.1 .•.^: .ti(r^ ^ '^'^■j^ if^- ^ .^ m ß<.4 ■ >v r^k--'^ -•c^'-'C^ if*- / '^ .S^iC ZEITSCHRIFT FÜR WISSENSCHAFTLICHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK BEGRÜNDET ^'ON \V. .1. BEHEENö Unter besonderer Mitwirkung von Prot'. Dr. Paul Schietferdecker und Prof. Dr. E. Soininerfelilt in Bonn ni Tübingen herausgegeben von Prof. Dr. EKNST KÜSTER in Halle a. S. Ba7td XXV (Jahrgang 1908) Mit (J9 Textabbildungen und 5 T a 1" e I n LEIPZIG Verlag- von S. Hirzel 1908 Alle Recbte vorbehalten. 19^ 1 11 li a 1 1 s Y e r z e i c h n i s. I. Abhandlungen. Seite Artom, C, Über ein \'ei-faliren, die beschälten Eier von Ascaris uieg-. mit jedem .gewünschten Konservierungsmittel zu fixieren . . 3 r.ödecker, C. F., Celloidin-Entkalkungs- und Entkiesekmgs-Methode 21 liraus, H., Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr -Köhler und seine Anwendung in der Rekonstruktionsteclmik . . . 282 Rreckner, A., Zur doppelten Einbettung in Celloidin und Paraffin . 29 Cavazza, L. E., Kicerche sperimentali: (Jontributo allu studio dei Tannini 13 Dantschakolf, W., Zur Herstellung der ( 'elloi'dinserien ' 32 Engel, Ein Kreuztisch mit automatischer Einstellung 60 Fischel, A., l'ber eine vitale und spezifische Nervenfärbung . . . 154 Fleiscbmauu, L., Eine einfache Methode zur Darstellung der organi- schen Bestandteile des Zahnschmelzes 31 G Funek, Ch. , Dispositifs permettant Biltz , W. , Einige Versuche über ultramikroskopische Löslichkeits- bestimmung 73 Björkenheim, E. A., Zur Kenntnis der Schleimhaut im Uterovaginal- kanal des Weibes in den verschiedenen Altersperioden . . . 233 Böhm, A., u. Oppel, A., Taschenbuch der mikroskopischen Technik 321 Brand, F., Weitere Bemerkungen über Porphyridium cruentum (Ag.) Naeg 511 Brefeld, O., Die Kultur der Pilze und die Anwendung der Kultur- methoden für die verschiedenen Formen der Pilze nebst Bei- trägen zur vergleichenden Morphologie der Pilze und der natürlichen Wertschätzung ihrer zugehörigen Fruchtformen . 248 Brückner, F., Une modification pratique du procede de Romanowsky, pour le sang et le treponeme 472 Brugsch , Th. , u. Schlittenhelm , A. , Lehrbuch klinischer Unter- suchungsmethoden für Studierende und Ärzte 321 Buard, G., Recherche de l'indol dans les cultures microbiennes . . 361 Yl luhaltsverzeiehnis. Soite Bucliholz , W. , Zur kulturellen Untersclieiiluns- der Typhus-Pjir;i- tyi)hus-Kolibakterien uutereinjinder li'd Butterfleld, E. E., Über die ungranulierten A'orstufen der Myelocyten und ihre Bildung in Milz. Leber und Lymphdrüsen. [Ein Bei- trag zur Histogenese der niyeloidcn Umwandlung bei Leukämie und Anämie] "214 Buxtoii, B. H., u. Teagiie. ().. iJber Ausflockung von Kolloiden. . 258 Cajal y Ramön, S.. L'appareil reticulaire de (.iOLO[-Hoi,MORi:x colore par le nitrate d'argent 1(>4 Carreras, R., L'impregnazione urgentica associnta all'uso della piridina per la colorazione del tessuto nervoso 47o Cepede, Cas. , öur une nnuvelle cuvette ä coloration ä rainures mobilem .■!2(; ("laussen, P. , Über Entwickhing und Befruchtung bei .Saprolegnia monoica 251 Curreri , G. . Ricerche intorno alla natura delle spine collatorali dei pridungamenti dendritici delle cellule nervöse 334 J)eineka. D., Das Nervensystem von Ascaris 210 DieiilatV', L., et Herijin, A., Histogenese de lUs maxillaire inferieur 331 Bisse, J., Über die Bildung des Knochengewebes 4^)4 Docters vau Leeuwen -Roi.jnvaan, AV. u. .7., Über die Spermato- genese der Moose , speziell mit Berücksichtigung der Zentro- somen- und Reduktionsteilungsfragen 254 — , — , Über das Färben der jüngsten Zellwände in A'egetations- punkten 3G3 Dogiel, V.. Catenata, eine neue Mesozoengrujjpe 213 Donau, J., Über den Nachweis von Gold, Silber und den Platin- metallen durch die Phosphorsalzperle 129 Dremv, H. , Dermatohistologische Technik iler UxxAschen Färbe- methode für den Praktiker 4it5 DUrkeu. B., Die Tracheenkiemenmuskulatur der Ephemerideu unter Berücksichtigung der Morphologie des Insektenflügels ... 81 Duesberg, J., Sur l'existence de mitochondries dans Iduf et lembryon d'Apis mellifica 2()1 Dumauski, A., Ultramikroskopische Untersuchungen des Eisen- hydroxydhydrosols 258 Eisenberg, Ph., Studien zur Ektoplasmatheorie. I. Iber die Kapsel- bildung beim Milzbrandbazillus 507 — , — , Über Fetteinschlüsse bei Bakterien, l'aibchemische Unter- suchungen 502 Eisler. E., Deckel und Brutpflege bei Spirorbis .' . . 87 Engelniaun, M. , Untersuchungen üüer die elastischen Fasern der Lymphknoten von Pferd , Kind, Schwein und Ilund und über die an ihnen ablaufenden Alters Veränderungen 217 Federici, F., L'ether sulphurique comme liquide intermediaire pour l'inclusion ä la parafflne et l'inclusion nn'xte h la celloidine et paraffine 200 Inhaltsverzeichnis. VII Seite Fehrs ii. Sachs -Müke. Beitrag /au- Züchtung und Isolierung von Anaörobiern 359 Fraeukel, E., Über den Uterus senilis, insbesondere das Verhalten der Arterien in demselben 107 Gage, S. Ph., The luethod of raaking raodels from sheets of blotting paper 74 Gates. R. R. , Pollen development in hybrids of Oenothera lata ;k 0. Lamarcklana and its relation to rautation 256 Gerini, C. , Quelques recherches sur les premieres phases de deve- loppement des neurofibrilles primitives chez l'embryon du poulet 498 Goldschmidt, R. , Das Nervensystem von Ascaris lumbricoides und megalocephala 479 Gottberg, M., Methoden zur Darstellung von Spirochäten und Try- panosomen in Organschnitten 238 Gow, J. E., Embryogeny of Arisaema triphyllum 254 — , — , Morphology of Spathyema foetida 25G Grohs. W., Die Primitivrinne der Fluß-Seeschwalbe [Sterna hirundo L.] 107 Grochmalicki, J., Über die Linsenregeneration bei Knochenfischen . 23(1 Griiber, G. B. , Über die Beziehung von Milz und Knochenmark zu- einander. Ein Beitrag zur Bedeutung der Milz bei Leukämie o4G Guieysse, A., Platine oscillante de Nachet pour la microphoto- graphie stereoscopique 71 — , — , Etüde des organes digestifs chez le scorpion 328 Guilllermond, A. , Contribution ä l'etude cytologique des Bacillus endospores 35G Guiliiermond. A. , et Mawas, Characteres histo-chimiques des gra- nulations des Mastzellen et rapport de ces corps avec la volutine des protistes 330 Hager, H., Das Mikroskop und seine Anwendung 70 Hamburger. C. Das Männchen von Lacinularia socialis Ehrbg, . . 80 Hammar, J. A., Zur Kenntnis der Teleostierthymus 497 Harrison, F. C, Eine neue Geißelfärbung für Pseudomonas radicicola 357 Hata, J., Über eine einfache Methode zur aerobischen Kultivierung der Anaeroben, mit besonderer Berücksichtigung ihrer Toxin- produktion 247 Heidinger, W., Die Entwicklung der Sexualorgane bei Vaucheria 253 Heinemann, P. G., Ein Ersatz für Kartoffeln als Kulturboden. . . 3.58 Heinzerling, O., Der Bau der Diatomeenschale mit besonderer Be- rücksichtigung der ergastischen Gebilde und der Beziehung des Baues zur Systematik 125 Heuderson, L. J., a. Webster, H. B., The preservation of neutrality in culture media with the aid of phosphates 359 Heuderson, W. D., Zur Kenntnis der Spermatogenese von Dytiscus marginalis L., nebst einigen Bemerkungen über den Nucleolus 83 Hermau, M., Sur la coloration du bacille tuberculeux 118 Herxheimer, G., Zur Pathologie der Gitterfasern der Leber. Zugleich ein Beitrag zur Frage der sogenannten .,Stauungscirrho3e" . 347 VllI Inhaltsvei'zeichnis. Seite Herxheiiiier, G., ii. Gierlicli, N., Studien über die Neurofibrillen im Zentralnervensystem. Entwicklung und normales Verhalten. Veränderungen unter pathologischen Bedingungen .... 105 Herzojo;, A., Mikrophotographischer Atlas der technisch wichtigen Faserstoffe. Handbuch der mikroskopischen Untersuchungs- raethoden für Textil-, Papier-, Seiler-, Stopf- und Kürsten- materialien 322 Herzog, F., Über das Vorkommen von Blutkörperchensehatten im Blutstrom und über den Bau der roten Blutkörperchen . . . 214 Heß, E., Das mikroskopische Aussehen von gehärtetem und über- sättigtem Stahl 366 Hocke, M., Beiträge zur vergleichenden Histologie des Pankreas der wichtigsten Haussäugetiere (^Hund, Katze, Schwein, Schaf, Ziege, Rind, Pferd) mit besonderer Berücksichtigung des „Aus- führenden Apparates" und der „Pankreas -Inseln'' 350 Hoirmann, R. W., Über die Morphologie und die Funktion der Kau- werkzeuge und über das Kopfnervensystem von Tomocerus plumbeus L. 3. Beitrag zur Kenntnis der CoUembolen . . . 202 — , — . Beitrag zur Färbung und Morphologie des Streptococcus mucosus 240 Hofsten, N. v., Studien über Turbellarien aus dem Berner Uberlantl 85 Hüne, Antiformin zur Anreicherung der Tuberkelbazillen im Auswurf, Stuhl, Urin usw 509 linmisch, K. B. , Untersuchungen über die mechanisch wirkenden Papillen der Mundhöhle der Haussäugetiere 342 Janicki, C. v. . Über die Embryonalentwicklung von Taenia serrata GoEZE 87 — , — , Über den Hau von Araphilina liguloidea Diesing 211 Jurewitsch, W., Kartoffelnährbouillon zur Züchtung der Tuberkel- bazillen 358 Kallius, E. , ('her die P^ntfernung der Gallerthülle des Amphibien- laiches 500 Karsten, G., Die Entwicklung der Zygoten von Spirogyra jugalis . 251 Kassianow, N., Untersuchungen über das Nervensystem der Alcyo- naria 481 Katz, L., Zur mikroskopischen Untersuciiung des inneren Ohres . . 109 Kaiiffman, C. H. , A contribution to the physiology of the Sapro- legniaceae with special reference to the variations of the sexual Organs 365 Klinge, E., Die inneren Irisschichten der Haussäugetiere 352 Klopstock, M., u. Kowarsky, A., Praktikum der klinischen, chemisch- mikroskopischen und bakteriologischen Untersuchungsmethoden 320 Koch , A. , Jahresbericht über die Fortschritte in der Lehre von den Gärungsorganismen 501 Köhler, A., Untersuchungen über das Ovarium der Hemipteren . . 81 Kohl, F. G. , Die Hefepilze, ihre Organisation, Physiologie, Biologie und Systematik, sowie ihre Bedeutung als Gärungsorganisraen 250 Inhaltsver/.oiclmis. IX Seite Krauß, F., Über die Genese des Chordaknorpels der Urodelon und die Natur des Chordaf^ewehes 4 Liefmann, H., Ein einfaches Verfahren zur Züchtung und Isolierung anaerober Keime 121 Loewit, M., Über die Membran und die Innenkörper der Säugetier- erythrocyten. Ein Beitrag zur Entstehung und zum Unter- gange der roten Blutkörperchen 88 Lorleberg, O., Untersuchungen über den feineren Bau des Nerven- systems der Ascidien 208 Lubenau, C, Weiteres über das Koffeinanreicherungsverfahren zum Nachweise von Typhusbakterien in Stuhl und Wasser . . . 242 — , — , Der Eigelbnährboden als Ersatz des Serums zur Kultur von Diphtherie- und Tuberkelbazillen 243 Mandelbaum, N., Eine vitale Färbung der Spirochaete pallida. . . 115 Marchand, Über die natürliche Fixierung von Blutpräparaten . . . 328 Marino. F., Methode pour isoler les anaerobies 121 ■^ Tnhaltsverzeiclinis. Seite Marpinann, G. , Wie sammelt man rezente Meerwassercliatoraeen auf dem Festlande'? 12(5 — , — , Über Befunde von Benzoesäure in Pinguicula vulgaris . . . 127 Marshall, W. S., Contributions towards the Embryology and Anu- tomy of Polistes pallipes. 2. The early History of tlic cellular Elements of the Ovary o28 Martini, E., Über Subcuticula und Seitenfelder einiger Nematoden 11 85 Masur. A., Beiträge zur Histologie und Entwicklungsgeschichte der Schmelzpulpa 220 Meikle.joliu , S. .T, , On the development of the plexiform nerve mechanism of the alimentary canal 338 Mencl, E., Über die Histologie und Histogenese der sogenannten l'unktsubstanz Leydigs in dem Bauchstrange der Hirudineen 32(j Mei'tou, H., Über den feineren Bau der Ganglienzellen aus dem Zentralnervensj'stem von Tethys leporina Clv 20(5 Meves, F., Die Chondriosomen als Träger erbhcher Anlagen. Cyto- logische Studien am Hühnerembryo 484 Meves, F., u. Duesberg, J. . Die Spermatozytenteilungen bei der Hornisse (Vespa crabro L.) 475 Meyer, A., Der Zellkern der Bakterien 11(3 Mez, C, Der Hausschwamm und die übrigen holzzerstörenden Pilze der menschlichen Wolinungen. Ihre Erkennung, Bedeutung und Bekämpfung 248 Michailow, S., Die Nerven des Endocardiums 228 ^, — , Zur Frage über den feineren Bau des intrakardialen Nerven- systems der Säugetiere 337 — , — , Die Neurofibrillen der sympathischen ( Janglienzellen bei Säuge- tieren 341 — , — , Die feinere Struktur der sympathischen Ganglien der Harn- blase bei den Säugetieren 499 Mie. G., Die optischen Eigenschaften kolloidaler Goldlcisungen . . . 131 Moliscli, H., Über einige angeblich leuchtende Pilze 36(5 Moll, J. W., Die Fortschritte der mikroskopischen Technik seit 1870 122 Mottrani. V. H., Grannies of mammalian liver cells 346 Mücke, M., Zur Kenntnis der Eientwieklung und Befruchtung von Achlya polyandra de Bary 252 Mügge, O., Über einige Demonstrationsversuche an Leucit, Kryolith, Perowskit, Gadolinit, Quarz und Quarzglas mit dem Leiimaxn- schen P^rhitzungsmikroskop 307 Mühlens, P. , u. Lohe, Über Ziiclitungsversuche der Spirochaete pallida 508 Müller, H. , Untersuchungen über Eibildung bei (Tadonemiden und Oodoniden 2o5 Nakao, A., Der Nachweis des Tuberkelbazillus im Sputum .... 510 Nathan, M. , La cellule de Kupffer (cellule endotheliale des capil- laires veineux du foie), ses reactions experimentales et jiatho- logiques. I. La cellule de Kupffer h l'ctat normal .... 347 luhaltsverzoirlinis. XI Seite Nathan, M. , La cellule de Kupffer (cellule endotheliale des capil- laires veineux du foie), ses reactions experimentales et patho- logiques 348 Nemec, B., Über die Natur des Bakterienprotoplasten 511 Ncstler, A. , Die hautreizende Wirkung der Priraula niollis Hook. und Fr. Arendsii Fax 364 — . — , Über „hautreizende" Fflanzen 364 Neiimanu, G. , Über die Untersuchung von Typhusstuhl mittels Ma- lachitgrünnährboden 245 Nichols, M. L., The developraent of the poUen of Sarracenia . . . 254 Nießen, M. v. , Der Syphilisbazillus. Seine Geschichte, Literatur, Kultur und spezifische Fathogenität für Tiere und Menschen 51() Nirenstein , E. , Über den Ursprung und die Entwicklung der Gift- drüsen von Salamandra maculosa nebst einem Beitrage zur Morphologie des Sekretes 4'J7 Nouotte, M. , et Demanche, R. , Dosage de Findol dans les cul- tures microbiennes . 361 — . — , — , — , Snr la recherche de Findol dans les cultures micro- biennes 361 Nowikotf, 31., Über die Kückensinnesorgane der Flacophoren nebst einigen Bemerkungen über die Schale derselben 85 — , — , Über den Bau des Medianauges der Ostracoden 476 — . — , Beobachtungen über die Vermehrung der Knorpelzellen, nebst einigen Bemerkungen über die Struktur der hyalinen Knorpel- substanz 491 Nxisbaum, J. , Weitere Regenerationsstudien an Folychäten. Über die Regeneration von Nereis diversicolor (0. F. MtJLLEK) . . 205 Ochs, A,, Die intrauterine Entwicklung des Hamsters bis zum Beginn der Herzbildung 223 Oes, A., Über die Autolyse der Mitose 127 Ognew, S. J. , Materialien zur Histologie des BiDDEUschen Organs der Kröten 224 Olive, F. W. , Sexual cell fusions and vegetative nuclear divisions in the rusts 366 Ortmaun , AV. , Zur Embryonalentwicklung des Leberegels | Fasciola hepaticaj 478 Ostwald, W., Der Werdegang einer Wissenschaft 322 Fadlewsky, L. , Eine neue Anwendungsmethode des Malachitgrün- agars zum Nachweis von Bazillen der Typhusgruppe . . . 508 Teabody, F., u. Pratl, J. , Über den Wert von Malachitgrünnähr- böden zur Diiferenzierung von Typhus- und Kolonbazillen. Be- schreibung einer neuen Methode zur Isolierung von Typhus- bazillen aus dem Stuhl 119 Perez, Ch. , et Gendre, E., Frocede de coloration de la nevroglie chez les Ichthyobdelles 327 Perroucito, A., Die Regeneration der Nerven 97 l*esker, D. J., Zur Lehre von der Histogenese der Neurofibrillen . 232 Xn Inhaltsverzeichnis. Seite Pesta, O,, Die Metamorphose von Mytilicola intestinalis Steuer . . 83 Petermaun, W., Zur Kenntnis der frühen Entwicklungsvorgänge am Ei des Igels [Erinaceus europaeus L.| vor Ausbildung der Medullarrinne lt>7 Petersen, O. V. C. E., Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Vesicula seminalis des Menschen und einiger Säugetiere . . 97 Philiptschenko, J., Beiträge zur Kenntnis der Apterygoten. 1. über die exkretorischen und phagocytären Organe von Ctenolepisma lineata F 84 Pöschl, V., Einführung in die Kolloidchemie 324: Pollitzer, H, , Beiträge zur Morphologie und Biologie di-r ueutru- philen Leukocyten 89 Popott", M. , Eibildung bei Paludina vivipara und Chromidien l)ei Pa- ludina und Helix 204 — , — , Die Gametenbildung und die Konjugation von Carchesium polypinum L 205 Porodko, Th., Reicht die Durchsichtigkeit der durch Glaswolle tiltrierten Agarlösungen für die üblichen bakteriologischen Zwecke aus? 240 Pringsheim, E. jun. , Über die Herstellung von Gelbfiltern und ihre Verwendung zu Versuchen mit lichtreizbaren Organismen . . 474 Prym, O., Zur Blutentnahme aus dem Kaninchenohr 217 Eachmanott', A. W. , Die Neurofibrillen und die chromatophile Sub- stanz in den Nervenzellen 102 Raciborski, M., Einige Chemomorphosen des Aspergillus niger . . 257 Read, E. A. , Contribution to the knowledge of the olfactory appa- ratus in dog, cat and man 354 Recueil de l'Institut botanique (Universite de Bruxelles) public par L. EiiRERA 365 Reicheuow, E. , Die Rückbildungserscheinungen am Anurendarm während der Metamorphose und ihre Bedeutung für die Zell- forschung 485 Reichensi)erger, A., Zur Kenntnis des (xenus Ophiopsita Forh. . . 204 — , — , Die Drüsengebilde der Ophiuren 483 Reichert, K., Beobachtung der Geißeln von Bakterien im unge- färbten Zustande mit Hilfe des Spiegelkondensors 237 Rodenwaldt, Eine Vereinfachung der NissL sehen Färbung und ilire Anwendung bei Beri-Beri 332 Rohland, P. , Die Tone als semipermeable Wände und Mittel zur Klärung von Fabrik- und Abwässern 13(» Rosani, A., Einfache Art der Mikrobenfärbung 117 Rosenblatt, St., Beitrag zur Gram -Färbung 239 Rosenhauch, E., Über die Entwicklung der Schleimzelle 7G Rotarski, Th., f'bersehene Angaben betreffs flüssiger Kristalle . . 3(j9 Rothe, Über die Verwendung verschiedener Zuckernäiirböden zur Differentialdiagnose der Gonokokken 121 Rothfeld, J. , Über das Verhalten der elastischen Elemente in den kaverntisen Körpern der Sexualorgane 222 lnhaltsvcrzeichnif<. XIII Seite Uubaschkiii , W. . Über das erste Auftreten und die Migration der Keimzellen bei Vögelembryonen 2oti Hiizicka, Tl., Depressionszustände und Kegulationsvorgänge bei dem Bact. anthracis 360 Saling, Th. , Zur Kenntnis der Entwicklung der Keimdrüsen von Tenebrio molitor L 79 Salonioii, E. . Zur Unterscheidung der Streptokokken durch kohlen- hydrathaltige Nährböden 241 Schafifer, J. , Zur Histologie der Unterkieferspeicheldrüsen bei Insek- tivoren 227 Schepotieff, A., Die Echinoderiden 209 — , — , Über den feineren Bau der Gordiuslarven 210 Schmidt, E. , Über die Stützsubstanz der Leber im normalen und pathologischen Zustande 224 Schmidt, P., Über Jagendstadien der roten Blutkörperchen. . . . 491 Schmitt-Marcel, W., Über Pseudo-Hermaphroditismus bei Rana temp. 500 Schoorl, N., Beiträge zur mikrochemischen Analyse 72 Schreiber, L., u. Schneider, P., Eine Methode zur Darstellung von Pigmenten und ihrer farblosen Vorstufen mit besonderer Be- rücksichtigung des Augen- und Hautpigments 495 Schridde . H. , Die Entwicklungsgeschichte des menschlichen Speise- röhrenepitheles und ihre Bedeutung für die Metaplasielehre . 223 Schuberg, A., Untersuchungen über Zellverbindungen. II. Teil . . 77 — , — , Beiträge zur vergleichenden Anatomie und zur Entwicklungs- geschichte der Lederhaut der Amphibien 495 Schumann, P., Beiträge zur vergleichenden Histologie des Enddarmes und des Übersranices des Mitteldarmes in den Enddarm der ■■fi' Haussäufiretiere 348 '■in Seiffert, G. , Vorrichtung zur qualitativen und quantitativen Gas- bestimmung bei gasentwickelnden anaeroben Bakterien . . . 359 Selensky, W. , Untersuchungen über die sogenannten Urnen der Sipunculiden 481 Senft, E. , Über das Vorkommen von „Physcion" (Hesse) = „Pa- rietin" (Thomsox, Zopf) in den Flechten und über den mikrochemischen Nachweis desselben 255 Shikinani, J., Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Gallenblase 350 Siedentopf, H. , Über künstlichen Dichroismus von blauem Steinsalz 130 Sinefl", A., Ein vereinfachter Thermostat 76 Sivanow, N., Acanthobdella peledina Grube, 1851 327 Sonnenbrodt, Die Wachstumsperiode der Oocyte des Huhnes . . . 501 Srdinko, (). V., Beiträge zur Kenntnis der Nebenniere der Knochen- fische: Über die erste Anlage der Stannius sehen Körperchen der Lophobranchier 225 Stamer, A., Untersuchungen über die Fragmentation und Segmenta- tion des Herzmuskels 92 Standfuß, R., Vergleichend-histologische Studien an den Malpighi- schen Körperchen der Niere der Wirbeltiere 95 XIV Inhaltsverzeichnis. Seite Stauflfacher, H., Zur Kenntnis der Phylloxera vastatrix 84 Stein, R., Die Plattenkultur der Streptobazillen des Ulcus molie . . 242 Sterzinger, J. , Über das Leuchtvermögen von Aiuphiura squaiuata SARS 207 Stockhausen, F., Ökologie, „Anhäufungen" nach Beijerixck. Bei- träge zur natürlichen lieinzucht der Mikroorganismen . . . 114 Stoerk, O., u. Haberer, H. v., Beitrag zur Morphologie des Neben- nierenmarkes 497 Swellengrebel, N. H., Erwiderung auf die Arbeit des Herrn Dr. Höl- LiKG „Spirillum giganteum und Spirochaeta Balbianii" . . . IIG Sykes, M. G., Nuclear division in Funkia 254 Szily, A. V., Über das Entstehen eines fibrillären Ötützgewebes im Embryo und dessen Verhältnis zur Glaskörperfrage .... 351 Szyinonowicz, Ladisl. , u. Krause, Rud. , Lehrbuch der Histologie und der mikroskopischen Anatomie mit besonderer Berück- sichtigung des menschlichen Körpers einschließlich der mikro- skopischen Technik 320 Takahashi , K. , Some conditions which determine the length of the internodes found on the nerve fibers of the leopard frog. Rana pipiens 333 Takayasu, R., Über die Beziehungen zwischen anatomischen Glome- rulusveränderungen und Nierenfunktion bei experimentellen Nephritiden it4 Thonia, R. , Über die netzförmige Anordnung der quergestreiften Muskelfasern 329 Thulin, J., Studien über den Zusammenliang granulärer, interstitieller Zellen mit den i\Luskelfasern 49G Trautmann, A. , Beiträge zur vergleichenden Histologie des Dünn- darmes der Haussäugetiere 349 Triucas, L., Nuovo metodo di colorazione per le spore, per i granuli metacromatici ed in sostituzione al metodo di Gram .... 118 Tröster, C, Eine neue Mikroskopierlampe 75 Ude, J., Beiträge zur Anatomie und Histologie der Süßwassertricladen 211 Verzär, F., Über die Anordnung der glatten Muskelzellen im Amnion des Hühnchens 94 Vial, F., Über Verwendbarkeit chemisch reiner Malachitgrünpräparate als Nährbodenzusatz bei der Untersuchung von Typhusstühlen 244 Viefhaus, Th., Die Entwicklung der Ringelnatter [Tropidonotus natrix Boie] nach Ausbildung der Falterform bis zur Er- hebung des Proamnios 109 Vorländer, D., Über durchsichtig klare, kristallinische Flüssigkeiten 3G8 Walter, F. H., Zur Kenntnis der peripheren markhaltigen Nervenfasern 339 Wassilieff, A., Die Spermatogenese von Blatta germanica .... 207 Weidanz, O., Zur Technik der sterilen Filtration 240 Weidenreich, F., Beiträge zur Kenntnis der granulierten Leukocyten. 5. Fortsetzung der Studien über das Blut und die blutbilden- den und -zerstörenden Organe 489 Inluiltsverzeiclmis. XV Seite Weygaudt, C, Beiträge zur Kenntnis der Spermatogenese bei I'lagio- stoma GiRAKDi 209 Widmaiiu, E., Über den feineren Bau der Augen einiger Spinnen . 476 AVilson, G. J., The nerves and nerve-endings in the membrana tyinpani 228 AVirtz. R., Eine einfache Art der Sporenfiirbung 2;]i> Wislicenus, H. , Über die faserähnlicli gewachsene Tonerde i^Faser- tonerde) und ihre Oberflächenwirkung 257 AVisselingh, C. v., Über die Karyokinese bei Oedogonium. Sechster Beitrag zur Kenntnis der Karyokinese 124 — , — , i'ber den King und die Zellwand bei Oedogonium .... 12(> Wolfruni, M. , Beiträge zur Anatomie und Histologie der Aderhaut beim ^Menschen und bei höheren Wirbeltieren 218 Wossidlo, E., Experimentelle Untersuchungen über Veränderungen der Nis8L sehen Granula bei Lumbalanästhesie 332 Wunderer, H., Über Terminalkörperchen der Anamnien 229 A'amada, K., Ein Beitrag zu den Untersuchungsmethoden über Erj- throzytenformen 485 Yamamoto, J., Eine Silberimprägnationsmethode zur Unterscheidung von Lepra- und Tuberkelbazillen 50(j — , — , Über das Verhalten des ^lilzlirandbazillus bei der Silber- imprägnation 507 Yamanouchi, Sh., Sporogenesis in Nephrodium 250 — , — , Spermatogenesis, Oogenesis and Fertilization in Nephrodium . 251 Young, R. Th., The Histogenesis of Cysticercus pisiformis .... 478 Zettnow, E., Über Swellengrebels Chromatinbänder in Spirillum volutans 239 Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XXV. Prof. Dr. H. Ambroiin in Jena, Dr. C. Artom in Cagliari. Dr. Fr. Bödecker in Berlin. Prof. Dr. Braus in Heidelberg. Dr. A. Breckner in Kiel. Prof. L. E. Cavazza in Bologna. Dr. W. Dantschakoff in Moskau. Prof. Dr. P. Eisler in tLille a. S. Dr. Engel in Düsseldorf. XVI Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XX\'. Prof. Dr. A. Fiscbel in Prag. Dr. L. Fleischmann in Wien. Ch. Funck in Nancy. Dr. P. Gälesescu in Bukarest. Herzog Gandolfi in Bergen. Prof. Dr. W. Gebhardt in Halle a. S. Dr. E. Giltay in Wageningen (Holland,!. Dr. H. Hahn in München. Prof. Dr. H. J. Hamburger in Groningen. Prof. Fr. C. C. Hansen in Kopenhagen. Prof. Dr. M. Heidenhain in Tübingen. 0. Heimstädt in Wien. Prof. Dr. H. L. Heusuer in Gießen. Dr. M. Hofraaun in Meran (Tirol). Prof. Dr. H. Hoyer in Krakau. Dr. W. V. Iguatowsky in Gießen. Dr. L. W. Ssobolew in St. Petersburg. Prof. Dr. J. Koenigsberger in Freiburg i. Br. Prof. Dr. R. Krause in Berlin. Prof. Dr. E. Küster in Halle a. S. Prof. J. Lendvai in M;iramarossziget. Dr. 0. Levy in Leipzig. Dr. B. Lunghetti in Bologna. Dr. L. Materna in Graz. Dr. 0. Meyer in Halle a. S. Dr. L. Neumayer in München. Prof. Dr. B. Rawitz in Berlin. Dr. W. Reideraeister in Halle a. S. Dr. P. Röthig in Charlottenburg. G. Sainmont in Lüttich. Dr. W. Schefler in Berlin. Prof. Dr. P. Schielferdecker in Bonn. Dr. E. Schoebel in Neapel. Dr. H. Siedentopf in Jena. Prof. Dr. E. Sommerfeldt in Tübingen. II. V. Winiwarter in Lüttich. Dr. M. Wolff in Bromberg. Dr. H. Wunderer in Lienz (Tirol). Dr. A. Zimmermann in Budapest. Band 1\\. Heft 1. [Aus dem Physiologischen Laboratorium der Universität Groningen.] Injektionen mit Eiweiß- und Seriimtusclie zu milvroskopischen Zwecken. Von Prof. Dr. H. J. Hamburger nacli Versuchen in Gemeinschaft mit den Herren Stiid. med. J. F. de Beer und G. A. Kalverkami). „Die großen Vorteile kaltflüssiger mikroskopischer Injektions- massen gegenüber den warmflüssigen sind so einleuchtend, daß heute sämtliche Lehrbücher der Histologie, neben den alten Verfahren mit Erwärmung, diese neueren Massen aufgenommen haben. Viele Prä- parate, namentlich histologische Strukturen, vertragen das Einlegen in Wasser und die Erwärmung nicht, und wo man gezwungen ist, feine Kanülen zu verwenden , sind die warmflüssigen Massen über- haupt äußerst unbequem, da sie in der Kanüle sehr leicht erstarren," Mit diesen Worten fängt Otto Grosser^ eine Arbeit an, in der er als kalte Lijektionsmasse eine Suspension von Tusche in Hühnereiweißlösung empfiehlt, statt der von K. Taguchi" vor- geschlagenen Aufschwemmung von Tusche in Wasser, welche Auf- schwemmung nach Grosser den Nachteil hat, daß sie aus isolierten Körnchen besteht, die wenn auch nicht aus den kleineren, so doch ^) Grosser, 0., Mikroskopische Injektionen mit Eiweißtusche (Diese Zeitschr. Bd. XVII, 1900, p. 178). ^) Taguchi, K., Über kalte Injektionen mit japanischer Tusche (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXXI, 1888, p. 565). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1, 1 2 Hamburger: Injektionen mit Eiweiß- und Serumtusche. XXV, 1. aus den etwas größeren Gefäßen leicht herausfallen , und beim Schneiden über die Schnittfläche verstreut werden können. Es lag daher nahe , nach einem Bindemittel für die Körnchen zu suchen, und als solches ist schon gewöhnliches flüssiges Hühnereiweiß ganz besonders geeignet, da es sich aucli gut fixieren läßt. Angeregt durch die von Grosser erzielten Resultate, wünschten auch wir dies Verfahren anzuwenden und rieben , wie das auch bereits Taguchi für seine wässerige Masse vorgeschlagen hatte , ein Stück Stangentusche mit dem filtrierten Hühnereiweiß auf einer matten Glasplatte an. Es möchte jedoch nicht gelingen eine geeignete leicht- flüssige Masse zu bekommen ; selbst in einer gut verschlossenen Flasche trat innerhalb 24 Stunden vollständige Verfestigung ein und be- reits während des Reibens bildete sich eine Membran an der Ober- fläclie. Wahrscheinlich lag das an der Tusche, von der bekanntlich viele Qualitäten im Handel vorkommen; aber es gelang uns nicht, Besseres zu bekommen. Es wurde nun versucht diese Schwierigkeiten zu umgehen , in- dem wir die Eiweißlösung mit käuflicher Tuschelösung ver- setzten. Hierzu wurde die GtJNTHER-WAGNERSche flüssige Perltusche gebraucht, und zwar im Verhältnis zur Eiweißlösung von 1:1. Es bildete sieb eine dünnflüssige Masse , . welche unter dem Mikroskop lediglich aus sehr feinen in Broavn scher Molekularbewegung verkehrenden Partikelchen zu bestehen sich erwies. Die Fixierung erfolgte mittels Sublimat -Formol. Nach Durch- färbung mit Alauncochenille und Einbettung in Paraffin wurden sehr schöne Präparate erhalten, in denen die Blutgefäße mit einer voll- kommen homogenen schwarzen Masse gefüllt waren. Wurde also nach dieser Methode der obengenannten Beschwerde aus dem Wege gegangen, so gewährte sie auch noch den Vorteil, daß sie schneller zum Ziel führte, denn man braucht keine Tusche abzureiben. Noch in einer anderen Richtung haben wir die Methode er- leichtert, indem wir nämlich das Hühnereiweiß durch eine natürliche Flüssigkeit, das Blutserum, ersetzten. Vermischung von 3 Vol. Serum mit 2 Vol. flüssiger Perltusche ergab vorzügliche Resultate. Das Blutserum braucht nicht von derselben Tierspecies zu stammen. Für die Injektionen von Meerschweinchen und von Kanin- chen benutzten wir mit Erfolg Pferdeserum und Rinderserum. Es sind diese Sera leicht zu gewinnen, indem man die aus dem Kuchen gepreßte Flüssigkeit abhebt. XXV, 1. Artora: ^'e^f;Uu•en, beschalte Eier von Ascarls mcg. zu fixieren. 3 Die Fixation mittels Subliniat-Formol erfolgte in derselben Weise wie oben. Sowohl mit Durchtarbung wie mit Einzelfärbnng wurden schöne Präparate erhalten. Vorläufig- wurden Nieren und Leber mikroskopisch untersucht. Die Injektionsmasse drang auch in Haut, Muskeln und Gehirn ein. Versuche, um mit Suspensionen von Karminkörnclien in Serum kalte Injektionen zu erzielen, scheiterten, da die Karminpartikelchen zusammenklebten. Vielleicht lassen sich aber Gemische von gelöstem Karrain oder anders gefärbten Flüssigkeiten mit Serum bereiten, die gute Resultate geben. [Eingegangen am 17. März 1908.] [Aus dem Zoologischen Institut Würzburg.] Über ein Verfahren, die beschälten Eier von Ascaris meg. mit jedem gewünschten Konservierungsmittel zu fixieren. Von Dr. Cesare Artom, Assistent am Zoologischen Institut in CagUari. Während meines kurzen Aufenthalts in dem Laboratorium des Zoologischen Instituts zu Würzburg hatte ich Gelegenheit, die ersten Entwicklungsstadien des Eies von Ascaris meg. mit einer neuen Methode zu untersuchen, welche mir von Prof. Boveri vorgeschlagen wurde. Für die wertvollen Ratschläge , die ich von ihm erhalten habe, bin ich sehr dankbar. Bekanntlich besitzen die abgelegten Ascaris -Eier eine äußerst resistente Schale (Perivitelliuhülle). Sie sind aus diesem Grunde gegen äußere f]inflüsse sehr wenig empfindlich. Es ist schon von früheren Untersuchern angegeben worden, daß sich die Eier in den gebräuchlichsten Konservierungsmitteln (Sublimat, Pikrinsäure, Osmiumsäure usw.) längere oder kürzere Zeit weiter entwickeln. 1* 4 Artom: Verfahren, beschalte Eier von Ascaris meg. zu fixieren. XXV, 1. Ich selbst habe Eier von Asearis meg. in FLEMMixcscher Flüssig- keit bis zu beweglichen Würmchen gezüchtet. Die bis jetzt be- kannten Mittel, die Eier rasch nnd also gerade in dem gewünschten Stadium zu fixieren , sind die Mischungen von Alkohol und Eisessig, nach dem Vorschlag von Erlanger (5) gewöhnlich in dem Verhältnis von 4 Teilen Alkohol (96 Prozent) und einem Teil Eisessig verwendet. Wenn nun auch dieses Verfahren für gewisse Zwecke, so vor allem für die Untersuchung der Embryonalentwick- lung sehr befriedigende Resultate liefert , so ist es doch für das Studium der feinsten cytologischen Verhältnisse nicht vollkommen ausreichend. Eine dem lebenden Zustand ohne Zweifel viel näher kommende Fixierung gibt das von Boveri ([4] p. 6.3) benützte Gemisch von 20 Teilen Alkohol (70 Prozent) und einem Teil Eisessig. Allein hier macht sich wieder der Nachteil bemerkbar , daß dieses Gemisch die Eischalen nicht sofort durchdringt , so daß einerseits die Eier sich häufig über das gewünschte Stadium hinaus entwickeln, anderseits die Möglichkeit nicht völlig ausgeschlossen erscheint, daß zunächst das Reagens in so verdünntem Zustand mit dem Ei in Berührung kommt, daß vor der Abtötung pathologische Verände- rungen Platz greifen. So hat erst kürzlich R. Fick ([6] p. 94) den Verdacht ausgesprochen, daß die zuerst von Boveri (1, 2) eingehend beschriebenen fingerförmigen Fortsätze der Blastomerenkerne patlio- logische Bildungen sein könnten. Wenn sich auch diese Vermutung- schön durch eingehenderes Studium der bisher über diese Frage veröffentlichten Arbeiten als sicher irrtümlich erkennen läßt , so ist doch hinsichtlich feinerer Verhältnisse die Mangelhaftigkeit und Ein- seitigkeit der bis jetzt anwendbaren Fixierungsmittel nicht zu ver- kennen. Über manche Fragen , so nach der Struktur der Zentren, nacli dem Verhältnis des Archiplasmas zu dem übrigen Protoplasma, nach der Struktur der Chromosomen, nach der Entstehung und dem Bau des Ruhekerns usw. , bestehen zwischen den verschiedenen Au- toren nicht unerhebliche Widersprüche, w^elche eine Kontrolle durch die sonst bewährten Methoden sehr wäinschenswert erscheinen lassen. Erst wenn diese Methoden sich hier verwerten lassen , kann das Ei von Asearis mit vollem Recht als eines der günstigsten Objekte für die Zellenforschung bezeichnet werden. Aber noch ein anderer Punkt verdient Beachtung. Nachdem man sich lange Zeit damit begnügen konnte, für den Kern eine spezifische Färbung zu besitzen, macht sich immer mehr das Bedürfnis geltend, auch andere Zellbestandteile durch besondere Färbung sichtbar zu machen, und XXV, 1. Artom: Voifaliron, bescliiilte Eior von Ascaris lueg'. zu fixieren. 5 diese komplizierteren Fiirbungsmetlioden erfordern gewölinlieli eine ganz bestimmte Vorbehandlung', welche für das Ascaris-Ei nicht anwendbar ist. Schon die sehr einfache Frage, von welcher Natur die im Ascaris-Ei enthaltenen Dotterkörner sind, konnte bisher nicht geprüft werden. Ist es nun die wunderbare Unempfindlichkeit des im Freien sich entwickelnden Ascaris-Eies, durch welche die bisher mangel- hafte Konservierungsfälligkeit bedingt war, so bildet gerade diese Unemplindlichkeit auch die Grundlage für die Möglichkeit , die be- stehenden Schwierigkeiten zu überwinden. Die P^igenschaft, die bei dem eingeschlagenen Verfahren benützt wird , ist die große Re- sistenz gegen Kälte. Ich habe Ascaris-Eier auf — 6^ C. abgekühlt ; sobald sie wieder in Zimmertemperatur zurückversetzt wurden, entwickelten sie sich ohne jede Störung weiter. Damit ist die Möglichkeit gegeben, große Massen von lebenden Eiern mit dem Gefriermikrotom zu schneiden , wobei an vielen Eiern ohne jede Deformation des Inhalts die Eischale durchgeschnitten oder an- geschnitten wird und nun jedes Härtungsmittel sofort mit der leben- den Eizelle in Berührung kommt. Die Art des Vorgehens war dabei die folgende : Mehrere Uteri wurden so lange in Kochsalzlösung belassen, bis die meisten Eier das gewünschte Stadium zeigten. Nun wurden sie in möglichst kompakten Haufen auf den Gefriertisch des Jung sehen Kohlen- säure-Gefriermikrotoms (Modell C) gebracht. Die Höhe eines solchen Haufens wurde auf etwa 0'5 cm bemessen. Das Zuströmen der CO2 wurde so reguliert , daß möglichst geringe Kälte zur An- wendung kam. Welchen Temperaturen die Eier hierbei ausgesetzt waren, habe ich allerdings nicht festgestellt. Doch habe ich mehr- mals die untersten auf den Objekttisch angefrorenen Eier nach dem Zurückbringen in normale Temperatur sich ungestört weiterent- wickeln sehen. Ist die Eierraasse mit der umgebenden Kochsalzlösung zu einem Block erstarrt , so ist es sehr leicht , dünne Schnitte zu machen ; ja es lassen sich weit dünnere Schnitte erzielen , als sie für unsere Zwecke nötig und sogar wünschenswert sind. Es stellte sich näm- lich heraus, daß wirklich zerschnittene Eier, auch wenn sie noch in gefrorenem Zustand in die Fixierungsliüssigkeit gebracht werden, in ihren feineren Strukturen sehr erheblich geschädigt sind. In Betracht kommen nur solche Eier, bei denen die Schale ein klein wenig angeschnitten ist. Und zwar ist es , wie ich glaube. 6 Artom: Verfahren, beschalte Eier von Ascaris meg. zu fixieren. XXV, 1. nicht einmal nötig , daß ein wirkliches Loch entsteht , sondern es scheint zu genügen , wenn nur die äußersten Schichten der Schale, welche oft'enbar die allein widerstandsfähigen sind , angeschnitten werden. unter diesen Umständen war es viel vorteilhafter, die Schnitte nicht zu dünn herzustellen. Eine Dicke von 30 /< bewährte sich am besten. Die auf dem vorher stark abgekühlten Messer liegenden Schnitte wurden gewöhnlich in noch gefrorenem Zustand in die Fixierungsflüssigkeit übertragen. — Ich benutzte Sublimat-Essig- säure, Pikriu-P^ssigsäure, Formol-Alkohol und vor allem das starke Gemisch von Flemming. — Betrachtet man die in das Konservierungsmittel übertragenen Schnitte mit dem Mikroskop, so erkennt man , daß zahlreiche Eier schon nach ganz kurzer Zeit von demselben ergriffen werden. Besonders in Flemming scher Flüssig- keit, tritt dies infolge der Schwärzung der Dotterköruer sehr deut- lich hervor. Bisher habe ich mich fast ausschließlich mit der Aveiteren Ver- arbeitung dieses Chrom-Osmium-Essigsäure-Materials be- scliäftigt. Man kann die Eier sowohl in t o t o untersuchen, als auch in Paraffin einbetten und in Schnitte zerlegen. Die ganzen Eier müssen wegen der überall zerstreuten, intensiv gescliwärzten Dotter- körner vor dem Studium gebleicht werden. Dies geschah durch mehrtägiges Verweilen in Terpentinöl, welclies die Körner voll- ständig auflöst. Es kann sonach keinem Zweifel unterliegen, daß diese Gebilde aus Fett bestehen (vgl. Flemming [7]). Zur Färbung solcher in Flemming scher Flüssigkeit konservierter Totalpräparate wendete ich Boraxkarmin und sehr verdünntes DELAFiELoscbes Hämatoxylin mit vorzüglichem Erfolg an. Zur Herstellung der Paraffinschnitte benutzte ich die von Bo- VERi (3) vorgeschlagene Methode, große Mengen von Eiern, nachdem sie in TOprozentigen Alkohol übergeführt waren, in eine dünne Membran (abgCAVorfene Hautfetzen von Cryptobr anchus) ein- zuwickeln. Über die Resultate der erzielten Fixierungen soll au anderer Stelle berichtet werden. Hier sei nur ein Punkt noch erwähnt. Es liegt der Gedanke nahe , daß sich das beschriebene Verfahren auch für eutwicklungsphysiologische Zwecke verwenden ließe. Schneidet man gefrorene Eier, die sich auf dem Zweizellen-Stadium befinden, so ereignet es sich nicht selten , daß eine Blastomere von ihrer Partnerin abgetrennt wird. Ließe sich ein Medium finden , das die XXV, 1. Artom: Verfahren, beschalte Eier von Ascaris mcg. zu fixieren. 7 in der Eischale enthaltene Flüssigkeit zu vertreten vermag, so wäre man imstande , die Entwicklung solcher isolierter Blastomeren zu verfolgen, was bekanntlich für das Ascaris -Ei von großem Interesse wäre. — Zitierte Literatur. 1) BovERi, Th., über Ditferenzierung- der Zellkerne während der Furchung des Eies von Ascaris megalocephala (Anat. Anz. Bd. XI, 1887). 2) Derselbe, Zellen -Studien, Heft 2, 1888. 3) Derselbe, Über das Verhalten der Centrosomen bei der Befruchtung des Seeigel-Eies (Verh. d. Phys.-med. Ges. zu Würzburg, N. F., Bd. XXIX, 1895). 4) Derselbe, Zellen -Studien, Heft 4, 1900. 5) EKLANGE5, R. v., über die Befruchtung und erste Teilung des Ascaris- Eies (Arch. f. raikrosk. Anat. Bd. XLIX, 1897). G) FiCK, R., Vererbungsfragen, Reduktions- und Chromosomenhypothesen, Bastard-Regeln (Ergebn. d. Anatomie u. Entwicklungsgesch. Bd. XVI, 190Gj. 7) Flemming, W., Weiteres über die Entfärbung osmierten Fettes in Ter- pentin und anderen Substanzen (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. u. f. mikrosk. Technik Bd. VI, 1889). [Eingegangen am 20. März 1908.] 8 Zimmermann: Über Anwendung d. Methode v. Bielscllo\vskJ^ XXV, 1. [Aus dem Histologischen Institut der Universität in Wien. Vorstand: Hofrat Prof. v. Ebner.] Über die Anwendung der Methode von Bielscliowsky zur Darstellung der Bindegewebstibrillen. Von Dr. A. Ziiuiiiermauu in Budapest. Die Verwertbarkeit der Bielschowsky sehen Methode zum Nach- weis von kollagenen Fibrillen durch Imprägnation haben bereits mehrere hervorgehoben. Jene Eigenschaft der Methode, welche Bielschowsky (1) seinerzeit als einen Fehler empfunden hat, daß sich nämlich mit ihrer Hilfe außer den Neurofibrillen , um deren Darstellung es sich ihrem Entdecker handelte, vielfach auch Binde- gewebsfasern färben , schien zur Darstellung des bindegewebigen Gerüstes einzelner Organe geeignet zu sein. Bei der Methode, welche Bielschowsky ursprünglich verwendete , färben sich nämlich außer den Neurofibrillen die leimgebenden und auch die elastischen Fasern ; um nervöse und bindegewebige Gebilde voneinander besser unter- scheiden zu können , modifizierte Bielschowsky (2) bald seine Me- thode. Später hat Max Wulff (7) mit ihrer Hilfe fibrilläre Struk- turen in der Leber des Frosches imprägniert. Maresch (4) gelang es durch dieselbe Methode das Biudegewebegerüst der menschlichen Leber sehr vollkommen darzustellen. Studnicka (5) hat ebenfalls vollständige Imprägnationen der bindegewebigen Grundsubstanz der Haut, der Speicheldrüsen , Thyreoidea , Thymus , Nebennieren , der Sehnerven usw. erhalten. Levi (3) gelang es mit der Bielschowsky- schen Methode die fibrilläre Grundsubstanz in hyalinen Knorpeln nachweisen. Die von Bielschow^sky zur Darstellung der Neurofibrillen an- gegebene Silbermethode ist nach Wolff (6) die folgende : Die höch- stens 2 mm dicken Stücke w-erden in 6- bis lOprozentigem neutralen Formol fixiert, dann in destilliertem Wasser gut ausgewasclien und XXV, 1. Zimmermann: Ühor Anwendung d. Methode v. Bielschowsky. 9 kommen zur Vorversilberunj? auf wenigstens 2 Tage in eine 2pro- zentigc llöilensteinlösuug ; dann werden sie einige Minuten lang aus- gewaschen und auf eine lialbe bis mehrere Stunden in eine frische aramoniakalische Silberlösung gelegt, welche man erhält, indem man zu einer lOprozentigen Lösung von Höllenstein unter Umschütteln tropfen- weise 40prozentige Natronlauge setzt, bis keine Fällung mehr statt- findet und dann auf gleiche Weise das Präzipitat in möglichst wenig Ammoniak nahezu löst, filtriert und mit destilliertem Wasser auf das 4- bis öfache verdünnt (die Lösung hält sich nur einige Stunden lang). Nach Auswaschen wird das Präparat zur Reduktion in 4- bis öprozentiges Formol, je nacli der Dicke, auf eine bis 6 Stunden ge- legt und nachher durch Xylol in Paraffin von 40 bis 50^ überführt. Die mit Eiweiß aufgeklebten Schnitte kommen zur Fixierung des Silberbildes auf eine bis 2 Stunden in eine etwa ein- bis O'öpromil- lige, am besten durch Lithiumkarbonat zu neutralisierende wässerige Lösung von Goldchlorid und nach Abspülen auf 5 bis 15 Minuten in ein öprozentiges Fixiernatronbad, dann werden sie 6 bis 12 Stunden lang in Leitungswasser ausgewaschen und in Balsam geschafft. Man kann auch die Stücke nach dem Fixieren in Formol und dem Aus- waschen mit dem Gefriermikrotom schneiden oder in Paraffin bringen, dann ist die Vorversilberung der Gefrierschnitte oder der mit Eiweiß aufgeklebten Paraffinschnitte die nämliche, dauert aber im letzteren Falle 7 Tage ; ebenso sind die weiteren Prozeduren gleich. Maresch (4) hat die von Bielschowsky auf diese Weise an- gegebene Methode für andere Organe zum Zweck der Darstellung der feinsten Bindegewebsfasern etwas modifiziert. So empfiehlt er zur Vorversilberung der Gefrierschnitte oder Paraffinsclmitte in der 2prozentigen Silbernitratlösung nur 12 bis 24 Stunden (Bielschowsky 7 Tage), auch in der ammoniakalischen Silberlösung läßt er sie kürzere Zeit : 2 bis 30 Minuten, je nach der Dicke der Schnitte (Bielschowsky eine halbe bis mehrere Stunden) , endlich soll nach Maresch das Goldbad auch nur etwa 10 Minuten auf die imprägnierten Schnitte einwirken (bei Bielschowsky eine bis 2 Stunden). Aus den in Paraffin eingebetteten Schnitten soll die Befreiung vom Einbettuugsmittel erst am Ende nach der Vergoldung und nach der Herausnahme aus dem Fixiernatron erfolgen, bis dahin behandelt Maresch die Schnitte nicht am Objektträger , sondern ähnlich , wie man bei Celloidinschnitten verfährt. Studnicka (5) gibt an, daß zur Bielschowsky sehen Methode die Fixierung der Objekte eine beliebige sein kann ; er hat voll- 10 Zimmermann: Über Anwendung' d. Methode v. Bielschowsky. XX Y, 1. kommen gute Resultate an mit Alkohol, mit Formol, mit 4prozentiger Salpetersäure, mit der Müller sehen, Flemming sehen, PEREXYischen, P. MAYERSchen, Kleinenberg sehen Flüssigkeit usw. erzielt. Etwas weniger gute Resultate gibt Sublimat. Das Einbetten kann nach Studnicka sowohl im Paraffin, als auch in Celloidin geschehen. Zur Vorversilberung nimmt er eine Sprozentige Lösung von Silber- nitrat und behält die Schnitte in derselben in der Regel bis 4 Tage. Aus der ammoniakalischen Lösung überführt Studnicka die Schnitte nach kurzem Abspülen in Wasser in eine lOprozentige Formollösung und nach 5 Minuten , nachdem sie wieder kurz ausgewaschen wur- den , in eine ^/^prozentige Goldchloridlösung. Das darauffolgende öprozeutige Fixiernatronbad soll nach Studnicka auf einige Sekunden einwirken. Eine weitere Modifikation der Bielschowsky sehen Methode gibt Levi (3) an. Zur Fixierung ist nach Levi das Formol am wenig- sten geeignet, denn es soll die Objekte zur Quellung bringen. Dem- gegenüber geben die Flemming sehen und Zenker sehen Flüssigkeiten ausgezeichnete Resultate. Zur Paraffineinbettung empfiehlt Levi das HEiDENHAiNsehe Verfahren mit Schwefelkohlenstoff. Kach dem Ver- silbern läßt er zur Reduktion die 5prozentige Formollösung nur 5 bis 10 Minuten einwirken, ebenso nach dem Goldbad das Fixiernatron gleichfalls durch 10 bis 15 Minuten. Aus dem Angeführten ist es ersiclitlich, daß die zur Imprägna- tion der Bindegewebsfasern empfohlenen Modifikationen der Biel- schowsky'sehen Methode teils die Konzentration der verwendeten Mittel, teils die Dauer der Anwendung dieser Stoffe betreffen. Zum Gelingen der Imprägnation ist aber beides von größter Wichtigkeit. Auf Anregung von Prof. Schafper habe ich an mehreren Ob- jekten Versuche angestellt zur Darstellung der Bindegewebsfibrillen mit der Bielschowsky sehen Methode. Anfangs hielt ich mich strenge an die von Maresch angegebenen Vorschriften, bekam aber sehr blasse, undeutliche Bilder. Später ließ ich zum Vorversilbern die 2prozentige Höllensteinlösung etwas länger, mindestens 48 Stunden, einwirken , ebenso verlängerte ich etwas die Zeit der eigentlichen Versilberung, sowie die des Goldbades und des Fixiernatronbades und bekam mit diesen kleinen Abänderungen sehr zufriedenstellende Resultate. Zur Imprägnation gelangten durchweg in Formol fixierte Objekte, welche längere Zeit in Alkohol gelegen sind. Levis Behauptung, daß in Forraol fixiertes Material nicht geeignet wäre zur Bielschowsky- XXV, 1. Zimiucrmann: ('her Anwendung d. Methode v. Rielscliowsky. 