absolument comparables à ceux que l’on constate pour le cris- tallin; la spécificité de l'espèce serait alors uniquement une propriété du sérum. Nous espérons, par des expériences ultérieures, arriver à vérifier cette hypothèse. 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Szizy (Von). — Ueber die Organspezificität der ausgebildeten Linse und über ihre Artspezificitäl in embryonaler Zeit. Klin. Monatsh. f. Augenh., Neue Folge, Bd XII, S. 150, 1911. UaLenautTa. — Zur Kenntniss der giftigen Eigenschaften des Blutserums. Zeilschr. f. Hygiene, Bd XXVI, S. 384, 1897. — Komplementablenkung und Blut-Eiveissdifferenzierung. Deutsche Med. Wochenschr., 1906. Uazexaute und HENDEL. — Untersuchungen über die praktische Verwertbar- keit der Anaphylaxie zur, etc. Zeitschr. f. Immunil., Orig., Bd IV, H. 6, S. 161, 1910. LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS | NOURRIS DE CAROTTES ET DES LAPINS SOUMIS A L'INANITION par D. ROUGENTZOFF (Travail du laboratoire de M. le professeur Metchnikoff.) INTRODUCTION L'étude actuelle apparaît comme un chainon de toute une série de travaux sur la flore intestinale, qui ont été faits dans le laboratoire de M. je professeur Metchnikoff. Dans ce travail, nous nous sommes efforcé d'étudier surtout la composition qualitative de la flore microbienne de l'intestin des lapins soumis aux deux régimes cités plus haut, et nous avons recherché quelle était la modification de cette flore, tant au point de vue qualitatif que quantitatif, modification à laquelle on doit s'attendre, vu les deux modes d'alimentation différents. Cette comparaison présente d'autant plus d'intérêt qu'elle contribuera peut-être à l'étude de la question : pourquoi l’urine des lapins nourris avec des carottes ne contient jamais d'indoxyl, tandis que celle des lapins dans l'état d’inanition en contient toujours en assez grande quantité. D'après l'opinion généralement admise, l'indican urinaire, dans la plupart des cas, tire son origine de l'indol, qui lui- mème se forme dans l'intestin, grâce à la destruction des substances albuminoïdes. La marche habituelle de la destruc- tion de ces sübstances est la suivante : sous l’action des fer- ments protéolytiques, pepsine, trypsine et érepsine, sécrétés par les organes de la digestion, les albuminoïdes se décom- posent en acides monoaminés et diaminés. La désintégration se poursuit et les produits ultimes de la digestion, la tyrosine 640 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et le triptophane, se décomposent sous l'influence des microbes et il se forme de l'indol, du scatol et des phénols. Ces sub- stances, facilement résorbées par la muqueuse de l'intestin, pénètrent dans le sang; plus tard, elles sont amenées au foie, où elles se transforment en se combinant avec l'acide sulfu- rique, et enfin sont sécrétées avec l’urine sous forme de sulfoconjugués. En partant de l’indol qui se forme dans l'intestin, on obtient dans l'urine l'indican. Cet indican doit avoir encore d’autres sources, Car On avait remarqué qu'il augmentait dans les cas de foyers de suppuration : cancer ou empyèmeBrieger, Ortweiler). Leyden, Blumenthal, Rosenfeld et Lewi ont trouvé l'augmen- tation de l'indican dans le diabète expérimental et dans l'intoxication par la phloridzine et l’acide oxalique. Enfin Senator, Brieger et Rosenbach ont attiré l'attention sur l'augmentation de l’indican dans des cas d'anémie grave dans la chlorose en expliquant ce fait par la destruction des albumines des tissus par l’autolyse cellulaire exagérée. L'origine de l’indican urinaire chez des animaux en état d'inanition fut l’objet de grandes discuss ons et de beaucoup de recherches. Salkowsky, Jaffe, Senator, Blumenthal et beaucoup d’autres s'appuyaient sur la présence de l’indican dans l'urine des animaux en état d'inanition, pour s'élever contre la théorie de l’origine intestinale de l’indican urinaire. Les partisans de cette dernière théorie essayaient, au contraire, de la prouver en supposant, les uns qu'une hémorragie se produisait, pendant le jeûne, dans l'intestin et que la décomposition de ce sang devenait une source d'indican. Les autres croyaient que l'indicanurie chez des animaux à jeun dépendait de la putréfaction des sucs digestifs, très riches en albumine, et pour démontrer que l'intestin était le lieu de formation de l'indican, on a fait toutes sortes de recherches pour tracer un parallèle entre l'indican dans l'urine et l’indol dans l'intestin des animaux en état d'inanition. Rosenfeld (1) a cherché l’indol dans les matières fécales des lapins à jeun, mais n’a pu le trouver que dans 5 cas seulement sur 34 qu'il avait étudiés. Gauthier et Hervieu (2) ont cherché l’indican dans l'urine de quatre lapins et ont pu le constater déjà après le premier jour de jeûne. Le deuxième jour, sa quantité a beaucoup augmenté, pour diminuer le jour de la mort. L'urine prise dans la vessie au moment de la mort ne contenait pas trace d'indoxyl. Les mêmes auteurs ont analysé le contenu intestinal de ces lapins; ils ont extrait l’indol par la benzine et, dans tous les cas, la réaction (1) Beitrüge für chem. Physiol. und Pathol., 589. (2) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXIIT, p. 223 et 610. LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 6%1 fut positive. Parallèlement, ils ont étudié le contenu du gros intestin d'un lapin, très bien nourri pendant trois jours de suite, et pas une trace d'indol n'a pu être constatée. Ellinger (1) a trouvé trois fois sur quatre de l'indol dans les matières fécales des lapins à jeun. Fr. Blumenthal a cherché l'indol dans le contenu intestinal des lapins à l'état d'inanition. Il distillait ce contenu avec un acide dilué, mais il n'a pas trouvé d’indol dans les quatre cas étudiés par lui. Ury (2) avait montré que les selles centenant de l'indol et distillées avec un acide fort donnaient souvent un résultat négatif, pendant que les mêmes produits à distillation alcaline donnaient une assez grosse quantité d’indol. Ury avait montré de plus que, pendant la distillation des fèces les pre- miers 20 ou 30 cent. cubes contenaient peu d’indol ou n’en contenaient pas du tout, Landis que les portions suivantes en donnaient beaucoup plus. La technique de la recherche de l'indol dans le contenu intestinal fut ainsi perfectionnée et Fr. Blumenthal et Jacoby (3) se sont mis de nouveau à étudier la question de l'origine de l'indican chez des animaux à l’état d'inanition. Pour voir s'il y avait un parallélisme entre l'indoxyl dans l'urine et l'indol dans les matières fécales, ces auteurs ont fait leurs expériences sur deux groupes d'animaux : d'un côté, ils avaient des lapins qu'ils soumettaient à l’inanition, dont l'urine contenait une grosse quantité d’indican; de l'autre, des lapins nourris de choux-fleurs et de carottes, et dans l'urine desquels on ne trouvait pas d'indican. Les conclusions de leurs recherches furent les suivantes : 1o L'intestin des lapins soumis à l'inanition contient encore beaucoup d'aliments au moment où leur urine contient beaucoup d'indican. 2° On ne remarque pas d'hyperémie ni d'hémorragie sur la muqueuse intestinale. 3° L'intestin grêle ne contient pas d'indol. 4° Le gros intestin en contient toujours. Chez des lapins nourris de carottes et de choux-fleurs, on a vu que : 1° Leur urine ne contient pas d'indican; 20 Le produit de distillation du contenu de l'intestin grêle ne contient pas d'indol; 30 Le contenu du gros intestin en contient, mais pas toujours. En se basant sur ces expériences, qui avaient pour but de constater le parallélisme entre l'augmentation de l’indol dans le contenu intestinal et de l'indican dans l'urine des lapins à l'état d'inanition, on aurait pu conclure que l’indican urinaire tirait, en effet, son origine de l’indol de l'intestin. Mais les deux auteurs précédents ne croient pas que la quantité d'indol trouvé puisse expliquer, d'une facon suffisante, l'indicanurie de ces animaux. Ils ont fait alors des injeclions sous-cutanées d'indol et, ayant constaté, aussitôt après, de l'indol dans le contenu intestinal, ils sont arrivés à cette conclusion qu'on ne pouvait savoir au juste si l'indol qu'on trouve dans les fèces des lapins en état d’inanition provenait de la putré- faction du contenu intestinal ou s'il y était déversé par le sang. Ils se sont mis alors à chercher de l'indol dans le sang circulant et dans les tissus des (1) Zeitschr. für physiol, Chem., 38. (2) Deutsche med. Wochenschr., 1904, n° 19. (3) Biochemische Zeitschrift, Bd XXIX, p. 472. 642 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR animaux en état d'inanition. Les résultats furent négatifs tandis qu'ils pouvaient toujours en constater dans. le sang et les tissus des animaux auxquels l’indol fut injecté. 3 L'étude parallèle de Ia flore microbienne des lapins nourris de carottes et de ceux qu'on soumet à l'inanition pourrait, il nous semble, éclaircir ce problème très difficile. Si nous savons que l'indican urinaire provient principale- ment de la putréfaction intestinale et si l’indican dans l'urine des animaux soumis à l’inanition a réellement cette origine, nous devrions constater également une modification corres- pondante dans la putréfaction intestinale des animaux à jeun et des animaux nourris de carottes et chez lesquels l'indican est absent. : : Nous savons que l’indol, dans l'intestin, peut se former aux dépens de la destruction, par des microbes, des substances albuminoïdes qui traversent le tube intestinal. Si on pouvait, en étudiant la composition qualitative de la flore intestinale des lapins soumis à nos deux régimes, établir la modification de cette flore, en constatant soit l'apparition de nouveaux microbes protéolytiques, absents dans les conditions habituelles, et qui contribueraient à la formation de l’indol dans l'intestin, soit en constatant encore la diminution ou la disparition des microbes antagonistes de la putréfaction, et plus encore si on pouvait démontrer qu’en état d'inanition la proportion réei- proque des microbes changeait dans le sens d'augmentation nette de ceux parmi eux qui produisent surtout de l'indol, et enfin si on pouvait remarquer dans le contenu intestinal la modification du milieu lui-même qui favoriserait les microbes donnant de Findol, nous aurions, par là mème, démontré que dans l'intestin des animaux en état d'inanition se trouvent réunies toutes les conditions favorables à la production d'indol et nous aurions pu supposer qu'en état d'inanition, l'indican est bien d'origine intestinale. Voilà les problèmes que nous nous sommes posés en accep- tant la thèse de M. Metchnikoff, thèse ayant pour but l’étude de la flore intestinale des lapins à l’état d'inanition. Le travail actuel sera la description de toutes les données de. nos recherches. LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 643 Nous avons divisé notre étude en deux chapitres : dans le premier nous décrirons l'étude qualitative de la flore intesti- nale des lapins nourris de carottes, et de ceux qui sont soumis à l’inanition dans le deuxième. Nous donnerons les résultats de nos recherches sur la modification quantitative du B. coli chez des lapins soumis à l’inanition et sur les variations de sa fonction, qui paraît être celle de former l'indol dans l'intestin des lapins nourris de carottes. ETUDE QUALITATIVE DE LA FLORE INTLSTINALE DES LAPINS NOURRIS DE CAROTTES ET DES LAPINS SOUMIS A L'INANITION. Pour nos recherches, nous avons adopté le plan suivant : onze lapins furent partagés en deux lots : un d'eux contenait cinq lapins (n° 1,2, 6, Tet 11), le deuxième était composé de six (n° 3, 4, 5, 8, 9 et 10). Les premiers ont été nourris exclu- sivement avec de la carotte ; les animaux du deuxième groupe, après avoir été longtemps nourris avec de la carotte, furent soumis au fur et à mesure à l’inanition. Chaque lapin avait sa cage spéciale, dans laquelle il y avait une sorte d’'entonnoir pour l'urine et deux filets pour retenir les excréments. Le fond de la cage formait un filet à mailles très larges, ce qui faisait tomber les matières fécales aussitôt émises et ce qui empèchait en même temps les animaux à jeun de se nourrir de leurs propres excréments. | Pendant toute la durée de nos expériences, l'urine fut ana- lysée tousles jours. Nous nous servions, pour chercher l’indoxyl, des réactions d'Obermayer, de Gracioni et Jaffé. Mais, plus tard, nous nous sommes arrêté à celle d'Obermayer en y appor- tant toutefois une petite modification. Nous nous servions du perchlorure de fer pur au lieu de le diluer dans de l'acide chlorhydrique. La marche de la réaction est la suivante : si l'urine contient du mucus (ce qui arrive à l’état d’inanition), on s’en débarrasse en ajoutant à l'urine 1/10 de son volume d'une solution à 20 p. 100 de sous-acétate de plomb et en faisant ensuite des filtrations successives. On prend ensuite 644 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 10 cent. cubes de cette urine, on y ajoute le même volume d'acide chlorhydrique, une goutte de perchlorure de fer et enfin une petite quantité de chloroforme. Après avoir bien agité, on laisse reposer les tubes à essai, les gouttes de chloroforme se déposant au fond et formant la couche inférieure. Si l'urine contient de l’indican, la couche transparente de chloroforme prend une coloration bleue. Pour la recherche de la flore du contenu intestinal, nous divisions, après avoir tué l’animal en expérience, son tube digestif en six parties : a) estomac; 4) duodénum; €) parte inférieure de l'intestin grèle ; d) appendice ; e) côlon et /)rectum. Nous les transportions, avec toutes les précautions nécessaires, dans les boîtes de Petri et là nous débarrassions les parties du tube digestif de leur contenu. A l’aide de sérum physiologique, on fait de ce contenu une émulsion qu'on verse ensuite dans quatre tubes à essai. Deux de ces tubes furent chauffés à la température de + 80 degrés pendant 15 minutes. Pour les recherches ultérieures, tous les quatre tubes (et ainsi pour toutes les parties du tube digestif) ont été portés à l'étuve; pour faire pousser les microbes qui se trouvaient dans le mélange et pour créer des conditions favorables aux anaé- robies, on a fait le vide dans deux des tubes. L’émulsion dans l’un de ces deux tubes fut chauffée et dans l’autre elle fut laissée à la température ordinaire. Pour isoler les microbes de telle ou telle autre espèce, nous avons eu recours, suivant les propriétés biologiques de ces microbes, à des milieux de culture spéciaux. En résumé, tout contenu de chaque partie du tube digestif avait subi les manipulations suivantes : 1° Isolement des microbes dans l’émulsion fraiche à laide des cultures en plaques (on faisait couler dans les boîtes de Petri de l’agar simple avec des ensemencements en stries, qu'on répétait aussi sur l’agar Drigalsky-Conradi) ; 2° Isolement des microbes dans l'émulsion fraîche à l’aide des cultures en plaques sur gélatine ; 3° Isolement des microbes sporulés dans l’émulsion fraiche, chauffée pendant quinze minutes à la température de 80 degrés à l’aide des cultures en plaques sur agar; 4° Isolement des microbes anaérobies à l’aide de l'ensemen- LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 645 cement profond dans l’agar de Veillon, d’une émulsion fraiche chauffée et non chauffée ; 5° Isolement du B. perfringens : on ensemence l’émulsion fraiche dans du lait qu'on porte ensuite à l’ébullition pendant une minute ; après en avoir chassé l'air, on met les tubes pour vingt-quatre heures à l’étuve. Avec la culture obtenue, on fait des ensemencements profonds dans de l’agar sucré de Veillon, agar fondu et refroidi à 45 degrés pour avoir des colonies isolées ; 6° Isolement des anaérobies protéolytiques. L'émulsion, chauffée à 85 degrés pendant 15 minutes, est ensemencée dans le bouillon de Martin, additionné de l’albumine d'œuf coagulé. Les tubes, après que l'air en fut chassé, sont placés pour quelques jours à l’étuve et ensuite on en a fait des ensemen- cements dans l’agar glucosé de Veillon pour obtenir des colo- nies isolées ; 1° Isolement des microbes acidophiles : le contenu frais de l'intestin est ensemencé dans du bouillon glucosé auquel on ajoute 1/2 à 1 p. 100 d'acide acétique ou lactique. Deux ou cinq Jours après, on procède à l'isolement des microbes en ensemençant la culture de ces tubes dans l’agar glucosé de Veillon fondu et refroidi à 43 degrés ; 8° Pour différencier les microbes de l'hémicellulose, on prenait le contenu frais chauffé et on l'ensemencait dans le milieu d'Omeliansky. On mettait les tubes pour quelques jours à l’étuve et on réensemencail ensuite dans de l’agar fondu et refroidi ; 9° Pour isoler les mêmes microbes de l’hémicellulose, on rem- plaçait le milieu d'Omeliansky par un autre, composé d'une solution de sérum physiologique dans lequel fut placé un morceau de pomme de terre : 10° Pour séparer les microbes amylolytiques, on procédait de la même façon que dans les cas précédents, mais, comme milieu préalable de la pullulation des microbes, on prenait une solu- tion d’amidon ; 11° Pour isoler les microbes protéolytiques aérobies, on ensemençait le contenu chauffé dans le milieu de culture d’Achalme-Passini. Après quelques jours à l’étuve, on faisait la séparation des microbes à l’aide des cultures en plaques sur agar. 646 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Pour isoler le B. Proteus, on se servait de la méthode de Schoukewitch (1), qui consiste à ensemencer le contenu de l'intestin dans l’eau de condensation de l’agar incliné. Le B. Proteus, comme microbe mobile, forme à la surface de l'agar un voile allant de bas en haut. Toutes les manipulations ont été refaites ultérieurement avec le contenu intestinal, auquel on a fait subir la putréfaction en respectant les conditions nécessaires à la vie aérobie et anaé- robie. Ainsi des tubes qui ont subi la putréfaction dans des conditions aérobies furent réensemencés pour isoler le B. Proteus; ies mêmes tubes, mais chauffés pendant quinze minutes à 80 degrés, servaient pour isoler les aérobies sporulés; le contenu des tubes qui ont subi, après chauffage préalable, la putréfaction dans les conditions anaérobies, servait pour séparer les anaérobies; on faisait, avec les mêmes, des ense- mencements en vue des anaérobies protéolytiques (K 6 et 7). Les tubes dans lesquels le contenu intestinal subissait la putréfacton sans chauffage préalable servaient pour faire les manipulations {K 8, 9, 10). Les colonies isolées de microbes que nous avons obtenues ont été étudiées dans tous les milieux nutritifs à tous les stades de leur développement et nous avons recherché également leur pouvoir pathogène. Nous donnerons plus loin l’énumération simple de tous les microbes que nous avons trouvés dans le contenu de l'intestin de nos deux groupes de lapins. A. — Flore intestinale des lapins nourris exclusivement de carottes. Avant de commencer à décrire et à énumérer les microbes que nous avons trouvés chez des lapins soumis au régime de carottes, nous donnerons un tableau général de cette flore telle qu'elle se présente sur des préparations faites avec de l’émul- sion du contenu de telle ou telle partie du tube digestif et colorées d’après la méthode de Gram. 1) Annales de l'Institut Pasteur, AM, p. 255. LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 647 Un frottis, fait avec le contenu de l'estomac, nous montre beaucoup de microbes; mais, vu que la plupart d’eux se colorent partiellement (granula- tion) ou se colorent faiblement, vu qu'ils présentent presque tous une granu- lation, nous pensons que les microbes périssent dans l'estomac. A côté des bâtonnets ne prenant pas le Gram, nous en trouvons une grande quantité qui se colorent très fortement par le Gram. On y trouve également des cocci et des diplocoques prenant le Gram. Les frottis faits avec le contenu du duodénum nous frappent par le peu de microbes qu'on y rencontre. D'après leur forme et leur manière de se: colorer, on peut conclure qu'il s’agit surtout de formes dégénérées. Sur les frottis, faits avec le contenu de la partie inférieure de l'intestin grèle, nous trouvons un peu plus de microbes, parmi lesquels beaucoup en voie de dégénérescence. Il y a des cocci et diplocoques tantôt prenant, tantôt ne prenant pas le Gram. On y voit aussi des bâtonnets prenant le Gram, et dans quelques-uns on remarque des spores qui sont restées incolores. Le tableau change brusquement quand on met sous le microscope un frottis fait avec le contenu de l'appendice. Une quantité énorme de microbes apparait dans le champ du microscope. Ce sont, pour la plupart, de petits bâtonnets ne prenant pas le Gram et rappelant par leur forme le B. coli Au milieu d'eux, on trouve, mais en quantité beaucoup moindre, des bätonnets plus grands, munis souvent de spores, se colorant par le Gram et nous rappelant, par leur forme, les bactéries du groupe Subtilis-Megatherium. Par-ci, par-là, quelques cocci et diplocoques. Le frottis, fait avec le contenu du côlon, nous fait voir dans le micro- scope le même tableau que le précédent. Dans le rectum, on trouve peut-être plus de formes dégénérées et encore plus de formes bacillaires prenant le Gram. Les préparations que nous venons de décrire ont été faites avec le contenu du tube digestif d’un seul lapin (n° 2). Le tableau microscopique varie d'un lapin à l’autre. Chez les uns, ce sont des bactéries du type PB. coli qui sont en plus grand nombre. Chez d’autres, ce sont les formes bacillaires prenant le Gram qui prédominent. En nous servant des méthodes d'isolement que nous avons décrites plus haut, nous avons pu mettre en évidence les microbes suivants : a) Parmi les microbes protéolvtiques, aérobies et anaérobies facultatifs, nous avons eu très souvent : B. megatherium, quelques variétés de B. mesentericus, fuscus, ruber, multipe- diculus et d’autres. Beaucoup plus rarement nous avons rencontré B. subtilis, Staphyloccus albus et aureus, Sarcina flava et dans un cas: B. proteus vulgaris. En outre, nous avons isolé douze espèces de microbes protéolytiques que nous 648 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR n'avons pas pu identifier et qui doivent être rapportés à des hôtes accidentels de l'intestin. b) Parmi les aérobies non protéolytiques et les anaérobies facultatifs, nous avons toujours pu isoler le B. coli et une espèce en forme de bacille, que nous n'avons pas pu identifier. Nous avons rencontré également l'Enterococcus saccharomuyces et enfin sept espèces de microbes observés à chaque étude une seule fois et que nous n'avons pas identifiés. c) Parmi les microbes acidophiles, nous avons isolé deux fois B. acidophilis Moro, el une fois dans chaque cas B. acido- philis Merechkowsky n° 1, B. bifidus et deux fois un cocco- bacille. d) Parmi les anaérobies, nous avons rencontré chezles lapins B. perfringens et ensuite nous avons vu très souvent B. putri- ficus, B. sporogenes À et B et enfin B. paraputrificus. B. — Flore intestinale des lapins en état d'inanition. Avant d'entrer dans la description des microbes isolés, nous allons faire comme précédemment et donner un tableau général de la flore microbienne telle qu'elle se présente à nos yeux sous le microscope, et nous noterons, chemin faisant, la différence de nos préparations avec celles que nous avons faites avec le tube digestif des lapins nourris de carottes. Dans l'estomac, nous trouvons, au milieu d'un petit nombre de cocci, des microbes ayant la forme de bacilles. La plupart de ces microbes sont en voie de dégénérescence, ce qui nous explique peut-être pourquoi nous y trouvons si peu de microbes prenant le Gram, malgré que le nombre total de microbes soit plus grand que dans le contenu de l'estomac du lapin nourri de carottes. Dans le duodénum, on voit dans le champ du microscope beaucoup plus de microbes que dans la même partie de l'intestin d’un lapin normal. La plupart des bactéries présentent une forme d'involution et ceux qui se colorent par le Gram le prennent partiellement. On ne remarque pas de formes en coccus. La partie inférieure de l'intestin grêle contient un grand nombre de bactéries ayant la forme des bacilles. De temps en temps, on y aperçoit des microbes prenant le Gram. Très peu de formes en coccus. Le tableau de ces frottis est différent de ceux que nous avons vus chez le lapin normal. Sur les frottis du contenu de l’appendice, un nombre colossal de microbes ayant exclusivement la forme de bacilles, De place en place, des bacilles se colorant par le Gram. Beaucoup de formes d’involution. On trouve parmi les bacilles qui ont perdu la propriété de prendre le Gram quelques-uns munis de spores. LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 649 Le peu de bactéries qui prennent le Gram différencient ces frottis de ceux pris chez des lapins normaux. Le contenu du côlon et du rectum ne diffère presque en rien de celui de l’'appendice du même lapin. Le nombre beaucoup plus grand de bactéries sur les frottis faits avec le contenu de l'estomac, du duodénum et de la partie inférieure de l'intestin grèle des lapins en état d'inanition parait être un fait généralement observé. Passons maintenant à l’énumération des microbes isolés par les mêmes procédés dont nous nous sommes servis pour le premier lot de lapins : a) Parmi les microbes aérobies et anaérobies facultatifs, nous avons eu très souvent B. megatherium, quelques espèces des B. mesenthericus, fuscus, vulgatus, multipediculus et d'autres; B. subtilis, mycoides; assez souvent nous renconirions Sfaphy- lococcus albus et Sarcina flava, et une fois dans chaque cas : Coccus flavus et aurantiacus, Sarcina citrea et aurantiaca, B. pyocyaneus. En outre, nous avons isolé dix autres espèces de bacilles que nous n'avons pas identifiés et deux moisissures. b) Comme aérobies non protéolytiques et anaérobies faculta- tives, nous avons toujours trouvé le B. coli et, comme dans le groupe précédent d’ailleurs, un petit bâtonnet, que nous n'avons pas identifié. Nous avons rencontré encore Æntero- coccus sacharomyces, et une fois B. coli tÿphomorphe (Tissier). En outre nous avons vu 10 microbes non identifiés par nous. c) Parmi les microbes acidophiles, nous avons isolé le Cocco- bacillus et encore une espèce que nous avons reconnue être le B. clostridioformis. d) Parmi les anaérobies protéolytiques, nous avons rencontré chez tous les lapins le B. perfringens et très souvent le B. spo- rogenes elle B. putrificus. e) Comme anaérobies non protéolytiques, nous avons ren- contré une fois dans chaque casle B. Rodella III, et encore deux formes que nous n'avons pas pu identifier. En comparant la flore intestinale des lapins nourris de carottes et de ceux qui ont été soumis à l'inanition, nous voyons qu'au point de vue des microbes protéolytiques, la différence n’est pas grande. Chez les uns et chez les autres nous avons également rencontré parmi les anaérobies : B. perfringens, B. putrificus et B. sporogenes; parmi les aérobies : B. megatherium, mesen- tericus et d’autres, 650 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Il faut remarquer cependant que le B. perfringens, B. putri- ficus et B. sporogeñes peuvent être isolés en nombre beau- coup plus grand chez les lapins en état de jeûne. Cette consta- tation ne doit pas être perdue de vue quand on étudie les conditions dans lesquelles l'indol se forme dans l'intestin des animaux à jeun. Ces microbes sont parmi les microbes protéo- lytiques les plus énergiques; et même quelques variétés de B. sporogenes produisent elles-mêmes de l’indol. En tout cas, elles préparent le terrain à ceux des microbes qui, comme le B. coli, jouent un très grand rôle dans la production d’indol. Ainsi l’augmentation du nombre de ces microbes dans l'intestin des animaux à jeun doit favoriser la production d’indol. La différence entre les deux flores paraît plus nette, quand on y étudie les microbes acidophiles : ce qui frappe, c'est l’absence totale dans l'intestin des animaux en état d’inanition de B. Moro, et de B. Mereschkowsky et aussi de B. bifidus. Ceci est impor- tant, car les microbes acidophiles sont de grands antagonistes de ceux qui décomposent les albumines. Malheureusement, la technique actuelle ne permet pas de donner la notion exacte du nombre de ces microbes dans l'intestin des lapins, nourris de carottes. En résumé et en nous basant sur l'étude de la flore intesti- nale, nous pouvons conclure que le B. coli est le plus grand producteur d'indol dans l'intestin des animaux à jeun. Nous avons trouvé ce microbe dans l'intestin de nos deux lots de lapins, et le fait que la production d’indol est plus riche chez des animaux à jeun doit être attribué soit à l'augmentation du B. coli chez ces derniers, soit à la création de conditions spé- ciales, qui favoriseraient la fonction indolique de ce microbe. IT DE LA VARIATION QUANTITATIVE DU B. coli cHEz LES LAPIXS SOUMIS A L'INANITION ET DE LA MODIFICATION DE SA FONCTION INDOLIQUE DANS L'INTESTIN DES LAPINS NOURRIS DE CAROTTES EXCLUSIVEMENT. Nos recherches sur la composition qualitative de la flore intes- tinale des lapins nourris de carottes exclusivement et de ceux qu'on avait soumis à l'inanition ne nous dennent pas encore LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 654 la raison de la production exagérée d'indol dans l'intestin des animaux en état d'inanition et par cela même ne nous expliquent pas l'augmentation de l'indican dans l'urine de ces mêmes lapins. En faisant avec des excréments des ensemencements en stries (ou sur agar dans les boîtes de Petri), nous avons remarqué que les excréments des lapins à jeun donnaient un nombre des colonies de B. coli plus grand que les matières fécales des lapins nourris de carottes. Ceci nous a fait supposer qu'il se créait pendant l'inanition des conditions spéciales, dans lesquelles le B. col, producteur principal de l’'indol dans l'in- testin, pouvait se développer librement et donner de l'indol aux dépens des peptones qui se trouvent dans l'intestin. Nous avons voulu vérilier notre supposition. La marche de nos recherches fut la suivante : les lapins qui ont servi à nos expériences ont été mis pendant un temps assez long (un à deux mois) au régime des carottes. Tous les jours nous cherchions l'indican dans leur urine. Ensuite, au bout d’un certain temps, nous élablissions le nombre moyen de colonies de B. col, poussé sur agar, ensemencé avec l’anse de platine chargée de l’'émulsion faite des exeréments. La concentration de l’émulsion pour le même lapin fut la même, mais pour des lapins différents, cette concentration variait en raison inverse de la quantité de B. coli contenue dans une unilé, qui est l’anse de platine. L'émulsion pouvait servir à l'expérience, quand Tl'anse de platine chargée une seule fois donnait 10 à 20 colonies. Le produit, qui fut l'objet de nos recherches, était cueilli de la facon sui- vante : on mettait sous le fond à mailles larges dela cage du lapin un papier à filtrer très propre, sur lequel venaient tomber les excréments du lapin. Nous nous servions pour nos recherches de matières fécales fraiches. Avec une petite pince stérile, on en pesait sur une balance de précision 1 gramme, qu'on écrasait soigneusement dans 10 cent. cubes de sérum physiologique. De cette émulsion à 1 p.10 on en faisait d'autres dilutions : 1 p. 100, 1 p. 1.000. 1 p. 8.000 et ainsi de suite. Pour rechercher laquelle de ces dilutions conve- nait mieux pour les ensemencements, nous prélevions chaque fois la quantité d'émulsion, avec laquelle on pouvait charger une anse de platine normale. Pour obtenir les colonies du B. coli, et pour leur numération, nous nous servions, les premiers temps, de deux procédés : 10 Nous faisions des ensemencements dans des tubes à agar simple fondu el refroidi à 43 degrés. Nous introduisions l’'anse de platine en l’agitant. On plaçait ensuite les tubes dans une position verticale. Pour éviter toutes sortes 652 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR d'éventualités on chargeait de la même émulsion 10 anses et on ensemençait 10 tubes ; 20 Nous faisions avec l’anse de platine, chargée de l’émulsion des ensemen- cements en stries sur la surface de l’agar coulé dans des boîtes de Petri et refroidi. (Agar Drigalsky-Conradi.) On prenait 10 anses de platine comme auparavant. Les colonies poussaient au bout de vingt-quatre heures (à peu d’exceptions près loutes furent des colonies de B. coli), on en faisait la numération dans lesdits tubes et en prenant le chiffre moyen, nous obtenions l'indicateur de la quantité de B. coli dans l'unité d’excréments du jour même. Il faut remarquer que les colonies ensemencées dans les boîtes de Petri, devenaient souvent confluentes et rendaient par là la numération difficile, nous nous sommes arrêlé au premier procédé. Nous donnons dans le tableau ci-contre le résultat de nos recherches quantitatives sur le P. coli, chez dix lapins (n° 12, 43,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21) soumis à l’inanition. Les la- pins n°* 12, 43, 14, 15 et 16 furent tués au moment de la grosse indicanurie; les lapins n°* 18, 19, 20, 21 ont succombé à l'ina- nition. Tout en faisant nos recherches quotidiennes sur la quantité des germes de B. coli dans les excréments, nous analysions également, tous les jours, l'urine au point de vue de l’indican et ceci pour voir s'il y avail un parallélisme entre l’augmen- tation du B. coli dans les matières fécales et celle de l’indican dans l’urine. En ramenant le nombre des colonies à un chiffre moyen, voici ce que nous avons vu chez nos lapins : Lapin n°12. — Pendant qu'une anse de platine chargée de l'émulsion d'excré- ments à 1 p. 1.000 donnait en moyenne avant l'inanition 2,2 colonies pour un tube, la même émulsion, après 2 jours de jeûne, donnait déjà 4,4, et, après 3 jours, quand on trouve dans l'urine une grosse quantité d'indican, on obtient avec la même émulsion 35,8 colonies pour un tube. Lapin n° 13. — Avant l'inanition : de 15,5 à 24 colonies (toujours avec une anse de platine et l’'émulsion à 1 p. 1.000). Après 24 heures de jeûne : 28,8. Après 2 jours de jeûüne : 39,0 avec beaucoup d’indican dans l'urine. Lapin n° 14. — Avant l'inanition, avec une émulsion à 1 p. 100 : 3 colonies ; 2 jours après, quand l’indican apparaît dans l'urine en quantité considérable, on trouve : 7,2 colonies. Lapin n° 15. — Avant l'inanition, l’anse avec l’émulsion à 1 p. 1.000 donne : 20,5 colonies pour un tube, Après 2 jours d'inanition : 26,3 et de l'indican dans l’urine. ox Co LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 65 LAPINS NOMBRE DE COLONIES et OBSERVATIONS DATES INDICAN DILUTION Par tube Total | Moyenne Année 1912. N° 12 3 (ET) 1/500 BAL: Br 6.1.6 10 6004 MSN AUS 29 oct. | Avant prenons 0 1/1.000 j 6! 2’ a CON 29 | 2/2 30 — |Pas d'excréments.| 0 NL 0 1/500 SAONE 0 MG MERE SON ISA 51 Après 2 j- d'inan. ; 0 1/2.000 5 » » é » 4, DMRO BI il 29 4,4 lernov.| "Après 3j. d'inan. || 1/1.000 |» 34, 56, 35, 29,:33, 34, 36, 31, 34, 30 | 358, 35,8 N° 13 21 oct. | Avant l'inanition. 0 VAPODOS AA M0 M6 19 2221912 MS 5 ME Do À g HA.000 | » » » » » 22, 24, 22, 28, 25 | 121 | 2£,0 ï 41/2 006 » » » » » 14, 12521248; 10 52 | 10,4 23 — » 0 12 000 412 ST SU OT 10308210 054)1082 181059 24 — |Après 24 h. d'inan. 0: | 4/2.000 |-49;:.44, 43; 14,48, 10,189 44, 14,43 | 144 | 14,4 25 — | Après 2j. d'inan. |++-+| 1/2.000 | 46, 24, 22, 17, 20, 23, 18, 22, 23, 13 | 195 | 19,5 N° 14 3 oct. | Avant l'inanition. 0 1/100 SAT CR OC SE Se dre US NON 30 SR 4 — |Pas d'excréments. 0 5 — 2 j d'inanition. |+++| 1/100 SAC RO RS RS eZ 0 120 6 MENT) » 3e et4°j. pas d’exc.| +++ 8 — 5 j. d'inanition. [+++] 1/100 D OO ON MS SN I AE 53 | 10,6 15 oct. | Avant l'inanition. 0 1/1.000 | 18, 19, 24, 23, 23, 23, 18, 20, 49, 24 | 205 | 20,5 17 — 2 j. d'inanition, beaucoup de pigm.| + 1/1.000 | 22, 24, 21, 24, 24, 96, 38, 29, 24, 38 | 263 | 26,3 Tué après 3 jours d'inanition.|+++ No 16 22 oct. | Avant l'inanition. O2U)A5-000 112% 13,246/00,97 48/0900 13713 10120 12 23 nov » DES 000! 050 AUD NE NOMME T0 NS TE RSR PSE 25 — » 0 |1/15.000 TND ANT RON AE RS 42 | 4,2 26 — » 0-114/15.000 | 8, 25 9008 me CS TRS To 408) 27 — » [HN PATATE TN SPA ONE OEIL rs Alec 28 — 1j: d'inanition. | H+ |41/15.000 | 3, 6, 8, 10, 4, 4, 2, 6, 4, 3 2081570 29 — 2 jours. ++] 1/15.000 | 86, 75, 90, 72, 10, 90, 90, 60, 85, 69 | 187 | 18,7 No 17 29 nov. | Avant l’inanition. û 1/500 D OR NO TER ER STD 26: | 2,6 30 — » 0 1/500 A LIT RE LC MEN PAT MR 2 déc. » 0 1/500 OR TER RE ER AL NE DER | OI 4 — » 0 1/500 DAT MARAIS AS 2 EE 0 198 |m4r2 5 — { j. d'inan., pigm. 0 11500 6,23; SAMEDI MEN 2081970 6 — 25 d'in paspien: |) (0 1/300 | 10, 13, 12, 40, 46, 10, 44, 43, 41, 44 | 120 | 12,0 Te = Sjidinanitione|L-et| 41/500. |-12, 14, 14/17, 48947243 45, 21,200 1610 |46;1 4e]. d'in.,pas d’'exc.| ++ 9 — | 5ej.d’in.; meurt. | + 11500 | 49, 51, 53, 43, 64, 64, 59, 54, 63, 75 | 568 | 56,8 Année 1913. N° 18 2 janv.| Avant l'inanition. 0 1/1.000 h, SENTE AO RS NID, 005 03 42 | 4,2 — » A2:000 |N 2 NN RER 35) 136: 13,6 5 — » 0 1/1.000 3 4 DUO METEO A RON 0 4; 4 41 4,1 0 24h dinamtions (eee 11.000 |) 92/4409 15 M2 M2 MONA, 9, 13 | 116) | 44,6 1 — 2 j. d'inanition. | + | 1/1.000 | 13, 12, 40, 40, 45, 40, 12, 41, 16, 10 | 119 | 11,9 LAPINS et DATES Année 1913. N° 18 8 Janv À SZ 16 — LL — 12 — No 49 11 jarv. 12 — SES 14 — 15 — 16 — 1T — 18 — KO — 20 — AS — 22 — 23 — 24 — 25 — 26 — No 20 18 jany 19 — 20 — 21 — 22 23 — 24 — A — 26 — 27 — 28 — N° 21 11 fév 12 — AB —— 14 — 45 — 17 — 18 — 19— 20 — 24 — 22 — 24 — DE — 26 — 27 S © res OBSERVATIONS 3 j. d'inanition. |Pas d'excréments. Pas d’excréments. 6 j. d'inanition. Avant l'inanition. 1 j. d'inanition. 2 1 d'inanition. 3 j. d'inanition. 4j. d'inanition. Pas Pas 1 j. d'inanition. 8 ]. d'inanition. 9 j. d'inanition. 10 j. d’inanition. (1j. d'inan., meurt. Avant l'inanition. » » 1 j. d'inanition. 2 j. d'inanition. 3 j. d'inanition. 4 j. d'inanition. 5j: d'inanition. Meurt le 6° jour. Avant J'inanition. DILUTION INDICAN Mort ap. 7j. d'inan. d’excréments. d'excréments.|+ S S 0 20 © © CT S © © (=) .000 .000 .000 5.000 .000 .000 ‘15.000 5.000 ‘15.000 115.000 15.000 .000 5.000 .080 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR NOMBRE DE COLONIES Par tube 12, 18, 20, 18, 15 S TPS MO, 10. --sPiSuan RU 1 IADAI TON RS AD CT SR 166 AA NME EC NE 7 Ÿ D 2 ss 3, 3, ë ù 3, 2 2, PA ART HA 18 14 A ET AT NES TEASER MEME EE CD RS NS 20, 22, 23, 19, 25, 24, 22, 23, 17, 21 24, 29, 20, 20, 26, 22, 31, 19, 17, 2% 2, 15.3 ch bars Euto ag 4 090 CDR red de TI 5, D 8 5 5, 8 5, 8 5 6 à AL RL ER D MMS LODEL AONEUNETS CRE 0 Ua : « 62 CE « N 4, 2, : ; 5, #4, 4, 3, 9, 4 DÉS NOT ES ALU BG GA LES ALICE MOTTE NE A EE AD DA SL 8ET (617 8. A0, AL: 9. 06, 9/40 10 HE 4812 0 #4. AD: 16, 42.09 41 16, 160 48) 13, 48, 43, 41, 17, 46, 14 20° AT, 24, 24, 24, A1, AT, 20, 49. 17 APR AN A M SAME SOL (90 6 ALES GÉNIE 9: 19 "6, “JT SI SAMSNE 10 BU 3h) SAGE 82 SAM 13, 42, 12, 6, 6, 424 8 8! dE 9! 8: 8, 1061561 HO AA AS. T 199 AMI EROUTIENS 6: MSA Ch, -3, 40. (TG, AUDE 197 9N 07 7, 43, 49, 8 19-45, 49 p, 6, 10, 9. S, 4, 5,10, 6, 6 DÉS 2, 24 D RD EE 10: /B0 8% 7, 40, 5,618 16,076 SOUDE, 4, 9 NS SAME LUS 16. 40, 8 5e SL LINE L 3 2HOURITSUR JU SRE ES (3 Ia ui Total | Moyenne TRE 19 | 7,9 33 | 037 31038 31! 3,1 32 | 3.2 50 | 5,0 A6 | 21,6 239 | 23.2 18 | 458 93 | 23 61 | 6,1 25 | 2,5 0 | 4,0 27 | 2,7 | 3 a | 4,1 23 | 2,3 58 | 538 59.| 5.9 85 | 8,5 113 |11,3 144 | 14,4 187 | 18,17 32 | 349 oO © = = + + =] © > © Cr # © IN 60 1 OÙ Or CO CO = = O2 sw à à re = —1 Le HOONOUIOMNMOIJOUCÉE s s S s s © LAPINS et DATES Année 1913. No 21 (Suite) 28 fév. 1er mars D IDE © NN LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS NOMBRE DE COLONIES OBSERVATIONS INDICAN Par tube D De DUO eo DILUTION RDS RON 6, 19, 2%, 1/1.000 1/10.000 1/10.000 j. d'inanition. 2j. d'inanition. J. d'inanition. j. d'in. , pas d’exe. 5 j. d'inanition. 6 J. d'inanition. 1j. d'in., pas d'exc. 8 j. d'inanition. 9 j. d'inanition. Meurt le 10° j. d'in. Go CIS 6 38, 44, 31, 1/10.000 | 36, 56, 20, 93,100, 90,110,100, 1/10.000 120 100, 18, 18, 47, 33, 16, 16, 15, 15, 20, 1%, A7, 40, 30, 38, 1/100 .000 16, 35, 1/100.000 avec l'émulsion à 1 p. Lapin n° 16. Avant l'inanition, 15.000, de 3,4 à 2 jours après : 4,9 colonies; 24 heures après : 5 colonies; 18,7 colonies, et beaucoup d'indican dans l'urine. Après 3 jours d’'inanition : 72,2, toujours d'une seule anse. Lapin n°17. — Avant l'inanition d'une seule anse, avec l'émulsion à 1 p.500 : 1,2 à 2,6 colonies ; 24 heures après : 3 colonies; 2 jours après : 12 colonies; 3 jours après : 16 colonies, et beaucoup d'indican dans l'urine. Après 5 jours : 5,68 colonies, pour une anse et un tube. Le 6° jour de jeûne, le lapin meurt, et, si on cherche à ce moment-là de l'indican dans l'urine, on en trouve très peu. Lapin n° 18. — Avant l'inanition, une anse d'émulsion à 1 p. 1.000 donnait : 3,6 à 4,2 colonies; 24 heures après : 11,6; 2 jours après : 11,9; 3 jours après : 17,9, et une grosse quantité d'indican dans l'urine. Après 6 jours de jeûne : 82,4 colonies. Le 7° jour, l'animal meurt, et, dans l'urine, des traces d'indican. Lapin n° 19. — Avant l'inanition, une anse d’émulsion à 1 p. 15.000 donnait : 3,1 à 3,1 colonies; 24 heures après : 3,2; 2 jours après : 5 colonies ; après 3 jours d'’inanition : 21,6, et beaucoup d'indican. Après 4 jours : 23,2. Deux jours de suite, pas d’excréments du tout. Après 7 jours d’inanition, on n'obtient que 41,8 colonies, avec cependant beaucoup d'indican dans l'urine. Après 8 jours : 2,3; après 9 jours dican. Après 11 jours ‘de jeûne : 12e jour, l'animal meurt. : 6,1; après 10 jours : 2,5, avec peu d'in- ? 4 colonies, et l’indican absent dans l'urine. Le Lapin n° 20. — Avant l’inanilion, on obtenait, avec une anse d’üne émulsion à 1 p. 1.000 : de 2,3 à 5,9 colonies ; après 24 heures : 8,5; après 2 jours : 11,5; après 3 jours : 14,4, et beaucoup d'indican. Après 4 jours : 18,7; après 5 jours, malgré 3,2 colonies seulement. Le 6° jour, l'animal meurt, l'analyse de l'urine montrant très peu d'indican. la grosse quantité d'indican, Moyenne 656 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Lapin n° 21. — Avant l'inanition, une anse avec l'émulsion à 1 p. 1.000, on avait : 2,4 à 6,9 colonies; après 24 heures : 57,2; après 2 jours : 88; après 3 jours : 258, avec beaucoup d'indican; après 5 jours : 427; après 6 jours : 1.015 ; après 8 jours : 1.560 ; et enfin, après 9 jours : 3.820 colonies, pour une anse et un tube. Le 10e jour, l'animal meurt, et, comme presque toujours, peu d’indican dans l'urine. Ces données nous amènent aux conclusions suivantes : 1° La quantité de B. coli viables augmente dans les excré- ments, aussitôt qu'on met le lapin en état d'inanition; 2° Leur nombre continue à augmenter parallèlement avec la durée de la période d’inanition et avec l'augmentation de l'in- dican dans l'urine ; 3° Parfois, après un jeûne longtemps continué, le nombre de B. coli diminue. L'indican disparaît petit à petit et, au moment de la mort, il est même difficile de le constater dans l'urine, prise dans la vessie. Ici, nous devons ajouter que l'augmentation du nombre du B. coli dans la même unité de poids, avant et pendant le jeûne, ne doit pas être mise sur le compte de la consistance des excréments. Les premiers Jours de l'inanilion, les excréments du lapin, au point de vue de la consistance, ne diffèrent en rien de ceux qu'on recueille avant le jeûne. Les jours suivants et plus près de la mort, les excréments deviennent secs, et c'est à ce moment- là que nous voyons le nombre de B. coli diminuer, ce qui est naturel, car le milieu devient de moins en moins nutritif. Quant au volume et au poids de la masse contenue dans l'in- testin des animaux à jeun, on ne voit pas de différence avec ce qui se passe chez les lapins normaux, à l'exception de l'estomac, où on trouve à la place d'aliments une grosse quantité de mucus. La réaction du contenu intestinal ne diffère pas non plus de celle qu'on a chez les lapins ordinaires. La grosse quantité de mucus qu'on trouve tout le long du tube digestif des lapins à jeun constitue la seule différence avec le contenu de l'intestin des animaux ordinaires. À l’autopsie des lapins en état d’inanition, nousn'avons jamais remarqué d'hémorragie, pas plus que d'hyperémie le long de l'intestin. Le fait de l'accumulation, dans l'intestin des lapins en état LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 657 d’inanilion, de mucus, riche en peptone, l'augmentation du nombre de B. coli, capables de produire beaucoup d’indol dans ce milieu peptoné, l'accroissement parallèle du B. coli dans l'intestin et de l’indican dans l'urine, sont autant de circon- stances qu'on n'a pas le droit de négliger, quand on discute la question de l’origine de lindican urinaire chez des animaux en état de jeûne. Avant d'aborder la recherche quantitative de B. coli chez un lapin donné, nous faisions des ensemencements d'essai avec les excréments de ce même lapin. Nous répétions ces ensemence- ments tous les Jours, pour nous assurer que la flore intestinale du lapin qu’on a soumis au régime de carottes était plus ou moins établie. Nous procédions en même temps à la numéra- tion du B. coli, pour savoir la dilution de l'émulsion à laquelle nous devions nous arrêter. Et ici nous avons assisté à des oscil- lations du nombre de B. coli, surtout prononcées les jours de passage vers le nouveau régime. Ici aussi, le nombre de B. coli augmentait beaucoup, mais sans influencer l’indican, car Jamais nous n'avons pu le constater dans l'urine. Cette dernière con- stalation nous fait supposer que ce n'est pas tant l'accroissement seul du nombre de B. coli qui influence l’indican; mais qu'en état d’inanition, il doit se développer des races spéciales du B. coli, douées de la propriété de produire de l’indol, ou peut- être, que, chez un animal en état d’inanition, sont écartées les conditions qui entravent la production de l'indol chez le lapin nourri avec des carottes exclusivement. Après avoir étudié 50 colonies du B. col chez un lapin normal et autant chez un lapin en état d’inanition, nous pou- vons conclure que, par rapport à la production d’indol, elles sont identiques. Nous avons recherché alors quelles étaient les con- ditions dans lesquelles vivait le B. coli, dans le contenu de l'intestin d’un lapin à jeun et d’un autre qu'on nourrit avec de la carotte. Le lapin nourri avec de la carotte absorbe une grosse quantité de sucre de 3,05 à 4,5 p.100 (1) du poids d'aliments. Il se crée dans l'intestin de ce lapin un milieu peptoné + sucre. [Il n'y a pas de sucre dans l'intestin de lapin en état de jeüne. (4) Bazcano, Les aliments. Baillière et fils, 1907, 2 volumes. 658 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR D'après les recherches de M. A. Berthelot (1), les sucres introduits avec les aliments, riches en hydrocarbure : carotte, betterave, raisin sec, datte, atteignent en certaine’quantité le cæcum du lapin, tandis que, chez le macaque, ces sucres pénètrent dans le cæcum et dans la partie ascendante du côlon en très petite quantité seulement. Dans le contenu de la partie supérieure du gros intestin de lapin, on trouve seulement une petite quantité de sucre, et dans celui du côlon ascendant et descendant du singe, on en trouve des traces. L'auteur a conclu en se basant sur ce fait que, pour faire pénétrer les substances sucrées dans le gros intestin, on peut utiliser certains aliments, parmi lesquels les dattes paraissent être le meilleur, car elles contiennent beaucoup de sucre et peu d'eau. Après viennent la carotte, la betterave, qui contiennent suffisamment de sucre. Notons que M. Metchnikoff et le D' Wollman, dans leur dernier mémoire (2) « Sur quelques essais de désintoxication intestinale », en citant ces recherches, déclarent : « Le fait que les lapins, nourris avec de la carotte et de la betterave, produisent des quantités minimes d'indol ou n’en sécrètent pas du tout, s'explique facilement par la pénétration d'une grande quantité de sucre dans le gros intestin, lieu de la putréfaction intestinale. Les conditions chez l'homme et le singe sont sous ce rapport moins favo- rables. » Ayant en vue toutes ces considérations, nous avons étudié les processus qui se passent dans l'intestin des lapins nourris de carottes, processus qui empêchent la production de l’indol ou qui en forment si peu qu'il est impossible de déceler dans l'urine lindoxyl qui en dérive. Il résulte de l’étude de la flore intestinale que le principal producteur d’indol dans l'intestin est le B. col. Notre attention fut attirée sur les conditions qui empêchent cette bactérie de produire l'indol. Nous disons que le B. coli, en se multipliant dans l'intestin des lapins, nourris avec de la earotte, vit pour ainsi dire dans un milieu peptoné et sucré, tandis que le contenu de l'intestin d'un lapin à l’état de jeùne présente un milieu peptoné mais sans sucre. Escherich avait fait remarquer l'action fermen- tative du B. coli sur le sucre. Plus tard, d’autres chercheurs comme Baginsky, Chantemesse et Widal, Péré Van Ermenghem et Van Ser, Neucké, Grimbert, Tissier et Martel et d'autres ont éludié les fermentations de ces différents sucres par ce microbe. Il a été établi depuis que, si on ajoute du sucré au milieu (1) A. Berruecor, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 19 mars 1910. (2) Annales de l'Institut Pasteur, 1912, p. 825. LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 659 dans lequel le B. co/i peut produire de lindol, ce microbe attaque avant tout ce sucre en formant des acides et que pendant ce temps il ne peut pas produire d’indol aux dépens des sub- stances albuminoïdes qui se trouvent dans le milieu, De notre côté nous avons entrepris l'étude de l'influence du sucre sur la production d’indol par le B. coli. Nous avons cultivé ce microbe dans du bouillon peptoné en y ajoutant 1 p. 400 de sucres variés et nous sommes arrivé à cette con- clusion (1) que, quand le B. coli vit dans le bouillon peptoné avec 1 p. 100 de variétés de sucres, qui fermentent rapidement, tels que glucose, lévulose, lactose et mannite, il perd sa pro- priété de produire l’indol. Dans le bouillon, au contraire, auquel on ajoute du maltose ou du saccharose, sucres faiblement fer- mentés parle B. coli, il formera de l’indol d’une façon d'autant plus intense que la fermentation des sucres sera plus faible. Ne se passe-t-il pas quelque chose d’analogue dans l'intestin du lapin, nourri de carottes riches en sucre? La fermentation de sucres dans l'intestin d'un lapin normal n’entrave-t-elle pas la production d'indol par le B. coli? Cet obstacle n'existe pas dans l'intestin des lapins en état d’inanilion et c’est pour- quoi peut-être le B. coli y produit aux dépens des peptones du mucus intestinal une si grande quantité d'indol. Nous n'avons pas l'intention d'identifier la vie du B. coli dans le bouillon de culture et dans le contenu de l'intestin; mais, pour expli- quer des faits semblables, nous nous sommes permis de faire cette analogie. On peut nous faire l’objection suivante et nous nous y attendons : Dans le tube au bouillon peptoné et sucré, dans lequel, après pullulation du B. coli, on n’a pas pu constater d'indol, il se produit toujours une grosse acidité, ce qu'on ne peut pas observer dans l'intestin du lapin, nourri avec de la carotte; ne pourrait-on pas considérer cette acidité comme obstacle à la production d'indol par le B. coli? À cette objection nous pouvons répondre par les recherches de Péré (2), qui cultivait le B. coli sur une couche mince de bouillon peptoné et sucré, bouillon qui était mis au-dessus d’une couche de car- (1) RouGenrzorr, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXXIV, p. 1098. (2) Péré, Annales de l'Institut Pasteur, 1892, p. 512. \ 660 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR bonate de chaux (qui servait justement à neutraliser l'acidité). Et dans ce milieu neutre il a remarqué un ralentissement dans la production d’indol. Nous-même, à notre tour, nous avons étudié 26 échantillons de B. coli, après des ensemencements dans du bouillon simple, dans du bouillon avec glucose et enfin dans du bouillon glucosé auquel on mélangeait une petite quantité de carbonate de chaux. On mettait les derniers tubes à l'étuve dans une position inclinée et on obtenait ainsi une couche mince de bouillon sur la couche de carbonate de chaux qui s'était déposée au fond. Nous avons étudié ces tubes au point de vue de l'acidité et de l'indol et nous avons obtenu les résultats suivants : BOUILLON GLUCOSÉ 70S : N° BOUILLON ORDINAIRE BOUILLON GLUCOSE se CARBONATE DE CHAUX des colonies. | Acidité. Indol. Acidité. Indol. Acidité. =) + CINE ET NO) [== = OuWUS OO ON NON NON OS SLR ee © [= XX DO NO PORTAL AR DR RO TT ER NN Xe Ki DNA DOTE NCe D DE Pe P CE DR A TETE NN ARC X DR D PU DR N DR EPP DT PE PCT ON DDC DS PP DR ERP PUR EPS DNA NII RC DORE RE RP ET Be DA NT RER OT EL D DAT D PU Xe Na NX D Nous pensons que le ralentissement dans la production d'indol est dû, non pas à l'acidité qui se forme dans le tube au LA FLORE INTESTINALE DES LAPINS 661 bouillon peptoné et sucré, mais à la modification dans l’alimen- tation du microbe. CONCLUSIONS. 1° L’élude comparée de la composition qualitative de la flore intestinale des lapins, nourris de carottes, et de ceux qui sont soumis à l’inanition, ne nous donne pas encore l'explication de l'augmentation de l'indican dans l'urine des animaux à jeun. 2° Il se crée peut-être, dans l'intestin des lapins nourris de carottes et grâce à la présence de sucres, des conditions spé- ciales qui empècheraient le B. coli de produire l’indol. 3° Chez des lapins, au contraire, qui sont soumis à l’inanition et qui sont ainsi privés de sucre alimentaire, le B. coli paraît produire de lindol d'une facon tellement intense qu'on peut constater dans leur urine le dérivé de l'indol, l’indican urinaire. 4° Les sucs digestifs, riches en albumine, doivent contribuer à la formation d'indol dans l'intestin des animaux à jeun. 5° L'augmentation de l’indol et de l'indican urinaire doit dépendre également du nombre toujours croissant de B. coli dans l'intestin des animaux en état d’inanition. 6° Toutes nos recherches nous permettent de supposer que l'indican chez des animaux à jeun est bien d'origine intestinale. En terminant ce travail, nous nous faisons un devoir et un plaisir d'exprimer toute notre reconnaissance à M. le professeur Metchnikoff, pour le sujet qu'il nous a proposé et de l’aide bienveillante avec laquelle il nous a guidé au cours de nos recherches. Nous adressons aussi nos meilleurs remerciements à M. le D' Wollman, pour les conseils qu'il a bien voulu nous accorder. 20 septembre 1913. Le Gérant : G. Masson. Paris - L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. PRE L. HaXT Se à re \ Ÿ Lé TUE ñ r à | \ Ï Ur, à k : 28° ANNÉE JUILLET 1914 N° 7 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT par AuUGusTE PETTIT. Suivant une tendance à la généralisation, contre laquelle on ne saurait trop réagir, on incline souvent, malgré les enseigne- ments de la pharmacodynamie, à admettre qu'une substance donnée provoque les mêmes actions sur les animaux les plus divers. En fait, une telle conception ne se vérifie complètement en aucun cas; elle est, d’ailleurs, invraisemblable & priori, en raison des différences de constitution chimique qui caractérisent les espèces animales (1). A ce point de vue, l'exemple de la toxine diphtérique est topique; il suffit, en effet, d'expérimenter sur un petit nombre d'animaux pour constater des variations profondes dans le mode d'action, pour observer un abaissement considérable, parfois même la suppression du pouvoir toxique. Aussi, peut-on distinguer schématiquement, suivant leur susceptibilité vis-à-vis du poison diphtérique, trois groupes d'animaux : a) Animaux sensibles, tels que Pigeon, Cobaye, Lapin; b) Animaux très peu sensibles, tels que Souris, Rat, Hérisson ; c) Animaux réfractaires, tels que Crapaud, Grenouille. Ainsi, il existe des degrés extrèmement variables dans la toxicité du poison diphtérique pour les diverses espèces animales, et, qui plus est, parmi celles-ci, certaines présentent une immunité plus ou moins complète. (1) Voir, à ce sujet, les expériences relatives à la réceptivité de deux espèces voisines de Grenouille (Rana esculenta et Rana lemporaria) pour un même Trypanosome. A. Laveran et A. Perrir. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CXLIX, p. 500-502, 1910. 4% 66% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ÏJ. — Résisrance pu RAT A LA TOXINE DIPHTÉRIQUE. Parmi les animaux communément employés dans les labo- ratoires, le Rat blanc (1) se distingue par sa résistance vis-à-vis de la toxine diphtérique ainsi que l'ont indiqué E. Roux et A. Yersin (1888), puis E. Roux et A, Borrel (1898). Ces cons- tatations ont recu pleine confirmation des recherches de L. Cobbett (1899), qui s'est attaché, en outre, à préciser la dose à laquelle succombentles Rats : pour tuer un Ratde 75 à 110 gr., l'auteur anglais devait injecter 600 à 700 fois autant de toxine que pour tuer un cobaye de 250 grammes. Il est bien évident que ces chiffres ne peuvent prétendre qu'à une approximation assez vague, par suite d'une foule de causes, au premier rang desquelles figurent notamment le mode de préparation de la toxine, sa toxicité, la résistance individuelle des sujets d'expérience, etc. Sous ces réserves, on peut admettre qu'un Rat pesant environ 100 grammes peut impunément recevoir par voie sous-culanée 1 cent. cube d'une toxine diphtérique, tuantle Cobaye de 250 gr. en 36 heures à la dose de 0,01 cent. cube et en 56 à 60 heures à la dose de 0,0025 cent. cube; avec 2 cent. cubes, le résultat n'est pas constant, car si la majeure partie des animaux résistent, certains peuvent succomber; à partir de3 cent. cubes, la mortest la règle. En d’autres termes, alors que, par injection sous-cutanée, une dose de toxine diphtérique approximativement égale à 1/25.000 du poids somatique détermine la mort du Cobaye et du Lapin en moins de deux jours, il faut dépasser le 1/100 pour obtenir ce résultat chez le Rat blanc. Toutefois, il est à noter que la répétition des injections est en général assez mal supportée par ce Rongeur et, comme c'est le cas pour nombre de toxines, l'administration renouvelée, à quelques jours d'intervalle, d'une dose infra- mortelle détermine de graves désordres et même la mort. On ne peut prati- quer des inoculations successives, sans trop nuire à l'animal, qu’à la condition d'espacer les injections et de n'administrer que des quantités sensiblement inférieures à la dose mortelle; encore, certains sujets peuvent-ils succomber ainsi qu'il ressort du tableau suivant: (1) D'après J. Kuprianow, le Rat gris (espèce non précisée) jouirait d'une immunité encore plus marquée. ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT 665 RATS BLANCS N°s d'observations. 1 2 3 & 5 6 7 8 Poids ten gr. 220 150 120 170 150 170 130 450 16 mai. . . . . . Injection sous-cutanée de 1 c.c. de toxine diphtérique. LORD AT ER EP RTS 155 115 175 131 168 145 (*) 455 20 mai. . . . . . Injection sous-cutanée de 1 c.c. de toxine diphtérique. DD MATE RP 20 150 110 70 130 168 165 159 28MMAeN 1e, A00 140 (2) 155 110 165 120 140 PU Te te 1SS 155 » 170 130 170 130 155 Injection sous-cutanée de 0,5 c.c. de toxine diphtérique. ÉRILIN A0 0 0180 160 » 165 130 175 125 155 13, 18 et 23 juin. Injection sous-cutanée de 0,5 c.c. de toxine diphtérique. DEAN Len «0e, AOÛ 170 » 160 140 190 135 175 {er juillet . . . . Injection sous-cutanée de 0,5 c.c. de toxine diphtérique. 4 juillet. : … 190 180 » 135 170 210 130 170 15 juillet. . . . . Les rats bien portants, 2, 5, 6 et 8, recoivent seuls, par voie sous-cutanée, 0,5 c.c. de toxine diphtérique. DMIUTLET UC 165 170 » 135 170 200 150 170 2, 5, 6 et 8 recoivent, par voie sous-cutanée, 0,5 c.c. de toxine diphtérique. HaOUte Se Ce 160 150 » 135 165 185 118 160 {*) Femelle en gestation ayant avortée, (**) Le rat n° 3 meurt avec lésions nettes du rein, du foie et de la rate. Les 7 Rats survivants (1) sont mous et paresseux à se mouvoir; ils sont sacrifiés pour servir à d’autres expériences; leur foie est gras et nécrosé par places. Le mode d'administration joue, d'ailleurs, un rôle important au point de vue du pouvoir toxique et cette action se manifeste beaucoup plus énergiquement lorsqu'on substitue à la voie sous-cutanée les voies intravasculaire ou intra- cœlomique,ou surtout intracérébrale. Dans ce dernier cas, ainsi que l'ont montré E. Roux et A. Borrel, une dose de 0,1 cent. cube est souvent suffi- sante pour entrainer la mort d'un Rat adulte, ce qui semble bien indiquer que le cerveau de ce Rongeur est sensible à la toxine. Aussi, ces savants n'hésitent pas à conclure que « l'immunilé du Rat vis-à-vis du poison diphté- rique ne tient point à une résistance des cellules nerveuses »... On ne saurait davantage attribuer cet état réfractaire à des propriétés antitoxiques du sang ni des tissus. En effet, J. Kuprianow a montré, dès 1894, que les macérations d'organes de Rat neuf injectées au Cobaye n'influencent pas l’action des cultures de Bacille diphtérique et que le sérum sanguin n'agit pas non plus sur les cultures vivantes de diphtérie. Le dosage du pouvoir antitoxique du sérum chez le Rat blanc neuf corrobore ces résultats : évaluée d’après la méthode de (1) Chez nombre de Rats, j'ai observé l'alopécie étudiée par H. M. Goodman. 666 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR P.Ehrlich, cette teneur n’atteint pas 0,25 d'I. E. par cent. cube; on ne peut donc vraisemblablement songer à lui attribuer un rôle dans l'immunité relative dont jouit naturellement le Rat. A ce point de vue, il est à noter que la sensibilité des espèces zoologiques n’est pas toujours en rapport avec le pouvoir pro- tecteur du sérum; c’est tout au moins ce qui semble résulter de l'examen comparatif du Pigeon, du Cobaye, du Lapin et du Rat; ce sont là, en effet, quatre animaux chez lesquels le pouvoir antitoxique du sérum est pratiquement nul (1), mais dont la résistance varie dans de larges limites : pour tuer sûrement le Rat, il faut lui administrer par voie sous-cutanée plus de 100 fois la dose mortelle pour le Pigeon et le Cobaye. En raison de son état réfractaire vis-à-vis de la toxine, le Rat se distingue donc parmi les divers Mammifères étudiés jusqu à ce jour, et, à s'en rapporter aux expériences de A. Strubell, il résiste, toutes choses égales d’ailleurs, à des doses plus élevées que le Hérisson (2). II. — RÉACTIONS TISSULAIRES CONSÉCUTIVES A L'INJECTION DE TOXINE DIPHTÉRIQUE CHEZ LE LapiN ET CHEZ LE RAT. Après avoir examiné Ja résistance générale du Rat vis-à-vis de la toxine diphtérique, il convient de compléter cette première indication par l'étude comparative des viscères chez ce Rongeur et chez un animal sensible, le Lapin par exemple, dont l'étude a fait l'objet de nombreuses recherches. (1) Le sérum du Pigeon ne titre pas 0,25 d'I. E. par cent. cube; ceux du Cobaye et du Lapin, pas 0,5 d'I. E. par cent. cube. 2) Voici quelques résultats empruntés à A. Strubell : POIDS DOSE INJECTÉE k du par voie sous-cutanée RÉSULTATS Hérisson. en cent. cubes. 100 grammes. É é Er à l 0,5 Mort en 10 jours. 150 grammes. 1.000 grammes. 2 » Mort en 7 jours et demi. 1.100 grammes. 4 » Mort en 9 jours et demi. 150 grammes. 6 » Mort en 4 jours et demi. 100 grammes. 4 » Mort en 6 jours et demi. 800 grammes. 8 » Mort en 4 jours et demi. 950 grammes. 0,3 Survit. 650 grammes. 0,1 Survit. ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT 667 Comme E. Roux et A. Yersin l'ont indiqué dès 1888, les lésions dominantes chez le Lapin siègent au niveau du foie (fig. 1). Une proportion de cellules, en général élevée, souvent même la presque totalité, est atteinte : le cylo- plasma présente de la dégénérescence granulo-graisseuse et les noyaux sont le siège de phénomènes extrêmement accusés de pyknose et surtout de karyorrhexis. Les lésions du rein ne sont guère moins graves ; le segment à bordure en brosse est nécrosé; en nombre de points, les tubes se desquament, à des degrés divers de leur revêtement épithélial ; la lumière canaliculaire s’obstrue ainsi de débris cellulaires plus ou moins altérés; dans certains cas, les C.COnNSTANTIR + — À F16. 1. — Coupe de foie de Lapin ayant succombé à l'injection intravei- neuse de 0,05 gr. de culture de Bacilles diphtériques. Nécrose de coagula- tion, pyknose et karyorrhexis. cellules sont encore parfaitement reconnaissables, mais, en général, il s'agit d'un magma granuleux parsemé de débris nucléaires; enfin, on notera l'intensité des lésions qui frappent les tubes droits : fréquemment ceux-ci se présentent comme des canaux complètement dépourvus de revêtement épithélial et obstrués par un bouchon granuleux, riche en particules basophiles. La surrénale est congestionnée et profondément altérée. Quant à la rate, en particulier dans le cas où la toxine est injectée dans l'épaisseur du parenchyme, sa structure est bouleversée; la majeure partie des cellules propres a disparu et les corpuscules de Malpighi sont presque complètement détruits; en nombre de points, le parenchyme est réduit à une bouillie formée d'hématies, de leucocytes et surtout de débris cellulaires (fig. 2), parmi lesquels on ne distingue guère que des fragments nucléaires (pyknose et karyorrhexis). 668 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Au niveau du système nerveux, les altérations les plus manifestes consistent en de la pyknose (1). Chez le ;Rat, il en va tout autrement : un animal pesant 100 grammes peut recevoir, par voie sous-cutanée, une dose de toxine diphtérique 10 fois supérieure à la dose mortelle pour ets st De Pod ‘6% D À - [CLONSTAATIN, Fic. 2. — Coupe de rate de Lapin ayant succombé à l'injection sous-cutanée de 0,1 cent. cube de toxine diphtérique. Pyknose et karyorrhexis. le Lapin, sans que, dans la majorité des cas, on constate de lésions histologiques manifestes au niveau de la rate, de la surrénale, du cerveau, du foie ni du rein. Certains sujets pré- sentent bien des modifications cellulaires, mais il s’agit de lésions 1) De nombreuses recherches (Oertel, Hanot, Bulloch et Schmorl, Barbacci, 3abes, Welch et Flexner, Dubief et Brühl, Bezancon, Baldassari, ete...) ont, depuis longtemps, mis en évidence l'importance des altérations nucléaires dans l’intoxication diphtérique ; d’après les descriptions de ces auteurs, ces modifications consistent essentiellement en des phénomènes de pyknose et de karyorrhexis. Certaines lésions nucléaires, cependant, ne rentrent pas dans ce cadre; c’est le cas, notamment, des noyaux des leucocytes poly- morphes chez le Lapin. Indépendamment des phénomènes bien connus de pyknose et de karyor- rhexis, on observe dans les leucocytes à noyaux polymorphes un autre processus dégénératif, caractérisé par une inversion des affinités chroma- tiques ; les lobes nucléaires sont plus nettement distincts qu'à l’état normal et leurs réactions sont complètement modifiées: ils ont perdu la faculté de ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT 669 légères (1), dont l'intensité n’est en aucune facon comparable à celle des altérations qui siègent au niveau des organes des animaux sensibles ou du Rat ayant reçu une dose mortelle. Parmi ces modifications, notons, entre autres, une hyper- trophie manifeste du noyau des tubes contournés du rein; son volume dépasse fréquemment le double des dimensions nor- males ; il est irrégulier et renferme de très nombreux et très fins grains de chromatine, ainsi qu'un ou plusieurs nucléoles ; il affecte ainsi un aspect de noyau de cellule néoplasique qui tranche sur celui des éléments normaux (fig. 3). Cette hyper- trophie s’observe surtout chez les Rats et les Sou- ris sacrifiés 24 heures après l'injection sous- cutanée d'une dose de toxine variant entre 0,5 à 1,5 p. 100 du poids somatique ; elle fait dé- faut, en général, chez les animaux qui succombent à l’intoxication diphtéri- F16. 3. — Coupe de rein de Rat. Noyaux hy- que avec des lésions cel- pertrophiés consécutivement à l'injection sous-cutanée de 0,5 cent. cube de toxine f lulaires graves. ee LE RE diphtérique: n, n', n'", noyaux hypertro- Avec des doses plus - phiés. élevées de toxine diphté- rique, et, notamment, dans le cas de doses mortelles ou infra- mortelles répétées, la plupart des viscères du Rat offrent des fixer les couleurs basiques usuelles pour prendre la teinture acide (fig. 4). Il est à noter qu'on ne saurait attribuer cette modification à un artifice de préparation ; en effet, on la retrouve invariablement sur toutes les prépara- tions, alors que les noyaux normaux ou pyknotiques ne cessent d’être basophiles. D'autre part, cette lésion présente ce caractère très particulier de n'être pas influencée par le sérum antidiphtérique : chez le Lapin qui a reçu 1 à 2 cent. cubes de sérum antidiphtérique 24 heures avant l'injection de 0,1 cent. cube de toxine diphtérique, les lésions sont très minimes; elles se bornent à des phénomènes peu accusés de pyknose et de karyorrhexis, notamment au niveau des organes hémolymphatiques; mais, l’action protectrice du sérum ne s'étend pas à tous les éléments : l’altération nucléaire, que rend manifeste l'inversion des affinités chromatiques, persiste, en effet, dans nombre de leucocytes à noyaux polymorphes (fig. 4). (1) Il faut tenir compte aussi du fait que le bouillon, qui sert de véhicule à la toxine, n’est pas sans action sur l'organisme du Rat. 670 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lésions rappelant, parleurs traits essentiels, celles réalisées chez le Lapin. Toutefois, l’ordre d'intensité des altérations qui frap- pent les divers parenchymes est modifié; on retrouve entre le Lapin et le Rat des différences analogues à celles que signa- laient naguère E. Roux et A. Yersin entre le Lapin et le Cobaye : « IL est remarquable que la pleurésie, qui est la règle chez le Cobaye après l’inoculation de la diphtérie, ne se ren- contre que rarement chez le Lapin; > : au contraire, la dégénérescence du * foie, qui est fréquente chez le Lapin, 65 @œ |: manque chez le Cobaye. » ‘ | Chez le Rat qui succombe à l’admi- %.. 4@° À nistration de toxine diphtérique, au 5 @ k premier rang des organes lésés figu- rent d'abord le rein (fig. 5), puis le foie (fig. 6) etla rate (fig. 7). Dans cer- & tains cas, le parenchyme rénal pré- | sente des lésions d’une intensité très 4 grande (fig. 5): la plupart des tubes des divers segments renferment des débris cellulaires plus ou moins né- Re id ce crosés, parfois agglomérés en cylin- de Lapin, ayant reçu pré- dres compacts. En second lieu, on ventivement du sérum an- observe un certain degré de nécrose a de coagulation, surtout accusée au d'un cerfainnombre de leu niveau du Sesmentt9#horduremen cocytes est devenu acido- brosse; cette dégénérescence s’ac- phile,æ compagne de pyknose ; dans ce der- nier Cas, ces processus aboutissent souvent à la destruction presque complète de l’épithélium de revêtement. Notons, enfin, une congestion vasculaire intense. Au niveau du foie (fig. 6), les modifications les plus mar- quées consistent en de la congestion vasculaire manifeste dans la zone centrale du lobule et en de l'atrophie des cordons de Remak. Comme chez le Lapin, il existe de la nécrose de coagulation et de la pyknose, mais celles-ci y sont infini- ment moins accusées et il n’y a pas de karyorrhexis mani- feste. Les lésions spléniques (fig. 7) sont caractérisées par un cer- ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT 671 ss Led # é : {> C.CONSTANTIN Fi6. 5. — Coupe de rein de Rat avant succombé à l'injection sous-cutanée de &3 [cent. cubes de toxine diphtérique. Un certain nombre de tubes sont dé- truits et leur emplacement occupé par du sang, s; d’autres renferment des cylindres denses, c; beaucoup ont subi la nécrose de coagulation, n. Fi6. 6. — Coupe de foie de Rat ayant succombé à l'injection intracérébrale de 0,5 cent. cube de toxine diphtérique. Nécrose de coagulation, congestion intense, destruction partielle des’cordons de Rémak, début de pyknose. 672 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR tain degré d'homogénéisation du parenchyme ainsi que par des phénomènes de pyknose et de karyorrhexis. En somme, dès que la quantité de toxine introduite dans l'organisme atteint une certaine limite, les éléments anato- miques du Rat réagissent vis-à-vis de ce poison à la façon de ceux d'un animal sensible. Les altérations les plus profondes siègent au niveau du rein, et on ne retrouve ni la dégénéres- cence hépatique du Lapin ni la congestion hémorragique surré- nale du Cobaye. Ainsi, la facon dont se comportent les divers Fr 7 jé De 0 TL UVPT ES CN LAS) 08 POLE NT, ec Et DIR | . ÿ « © . ge e ne) "% 0 . Lex” Fa | 8 & A Ps. ae 1 4 e7 , : La ER LUE C) #” SE LATINE ex DL EX LEA do, fie es DT. Se à. 2. M OP Are 2 DRE De, GATE AT LEE Dit S 2 le Con MEL B° » 07e CPR TE LEE £ @°@ +» 0: k 9 HA ® bee SG... à % ÿ 0 _”! e\4 1e rs) EC TRE | 4 AP ie, =. @,9 °: . 8% p'olle. re en OT OS 0. 2280 EU ep OT eo tes 009 à +. 9e Dove: rh ee tot Sénart. ee LT 0 ee to te ten ere 1 FN 8 6.0, eceo “dr à. re 2, Vo re 9 pee ae NY ECET LES > nt LA .e. D er 3 LD n 0, LE San du des DONNE" REA PET ESS ORDRES ÿ e° 5 VA ee — Fe e Goe %e ee : a C2 ste 00 DIE SOU LR Dee To vee à LAN &.:e e® te. 7° & Le é, œ © 1 g F6. 7. — Coupe de rate de Rat ayant succombé à l'injection sous-cutanée de 3 cent. cubes de toxine diphtérique. Pyknose et karyorrhexis. parenchymes organiques varie sensiblement suivant les espèces zoologiques et, pour chacune de celles-ci, il y à une hiérarchie dans les organes au point de vue de la gravité des lésions cellulaires. . IT. — PERSISTANCE DE LA TOXINE DANS L'ORGANISME. Les observations précédentes concordent pour montrer que l'immunité relative du Rat vis-à-vis de la toxine diphtérique est en rapport avec la résistance à la dislocation des éléments anatomiques. À l'appui de cette conception, on peut faire valoir ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT 673 les expériences du genre de celle-ci: un Rat est anesthésié ; puis, avec les précautions habituelles d’asepsie, on met à nu la rate et on injecte dans l'épaisseur du parenchyme 0,2 à 0,4 cent. cube de toxine diphtérique; ceci fait, on suture la paroi et on abandonne l'animal à lui-même pendant vingt- quatre à quarante-huit heures ; au bout de ce temps, l’animal est sacrifié, la rate fixée, puis étudiée suivant les méthodes his- tologiques usuelles; alors que, chez le Lapin traité de cette façon, une portion plus ou moins étendue du parenchyme splé- nique serait complètement détruite, chez le Rat, au contraire, les cellules demeurent à peu près inchangées et les lésions se bornent à des troubles circulatoires et à quelques infarctus. Il est à remarquer d’ailleurs que les injections sous-cutanées de toxine reproduisent, au point de vue du mode d'action sur les cellules de l'organisme, des conditions assez comparables à l'inoculation intraparenchymateuse. En effet, injectons, par voie sous-cutanée, 1 à 2 cent. cubes de toxine diphtérique à un Rat adulte; recueillons son urine et inoculons 3 à 5 cent. cubes de celle-ci, après l'avoir filtrée sur bougie, à un Cobaye de 256 grammes; lorsque les urines ont été émises de quelques heures à un — trois jours après l’inocu- lation, le Cobaye succombe (1) avec les lésions caractéristiques de l’empoisonnement diphtérique (exsudats pleural et cœlo- mique, congestion pulmonaire, hémorragie surrénale, etc...); lorsque la survie est suffisante, une escarre apparaît au point d'inoculation. Mais, il suffit d’administrer préventivement au Cobaye 1 à 2 cent. cubes de sérum antidiphtérique ou encore d'additionner l'urine d’une quantité égale de ce mème sérum pour empêcher l'apparition de ces divers phénomènes. Ainsi, de la toxine diphtérique traverse l'organisme du Rat, en conser- vant intactes ses propriétés essentielles, après avoir baigné les cellules de l'organisme. IV. — L'IMMUNITÉ CELLULAIRE. On est donc amené à conclure, avec A. Calmette et À. Deléarde, dansleurs recherches sur les venins, que « l'état (1) L. Cobbett n'a observé qu'une fois la mort de l'animal. 674 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR d'ixmmunité naturelle à l'égard des toxines n'implique nulle- ment l'existence, dans ie sang des animaux réfractaires, de substances antitoxiques spécifiques et que ces substances, lors- qu'elles existent, ne sont Jamais assez actives pour expliquer l'immunité relativement solide dont jouissent ces animaux » Le RALEL TE ... RE: 25% NC Fi6. 8, — Coupe de rate de Rat. Fausse membrane "», développée consécutivement à l'injection intrasplénique de toxine diphtérique. et que celle-ci est en rapport avec une résistance cellulaire, constatable morphologiquement. En somme, les cellules du Rat se comportent d’une façon comparable à celles des organismes monocellulaires, mises en contact avec les toxines. Chez ceux-ci, comme l’a montré O. Gengou, il ne se produit pas de lésions, bien qu'il ne puisse être question ni d'un pouvoir antitoxique du sang ni d’une élimination rapide des toxines injectées, puisque ces organismes se meuvent dans le milieu toxique et sont, par conséquent, tou- ACTION DE LA TOXINE DIPHTÉRIQUE SUR LE RAT 675 jours en contact avec celui-ci. La seule explication plausible est qu'il s'agit de l’immunité histogène de Behring (ou cytologique de L. Camus et E. Gley). IL est très vraisemblable, d’ailleurs, qu'ilexiste des degrés dans cette immunité relative des éléments anatomiques des divers organes (1); ei tout cas, on peut observer une discordance dans les effets de la toxine diphtérique ; c’est ainsi qu’une injec- tion intrasplénique de toxine, incapable d'entraîner la mort, ou même. simplement des altérations manifestes, peut cependant provoquer, dans quelques cas, la formation de fausses mem- branes fibrineuses à la surface de la rate (fig. 8). En résumé, le Rat présente vis-à-vis de la toxine diphtérique un état réfractaire assez marqué, supérieur à celui de la plu- part des autres mammifères ; en dehors des réactions leucocy- taires et des propriétés du sérum auxquelles on attribue géné- ralement la prééminence dans les phénomènes d'immunité naturelle, il convient donc, dans le cas de ce Rongeur, d’attri- buer un rôle important à la résistance propre des éléments anatomiques de l'organisme (2). INDEX BIBLIOGRAPHIQUE BEuRiNG (E.). — Article « Immunität ». Eulenburg's Real-Encyclopädie der ges. Heilkunde, t. XI, p. 451-456, Wien et Leipzig, 1896. CaLMetTTE (A.) et DELÉARDE (A.). — Sur les toxines non microbiennes et le mécanisme de l'immunité par les sérums antitoxiques. Annales de l'Ins- litut Pasteur, t. X, p. 615-708, 1896. Cauus (L.) et GLey (E.). — Recherches sur l'action physiologique des ichthyo- toxines, p. 106-108. 1 vol. in-8°, 233 pages. Paris, Masson et Cie, 1912. CHANTEMESSE (A.) et Ponwyssorsky (A.). — Les processus généraux, t. Ier, 1 voi. in-80, 428 pages. Paris, Naud, 1901 (p. 386, Dissolution de la chromatine des noyaux). (1) D'après les recherches de L. Camus et E. Gley, la Marmotte réalise à ce point de vue un exemple intéressant; quoique très sensible à l’action générale du sérum d'Anguille, ses hématies cependant ne sont point hémo- lysées par ce liquide. (2) Rappelons l'hypothèse émise par H. M. Goodman. D'après cet auteur, limmunité du Rat serait due à ce que ses cellules se répartiraient en trois catégories dont les récepteurs posséderaient à des degrés divers ou ne pos- séderaient pas la faculté de s'unir avec la toxine diphtérique. 676 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Cosserr (L.).— The Resistance of Rats to Diphtheria Toxin. The british medical Journal, I, p. 902-903, 1899. Cogserr (L.). — Excretion of Diphtheria Toxin in the Urine. The british medical Journal, t. II, p. 21, 1900. DEAN (G.). — Types of Immunity. The Toxin of the Diphtheria Bacillus. 1n Nurrazz (G. H.F.) and Gran Surrn (G. S.), The Bacteriology of Diphtheria, P. 449-500, 1 vol. in-4o, Cambridge, 1908. GENGOU (0.). — Sur l'immunité naturelle des organismes cellulaires contre les toxines. Annales de l'Institut Pasteur, t. XII, p. 465-410, 1898. Goopman (H. M.). — Observations on natural Immunity and Susceptibility to Diphteria Toxin. The Journal of infectious Diseases, t. IV, p. 509-540, 1907. 