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工具 酶 的 活力 测定

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EM AE HR 版 社
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内 容 简介

本 书 着 重 介绍 生化 研究 、 临 床 生 化 、 生 化 分 析 等 工作 申 常 用
的 五 十 五 种 工具 酶 和 辅酶 的 活力 测定 方法 ， 并 收集 了 它们 的 某 坚
物理 化 学 数据 ， 以 供 参 考 。 本 书 偏重 实用 ， 书 中 罗列 的 方法 大 部
分 经 作者 多 年 实践 检验 ， 成 熟 可 用 ， 读 者 参照 本 书 即 能 进行 工人
酶 的 活力 测定 。 附 录 内 有 蛋白质 浓 度 的 测定 方法 和 常用 缓冲 液 的
配方 , 为 测定 提供 方便 。

本 书 可 供 工业 农业 \ 医 药 卫生 、 国 防 ,环境 保护 各 领域 中 从 事
临床 化 学 、 食 品 化 学 、 药 物化 学 .生物 化 学 和 免疫 学 等 工作 的 有 关
科技 人 员 及 大 专 院 校 师 生 参 考 。

工具 酶 的 活力 测定
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; 上 海 科 学 技术 出 版 福 出 版
(上 海 瑞金 二 路 450 号 )
下 垃 专 并 上 海 发 行 所 发 行 无 锡 温 人 民 印 刷 厂 印 刷
FEAR TET x 1092 1/32 ERIK 5.5 字数 117,000
1982 FPL A 1 版 “1982 年 11 月 第 1 次 印刷
“Epa =" 4,600
统一 书号 : 18119-1083 = et: (FH) 0.6475

1 酶 的 定义 和 特性 pe wesoosocoo。
2. 酶 活力 的 定义 和 表示 方式 pe ee
Re Jib Ue ee
4. 测定 酶 活力 的 注意 点 oo oo oosoosoeos。ooooosooo。o。
ee
。 醇 脱 氢 酶 (ADH) (EC 1.1.1.1) correceeeeeereceeeseeeeeeeeeeenes
. FLBRARALBECLDH) CEC 1.1.1.27) pe
2 se RRS Be (MDH) (EC 1.1.1.37) ……………… : ccccccccece
. 葡萄 糖 -6- 磷 酸 脱氧 酶 (G-6-PDH) (EC 1.1.1.49)………
。 葡萄糖 氧化 酶 (GOD) (EC 1.1.3.4) .9
. 3- 磷酸 上 冉 油 醛 脱 氨 酶 CEC 1.2.1.12) pp
. BEAL BE CXOD) (EC 1.2.3.2) ps
. L-gERSeBSCL-AOD) (EC 1.4.3.2) ev
. 卫 - 氨 基 酸 氧化 酶 (D-AOD) (EC 1.4.8.8) cerereeeeeeeeeeees
、 胺 氧化 酶 (MAO) CEC 1.4.3.4) ps
本 (OURICASE7) (EC 1.7.3.3)-+:cccececsceeeeeeees
。 过 氧化 氨 酶 (CTS) (CEC 1.11.1.6) ceceesecececeeceeneceeeeees
。 过 氧化 物 酶 (POD) (上 EC 1.11.1.7) .pp
， 谷 天 转氨酶 (GPIT) CEC 2.6.1.2) pp
.已 糖 激酶 ( 卫 K 氏 ) CEC 2.7.1.1) cecceecerseeeeeeeeeeeeeeeeeeeeees
。 琴 酮 酸 激 酶 (PK) CEC 2.7.1.4077
， 肌 酸 激酶 (CE) CEC 2.7.3.2) cereeeseserseceneeeecseeeeenenees

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18. WEAR MECEEC. 3.1.1.3) ----0--s0-tsstsesresestencsneseatncdeneaneanaa 51

19. 乙酰 胆 碱 酯 酶 (AChE) CEC 3.1.1.7) ceerececscecceceeeceeees 54
20， 果 胶 酶 (EC 3.1.1.11) pe 57
21.， 碱 性 磷酸 酶 (了 C 8.1.3.1) -crccereerecececenceececccececsecerccsaene 60
22， 琶 性 磷酸 酶 (EC 3.1.8.2) .pe 62
23， 磷 酸 二 酯 酶 工 (了 C 8.1.4.1) cereessesseeeeeererteettseeeeeees sree 65
24， 脱 氧 核 糖 核酸 酶 I(DNase I) (EC 3.1.21.1) cere 67
25. 核糖 核酸 酶 TI (RNase Ti) (EC 3.1.27.3 刀 pp 69
26. 核糖 核酸 酶 A(RNase A) (CEC 3.1.27.5)……p 72
QT. a-YE RS BE CEC 3.2.1.1) ee 74
28. BYERS RECEC 3.2.1.2) .pe 76
29. £F HEA Bis CEC BDL.) ceecererceeeceeceeeeteeerseceesrcsseceeseuees 79
30. YAPARECEC 3.2.1.17) pp 8?
31. 神经 氨 酸 苷 酶 (唾液 酸 酶 )(EC 3.2.1.18) pp 4
32.，RB8- 葡 萄 糖 醛 酸 苷 酶 (EC 3.2.1.31) pp 87
33. 透明 质 酸 酶 (HAse) (EC 32 .1.35) .pp 89
34. 氢 肽 酶 ( 胞 浆 ) CEC 3.4.11.1) ，……… ee 92
35. 氢 肽 酶 (微粒 体 ) «CEC 3.4.11.2) np 94
36. RUBE A (CPA) (EC 3.4.17.1)--+-->-:seeereeee 97
37. MUABEB (CPB) (CEC 3.4.17.2)--++-0cen-smeeneeee see 99
$8. PRREFALS SBECEC 3.4.91.1) -cveescocncesecasac tess enas came 101
SO. FREE BECEC 3.4.91.4) -+0:c.cccsccnssens.esanenyeeeneneaae 104
40. URE RE CEC 3.4.91.8) «+: +000.ssnssonsenctesseeeneneeeeaanl 107
41. 枯草 杆菌 蛋白 水 解 酶 (EC- 3.4.21.14) .0 110
2 木瓜 蛋白 梅 K 上 EEC: 8.4:22.9) Tora raeE seca 119
从。 上 朋 蛋白 酶 (AD)(EC 3.4;23.1》 sees TEN ore ee 114
44, FRICMECTRRS) (EEC. 3.5.1.5) 区 117
45.) SERB CEC .3.5.:1.14) 0 --0000s.dl.:100s lease 119
O65.” FASE BAES CEC :35 125

47. 配给 梅 (ALD7 (EC 4.1.2.13) -cccecececeectestseesetereeees 198
48. 柠檬 酸 合成 酶 (CS) (CEC 4.1.3.7) crreeeeeeeeteeereeeeeeeeees 131
49. PRABBFRE(CHL) CEC 4.9.1.1) sererrsereesseteeeeeseeneeeee: 133
50.， 胰 蛋白 酶 抑制 剂 (TPI) .pp 135
51. 辅酶 II(NAD)J (DPN) ppp 138

52. 还 原 辅酶 I(NADH) (DPNH) pp 141
53. 辅酶 II(INADP) CT PN) cecetsceceseteseeeeseeeeeeeeeeeeees 143
54. JRHBMEIIT (NADPH) (TPNH) coveeeesesececeeeeses 146
55. SUL PRR ERED (HUHRBE) (TPP) -oeseeeeeeeeseeees 149
三 、 附 录 pe 152
(—) BSE PNET RE nnn eee cnceceseessnncncccceecsesnetsnses 152
(二 ) 常 用 缓冲 液 的 配置 pe 155
四 、 英 文 索引 pe 163

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缩写

光 吸 收

乙酰 胆 碱 酯 酶

Bia as

腺 苷 二 磷酸

Bah

腺 苷 -磷酸

PRE = BERR

N- Fi 酰 - 工 - 精 氢
酸 乙 酯

N- 葵 A 酰 - 工 - 酷 A
酸 乙 酯

TRERET BS

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羧 肽 酶 人

KES B

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卫 -氨基酸 氧化 酶

脱氧 核糖 核酸

脱氧 核糖 核酸 酶

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EDTA ZORRO

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GAPDH HihR-3-# Be Bi
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GOD 葡萄 糖 氧 化 酶

G-6-P 葡萄糖-6- 磷 酸

C-6-PD 互 葡萄 糖 -6- 磷 酸 脱 氢
Bg

GPT BA AB

GTP 鸟 背 三 磷酸

HAse 透明 质 酸 酶

HK Ce eas

L-AOD 工 -氨基 酸 氧 化 酶

LAP Fe BARA KB

LDH FLEAS

MAO FRAC BG

MDH Sf RRA BS

NAD Fa MS I

NADH iG RAEI

NADP ”辅酶 工

NADPH 还 原 辅酶 开

PK 丙酮 酸 激酶

POD 过 氧化 物 酶

RNA 核糖 核酸

RNase 核糖 核酸 酶

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TAME

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TPI
TPN
TPNH

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三 硝 基 茉 磺 酸

胰 蛋 白 酶 抑制 剂

辅酶 工

还 原 辅酶 工

TPP

Tris
UTP
XOD

氧化 硫 胺 素 焦 磷 酸 未
( 辅 送 酶 )

三 产 甲 基 毛 基 甲烷

尿 背 三 磷酸

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1. 酶 的 定义 和 特性

酶 普遍 存在 于 生物 体 (动物 、 植 物 和 微生物 ) 中 , 是 生物 体
内 起 催化 作用 的 蛋白 质 。 由 于 酶 的 存在 使 生命 赖 以 存在 的 很
多 化 学 反应 能 在 生理 条 件 (常温 、 常 压 和 中 性 的 环境 ) 下 迅速
完成 。 酶 具有 一 般 众 化 剂 的 共性 ， 即 只 改变 化 学 反应 达到 平
衡 的 时 间 , 而 不 改变 平衡 点 。 此 外 , 酶 还 有 其 本 身 的 特点 : (1)
酶 有 很 高 的 催化 效率 。 生 物体 内 的 许多 化 学 反应 ， 在 体外 没
有 了 酶 存在 的 情况 下 , 几乎 都 不 能 进行 , 然而 在 体内 有 酶 催化 的
情况 下 可 以 在 常温 、 常 压 和 中 性 的 环境 下 迅速 完成 。 例 如 : 碳
酸 酬 酶 催化 水 和 二 氧化 碳 的 水 合 反应 ， 在 一 秒 钟 内 一 个 碳酸
BERGA} FAT WE 105 个 二 氧化 碳 分 子 与 水 分 子 发 生 水 合 反
应 , 其 效率 之 高 是 惊人 的 。 (2) 酶 具有 高 度 的 专 一 性 。 一 种 酶
只 能 作用 于 某 一 种 底 物 或 某 一 类 底 物 。 例 如 : 脲酶 只 能 作用
FR, 其 他 化 合 物 一 概 不 能 作用 ， 这 是 绝对 专 一 性 。 此 外 , 还
有 作用 于 某 一 类 化 合 物 的 。 例 如 : 工 -氨基 酸 氧化 酶 ， 它 能 作
用 于 所 有 工 -型 的 氨基 酸 , 但 不 能 作用 于 D- 型 的 氨基 酸 , 这 叫
做 族 专 一 性 。(3) 酶 作为 一 种 蛋白 质 , 它 具 有 一 般 蛋白 质 的 共
HE, DUA AAEM, RRR BR, BI. APLAR

和 恋 性 剂 等 都 会 引起 酶 的 变性 。 酶 变性 以 后 ,生物 活性 丧失 ，
因而 在 制备 和 保存 酶 制剂 时 要 特别 注意 这 一 点 。 在 使 用 酶 时
_ 般 首先 要 了 解 一 下 酶 是 否 已 经 失 活 ， 这 就 需要 对 酶 进行 洒
力 测定 。

2， 酶 活力 的 定义 和 表示 方式 ”

天 多 数 酶 都 不 象 常用 的 无 机 或 有 机 催化 剂 那样 用 百分比
或 克 分 子 来 表示 酶 的 含量 。 酶 存在 的 量 是 通过 测定 它 所 催化
的 反应 速度 来 定量 的 , 在 适当 条 件 下 , 酶 所 催化 的 反应 速度 正
比 于 酶 量 。

酶 量 常用 酶 活力 单位 表示 。 所 请 酶 的 活力 单位 《简称 酶
单位 U), 就 是 酶 在 一 定 的 作用 条 件 下 ， 单 位 时 间 内 作用 物 的
消耗 量 或 产物 的 生成 量 。 酶 含量 可 以 用 每 克 酶 制剂 或 每 毫升
酶 制剂 含有 多 少 酶 单位 来 表示 (U/g wk U/ml),

在 实际 测定 中 , 酶 单位 往往 与 所 用 的 测定 方法 、 底 物 的 特
性 和 反应 条 件 等 因素 有 关 ， 因 此 对 同一 种 酶 由 于 采用 不 同 的
测定 方法 而 有 不 同 的 单位 。 为 了 避免 混乱 ， 经 过 各 国 科 学 家
的 努力 已 使 各 种 酶 的 活力 单位 得 以 标准 化 。1959 年 国际 生物
化 学 协会 酶 学 委员 会 和 国际 纯化 学 与 应 用 化 学 协会 临床 化 学
委员 会 接受 了 Racker 等 人 的 建议 ， 采 用 了 “国际 单位 表示
酶 活力 。 “国际 单位 ?的 定义 为 : 在 25°C, 以 最 适 底 物 浓度 , 最
适 缓冲 液 的 离子 强度 , 以 及 最 适 PH 值 等 条 件 下 , 每 分 钟 能 众
化 消耗 一 征 克 分 子 (w mole) 底 物 的 酶 量 定 为 一 个 活力 单位 。
由 于 制订 了 “国际 单位 >， 就 有 可 能 将 各 种 酶 制剂 或 来 源 不 同
的 同 种 酶 制剂 加 以 比较 。

为 了 比较 酶 制剂 的 纯度 , 往往 采用 比 活力 作为 一 个 指标 ，
所 谓 比 活力 是 表示 每 毫克 酶 蛋白 所 具有 的 酶 活力 单位 ,用 Q/

— 2 —

mg 蛋白 表示 。 比 活力 是 酶 的 生产 和 研究 过 程 中 经 党 使 用 的
基本 数据 ， 用 来 比较 每 单位 重量 酶 蛋白 的 催化 能 力 。 比 活力
越 高 , 表示 酶 越 纯 。

Katal (Kat) 单 位 是 1972 年 国际 酶 学 委员 会 推荐 的 一 个
”新 的 酶 活力 国际 单位 。1 Kat 单位 定义 为 :在 最 适 条 件 下 , 每
秘 钟 能 使 1 mole 底 物 转化 的 酶 量 ; 同样 能 使 1 micromole 底
物 转化 的 酶 量 为 microkatal (NA Kat) 单位 ;， 以 此 类 推 ， 有
nano Katal (n Kat) 和 Pico Katal (p 开 at) 等 。

Kat 单位 与 国际 单位 的 换算 如 下 :

1 Kat=1 mole/ 秒 =60 mole/4}

=60x10%u mole/ 分 =6x107U

1 U=ip mole/$} =m mole/#>

=e Kat=16.67n Kat

3, wm B™

“ 酶 的 活力 是 用 酶 所 催化 的 化 学 反应 的 速度 来 表示 的 ， 因
此 测定 酶 活力 实际 上 就 是 测定 为 酶 所 催化 的 化 学 反应 的 束
度 。 与 一 般 催化 反应 相同 ， 酶 促 反应 速度 可 以 用 单位 时 间 内
底 物 的 减少 或 产物 的 增加 来 表示 。 酶 反应 的 过 程 若 用 产物 生
成 和 时 间 的 关系 作 图 〈 图 1)， 反 应 速度 即 为 图 1 中 曲线 的 余
率 ; 在 反应 开始 时 反应 速度 可 以 保持 一 定 值 , 可 是 随 着 时 间 的
增加 ; 反应 速度 逐渐 降低 , 造成 这 一 现象 的 可 能 因素 很 多 , 如 :
底 物 浓度 的 降低 和 产物 浓度 的 增加 而 加 速 了 逆反 应 的 进行;
产物 的 抑制 作用 ; 酶 的 失 活 等 等 。 因 此 为 了 准确 表示 酶 活力 ，
” 就 必须 采用 图 工 中 曲线 的 直线 部 分 即 反应 的 初速 度 。 在 一 定

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条 件 下 , 只 有 用 初速 度 表 示 反 应 速度 时 , RAT
能 有 正比 例 的 关系 。

图 2 a 是 不 同 酶 量 的 酶 反应 过 程 曲线 ， 图 8, b 是 不 同时
间 的 反应 速度 和 酶 量 的 关系 曲线 。 可 以 看 出 ， 只 有 在 反应 的
初速 度 阶段 ,反应 速度 才 正 比 于 酶 量 , 因此 只 有 用 初速 度 卖 示
了 活力 才能 准确 地 代表 酶 制剂 中 酶 的 含量 。 但 是 并 不 是 所 有 ，
情况 下 用 初速 度 表示 酶 单位 都 一 定 正比 于 酶 量 的 ， 例 如 图 3
中 举 出 的 是 属于 在 初速 度 阶段 速度 与 酶 量 不 成 正比 的 例子 。
因此 , 为 了 得 到 正确 的 测量 结果 , 一 般 取 三 个 酶 浓度 来 测定 反
应 初速 度 。 以 初速 摩 对 酶 浓度 作 图 , 如 果 是 线性 关系 , 这 说 明
你 选择 的 条 件 是 合适 的 , 这 样 计算 得 到 的 酶 活力 才 正 确 ; 如 果
初速 度 与 酶 浓度 不 成 线性 关系 ， 那 么 酶 样 必 须 进一步 稀释 或
找 其 他 原因 。 总 之 在 后 面 详 酶 的 测定 中 酶 样 必 须 稀释 成 “ 适
Ye RE”, 这 个 “适当 浓度 ”的 含意 即 在 这 个 浓度 范围 内 取 三 个
隆 浓 度 测 得 的 反应 速度 和 酶 浓度 成 正比 。

在 实际 测定 过 程 中 , 为 了 保证 测 得 的 是 初速 度 , 往往 债 底
IHC E FEA Ae, 把 酶 完全 他 和 。 这 样 整个 酶 反应 对 于 底 牺 来 说

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0 1 2 和 “请 单位

2 不 同 酶 量 的 酶 反应 过 程
a. 不 同 酶 量 的 酶 反应 过 程 曲 线 ; b, 反应 速度 与 酶 量 的 关系 曲线

是 零 级 反应 ， 而 对 于 酶 来 说 是 一 级 反应 。 这 样 测 得 的 初速 度
可 以 比较 可 靠 地 反映 酶 的 含量 ， 但 是 对 某 些 会 受过 量 底 物 抑
制 的 酶 就 不 能 这 样 做 ， 因 此 底 物 也 要 选择 最 合适 的 浓度 。 一
MUL, 测 酶 活力 时 , 酶 要 稀 一 些 , 底 物 要 适当 地 过 量 一 些 。

-一 5 一

i 浓度
图 8 酶 活力 和 酶 浓度 的 关系

A. 表示 正常 的 反应 曲线 ; B. 有 两 种 情况 : 〈1T) 以 非 线性 部 分 来 计算

酶 活力 ; (2) 梅 制剂 中 含有 酶 的 抑制 剂 ; C. 酶 制剂 中 含有 激活 剂 ; 王 。

底 物 不 够 ， 在 反应 过 程 中 耗 尽 ; E. 体系 中 存在 着 一 定量 的 失 活 剂 如
重金 属 离子 等

4. 测定 酶 活力 的 注意 点 “
(1) 必须 将 影响 酶 友 应 速度 的 因素 恒定 在 最 适 当 的 数值

影响 酶 反应 速度 的 因素 很 多 ， 前 面谈 到 的 底 物 浓度 是

个 因素 , 温度 对 反应 速度 影响 也 很 大 , 酶 促 反 应 速度 的 温度 系
数 之 10% /1C 即 温度 变化 10°C 就 要 引起 反应 速度 测定 申 的
100 匈 的 误差 。 所 有 的 酶 的 活力 都 受 pH 影响 , 因此 都 要 选择
最 适当 的 pH 范围 ， 某 些 酶 的 PH wR. PH, 温度
等 反应 条 件 对 底 物 浓度 的 选择 也 有 影响 。 总 之 ， 应 将 这 些 因
素 综合 考虑 , 选择 最 佳 测定 条 件 。 ss a

(2) 86 要 测 准 酶 活力 ， 扣 除 正 确 的 空 自 值 是 重要
的 。 空 白 值 往往 通过 底 物 中 杂质 、 酶 制剂 中 杂质 或 其 他 参 加
反应 的 试剂 引起 的 。 如 时 测定 过 程 中 要 终止 反应 于 那 辫 窒 自
的 做 法 可 先 加 终止 反应 的 试剂 后 加 酶 ， 这 样 扣除 的 空白 较 全
面 。 如 果 测 定 中 不 终止 反应 , 则 可 做 多 种 空白 , 其 他 试剂 都 和

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样品 管 相 同 ， 只 缺 底 物 的 “ 酶 空白 ?或 其 他 试剂 都 和 样品 管 相
同 而 只 缺 酶 样 的 “ 底 物 空白 ?等 等 , 这 些 空白 都 应 扣除 , 但 在 某
些 空白 值 很 小 的 情况 下 可 忽略 不 计 。

(3) 酶 波 度 的 选择 “通常 测定 时 , 酶 样 要 充分 稀释 , 使 反
应 很 慢 地 进行 , 这 样 有 利于 测定 反应 速度 , 反应 速度 慢 可 使 过
程 中 底 物 浓度 的 变化 小 到 可 以 忽略 不 计 。 酶 样品 稀释 到 怎样
的 程度 才 叫 适当 呢 ? 取 3 个 不 同 酶 量 测 得 的 初速 度 和 酶 量 之
间 为 正比 关系 , 这 样 的 酶 浓度 范围 就 是 适当 的 。

(4) 偶 联 酶 友 应 ”第 一 个 酶 反应 产物 为 第 二 个 酶 反应 的
底 物 , 这 样 两 个 酶 系统 在 一 起 反应 即 为 酶 的 偶 联 反应 。 如 果 第
二 个 反应 过 程 中 引起 参与 反应 的 物质 发 生 光 吸收 的 变化 〈 例

ty NAD #1 NADP KARR NADH #7 NADPH yA 74b),
则 第 一 个 反应 速度 的 测定 就 可 以 用 第 二 个 反应 中 引起 的 光 吸
收 的 变化 来 表示 ， 利 用 偶 联 反应 简化 测定 工作 是 酶 分 析 中 常
用 的 手段 。 例 如 :
下

GP
FAA + 0 fl RF AR + SR iB Bs

Am + NADH+ Hap +NADt (2)

以 上 两 个 反应 如 果 偶 联 起 来 ， 第 一 反应 中 的 GPT BARA

酶 ) 就 可 以 用 紫外 分 光 光 度 法 来 测定 其 活力 ,但 是 有 一 个 必要

— 的 前 提 , 第 二 个 反应 速度 必须 比 第 一 个 反应 快 很 多 倍 ， 以 玉 ;

表示 第 一 反应 的 反应 速度 常数 , 玉 ; 表示 第 二 个 反应 的 反应 速

度 常 数 ， 理 论 上 讲 当 天 :: 开 ;=1000:1 时 ， 测 得 的 速度 才能 真

正 表 示 第 一 反应 的 速度 ， 当 K,=1000 Ki 时 ， Vary =0.993
YY 第 -反应 则 误差 为 0.796。

5) 杂 酶 分 析 有 些 很 难 提纯 的 酶 制剂 往往 会 有 一 些 杂

酶 存在 。 对 于 特定 的 实验 要 求 , 某 些 杂 酶 可 能 有 害 , 另 一 些 杂

一 了 一

酶 可 能 无 害 或 害处 很 小 ， 因 此 只 要 杂 酶 不 影响 实验 的 进行 或
把 酶 量 控制 在 一 定 的 范围 内 使 用 时 , 杂 酶 的 影响 不 显著 , 这 样
的 酶 制剂 还 是 可 以 用 的 。 这 就 要 求 对 酶 进行 杂 酶 的 分 析 ， 一
般 进行 杂 酶 分 析 主要 是 测定 一 些 有 害 杂 酶 的 含量 。 例 如 : he

毒 磷酸 二 酯 酶 制剂 , 往往 含有 一 些 磷 酸 单 酷 酶 , 因此 在 测定 二

酯 酶 活力 后 ， 一 般 也 测 一 下 制剂 中 磷酸 单 酯 酶 的 活力 。 这 两
种 数据 都 表示 酶 的 质量 情况 。 杂 酶 含量 一 般 也 以 每 蓝 殉 酶 蛋

白 含 有 多 少 活力 单位 来 表示 ， 也 有 人 用 相对 于 主 酶 活力 的 百

It FE ZEN HY 0

(6) 其 他 “测定 酶 活力 的 反应 除 特 别 规定 外 ， 一 般 在 ，

25°CHE(T, 酶 样 应 放 在 4°C 或 更 低温 度 保存 。 反 应 之 前 , 酶 和

底 物 应 预先 在 反应 温度 下 平衡 ， 这 样 使 试 样 一 混合 即 达到 反

应 温度 。 实 验 中 应 全 部 用 重 著 水 ， 和 避免 其 他 离子 对 酶 反应 的
影响 。

参考 xX 献

[ 1 ] Dixon, M. and Webb, E.C. (1979), Enzymes, 8rd ed.

[ 2 ] CRC Handbook of Biochemistry and Molecular Biology, 3rd
ed.

[3] Plummer, D.T. (1978), An Introduction to Practical Bioche-
mistry, 2nd ed. |

[ 4] Bergmeyer, H. U. (1963), Methods of Enzymatic ae
Academic Press, N. Y。

:
|
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二 、 各 秋 得 的 活力 测定

1. BF Be a Be
AT.COHOL DEHYDROGENASE (ADH)

EC 1. 1. 1.1 Alcohol: NAD* oxidoreductase

和 催化 反应

ADH
CH,CH,OH + NAD*——CH,CHO+NADH+Ht+

存在 和 性 质

豆 脱 氢 酶 在 哺乳 动物 的 组 织 内 , 以 肝 和 肾 中 含量 较 高 ; 在
微生物 中 以 酵母 中 含量 最 丰富 ,一般 从 面包 酵母 提取 。

每 个 醇 脱 氢 酶 分 子 含 有 四 个 NAD* 分 子 和 四 个 锌 原子
及 约 三 十 六 个 游离 的 琉 基 。

[溶解 度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 , 一 般 深 解 于 PHY.5
的 0.01M 磷酸 盐 缓 冲 液 。

[稳定 性 ] 此 酶 的 冷冻 干粉 在 一 20"C 贮 存 , 可 稳定 一 年 。
于 粉 状态 加 入 蔗糖 可 增加 其 稳定 性 ; 溶液 状态 加 入 0.1% 4
SLs ABE BBY HS AS FE PES

(AFH) 148, 000 (itt #2 BEBE); 80, 000 (BF)

(#36 pH) 7.90.05M Na‘)

[等 电 点 ] PH5.4( 酵 母 ); pH 4. 0( 鼠 肝 微 粒 体 )

pH8.5( 鼠 肝 细 胞 浆 ); PH 5. 6( 忌 肝 线 粒 体 )

[激活 剂 ] «Nat

[抑制 剂 重金属 离子 .NADP、ADP、ANME

[光谱 性 质 ] ALm =12.6(1 cm 36%) (BP)

活力 测定

[原理 ] ” 醇 脱 氢 酶 催化 乙醇 氧化 为 乙 醛 ， 同 时 辅酶 工 被
还 原 ， 还 原 辅酶 工 在 340nm 处 有 一 吸收 峰值 , FB Phd ETE
度 计 测定 反应 过 程 中 340nm 处 光 吸 收 的 增加 , 以 还 原 辅酶
在 340nm 处 克 分 子 消光 系数 计算 出 每 分 钟 还 原 箱 Wit 1 Et AY
变化 来 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 25°C, 每 分 钟 能 催化 产生 1 微克 分 本 了
物 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

® JEWRAR: 95% CBRAR.

@ 0.05M pH8.8 焦 磷 酸 盐 缓冲 液 。

@ 0.01M pH7.5 MME AA 0.1% FILA
GA 4’C).

@ 0.015 M Hyae 1 YAM.

© 待 测 酶 溶液 ， 将 待 测 的 酶 用 试剂 @@ 深 解 , Ir Se
当 的 浓度 .

[测定 方法 )

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 文 试管 ， er Te
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选
择 波 长 为 340nm, 用 icm 光 径 的 比 色 杯 测 定 光 吸 收 值 : 以 重

Da

- 有
aeuagaiE nites. -

;

aii ait tt me i ee So

步 RR 22 A‘ (ml) | Fda Gal)

1. 加 pPH8.8 的 焦 磷 酸 盐 缓冲 液 1.40 1.30
2. 加 底 物 溶液 0.10 0.10
5. jm 0.015 M 辅酶 工 溶液 1.50 叶 1.50
4 迅速 加 入 待 测 酶 溶液 , 立即 混 匀 并 记 时 一 Teg

FR AK BE IE FEW CB 0 点 , HE AAS PRE EK CA),
共 读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出
每 分 钟 A 的 增加 值 CAA/ 分 ) 为 人 Askionm 人 /分 AAs ty AAAs/ 分 o
Gr)
AAs 4onm/ 4

AAt/M8= 6 "59x me 栈 /ml BSW
还 原 辅酶 工 在 340nm 处 元 分 子 消光 系数 为 6.22 x 108,
应 用 范围 生化 分 析 和 生化 研究 。

$ # x @

Vallee, B.L. and Hoch, F.L. (1955), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S,

41, 327.

2. FL PR ft A
LACTATE DEHYDROGENASE (LDH)

EC 1.1.1.27 L-Lactate: NAD* oxidoreductase

催化 反应

ae
pHs .8~9.8
Lat + NADt
pH7.4~7.8

LDH

aisimth +NADH+H*

存在 和 性 质
引 酸 脱 氮 酶 存在 于 微生物 和 很 多 哺乳 动物 的 组 织 中 ， 克
其 在 心肌 和 骨骼 肌 中 含量 较 高 。 它 有 五 种 同 功 酶 都 是 由 两 各
类 型 亚 基 所 构成 的 四 聚 体 。
[溶解 度 ] 溶解 于 水 或 稀 缓冲 液 。
[稳定 性 ] ”此 酶 结晶 悬浮 于 3.2M, pH7 REP, 在
4C 贮 存 , 不 要 冰冻 , 可 稳定 一 年 。
(FH) 132, 000( 免 肌 ); 135, 000( 猪 心 )
(#36 pH) 8.8~9. 8 (IMI WZ); 7.4~7. 8 GH TREY)
[等 电 点 ] pH4.5~4.8
[抑制 剂 ]】 重金 属 离子 、 稀 碘 液 、2， 4 ARSE AE A
36 FARR. |
CME) ALF =14.9C1cm 36) FD)
ALS. =12.6C1cem 光 径 )( 免 肌 )
活力 测定 | |
[原理 ] FLARE ELT RE LM, 同时 使 还
原 辅酶 工 氧化 为 辅酶 工 。 还 原 辅酶 工 在 340nm 处 有 一 吸收 峰
值 。 一 般 以 340nm 处 光 吸 收 值 的 减少 表示 酶 活力 。

[单位 定义 ] 在 2"C、PH7. 沁 每 分 钟 能 催化 生成 1 微

克 分 子 辅酶 工 的 酶 量 为 1 单位 。
(试剂 ]
® 底 物 溶液 : 0.02271 WHR.