1 1 scheu Methode , trift't nicht zu , denn man bekommt auch hier sehr schöne Bilder mit dieser Methode, Auch bringt neutrale Formalin- lösuug- leimgebende Fasern nicht zur Quellung. Nachdem durch Auswaschen die Fixierungsflüssigkeit entfernt worden war , wurde das Objekt in Alkohol gehärtet und dann in Paraffin eingebettet. Aus den 5 f.i dünnen Paraffinschnitten, welche am Objektträger aufgetragen wurden, entfernte ich das Einbettungs- mittel, im Gegensatz zu Maresch, noch vor der weiteren Behand- lung mit Xylol. Die vom Paraffin befreiten 5 /t dünnen Schnitte kommen auf 48 Stunden in eine 2prozentige Höllensteinlösuug zur Vorversilberung und von hier nach Abspülen mit Wasser in die nach Bielschowskys Angaben immer frisch bereitete animoniakalische Silberlösung. Bei der Bereitung dieser Lösung ist die größte Vorsicht notwendig, man soll es ja nicht versäumen nach der Zugabe eines jeden Tropfen Ammoniaks das Gefäß zu schütteln, denn Überfluß von Ammoniak richtet die ganze Imprägnation zugrunde 5 deswegen ist es auch zweckmäßig, um zu vermeiden, daß freies Ammoniak zurückbleibe, eine kleine Menge des von der 40prozentigen Natronlauge gefällten Silbersalzes ungelöst zu lassen. Nach dem Filtrieren wird diese Solution noch mit destilliertem Wasser vierfach diluiert. In der ammouiakalischen Silberlösung bleiben die Schnitte eine halbe Stunde. Während dieser Zeit nehmen die bisher weißen oder gelblichen Schnitte eine gelblich braune Farbe au. Sie werden nun in destilliertem Wasser wieder flüchtig abgespült und kommen zur Reduktion in eine öprozentige Formollösuug auf eine halbe Stunde. Die Schnitte werden hier bald dunkelbraun und man kann sich schon jetzt überzeugen, wie die Imprägnation ausgefallen ist. Gar oft bemerkt man, daß sich die Kerne schwärzen , während die Imprägnation der Fibrillen mißlungen ist, aber dafür sind jene und das Zellplasma so scharf, wie bei Färbung mit Hämatoxylin. Aus der Formollösung kommen die Schnitte, nachdem sie mit Brunnenwasser kurz ausgewaschen wurden, zur Fixierung des Silber- bildes auf eine Stunde in eine 1:1000 Goldchloridlösung, in der sich ihre gelblich braune Farbe in eine graue umwandelt. Nach Abspülen mit Brunnenwasser gibt man die Schnitte in eine öprozen- tige Lösung von Fixiernatrou (Natriumhyposulfat), um das etwa nicht reduzierte Silber aus den Schnitten zu entfernen. Aus dem Fixier- natronbad trägt man die Objekte zum gründlichen Auswaschen auf mehrere Stunden (6 bis 12 Stunden) in Brunnenwasser, welches 12 Zimmermann: Über Anwemlun«,^ d. Methode v. Bielsehowsk}\ XXV, 1. mehrmals gewechselt werden kann. Dann folgt Entwässern mit Alkohol, Aufhellen in Xylol und Einschließen in Kanadabalsam. An gelungenen Präparaten erscheinen die kollagenen Fibrillen intensiv schwarz, die Zellen und Kerne violett, während bei miß- lungener Imprägnation die Kerne sich schwärzen und auch das Zell- plasma scharf hervortritt. Im ersteren Falle ist die Imprägnation der Fibrillen vollkommen und meistens auch gleichmäßig. Ich stellte meine Versuche bei der Thymus des Kalbes und des Maulwurfes, dann bei Speicheldrüsen und Lymphfollikeln an. Besonders scharf tritt das Retikulum in den lymphadenoiden Organen hervor, aber auch sehr vollkommen und instruktiv zeigt diese Methode die Binde- gewebsfasern in der Thymus und der Speicheldrüse. Stellenweise macht sie sogar die Fettzellenmembranen sichtbar. Außer den Binde- gewebsfibrillen sind auch die übrigen Gewebsbestandteile in hinläng- licher Deutlichkeit zu unterscheiden, so daß es in der Regel nicht notwendig erscheint, die Imprägnation mit einer anderen Färbung zu kombinieren , doch kann man immerhin , wenn z. B. die Kerne nicht durchweg gleichmäßig zur Anschauung kommen, die gründlich ausgewaschenen Schnitte, wie es Maresch empfiehlt, noch nachträg- lich mit Kernfarbstoffen nachbehandeln, aber, wie bereits darauf hingewiesen wurde, scheint in den meisten Fällen eine Nachfärbung überflüssig zu sein. Aus den Versuchen geht hervor, daß die BiELscHOwsKvsche Methode zur Darstellung der Bindegewebsfibrillen sehr gut brauchbar ist, man kann sie an verschiedenen Organen verwenden, bei welchen man durch sie über die feinste Verteilung des Bindegewebes orien- tiert wird; aus diesen Gründen verdient die BiELscHowsKYSche Methode bei derartigen histologischen Untersuchungen eine besondere Beachtung. Die Methode ist verhältnismäßig nicht schwer aus- zuführen, man kann sich bald in sie einarbeiten und bekommt bei Befolgung der schon von Wulff hervorgehobenen peinlichsten Rein- lichkeit höchst zufriedenstellende Resultate. Literatur. 1) BiELSCHOWSKY , Die Silberimprägnation der Neurotibrillen (Journ. f. Psycho!, u. Neurologie Bd. III, 1904). 2) BiELSCHOWSKY, Die Darstellung der Achsenzylinder peripherisclier Nerven- fasern usw. (Journ, f. Psychol. u. Neurologie Bd. IV, 1905). 3) Levi, Della colorazione elettiva dal connetivo col raetodo Bielschowsky (Mon. Zool. Ital. t. XVIII, 1907). XXV, 1. C.-ivazza: Contiibuto allo studio dei Tannini. 13 4) Maresch, Über Gitterfjisern der Leber und die Verwendbarkeit der Methode Biklschowskys zur Darstellung feinster Bindegewebsfibrillen (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905). 5) Studxicka, Über die Anwendung der Methode von Bielschowsky zur Imprägnation von Bindegewebsfibrillen, besonders im Knochen, Dentin und Hyalinknorpel (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXIII, 1907). (3) WoLFF, Neue Beiträge zur Kenntnis des Neurons (Biolog. Zentralbl. Bd. XXV, 1905). 7) WoLFF, Über die fibrillären Strukturen in der Leber des Frosches (Anat. Anz. Bd. XXVI, 1905). Wien, am 31. März 1908. [Eingegangen am 10. April 1908.] Ricerche sperimentali :' Contributo allo studio dei Taiiniiii. [Nota P r e 1 i m i n a r e.] Di Luigi Ermaiiiio Cavazza in Bologna. Una delle piu gravi lacuiie delia fitochimica sta uella deficenza di uozioni sulla costituzioue e siil significato fisiologico di un vasto gruppo di sostanze organicbe diffuse uelle piante : i tannini. Questi sono cosi universalmente abbondanti nei ritidomi caulinari e radicali degli alberi, da render manifesta la loro importauza uella genesi e uel funziouameuto dei felloderma^] non solo per ragioni ecologiche^ ma piii ancora nelle migrazioni diosmoticbe dei glucosi. E per questo che si trovauo tannini anche nelle foglie. ^) Cosicche, tutti gli alberi avendo felloderma, se tutti i fellodermi contengono tannino o derivato fenolico equivalente, ogni albero ha tannino. Del resto e facile osservarlo per es. in querce, castani, olmi, acacie e affini, ontani, tamarischi, pioppi gelsi, melograni, cotogni, mandorli, peri e affini, prugni e affini, peschi; abeti e altre conifere; senza contare molti arbusti, filicinee, muschi, alghe, funghi, ecc, V. F. Czapek, Biochemie der Pflanzen. 14 Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1, Di piü; i tannini si rinvengono spesso in cellule o gnippi di celhile nei peridermi corticaii delle radici, nelle celhile delimitanti i vasi legnosi, ed in quelle costituenti i fasci liberiani. Non basta ; i tannini sono frequentissirai nei frntti , cosi nel pericarpo, come nel mesocarpo e nell' endocarpo ; per es. castagne^ melograne, sorbe, mele, pere, uva, ecc. Infine Fenocianina della vite ed i pigmenti azziirri fantocianina) e rossi (eritrofilla) cosi comuni nei fiori delle plante erbacee sono dovuti proprio a derivati fenolici piü complessi , ma analoghi ai tannini. Perclie , dunque , delle sostanze cosi diffuse e che adempiono certo a importanti fuuzioni fisiologiche sono ancora cosi poco note? Ognuno sa che , affinehe Tanalisi organica dia risultati atten- dibili, si deve operare su niateriale chimicamente puro. Ora cio e agevole per le sostanze che cristallizzano e fondono o volatilizzano ; ma non lo e pei tannini che si ossidano, si scindono, danno com- posti fioccosi, colloidali, instabili. Ciö non toglie che alcuni tannati sopportino la filtrazione (nikeltannati ecc). Nonostante queste ditficolta, persuaso che il problema meritava la piü viva attenzione , diedi principio , due anni or sono , ad una Serie metodica di ricerche sperimentali , incominciando dalla com- parazione dei diversi reagenti coi differenti acidi tannici. Alla fine dei 1906 avevo gia riassunto i risultati delle prove piü significanti, rilevando, fra Taltro, la frequenza di riduzioni, e di composti complessi piü o meno idrolizzabili per es. il ferritannato potassico color porpora che, trattato con acido acetico, libera il tannato ferrico. Talvolta questi composti sembrano miscugli. Intanto le nozioni acquisite sull'argomento mi permisero di perfezionare il m e t o d o d i e s t r a z i o n e : Estrarre dei tannino puro non si puo con nessun solvente, se non si procede ad ulteriori purilicazioni. Occorreva perö estrarlo il meno impuro possibile. Per far ciö il miglior solvente rai parve quello che avesse efficacia minore sulle sostanze oleose, proteiche e aromatiche concomitauti. Dunque non alcool, non etere acquoso ; ma acqua ripetutamente distillata. 1) Nessuna delle analisi di castagne ricordate negli Atti dei VI Con- gresso di chlni. appl. vol. V, pag. 409, accenna a questo tannino. Eppure nella farina e nel frutto rimondato e inciso di lievi scaltitture la reazione non lascia dubbio alcuno. Poi bastava ricordare che Rochleder l'aveva notato fino dal 1867. XXV, 1. Cavazzji: Contributo allo studio dei Tannini. 15 L'estrazione vuol fatta in ambiente privo di ossigeno, sia in recipienti a cliiusiira ermetica, sia nel vuoto, sia in gas inerte (azoto, anidrica carbonica , ecc). Per evitare scissioni occorre compiere tutta l'operazione in poche ore, usando l'acqua a 80^ per raggiungere il dnplice efietto di atfrettare l'estrazione e di insolubilizzare le pro- teine coagnlandole ; oltre alla distruzione delle tannasi. Con acqua distillata, deossigenata, senza tracce di ammoniaca, e fuori del contatto dell'aria, sono riuscito ad ottenere diversi tan- nini , fra cui 1' aeido ampelotannico , in uno stato brillantemente micaceo. La prima tappa era raggiunta. Ho provato anclie ad estrarre il prodotto di ossidaxione coui- pleta^, con risultato diverso, ma costante ; e dall'acido ampelotan- nico ebbi un liquido intensamente rosso, che per evaporazione lascia della laraeile splendenti di color rubino. Mi restava a trovare nn metodo per purificare gli estratti tan- nici. Cercai dapprima di formare qualche composto ben definito, cristallino e stabile ; e siccome quelli noti non servivano all' uopo mi rivolsi alla ricerca di niiovi composti. In poche settimane ero riuscito ad ottenere addirittura una nuova serie di composti tannici con diversi metalli. Ne posso, con sicurezza, enumerare gia dieci: tallitanuati, cesitannati, rubiditannati, stronzitannati, va- naditannati, toritannati, cobaltannati, nikeltannati, uraniltannati, arsen- tannati , ' ed i sali doppi come selentannati potassici , cobaltannati potassici, ecc " II plurale di qnesti composti sta ad indicare che ciascuno va moltiplicato pel numero dei diversi acidi tannici ; e la cifra risul- tante dk un'idea della vastitä di questa miniera ancora intatta. Pur concedendo che tali composti non risolvano il problema ^) Questa ossidazione atmosferica e ben diversa dalla ossidazione in soluz. alcalina ; ciö e inerente alla coniugazione, o meno, dei doppi legami. -) Contrariamente a ciö che avviene per gli altri tannati, quelli nikel-cobaltici non si ottengono nel modo solito, ma agendo a caldo sul- l'idrato. Lavando prolungatamente il precipitato sino a reaz. tannica negativa, e trattandolo con ac. acetico, sul tannato scomposto ha luogo la reazione. Eguale verifica si ha pei comp, complessi come arsentannato e ferritannato potassico. Basta scomporli cautamente con ac. acetico per avere la dimustrazione immediata e convincente della loro coraposizione. Un'altra reazione facile, elegante si ha trattando l'acetato di Pb con tan- nino e potassa. Si ottiene, dopo aver agitato, una viva colorazione rosa carmino. 16 Caviizza: Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1. della purificazione ; essi , come vedremo, sono ancora piü utili col servire da reattivi differenziatori , permettendo di identificare molti tamiini nei tessuti stessi, senza aualisi , senza estrazione , cioe senza pericolo di iuquinamenti e di ossidazione. La purificazione dei tannini, e bene dirlo francamente, e difficile, ma con certi mezzi di laboratorio, riesce. Non con alcool amilico, non con la dialisi che e soltanto iin mezzo ansiliare ; il metodo di purificazione che va meglio e quello per successive evaporazioni. II che si puo fare con varie modalita : lo uso a questo scopo , ampie bacinelle circolari di por- cellana o di cristallo perfettamente pulite , ove verso accuratamente un po' deUa soluzione tannica. Per una purificazione rigorosa oc- corre operare in arabiente caldo e secco (per affrettare 1' evapora- zione) facendo le nianipohizioni entro un largo recipiente pieno di anidr. carbonica mantenuta a secchezza. Ma il metodo migliore consiste nel far passare una corrente con- tinua di azoto (o altro gas inerte) secco e caldo, sopra una serie di bacinelle chiuse in apposite concamerazioni, fino ad evaporazione completa.^ Eliminando sisteraaticaraente le cristallizzazioni periferiche e quelle centrali ove si depositano le poche sostanze inquinanti fornite di un diverso grado di cristallizzabilita, e ripetendo 5 o 6 volte r operazione, si puo spingere la purificazione al massimo liniite. " Ora che sappiamo ottenere un tannino puro possiamo chiederci che cosa e chimicamente. "Sotto il nome di tannino va compreso un complesso di so- tanze unicaraente composte di tre eleraenti (C, H, 0) , e che hanno uno 0 piü nuelei fenolici con almeno un carbonile ". Dunque 1' ossatura costitutiva di un tannino e questa : / CO' \. / ^) Si costruisce un apparecoliio a circuito tubolaro che attraversi le concamerazioni, e dentro al quale il gas, continuaiuente ripristinato da esiccatori, circoli per l'aspirazione interna prodotta nella regione riscaldata, e circoli sempre nel senso voluto, uiediante una valvola automatiea. -) Ho insistito su questi due punti sapendo che, in tal genere di studi, vale assai piii, anche la sola enunciazione di un nuovo metodo, che non la etitottuazione manuale di moltc analisi. XXV. 1. Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. 17 Allo stato attnale delle cognizioni non si puo neppur parlare di una classificazione completa. Pero quella rudimentale che pre- sento mi lia servito non poco ad appianare diverse difficoltä. I gruppo. — Derivafi carbossilfenolici. I qnali a seconda che hanno CL 0 un multiplo di 7 si distinguono in ,' mononiicleare — ac. gullico i binucleare — ac. digallici e tamiini tijjicP p ' trinucleare — ac. seqiiojtannico {C^^ H„q O^q) tetranucleare — ecc. Si conoscono tannini ad elevata poHnuclearitä come l'ac. nuphartannico (650 H^q ög,). II gruppo. — Derivafi carbossilfenolici in cui C ha un numero non multiplo di 7. in gruppo. — Derivati carhonilfenolici. Auch' essi a seconda del numero dei nuclei fenolici si dividono in mononucleare — p \ binucleare — ac. caffetannico (Nierenstein) ^ trinucleare — ecc. Ciascuna classe comprende due otticamente attivi = con atomo di C asimmetrico. [ levogira Ordixi : Forme l destrogira ö^ ottic. inatt. ^ senza C asimmetrico. La distinzione fra tannini glucosidi e non glucosidi interessa piü la tisiologia che la chimica ; perche i primi vanno considerati come eteri salini, nei quaU, se vogliamo conoscere la costituzione dell'ac. tannico, questo deve venir liberato da ogni legame. OH H OH H OH I 1) 0H< >-C*-< >0H OH H 0 — C:0 OH CeH„0,-0 0 -'H H Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 18 Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1. Corae si scorge facilmente le classi di grau liuiga piü impor- tanti souo le biuucleari, aiiclie perche i tamiiui polinncleari possono scindersi e ricondursi a binucleari e perfiuo monouiicleari. Parallelo alla binnclearita sta il fatto che generalinente il tau- iiiuo fimziona da acido bibasico dando sali amorfi. Ad ogui modo i piinti da cliiarirsi sono ancora molti, moltis- sime le iucertezze. Le quali, se spiegano e scusauo qualcbe iuevi- tabile eqiiivoco od errore, d' altra parte impediscono di studiare con successo , le diverse sostaiize di analoga derivazioue beuzoica , come i poliglucosidi dell' aciclo eUctgico, i ciii prodotti di ossidazione sono cosi simili a quelli dell' ac. gallico. •'• Neil' accennare ai miovi composti, se dovessi soltanto trascri- vere, nonche commentare , le uote sperimentali che via registravano i risultati acquisiti di ogni esperienza ; mi dilungherei di troppo ; d' altra parte qiiello che per ora piü importa e la nozioue certa deir esistenza di ben cUeci mtovi tannati trascurando i secondari e meno appariscenti come qiielli col Mg metallico, e senza dire che ve ne poträ essere qualche altro specialmente col metalli delle terre rare {Ce., Tb. ecc.)- Vediamo piuttosto qualche differenziazione do- V u t a a q u e s t i composti, in vista di a }) p 1 i c a z i o n i m i c r o - tecniche. Pei diversi tannini i sali ferrici danno una colorazione unifor- meraente violaceo-verdognola scura, che serve ottimameute in ricerche sommarie e preliminari , ma e una pessima differenziatrice. Ecco invece che cosa si ottiene col carb. di TaUio: -|- ac. castanotannico = delicata eoloraz. paglierina -|- ac. caffetannico = soluzione verde smeraldo -f- ac. pelargotannico^ = lieve precipitato jalino Tl \ -f- ac. qnercitannico = densa flocculazione caseosa -)- ac, patoquercitanu. (galle) = soluz. giallo vivo e poco prec. rosso -|- ac. ampelotannico = precip. bruno col nitrato di n r a n i 1 e ^) Ancora i)iü problematici sono i ßohafeni. Per ora Tac. ellagico lo riteniamo la bianidride dell'ac. digallico. '^) Chiamerei cosi il tannino che lio trovato (e diffusamente) nei gerani. XXV, 1. Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. 19 -j- ac. castanotannico = viva colorazione ruggine -j- ac. caffetanuico =^ denso precip. nocciola -|- ac. pelargotaunico = precip. giallo-rosso U / -|" ac. quercitaumco = soluzione giallo briina con poco dep. rosso -|- ac. patoquercitannico ^ precip. denso neutro -[- ac. ampelotauuico = colorazione mattoue Da nn atteuto esame apparira manifesta la diifereuziazione ; ma bisognerebbe avere inuauzi agli occhi la scliiera eloquente dei tubi da saggio , per farsi una giusta idea delle diifereuze di colorito e dello stato prevalente di soluzione o precipitato. Anche 1' idrato di stronzio , da notevoli differenziamenti e da un bei composto rosso coli' ac. castanotannico ; e il nitrato di Torio con Facido pelargotannico produce un' abbondante lattescenza. Ciascuno , poi , di questi precipitati (o soluzioni) puö venire individuato e riconosciuto con ulteriori reazioni. Cosi ad es. un uraniltannato non puö venir confuso con nessun altro bastando trat- tarne una parte con vauadato ammonico e un' altra con ferrocianuro potassico , per avere nel primo caso una colorazione indaco , e nel secondo un colore rosso poi'pora dovuto all' uranio. Di piü; si possono ditferenziare non soltantc acidi tannici di diverse plante ; ma vi e modo perfino di diversificare per es. nella quercia il tannino fisiologico dal tannino patogenico , e cio non con un solo reattivo ma con almeno tre {Tl, Sr, TJ). Ora dovrei far qualche cenno sui densi cesitcmnatl notevolmente fusibili a caldo, sui chiari nibidltaiumti auch' essi ossidantisi forte- mente all' aria, sui ioritaiuicdi gelatinosi e caratteristici, e sui diversi sali complessi come il selentännato potassico solubile in ac. ossalico e identiticabile con vanadato ammonico , il cobaltannato potassico assai ossidabile, ed altri analoglii ; ma ora che questa serie di nuovi composti sta modestamente per entrare nel regno della Cbimica, non mi resta che augurare che vengauo ripresi allo studio con piü vasti mezzi ; onde ritrarne ogni utile possibile e, almeno, piu precise nozioni intorno a un gruppo di sostanze di alto Interesse cbimico e fisio- logico, quali sono i tannini. Perclie non rimanesse uessuna via intentata , e per studiare tutti i lati della questione^ in vista della differenziazione aggiungo ^) Poiche non ho trascurato la parte pratica, dimostrando l'influenza dei tannini nel terreno non solo per disgregazioni e idrolisi litologiche, 2* 20 Ca V a z z a : Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1. di aver fatte ricerclie spettroscopicbe coi mezzi gentilmeiite fornitimi dal Prof. P. G. Costaxzo, che cordialmente ringrazio. Per le sostanze spettrofore si potrebbero avere preziosi risultati specialmente ab- biuando lo spettroscopio al m i c r o s e o p i o , e giovandosi dell' am- piezza delle cellule idioblastiche e della finitezza del microtomo, per fare ricerche istospettroscopicbe. Non pei tannini che non m' hanno dato spettri per assorbimento differenziati, ma per altre sostanze, questo metodo non e trascurabile. Invece, quello clie, neUa ricerca microchimica dei tannini, troverä una splendida applicazione e il colorito indaco scurissimo che si ha con la formazione del vanaditannato. Ho giji fatte ripetute prove anche con sezioni di radici di vite colorate con soluzioni diluite di clornro di vanadio e coufrontandole con altre trattate col Fe Cl.^ si notano diversi vantaggi, qnali una maggior prontezza e intensitä di colorazione tale da permettere i piü forti ingrandimenti, un rilievo perfetto dei tannini snbcuticolari e di quelli dei fasci librosi , insomma un complesso di caratteri che assicurano al vanadio uno dei primi posti tra i piü delicati reagenti del tannino. ^ ma ancora nella coiupleta scissione del fosfato ferrico di nota e deplorata insülubilitä. ^) Si obbietterä che il vanadio e costoso, ed e un duplieato del ferro. Ebbene non e vero. 100 cm^ di soluz. opportunamente diluita di cloruro di vanadio si hanno con pochi centesimi. Pure con pochi centesimi si ha un litro di soluzione acquosa di vanadato ammonico , che in certi casi serve ancor meglio per essere incolora. II vanadato ammonico e insupera- bile nei casi di competizione e coesistenza di altri acidi, i quali se non fossero neutralizzati, impedirebbero la reaz. ferrica. II vanadio poi diver- sifica dal ferro: infatti, coiue le radici di vite si colorano in nero-indaco col vanadio e in viola-verdognolo col ferro , cosi le ripiegature subcuti- colari delle castagne col ferro si colorano in nero-violaceo , col vanadio in verde-celeste. Allora, si obbietterä, nel caso delle castagne serve meglio il ferro! E vero, ma pel tannino del caife, della vite, dei pomi ed altre frutta e di altre piante e senza fallo assai prefei-ibile il vanadio. Ma il parlare di "meglio" e di " preferibile " non e giä un dimostrare che il vanadio non e un duplieato del ferro? Bologna, 28 febbraio 1908. [Eingegangen am ß. April 1908.] XXV, 1. Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methode. 21 Celloicliii-Entkalkungs- und Entkieselungs- Metliocle. Von Dr. C. Francis Bödecker in Berlin. Hierzu eine Textabbildung und eine Tafel (Tab. 1). Die Entkalkmig oder Entkieselimg von Objekten, welche wenig- organische Substanz enthalten , bietet verschiedentliche Schwierig- keiten. Will man einen solchen Prozeß vornehmen , so sinken die Reste der organischen Masse zusammen oder werden in der Ent- kalkungs- oder Entkieselungsflüssigkeit vollständig auseinandergerissen und verstreut. Es ist daher fast unmöglich die feineren Strukturen dieser organischen Substanz zu untersuchen. Dieser Umstand ver- anlaßte mich eine Methode zu ersinnen, welche auch das geringste Quantum organischer Masse von der anorganischen trennt ; zur ge- naueren Untersuchung fertigstellt, dabei aber Lage und Form des zu untersuchenden Objekts unverändert läßt. Eine vorläufige Mit- teilung dieser Methode erschien bereits in dieser Zeitschrift. -"^ Das Prinzip der Celloidin-Entkalkungs- oder Eutkiesehmgsmethode beruht darauf, daß, sobald die Säure die anorganischen Substanzen löst, das Celloidin au deren Platz tritt und die feinen organischen Strukturen so unterstützt, daß sie weder zusammensinken, noch aus- eiuandergerissen und weggewaschen werden können. Bei gewöhn- licher Entkalkung wird das Objekt in die Säurelösung gelegt und dann und wann kontrolliert. Jedoch Avird bei der leisesten Be- wegung des Gefäßes eine Strömung in der Flüssigkeit verursacht, durch die alle organischen Teile abreißen und als feines Sediment zu Boden sinken. Dies ist natürlich nur der Fall, wenn das Objekt ein geringes Quantum (5 bis 10 Prozent) organische Substanz ent- hält, welche ganz fein verteilt ist. Beim Knochengewebe z. B. ist 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 190. 22 Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methode. XXV, 1. diese Methode überflüssig, da der Prozentsatz der übrig bleibenden organischen Substanz ein großer ist und eine einheitliche Masse bildet. Das zu entkalkende oder zu entkieselnde Objekt muß gut fixiert und ständig feucht gehalten sein. Letztere Mahnung wird überflüssig erscheinen, jedoch sind schon viele Ergebnisse von Unter- suchungen veröffentlicht worden , die an ausgetrockneten Objekten vorgenommen waren. Die Untersuchenden schienen gedacht zu haben, daß eine Austrocknung ausgeschlossen sei, da nur wenig organische Masse vorhanden war, welche in größeren Mengen anorganischer Substanz eingebettet war. Als Fixierflüssigkeit nehme man eine, die keine Säure enthält, da sonst die Entkalkung schon bei der Fixation anfängt. Formaliu, Quecksilberchlorid oder absoluter Alkohol leisten gute Dienste. Das fixierte Objekt wird gründlich entwässert und in eine dünne Celloidin- lösung gebracht. Danach wird es in die Entkalkungslösung gelegt, welche aus einer Celloidinlösung mit Zusatz von 10 Prozent Salpeter- säure besteht. Die Bereitung dieser Lösung wird folgendermaßen vorgenommen : Um 50 cc saueres Celloidin herzustellen nimmt man 5 cc Salpetersäure, welche mit 20 cc Äther und absoluten Alkohol vollständig untermischt unter stetem Umrühren tropfenweise zu 30 cc Celloidin zugesetzt wird. Ist die Säure ungenügend verdünnt, oder die Celloidinlösung zu dick, so wird das Celloidin teilweise gegerbt und kann nicht wieder zum Lösen gebracht werden. Es ist manch- mal vorteilhaft, die Säure noch stärker mit Alkohol und Äther zu verdünnen , um das Niederschlagen des Celloidius zu verhindern. Sollte sich jedoch in solchem Fall die entstandene Lösung als zu dünn erweisen , so ist es ein leichtes , dieselbe durch Verdunstung wieder zu verdicken. Die Konsistenz dieser Lösung soll ungefähr der der gewöhnlichen dicken Celloidinlösung entsprechen und soll in diesem Zustand permanent gehalten werden. Wird die Lösung zu dünn, so sinken die organischen Strukturen zu Boden ; ist dagegen das Celloidin zu dick, so kann die Säure nicht frei genug durch das Gewebe zirkulieren , wodurch die Entkalkung zum Stillstand kommt. Um nun Objekte in einer permanent normalen Lösung zu entkalken, müssen die Gefäße, in denen der Prozeß vor sich gehen soll, einen möglichst luftdichten Verschluß haben. Die gewöhnlichen Glasschalen mit aufgeschlitfenem Deckel leisten nicht genügende Dienste, da die Ätherdämpfe den Deckel in die Höhe treiben und das Celloidin ungehindert austrocknet. Dies kann verhindert werden, indem man eine gewöhnliche Uhrfeder (von einem Wecker) in die XXV, 1. Bödeckcr: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methocle. 23 Form, wie sie in nebenstehender Figur angegeben ist, biegt, so daß sie den Deckel fest auf das Gefäß preßt. Hierdurcli verhindert man das Entweichen des Alkohols und Äthers und somit das Austrocknen des Celloidins. Trotz alledem ist es immerhin eine wohlangebrachte Vorsicht , dann und wann zu kontrollieren , ob das Celloidin nicht doch zu dick geworden ist. Ist dieses trotz aller Vorsichtsmaß- regeln erstarrt , so ist es nicht möglich durch einfaches Zusetzen von Alkohol und Äther die normale Konsistenz herzustellen. In diesem Fall ist es nötig das Stück Celloidin um das Präparat herum samt denselben auszuschneiden und von neuem in saueres Celloidin einzulegen. Auf den Teil der Methode, welcher die Entkieselung behandelt, behalte ich mir vor später zurückzukommen, da meine Experimente in dieser Richtung noch nicht vollständig sind. Die Zeitdauer der Entkalkung variiert je nach der Größe des zu entkalkenden Stückes. Es ist ratsam die Objekte möglichst klein zu benutzen, da sich sonst die Zeit der Fertigstellung bis auf 2 Monate erstrecken kann. Auch kommt es darauf an , wie groß der Pro- zentsatz der zu entkalkenden anorganischen Substanz ist. Ein Objekt mit verhältnismäßig wenig anorganischer Substanz entkalkt sich lang- samer als eines, das einen größeren Prozentsatz davon enthält. Im ersten Augenblick mag diese Behauptung widersinnig erscheinen, aber sie erklärt sich leicht, da bei vorwiegender organischer Masse eine leichte Zirkulation der Säure vorhindert wird. Dies ist z. B. der Fall bei der Entkalkung eines Stückchens Zahnbeins und -Schmelzes. Hier entkalkt sich der Schmelz viel schneller als das Zahnbein. Da- 24 Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Metbode. XXV, 1. lier ist es ratsam, bei Schmelzimtersucbimgen möglichst wenig- Zahn- bein an dem Präparat haften zu lassen, Objekte von einem halben Millimeter Stärke können bereits in einer AVoche entkalkt sein. Ist nur wenig organische Masse vorhanden, so ist es leicht, das Ende der Entkalkung zu erkennen, da in diesem Fall das Objekt ziemlich durchsichtig wird , wenn die Entkalkung beendet ist. Ist jedoch mehr organische Masse vorhanden, so muß die Fertigstellung durch Versuche geprüft werden. Eine solche Prüfung, um die vollständige Entkalkung festzustellen, kann folgendermaßen vorgenommen werden. Nachdem das Celloidin vollständig erstarrt ist, kann man sich durch Durchstechung mittels einer feinen Nadel überzeugen, ob das Prä- parat bereits die nötige Weichheit aufweist. Ist dies der Fall, so ist es zur Weiterbehandlung fertig; ist es dagegen noch zu hart, so muß es auf oben erwähnte Weise aufs neue in frischem saueren Celloidin eingebettet werden. Als ratsam möchte ich jedoch diese Prüfung nicht darstellen, da man das zu untersuchende Objekt durch den Stich verletzen und untauglich macheu kann, muß jedoch er- klären, daß es vorläufig weiter keine direkt empfehlenswerte, unfehl- bare Art der Prüfung gibt. Das Erhärten des Celloidins war früher eine langwierige Sache, da, wenn es zu eilig betrieben wird, sich Luftblasen in dem Celloidin entwickeln, welche später störend wirken. Ein anderes Verfahren läßt sich, dank Herrn Prof. Dr. Willixger vom hiesigen Zahnärzt- lichen Institute, innerhalb 24 Stunden ohne jede Blasenentwicklung vornehmen. Man setzt die das Präparat enthaltende Glasdose, sowie eine Schale mit Chloroform unter eine luftdicht abschließende Glas- glocke. Nun entziehen die Chloroformdämpfe innerhalb 12 bis 24 Stunden den Alkohol-Äther und man erhält das Celloidin in a-oII- ständig gleichmäßig erhärteten Zustand. Sodann wird das Präparat ausgeschnitten , wobei man darauf achten muß , daß es überall von einer 3 bis 4 mm dicken Celloidinschicht umgeben bleibt. In manchen Fällen empfiehlt es sich sogar, ein wenig gewöhnliches, dickes Cel- loidin an die untere Seite des Blockes, d. h. an die Seite, an welcher das Präparat in Berührung mit dem Boden des Gefäßes gelegen hat, anzufügen. Darauf muß der Block 10 Minuten an der Luft trocknen, ehe man zur Weiterbehandlung übergeht. Bei meinen ersten Versuchen habe ich Celloidinschnitte angefertigt, die ich aber nicht feiner als 25 bis 30 i^ erlangen konnte. Die Ursache dieses Ergebnisses glaube icli darin zu sehen, daß wahrscheinlicli die Ein- wirkung der Säure das Celloidin beeinflußt hat. Auch erwies sich XXV, 1. Bödecker: Cello'ülin-Entkiilkungs- u. Entkieselungs-Methode. 25 diese Säureauwesenheit für das Mikrotommesser als schädlich. Ein dritter Nachteil war , daß das Celloidin alle zur Färbung des Prä- parates angewandten Farben in sich aufnahm. Daher bettete ich fortan die Blöcke in Paraffin ein und erlangte dadurch tadellos dünne Schnitte und konnte außerdem auch im fertigen Präparat das Celloidin gänzlich entfernen. Vor dieser Einbettung jedoch muß eine Neutralisation "der Säure und dazu eine gründliche Entwässerung vorgenommen werden. Der Block wird erst in TOprozentigen Alkohol eingelegt, Avorin er mindestens 6 Stunden verbleibt. Die Abkürzung dieser Zeit ruft eine starke Schrumpfung des Celloidins hervor. Nachdem dann der Block für 2 Stunden in 40prozentigem Alkohol gelegen hat, wird er in eine öprozentige wässerige Alaunlösung gebracht, in welcher er 12 Stunden bleibt. Zuerst entstellt eine Wolkenbildung im Celloidin, welche sich aber meistens wieder vollständig verzieht. Tritt diese Rückbildung jedoch nicht ein, so weist das darauf hin, daß die vor- herige Behandlung zu rasch vorgenommen war. Nachdem die Neu- tralisation der Säure vollendet ist, nimmt man eine 12stündige Wäs- serung des Blockes , am besten in fließendem Wasser , vor. Der Block wird dann durch steigenden Alkohol bis zu 70 Prozent ge- bracht, wo man ihn lange Zeit aufbewahren kann, falls Zeitmangel die weitere Untersuchung verhindert. Ehe jedoch die Säure gänz- lich entfernt ist, darf man die Behandlung für längere Zeit nicht aussetzen, da durch die Verdunstung des Alkohol-Äthers die Kon- zentration der Säure sehr schnell zunimmt. Darum muß das Präparat, sobald das Celloidin sich verhärtet hat, möglichst schnell durch die bezeichneten Flüssigkeiten gebracht werden , um der schädlichen Wirkung der konzentrierten Säure zu entgehen. Eine durchaus vollständige Entwässerung durch absoluten Alkohol ist ausgeschlossen, da dieser das Celloidin langsam auflöst. Nichts- destoweniger kann man den Block kurze Zeit (eine halbe Stunde) in 96prozentigen Alkohol legen und darauf für 10 Minuten in absoluten Alkohol. Ist der Block sehr klein, oder ist der Celloidinrand um das Präparat sehr schmal , so muß die Zeit verkürzt werden , da sonst die Gefahr nahe liegt, daß das Celloidin aufgelöst wird. Um auch den letzten Piest des Wassers zu entfernen , habe ich ver- schiedene Methoden versucht. Das Kreosot, wie es von Pavlow^ ^) Pavlow, W., Kreosot als wasserentziehendes Mittel (Diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 186). 26 Böclecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methode. XXV, 1. benutzt wird, leistet gute Dienste, doch habe ich es wegen seines •unangenehmen Geruches nicht weiter verwandt. Kai-bolsäure oder Anilin haben genügende Wasserentziehungskraft, um den Block gänz- lich zu entwässern. Die Karbolsäure muß in der Form von absolut wasserfreien Kristallen durch Hitze geschmolzen werden und dann mit "-/.^ ihres Volumens Chloroform verdünnt werden. Diese Lösung wird wie das Anilin verwendet , auf welches ich weiter unten zu- rückkomme. Nachdem der Block kurze Zeit in absolutem Alkohol verweilt hat, legt man ihn in wasserhelles Anilin, welches mehrere Male ge- wechselt werden muß, d. h. so lange, bis der Block gänzlich durch- sichtig geworden ist. Darauf wird das Anilin durch Zusatz von Chloroform verdünnt, in welcher Flüssigkeit dann das Präparat wieder mehrere Stunden liegen muß. Schließlich kommt der Block in reines Chloroform, welches ebenfalls öfters gewechselt wird. Ist das Anilin durch Chloroform nicht genügend ausgewaschen, so färbt sich das Celloidin ganz dunkel, doch ist dieses, meines Erachteus nach, kein besonderer Nachteil. Jetzt wird der Block in der gewöhnlichen Weise erst mit Chloroform und Paraffin, dann mit weichem und endlich mit hartem Paraffin durchtränkt und eingebettet. Als Löse- mittel für Paraffin leistet Chloroform erheblich bessere Dienste als Xylol, da letzteres das Celloidin nicht in demselben Maße zu härten imstande ist wie ersteres. Überführt man einen Celloidin- block vom Anilin ins Xylol, so ist es fast unmöglich denselben zu schneiden. Ehe ich nun zur Weiterbehandlung der Schnitte übergehe, möchte ich noch ein paar Worte über das übrigbleibende sauere Celloidin sagen. Da das Celloidin ein ziemlich kostspieliges Mittel ist, geht man wohl nicht gern verschwenderisch damit um. Für jedes Prä- parat von 2 mm Dicke und 5 mm Länge und Breite sind ungefähr 20 bis 30 cc Entkalkungsflüssigkeit nötig. Ist die Entkalkung voll- endet, so ist das zum größten Teil übriggebliebene Celloidin von Säure und Kalksalzen durchtränkt. Da es in diesem Zustand natür- lich vorerst nicht wieder für denselben Prozeß benutzbar ist , muß es gründlich ausgewaschen werden. Man schneidet daher das Celloidin in feine Stücke und legt es für 24 Stunden, eventuell auch für länger, in TOprozentigen Alkohol. Bei weiterer Behandlung verfährt man ähnlich wie bei Präparaten , indem man es der Reihe nach durch 40prozentigen Alkohol, Alaunlösung, fließendes Wasser und Ent- wässerung gehen läßt. Nur muß die Dauer des Aufenthalts in den XXV, 1. Bödecker: Celloidin-Entkalkiuiii's- u. Entkieselungs-Methode. 27 verschiedenen Lösungen selir in die Länge gezogen werden. Nach- dem das Celloidin kurz durch OOprozentigen Alkohol gegangen ist, breitet man es an. einer staubfreien Stelle aus , um den Rest des Wassers ausdunsten zu lassen. Hierdurch dunkelt es ein wenig nach, was jedoch nicht verhindert, daß es sich wieder zu Eutkalkungs- zwecken verwenden läßt, nur ist die Schnittfähigkeit dieses Celloidins nicht so gut, wie die des ungebrauchten. Ersteres kann auch darum nicht mehr für die Methode des gewöhnlichen Celloidinschnittes in Betracht kommen. Da es jedoch für Entkalkungszwecke zulässig ist, kann ein in solches Celloidin gelegtes Objekt, falls es später auch in Paraffin gebettet wird, wieder in normaler Weise gebraucht werden. Das Schneiden des Paraftiublocks , in dem der Celloidinblock enthalten ist, geschieht in der gewöhnlichen Weise, das Aufkleben der Schnitte jedoch am besten durch die sogenannte „Japanische Aufklebemethode". Nachdem der Objektträger mit den aufgeklebten Schnitten Xylol und Alkohol passiert hat, ist es nötig, das Celloidin vorsichtig in absoluten Alkohol und Äther zu lösen, was 3 bis 4 Mi- nuten in Anspruch nimmt. Von diesem Punkt an ist die Weiter- behandlung die gewöhnliche. Das Präparat kann mit jeder beliebigen Färbungsmethode be- handelt werden. Als besonders empfehlenswert nenne ich die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylin-Färbung, die sich bei meinen Unter- suchungen gut bewährt hat. Eine kurze Zusammenfassung der Celloidin- Entkalkungsmethode findet mau in der folgenden Tabelle : Arbeitstabelle. Bemerkung. Flüssigkeiten. Zeitdauer. Nach Fixierung passiert das Prä- parat folgende Flüssigkeiten: Alkohol, 40prozentiger 1 Stunde. n '*-' ;i 12 n 9fi 1/ „ absol. 12 Stunden. Äther und absoluter Al- kohol 1 Stunde. Dünnes Celloidin 12 Stunden. Säuerliches Celloidin 1 Woche bis 2 Monate. 28 Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- ii. Entkieselungs-Methode. XXV, 1. Bemerkung. Nachdem die Entkalkung voll- zogen ist, wird ein Block aus- geschnitten in der Weise, daß man einen 3 mm breiten Rand Celloidin um das Präparat her- um mitsamt demselben heraus- hebt. Der Block geht nun wei- ter durch: Flüssigkeiten. Zeitdauer. Das Anilin oder Karbolsäure und Chloroform muß mehrere Male gewechselt werden , so lange bis das Präparat durchsichtig erscheint. Dann wird dem vorhandenen Vo- lumen ein gleiches Quantum Chloroform zugesetzt. Endlich in reines Chloroform. Auf den Paraffinofen. Im Paraffinofen. Alkohol, TOprozentiger 6 Stunden. « 40 „ öproz. wässerige Alaun- lösung 2 „ 12 „ Fließendes Wasser 12 „ Alkohol, 40prozentiger 1 Stunde. . 70 „ 30 Minuten. . 96 „ „ absol. 30 „ 10 „ Karbolsäure - Kristalle , Vs und Chloroform ^/g J oder \ 12bis24Stun den. Anilin ' Chloroform zugesetzt 6 Stunden. Chloroform 12 „ Chloroform und Paraffin p: C5 Phosphorsäure : er CD cr 2. INS o er 2. CT o er •^ cc g: o r S B t<5 fC, 5 CT g- ? ^ s 5 § " 2 C6 P_ C5 -! >^ ^ '^ ^ ?, g5 9 tO :^ 1 i " : 1 0 0 0 5- 1— o re 95 CT o 55 o CD P ct. i? 7- » 1-^ _ O ES! 1 1 s ^ i- '^ Si g 5 S 0 0 4^ N = 1 5^ S3 5- 2 o o Ct> SS CT o ? ? ^ CT ^ 5= ^ »-^ 0-« E^- 1 i « s s- P- 3 p: O 2. i i ^ ■ C5 03 0 er o -^ P CD CD P C5 »1 =.. ? 5 i 1 ^' i ^ : 1 - ^g 1^1 h-' 0 INS > B o- er CD_ CT o er Ä. o '-• o ^ B ^ ö 2. « £- § B, S ^- ii Ins c£> SS- i i « ^ & & 3 0 CD o CT o s. S^ - s s ^ CD &S r C5 C5 g. ? § 2 1. i i " g 1 1 0 05 0 CT C6_ o » 2 C ^ B ö cc &5 Ol V C5 O p: g O a o p o »-s ■^ Ö 3 S« CD P 0 S S^ ^ ri ^ CD 1— 1 _ 0 0 CO > B er 2. ö et- dl o 5?. g'l §■ 1 o es p= i^ CT er S P Ü» CD «= j' P Ö ^ P: ° tO CO S2- S B „ c « » ü 0 3 S p. 3 Ins 0 0 O 2. CT 2 p ^ 1 C Ins C» P CT 7^ C5 C5 ^ o o 2 p: - tO H- -. ^ er t^ CD % i ^ 7^ CS C5 0 XXV, 1. Reidemeister: Einfluß von Säure- usw. Zusatz des Agars. 51 bei 100° auf 2 Prozent Agar, 1 cc N. Oxalsäure bei 100° auf 2 Prozent Agar). Auch wurde durch Versuche im Reagenzglase fest- gestellt, daß Salpetersäure, Schwefelsäure, Salzsäure, Oxalsäure und Weinsäure den Agar zu spalten vermögen ; dagegen konnte das Auf- treten von Zucker nach Y2 stündigem Kochen eines Agar, der nur 2 Prozent Agar in 100 cc destillierten Wassers enthielt, nicht fest- gestellt werden. Demnach beruht wohl die verallgemeinernde An- gabe von Friedberger (14) : „Die Herstellung zuckerfreien Nähragars gelingt nicht, da beim Kochen des Agar-Agars, das bekanntlich ein Kohlehydrat ist, stets geringe Mengen Zucker abgespalten werden", auf einer irrigen Auslegung einer Notiz von Beyerinck (15) [„das Fleischagar erzeugt, ceteris paribus, viel mehr Gas wie Fleischgelatine, offenbar durch Zuckerbildung aus dem Agar infolge Präparation"]. Untersuchungen über die Reaktionsgeschwindigkeit und Art des Zuckers wurden nicht angestellt. Zum Schluß sei es mir auch an dieser Stelle gestattet, Herrn Privatdozent Dr. Küster für die Anregung zu der Arbeit und Herrn Prof. Dr. NoLL für die Erlaubnis, die Arbeit im botanischen Institut anzufertigen, besten Dank auszusprechen. Literaturverzeichnis. 1) Schutz, A rapid metbod of making nutrient Agar-Agar (Bull, of the Hopkin's Hospital III, no. 24, p. 92). JoKOTE, Über die Darstellung von Nähragar (Zentralbl. f. Bakterie!. Abt. 1, Bd. XXV, 1899, p. 379). Jacobi, Kleine Beiträge zur bakteriologischen Methodik (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. III, 1888, p. 538). Karlinski, Vorrichtung zum Filtrieren vollständig klaren Agar-Agars (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. VIII, 1890, p. 643). Heim, Die Neuerungen der bakteriologischen Untersuchungsmethodik seit 1887 (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. X, 1891, p. 361, 393). Unna, Der Dampf trichter (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. IX, 1891, p. 749). Paui-, Die Anwendung des Sandes zum schnellen Filtrieren des Nähr- agars (Münchn. med. Wochenschr. Jahrg. XLVIII, No. 3). Drigalski, Ein Schnellfilter für Agarlösungen (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XLI, 1906, p. 298). Haegler, Zur Agarbereitung (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XVII, 1895, p. 558). 4* 52 Reidemeister: Einfluß von Säure- usw. Zusatz des Agars. XXV, 1. Fränkel, A. , Bakteriologische Mitteilungen (Zeitschr. f. klin. Med. Bd. X, 1886, H. 5 u. 6). 2) London, Schnelle und leichte Methode zur Bereitung von Nähragar (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XXI, 1897, p. 686). Freudenreich, Zur Bereitung des Agar-Agars (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. III, 1888, p. 797). 0 VERBECK de ÄIeyer, über die Bereitung des Nähragars (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. IX, 1891, p. 163). Walbaum, Zur Methodik der bakteriologischen Wasseruntersuchung, mit Angaben über die Bereitung des Nähragars (Zentralbl. f. Bak- teriol. Abt. 1, Bd. XXX, 1901, p. 790). Cache, Über die Frage der bakteriologischen Technik (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Ref. Bd. XXXVII, 1906, Originalreferat). 3) Drigalski, Ein Schnellfilter für Agarlösungen (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XLI, 1906, p. 298). 4) Schultz, Zur Frage der Bereitung einiger Nährsubstrate (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. X, 1891, p. 52). 5) TiscHUTKiN, Eine vereinfachte Methode der Bereitung von Fleisch- Pepton-Agar (Wratsch 1890, No. 8). 6) ScHOTTELius, Einige Neuerungen an bakteriologischen Apparaten (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. II, 1887, p. 97). 7) Cache, Über die Frage der bakteriologischen Technik (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Ref. Bd. XXXVII, 1906, p. 47; Originalreferat). 8) Günther, Einführung in das Studium der Bakteriologie. 5. Aufl. Migula, Kompendium der bakteriologischen Wasseruntersuchung. Heim, Lehrbuch der bakteriologischen Untersuchung und Diagnostik. Küster, Kultur der Mikroorganismen. 9) VON der Heide , Gelatinöse Lösungen und Verflüssigungspunkt der Nährgelatine (Arch. f. Hyg. Bd. XXXI, 1897, p. 82). 10) GaehtCtENS, Einfluß hoher Temperaturen auf den Schmelzpunkt der Nährgelatine (Arch. f. Hyg. Bd. LH, 1905, p. 239). 11) Hutchinsoh, über Form und Bau der Kolonien niederer Pilze (Centralbl, f. Bakteriol. Abt. 2, Bd. XVII, 1907, p. 65). 12) Rohrbeck, Zur Lösung der Desinfektionsfrage mit Wasserdampf (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. VI, 1889, p. 493). 13) KÜSTER, Kultur der Mikroorganismen, p. 36. 14) Friedberger, Die allgemeinen Methoden der Bakteriologie (Handbuch d. pathog. Mikroorganismen Bd. I, p. 446). 15) Beyringk, Emulsions- und Sedimentfiguren bei beweglichen Bakterien (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 2, Bd. III, 1897, p. 41). 