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Mesnil, à l'Institut Pasteur.) Au cours de l'infection par le Trypanosoma pecaudi, virus de la Baléri, chez les animaux, le parasite se présente sous deux formes différentes, l’une longue et effilée, l'autre courte et trapue. Au début des recherches sur la Baléri, Pécaud était incliné à croire qu'il s'agissait bien, au point de vue morpho- logique, d'une infection double due à deux trypanosomes d'espèces différentes, mais il n’a jamais pu appuyer son hypo- thèse sur des preuves. Dans ses nombreuses expériences, Lave- ran n’a pas réussi non plus à séparer les deux formes. Il était donc intéressant de rechercher le rapport existant entre l'allure de l'infection et l'apparition des deux formes dans le sang des animaux en expérience, et de se demander si ces deux formes, si différentes morphologiquement, le sont aussi par leurs caractères dans certaines conditions expérimentales. Il était bon aussi de donner, de ce Trypan. pecaudi, si souvent rapproché d'espèces pathogènes de l'Afrique orientale où du Congo central, une étude biométrique comparable à celle aux- quels ont été soumis les trypanosomes en question. Nous avons dans ce double but entrepris, sur les conseils de M. le profes- seur Mesnil, l'étude morphologique et biologique de ce trypa- nosome. Pour cela, nous avons employé des cobayes et des souris infectés avec un virus rapporté du Dahomey par le D' Bouet ; il existait au laboratoire de M. Mesnil depuis 1908; il y était conservé sur cobayes. Nous résumons les observations de 15 cobayes et 10 souris dans les tableaux suivants : 678 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR TABLEAU |. — Observations sur les cobayes. DURÉE DURÉE TOTALE INOCULATION de l'incubation de l'infection (jours). (jours). POIDS a ., Sous-culanée. » Du 9e au 11° jour. » Id. Intrapéritonéale. Sous-cutanée. Intrapéritonéale. Sous-cutanée. » Du 5e au 7e jour. ] » 10° jour. Du 12° au 18e jour. Du 10° au 11° jour. Du 11° au 12e jour. Du 11° au 12° jour. D © © Or Or D NO & ND NO C9 He O7 Ur TABLEAU Il. — Observations sur les souris. DURÉE DURÉE TOTALE INOCULATION de l’incubation| de l'infection (Jours). (Jours.) POIDS (gr.). DS AS Sous-cutanée. = 1 Qt CE À Or Or Or O7 O Cr Id. Intrapéritonéale. ete NN N N N IN L'infection chez les animaux en expérience s'est toujours terminée par la mort. Chez les cobayes, la durée moyenne de la maladie à été de 16 jours, au maximum de 24 jours, au mini- mum des jours. L'incubationa duré de 2 à 6 jours. Les 7 cobayes ont élé atteints de cerise le 5° jour au plus tôt, le 12° jour au plus'tard, et la crise a duré de 1 à 3 jours. Chez les souris, la maladie a affecté une forme plus rapide que chez les cobayes. La durée moyenne a été de 6 Jours, au maximum de 15 jours, au minimum de 4 jours. Il n'y a jamais eu de crise. L’incubation n’a duré que 2 jours en général. Une TRYPANOSOMA PECAUDI 679 seule souris de 25 grammes a présenté une incubation de # jours. En revanche, chez 3 souris, l'apparition des trypanosomes dans le sang a eu lieu dès le lendemain de l’inoculation. Au début de l'infection, à l'examen microscopique du sang pris à l'oreille des cobayes et à la queue des souris, les trypa- nosomes étaient extrêmement rares. Les parasites, dès leur apparition dans le sang, se sont multipliés constamment, excepté pendant la période de crise, quand elle a existé. En cas de crise, ils diminuaient notablement ou disparaissaient tout à fait. Dans tous les cas, on a constaté, dans la dernière période de l'infection, une augmentation considérable du nombre des parasites. Les courbes suivantes donnent des exemples du nombre des parasiles au cours de l'infection. Ces trypanosomes ont été examinés dans les préparations fixées et colorées. La ligne verticale représente le nombre moyen de trypanosomes par champ (Leitz, oculaire compensateur 8, objectif, immersion 8 millimètres, longueur du tube 152 millimètres), la ligne horizontale les jours de l'infection. Nombre moyen des Trypanosomes parchamp JUILLET 1912. ; EURE RE RE ee ui 01 510 ee mL LE 15116 |17 18119 120/21122123,24/25|26|27|28|29 30131 11 à 20 À re . 21021307 . IV 31 à 40 TS er V : #1 à 50. VEUT - 51 à 60 En Tare 2e VII 61 à 20. ne VII 1 71 à 80. RE NES P Re xl ° 91 a100 Re AL ADI 200 Ile au-dessus’ de 200 XII Courbe 1. Tracé des parasites chez le cobaye 76, inoculé le 15 juillet 1912. AOÛT SEPTEMBRE 1912. AOÛT 1912 27/28/29/30|31 |1 21341516 [1 8 |9 10/11/12 13/14/15/16/17|18/19 | <; - a . XI} | | Joe ur ee RTE | il je | VII L Li | XII | | A ue À | RL! VIT EL + + . —| —+ HET LR : 4 E dinde i 0 # Courbe 2. Courbe 3. Tracé des parasites chez le cobaye 215, Tr. chez cob. 18, inoculé le 27 avril 1912. inoc. 12 avr. 1912. 45 680 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR JUILLET 1912. JUIELET 912€ 91/10/11 |12/13 | 14 |15 ' Es | 1] Sr L | 16/17 |18 = / Courbe 4. Courbe 5.. Tracé des parasites chez la souris n° 8, inoculée le 9 juillet 1912. n° 9, inoculée le 12 juillet 1912. MorPHOLOGIE. Les deux formes, longues-effilées et courtes-trapues, se sont présentées chez tous les animaux en expérience. A l’état frais, entre lame et lamelle, les trypanosomes se montrent d’une grande mobilité, tantôt s’agitant sur place, tantôt s'avancant avec rapidité. On peut facilement se rendre compte que les formes longues, munies d'un flagelle libre, sont généralement plus vives que les formes courtes-trapues. Dans les frottis de sang fixé aux vapeurs osmiques (solution aqueuse à 2 p. 100) à l’état humide quinze secondes et coloré au Giemsa, on distingue très nettement les deux formes. Les unes ont le corps protoplasmique long et mince avec un flagelle dont la partie libre est assez longue, et avec l'extrémité posté- rieure plus ou moins effilée. Les autres sont courtes et larges avec l'extrémité postérieure mousse ou en tronc de cône; le protoplasma se prolonge jusqu’à l'extrémité antérieure comme chez le Trypanosoma dimorphon. La membrane ondulante est assez développée, mais peu plissée; elle est plus large chez les formes courtes que chez les formes longues. Vers le milieu du corps, on trouve un noyau compact: il est plus ou moins allongé dans le sens de l’axe du corps dans les formes longues, et arrondi dans les formes courtes. Le blépha roplaste sphérique, parfois ovalaire, est placé, dans les formes longues, à 2 ou 3 4 environ de l'extrémité postérieure, tandis qu'il est situé, dans les formes courtes, tout près de l'extrémité postérieure. Dans le protoplasme teinté en bleu, on distingue parfois, prin- TRYPANOSOMA PECAUDI 681 cipalement dans la moitié antérieure, des granulations plus ou moins grosses qui se colorent en rouge foncé. Dans les formes courtes, on voit souvent une vacuole ronde située près du blépharoplaste. Dans l'étude morphologique du Trypanosoma rhodesiense, Stephens et Fantham ont décrit, chez les rats infectés, une forme particulière dont le noyau est situé tout près de l’extré- mité postérieure. Récemment, Yorke et Blacklock ont observé la même forme également chez le Trypanosoma equiperdum. Fi6. 1 et 2, Formes longues; 3 et 4, Formes intermédiaires : 5 à 8, Formes courbes. Parmi les formes courtes et trapues du 7rypanosoma pecaudi dans le sang des cobayes et des souris infectés, nous avons noté aussi, à la suite de Wenyon, Laveran et Nattan-Larrier, des individus avec le noyau situé près de l'extrémité postérieure (à une distance variable) ou même rarement en arrière du blépharoplaste (1 fois sur 823 {rypanosomes examinés dans une préparation de sang de cobaye infecté). En outre, on voit souvent des formes intermédiaires munies d'un flagelle court. Les dimensions des trypanosomes en y sont les suivantes : Formes longues-effilées . . . 2? 0 5 pe Formes courtes-trapues , . de long, A ue de large. : D 2 AND g, Formes intermédiaires. . . . ; À ce ur 1 5Ea de large. 682 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Quant à la structure du protoplasme el du noyau des deux formes du Trypanosoma pecaudi, on ne peut y trouver de diffé- rences en ce qui concerne la sexualité. APPARITION DES DEUX FORMES DANS LE SANG DES ANIMAUX INFECTÉS. 1 Au cours de l'infection, on peut constater une proportion remarquable entre le nombre des formes longues et celui des formes courtes. Les formes longues et les formes de division apparaissaient d'abord dans le sang. Les formes courtes se présentaient seulement quelques jours après l'apparition des premières formes. Quand la maladie durait assez longtemps c'était le cas presque toujours pour les cobayes), dès la période moyenne, les formes courtes se présentaient en nombre notable. Puis, dans la der- nière période de l’infeclion, c'étaient de nouveau les formes longues qui dominaient. Laveran à noté des variations sem- blables chez les rats infectés. Chez les animaux qui succombaient rapidement (c'était le cas presque toujours pour les souris), les formes longues étaient en nombre bien supérieur à celui des autres pendant tout le cours de l'infection. Tasceau. III. — Nombres des trypanosomes considérés dans leurs É LONGUEURS EN pH S 05 SAS = E jo los a las,s | 46 | 48,5 | 45 | 45,5 | 46 | 46,5 | 47 | 47,5 | 18 | 18,5 | 49 | 19,5 20 | 20,5 | 21 | 21,5 | 22 6° 0] "0010000000 | no on No EL) 20 100) 05 ON AUS 0 |3 T° 5 0 000 lot e0 le TION 000100 A ER a | 9 | 4:14 $e | Gare PRET AIN ESS 2| 9 | 1531 ge ol 4 | ee Mél ON ENREnNES 00e Se 1121318 Hole | © | 04 6 CNE Re UNE o |<8 [ee 11e dt Sa oladoo lc eooNen 000 10) EN 2 |3| +1" 12° a 10 00 0 lo APR ENS 100 Et ASS 3| 1 | 24 13e a 0 141 0 lolo ON enEnEnEne ase 3 [6| 3104 14° nl à la l'aller 111l 6 15e eo lo 72 lo l'O 210005) SE EU RER |: © nm dr lala laslio a SIENNE) 45 | 45/4601 SN ARS 33 | 29 | 42 p. 200. lo,9lo,71,211,4/1,714,9 [2,1] 2,6 [1,6] 2,0 11,8) 1,9 11,3 1,6 2,5] 2,1[3,311,8|3,3|2,2|4,2 TRYPANOSOMA PECAUDI 683 L'étude biométrique met bien en évidence les faits que nous venons de décrire (tableaux IL, IV, V, VI). Il en résulte clai- rement que le tableau des parasites diffère notablement suivant le jour de l'infection et l’espèce animale. Les trypanosomes (dans les préparations fixées à l'état humide aux vapeurs osmiques et colorées au (riemsa) ont été projetés à un grossissement de 2.000 diamètres à l’aide de la chambre claire et mesurés avec un eurvimètre d’un millimètre d’entre- dent (1/2 y par conséquent). La longueur a été prise dans l'axe du corps, de l'extrémité postérieure au bout du flagelle libre. Nous avons absolument négligé les formes de division. 100 try- panosomes par jour d'infection, chez 2 cobayes (n° 18 et 76) et 2 souris (n° 8 et 9), au total, 2.500 trypanosomes, ont EE examinés. Cobaye n° 76, du poids de 440 grammes, est inoculé avec le Trypanosoma pecaudi le 15 juillet 1912. L'inoculation est faite sous la peau avec le sang d'un cobaye fortement infecté. Le 18 juillet, à l'examen microscopique du sang pris à l'oreille, les trypanosomes sont extrêmement rares. Les parasites, dès leur apparition, se multiplient constamment. Cependant, ils diminuent notablement du 23 au 95 juillet. Le 31 juillet, l'animal meurt. On 2 constaté, à la dernière période de l'infection, une augmentation considérable du nombre des parasites. (Voir courbe 1, p. 679.) Cobaye n° 18, du poids de 495 grammes, est inoculé dans le péritoine, le longueurs, chez le cobaye n° 76, du 20 au 29 juillet 1912. LONGUEURS EN ! 22,5 | 23 | 23,5 | 24 |'24,5 | 25 | 25,5 | 26 | 26,5 4 0 8 3 2 2 4 5 3 ÿ = w © & N D O7 D Or ©t © = NN O1 # OO = = 28 ,5 | 29 | 29,5 | 30 | 30,5 | 31 | 31,5 | 32 | 32,5 = Co 9 Cr O7 09 CC CO © CO On 1 a = SLR De © © -1 00 1 NO N9 19 | Le oumISckKeDEk en = 10m N©© 2 © & © © © À ON OO DmORDOEX & S © CO À © © 9 N © D 2 LO 1,110,410,2/0,1/0,1/0,1 Taezrau IV. — Nombres des trypanosomes considérés dans leurs» LONGUEURS EN y de l'infection. | Au total : PAMUD: Taszeau V. — Nombre des trypanosomes considérés dans leurs JOUR LONGUEURS EN de l'infection. | 43,5| 44 |14,5| 15 |15,5| 16 |16,5| 17 |17,5| 18 |18,5| 19 |12,5| 20 |20,5| 21 |21,5| 22 6° 0 0 0 0 0 0 (l 0 0 il 0 0 2 1 0 5 6 5 | JE 0 () 0 0 Il 0 0 0 2 0 0 (l 0 0 0 2 2 5r| se 0 0 0 0 0 0 0 2 0 2 3 5 0 2 4 3 1 3 ge 0 1 0 2 0 1 5 3 ue 1 5 0 2 { 6] 1 3, 10° 2 Î 2 7l ù 4 6 xl 2 1 2 2 0 il | ë: 3 3 6 RE 0 1 0 0 0 3 5 2 2 2 3 8 2 6 3 2 3 2 125 0 0 0 0 0 0 1 4 0 3 5 ï 3 5 1 3 6] 6 13e 0 0 l 0 0 0 1 D 1 2 3 8 il 7 3 2 4 6 44° 0 0 6}. Peu) (] il 2 2 0 {l il 1 3 3 2 5] 4 5) 45€ (Ù 0 1 0 0 1 (Ù 1 0 2 1 2 4 9 4 8 6 14] Au total : 2 3 1 9 6 1020023920 226 RSS NME RSS) SAIS SAIS P. 100. |0,2| 0,31 0,7 | 0,9 | 0.6 | 4,0 | 2,0 | 2,31 4,4] 2,6 | 2,3] 3,81 1,5 | 3,6 | 2,1 | 3,8 1 3;517%58 Tagceau VI. — Nombres des trypanosomes considérés dans leurs LONGUEURS EN Le [a | a la COANEMRSMRN Us ON OS 5 a a lé Oo EME Er | on NS MIROIR 2 l'o | OP RME) à l'uno | US OR ER PHONE | Au total : | 2 2 | | longueurs, chez le cobaye n° 18, du 18 au 19 juillet 1912. 25,5 26 26,5 27 27.5 28 28,5 29 29,5 30 30,5 31 31,5 1 8 î 1 6 6 (l 4 3 3 3 Î 0 100 11 6 #l 6 ÿ 3 8 5 3 1 l 0 1 100 29 | 44 | 14 3 | 43 g | & 9 6 4 AN 200 11 1 HA MENnelE 6556 17205 A 4,5 3 2 2106 OS longueurs, chez la souris n° 8. du 14 au 23 juillet 4942. LONGUEURS EN Lt. 22,5| 23 193,5] 24 |24,5| 25 |25,5| 26 |26,5| 27 |27.5| 28 | 28,5) 29 | 29,5! 30 |30,5| 31 | 31,5 "| | | — | — | — | — | — | — | — — — | —)—|— — 10 qi 2 4 1 | 10 on. 8 4 4 0) Il 1 { 1 0 10 (l 100 3 2 gi ent DA) SA 12 1 D) 2 4 3 1 Il 0 | 0 (l 100 5 8 7 4 5 2 9 | 10 6 8 GT | 6 3 2 () 0 | 0 0 100 n 3 1 6 il 6 6 2 bi) 4 2 1 1 3 0 0 0 NON IEAO 100 4 4 5) s) il 7 4 6 3 2 () 0 1 û 0 0 1120 (l 100 2 S L 2 2208 Nu |R) 3 9 3 3 5 (Ù 0 3 0 0 «(M | 100 { 3 ï 2 6 0 5 5) 6 fl 5 3 2 2 0 il 11 (l 100 3 6 2 3 8 2 7 ë 4 3 3 1 0 6 0 1 1nib4 0 100 6 6 112 6 5 1 2 9 0 D 1 0 0 1 0 0 | à (l 100 6 8 | 10 S 5 7 2 1 2 2 l 0 | 4 0 0 1 0 | 0 (l 100 24 | 55 | 29 | 56 | 43 | 64 | 54 | 66 | 58 | 40 | 29 | 14 | 16 | 21 ) Gi 2 | 1 1.000 2,415,514,915,614,316,415,4 6,615,814012,911,411,6/2,410,5|0,510,4/0,2] 0,1 longueurs, chez la souris n° 9, du 14 au 46 juillet 4912. LONGUEURS EN 1 26 26,5 27 21,0 28 28,5 29 29,5 30 30,5 31 31,5 32 34 fl 0 7 G S 7 1 3 6 3 1 3 il 1 109 j 13 S 1 7 5] b) 3) 0 (l 0 (l 0 0 0 100 A5 à) 3 D 3 . 3 { 2 (Ù (l 0 0 0 100 3) TS MIRE if 14 12 ÿl 4 D) D I 3 il 1 300 MP tS.6 | 5,6 | 4,604 |9,30/4,3 | 2,6 | À | 0,3) :1,,"0,3 0:38 LONGUEURS EN y 686 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 12 août 1912. Les trypanosomes apparaissent dans le sang le 15 août. Le cobaye succombe le 19 août. (Voir courbe 3.) Souris n° 8, du poids de 25 grammes, est inoculée sous la peau le 9 juillet 1912. Le 13 juillet, les trypanosomes apparaissent dans le sang pris à la queue. Le 24 juillet, la souris meurt. (Voir courbe 4.) Souris n° 9, du poids de 18 grammes, est inoculée sous la peau le 12 juillet. Elle succombe le 17 juillet. (Voir courbe 5.) « SN & + 8 9 © © 5 à À A O2 ON 1 IS 16 I} 8 /9 20 4 422 23 24 25 26 <7 28 2? 30 2] 52 TABLEAU VII. — La courbe Cobaye n° 76. (Voir tableau III.) La courbe ...... Cobaye n° 18. (Voir tabteau IV.; SO à CO HR Tr 6 7 D © LE EC AUS La . . AE TENIST 16 1} 19 79 40 21 2202502 ET 25 27 30 IST TagLeau VIII — La courbe Souris n° 8. (Voir tableau V.) La courbe ...... Souris n° 9. | Voir tableau VI.) TRYPANOSOMA PECAUDI 687 Les tableaux ci-dessus donnent la représentation graphique des résultats de nos observations. Dans les tableaux, la ligne verticale montre le nombre de trypanosomes et la ligne horizontale la longueur en y. Ces tracés d'ensemble diffèrent donc d'animal à animal, même à l'intérieur d'une seule espèce (cobaye, souris). On voit ainsi, une fois de plus, avec quelle circonspection il faut se servir des tracés biométriques, mème résumant toute une infection, pour caractériser une espèce. INFLUENCE DE LA TEMPÉRATURE. Du sang riche en trypanosomes, pris au cœur d’un cobaye infecté, était mélangé à de l’eau physiologique citratée et sou- mis aux différentes températures pendant des temps différents. Expr. 1. — A la température du laboratoire, au bout de 30 heures, beaucoup de trypanosomes se sont déformés. Une souris injectée avec du sang ainsi conservé a été infectée avec un retard de 4 jours sur le témoin. Après 4 jours, on a trouvé très peu de trypanosomes d'aspect normal et. mobiles. Le sang injecté à une souris n'a pas produit d'infection. Au bout de 6 jours, la plupart des parasites étaient détruits et les autres étaient déformés et d’une mobilité très faible. Exp. 2. — À la glacière, les flagellés se conservent mieux qu'à la tempéra- ture du laboratoire. Après 5 jours, les trypanosomes d'aspect normal et mobiles n'étaient pas rares. Après 8 jours, la majorité étaient altérés ou détruite, et au bout de 14 jours, il n'y avait plus que très peu de trypano- somes encore vivants. : Le sang injecté, au 3° jour, à une souris a produit l'infection avec un retard de 7 jours sur le témoin. 3 souris injectées, aux 8e, 12e et 14 jour, sous la peau (1/10 de cent. cube environ), ont succombé très rapidement : l’une en 4 jours, les autres en 3 jours. Malgré cela, l'examen microscopique du sang et des organes a été toujours négatif, Comme ce fait nous semblait très remar- quable, nous avons ensemencé, dans le milieu de gélose ordinaire, de ce sang conservé à la glacière et du sang pris au cœur de l’une des souris ayant succombé, et nous les avons mis à l'étuve à 31 degrés. Mais aucune bactérie ne s’y est développée. Quelle est donc la cause de la mort des animaux? S'il s'agissait d’une toxine due à la destruction du corps des trypanosomes, ce serait une toxine très labile, car l'injection, faite avec le sang conservé jusqu’au 23° jour, à une souris, a donné de nouveau un résultat négatif. Exr. 3. — A une température variant entre — 5 et — 10 degrés (dans un mélange de glace et de sel), au bout de 1 heure, les trypanosomes étaient encore très vifs et d'aspect normal. Ensuite, à une température entre — 20 et — 15 degrés, au bout de 30 minutes, on a trouvé dans le sang qui s’est décon- gelé et réchauffé, à la température du laboratoire, un grand nombre de trypa- 688 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR nosomes immobiles, déformés, détruits, et très peu d'individus encore mobiles et d'ailleurs altérés. Une souris inoculée avec ces trypanosomes a été infectée avec un retard de 5 jours sur le témoin. Exp. 4. — À la température de 37 degrés, au bout de 2 heures, le sang con- tenait beaucoup de trypanosomes immobiles, mais légèrement altérés. Au bout de 4 heures, la plupart étaient immobiles, fortement déformés ou détruits. Le sang injecté à une souris a produit l'infection avec un retard de 6 jours. Exp. 5. — A la température de 40 degrés, au bout de 2 heures, presque tous les trypanosomes étaient détruits. L'inoculation à une souris a été négative. En général, les trypanosomes altérés se mettent en têtards ou en boules. À un stade d’altération plus avancé, le protoplasme disparaît d'abord; dans les préparations colorées, on ne voit plus que le noyau plus ou moins pâle et le flagelle avec le blépharoplaste. Dans toutes ces expériences, aucune des deux formes du trypanosome n'a joui d'une propriété particulière; elles ont été également sensibles aux influences nocives de la tempéra- ture. Nous n'avons pas réussi à séparer l’une de l'autre. Dans tous les cas où l'infection a été positive, on a retrouvé les deux formes du trypanosome dans le sang des souris. ACTION DES SÉRUMS. Du sérum de cobayes saignés à la période de crise a joui d'un pouvoir protecteur, c’est-à-dire que ce sérum, mélangé aux trypanosomes, allongeait notablement l’incubation chez les souris inoculées. Pour cette expérience, nous avons employé le sang d’une souris riche en trypanosomes, dilué dans l’eau physiologique citratée. Nous avons préparé cette dilution, en suivant les indi- cations de MM. Mesnil et Brimont, de facon qu’une goutte, exa- minée entre lame et lamelle à un grossissement de 350 dia- mètres, montre une dizaine de trypanosomes par champ (Leitz : oculaire compensateur, 12; objectif, 8 millimètres; longueur du tube, 141 millimètres). Nous avons pris 1/10 de cent. cube comme dose étalon. On ajoute ensuite cette dilution au sérum, en différentes proportions, et après un certain temps de contact, ces mélanges sont injectés sous la peau du dos des souris. TRYPANOSOMA PECAUDI 689 Le tableau ci- contre donne un Z u REX TENTE exemple des résul- * È tats de nos expé- NS É e a = = 2 — © riences. 5 4 ; + 3 Comme le mon- — É tre le tableau, le sé- = à SMALL = rum, aux doses de _ nn 8 La ! à = F4 1/4 cent. eube et 2: : ; EUR 5 9) D û p À 2 S 5 2 ei 4/2 cent. cube, a né St ÿ retardé l'incubation 0 = | déRSRours el, ae21 HE AN D'ART ME + ES © Î 1éent cube sde OPEN AE TA Li : ; : Oo à £ A jours après uncon- #ŸT Z LUS UEe £ : © æ: : 2. F4 2 tact de 10 minutes. & £ r Z + À — à cel — pet — = tube contenant ce sig À RP Le 3 mélange a été mis € Ë PR £ à l’étuve à 37 de- ; RAP EN Ve z ART Z = SM ne 5 erés. Nous en avons £ SMS = pris une goutte el AE $ . = = = (te le 20 + E= El examiné entre lame S 6. Dit) SRE 5 et lamelle tous les # E | quarts d'heure pen- 5 à F1. SENS dant deux heures et F — 690 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR demie. Dès une demi-heure ou une heure, on a obtenu de belles agglomérations en rosace des éléments flagellés; ils se sont accolés par leur extrémité postérieure. Au bout de deux heures et demie, il y avait un assez grand nombre d'’amas des trypanosomes agglomérés (agelomération secondaire). Tous les trypanosomes avaient encore leurs mou- vements propres; il n'y a eu aucune trypanolyse. Du sérum d’un cobaye neuf n'a donné, dans les mêmes con- ditions, que de petites agolomérations non persistantes. Essai DE CULTURE. Nous nous sommes servis du milieu de Novy-Nicolle, Deux essais avec le sang pris au cœur de deux cobayes fortement infectés ont échoué. Dans ce milieu, les trypanosomes n'ont montré aucune multiplication, bien qu'il y eût des individus encore vivants après une vingtaine de jours. Nous avons observé une fois, au 6° jour de l'ensemencement, les irypanosomes en une rosace très nette. Dans les tubes destinés à la culture, les trypanosomes se déforment en quelques jours. Des granulations très réfringentes apparaissent dans le protoplasme et enfin les trypanosomes succombent. Les trypanosomes conservés dans le milieu de culture pen- dant 10 jours et injectés alors sous la peau à un cobaye n'étaient plus virulents. L'examen microscopique du sang Jusqu'au ÎT° jour après l’inoculation restait négatif. Mais l'animal restait sensible à une nouvelle inoculation faile ensuite avec du sang d’un cobaye infecté. ConcLusIONS. Nous pouvons résumer ainsi l'ensemble de notre travail : 1° Dans le sang des animaux infectés du Trypanosoma becaudi, nous avons toujours constaté, comme nos devanciers, Jes deux formes longues-effilées et courtes-trapues. En outre, les formes intermédiaires ne sont pas rares: 2° Chez les formes courtes, nous avons constaté la présence du noyau postérieur, 1 fois sur 823 trypanosomes examinés : TRYPANOSOMA PECAUDI 691 3° 11 ya un rapport certain entre l'allure de l'infection et l'apparition des deux formes dans le sang des animaux en expé- rience. Ce sont les formes longues qui apparaissent d'abord dans le sang. Dès la période moyenne de l'infection, les formes courtes se présentent très nombreuses. Dans la dernière période, les formes longues dominent de nouveau. En cas d'infection d'allure rapide, ce sont les formes longues qui sont 1es plus nombreuses pendant tout le cours de l'infection. Les tableaux et les tracés publiés donnent une idée précise de la présence et de la variation des diverses formes; Ke Les deux formes sont également sensibles aux influences nocives des différentes températures. Par ce moyen, on ne peut pas séparer l'une de l’autre; 5o Le sérum des cobayes saignés à la période de crise possède un pouvoir protecteur contre l'infection expérimentale ; Ge In vitro, au céntact des éléments flagellés avec le sérum, on constate le phénomène d'agglutination spécifique ; 7 Les essais de culture n'ont pas réussi. BIBLIOGRAPHIE Brumpr. — Précis de Parasitologie, Paris, 1910. LAvEran. — Sur les trypanosomiases du Haut-Niger. Annales de l'Institut Pasteur, t. XXI, 1907. Laveran et Mesniz. — Trypanosomes et trypanosomiases, Paris, 1912. Mes et BRIMONT. — Sur les propriétés protectrices du sérum des animaux trypanosomés, Annales de l'Institut Pasteur, À. XXI E19 09! Lecer et RINGENBACH. — Sur la spécificité de la propriété trypanolytique des sérums des animaux trypanosomés. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, PINS p349, 1911 Grepuens et FantHam. — On the peculiar morphology of a Trypanosomu, etc. Ann. of trop. Med. and Parasit., t. IV, 1911. 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L'analogie frappante entre les phénomènes de fermentation et la combustion à la fumière solaire des corps ternaires en solu- tion alcaline a été, pour la première fois à notre connaissance, mise en relief par Duclaux. « Non seulement, dit-il, les produits de la combustion solaire sont tous des produits de fermentation, mais la même substance fermentescible donne volontiers les mêmes produits, qu'on la brûle au soleil ou qu'on la fasse fermenter » [41]. Cette phrase se rapporte principalement à une observation des plus importantes de Duclaux, à savoir que le glucose et le lactose, exposés au soleil en solution alcaline et à l'abri certain de toute ingérence microbienne, donnent naissance à de l'alcool éthylique et à de l’anhydride carbonique. Cette action de la lumière solaire ne peut pas actuellement être considérée comme spécifique, et la lumière ne doit être envi- (1) Un résumé de ce travail a été présenté à l'Académie des Sciences, séance du 30 mars 1914, t. CLVIII, p. 976. QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 693 sagée que comme une forme d'énergie qui intervient dans le phénomène pour amorcer et accélérer la décomposition du sucre. La preuve en est que cette forme d'énergie peut être remplacée par d’autres, notamment par l'énergie calorifique. C'est ainsi que E. Buchner et J. Meisenheimer !2]}, en faisant bouillir du sucre interverti avec de la soude concentrée, ont obtenu de l'alcool, caractérisé par sa transformation en éther p-nitrobenzoïque cristallisé, fait qui a été confirmé récemment par des expériences analogues de A. Jolles [3]. Dans ces cas, le rendement en alcool est minime par rapport au sucre mis en œuvre (1). Il est relativement beaucoup plus facile de transformer le glucose en acide lactique sous l'in- fluence des alcalis, réaction dans laquelle les divers auteurs qui se sont occupés de la question ont indiqué des rendements en acide lactique pouvant atteindre et même dépasser 50 p. 100 du poids du sucre décomposé [4]. La dislocation de la molécule de sucre, soit par l'alcali et la lumière solaire, soit par l’alcali et la chaleur, présente quelques caractères tout particuliers, qui impriment au phénomène une allure spéciale. Tout d’abord, pour disloquer cet édifice com- plexe, il suffit de la présence de traces d’alcali; sans doute l'intensité de la décomposition est fonction de fa concentration en alcali; mais il n’y a aucun rapport défini entre les quantités considérables de sucre dont on peut produire la décomposition et les quantités faibles d’alcali qui la provoquent. D'autre part, en dehors de la fixation de l’alcali à l’état de sels par les acides qui prennent naissance, on ne trouve pas de combinaisons défi- nitives entre l’alcali et les produits de la décomposition. Il suit de ce dernier fait, ainsi que de la disproportion entre la quan- tité de matière décomposée et la quantité du réactif qui en pro- voque la dislocation, que Peffet des alcaïis sur les sucres prend l'allure d’une véritable action catalytique. C'est là une analogie qui rapproche d’une manière des plus intéressantes, à notre avis, l’action des alcalis sur les sucres des phénomènes de fermentation, que tout le monde actuellement s'accorde pour considérer comme des phénomènes diastasiques, (1) Bucaxer et MEISENHEIMER n’ont obtenu dans leurs expériences que 2 gr. 8 d'alcool en partant de 3 kilogrammes de saccharose. 69%. ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR c’est-à-dire catalytiques. Il y a cependant entre les deux ordres de phénomènes une différence essentielle. Dans les actions cata- lytiques typiques, telles que l'hydrolyse du saccharose par les acides étendus ou l'oxydation de l'alcool éthylique par le noir de platine, nous avons affaire à une transformation qui reste relativement simple et qui donne naissance à des produits faci- lement saisissables, de telle sorte qu'on peut suivre la marche de la réaction et en mesurer la vitesse. Les choses se passent tout autrement dans l’action des alcalis sur les sucres : ici, nous avons affaire, pour emprunter à Duclaux une expression imagée, à un écroulement général de la molécule très complexe du sucre, au cours duquel il se forme une foule de corps divers (1). Oxydations et réductions, processus de décomposi- tion et de synthèse se succèdent et se superposent. Les produits intermédiaires de la réaction se mélangent aux produits finaux, et les proportions relatives de tous ces corps dépendent non seulement de la nature et de la concentration de l’alcali, mais encore de la concentration de la solution sucrée et de la tem- pérature à laquelle la réaction a lieu. Cette complexité extrème n'exclut pas, néanmoins, l’analogie avec les processus biologiques dont parle Duclaux, surtout si on envisage les phénomènes dans leur ensemble et dans leurs résultats finaux, et si on se borne à comparer le mécanisme de formation des produits qui prennent naissance. Il serait évi- demment tout à fait erroné de vouloir chercher autre chose que des analogies et d'étendre systématiquement aux dédouble- ments biologiques les résultats obtenus dans la décomposition des sucres sous l'influence des alcalis. L'intervention de la cellule vivante donne le plus souvent aux phénomènes une com- plexité que n'ont pas les processus purement chimiques, et ceux-ci ne peuvent fournir que des indications de travail pour l’étude des processus biologiques. C'est en nous plaçant unique- ment à ce point de vue que nous avons été conduits à l'étude des quelques faits exposés dans la présente note. (1) D'après J. U. Ner [5], chaque hexose en solution alcaline peut donner naissance à 116 corps différents. QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 695 Ai Les remarquables travaux de C.-A. Lobry de Bruyn et A. v. Ekenstein [6] ont fait voir que, sous l'influence des alcalis, le glucose perd peu à peu son pouvoir rotatoire, et qu'il s'isomé- rise en même temps, en fournissant du lévulose, du mannose et du glutose. Les autres hexoses, aussi bien cétoses qu'aldoses, subissent des transformations analogues. L'action catalytique des ions oxhydryles n'est pas limitée à ces transpositions intra- moléculaires ; elle se poursuit en donnant naissance à toute une série de corps, notamment des acides. Nous avons répété les expériences des deux savants néerlan- dais en soumettant du dextrose à l’action ménagée d’aleali dilué, afin de nous rendre compte de la vitesse avec laquelle ce sucre est transiormé. À cet effet, des solutions de glucose pur à 5 p. 100 ont été chaulfées au bain-marie à 50 degrés en pré- sence de 2 p. 1.000 de carbonate de soude, c’est-à-dire d’une dose d'alcali carbonaté, et non libre, infiniment plus faible que les doses d’aleali caustique employées par Lobry de Bruyn et v. Ekenstein. À divers stades, nous avons déterminé la rota- tion de la solution sucrée, en même temps que son alcalinité. Voici, à titre d'exemple, les résultats d’une expérience de ce genre. SOLUTION DE GLUCOSE A à P. 100 ET Dä CARBONATE DE SOUDE A 2 p. 4.000 A LA TEMPÉRATURE DE 50 DEGRÉS. TEMPS ROTATION ALCALINITÉ FA en en c.c. SO#H? N/20. “A degrés nécessaires pour heures. saccharimétriques. neutraliser 10 cent. cubes. (EME PAU FTP ET AE 24,4 A5 16. 4,6 65 ET ENE ee EC ER PT | 6,1 LORENENRS ETES à 0 >, 6 6#. 0 5,0 58. (Ù 4, Méme expérience avec une solulion de glucose à 10 p. 100. (es MEET ONE 48,4 8,1 20 CM IAE | 9,4 6,4 LV. . . 6,8 5,8 NOR! ATEN 5,9 5,2 46 696 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ces chiffres font voir tout d’abord que la chute de rotation, très rapide au début, se ralentit peu à peu. La solution de glu- cose à 10 p.100, bien que renfermant encore une quantité rela- tivement élevée d’alcali au bout de soixante-huit heures, n’a pas encore atteint au bout de ce temps la neutralité optique, tandis que la solution à 5 p. 100 est déjà optiquement neutre au bout de quarante heures. Il n'y a pas de relation directe entre la diminution de l’alcalinité et la chute de la rotation, car, alors que celle-ci est brusque, la première est progressive; en outre, l’alcalinité continue à diminuer après que la solution sucrée est devenue optiquement inactive. I apparaît donc que la transformation du dextrose en un mélange inactif et la forma- tion de corps acides sont des processus parallèles, mais indé- pendants l’un de l'autre. Nous avons d’ailleurs constaté que les choses se passent de la même manière si l’on chauffe le glucose avec le carbonate de soude, soit dans le vide, soit en présence d'hydrogène, ce qui exclut toute intervention de l'oxygène de l'air dans le phénomène et concorde bien avec les observations faites par Ad. Jolles [3]. Quels sont les acides, et en première ligne les acides volatils, qui se forment lorsqu'on soumet le glucose à un traitement ménagé par le carbonate de soude ? Pour répondre à cette question, nous avons distillé dans Île vide la solution sucrée, devenue optiquement neutre à 50 degrés, après l'avoir légèrement acidifiée par l'acide sulfurique. Le dis- tillat acide a été neutralisé par la soude, et évaporé à sec au bain-marie; le résidu repris par l’eau distillée et filtrée a été amené à 150 cent. cubes. Sur 100 cent. cubes, additionnés d'acide sulfurique et amenés à 110 cent. cubes, nous avons dosé les acides volatils par la méthode de Duclaux [7]. Les chiffres de distillation obtenus (1) concordent d'une manière {1) Voici ces chiffres : CHIFFRES CHIFFRES DE DUCLAUX trouvés. pour l'acide acétique. 4. 7,6 1,4 5 15.4 15,2 5: 93.4 93,4 4. 31,7 32.0 5. 40,8 20,9 6. 19.8 50,5 7 59,8 60,9 8 74,0 71,9 9 84,0 84 4 10 100,0 1000 QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 697 tout à fait satisfaisante avec ceux de l'acide acétique. L'action du carbonate de soude sur le glucose à 50 degrés donne donc naissance à de l'acide acétique, dont la production est d’ailleurs confirmée par la formation de cacodyle aux dépens du sel et de l'acide arséniéux et par celle d’acétate d'éthyle lorsqu'on chauffe l'acide avec de l'alcool et de l'acide sulfurique. Nous avons fait une autre expérience dans laquelle Ia décom- position du glucose a été plus brutale : nous avons fait tomber le glucose à 5 p. 100 goutte à goutte dans une solution de car- bonate de soude à 5 p. 100 maintenue en ébullition par un courant de vapeur d'eau. Dans ce cas également, nous avons constaté que l'acide volatil produit est de l'acide acétique pur (1). Une partie du distillat obtenu dans cette opération a servi pour préparer un sel de calcium. On a chauffé 100 cent. cubes de liquide, renfermant 0 gr. 504 d'acide volatil exprimé en acide acétique, avec un excès de craie, et, après filtration, on a ramené le volume avec de l’eau distillée à 100 cent. cubes. Dans ce liquide, la chaux a été dosée soit directement, par la calcination du sel organique, soit par précipitation au moyen de l'oxalate d’ammoniaque. La moyenne de trois déterminalions concordantes conduit par le calcul à une quantité totale de 0 gr. 233 CaO dans Les 190 cent. cubes, soit 0 gr. 6.574 d'acétate de chaux, au lieu de 0 gr. 6.636 qu’on obtient en supposant que la totalité de l'acide volatil était de l'acide acétique. Calculé Pour O EC 35,44 p. 100 CaO. IITOUMÉ NT RE M Se 6 39,411 — La formation de l'acide acétique est donc indiscutable. Cet acide se forme d’ailleurs en quantité très notable, car, sans tenir comple des pertes inévitables, nous en avons obtenu 0 gr. 756 en partant de 12 gr. 5 de glucose, ce qui correspond à un rendement de 6 p. 100. I n'ya pas lieu d'être surpris de trouver ainsi l'acide acétique (1) Chiffres trouvés dans le dosage par la méthode de Duclaux : 1. 1,6 6. RE LOT oi. DNOUSS HAE ATEN): 59.7 cl 23,1 ÉRMNE PME 70,9 LR 31,7 DR NEA. 53.7 5. 0,6 USE ET PTS 24000 698 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR parmi les produits de la décomposition du glucose par le carbonate de soude. Le fait concorde tout à fait avec les vues de Duclaux, qui attribue avec raison sa présence constante comme produit final des réactions chimiques ou biochimiques à ce qu'il est relativement stable dans les conditions et dans Île milieu où il est formé. L’acide acétique a d’ailleurs été rencontré récemment par Jolles {8}, à côté de l'alcool, dans la décomposi- tion de certains sucres par la soude caustique, et Duclaux lui- mème avait observé sa formation en exposant à l’action de la lumière solaire, non pas, il est vrai, le glucose, mais les lactates alcalins. Ce qui est difficile à admettre, c’est la formation directe de l'acide acétique aux dépens du glucose, et il semble bien plus logique de penser qu'on n'arrive à ce terme final qu’en passant par des corps intermédiaires dérivant plus ou moins directe- ment de la molécule de sucre. On comprend ainsi que ces substances, moins stables que l'acide acétique lui-même, puissent subir des transformations ultérieures qui ne con- duisent pas nécessairement à l'acide acétique, et que ce dernier acide puisse, dans certains cas, faire défaut. Nous sommes mis en présence d’un cas semblable par un travail de Ed. Buchner, J. Meisenheimer et H. Schade |8}, dont les résultats sont particulièrement intéressants pour la question qui nous occupe. L'un de ces auteurs, H. Schade, avait anté- rieurement [9] cru observer que l'oxydation du glucose par l'eau oxygénée en milieu alcalin fournit à la fois de l'acide formique et de l’aldéhyde acétique, ou le produit d’oxydation de ce dernier corps, l'acide acétique. Dans cette transformation, chaque molécule de sucre fournirait 2 molécules d’aldéhyde acétique et 2 molécules d'acide formique, d'après l'équa- {ion : CHOSE PAICOEEPICEHOZ Dans un travail qui semble trop peu connu, H. Sainte-Claire Deville et IH. Debray [10] ont indiqué que, soumis à l’action catalytique du rhodium pulvérulent, l'acide formique se décom- pose en hydrogène et en anhydride carbonique. Schade à mis à profit cette observation, en montrant que le même catalyseur transforme le mélange en question, aldéhyde acétique et acide formique, en alcool éthylique et acide carbonique; et, en se QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 699 basant sur ces faits, il a imaginé un schéma de la fermentation alcoolique d'après lequel la molécule de sucre se décomposerait d’abord en aldéhyde acétique et acide formique, ces deux corps réagissant ensuite l’un sur l'autre pour fournir de l'alcool et de l'acide carbonique. C’est ce qu'il désigne, dans le titre même de son mémoire, sous la dénomination : « Fermentation alcoo- lique des sucres sans enzymes ». Buchner et Meisenheimer ont pensé avec raison que ce travail méritait d’être soumis à un examen critique, et c'est cette revision qu'ils ont entreprise en collaboration avec Schade lui-même. Ils ont d'abord constaté que la soi-disant transfor- mation intégrale du sucre en aldéhyde acétique et acide formique exigeait une sérieuse rectification. En effet, l'acide formique ne représente qu'une fraction des acides résultant de la décom- position du glucose en milieu alcalin, en présence d'eau oxy- génée, et non la lotalité, comme Schade l'avait admis à la suite d’une simple titration. Ensuite, la recherche de l’aldéhyde et de l'acide acétique n’a donné que des résultats négatifs. Par contre, ces auteurs ont trouvé de l'acide glycolique et de l'acide trioxy- butyrique, mélangés très probablement avec d’autres corps acides. Ils ont été ainsi conduits à la conclusion que « ces décompositions des sucres ne représentent que des phénomènes d'oxydation, et ne peuvent pas être rapprochés de ceux de la fermentation alcoolique ». Ces résultats justifient-ils l'abandon pur et simple du schéma de Schade, et sont-ils incompatibles avec ce schéma, notam- ment en ce qui concerne la formation de l'acide glycolique? Évidemment non. En effet, l'acide glycolique, CH:OH.COOH, peut être envisagé comme l'oxyacide correspondant à l'acide acétique, CH5.COOH, ce qui conduirait à penser que, dans les conditions des expériences de Buchner, Meisenheimer et Schade, c'est-à-dire sous l'influence de l’eau oxygénée, ou d’un fort courant d’air en milieu alcalin, il y a eu oxydation du groupe méthyle, sinon dans l'acide acétique, ce qu'on aurait peut-être quelque difficulté à admettre, tout au moins dans le composé qui le précède. Chimiquement, une oxydation de ce genre n'est nullement impossible ; elle amême été réalisée pour l’aldéhyde acétique, ainsi qu’il résulte des observations de G. W. Heimrod et P. À. Levene [11}|, quiont obtenu de l’aldéhyde 700 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR olycolique parmi les produits d'oxydation de l'aldéhyde acétique en milieu alcalin. On serait ainsi conduit à la conclusion que le fait d’avoir trouvé de l'acide glycolique comme produit de la réaction n'exclut nullement la production préalable de l'acide acétique, ou au moins d'aldéhyde acétique, c’est-à-dire un mécanisme analogue à celui que nous avons constaté plus haut dans la décomposition du glucose par les alcalis. III Quelle est l'origine de l'acide acétique dont nous venons de constater la formation dans l’action de l’alcali sur Le glucose ? Ne pourrait-on trouver à cet égard des indications utiles en étudiant les produits volatils non acides qui se forment en même temps que l'acide acétique? Pour pouvoir répondre à celte question, nous avons fait un certain nombre d'essais en employant le dispositif suivant, destiné à permettre de recueillir les corps volatils non acides au fur et à mesure de leur formation. Dans un ballon à distillation, renfermant une solution de carbonate de soude à 5 p. 100, on introduit goutte à goutte, à l’aide d’un entonnoir à robinet, une solution de glucose à 5 p. 100. On maintient l'ébullition à l'aide d'un courant de vapeur d’eau, qu'on règle de telle sorte que le niveau reste à peu près constant dans le ballon de manière à éviter la concentration du carbonate de soude. On recueille le liquide qui distille dans un récipient fortement refroidi. Ce distillat donne avec la soude et l’iode, dissous dans l’iodure de potassium, un abondant précipité d’iodoforme à froid. I] réduit le réactif de Nessler à l’état métallique et fournit avec le nitrale d'argent ammoniacal un miroir d'argent. Il décolore instantanément une solution alcaline de bleu de méthy- lène, et réduit fortement 4 froid la liqueur de Fehling. Nous nous trouvons donc en présence de corps aldéhydiques ou cétoniques. Parmi ces corps, il faut exclure la présence de l’aldéhyde acétique, car nous n'avons obtenu ni la recoloration de la fuchsine, décolorée par l'acide sulfureux, ni la coloration bleue caractéristique que fournit cette aldéhyde avec le nitroprussiate QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 701 de soude et la triméthylamine {réaction de Simon) (1). D'autre part, comme nous avons constaté que les produits volatils qui donnent la réaction de l’iodoforme peuvent être retenus par le bisulfite de soude, nous pouvons également affirmer l'absence de l'alcool éthylique. Chauffé avec la phénylhydrazine en solution acélique, le distillat a fourni un produit cristallin, soluble dans l'alcool, Par recristallisation dans ce dissolvant, on a obtenu finalement une osazone fondant à 146-147 degrés, que l'oxydation par le bichromate de potasse, en présence d'acide acétique, selon les indications de H. von Pechmann 15], transforme en une tétrazone fusible à 101-102 degrés. Ce produit, plus stable que l’'osazone dont il dérive, a été soumis à l’analyse après plusieurs recristallisations dans l’éther et l’acétone. 0 gr. 0534 de substance ont donné à 19 degrés et 756 millimètres depression ice CELA Ue 10 c.c. 4 d'azote. Calculé Pom OBHENSER Re CRC 22,4 p. 100 d’azote. ROUVÉ REP CC Le cie 22,6 p. 100 d'azote. Il s'agit donc bien ici de la mnéthylglyoxaltétrazone, formée aux dépens de la #7éthyqlyoxalosazone. Ce dernier corps peut provenir lui-même soit de l'alcool pyruvique, soit de l’aldéhyde pyruvique, ces deux composés fournissant ia même osazone, et c'est là un point qui mérite d'être examiné, bien qu'il soit actuellement difficile de le trancher d’une manière définitive. Divers auteurs ont déjà entrevu la possibilité de la formation de méthylglyoxal (aldéhyde pyruvique) au dépens des sucres par voie purement chimique. C’est ainsi que G. Pinkus [16] a constaté que lorsqu'on chauffe du glucose en milieu alcalin avec de la phénylhydrazine, il y a production de méthylglyoxa- losazone, fait confirmé par les expériences de J.-U. Nef [17]. Mais, tandis que Pinkus semble porté à admettre que cette osazone dérive de l'alcool pyruvique (acétol), Nef est d'avis que c'est l’aldéhyde pyruvique (méthylglyoxal) qui résulte de la 1) Cette réaction£est désignée dans la littérature allemande sous le nom de Rimini, alors qu'en réalité elle a été indiquée pour la première fois par L. Simon [143], et que Rimini [42] n’a fait que l’étudier de plus près. Tout récemment, A. v. Lebedew [14] indique comme nouveau le fait que la présence d’ammoniaque gêne la réaction (qu'il appelle, lui aussi, réaction de Rimini); ce fait avait déjà été signalé par Simon. 102 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR décomposition des sucres par les alcalis, car en milieu alcalin l’acétol se polymérise avec une facilité extrême, en donnant naissance à des résines très compliquées. Ce sont d’ailleurs ces composés résineux mal définis qui, d’après Nef, communiquent leur couleur brune intense aux solutions alcalines des sucres. Quelle que soit la nature du composé fournissant la méthyl- glyoxalosazone, les expériences que nous avons résumées plus haut apportent la preuve directe que l’action de l’alcali sur le glu- cose donne naissance à un corps au moins appartenant au groupe pyruvique (1). Les conditions que nous avons réalisées dans ces expériences, danslesqueilesles produits volatilséchappent plus ou moins à une transformation ultérieure, permettent de retrouver ces produits en quantité très notable. Ainsi, 500 cent. cubes du distillat provenant de 12 gr. 5 de glucose ont fourni 1 gr. 48 de méthylglyoxalosazone ; et 10 cent. cubes de ce liquide absorbaïent 62 c.c. 8 d’iode N/20. Par contre, dans les expériences du cha- pitre précédent, dans lesquelles le carbonate de soude a agi sur le glucose à lébullition, la production des corps cétoniques a été minime, et ilse peut que ce soit là la raison pour laquelle leur formation a échappé à divers auteurs. Quel est le rôle des corps du groupe pyruvique dans la pro- duction de l'acide acétique aux dépens du glucose (2)? Prenant pour point de départ le fait, démontré plus haut, de la présence de corps de ce groupe dans les produits de décomposition du glucose par les alcalis, et admettant avec Nef que c’est l’aldéhyde pyruvique qui se forme tout d’abord, nous pouvons imaginer que celte aldéhyde donne naissance, en vertu des propriétés carac- téristiques des aldéhydes (réaction de Cannizzaro), d'une part à ‘alcool correspondant, l’acétol, et d'autre part à l'acide corres- pondant, l'acide pyruvique. CHE — CO — CHO H° CH$ — CO — CH°OH CH — CO — CHO O | MG Co — COR (1) Tout dernièrement, H. D. Dakin et H. W. Dudley [48] ont montré que e glucose, distillé avec du phosphate de sodium, fournit un'corps du groupe pyruvique, qu'ils ont isolé à l'état de méthylglyoxal-p. nitrophénylosazone. (2) La possibilité de divers mécanismes de formation de ces corps aux dépens des sucres a été développée avec une remarquable netteté par A. Wohl [19;, dans une conférence faite en 1907, à l'Assemblée générale des chimistes allemands, à Dantzig. QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 703 On sait que l'acide pyruvique peut facilement perdre de l'anhydride carbonique pour donner naissance à l’aldéhyde acé- tique, ou, lorsqu'il est soumis à l’action d’un agent oxydant, à de l'acide acétique. Nous trouvons ainsi une explication logique pour les faits expérimentaux que nous ayons observés. Une partie de l'al- déhyde pyruvique formée est entraînée par la vapeur d'eau; une autre se transforme en acélol et en acide pyruvique. L'acétol, à son tour, peut être en partie entraîné par la vapeur d’eau, et fournir, en même temps que l'aldéhyde pyruvique, à laquelle il se trouve mélangé dans le distillat, la méthyglyoxalosazone ; tandis que le reste de l’acétol se transforme en résines qui colorent fortement la solution sucrée. Quant à l'acide pyru- vique, il est transformé en anhydride carbonique et acide acé- tique, dont la présence est facile à mettre en évidence. Cette manière de concevoir la formation de l'acide acétique aux dépens du glucose, n'implique pas la production d'acide formique. De fait, nous n'avons pas pu le retrouver dans nos expériences, la totalité des acides volatils étant constituée par de l'acide acétique seul. L'absence d'acide formique peut d’ailleurs expliquer pourquoi nous n'avons pas trouvé d'alcooï éthylique; et nous aurons plus loin l'occasion d'insister sur cette expli- cation. IV Nous venons d'indiquer un mécanisme de la formation de l'acide acétique aux dépens du glucose sous l'influence des alcalis. Ce n’est assurément pas le seul qui se présente à l'esprit. Parmi les nombreuses hypothèses imaginées par divers auteurs, l’une des plus intéressantes, celle qui mérite de fixer notre attention, c'est l'hypothèse de l'intervention de l'acide lac- tique comme produit intermédiaire. Nous avons déjà indiqué plus haut que l'acide lactique a été obtenu par divers savants en faisant agir les alcalis sur les sucres. D'autre part, en exposant l'acide lactique ou des lactates à l’action de la lumière solaire, Duclaux [1] a observé la forma- tion d'acide acétique et d'alcool éthylique; mais, chose curieuse, il se produit de l'alcool en présence de potasse et non en pré- 704 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sence de baryte [20]}. « Le sucre, dit Duclaux, donne toujours de l'acide lactique en présence de tous les alcalis; mais, en pré- sence de la baryte le lactate formé ne donne pas d'alcool, tandis qu'il en donne en présence de la potasse ». Voilà, netlement exprimée, l'idée que l'acide lactique doit jouer le rôle de corps intermédiaire dans la formation de l'alcool aux dépens des sucres, hypothèse qui est encore actuellement très controversée, surtout lorsqu'elle s'applique à la production biochimique de l'alcool. Rien de plus simple en apparence que d'expliquer de cette manière la formation d'acide acétique aux dépens du glucose : la molécule de sucre se dédoublerait en deux molécules d’acide lactique, dont chacune se décomposerait en anhydride carbo- nique el alcool éthylique, C'H“OB=2C'H*0* C'H°0* — CO? + C'HSOH, ce dernier corps fournissant finalement de l'acide acétique par oxydalion. Mais cette simplicité n’est qu'apparente, car, si on examine la structure moléculaire des corps qui interviennent dans ces équations, et non leur formule brute, on reste convaincu que les phénomènes sont beaucoup plus complexes. En effet. consi- dérons d'abord la formation de l'alcool éthylique ou de l'acide acétique aux dépens de l'acide lactique, réalisée dans les expé- riences de Duclaux. Il y a évidemment là un processus d’oxyda- tion, qui comporte la formation d'acide carbonique, comme l'a déjà fait voir Duclaux [1] (loc. cit., p. 28), c'est-à-dire d'un corps plus oxydé que l'acide lactique. Sur quel point de la molé- cule de l'acide lactique va tout d’abord porter cette oxydation? Évidemment sur la fonction alcool secondaire, qui est la plus facilement oxydable, et qui sera transformée en fonction cétonique : CH CE CHOH + O = CO + H°0 | COOH COOH En d'autres termes, comme l'indique l'équation ci-dessus, l’acide lactique est transformé tout d'abord en acide pyruvique. QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 705 Ensuite, ce dernier corps, qui partage avec tous les acides cétoniques qui renferment un CO dans la position 2 ou 3 la propriété de céder facilement de l’anhydride carbonique, donne naissance à de l’aldéhyde acétique, CH CH | CO ee | 2 CO° | CHO COOH aldéhyde qui, oxydée à son tour, fournit de l'acide acéti- que. Ce n'est pas là un processus isolé, exceptionnel, car on le retrouve dans la (ransformalion de l'acide 8-oxybutyrique en acétone. L'oxydation de la fonction alcool secondaire de cet acide fournit, comme on Île sait, de l'acide acéto-acétique, dans lequel le groupement cétonique se trouve dans la position 3, et dont la décomposition spontanée en acétone et anhydride carbonique est bien connue : CH° CHS CH° | | CH.OH CO COM CO? | > | — | CHE CHE GÉ | COOH COOH On voit donc que l'acide acétique (comme d'ailleurs l'alcool) ne saurait dériver directement de l'acide lactique, et qu'il ne peut en provenir que par une voie détournée, en passant par l'acide pyruvique. La formation de l'acide lactique aux dépens du glucose n'est pas moins compliquée, car il est véritablement difficile de con- cevoir le passage direct du second de ces corps au premier, lorsqu'on considère la structure de leurs molécules. Par contre, la formation facile de l'aldéhyde pyruvique aux dépens du glucose, que nous avons montrée dans le chapitre précédent, ainsi que les expériences de Nef [17] (/oc. cit., p. 255), per- mettent de considérer comme vraisemblable que lorsque le glucose donne naissance à de l'acide lactique, c’est en passant par l’aldéhyde pyruvique. Il est, en effet, très facile de passer de ce dernier corps à l'acide lactique; 11 suffit de chauffer sa 706 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR solution aqueuse à 100 degrés pour provoquer une fixation d’eau et une transposition moléculaire, CHS CHE | CO + H°0 — CHOH CHO COOH réaction qui peut même se faire à froid, en présence de la potasse, comme le font voir les belles expériences de M"° W. Denis [21]. Tout porte donc à croire que, quand il se forme de l'acide lactique aux dépens du glucose, cet acide est précédé par un composé du groupe pyruvique. Mais cette production d'acide lactique dans l’action des alcalis sur le glucose n’est pas un fait constant, car nous n'avons pas pu mettre cet acide en évidence dans nos expériences, ni avec le carbonate de soude très dilué à 50 degrés, ni avec du carbonate à 5 p. 100 à 100 degrés. D'ailleurs, Buchner, Meisenheimer et Schade [8] n’ont pas non plus trouvé d'acide lactique parmi les produits d’oxydation du sucre par l’eau oxygénée. Nous ne voulons pas dire par là que ces résultats négatifs excluent la formation de l'acide lactique, car on pourrait sup- poser que, dans le passage du glucose à l'acide acétique, l'acide lactique se forme d'une manière transitoire, pour être détruit au fur et à mesure de sa production. Mais cette supposition ne serait justifiée qu'aultant qu'on aurait constaté que l'acide lactique, traité par les alcalis dans les mêmes conditions que le glucose, est capable de fournir de l’acide acétique. Que nous répond l'expérience sur ce point ? Sa réponse est négative. En traitant soit jde l'acide lactique, soit des lactates, par le carbo- nate de soude, dans les conditions dans lesquelles nous avons traité le glucose, nous n’avons pas pu arriver à obtenir de l’acide acélique. Ce résultat est en désaccord avec ceux de Duclaux, qui a obtenu de l'acide acétique, à côté d'alcool éthylique, en soumeltant des lactates à l’action de la lumière solaire, conditions qui sont, sans doute, plus favorables à l’oxyda- tion. Si, dans les conditions de nos expériences, l'acide lactique ne satisfait pas aux caractères qu'on est en droit d’en exiger QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 707 pour pouvoir lui attribuer Le rôle de corps intermédiaire entre le glucose et l'acide acétique, il n’en est pas de mème de l'acide pyruvique. Bien que nous ne soyons pas arrivés à mettre cet acide en évidence parmi les produits de décomposition du glucose, mais seulement l’aldéhyde qui lui correspond, il n’en est pas moins du plus haut intérêt de constater que, traité par les alcalis dans les mêmes conditions que le sucre, l'acide pyru- vique fournit de l'acide acétique. En voici la preuve expéri- mentale : 5 cent. cubes d'acide pyruvique pur, préparé au laboratoire par la méthode de E. Erlenmeyer {22}, modifiée par L. Simon [23 |, ont été dissous dans 50 cent. cubes d’eau, et la solution a été introduite goutte à goutte dans une solution de potasse à 10 p.100, maintenue en ébullition par un courant de vapeur d'eau. Le distillat qui passe d’abord est neutre, et ne renferme pas de produits cétoniques. On acidifie alors le liquide avec de l'acide sulfurique et on recommence à distiller. On recueille un dis- tillat acide, qui est neutralisé par la soude et évaporé à sec. On reprend le résidu par l’eau et, sur une partie de la solution, on dose les acides volatils par la méthode de Duclaux. Voici les chiffres obtenus : 1 Te Brpes es PORN DE O 2 15,9 LT APP ENS ERS 3 23,4 8.0.4 SU OMEMMATS 4 32,8 9Ù os ce EN ; 41,1 10: 25.2 ERSRSRSRETTAU La quantité totale d’acide passé à la distillation correspond à 64 cent. cubes de soude décime. Les chiffres correspondent bien à ceux de l'acide acétique. La décomposition de l'acide pyruvique par la potasse fournit donc de l'acide acétique. Les faits que nous venons d'exposer conduisent tout naturel- lement à se demander si véritablement, parmi les produits intermédiaires par lesquels passe le sucre avant de prendre la forme d’acide acétique et d'alcool, l'acide lactique Joue le rôle qu'on lui à si souvent attribué. N'’est-il pas plus logique et plus conforme aux faits expérimentaux d'admettre que l'acide acé- tique dérive directement des corps du groupe pyruvique, notam: ment de l’aldéhyde et de l'acide pyruvique ? 108 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR A Si l'on se range à cette manière de voir, on est conduit à admettre, comme conséquence logique et nécessaire, que l’acide acétique est précédé transitoirement par l’aldéhyde acétique. Au sujet de la formation de cette aldéhyde, nous possédons bien quelques indications, mais aucune donnée suffisamment nette pour entrainer la conviction. Cette critique s'applique aussi bien aux expériences de Framm [24]! sur l'oxydation des sucres en milieu alcalin qu'à celles de Schade !9}, qui a repris le travail de Framm ; et, comme l’on fait remarquer avec raison Buchner, Meisenheimer et Schade |8},, les réactions sur lesquelles ces auteurs basent leurs affirmations ne suffisent aucunement pour caractériser l’aldéhyde acétique. Nous avons déjà indiqué nous- mêmes plus haut que, dans nos expériences, nous ne sommes pas arrivés à mettre cette aldéhyde en évidence. Y a-t-il lieu de s'étonner de ce résultat négatif? N'oublions pas qu'il s’agit ici d’un corps formé transitoirement, c'est-à-dire qui ne pourrait être présent qu'à l’état de traces, et que de plus son instabilité même vis-à-vis des agents chimiques, la facilité avec laquelle il se polymérise, surtout en présence d’alcali, pour fournir des corps à molécule plus complexe, expliquent aisé- ment pourquoi on ne le retrouve pas. Quelles sont donc les transformations que peut subir facile- ment l’aldéhyde acétique? Les intéressantes observations de G. W. Heimrod et P. A. Levene, publiées dans le supplément du travail que nous avons déjà mentionné [11|, font voir que déjà, à l'air, l’aldéhyde absorbe de l'oxygène pour donner de l'acide acétique. L’aldéhyde acétique peut également fournir de l’acide formique, soit par oxydation électrolytique | 25}, soit sous l'influence de l’eau oxygénée en milieu alcalin, et c’est probablement là l'origine de l'acide formique trouvé par Buchner, Meisenheimer et Schade, parmi les produits de la décomposition alcaline des sucres. En dehors de ces produits de dégradation de sa molécule, l'aldéhyde acétique peut s’aldoliser en milieu alcalin, en don- nant lieu à de véritables synthèses, c’est-à-dire à des molécules plus complexes que celle du corps primitif. C’est ainsi qu'il QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 709 peut se former de l’aldol ou aldéhyde B-oxybutyrique, si l'on en juge d’après les résultats auxquels sont arrivés W. Loeb et G. Pulvermacher !26 |, qui, en traitant par la phénylhydrazine les produits volatils de l’action de l’hydroxyde de plomb sur le glucose, ont isolé, à côté de la méthylglyoxalosazone, l'osazone du biacétyle ou de l’acétylméthylcarbinol. Cette osazone peut dériver soit de l'acétylméthylcarbinol, formé aux dépens de l'aldol, soit de l'aldol lui-même. En effet, l'acétyIméthylcar- binol, isomère cétonique de l’aldol, peut prendre naissance aux dépens de l’aldol en milieu alcalin, en vertu d’un processus de transposition moléculaire analogue à celui qui a permis à Lobry de Bruyn et v. Ekenstein de passer du glucose, qui est un aldose, au lévulose qui en est l’isomère cétonique. CH°OH CH°O'H OH — € — H OH — c — H OH — € — H OH — c — H H — C — OH H — d — OH OH — € — H Co dHo HoH Dextrose. Lévulose. CH CH° CHOH Con CH Co CHO ds Aldol. Acétylméthylcarbinol. On peut citer encore, comme exemple d’une transposition moléculaire de ce genre, la transformation de l’aldéhyde gly- cérique en dioxyacétone, signalée par A. Wobhl et C. Neu- berg [27]. Nous avons, dans les conditions de nos expériences, fait quelques observations qui confirment les résultats auxquels sont arrivés Loeb et Pulvermacher par une méthode différente. Si, en effet, nous ne sommes pas arrivés, comme nous l'avons déjà dit, à déceler la présence d’'aldéhyde acétique, nous avons, par contre, recueilli des indications qui rendent la production d’aldol infiniment probable. Le liquide distillé, de la page 700, qui a fourni de la méthylglyoxalosazone, fournit de l'aldé- 710 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR hyde acétique lorsqu'on le distille avec de l'acide sulfurique; celte aldéhyde a été caractérisée par la réaction de Simon et par la formation de sa p-nitrophénylhydrazone. En outre, à côté de la méthylglyoxalosazone, nous avons obtenu à l'état de traces, avec le liquide primitif, une autre combinaison de la phénylhydrazine, insoluble dans l'alcool et fondant au-dessus de 200 degrés. Malheureusement, la petite quantité de ce corps ne nous à pas permis de le purifier suffisamment et de pouvoir l'identifier d’une façon plus certaine. L'aldolisation de l’aldéhyde acétique présente encore l'intérêt de fournir une explication relativement simple d’un fait très curieux observé par Duclaux [1 et 28]. En oxydant au soleil l'acide lactique ou les lactates en présence de sels de mercure, Duclaux a constaté la formation d'acide butyrique. Là encore, on est conduit à invoquer un mécanisme analogue à celui que nous avons esquissé plus haut : l'acide lactique, passant sous la forme d'acide pyruvique, fournit de l’aldéhyde acétique, qui, en s’aldolisant, donne l'aldéhyde 8-oxybutyrique; il suffit de la réduction de la fonction alcool secondaire de ce corps et de l'oxydation de son groupement aldéhydique, ou, si l'on veut, du transport de l'oxygène de la première de ces fonctions sur la deuxième, pour donner naissance à l'acide butyrique (1). CH° CH° | CHOH CH® CH° CH® [ae CHO COOH Aldol ou Acide Aldéhyde g-oxybutyrique. butyrique. Peut-être y a-t-il lieu d'expliquer par un mécanisme analogue la formation de l'acide trioxybutyrique dans l'oxydation des sucres, observée tout d’abord par Bürnstein et Herzfeld {31}, et confirmée par divers auteurs, entre autres par Buchner, Mei- senheimer et Schade [8]. (1) Cette conception est tout à fait d'accord avec les considérations sur la fermentation butyrique exposées en 1908 par Ed. Buchner et J. Meisenhei- mer [29]. C'est ainsi d'ailleurs qu'a été expliquée antérieurement la produc- tion de l'acide £-oxybutyrique aux dépens des sucres par Spiro, ainsi que par Hugounenq (Kevue de Médecine, t. VIII, 301; 1887), dont les conceptions sont discutées par Ad. Magnus-Lévy, dans son travail bien connu sur le dia- bète [30]. QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 711 Ainsi la production transitoire d'aldéhyde acétique dans la décomposition des sucres, sous l'influence des alcalis, permet d'expliquer nombre de réactions synthétiques qui accompagnent cette dégradation. Peut-être aussifaut-il attribuer à cette aldéhyde un rôle non moins important dans la production de l'alcool éthylique, obtenu par Duclaux en soumettant le sucre en solu- tion alcaline à l’action de la lumière solaire. Le passage de l’aldéhyde à l'alcool par réduction semble tout naturel. Mais quel est l’agent de réduction qu'il faut faire intervenir? C'est très vraisemblablement l'acide formique, qu’on retrouve parmi les produits de décomposilion du sucre par les alcalis chaque fois qu'il y a formation d'alcool. Cet acide est décomposé en anhydride carbonique et hydrogène, soit qu'on l’expose à la lumière solaire, comme l’a fait voir Duclaux dans le travail que nous avons si fréquemment cité, soit qu'on le soumette à l’action du rhodium pulvérulent, comme l’ont vu Sainte-Claire-Deville et Debray [10!. Il serait dès lors tout à fait logique d'admettre que, dans l'expérience de Duclaux, la lumière solaire et l'alcali ont la même action catalytique que le rhodium dans l’expé- rience de Schade, et que, dans les deux cas, l'acide formique réagit de la même manière sur l’aldéhyde acétique pour donner naissance à de l'alcool éthylique et de l’anhydride carbonique. L'alcool éthylique serait ainsi le produit de réduction de l’aldéhyde, comme l'acide acétique en est le produit d’oxy- dation. En exposant les considérations qui précèdent, nous n'avons pas eu la prétention d'étudier dans son ensemble la décompo- sition du glucose sous l'influence des alcalis; car il est évident qu'entre le sucre et les corps saisissables dont nous avons reconnu la présence, il y a place pour nombre de produits inter- médiaires. Nous avons voulu simplement rechercher si l’ana- logie signalée par Duclaux entre les termes ultimes de cette dégradation et ceux que fournissent les processus de fermen- tation ne pourrait pas s'appliquer aussi aux termes intermé- diaires de la réaction que nous avons pu mettre en évidence. A ce point de vue, les corps du groupe pyruvique, dont nous avons constaté la formation, offrent une indication très pré- - Î 4 712 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR cieuse pour les recherches ultérieures dans le domaine biochi- mique. Cette manière de voir est d'autant plus justifiée que l'attention a été récemment attirée par Neuberg et ses collabo- rateurs sur l'importance du rôle de l'acide pyruvique comme produit intermédiaire possible dans la décomposition biochi- mique du sucre, et que nous avons nous-mêmes démontré dernièrement la présence de cet acide parmi les produits de la vie de la levure |321. Ces corps du groupe pyruvique sont-ils véritablement la forme qui précède nécessairement et constamment l’alecol dans la fermentation ? Pour pouvoir répondre à cette question, il est évident qu'il faut réaliser des conditions qui permettent à ces corps de s'accumuler dans le liquide qui fermente, et c’est là le but vers lequel tendent nos expériences en cours. Mars 1914. INDEX BIBLIOGRAPHIQUE 1] E. Ducraux. — Action de la lumière solaire sur les substances hydro- carbonées. Extrait des Annales de l'Institut Nat. Agr.,t. X, p.39; 1887. [2] En. Bucaxer et J. MeisENuEIMER. — Die chemischen Vorgänge bei der alko- holischen Gärung. Ber. d. deutsch. chem. Ges., t. XXXVIII, p. 624; 1905. 3] An. Jocres. — Zur Kenntnis des Zerfalls der Zuckerarten. Bioch. Zeitschr., t. XXIX, p. 152; 1940. [4] Nenckr et Sieser. — Journ. f. pr. Chem. [2], t. XXIV, p. 498 ; 1881. — SCHUTZEN- BERGER. Bull. Soc. Chim. [2], t. XXV, p. 289. [5] J. U. Nr. — Dissoziationsvorgänge in der Zuckergruppe. 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Levene. — Oxydation von Aldehyden in alkalischer Lôsung. Biochem. Zeilschr., t. XXIX. p. 31; 1910. QUELQUES PRODUITS DE LA DÉCOMPOSITION DU DEXTROSE 713 [42] E. Rimini. — Ueber eine neue Farbenreaktion des Acetaldehyds. Chemisch. Centralbl., t. LXV (I), p. 271; 1898, d’après Annali Farmacoter., e Ch., p.249; 1598. [13] L. Simon. — Un réactif coloré de l’aldéhyde ordinaire. Bull. Soc. Chim., XIE p.291:"1898 [44] A. v. Lesepew. — Ueber den Mechanismus der alkoholischen Gärung, (LIL). Ber. d. deutsch. chem. Ges., t. XLVIT, p. 672; 1914. [45] H. v. Pecaman. — Ueber Osazone. lbidem., t. XXI, p. 2751 ; 1888. M6] G. Pinkus. — Ueber die Einwirkung von Benzhydrazid auf Glucose. Ibidem., t. XXXI, p. 31 ; 1898. [47] J. U. Ner. — Dissoziationsvorgänge in der Glycol-Glycerinreihe. Liebig's Annalen, t. CCCXXXV, p. 191; 1904. M8] H. D. Dax et H. W. Duocev. — The interconversion of x-amino-acids, a-hydroxy-acids and «-ketonic aldehydes. Il° partie. Journ. of Biolog. Chem: tv XL,-p.121;:1913: 119] A. Won. — Die neueren Ansichten über den chemischen Verlauf der Gärung. Biochem. Zeitschr., t, V, p. 45; 1907. [20] E. Ducraux. — Sur les analogies entre les procès de fermentation et de combustion solaire. Annales de l'Instilut Pasteur, L. VIT, p. 1752; 1893. [24] Mie W. Denis. — On the behavior of various aldehydes, ketons and alcohols towards oxidizing agents. Amer. Chem. Journ., t. XXXVIII, D 56154901 [22] E. Encenuever. — Verhalten der Glycerinsäure und der Weinsäure gegen wasserentziehende Substanzen. Ber. d. deutsch. chem. Ges., &. XIV, p. 320; 1881. [23] L. Simon. — Action des composés cétoniques dissvmétriques surlesamines aromatiques primaires. Bull. Soc. Chim.,t. XIII, p. 335 ; 1895. [24] F. Framu. — Ueber die Zersetzung von Monosacchariden durch Alkalien. Pfrüger's Arch. f. d. ges. Physiol.,t. LXIV, p. 575 ; 1896. [25] G. W. Hermron et P. A. LEvexE. — Die anodische Oxydation der Alde- hyde. Ber. d. deutsch. chem. Ges.,t. XLI, p. 4443; 1908. (26, W. Lorr et G. PuzverMacHER. — Die Einwirkung von Bleihydroxyd auf Traubenzucker. Biochem. Zeitschr., t&. XXTIT, p. 10; 1910. [27] A. Wouc et C. NEuUgSErG. — Zur Kenntnis des Glycerin-Aldehyds. Ber. d. deutsch. chem. Ges., &. XXXIIT, p. 3095 ; 1900. [28] E. Ducraux. — Sur les transformations chimiques provoquées par Ja lumière solaire. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t&. CIII, p. 881; 1886. [29] Evo. Bucaxer et J. MEISENHEIMER. — Die Buttersäuregärung. Ber. d. deutsch. chem. Ges., t. XLI, p. 1410; 1908. [30] An. Macxus-Lévy. — Die Oxybuttersäure und ihre Beziehungen zum Coma diabeticum. Archiv f. exper. Palhol. u. Pharm., t. XLII, p. 149 ; 1899. [31] E. Bürxsrein et A. HErRzrELD. — Ueber die Oxydation der Lävulose. Ber. d. deutsch. chem. Ges., t. XVIII, p. 3353; 1885. [32] A. Fernsacu et M. Sonoex. — L'acide pyruvique, produit de la vie de la levure. C’omples rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLVII, p. 1478; 1913 ACTION DES ACIDES SUR LA FERMENTATION ALCOOLIQUE (DEUXIÈME MÉMOIRE) par M. et Mme ROSENBLATT (Travail du Laboratoire de M. Gabriel Bertrand.) Dans un travail publié (1) en 1910, nous avons fait connaître les concentrations de divers acides qui paralysent la fermenta- tion alcoolique du saccharose par la levure haute. On voit, dans ce travail, que l’ordre du groupement des acides, rangés d'après leur activité paralysante, présente avec celui de leur force saccharifiante des irrégularités spécifiques. On voit, de plus, que les doses paralysantes sont considérables par rapport à celles qui suffisent, en général, à arrêter l’action des dia- stases (2). Nous avons alors émis la supposition que la mem- brane cellulaire de la levure est peu perméable aux acides et protège suffisamment les diastases qu'elle contient contre l'action de ces réactifs. Depuis lors a paru un mémoire de Johannessohn (3) qui traite un sujet analogue : l’action des acides de la série grasse sur la fermentation alcoolique. Les résultats de cet auteur ne diffèrent que peu des nôtres, quant à l’ordre du classement des acides par rapport à leur activité paralysante, comme il résulte du tableau suivant : ROSENBLATT JOHANNESSOHN ISOVAlÉ TIQUE A RNCS PE ER EC Formique- Formique 428 Ness RCE EE Isovalérique. Acétique MR CR CIE CRE Acétique. Isobutyrique FREE ER ECS. Isobutyrique. Propionique" 2" Enr N. butyrique. N. butyrique FORCER Propionique. (1) Bull. Soc. Chim. (4), t. VII, p. 691, 1910. — Annales de l'Institut Pasteur, LEXENV p. 196, 1910: (2) Gas. Berrraxo, Recherches sur l'influence paralysante exercée par cer- tains acides sur la lactase. Bull. Soc. Chim. (4), t. Ier, p. 1121, 1907. — Annales de l'Institut Pasteur, t. XXI, p. 673, 1907. (3) Biochem. Zeilschr., t. XVII Ep 91, M9r2: ACTION DES ACIDES SUR LA FERMENTATION ALCOOLIQUE 715 Mais ils en diffèrent en ce qui concerne les concentrations moléculaires des doses paralysantes : celles-ci sont, d'après Johannessohn, inférieures aux concentrations trouvées par nous. L’explication de ces différences d'ordre quantitatif doit être, sans doute, cherchée principalement dans la moindre résistanee de la levure employée par Johannessohn. Des exemples de discordances analogues sont nombreux; ainsi, entre autres, nous pouvons citer les différentes con- centrations d’acide sulfurique données par divers auteurs comme suffisantes pour arrêter la fermentation alcoolique; les doses en molécules-grammes par litre sont, d'après Dumas, m/1,63 (pour 5 grammes de levure); d’après Biernacki m/9,8; d'après Bokorny m/490 et d’après nos expériences m/10. Ce dernier chiffre a lui-même changé au cours de nos recher- : ches, de ce fait que la levure employée par nous était préparée (comme nous l'avons appris dans les derniers mois) avec des moûts auxquels on avait ajouté, à l’époque de nos dernières recherches, une certaine quantité d'acide sulfurique. La levure s’est alors accoutumée à cet acide, elle est devenue plus résistante et il a fallu employer l'acide sulfurique à la concentration de m/5 au lieu de m/10 pour arrêter com- plètement la fermentation alcoolique. Il est évident, d’après les exemples précités, qu'on ne doit pas attribuer aux concentralions observées une valeur absolue en ce qui concerne les différentes races de levure. Ce qu'il faut considérer dans ce genre de recherches biologiques, ce sont les résultats obtenus dans une série d'expériences exé- cutées avec la même espèce de cellules vivantes ou avec une diastase de la même provenance. Ayant dernièrement repris nos recherches sur la fermenta- tion alcoolique, nous avons constaté que, si la dose paralysante d'acide sulfurique avait augmenté, celles des acides de la série grasse étaient restées les mêmes qu'en 1910. Nos nouvelles expériences ont été exécutées soit avec la saccharose, soit avec le glucose, d'après notre mode opératoire, ou en nous pla- 716 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR cant dans les conditions d'expériences de Johannessohn (1). Dans le mémoire cité plus haut, Johannessohn indique aussi que certaines doses d'acides gras activent la fermentation alcoo- lique. La question de lactivalion par les acides est intéres- sante surtout à cause des faits contradictoires publiés par les différents auteurs ; Dumas (2), qui a essayé les acides sulfu- rique, sulfureux, phosphorique, arsénieux, borique, oxalique, acétique et tartrique, dit que l'addition de l’un de ces acides à faible dose ne hâte ni le commencement de la fermentation, ni sa fin. Quand on en ajoute beaucoup, il y a retard ou arrêt. Kayser (3), en étudiant le rôle des acides tartrique, malique et citrique, trouve que la fermentation marche plus vite dans les moûts neutres que dans les moûts acides, mais que l'action antiseplique des acides n’est pas la mème sur toutes les levures. Par contre, les expériences de Schulz et de ses élèves sur les acides arsénieux, chromique et formique, de Biernacki sur les acides benzoïque, salicylique, sulfurique, pyrogallique et borique, et de Johannessohn sur les acides formique, acétique, propionique, butyrique et isovalérique, indiquent que les faibles doses de ces réactifs ont une action accélératrice sur la fermentation alcoolique. Pour trancher cette question de l'influence des acides, nous avons repris l’étude de l'action de petites doses des acides et des sels acides suivants : acides chlorhydrique, formique, acé- tique, propionique, n-butyrique, sulfurique, tartrique, citrique et phosphorique. Parmi les sels, nous avons étudié le sulfate, le phosphate, l’oxalate, le cilrate monopotassique, le citrate bipotassique et le tartrate monosodique. Nous avons trouvé que tous les acides, ainsi que le sulfate monopotassique, n'ont pas d'action favorisante sur la fermen- tation alcoolique. En opérant avec les doses croissantes de l’un quelconque des acides mentionnés ci-dessus, on n'observe jusqu'à une certaine concentration aucune différence entre la (4) 1] faut remarquer que la méthode polarimétrique employée par Johan- nessohn ne permet pas de constater avec certitude l'arrêt complet de la fermentation alcoolique. Les petites variations en sucre échappent à l’obser- vation. Il est donc indispensable de se servir pour les dosages de sucre d'une méthode beaucoup plus sensible, par exemple de la méthode de Gab. Bertrand. (2) Ann. de Chim. et Phys., 5e série, t. III, p. 51, 1874. (3) Annales de l'Instilut Pasteur, .p. 51, 1896. ACTION DES ACIDES SUR LA FERMENTATION ALCOOLIQUE 717 quantité de sucre disparu dans le liquide en fermentation addi- tionnée d'acide et entre le liquide témoin. A partir de cette dose limite, l’action défavorable de l'acide commence à se manifester. Par contre, les expériences avec le phosphate, les citrates, le tartrate et l'oxalate ont montré l'existence d'une certaine action favorisante sur la fermentation alcoolique. Notre mode opératoire était Le suivant : des tubes à essai en verre d'Iéna, contenant 10 cent. cubes d’eau pure (témoin) ou de solution acide de concentration convenable et contenant, en outre, 125 milligrammes de glucose pur, ont été additionnés de 100 milligrammes de levure (apportée journellement et tou- jours de la même provenance). Après deux heures de séjour à + 28 degrés, on a ajouté 1/4 de cent. cube d'acide chlorhy- drique concentré dans chaque tube, de manière à arrêter la fermentation. Ensuite on a dosé le sucre restant par la méthode de Gab. Bertrand (1). L'alcool formé a été dosé dans certains cas après distillation par la méthode au bichromate (2). Après deux heures de séjour à + 28 degrés, les {tubes témoins accu- saient presque constamment une disparition de 30 p. 100 envi- ron de glucose (3). Les résultats obtenus se divisent en deux séries ; Ia première comprend les réactifs qui n’ont aucune action favorisante. Ce sont les acides libres et le bisulfate de potassium. Voici les concentrations en molécules-grammes à partir desquelles com- mence, avec ces réactifs, une action défavorable sur la fermen- tation. 1OPACIde ChlOTRYALIQUE. RENE ENTREE m/6.000 UD LOLIRIQUENS Ne 02e ec VEN NE m/5.000 — ACÉNCUIE ME MEME LS RS" m/300 D PrOPDIONIQUE.s- 0. Le PINCE m/250 IN ADULYTIQUE 2 2 CH UC NET RCE EU m/200 AIGITGRSUIIUELQUE. +. 0 CON PEN UE m/6.000 TL ADODIQUICR SMS 12060 de INA PI INIRNESR m/1.000 NGITeDhOSDhOrIQUE NEC MEME ICE m/5.000 RL CTI. el. NU 0 Ve R-RONPAIPIER m/3.000 2ORSUTATCAMONOPOLASSIQUE. NRC CRTC m/2.000 (4) Bull. Soc. Chim. (3), t. XXXV, p. 1285, 1906. (2) Voir la technique dans : Gab. Bertrand-P. Thomas. Guide pour les mani- pulations de chimie biologique, Paris, 2° édition, 1913, H. Dunod et E. Pinat, éditeurs. (3) C'était un critérium de la constance de l’activité de la levure étudiée. 718 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR L'ordre de classement de ces acides est à peu près le même que pour les doses paralysant complètement la fermentation. La deuxième série comprend les réactifs qui, au contraire des précédents, favorisent la fermentation. Ce sont le phosphate acide de potassium et les sels organiques acides. Voici les concentrations de ces réactifs qui favorisent le mieux la fermen- tation alcoolique. Oxalate monopotassiques.... 