@ 0.10M pH7.4 磷酸 缓冲 液 。

@ 0.006 M 还 原 辅酶 工 溶液 。

® 待 测 酶 液 : 用 试剂 包 稀 杰 成 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紧 外 分 光 光 度 计 ， 选

步 RR 空白 管 (m1) | aa‘ (ml)

1. 加 磷酸 缓冲 液 1.00

2. 加 还 原 辅酶 工 溶液

3. 加 底 物 溶液

4. NHR

6. 迅速 加 入 待 测 梅 溶液) 立即 混 匀 并 记 时

择 波 长 为 340nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 : 以 重
燕 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (A), 共
读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每
分 钟 A 的 减少 值 (AA/ 分 ) 为 AA34onm/3 x AAg)4— AAs 46

Gr)

| A 340nm/
M/s same mat EE

还 原 辅酶 工 在 340nm 处 克 分 子 消光 系数 为 6.22x 10°,

应 用 范围

用 于 测定 工 ( 七 ) 乳 酸 和 丙酮 酸 , 也 可 和 其 他 酶 偶 联 测定 。

参考 X wm

Reeves, W.J. and Fimognari, G. M. (1963), J. Biol. Chem. 238,
3853.

3, SEAR Be Ait a Ba
MALATE DEHYDROGENASE (MDH)

EC 1.1.1. 37 L-—Malate: NAD* oxidoreductase

催化 反应

D

上 -苹果 酸 盐 十 辅酶 一 人 草本 CARER + ME I

存在 和 性 质

苹果 酸 脱 气 酶 广泛 存在 于 动 植物 中 , 一 般 从 猪 记 中 提取 。
此 酶 有 两 种 形式 : 一 种 是 线粒体 MDH, 一 种 是 细胞 质 MDH,
每 克 分 子 酶 含有 2 克 分 子 辅酶 工 和 14 克 分 子 游离 的 琉 基 。

(溶解度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

(稳定 性 ] 此 酶 的 冷冻 干粉 在 4°C 贮存 一 年 不 失 活 ; 此
酶 巧 浮 于 70 多 tt FRE REAR ER, 在 5°C 贮存 二 年 不 失 活 ; 在
Ue i i PAE, 加 入 白 蛋 白 可 增加 酶 的 稳定 性 。

(AFA) 70, 000( 猪 心 ); 66, 300 RUF)

[最 适 PH) 6.9( 顺 向 反应 );7.4( 逆 向 反应 )

(FHA) pH6.1~6.4

[抑制 剂 ] AE EIER, YK REA BEZR, Bat
MR 1, 10- 邻 啡 罗 啉 *#。

hia) 磷酸 根 、 砷 酸根 * 和 锌 离子 #。
ei) A3 和 ana=4:5(1cm 光 径 ) GRD)
Axism /Azgonm=1.6~1.7
活力 测定
【原理 ] 苹果 酸 脱 氢 酶 能 催化 草 酰 乙 酸 生 成 蔷 果 酸 ， 同
时 使 还 原 辅酶 工 氧 化 为 辅酶 工 。 一 般 以 还 原 辅酶 工 在 340nm
处 光 吸 收 减少 的 数值 表示 酶 活力 。
[单位 定义 】 在 35"C、pHT7.4， 每 分 钟 能 催化 产生 1 工 微
克 分 子 辅 酶 工 的 酶 量 为 1 单位 。
【试剂 ]
底 物 溶液 : 0.000M 草 酰 乙酸 (用 试剂 包 新 鲜 配 置 )。
@ 0.10M pH7.4 磷酸 缓冲 液 。
@ 0.006M 还 原 辅酶 工 溶液 : 用 试剂 包 新 鲜 配 置 。
外 MBAR. 用 试剂 包 稀 释 成 适当 浓度 。
[测定 方法 ]
在 25°C 保温 条 件 下 ， 取 二 支 试 管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入

步 BR 空白 管 (ml) | ah (ml)
1. 加 0.10M pH7.4 磷酸 缓冲 液 2.80 i 2.70
2. 加 0.006M 还 原 辅酶 工 溶 液 0.10 0.10
3. smn 一 - 0.10
4. sn A HIME 立即 混 匀 并 记 时 Mey ir i 0.10

* 仅 对 线粒体 中 MDH 有 效 。

试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选

择 波 长 为 340nm, 用 1cm 光 径 的 比 色 标 , 测定 光 吸 收 值 : 以 重

蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , SLED HERS AERA), te

i 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每

分 钟 A 的 减少 值 (AA/ 分 ) 为 AAasionm/ 分 三 全 A 尖 分 一 全 人 As/ 分。
计算 ]

aay ai A A; 40nm/4}
H/MS= 6 59 xmg ig/ml RES

还 原 辅酶 1 ZE 340nm She 3} FER BO 6.22 10%
应 用 范围
广泛 用 于 生物 代谢 过 程 中 酶 偶 联 测定 。

S$ 5 文 献

Mehler, A. H. et al. (1948), J. Biol. Chem. 174, 961.

A. 葡萄 糖 -6- 磷 酸 脱氧 酶
GLUCOSE-6-PHOSPHATE DEHYDROG-
ENASE (G-6-PDH)

EC 1.1.1.49 3a-Hydroxysteroid: NAD(P)* oxidoredu-
ctase

催化 反应

G-¢-PDH
D-G-6-P+NADP* =~ 6- 磷 酸 葡萄 糖 酸 内 栈
+NADPH-+ H+

存在 和 性 质
葡萄 糖 -6- 磷 酸 脱氧 酶 广泛 存在 于 动物 组 织 和 微生物 中 ，
一 般 从 啤酒 酵母 中 提取 。
(溶解度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。
(稳定 性 ] ”此 酶 的 冷冻 干粉 在 4"C 贮存 可 稳定 六 个 月 ，
其 结晶 悬浮 于 3.2M PH6 硫酸 铵 溶液 ，4"C 贮存 , 可 稳定 几
个 月 。
[分 子 量 ] ”212, 000( 醇 母 )
[最 适 PH] 了 .8( 以 NAD 为 辅酶 ), pH>8.5( 以 NADP
为 辅酶 )
(等 电 点 】 PH4.5
[激活 剂 ] 5 一 10m M Mg** Cat*+ Nat Kt
【抑制 剂 ] 五 8 一 、 高 浓度 Mg++、 其 他 二 价 离子 .ADP、
ATP GTP UTP 等 。
OG HET) «ALF, um=11.5(1cm 光 径 )
(Leuconostoc mesenteroides)
活力 测定
【原理 ] 该 酶 能 催化 葡萄 糖 -6- 磷 酸 生 成 6- 磷 酸 葡萄 糖
RAR, FN TC 还 原 为 还 原 辅酶 工 。 还 原 辅酶 开 在
340nm 处 有 一 吸收 峰值 。 一 般 以 340nm 处 光 吸 收 值 的 增加
表示 酶 活力 。
(单位 定义 ]】 在 25°C, 每 分 钟 能 催化 生成 1 微克 分 子 还
原 辅酶 的 酶 量 为 单位 。
(试剂 ]
© 底 物 溶液 : 0.10M 葡萄 糖 -6- 磷 酸 钠 盐 ( 用 重 蒸 水 配
置 )。
@ 0.20M pH8.5 Tris 缓冲 液 。

@ 0.10M 氯化镁 洲 流 。

@ 辅酶 工 溶液 ， 每 ml AWS HM) 4.0
mg。

© 待 测 酶 溶液 : 用 重 蒸 水 稀释 到 适当 浓度 。

[测定 方法 J

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试 管 ， 按 下 表 操 作 步 虽 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选

空白 管 (m1) | 样品 管 (ml)

1. 加 ice 0.50 0.50
2. 加 氧化 镁 溶液 i: 0.30 0.30
3. 加 辅酶 IT Yay 这 ii 0.30 0.30
4. 加 重 蒸 水 时 1.80 1.70
5 .加 底 物 溶液 一 - 0.10
6. 迅速 加 入 待 测 酶 溶液 , 立即 混 匀 并 记 时 0.10 0.10

择 波长 为 340nm, 用 1cm 光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 : 以
重 蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸收 人 CA)
共 读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出
每 分 钟 A 的 增加 值 (AA/ 分 ) 9 AAs som =A Aggy — AAs) 4,
tH)
A AS ionin (ay

L/S = & 59 xe fii/ml 反应 泥 合法
iA Jit Hj AIL ZE 340nm 处 克 分 子 消 光 系 数 为 6.22Xx 108,

应 用 范围
用 于 测定 葡萄 糖 -6- 磷 酸 和 其 他 偶 联 反应 的 底 物 。

参考 文 献

Glaser, L. and Brown, D.H. (1955), J. Biel. Chem. 216, 67.

5. Fal 2d BH AL Be
GLUCOSE OXIDASE (GOD)

EC 1.1.3.4 g-D-Glucose: oxygen 1-oxidoreductase

HL

B-D-ij #5 + 0, ->D-4j HH R-5—- PRE + HLLO,

FA y=. ABE 2, 6-2 ED RD RE TE AS KARE
氧气 。

存在 和 性 质

葡萄 糖 氧化 酶 存在 于 Penicillium notatum, P. amag-
asakiense, Aspergillus mger 和 蜂 密 中 ， 是 含有 16% BR
分 的 糖 蛋白 , 每 克 分 子 酶 含有 二 克 分 子 的 黄 素 腺 嘎 叭 二 核 背
酸 。

(溶解度 】 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 。

[稳定 性 ] 最 适 稳定 pH 4.0~6.5, CRF CREA
稳定 一 年 。 此 酶 的 水 溶液 在 PH>s8 和 温度 高 于 50°C HAE
下 证 不 稳定 的 ,葡萄糖 的 存在 对 酶 有 保护 作用 。

(AFH) 186,000 (A. niger)

152,000 (P. notatum)

[最 适 PH] 3.5~7.5， 在 pH5.5 有 极 大 值 。

(SHA) pH4.3

(Mie Ag*, Cutt, He** xp ake, D—-Bal Ar fA He Fo
2- 脱 氧 D- 葡 萄 糖 。

(Ben) BRARESIBABEAD),

COL «AL m =16.7cm ER) (A. niger)

Ad* am= 11.9 (icm 光 径 ) (CP. amagasakiense)

光 吸 收 极 大 值 在 278,383, 454nm,

活力 测定

[原理 ] ”葡萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧化 物 酶 偶 联 测定 ， 反应 i
程式 如 下 :

_B-D- 葡 萄 糖 十 0 一 >D- 葡 糖 酸 -3- 内 酯 十 也 .0，

4H,0,+4-45 99 ease 全
PU AS FR 4 SER + 8 HO

ices rules access aioe 本

[单位 定义 ] 在 25°C, pH 7.0, 4) FRM 1 ao
分 子 葡萄 糖 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

© 底 物 溶液 ，1.0M 葡萄 糖水 溶液 。

@ 0.125 M pH7.0 磷酸 缓冲 液 (AG 0.36mM 邻 甲 氧
IER). |

@@ 过 氧化 物 酶 溶液 ，1ml 水 溶液 含 img mae.

® 待 测 酶 溶液 ， 用 水 稀释 至 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25"C MAES, ROME, RVR RMA
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0 ml。 然 后， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选

i ae 空白 管 (ml) | 样品 管 (m17

1. 加 磷酸 缓冲 液

.48
2. 加 底 物 溶液 0.50
8. 加 过 氧化 物 梅 溶液 0.01
4. 迅速 加 入 竺 测 酶 液 ，, 立即 混 匀 并 记 时 0.01

择 波长 为 436nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 : 以 重
燕 水 校正 光 吸 收 到 O 点 , 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 的 光 吸 收 (A)，
共 读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出
每 分 钟 A 的 增加 值 C(AA/ 分 ) FA A yzenm/4 = AA 4 — AAs) 535
[计算 ]
单位 mg 35 Sing weal RRA
PU AS FH ERASE 436 nm 处 克 分 子 消光 系数 为 25.5x

” 108,

应 用 范围

和 过 氧化 物 酶 偶 联 可 以 测定 葡萄 糖 ， 些 方法 可 用 于 诊断
糖尿 病 ; 和 过 氧化 氨 酶 联合 使 用 可 除去 体系 中 的 氧气 或 葡萄
Bio

S$ 4 xX 献

Bergmeyer, H. U. (1970), Methoden der Enzymatischen Analysis
p. 416.

6. SRR MERA
GLYCERALDEHYDE-PHOSPHATE
DEHYDROGENASE

EC 1.2.1.12 D-Glyceraldehyde-3-phosphate: NAD*
oxidoreductase (phosphorylating)

催化 反应

CHO

|
H—c0Hn +H,PO,+NAD*=>

|
CH,O—PO,H,

COO~PO,H,
i w —OFT +NADH-+Ht*
Co_Po 百
存在 和 性 质
3- 克 酸 甘油 醛 脱氧 酶 存在 于 动物 的 肌肉 组 织 、 酵 母 、 其 他
微生物 和 高 等 植物 组 织 中 ， 一 般 从 兔 肌 和 酵母 中 提取 。 它 是
含 锌 的 和 蛋白质 , 1 分 子 的 酶 含有 12~16 AEF,
(溶解 度 】 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 溶液 。 |
(稳定 性 】 JORMA pH 6 时 是 不 稳定 的 , 在
2.5! 硫酸 铵 溶液 中 悬浮 , 0O~4°C 贮存 可 稳定 半年 。
(AFH) 138, 000( 兔 肌 ); 144, 700( 酵 母 )
(#35 pH) 8.6~9.0

(SHA) PH6.5

【激活 剂 ] ” 硫 赶 试剂

Ci) 重金属 离子 、 破 坏 苞 基 的 试剂 .10-4《 i ZR
和 2M HAAR AC A SESE HN hil 1 克 分 子 的 酶 。

OGTR) = ARF m = 10(lcm 光 径 )( 猪 )

Ainu =8.29(1em 光 径 )( 兔 肌 )

活力 测定

ORE) 此 酶 在 催化 3- 磷 酸 甘油 醛 氧 化 的 同时 ， 辅酶 了
被 还 原 为 还 原 辅酶 I, 以 还 原 辅酶 工 在 340nm 处 光 吸 收 值 的
变化 来 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 25C、P 开 8.4 条 件 下 ， 每 分 钟 能 产生 1
向 克 分 子 还 原 辅 酶 工 的 酶 量 为 工 单位 -

[试剂 ]

中 底 物 溶液 : 8.8m M 3- 磷 酸 甘 油 醛 。

@ 30m M p 也 8.4 焦 磷酸 盐 缓 冲 液 。

@ im M 辅酶 工 水 溶液 。

® 170m M 砷 酸 钠 水 溶液 。

© 40m M pH8.4 “4pm yyy. 用 试剂 四 新 鲜 配 置 。

4m M pH 8.4 半 胱 氨 酸 溶液 ， 用 4 试剂 @ 新 鲜 配

© 待 测 酶 洲 液 ， 用 试剂 @ 稀 释 成 适当 浓度

[测定 方法 )

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 按 下 玫 操 作 步 又 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0m1。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选
择 波长 为 340nm， 用 1cm 光 径 的 比 双 杯 ， 测定 光 吸 收 值 ， 以
重 素 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 琢 收 (AJ)，
ALE 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计算 出

步 又 22 (ml) | fia‘ (ml)

1. 加 焦 磷 酸 盐 缓冲 液 | 1.70 1.70
2. 加 40m M SRI |, eee ge
3.- 加 170m M 砷 酸 钠 溶液 of Sate 0.30
4. WHS I eR <a | 0.10 0.10 EB
5. 加 底 物 溶液 | 0.50 : 0.650
6. 加 4m M 半 胱 氨 酸 溶液 ead | 一
¥: 放置 一 分 名 |

cae 4 pega aigiitur tly beg tlw ete) en
8. aA WARS ich | = | 0.10

每 分 钟 A 的 增加 值 CAA/ 分 ) 为 AAassom 分 三 A Ag) 3—AAz/4,

计算)

de at AAs icons
人 mg ¢ 55x me f/m! A

1G Ja ME I FE 340nm 处 的 克 分 子 消 光 系 数 为 6.22X
10°,

应 用 范围

用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。

参考 文 献

Velick, 5S. F. (1955), Methods in Enzymology 1, 401 (Colowick, S. P.
and Kaplan, N.O. ed.) Academic Press, N. Y.

7. 黄 嗓 叭 氧化 酶
XANTHINE OXIDASE (XOD)

EC 1.2.3.2 Xanthine: oxygen oxidoreductase

催化 反应
次 黄 厌 叭 七 0, 一 > 黄 味 叭 十 H2O，
O, jxop
FRR + HO,
存在 和 性 质

黄 味 叭 氧化 酶 存在 于 牛奶 肝脏 、 牛 的 小 肠 和 细菌 中 ， 能
KEG, KR LA WER RR, CRA
原 辅酶 工 也 能 被 其 氧化 。 可 作为 该 酶 电子 受 体 的 有 : 氧气 、 细
胞 色素 CORRAL. PEER, WORMED
提取 。

CARRE) 溶解 于 水 和 稀 缓冲 液 中 。

(稳定 性 ] 于 4"C 贮存 , 活力 损失 不 大 。

[分子 量 ] 181, 000( 牛 奶 )

(最 适 PH]J 8.3

[等 电 点 ] = pH5.3~5.4

[抑制 剂 ] Hg、Ag+*、Cd++、 尿 素 、 wet. 磷酸 根 和 和 氧
离子 。

(稳定 剂 】 水 杨 酸 盐 、 半 胱 氨 酸 、 组 腕 和 维尔 烯 酸 盐 。

活力 测定

[原理 ] ”利用 此 酶 催化 反应 的 最 终 产 物 尿 酸 在 293nm
处 有 特征 吸收 峰 , 以 每 分 钟 293nm 处 光 吸 收 的 增加 来 计算 酶
活力 。

[单位 定义 ] 在 25"C， 每 分 钟 能 催化 分 解 1 微克 分 子 黄
味 叭 的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

@ 底 物 溶液 . 0.15m M 黄 味 叭 水 溶液 。

@ 0.05M pH7.5 磷酸 缓冲 液 。

@ 待 测 酶 溶液 : 用 试剂 包 溶 解 和 稀 杰 至 适当 的 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试 管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选

步 又 | acm) nS (ml)
os 加 磷酸 缓冲 液 2.00 1.90
2. 加 底 物 溶液 1.00 1.00
8. 迅速 加 入 待 测 酶 溶液 ,立即 混 匀 并 记 时 ae | ono

择 波 长 为 293 nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 : 以
重 蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸收 和 A)，
共 读 3 分钟, 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 ，
每 分 钟 A 的 增加 值 (AA/ 分 ) 为 AAzssnm 分 三 AA 玫 分 一 人 As/ 分 o
Tr)
SRO
尿酸 在 293nm 处 元 分 子 消 光 系 数 为 12.3X 关 108。

应 用 范围
FF BE UC BES WLR I ES

S$ = XX 献

{ 1] Massey, V. et al. (1969), J. Biol. Chem. 244, 1682.
[ 2 ] Andrews, P. et al. (1964), Biochem. J. 93, 627.

8. L-seieA1t s
L-AMINO ACID OXIDASE (L-AOD)

EC 1.4.3.2 L-Amino acid: oxygen oxidoreductase (de-
aminating) |

催化 反应
L_-RCHNHIiCOO-TO+H ODS
RCOCOO- 上 +NHT+ 二 H2O，

存在 和 性 质

王 -氨基 酸 氧 化 酶 存在 于 蛇毒 、 免 肝 、 鼠 肾 和 鼠 肝 中 ， 一 般
从 蛇毒 中 提取 。 每 克 分 子 酶 含有 二 克 分 子 的 EAD。

[溶解 度 】 溶解 于 水 和 稀 缓冲 液 中 。

[稳定 性 ] ”结晶 悬浮 于 3.2M pH 的 硫酸 铵 溶液 ， 于
4°C 可 保存 一 年 ; 干粉 在 4"C 贮存 几 个 月 内 不 失 活 。

[分子量 ] 89, 000( 鼠 肾 )

[最 适 pH) 7 一 7.5.

(SH) PH5.2( 蛇 毒 )

[激活 剂 ] Kt

[抑制 剂 ] 芳香 族 羚 酸 盐 、 磺 酸 、 硫 酰胺 。

[光谱 性 质 ] AdZm =9.55Clicm) (RR)

活力 测定

[原理 ] 利用 此 酶 催化 工 - 氨 基 酸 产生 过 氧化 氢 的 反应
和 过 氧化 氢 酶 偶 联 以 释放 出 氧气 的 体积 来 计算 酶 活力 。2 总
分 子 工 -氨基 酸 脱 氮 可 产生 1 区 分 子 氧气 。

[单位 定义 】 在 37"C， 每 分 钟 催化 工 微克 分 子 工 - 亮 氮

酸 脱 氨 的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

@ 底 物 溶液 : 0.10M 工 - 亮 SAMY.

@ 0.20M pH7.8 Tris evi (4p ml 缓冲 液 内 含 2~3
PLT ALAM). ‘j

@ 0.10M 氯 化 钾 溶液 。

@ 待 测 酶 溶液 : 用 试剂 稀释 成 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 37'C 恒温 条 件 下 , 取 一 只 丽 氏 烧瓶 技 下 表 操 作 步 又 加
入 试剂 :

步 ， Om ReaD,
3! Net oe See
1. 加 Tris 缓冲 液 | 1.00
一 一 一 一 一 +
IN AULERE IR | 1.30
ss =n
8. IMRT 7 0.20

二 S— se Ahem is
4. 混合 后 于 37°C 平衡 10 494% |

5. 迅速 加 入 底 物 溶液 立即 混 义 并 记 时 | 0.50

然后 , 每 隔 5 分 钟 测定 所 产生 氧气 的 体积 , 共 测 30 分 钟 ，
以 所 产生 氧气 体积 Vo. Gh Fr) XT EY Al t( 分 ) 作 图 得 一 直线 , OR
得 每 分 钟 所 产生 氧气 体积 Vo,/t 〈 微 升 / 分 )。

[计算 ]
ils =f Vo,/t Be tke
HADL/MS= ox GRE MH mE HK
应 用 范围

用 于 测定 二 -氨基 酸 含量 和 制备 较 纯 了 -所 基 酸 。
参 考 文献

Wellner, D. and Meister, A. (1960), J. Biol. Chem. 235, 2013.

9, D- 氮 基 酸 氧化 酶
D-AMINO ACID OXIDASE (D-AOD)

EC 1.4.3.3 D-Amino acid: oxygen oxidoreductase (de-

aminating)

催化 反应

D-AOD
D-RCHNH;COO- + O, + H,O———>

RCOCOO- +NH; +H.0,

存在 和 性 质

D- 氨 基 酸 氧化 酶 存在 于 所 有 哺乳 动物 中 , 特别 是 绵羊 和
SATA BA Ma ia FAY FAD,

CHEM BE) 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 。

[稳定 性 ] 结晶 悬浮 于 p 百 6.5，1.81 mime,
于 4C 可 稳定 几 个 月 ; 干粉 于 4°C 可 贮存 一 年 。

[分 子 量 ] 35;, 000 一 40, 000

(838 pH) 9.0, pH8.3 (.02M Nat),

(HA A] Na”

[抑制 剂 ] 重金 属 离子 、 琉 基 试 剂 。

[ 兴 谱 性 质 ] =Ad%m=16.0 (1om 光 径 )( 猪 肾 )

活力 测定

ORE) 利用 些 酶 催化 工 -氨基 酸 产 生 过 氧化 氨 的 反应
和 过 氧化 氢 酶 偶 联 以 释放 出 氧气 的 体积 来 计算 酶 活力 。2 克
分 子 卫 -氨基酸 脱 氨 可 产生 1 克 分 子 氧气 。

(单位 定义 ] 在 37"C， 每 分 钟 催化 工 微克 分 子 D- 丙 所
酸 脱 氨 的 酶 量 为 1 单位 。

【试剂 ]

© 底 物 溶液 : 0.30M DEL- 丙 氨 酸 用 试剂 四 配置 。

@ 0.020M pH8.3 焦 磷酸 钠 缓冲 液 。

@ 待 测 酶 液 : ARMORR BYE,

® 过 氧化 氢 酶 溶液 ， 每 ml 酶 液 含 8.0 微克 过 氧 伦 氢
了 酶 。

【测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 , 取 一 只 瓦 氏 烧瓶 按 下 玫 操 作 步 又 加
入 试剂 。 然 后 ， 每 隔 5 分 钟 测定 所 产生 氧气 的 体积 ， 共 测 30
分 钟 , 以 所 产生 氧气 体积 Vo,( 微 升 ) 对 时 间 t( 分 ) 作 图 得 二 直
Bo 求 得 每 分 钟 所 产生 氧气 体积 Voyt GFE/AY) «

【计算 ]

nist Vo,/t
POL/ME= a RRR mg Hi

步 RR Fein (ml)

1. 加 焦 磷 酸 钠 缓 冲 液 1.50

2. INFRA R 0.50

3. At ABA IEA IF 387°C 平衡 10 分 钟 | 0.50

4. 迅速 加 入 底 物 溶液 , 立即 混 匀 并 记 时 0.50
应 用 范围

用 于 测定 D- 氨 基 酸 含量 和 制备 较 纯 工 -氨基 酸 。
S$ = 文 献

Wellner, D. and Meister, A. (1960), J. Biol. Chem. 235，2013.

10. KK A te BB
MONOAMINE OXIDASE (MAO)

EC 1.4.3.4 Amine: oxygen oxidoreductase (deaminat-

ing) (flavin-containing)

催化 反应

MAO
RCH,NH, +0, + H,O—+>RCHO+NH, +H,0,
存在 和 性 质
胶 氧 化 酶 存在 于 植物 、 动 物 的 肝 、 脑 、 血浆 及 细菌 中 , 一 般

Mi fie, MAO 是 含 黄 素 的 蛋白 质 。

[溶解 度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

[稳定 性 ] 最 适 稳定 的 P 卫 为 7.2~7.6， 冷 冻 于 粉 在
一 20C 保 存 较 稳 定 。

【分 子 量 ] 170, 000(F I)

[最 适 pH) 7.4 ©.2M K4

[激活 剂 ] Kt

[抑制 剂 ] ”重金 属 离子 、 肝 类 化 合 物 。

[光谱 性 质 ] =AL%m =9.8 Cicm 36%) (4m)

活力 测定

(原理 该 酶 能 催化 腕 氧化 为 醛 的 反应 ， 导致 反应 体系
中 250nm 光 吸 收 值 的 增加 ， 以 每 分 钟 250nm 处 光 吸 收 的 增
加 值 计 算 酶 活力 。

[单位 定义 】 在 中"C， 每 分 钟 能 催 花 分 解 工 微克 芬 子 底
物 的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

® 底 物 溶液 : 0.10M 举 胶 硫酸 盐 (1.07g AEH +5ml 2N
硫酸 加 水 到 100ml) ,

@ 0.20M pH7.4 磷酸 钾 缓 冲 液 。

@ 待 测 酶 液 ， 用 试剂 四 稀 杰 成 适当 浓度 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择
波长 为 250nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : | BABE AE
水 校正 光 吸 收 到 0 点 , EMRE} PPR HLA EMM (A), FEE
3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ”计算 出 每 分
钟 A 的 增加 值 为 AA? sonm/y = AAy 3 — AAs),

sb 又 空白 管 Cml) | PEAKE Cm)

1. 加 底 物 溶 液 0.10 0.10
2. 加 磷酸 钾 缓冲 液 2.90 2.80
3. Tae APE UUBRA i, 立即 混 多 并 记 时 a 0.10
【计算 ]
单位 /mg= og

11.3 mg 酶 /ml 反应 混合 液
2 FA PRE AE He ZE 250nm 处 光 吸 收 差 值 的 克 分 子 消 光 系
数 为 11.3 x 108,

应 用 范围

用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。
| S$ £ 文 tt

[ 1 ] Tabor, C. W. et al. (1954), J. Biol. Chem. 298, 645.

[ 2 ] Buffoni, R. and Blaschko, H., F.R.S. (1964), Proc. Roy. Soc,
Bi161, 153.

LL. 尿酸 氧化 酶 (尿酸 酶 )
URATE OXIDASE (URICASE)

EC 1.7.3.3 Urate: oxygen oxidoreductase

催化 反应

fim +0, 421,07 po axe 4 19,0;4.00,
存在 和 性 质
不 酸 氧化 酶 存在 于 微生物 和 大 多 数 哺乳 动物 的 肝 、 腑 、 肾
中 , 一 克 分 子 酶 含有 一 克 原 子 的 铜 ， 一 般 从 猪 肝 中 提取 。
[溶解 度 ] 溶解 于 水 和 pH 7~11 稀 的 缓冲 液 中 。
(稳定 性 】 在 pH6.5~10.5 范围 内 酶 液 较 稳定 ， 于 粉 在

”一 20C 干 燥 保 存 至 少 可 稳定 二 年 。

(FH) 100, 000( 猪 肝 ); 122， ee，

(Bi pH) 9.25

[等 电 点 ] PH6.3

CERI) FT BEAR, BIER PK, ae- 联 吡 院 、 硫 腺 和 二 之
基 二 硫 代 氮 基 甲 酸 酯 。

(Hila) 氰 化 物 和 重金 属 离子 。

OER) =Ad%m =11.3(1% Na,CO,) EFF)

活力 测定

(原理 ] ”利用 尿酸 氧化 酶 能 分 解 尿酸 , 使 其 在 993nm 处
兴 吸 收 减 少 , 利用 这 一 性 质 来 测定 酶 活力 。 |

(单位 定义 ] 在 25°C, pH8.5, 每 分 钟 能 分 解 1 微克 分 -
子 尿 酸 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

® IR EMR: omg FRIIS F 380ml 试剂 @ 中 , FA KOH
溶液 调节 DH 25 8.6, RIG HRM MR, 使 测定 时 293nm 处
TERA 0.50,

@ 0.1M pHs .5 硼酸 缓冲 液 。

@ 待 测 酶 液 ， ARINO MERI ERE,

® 测定 方法 ;

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择

步 空白 管 (m1) | 样品 管 (ml)

1. 加 底 物 溶液

2. 加 硼酸 缓冲 液

3. 迅速 加 入 待 测 梅 液 , 立即 混 匀 并 记 时

波长 为 293nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 ， 测 定 光 吸收 值 : UE

蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 人 4A)， 共

读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 取 反 应 最 初 线性 部 分 , 计算 出 每 分

钟 A 的 减少 值 CAA/ 分 ) 为 AAa2ssam/ 分 三 AA 并 分 一 人 As/go
GH)

单位 /mg= 和 AA2o3nm/ 人 分

12.3x mg 酶 /ml 反应 混合 液

尿酸 在 293nm 处 克 分 子 消 光 系 数 为 12.3 10°,

应 用 范围

由 于 尿酸 氧化 酶 具有 高 度 专 一 性 ， 它 广泛 地 用 于 测定 体
液 中 的 尿酸 。

参考 文 献

Hiibscher, G. et al. (1957), Biochem. Biophys. Acta. 23, 43.