16) Küster, Kultur der Mikroorganismen, p. 38 u. 89. [Eingegangen am 29. April 1908.] XXV, 1. Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le trancliant etc. 53 Dispositifs permettant dutiliser tout le tranchant des rasoirs ä microtome. Par Ch. Funck de Nancy. Avec 4 figures. II arrive souvent dans les laboratoires oü Ton s'occupe de microscopie , d'etre ennuye par les stries des coupes , stries dues aux ebrecbiires du rasoir. Eii anatomie pathologique surtout, ces causes d'ennui peiivent arriver frequemment , vu le grand nombre de coupes de toute sorte qu'un Service si etendu est susceptible de faire. Un rasoir deteriore de la sorte demande beaucoup de temps et de patience pour etre remis ä neuf, et si jamais on a la mal- chance de voir s'abimer le rasoir de reserve (celui que prudemment on avait mis de cote pour les coupes fines de morceaux plus tendres), on est completement arrete dans son travail. — Or, ä moins de ressources particulieres , les petits rasoirs que l'on a sous la main ont une lame assez courte ; eile ne peut etre enserree que par ses deux extremites sur le support, dont les deux mäcboires ont un ecarte- ment limite et invariable. Donc, faute d'uu deplacement lateral, on ne dispose que d'une etendue limitee pour la coupe des morceaux. C'est la necessite qui nous a ainsi force a trouver des dispositifs simples et ä la portee de tous, permettant d'utiliser, selon les mo- ments , la partie moyenne de la lame ou les deux parties laterales jusqu'ici inoccupees, soit tantöt pour les coupes exigeant toutes les precautions, soit tantöt pour les morceaux laissant craindre les ebre- chures. — II serait ä desirer que les constructeurs de microtomes s'inspirent des lignes qui vont suivre pour joindre a tous leurs micro- tomes un pareil dispositif. Cela permettrait j\ tous les micrographes de ne pas subir de fächeux retards dans leurs travaux 5 car pendant qu'on repasse son rasoir sur le cuir pour les endroits qu'on utilise, les autres parties ebrechees se trouvent ainsi forcement remises ä 54 Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. XXV, 1. neuf peu ä peu, saus qu'ou ait ä deplorer du temps perdu, pour- tant si precieux. Dans ce qui suit, on verra la descriptiou de deux dispositifs qui realisent les desiderata exprimes ci-dessus. L'un est relative- ment simple, aussi moius parfait, mais ne demande aucun cbangement h faire au microtome meme, ce qui peut avoir son importance. Le second dispositif resulte d'une modificatiou faite k la glissiere du Support ä rasoir, et dans le cas present, ä la glissiere du microtome MiNOT (constructeur E. Cogit & Cie.^ Paris). II pourrait ueaumoius etre construit avec quelques modifications pour d'autres, car presque tous les microtomes fixent d'une fagon analogue leur support ä rasoir sur le socle en fönte. A. Mächoires supplementaires, permettant d'utiliser une plus grande partie du tranchant du rasoir. Le dispositif tres simple consiste essentiellement en une mächoire pareille a celle du microtome sur lequel on veut l'adapter. Cette mächoire servira ä enserrer l'extremite libre de la lame du rasoir. Son originalite n'allant du reste qu'ä oftrir cet unique avau- tage de permettre seulemeut l'utilisation de la partie jusque-lä iuaccessible du rasoir, allant du milieu vers l'extremite libre de la lame. Supposons qu'on ait l'babitude, a moins que la construction du rasoir ne l'exige elle-meme , de tourner le manche du rasoir vers soi, au moment de fixer celui-ci sur le support. Dans ce cas, pour vouloir se servir de la partie autrefois inutilisable mentiounee plus haut, on doit attirer le manche vers soi. L'extremite libre du rasoir n'atteindra plus la mächoire opposee. Pour fixer alors la lame, on intercalera entre l'extremite du rasoir et la mächoire fixe la nouvelle mächoire (fig. 1, a). On fixe celle-ci elle-meme solidement par le prolongement P (fig. 1, a) qui se trouve ä son cote oppose, pro- longement ayant en coupe une forme analogue au rasoir et s'engageant comme celui-ci entre les mors de la mächoire fixe. Pour que la mächoire supplementaire offre son maximum de resistance au rasoir, eile doit etre appliquee etroitement contre la mächoire fixe , avant de serrer la vis de cette deruiere. Si le rasoir, de par sa forme, exige qu'on tourne le manche du cote oppose, cette mächoire mobile ne servira plus. II en faudra XXV, 1. Fiinck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le trancUant etc. 55 iiue aiitre, analogue et symetrique, pour ce c6t6, non representee sur la tig. 1, Comme il arrive souvent clans les laboratoires, d'avoir de ces rasoirs iiou „reversibles", les coustructeiirs devront toujours fournir les deux mächoires supplementaires et symetriques. Certains Supports u'out pas la tige transversale siiperieure T (fig. 1, a). Dans ce cus, il sera commode et moins coüteiix de fabriquer en une seule piece les deux mächoires , reliees l'une ä l'autre par leurs bases, comme le montre la fig. 1, 6. On voit donc, que par cet arrangemeut, on poiirra utiliser une plus grande partie du trancliant, mais cela seulement vers l'extremite /? opposee au manche. La coustruction simple de cet appareil ne necessite aucune modification au microtome meme, et peut rendre souvent quelques Services 5 mais il fallait trouver mieux, car la partie du rasoir atteuant au manche est encore in- accessible. Au lieu de vouloir transformer les mächoires actuelles, l'une restant fixe , l'autre pouvant se rapprocher ou s'eloigner de la mächoire fixe , realisant ainsi les couditions de la machoire supple- meutaire, mais avec cet avantage d'etre percee , ce qui permettrait de retourner le rasoir pour utiliser la partie de la lame situee vers le manche, uous avons pense ecarter cette disposition dissymetrique et peu pratique dans son fonctionnemeut, en modifiant la glissiere du Support. 56 Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. XXV, 1. B. Glissiere - Support permettant d'utiliser tout le tranchant du rasoir. Cette glissiere, comme le fait prevoir le titre, est uu auxiliaire precieux pour la coufection de coupes irreprochables. L'ancienne mauiere de faire consistait ä ne permettre au Support a rasoir qu'un mouvement ä direction invariable, qui fait rapprocher ou eloigner le rasoir du morceau k couper (fig. 2). C'est le mouvement antero-posterieur par rapport ix ce morceau et, 2. a moins de cas rares (bloc a couper tres volumineux et epais) on ne s'en sert jamais. Le n 0 u V e a u dispositif consiste a pouvoir deplacer laterale- ment le support devant le morceau k couper (voir figg. 3 et 4 la fleche x) , l'ancienne disposition a direction antero-posterieure ayant ete conservee en meme temps, pour toute l'etendue de ce deplacement lateral. II fallait presenter devant le morceau les parties du rasoir jusque-lä, inutilisables situees de part et d'autres de son milieu. Le maximum de ce deplacement est donc indique par le double de la distance qui existe entre le bord du plus grand plateau porte-objet et la partie interne de la mächoire fixe. XXY, 1. Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. 57 Descriptioii de la glissiere : Les figures 3 et 4 montrent nettement ce dont il s'agit. La description en sera doiic courte. Sur la figure 3 011 voit les trois pieces indispensables qiii entrent dans la Constitution de la nouvelle glissiere. — Une plaque rectangu- laire Ä, ayant le long de ses plus grands cotes deux rebords {R et R')^ est pereee d'un trou rectangulaire dont le plus grand axe indique la direction du nouveau deplacement lateral (voir la fleche x). Cet orifice laisse passer la tige de la vis de calage F, dont la tete prend point d'appui derriere la plaque Ä. La longueur de cette tete (voir le poiutille de la fig. 3) est teile que dans n'importe quel endroit de la course de la vis, eile trouve toujours un point d'appui süffisant. 3. Cette vis servira ä fixer solidement le support ä rasoir, comme le faisait l'ancienne vis de calage. Le support lui-meme sera guide dans ses mouvements par la piece B (fig. 3 et 4), sur laquelle il repose; les deux petits rebords r et r' (fig. 4) l'y fixeront ample- ment. La plaque B sera guidee elle-meme pour le mouvement dit lateral par les deux rebords R et R' de la plaque J., entre lesquels eile sera placee. La longueur de la plaque A est egale ä celle de la plaque -ß, plus la double distance allaut du plateau porte-objet ä la machoire. Les deux rebords R et R' egalent en longueur la plaque i?, moins la double distance mentionuee plus haut. Le mode d'emploi et le fonctionnement n'ont plus guere besoin d'etre expliques. L'inspection de la figure 4 indique 58 Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. XXV, 1. suffisamment comment ou se sert de cette nouvelle disposition. D'ime part, Ton pourra effectuer le deplacement lateral par rapport au morceau jx couper (voir la fleche x, fig. 4) , eu glissant le support dans cette directioii jusqu'ä l'eudroit voulu. Les deux rebords y et r' du support eutraiueront la plaque B] celle-ci, eugainee elle-meme par les deux rebords R et R' de la plaque Ä , aura ainsi une direction rigoureusement parallele a Faxe lougitudinal de cette plaque, La vis de calage F, retenue et entrainee par la barre transversale T du support, ainsi que par la fente F de la plaque B, effectuera tous les mouvemeuts que lui ferout subir les deux pieces, dont le deplace- ment lateral est concomittant. L'espace rectangulaire creuse dans la plaque Ä est tel qu'il ne genera pas la tige de la vis dans ce deplacement. L'ancien dispositif a ete cependant conserve. Ainsi ou voit que, dans n'importe quel point de la course dite laterale du support, on pourra toujours etfectuer, selon les besoins, le deplacement dit antero-posterieur. C'est a cet effet, que la fente F de la plaque B est allongee dans cette direction, que la largeur du trou rectangu- laire de la plaque A egale la longueur de la fente F^ pour que la tige de la vis trouve toujours un espace libre, entrainee qu'elle sera par le support. La tete de la vis est egalement allougee dans ce XXV, 1. Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. 59 seiis , plus lougue cependaut que la largeur du trou rectang-ulaire, de Sorte que, meme a Textremite de la course dite antero-posterieure, eile aura ses deux extremites engagees sous la plaque Ä. La plaque B avec son support, arrivee ä l'extremite de sa course laterale , trouve toujours une base solide , vu la longueur de la plaque Ä, autrement il pourrait se faire des deformations sous la forte pressioii exercee par Ifi vis au moment du serrage. Cette meme plaque -B, arrivee a la flu de sa course, se trouvera au meme niveau que l'extremite des deux rebords R et R' permettant ainsi, meme daus cette position, le deplacemeut antero-posterieur du support. — Toutes les pieces ont ete calculees pour l'efFort qu'elles ont a subir ; les deformations ue sont pas a craindre. Le tout forme im ensemble barmonieux , qui ne prend guere plus de place sur les microtomes actuels que l'ancienne glissiere, En somme , deux mouvements sont permis par ce Systeme : le plus importaut est le deplacement lateral dans les limites necessaires indiquees plus haut; puis le deplacement dit antero-posterieur, le seul possible autrefois. Ces deplacements se fönt dans deux directions parfaitemeut perpendiculaires l'une ä Tautre , sans subir aucune de- viation, par suite de Tadaptation exacte de toutes les pieces. On voit donc, que par deux dispositifs tres simples, on parvient ä satisfaire amplement ses exigences de parfait technicien vis-a-vis des coupes ä obtenir. Nous avons fabrique les deux systemes; ils nous donuent des resultats entierement satisfaisants. II n'y a pas ä douter que les constructeurs ue se trouvent incites a l'adopter, uuiquemeut pour les avantages qu'ils procureront k leurs clients. D'autre part, nous ne doutons pas que quelque ingenieux micrographe ne se tire lui-meme d'afFaires d'ici-hi, j\ moins qu'il ne l'ait dejä fait par un autre dispositif, dont Texistence nous serait incounue. Resume: Yu la necessite d'un deplacement lateral du rasoir ä micro- tome devant le morceau ä couper, deux systemes peuvent etre employes: Systeme A: Mächoires mobiles, supplementaires , une pour chaque cote, au besoin les deux formant une seule piece; k fixer sur le cöte interne de la mfichoire fixe. Resultat: Utilisation seulement de l'extremite libre de la lame du rasoir. Systeme B: Glissiere-support, deplacant ä volonte le support ä rasoir dans deux directions perpendiculaires l'une ä l'autre : 1) Deplacement lateral devant le bloc ä couper. 2) Deplacement antero-posterieur par 60 Engel: Ein Kreuztisch mit automatischer Einstelhmg. XXV, 1. rapport au morceau, possible h chaque point du deplaceraent lateral. Resultat: Utilisation de tout le tranchant de la lame du rasoir. PossibiHte pour un point quelconque de la lame (ä part las points de fixation ex- tremes), d'occuper tous les points d'une aire rectangulaire, dont l'etendue peut etre calculee selon les besoins. [Eingegangen am 29. April 1908.] [Aus der Akademischen Klinik für Kinderheilkunde in Düsseldorf. Direktor: Prof. Dr. Schlossmann.] Ein Kreuztisch mit automatischer EinsteUung. Von Dr. Engel, Oberarzt der Klinik. Hierzu eine Textabbildung. Die Durchmusterung mikroskopischer Präparate in lückenloser Reihenfolge der Gesichtsfelder ist eine so mühevolle Arbeit, daß wohl jeder Versuch der technischen Erleichterung auf Beifall rechnen kann. Besonders beim Auszählen von Blutpräparaten oder bei der Durchmusterung von Schnitten nach vereinzelten Bazillen , dürfte es willkommen sein, eine Einrichtung zu besitzen, welche das Auslassen vereinzelter Präparatstellen durch eine mechanische Eiurichtimg, wenigstens bis zu einem hohen Grade, verhindert. — Der gewöhn- liche Gang der Dinge bei Arbeiten der genannten Art ist wohl der, daß man den Kreuztisch um eine Gesichtsfeidbreite nach oben oder unten verschiebt und dann durch langsame Drehung der Horizontal- schraube eine Gesichtsfeldreihe am Auge vorübergleiten läßt. Hier- bei muß der Beobachter einen Teil seiner Aufmerksamkeit darauf richten, daß die Bewegung wirklich immer nur einer Gesichtsfeld- breite entspricht, und daß er nicht etwa versehentlich über das Ziel hinausschießt. So muß er also seine Aufmerksamkeit teilen in das Bestreben, die gesuchten Details zu finden oder zu zählen und XXV, 1. Engel: Ein Kreuztisch mit automatischer Einstellung. 61 die Verscliiebuug so zu regulieren , daß ihm wirklich keine Stelle des Präparates entgeht. Die letztere Aufgabe dem Beobachter zu ersparen und ihm gleichzeitig eine Garantie an die Hand zu geben, daß er wirklich alles durchmustert habe, beabsichtigt die nun zu schildernde Ein- richtung. Das Prinzip besteht darin, daß die Bewegung der Hori- zontalschraube nicht durch das Augenmaß reguliert wird , sondern durch eine automatische Einrichtung, welche einmal eingestellt, immer nur wieder dieselbe Verschiebung, und zwar durch einen leichten Fiugerdruck ermöglicht. Zu diesem Zweck ist au einem gewöhn- lichen Kreuztisch die Einrichtung zur Bewegung der Präparate in seitlicher Richtung außer der Spindelschraube mit einem Zahnrad ausgestattet, welches auf der Gewindespindel sitzt und mit 50 Zähnen versehen ist. An dem Zahnrad wiederum ist ein Hebel mit einer federnden Sperrklinke befestigt (s. Abbildung). Diese Sperrvorrich- tung hat 2 Zähne, welche je nach der Einstellung mittels derselben Hebelbewegung die Drehung des Zahnrads nach vorn oder rück- wärts bewerkstelligen. Die Bewegung des Hebels wird durch eine Anschlagschraube reguUert, wodurch soviel Zähne eingestellt werden können, als zur Verschiebung erwünscht wird. Die Benutzung der ganzen Einrichtung gestaltet sich nun derart, daß man mit Hilfe der Sperrschraube die Bewegung des Hebels so reguliert , daß etwa "/., eines Gesichtsfeldes durch eine einmalige Bewegung weiter geschoben werden. Die Einschränkung der Be- wegung auf -/o empfiehlt sich wegen der unscharfen Zeichnung der Gesichtsfeldränder. Ist nun unter ganz automatischer Hin- und Her- 62 Heusner: Ein Objekttisch mit auswechselbaren Tischplatten. XXV, 1. bewegung des Hebels eine Horizontalreihe besichtigt, so wird mittels der Schraube für die hierzu senkrecht stehende Richtung wiederum eine Verschiebung des ganzen Präparats um '-^/g Gesichtsfeldbreite in diesem Sinne vorgenommen, und man beginnt die Horizontalbewegung wieder nach Umschaltung der Sperrklinke. Auf diese Weise ist der Beobachter in den Stand gesetzt, seine Aufmerksamkeit gänzlich ungeteilt dem Objekt zuwenden zu können. Der Kreuztisch ist übrigens jederzeit dadurch , daß man die Sperrklinke in die Mittelstellung bringt, in der üblichen Art zu verwenden. Die Firma E. Leitz in Wetzlar, von der auch die Zeichnung stammt, hat die Herstellung des Kreuztisches übernommen. [Eingegangen am 6. Februar 1908.] Über einen Objekttiscli mit auswechselbaren Tischplatten. Von Hans L. Heusner in Gieiäen. Hierzu eine Textabbildung. Die Tische der normalen Mikroskope werden meistenteils mit einer Platte aus mattem Hartgummi bedeckt. Legt mau auf diese ein schwach gefärbtes Präparat, so verschwindet dasselbe vollständig für das Auge , da sich die Konturen auf dem dunklen Untergrund nicht oder nur schwach ablieben. Es wäre daher oftmals wünschens- wert die dunkle Tischplatte gegen eine solche anderer Färbung auswechseln zu können. Unter gewöhnlichen Verhältnissen ist dieses jedoch nicht durchführbar, da die Platten auf dem Tische fest auf- geschraubt sind. Man kann sich zur Not damit behelfen auf der Platte ein Stück Fließpapier zu befestigen. Für ausgedehntere Arbeiten ist das aber sehr unzweckmäßig , da das Papier öfters XXV, 1. Heusner: Ein Objekttisch mit auswechselbaren Tischplatten. 63 erneuert werden muß. Verwendet man dazu noch einen beweglichen 01)jekttisch , so wird das Papier in kurzer Zeit abgerieben, sofern es überhaupt möglich ist, bei genau gearbeiteten Tischen eine Papier- lage einzuschieben. Ich habe mir daher mein Stativ A (von Leitz) so einrichten lassen, daß nach Abnahme des beweglichen Objekt- tisches die Hartgummiplatte , welche um etwaiges Verziehen zu ver- hindern auf einer besonderen Metallplatte aufgelegt ist, in einfachster Weise gegen eine mattweiße Milchglasplatte ausgewechselt werden kann. Diese Vorrichtung, die den Preis des Statives nur unwesent- lich erhöht, läßt sich unschwer an den meisten Stativen auch noch nachträglich anbringen und hat sich während eines nunmehr etwa vierjährigen Gebrauches gut bewährt. Wie aus der Abbildung er- sichtlich ist, werden die Platten in den vertieften Objekttisch ein- gelegt und sind, außer von der mittleren größeren Öffnung für die Beleuchtung, mit noch zwei kleineren Öffnungen durchbohrt, durch welche die Konusse für die Objektklammern hindurchgehen; auf diese Weise werden die Platten unverschieblich festgehalten. Man wird durch diese Vorrichtung in den Stand gesetzt, z. B. beim Betrachten größerer Reihen von Serienschnitten, unmittelbar 64 Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. XXV, 1. vor dem Einstellen noch makroskopisch das Präparat zu kontrollieren und die gewünschte Stelle in die Höhe des Objektives zu bringen. Bei ungefärbten Präparaten wird man dagegen die Hartgummiplatte benutzen. Da beide Platten genau gleich dick sind, wird der Objekttisch in keiner Weise erhöht. Dieses ist besonders bei starker Vergröße- rung und Verwendung des Abbe sehen Beleuchtungsapparates von Bedeutung, gestattet aber auch etwaige Nebenapparate wie den be- weglichen Objekttisch ohne irgendwelche Abänderung zu benutzen. Geliefert wird die Vorrichtung von der Firma E, Leitz in Wetzlar. [Eingegangen am 28. Februar 1908.] Ein neuer Spiegelkondensor. Von W. V. Ignatowsky in Gießen. Hierzu zwei Textfiguren. In den letzten Jahren fand die sogenannte Dunkelfeldbeleuchtung vielfach besonderes Interesse und dementsprechend wurden von einigen Firmen z. B. Zeiss\ Reichert", Leitz ^ verschiedene Beleuchtungs- einrichtungen ausgeführt, welche zur Beobachtung im Dimkelfelde eingerichtet waren. Im folgenden möchte ich einen neuen Spiegelkondensor be- schreiben , der nach meinen Angaben von der Firma E. Leitz in Wetzlar schon seit Oktober vorigen Jahres ausgeführt wird. Bekanntlich beruht die Möglichkeit der Beobachtung im Dunkel- feld auf der Kontrastwirkung zwischen den leuchtenden Teilchen z. B. Bakterien und dem dunkeln Untergrund. Je mehr Details man 1) Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 104. 2) Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 233. 3j Diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 114. XXV, 1. Ignatowsky: Ein neuer Hpiegelkondensor. 65 beobachten will, um so intensiver müssen die Teilchen beleuchtet werden , um genügend zerstreutes Licht liefern zu können. Man kann die Spiegelkondensoren oder andere Einrichtungen für üunkel- feldbeobachtung auffassen als Objektive, die die Lichtquelle an der- jenigen Stelle, wo sich das zu beobachtende Teilchen befindet, ab- bilden, und zwar mittels derjenigen Strahlen, welche nicht direkt in das beobachtende Objektiv gelangen können. Wir beobachten des- halb nur da zerstreutes Licht, wo sich Teilchen befinden, die sich optisch von dem umgebenden Medium unterscheiden ; das übrige Feld bleibt dunkel. Diejenigen Strahlen, welche die Abbildung der Lichtquelle be- werkstelligen, füllen, innerhalb des Kondensors, den Raum zwischen zwei Kegeln, welche gemein- same Achse und Spitze besitzen, aus. Die Apertur des inneren Kegels ist ein wenig größer als diejenige des beobachtenden Ob- jektivs, damit eben in dasselbe keine direkten Strahlen gelangen können. Je kleiner die zu beobach- tenden Teilchen sind, um so intensiver müssen dieselben be- leuchtet werden. Um dieses zu erzielen müssen 1) die Diffe- renzen der Aperturen zwischen dem äußeren und inneren Kegel möglichst groß sein , 2) muß das an der Spitze des Kegels befindliche Bild der Lichtquelle möglichst präzis sein, d. h. durch möglichst präzise Strahlenvereinigung zustande kommen und 3) möglichst frei von der sphärischen Differenz der Vergrößerung (Erfüllung der sogenannten Sinusbedingung) sein für alle zwischen den Kegeln verlaufende Strahlen, Was die chroma- tischen Fehler anbelangt, so fallen dieselben bei den Spiegelkonden- soren von selber weg, da hierbei die Strahlenvereinigung nicht durch Brechung, sondern durch Spiegelung erzielt wird. Den Forderungen 2) und 3) wird um so mehr Genüge geleistet werden können, je mehr spiegelnde Flächen vorhanden sind. Wie aus Figur 1 ersichtlich, besitzt der LEiTzsche Spiegel- kondensor zwei spiegelnde Flächen , eine innere und eine äußere. Dadurch erzielt man, wie gesagt, in P eine bessere Strahlenvereinigung, Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 5 1. 66 Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. XXV, 1. als dies mit nur einer sphärischen Fläche möglich wäre. Die beleuchtenden Strahlen haben eine numer. Apertur von etwa 1"1 bis 1-45. Der Spiegelkondensor befindet sich in einer Fassung, welche mit einer Zentriervorrichtung versehen ist und an Stelle des ge- wöhnlichen Kondensors in das Mikroskopstativ von unten eingeführt werden kann. Der Spiegelkondensor wird außerdem in vereinfachter Art her- gestellt, und zwar in Form einer auf den Tisch des Mikroskops auflegbaren Platte (Fig. 2). Dadurch bedarf der Spiegelkondensor keiner besonderen Anpassung an ein Mikroskopstativ , sondern er kann ohne weiteres an jedem Stativ verwandt werden. Mittels des 2. auf der Figur 2 sichtbaren Hebels kann der Spiegelkondensor längs der Achse des Mikroskops in den nötigen Grenzen, d. h. entsprechend der Dicke der Objektträger, verschoben werden. Zum bequemeren Vergleich der einzelnen Kondensoren unter- einander seien hier die vorher in Punkt 2) und 3) beschriebenen Abweichungen in Prozenten der Brennweite ausgedrückt, was man machen kann, da wir, wie gesagt, die Spiegelkondensoren als Objek- tive auffassen können, bei welchen die Zentralstrahlen fehlen. Diese prozentualen Abweichungen lassen sich in folgender Tabelle zusammenfassen : Strahlenvereinigung Sinusbedingung Leitz 4 Prozent 8 Prozent Zeiss (Paraboloid) . . 0 _ 15 „ Reichert (sphärischer Kondensor) .... 15 „ 15 „ XXV, 1. Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. 67 Hierbei wurde angenommen, daß die Aperturen der beleuchten- den Strahlen bei allen drei Kondensoren gleich sind, und zwar zwischen 1"1 und 1'45 liegen. Für die ersten zwei Kondensoren stimmt diese Voraussetzung ungefähr , während bei dem Kondensor von Reichert die Dilferenz der Aperturen kleiner ist. Beobachtet man im Dunkelfeld mit starken Trockensystemen, so muß man bekanntlich ein dem Objekt entsprechend dickes Deck- glas anwenden oder eine Korrektion auf die Deckglasdicke ausführen. Außerdem tritt ein Lichtverlust infolge der Reflexionen an der Ober- fläche des Deckglases und an der Oberfläche der Frontlinse des Objektivs ein. Beide Übelstände fallen weg, sobald man mit Immer- sionssystemeu beobachtet. Hierbei müssen dieselben, um die direkten Strahlen nicht hinein zu lassen, entsprechend abgeblendet werden. Auch hier wie bei Trockensystemen ist die Anwendung eines Apo- chromaten, z. B. von 2 mm , einem Achromaten vorzuziehen, wegen der außerordentlichen Farbenempiindlichkeit bei derartigen Beob- achtungen. Die Beleuchtung mit dem Leitz sehen Kondensor in Verbin- dung mit einer Bogenlampe von 4 Ampere ist genügend intensiv, um die Herstellung von Momentaufnahmen lebender Bakterien zu ermöglichen. ^e' [Eingegangen am 26. April 1908.] 5* 68 Röthig: Vorrichtung z. lebenswarmen Fixieren d. Eileitereier. XXV, 1. Eine Vorrichtung zum lebenswarmen Fixieren und leichten Trans- portieren der Eileitereier der Vögel. Von Dr. Paul Röthig in Charlottenburg - Berlin. Hierzu zwei Textabbildungen. Für die Sammlung so zarten und schwer zu behandelnden Materiales , wie es die Eileitereier der Vögel sind , habe ich mir 1. seinerzeit von der hiesigen Firma Dr. Ron. Muencke einen Transport- kasteu bauen lassen, der sich in den ganzen Jahren, seitdem ich XXV, 1. Röthig: Vorrichtung z. lebenswarmen Fixieren d. Eileitereier. 69 ihn zum Sammeln meines embryologischen Materiales verwendet habe, durchaus bewährt hat. Man ist durch ihn in den Stand gesetzt, auf den Geflügelschlachthöfen die Eier unmittelbar nach dem Tode der Tiere noch lebenswarm zu fixieren und das Material leicht und schonend nach dem Laboratorium zu transportieren. Gefüllt ist der Kasten, von dem eine Zeichnung in ^/^ der natürlichen Größe in der beistehenden Abb. 1 wiedergegeben ist, mit einer Anzahl gewöhn- licher, durch einen Korken fest verschließbarer Wassergläser, in die je ein Eileiterei des Huhnes in der Fixierungsflüssigkeit Platz findet (Abb. 2). Der Kasten besteht aus zwei durch Scharniere miteinander verbundenen Etagen, von denen jede 2.5 Gläser faßt und die eventuell einzeln, jede für sich allein, transportiert werden können. Zu gleicher Zeit könnten also 50 Eileitereier der Hühner fixiert werden. Als Fixierungsflüssigkeit wandte ich meistens die in meinem Handbuch der embryologischen Technik (Wiesbaden 1904), p. 173, erwähnten beiden Gemische nach Nowack und Ger- hardt mit gutem Erfolge an. Die Einrichtung des Apparates wird sich ohne weiteres aus den Abbildungen 1 u. 2 ergeben. 2. [Eingegangen am 1. Februar 1908.] 70 Referate. XXV, 1. Referate. 1. Lehr- und Handbücher. Hager, H., Das Mikroskop und seine Anwendung. Hand- buch der praktischen Mikroskopie und Anleitung zu mikro- skopischen Untersuchungen. Nach dem Tode vollständig umgearbeitet und in Gemeinschaft mit Dr. 0. Appel, Dr. G. Brandes, Dr. Th. Lochte neu herausgegeben von Dr. Carl Mez. Zehnte , stark vermehrte Aufl. , 463 Figg. Berlin (Jul. Springer) 1908; 444 pp. Wir rühmten schon bei Besprechung der neunten Auflage^ die Vielseitigkeit des Buches. Mit der Mannigfaltigkeit seines Inhalts ist bei der neuen Auflage auch seine Verwendbarkeit noch weiter gefördert worden. Die neue Auflage bringt namentlich auch An- gaben über Mikrophotographie — mit weißem und mit ultraviolettem Licht — und widmet auch dem Ultramikroskop einige Seiten. Bei Durchsicht des speziellen Teiles, der eine sehr große Anzahl mikroskopischer Objekte bespricht und vorzüglich abbildet, sind uns zahlreiche Änderungen und Ergänzungen aufgefallen — z. B. in dem die Pilzkrankheiten der Kulturgewächse behandelnden Abschnitt, ferner in den Abschnitten „Die wichtigsten Wasserpilze", „Blutuntersuchung zum Zweck gesundheitspolizeilicher Maßnahmen", „Auswurf" u. a. Unberücksichtigt bleiben in dem Buche die Schädiger der Nadelhölzer und der Forstpflanzen überhaupt — nur die „grüne Tannenlaus" 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXI, 1904, p. 325. XXV, 1. Referate. 71 wird genaunt ; vielleicht läßt sich in der nächsten Auflage des treff- lichen Buches , die gewiß nicht lange auf sich warten lassen wird, wenigstens die Schilderung der wichtigsten Koniferen bewohnenden Pilze noch einfügen. Bei Besprechung der „empfehlenswerten Mikroskopformen" war in der neunten Auflage ausschließlich von Seibert sehen Fabrikaten die Rede; die neue Auflage macht auch auf die Produkte der Leitz sehen Werkstätten aufmerksam, während ein Hinweis auf andere vortreff- liche deutsche Firmen — Zeiss, Winkel — noch fehlt. Der von Appel, verfaßte Abschnitt über Pflanzenkrankheiten ist auch separat erschienen. Küster {Halle a. S.). 2. Mikrophotographie und Projektion. Guieysse, A. , Platine oscillante de Nachet pour la microphotographie stereoscopique (C. R. Soc. Biol. Paris t. LXIII, 1907, no. 24, p. 18—19 av. 1 Fig.). Verf. macht darauf aufmerksam, daß die Idee, stereoskopische mikrophotographische Bilder herzustellen, indem man zuerst eine Photographie herstellt von einem Präparate , das in einem Sinne geneigt ist und darauf von demselben Präparate bei einer Neigung im entgegengesetzten Sinne, schon von Moitessier herrührt, der durch Nachet einen geeigneten Schaukeltisch herstellen ließ.^ Dieses Hilfs- mittel war in Vergessenheit geraten und neuerdings haben Quidor und Nachet^ ein Schaukelmikroskop zu demselben Zwecke konstruiert, bei dem das Präparat unbeweglich bleibt, während das Mikroskop seinen Platz verändert. Verf. hat nun die alte Idee wieder auf- gegriffen und durch Nachet den Schaukeltisch wieder herstellen lassen, den er iu seiner Arbeit abbildet. Der Tisch kann bei jedem Mikroskope angebracht werden, was als ein Vorteil gegenüber dem Mikroskope von Quidor und Nachet anzusehen ist. Schiefferdecker {Bonn). ^) Moitessier, La Photographie appUquee aux recherches micro- graphiques (Bailiiere, 1866). 2 Quidor, A. et Nachet, A., Sur an nouveau microscope et ses applications ä la micrographie stereoscopique (C. R. de l'Acad. d. sciences, 29 avril 1907). 72 Referate. XXV, 1. 3. Präparationsmethoden im allgemeinen. Schoorl , N. , Beiträge zur mikrochemischen Analyse (Zeitschr. f. analyt. Chemie Bd. XLVI, 1907, p. 658—671). Der Verf. empfiehlt im wesentlichen die mikrochemischen Metho- den von Behrens, hat aber eine Reihe von Ergänzungen und Ver- besserungen daran vorgenommen ; z. B. wird mit Recht betont , daß die Vermeidung von Trichtern, Filtern u. dgl., ferner die Vermeidung der wichtigen Reagentien Schwefelwasserstoff und Schwefelammonium, wie Behrens sie vornimmt , oft zu unnötigen Komplikationen und Einschränkungen führt. Der Verf. hat vielmehr einen systematischen Gang zur qualitativen Analyse von Gemischen ausgearbeitet, welcher die Hauptgruppen der qualitativen Makroanalyse beibehält, aber innerhalb dieser Gruppen die Nachweisung der einzelnen Elemente mit Hilfe des Mikroskops gestattet. In der Tat erscheint diese Me- thode naturgemäßer als der von Behrens angegebene systematische Gang zur qualitativen Trennung von Gemischen , welchen Behrens auf die Fällung der Chloride , Jodide , Karbonate und Oxalate ge- gründet hat. Die vom Verf. adoptierte Einteilung in Gruppen, innerhalb deren die Trennung mikrochemisch zu erfolgen hat, ist folgende: 1) Die in Wasser schwer löslichen Chloride von Silber, Queck- silber und Blei. 2) Die Sulfide von Arsen, Antimon und Zinn (aus der Schwefelammoniumlösung durch Salzsäure gefällt). 3) Die Nitrate von Blei, Wismut, Kupfer, Kadmium (durch Lösung ihrer Sulfide in Salpetersäure erhalten). 4) Das Sulfid von Quecksilber (welches als Rückstand beim Lösen der Gruppe 3 bleibt, aber noch Spuren von dieser sowie Schwefel enthalten kann). 5) Die Chloride von Nickel und Kobalt (aus den in kalter Salzsäure unlöslichen Sulfiden der Eisengruppe erhalten durch Behandlung mit Königwasser, Verjagen der überschüssigen Säure und Überführung in Chloride). 6) Die Hydroxyde von Eisen , Aluminium , Chrom. 7) Die als Lösung von letzteren sich trennenden Metalle Mangan und Zink. 8) Die Karbo- nate von Kalzium, Strontium, Barium. 9) Die Restgruppe Magnesium, Lithium, Kalium, Natrium. 10) Die unlöslichen Substanzen. E. Sommerfeldt {Tühmgeii). XXV, 1. Referate. 73 Biltz, W., Einige Versuche über ultramikroskopische Löslichkeitsbestimmung (Zeitschr. f. physik. Chemie Bd. LVIII, 1907, p. 288—292). Der Verf. hat die Benutzung-sweise des Siedentopp-Zsigmondy- schen Ultramikroskops für die Löslichkeitsbestimmung sehr schwer löslicher Substanzen ausgearbeitet und gefunden, daß in denjenigen Fällen , in welchen die Kristallisationsgeschwindigkeit der suspen- dierten Teilchen klein ist, die ultramikroskopische Methode sehr vor- teilhaft zur Löslichkeitsbestimmung verwandt werden kann, denn es existiert alsdann für die Konzentration ein scharfer Grenzwert, von dem ab in der Richtung der zunehmenden Verdünnung die Lösung leer ist, in der Richtung zunehmender Konzentration hingegen suspendierte Teilchen enthält. Wenn nun aber die Kristallisationsgeschwiudigkeit groß ist, findet man auch über den kritischen Wert hinaus über- sättigte teilcheufreie Lösungen, welche plötzlich den Übersättiguugs- zustand verlieren und alsdann sogleich relativ große Teilchen suspen- diert enthalten. Besonders die Löslichkeit von Silbersulfid hat der Verf. experimentell nach seiner Methode bestimmt. E. Sommerfeldt {Tübingeji). Gage, S. Ph., The method ofmaking modeis froni sheets of blotting paper (Americ. Journ. of Anat. vol. VII, 1907, no. 3; The anatom. Record no. 7, p. 166—169). Verf. beschreibt eine Methode, welche geeignet ist, die Wachs- platten der Born scheu Methode bei der Rekonstruktion zu ersetzen. Diese letzteren sind schwierig herzustellen. Verf. hat sich dicken Fließpapiers bedient, welches in Stärke von 1 mm, 0"5 mm, 0"77 mm und 0"9 mm käuflich zu haben ist. Verf. benutzt die Methode seit 1905 und derartige Modelle sind auf amerikanischen Kongressen schon mehrfach demonstriert worden. Um die Dicke der Lagen auszuprobieren , nimmt man einen Haufen von 40 übereinander ge- legten Stücken , die aus verschiedenen Blättern des Fließpapiers ausgeschnitten sind, und die durch ein Gummiband zusammengehalten werden. Ein Ende des so gebildeten Blockes wird in heißes Paraffin getaucht und mit den Fingern zusammengedrückt. Die Dicke dieses mit Paraffin behandelten Endes , dividiert durch die Zahl 40 der Blattstücke ergibt die Dicke des Papiers. Verf. teilt dann Näheres über die Umrechnung der Schnittdicke in die Papierdicke mit. Sind die Dicke des Papiers , die Größe des Modells und die Stärke der Vergrößerung festgestellt , so werden die Zeichnungen der Schnitte 74 Referate. XXV, 1. auf dem Fließpapiere mit Hilfe einer Camera lucida oder noch besser eines Projektionsmikroskopes ausgeführt. Eine oder mehrere Dupli- kate der Zeichnungen kann man leicht erhalten durch Verwendung von Kohlepapier und von dünnen Blättern über dem Fließpapier. Die Wachsplatten lassen sich nur schwierig schneiden. Diese Schwierig- keit wurde von E. L. Mark überwunden durch die Benutzung einer Nähmaschine mit einem elektrisch erhitzten Drahte als schneidendes Werkzeug (die Methode ist publiziert worden in The American Academy of art and sciences, March 1907, ferner in Science Bd. XXV, 1907, Anatomical Record, April 1907). Das Fließpapier kann, wenn die Zeichnungen klein sind , leicht mit Schere oder Messer geschnitten werden, sind die Zeichnungen groß und besonders, wenn das Modell so aufgebaut werden soll, daß jeder Schnitt durch die doppelte bis vierfache Dicke des Fließpapiers wiedergegeben wird, so kann man eine gewöhnliche Nähmaschine zum Schneiden benutzen. Stellt man die Stichregulierung auf den kleinsten Stich ein, so erhält mau fast einen gleichmäßigen Schnitt und kann die Stücke leicht voneinander trennen. Wird eine große Nähmaschinennadel meißelartig zugeschärft, so wird der Schnitt beträchtlich gleichmäßiger. Bei länger dauern- der oder besonders schwerer derartiger Arbeit verwendet man am besten einen elektrischen Maschinenmotor. Die nötige Übung erlangt man bald. Manche Details bei komplizierten Zeichnungen umschneidet man besser mit Schere oder Messer, nachdem die Hauptlinien durch die Maschine ausgeschnitten sind. Bei jedem Modell ist es sehr vorteilhaft, in bestimmten Zwischenräumen Schnitte besonders gefärbt hervortreten zu lassen. Fließpapier ist in einer größeren Anzahl von Farben (schwarz , rot , blau , rosa) leicht käuflich zu haben. Verf. hat bei den Modelleu jede zehnte Schicht von hellerer Farbe ge- nommen und jede hundertste schwarz; so konnte man schnell eine Zählung ausführen. Sind die Papierschnitte soweit vorbereitet, so legt man sie nach vorherbestimmten Richtungslinien aufeinander. Man kann sich leicht einen Leitapparat für das im Aufbaue begriffene Modell dadurch herstellen, daß man die Kontur, der man zu folgen hat, aus einem Blocke von 4 bis 5 Blättern Fließpapiers ausschneidet und auf ihr die Richtungslinien für jeden 10. oder 20. Schnitt mar- kiert. Die gefärbten 10 Platten müssen dann natürlich dem Abstände und der Richtung dieser Linien entsprechen. Nachdem das Modell im wesentlichen aufgebaut ist, geht man an die feinere Modellierung. Die Papierschichten verschieben sich leicht gegeneinander; um sie zu befestigen, benutzt man Stecknadeln oder Drahtstifte von ver- XXV, 1. Referate. 75 schiedener Größe , irgendein Kitt oder Leim erwies sich nicht als praktisch. Ist das Modell so ausgeführt, so entfernt man Uneben- heiten am besten mit der Schneide eines stumpfen Messers und glättet mit Sandpapier. Will man irgendwelche Zerlegungen des Modells vornehmen , um Bauverhältnisse im Innern zu zeigen , so tue man das zu dieser Zeit. Ebenso entferne man jetzt auch jene „Brücken"^ die man eventuell stehen gelassen hat , um abgetrennte Teile zu stützen. Schließlich wird das Modell in sich gefestigt und angestrichen mit heißem Paraffin, entweder durch Überstreichen mit einem Kamel- haarpinsel oder durch Eintauchen in das Paraffin, wobei der Über- schuß mittels eines heißen Instrumentes entfernt wird. Bei einem sehr großen Modelle kann man auch einen Thermokauter benutzen. Durch das Paraffin erlangt das Modell etwa die Festigkeit von Holz, ohne seine Leichtigkeit einzubüßen, um die Oberfläche des Modells zu färben, verwendet man am besten japanisches Fließpapier (Japa- nese bibulous paper ; das „lens paper" der Mikroskophändler) , das man in Wasserfarbe taucht und dann trocknet. Man kann hierzu irgendwelche in den Laboratorien verwandte Farben benutzen (Eosin, Pikrinsäure, Methylgrün, schwarze Tusche usw.). Das gefärbte „lens paper" schmiegt sich leicht der Oberfläche an und wird durch heißes Paraffin befestigt. Alle farbigen und zur Zählung dienenden Linien und die Feinheiten der Modellierung sind unter dem transparenten Papiere sichtbar. Wird das Modell nicht mehr direkt zur Arbeit verwendet , so kann es mit Ölfarben , die mit heißem Paraffin ge- mischt sind, bestrichen und so beliebig fein zurecht gemacht werden. Zerlegen kann man das Modell entweder mit Hilfe eines heißen Messers , das man in den Spalten zwischen den Blättern hinführt, oder mit Hilfe einer Säge, wenn man Schnitte ausführen will. Diese Fließpapiermodelle sind leicht und reinlich herzustellen , besitzen ein geringes Gewicht und sind dauerhaft; sie zerbrechen nicht leicht und können leicht verpackt und versendet werden. Schiefferdeclier {Bonn). Tröster, C. , Eine neue Mikroskopierlampe (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1^07, H. 6, p. 574). Das Licht wird von der Lampe bis zum Mikroskopspiegel durch ein gerades, innen poliertes Metallrohr geleitet. Als Lichtquelle ge- nügt eiae GasglüWichttope. ^...^^^^ ^^^^^^ ^ ^ ^ 76 Keferate. XXV, 1. Sineif, A. , Ein vereinfachter Thermostat (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1907, No. 2, p. 191). Verf. bedient sich eines Pappkastens ; unmittelbar oberhalb des Bodens wird durch eine Spalte, die an zwei gegenüberliegenden Wänden angebracht ist , ein Streifen Kesselblech gezogen ; letz- teres wird seitlich von einer Petroleumlampe angeheizt. Im Deckel der Pappschachtel steckt ein Thermometer. — Für manche Ver- suche mag dieser einfache Apparat wohl genügen. Küster {Halle a. S.). Roseubauch, E. , Über die Entwicklung der Schleim- zelle (Bull, de l'acad. des sciences j\ Cracovie ; Classe des Sciences mathematiques et natur. juin, 1907, p. 529 — 549 av. 3 pls.). Untersucht wurde die Submaxillardrüse der Schweine und die sogenannte Retroliugualdrüse (Ranvier) der Mäuseembryonen, sowie die Becherzellen des Darmepithels. Submaxillardrüseu der Schweine- embryonen wurden frisch in humor aqueus oder mit Zusatz von anderen Reageutien, an Gefrierschnitten und an fixierten Präparaten unter- sucht, die anderen nur an fixierten Präparaten. Gegenüber von Langley und E. Müller wird bemerkt, daß durch Einfrieren die 'Protoplasmastruktur nicht verändert wird. Zur Fixierung benutzte Verf. : 1) Eine Mischung von 2 Teilen gesättigter Sublimatlösung in physiologischer Kochsalzlösung und einem Teile Sprozentiger Salpeter- säure 5 2) 95 cc einer ähnlichen Sublimatlösung mit 5 cc Eisessig; 3) die Flüssigkeit von Carnoy (absoluter Alkohol 6 Teile, Chloroform 3 Teile, Eisessig 1 Teil). Obwohl alle diese Flüssigkeiten die Prä- parate gut fixieren , stimmt Verf. doch E. Müller darin bei , daß zur Darstellung der Granula sich am besten die Mischung von Sublimat mit Eisessig eignet. Die fixierten Präparate kamen dann durch Alkohol von 30, 50, 90, 96 Prozent, zweimal durch absoluten Alko- hol, dann durch ein Gemisch von absolutem Alkohol und Chloroform, dann zweimal durch reines Chloroform, dann durch ein Gemisch von Chloroform und Paraffin von 48 ^ Schmelzpunkt in reines Paraffin von 48 ^, dann in 52grädiges Paraffin, in dem sie nach zweimaligem Wechsel eingebettet wurden, Schnittserien von 3 bis 5 |U. dicken Schnitten. Färbung: 1) Eisenhämatoxylin (Heidenhain) , Mucikarmin , Thionin, Toluidinblau und Mucihämatein , Mayers Mucikarmin, nach seiner Vorschrift dargestellt, eignet sich am besten zum mikrochemischen Nachweise des Mucins. Schiefferdecker (Bonn). XXV, 1. Referate. 77 Schuberg, A., Untersuchungeu über Zellverbindungeii. IL Teil (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 551—602 m. 1 Fig. u. 4 Tfln.). Zur Untersuchung kamen im wesentlichen Larven von Siredon, Sahimandra und Bombiuator, die mit Rücksicht auf Verfassers Dahlia- färbung meist mit konzentrierter Sublimatlösung oder mit Sublimat- essigsäure fixiert wurden. Zur Färbung der kollagenen Fibrillen wurde vielfach die MALLORYSche Färbung benutzt (Beizen der mit Safranin vorgefärbten Schnitte in eiuprozentiger Lösung von Phosphor- molybdänsäure während einiger Minuten; Auswaschen in zweimal gewechseltem Wasser; Färben 2 Minuten oder länger in einem Ge- misch von Anilinblau 0'5, Orange G 2, Oxalsäure 2, Wasser 100; Auswaschen in Wasser; Überführen durch 95prozentigen Alkohol in Origanumöl ; Einschluß in Balsam), ferner die Weigert sehe Häma- toxylin-Eisen-Methode [vgl. diese Zeitschr. Bd. XXI, 1904, p. 2] mit Nachfärbung in einem Gemisch von Säurefuchsin und Pikrinsäure. Sehr gute Dienste leistete ferner die vom Verf. abgeänderte Modi- fikation Blochmanns der van Giesox sehen Methode, nach welcher die Schnitte der mit Boraxkarmin vorgefärbten Objekte mit einer 0*05- prozentigen Lösung von triphenylrosanilintrisulfosaurem Natron in gesättigter wässeriger Pikriusäurelösung nachgefärbt werden. Das triphenylrosanilintrisulfosaure Natron bildet, wie auch das von Bloch- MANN verwandte entsprechende Kalksalz einen der Bestandteile des Anilinblaus oder steht doch den unter diesem Namen in den Handel kommenden Farbstoffen sehr nahe. Man kann daher auch ziemlich ähnliche Färbung erzielen , wenn man in der oben erwähnten Vor- schrift das gewöhnliche Anilinblau als Ersatz nimmt. Je nach dem zu untersuchenden Objekt ist übrigens die Färbungsdauer wie der Prozentsatz des blauen Farbstoffes zu modifizieren. Zur Färbung der elastischen Fasern kam außer der sauren Orceinlösung nach Unna noch die Weigert sehe Fuchsin-Resorcin-Färbung und die ältere Unna sehe Dahlia- Methode zur Verwendung. Betreffs letzterer ließ sich durch entsprechende Versuche feststellen , daß sie ganz andere Färbung liefert als Verf. Dahlia- Methode zur Darstellung von Zell- verbiudungen. Allerdings ergab sich dabei, und zwar deutlicher als früher wegen günstigeren Materials (Proteus-Haut), daß letztere auch öfter elastische Fasern fingiert. Die Färbung ist dann allerdings keine sehr intensive und jedenfalls viel schwächer als jene des Zell- plasmas, besonders der Epithel- und Biudegewebszellen. Um elastische Fasern und Zellausläufer gleichzeitig darzustellen, wurden die Schnitte 78 Referate. XXV, 1. erst mit Orcein und dann mit Verf. Dablia- Methode gefärbt. Hier- bei zeigte sich, daß durch letztere nicht nur die Zellausläufer tingiert wurden, sondern auch die Orceinfärbung der elastischen Fasern eine recht bedeutende Verstärkung erfuhr, so daß die Unterscheidung von beiderlei Elementen nur schwer möglich war. Eine ähnliche, eben- falls sehr intensive Verstärkung der Orceinfärbung der elastischen Fasern ist aber auch durch Behandlung der Schnitte mit 0*5prozen- tiger wässeriger Toluidiublaulösung zu erreichen. In solchen Prä- paraten sind die elastischen Fasern tief dunkelblau mit einem braun- roten Stich, die Zellausläufer aber ungefärbt. Anderseits färben sich diese nur allein , oder wenigstens allein dunkel , wenn mau nur mit Dahlia ohne Orcein färbt. Wenn also auch die Kombination von Orcein und Dahlia in demselben Schnitt, die Unterscheidung von elastischen Fasern und Zellausläuferu erschwert, so ist dies doch leicht und sicher möglich, wenn man die Befunde an verschiedenen, einerseits mit Dahlia, anderseits mit Orcein-Toluidinblau behandelten Schnitten miteinander vergleicht. Zur Färbung der Zellen, insbeson- dere der feinen Ausläufer der Biudegewebszellen und ihrer Ver- bindungen mit den Epithelzellen der Epidermis bediente sich Verf. wieder in erster Linie der von ihm früher beschi-iebenen Dahlia- Methode (vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1904, p. 309). Modifikationen wurden nur insofern vorgenommen , als häufiger eine schwächere Dahlia -Lösung (9 fache Verdünnung) und eine stärkere (2- bis 3pro- zentige) Brechweinsteinlösung zur Verwendung kam. Als wichtig wird betont , daß nach der Färbung sehr sorgfältig ausgewaschen werden muß , etwa eine halbe Stunde in fließendem Wasser , und daß die Brechweinsteinlösung öfter erneuert werden muß , da sie sehr bald verdirbt. Der Umstand, daß Eosinbehandlung vor der Dahliafärbung eine Beizwirkuug ausübt, läßt sich zur Erzielung einer etwas stärkeren Färbung benutzen ; man bringt zu diesem Zweck die Schnitte einfach für kurze Zeit in eine 0'02prozentige wässerige Eosinlösung. Zur Gegenfärbung der elastischen Fasern des Binde- gewebes ist nach Dahliafärbung Safranin (2 g in 150 cc absolutem Alkohol) gut geeignet. Die kollagenen Elemente des Bindegewebes werden dabei leuchtend rot, so daß die dunkelvioletten Zellen mit ihren Ausläufern sehr scharf hervortreten. Da übrigens auch andere basische Farben mit Tannin-Brechweinstein fixiert werden, läßt sich u. a. auch Methylgrün (0"5 Prozent in Wasser) und Methylviolett (0'02 Prozent in Wasser) an Stelle der Dahlialösung zu dem gleichen Zwecke verwenden. E. ScJioebel (Neapel). XXV, 1. Referate. 