17 Optimum m/200 Gitrate1bipotassique enter CET — m/10 — monopotassique . . . . . . . Mious — m /5 Tartratetmonosodique te mr — m/ Phosphate monopotassique . . . . . . . . — m /3 L'augmentation de la quantité de sucre fermenté dans le tube contenant la dose optimale de sel acide comparé avec le tube témoin était de 13 p. 100 environ avec le phosphate et citrate monopotassique, 19 p. 100 avec l’oxalate monopotas- sique et le tartrate monosodique et 22 p. 100 avec le citrate bipotassique. D'après les résultats indiqués ci-dessus, nous pouvons con- clure que les acides libres étudiés n’ont, à aucune dose, d'action favorable sur la fermentation alcoolique du glucose par la race de levure employée par nous. La fermentation s’est manifestée de la même manière dans les tubes additionnés d'acide (à des doses inférieures à celles indiquées dans le tableau) que dans les tubes témoins. Il est à remarquer que ces derniers avaient aussi une légère réaction acide, apportée par les 100 milligrammes de levure employée. Cette acidité (1) saturait : en présence de l'héliantine : 0,01 c.c. NaOH m/10 ou 1 c.c. NaOH m/1.000; en présence de l’alizarine : 0,01 c.c. NaOH m/10 ou 1 c.c. NaOH m/1.000; en présence de la phtaléine de phénol et du rouge neutre : 0 c.c. 025 m/10 ou 1 c.c. m/400. Ce qui représentait une concentration de m/4.000 (titré en présence de phtaléine). (1) Pour les titrages,on a employé une macération de 10 grammes de levure dans 100 cent. cubes H?0. ACTION DES ACIDES SUR LA FERMENTATION ALCOOLIQUE 719 Cette concentration, mesurée à l’électromètre et exprimée en ions-hydrogène, était égale 10. Il est assez curieux de constater que l'introduction de cer- tains cations dans la molécule de l'acide peut contre-balancer et au delà l’action défavorable de l'hydrogène acide sur la fermentation alcoolique. La discordance existant dans les observations des auteurs sur l’action favorable ou défavorable des acides doit avoir sa cause, soit dans le mode opéraloire, qui souvent manque de précision, soil aussi dans la différence d’origine et de race des levures étudiées. Nous avons déjà dit ce qu'il fallait penser de l’imperfection des méthodes (1). Quant à la race de la levure, elle peut déter- miner ou bien une inégale perméabilité de la membrane cellu- laire aux réactifs acides, ou bien même une différence de sensi- bilité des diastases à la réaction du milieu. L'exemple de la sucrase étudiée par Gabriel Bertrand et nous (2) est une preuve indiscutable du rôle capital de l'ori- gine diastasique. Tandis que les sucrases de levure et d’Asper- gillus fonctionnent mieux en présence d’une acidité notable vis-à-vis de l’héliantine, la sucrase de Kôji a son optimum d'action en milieu où la concentration en ions-hydrogène est voisine ou même très légèrement inférieure à celle qui corres- pond à la neutralité, à l'héliantine. De même que dans nos recherches sur la sucrase de levure, nous avons observé que les doses oplima d'acides variaient notablement selon la provenance de la levure. En associant tous ces phénomènes, on aperçoit la grande importance qu'il faut attribuer aux corrélations qui existent entre la nature spécifique des cellules vivantes ou des ferments solubles et la réaction du milieu. (4) Bull. Soc. Chim. (4), t. VII, p. 691, 1910, et Annales de l'Institut Pasteur, t'XXIV,-pA9tet 198 avril 1910. (2) Bull. Soc. Chim. (4),t. XI-XII, 4, p. 176 et 9, p.464, 1912, et t. XIII-XIV, 5, p. 241, 1913. — Annales de l'Institut Pasteur, t. XXVTI, p. 321 et 931, 1912, et t. XX VII, p. 366, 1913. LE TUBERCULEUX PEUT-IL ÉMETTRE DES PARTICULES LIQUIDES RESPIRABLES ? par P. CHAUSSÉ. (DEUXIÈME MÉMOIRE) Les acquisitions que nous avons précédemment faites sur la pulvérisation liquide, et sur la pulvérisabilité de la salive et des crachats tuberculeux, nous permettront de discuter la pré- sente question en meilleure connaissance de cause. Dans l'historique de la théorie de Flügge (1) nous avons indiqué toutes les constatalions enregistrées au sujet de l’émis- sion de gouttelettes par le malade. En général, on à mis en évidence la projection de particules liquides à une faible dis- tance du tubereuleux, et Flügge Iui-mème estime qu'il n’y a guère de danger au delà de 1 mètre ou de 1 m. 50 centimètres. Il résulte de cette manière de voir que cet auteur admet hypo- thétiquement la respirabilité de gouttelettes relativement volu- mineuses et qu'il ne semble plus envisager, bien qu'il y ait pensé antérieurement, l'émission possible de particules extrè- mement fines, puisque ces dernières seraient certainement transportées beaucoup plus loin. B. Heymann est, ainsi que nous l'avons déjà fait ressortir, l'auteur des travaux les plus importants sur la contagion par les particules liquides. Les gouttelettes les plus fines qu'il ait observées avaient 30 microns de diamètre; mais, peut-être, ainsi qu'il le suppose, existe-t-il des particules plus fines, sus- ceptibles d’être inhalées. S'il en est ainsi, la thèse de Flügge serait exacte, au moins en partie, mais la preuve en reste tout entière à apporter. Le problème que nous nous proposons de discuter, sinon de résoudre, est, certes, des plus complexes. Il faut tenir compte (1) Revue d'Hygiène el de Police sanilaire du 20 juin 1913. TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES : 124 des conditions physiques réunies dans l’appareil respiratoire au moment de la toux, de la pulvérisabilité de la salive et des crachats tuberculeux; il est nécessaire de recueillir les parti- cules émises, de les examiner au microscope au point de vue de leur teneur en bacilles et de les mesurer; il est indiqué de recevoir les mêmes particules dans des récipients stériles placés à des distances diverses des malades, et d'inoculer ensuite le contenu de ces récipients pour connaître la distance de projection ; enfin, après avoir tenté de nous rendre compte des chances d'inhalation, nous procéderons à des épreuves de toux artificielle et à d’autres recherches consistant en l’inha- lation directe, par le cobaye, de l'air expulsé pendant la toux. Ces dernières investigations nous renseigneront d’une manière définitive, pensons-nous, sur le danger de contagion par les particules liquides. LES CONDITIONS PHYSIQUES NÉCESSAIRES, POUR LA PULVÉRISATION FINE DES MUCOSITÉS OÙ DE LA SALIVE, SONT-ELLES RÉUNIES DANS L'APPAREIL RESPIRATOIRE, AU MOMENT DE LA TOUX OU DE LA PAROLE ? Les gouttelettes bacillifères pourraient provenir effective- ment soit des mucosités, soit de la salive, au moment où l'air traverse ces produits à une forte vitesse. Voyons donc si, en quelque point de l'appareil respiratoire, les conditions néces- saires sont réunies pour diviser les liquides bacillaires en parti- cules respirables. Nous savons déjà que la viscosité des liquides muqueux s'oppose énergiquement à leur pulvérisabilité, d’après les recherches que nous avons faites avec la salive et les crachats des tuberculeux. [Premier mémoire, ces Annales, 25 juin 1914.) Le total des sections bronchiques est supérieur à la section de la trachée ; c’est donc dans ce dernier conduit, et ensuite au niveau du rétrécissement laryngien, que les condilions de vitesse de l'air seraient le plus favorables à la pulvérisation. Dans des recherches inédites faites avec M. Magne, chef des travaux de physiologie à l'Ecole d’Alfort, nous avons étudié les 722 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR conditions physiques réalisées dans les voies respiratoires, pendant la toux. Nous avons d’abord mesuré la quantité d’air expulsée pendant un violent effort de toux et l'avons trouvée égale à 1 litre chez un sujet normal de 1 m. 80 (80 kilo- grammes), et à 860 cent. cubes chez un autre sujet normal de 1 m. 60 (60 kilogrammes). La durée et la forme du mouvement de toux ont été enregistrées par plusieurs méthodes. Le temps de la toux forte varie de 25 à 40 centièmes de seconde. La courbe d'expulsion de l'air atteint brusquement un maximum qui est soutenu seulement pendant quelques centièmes de seconde, et qui est suivi d’une chute un peu moins brusque que le début. Après la toux, :l y a parfois expulsion lente d'une certaine quantité d'air. Ces recherches devant être prochainement publiéesen détail, nous nous contenterons de dire que la vitesse de l'air dans la trachée, pendant la toux, est comprise entre 5 et 17 mètres par seconde, cette dernière vitesse n'étant atteinte que dans des efforts violents. Au moment de la toux, la glotte se dilate sous la poussée de l'air; toutefois, le calibre de cet orifice reste inférieur d'un tiers environ à celui de la trachée; au passage de la glotte, la vilesse de l'air peut donc atteindre environ 25 mètres. Mais les vitesses maxima ne sont pas celles qui se réalisent couramment chez le malade, car elles ne tarderaient pas, en raison de leur action mécanique, à créer des lésions inflamma- toires; ces vitesses ne peuvent être soutenues. La toux habi- tuelle ne met en œuvre que des vitesses trachéales de 5 à 12 mètres, ou des vitesses laryngiennes de 7 à 18 mètres environ. Chez le tuberculeux, il faut également considérer qu'il y a diminution de la capacité respiratoire et que la toux répétée, par suite de la douleur qui l'accompagne, est le plus souvent d'intensité modérée. Admettons, du reste, que les vitesses maxima de 17 et de 25 mètres soient réalisées. Nous avons vu que ces vitesses ne suffisent pas à effectuer la pulvérisation liquide aux dépens de la salive et des crachats. Nous devons également remarquer que l'appareil laryngien n'est pas disposé, pour la pulvérisation du muco-pus, d'une manière aussi propice que notre pulvéri- TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 123 sateur simple : le mucus, soulevé par l'air, lorsqu'il arrive dans la trachée et le larynx, est projeté simplement dans la cavité bucco-pharyngienne. Si, dans nos expériences sur la pulvérisa- bilité de la salive et des crachats, nous sommes arrivé à faire détacher une petite quantité de particules, grâce à des vitesses de 35, 50, 80 mètres par seconde, en procédant par barbo- tage, c’est que le produit bacillaire ne pouvait être chassé; il retombait toujours en petite quantité et sous une faible épais- seur, sur le jet d'air; d'autre part, l'air étant débité par un tube de très faible diamètre (1 à 1/10 de millimètre carré de section), tandis que la trachée et le larynx ont respectivement, en moyenne, 250 et 180 millimètres carrés de section, soit 300 à 2.500 fois plus, les contacts d’une même quantité d'air étaient beaucoup plus intimes, dans nos expériences de barbo- tage, et les chances de contamination de cet air bien plus élevées; enfin les vitesses maxima de l'air dans chaque mou- vement de toux n'existent que pendant quelques centièmes de seconde ! Cependant quelques résultats positifs n'ontété obtenus, par barbotage de l'air dans les crachats et la salive, qu'à la condition de faire passer dans ces liquides un grand volume d'air; et nous avons bien observé que toujours les produits virulents ont été brassés et agités beaucoup plus qu'ils ne le sont dans les conditions naturelles. Dans les voies respiratoires et dans le poumon malade, c'est surtout la ventilation superficielle qui intervient; or celle-ci n'effectue aucune division: elle projette seulement la masse muco-purulente hors des voies respiratoires. La pénétration du crachat par l'air n'est presque pas réalisée et elle ne peut avoir lieu que dans la profondeur, par un petit volume de gaz et à une faible vitesse. Pour nous rendre compte de la manière dont se comporte l'appareil trachéo-laryngien, lors de la toux, nous avons pris un tube de verre de 18 millimètres de diamètre intérieur et l'avons coudé en trois endroits. Le coude supérieur, présentant un rétrécissement, simulait le larynx; la partie inférieure de ce tube était coudée à angle droit (fig. 1) et un peu relevée à son extrémité. Mettant dans ce tube du mucilage coloré préparé avec de la graine de lin, et soufflant par secousses, à l’aide d'un gros tube de caoutchouc adapté sur l'extrémité inférieure, 724 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR le segment médian étant tenu vertical, nous avons tenté de recueillir, à l’orifice supérieur, des particules fines. Le tube ainsi préparé donnait exactement le bruit de la toux grasse et profonde, mais le produit mucilagineux, de consistance cepen- dant un peu inférieure à celle du muco-pus bronchique, ne pouvait être divisé finement : il était toujours projeté en masse ou en grosses gouttes, de la même manière que les crachats. fRétrécissement Tube de caoutchouc — — ucilage colore F1G. 1. — Tube coudé, en verre, réalisantle schéma des voies respiratoires supérieures, et permettant de voir l'agitation d'un liquide très visqueux, dans des conditions comparables à celles de la toux. Il nous parait donc certain que les conditions physiques nécessaires ne sont pas réunies dans les voies respiratoires, au moment de la toux, pour la division fine des mucosités. À plus forte raison, ces conditions ne sont pas réunies dans la respi- ration normale, la parole ou le chant, les vitesses aériennes mises en œuvre dans la trachée et le larynx étant alors de 5 à 10 fois plus faibles que celles dont il vient d’être question. La cavité bucco-pharyngienne, beaucoup plus large, ne pré- TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 725 sente pas de disposition plus propice à la formation des gout- telettes fines aux dépens des mucosités ou du liquide buccal. Sous l'influence des vibrations dont elle est animée, la luette pourrait donner quelques gouttes ou gouttelettes; cette possi- bilité sera examinée plus loin et résolue par d’autres expé- riences. Les cavités nasales et les narines ne contiennent en général qu'un produit muqueux non virulent ou peu virulent; et, au moment de la toux, elles ne recoivent qu'une portion de l'air expulsé. C'est surtout dans la cavité buccale qu'il faut rechercher s’il y a production de gouttelettes microscopiques; ce point sera également examiné dans les pages suivantes. Il EXAMEN MICROSCOPIQUE ET MENSURATION DES GOUTTELETTES PROJETÉES A L'OCCASION DE LA PAROLE, DE LA TOUX ET DU CRACHEMENT. C'est au niveau des lèvres, alternativement rapprochées ou éloignées, et frappées par l’air chassé du poumon, au moment de la toux, de la parole ou du crachement, qu'il pourrait y avoir production de gouttelettes fines. Pour nous rendre compte des caractères de la pulvérisation obtenue dans ces divers actes, car il est évident qu’on cons- tate parfois, à l'œil nu, la projection de gouttelettes, nous avons employé deux méthodes. I. Méthode chimique. — Nous avions le choix entre diverses réactions colorées inoffensives pour l'opérateur; nous avons opéré avec celle du tannin sur le fer. Ayant imprégné une feuille de papier blanc avec une solu- tion de sulfate ferrique, nous l'avons mise sécher à l'étuve. Cette feuille étant ensuite retirée et fixée sur un support, nous nous rincions la bouche avec une solution de tannin et procé- dions à des essais, à faible distance (30 centimètres), en face de la feuille de papier, parlant, toussant et crachant; nous avons fait faire les mèmes épreuves à plusieurs personnes. 726 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Toute particule liquide reçue par la feuille de papier se des- sinait en noir sans augmentation de dimensions, car le papier utilisé ne buvait pas; nous pouvions ensuite examiner ce papier au microscope et mesurer les gouttelettes s’il en existait. Voici les résultats de ces examens. 1° Pendant la parole. — 11 y a rarement projection de gout- telettes; lorsque cette projection a lieu, il s’agit de particules volumineuses dont la chute est instantanée et l’inhalation impossible. 2° Pendant la tour. — Au moment de la toux, il y a très rare- ment projection de gouttelettes si les lèvres sont écartées, ce qui est le cas ordinaire, mais il y a émission d’un petit nombre de particules s? /es lèvres se touchent légèrement, de telle sorte que l'air, comprimé un instant dans la bouche, les sépare en projetant et divisant le liquide qui les imbibe. Le diamètre des gouttelettes formées varie de 30 microns à 5 ou 6 millimètres. Sur ce point, nous confirmons donc, partiellement, les faits cons- tatés par B. Heymann, mais en ajoutant que le contact des lèvres est nécessaire à cette pulvérisation; si les lèvres sont tant soit peu écartées au début de l'acte, l'émission est minime ou nulle. Dans tous les cas, il importe de remarquer que les goutte- lettes les plus fines, parmi celles-ci, sont à la limite de la res- pirabhilhité. Ce ne sont pas des vésicules; la formation de ces der- nières est exceptionnelle, et les particules ayant un vide central sont plus volumineuses que les plus fines des précédentes. L'émission des particules les plus fines ne peut avoir lieu pendant la parole, par le même mécanisme, parce que la force expiratoire mise en jeu est beaucoup plus faible, même au moment de la prononciation des consonnes. 3° Pendant le crachement. — C'est pendant le crachement que la production des gouttelettes est la plus abondante, à /a condition que celui-ci soit effectué du bout des lèvres. Le méca- nisme de division de la salive est donc le même que précédem- ment, et, dans ces conditions, Le diamètre des particules est identique : il va de 30 microns à plusieurs millimètres. L'acte qui consiste à expulser les grosses mucosités avec len- teur, tel qu'il est habituellement exécuté, ne peut donner lieu à aucune pulvérisation fine. TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 127 Il. Recherches faites avec les phtisiques. — Nous avons essayé de recueillir les particules liquides que le malade peut émettre à l’occasion de la parole, de la toux et du crachement, de les fixer et de les examiner au microscope. Pour recevoir ces particules nous avons construit une boîte métallique plate de 15 sur 20 centimètres, ayant 2 centimèlres d'épaisseur. Sur l’une des faces de cette boîte pouvait être fixée une plaque de verre de 13 sur 18 centimètres. Dans la boîte, nous versions de l’eau chauffée à une température voi- sine de l’ébullition, de telle sorte que celte réserve de calorique portait la lame de verre à 80 degrés environ. La boîte ainsi préparée élant placée en face de la bouche du malade, à une distance de 15 centimètres, celui-ci parlait, tous- sait ou crachait (fig. 2); les gouttelettes projetées tombaient sur le verre et se fixaient instantanément, par suite de l’évapora- tion de l'eau, avec leur forme et leurs dimensions. Nous pou- vions ensuite colorer ces particules, les mesurer et reconnaitre leur contenu au microscope. 1° Pendant la parole. — Pendant la parole nous avons cons- taté qu'il n’y a ordinairement aucune émission de particules. Par exceplion, il peut y avoir projection d'une ou de plusieurs goultelettes de fortes dimensions, dont la composition est la mème que celle indiquée ci-dessous, et qui peuvent contenir des bacilles; mais ces particules n'ont pas un intérèt pathogé- nique immédiat : elles sont trop volumineuses et ne peuvent être inhalées qu'après dessiccation si elles sont à nouveau pul- vérisées. , 2° Pendant la toux naturelle. — Après 30 à 40 efforts de toux, la lame de verre ne récolte qu'un très faible nombre de parti- cules. En faisant celte épreuve chez trois malades dont les expectorations étaient particulièrement riches en bacilles, et qui crachaient abondamment (ils sont morts peu de temps après), nous avons vu que les dimensions des gouttelettes pro- jetées varient de 30 à 3.000 micromillimètres environ. Morpho- logiquement il s’agit de sphérules ; une seule fois nous avons trouvé une vésicule ayant 36 micromillimètres de diamètre et dépourvue de bacilles. Ces gouttelettes sont composées de salive et de muceus ; elles contiennent des cellules épithéliales desquamées, ordinairement 45 728 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR d'origine buccale ou pharyngeionne, et des microbes communs Fi. 2. La boite plate que le malade tient devant sa bouche porte une re chauffée à 80-90 degrés, sur laquelle viennent se fixer les plaque de ve des projetées pendant la parole, la toux ou le crachement. particules liqui de la bouche ;:’nous n’avons pu y découvrir une seule fois un TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 729 bacille tuberculeux, parce que ces derniers sont relalivement peu nombreux dans la salive, et parce que l’émission de gout- telettes est minime. En résumé, à l’occasion de la toux naturelle, la production des gouttelettes est très faible: la plupart de ces particules ont de fortes dimensions (60 microns et au-dessus) et il est difficile d'y découvrir des bacilles de Koch au microscope, mème chez les malades dont les expectorations sont riches en ces agents pathogènes. 3° Pendant le crachement. — Nous venons de constater qu'il y a deux manières de cracher, dont le pouvoir de division est différent : 1° l’une qui consiste à laisser choir doucement dans le récipient, sur le sol, ou dans le mouchoir, les expectorations apportées dans la bouche par un effort de toux ; 2° l’autre qui met en œuvre le mécanisme de la pulvérisation labiale, les lèvres étant rapprochées pendant cet acte, et recevant sur leurs bords mouillés de liquide une poussée aérienne brusque. Le tuberculeux emploie presque exclusivement le premier mode et 1l est impossible, dans ces conditions, de recueillir, en plaçant notre appareil près de son orifice buccal, la moindre parcelle salivaire. Le crachement labial, plus violent, est rarement employé ; par sa répétition il aurait d’ailleurs l'inconvénient d'irriter les lèvres enr raison de la friction qu'il exerce sur elles. Nous avons voulu néanmoins nous rendre compte de sa puissance de division, et, pour cela, nous avons demandé aux malades pré- cédents de cracher volontairement, de cette manière, sur nos lames de verre chauffées. Les particules ainsi récoltées sont assez nombreuses, et elles sont de l’ordre de celles recueillies, en quantité beaucoup plus faible, pendant la toux naturelle. Il était utile de les fixer et de les examiner après coloration. Nous avons ainsi constaté que ces gouttelettes ont de 30 à 3.000 micromillimètres, comme précédemment ; les plus nom- breuses sont celles de 80 à 150 micromillimètres ; il y en a seulement quelques-unes de 35 et de 30 micromillimètres, ces dernières étant tout à fait exceptionnelles. Selon le volume de ces gouttelettes on y décèle un nombre variable de cellules épithéliales, de microbes banaux et de leu- 730 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR cocytes ; elles ne contiennent qu'un nombre relativement faible de bacilles tuberculeux. Ce sont toujours des sphérules. Quant à la teneur en bacilles et aux dimensions, voici ce que donne l'examen microscopique des gouttelettes prises successi- vement au hasard. Diamètre Nombre de bacilles 150mieromIimeIreS CPE TN Re 100=mieromillimetres PMR EC CON 920fmieromillimefres Pre PE A100@micromiimetres ee MP IEIEE NT 1S0MmMeLoMIIImMeILe SEC RRCNREER 60AMICLOMIIIMÈI ES PRO ROME NE RP RENNES 120mmicromilimetres ee CE 3 (accolés). D 10tmicromilimetres eee 75 micromillimètres. 90Mmiecromillimetres CR CNP EC G0imIeromIlTeMeSs ee RER ECC CRE 200MMICTOMIIMOLTES CPR ET 260kmicromillimetres- MT 65 -micromillimèetres Lu. 200 mMmICLOMIUNMELTES RS NS TU M PIC filament muqueux ; quelques-uns sont isolés). A0OMmiICcromillimetre se PA MEMONENE ECS J0MMICLOMILMEÈITES PCR RCE. 1H5EmICcromIIIMereS RL 160Mmicromillimetres Re MN CNE ET SSemieromillimetres er RCE 100mieromilimelres MT ET E 1 1 0 û 0 0 180EmicromilINMerTeSs EN PR NC EE 0 0 0 0 1 (Ù Ô 0 a (dans un NN Chez le malade ainsi examiné les bacilles étaient beaucoup plus abondants que chez la généralité des phtisiques. N'oublions pas non plus qu'il s’agit ici d’une division labiale volontaire, exécutée spécialement dans le but de produire des goutte- lettes. Nous nous résumerons en disant que le tuberculeux ne pro- duit : 4° à l’occasion de la parole aucune particule respirable ; 2° pendant la toux qu'un très faible nombre de gouttelettes ; parmi celles-ci, une très minime proportion se trouvent à la limite de la respirabilité, mais elles ont d'autant moins de chances de contenir des bacilles qu'elles sont plus fines ; 3° pendant le crachement lent, habituel, il n'y a aucune émission de gouttelettes ; 4° pendant le crachement labial, généralement non usité, il peut y avoir formation d’un plus TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 731 grand nombre de gouttelettes que pendant la toux, les autres caractères de ces particules étant les mêmes. L'inhalation des plus fines de ces particules apparaît possible st un certain nombre d'autres conditions indispensables sont pré- cisément réunies au moment de leur émission. Re EXPOSITION, A QUELQUE DISTANCE DU PHTISIQUE QUI TOUSSE, DE RÉCIPIENTS CONTENANT UN LIQUIDE STÉRILE, ET INOCULATION DE CE LIQUIDE A DES COBAYES. Les élèves de Flügge n'ont reconnu la projection de particules liquides qu'à une faible distance du tuberculeux ; dans la thèse que nous voulons discuter il était indiqué de rechercher, par la méthode qui consiste à recueillir les gouttelettes et à les inoculer, s'il y a vraiment émission de semblables particules, et, dans l’affirmative, à quelle distance elles sont transportées. Dans ce but nous avons fait des épreuves avec 12 malades dont les expectorations, examinées à diverses reprises, el notam- ment chaque fois, au cours des expériences, étaient riches en bacilles. Il est ulile de mentionner que plusieurs de ces malades avaient en outre de la laryngite tuberculeuse (Bac..., Dum..., Daut..…., Péj.…, Led.…, Bill...) témoignant de la virulence extrème des mucosités. La présence de plaies laryngiennes paraît éminemment favorable à la dispersion de particules bacillaires au moment de la toux. Voici quelques brefs renseignements concernant l’état de chacun de ces malades, tous tuberculeux cavitaires : 1° Bon..., trente-huit ans, lésions pulmonaires et osseuses; environ 50.000 bacilles par milligramme de crachats ; 20 Bac.., quarante ans; lésions pulmonaires anciennes ; laryngite bacillaire datant de 6 mois; environ 100.000 bacilles par milligramme de crachats ; 39 Dum..., cinquante-neuf ans ; fortes lésions pulmonaires fibro-caséeuses ; laryngite spécifique ; environ 40.000 bacilles par milligramme ; mort 30 jours après ; 49 Daut..…. cinquante-huit ans; très fortes lésions pulmonaires et laryn- siennes ; environ 100.000 bacilles par milligramme ; mort 18 jours après ; 50 Bill..., cinquante ans; très vieilles lésions thoraciques avec emphysème ; environ 60.000 bacilles par milligramme de crachats; 60 Fav..., trente-deux ans ; tuberculose cavitaire des deux sommets ; environ 25.000 bacilles par milligramme de crachats ; 132 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Te Led..., trente-sept ans ; mêmes lésions thoraciques ; environ 50.000 bacilles par milligramme de crachats ; 8° Danel..., dix-huit ans ; tuberculose pulmonaire à évolution rapide ; envi- ron 125.000 bacilles par milligramme de crachats ; décédé 25 jours plus tard ; 99 Car..., quarante-cinq ans; fortes lésions thoraciques ; environ 50.000 ba- cilles par milligramme de crachats ; 109 March.…, quarante-cinq ans; même état; environ 15.000 bacilles par milligramme de crachats ; 119 Sor..., trente-cinq ans; environ 80.000 bacilles par milligramme de crachats ; même état pulmonaire ; 12° Péj., quarante-huit ans: vieilles cavernes pulmonaires ; laryngite de même nature; environ 60.000 bacilles par milligramme de crachats. Les quatre premières expériences ont consisté à faire asseoir les malades devant une table longue de 2,50, sur laquelle étaient posées, à 50 centimètres, ! mètre, 1",50 et 2 mètres, des boîtes de Petri contenant de l’eau bouillie. Ces malades tous- saient selon leurs besoins, dans la direction des boîtes. Un seul malade toussait à chaque expérience, pendant une demi-heure environ, puis il se retirait ; les boîtes, laissées au repos dans la salle pendant une seconde demi-heure, étaient ensuite inocu- lées séparément, chacune à trois cobayes. Quelques heures plus tard, ou le lendemain, avec un nouveau matériel stérilisé, nous procédions à une autre expérience. Les huit autres épreuves ont été faites à l’aide de notre caisse à inhalation de 86 litres. Sur l’un des côtés verticaux de cette boîte était adapté un large tube muni d'un pavillon dans lequel toussait le malade; une seconde ouverture, dans la même paroi, permettait à l’air de sortir à mesure qu'une nouvelle quantité de ce gaz, provenant de la toux, pénétrait dans le réci- pient (voir fig. # et 5). Deux boîtes de Petri contenant de l'eau stérile se trouvaient dans la eaisse à inhalation : l’une tout auprès du tube de rentrée de l'air, et à 30 centimètres environ de la bouche du malade ; l’autre à l'extrémité opposée, soit à 80 centimètres à peu près de la bouche du phtisique. Après chaque expérience, le liquide des boîtes de Petri fut inoculé à des cobayes, à raison de # cobayes par récipient. Sur ces huit expériences 4 ont été pratiquées en faisant tousser un seul malade ; dans les quatre autres nous avons fait tousser successivement 2, 3, 4 et 5 tuberculeux sans changer les boîtes de Petri, et c'est le liquide exposé à ces causes multiples de pollution qui a été inoculé. TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 133 Les huit dernières expériences avaient un autre but plus important : des cobayes étaient soumis simultanément à l'inha- lation de l’air expiré ; le résultat de cet autre genre d'épreuves sera rapporté plus loin. Le tableau récapitulatif ci-joint permet de saisir d'un seul coup d'œil les résultats des recherches effectuées par inocula- tion. NOMS des malades (1) NUMÉROS des expériences NOMBRE desefforts de toux Bon. zac. Dum. Dant. COEUR CES | TABLEAU DISTANCE : 0 m. 50 Boîtes de Petri inoculés Cobayes tubercul. Cobayes RÉCAPITULATIF DISTANCE : 1 m. DISTANCE : DISTANCE : 1 m. 50 2m: Cobayes inoculés Cobayes tubercul. S © QU Lo Co | e | Boites de Petri Cobayes inoculés Boîtes de Petri inoculés tuberecul. Cobayes nl v = æ pe) Q © Cobayes tubercul. Totaux. = 1© 3on. 100 Bac. 30 Dum. 50 Dan. 150 Sor. 53 (Péi. 114 jan s0 Danel. s0 March. 90 | Bon. 110 | Bill. 150 Fava. 24 Led. 50 Danel. 70 3111. 120 Car. 103 ? Bon. 110 \ Péj. 100 | Totaux .|1.250 (1) Tous ces noms si DISTANCE : 0 m. 30 DISTANCE : 0 m. 80 inoculés tubercul. Cobayes Cobayes SC 1 8 3oites de Cobayes inoculés Cobayes tubercul. I TR DRE | de Petri © Co © C2 | = ont modifiés. Pour les expériences 5 à 12 inclusivement les ma- lades ont toussé dans le pavillon de la caisse de S6 litres, dans laquelle se trouvaient les boîtes de Petri. 734 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR En résumé 12 malades ont toussé 1490 fois en tout, devant 33 boîtes de Petri; 107 cobayes ont été inoculés avec le liquide de ces récipients; Sur ce nombre, 2 animaux inoculés avec le liquide recueilli à 50 centimètres de la bouche des malades Bac... et Dum..., sont devenus tuberculeux. Il faut également noter que, dans les deux cas de virulence constatée, 3 cobayes furent inoculés et un seul devint tuberculeux. Ces expériences nous permettent donc de conclure qu'il n'y a pas de projection de particules extrémement fines, au moment de la toux, car celles-ci seraient transportées à plus de 50 centi- mètres; élant donné ce petit nombre de résultats positifs, dans les condilions ci-dessus, et la courte distance de projection, nous pouvons dire que c'est seulement par exception qu'une gouttelette assez volumineuse est émise. Quant à la distance de projection, nous sommes donc entiè- rement d'accord avec Flügge et ses élèves, mais nous devons logiquement aboutir à une interprétation différente des faits observés. Il n'est plus permis de croire, avec Flügge et Cornet à la fois, que le tuberculeux qui tousse donne naissance à un nuage de gouttelettes dont les unes, de l'avis de Flügge seule- ment, restent longtemps suspendues; jusqu'ici / nous paratt y avoir tout au plus émission de quelques unités non transportables et dont la respirabilité est douteuse. LE SUR LES CHANCES D'INHALATION DES PARTICULES LES PLUS FINES, ÉMISES EXCEPTIONNELLEMENT, PENDANT LA PAROLE, LA TOUX OÙ LE CRACHEMENT. Dans les expériences failes par crachement, avec l'intention de diviser le liquide buccal sur les lèvres, nous avons constalé quil est possible de produire un petit nombre de gouttelettes de 30 micromillimètres. Le tubereuleux ne pourrait-il émettre parfois une minime quantité de semblables particules, et, s’il en est ainsi, quelles chances celles-ci auraient-elles d’être inhalées et d'être pathogènes ? Nous savons que des gouttelettes de ces dimensions sont à la TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 135 limite de la respirabilité ; ce sont des particules dont on ne peut dire qu’elles ne peuvent être inhalées, mais, à cause de leurs dimensions, leur pouvoir pathogène est très restreint. Essayons donc d'apprécier quelles peuvent être les chances de trans- mission de la maladie par de telles gouttelettes : 1° Leur nombre:est très faible; nous n'avons pu les observer qu'en les produisant volontairement: 2° En général, le tuberculeux s'applique à expectorer douce- ment et, dans tous les cas, le dernier temps de l’expulsion, le temps labiàal, est effectué avec lenteur ; 3° On constate de visu que la salive est très visqueuse, filante, adhérente aux lèvres, très difficilement pulvérisable : 4° Si des gouttelettes fines se forment, c'est aux dépens du liquide buccal qui est de 100 à 100.000 fois moins riche en bacilles que les crachats ; la très grande maJorité de ces goutte- lettes fines ne contiennent aucun bacille ; 5° Si de telles particules, en les supposant bacillaires, se présentaient aux orifices respiratoires, elles n'auraient que peu de chances d'arriver aux alvéoles, d’après ce que nous avons acquis sur la transportabilité et la respirabilité (1); or, elles ne peuvent être pathogènes qu'à la condition d'atteindre les vésicules pulmonaires ; 6° Que représente cette production minime à côté du nombre invraisemblable de particules que nous mettons en œuvre pour réaliser la tuberculose expérimentale par inhalation ? Chaque milligramme de liquide pulvérisé artificiellement donne au moins 100.000 gouttelettes ; et, d'une hauteur de 2",20, après Î minute, il ne reste plus dans l’atmosphère de particules ayant plus de 30 micromillimètres. 1 Mais encore, pour que l’inhalation ait lieu, il faut que les dites particules soient aspirées avec une certaine force; le faible volume d'air inspiré à chaque fois (400 à 600 cent. cubes), à une vitesse peu élevée, n’exerce une aspiration sensible que tout auprès de la bouche et des narines, à quel- ques centimètres au plus; pour pénétrer dans les premières voies respiratoires les particules devraient donc être projetées directement, au moment de la toux et au moment d’une inspi- (1) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 24 février et 25 mars 1913. 136 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ration de la personne voisine du malade, en face des orifices respiratoires de celle-ci, conditions qui seront rarement réalisées. Pour ces raisons théoriques et expérimentales, /a contagion naturelle par les particules liquides nous paraît, dès maintenant, très difficilement réalisable; pour être plus complètement édifié, il est nécessaire de procéder à d’autres recherches avec les crachats bacillaires et avec les malades. V EPREUVES DE TOUX ARTIFICIELLE AVEC DES CRACHATS BACILLAIRES. L'une de nos dernières méthodes de recherche a consisté en la réalisation d’un dispositif en verre, dans lequel nous mettions des crachats riches en bacilles, et destiné à imiter si possible les conditions d’agitation des mucosités dans la toux du phtisique ; cette imitation était obtenue en faisant arriver sur les crachats un courant aérien suffisamment rapide. C'est ce que nous appelons l'épreuve de la toux artificielle. Caisse à inhalation de 126 L. Fi6c. 3. — Coupe verticale schématique de la caisse 126, à inhalation, disposée pour l'épreuve de la toux artificielle. Cr : crachats bacillaires dans le tube horizontal AB; CD : double coudure destinée à favoriser l'agitation des mucosités; EF : tube horizontal conduisant dans la caisse l’air qui a été au contact des crachats; T : tube de décompression; à gauche, en A, est adapté un tube de caoutchouc par lequel on souffle par secousses. Dans ce but nous avons pris un tube de verre de 14 milli- mètres de diamètre intérieur, long d'environ 50 centimètres, que nous avons coudé en quatre endroits de la façon indiquée TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 181 sur la figure ci-contre, en À, B, C et D. Sur ce tube nous avons ajusté un ballon renversé, traversé lui-même par un tube de 1% millimètres, EF, ouvert aux deux extrémités (voir fig. 3); le raccord entre ces deux pièces fut exécuté d’une manière hermé- tique à l’aide de cire à cacheter. Les coudures C et D correspondaient schématiquement aux rétrécissements laryngien et bucco-pharyngien ; à leur niveau, la lumière du conduit était diminuée par la flexion qui détermi- nait intérieurement à chaque angle interne un relief linéaire mousse analogue à une corde vocale. Exr. [. — Pour effectuer cette expérience nous avons mis dans le tube, en Cr, 25 grammes de crachats bacillaires teis qu'ils sont expectorés; leur teneur était de 63.500 bacilles par milligramme. Du côté A était adapté un long tube de caoutchouc, large de 14 millimètres. Le tube EF pénétrait par son extrémité libre dans notre caisse à inhalation de 126 lilres; cette dernière contenait 8 cobayes. La toux artificielle fut obtenue en soufflant 100 fois, très fortement et par secousses, dans le tube de caoutchouc. La quantité d'air expulsée par le tube était d'environ 1.200 cent. cubes à chaque fois, en un quart de seconde, ce qui donne une vitesse de 30 mètres par seconde, et au total 120 litres d'air. À chaque introduction d'air nous constations que les crachats étaient projetés sur le tube EF: l'air ayant subi un contact violent avec les mucosités se rendait ensuite dans la caisse à inhalation. À cause de la disposition réalisée les mucosités ne pouvaient être entrainées en masse; elles retom- baient aussitôt après leur projection dans la partie AB, d'où elles étaient à nouveau chassées par l'air. A la fin de l'épreuve, qui dura environ 5 minutes, les crachats, agités commeil vient d’être dit, étaient complètement homogénéisés, ce qui n’a pas lieu dans les voies respiratoires du phtisique sous l'actionde la toux. L'expé- rience fut donc plus sévère que dans les conditions naturelles. Les cobayes ont inhalé pendant 3 heures 45 minutes, l'air ayant frappé les crachats. L'un des animaux périt prématurément d'affection intercurrente; un autre mourut après 24 jours, temps suffisant pour le développement des tubercules, et fut reconnu indemne; les six autres, sacrifiés 37 jours après l'inhalation, étaient parfaitement sains. Exp. Il. — Effectuée avec le même appareil et les expectorations d’un autre malade: ces expectorations contenaient 71.000 bacilles par milligramme. Les conditions expérimentales furent les mêmes que précédemment. Les 8 cobayes exposés à l'infection restèrent bien portants; sacrifiés après 34 et 35 jours, ils élaient indemnes de tuberculose. Exp. II. — Même dispositif et même façon d'opérer avec les crachats d'un troisième malade; le produit contenait 62.000 bacilles par milligramme. Les 8 cobayes ayant inhalé furent tués après 38 jours; aucun d'eux n'élart atteint de luberculose. 138 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Exp. IV. — Même matériel et même méthode avec les crachats d’un quatrième phtisique; la richesse bacillaire de ces expectorations était de 90.000 par milligramme. Sacrifiés 35 jours après l'expérience les 8 cobayes utilisés n'étaient pas tuberculeux. En résumé, sur 31 cobayes ayant inhalé l'air qui a barboté dans des crachats bacillaires provenant de k malades éminem- ment contagieux, les conditions étant plus sévères que celles réalisées pendant la toux, aucun animal n'est devenu tubercu- leux. En d’autres termes, sous l'influence d'un brassage éner- gique par l'air, les mucosités n'ont laissé détacher aucune particule liquide respirable. vil INHALATION DIRECTE, PAR LE COBAYE, DE L'AIR EXPIRÉ PAR DES PHTISIQUES, AU MOMENT DE LA TOUX. Il y a une trentaine d'années, un médecin francais, Giboux (1), avait fait inhaler à deux lapins l'air expiré par des tuberculeux : cet auteur rapporte avoir communiqué la tuber- culose par ce moyen. Quelques années plus tard, Cadéac et Mallet (2), recueillaient dans un ballon de 40 à 50 litres, de 20 à 95 litres de l’air expiré par des tuberculeux; ils achevaient le gonflement avec de l'air atmosphérique et donnaient le tout à inhaler à des lapins; ces animaux restèrent bien portants. | Ces expériences anciennes ne sauraient autoriser des conclu- sions fermes. Le lapin convient mal pour ces recherches, et cependant Giboux l'aurait tuberculisé (?). Si les sujets de Cadéac et Maliet sont restés indemnes, on peut et l’on doit objecter pareillement que le lapin est trop peu sensible aux petites doses de virus tuberculeux; mais il y a lieu de formuler une objection plus importante : c’est que, durant les manœuvres de remplissage des ballons, pendant le temps employé pour le transport et les manipulations diverses, l'air avait le temps de se débarrasser des particules bacillaires qu'il (1) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 1882. (2) Revue de Médecine, A881. TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 139 pouvait contenir au moment de son émission, et cela par simple dépôt; les résultats négatifs ainsi obtenus étaient donc sans valeur. Enfin, si l'air expiré dans l'acte physiologique ne contient pas le virus tuberculeux, il ne peut en résulter que le gaz rejeté pendant les efforts de toux soit également inoffensif, les conditions mécaniques réalisées dans les voies respiratoires étant toutes différentes. En plaçant une cage contenant des cobayes à proximité de la bouche du malade, B. Heymann rapporte avoir obtenu l'infec- tion de quelques sujets, mais on ne saurait dire si cela est dû aux particules liquides inhalées directement ou à des pous- sières provenant de la dessiccation de ces particules, ou du malade lui-même. On voit donc que la question de la nocivité de l’air rejeté par le tuberculeux reste tout entière à élucider. Malgré certaines difficultés pratiques, nous avons cru que, pour établir nos con- clusions, il était indispensable d'expérimenter avec le malade. Pour savoir si le tuberculeux expire, au moment de la toux, de l'air chargé de particules liquides respirables, il nous à semblé que la meilleure méthode consiste à recueillir cet air dans un récipient où se trouvent des cobayes qui inhaleront immédiatement le qaz suspect. Dans ce but nous avons choisi des malades très contagieux. Sur notre caisse à inhalation de 86 litres dont il a déjà été question, nous avons adapté à l’un des bouts un tube de T centi- mètres de diamètre portant extérieurement un pavillon large de 20 centimètres (voir fig. 4 et5 ci-contre). Sur le même côté que ce pavillon était fixé un tube de décompression T, de 25 millimètres de largeur. La caisse étant fermée nous avons vérifié que, quand on toussait dans le pavillon, l'air pénétrait à l'intérieur; pour s’en convaincre, il suffisait de mettre une flamme en face de l'orifice T, et on constatait qu'à chaque effort de toux cette flamme était fortement soufflée; la même vérification fut faite au cours de chacune des expériences qui suivent. = Il convient encore de remarquer qu'avec cette disposition, l'air rentrant par le pavillon et le tube qui le prolonge, est obligé de faire le tour de la boîte pour atteindre le tube de décompression T; il se mélange done chaque fois à la masse 740 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR d'air contenue dans la caisse et cette quantité d’air destiné à inhalation directe de l'air expiré au moment de la toux: ètre, en grande partie, dans la caisse contenant des cobayes. le malade tousse dans le pavillon et l'air pén 1G. 4. — Photographie du dispositif employé pour les épreuves d’ l'inhalation s'enrichit de plus en plus du gaz sorlant directe- ment des voies respiratoires du malade. TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 741 Une cage contenant des cobayes neufs était placée dans l’ap- pareil. A côté de cette cage étaient deux boîtes de Petri conte- nant de l’eau stérile; ces récipients devaient, en quelque sorte, servir de témoins et recueillir, s'il en existait, une partie des gouttelettes liquides, même non respirables; après chaque expérience, le liquide de ces boites fut inoculé à 3 ou 4 cobayes pour chacune. Fi. 5. — Coupe horizontale schématique de la caisse S6 disposée pour l'inhalation de l'air expiré par le tuberculeux; Pa : pavillon dans lequel tousse le malade ; 30 : boite de Petri placée à 30 centimètres environ de la bouche du phtisique ; 80 : boîte semblable placée à 80 centimètres environ ; T : tube de décompression; F : direction du courant aérien. Exp. [. — Cette experience est faite avec le malade Bon..., dont les cra- chats contiennent environ 50.000 bacilles par milligramme. Tout étant pré- paré comme il est dit ci-dessus, et la caisse contenant 8 cobayes, le malade tousse environ 100 fois dans le pavillon, en une heure; les cobayes restent à respirer cet air pendant une heure vingt minutes de plus, c'est-à-dire qu'ils sont restés en tout deux heures vingt minutes dans la caisse à inhalation. Deux de ces animaux périrent trop tôt; les six survivants, sacrifiés quarante- deux jours après l'épreuve, n'élaient pas luberculeux. Ceux inoculés avec les boîtes de Petri sont également restés sains. Exe. II. — Exécutée de la même manière avec le malade Bac.…, atteint de laryngite tuberculeuse et dont les crachats contenaient environ 100.000 bacilles par milligramme. Ce malade tousse trente fois en une heure. Les cobayes inhalent pendant une heure et demie au total l'air expiré par ce malade. Un {des cobayes meurt vingt-neuf jours plus tard: il est sain. Les sept autres sont sacrifiés quarante-qualre jours après l'expérience; aucun d'eux n'est atteint de tuberculose. + 42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Les cobayes inoculés sous la peau, avec le liquide des boîtes de Petri, sont également indemnes soixante jours après l’inoculation. Exr. III. — La même épreuve est faite avec le malade Dum..., dont les mucosités sont riches en bacilles (environ 40.000 par milligramme) et qui est également atteint de laryngite bacillaire. Ce malade tousse cinquante fois en une heure, et les cobayes inhalent au total pendant deux heures trente minutes. Deux des animaux périssent trop tôt, d'affection intercurrente com- mune ; les six survivants meurent ou sont sacrifiés vingt-huit, trente-neuf, et les quatre derniers, quarante-quatre jours après l'expérience; {ous sont indemnes de luberculose. Les cobayes inoculés avec le liquide des boîtes de Petri, sacrifiés après un délai de deux mois, étaient sains. Exp. IV. — Réalisée avec le malade Dant..,, également atteint de laryngite bacillaire, et dont les mucosités contenaient environ 100.000 bacilles par milligramme. Ce malade tousse 150 fois en une heure. Les 8 cobayes inhalent pendant deux heures ; sacrifiés quarante-trois jours plus tard ils sont indemnes. Les animaux inoculés sous la peau sont égale- ment sains. Le malade meurt dix-huit jours après la réalisation de cette expérience. Exr. V. — Cette expérience et les suivantes sont faites dans des condi- lions plus sévères. Au lieu de faire inhaler aux cobayes l'air expiré par un seul malade, au moment de la toux, nous faisons tousser successivement dans le pavillon de la caisse 86, pendant le séjour des cobayes, plusieurs malades dont les expectorations sont particulièrement riches en bacilles. Quatre malades participent à la présente expérience ; ce sont : 19 Bon... environ 50.000 bacilles par milligramme de crachats; 2° Bill... environ 60.000 bacilles ; 3° Fav..…., environ 25.000 bacilles ; 4° Led..., environ 50.000 bacilles par milligramme. La caisse à inhalation contient quatorze jeunes cobayes. L'expérience commence à midi vingt-cinq par le malade Bon.…, qui tousse 100 fois; aus- sitôt après, Bill... tousse 150 fois ; Fav..., tousse 20 fois seulement et Led... 50 fois. Cela fait en tout 320 efforts de toux dans une caisse de 86 litres et en deux heures. Après la cessation de la toux des quatre malades, les cobayes continuent d'inhaler l’air de la boite pendant une heure de plus. Comme à l'ordinaire il y avait en outre dans la caisse deux boîtes de Petri dont le contenu fut inoculé après l'expérience, à 4 cobayes pour chaque récipient. Un cobaye ayant inhalé périt six jours plus tard; les 13 survivants furent sacrifiés quarante-cinq jours après l'expérience; fous étaient parfaitement sains. Les sujets inoculés furent d'autre part reconnus indemnes de tuber- culose. Exp. VI. — Cette expérience est faite dans les mêmes conditions que la précédente, mais avec cinq malades au lieu de quatre ; 1° Danel..., 125.000 bacilles par milligramme de crachats ; il tousse 70 fois en quarante minutes ; 2° Bill... 60.000 bacilles par milligramme; il tousse 120 fois en trente minutes ; 3° Car... 50.000 bacilles par milligramme ; il tousse 103 fois en trente-cinq minutes: : TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 743 40 Bon..., $0.000 bacilles par milligramme (les crachats de ce malade son plus riches que précédemment): il tousse 110 fois en vingt minutes ; 50 Péj.…, 60.000 bacilles par milligramme; tousse 100 fois en trente minutes. Cela fait en tout 503 efforts de toux. Il y avait dans la caisse 12 cobayes, qui inhalèrent pendant trois heures quinze minutes. Pendant l'expérience la température extérieure élait très élevée ; les cobayes, recevant en outre l'air expiré par les malades et saturé d'humidité, furent très incommodés; leur respiration étail très accélérée et ils étaient en sueur. Deux boites de Petri contenant de l’eau stérile se trouvaient dans la caisse à inhalation, aux endroits habituels, c'est-à-dire à 30 et S0 centimètres de la bouche des malades. Le liquide de ces boîtes fut inoculé à la fin de l'expé- rience à 4 cobayes pour chaque boîte ; ces cobayes sont restés sains. Deux des cobayes à inhalation sont morts après trente neuf jours: i/s n'étaient pas luberculeux. Les dix autres ont été sacrifiés le quarante-cin- quième jour après l'expérience ; sur ce nombre neuf étaient indemnes ; le der- nier présentait un lubercule pulmonaire primilif caséeux bien développé, avec une adénopathie caséeuse prononcée et des lésions récentes de généralisa- tion, ces dernières visibles dans le poumon (granulations grises), le foie et la rate. Les ganglions hépatiques étaient un peu dégénérés ; ceux du mésen- tère et de la région cervicale étaient sains. Il s'agissait donc bien d'une tuberculose d’inhalation datant d'environ quarante-cinq jours, c'est-à-dire du moment même de l'expérience. Exe. VIL — Effectuée dans les mêmes conditions avec trois malades : 19 Bon, déjà connu; 2° Danel.…., également connu; 3° March, qua- rante-cinq ans, emphysémateux et cavitaire ; crachats très purulents, épais et émis en grande quantité, d'une teneur de 15.000 bacilles par milligramme. La caisse étant préparée avec 12 cobayes et des boîtes de Petri, le premier malade tousse 80 fois en quarante minutes ; le second tousse 80 fois égale- ment, mais en vingt-cinq minutes ; le troisième tousse 90 fois en cinquante minutes. Au total, la caisse reçoit 250 efforts de toux et les cobayes inhalent pendant trois heures. Les animaux ayant inhalé ont été sacrifiés après quarante-cinq jours, ainsi que ceux ayant été inoculés; aucun ne présentait la moindre trace de tuber- culose. Exr. VIIL — Cette expérience est effectuée, toujours selon la même méthode, avec deux autres malades : 1° Sor..., trente-cinq ans, tuberculeux cavitaire crachant beaucoup; mucosités purulentes épaisses contenant 80.000 bacilles par milligramme; légère laryngite bacillaire. 29 Péj.., déjà connu. Le malade Sor.. tousse 53 fois en trente-cinq minutes ; Péj... le remplace aussitôt et tousse 114 fois en cinquante minutes. Les cobayes continuent d'inhaler l’air suspect pendant quarante minutes. En résumé, deux malades ont toussé 167 fois et les cobayes ont subi l'inhalation pendant deux heures. Comme précédemment, le liquide des boîtes de Petri a été inoculé à 8 cobayes. Tous ces animaux ont été sacrifiés quarante-quatre jours plus tard : aucun d'eux n'était tuberculeux à quelque degré que ce fut. Daus ces huit dernières expériences, consistant dans l’inha- 49 74% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lation de l'air expiré au moment de la toux, nous avons opéré au total avec 12 phtisiques des plus contagieux, lesquels ont toussé 1570 fois dans notre appareil; certains de ces malades se sont prètés plusieurs fois à l'épreuve. 79 cobayes ont subi l'inhalation directe de l'air expiré pendant la toux; sur ce nombre d'animaur un seul à contracté un tubercule pulmonaire primitif dont l'origine ne peut être indiquée avec certitude. Ce cas d'infection minima est-il dù à une particule liquide ? Cela est possible, bien que, dans ces huit expériences, et dans l'expérience VI en particulier, le résultat de l’inoculation du liquide recueilli dans les boîtes de Petri exposées dans la caisse ait toujours été négatif; or 16 boîtes de Petri ont été inoculées à 64 cobayes! Malgré le grand nombre des séances de toux Ja quantité de particules liquides émises a été nécessairement infime, puisque dans nos récipients 1l n’a été récolté aucune souttelette, même grossière, à 30 centimètres de la bouche des malades. L'infection accidentelle par une particule sèche provenant de l'un de nos sujets nous paraît plus vraisemblable, car plusieurs d’entre eux étaient sales : le malade Bill... avait une très longue barbe ; Dan. possédait un mouchoir qui, par agitation, les jours suivants, à communiqué la tuberculose à un haut degré à tous nos cobayes, et cela après plusieurs jours de dessiccation; les cheveux mêmes de ce malade se sont montrés virulents. En présence de certaines difficultés, pour réaliser ces expériences d'inhalation de l’air expiré, nous n'avons pu obtenir les pré- cautions rigoureuses que nous eussions désirées à l'égard des particules sèches pouvant provenir du malade ou de ses vètements. Quoi qu'il en soit, si nous considérons ce cas positif comme imputable à une gouttelette bacillifère, nous devons également remarquer que, pour l'obtenir, il a fallu multiplier les épreuves, recueillir une grande quantité d’air dans un récipient et faire inhaler cet air par de nombreux cobayes. Dans la nature le danger serait beaucoup moindre, la dilution immédiate de l'air expiré le réduisant dans des proportions considérables, Coxezusioxs. — Nous croyons pouvoir conclure de l’ensemble des expériences qui précèdent, qui ont été exécutées par diverses TUBERCULOSE ET PARTICULES LIQUIDES 745 méthodes et dont les résultats sont concordants, que la contagion de la tuberculose par les particules liquides directement inhalées ne peut avoir lieu que très rarement et avec la plus grande diffi- culté. Le muco-pus bronchique se comporte vraiment comme un produit de défense qui a pour rôle de conglober les produits nocifs et de faciliter leur expulsion en masse; il en empêche la division et la dispersion dans les parties saines du poumon et du tube digestif, au moins pour la plus grande partie; il diminue l'étendue des contacts ayec les muqueuses; il rend impossible la pollution de l'atmosphère et s'oppose ainsi, dans une très large mesure, sinon totalement, à la contagion directe par les gouttelettes. La présence de mucine dans la salive buc- cale, dont la richesse bacillaire est beaucoup moindre, remplit le même rôle de protection. Pour mieux apprécier ces résultats, il est nécessaire de les rapprocher de ceux, constamment positifs, que nous avons obtenus avec les crachats secs, en procédant par brossage ou agitation de linges bacillaires (1), et de ceux, également positifs, qui nous ont été fournis par des expériences de coha- bitation de cobayes avec les malades ; ces dernières recherches feront l'objet d’un prochain mémoire. La plupart des expériences qui précèdent ont été effectuées dans le service de notre excellent maître, M. le professeur Letulle, à l'hôpital Boucicaut; c'est pour nous un agréable devoir à remplir que de lui exprimer iei notre inaltérable reconnaissance, pour son bienveillant accueil et pour la solli- citude qu’en maintes circonstances il à bien voulu nous témoigner. (4) P. Cnaussé, Transmissibilité de la tuberculose par brossage de vête- ments souillés. Bull. de l’'Acad. de Médecine, 13 mai 1913, et Revue d'Hygiène et de police sanitaire, du 20 mai 1913. P. Caaussé, Transmissibilité de la tuberculose par agitation de linges bacil- laires. Bull. de l’Acad. de Médecine, 22 juillet 1913, et Revue d'Hygiène et de police sanitaire, du 20 octobre 1913. 746 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Errarum. — La figure qui porte le n° 3 dans le premier mémoire de M. Chaussé (ces Annales, juin 1914, p. 615), doit être remplacée par la figure ci-dessous, la légende étant conservée. Caisse à inhalation L'INFLUENCE DE LA RÉACTION DU MILIEU SUR L'ACTION DE L'INULASE DE L'ASPERGILLUS NIGER par A. KIESEL (Travail du laboratoire de M. le professeur Gabriel Bertrand.) L'inulase, découverte par Green (1) dans les tubercules en germination du topinambour, fut retrouvée par Bourquelot (2) dans le mycélium de lAsperqillus niger. Mais, déjà avant la découverte de Green, Bourquelot (3) avait observé le dévelop- pement de cette moisissure sur un milieu contenant de l’inu- line, fait qui rendait très probable l’existence de l’inulase dans l’'Asperqullus niger. L'inulase a été étudiée ensuite dans la même moisissure, par Dean (4), Richaud (5) et dans les derniers temps par Boselli (6). Pour l'inulase du topinambour, Green a indiqué que l’action optimale sur l’inuline avait lieu à 40 degrés en solution neutre, en ajoutant toutefois que la présence de traces d'acide ne gênait pas, mais favorisait plutôt la réaction. L’acidité du suc du topi- nambour correspondait dans ses expériences à 0,001 p. 100 ou à 4/3640-norm. HCI, et c’est cette concentration qu'il a appelée optimale dans son livre sur les diastases (7). La réaction alcaline fut trouvée très nuisible par Green. L'inulase de l’Aspergillus niger se comporte en général de la même façon envers les acides et les alcalis, quoique les auteurs qui se sont occupés de cette question donnent des chiffres très différents pour les concentrations optimales et paralysantes des acides. (1) Annals of Botany, vol. 1, 1888, p. 223. (2) Journ. de pharm. et de chim., 5e série, t. XXVIIT, 1893, p. 5; Comptes rendus de l’Acad. des sciences, t. CXVI, 1893, p. 1143. (3) Journal de l’Anatomie et de la Physiologie, 1886, p. 193. (4) Bot. Gaz., t. XXXV, 1903, p. 24. (5) Thèse (1900), Recherches physiologiques sur l’inulase et sur l'inuline. (6) Annales de l'Institut Pasteur, t. XXV, 1911, p. 695. (1) Die Enzyme, p. 85 (Trad. de Windisch, 1901). 748 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ainsi Dean (1) indique une très petite concentration opti- male : 0,0001-norm. pour l'acide sulfurique à + 35-37 degrés. Déjà 0,0002-norm. est moins favorable, 0,001-norm. diminue et 0,01-norm. arrète l’action de la diastase. Boselli (2) trouve, pour la même température (35 degrés), une concentration opti- male beaucoup plus forte : en ajoutant toujours une solution diastasique neutralisée à l'hélianthine, il trouve la concentration optimale pour l'acide sulfurique à 0,009-norm. et pour l'acide acétique à 0,16-norm. L'action de l’inulase ne se produisait plus en présence des concentrations dépassant 0,06-norm. pour l'acide sulfurique et 0,60-norm. pour l'acide acétique. Quant à l’action des alcalis, nous ne trouvons des indications précises que chez Dean : la potasse caustique à 0,0001-norm. alfaiblit déjà, à 0,001-norm. diminue fortement et à 0,01- norm. arrête complètement l’action diastasique. D’après Boselli, la concentration de la soude caustique à 0,002-norm. suffit pour arrêter le dédoublement de l'inuline par l’inulase de l’Asper- gillus niger. Dans le présent travail, j'ai eu l'intention de vérifier les résultats des auteurs que j'ai cités en tenant compte du chan- gement de la réaction du milieu par l'addition de la diastase (3) et d'étudier en même temps l'action comparée de divers acides dans le dédoublement diastasique de l’inuline en présence d’inu- lase, comme cela a déjà été fait pour quelques autres diastases : la laccase, la peroxydiastase, la sucrase et ia maltase (4). En prenant comme critérium de l’activité des acides les con- centrations optimales, — les plus caractéristiques pour Le pro- cessus diastasique — j'ai constaté l'absence d'un optimum assez (1) Loc. cit. (2 ) Loc: cit. (3) G. Bertrans et M. et M®° RosenBLarr, Annales de l'Institut Pasteur, t. XXNI, 1912, p. 3212. (4) G. BERTRAND, Bulletin de la sociéte chimique, 4e série, t. I, 1907, p. 1120; G. Bertkanp et M'e RozenBan», ibid., t. V, 1909, p. 296; FerNBAcH, Annales de l'Institut Pasteur, t. III, 1889, p. 531; GÔRENSEN, Trav. du lab. de Carlsberg. t. VIII, 1909, p.1 ; Eucer et Berk Ar UGGLas, Zeit. f. phys. Chem., t. LXV,1910, p.124; Hupson et Paie, Journ. Amer. Chem. Soc., t. XXXII, 1910, p. 174; MicHAELIS et Davipsox, Bioch, Zeit., t. XXXV, 1911, p. 386; G: Berrrann et M. et Mne Ro- SENBLATT, ullelin de la sociélé chimique, 4° série, t. XI, 1912, p. 176 et 464 Kopaczewski, Thèse, Fribourg, 1911; Zeit. f. physiolog.. Chem., t. LXXX, 1912, p- 182: ACTION DE L’INULASE DE L'ASPERGILLUS NIGER 749 bien défini pour qu'on puisse faire le calcul d'activité avec quelque précision. Il est évident que je ne pouvais pas obtenir une série de chiffres comparable à celle qu'ont obtenue G. Ber- trand et M. et M"° Rosenblatt (1). C'est pour cela que je me suis contenté d'étudier seulement un petit nombre d'acides. Les acides étudiés étaient les acides sulfurique, chlorhy- drique, phosphorique et acétique. Outre l'influence des acides nommés, j'ai encore étudié celle du carbonate de sodium, de certains sels acides, ces derniers étant choisis d'une acidité croissante comme l'indique le tableau suivant : A L'HÉLIANTINE A LA PHTALÉINE Carbonate de soude... . . . Alcalin. Alcalin. Phosphate bisodique . . . . Alcalin. Neutre. Citrate bisodique Neutre (2). Acide (2). Phosphate monosedique : . Neutre. Acide. Citrate monosodique . . . . Acide (2). Acide. L'inuline qui a servi pour les expériences provenait des tubercules de Dahlia et m'était généreusement fournie par M. G. Bertrand. La diastase était employée sous forme d'extrait de mycélium d'Asperqillus niger, cultivé à 35 degrés sur le liquide de Raulin, pendant soixante-dix-sept heures. Après un rapide lavage avec de l’eau distillée, le mycélium était desséché dans le vide à 28 degrés et pulvérisé. Pour chaque série d'expériences on uti- lisait une macération fraiche. On broyait 0,25 gramme de la poudre avec un peu d’eau, on amenait le volume à 25 cent. cubes et on laissait macérer pendant vingt-quatre heures à 35 degrés. Après avoir filtré, on diluait le liquide diastasique complètement limpide avec trois volumes d’eau. Pour chaque expérience, on prenait 2 cent. cubes de ce liquide dilué. Dans ces 2 cent. cubes on trouva : Résidu sec apres lévaporation de l'eau..." "7. 2 milligr. Alcalinité à l'hélianthine . . . . . . . ."1/2nicent. cube: 0,001-norm. Acidité à la phtaléine du phénol. . . . . . 2 » cent. cubes. 0,001-norm. En calculant l’alcalinité et l’acidité de la solution diastasiqne pour 6 cent. cubes du liquide total de chaque expérience nous (1) Loc. cit. (2) G. Bertrax», Bulletin de la Société chimique, 4° série, t. 1, 1907, p. 1128. 750 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR trouvons un changement de la réaction dû à la diastase intro- duite égal à : Alcalinté alhélantimene etes . + «< «+ 1/4800-norm. Acidité à la phtaléine du phénol. . . . . . . . 1/3000-norm. Dans chaque expérience, faite dans de petits tubes à essai en verre d'Iéna, on pesait dans le tube 100 milligrammes d’inu- line. On les dissolvait dans 1 à 4 cent. cubes d’eau en plongeant le tube dans l’eau bouillante un temps juste suffisant pour la dissolution. Après le refroidissement rapide du tube, on ajoutait la dose correspondante d’un acide titré et convenablement dilué pour avoir en tout 4 cent. cubes. Ensuite, on ajoutait 2 cent. cubes de la solution diastasique et V gouttes de toluène. Après avoir bien mélangé le contenu des tubes, on abandonnait ceux- ci, pendant vingt heures, plongés dans l’eau, dans une chambre thermostat à + 35 degrés. On trouvait ainsi, à la fin des expériences, dans les tubes sans acide, un dédoublement de l'inuline correspondant à peu près à 20 milligrammes du sucre réducteur; alors il y avait toujours un grand excès d'inuline inattaquée. Dans chaque série d'expériences, il y avait toujours deux témoins sans acide que l'on analysait l'un au commencement, l’autre à la fin de la série. Pour arrêter les expériences, on ajoutait III gouttes de soude normale après avoir neutralisé l'acide ajouté, en refroidis- sant le tube. Cette quantité fut trouvée suffisante pour arrêter complètement l'action diastasiqne sans détruire le lévulose formé. Les doasges du sucre réducteur ont été faits suivant la méthode de G. Bertrand (1). Chaque expérience avec les acides comportait un témoin préparé dans les mêmes conditions, avec la seule différence que la diastase était préalablement inactivée par chauffage au bain-marie. Ces témoins ont démontré que l’inuline est fortement hydro- lysable même par les concentrations très faibles des acides. (1) Bulletin de la Sociélé chimique, 3° série, t. XXXV, 1906, p. 1285. ACTION DE L’'INULASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 151 ACTION DES ACIDES Tous les acides étudiés produisaient une action favorisante sur le dédoublement diastasique de l’inuline, même si on les ajoutait en quantités si petites qu'elles ne suffisaient pas pour la neutralisation de l’alcalinité de la diastase à l’héliantine (1/4800-norm.). Ainsi, j'ai trouvé une augmentation suivante de l'activité de la diastase : Avec 1/12000 mol.-gr. d'acide sulfurique. . . . . . . . 14 p. 100 Avec 1/6000 — d'acide chlorhydrique. . . . . . 15 — Avec 1/12000 — d'acide phosphorique . . . . . . 15 — Avec 1/6000 daCIde ACER EN E. 14 — Ces chiffres nous prouvent que l'activation était à peu près la même dans le cas de tous les acides étudiés. Mais on remar- quait encore une activation produite par les acides en concen- trations plus petites. En augmentant les concentrations en dehors dé la neutralité à l’héliantine, on observa une différence très nette entre l'acide acétique et les acides minéraux. Pour l’acide acétique, l'activation alteinte par la neutralisation à l’héliantine de la solution diastasique ajoutée changea très peu jusqu'à la con- centration où on commença à trouver une diminution d'activité de la diastase, c'est-à-dire jusqu’à environ 1/5 mol.-gr. Pour les autres acides, l'activation par les concentrations, dépassant la neutralité à l’héliantine, augmentait assez régulièrement et atteignait un chiffre maximum qui était situé dans une zone plus ou moins large des concentrations croissantes. L'optimum, ou l'activation maxima, était situé dans les limites suivantes : Avec l'acide sulfurique . . . . . . Entre 1/343 et 1/240 mol.-gr. Avec l'acide chlorhydrique. Avec l'acide phosphorique . . Avecrliacideracétiquer.-.. Entre 1/120 et 1/100 mol.-gr. Entre 1/90 et 1/72 mol.-gr. Entre 1/2000 et 1/50 mol.-gr. Pour l'acide acétique, il y avait après cette zone un affaiblis- sement d'activation, mais cet affaiblissement était tellement lent que les limites de la zone optimale ne pouvaient pas être 152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR précisées. Peut-être aurait-il fallu étendre cette zone dans la direction des concentrations plus grandes, Dans la série des concentrations croissantes, il ne manquait pas d'irrégularités (1) dans les résultats trouvés de l’action dias- tasique ; seulement, ces irrégularités, chose inexplicable, étaient les plus grandes en présence des petites concentrations de tous les acides et en présence de l'acide acétique de toutes concen- trations, c’est-à-dire dans tous les cas de faible activation du phénomène diastasique. En prenant les moyennes dans les zones optimales des acides, nous avons : ACTIVITÉ COMPARÉE DES ACIDES z & an $ 5€ E à (HCI — 100) EN PRÉSENCE DE a 2 9 < 6 E 29 É > 2 8 at ÉE 2 l'inulase sucrase sucrase Cie & £ de de de az Se & l'Asp. Nig. | levure (1). |l'Asp. Nig. (1). GE Ac. sulfurique . . . .| m/291 265 128,5 95,25 107,2 Ac. chlorhydrique . .| m/110 100 100 » 100 » 100 » Ac. phosphorique . .| m/81 14 19,6 3955 18,63 ACMACÉTIQUE MER Re Ÿ (?) 10,7 2,38 0,40 | (1) G. BERTRAND et M. et Mme RosENBLATT, loc. cit. (2) W. Osrwazp. Jahresb. üb. Fortsch. d. Chem., 1884, p. 21. On voit bien qu'il n'y a pas de correspondance étroite entre l'activité des acides dans le dédoublement diastasique de l'inu- line et celle dans les autres phénomènes, quoique les acides se suivent dans le mème ordre dans tous les cas. Les résultats trouvés sont ainsi en général d'accord avec les résultats de G. Bertrand et M. et M"° Rosenblatt (2). C'est-à- dire qu’à côté de l'action des ions des acides, nous avons trouvé une action indubitable'des anions dans le phénomène diastasique. La plus grande activation était obtenue avec les acides chlor- (1) Irrégularités dues aux petites erreurs inévitables dans le mesurage des solutions constiituantes. (2) Loc. cit. ACTION DE L’INULASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 133 hydrique et phosphorique ; l'acide sulfurique a montré une activation moins grande. Activation maximale : AVeGRNACIdeRSUIUlIAUCRE RC 04 p dUD Avec Pacide CRIOTRYArIQUER EL MN TNT AvecahacidepioSDROnQUErTA- PEN NT AVeCRHACIde ACÉAUC AE E ER clac 20 — Comme concentrations maximales arrètant le dédoublement diastasique de l'inuline, on trouva : ACTIVITÉ HCI — 100 Avec l'acide sulfurique . . . >> 1/48 mol.-gr. 190 Avec l'acide chlorhydrique. . >> 1/25 mol.-gr. 100 Avec l'acide phosphorique. . > 1/3 mol.-gr. 12 Avec l'acide acétique.. . - : .>"3 mol.-gr, 15 L'activité des acides calculée pour les concentrations maxi- males présente une différence assez grande avec l’activité en concentrations optimales. ACTION DES SELS ALCALINS Le carbonate de sodium et le phosphate bisodique, si on prend leur alcalinité correspondant à l'héliantine, c'est-à-dire l’alca- linité moléculaire du phosphate égale à la moitié de l’alcalinité moléculaire du carbonate de sodium, se montrent dans les concentrations initiales à peu près d’un même effet nuisible. En comparant de cette façon les résultats obtenus avec les différentes concentrations de ces sels nous avons trouvé : 1/12000 1/6000 1/3000 1/2000 1/1000 1/750 1/500-norm. Carbonate de sodium. 16,2 142 9,9 6,6 1,8 1,1 0,7 mgr. Phosphate bisodique. 16,2 13,3 8,9 HE 56) 4,5 3,1 mgr. Dans ce tableau, on à marqué les quantités de sucre réduc- teur formé en m.-gr.; au-dessus de ces chiffres on a mis les concentrations correspondantes des sels par rapport à l’hélian- tine. Nous voyons qu’au commencement, jusqu'à la concen- tration 1/3.000-norm., le carbonate de sodium est même un peu moins défavorable que le phosphate ; après cette concentration, l’ordre est renversé, mais ce n'est qu'à partir de la concen- tration 1/2.000-norm. (1/4.000-mol. pour le carbonat de 154 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR sodium) que l'action pernicieuse du carbonate augmente rapi- dement, tandis que l'action du phosphate monte peu à peu et n'arrète même pas complètement le dédoublement diastasique de l’inuline à une concentration de 1/100-norm. On comprend bien cette différence brusque dans l’action du carbonate de sodium après 1/4.000-mol., si on se souvient que la concentration de 1/3.000-mol. de carbonate de sodium (1) cor- respond à la neutralisation à la phtaléine de la solution diasta- sique ajoutée. Le phosphate bisodique, neutre à la phtaléine du phénol, ne peut pas dépasser ce point de réaction du milieu Le carbonate le dépasse. audajeud eje shjeuina| , MILLIGRAMMES DE SUCRE REDUCTEUR Concentrations en norm.à l'héliantine. FiG. 1. Les courbes de la figure [| nous donnent l'illustration de ces faits et des expériences faites avec les deux sels noramés. L'influence pernicieuse des alcalis est mesurable non seule- ment par rapport à l’héliantine, mais aussi par rapport à la phtaléine du phénol. ACTION DES SELS ACIDES Les sels étudiés présentaient certains inconvénients. Em- ployés à de grandes concentrations, ils commençaient à préci- 1) Ou 1/3.000-norm. à la phtaléine du phénol. ACTION DE L’INULASE DE L'ASPERGILLUS NIGER 755 piter l'inuline. Cette précipitalion devait sûrement être suiyie d’une diminution du dédoublement qui ne correspondait pas à l'action du sel sur le travail de la diastase. D'autre part, dans les concentrations encore plus grandes, où l’action était encore favorable, les sels commencaient à se dissoudre très lentement dans les conditions données : on élait obligé d'ajouter les sels dans ces cas à l’état solide à cause de l'impossibilité d’avoir des solutions bien mesurables (1) ou en solutions assez concentrées, avant l'introduction du liquide diastasique. Après l'introduction de la solution diastasique, on ne pouvait plus chauffer les tubes pour faciliter la disso- lution et on comprend bien qu'il devait y avoir dans ces conditions des grandes irrégularités, même dans les expériences identiques. Les résultats oblenus pour les grandes concentra- tions ne présentent qu'une précision très petite. L'action du citrate monosodique est très différente de l’action de deux autres sels. Elle ressemble surtout à l'action de l'acide acétique : le citrate monosodique active déjà l’inulase à de petites concentrations (pour 1/1.200 mol.-gr. l'activation est de 16 p. 100); il ne change presque plus du tout cette activation jusqu’à 1/20 mol.-gr.; enfin, l'activation devient de plus en plus petite et, pour 1/4,8 mol.-cr. du sel, l’action diastasique revient au niveau de l’action en l'absence du sel. Le maximum de l’acti- vation trouvé dans toutes les expériences (19 p. 100) est à peu près le même que pour l’acide acétique. Nulle concentration n'arrètait le travail de la diastase. Le citrate bisodique et le phosphate monoscdique agissaient en général de la même façon. Seulement, le phosphate com- mençait à produire son action sous des concentrations plus petites : pour le phosphate, on trouva une activation nette à 1/100 mol.-gr., pour le citrate seulement à 1/10 mol.-gr. Néan- moins, l’action du citrate augmentait plus vite et dans sa con- centration oplimale, près de 1,5 mol.-gr., le citrate produisait une activalion plus forte. À vrai dire, on remarqua déjà à cette concentration une précipitation partielle de linuline et aussi une solution incomplète des sels Les grandes irrégularités dépendant de ces deux faits dans les expériences parallèles ne (4) À cause de la grande viscosité. 756 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR nous permettent pas de tirer des conclusions irréprochables. S'il n'y avait pas intervention de ces faits secondaires, lopti- PA} ie (AB En 51, 38 LR Fa Sr Ne ait £ PAT / 10e \ # À eu AE ME A EE à Fe NP MER MR RENE ET À | 2e ME en M / Été ul 26 1 = | Pas A = É FN BE) ET E e | PIUTENT 2! 20 =] AGE = = RIRE | CRAN & = DR EAe a) él: |S| 1 À EE | SRE RON EE Sr EN RE 17 * A FEPRNEEE 8 ) MES) - DRE FENTE - 4 83|_Phosplhatb mlono e \ a 2 \ = | LS)" TERRE mé % | il bs1s | 2b | as | sjo | als aysdo | | Concentrations en mol gr: FTG:222 mum devrait être trouvé probablement en présence des concen- trations plus fortes des sels et le dédoublement de l’inuline aurait été trouvé plus grand. Je dois ajouter que les deux ACTION DE L’INULASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 757 inconvénients dans les expériences étaient plus marqués en présence du phosphaste. Pour ces raisons je me suis contenté de donner ici les ré- sultats trouvés sous forme de courbes dans la figure Il. Les courbes 2 et 3 représentent les résultats maxima et minima obtenus pour le phosphate dans deux séries d'expériences. On pouvait s'attendre à ce que l’inulase, étant favorisée par les acides, surtout par les acides minéraux, serait plus favo- risée par le sel acide plus dissocié et donnant plus d'ions H, c'est-à-dire plus favorisée par le citrate monosodique que par le citrate bisodique (1). En réalité, c'est l'inverse qu'on a trouvé, le citrate bisodique produisait une action plus forte, quoique, en rapport avec la dissociation plus petite, sa concentration optimale était trouvée plus forte que pour le citrate monoso- dique. Les plus grandes activations trouvées étaient : AVeCRIeNCItratemOonoSOUQUE EEE 19 p. 100 AvecHlencitrale bDISOUIqQUE PEN RE NN 104 — Avec lesphosphate monosodique- 7 131 — Cette action plus forte produite par le citrate bisodique reste inexplicable. (1) D'après KanLeNBERG et AusrTiN (Journ. of physic. chem., t. IV, 1899, 553), 1 gramme d'ions H, dosés d’après l’inversion du saccharose par les solutions de 1/128 mol.-gr., est contenu dans 6,666 litres de solution de citrate mono- sodique et 21,333 litres de citrate bisodique. Le Gérant : G. Masson. Paris - L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. D. Fe 98° ANNÉE AOÛT 1914 N° 8 (Paru le 25 Novembre 1914 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ESSAIS SUR LA PATHOGÉNIE DU CHOLÉRA par H: VIOLLE. La pathogénie du choléra est peut-être le point le plus obscur de cette maladie. Nous ne parlons pas, bien entendu, de la pathogénie des symptômes cholériques, mais du mode de déve- loppement du vibrion de Koch chez l’homme : pathogénie du vibrion plutôt que pathogénie du choléra. Nous avons en vue le vibrion donnant le choléra typique, l'attaque qui apparaît brusquement et terrasse le sujet en pleine vigueur. Or, ce qui est si rapide, ce n'est pas seulement le développement des grands symptômes externes, mais aussi le développement du vibrion dans l'organisme, dont le premier n’est que le reflet bruyant. À côté du drame externe, si violent dans son évolution, que nous n’en voyons souvent que le der- nier acte, se joue un drame interne, encore plus rapide et qui est le créateur de l’action. Or, pour surprendre à ses différentes phases le développe- ment du vibrion cholérique dans l'intestin, il est nécessaire de reproduire expérimentalement l'affection, et de se rendre maître de tous les facteurs. L'autopsie dans les cas typiques ne nous révèle que le fait un peu déconcertant de la présence d’une purée blanchâtre, sorte d'eau de riz, occupant tout le conduit intestinal, et de parois congestionnées, lie de vin ou rouge hortensia. L'expérimentation encore que positive ne nous donne pas la clef du problème; les résultats heureux obtenus par diffé- 50 760 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR rents auteurs chez les animaux prouvèrent seulement que ces animaux n'étaient pas totalement réfractaires au choléra et rien de plus. En 1894, M. Metchnikoff, s'étant attaqué à ce problème, obtint des résultats extrêmement intéressants. Il se basa sur ce fait, qui devait ie conduire plus tard à sa théorie si féconde des fermentations intestinales provoquées par les microbes, que le vibrion cholérique amené du milieu extérieur dans le tube digestif devait forcément, en face d'une flore très nombreuse, compter avec ses divers représentants. Il s’en sui- vait que pour simplifier le problème, il fallait éliminer cette flore inconnue, agir sur des intestins aussi peu septiques que possible : les conditions se trouvaient réalisées chez les animaux encore à la mamelle, par conséquent nourris seulement de lait et dont l'intestin ne renfermait qu'un nombre restreint de bactéries. Les expériences faites sur des lapins nouveau-nés furent positives; elles démontrèrent que le vibrion cholérique était bien l'agent du choléra ; elles ne démontrèrent point com- ment le choléra se développe chez l'homme adulle. Allant alors plus loin, M. Metchnikoff établit in vitro que certaines bactéries banales telles que les torula, les sarcines, quelques bacilles coliformes facilitaient le développement du vibrion, et que d’autres microbes, inversement, enrayaient cette prolifération. Passant des tubes de culture à l'animal, il arriva en associant avec le vibrion cholérique des espèces favorisantes à provoquer un choléra typique chez les jeunes lapins à la mamelle. Cette théorie de microbes favorisants et empèchants, où le vibrion cholérique joue sans doute le rôle principal, mais n'est pas tout dans l’étiologie du choléra, est basée sur des faits théo- riques et pratiques indiscutables. Toutefois, elle explique malai- sément le développement de ces épidémies foudroyantes de choléra où il est impossible, tout en admettant une virulence spéciale et temporaire de l'agent, de saisir le rôle exelusif de la flore intestinale chez chaque individu qui suecombe à l'attaque. C'est en présence de faits d’expérimentation, que nous nous sommes trouvés conduits à envisager l'hypothèse que d'autres facteurs, et principalement les sécrétions des glandes diges- ESSAIS SUR LA PATHOGÉNIE DU CHOLÉRA 761 tives peuvent intervenir dans la pathogénie de la maladie cholé- rique. Injectons dans les veines d’un lapin adulte (2 à 3 kilogrammes) une dose mortelle de bouillon de culture cholérique : à l’au- topsie nous retrouvons le vibrion, non seulement dans le sang où il fut injecté, mais encore dans l'intestin grèle où 1l est passé. Or, si l'on ouvre sur toute sa longueur cet intestin grêle aussitôt après la mort et, si après l’avoir lavé rapidement, on l’examine avec soin, on verra que la muqueuse est conges- tionnée, et que la congestion est un peu plus prononcée à 20 ou 30 centimètres à partir du pylore, restant telle Jusqu'au cæcum. Autrement dit, la première portion de l'intestin grèle est moins atteinte que les suivantes. Or, que voyons-nous à la limite des deux zones : un point en saillie, Ia caroncule du canal pancréa- tique; tout l'intestin en aval, y compris cette caroncule et une zone aréolaire, est rouge ; en amont il est légèrement rosâtre. Prélevons un peu de l’enduit déposé à la surface de la muqueuse, en amont et en aval du canal pancréatique, et exami- nons-le au microscope : nous trouvons dans les deux portions des vibrions, mais le frottis d’amont en contient extrêmement peu, et le frottis d’aval beaucoup. Partant de ce fait, nous allons essayer de déterminer le rôle joué par les sucs digestifs dans le choléra. Aliments, microbes etsucs digestifs sont les trois substances qui forment le contenu du tube digestif. Cherchons l'effet des diastases intestinales sur le vibrion cholérique. Pancréas. — Et d'abord le suc pancréatique. Nos expériences portèrent sur le lapin qui présente dans la série animale ce fait particulier, d’avoir le canal de Wirsung débouchant 20 à 30 centi- mètres plusbas que lecanalcholédoque (fig. 1). Les deux sécrétions sont donc absolument séparées l’une de l’autre, et c'est en utili- sant cette séparation, rappelons-le, que Claude Bernard établit ses découvertes sur la digestion pancréatique des graisses. La sécrétion pancréatique chez le lapin est continue et abondante. Supprimons l’action du pancréas. La ligature du canal de Wirsung serait insuffisante car, quoiqu'il n’y ait pas d'autres canaux excréteurs, le suc pancréatique peut être résorbé dans 162 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR la circulation générale et modifier le résultat des expériences. La destruction de la glande sera donc faite soit par le fer rouge, soit par l'injection de suif fondu dans, ses canaux. En suppri- mant la glande par un de ces procédés et en injectant le vibrion dans l'intestin et en aval (6, fig. 1), on n'arrive point à déter- miner le choléra chez l'animal. Mème résultat négatif si l'on a injecté le vibrion en amont, c'est-à-dire entre le canal cholédoque et le canal de Wirsung (Dane) Même résultat négatif si l'injection est faite au niveau même de l’orifice de sortie du canal pancréatique. Maintenons l'action du pancréas. Faisons les inoculations de vibrions dans l'intestin aux trois points précédents : au lieu même de sortie du suc pancréatique, en aval et en amont : dans les trois cas résultats négatifs. Exaltons l’action du pancréas. Pour ce faire, injectons dans les veines de l'animal et d’une facon subintrante de la sécré- tine, et inoculons-lui du vibrion dans l'intestin au niveau du canal de Wirsung : résultat encore négatif. Foie. — Portons-nous maintenant vers le foie; la sécrétion biliaire chez le lapin est continue et très abondante, atteignant plus de 250 grammes en 24 heures (lapin moyen) : une fistule du cholédoque laisse s’écouler la bile goutte à goutte; d'autre part, on sait que la vésicule biliaire vidée de tout son contenu est à nouveau remplie en quelques minutes ({). La mort par rétention biliaire est très variable : le canal cholédoque étant lié seul ou avec son paquet vasculo-nerveux et au niveau de son point d’abouchement dans le duodénum (1 à 2 centimètres au-dessous du pylore), la survie est de 2 à 12 jours, chiffres extrêmes, sénéralement 5 à 6 jours. L'animal meurt avec tous les signes d'ictère grave (reins de couleur iodoforme, teinte ictérique de toutes les muqueuses, amaigrissement considérable, etc.). La teinte subictérique des conjonctives apparaît dès le lendemain de l'opération. Injections chez les lapins dont le cholédoque est lié (y compris (4) H. Viozr, De la vésicule biliaire comme lieu d'inoculation. Thèse de Doctorat ès sciences, 1912. ESSAIS SUR LA PATHOGÉNIE DU CHOLÉRA 763 STE CRAN RER Ra re M LAN | Re ri | | | l 4 0 D PM db 7 Te M nn | ce : b F16. 