12. w At a
CATALASE (CTS)

EC 1. 11. 1. 6 Hydrogen-peroxide: hydrogen-peroxide

oxidoreductase
催化 反应 一
crs
H,0, + H,O,—->0,+ 2H,O
存在 和 性 质

广泛 存在 于 植物 和 动物 的 细胞 中 一 般 从 后 肝 , 血 液 、 微
生物 特别 是 Aspergillus miger 中 提取 。

[溶解 度 ] 溶解 于 磷酸 缓冲 液 。

(稳定 性 】 «FE PHT.0 较 稳 定 , THF 4C 避 光 于 燥 保 存 ，
一 年 内 稳定 。

【分子量 ] 244, 000(4E FF)

[最 适 pH) = 7.00), pH6.0 (A. niger)

[等 电 点 ] PH6.7( 鼠 肝 )，PH5.7( 和 后 肝 )

[激活 剂 ] 区

[抑制 剂 ] 9072、Cu" 、AsO5 、 酚 。

[光谱 性 质 ] «=Ad®n =15.5(1 cm 56%) CRP)

A gounm/ Ao7¢nm= 0.775

活力 测定

【原理 ] 该 酶 能 催化 过 氧化 氧 分解 ， 使 过 氧化 氢 在 240
nm 处 吸收 随时 间 增 加 而 减少 。

站

[单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 能 催化 分 解 1 微 死 分 子 的 底
物 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

® 底 物 溶液 : 0.0672M 过 氧化 气 溶 液 : 取 0.16ml 30%

“过 氧化 氧 海 液 用 试剂 四 稀释 成 100ml, (Agim = 0.500)。

@ 0.067M pH7.0 磷酸 缓冲 液 。

@ 待 测 酶 溶液 用 试剂 @ 稀 释 至 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择

步 又 室 白 管 (mI) | FEA Gal)
” 1. J00.067M pH7.0 RAM IK 0.10 —
2. 加 底 物 溶液 | 2.90 2.90

-
|
Se ane
8. 迅速 加 入 待 测 酶 溶液 立即 混 匀 并 记 时 | — | 0.10
波长 为 240nm, 用 lcm JEL AK, WIAEEMIC. DL Eze
水 校正 光 吸 收 到 0 点 , BERRA PIE IER (A), FER
3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 直线 部 分 ， 计 算出 每 分
钟 A 的 减少 值 为 A Adsonm = AAw 3 — AAs 4,

(计算 ]
A A 2 sonm/4

#i AL /MS= >-043 xme Mi /ml RE Se
WALA ZE 240nm Lh 54} FASE RBON 0.043 x 108,
应 用 范围
用 于 测定 生物 体内 和 代谢 物 中 过 氧化 氧 的 含量 。

&$ 二 二

Beers, R. F. and Sizer, I. W. (1952), J. Biol. Chem. 195, 133.

过 氧化 物 酶
PEROXIDAE (POD)

EC 1.11.1.7 Donor:hydrogen-peroxide oxidoreductase

催化 反应

POD
供 体 二 了 0 一 人 氧化 型 供 体 二 9H.O
供 体 为 酚 芳香 胺 、 色 氮 酸 、 焦 性 没食子 酸 和 胆 红 素 等 。
存在 和 性 质
几乎 存在 于 所 有 的 植物 细胞 中 ， 也 存在 于 白血球、 酵母 、
EDP. FER WAH) PR RE, RNR PR
取 。
[溶解度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 。
(稳定 性 ) P 瑞 <3.5 或 P 卫 >12 时 均 不 稳定 ， FF
Cit RIL, 一 年 内 稳定 。
(AFH) 40, 200 GB)
(Bi pH) 4.0-8.0
(HA) =pH7.2
(抑制 剂 ] CN S733 ANE
Obi) A3 和 aa =7.5(1cm 光 径 )
Giosmm=91(cm2/ 微 克 分 子 )

RZ= A gosnm/ A275nm = 3. 04 (45 ih 纯 酶 )
活力 测定
【原理 ] 利用 该 酶 在 过 氧化 氢 存 在 下 使 邻 甲 氧 基 酚 氧化

生成 四 邻 甲 氧 基 连 酚 ， 氧 化 产物 在 436nm 处 有 光 吸 收 峰 , 测

和 定 每 分 钟 436nm 处 光 吸 收 的 增加 计算 酶 活力 。
反应 式 如 十: 4

4 邻 甲 氧 基 酚 十 4 再 2Os， 四 邻 甲 氧 基 连 酚 十 8 卫 :9
(单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 催化 分 解 工 微克 分 子 底 物 的
。 酶 量 为 工 单位 x。
[试剂 ]

® 底 物 浴 液 : 0.008M HALA: 取 0.1ml 30% 过 氧
化 氢 用 水 稀释 至 120ml。Aaziom= 0.400(lcm 光 径 )。

@ 0.1M pH7.0 磷酸 缓冲 液 。

@ 0.018M 邻 甲 氧 基 酚 : 24.5mg 邻 甲 氧 基 酚 溶 于 水 定 ，
容 10ml。

® UGA: 用 水 稀释 至 适当 浓度 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择
波长 为 和 6nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 : LL ERE
水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (A),， 共 读
3 分钟, 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 分
OFA HY RS HIME AAgsenm/4 = AAp 3 —AAx,s,

(计算 ]

过 氧化 物 酶

“ 工 邻 甲 氧 基 酚 单位 (25°C) 近似 于 0.95 焦 性 没食子 酸 单位 (20°C) 近似 于
12.85 邻 联 疝 香 胶 单位 (25"C )。

步 R 75‘ (ml) | 样品 管 (m1)

1. 加 底 物 溶液 0.05 0.05
2. 加 磷酸 绥 冲 液 | 2.90 | 2.80

4. MAT UB VRS FF icht ee

|

3. Ip RRA 0.05 | 0.05
<a eas

| 0.10

ty = AA gsenmsy X 4
单位 /mg= 25-5xing hy /ml RMSE

四 邻 甲 氧 基 连 酚 在 436 nm 的 克 分 子 消光 系数 为 中 .5x
LG*

A WARMERS LILA WA ny aU
原作 用 , 产生 有 色 产 物 。 它 与 产生 HO, 的 其 他 酶 反应 偶 联 ，
可 比 色 测 定 葡萄 糖 . 半 乳 糖 和 工 -氨基 酸 ， 也 可 用 于 免疫 酶 标

记 实 验 。

参考 文 献

Bergmeyer, H. U. (1974), Methods of Enzymatic Analysis 1, 495.

14. @W HR A
ALANINE AMINOTRANSFERASE
(GLUTAMIC-PYRUVIC
TRANSAMINASE, GPT)

EC 2.6.1.2 L-Alanine: 2-oxoglutarate aminotransferase

A Ca Hee =H Sh

催化 反应

GPT
BAR +q-ML-—R— AMR+ FAR

存在 和 性 质

广泛 存在 于 动物 和 植物 的 组 织 中 ， 在 哺乳 动物 的 心 胜 中
含量 较 高 ,一般 从 猪 心中 提取 。

(溶解度 】 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

[稳定 性 ]】 结晶 悬浮 于 3.2M ple ime, 于 re Ck
存 可 稳定 六 个 月 ,干粉 一 20"C 贮 存 可 稳定 二 年 。

(AFH) 115, 000( 猪 心 )

(His pH) 7.3 一 7.8〈 磷 酸 缓冲 液 )

[激活 剂 】 Kt

[抑制 剂 ] 劳 基 或 羧基 试剂 .甘氨酸 、 工 -天 门 冬 氢 酸 、 正
AR IEAM.

活力 测定

[原理 ] ”利用 该 均 酶 的 转 氨 作 用 将 丙 氨 酸 上 的 氨基 转移 到
a- 酮 成 二 酸 上 , 形成 丙酮 酸 和 谷 氮 酸 , AMR NADH 参与
下 由 乳酸 脱 氢 酶 还 原生 成 乳酸 及 NAD-*， 在 340nm 处 测量
NAD 互 被 氧化 后 光 吸 收 的 减少 来 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 能 催化 产生 1 微克 分 子 产物
的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

@ 底 物 : 0.10M a- 酮 成 二 酸 溶液 用 试剂 @@ 配 置 。

@ 底 物 : 0.133 M LIL- 丙 氨 酸 溶液 用 试剂 @ 配 置 。

@ 0.10M pH7.5 磷酸 钾 绥 冲 液 。

由 0.006M 还 原 辅酶 工 。

© 乳酸 脱氧 酶 溶液 : 每 ml 试剂 四 含 1.0mg 酶 蛋白 。

© FURR: 用 试剂 @ 稀 释 至 适当 浓度 。

【测定 方法 ]

在 25"C 人 恒温 条 件 下 , MOMS RT REP RMA
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ,使 用 紫外 分 光 光 度 计 ”选择

步 RR 25 Fle (ml) | fin‘ Gal)
1. 加 0.10M pH 7.5 磷酸 钾 缓 冲 液 = 1.50
2. 加 0.00674 Fass I | 0.10 ; 0.10
3. 加 乳酸 脱 氢 酶 溶液 0.10 0.10
4. 加 0.1337 工 -两 氨 酸 溶液 1.00 1.00
5. 加 待 届 本 溶液 -= 0.10
6. 迅速 加 入 试剂 中 立即 混 匀 并 记 时 0.20 0.20

波长 340nm， 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 , WECM. «DAE
水 校正 光 吸 收 到 0 点 ， 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 (A), SEE
3 分钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 直 线 部 分 ， 计 算出 每 分
钟 A 的 减少 值 C(AA/ 分 ) 为 和 A 人 10 站 二 AApy—AAz 56

GH)

A res APs ated
RUliL/M8 = ¢>5 me hi /ml REA
还 原 辅 酶 工 在 340nm 处 克 分 子 消 光 系 数 为 6.22x10s。
应 用 范围 ”用 于 生化 分 析 和 临床 测定 。

1 A

$4 x wt

Wroblewski, F. and LaDue, J.S. (1956),Proc. Soc. Exp. Biol. Med.
91, 569.

15. 已 糖 激 酶
HEXOKINASE (HK)

EC 2. 7. 1. 1 ATP:D-hexose-6-phosphotransferase

催化 反应
HK
ATP + D-C,H;,0,—ADP + D-C,H,,0,-6-PO;H,
Ce Ce -+4-BR
存在 和 性 质

广泛 存在 于 酵母 、 动 物 组 织 、 高 等 植物 、 霉 菌 等 生物 中 。
一 般 从 酵母 中 提取 。 己 糖 激酶 能 催化 已 糖 如 : D- 葡 萄 糖 、
D- 果 糖 、D- 甘 露 糖 的 磷酸 化 作用 。 它 有 两 种 类 似 物 了 - 工 和
P-Tll, E17 DEAE 纤维 素 柱 层 析 的 行为 和 电泳 性 质 ， 以
及 对 不 同 己 粮 的 催化 特异 性 都 不 相同 ， 其 中 P-I 对 葡萄 糖
3 的 活力 比 了- 工 对 葡萄 糖 的 活力 高 三 倍 。
本 [ 洲 解 度 ] “ 洲 解 于 水 和 稀 缓冲 液 。

[稳定 性 ] “ 酶 二 制剂 悬浮 于 3.0M RRRIAM RM 50% H
油 中 ,在 O~4°C 可 保存 一 年 。

(AFH) 105, 000 (酵母 P- I)，102, 000 (酵母 P- 工 )

100, 000( 兔 肝 )
(Ri pH) 6.0~9.0

(SHAR) pH4.5~4.8
[抑制 剂 ] BSeat, SRSFWASH, wget
的 试剂 。
[激活 剂 ] Mg8+ + 、Mnt+ (Mg++ 最 适 浓度 为 526.5X
10°M), h
(光谱 人 性质] 了 P-I A}®.. =8.85(icm 36%)
P-TT A 和 二 =9.47(lcm 光 径 )
活力 测定
ORE) 测定 已 糖 激酶 时 偶 联 葡萄 糖 -6- 磷 酸 脱氧 酶

(G6PDH), (Hi NEL IR, LL 340nm 光 吸 收 的 增加 来 麦 示

酶 活力 。
HK
iii Sd 58 + ATP #j i H-6- BEM + ADP

G-§~PDH
葡萄 糖 -6- 磷 酸 +TNADP+< 一 一 6- 磷 酸 葡萄 糖 酸 内 栈
+NADPH+ Ht
(单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 能 催化 工 微克 分 子 D- 葡萄
糖 磅 酸化 的 酶 量 为 工 单位 。
[试剂 ]
© 底 物 溶液 : 用 试剂 四 配制 10% B-D- 葡 萄 糖 溶液 。
@ 0.10M pH7.6 三 乙醇 胺 缓冲 液 。
@ 0.08M ATP wy,
@® 0.10M MgCl, 溶液 .
© 0.013M 辅酶 开 溶液 。
© G6PDH 溶液 ， HitMORMRMA 15 单位 /ml
© 待 测 酶 液 : 用 试剂 四 稀释 成 适当 浓度 。
【测定 方法 ]
在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试

步 RR 23 (ml) | Pin‘)

ee 一 一 一 一 一 一 <

1. 加 三 乙醇 胶 缓冲 液 1.20 1.10

2. 加 底 物 溶液 1.20 ‘ 1.20

3. 加 氯化镁 溶液 0.20 0.20

4. 加 ATP 溶液 | 0.10 0.10
Pg 加 辅酶 II 溶液 0.20 0.20

6. 加 G6EPDH 溶液 0.10 0.10

7. 迅速 加 入 待 测 梅 液 , 立即 混 匀 并 记 时 i 一 pat

剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择
波长 为 340nm, 测定 光 吸 收 值 : 以 重 燕 水 校正 光 吸 收 到 OR,
每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 4A)， 共 读 3 分 钟 ， 以 A 对 时 间
作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 ee 增加 值 为
AAS ¢onm/3= AA 3 — AAs,

[计算 ]

A As 4onm/4

#AL/ME= Goo xme Ae/ml RES

; 还 原 辅酶 开 在 340nm Kb AF EAR BEN 6.22 x 10%,
i MAH WAT WeMa. Hee eA ATP,
eA sy SY ed Fy IP FA EF FEE

参考 xX 献
Beisenherz, G. (1953), Z. Naturforsch. g6, 555.

-一 45 一

16. 丙酮 酸 激 酶
PYRUVATE KINASE (PK)

EC 2.7.1.40 ATP: pyruvate 2-O-phosphotransferase

催化 反应
PK
ADP +CH,—C(OPO,H,) COONa=—
maT STAR
ATP +CH,COCOONa
丙酮 酸 钠

存在 和 性 质

广泛 存在 于 动物 的 肌肉 、 脑 、. 肝 、 心 脏 ， 植 物 、 细 菌 和 酵母
中 ; 存在 于 一 切 能 进行 糖 酵 解 的 生物 组 织 中 。 一 般 从 兔 肌 中
提取 。 此 酶 含有 1.6% S 和 0.06% P

[ 洲 解 度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓冲 液 。

(Bett) 丙酮 酸 激酶 悬浮 于 3M CNH) SO, 溶液 中 ，
EAC 至 少 可 保存 一 年 。

(AFH) 237, 000( 兔 肌 ) 166, 000( 酵 母 )

[最 适 PH] 6.8~7.8

[等 电 点 ] pH 5.98( 免 肌 )

[激活 剂 ] + Mg++、Mnt+ 共存 或 NHE 和 及 bt+ 共 存 。

[抑制 剂 ] Na+、Cat+t+、2.5M 尿素

[光谱 性 质 ] Ai 元 ma=5.4 (1cm 光 径 )( 锡 肌 )

AlZ. mm =6.53(1 cm 光 径 )( 酵 母 )
活力 测定
[原理 ] ”丙酮 酸 激酶 和 乳酸 脱氧 酶 偶 联 以 还 原 辅酶 工 的

Asionm 的 变化 表示 酶 活力 。 -

[单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 催 化 分 解 工 微 死 分 子 磷 酸 烯
醉 丙 酮 酸 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

® 底 物 溶液 : 30m 磷酸 烯 醇 丙 酮 酸 环 已 胶 盐 的 水 溶
液 。

@ 0.1M pH7.6 Tris 缓冲 液 。

@ 激活 剂 : 含有 0.2M MgSO, 和 0.8M KCl KAR.

@® 10mM 还 原 辅酶 I YAM.

© 0.02M ADP 水 溶液 。

31 We SA. 1.0ml 溶液 含有 3600 单位 。

@ 待 测 酶 液 : 用 试剂 @“〈 含 0.129 +i ABA) he

到 适当 浓度 。
(测定 方法 ]
步 又 25 FA ‘= (inl) or

i ieee | 2.20 2.10

2. 加 激活 剂 an at 0.10

3. 加 底 物 溶液 0.10 0.10
ts, jn 0.02M ADP 水 溶液 0.60 0.60

6. 加 1omM jaya HAS I AR b 0.05 eh 0.05

6. MARRABAK ee | 1,8,
e s sien AF URE ee SLO IE | 5 a | 0.10

在 23°C 便 温 条 件 下 , 下 二 支 试 管 按 玫 中 操作 步 又 加 入 试
剂 。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择 波长 340nm， 用 lcm
光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 ， 以 重 燕 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ，
每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (A), 共 读 3 分 钟 ， 以 A 对 时 间作
图 取 反 应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 分 钟 A 的 减少 值 (AA/ 分 )
为 AAS sonm/ 3 = AAg sy —A Aw 4,

[计算 ]

i SR; A As3aonm,
单位 /mg= Saxe Mi/ml REESE

还 原 辅酶 工 在 340nm 处 的 克 分 子 消光 系数 为 6.22x
10°.

应 用 范围 ”用 于 用 偶 联 酶 方法 测定 磷酸 烯 醇 丙酮 酸 、
ADP, ATP 4,

S$ = xX 献

Biicher, T. and Pfleiderer, G. (1955), Methods in Enzymology 1, 435
(Colowick, S.P. and Kaplan, N.O. ed.) Academic Press, N. Y.

17. 肌 酸 激酶
CREATINE KINASE (CK)

EC 2. 7.3.2 ATP: creatine N-phosphotransferase
催化 反应

CK
LAR + = BF AR he —— BERL + — BRR

存在 和 性 质

存在 于 兰 椎 动物 的 肌肉 和 组 织 中 , 一 般 从 兔 肌 中 提取 。

(溶解 度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

(ete) PHI~ORBE, SAF MF-20° CURE
一 年 。

(AFH) 81, 000( 兔 肌 )

Gaia pH) 正 向 反应 是 PH9.0, By Rwy pHe~7,

(SHA) pH 6.1 Call)

【激活 剂 ] Mg**,Mn*t Ca*+

[抑制 剂 ]】 Zn 一 Cu AMP、ADP、 甲 状 腺 素 、 三 碘 甲
REAR ARAL.

【光谱 性 质 ] «= AL% m =8.76(1 cm 光 径 )( 免 肌 )

活力 测定

[原理 ] 利用 酶 的 偶 联 法 以 340nm 光 吸 收 的 变化 表示
BREE.

CK
DL + = GER ik — BBL + — BER RE

PK
二 磷酸 腺 苷 十 磷酸 烯 醇 丙 酮 酸 二 一 丙酮 酸

+ = BERR RE
LDH
丙酮 酸 十 NAD 瓦 一 一 乳酸 NAD+

iP

CK,PK
WLR + BERR BETS Ba + NADH AR
+ BER LR + NAD*

[单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 能 催化 分 解 工 微克 分 子 底 物
的 酶 量 为 1 单位 。 |

[试剂 ]

底 物 0.10M 肌 酸 溶液 : 用 试剂 @@ 配 制 调节 pH 至
9.0 备用 。

@ 0.15M pH9.0 甘氨酸 - 氢 氧 化 钠 缓冲 液 。

@ 0.03M 氯化镁 溶液 。

由 0.006M 还 原 辅酶 工 溶液 。

© 0.03M 三 磷酸 腺 苷 溶液 。

© 0.06M 磷酸 烯 醇 丙 酮 酸 洲 液 。

@) FRRABHAM: ml SFL BAM 360 单位 。

待 测 酶 溶液 ， 用 含有 0.1% 牛 血 清白 蛋白 的 冷 试剂
@ 配 制 。
”，@@ 丙酮 酸 激酶 溶液 : 每 mm 含 540 单位 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ,选择
波长 为 340nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 测 定 光 吸 收 值 : WR
水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (CA), FER
3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 分
钟 A 的 减少 值 为 AAsionm/ 分 三 人 A 枯 分 一 人 人 As/

Gt) |

从 只 0
单位 /mg 65255 醒 /ai RA

还 原 辅酶 工 在 340nm 处 死 分 子 消光 系数 为 6.22 x 10°,
应 用 范围 ”可 用 于 测定 肌 酸 和 磷酸 肌 酸 的 含量 。

Oo

©

步 MR
. DR 0.10M 肌 酸 溶液
. 加 0.037M 氯化镁 溶液
. 加 0.0067 还 原 辅酶 工 溶液
jn 0.03M 三 磷酸 腺 苷 溶 液
. 加 0.0674 磷酸 烯 醇 丙 酮 酸 溶液
.加 乳酸 脱氧 酶 溶液

.加 丙酮 酸 激酶 溶液

.加 缓冲 液 (试剂 @)

. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时

S$ 考 文 献

Tanzer, M.L. and Gilvarg, C. (1959), J. Biol. Chem. 234, 3201.

18. fis
LIPASE

催化 反应

25 A (ml) | Fah (ml)

2.30
Rika ie
: ) soa.
一 一
| 0.10 0.10
| 0.10 0.10 F
0.10 0.10 :
0.10 Rie
0.10 odes
| ba

肪 ie

EC 3.1.1.3 Triacylglycerol acylhydrolase

i ii as

脂肪 梅
‘Hn = Bs + H.O—= Hh — Bs + HF i

存在 和 性 质

广泛 存在 于 动物 组 织 、 植 物种 子 、 微 生物 、 酵 母 、 丝 状 商
中 ， 特 别 是 胰 脏 中 含量 最 高 。 脂 肪 酶 水 解 长 链 脂 肪 酸 的 酯 比
酯 酶 更 有 力 。

(ARE) 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

[稳定 性 ] pH3~T 时 , 酶 溶液 稳定 , 贮 藏 于 巴 比 妥 组 种
液 和 牛 胆 酸 钠 溶液 中 4"C 可 保存 一 个 月 ， 于 粉 在 一 20C 可 保
存 二 年 。

(AFH) ~42, 000( 胰 脏 )

(ig pH) =7.5~8.0C0R HE)

[等 电 点 ] =pH5.0Cie).

【激活 剂 ] Cat", RR

[抑制 剂 二 Fet* Fe" Zn" Cae ae

[光谱 性 质 ] Aag&a=13.3(1cm 364%) GE

活力 测定

(原理 ] ”脂肪 酶 在 一 定 条 件 下 , 将 甘油 三 酯 水 解 , 在 不 同
水 解 阶 段 可 放出 脂肪 酸 、 甘油 二 酯 .甘油 单 酯 及 甘油 。 水 解 所
放出 的 脂肪 酸 可 以 用 标准 碱 液 滴定 之 , 以 此 表示 酶 活力 。

(单位 定义 】 在 37°C, 每 分 钟 催化 产生 工 微 死 分 子 脂肪
酸 的 酶 量 为 1 单位 。

4 试剂]

中 底 物 溶液 : MW 40g RHE, 加 蒸 饮水 约 1000ml,
在 小 火 上 加 热 , 并 不 断 搅 拌 ， 至 聚 乙烯 醇 全 部 溶解 ,冷却 后 定
容 至 1000ml。 小 心 倾 倒 清 液 75ml, 加 25ml 橄榄 油 用 高 速 组
织 执 碎 机 搅动 六 分 钟 , 即 成 乳白 色 聚 乙烯 醇 橄 榄 油 乳 化 液 , 低

温 保 存 。

@ 0.025M pH 7.5 磷酸 缓冲 液 。

@ 0.0500N 氢 氧 化 钠 标 准 深 液 。

® 1S MRA.

© 20% -RIARAKAM, 过 滤 后 备用 。

@ 95% 乙醇 。

@ 脂肪 酶 溶解 于 水 , 并 稀释 成 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 只 三 角 烧 瓶 ， 按 下 表 操 作 步 又
加 入 试剂 :

4 m 空白 瓶 (ml) | 样品 瓶 (ml)
1. 加 0.0257M pH7.5 磷酸 缓冲 液

2. 加 底 物 溶液

8. 加 20 多 牛 磺 胆 酸 钠 水 溶液

4, 加 95 名 乙醇

5. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 保 oti Reae oe
温 十 分 钟 |

6. 立即 加 95 多 乙醇 一 15.00

7. 加 1 多 酚 栈 指示 剂 0.1 0.1

8、 用 试剂 @ 滴定 到 微 红色 出 现 读 出 滴定 | vy. | ve
体积 se ae ii

TF)

— 53 —

~

(V# 一 Vs) XN

单位 /mg= 10S) x FER SR me

式 中 :，XN 为 每 ml AAEM AEA TR

测定 时 使 用 聚 乙烯 醇 的 聚合 度 应 以 1000~21750 为 好 ; HH
槛 油 的 酸度 必须 小 于 2%, 底 物 液 必须 新 父 配 置 。

应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 工业 生产 。

参 考 文 南
中 山大 学 生物 系 生 化 微生物 学 教研 室 。 1978。 生 化 技术 导论 /58。

19. 乙酰 胆 碱 酯 酶
ACETYLCHOLINESTERASE (AChE)

EC 3.1.1.7 Acetylcholine acetylhydrolase.

催化 反应

AChE ©
(CH,) =*N—CH,—_CH,_O—CO—CH, + H,O—
乙酰 胆 碱
(CH,) =*N—CH,—CH,—OH + CH,COOH
AL Bik
存在 和 性 质

存在 于 动 物 的 导电 组 织 , 一 般 从 电 馒 的 电器 官制 备 ，.

(ARE) 溶解 于 水 和 稀 组 冲 液 中 。

[稳定 性 ] 干粉 贮存 于 4"C， 可 保存 半年 不 失 活 ， 在 50
mM, pH7.2 磷酸 缓冲 液 中 可 稳定 数 天 。

[分 子 量 ] 230, 000( 电 鳗 电器 官 )

<

(Bam pH) 7
[等 电 点 】 PH4.5
[抑制 剂 ] ”天然 氨基 酸 、 大 量 胺 类 、 二 肽 和 有 机 磷 化 合
物 。
[ 兴 谱 性 质 ] «= Aaga =22.9(lcm 光 径 ) 电 鳗 的 电器 官 )
活力 测定
方法 I C1)
OR) 乙酰胆碱 酯 酶 作用 于 乙酰 硫 代 胆 碱 ， 产 生 硫 代
ABB, it RHE ish Bj = tht EOC BE AE HE DTNB) fe py, AER
一 种 黄色 化 合 物 , 进行 比 色 测 定 。 反 应 式 如 下 :

AChE
ZOE Tit UAB kit CH + ZR HE

TV tse Es
硫 代 胆 碱 - 硫 代 硝 基 葵 甲酸 二 硫 醚
+ RAE
[单位 定义 ] 在 25°C, pH7.2 每 分 钟 催化 分 解 工 微克 分
子 底 物 的 酶 量 为 1 单位 。
[试剂 ]
@ 底 物 溶液 : 0.156M 乙酰 硫 代 胆 碱 碘 化 物 溶液 , 45.1
mg 乙酰 硫 代 胆 碱 碘 化 物 溶 于 lml 水 中 。
@ 0.01% DTNB 洲 液 ， 以 50mM pH7.2 磷酸 缓冲 液
配置 。
@ 待 测 酶 溶液 ， 用 水 稀释 到 适当 的 浓度 。
[测定 方法
在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.12ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选择
波长 405nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 测 定 光 吸收 值 : 以 重 燕 水

步 又 空白 管 (mi) | 样品 管 (ml1)
1. 加 0.01 多 DTNB = 3.00 | 3.00
2. 加 底 物 溶液 :天 于 0.10 0.10
8. 加 重 蒸 水 0.02 3 e
4. 迅速 加 入 竺 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 0.02

校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 \A)， 共 读 3

分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 取 反 应 最 初 线性 部 分 , 计算 出 每 分 钟 A

的 增 加 值 为 AAgsam= a
OTH)
AW AA, 5nm
Al/ms= 75 -sxmg i/ml RRA We

硫 代 胆 碱 - 硫 代 硝 基 薄 甲酸 二 硫 醚 在 405mm FY HSB
光 系 数 为 13 .3 X 108,
ya

(原理 ] FFA ZEAE RS a HE A ACR ZW HB Ae

酸 , 引起 反应 体系 PH 变化 来 测定 酶 活力 。

[试剂 ]

® 底 物 溶液 :2.16 x 10-21M “eZ BERD.

@ 200mM NaCl 深 液 : 44 40mM MgCl, 和 0.02% 4+
血清 白 蛋 白 。

@) 待 测 酶 液 : 用 0.02% 牛 血清 已 蛋 蝗 配 制 成 酶 含量 为
10~50 g/ml,

@ 0.01000N 氧 氧化 钠 标 准 溶液 。

[测定 方法 ]

取 一 只 三 角 烧 瓶 ， 在 自动 PH 滴定 仪 上 操作 , 在 25°C fH
温 条 件 下 , 加 入 4.0ml 试剂 @, 加 1.0ml 底 物 溶液 , 加 3.0ml
水 , 用 试剂 鸭 调 节 至 pH7.4, BARDIA 10ml AHO, 用 试剂
OR. WAS) PH7.4 的 时 间 t( 分 ) 和 所 用 标准
氢 氧 化 钠 的 体积 VCmD。

同时 配制 几 种 不 同 浓度 的 酶 溶液 ， 求 得 各 种 酶 浓度 下 ， 每
分 钟 消耗 氧 氧 化 钠 的 体积 V/t Gnl/4}),

(计算 )

以 各 种 酶 浓度 下 得 到 的 _V/t 对 酶 浓度 作 图 得 线性 关系
at, 即 可 取 任意 一 酶 浓度 的 V/t 值 计算 之 。
V/tx Nwyaon X 103
se EET Ret awh me
式 中 ，Nivon 为 试剂 @ 的 准确 当量 浓度 。
应 用 范围
可 用 于 生化 研究 和 临床 检验 。

Peis to shen Mates

参 = xX 献

{ 1} Ellman, G.L. et al. (1961), Biochem. Pharmacol. 7, 88.
{ 2 ] Kremzner, L.T. and Wilson, I, B. (1963), J. Biol, Chem. 238,
1714,

20. 果 胶 酶
PECTINESTERASE

LEE RRA [ean

EC 3.1.1.11 Pectin pectylhydrolase

— 7 —

催化 反应

果 胶 +nH:O= 僵 n 甲 醇 十 果 胶 酸 盐
存在 和 性 质
果 胶 酶 存在 于 植物 和 细菌 中 。

CARE) 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 。

(稳定 性 】 在 50°C 稳定 , 但 在 62°C 经 30 分 钟 ， 酶 可 全
部 失 活 , 干粉 在 4"C 可 保存 半年 。

[分 子 量 ] ”27, 500( 西 红 柿 )

(最 适 pH) 4.5
【激活 剂 ] ”Mnt+、 二 价 金 属 离子 。
活力 测定

【原理 ] ”此 酶 水 解 果 胶 , 生成 半 乳 糖 醋酸 , 其 产物 具有 还
原 狂 醛 基 ， 可 用 次 亚 碘 酸 法 定量 测定 所 生成 半 乳 糖 醛 酸 的 量
以 表示 果 胶 酶 的 活力 。

(单位 定义 ] 在 50"C， 每 小 时 催化 分 解 果 胶 生成 工 剖 过
当量 游离 半 乳 糖 醛 酸 的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

19% ARAM. 称 取 1 克 橘 子 果 胶 粉 ， 加 热 水 溶解 、
Bb, 冷却 后 过 波 , 调 pH # 3.5, 定 容 至 100ml。

@ 0.0500) 标准 硫 代 硫酸 钠 溶 液 。

@ 1M 碳酸 钠 溶液 。

@ 0.10N 碘 溶 液 : 称 取 258g 碘化钾 洲 于 20 ml 水 中 , 另
OBR 12.7g 深 于 碘化钾 溶液 中 , 定 容 1000ml,

© 2N RAR.

0.5% 可 溶性 淀粉 。

© 待 测 酶 液 : 用 水 稀释 至 适当 浓度 , 调节 pH 至 3.5.