79 4. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere» Saling, Th. , Zur Kenutuis der Entwicklung der Keim- drüsen von Tenebrio moIitorL. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 238—309 m. 14 Figg. u. 2 Tfln.). Wie bei allen Insekten bereiteten auch hier Dotter und Chitin bei der Bearbeitung große technische Schwierigkeiten. Die leichte Verletzlichkeit der Eier macht es nötig dieselben zusammen mit den Wollstoffstücken, an denen sie abgelegt sind, in das Fixierungsgemisch zu bringen. Erst nach genügender Härtung in starkem Alkohol kann die Lospräparierung der Eier gefahrlos vorgenommen werden. Im Laufe der Entwicklung erhärten die Eihüllen so stark, daß selbst siedende Fixierungsgemische nicht rasch genug eindringen. Infolge- dessen stellen sich bei nicht genügender Vorsicht die verschieden- artigsten Deformationen des Eies ein. Als Fixierungsmittel gab vor allem ein Gemisch aus 56 Teilen konzentrierter Sublimatlösung, 40 Teilen 96prozeutigen Alkohol und 4 Teilen konzentrierter Salpeter- säure gute Resultate. Aus dem siedenden Gemisch kommen die Eier nach 2 Minuten langem Verweilen darin sofort in 90- oder 96pro- ^entigen Alkohol. Schwächere Alkohole sind zu vermeiden, da sie Quellung hervorrufen. Die Salpetersäure wirkt erweichend auf Ei- häute und Dotter. Weiter wurde unter anderem auch siedendes Formol, mit der 3fachen Menge destillierten Wassers verdünnt, ver- wendet. Hierin bleibt der Dotter geschmeidig. Osmiumgemische, wie Flemmings oder Hermanns Lösung in geschlossenem Reagenz- glas bis auf 80*^ C erhitzt, fixieren gut, haben aber den Nachteil, daß sie den Dotter schwärzen. Nachfolgendes Bleichen ist unerläß- lich. Ein Zusatz von Natriumjodat zum Fixierungsgemisch wirkt übrigens der Schwärzung recht kräftig entgegen. Der großen Sprödig- keit des Dotters wegen erfolgte die Einbettung der Eier in Hoff- manns Nelkenölkollodium (vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1899, p. 314ff.). Die Eier wurden aber nicht nur 5 Minuten, sondern eine Stunde im Paraffin belassen, wodurch eine bessere Schneidbarkeit des Dotters erzielt wird. 80 Referate. XXV, 1. Gefärbt wurden die Eier in toto, meist mit Hämalaun, das be- sonders deshalb zu empfehlen ist, weil es nur das embryonale Ge- webe tingiert, nicht aber Fett und Dotter. Empfehlenswert ist eine Nachfärbung der Schnitte mit Orange G, und zwar ist eine Orange- alaunlösung besser als eine rein wässerige Lösung. Verf. löste in 2prozeutigem Alaunwasser Orange G bis zur Sättigung und verdünnte 8 cc dieser Stammlösung mit 50 cc 2prozentiger Alauulösung. Bei den Objekten zum Studium der postembryonalen Entwick- lung ergaben sich noch größere technische Schwierigkeiten , indem die besonders bei den Larven stark entwickelte Chitinbedeckung das Mikrotomieren geradezu unmöglich macht. Nach mehreren Versuchen erhielt Verf. mit folgender Methode noch die brauchbarsten Resultate : Die Mehlwürmer werden lebend in ein Reagenzglas mit siedender, frisch zubereiteter Eau de Labarraque geworfen und darin je nach Größe verschieden lange gekocht (ausgewachsene Würmer etwa 5 Minuten). Hauptsache ist auf den richtigen Zeitpunkt zu achten, wenn das Kochen unterbrochen werden muß, damit die Mazerations- flüssigkeit nicht in das Körperinnere eindringt. Bei richtiger An- wendung dieses Mittels bleibt nicht nur die Lagerung der Organe erhalten, sondern auch die histologische Erhaltung ist befriedigend. Nach dem Entchitinierungsprozeß wird das Objekt gehörig gewässert, am besten in warmem destillierten Wasser, und dann erst in Alkohol überführt. Eingebettet wurde in Paraffin oder in HoFFMANNSches NelkeuölkoUodium, gefärbt mit Hämalaun-Orauge. In gleicher Weise wurden auch Puppen und junge Imagines behandelt, nur daß bei diesen die Vorbehandlung mit Eau de Labar- raque meist nicht nötig wurde. Dann fand die Fixierung einfach durch heißes Wasser statt oder durch das oben erwähnte Sublimat- Alkohol -Salpetersäuregemisch, in dem natürlich ein längeres Ver- weilen erforderlich war, als bei den Eiern. Den Larven, Puppen und Käfern entnommene Genitaldrüseu wurden kalt fixiert, entweder in Flemming scher Flüssigkeit oder in Sublimat -Alkohol -Eisessig. E. Schoebcl (Neapel). Hamburger, C, Das Männchen von Lacinularia socialis Ehrbg. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 625—643 m. 3 Figg. u. 1 Tfl.). Untersucht wurden lebende Tiere, ferner in toto präparierte und in Schnittserien zerlegte. Die immer notwendige Betäubung wurde nach RoussELET vorgenommen, indem dem die Tiere enthaltenden XXV, 1. Referate. 81 Wasser tropfenweise eine Mischung von 3 Teilen 2prozentiger Kokain- lösung, einem Teil 90prozentigem Alkohol und 6 Teilen Wasser so lange zugesetzt wurden, bis die Cilien zu schlagen aufhörten. Fixiert Avurden dann die betäubten Tiere in Sublimat-Alkohol oder in Sublimat allein. Immer muß aber vorher das Kokain erst kurz ausgewaschen werden, um Niederschläge zu vermeiden. Die Färbung geschah mit Borax- karmin, ferner nach Blockmaxn [moditizierte van GiEsoxsche Färbung] oder Malory [Safranin, Phosphormolybdänsäure, Anilinblau, Orange- Oxalsäure] oder schließlich mit Heidexhains Eisenhämatoxylin teils mit, teils ohne Nachfärbung. E. Schoebel (Neapel). KÖliler , A. , Untersuchungen über das 0 v a r i u m der Hemipteren (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 337— .381 m. 2 Tfln.). Die Ovarien wurden in physiologischer Kochsalzlösung heraus- präpariert und möglichst schnell in Hermanx scher Flüssigkeit fixiert. Brauchbare Resultate gab auch das Zenker sehe Gemisch. Eingebettet wurde im allgemeinen in Paraffin. Bei Objekten , die eine Orien- tierung wünschenswert erscheinen ließen, wurde dagegen Nelkenöl- kollodium verwandt. Um das Splittern des Dotters nach Möglichkeit zu vermeiden, wurde die Schnittdäche nach jedem Schnitt mit Mastix- lösung bepinselt. Als hinderlich beim Schneiden erwies sich fast ausschließlich der Dotter , nicht das Ohorion. Alle Versuche , den Dotter zu erweichen, blieben mehr oder weniger resultatlos. Gefärbt wurden die Schnitte meist mit Eisenhämatoxylin. Für die Chorion- bildung zeigte sich aber auch Färbung mit Thionin, Pikronigrosin, Safranin oder Pikrinsäure geeignet. E. Schoebel (Neapel). DUrken, B., Die Tracheenkiemenmuskulatur der Ephe- meriden unter Berücksichtigung der Morpho- logie des Insekten flügels (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 435—550 m. 30 Figg. u. 3 Tfln.). Der Versuch, Ephemeridenlarven im Aquarium aufzuziehen, war nur von geringem Erfolg begleitet. Es schlüpften wohl eine Reihe von Imagines resp. Subimagines aus, aber es gelang nicht, die Nymphen längere Zeit am Leben zu erhalten. Da der Transport der lebenden Nymphen wegen ihrer Empfindlichkeit große Schwierigkeiten bereitet, wurden die Tiere in der Regel am Fangort in SOprozentigem Alkohol abgetötet und in Alkohol oder schwacher Formollösung aufbewahrt. 'ö Das Absterben im Alkohol erfolgt sehr rasch. Für die anatomische Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 6 g2 Referate. XXV, 1. Untersuchung erwies sieb diese einfache Konservierungsmethotle als ausreichend, aber auch für einige gelegentliche, histologische Beob- achtungen war das Material brauchbar. Immer wurden die Unter- suchungen mit Beobachtungen des lebenden Objektes begonnen , um namentlich über die Bewegungsart der Tracheeukiemen Aufschluß zu erhalten. Zum Studium der Skelettverhältnisse wurden durch Mazerieren in 15- bis 20prozentiger Kalilauge von den in der Mediau- ebene halbierten Tieren Chitiupräparate hergestellt. Dabei ist große Vorsicht geboten ; namentlich ist Kochen in der Lauge zu vermeiden, ebenso alles Schütteln oder Anfassen mit Pinzetten usw. Die Ob- jekte müssen unter Umständen bis zu 14 Tagen in der Kalilauge belassen werden. Nach sorgfältigem Auswaschen wurden die Chitiu- skelette gefärbt und in Kanadabalsam eingeschlossen, w^obei das Deckglas derart gestützt wurde, daß die Objekte ihre natürliche Form nicht veränderten. Vom Abdomen brauchbare Chitinskelette herzustellen gelang nur bei Nymphen. Für die Untersuchung der Muskulatur kamen gefärbte und in Balsam eingeschlossene Halbpräparate des ganzen Objektes (Nymphe und Imago) zur Verwendung. Bei Nymphen waren des stark ge- füllten Darmes wegen aber nur wenig gute Präparate zu erzielen. Männliche Imagines lieferten wenigstens vom Thorax einigermaßen brauchbare Präparate, immer sind aber nur die gröbsten Muskelzüge festzustellen. Deshalb war . zum Studium des Muskelverlaufes auch die Schnittmethode unerläßlich. Für den Thorax sind Frontal- und Querschnitte zu empfehlen , für das Abdomen außerdem Sagittal- schnitte. Gute Schnitte sind aber nicht leicht zu erhalten, fast aus- geschlossen sind sie bei weiblichen Tieren, wegen der großen Anzahl der recht harten Eier. Im allgemeinen gelingen Längsschnitte besser -als Querschnitte. Zur genauen Feststellung der Muskelansätze dienten außerdem Rekonstruktionen des Meso- und Metathorax. Als Färbemittel kam bei Ganzpräparaten für Chitin und Musku- latur Pikrinsäure zur VerAvendung; ferner für Chitinpräparate noch Eosin und Triacidgemisch nach Ehrlich. Die Schnitte wurden mit Hämatoxylin - Pikrinsäure , Hämatoxylin - Eosin oder mit Triacid gefärbt. Zur anatomischen Untersuchung ist mäßige Überfärbung der Schnitte eher ein Vorteil als ein Nachteil. E. Schoebel (Neapel). XXV, 1. Referate. 83 Heiidersoii , W. D. , Zur Kenntnis der Spermatogenese von Dytiscus niarginalis L. , nebst einigen Be- merkungen über den Xucleolus (Zeitschr. f. wiss, Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 644—684 m. 5 Figg. u. 2 Tfln.). Für gute Präparate ist rasches Herauspräparieren der Geschlechts- organe , aber nicht unter physiologischer Kochsalzlösung , notwendig. Zur Fixierung ist außer Zenker scher Flüssigkeit vor allem das von Petrunkewitsch modifizierte GiLsoxsche Sublimatgemisch bei einer 24stündigen Einwirkung zu empfehlen. Eingebettet wurde in Paraffin, in welches nach der üblichen Behandlung mit Jodalkohol, den ver- schiedenen Alkoholen steigender Konzentration und Durchträukung mit Zederholzöl die Objekte direkt gebracht werden. Diese Methode hat den Vorteil, daß die Objekte nicht brüchig werden. Die zu schneidenden abdominalen Segmente wurden des Chitins wegen in folgender Weise behandelt : Sie wurden zuerst in üblicher Weise in Celloidin eingebettet und dann die Celloidinblöcke für 12 Stunden in TOprozentigen Alkohol, dann für 6 Stunden in 90prozentigen gebracht, schließlich je auf wenige Stunden der Reihe nach in ein Gemisch von ■^/g Origauumöl und ^/g 90prozentigen Alkohol, in reines Origanumöl, in ein Gemisch von -"-/g Xylol und '/o Origanumöl , in reines Xylol, in Xylol-Paraffin aa und schließlich in reines Paraffin. Zur Färbung wurde die HEioEXHAixsche Eisenhämatoxylin-Methode nach Vorbehand- lung mit Bordeaux- oder Kongorot angewandt oder Böhmer sches Hämatoxylin kombiniert teils mit Eosin, teils mit Pikrokarmin. Zur Kontrolle wurden noch Boraxkarmin- und Bleu de Lyon - Färbungen angefertigt und Hämatoxylin -Pikrokarmin -Präparate mit Eiseuhäma- toxylin umgefärbt. E. Schoehel {Neapel). Pesta, 0., Die Metamorphose von Mytilicola intesti- nalis Steuer (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 78 — 98 m. 1 Tfl.). Um die Parasiten aus dem Darm zu erhalten, empfiehlt es sich diesen zunächst zusammen mit der Leber aus der Muschel heraus- zuschneiden und in eine größere flache Glasschale mit Seewasser zu legen. Während dann die freiliegenden Darmteile leicht mit einer Schere aufgeschnitten werden können, erfordert die Leberregion sorg- fältiges Zerzupfen. Den nun leicht aufzufindenden Weibchen werden die Eisäcke abgeschnitten , diese in kleinere Glasaquarien gegeben und, gut zugedeckt, sich überlassen. Je nach dem Reifezustand der 6* 84 Referate. XXV, 1. Eisäcke kommen mehr oder minder rasch die ersten Larven an die Oberfläche, welche sich zufolge ihres positiven Heliotropismus an der dem Fenster zugekehrten Glasseite ansammeln. Spätere Entwicklungs- stadien verlieren den Heliotropismus und müssen dann einzeln aus dem Gefäß mit einer Pipette gefischt werden. Neben der unerläß- lichen Untersuchung der lebenden Objekte sind zum Studium auch fixierte Totalpräparate nötig. Sublimatfixierung mit erwärmter Lösung, Färbung mit stark verdünntem alkoholischen Hämatoxylin, Differen- zierung in Salzsäure -Alkohol, Überführung mittels der Senkmethode in Nelkenöl , Einschluß in Balsam , liefert solche in befriedigender Qualität. Bei der Untersuchung älterer Stadien empfiehlt sich für gewisse Zwecke, z. B. zur Feststellung von Segmentgrenzen und Borsten, die vorsichtige Behandlung der fixierten Objekte mit Kali- lauere. •o^ E. Sclioebel {Neapel). Philiptsclienko , J. , Beiträge zur Kenntnis der Aptery- goten. 1. Über die exkretorischen und phago- c y t ä r e n Organe von C t e n o 1 e p i s m a 1 i n e a t a F. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 99—116 m. 1 Tfl.). Zur Untersuchung der exkretorischen und phagocytären Organe wurden physiologische Injektionen mit ammoniakalischem Karmin, mit Tusche und mit Indigokarmin ausgeführt. Nach den beiden zuerst genannten Injektionssubstanzen wurde mit Sublimat-Essigsäure, nach der letzteren mit absolutem Alkohol fixiert. Zur Untersuchung des Fettkörpers wurde das Material nach Abtötung in kochendem Wasser mit Osmiumsäure fixiert. j^ Schoehel {Neapel). Stauffaclier, H., Zur Kenntnis der Phylloxera vastatrix (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 131—152 m. 5 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung findet Verf. Flüssigkeiten, die keinen Alkohol enthalten, ungeeignet, weil sie die Tiere nur schwer benetzen. Mit Vorteil wurde Apatiiys Sublimatalkohol (2prozentige Lösung von Sublimat in 40prozentigem Alkohol mit 5 Prozent Essigsäure) ver- wendet. Zur Färbung leistete Hämatoxylin gute Dienste. E. Schoehel {Neapel). XXV, 1. Referate. 85 Nowikoff, M., Über d i e R ü c k e n s i ii n e s o r g a n e der P 1 a c o - p h 0 r e 11 nebst einigen Bemerkungen über die Schale derselben (Zeitscbr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 154—186 m. 9 Figg. u. 2 THn.). Das in unbekannter Weise fixierte , dem Verf. zur Verfügung gestellte Material wurde zum Entkalken der Schale mehrere Tage mit einem Gemisch von Salpetersäure und TOprozentigem Alkohol (1 : 100) behandelt. Zur Difierenzierung der verschiedenartigen Zellen und zwischen Bindegewebs- und Nervenfasern wurde die MALLORYSche Färbung verwendet (vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 175), und zwar zweckmäßig kombiniert mit einer Boraxkarminvorfärbung. Zum Studium feinerer histologischer Details wurden die Objekte ent- weder mit Eisenhämatoxylin oder mit Osmiumsäure behandelt. E. Schoebel {Neapel). Hofsteil , N. Y. , Studien über TurbeUarien aus dem Bern er Oberland (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXV, 1907, p. 391—654 m. 8 Figg. u. 6 Tfln.). Zunächst wurden immer frische Quetsch -Präparate untersucht und Verf. hält bei gewissenhafter Anwendung diese Methode in den meisten Fällen zur sicheren Identifizierung der Arten uud zur Auf- stellung neuer Species für hinreichend. Zum genaueren Studium des anatomischen Baues wurde dann aber weiter die Schnittmethode heran- gezogen. Zum Fixieren benutzte Verf. ausschließlich heiße Sublimat- lösung, meist das sogen. Lang sehe Gemisch. [Verf. gibt nicht au, welche der von Lang angegebeneu Flüssigkeiten zur Verwendung kamen; zuerst empfahl Lang ein Gemisch von Wasser 100 cc, Koch- salz 6 bis 10 g, Essigsäure 6 bis 8 g, Sublimat 3 bis 12 g eventuell mit Zusatz von 0"5 g Alaun, später konzentrierte Lösung von Sublimat in Pikrinschwefelsäure , der 5 Prozent Essigsäure zugesetzt war.] Die Schnitte wurden entweder mit Ehrlichs Hämatoxylin uud Eosin oder mit Heidenhains Eisenhämatoxylin und Nachbehandlung in Eosin oder ausnahmsweise in Orange G, Fuchsin S oder Pikrinsäure tingiert. E. Schoebel (Neapel). Martini, E., Über Subcuticula und Seitenfelder einiger Nematoden II. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 1—54 m. 2 Figg. u. 3 Tfln.). Zur Untersuchung dienten Pseudalius minor aus Phocaena com- munis, Nematoxys ornatus uud Rhabditis nigrovenosa aus Rana. Die 86 Referate. XXV, 1. Embryonen von Pseudalius minor, die fast jedes "Weibchen in größerer Menge enthielt, ließen sich bei der Durchlässigkeit ihrer Eihüllen mit allen angewandten Fixierungsflüssigkeiten leicht und wohl auch ohne schädliche Veränderung der Struktur fixieren. Zur Fixierung wurden in erster Linie Sublimat, Sublimat-Essigsäure, ferner Sublimat- Osmium- säure, FLEMMiNGSche Mischuug, Pikrinessigsäure, endlich Goldchlorid verwendet. Auch in den in toto mit Sublimat oder Sublimat-Essig- säure fixierten Weibchen waren die Embrvonen gut erhalten. Zur Herstellung von Totalpräparaten wurden bei großen Nematoden der Uterus , bei kleinen die ganzen Tiere in einer Spur physiologischer Kochsalzlösung auf dem Deckgläschen möglichst fein zerzupft, die Fragmente gleichmäßig über das Gläschen verteilt und dasselbe dann , wenn an den Rändern des Präparates Eintrocknung sich eben zu zeigen beginnt, mit der Objektseite nach unten auf die Fixie- rungsflüssigkeit fallen gelassen. Es gerinnen dann genug Eiweiß- bestandteile, um die Mehrzahl, besonders die isoliert liegenden Em- bryonen am Glase zu befestigen. Diese Befestigung beweist sich auch bei der Überführung in öOprozentigen Alkohol als dauerhaft. Wie die Fixierung werden auch die weiteren Prozeduren, Färben usw. auf den betreffenden Flüssigkeiten vorgenommen. Erst das in Xylol aufgehellte Objekt kommt mit ein paar Haaren gestützt auf den mit Balsam versehenen Objektträger. Eine Anzahl Objekte gehen bei solcher Behandlung zwar zusammen mit abschwimmenden größeren Stücken von Leibeswaud oder Uterus verloren, was aber keinen Nach- teil, sondern für die Klarheit des Präparats geradezu einen Vorteil bedeutet. Man entfernt sogar am besten größere Gewebsteile noch absichtlich. Auf solche Weise hergestellten Präparaten fehlt natür- lich die Rollbarkeit der nach dem Boveri sehen Verfahren hergestellten, was aber bei den interessierenden Stadien der in Frage kommenden Untersuchung ohne wesentlichen Belang ist, da doch genügend Objekte in allen Stadien und in allen Orientierungen vorhanden sind. Selbst- verständlich läßt sich die Fixierung auch auf dem Objektträger vor- nehmen , indem man ihn mit der Ausstrichseite nach unten etwa 3 Minuten auf die Fixieruugsflüssigkeit hält, dann umdreht, vor- sichtig untertaucht und auf den Boden des Schälchens mit der Fixie- rungsflüssigkeit legt. Nach genügender Fixierung läßt sich dann der Objektträger wie ein mit Schnitten beklebter weiter behan- deln. Die Stütze des aufzulegenden Deckglases muß natürlich sehr dünn genommen werden, wenn man bei der Untersuchung starke Immersionssysteme benützen will. Vielfach können auch Trümmer XXV, 1. Referate. 87 des mlitterliclien Organismus den Schutz der Embryonen vor dem Druck des Deckglases besorgen. Die Hauptschwierigkeit, die Pseu- dalius minor bei der Untersuchung darbietet, ist die wenig aus- gesprochene Differenzierung der Kerne und Zellen für die einzelnen Organe, die sich besonders an Totalpräparaten geltend macht. Auch die Zellgrenzen sind kaum mit der wünschenswerten Deutlichkeit zur Anschauung zu bringen. Alaunkarminfärbung ließ aber wenigstens einiges erkennen. Zur Schnittfärbung kam außer Alaunkarmin Häm- alaun und Chlorgold zur Verwendung. So gute Resultate wie letztere Methode in bezug auf manche histologische Einzelheiten bei Schnitten durch erwachsene Nematoden gibt, so wenig befriedigen ihre Leistungen bei Embryonen, besonders wegen häufig auftretender ungemein stören- der Niederschläge. Die beste Schnittfärbung ergab entschieden Häm- alaun. Über die Technik bei der Untersuchung von Nematoxys ornatus ist nichts Besonderes zu erwähnen. Bei Rhabditis nigro- venosa gibt Sublimatfixierung und Hämalaunfärbung für Totalpräparate gute Resultate. Auf Schnitten zeigen mit Pikrinessigsäure fixierte Objekte die Zellgrenzen deutlich , oft aber die Kerne wenig gut. Sublimatfixierung gibt gute Kerne, aber sehr schlechte Zellgrenzen. Im allgemeinen stört bei der Untersuchung von Rhabditis nigrovenosa die schwer durchlässige Eihülle recht empfindlich. E. Schoebel {Neapel). Jaiiicki, C. T. , Über die Embryonalentwicklung von Taenia serrata Goeze (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 685—724 m. 3 Figg. u. 2 Tfln.). Die Untersuchungen wurden fast ausschließlich an Schnittpräpa- raten ausgeführt, da bei der Kleinheit der Eier und ihrer massenhaften Ansammhing in jedem Uterus genügend Garantie vorliegt, daß der so zu gewinnende Einblick in die Entwicklungsvorgänge ein voll- ständiger ist. Die besten Präparate gab Fixierung mit Flemming- scher Flüssigkeit und Färbung mit Delafields Hämatoxylin. E. Schoebel {Neapel). Eisler, E., Deckel und Brutpflege bei Spirorbis (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 603 — 643 m. 13 Figg. u. 1 Tfl.). Die Untersuchung wurde im wesentlichen teils am lebenden Objekt , teils an Totalpräparaten , die mit Hämatein , Boraxkarmin oder Alaunkarmin tiugiert waren, angestellt, in beiden Fällen nach 88 Referate. XXV, 1. Entfernung der Wohnröhre. Teilweise wurden auch die kalkigeu Teile des Operculums entfernt , und zwar am besten dadurch , daß die Objekte in FLEMMixGScher Chrom - Osmium - Essigsäure fixiert wnirden, wobei gleichzeitig eine genügende Eutkalkung erhalten wird. Ergänzt wurden diese Beobachtungen an Schnittpräparaten von Osmiummaterial. Wenu der Deckel viel Kalk enthielt, mußte iu Flemmixg scher Flüssigkeit entkalkt werden. Gefärbt wurden die Schnitte mit Eosin oder mit Heidenhains Eisenhämatoxylin. E. Schoebel {Neapel). B. Wirheitiere. Loewit, 31., Über die Membran und die Innenkörper der S ä u g e t i e r e r y t h r 0 c y t e n. Ein Beitrag zur Entstehung und zum Untergange der roten Blut- körperchen (Beitr. zur pathol. Anat. und zur allgem. Pathol. Bd. XLII, 1907, H. 3, p. 559—605 m. 1 Tfl.). Verf. macht auf eine einfache Färbungsmethode aufmerksam, die am fixierten Blute von Säugetieren und Menschen die Darstellung der Erythrocytenmembrau , seiner Ansicht nach, in unzweifelhafter Weise gestattet. Die gut ausgestrichenen und lufttrockenen Präpa- rate kommen möglichst frisch (einige Wochen alte, lufttrockene Präpa- rate ergeben bei nachträglicher Färbung im Vergleiche mit frischen weniger gute, manchmal sogar ausbleibende Membranfärbungen) so- fort in eine methylalkoholische Farblösung; es kann zur Darstellung der Membran sowohl Orange G, Säurefuchsin, wie auch Aurantia verwendet werden, während Eosin (extra B. A. Höchst) sich für diesen Zweck als unbrauchbar erwies. Eine vorhergehende Erwärmung des Präparates ist überflüssig und sogar schädlich, indessen kann das lufttrockene Präparat immerhin zwei- bis dreimal durch den unteren, weniger warmen Teil der Bunseuflamme ohne jede Beein- trächtigung hindurchgezogen Averden. Dagegen genügt ein drei bis viermaliges Durchziehen des lufttrockenen Präparates durch die Spitze der Bunseuflamme , um die nachträgliche histologische Darstellung der Membran unmöglich zu macheu. Die methylalkoholische Farb- lösung bestand stets aus 0*5 g des Farbstoffes auf 90 cc Methyl- alkohol; am meisten zu empfehlen sind Fuchsin S und Orange G. Aurantia gibt leicht Veranlassung zu Fällungen und Netzbildungen XXV, 1. Referate. 89 in den roten Blutkörperchen, Orange nur sehr selten. Dieser letztere Farbstoff ergibt, bei nachträglicher Färbung mit Toluidinblau , sehr dunkle und klare Membranfärbungen. P^uchsin S begünstigt die Membranfärbung schon in stark verdünntem Zustande : 2 Tropfen einer solchen Lösung als Zusatz zu 0*5 cc einer methylalkoholischen Eosinlösung genügen zur nachträglichen Darstellung der Erythrocyten- membran, während die Eosinlösung allein unwirksam ist. In der jeweilig verwendeten methylalkoholischen Farblösung verbleibt das Präparat 4 bis 8 Minuten und wird dann sofort in fließenden Methyl- alkohol rasch, aber gründlich abgespült uud zwischen Filtrierpapier getrocknet. In diesen sauren Farblösungen tritt eine Membranfärbung an den roten Blutkörperchen nicht ein, die Vorfärbung ist aber not- wendig, damit bei der nachträglichen Behandlung mit den basischen Farben die Membran hervortritt. Als basische Farbstoffe eignen sich sehr gut: Toluidinblau (chlorzinkfrei, Grübler) oder Thionin (Mühl- heim) oder Methylenblau (Puriss. medic. Höchst), alle in einprozen- tiger, wässeriger Lösung. Auf die wässerige Farblösung werden die vollständig getrockneten, vorgefärbten Deckgläschen mit der Schicht- seite nach unten gelegt und verbleiben auf der Lösung schwimmend 3 bis 5 Sekunden, Hierauf möglichst schnelles und kurzes Abspülen in Leitungswasser, ebenso schnelles Trocknen zwischen Fließpapier, Einschluß in Balsam. Eine etwas länger dauernde Wassereinwirkung schädigt die Darstellung der Erythrocytenmembran; Verf. verfährt daher in der Regel so, daß die aus der basischen Farblösung ent- nommenen Deckgläschen sofort zwischen Fließpapier völlig abgetrocknet werden und dann erst in einer bereitstehenden Schale mit Wasser mehrere Male abgeschwenkt und von neuem zwischen Fließpapier abgetrocknet werden. Auf diese Weise kann man völlig klare und von Farbstoffniederschlägeu freie Präparate erhalten. Schiefferdeeker {Bonn). Pollitzer, H., Beiträge zur Morphologie und Biologie der neutrophilen Leukocyten (Zeitschr. für Heilk. Bd. XXVIII, 1907, H. 10, p. 239—295 m. 1 Tfl.]. Verf. hebt hervor, daß bei hämatologischen Untersuchungen die Technik eine hervorragende Rolle spielt, da alle feineren analytischen Criterieu in einem mangelhaft angefertigten Blutpräparate versagen. Es scheint indessen, daß der Wert dieser Technik besonders seitens der Histo- logen unterschätzt wird. Verf. ist der Ansicht, daß die Koch-Ehrlich sehe Technik des Strichpräparates nur in jahrelanger täglicher Übung an 90 ■ Referate. XXY, 1. normalen und pathologischen Objekten erlangt werden kann. Die Behandlung , die ein normales Blut erfordert , ist eine ganz andere als jene, die das eingedickte Blut eines fiebernden Pneumonikers oder das wasserdünne einer schweren Anämie verlangt. Hat man einmal seine Technik allen Anforderungen, die die wechselnde Beschaffen- heit des Blutes stellt , angepaßt , dann gelingt es , abgesehen von extremen Fällen, stets, Präparate herzustellen, in denen die Zellen in sehr vollkommener Weise konserviert sind. Auch in wohlkonser- vierten Präparaten finden sich am Rande stets eine Anzahl von mechanisch geschädigten Zellen. Nach Verf. ist die gut ausgeführte Technik des Strichpräparates jeder anderen histologischen Konser- vierungs- und Präparationsmethode ebenbürtig. Verf. verspricht dann eingehender die Vorgänge bei der Anfertigung des Strichpräparates. Er hat im Wesentlichen mit der LsiSHMANSchen Modifikation der RoMANOwsKvmethode gefärbt. Sie erlaubt eine Kernfärbung, die dem Hämatoxylin an Feinheit und Klarheit nichts nachgibt, an Kraft und Mannigfaltigkeit der Töne überlegen erscheint. Gleichzeitig färbt sie sämtliche Granulationen, das Protoplasma in einer vom Kerne ditferenten Farbe , so daß sie im ganzen als eine sehr vollkommene Methode zu bezeichnen ist. Trotzdem wird sie nicht recht anerkannt. Die Ursache des Mißlingeus von Leishman sehen Präparaten wird meist an falscher Stelle , namentlich in der Farblösung , vermutet. Wenn eine Lösung , die mit tadellos reinem , vorher destilliertem Methyl- alkohol hergestellt ist, und die während der Bereitung nur mit voll- kommen reinem Materiale in Berührung gekommen ist, schlechte Resultate gibt , so liegt das nie an der Lösung , sondern immer an anderen Ursachen. Verf. verwendet seine Lösungen Monate lang, ohne daß ihre Güte sich ändert. An jenen schlechten Präparaten, in denen die Erythrocyten grau gefärbt sind. Kerne und Protoplasma überfärbt, ist immer das destillierte Wasser schuld. Das sogenannte destillierte Wasser ist oft nichts weniger als chemisch rein. Es sind fast immer Verunreinigungen alkalischen oder saueren Charakters vorhanden. Beide können schon in minimalen Spuren die Färbungs- resultate vollkommen verderben. Die Folge von sauren Verunreinig- ungen ist die Zerstörung des Azurfarbstoftes, sodaß die Präparate beim Abspülen sehr rasch eosinrot werden, in Wirklichkeit aber dann nur eine schlechte Eosin-Methylenblaufärbung zeigen. Sehr hübsch sieht man diese Vorgänge an gut gelungenen Präparaten, auf die während des Ausstreichens einige Staubkörnchen gefallen sind. Fast jedes dieser Stäubchen umgibt ein Hof von mißgefärbten XXV, 1. Referate. 91 Zellen: bald ein graiier Alkalihof, bald ein Säurehof, in dem die Kerne blaßblau statt violett sind und die neutrophilen Granulationen eosinrot. Selbst wenn das destillierte Wasser ursprünglich voll- kommen rein war, wird es beim Stehen im gut verschlossenen Glas- gefäße innerhalb weniger Tage unweigerlich schlecht. Soweit sich das auf alkalische Verunreinigungen bezieht, trägt die Hauptschuld wohl die Glasflasche als solche. Aber wenn man auch zur Aufbewahrung Flaschen aus Jeuenser Gerätglas verwendet, die Flasche mit einem tadellos reinen Stopfen verschließt , der nie mit etwas anderem in Berührung gekommen ist, leidet die Güte des Wassers schon nach wenigen Tagen. Will man stets vollkommene Präparate er- zielen, dann muß man einen Destillierapparat im hämatologischen Laboratorium aufstellen und sich bei täglichen Arbeiten am besten täglich frisches destilliertes Wasser herstellen. Der Kühler des Apparates soll wie die Auffangflasche aus Jenenser Glas bestehen. Sämtliche Geräte, mit denen FarbstoÖ", Präparate und Wasser in Berührung kommen, dürfen nie zu anderen Zwecken verwendet werden. Mit solchem Wasser erhält man unter jeder Bedingung tadellose Präparate. Doch darf man selbst mit ihm nicht schematisch verfahren. Es gibt auch hier noch Ausstriche, die sich schwer und solche, die sich leicht diff"erenzieren. Ist das Wasser absolut rein, dann kann man das Präparat ruhig so lange darin abspülen, bis es makroskopisch einen schönen Eosinton angenommen hat, selbst wenn das minutenlang dauern sollte. In diesem Falle tut man aber besser, schon im zweiten Akte die Färbung in zur Hälfte verdünnter Lösung anstatt zwei Minuten etwa fünf Minuten lang vorzunehmen. Als Ursache dieser auch dem Verf. immer noch rätselhaften Schwankungen, die eine und dieselbe Farblösung heute zeigt und morgen vermissen läßt, möchte er fast die verschiedene Alkaleszenz des Blutes an- sehen. Er bemerkt allerdings noch, daß er in einem chemischen Laboratorium arbeite , in dessen Luft wohl mannigfaltige Dämpfe enthalten sind. Nur wo diese feinen Bedingungen nicht zu erfüllen sind, ist die JENNERSche Färbung als weit unempfindlicher vorzu- ziehen. — Verf. erwähnt hierbei eine Deckglasmarkierungs- methode, die ihm gute Dienste geleistet hat. Die Schattenseiten der Noniusmarkierung, bei der man bei Arbeiten, die sich über längere Zeit erstrecken, nie weiß, ob sich das Deckglas nicht unter- dessen verschoben hat, machten das Suchen einer anderen Methode nötig. Die Firma Zeiss verkauft einen Deckglasmarkierungsapparat in Form eines gefederten Linsentubus. Zur Markierung soll eine beigegebene 92 Referate, XX Y, 1. Flüßigkeit dienen, die aber weder an Metall noch an Glas haftet. Verf. empfiehlt das Folgende: Man bereite sich aus Vaseline und der Sub- stanz eines Glasfarbstiftes durch Verreiben eine dicke Paste, diese trägt man auf das Farbpolster auf, daß sich in dem Zeiss sehen Etui be- findet. Sie hält sich über ein Jahr lang unverändert. Will man markieren, so schraubt man an den Revolver den Apparat an, dessen Spitze mittels eines kurz gestutzten Pinsels mit etwas Paste bestrichen ist. Arbeitet man mit einem Trockensysteme, dann kann man so in kürzester Zeit durch Umschalten eine beliebige Anzahl von Zellen mit roten Ringen, die zentriert sind, umgeben. Später umzieht man alle mit Tintenringen imd spült mit Xylol darüber, wobei die Paste von selbst wegfließt. Tintenringe sind gegen jedes Abwaschen wider- standsfähig. Schi e ff er (lecker {Bonn). Stamer, A., Untersuchungen über die Fragmentation und Segmentation des Herzmuskels (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XLII, 1907, H. 2, p. 310—353 m. 2 Tflu). Es wurden 84 Herzen erwachsener Menschen untersucht. Die nötigen Manipulationen wurden möglichst schonend ausgeführt, da es nicht unmöglich war, daß solche durch Erzeugung von Artefakten oder durch Modifizierung des histologischen Bildes der wirklichen Fragmentation Einfluß ausübten. Betreff"en die Untersuchungen auf- geschnittene Herzen, so läßt der Einfluß der Manipulation sich nicht völlig ausschließen. Einzelne Herzen wurden deshalb unaufgeschnitten herausgenommen und sofort in lOprozentiger Formollösung fixiert. Die meisten aufgeschnittenen Herzen wurden in toto in derselben Lösung fixiert. Nach 2 bis 3 Tagen wurden die Herzen dann eine Stunde lang in fließendem Wasser ausgewaschen, dann wurden mit einem scharfen Messer, möglichst parallel zum Verlaufe der Fasern, Stückchen ausgeschnitten, die teils zu Gefrierschnitten ver- wandt, teils in steigendem Alkohol entwässert, in Xylol aufgehellt und in Paraffin eingebettet wurden; nur ganz vereinzelte Stückchen wurden in Celloidiu eingebettet. Wenigstens wurden vom jedem Herzen untersucht: Stückchen beider Mitralpapillarmuskeln , zwei Stückchen aus "der Wandung des linken Ventrikels, zwei Stückchen aus den verschiedenen Seiten des Septum, zwei aus der Wand des rechten Ventrikels und ein bis zwei Tricuspidalpapillarmuskeln. Kam es besonders daraut an, das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein der Fragmentation festzustellen, so wurden sehr viele Stückchen unter- XXV, 1. Referate. 93 sucht. Bei acht Herzen benutzte Verf. die von Sainton und Katt- wiNCKEL ^ zur Untersuchung- des Zentrahiervensystems verwandte und von Faber und Bloch" beim Magendarmkanal angewandte Methode: die Herzen wurden unmittelbar (etwa eine Viertelstunde) nach dem Tode des Patienten durch Injektion von lOprozentiger Formollösung in die Perikardialhöhle gehärtet. Bei der Sektion wurden dieselben dann in toto gehärtet und in der obigen Weise untersucht. Durch diese Technik wurde die Einwirkung der Fäulnis und die der Mani- pulationen ausgeschlossen. Außer den Herzen der Erwachsenen wurden einzelne Herzen von ein bis zehnjährigen Kindern und 20 Herzen von Neugeborenen, die während oder kurz nach der Geburt starben, wie auch Herzen von macerierten Embryonen untersucht. Ferner die Herzen von 16 Hunden verschiedener Größe und verschiedenen Alters, die unmittelbar nach der Tötung der Tiere durch Chloroform herausgenommen und in toto in lOprozentigem Formol fixiert wurden. Zur Untersuchung auf Fett wurde die Färbung von Gefrierschniten nach Formolhärtung mit Sudan und Scharlach wie auch die Methode von Marchi benutzt. Einige der Paraffinpräparate wurden nach den üblichen Methoden gefärbt: Hämatoxylinfärbung nebst Hansens Binde- gewebsfärbung oder Eosinfärbung; unter deuHämatoxylinen erwies sich das Eisentrioxyhämatein von Hansen^ als das brauchbarste. Verf. be- nutzte dieses fast ausschließlich zur Normalfärbung, entweder allein oder zusammen mit Hansens Biudegewebsfärbung: Es hebt ebenso vortreiflich die Kittlinienstruktur wie die Querstreifung hervor. Zu feineren Untersuchungen wurden die Eisenhämatoxylinmethode von Benda-Heidenhain mit Eosinfärbung, Ehrlich s Triacidfärbung und die Hfidenhain sehen Neutralfärbungen benutzt. Auch die LEiSHMAN-Färbung ergab schöne Kittlinienstrukturen und schöne Querstreifen. Ferner ver- wendete Veri^ die Methode von Kolossow^: Fixierung und Impräg- nierung frischen Gewebes mit Osmiumsäure undPieduktion der Letzteren im Stücke durch Tannin-Pyrogallussäure. Verf. wendete sowohl Impräg- nierung von Stückchen als auch Färbung aufgeklebter, in anderer Weise gehärteter Schnitte an. Diese Methoden liefern schärfere Bilder als das Eisentrioxyhämatein, wendet man aber Imprägnierung der Stückchen an, so erhält man leicht Kunstprodukte wegen des Sprödewerdens des Gewebes. Verf. ist der Meinung, daß man bei richtiger An- 1) Deutsch. Arch. f. klin. Med. 1898. 2) Nord. med. Archiv 1899. ») Diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 45—90. ^) Diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. 38—43 u. p. 316—320. 94 Referate. XXV, 1. Wendung des Eisentrioxj^liämateiins die meisten Strukturen des Herz- muskels deutlich darstellen kann, wenigstens ist man im stände, an so gefärbten Präparaten mit Leichtigkeit die Bilder wieder zu linden, welche die KoLOSSOw-Präparate darbieten. Es wurden Schnitte von 6 bis 10 [Ji Dicke hergestellt. Am Ende der Arbeit bespricht Verf. eingehend die Bildung von Artefakten durch die Schneide- oder Zer- zupfungsmethode etc. Es wird dieserhalb auf das Original verwiesen. Schiefferdecker {Bonn). Terzär , F. , Über die Anordnung der glatten Muskel- zellen im Amnion des Hühnchens (Intern. Monats- schr. f. Anat. u. Physiol. Bd. XXIV, 1907, H. 7—9, p. 292 —303 m. 1 Tfl.). Als Fixierungstlüssigkeit benutzte Verf. ein von v. Lenhossek angegebenes Gemisch, das bei der Fixierung von Hühnerembryonen ausgezeichnete Dienste leistet: Gesättigte Sublimatlösung 75 cc Acid. acet. concentratum 5 „ Alkohol, öOprozentiger 25 „ Pikrinsäure bis zur Sättigung. Anwendungsdauer 10 bis 30 Minuten. Die Zellgrenzen des Epithels (ektodermales Plattenepithel) treten an Eisenhämatoxylinpräparaten, besonders nach kurzer Ditferenzierung, sehr schön hervor. Nach Färbung mit Hämatoxylin und Eosin zeigen sich in der Muskelschicht des Amnion ziemlich lange, spindelförmige, anscheinend selbständige glatte Muskelzellen, nach Eisenhämatoxylin sind die Grenzen der Muskelzellen weniger ausgesprochen , eigent- liche Grenzen sind überhaupt nicht zu sehen , dagegen zeigen sich eine Menge von Myofibrillen. Schiefferdecker {Bonn). Takayasu , R. , t'ber die Beziehungen zwischen anato- mischen Glomerulusveränderungen und Nie- re n f u n k t i o n bei experimentellen N e p h r i t i d e n. (Deutsches Arch. f. klin. Med. Bd. XCII, 1907, H. 1, 2, p. 126—153 m. 1 TU.). Die Nieren der Tiere wurden sofort nach der Funktionsprüfung in Längsscheiben geschnitten und in Formol-MüLLER, in konzentrierter Sublimatlösung, in kochendem Wasser (Posner) oder absolutem Alkohol (Ribbert) und in Flejiming scher Lösung gehärtet. Von jeder Niere wurde eine Anzahl von großen Schnitten, welche die ganze Längs- XXV, 1. Referate. 95 schnittriäclie der Niere umfaßten, angefertigt. Stets Celloidineiubet- tung. Zur Färbung diente meist die Methode von vax Gieson, ferner Eisenhämatoxylin nach Heidexhaix, Toluidiublau, Safrauin, Phosphor- raolydänsäure nach Mallory. Verf. bestimmte dann die Anzahl der Glomeruli, die anatomisch verändert waren, in mehreren der großen Längsschnitte, und nahm daraus das Mittel. Die Glomeruli wurden in möglichst dünnen Schnitten (8 bis 10 jM) mit Immersion untersucht. Es war dabei trotz aller Bemühung nicht möglich, immer scharf zwischen Endothelien und Epithelien zu unterscheiden. Schiefferdecker {Bonn). Standf iiß , R. , V e r g 1 e i c li e u d - h i s 1 0 1 0 g i s c h e Studien an den MALPiGHischen Körperchen der Niere der "Wirbeltiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1907, p. 116—128 m. 1 Tfl.). Zur Untersuchung dienten meist weiße Mäuse, die nach Tötung mittels Chloroform von der Aorta aus mit Berlinerblau injiziert wurden. Zu der dann folgenden Fixierung und Härtung kam Formol oder MüLLERSche Flüssigkeit zur Verwendung. Die Einbettung erfolgte fast immer in Celloidin und diei Färbung mit Hämatoxylin kombiniert mit Eosin oder der van Gieson sehen Methode. E. Schoebel {Neapel). Letulle, M., et Larrier, N., Contribution a l'histopatho- logie generale de la glande hepatique. Les capillieules biliaires intra-trabeculaires (Journ. de Physiol. et de Pathol. gen. t. IX, 1907, uo. 4, p. 653 —663 av, 6 figg. et 1 pl.). Verf. hebt hervor, daß die Hämatoxylin-Eisenalaun-Färbmig von Heidenhain die elegantesten Bilder zur Darstellung der Gallenkapil- laren ergab. Es genügt, den Schnitt einige Stunden in der 2pro- zentigen Eisenalaunlösung liegen zu lassen ; ihn dann einen Augen- blick in "Wasser zu bringen; ihn dann in die Heidenhain sehe Hämatoxyliulösung zu übertragen ; ihn mit einigen Tropfen der Eisen- alaunlösung zu behandeln , bis er unter dem Mikroskope eine grau- blaue Färbung angenommen hat ; ihn dann sorgfältig auszuwaschen und schließlich, wie üblich, in absoluten Alkohol, Bergamottöl, Xj^lol, Zedernholzöl zu übertragen. Das Eosin in stärkerer Verdünnung ergibt nach Kernfärbuug mit saurer Hämalaunlösung bei 24stündiger Einwirkung ebenfalls oft sehr schöne Präparate der Gallenkapilkren. Schiefferdecker {Bonn). 96 Referate. XXV, 1. Lane, M. A. , The Cytologie al cliar acters oftlie areas of Langerhans (The Americ. Journ. of Anat. vol. YII, 1907, no. 3, p. 409—422 w. 1 pL). Unter den vielen Fixierungsflüssigkeiten und Färbeflüssigkeiten, die Verf. versucht hat, zeichneten sich drei von den ersteren und eine von den letzteren durch ihre Brauchbarkeit aus. Fixierungsflüssig- keiten: 1) Alkoholisches Chrom- Sublimat, bestehend aus gleichen Teilen einer 3*5prozentigen Lösung von Kaliumbichro- mat in Wasser und einer gesättigten Lösung von Sublimat in 95pro- zentigem Alkohol. 2) 70 prozentiger Alkohol. 3) Wässeriges Chrom-Sublimat: Müller sehe Flüssigkeit mit Zusatz von 5 Pro- zent Sublimat. Sehr kleine Stückchen des Pankreas (am besten von dem Milzende) werden dem lebenden Tiere entnommen und schnell in eine reichliche Menge der Fixierungsflüssigkeit übertragen. Für kleine Stücke genügen, bei einmaligem Flüssigkeitsweehsel, 2 Stunden bei der alkoholischen Chrom-Sublimatmischung. Für den 70prozentigen Alkohol genügen 24 Stunden, für die wässerige Chrom- Sublimat- Mischung 3 bis 4 Stunden. Von größter Wichtigkeit ist es, daß Essigsäure sorgfältig vermieden wird, da dieselbe schon in geringer Menge schwer schädigend wirkt. Nach der Fixierung Härtung in steigendem Alkohol , Aufhellen in Bergamottöl und Einbettung in Paraffin. Aufkleben der 3 bis 5 /t dicken Schnitte mit Wasser auf den Objektträger. Färbung mit dem neutralen Gentianaviolett I von Bensley : Zu einer gesättigten wässerigen Lösung von Gentiana- violett setzt man eine gesättigte wässerige Lösung von Orange G, der saure Farbstoff schlägt den basischen nieder; man filtriert und wäscht den Niederschlag aus und trocknet ihn, worauf er in 25 oder 30 cc absoluten Alkohols gelöst wird. Zur Färbung setzt man von dieser Stammlösung zu 20prozentigem Alkohol soviel zu, daß die Lösung dunkel violett aussieht. In dieser färbt man 25 Stunden lang, trocknet die Schnitte mit dickem Fließpapier schnell und gründlich ab oder mit mehreren Lagen Filtrierpapier , die aufeinander liegen. Differenzieren kann man auf zwei Arten : Bei der ersten übergießt man unmittelbar nach dem Abtrocknen den Objektträger mit abso- lutem Alkohol mittels eines Tropfglases, um den Überschuß der Farbe zu lösen, saugt den Alkohol schnell mit Fließpapier ab und bedeckt die Schnitte sofort mit Nelkenöl. Die Difl'erenzierung wird dann unter dem Mikroskope weiter verfolgt , bis die Zymogenkörner in den Drüsenzellen scharf hervortreten aus dem Cytoplasma , das bei dieser Methode den brauugelben Farbenton des Orange G annimmt. XXV, 1. Referate. 