1. — Intestin grêle de lapin (portion initiale). 1, Pylore. 2, Pancréas. 3, Canal cholédoque. 4%, Canal pancréatique. 5, Injection intestinale haute ou sus-pancréatique. 6, Injection intestinale basse ou sous-pancréatique. 7, Ligature du canal cholédoque, 8, Ligature du canal pancréatique. 764 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ou non les vaisseaux) du vibrion cholérique dans l'intestin à quelques centimètres au-dessous du pylore : l'animal n’éprouve aucun trouble. Répétons la même expérience mais en faisant l'injection de vibrions plus bas, à 1 ou 2 centimètres au-dessous du canal de Wirsung : l'animal meurt rapidement d’une attaque typique de choléra. Sur neuf cas, huit positifs. L'animal opéré l’après- midi est trouvé mort et froid le lendemain matin, ayant succombé dans certains cas en l’espace de quelques heures. A l’autopsie, l'intestin grêle se montre plus ou moins conges- tionné, allant d’une coloration rosée à une coloration lie de vin ou rouge écarlate; cette teinte intéresse toute la longueur de l’in- testin grêle, y compris le cæcum, qui présente généralement un fin piqueté hémorragique; elle est souvent un peu plus prononcée dans le voisinage du pylore et de l’orifice de sortie du canal de Wirsung. À l'intérieur de l'intestin, on trouve sur tout le trajet un liquide très abondant, blanc ou blanc jaune sale, légère- ment visqueux et ressemblant à de l’eau albumineuse ou de l’eau de riz, ne présentant pas d’odeur ou une odeur légèrement fade. Examinée à l’état frais, une goutte de ce liquide fourmille de vibrions; par place on ne voit que des formes vibrionniennes. Ensemencée dans un ballon d’eau peptonée ou de bouillon de panse de porc, une goutte du contenu intestinal donne, après quelques heures, une culture pure de vibrions ayant tous les ca- ractères du vibrion d'inoculation. Examinésur les frottis faits avec une parcelle de mucus, le vibrion montre des aspects différents : tantôt la forme en virgule typique, tantôt des formes allongées, tantôt, et c'est l’aspect Le plus souvent rencontré dans l'intestin grêle, des formes spiralées de deux, trois, quatre et cinq élé- ments vibrioniens avec prédominance des formes à deux spirales (V. fig. 2). Les grains riziformes contiennent, outre les vibrions caractéristiques, des cellules endothéliales de desqua- mation, des leucocytes et du mucus qui agglomère les divers vibrions. Il résulte de ces faits que le vibrion injecté a déterminé l'attaque de choléra et par suite, que non seulement il n’a pas été détruit dans l'intestin, non seulement il a conservé sa vita- lité, mais il s’est trouvé dans des circonstances telles qu'il s'est développé avec une rapidité extrême, provoquant en l’espace ESSAIS SUR LA PATHOGÉNIE DU CHOLÉRA 765 de quelques heures une entérite très prononcée. Le vibrion a remonté l'intestin grêle, pullulant en un temps très court mieux qu'en n'importe quel autre milieu artificiel, ne tenant compte dans ce développement que rien ne paraît pouvoir entraver, ni de l’alimentation de l'animal, ni de l’état de son intestin, ni du régime, ni de la température. Ici nous avons seulement modifié — F16. 2. — Frottis de conténu intestinal de lapin mort de choléra. 1, Cellules endothéliales. 2, Bactéries diverses. 3, Vibrions cholériques. un facteur par la suspension de la sécrétion biliaire, et nous avons choisi Le lieu d'inoculation après le canal de Wirsung. La quantité de vibrions injectés dans ces expériences est faible : nous avons généralement employé 1 cent. cube (bouillon de vibrions cholériques de 18 heures à 37 degrés) (1) par kilo- gramme d'animal. Nous avons employé aussi 3 cent. cubes, 2 cent. cubes, 1/2 cent. cube, 1/4 de cent. cube par kilogramme, (1) Vibrion cholérique de l'épidémie de Marseille, 1911. 766 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et nous avons obtenu dans tous ces différents cas des résultats posilifs. Le jour suivant l’inoculation, le vibrion avait transformé tout le contenu intestinal représentant plus de 20 cent. cubes en une bouillie blanchâtre remplie des produits de sa pullulation. L'examen des autres organes ne présente point grand intérêt. La vessie est vide, la cavité péritonéale renferme généralement un peu de liquide, résultat de la réaction opératoire; le cœur et les poumons sont normaux ; les reins et la rate ne présentent aucune allération sensible; le foie est un peu congestionné, mais la vésicule biliaire est de volume normal indiquant par ce fait que malgré la ligature du canal cholédoque, la bile ne s'est pas accumulée : la sécrétion a été vraisemblablement vite tarie sous le développement intensif du vibrion et la résorp- tion consécutive et rapide de la toxine, dont un des princi- paux effets est de provoquer l'acholie (selles généralement décolorées). Le mode opératoire : ligature du cholédoque et inoculation intestinale basse présente évidemment quelques difficultés. Pour ce qui est de l’inoculation intestinale, il est évident que la méthode pratique serait de faire ingérer le vibrion per os; mais avec le lapin comme animal d'expérience, nous avons vu que le problème était théoriquement irréalisable, puisque le choléra ne peut se développer dans l'intestin qu'au-dessous du canal de Wirsung. Nous avons cherché à user d'artifices tels que le vibrion soit déposé en ce lieu récepteur, et saute toute la zone négative, soit par des ingestions en quantité massives de vibrions permettant à quelques-uns d'entre eux de gagner la zone posilive, soit par leur introduction dans des capsules de gluten et leur libération par le suc pancréatique; mais ces deux procédés sont incertains. Il nous semble préférable de renoncer au lapin comme animal d'expérience courante, par les raisons mêmes qui le rendent très intéressant pour déterminer les grandes lignes de la pathogénie de la maladie asiatique. En ce qui concerne la ligature du cholédoque, il y aurait évidemment tout intérêt pour simplifier l'opération, à injecter sous la peau ou dans les veines, une substance qui arrêtât pendant quelques heures la sécrétion biliaire. ESSAIS SUR LA PATHOGÉNIE DU CHOLÉRA 167 Mais le physiologiste n’a à sa disposition aucun corps capable d'arrêter électivement, longuement et avec inocuité la sécrétion biliaire. Il semble que le foie qui joue un rôle défensif si pro- noncé dans l'organisme soit précisément en dehors de l'atteinte des corps qu'il a charge d'éliminer. S'il vient à faillir à cette fonction, l'organisme succombe. Et de fait dans le département des toxines, nous trouvons une substance ayant un pouvoir électif sur la suppression de la sécrétion biliaire : c'est préei- sément la toxine cholérique. Injectons dans les veines d’un lapin, de la toxine cholérique (1) mais à une dose bien inférieure à la dose mortelle; inoculons ensuite du vibrion dans l'intestin au lieu d'élection, c'est-à- dire après le canal de Wirsung : l'animal meurt d'attaque cholériforme typique analogue à celle provoquée par la ligature du cholédoque. Nous nous trouvons donc en face de ce fait un peu paradoxal d'une affection dont l’évolution est provoquée par elle-même. il en est du choléra comme de la fièvre qui crée la fièvre, ou de la bile qui fait sécréter la bile. On peut entrevoir ainsi le cycle vibrionien dans l'intestin : des vibrions ont été ingérés par l'organisme et ont gagné la portion subpancréatique de l'intestin grèle; grâce au ralentis- sement ou à l'arrêt même momentané de la sécrétion biliaire, le vibrion se développe activement ; il élabore de la toxine qui résorbée par la circulation arrive au contact du tissu hépatique et là, suspend la sécrétion biliaire. Le vibrion peut alors se développer en toute sécurité, descendant l'intestin grèle favo- rable à son développement et maintenant amorcé, le remontant d'autre part jusqu'au pylore, n'y trouvant plus d’obstacle. Ceci explique le développement intense et rapide du vibrion dans l'intestin, maintenu continuellement à l'écart lant que dure la persistance d'une bonne sécrétion biliaire, et détermi- nant le choléra foudroyant, tant sont favorables les conditions dans le milieu chaud, humide, alcalin et peptonisé de l'intestin, lorsque la sécrétion hépatique vient à ètre modiliée. Ceci tend à montrer la différence des phénomènes ?n vivo et in vulro. (1) Cf. SaALIMBENI, Annales de l'Institut Pasteur, 1908. 768 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR La bile #2 vitro est pour le vibrion cholérique un bon milieu de culture, quoique à l’état pur il soit manifestement inférieur à ceux que l’on emploie dans les laboratoires (eau peptonée, milieu de panse, etc.). Le suc pancréatique pur alcalin 2n vitro permet également le développement des vibrions cholériques. Nous ignorons l’action de ces sucs sur le vibrion, nr vivo, leur action complète sur les terminaisons nerveuses, sur les cellules et les glandes de la muqueuse intestinale, sur les vais- seaux qui entourent la muqueuse, sur le contenu intestinal, aliments, autres diastases et flore microbienne. On a seulement déterminé le rèle des diastases vis-à-vis du vibrion en se basant sur leur caractère de réaction acide ou alcaline. Mais nos résultats expérimentaux restent : chez l'être vivant, la suppression d'une des diastases, la bile, la conservation de l’autre, le suc pancréatique agissent favorablement sur le déve- loppement du vibrion. Dans l'intestin grèle, là où l’action biliaire est épuisée ou neutralisée, là où l’action pancréatique est à son optimum, en ce point d'élection est le berceau du choléra. Chez le chien et le singe dont les voies biliaires et pancréa- tiques affectent une disposition très analogue à celle de l’homme, on déterminera l'attaque chclérique par la ligature du cholédoque et l'injection des vibrions un peu bas dans le duodénum. Il s'ensuit que la réceptivilé d'un organisme au choléra sera la conséquente, non pas de la composition humorale ou tissu- laire de cet organisme, mais plus volontiers de la disposition anatomique de ses glandes digestives et de leur particularité de sécrétion. Nous disons « réceptivité » et non « sensibilité », car d'après les expériences précédentes il paraît évident que tous les sujets et tous les animaux de laboratoire sont également sensibles. La «réceptivité » c’est-à-dire l’imperfection des barrières naturelles qu'offre l'organisme, conséquence des dispositions anatomiques ou de formations physiologiques différentes varient seules : nous avons donné à un jeune fox-terrier de 3 kilogrammes et par ingestion, jusqu'à un litre de bouillon de vibrions cholériques en l'espace de 48 heures : il n'en éprouva aueun malaise; le ESSAIS SUR LA PATHOGÉNIE DU CHOLÉRA 169 même bouillon inoculé à la dose de 1 cent. cube dans le duodé- num, après ligature du cholédoque, tue l'animal. Il est plausible d'admettre d’après cela que l'animal qui pré- sentera cette double caractéristique : 1° d'avoir les canaux sécréteurs de la bile et du suc pancréatique très haut dans le tube digestif; 2 d’avoir une sécrétion biliaire discontinue, se présentera dans les conditions les plus favorables pour permettre la culture des vibrions cholériques. De telles conditions se trouvent réalisées chez l’homme dont l'organisme est, on le sait, de beaucoup le plus réceptif aux vibrions cholériques. En effet, la sécrétion biliaire chez l'homme est rémittente, avec exagération au moment de la digestion. Mais la bile qui est sécrétée en dehors de la digestion s’accumule dans la vési- cule, d’où elle est excrétée lorsque le contenu acide de l’esto- mac vient toucher l’orifice du canal cholédoque, tandis que l’'attouchement avec un liquide alcalin est presque sans effet. Il yaura donc deux périodes dans l'organisme : l’une de sécré- tion abondante, l’autre de repos, périodes ayant leur retentisse- ment sur le développement du vibrion. Il en résulte que tout ce qui provoque un trouble intesti- nal (1) avec retentissement hépatique, tout ce qui surchargera le foie, entravant son bon fonctionnement ou neutralisant sa bile, facilitera la culture du vibrion de Koch et par suite favo- risera l’éclosion du choléra. Les nombreuses expériences que nous avons faites sur les lapins, sur les chiens et précédemment sur les singes, les cons- tatations faites chez l’homme conduisent également à cette conclusion : Le vibrion cholérique ne se développe primitivement que dans une zone déterminée de l'intestin que nous avons appelée «zone sensible ». Il ne se développe que si cette zone est indemne de tout suc biliaire. Une des défenses naturelles de l'organisme humain contre le choléra résidera donc dans le jeu intégral des sécrétions du foie. (4) H. Porrevix et H. Viozze, Choléra expérimental chez le Singe. Comptes rendus de l'Académie des Sciences, 1913. ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR D AUBAIA — ‘&ÿI049 07 onb one uonsope oun,p JON + ‘E191040 op Jo ue Po UNSAPANO DE ON D IAB UN OMAOUR UT EE OT TIT DIET A PI ON OS UEDIN CL} — —|'SUNSIMNA 9P ‘UB9 NP [PAB U9 JU99 8 R F|'SOUIDA SO SUBP 2U194199S 9p ‘Jaoluple * + + + + + + + + + + op +|"SUNSITA\ 9p [UB9 NP [BAB U9 JU998 Rp © : + *|‘souroAso[suep xojopuonoofu] ‘ef = |SUNSITAN 9D 'UB9 NP BAR U9 U99 88 FI © > NN Ne * *lonbOP9I0U9 ‘P ‘X01 9p ‘J00[UT 77 + +|'SUNSIIN 9p ‘U9 NP [EAB U9 ‘Ju99 38 pl * * * * * * * * * * + * *|-souro4 99 Jogo suep ‘xoJ op ‘[u] ‘£ç + +/SUNSIAX 9p ‘U69 np [UAB U9 ‘Ju99 ze j|° * ‘SUNSIMA 9p jfeueo np oinjeSrqlonbopy[ouo jeuvto np a1nje8rT ‘zj + +['SUNSIA 9p ‘89 Np [EAU U9 jU99 8 & [|° * * © * Seaioued np uoronaso({" * * onbopy|oyo np oanpesrT :j} Ne lee ee Do els ee ++ segJoued AP'UONONNSTQ MUR ER ECS ‘OI — —|'SunSITM 9p J6UB9.np jeAB u9 ‘ju99 pal: ‘ © : “sV9IOUET np UOHINI89{" 0 * * +: à + nn. à ——+|'SUnSiTN Op 069 9119 "P9I0U9 pr 9quA|" 2 + S9IOUET np UOHINIS0| 0 Haye *SUNSII M 0p [euro a] soude JOUR AN CP ES CES RS CCR ON ee NU dE *SUNSIM op [euro PU LA QI ME SO OR SCRE SCT QT OR SEAT SCO FPE SCALE SOPERCTs ES pee 1 -Sunsir A ODATEULO MDP AGO UDC | NI MS TONER POSE RES SE NN ee Les RUES Suns DD JéUBOND NEO NV EE NS UNSS PR Cr + + + + + + an 01 se lee tie). o1-v 7 CCE OS ESC OC TENC mt o| OO EST PCT Ou TT DC TONTT SO OR . . . ‘onboparouo euro np a4nJSl"T cr + + + + + +l'onboporouyo reuvo or saade u09 & CRT EE OM DOP AO EU PO MP 91N POIL € = "Suns À — HALLE 4 LOLITA 9p [eu89 np JeAB uo ‘quoo ze Il: * * ‘|-anbop9jouyo jeueo np o1n3e817 ‘F SLVL'INSAU 4NÜIHAIOHD NOIHYIA NG NOILOHPNI Œ AAIT SVAUONVd AT UNS NOILOV SAHIVI'II4 S4IOA SAT UNS NOILIV ‘uider 27 zouyo enbris[ouyo uoriqraA np uorjepnoour p soouerodxe sep ewuns9oy RECHERCHES COMPLÉMENTAIRES SUR LA CONTAGION TUBERCULEUSE AUPRÈS DU MALADE, ET EN DEHORS DE L'HABITATION par P. CHAUSSÉ. (TROISIÈME MÉMOIRE) Les diverses méthodes d'investigation que nous avons em- ployées jusqu'ici nous conduisent à admettre que la contagion tuberculeuse s'effectue exclusivement, ou presque exclusive- ment, par les particules sèches; voici, du reste, en quelques mots, quelles ont été nos principales constatations : 1° La vilalité du bacille tuberculeux est suffisante, dans les conditions de l'appartement, pour permettre la transmission de la tuberculose par les crachats desséchés (1); 2° Le brossage d’habits souillés nous a permis de communi- quer la maladie au cobaye, avec la plus grande facilité (2); 3° La simple agitation de linges bacillaires mobilise égale- ment une quantité importante de particules sèches respirables et virulentes (3); 4° La salive et les crachats tuberculeux sont très difficilement pulvérisables par les courants aériens (Conclusion de notre premier mémoire, ces Annales, 25 juin 191%); 5° Le tuberculeux ne projette que très exceptionnellement des particules liquides d'origine buccale, relativement volumi- ueuses, qui tombent à une faible distance et ne sont pas respi- rables (Conclusion de notre second mémoire ; 25 juillet, 1914); 6° L'inhalation directe, par le cobaye, de l'air expiré par le tuberculeux au moment de la {oux, ne communique pas la tuberculose (Conclusion de notre second mémoire). (1) Revue de la tuberculose, 5 octobre 1918. 2) Bull. Acad. de médecine, 13 mai 1913, et Revue d'hygiène, 20 mai 1913. (3) Bull. Acad. de médecine, 22 juillet 1913, et Revue d'hggiène, 20 octobre 1913. RP ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Toutes nos recherches tendent donc à réfuter la thèse de la contagion par les gouttelettes, tandis que simultanément elles confirment la conception de la transmission par les pous- sières. Pour terminer notre travail d'ensemble relatif à la contagion tuberculeuse, il nous reste à publier quelques expériences faites auprès du malade. Diverses questions restent encore en sus- pens : 1° quelle est l'importance du danger? Nous l’apprécierons par le résultat d'épreuves de cohabitation de cobayes avec des phtisiques atteints de tuberculose dite ouverte; 2° quelle est l'origine principale de ce danger? Nous essaierons de nous en rendre compte par plusieurs méthodes. ÉPREUVES DE COHABITATION DE COBAYES AVEC LES MALADES Notre très honoré maître, M. le professeur Letulle, chef de service à l'hôpital Boucicaut, a bien voulu nous permettre de poursuivre cette partie de nos recherches dans les salles de tuberculeux confiés à ses soins; ces recherches n'auraient pu être exécutées en l’absence des encouragements de ce maître si dévoué au progrès scientifique ; nous lui exprimons notre bien vive reconnaissance pour la bonté inoubliable dont il a fait preuve à notre égard. Conditions hygiéniques des salles de tuberculeux à l'hôpital Boucicaut. — L'hôpital Boucicaut est, comme on le sait, de construction moderne. Le pavillon des tuberculeux est séparé en deux moitiés, l’une pour chaque sexe: et chacune de ces parties comprend elle-même une salle commune de 30 à 40 lits, et plusieurs petites salles d'isolement de 4 ou 2 lits. Les conditions hygiéniques sont les mêmes dans la salle commune et dans les petites salles : éclairage parfait, aération abondante; le sol, carrelé au grès cérame, est lavé tous les matins: la literie, d'un modèle unique et très simple, est d'un nettoyage facile. La salle commune des hommes est d'une capacité de 1.104 mètres cubes ; elle contient généralement 32 malades, ce qui représente un volume d'air de 34 mètres cubes par malade ; mais, en réalité, la quantité d’air de chacun est bien CONTAGION TUBERCULEUSE 113 supérieure à ce chiffre parce que, sur l'un des côtés de la pièce, les fenêtres sont continuellement ouvertes. Il y a deux rangées de lits, deux latérales et deux centrales, dans le sens de la longueur (voir photographie et figure sché- matique). En dehors de l'usage du erachoir il n’est pas pris de précau- tions spéciales à l'égard des expectorations. Le récipient qui reçoit ces produits contient une certaine quantité d'acide phénique; il est changé aussi souvent que cela est nécessaire, mais au moins tous les matins. Les malades possèdent un mouchoir qu'ils utilisent pour s’essuyer les lèvres et qu'ils déposent sous l’oreiller ou le tra- versin ; ce mouchoir leur appartient souvent en propre; ils le lavent eux-mêmes ou le donnent à laver dans leur famille. Nous démontrerons plus loin qu'il y a là une cause importante de dis- sémination de poussières virulentes sèches, bien que cette dissé- mination aitété niée par Sticher, puis Beninde, élèves de Flügge. Ajoutons à cela que, forcément, pendant la toux, il y a projec- tion de quelques grosses gouttelettes sur le linge du malade ou sur lé lit: Néanmoins, les soins quotidiens de propreté dont les salles sont l'objet, le changement assez fréquent du linge (toutes les semaines), la récolte et la destruction des expectorations, la perte de la virulence des crachats en 10 à 20 jours lorsqu'ils sont desséchés, nous paraissaient devoir éliminer presque entiè- rement le danger de transmission par les poussières. Exe. I (salle commune). — Nous nous sommes d'abord rendu compte de l’état bacillaire général en examinant les crachats de tous les malades ; voici quelques-unes des teneurs de ces crachats en bacilles, rapportées au milli- gramme de produit humide : 1.000 ! 26.000 47.000 98.000 8.000 ‘ 32.000 52.000 104.000 10.000 33.000 65.000 110.000 12.000 35.000 S0.000 125.000 14.000 42.000 90.000 135.000 16.000 45.060 95.000 160.000 Les malades étaient placés dans la salle, sans affectation particulière pour les plus riches ou les moins riches en bacilles. Au cours de l'expérience plu- sieurs malades sont décédés; d’autres ont été admis, et l'état bacillaire général n'a pas varié d'une manière appréciable. Notre expérience a consisté à laisser séjourner pendant 34 jours, dans cette salle, de façon permanente, une cage contenant 13 cobayes. Cette cage était 114 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR déposée au milieu de la pièce, sur une table haute de 1 mètre. À côté de la table portant les cobayes, était un malade dont les mucosités étaient des plus riches en bacilles (125.000), et qui toussait énormément. Pendant loute la durée de leur séjour, commencé le 44 juillet 1912 et terminé le 14 août suivant, les animaux sont restés en bonne santé apparente. Après la fin de l'expérience, ils ont été conservés un certain temps afin que les tubercules ayant pu être contractés pendant les derniers jours de la: F16. 1. — La salle commune des tuberculeux hommes à l'hôpital Boucicaut ; au centre, une croix blanche indique la table sur laquelle ont séjourné les cobayes. CONTAGION TUBERCULEUSE 175 cohabitation aient le temps de se développer. Il faut environ 18 jours pour que des tubercules d'inhalation commencent à être visibles à l'œil nu; pour plus de certitude, à part trois sujets qui sont morts d'affection intercurrente, les autres ont été sacrifiés 35 jours après leur sortie de l'hôpital. Les trois premiers sujets sont morts les 18 et 19 août, soit 38 et 39 jours après le début de l'expérience; ils étaient sains en apparence; leurs poumons ont été prélevés aseptiquement, broyés et inoculés sous la peau de deux cobayes neufs pour chacun; ces derniers animaux sont restés sains. Les 10 autres cobayes ont été sacrifiés le 18 septembre, c'est-à-dire 69 ou 35 jours après le début ou la fin de l'expérience ; ils étaient tous parfaitement sains et en bon état général. Après ce délai de 35 jours, l’inoculation du poumon était inutile, puisque tout bacille isolé et virulent, arrivé dans le poumon, aurait déjà produit un tubercule caséeux avec adénopathie, correspondante et que, de plus, la généralisation aurait été apparente. Le résultat de celle première expérience est donc entièrement négatif. Exr. II (salle de deux lits), — Nous avons fait, parallèlement à la précédente, une autre expérience qui fut commencée le même jour, et terminée de même, dans une salle de deux lits. Dans cette chambre d'une capacité de 60 mètres cubes, étaient deux malades. L'un de ces malades, présentant environ 120.000 bacilles par milligramme de crachats, res- tait continuellement alité; l’autre, ayant 50.000 bacilles par milligramme, se levait une partie du jour. En présence de ces deux malades, nous avons placé deux cages contenant chacune T cobayes: chaque cage était posée sur une table de 80 centimètres de hauteur, près du lit, et à une distance de 80 centimètres ou de 1 mètre de la bou- che du malade, selon la position prise par celui-ci (voir figure 3). En ee ES HAE ES a a HO CROP PEAU led re Radeartes AUTANT LAN ) au) Fie. 2. — Plan schématique de la salle commune des tuber- culeux hommes, à l'hôpital Boucicaut. Chaque rectangle représente un lit. — C, la cage à cobayes placée au centre de ja salle, sur une table, entre deux lits; P, porte d'entrée dans la salle. Dans cette pièce, la baie était toujours ouverte ou entr'ouverte ; de plus, la porte donnant dans le couloir était fréquemment ouverte jour et nuit, ce qui assurait une ventilation importante. Vers le milieu de l'expérience, le 27 juillet, le malade le plus riche en bacilles, occupant le lit n° 23, mourut d'hémoptysie. Nous fimes venir alors dans la chambre deux autres malades possédant respectivement 75.000 et 51 116 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 135.000 bacilles par milligramme de mucosités et qui restaient constamment alités. L'expérience se poursuivit dans les mêmes conditions que précédem- ment, cette fois jusqu'à la fin, c'est-à-dire jusqu'au 14 août inclusivement. Ces deux derniers malades sont décédés peu de temps après, l’un le 30 août, l'autre le 6 septembre. Deux cobayes ont péri les 2 et 4 septembre, c'est-à-dire 19 et 21 jours après la fin de l'expérience; ils étaient en apparence indemnes de tuberculose ; leurs poumons furent inoculés à quatre cobayes, avec résultat négatif. Les 12 cobayes restants furent sacrifiés le 18 septembre, soit 69 et 35 jours après le début ou la fin de l'expérience. Sur ce nombre, 11 étaient parfaite- Baie L'ILUNSU2S Fi6. 3. — Plan schématique d'une petite chambre de deux lits à l'hôpital Boucicaut. On voit les deux cages, contenant chacune 7 cobayes, placées à 80 cent. cubes ou 1 mètre de la tète du malade, chacune sur une table. (Exp. II. — Echelle : environ 1/50.) ment sains; un seul présentait un {ubercule pulmonaire caséeux avec adéno- palhie correspondante très marquée et des lésions de généralisation récente : les ganglions cervicaux et mésentériques de cet animal étaient normaux. IE s'agissait donc d'une tuberculose d’inhalation pure, remontant à 40 jours envi- ron, c'est-à-dire que cet animal avait été infecté quelques Jours avant la fin de la cohabitation. Expr. IIT (chambre de deux lits). — Cette expérience a été faite pendant l'hiver 1912-1913, dans une chambre contenant deux malades à la troisième période, avec expectorations riches en bacilles : 1° Cr..…., trente-quatre ans, atteint de laryngite tuberculeuse depuis 2 mois et demi; 71.000 bacilles par milligramme de crachats; 2° Hag..., vingt ans, également atteint de laryn- gite; 63.500 bacilles par milligramme de crachats. Tous les deux expectorent abondamment. CONTAGION TUBERCULEUSE 711 Deux cages contenant chacune 8 cobayes sont posées sur le sol carrelé, entre les deux lits, à 2 mètres ou 2250 de la tête des malades (voir figure 4 ci-dessous). L'expérience, commencée le 5:décembre 1912, à 10 heures du matin, est terminée le 4 janvier 1913, à la même heure, soit exactement 30 jours après. Le séjour des cobayes dans la chambre est continu. Fenêtre Cages avec cobayes Porte F16. 4. — Plan schématique d’une chambre de deux lits, de 41 mètres cubes, utilisée dans les expériences III, IV et V. (Echelle : 1/25 environ.) Il convient de noter que, pendant la saison d'hiver, la porte de la chambre est fermée; la fenêtre, ouverte le jour, est presque entièrement fermée la nuit. La ventilation est donc beaucoup moins abondante que pendant l'été ; il en résulte que les conditions sont certainement plus favorables à la contagion. Deux cobayes périssent les 3 et T février suivants; is sont tuberculeux avec chacun un nodule primitif caséeux, de fortes adénopathies et des lésions 118 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de généralisation. L'infection remonte environ à 45 jours pour l’un et à 50 ou 60 jours pour l'autre. Les 14 autres cobayes sont sacrifiés le 8 février, soit 65 ou 35 jours après le début ou la fin de l'expérience ; sur ce nombre 8 sont tuberculeux avec des lésions de type respiratoire, comme les précédents, et remontant à 35-50 jours environ. En résumé, sur 16 cobayes ayant cohabité avec les deux malades, il y a 16 Ltuberculeux. Pour l'un de ces animaux il y a doute quant au mode d'infection, bien qu'il s'agisse vraisemblablement de tuberculose d'inhala- tion; mais, pour 9, nous sommes en présence de {uberculose d'inhalation pure. Exr. IV (chambre de deux lits). — Cette expérience est exécutée en même temps que la précédente, dans une chambre contiguë semblable, les autres conditions étant les mêmes. Les deux malades occupant cette chambre étaient à la même période de la maladie que les précédents : 1° Leg.…., vingt-cinq ans, laryngite tuberculeuse, 35.000 bacilles par milligramme de crachats; 20 Sig... trente-cinq ans, laryngite tuberculeuse, 62.000 bacilles par milligramme de crachats. Un cobaye périt le 27° jour : il est sain. Les 13 autres, retirés le 4 janvier de l'hôpital, sont sacrifiés le 8 février suivant, c'est-à-dire, comme précé- demment, 65 ou 35 jours après le début ou la fin de la cohabitation. Sur ce nombre, 4 sont tuberculeux avec des lésions de type respiratoire remontant à 35, 40, 45 et 60 jours environ. Les deux malades dont il s’agit sont décédés quelques semaines après : ils présentaient à l'autopsie des lésions thoraciques prononcées et des ulcères laryngiens. c Exr. V (chambre de deux lits). — Exécutée dans les deux chambres précé- dentes que les malades occupaient alternativement, pour une raison qui sera indiquée plus loin, celte expérience a eu lieu du 26 février au 5 avril 1913; les conditions d'aération et autres sont les mêmes que précé- demment. Les malades ayant séjourné dans la chambre avec les cobayes sont : 10 Cr.…., du 26 février au 4 mars ; 71.000 bacilles par milligramme de crachats ; c'est l'un des malades de l'expérience précédente; 20 Leg... du 26 février au 3 avril; 35.000 bacilles par milligramme ; a éga- lement servi pour l'expérience AVE 30 Dum.…, du 6 mars au à avril, en remplacement de Cr..; ce malade a environ 50.000 bacilles par milligramme et il est atteint de tuberculose du larynx. i9 cobayes ont cohabité avec ces malades du 26 février au 5 avril, soit pendant 38 jours consécutifs. L'un des cobayes périt le 7 avril, soit 41-2 jours après le début ou la fin de l'expérience; it n’est pas tuherculeux. Un second cobaye périt le 18 avril(52-13 jours); i/ a 2 tubercules pulmonaires primilifs et l'infection date de 45 à 50 jours. Un troisième cobaye est sacrifié le 26 avril (60-21 jours); i/ a un tubereule pulmonaire primitif et l'infection remonte à 45 jours environ. Les 16 autres cobayes sont sacrifiés le 8 mai, soit 72 ou 33 jours après le début ou la fin de l'expérience; 13 sont luberculeux avec 1 à 3 tubercules pul- monaires primilifs; lous ont des lésions d'inhalation pure; les ganglions pha- CONTAGION TUBERCULEUSE 19 ryngiens et intestinaux sont indemnes: l'ancienneté de l'infection correspond bien à leur séjour à l'hôpital. Au total, sur 19 cobayes il y a 15 luberculeux infectés par inhalation. En résumé, les expériences de cohabitation avec le malade nous ont donné : EXD MSUuntNCcObAYES EXPOSÉS... 0. O:tuberculeux Exp. II, sur 14 cobayes exposés. . - . . . 1 tuberculeux. Exp. III, sur 16 cobayes exposés. . . . . . 10 tuberculeux. Exp. IV, sur 14 cobayes exposés. . . . . . 4 tuberculeux. Exp: V, sur 19 cobaycs exposés. . . : . . 15 tuberculeux. DORE, 0-0 00716 30 Les expériences I et Il semblent avoir été moins inquié- tantes, dans leurs résultats, pour l'unique raison qu'elles ont eu lieu en été, saison pendant laquelle l’aération est plus grande, le virus suspendu en l'air est dilué, chassé en grande partie à l'extérieur, et conséquemment le danger de trans- mission par inhalation est considérablement diminué; nous dirons même que ce danger n'est pas alors ce qu'il est réelle- ment au domicile du tuberculeux où l’aération est en général beaucoup moindre. Ce sont donc vraiment les trois dernières expériences qui nous renseignent le plus exactement sur Îles chances d'infection qui se rencontrent communément dans la cohabitation avec le malade. Quoi qu'il en soit, en totalisant nos résultats, nous trouvons que 30 cobayes sur 76, soit 39,47 p. 100, ont été infectés après environ un mois de cohabitation! Nous devons considérer enfin que l'homme inhale, dans les mêmes conditions, 106 fois plus d’air et de bacilles que nos animaux d'expérience; d’où il résulte qu'un être humain ne peut cohabiter avec un phtisique ainsi entretenu, sans réaliser environ un tubercule pulmonaire chaque jour! \ est bien entendu que l’évolution de cette iésion théorique est subordonnée à d’autres conditions. Nous n'avons pas moins là l'explication de la proportion considérable des tuberculoses latentes, et aussi celle des tuberculoses elinique- ment caractérisées et mortelles. Ces épreuves de cohabitation ont un autre intérêt au point de vue pathogénique : depuis plusieurs années, nous défendons cette thèse que la phtisie humaine « se respire », tout comme 780 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR la maladie bovine, et même davantage, et qu’elle « s’avale » exceptionnellement. Nous venons d’en avoir une nouvelle démonstration : sur 30 cobayes infectés, à part un dont les lésions étaient douteuses, mais vraisemblablement d’origine respiratoire, 29 présentaient incontestablement de la /uber- culose d'inhalation pure, telle que nous la réalisons expérimenta- lement à volonté, avec des doses infimes de virus naturel. Il n'est pas nécessaire d'insister davantage sur l’interpréta- tion qui doit être faite de ces épreuves de cohabitation. VIRULENCE DES POUSSIÈRES DES CHAMBRES RECHERCHÉE PAR INOCULATION Ayant constaté l'infection des cobayes par cohabitation avec nos malades, il était indiqué de se rendre compte si les pous- sières, recueillies en divers points des salles de tuberculeux, étaient virulentes. Sachant aussi que la virulence par inocula- tion sous-cutanée est la plus facile à mettre en évidence, nous avons voulu d’abord faire une série d'épreuves par ce moyen. Pour récolter les poussières nous avons employé des boîtes de Petri stériles; nous déposions dans ces boîtes environ 20 cent. cubes d’eau bouillie destinée à fixer les poussières et à empêcher l'alténuation du bacille de se continuer après son dépôt; nous savons, en effet, par nos recherches sur la vitalité, que la destruction du virus est assez rapide, et que celte destruction est surtout l’œuvre de la déshydratation. Toutes nos récoltes de poussières ont été faites dans une des chambres de deux lits, occupée par deux phtisiques à la période cavitaire; en réalité, au cours de ces recherches, trois malades ont habité dans la pièce, car, l’un des premiers (Dum...) étant décédé, nous le fimes remplacer par un autre dans le même état clinique. Les récipients destinés à recevoir les poussières ont été placés en trois points différents :’1° sur la table, entre les deux lits, dans un cristallisoir découvert, pour éviter des contacts manuels directs; 2° sous les lits, également dans un cristalli- soir; 3° sur le mur, près de la tête des malades, mais à 80 centimètres au-dessus (voir figure 5 ci-contre), la boîte CONTAGION TUBERCULEUSE 781 de Petri étant déposée, en outre, dans une cuvette photogra- phique. F16, 5. — Dispositif employé pour recueillir les poussières dans une chambre de deux lits. Sur le mur est suspendue une cuvette contenant une boîte de Petri à moitié remplie d’eau stérilisée au préalable. 182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Pour les récipients placés sous les lits, et pour ceux fixés au-dessus de la tête des malades, la projection directe était évilée à coup sûr; mais, pour ceux ayant séjourné sur la table, cette projection restait possible. Les boîtes de Petri, devant récolter la poussière, sont restées généralement 4 jours dans la chambre; pendant tout ce temps, elles ont donc pu recevoir les particules mobilisées par les mouvements du malade, les courants d’air, la réfection des lits. Au bout de 24 heures, on constatait toujours, quel que fût l'endroit occupé par le récipient, que la surface du liquide se recouvrait de filaments blancs très fins provenant des linges, et vraisemblablement surtout des draps. Ces filaments étaient donc assez légers pour être portés très au-dessus des ma- lades, et, sans aucun doute, dans toutes les parties de l’appar- tement. Après les 4 jours de stationnement indiqué, dans le local, le liquide fut récolté avec les précautions d'asepsie nécessaires: il contenait à ce moment un grand nombre de filaments, si bien que, pour l’homogénéiser, nous dûmes le brasser dans un mortier stérile; la plus grande partie des filaments s’aggluti- naient alors, mais la libération des bacilles avait chance d’être plus complète. Pour chaque récipient, le liquide obtenu servit à l’inoculation de 3 cobayes. Dix-huit échantillons de poussières ont été ainsi recueillis, dont 4 sur la table, 4 sous les lits, et 10 au-dessus de la tête des malades. Sur ce nombre, 7 se sont montrés virulents; ces derniers comprenaient 2 échantillons pris sur la table, 2 sous les lits et 3 au-dessus de la tête des malades. La virulence des poussières a donc été reconnue dans 38, 88 p. 100 des cas; mais, pour chaque échantillon prélevé et virulent, la totalité des cobayes n’ont pas toujours été tuberculisés : sur 50 cobayes inoculés et survivants, 13 ou 26 p. 100 ont contracté la tuber- culose. Ces résultats confirment ceux de Cornet et de B. Heymann ; ils nous montrent, de plus, que l'usage du crachoir ne suffit pas pour empêcher la pollution totale d'une salle occupée par un tuberculeux cavitaire. CONTAGION TUBERCULEUSE 783 TABLEAU RÉCAPITULATIF CONCERNANT LES INOCULATIONS DES POUSSIÈRES 2 | ND ÿ NOMBRE DE COBAYES : ENDROITS D'ASTE Sie k NOMS = © & e où les poussières ESS AS re des malades. © 2.E | < ont été recueillies. PRE = = % tuberculeux. sains. 1 Sur la table. Dum. et And. D (l 2 2 Sur la table. Dum. et And. 3 1 2 3 Snr la table. And. et Bill. 3 D) 1 4 Sur la table. And. et Bill. 3 0 3 5 Sous les lits. Dunm. 2 1 1 6 Sous les lits. Dum. 3 (l 3 7l Sous les lits. And. 3 2 1 8 Sous les lits. And. 2 0 2 9 |Au-dessus des malades. Dum. 3 2 1 10 [Au-dessus des malades. Dum. 3 3 0 11 |Au-dessus des malades. And. 2 0 2 12 Au-dessus des malades. And. 3 0 3 13 [Au-dessus des malades. And. 3 2 1 14 lAu-dessus des malades. And. 3 (il 3 15 Au-dessus des malades. And. 3 0 4 16 [Au-dessus des malades. Bill. 3 | 0 3 17 [Au-dessus des malades. Bill. 3 0 3 18 [Au-dessus des malades. Bill. 3 0 | 3 50 13 | 37 | Are .. 7 échantillons virulents sur 18 ou 38 p. 100. DDC : ( 13 cobayes tuberculeux sur 50 ou 26 p. 100. La tuberculose communiquée par l’inoculation des poussières a été le plus souvent aussi wne tuberculose à évolution lente: mais, pour un échantillon au moins, lequel fut recueilli au-dessus d'un malade (Dum...), la maladie avait une évolution subaiguë avec caséification prononcée, dénotant une virulence moyenne des bacilles. Cet état d'atténuation des bacilles rencontrés dans les poussières, prouve également que ces agents avaient été desséchés un cerlain temps et qu'ils ne provenaient pas directement de l'organisme, comme s’il se fut agi de projec- tion liquide récente. Mentionnons enfin que la tuberculose des cobayes fut toujours en tous points caractéristique, et que l'on découvrit constam- ment des bacilles de Koch dans les lésions d’inoculation. Les malades, ayant occupé cette chambre, furent And.., (mort un mois après), Dum... (mort en cours d'expérience), 78% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Bill... (sorti de l'hôpital dans un état grave); les deux derniers se sont prôlés à des épreuves d'inhalation de l'air expiré au moment de la toux, mais le résultat de ces épreuves a été négatif. VIRULENCE DES POUSSIÈRES DES CHAMBRES RECHERCHÉE PAR INHALATION La cohabitation de cobayes avec les malades et l'inoculation des poussières recueillies dans les chambres nous ont démontré irréfutablement que l'air véhicule des bacilles; mais nous savons que la virulence par inoculation sous-cutanée n'est pas identique à la virulence par inbalation. C'est pourquoi nous nous sommes demandé s’il était possible de démontrer expérimentalement que l'infection des cobayes, dans les expériences de cohabitation, est due aux poussières des linges; dans l’affirmative, nous aurions une confirmation intéressante de toutes nos déductions précédentes. Envisageant cette possibilité, nous avons eu l'idée de réaliser l'expérience suivante : Disposant de deux chambres contiguës, de deux lits chacune, et de deux phtisiques richement bacillaires, nous avons fait changer ces derniers de chambre tous les soirs à 6 heures; il en résultait que, dans le jour, l’une des chambres était toujours libre. Nous avons exposé deux lots de cobayes à l'infection : 1° Un lot À, comprenant 19 cobayes, se trouvait avec les malades d’une manière permanente; il les suivait tous les soirs, au moment du changement de chambre; un lot B, compre- nant 18 cobayes, ne se trouvait jamais avec les malades, mais il était exposé à la cause d'infection résultant des poussières des chambres; pour cela nous le faisions apporter tous les matins à 7 heures dans la chambre libre depuis la veille, et, en présence de ce lot de cobayes, on procédait au nettoyage de la chambre et à la réfection des lits. Le soir, un peu avant le retour des malades, le lot B était remporté au laboratoire où il passait la nuit : le lendemain matin, ce lot B était rapporté dans la chambre occupée la veille, etc. (fig. 6). Uette expérience se confond en. partie avec l'expérience V de CONTAGION TUBERCULEUSE 785 cohabitation : cette dernière comprend en effet le lot À, et nous en avons indiqué le résultat. En opérant ainsi, nous n'avons pas manqué d'observer que le lot À était exposé toute la journée et toute la nuit à inhaler des particules sèches, car chaque mouvement de l'un ou l’autre des malades pouvait mobiliser des poussières venant des linges de corps ou des draps et couvertures. Pour le lot B, le danger existait à peu près exclusivement pendant le temps où l’on faisait la chambre et les quelques heures qui suivaient; encore & Fenêtre Porte Porte Fic. 6. — Plan schématique des deux chambres (de 41 mètres cubes), con- tiguës, disposées pour la recherche de la virulence des poussières par inhalation. (Echelle : 1/50.) ce danger diminuait-il rapidement dès que Îles soins habi- tuels du ménage avaient cessé de l’entretenir. Les chances d'infection étaient done beaucoup plus faibles pour le lot B que pour le lot À. Afin de compenser en partie cette inégalité, nous avons prolongé l'épreuve pour le lot B; tandis que pour le lot À, l'expérience a duré 38 jours, elle a continué pour Îe lot B, pendant 70 jours. L'expérience a été commencée le 26 février 1915. D'une manière constante, il y à eu deux malades dans l'une des chambres, mais deux de ces malades élant décédés, nous Îles avons remplacés par deux autres également bacillaires. Ces malades ont été : 1° Cr... du 26 février au 4 mars, 71.000 ba- 786 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR cilles par milligramme de crachats:; 2° Leg... du 26 février au 3 avril, 35.000 bacilles par milligramme; 3° Dum..…, du 6 mars au 7 mai, 50.000 bacilles par milligramme: 4° Dant..…, du 8 avril au 7 mai, 80.000 bacilles par milligramme. Tous ces malades avaient des lésions plus ou moins prononcées de laryngite bacillaire. L'expérience a été terminée le 5 avril pour le lot À, et le T mai pour le lot B. Nous avons vu que le lot A, sacrifié le 8 mai, a donné 15 tuberculeux sur 19 cobayes exposés. Le lot B, exposé seule- ment à l'inhalalion des poussières de la chambre pendant un temps plus court, à fourni 2 {uberculeux sur 18 cobayes; ces derniers ont élé sacrifiés 35 jours après la fin de l'expérience, c'est-à-dire le 11 juin. Ce dernier résultat est donc conforme aux précédents; la virulence des poussières, déjà établie par inoculation, est à nouveau démontrée par inhalation, sans qu'on puisse songer à une infection possible par les gouttelettes puisque les animaux de la série B ne sont venus dans les chambres que 14 heures après le départ des malades; or, nous avons constaté que les particules liquides mettent environ 7 heures à se déposer après leur pulvérisation dans l'atmosphère. ORIGINE DES POUSSIÈRES : DANGER DES MOUCHOIRS Be précédentes recherches nous ont permis de dire que la simple agitation de linges ayant reçu des mucosités de phti- siques suffit à mobiliser des particules respirables. Le linge qui nous semble immédiatement le plus dangereux est, par consé- quent, le mouchoir. Nous avons noté que les malades auprès desquels nous avons fait cohabiter des cobayes avaient tous un mouchoir à leur disposition et qu'ils le déposaient sous l'oreiller ou le traversin. Voyons donc jusqu'à quel point le mouchoir, conservé par le tuberculeux, peut communiquer la tubercu- lose par inhalation. Exp. I. — Pour cette expérience et la suivante nous avons remis à deux malades deux linges de coton blanc, en les priant de se servir de ces linges (1) Comptes rendus de l'Académie des Sciences, 24 février 1913. CONTAGION TUBERCULEUSE 781 comme de mouchoirs, pendant une période de 2 jours. Ce temps écoulé, nous avons retiré les deux linges et les avons conservés à la température de l'appartement et à la lumière diffuse pendant 24 ou 48 heures. Ces linges étaient plus ou moins souillés. Pendant le temps de conservation, il faut noter que les linges n'étaient pas dépliés et étendus, mais «pelotonnés », tels qu'ils se trouvent dans la poche; cette condition est défavorable à la dessiccation, surtout à la température ordinaire. Le premier linge, utilisé par le malade E. Rec... présentant 90.000 bacilles par milligramme de crachats purs, a été D HÉONE 24 heures dans notre bibliothèque; ce temps écoulé, il servit pour la présente expérience, qui fut faite le 29 septembre 1912, La caisse 126, à inhalation, étant disposée comme dans nos précédentes épreuves d’agitation de linges (1), nous y avons Ca&ilsse 126 1É 1 1 FiG. 7. — Coupe horizontale de la caisse 126, à inhalation, disposée pour l'épreuve de transmission par agitation de linges bacillaires. Règle mobile autour du point O, et portant le linge; B, B', B" : buttoirs R : ressort de rappel; PI : planchette-support; F : fil de fer pouvant être tiré de l'extérieur. placé 6 cobayes; ensuite 200 mouvements d’'agitation ont été effectués en 2 minutes environ et les animaux sont restés dans l'appareil pendant 2 heures 30 minutes. Sacrifiés 23. à 28 jours plus tard, 2 sujets sur les 6 élaient tuberculeux; ils présentaient chacun un tubercule pulmonaire primitif bien développé avec adénite caséeuse prononcée. Exp. II. — Faite le 30 septembre 1912, selon la même méthode, avec la compresse-mouchoir d'un se ayant environ 105.000 bacilles par milli- gramme de crachats (M. Lef..….). Celte compresse, utilisée comme mouchoir pendant 48 heures, a été conservée ensuite un temps égal, « pelotonnée », dans notre bibliothèque. (1) Revue d'Hygiène et de Police sanitaire, 20 octobre 1913. 788 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Six cobayes étant dans la caisse à inhalation, nous exécutons, en 5 minutes environ, 500 mouvements d’agitation du linge; les cobayes inhalent l'air de la caisse pendant 2 h. 30 minutes. Morts ou sacrifiés 19 à 27 jours plus tard ils ont respectivement 10, 33, 14, 30, 36 ef 33 tubercules pulmonaires primitifs chacun; comme on le voit, il s’agit-là d’une infection particulièrement intense. Exp. III. — Exécutée en avril 1913 avec le mouchoir du malade Lef..…., dont les crachats contiennent environ 30.000 bacilles par milligramme; ce malade est assez propre. Dans cette expérience et les suivantes, les mouchoirs ont été pris aux malades d’une façon inopinée, sous prétexte de les faire laver. Le mouchoir du malade Lef... a été conservé 6 jours avant de servir; pendant le temps de conservation, il était à moitié étalé. En présence de 8 cobayes, nous exécutons 500 mouvements d’agitation en 5 minutes, dans la caisse de 126 litres; les animaux inhalent pendant 1h. 40 minutes. Sacrifiés 35 jours plus tard, fous ces cobayes sont sains. Exr. IV. — Exécutée également en avril 1913 avec le mouchoir du malade Bar... Ce malade est propre; il a environ 80.000 bacilles par milligramme de mucosité. Le mouchoir est conservé 5 jours dans les conditions ci-dessus. Nous effectuons 600 mouvements d'agitation; 10 cobayes inhalent pendant 4 h. 45 minutes ; sacrifiés 35 jours plus tard, aucun d'eux n'est tuberculeux. Exr. V. — Faite en juillet 1913 avec le mouchoir du malade Soret.…, qui présente 95.000 bacilles par milligramme de crachats. Ce mouchoir est con- servé 2 jours et demi complètement étendu. Nous réalisons 400 mouvements d'agitation; 6 cobayes survivants donnent 4 tuberculeux ayant chacun un tuber- cule pulmonaire primitif; mais ces tubercules sont peu développés et les ganglions correspondants sont modérément hypertrophiés et peu caséeux: il s’agit assurément de tuberculose atténuée par la dessiceation. Exr. VI. — Faite avec le mouchoir du même malade, en conservant ce linge 2 jours de plus. 400 mouvements d’agitation sont exécutés ; les cobayes inbalent pendant 1 h. 50 minutes; sacrifiés 35 jours plus tard, 4 sujets, sur les 6, sont luberculeux, chacun avec un tubercule primitif, une adénopathie caséeuse moyennement développée et des lésions de généralisation au début; cette tuberculose est du type atténué. Exr. VII. — Réalisée en juillet 1915 avec le mouchoir du malade Bon... dont les crachats contiennent 50.000 bacilles par milligramme; ce malade est propre et me fait savoir qu'il ne crache pas dans son mouchoir. Après 1 jour de dessiccation, étalé, le mouchoir est agité 350 fois; 6 cobayes inhalent pendant 1 h. 30 minutes; {ués après 35 jours, ils sont tous indemnes. Exp. VIII. — Faite en juillet 1913 avec le mouchoir du malade Danel... qui a 120.000 bacilles par milligramme de crachats ; ce mouchoir a été pris à côté de l’oreiller pendant que le malade dormait. Après un jour de dessiccation, complètement étalé, il est agité 300 fois en présence de 9 cobayes qui inhalent pendant 1 heure et demie. Morts ou sacrifiés, 29 à 35 jours après, tous ces cobayes sont tuberculeux; ils fprésentent en moyenne 38 {ubercules pulmonaires primitifs; les lésions sont bien développées et fortement caséeuses. CONTAGION TUBERCULEUSE 7189 Il convient d'observer que ce malade, très sale, a servi pour les expériences V et VI d’inhalation de l'air expiré pendant la toux; tandis que l'expérience VI a donné un résultat négatif, l'expérience V a fourni un cobaye tuberculeux sur 12, avec un tubercule primitif; il est très vraisemblable, avons-nous dit, qu'une particule sèche, provenant de ce malade éminemment contagieux, a été la cause de ce cas d'infection (second mémoire; ces Annales, 25 juil- let 1914). Exp. IX. — Le même mouchoir du malade Danel.... conservé 3 jours de plus, parfaitement étalé, sert pour une nouvelle expérience; celle-ci a donc lieu après 4 jours de dessiccation. Nous effectuons 350 mouve nents d’agitation en 3 minutes, et les 9 cobayes employés inhalent pendant : ‘h. 20 minutes. Morts ou sacrifiés, 27 à 35 jours après, ces 9 animaux sont tuberculeux, et ils présentent en moyenne 14 tuber- cules pulmonaires primitifs. Exr. X. — Le même mouchoir, conservé encore 2 jours de plus, dans les mêmes conditions, sert pour une dernière expérience ; celle-ci a donc eu lieu après 6 jours de dessiccation, et en été; le linge était parfaitement sec après 24 heures, et l'action atténuante de la lumière diffuse et de la sécheresse s'est prolongée 5 jours de plus. Nous effectuons 500 mouvements d’agitation; 7 cobayes survivants ont inhalé pendant 1 heure et demie; ces animaux ont été sacrifiés après 35 jours ; 6 sur les 7 élaient tuberculeux, et ils présentaienten moyenne 3 luber- cules primitifs. Il importe de remarquer que ces lésions, ainsi que les adéno- pathies correpondantes, étaient moins développées qu'avec le virus frais du même malade; dans cette dernière expérience, il s'agissait donc d'un virus notablement atténué et sur le point de perdre sa virulence par inhalation. Le tableau récapitulatif ci-après permet de voir l’ensemble des résultats que nous avons obtenus avec les mouchoirs. Tout d’abord on remarque qu'il existe de grandes différences, selon les malades, dans le pouvoir tuberculigène des mou- choirs; les malades qui ne font que s'essuyer les lèvres sont les moins dangereux; ceux qui crachent dans leur mouchoir sont très redoutables. Au total, sur 10 expériences faites avec les mouchoirs, 7 ont donné des résultats positifs ; 41 cobayes, sur 73 utilisés et sur- vivants, ont été tuberculisés, en quelques minates d’agitation, soit environ 56,1 p. 100. Nous avons constaté d'autre part, en accord avec nos précé- dentes conclusions sur la vitalité, que le danger des linges diminue assez vite, aussitôt que la dessiccation est réalisée; ce danger tend à devenir nul vers le dixième Jour, si la dessiccation est bonne. De plus, nous avons obtenu, dans les expériences V, VI et X, des tuberculoses d’inhalation manifestement atté- nuées. 190 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR TABLEAU RÉCAPITULATIF DES EXPÉRIENCES FAITES AVEC LES MOUCHOIRS DES TUBERCULEUX. | a à 5 Le a PA NE = NOMBRE DE COBAYES | # © = 2 BOTE < = z x & |SÉSS| w 8 285$ ns| £ % RER SE 0 | —m rm | 4, S = | OZSERVATIONS £ = He È sains. tuberculeux. 52 Fr œ © FA Fu L= nt ——…—— | | nes : | ee 4 | E Rcc.|.90.000 | 1 jour. 3 ee Malade sale. 2 |M. Lef.|130.000 |2 jours. (0 6 26 Malade sale. 3 Laf. 30.000 |6 jours. 8 0 ......| Malade propre. 4 | Bar. 80.000 |5 jours. 10 (UC EE Malade propre. 5 Sor. 95.000 |2 j. 1/2. 2 4 1 Malade sale. 6 Sor. 95.000 |4 j. 1/2. 2 4 1 Malade sale. 1 | Bon. 50.000 | 4 jour. 6 QT CES Malade propre. 8 | Danel. [120.000 | 1 jour. 0 9 38 Malade sale. 9 | Danel. |120.000 |% jours. 0 9 14 Malade sale. 10 | Danel. |120.000 |6 jours. 1 6 3 Malade sale. Nous avons recherché, en outre, s’il était possible de com- muniquer la tuberculose au cobaye, par inhalation, en se servant des taies d'oreiller des malades, et en opérant comme avec les mouchoirs. Six expériences ont été ainsi faites, avec des taies d'oreillers provenant de malades propres, mais dont les expectoralions étaient riches en bacilles (Laf... et Bar...). Les temps de conservation de ces taies ont été de 2,3 et 4 jours; sur 58 cobayes ayant inhalé, en plusieurs séries, aucun n'est devenu tuberculeux. Avec les torchons ayant servi le matin à faire le ménage, à essuyer les meubles et boiseries, mais non les tables placées à côté des lits, nous avons eu également quatre résultats négatifs en procédant par inhalation. D'où proviennent donc les bacilles contenus dans les pous- sières des chambres, ces poussières ayant été reconnues viru- lentes? Ils ne peuvent venir que des mouchoirs, du linge de corps, de la barbe, de la figure et des mains du malade, et, pour une part difficile à apprécier, des linges du Ht souillés directement par les projections de salive ou de crachats. CONTAGION TUBERCULEUSE 791 Dans d’autres essais nous avons mis en évidence la virulence des cheveux du malade, par souillure de crachats, notamment pour le malade Danel. Pour 4 malades à la 3° période, nous avons prélevé, après décès, des mèches de cheveux qui ont été lavées à l’eau stérile; ce liquide à été inoculé à quatre lots de & cobayes,; la virulence a été constatée 2 fois sur 4; mais, dans chaque lot, un seul animal sur 4 inoculés et survivants, est devenu tuberculeux et ses lésions étaient dues manifestement à un bacille atténué par dessiccation. Les linges du lit ne doivent recéler qu'une quantité relative- ment faible de bacilles, si on les compare aux mouchoirs; le danger ne devient important que par sa répétition et sa pro- longation. Nous avons bien noté que dans tous les récipients mis dans les chambres, pour recueillir Les poussières, il y avait un grand nombre de filaments blancs venant des linges; et que ces poussières étaient virulentes dans plus d’un tiers des cas. Mais il existait en outre des poussières plus fines, car Les filaments dont il s’agit n'auraient pu tuberculiser nos cobayes par inha- lation, dans les expériences de cohabitation; les dimensions trop grandes de ces filaments s’opposeraient en effet à leur respirabilité. COMMENT CONCEVOIR LA CONTAGION DANS LES VÉHICULES ET LIEUX PUBLICS Il n’est nécessaire de faire aucune démonstration pour sa voir que plus le virus est dilué, moins les chances de contagion sont grandes; plus les contacts directs ou indirects avec les malsdes sont répétés, et plus les chances de contamination sont élevées. Les travaux de Cornet et de quelques autres auteurs montrent que les poussières des rues ne sont pas virulentes. Il résulte d'une statistique de Hirt {cité par Cornet, in Ueber Tuberkulose, page 107) que les balayeurs des rues, qui inhalent une grande quantité de ces poussières, ne présentent pas une morbidité tuberculeuse, ni même une proporlion d’affections des voies respiratoires, plus élevées que les moyennes. Pareillement Kunz(1900) n'a pu mettre le bacille en évidence avec 20 échan- tillons de poussières des rues. 792 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Cette innocuité des poussières des rues s'explique aussi par ce que nous avons fait connaître personnellement sur la vitalité du bacille tuberculeux : cet agent pathogène est non seulement dilué, mais il est détruit encore plus rapidement que dans les conditions de l'habitation. Lorsque le sol est sec, la vitalité ne dépasse pas quelques jours: lorsque le sol est humide, les poussières sont fixées et ne peuvent ètre inhalées. Toute cause qui empêche la dilution du virus et retarde l’action atténuante de la lumière et de la dessiccation augmente la nocivité des poussières. La contagion a donc quelques chances de se produire dans les locaux très fréquentés par le publie, et cela d'autant plus que la circulation d'air y est moins active, la capacité plus faible, et le sol plus fréquemment souillé par des expectoralions. Toutefois, Cacace (1901) n'a eu que des résultats négatifs avec la poussière des écoles: Kelsch (1899) n'a enregistré qu'un seul résultat positif avec les poussières des casernements de Lyon; Gotschlich (1903) ne trouve aucun échantillon viru- lent sur 119 prélèvements effectués dans les gares ou les mai- sons de commerce ; la même année, Belli échoue totalement avec 39 échantillons de poussières des vaisseaux de guerre. Cependant, Mitulescu (1902) aurait démontré la virulence des poussières des livres d’une bibliothèque populaire, mais ce résultat nous semble très*douteux. Certains locaux, tels que les bureaux et ateliers, par suite de la proximité de sujets malades et de sujets sains, réalisent en partie les conditions de l'habitation du tuberculeux quant au danger de transmission; cependant, l’une des plus grandes causes ne sy trouve pas: l'agitation des linges du lit. Le malade propre ne fera courir à ses voisins qu'un danger insi- enifiant; celui qui utilisera un mouchoir souillé de crachats desséchés, et portera des habits également bacillaires qui par- fois seront brossés à une faible distance, sera redoutable. Dans la cohabitation nécessitée par le travail en commun, les chances d'infection deviennent importantes aussi parce qu'elles sont quotidiennement renouvelées. Il est un lieu public où toutes les conditions semblent réu- nies pour la transmission de la maladie s’il y a émission de CONTAGION TUÜUBERCULEUSE 793 bacilles, et qui pourra nous servir d'exemple à étudier : c'est le wagon de chemin de fer, spécialement celui qui est Le plus mal tenu, c’est-à-dire le wagon de troisième classe et le com- partiment de fumeurs. Praussnitz (1891) rapporte avoir reconnu la virulence de 5 échantillons de poussières sur 20, qui avaient été recueillis dans les wagons de la ligne Berlin-Meran; cette ligne, fré- quentée par des malades, était donc très dangereuse, au moins à cette époque. Nous avons voulu nous rendre compte du danger des pous- sières des wagons en faisant des prélèvements dans les compar- timents de fumeurs de la ligne de Paris-Versailles. Dans ces compartiments il y a des traces nombreuses d'expectorations : le nettoyage est insuffisant; la poussière s’accumule dans tous les endroits tant soit peu inaccessibles au balai: de plus, le balayage est fait d'une manière habituelle quand les voyageurs occupent déjà les compartiments. Enfin, les trépidations du train en marche mobilisent les particules sèches Les plus fines. Il était donc intéressant de rechercher la virulence des poussières de ces wagons. Pour ce faire, à diverses dates, et dans divers compartiments de fumeurs, nous avons prélevé {1 échantillons de poussières. Chaque échantillon, délayé avec un peu d’eau stérile, a été inoculé sous la peau de # cobayes. Une partie des animaux sont morts de complications septiques précoces; mais, étant donné le nombre des inoculés, nous avons eu des survivants dans tous les lots, c'est-à-dire pour les 11 échantillons de poussières. Aucun des animaux n'a contracté la tuberculose. De ces constatations on ne peut certes pas déduire que les poussières des wagons ne sont pas dangereuses, mais seulement qu'elles sont moins fréquemment virulentes que celles des locaux où séjournent des malades. Dans les divers véhicules et lieux publics les malades ne font que passer; les nettoyages sont tout au moins quotidiens. Si des expectorations bacillaires sont déposées sur le sol, c’est d'une manière oceasionnelle et en petite quantité. Le danger des poussières des lieux fréquentés par le public n’est certes pas nul, mais il est généralement faible comparé à celui des poussières des locaux occupés par les malades. 194 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ce qu'il faut plutôt envisager comme cause de contagion dans les rassemblements, c’est la mobilisation des poussières viru- lentes apportées sur Les habits ou répandues par les mouchoirs que l'on déploie en leur faisant subir des froissements:; mais c'est là encore un danger qui a peu de chances de se répéter pour la même personne. CONTAGION D’ORIGINE ANIMALE Nous ne voulons pas ouvrir ici un long chapitre sur les causes d'infection tuberculeuse d’origine animale. On sait que, selon Behring et quelques autres auteurs, la tuberculose humaine a sa source principale dans le lait et dans la viande. En 1911 (Annales de l'Institut Pasteur, 25 juillet), et tout récemment (Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 20 oc- tobre 1913), nous avons publié quelques documents qui doivent, pensons-nous, entrainer le rejet de cette hypothèse. En France, la tuberculose bovine n’est pas aussi étendue qu'on le dit géné- ralement : 6 à 20 p. 100 des bovins sont tuberculeux, la plu- part avec de faibles lésions. 0,60 p. 100 des porcs sont touchés par la maladie. Si le lait était aussi dangereux que certains le supposent, c'est le veau qui serait tuberculisé le plus fréquem- ment; or, des recherches que nous avons faites chez cet animal, et qui portent à ce jour sur environ 35.000 sujets, il résulte que la morbidité tuberculeuse du veau est d'environ 1 p. 400; mais, parmi ces animaux, il en est seulement 1 sur 6.000 qui soit infecté par ingestion lactée. À plus forte raison, l'homme ne peut trouver dans le lait de vache, ce liquide étant le plus souvent ingéré après ébullition, la source habituelle de sa propre tuberculose: il s'agit seulement d'une source d'excep- lion que, du reste, il ne faut pas négliger. Ces conclusions ont été confirmées au dernier Congrès contre la tuberculose tenu à Rome, en 1912, par Kossel, Gosio, Jatta. D'autres recherches inédites que nous avons réalisées nous montrent, confirmant en cela les conclusions de divers auteurs, que le muscle des bœufs et pores tuberculeux généralisés n'est pas virulent par inoculation au cobaye : notons bien qu'il s’agit ici des animaux que nous relirons de la consommation et qui CONTAGION TUBERCULEUSE 795 sont atteints de généralisation sanguine indiscutable. Cette autre origine animale de la tuberculose humaine est donc encore plus rarement exacte que la première. Tout indique également que l'infection par inhalation d’ori- gine animale, c'est-à-dire par la cohabitation avec des bovins tuberculeux, ne joue aucun rôle appréciable : c'est parmi la population rurale que la tuberculose humaine est le plus rare- ment observée. Enfin, les autopsies faites chez l'homme tendent à incriminer l'inhalation comme le mode de contagion presque exclusif; et nous avons bien constaté, dans nos expériences de cohabitation de cobayes avec les malades, que les sujets tuberculisés pré- sentaient une tuberculose d'inhalation absolument typique et identique à celle que nous obtenons expérimentalement. Ces divers résultats, qui se confirment mutuellement d’une manière remarquable, font ressortir, autant qu'il est possible, l'intérêt des acquisitions que nous avons faites sur la contagion par inhalation dans l'espèce humaine. Le rôle de ce mode d'infection nous apparaît donc extrêmement important et il est d'une utilité primordiale de savoir dans quelles conditions il se réalise ; est-il besoin de dire qu'en l'absence de connais- sances précises sur la contagion on ne saurait faire de bonne prophylaxie ? CoOxCLUSIONS. Des recherches précédentes nous croyons pouvoir conclure : 1° La tuberculose humaine est surtout d'origine humaine ; 2° La contagion s'effectue très généralement par inhalation ; 3° Cette contagion est due aux particules sèches d’une ma- nière exclusive ou presque exclusive, la transmission par les particules liquides ne pouvant ètre envisagée qu'à titre d'hypo- thèse, comme un mode exceptionnel et peu vraisemblable ; 4° La maladie se contracte principalement dans l'habitation, là où les causes de mobilisation des particules sèches sont réunies au maximum, et le virus où se trouve le plus abondant ; 5° Dans la cohabitation avec le malade, en l'absence de précautions suffisantes contre la dissémination du virus, et bien que la résistance du bacille desséché ne soit que de quel- 796 ANNALES DE L'INSTITUT ‘PASTEUR ques Jours, le danger de transmission est beaucoup plus grand qu'on ne le suppose. Il est, par conséquent, indispensable de prendre des mesures de prophylaxie et de les généraliser; il ne nous semble pas qu'il soit impossible de les appliquer avec les ménagements nécessaires. Dans là persistance de la morbidité tuberculeuse à un chiffre élevé il faut voir le résultat de la contagion libre et attribuer au terrain le rôle tout à fait secondaire qu'il possède réelle- ment. Notre conviction est que, dans l'avenir, tous les efforts auront pour but d'éviter la contagion et que ce sera là, à coup sûr, la méthode la plus fructueuse. DU ROLE PHYSIOLOGIQUE JOUÉ PAR LE « BACILLUS BIFIDUS » DANS LE CANAL INTESTINAL par Carz A. KLING, Professeur agrégé à l’Institut Carolin de Stockholm. s (Travail du laboratoire de M. E. Metchnikofr.) C’est une vérité généralement connue que les enfants élevés au sein résistent beaucoup mieux à toutes sortes d’influences nocives que ceux allaités artificiellement. Aussi la mortalité est-elle beaucoup plus considérable parmi ceux-ci que parmi ceux-là. Les troubles de la digestion constituent une des prin- cipales causes de la grande mortalité parmi les enfants au bibe- ron, tandis que ces troubles sont relativement rares chez les enfants au sein, et quand ils apparaissent chez eux, ils sont légers et de courte durée. On s’est beaucoup occupé de trouver l'explication de cette véritable immunité chez l'enfant au sein, et nombre d'opinions ont été avancées à cet égard. Les recherches de ces dernières années sur la flore de l'in- testin et son influence ont enfin commencé à jeter une certaine lumière sur cette intéressante question. Lors de ses études sur l'infection cholérique, Metchnikoff (1) constala que, dans le canal intestinal de certains animaux d'expérience, ilexiste des micro- organismes ayant la propriété d'empêcher le développement des vibrions cholériques, tandis que d’autres, par contre, favorisent l'apparition de l'infection. En faisant ingérer des cultures de ces bactéries empèchantes, ce savant réussit même à rendre ces animaux résistants à la maladie. S'appuyant sur ces expérien- ces, Metchnikoff se demanda si la résistance de l’homme (et aussi de certains animaux) aux vibrions cholériques n'était pas en relation étroite avec la fréquence normale dans le canal in- testinal de microbes, empêchant les vibrions de se multiplier et de provoquer l'infection. 798 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Les recherches de Bienstock (2) sur les facteurs qui empêchent la putréfaction sont d’un grand intérêt pour cette question. Il fit l'observation que le Bacterium coli et le B. lactis aerogenes paralysent l’action du Bacillus putrificus sur les substances albuminoïdes. La présence des bactéries lactiques fait que le lait cru n'est pas susceptible de putréfaction, tandis que le lait stérilisé ne tarde pas à J& subir. Lors de ses études fondamentales sur la flore intestinale chez le nourrisson, Tissier (3) aborda aussi la question du rôle Joué par les bactéries intestinales normales. C’est le Bacillus bifidus, découvert et décrit par lui, ce microbe prédo- minant dans l'intestin de l'enfant au sein bien portant, qui y joue le rôle d’une espèce empêchante. Il observa que certaines bactéries gazogènes, comme le B. coli, le Coccobacillus perfæ- tens et autres, quand ils croissent en symbiose avec le Bacillus bifidus, sont empêchés dans leur production de gaz et qu'après un certain temps ils ne se laissent plus cultiver. Comme le Br'idus fermente aussi diverses espèces de sucre en pro- duisant une grande quantité d'acide, Tissier vit dans ce fait la cause pour laquelle ce micro-organisme empêche le déve- loppement d’autres microbes moins résistants aux acides. A la suite de ces recherches, on commença à s'occuper de plus en plus du rôle physiologique joué par les bactéries intes- linales. Ainsi d'après Eijkmann (4), Conradi et Kurpjuweit (5), il y a dans des cultures de bactéries, des substances thermolabiles (autotoxines), qui, tout en exerçant une action empêchante sur le développement ultérieur des cultures, ont aussi la propriété d'empêcher d'autres bactéries de se multiplier. Les deux derniers de ces anteurs ont trouvé de pareilles substances empèchantes aussi dans les fèces de l'homme adulte et considèrent que le Bac- terium coli est de la plus grande importance pour la formation de ces substances. Prenant ces recherches pour point de départ, Moro et Murath (6) cherchèrent à trouver de pareilles substances aussi dans les fèces de nourrisson. Ils constalèrent que les excréments de l'enfant au sein, aussi bien que ceux de l'enfant au biberon, exercent une action bactéricide sur un grand nom- bre de micro-organismes, de sorte que les substances empè- chantes ont la valeur de sauvegardes naturelles. Ils supposèrent LE « BACILLUS BIFIDUS » DANS LE CANAL INTESTINAL 799 que le Bacillus bifidus est actif lors de la formation de ces sub- stances el essayèrent d'appuyer cette hypothèse expérimentale ment; ils n'y réussirent pas. En revanche ils firent valoir que le B. coli est le véritable producteur des substances empêchantes. Peu de temps après, Rolly (7) chercha à vérifier la découverte d'Eijkmann,de Conradi et de Kurpjuweit, mais il ne put trouver aucune preuve de l'existence de pareilles substances empè- chantes ni dans les cultures, ni dans les fèces. L'étude du rôle joué par les bactéries intestinales dans la physiologie de l'intestin n’est pas encore très avancée, mais les résultats déjà obtenus, quoique en partie contradictoires, sont pourtant intéressants et semblent démontrer que cer- taines bactéries intestinales de fréquence normale jouent un rôle dans la lutte de l’organisme contre les micro-organismes pathogènes. Cela paraît tout particulièrement le cas du Bacillus bifidus qui est l'habitant constant et presque unique de l'intestin de l'enfant nourri au sein et bien portant. Il n’est donc pas sans intérêt de mettre encore à l'étude la question : quel rôle joue le Bacillus bifidus pour empêcher l'apparition d'autres bactéries? Nous nous sommes demandé si une culture du Bacillus hifidus exerce une action bactéricide ou empêchante sur certaines bactéries ensemencées. L'espèce de Br/fidus employée provenait d'un enfant sain, âgé de trois mois et nourri exclusivement avec le lait maternel; il fut cultivé dans une gélose glucosée profonde (1,5 p. 100) selon la méthode employée par Tissier. Le bacille présentait les propriétés indiquées par cet auteur. Pour être à même de déterminer plus exactement son aclion sur d’autres microbes, il convient de se servir d'un milieu liquide de culture. Le Bacillus bifidus pousse bien dans Île bouillon ordinaire qu'on additionne de 1 1/2 p. 100 de glucose, pourvu que la culture soit anaérobie. Dans toutes les expé- riences qui suivent, nous nous sommes servi d’une telle cul- ture en bouillon. Dans des échantillons prélevés sur le liquide de culture, le nombre des bactéries ensemencées est facile à déterminer, à l'aide de la méthode de la numération sur plaque. (Pour plus amples détails, voir ci-dessous.) Exp. I. — 4,5 cent. cubes d’une culture de Bifidus en bouillon de quatre jours, dans laquelle se trouvait un résidu riche en bacilles, sont mèlés avec 4,5 cent. cubes de bouillon sucré et 0,00001 cent. cube d’une culture de Bact. 800 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR coli com., ou de Bact. lact. aerogenes en bouillon, datant de vingt-quatre heures et diluée dans 1 cent. cube d'une solution physiologique salée (1). Par un examen au microscope et l'établissement de cultures, nous nous sommes convaincu que. dans cette expérience comme dans toutes les suivantes, la culture de Bifidus était restée pure. A titre de contrôle, nous avons mêlé 9 cent. cubes d'un bouillon sucré avec 0,00001 cent. cube de Bact. coli ou de Bact. lact. aerogenes, également dilué dans 1 cent. cube de solution physio- logique salée (Il). Immédiatement après le mélange, nous avons prélevé 0,1 cent. cube sur les différents tubes à essai en vue de déterminerle nombre des bactéries ensemencées. Pour imiter autant que possible les conditions naturelles du canal intestinal, nous avons fait le vide dans les tubes à essai et nous les avons mis à 37 degrés centigrades. Après quarante-huit heures, de nouveaux échantillons furent prélevés. Résultat : TABLEAU I. Bac. coli commune. Bac. lactis aerogenes. EEE TT — — Immédiatement. Après 48 heures. Immédiatement. Après 48 heures. [Ê 23.594 (1) 136 1.516 8 IL. 31.222 oo 1.084 co L'expérience fut faite de manière à tenir toujours en vie le Bacillus bifidus, et, en ajoutant du bouillon sucré frais, on lui a donné la possibilité de pousser ultérieurement. Son action sur les bactéries ensemencées, comme le montre le tableau I, est frappante. Après quarante-huit heures, il ne reste plus en vie de B. coli et de B. aerogenes, qu'un tout petit nombre, tandis que dans les tubes témoins une quantité innom- brable de ces microbes se sont développés. Une culture de Bifidus en développement agit donc sur le Bac. coli com. et sur le Bact. lact. aerog. comme un liquide bactéricide énergique. Quelle peut être la cause de cette action bactéricide qui se ma- nifesle ?n vitro? S'agit-il d'une concurrence entre Le Z. bifidus et les autres bactéries, en ce sens que le Pifidus, par suite de son énergie vitale plus intense, enlève aux autres microbes les prin- cipes qui servent à leur développement? S'il en est ainsi, on doit s'attendre à ce que lempêchement de la pullulation du Bifidus, réalisé par la vie en présence de l'oxygène, supprime cette action bactéricide. Nous avons entrepris des expériences de ce genre et nous avons constaté qu'au contraire, dans ces condi- tions, cette action bactéricide persiste. (1) Nombre de colonies apparues sur la plaque d'agar après vingt-quatre heures. LE « BACILLUS BIFIDUS » DANS LE CANAL INTESTINAL 801 Exp. Il. — I. — 3 cent. cubes d'une culture de Bifidus datant de à jours sont mélés avec 3 cent. cubes de bouillon sucré, 0,00001 cent. cube d'une culture de B. proteus vulgaris, ou de Staphylococcus aureus datant de 24 heures et dilué dans 1 cent. cube de solution physiologique salée. Culture aérobie. II. — Contrôle, 3 cent. cubes de solution physiologique salée +3 cent.cubes de bouillon sucré + 0,00001 cent. cube de prof. ou de Staphyl. dans 1 cent. cube de solution physiologique salée. TagLeau Il. Bac. proteus vulgaris. Staphylococcus aureus. RE — TE Immédiatement. Après 20 heures. Immédiatement. Après 20 heures. [e 10.782 )0 2.063 8 IT. 4.262 C2 3.596 oo Les microbes employés dans cette expérience, le B. proteus vulgaris et le Staphylococcus aureus avaient, comme le montrent les tubes de contrôle, suffisamment de substances alimentaires pour se développer. La même quantité de ces substances se trouvait dans les tubes où les bactéries avaient été mis en- semble avec Le Bac. bifidus, néanmoins, non seulement ils ne se développèrent pas, mais ils succombèrent. Il ne peut donc pas s'agir d’une concurrence pour les substances alimentaires, mais l'expérience nous prouve plutôt que, dans un liquide où s'est développé pendant quelque temps le Bac. bifidus, existent des produits ayant des propriétés bactéricides. Or, il y avait intérêt à analyser la nature et la provenance de ces substances bactéricides. Pour décider si elles se trouvent dans Les corps des bacilles, nous avons fait l'expérience suivante. Exp. III. — Une culture de Bifidus de jours est énergiquement centrifugée. Le liquide est prélevé à l’aide d'une pipette et le résidu lavé à trois reprises dans une solution physiologique salée. Les bacilles lavés sont ensuite dilués dans une quantité de solution physiologique salée de même volume que la culture employée. L'émulsion de bacilles est traitée par la congéla- tion et par un chauffage à 45 degrés centigrades, pratiqués alternativement à plusieurs reprises. I. — 4 cent. cubes du liquide de centrifugation +3 cent. cubes de bouillon sucré. IT. — 4jcent. cubes de [l'extrait de bacilles + 3 cent. cubes de bouillon sucré. III. — 4 cent. cubes de solution fphysiologique salée +3 cent. cubes de bouillon sucré. Tous les tubes furent additionnés de 0,0000! cent. cube de B. coli, ou de B. lactis uerogenes dans 1 cent. cube de solution salée. 802 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR TABLEAU III. Bac. coli commune Bac. lactis aerogenes. Immédiatement. Après 20 heures. Immédiatement. Après 20 heures. Il 110 36 232 0 {JE 92 o 396 co II. 85 co 1.551 co Les bacilles Bifidus lavés, et dont on avait préparé l'extrait n'ont aucune action sur le développement du B. coli et du B. lactis aerogenes ; ils poussent dans ce liquide aussi bien que dans un bouillon ordinaire. Le liquide de centrifugation, par contre, exerce un effet bactéricide énergique. L'expérience nous dé- montre donc que les produits bactéricides d'une culture de B. bifidus sont dissous dans le liquide et non liés aux corps mêmes des bacilles. Les substances en question passent à travers un filtre Cham- berland, ce qui ressort de l'expérience suivante : Exe. IV. — Une culture de Bifidus de 5 jours est passée par un filtre Cham- berland. a I. — 3,5 cent. cubes du filtrat 4- 3,5 cent. cubes de bouillon sucré. II. -— 3,5 cent. cubes de solution salée + 3,5 cent. cubes de bouillon sucré. Chacun des tubes est additionné de 0,00001 cent. cube de B. coli ou de B. lact. aerog., dans 1 cent. cube de solution physiologique salée. TABLEAU IV. Bac. coli commune. Bac. lactis aerogenes. EE —— — Jmmédiatement. Après 20 heures. Immédiatement. Après 20 heures. 1. 432 il 26 0 IE 420 cp 29 co Les substances bactéricides du sérum sanguin et certaines substances des globules blancs se distinguent, on le sait, par leur thermolabilité. On serait donc porté à supposer que les substances bactéricides existant dans les cultures de Bifidus sont de nature semblable. Les deux expériences suivantes prouvent pourlant à l'évidence qu'il n'en est pas ainsi : Exr. V. — I. — 3 cent. cubes d'une culture de Bifidus de 3 jours + 3 cent. cubes de bouillon sucré. IT. — 3 cent. cubes de culture de Bifidus, chauffée pendant une demi-heure à 75 degrés centisrades + 3 cent. cubes de bouillon sucré. LE « BACILLUS BIFIDUS » DANS LE CANAL INTESTINAL 803 III. — 3 cent. cubes de culture de Bifidus, chauffée pendant une demi-heure à 100 degrés centigrades +3 cent. cubes de bouillon sucré. IV. — 3 cent. cubes desolution physiologique salée + 3 cent. cubes de bouil- lon sucré. Tous les tubes sont additionnés de 0,00001 cent. cube de B. coli dans 1 cent. cube de solution physiologique salée. Tagceau V. Immédiatement. Après 20 heures. GES FT QE So 46% 362 RIRES RDA ETES ee 620 308 INRP ARMEMREC IE 652 236 INSEE RES AR 864 2 Exe. VI. — Une culture de Bifidus de sept jours est passée par le filtre Chamberland. 