(测定 方法 ]
在 50°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 20aml。 然 后 , 在 50°C 水 浴 中 准确 恒温 二 小

步 又 空白 管 (ml) | 样品 管 (ml)

1. 加 1 多 RRR 10.00 10.00

8. TRINA URSA RZ BIR SF ici 一 5.00

2 加重 蒸 水 10.00 5.00

| .
时 , 37 BUR — Sik ES VE KA UE 3 分 钟 , RK.
却 后 , DR RMI, 分 别 依 次 加 入 如 下 试剂 : ERRORS
中 的 反应 液 5.00ml、JM 碳酸 钠 溶液 1.00ml、 碘 溶液 5.00
ml, i Ki, #3, 于 室温 下 放置 20 分 钟 后 ， 分 别 加 入 2N
硫酸 溶液 2.00ml， 摇 义 ， 再 分 别 用 标准 硫 代 硫 酸 钠 溶液 滴定
到 淡 黄 色 。 然 后 , 分 别 加 入 可 溶性 淀粉 溶液 1.0ml, 继续 用 标
准 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 滴定 到 蓝 色 消失 ， 记 录 标 准 硫 代 硫 酸 钠 溶
液 的 总 用 量 : 装 有 空白 管 溶液 的 碘 量 瓶 用 去 B ml 装 有 样品
Svan) Mla AA A ml,

[计算 ] arn
ef X0.51X
下
式 中 : A 为 滴定 样品 管用 去 试剂 @@ 的 用 量 ;
B 为 滴定 空白 管用 去 试剂 四 的 用 量 ;
N 为 试剂 @ 的 当量 浓度 ;
0.51 为 表示 工 毫 克 当 量 硫 代 硫 酸 钠 相 当 于 0.51
毫克 当量 游离 半 乳 糖 醛 酸 ;

20 为 反应 液 总 体积 (ml);
5 为 吸取 反应 液体 积 (mD)。
应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 食品 工业 。

参考 文 献
中 山大 学 生物 系 生 化 微生物 学 教研 室 编 , 1978。 生 化 技术 导论 ,64。

21. 碱 性 磷酸 酶
ALKALINE PHOSPHATASE

EC 3.1.3.1 Orthophosphoric-monoester Phosphohydrolase
(alkaline optimum)

催化 反应
CE) Re Mm + HOF? ( 正 ) 磷 酸 盐 十 醇

存在 和 性 质

碱 性 磷酸 酶 广泛 存在 于 动物 的 上 骨头、 牛奶、 猪 上 痛 、 肠 、 胎 盘
和 某 些 微生物 中 , 一 般 从 小 牛 的 肠 粘膜 中 提取 。

CARRE) 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

(稳定 性 ] ”最 适 稳定 PH W 9.0~10.0 GH), IP BPE
磷酸 酶 保存 在 25°C 较 稳 定 。 酶 粗 品 冷冻 干粉 于 一 20"C 能 保
存 二 年 , 精品 和 干粉 于 一 20"C 能 保存 半年 。

[分 子 量 ] 100,000 (iH); 80,000 CE. Colt); 190, 000
〈 牛 肝 )
(Si pH) 8~10
[等 电 点 ] pH4.4(4]H)

[激活 剂 ] Mg*+、Mnr+(M8g++ 最 适 浓度 为 10-2M)。

[抑制 剂 ] BAK), FHLB AR Zn**,Be** CN -等 。

[ 兴 谱 性 质 ] =ALZn =13.9(icm 36%) GER)

A 说 am = 10Cicm 光 径 )( 牛 肠 )

活力 测定

[原理 ] ” 碱 性 磷酸 酶 在 碱 性 条 件 下 能 水 解 对 硝 基 酚 磷酸
产生 黄色 的 对 硝 基 酚 ， 该 产物 在 405nm 处 有 吸收 峰 ， 因 此 用
测定 每 分 钟 405nm 处 光 吸 收 值 的 增加 计算 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 37"C, 每 分 钟 催化 分 解 工 微克 分 子 底 物
的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

® JR WAR. 0.01M 对 硝 基 酚 磷酸 : 精确 称 取 105mg
对 硝 基 酚 磷 酸 二 钠 盐 , YE-F 4oml 试剂 @@ 中 再 加 0.4ml 0.LIM
氧化 镁 溶液 混合 (新 鲜 配 置 )。 |

加 0.20M pH10.25 Tris 缓冲 液 。

@ 0.04M ASA RK.

© 待 测 碱 性 磷酸 酶 : FANT O ti IRE.

【测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 6.1ml。

Ot) :
; Wy oe DP: eG. Ce

[年 位 /mg Te BX BGH) x aL ee K
式 中 : 6.1 为 反应 总 体积 ; 5 为 反应 时 间 ( 分 );
AA josnm 7 As oe Aus;

XY AH SEF a PE KP FE 405nm LEN FEAT WH St RK

为 18.8x 10%,

步 RR

1. 加 底 物 溶液

2. 加 氢 氧 化 钠 溶液

3. 也 速 加 入 待 测 酶 液 立即 混 匀 并 记 时 0.10 | 0.1¢

4。375C 准 确 反 应 5 分钟
5. 迅速 加 入 氢 氧 化 钠 浴 液 | 一 5.00

6. 混 匀 后 在 405nm 处 读 光 吸收 值 | Ax A

应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。

参考 文 献 ，

Bessey, O. A. et al. (1946), J. Biol. Chem. 164, 321.

22, HE OEM
ACID PHOSPHATASE ~

EC 3.1.3.2 Orthophosphoric-monoester phosphohydrolase |
(acid optimum)
8 14 52 bY
| 磷酸 酶
GE) 2 #4 it + H,O——-> CIE) BERR ER + ME

存在 和 性 质
一 酸性 磷酸 酶 户 泛 存在 于 植物 、 动 物 和 微生物 中 , 一 般 从 小
时 麦芽 萄 中 提取 。 有 四 种 同 功 异 构 酶 具有 不 同 的 特性 ， 能 用 层
时 析 方 法 分 离 纯化 。
OAR BE) ”溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。
(稳定 性 】 在 中 性 PHARM TARe, PH<6.5 稳定
性 增加 , 在 酶 的 水 溶液 中 加 入 柠檬 酸 和 乙酸 降低 pH, 能 增加
酶 的 稳定 性 。 冷 冻 干 粉 贮 存 于 一 20"C 可 保存 二 年 。
【分子量 ] 100, 000( 鼠 肝 ); 23, 000( 4)
[最 适 pH) 4.8~5.0
[激活 剂 ] Mg++
[抑制 剂 ] NaF \Cu** WWamih BBE PE,
属性 质 At~om =4.7 Cicm 36%) CRIP
活力 测定
【原理 」 酸性 磷酸 酶 在 酸性 条 件 下 能 水 解 对 硝 基 酚 磷
酸 ， 产 生 黄 色 的 对 硝 基 酚 。 其 产物 在 405nm 处 有 吸收 峰 , A
此 用 测定 每 分 钟 405nm 处 光 吸 收 值 的 增加 计算 酶 活力 。
[单位 定义 ] 在 37"C， 每 小 时 催化 释放 出 工 微克 分 子 对
硝 基 酚 的 酶 量 为 1 单位 。
[试剂 ]
® 底 物 溶液 : 0.0055 对 硝 基 酚 磷酸 〈 用 试剂 @ 新 鲜
配制 )。
加 0.05M pH4.8 柠檬 酸 钠 。
@ 0.10M AML.
® 待 测 酸性 磷酸 酶 : ARMOR REYKE.
[测定 方法 )
在 37°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入

试剂 , 反应 总 体积 为 5.20ml]。

2 ae ses src | 样品 管 c)
1. 加 底 物 溶液 ea | 1.00
2. 加 氢 氧 化 钠 溶 液 4.00 | -一
3; Zikin ARHARTER, SRICAE 0.20 | 0.20

4. 375C 准 确 反 应 一 小 时

5. 迅速 加 入 0.1Mf 氢 氧 化 钠 溶液 -- 4.00
6. 混 匀 在 405nm 处 读 光 吸 收 值 Az Ar

(计算 ]

AAAaoinmX DOG0
年 位 /mg= Te SIN) x PER Ee MR

式 中 : 5.2 为 反应 总 体积 ; 1 为 反应 时 间 ( 小 时 );
AAuiosmm 王 人 社 一 As;
对 硝 基 酚 于 碱 性 溶液 中 在 405nm 处 的 克 分 子 消 Ib AB
Wy 18.8 x 10°,
应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。

S$ +x 献

[1] Bessey, O. A. et al. (1946), J. Biol. Chem. 164. 321.
[ 2 ] Sigma Chemical Co. (1960), Bulletin 104, St. Louis, Missouri.

23. 磷酸 二 酯 酶 1
PHOSPHODIESTERASE I

EC 3. 1. 4. 1 Oligonucleate 5’-nucleotidohydrolase

俊 化 反应

RNA (ak DNA) + H,0 5K RR
从 核酸 分 子 的 3- 末 端 开 始 逐 个 地 将 下 - 核 痛 酸 水 解 下
来 , 因此 磷酸 二 酯 酶 工 也 称 作 外 切 核 酸 酶 。
存在 和 性 质
磷酸 二 酯 酶 工分 布 较 广 泛 ， 一 般 从 毒蛇 的 毒液 中 提取 。
CARE) 溶解 于 水 或 稀 缓 冲 液 中 。
[稳定 性 ] 耐 热 ,在 pH<5 和 :PH> 10 时 不 稳定 ， 冻 干
会 引起 失 活 , 干粉 在 CREAN AAI FM 15%,
[分 子 量 ] 100, 000~130, 000 CE H)
(iG pH) 8.9~9.3
(SHA) PH9
【激活 剂 ] Mg 一 Ca 一
(抑制 剂 ] 半 胱 氨 酸 、 谷 胱 甘 肽 、 维 生 素 CCua++ 和 开 CN

磷酸 二 酯 酶 I
-一 一 -一 ->

等 。
活力 测定

【原理 】 双 - 对 硝 基 酚 磷酸
对 硝 基 酚 。
磷酸 二 酯 酶 催化 上 述 反 应 ， 测 定 产物 对 硝 基 酚 的 生成 速

磷酸 二 酯 梅

单 对 硝 基 栈 磷酸 十

BEREAN ET

[单位 定义 ] 25°C, 在 测定 条 件 下 , 能 催化 产生 1 HED
子 产 物 的 酶 量 为 工 单位 。

GARI

® 底 物 溶液 . 0.001M 双 - 对 硝 基 酚 磷酸 二 钠 盐

@ 0.10M pH8.9 Tris 缓冲 液 。

@ 0.005M 氯 化 钙 溶 液 。

® 待 测 酶 液 : 用 水 稀释 至 ee

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 亦 下 表 操 作 步 骤 加 入
试剂 ， 反 应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选

步 RR 空白 管 (m1) Be Cm)
1. 加 试剂 @ Tris 缓冲 液 100
2. MAIC RD ; 1.20
3. 加 试剂 @@ 氧 化 钙 溶 液 0.30
4. (BAK ew |
5 -于 ee

. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 gs ae ) 0.005

择 波长 为 405nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : WE

蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (人 A), 共

读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每

分 钟 A 的 增加 值 CAA/ 分 ) 为 AAiooc 4 = A Ap y —-AAg ye
【计算 )

3 ee AAuiosnmy/ 分
单位 /mg= Te 5 x<ang m/l MAE

对 硝 基本 在 405nm 处 的 克 分 子 消 光 系 数 为 18.5x 10°,
应 用 范围 ”用 于 生化 分 析 、 生 化 研究 , 如 核酸 的 顺序 测定
等 。

参考 xX 献

Sulkowski, E, and Laskowski, M. Sr. bv Biochim. Biophys. Acta.
240, 448.

24. 脱氧 核糖 核酸 酶 T
DEOXYRIBONUCLEASE I (DNase I)

EC 3.1.21.1. Deoxyribonucleate (double stranded) 5’-
oligonucleotidohydrolase

催化 反应
DNase I

(n—1)H,0+ DNA Sn 窜 聚 核 彰 酸 (8 磋 酸 栈 )

该 酶 为 内 切 核酸 酶 , 产物 为 久 - 核 昔 酸 和 中 碍 酸 赛 聚 核 埋
酸 。

存在 和 性 质

存在 于 动物 组 织 中 , 特别 是 在 胰 脏 中 含量 较 高 , 一 般 从 牛
胰 中 提取 。

(EMRE) 洲 于 水 和 稀 缓冲 液 。

[稳定 性 】 冷冻 干粉 在 OC 可 贮存 5 年 。

(分 子 量 ] ”30, 000(4- i)

= =

(#36 pH) 6.0~7.0 (0.05M Mg

[等 电 点 ] pH4.7(4F i)

[激活 剂 ] Mg Mn Co

[抑制 剂 ] 可 以 络 合 Mg++ 的 明 离子 如 : 柠檬 酸 、 误 化
乙 锭 、 放 线 菌 素 D、 牛 脾 抑 制剂 。

[光谱 性 质 ] «ALF m =12.8C. cm 3¢#) AFR)

活力 测定

[原理 ] ”该 酶 能 降解 脱氧 核糖 核酸 形成 寡 聚 核 苷 酸 5-
磷酸 酯 )， 测 量 每 分 钟 260nm 处 光 吸 收 值 的 增加 来 表示 酶 活
Fk

[单位 定义 ] 在 35"C， 每 分 钟 使 20nm FER Me HS
0.001 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂

@ 底 物 DNA 洲 液 : 4mg DNA 加 50ml BAKA AR
器 使 其 溶解 , 再 加 10ml 试剂 @@ 和 10ml RAOBAYAH.

@ 1.0M pH5.0 乙酸 缓冲 液 。

@ 0.05M 硫酸 镁 溶液 。

@ 待 测 酶 液 :， 用 水 配 成 适当 浓度 。 -

【测定 方法 ]

在 25°C HIRAI PE, ROR, RP RES RMA

步 又 空白 管 (ml) | 样品 管 (mDl)
1. 加 底 物 DNA 溶液 3.00 3.00
2. 加 重 蒸 水 1.00 一

3. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 -一 1.00

”试剂 , 反应 总 体积 为 4.0ml。

使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选择 波长 为 250nm， 用 lcm 光 径
的 石英 比 色 杯 测 定 光 吸收 值 : 以 重 燕 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每

隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 〈4A)， 共 读 3 分 钟 ， 以 A 对 时 间作
”图 , 取 反 应 最 初 线性 部 分 , 计算 出 每 分 钟 A 的 增加 值 C(AA/7 分 )
为 AAaeonm 分 一 全 人 洋人 分 一 人 As/4

【计算 ]
A A260nm/4

年 位 ,mg 一 0 ool xm f/m! AEA
应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。

$4 文 献

Kunitz. M, (1950), J. Gen. Physiol. 33, 349, 363.

25. 核糖 核酸 酶 工
_ RIBONUCLEASE T (RNase T,)

EC 3.1. 27.3 Ribonucleate 3’-guanylo-oligonucleotido-
hydrolase

催化 反应
RNase T;

核糖 核酸 一 一 全 3/- 鸟 味 叭 核 苷 酸
十 3/ 端 为 鸟 嗓 叭 核 音 酸 的 赛 聚 核 苷 酸
存在 和 性 质 、
该 酶 是 一 种 高 度 专 一 性 的 内 切 核糖 核酸 酶 ,是 从 米 曲 (4.

Dryzae) 中 制 得 的 。 在 其 他 多 种 细菌 中 也 存在 着 类 似 性 质 的
Bit, 3

CARE) ” 溶 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

(稳定 性 ] 对 热 较 稳 定 ， 在 pPH>o 的 碱 性 溶液 中 不 稳
jE, 在 42"C 保存 一 年 不 失 活 。

(AFH) 11, 085

[最 适 pH)s 7.4~7.5

(SHA) pH2.0

(抑制 剂 ]】 Zn 人 Ca、 Hgt* 等 。

(光谱 性 质 ] = Ad%m =19(1 cm 光 径 )

活力 测定

(原理 ] 该 酶 能 降解 RNA 为 酸 洲 性 的 小 分 子 赛 聚 核 萌
酸 片段 , 引起 260nm 紫外 吸收 增加 , 以 此 表示 酶 活力 ”

(单位 定义 ] 37°C, 在 测定 条 件 下 , 使 每 ml 反应 液 在 15
分 钟 内 水 解 玉 NA， 产生 260nm 处 光 吸 收 增加 1.0 的 酶 量 为
工 单位 。

[试剂 ]

ORY: BAR RRAR 〈 每 mL 含 12.0mg 核酸 钠
2 |

@ 0.20M pH7.5 Tris 缓冲 液 。

@ 0.020M pH7.5 EDTA 溶液

四 PE del dis (750mg 乙酸 氧 铀 溶解 于 100
ml WARM PH, 这 一 过 氧 酸 溶液 由 22.0ml 70% 车 所 酸 加
78ml 重 蒸 水 配 成 )。

© 待 测 酶 液 ， AAMOM Rae ml Rs 0.1 微克 和 蛋
A.
[测定 方法 ]

一 70 一

在 37°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 3ml BD, HEE RED
” 又 加 入 试剂 :

步 RR 空白 管 (ml) | Pein’ Cm)

1. 在 3ml 离心 管 中 加 入 0.20M pH7.5
Tris 缓冲 液

2. 加 0.020M pH7.5 EDTA 溶液 0.10
aA 加 重 蒸 水 0.30
4. 加 待 测 酶 液 0.10
5. 迅速 加 入 试剂 中 底 物 液 , 立即 混 匀 并 记 时 0.25
6. Tapes pe oe ads aga age 0.25
有。 高 agli aes 10.0ml 试管 吸取 离 0.20
8. 加 重 蒸 水 4.80
cy re 后 在 260nm 处 测定 光 吸 收 值 Att

(计算 )

0.2
ti/ns-— a el

式 中 : AA 为 Ag— Ass -> 为 稀释 僧 数 。
应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。

参考 X 献

Takahashi, K. (1961), J. Biochem. (Japan) 49, 1.

26. 核糖 核酸 酶 人
RIBONUCLEASE A (RNase A)

EC 3.1. 27.5 Ribonucleate 3’ ian ee
tidohydrolase ;

催化 反应

BESS. A

核糖 核酸 一 -一 一 3'- 喀 啶 核 音 酸 十 3' 端 为 喀 喧 核
HRW SEHR 3

核糖 核酸 酶 A 水 解 核 糖 核酸 时 ， 首 先生 成 2，3“=- 环 状 核
背 酸 ， 然 后 再 进一步 水 解 2, 3/- 环 状 核 背 酸 为 3 一 核 埋 酸 。 该
酶 的 碱 基 专 一 性 不 是 绝对 的 , 它 也 能 缓慢 地 水 解 聚 腺 苷 酸 等 。

存在 和 性 质

存在 于 牛 的 胰 脏 中 ， 在 哺乳 动物 的 夺 脏 中 也 存在 类 似 的
核糖 核酸 酶 。

[溶解 度 ] 溶解 于 水 或 稀 缓冲 液 。

(稳定 性 ] ”最 稳定 的 pH # 2.0~2. 5 在 4 条 件 下 ,二
i FET Bes OLE A RAF BE

(AFH) 13, 683

[最 适 pH) 7.0~7.5

[等 电 点 ] pH9.45

[抑制 剂 ] = AFR Cutt Zn** 和 和 琉 基 化 合 物 等 。:
CCH) 人 说 am 三 6.95

活力 测定

[原理 ] Kunitz 经 典 方法 认为 : SERRE
酸 的 环 状 磷酸 被 该 酶 水 解 时 , 此 溶液 在 300nm 处 的 光 吸 收 随
时 间 而 下 降 ( 这 称 为 减 色 效应 ), 用 300nm 光 吸 收 减少 的 速度
推算 出 此 酶 的 活力 单位 。

[单位 定义 ] 在 按 下 述 测定 方法 的 条 件 下 ， 能 众 化 水 解
核糖 核酸 ， 使 一 级 反应 速度 常数 K=1 的 酶 量 为 上 单位 。 通
常 称 作 Kunitz 单位 。

[试剂 ] ae

Q@ 底 物 ,0.1 狗 酵 母 核糖 核酸 (以 试剂 四 配置 )。

@ 0.10M pH5.0 乙酸 缓冲 液 。

@ 待 测 酶 液 : AMAKMRAR ml 含 酶 0.15 一 0.25
单位 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 4.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选

步 又 空白 管 (m1) | Fein’ (ml)
1. 加 底 物 溶液 2.00 2.00
“其 放水 2.00 一
8. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 — 2.00

择 波 长 为 300nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : 以 重
蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ， 每 隔 半分 钟 读 300nm 处 光 吸 收 , 共

读 3 分 钟 , 得 到 一 组 对 应 于 时 间 t Gw A, 值 ， 当 样品 管 反
应 进行 三 小 时 后 ， 再 测定 300nm AEM As, Ap WHA
光 吸 收 , 分 别 求 得 一 组 对 应 于 t 的 log(At 一 AD， 将 15g4A: 一
A) 对 t+ 上 作 图 , 应 得 到 线性 关系 ， 画 出 直线 ， 求 出 直线 斜率 的
数值 称 为 S, 将 S 代入 下 述 公式 即 可 求 出 酶 活力 。
[计算 ]
le EX = ae
‘MUS ae ae ae mB

应 用 范围 ”用 于 生化 分 析 和 生化 研究 。
参考 xX 献

Kunitz, M. (1946), J. Biol. Chem. 164, 563.

27. &— he pri
a-AMYLASE

EC 3.2.1.1 1, 4-a-D-Glucan glucanohydrolase

催化 反应

在 含有 多 个 1, 4-a-D- 葡 萄 糖 单位 的 多 糖 链 上 -内 切 了
4-a- 了 -糖苷 键 。

存在 和 性 质

广泛 存在 于 动物 、 植 物 、 微 生物 中 ， 例 如 在 考 荐 和 动物 的
唾液 ,脾脏 中 都 含有 较 多 的 a- 演 粉 酶 。

溶解度】 非常 容易 溶解 于 水 和 稀 的 缓冲 液 中 。

[稳定 性 ]】 溶液 保存 于 pH4.8~10.6, jm Cat* 可 增加

酶 的 稳定 性 , 干粉 于 一 20"C 保 存 , 可 放置 一 年 。
[分 子 量 ] 45, 000 F#BD; 51, 000(C4，o78202)
[最 适 pH] 6.9; 5.5~.0( 细 菌 )
[等 电 点 ] pHs.8Chwe
(we Nat, K+ Catt Cl 、Br NOs
[抑制 剂 ] 重金 属 离子 、Ag+、Cu++、Hg++、 尿 素 。
[光谱 性 质 ] «= AMim =24G#BD
活力 测定
[原理 ] ”以 3，5- 二 硝 基 水 杨 酸 测定 a- 淀 粉 酶 水 解 演 粉
产生 的 糖 量 来 表示 酶 活力 。
[单位 定义 ] 在 25°C, 每 分 钟 能 催化 分 解 底 物 产生 1 微
克 分 子 麦 芽 糖 的 酶 量 为 1 单位 。 |
【试剂 ]
® JRWYR: 1% BHM XH H—V 20mM PH6.9
磷酸 钠 ( 内 含 6.7m 氧化 钠 ) 的 缓冲 液 配 置 。
加 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 显 色 剂 : 1.608 所 氧化 钠 溶 于 70

mi H,O 中 ， 再 加 入 1.0g 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 、308g 酒石酸 钾

钠 , 用 水 稀释 到 100ml,

@ 麦芽 糖 标准 溶液 ，1.0ml 溶液 含有 0.360mg KA
Cl 微克 分 子 麦 芽 糖 /ml)。

® 待 测 -淀粉 酶 : 用 水 稀 杰 至 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 四 支 试 管 ， 按 下 表 操 作 步 骤 加 入
试剂 。

Gr)

As 一 A>) x Fey mole
单位 /mg= eG SCRE neat

步 又 SAE | 样品 管 | 标准 空白 管 | 标准 管
(m1) (ml) (ml) m
1. 加 底 物 溶液 0.50 0.50 =
}
2. 加 重 薰 水 0.50 -一 | 1.00 ae
8. IAB, IZBNICN, ae 0.50 项 x
25°C TA Rin — 77 '
4 ee ag 39 5- 二 硝 基 水 杨 酸 显 1.00 1.00 1.00 1.00
|
5. MEFRVERR 一 一 -一 1.00

6. 在 100?C 水 浴 沸 腾 五 分 钟 后 冷却

.加重 蒸 水

. 测定 540nm 处 光 吸 收 值

应 用 范围 ”用 于 生化 分 析 和 工业 用 酶 。

参考 文 献
Bernfeld, P. (1955), Methods in Enzymol. 1, 149 (Colowick, S. P. and
Kaplan, N.O. ed.) Academic Press, N. Y.

28. Bie 粉 酶

g-AMYLASE

EC.3. 2. is 2 .1,4-a-D-Glucan maltohydrolase -

fe
从 多 糖 链 的 非 还 原 端 , 水 解 1 4-o- BE, 7 HSB IES

糖 。 ，
存在 和 性 质
存在 于 植物 、 细 菌 和 牛乳 中 。 例 如 : BAKKE
暮 中 都 含有 此 酶 , 才 芽 中 含量 最 高 , 一般 从 麦芽 中 提取 。

[溶解 度 ] 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

[稳定 性 ] 干粉 于 一 20"C 可 保存 一 年 。

[分 子 量 ] 152,000+15, 000; 57,200 (面粉 )

[最 适 pH) 4~6(H)

[等 电 点 ] pH4.74~4.79

[激活 剂 ] ~=K* Nat

[抑制 剂 ] 卫 gCl、Ag*、 Cu 、H8 tA

[光谱 性 质 ] Ad%m =17.7cm 光 径 ) (HE)

活力 测定

[原理 ] 以 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 测 定 C- 淀 粉 酶 水 解 淀粉
产生 的 糖 量 来 表示 酶 活力 。

[单位 定义 ] 25"C， 每 分 钟 能 催化 分 解 底 物产 生 工 微 死
分 子 麦 芽 糖 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

© 底 物 溶液 : 1% 马 铃 昔 支 链 淀粉 用 16m PH4.8 的
乙酸 缓冲 液 配 置 。

@ 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 显 色 剂 : 1.608g 氧 氧化 钠 深 于 70
ml 水 中 , 再 加 入 1.08g 3, SS REKREM 208 WARE,
用 水 稀释 到 100m1,

@ 麦芽 糖 标准 液 : 1.0ml 溶液 含有 0.360mg BMA

微克 分 子 麦 芽 糖 /1.0mD)。
® 待 测 6B- 淀 粉 酶 : FRSA RE,
(测定 方法 ]

在 25"C 恒温 条 件 下 ， 取 四 支 试管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 六

试剂 :

| sae | ane | 标准 空 自 管 | mee
| ml) | Gal) | Gal)

1. 加 底 物 溶液

2. 加 重 蒸 水

3. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并
记 时

4. 25"C 准 确保 盟 三 分 钟

5. 加 3 5- 二 硝 基 水 杨 酸 显 色 剂 1.00 1.00 1.00 1.00

一 -一 一 一 | 一 -| 一 一 -一 -一 | 一 一 一

6. MAF Rie 一 一 一 1.00

7. 在 100C 水浴 中 沸腾 五 分 钟 后 冷却

8. 加 重 攻 水 10.00 | 10.00 10.00 10.00
9. 测定 540nm 处 光 吸 收 值 Az | A Ags Ag

= (Aaa As)» ie eae mmole
单位 /mg= (Ag—Ages) x 3( 分 ) x 样品 管 rh jig mg 数

应 用 范围 ”用 于 生化 分 机 和 工业 用 酶 。

eae. ale

S$ £ x i

_ Bernfeld, P. (1955), Methods in Enzymol. 1, 149 (Colowick,S. P,

and Kaplan, N.O. ed.) Academic Press, N. Y.

29. 纤维 素 酶
CELLULASE

EC 3.2.1.4 1,4-(1,3; 1,4)-8-D-Glucan 4-glucanohydro-
lase

催化 反应

能 催化 纤维 素 的 B-1 4- 糖苷 键 水 解 。

存在 和 性 质

广泛 存在 于 细菌 、 低 等 和 高 等 动物 中 。 可 由 木 霉 提取 。 纤
维 素 酶 是 一 种 多 组 分 的 酶 ， 一 般 认 为 有 (4 酶 、Cx 酶 和 A- 葡
， 萄 糖苷 酶 ， 而 不 同类 型 的 菌 毛 显示 的 酶 活性 也 不 完全 一 样 ，
为 了 综合 表示 纤维 素 酶 的 活性 , 可 用 不 同方 法 测定 。 所 谓 Cr
酶 系 指 分 解 天 然 纤 维 素 为 短 链 纤维 素 或 直 链 纤维 素 的 纤维 素
酶 。 所 谓 Cx 酶 系 指 分 解 短 链 纤维 素 成 纤维 诊 糖 、 纤 维 二 糖 等
较 小 单位 的 纤维 素 酶 。

CARE) 溶解 于 水 和 稀 绥 冲 液 中 。

(稳定 性 ] 在 pH4~6 较 稳 定 , 干粉 在 4"C 贮存 , 可 稳定
一 年 。 一 般 在 40 一 50"C 反 应 , 在 60C 以 上 失 活 。

[分 子 量 ] 63,000 (Myrothecium verrucaria)

35,500 (CPejzzcz112U1L notatum)

一 79 一

(ig pH) 5~6
(HR) pHe.9 Gite)
[抑制 剂 ] «AAR AR E-C- Aa a Cott,

Her

[光谱 性 质 ] AdL%.m =26(1cm 56%) (Penicillium no-
tatum) .