97 Bei der zweiten Methode werden die Schnitte schnell abgetrocknet, wie oben, und die Difterenzierung wird ausgeführt mit Aceton (Di- methylketon). Die Schnitte werden mittels eines Tropfglases mit Aceton beträufelt, schnell unter das Mikroskop gebracht, und, wenn die Zymogenkörner hervortreten, wie oben, wird der Objektträger in Xylol gelegt. Dieses letztere wird auch angewendet zur Aufhellung der durch Alkohol dift'erenzierten Schnitte. Dann Aufheben in Kanada- balsam. Scliiefferdecker {Bonn). PeiTOneito, A., Die Regeneration der Nerven (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol., Bd. XLII, 1907, PI, 2, p. 354—446 m. 6 Tfln). Verf. hat nach vorheriger Fixierung in Osmiumlösung (Flemming, GoLGi) die üblichen Färbungsmethoden im weitesten Umfange benutzt; auch die GoLGi-Silberreaktion leistete, namentlich zur Kontrolle, gute Dienste. Als ganz besonders geeignet erwies sich die ÜAjALsche Methode. Von besonderem Vorteile beim Studium des Regenerations- prozesses ist die Modifikation von Veratti: diese gestattet das Ge- webe aufzuhellen und nach den verschiedenartigsten Methoden zu färben, ohne hierbei die charakteristische schwarze Färbung der Nerven zu zerstören, so daß die Verhältnisse dieser Letzteren sich recht gut zur Anschauung bringen lassen. Die Objekte wurden so- wohl in Zupfpräparaten, wie auch in Schnittserien untersucht. Scliiefferdecker {Bonn) . Petersen, 0. Y. C. E., Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Vesicula semin alis des Menschen und einiger Säugetiere (Anatom. Hefte, H. 103 [Bd. XXXIV, H. 2], 1907, p. 239—362 m. 11 Tfln.). Das menschliche Material wurde zum größten Teile in wässe- rigen Formollösungen von verschiedener Stärke fixiert. Bei den gewöhnlich benutzten Formoliujektionen in die Bauchhöhle gelingt es nicht , die Samenblasen in hinlänglich kurzer Zeit zu fixieren ; selbst bei Sektionen, die 24 Stunden nach dem Tode unternommen werden, kann man sie uufixiert antretfen, obgleich sonst alle mit Peritoneum bekleideten Organe gut fixiert sind (makroskopisch be- trachtet). Der Grund ist die tiefe Lage im Becken. Verf. ver- wendete daher die folgende Methode: Ein 14 cm langer Trokart wird durch das Rectum eingeführt und durch die vordere Wand dieses durchgestochen in den Bindegewebsraum zwischen den beiden Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 7 98 Referate. XXV, 1. Vesiculae semiuales ; durcb diesen hindurch kann man mit Leichtig- keit 50 bis 75 CO injizieren. Nachdem man die Kanüle heraus- genommen hat, füllt man die Blase durch einen Katheter mit 150 cc Fixationsflüssigkeit (um den Penis wird eine Ligatur gelegt) , und eine ähnliche Menge wird durch eine oder mehrere Punkturöftuungeu in der Bauchwand in die Peritonealhöhle eingeführt. Bei dieser Methode wurden sowohl die Därme als auch alle Organe des Beckens vorzüglich fixiert. Der Grund , weshalb Verf. Formol verwandte, war der , daß das Organ in situ fixiert werden mußte ; es mußte außerdem ein Stoff sein, der sich schnell über größere Strecken verbreitete, da die Vesiculae seminales außerordentlich schnell faulen. Verf. hebt dann die Nachteile der mit Formol erzielten Fixierung hervor. Obgleich das Formol soviel gerühmt worden ist, besitzt es doch wesentliche Nachteile. In lebenden Organen , die Muskulatur enthalten, wird eine maximale Kontraktion der letzteren hervorgerufen. Es ist dies besonders ungünstig für den Darm. Die histologischen Wirkungen des Formols sind sehr verschieden , je nachdem man schwächere oder stärkere Lösungen benutzt. Dieses gilt besonders für Epithelien und Bindegewebe. Während man bei einer schwachen, 4 bis 5 Prozent Formaldehyd enthaltenden Lösung die Epithelien angeschwollen findet, erhält man durch eine starke Lösung von 10 bis 20 Prozent Formaldehydgehalt eine so gute Fixierung, daß diese mit der Osmiumsäurefixierung verglichen werden kann. Verf. hat daher zu seinen Leicheninjektionen auch eine 20prozentige wässerige Formaldehydlösuug verwendet. Das Bindegewebe läßt sich dagegen besser in schwächerer Lösung fixieren, da es in der stärkeren sehr hart, fast hornartig wird. Die in Formol fixierten Orgaue sollen nicht in Wasser ausgespült werden, sondern sofort in 96prozentigen Alkohol kommen, da die Wasserbehandlung oft den Zellinhalt aus- wäscht oder auflöst. Bei den Samenblasen von Säugetieren , bei denen ja ein beliebiges Fixierungsmittel genommen werden konnte, ergab eine gesättigte wässerige Sublimatlösung die besten Resultate : sie läßt allerdings die Zellen etwas einschrumpfen, doch werden die Protoplasmastrukturen besonders gut konserviert. Ein großer Teil des menschlichen Materials wurde mit Parakarmin durchgefärbt und in 10 fi dicke Serienschnitte zerlegt. Sonst wurden zu Schnitt- färbungen die gewöhnlichen Kernfärbungsmittel verwendet , Häma- toxylin, Eisenhämatoxylin, Thionin und Toluidinblau in einprozeutiger wässeriger Lösung, Mucikarmin, Säurefuchsin-Pikriusäure (Haxsen) und das Hansen sehe Eisen- und Chromhämatein. Diese beiden letzten XXV, 1. Referate. 99 Methoden erleichterten dem Verf. die Arbeit bedeutend, teils wegen ihrer schnellen Wirkung , teils , und zwar namentlich , wegen der Sicherheit , mit der man imstande ist , das Intensitätsverhältnis zwi- schen der Kern- und der Plasmafärbung zu variieren , indem man die Farblösungen ein wenig modifiziert (wie von Hansex angegeben). Endlich ist sehr wichtig die Widerstandsfähigkeit dieser Färbungen gegen sauere Nachfärbungen. Verf. empfiehlt da besonders die Kom- bination Chromhämatein-Eosin : vorzügliche Färbung der Plasma- und der Kernstruktur. Noch distinkter färbt Chromhämatein-Säurerubin; diese Färbung läßt sich in folgender Weise leicht ausführen. Nach der Färbung mit Chromhämatein spült man ganz kurze Zeit (wenige Sekunden) lang in destilliertem Wasser aus und färbt 2 bis 5 Mi- nuten lang in einer Lösung von Säurerubin von 0'25 auf 250 cc Wasser. Nach der Färbung kommt das Objekt direkt in 96prozen- tigen Alkohol usw. Es scheint, daß die geringe in der Chromhämatein- lösung befindliche Menge von Schwefelsäure bei kurzem Abspülen in destilliertem Wasser im Schnitte zurückbleibt und diesen hierdurch gegen die nachfolgende Säurerubinfärbung „beizt" ; spült man da- gegen lange in gewöhnlichem Wasser ab , so kann man 30 bis 45 Minuten mit Säurerubin färben , ehe die Färbung gelingt , was wahrscheinlich darauf beruht, daß der Schnitt aus dem Wasser Alkali aufgenommen hat und das Säurerubin verträgt eine alkalische Reak- tion schlecht. Außer zur Protoplasmafärbung empfiehlt Verf diese Doppelfärbung auch zur Untersuchung der quergestreiften Muskula- tur: mit keiner anderen Methode werden die verschiedenen Elemente der Muskelfasern so schnell und so deutlich gefärbt, wie mit dieser. Nach Hansen ist das Eisenhämatein mehrere Monate lang haltbar; Verf. fand nach 5 Monaten die Färbefähigkeit noch vollkommen, wie am ersten Tage ; man darf indessen die Lösung nicht von Tag zu Tag in offenen Farbschälchen stehen lassen, da sie , selbst wenn man sie mit einem Glase bedeckt, dann von der Luft oxydiert wird und die von Hansen beschriebenen höheren Oxydationsgrade annimmt. Ein weiterer sehr wesentlicher Vorteil ist der, daß man durch diese Farben schnell ein haltbares Präparat herstellen kann , das sich, wenn man mit fokusdiflTerenzfreien Linsen arbeitet, auf gewöhnlichen photographischen Platten ohne Farbenfilter mikrophotographieren läßt. Die durch das Chromhämatein erzeugte Färbung ist, wie Verf. durch Mikrospektroskopie nachweisen konnte , nur für rote , grünblaue und blaue Strahlen durchlässig, und der blaue Teil des Spektrums war um so dunkler, je dichter die Färbung wurde ; der Grund, weshalb 7* 100 Referate. XXV, 1. man in Chromhämatein gefärbte Objekte auf die angegebene Weise photographieren kann, ist also der, daß die Farbe zu dicht ist, um Licht durchzulassen , man würde es ja sonst nicht recht verstehen können, daß eine blaue Farbe beim Photographieren schwarz ab- gebildet wird. Die Farblösung selbst hat übrigens ein etwas anderes Spektrum, als das gefärbte Objekt. Die Haltbarkeit der so gefärbten Präparate ist sehr gut, es ist indessen nötig, daß die Präparate wenigstens 10 bis 15 Minuten in Wasser ausgewaschen werden. Sclüefferdecker (Bonn). Bielschowsky, M., u. Brühl, G., Über die nervösen End- organe im häutigen Labyrinth der Säugetiere (Ärch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1907, p. 22— .57 m. 2 Tfln.). Als Material wurde hauptsächlich das Gehörorgan des Meer- schweinchens benutzt , weil bei diesem Tier die Schnecke nur von einer dünnen Knochenwand umhüllt in die Paukenhöhle hineinragt. Dieses Verhalten ermöglicht eine rasche Entkalkung und außerdem eine sichere Orientierung der Schnittebenen auf dem Mikrotom. Zur Untersuchung diente die Bielschowsky sehe Methode, welche auf der Aldehydreduktion ammoniakalischer Silberlösungen beruht und die besten Resultate an Gefrierschnitten liefert. Das Verfahren, welches ursprünglich für das zentrale Nervensystem angegeben ist , mußte für die Darstellung peripherer Nervenfasern modifiziert werden, weil andernfalls die sich mitfärbenden Bindegewebselemente eine genaue Orientierung erschweren. Das angewandte Verfahren ist folgendes : Die in Betracht kommenden Partien des Felsenbeins werden in 20prozentiger Formollösung fixiert und in 5prozentiger Salpetersäure entkalkt. Nach vollendeter Entkalkung werden sie entwässert und für einige Tage in 20prozentige Formollösung zurückgebracht. Vor dem Schneiden empfiehlt es sich die Präparate etwa eine Stunde in fließendem Wasser abzuspülen, um das freie Formalin , welches den Gefrierprozeß sehr erschwert resp. ganz unmöglich macht, zu ent- fernen. Die so vorbehandelten Objekte lassen sich auf jedem Kohlen- säuremikrotom leicht zum Gefrieren bringen und schneiden. Bei einiger Übung ist die Gefriermethode dem Einbettungsverfahren hin- sichtlich der Schnittgüte mindestens gleichwertig. Ein großer Vorzug dieses Verfahrens vor den Einbettungsmethoden besteht darin, daß vor der Färbung kein Alkohol mit dem Gewebe in Berührung kommt ; einmal werden dadurch Schrumpfungen vermieden und dann bleibt die Färbbarkeit der Neurofibrillen eine bedeutend bessere. XXV, 1. Refonite. 101 Die Schnitte werden vom Messer in destilliertes Wasser über- tragen und kommen dann für 24 Stunden bei Zimmertemperatur in eine 4prozentige im Dunkeln aufzubewahrende Lösung von Argentum nitricum, um dann nach kurzem Durchziehen durch destilliertes Wasser in eine Silberoxydammoniaklösung übertragen zu werden. Diese wird in folgender Weise hergestellt : Zu 5 cc einer 20prozentigen Argentum nitricum - Lösung setzt man 5 Tropfen einer 40prozentigen Natron- lauge. Der entstehende dunkle Niederschlag wird durch tropfen- weisen Zusatz von Ammoniak wieder gelöst, so daß die Flüssigkeit vollkommen klar erscheint oder nur noch einen leicht gelblichen Schimmer aufweist. Dann gießt man 20 cc destilliertes Wasser hinzu. Von Wichtigkeit ist, daß kein zu starker Ammouiaküberschuß, der am Geruch ohne weiteres erkennbar ist, in der Lösung vorhanden ist. In diese Flüssigkeit kommen die Schnitte für einige Minuten, bis sie einen bräunlichen Ton angenommen haben. Dann überträo:t man sie 'O^ in schwach mit Essigsäure angesäuertes Wasser. Es genügt ein Tropfen Eisessig für 20 cc destilliertes Wasser. Hier weicht der braune Ton nach kurzer Zeit einer etwas helleren Nuance und jetzt erfolgt die Überführung in 20prozentige Formalinlösung. Die Reduk- tion vollzieht sich ziemlich langsam. Man läßt die Schnitte so lange in dieser Lösung, als noch weiße Wölkchen aus ihnen aufsteigen. Damit ist die eigentliche Färbung vollendet. Bei älteren Objekten, welche längere Zeit in der Konservierungs- flüssigkeit gelagert hatten, erzielt man gute Resultate nur dann, wenn man die Prozeduren 3- bis 5mal wiederholt, wobei zu beachten ist, daß man formalinhaltige Schnitte nicht unmittelbar in ammoniaka- lisches Silberoxyd bringen darf, sondern dieselben längere Zeit vor- her wässern muß. Diese Verdoppelung der Prozeduren ist übrigens nie von Nachteil und erhöht unter allen Umständen die Sicherheit des Gelingens der Färbung. Um recht brillante und unvergängliche Präparate zu erhalten, empfiehlt es sich, eine Vergoldung und Fixie- rung mit unterschwefligsaurem Natron in bekannter Weise folgen zu lassen. Das Entwässern und Aufhellen der Präparate geschieht wie gewöhnlich in Alkohol von steigender Konzentration und 5pro- zentigem Karbolxylol und der Einschluß in Kanadabalsam. Der Hauptvorzug dieses Verfahrens vor der Methode Ramon y Cajals besteht darin, daß es die nervösen Elemente häufig mit quanti- tativer Vollständigkeit auf der ganzen Fläche des Schnittes zur An- schauung bringt und nicht nur in einzelnen tupfenförmigen Gebieten. Ein weiterer Vorzug besteht darin , daß man nicht nur die Kerne 102 Referate. XXV, 1. der Zellen, sondern auch deren Grenzen scharf und deutlich sieht, so daß Zweifel über die genaue Lage der Neurofibrillen zur Sinnes- zelle, über intra- oder extrazelluläre Strukturen kaum auftauchen können. Schließlich werden aber auch noch protoplasmatische Struk- turen in den Zellkörpern sichtbar, welche die Ramön y CAJALSche Methode nicht darstellt. E. Schoehel {Neapel). \ Rachmanoff, A. W., Die Neurofibrillen und die chroma- tophile Substanz in den Nervenzellen (Obosrenie psychiatrii, nervrologii i experimentalnoi psychologii Bd. III, 1907, p. 1—21 m. 2 Tfln. ; Ref. n. Ref. in Folia neuro- biologica Bd. I, 1907, No. 1, p. 90—91). untersucht wurden normale und pathologische Rückenraarks- zellen von Hund, Kaninchen und Katze. Um die Zellen pathologisch zu machen, wurden die Tiere entweder mit Strychniu vergiftet oder es wurde ihre Temperatur künstlich im Thermostaten erhöht oder es wurden Nerven ausgerissen oder torquiert. Stücke der Hals- und Lendenanschwellung des Rückenmarkes wurden in 95prozentigem Alkohol fixiert, in Paraffin eingebettet und in Serienschnitte zerlegt. Diese wurden gefärbt entweder in einer wässerigen Lösung von Toluidinblau mit nachfolgender Entfärbung in 95prozentigem Alkohol oder in einer 5prozentigen Silbernitratlösung innerhalb 24 Stunden bei 37*^. Letztere Schnitte wurden ausgewaschen in destilliertem Wasser und mit der folgenden aufs 2- bis Sfache verdünnten Mischung Übergossen: Destilliertes Wasser 25*0; Natr. sulfurosi 4*5; Kali carbonici 3*0; Hydrochinon 0*5. Nach dem Auswaschen kamen die Schnitte für einige Minuten in ein auf das 5fache verdünntes Ge- misch von gleichen Teilen einer Öprozentigen Lösung von Natr. bisulfurosum und einer lOprozentigen Lösung von Natr. hyposulfuro- sum. Nach abermaligem Auswaschen wurden die Schnitte in Balsam eingeschlossen. Verf. färbte zwecks besserer Vergleichung entweder zwei benachbarte Schnitte einer Serie, den einen nach dem ersteren, den zweiten nach dem letzteren Verfahren oder einen Schnitt zu- nächst mit Toluidinblau, photographierte ihn oder zeichnete ihn, zog dann aus ihm das Toluidinblau aus und färbte darauf denselben Schnitt mit Silbernitrat , oder aber er wandte eine Doppelfärbung mit den beiden genannten Färbungen an, die jedoch nur an normalen Zellen gelang. Schiefferdecker {Bonn). XXV, 1. Referate. 103 Larionoff, W. , Die feine Struktur und eine neue Fär- bungsmethode des Gehirns des Menschen und der Tiere (Arch. f. Psychiatrie u. Xervenkrankh. Bd. XLIII, 1907, H. 1, p. 388—397 m. 3 Tfin.). Verf. hebt hervor^ daß bei den jetzigen Untersuchungsmethoden die Nervenzellen zum Teil stark verändert, zum Teil direkt zerstört werden. Man müsse daher auch dicke Schnitte nehmen, damit wenig- stens die Zellen in der Tiefe erhalten bleiben, wenn auch die an der Oberfläche zerstört werden. Je einfacher die Bearbeitung der Präparate ist, desto besser werden die Bilder erhalten. Verf. hat daher seine Modifikation der Golgi- Methode noch bedeutend verein- facht: Das frisch herausgenommene Gehirn wird, um es lange zu konservieren, in lOprozentige Formollösung getaucht. Nach 3 bis 4 Tagen wird eine beliebige Windung mit der Pia oder sogar eine Hälfte des Gehirns des Hundes oder der Katze herausgeschnitten und in ein Glas mit einer kleinen Menge einer ^/,-, ein- bis 2pro- zentigen Lösung von Kaliumbichromat auf 4 bis 7 Tage in den Ofen bei einer Temperatur von 27^ bis 30^ gelegt. Je schwächer die Lösung des Kaliumbichromats ist , desto besser ist es. Dann gießt man diese Lösung ab und statt ihrer eine 3prozentige Lösung von Silbernitrat hinein. Das Glas bleibt wieder im Ofen bei derselben Temperatur 4 bis 7 Tage. Dann wird es herausgenommen , mit Fließpapier getrocknet, mit dem Papier in das Mikrotom gelegt und trocken oder mit Alkohol von 70^ bis 90*^ geschnitten; dicke Schnitte von 7 bis 10, 12 bis 20 Abteilungen des Mikrotoms. Dann schnelle Entwässerung und Einlegen in den Alkohol -Sandaraklack und nach Austrocknen Begießen mit hartem Kanadabalsam , gelöst in Xylol. Man darf das Präparat nicht mit Wasser abwaschen, da das der Färbung schadet. Um eine sichere Färbung zu erhalten, kann mau das Präparat noch mehrere Tage in einer frischen Lösung von Silbernitrat bei einer Temperatur von 16 bis 18*^ R liegen lassen und dann mehrere Tage in eine 3prozeutige Formollösung legen. Konservieren- kann man es in denselben Lösungen von Silbernitrat oder Formol. .Um eine Färbung der weißen Substanz zu erhalten, muß man die Färbung 20 Tage lang bei 25^ C fortsetzen und zur Lösung des Kaliumbichromats MtJLLERsche Flüssigkeit hinzufügen. Man kann auch eine noch bessere Färbung bei der umgekehrten Bearbeitung, d. h. zuerst mit Silbernitrat und dann mit Kalium- bichromat oder Formol erhalten. Schiefferdecker {Bonn). 104 Referate. XXV, 1. Cajal y Kamou, S. , L'appareil reticulaire de Golgi- HoLMGREx colore par le nitrate d'argeut (Trav. du Laborat. de Rechercbes biol. de l'Uuiv. de Madrid t. V, 1907, fasc. 3, p. 151—154 av. 1 fig.)- Es ist dem Verf. gelungen, den netzförmigen Apparat von Golgi- HoLMGREN in den Zellen der Spinalganglien und des Rückenmarkes des Hundes und der Katze bei neugeborenen oder nur wenige Tage alten Tieren mit Silber zu färben. Ebenso wie die Methode von GoLGi und die von Golgi-Veratti tritt die Färbung hinreichend stark und konstant nur bei jungen Tieren ein. Je älter das Tier wird, um so blasser wird die Imprägnation. Methode: 1) Die Stücke des Nervensystems werden für 24 Stunden zur Fixierung in eine lOprozentige Formollösung gebracht. 2) Dann vierstündiges Aus- waschen in fließendem Wasser , um das Formol auszuziehen , dann Übertragen in die Silberlösung (1*5- bis Sprozentig), in der sie 3 bis 5 Tage verbleiben. Man kann auch, bevor man die Stücke in das Silberbad bringt , sie erst noch einen Tag in Alkohol härten , wo- durch das Auswaschen ersetzt wird. 3) Reduktion des Silbers, wie gewöhnlich, in dem Pyrogallol-Formol-Bade. Entwässerung und Ein- schluß in Celloidin. Diese Methode, welche Verf. schon bei der Beschreibung der Imprägnierung der Neurofibrillen früher erwähnt hat , ist fast identisch mit dem von Levaditi zur Darstellung der Spirochäte der Syphilis angegebenen Verfahren. "Was die Färbung der Neurofibrillen und der Nervenfasern anlangt, so ist diese Methode lange nicht so günstig, wie die direkte Fixierung in Silbernitrat, und wie die mit vorheriger Fixierung in Alkohol allein oder in ammoniakalischem Alkohol. Dagegen läßt sie mit absoluter Sicher- heit die Nukleolen erkennen , die sich sogar in den Mitosen färben (Hühnchen usw.) und ferner die Bindegewebszellen, welche das Silber stark aufnehmen. Endlich färbt sie die Bindegewebsfibrillen , so daß man deren embryonale p]ntwicklung sehr bequem studieren kann. Man kann aus dieser Silberreaktion noch einen besonderen Nutzen ziehen. In dem Bindegewebe , dessen Zellen sich oft kaum gefärbt zeigen, ziehen diese lebhaft die basischen Anilinfarben an, besonders das Safranin , das Thiouin , das Methylenblau usw. Wahrscheinlich wirkt der schwache kolloidale Silberniederschlag, durch welchen die Zellen gelb gefärbt erscheinen, als eine ausgezeichnete Beize auf die basischen Anilinfarben , welche sich infolgedessen sehr elektiv ver- halten. Auch die in der Entwicklung begriffenen Bindegewebsfasern treten auf diese Weise besser hervor. Verf. verwendet daher die XXV, 1. Referate. 1Q5 eben angegebene Silberimprägnation häufig bei einer Färbung- mit basischen Anilinfarben sowohl bei normalen wie bei pathologischen Geweben. ScMefferdecker {Bonn). Herxlieimer, G., u. Gierlich, N., Studien über die Neuro- fibrillen im Zentralnervensystem. Entwick- lung und normales Verhalten. Veränderungen unter pathologischen Bedingungen. Wiesbaden (J. F. Bergmann) 1907; 210 pp. m. 1 Atlas von 20 Tfln. Die Verff. haben sich bei diesem ebenso umfangreichen wie eingehenden Werke zur Darstellung der Neurofibrillen ausschließlich des von Bielschowsky angegebenen Verfahrens bedient und sich im allgemeinen genau au die Vorschriften gehalten, die der genannte Autor 1904 in erweiterter und verbesserter Form mitgeteilt hat. Von der sogenannten Blockmethode , bei der ganze Stücke erst im- prägniert, dann eingebettet und geschnitten werden, haben die VerfF. bald Abstand genommen, da die so erzielten Schnitte oft nur streifen- weise das Silber annahmen und namentlich am Rande vielfach helle und ungefärbte Stellen aufwiesen. Es wurde also fast ausschließ- lich die Imprägnierung am Gefrierschnitte angewendet. Nachdem das Präparat in lOprozentiger Formollösung fixiert und gehärtet war, wurden mit Hilfe des Kohlensäuregefriermikrotoms Schnitte von mög- lichst 5 ^ Dicke augefertigt, unter Wasser aufgefangen und 24 Stun- den in eine 2prozentige Lösung von Silbernitrat gebracht. Nach kurzem Durchziehen durch Wasser wurden die Schnitte dann in stets frisch bereitete ammoniakalische Silberlösung übertragen (2 bis 3 Tropfen einer 40prozentigen Natronlauge wurden 20 cc einer 2prozentigen Lösung von Silbernitrat zugefügt und nun so viel Am- moniak unter ständigem Schütteln im Meßzylinder tropfenweise bei- gegeben , bis der sich bildende schwarzgraue Niederschlag sich ge- löst hatte. In dieser Lösung verweilten die Schnitte je nach der Dicke 2 bis 3 Minuten. Ein gelbbrauner Farbenton läßt die rich- tige Durchtränkung des Schnittes mit der ammoniakalischen Silber- lösung erkennen. Dann kamen die Schnitte nach kurzem Durchziehen durch Wasser in die reduzierende 20prozentige Formollösung, meist für 12 bis 24 Stunden. Dann Vergoldung unter Verwendung eines schwach saueren Goldbades mit nachfolgender Fixierung in sauerer schwefelsauerer Natronlösung. Auf der richtigen Durchtränkung des Schnittes mit der Ammoniak-Silberlösung beruht im wesentlichen das o Gelingen der Färbung. Die Zeitdauer des Verweilens in dieser 106 Referate. XXV, 1. Lösung ist daher für jeden Schnitt genau zu bemessen und richtet sich in erster Linie nach seiner Dicke. Anderseits sind auch einige Stellen des Nervensystems besonders leicht zu imprägnieren, so z. B. die vordere Kommissur des Rückenmarkes, die Substantia reticularis des verlängerten Markes und die Radii der Hirnrinde. Das embryo- nale Gewebe bedarf im allgemeinen einer stärkeren Durchträukung mit der Ammoniaksilberlösung. Haben die Schnitte in dieser zu lange verweilt, so tritt Überfärbung ein und die feinen Fasern und Netze in den Zellen verlieren an Deutlichkeit. Zuweilen haben die Verff. in pathologischen Fällen absichtlich stärkere Imprägnierung resp. leichte Überfärbung hervorgerufen , um so sicher alle vorhan- denen Neurofibrillen zur Darstellung zu bringen , so namentlich in der Regio zonalis der Hirnrinde bei Paralyse und Krampfzuständen. — Auch die Verff. haben bei Überschuß von Ammoniak in der Silber- lösung zuweilen ein Umschlagen der Färbemethode beobachtet; es findet sich dann statt der Fibrillenfärbung eine prächtige P^ärbung des Gliagewebes. So namentlich bei chronischen pathologischen Prozessen des Rückenmarkes. Worauf dieser Umschlag beruht, ist noch nicht bekannt ; ein absichtliches Hervorrufen dieser Gliafärbung war nicht immer von Erfolg; die Verwendung stärkerer Silberlösung (3 bis 5 Prozent) bot keine besonderen Vorteile. Die Unterscheidung des namentlich in pathologischen Fällen vermehrten und mitgefärbten Bindegewebes und der Glia von den Neurofibrillen läßt sich bei großer Übung meist durchführen , wenngleich bei isoliert gelegenen Fibrillen die Deutung mitunter sehr schwer sein kann. Gewöhnlich sind die Bindegewebsfibrillen durch ihre Dicke, Verlaufsrichtung und Lage zueinander gut charakterisiert. Auch heben sich die Neuro- fibrillen durch tiefere Schwärze gut ab von den Fasern des Stütz- gewebes , die meist auch ungleichmäßiger imprägniert sind. Auch von den Gliafasern unterscheiden sich die nervösen durch Dicke und Verlaufsrichtung; vor allem aber tritt der Unterschied zwischen den beiden Faserarten bei eifrigem Gebrauche der Mikrometerschraube hervor, wenn man sich ein körperliches Bild herzustellen versucht. Ist ein Farbenumschlag erfolgt, hat sich die Glia also in ausgedehntem Maße mitgefärbt, so sind solche Präparate zum Studium der Neuro- fibrillen nicht zu verwenden, sondern auszuschalten. Diese Unter- scheidung der Neurofibrillen von den anderen Geweben wird wesent- lich erleichtert durch die von Bielschowsky angegebene Modifikation des Durchziehens des Schnittes durch eine schwache Essigsäurelösung vor dem Eindringen in die reduzierende Formollösung. Vorsicht XXV, 1. Referate. 107 iiiul Kritik ist bei dieser, wie bei jeder Imprägnationsmetliode sehr nötig, man muß stets viele Schnitte herstellen und dann die besten aussuchen. Vorteilhaft war es auch oft, teils hellere, teils dunklere Schnitte herzustellen , je nachdem mehr Gewicht auf den Verfolg des Verlaufes einzelner Fibrillen oder auf eine sichere Darstellung ihrer Gesamtheit gelegt wurde. Unter Anwendung dieser Vorsichtsmaßregeln bewährte sich das Bielschowsky sehe Verfahren als eine fast konstante, sehr sichere und klare Methode. Schiefferdecker {Bonn). Fraenkel , E. , Über den Uterus senilis, insbesondere das Verhalten der Arterien in demselben (Arcli. f. Gynäkolog. Bd. LXXXIII, H. 3, 1907, p. 640—652 m. 4 Figg. im Text). Um die Arterienveränderung festzustellen, hat sich Verf. zur Darstellung der elastischen Fasern der Methoden von Unna-Tänzer und Weigert bedient. Besonders die Kombination des sauren Orzein mit Pikro-Lithion-Karmin oder Lithion- und Pikro-Indigo-Karmin gibt sehr übersichtliche, eine weitgehende Differenzierung der interessieren- den Gewebsbestandteile ermöglichende Bilder. Schiefferdecker {Bonn). Petermanii, W., Z u r K e n n t n i s der f r ü h e n E n t w i c k 1 u n g s - Vorgänge am Ei des Igels [Erinaceus euro- paeus L.] vor Ausbildung der Medullarrinne (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXV , 1907, p. 305—361 m. 20 Figg. u. 2 Tfln.). Die in ZENKERScher Flüssigkeit oder Eisessig -Sublimatlösung fixierten Objecte wurden nach Behandlung mit Jodalkohol behufs Entfernung des Sitblimates teils in alkoholischem Boraxkarmiu in toto gefärbt und in Salzsäurealkohol differenziert, teils ungefärbt durch Chloroform in Paraffin eingebettet und mikrotomiert. Die Schnitte wurden mittels Glyzerin-Eiweiß aufgeklebt und die der ungefärbten Stücke mit starkverdünntem Hexsen sehen Hämatoxylin und alkoho- lischem Eosiu tingiert. E. Schoebel {Neapel). Grohs , W., Die Primitivrinne der Fluß-Seeschwalbe [SternahirundoL.] (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXV, 1907, p. 362—390 m. 1 Tfl.). Bei der Fixierung des Materials wurde in folgender Weise vor- gegangen. Der den Eiern entnommene Dotter wurde zunächst in 108 Referate. XXV, 1. schwach erwärmte physiologische Kochsalzlösimg gebracht, am Keim- hof von dem anhafteuclen Eiweiß befreit und dieser dann nebst Embryo mittels Pinsel so lange mit dem Fixieruugsmittel (Zenker sehe Flüssigkeit oder Eisessig-Sublimat) betupft, bis das Eiweiß geronnen war. Nach ümschneidung des Keimhofes wurde dieser vom Dotter abgeschwemmt und für mehrere Stunden in das betreffende Fixatif übertragen. Nach Behandlung mit Jodalkohol wurde dann in üblicher "Weise durch Chloroform in Paraffin eingebettet und die mittels der Glyzerin-Eiweiß-Wasser-Methode aufgeklebten Schnittserien mit Borax- karmin gefärbt. E. Schoebel (Neapel). Lanis , H. , C o n t r i b u t i o n a 1' e t u d e de 1 a genese du v i - teil US dans l'ovule des amphibies [Rana tem- poraria] (Arch. d'anatom. microscopique t. IX, 1907, fasc. 3, 4, p. 607 — 66.3 av. 7 pls.). Das Tier wurde durch Durchschneiduug im Zervikalmarke ge- tötet ; es wurden hierdurch die meisten Reflexe vermieden , welche sonst hinderlich sind bei dem Uftnen des Unterleibes. Das Ovarium wurde schnell und vorsichtig entfernt, wenn es klein war, zusammen mit den Nieren , und sofort in die Fixieruugsflüssigkeit gebracht. Es wurde eine ganze Anzahl von Reagentien gleichzeitig verwendet, um vergleichende Bilder zu erhalten. Schnitte von Stücken, welche in Osmiummischung fixiert worden waren (BsNOASche Flüssigkeit, FLEMMiNGSche uud HERMANNSche Flüssigkeit), wurden gefärbt in Safrauin mit darauffolgendem Lichtgrün, mit Eisenhämatoxylin von Heidenhain mit oder ohne Eosiu, oder mit Bordeauxrot, Kongorot, Lichtgrün, Azurkarmin (nach den neuesten Angaben von Heidenhain). Nach der Fixierung mit der Benda sehen Flüssigkeit färbte Verf. zur Probe einige Schnitte auch mit der von diesem Autor angegebenen Methode (Kristallviolett). Andere Präparate (oft eins von den beiden Ovarien) wurden fixiert in Sublimat-Essigsäure nach Lenhossek, den Flüssigkeiten von Bouin, Zenker, MtJLLER oder in absolutem Alkohol. Gefärbt wurden die Schnitte dann mit Eisenhämatoxylin nach Hei- denhain mit oder ohne Eosin, Bordeauxrot usw. Eine Fixierungs- flüssigkeit kann nicht alle Feinheiten im Baue des Eies erhalten : die Flüssigkeiten von Benda , von Zenker und von Bouin ergaben klare Bilder von dem BALBiANischen Körper, der vitellogenen Sub- stanz und von den Dotterelementen. Die Flüssigkeiten von Flemming, Hermann und Müller ließen vor allem Details in bezug auf den Proto- plasmabau erkennen. Die Sublimatessigsäure und die FeejimingscIic XXV, 1. Referate. 109 Flüssigkeit zeigten deutlicli die Kernstruktur in den verschiedenen Entwicklungsstadieu. Nach den Ratschlägen von van der Stricht hat Verf. nach Fixierung und Behandlung mit Alkohol von 50° und 70*^ einen großen Teil seiner Präparate eine Zeitlang in TOgrädigem Alkohol mit Jodzusatz (Kognakfarbe) gelassen. Einige solcher lagen darin 3 und 6 Monate, die Resultate waren vorzügliche. Die intra- protoplasmatisclien Cytomikrosomen , die in frischem Zustande sicht- bar sind, waren gewöhnlich gänzlich verschwunden in nicht jodierten Stücken. Durch längere Behandlung mit dem Jodalkohol scheinen diese zarten Elemente widerstandsfähig zu werden gegen die Be- handlung, der die Stücke unterliegen. Das Jod scheint sie zu beizen und auf den mit Eisenhämatoxylin gefärbten Schnitten sieht man sie intensiv blau gefärbt sich von der schiefergrauen Farbe des Proto- plasmas scharf abheben. Auch in frischem Zustande wurden die jungen Eier untersucht : Es wurde eine Anzahl Eier in der dem Rückenlymphsacke entnommenen Flüssigkeit auf dem Objektträger untersucht. Schiefferdecker {Bonn). Tief haus, Tli., Die Entwicklung der Ringelnatter [ T r o - pidonotus natrix Boie] nach Ausbildung der Falterform bis zur Erhebung des Proamnios (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 55—99 m. 3 Figg. u. 3 Tfln.). Das Material wurde mit Sublimat -Eisessig oder Zenker scher Flüssigkeit fixiert, meist mit Boraxkarmin in toto gefärbt und in der üblichen Weise nach Paraffineinbettung zu Schnittserien verarbeitet. E. Schoebel {Neapel). Katz , L. , Zur mikroskopischen Untersuchung des in- neren Ohres (Arch. f. Olirenheilk. Bd. LXXIV, 1907, Teil 2, p. 135—147 m. 3 Tfln.). Verf. ist wohl der genaueste Kenner der mikroskopischen Technik über die Untersuchung des Ohres, so ist es sehr dankenswert, daß er in der vorliegenden kurzen Arbeit seine Erfahrungen kurz zu- sammenfaßt. Verf. spricht zunächst einige Wünsche aus: so wäre es sehr erwünscht, ein noch bequemeres und rascher eindringendes Füllungsmittel, als es das Celloidin ist, zu finden. Ebenso eine neue Methode des leichten und schnellen Aufklebens von Celloidinschnitt- serien. Endlich wäre eine bequeme und exakt wirkende Zerzupfungs- methode für die Kenntnis der Nervenendigung des Gehörnerven wesent- 110 Referate. XXV, 1. lieh. Besonders empfiehlt Verf. zunächst die Osmiumsäure in einem Osmiumgemische. Er öffnet dabei stets bei größeren Tieren und beim Menschen in vorsichtiger Weise das Labyrinth, entweder vom oberen Bogengänge aus oder au der basalen Schneckenwiudung. Die ja an sich schwer eindringende Osmiumsäure dringt bei Zusatz von Essig- säure und Chromsäure oder Platinchlorid wesentlich leichter ein. Die nachträgliche Reduktion der Osmiumsäure mit Holzessig, Tannin oder Pyrogallussäure ergibt sehr schöne scharfe Präparate. Die Zenker sehe Flüssigkeit leistet beim Labyrinth unvergleichlich mehr als die MtJLLERSche Flüssigkeit und zwar nicht wegen des Gehalts an Subli- mat, das kaum eindringt, sondern durch die relativ große Menge von Eisessig, welche auf die Umsetzung des Kalium bichromicum nicht ohne Einwirkung ist. Die von Wittmaack angewendete Methode ist sehr umständlich aber wertvoll. 1) Fixierung in einer Kalium- bichromat-Formalin-Eisessig-Mischung für mindestens 6 bis 8 Wochen im Brutofen, dann 24stündiges Auswaschen. 2) Hineinlegen in eine Formalin-Eisessiglöäung für 1 bis 4 Wochen; dann 3) Vorentkalkung in Formalin-Salpetersäurelösung 3 bis 14 Tage; 4) dann erst Osmium- Kaliumbichromat-Lösung für 1 bis 3 Wochen; 5) endlich späterhin Reduktion mit Pyrogallussäure etc. Auch die von Benda empfohlene 24stündige Fixierung durch lOprozentige Salpetersäure mit nach- träglicher mehrtägiger Behandlung mit doppeltchromsaurem Kalium hält Verf. für sehr brauchbar, aber für die Feinheiten des Corti sehen Organs leistet sie nicht das Wünschenswerte, jedenfalls weniger als das Osmiumgemisch. Die von Retzius mit so ausgezeichnetem Er- folge angewendete Goldchlorid-Osmiumsäure-Mischung hat den Verf. oft im Stiche gelassen und zwar wohl wegen der Unsicherheit der Einwirkung des Goldchlorids. Verf. nimmt an, daß hier Modalitäten des Verfahrens und der Präparation bestehen, die ihm nicht bekannt sind. Das große Werk von Retzius spricht für die Brauchbarkeit der Methode. Verf. kommt dann auf diejenigen Maßnahmen zu sprechen, die er selbst als einfach erprobt und als sehr zweckmäßig und meist zuverlässig befunden hat. Es kommt bei den Labyrinth- untersuchungen wesentlich darauf an, ob man es mit dem Schläfen- beine eines frisch getöteten Säugetieres, etwa eines Kaninchens, oder mit demjenigen eines erwachsenen, vielleicht nach langer Agonie ge- gestorbenen und 24 Stunden nach dem Tode sezierten Menschen zu tun hat. Für den ersten Fall schlägt Verf. vor, das Labyrinth des frisch getöteten Tieres von allen überflüssigen benachbarten Weich- teilen und Kuochenteilen zu befreien, den oberen Bogengang weit zu XXV, 1. Referate. 111 öftnen und das Präparat für eine bis 2 Stunden in die folgende Osmium- Essig'säure-Mischung- zu bringen: Osmiumsäure, 0"5prozentige Lösung . . 30*0 cc Essigsäure (konzentriert) 5 Tropfen. Nach Ablauf von 2 Stunden wird diesem Gemische zugesetzt: o^ Chromsäure, Oöprozentige Lösung . . 60'0 cc Essigsäure (konzentriert) 10 Tropfen. Hierin bleiben die Präparate 4 Tage. Anstatt der O'öprozen- tigen Chromsäure ist auch eine 0'5prozentige Lösung von Platin- chlorid vorteilhaft, sodaß der betreffende Zusatz zur Osmium-Essig- säure sein würde: Platinchlorid, O'öprozentige Lösung . . 60'0 cc Essigsäure (konzentriert) 10 Tropfen. Es handelt sich also bei diesen Lösimgen um eine modifizierte FLEMMiNGSche odcr Hermann sehe Lösung. Die Chromsäurelösuug oder Platinchloridlösung ist auf weitere 4 Tage zu erneuern. Es schadet nichts, wenn es einige Tage länger wie 4 Tage wird. Für außerordentlich nützlich hält Verf. es, besonders für die Darstellung der Nerven- und Ganglienzellen , die gehärteten Präparate unmittel- bar nach der Fixation, aber nach vorhergehendem 15 Minuten langem Abspülen in fließendem Wasser, in eine Holzessiglösung (1:1) für 12 bis 24 Stunden einzulegen, oder in Pyrogallussäure oder Tannin. Zur Entkalkung nach vorheriger Anwendung der Osmiummischung benutzt er für Schläfenheine kleiner Tiere: Chromsäure 0"5 Salpetersäure oder Salzsäure 2"0 — 5'0 Destilliertes Wasser 1000 Die Konzentration der Salpetersäure oder Salzsäure richtet sich nach der Dicke und Härte des betreffenden Schläfenbeines. Das durch Osmiumreduktion imd Holzessig schwarz gewordene Präparat, an dem man sich allerdings schwer orientieren kann, muß ungefähr ein bis 2 Stunden lang in fließendem Wasser ausgewaschen werden. Ob genügende Entkalkung eingetreten ist, muß man mit der Präpa- riernadel probieren. Die Entkalkungsflüssigkeit muß nach Bedürfnis ungefähr nach 2 Tagen erneuert werden. Gewöhnlich ist bei kleineren Tieren (Kaninchen) bei Sprozentiger Salzsäurelösung die Entkalkung in 3 bis 5 Tagen eingetreten, bei älteren Katzen in 4 bis 6 Tagen; bei Mäusen bewirkt z. B. die Hermann sehe oder die FLEMMiNGSche 112 Referate. XXV, 1. Härtuiigsfliissigkeit durch ihren Gehalt an Essigsäure in etwa 8 Tagen meist auch vollkommene Entkalkung. Eine Schädigung der vorher fixierten Labyrinthgebilde durch die Entkalkungsfllissigkeit ist nur bei unzureichender Fixierung zu befürchten. Verf. hält diese Osmium- mischungen für die besten Methoden, ebenso die Entkalkungsfiüssig- keiten für sehr brauchbar. Bei festen und schweren Felsenbeinen des Menschen ist der geringe Zusatz von Chlorpalladium (Waldeyer) zu leichterer Entkalkung von großem Nutzen. Einbettung stets in Celloidinlösung, die möglichst frisch hergestellt und ganz wasserfrei sein muß. Paraffineinbettung des Labyrinthes ist unbrauchbar, da beim Schneiden sowohl das CoRTische Organ, als auch die gespannte REissNEKSche Membran fast regelmäßig entzwei reißen. Will man dagegen recht feine Schnitte (5 fx) von festeren bindegewebigen Be- standteilen des häutigen Labyrinthes oder von der Stria vascularis erhalten, dann leistet die Paraffineinbettung bei kleinen Säugetieren sehr gute Dienste. — Was die Untersuchung des menschlichen Labyrinthes anlangt, so muß man vorläufig noch auf die Darstellung der feinsten histopathologischen Verhältnisse am Nervenendapparate des Gehörnerven und an den Sinueszellen verzichten, da in der Regel die Sektionen zu spät ausgeführt werden (24 bis 36 Stunden nach dem Tode), und da dem Tode meistens eine längere Agonie vorausgegangen ist. Es kommt daher für gewöhnlich bei diesen Labyrinthuntersuchungen wesentlich darauf an, durch eine passende Härtung noch den allgemeinen Situs und die allgemeinen Größen- verhältnisse der einzelnen Gebilde, sowie die Spannung der Mem- branen, die markhaltigen Nervenfasern des Gehörnerven, die Gang- lienzellen im Spiralkanal , etwaige Exsudate , den Knochen und die Gefäße usw. derart zu erhalten, daß man daraus noch relativ gröbere pathologische Verhältnisse mit Sicherheit erkennen kann. Auch für normal histologische Studien ist das Labyrinth des erwachsenen Menschen aus demselben Grunde kaum verwertbar, man behilft sich mit dem Schläfenbeine von Neugeborenen, die während der Geburt gestorben sind, und öfters verhältnismäßig frisch untersucht werden können. Spiritus und Müller sehe Flüssigkeit sind für das mensch- liche Labyrinth durchaus unbrauchbar. Verf. schlägt das folgende Verfahren vor: Nachdem das menschliche Schläfenbein aus der Schädelbasis herausgenommen ist, wird 1) das Tegmen antri vor- sichtig mit dem Meißel eröffnet; 2) ebenso der obere Bogengang; 3) die Spitze der Felsenbeinpyramide wird abgesägt, und zwar am äußeren Rande des Porus acusticus internus und ungefähr parallel XXV, 1. Referate. ]^J3 der Scilla feubeinsclmppc unter Schonung des Nervus acusticus und facialis. Der Sägeschnitt verläuft dann ziemlich nahe dem vorderen Rande der basalen Schneckenwindung, und von dieser Stelle aus kann man die Schnecke mit einem sehr feinen Meißel leicht eröffnen. Die dabei abgesägten Teile der Tube und der vorderen Paukenhöhle sind besonders aufzubewahren. Was die feinere und feinste Dar- stellung des Nervenendapparates betrifft, so empfiehlt Verf. auch hier, besonders für das Labyrinth des Kindes, die oben erwähnten Osmiumgemische mit eventueller Holzessigreduktion. Für die ge- wöhnlichen Untersuchungen des nicht frischen menschlichen Schläfen- beines reichen aber vollständig aus : Formol - MtJLLER -Verfahren : Formalin 100 Müller sehe Flüssigkeit ad 1000 oder besser : Formalin 10-0 Müller sehe Flüssigkeit 870 Eisessig 3-0 Hierin bleiben die Präparate unter öfterem Wechsel der Flüssigkeit etwa 3 Wochen. Eine brauchbare Konservierungsflüssigkeit, die gleichzeitig entkalkt, ist: Salpetersäure 7-5 Destilliertes Wasser lOO'O Formalin 5-0 Nach 3 Tagen kommt das Präparat zur eigentlichen Ent- kalkung in : Salpetersäure 100 Destilliertes Wasser 100"0 Chromsäure 05 Die Entkalkungsflüssigkeit muß alle 2 Tage erneuert werden bis zur vollständigen Entkalkung, die ungefähr nach 14 Tagen unter Kontrolle mit der Präpariernadel eintritt. Daß bei der Untersuchung des menschlichen Schläfenbeines alle überflüssigen Knochen und Weich- teile zu entfernen sind, ist selbstverständlich. Außer der Salpeter- säure verwendet Verf. auch bei dem menschlichen, sehr harten Schläfenbeine zur Entkalkung folgende Mischung: Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1 8 214 Referate. XXV, 1. Salzsäure lO'O Chromsäure 0"5 Chlorpalladium 0-05 Destilliertes Wasser 1000 Auch diese Mischung ist mindestens alle 3 Tage zu erneuern. Sie schädigt das in der Tiefe liegende membranöse Gebilde mit seinen Epithelzellen und Nerven in keiner Weise, wenn die Härtung eine vollständige war. Finden sich trotz der regelrecht vorgenommenen Entkalkung noch einige kleine Knochenmassen in der Tiefe, so soll man das in Celloidin eingebettete Präparat in Alkohol mit 5 Prozent Salpetersäure oder Salzsäure für einige Tage einlegen (Salzsäure 5'0, verdünnter Alkohol ad 100"0). Sowohl die Fixierungs- wie die Ent- kalkungstlüssigkeit muß stets in beträchtlicher Menge angewendet werden, bei größeren Tieren nicht unter 200 cc. Vor dem Schneiden der Celloidinblöcke sei man auf gute Orientierung bedacht : Verf. benutzt dazu meistens den oberen Bogengang imd den inneren Ge- hörgang. Was die Färbung anlangt, so ist eine solche nach Be- handlung mit Osmium und Holzessig meist unnötig. Man kann die Schnitte auch noch färben mit der Benda- Methode, d. h. nach mehr- stündiger Beizung in einer ungefähr 20prozentigen Lösung von Liquor ferri sulfurici oxydati in sehr verdünntem einprozentigem WEiGERxschem Hämatoxylin usw. Auch die Färbung nach van Gieson, die mit Hämatoxylin-Eosin oder mit Pikrokarmin oder die WEiGERTSche Nerven- färbung sind je nach Wesen und Beschaffenheit der zu untersuchen- den histologischen Elemente vorteilhaft anzuwenden. Es muß indessen bemerkt werden, daß die Färbbarkeit der Labyrinthpräparate besonders dann sehr leidet, wenn bei der Entkalkung scharfe Säuren ange- wendet werden, und das ist ja besonders nach dem vorangegangenen Osmiumgemische der Fall. Die Anwendung des Formols ist als ein großer Fortschritt in der Behandlung des Labyrinthes zu betrachten. Schiefferdecker {Bon7i). C. Mikroof^ganisnien. Stockhausen, F., Ökologie, „Anhäufungen" nach Beije- RiNCK. Beiträge zur natürlichen Reinzucht der Mikroorganismen. 11 Abb. ' Berlin (Institut f. Gärungs- gewerbe) 1907. XXV, 1, Referate. 115 Die außerordentlich dankenswerte Zusammenstellung des Verf. referiert in dem Sinne über zahlreiche Arbeiten Beijerincks und seiner Schüler, daß alle von ihnen angegebenen Methoden zur natür- lichen Reinzucht oder Anhäufung bestimmter Mikroorganismen zur Besprechung kommen. Beijerincks in Rede stehenden Methoden be- zwecken, „aus einem Gemenge von Mikroben diejenigen Arten und Varietäten, welche au gewisse, voraus bestimmte Lebensbedingungen adaptiert sind, in flüssigen Kulturmedien zur einseitigen Entwicklung zu bringen". Dabei werden einmal die Beziehungen der Mikro- organismen zu Licht und Sauerstoff und Temperatur, in zahlreichen anderen Fällen ihr ungleiches wählerisches Verhalten verschiedenen chemischen, als Nährstofte wirksamen Agentien gegenüber verwertet. Die Bakterien stehen im Vordergrund des Interesses. (Beziehungen der Bakterien zur Kohlensäure der Luft, StickstotF assimilierende imd denitrifizierende Bakterien. Oligo- und Mesonitrophilie , üreumbak- terien , Trennung der Milchsäurebakterien voneinander und von den Hefen, Zellulose zersetzende Mikroorganismen, Methanmehrer und Methauzehrer, Diastase und Gelase erzeugende Bakterien u. a.) Neben den Bakterien werden die Hefen, ferner auch kurz die kultivierbaren Algen und Protozoen behandelt. Küster {Halle a. S.). Mandelbaum, Ji., Eine vitale Färbung der Spirochaete pallida (Münch. med. Wochenschr., Jahrg. LIV, 1907, No. 46, p. 2268 — 2269). Verf. gibt eine Methode an, durch die es gelingt, die Spiro- chaete in kürzester Zeit, ohne im geringsten irgend welche für die- selbe charakteristische Merkmale zu zerstören, zu färben und für das Auge gut sichtbar zu machen. Es handelt sich um eine Färbung in vivo. Man bringe das zu untersuchende Material (Reizserum von einem Primäraffekt oder von einer nässenden Papel) in Form eines hängenden Tropfens auf ein Deckgläschen. Zu diesem setze man mit der Platinnadel etwas LöPFLERSches Methylenblau, vermenge den Farbstoff und das zu untersuchende Material und füge eine Öse l/lO Normalnatronlaugenlösung zu dem ganzen hinzu. Untersucht man nun mit der Ölimmersion und Okular 4 (Zeiss) den Rand des hängenden Tropfens, so sieht man die Spirochaete als zartes, feines, blaßblau gefärbtes Gebilde mit engen, unmittelbar aneinander gereihten Win- dungen, die nach beiden Enden zu immer niedriger werden und in einer feinen Spitze endigen. Verwechselung der Spirochaete pallida mit anderen Spirochaetenarten , namentlich mit der Spirochaete re- 116 Referate. XXV, 1. fringens, sind ganz unmöglich, da letztere grob gefärbt dagegen er- scheint. Sehr schön ist nach dieser Färbung auch die Spiralform der Spirochaeten zu sehen. Dies ist bei den bis jetzt bekannten Färbemethoden garnicht möglich gewesen, da die fixierte Spirochaete und dadurch natürlich auch die Windungen derselben in einer Ebene lagen. Dadurch scheinen auch die Gebilde, die Herxheimer als feine Körner im Protoplasma des Spirochaetenleibes beschrieben hat, vorgetäuscht worden zu sein. Wenn man das zu untersuchende Material unmittelbar nach seiner Entnahme nach der angegebenen Methode färbt, so kann man ganz deutlich noch Eigenbewegung der bereits gefärbten Spirochaete pallida beobachten. Umrandet man das Deckgläschen mit dem hängenden Tropfen mit Wachs, so kann man die Spirochaeten wochenlang, ohne die geringste Veränderung in deren Färbung wahrzunehmen , aufbewahren. Vorhandene Eigen- beweguugen sind aber nach 24 Stunden verschwunden. Der Vorteil der angegebenen Methode liegt also erstens in der sofortigen Färbung derselben, zweitens in dem vollkommenen Erhaltenbleiben der natür- lichen Form der Spirochaete und drittens in dem Erkennen von Eigen- bewegung der gefärbten Spirochaete. Schieferdecker {Bonn). Swellengrebel , N. H., Erwiderung auf die Arbeit des Herrn Dr. Hölling „Spirillum giganteum und Spirochaeta Balbianii" (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1 , Orig. Bd. XLVI, 1908, PI. 1, p. 1). Verf. widerlegt die Einwände Hölling s.^ Fixierung der Bak- terien (Spirillum giganteum) gelang mit Formol , Osmiumsäure , Jod- dämpfen, Hermann scher Flüssigkeit, Alkohol; zur Färbung dienten außer Heidenhains Hämatoxylin neuerdings noch Methylenblau, Giemsa- Lösung, Delafields Hämatoxylin. Küster {Halle a. S.). Meyer, A., Der Zellkern der Bakterien (Flora Bd. LXLVHI, 1908, H. 3, p. 335). Verf. beschäftigte sich mit den Sporangien von Bacillus Pasteu- rianus Winogradsky, die nach Bredemann völlig volutinfrei sind, und behandelte zum Zweck der Kern färbung die Objekte nach verschiedenen Methoden. 1. Verfahren. — Das Material wird im Reagensglas zwei Minuten mit Wasser gekocht, in ein Spitzgläschen gegeben und ») Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 331. XXV, 1. Referate. j j 7 zentrifugiert. Nach Entfernung des Wassers gibt Verf. zum Absatz etwas schwefelsaures Eiseuoxydammoniak (^/., g auf 100 cc) , zentri- fug-iert abermals , hebt die Flüssigkeit ab und setzt zum Sediment Iläraatoxylinlösung (1:200). Nach 24 Stunden wird wieder zentri- fugiert, und die Bakterien werden unter dem Deckglas entfärbt. Besser als Eisenlösung bewährte sich dabei Salzsäure (5 Tropfen auf 10 cc Wasser). Zytoplasma und Sporenanlage entfärben sich, der Kern der Sporenaulagen tritt deutlich hervor; meist ist er in der Mitte von einem hellen Hof umgeben. 