1. — 3 cent. cubes de filtrat +3 cent. cubes de bouillon sucré. II. — 3 cent. cubes de filtrat, chauffé pendant une demi-heure à 15 degrés centigrades + 3 cent. cubes de bouillon sucré. III. — 3 cent. cubes de filtrat, chauffé pendant une demi-heure à 100 degrés centigrades +3 cent. cubes de bouillon sucré. IV. — 3 cent. cubes de solution physiologique salée +3 cent. cubes de bouillon sucré. Tous les tubes sont additionnés de 6,00001 cent. cube de B. lactis aerog., dans 1 cent. cube de solution physiologique salée. Taszeau VI. Immédiatement. Après 20 heures. I 14 0 LPPSMETE à sl 12 L ITR PAEE CPAS 52 2 NP 5 e: Les cultures de #ifidus chauffées pendant une demi-heure à 15 ou à 100 degrés centigrades exercent la même action baclé- ricide que la culture non chauffée (tabl. V). Il en est de même des filtrats Chamberland (tabl. VD). Ces deux expériences nous démontrent donc que les substances bactéricides renfermées dans une culture de Bifidus, sont ther- mostabiles. Pour déterminer plus exactement la nature des corps en question, nous les avons encore mis à l'épreuve pour voir COm- ment ils se comportent au point de vue de la dialyse. Ex». VII. — Un sac en collodion est rempli de 15 cent. cubes d'une culture de Bifidus datant de 3 jours, plongé dans 15 cent. cubes d’eau distillée stéri- 804 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR lisée et mis à la température de la chambre pendant 48 heures. Par des expériences de culture, nous avons vérifié que les liquides n'étaient pas infectés par d’autres microbes. I. — 4 cent. cubes de culture de Bifidus + 3 cent. cubes de bouillon sucré. IT. — 4 cent. cubes de culture dialysée + 3 cent. cubes de bouillon sucré. HT. — 4 cent. cubes de dialysat +3 cent. cubes de bouillon sucré. IV. — cent. cubes de solution physiologique salée +3 cent. cubes de bouillon sucré. Chacun des tubes est additionné de 0,00001 cent. cube de culture de B. coli ou de B. lactis aerog., dans 1 cent. cube de solution physiologique salée. TaBLEeAu VII. Bac. coli commune. Bac. lactis aerogenes. TR Re EE EE — DR —— Immédiatement. Après 18 heures. Immédiatement Après 18 heures. I. 276 64% 1.798 73 IE 288 102 129871 136 LIT. 312 52 2,121 108 IV. 116 co 1.588 - co Les produits bactéricides, comme il ressort du tableau VII, ont passé à travers la membrane de collodion, mais ils restaient tout de mème dans le sac en quantité suffisante pour provoquer ie même effet bactéricide que Le dialysat et la culture originale. L'expérience nous permet par conséquent de tirer la con- clusion que la substance bactéricide n'est pas de nature colloïdale. Quand le B. bifidus s'est développé énergiquement dans un bouillon sucré, la réaction est fortement acide. Cette réaction, comme le montre Tissier, est produite par l'acide lactique et l'acide acétique formés par la décomposition du sucre. Aussi cet auteur est-il d'avis que ces acides constituent la cause de l'action bactéricide de la culture de Bifidus. Si la culture est neutralisée, les bacilles coli et lactis aerogenes poussent libre- ment, comme le montre l'expérience suivante. Exp. VIIT. — Une culture de Bifidus, datant de 5 jours est passée au filtre Chamberland. Le filtrat est fortement acide. l. — 3 cent. cubes de filtrat- 4 cent. cubes de bouillon sucré. Il. — 3 cent. cubes de filtrat neutralisé + 4 cent. cubes de bouillon sucré. IT. — 3 cent. cubes de filtrat, neutralisé et chauffé pendant une demi-heure à 75 degrés centigrades + 4 cent. cubes de bouillon sucré. IV. — 3 cent. cubes de solution physiologique salée + 4 cent. cubes de bouillon sucré. Tous les tubes sont additionnés de 0,00001 cent. cube de B. coli ou de LB. lactis aerog., dans 1 cent. cube de solution physiologique de chlorure de sodium. LE « BACILLUS BIFIDUS » DANS LE CANAL INTESTINAL 805 TaABLEAU VIII. Bac. coli commune. Bac. lactis aerogenes. Immédiatement. Après 20 heures. Immédiatement. Après 20 heures. L. 632 0 112 9 II. 364 co 102 oo AT 396 co 9% cn IV. 880 co 150 2 On pouvait penser qu'à côté des acides comme facteurs bactéricides, il existait, dans une culture de Bifidus, aussi d'autres substances bactéricides, dont la présence ne pourrait être constatée qu'après la neutralisation. L'expérience nous montre qu'il n'en est pas ainsi. Le filtrat de culture neutralisé reste complètement inactif. Nos expériences ont done prouvé que les cultures de 5. bifidus exercent une action bactéricide énergique sur un certain nombre de micro-organismes, tels que B.coli com., lactis aerogenes, pro- teus vulgaris et Staphylococeus aureus, et que, selon toute vraisemblance, ce sont les produits acides, formés par l’action du Bifidus sur le sucre, qui causent la disparition des bactéries. Nous n'avons pas réussi à constater dans une culture de Bifidus la présence de substances bactéricides thermolabiles de nature colloïdale, analogues à celles trouvées par Eijkmann, Conradi et Kurpjuweit, Moro et Murath dans des cultures de bactéries et dans des fèces. Nous avons mentionné que Moro et Murath n'ont pu cons- tater d'action bactéricide chez le B. bifidus. Ils examinaient si dans le résidu d’une culture de Bi/idus en bouillon il existait des substances ayant des propriétés de cette nature. Leur expérience donnant un résultat négatif, ils tirèrent la con- clusion que ce microbe ne produit pas de substances empè- chantes. Or, que l'extrait de B. bifidus n'exerce pas d'action bactéricide, notre expérience HI l'a montré. Les expériences de Moro et de Murath ne se trouvent donc pas en contradiclion avec les nôtres. Mais dans. leurs conclusions ces auteurs n'ont pas tenu compte des produits du développement du Bacillus bifidus qui sont susceptibles d'empêcher le développement des bactéries. Le Bacillus bifidus exerce-t-il aussi dans l'intestin cette action 806 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR bactéricide que nous avons pu constater in vitro? Selon toute vraisemblance, oui. Nous savons que les fèces de l'enfant au sein, bien portant, ont une réaction acide. Chez l'enfant élevé avec du lait de vache, au contraire, nous trouvons assez fré- quemment des fèces alcalines. Le sucre introduit avec la nour- riture n’est pas complètement résorbé dans l'estomac et l'intestin grêle ; il en existe dans le gros inlestin des restes qui sont attaqués et décomposés parle Bacillus hifidus. La réaction acide des fèces de l'enfant au sein est, selon toute vraisem- blance, le résullat de ce processus chimique. Si cette hypothèse est juste, il en résulte que le Bacillus bifidus joue un rôle important contre la pullulation dans l'intestin des miCro-0rga- nismes étrangers pathogènes. BIBLIOGRAPHIE . Mercanikorr, Annales (le l'Institut Pasteur, 1894, p. 529. . BïENstTocx, Jbidern, 1899. - Tissier, Recherches sur La flore intestinale des nourrissons. Paris, 1900. + EUKMANN, Centr. f. Baké., 1904. Orig., p. 436. . CoxraDt et Kurrsuwetr. München. med. Wochenschr., 1905, p. 1761. . Moro et Murarn, Wien. klin. Wochenschr., 1906, p. 311. . Rozzy, Deutsch. mer. Wochenschr., 1906, p. 1133. HIDE NN SUR UN FERMENT CONTENU DANS LES EAUX AGENT DE DÉSHYDRATATION DE LA GLYCÉRINE par E. VOISENET. Au cours de mon étude sur un ferment végétant dans les vins amers (1), transformant la g/ycérine en acroléine, et que pour cette double raison d'origine et de fonction physiologique, FiG. 1. — B. amaracrylus. (Gr. : 1/187 j ai dénommé Bacillus amaracrylus (Mg. 1), j'ai reconnu qu'en en / semençant avec de l’eau de Dijon, un milieu minéral glycériné, l) Comptes rendus de l’Acad. des Sciences. t. CLIII, 1941. D 9609, ebt. CIM 1913;-p: 414SA 808 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR peptoné ou non, il se produisait des cultures abondantes d'un bacille présentant les caractères morphologiques de celui que je venais d'isoler des vins amers, et capable, lui aussi, de. déshvdrater la glycérine. J'ai appliqué cet essai à des eaux d'origines très diverses : toutes ont confirmé ce résultat. Cette propriété parait donc vénérale pour les eaux. En fait, voici dans sa simplicité, l'expérience qui montre cette déshydratation par voie biologique. Le milieu liquide de composition suivante : Sulate dAMMONAMEMMEMEE CNE 4 gr. 70 Phosphate de potasse 0 gr. 75 Sulfate detmagnésie RAR PNR me Pi 0 gr. 10 PepLOne sn CROP ARE MERE RE SUR ra GIYCÉ EIRE MAN NEA. ER LUS AC CT MERE MIE FAUROLAINAILe RL EE EN RE RP QUNSl LES est placé, en flacon plein et bouché, à l'étuve à la température de 25 à 30 degrés. Au bout de vingt-quatre heures, le liquide est trouble : s'il a été préparé avec le phosphate bipotassique, sa réaction primitivement alcaline au tour- nesol, est devenue acide; préparé avec le phosphate monopotassique dont je me suis habituellement servi, sa réaction acide s'est accentuée : il est le siège d'une effervescence constituée par un mélange des gaz hydrogène et acide carbonique ; l'hydrogène se dégageant à ce moment en proportion dominante, le gaz carbonique restant dissous en majeure partie. Dès après cette période, tout à fait initiale, le réactif pro- téique acide, agissant directement sur le liquide, révèle géné- ralement l'existence de l’acroléine. Ce réactif est composé des deux solutions suivantes : Acide chlorhydrique nitreur. — On ajoute à 200 cent. cubes d'acide chlorhydrique pur et concentré (d—1,18), 1/10 de centimètre cube d'une solution d’azotite de potasse pur à 3 gr. 6 p. 100. Eau albumineuse. — À un blanc d'œuf, on ajoute 5 à 7 cent. cubes d’eau distillée et l'on bat énergiquement ; on filtre sur une toile en exprimant : on obtient ainsi une solution d'albu- mine à 10 p. 100 environ. Pour reconnaitre l’acroléine dans le liquide de fermentation, il suffit de mesurer successivement dans une petite éprouvette graduée, 4 cent. cubes de liquide, 1 cent. cube d'eau albumineuse, puis 15 cent. cubes d'acide SUR UN FERMENT CONTENU DANS LES. EAUX 809 chlorhydrique nitreux: après agitation pour redissoudre l'albumine coagulée, le mélange est versé dans un tube à essai pour être placé au bain-marie à 50 degrés : en quelques minutes,il se développe une coloration d'abord verte, conservant celle teinte, si la richesse du liquide en acroléine est égale ou supérieure à 1/5.000, et devenant bleue ensuite, si la richesse est inférieure à cette proportion. Quelquefois, l'apparition de l’acroléine est plus rapide ou plus tardive; mais, dans la grande majorité de mes nombreux essais, le réactif l’a toujours décelée au bout de vingt-quatre à quarante-huit heures. Elle se forme aussi à température plus basse, 20,18 ou 15 degrés ; mais au bout d'un temps plus long, elle apparaît également à la température de 35 degrés, mais se transforme rapidement en sorte que sa formation peut passer inaperçue. Elle naît en milieu fortement magnésien, ou moins peptoné, ou purement minéral et sa production dans le vase à fermentation est toujours précédée de celle d'une autre aldéhyde, ainsi que je l'explique dans ce qui suit. La présence de l’acroléine étant reconnue, le liquide, rectifié à l’aide d'un tube à distillation fractionnée, donne un premier fractionnement irritant pour les muqueuses nasale et surtout lacrymale exposées au voisinage de l'extrémité du réfrigérant. En raison de la facile volatilisation de l’aldéhyde acrylique, son odeur caractéristique si pénétrante se manifeste déjà avant l'entrée en ébullition du liquide et par suite avant l’écou- lement dans le tube du réfrigérant des premières portions condensées. En opérant avec des liquides de fermentation donnant directement par le réactif protéique acide une teinte verte accusée et ne virant pas au bleu, indice d’une teneur maxima en acroléine, l'odeur à ce début de la distillation est intolérable; le larmoiement est intense, même lorsque l'expé- rience ne porte que sur un litre de culture : avec de tels liquides, l’action irritante se manifeste déjà dans les vapeurs dégagées par un volume même restreint porté à l’ébullition. En prenant toutes les précautions requises en pareil cas pour condenser un produit aussi volatil et aussi altérable, on peut recueillir l'acroléine dans un volume réduit de distillatum, et la reconnaître à l’aide de ses autres réactions que j'ai déjà rappelées (1). (1) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CL, 1910, p. 1614; t. CLI, 1910, p. 518. 810 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR À part cette réaction fournie par le réactif protéique acide, et dont j'ai fait antérieurement l'étude (1), aucune de celles habituellement employées pour caractériser l’aldéhyde acrylique ne m'a permis d'en faire nettement la‘reconnaissance directe sur le liquide de fermentation, sans concentration préalable par distillation. Cet insuccès tient au manque de sensibilité pour les unes et de spécilicité pour les autres ; ce dernier défaut étant commun en particulier au bisulfite de rosaniline et au nitrate d'argent ammoniacal : c’est ainsi que le liquide fermenté recoiore bien le réactif de Schiff, parfois même énergiquement, mais celte coloration ne peut qu'annoncer la présence de la fonction aldéhyde sans attribution nominale. Au contraire, le réactif protéique acide, très sensible pour l'acroléine, donne en outre avec elle une réaction distincte de celles fournies par les nombreuses aldéhydes saturées, ou comme elle, non saturées, que j'ai soumises à son action : en particulier, cette distinction existe même à l'égard de son homologue supérieure, l'aldéhyde erotonique, laquelle ne donne pas la coloration bleue fournie par l’acroléine. Toutelois, il convient de remarquer, surtout pour l'étude actuelle, que l’aldéhyde hydracrylique en solution de titre supé- rieur à 1/1.000, donne une réaction colorée verte analogue, vrai- semblablement par suite de sa transformation partielle en acro- léine par déshydratation sous l'influence de l'acide chlorhydrique et de la température. En solution plus diluée, cette aldéhyde fournit sa réaction colorée propre qui est rose; pour certaines concentrations voisines du titre limite précédent on obtient une coloration mixte parfois dichroïque, rose à reflets verdâtres dans les mêmes conditions, l'acroléine, même à dose infinité- simale, donne une belle couleur bleue. Ainsi, et indépendamment d'autres propriétés, notamment de l'odeur bien moins irritante de l’aldéhyde hydraerilique et de son point d’ébullition beaucoup plus élevé, situé à 90 degrés sous la pression de 18 millimètres, tandis que l’acroléine bout à 52 degrés sous la pression ordinaire, le réactif protéique acide permet encore, avec des dilutions convenables, de faire la 1) Sur une nouvelle réaction colorée de l'acroléine. Journal de Pharmacie e de Chimie, t. Il, 1910, p. 214. SUR UN FERMENT CONTENU DANS LES EAUX 811 distinction entre ces deux aldéhydes dont chacune est capable d'engendrer l’autre par les processus inverses d'hydratation et de déshydratation. Ces propriétés attestent la supériorité évidente de ce réactif pour la reconnaissance de l’aldéhyde acrylique en général, et font que la fermentation précédente, par la facilité de sa démon- stration, peut devenir l’objet d’une expérience très intéressante dans un cours ou une séance de travaux pratiques de chimie biologique. Bien plus, ce réactif permet de reconnaitre les deux phases de la déshydratation de la glycérine. On admet en eflet, et on enseigne sans le démontrer expérimentalement, que l'action des agents de déshydratation sur ce tri-alcool est comparable à celle qu'ils exercent sur les glycols : une première soustraction d’eau et une isomérisation conduisant au propanolal 1-3, aldéhyde saturée; puis, l’action comportant une phase de plus, par suite de la présence d'une troisième fonction alcool, une deuxième soustraction d'eau transforme le propanolal en acroléine, aldéhyde non saturée : CHOH CÆOH CHOH 5 = — CH° CI E | | | | Il Da = Ch, cr OS ESRCE SES | n — — CH—OH CHOH CHO CHO CHO Propane-triol Propène-diol. Propanolal Propénal (glycérine). Aldéhyde hydracrylique). (Acroléine). En suivant la fermentation à l’aide de- notre réactif de colo- ration des aldéhydes, on reconnait la succession de deux phases aboutissant à la production d’aldéhydes distinctes. En essayant le liquide avant qu'il puisse donner la coloration vert bleuâtre, due à l’acroléine, par exemple quinze à vingt heures après Ia mise à l’étuve, on obtient une coloration rose qui est due à une aldéhyde, car le liquide recolore aussi le réactif de Schiff : sa production à partir de la glycérine, sa transformation succes- sive en acroléine, sa réaction colorée permettent d'identifier cette aldéhyde avec le propanolal 1-3 où aldéhyde kydracrylique. La même coloration se reproduit d’ailleurs à la fin de la fermentation quand celle-ci devient languissante ; mais la cause en est différente et tient alors à l'incapacité du ferment, paralysé par les acides, de pouvoir réaliser la seconde phase, et la meil- 812 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR leure preuve en est qu'il suffit à ce moment d'ajouter du carbo- nate de chaux pour voir reparaitre l’acroléine quelques heures après, surtout s'il reste encore suffisamment de glycérine à transformer. C'est encore à la production de ces deux aldéhydes, qu'est due la succession de colorations observées au cours de la fer- mentation dans l'action du réactif, sur une même prise d'essai du liquide donnant faiblement l'odeur de l'acroléine à la dis- tillation ; coloration d'abord rose, puis violacée, devenant finalement bleue. Au bout de deux jours environ, la quantité d’acroléine peut atteindre 0 gr. 20 par litre, dose maxima compatible avec la vitalité du ferment dans le milieu acide qu'il s'est créé : mais l'aldéhyde acrylique, comme le propanolal dont elle dérive, se transforme sans cesse dans le vase à fermentation et ses méta- morphoses sont d'origine chimique et biochimique. Dans ce procès fermentatif de la glycérine, comme dans celui qu'eile subit sous l’action du ferment des vins amers, l'évolution de cette substance et de ses produits successifs de déshydratation, propanolal et acroléine est subordonnée à divers facteurs, tels que : température, valeur nutritive et réaction du milieu, qualité et quantité du ferment, vie aérobie ou anaérobie, réactions chimiques secondaires, etc. Lorsque toutes ces conditions s'accordent pour conférer au ferment l'activité déshydratante maxima, la première aldéhyde ne subsiste pas dans le liquide, et, à part ses autres métamor- phoses, elle est transformée dans la seconde presque au fur et à mesure de sa production : il en résulte un changement souvent subit dans l'allure de la réaction ; ainsi, dans plusieurs de mes expériences, j'ai obtenu avec la mème culture, par deux examens successifs, à trois heures seulement d'intervalle, passage du rose au vert : c’est alors que le réactif protéique acide donne la coloration verte intense et ne virant pas au bleu qui est le témoin de la richesse du liquide en acroléine et de l'instant propice pour son extraction; c'est également à cette période que la distillation révèle au plus haut degré l'odeur intolérable de cette aldéhyde. Au contraire, lorsque le ferment se présente à la glycérine avec une activité déshydratante minima. ainsi qu'il arrive au SUR UN FERMENT CONTENU DANS LES EAUX 813 début et à la fin de la fermentation, mais pour des causes diffé- rentes, l'aldéhyde hydracrylique, soit qu'elle demeure dans le liquide, soit qu'elle se transforme, notamment par hydrogéna- tion, y domine néanmoins par rapport à l'acroléine, dont la pré- sence est cependant révélée par la nuance bleue finale de la réaction et l'épreuve organoleptique à la distillation. Exceptionnellement, le réactif donne uniquement, même au milieu de l'opération, une teinte rose violacé due à la première aldéhyde : dans ce cas, ou bien le ferment est impuissant à réaliser la seconde phase de la déshydratation, ou plutôt la for- mation de l’acroléine est trop réduite, ses métamorphoses sont trop rapides, pour qu'elle puisse être nettement reconnue. La coloration rose ne peut être attribuée à la peptone ou à l'un de ses dérivés, car, d'une part, le même liquide de culture non glycériné ne la reproduit pas dans des conditions compa-. rables ; d'autre part, elle se manifeste avec une culture glycé- rinée purement minérale. Il importe également de ne pas la confondre avec la réaction colorée analogue que peut produire l'HCI nitreux agissant seul sur l’albumine dans certaines conditions que j'ai précisées (1) : cette dernière diffère de celle que donne le réactif acide sur la matière protéique en présence d’une aldéhyde, à la fois par le temps nécessaire à sa production, qui est beaucoup plus long; par l'intensité de la coloration, qui reste toujours faible et par la nature même de cette coloration dans les solutions faibles d'albumine : en particulier, pour cette distinction, il convient, dans les essais comparatifs, de diminuer la dose d'albumine, jusqu’à ce que l'épreuve à blanc des réactifs ne donne qu'une légère coloration orangée. En rectifiant les liquides de culture qui donnent, avec le réactif protéique acide, la coloration verte, signe de la richesse maxima en acroléine, j'ai pu isoler une quantité suffisante de cette aldéhyde pour la caractériser par sa transformation en acide acrylique et sous forme de son sel d'argent. Chaque culture, du volume de 5 litres, est soumise à la distillation et le premier réactionnement est rectifié une seconde fois sur de l’oxyde de (1) Sur une réaction colorée des albuminoïdes, Bulletin de la Société Chi- mique, &. XXXIIT, 1905, p. 1200. 814 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR plomb, pour fixer les traces d'acides volatils : ce dernier distillatum, du volume de 100 cent. cubes environ, est aussitôt mis en rapport avec de l’oxyde d'argent récemment précipité et bien lavé ; on abandonne pendant deux jours à la température ordinaire et dans l'obscurité, en agitant fréquemment : au bout de ce temps, l'odeur acrylique a disparu; on porte à l’ébullition et on filtre. L'ensemble des liqueurs ainsi obtenues, du volume de 1 litre environ, et provenant de 50 litres de culture, est additionné de carbonate de soude jusqu’à réaction faiblement alcaline : on filtre, on évapore à sec et on traite le résidu par de l'acide sulfurique dilué de son volume d’eau; on filtre à nouveau, et la liqueur est soumise à la distillation. Le distillatum saturé à chaud par de l'oxyde d'argent, filtré, laisse déposer par refroidissement dans l'obscurité, des cristaux prismatiques à éclat velouté, brunissant lente- ment à la lumière. Ce fractionnement cristallin, recueilli et complètement séché à 95 degrés, dans une étuve à air, pèse 1 gr. 28. Soumis à l'analyse, 0 gr. 5718 ont donné : 0 gr. 4204 CO? ; 0 gr. 0904 H20 ; 0 gr. 3498 Ag ; nombres qui permettent d'établir les compositions centésimales suivantes : TROUVÉ CALCULÉ POUR C*H*O*.Ag CRE NES ce 19,85 20 ,11 16 HSE SOON ARR ERS LEE OT 1,74 1,68 OEM RS AN ET Ce » 17,88 AE Sr rt Meet LI AE UC e 60,54 60,33 100,00 résultats qui concordent avec la composition de l’acrylate d'argent. Il_est à remarquer que, dans cette opération, la présence d'aldéhyde hydracrylique ne nuirait pas à l'exactitude de l’ana- lyse, l'acide résultant de son oxydation étant décomposé par l'acide sulfurique en eau et acide acrylique. En déposant sur une lame une goutte de la culture et la colo- rant légèrement avec du bleu de méthylène boracique, l'examen microscopique révèle la présence de nombreux bacilles en forme de bâtonnets. Le ferment a été purilié par ensemencements successifs dans le même milieu, puis isolé par des cultures sur plaques de gélatine. Les colonies sont tardives, minuscules, arrondies, blanchâtres, non liquéfiantes. Une trace d’une colonie ense- mencée dans le milieu précédent, maintenu à la température de 30 degrés, m'a donné une culture d’un bacille présentant les caractères suivants (fig. 2) : Petits bâtonnets, mesurant 0,8 y de largeur, sur 2 u à 4 y de longueur, géné- ralement séparés, quelquefois soudés bout à bout, en ligne droite, courbe ou sinueuse, formant dans les cultures anciennes des filaments plus ou SUR UN FERMENT CONTENU DANS LES EAUX 815 moins longs : bacille très mobile, prenant le Gram, anaérobie facultatif, sporifère, résistant à la dessiccation et à une chaleur sèche de 100 degrés ; ne donnant pas d'indol dans les milieux peptonés, mais un peu d’ammo- niaque ; transformant en nitrite le nitrate de potasse, coagulant le lait : très facile à cultiver, avec température oplima de développement comprise entre 30 et 35 degrés; végétant dans le bouillon peptoné phéniqué à 1 p. 1.000, à la température de 42 degrés; il s'accommode de liquides nutritifs minéraux dans lesquels on dissout la matière fermentescible. , I fait fermenter les sucres et divers alcools polyatomiques, notamment la Fi6. 2. — Bacille des eaux. (Gr. : 1875/1.) glycérine et la mannite; il n'agit que modérément sur la dextrine et reste inactif vis-à-vis de l'amidon. À part l'aldéhyde hydracrylique et l'acroléine, ainsi que leurs dérivés par hydrogénation, comme le glycol triméthylénique; par polymérisation, acéta- lisation, résinification ou décomposition par l'eau, qu'il fournit avec la glycé- rine, les produits de ces fermentations sont les suivants : mélange gazeux constitué par de l'hydrogène en proportion dominante et de l'acide carbo- nique, alcool éthylique ; acides formique, acétique, une petite quantité d'acide volatil insoluble, et les acides lactique et succinique. Tous les faits précédents ont été reproduits et contrôlés avec 816 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR l'espèce pure, cultivée en milieu glycériné peptoné ou pure: ment minéral. Il est à remarquer que cette fermentation de la glycérine donne lieu à la formation d'une quantité appréciable de glycol triméthylénique. J'ai reconnu cette production en éludiant l’action en milieu minéral additionné de carbonate de chaux et en recherchant si la transformation était complète ; en utilisant les méthodes d'extraction usitées en pareil cas, j'ai obtenu invariablement un résidu sirupeux à saveur chaude et légèrement sucrée, que j'ai pris tout d’abord pour de la glycérine, mais qui n’en contient pas trace, si la fermentalion à été suffisamment prolongée et en prenant soin de protéger le bacille contre l'acidité du milieu en remettant en suspension le carbonate de chaux par l'agita- tion journalière du liquide ; ce résidu chauffé avec du bisulfate de potasse ne donne, en effet, aucun dégagement d’acroléine. Pour l'étudier, je l'ai produit en plus grande quantité en soumettant à la fermentation 300 grammes de glycérine en milieu purement minéral. Le liquide minéral de Laurent, additionné de 30 grammes de glycérine par litre, est réparti dans des flacons à l'émeri de 1 litre, dans chacun desquels on a introduit 20 grammes de carbonate de chaux; après stérilisation et refroidissement, on ensemence avec l'espèce pure, et les flacons, pleins et munis de leurs bouchons, sont placés à l'étuve à 30 degrés; on agite matin et soir; au bout de trois semaines, la fermentation est terminée et complète. Le liquide séparé du carbonate de chaux résiduel est soumis à la distilla- tion jusqu'à réduction au cinquième ; on précipite exactement la chaux par l'acide oxalique que l’on ajoute ensuite en léger excès pour libérer les acides de leurs combinaisons alcalines; on filtre, et le liquide est évaporé au bain-marie jusqu'à réduction au dixième, puis finalement dans le vide; il se forme un abondant dépôt de sulfate d'ammoniaque ; on reprend par l'alcool absolu qui insolubilise complètement ce sel, on filtre, et on évapore à nouveau au bain-marie d'abord, puis dans le vide pour achever de séparer l'alcool. On obtient ainsi un liquide sirupeux que l'on triture avec du sable et que l’on épuise par l'éther concentré pour enlever les acides fixes; le résidu incorporé au sable est ensuite dissous par l'alcool et la solution évaporée comme précédemment abandonne un produit sirupeux très épais, légèrement coloré en brun qui est constitué presque uniquement par du glycol triméthylénique, mélangé à une petite quantité d'une matière azotée d’excrétion du bacille. En soumettant ce produit à la distillation fractionnée, il se dégage d'abord à 18 degrés des traces d'alcool, ensuite, et jusque vers la température de 150 degrés, une notable quantité de vapeurs à odeur et à réaction ammo- SUR UN FERMENT CONTENU DANS LES EAUX 817 niacales ; puis le thermomètre monte rapidement et se fixe à 214 degrés, température à laquelle il distille un produit incolore, sirupeux, très épais, à odeur légèrement empyreumatique, à saveur chaude et iégèrement sucrée. Ce liquide ne renferme pas trace de glycérine et présente les caractères d'un alcool ; exposé longuement à l'air, il s'oxyde lentement en donnant une aldéhyde reconnaissable par le réactif de Schiff; l'oxydation par l’eau oxygénée en liqueur très diluée et en présence de sulfate ferreux, suivie de l’élimi- nation du fer et de l’acide sulfurique par l’eau de baryte, donne immédiatement et avec plus d'intensité le même résultat : de plus, l’aldéhyde ainsi engendrée fournit avec le réactif pro- téique acide les caractères de coloration de l'aldéhyde hydracry- lique : tous résultats qui, à eux seuls, suffiraient presque à caractériser le propylglycol normal. Soumis à une deuxième rectification, puis à l'analyse élé- mentaire, 0 gr. 3520 de ce produit ont donné : 0 gr. 6115 CO*; 0 gr. 3396 H°0; d'où les compositions centésimales : TROUVÉ CALCULÉ POUR C*HO* CR RE RE 41,40 471,31 ÉD RS 2 EU 10,71 10,52 OR Ie » 42,11 100,00 résultats qui concordent avec la composition d’un propylelrcol. Cette production de glycol triméthyiénique que J'avais déjà observée dans l’étude du Bacillus amaracrylus est intéressante, car elle peut servir d'appui à la formation de l'aldéhyde hydra- crylique jusqu'ici simplement révélée par une réaction colorée et par sa qualité de corps aldéhydique dérivé de la glycérine et transformable en acroléine. Ce propanolal, corps de transition entre la glycérine et l'acroléine, autre dérivé dont la présence a été dûment cons- tatée, ne jouerait-il pas le même rôle entre la glycérine et Île propylglvecol dont il est précisément l’aldéhyde et dont l'ana- lyse du liquide révèle également l'existence ? Sachant que cette fermentation de la glycérine est accom- pagnée d'une production abondante d'hydrogène, résultant de sa transformation analytique én alcool, en acides formique, acétique, lactique, ou même synthétique sous forme d'acide 818 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR succinique, cette hypothèse fondée sur la génération classique d'un alcool par hydrogénation de son aldéhyde prend l'appa- rence d'une très grande vraisemblance. En résumé, cette idée étant admise, deux actions principales traduiraient, au moins en partie, cette fermentation de la elycérine : L° Une déshydratation avec production d'aldéhyde hydra- crylique, déshydratation complétée par une transformation partielle de ce corps en acroléine : cette action primordiale élant subordonnée à la présence d’un être vivant. 2° Une hydrogénation, transformant une autre partie de l'aldéhyde hydracrylique en son alcool, le glycol triméthylé- nique : cette action secondaire étant purement chimique. L'aldéhyde hydracrylique deviendrait alors en quelque sorte le pivot de cette transformation et ligurerait, même en priorité sur l'acroléine, dans la catégorie de ces corps transitoires dont la présence momentanée dans le vase à fermentation est beau- coup plus utile à reconnaître que celle des termes ultimes et définitifs, parce qu'ils traduisent le mode de fonctionnement de la cellule ferment. , Tous ces faits de l’expérience et de déduction m'ont conduit à cultiver le ferment en milieu nutritif seul ou en présence de substances sur lesquelles il agit, olycérine, mannite, sucres, chacun de ces milieux étant additionné d’aldéhyde hydracry- lique par petites doses et graduellement espacées. La quantité maxima de cette aldéhyde tolérée par le ferment est relative- ment beaucoup plus grande que pour l'acroléine : l’aldéhyde hydracrylique subit une transformation assez rapide ; mais ces expériences ne sont encore qu'à leur débüt. En résumé, par ses caractères morphologiques, par ses pro- priétés biochimiques, au moins qualitatives, ce ferment retiré des eaux, apparaît comme identique au Bacillus amaracrylus, isolé des vins amers. Il reste à savoir si cette ressemblance S'aflirme encore par l'analyse quantitative des produits formés et si, enfin, ce ferment ensemencé dans un vin de composition lavorable à son développement, peut lui communiquer la maladie de l'amertume : c'est là le but de recherches actuelle- ment en cours ÉTUDES SUR LA RICINE RECHERCHE DE LA RICINE [TOXINE ET AGGLUTININE) DANS LES DIFFÉRENTES ESPÈCES ET VARIÉTÉS DE RICIN par HENxRt AGULHON. Stillmark à signalé la présence de la ricine (toxine ageluti- nine) dans 10 espèces différentes de ricin (1). Il nous a paru intéressant de reprendre et d'étendre cette recherche. En effet, il est important de savoir, au point de vue théorique, si la présence de ricine est une propriété spécifique des graines du genre Ridinus, un caractère définissant ce genre, comme la présence de certains alcaloïdes définit certaines espèces végé- tales. D'autre part, la teneur en toxine et agglutinine est-elle constante ou variable suivant les différentes espèces et variétés pour un même poids de graine ? Cette dernière question n’a pas été abordée par Stillmark. Nous avons pu nous procurer 21 espèces ou variétés de graines dont on trouvera l'énumération dans le tableau ci-joint. La longueur des graines variait de 10 millimètres (R. africanus) à 22 millimètres (AR. zanzibariensis enornis). Dix grammes de graines de chaque espèce étaient broyées au mortier avec 20 cent. cubes d’eau physiologique. Après un quart d'heure de contact, on filtrait sur filtre mouillé. Dans ces conditions on obtenait un liquide clair sur lequel nous recher- chions, d’une part la toxine, d'autre part l’agglutinine ; 1 cent. cube de nos solutions correspondait donc à 0 gr. 5 de graine (50 p. 100). 1) Ueber Ricin, Arbeil. des pharm. Inst. Dorpat, t. LT, p. 145, 1889 (M. Ali- laire avait déjà reconnu l'existence de toxine spécifique dans certains des échantillons que nous avons étudiés. — Recherches inédites). S20 ANNALES DEMAINS PEUR PASREUR RécHERCHE ET TITRAGE: DE LA TOXINE: L'animal d'expérience était le cobaye de 400 à 450 grammes. Les injections étaient faites sous la peau du ventre. Des dilutions successives dans l'eau physiologique de la liqueur primitive nous permettaient d'en injecter 1/10,1/100,17/1000,1/10.000 de cent. cube sous le volume constant de 1 cent. cube. Le tableau ci-contre donne les résultats obtenus avec les dif- férentes espèces et variétés de ricin. On y note le temps au bout duquel l'animal injecté meurt. Pour les animaux vivants encore après une semaine, nous indiquons la grandeur de l’eschare, en appelant « eschare étendue » une eschare de diamètre supé- rieur à 3 centimètres, « petite eschare » une eschare de diamètre inférieur à 1 centimètre, et simplement «eschare » tout type intermédiaire entre les deux extrêmes. On voit que, pour la dose de 1/100 de cent. cube, l'extrait aqueux à 50 p. 100 des graines de toutes les espèces et variétés de ricin étudiées tue le cobaye de 400 à 450 grammes en 1jour 1/2 à 2 jours. Pour les doses inférieures les variétés de résistance individuelle rendent la concordance des résullats moins nelte, mais ces résultats sont cependant du même ordre. Dans tous les cas, les réactions observées étaient bien les réac- lions caractéristiques de l’intoxication ricinique, comme l'ont montré l'étude anatomo-clinique et l'influence neutralisante du sérum spécifique préparé par M. Truche. On peut donc dire 1° Que les 21 espèces et variétés de ricin étudiés renferment de la ricine (1); 2° Que pour un méme poids de graine, la quantité de toxine, mesurée par ses effets, est sensiblement identique dans tous les cas: La présence de ricine apparaît donc bien comme un carac- tère fixe du genre Æicinus. (1) Quatre des espèces étudiées par Stillmark ne figurent pas dans celles que nous avons pu nous procurer : À. guyanensis nanus, R. altissimus, R. bra- siliensis el R. jamaicensis. Cela fait donc en tout 25 espèces ou variétés dans lesquelles la présence indubitable de toxine a été démontrée jusqu'ici. _ ” R LA RICINE SU ETUDES ‘2/4 ‘TE U9 WON *91189$9 91194 ‘91189S9 91194 ‘onpu9)9 21HMPISA ‘2118989 9194 9418969 91194 *onpu9}9 24118984 MARLREN | JIBISA *“AI109S4 ‘91189S9 91194 "AHUP9S AH "AUPISA RARE ‘21109S4 -sinol L u9 JON ‘a1189$9 911194 91418989 91194 RATER | "9118959 9119 "HIPIS ii 000 0F/Y : SAILIKINA NOILNTO "DAILIS "269$ PARLER! ‘sinof G u9 JON "A189S ARLES | ‘onpu97) AUBISA ‘onpuo}) 2AUPISH "911898 ‘aly Te ua ON ‘“sanof 3 U9 ON ‘sinof L u9 JON ‘sanof € ua TION ‘onpu9)9 214189S4 ‘sanof 4 Ua MON ‘onpu92)9 JHULISE ‘SAnO[ L U9 JON a/1 TE uo WON ‘Sanol L U9 ON ‘Sinof + Ua JON "AURISA [ Y G [ L l ( V I L [ [ | l l u9 u, u9 u) u) u9 u9 Uu) U9) UY u9 ua u9 Uu9 u9 el a Ale -sanot tel “sanof safe ‘sanof ‘sanof ah et ‘[ z op suiow CTel a TEE Ed M 2 Area LR AA | AA Ml GI ouL a] A0 vale "a/v ‘À A ON HON TON JOIN HON JON ON TION TON U9 JON HON HON RON MON TON HON TION WHOIN JHOIX ON JOIN a — © 4Q 44N9 AULANILNA9 40 SVOILOVHA NA AALOHINI ASOU -inolf y ua ‘Anof j u9 “anof y u9 noi | uo ‘[ y op surtout 9p SUIOU JIONN on WION AIOIN u9 JON ua JON “snaunduind sisuaru * SN9U19909 * ‘ * SIWUOUA * Aou * *SN]DJNODU * SUIISDAAULI + *snyD4NJod snaundand snyjh SISU9LUDQIIUNZ 1ddipuyd * S1p1QD4U 1U0SQUE °Y tuosqrb ‘i] ‘auosqrb ‘y ne “ul jdouonu * * * Sn240q4D SiSU9I1U0Q40Q ‘y + snuppruiound snpriqhy ‘4 D TC ROM OMOMONNT) aundund ‘1 * sinq0pads ‘y 40700747 "+ * SnaUMPUDS * + ‘ * siSUa/0poqQUIN A D AO - + “uolput Siunwuu nupnoit/n ‘y " AOUTU SIUNUUOD ‘YU 109 SNUIDU] 822 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR RECHERCHE ET TITRAGE DE L'AGGLUTININE. Nous avons recherché et titré comparativement la propriété agelutinante de l'extrait aqueux des différentes graines sur Les hématies de lapin lavées à l’eau physiologique. De petits tubes, contenant chacun 1 cent. cube d'une émulsion à 5 p. 100 de ces hématies dans l’eau physiologique, recevaient, sous le volume de 1 cent. cube, des dilutions de l'extrait aqueux des graines correspondant respectivement à 1/10, 1/100,1/1.000, 1/10.000, 1/100.000 de cent. cube du liquide primitif. On abandonnait pendant 24 heures à la température ordinaire. Avec toutes les oraines examinées les résultats observés pour les différentes dilutions ont été sensiblement les mêmes, à savoir : Pour 1/10 de cent. cube, agglutination très rapide et totale; en moins d'une heure, un coagulum dense se déposait au ou des tubes. Pour 1/100 de cent. cube, agglutination rapide et totale ; coagulum dense formé dans la journée. Pour 1/1.000 de cent. cube, agglutination lente; le lendemain, coagulum fragile. Pour 1/10. 000 de cent.cube, rien le jour mème; le lendemain, trace d° agelutination dans dires cas seulement. En résumé, les 21 sortes de graines de ricin renferment l'agglutinine spécifique: leur teneur est sensiblement la méme; 1/1.000 de cent. cube de leur extrait aqueux à 50 p. 100 agglu- tine encore 1 cent. cube: d'hématies de lapin, dans nos condi- tions expérimentales. Nous sommes donc amené à conclure que la présence, dans les graines, de la toxine et de l’agglutinine, en quantité sensi- blement constante pour un même poids de substance végétale, doit être considérée, jusqu'à nouvel ordre, comme une propriété fixe du genre Ricin. Le Gérant : G. Masson. Paris — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. 98° ANNÉE SEPTEMBRE-OCTOBRE 1914 N° 9-10 (Paru le 25 Décembre 1914 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX par A. LAVERAN. L'étude des leishmanioses naturelles ou expérimentales chez les animaux présente un grand intérêt; la leishmaniose natu- relle du chien est probablement de même nature que le kala-azar infantile ou méditerranéen, et il est vraisemblable que le chien joue un rèle dans la propagation de cette maladie. L'étude des leishmanioses humaines est difficile quand on se borne aux faits que peuvent fournir l'observation des malades et les nécropsies; grâce à la réceptivité de certains animaux pour les Leishmania, nous pouvons étudier à loisir, dans les labora- (oires, beaucoup de problèmes d'une grande importance, tels que les modes de transmission des Leishmania et les caractères communs ou distinctifs des différents virus, d'après les infec- lions auxquelles ils donnent lieu chez différentes espèces animales. J’étudierai successivement : I. La leishmaniose naturelle du chien ; IL. Les infections expérimentales produites par la Z. infan= lum ; LIL. Les infections expérimentales produites par la L. Dono- Canx, IV. Les infections naturelles ou expérimentales produites par la L. fropica. 82% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR l. — LEISHMANIOSE CANINE NATURELLE Hisrorique. RépartirIon. — En 1908, C. Nicolle et C. Comte ont publié la première observation de leishmaniose naturelle du chien (1). I s'agissait d’un caniche noir, très amaigri, pré- sentant un écoulement purulent d'une des oreilles, asphyxié : à la fourrière de Tunis. La rate était un peu hypertrophiée. Des Leishmania existaient en assez grand nombre dans la rate et dans la moelle osseuse, en très petit nombre dans Île foie. C. Nicolle et C. Comte qui, en 1908, ont examiné 222 cadavres de chiens provenant de la fourrière de Tunis, ont constaté que , de ces animaux, soit 1,8 p. 100, étaient atteints de leishma- niose (2). De 31 chiens ie environs de Tunis, de Gafsa et de Sfax examinés, aucun ne fut trouvé infecté. Ces faits ont été confirmés par un grand nombre d’observa- teurs, non seulement pour la Tunisie, mais pour toutes les régions dans lesqueiles le kala-azar infantile existe à l'état endémique. W.-L. Yakimoff M Yakimoff qui ont répété, à Tunis, les recherches de Nicolle et Comte sur les chiens de la four- rière (3) ont trouvé 5 chiens infectés de leishmaniose sur 299, soit une proportion 1,67 p. 100, presque identique à celle signalée par Nicolle et Comte. L'infection était légère chez 2 chiens, forte chez les 3 autres. Gray, qui a repris ces recherches à Tunis, a constaté l'infec- lion de 2 chiens sur 127 examinés, soit une proportion de 1,6 p. 100 (4 Enfin C. Nicolle, dans une dernière série de recherches, sur les chiens sacrifiés à la fourrière de Tunis, mais qui n'a porté, cette fois, que sur les chiens maigres et malades, au lieu de porter, comme précédemment, sur l’ensemble des animaux, à trouvé que la proportion des chiens infectés de leishmaniose (4) G. Nicoze et C. Coure, Acad. des Sciences, 6 avril 1908. (2). CG. NicoLLe et C. Conte, Arch. de l'Institut Pasleur de Tunis, 1908, p. 109. (3) W.-L. Yaxmorr el et N. Kour-Yaximorr, Arch. de l'Institul Pasleur de Tunis, 1911, fasc. 4. (4) A.-C. “5 Gray, Soc. de path. exotique, 12 mars 1913. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 825 était de 5,50 p. 100. Cette proportion à été à peu près la même aux différentes saisons (1). En dehors des enquêtes systématiques faites à Tunis, 2 chiens atteints de leishmaniose ont été observés, le premier par C. Nicolle à Khereddine, près de La Goulette (Tunisie), le second par Langeron, à Tunis, en septembre 1911. Ed. Et. Sergent et Senevet ont constaté l'existence de la leishmaniose canine à Alger (2). Senevet a trouvé, au prin- temps, 3 chiens infectés sur 186, soit 1,6 p. 100 et, en été, L chiens infectés sur 45, soit 8,8 p. 100. La leishmaniose canine serait done plus fréquente en été qu’au prin- temps. y En 1912, d'août à septembre, Lemaire, Ed. Sergent et Lhé- ritier ont examiné 205 chiens tués à la fourrière d'Alger; 2 animaux seulement étaient infectés de Leishmania, soit, à très peu près, une proportion de 1 p. 100. En 1913, d'avril à juillet, les mêmes observateurs ont examiné 272 chiens pro- venant également de la fourrière d'Alger sur lesquels 7 ont été trouvés infectés, soit une proportion de 2,57 p. 100 (3). De ces chiffres on ne peut pas conclure à la prédominance au printemps de [a leishmaniose canine, parce que l'examen des chiens n'a pas été fait dans les mêmes conditions en 4912 et 1913. En 1912, ies auteurs ont porté le diagnostic après examen de frottis de rate et de moelle osseuse, tandis qu’en 1913, ils ont procédé par ensemencement de la moelle osseuse, ce qui constitue un moyen de diagnostic beaucoup plus préeis que l’examen histologique de frottis de la rate et de la moelle osseuse. Critien a constaté que la leishmaniose était commune à Malte chez les chiens, comme chez les enfants; sur 30 chiens exami- nés, 3 avaient des Leëshinania daus la rate (4). Wenyon, qui a recherché à Malte la fréquence de la leishma- niose canine, est arrivé à un chiffre très voisin de celui de (1) CG. Nicore, Soc. de path. exolique, 10 juin 1914. (2) En. et Er. SERGENT, Sac. de path. exotique, 12 octobre 1910. — G. Sexever, méme Soc., 14 février 1912. (3) G. LemaIRE, En. SERGENT et A. LuékiriER, Soc. de path. exolique, 8 octobre 1913. (4) À. Crrrten, Arch. de l'Institut Pasteur de Tunis, 1910 et Ann. 0j trop. med. a. parasilol., avril 1914. 826 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Critien; sur 46 chiens examinés, 6 ont été trouvés infectés (1). D. Alvarès et Pereira da Silva, sur 300 chiens examinés à Lisbonne, en ont trouvé 8 qui étaient infectés de leishmaniose. Dans une autre série de recherches, P. da Nilva à noté, à Lisbonne, # chiens infectés, sur 109 examinés, et les Leish- mania n'ont été recherchées que dans la rate (2). G. Pittaluga, en Espagne, a observé 2 chiens infectés de leishmaniose aux environs de Tortosa et un troisième chien infecté à Beninar {province d'Almeria (3)]. On sait que de nombreux cas de kala-azar infantile ont été signalés depuis quelques années dans l'Italie méridionale, principalement en Calabre et en Sicile; la leishmaniose canine est enzootique dans les mêmes régions. R.Jemma, à Palerme, a examiné 227 chiens avec résultat négatif au point de vue de la leishmaniose, mais, aux environs de Palerme, il a constaté à deux reprises l'infection du chien dans les mêmes localités que le kala-azar infantile; un des chiens infectés vivait dans le voisinage immédiat d'un enfant atteint de kala-azar (#4). À Bordonaro, près de Messine, Basile, sur 33 chiens examinés (par ponction du fémur), a trouvé 27 fois des Leishmania; 1 y avait des chiens infectés dans toutes les maisons renfermant des enfants atteints de kala-azar (5). Si, en Italie, la leishmaniose canine a élé signalée dans toutes les régions d’endémicité du kala-azar infantile, il s'en faut qu'il y ait une relation étroite et constante entre Îles chiffres de fréquence de ces maladies chez le chien et chez l'enfant. À Palerme, Caronia et di Giorgio n'ont trouvé qu'un chien infecté sur 1.005 chiens examinés (6) et, à Rome, sur 60 chiens du dépôt municipal examinés, 16 ont été trouvés infectés (7); or, à Palerme, le kala-azar est endémique, tandis que la région de Rome parait indemne. (4) C.-M. Wenxow, Soc. of trop. med. a. hyg., janv er 1914. (2) D. ALvarës, Med. conlemporanea, 20 mars 1910. — D. ALvarEs et E. PEREIRA pA SiLva, *#éme recueil, 26 mars 1911 et Arqg. do Inst. bact. Camara Pestana, iuin 1914. (3) G. Pirrazuca, Pathologica, 1e" mars 1914. (4) R. Jeuua, Pathologica, 1% juin 1910 et 1°" août 1912. (3) GC. Basizr, Rendiconti d. R. Accad. dei Lincei, 1910, €. XIX, p. 158. (6) Carowra et pr GiorGio, Pathologica, 15 avril 191. (7) @. BASILE, 0p. cit. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 827 Sur 310 chiens examinés à Marseille par Pringault, 5 ont été trouvés infectés de leishmaniose, soit une proportion de 1,61 p. 100 (1). Jusqu'ici aucun cas de kala-azar infantile n'a été observé dans la région de Marseille. La leishmaniose canine est commune en Grèce. Sur 589 chiens examinés à Athènes par {Cardamatis, 81 élaient parasités, soil 13,75 p. 100 (2). Sur 48 chiens examinés par Lignos dans l’île d'Hydra, 8 étaient infectés de leishmaniose, soit 16,66 p. 100 (3); les recherches de Lignos ont été faites de mai à octobre 1912. Dschunkowsky et Luhs ont signalé l'existence de la leishma- niose canine en Transcaucasie (4); la maladie ne serait pas rare dans cette région, d'après Marzinowsky (5). À Taschkent (Turkestan), W.-L. Yakimoff, M*° Yakimoff et N.-J. Schokor, sur 647 chiens examinés d'avril à septembre 1913, en ont trouvé 157 qui étaient infectés de leishmaniose, ce qui donne la forte proportion de 24,26 p. 100 (6). Au Soudan, Bousfield a trouvé dans la rate d’un chien qui vivait dans la même hutte qu'un malade atteint de Kkala-azar très aigu des éléments parasitaires qui paraissent être des Leishmantia (T). Jusqu'ici, la leishmaniose naturelle du chien n'a pas été observée dans les régions où le kala-azar indien est endé- mique. EvoLuTiox. SympTôuEs. — La maladie est tantôt légère et latente, tantôt grave; la durée de son évolution, plus où moins rapide, est difficile à fixer, attendu que les débuts sont toujours méconnus. Dans la forme légère ou latente, la maladie ne peut ètre (1) E. PrivGauzr, Soc. de palh. exolique, 10 janvier et 10 juin 1914. (2) J. Carpamwaris, Soc. de path. exotique, 14 février 1912. (3) A. Liexos, Soc. de path. exolique, 12 février 1913. (4) E. Dscauxkowsky et J. Luus, ZXe Congrès internat. de méd. vélér., La Haye, septembre 1909. (5) E.-1. Marzinowsky,Soc. de palh. exolique, 11 décembre 1912. (6) N. Kour-Yakimorr, W.-L. Yakimorr et N.-J. Scnokuor, Soc. de palh. exotique, 11 juin 1913. — W.-L. Yakimorr et N.-J. Scaoknok, méme Soc. IT mars 1914. (1) L. BousrteLp, J!. R. Army med. Corps, 1910 et Transact.of the Soc. of trop. med. a. hyg., avril 1912. 828 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR reconnue que par les procédés de recherche des Leishmania qui serontindiqués plus loin. (V. Diagxosric.) Les manifestations cutanées qu'on observe parfois chez les chiens atteints de leishmaniose, dépendent en général. d'affections parasitaires indépendantes de cette maladie (P. da Silva.) Dans les formes graves, le symptôme principal, et souvent unique, est fourni par l'amaigrissement. Chez certains animaux, le poil tombe par places ou bien de petites ulcérations se pro- duisent aux muqueuses buccale, conjonctivales ou nasale. A une période avancée de la maladie, les chiens sont apathiques, ils restent couchés et, quand on les oblige à se lever, ils mon- trent des signes d'une faiblesse surtout apparente dans les pattes postérieures. Chez quelques animaux, il existe une véri- table parésie du train postérieur. L'anémie est généralement peu marquée, l'appétit est conservé jusqu'à la période termi- nale; à ce moment, on observe parfois de la diarrhée. La rate est souvent hypertrophiée, mais cette hypertrophie est très difficile à constater. La mort se produit d'ordinaire en hypo- thermie. Les Leishmania sont généralement assez nombreuses pour que leur recherche soit facile dans la moelle osseuse, dans la rate où dans le foie (V. nraëxosric). Quelques chiens présentent de la kératite avec opacité con- sécutive d’une cornée ou des deux cornées. La durée approximative de la maladie varie de trois mois à un an (|). ANATOMIE PATHOLOGIQUE. — La rate est souvent augmentée de volume, elle est ramoliie dans les formes aiguës de l’infec- lion, dure, comme sclérosée, chez les chiens qui sont sacrifiés à une période avancée de la maladie. Le foie peut être aussi augmenté de volume dans les formes aiguës, sclérosé dans les lormes chroniques. La moelle osseuse est rouge, diffluente. C'est dans la moelle osseuse que l’on trouve d'ordinaire les Leishmania en plus grand nombre ; parmi les viscères les plus (4) Consulter pour la description de la leishmaniose naturelle du chien : C. Basie, À. Accad. dei Lincei, 20 novembre 1910; W.-L. Yakimorr et N. Kou.- YarimMorr, Arch. de l'Inst. Pasteur de Tunis, 1911; G. LEMAIRE, Ep. SERGENT et A. LHÉRITIER, Revue méd. d'Alger, janvier 1914. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 829 atteints, il faut citer en premier lieu la rate, en second lieu le foie. On trouve assez souvent des Leishmania dans les gan- glions Iymphatiques. Les parasites, très nombreux dans la moelle osseuse et dans la rate, chez les chiens atteints d’infec- lions aiguës graves, sont si rares dans les formes légères ou à la période terminale des infections en voie de guérison que leur recherche présente de sérieuses difficultés. C. Basile a constaté, à l’autopsie de deux chiens atteints de leishmaniose naturelle, la présence de Leishmania dans la moelle épinière, ce qui rendrait compte des symptômes spi- naux assez fréquents à la dernière période de la maladie (4). Lacava avait noté précédemment l'existence de Leishimania ‘dans le liquide cérébro-spinal d'un enfant atteint de kala-azar. Lemaire, Ed. Sergent et Lhéritier ont signalé l'existence de Leishmania dans l'épaisseur de la cornée d’un chien atteint de leishmaniose compliquée de kératite (2). AGENT PATHOGÈNE. — Les Leishmania que l'on trouve chez les chiens infectés naturellement sont identiques, morphologi- quement, à celles du kala-azar humain, ce qui me dispense d'en faire la description; comme ces dernières, elles donnent, dans le milieu de Novy simplifié, de belles cultures de Fla- gellés qu'il est impossible de distinguer, d'après leurs carac- tères morphologiques, des Flagellés de culture des Leishmania Donovani où des L. infantum. Chez les chiens infectés natu- rellement, la répartition des parasites est la même que chez les chiens atteints de leishmaniose expérimentale. Dans les deux cas, c'est la moelle osseuse qui est le siège principal et parfois unique des Leishmania; par ordre de fréquence des parasites, il faut citer ensuite la rate et le foie. Les animaux sensibles au virus humain sont également sen- sibles au virus canin. Nicolle et Conor ont constaté que le singe était sensible au virus canin comme au virus humain du kala-azar et que les localisations des parasites étaient les mêmes chez les singes inoculés avec l’un ou l’autre de ces virus (3). (1) C. Basrice, R. Accad. dei Lincei, 20 avril 1913. (2) G. Leuamme, ED. SERGENT et A. Laéririer, Soc. de path. exotique, 11 mars 1914. (3) C. Nicouce et M. Coxor, Soc. de path. exotique, 12 juin 1942. 830 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR On peut produire, chez la souris blanche, des infections généralisées par l’inoculation intrapéritonéale du virus de la leishmaniose naturelle dn chien, comme par l’inoculation du virus humain du kala-azar (1). Si grandes que soient les ressemblances entre la leishma- niose naturelle du chien et la leishmaniose expérimentale produite par l'inoculation du virus humain, quelques observa- teurs contestent encore l'identité de ces infections. Gabbi, Spagnolio et Giugni ont comparé le tableau clinique de la leishmaniose naturelle du chien à celui du kala-azar chez l’homme et ont conclu des dissemblances existant entre ces tableaux à l'existence d’entités morbides distinctes (2); cette comparaison prète à la critique : il est assez naturel en effet que l'homme et le chien ne réagissent pas de la même manière ; si les observateurs précités avaient comparé le tableau clinique de la leishmaniose naturelle du chien, non pas au tableau clinique de la maladie chez l'homme, mais à celui de l'infection produite chez le chien par l'inoculation du virus du Kkala-azar, ils auraient vu que, dans les deux cas, l'évolution et les symptômes de la maladie élaient les mêmes. Les auteurs italiens objectent, avec plus de raison, qu'il n'y a pas de rapport exact et constant entre la fréquence de la leishmaniose naturelle chez le chien et celle du kala-azar infantile. Scordo, Giugni et Moïdovan ont recherché comment les cul- tures de la Leishmania du chien (infection naturelle) et de la L. infantum se comportaient in vitro sous l’action du sérum de sujets atteints de kala-azar (3). D’après Scordo, les flagellés des deux espèces de cultures s’agglutinent, s’'immobilisent et se désagrègent au bout d'un certain temps, mais ces phéno- mènes se produisent avec un notable retard dans les cultures de la Leishmania de l'infection naturelle du chien. Giugni et Moldovan, plus affirmatifs, concluent que dans des conditions (1) A. Jaxnor, Soc. de path. exotique, 10 décembre 1913: (2) A. Sracnozio et Fr. Giuenr, Malaria e malallie dei paesi caldi, 20 août 1914, anno V, p. 297. (3) F. Scorno, Malaria e malattie dei paesi caldi, 20 août 1914. — G. Spa- GNOLIO et FR. GuiGnr, méme recueil, même numéro. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 831 d'expérience identiques, les deux cullures se comportent d’une manière complètement différente. Les phénomènes sur lesquels Scordo, Giugni et Moldovan se basent pour distinguer la Leishmania de l'infection naturelle du chien de la Leishmania du kala-azar infantile sont bien loin d'être assez caractéristiques pour trancher la question. En ce qui me concerne, j'ai cherché plusieurs fois à obtenir des agglu- üinations dans des cultures de Leishmania infantum à Vaide du sérum d'animaux en cours d'infection par cette Leishmania, ou après guérison, et les résultats obtenus ont été nuls ou incertains. Toutes les probabilités paraissent être en faveur de l'iden- lité de la L. infantum et de la Leishmania de l'infection natu- relle du chien; toutefois il n’est pas douteux que la question présente encore des obscurités. Pourquoi le rapport de fré- quence de la leishmaniose du chien et de la leishmaniose infan- ile est-il aussi inconstant? Pourquoi est-il si rare de constater l'existence de chiens infectés de leishmaniose dans [es maisons où se trouvent des malades atteints de kala-azar? Enfin si, comme cela paraît probable, le kala-azar indien est de même nature que le kala-azar méditerranéen, comment se fait-il que, dans l'Inde, toutes les recherches faites pour découvrir des cas de leishmaniose naturelle du chien soient demeurées infructueuses? Il est probable qu'il ne sera possible de répondre à ces questions que lorsque nous connaîtrons le mode de dif- fusion des leishmanioses. Mopes p'inrecriox. — Dès 1908, Nicolle a émis l'hypothèse que la leishmaniose naturelle du chien et le kala-azar infan- tile étaient propagés par les puces (1), et quelques faits expéri- mentaux ont paru confirmer cette opinion. D'après Basile, la L. infantum pourrait évoluer dans le tube digestif de la puce du chien, C{enocephalus canis, et de la puce de l’homme, Pulex irritans, et ces deux insectes seraient capables de propager la maladie chez l’homme, comme chez le chien. Le même observateur à réussi à infecter un jeune chien en le (4) C. Nicozze, Arch. de l'Institut Pasteur de Tunis, 1908, fasc. III, p. 116. 832 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR plaçant dans une cage voisine de celle d’un chien fortement infecté de leishmaniose et ayant de nombreuses puces, qui émi- grèrent en partie sur le jeune chien. Basile a infecté, d’autre part, une souris en lui inoculant le contenu du tube digestif de puces nourries sur des chiens atteints de leishmaniose (1). Ed. et Et. Sergent, A. Lhéritier et G. Lemaire ont cité le fait suivant : une chienne en bonne santé, piquée par de nom- breuses puces nourries sur un chien atteint de leishmaniose, s'est infectée ; à l’autopsie, on a constaté l'existence de Leish- mania dans la rate et dans la moelle osseuse (2). On peut objecter que la leishmaniose naturelle du chien n'est pas rare dans les régions où ces expériences ont été faites el que les procédés ne par les auteurs précités pour constater l'absence de Leishmania chez les chiens soumis aux piqûres de puces, la ponction du foie notamment, sont tout à fait insuffisants. La chienne de Ed. et Et. Sergent, Lhé- ritier et Lemaire, essayée par ponction du foie au début de l'expérience, n'a montré, à l’autopsie, aucune Leishmania dans le foie, alors qu'il y avait des Leishmania dans la rate et dans la moelle osseuse, Ce qui prouve ques le procédé de diagnostic employé était insuffisant. Les inoculations, en apparence Arte faites à différents animaux avec le contenu des puces ayant sucé du sang de sujets infectés de leishmaniose ne sont pas non plus probantes:; l'infection des puces par des Flagellés qui n'ont rien à faire avec les Leishmania est très fréquente (3) et il résulte des recherches de Laveran et Franchini que ces Flagellés des puces, de la puce du chien en particulier, C{enocephalus canis, peuvent donner lieu, chez certaines espèces animales, à des (1) C. Basize, À. Acead. dei Lincei, 20 novembre 1910, S janvier, 19 février, 19 mars 1911 et 6 avril 1913. (2) Evo. et Er. SERGENT, À. LuéririEr et G. Lemaire, Soc. de palh. exotique, 9 octobre 1912. (3) A. Barrour, Journal of Hygiene, 1906, p. 1040 et Second Report of the Wellcome research Laboratories, Khartoum, 1906, p. 105. — Parron el Srrrc- KLAND, Parasitology, 1908. p. 333. — G. SANG10RGI, Pathologica, 15 janvier 4911. — V. Marzoccnt, Pathologica, 1911, p. 256. — A. Porter, Parasitology, octobre 1911. — H.-B. Fanraam, Brit. med. Assoc., Liverpool, juillet 1912 et Brit. med. Journal, 2 novembre 1912. — En. Caarron et DELANOE, Soc. de Biologie, 21 juil- let 1912. — W. Nôccer, Arch. f. Prolistenkunde, 11 mai 1912. — H.-B. FANTHAM et A. Porter, Ann. trop. med. a. parasitol., 30 décembre 1913. — A. LAVERAN, Soc. de path. exotique, 1913, t. VI, p. 113. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 833 infections légères, caractérisées par la présence dans le foie, dans la raie et dans la moelle osseuse, d'éléments parasitaires ayant une grande ressemblance avec les Leishmania (1). | D'après Basile, les parasites que l’on trouve dans les puces infectées sur les enfants ou sur les animaux atteints de leishmaniose seraient bien distincts, morphologiquement, des Herpelomonas propres aux puces. Cette assertion me parait très contestable; j'ai trouvé chez des puces infectées naturellement, et n'ayant certainement sucé le sang d'aucun sujet atteint de leishmaniose, des parasites qui avaient tout à fait l’aspect des Leishmania. Massaglia (2), Marshall (3), Pereira da Silva (4), Wenyon (5) ont essayé sans succès d’infecter des chiens à l’aide de puces ayant sucé du sang d'animaux atteints de leishmaniose; les expériences de Wenyon, faites à Malte, dans d'excellentes conditions, sont particulièrement intéressantes. Wenyon avait amené d'Angleterre 4 chiens; 2 de ces chiens furent soumis aux piqüres de nombreuses puces nourries sur un chien infecté de leishmaniose; ces deux chiens moururent d'anémie el on pouvait supposer qu'ils s'étaient contaminés, mais il fut impossible de trouver des Leishmania à l'examen des frottis du foie, de la rate ou de la moelle osseuse, et des essais de culture donnèrent des résultats négatifs. D'après Basile, les conditions de température ont une grande importance dans les expériences de transmission de la leish- maniose par les puces; les températures de 18 à 30 degrés seraient seules favorables au développement des Leishmania ; au-dessous de 18 degrés, et au-dessus de 30 degrés, les puces ne pourraient pas s’infecter. On s'expliquerait ainsi les résul- tats négatifs obtenus par quelques observateurs. On se place aussi dans des conditions défavorables à l'expérience quand on nourrit les puces sur des animaux faiblement infectés, ayant des Leishmanie très rares dans le sang (6). (4) A. LaAvERAN et G. Francninr, Acad. des Sciences, 17 septembre el 3 novembre 1913; Soc. de path. exotique, 8 juillet 1914. (2) A. MassaGzra, Palhologica, 1er juin 1942. (3} W.-E. MaArsHaLe, JE. R. Army med. Corps, septembre 1912. (4) P. pa Sizva, Arq. do Inst. bacter. Camara Pestana, 1913, t. VI, fasc. 2. (5) C.-M. WEnxow, Soc. of trop. med. «. hyg., janvier 1914. (6) C. Basie, R. Accad. dei Lincei, 5 et 19 avril 1915. 834 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR On conçoit que les expériences sur le rôle des puces dans la transmission de la leishmaniose soient difficiles à réaliser et que, si même ces insectes ont le rôle qui leur a été attribué par Nicolle et Basile, les résullats soient souvent négatifs; les Leishmania sont, en effet, toujours rares ou très rares dans le sang des chiens infectés et, d'autre part, la sensibilité des chiens au virus humain du kala-azar et même au virus canin n'est pas très grande. On verra dans le chapitre suivant que, pour infecter des chiens avec la L. infantum, il faut leur inoculer de très fortes doses de virus. Avec le virus de la leishmaniose canine, on réussit facilement un ou deux passages par chiens, mais il est difficile de pousser au delà du troisième passage (1). Les recherches de Franchini tendent à démontrer que les Culicides jouent un rôle important dans la transmission de la L. infantum (2). D'après cet observateur, on réussirait assez facilement à infecter divers culicides et, en particulier l’Ano- pheles maculipennis, ‘en leur faisant sucer soit des cultures de Leishmania, soit le produit de la ponction de la rate de sujets infectés de kala-azar. Ici, comme pour les puces, on se heurte malheureusement à l'objection fournie par l'existence fré- quente, dans le tube digestif des moustiques, de protozoaires ayant une grande ressemblance avec les Leishmania. D'autre part, il ne suffirait pas de démontrer que les Leishmania peuvent vivre et se développer dans le tube digestif de certains moustiques, il faudrait prouver que les moustiques ainsi infectés sont susceptibles de transmettre la maladie, ce qui n'a pas été fait Jusqu'ici. Patton qui, en nourrissant des punaises (Cimer rotundatus ou C. lectularius) sur des sujets ayant des Leishmania Donovani nombreuses dans le sang, a réussi à observer le développement complet des parasites du kala-azar indien dans le tube digestif des punaises, a conclu de ses expériences que les punaises sont les agents de propagation du kala-azar indien et probablement aussi du kala-azar méditerranéen (3). (4) C. Nicozze et MarrHe Cowor, Soc. de path. exotique, 10 juin 1914. (2) G. Francuint, Malaria e malattie dei paesi caldi, novembre 1911; Ann. 07 lrop. med. a. parasit., mai 1912; Riforma med., 1 septembre et 7 décembre 1912. (3\ W.-S. Parron, Scientif. Mem. by Offic. of the med. a. sanit. Dep. of the Gov. of India, 1912. N. S., n° 53. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 835 On trouve parfois (rarement il est vrai), chez les punaises, comme chez les puces et les moustiques, des Flagellés qui peuvent être confondus avec des formes d'évolution des Leish- mania (1); afin de se mettre à l'abri de cette cause d'erreur, Patton s’est servi, pour ses expériences, de punaises issues d'œufs, au laboratoire, qui ont été nourries à l'élat de nymphes sur un malade atteint de kala-azar ayant des Leishinania nom- breuses dans le sang; c'est dans les nymphes de C. rotundatus et de C. lectularius ainsi infectées qu'il a pu suivre l'évolution des parasites qu'il divise en stades préflagellé, flagellé et post- flagellé. Les observations de Patton sont très intéressantes, mais il reste à compléter la démonstration qu'il a commencée en montrantque les punaises parasitées sont susceptibles de trans- mettre l'infection, ce qui n’a pas été fait Jusqu'ici. Franchini a essayé sans succès d’infecter des Cimex lectu- larius avec des cultures de la L. infantum (2). On voit que, malgré les nombreuses recherches entreprises pour découvrir le mode de propagation de la leishmaniose canine ou de la leishmaniose humaine, la question est encore très obscure. Dracxosric. Pronostic. — Comme on l'a vu plus haut, les symptômes de la leishmaniose canine sont rares el peu carac- téristiques, si mème ils ne font pas complètement défaut. L'amaigrissement, qui est le symptôme le plus constant, s'observe dans un grand nombre de maladies. Le seul moyen de diagnostic consiste à rechercher les Leishmania et il faut bien savoir que la découverte de ces parasites est difficile quand ils n'existent qu'en très petit nombre, comme cela arrive dans les formes légères ou chez les animaux en voie de guérison. Mème à l’autopsie, alors qu'on peut multiplier les examens histologiques de frottis de la moelle des os, de la rate et du foie, on n'arrive pas toujours à déceler ainsi l'existence des Leishmania. Laveran et Pettit ont montré qu'il y avait lieu (4) R.-B. ArcniBaLD, Fourth Rep. Wellcome trop. research Labor., Khartoum, 1OAMAEIT AT SD 11107 2) G. Francais, Malaria e malaltie dei paesi caldi, juin 1911 et Soc. de path. exotique, 11 décembre 1912. 836 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de recourir dans ces cas à l’ensemencement dans le milieu de Novy simplifié qui donne souvent des résultats positifs, alors que la recherche directe des parasites en avait donné de néga- üfs (1). On à vu plus haut que c’est la moelle osseuse qui con- üent, en général, le plus grand nombre de parasites chez le chien, c'est donc à l’ensemencement de ce tissu qu'il faut avoir recours; il est d’ailleurs plus facile d’ensemencer une parcelle de moelle osseuse qu'une parcelle de rate. Après avoir enlevé un iémur, on le scie et cn flambe une des surfaces de sec- tion, on plonge dans la moelle, généralement ramollie, un il de platine un peu rigide, recourbé en anse à son extré- mité, après l'avoir flambé; on charge sur l’anse une par- celle de la moelle que l'on dépose dans l’exsudat liquide d'un tube de culture; on peut préparer ainsi plusieurs tubes; 2 à 3 suflisent en général. Au bout d'un temps qui varie avec la richesse en Leishmania du tissu ensemencé on voit apparaitre les flagellés caractéristiques. Quand les Leishmania sont extrêmement rares, l'apparition des flagellés peut être tar- dive; il faut conserver les tubes de culture pendant un mois au moins. Les tubes doivent être placés dans une étuve à tem- pérature constante, réglée à 22 degrés. La recherche des Leishmania est naturellement plus difficile chez le chien vivant que chez le chien mort. L'examen direct des tissus, suffisant dans les cas d'infection forte, doit être com- plété dans les cas d'infection faible, avec examens histologiques négatifs, par l’ensemencement du sang ou de lambeaux des lissus. Nicolle et Conor ont préconisé la ponction du foie pour le diagnostic de la leishmaniose du chien, la ponction de la rate n'étant pas possible chez cet animal; le siège d'élection est le 10° espace intercostal droit à 4 ou 2 travers de doigt des apophyses épineuses (2). La ponction du foie ne permet de déceler l'existence des Leishmania que lorsqu'il s'agit d'infections graves; dans beau- coup de cas ce procédé de diagnostic est tout à fait insuffisant. L'examen de la moelle des os qui, comme on l’a vu plus (1) A. Laveran et A. P£rrir, Soc. de path. exolique, 8 décembre 1909. (2) G. Nicozze et A. Coxor, Arch. de l'Inst. Pasteur de Tunis, 1910, fase. II, p. 109. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 837 haut, est le siège d'élection des Leishmania chez le chien, constitue un procédé de diagnostic plus exact que la ponction du foie surtout si, en outre de l'examen histologique, on fait des ensemencements; il est facile de trépaner le fémur à sa face externe. Dans les infections fortes, on constate assez facilement par l'examen histologique la présence des Leishmania dans le sang: il est indiqué d'examiner, dans les frottis de sang desséché, la partie terminale qui renferme des leucocytes en grand nombre, on peut aussi faire des préparations un peu épaisses que l’on colore au Romanowsky sans fixer. Novy a conseillé de recueillir 10 cent. cubes environ de sang chez le chien suspect et d’ensemencer avec ce sang une vingtaine de tubes de culture (1). J'ai réussi à déceler plusieurs fois la leishmaniose du chien en ensemencçant 2 à 3 tubes seule- ment, chacun avec une dizaine de gouttes de sang; il est très facile, chez le chien, de prendre aseptiquement du sang dans les saphènes externes. I! est probable que la leishmaniose naturelle du chien se ter- mine souvent par guérison comme la leishmaniose expérimen- tale dont il sera question dans un autre chapitre. ProPHYLAXIE. — La prophylaxie de la leishmaniose canine est d’un grand intérèt altendu que, dans l’état actuel de la science, il y a des probabilités pour que la maladie puisse être transmise du chien à l'enfant. Nous avons vu que le diagnostic ne pouvait être fait que par la recherche des Leishmania chez le chien vivant ou mort; il est à désirer que les vétérinaires se familiarisent avec les pro- cédés d'examen qui ont été exposés plus haut, qu'ils sachent reconnaître, dans les préparations histologiques, les Lerish- mania dont l'aspect est d'ailleurs si caractéristique, et qu'ils puissent procéder à la recherche de ces parasiles par la méthode de l’ensemencement dans le milieu de Novy simplifié. Les chiens reconnus atteints de leishmaniose seront abattus ainsi que les chiens errants. (1) F.-G. Novyx, Soc. de path. exotique, 21 juillet 1909. 838 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR L'importation des chiens provenant de régions contaminées sera prohibée. Dans les régions menacées, on procédera à des examens méthodiques des chiens abattus en fourrière, afin de connaître la fréquence de la maladie, et de se rendre compte des progrès qu'elle pourrait faire. On ne connaît pas de traitement eflicace de la leishmaniose canine. (A suivre.) RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS par ALBEHT BERTHELOT. (Laboratoire de M. Metchnikoff.) Les recherches que je vais exposer portent toutes sur le Proteus vulgaris, mais elles forment cependant deux groupes bien distincts. Les unes, en elfet, ont eu simplement pour objet l'étude critique d’un petit nombre de caractères différentiels de ce microbe : coloration par la méthode de Gram, action sur les hydrates de carbone, production de phénolet d’indol, tandis que les autres avaient principalement pour but la détermination des propriétés pathogènes d'un Proteus d'origine bien déterminée. Grâce à la bienveillance de M. Metchnikoff et à l’amabilité de quelques-uns de mes collègues j'ai pu disposer, pour mes recherches, de soixante et une races de Proteus, de provenances très diverses ainsi que l’on peut s’en rendre compte par le tableau ci-dessous : NUMÉROS ÉCHANTILLONS ISOLÉS PROVENANCE L à 24 |Par M. Metchnikoff . . . Diarrhées infantiles (Paris). 35 à 40 45 à 57 41 — M. Metchnikoff . . . Matières d'une adulte atteinte de troubles intestinaux chroniques. 25 à 34 | — M. D.-M. Bertrand . Diarrhées infantiles (Londres). 43 — AUS USE SC Otite. 44 NM HPMHSSIer . NN: Viande en putréfaction. 58 et 59 | — M. M. Cohendy . . . Vomiques. 60 — M. D.-M. Bertrand . Otite. GI — M. D.-M. Bertrand . Ozène. 42 Identifié par M. Legroux. Collection de l’Institut Pasteur. Ori- gine inconnue. Cultivé depuis long- temps sur gélose ordinaire. SN 99 x 840 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Malgré cette diversité d’origine tous présentaient à un degré variable (1) les propriétés suivantes : mobilité, liquéfaction de la gélatine, coagulation du lait suivie de la digestion du coagu- lum, production d’ammoniaque et d'hydrogène sulfuré ; toutes possédaient donc un ensemble de caractères qu’accuse toujours le microbe décrit par Hauser (2) sous le nom de Proteus vulgaris et étudié dans certains ouvrages récents sous celui de Bacillus vulgaris. Au point de vue des propriétés sur lesquelles l’entente des bactériologistes n’est pas encore faite (fonction indologène, action sur les sucres) ces races semblaient différer quelque peu entre elles; mais, ainsi qu'on le verra plus loin, j'ai pu établir qu'il s'agissait de différences apparentes et qu'elles apparte- naient bien toutes à une seule et même espèce. I. — LE PROTEUS ET LA MÉTHODE DE GRAM. Tous les bactériologistes ne sont pas d’accord sur la manière dont se comporte ce microbe quand on le traite par la méthode de Gram. Les uns, et ce sont les plus nombreux et les plus anciens, le considèrent comme prenant le Gram; les autres affirment qu'il se décolore toujours après l’action de la solution iodo-iodurée. Bien des auteurs ont dû être frappés de cette divergence d'opinions, mais cependant il en est peu qui aient tenté de faire cesser l’indécision qui persistait sur ce point important. C'est Léon Feltz (3) qui le premier, en 1900, aborda sérieusement ce sujet; ses essais portèrent sur quatre Proteus d'origines di- verses qu'il étudia très complètement à différents points de vue. A l'égard des affinités colorantes, après avoir répété maintes fois ses expériences dans des conditions variées, il en arriva aux conclusions suivantes : « Le Proteus vulgaris prend toujours le Gram, mais il faut pour cela opérer sur des cultures Jeunes, ensemencées sur des milieux où il pousse bien; ces conditions (1) Certains échantillons récemment isolés manifestaient, à la température du laboratoire, un pouvoir protéolytique très faible, mais celui-ci ne tardait pee à s’accroitre à la suite des passages en milieux usuels. (2) Gusrav Hauser, Ueber Füäulnissbakterien; ein Beitrag zur Mod der Spaltpilze, 1885, F. C. W. Vogel, Leipzig. (3) Léon Fezrz, Le Proteus vulgaris Hauser; Thèse de Pharmacie , Paris, 1900. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 841 sont très importantes pour arriver à de bons résullais. » Il fit également remarquer qu'il est indispensable de toujours employer une solution de violet de gentiane faite, au moment du besoin, avec de l’eau anilinée récente et que, si l’on veut utiliser le violet phéniqué, il est de même nécessaire qu'il soit fraichement préparé. Étant donné le soin que Felltz avait apporté à ses recherches, il semble que ses résultats auraient dû résoudre définitivement la question qui nous occupe ; pourtant il n’en est rien et, parmi les nombreux auteurs qui ont étudié le Proteus après lui, bien peu ont confirmé ses conclusions si catégoriques. Je ne passerai pas en revue tous les travaux qui, depuis 1900, ont eu ce microbe pour objet et je me contenterai d'en citer trois, relativement récents. [ls sont d'ailleurs particulièrement suggestifs parce qu'ils ont été publiés presque en même temps, qu'ils ont porté sur des races isolées dans des lieux fort éloignés les uns des autres et qu'ils classent tous les trois le Proteus parmi les espèces ne prenant pas le Gram. Dans le premier de ces mémoires, en juillet 1911, C. A. Herter et C. Ten Broeck (1), de New-York, indiquèrent, en effet, que les deux Proteus qu'ils ont examinés se décoloraient après l’action de l’iode. Dans le second, paru trois mois plus tard, E. Glaser et J. Hacla (2), de Vienne, dirent avoir étudié 16 Proteus d'origines très diverses et qui étaient tous Gram- négatifs. Enfin, en novembre de la même année, Ch. Cantü (3) publia les résultats de recherches entreprises à l'Institut Pasteur sur plus de 180 Proteus isoléspar lui, dans les conditions les plus variées, et quitous se décoloraient après traitement par la solu- tion iodée. Si ces divers auteurs avaient précisé la technique de leurs essais de coloration, peut-être aurais-je trouvé l'explication du désaccord qui existe entre leurs affirmations et celles de Feltz ; mais, comme aucun d'eux n'a donné les détails nécessaires, j'ai tenu à me faire une opinion personnelle en utilisant les (1) C. A. Herrer et CarL TEN BRoECk, À biochemical study of Proteus vulgaris Hauser. Journal of biological Chemistry, t. IX, juillet 1911, p. 491. (2) E. GLaser et Joser HacLa, Beiträge zur Kenntnis der Proteushakte- rien. Zeëlschr. f. Immunitätsforschung, 1 Original, t. XI 14 okt. 1911, p. 310-355. (3) Ca. Caxru, Le Bacillus proteus, sa distribution dans la nature. Annales de l'Inslilul Pasteur, L. XXV, novembre 1911, p. 852. 842 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 61 Proteus que j'avais à ma disposition. Pour chacun de ces échantillons d'origines si diverses, j'ai fait plusieurs séries d'essais en employant des cultures en eau peptonée ou sur sélose ordinaire. L'eau peptonée était une solution à 20 p. 1000 de peptone pancréatique Defresne; la gélose était préparée avec un mélange à parties égales de bouillon de viande non peptoné et de peptone Martin. Les préparations étaient faites avec des cultures ayant 7, 24 ou 48 heures de séjour à 37 degrés et établies en six exemplaires pour chaque série. Après dessiccation spontanée, deux d’entre elles étaient fixées par la chaleur à la manière ordinaire; deux autres étaient fixées par immersion dans une solu- tion aqueuse saturée de sublimé, contenant 5 p. 1000 d'acide acétique, lavées à l'alcool et séchées à 37 degrés; enfin les deux dernières étaient arrosées avec un mélange à parties égales d'alcool absolu et d’éther que je laissais s'évaporer sans faire intervenir la chaleur. Ces préparations diversement fixées étaient traitées, les unes suivant l'ancienne technique — violet de gen- tiane aniliné fraîchement préparé, solution iodo-iodurée à 1 p. 300 d'iode, alcool absolu — les autres par la méthode généralement employée aujour- d'hui — violet de gentiane phéniqué, solution iodo-iodurée au 1/300, décolo- ration par le mélange de Nicolle : alcool absolu ÿ volumes, acétone, 1 volume. Toutes étaient alors immergées quelques instants dans la fuchsine de Ziehl diluée au 1/10 pour recolorer les éléments microbiens devenus inco- lores. De plus, je n’ai jamais employé de liqueur iodo-iodurée vieille de plus de quinze jours et J'ai toujours pris soin de faire une décoloration aussi ménagée que possible. Chaque fois que j'ai utilisé l’alcool-acétone, j'ai suivi scrupuleusement les indica- tions données par MM. Nicolle et Remlinger dans leur Précis de Technique Microbiologique. Je me suis done placé dans des conditions très variées, mais, malgré cela, parmi les nombreuses races de Proteus que j'ai examinées, je n'en ai pas trouvé une seule qui ait pris le Gram. Cependant je n'ai pas voulu me contenter de ce résultat et j'ai fait encore quelques essais en utilisant des milieux qui me semblaient capables d’influencer quelque peu les affinités colo- rantes des Proteus cultivés sur eux. Des cultures sur lait et sur deux milieux contenant de l'oléate de Na m'ont permis d’ob- server, dans des préparations traitées par l’ancienne technique, des éléments plus ou moins nombreux encore colorés en violet avec une proportion variable de microbes d'aspect granuleux; mais les Proteus provenant des mêmes cultures se sont toujours RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 843 complètement décolorés lorsque je les ai soumis à l'action du violet phéniqué et de l'alcool acétoné (1). Dans certaines conditions le Proteus peut donc acquérir tran- sitoirement la propriété de retenir quelque peu la matière colo- rante après l'action de l'iode, mais ce fait est sans grande importance en raison des circonstances exceptionnelles dans lesquelles il se produit. Il est bon de le noter cependant, car il prouve une fois de plus la réelle efficacité de l’alcool acétoné et montre bien qu'en adoptant exelusivement ce décolorant on se garantit contre les erreurs qui pourraient provenir des modi- fications que certains milieux apportent aux affinités colorantes des microbes. Enfin, il est un dernier point qu'il m'a fallu élucider, c’est celui qui résulte de l'imprécision dans laquelle Feltz a laissé ses lecteurs quant à la nature du décolorant qu'il a utilisé. Il dit simplement qu'il a toujours fait le «Gram-Weigert» en colo- rant avec du violet de gentiane aniliné, mais il ne parle pas des opérations consécutives; or, si l’on se rapporte aux ouvrages de technique, comme ceux de Besson (2) ou de Rudolf Abel (3), on voit que la méthode de Gram modifiée par Weigert comporte, avec l'emploi du violet aniliné, une décoloration par l'huile d'aniline pure. Il me fallait donc rechercher si ce procédé appliqué intégralement ne me donnerait pas des résultats diffé- rents de ceux que j'ai ulilisés. | C'est ce que j'ai fait pour quelques Proteus pris au hasard parmi mes soixante et une races. Je les ai utilisés en cultures de 48 heures et je les ai traités suivant Weigert, avec des réactifs fraîchement préparés; malgré cela j'ai constaté qu'ils se comportaient tous de la mème façon qu'avec l'alcool absolu et l’alcool-acétone. En résumé, il résulte de mes recherches que le Proteus vul- garis Hauser ne prend pas le Gram, lorsqu'il provient de cultures en milieux usuels et qu'il est traité par Ia mé- thode de Gram-Nicolle. La diversité des races que J'ai étu- diées ainsi que la multiplicité de mes essais me donnent, (1) A. Berruecor, Recherches sur quelques caractères du Proteus vulgaris ; Thèse de Médecine, Paris, 1913, p. 8. (2) A. Besson, Technique microbiologique el sérothérapique, 5° éd., Paris, 1911. (3) R. Age, Bakteriologisches Taschenbuch, 10° éd., Würzburg, 1906, p. 46. 