活力 测定

[原理 ] ”纤维 素 酶 水 解 滤 纸 中 纤维 素 , 产生 纤维 二 糖 、 葡
萄 糖 等 还 原 糖 ， 这 些 还 原 糖 能 将 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 中 硝 基 还
原 成 橙黄 色 的 氨基 化 合 物 ， 利 用 比 色 法 测定 其 还 原 物 生成 量
来 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 40"C,， 每 分 钟 催化 分 解 滤纸 产生 相当 于
1 微克 分 子 葡 萄 糖 的 还 原 糖 的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

ORY: 新 华 一 号 中 速 层 析 滤 纸 , BM 1x lem yp) ie
用 。

@ 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 显 色 剂 : 称 取 10g 3, 5- 二 硝 基 水
AR YET AHA PH, 加 入 20g AA, 2008 HARA,
加 水 500ml, FHA Rae, MARA 28 和 无 水 亚硫酸钠
0.58, INTHE, 待 全 溶 后 冷却 , 定 容 1000ml。 贮 存 于 棕色 瓶
中 , 放置 一 周 后 使 用 。

@ 0.04M pH4.5 乙酸 -乙酸 钠 缓 冲 液 。

® 待 测 纤维 素 酶 溶液 用 试剂 @ 稀 释 至 适当 浓度 。

© 和 葡萄糖 标 准 溶 液 : 180mg 干燥 葡萄 糖 深 于 水 中 定 容
100ml, 则 每 ml 溶液 含 葡萄 糖 10 微克 分 字 。

[测定 方法 ]

在 40°C 恒温 条 件 下 , 取 四 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试

=— $0 —:

剂 ;

1. 加 葡萄 糖 标准 溶液 = Big a aes
2 加 待 测 酶 溶液 ere pre 一 到
3. 加 乙酸 缓冲 液 Pci th aches 200 vee

上 述 试剂 , 混合 均匀 后 置 40°C 水 浴 中 准确 保温 反应 60 4} Bh,
立即 取出 。 再 加 热 者 沸 10 分 钟 ,冷却 后 , 分别 在 各 试管 中 加
入 3, 5- 二 硝 基 水 杨 酸 显 色 剂 3.00 ml, 在 空白 管 中 加 入 OF
新 华 一 号 中 束 层 析 滤 纸 (6 x lcm2) ， 然 后 将 各 试管 置 沂 水 浴
中 加 热 15 分 钟 ， 冷 却 后 分 别 在 各 管 中 加 重 蒸 水 10.00 ml 并
AWA, 最 后 在 550nm 处 读 光 吸收 值得 As, Ag, Ages, Aig,
[计算 ]
uv AAs) x 标 准 管 中 含 葡萄 糖 的 wmole 数
年 位 /mg 一 (AAAkay x 60S) x SLAVES HBG mg He
应 用 范围 ”用 于 植物 细胞 脱 壁 、 细 胞 杂交 、 生 化 研究 。

参考 文 献
BA, HEH, 1979, ile, 3, 33,

=— BL

30. 8 FH Mw
LYSOZYME

EC 3. 2. 1. 17 Mucopeptide N-acetylmuramoylhydrolase

催化 反应

溶菌 酶 能 洲 解 很 多 细菌 的 细胞 壁 ， 对 草 兰 氏 阳 性 菌 和 产
生 M. Lutevs 的 小 球菌 比较 敏感 ,对 革 兰 氏 阴 性 菌 , IL a
宾 聚 N- 乙 酰 氮 基 葡 萄 糖 也 有 作用 。 它 作用 于 粘 肽 和 粘 多 糖 中
N- 乙 酰 胞 壁 酸 和 2 乙酰 氨基 -2- 脱 氧 了 -葡萄 糖 之 间 的 BC-]
人 4- 键 。

存在 和 性 质

广泛 存在 于 动 植物 组 织 、 分 沁 物 、 卵 白 和 微生物 中 ， 一 般
用 鸡蛋 白 来 提取 。

CARRE) 溶 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

(稳定 性 ] 在 P 也 4~ 汪 时 很 稳定 ， 在 碱 性 和 中 性 条 件 下
酶 不 稳定 。 干 粉 在 4"C 保存 一 年 以 上 不 失 活 。

【分子量 ] ”14, 388( 鸡 蛋白 )

(最 适 PH] 6~7

于 训 ] pH 10.5~11.0

[抑制 剂 ] 重金 属 离子 、 氧 化 剂 . 表 面 活性 剂 如 二 二 烷 基
Fei PY KE A RAY AT AED,

[光谱 性 质 ] ALF =26.2(.cm 36%) OSA)

活力 测定

【原理 】 溶菌 酶 能 水 解 Meczococcxs Lysodeikticus 菌 的

悬浮 液 , 使 450nm 处 光 吸 收 减少 , 以 此 测定 酶 活力 。
[单位 定义 ] 25°C, 2) BR 450 nm 光 吸 收 减少 0.001
。 的 酶 量 为 工 单位 。

[试剂 ]

@ 底 物 溶液 : BABE R. 将 -Mrzcrococczs Lysodetk-
ticus 菌 种 接种 于 固体 培养 基 上 ，35"C 培 养 48 小 时 。 用 蒸 饮
水 将 菌 体 洗 下 来 , 纱布 过 滤 , 滤液 离心 后 , 倾 去 上 层 清 液 , 用 蒸
馆 水 洗 菌 体 数 次 ， 以 除去 混杂 的 培养 基 ， 最 后 用 少量 水 悬浮 ，
冰冻 干燥 得 黄色 粉末 备用 。 称 取 上 述 菌 体 冻 干粉 10mg, 加 试
MOLE, DRAM 2 分 钟 ， 倾 出 后 用 试剂 @ 稀 释 至
50ml, 使 此 悬浮 液 的 Auson 为 0.7 左右 。

@ 0.10M pH6.24 磷酸 钾 缓 冲 液 。

@ UBM: HAMOMRBIBE4KE, 即 能 使 反应 管
每 分 钟 Ajsonm 变化 为 0.02 一 0.04 时 的 酶 浓度 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 二 支 试管 ， 按 下 表 操 作 步 又 加 入
试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选

步 RR 空白 管 (ml) | 样品 管 (ml)
1. 加 底 物 溶液 2.50 2.50
2. 加 0.10MM pH6 24 磷酸 缓冲 液 0.50 一
3. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 一 0.50

择 波长 为 450nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : 以 重
蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 4 人 4) 共
读 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每

分 钟 A 的 减少 值 (CAA/ 分 ) 为 A Agsoam/3 ar AAg 5 一 人 As/
TE) :
ye os A Agsonm/4
HMIL/M8= 9 Ooi xme hi /mal MILAM

应 用 范围 ”用 于 生化 研究 和 作为 生化 药物 。
Ss M Mm

Shugar, D. (1952), Biochim. Biophys. Acta. g, 302.

31. 神经 氨 酸 音 酶 (唾液 酸 酶 )
NEURAMINIDASE (SIALIDASE)

EC 3. 2.1.18 Acylneuraminyl hydrolase

催化 反应
神经 氨 酸 苷 酶 水 解 各 种 粘 多 糖 末端 的 N- 乙 酰 神经 氨 酸

和 2- 乙酰 氮 基 -2- 脱 氧 -了 - 半 乳 糖 之 间 的 wa-27 6- 键 5
粘 多 糖 一 > 及 人 -乙酰 神经 氨 酸 粘 多 糖
+N- 乙 酰 神 经 氨 酸

存在 和 性 质

广泛 存在 于 微生物 (病毒 、 细 菌 ) 和 动物 ( 鸟 类 和 哺乳 类 )
组 织 中 。 神 经 氨 酸 苷 酶 最 好 的 来 源 是 流感 病毒 颗粒 和 埠 乱 细
菌 。 在 病毒 中 , CAPRA KAY, SZAA, BAL
在 生长 过 程 中 将 此 酶 释放 在 培养 基 中 。

(溶解度 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 溶液 。

(稳定 性 】 神经 氨 酸 背 酶 冻 干 粉 在 4°C 干燥 保存 。 鼠 心

神经 氨 酸 酶 经 纯化 后 极 不 稳定 ，0C 保 存 , 在 一 星期 内 活力 可
损失 一 半 。
(AFH) 130, 000( 流 感 病毒 Az)
90, 000 (#2 ALEX)
(最 适 pH) 5.0C iD)
[等 电 点 】 pH5.1 C. perfringens); pH7.0~7.3CiK
心 )
[抑制 剂 ] N- 乙 酰 神经 氨 酸 和 N- 取 代 的 氨 痰 基 甲 酸 可
400 ail BLD HH ZS A A,
活力 测定
[原理 ] 神经 氢 酸 苷 酶 作用 于 底 物 糖 蛋 白 释 放出 游离 的
神经 氮 酸 ， 游 离 的 神经 氮 酸 经 高 碘 酸 氧化 ， 转 化 成 BE- 甲醛 丙
酮 酸 ， 后 者 和 硫 代 巴 比 妥 作用 生成 能 被 有 机 溶剂 鞭 取 的 生 色
团 , 进行 分 光 光 度 法 测定 。
(单位 定义 ] 在 37"C、Pp 了 5.0 的 条 件 下 , 每 分 钟 能 催化
产生 1 微克 分 子 N- 乙 酰 神 经 氮 酸 的 酶 量 为 工 单位 。
[试剂 ]
© 底 物 溶液 : 2mg 胎 球 蛋白 溶 于 iml 水 中 。
回 0.20M pH5.0 乙酸 钾 绥 冲 液 。
@ 0.20M 高 碘 酸 钠 溶液 : 用 9 磷酸 配置 。
® 10 儿 (重量 /体积 ) 砷 酸 钠 溶液 ， 用 含有 0.52M 硫酸 钠
和 0.1N 硫酸 的 溶液 配置 。
© 0.6% 《重量 /体积 ) 硫 代 巴 比 妥 溶液 : 用 0.5M 硫酸
钠 洲 液 配置 。
HK Me. ,
@ N-ZRMAARNER: 每 ml 洲 液 含 10 微 区 分 子
N- 乙 酰 神经 氨 酸 。 | |

©) fy ul Raya i: 将 神经 氨 酸 童 酶 用 试剂 四 稀释 到 适当

浓度 。
[测定 方法
By DSe te HF SEAR Eo IMG.
空白 管 | 样品 管 | MESA rte
BO (ml) | (ml) | ml) | (ml)
1. 加 底 物 溶液 0.10 0.10
2. 加 0.20M pH5.0 乙酸 缓冲 液 0.10 0.10
8. 加 N- 乙 酰 神 经 氨 酸 标准 液 一 0.10
4. MBAK 0.10 一

5. 迅速 加 入 待 测 酶 溶液 , 立即 混 匀
并 记 时

6. 于 87°C KGET RIB LR 人
7. 同人 20M 高 碘 酸 钠 溶液
8. 加 待 测 酶 溶液

12. 每 管 混合 均匀 ， 在 沸水 中 加 热 15 分 钟 ,冷却 到 室温

9. 每 管 混合 均匀 ， 室温 放置 25 分 钟

10. 01% BBE YES TR

11. 0.6% 硫 代 巴 比 妥 溶液

18. MAM 2.00

2.00 | 2.00 2.00

接着 振 摇 菜 取 有 色 化 合 物 ， 取 环 已 酮 层 在 549nm 或 532
”mm 处 进行 比 色 测定 , 得 到 下 列 各 值 : Ax. Ap Ame, Ane
GH) |
单位 /mg= (A# 一 As)x 标准 管 中 六 - 乙酰 神经 氮 酸 的 wmole 数
(Ag — Ages) x 60( 分 ) x 样品 管 中 酶 的 mg By
应 用 范围
用 于 病毒 学 研究 、 粘 多 糖 结构 分 析 和 临床 检验 。

参考 文 献

Tallman, J. F. et al. 〈1l972)， Methods in Enzymol. 28, 825. (Ginsburg
V. ed.) Academic Press, N. Y.

32. B—FHi 2d Be RE EF
g-D-GLUCURONIDASE

EC 3. 2.1.31 g-D-Glucuronide glucuronosohydrolase

催化 反应

B-D-%ij 44 Fe ER FF + H,O—D- 4 45 HF EMR + ROH

存在 和 性 质

广泛 存在 于 微生物 高 等 植物 和 动物 的 脾脏 、 肝 脏 、 肾 脏
等 组 织 中 。 一 般 从 动物 的 肝 脾 组 织 中 提取 。

CARRERE) 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

[稳定 性 】 酶 的 冷冻 干粉 4C 贮存 , 半年 内 不 失 活 , 如 果
在 一 20"C 贮 存 可 保存 二 年 或 更 长 时 间 。

[分 子 量 ] 280,000 (AIF)

[最 适 pH) 4.0-~5.0

[等 电 点 ] PH5.8( 鼠 肾 )

[激活 剂 ] Na+、DNA。

[ 换 制 剂 ] Cur+、Hg+r+、Ag+、D- 葡 糖 醛 酸 内 酯 。

[光谱 性 质 ] Asm =17 Cem 光 径 ) 〈 牛 肝 )

活力 测定

[原理 ] ”B- 葡 萄 糖 醛 酸 背 酶 作用 于 底 物 酚 酌 葡 糖 醋酸
昔 释 放出 游离 酚 酌 , 用 比 色 法 测定 游离 酚 本 的 量 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 37°C, 每 分 钟 能 催化 生成 1 微克 分 子 产
物 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

® 底 物 溶液 ，0.010M pH7.0 酚 酌 葡 糖 醛 酸 背 水 溶液 。

@ 0.10M pH4.0 乙酸 缓冲 液 。 eens

@ 0.40M 氨基 乙酸 溶液 ， 以 氢 氧 化 销 溶液 调节 pH 至
Ly . |
® BEAVER: ERR 31.84mg BA, CES
解 并 稀释 至 looml, 每 ml 溶液 相当 于 1 PHD TK,

© 待 测 酶 溶液 ， 用 重 蒸 水 稀释 到 适当 的 浓度 。

[测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 , 取 三 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 1.0ml。

(计算
v/mg=_CA# 一 As)X 标 准 管 中 酚 酰 的 wmole 数 ，
inal (Ag — Az) x 60( 分 ) x FE an EP AMS Be

应 用 范围
用 于 生化 分 析 和 生化 研究 。

7

步 RR 空白 管 (ml) | 样品 管 (m1) | 标准 管 (ml)

1. 加 底 物 溶液 | 0.10 0.10 0.10
2. 加 0.10M PH4.0 乙酸 缓冲 液 0.40 0.40 0.40
3. IMBIBE 一 一 0.10
4. 加 重 燕 水 0.50 0.40 | 0.40

6. 76 37°C 保温 准确 反应 一 小 时 , 立即 终止 反应 。

7. 加 0.40M 氨基 乙酸 溶液 终止 et ds
反应 4.00 —. 4.00 : 4.00
8. 在 540nm 处 比 色 测 光 吸收 值 Ax Ar Ag

S$ £ xX 献

Fishman, W.H. et al. (1948), J. Biol. Chem. 173, 449.

33. 透明 质 酸 本
HYALURONIDASE (HAse)

EC 3. 2.1.35 Hyaluronate 4-glycanohydrolase

催化 反应
能 众 化 透明 质 酸 中 2- 乙酰 氮 基 -2- 脱 氧 BE-D- 葡 萄 糖 和

D- 葡 糖 醛 酸 残 基 相 连接 的 键 水 解 。

存在 和 性 质

透明 质 酸 酶 广泛 存在 于 动物 组 织 中 ， 如 : SL Pee.
皮肤 、 血 液 等 ， 也 存在 于 蛇毒 和 某 些 细菌 的 代谢 产物 中 ， 一
般 用 动物 罕 丸 来 提取 。 它 由 蛋白 和 2.17~5% 氨基 葡萄 糖 及
5.0~5.2% HS AR.

(溶解度 ] YAR 7k GE oH

(稳定 性 ] BEANO UR RIZE 4°C 贮存 , 可 稳定 二 年 以 上 ，
水 溶液 在 4°C 可 稳定 二 星期 。 用 pH 6.0 绥 冲 液 溶解 该 酶 可
增加 其 对 热 的 稳定 性 。

(AFH) 61 000/423) 89, 000 (4a FF)

[最 适 pH) 4.5~6

[抑制 剂 ] 高 分 子 量 的 多 糖 和 重金 属 离子 Fett, Znt+
CE

[激活 剂 ] RAAB SRR MA 1:10 二 氨基 业
烷 。

活力 测定

【原理 ] 透明 质 酸 酶 能 水 解 透 轩 质 酸 使 其 分 子 量 变 小
并 增加 水 溶性 , 一 般 以 浊 度 降低 来 表示 酶 活性 。

(单位 定义 ] JEP 125 weg 透明 质 酸 , 在 测定 条 件 下 被
透明 质 酸 酶 水 解 ， 使 该 底 物 浊 度 降低 50 9% 的 酶 量 为 1 单位
CUSP 单 位 )。

【试剂 ]

© JR WYER. 透明 质 酸 用 试剂 @ 配 成 悬浮 液 , KBAR
度 为 250wg/ml。

@ 0.10M pH6.0 乙酸 缓冲 液 , 内 含 0.0652 毛 化 钠 。

@ 0.035M 省 化 十 六 烷 基 三 甲 铵 盐 ， 用 O.50M PH4.2

一 96 一

-了 ae ant mt >

乙酸 缓冲 液 配置 。

® 待 测 酶 液 ， 用 试剂 @ 配 置 并 稀 梭 成 适当 浓度 。
【测定 方法 ]
在 37°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试

剂 , 反应 总 体积 为 2.0 ml,

wo

~~

ot

步 又 空白 管 (ml1) | 样品 管 (m1)
. 加 底 物 溶液 0.50 0.50
. 加 0.10M pH6.0 乙酸 缓冲 液 1.50 1.40~1.00
. eM AMAR, WAR AFH ic = 0.10~0.50
i ae 80 分 钟 后 立即 加 入 试剂 加 终止 | ，4.00 4.00
.离心 后 , LA 400nm 处 测定 光 吸 收 值 Az ah

如 果 不 同 酶 浓度 的 样品 管 所 得 (As 一 A#) 值 和 酶 浓度 成

线性 关系 , 即 可 进行 活力 单位 计算 。

[计算 ]
A» — Ap
单位 /mg= age he
ees 0 5X me PM mg 数
应 用 范围
可 用 作 生化 研究 和 作为 生化 药物 。

参考 文 献

Biochemica (1978), Merck, p. 24.

34, AKG ( 胞 浆 )
AMINOPEPTIDASE (CYTOSOL)

EC 3.4.11.1 a-Aminoacyl-peptide hydrolase (cytosol)

催化 反应
O

| SKE
L-(CH,) ,CH-CH,-CH(NH,)C—NH—R + H,O—

0
L—(CH,),CH-CH,-CH Hyon +NH,—R
R ¥y Fy KE he A,
存在 和 性 质
氨 肽 酶 ( 胞 浆 ) 广 泛 存在 于 动物 组 织 、 醇 母 、 细 菌 中 ， 在 猪
肾 中 含量 较 高 ,一般 从 猪 肾 中 提取 。 它 是 含 锌 的 蛋白 质 。
( 洲 解 度 j 溶解 于 水 或 稀 缓 冲 液 。
[稳定 性 ] ”最 适 稳定 pH7~9, Me** 可 使 该 酶 水 溶液 稳
定 二 天 , 该 酶 悬浮 于 3M 硫酸 匀 ( 含 0.MM pH8.0 Tris 缓冲
WA 0.005M MgCl) 中 在 4"C 可 保存 四 个 月 , 酶 的 干 制剂 在
0~~4C 可 稳定 几 个 月 。
(Fit) 300,000 GA)
[最 适 pH) 98.20.0054 Mg**)
[等 电 点 】 pH4~5
[激活 剂 ] Mg Mn
[抑制 剂 】 加、 Cut? Cd、 Het*, Pott, #AaR, H

= 92 =
=

HATE TAY. |
(光谱 性 质 ] AL. =8.4(icem 光 径 )( 猪 肾 )
活力 测定
[原理 ] ”该 酶 能 水 解 底 物 亮 氨 酰 胺 , 使 其 在 238nm 处 光
吸收 值 增加 , 以 Assan 减少 表示 酶 活力 。
[单位 定义 ] 在 25"C、pH8.5 条 件 下 , 每 分 钟 能 催化 分
解 1 微克 分 子 底 物 的 酶 量 为 1 单位 。
[试剂 ]
® 底 物 溶液 ， 0.06M 工 - 亮 氨 酰 胺 盐酸 盐 溶液 (以 试剂
@ 配 置 )。
@ 0.50M pH8.5 Tris 缓冲 液 。
@ 0.025M 氯化镁 溶液 。
@@ 待 测 酶 液 ， 用 试剂 四 稀释 到 适当 浓度 。
[测定 方法 ]
在 25"C MBA, 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择

ge R A Gnl) | Han‘ Gal)
1. 加 底 物 溶液 is 2.50 } 2.50
2. 加 Tris 缓冲 液 0.30 ae
8. 0.025M 氧化 镁 溶液 Heyis 0.20
4. PRIA FEU BRA he SEAR IFICN 一 0.10

波长 为 238nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 测 定 光 吸 收 值 : LAR
水 校正 光 吸 收 到 0 点 , 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸收 人 A)， 共 读

3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 分
eh A Wy PI (AA/4}) Wy AAzsgnm/y = Ag) — AAs 4,
Tr)

ve os. A Ao3zgnm/s
年 位 /mg 一 0 O11 x me fig /mal Ee

工 - 亮 氨 酰 胺 的 酰胺 键 的 克 分 子 消光 系数 为 0.011x':10 。
应 用 范围
A ATE ARIA HT.

参考 xX 献

Binkley, F. and Torres, C. (1960),Arch. Biochem. Biophys. 86, 201

35. 氮 肽 酶 (微粒 体 )
AMINOPEPTIDASE (MICROSOMAL)

EC 3.4.11.2 a-Aminoacyl-peptide hydrolase (micro-
somal)

催化 反应 |
RG HEAL: NEE WRK, BE RSE
AX B.-A SARE, AB a BR RE, BE I
肽 酶 水 解 肽 链 时 , A 为 两 氨 酸 时 水 解 速度 最 快 , A 为 非 极 性 残
基 时 水 解 速度 也 很 快 。 氨 肽 酶 M 能 水 解 人 为 且 氨 酸 、 碱 性 所
基 酸 及 其 他 一 般 氨 基 酸 。
存在 和 性 质

广泛 存在 于 动物 脏 器 中 , BEAM EAM,

CARE) 溶解 于 水 和 稀 缓 冲 液 。

[稳定 性 ] ”该 酶 应 贮存 于 干燥 、 避 光 和 低温 处 。

[分 子 量 ] 75, 000 一 80, 000

[最 适 PH] 8.0~9.2

(SHR) pH4.6

(HA) L-ERAR.L AB AR LAR,

活力 测定

[原理 ] ”该 酶 能 水 解 亮 氨 酰 B- 蔡 胺 产生 游离 6- 蔡 胶 ，
用 比 色 法 测定 游离 B- 蔡 胺 量 表示 酶 活力 。

[单位 定义 ] 在 反应 条 件 下 ， 每 分 钟 催化 生成 1 微 死 分
子 B- 蔡 胺 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

® 底 物 溶液 : 0.209% 工 - 亮 氨 酰 -G- 蔡 胶 : 称 取 200mg
L- 亮 氨 酰 -B- 蔡 胶 盐 酸 盐 , 溶解 于 少量 甲醇 中 , BAK
释 到 100ml,

@ 0.05M pHs.2 fil pH7.4 Tris 缓冲 液 〈 测 定 所 肽 酶
M 用 PH7.4, Wiese AR AK A pHs.2),

@ 8B- 葵 胶 标 准 液 : 准确 称 取 17 .97mg - 茜 胺 盐酸 盐 ，
溶 于 水 中 ， 用 水 稀释 到 looml, Bide ml WMA 1 ha TF
B- 蔡 胺 。 |

@ 20% (HE/ (KR) ARIK.

© 0.20% (重量 /体积 ) 亚 硝酸 钠 深 液 。

© 0.50% (重量 / 体 积 ) ASE RIA IK CT BC)

@ 0.050% (重量 /体积 ) N-1- 蔡 基 盐 酸 二 氨基 乙 炳 : 用
甲醇 配置 , 在 4°C 保存 可 用 二 周 。
0.10M 氯化镁 溶液 。

© 待 测 酶 溶液 : 用 试剂 @ 稀 释 到 适当 浓度 。

【测定 方法 j
取 三 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试剂 ;
步 RR 空白 管 (ml) | 样品 管 (ml) | 标准 管 (ml)
1. 加 底 物 溶液 0.20 0.20 ». 0.20
2. 加 0.10M 氯化镁 溶液 0.20 0.20 0.20
3. 加 Tris 缓冲 液 1.30 本
4. 加 R-AK NER 一 一 0.20

5. 37°C 2 10 分 钟

6. 加 入 待 测 酶 液 , 混 匀 并 记 时 0 0.30 on

ar oo 10 分 钟 后 立即 加 入 斌 1.00 1.00 1.00
8. IAM RK 0.30 于 全 0.30

9. 用 定量 滤纸 渡 去 沉淀 , 另 取 一 套 试管 , 做 上 记号

10. 取 过 滤 后 清 液 了 工 .00 1.00 1.00
11. 加 试剂 @, 振 摇 10 分 钟 1.00 工 .00 工 .00
12. 加 试剂 @, 振 摇 5 分 钟 1.00 1.00 1.00
13. 加 试剂 @ 后 放置 30 分 钟 oh tks 2.00 2.00.
14. ZEB E BG 578nm Yaa | ana rap
= 96 =

FL
Sa <

HH) ,
(Ag—Az) x 10G)) x 样品 管 中 酶 的 mg 数

应 用 范围

用 于 蛋白质 结构 分 析 。

\
S & M BM

Bergmeyer, H.U. (1963), Methods of Enzymatic Analysis, p. 830,
Academic Press, N. Y.

36. YeIKRE A
CARBOXYPEPTIDASE A (CPA)

EC 3. 4.17.1 Peptidyl-L-amino acid hydrolase

催化 反应
羧 肽 酶 人

肽 链 - 工 -氨基 酸 +H:O0 一 > 肽 链 十 工 -氨基 酿

工 -氨基 酸 一 般 为 带 有 芳香 环 的 氨基 酸 或 羟基 氨基 酸 。

存在 和 性 质

存在 于 牛 和 猪 的 胰 脏 中 ， 一 般 从 牛 胰 中 提取 。 该 酶 以 酶
及 形式 存在 于 胰 脏 中 , 被 胰 蛋 白 酶 激活 后 , 能 催化 具有 游离 氨
基 、L- 构 型 的 酰胺 、 肽 和 酯 的 类 似 物 的 C 端 肽 链 的 残 基 依 次
水 解 。 每 克 分 子 酶 含有 1 克 分 子 锌 。

CARRE) Ze pH4.0~7.0 水 中 不 溶解 , 溶 于 10% Ath
锂 ( 以 PH7.5 Tris 缓冲 液 配置 ) 中 可 稳定 几 个 星期 。

(稳定 性 ] ” 酶 结晶 悬浮 于 水 中 , 在 42C 保存 较 稳 定 。

(AFH) 34, 600( 牛 胰 ); 34, 300 GRR)

[最 适 pH) 7.5~7.8

(SHA) pH6.0

[抑制 剂 ]】 Cut? | Pb** Fet** 人 柠檬 酸 、 草 酸 、 硫 酸 、 某 些
肽 、D- 氨 基 酸 和 含有 游离 羧基 的 芳香 族 化 合 物 。

[ 兴 谱 人 性质] Ad%m =19.4(icm 光 径 )

活力 测定

ORE) JKR ATKMUR WE REA AR, 改变 了
259nm 处 沧 吸 收 ， 以 259nm 处 光 吸 收 的 变化 表示 酶 活力 。

(单位 定义 】 在 25C、PH7.5， 每 分 钟 能 催化 分 解 工 微
Sit FEW BN 1 AR,

[试剂 ]

© 底 物 溶液 : 0.001M 马 尿 酰 苯 丙 氨 酸 ( 用 新 鲜 试 剂 @
配置 )。

@ 0.05M pH7.5 Tris 缓冲 液 : WH 1.0M 氧化 钠 和
10 % A tb E.

@) 10% Ath AY MK,

© 待 测 酶 液 : AAKRMRAOME, HMR RIE wu
度 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择
MRA 259nm, 用 lem 光 径 比 色 杯 测定 光 吸 收 : 以 重 燕 水 校
正光 吸收 到 0 点 , 每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (A), 共 读 3 分
钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ,计算 出 每 分 钟 A
的 增加 值 CAA/ 分 ) 为 AAosonm, = AAy 4, —AAg 人

步 又 空白 管 (ml) | 样品 管 (ml)

1. 加 底 物 溶液 2.90 2.90

2. 10% 氯 化 锂 溶液 0.10 一

8. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 一 0.10
Gr)

ne AAo2sonm/33
ALLS = 7 30xme M/ml 反应 混合 泊

马 尿 酰 茶 两 所 酸 在 259 nm 处 的 死 分 子 消光 系数 为 0.30
HIE, .
应 用 范围
用 于 蛋白 质 结 构 分 析 。

参考 文 献

Folk, J. E. and Schirmer, E. W. (1963), J. Biol. Chem. 238，3884.

37. FR 肽 AB
CARBOXYPEPTIDASE B (CPB)

EC 3.4.17.2 Peptidyl-L-lysine (-L-arginine) hydrolase

催化 反应

肽 链 - 工 -氨基 酸 上 + HO 5 pepe + Laem

工 -氨基 酸 为 赖 、. 精 、 乌 或 类 精 氨 酸 。

存在 和 性 质

存在 于 牛 和 猪 的 胰 脏 中 ， 一 般 从 猪 胰 中 提取 。 它 是 含 匀
的 酶 蛋白 。

CARE) WHAM,

(稳定 性 ] FRIKBBYAF pH7.5 稀 Tris Bab yeny ye rey
或 悬浮 于 水 的 结晶 ,在 一 10C 冰 冻 贮 存 , 一 年 内 不 失 活 。

(AFH) 34, 300( 猪 )

(EE pH) 7.6~8.0

(SHA) PH6.9( 人 胰 )

[抑制 剂 ] 碱 性 氨基 酸 及 其 衍生 物 、 金 属 离子 束 合 剂 如 .
2, 2- 联 二 吡啶 1 10- 二 氮 杂 非 .8- 羟 基 唑 啉 -5- 磺 酸 。

Ob «ALF =21.0(4 IR)

活力 测定

(原理 ] KM BREW N- 马 尿 酰 精 气 酸 ， 增加 了
254nm JOR, 以 此 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 25"C、PH7.8， ae 1 微
SE FR A 1 PAR

【试剂 ]

© JEWRAMR: 0.002M N- 马 尿 酰 - 工 - 精 氨 酸 : 称 了 到 33.6
mg N- 马 尿 酰 - 世 - 精 氨 酸 湾 于 50ml BAK,

@ 0.05M pH7.8 Tris- 冰 乙酸 缓冲 液

@ 待 测 酶 液 : 用 试剂 @ 稀 释 成 适当 浓度 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , RX INGE PF ER EB RIM AIR
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择
波长 为 254nm, 用 lcm 光 径 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 ， 以 重 蒸 永

23 Ae (mul) | 样品 管 (m1)

1. 加 底 物 溶液 1.50 1.50
2. 加 试剂 @ 缓 冲 液 1.50 1.40
3. 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 一 0.10

校正 光 吸 收 到 0 点 ,每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (人 ), JE 3

分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 分 钟

A 的 增加 值 CAA/ 分 ) 为 AAgsinmy = AAy 3 —AAx a,
Gre)

WOE elie eT hr eee ee
Saft /mg = 0.12 x mg jig/ml 反应 混合 液

N- 马 尿 酰 - 工 - 精 氨 酸 在 254nm 处 的 克 分 子 消 光 系 数 为
0.12x 108,
应 用 范围
用 于 蛋白 质 结构 分 析 。
参考 文 献

Wolff, E.C. et al. (1962), J. Biol. Chem. 237, 3094.

38. IBEFL EE ANG
CHYMOTRYPSIN

EC'S. @Qii 1.

催化 反应

— 161 —

胰 凝 乳 蛋 白 奈 能 催化 水 解 芳香 族 氨基 酸 的 羧基 所 组 成 的
IKE, ERR BE AS BE,
R’ ‘ ie
R— NCH ‘ ~R’+H,0—>R—-N—CH- i —OH +R”
tt tt

为 工 -氨基 酸 非 极 性 侧 链 。

下 为 色 氨 酸 、 酷 氨 酸 和 苯 丙 氨 酸 的 侧 链 。

RY 为 一 般 的 氨基 酸 、 肽 或 醇 的 残 基 。

存在 和 性 质

存在 于 牛 、 猪 等 动物 胰 脏 中 ， 是 从 胰 凝 乳 蛋白 水 解 酶 原
4^、 卫 衍生 出 的 一 系列 蛋白 水 解 酶 。 胰 蛋白 酶 可 激活 存在 于 胰
脏 中 的 胰 凝 乳 蛋白 水 解 酶 原 A、B， 3 2) LF a, By do 胰
BE FL A BG

[溶解 度 ] 溶解 于 水 和 稀 盐 酸 中 。

(稳定 性 ] ” 酶 水 溶液 (pH2~6) 于 370 贮存 生 小 时 活力
损失 20%; 酶 干粉 4C 迪 存 一 年 不 失 活 。

(AFH) 25, 100( 牛 胰 )

[最 适 稳定 PH] 3.0 ©

[最 适 pH) 7.0~8.0

[等 电 点 ] PH 8.1 一 8.6( 牛 胰 )
[抑制 剂 ] ”重金属 离 子 、 有 机 磷 化 合 物 和 天 然 胰 蛋 白 酶
i til 7 , :

【激活 剂 ] Catt

GHEE] = ARF m =20.2(1cem JE FE) (AEB)

活力 测定

【原理 ] 胰 凝 乳 蛋白 酶 能 水 解 底 物 六 酷 氨 酸 乙 酯 , 使 其

一 102 一

Pee -. any)

234nm 光 吸 收 减 少 ,以 此 表示 酶 活性 。

[单位 定义 】 76 25°C, pH7.0, AT EBT Hite 1 微
克 分 子 产 物 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

中 底 物 溶液 : 0.002M MAR ZEA MR CA 0.02M
Cat*). 称 取 49.14mg 工 - 酷 氨 酸 乙 酯 深 于 90m! 试剂 @, 加
入 4.00ml 0.5M CaCl, 溶液 ， 最 后 用 试剂 @ 稀 释 到 100ml,

@ 0.05M pH7.0 Tris 缓冲 液 。

@ 0.001N 盐酸 。，

® UMM: 用 试剂 @@ 深 和 解 并 稀释 成 适当 浓度 。

[测定 方法 ] 在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操
作 步 又 加 入 试剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光
光度 计 , 选择 波长 为 234nm， 用 lem 光 径 比 色 杯 测定 光 吸 收

5 a | sxe Canty | Pea Cnly

1. 加 底 物 溶液 3.90

2. 加 0.001N 盐酸 0.10

S$. aR MAR AS ENR FCN or

值 : 以 重 蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ， 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸
We CA), SEE 3 分钟 , 以 A 对 时 间作 图 , 取 反 应 最 初 线性 部 分 ，
计算 出 每 分 钟 A 的 减少 值 CAA/ 分 ) 为 AAgsinm)y = AAg y —
AAs) 4,

(计算 ]

2

A Ao3inm/s

FANL/M8 = 9 675 x mg fij/ml Se

酷 氨 酸 乙 酯 和 酷 氨 酸 在 234nm 处 克 分 子 消 光 系 数 差 值
为 0.672 x 108,

应 用 范围

用 作 蛋 白质 结构 分 析 和 其 他 生化 研究 。

参考 文 献

[ 1 ] Schwert, G. W. and Takenaka, Y. (1955), Biochim. Biophys
Acta. 16, 570.