2. Verfahren. — Das zentrifugierte Material wird drei Stunden lang mit FLEMMiNGScher Lösung (1:1) behandelt, mit Wasser auf der Zentrifuge sechsmal gewaschen , dann wird Alkohol innerhalb 2 — 3 Tagen tropfenweise bis zu 20 Prozent zugesetzt. Zur P'ärbung wird zugesetzt verdünntes (1 : 1) DELAFiELDSchesHämatoxylin, das nach 24 Stunden wieder abgeschleudert wird. Zur Differenzierung nimmt Verf. 10 cc lOprozentigen Alkohol -|- drei Tropfen einprozentigen Salz- säurealkohol. Die Kerne in den Sporenanlagen treten gut hervor als scharf umschriebene dunkle Punkte in einer helleren kreisrunden Scheibe. Das Zytoplasma wird hellblau, die Membranen etwas dunkler blau. 3. Verfahren. — Vorbehandlung wie oben beim zweiten Ver- fahren; dann wird Eisenlösung auf 24 Stunden zugesetzt, Zentrifuge, Abheben der Eisenlösung und Zusetzen von Hämatoxylin (24 Stunden). Nach abermaligem Zentrifugieren werden die Objekte unter dem Deckglas mit Eisenlösung differenziert. Die vom Verf. beschriebenen Zellkerne sind 0"3 /u groß. „Wenn sie sich, wie zu vermuten, durch indirekte Kernteilung vermehren, so muß es uns unmöglich sein, den Teilungsvorgang zu beobachten, denn Körnchen von 0*1 ju.^ wie sie dann in den Chromatinmassen vorliegen würden, könnten wir mit unseren Instrumenten nicht mehr sehen." Küster {Halle a. S.). ßosam, A., Einfache Art der Mikrobe nfärbung (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 2, Bd. XX, 1908, Nr. 21, 23, p. 724). Verf. färbt mit Methylenblau oder mitMENCLs Gemisch (^/^ Safranin und -^/^ Methylenblau); die Farbe wird in Spiritus konzentriert gelöst und beim Gebrauch mit gleichen Mengen Wasser und Alkohol ver- dünnt. Schließlich werden noch 10 Prozent Ammoniak zugesetzt. In einem Tropfen der Farbstofflösung wird eine kleine Menge der Bakterien gut verteilt und unter dem Deckglas sogleich beobachtet. Küster {Halle a. S.). 118 Referate. XXV, 1. Triucas, L., Nuovo metodo di colorazione per le spore, per i granuli metacromatici ed in sostituzione al metodo di Gram (Soc. delle sc. med. e natur. di Cagliari 1907; vgl. Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Ref. Bd. XLI, 1908, No. 7/10, p. 316). Spor eufärbung: Mazeration in öprozeutiger Chromsäiire (einige Minuten), Kochen in karbolsaurem Fuchsin, Auswaschen, Ent- färbung mit unterchlorsaurem Kalk (10 Prozent), reichliches Aus- waschen, Passage in 40prozentiger Formalinlösung (einige Sekunden), reichliches Auswaschen, Färben mit Chrysoidinlösung (1:30). Die Sporen werden rotbraun, die Bazillen gelb, die Vakuolen schön zitronen- gelb. Nach Verf. ist seine Methode einfacher und schneller durch- führbar als die Möller sehe. Metachromatische Körnchen: Verf. färbt zunächst eine Minute lang in Toluidinblau 0-25 g Alkohol 5 Essigsäure, 2prozentige 100 n und unmittelbar darauf, ohne die Präparate auszuwaschen, eine Mi- nute in einprozentiger Vesuvinlösung. Die metachromatischen Körn- chen erscheinen schwarzblau, die anderen Teile der Zelle blaßgrün. Weiterhiu macht Verf. Mitteilung über die Färbung von Bak- terien aus Reinkulturen nach der von Löffler für Gewebsschnitte angegebenen Methode. Küster {Halle a. S.). Kreibich , Über Silberimprägnation von Bakterien- geißeln (Wiener klin. Wochenschr. 1907, No. 21, p. 633, vgl. Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Ref. Bd. XLI, 1908, No. 4/6, p. 153). Im Anschluß an die von Stern zur Darstellung der Spirochäte angegebenen Methode färbt Verf. Geißeln von Bakterien dadurch, daß er das ausgebreitete Material auf dem Objektträger mit öOpro- zentiger Höllensteinlösung zur Fixierung übergoß und dann bis zur Braunfärbung dem Sonnenlicht (oder Finsenlicht) aussetzte. Küster {Halle a. 8.). Hernian, M., Sur la coloration du bacille tuberculeux (Ann. de Tlnst. Pasteur t. XXII, 1908, no. 1, p. 92). Verf. veröffentlicht eine neue Modifikation seines Färbungsver- XXV, 1. Referate. 119 ffthrens.^ Als Beize benutzt mau eine einprozentige Lösung von Ammoniuiukarbonat in destilliertem Wasser, als Farbflüssigkeit eine Sprozeutige Lösung von Kristallviolett in Oöprozeutigem Alkohol. Vor dem Gebrauch mischt man einen Teil der Farbtlüssigkeit mit 3 Teilen der Beize. Auch für Schnitte ist dieselbe Flüssigkeit ge- eignet. Zur Entfärbung dient lOprozentige Salpetersäure und 95pro- zentiger Äthylalkohol. Schnitte, die mit dem Kohlensäure -Gefrier- mikrotom (nach Fixierung in Eisessigsublimat) angefertigt sind, bringt man in eine mit destilliertem Wasser gefüllte Schale und fängt aus diesem die Schnitte mit dem Objektträger auf. Auf dem Deckel eines Wasserbades läßt man die Schnitte langsam antrocknen, bis sie halb durchscheinend werden. Dann trägt man 6 bis 8 Tropfen Farblösung auf das Präparat auf. Man läßt die Objektträger auf dem Wasserbad. Wenn eine Minute lang Dämpfe von dem Präparat aufgestiegen sind, ist die Färbung als beendet zu betrachten. Hier- nach Entfärbung mit Säure , Auswaschen mit reichlich Wasser. — Die Kristallviolettfärbung läßt sich noch mit anderen Farbstoffen (Eosin u. a.) kombinieren. Küster {Halle a. S.). Peabody, F., u. Prall, J. , Über den Wert von Malachit- grünnährböden zur Differenzierung von Ty- phus- und Kolon bazillen. Beschreibung einer neuen Methode zur Isolierung von Typhus- bazillen aus dem Stuhl (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1907, H. 6, p. 550). Verff. fertigen die Bouillon aus Pändfleischwasser an und setzen nach dem Sterilisieren zu je 100 cc heißer Bouillon 10 cc einer etwa O'lprozentigen ( — die Optimalkonzentration muß für die ver- schiedenen Malachitgrünpräparate erst ausprobiert werden — ) , mit sterilem Wasser hergestellten Malachitgrünlösung zu, die Säure des Nährbodens entspricht für 100 cc Agar einem ^/o cc Normal -Na OH. Die Bouillon wird in Reagensgläseru in Portionen von je 10 bis 15 cc verteilt. Die Fäcesaufschwemmung wird bei festen Stühlen durch Aufschwemmung mit dem gleichen Volumen steriler normaler Salz- lösung gewonnen ; zu jedem Röhrchen Malachitgrünbouillon kommen je 2 Tropfen Fäceslösung. Nach 18- bis 20stündigem Wachstum im Brutofen werden Drigalski-Conradi- Platten in der Weise geimpft, daß ein Tropfen der Malachitgrünbouillon-Kultur über die Oberfläche 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. VI, 1888, p. 361. 120 Referate. XXV, 1. des Agars mit einem Drigalski- Conrad: sehen Spatel oder mit dem Ende eines kleinen sterilisierten Reagensglases gestrichen wird. Küste}' {Halle a. S.). Buchholz, VV., Zur kulturellen Unterscheidung der Typh US-Paratyphus-Kolibakterien unterein- ander (Zeitschr. f. Hygiene Bd. LYI, 1907, IL 2, p. 220). Auf 0"3- bis O'Öprozeutigem Nähragar nach Oldekop lassen sich die im Titel genannten Bakteriengruppen nach Zusatz bestimmter Farbstoffe — Neutralrot, Malachitgrün, Orseille — gut unterscheiden. Typhus : Neutralrot bleibt unverändert, Orseille wird in 20 Stun- den, Malachitgrün spätestens am zweiten Tage entfärbt. Paratyphus (Schottmüller- Kurth), Mäusetyphus, Bacillus ente- ritidis Gärtner und einige andere alkalibildende Darmbakterien : Entfärbung aller Nährböden nach 12 bis 24 Stunden. Paratyphus A (Brion-Kayser) : Orseille wird nicht oder erst nach mehreren Tagen entfärbt ; auf Malachitgrün ähnliches Verhalten wie bei Typhus ; Entfärbung des Neutralrots (laugsamer als durch Paratyphus B). Bacterium coli: Malachitgrün wird langsamer entfärbt als von den vorigen, Orseille später als von Typhus und Paratyphus B, früher als bei Paratyphus A. Neutralrot wird etwas langsamer entfärbt als von Paratyphus A und B. Ruhrbacillus (Shiga- Kruse): Die genannten Nährböden bleiben in den ersten Tagen unverändert. Küste?- (Halle a. S.). Kutscher, K., I^in Beitrag zur Züchtung des Meningo- coccus (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1907, No. 3, p. 286). Gute Resultate erhielt Verf. auch nach unmittelbarer Isolierung aus dem menschlichen Körper mit folgender Methode. Möglichst frische menschliche Placeuta wird in kleine Stücke zerschnitten und mit dem ausfließenden Gewebssaft usw. gewogen. Nach Zusatz der doppelten Menge Wasser wird in der üblichen Weise die Nähr- flüssigkeit hergestellt und zu Agar (2^/2prozentig), welchem 0*5 Prozent NaCl, 1 Prozent Traubenzucker, 2 Prozent Nutrose und 2 Prozent Pepton (Chapöteaut) zugefügt werden, verarbeitet. „Der schwach alkalisch reagierende Agar wird in kleinen Kölbchen zu 100 cc sterilisiert. Zu 3 Teilen dieses Agars wird, um den fertigen Nähr- boden zu erhalten, ein Teil sterilen (in Kölbchen von 50 cc 4 Tage XXV, l. Referate. 121 liintereinander je eine Stunde bei 60*^ gelialtenen) Rinderseriims hin- zugesetzt. Beide Hauptkomponenten des fertigen Nährbodens, Pla- centaagar und Rinderserum, können vorrätig gehalten werden. Zum Gebrauch wird der fertige Nährboden ebenso wie Ascitesagar jedes- mal friscli hergestellt." Das Wachstum des Meningococcus ist auf dem Placeutaagar dasselbe wie auf Ascitesagar. Küster {Halle a. S.). Rotlie, Über die Verwendung verschiedener Zucker- nährböden zur Dif fer entialdiagnose der Gono- kokken (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLVI, 1908, No. 7, p. 645). Nach den Angaben v. Lingelsheims stellt sich Verf. Zucker- lakmusnährböden in der Weise her, daß in Rubel -Tiemann scher Lakmuslösung (Kahlbaum) 10 Prozent der zur Prüfung bestimmten Zuckerart gelöst werden; von der Nährlösung werden je 10 cc in Reagensgläsern 2 Minuten im Wasserbad gekocht. Dann kommen zu je 10 cc Lösung 0'5 cc Normaljodlösung. Von der Zuckerlakmus- lösung werden je 1*5 cc zu 13*5 cc einer flüssigen Mischung von 3 Teilen Sprozentigen Nähragars und einem Teil Ascitesflüssigkeit zugefügt und das Ganze wird in eine Petrischale geschüttet. Nach dem Erstarren Strichkultur. Rotfärbung nach 24stündigem Aufent- halt im Brutschrank beweist die eingetretene Vergärung, Verf. zeigt mit Hilfe der Lingelsheim sehen Nährböden, daß Meningokokken Maltose und Dextrose vergären können, während Gonokokken der Maltose gegenüber unwirksam sind. Küster (Halle a. S.). Liefmanii, H. , Ein einfaches Verfahren zur Züchtung und Isolierung anaerober Keime (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLVI, 1908, No. 4, p. 377). Verf. vermochte auf den gewöhnlichen Petrischalen nach Auf- decken eines Glimmerscheibchens auf den Nährboden anaerobe Orga- nismen zu züchten , wenn dieser irgendwelche reduzierende Stoffe enthielt (z. B. Traubenzucker, Natriumsulfid, Pyrogallol, ameisensaures Natron, Ferroammonsulfat, ferner frische oder kurze Zeit auf 100*^ erhitzte feine Gewebsteilchen aus irgendwelchen Orgauen). Küster (Halle a. S.). Marino , F. , Methode pour isoler les anaerobies (Ann. de rinst. Pasteur t. XXI, 1907, no. 12, p. 1005). 122 Referate. XXV, 1. JH^ 1. Verf. gibt zu der üblichen Nährgelatine 0*3- bis O'öprozentige Glukose und verteilt die Masse in weiten Reagensgläsern, so daß jedes 30 bis 35 cc enthält. Im Wasserbad werden vor dem Ge- brauch die Gläschen auf 42*^ erwärmt und zu jedem wird 1 cc Serum (Kanin- chen oder Pferd), das vorher 20 Mi- nuten auf 55^ erwärmt worden ist, zu- gesetzt. Das zur Prüfung bestimmte Material wird auf dem ersten Kultur- gläscheu ausgesät und dann von diesem aus zur nötigen Verdünnung ein zweites, drittes und auch viertes geimpft. Hier- nach gießt man die Masse in die größere (Deckel-) Hälfte einer Petrischale aus und bedeckt mit der umgekehrten kleineren Hälfte (Fig. 1) : unter der Glasscheibe entwickeln sich die Anaeroben. Beim Sterilisieren der Schalen bringt man diese bereits in die der Gebrauchsweise entsprechende Lage ; das Ganze überdeckt man zweckmäßig noch mit einer größeren Schale (Fig. 2). Küster (Halle a. 8.), 2. X). Botanisches. Moll , J. W. , Die Fortschritte der mikroskopischen Technik seit 1870 (Progressus rei botanicae vol. H, 1908, H. 2, p. 227—292). Das zusammenfassende Referat des Verf., das zur Lektüre an- gelegentlichst empfohlen sei , bekommt dadurch besonderen Wert, daß er die historische Entwicklung der botanischen Arbeits- methoden klarlegt und ferner auf manche Verfahren, die zum Teil schon vor langer Zeit veröftentlicht worden sind, aber aus irgend- einem Grunde nicht das verdiente Interesse der beteiligten Fach- kreise gefunden haben, neuerdings aufmerksam macht und auf Grund seiner eigenen reichhaltigen Erfahrung empfiehlt. Aus dem ersten Kapitel (Allgemeine Übersicht über die Mikrotechnik um das Jahr 1870 und die Entwicklung derselben seit dieser Zeit) werden die Nachrichten über Arbeitsraum und Beleuchtung vielleicht am meisten interessieren. XXV, 1. Referate. 123 Im zweiten Kapitel stellt Verf. „einige wiclitige spezielle Me- thoden der modernen Mikrotechnik" zusammen und läßt uns hier und da seine Kritik (z. B. der Ansichten Fischers betreffend Bau und Fixierung des Protoplasmas) hören. Die meisten der dem Bo- taniker bekannten Methoden sind zunächst dem Gebiet der tieri- schen Histologie entlehnt und auf diesem in ihrer Feinheit aus- gebildet worden, verhältnismäßig wenige (besonders die plasmolytische Methode von de Vries, die Erhitzungsmethode und die Lösungsmethode WissELiNGHS, über dessen technische Neuerungen in dieser Zeitschrift ausführlich berichtet worden ist^) können als spezifisch botanische Methoden angesprochen werden. Auf die Einzelheiten des umfangreichen Referates kann hier nicht eingegangen werden ; ich beschränke mich darauf, im folgenden einige der wenig bekannten Methoden zu nennen, die Verf. anführt und zur Benutzung empfiehlt. Als vielseitig anwendbares Fixierungsmittel für Pflanzengewebe benutzt Verf. 0"25- bis einprozentige Chromsäure. Altmann -^ läßt kleine Organstückchen gefrieren und bei einer Temperatur von etwa — 30^ C über Schwefelsäure im Vakuum trocknen. Hiernach werden die Objekte ohne weiteres in Paraffin eingebettet. Auch in botanischen Laboratorien dürfte die Methode mit Vorteil anzuwenden sein. Tammes^ empfahl zum Fixieren Fluorwasserstoffsäure; eine Me- thode , sich Behälter aus Zelluloid , wie sie für die Aufbewahrung dieses Fixiermittels erwünscht sind, selbst herzustellen, haben Vosmaer und Wijsman angegeben.'^ Über ScHOUTES Methode, komplizierte Pflanzenzelluetze mit Hilfe von Mikrotomschnitten zu untersuchen , wurde in dieser Zeitschrift berichtet, ■' über des Verf. Methode, Mikrotommesser selbst zu schärfen, vergleiche seine Abhandlung über das Mikrotom Reinhold -Giltay^; 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 265, 512; Bd. XVI, 1899, p. 506; Bd. XVII, 1900, p. 390; Bd. XIX, 1902, p. 257; Bd. XX, 1903, p. 493. ') Vgl. diese Zeitschr. Bd. VII, 1890, p. 199. 3) Über die Verbreitung des Carotins im Pflanzenreiche (Flora Bd. LXXXVII, 1900, p. 205). *) VosiiAER, G. C. J., a. Wijsman, H. P., On the structure of some sifieeous spicules of Sponges (Proceed. kon. Akad. Wet. Amsterdam 1905, vol. VIII, p. 17). ^) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 524. 6) Vgl. diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. 455. 124 Referate. XXV, 1. Verf. bedient sich neuerdings beim Abziehen der Mikrotommesser fast ausschließlicli des aus Ammoniumeisensulfat gewonnenen Eisen- oxyds , die seinerzeit empfohlene Diamantine ist im Handel leider nicht mehr erhältlich. Als mikroskopische Präparate zweiter Ordnung bezeichnet Verf. solche , welche aus gewöhnlichen mikroskopischen Schnitten durch abermaliges Schneiden in bestimmter Richtung gewonnen werden. Die Präparate erster Ordnung werden in eine dünne Celloidiuschicht eingebettet und unter dem Mikroskop geprüft ; die Richtung, in der man beim Anfertigen der „sekundären" Präparate schneiden will, wird durch Beschneiden der Celloidinplatte augegeben 5 die Celloidin- platte wird dann gefärbt und in Paraffin eingebettet. WissELiNGHS Methoden werden zur Benutzung sehr empfohlen, die Bedenken , welche gegen seine Lösungsmethode gelegentlich ge- äußert worden sind, als unberechtigt zurückgewiesen. Küster (Halle a. S.). Wisselingh, C. V., Über die Karyokinese bei Oedogo- nium. Sechster Beitrag zur Kenntnis der Karyo- kinese (Beih. z. bot. Zeutralbl. Bd. XXIII, 1908, Abt. 1, H. 2, p. 137). Verf. arbeitet mit seiner Chromsäure-Lösungsmethode. ^ Fäden einer dicken Oedogonium-Art (Oe. cyathigerum) werden mit Flemming scher Flüssigkeit fixiert. Sie verbleiben in dieser mehrere Tage und werden dann mit 20prozentiger Chromsäure behandelt. Die früher vom Verf. angewandte 40- und öOprozentige wirken zwar schneller als 20prozen- tige, in welcher der Lösungsprozeß mehrere Stunden oder selbst einen halben Tag in Anspruch nimmt, lassen aber zu viel Bewegung in den Zellen zustande kommen. Das Kerngerüst der Zellwandung und der äußere Zellwandteil erleiden durch die Vorbehandlung mit der Fixierungsflüssigkeit Veränderungen derart, daß sie gegen Chrom- säure besonders widerstandsfähig werden. Die genannten Teile bleiben demnach erhalten, wenn das übrige bereits verschwunden ist. Später lösen sich auch noch die Teile des Kerngerüstes, das allmählich aus- einanderfällt. Gelegentlich färbte Verf. — nach Auswaschen der Chromsäure mit Wasser — mit Brillantblau extra grünlich. Küster {Halle a. S.). 1) Siehe oben p. 123, Ann. 1. XXV, 1. Referate. 125 Heiiizeiiing, 0., Der Bau der Diatomeenschale mit be- sonderer Berücksichtigung der ergastischen Gebilde und der Beziehung des Baues zur Systematik (Bibl. Botan. Heft 69, Stuttgart [1908], 3 Tflu.). Bei der Färbung der Diatomeenzellkerne hat Verf. nach An- wendung der Lauterborn sehen Methylenblaufjirbung keine guten Resultate erzielt , da sich gleichzeitig mit dem Zellkern auch das Zytoplasma färbte. Dagegen trat bei Pinnularia viridis-nobilis und Navicula radiosa nach Fixierung mit einprozentiger Osmiumsäure und Jodjodkalium c (nach A.Meyer, Praktikum der Bakterienkunde, 1903: 3 g Jod, 3 g Jodkalium, 20 cc Wasser) und nach Übertragen in Wasser mit Methylenblau 1 -[~ 10 (nach A. Meyer) und nachfolgendem Ent- färben mit einprozentiger Schwefelsäure gute Kernfärbung ein ; die Nukleolen waren etwas dunkler gefärbt. Nach Fixierung mit Flem- jsnNGScher Lösung und Färbung in Safranin treten die Nukleolen leuchtend rot hervor; die übrigen Bestandteile des Zellkerns bleiben schwächer gefärbt. In Pfitzers Pikrinsäure-Nigrosin färbt sich der Zellkern graubraun; zum Studium der feineren Strukturen ist das Verfahren nicht zu empfehlen. Die Fixierung des Zytoplasma s erreichte Verf. mit ver- schiedenen Mitteln. Osmiumsäure , schon von Pfitzer empfohlen, fixiert den Protoplasten fast unverändert und ist besonders am Platze, wenn die Präparate ungefärbt untersucht werden sollen. FLEMMiNGSche Lösung, Sublimat und Pikrinschwefelsäure sind anzuwenden, wenn die Präparate gefärbt und in Balsam eingeschlossen werden sollen ; der Färbung muß aber noch Härtung mit Alkohol vorausgeschickt werden; Pikrinschwefelsäure gibt weniger gute Resultate als die beiden anderen Mittel, Jodjodkali c färbt gut, macht aber die Prä- parate zu braun. Pikrinsäure-Nigrosin fixiert gut, ist aber für das Studium feinerer Strukturen nicht zu empfehlen. Alkohol ist zum Fixieren nicht zu gebrauchen, wohl aber zum Härten. Chloralhydrat treibt die Schalen auseinander, die Struktur des Plasmas wird zerstört. Die schon von Pfitzer beobachteten und von Lauterborn als Doppelstäbchen bezeichneten Einschlüsse der Diatomeenzelle erkennt Verf. als Doppelplatten. Zur Fixierung der Gebilde eignen sich am meisten einprozentige Osmiumsäure und FLEMMiNOSche Lösung; nachfolgende Färbung mit Safranin. Bei Untersuchung des Volutins folgt Verf. den von Meyer angegebenen Verfahren (insbesondere Methylenblau - Schwefelsäure- 12G Referate. XXV, 1. reaktion); er ergänzt Meyers Angaben über die Mikrochemie des Volutins. Weitere mikrochemische Mitteilungen des Verf. gelten den Pyrenoiden. Küster {Halle a. 8.). Wisselingli, C. V., Über den Ring und die Zellwand bei Oedogonium (Beih. z. botan. Zentralbl. Abt. 1, Bd. XXIII, 1908, H. 3, p. 157). Bei Oedogonium-Material, das „während einiger Zeit" in Flem- MiNG scher Fixieruugsflüssigkeit gelegen hat, ist der bekannte Cellulose- ring und der aus ihm hervorgehende Teil der Membran geschwollen und chemisch verändert , wie aus ihrem Verhalten verschiedenen Reagentien gegenüber hervorgeht. Liegt das Material „einige Tage" in derselben Lösung, so nehmen die genannten Teile eine ähnliche Modifikation an wie die Zellkerne und erweisen sich einer (z. B. 20prozentigen) Chromsäurelösung gegenüber besonders widerstands- fähig. Man vergleiche im übrigen p. 124 das Referat über v. Wis- sELiNGH. Küster {Halle a. S). Marpmann, G., Wie sammelt man rezente Meerwasser- diatomeen auf dem Festlande? (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. XIII, 1908, p. 183). Verf. macht darauf aufmerksam, daß die Magen und Eingeweide vieler Seefische eine Fundgrube für viele interessante Plauktonorganis- men sind, bei deren Durchmusterung man je nach Heimat und Lebens- weise des vorliegenden Fisches die verschiedensten Formen antreffen kann. Verf. empfiehlt grüne Heringe, welche mit Eingeweide in den Handel kommen, zu untersuchen, ferner den Stint, frischen Schollen oder andere Plattfische , die ihrer Lebensweise entsprechend eine Masse Senkplankton liefern. Um die gewünschten Planktonorganismen von allerhand organi- schen Verunreinigungen zu befreien , verfährt Verf. folgendermaßen. Ein oder zwei Heringsmageu (mit allen anhängenden Teilen) werden in ein größeres Probiergläschen gebracht; man setzt 5 cc W^asser und eine Federmesserspitze Natriumsuperoxyd zu. Die Probe wird von Zeit zu Zeit geschüttelt und bleibt dann 24 Stunden stehen. Die Flüssigkeit ist dann meist völlig klar geworden , alle Gewebe sind zerstört. Verdünnt man hiernach mit Wasser, läßt absetzen oder zentrifugiert man, so ist die größte Menge der Diatomeen und Kalk- körperchen im Bodensatz zu finden. Ist aber die Flüssigkeit noch nicht geklärt, so kann mau noch etwas Natriumsuperoxyd zusetzen. XXV, 1. Referate. 127 oder iiiaii erwärmt die Flüssigkeit, bis Klärung eintritt. In beiden Fällen werden aber die Schalen der Diatomeen stark angegriffen. Besser ist es , die Lösung in der Kälte vor sich gehen zu lassen und nötigenfalls die Mischung 2 bis 3 Tage stehen zu lassen. Eine Kombination von Natriurasuperoxyd und konzentrierter Schwefelsäure gestattet, kleine Mengen organischer Substanz schon in wenigen Mi- nuten zu zerstören. Es bedarf bei dem Verfahren großer Vorsicht; das Natriumsuperoxyd darf man nur in kleinsten Körnchen in die Schwefelsäure fallen lassen. Küster {Halle a. S.). Marpmann, G. , Über Befunde von Benzoesäure in Piu- g u i c u 1 a vulgaris (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. XIV, 1908, IL 1, p. 1). Pinguicula vulgaris gibt ein vortreffliches Material ab, um die Behrens sehe Methode zum Nachweis chemischer Stoffe in Form ihrer Sublimate zu prüfen und zu üben. Man legt auf eine Glimmerplatte (0*2 bis 0'3 mm Dicke und 30 X 80 mm Oberfläche) einen Metall- ring (15 bis 20 mm Durchmesser, 15 mm Höhe) und füllt eine kleine Probe des vorliegenden Materials getrocknet und zerrieben in die Zelle, die man mit einem Objektträger bedeckt. Der kleine Apparat wird auf eine Metallplatte gestellt und erwärmt. Es bilden sich bei Untersuchung der Pinguicula zunächst Dämpfe von Benzoesäure, Bernsteinsäure u. a., die man auf dem Objektträger in Form von Kriställchen niedergeschlagen findet. Bei kräftigerer Erwärmung entstehen eventuell neue Körper und diese können auf einem weiteren Objektträger aufgefangen werden. Mit Hilfe dieser Methode gelingt es, auch geringe Mengen von Teein in Teeproben nachzuweisen und eventuell Verfälschungen zu erkennen. Reguliert man mit Hilfe eines heizbaren Objekttisches die Temperatur genau und erhitzt man nur bis zum Siedepunkt der betreffenden flüchtigen Substanzen, so gelingt es, den einen von den andern Körpern getrennt aufzufangen. Küster {Halle a. S.). O" Oes, A. , Über die Autolyse der Mitose (Botan. Zeit Abt. 1, Bd. LXVI, 1908, H. 5 u. 6, p. 89). Oes erbringt in seiner interessanten Arbeit auf mikroskopischem Wege den Nachweis für die Existenz eines chromatolytischen Enzyms in den Pflanzenzellen, das bei Zusatz von Toluol, Chloroform, Karbol- säure , Kochsalz u. a. die angefangenen Mitosen auflöst und die Nukleine dabei wahrscheinlich auch tief spaltet. 128 Referate. XXV, 1. Verf. unterwarf Wurzelspitzen (Vicia faba u. a.) meist bei 32 bis 40 '^ in Toluol- oder Chloroformwasser (Vg '^is ^lo Vol.-Prozent) mit oder ohne Beigabe von Neutralsalzen (meist 0*5 Prozent Koch- salz) der Autolyse; die besten Resultate lieferte Toluolwasser mit 0*5 Prozent Chlornatrium bei 38^ C. Zum Fixieren der Objekte wurde in erster Linie FLEMraNGS Gemisch (stärkere Modifikation) gewählt; gefärbt wurde mit Safranin und Gentianaviolett, ferner mit Delafields Hämatoxylin, Heidenhains Eisenalaunhämatoxylin, Fuchsin, Säurefuchsin u. a. Die Veränderung der Kerne bei der Autolyse besteht darin, daß die färbbare Substanz in' den Chromosomen der Meta- und Anaphasen (inkl. Telophasen) abnimmt; viel langsamer werden Mutterkuäuel und ruhende Kerne angegriffen. Die Chromo- some werden weiterhin löcherig und schwinden schließlich ganz ; sie hinterlassen ein Negativ, in dem oft Körnchen liegen. Später verschwinden auch die Negative; vermutlich wird der von ihnen in Anspruch genommene Raum vom Zytoplasma ausgefüllt. ■ — Nach totaler Autolyse der Chromosome vermochte Verf. die Negative besonders bei Fixierung mit Platinchlorid (lOprozentig) und Flemming scher Lösung, mit Phosphorwolframsäure (Sprozentig) und Heidenhain scher Färbung, seltener mit Silbernitrat (2prozentig) und Färbung nach Delafield und mit Safranin nachzuweisen. Es wurde versucht, auf fixieranalytischem Wege Aufschluß über die Natur der Lösungs- und Spaltungsprodukte zu bekommen. Nur mit 3prozentiger Phosphor- wolframsäure erhielt Verf. Niederschläge in den Negativen ; Nukleine, Nukleinsäure , Albumine und Albumosen sind auszuschließen, da sie durch Flemming s Gemisch wasserunlöslich niedergeschlagen werden müßten ; Pepton hätte durch Sublimat oder Platinchlorid gefällt werden müssen ; da Chlorbaryum und Silbernitrat ebenfalls keine Niederschläge gaben, waren ferner Phosphate auszuschließen ; „durch das negative Resultat dieser beiden Versuche ist zwar nicht bewiesen, daß keine Phosphorsäure abgepalten wurde, da die freie Säure und ihre sauren Alkalisalze durch die genannten Reagentien nicht gefällt werden". Vielleicht hat man hinsichtlich des chemischen Charakters der Stoffe, durch welche in den Negativen Niederschläge mit Phosphorwolfram- säure erzeugt werden, in erster Linie an Hexonbasen zu denken. Ein an chromatolytischem Enzym armes Objekt scheint in den Pollenmutterzellen von Lilium candidum vorzuliegen. Die besten Resultate gab O'öprozentige Karbolsäure, zumal nach Kochsalzzusatz (0-25 bis 0-5 Prozent). Küster {Halle a. S.). XXV, 1. Referate. 129 JEJ. 3Ihiera1ogisch - Petrof/raphisches. Physikalisch es. Donau , J. , Über den Nachweis von Gold, Silber und den Platin metallen durch die Phosphorsalz- perle (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1908, p. 273—275). Der Verf. weist mikrochemisch das Gold dadurch nach , daß Asbest, welcher mit GoldchloridchlorwasserstofF getränkt und hierauf zum Glühen erhitzt wird, Purpurfarbe annimmt, die sehr hitzebeständig- ist und sich bei mikroskopischer Prüfung als ganz homogen erwies. Besonders empfindliche Nachweise gelangen dem Verf. durch Ver- besserung der Phosphorsalzperlenreaktion. In gewissen Temperatur- intervallen liefern die Metalle in dieser Perle die Färbungen kol- loidaler Lösungen , welche als Übergang zwischen äußerst feinen ultramikroskopischen Teilchen und größeren Molekülkomplexen hierbei auftreten. Unterbricht man das Erhitzen im Temperaturintervall des kolloidalen Zustandes, so bleibt dieser wegen des raschen Erhärtens der Perle längere Zeit hindurch bestehen und man kann z. B. beim Gold rubinrote , violette , blaue , grünliche Perlen erhalten , je nach der Zeit, während welcher die Perle flüssig war. Später wird infolge der Zusammenballung zu größeren, nicht kolloidal gelösten Teilchen die Perle farblos. Der Verf. prüfte die Färbungen auch mikro- skopisch und stellte hinsichtlich der goldhaltigen Perle fest, daß sie wohl bezüglich ihrer chemischen Natur, nicht aber bezüglich der Existenzbedingungen mit Goldrubinglas übereinstimmt (in diesem ist der kolloidale Zustand reversibel, in der Perle hingegen nicht). Beim Silber erhielt der Verf. nicht eine solche Mannigfaltigkeit von Färbungen wie beim Gold, vielmehr zeigten Glasflüsse, Fasern, wie auch Phosphorsalzperlen nur die bekannte Gelbfärbung bei Zusatz von Silber. Platin führte zu rehbraunen kolloidalen Färbungen, bei größeren Mengen war eine Opaleszenz im auffallenden Licht sichtbar. Die übrigen Platinmetalle zeigen Reaktionen, welche den des Platins selbst sehr ähnlich sind. Die Abhandlung enthält noch eine interessante Tabelle, in welcher die empfindlichsten Reaktionen der Edelmetalle [1) mikrochemische a. aus Lösungen , b. in Perlen , 2) spektralanalytische , 3) makro- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 9 130 Referate. XXV, 1. chemische] hinsichtlicli ihrer Empfindlichkeitsgrenze miteinander ver- glichen werden. E. Sommerfeldt {Tübingen). Siecleutopf, H. , t'ber künstlichen Dichroisraus von blauem Steinsalz (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1907, p. 133— 1;;4). Der Verf. bestätigt den Befund Cornus, daß gefärbtes Steinsalz beim Ausüben von Druck pleochroitisch wird und bereichert die ein- schlägigen Beobachtungen durch Untersuchung der Polarisationszustände der einzelnen mittels des Ultramikroskops erkennbaren Teilchen. Wäh- rend bei nicht gepreßtem Steinsalz diese Polarisationszustände un- regelmäßig verteilt sind , ordnen sie sich bei Ausübung von Druck so, daß sie alle gleichmäßig je zwei senkrecht zueinander polari- sierte Farben aussenden, und zwar grün und orangerot. Die Polari- sationsebene der abgebeugten grünen Farbe liegt wie die in der gleichen Richtung hindurchgelassene rote Farbe, nämlich parallel zur gedrückten Hexaederfläche ; die Polarisationsebene der abgebeugten orangeroten Farbe liegt senkrecht zur gedrückten Hexaederfläche und ebenso wie die Polarisationsebene der in gleicher Richtung hindurchgelassenen Farbe. Zur objektiven Demonstration empfiehlt der Verf. die durch Kathodenstrahlen erzielte Blaufärbung, welche bis nahezu zur Un- durchsichtigkeit gesteigert werden kann und die Gestalt eines metallisch glänzenden Überzuges annimmt. Auch auf Flußspat lassen sich metallisch glänzende Überzüge, welche ganz ähnliche Eigenschaften wie die analogen dunkeln Schichten des Steinsalzes zeigen, mittels Kathodenstrahlen hervorbringen. E. Sommerfeldt {Tübingen). B-ohlaild, P. , Die Tone als semi permeable Wände und Mittel z u r K 1 ä r u n g von Fabrik- u n d A b w ä s s e r n (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1907, p. 177—179). Der Verf. hat besonders einen hochplastischen Ton von Striegau i. Schles. untersucht, dessen Zusammensetzung folgende ist: Glüh- verlust 13-407o, Kieselsäure 52-53''/o, Tonerde 29-01 7o, Eisenoxyd 3-43<^/o, Kalziumoxyd l'OO^o? Magnesia 0-02 ^o, Alkalien 1*01 ^/^ und findet, daß die Absorptionsfähigkeit der Tone um so größer ist, je plastischer sie sind und daß ihr Gehalt an Kolloidstoff'en mit dem Plastizitätsgrad in engster Beziehung stellt. Fabrikwässer, welche XXV, 1. Referate. 131 fettige Substanzen enthalten, lassen sich von ihrem Fettgehalt beim Filtrieren durch plastischen Ton gut befreien. Da gerade in diesen Fällen die elektrochemische Reinigungsmethode und diejenige der Berieselung versagen , kommt den Vorschlägen des Verf. praktische Bedeutung in den Betrieben der Spinnerei (Kämmprozeß) , Stärke- fabrikation, Gerberei, Färberei, Leimsiederei, Zuckerfabrikation, Papier- fabrikation und Brauerei zu. E. Sommerfeldt (Tübingen). 31ie, G., Die optischen Eigenschaften kolloidaler Gold- 1 ö SU n gen (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1907, p. 129 — 133 m. 3 Figg.). Um die vielerlei Faktoren zu bestimmen , welche für die Er- klärung der optischen Eigenschaften kolloidaler Lösungen in Betracht kommen, wurden für das Beispiel der kolloidalen Goldlösungen folgende Messungen ausgeführt: 1) Bestimmung der Absorptionskurve mittels des Spektralphotometers , 2) Ermittelung der Intensität des seitlich (d. h. senkrecht zu dem durch die Lösung gehenden Lichtstrahl) aus- gestrahlten Lichtes, 3) Abzahlung der Teilchen pro Kubikmillimeter im Ultramikroskop , 4) Bestimmung des Goldgehaltes durch Elektro- lyse. — Aus diesen Messungen zieht der Verf. die Schlüsse , daß die optischen Eigenschaften der rubinroten Lösungen sich durch die Annahme kugelförmiger Teilchen erklären lassen ; daß ferner das Gold dieser Lösungen eine ganz andere Absorption als festes Gold zeigt, daß die früher vielfach angenommene optische Resonanz zur Erklärung des Verhaltens dieser Goldlösungen nicht in Betracht kommt. E. Sommerfeldt {Tübingen). 9* 132 Neue Literatur. XXV, 1. 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Perles) 1908. 16 M., geb. 18 M. Kitt, Th. , Bakterienkunde und pathologische Mikroskopie für Tierärzte und Studierende der Tiermedizin. Fünfte, wiederholt verbess. u. um- gearb. Aufl. Wien (M. Perles) 1908. 15 M. Königer, H. , Die z3'-tologische Untersuchungsmethode, ihre Entwicklung und ilire klinische Verwertung an den Ergüssen seröser Höhlen. Jena (Fischer) 1908; IV, 112 pp., 8». 3 M. Rubenthaler, G, , Technique histologique et cytologique. 60 figg. Paris (Bailliere et Fils). 306 pp. S». 4.50 M. Whittaker, E. T. , l'he theory of optical Instruments. Cambridge (Univ. Pr.) 1907; VHI, 72 pp. 8^ (Vgl. Cambridge Tracts in Mathematics and Math. Physics, no. 7.) XXV, 1. Neue Literatur. I33 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Marx, H., Ein handliches Obduktionsraikroskop (Zeitschr. f. Medizinalbeamte Jahrg. XX, 1907, No. 21, p. 744—745). Beck's „London" Microscope, Regent model (Journ. R. Microsc. Soc. 1908, pt. 2, p. 227; vgl. R. and J. 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Seit vielen Jalireu beschäftige ich mich mit Untersuchungen über die histologischen Färbungen und deren Theorie, und darf ich voraussetzen, daß meine ausführlichen Darstellungen, welche ich in meiner Arbeit: „Der Hy a linknor pel" (Anat. Hefte No. 82, 1905 [auch dänisch schon 1900]), über die Knorpel- und Binde- gewebsfärbungen gegeben habe, sowie meine Arbeit : „ÜberEisen- hämatein, Chromalaunhämatein, Tonerdealauuhäma- tein, Hämateinlösungen und einige Cochenillefarb- lösungen" (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXII, 1905, p. 45—90), hinreichend bekannt sind , so daß ich es unterlassen kann , schon früher Gesagtes zu wiederholen. Meine Untersuchungen über die M e t a c h r o m a s i e betreffen einen Spezialfall, welcher einigen Zusammenhang mit den Knorpel- und Bindegewebsfärbungeu hat, aber dennoch allgemeinere Bedeutung besitzt ; in diesem ersten Abschnitt gebe ich die allgemeinen Gesichts- punkte für die Metachromasie und deren Beurteilung, im zweiten Abschnitte folgt die speziellere Darstellung. Die Arbeit hat mich seit 1898 beschäftigt; vielfache Anregung habe ich dabei aus der fach chemischen Literatur , z. B. den Untersuchungen W. Ost- walds über die Farbe der Jonen und aus desselben Verfassers Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, i. 10 140 Hansen: Über die Ursachen der metachiomatischen Färbung. XXV, 2. „Die wissenscliaftliclien Grundlagen der analytischen Ciieniie" er- halten, sowie ans vielen Arbeiten, besonders in der Zeitschrift für physikalische Chemie n. a. , wie ich es bei dieser Ge- legenheit ausdrücklich hervorheben möchte, weil wir alle Histologen, welche in den letzten 10 Jahren die Theorie der histologischen Färbungen auszuarbeiten unternommen haben , wahrscheinlich aus denselben Quellen der fachchemischen Wissenschaft geschöpft haben — „ex unge leonem". Bekanntlich färben gewisse reine basische Farbstoffe, Methyl- violett, Thionin, Toluidinblau , sowie Neutralrot und Safranin, um nur einige der altbekanntesten zu nennen, gewisse Elemente wie Schleim, Knorpelgrundsubstanz und auch andere Ge- webe , wie man sagt , metachromatisch nicht mit der gewöhn- liehen Farbe des neutralen Farbsalzes violett oder blau bei den drei ersten , rot bei den zwei letzten , sondern in der Farbe der Farbbase, nämlich rot, bis purpur bei den drei ersten, gelb bei den zwei letzten. Verschiedene andere Farbstoffe zeigen ähnliches, aber ich halte mich hier an diesen fünf, wo die erwähnte Farbveränderung auch bei den reinen Farbstoffen auftritt , wo eine Verunreinigung mit anderen Farbstoffen (wie Fischer^ supponierte) nicht vorliegt. Um diese Metachromasie zu erklären, nimmt L. Michaelis" an, daß es sich nicht um eine Färbung mit der Farbbase handelt, denn Aväre das der Fall , müßte mau den Mastzellenkörnern eine starke basische Reaktion zuschreiben, so daß sie die Farbbase in Freiheit setzen konnten , aber man kann die rotgefärbten Mastzellengranula mit Salzsäure behandeln und dennoch behalten sie ihre rote Farbe, also ist es nicht die Färb base, welclie hier färbt. Deshalb nimmt Michaelis an , daß in einer wässerigen Lösung von Thionin sich ausschließlich oder fast ausschließlich die blaue Modifikation des Thioninfarbsalzes findet ; in einem Schleimmedium oder in den Mast- zellen findet sich eine tautomere Modifikation des Salzes,^ ^) Fischer, A., Fixierung, Färbung usw. 1898. 2) Enzyklopädie d. mikrosk. Technik Bd. II, p. 800—803. ^) Jüngst hat P. Köthig (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXIV, 1907, p. 109) beim Hämatoxylin das Auftreten einer Metachroiuasie besprochen und die Möglichkeit einer „Laktonbildung" als Ursache vermutet. Ehe ich diese Möglichkeit, die beim Hämatoxylin mir aus den gegebenen Daten durch- aus nicht hervorzugehen scheint, zu diskutieren vermag, müßte es bei XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der mctaeliromatischen Färbung. 147 nämlich eine hypothetische rotgefärbte Form des Thioninfarbsalzes von demselben Molekulargewicht und elementaren Zusammensetzung, aber von veränderter Strukturformel. Die Ursache der veränderten Farbe sucht Michaelis also in einer tautomer veränderten Konstitu- tiousformel des Farbsalzes, und er führt diesen Gedanken weiter aus unter Erörterung der Konstitutionsformeln auch anderer Farb- salze, z. B. des Methylvioletts. Ich gehe auf diese rein hypothetischen Erörterungen, deren Richtigkeit ich, beiläufig gesagt, nicht anerkennen kann, hier nicht näher ein, der Sachkundige möge die Stellen im Original nachsehen. Die Theorie Fischers, daß die Metachromasie auf Verunreinigungen der Farbstoffe mit anderen Farbsalzen beruhe, tritft für die von mir genannten Farbstoffe nicht zu. Dagegen haben meine eigenen Untersuchungen mich zu einem anderen Resultat geführt , ein Resultat, welches ich schon in einem Vortrage in der Kopenhagener biologischen Gesellschaft in der Sitzung von 17. Dezember 1903 ausführlich neben anderen meiner Untersuchungsresultate die mikro- technische Färbung betreffend veröffentlicht habe. (Der Titel des Vortrages lautete : „Über die wissenschaftlichen Grundlagen der mikroskopischen Färbungen.") Meine Resultate sind folgende : Die wässerigen (auch schwäch alkoholischen) Lösungen der ge- nannten basischen Farbsalze ^ sind teilweise hydrolytisch ge- spalten. Die wässerigen Lösungen enthalten außer den undisso- ziierten Farbsalzmolekülen und den jonisierten Farbsalzmolekülen zugleich Moleküle der freien hydrolytisch gebildeten Farbbase in undissoziiertem Zustande (und natürlich eine ent- sprechende Anzahl der Moleküle der freien Säure oder deren Jonen). Diesem Gehalt der Lösung an freier hydrolytisch gebildeter Farbbase verdanken die wässerigen Lösungen von Methylviolett, Thionin, Toluidinblau ihren violetten oder purpurnen Farbton, welcher Farbton also eine Mischfarbe aus der blauen des reinen undissoziierten Farb- den Versuchen von Röthig ausgeschlossen sein, daß sich in seiner Häma- toxylinlösung nicht kleine Mengen von Hämatein gebildet hätten bei den ziemlich eingreifenden Prozeduren, welchen er seine Hämatoxylin- lösungen unterzogen hat, und wo eine teilweise Oxydation des Hämatoxylins mir sehr naheliegend erscheint. ^) Ähnliches gilt für andere Farbstoffe (auch saure), ich habe mehrere davon untersucht , beschränke mich aber hier der Einfachheit halber auf einige besonders typische. Auch das Nil blau ist hydrolytisch gespalten, darüber im Abschnitt II. 10 * 148 Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. XXV, 2. Salzes oder der positiven Farbjonen und der roten Farbe der hj'dro- lytiscli gebildeten Farbbase ist ; denn die Farbe der freien Farbbase in wässeriger Lösung ist rot oder purpur. Mit steigender Konzen- tration der Lösnng wächst der absolute Gehalt an freier Farbbase im großen und ganzen nach den bekannten Regeln für hydrolytische Dissoziation. Bei Verdünnung mit hinreichend reinem destil- liertem Wasser wird die Farbe immer mehr blau , indem die Mole- külen der Farbbase ähnlich den Farbsalzmolekülen jonisiert werden, wodurch die Farbe der Lösung sich der Farbe des Farbsalzmoleküls, resp. der des elektropositiven FarbstoflPjons nähert (die negativen Jonen usw. z. B. sind ja farblos).-^ Ganz Analoges gilt für die roten Farbstoffe — beispielsweise Neutralrot und Safranin, wo die freie Farbbase gelb ist. Bei anderen basischen Farbstoffen, wo die freie Base nur seh v/ ach gefärbt ist, gibt sich diese hydrolytische Spaltung nicht annähernd so deut- lich dem Auge kund durch die geringfügigere Änderung des Farb- tones der wässerigen Farbsalzlösung bei der Verdünnung z. B., oder gegenüber den stark alkoholischen Lösungen, wo die Hydrolyse zurückgedrängt ist. Als Beispiele dieser Art nenne ich das reine Methylenblau mit schwach rotgefärbter Base, das Malachit- grün mit schwach gelbbraungefärbter Base, das Methylgrün mit farbloser Base , das Fuchsin und das R h o d a m i n mit farbloser Base. Solche Farbstoffe zeigen, wenn rein," bekanntlich keine Metachromosie. Endlich sind zu nennen die basischen Farbstoffe, wo die freie Base annähernd dieselbe Farbe zeigt wie das Farbsalz ; bei solchen gibt sich die Hydrolyse dem Auge nicht so leicht zu erkennen, auch zeigen sie keine ausgesprochene metachromatische Färbung der Gewebe, obwohl eine starke Hydrolyse der wässerigen Lösungen mit passenden Mitteln nachweisbar ist, wie ich im zweiten Abschnitte zeigen werde. Diese hier erörterten Verhältnisse sind nicht theoretisch ausgeklügelte , sondern lassen sich durch einfache Versuche demonstrieren. Die met ach romatischen Färbungen mit den anfangs genannten Farbstoffen beruht nun darauf, daß gewisse histologische ^) Anders verhält es sich natürlich, wo das negative Jon selbst ge- färbt ist , z. B. bei den beliebten Farbkompositionen aus einer Farbbase und einer Farbsäure (z. B. eosinsaures Methylenblau). ■•^) Ich habe alle diese Farbstoffe in gereinigtem Zustande untersucht. XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. 149 Bestandteile — um nur die bekanntesten anzuführen, nenne ich: Schleim und Schleimgranula, Knorpelgrundsubstanz, Mastzelienkörner und Amy- loid (aber bekanntlich gibt es gelegentlich auch viele andere) — , die in den wässerigen Farblösungen also schon vorhandenen, hydro- lytisch gebildeten freien Moleküle der Farbbase im besonderen Grade aufspeichern und sich daher im Ton der freien Farbbase besonders stark färben. Ich betrachte diese Aufspeicherung als eine Asso- ziation zwischen der Farbbase und den genannten Gewebssub- stanzen, also als eine chemische obwohl in der Regel ziemlich lockere Bindung (aber keine Salzbildung). Als wohlbekannte Analogien führe ich an Assoziation von Kristall- wasser. Aber außerdem ist es meine Ansicht, daß wir es hier mit einer ungleichen, auswählenden L ö s 1 i c h k e i t zu tun haben (wofür ja auch Analogien^ in Hülle und Fülle in der Chemie vor- liegen) , indem die Farbbase nach dem Verteilungskoeffizient sich vorzugsweise in die sich metachromatisch färbenden Substanzen auf- speichert und löst, also darin einwandert und verbleibt. Ganz, wie wenn man eine organische Base, z. B. ein Alkaloid aus seiner wässe- rigen Lösung mit einem geeigneten Lösungsmittel ausschüttelt, oder wie (s. später) wenn ich seinerzeit" die schwach braungelblich ge- färbte Malachitgrünbase oder die farblose Rhodaminbase z. B. mittels Xylols oder Benzins aus seiner wässerigen alkalischen Lösung aus- schüttelte , um diese Xylolbaselösung für die Färbung von wasser- freien Knorpelschnitten in Xylol zu gebrauchen, wodurch ich schon im Jahre 1899 eine echte Bildung von grün oder rot gefärbtem Färb salz in den Knorpelschnitten bekam (vgl. meine Arbeit von 1900 oder 1905). — Oder wie ich eben aus den rein wässerigen, nicht alkalisch gemachten Lösungen von Methylviolett, Thionin, Toluidinblau , Neutralrot, Safranin usw. mittels Xylol, Chloroform, Benzin usw. die rote resp. gelbe Farbbase auszuschütteln vermochte^, und durch Anfärben von wasserfreien Knorpelschnitten oder anderen Gewebsschnitten aus Xylol in den sicher wasserfreien Xylolbasen- lösungen die Anwesenheit* der freien Farbbase in der Xylollösung ^) Ich betrachte diese metachromatische Färbung ganz wie die so- genannten Fettfärbungen mit Sudan, Alkanna. -) Vgl. meine Arbeit von 1900 (oder 1905, p. G05-606f.). **) Dieses ist die richtige Erklärung, dagegen kann von einer Aus- schüttelung, z.B. eines „roten" Farbstoffes als „Verunreinigung", wie andere analoge Fälle gedeutet worden sind, durchaus keine Hede sein. *) Aus diesen Xylolbasenlösungen läßt sich das Farbsalz mittels Hinein- leitung von luftförmigen Chlorwasserstoffs im Xylol bilden und ausfällen. 