544 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR il me semble, le droit de conclure d’une facon aussi for- melle. IT. — ACTION DU PROTEUS SUR LES HYDRATES DE CARBONE. Bien que le mode d'action sur les sucres constitue un des meilleurs caractères différentiels des espèces microbiennes, de nombreux ouvrages classiques sont muets sur ce point en ce qui concerne le Proteus vulgaris. Celte omission est d'autant plus regrettable qu'il s’agit d'un microbe très répandu dans la nature, tantôt saprophyte, tantôt pathogène et pouvant peut- être donner lieu à des races très voisines, ne se distinguant que par quelques caractères biochimiques. A vrai dire, la négligence des auteurs de ces ouvrages est peut-être voulue et elle a sans doute pour raison l'incertitude dans laquelle nous laissent les travaux des bactériologistes qui ont étudié les propriétés saccharolytiques du Proteus. En effet, parmi ceux-ci, les uns comme Leiborius (1), Gail- lard (2), Théobald Smith (3), Herter et Ten Broeck (4), sont d'accord pour affirmer que ce microbe, quelle que soit son origine, attaque toujours le glucose et le saccharose, mais laisse intact le lactose, tandis que d’autres comme Cantù (5) ont une opinion un peu différente. Pour ce dernier «les sucres sont attaqués par tousles Proteus. Avec le lactose seulement, l'attaque n’est pas constante avec toutes les races et avec un mème Proteus ». « Les races isolées des viandes et, en général, des substances animales pourries, attaquent les sucres avec une violence qu’on ne retrouve pas dans les cultures de Proteus isolées des végé- taux : cette différence est vraie des premières cultures; elle s’efface quand les Proteus ont été réensemencés plusieurs fois et s'éloignent pour ainsi dire des conditions naturelles. » Il est assez difficile de se faire une idée de la valeur respec- (1) LrrBorius, in die Mikroorganismen de Flügge, 1896. (2) GaïLLarD, Contribution à l'étude chimique du Groupe Proteus, Thèse de Médecine, Paris, 1897. (3) Taeogazo Suiru, Modifications temporary and permanent of the physio- logical characters wf bacteria in mixed cultures. Trans. Ass. of Amer. Phys., IX, 4894, p. 567-599. (4) Herter et TE BRoEck, loc. cit. (5) CH. Canru, loc. cit. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 845 live des conclusions de ces divers auteurs, car elles résultent de recherches faites dans des conditions pas trop dissemblables. C'est ainsi que Gaillard et Herter ont étudié un très petit nombre de races, alors que Cantù a examiné 184 Proteus d'ori- oines extrèmement variées. D'autre part, les auteurs que Je viens de citer ne précisent guère, dans leurs mémoires, la com- position des milieux qu'ils ont utilisés et ne donnent que fort peu de détails sur la technique qu'ils ont suivie. Comme j'avais la chance de disposer d’un grand nombre de Proteus, j'ai tenu à étudier, à mon tour, l'action de ce microbe sur les hydrates de carbone, non seulement dans le but de pré- ciser quelque peu la valeur d'un caractère important, mais aussi pour être en mesure de mieux comparer les échantillons isolés des diarrhées infantiles avec ceux qui provenaient d’autres origines. Afin de pouvoir examiner toutes les races que je possédais j'ai dû m'en tenir, comme Cantü, à une méthode de recherches simple et d'application rapide; je me suis efforcé toutefois d'éviter les causes d'erreurs dontil ne semble pas s'être mquiété. Il est regrettable que le nombre d'essais à entreprendre m'ait forcé d'utiliser des procédés purement qualitatifs; mais, fort heureusement, l’infériorité des résultats que ceux-ci m'ont donnés est largement compensée, il me semble, par la grande diversité d'origine des Proteus que j'ai étudiés. Comme milieu de culture j'ai utilisé la solution suivante : BEL a ee LS EEE Re 0-00 Peptone pancréatique Défresne te en paillettes : 20 A l’aide de microbes dont je connaissais parfaitement les propriétés biochi- miques je m'étais assuré au préalable que l'échantillon de peptene qui devait me servir pour toutes mes expériences ne renfermait pas de substances hydro” carbonées pouvant donner lieu à la production d'acides. Pour neutraliser l'eau peptonée je l’additionnais d'un excès de carbonate de calcium pur-pré- cipité et je la portais à l’ébullition pendant quelques minutes; je laissais le carbonate se déposer et le décantais sur un filtre. Le liquide filtré, neutre au tournesol et à peine coloré, était alors réparti dans des tubes à essais, dans lesquels on en versait uniformément 10 cent. cubes, puis stérilisé 20 minutes à 120 degrés. D’autre part, je préparais des solutions concentrées des diverses substances parfaitement pures sur lesquelles je voulais faire agir le Proteus, solutions qui étaient stérilisées soit à 120 degrés, soit à froid (lévulose) par filtration sur bougie Chamberland. Pour chaque expérience, j'ajoutais aseptiquement 846 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dans une série de tubes d’eau peptonée un volume de solution sucrée calculé de telle façon que le milieu de culture contint environ 3 p. 100 de l'hydrate de carbone considéré; je plaçais alors tous ces tubes à l'étuve à 37 degrés Vingt-quatre heures après je m'assurais qu'aucun d'eux n'avait cultivé et je pratiquais l’ensemencement avec une race de Proteus provenant d'une culture de 24 heures sur gélose ordinaire. Les milieux sucrés ainsi ensemencés étaient mis à 37 degrés en même temps qu'un nombre égal de tubes d'eau peptonée ensemencés avec les mêmes Proteus. Après un temps convenable de séjour à l’étuve, je versais dans tous les tubes le même volume d’une teinture de tournesol sensible et je notais la réaction présentée par les diverses cultures en eau peptonée et en milieu sucré. Mes essais ont porté sur le glucose, le galactose, le lévulose, le maltose, le saccharose, le lactose et ia mannite; mais, comme le Proteus est avant tout un fort producteur d’ammoniaque, je ne me suis pas contenté d'un seul essai et j'ai examiné succes- sivement des cultures de deux, cinq, dix et quinze jours. Voici les résultats que j'ai obtenus : Avec le glucose et le galactose toutes les cultures de cinq, dix et quinze jours étaient acides, tandis qu'elles étaient toutes alcalines avec le lactose et la mannite. Je dois dire cependant qu'un certain nombre de cultures de deux jours sur glucose ou galactose étaient neutres, mais le cinquième jour elles étaient toutes devenues acides. Avec le saccharose, au bout de deux jours, certaines cultures accusaient une réaction acide, tandis que d’autres étaient neutres ou faiblement alcalines; les cultures de cinq jours étaient presque toutes acides, mais quelques-unes étaient neutres ; enfin les cultures de dix et quinze jours étaient nettement acides. Les cultures sur lévulose et maltose se comportaient, au début, à peu près comme celles sur saccharose; les unes étaient acides, les autres neutres ou alcalines : mais le nombre de ces dernières ne diminuait pas, même au bout de 10 ou 15 jours. De l’ensemble de ces constatations il faut donc retenir que toutes les races de Proteus vulgaris, quelle que soit leur ori- gine (1), acidifient au bout de dix jours à 3T degrés les milieux renfermant du glucose, du galactose ou du saccharose comme (1) A ce propos je dois faire observer que, pour éviter autant que possible l'influence de toute variation individuelle, je n'ai utilisé pour mes essais que des Proteus isolés depuis au moins deux mois et ayant subi de nombreux passages sur les milieux usuels. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 847 unique aliment hydrocarboné, mais laissent neutres ou alcalins ceux qui contiennent du lactose ou de la mannile. D'autre part, il est important de remarquer que la grande variabilité des pouvoirs alcaligène et acidogène impose de ne tenir compte que des changements de réaction constatés sur des cultures assez âgées. Pour certains Proteus en effet, la produc- tion d’'ammoniaque est extrêmement précoce et intense, alors que la formation d'acides aux dépens des hydrates de carbone est assez lente; on comprend facilement que, dans ces condi- tions, une observation trop hâtive donnerait un résultat inexact. Ainsi qu'on peut s'en rendre compte par les faits rapportés plus haut, il suffit généralement, pour éliminer celte cause d'erreur, de n’examiner les cultures qu'au bout de 10 jours. Pour ce qui concerne le lévulose et le maltose, si l'on avait affaire à une autre espèce qu'au Proteus, on pourrait conclure à l'existence de deux sortes de races caractérisées par leur diffé- rence d'action sur ces deux sucres. Mais avec un microbe comme celui qui nous occupe, il serait singulièrement impru- dent d’adopter de telles conclusions; l'exemple du saccharose est là pour montrer que, dans des essais de cette sorte, basés simplement sur l’observation de la réaction finale, il ne faut pas oublier que celle-ci résulte du balancement des deux actions principales qui se manifestent simultanément dans les cultures : 1° attaque de l'aliment azoté avec formation d’am- moniaque; 2 attaque éventuelle de l'aliment hydrocarboné avec formation d'acides. Tous les Proteus donnent peut-être des acides aux dépens du lévulose ou du maltose et il est possible que la diversité des résultats que j'ai obtenus à cet égard tienne simplement à des différences d'intensité du pouvoir alcaligène et de l'action saccharolytique des diverses races. On pourra facilement m'objecter que je n'aurais pas dû laisser persister un tel doute sur un point aussi important. À cela je répondrai qu'il m'était pratiquement impossible d'examiner l’action de 61 Proteus sur sept substances avec des méthodes comportant des déterminations quantitatives. Les résultats que m'ont donnés mes essais avec le glucose, le salactose, le saccharose, le lactose et la mannite sont assez constants, il me semble, pour aider à l'identification du Proteus S48 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR vulgaris, d'autant mieux qu'ils confirment pour le glucose, le saccharose et le lactose les constatations .des auteurs qui ont étudié quelques races avec des méthodes plus précises. Toute- fois, ces résultats ayant été obtenus à l’aide d’un procédé pure- ment qualitatif, je les considère simplement comme des ren- seignements utiles et je leur refuse toute valeur intrinsèque permettant de les utiliser à la distinction éventuelle de plusieurs races dans l'espèce créée par Hauser. A ce point de vue, seuls des dosages pourront fournir les données nécessaires. II1. — [LE PROTEUS CONSIDÉRÉ COMME PRODUCTEUR DE PHÉNOL ET D INDOL. A. — Recherche du phénol et du p. crésol. En 1890, Lewandowsky (1) publia que les cultures de Proteus vulgaris en bouillon de viande contiennent à la fois du phénol et de l’indol. La plupart des auteurs qui étudièrent ce microbe après lui s'inquiétèrent peu du premier de ces corps et s'intéres- sèrent surtout au second, qu'ils considéraient comme beaucoup plus facile à déceler. Toutefois Tissier et Martelly (2), en 1902, puis Dobrowolsky (3), en 1908, examinèrent à nouveau le Pro- teus au point de vue de la production de phénol. Les deux premiers auteurs étudièrent un Proteus vulqaris isolé d'une putréfaction de viande et ils confirmèrent les résultats de Lewandowsky. Dobrowolsky utilisa pour ses recherches deux races dont il ne précise pas l'origine et qu'il cultiva sur bouillon additionné de 20 p. 1000 de peptone et d'un excès de carbonate de calcium. Il analysa ses cultures au bout de 48 heures et, dans le distillat qu'elles lui fournirent, il trouva seulement des traces de phénol. Des dosages exécutés avec des cultures de 10 jours lui indi- quèrent la présence de moins de 4 milligramme de phénol par litre pour l’un des échantillons, et de 3 milligrammes pour (4) Lewaxpowsky, Ueber Indol und Phenolbildung durch Bakterien. Deutsche med. Wochenschrift, 1890, no 51, p. 4186. (2) H. Tissier et Marrtezzy, Recherches sur la putréfaction de la viande de boucherie. Annales de l'Institut Pasteur, 1902, p. 865. (3) Dosroworsky, Des microbes producteurs de phénol. Annales de l'Institut Pasteur; 4910 n° 1;p- 595: RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 849 l'autre. Il résulte dons des travaux de cet auteur que la produc- tion de phénol par le Proteus vulqaris est pratiquement sans importance. Plus récemment Herter et Ten Broeck (1) recherchèrent aussi le phénol dans les cultures de deux races de Proteus vulgaris, mais ils n'en trouvèrent point, pas plus dans celles en bouillon peptoné que dans d’autres sur bouillon additionné de 0,2 p. 1.000 de lyrosine. Enfin, pour ma part, je viens d'obtenir des résultals qui con- cordent absolument avec ceux de ces deux derniers auteurs. Dans un premier essai sur bouillon de viande peptoné addi- tionné de CO'Ca, aucun de mes Proteus ne m'a donné de phénol ; mais je ne m'en suis pas tenu là, car J'ai voulu,comme Herter, me placer dans de meilieures conditions de culture. Ne pouvant naturellement effectuer ces nouvelles recherches sur 64 échantillons, j'ai pris au hasard, parmi eux, 5 Proteus de diarrhées infantiles (Paris et Londres), et 5 autres d'origines diverses (putréfaction, otites, vomique, collection de l’Institut Pasteur). Je les ai ensemencés dans une solution d’une peptone pancréatique riche en tyrosine libre et dans un liquide nutritif chimiquement défini contenant des acides aminés et notamment une forte proportion de tyrosine (2); avec aucun de ces deux milieux, je n'ai pu déceler trace de phénol ou de crésol dans le distitlat de cultures âgées de 4, 8 et 15 jours. En somme, dans les conditions variées où je me suis placé, le Proteus vulgaris Hauser n'est pas un producteur de phénol. B. — Étude de la fonction indologène. Ainsi que je le disais au début de ce chapitre, les bactério- logistes qui ont étudié le Proteus vulgaris ont généralement négligé la recherche du phénol dans les cultures de ce microbe. Par contre, toute leur attention s’est portée sur l’indol et, depuis Lewandowsky, ils ont toujours considéré la faculté {de produire cette substance comme l’un des plus importants caractères du (4) Herrer et TEN Brozck, loc. cil. - {2) A. Berraecor, Recherches sur quelques caractères du Proteus vulgaris, loc. cit., p. 16-17. ” 850 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR microbe de Hauser. En 1900, Feltz (1) étudia même assez com- plètement ce point de la biochimie du Proteus. I eut l’heureuse idée de tenir compte des indications de Grimbert (2) sur la variabilité de composition des peptones et il montra qu'une même race de Proteus peut produire de l’indol aux dépens de certaines de ces préparations et ne pas en donner avec d’autres. Ses recherches, qui portèrent sur 4 échantillons, furent donc faites dans de meilleures conditions que celles de ses devan- ciers ; elles aboutirent à cette conclusion que le Proteus vulgaris se comporte toujours en producteur d’indol lorsqu'on le cultive dans un milieu préparé avec une peptone convenablement choisie. | Deux ans plus tard, Tissier et Martelly examinèrent un Pro- teus isolé de viande en putréfaction ; ils trouvèrent qu'il pro- duisait de l’indol mème dans les cultures sur bouillie de viande. La constance du caractère biochimique qui nous occupe semblait assez bien établie lorsqu'en 1906, F. A. Steensma (3) remarqua que le distillat des cultures de certaines races de Proteus ne contenait pas d’indol, alors que les cultures mêmes prenaient une coloration rose par addition de nitrite de potas- sium et d'acide sulfurique. On ne prèta guère attention à ces faits pourtant intéressants et 5 ans après, Herter et Ten Broeck n’en tinrent aucun compte quand, après avoir examiné seulement deux races, ils publièrent que le Proteus cultivé dans une solution de peptone de Witte (4 p. 100) et d'extrait de viande Liebig (0,4 p. 100) produit un peu d’indol et une quantité notable d'acide indolacétique. Dans un travail paru à peu près à la même époque que celui de Herter, Cantù considère ce microbe comme un producteur d'indol et, bien qu’il en ait étudié plus de 180 échantillons, il ne dit pas en avoir trouvé qui n'ait pas ce caractère. En 1912, Louis Gauthier (4), se basant sur l'examen de deux (1) Fezrz, loc. cit. (2) L. Grimsexr, De l'unification des méthodes de culture en bactériologie. Archives de Parasilologie, t. X, n° 2, p. 191, 1898. (3) SreexsuA, Ueber den Nachweis von Indol … in Bakterienkulturen. Cen- tralbl. f. Bakteriologie, Originale, mai 1906, t. XLI, p. 215. (4) Louis Gaurnier, Recherches sur l’indol en microbiologie. Thèse de Phar- macie, Lyon, 1912. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 851 races, publia que les cultures de Proteus dans une solution de peptone pancréatique contiennent toujours de l’indol au bout de 12 heures. Enfin, quelques mois plus tard, J. 4. van Loghem et J. C. W. van Loghem-Pouw (1), après avoir étudié 30 échantillons, con- firmèrent les résultats obtenus par Steensma et crurent bien faire de considérer comme représentants d'une espèce à part, Bacillus proteus anindologenes, les Proteus vulgaris ne donnant pas d’indol. En présence d’une telle confusion il m'a semblé utile de déterminer, d’une manière aussi précise que possible, quelle est la valeur réelle de la fonction indologène en tant que carac- tère spécifique du Proteus vulgaris, Pour cela, J'ai fait porter mes recherches sur les 61 Proteus dont je disposais. Avant d'exposer le détail de mes expériences, je crois bon d'insister quelque peu sur les procédés que j'ai employés pour déceler la présence de l'indol dans les cultures micro- biennes. Jusqu'à ces dernières années, pour {caractériser cette sub- stance, les bactériologistes utilisaient généralement une réaction basée sur la formation de nitroso-indol. Cette réaction se pra- tique le plus souvent suivant la technique adoptée par Kita- sato (2) lors de ses premières recherches sur les microbes indologènes, c’est-à-dire qu'à 10 cent. cubes d’une culture en bouillon ou en eau peptonée on ajoute 1 cent. cube d’une solu- tion aqueuse de nitrite de sodium ou de potassium à 0,2 p. 1000, puis quelques gouttes d'acide chlorhydrique à 22° B° ou d'acide sulfurique à 66° B°. Une coloration rouge ou rose indique la présence d’indol; la sensibilité de la réaction peut être accrue en rassemblant dans l'alcool amylique le nitroso- iudol formé. jien que ce procédé de recherche soit encore employé très fréquemment, depuis 1901, on tend de plus en plus à lui sub- stituer la réaction d'Ehrlich au p. diméthylaminobenzaldéhyde (1) J. J. Van Locneu et J. €. W. Van Locneu-Pouw, Beitrag zur Differenzie- rung der Proteus-Gruppe. Centralbl. f. Bakteriologie. Originale,t. LXVI, 24 août 4942. (2) Krrasaro, Die negative Indol-Reaktion der Typhusbazillen im Gegensatz zu anderen ähnlichen Bazillenarten. Zeilschr. f. Hygiene, t. VII, 1889, p. 515. 852 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR qui est d'une extrème sensibilité (1). Dans les laboratoires de bactériologie on l’effectue généralement en ajoutant à 10 cent. cubes d'une culture, en bouillon ou en eau peptonée, quelques centimètres cubes d’une solution alcoolique de diméthylamino - benzaldéhyde à 2 p.100, puis avec précaution quelques gouttes d'acide chlorhydrique ou d'acide sulfurique concentré. Certains expérimentateurs croient utile d'ajouter un persulfate ou un nitrile alcalin ou de faire la réaction à chaud. Bien d’autres réactions permettent, comme on le sait, de caractériser l’indol, mais je ne m'en occuperai point ici, car leur emploi est rarement utile dans le cas qui nous occupe. Je préfère m'en tenir aux deux que je viens de citer et montrer combien la valeur des résultats qu'elles fournissent dépend des conditions dans lesquelles elles sont effectuées. Pendant longtemps on s’est conlenté d'ajouter directement aux cultures du nitrite de sodium et de l'acide; puis, pour déceler les très petites quantités d'indol, on eut l’idée de carac- tériser ce composé non plus dans les cultures mêmes, mais dans leur distillat. Cette manière de faire avait en même temps l'avantage de supprimer une importante cause d'erreur, surtout avec les réactifs modernes; avec elle on évitait de pratiquer la recherche de l'indol en présence de certaines substances qui existent dans les cultures et qui peuvent donner lieu à des colorations gènantes. De nombreux auteurs, et notamment Steensma, montrèrent l'intérêt qu'il y avait de préférer à toute autre technique la distillation des cultures ; pourtant celle-ci ne mérilait guère, ainsi que nous allons le voir, la confiance qu'ils lui accordaient. Porcher et Panisset (2) ont établi, en effet, que dans les cul- tures microbiennes, même d'espèces ne donnant pas d’indol, peuvent se former certaines substances, qui ont comme carac- ère commun de se décomposer facilement en donnant de (1) Enrcicn, Ueber die Dimethylaminobenzaldehyd-Reaktion, Deutsche med. Wochenschrifl, 1904, n° 15. (2) Cu. Porcner, Des corps indologènes dans l'urine, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 3 mai 1909. Cu. Porcaer el L. Panisser, Recherche de l'indol dans les bouillons micro- biens, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 24 août 1909. Des composés indologènes dans les cultures liquides, Comples rendus de l'Acad. des Sciences, 17 mai 1909. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 853 l'indol ;: or l’une d'elles, l'acide indolcarbonique, se dissocie mème lorsqu'on porte simplement sa solution aqueuse à lébul- lition. La présence de lels composés indologènes rend donc illusoire la précaution que l'on prenait de distiller les cultures et, pour extraire l'indol qui peut se trouver dans celles-ci, il apparaît indispensable d’avoir recours à d'autres procédés qu'à l'entraînement par la vapeur d’eau. Celui qui convient Île mieux est certainement l'épuisement des liquides à analyser par l’éther convenablement purifié. Porcher et Panisset ont donc eu le mérite de révéler une grave cause d'erreur dans l'étude de la fonction indologène des microbes et de rappeler en même temps aux bactériologistes qu'on ne doit jamais caractériser directement un corps dans une culture microbienne. Malheureusement leurs conseils n'ont pas été suivis comme ils Le méritaient, à tel point que les résultats obtenus par Steensma, en 1906, sont sûrement plus près de la vérité que ceux publiés dans nombre de travaux récents. En effet, certains auteurs, ennemis de ce qu'ils appellent dédaigneusement des complications, considèrent comme très suffisant de rechercher lindol en pratiquant la réaction d'Ehrlich directement dans les cultures. Pas plus qu'ils ne s'inquiètent des recommandations de Porcher et de Gauthier, ils ne tiennent aucun compte des travaux des nombreux chi- mistes (1) qui ont montré que le diméthylaminobenzaldéhyde donne avec diverses substances, existant normalement dans la plupart des cultures microbiennes et même dans certains milieux stériles, des colorations très difficiles à distinguer de celles que produisent l'indol et le scatol. Il n’est d’ailleurs pas besoin de connaître les travaux que je viens de signaler, pour se rendre compte des précautions (1) SreexsMA, Uber Farbenreaktionen der Eiweisskürper... mit aromatischen Aldehyden und Nitriten, Zeitschr. f. Physiol. Chemie, t. XLVII, p. 25. STEENSMA, Die Farbenreaktionen in der Biochemie, Biochem. Zeitschr., t. VIT, p. 203, 1908. FLEIG, Réactions colorées du tryptophane, de l'indol, du pyrrol, etc... avec les aldéhydes aromatiques, Coinples rendus de la Soc. de Biologie, juilleL 1908. CL. Gaurier, Réactions de la phloroglucine et de l’orcéine avec le p. dimé- thylaminobenzaldéhyde..…, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 23 mai 1908. Ruove, Die Farbenreaktionen der Eiweisskürper mit p.-dimethylamino- benzaldehyd..., Zeitschr. f. Physiol. Chemie, t. XLIV, 1905, p. 161. 854 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR qu'impose l’usage du diméthylaminobenzaldéhyde; il suffit de se conduire en expérimentateur consciencieux et de ne pas adopter un réactif aussi sensible sans avoir vu ce qu'il donne avec des milieux témoins. Si les auteurs dont Je parle plus haut avaient pris ce soin, ils auraient vu que certains milieux usuels et les solutions de certaines peptones, stériles ou ense- mencés avec des microbes non producteurs d'indol, donnent, lorsqu'on les traite directement avec le réactif d'Ehrlich, des coloralions très variées allant du bleu au rouge groseille en passant par toutes les teintes du violet. Je veux croire qu'en présence de constatations de cette sorte, ils n'auraient pas adopté une lelle manière de procéder et auraient cherché un moyen d'éviter des causes d'erreur aussi évidentes. Il faut croire toutefois que la nécessité des témoins et des expériences à blanc n’est pas encore admise par tout le monde, car j'ai eu maintes fois l’occasion de voir employer le procéder simpliste dont, après tant d'autres, je viens de montrer les inconvé- nients (1). Quoi qu'il en soit, l'exemple est assez curieux des mauvais résultats que peut donner, lorsqu'elle est utilisée sans précau- tion, une méthode excellente et très sensible. Il est pourtant bien facile ainsi qu'on le verra plus loin, d'appliquer correcte- ment la réaction d'Ehrlich et d'en obtenir des résultats ne prè- tant guère à discussion. Bien entendu loutes les réserves que je viens de faire ne s'appliquent qu'aux travaux récents et, pour identifier des microbes appartenant à des espèces décrites depuis longtemps comme producteurs d’indol, il faudra toujours se servir du procédé au nitrite tels que l'utilisaient les anciens auteurs, quitte à compléter ou corriger leurs observations en faisant des témoins et en employant des méthodes plus rigou- reuses. Enlin, élant donné ce que l’on sait sur l’origine de l’indol qui se forme dans certaines cultures microbiennes, on conçoit sans peine que les microbes capables d'attaquer le tryplophane, de (4) On trouvera dans un travail de H. Seidelin et Fr. Lewis (Some notes on indole-reaction and allied phenomena, Journal of Hygiene, décembre 1914, p. 504) un exemple des pertes de temps, des incertitudes et des difficultés d'interprétation auxquelles expose la méconnaissance des faits révélés par. Neubauer, Cole, Rhode, Porcher, Steensma et Gauthier. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 855 quelque manière que ce soit, manifesteront beaucoup mieux leur action lorsqu'ils se trouvent directement en présence de cet acide aminé libre et qu'ils n'auront pas à le séparer d’un édifice moléculaire le plus souvent très complexe. Comme l’on sait que le meilleur procédé de préparation du tryptophane consiste dans la digestion tryptique, aseptique et prolongée, de matières albuminoïdes convenablement choisies, on doit done, pour préparer les milieux destinés à l'étude de la fonction indologène, donner la préférence aux « peptones pan- créaliques », particulièrement à celles de caséine. Toutelois, il vaut encore mieux, comme Je vais le montrer, employer des milieux de composition bien définie auxquels on incorpore du tryptophane. J'ai déjà rapporté sommairement les résultats que j'avais obtenus en examinant 57 races de Proteus vulgaris au point de vue de leur fonction indologène (1): je vais maintenant les exposer plus complètement, tels que je les ai confirmés par l'étude de quatre autres échantillons, en précisant autant que possible les conditions dans lesquelles mes recherches ont été réalisées. J'ai d'abord ensemencé tous mes Proleus dans de l'eau peptonée à 20 p. 1.000. Celle-ci était préparée avec une peptone commerciale obtenue par digestion tryptique de la viande et donnant nettement avec l'eau de brome la réaction du tryptophane ; comme l'extrait éthéré de cette même peptone donnait une légère coloration rose avec le réactif d'Ebrlich, je prenais la précaution, indiquée par Porcher, de réduire au cinquième de son volume, par une vive ébullition à l'air libre, la solution à 20 p. 1.000. Après avoir rélabli, par addition d’eau distillée, le volume primitif de celle-ci, je la neu- tralisais par la soude ; j'avais ainsi une eau peptonée débarrassée des traces d'indol décelables par le diméthylaminobenzaldéhyde. J'ai donc cultivé sur ce milieu les 61 Proleus dont je disposais et, après 24 heures de séjour à 31 degrés, j'ai recherché l'indol dans les cultures par le procédé suivant (2): 19 Opérer sur 10 à 15 cent. cubes de culture; prendre la réaction de (1) Acsertr BEertaeLor, Recherches sur quelques caractères spécifiques du Proteus vulgaris. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 15 mars 1943, t. LXXIV, p. 515. Acsert Bertnecor, Recherches sur le Proleus vulgaris considéré comme producteur d'indol. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 24 février 1913, &. CLVI, p. 641. 2) Ce procédé ne diffère de celui de Porcher et Panisset que par l’alcali- nisation préalable de la culture, alcalinisation ayant surtout pour but, dans le cas du Proteus d'empêcher l'entrainement de l'acide indolacétique par l’éther (Sur la recherche de l'indol dans les milieux liquides des cultures, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1911, t. LXX, p. 369 et 371). 06 856 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR celle-ci au papier de tournesol et, si besoin est, l'additionner de quelques souttes de lessive de soude pour l'alcaliniser franchement. 20 Ajouter à la culture contenue dans un tube à essai son volume d'éther purifié spécialement (1) ; agiter doucement pendant quelques minutes, puis laisser déposer jusqu'à ce que la couche éthérée soit bien limpide au moins dans la moitié supérieuré de sa hauteur — dans le cas d’une AT sion par trop stable, disloquer celle-ci par addition de quelques gouttes d'alcool. 30 Avec un tube à effilure courte dont on se sert à la manière d'un tâtevin prélever en s'y reprenant à plusieurs reprises, quelques centimètres Free de la solution éthérée, en prenant bien garde de n’entraîner aucune goutte- lette du milieu de culture (2). zo Aux 3 ou #4 cent. cubes d'’éther ainsi recueillis dans un tube à essai, ajouter le quart de leur volume d'une solution de diméthylaminobenzaldé- hyde à 4 p. 100, dans l'alcool! à 96 degrés; agiter pour bien mélanger les deux liqueurs. 50 À l’aide d'un tube effilé faire arriver lentement au fond du tube renfer- mant le mélange solution éthérée + réactif, 2 ou 3 cent. cubes d'acide chlorhydrique. Laisser reposer cinq minutes : examiner alors le tube devant un fond blane. La présence d'indol dans la culture examinée est caractérisée par l'apparition d'un anneau rouge légèrement violacé dans la zone de contact des deux liqueurs ; lorsque la proportion d’indol est assez forte, la coloration s'étend à toute la couche inférieure. Une teinte plus violacée, une tendance vers le bleu s’accusant avec le temps est l'indice de la présence de scatol (3) ou tout au moins d'un mélange de ce corps avec l'indol; bien entendu, dans ce cas, on ne doit pas s'en tenir à cette simple coloration et il faut utiliser des réactions différentielles plus nettes, qui sont fort bien exposées dans la thèse d'Hervieux. Le procédé que je viens de décrire est moins rationnel que celui de [. Gauthier, mais, ainsi que je l'ai maintes fois vérifié, il fournit des résultats qualilalifs tout aussi exacts. Son seul point délicat réside dans la séparalion de la solution éthérée, bien que, lorsqu'on opère avec soin, il soit impossible d'entraîner des gouttelettes aqueuses avec l'éther. Il est d'ailleurs très simple de se mettre à l'abri de toute cause d'erreur de cette sorte en agitant doucement, dans un tube étroit, les quelques centi- mètres cubes de liqueur éthérée avec leur volume d'eau légèrement alcali- nisée par la soude; en laissant reposer pendant quelques instants il est alors facile de puiser avec une pipelle effilée une quantité suffisante de solution éthérée totalement exempte d'impuretés, capable de donner une coloration avec le réactif d'Ehrlich. Même en prenant l'excès de précautions que je viens d'indiquer il ne m'a jamais fallu plus de dix minutes pour rechercher l'indol dans une culture. (1) Sur la nécessité et la technique de cette purificalion voir la thèse de Louis Gauthier (page 20); pour purifier l'éther je me contente ordinairement de le laver avec le tiers de son volume d'une solution de soude à 5 p. 100, puis, à deux reprises avec de l'eau distillée. ; (2) Quand on opère sur un petit volume de culture il est très commode, ainsi que mon regretté collègue M. D. M. Bertrand en a eu l'idée, d'employer une pipette de Wright à tétine de caoutchouc. (3) Avec le scatol seul la teinte primitivement violette devient complète- ment bleue en trente minutes. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 857 J'ai donc examiné avec cette méthode les cultures de 24 heures de mes Proteus, sur peptone pancréatique de viande, et j'ai constaté que seulement vingt-quatre d’entre elles conte- naient de l'indol. En présence de ce résultat j'ai ensemencé les échantillons qui ne donnaient pas d'indol dans plusieurs séries de tubes du mème milieu et j'ai analysé les cultures après 2, 4 et 8 jours d'étuve ; cette fois encore je n'ai pu trouver trace d'indol. Mais dès le deuxième jour, les cultures de sept de ces Proteus non producteurs d’'indol, ont pris une teinte rose lorsque j'y ai ajouté les proportions habituelles de nitrite de potassium et d'acide chlorhydrique, alors que toutes les autres restaient incolores. Les résultats obtenus par Herter ayant attiré mon atlention sur la présence possible d'acide indolacé- tique, je n'ai pas été, comme Steensma, intrigué par la réaction colorée que me présentaient ces cultures et j'y ai cherché cette substance. Pour cela j'ai immédiatement ensemencé chacun des Proteus non indolo- genes dans 750 cent. cubes d’eau peptonée et, au bout de 48 heures, sur 50 cent. cubes des diverses cultures, j'ai répété l'essai avec le nitrite. En même temps jeflectuais celle-ci avec de l'eau peptonée additionnée d'une part de traces d'indol, d'autre part de traces d'acide indolacétique. J'ai remarqué immédiatement que les cultures de Proteus el l'eau peptonée chargée d'acide indolacétique, prenaient une teinte rosée légèrement violacée, peu accusée, tandis que l’eau peptonée chargée d’indol se colorait nettement en rouge. Dans toutes ces liqueurs j'ai extrait la substance colorante avec le même volume d'alcool amylique. Les différences de colo- ralion se sont encore accusées ; j'ai alors dilué avec de l'alcool amslique les solutions trop foncées, de manière à les amener à peu près à Ia même intensité colorante et je les ai examinées au spectroscope. J'ai constaté que les solutions amyliques provenant de cultures de Proteus non indologènes et d'eau peptonée chargée d'acide indolacétique donaaient, pour une même épaisseur, un spectre caractérisé par une bande d'absorption dans le vert, bien accusée entre les longueurs d'onde 7 = 560 et x — 530, se dégradant vers le jaune jusqu'à À — 575 et vers le bleu jusqu'à } = 515, tandis que la solution amylique de nitrosoindol absurbait le vert, le bleu, l'indigo el le violet du spectre à partir de la longueur d'onde } — 565, l'absorption commençant même au voisinage de } = 582. Par l'examen spectroscopique il semblait donc bien probable que les Proteus qui donnaient une réaction colorée avec le nitrite, étaient simplement des producteurs d'acide indolacétique. Je m'en suis assuré de la facon suivante : Les 700 cent. cubes de culture qui me restaient après l'épreuve spectroscopique ont été légèrement acidifiés par l'acide sulfurique: et épuisés par l’éther dans une boule à décantation : la liqueur éthérée (500 cent. cubes environ) a été réduite au cinquième par distillation et agitée avec la moitié 858 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR de son volume (50 cent. cubes environ) d'eau faiblement alcalinisée par la soude. La liqueur aqueuse décantée, additionnée d’acide chlorhydrique jusqu'à très faible réaction acide, a été maintenue quelques instants à 45 degrés pour chasser l’éther dissous. De petites portions des liqueurs aqueuses ainsi obtenues pour les 7 Proteus, ont alors été examinées en même temps qu'une solution aqueuse d'acide indol-3-acétique à 1 p. 1.000; toutes m'ont donné un résultat positif avec les réactions considérées par Salkowsky et Herter (1) comme caracté- ristiques : 49 Avec HCI et NO°K production d’une coloration rose passant complète- ment dans l'alcool amylique et donnant une bande d'absorption dans le vert. 20 Avec HCI et {races de Fe?Clf production d’une coloration voisine du rouge cerise. J'ai alors épuisé par l’éther le reste des solutions légèrement acides, dont j'avais utilisé une très faible partie pour les réactions ci-dessus, et j'ai con- centré par distillation les liqueurs éthérées résultant de cet épuisement. J'ai versé le résidu de ces distillations dans des petits ballons à fond rond et j'ai chassé le reste d’ éther en les maintenant à 60 degrés. À ce moment j'ai placé les ballons sur ün bain de sable que j'ai maintenu à 110-115 degrés pour chasser l'eau que l’évaporation avait laissée, puis j'ai élevé la tempé- rature à 210 degrés, mais en ayant soin de ne chauffer que le fond des ballons, c'est-à-dire la partie sur laquelle existait un léger résidu. Après 10 minutes de chauffage, j'ai laissé refroidir les ballons et j'ai repris par quelques centimètres cubes d'alcool le léger enduit qui se trouvait sur leurs parois; j'ai traité la solution alcoolique ainsi obtenue par le réactif d'Ehrlich et l’acide chlorhydrique. Toutes contenaient du scatol car elles m'ont donné une coloration violacée d'abord peu accentuée, mais qui a foncé rapidement et s'est changée assez vite en une teinte bleue, présentant un spectre d'absorption parfaitement caractéristique. L'existence de ce scatol, qui se forme quand on chauffe à sec vers 200 degrés l'acide indolacétique, était une preuve de la présence de cette substance dans les liqueurs que je venais d'examiner. J'avais donc établi par trois réactions qu'il s'agissait bien d'acide indol-3-acétique, confirmant en somme Îles faits observés par Herter et Ten Broeck avec seulement deux races de Proteus. Pour me placer dans de meilleures conditions, J'ai répété l'expérience que je viens de décrire en substituant à la peplone de viande une peptone tryptique de caséine que je devais à l'obligeance de M. P. Macquaire (2); les résultats ont été exactement les mêmes que dans le premier cas : 24 Proteus (4) C. A. Herrer, On indolacetic acid, Journal of biological Chem., 1. IV, 1908, p. 254. (2) En 1911, Porcher et Panisset avaient déjà signalé l'intérêt que présen- terait une peptone de cette nature pour l'étude de la fonction indologène des microbes : Les diverses peptones et la formation de l'indol. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXX, p. 464. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 859 producteurs d’indol, 37 Proteus non indologènes dont T pro- ducteurs d'acide indol-acétique. J'ai alors voulu rechercher si une variation plus importante dans la composition du milieu ne modifierait pas ces résultats. Pour cela j'ai utilisé un mélange de produits abiurétiques obtenus par l'hydrolyse chlorhydrique de la caséine, mais comme l’action des acides ne convient pas à la séparalion du tryptophane, j'avais soin d'ajouter à ce mélange, bien décoloré par le noir animal, 1 p. 100 de tryptophane ; avec cel ensemble de constituants de la caséine, je préparais des solutions à 20 p. 1.000 qui constituaient un milieu dans lequel le Proteus se développait remarquablement bien. Dans ces conditions les résultats ont été identiques en ce qui concerne la production d'indol, tout au moins qualitalivement, mais le nombre des échantillons producteurs d'acide indolacétique est passé de 7 à 19: en même temps j'ai noté que, tant pour l'indol que pour l'acide indolacétique, la production de ces substances était beaucoup plus intense qu'en milieu peptoné. Ces faits m'ont conduit à me servir d’un milieu encore mieux adapté à l'étude de la fonction indologène, plus riche par con- séquent en substances mères de l'indol et de l'acide indolacé- tique, c'est-à-dire en tryptophane. J'ai d'abord utilisé un milieu chimiquement défini dont j'avais déjà indiqué la composition (1) et qui renfermait, avec 1,5 p. 1.000 de tryptophane, divers autres acides aminés et des sels, mais je l'ai abandonné pour l'étude du Proteus, car certains de ces éléments indispensables pour nombre de microbes étaient inuliles pour une espèce protéolytique et d’une telle activité biochimique. (1) Azgert BERTHELOT, Sur l'emploi de milieux chimiquement définis à base de tryptophane, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 20 avril 1912, t. LXXIT, p. 595. A propos des milieux de culture au tryptophane et de l'utilisation de ceux-ci pour l'étude de la fonction indologène des microbes, je tiens à signaler deux mémoires qu'un auteur allemand, Hugo Zipfel, a publiés sur ce sujet en 1912 et 1913 (Centr. f. Bakt. 1 Abt. Originale t. LXIV, juin 1912, p.65 et t. LXVIT, janvier 1915, p. 197). Ces deux mémoires ne comportent pas moins de 31 pages de texte, l'auteur y énumère un nombre considérable de travaux sur les bactéries productrices d'indol; il y indique même le procédé de préparation du tryptophane, et y donne plus de 150 indications bibho- graphiques; mais, par une singulière coïncidence, il se trouve que, parmi les nombreux noms d'auteurs qu'il cite, ne figurent pas celui de Seidelin et le mien. L'un et l'autre nous avons pourtant employé bien avant lui le trypto- phane dans les milieux et nous l'avons appliqué à l'étude de la fonction 860 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Pour les expériences qui vont suivre il m'a donc paru plus simple d’imiter Hopkins et Cole et d'ajouter de la gélatine à une solution nutritive analogue à celle que j'ai préconisée lors de mes premières recherches sur les microbes acidaminolytiques de Ia flore intestinale. La gélatine ne renfermant pas de trypto- phane, le Proteus n'avait done à sa disposition que celui exis- lant à l’état libre dans le milieu, qui présentait la composition suivante : HET ON EME ET AU LEE PRINCE PR 1.000,00 Phosphate dipotassique. . . . . . 1,50 Sulfate de magnésium. . . . .. 0,50 ryptophane M RTC ER 1,50 MChlorure de éaiciumn 0 UE 0,02 Géletner Lies Er Ie rs 25,00 Grâce à l'amabilité de M. F. Hoffmann-La Roche qui avait mis à ma disposition une quantité assez importante de trypto- phane parfaitement pur. J'ai pu éludier l’action de toutes mes races de Proteus sur cet acide aminé. J'ai examiné une première série de cultures après 48 heures de séjour à 31 degrés et j'ai constaté que le nombre des échantillons producteurs d'indol était le même que dans les essais précédents; par contre il y avait 31 Proteus producteurs d'acide indolacétique. D’autres cultures examinées après quatre jours d’étuve m'ont donné les mêrnes résultats pour l'indol, mais cette fois tous les Proteus non indologènes avaient produit de l'acide indolacétique. Je ne m'en suis pas tenu là et j'ai recherché si les échan- tillons qui avaient donné de l'indol n'avaient pas produit en même temps de l'acide indolacétique. Pour cela, après avoir alcalinisé par la soude les cul- tures sur milieu au tryptophane chargées d’indol, je les ai épuisées par l’éther jusqu'à ce que ce dissolvant ne n'ait plus donné de coloration avec le réactif d'Ehrlich ; après cette opération, je pus déjà observer, sur une petite portion de ces cultures complètement débarrassées d'indol, qu'elles indologène des microbes (A. Berthelot, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 24 juillet 4911, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, avril 1919, Loc. cil.). Zipfel n'a pas davantage tenu compte de l'excellent travail de Louis Gauthier (mars 1912 loc. cit.) qui a réalisé avec des méthodes analytiques précises les recherches que l’auteur allemand a exécutées avec des procédés imcor- rects en dépit de leur apparente exactitude. M. Zipfel oublie par trop faci- lement que les principes fondamentaux de l'analyse chimique ne varient pas avec l’objet auquel on les applique et que, pour caractériser un corps dans une cullure microbienne, l'on doit toujours s’efforcer de l’extraire et de le purifier. En utilisant les milieux au tryptophane pour étudier systémati- quement les bactéries productrices d’'indol, H. Zipfel n’a fait qu'imiter certains auteurs qu'il ne daigne pas citer; il est regrettable pour lui qu'il ne se soit pas en même temps inspiré de L. Gauthier et qu'il n'ait pas acccordé un peu plus d'attention aux conseils donnés par Porcher et Panisset, car la valeur scientifique de son travail y aurait certainement beaucoup gagné. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 861 prenaient une coloration rose par addition de nitrite et d'acide chlorhydrique, alors qu'un tube témoin du milieu stérile n'accusait qu'une légère teinte jaune. Je soumis alors ces mêmes cultures à un nouvel épuisement par l'éther après les avoir acidifiées et, après concentration de ce solvant, il me fut facile de constater la présence d'acide indolacétique. En résumé, mes 61 Proteus cultivés sur tryptophane se montraient tous producteurs d'acide indolacétique au bout de quatre jours, tandis que seule- ment 24 d'entre eux étaient capables de former de l'indol. Ces résultats auraient pu me faire croire à l'existence de deux variétés de Proteus ; mais, en présence des varialions de ce microbe sous l'influence du milieu, j'ai pensé qu'il devait plutôt s'agir de races différant simplement par une inten- sité plus ou moins grande de leur action sur le tryptophane oules substances qui en renferment, action beaucoup trop variable pour que ses divers degrés puissent être utilisés comme caractères différentiels. Je n'ai pas tardé à m'apercevoir combien cette hypothèse était exacte. En effet, au mois d'octobre 1912, jai examiné à nouveau 24, Proteus de diarrhées infantiles que j'avais étudiés au mois de février de la mème année el qui avaient subi de nombreux passages en gélatine préparée avec du bouillon Martin; bien que je me sois placé dans les mèmes conditions et que j'aie utilisé le mème milieu (solution de peptone pancréatique de viande à 20 p. 1.000), j'ai constaté que 6 Proteus, qui, primitivement produisaient de l'indol et de l'acide indolacétique, ne donnaient plus que de ce dernier corps, tandis que 11 autres, qui ne formaient que de l’acide indolacétique, étaient devenus également producteurs d'indol. Le Proteus vulgaris présentait donc bien la grande variabilité d'action que je lui attribuais à priori et qui me faisait paraitre peu probable l'existence de races bien fixées au point de vue du pouvoir indologène. Ayant ainsi observé une variation spontanée de ce caractère du Proteus, j'ai essayé d'obtenir plus rapidement une modification analogue. Dans ce but, j'ai pris au hasard, parmi les échantillons dort l'expérience précédente m'avait montré la fixité d'action, 3 Proteus qui m'avaient toujours donné de l'indol, en solution de peptone pancréatique de viande, et 5 autres qui, au contraire, n'avaient jamais produit que de l'acide indolacétique. Je les ai ensemencés en même temps dans une solution de peptone pancréatique de caséine à 3 p. 100, dans une solution renfermant, avec les sels habituels, 2 p. 1.000 de tryptophane avec seulement 5 p. 1000 de gélatine et enfin dans une solution à 20 p. 1000 de l’ensemble des acides aminés qui entrent dans la constitution de la molécule de caséine. J'ai examiné les cultures au bout de 72 heures de séjour à 37 degrés et j'ai constaté que sur peptone de caséine les 6 échantillons donnaient de l'acide indolacétique et qu'un seul des 3 indologènes donnaient de l'indol. Au contraire, sur les deux autres milieux, tous les échantillons donnaient à à la fois de l’indol et de l'acide indolacétique. Enfin, j'ai analysé de nouveau, après quinze jours d'étuve, les cultures sur peptone de caséine, mais j'ai obtenu les mêmes résultats, c'est-à-dire qu'une seule renfermait de l'indol. Pendant un mois, j'ai continué à cultiver ces 6 Proteus sur les trois milieux, et, après leur avoir ainsi fait subir six passages, j'ai constaté que leur action respective sur le tryptophane ne s'était pas modifiée. Par conséquent, sur six échantillons, un seul avait gardé ses propriétés primitives, trois autres semblaient avoir: acquis, dans les milieux contenant du tryptophane libre, la faculté de produire de l'indol, tandis que les deux derniers, en passant par la solution de peptone de caséine, avaient perdu leur pouvoir indologène. 862 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR En présence de ces faits il était intéressant de rechercher si les propriétés des Proteus ainsi cultivés en milieux spéciaux étaient modifiées définitivement ou s'il s'agissait simplement de variations apparentes essentiellement dépen- dantes de la composition du milieu. C’est ce que j'ai fait en ensemençant à aouveau dans une solution à 20 p. 1.000 de peptone de viande les 3 échan- lillons dont les caractères semblaient avoir varié; j'ai alors constaté que les deux races qui avaient perdu leur pouvoir indologène ne le recouvraient pas dans le milieu primitif et que les trois autres, devenues capables de pro- duire de l'indol, ne donnaient plus dans ce milieu que de l'acide indolacé- tique, ainsi qu'elles le faisaient antérieurement. Si j'avais borné là mes recherches j'aurais pu tout au moins conclure à la possibilité de variations régressives stables : mais, connaissant l'extrême variabilité du Proteus, j'ai continué à étudier les races que j'avais utilisées pour mes dernières expériences. J'ai repiqué ces 6 Proteus sur gélatine au bouillon Martin et, après 8 passages effectués en deux mois, j'ai examiné de nouveau leurs cultures en solution de peptone de viande (72 heures à 31 degrés), Dans ces conditions, j'ai observé que les 6 échantillons avaient repris leurs propriétés primitives, c'est-à-dire que tous donnaient de l'acide indolacétique et que les trois anciens producteurs d'indol en formaient comme par le passé. Les variations apparentes du pouvoir indologène que J'avais déterminées brusquement n'étaient donc bien que des modifications essentiellement transitoires. Enfin, j'ai étudié plus complètement l'action de ces 6 Proteus sur le tryp- tophane, à l’aide des cultures obtenues en présence de 2 p. 1.000 de cet ami- noïque et de 5 p. 1.000 de gélatine. Ainsi que je l'ai déjà dit, dans ce milieu, après 72 heures à 37 degrés, les 6 échantillons ont produit de l'indol et de l'acide indolacétique. J'ai laissé séjourner des cultures à l’étuve pendant encore 15 jours et, au bout de ce temps, j'y ai trouvé beaucoup plus d'indol; par contre, c’est à peine si j'ai pu y caractériser l'acide indolacétique, alors que cette substance existait en forte proportion dans les jeunes cultures. Toutefois, si l'acide indolacétique avait presque complètement disparu, peut-être l’indol était-il accompagné d’un autre dérivé plus simple du tryp- tophane? Par la recherche même de l'indol j'avais la preuve que mes cul- tures ne renfermaient pas de scatol, mais peut-être contenaient-elles de l'acide indol-carbonique, cette substance indologène dont Porcher a montré la présence dans les cultures de certains microbes ? Pour m'en rendre compte, j'ai employé ce qui me restait de mes six cul- tures de 15 jours sur tryptophane ; à ce moment elles étaient déjà complè- tement débarrassées de leur indol par des lavages à l'éther, en présence d'un léger excès de soude. Je les ai exactement neutralisées avec HCI et je les ai distillées : les 6 distillats contenaient de l'indol que j'ai caractérisé par le diméthylaminobenzaldéhyde et la formation du dérivé nitrosé ; le liquide distillé renfermait donc de l'acide indol-carbonique. Dans le résidu de ces distillalions j'ai retrouvé les traces d'acide indolacétique dont j'avais antérieurement constaté la présence. J'ai extrait cette substance en épuisant par l’éther la liqueur légèrement acidifiée ; j'ai débarrassé celle-ci de l'excès d'éther en la chauffant quelques instants au bain-marie, puis, après l'avoir étendue d’eau, je l'ai filtrée sur bougie. Dans le filtrat ainsi obtenu, avec l'eau de brome et le réaclif glyoxylique, j'ai obtenu pour les six cultures les réactions caractéristiques du tryptophane ; tout cet acide aminé n'avait donc pas été détruit en 15 jours par le Proteus. Quant à l'acide indolcarbonique, sa présence, à côté de l’indol et de traces RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 863 d'acide indolacétique, est incontestable, car j'ai vérifié que la distillation de 200 cent. cubes de milieu au tryptophane additionné de 5 centigrammes d'acide indolacétique et exactement neutralisé donnait un distillat ne réagis- sant en aucune facon avec le diméthylaminobenzaldéhyde, tandis que dans les mêmes conditions 5 centigrammes d'acide indol-carbonique produisaient une quantité notable d’indol. Ayant constaté que le Proteus peut donner de l'acide indol-carbonique, j'ai recherché cette substance dans des cultures de tout âge en eau peptonée ou en milieu aux acides amiués de la caséine, ainsi que dans des cultures jeunes sur tryptophane ; bien que mes essais aient porté sur les six races de mes dernières expériences, je n’en ai pas trouvé par le procédé que je viens d'indiquer. Ce corps me semble exister surtout dans les vieilles cul- tures en milieu particulièrement favorable ; en pratique, au point de vue du simple diagnostic bactériologique, il n’y a donc guère lieu de s’en inquiéter. On a pu remarquer que, dans mes recherches, j'ai négligé l'acide indol- propionique ; je tiens à faire observer que j'avais des raisons d'agir ainsi. En effet, toutes mes cultures ont été effectuées au large contact de l'air; par conséquent, en admettant que le Proteus ait pu produire ce corps aux dépens du tryptophane, jamais il n'aurait trouvé dans mes expériences les condi- tions d'anaérobiose nécessaires. D'ailleurs, aucune de mes cultures, ainsi que je l'ai établi en recherchant l’indol, ne renfermait de scatol, composé qui accompagne ordinairement l'acide indol-propionique dans la destruction anaérobie du tryptophane par certains microbes. J'aurais dù, pour être complet, rechercher également s’il y avait formation d’indoléthylamine ; si je ne l'ai point fait, c’est que la recherche de cette sub- slance ne peut s'effectuer par des méthodes aussi simples que la caractéri- sation de l'indol, du scatol et des acides à noyau indolique. L'examen de ce point de la biochimie du Proteus m'aurait du reste trop écarté de l’étude critique du pouvoir indologène et j'ai préféré le réserver pour des recherches ultérieures. Enfin, je tiens à insister sur ce fait, que toutes les cultures dont je me suis servi au cours de cette étude ont toujours été obtenues avec des milieux donnant, par le brome, la réaction du tryptophane libre. J'ai laissé systématiquement de côté l'étude des cultures dans lesquellés le Proteus aurait dù effec- tuer une dislocation préalable d’une molécule albuminoïde quelconque pour en libérer le tryptophane, car il m'aurait fallu tenir compte non seulement des variations de l’activité d'attaque de cet amino-acide, mais encore de la variabilité des pouvoirs protéolytique, peptolytique ou peptidolytique. Je n'ai donc pas examiné sous toutes ses faces la question de la production d’indol par le Proteus vulqaris, mais comme je m'étais placé uniquement au point de vue de la diagnose pré- cise de cette espèce, je crois avoir fait œuvre plus utile en examinant un grand nombre de races dans des conditions assez limitées, mais bien définies. 86% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Quoi qu'il en soit, de l'ensemble de mes recherches il résulte que le Proteus vulgaris est un microbe qui attaque le trypto- phane en donnant, par le même mécanisme que les autres aérobies étudiés par Hopkins et Cole, une série de produits dont la dégradation plus ou moins avancée marque l'intensité de son action sur la molécule aminoïque. Dans certaines cultures très âgées, en milieu contenant beaucoup de tryptophane, on peut ne trouver pratiquement que de l'indol; dans d’autres, en général assez jeunes et sur milieu pauvre en tryptophane libre, il n'y a que de l'acide indolacétique, mais ce que l’on rencontre le plus souvent c'est à la fois de l'indol et de l’acide indolacé- tique en proportions variables. L'action du Proteus variant non seulement avec les divers échantillons, mais même pour une race donnée, il est impos- siole de se baser sur l'absence d'indol dans les cultures de ce microbe pour le différencier des autres espèces. Par contre, et autant que lon puisse conclure de l’examen de 61 races, on peut dire que tous les Proteus vulgaris Hauser sont capables d'attaquer le tryptophane libre et de produire, aux dépens de cet acide aminé, au moins de l'acide indol-3-acétique. L'espèce Bacillus proteus anindologenes Van Loghem n'a aucune raison d'être et l’on doit considérer comme Proteus vulgaris Hauser tout microbe possédant, avec les autres carac- tères de cette espèce, la propriété de donner, à 37 degrés, dans un des milieux que je viens d'indiquer, soit de l’indol ou de l'acide indolacétique, soit un mélange de ces deux corps (1). (1) Pour la recherche du pouvoir indologène des microbes je ne saurais trop recommander les milieux à base de tryptophane; leur préparation ne présente plus de difficulté maintenant que cet acide aminé se trouve dans le commerce à un prix abordable (5 francs le gramme environ). Il y a cependant une précaulion à prendre : exiger des fabricants un produit dont l'extrait éthéré ne réagisse en aucune façon avec le réactif d’Ehrlich et dont la solu- tion aqueuse presque incolore ne donne aucune coloration rose ou rouge avec les nitrites et l'acide chlorhydrique dans les conditions habituelles. NOTA. — Depuis que mon mémoire a été rédigé, M. E.-A.-R.-F. Baudet a publlé un travail dans lequel il étudie, au point de vue de la production d'indol, quelques Proteus d'origines variées (Indol-reaktionen bei Proteus- bacillen, Folia Microbiologica, t. IL, 3° fascicule, 7 mars 1914). Cet auteur emploie le diméthylaminobenzaldéhyde avec le persulfate de potassium et, comme il se sert de milieux au lryptophane, il prétend que lon peut très bien effectuer la réaction sur la culture même; de plus, il estime que la recherche de l'indol par distillation des cultures est un RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 865 procédé parfaitement correct. M. Baudet n’est sans doute pas chimiste, car il considère comme inexistants — bien qu'il les fasse figurer dans sa biblio- graphie — les travaux de L. Gauthier, Porcher et des nombreux auteurs qui ont montré les inconvénients de la réaction d'Ehrlich mal appliquée et ceux de la distillation des cultures. Il prétend méme découvrir les causes d'erreur que peuvent apporter les dissolvants tels que la benzine et l'alcool amylique, comme si les chimistes qu'il critique ne les avaient pas indiquées depuis longtemps et n'avaient point préconisé l'emploi de l'éther convena- blement purifié. Au point de vue des milieux au tryplophane il m'attribue un milieu de culture — il en donne même une formule qui comporte 50 grammes de SO#Mg par litre (!) — et le trouve inférieur au milieu de Zipfel; il accorde également une grande importance au fait qu’il n’a pu réussir à faire produire de l'indol à une race indologène comme si la variation d'une propriété biochimique devait obligatoirement se produire dans les mêmes conditions pour des Proteus d'origines différentes. Il ne parait, d’ailleurs, pas connaitre les divers termes possibles de la dégradation bactérienne du tryptophane. Bien qu'il cite une de mes Notes, M. Baudet n'a pas remarqué que j'ai indiqué plusieurs milieux au tryptophane et que je n'ai préconisé spécialement aucun d'eux, mais que j'ai été simplement le premier à recommander et à employer systématiquement les milieux à base de tryptophane pour l'étude de la fonction indologène des microbes. Comme il ignore certainement les travaux d'Herter et qu'il ne parait pas connaitre ceux que j'ai publiés depuis 1912 sur les milieux au tryptophane et sur les caractères du Proteus, je ne discuterai pas davantage ses recherches ; je me contente de faire remarquer qu'elles justifient une fois de plus les critiques que je me permets dans ce présent travail. (A suivre.) L'INDÉPENDANCE DE LA TEMPÉRATURE OPTIMALE D'UNE DIASTASE A L'ÉGARD DE LA CONCENTRATION EN SUBSTRAT ET EN DIASTASE par Arraur COMPTON (Imperial Cancer Research Fund, Londres.) On connait aujourd'hui plusieurs causes modificatrices de l'influence exercée par la chaleur sur l’activité d’une diastase. Parmi les mieux connues, citons d’abord l’origine de la dias- tase (1), sur laquelle je ferai plus loin une observation de quelque intérêt, ensuite le temps pendant lequel la diastase et son substrat (ou matière organique décomposée) se trouvent en contact (2). Il est important de bien connaître ces causes quand il s'agit de caractériser un ferment par sa température optimale, c'est-à-dire par la température à laquelle son activité est la plus grande. Ces considérations et l'intérêt qu'il y a de préciser la valeur pratique de la température optimale m'ont paru rendre nécessaire de rechercher si la concentration en substrat el la concentration en diastase modifient ou non la tempéralure optimale. En outre, des considérations d'ordre théorique m'ont amené à croire que la température optimale d'un ferment est indépendante de la concentration en substrat. Voici ces considérations : D’après la théorie de M. Gabriel Bertrand (3) sur la consti- tution des diastases, tout système diastasique comporte deux substances dont les actions se complètent : la complémentaire (4) G. J. Livrner et F. EcxkHaroTt, Journ. f. pr. Chem. (2), t. XLI, 1890, p. 94. — GABRIEL BERTRAND, Bull. Soc. chim (3), 1896, t. XV, p. 1218. — GABRIEL BER- TRAND et W. MurermizcH, /dem. (4), t. I, 1907, p. 837. — GABRIEL BERTRAND el M. Rosengcarr, Annales de l'Institut Pasteur, &. XXIV, 1910, p. 653. (2) GagriEL BERTRAND et A. Coupron, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLIT, 1911, p. 1518. — M. Javiccrer et H. Tcnernorourzxy, Annales de l'Ins- hitut Pasteur, t&. XXVIT, 1913, p. 440. (3) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CXXIV, 1897, p. 1032 et p. 1385. Revue générale des Sciences, t. XVI, 1905, p. 459, elc. LA TEMPÉRATURE OPTIMALE D'UNE DIASTASE 867 active, et la complémentaire achivante. La première, générale- ment de nature minérale, est, comme son nom l'indique, l'agent actif dans la réaction chimique qui caractérise le ferment. La seconde, de nature organique, facilement altérée par la chaleur et d’autres conditions physiques, sert, par une sorte d'effet de concentration, à rapprocher la complémentaire active et le substrat, et à produire des conditions favorables à la vitesse de leur réaction chimique. Donc, en partant de celte théorie, on peut concevoir que, dans tout système diastasique, il existe deux concentrations du substrat : l’une /ocale, aux environs de la molécule de diastase; elle est due à l'attraction qu'exerce la complémentaire acti- vante sur les molécules de substrat qui se trouvent dans sa sphère d'action. L'autre, périphérique ou générale, est située en dehors de la sphère d'attraction de la complémentaire acti- vante. La concentration locale, qui dépend de l'énergie d’attrac- tion de la complémentaire activante, sera plus ou moins cons- tante à une température donnée, tandis que la concentration périphérique variera continuellement. On peut aisément con- cevoir qu'il existe, entre les deux zones de concentration, à mesure que l’action diastasique se poursuit, un échange continu de molécules de substrat pour des molécules de produits de réaction. Or la température optimale d’une diastase n’est que la température à laquelle s’équilibrent les effets accéléranis et destructifs de la chaleur sur l’action qu'exerce la diastase sur le substrat environnant. Pourvu donc qu'il y ait toujours excès de substrat, ces deux effets n'alfecteront évidemment que la concentralion locale. Par conséquent, on a le droit de s'attendre à ce que la température oplimale d’une diastase soit indépen- dante des variations de la concentration générale. Celte conception m'a conduit à rechercher sa vérification expérimentale, et à étudier en même temps l'influence de la concentration en diastase sur le phénomène. Je puis donner aujourd’hui les résultats confirmatifs que j'ai obtenus avec la salicinase, nouvelle diastase dédoublant la salicine en glucose et saligénine, dont nous avons, M. Gabriel Bertrand et moi (1), tout récemment établi lindividualité. (1) GakiEL BErtRAnD et A. Compton, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, D OCEVIM918;p: 197: 868 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR La préparation diastasique que j'ai employée provient d'un extrait d'amandes douces, et je me suis assuré de la pureté de la salicine par son point de fusion +200°5 et son pouvoir rota- toire. [x] 1eme 62°7. Les étapes successives du travail peuvent se résumer ainsi : 1° une détermination préliminaire de l’activité de la préparation diastasique en tenant compte de certaines conditions, telles que concentration du substrat, température et durée de l’expé- rience; 2° une détermination préliminaire de la température optimale, en employant la quantité de diastase capable d’hydro- lyser 50 p. 100 de substrat dans les mêmes conditions de durée et de concentration en substrat; 3° une détermination des courbes d'activité de la diastase à la température ainsi établie, pour cinq concentrations de substrat, M/5, M/10, M/15, M/30, et M/50, l’action ayant la même durée ; 4° une détermination de la température optimale de la diastase pour chacune des cinq concentrations du substrat, en présence d'une concen- tration constante de diastase; 5° une détermination de la tempéralure optimale de la diastase, pour chacune des cinq concentrations de substrat, avec les quantités de diastase — indiquées par les courbes d'activité ci-dessus — capables de produire 70 p. 100 d'hydrolyse de substrat en 15 heures; 6° une détermination de la température optimale de la diastase pour une concentration constante de substrat en présence de concen- trations différentes de diastase. La détermination préliminaire de l’activité de la diastase est faite en présence d'une solution M/5 de substrat pendant 15 heures à 40 degrés. Sept tubes à essai soigneusement nettoyés reçoivent, chacun, 286 milligrammes de salicine et une quan- lité différente de diastase dissoute dans 5 cent. cubes d’eau spécialement purifiée par redistillation dans le vide. Les tubes sont placés dans le bain-marie à 40 degrés pendant 15 heures. On arrèle alors l’action diastasique en refroidissant les tubes dans un courant d’eau et en les additionnant d’une goutte d'am- moniaque. Ensuite, d'après la méthode de Gabriel Bertrand (1), (1) Bull. Soc. chim. (3), t. XXXV, 1906,4p. 1285. LA TEMPÉRATURE OPTIMALE D'UNE DIASTASE 869 on dose la quantité de glucoside dédoublée dans chaque tube. Les chiffres obtenus sont indiqués dans le tableau E. TABLEAU I. QUANTITÉ DE DIASTASE SALICINE HYDROLYSÉE end milligr. p. 100. DORE RES RE PAR 44 0 AE ER EE 7 (67:2 DO ET ee NC De ee 100.8 HOME 0 EU ane lee ON DO RRITS Ce C P 0 ROSE NE Ne ce 2 061 DDR Re ee Re RO Te D) Si l'on porte en abscisses les quantités de diastase et, en ordonnées, les pourcentages de salicine hydrolysée, ces chiffres donnent la courbe d'activité représentée par la figure 1. La détermination préliminaire de la température optimale de la diastase se fait de la façon suivante. On dissout dans 10 cent. cubes d’eau pure, 10 fois la quantité de diastase nécessaire, indiquée par la figure 1, pour produire le pourcentage voulu d'hydrolyse du substrat, — c’est-à-dire, 0,9 milligramme de diastase, produisant une hydrolyse de 50 p. 100 du substrat en 15 heures. — Après un contact d’une 1/2 heure à 1 heure, à la température ordinaire, on distribue cette solution à raison de 1 cent. cube par tube, dans une série de 8 à 9 tubes à essai contenant chacun 286 milligrammes de salicine et 4 cent. cubes d'eau. Les tubes sont plongés ensuite dans des bains-marie réglés à des températures constantes; au bout de 15 heures on arrête l’action diastasique et on dose la proportion de glucoside hydrolysé. Le tableau IT contient les chiffres obtenus. TABLEAU II. TEMPÉRATURES EXTRÊMES SALICINE HYDROLYSÉE de chaque expérience. p. 100. (OS UNIES 124,9 DOPSEAMA OO RRE -- … 42,8 3407 NRC. 1: * 5050 CAO AN ANOTR CERN". 23,0 OUAIS PNR SI 5705 à 5106 16,4 870 ANNALÉS DE L'INSTITUT PASTEUR En portant en ordonnées le pourcentage de salicine hydro- lvsée et en abscisses la température de lexpérience, ces chiffres donnent la courbe de la figure 2. Dans ces conditions, 100 © © © Ca (en) ss © © © + [e} © © EN © nn © (e? © Salicin hydrolysed(%) — Salicin hydrolysed (0h) ——- 10 20 30 40 OM NGOC- temperature > Fig. 2. 20 F0 0 CS MO 0 060 Cr O US 0 06:0 mg. Quantity of enzyme in millégrams. ua Abscisses des figures 1 et 3 : Quantité d'enzyme en milligrammes. Ordonnées de toutes les figures : Salicine hydrolysée p. 100. la température optimale se trouve ainsi aux environs de + 34 degrés. On détermine ensuite l’activité de la diastase aux environs de + 34 degrés (exactement 33°6-33°8), dans une action de 15 heures de durée, avec les concentrations suivantes de substrat : M/5, M/10, M/15, M/30 et M/50, dont on veut ulté- rieurement étudier l'effet sur la température optimale de la diastase. Les autres détails techniques sont les mêmes qu'aupa- ravant. Les chiffres obtenus sont donnés dans le tableau IE. LA TEMPÉRATURE OPTIMALE D'UNE DIASTASE 871 TaABLEAU III. SALICINE HYDROLYSÉE P. 100 QUANTITÉ DE DIASTASE AVEC CONCENTRATION DE SUBSTRAT EN MILLIGR. M/5 M/10 M;15 M/30 M/50 0,5 » 31,4 35,8 28,2 » 1,0 55,1 57,9 8,0 49,5 36,9 2,0 79,4 84,7 88,1 77,0 » 3,0 88,3 939 9165 90,0 1182, 5,0 94,2 97,5 99,6 99,0 93,9 7,0 94,9 JO 99,2 | 100,6 | 100,0 10,0 95,71 |: 100,2 99%6 » 100,5 1955 GO » 100,6 | 100,6 | 100,0 En portant en ordonnées le pourcentage de salicine hydro- lysée, en abscisses la quantité de diastase en action, on a les courbes d'activité de la figure 3. 80 SOL SUIS ClySEX ( Jo) > 8 “year @ © Salicin 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Quantity of enzyme in milligrams ———; Fig. 3. On peut maintenant envisager l'influence de la concentration en substrat sur la température optimale du ferment. Il s'agit 57 872 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR d'étudier la température optimale dans une série d'expériences où la concentration en diastase reste constante, tandis que la concentration en substrat varie. On a choisi, d'après la figure 3, comme concentration en diastase, 8 X 10° grammes par centi- mètre cube. On laisse reposer, 1/2 heure à 1 heure, à la tem- pérature ordinaire, cinq solutions différentes contenant 4, 8, 12, 24 et 40 milligrammes de diastase, dissous dans 10 cent. cubes d’eau. Ces solutions sont réparties à raison de 1 cent. cube par tube dans cinq séries de tubes à essai, contenant 286 milligrammes de salicine et 4, 9, 14, 29 et 49 cent. cubes d'eau. Après 15 heures d'incubation dans des bains-marie réglés à des températures connues, on arrête l’action diastasique et on dose la quantité de salicine hydrolysée dans chaque tube, comme auparavant. Les chiffres obtenus sont ceux du tableau IV. TABLEAU IV. SALICINE HYDROLYSÉE P. 100 TEMPÉRATURES EXTRÈMES avec concentration en substrat de chaque expérience M/5 M/10 M/15 M/30 M/50 ICO Le lotte sd oo lo oo. 10,8 SORA OURS CRE EEE 6,6 CRETE vo Mo croi dons à otanile oe 18,3 002 41008 met ice etc Re EeePC RE 26,0 PAU SR RE EN CON Se ES onu US 6e à ds os 30,0 ICRA Se SO 5 66 0 0 010 © 0 23,0 TOLEDO NOR ENUOE 2 no No nl ao 0 | 0000 Le 32,0 1806 à 1805. 50h DOS 1809 oo Troie ro alle otoulo ste © lors & 41,0 DORE UD OM MORE OR EG Roma Me NS ton 0 1e ‘lo. o 106 63,7 AO EU PETONREeNO oO or on ol oo loto. o | 5 COMITE 1540 2605 MES NE lo A TT 8,6 50,8 3000 NORME a oO eo) me) 41,9 58,5 15,9 3005 NAS io 0 Con 0 ioMbllos momie o n°0 lors … 4_{Substrate conc® M/S 10 M/50 Fig \Engyme conce 8x 107 Gr per cm? Fi&. 4-10 : Substrate conen — concentration du substrat. — Enzyme concn ……. gr. par cm° — concentration de l'enzyme .…. gr. par cm$. de type uniforme, facilement comparables entre elles. On n'atteint ce but qu'en faisant varier la concentration de la dias- tase en même temps que celle du substrat, car, cœteris paribus, ce qui détermine l'étendue de l'action diastasique, c’est, comme le démontrent les courbes d'activité 1 et 3, le rapport du nombre de molécules de diastase au nombre donné de molécules de substrat, présentes dans le milieu de réaction. 874 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR TABLEAU V. SALICINE HYDROLYSÉE P. 100 EN 15 HEURES avec concentration moléculaire de substrat TEMPÉRATURES EXTRÊMES et concentration diastasique en grammes par cent. cube de chaque expérience M5 à M/10 M/15 M}/30 M/50 31 X10°113,5X10—18,7xX10$15,7X 10? 5 X10—5 | | | | SOUMET rc elle te cure Sort 0 AE OOORARS OP RC CC Ati GORE BL OMG de 50 dl'etoanec MUR. Apte le 18,8 1HOSPAMNCENEER ECE 35,0 10 IMAMSE EN |E into 34,2 ASOO PARIS CAE er OCR A PR RC AS LEE RER RES 39,1 1804 Sora |Iiro ete OP TMC ON ol lo ion EME S 41,9 OA ASS 2e ce AUD FRS EE Tin) 1SCSRANLS OT EN | À HUM ONE 60,3 2901 4102200 M ee ON POMEROURS re ol ne NN te lee ent Ale RCE 50,5 601 ARAGOD EME RCE IE Leone cle 53,3 DE NL NN SCIE PPRESLE as ele SL ae AO OS EE) EPA AU NE 6 66 en alle aus 56,9 2907 Me eRede 62,2 BAUME RS DCE ENS | EME Anouo colon ue 65,7 SOC ie ce RC oc & ce - 68,6 69,4 SORENANIO TS CRE S MO | 0 5 dore pe 63,7 UE ME CN M LE fe 2692 0688 DOS rc ci -cl-e CU leRUe 1050 MSC 70 ,0 LUReNE CO ES Poronalonc DO] PM OA) ES cc LE TUPENTE La SO eh GOT S oo co alle ot e v UE AU 65,8 SOL Go Milbn 0 cone|loanoteo ec 69 ,4 SOOR RC CE | ECO 6 a code ot = 66,3 AVENUE NS ON lose Salou: à té Hors: 09,7 PACELIE, PPT 6 068 ane OU: S 58,3 PO ET PE) 6 0 cell one re Que 56,3 4390 HR ee Pc |tretRe Mods 0 lose No. oo |lita ét 53,0 RUBAN ETES ne 00 || NT CERCLE 51,2 ANIME ON NAN POP PO NT HHCSRABLSOURCR EC ECRIRE 5 0 43,3 AS 0 AP ASC AE RS de 2 Nn PU A obor diode Vo the Eu oo 31,1 36, 4 ROCOMAMAOS le other 34,1 BD) Le wie & lon 44,6 DO ONE ERA ER 35,6 GORE OS me ENS aille Sn On MODO À 30,7 HOD ME No vhone 0 late do ol © 0 0 2 BÉCBL ET AUS 6 ge motalorae PO REN 00 ||. 0080 ON ESRI 22,5 22,4 DAC Re 10593: 0 GO OL EEE Eu 0. DU En vue d’avoir des courbes assez prononcées pour que les points maxima soient nettement définis, j'ai voulu obtenir une hydrolyse de 70 p. 100 de substrat à la température optimale pour chaque dilution de substrat étudiée. Un examen rapide de la figure 3, dont les courbes ont été construites à la température d'environ + 34 degrés, montre que pour obtenir LA TEMPÉRATURE OPTIMALE D’UNE DIASTASE 875 ces courbes de température optimale — en admettant pour l'instant ce dont la figure 4 indique déjà la probabilité, à savoir, que la température optimale est indépendante de la concentra- tion en substrat et est située approximativement vers +34 degrés — les quantités de diastase qu'il faut employer sont 1,55; 1,35; 1,30; 1,70 et 2,50 milligrammes respectivement pour des con- D 1 Ÿ 70 È ; Ë 360 d : È D 50 \ S £ Fe À &E Ÿ 40 \ S = = q 5 n Re 0 a : 10 20 30 40 s0°C temperature —> = temperature —> Fi FREE conc® M/5 F Substrate conc? M/0. 77 Enzyme conce? 31x10 gr per cm 96 Enjyme conc® 13-5x10 gr per cm! à LES RÉ à Le] Salcin hydrolysed{%) —= Salicin hydrolysed (4) — 10 20 30 40 50 C ee temperature —> XE ES temperature ——> 4 Fig AE conc? M/I5 io 8: Substraié conc? 230 | | ” VEngyme conce® 8x 107 gr per cm LAC lEnsy me conc? S7xi "gr per cm centrations de substrat : M/5, M/10, M/15, M/30 et M/50. Les résultats obtenus avec ces quantités sont résumés dans le tableau V. Avec Les pourcentages de salicine hydrolysée pour ordonnées, et les températures pour abscisses, ces chiffres donnent les courbes représentées par les figures 5, 6, T7, 8 et 9. Un simple examen démontre que l'activité de la diastase atteint son point maximum dans ces cinq courbes entre Îles températures de + 33°5 etL 345; en d’autres termes, que la température optimale se trouve au voisinage de + 34 degrés, 876 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et qu'elle est constante malgré les grandes variations de dilu- tion du substrat et les variations correspondantes de dilution de la diastase. S2licin hydrolysed(#) —> temperature —— Substrate conct M/50. Enzyme conc? 5x 10 gr per cm*! Fig9-| A sl su> TES 4 TA l ! nl A L----"…s.e Salicin Aydrolysed (X) —— IQ... 2m 30 . 4400/5000 60°C temperature ——> Substrate conc® M/30: Fig.10—{ Engyme con? 8x 10 to 18x Or per cm reste maintenant à examiner le cas où la concentration en substrat reste constante tandis que celle de la diastase change. C'est en cela que consiste l'étude, proprement dite, de l'influence de la concentration en diastase sur la température optimale. LA TEMPÉRATURE OPTIMALE D'UNE DIASTASE 877 Bien que rendue peu nécessaire par ce qui précède, cette der- nière expérience complète le travail. On choisit comme concen- tration de substrat M/30, et la température optimale est déter- minée dans une action de 15 heures de durée, avec des quan- tités de préparation diastasique, comprises entre 1,8 X 10° et 18 < 10 gr. par cent. cube. Les chiffres obtenus sont contenus dans Le tableau VE. TaBLEeau VI. SALICINE HYDROLYSÉE P. 100 EN 15 HEURES avec concentration diastasique TEMPÉRATURES EXTRÊMES en grammes par cent. cube de chaque expérience | 1,8X10—5|3,3X10—516,8X10—5|11,7X 105115 X 10—5|18 X 105 CRE AU ACER RAA ARE LA PEER ET EEE CPE E ALAN 43,7 Rs ele PT te EP alt at 48,1 LC 6 HU RSR RARE 16,0 1705 RNA en er AREA AE Rice let te 0) 3 10,0 OR ACNS RER ES 24,7 DÉUACE EE UD RRRMESN ERPRCTONPE CRT ER OR | CR PRE SCT EN PU RETAEEE® 7927 ÉCRENRT CT SE MERS FURPEN PETER ARTS CAES 63,0 1900 PERTUIS OO TOO E CARPE CAT RSS 47,1 GAL ICE ASP REC NON ACTE M VS) COR ER 84,0 HO PAR LC ee LS EE 51.6 2205 PR A A TE D RE Cr POP AUE 92,0 240% DORE EN AIRIS AS RES SNEU EU ATT 3 18,0 LEE NON PRE ÉCRAN ER PI, 2805 4 2306. . . . . .| 29,5 DoE AB o6 Li sos du + SU 380 DA es En RE PR 7 tente el 000 750 ONCLONPSREEER PR DC: | Le tretat | | PRIS Fit BETSE Re | 050 46,8 ELEC CANON RON NNES HER LLS PLUS 91,0 Ce ne LE ns 3h00 ee LE 2 | Ce RNÉETEAQ 19 19 NO AB MARS ET I EIRE LG x JE INSEE 94,1 3305 Ur BG SUR RER PEL: 98,0 3400 SRRERAEEN EE TE DC ADR du Lin letras 74,2 UE CR RER Re CS AN ET té 99,7 4002 ere ll 2430 4005 ln. 43,3 83,0 4007 HE 99,0 1108 à 4200. 65,3 4500 à 4502. 35,8 13,3 84,0 1500 à 4504. 18 LION A 4900 SN NN 1305 DOCS AND O0 EU 11e | MA RE NIEa 61,3 69,0 DAC AMAR TOO RS RNA DT. 2 Ni 41,1 BAD AS DOC PA ee ET RE ne 607 5306 à 5305 ! 26,8 5400 L4,6 32,7 5403 ) 35,0 5500 44,3 5600 GAS 5700 18,0 878 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Ces résultats sont résumés dans les courbes de la figure 10. Les courbes de la figure 10, aussi bien que la courbe M/30 de la figure 4 et celle de la figure 8, démontrent que la tempéra- ture optimale de la diastase est partout la même, qu’elle est, par conséquent, indépendante de la concentration en diastase. Il en est de même, comme le démontrent deux des courbes de la figure 10, lorsque le rapport de la quantité de diastase à la quantité de substrat est plus que suffisant pour produire une hydrolyse totale du substrat au voisinage de la température optimale. Dans ces deux cas, le point optimal est imaginaire et correspond au point d'intersection des courbes représentant respectivement l'accélération et la destruction de la diastase par la chaleur. On peut donc dire que la température optimale de la salici- nase d'amandes douces est indépendante, pour une action d’une durée connue, à la fois de la concentration en substrat et de la concentration en diastase. Cette observation est-elle vraie pour tous les ferments? C’est là une question à laquelle j'espère pou- voir répondre bientôt par de nouvelles expériences avec d'autres types de diastases. Je signalerai enfin un fait de quelque intérèt, démontré inci- demment au coursde ces recherches. Tout récemm ent, M. Gabriel Bertrand et moi (1) avons trouvé, comme température optimale de la sa/icinase d'amandes douces, 42°5, dans une action de 15 heures de durée — la concentration du substrat étant M/27,4 — c'est-à-dire une température optimale qui dépasse de 85 celle de la préparation dont je m'occupe aujourd'hui. Donc une mème diastase qui provient de sources différentes peut non seulement se comporter différemment sous l'influence de la température, mais il faut s'attendre aussi à des variations dans des préparations qui ont la même origine. (4) Loc. cit. CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU GONOCOQUE par P. FORGEOT (Travail du laboratoire de M. Morax). La plupart des auteurs attachent à la recherche imaginée par V. Lingelsheim, pour le diagnostic différentiel des microbes du groupe gonocoque, méningocoque, catarrhalis, une très grosse importance. On sait que cette méthode est basée sur les pro- priétés fermentatives des microbes vis-à-vis des sucres; celles- ci sont appréciées par le « virage » au rouge plus ou moins accusé de la teinture de tournesol dont le milieu de culture sucré est additionné. On résume, généralement, l’action sur les sucres des trois microbes dans le tableau suivant : : : es = à a a a 53 Ô F: a Él 2 2 = = = = © © £ MICROBES = = =: | G 5 £ = 5 D / > 5 < =) (=) < 4 2 = £ = z A S É S ñ à = = z Méningocoque .