[ 2] Rick, W. (1968), Methods of Enzymatic ‘Avelysiay Pp. 802.
(Bergmeyer, H. U. ed.) Academic Press, N. Y.:

39, BE Eg
TRYPSIN

EC 3. 4. 21. 4

催化 反应
胰 蛋 拍 酶 能 从 化 水 解 碱 性 氨基 酸 的 羧基 所 组 成 的 肽 键 、
酰胺 键 和 酯 键 。
oO Ri COAG
RoON-CH—C—R"+H,0—>r—n—_Ca_¢_on sete |

| |
H H

一

有 为 工 -氨基 酸 非 极 性 侧 链 。
及 ' 为 赖 氨 酸 、 精 氨 酸 和 组 氨 酸 的 侧 链 。
及 "为 一 般 的 氨基 酸 、 肽 或 醇 的 残 基 。
FEAR
胰 蛋 白 酶 以 胰 蛋 白 酶 原形 式 存在 于 动物 胰 脏 中 ， 一 般 从
和 后 , 羊 、 猪 胰 脏 提取 。 它 对 天 然 蛋 白质 活性 较 低 ， 不 水 解 血 红
蛋白 、 卵 清 蛋白 和 胶原 蛋白 。

(ERE) 溶解 于 0.01MV 盐酸 。

(稳定 性 ] BEAM TE PH2 最 稳定 , 它 保持 在 pH2.3~3
条 件 下 可 稳定 几 天 , 酶 干粉 在 4°C 贮存 几 个 月 不 失 活 。

(AFH) 23, 800C4F IR)

(Bie pH) 7.8~8.5

(Sm) pH3.7, 4.0 Chee)

(抑制 剂 ] 重金 属 离子 、 有 机 磷 化 合 物 和 天 然 胰 和 蛋白酶
抑制 剂 。

(激活 剂 ] Catt

[光谱 性 质 ] = ALmm =16.0Cicm 光 径 ) (imM thm)

活力 测定

(原理 ] ” 胰 蛋 白 酶 能 催化 水 解 底 物 N- 葵 甲 酰 - 工 - 精 氨
酸 乙 酯 (BAEE) 的 酯 键 , 使 其 254nm 光 吸 收 增加 ， 以 此 表示
酶 活性 。

(单位 定义 ] 在 25°C, PH 8.0, 每 分 钟 能 催化 产生 1 微
克 分 子 产 物 的 酶 量 为 1 单位 。

【试剂

® 底 物 溶液 : 0.001MN- 葵 甲 酰 - 工 - 精 氢 酸 乙 酯 盐酸 盐
《用 试剂 @ 新 鲜 配 置 )。

@ 0.10M pHs.0 Tris 缓冲 液 ( 内 含 lomM Carty:

eS

© 0.001N 盐酸 。

® 待 测 酶 液 : 用 试剂 @ 溶 解 并 稀释 成 适当 浓度 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , Mo MIA ERED RM Aik
剂 , 反应 总 体积 为 3.0mj。 然 后 ， 使 用 紫外 分 兴 光 度 计 ， 选 择

ge R 空白 管 (ml) | Ha‘ (ml)
1. 加 底 物 溶液 2.90 Bhs
2. 加 0.001N 盐酸 ae 7s
8. kM AB IBRD IIA mE 0.10

波长 为 254nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : WHA

水 校正 光 吸 收 到 0 点 ,每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 (A), 共 读

3 分 钟 ,以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ,计算 出 每 分

钟 A 的 增加 值 (AA/ 分 ) 为 A Ags sam)» = AAp,3— AAs 4,
[计算 ]

i® Bey AAd. nb e
AL/ME= TI5Xmg 责 /ml 反应 混合 流

葵 甲 酰 精 氮 酸 和 BAEE 在 254nm BL SEF IG A Bee
{Hy 1.15 x 10°,

应 用 范围

2ATEA 质 顺序 研究 以 及 作为 为 临床 药物 。

S$ 考 文 th
f 1] Schwert, G.W. and Takenaka, Y. (1955), Biochim. Biophys,
Acta. 16, 570.
[ 2 ] Rich, W. (1963), Methods of Enzymatic Analysis, p. 815. (Ber-
gmeyer H.U. ed.) Academic Press, N. Y.

AO. 激 肽 释放 酶
KALLIKREIN
EC 8. 4. 21. 8
催化 反应
wk ik

激 肽 释放 酶 属于 动物 来 源 的 蛋白 水 解 酶 类 。 它 可 以 从 激
肽 原 中 释放 出 激 肽 而 不 分 解 其 他 和 蛋白质， 它 不 能 分 解 酰胺 键
但 可 以 分 解 NX- 取 代 的 精 氨 酸 和 赖 氨 酸 的 酯 ,分解 前 者 的 速度
比 后 者 快 。

存在 和 性 质

存在 于 猪 的 胰 脏 动物 的 唾液 .血清 和 尿 中 。

[ 洲 解 度 】 溶解 于 稀 缓 冲 液 中 。

[稳定 性 】 在 一 50"C 贮 存 可 几 个 月 内 不 失 活 。

(AFH) 108,000( 人 血 ); 95,000C4F IL); 24,0008
We) |
(B36 pH) =7.65(A im, %} TAME); 8.8( 牛 血 )

— i —

[等 电 点 ] = pH4.0 (Ame)

Obi HE) A 培 = =20.5(. cm is EIR)

活力 测定

[原理 」 激 肽 释放 酶 水 解 底 物 一 一 对 甲 蔡 磺 酰 洒 二 精 氢
酸 甲 酯 盐酸 盐 (TAME), 释放 出 游离 甲醇 。 Fa SEBUM ae FE
放 甲 醇 的 量 来 表示 酶 活力 。

[单位 定义 】 在 37"C、PH7.6， 每 分 钟 催化 分 解释 放出
1 微 元 分子 甲 醇 的 酶 量 为 1 单位。
GRAD ;

O 底 物 溶液 : 0.055M TAME yyy. wae 208mg
对 甲苯 磺 栈 - 工 - 精 氮 酸 甲 酯 盐酸 盐 深 于 10ml AHO, 使 用 前
新 鲜 配 置 。 |

@ 0.10M pH7.6 BERR eh we 0.15M AL bh),

@ 2 狗 高 锰 酸 钾 溶 液 。

@® 10 儿 亚硫酸钠 溶液 。

© 和 任 变 酸 溶液 : 称 取 400mg HAR ye he 20 ml ti
水 中 , 加 入 180ml 65% FR, 圣 黄色 备用 之 。

© 1b%Z=AZR,

@ 待 测 酶 溶液 : 用 试 ; i) @ Fir FE WE 4 RE,

@ 标准 甲醇 溶液 : 准确 称 取 优 级 纯 甲 醇 160.20 mg 用
7k Hi FEB) 200ml, YM HK EF 25m M.

【测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 ， EADY Se isk RF Be EE PM Ak
剂 。 |

SR ae Bik ve Ht 15 分 钟 GRE DURE MBER BR BY AE 2
洲 液 蒸发 损失 )， 冷 却 到 室温 ， 在 580nm 测定 光 吸 收 值得 : 下
Ag, Ay. Age Ag,

— 108 —

|

‘iin . aad :

om ae Rae eee ee
1. iret a | 2.00 | 2.00 2.00 ae
2、 加 标准 甲醇 溶液 Hh tae bm 的 ag i
8. 加 重 蒸 水 人 ace pe
rk PARNER, 立即 混 匀 并 记 时 ree 0.20 hae AIG

5. 在 37sC 准确 反应 80 分 钟

6. 立即 加 入 试剂 @ | 0.50

7. WPM 0.20

8. 另 取 一 套 试管 吸取 上 述 反 应 液 上 | 0.50 | 6.50 0.50 0.50

9. 加 2 多 BARAK 0.10 0.10 0.10

10. MBHORBSEA 0.10 ; 0.10 0.10

11. 加 铬 变 酸 溶液 4.00 4.00 4.00 “
[计算

(Ag —Age) Xx30( 分 ) x 样品 管 中 酶 的 mg BH

iy Fae
用 于 生化 或 生化 药物 的 研究 。

单位 /mg= 一 (A## 一 As) x 标准 管 中 甲 醇 的 mmole 数

+ 如 果 反 应 液 混浊 可 离心 或 过 滤 除 去 沉淀。

-—

参考 M 献

Colman, R. W. and Bagdasarian, A. (1976), Methods in Enzymology,
45, 303 (Lorand, L. ed.) Academic Press, N. Y.

41. 枯草 杆菌 蛋白 水 解 本 |
SUBTILISIN

EC 3,.4. 21: 14

催化 反应

枯草 杆菌 蛋白 水 解 酶 水 解 蛋白 质 或 多 肽 中 的 酰胺 键 。

存在 和 性 质

存在 于 枯草 杆菌 中 。

(CARRE) 深 于 稀 缓 冲 液 中 。

(稳定 性 ] 在 PH6 一 10 最 稳定 , 酶 干粉 4C 保 存 ,一 年 内
不 失 活 。

(AFH) 27,600

[最 适 pH} 7 一 10

(WOR) Cat+、Na+、Mg+t+。

[抑制 剂 ] ， 重 金属 离子 、 有 机 磷 化 特 如 二 异 丙 基 所 磷酸
等 。

[光谱 性 质 ] ABZ. =8.6(icm 光 径 )

活力 测定

[原理 ] ”该 酶 能 水 解 N- 乙 酰 - 世 - 栈 所 酸 乙 酯 产生 游离
的 羧基 , 用 标准 氢 氧 化 钠 深 液 滴定 羧基 的 量 表示 酶 活力 ;

-一 1L0 一 7

[单位 定义 ]】 在 30°C, sella betiaaasacs 1 微克 分 子 底
物 的 酶 量 为 工 单 位 。

[试剂 ]

@ 底 物 溶液 ，0.020M N-Zhi-L-BRARZEE: 用 含有
8% (体积 比 ) 二 氧 六 图 的 0.100M 氧化 钾 溶液 配置 , 调 PH 至
8.0。

@ 0.020M pH7.5 乙酸 钠 缓冲 液 , 含 0.0104 ZRF.

@ 待 测 酶 液 : AAMOMHA Mis 4KE,

@ 0.02000M 标准 氢 氧 化 钠 深 液 。

【测定 方法 ]

在 30°C 恒温 条 件 下 ， 取 一 只 50ml 党 杯 装 在 pH A ahi
定 仪 上 ， 加 入 10.00ml 底 物 预 热 到 30°C, FM BHA WIA
立即 记 时 , 迅速 用 标准 氢 氧 化 钠 溶 液 滴定 反应 液 , 在 搅拌 条 件
下 保持 终点 PH 8.0, 连 续 滴 定 , 记 下 每 分 钟 消耗 试剂 由 的 ml
数 。 同 时 校正 空白 。
Crs)

4 p>. Nyaon X AVNaoH/ 分 X 10°

单位 /mg= ehh me He
式 中 : Nyaon 为 试剂 人 @ 的 准确 当量 浓度 。
AV aon» AA BI ERA OW AB MAS AH Gal/
分 )。

应 用 范围

用 于 生化 研究 或 工业 用 酶 。

Glazer, A. N. (1967), J. Biol. Chem. 242, 433.

ee BEL

42, KE A we
PAPAIN

EC 3. 4. 22. 9

催化 反应
能 催化 水 解 肽 键 、 酯 键 、 酰 胶 键 。

0 R’ >
| | |
R—N—CH—C—R"+H,O0—> R—N—CH— C—OH+HR"
| |
H H

RA 工 -氨基 酸 非 极 性 侧 链 。
R AM A AA a ny ge
RY 2s — Ai BER ORR RAE,
存在 和 性 质
栗 瓜 蛋白 酶 存在 于 番 木 瓜 的 胶乳 中 。
(溶解度 】 MAPK AR Seay.
[稳定 性 ] 酶 干粉 在 45C 保存 ， 可 稳定 六 个 月 8
(FH) 20,700
(最 适 PH] 6~7
| GEER) PH8.75
[抑制 剂 ] Hg 等 重金 属 离子 .抗坏血酸 和 破坏 芒 基 的
试剂 。 | | |

—- 113—

[激活 剂 ]” 卫 DTA. 弱 还 原 剂 ( 半 胱 氨 酸 、 硫 化 物 、 亚 硫酸

sh ABUL WS).
GENER Adfa =25.0(1om 光 径 )
活力 测定 ,

[原理 ] 木瓜 蛋白 酶 水 解 底 物 一 一 N- 葵 甲 酰 - 工 - 精 氨 酸
乙 酯 , 汪 放 出 N- 葵 甲 酰 - 工 - 精 氨 酸 ， 用 标准 氢 氧 化 钠 溶 液 滴
定 , 以 此 表示 酶 活力 。

[单位 定义 】 在 25°C, 每 分 钟 内 催化 分 解 1 微克 分 子 底
物 的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

@ 底 物 溶液 :80 mM N- 苯 甲酸 - 工 - 精 氨 酸 乙 酯 : 准确
” 称 取 N- 葵 甲 酰 - 工 - 精 氨 酸 乙 酯 盐酸 盐 1.42g， 加 2.6ml 试剂
@, 2.6ml AMO, 加 适当 水 ,用 0.1XY- 氢 氧 化 销 调节 pH a
6.2, 最 后 用 水 稀释 到 50.0ml。

@ 10mM EDTA 溶液 。

@ 50mM 半 胱 氨 酸 溶液 。

@ 2M 氧化 钠 溶液 。

© 0.01000N AAW EAR

待 测 木瓜 蛋白 酶 ; PORE RES REE, vd pH & 6.2,

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， 取 25ml 浇 杯 装 在 pH 自动 滴定 仪
上 , 加 入 底 物 溶液 3.75ml、3M 氧化 钠 溶 液 2.50ml、 重 蒸 永
1.25 ml， 混 合 后 在 25°C 恒温 。 然 后 加 入 待 测 酶 液 后 立即 记
时 ， 用 标准 氢 氧 化 钠 溶液 在 电磁 搅拌 的 条 件 下 保持 终点 pH
6.2 连续 滴定 , 记 下 每 分 钟 消耗 试剂 @ 的 ml By, RIE aS
A.

(计算 ] ”v

“2

Nyaon X AV xa0n/4 x 10°

单位 mg” Some mg 散
式 中 : Nyon 为 试剂 @ 的 准确 当量 浓度 。
AV nose TA ae

应 用 范围
ATH 质 结构 分 析 。

S$ 考 X 献

Smith, E.L. and Parker, M. J. (i958), J. Biol. Chem. 233, 1387.

43. 83 ABA
PEPSIN (A)

EC 3. 4, 23.1

催化 反应

BEAR A 催化 水 解 含 有 芳香 环 或 二 羧 酸 的 氨基 酸 形 成
的 肽 键 。

存在 和 性 质

存在 于 所 有 肴 椎 动物 的 胃液 中 。

溶解度] 溶解 于 PH 低 于 6 的 水 或 缓冲 液 中 。

(BE) “ 酶 水 溶液 pH 高 于 6, WHE, 酶 干 制剂 在
4C 贮 存 , 可 稳定 一 年 。

(AFB) 33,367(4); 34,000( 人 )

[最 适 pH) 1.5~2

—7e—

4

[等 电 点 ]” pH2.2,2.8 GE
(抑制 剂 ] AMS MAR,
[光谱 性 质 ] Ag =14.81 (1cm 光 径 )( 牛 )
ALS =17.3° (10cm 光 径 (大 >
活力 测定
【原理 ] ” 磷 钨 酸 和 磷 钼 酸 的 混合 物 ( 即 福 林 酚 试 剂 ) 在 碱

性 溶液 中 极 不 稳定 , 易 被 酚 类 化 合 物 还 原 为 蓝 色 化 合 物 \ 钼 蓝

和 和 钨 蓝 混 合 物 )。 用 蛋白 酶 催化 水 解 血 红 蛋 白 〈 底 物 ) 游离 出
SRE AER, 与 福 林 酚 试剂 星 蓝 色 反应 , 可 从 蓝 色 的 深浅
测定 酶 活力 的 大 小 。

[单位 定义 ] 在 37"C， BAF, BRAMALL
白 产生 的 溶 于 三 氯 乙酸 的 物质 ， 与 福 林 酚 试剂 反应 后 在 660
nm 的 光 吸 收 值 相当 于 1 微克 分 子 酷 氨 酸 所 给 出 的 光 吸 收 值
则 为 工 单位 。

© 底 物 溶液 : 2% BA: lg 血红 蛋白 洲 于 50 ml

0.06N 盐酸 。

@ IN 福 林 酚 试剂 \ 见 附录 一 蛋 上 白质 浓度 测定 部 分 )。

@ 0.5N 和 氢 氧 化 钠 溶液 。

® .55 三 氧 乙 酸 。 .

© 0.01N 盐酸 .0.06WN 盐酸 0.2N 盐酸 。

© MARDER. 精密 称 了 到 干燥 到 恒 重 的 酷 氨 酸 18.12
mg, ff] 0.2N 盐酸 溶解 并 稀释 到 100ml, 此 溶液 每 ml SHA
酸 工 微克 分 子 。

@ 胃 和 蛋白 酶 溶液 用 0.01LN 盐酸 稀释 到 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 三 支 试 管 按 下 玫 操 作 步 又 加 入 试
i;

“a

Ge RR 28a) | eal an‘ (m1)

1. IRATE = rh aad lee
2. MAM RR | -一 一 < 0.10
3. 加 0.01N 盐酸 | 0.50 0.20 / 0.40
4. 在 37"C 保 温 数 分 钟
混和 多 . - . P . . .
6. 准确 反应 10 分 钟 ， 立 即 加 入 试 5.00 5.00 5.00
剂 @ 2
7.。 用 离心 或 过 滤 的 方法 除去 沉淀 , 另 取 一 套 试管
8. 取 离 心 后 上 清 滚 2.50 2.50 2.50
pigs PERT OS ee) SA a eit yy FU : id
9. 加 0.5N SAUER 5.00 5.00 5.00
10. 加 1N 福 林 酚 试剂 0.50 0.50 0.50

最 后 混 匀 , 在 25°CRCE 30 分 钟 后 , 在 660nm Pi) EMI (A)
值得 : Az Ay Ap, .
[计算 ]

~*

、， (Ag—As) x 标准 管 中 酷 氨 酸 的 mole 数
PLIST — Ag) x 10h) x PEAN EE HE DE 数

应 用 范围
用 于 蛋白 质 结构 分 析 , 也 可 作 生 化 药物 。

ee

Se xX 献
中 山大 学 生物 系 生化 微生物 学 教研 室 ;1978。 生 化 技术 导论 53。

Ras ME KES)
UREASE

EC 3.5.1.5 Urea amidohydrolase

催化 反应
Ms pean Ha) GO-+ HAO FEEL GO),
存在 和 性 质

: 谨 泛 存在 于 微生物 和 动 植物 的 组 织 中 ，1926 年 由 Sum-
Der 最 早 制 得 结晶 ， 酶 蛋白 由 六 个 亚 基 组 成 ,一 般 从 巨 豆 中 提
取 。

[溶解度 ] ”溶解 于 水 或 稀 缓 冲 液 中 。
- [稳定 性 】 纯 酶 不 太 稳 定 ， 粗 酶 较 稳 定 ， 该 酶 在 50% 甘
油 溶液 中 2°C 保存 ， 可 稳定 几 个 月 ， 干 粉 4C 保存 可 稳定 一
年 。

(AFH) 483,000 〈 巨 豆 )

， [最 适 PI 6~7.3 CE RIBERA Pe PH

6.5, #6 Tris yp ye 858 pH 4 7.5),

[等 电 点 ] pH4.9 (BB)

(抑制 剂 ] FASE FAK GR HM BS RAT.

— aly —

[激活 剂 ] AR, AEB MPR,

CEE) = Ajgim =5.89(] cm 光 径 )( 巨 豆 )

活力 测定

【原理 ] 刊 用 纳 氏 试剂 测定 该 酶 水 解 尿素 时 放出 的 氨 来
表示 酶 活力 。

PALE QJ 在 25°C, 每 分 钟 催化 产生 工 微克 分 子 氨 的
酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

O KY: 3 狗 尿 素 (用 试剂 四 新 鲜 配 置 )

@ 0.68M@ pH7.0 磷酸 缓冲 液 。

@ 1M 硫酸 溶液 。

© 纳 氏 试剂 : 称 取 145 g NaOH， 溶 于 700ml 水 中 , 称
取 50g 红色 磺 化 汞 和 40g 碘化钾 湾 于 200ml 水 中 , 将 后 者 溶
波 倾 入 前 者 溶液 中 并 稀释 至 1000ml, 静 置 ， 取 上 清 液 用 之 。

© 硫酸 匀 标 准 液 ， 精 密 称 取 在 60°C FIRE BYR
TRIER 2.6438 洲 于 水 中 稀释 至 500m1, 此 溶液 每 毫升 含有
80 微 殉 分子 NH,

© 待 测 酶 液 ， 用 0.02M pH7.0 (4 0.001M EDTA)
Bi) (oie Fie 2 Th a FS PE a 24 Ye RE.

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 ， KS SRG EAB ee MA
剂 。

Gt)

(Aj— Az) x 5 (4h) x 样品 管 中 ig fy mag By
应 用 范围 NY WEIR A

— 118 —

at nn

x Fs 空白 管 (ml) | 标准 管 (m1l) | 样品 管 CmD1)
1. 加 待 测 酶 液 + 1.00 , 1.00 | 1.00 i
2. In FRM Si 一 1.00 一
“3. MRR | " 1.00 JE 1.00
4. 加 1M 硫酸 溶液 1.00 1.00 =
6. aA RIN ANSI | og 人
6. aC EN 8 AHR | 了 区 1.00
1 BRAM LBS | 4 iy 8 ieee pe
8. Wi AK rr 8.60 8.60
9. 加 纳 氏 试剂 a 1.0 te 1.0 1.0
10. RAR eAsonm AMIE WIS Ag Ag y Ar

S$ 4 MXM 献

Sumner, J. B. (1955), Methods in Enzymol, 2, 378 (Colowick, S.P.
- and Kaplan, N.O. ed.) Academic Press, N. Y.

45. 氨基 酸化 酶
AMINOACYLASE

EC 3. 5.1.14 N-Acylaminoacid amidohydrolase

2

催化 反应
氮 基 栈 化 酶 能 催化 水 解 并 释放 肽 链 C Sah) 工 -氨基 牙 .
R， |
R, — CH, co. yas Ae ogee +H,0-~5
(L-#)
R,
R,CH,COOH + NH; _-CHAeOOH
(L-#)
其 中 及 ;一 CIL.H_NHL
= AER MBE

存在 和 性 质

存在 于 动物 、 植 物 和 微生物 中 ， 一 般 从 猪 肾 和 米 曲 霉菌 中
制备 。

该 酶 以 水 解 底 物 的 专 一 性 不 同 而 分 为 酶 工 和 酶 开 ， Ait
BEtL BE I BE ZK AE BE HL BABE Hy 王 -氨基酸 , 酰 化 酶 开 能 水 解 酰
化 二 羧基 的 工 -氨基 酸 。 |

(溶解 度 ] 洲 解 于 水 和 稀 缓 冲 液 中 。

(稳定 性 ] RT HE -—20°CR-#, 可 稳定 二 年 ， 在 中 性
PH 70'C 时 可 放置 60 分 钟 ， 但 DH 低 于 5 时 立即 失 活 。

(AFH) 76， 500( 猪 肾 ) .

(最 适 pPH] ~7.0

【激活 剂 ] . Cot+

(抑制 剂 ] ” 马 尿 酸 、 乙醚 -也 - 甲 硫 氨 酸 。 !

【光谱 性 质 ] Azz. =9.96(icm 光 径 )

活力 测定

— 120 一

方法 工 吕

ORS) 利用 氨基 醋 化 酶 水 解 N- 乙 酰 - 工 - 甲 硫 氮 酸 后
引起 238nm 光 吸 收 减少 的 性 质 进 行 测定 。
[单位 定义 ] 235"C， 每 分 钟 催化 水 解 工 微克 分 子 底 物 的

酶 量 为 1 单位 。

(试剂 ]

@ 底 物 : 0.015M N- 乙 酰 - 工 - 甲 硫 氨 酸 : 用 试剂 包 配
置 ,调节 pH 4 7.0,

@ 0.10M pH7.0 磷酸 钾 缓 冲 液 。

@ 待 测 酶 液 : 用 试剂 包 稀 释 成 适当 浓度 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.10ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选择

步 RR 空白 管 (m1) | Fans (ml)

1. 加 底 物 溶液 3.00 3.00

eeenee | groans ht he
3. eI AMR, 立即 混 匀 并 记 时 - 0.10

波长 为 238nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : WR

水 校正 光 吸 收 到 0 点 ,每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 \A)， 共 读

3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出 每 分

钟 A 的 减少 值 (AA/ 分 ) 为 AAA2ssnm/ 分 二 人 人 A 样 /分 一 人 Asyg
GT)

单位 /mg= AA2ssam 人 分

0.018xmg 酶 /ml 反应 混合 液

o— GE 疡 二

N- 乙 酰 - 工 - 甲 硫 氨 酸 在 238nm 处 的 克 分 子 消 光 系 数 为
0.018 x 108,

A #T™.

【原理 ] 利用 节 三 酮 比 色 法 测定 该 酶 水 解 N- 乙 酰 - 工 -
甲 硫 氨 酸 后 , 释放 出 一 甲 硫 氨 酸 的 量 来 表示 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 37°C, 每 分 钟 催化 水 解 1 微克 分 子 底 移
的 酶 量 为 开 单位 。

-试剂 ]

@ JEW: 0.025M pH7.0, N- 乙 酰 - 工 - 甲 硫 氨 酸 。

@ 0.10M pH7.0 BERR th Ue

@ 0.20M pH5.0 FY EIR RH

@® 前 三 酮 乙 二 醇 甲 醚 溶液 : 85mg 昔 三 酮 加 还 原型 节 三
Aid CB iil) 15mg, 溶 于 10ml 2, — FPF FA CEFR)

© 60% ZR yy. .

© 等 测 氨基 酰 化 酶 用 试剂 @ 稀 释 至 适当 的 浓度 。

D 标准 工 - 甲 硫 氨 酸 溶液 . 准确 称 取 3.98mg 干燥 工 - 甲
硫 氨 酸 深 于 水 中 ， 用 水 稀 释 至 100ml， 每 ml 溶液 含 0.30 微
HAF 工 - 甲 硫 氨 酸 。
[测定 方法

在 37°C 人 恒温 条 件 下 ， 取 三 支 试管 按 下 表 操 作 步 骤 加 入 试
WM, WARE 37°C 准确 反应 30 分 钟 后 ， 立 即 从 各 管 中 取出
0.100m1 BDL IMD BIG ME 4 UF) ez 1 oml 试剂 @ 和 1.0
ml 试剂 图 的 硬 质 试管 中 终止 反应 ， 将 这 些 硬 质 试管 分 别 用 和 焉

* 还 原型 荫 三 酮 的 制备 ， 58g AY =AAjN 250ml 水 并 加 热 溶解 ， 将 2 多 维生素
琴 水 溶液 滴 加 入 茹 三 酮 溶液 内 ， 避 光 冷却 使 结晶 析出 ， Wik. ik. FR SB
棕色 瓶 中 备用 。

一 123 一

eG RR 23 A (ml) | 样品 管 (m1) | 标准 管 (ml)

1. 加 底 物 溶液 1.00 1.00 1.00
2. 加 0.10M pH7.0 磷酸 缓冲 液 2.00 1.00 1.00
8. nie Lae a RIE VI
a a APUUB Ns SERDIRSIE | 。 一 家 Ss

璃 泡 盖 上 (防止 内 部 溶液 蒸发 ), 在 100°C 7K AH ABE 15 分 钟 ，
在 流动 水 中 冷却 10 分 钟 , 待 颜色 稳定 后 , 加 入 3.0ml 60% Z,
醇 , 混 义 ,于 570nm 处 比 色 测定 , 得 到 As, Ap Ag,

【计算 ]
Mi /mg= (Ay— Az) x 标准 管 中 LFA it SAR oe ad FB

(Ag—Az) x 30( 分 ) x 样品 管 酶 的 mg 数

4 3% TITS

[原理 ] ”利用 三 硝 基 苯 磺 酸 (INBS) 比 色 测定 些 酶 水 解
N- 己 酰 - 工 - 甲 硫 氨 酸 后 ， 释 放出 I 甲 硫 氨 酸 的 量 表 示 酶 活
Ae

[单位 定义 】 在 37°C, 每 分 钟 催 化 水 解 工 微克 分 子 底 物
的 酶 量 为 1 单位 。

[试剂 ]

底 物 溶液 : 0.025M PH7.0,N- 乙 酰 - 工 - 甲 硫 氨 酸 。

@ 0.10M pH7.0 磷酸 缓冲 液 。

G@) 4% TRB IKE K.

由 0.01M 亚硫酸钠 水 溶液 。

© 0.1% TNBS 水 溶液 。

JS

© SWAG. ARNONF 2k 4RE.

@ 标准 工 - 甲 硫 氨 酸 溶液 :准确 称 取 2.384mg 于 燥 L-
甲 硫 氨 酸 溶 于 水 中 , 用 水 稀释 至 100ml, ml 溶液 含 0.16 微
克 分 子 工 - 甲 硫 所 酸 。

[测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 , 取 三 支 试管 按 下 表 操 作 步 骤 加 入 试

剂 :

2 sa 样品 管 (ml) | 标准 管 (ml)
1. 加 0.10M pH7.0 磷酸 绥 冲 液 2.00 1.00 1.00
En a eee beth INE a mei ake fi __-- hs hie Ea
2. 加 底 物 溶液 1.00 1.00 | 1.00
3. 加 标准 工 - 甲 硫 氨 酸 溶液 TE 一 1.00
4, Sal abel eat Locals 1.00 yet Pak

Ea, 4 37°C 准确 反应 30454, WENFMKB PM
热 10 分 钟 , 冷却 至 室温 。 另 取 一 套 试管 ， 从 上 述 各 试管 中 各
取出 0.10mj 分 别 加 入 新 的 一 套 试管 中 ， 再 分 别 加 入 重 蒸 水
0.90ml 4% 碳酸 钠 溶液 1.00ml.0.19% TNBS ¥s¥¥ 1.00ml,

然后 在 40°C 避 光 恒温 60 分 钟 ， 加 入 0.01M 亚硫酸钠 溶液

1.00ml, 混 匀 后 , 使 用 比 色 计 , 选择 波长 为 420nm 测定 各 管 的
光 吸 收 值 A， 空 白 管 的 光 吸 收 值 为 As、 祥 品 管 的 光 吸 收 值 为
Aw se SM ICBC Ag.