150 Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. XXV, 2. und durch Färbung der Gewebeschnitte im Ton der F a r b s a 1 z e (also blau oder rot) eine echte chemische Färbung durch Salzbilduug erzielen konnte unter den eiuwandfreiesten Bedingungen. Die Abhängigkeit der Hydrolyse von der Anwesenheit des Was- sers erklärt die bekannte Unbeständigkeit vieler dieser metachroma- tischen Schleimfärbungen usw. Alkohol , Glyzerin , sowie andere energische Entwässerungsmittel vernichteten vielfach die Meta- chromasie. Es erklärt sich ferner, daß eine Metachromasie dieser Art sich am besten erhält in wasserhaltigen Einschlußmedien , in essigsaurer Kalilösung (welche selbst stark hydrolysiert ist) z. B. und daß beispielsweise die rote Thioninmetachromasie, sowie die Toluidin- blaumetachromasie sich hält, wenigstens für einige Zeit, sobald man die gefärbten Präparate unmittelbar in eine Mischung von Xylol und Alkohol absol. bringt, in welcher Mischung einige Prozente Wasser klar gelöst (dies ist angängig) worden sind, und nun hierin zum größten Teile aber nicht absolut entwässert und nachher in reines Xylol und schließlich in Balsam überführt. Durch diese Prozedur wird eben die Hydrolyse nicht ganz auf- gehoben, die rote Farbe hält sich wenigstens im Sclileim und in Mastzellenkörnern, sowie in der Knorpelgrundsubstanz, welche Spuren von Feuchtigkeit fester behalten. L'ber die sogenannte Fixierung der Metachromasie und ihre wahre Bedeutung werde ich später berichten. Ferner bildet der Umstand, daß verdünnte Säuren in wässeriger Lösung die z. B. rote metachromatische Färbung bei blauen Farb- stolfen nicht aufheben , kein Argument gegen den basischen (im gewöhnlichen chemischen Sinne, nicht im Sinne Ehrlichs) Zustand der roten Farbe, denn ich habe u. a. bei Methylviolett, Toluidinblau, Thionin gefunden, daß erst von einer gewissen^ oft ziemlich großen Konzentration des Säuregehaltes an die hydrolytische Abspaltung der freien Farbbase so sehr zurückgedrängt wird, daß sie fast unmerk- lich wird ; also braucht eine schon (in einem gefärbten Schnitte) ein- getretene metachromatische Rotfärbung (resp. Gelbfärbung) in gewissen Gewebselementeu wie Schleim, Mastzellenkörner, Knorpel usw. nicht sogleich (auch nicht bei vergrößertem Säuregehalt der Farblösung) rückgängig gemacht zu werden. Am widerstandsfähigsten scheint mir fast die Mastzellenkörnermetachromasie zu sein. Wir dürfen aus diesen Verhältnissen schließen, daß in solchen Gewebselementeu eben die rela- tive Löslichkeit der Säure und der Farbbase anders ist als außerhalb. XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. 151 Auch habe ich vielfach gefunden, daß ein ziemlich großer Essig- säurezusatz zur Farblösung, ja selbst ein nicht unerheblicher Gehalt der wässerigen Farblösung an Salzsäure , Schwefelsäure usw. nicht die metachromatische Färbung verhinderte. Auch hier zeigen ver- schiedene Elemente bei steigendem Säuregehalt der Farblösung die Einbuße der Metachromasie früher als andere , dessen Aufspeiche- rungsvermögen für die freie Farbbase bei gegebener Konzentration der Säuremoleküle größer ist. Erst wenn die Konzentration des Säuregehaltes so groß geworden ist, daß die Hydrolyse des Farb- stoffes in der Lösung stark zurückgedrängt worden ist, wodurch der Gehalt der Lösung an freier Farbbase sehr gering, eventuell fast Null geworden ist, tritt die Metachromasie der Gewebselemente nicht mehr ein. Einfache Verdünnung mit Wasser genügt, um die Hydro- lyse wieder hervorzurufen, indem die Konzentration der Säuremoleküle herabgesetzt wird, und die Metachromasie stellt sich sogleich wieder ein. Wir haben es also auch hier zu tun mit einem Falle des von den ^lassenverhältnissen abhängigen variierenden Gleichgewichtes^ (loc, cit. p. 629 ff.). Es ist ferner klar , daß gelegentlich auch andere Bestandteile eines Gewebes als die , welche gewöhnlich eine metachromatische Färbung zeigen, die Fähigkeit haben können, die in der Farblösung vorhandene freie Farbbase aufzuspeichern, resp. sich metachromatisch färben können. Es wird jedem praktischen Mikroskopiker eine solche akzessorische Metachromasie vielfach aufgefallen sein , und ebenso daß diese Metachromasie manchmal so ausgesprochen sein kann, wie die par excellence des Schleimes, des Knorpels und der Mastzellenkörnelung. Die Art der Fixierung spielt hier ja eine große Kolle. Ferner beobachtet man diese akzessorische Metachromasie, z. B. bei dem Bindegewebe, den glatten Muskeln, auch bei den ruhenden ^) Dies ist von mir gelegentlich der Knorpelfärbungen mit angesäuerten basischen Farbstoff lösungen ausführlich dargelegt worden, ebenso bei der eingehenden Begründung meiner (nicht van Gieson!) Bindegewebsfärbung mit Säurefuchsin-Pikrin. Bezüglich dessen verweise ich auf mein dänisches Werk: Den hyaline Bruskgr undsubstans, Kopenhagen 1900, oder dessen deutsche Ausgabe: Der Hyalinknorpel (Anat. Hefte, No. 83, 1905, besonders p. 603 f. u. GlTff. u. p. 629—634 u. p. 637—640). Meines Wissens war dieses in der histologischen Mikrotechnik das erstemal (1900), wo bei einer histologischen Färbung durch bewußte quantitative Versuche das Gesetz der Massenwirkung als geltend nachgewiesen wurde. Freilich scheint dieser Abschnitt meiner Knorpelarbeit fast unbekannt zu sein. 152 Hjvnsen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. XXV, 2. Zellkernen und Zellen, an koagulierten Gewebsflüssigkeiten, an Sekreten usw. , wenn man die basischen Farbstotfe in wässeriger Lösung verwendet und die Farbtiüssigkeit schon größtenteils vom Schnitte abgetropft ist, das Präparat aber noch nicht mit destilliertem Wasser abgespült worden ist ; die akzessorische Metachromasie ist dann in maximaler Ausbreitung vorhanden , sie schwindet aber in vielen Gewebsbestandteilen durch die Abspülung in (destilliertem) AVasser, weil das Wasser die Farbbasemoleküle dissoziiert und nach- her die Farbe eines Farbsalzes oder eines freien Jons erscheint. Wir haben also wenigstens drei verschiedene Grade der Meta- chromasie bei jedem basischen Farbstotfe und bei jeder Fixierung 1) eine solche, die in reinem Wasser schwindet, 2) eine, die sich dem dissoziierenden Einflüsse des Wassers gegenüber behauptet, 3) eine, die auch einem Säurezusatz widersteht, wobei das verschie- dene Verhalten den verschiedenen Säuren (z. B. die schwache, wenig jonisierte Essigsäure und andere schwache organische Säuren und die stark jonisierten Mineralsäuren) gegenüber, abhängig von dem Jonisierungsgrade und der Konzentration der Jonen in erster Linie zu beachten wäre. Daß hier die Temperatur eine große Rolle, ebenso wie bei der Hydrolyse spielt, muß in Rechnung gezogen werden ; auch dies läßt sich durch Versuchsfärbungeu unter dem Mikroskope beobachten. Die Abhängigkeit der Metachromasie von der Anwesenheit von Wasser läßt sich sehr scliön bei der Entwässerung demonstrieren ; ist bei der Entwässerung, z. B. mittels Alkohols (oder durch vor- sichtiges Austrocknen im Exsikkator oder über eine warme Metall- platte) , die Metachromasie ganz oder teilweise geschwunden , wie unter dem Mikroskope zu sehen ist, kann man augenblicklich fast die Metachromasie wieder hervorrufen durch Wasserzusatz oder durch Wasserdampf. Die Hydrolyse tritt ja also auf. Endlich möchte ich in diesem Zusammenhang noch erwähnen, daß man sehr häufig eine doppelte Bindung der Farbe an den Ge- websbestandteilen findet, indem sowohl eine Bindung des Farbstoft'es in der Form eines F a r b s a 1 z e s und mit dessen Farbe (also blau, resp. rot) als auch eine Aufspeicherung der freien Farbbase mit deren Farbe (also rot, resp. gelb) in denselben Gewebsbestand- teilen statt hat. Dieser Fall, welcher meinen Erfahrungen nach, wenn die Präparate in der wässerigen Farblösung untersucht werden, der häufigste sein dürfte, weist eine ganze Reihe von Übergängen auf von der fast reinen salzförmigen Bindung in dem Ton des Färb- XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der metachrouiatischen Färbung. 153 Salzes auf der einen Seite bis zur fast reinen Basenassoziation in dem Ton der freien Farbbase. Die ausgesprochenen Zwisclienstadien der doppelten Farbbindung' in der Form als Salz und als Base geben natürlich eine mehr weniger ausgesprochene Mischfarbe, bei Methjiviolett, Toluidinblau und Thionin also einen mehr violetten , resp. r 0 1 v i 0 1 e 1 1 e n Farbton, bei Safranin und Neutralrot einen mehr orangenen, resp. scharlachroten Ton, wenn man die Präparate in der wässerigen Losung untersucht. Bei der nun folgenden Nachbehandlung mit Alkohol schwindet der Mischton , welcher von der Anwesenheit der freien Farbbase her- rührte, an den meisten Stellen, indem die Hydrolyse zurückgedrängt wird. Es erklärt sich so zum großen Teil die Änderung der Farb- nuance, welche bei den genannten basischen Farbstotfen, wenn man die Präparate in Xylol und in Balsam überführt, deutlich wird. Da ich also meine, daß der physikalisch-chemische Zustand der Farblösungen eine große, vielleicht die grijßte Rolle beim Auftreten der Metachromasie spiele , da ferner ein Wassergehalt und die da- durch bedingte Hydrolyse des Farbstotfes von ausschlaggebender Bedeutung ist, versteht man wie unsicher alle Schlüsse aus diesem Verhalten eines Gewebsbestandteiles sein müssen. Aus dem Auftreten einer M e t a c h r 0 m a s i e kann man meiner Meinung nach eigentlich nur schließen, daß der betreffende Gewebsteil die freie in der Farb- lösung hydrolytiscli entstandene Farbbase zu ad- dieren, a ufzusp eich er n vermag. Woran das liegt, in welcher Eigenschaft des Gewebsteiles dieses Verhalten begründet sein mag, darüber muß man in jedem speziellen Falle Untersuchungen anstellen. Vielleicht beruht es auf einem ge- wissen im gegebenen Falle besonders sich geltend machenden moleku- laren Zustand, wie ihn „Schleim" z. B. oft zeigt, ebenso wie Knorpel- grundsubstanz und die Mastzellenkörnelung; daß „schleimähnliche" Substanzen nicht immer eine Metachromasie zeigen , besagt selbst- verständlich nichts gegen ihre chemische Natur als „Schleim", ebenso- wenig wie man berechtigt wäre, mikroskopische Tropfen von Xylol, Chloroform, Benzol usw., die in einer wässerigen Thioninlösung ver- teilt sich unter dem Mikroskope metachromatisch rotgefärbt zeigen, als „mucinös" zu bezeichnen. [Eingegangen am 22. Juli 1908.] 154 Fischöl: Über eine vitule und spezitisclie Nervenfärbung. XXV, iJ. Über eine vitale und spezitisclie Nervenfärbung. Von Alfred Fischel. Wir besitzen bekanntlich im Methylenblau ein Mittel , um Nerven beim lebenden Tiere zu färben. Diese Färbung ist aber keine spezifische, da das Methylenblau außer den Nerven auch noch andere Gewebselemente hierbei mitfärbt. Es ist mir nun gelungen, einen Körper zu ermitteln, mit wel- chem man eine vitale und gleichzeitig auch spezifische Nervenfärbung erzielen kann. Dieser Körper ist das Alizarin (Alizarinum siccum). Die Objekte, an welchen ich bisher mit diesem Farbstoffe positive Resultate erhielt, sind Cladoceren. In einfachster Weise läßt sich bei diesen Tieren eine Nerven- färbung schon erzielen, wenn man in das Wasser, in dem man die Tiere hält, etwas Alizarinpulver schüttet. Nach einigen Stunden, spätestens am nächsten Tage, wird man in der so entstandenen gelb- lichen Lösung Tiere vorfinden, bei welchen wenigstens einzelne Teile des Nervensystems dunkelviolett gefärbt sind. Die Zahl der gefärbten Tiere und die Färbungsintensität nehmen allmählich noch zu. Bessere Resultate lassen sich mit reinen Alizarinlösungen er- zielen. ]Man erhält dieselben, indem man in siedendes (Leitungs-, eventuell destilliertes) Wasser Alizarin im Überschusse zusetzt, dann noch eine Zeitlang aufkochen läßt und nachher filtriert. Die noch nicht filtrierte Lösung soll eine dunkelviolette Farbe besitzen, die filtrierte ist viel heller. Vom Alizarin löst sich nur wenig, etwa 0*01 g in 250 cc Wasser. Setzt man es vor dem Erhitzen dem Wasser zu, so löst sich noch weniger, und die Wirkung der Lösung ist infolgedessen geringer. Nach dem Erkalten der Lösung setzt man von ihr mindestens das gleiche Volumen dem Wasser zu, in dem sich die Tiere be- finden. Die Färbung der Nerven tritt zeitlich in derselben Weise ein, wie dies oben geschildert wurde. Das im Handel vorkommende Alizarinum siccum ist kein reines Produkt, es ist vielmehr in verschiedenem Grade, und zwar liaupt- XXV, 2. Fischel: Über eine vitale und spezifische Nervenfiirbung. 155 sächlich mit Flavo- und Anthrapurpnrin verunreinigt. Um zu er- mitteln, was das eigentlich färbende Prinzip des Alizarinum siccum ist, habe ich Färbiingsversuche einerseits mit reinem Purpurin, ander- seits mit chemisch reinem Alizarin (Kahlbaum) augestellt. Die erst- erwähnten sind negativ, die letzteren positiv ausgefallen. Es handelt sich also um eine Wirkung des Alizarins, die aber durch die Bei- mengung von Purpurin nicht geschädigt wird. Die gefärbten Nerven sehen, wie erwähnt wurde, dunkelviolett aus. Es ist das ein Farbenton, den die Alizarinlösung dann an- nimmt, wenn man sie leicht alkalisch macht. Dieser Umstand legt die Vermutung nahe, daß auch die Färbung der Nerven durch Alka- leszenz zustande kommt : Ein schwach alkalisch reagierender Bestand- teil der Nervensubstanz verwandelt vielleicht die Farbe des Alizarins in Dunkelviolett. Der Farbstoff haftet im Nerven an Schollen und Körnchen von verschiedener Größe und Gestalt. Es handelt sich hier um eine Färbung der feinkörnigen „molekularen Nervensubstanz" selbst. Eine Fibrillenfärbung ist insofern erzielbar, als oft auch die feinsten End- zweige der Nerven sichtbar werden ; doch werden hierbei wohl nicht die Fibrillen selbst gefärbt, sondern nur jene feinen Plasmagranula („perifibrilläre Substanz"), in welchen die Fibrillen offenbar einge- bettet liegen. Die Resultate dieser Färbungsmethode sind außerordentlich schöne und instruktive. In den großen Muskeln z. B., welche die Ruderantenne bewegen, lassen sich die baumartig verzweigten Nerven zur Gänze übersehen; in den Ruderantennen selbst sieht man sowohl die zu den Muskeln zielienden, als auch die zu Ganglien ziehenden, offenbar sensiblen Nerven ; da auch die zentralen Ursprungszonen der Nerven durch Farb-Granula sichtbar werden, und ferner gewisse Nerven-Endorgane den Farbstoff annehmen können, lassen sich einzelne Systeme färberisch — beim lebenden Tiere — vollkommen zur An- schauung bringen. Ebenso lassen sich einzelne Nervengeflechte und Ganglienzellen auf diese Weise sichtbar machen. Betreffs der näheren Schilderung dieser Resultate verweise ich auf meine soeben erschienene Arbeit: Untersucliungen über vitale Färbung an Süßwasser- tieren, insbesondere bei Cladoceren. (Mit 2 Tafeln und 8 Figuren im Texte.) Leipzig, Verlag Dr. W. Klinkhardt^ ^) Separat und in der „Internat. Revue der gesamten Hydrobiologie" Bd. I, H. 1, erschienen. 15G Fischel: Über eine vitale und spezifische Nervenfiirbung. XXV, 2. Leider besitzt die Methode auch Nachteile. Der eine besteht darin, daß die Wirkung der Farblösuug eine sehr verschiedene ist: In ein und derselben Lösung findet man neben gut gefärbten Tieren auch solche, deren Nervensystem nur zum Teile oder gar nicht ge- färbt ist. Dieses Schwanken der Reaktion deutet darauf hin, daß ihr Eintritt nur bei ganz bestimmten chemischen Vorbedingungen möglich ist. Hier spielen wohl in erster Linie die in den ver- schiedenen Jahreszeiten wechselnden Ernährungszustände und StotF- wechselprozesse eine Rolle , vielleicht in der Art , daß das Nerven- system hierbei lokal und funktionell verschiedene Alkaleszenzgrade aufweist. Ein weiterer Nachteil ist der, daß es mir — bisher wenigstens — nicht gelungen ist, diese Nervenfärbung auch bei anderen Tier- arten zu erzielen. In dieser Hinsicht bedarf es noch weiterer Ver- suche. Sollte es sich übrigens herausstellen, daß das Alizarin nur bei den Cladoceren die Nerven färbt, so wäre auch dieser Nachweis sehr interessant, da es sich um eine ganz spezifische Art-Reaktion handeln würde. Es wäre das um so interessanter, als das Methylen- blau gerade als Nervenfärbungsmittel, nicht als vitaler Farbstoff im allgemeinen (siehe die zitierte Arbeit), bei den Cladoceren versagt. Vielleicht besteht in der Wirkung dieser beiden Farbstoffe auf die Nerven ein Gegensatz, der sich für die Ermittelung chemischer Ver- hältnisse verwerten ließe. Sollten die weiteren Versuche auch lehren, daß die Methode nur für eine ganz beschränkte Zahl von Arten verwendbar ist, so läßt sich doch jetzt schon sagen, daß diese Färbungsmethode außer- ordentlich interessant und prinzipiell wichtig ist. Denn sie stellt eine vitale und gleichzeitig auch eine spezifische Reaktion dar. Das erstere aus dem Grunde, weil die Nervenfärbung vom lebenden Tiere ohne jeglichen Schaden vertragen wird und die gefärbten Nerven ihre Funktionen auch weiterhin ausüben; die in ihnen gefärbten Ge- bilde ändern dabei ihr Aussehen nicht. Spezifisch aber ist die Methode deshalb, weil nur Elemente des Nervensystems, nicht auch solche anderer Organsysteme den Farbstofi' annehmen, und weil die Granula, die sich mit dem Alizarin färben, von ganz anderer Art sind, als die mit den übrigen Vitalfarbstoffen in den Zellen darstell- baren Gebilde. Eine Methode, welche gleichzeitig vital und spezifisch wirkt, war bisher nicht bekannt. Der Nachweis, daß sie möglich ist, scheint mir technisch und prinzipiell wichtig zu sein. Es ist in dieser Hinsicht XXV, 2. Winiwarter-Sainmont: Über Flemmingsche Dreifärbung. 157 von weiterem Interesse, daß man, wie in der oben genannten Arbeit näher ausgeführt wird, auch imstande ist, durch Alkalisierung, bzw. durch Ansäuerung der Alizarinlösung eine spezifische Färbung von bestimmten, otfenbar funktionell ungleichAvertigen Abschnitten der Kiemen der Cladoceren zu erzielen. Weitere Versuche sollen lehren, ob sich solche vitale und spezifische Reaktionen auch für andere Organe oder Tierarten er- mitteln lassen. Prag, Anatom. Institut, Juni 1908. [Eingegangen am 2G. Juni 1908.] Erfahrungen über die Flemmingsche Dreifärbung. Von Hans T. Winiw arter u. G. Sainmont, Enibryologisches Institut der Kgl. Staatsuniversität in Lüttich. Seit einigen Jahren scheint die Dreifärbung mikroskopischer Schnitte nach Flemming ziemlich in Vergessenheit geraten zu sein, namentlich weil eine Reihe von Autoren ungünstige Resultate mit dieser Methode zu verzeichnen hatten, um einige der schärfsten Urteile anzuführen, verweisen wir u. a. auf Skrobansky (Arch. f. mikr. Anat. Bd. LXII), V. BoNNEY (ViRCHOws Arch. Bd. CLXXXV) und besonders auf das bekannte Werk von Meyer und Lee (Mikr. Technik.) : sie alle stimmen darin übereiu , das Verfahren als „unsicher , langwierig, mühevoll''', ja sogar als ungeschickt zu bezeichnen, und ihm höchstens ästhetischen Wert zugestehen, da andere P'ärbemittel, wie z. B. das Eisenhämatoxylin ebensoviel und ebensogutes leisten, ohne seine Nach- teile zu besitzen. Wir können uns dieser abfälligen Kritik nicht anschließen. Die Flemming sehe Dreifärbung hat uns in den verschiedensten Gebieten so ausgezeichnete Bilder geliefert, daß wir gerade dieses Verfahren als eines der besten auf das wärmste empfehlen müssen. Übrigens sollte der Umstand, daß ein so gewissenhafter Forscher w4e Flemming auf seine Methode Gewicht legte , allein schon diejenigen zur Vor- 158 Winiwarter-Sainiuont: Über Flemraingsche Dreifärbung. XXV, 2. sieht mahnen , welehe sie ohne weiteres als unpraktisch verwerfen wollen. Allerdings hängt es bei der Durchführung derartiger tech- nischer Vorschriften sehr oft von gewissen Kunstgriffen ab, ob man gute oder schlechte Resultate erzielt, und gerade diese Kunstgriffe, sei es mit Absicht oder nicht, bleiben in der Regel unerwähnt. Wir haben die Dreifärbung seit etwa 12 Jahren fortwährend angewandt ; die ersten Male mißglückte sie oft, nicht weil die Methode an und für sich unsicher ist, sondern weil Flemjiings Vorschriften nicht genügend genau waren , so daß wir die zum Gelingen unbe- dingt nötigen Kunstgriffe selbst mühsam auffinden mußten. Seither haben wir das Verfahren ziemlich modifiziert ; es liefert uns jetzt genau bestimmbare Resultate. Wir glauben den Cytologen einen Dienst zu erweisen, indem wir unsere Technik im Detail beschreiben, und hoffen, daß sie mit dieser in Mißkredit geratenen Methode ebenso sichere Erfolge erzielen werden, wie wir sie erzielt haben. Zuerst einige Worte über Fixierung. Die Dreifärbung wird speziell nach Flemming scher Lösung gebraucht; sie kann aber nach irgendeinem anderen Fixierungsmittel (Zenker, Sublimat usw.) in An- wendung kommen, wenn man die aufgeklebten Schnitte 24 Stunden in Flemming sehe Lösung legt und etwa 20 Minuten in strömendem Wasser auswäscht. Wird das FLEMMiNGSche Gemisch direkt gebraucht, so muß es mindestens 24 Stunden einwirken, die Präparate können aber auch unbeschadet tage- und wochenlang in der Flüssigkeit verbleiben. Die für das Gelingen der darauffolgenden Färbung wichtigste Bedingung ist das Auswaschen. Die Größe des fixierten Stückes kommt dabei weniger in Betracht, wenigstens nach unserer Erfahrung. Wir haben mehrere zentimeterlange Embryonen in toto fixiert, ebenso Hautstücke, ziemlich große Tumoreubestandteile usw., und haben stets gut kon- serviertes Material erhalten. Das Auswaschen muß in einer besonderen Flasche vorgenommen werden, in welche das Wasser von oben hineingeleitet Avird, während es durch eine auf den Grund reichende Glasröhre wieder abfließt. Es darf keine stagnierende, gelbliche Zone entstehen. Die zu diesem Zweck konstruierten durchlöcherten Porzellanbehälter finden wir nicht praktisch. Trotz der Löcher fließt das Wasser nicht genügend hin- durch, und wenn man es dazu bringt, legt sich das Objekt gewöhn- lich gegen eine der Öffnungen, wird beschädigt, und sehr ungleich ausgewaschen, einige Teile ungenügend, andere zu stark. Die Dauer des Auswaschens muß mindestens 24 Stunden be- XXV, 2. Winiwarter-Sainmont: t'ber Flemiuingsche Dreifärbung. 159 tragen. Am besten läßt man dann sofort die aufsteigende Serie der Alkoliole einwirken und bettet in Paraffin ein, respektive man bewahrt die Objekte in Paraffin und niclit in Alkohol auf. Wenn die Schnitte erst nach mehreren Jahren angefertigt werden, so haben die Präpa- rate ihr Färbungsvermögen einigermaßen eingebüßt. Neuerliches Einlegen der aufgeklebten Schnitte in FtEMMiNGSche Lösung, wie be- reits oben erw^ähnt, beseitigt diesen Übelstand. Bei unserer eigentlichen Dreifärbung wird folgendermaßen ver- fahren : 1) Das Paraffin wird nicht über einer Spiritusflamme ge- sclimolzen, sondern einfach in zwei oder drei Xylolbädern bei gewöhn- licher Zimmertemperatur sehr leicht aufgelöst. 2) Auswaschen in einem Gemisch von Xylol und absolutem Alkohol, dann in zwei verschiedenen Alk. abs., um sämtliche Spuren von Xylol zu entfernen; 95prozeutigen Alkohol und zuletzt in 65pro- zentigem Alkohol. 3) Dann kommen die Objektträger in Safranin während 24 Stunden. Je nach dem Safranin gebrauchen wir ^/„prozentige oder einprozentige Lösung in 50° Spiritus. (Die Stammlösuug besteht aus einprozentiger Safraninlösung in abs. Alkohol, welcher einige Tropfen Anilinw^asser zugesetzt werden. Zum Gebrauch wird ein gleiches Volumen destillierten Wassers beigemischt.) 4) Mehrmaliges Abwaschen in destilliertem Wasser. 5) Sodann werden die Schnitte in einprozentiges wässeriges Gentianaviolett gebracht, ebenfalls während 24 Stunden. 6) Wiederholtes Abwaschen in destilliertem Wasser. 7) Eintauchen in eine wässerige Lösung von Orange G während etwa einer Minute. Die Konzentration dieser Lösuug hängt ganz von dem zu färbenden Objekt ab. Alle embryonalen Stadien oder Gewebe erfordern eine drei- oder viermal stärkere Konzentration als die anderen. Das einfachste Mittel ist ein für allemal empirisch diese Konzentration für ein bestimmtes Objekt festzustellen und unter dem Mikroskop zu kontrollieren, da alle späteren Manipulationen den Ton des Orange nicht mehr beeinfiussen. 8) Sechs bis acht Tropfen einer Mischung von gleichen Teilen abso- luten Alkohols und reiner Salzsäure w^erden 100 cc absoluten Alko- hols (ungefähr) beigemengt und die Schnitte in diese Flüssigkeit (acidulierter Alkohol) getaucht. Beim ersten Auftreten von violetten Wolken (nach 2 oder 3 Sekunden) werden die Schnitte sofort ent- fernt und 160 Win iwarter-Sain raunt: Über Flemmingsche Dreifärbung. XXV, 2. 9) in reinem abs. Alkohol ordentlich ausgewaschen, nm Säure und Überschuß von Farbe zu entfernen. 10) Die eigentliche Differenzierung beginnt nun in Nelkenöl mit etwas wenigem abs. Alkohol. Diese erfolgt langsam und kann von dem Anfänger leicht mittels des Mikroskopes kontrolliert werden. Gewöhnlich ist sie beendigt , wenn die Schnitte eine schöne blaue Farbe in kernreichen, eine intensiv gelbe Farbe in kernarmen Teilen aufweisen. 11) Reines Nelkenöl, um die letzten Spuren von Alkohol zu entziehen. 12) Die Objektträger werden senkrecht auf Fließpapier aufge- stellt, um das Nelkenöl größtenteils zu entfernen. Indessen dift'eren- ziert man eine Serie von neuen Objektträgern, nehme aber nicht mehr denn sechs oder sieben , da schließlich das Nelkenöl Wasser aufnimmt. 13) Genaues Auswaschen in purem Xylol. 14) Einschluß in Kanadabalsam. Dieses muß mit Xylol und nicht mit Chloroform bereitet werden. Das Chloroform verdunstet sehr langsam, in Wirklichkeit nur an den Rändern des Deckglases, während im Inneren das Gemisch jahrelang tliissig bleibt. Spuren von Nelkenöl oder Chloroform lösen nach und nach die Farbstoffe ; die Schnitte nehmen dann einen schmutzigen, gleichmäßigen braun- violetten Ton an und können histologisch nicht mehr verwertet werden. Befolgt man genau die angegebenen Vorschriften, so erhalten sich die Präparate jahrelang, ohne sich merklich zu verändern. Nach der Beschreibung zu schließen, schiene die Methode sehr lang zu dauern; aber die eigentlichen Manipulationen vom Violett bis zum Einschluß in Kanadabalsam gehen sehr rasch vor sich : etwa 20 Objektträger können in einer Stunde fix und fertig gestellt werden. * Die im Handel gebräuchlichen Gentianaviolette und Orange be- sitzen alle wesentlich gleiche Eigenschaften. Mit dem Safranin ist es freilich eine viel heiklere Sache. Wir verwenden seit langem im Laboratorium ein Produkt der ehemaligen Firma Trommsdorf, welches ganz vorzügliche Bilder gibt. Wir haben dagegen eine Anzahl anderer Safranine untersucht, die uns wenig befriedigt haben. Folgende Muster wurden probiert: E. Merck, Safr. T; Kahlbaum, XXV, 2. Winiwarter-Sainiuont: Über Flemraingsche Dreifärbung. 161 Safr. extra-G ; Höchst, SalV. AN 5 de Haen, Safr. I, II und III; ScHUCHARDT, Safr. 0, Safr. G 5 Grübler, Safr. 20 (zwei Arten), 0, rein, alcohol (zwei Varietäten); Könicj, Safr. G, extra-G, G-extra, NNSO und OSSN. Sämtliche Safranine zeigen unter sich schon große Verschieden- heiten ; für ein gleiches Gewicht schwankt das Volumen in erheb- lichen Grenzen. Einige lösen sich nie vollständig auf; im Satz scheint Sand enthalten zu sein. Ebenso wechselt die Farbe von einem Produkt zum anderen: einige sind eher bläulich oder violett, andere bräunlich , andere sogar geradezu gelb (König , NNSO und OSSN). Der größte Nachteil liegt in einer zu starken Färbung des Proto- plasmas. Durch die spätere Einwirkung des Orange nimmt dasselbe einen schmutzigen braunroten Ton an , in welchen die Kerne heller heraustreten, während das Gegenteil geschehen soll. Um aber eine gute Dreifärbung zu gewinnen, ist es absolut nötig, daß vor allem das Safranin gut wirkt , da sonst das Violett und Orange ebenfalls untaugliche Bilder liefern. Die besten Resultate wurden erzielt mit Safranin Grübler 20, DE Haen I und Schuchardt 0, in '/aP^o^^^^iSöJ" Lösung. Wir geben überdies zu, daß auch andere Safranine gute Dienste leisten können ; es hängt eben von dem zu färbenden Objekt ab. Die gelben Safranine z. B. von König (NNSO u. OSSN) färben die Granulationen von Mastzellen intensiv braun, eignen sich also in dieser Hinsicht, um jene Elemente gut hervortreten zu lassen. Welches sind die Merkmale einer wohlgelungenen Dreifärbung? Das Chromatin der ruhenden Kerne ist tief dunkelblau, der Nukleolus hellrot ; die Chromosomen einer Kernteilung rot ; das Chromatin degenerierender Kerne, in Teilung begriften oder nicht, zeigt alle Abstufungen zAvischen dem schmutzigen Braunrot zum Violett ; im Ovariura sind die Kerne der erwachsenen interstitiellen Zellen rot ; ebenso die Blutkörperchen, welches, nebenbei gesagt, das beste Zeichen eines guten Safranins ist. Das Protoplasma hellgelb , in untergehenden Zellen braun oder leicht bläulich. Das Bindegewebe färbt sich stärker in gelb oder braun. Die Fetttropfen, welche durch Osmiumsäure schwarz werden, besitzen ein ganz anderes Aussehen, als das intensiv dunkelblaue Chromatin. Die verschiedenen Kern- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 11 162 \A iniwar ter-Siiinmont: Über Flemmingsche Dreitarbung. XXV, 2. typen der Oogenese weisen bestimmte Farbendifferenzen auf, welche wir hier nicht näher beschreiben können (cf. unsere spezielle Arbeit über das Katzenovarium in Archives de Biologie). Die Membran der Zellen ist immer sehr deutlich ; die achro- matischen Figuren gut ausgeprägt, wenn auch das Eisenhämatoxylin für diesen besonderen Zweck vorzuziehen ist. Endlich möchten wir betonen, daß die Dreifarbenmethode, besser denn alle übrigen, den Gegensatz zwischen Epithel- und Bindegewebe hervortreten läßt ; dieser Umstand wäre an und für sich schon ein großes Verdienst, da namentlich bei embryologischen wie bei pathologisch anato- mischen Studien die Entscheidung, ob dieses oder jenes Element dem Epithel oder Bindegewebe zukommt, von großer AVichtigkeit ist. Dem Einwand, daß unsere Methode langsam und zeitraubend ist, können wir nur entgegnen, daß dieser Umstand gar nicht ins Gewicht fällt, wenn es darauf ankommt, tadellose Präparate zu er- halten. Wir haben uns schon an einer anderen Stelle gegen die allzu rapiden Verfahren ausgesprochen , die namentlich zu anatom- pathologischen Zwecken mit Vorliebe angewendet werden. Gerade beim Studium von malignen Neubildungen (Carcinome , Sarkome, Pagetkrebs usw.) hat uns die Dreifärbung ausgezeichnete Dienste ge- leistet, und sie ermöglicht, die verschiedensten Elemente hervortreten zu lassen, für welche gewöhnlich die Pathologen besondere Methoden empfehlen (Mastzellen, Plasmazellen, Leukocyten im weitesten Sinne des Wortes usw). Überzeugender denn eine Beschreibung wäre selbstverständlich die Demonstration eines Präparates. Da solches aber nicht möglich, können wir nur dringend ermahnen, die Dreifärbuug nach den oben erwähnten Vorschriften zu versuchen. Wer Geduld und Ausdauer auf sie verwenden will, der wird mit den erreichten Resultaten zu- frieden sein. Zum Schluß müssen wir uns ausdrücklich dagegen verwahren, als ob wir der Dreifärbung einzig und allein das Wort sprächen und alle anderen Verfahren verwürfen. Jede Technik hat bestimmte Zwecke, und wir wenden ebenso oft andere Verfahren an, schon aus Rücksicht auf Kontrollbilder; aber die Dreifärbung besitzt so ungemein viel Vorzüge, daß es schade wäre, sich ihrer nicht zu bedienen. [Eingegangen am 19. Juni 1908.] XXV, 2. Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. 163 Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. Von Dr. E. Giltaj in Wageningen (Hollanrtj. Hierzu drei Textfiguren. In bezug auf Beleuchtung beim Mikroskopieren findet man mehr- mals, wie ich meine, nicht genau Zutreffendes. Es rührt dies wohl daher, daß man sich zunächst die allgemeinen Bedingungen einer guten Beleuchtung nicht genügend vor Augen hält. Fangen wir also mit einer raschen Übersicht über dieselben an. Schlechte Qualität des Lichtes kann von drei Ursachen her- rühren : von zu geringer Intensität, von ungeeigneter Farbe und von ungenügender Ausdehnung der Lichtquelle. Es ist gewöhnlich leicht, sich über die beiden ersten Qualitäten ein Urteil zu bilden; ein wenig schwieriger ist dies in bezug auf die dritte, weshalb wir in erster Linie diese etwas genauer besehen wollen. Ungenügende Ausdehnung der Lichtquelle, woraus Beleuchtung des Feldes mit zu engen Lichtkegeln resultiert, verspüren wir an dem Auftreten störender Interferenzfiguren. Ein sehr geeignetes Objekt, um in dieser Hinsicht die Beleuchtung zu prüfen, bildet Kartoffelstärke, die man einfach in Wasser liegend unter dem Mikroskop zu betrachten hat. Ist die Lichtquelle genügend aus- gedehnt, dann überlagern sich die an den Grenzflächen auftretenden, von den einzelnen Punkten der Lichtquelle herrührenden Interferenz- figuren derart, daß eine gleichmäßige Lichtstärke resultiert, abge- sehen von einem einzigen, wenig auffallenden Lichtring an der ge- nannten Grenzfläche. Sowie aber die Lichtquelle von ungenügender Ausdehnung ist, werden mehrere, wenigstens teilweise gefärbte Licht- bänder sichtbar, die der Grenzfläche parallel laufen und namentlich bei nahe zusammenliegenden Grenzen äußerst hinderlich sind. Das Bild ist, wie man sagt, unruhig geworden. 11* 164 Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. XXV, 2. Es ist deutlich, was man iu diesem Fall zu tun hat. Mau hat sich einfach mittels einer das Licht ditl'us machenden Fläche eine neue Lichtquelle von genügender Ausdehnung zu schaffen ; weil aber durch die ditfuse Ausbreitung viel Licht für das Mikroskop verloren geht, muß dafür gesorgt werden, daß zugleich die ursprüngliche Lichtquelle genügend lichtstark ist. Und weil diese beiden Maß- regeln öfters leicht zu verwirklichen sind, ist es in vielen Fällen auch gar nicht schwer, ausgezeichnetes Licht zu erhalten. Worin besteht nun das anfangs erwähnte Unzutretfende? Erstens darin, daß man nicht selten der Meinung begegnet, daß zum Mikroskopieren ein Nordfenster in hohem Grade erwünscht, ja sogar notwendig sei. Gewiß, wer ein Nordfenster und ein Süd- fenster zur Verfügung hat, wird aus Bequemlichkeitsrücksichten das erstere vorziehen ; wer jedoch nur ein Südfenster hat, darf getrost an die Arbeit gehen, ja für einige Fälle würde ich sogar dasselbe vorziehen. Man hat einfach vor einen Teil des Fensters eine, oder ein paar Mattscheiben anzubringen; dieselben werden bei Sonnen- licht eine weiße Wolke ganz entbehrlich machen; und ist die Sonne verhüllt, so hat man den Spiegel nur auf einen nicht mit Mattglas versehenen Fensterteil zu richten. Für gewöhnliche Verhältnisse wird man erfahren, daß man relativ sehr kleine Fensterteile zu einer guten Beleuchtung braucht, so daß man sich, ohne irgendwelchen Schaden, von einem gewöhnlichen Fenster auch mehrere Meter ent- fernen kann, wenn nur der Spiegel genau gestellt wird. Das Unterlassen dieser einfachen Maßregel bildet das zweite Unzutreifende, auf das ich im Anfang hindeutete. Der Hauptzweck dieses Aufsatzes ist jedoch nicht über Sonneu- beleuchtung zu sprechen, sondern ein paar Lampen zu beschreiben, die ich vor einiger Zeit habe anfertigen lassen. Ich war nämlich damals in der Notwendigkeit, das Praktikum der Mikroskopie, wel- ches bis dahin nur bei guter Tagesbeleuchtung stattgefunden hatte, zum Teil wenigstens auch bei künstlicher Beleuchtung abzuhalten. Es war nun die Frage, welches Beleuchtuugssystem Verwendung finden sollte. Die besten mir bekannten Lampen sind erstens die Lampe mit Schusterkugel oder mit Sammellinse der Firma Zeis.s; diese hat je- doch für meinen Zweck den Nachteil, daß sie verhältnismäßig viel Raum beansprucht. Weiterhin kommt in Betracht die Lampe nach Kochs und Wolz, bei welcher mit dem bekannten gebogenen Glas- stab das Licht bis nahe unter das Präparat geleitet wird. Aber XXV, 2. Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. 165 auch diese beansprucht ziemlich viel Raum unmittelbar vor dem Mikroskop und wird obendrein kostspielig, weil man bei ihr zu be- quemem Gebrauch Zalin und Trieb bedarf, um schnell hoch und tief stellen zu können. Auch für Verwendung mit P^lektrizität hat dasjenige, was ich vorfand, mich nicht in jeder Hinsicht befriedigen können, so daß J. icli nach speziellen Angaben zwei neue Lampen habe anfertigen lassen, und zwar eine für Elektrizität und eine für Gas. Ich habe nicht ausscliließlich Gas verwenden wollen, weil dadurch der Hitzegrad im Arbeitsraum zu sehr gestiegen wäre, und auch nicht ausschließlich Elektrizität, weil liierzu der verfügbare Teil der elektrischen Anlage der Hochschule nicht ausreichte. 166 Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. XXV, 2. Zuerst bespreche ich die Gaslampe (Fig. 1). Dieselbe kann in unveränderter Form zu gleichzeitigem Gebrauch zweier Laboranten verwendet werden. Bei einer anderen Stellung der Tische und bei geringer Abänderung in der Form wäre übrigens auch eine Lampe für vier Personen verwendbar, und bei zentraler Aufstellung auf rundem Tisch sogar noch für mehr arbeitende. In der Hauptsache besteht die Lampe aus einem gewöhnlichen Auer- brenner. Um jedoch Lichtkegel von genügend großer Öffnung zu erhalten, habe ich verschiedene diffus machende Flächen vor der Flamme versucht. Nur Mattglas jedoch hat gute Resultate gegeben. LTm die Flamme immer bequem sehen und gut regulieren zu können, habe ich es vorgezogen, nicht eine einzige Mattkugel zu ver- wenden, sondern vor der Flamme zwei separate flache Mattscheiben anzubringen, und zwar in solcher Stellung, daß sie, ohne daß der Arbeitende aufzustehen braucht, mit der Hand gefaßt und beiseite geschoben werden können. Es befindet sich weiter an dem Gestell eine dunkle Gardine, damit die Augen nicht unmittelbar das Licht empfangen. Diese Gardine ist etwas weit von der Flamme ange- bracht, damit sie sich nicht zu sehr erwärmt, was von dem Antlitz sehr unangenehm empfunden wird. Weiter ist auch ein Ring sicht- bar, mit dem der Luftzutritt in ähnlicher Weise wie bei dem Bunsen- brenner reguliert wird. Derselbe ist ein sehr wesentlicher Bestand- teil einer Lampe, wenn man eine möglichst ruhige Flamme wünscht. Die Kappe sorgt dafür, daß zugleich auch die Tischfläche gut be- leuchtet wird. — Bei der elektrischen Beleuchtung stellte ich mir zunächst die Frage, mit wie wenig Akkumulatoren es möglich sein würde, ge- nügende Lichtstärke zu bekommen. Es stellte sich diese Zahl als sehr gering heraus , denn mit den neuen OsRAMlampen für nur 4 Volt Spannung (also zu liefern mit nur 2 Akkumulatoren) war ausgezeichnetes Licht zu erzielen. Die Resultate sind sogar, bei ge- eigneter Anwendung, dem besten was ich kenne mindestens voll- kommen gleichwertig. Der Stromverbrauch war dann 0'9 Ampfere. Um möglichst wenig Lichtverlust zu haben, bringe ich die eigent- liche Lampe an die Stelle des Spiegels, welche beiseite geschoben oder weggenommen wird. Das kleine Stativ wird mit einer Schraube, eventuell mit beiden, an den Fuß des Mikroskopes befestigt. Wie die Sache eingerichtet ist, ergibt sich sofort aus den Figuren 2 und 3. Die erstere stellt die Lampe vor bei Verwendung mit einem ein- fachen Hufeisenstativ, in welcher Form wir sie zunächst näher be- 1 XXV, 2. Giltay: Einiges über Beleuclitung beim Mikroskopieren. I67 trachten werden. Dabei ist die erste Frage, wie die Lichtquelle vergrößert wird, denn ohne weiteres würde das elektrische Licht fast ganz unbrauchbar sein. Die Vergrößerung geschieht wiederum am besten mit Mattglas. Um mr)glichst gute Resultate zu erhalten, muß aber dasselbe bei so kleiner Lichtquelle wie einer kleinen elek- trischen Lampe au zwei Stellen angebracht werden, und zwar etwas weit auseinander ; das helle Licht der Lampe erträgt die zweifache Zerstreuung sehr wohl. Praktisch ist es, das Glas der Lampe an der nach oben gewendeten Seite mit Karborundumfeile matt zu feilen, und dann die zweite Mattfläche auf das Diaphragma zu legen. Ich verwende hierzu möglichst dünne Objektgläser, die mit Karborundum- 168 Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. XXV, 2. pulver oder mit Amaril matt geschlifFeu werden. Ein Stückchen dieses Glases wird also unmittelbar auf das Diaphragma gelegt (Fig. 2, O). Um zu verhindern, daß beim Heben des letzteren die Luft zwischen dem Objekt- und dem Mattglas das Objektglas Aer- schiebt, werden die vier Ecken des Mattglases etwas zusammen- geschmolzen, so daß die Ränder dieser Glasplatte dem Diafragma nicht mehr überall aufliegen und die Luft also leicht passieren kann. Auch empfiehlt es sich, vermittels eines übergeschobenen kleinen Kupferringes (Fig. 2,jBj zu verhindern, daß beim Heben der Diaphragma- röhre die Matttläche selbst gegen das Objektglas stößt. Wegen der geringen Dicke des Glasplättchens kann man diesen Ring einfach an seiner Stelle belassen. Bei Verwendung resp. Ausschaltung der elektrischen Beleuchtung hat man dann außer mit der Manipulation mit der Lampe nur mit dem Auflegen resp. Fortnehmen des Glas- plättchens zu tun. Größe und Entfernung des beleuchteten Teiles dieser Matt- scheibe bedingen die Weite der Beleuchtungskegel. Li der gewöhn- lichen Art, durch Heben oder Senken der Diaphragmaröhre, wird für jeden Fall die geeignetste Beleuchtung aufgesucht. Will man diese Lampe auch mit größeren Stativen, eventuell mit AßBE-Kondensor verwenden, dann muß die zweite Mattfläche unter der Kondensorlinse angebracht werden. Bei größereu Zeiss- Stativen wird das Mattgläschen unmittelbar unter das Diaphragma, auf den hier vorhandenen Ring gelegt. Figur 3 stellt die Lampe vor, wie sie beim Gebrauch mit größeren Stativen eingerichtet ist. Die seit- liche Verschiebung mittels Kupferstabes K gestattet die Verwendung an Stativen verschiedener Abmessung. Zur Abhaltung von Licht- reflexen ist in dem Exemplar von Figur 3 der untere Teil matt- schwarz gemacht. Öfters jedoch ist dies nicht notwendig, weil dann der Tisch diesen Teil genügend verdeckt. Anderen Einrichtungen gegenüber — dem Tammes - Stativ z. B. — ist die beschriebene Lampe im Nachteil, indem sie etwas weniger schnell bereit ist; man braucht etwa 20 Sekunden zu ihrem Anbringen. Einmal am Platze — was übrigens doch auch hier schnell geschieht — hat sie jedoch den Vorzug, daß sie mit dem Mikroskop, ohne Derangierung der Beleuchtung, beiseite gestellt wird. Natürlich könnte man auch eine Stativform wählen, welche nicht bestimmt ist augeschraubt zu werden (man kann es übrigens auch mit der beschriebenen Form unterlassen), aber dann bekommt man leicht wiederholte Lichtregulierung mit in den Kauf. XXV, 2. Wulff: Gefriermethoden u. Gefrierraikrotome im allgemeinen. 169 St'liließlich erwäliiie ich noch, daß, wer nur selir gelegentlich künstliche Beleuchtung braucht, mit Vorteil auch eine gewöhnliche liadfahrer-Acetylenlaterne verwenden kann. Wenn man liiervor Matt- glas aufstellt, hat man gleichfalls Licht von ausgezeiclineter Qualität. Wer jedoch öfters künstliche Beleuchtung zu verwenden hat , ge- braucht wohl vorteilhafter eine der verschiedenen Einrichtungen ad hoc. In einer Hinsicht jedoch stehen, soviel ich weiß, alle künstlichen Beleuchtungssysteme gegen Tagesbeleuchtung zurück: in bezug auf Farbe des Lichtes. Zur Beurteilung zarter Farbenschattierungen wird die Tagesbeleuchtung durch kein künstliches System bis dahin ersetzt. [Eingegangen am 16. Mai 1908.] Über Gefrierm etil öden und Gefriermikrotome im allgemeinen, sowie über einen neuen Gefriertisch für die Zimmermannschen Mikrotome und über die Behandlung freier Schnitte. Von Dr. Max Wolff, Allteilung für Pflanzenkrankheiten am Kaiser WUhelms- Institut für Landwirtschaft zu Brornberg. Hierzu vier Textabbildungen. Die Wichtigkeit der Gefriertechnik für gewisse liistologische Spezialzwecke, in erster Linie für die neuere Impräguationstechnik der Nervenfibrillen, hat die Vorurteile etwas zurückgedrängt, die vielfach und sehr zu Unrecht der ausgiebigen Verwendung dieser Methodik im Wege standen. BiELscHOWSKY Und ich haben bei unsern Arbeiten über die neuro- fibrillären Strukturen des Neurons fast ausschließlich die Kohlensäure- Gefriermethode verwendet. Und zwar bedienten wir uns des be- kannten Jung sehen Studentenmikrotomes. Icli bin neuerdings sowohl von der Verwendung der Kohlensäure, wie des Jung sehen Instru- 170 Wulff: Gefrierraethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. XXY, 2. mentes ganz abgekommen. Ich habe die Erfahrung gemacht, daß die Kohlensäure teurer ist im Gebrauch, als es an und für sich nötig wäre, weil die Ventile der Bomben sehr wenig exakt funktio- nieren. Die Folge davon ist, daß sich das Ausströmen der Kohlen- säure nicht immer so regulieren läßt, wie es zu wünschen wäre und nötig ist, um bei starkem Strömen ein Zufrieren des Metallrohres zu verhindern. Dazu muß ich jedoch zweierlei bemerken, was meine abfällige Beurteilung der Anwendung Hüssiger Kohlensäure zu Ge- frierzwecken erklärlich erscheinen lassen wird. Erstens haben so- wolil BiELscHOwsKY wie ich immer relativ große Blöcke zu verar- beiten gehabt, die einen längeren Kohlensäurestrom erforderten, wo- bei die Mängel der Ventile sich besonders bemerkbar machen konnten. Und dann habe ich bis heute nicht Gelegenheit gehabt, die von Jung (zum Preise von 25 Mk. etwa 10 kg haltend), ferner von Leitz, Sartorius und anderen Firmen eigens für Gefrierzwecke hergestellten Bomben kennen zu lernen. Vielleicht arbeiten sie exakter, als die gewöhnlichen Bomben. Jedenfalls ist in Betracht zu ziehen, daß dann die Mehrkosten bei der Anschaffung und die Umständlichkeit der Füllung immer noch eine Rolle spielen. So meine ich denn, daß das Gefrieren mit dem Äthylchlorid-Spray bequemer und auch aus anderen Gründen dem Arbeiten mit flüssiger Kohlensäure vorzuziehen ist, — gar nicht zu reden von dem höchst unerquicklichen Arbeiten mit dem entschieden vera4teten Ather-Spray. Bei meinen Arbeiten mit Äthylchlorid als Gefriermittel kam mir der Gedanke, den Spray, anstatt auf die für Äthylchlorid berechnete Gefrierkammer des bekannten Jung sehen Studeutenmikrotoms (Neues Modell B), auf die sehr massiv gearbeiteten Metalltischchen des Minot- ZiMMERMANN sehen Mikrotomes (Fig. 1) wirken zu lassen. Ich verwen- dete eines dieser (eigentlich zum Aufkitten der Paraffinblöcke be- stimmten) Tischchen von mittlerer Größe. Um wenigstens während des Gefrierprozesses die Wärmeleitung auszuschalten, setzte ich das Tischchen mit seinem Fuße in einen durchbohrten Kork ein und um- gab zum Überfluß die Unterseite der Metallplatte mit etwas locker auf- gezupfter Watte, um ein Herabtropfen des Äthylchlorids zu verhindern. Bei meinen Schneidversuchen wählte ich als Objekt 8 mm hohe Blöcke eines frisch in Formol (lOprozentig) fixierten An- gioms, die eine 2 qcm große Schnittfläche liatten. Das Durchfrieren und Festfrieren der Objekte gelang vorzüglich, trotz der hohen Zimmertemperatur von 19*^ C. Der Verbrauch von Äthylchlorid be- trug bei diesen Versuchen durchschnittlich 5*5 g zum Preise von etwa XXV, *2. Wulff: (»ofiieimetlioden u. Gefiiermikrotorae im allgemeinen. 