| + 0 0 0 0 + 0 0 Catarrhalis . . 0 0 0 0 0 0 0 0 (onocoque . .| + 0 0 0 0 0 0 0 0 On voit que : le catarrhalis ne fait fermenter aucun sucre : le gonocoque fait fermenter uniquement le dextrose, le ménin- gocoque fait fermenter à la fois le dextrose et le maltose. M. le D'Morax, qui a pratiqué de très nombreuses recherches sur les caractères fermentatifs des gonocoques provenant soit de l’urètre, soit, plus souvent, de l'œil, avait toujours vu jusqu'ici se vérifier la règle posée par V. Lingelsheim. Au cours de recherches sur la toxine gonococcique, nous avons examiné également un grand nombre d'échantillons de gono- &80 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR coques, et nous avons eu la surprise de constater que l’un d’eux, que nous dénommerons « Vid... », avait la curieuse propriété de faire fermenter d’une facon fort nette à la fois le dextrose et le malfose. Ce gonocoque a été isolé d'une ophtalmie par M. Morax, dans son service de l'hôpital Lariboisière. Il s'agissait d'un enfant de quatre ans, Vid..., qui fut présenté le 8 novembre 1912, pour une conjonctivite purulente bilatérale avec sécrétion assez abon- dante, mais sans lésions de la cornée. L'examen de la sécrétion montrait l'aspect typique des gonocoques intracellulaires, et le tube de gélose ascite ensemencé donna en vingt-quatre heures de nombreuses colonies ayant tous les caractères du gonocoque. L'enfant fut traité à la consultation et son affection ne présenta aucune particularité. L'étiologie de son infection oculaire n'avait pu être précisée. Le seul renseignement obtenu indiquait l'existence de pertes blanches assez abondantes chez la mère de l'enfant. L'examen bactériologique de ces pertes ne fut pas pratiqué. Nous avons alors recherché comment ce gonocoque se com- portait vis-à-vis d’autres sucres, et nous avons vu qu'il faisait fermenter également le galactose et la dulcite. Voici, par com- paraison avec le tableau précédent, la série des réactions sucrées du gonocoque « Fid..…. » E 5 a FE 2 = e un) n = el à | oil NS RS re eee MICROBES = D © E È £ = E = Le > = < D Le) < = 2 a 5 < = A = ëä A Æ a un Méningocoque .| + 0 0 0 (] 0) + 0 0 Catarrhalis . . 0 0 0 () 0 0 0 0 0 (ronocoque . .| + 0 0 0 0 0 0 0 0 idem = () — (] + 0 + 0 0 Nous sommes donc en présence d’un microbe qui, par son origine et son histoire clinique, paraît être nettement un gono- coque ei qui, par ses réactions sucrées, se rapproche du ménin- gocoque. Ce microbe appartient-il à l’une de ces deux espèces ou à une espèce différente ? Il y a lieu de remarquer, en faveur de la première hypothèse, CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU GONOCOQUE 881 que l'affection humaine dont il a été isolé a présenté les carac- tères habituels de l'infection blennorragique, avec cette restric- tion qu'il s'agissait d’un enfant mâle, infecté directement dans sa muqueuse oculaire sans infection urétrale. On rencontre parfois des cas de ce genre dus à une contamination indirecte par les linges ou objets de toilette. En admettant la nature gonococcique des pertes maternelles, l'infection de l'enfant s’expliquerait par le transport du pus vaginal. On ne connaît, d’ailleurs, qu'un très petit nombre d’obser- vations où d’autres agents infectieux morphologiquement ana- logues au gonocoque (diplocoques ne prenant pas le Gram) ont élé considérés comme susceptibles de produire lophtalmie purulente (pseudo-gonocoques de Brons). Frenkel a bien cité un cas d'infection conjonctivale par le méningocoque, mais cette étiologie n'a généralement pas été admise. Les essais d'agglutination de notre microbe par le sérum antiméningocoecique ont été nettement négatifs aux taux ci-après : 1/10, 1/20, 1/50, 1/100, même après 12 heures. Dans le but de rechercher s'il existait des caractères diffé- rentiels entre le gonocoque « Vid..… » et un gonocoque de même origine, nous avons éludié parallèlement les résultats de l’inoculation de ce premier microbe (vivant ou mort) avec ceux fournis par l’inoculation du gonocoque « Leroy », provenant d'une ophtalmie gonococcique de l'adulte. Micros vivanrs. — Sujet d'expérience : cobaye de 300 à 350 grammes. a) Sous la peau. La valeur d'une spatule ordinaire de gonocoque « Vid... » représentant le grattage de la surface d'un tube de culture de 2% heures sur gélose-ascite, détermine, le lendemain, l'apparition d’un œdème du volume d'une noix au niveau duquel la peau est rouge vif; cet œdème augmente, et,après 36 heures, on voit apparaitre une petite eschare ayant les dimensions d’une lentille, puis l'œdème diminue, l'eschare tombe le 4° jour et laisse sourdre une goutte de pus. — Même lésions avec le gonocoque Leroy. b) Dans la veine. La moitié de la dose précédente détermine la mort dans la nuit; à l’autopsie, on note simplement une congeslion violente des pou- rmnons. — Mêmes lésions avec le gonocoque Leroy. c) Dans le périloine. La même dose que dans la veine donne la mort dans la nuit. A l’autopsie, on trouve un abondant exsudat périlonéal qui, ense- mencé, donne des cullures du gonocoque. Le sang au cœur est stérile. — Mèêmes lésions avec le gonocoque Leroy. Microges morrs. — Ces microbes, obtenus par le râclage des cullures sur boites de Roux, sont mis à dessécher pendant 48 heures sur boites de Petri, 882 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR dans le vide sulfurique, puis triturés dans un mortier stérile, pour les réduire en poudre fine. a) Injections sous-culanées. Nous avons injecté les doses suivantes de « Vid..…. » : 2, 1 el 1/10 de centigramme. Seules les doses de 2 et 1 centi- gramme donnent des lésions appréciables qui peuvent se résumer ainsi : le lendemain, œdème mou variant, suivant la dose, d'une noix à une noisette : tache violette à la peau dont les dimensions varient de 1! millimètre à 0mm50; 3 jours après, l’eschare, d’abord humide, commence à sécher, puis s’élimine avec le 5° jour. L’abcès se cicatrise très rapidement. Avec des doses supé- rieures à ÿ centigrammes, on tue le cobaye en 12-24 heures. b) Injeclions intraveineuses. Les doses de 2, 1 centigramme du gonocoque « Vid.. » déterminent la mort dans la nuit. Si on force la dose (5 centi- grammes et au-dessus), on a la mort en quelques minutes (30 minutes habi- tuellement) ; l'animal titube immédiatement, présente de l’apnée, puis tombe sur le côté et meurt. A l'autopsie, on trouve la rate hypertrophiée et noirâtre, le foie congestionné, ainsi que les reins; l'intestin est normal. Au-dessous de 1 centigramme, la mort est plus tardive; avec 1/10 de centi- gramme, on a la mort en 24 heures une fois sur deux. C'est la dose minima mortelle. Le gonocoque Leroy donne les mêmes lésions aux mêmes doses. Au cours de ces inoculations, un certain nombre d'animaux ayant résisté, nous nous sommes demandé s'ils n'auraient pas acquis une certaine immunité vis-à-vis de doses plus élevées. Notre premier essai a porté sur le cobaye, dont 4 avaient été injectés dans la veine aux doses de 1/10 et 1/100 de centigramme et 2 sous la peau à la dose de 2 centigrammes. Tous reçurent, dans la veine, 1/2 centigramme, dose sûrement mortelle dans la nuit. Voici les résultats : PREMIÈRE INJECTION DEUXIÈME INJECTION (27 décembre 1912) (17 janvier 1913) RÉSURLATS 9 : / A2 centigr. dans la veine.|Mort dans la nuit. 2 centigr. sous la peau . . Id. Mort 1/2 centigr. dans la veine.|Résiste. 1/10e centigr. dans la veine. ré l e Résiste. 1/100° centigr. dans la veine. A N 4 N LES TA 1/2 centigr. dans la veine.|Résiste. Id. Résiste. 1/2 centigr. dans la veine.|Mort dans la nuit. Témoins. 5 Id. Mort dans la nuit. Il résulte de cet essai que l'injection sous-cutanée de doses assez élevées de microbes morts ne confère aucune immunité, alors que l'injection intraveineuse, méme à dose faible, permet CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU GONOCOQUE 883 aux animaux de résister à une dose, mortelle dans la nuit, pour les témoins. Nous avons répété cet essai d'immunisation sur 6 nouveaux cobayes en commençant par le 1/100 de centigramme (le 1/10 de centigramme amenant parfois la mort, comme nous l'avons dit plus haut): l’un de ces animaux est mort accidentellement. Nous résumerons, dans le tableau ci-dessous, cette expé- rience. 3e injection. mort dans la nuit. NUMÉROS DATE ET DOSE DATE ET DOSE DATE ET DOSE des Cobayes |de la première injection|de la deuxième injection|de la troisième injection Java 01e 2 mai 1913 : 16 mai 1913 : 64 F 1/100e centigr. 1/10° centigr. 1/2 centigr. pe sy mptôme. aucun symptôme. | aucun symptôme. 9 avril 1913 : 2 mai 1913 : 16 mai 1913 : 65 F 1/100e centigr. 1/10e centigr. 1/2 centigr. Rue sou aucun symptôme. | aucun symptôme. avril 1913 : 2 mai 1943 : 16 mai 1913 : 66 F du 1/100° centigr. 1/10° centigr. 1/2 centigr. aucun symptôme. aucun symptôme. aucun symptôme. 9 avril 1913 : 2 mai 1913 : 16 mai 1913 : 67 F 1/100e centigr. 1/10 centigr. 1/2 centigr. aucun symptôme. aucun symptome. | aucun symptôme. \ 9 avril 1913 : 2 mail 1913 : 16 mai 1943 : 68 F 4 _1/100€ centigr. 1/10e centigr. 1,2 centigr. l aucun symptôme. aucun symptôme. | aucun symptôme. Témoin 9 avril 1913 : de la 1/100e centigr. » re injection. Rien. 2mMmai 41913: Témoin 1/100° centigr. de la » Très mal le soir 2e injection. mais se remet dans la nuit. Témoin 16 mai 1943 : de la » » 1/2 centigr. è Ces 5 cobayes ont enfin reçu une 4° injection intraveineuse de 1 centigramme le 28 mai 1913. Tous ont succombé dans la nuit. Conclusion. — On peut arriver à donner au cobaye, par injec- tion intraveineuse de petites doses faiblement croissantes de microbes morts, une certaine immunité. Avant la 4° épreuve, nous avons prié M. M. Nicolle de prélever une certaine quantité de sang du cœur du cobaye 67 F; le len- 88% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR demain, nous retirons le sérum qui a exsudé (1/2 cent. cube) pour rechercher s'il possède un pouvoir antitoxique appréciable in vivo. Voici le résultat de cette expérience : 84 F. Injection intraveineuse du ( 1/2 eentigr. Vid… mélange. | ne centigr. sérum cobaye 61 F. Mort dans la nuit. 86 F. Témoin. Injection intraveineuse de 1 centigr. Vid.…. Mort dans la nuit. L'immunité conférée au cobaye n'est donc pas appréciable par mélange du sérum et du microbe mort (dans les conditions de l'expérience). CONCLUSIONS GÉNÉRALES. 1° Si on admet que le microbe étudié est un gonocoque, la règle donnée par V. Lingelsheim ne serait pas absolue : 2° La méthode d’agglutination doit compléter toujours cette première épreuve ; 3° L'’immunisalion du cobaye par les microbes morts pourra, sans doute, fournir aux chercheurs d'utiles indications pour l'identification de l'espèce microbienne isolée. Il eût été, en effet, intéressant de voir si l'immunité conférée au cobaye était spécifique du microbe « Vid... », ou si elle se manifestail éga- ment à l'égard du gonocoque « Leroy » et non vis-à-vis du méningocoque. Des circonstances indépendantes de notre volonté nous ont empêché de poursuivre ces recherches. Le Gérant : G. Masson. Paris. - L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. 28° ANNÉE NOVEMBRE-DÉCEMBRE 1914 N211-19 (Paru le 25 Janvier 1915). ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX par A. LAVERAN. Il. — INFECTIONS EXPÉRIMENTALES PRODUITES CHEZ DIFFÉRENTES ESPÈCES ANIMALES PAR LA LEISHMANIA INFANTUM Le kala-azar méditerranéen dont l'agent est la L. infantum est inoculable au chien, au chacal, à différentes espèces de singes, à la souris, au rat, plus difficilement au cobaye et au lapin. Le procédé d’inoculation, qui donne les meilleurs résultats, consiste à injecter dans le péritoine ou dans le foie des animaux en expérience le produit du raclage ou du broyage de la rate, du foie ou de la moelle osseuse de sujets fortement infectés de leishmaniose (malades ayant succombéau kala-azar, animaux infectés expérimentalement). L'inoculatior intrahépatique est à conseiller chez le chien et le singe; la dose de virus doit toujours être très forte; on injec- tera à un ch'en 2 à # cent. cubes au moins d’une émulsion épaisse de pulpe de rate ou de foie dans de l’eau physiolo- gique. Chez les rats et les souris, les injections faites dans la cavité péritonéale donnent de bons résultats, 58 . 886 ANNALES DE L'INSTITUT. PASTEUR Les injections dans le tissu conjonctif sous-cutané sont le plus souvent sans effet. «_ À priori, on pouvait espérer que l'inoculation des éléments flagellés, très mobiles, qui, puliulent dans les cultures de la L.infantum, réussirait mieux que celle des formes endocellu- laires, immobiles, du parasite. Il n'en est rien. La difficulté qu'on éprouve à infecter des animaux avec les cultures de la L. infantum provient sans doute de ce que les flagellés deviennent rapidement la proie des phagocytes (1); au con- traire, les Leishmania, telles qu'on les rencontre dans les tissus, peuvent vivre et se multiplier dans les éléments cellulaires qui les ont englobées. La destruction de ces éléments meten liberté des Leishmania qui propagent l'infection. Il est à remarquer que, chez les animaux inoculés avec de la pulpe d'organes, on ne trouve jamais d'éléments flagellés ni dans le sang, ni dans l'exsudat péritonéal (après inoculation intrapéritonéale), ni dans les tissus. « Les cultures anciennes, ayant subi de nombreux passages, sont moins virulentes que les cultures récentes. «Les moyens naturels de transmission de la maladie, à l'aide de quantités très faibles de virus déposées sans doute dans la peau ou dans le tissu conjonctif sous-cutané, sont évidemment plus puissants que ceux dont nous disposons (2). » Cmex. Cnacar. — En 1908, C. Nicolle à annoncé qu'il avait réussi à infecter ui jeune chien avec le virus du kala-azar infantile (3). Le chien avait été inoculé dans le foie et dans la cavité péritonéale, une première fois avec une goutte de sang provenant d'une ponction de la rate pratiquée chez un enfant atteint de kala-azar : la deuxième fois, avec le produit de broyage d'un fragment de la rate recueilli à l'autopsie du même enfant. Le chien, sacrifié 159 jours après la première inoculation, 80 jours après la seconde, avait des Leishmania en grand (1) DELANOE, Ann. Inst. Pasteur, 1912, t. XXVI, p. 172. — Fr. Scorpo, Malaria e malattie dei paesi caldi, septembre-octobre 1912. (2) A. Laveran et C. Nico, Rapport au XVII Congrès internat. de médecine, Londres, 1913, XXIe section. (3) G. Nicozre, Acad. des Sciences, 2 mars 1908, et Soc. de path. erotique, 11 mars 1908. — C. Nicoize et C. Courte, Ann. Inst. Pasteur de Tunis, 1908, fasc. IV. — C. Nicozce, Ann. Inst. Pasteur, 1909, t. XXITE, p. #41. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 887 nombre dans la moelle osseuse, non rares dans la rate, rares dans le foie. Depuis lors, de nombreux observateurs ont constatéqu'ilétait facile, enelfet, d'inoculer Le kala-azar au chien. Le procédé de choix consiste à injecter le virus dans le foie du chien. Avec des produits provenant de l'enfant, de singes ou d’autres chiens, C. Nicolle a inoculé 19 chiens qui, à une exception près, se sont tous infectés; la dose de virus injectée a varié de 2 à 4 cent. cubes d'une émulsion assez épaisse. Sur 30 chiens inoculés par moi, avec la pulpe d'organes contenant des Lershmania en grand nombre ou en assez grand nombre, 26 se sont infectés; 4 fois seulement les résultats ont été négatifs (1). Les jeunes chiens s'infectent en général plus facilement que les chiens adultes ou vieux; cependant, il m'est arrivé d’avoir des insuccès chez de jeunes chiens et de réussir, au contraire, à infecter de vieux chiens (Obs. 8 et 25). Sur 9 chiens inoculés par Jemma, di Cristina et Cannata, 5 seulement se sont infectés (2). P. da Silva a inoculé avec succès le virus humain au chien etil a obtenu ensuite des passages de chien à chien (3). Les inoculations sous-cutanées donnent des résultats néga- tifs (4). Novy a réussi à infecter 6 chiens en leur inoculant, dans le péritoine, des cultures de la L. infantum (5). Une seule injection du liquide de condensation recueilli dans une vingtaine de tubes de culture a suffi pour produire une infection, tardive à l'a vérité, chez le chien. De 4 chiens que j'ai inoculés dans le foie avec des cultures de la L. enfantum, 3 se sont infectés (Obs. 6 et T, un troisième chien, mort de complication 7 Jours après l’inoculation, avait des Leishmania dans la rate et dans la moelle osseuse). (4) A. Laveran et C. Nico, Rapport déjà cité au XVII Congrès interna- lional de médecine, Londres, 1913. (2) R. JEuma, G. 1 Cristina et S. CannaTA, La Pedialria, 1910. (3) P. pa SiLva, Arg. do Inst. Camara Pestana, juin 1914. (*) G. Nrcozce et L. Manceaux, Arch. Inst. Pasteur de Tunis, 1910, fase. III, p: 407; (5) F.-G. Novx, J7. of americ. med. Assoc., 24 octobre 1908, p. 1:23 et Soc. de path. exotique, 21 juillet 1909. 888 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Les inoculations faites dans le foie paraissent donner de meilleurs résultats que celles qui sont faites dans le péritoine. Salvatore à inoculé sans succès 10 jeunes chiens dans le périloine avec des cultures de la L. infantum (1). {Il est toujours nécessaire d'employer de fortes doses de cultures, et les cultures paraissent devenir de moins en moins actives à mesure qu'elles subissent un plus grand nombre de passages 2n vitro. W.-L. Yakimoff et M°° Yakimoff ont réussi à infecter 2 chiens par inoculation intraveineuse du liquide des cultures de la L. infantum; un des chiens n'avait reçu que # cent. cubes de ce liquide (2). C. Nicolle et L. Blaizot ont inoculé avec succès 2 très jeunes chiens par la voie intraveineuse ; chacun des chiens avait recu, dans la jugulaire externe, le liquide provenant de 15 cultures. L'un des chiens, sacrifié 72 jours après l'inoculation, avait une infection généralisée assez forte (3). Chez des chiens moins jeunes que ceux employés par Nicolle et Blaizot dans cette expérience, l'inoculation est plus facile dans la saphène externe que dans la jugulaire externe. J'espérais qu'au moyen de passages successifs par chiens, et en employant de fortes doses de virus, je réussirais à obtenir des infections de plus en plus graves et rapides; il n’en a rien été, mon virus à élé en s’aflaiblissant et, après le 6° passage par chien, je l'ai perdu. Le chacal est aussi sensible que le chien à la L. infan- tum (4). Symptômes. Evolution de l'infection. — La leishmaniose expérimentale est souvent latente chez le chien, comme la leishmaniose naturelle, et pour constater son existence, on n'a d'autre ressource que de rechercher les Leishmania. L'amaigrissement est le symptôme le moins rare; sur 26 chiens inoculés par moi avec succès, 9 élaient amaigris au moment de la mort et parfois l’amaigrissement était très (1) D. SazvarTore, Malaria e malattie dei paesi caldi, janvier-février 1914. (2) W.-L. Yakimorr et Nina K. Yaximorr, Soc. de path. exotique, 12 juin 1912. (3) C. Nicozee et L. BLarzor, Soc. de path. exotique, 13 novembre 1912. (4) C. Nircozce et L. BLarzor, Soc. de path. exotique, 13 novembre 1912. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 889 marqué; 1 chien de 8 kilogrammes ne pesait plus que 5 kilo- grammes (Obs. 4);:-1 chien de 11 kil. 500 ne pesait que 8 kil. 400 (Obs. 5); 4 chien de 10 kilogrammes était tombé à 7 kilogrammes (Obs. 9). Nicolle a noté, chez un chien infecté, un amaigrissement subit et rapide avec hypothermie suivie bientôt de mort. Le nombre des chiens infectés de leishmaniose qui aug- mentent de poids est plus grand que celui des chiens qui diminuent de poids, surtout s’il s'agit de chiens bien nourris et de jeunes animaux dont la croissance continue, ce dont il faut tenir compte. Au début de l'infection, il se produit quelquefois de petites poussées fébriles qui ne sont appréciables qu’au thermomètre (C. Nicolle). L'anémie est peu marquée. On observe parfois, à la dernière période de l'infection, de la paralysie ou de la parésie du train postérieur. Sur 26 chiens infectés, J'ai noté une fois de la paralysie du train postérieur (Obs. 1). C. Nicolle a observé, dans un cas, une paralysie pro- gressive, mortelle. Un de mes chiens à présenté une kératite double qui a per- sisté jusqu'à la mort qui n'est survenue que 456 jours après l’inoculation (Obs. 5). C. Nicolle a observé la même complica- tion sur 2 chiens. On a vu précédemment que la kératite, suivie de l’opacité plus ou moins complète des cornées, avait été notée dans la leishmaniose canine naturelle. La néphrite est souvent signalée dans les observations des chiens infectés par la L. infantum, mais cette affection, banale chez les chiens, surtout chez les chiens âgés, paraît étrangère à la leishmaniose. Un de mes chiens a subi la splénectomie au cours de l'infec- tion (Obs. 6), cette opération ne paraît pas avoir eu d'influence sur la marche de la maladie; Nicolle et Comte avaient déjà constaté le fait. Le tableau clinique de l'infection produite par la L. infantum chez le chien est en somme le même que celui de la leishma- niose naturelle. L'évolution de la maladie est parfois assez rapide. Un chien inoculé par moi, et sacrifié 67 jours après l’inoculation, avait 890 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR une infection d'intensité moyenne; un autre chien, mort acci- dentellement 55 Jours après l’inoculation, avait une infection assez forte. Les ensemencements de la rate et de Ia moelle osseuse d'un chien mort de complication, 7 jours après l’inocu- lation, ont donné de belles cultures. C. Nicolle a constaté la présence de Leishmania dans le foie d'un chien sacrifié 15 jours après l'inoculation. En général, l’évolution de la leishmaniose canine est lente ; la maladie peut se terminer par la mort ou par la guérison. Dans 5 cas où la maladie s’est terminée naturellement par la mort, la durée moyenne a été de 257 jours {minimum 200 jours; maximum, 320 jours). Des chiens sacrifiés, en bon état, au 454° jour et au 456° jour après l’inoculation, ont été trouvés encore infectés, mais en voie de guérison (rate petite; fibreuse, Leishmania très rares). Un chien de C. Nicolle était encore infecté 14 mois après l’inoculation. Une première atteinte de leishmaniose procure l’immunité, à condition que la guérison soit complète et remonte à plusieurs mois; au contraire, une première atteinte sensibilise l'animal s'il est réinoculé avant guérison complète (1). Je résume les observations de 25 chiens inoculés avec succès, le premier à Tunis par C. Nicolle, les autres par moi à l'Institut Pasteur. 1° Un chien griffon, inoculé de kala-azar, par M. C. Nicolle, m'est remis à l'Institut Pasteur le 23 janvier 1909. L'inoculation remonte à 3 mois environ; des Leishmania ont été vues dans le produit d'une ponction du foie, faite au mois de janvier. — 28 janvier, le chien pèse 4 kil. 500. — 24 avril 1909, le chien est très malade, il est amaigri et présente de la parésie du train pos- térieur ; il est sacrifié. Le chien pèse 4 kilogrammes; la rate pèse 15 grammes. L'augmentation de volume de la rate est la seule lésion appréciable. On trouve des £eishmania en grand nombre dans les frottis de rate et de moelle osseuse, plus rares dans les frottis du foie. 2e Un jeune chien est inoculé, le 21 mars 1909, avec la pulpe de la rate d'un singe infecté de kala-azar tunisien. Une ponction du foie faite le 30 avril révèle l'existence de Leishmania non rares. Le chien est sacrifié le 6 mai 1909, 40 jours après l'inoculation. (1) C. Nicozce, Soc. de path. exotique, 13 juillet 1910. — C. Nicore et C. Core, Arch. Inst. Pasleur de Tunis, 1910, fase. III, p. 103. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 891 Poids du chien : 8 kil. 650. Poids de la rate : 15 grammes. Poids du foie : 418 grammes. La moelle osseuse est rouge, diffluente. Leishmania rares dans le foie, dans la rate et dans la moelle osseuse. 3° Un chien adulte, pesant 9 kilogrammes, est inoculé le 27 mars 1909 dans les mêmes conditions que le précédent. Une ponction du foie, faite le 21 mai 1909, ne décèle pas l’existence de Leishmania. Le chien meurt acciden- tellement le 3 juin 1909, 68 jours après l’inoculation. Le chien pèse 9 kil. 500. La rate pèse 17 grammes. Les autres viscères ne présentent pas d’altérations macroscopiques Leishinania non rares dans la moelle osseuse, rares dans la rate et le foie. Des ensemencements faits, dans le milieu de Novy simplifié, avec la rate, le foie et la moelle osseuse donnent de belles cultures. 4° Un chien griffon, adulte, pesant 8 kilogrammes, reçoit le 3 juin 1909, dans le foie, 10 cent. cubes d’une émulsion de pulpe de rate, de foie et de moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 3. — Des ponctions du foie faites les 3 juillet, 29 août et 8 octobre ne décèlent pas l'existence de Leishmania. Cependant, le chien maigrit; le 16 octobre, il ne pèse plus que 6 kil. 500. — Le chien est trouvé mort le 20 décembre 1909, 200 jours après l'inoculation. Poids du chien : 5 kilogrammes. Poids de la rate : 23 grammes. La con- sistance de la rate est augmentée; foie cirrhotique, lobulé, jaunätre; reins granuleux (néphrite interstitielle), urine albumineuse. Leishmania nom- breuses dans la rate et la moelle osseuse, moins nombreuses dans le foie. Les ensemencements faits avec la rate et la moelle osseuse donnent de belles cultures. 50 Un chien adulte, pesant 411 kil. 500, est inoculé le 3 juin 1909, dans le foie, avec 10 cent. cubes de l'émulsion de pulpe de rate, de foie et de moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 3. — Des ponctions du foie faites les 3 juillet, 29 août, 8 et 16 octobre ne révèlent pas l'existence de Leishmania. — 16 octobre, le chien pèse 11 kilogrammes. — 2 décembre, la ponction d'un des fémurs donne 10 cent. cubes de sang. L'examen histolo- gique du sang est négatif, mais 1 tube du milieu de Novy simplifié, sur 6 qui ont été ensemencés avec le sang, donne une culture de Leishmania. Le chien pèse, le 21 décembre, 11 kilogrammes; le 22 février 1910, 43 kil. 300; le 22 mars, 12 kil. 900; le 4 avril, 13 kilogrammes. On constate, le 4 avril, que les cornées sont troubles. — Le chien maigrit; il pèse, le 7 juillet, 11 kilogrammes, le 12 août, 10 kilogrammes. Mort le 2 septembre 1910, 456 jours après l'inoculation. Le chien ne pèse plus que 8 kil. 400. L'émaciation est donc extrême. La rate, très grosse, pèse 55 grammes. Foie gras. Néphrite, urines fortement albumineuses. Cœur et poumons à l’état normal. Moelle osseuse rouge. Cornées très troubles. Leishmania très rares dans la rate et dans le foie. L'examen de la moelle osseuse est négatif. 6° Une jeune chienne recoit, à quatre reprises, dans le péritoine, dans le foie ou dans le tissu conjonctif sous-cutané, des injections de belles cul- lures de la L. infantum. Une de ces injections faite dans le foie est de 10 cent. cubes, les autres sont de 2 à 6 cent. cubes. Les inoculations sont faites aux dates suivantes : 11 et 26 août, 12 octobre 1909 et 411 janvier 1940. 892 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Deux tubes du milieu de Novy simplifié, ensemencés le 31 janvier 1910 avec le produit d'une ponction du foie, donnent de belles cultures de Leish- mania. — La chienne pèse, le 21 décembre, es 10 Eloge le 22 février 1910, 11 kilogrammes ; le 23 mars, 43 kil. Le 9 mai 1910, on pratique la Re La rate, très hypertrophiée, pèse 135 grammes; elle est ramollie. Leishmania assez rares dans les frottis de rate. € La chienne maigrit; le 1e juin, elle pèse 12 kil. 600; le 20 juin et le 1er juillet, 11 kilogrammes. Elle est sacrifiée en mauvais état, le 23 août 1910, 381 jours après la première inoculation. Les ganglions inguinaux et axillaires sont fortement augmentés de volume (hypertrophie compensatrice de la splénectomie?). Gros reins blancs, urines fortement albumineuses. Les autres viscères ne présentent pas d’allération macroscopique. Moelle osseuse rouge, diffluente. Leishmania en assez grand nombre dans les frottis de moelle osseuse, et des ganglions Ilympha- tiques, plus rares dans les frotlis du foie, | 10 Un jeune chien, pesant 2 kil. 200, recoit le 30 novembre 1909,dans lamoelle du fémur droit, 1 cent. cube de belle culture de la L. infantum ; il reçoit en outre dans le foie, à 3 reprises, le 15 décembre 1909 et les 5 et 11 janvier 1910, des injections de cultures en milieu liquide de la même Leishkmania ; chaque injection est de 10 cent cubes. Le chien pèse, le 21 décembre, 3 kil. 800; le 20 janvier 1910, 4 kil. 500; le 22 février, 5 kil. 700; le 22 mars, 5 kil. 00. Deux tubes de ne sont ensemencés, le 16 février, avec le pro- duit de ponctions du foie et d'une côte; le résultat est négatif. Le chien est trouvé mort le 11 avril 1910, 132 jours après la première inoculation. Le chien pèse 4 kil. 800, la rate pèse 5 grammes; elle n’est pas augmentée de volume, sa consistance est normale. Les reins présentent les caractères macroscopiques de la néphrite. L'examen histologique des frottis de rate, de foie et de moelle osseuse ne révèle pas l'existence de Leishmania, mais un tube ensemencé avec la rate donne, à la date du 26 avril, une culture carac- téristique ; 3 tubes ensemencés avec le foie et la moelle osseuse restent stériles. 8e Un vieux chien pesant 10 kilogrammes recoit le 20 décembre 1909, dans le foie, 10 cent. cubes du produit du broyage du foie, de la rate et de la moelle osseuse du chien qui fait l’objet de l'observation 4. — 19 janvier 1910, le chien pèse 10 kilogrammes. — Le chien meurt le 23 janvier 1910, 34 jours après l'inoculation. .Le chien pèse 9 kil. 900. La rate fortement hypertrophiée pèse 40 grammes ; son parenchyme est diffluent. Foie congestionné. Reins scléreux. Moelle osseuse jaunâtre, graisseuse. L'examen histologique de la rate, du foie etde la moelle osseuse ne révèle pas l'existence de Leishmania, mais 4 tubes ense- mencés avec la rate et 2 tubes ensemencés avec la moelle osseuse donnent des cultures caractéristiques ; 2 tubes ensemencés avec le foie restent stériles. 9o Un chien adulte, pesant 10 kilogrammes, recoit le 20 décembre 1909, dans le foie, 10 cent. cubes du produit du broyage du foie, de la rate et de la moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 4. — Des ponctions du foie faites les 31 janvier et 10 juin 1910 ne révèlent pas l’exis- tence de Leishmania. Les Lubes de culture ensemencés avec les produits de LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 893 ces ponctions restent stériles. — Le chien pèse, le 12 février, 9 kil. 500; le 22 mars, 11 kilogrammes; le 12 août, 9 kilogrammes. — 23 août 1910, le chien reçoit, dans le foie, 20 cent. cubes de pulpe du foie de la chienne qui fait l'objet de l'observation 6. — Le chien pèse, le 1er septembre, 9 kil. 600; le 17 novembre, 7 kil. 500, il a donc beaucoup maigri à cette date. Le produit d'une ponction du foie faite le 14 octobre, ensemencé, donne une culture caractéristique. Le chien meurt le 5 novembre 1910, 320 jours après la pre- mière inoculation, 74 jours après la deuxième. Le chien pèse 3 kilogrammes. La rate, fortement hypertrophiée, pèse 43 grammes. Altérations macroscopiques de la néphrite interstitielle et de l'hépatite. Moelle osseuse rouge. Leishmania nombreuses dans les frottis de rate, de foie et de moelle osseuse. 109 Une chienne, pesant 4 kil. 300, reçoit, les 22 et 26 mars, 4, 14 et 18 avril 1910, dans le foie ou dans le tissu conjonctif sous-cutané, 5 injections (de 10 cent. cubes chaque) de culture de la Leishmania infantum en milieu liquide. — Le 30 avril, on ensemence 2 tubes du milieu de Novy simplifié avec le pro- duit d'une ponction du fémur et, le 19 juillet, 2 tubes avec le produit d’une ponction du foie; les 4 tubes restent stériles. — Le 25 juillet, on ensemence 2 tubes avec le produit d'une ponction du fémur, l'un des tubes reste stérile, l'autre donne une belle culture de flagellés. Le 23 août 1910, on réinocule la chienne afin de voir si la marche de l'infection pourra être accélérée; on injecte, dans le foie, 20 cent. cubes de la pulpe du foie de la chienne qui fait l'objet de l'observation 6. La chienne meurt le 5 novembre 1910, elle pèse 6 kil. 100. La rate, fortement hypertrophiée, pèse 43 grammes. Les reins présentent les altérations caractéristiques de la néphrite interstitielle chro- nique, et le foie celles de l'hépatite (cirrhose). L'examen des frottis de rate et de moelle osseuse révèle l'existence de Leishmania rares. 119 Un chien, pesant 3 kilogrammes, reçoit, à trois reprises, sous la peau ou dans le foie, les 22 et 26 mars et 4 avril 1910, 10 cent. cubes de culture de la L. infantum en milieu liquide. — Le chien pèse, le 10 juin» 5 kil. 300; le 19 juillet, 7 kilogrammes.— Des ponctions du fémur et du foie, faites les 10 juin, 19 juillet et 10 août, donnent des résultats négatifs à l'examen histologique et aux essais de culture. — 23 août 1910, le chien recoit, dans le foie, 20 cent. cubes de pulpe du foie de la chienne qui fait l'objet de l'observation 6.— Le 1 septembre, le chien pèse 7 kil. 500 et le 1er octobre, 8 kil. 300. — 26 octobre, le produit d'une ponction du fémur donne à l'ensemencement des flagellés. Le chien meurt le 28 novembre 1910, 251 jours après la première inoculation, 97 jours après l'inoculation de pulpe de rate, qui paraît avoir donné lieu à l'infection. | Le chien pèse 7 kil. 500. La rate pèse 14 grammes. Légère hypertrophie des ganglions iliaques.Broncho-pneumonie. Leishmania très nombreuses dans Jes frotlis de rate et de moelle osseuse; nombreuses dans les frottis du foie. 129 Une chienne adulte, pesant 6 kil. 300, recoit le 9 mai 1910, dans le foie, 10 cent. cubes de ia pulpe splénique d'une chienne, objet de l'observation 6, qui a été splénectomisée et qui est infectée de kala-azar tunisien; le 10 mai, nouvelle injection dans le péritoine, de la même pulpe qui a été conservée à la glacière. — 19 juillet, la chienne pèse 6 kil. 300; une ponction du foie ne révèle pas l'existence de Leishmania ; il en est de même d'une ponction du 894 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR fémur faite le 10 août. — 15 septembre, on injecte dans le foie 10 cent. cubes d'une belle culture de la L. infantum. — 22 décembre 1910, la chienne, qui est amaigrie et affaiblie,est sacrifiée, 227 jours après la première inoculaticn. La chienne pèse 5 kil. 600. La rate, qui est hypertrophiée, pèse 22 grammes. Les autres viscères ne présentent pas de lésions macroscopiques. Leish- mania très nombreuses dans la moelle osseuse, assez nombreuses dans !a rate, rares dans le foie. 130 Un chien adulte, pesant 6 kil. 100, recoit le 10 mai 1910, dans le foie et dans le périloine, 20 cent. cubes de pulpe de rate de la chienne qui fait l'objet de l'observation 6 (splénectomie du 9 mai). — 10 août, une ponction du fémur ne révèle pas, à l’ensemencement, l'existence de Leishmania. — 15 septembre, on injecte, dans le foie, 10 cent. cubes de culture de L. in- fantum en milieu liquide. — Le chien pèse, le 15 octobre, 7 kilogrammes et, le 15 novembre, 7 kil. 300. — 8 décembre, le produit d’une ponction du fémur donne, à l’'ensemencement, une belle culture de flagellés. — 10 décembre, le chien pèse 6 kil. 200. On injecte encore, dans le péritoine, 10 cent. cubes de culture de L. infantum, dans le but d'obtenir une forte infection. L'animal amaigri, affaibli, est sacrifié le 21 janvier 1911, 256 jours après la première inoculation. Le chien pèse 6 kil. 400. La rate pèse 11 grammes; sa consis- tance est augmentée. Foie gros, congestionné. Néphrite légère, urine albu- mineuse. Leishmania rares dans la moelle osseuse, très rares dans la rate : examen de frottis du foie négatif. 14 Un chien adulte, pesant 10 kilogrammes, reçoit le 23 août 1910, dans le foie, 25 cent. cubes de la pulpe du foie de la chienne qui fait l'objet de l'observation 6. — Le chien pèse, le 4er octobre, 10 kilogrammes ; le 1% no- vembre, 9 kil. 700. — 5 novembre, le chien recoit, dans le foie, 5 cent. cubes d'émulsion, après broyage, du foie et de la rate du chien qui fait l'objet de l'observation 9. — 15 novembre, le chien pèse 9 kil. 800. Une ponction du fémur est faite le 16 novembre, le produit ensemencé donne de belles cul- tures de Leishmania, au 17° jour. — 11 décembre, injection intrapéritonéale de 10 cent. cubes de culture de L. infantum.— Le chien, qui est en mauvais état, est sacrifié le 24 janvier 1911 ; il pèse 9 kil. 300. La rate, hypertrophiée, pèse 28 grammes. Reins congestionnés. Urine albumineuse. Leishmania très rares dans la rate et dans la moelle osseuse. Examen de frottis du foie négatif. 150 Un jeune chien, pesant 5 kil. 100, reçoit le 5 novembre 1910, dans le foie, > cent. cubes de pulpe de foie et de rate du chien qui fait l'objet de lobserva- tion 9. — Le 15 novembre, le chien pèse 6 kil. 200 et, le 11 janvier 1911, 5 kil. 400. Le chien, qui est malade, est sacrifié le 11 janvier, 67 jours après l'inoculation. La rate pèse 14 grammes. On constate l'existence de plusieurs foyers de pneumonie. Leishmania nombreuses dans la moelle osseuse, très rares dans les frottis de rate. L'examen d’un frottis du foie est négatif 16° Un chien adulte, pesant 8 kil. 300, reçoit le 28 novembre 1910, dans le foie, 10 cent. cubes d'émulsion, après broyage, de la rate et de la moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 41. — Le chien pèse, le 16 décembre 1910, 40 kil. 500; le 15 janvier 1911, 12 kil. 500; le 6 mars, 12 kil. 700. Le chien meurt le 10 mars 1911, 108 jours après l'inoculation; il pèse 9 kil. 800. La rate, de consistance normale, pèse 21 grammes. Reins « LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 895 marbrés, néphrite probable. Moelle osseuse rouge, non diffluente. Leish- mania non rares dans les frottis de rate, très rares dans les frottis de moelle osseuse. L'examen d'un frottis du foie est négatif. 17° Un chien adulte, pesant 4 kil. 800, reçoit le 22 décembre 1910, dans le péritoine, 10 cent. cubes de pulpe de rate de la chienne qui fait l'objet de l'observation 42. — Le chien pèse : le 15 janvier 1911, 4 kil. 700; le 4er février, 5 kilogrammes; le 6 mars et le 4er avril, 5 kilogrammes; le 15 juin, 6 kilo- grammes. — Le 21 janvier 1911, un des fémurs est ponctionné, l'examen histologique ne révèle pas l'existence de Leishmania, mais, à l’ensemence- ment , on obtient une culture caractéristique. Le chien est sacrifié le 19 août 19114, 240 jours après l'inoculation; il pèse 5 kil. 300. La rate pèse 9 grammes, sa consistance est augmentée, la capsule est épaissie. Leishmania rares dans la moelle osseuse, très rares dans la rate. L'examen d’un frottis du foie est négatif. L'état de la rate et la rareté des Leishmania dans ce viscère indiquent que l'infection était en voie de-guérison. 18° Un jeune chien, pesant 3 kil. 200, recoit le 24 janvier 1911, dans le péri- toine, 5 cent. cubes de la pulpe de rate et de moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 14. — Le chien pèse : le 4er février, 4 kil. 300; le 6 mars, 5 kil. 700; le 3 mai, 5 kil. 800; le 4er juin et le 2 août, 6 kil. 600. Le chien, qui est en bon, étatest sacrifié le 2 septembre 1914,221 jours après l'inoculation ; il pèse 6 kil. 400; la rate, hypertrophiée, pèse 11 grammes. Les autres viscères ne présentent aucune altération macroscopique. Leishmania non rares dans la rate et dans la moelle osseuse; l'examen de frottis du foie est négalif. 19° Un jeune chien, pesant 2 kil. 470, reçoit le 4 janvier 1911, dans le péri- toine, 2 cent. cubes de la pulpe de rate et de moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 14. — Le chien pèse : le 6 mars, 3 kil. 300; le 3 mai, 3 kil. 700; le 4er juin, 4 kil. 300; il est trouvé mort le 19 juin 1911, 146 jours après l'inoculation. Le chien pèse 4 kil. 200; la rate, augmentée de volume, pèse 15 gr. 50. Foie d'aspect normal. Reins pâles. présentant les altérations de la néphrite épithéliale ; urine fortement albumineuse.Organes thoraciques à l’état normal. Leishmania non rares dans la moelle osseuse, très rares dans la rate. L'examen de frottis du foie est négatif. 29° Un jeune chien, pesant 5 kilogrammes, recoit le 16 mars 1911, dans le foie, 4 cent. cubes de pulpe de rate et de foie du chien qui fait l’objet de l'ob- servation 16. Le chien pèse : le 1 avril, 5 kilogrammes; le 3 mai, 5 kil. 700; le 1er juin, 6 kil. 500; le 1er juillet, 7 kil. 100; le 2 août, 7 kil. 200. —2 sept. 1911, le chien est réinoculé, dans le foie, avec la pulpe de rate et de moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 18. — Le 4 octobre, le chien pèse 8 kil. 500 ; il est sacrifié, en bon état, le 26 octobre 1911, 224 jours après la première inoculation. Le chien pèse 9 kil. 500; la rate, notable- ment hypertrophiée, pèse 42 grammes, Sa consistance est augmentée. Les autres viscères ne présentent pas d’altérations macroscopiques. Leishmania non rares dans la moelle osseuse, rares dans la rate; l'examen de frottis du foie est négatif. 210 Une chienne adulte, pesant 5 kilogrammes, est inoculée le 2 septembre 1911, dans le foie, avec la pulpe de rate et la moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 18. — La chienne pèse, le 4 octobre, 5 kil. 500 896 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR elle meurt le 27 octobre à la suite d’une nouvelle inoculation intrapérito- néale faite le 26 octobre. La chienne pèse 5 kil. 200; la rate pèse 35 grammes. Leishmania nombreuses dans la moelle osseuse, rares dans la rate. L'examen de frottis du foie est négatif. 220 Un jeune chien, pesant 6 kil. 500, est inoculé le 26 octobre 1911, dans le foie, avec 5 cent. cubes de la pulpe de rate et de la moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 18. — Le chien pèse, le 15 novembre, 6 kil. 800; le 18 décembre, 8 kil. 400: le 2 Janvier 1912, 11 kilogrammes. A l'examen du sang je constate l'existence de Leishmania très rares. Le chien estsacrifié, en bon état, le 25 janvier 1912,91 jours après l'inoculation. Le chien pèse, 11 kil. 700: la rate pèse 25 grammes. Le foie a son aspect normal, ainsi que les autres viscères. Leishmania nombreuses dans la moelle osseuse, non rares dans la rate, très rares dans le foie. 23° Une chienne adulte, pesant 8 kil. 200, reçoit le 25 janvier 1912, dans le foie, 5 cent. cubes environ de la pulpe de rate, de foie et de la moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 22. — La chienne pèse : le 1er février, 8 kil. 300 et le 2 mars, 8 kil. 400. — La chienne est sacrifiée, en bon état, le 27 avril, 93 jours après l'inoculation. La chienne pèse 8 kilo- grammes. Il existe deux rates principales, parfaitement indépendantes l’une de l’autre, qui pèsent l'une 27 grammes et l’autre 32 grammes; on distingue: en outre, dans le grand épiploon, des corps brunâtres de la grosseur de grains de chènevis qui constituent évidemment de petites rates accessoires. Les autres viscères ont l'aspect normal. Leishmania très rares dans la rate et la moelle osseuse. La moelle osseuse ensemencée dans deux tubes du milieu de Novy simplifié donne de belles cultures. 249 Une chienne adulte, pesant 7 kil. 100, recoit le 23 janvier 1912, dans le foie, 5 cent. cubes environ de la pulpe de rate et de moelle osseuse du chien qui fait l'objet de l'observation 22. — La chienne pèse : le 26 mars, 8 kil. 700 et le 27 avril, 8 kil. 200. — La chienne est sacrifiée, en bon état, le 17 mai 1912, 113 jours après l’inoculation:; elle pèse 10 kilogrammes; la rate, hypertrophiée, pèse 31 grammes. Les autres viscères ont l'aspect normal. Leishmania rares dans les frottis de rate. 25° Un vieux chien, pesant 4 kil. 300, est inoculé le 47 mai 4912, dans le foie, avec la pulpe de rate du chien qui fait l'objet de l'observation 24. — Le chien est sacrifié le 31 juillet 1912, 75 jours après l'inoculation, il pèse 4 kil. 500. La rate pèse 18 grammes, sa consistance est augmentée. Les autres viscères ont l'aspect normal. Moelle osseuse jaune, graisseuse. Leishmania non rares dans la rate; deux tubes ensemencés avec la rate donnent de belles cultures. Anatomie pathologique. — La rate est presque toujours aug- mentée de volume ; j'ai trouvé pour 27 chiens, du poids moyen de 7 kil. 24, un poids moyen de la rate de 28 grammes, nota- blement supérieur au poids normal (1). Chez quelques chiens, (1) D'après EcuenserGer et Baum, le poids de la rate du chien normal est de 1 p. 500 à 1 p. 600 du poids du corps; dans le cas particulier, le poids.de la rate de chiens normaux n'aurait pas dû dépasser 14 gr. 48. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 897 l'hypertrophie de la rate était très marquée. Un chien de 13 kilogrammes, qui a subi la splénectomie, avait une rate pesant 135 grammes (Obs. 6); un chien, de 8 kil. 400, avait une rate de 55 grammes ; un chien, de 7 kilogrammes, une rate de 43 grammes; un chien, de 5 kil: 200, une rate de 35 grammes ; un chien, de 8 kilogrammes, avait 2 rates pesant l’une 27 gr., l’autre 32 grammes, 59 grammes en tout (Obs. 23). Chez les chiens qui sont au début ou à la période d’état de la maladie, la consistance de la rate est d'ordinaire diminuée ; chez les chiens qui meurent de complications ou qui sont sacri- fiés alors que la leishmaniose est guérie ou en voie de guéri- son, la rate est petite et de consistance fibreuse. Chez le chien splénectomisé qui avait survécu plus de 3 mois à l'opération, les ganglions, notamment les inguinaux et les axillaires étaient fortement hypertrophiés. La moelle osseuse est souvent rouge et diffluente. Le foie présente son aspect normal. Les reins sont souvent malades chez les chiens âgés, mais les lésions de néphrite sont banales dans ce cas. Les organes thoraciques sont presque toujours à l'état sain. Chez un chien, mort de leishmaniose, C. Nicolle à noté des hémorragies ou infarctus dans les poumons, des épanchements séro-fibrineux dans le péritoine, les plèvres et le péricarde. C’est dans la moelle osseuse et ensuite dans la rate, qu’on trouve les Leishmanta en plus grand nombre ; cette règle com- porte toulefois quelques exceptions (Obs. 5 et 16); le foie est d'ordinaire beaucoup moins parasité; il arrive souvent qu'on ne voit pas de Leishmania dans les frottis du foie, alors qu’elles sont assez nombreuses dans les frottis de moelle osseuse ou de rate. Sur 25 chiens infectés de leishmaniose expérimentale, J'ai trouvé que les parasites étaient répartis de la manière suivante : Moelle osseuse : Leishmania nombreuses, 8 fois ; non rares, 6 fois; rares ou très rares, 9 fois. L'examen histologique a été négatif 2 fois ; il a porté dans ces cas sur des os de vieux chiens dont la moelle osseuse était jaune, tout à fait graisseuse. Rate : Leishmania nombreuses, 4 fois; non rares, 5 fois; rares ou (rès rares, 16 fois. Foie : Leishmania nombreuses, 1 fois ; non rares, 4 fois ; rares 898 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ou tres rares, 8 fois. 12 fois l'examen histologique des frottis du foie a été négatif. ) Dans les ganglions lymphatiques, on trouve souvent des Leishmania; ces parasites étaient assez nombreux dans les gan- glions Iymphatiques fortement hypertrophiés du chien ayant subi la splénectomie dont il a été question déjà. Dans les frottis, les Leiëshmania sont souvent libres, ce qui s'explique par la destruction artificielle d’un grand nombre d'éléments distendus par les parasites et très fragiles. Sur les coupes, on constate que la plupart des Leishmania sont endo- cellulaires. Les parasites se trouvent en nombre variable dans des leucocytes mononucléaires (rarement dans des polynu- cléaires), dans des cellules endothéliales et, parfois, dans les cellules hépatiques. Un même leucocyte, fortement distendu. peut contenir de 60 à 80 Leishmania. Nous n'avons pas à décrire ici la Leishmania infantum qui est bien connue. Diagnostic. Pronostic. — Ce que nous avons dit précédem- ment à propos du diagnostic de la leishmaniose naturelle du chien s'applique au diagnostic de la leishmaniose produite expérimentalement par la L. infantum ; les procédés employés dans les deux cas pour déceler l'existence des parasites sont les mêmes. On remarquera que chez plusieurs des chiens dont les observations sont résumées plus haut, l'examen histologique des produits de ponctions du foie ou même de la moelle osseuse a donné des résultats négatifs, alors que l’ensemencement de ces produits fournissait la preuve de l’existence des Leishmania (Obs. 5, 8, 17), Dans un seul cas, l'existence de Leishmania a été notée à l'examen direct du sang (Obs. 22) ; mais je dois dire que j'ai eu recours trop rarement à ce moyen de diagnostic. La leishmaniose provoquée chez le chien par de fortes doses de virus se termine souvent par la mort, mais la terminaison par guérison n’est pas rare. Chez les chiens qui sont sacrifiés, alors que l'infection est en voie de régression, la rate est petite, de consistance plus grande qu’à l’état normal et on ne trouve que des Leishmania très rares dans la moelle des os et dans la rate (Obs. 17). LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX $99 Traitement. —L'impossibilité où l’on a été jusqu'ici d'obtenir, chez le chien, des infections par la L. infantum à évolution régulière à rendu impossible l'étude du traitement de ces infec- tions. Dans les cas où des chiens infectés et traités guérissent, on doit toujours se demander si la guérison n’a pas été la con- séquence de la marche naturelle de la maladie. Je dois signaler cependant que C. Nicolle et À. Conor ont observé, chez un chien infecté, une guérison rapide à la suite d’une seule injection de salvarsan de 20 centigrammes pour un chien de 10 kil. 900 (1). SINGES. — C. Nicolle, puis C. Nicolle et L. Manceaux ont montré que le Macacus sinicus et le M. cynomolqus s’infectaient assez facilement lorsqu'on leur inoculait, dans le foie, de la pulpe d'organes d'enfants ou d'animaux atteints de kala-azar méditerranéen (2). | Le procédé d’inoculation préconisé par C. Nicolle est celui qui donne les meilleurs résultats chez le singe, comme chez le chien. Les inoculations sous-cutanées n’ont jamais donné lieu à des infections généralisées. Le fait suivant observé par Nicolle et Manceaux (3) mérite d'être rapporté. Un bonnet chinois inoculé sous la peau de l’avant-bras droit, avec le produit du broyage de la rate d’un singe fortement infecté par L. infantum, a présenté une réaction thermique très courte, son bras a enflé et il est resté gros pendant plus de 2 mois. Une ponction, pratiquée au point d'inoculation, 45 jours après l'injection du virus sous la peau, a révélé l'existence de nombreuses Leishmania. La rate n’a jamais présenté les signes de l’hypertrophie et quand l'animal est mort d’une autre maladie, après guérison complète de l'affection locale, on n’a trouvé de Leishmania ni dans la rate, ni dans le foie, ni dans la moelle des os. Comme le font remarquer Nicolle et Manceaux, la lésion locale provoquée dans ce cas ne ressemblait en rien au bouton d'Orient. (1) C. Nicozce et A. Conor, Ann. Inst. Pasteur de Tunis, 1914, fase. LE, p. 117 2) C. Nicoze, Ann. Inst. Pasteur, juin 1909, t. XXIIT, p. 457. — C. Nicoze el L. Manceaux, Arch. Inst. Pasteur de Tunis, juillet 1909, p. 133. (3) C. Nicozce et L. ManxcEaux, Arch. Inst. Pasteur de Tunis, 1909, fase. IV, pau0E : 900 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR On pourrait croire que la leishmaniose, une fois adaptée à l'organisme du singe, devient plus virulente pour cet animal ; il n’en est rien: à la suite des passages de singe à singe, le virus s'affaiblit au contraire rapidement (1). Sur 7 singes, inoculés par Nicolle à Tunis, 2 ont succombé au kala-azar, 2 ont été sacrifiés en pleine infection, À est mort d’une infection étrangère, 2 étaient encore vivants et infectés au moment où cette statistique a été établie; ils ont guéri depuis. : Sur 1% singes appartenant aux espèces : M. sinicus, M. cyno- molqus, M. rhesus, inoculés par moi à l'Institut Pasteur, 2 ont eu des infections mortelles (il s'agissait dans les deux cas de M. cynomolqus); 7 ont eu des infections légères (M. sinicus, 2; M. cynomolqus, k; M. rhesus, 1); 5 ne se sont pas infectés (M. cynomolqus, k; M. rhesus, L). Le M. rhesus noté comme ayant eu une infection légère a guéri sans que la présence des Leishmania dans le foie ait été constatée, mais l'hypertrophie de la rate qui s'est produite quelque temps après l'inoculation, pour disparaître ensuite, laisse peu de doutes sur la réalité de l'infection. Marshall, au Soudan, a réussi à infecter 5 Cercopithecus sabæus, sur 7 inoculés, avec le virus du kala-azar soudanais qui paraît devoir être identifié au kala-azar méditerranéen (2). Symptômes. Evolution de l'infection. — Les symptômes de la’leishmaniose sont, en général, plus apparents chez le singe que chez le chien. ; La fièvre est souvent précoce, ce qui permet de reconnaitre le début de l'infection; elle procède par poussées qui alternent avec des périodes d’apyrexie. Dans les cas graves, la fièvre devient continue, pour faire place à une hypothermie finale; dans les cas légers, qui se terminent par guérison, les poussées fébriles s’espacent, puis disparaissent (C. Nicolle). Avec la fièvre, il faut citer, parmi les symplômes les plus constants de la leishmaniose simienne, l'hypertrophie de la rate. La rale qui, à l’état normal, n'est pas perceptible au (4) C. Nicorre et L. MANCrAUx, Op:"cit: (2) W.-E. MarsuaLz, Fourth Rep. Wellcome trop. research Laboratories, Khar- toum, 1914, 4. A, p. 164 et J{. R. Army med. Corps, septembre 1911. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 901 palper chez les singes, déborde les fausses côtes chez ceux de ces animaux qui sont infectés de leishmaniose; son extrémité inférieure peut être saisie entre le pouce et l'index; mobile et allongée, cette extrémité de la rate ne doit pas être confondue avec la masse immobile et de forme spéciale du rein gauche. Tantôt on observe un amaigrissement progressif et la mort survient dans le marasme, tantôt l'état général reste bon; la maladie se termine alors par guérison. Les singes, comme les enfants infectés de kala-azar, présen- tent quelquefois des éruptions pétéchiales. La splénectomie pratiquée au cours de l'infection paraît ètre sans action sur l’évolution de la maladie. La durée de la leishmaniose dans les formes graves, termi- nées par la mort, est de deux à trois mois; dans les formes d'intensité moyenne, elle peut être beaucoup plus longue; des singes inoculés par Nicolle, et infectés, étaient encore vivants six mois après l’inoculation. Une première atteinte de kala-azar confère une immunité complète au singe, comme au chien (1). Les observalions 1 et 2, résumées ci-après, sont des exem- ples d'infections fortes, terminées par la mort chez des Macacus cynomolqus. La durée de la maladie a été de 59 jours dans le premier cas et de 36 jours seulement dans le deuxième, c’est-à- dire beaucoup plus courte qu'elle ne l’a été chez les chiens ; on x a vu plus haut que chez 5 chiens qui ont succombé à la leish- maniose expérimentale, la durée moyenne de la maladie a été de 257 jours. 19 Un Macacus cynomolqus, pesant 1 kil. 450, est inoculé le 27 janvier 1909, dans le foie, avec la pulpe de rate d’un chien fortement infecté de kala-azar tunisien (infection expérimentale). — 6 mars, le singe pèse 1 kil. 440; la tem- pérature est de 3806. La rate est augmentée de volume. — 12 mars, le singe pèse 1 kil. 260; la température est de 3808. — 19 mars, le singe pèse 4 kil. 320 ; ta température est de 3901. Dans le produit d'une ponction du foie, on constate l'existence de Leishmania non rares. — 26 mars, le singe ne pèse plus que 1 kilogramme ; il a donc sensiblement maigri; il est moins vif qu'à l'ordinaire et la température est seulement de 375. — Le singe est trouvé mort le 27 mars. La rate, hypertrophiée, pèse 22 grammes. Le foie pèse 18 grammes. Les autres viscères ont l'aspect normal. Leishmania très nom- (1) C. Nrcozce et C. Comte, Arch. Instilul Pasteur Tunis, 1910, fasc. II, p.103. 29 902 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR breuses dans la rate, nombreuses dans le foie, assez rares dans la moelle osseuse. 20 Un Macacus cynomolgqus reçoit le 28 novembre 1910, dans le foie, 5 cent. cubes d'une émulsion de rate et de moelle osseuse d'un chien infecté avec le kala-azar tunisien. — 30 décembre 1910, le singe est amaigri, toujours accroupi au fond de la cage, mange peu. Il est trouvé mort le 3 janvier 1911. — Le singe pèse 1 kil. 600; la rate, hypertrophiée, pèse 18 grammes. Les autres viscères ont l'aspect normal. Leishmania non rares dans la moelle osseuse, très rares dans la rate: l'examen d'un frottis du foie est négatif. Anatomie pathologique. — Les singes, qui succombent à la leishmaniose, présentent constamment de l'hypertrophie de Ia rate. La rate qui chez un M. sinicus normal, de taille moyenne, pèse 3 grammes environ, atteint souvent le poids de 11 et 12 grammes, ou même davantage, chez ceux de ces animaux qui sont infectés. Un M. sinicus, inoculé avec succès par C. Nicolle, avait une rate pesant 25 grammes. Le Macacus cynomolqus qui fait l’objet de l'observation 1, résumée ci-dessus, ne pesait que 1 kilogramme au moment de la mort, el sa rate pesait 22 grammes. Le M. cynomolqus de l'observation 2 . pesait 1 kil. 600 et avait une rate de 18 grammes. Chez les singes qui sont'sacrifiés après guérison de la leish- maniose, la rate est petite, globuleuse, de consistance fibreuse. Un M. sinicus mort de complication, après guérison d’une infec- tion par la L. infantum, avait une rate de consistance fibreuse qui ne pesait que 1 gr. 80; le poids du singe était de 1 kil. 570. La moelle osseuse est rouge et souvent diffluente. Les localisations des Leishmania sont les mêmes que chez le chien et chez l'enfant; c'est dans la moelle osseuse et dans la rate que l’on trouve les parasites en plus grand nombre; le foie vient ensuite. Les Leishmania siègent en général dans les leu- cocytes ou dans les cellules endothéliales ; elles peuvent envahir aussi les cellules hépatiques (C. Nicolle). Diagnostic. Pronostic. — Ce que nous avons dit plus haut du diagnostic de la leishmaniose canine s'applique ici. Les formes lalentes sont communes chez le singe, comme chez le chien, cependant l'hypertrophie de la rate, presque toujours apparente chez le singe, fournit un signe important qui fait défaut chez le chien. Ici, comme chez le chien, pour porter le diagnostic, il faut LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 903 toujours en venir à la recherche des Leishmania. La ponction du foie qui donne de bons résultats quand il s’agit d'infections _généralisées graves, comme chez le singe qui est l’objet de l'observation 1, est insuffisante dans les cas d'infections légères, comme le prouve l’observation suivante (1). 30 Un Macacus cynomolqus, pesant 2 kil.500, est inoculé le 24 avril 1909 avec du virus provenant d'un chien infecté de leishmaniose. 5 ponctions du foie, pratiquées le 4° juin, les 2 et 30 juillet, le 26 août et le 43 octobre 1909, ne décèlent pas, sur frottis colorés, de Leishmania. La rate s'hypertrophie au début de juin, devient dure et volumineuse en juillet-août, et commence à diminuer en octobre. Le 30 octobre, l'animal, qui avait maigri pendant l'été, pèse 2 kil. 580; son état est très bon; il est alors splénectomisé ; la rate pèse 19 grammes; à la coupe, son parenchyme est résistant, légèrement sclérosé ; un examen prolongé de plusieurs frottis de pulpe splénique, pré- levée en deux régions éloignées, ne décèle pas de Leishmania. L'ensemen- cement, en 6 tubes, renfermant du milieu de Novy simplifié, de quantités relativement fortes de pulpe splénique fournit les résultats suivants : 2 tubes stériles ; 2 tubes avec bactéries; 1 tube avec flagellés et bactéries; 1 tube avec culture pure, très riche de flagellés libres ou en rosaces volumineuses. repiquables. Le 2 décembre 1909, l'animal pèse 2 kil. 500 et sa santé parait très bonne. Ainsi, des ponctions répétées du foie n'ont pas permis, dans ce cas, de constater l'existence des Leishmania et des ponctions de la rate n'auraient sans doute pas donné de meilleurs résul- tas, puisque, après la splénectomie, l'examen de frottis de la rate a été négatif et que l'existence des Leishmania n'a été révélée que par les cultures obtenues à la suite des ensemen- cements faits avec la pulpe splénique. Marshall (Op. cit.) a trouvé 5 fois sur 5 des Leishimania dans le sang de cercopithèques infectés avec le virus du kala-azar soudanais, mais les parasites étaient très rares et par suite leur recherche était laborieuse. L'infection produite par la L. infantum chez le singe se termine tantôt par la mort, tantôt par la guérison. Traitement. — Xci, comme chez le chien, l’irrégularité avec laquelle évoluent les infections dues à la L. infantum n'a pas permis d'entreprendre des expériences de traitement. (1) A. Laverax et A. Perrir, Bullet. Soc. de path. exotique, 8 décembre 1909. & LE p: 585: 904 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Souris. — Laveran et Pettit ont montré, en 1909, que lors- qu'on inocule à des souris ou à des rats, dans la cavité périto- néale ou dans le foie, de la pulpe des viscères d’un animal for- tement infecté de kala-azar (virus tunisien), on peut produire chez ces animaux des infections légères qui, localisées à la cavité péritonéale, se terminent par guérison (1). La plupart des souris inoculées n'avaient pas été suivies assez longtemps pour que l'infection eût le temps de se généraliser. En 1912, Laveran a montré qu'on pouvait produire, chez la souris, des infections généralisées avec le virus du kala-azar tunisien (2). W.-L. Yakimoff et N. Kohl-Yakimoff ont réussi également à produire des infections généralisées légères chez les souris avec la Leishmania infantum (3). Sur 26 souris blanches inoculées, dans le péritoine, avec la pulpe de rate, de foie ou de moelle osseuse de chiens ou de souris infectés de kala-azar, j'ai constaté : 4 fois des infections généralisées fortes, 4 fois des infections généralisées moyennes, 43 fois des infections généralisées légères. 5 souris, qui avaient montré des Leishmania en plus ou moins grand nombre dans l’exsudat péritonéal, à la suite de l’inoculalion, n’ont pas eu d'infection généralisée ou bien elles étaient complètement guéries quand elles ont été sacriliées. Deux souris, sacrifiées 24 et 31 jours après l'inoculation, avaient des infections généralisées fortes; une troisième, sa- crifiée au bout de 138 jours, avait aussi une infection généra- lisée forte, mais cette longue durée des infections parait exceptionnelle. Chez les souris sacriliées 127 à 203 jours après l’inoculation, j'ai trouvé, presque toujours, des infections légères ou très légères en voie de régression. Une seule souris a succombé après avoir été inoculée trois fois (deux fois avec des cultures de Leishmania, une fois avec la. rate broyée d’une souris fortement infectée de kala-azar). Les parasites étaient nombreux dans la rate hypertrophiée et il n'y (1) A. Laverax et A. Perrir, Soc. de Biologie, 15 juin 1909. (2) A. Laveran, Acad. des Sciences, 26 février 1912; Soc. de path. exotique, 143 novembre 1912. (3) W.-L. Yaximorr et N. Kogz-YVaximorr, Soc. de path. exotique, 1912, t. V, p. 218 et 355. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 905 avait pas de lésions macroscopiques pouvant expliquer la mort, néanmoins il n'est pas démontré que cette souris ait suc- combé à la leishmaniose; des infections plus fortes ont été observées chez des souris qui avaient résisté. Les infections généralisées les plus belles ont été obtenues par l'injection, dans le péritoine, de la pulpe de rate, de foie ou de moelle osseuse, de chiens ou de souris infectés de kala- azar; huit jours après l'inoculation, la ponction péritonéale permet de constater l'existence de Leishmania en plus ou moins grand nombre dans l’exsudat; les parasites sont con- tenus dans des leucocytes (mononucléaires en général) ou dans des cellules endothéliales qui parfois en sont littéralement bourrées, on trouve aussi un certain nombre de Leishmania libres. Tantôt l'infection reste ainsi localisée au péritoine, tantôt elle se généralise; les Leishmania envahissent la rate, le foie et la moelle osseuse. L'injection des cultures de Leishmania infantum dans le péritoine des souris ne donne, en général, que des résultats négatifs ; les flagellés deviennent rapidement la proie des pha- gocyles qui les détruisent, tandis que les Leishmania telles qu'on les rencontre dans les tissus, à l’état préflageilé, peuvent vivre et se multiplier dans les éléments anatomiques qui les ont englobés. En injectant, dans le foie d’une souris, une culture de L. infantum, Laveran a obtenu une infection légère; des infec- tions peuvent aussi être produites, comme M. et M" Yakimoff l'ont annoncé (1), par l'injection des cultures dans les veines caudales des souris. En se servant d’aiguilles de platine très fines, il est assez facile de réussir cette petite opération; on plonge la queue de la souris dans de l’eau chauffée à 40 degrés environ afin de dilater les veines; le liquide de culture est étendu à moitié avec de l’eau physiologique. On ne réussit, en général, à produire par ce procédé que des infections légères. La virulence de La Leishmania infanlum pour les souris, loin d'augmenter à la suite des passages chez ces animaux, comme on pouvait l'espérer, va en décroissant. (4) W.-L. Yakimorr et Nixa K. Yakiuorr, Bullet. Soc. de path. exotique, 1912, CV, p.219; 906 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR L'hypertrophie de la rate est une lésion constante chez les souris qui ont des infections généralisées, et c'est dans la rate que l’on rencontre les Leishmania le plus souvent et en plus grand nombre. Sur 24 souris, la rate a été notée, dans 5 cas, comme très fortement hypertrophiée (5 à 6 fois le volume normal); dans 10 cas, comme fortement hypertrophiée (1 fois 1/2 à 2 fois 1/2 le volume normal). Chez une souris, le poids de la rate atteignait #5 centigrammes; chez plusieurs, il était de 25 à 30 centigrammes (1). Sur 20 souris, chez lesquelles j'ai recherché l’existence des Leishmania dans la rate, dans le foie et dans la moelle osseuse, les parasites ont élé trouvés 19 fois dans la rate, 10 fois dans le foie, 5 fois dans la moelle osseuse. Le fait que la rate, chez les différentes espèces animales sen- sibles, comme chez l'homme, est un lieu d'élection pour les Leishmania, montre, une fois de plus, que ce viscère Joue fort mal le rôle de défense qui lui a été attribué par quelques observateurs. Je résume ci-dessous les observations de quelques-unes des souris qui, inoculées par moi avec la L. infantum, ont eu des infections généralisées (2). Souris 1. — Inoculée le 25 janvier 1912, dans le péritoine, avec la rate et la moelle osseuse d’un chien fortement infecté par la L.&nfantum. — L'examen de l’exsudat péritonéal fait le 5 février révèle l'existence de Leishmania nom- breuses, beaucoup plus nombreuses que dans l’'émulsion qui a été inoculée le 25 janvier. Les parasites sont inclus dans des leucocytes mononucléaires ou dans de grandes cellules endothéliales. De nouveaux examens de l’exsudat péritonéal faits les 12 et 24 février révèlent encore l'existence des Leishmania, mais en moins grand nombre que lors du premier examen. La souris est sacrifiée Le 25 février; on ne trouve plus, dans le péritoine, au’un exsudat blanchâtre très peu abondant. La rate, fortement hypertro- shiée, à cinq à six fois le volume normal. Le foie ne présente pas d’'altéra- tion macroscopique. Des frottis sont faits avec la rate, le foie et la moelle osseuse; après dessiccation et fixation par l’alcool-éther, ils sont colorés au moyen de la solution de Giemsa. On trouve, dans tous les frottis de la rate, du foie et {1} Le poids normal de la rate d’une souris de 20 gr. est de T à 8 centi- grammes. (2) A. Laveran, Acad. des Sciences, 26 février 1912 et Soc. de path. exotique, 13 novembre 1912. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 907 de la moelle osseuse, des Leishmania en grand nombre qui souvent sont libres, probablement à la suite de la destruction des éléments anatomiques dans lesquels les parasites s'étaient développés. Souris 2. — Inoculée le 25 janvier 1912, dans le péritoine, avec la pulpe de rate et de moelle osseuse d'un chien infecté de kala-azar. Des examens de l'exsudat péritonéal faits les 1°°, 8 et 17 février révèlent l'existence de Leish- mania qui, nombreuses lors du premier examen, sont plus rares lors des examens suivants. L'’exsudat ensemencé le 1° février dans deux tubes du milieu de Novy simplifié donne de belles cultures de Leishmania. La souris esi sacrifiée le 11 juin 1912, 138 jours après l'inoculation. Pas d'exsudat péritonéal. La rate est fortement hypertrophiée, elle a cinq à six fois le volume normal. On trouve des Leishmania nombreuses dans les frottis de rate, rares dans les frottis de foie ; l'examen d'un frottis de moelle osseuse est négalif. Souris 3. — Inoculée le 25 janvier 1912, comme la souris 1. Des examens de l'exsudat péritonéal, faits les 3, 10 et 24 février, révèlent l'existence de Leishmania qui, nombreuses le 3 février, deviennent plus rares aux examens suivants. L'exsuda ensemencé le 3 février sur milieu de Novy simplifié donne une belle culture. La souris est sacrifiée le T mars 1912, 42 jours après l'inoculation. Pas d'exsudat péritonéal. La rate a cinq à six fois le volume normal. Leishmania assez nembreuses dans les frottis de rate, rares dans les frottis de moelle osseuse; l'examen des frottis de foie est négatif. Souris 4. — Inoculée le 25 février 1912, dans le-péritoine, avec la rate et le foie broyés de la souris 1. L'examen de l'exsudat péritonéal, fait le 6 mars, montre des Leishmania en très grand nombre. La souris est sacrifiée le 20 mars, 24 jours après l’inoculation. Exsudat péritonéal très rare, contenant encore des Leishmania nombreuses. Rate for- tement hypertrophiée. Leishmania nombreuses dans les frottis de la rate et du foie. Les parasites sont endocellulaires ou libres; un certain nombre de Leishmania se trouvent dans des cellules hépatiques. La moelle osseuse est moins parasitée que la rate et le foie. Souris 5. — Inoculée le 25 février 1912, comme la souris 4. 6 mars, Leish- mania nombreuses dans l’exsudat péritonéal. La souris est sacrifiée le 27 mars, 31 jours après l’inoculation. Exsudat péritonéal presque nul, avec Leishmania très rares. Rate hypertrophiée. Les parasites, assez nombreux dans les frottis de rate, sont assez rares dans les frottis de foie, et très rares dans les frottis de moelle osseuse. Souris 6. — Inoculée le 25 février 1912, comme les souris 4 et 5. 8 mars, Leishmania très nombreuses dans l’exsudat péritonéal, principalement dans les cellules endothéliales. La souris est sacrifiée le 4 avril 1912, 39 jours après l’inoculation. Pas d'exsudat péritonéal. Rate hypertrophiée. La souris pèse 20 grammes; la rate pèse 25 centigrammes. Leishmania assez nombreuses dans les frottis de rate et de foie, très rares dans les frotlis de moelle osseuse. Souris 1. — Inoculée le 25 février 1912, comme les souris 4, 5 et 6. 8 mars, Leishmania assez nombreuses dans l’exsudat péritonéal, principalement dans les grandes cellules endothéliales. 908 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR La souris est sacrifiée le 21 août 1912, 178 jours après l'inoculation. La rate est très fortement hypertrophiée : la souris pèse 21 grammes; la rate pèse 45 centigrammes. Leishmania assez nombreuses dans les frottis de rate: l'examen des frottis de foie et de moelle osseuse est négatif. Rats. — Les rals inoculés dans le périloine avec la pulpe de la rate, du foie ou de la moelle osseuse d'animaux atteints de leishmaniose, peuvent présenter des infections généralisées. Un rat, inoculé par moi avec la pulpe de la rate et du foie d’une souris infectée, et mort, 12 jours après l'inoculation, avec de la diarrhée, avait des Leishmnania assez nombreuses dans l'exsudat péritonéal, très rares dans la rate qui était hyper- trophiée (1). Chez un rat, inoculé par M. et M"° Yakimoff, les Leishmania n'ont pas été vues sur les frottis de rate, mais l’ensemencement d’un morceau de la rate a donné une culture (2). Les rats s'infectent beaucoup plus difficilement que les souris. GC. Nicolle à inoculé sans succès 4 rats blancs avec la pulpe d'organes infectés par la L. infantum (3). Visentini à inoculé sans succès avec des cultures de la L. infantum 10 rats blancs dans le péritoine, sous la peau ou dans les veines. Les flagellés injectés dans le péritoine devien- nent rapidement la proie des leucocytes (4). CoBaye. — En 1909, Laveran et Petlit ont montré qu'on pouvait provoquer chez les cobayes des infections légères en leur inoculant, dans le péritoine, le produit du raclage ou du broyage d'organes provenant d'animaux infectés de kala- azar (5). 59 Jours après l’inoculation, on trouvait encore dans la cavité péritonéale d’un cobaye des Leishmania typiques, sus- ceptibles de donner des éléments flagellés dans le milieu de Novy simplifié. Franchini a obtenu une infection générale chez un jeune cobaye après injection, dans le péritoine, de 1 cent. cube de culture de Leishmania de 8° passage et du 15° jour environ. L'animal, (4) A. Laveran, Bullet. Soc. de path. exotique, 13 novembre 1912, t. V, p°#149; ) W.-L. Vaximorr et Nina K. Yanimorr, Bullet. Soc. de path. exotique, 12 juin TON AL AVE D: 351: 3) G. Nicorre, Ann. Inst. Pasteur, 1909, t. XXIII, p. 441. A. Visenrini, Soc. de path. exotique, 12 juin 1912. À. Laveran et A. Perrir, Soc. de Biolugie, 3 juillet 1909. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 909 qui avait beaucoup maigri, fut sacrifié 26 jours après l’inocu- lation et, dans les frottis de la rate, du foie, de la moelle osseuse et du sang, on trouva des Leishmania \ypiques, plus nombreuses dans les frottis de la rate que dans les autres (1). Mais, à côté de ces faits positifs, on peut citer des faits néga- üifs en plus grand nombre. GC. Nicolle à inoculé sans suceès 4 cobayes avec de la pulpe d'organes riche en L. infantum (2). C. Nicolle et L. Blaizot ont inoculé 4 très jeunes cobayes dans la jugulaire externe avec des cultures de £L. infantum; les cobayes sacrifiés du 15° au 80° jour après l’inoculation n'ont pas montré de Leishmania (3). J'ai eu des résultats négatifs chez 2 cobayes inoculés dans le foie avec la pulpe d'organes d'un chien infecté de kala-azar, chez un cobaye inoculé, dans le péritoine, avec la sérosité péri- tonéale d’un cobaye infecté et chez 4 cobayes ayant recu, dans le foie, dans le péritoine ou sous la peau, de fortes doses de culture de L. infantum. Un cobaye inoculé, dans le péritoine, avec la pulpe d'organes d’un chien infecté de kala-azar a eu une infection légère, localisée au péritoine (4). A. Visentini (op. cit.) a inoculé sans succès, avec les cultures de la L. infantum, 20 cobayes, par injection du virus dans le péritoine ou sous la peau. Lapin. — Volpino a réussi à provoquer, chez un lapin, une kératite parenchymateuse en déposant, sur la cornée scarifiée, de la moelle osseuse d’un chien infecté de kala-azar. Au bout de 3 mois, la cornée était opaque, d'un blanc rosé et, sur les frottis, on voyait des Leishmania typiques incluses dans de gros mononucléaires (5). Mantovani a chtenu une infection généralisée chez un lapin auquel il avait injecté, dans la veine marginale d’une des oreilles, { cent. cube de culture de L. infantum. L'animal, qui avait beaucoup maigri, fut sacrifié 20 jours après l’inoculation (4) G. Francini, Pathologica, 4°r juin 4911 et München. mediz. Wochenschr., 4911, n° 39. (2) C. Nicozce, Ann. Insl. Pasteur, 1909, t. XXIII, p. 441. (3) GC. Nicozee et L. BLarzor, Soc. de path. exotique, 13 novembre 1912. ) A. LaveraAx, Soc. de path. exotique, 12 février 1913. ) (4 (5) G. VoLriNo, Pathologica, 1er février 4911. 910 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR et, sur les frotlis des organes, on trouva des Leishmania: les ensemencements en milieu de culture donnèrent aussi des résultats positifs (1). L'évolution de l'infection dans ce cas a été particulièrement rapide. C. Nicolle (op. cit.) a inoculé sans succès 2 lapins avec de la pulpe d'organes d'animaux infectés de kala-azar. C. Nicolle et Blaizot (op. cit.) ont inoculé à 4 Jeunes lapins, dans les veines, des cultures de L. infantum ; les lapins, sacri- liés du 15° au 80° jour après l'inoculation, étaient indemnes. Deux jeunes lapins inoculés par moi, dans le péritoine, avec la pulpe d'organes d’un chien infecté de kala-azar ne se sont pas infectés. Il en à été de même de deux jeunes lapins qui ont reçu chacun dans la moelle osseuse, dans le foie ou dans le périltoine, 30 cent. cubes (en 4 fois) de cultures très riches de L. infantum, et de 2 lapins qui ont recu chacun dans les veines marginales des oreilles 5 injections de 4 à 2 cent. cubes de cultures très riches de L. infantum (2). Guar. — Ed. et Et. Sergent, Lombard et Quilichini ont publié, en 1912, une note intitulée : « La leishmaniose à Alger: infec- tion simullanée d’un enfant, d’un chien et d’un chat dans la même habitation (3) ». Le chat dont il est question dans ce travail était âgé de 4 mois environ, il fut sacrifié et on trouva dans la moelle osseuse du fémur de très rares Leishmania. C'est, je crois, le seul fait de leishmaniose naturelle du chat qui ait été publié. Nicolle rapporte que, sur 51 chats provenant de la fourrière de Tunis ou capturés à Gafsa, aucun ne fut trouvé infecté de Leishmania (4). Le même observateur a inoculé sans succès 4 chats avec la pulpe d'organes d'animaux infectés de kala-azar. En 191%, 20 chats de Tunis ont été examinés également avec résultat négatif (5). À plusieurs reprises, j'ai essayé d’inoculer le kala-azar à des chats et les résultats des inoculations ont toujours été négatifs. Le 6 mai 1909, 3 chats de 8 jours environ sont inoculés avec (4) M. Manrovani, Palhologica, 15 juillet 1942. (2) A. Lavera, Soc. de path. exotique, 12 février 19143. (3) Bullet. Soc. de path. exotique, février 1942, &. IV, p. 93. (4) GC. Nicoice, Ann. Inst. Pasteur, juin 1909, t. XXIII, p. 467. (5) C. Nicorce, Soc. de path. exotique, 10 juin 4914. LES LEISHMANIOSES CHEZ LES ANIMAUX 914 la pulpe du foie d’un chien infecté de kala-azar; chez un des chats, la pulpe est inoculée sous la peau, chez les 2 autres l’ino- culation a lieu dans le péritoine et dans le foie. Les 3 chats restent indemnes: chez le chat inoculé dans le péritoine, on n'observe même pas le développement local des Leishmania, qui est commun chez d'autres animaux (souris, rats, cobayes). Trois jeunes chats inoculés au mois de mai 1912, chacun à. trois reprises, dans le foie, avec de fortes doses de cultures de L. infantum très riches en flagellés, ne se sont pas infectés. Non seulement, on ne voyait pas de Leishmania dans les frottis de rate, de moelle osseuse et de foie, mais les tubes du milieu de Novy simplifié ensemencés avec la moelle osseuse et la rate ou le foie restèrent stériles. C. Nicolle et L. Blaizot ont inoculé dans la jugulaire externe d'un jeune chat le liquide fourni par 6 tubes de culture de L.infantum ; le résultat de cette inoculation a été négatif (1). Au mois d'août 1912, j'ai examiné le contenu de 12 puces capturées sur un des chats inoculés au mois de mai 1912, avec des cultures de L. infantum, et chez lesquels je n'ai jamais constaté trace d'infection. Dans le frottis fait avec le contenu d’une des puces appartenant à l'espèce C{enocephalus canis, J'ai trouvé des éléments parasitaires nombreux, ayant la plus grande ressemblance avec des Leishmania. Ces éléments, de forme arrondie ou plus souvent ovalaire, mesurent de 2 à 6 » de long sur 2 à 44 de large, ils sont souvent groupés en rosaces. Dans le protoplasme, qui se colore faiblement en bleu par le Giemsa, on distingue un karyosome principal, arrondi ou ovalaire, et un karyosome accessoire souvent allongé en bâätonnet. Je n’ai pas vu de formes munies de flagelles ; néanmoins, il ne me paraît pas douteux que ces parasites doivent être rapportés aux trypa+ nosomides qui ont été décrits chez différentes espèces de puces, notamment par Patton, en 1908, chez Ctenocephalus felis, puce qui doit être probablement identifiée à Cf. canis, par Porter chez Pulex irritans (2) et par Nôüller chez 12 p. 100 des C£. canis examinés par lui (3). Sile chat avait été infecté de leishmaniose, on eût été évidemment tenté de supposer que ks éléments Nicozce et L. BLarzor, Soc. de path. exolique, 13 novembre 1912. Porren, Parasitology, octobre 1911. W. Nôzcer, Arch. f. Protistenkunde, 17 mai 1912. >n 1) (2) 3) 912 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR parasilaires trouvés chez la puce devaient être rapportés à L. infantum (1). VIsEAUxX. — L'inoculation à une poule, dans la cavité périto- néale, de la pulpe de rate, de foie et de moelle osseuse d’un chien fortement infecté de kala-azar n'a eu aucune suite. Au bout de 5 jours, les Leishmania avaient complètement disparu. ANIMAUX 4 SANG FROID. — Lézarps. GRENOUILLES. — Chez un Lacerta viridis inoculé dans le péritoine avec la pulpe des organes d'un chien fortement infecté de kala-azar, on voyait encore au bout de 30 jours des Leishmania dans les éléments cellulaires obtenus par ponction de l'abdomen, mais les résul- tats des ensemencements dans le milieu de Novy simplifié étaient négatifs. Chez deux autres L. viridis, les Leishmania ont disparu rapidement de la cavité péritonéale. Chez des grenouilles (R. temporaria et R. esculenta), inoculées dans les mêmes conditions que le lézard, on ne trouvait plus trace des Leishmania au bout de 4 jours. En résumé, la L. infantum, agent du kala-azar méditerra- néen, est assez facilement inoculable au chien, aux macaques et à la souris, plus difficilement au -rat, exceptionnellement au cobaye et au lapin; tous les essais d’inoculation au chat et à d’autres animaux ont échoué. L'infection expérimentale du chien par la Leishmania in- Jantum a la plus grande ressemblance, au point de vue des symptômes et de l'anatomie pathologique, avec la leishmaniose canine naturelle. Cest le chien qui se prête le mieux aux inoculations en série de L. infuntum; encore ces inoculations, bien que faites avec de fortes doses de virus, échouent-elles assez souvent ou bien donnent-elles lieu à des infections légères, latentes, difficiles à déceler; à la suite d'un certain nombre de passages par chiens, le virus, loin d'acquérir une activité plus grande pour ces animaux, s'affaiblit. Nous aurons à comparer, dans une autre partie de ce travail, les infections produites par L. Donovani à celles produites par L. infantum que nous venons d'étudier. (A suivre.) (1) A. Laveran, Soc. de path. exotique, 12 février 1913. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS par Agent BERTHELOT. (Laboratoire de M. Metchnikoff.) IV. — RECHERCHES SUR LES PROPRIÉTÉS PATHOGÈNES D'UNE RACE DE PROTEUS PROVENANT D'UN CAS DE DIARRHÉE INFANTILE. L'exposé détaillé de ces recherches ayant été déjà publié dans un mémoire d'ensemble (1), je me contenterai de rapporter sommairement les résultats de mes expériences. Celles-ci ont porté sur un Proteus vulgaris isolé, par M. Metchnikoff, dans les matières fécales d'un nourrisson de 7 mois, atteint d'une gastro-entérite aiguë. Je la désignerai par les lettres (7x) pour les distinguer de deux autres échantillons que j'ai employés incidemment pour quelques essais comparatifs. A. — Virulence ; toxicité des cultures, des filtrats, des corps microbiens et des autolysats ; endotoxine et poison de Vaughan. 4° ViruLENCE Du Proreus Tx Pour déterminer la virulence, J'ai utilisé des cultures en bouillon Martin, c'est-à-dire dans un mélange à parties égales de peptone Martin et de bouillon de viande non peptoné. Voici les résultats que j'ai obtenus : a) Cultures de 18 heures à 3T degrés. 4° Cobaye (animaux d'un poids moyen de 500 grammes). Inoculation sous-cutanée : une dose de 2 cent. cubes déter- minait localement une assez forte réaction inflammatoire dont il ne persistait, après 15 jours, d'autre trace qu’un petit nodule induré. Inoculation intrapéritonéale : avec 1 cent. cube on détermi- (1) Az8ertT BERTHELOT, Thèse de Médecine, loc. cit., page 35. 914 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR nait la mort en ÿ à 7 jours : avec 2 cent. cubes les animaux succombaient en 48 heures. Inoculation intraveineuse (dans la jugulaire) : une dose de 1 cent. cube provoquait la mort en 48 heures environ; avec 1/2 cent. cube, les animaux ne succombaient guère qu’au bout de 3 jours ; 2° Lapin (animaux d'un poids moyen de 2.000 grammes). Inoculation sous-cutanée : avec 5 cent. cubes : abcès, suppu- ration, cachexie et mort de l'animal à la fin de la troisième semaine ; avec 2 cent. cubes, tuméfaction qui diminuait len- tement pour ne laisser, vers le quinzième jour, qu'un gros noyau induré. Inoculation intrapéritonéale : avec 2 cent. cubes, mort en S Jours; avec 3 cent. cubes, morten 5 jours. Au cours des deux dernières journées les animaux présentaient une très forte diarrhée. Inoculation intraveineuse : 2 cent. cubes déterminaient la mort en 36 heures environ; avec 1 cent. cube les animaux succombaient également, mais seulement vers le quatrième Jour. a") Cultures de T jours à 37 degrés. 1° Cobaye. È Inoculation sous-cutanée : Mort vers le sixième jour avec une dose de 2 cent. cubes. Inoculation intrapéritonéale : Mort en 3 à # jours avec 1/2 cent. cube. Inoculation intraveineuse : Mort en 18-24 heures avec 1 /2 cent. cube. 2° Lapin. Inoculation sous-cutanée : Avec 5 cent. cubes, mort en 5 jours: avec 2 cent. cubes : abcès, suppuration et mort du 44° au 13° jour. Inoculation intrapéritonéale : Avec 2 cent. cubes mort en L jours environ. Inoculation intraveineuse : Une dose de 1 cent. cube suffisait pour déterminer la mort en moins de 48 heures. Les cultures de 7 jours en bouillon Martin se sont donc montrées notablement plus virulentes que les ‘cultures de 48 heures. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS J1n b) Emulsion de corps microbiens vivants. J'ai également étudié la virulence du Proteus Tr inoculé sous forme d’émulsion de jeunes microbiens. J'ensemencais ce microbe sur gélose ordinaire inclinée, exempte d’eau de con- densation, et au bout de 24 heures de séjour à 37 degrés, je délayais la culture obtenue dans 10 cent. cubes d'eau physio- logique. Cette dilulion correspondait sensiblement à une teneur de 2 milligrammes de microbes secs — soit environ 10 milli- grammes de corps microbiens frais — par centimètre cube. J'ai éprouvé cette émulsion par tnoculation intrapéritonéale et J'ai constaté ce qui suit : 4° Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Un 1/2 cent. cube, soit approximativement 5 milligramues de microbes pesés humides, constituait la dose suffisante pour provoquer la mort en 24 à 36 heures à la suite d’une violente péritonite ; 2° Lapin (poids moyen : 2.000 grammes). Avec le lapin, la dose nécessaire pour déterminer la mort des animaux en 24 à 36 heures s'élevait à 2 cent. cubes d’émulsion, soit environ 20 milligrammes de microbes frais. Comme chez le cobaye il y avait une péritonite très violente: à l’autopsie, on trouvait en abondance le Proteus dans le sang du cœur, même lorsque l’ensemencement était pratiqué moins d’une heure après la mort ; 2° ToxICITÉ DES CULTURES TOTALES DE PRroTEUSs Tx EN DIVERS MILIEUX Pour déterminer cette toxicité, je ne me suis servi que de cultures de 7 Jours, stérilisées par l’éther et bien débarrassées- de cet anesthésique. Dans presque toutes les expériences que Je vais rapporter, J'ai injecté à des cobayes, dans le péritoine ou dans les veines, des doses croissantes des diverses cultures; pour simplifier, je n'indiquerai ici que les doses qu'il m'a fallu atteindre pour pro- voquer, dans un temps inférieur à 24 heures, la mort d'animaux d'un poids moyen de 500 grammes. a) Cultures totales en bouillon Martin, stérilisées par l'éther. Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 grammes). 916 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle 5 cent. cubes ; mort en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle 2 c.c. 5; mort en moins de 18 heures. b) Cultures obtenues avec une solution des produits abiuré- tiques d'hydrolyse acide de la caséine, stérilisée par l'éther. Le milieu employé pour cette expérience était une solution aqueuse à 15 p.1.000 d’un mélange des acides aminés qui con- stituent la molécule de caséine. Dans cette solution exactement neutralisée par la soude, le Proteus se développait rapidement et donnait des cultures très abondantes et dont la toxicité était identique à celle des cultures en bouillon Martin. c) Cultures en solution de peptone de caséine, stérilisées par l'éther. Je me suis servi d'une solution à 20 p. 1.000 d’une peptone pancréatique de caséine que M. Macquaire avait eu l'obli- geance de me préparer pour mes recherches sur la fonction indologène. Les cultures obtenues avec ce milieu étaient moins riches que celles en bouillon Martin, mais plus abondantes que celles de l'expérience précédente. Toxicité pour le cobaye (poids moyen 500 grammes.) Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle 3 cent. cubes ; mor- en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. —Dose mortelle 2e.c.5; morten16heures. d) Cultures dans une solution d'un mélange commercial d'acides aminés de la viande, stérilisées par l'éther. Je me suis servi d’une solution à 20 p. 1.000 d’un produit commercial préparé d'après les indications d’Abderhalden. Cette solution constitue un excellent milieu de culture pour un grand nombre de microbes; le Proteus s’y développe très vite et très abondamment. Toxicité pour le cobaye (poids moyen de 500 grammes). Voie in/rapéritonéale. — Dose mortelle 3 cent. cubes; mort en 18 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle 4 cent. cubes ; mort en 6 heures. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 917 e) Cultures dans un milieu chimiquement défini, stérilisées par l’éther. Le milieu que j'ai employé avait la composition suivante : DAT CS ENREREE IS RET LEARN: L'ORENNE RS TR ORNE (I've 500,00 Phosphate/dipotassique "1 .#41. 410. LU, 1,00 Sulfate de magnésium .. .. .. D 0,50 GISCOCONER PR Eee. PR Re Le 0,175 BEDALAle dersodiumet PAM EAN eu LT Le 0,50 Chlorhydrate de l'acide glutamique . . . . . . . .. 0,50 ANATINE. Sen Pi: ON ENS ne OU 0,50 Chlorhydrate d'histidine . . . . . .. .. 0,50 NTOSIRE ER D PME del 0 0 PU RS eu 0,25 HEVDIOpDhane tr rec + CRETE 0,25 HeuCmersnr. rte A) PTS AD PAS MOQUE 0,30 Bhénylalanine 7000 DRE 0,30 Chlorhydrate de guanidine. . . 0,20 CHÉADDER EMA SR NOROR O UE ARRETE 0,20 Chlorhydrate de glucosamine 0,20 CYR ne EM he a NO CA RE DAT 0,10 Dans le milieu ainsi préparé le Proteus ne donnait pas d'aussi belles cultures qu'en bouillon Martin ou que dans le milieu précédent; mais elles étaient aussi riches que celles obtenues avec les acides aminés de la caséine. Toxicité pour le cobaye (poids moyen 500 gr.) (Proteus Tr). Cette toxicité est pratiquement nulle, puisqu'il faut dépasser 10 cent. cubes dans le péritoine et 5 cent. cubes dans les veines. En présence de ces résullats. j'ai cultivé sur ce même milieu et sur la solution d'acides aminés de la viande un Proteus isolé d'une putrélaction (Proteus PV) sensiblement moins virulent que le Proteus Tx et j'ai constaté ce qui suit : Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 gr.) (Proteus PV). Milieu D.,— Voie intrapéritonéale. Dose mortelle 3 cent. cubes; mort en moins de 48 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle 2 €. c. >; mort en 18 heures. Milieu E. — Voie intrapéritonéale. Dose mortelle 1 cent. cube ; mort en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle 4 cent. cubes; mort en 20 heures. L'absence de toxicité des cultures du Proteus Tx dans le milieu E ne dépendait donc qu'indirectement de la composition de celui-ci. 60 918 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 3° ToxICITÉ DES FILTRATS (BOUGIE CHAMBERLAND, N° 3). a) Filtrat culture en bouillon Martin. Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale.— Dose mortelle : supérieure à 12 cent. cubes. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : supérieure à 5 cent. cubes. b) Filtrat culture acides aminés de la caséine (hydrolyse acide). Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale.— Dose mortelle : supérieure à 12 cent. cubes. Voie intraveineuse (non étudiée). ce) Filtrat culture peptone de caséine. Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle 8 cent. cubes; mort en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle 2 c.c.5; mort entre 18 et 24 heures. d) Filtrat culture acides aminés de la viande (Hydrolyse dias- lasique). Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : supérieure à 12 cent. cubes. Voie intraveineuse. — Dose mortelle 4 cent. cubes; mort en 20 heures. e) Filtrat culture milieu chimiquement défini. Toxicité pour le cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : supérieure à 10 cent. cubes. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : supérieure à 5 cent. cubes. Au point de vue de la formation de produits toxiques solubles, c'est donc la peptone pancréatique de caséine qui m'a donné les meilleurs résultats (1). (1) Des cobayes témoins ne présentaient aucun signe d'intoxication lors- qu'on leur injectait dans la ;veine 5 cent. cubes de la solution stérile de peptone de caséine. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 919 Tito Carbone ayant montré que dans les cultures de Proteus on trouve des bases comme la choline, l’éthylènediamine, le gadinine el la triméthylamine, j'ai essayé de déterminer la part qui revient à ces substances dans les cultures totales du Proteus Dans ce but j'ai pris une culture de 7 jours en bouillon Mar- tin, stérilisée par l’éther et dont la dose mortelle par voie intra- péritonéale était de 5 cent. cubes pour un cobaye d'environ 500 grammes; je l'ai additionnée de 10 volumes d'alcool à 96 degrés, et j'ai laissé reposer le mélange pendant 24 heures. Je l’ai alors filtré sur papier pour séparer le précipité formé et j'ai distillé dans le vide à 50 degrés le liquide clair obtenu. J'ai repris le résidu de cette distillation par de l’eau physiolo- gique (1) en quantité telle que le volume de la solution ainsi obtenue soit le dixième de celui de la culture employée. Les poisons de nature albuminoïdique ayant été précipités par l'alcool, cette solution ne renfermait guère comme sub- stances très nocives que les substances alcaloïdiques ; elle don- nait d'ailleurs un précipité avec les acides phosphotungstique ou silicotungstique et avec une solution iodo-iodurée. Je l'ai éprouvée sur le cobaye par voie intrapéritonéale et j'ai trouvé que la dose mortelle était de # cent. cubes. Cette dose repré- sentant #0 cent. cubes de la culture primitive, on voit donc que les ptomaïnes ne constituaient qu'une très faible part des produits {toxiques élaborés dans les cultures par le Proteus Tr. 4° TOoxICITÉ DES CORPS MICROBIENS Pour toutes les expériences qui vont suivre j'ai utilisé des corps microbiens obtenus par la méthode de M. Maurice Nicolle, en employant les grandes cuvettes métalliques dont il a établi le modèle, en collaboration avec M. Alilaire (1). (1) M. Nicozr, Etudes sur la morve expérimentale du cobaye. Ann. Inst. Pasteur, août 1906, p. 626. M. Nicozce et ALizarre, Note sur la production en grand des corps bacté- riens et sur leur composition chimique. Ann. Inst. Pasteur, juillet 1909, p. 541. 920 ANNALES DE L'INSTITUT. PASTEUR Toutefois, j'ai substitué à la gélose, viande, pomme de terre, préconisée par M. Nicolle, un milieu plus économique dont le procédé de préparation est basé sur la méthode générale que af j'ai publiée il y a trois ans (1). Voici d’ailleurs la technique que j'ai adoptée : Deux kilogrammes de viande de cheval hachée, bien maigre, étaient placés dans une marmite émaillée et mis en suspension dans la soiution suivante : Eau /boulante RE ed ee tou 5 litres. Lessive de soude chimiquement pure à 36 Baumé . . 135 cent. cubes. Le tout était porté à l’autoclave et maintenu à 134 degrés pendant une heure et demie. Aussitôt le mélange sorti de l’autoclave, je l’acidifiais érès légèrement avec de l'acide chlorhydrique chimiquement pur, puis je l'aban- donnais jusqu’au lendemain. Je le passais alors sur un tamis de crin, de facon à séparer les débris de tendons et d’aponévroses ainsi que de petites masses d'acides gras; j'avais ainsi une solution renfermant tous les pro- téiques de la viande à l’état de deutéroprotéoses, c'est-à-dire au stade de désintégration de la molécule albuminoïde le plus rapproché des peptones de Kühne. J'ajoutais à ces cinq litres de solution le même volume d'une bouillie très fluide, passée au tamis, obtenue en délayant dans cinq litres d'eau 2 kilo- grammes de pommes de terre pelées, découpées en petits fragments et cuites 30 minutes à l’autoclave à 120 degrés. Je neutralisais ce mélange, qui contenait alors une proportion de chlorure de sodium voisine de la teneur habituelle des milieux de culture, puis j'y introduisais 300 grammes de gélose. Je portais le tout à 120 degrés pendant une heure et enfin je répartissais le milieu dans des fioles à fond plat d’un litre que je stérilisais à 120 degrés. Dans chaque fiole je mettais environ 650 cent. cubes, c'est-à-dire le volume convenable pour une cuvette. Le dépôt abondant que contenait ce milieu imposait naturellement la pré- caution de le couler très chaud dans les boîtes, en agitant le mieux possible les fioles qui le renfermaient; mais, après refroidissement, sa surface était aussi solide et aussi unie que celle du milieu de M. Nicolle. De même que cette gélose, il m'a constamment donné, par cuvette, un rendement moyen de 5 grammes de corps microbiens humides; la toxicité de ceux-ci était la même avec les deux milieux. Ces résultats concernant le Proteus, c'est-à-dire un microbe très facile à cultiver et possédant même, d’après les travaux de certains auteurs, une affi- nité marquée pour les protéoses, il serait prudent de faire un essai en petit avant d'utiliser ce milieu pour la culture en grand d'une autre bactérie. Dans toutes mes expériences j'ai récolté les corps microbiens après 18 à 20 heures de culture à 37 degrés; j'y ai plusieurs fois dosé l'humidité et j'ai toujours trouvé, à quelques décigrammes (1) ALBERT BeRTHELOT, Préparations des milieux de culture par l'hydrolyse alcaline ménagée des substances albuminoïdes naturelles. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXVIII, 30 avril 1910, p. 757. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 921 près, une teneur en eau de 80 p. 100, très voisine par consé- quent du chiffre donné par MM. Nicolle et Alilaire pour le Proteus vulgaris. Les essais suivants ont tous été exécutés avec des corps micro- biens desséchés, représentant par conséquent cinq fois leur poids de bacilles frais, mais jJ'exprimerai tous les résultats en milligrammes de microbes humides. 1° Toxicité des corps microbiens desséchés à 3T degrés (Pro- teus Tr). Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 100 milligrammes de corps bacillaires humides. Mort en moins de 18 heures ; exsudat péritonéal stérile. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 50 milligrammes; mort en 20 heures. 2° Toxicité des corps microbiens légèrement autolysés et des- séchés dans le vide. Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 300 milligrammes bacilles humides; mort en 18 heures. Voie intraveiceuse. — Dose mortelle : 50 milligrammes ; mort en 15 heures. 3° Toxicité des corps maicrobiens plasmolysés par le chlorure de calcium et débarrassés de ce sel par le dialyse. Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 50 milligrammes bacilles humides ; mort en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 50 milligrammes ; mort en 19 heures. 4° Toxicité des corps microbiens tués par l'acétone. Cobayes (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 100 milligrammes bacilles humides ; mort en 2% heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 10 milligrammes ; mort en 20 heures. 5° Toxicité des corps microbiens tués par l'alcool. Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 150 milligrammes bacilles humides ; mort en moins de 18 heures. 922 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 25 milligrammes ; mort en 20 heures. 6° Toxicité des corps microbiens épuisés par une solution de carbonate de sodium à 5 p. 100. Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 25 milligrammes bacilles humides: mort en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 25 milligrammes:; mort en 15 heures. 1° Toxicité des corps microbiens épuisés par l'alcool, l'acétone, l'éther et le chloroforme. Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Dose mortelle : 150 milligrammes de bacilles humides; mort en 18 à 24 heures. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 10 milligrammes; mort en 20 heures. Comme on le voit par ces diverses expériences, les corps microbiens du Proteus que j'ai étudié possèdent une toxicité propre assez élevée, parliculièrement lorsqu'ils ont été traités par l'alcool, l’acétone ou une solution faiblement alcaline. 5° ToxICITÉ DES AUTOLYSATS. a) Autolysat de 2 grammes de bacilles humides abandonnés pendant À mois dans 20 cent. cubes d’eau physiologique, traité par l'éther comme les cultures totales : Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale et voie intraveineuse. — Dose mortelle : 1/4 de cent. cube correspondant à 25 milligrammes de bacilles humides ; mort en moins de 18 heures. Lapin. Voie intrapéritonéale. — 300 milligrammes. de bacilles humides, soit 3 cent. cubes d’autolysat, étaient nécessaires pour tuer en moins de 18 heures un lapin de 2 kilogrammes. Voie intraveineuse. — Il suffisait de 100 milligrammes de bacilles, soit 4 cent. cube d’autolysat pour déterminer la mort d’un lapin de 2.480 grammes en 8 heures. | Après avoir ainsi déterminé la toxicité de l’autolysat total, J'ai centrifugé ce qui m'en restait et j'ai éprouvé chez le cobaye et le lapin le liquide clair obtenu : RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 923 Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — Les doses correspondant à 25 et 50 milligrammes de bacilles frais étaient sans effet appa- rent. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : V gouttes de liquide correspondant environ à 25 milligrammes de bacilles humides; mort de l'animal en 15 heures. Lapin. — Par voie intraveineuse une dose de liquide corres- pondant à 100 milligrammes a suffi pour tuer en 18 heures un animal de 2.515 grammes. La toxicité de l’autolysat centrifugé était donc, pour la voie intraveineuse, à peu près identique à celle de l'autolysat total. b) Autolysat de bacilles frais mis en suspension dans 3 fois leur poids d'eau physiologique et abandonnés pendant 6 mors à l'abri de la lumière et à la température du laboratoire. Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Voie intrapéritonéale. — La dose mortelle correspondait à 125 milligrammes de bacilles humides ; la mort survenait en moins de 18 heures. Voie intraveineuse. — La dose mortelle équivalait à 60 milli- grammes de bacilles; mort en 19 heures. Cet autolysat, vieux de 6 mois et obtenu en présence d° éther, était donc notablement moins toxique que le précédent, qui d’ailleurs était déjà beaucoup moins actif pour une même dose de bacilles, qu'une simple émulsion de corps microbiens modi- fiés par l'alcool, l’acétone ou un carbonate alcalin. Du reste, l’expérience n° 2 des essais faits avec les corps bactériens mon- trait déjà un affaiblissement de la toxicité pour une simple autolyse de 48 heures sans addition d’eau. 6° ENDOTOXINE ET POISON DE VAUGHAN. Le procédé de Besredka (1), appliqué au Proteus Tr, m'a donné une solution peu toxique, aussi ai-je essayé d'obtenir l’endotoxine par une autre méthode. Pour cela j'ai délayé peu à peu, dans un mortier de Joulie, des corps microbiens humides (1) Besrenka, Des endotoxines solubles. Ann. Inst. Pasteur, L. XXV ,avril 4906, p. 304. 994 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR (gélose Nicolle) dans trois fois leur poids de glycérine pure à 30 degrés; J'ai laissé la glycérine agir pendant 1 heure à la tem- pérature du laboratoire, puis j'ai additionné le mélange de dix volumes d'alcool absolu. J'ai laissé se déposer le précipité de corps microbiens, puis j'ai siphonné la liqueur alcoolique surna- geante. J'ai repris les microbes par le même volume d'alcool et répété encore deux fois cette opération, j'ai fait dans les mêmes conditions un lavage à l’alcool-éther etj'aiterminé par un lavage à l’éther à 66 degrés. J'ai essoré les corps bacillaires sur un entonnoir de Büchner, puis Je les ai laissés 24 heures à 37 degrés et 24 heures dans le vide, sur l'acide sulfurique, à la température ordinaire. J'ai déterminé leur toxicité massive qui était exprimée par les chiffres suivants : Cobaye (poids moyen : 500 grammes). Votre intrapéritonéale. — Dose mortelle : 150 milligrammes de bacilles humides. Voie intraveineuse. — Dose mortelle : 50 milligrammes. Dans les deux cas mort en plus de 6 heures et moins de 18. Pour extraire l’endotoxine j'ai mis en suspension 1 gramme de microbes secs ainsi plasmolysés par la glycérine dans 50 cent. cubes d’eau physiologique et j'ai laissé en contact, à la tem- pérature du laboratoire, pendant 24 heures; au boutde ce temps, j'ai centrifugé longuement à l’aide d'une centrifugeuse de Jouan pour séparer complètement les corps bacillaires. J'ai obtenu ainsi un liquide parfaitement clair, légèrement jaunâtre que j'ai éprouvé sur de petits cobayes d’un poids moyens de 300 gr. Par voie intrapéritonéale, la dose mortelle était de 4 cent. cubes, volume de solution contenant l’endotoxine de 80 milli- grammes de microbes secs, c’est-à-dire 400 milligrammes de bacilles humides. Par voie intraveineuse, la dose mortelle était de 2 cent. cubes contenant l’endotoxine de 200 milligrammes de bacilles humides. Les animaux injectés dans le péritoine présentaient d’abord au bout de 5 à 6 heures les mêmes symptômes qu'avec la solu- tion obtenue par la méthode de Besredka, mais vers la huitième heure ils tombaient sur le flanc, le train postérieur paralysé et mouraient vers la vingtième heure; les cobayes injectés dans RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 925 les veines présentaient des symptômes analogues, mais la mort survenait beaucoup plus vite, au bout de 9 heures. J'ai arrèté [à mes essais, mais ils sont suffisants pour montrer que l’on peut, par le procédé que je viens d'indiquer, extraire une endotoxine des corps microbiens jeunes du Proteus vulgaris; cette substance ne semble d’ailleurs être qu'un facteur de toxicité peu impcrlant pour la race que j'ai examinée. D'autre part, pour extraire le « poison de Vaughan » du Proteus Tr, j'ai appliqué à 10 grammes de corps microbiens la technique si bien précisée par S. M. Wheeler (1). J'ai obtenu finalement 1 gr. 35 d’une poudre jaune entièrement soluble dans l'alcool absolu bouillant et dans l’eau. J'en ai fait une solution dans l’eau physiologique, à une concentration telle que 1 cent. cube correspondait à 20 milligrammes; j'ai déterminé la toxi- cité de cette liqueur en injectant des doses croissantes dans la jugulaire de très gros cobayes d’un poids moyen de 700 grammes. Il m'a fallu atteindre la dose de 45 milligrammes pour obtenir la mort immédiate des animaux — en 3 à # minutes — avec la dyspnée violente si caractéristique. La toxicité du poison de Vaughan que J'ai extrait du Pro- teus Tzx est donc relativement faible, puisque la dose mortelle établie par M. Nicolle et G. Abt (2) pour le B. coli était seu- lement de 53 milligrammes. B. — Essais d'immunisation contre un Proteus provenant d'un cas grave de diarrhée infantile. M. Cantù ayant annoncé qu'il allait entreprendre des recher- ches d'ensemble sur la vaccination et la sérothérapie contre le Proteus, je me suis borné à rechercher s'il était facile d’im- muniser les animaux avec une race isolée d'un cas grave de diarrhée infantile. L'échantillon que J'ai utilisé pour toutes mes expériences avait été isolé par M. Metchnikoff des matières fécales d’un nourrisson mortellement atteint d'une gastro-entérite aiguë. (4) Sysiz May Wugeer, À study of the chemistry of bacterial cellular pro- teins. Journal of Biological Chemistry, t. VI, 1909, p. 508. (2) M. Nrcozze et Agr, Les anticorps des albuminoïdes et des cellules. Ann. Inst. Pasteur, t. XXII, 1908, p. 132. 926 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Sa virulence et sa toxicité étaient assez grandes, ainsi que le montrent les chiffres suivants : 1° Culture de 7 jours en bouillon Martin, vivante : 1/2 cent. cube en injection intrapéritonéale tuait en 24 heures un cobaye de 500 grammes (avec une culture de 24 heures il fallait 2 cent. cubes) ; 2 Culture de 7 jours en bouillon Martin,'stérilisée par l’éther : la mort du cobaye de 500 grammes survenait en 24 à 30 heures à la suite d’une injection de 2 cent. cubes dans le péritoine. L'injection intraveineuse de 1 cent. cube tuait les animaux en moins de 18 heures ; 3 Corps microbiens vivants âgés de 24 heures : 5 milli- grammes de bacilles humides injectés dans le péritoine, déterminaient en 24 heures la mort de cobayes d'environ 500 grammes. Pour tuer en 24 heures des lapins d'environ 2.000 grammes, il suffisait de leur injecter, dans le péritoine, 2 cent. cubes d'une culture en bouillon Martin, vieille de 7 jours, ou 10 milli- grammes de corps microbiens Jeunes. Possédant ainsi un microbe assez virulent, j'ai eu tout d’abord la curiosité de répéter les expériences de Foà, Bonome et Tito Carbone (1) sur l’action anti-infectieuse de la choline et de la neurine à l'égard du Proteus (2). Jai obtenu des résultats confirmant ce qu’avaient avancé ces divers auteurs, c’est-à-dire que l'injection d’une faible dose de choline ou de neurine dans les veines d’un lapin, le protège contre une dose sûrement mortelle de Proteus injectée 24 heures après dans le péritoine. Cette constatation m'a conduit à rechercher si l'action protec- trice de ces deux bases était limitée au Proteus. J'ai fait quelques essais avec le B. coli, le Pneumobacille de Friedlander ainsi que le B. pyocyanique et ils m'ont permis d'établir que la choline et la neurine semblent bien susceptibles de renforcer considérablement la résistance de l'organisme à divers virus, (1) Foa et Bonouwr, Archives italiennes de Biologie, 8 avril 14887, 16 décembre 1889, Académie de Médecine de Turin. Trro CaxBonxe, Ueber die vom Proteus vulgaris erzeugten Gifte. Centralbl. f. Bakteriologie, 1890, t. VIII, Originale, p. 768. (2) Azserr BeRrHELOr, Thèse de Médecine, loc. cil., p. 64. RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 927 tout au moins lorsque ceux-ci sont introduits par la voie intra- péritonéale. Dans quelles conditions et dans quelles limites cette action anti-infectieuse peut-elle se manifester, quel en est le mécanisme et quelles applications thérapeutiques pourra-t-on peut-être en faire? C’est ce que j'essaierai d'établir. Comme essais d'immunisation, j'ai tenté simplement de vac- ciner des lapins et des cobayes contre l'infection par voie intra- péritonéale. Pour immuniser les lapins, J'ai utilisé des bacilles vivants que j'injectais dans les veines, à doses croissantes, après les avoir dilués dans un grand volume d’eau. Voici d’ailleurs le compte rendu d’une expérience : Proteus M, culture de 24 heures sur gélose ordinaire (tube de 170 millim. X 17 millim.). Totalité de la culture délayée dans l’eau physiologique, centrifugée, lavée trois fois et amenée au volume de 10 cent. cubes. Deux lapins : 2.680 et 2.450 grammes. À chacun d'eux, injecté très lentement dans les veines : LeTJOURESs MPLOULLE EE. \ COUR SOU EEE LNIOUr A FOUT RE EN d'émulsion au 1/10e 16e jour : 6 gouttes . . . . . . } (diluée dans 10 cent. cubes PAP JOUT EN So OUtIC PR A eau physiologique). 26° jour : 10 gouttes . . . . HMjOur A5 couttess 0 Le 36° jour, les deux animaux furent éprouvés par injection intrapéritonéale de 2 cent, cubes d’une culture de 7 jours en bouillon Martin; tous les deux résistèrent. Ils étaient encore vivants et bien portants, 45 jours après l’inoculation d'épreuve, alors qu'un témoin de 2.530 grammes était mort en 24 heures. Ayant ainsi immunisé des lapins par voie intraveineuse, j'ai essayé, en collaboration avec mon collègue et ami, M. D.-M. Ber- trand, de vacciner des cobayes par voie sous-cutanée. Nous avons employé le même Proteus M; nos vaccins, préparés avec des corps microbiens jeunes, correspondaient tous à la dilution d’une culture de 2% heures sur gélose ordinaire (tube de 170 millim. X 17 millim.) dans 10 cent. cubes d’eau physiolo- gique. Dans une même expérience nous avons essayé les sept émul- Sins suivantes : 928 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR I. Bacilles vivants sensibilisés suivant la technique de Bes- redka avec le sérum des deux lapins immunisés par les injec- tions intraveineuses. Nous avons vérifié par l'épreuve du péri- toine, faite d'après les indications de Dopter (1), que ce sérum très agglutinant était aussi antimicrobien. IL Bacilles stérilisés par l'éther suivant la technique de Vincent. IT. Bacilles stérilisés par le chlorure d'éthyle (2). IV. Bacilles stérilisés par la chaleur, une heure à 55°. V. Bacilles stérilisés par l'alcool à 50° ; contact de 24 heures. VI. Bacilles traités par le bleu de méthylène ; contact de 24 heures, solution aqueuse à 1 p.100, bleu médicinal Hoechst. Bacilles vivants. VIT. Bacilles traités par l'iode. Action prolongée 24 heures de la solution : Eau 100; KI 0,2; I 0,1. Dans toutes ces préparations, les bacilles avaient été lavés deux fois par centrifugation en présence d'eau physiologique. Nous avons injecté 1 cent. cube de chacun de ces vaccins sous la peau de deux cobayes de 4 à 500 grammes; 7 jours après, nous avons fait une nouvelle injection de 1 c.e. 5; enfin, après un nouveau repos de 7 jours, neus avons encore injecté 2 cent. cubes. Indépendamment de ces quatorze cobayes, nous en avons traité trois par des injections sous-cutanées de bacilles vivants non modifiés, mais, si la première injection de 1 cent. cube ne leur avait causé qu'un empâtement dur assez volumineux, la seconde, de 1 6.c. 5, a provoqué la formation de lésions sup- purées qui nous ont empêché de pratiquer la troisième. D'ail- leurs, au bout de 5 semaines, les trois témoins étaient morts, l’un de pneumonie, les deux autres cachectiques. Voici maintenant ce que nous avons observé avec les divers vaccins : après la première injection, les animaux qui avaient été traités par I, IT et IT ont présenté pendant 2 ou 3 jours un petit nodule induré ; les autres ont eu une réaction locale un peu plus intense avec une induration plus persistante, sauf un des cobayes traité par IV. Après la seconde injection, la réaction a été la même pour II, IV, V et VII, mais plus accusée pour les autres, particulièrementavec Il; enfin la troisième injection, RECHERCHES SUR LE PROTEUS VULGARIS 929 de 2 cent. cubes, a causé un léger empâtement, disparu en 3 à 4 jours, avec EL, V, VLet VII, et la formation de noyaux indurés assez persistants avec tous les autres vaccins (depuis Tet9 Jours pour IT, jusqu'à 13 jours pour un des cobayes Il). Tous ces animaux ont élé éprouvés, 8 Jours après la der- nière vaccination, par injection intrapéritonéale d'un cent. cube d'une émulsion de jeunes bacilles, dose correspondant à environ 3 milligrammes de microbes humides (Proteus M). Aucun de ces cobayes n’a succombé; ils étaient tous en bon élat 8 jours après, alors que trois témoins, de 425, 535 et 480 grammes, éprouvés dans les mêmes conditions, étaient morts au plus tard en 27 heures. En résumé, nous n'avons pas éprouvé, M. D.-M. Bertrand et moi, plus de difficulté à vacciner les cobayes par voie sous- cutanée que je n'en avais eu pour immuniser les lapins par voie intraveineuse contre le mème Proteus virulent provenant d'un cas grave de diarrhée infantile. INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS CHEZ LES LAPINS EN ÉTAT D'HÉMATOLYSE par W. J. PENFOLD HVIOPLE du « Lister Institute ». de l'Institut Pasteur. Hort et Penfold, en 1912 (1), ont montré que des doses non mortelles de culture de bacilles typhiques tuent les lapins, lorsqu'elles sont injectées avec une large quantité d'eau dis- tillée. Ils montrèrent également que si l'eau est injectée dans une veine, et la dose subléthale de culture, en second lieu, dans une autre veine, la mort survient aussi. Nous apportons, dans ces notes, la preuve : 1° que les mêmes effets d'intoxication, accentués par l’eau distillée, sont obtenus avec des cultures de vibrion cholérique et beaucoup d'autres organismes, et qu'ils ne sont point dus au bouillon employé comme milieu de culture; 2° qu'ils sont obtenus avec la toxine cholérique et n'exigent pas la présence de micro-organismes ; 3° que dans le cas de vibrion cholérique, la mort est souvent immédiate, pré- sentant quelques analogies avec l’intoxication aiguë anaphy- lactique ; 4° que si la toxine est injectée d’abord, et l’eau dis- tillée deux heures après, la mort peut survenir immédiatement : 5° que certaines substances toxiques ne deviennent pas plus toxiques, lorsqu'on les dilue dans une grande quantité d’eau distillée ; 6° que la lyse du sang joue un rôle important dans la production de ces effets. Nos expériences ont porté sur les lapins. Le poids des ani- maux à varié entre 1 kil. 800 et 2 kil. 200. Nous avons employé généralement la méthode d'injection intraveineuse. (1) Horr et Pexrorr, Microorganisms and their relation to fever. Journal of Hygiene, 1912, vol. XII, p. 361. INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS 931 Nous avons fait les expériences de contrôle, établissant : 1° L'effet des injections intraveineuses d’eau distillée, cor- respondant au 1/30 du poids de l'animal ; 2° L'effet des injections intraveineuses d’eau distillée, cor- respondant au 1/30 du poids de l'animal, additionnée de bouillon ou d’eau peptonée ; 3° L'effet des cultures pures de vibrion cholérique. ConTRôLe 1. — Effet des injections intraveineuses d'eau dis- tillée, correspondant au 1/30 du poids de l'animal. POIDS QUANTITÉ D'EAU du injectée RÉSULTATS lapin dans les veines NOK AS HINCAC Animal très bien, 14 jours après. N°2: 2 kil: 09 10KCXC Très bien. NO 2 ARTE HARCIC Très bien le jour suivant ; est employé pour d’autres injections. L'eau employée a toujours été distillée par deux fois, et employée immédiatement après la seconde distillation. ConrRôLe IL. — Æffet des injections d'eau distillée, addi- tionnée de bouillon stérile. Le bouillon employé était légère- ment alcalin au tournesol et additionné de 10 cent. cubes de soude normale par litre. Ce bouillon était identique à celui employé pour les cultures cholériques. POIDS QUANTITÉ QUANTITÉ COEFFICIENT d'eau distillée . des de d'eau par rapport RÉSULTATS au poids animaux bouillon distillée de l’animal NOMME OMC CONS; 81C.C. 1/36 Animal examiné 3 jours après : très bien. NORD OR AA 0 TENCE C0 32 C:C- 1/30 Examiné après 14 jours très bien. NO 6 ANNE CEE CO ACTNENEE 1/30 Toujours vivant. NOR MARIN TA 9TNC.C. "65 ;CNC.c- 1/30 = NORD MALTE 00 OC C6: 2 CAC. 1/30 _ Conrrôze HI. — Effet des injections intraveineuses de culture de vibrion cholérique (culture en bouillon de dix-huit à vingt- quatre heures). Le vibrion employé, dans toutes nos expériences sur le choléra, est le vibrion isolé par Pottevin, à Constan- 932 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR tinople, en 1911 (1), et employé par Pottevin et Violle, en 1913, dans leurs travaux sur la production expérimentale du choléra chez les singes inférieurs (2). QUANTITÉ DE CULTURE Er absolue par kilo. RÉSULTATS A. 10: C: 3,1 Animal examiné 3 semaines après, et trouvé tout à fait bien. B. 2,9 1RG AC: 1,0 Mort après 1 heure. A l’autopsie, gros kyste hydatique à l'épaule gauche. c 4,94 CC 1,0 Vivant 3 jours après. É 2,2 CC 4,0 » » D. 1.13 C.c. 1,0 à ) | 1,9 cc. 1,0 » 4,76 CC. 1,0 » » E $ ® 1,62 CE: 1,0 » » ( 1528%C:0;: 1,0 » » (EE TEE) 1,0 » » F- { 226 1 C..C. 1,9 » » G. 051 CTe- 0,33 » » Les expériences précédentes furent faites avec six cultures dif- férentes de vibrion cholérique (culture de dix-huit heures). Dans le cas de mort soudaine (voir B.), l'animal avait une infection hydatique. Le même jour, deux autres animaux (voir F.) furent injectés avec la même quantité de la même culture et ne furent point affectés par cette injection. Les accolades indiquent les séries d'animaux inoculés avec une même culture. Des résultats précédents, il appert que : 1 cent. cube de cul- ture cholérique, par kilogramme de lapin, n’est pas fatal chez un animal sain. EXPÉRIENCES FAITES AVEC LE VIBRION CHOLÉRIQUE ET SA TOXINE I. — Vibrion cholérique. L'effet d'une injection de bouillon cholérique de dix-huit heures, diluée ‘dans une grande quantité d'eau distillée, est montré par les expériences suivantes : (1) H. Porrevix, Bulletin de l'Office international d'Hygiène. (2) H. Porrevx et H. Vrozre, Choléra expérimental des singes inférieurs. Comptes rendus de l’Acad. des sciences, 1913, &. CLVIT, p. 343. INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS 933 POIDS QUANTITÉ COEFFICIENT de de culture d'eau distillée RÉSULTATS l'animal par kilogr. par rapport au poids kr 51 05#3.1c.0C. 1/39 Mort immédiate. A. 4 Akil. 9 OUT c.c. 1/96 Mort immédiate. ( 1 kil. 50 0,044 c.c. 1/31 Mort immédiate. B (1/kil57 (HE TE 1/30 Vivant. | ° 1kil. 82 0,066 c.c. 1/30 Mort après 3 heures. 1 kil. 37 0'83m10C:c-. 1/30 Mort après 1 h. 30 min. C. 1 Kki1te72 (ER MERE. 1/30 Mort après 4 minutes. 2 kil. 47 (LIÉE PC 1/30 Vivant. Des résultats semblables furent obtenus, avec d’autres eul- tures cholériques. Il en ressort que certaines cullures peuvent produire une mort extrêmement rapide, alors que d’autres la provoquent, après un temps un peu plus long. Nous n'avons pu déterminer les causes de ces irrégularités. II. — Toxine cholérique. L'augmentation de la toxicité par l’eau distillée, dans le cas de toxine cholérique, est montrée par les expériences sui- vantes. On a employé du bouillon cholérique de quatre jours, filtré au Berkefeld ; une série de lapins fut injectée avec la toxine simple, et une autre série avec la même toxine, diluée dans une quantité d’eau distiliée correspondant au 1/30 du poids de l'animal. SÉRIE I. — Toxine seulement. de ana de ee pale RÉSOREÈTS 1 kil. 62 HDICAC: Animal survit. 4 kil. 62 S:0NG:C: Mort après 1 h. 40. 2 kil. 27 MOÔRC:C: Mort après 2 h, 30. 4 kil. 84 4,0 c.c. Mort après 2 h. 30. 2 kil. 10 3,01€. c. Mort après un jour. All 57 3,0 c.c. Mort après un jour. 1 kil. 58 3,0 GC: Mort après un jour. A kil. 65 3,0/C-€; Mort après un jour. 4 kil. 60 RDC: GC: Mort après un jour. 4 kil. 75 2,0nC:c: Mort après un jour. 4 kil. 50 20100 Mort après un jour. 61 934 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR SÉRIE Il, — Toxine et eau distillée. POIDS QUANTITÉ EAU ; A kil. 82 0HACAC 1/30 Mort immédiate. 1 kil, 70 0,5AC2C: » Mort après 40 minutes. 2 kil. 22 0,5 c.c- » Mort après 48 minutes. 2 kil. 22 D'SACAC: ) Mort après 50 minutes. 2 kil. 52 OM5ECAC: » Mort après 54 minutes. 1 kil, T1 0H1c.c: » Mort après 1 h. 2 minutes. 2 kil. 25 (roc: » Mort après 1 h. 17 minutes. 1 kil, 73 (5 "C- » Mort après 2 heures. 1 kil. 84 (EP ES ES » Mort le jour suivant. 1 kil. 76 cDANCAC- » Mort immédiate. Po 1] (TU TETE EE » Mort après 1 h. 30 minutes. À kil. 74 (Se » Animaux très malades immédiatement : 2 kil. 44 0,1\c.c: » tout à fait bien une semaine après. À kil. 73 0TINCAC: » Mort après 1 h, 5 minutes. 4 kil. 95 0,01 c.c. » Mort après 2 h. 10 minutes. 4 kil. 95 0,001 c.c. » Vivant. À kil, 95 0,001 c.c. » Vivant. Injections séparées de toxine cholérique et d’eau distillée. Dans une première série d'expériences, une toxine de quatre jours fut injectée dans le périloine de deux animaux. Deux heures après, l’eau distillée fut injectée dans les veines de l’un des animaux. Les résultats furent les suivants : QUANTITÉ DE TOXINE par kilogramme EAU DISTILLÉE RÉSULTATS 1NC;e. 1/78 du poids. Mort immédiate. 1/C:C: Rien. Animal vivant, Dans une seconde série d'expériences, l’eau distillée fut injectée en premier lieu dans les veines. La culture de choléra (de dix-huit heures) fut injectée ensuite, également, dans les veines, après des intervalles de temps différents. CULTURE CHOLÉRIQUE INTERVALLE EAU DISTILLÉE par kilogramme 6 re RÉSULTATS 1/30 0,33 20 minutes. Animal mort, après 2 h.30 du poids du corps. à » 1 heure. Très malade après l’inj. p » th. 10 m° Mort le jour suivant. n » 2 heures. » » » » » 18 heures. Vivant. INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS 935 L'injection de toxine cholérique dans le péritoine, suivie de l'administration d’eau distillée, en grande quantité, dans l’esto- mac, n'a provoqué aucune augmentation d'intoxication chez les trois animaux en expérience. Chez deux paires d'animaux, nous avons essayé de prévenir les phénomènes aigus d'intoxication produits par l'injection de cultures cholériques, diluées dans l’eau distillée, en admi- nistrant, par voie intraveineuse, et immédiatement avant l’in- jection de toxine, une solution concentrée de chlorure de sodium. Les résultats furent les suivants : SOLUTION SALÉE CULTURE CHOLÉRIQUE à 5 p. 100 par kilogramme RON CORRE RSR AA l 20FCAC: 0,38%c:c: 1/43 du Mort après 2 heures, Il poids du corps. 2 Rien. sets 1/43 Mort immédiate. ) 1 20 c.c. 033N0C7C: 1/30 Mort après 3 h. 30 Il 2 Rien. 033ReNc: 1/20 Mort après 3 heures. D'où l’on peut conclure que la solution saline hypertonique est impuissante à prévenir l'intoxication. Dans les cas d'intoxication aiguë, provoquée par la toxine cholérique en dilution dans l'eau distillée, les animaux pré- sentent de la paralysie débutant dans l'avant ou l’arrière-train, du coma, des convulsions avec opistholonos et exophthalmie. A l'autopsie, on trouve une congestion intense du système porte, spécialement marquée dans l'intestin grêle. Le péri- toine contient un peu de sérosité sanglante. Les urines sont teintées en rouge. Le sérum sanguin est coloré. Le cœur droit contient généralement un caillot. Les poumons sont d’appa- rence normale. Des tentatives d’immunisation contre la toxine cholérique, diluée en eau distillée, ne nous ont donné aucun résullat satis- faisant. Le sérum normal et le sérum anticholérique ordinaire sont tout à fait insuffisants, pour prévenir l'intoxication suraiguë résultant d’une injection de culture ou de toxine cholériques, en eau distillée, soit que ces substances aient été injectées avant ou après le sérum. 936 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR À quoi est due l'augmentation de toxicité? C'est ce que nous examinerons plus loin. ‘EXPÉRIENCES FAITES AVEC D’AUTRES BACTÉRIES Deux expériences, faites avec des cultures en bouillon de Proteus vulgaris, ont donné les résultats suivants : 1° Injection de culture de vingt-quatre heures, diluée dans l'eau distillée. mA AE EAU DISTILLÉE RÉSULTATS À kil. 60 022ne-c. 1/30 Animal mort après 30 minutes. 2 kil. 06 0,033 c.c. 1/30 Mort après 2 heures. 2 kil. 43 0,0033 c.c. 1/30 Mort après 2 heures. Contrôles (sans eau distillée) : 2 kil. 14 2DNC:Ce Rien. Animal vivant. À kil. 35 0,33 C.Ce Rien. Animal vivant. 2 Injection sous-cutanée, chez deux animaux, de culture de quarante-huit heures, et suivie, chez un animal, d'injection intraveineuse d’eau distillée. POIDS CULTURE EAU DISTILLÉE = des animaux par kilogr. (après 3 h. 30) POUSSE 3 kil. 01 D 5NE Ce 1/13 Animal mort après 4 minulese du poids du corps. 2 kil. 87 DC C- Rien. Animal vivant. Les cultures de bacille pyocyanique, données avec puis sans eau, ont fourni les résultats suivants : POP COPRERE EAU DISTILLÉE RÉSULTATS des animaux par kilogr. DH. 29 02331C:0C: 130 Animal mort après 2 heures. du poids du corps. 3 kil. » 1R0 CAC: Rien. Vivant. Les cultures de bacille dysentérique (culture de vingt-quatre heures), données avec eau, puis sans eau, ont fourni les résul- tats suivants : INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS 937 POIDS CULTURE ; = ; LASER He fe EAU DISTILLÉE RÉSULTATS 2 kil. 31 (LÉTREKESE 1/30 Animal mort après 1 h. 30. 2 kil. 47 01 cC"C Rien. Vivant. Les cultures de bacille prodiqgiosus ont donné des résultats analogues. Le bacille du choléra des poules, très pathogène pour les lapins, les tua en douze heures, après l'injection intraveineuse ; néanmoins, l'addition, à la culture, d’eau distillée est capable d'accélérer l’intoxication et de causer la mort soudaine : Un lapin de 2 kil. 45 recoit 0,33 cent. cube, par kilogramme, d'une culture en bouillon de choléra des poules, de vingt- quatre heures, en injection intraveineuse; 1h. 45 min. après, 1l reçoit 20 cent. cubes d’eau distillée, et meurt immé- diatement. La tuberculine de Koch (tuberculine vétérinaire), injectée avec eau, puis sans eau, à donné les résultats suivants : QUANTITÉ PAR KILOGR. EAU DISTILLÉE RÉSULTATS 2,5. e: 1/30 Animal mort après 5 heures. du poids du corps. 1PONC\C- 1/30 Vivant. OMNcC:c 1/30 Vivant. 5 0NC.6- Rien. Vivant (quelques convulsions immédiatement après l'inj.). 2/50: C- Rien. Vivant. L'effet toxique de la tuberculine paraît seulement un peu augmenté par cette méthode. Les expériences suivantes, faites avec du bouillon de vingt- quatre heures, pour chacune des bactéries employées, n’ont pas amené chez les animaux la mort immédiate : OPEN Pre kil. distillée RÉSULTATS B. du Charbon. . ul 9 0,33 c.c. 1/30 Mort en 2 jours. À kil. 74 (SE MTENCE Rien. Mort en 3 jours. BERSLD LISE 2 kil. 06 0,33 CC: 1/30 Vivant. 2HKU A2 0,066 c.c. 1/30 Vivant. B. Pneumocoque . 20k11- 23 03906 e: 1/30 MAVivant: 2 kil. 32 0,066 c.c. 1/30 Vivant. : 938 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR EXPÉRIENCES FAITES AVEC DIVERS POISONS Cyanure de potassium. — Un cent. cube, par kilogramme, d’une solution en eau distillée à 4 p. 100 de cyanure de potas- sium, fut injecté intraveineusement à un lapin de 1 kil. 37 : l'animal mourut immédiatement. Un cent. cube, par kilo- gramme, d'une solution à 0,1 p. 100, fut donné à un second lapin de 1 kil. 86 : l'animal entra en convulsions, puis dans le coma, et revint à la vie après une demi-heure. Un troisième lapin, de 4 kil. 77, reçut 1 cent. cube, par kilogramme, d'une solution à 0,1 p. 100 de cyanure de potassium, dans une masse d'eau distillée équivalente à 1/30 de son poids : l’animal ne présente ni convulsions ni coma, mais reste inerte pendant dix minutes. Cette dilution paraît avoir rendu la substance chi- mique moins toxique. Deux autres lapins reçurent 1 cent. cube, par kilogramme, d’une solution à 0,01 pour 100 de cyanure de potassium ; à l’un, il fut ajouté de l’eau distillée {1/30 de son poids) : aucun effet d'augmentation d'intoxication ne fut re- marqué chez l’un et l’autre des animaux. Strychnine.— Avec la strychnine on ne remarque, de mème, aucun effet d'accroissement d’intoxicalion. SUR LA CAUSE DE LA TOXOHÉMATOLYSE Les expériences suivantes ont eu pour but de rechercher la cause de l'augmentation de toxicité due à l’action combinée de l'eau distillée et d’un produit bactérien. On a employé toujours les injections intraveineuses. I. Globules rouges. — 1° Dix cent. cubes de sang normal de lapin sont lysés dans 20 cent. cubes d’eau distillée; on donne, par kilogramme d'animal, 10 cent. cubes de ce mélange à deux lapins ; on ajoute 1 cent. cube, par kilogramme d’ani- mal, d'une culture cholérique de dix-huit heures en bouillon, à l’un des deux animaux. Celui qui a reçu le mélange, plus la culture cholérique, meurt en deux minutes, l’autre reste vivant. Un cent. cube de culture cholérique de dix-huit heures, seule, par kilogramme d'animal, est une dose subléthale. INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS 939 2° Du sang de lapin est lysé, dans deux fois sa quantité d’eau distillée; on donne 3 cent. cubes du mélange, par kilo- gramme, à une paire de lapins; à l’un des deux, on ajoute 1 cent. cube, par kilogramme, de culture cholérique de dix-huit heures. Ce dernier reste dans le coma, durant une demi-heure, mais il revient peu à peu à la santé. Le témoin ne subit au- cune atteinte. 3° Une paire d'animaux recoit, l'un du sang lysé, l’autre du sang lysé additionné de culture cholérique, en quantité sub- léthale. Le contrôle (sang lysé seulement) reste tout à fait bien portant, mais l'animal qui a reçu le mélange (sang lysé et culture cholérique) meurt. Ces expériences suggèrent que la lyse du sang est un facteur important d'augmentation de la toxicité; mais cette lyse est obtenue par l'eau distillée, de telle sorte que la pression osmo- tique du sang, après l'injection, est plus faible que normale- ment : c'est pourquoi nous avons pensé que la lyse du sang, par l’éther, pouvail supprimer cet inconvénient. Dans les expériences suivantes, le sang est lysé par l'éther, et l'éther complètement chassé par le vide. POIDS SANG LYSÉ CULTURE CHOLÉRIQUE SOLUTION de l'animal par l'éther de dix-huit heures sahne RÉSULTE kil. » PDrtEc tee Rien. Rien. Animal vivant. 1Rkal 67 IS INCXC: ARC" C- 56-01C:C: Mort durant la nuit. Coma après 2 heures. ANk119 159Rc7c. 120802 C: Rien. Mort après 2 heures. Une seconde expérience, faite dans les mêmes conditions, a donné les résultats suivants : ‘ Fa Eee ee VIBRION CHOLÉRIQUE RÉSULTATS À kil. 04 A00£C-c: Rien. Animal vivant. 4 kil. 96 1996: C- Rien. Vivant. 1Nk11-493 1,93 c.c. 1593520240: Mort après 2 heures. 2 kil. 26 2ÉDGAC. C- 226% e: Mort après 2 h, 35. De ces expériences, nous pouvons conclure que la lyse du sang joue en effet un rôle important dans la sensibilisation d’un animal au poison bactérien par l’eau distillée. 940 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR , 15 cent. cubes de sang de lapin ont été défibrinés et lavés deux fois, dans une solution d’eau physiologique. La quantité finale de globules rouges était de 4,5 cent. cubes ; 13 cent. cubes d’eau distillée furent ajoutés pour obtenir l’'hé- molyse. Le mélange fut injecté à-des animaux, avec ou sans culture cholérique. POIDS DES ANIMAUX SANG LYSÉ CULTURE CHOLÉRIQUE RÉSULTATS A kil. 70 4 c.c. par kil. 19C-CHpar kil: Mort en 3 heures. 10118095 4 c.c. par kil. Rien. Vivant. Cette expérience fut refaite une seconde fois, et donna Île même résultat. Il apparaît que la lyvse des globules rouges du sang est au moins une des causes de l'augmentation de l’action toxique. Il. Sérum. — L'action du sérum fut essayée dans lexpé- rience suivante : un lapin de 2 kil. 9 recoit, dans les veines, le mélange suivant : 4,35 cent. cubes de sérum frais de lapin, dilué dans 97 cent. cubes d’eau distillée (4/30 du poids du lapin); on ajoute 1,45 cent. cube de culture cholérique (de vinget-sept heures, à 37 degrés) et du chlorure de sodium, en quantité suffisante, pour faire la solution isotonique. Le mélange est injecté : l'animal survit. Une autre expérience fut faile, équivalente à la précédente, mais l'eau distillée ajoutée était seulement égale à deux fois le volume de sérum : l'animal qui reçut, cette injection ne pré- senta aucun signe d'intoxication. Il est donc probable que la lyse des éléments cellulaires du sang joue un rôle plus impor- tant que le sérum. II. Globules blancs. — Afin de déterminer le rôle joué par les leucocytes, nous avons injecté, à des animaux, un mélange de leucocytes (obtenu d'un exsudat intrapéritonéal de lapin) d’eau distillée et de culture cholérique (de trente-six heures), et du chlorure de sodium, en quantité sulfisante, pour rendre le mélange isotonique; ce mélange est injecté dans les condi- lions suivantes : Poids de l'animal "Here : 1 kil. 900 Exsudat, par kilogramme . . . . .. 3,0 C-c- Culture cholérique, par kilogramme. d;02C-C. Eauidistillée "2" D -- 1/60 du poids du corps. Chlorure de SOUMET OS: INTOXICATION RAPIDE PAR CERTAINS PRODUITS BACTÉRIENS 941 L'animal survécut et ne montra aucun symptôme grave. L'expérience fut répétée une seconde fois, et donna les mêmes résultats. Il paraît en résulter que le rôle joué par Les leucocytes, dans la production de ce phénomène d’accroissement de l'intoxi- calion, est insignifiant, comparativement à celui qui est tenu par les globules rouges. De ces expériences, nous pouvons conclure que l'organisme est sensibilisé à certains produits bactériens par l'hématolyse. Nous proposons pour désigner ce phénomène, dû à deux fac- teurs insuffisants, lorsqu'ils sont isolés, pour déterminer la mort, mais dont la réunion est suffisante pour la provoquer, le nom de « Toxohématolyse », qui indique la coordination de cette action. CONCLUSIONS. 1° L'organisme est sensibilisé à certains produits bactériens, y compris les vibrions cholériques, par l’action de l’eau dis- tillée. 2 Cette sensibilisation, par l’eau distillée, se manifeste de même avec la toxine cholérique, c’est-à-dire lorsque tout orga- nisme vivant est exclu. 3° L'intoxication, produite par la toxine ou la culture cho- lériques diluées dans l’eau distillée, est aiguë, et la mort peut survenir immédiatement. 4° La mort aiguë apparait également si la culture ou la toxine cholériques ont été données en premier lieu, et l’eau distillée ensuite ; la toxine cholérique peut ètre injectée par une voie autre que la voie intraveineuse. 5° Une injection préventive, de solution saline concentrée, n'a que peu d'effets contre cette intoxication. 6° L'augmentation de l'effet toxique, par l'addition d'eau distillée, apparaît avec le Proteus vulgaris, le bacille pyocya- nique, le bacille dysentérique (Shiga), le Bacillus prodigiosus, et aussi, mais faiblement, avec la tuberculine ; on ne l'observe point avec les poisons minéraux, tels que le cyanure de potas- sium, et les alcaloïdes, tels que la strychnine. 942 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 1° L'injection, en petite quantité, de sang lysé et de dose subléthale de culture cholérique produit la mort aiguë. 8° La lyse des cellules rouges paraît être le facteur le plus important dans la production de cet effet. 9 Nous proposons, pour désigner ce phénomène, produit par la coordination des deux facteurs, nécessaires et suffisants, le nom de « toxohématolyse ». TABLE DES MATIÈRES Activation de la toxine tétanique, par À. MaRiE. . . . . . l Action des abcès de fixation sur la trypanosomiase expé- rimentale du cobaye el sur son traitement par latozyl par A. Crucaide Bucarest) : . - 1100" ( Recherches de physiologie végétale {4° mémoire). Dee. respectives des éléments de la solution minérale sur le développement du maïs, par P. Mazé (avec les Dianchés thetiID)E ere. . "PRET SAN AA er 21 Étude de la chlorose des végétaux supérieurs attribuée à la richesse excessive de sols en calcaire, par P. Mazé, M. Ruor et M. Lemoine (avec les planches IT et IV). 47 Sur l’évolution culturale des dermatophytes, par L. Cazac- BOULE M Eee Ma ie AAA LE 0) Études sur la flore He cE (4° PL Les diarrhées des nourrissons, par El. Mercuxixorr (avec les plan- ches V à VIIL). . AR M LORS Eng 89 Recherches sur la nee le dans F de de nOuUrTISSONS par D'=M BERTRAND 2.124. Lien. 191 Recherches sur la flore intestinale. Nouvelles données expérimentales sur le rôle pathogène de certaines associations microbiennes, par Albert BertTHELoT. . . 132 Essais de stérilisation des spores charbonneuses, par GÉOEBES AT LIRE LE SARA U ET) Lésions à système nerveux Phne A can vermi- neuse, par A. RacHmanow (avec la planche IX). . . . 181 Influence de différentes espèces de saccharomyces sur milieux artificiels et naturels, par Jules VexrRe . . . 19% Études sur les staphylocoques dorés. [. — Parallèle entre divers staphylocoques. dorés d'origine humaine et animale par J'DurAs MSA EN MEME 213 Études sur les staphylocoques dorés. IL. — Toxicité de échantillons étudiés dans le travail précédent. Vue d'ensemble sur les staphylocoques dorés, par M. Nr- COLLE NE NCÉS ARTE ANR PRES PEN. | LS 29 ME MES: 94% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Recherches histologiques sur les glandes salivaires de la rage, par Ÿ. Maxouézrax (avec les planches X et XI). . Essais de Chimiothérapie. Combinaisons des sels d'argent et des composés arsenicaux dans le traitement des trypanosomiases expérimentales et de la syphilis chez l'homme Spar J'NDANTSZ UM ONE ER RERES Influence de différentes espèces de saccharomyces sur milieux artificiels et se par Jules VENTRE (atpartie) #4 #erte : ; MR EC Le coccobacille des ele par F. D He : À Contribution à l'étude de l'immunité antituberculeuse chez les bovidés, par A. Cazuerre et C. Guérin. . . . : Contribution à l'étude de la réaction de fixation de Borde Gengou au cours de l'infection et de l’immunisation tuberculeuse, par A. Cazmerre et L. Massoz . . . . . Méningile par injection de microbes pyogènes dans les nerfs périphériques par C. Levanini, V. Danuzesco et L. Arzr (avec la planche XIT). RE ; Étude expérimentale sur la cénurose Da lapin, . À: H CLPAMCIDOAE TE ER TENMARTE RAIN Le coccobacille. des melon par F. ae (fin,. . Essai de destruction des sauterelles en Algérie par le Coccobacillus acridiorum de d’Herelle, par Edmond SERGENT et Albert LHÉRITIER. . . . . Recherches expérimentales sur une noi Pinot lique. basée sur la stimulation des is par T. Yawanoucui. . . . ie Re Influence de la lécithine P de 1 ar sur 1 ou cité des œufs et des ovaires, par Henri Viexes . . Sur la flore intestinale des chauves-souris, par M1 Tsi- KLINSKY (avec la planche XIIE). . - . . . : É Influence.du mode de pénétration cutanée ou FACE in Stephanurus dentatus sur Les localisations de ce néma- tode dans l'organisme du pore et sur son évolution, par P.-Noël BernaroetJ Baucue(avec la planche XIV). Recherches biologiques sur l’éosinophilie, par M. WeinserG et P. Secuix (1° mémoire) [avec les pl. XV et XVI]. La Neuronophagie dans la Poliomyélite, par CG. Levanini et J."Piénor (avec la planche XVIL)." EE 233 238 257 280 329 338 3506 36 387 408 450 470 509 TABLE DES MATIÈRES Le sang de la poule dans la spirillose expérimentale, par L. Lauxoy et M. Lévy Bruuz (avec la planche X VIII). Traitement vaccinothérapique de la fièvre typhoïde, par E. Boxer (1° partie) . HRCRENPEE Note sur le Bacillus perfringens (Veillon), par M'° A. RAPHAEL. . ue De Ia réaction de use Dies ie NA par ne bi REDKA €t J. MANOUKHINE.. : La Gélose à l'œuf, par A. BESREDKA et F. Fo : Recherches sur le Plexus cardiaque et sur l'innervation de l'aorte, par Y. MaxouéLrax (avec les pl. XIX et XX). À propos des théories nouvelles sur la pathogénie de l’an- g#mede poitrine, par: YŸ.-MANOUÉLTANEUE 2m. 1.110 Remarque à propos de l'existence des centres nerveux dans les organes, par Y. ManouéLian. se LAPS Études sur le bacille de Malassez et Vignal. La pseudo- tuberculose du cobaye, maladie Robe et maladie expérimentale, par G. Ramon. . . . . RE Traitement vaccinothérapique de la fièvre phoïde. par E. Boiner (2° partie). . . . . RTE : Études sur la ricine. HI. — Hi ee bilite à 1 ricine, DORA CA ELLATR EE NT: SEXE Teneur bacillaire et odinene ik aie de la salive et des crachats tuberculeux par les courants aériens, par P. Caaussé (1° mémoire). rer Recherches sels sur les réaclions nn Le tiques produites par les albuminoïdes du cristallin, par V. Morax et J. Boccacx. : . . : La flore intestinale des lapins nourris de te. : Fe lapins soumis à l’inanition, par D. ROUGENTZOrr . Action de la toxine diphtérique sur le rat, par A. Perrir. Étude morphologique et biologique sur Trypanosoma Peearidi par OGEWA LORS RERENE Sur quelques produits de la ÉbeRo ne on du dre en milieu alcalin, par A. Fernsac et M. ScHozx. Action des acides sur la fermentation alcoolique, par M. et M"° RosENBLATT (2° mémoire) . . . FE Le tuberculeux peut-il émettre des enoues Maude respirables? par P. Cuaussé (2° mémoire). a 608 946 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR L'influence de la réaction du milieu sur l’action de l’inu- lase de l’Aspergillus niger, par À. Kiese. £ssais sur la pathogénie du choléra, par H. Viozre. . Recherches complémentaires sur la contagion tubercu- euse auprès du malade, et en dehors de l'habitation, par P. Cuaussé (3° mémoire). Du rôle physiologique joué par le FD Pa ue le canal intestinal, par Carl A. Kriwc. Sur un ferment contenu dans les eaux, agent “e deshoe dratation de la glycérine, par E. Véihee LU Études sur la ricine. IV, — Recherche de la ricine te etagglutinine) dans les différentes espèces et variétés de ricin, par Henri AGuron . à ALAE Les leishmanioses chez les animaux, par nn Re. Recherches sur le Proteus vulgaris, par Albert BrRrHELoOT. L'indépendance de la température optimale d’une diastase à l'égard de la concentration en substrat et en diastase, par Arthur Couprox. MIE Contribution à l'étude du Sao A par D Ho Les leishmanioses chez les animaux, par Laveran (suite). Recherches sur le Proteus vulgaris, par A. BerreLor (fin). Intoxication rapide par certains produits bactériens chez les lapins en état d'hématolyse, par W.-J. PenroLn et H. Vioize . TABLE DES PLANCHES PAT EAINV RE Mémoire de MSP MMA ZE NE 0 NN Pr iVS NII Re -- M. ÉL, METCHNIKOFF. . . . . . PL PEN NUE eS — MÉTASMRACHMANOW MEME BEMAX Te ENTER —— MONS SMANOUELTAN MEN PE EL DR ANUS, ner MM. C. Levanim, V. Danuzesco et EAPARZT. 0e ee PLSBXIEL TS: SANTE —— MU SPSTRÉINSK Y : !P Le NONMENREENCE PRIVEE Le SEE _— MM. P.-N. Bernanp et J. BAUCHE. Pr AXVEELEXVL. 00 —- MM. WEINBERG et P. SEGUIN . . Pr XI CRE MM. C. Levanimi et J. PIGNOT . . PL XII — MM. L. Launoy et M. Lévy BruxL. PT, OXEXPeL ONE — M. Y. MANOUÉLIAN. . . . TABLE DES MATIÈRES TABLE ALPHABÉTIQUE PAR NOMS D'AUTEURS Agr (Georges) . . . . . . Essais de stérilisation des spores char- Donneusese en. te. + ice AGULHON (Henri) . . . . . Etudes sur la ricine. IV. — Recherche de la ricine (toxine et agglutinine) dans les différentes espèces et variétés de LICE EE... Us 2 SE ALILAIRE (E.) . . . . . . . Etudes sur la ricine. III. — Hypersen- SbIRtE la riCine nn. Ce ARZT (L.), Levapiti (C.) et DanuLESsCo (V.) . . . . . . Méningite par injection de microbes pyogènes dans les nerfs périphériques (avecila planche XIDIe .0.:,. , ..: BAUCHE (J.) et BERNARD HE NOGDMNES 2... . Influence du mode dé pénétration, cu- tanée ou buccale, du Stephanurus dentatus sur les localisations de ce nématode dans l'organisme dü porc et sur son évolution (avec la plan- Che INDE RS PE 2e BERNA4RD (P.-Noël) et Bau- CHEN ls 7 Le Influence du mode de pénétration, cu- tanée ou buccale, du Stephanurus dentatus sur les localisations de ce nématode dans l'organisme du porc et sur son évolution (avec la plan- CRE XIV EEE re Hs CE BerTHELOT (Albert) . , . , Recherches sur la flore intestinale. Nou- velles données expérimentales sur le rôle pathogène de certaines associa- tions MUCrODIENNES RS NN RER CRT OT Recherches sur le Proteus vulgaris. 839, BERTRAND (D.-M.). . . ., Recherches sur la flore intestinale dans la diarrhée des nourrissons, , . . . BESREDKA (A.) et Manou- Le KHINE (J.), . . . . , . . De la réaction de fixation chez les tu- LerCOIERE ES RENTRER, —16t JuPILLE (Fi), 0. Lassgclose alu nes , ne BoinET (E.), . . . . . . . ‘Traitement vaccinothérapique de la Hévretyphoiden, MEME |," , 040, 605 450 450 132 909 121 569 576 597 948 BozLacx (J.) et Morax (V.). CALMETTE (A.) et GuÉRIN (C.). — et Massoz (L.). CAZAËBOU (L.) , . . . Césani (E.) et Nicozze (M.). CHAUSSÉ (P.) . S'AOMOMECENO Ciuca (A.) (de Bucarest) . —"et Hennr (A). CompTon (Arthur). . . . . DANULESCO (V.), LEvADITI (Ce PARAAUIE NIET Danvsz (J.). e Dumas (Je. . [ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR Recherches expérimentales sur les réac- tions anaphylactiques produites par les albuminoïdes du cristallin. Contribution à l'étude de l’immunité antituberculeuse chez les bovidés . Contribution à l'étude de la réaction de fixation de Bordet-Gengou au cours de l'infection et de l’immunité tuber- Etudes sur les none dore IF. — Toxicité des échantillons étudiés dans le travail précédent [de Dumas]. Vue d'ensemble sur les staphylocoques dorés Teneur bacillaire ; onde de Dub vérisabilité de la salive et des crachats tuberculeux par les courants aériens (1e mémoire) . Le tuberculeux peut-il émettre des ie ticules liquides FR (2° mé- Recherches near sur 1 con- lagion tuberculeuse auprès du ma- lade et en dehors de l'habitation (82 MéMOIECe,, VOTES À Action des abcès de fixation sur a D panosomiase expérimentale du cobaye et sur son traitement par l'atoxyl. . Etude expérimentale sur la cénurose du AADINs SE L'indépendance de la nds ue male d’une diastase à l'égard de la concentration en substrat et en dias- LAS RE". CNET Méningite par injection de microbes pyogènes dans les nerfs périphériques (avec lagplanche XII) eme Essais de Chimiothérapie. Combinaisons des sels d'argent et des composés arsenicaux dans le traitement des try- panosomiases expérimentales et de la syphilis chez l'homme . . . . Etudes sur les staphylocoques dorés. I. — Parallèle entre divers staphylo- 338 69 608 869 356 238 TABLE DES MATIÈRES FERNBACH (A.) et SCHOEN (M.)5 2100 FORGROMUP PE A TEA". GuÉkin (C.) et CALMETTE (A.). HéRELLE (FE. D°). 0:01, HENRY (A.) et Ciuca (A.) . Juricce (F.)et Besrenxa (A.). KiEsEL (A.). KLinG (Carl A.) . Launoy (L.) et Lévy BruaL (M) RCA PAVERAN (A) MMM PTT, LEMOIGNE (M.), MAzé (P.) et Ruor (M.) LEvADITI (C.), DANULESCO ( V.) COPARATU SM En — et Pienor (I.). Lévy BruxL (M.) et Launoy (LOS CNRS LHériTieR (Albert) et SEr- GENT (Edmond). MaNouÉLIAN (Y.) coques dorés d'origine humaine et animale , Sur quelques produits de la décom- position du dextrose en milieu alca- LE TARN AN ER ROSES Re PO Contribution à l'étude du gonocoque . Contribution à l'étude de l’immunité antituberculeuse chez les bovidés . Le coccobacille des sauterelles. . 280, Etude expérimentale sur la cénurose du lapin, Re Os basélosolaufe ere 00 L'influence de la réaction du milieu sur l'action de l’inulase de l’Aspergillus MJÉRENP NI OPS PP RREENESS Du rôle physiologique joué par le Bacillus bifidus dans le canal intestinal . . Le sang de la poule dans la spirillose expérimentale (avec la planche XVIIT). Les leishmanioses chezlesanimaux. 823, Recherches de physiologie végétale (4 mémoire). Étude de la chlorose des végétaux supérieurs attribuée à la richesse excessive des sols en cal- caire (avec les planches III, IV) . Méningite par injection de microbes pyogènes dans les nerfs périphériques (avec lt planche XI) 0e RER La neuronophagie dans la poliomyélite (avec la planche XVII). . : .:. .'. . Le sang de la poule dans la spirillose expérimentale (avec la planche XVII). Essai de destruction des sauterelles en Algérie par le Coccobacillus acridiorum derd'Hérelle 72520 euS rar. Recherches histologiques sur les glandes salivaires dans la rage (avec les plan- ches X'et XE°) >. Recherches sur le plexus cardiaque et sur l’innervation de l'aorte {avec les planchesIXIX et XX) 0-4 : 0. 517 885 47 396 509 408 579 950 MANOUÉLIAN (Y.),. METCHNIKOFF (El.) . . Morax (V.) et BoL Nicozce (Maurice) LE) tan OcAwaA. . ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR A propos des théories nouvelles sur la pathogénie de l’angine de poitrine. . . . |. |. Remarques à propos de l’existence des centres nerveux dans les organes . . MANOUKHINE (I.) et BESREDKA (A.) . De la réaction de fixation chez les tuber- CURE EIRE : MARIE (A.) . , . Activation de la toxine nique ] MassoL (L.) et CALmETTE (A.). Contribution à l'étude de la réaction de fixation de Bordet-Gengou au cours de l'infection et de l’immunisation tuberculeuse. RTS EE ED: MAZÉ (P.). . Recherches de physiologie végétale (4 mémoire). Influences respectives des éléments de la solution minérale sur le développement du maïs (avec les planches I et IT). . . . . Recherches de physiologie végétale (4° mémoire). Étude de la chlorose des végétaux supérieurs attribuée à la richesse excessive des sols en cal- caire (avec les planches IIT et IV) . . Études sur la flore intestinale (4° mé- moire). Les diarrhées des nourrissons [avec les planches V à VIII). LACk (J.). Recherches expérimentales sur les réac- tions anaphylactiques produites parles albuminoïdes du cristallin. et CÉSARI . . | Etudes sur les staphylocoques dorés. IL: — Toxicité des échantillons étu- diés dans le travail précédent [de Dumas]. Vue d'ensemble sur les sta- phylocoques dorés . . Étude morphologique et Mob sur Trypanosoma Pecaudi . Penrozp (W.-J.) et VIOLLE (H:}2E Perrnir (Auguste) . Intoxication rapide par certains pro- duits bactériens chez les Sa en état d'hématolyse : Action de la toxine dipthérique: sur le rat. Pieno1 (J.) et Levaniri (C.). La neuronophagie dans la poliomyélite RACEMANOw (A.). . RaMON (G.). {avec la planche XVII) . Lésions du système nerveux dans Vins toxication vermineuse (avec la pl. IX). Études sur le bacille de Malassez et 582 338 47 89 625 219 677 930 663 509 181 TABLE DES MATIÈRES RAPHAEL (Mile A.) . .. RosEenBLatT (M. et Mme) , ROUGENTZOFF (D.). Ruor (M.), MAzé (P.) et Le- MOIGNE (M.). . SCHOEN (M.) et FERNBACH (A.). SÉGUIN (P.)et WEINBERG (M.). SERGENT (Edmond) et LHé- RITIER (Albert) . Tsixinsky (Mie) VENTRE (Jules) . ViGnEs (Henri). . MADAME (HE 0; . VioLLe (H.; et PENFoLD ( W.-J. . VoIsENET (E.) . . WEINBERG (M.)et SÉGuIN (P.). YAMANOUCHI (T.) Vignal. La pseudo-tuberculose du cobaye. (Maladie naturelle et maladie expérimentale), Note sur le Bacillus perfr ere ns (Veillon)}. Action des acides sur la fermentation alcoolique (2° mémoire). .-, . : . La flore intestinale des lapins nourris de carottes et des lapins soumis à linanition , . Recherches de physiologie végétale (4 mémoire). Étude de la chlorose des végétaux supérieurs attribuée à la richesse excessive des sols en cal- caire (avec les planches III, IV) . Sur quelques produits de la décomposi- tion du dextrose en milieu alcalin. . Recherches biologiques sur l’éosino- philie (4° mémoire) [avec les plan- ches XV et XVI.]. Essai de destruction des sauterelles en Algérie par le Coccobacillus acridiorum de d'Hérelle . AARRENE E CNE Sur la flore intestinale des chauves- souris (avec la planche XIII.) Influence de différentes espèces de sac- charomyces sur milieux artificiels et naturels . . . . AREA LOS Influence de la cire et de la cho- lestérine sur la toxicité des œufs et des ovaires ; Essais sur la pathogénie du choléra te Intoxication rapide par certains pro- duits bactériens chez les ne en état d’'hématolyse Sur un ferment contenu dons 1. eaux, agent de déshydratation dela glycérine Recherches biologiques sur l'éosino- philie (1°7 mémoire) [avec les plan- ches XV et XVI.]. . LR du Recherches expérimentales sur une méthode thérapeutique basée sur la stimulation des phagocytes . . Le Gérant : G. Masson. 951 585 564 714 639 & —+ 470 408 441 420 Paris. — L. MAReTHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette, Le « | Cr EL, y 'N et Hu “ù re 1 “ Va ; | k (A Re en ie ) D PUR D n our AVES PT - he ces DORA 6 AL br ANIME ui FHÉQITe (Je #: * k 14 3 RAC AS UV DATENT A Ales J Vos FLO NOTE HONTE MALE an DARTENE “acote hL, RC CUS à du : - + ; : ; 4e REP F e 4 ATUTAN auitie fab LE Le sis qe (Be ï ï x ï A 4 l LAN ET ais AT | AC in, e Are a! ni L'Ile à = | at IUT Le Dur < DEtHEDE ENT Pl san ( ei LÉ NUE «11 PIRE Fr Lie AtUS #01 UT) Hi, Ë 4 ei : ; nt Y, (RES ad Ait: \ : ( Fi - k DNA UTTT tie DATE 14 À y AU x d PE ; lé à rat 2 Du er: ; A À We th Lu : es oc No WPAAETS A PACE T 120 MIT FC) 12 2 À 4S4 ; j & k 4 AC à | , Fe 5 : + N LES MINE de ( SRE | | RACONTER ARTER TUE AS Va 1e 3 a! LE \ NUE. 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ENT PR dd Ce ou sains — : - 4 ns x ' = ; : î ’ _ ll t \ . “ : ' 4 ‘ C . LL : L dl D r . ' ni . e \! \ * \ ï CA | : : , "A n x " F. : En, es À Le ” ' »" 3 ï ss : 1 , AL , PRES ù k A ER ’ . . « cs A ss i ‘ : 0] + . = ÜÙ l ' ne CE + , " F4 w “ : * " 1! b LA Ê Û a . î \ | EL . 1 fl , el en * ; DE : =? = ® l à : x » “ MT | {Qc : 3 : M ; L “ : =. D} AE, à V = : Le nr . LA 18 1 = ié : CP ' 4 Es er ri ( oi SE, à ; : 1 Û : CR L _ Fr LE 1 = | At : | i x + — a er +1 41 F4 F Ka PS ES) rs … æ) LO© D IS UC ] l \ sé t ES (tp) j ai à VZ en AVI ARTS VS En 7 er RS NN) - de = - £ Hs 4 = et né & d LORSRR ARRET Annales de l’Institut Pasteur Fig.3 El MetcEnikolf del. ere Fig Z Imp L. Lafontaine TT VoLXXVIU Pi V. (Merm.Metchnikoff) Constantin d'il. Annales de l’Institut Pasteur Vol XX VIII PI VI (Mém.Metchnikoff| Ella Fig 5 y Hg. 9 . Fig.8 LN ie u as FT] sl à re ee À) AS {= ng7 ZW S PU 08 ? 2 É 7e }/ , Lg j Fig.!1 4 y ZT aide | 8 a ® Cod \ MIE ; LEE i A Fig17 |, A : Fa.19. ù | g.19 LAON See AN | A (9 44 } : > LS SA vÉ F2: À EE Te % Ag. 20 | | , E1. Metchnikoff del. Constantin lith mp L. Lafontaine Annales de l'Institut Pasteur. Vos JON = TBE MATE (Memoire MetchnikofT). Fig. 16. VIII. PTE XXVIV. - VOL. Annales de l'Institut Pasteur. (Mémoire MetchnikofT) 10e Vol.XXVIIL PI.I Annales de l'Institut Pasteur. TLOW.) LL + L {(Mém.Rachr RE NAS tm ML 1 #  19 10 onstantin hth te U Rachmanow del. L.Jafontaine Paris. Trip nales de l'Institut Pasteur. Sn Se? PRLEr Constanün del & th. Vol. XXVIL. PIX. {Mem.Manouélian) Imp_L.Lafontaine Parts Vol .XXVIIL.PLXI (Mérn. Manougiien) Annales de l'Institut Pasteur # C7 À 2 0 # ni 7 EX = ’ C Constantin del.& hth mp. L. Lafontaine, Paris Vol. XXVITT_P1:XIT (MémLevaditi, Danulesco et Artz ] Institut Pasteur. s dei Anval _V Le de GNT APRES Ch, Constantin del. et lith SR — Annales del'InsututPasteur Vol XXVIL PLXUT. | e (MemTI sikinsky —— Constantin hth. * Jmp.L. Lafontaine, Paris. Annales de l'Institut Pasteur Vol. XXNIIL PI XIV (Mem F Noël Bernard et Bauche) Fig 3. C. Constantin del. & lith. : « Û Imp.L.Lafontame,Paris EEE RE EE a = 2 ë EEE = = S 2 F EEE neue RS É = à = RE Annales de l'Institut Pasteur Vol. XXVIIT_ PI XV (Mém.M Weinberg&P Séquin) oo © © hp & C2 20° © : { o) P © ie Q À g } 0 à. o ÿ Ven 0 g D n [Pres RCE F.&S. Pol 2] 2 or £$9n © FL PE 5 j 7) VA ESS LT e.. Xe ES] > D # © . 6 ë ® PE g Constantin, de] & lith. Annales de l'Institut Pasteur Vol. XXVIII_ PI XVI (Mém.M Weinberg &P Séguin) "Eos'a À Fa a” ALT Br Os D. per pe 2° La ] (Os Fig. S Caps. .Eos. Constantin, del & lith. Imp-d'Art L Lafontaine, Parts. Lt LR etes [AL Annales de l'Institut Pasteur Vol XXII _P1 XVII ; aditi &Pignot) s FT eo à Li AN) d,* yo 1@ & 8 CES oi CAS PE. ge td 52 CR Re Im » ñ , L [Ne « 2 È D &: : ", : | ol un R — enr | : L . et SR ST ER 0 le es CS De D LD O2 eu _ + Annales de l'Institut Pasteur C.Constantin del.& lith. Vol. XXVIIT_ PI. XVIII (Mém Launoy &Léuy - Bruhl ) S 16 Imp.L.Lafontsine, Paris Annales de l'Institut Pasteur Vol. XXVIII_ PI XIX {Mém Manouélian ) (a L C Constantin & E Budin, ad nat del s lith. Imp.d'Art LLafontaine, Paris Annales de l'Institut Pasteur Vol. XXVIII_PI.XX {Mëm Marouélian } Fig.7 Mg9 ÆE.Budin.s C Constantin ad nat del & Jith. Imp.d'Art L Lafontaine, Paris. ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR FONDÉES SOUS LE PATRONAGE DE M. PASTEUR PAR E. DUCLAUX . COMITÉ DE RÉDACTION D: CALMETTE, directeur de l’Institut Pasteur de Lille; D: CHANTEMESSE, professeur à la Faculté de Médecine; Dr LAVERAN, membre de l'Institut de France ; D' L. MARTIN, directeur du service de Sérothérapie ; Pr METCHNIKOFF, sous-directeur de l’Institut Pasteur ; D' ROUX, directeur de l’Institut Pasteur ; Dr VAILLARD, membre de l’Académie de Médecine. TOME VINGT-HUITIÈME 1914 AVEC 20 PLANCHES PARIS MASSON ET Ci°, ÉDITEURS LIBRAIRES DE L'ACADÉMIE DE MÉDECINE 120, Boulevard Saint-Germain (6€), RES HAE À LA MÊME LIBRAIRIE BULLETIN DE L'INSTITUT PASTEUR. -: Revue et analyses des travaux de bactériolugie, médecine, biologie générale, physiologie, chimie biologique dans leurs rapports avec la microbiologie. Comité de rédaction : Gab. BERTRAND, À. BisuEukA, À. BoRREL, C. D'ELEZENNE, A. Marie, F. Mesniz, de l'Institut Pasteur de Paris. Prix de l'abonnement : Paris, Seine et Seine-et-Oise, 24 francs; Départernents, 25 fr.; Union postale, 26 francs. 7 Techniques du diagnostic par ia méthode de déviation du Complément, par le D' P.-F. Aruwano-Deiire. 1 vol. in-8 de vi-200 pages, avec 25 figures dans le texte et une planche hors texte en couleurs, cartonné toile. . 5fr. Nouveau Traité de Pathologie générale, publié par Ch. BoucHARD, pro- fesseur honoraire de pathologie générale à la Faculté de médecine, membre de l’Académie des sciences et de l’Académie de médecine, et G.-H. RoGER, professeur de pathologie exprimentale à la Faculté de médecine, membre de l’Académie de médecine. médecin de l'Hôtel-Dieu. 4 vol. gr. in-8, avec figures dans le texte. Relié toile. En souscription jusqu’à l'apparition du Tome LIL ES ENS FRA TRE MR ON CR TN EE AE 105 fr.! Déjà parus : Tomes I et Il. — 2 vol. gr. in-8. Reliés toile. Tome I. 22 fr. Tone LEE ST LEA ANR METRE 5 1, ne 2 ere C'ÉMROROS ES Nouvelle Pratique médico-chirargicale illustrée : Chirurgie, Médecine, Obstétrique, Thérapeutique, Dermatologie, Psychiatrie, Oculistique, Oto- Rhino-Laryngologie, Odontologie, Médecine militaire, Médecine légale, Acci- dents du travail, Bactériologie clinique, Hygiène, Puériculture, Médications, Régimes, Agents physiques, Formulaire. Directeurs : E. Brissaup, A. PINARD, M P. REcLUS, professeur à la Faculté de médecine de Paris. Secrétaire géné- ral : Henry Meice. La Nouvelle pratique médico-chirurgicale illustrée formel 8 vol. gr. in-89, reliés maroquin rouge, tête dorée, dos plat, fers spéciaux, comprenant un ensemble de 8.000 pages, avec 2:218 figures dans le texte. et 75 planches hors texte en noir et en couleurs. à Prix de l’ouvrage complet avec le premier supplément. , . . .. . 206 fr (Avec le supplément, relié en 2 volumes : 211 francs.\ Vient de paraître : pes EE Premier supplément (années 1911-1912), publié par M. A, CouvELAIRE, Henry Meice et Ch. LenorMaANT. 1 vol. de 1.880 pages, relié maroquin rouge. . 30:fr.… (Se vend également relié en 2 volumes : 35 francs.) Trypanosomes et Trypanosomiases, par A. LAvERAN, professeur à l’Institut. Pasteur, membre de l’Institut et de l'Académie de médecine, et F. MEsNiz, proiesseur à l'Institut Pasteur. Deuxième édition entièrement refondue. 1 vol.# gr. in-8, de viur-1.000 pages, avec 198 figures dans le texte et une planche huis LéXienen ‘couleurs. 5," NEA NN ENST nt LR tee nn 25 Îr. - Moustiques et Maladies infectieuses : Guide pratique pour l'étude des, moustiques, par les D'S Epmono et Etienne SERGENT, de l’Institut Pasteur des Paris, avec une préface de E. Roux, membre de l'Institut, 2 édition. 1 vol.i petit in-8, de l'Encyclopédie des Aide-Mémoire, avec 43 figures. Broché, 2 fra Cartonné. folles. SALLE UN Das AREA, MES RAA 3 fr. Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette. je qi ce + HN WHOI LIBRARY ii CLR ARTE “+ HE je RHIHNS ant titre + + tre TItÉ Gi LIN eee re DLPE RH fs tit: pi tt RUHATAENS AR RENE ENT ne fé te FE {: rires ste nets 1éi4ieTe fi it ti 4 rt ; ivre PRE tt: tit ét # “ trivien mnt ie BA sai : 14 ue à * ne lie 1 He 414 es 0 cu 4 Fe 113 de UE 4 ll 3 li fi hi UE 21: es + +114 Hu 4 Hi : y 12 LIL) ++ 10 EUX TEE cl éies FHtate le droitier 4 sv v. nee rinese + el tint uer aies De He EUR S 4 £ R ri Li Ÿ n