[计算 ]

(A 标 一 人 As) x 50G)) x Fi an YF MAY mg 数

= 124—

—_—

一

应 用 范围 ”，， 由 于 该 酶 有 光学 特异 性 ;因此 可 用 于 消 旋
氨基 酸 的 拆 分 。

参考 文 献

{ 1] Mitz, M.A. and Schlueter, J. (1958), Biochim. Biophys. Acta
27, 168.

C2] 潘 家 秀 等 ,1962。 有 蛋白 质 化 学 研究 技术 , 27。

[ 3 ] 生化 所 四 室 ,1976。 生 物化 学 与 生物 物理 进展 , 3, 19。

46. i SR
ARGINASE

EC 3.5.3.1 L-Arginine amidinohydrolase

HL BE
Lec +H OPEL we + RE
存在 和 性 质

精 氢 酸 酶 广泛 存在 于 动物 的 脏 器 和 植物 中 ， 酵 母 和 细菌
中 也 有 。

CARE) 溶 于 水 和 稀 组 冲 液 。

(稳定 性 】 干粉 贮存 于 AC 可 以 稳定 半年 。

(分子 量 ] 110,000 〈 免 肝 )

[最 适 pH) 9.2~10.2

“0

[等 电 点 ] PH6.5( 免 肝 ); PH9.4( 鼠 肝 )

Qaim) 4=Mnt* | Fet+ Cot+ Nit+,

[抑制 剂 ] Ag*\Hg**,Zn*+, L- sam, L-mam,
Te PR FY Bk.

OGRE) §=Azhim =10.9(1 cm 36) (REP)

活力 测定

[原理 ] “ 精 氨 酸 酶 催化 分 解 精 氨 酸 为 尿素 和 鸟 氨 酸 ， 测
和 定单 位 时 间 内 底 物 精 氨 酸 的 减少 量 , 计算 酶 活力 。

(单位 定义 ] 在 37"C、PpH9.4 反 应 1 小 时 ， 从 精 氨 酸
的 最 初 量 1 毫克 分 子 分 解 0.1 微克 分 子 所 需要 的 酶 量 为 1 单
人

【试剂 ]

© JEW: 0.010M 精 氨 酸 水 溶液 ， 含 有 0.00095
fii (21.07 mg 工 - 精 氨 酸 盐酸 盐 深 于 少量 水 ， 加 0.01M
”MnCl，32.5ml， 用 水 稀释 至 100ml) 。

@ 0.10M PH9.4 巴 比 妥 钠 盐 缓 冲 液 。

@ 2.5% SALAM,

© 4.5% A ALAA,

© 次 亚 溴 酸 钠 溶液 18g BAF 100ml 5% 氢 氧 化 钠 水
溶液 中 , 可 于 棕色 瓶 (4*C) 保 存 数 周 。

© 显 色 剂 : 5% 磺 酸 水 杨 酸 50ml jp 0.01M HAR 50
mm ， 混 合 后 加 入 8-FBSE MEME 0.05g GEYER SRE 4 thi 备
He

@ 16 多 三 毛 乙 酸 水 溶液 。

® WARM. HEA KREME eR,

[测定 方法 ]

在 37°C 恒温 条 件 下 ， 取 四 文 试 管 按 下 表 中 操作 步骤 加 入

二 人 人 二

试剂 :

eS cat | ‘Gan | Cad | Cab
1. 加 0.10M pHo.4 Brom sere we 0.50 | 0.50
‘mk |
5。 迅速 加 入 待 测 酶 液 , 立即 混 匀 并 记 时 2 ape nib eaigg alaiage
网 总 一 定时 间 re ee Bae toe
7. 加 16 多 三 氧 乙 酸 溶液 Dias ees 7 eee ee

各 反应 管 于 37°C 放置 10 分 钟 , 离心 , 保留 上 清 液 。 再 另
取 一 套 试 管 , 按 右 表 中 的 操作 步 又 继续 进行 实验 。

GA)
设 反应 遵守 一 级 反应 的 规律 。
yo ee Z=9.491 In. ry

Z
单位 /mg tx 样品 管 中 酶 mg 数

式 中 : 9.491 为 常数 ( 见 参考 文献 )。
t 为 反应 时 间 , 以 小 时 为 单位 ,Az 和 t 是 对 应 的 。
MASE. 用 于 生化 分 析 和 生化 研究 。

et eras

Ey 管

五 1 管 a Ey 管
(ml)

(ml) | 《ml)

1. 取 上 述 上 清 液

|

|
2. 加 显 色 剂 | 1.0
ee oe at) |

3. 4.5% 氢 氧 化 钠 溶 液 1.0
4. 12.5% ZAUHBRR
5. 加 水 6.0

一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 -一 一 -一 一 -一 一-

6. 在 六 浴 里 放置 15 分 钟

7. 加 次 亚 首 酸 钠 溶液

\ 立即 摇 匀 记 时 ,2 分 钟 后
eesieoomn EMRE | As

参考 文 献
前 田 昌 利 (1962)。 生 化 学 ,34(5)， 8。

AT. WE 3a 酶
ALDOLASE (ALD)

EC 4. 1. 2.13 D-Fructose-1, 6-bisphosphate D-glyceral-
dehyde--3p-hosphatelyase

催化 反应

一 128 —

D
果糖 -1， 6_ 二 次 本 全 全 碍 酸 二 产 丙 十 十 3- 磷酸 甘油 本
存在 和 性 质
广泛 存在 于 动物 组 织 和 人 酵母 中 。
CARRE) ” 溶 于 水 和 稀 缓 冲 液 。
[稳定 性 】 该 酶 在 PH<4 和 pH>10 情况 下 是 不 稳定
“的 ,pH7.6 时 该 酶 悬浮 于 3.2M 硫酸 镇 中 ,于 4C 可 稳定 六 个
月 ,干粉 于 4"C 可 贮藏 十 二 个 月 不 失 活 。
(AFH) 158,000 4H HSH); 75, 000( 面 包 酵 母 )
(最 适 pH) 7.0
[等 电 点 ] pH6.1
[激活 剂 ] K*
(抑制 剂 Cutt Znr+、Ag+、 邻 非 绕 啉 ; 竞争 性 抑制 齐
的 抑制 次 序 为 : ATP> ADP> AMP,
活力 测定
[原理 ] ”利用 酶 偶 联 法 测定 340nm FEMS TE Ze AR
活力 。 偶 联 酶 反应 如 下 :

ALD
果糖 -1, 6-— HR BRO BAM + 3-H A
磷酸 丙 糖 同 分 异 构 酶
3- 磷 酸 甘 油 醛 一 一 一 一 一 ” 供 酸 二 产 丙 酮

磷酸 甘油 脱氧 梅
碳酸 二 叛 丙酮 +NADH+H+ 一 一 一 一

甘油 -1 磷酸 二 NAD-

(单位 定义 ] 在 25°C, 每 分 钟 俊 化 水 解 工 微克 分 子 底 物
的 酶 量 为 1 单位 。
[试剂 ]

o28

@ 底 物 深 液 ， 果 糖 -1 6- 二 磷酸 四 钠 盐 溶液 ;30m8g 志
糖 -1 6- 二 磷酸 四 钠 盐 深 于 iml Hz2O 中 。
@ 0.10M pH7.6 三 乙 胶 绥 冲 液 。
@ 还 原 辅酶 工 溶液 : 每 ml KAM PARR wy I 10
® 混合 酶 液 : ml 水 溶液 含 代 酸 丙 糖 同 分 异 构 酶 和
磷酸 甘油 脱 气 酶 各 2m8。
© 待 测 得 液 ， 用 试剂 包 稀 释 到 适当 浓度 。
[测定 方法 ] -
FE 25°C 人 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 骤 加 入 试
i:

mg

|
步 R | 25 (ml) | Han‘ Gl)

1. 加 0.10M pH7 6 三 乙 胺 缓冲 滚 = 2.83 2.81
2. 加 还 原 辅酶 工 溶 液 0.05 ‘Ws
3. 加 底 物 溶液 be 3 0.10
4. DME BBA 和 0.02 ite

5. WRIA, WEAVERS HCN 一- 0.02

然后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选择 波长 340nm; 用 lem FG
径 的 比 色 杯 测 定 光 吸 收 值 : 以 重 蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ， 每
隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 4A)， 共 读 3 分 钟 ， 以 A 对 时 间作
图 , 取 反 应 最 初 线性 部 分 , 计算 出 每 分 钟 A 的 减少 值 (AA/ 分 )
为 AAs 40/4 = AAg ya — AAs) 4,

tH)

a

AAaionm,
单位 /mg 一 5 ooxme f/m! RMA

还 原 辅酶 工 在 340nm 处 的 克 分 子 消 光 系 数 为 6.22x
10°,

应 用 范围 ”用 于 测定 果糖 -1，6- 二 磷酸 的 含量 及 醛 缩 酶
活力 ; 对 血液 中 醛 缩 酶 活力 的 测定 可 用 于 诊断 一 些 疾病 。

S$ 4 文 献

Biochemica Catalogue (1978), Boehringer Mannheim GmbH, Mannhe-
im-Germany.

48. 柠檬 酸 合成 酶
CITRATE (si)-SYNTHASE (CS)

EC 4. 1. 3. 7 Citrate oxaloacetate-lyase (pro-3S-CH,
COO-—-»acetyl CoA)

催化 反应
CS

H,0+ 乙酰 辅酶 A 十 草 酰 乙酸 二 全 柠檬 酸 十 辅酶 人 A

存在 和 性 质
“广泛 存在 于 动物 、 植 物 、 酵 母 和 细菌 中 。 一 般 从 猪 心 制
备 。
CARE) 深 于 水 和 缓冲 液 。
(稳定 性 】 在 PH5.5~10.0 溶液 中 较 稳 定 , 在 离子 强度
M=0.2 时 酶 很 稳定 , 酶 干粉 一 般 于 43"C 贮存 。

(FH) ”87, 000( 猪 心 )

一 于 一

it A

(最 适 pH) 9.0( 鼠 肝 ); 7.0~8.0(RFAR)

[抑制 剂 ] 一 价 阳离子 、 硫 氰 酸根 、AIP 和 长 链 酰基 畏
A ATA

[光谱 性 质 ] ALZ..=17.8C.cm 36%) GHb)

活力 测定 4

[原理 ] 用 5,5' 二 硫 基 双 -2- 硝 基 葵 甲酸 盐 (DTNB) 试

剂 , 测定 释放 出 的 辅酶 A 表 示 酶 活力 。

[单位 定义 ] 在 25°C, pH8.1, 每 分 钟 催化 形成 工 微克

分 子 辅酶 A 的 酶 量 为 1 单位 。

HCl

[试剂 ]

® JEWYR. 1omM 草 酰 乙酸 用 100mM pH8.1 Tris-
缓冲 液 配 置 。
@ imM DINB 溶液 : 用 1.0M pH8.1 Tris-HCl 缓冲

液 配置 。

1

3

4

5

ei oats

@ 13mM 乙酰 辅酶 A， 用 重 蒸 水 配置 。
Q@ AMMAR: 用 水 稀释 至 适当 浓度 。
[测定 方法 ]

空白 管 (m1l) | Fen‘ Gl)

. 加 lm DTNB 溶液
.加 乙酰 辅酶 A 溶 液

.加 待 测 酶 溶液
.加重 蒸 水

.迅速 加 入 底 物 溶液 ,立即 混 匀 并 记 时

在 35"C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 珍 中 操作 步骤 加 入 试
剂 , 反 应 总 体积 为 1.0ml。 然 后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择

波长 412nm, 用 icm 光 径 比 色 杯 测 定 光 吸收 值 : WAKE

正光 吸收 到 0 点 ,每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸收 (A), 共 读 3 分
钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反 应 最 初 线性 部 分 计算 出 每 分 钟 A
的 增加 值 (AA/ 分 ) 为 A A gionm/ 4 = AAp 5 “ys AAs),
[计算 ]
AA gionmj#

年 位 /mg= 13-6Xmg 酶 /ml RMS
DINB 和 辅酶 A 的 反应 产物 在 412nm 处 克 分 子 消 光 系
数 为 13.6 10°,
应 用 范围
可 用 于 生化 研究 和 生化 分 析 工 作 。

参考 文 献

Jangaard，N. O. (1968), Biochim. Biophys. Acta. 151, 225.

49, te RR ie
CARBONATE DEHYDRATASE (CHL)

EC 4. 2.1.1 Carbonate hydro-lyase

催化 反应
CHL .
H,CO,——CO0,+H,0

存在 和 性 质
存在 于 动物 的 红血球 、 胃 粘膜 、 肾 胜 皮质 、 鱼 鳄 和 植物 的

绿叶 中 。 每 克 分 子 酶 含 1 4TH

CARRE) 溶 于 水 和 稀 绥 冲 液 。

(稳定 性 ]” 酶 溶液 在 PH 5.0~10.0 较 稳 定 , MBM 5c
可 保存 一 年 。 干 粉 在 一 20"C 保 存 , 至 少 可 稳定 2 年 ;

(FH) 30,000( 牛 )

(最 适 pH} 6~10

[等 电 点 ] pH4.5( 8A)

(抑制 剂 ] 大 多 数 一 价 的 阴离子 工 、NO;、Br-、CI- 和

Cut+ Agt Zn** 等 阳离子 。

GSE) «Alvin =19.0(1 cm 光 径 )( 咎 )

活力 测定

(原理 ] 碳酸 栈 酶 能 分 解 对 硝 基 酚 乙酸 酯 引起 348nm
处 光 吸 收 增加 , 以 此 表示 酶 活力 。 |

(单位 定义 】 在 25"C、pPH7.6， 每 分 钟 催 化 分 解 1 微克
分 子 底 物 的 酶 量 为 1 单位 。

【试剂 ]

外 底 物 溶液 : 0.003M 对 硝 基 酚 乙酸 酯 (13.60mg 对 硝

基 酚 乙酸 酯 溶 于 lml 丙酮 中 ， 用 水 稀释 至 25ml)， 必 须 新 鲜
配制 避 光 保存 。

@ 0.015M pH7.6 Tris- 硫 酸 缓冲 液 。

Q) 待 测 酶 液 : Fil 7K Fis FE 2 3 3 PR BE

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 了 到 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试
剂 , 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选择
波长 为 348nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 ， 以 重 蕉
水 校正 光 吸 收 到 0 点 ， 每 隔 半 分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 ( 人 7 共 读
3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， AE Ree 计算 出 每 分

ee

此 RR | 站 管 Gm 样品 管 (ml)
1. 加 Tris 缓冲 液 2.00 1.90
2. 加 底 物 溶液 1.00 1.00
3. 迅速 加 入 待 测 酶 液 ， 立即 混 匀 并 记 时 0.10

钟 A 的 增加 值 CAA/ 分) 为 AAgisnm=AAg, 3» —AAs yg, “
Gr)

a om AAsignm
*iL/m8=—5 5 xmg f/m! MAE
EMBER YESS FIER BON 5.010%,
CASA WLI LAT KA,

参考 文 献

Armstrong, J. McD. et al. (1966), J. Biol. Chem. 241, 6187.

SO. je A Beat) ll 7
TRYPSIN INHIBITOR (TP)

催化 反应

胰 重 白 酶 抑制 剂 可 抑制 胰 和 蛋白酶 水 解 蛋 白质 或 肽 等 底 物
的 反应 。 :

存在 和 性 质

胰 和 蛋白 酶 抑制 剂 从 大 豆 、 鸡 蛋白 . 牛 胰 中 提 取 。

【溶解度 溶 于 水 和 稀 缓 冲 液 。

一

[稳定 性 ] ”该 抑制 剂 干粉 贮存 于 45C 可 保存 二 年 。
(AFH) 21, 000( 大 豆 ); 28, 000( 鸡 蛋白 );
6, 155( 牛 胰 )
(SHR) pH 4.5K); pH3.8~4.5G884)
Cb Atgm =9.10 cm 36%) (KB)
| Al® . =5.9(1cm $6) (4A)

活力 测定

(原理 ] ” 胰 和 蛋白 酶 可 催化 水 解 N- 苯 甲 酰 - 工 - 精 氨 酸 乙 酯
(BAEE), ,引起 254nm 光 吸收 值 的 增加 ,而 胰 和 蛋白酶 抑制 剂 加
入 上 述 体系 后 , 抑制 了 胰 蛋 白 酶 的 活力 ,使 4nm 光 吸收 值 增
加 的 幅度 有 所 减少 ， 以 它 的 减少 程度 玫 示 此 抑制 剂 的 抑制 能
Fh |

GAR

@ 0.10M pH8.0 Tris 缓冲 液 ( 含 10mM eae

@ 0.001N 盐酸 。

@ 结晶 胰 蛋 白 酶 溶液 ， 用 试剂 @ 配 成 每 惠 1 WRF 1.0
mg 结晶 胰 蛋白 酶 。

由 胰 和 蛋白 酶 底 物 溶液 : 0.00134N- 苯 甲 酰 - 工 - 精 氨 酸 乙
酯 盐酸 盐 ( 用 试剂 四 新 鲜 配 置 )。

© 待 测 抑制 剂 溶液 : 用 试剂 四 配 成 每 ml 溶液 含有 1.0
mg 胰 和 蛋白 酶 抑制 剂 。

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 三 支 试管 按 下 玫 操 作 步 又 加 入 试
剂 。 上 述 试剂 混合 均匀 后 在 25°C 恒温 30 44h, RMA
中 取出 0.100ml 分 别 注入 另外 三 支 试 管 。 在 三 支 试 管 中 各 加
2.90ml 胰 蛋 白 酶 底 物 深 液 ， 立 即 混 匀 并 记 时 ， 再 使 用 紫外 分
光 光 度 计 ， 选择 波长 为 254nm， 用 icm 光 径 的 比 色 杯 测定 光

ass —

步 这 自 管 tmD | 标准 管 (ma 品 管 (Cml)
1. DEE REK | eo 7.00 6.00
| 2. 加 0.001N 盐酸 yee 一 -一
| 3. 加 Tris 缓冲 液 2.00 2.00 2.00
4. REA AAR 一 sar ee 1.00
5. 加 待 测 抑制 剂 溶液 一 一 1.00

吸收 值 : 以 重 蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ,每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光
mc CA), FE 3 分 钟 , 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部
分 ,计算 出 每 分 钟 A 的 增加 值 (AA/ 分 ) 为 AAxzsinam/ 分 (样品 ) =

AAA 祥 分 一 人 As 分 ) Ads nm RYE) = AAg 4 —AAz 5,

Gr)
a3 A Adasen (PRE) La A Ads nm (FE 品 )
多 抑制 程度 一 AAazstnm/ 分 (标准 ) ‘ate
应 用 范围

用 于 生化 研究 .生化 分 析 和 作为 生化 药物 。
S$ = 文 献

Laskowski, M. (1955), Methods in Enzymol, 2, 36 (Colowick, S.P
and Kaplan, N.O. ed.) Academic Press, N. Y,

— 1Si

4

. 4
; |

|

51. 4H fe I
NICOTINAMIDE ADENINE

DINUCLEOTIDE (NAD)
DIPHOSPHOPYRIDINE NUCLEOTIDE (DPN)

ASF RX: C.,H.,N,O,, P,

Ay fH: 663.5
结构 式 :
NH,
ee eB ee.
a K
N rays) OH N N
O CO- 让 O
+
O O
HO OH HO OH
性 质

辅酶 工 易 深 于 水 、 易 吸 潮 , 应 避 光 干燥 、45C 存放 。

[aj] 允 = 一 34.8 (c=1,H,0)

FE 三 二 00318 伏 (pH7,30"Gy
PH7.5, Amxesoom 2m 一 17800 |
PH7.5, Apposonm = EaSm =8000

PH7, Aosoom/Azeonm= 0.83, Acgonm/ Asepam = Olea
俊 化 反应

wr LSS Se

本 ‘~~ — F

氧化 型 辅酶 还 原型 辅酶 T

RRQ BH PRB REAR
含量 测定
【原理 ] ”辅酶 工 参 于 如 下 反应 :

a BLA % O
—DPNH+H*+CH,CQ

DPN*+CH;CH,OH

<———

测定 还 原 辅酶 工 在 340mm 处 的 特征 吸收 峰值 即 可 计算 出 畏
酶 工 的 含量 。

【试剂 ]

@ 底 物 溶液 : 0.5M 乙醇 ,用 0.1M Tris 缓冲 液 配置 ( 称
取 4.68g 无 水 乙醇 加 2.48g Tris 用 水 溶解 , 调 pH 8.8, 用 水 稀
释 到 200ml),

@ 醇 脱 氢 酶 溶液 :稀释 成 每 蔬 ] 酶 含 Img HEA,

@ 待 测 辅酶 工 溶液 : 用 水 配 成 每 ml 溶液 含 lmg 样品 。

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 按 下 表 操 作 步 骤 加 入 试
剂 ， 反 应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选
择 波 长 为 340nm， 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : 以
重 蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ， 加 试剂 @ 之 前 测 各 管 光 吸收 值
《Agonm)， 加 试剂 @ 之 后 每 隔 一 分 钟 测 各 管 光 吸收 值 CAstonam)，
直到 Asionam 不 再 随时 间 增 加 为 止 , 最终 的 光 吸 收 值 为 Astonme

—<.°"

| Ae (ml) | 样品 管 (ml)

步 we ae
1. 加 底 物 溶液 了 2.00
-上 snes USE 1 a 0.20
i: 加 重 蒸 水 0.90 0.70
4. ABA Ai, ie

(计算 )
AA= (Ag 一 A8) 一 (As 一 人 8)

as AAx 分 子 量
B-DPN & B= § 95x 10°xme HM /ml RIES

x 100%
6.22 10° AiGJR RL AWA TB HAS
应 用 范围
辅酶 工 可 作为 多 种 酶 系 的 辅酶 ， 是 用 途 极 广 的 生化 试剂
和 生化 药物 。

参 5 xX 献

Klingenberg, M. (1963), Methods of Enzymatic Analysis, p. 528.
(Bergmeyer, H. U. ed.) Academic Press, N. Y.

一 149 一

52. 还 原 辅 酶 I
NICOTINAMIDE ADENINE DINUCLEOTIDE

REDUCED (NADH)
DIHYDRODIPHOSPHOPYRIDINE
NUCLEOTIDE (DPNH)

分 子 式 : C,,H. NOx, P,

分 子 量 : 665.5
结构 式 :
O 〇
eae Ar
Cy Cry

HO OH HO OH |

性 质

还 原 辅酶 工 易 溶 于 水 、 易 吸 潮 ， 应 避 光 干燥 4C 存放 。
PH7.5 入 权 大 25onm 全 六 hm 一 16, 900

PH7.5 入 极 大 ss8nm €3znm = 6, 220

PH7.5 Ag nogcnm €231am = 6, 600

PH7.5 Ag jn200am E2pam = 1, 300

含量 测定

(原理 】 利用 乳酸 脱 氢 酶 催化 丙酮 酸 钠 还 原 为 乳酸 ， 同

— 24) —

时 将 还 原 辅酶 工 氧化 成 辅酶 工 , 测定 340nm 光 吸 收 值 的 减少
计算 其 含量 。

[试剂 ]

@ 0.05M pH7.5 Tris 缓冲 液 。

@ 0.05M 丙酮 酸 钠 水 洲 液 。

@ 乳酸 脱氧 酶 溶液 ， 用 试剂 四 配 成 每 问 溶液 含 1mg
蛋白 。

® 待 测 还 原 辅酶 工 样 品 溶液 : 用 水 配 成 每 ml 溶液 含 1
mg 样品 。

【测定 方法
在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试管 过 下 表 操 作 步 骤 加 入 试
剂 ,反应 总 体积 为 3.0ml]。

步 又 | 空白 管 (ml) | 样品 管 (ml)
1. 加 Tris 缓冲 液 2.00 2.00
2. 加 丙酮 酸 钠 溶 液 i! 0.10 oi 0.10
3. 加 待 测 还 原 辅酶 -I 溶 液 a 0.20
4. 加 重 蒸 水 a "a ae Pigs
‘ae, UBER ) 0.10 0.10

~ ane

然后 , 使 用 紫外 分 光 光 度 计 , 选择 波长 340mm, FA 1cm 光 径 的
比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : 以 重 燕 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ,加 试剂 @
之 前 测 各 管 光 吸收 值 “Asgonm)， 加 试剂 @@ 之 后 每 隔 一 分 钟 测
各 管 光 吸收 值 CAsioanm), 直到 As coum 不 再 随时 间 减 少 为 止 , 最

— 142—

HIE IK 收 值 为 Asai
【计算 ]

AA= (AR — Ay) — (AZ — Az)

4 AA x 分 子 量
B-DPNH wits ox io'xme fii/ml RMS

x 100%

1B JR i AE I ZE 340nm bots) FIR IG ABN 6.22 x 10°,
应 用 范围
还 原 辅酶 工 用 于 多 方面 生化 研究 工作 。

参考 文 献

Klingenberg, M. (1963), Methods of Enzymatic Analysis, p. 531.
(Bergmeyer, H. U. ed.) Academic Press, N. Y.

53. 辅 Be 瑟
NICOTINAMIDE ADENINE

DINUCLEOTIDE PHOSPHATE (NADP)
TRIPHOSPHOPYRIDINE NUCLEOTIDE (TPN)

$y Fk; Ca,H,.N,0,, P;
Ay FH: 743.4
结构 式 :

4

9 NH,
& ws ee.
E Sa
N~ 0° «OOH N
O O
t +
0 O
se
HO. GH HO
O-P-OH
Y
O

性 质

辅酶 开 易 溶 于 水 、 易 吸 潮 , 应 避 光 干燥 、4*C Fee
pK, @3.9 @6.1

E, = 一 0.317 {K(pH7, 30°C)

PHT Agkosonm E28 m=18, 000

PH7 Agposinm ESE m=8, 100

PH? A25/Asg9= 0.83, A28o/Ax9=0.21

°

催化 反应
H. jH

H BS
¢ \—CONH, /\ _CONH,
ig) von ame
\N7Z \NZ

|

R R
SCRE EDR BIE

R 代表 PeHI-— PHP sumep

: ie

含量 测定

[原理 ] 葡萄糖 -6- 磷 酸 脱 氢 酶 催化 葡 敬 糖 -6- 磷 Re

“hi

化 , 同时 将 辅酶 开 还 原 为 还 原 辅酶 工 ， 测 定 还 原 辅酶 在 340
nm 处 的 特征 吸收 峰值 , 可 计算 出 辅酶 开 的 含量 。

[试剂 ]

@ 1.0M pH8.0 Tris 缓冲 液 。

@ 0.10M 氯化镁 溶液 。

3) 0.030M 葡萄 糖 -6- 磷 酸 钠 溶液 。

由 待 测 辅酶 TL 溶液 : 用 水 配 成 每 ml 溶液 含 1.0msg Hj
BIT.

© 葡萄 糖 -6- 磷 酸 脱 氢 酶 溶液 : 用 重 蒸 水 配 成 每 ml 洲
WE img MEA.

[测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , RO MIRE PRE AMAR
剂 ,反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ， 使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选 择

ea ees ase 88cm) REEL (ml)

1. 加 Tris 缓冲 液 0.50 0.50
2. 加 和 氧化 镁 溶液 0.20 0.20
3. 加 葡萄 糖 -6- 磷 酸 溶液 0.10 0.10
4. 加 待 测 辅酶 II 溶液 sate 0.20
5. 加 重 蒸 水 | 2.10 1.90
6. SmaI Was BRE TRE | 0.10 0.10

波长 340nm, 用 lcm 光 径 的 比 色 杯 测定 光 吸 收 值 : by Fa AR 7K
校正 光 吸 收 到 0 点 ， 加 试剂 @ 之 前 测 各 管 光 吸收 值 C(Agonm)，

7 eo

加 试剂 @ 之 后 每 隔 一 分 钟 测 各 管 光 吸收 值 (Asatoam)， 直 到
Aison 不 再 随时 间 增 加 为 止 ， 最 终 的 光 吸 收 值 为 Ansett

[计算 ]

AA= (Ay— Ag) 一 (AS 一 A&)
B-IPN 含量 = Sooo) xme 辅酶 /GT 反应 混合 芒
x 100% |

JR RS TO ZE 340nm 处 克 分 子 消 光 系 数 为 6.22x10>。

应 用 范围

该 辅酶 在 生化 研究 、 生 化 分 析 和 临床 生化 测定 中 都 有 重
要 的 用 途 。

参考 文 献

Klingenberg, M. (1963), Methods of Enzymatic Analysis, p. 535.
(Bergmeyer, H. U. ed.) Academic Press, N. Y.

54, 还 原 辅 酶 开
NICOTINAMIDE ADENINE DINUCLEOTIDE
PHOSPHATE REDUCED (NADPH)
-DIHYDROTRIPHOSPHOPYRIDINE
NUCLEOTIDE (TPNH)

分 子 式 : C21H3.N,0,, P;
Sy FH: 745.4
结构 式 :

-一

HO OH HO o-p-OH

P 一
Oo
性 质
AR AR RTL BAT ok, 易 吸 潮 , 应 避 光 、 干 燥 、4"C 人 存放。
PH7.5 Amzkosonm Casnm=16, 900 |

PH7-5 Agkssoom €CoSm=6, 200

pH7.5 入 极 小 236nm €xenm = 7600

pH7.5 入 极 小 290nm €30am = 1400

含量 测定

[原理 ] ” 谷 胱 甘 肽 还 原 酶 催化 氧化 型 谷 胱 甘 肽 还 原 ， 同

时 还 原 辅酶 开 被 氧化 为 辅酶 开 , 测定 340nm 光 吸 收 值 的 减少
来 计算 还 原 辅酶 开 的 含量 。

[试剂 ]

中 0.10M pH7.5 Tris 缓冲 液 。

Q@ 0.10M 氧化 型 谷 胱 甘 肽 溶液 。

@ 谷 胱 甘 肽 还 原 酶 ， 用 试剂 @ 配 成 每 ml 溶液 含 Ime

HA

图 待 测 还 原 辅酶 开 溶 液 : 用 水 配 成 每 mm 溶液 含 1.0m8g

还 原 辅酶 开 。

【测定 方法 ]
在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 二 支 试 管 按 下 表 操 作 步 又 加 入 试

460

步 又 空白 管 (m1D | 样品 管 \mDl)

1. 加 Tris 缓冲 液 2.80 2.40
2. 加 氧化 型 谷 胱 甘 肽 溶液 0.10 fe
3. Tee Bs IT eR 一 0.40
4. 加 谷 胱 甘 肽 还 原 酶 溶液 0.10 0.10

剂 , 反 应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ,使 用 紫外 分 光 光 度 计 ， 选择
波长 为 340nm, 用 icm 光 径 的 比 色 杯 , 测定 光 吸 收 值 : WBA
水 校正 光 吸 收 到 0 点 ,加 试剂 加 之 前 测 各 管 光 吸收 值 (Astonm)，
加 试剂 @ 之 后 每 隔 一 分 钟 测 各 管 光 吸收 值 (Asiomn)， 直 到
As::sonm 不 再 随时 间 减 少 为 止 ， 最 终 的 光 吸 收 值 为 As serene

Gre

AA= (AR — Ay) 一 (A& 一 人 As)
5 ee AAAx 分 子 量
BTPNH 含量 = 05X105X 南 区 和 和 八大 下 二 二 生生 汪
x 100%

还 原 辅酶 开 在 340nm Abi 4} FY StABH 6.22 x 10%,
应 用 范围
用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。、

GS 5 文 献

Ciotti，M. M. and Kaplan, N.O. (1957), Methods in Enzymology 3,
894 (Colowick, S. P. and Kaplan, N. O. ed.) Academic Press, N.Y:

=~ 145 <=

55. 氧化 硫 腕 素 焦 磷酸 盐 〈 辅 次 酶 )
THIAMINE PYROPHOSPHATE (CHLORIDE),

COCARBOXYLASE (TPP)

AY FX: C,2H,.N,O,;P,SCI

分 子 量 : 460.78
结构 式 :
Z ae Hs at
- 二 | is HoT P -O- 一 ok
3 He i
性 质

辅 羧 酶 易 溶 于 水 ,熔点 为 242~244"C (分 解 )

pK, 5.0

A1%=952 (233nm, 7¢ pH7 PRR MEP)

Aim =186 (266nm, 在 PH7 磷酸 缓冲 液 中 )

pH 7 €233nm = 11, 600

pH7 E26enm = 8, 600

含量 测定

(原理 】 辅 痊 酶 是 丙酮 酸 脱羧 酶 催化 丙酮 酸 脱羧 反应 的
必 不 可 少 的 辅酶 , 将 丙酮 酸 脱羧 酶 和 醇 脱 氢 酶 偶 联 , 用 分 光 光
FRM HRMS, HR RMP:

O

O
| | 丙酮 酸 脱羧 酶 |
ase On +CH,— C 3+ GQy4

— 149 —

O
ae RS
(es : _H4NADH +H*—-_>CH,CH,OH + NAD*

[试剂 ]

@ 0.02M pH6.6 顺 丁 烯 二 酸 缓 冲 液 : 2.32g MT Me
Mamie 70ml 重 蒸 水 中 ， 用 氢 氧 化 钠 溶液 调节 pH 26.6,
并 用 水 稀释 到 100ml。

@ 0.50M 硫酸 镁 溶液 。

@ 1.0! 丙酮 酸 钠 溶液 。

@ 0.014M 还 原 辅酶 工 溶 液 。 |

© BABAK. ml MARA lmg BEA.

© il] TPP 样品 液 : Beads ml HMA lwg TPP,

@ 丙酮 酸 脱羧 酶 溶液 : 每 ml BAK Img BEA.

TPP 标准 品 : 配 成 每 ml 溶液 准确 含 1.0 上 8g IPP,

【测定 方法 ]

在 25°C 恒温 条 件 下 , 取 三 支 试管 按 下 玫 操 作 步 又 加 入 试
Fl, 反应 总 体积 为 3.0ml。 然 后 ,使 用 紫外 分 光 光 度 计 ，, 选择
波长 为 340nm, 用 lem 光 径 的 比 色 杯 ， 测定 光 吸 收 值 : 以 重
蒸 水 校正 光 吸 收 到 0 点 ,每 隔 半分 钟 读 取 各 管 光 吸 收 人 A)， FE
读 3 分 钟 ， 以 A 对 时 间作 图 ， 取 反应 最 初 线性 部 分 ， 计 算出
每 分 钟 A 的 减少 值 (AA/4}) 为 AAssonm/ 分 (样品 ) 一 人 人 并 分 一
人 As 分 AAassoam/ 分 (标准 ) = AAg 3 — A Ax 4,

(计算 ]

TPP __AAstonm/ 分 (样品 ) x PRE TPP HE MS 数
含量 AAskionm/ 分 (标准 ) x 样品 管 中 TPP 称 量 Ag 数
x 100%

应 用 范围

— =

=

步 RR emem 标准 管 (ml1) | Fin Cm!)

1. MT AIRA HR 1.50 1.50 1.50

pe eee " ee ye SS Aaa
训 oem TPP 样品 液 | 一 一 fA 0.50
4. 加 硫酸 镁 溶液 ie 0.05 pings ali 0.05
5. MARRS ERK riage 0.06 0.06
SOE POOR ie te ee eee BRD Aide

6. MPAA | 0.06 0.06 0.06
7. IMPSRRMS WE RBM 、 el hee 0.08 | 0.08
8. ini 2k - 1.18 aloe: 0.68

9. 7E 26°C 保温 30 分 钟

10. 加 再 酮 酸 钠 溶液 立即 记 时

用 于 生化 研究 和 生化 分 析 。

参 考 xX mR

Holzer, E. et al. (1963), Methods of Enzymatic Analysis, p. 602.
(Bergmeyer, H. U. ed.) Academic Press, N. Y,

Www As i's 这 -一 151 一 -

一 人
-一 一 人 下
=. hte

(一 ) 和 蛋白 质 浓度 的 测定 方法

测定 酶 制剂 中 蛋白 质 的 含量 通常 有 下 列 几 种 方法 :

1 紫外 吸收 法 号 “该 方法 是 根据 构成 酶 蛋 自 的 某 些
氨基 酸 ( 酷 氨 酸 、 色 氮 酸 和 苯 丙 氮 酸 等 ) 具 有 吸收 紫外 光 的 特
性 而 建立 起 来 的 。 酶 蛋白 溶液 吸收 紫外 光 的 数值 与 酶 中 酷 氨
酸 、 色 氨 酸 和 共 丙 氮 酸 的 含量 有 关 ; 酶 蛋白 吸收 紫外 光 的 最 大
值 在 波长 280nm 处 。 吸 收 值 与 浓度 之 间 的 关系 在 一 定 范围 昌
是 符合 Beer-Lambert 定律 的 。

A=E.-d-C

A 为 一 定 波长 下 的 光 吸 收 值 。

E 为 酶 蛋白 溶液 的 消光 系数 。

d 为 紫外 分 光 光 度 计 比 色 标 的 光 径 长 度 。

C 为 酶 蛋白 浓度 。 (如 果 卫 是 克 分 子 消光 系数 , 则 C 为 克
PFI WAREZ E*, 1% SARE PHER, WCH
百分比 浓度 , 就 是 每 100ml 溶液 中 酶 的 克 数 。) 假设 标准 比 色
杯 的 光 径 A= Lem, 则 蛋白 浓度 计算 可 简化 为 C= A/E。

利用 紫外 吸收 法 测定 蛋白 质 浓 度 已 有 很 多 人 人 总结 了 许多

经 验 公 式 , Ti AWA PE LARP:

蛋白 质 浓 度 (mg/ml) =1.45Azsonm 一 0. T4Arsoam

#5 FA Jit PK BE Gg /ml) = 0.144 Asisnm — Avosnm)

蛋白 质 浓 度 (wg/ml) = 183 Ac392m— 75 .8A260nm

=e

= POR UL, 合用 的 波长 较 长 则 测定 的 灵敏 度 较 低 , 但 较 长
的 波长 对 于 样品 中 含有 紫外 吸收 杂质 的 干扰 较 小 。 具 体 使 用
时 可 以 酌情 选择 ;该 方法 简便 .快速 ,不 损坏 被 测 样品 ， 但 对
于 不 同 种 类 的 蛋白 质 其 汕 定 的 谁 确 度 往往 不 同 ， 这 往往 是 因
为 各 种 蛋白 质 含 有 紫外 吸收 的 妥 营 酸 的 量 不 同 而 引起 的 ， 为
T seek he, 人 们 又 采用 了 其 他 方法 。

2. Weis! 蛋白 质 中 的 肽 键 在 碱 性 溶液 中 与 Cu
络 合 显示 蓝 色 , 这 是 蛋白 质 的 特异 反应 , 称 作 双 缩 腺 反应 。 游
离 的 氨基 酸 、 小 的 肽 或 核酸 不 产生 这 种 反应 。 大 们 利用 这 个
反应 来 测定 蛋白 质 中 肽 键 的 数量 ， 以 此 表示 蛋白 质 的 含量 。

试剂 二 配制 : 0.175g CuSO,.5H2O 深 于 15ml wk
”中 , BF 100ml 容量 瓶 中 , 加 入 30ml 浓 氨 水 .30ml 4 ze Hak
和 20ml ja IAA AM. HOA, 置 室温 1~2 小 时 ， 然
ar KBB, HOB, 一 般 可 用 3 一 和 个 月 。

操作 过 程 : 3.0ml 蛋白 溶液 (ASEH 0.10~1.25mg/
ml 于 试管 中 , 加 入 20ml 试剂 1, 充分 混 匀 后 , BORA, 立
即 于 540nm 处 测定 其 光 吸 收 全， 从 标准 蛋白 质 浓 度 与 A 的 关
系 曲 线 上 , 求 得 样品 的 蛋白 质 浓度 。
该 方法 比较 简便 , 适合 于 各 种 蛋白 质 的 测定 , 但 灵敏 度 较
8. 福 林 艳 试剂 法 吕 ， 根 据 蛋白 质 中 的 酷 氨 酸 和 色 氨 酸

在 碱 性 溶液 中 易 将 磷 钼 酸 和 了 磷 钨 酸 的 混合 物 还 原 为 蓝 色 化 合
物 (通常 称 作 钼 蓝 或 钨 蓝 ) 的 原理 ， 7 UN TB
A PRN

试剂 2 配制 ( 福 林 人 酚 试 剂 ); 在 1.5 升 容积 的 磨 口 回流 瓶
中 , 加 入 100g 钨 酸 钠 、258g FARA 700ml 蒸馏水 .50ml 85%
磷酸 和 100ml yet 盐酸 。 充分 混合 ， 接 上 回流 冷凝 管 ， 以 小 火

回流 10 小 时 。 回 流 完毕 ， 再 加 入 150g 硫酸 锂 ，50ml 蒸 馆 水
和 数 滴 液体 省 。 开 口 继续 沸腾 15 分 钟 ， 以 便 去 除 过 量 的 省
冷却 后 稀释 至 1 升 , 过 滤 , EMER, 置 于 棕色 瓶 中 保存 , 使
用 时 用 标准 氢 氧 化 钠 滴定 , 用 水 稀释 到 AN 备用 。

试剂 3 配制 : SOM] 溶液 (a) 和 lml WR), ARE
合 ， 可 使 用 一 天 。 溶 液 (a) 为 1g Na.CO, 溶解 于 50ml 0,1N
NaOH 溶液 中 ; 溶液 人 b) 为 0.5g CuSO,-5H,O 溶解 于 100ml
1 多 酒 石 酸 钾 溶 液 中 。

操作 过 程 : 1.0ml 蛋白 质 溶液 (0.005~0.2mg/ml) 中 加
入 5.0ml 试剂 3 0.5ml 试剂 2 室温 放置 30 分 钟 后 ， 于 500
nmx#x 处 测定 光 吸 收 值 A, 从 标准 蛋白 浓度 与 A 的 关系 曲线 上 ，
求 得 样品 的 蛋白 质 浓 度 。 |

该 方法 测定 蛋白 质 含 量 时 灵敏 度 比 缩 脲 法 高 得 多 ， 但 它
与 紫外 法 类 似 , 测定 的 是 蛋白 质 中 酷 氨 酸 和 色 氮 酸 的 含量 , 若
被 测 蛋 白 与 标准 蛋白 中 这 二 种 氨基 酸 的 含量 不 同时 会 产生 误
2, 因而 它 的 通用 性 没有 缩 腺 法 好 。

4. 缩 脲 福 林 法 5 © 缩 腺 法 和 福 林 法 联 用 ， 既 具有 福 林
法 较 高 的 灵敏 度 , 又 具有 缩 腺 法 比较 广泛 的 通用 性 。

试剂 4 的 配制 〈 稀 缩 腺 试剂 ): 1 份 体积 的 试剂 5 加 7 份
体积 2.3% Na,CO; 溶液 , 可 稳定 一 个 月 。

试剂 5 的 配制 : 将 150mg CuSsO0,…5H2O 和 600mg 酒 石 酸
| BRET 50ml 水 中 ， 在 不 断 搅 拌 的 条 件 下 ， 加 入 30ml 10%
NaO 贡 溶液 并 用 水 稀释 到 100ml。

操作 过 程 : 取 1.0ml (A 0.05~0.6mg 蛋白 ) SAM

溶液 ， 加 4.0ml 试 剂 4 室温 下 放置 10 分 钟 ， 加 0.25ml 试 剂

* 反应 体系 中 蛋白 质 含量 在 24g 以 上 时 ， 选 用 500nm 比 色 ; 蛋 白质 含 量 在
5~2548 之 间 选 用 755nm 比 色 测定 。

— 154—

2, #4), 30 分 钟 后 在 680nm 处 测定 光 吸 收入。 从 标准 蛋白

浓度 与 A 的 关系 曲线 上 , 求 得 样品 蛋白 质 的 浓度 。
5. 加 热 缩 脲 福 林 法 必 2 加热 缩 腺 福 林 法 比 缩 腺 福 林
法 具有 更 高 的 灵敏 度 。 在 100°C 加 热 10 分 钟 , 可 使 各 种 蛋白
质 在 660nm 的 光 吸 收 值 趋 于 一 致 , 从 而 使 测定 误差 降低 。

”试剂 6 配制 ， 10ml(a)，10ml(b)，80ml 蒸馏水 ， 1.0ml
《c 和 1.0ml 〈d) 混 合 。 其 中 (a) 为 209% Na,CO,; (b) 7 1N
NaOH; (c) Wy 20% FEM (d)4 5% CuSO,-5H,O (用
前 稀释 10 倍 )。

操作 过 程 : 取 1 om 3 BRR 0~0.01mg #), 加

A 5.0m! 试剂 5, 在 沸水 浴 上 加 热 100 分 钟 \ 试 剂 顶部 放 一 小
玻璃 球 , PF ILAKA ARK), WPT, CASE PMA 0.50ml
试剂 2 eB, WA 10°C 水 中 冷却 15 分 钟 , 然后 平衡 到 室温 ，
在 660nm 比 色 测 定 光 吸收 值 A。 从 标准 蛋白 浓度 与 A 的 关
系 曲 线 上 , 求 得 样品 的 蛋白 质 浓度 。

参考 文 献

[ 工 ] 潘 家 秀 等 ,1962。 有 蛋白质 化 学 的 研究 技术 ,第 11 页 。

[ 2 ] CRC, Handbook of Biochemistry and Molecular Biology, 3rd
ed.

[ 3 ] Ohnishi，S. 工 _ (1978)，Anal. Biochem. 86，193.

[ 4 ] Thomas, E, D. (1977), Anal. Biochem. 78，156.

C5) 蒋 传 莫 ,1980。 化 学 试剂 ，3， 48.

(=) FF FA Beth RY ic
由 酶 催化 的 化 学 反应 的 速度 受 PH 的 影响 很 大 ， 因 此 ，
酶 反应 的 体系 中 均 需 加 入 一 定 浓度 的 缓冲 液 ， 使 反应 过 程 中
PH 值 保持 恒定 。 所 谓 缓 冲 液 就 是 指 在 瞬时 “ 酸 或 “ 碱 的 变

eed Noam

oem yy mis PH 值 的 溶液 ， 缓 冲 帮 用 的 大 小 依 缓冲
(8) tex, B=dCb/dpH= oe Ca 为 “ 碱 ”
三 BM wk), 也 可 写 为

K.-C
Pack. 303] ear + Cut Con|

其 中 C 为 弱酸 HA 和 它 的 盐 MA 的 总 克 分 子 浓 度 ; K 为 弱酸
HA 的 解 离 常 数 ; Ca 和 Con 分 别 玫 示 HOt 的 浓度 和 OHT 的

浓度 。 当 Cu=K mt, B PH=pK mt, Bex==—C, HERTS

液 的 缓冲 能 力 最 大 。 例 如 : 在 25°C 时 乙酸 的 E fu 乙
EME PH=4.7 时 缓冲 能 力 最 大 -任何 缓冲 液 的 缓冲 范
围 均 在 PK 附近 ,乙酸 缓冲 液 的 缓冲 范围 在 PH 3.7~5.6 Z
间 , 超出 此 范围 即 失去 级 冲 作用 。 所 以 我 们 要 根据 所 需 的 P 互
来 选择 适当 的 缓冲 液 。

缓冲 液 之 配制 方法
1. 甘氨酸 -了 C1L 缓冲 液 (0.0500D)
Xmli 0.2M 甘氨酸 十 Yml 0.2VECI1 加 水 稀释 至 200ml

Sa

pH(25°C) 4 | Y Sa: 25°C)
Se
aa nae 3.0
2.4 50 | $2.4 |. 8.2
2.6 50 24.2 | 3.4
2.8 50 | 16.8 | 3.6

HARaTE =75. 07。
0.2M 甘氨酸 溶液 含 15.018g/1。

下 0

2. Size FAR-HC! 缓冲 液 (0.053I )
Xmi 0.2M-KH-43#—HmM+ Ym! 0.2N HCl 家 水 稀释 至 20mi

pH(20°C) pH(20°C) xX 站:
2.2 5 3.2 5 _ 工 .470
2.4 5 3.960 3.4 5 | 0.990
2.6 5 3.295 3.6 5 0.597
2.8 5 2.642 3.8 5 0.263
3.0 5

KH-835 — AR FB = 204.23,
0.2M KH-S#— HARARE 40.852/1,

3..Na>HPO,4- 柠 檬 酸 组 冲 液

1 | 0.2M NasaHPO4|0.13X 符 榜 酸 | 7, | 0.2 NagHPO,|0.1M HER
P - (mal) P (ml)...

(ml) (ml)
2.2 0.40 19.60 5.2 10.72 9.28
2.4 1.24 18.76 | 5.4 11.15 8.85
2.6 2.18 17.82 || 5.6 11.60 8.40

* Te 3.17 16.82 Ie 12.09 7.91
3.0 4.11 15.89 | 6.0 12.63 7.37
3.2 4.94 15.06 6.2 13.22 6.78
3.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.15
3.6 | 6.44 13.56 6.6 14.55 5.45
3.8 7.10 12.90 6.8 15.45 4.55
4.0 7.71 12.29 | 7.0 16.47 3.53
4.2 | 8.28 11.72 7.2 17.39 |. “9.61
4.4 8.82 11718 | 7.4 18.17 | 1.88
4.6 9.35 | 10.65, || 7.6 18.73 tie ee
4.8 9.86 | 10.14 | 7.8 ig M18 | 0.85
5.0 | 10.30 | 9.70, | 8.0 | 19.45 | 0.55

Na,HPO,-2H,0 45-F% =178.05; 0.2M@ RA 35.618/1,
eR - HO 4>-F Hk =210.14; 0.1M@ BRE 21-.01¢/1,

—— ERT

4. 柠檬 酸 -柠檬 酸 钠 组 冲 滚 (0.1M)

oe =e

pt [0-18 _Jpieto.1M Noo Hit no 0.1 Ho 1M Nag HH
3.0 18.6 | 1.4 | 5.0 8.2 11.8
3.2 17.2 | 2.8 | 5.2}. 7.3 12.7
3.4 igor 4.0 5.4 6.4 13.6
3.6 14.9) 9 64 seta eewe ae 14.8
3.8 14.0 | 6.0 5.8 4.7 15.8
4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2
4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17,2
4.4 11.4 8.6 | 6.4 2.0 18.0
4.6 10.3 9.7 | 6.6 1.4 18.6
4.8 9.2 10.8

柠檬 酸 . HO 分 子 量 =210.14; 0.1M 溶液 含 21.0g/L
Nas- 柠 檬 酸 .2H2O 分 子 量 =294.12; 0.1M 溶液 含 29.4g/1。

5， 栈 酸 缓冲 液 (0.244 )

pH(18°C) | 区 Mens | pH(18°C) nig ee OA ine
bie dis SR RS Eb! 了
3.6 0.75 9.25 : 4.8 5.90 4.10
|
mee je? 1.20 8.80 i 5.0 7.00 3.00
4.0 1.80 8.20 | 5.2 7.90 2.10
$2 | 2.65 7.35 | 5.4 8.60 1.40
44 | 3.70 6.30). | BiG 9.10 0.90
4.6 | 4.90 5.10 | 5.8 9.40 0.60

NaAc-3H,O 分 子 量 =136.09; 0.2M jaR& 27.228/1, —
vk HAC 相当 于 17N;. 0.2M 溶液 含 11.8ml/1。

— 158 —

| 0.2M
pH(25°C)! Na,.HPO,
(ml)

5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8

8.0
12.3
18.5
26.5

37.6

49.0

6. BRR CO.2M)

0.2m | |
NaH,PO, | pH |
SS oP Ea | ees
92.0 7.0
87.7 t4
81.5 7.4
73.5 7.6
62.5 7.8
51.0 8.0

0.2M

Na,zgHPO,
(ml)

61.0
72.0
81.0
87.0
91.5
94.7

0.2m

NaH,PO,
(mal)
39.0
28.0
19.0
13.0
8.5

5.3

NasHPQ,-2H:0
Na,HPO,-12H,O

NaH,PO,-H,O

NaH,PO,-2H,O

分 子 量 =178.05; 0.2M 溶液 含 35.618g/1。
分 子 量 =858.22; 0.2M WRA 71.648/1,

分 子 量 =

138.0; 0.2M 溶液 含 27.6g/]。

分 子 量 =156.03; 0.2M 溶液 含 31.218g/1。

Xml 0.2M KH,POQ,+Yml 0.2N NaOH 吉水 稀释 至 20ml

pH(20°c) | Xx (ml) | Y (ml)

pH(20°C)

xX (ml)

Y (ml)

LL YC || | | -

5.8
6.0
6.2

6.4 |

6.6
6.8

- ‘Sl. es oye Ot ae

0.372
0.570
0.860
1.260
1.780
2.365

te EC,

7.2
7.4
7.6
7.8
8.0

2.963
3.500
3.950
4.280
4.520

4.680

—(o—

8. 巴 比 妥 缓 冲 液 “

0.04M 巴 比 | 0.2N HCL | pHCissCy| 0:04M Ete] 0.2NHCI

PH(18°C)| 受 销 直 (< 卫 DGnl) 受 钠 盐 (mD| Gm):

一 -一 一 一 | 一 一 一 | 一
一 一 一 一 一 一 一 一 一 | 一 一 一

6.8 100 18.4 8.4 100 5.21
7.0 100 17.8 8.6 100 3.82
7.2 | 100 16.7 8.8, 100. | 2.62
7.4 | 100 15.3 9.0 100 | 1.65
7.6 100 13.4 9.2 10. | 128
7.8 100 11.47 9.4 100 0.70
8.0 100 9.39 9.6 100 0.35
8.2 100 7.21 100

巴 比 妥 钠 盐 (Na diethylbarbiturate) 分 子 量 = 206.2; 0: 04M Bs jo
8.25g/1,

9. =CBeRERE-NaOH RhRK(O. 05M)
50.0ml 0.17M 三 乙醇 胺 盐酸 盐 溶 液 +Xml 0.1N NaOH 用 水 稀释 至 100ml

pi(20°C) Xml 0.1N NaOH pH(20°C) Xml 0.1N NaOH

6.8 6.00 1.8 | 26.00
7.0 9.00 8.0 31.50
7.2 12.15 8.2 36.00
= aay 15.80 8.4 40.00
7.6 20.05 “pee LP 46.00

dpH/dt = —0.020 pH 单位 /"C。
三 乙醇 胺 盐酸 盐 CeHi3NO3-HCl 分 子 量 =185.7。
0.1M 三 乙醇 胺 盐酸 盐 溶 液 含 18.578/1。

一

10. Tris-= 缓 冲 液 (0.0577 )
Xmli0.2M 三 产 甲 基 氨 基 甲 烷 十 Yml 0.1N HCl 加 水 稀释 至 100m!

ER ELLE TE CI TY

pli 0.2M pH l0.2M

$$ ——. | 0.1N HC | 一 一 一 一 ] 0.1N HCl
23°C. |..87°C |. Tris 23°C. |. 87°C. | Tris .
9.10 | 8.95 ) 26 65 8.05 | 7.90 | 25 27.5
8.92 | 8.78 | 25 7.5 7.96 | 7.82 | 26 30.0
8.74 | 8.60 | 25 10.0 7.87 | 7.78 | 25 32.6
8.62 | 8.48 | 5 12.5 7.77 | 7.63 | 25 | 36.0
FBO fo BeBZ fw BEna| 15.0 7.66 |...7.52 | 25 37.5
8.40 | 8.27 | 25 17.5 7.54 | 7.40 | 26 40.0
8.32 | 8.18 | 25 20.0 | 7.36 | 7.22 | 26 42.6
8.23 | 8.10 | 25 |. 22.6 7.20 | 7.05 | 25 45.0
8.14 | 8.00 | 25 25.0 |

HOH CH,0H

ee

sama ve 分 子 量 =121.14; 0.2M BRE
HOCH, NH,

24 .238/1, | |

11. 硼酸 缓冲 液 (0.2M 硼酸 盐 )

Pr CRE 二 PT oF:

0.057IT 硼 砂 oem me |
(ml)

(ml)
7.4 1.0 9.0 |
7.6 Tus 82a 8.5 |
778 TH (2.0 8.0
8.0 3.0 7.0 |

硼砂 NazB,O7-10H,0, 4} =381.43) 0.05M 溶液 (=0.2M 硼砂 ) 含
19.07g/1。

硼酸 分 子 量 =61.84; 0.2M 溶液 含 12.37g/1。

硼砂 易 失 去 结晶 水 ， 必 须 在 带 塞 的 瓶 中 保存 ， 硼 砂 溶 液 也 可 以 用 半 中 和 的 碘
RARKE.

~—- 161

12. 甘氨酸 -NaOH 缓冲 液 (0.0574)
Xml 0.27M 甘氨酸 十 Yml 0.2N NaOH fie 200ml

xX Y pH x ‘i

pH |

8.6 | 50 4.0 9.6 50 22.4
8.8 | 50 6.0 9.8 50 27.2
9.0 | 50 8.8 10.0 50 82.0
9.2 | 7 5O 12.0 10.4 50 38.6
9.4 | 50 16.8 10.6 50 | ab

甘氨酸 分 子 量 =75.07; 0.2M WRE 15.012/1,

13. Pirb-NaOH 缓冲 液 (0.057 硼酸 根 )
Xml] 0.05M 磺 砂 十 Yml 0.2N NaOH 加 水 稀释 至 200ml

14， 碳 酸 钠 -碳酸 氢 钠 缓冲 液 (0.1M )
Catt, Mgt 存在 时 不 得 使 用

pH .0.1M | 0.1M pH 0.1M | 0.1M
_________| Na,CO; | NaHCO, .| 并 | NasCO; | NaHCO,
20°C | 37°c | Gn) (ml) 20°C | 7c | Gab (ml)
9.16 | 8.77 1 9 10.14| 9.90 6 4
9.40 | 9.12 2 8 10.28 | 10.08 7 3
9.51 | 9.40 3 7 10.53|10.28 8 2
9.78 | 9.50 4 6 | 10.83 |10.57 9 1
9.90 | 9.72 | 5 |

|
Na ,CO3-10H,047 Fi = 286.2; 0.1M R= 28.622/1,
NaHCO; 分 子 量 =84.0; 0.1M 溶液 含 8.40g/1。

2

英文 索引

1. Acetylcholinesterase “乙酰胆碱 酯 酶 5 有 54
2. Acid phosphatase ”酸性 磷酸 酶 pp 62
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A, Aldolase BEAR ---:1--eee reese eer eeeecteneeeereceeeereereececeseesees sen eneenecnenss 128
5. Alkaline phosphatase RLEEBRER pe 85 60
6. Amine oxidase BRS BR <ceccceeeeececeeeeeteceteeeeteeeeeeneeeeseeneeeens Gran 31
7. D-Amino acid oxidase D- 氨 基 酸 氧化 酶 pp 29
8. L-Amino acid oxidase 工 - 氨 基 酸 氧化 酶 “pp 27
9. Amino acylase 氨基 酰 化 酶 Pet 119
10. Aminopeptidase (cytosol) ” 氨 肽 酶 ( 胞 效 7 92
11. Aminopeptidase (microsomal) 氨 肽 酶 (微粒 体 ) -crreeeese terres eee eee eee e 94
12. a-Amylase ,2 证 粉 酶 “ee 74
18. B-Amylase “有 -淀粉 酶 ee 76
TA. Arginase 精 氨 酸 酶 .0 118, 125
15. Carbonate dehydratase ”碳酸 栈 酶 -+---+---seceseeceseeseseecenceecneneesenenes 133
16. Carboxypeptidase A 羧 肽 酶 A --seeeeesceeesseeesseeeteeeeteneetenneeeneneees 97
17. Carboxypeptidase B 36 RK BS ae 本 99
18. Catalase 过 氧化 氢 酶 36
19. Cellulase 纤维 素 酶 0 79
20. Chymotrypsin BRE SLE ABS , ， ee sab Lesa 101
21. Citrate synthase 柠檬 酸 合成 酶 “PP 9… mach nad taste 131
22. Cocarboxylase (Thiamine pyrophosphate, Diphosphothiamine)

MIN REMINDS 52.5005. 01- nnsntendicsedonnanscayosAinnoaptacaves uke whqare 149
23. Coenzyme I (NAD,DPN,Col) 辅酶 工

UPA RNR n dil Sue adda va oad odes ve ted sk donde ss Ts 99 125145 225 415 495 129, 138
24. Coenzyme II (NADP, TPN, Coll) 辅酶 开 …………… Ty 165 445 143

+3

256. Creatine kinase ALE BS ii 48

26. Deoxyribonuclease I 脱氧 核糖 核酸 酶 工 pp 67
27. Diphosphothiamine (Thiamine pyrophosphate, Cocarboxylase)
FRE PR (RAIAES) 说 149
28. DPN (NAD, Ce I) #§BE I ocerereeeseeeeeee 7s 9 12 145 225 415 495 129 138
29. DPNH (NADH, 还 原 Col) ”还 原 辅 酶 工 ………- Ts 9y 125 14 16 47) 141
80. Glucose oxidase A 2 oa 和 人 和 19
31. Glucose-6-phosphate dehydrogenase 48) 25 TE -6- PRLS ---16,44,144
32. B-Glucuronidase B-A# Aj HERE BREE AS cere ee seer eee eeee retteeeeaeeees 8
33. Glutamic pyruvic transaminase 谷 两 转氨酶 .…………… ev 9 40
34. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 甘油 醛 -3- 磷 酸 脱
氢 酶 . oo eeoooooooooooooooooooooooooaesooooiieoooaaoesaasio55 225 129
35. Hexokinase 已 糖 激酶 ---ecec reece eeeceeeeteeeecseccenecneecenesennes 4
36. Hyaluronidase 透明 质 酸 酶 .ee :89
37. Kallikrein “ 激 肽 释放 酶 -----eeceeeeeeeeeeeeeceeneeeneeeeneennne 本 107
38. Lactic dehydrogenase 乳酸 脱 气 酶 .0 7? 115 415 475 49 141
39. Lipase fZkiEs 和
40. Lysozyme 4: | Se xh anes 82
41. Malate dehydrogenase 32 FLASH Sl Bg --+--+e-e eres enccneesceceneees 1
42. Neuraminidase (sialidase) eH ES GS EF BS (TE RL RBS) «ose eee nese enenee 84
43..NAD (Col, DPN) 辅酶 工 .………………… [5 95125 145 225 415 495 129) 138
44. NADH (还 原 Col, DPNH) 还 原 辅酶 工 …………. 79s 125 145 165 47) 141
45. NADP (ColI, TPN) 辅酶 开 ……? 本 et Ty 49 143
46. NADPH (JH Co II, TPNH) 还 原 辅 酶 开 ……-: 2
47. Papain AVE BB esc eicinenacssobcvewscescasevcccesssossecccuaity saan ieee or 112
SR ectinesterase BURT Hs ---<---+-0cecdanenccestsenneeconsscnmgunnaaas wth eine =< ea BT
49. Pepsin (A) Be BBs (A) t Apne ts a 5 i sccccccccccn cuss ws cnaes seems 114
50. Peroxidase jt AY BS TOO rerrerrrerernrre ny) oo 38
B1. Pyruvate Kimase PUAAER BBE --0-----ccceesesccsseccssennescconemeneoemmenene 465 49
52. Ribonuclease A #EHEEEBRBG A .pp 72
53. Ribonuclease Ti 核糖 核酸 酶 工 000095 0.0.9.0.0.0.0.0.90.0.0,00.0.0.0.0,010,0,n0\5.55 ame 69

54. Sialidase (Neuraminidase) MEYKESHE (HAZ ARETE RG) .8

= az

55.
56.
57.

58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.

/
Snake venom phosphodiesterase HE REDE — ARNG -----eeeeeenee eee eee 8» 65
Subtilisin 枯草 杆菌 蛋白 酶 .…… ie Soest , ies a i 2 110
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