171 15 Pfg. Dazu habe ich nocli zu bemerken, daß icli nach beende- tem Durchgefrieren des Objektes den Tisch schnell aus dem Kork nahm und in den Objekthalter einspannte. Ich vermochte mit dem vorzüglichen Zimmermann sehen Modell dann meist in einer Minute soviel Schnitte (Schnittdicke 9 und 12 /t) herunterzuhobeln, daß nur ein Blockrest von 1 mm Höhe stehen blieb. Ich hätte es früher nicht für möglich gehalten, daß die Wärmeleitung immerliin eine volle Minute brauchen würde, um bis zur Tischplatte vorzudringen. Übrigens wurde das drohende Abtauen des Blockes (da dieser selbst als schlechter Wärmeleiter meist noch gefroren ist, wenn er von 1. der Unterlage abtaut, ist es natürlich wünschenswert, — zur Vermeidung von Materialverlusten und eventueller Beschädigung des Messers, — daß man sich vom Abtauen des Wassers nicht überraschen läßt) sehr präzise durch das vorrückende Abtauen der Bereifung des Objekttischfußes und der Unterseite der Tischplatte signalisiert. An und für sich ist es also recht gut möglich, auf dem Minot- ZiMMERMANN sehen Mikrotom mit Hilfe des Athylchlorid-Sprays und unter Verwendung eines ganz gewöhnlichen einfachen Paraffiutisch- chens selbst größere Blöcke in Gefrierschnitte zu zerlegen. Immerhin erschien es wünschenswert, den Äthylchloridverbrauch durch geeignete Isolierung der Objekttischplatte zu verringern und dadurch gleichzeitig die Möglichkeit zu gewinnen, auf das Schneiden 172 Wolff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotorae im allgemeinen, XXY, 2. des Objektes iiacli Belieben auch mehr Zeit als eine Minute ver- wenden zu dürfen. Das Anfertigen einer so großen Zahl von Gefrierschnitten in kürzester Zeit, wie ich sie bei meinen erwähnten ersten Versuchen erhielt, ist ja meines Erachtens überhaupt nur bei einem in so hohem Maße durch Schnelligkeit und Präzision des Arbeitens ausge- zeichneten Mikrotom, wie es das MiKOT-ZiiiMERMANNSche darstellt, möglich. Und bei aller selbstverständlichen Wertschätzung des genial erdachten Jung sehen Modelles (das in seiner neuen Form durch Wohlfeilheit und universelle Verwendbarkeit sich gewiß aufs beste jedem über nur geringe Geldmittel verfügenden Mikroskopiker emp- fiehlt und, für Paraffin-, Celloidin- und Gefrierschnitte eingerichtet, tatsächlich für jeden zu erschwingen ist) meine ich daher jetzt doch, für universale Verwendung vor allen anderen Instrumenten die Zimmermann sehen empfehlen zu müssen, Avenn man überliaupt die Anschaffung eines teureren Instrumentes beabsichtigt. Eines be- sonderen Gefriermikrotomes kann man auf jeden Fall alsdann ent- raten. Aber überhaupt ist es ein großer Vorzug dieser Instrumente, daß sie durch rotierende Bewegung (eines Schwungrades) betätigt werden, da das längere Arbeiten so bei weitem nicht in dem Maße ermüdet, wie dies infolge der anders gearteten Betriebsweise bei anderen Instrumenten (z. B. dem Jung sehen Studentenmikrotom) der Fall ist. Speziell für die oft recht empfindlichen Gefrierschnitte ist es ferner sehr wichtig, daß die Schnitte sofort nach ihrer Bildung auf einer feststehenden, nicht auf einer sich mehr oder weniger rasch stoßweise hin und her bewegenden Unterlage, der Messerfiäche, abgelegt werden. Das erste geschieht beim Zimmermann sehen Mikrotom, dessen Messer ja feststeht, das letzte ist dagegen, leider, bei allen mehr oder weniger speziell für Gefrierzwecke konstruierten Mikrotomen der Fall. Daß bei den Gefriermikrotomen das Messer hin und her be- wegt wird, ist praktisch jedenfalls ein Fehler der Konstruktion. Ob theoretische technische Erwägungen bei jenen Instrumenten zu diesem Konstruktionstyp geführt haben , vermag ich niclit zu beurteilen. Aber icli kann versichern, daß bei den ZniMERMANNSchen Modellen der gegensätzliche Konstruktionstypus absolut keine Mißstände (etwa ein Abweichen, Durchbiegen des Objekthalters) gezeitigt hat, wie ich besonders ganz allgemein gegenüber Mayers abfälliger Beurteilung hervorheben möchte. ^ *) Ich habe vor Jahren in Jena lange Zeit ein Zimmermann sches Mikro- XXV, 2. Wolff: Gefricrmothoden u. (Jefrieniiiki-otuuie im ullgeiueinen. 173 MAi'ER sagt, daß das von Minot angegebene Instrument an Genauigkeit der Ausführung liinter dem Scbaukelraikrotom zurück- zustehen scheine, und daß er übrigens (wenn man auf das Schneiden gerader {"lachen Wert legt) nicht das Zimmermann sehe Modell, „weil es trotz des hohen Preises nicht exakt genug arbeitet", sondern die Form, in der Becker das Mikrotom liefert , empfiehlt. Mindestens für die Instrumente, die ich kennen gelernt habe, ja ich glaube sagen zu dürfen : für die jetzt von den betreffenden Firmen ge- lieferten Instrumente (ob früher einmal die einen weniger exakt und die anderen besser gearbeitet wurden, entzieht sich natürlich meiner Beurteilung) gilt das, was Mayer sagt, nicht und ist in dieser apodik- tischen P^orm ein ganz und gar ungerechtes Urteil. Ich machte die Erfahrung, daß in den Händen der Praktikanten das Rockiug-Mikrotom schnell in Unordnung geriet, — meist lockerten sich Schrauben des Einstellapparates, was bei schnellem Arbeiten infolge des raschen Hin- und Herbewegens des Hebels, der Mikrometerschraube und Objektarm bewegt, ganz natürlicher Weise leicht eintreten kann. Dagegen passierte an dem ebenfalls von Praktikanten sehr stark benützten Zimmermann sehen Mikrotom nie das geringste. Ich bestreite absolut nicht die Brauchbarkeit und Preiswürdigkeit des Kocking-Mikrotoms, — aber wenn man Leistung und Präzision im Betriebe von beiden Instrumenten vergleichen will, so kommt man jetzt gerade zu dem entgegengesetzten Resultat wie Mayer. Die BECKERSchen Instrumente (Minot- Modelle) kenne ich nicht, aber mehr wie exakt arbeiten und sehr widerstandsfähig bei starkem Gebrauch sich erweisen, — mehr werden die Becker sehen Mikrotome auch heute nicht leisten können. Ich glaube, daß diese Abschweifung zu dem Thema Mikrotome nicht ganz überflüssig ist, um so mehr, als es sich hier ja um deren Verwendung zu Gefrierzwecken handelt, die von meinen engeren Fachgenossen ohnehin etwas zu wenig beachtet wird. Jedenfalls möchte ich nach dem Gesagten noch ausdrücklich auf die prinzipielle Brauchbarkeit der Zimmermann sehen Mikrotome für das Zerlegen (in Gefrierschnitte) der doch meist diffizileren Objekte des Zoologen hin- tom neben einem Jung sehen Rocking Mikrotom benützt. In meinem hiesi- gen Laboratorium veiwende ich ausschließlich ein Zimmermann sches Modell. Nach meinen, sich nun über 8 Jahre erstreckenden Erfahrungen mit den Zimmermann sehen Modellen muß ich bei aller aufriciitigen Achtung seiner außerordentlichen Autorität den Ausführungen P. Mayers in der zweiten Auflage der „Grundzüge der mikroskopischen Technik" (p. 79) mit aller Entschiedenheit widersprechen. 174 ^Volff: Gefrieriuethoden u. Gefriermikrotorae im allgemeinen. XXV, 2. gewiesen haben. Die Vorteile des feststehenden Messers hatten wir schon behandelt. Sehr wichtig jedoch ist es weiter, daß hier der Messerrücken nach unten steht. Hält man eine kleine Schale mit Wasser bereit, die direkt unter dem Messerrücken zwischen den beiden Säulen des Messerhalters Aufstellung finden mag, so kann man die Schnitte — eventuell läßt man etwas Wasser auftropfen — sehr bequem von der Schneide zum Rücken und von da in die Schale fließen lassen. Es gelingt so, Objekte, die sich nach der Meinung der meisten Untersucher gewiß nicht für die Zerlegung in Gefrierschnitte eignen würden (und auch bei Anwendung anderer Gefriermikrotome wirklich sich nicht dafür eignen), in durchaus befrie- digender AVeise zu schneiden, z. B. Annelliden , Insektenlarven usw. Über die Weiterbehandlung solcher Schnitte soll am Schlüsse noch einiges mitgeteilt werden. Um nicht, wie oben erwähnt, gezwungen zu sein , die ganzen Schnitte, die man zu erhalten wünscht , in einer bis höchstens auderthalber Minute herunterzuho- beln, wandte ich mich mit Vor- schlägen zwecks Konstruktion einer für Äthylchlorid geeigneten Gefrier- kammer an die Firma E. Zimmer- mann in Leipzig, die meiner An- 2. regung in entgegenkommenderweise entsprach und jetzt die in folgen- dem kurz beschriebene Gefrierkammer zu dem sehr niedrig bemes- senen Preise von 12 M. liefert (Fig. 2). Die Gefrierplatte ist hier, im Gegensatz zu den Platten der Paraffintische, mit konzentrischen Riefen versehen. Da sie an ihrer, dem Innenraum des Apparates zugekehrten Unterseite zylindrisch ausgebohrt ist, so hat sie etwa die Form eines Kapsel- oder Dosen- deckels. Die Unterseite ist mit einem grobfaserigen Stotfstück belegt , das den Äthylcliloridüberschuß , der sonst abtropfen würde, aufnimmt. Diese Gefrierplatte ist nun auf einen Hartgummiring auf- geschraubt, der seinerseits durch feste Verschraubung mit dem eigent- lichen Tischteil (der gewöhnlichen Tischchen) verbunden ist, an dem ! XXV, 2. AVolff: Gefriermethoden u. Gefriennikrotorae im allgemeinen. 175 das zum Einklemmen in den ObjektLalter dienende Fußstück sich befindet. Der Hartgummiring trägt 15 genügend weite Durchbohrungen, durch die man den Strahl des Äthylchlorid-Sprays bei jeder Stellung der Kammer gegen die Unterseite der Gefrierplatte richten kann. Ich lasse die in lOprozentigem Formol fixierten Objekte zum Auswaschen des Fixierungsmittels 2 Stunden in fließendem Wasser und bringe sie dann, mit destilliertem Wasser genügend benetzt, auf die Gefrierplatte. Bei einer (absichtlich so hoch gehaltenenj Zimmer- temperatur von 21^ C blieben die Blöcke (ebenfalls von der oben angegebenen Größe, also 3X10X20 mm) 5 Minuten lang gefroren. Das vom Flechtwerk an der Unterseite der Gefrierplatte zurückge- haltene Athylchlorid bewirkt also ein sehr ausgiebiges Nachgefrieren. Die Isolierung gegen Wärmeleitung vom Mikrotom her ist natürlich eine sehr vollkommene. Zur Erzielung einer so langdauernden Ver- eisung hatten 4 g Äthylchlorid genügt, die in maximo 12 Pfennige kosten. Übrigens müssen in diesem Falle irgendwelche ungünstige Faktoren mit im Spiele gewesen sein, die sich bei größerer Acht- samkeit vielleicht stets werden ausschalten lassen (ich vermute, daß bei ungeeigneter Richtung der Äthylchloridstrahles unnötig viel von der Gefrierplatte abtropfen konnte, wenn z. B. der Strahl den Winkel zwischen Kapseldecke und Seitenwand, oder gar den Hartgummiring selbst traf), denn später habe ich bei derselben Zimmertemperatur und derselben Blockgröße und meist auch mit einer gleichen Nach- gefrierzeit, oft nur 2*5 oder 2 g Äthylchlorid verbraucht. Im Durch- schnitt wird also bei einer recht hohen Lufttemperatur (21^ C und einer ziemlich ansehnlichen Blockgröße (3X10X20 mm) der Äthyl- chloridverbrauch nicht mehr als 3 g zum Preise von 9 Pfennigen be- tragen, wenn man den Block in aller Ruhe bis auf ein Reststück von 1 mm in Schnitte zerlegen will. Gleichzeitig glaube ich auch den Beweis erbracht zu haben, daß man mit der Äthylchloridmethode selbst in den wärmeren Klimaten sehr gut und ohne besonderen Kostenaufwand — infolge zu starken Verbrauchs von Äthylchlorid — wird arbeiten können. Mir lag daran, dies festzustellen, da es vielfach, auch von P. Mayer, in Ab- rede gestellt wird, — für die Ätherspray-Gefriermethode entschieden mit Recht. Diese ist sogar in unserer Breite während der Sommer- monate einfach unbrauchbar. Ich meine nach alledem, es müßte das kompendiöse Zimmer- mann sehe Instrument (in seinem Kasten verpackt nimmt es nicht 176 Wulff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. XXV, 2. mehr Kaum weg, als das Jung sehe Studentenmikrotom) — in voll- kommener Weise für Paraffinschnitte geeignet und durch Unterbringung der kleinen Gefrierkammer und einiger Äthylchloridtlaschen in dem dazu gehörigen Kasten (die ohne weiteres darin Platz finden) als das brauchbarste Gefriermikrotom ausgerüstet, das ich kenne — der unentbehrliche Begleiter jedes Zoologen sein, der den Wunsch hat, an Ort und Stelle , bei längerem Aufenthalt seine Untersuchungen auszuführen. Die tatsächlich bestehende Abneigung der meisten Zoologen gegen die Gefriermethode läßt sich nur damit entschuldigen, daß es allerdings sehr umständlich sein würde, zwei Mikrotome mitzuschleppen. Die Athermethode ist auf Reisen in wärmeren Kliraaten natürlich ganz unbrauchbar. Kohlensäureboraben können für den einsam irgendwo hausenden Forscher ebensowenig als praktisch in Frage kommen. Anders steht das mit dem Äthylchlorid. Nur können auch hier wieder, meiner Erfahrung nach und vor allem für wärmere Gegenden, nur schnell arbeitende Instrumente, z. B. nicht die bei aller Exaktheit viel zu langsam arbeitenden Schlittenmikrotome (für die es ja auch Äthylchloridgefriertische gibt), Verwendung finden. Es ist aber zweifellos die Bedeutung der Gefriermethode an sich gei'ade für feinere histologische Methoden eine ganz außerordent- liche und kann gar nicht überschätzt werden. Daß ein frisch und gut — etwa in lOprozentigem Formol — fixiertes Objekt nach seiner Zerlegung in Gefriersclmitte stärkere arteficielle Veränderungen aufwies, als ein in Paraffin oder in Celloi'din eingebettetes, wie von mancher Seite behauptet worden ist, bestreite ich ganz entschieden. Das ist wirklich eine völlig haltlose Legende. Die Gefriermethode schafft bei achtsamer Handhabung die geringsten Veränderungen in der Struktur des Objektes, — von allen Methoden gibt uns der Ge- frierschnitt die Strukturverhältnisse noch am meisten der vitalen Struktur genähert wieder. In weitem Abstände erst folgen jene Methoden, bei denen das Objekt eine Alkoholpassage über sich er- gehen lassen muß. Das gilt nun nicht nur von den gröberen und feineren Struk- turen, wenn es auch, diese anlangend, sehr in die Augen fällt, wie ich mich bei meinen Studien über die Kontinuität der Neurofibrillen und des Neuroplasmas und über die feineren Lagebeziehungen der Fibrillen zur plasmatischen Wabenstruktur immer wieder überzeugt habe. Die Erhaltung der Affinität gewisser Strukturen der lebenden und der frisch fixierten Zelle — auf deren teils chemischen, teils 1 XXV', 2. Wulff: Ciefriermethoden u. Gefrierinikiotome im allgemeinen. 177 physikalischen Besonderheiten beruhend - — ist bei der Gefrierraethode eine so vorzügliche, geht dagegen bei den üblichen, eine sorgfältige Entwässerung in Alkohol verlangenden Methoden oft in gar nicht berechenbarer Weise verloren, daß allein aus diesem Grunde die Gefriermethode bei feineren histologischen Arbeiten nicht so ver- nachlässigt werden sollte, wie es doch zweifellos meistens geschieht. Ich selbst habe mich noch vor 3 Jahren bei weitem nicht so enthusiastisch über die Gefrierraetliode geäußert (vergl. Biol. Zen- tralbl. Bd. XXV, p. 679—687, 691—702, 729—741) und habe empfohlen, gewöhnliche mit Wasser aufgeklebte Paraffinscbnitte mit der Methode Bielschowskys zu behandeln (Anat. Anz. Bd. XXVI, 1905, p. 136). Ich suchte dadurch hauptsächlich den sehr unan- genehmen Verletzungen aus dem Wege zu gehen, die die Präparate nur zu leicht erleiden, wenn man die Gefrierschnitte durch die Alkoholreihe, ctr. transportiert. Aus diesem Grunde hauptsächlich hat sich auch Rosenzweig bei seinen Untersuchungen über die Sub- stantia Rolandi des von mir angegebenen Kunstgriffes bedient. Wenn ich also seiner Zeit davon sprach, daß ich im Gegensatz zu BiELSCHOwsKY die „rohe Gefriermethode" durchaus nicht für technisch einwandsfrei hielt, „besonders bei fast allen Wirbellosen nicht", so war von vornherein damit nicht etwa eine Bemängelung des Erhaltungszustandes der feineren histologischen Strukturen be- absichtigt, sondern nur die oft recht ungünstige Bewahrung oder mindestens außerordentlich erschwerte Erhaltung der normalen Lage- beziehungen gemeint. Was den gewöhnlichen Modus procedendi an- geht: zu Recht, — sage ich auch heute noch. Aber ich liabe gefunden, daß vermittelst eines sehr einfachen und eigentlich kaum neu zu nennenden Kunstgriffes sich der be- mängelte gewöhnliche Modus procedendi gerade in bezug auf den eigentlich kritischen Teil umgehen und somit die Fehler der Methode vermeiden lassen. Mit alledem möchte ich übrigens in keiner Weise meine frühere Angabe modifizieren, daß die BiELscHOwsKv-Methode von allen Fibrillenmethoden noch am ehesten an alten, nicht vorschriftsmäßig vorbehandeltem Material, (das z. B. mit Boraxkarmin durchgefärbt und längere Zeit mit Alkohol behandelt, oder mit anderen Fixier- mitteln, als Formol, fixiert worden war) gute Resultate gibt. Grund- bedingung für das Gelingen ist bei solchem Material natürlich erst recht: peinliche Sauberkeit! Aber es läßt sich auch dann freilich, wie schon erw^ähnt, der Erfolg recht oft nicht voraussagen. Manchmal Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 12 178 Wolff: Gefriermethoden u. Gefiiermikrotome im allgemeinen. XXY, 2. hat eben die Erhaltung gewisser Affinitätsqualitäten der Fibrillen — meistens übrigens nur der Neurofibrillen, nicht der fibrillären Strukturen des Bindegewebes — durch die betreffende Vorbehand- lung keinen Schaden erlitten, manchmal aber ist es trotz der schein- bar völlig gleichen Vorbehandlung doch der Fall gewesen, ohne daß sich die Sache recht erklären läßt. Ebenso bestreite ich keinen Augenblick, daß bei Objekten, deren gröberes Gefüge nur sehr zarten, losen Zusammenhalt hat — wie sie also allerdings der Zoologe öfter, als der Anatom zu bear- beiten haben wird — die Paraffin- und Celloidinmethode nicht vom Gefrierschnitt ersetzt werden können. Was da die Bielschowsky- Methode anlangt, so halte ich durchaus an meinem früher geäußerten Bedenken gegenüber einer Überschätzung der Gefriermethode fest. Ich kann auch meinen früheren Angaben , die direkte Versilberung aufgeklebter Paraffinschnitte betreffend, eine neue hinzufügen, daß ich nämliche befriedigende Imprägnationen der Neurofibrillen mittels der BiELSCHOWSKY sehen Methode auch dann erhielt, wenn ich Schnitte von Material, das in Celloidin oder Gelatine eingebettet war, ganz wie gewöhnliche Gefrierschnitte behandelte. Über meine Erfahrungen mit Gelatineschnitten will ich gesondert später eingehendere Mitteilungen machen. Ich habe bis jetzt die t'berzeugung gewonnen, daß die Einbettung in Gelatine bei Wirbel- losen von großem Vorteil sein kann, wenn man die Alkoholpassage aus irgendwelchen Gründen vermeiden möchte. Vor allem lassen sich die Gelatineblöcke bequem in Gefrierschnitte zerlegen. Dadurch werden Objekte der Gefriermethode zugänglich, die sonst aus ver- schiedenen Gründen ihr nicht geringe Schwierigkeiten bereiten würden. Ich habe auf diese Weise z. B. Enchytraeiden und Anguilluliden be- quem in Gefrierschnitte zerlegen können. Das wäre sonst entweder überhaupt nicht möglich gewesen, oder die AVeiterbehandlung der winzigen Schnitte würde sich zum mindesten außerordentlich schwierig gestaltet haben. Gewölmliche Gefrierschnitte, wie Celloidinschnitte und Gelatine- schnitte, behandele ich jetzt in folgender Weise und mit folgenden, meiner Ansicht nach technisch wesentlichen Vorteilen. Deckgläser wie Objektträger werden nach der Zettnow sehen Methode auf das sorgfältigste gesäubert. Besonders wichtig ist es, daß die Objektträger absolut entfettet sind, damit sie das Wasser völlig gleichmäßig aufnehmen. Man kann natürlich auch so verfahren, wie ich es jetzt ausschließlich tue, daß man nämlich ständig einen Vor- XXV, 2. Wolff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. 179 rat Objektträger und Deckgläser in einem Gemisch konzentrierter Lösungen von doppeltchromsaurem Kali und Schwefelsäure (Vorsicht beim Mischen!) aufbewahrt. Man braucht dann die zu entfettenden Gläser nicht in der Flüssigkeit zu kochen. Sobald ich meinen Vor- rat von gebrauchsfertig in Alkohol aufbewahrten Gläsern erschöpft habe, nehme ich die im Kali-Schwefelsäuregemisch liegenden Gläser aus der Flüssigkeit heraus, in der sie mindestens 2 bis 3 Wochen gelegen haben, und spüle sie zunächst gut mit destilliertem (oder abgekochten) Wasser ab, wasche sie dann einige Minuten in gewöhn- lichem Leitungswasser und bringe sie dann wieder durch destilliertes Wasser in starken Alkohol. Gleichzeitig wird das Kali -Schwefel- säuregemisch mit einem frischen Gläservorrat beschickt. So behandeltes Glas gab völlig einwandsfreie Präparate auch mit den empfindlichsten Geißelmethoden. Was für unseren Zweck aber die Hauptsache ist: das Wasser breitet sich auf ihm auf das gleichmäßigste und in dünnster Schicht aus, — es benetzt das Glas, ohne beim Herausziehen des Objektträgers wieder herunterzurollen. Das ist nun für das Auffischen aller zarteren Schnitte von größter Wichtigkeit. Der Leser wird gewiß, wenn er Schnitte, wie die oben genannten, verarbeitet hat, bemerkt haben, daß es nicht nur sehr schwer hält, die Schnitte einigermaßen prompt auf Spatel, Glasstäbe oder Objektträger zu bringen, wenn diese sich nicht ganz gleich- mäßig vom Wasser benetzen lassen, sondern daß die Schnitte selbst dann, wenn man die zum Herausfangen verwandten Gerätschaften vorher ganz sauber mit einem Tuch abgerieben hatte, häufig an den betreffenden Instrumenten ganz oder teilweise hängen bleiben beim Versuche, sie in der nächsten Flüssigkeit (auch wenn dies ein stär- kerer Alkohol ist) abzuschwemmen. Das hält beim Arbeiten stets sehr auf, zum mindesten! Empfindlichere Schnitte, und zwar nicht bloß dünne, sondern auch alle solche von komplizierterem Gefüge, werden dabei sogar meistens mehr oder weniger lädiert oder in Un- ordnung gebracht. Ich bemerkte, daß das einzige Mittel, diesen Übelstand zu beseitigen, die oben geschilderte Behandlung der be- treffenden Gerätschaften ist. Vielleicht kommen noch andere Eigen- schaften des Materials (Glas) in Betracht, als bloß ein minimaler Fettüberzug, die dann in günstigem, die totale Benetzbarkeit herbei- führenden Sinne verändert werden. Jedenfalls genügt auch Abreiben mit Alkohol oder Äther, ja selbst Absengen in der Bunsenflamme nicht, um dasselbe Ergebnis oder dies wenigstens auch nur an- nähernd mit der gleichen Vollkommenheit zu erreichen. 12* 180 Wolff: Gefrieimethoden u. Gefriermikrotorae im allgemeinen. XXV, 2. Mit derartig präparierten Objektträgern fange ich die Schnitte einzeln heraus. Zum Halten des Objektträgers leistet eine kräftige KtJHXESche Pinzette mir die besten Dienste. Den Objektträger trockne ich nun bis auf eine kleine Zone rings um den Schnitt schnell, aber sorgfältig ab. Dies geschieht, damit die Wachsfüßchen eines etwas reichlich großen Deckgläschens, mit dem der Objektträger nunmehr zu beschicken ist, gut auch auf ihm, von unten her, ange- schmolzen werden können. Das Deckgläschen, an dem die drei Wachsfüßchen vorher angeschmolzen worden sind, wird nun aufgelegt und, indem ein kleiner erhitzter Spatel von unten her an die be- treffenden Stellen des Objektträgers gebracht wird, auf seinen Wachs- füßchen durch Herabschmelzen soweit auf den Schnitt nieder ge- senkt, daß dieser eben gerade noch nicht vom Deckglas berührt wird. 3. 4. Die Figuren 3 und 4 veranschauUchen das Gesagte zur Genüge. Die Methode bereitet nicht die geringsten Schwierigkeiten und ist an sich auch keineswegs neu. Neu ist meines Wissens nur das eine, daß ich die ganze Zusammenstellung, die etwa an ein Schau- DiNNSches Mikroaquarium erinnert, benutzte, um die genannten Arten freier Schnitte unter ihrem Schutze durch Färbflüssigkeiten, Ent- wässerungs-, Aufhellungsmedien usw. zu führen und sogar, wenn es sich um besonders empfindliche Schnitte handelte, einem komplizier- teren Imprägnationsverfahren zu unterziehen. Bisher ist es doch, meines Wissens wenigstens, ganz allgemein üblich gewesen, die Schnitte mit Hilfe von Siebschalen oder ähnlichen Apparaten (für feinere Arbeiten übrigens sämtlich in gleicher Weise unbrauchbar), oder aber mit Glas-, Hörn- und Metallspateln von einer Flüssigkeit in die andere zu befördern, wobei eben sehr leicht die feinen und XXV, 2. Wolff: Gefrienuethodcn u. Gefrieriuikrotome im allgemeinen. 181 zerreißlichen Schnitte bescliiidigt werden und — last not least — der Verbrauch an Reagentien ein erheblich größerer ist. Da das Deckglas den Schnitt nicht gerade berührt, sondern ihm nur sehr genähert ist, so können Flüssigkeiten, die ich den schmalen Spalt zwischen Objektträger und Deckglas passieren lasse, auf den Schnitt mindestens ebenso gleichmäßig einwirken, wie auf einen in gewöhnlicher Weise aufgeklebten Paratfinschnitt, als ob der Schnitt von einem Deckglas überhaupt nicht überlagert wäre. In Wirklichkeit und im Gegensatz zum aufgeklebten Schnitt, wird der Schnitt natürlich aucli durch einen kapillaren Spaltraum zwischen ihm selbst und dem Objektträger, auf dem er liegt, vollständig ge- nügend an dieser seiner Unterseite mit der Flüssigkeit zwischen Ob- jektträger und Deckglas in Berührung kommen. Der Schnitt wird also von allen Seiten von den Reagentien, die man unter das Deckglas bringt, bespült, was — wie man sich bei Färbungen ohne weiteres leicht überzeugen kann — bei dem gewöhnlichen „Färben unter dem Deckglase", d. h. bei direkt auf den Schnitt gelegtem Deckglase nie geschieht (wenigstens besteht dann, wenn man soviel von der Flüssigkeit zusetzt, daß das Deck- glas „schwimmt", die Gefahr, daß Deckglas und Schnitt verrutschen, und daß das Arbeiten überhaupt ein unsauberes wird). Dazu kommt nun noch ein anderer prinzipieller Vorteil : In dem Augenblicke, wo die etwa unter dem Deckglase zu rasch hinströmende Flüssigkeit den Schnitt mit sich reißen will, bildet der Schnitt eine leichte Welle oder Falte, die dann das Deckglas berührt. Diese Be- rührung genügt vollkommen, um die Bewegung des Schnittes in statu nascendi zu bremsen: fließt die Flüssigkeit unter dem Deckglase zu schnell, so verankert der Schnitt sich automatisch durch Wellenbildung. Die Schnitte verhalten sich also beim Durchtränken mit den verschiedenen zur Anwendung gelangenden Reagentien wie freie Schnitte, indem sie allseitig umspült werden. Dem Angriff der Stromkraft gegenüber aber verhalten sie sich gleichzeitig wie auf- geklebte Schnitte, denn sie rühren sich nicht von der Stelle. In- folgedessen bekommt man z. B. Gefrierschnitte auch von wenig zu- sammenhängend gebauten Organen (z. B. Schnitte durch die Cutis) in außerordentlich befriedigender Weise in den Balsam. Nach den anderen Methoden sind Falten- und Wellenbildungen im fertigen Balsampräparat vielfach gar nicht zu vermeiden. Hier dagegen fehlen sie völlig. Meine (Hämalaun van Gieson gefärbten) 2 qc großen und 9 /< dicken Gefrierschnitte durch das schon oben 182 Wolff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. XXV, 2. erwähnte Hämangiom liegen als fertige , in Balsam eingeschlossene Präparate so glatt unter dem Deckglase, als ob es mit Wasser auf- geklebte, tadellos geglättete Paraffinschnitte wären. Ich führe dieses günstige Ergebnis darauf zurück, daß die außerordentlich flachen Falten, die den Schnitt verankern, mit Leichtigkeit durch das Deck- glas glatt gedrückt worden, wenn dessen Füße von Aufhellungs- medien (Xylol, Karbolxylol usw.; übrigens kann mau das Weglösen der Wachsfüßchen durch einen warmen Spatel wesentlich beschleu- nigen) weggelöst sind — daß stärkere Faltungen aber während der ganzen Prozedur nie stattfinden können. Wenn man so, wie es bisher allgemein üblich ist, verfährt, d. h. die freien Schnitte mit Spateln, ctr. von einem Medium ins andere überführt, so lassen sich stärkere Faltungen bei den meisten Objekten — wenn es sich nicht etwa ge- rade um besonders günstige handelt — kaum vermeiden. Und dabei handelt es sich fast ausschließlich um tiefe, fast nie um flache Falten (der Schnitt klappt zusammen, z. B., und ähnliches). Werden solche Falten, die ohnehin bei der Alkoholpassage besonders gern sich einstellen, nun im Alkohol noch gehärtet, so kann es nicht weiter wundernehmen, daß ihre Spuren sich im fertigen Präparat nie ganz beseitigen lassen und, wenn man den Schnitt im Balsam überhaupt hatte wieder ganz ausbreiten können, als leichte Wellungen im fer- tigen Präparat dauernd persistieren. Das ist aber besonders beim mikrophotographischen Verarbeiten der Präparate höchst störend, macht die Aufnahme fehlerfreier Übersichtsbilder sogar unmöglich. Bei meiner Methode, die freien Schnitte unter dem Deckglas, das auf Wachsfüßchen fest ruht, zu behandeln, erhält man mühelos auch von schwierigen Objekten Präparate, die bei jeder Vergrößerung die Anfertigung gleichmäßig scharfer Photogramme erlauben, weil sie eben völlig gestreckt bleiben. Es ist nur noch wenig über die Behandlung solcher Präparate zu sagen. Das meiste ergibt sich aus den verfolgten Sonderzwecken für jeden, der sich etwa der Methode bedienen sollte, von selbst. Selbstverständlich muß man die Objektträger, wenn man die Schnitte sehr langsam mit dünnen Farblösungen färben oder etwa mit Silber imprägnieren will, in einer feuchten Kammer unterbringen. Man kann ferner den Austausch der Flüssigkeiten nach Belieben langsamer oder schneller vollziehen. Je nachdem gibt man, indem man gleichzeitig den Objektträger etwas schräg hält oder aufstellt (ev. genügt eine ganz minimale Neigung), die Flüssigkeit reichlicher oder sparsamer von der einen Seite des Deckglases her zu oder XXV, 2. Wolff: Gefriermethoden u. Gefrierraikrotoiue im allgemeinen. 183 läßt sie durch einen Wollfaden oder Fließpapierstreifen, der als Heber wirkt, aus einem etwas höher stehenden Schälchen von der einen Seite zu-, auf der anderen ebenso in ein tiefer stehendes ab- fließen. Z, B. läßt sich das Fixiernatron aus vergoldeten Schnitten auf die eine wie auf die andere Weise ganz vorzüglich auswaschen. Daß man die Alkoholpassage mühelos und ohne den sonst nötigen großen Schaleuaufwand zu einer sehr allmählichen unter dem Deckglase machen kann, ist eine bekannte Tatsache, die natürlich für die nach der angegebenen Weise verankerten Schnitte ebenso, wenn nicht in noch höherem Grade , als für die Schnitte gilt , die nach der herkömmlichen Weise unter dem Deckglase behandelt werden, wo also das Deckglas dem Schnitte unmittelbar aufliegt. Sehr wesentlich scheint mir endlich noch ein Vorteil. Eine ge- nügend geräumige feuchte Kammer ist leicht und mit geringen Mitteln herzustellen. Bedient man sich einer solchen und arbeitet beim Herstellen der Gefrierschnitte entsprechend langsam, so kann man die Gefriermethode benützen, um ein Objekt in geordnete Serien von Schnitten zu zerlegen. Man fängt dann je 3 oder 4 auf- einanderfolgende Schnitte aus destilliertem Wasser mit dem nume- rierten Objektträger auf. Diesen bearbeitet man zunächst nicht weiter, sondern sclineidet das Objekt fertig, indem man immer je 3 oder 4 Schnitte auf einem Objektträger auffängt. Ist die Luft im Laboratorium sehr trocken, oder will man überhaupt schneller arbeiten, so mag ein Assistent das Auffangen der Schnitte imd die Versorgung der Objektträger (Einbringen in die feuchte Kammer) übernehmen. Daß man also, ohne einen riesigen Schalenapparat anwenden zu müssen (oder die ganz unpraktischen Porzellanplatten, die für solche Zwecke angegeben worden sind) freie Schnitte, in einer Serie geordnet, behandeln kann und dabei doch nur minimale Quantitäten von Reagentien braucht, ist für die meisten Imprägnationsmethoden zweifellos von einiger Bedeutung. Stückversilberungen (mit nach- heriger Einbettung in Paraffin) sind eben immer eine riskante Sache. Der Erfolg bleibt da stets ungewiß^ selbst bei Objekten, von denen jeder Gefrierschnitt ohne weiteres und mit absoluter Sicherheit eine gute Imprägnation zuläßt. Daß auch die von mir empfohlene Ver- silberung gewöhnlicher aufgeklebter Paraffinschnitte nicht immer so gute Resultate gibt und nicht so sicher ist, wie die von Gefrier- schnitten, sagte ich schon. Rosexzweig nahm zu dieser Methode seine Zuflucht, weil er Serien brauchte, und weil sie immerhin zu- 184 Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. XXV, 2. verlässiger als die Bloekversilbening war. Jetzt würde ich aber doch raten, in allen Fällen, wo ein Objekt an und für sich der Ge- friermethode zugänglich ist, für Fibrillenversilberung von Serum- schnitten die geschilderte Gefrierschnittserienniethode anzuwenden. Man ist keineswegs gezwungen, die Objektträger sofort weiter zu verarbeiten. Ich verwende zum Feuchthalten der Kammer Subli- matlösungen, dem Wasser, aus dem ich die Schnitte auffange, setze ich etwas Thyraol oder Formol zu. So sind die Schnitte auf Wochen vor dem Verderben geschützt und können solange ruhig in der feuchten Kammer aufbewahrt werden. Die Deckglasbedeckung wie die übrigen Prozeduren brauchen erst vorgenommen zu werden, wenn man die genügende Muße zum Verarbeiten des geschnittenen Materiales besitzt. [Eingegangen am 16. Juli 1908.] Apparat zur Einbettung in Paraffin. Von Dr. H. Hahn, Prosektor am Anat. Institut in München. Hierzu zwei Textabbildungen. Um Objekte, deren Orientierung eine besondere Sorgfalt und Vorsicht erfordert, mit möglichster Genauigkeit und Ruhe in Paraflin einbetten zu können, habe ich einen einfachen Apparat anfertigen lassen, der seinem Zwecke recht gut entspricht. In der Hauptsache besteht die Vorrichtung aus einem Metall- kästchen, dessen Oberfläche durch abwechselnde Heiß- oder Kalt- wasserzuführung bald als Heizplatte wirkt und so ein beUebig langes Flüssigerhalten des Paraffins im Einbettungsrahmen gestattet, bald als Kühlplatte verwendet werden kann, um das Paraffin zum Erstarren zu bringen. Dabei erfolgt die Umschaltung des Warm- bzw. Kalt- wasserzuflusses nicht durch einen Handgriff, sondern wird durch einen Fußhebel ausgelöst. So behält man stets beide Hände frei XXV, 2. Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. 185 und kann das zu orientierende Objekt mit Nadel oder Pinzette nötigen- i'alls so lange festhalten, bis dessen Fixierung durch den Beginn der Paraftinerstarrung genügend gesichert ist. Im einzelnen ergibt sich die Konstruktion des Einbettungs- apparates und seine Gebrauchsweise aus den beigegebenen Skizzen. Auf einer 120 cm über dem Fußboden befindlichen — um ein bequemes Arbeiten im Stehen zu ermöglichen — , durch Konsolträger an der Wand festgeschraubten Tischplatte von 70 cm Breite und 186 Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. XXV, 2. 40 cm Tiefe ist linkerseits das aus Kupferblech gefertigte Kästchen Figur 1, a angebracht. Es ist 3"5 cm hoch, seine obere Platte mißt 20:15 cm. Diese letztere ist aus besonders dickem Kupferblech gearbeitet, um jede Erschütterung durch den Druck des einströmen- den Wassers auszuschalten. Dies wird noch weiter dadurch ver- 2. hütet, daß die eng gehaltene Düse für das Zuleitungsrohr (Fig. 1, h) im Inneren des Kästchen gebogen ist und so den Wasserstrahl zu- nächst bodenwärts sendet (Fig. 2). Um eine ganz gleichmäßige Temperaturänderuug der Oberfläche zu erzielen, wird das zugeleitete Wasser im Inneren des Kästchens durch eingelötete vertikale Me- tallwände gezwungen, den aus Figur 2 a b e ersichtlichen Weg zum Abflußrohr (Fig. 1, c) zu nehmen. Bei d (Fig. 1) ist ein Dreiweg-Hahn angebracht, der mittelst XXV, 2. Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. 187 des Fußliebels F umgeschaltet wird und je nach seiner Stellung ent- weder nur dem Heiß- oder nur dem Kaltwasserstrom den Zutritt gestattet. Steht im Gebäude keine Heißwasserleitung zur Verfügung, so läßt sich durch Vorlage eines gewöhnlichen kleinen Gas- oder Spiritus- Heizkörpers das warme Wasser leicht in genügender Menge gewinnen. Will man nun den Apparat benutzen, so öffnet man zunächst die beiden Sperrhähne für die Warm- (f) und Kalt- {g) Wasserleitung unterhalb des Dreiweghahnes, stellt den letzteren durch Niedertreten des Fußhebels nach vorne auf die Zuführung des Heißwassers, bringt hierauf den auf einer dünnen Metall- oder Glasunterlage befindlichen Einbettungsrahmen auf die Platte des Kästchens und läßt denselben hier sich etwas anwärmen. Dann gießt man das Paraffin ein und überträgt das Präparat. Ist die gewünschte Orientierung erreicht, so tritt mau mit dem beim Stehen als Spielbein zu benützenden rechten Fuß, der auf dem Tritthebel ruht, den letzteren nach rück- wärts herunter, wodurch die Warmwasserzufuhr momentan abge- schnitten wird und durch das zuströmende kalte Wasser die Ab- kühlung eintritt. In 20 Sekunden ist die Temperatur der vorher auf 80*^ C erwärmten Tischplatte auf 10 bis 12^ heruntergegangen. Ist die nun sofort am Boden des Einbettungsrahmens beginnende Er- starrung des Paraffins genügend, um das Präparat zu fixieren, so überträgt man den Rahmen mit seiner Unterlage in das rechterseits im Tisch eingelassene Becken mit Kaltwasserzufluß und Standrohr, und läßt dort die Erstarrung des Blockes sich vollenden. Um jeden Stoß des zufließenden Wassers sowie einen eventuellen Ablaufrückstoß im Moment des Umschaltens auszuschließen, ist es zweckmäßig, das Zu- und Ablaufrohr zwischen Dreiweghalm und Metallkästchen nicht aus starren Metallrohren, sondern aus starken Gummischläuchen herzustellen. Die Ausführung der Vorrichtung übernimmt der Spengler Otto Reinig, München, Schillerstr. 21a I. [Eingegangen am 28. Juni 1908.] 188 Heimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Spiegelkondensor und Paraboloid. Von Oskar Heimslädt. Hierzu eine Textabbildung. In dem 4. Heft des Bandes XXIV dieser Zeitschrift hat Herr Dr. H. Siedentopf einen Artikel: „Die Vorgeschichte der Spiegel- kondensoren" veröffentlicht, welcher von selten der Firma C. Reichert nicht ohne Entgegnung bleiben kann, da sein Inhalt geeignet ist, irrige Vorstellungen über die Wirkungsweise und Leistungsfähigkeit der Spiegelkondensoren dieser Firma zu erwecken. Vor allem beeinträchtigt es den Wert und auch die Neuheit dieser Dunkelfeldbeleuchtung nicht im geringsten, daß dabei längst vergessene Methoden älterer englischer Optiker wieder ver- wendet wurden. Noch vor einem halben Jahre scheint Dr. Siedentopf derselben Ansicht gewesen zu sein. Er beschrieb den Paraboloid- Kondensor unter der Überschrift : Paraboloid-Kondensor, eine neue Methoden, s. f. (1). Und im Text: „Von Wenham und Stephenson ist bereits noch viel früher ein solches Paraboloid angegeben worden. Die Wirkung wurde aber nicht recht erkannt, indem fälschlich an- genommen wurde, daß durch Totalreflexion am Deckglase eine Be- leuchtung von oben her stattfände und hierdurch das Objekt sichtbar würde. Zu jenen Zeiten war eben von Beugung des Lichtes an mikroskopischen und ultramikroskopischen Objekten noch nichts bekannt." Auch die Druckschrift der Firma Carl Zeiss: „Paraboloid-Kondensor nach Siedentopf" (nicht nach Wenham) betont die Neuheit dieser Anordnung. Mit noch größerem Recht als die Firma Zeiss konnte die Firma C. Reichert ihre Spiegelkondensoren als „neu" bezeichnen. Denn diese Instrumente waren früher als das Paraboloid von Zeiss im öffentlichen Gebrauche, ganz abgesehen davon, daß dieses optische Hilfsmittel der Spiegellinse an Ehrwürdigkeit nicht nachsteht. Nichts- destoweniger wird selbst in Wien die Version zu verbreiten gesucht, XXV, "2. He im Stadt: Spiegelkondensur und Paraboloid. jgg Reichert hätte den Spiegelkondensor, nach dem Muster des Para- boloides, der Firma Zeiss „nachgemacht". Selbst wenn dieser Firma der Nachweis gelingen würde, daß ihre Paraboloide vor dem Natur- forschertage in Stuttgart (September 1906) außerhalb der Zeiss- sclien Laboratorien und mit Erfolg im Gebrauche waren, steht der Firma C. Reichert das Recht auf die Anerkennung zu, auf diesem Gebiet unabhängig von Zeiss vorgegangen zu sein. — So- lange dieser Nachweis nicht erbracht ist, muß die Firma C. Reichert mit Entschiedenheit auf ihrem Staudpunkte beharren, als erste mit dieser neuen „alten Dunkelfeldbeleuchtung" hervor- getreten zu sein. Die „Wiederentdecker" der Spiegelkondensoren, Cotton und MouTON, ScARPA (diese haben ihre Apparate immer als Ultramikro- skope bezeichnet) und meine bescheidene Person, befinden sich eigent- lich in einer guten Gesellschaft, in der eines — Abbe, welcher doch nach dem Zeugnis des Herrn Dr. Siedentopf (2) die Anregung zu der Konstruktion des Paraboloid -Kondensors gegeben hat. Es hat den Anschein, als hätten die Versuche in dieser Richtung zu Fehlschlägen geführt und wären sie erst nach dem Bekanntwerden des Spiegel- kondensors wieder mit Erfolg aufgenommen worden. Daß auch die Ver- suche anderer mit dem Wenham sehen Paraboloid zu ungenügenden Resul- taten geführt haben, bezeugen Cotton und Mouton (3): „De son cote, M. Izarn nous avait propose cette Solution et M. Jobin nous avait construit un semblable appareil. A l'essai, il n'a pas donne de resultats bien satisfaisants. Cela tient surtout a ce qu'un miroir parabolique tres ouvert, ne peut, comme on le voit sans difficulte, donner de bonnes Images d'iin objet qui n'est pas reduit a un point situe sur Taxe." Daraus geht hervor, daß Cotton und Mouton ihre Mißerfolge auf die großen Aberrationen des Paraboloides außerhalb der Achse zurückführten. An den ungünstigen Resultaten war aber nur die Wahl des Hilfsmittels, des Wenham sehen Paraboloides, schuld, bei dessen Herstellung große technische Schwierigkeiten überwunden werden mußten. Nicht so sehr Fehler in der Form, als vielmehr Mängel in der Politur des lichtsammelnden Glaskörpers, sei es nun eine Spiegel- linse , ein Paraboloid oder Kegelstumpf, machen ein derartiges In- strument für die u 1 1 r a m i k r o s k o p i s c h e Dunkelfeldbeleuchtung gänzlich unbrauchbar. Um ein weiteres Beispiel anzuführen, sei be- merkt, daß ich bei der Nutzbarmachung des „primitiven Glaskonus" von Nachet zur Dunkelfeldbeleuchtung für ultramikroskopische Zwecke auf größere Schwierigkeiten gestoßen bin, als bei der 190 Heimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Spiegellinse, weil das Schleifen einer Kegelfläclie den Arbeitern nicht geläufig war. Es ist auch möglich, daß die Ansicht des Herrn Dr. Siedentopf, zu welcher er sich am Schlüsse seiner Ausführungen bekannte, „daß die Spiegelkondensoren nur in sehr beschränktem Maße als Ersatz für die vollständigeren P^inrichtungen zur Unter- suchung ultramikroskopischer Teilchen gelten können", hemmend auf die Ausbildung der Paraboloide als ultramikroskopische Behelfe ein- gewirkt hat. Herrn Dr. Siedentopf berührt es sonderbar, daß „in den letzten Jahren die Spiegelkondensoren als sogen. ,neue vereinfachte Ultramikroskope' weite Beachtung fanden, die ihnen als Einrich- tung für Dunkelfeldbeleuchtung nicht in dem gleichen Umfange beschieden war". Dadurch wird die Frage nach der Definition des Ultramikroskopes aufgeworfen. Als Ultramikroskop ist doch wohl jedes Instrument anzusprechen, das submikroskopische Gebilde in das Gebiet der mikroskopischen Wahrnehmung überführt. Das wird ausnahmslos erreicht durch intensive Beleuchtung des Objektes im dunklen Felde. Auch das erste L^tra- mikroskop nach Zsigmondy und Siedentopf realisierte die Sichtbar- machung ultramikroskopischer Teilchen durch Dunkelfeldbeleuchtung. Nach Dr. Siedentopf (2) war die Richtung der beleuchteten Stralilen- bündel zu der Richtung der abbildenden für die Sichtbarmachung von Ultramikronen gleichgültig, und die Beleuchtung mit Strahlen höherer und Beobachtung mit Strahlen niederer Apertur (Paraboloid) wurde von ihm als „physikalisches Prinzip zur Sichtbarmachung ultra- mikroskopischer Teilchen" bezeichnet. So lange die Spiegelkonden- soren ultramikroskopische Teilchen in Flüssigkeiten (Lösungen von Kolloiden, Blut u. s. f.), ferner Geißeln und Geißelstränge von Bak- terien und vor allem die nach Dr. Siedentopf „meist ultramikro- skopische" Spirochaete pallida(l) sichtbar machen, so lange wird man dem damit ausgerüsteten Mikroskope den Charakter eines Ultramikro- skops nicht absprechen können. Vor allen Dingen zeichnen sich die Spiegelkondensoren vor den Einrichtungen der älteren englischen Oi)tiker dadurch aus, daß bei ihnen die Intensität der Beleuchtung höher ist. Damit geht Hand in Hand die vollkommenere mechanische Durchbildung dieser Apparate. Und last not least unterscheiden sich die Spiegelkondensoren von den Einrichtungen für Dunkelfeldbeleuchtuugen nach Wenham und Stephenson hauptsächlich durch die Objekte, welche damit untersucht werden. Zsigmondy, der Entdecker des ultramikrosko- XXV, 2. Heimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. xQi pisclien Prinzips, nnd Dr. Siedentopf, der Schöpfer der ersten ein- schlägigen Apparate , würden sich entschieden dagegen verwahren, daß die Namen Stephenson und Wenham mit dem Begriff der Ultra- mikroskopie in irgendeinen Zusammenhang gebracht werden. Ihre Dunkelfeldbeleuchtungen können nur als Vorläufer der heutigen Ein- richtungen zur Beleuchtung im dunklen Felde angesehen werden. Allein der Umstand, daß die gewissermaßen auf der Hand liegende Idee der Spiegelkondensoren eine geraume Zeit zu ihrer endgültigen Ausbildung gebraucht hat, illustriert die Stichhaltigkeit dieser Annahme. Herr Dr. Siedentopf behauptet, die Leistungsfähigkeit der Spiegelkondensoren werde durch gewisse ihnen anhaftende Mängel beeinträchtigt. Er schreibt (l) : „Von C. Reichert ist die Paraboloid- fläche durch eine sphärische ersetzt. Infolge des großen Astigma- tismus entsteht dadurch eine große Helligkeitsverminderung gegen- über dem Paraboloide." Und weiter in der Abhandlung „Die Vor- geschichte der Spiegelkondensoren": „Seit dem Jahre 1906 macht ein weiterer Dunkelfeldkondensor von sich reden, der noch im vorher- gehenden Heft dieser Zeitschrift trotz seiner sphärischen Aberrationen ,als das Vollkommenste auf dem Gebiet der Ultra- mikroskopie' angepriesen wird, der Spiegelkondensor von Reichert." Zunächst weise ich darauf hin, daß die Anordnung, auf welche sich in meinem Artikel die betreffende Bezeichnung bezieht, nicht identisch ist mit dem ersten Spiegelkondensor, der seit dem Jahre 1906 von sich reden macht. Sie weicht vielmehr von diesem ganz wesentlich ab, indem sie die Dunkelfeldbeleuchtung nicht durch Totalreflexion am Deckglase, sondern durch Ab- biendung der Beleuchtungsbündel im apoch roma- tischen Immersionsobjektiv realisiert. So lange mir niclits Besseres, insbesondere zur leichten Sichtbarmachung der Spirochaete pallida, gezeigt wird, muß ich es ablehnen, diese „Anpreisung" ein- zuschränken. Ich kann nicht einsehen, in welcher Weise die astigmatischen Deformationen des Bildes, die doch erst bei größerer Neigung der Strahlenbündel gegen die optische Achse sich bemerkbar machen können, imstande sein sollen, die Helligkeit des Spiegelkondensors zu beeinträchtigen. Beträgt doch der Neigungswinkel der beleuch- tenden Büschel gegen die optische Achse bei der Kleinheit des Fel- des, welches bei Beobachtung mit mittelstarken und starken Trocken- objektive in Betracht kommt, je nach Vergrößerung des Mikroskopes und Brennweite des Kondensors ^2 ^'^^ - ^- 192 Heim Stadt: Spiegclkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Betreffs der sphärisclien Aberrationen des Spiegelkondensors habe ich schon in meiner ersten Abhandlung (4) bemerkt: „Die un- genügende Strahlenvereinigung tut der Helligkeit keinen wesentlichen Abbruch, da infolge der endlichen Ausdehnung der Lichtquelle jeder Punkt der mittleren Partie des Bildes . . . von Strahlen jeglicher numer. Apertur durchsetzt wird, soweit diese nicht durch Form und Größe der Blende beschränkt wird." Mit Hilfe untenstehender Zeich- nung gedenke ich diese Behauptung zu beweisen. Das optische System AB^ mit bedeutenden sphärischen Aberra- tionen behaftet, bildet eine leuchtende Fläche ab. Es seien durch bh' und cc' die Brennebenen von zwei sehr dünnen, hohlen Strahlen- kegeln bezeichnet, welche die entsprechenden numer. Aperturen x und JC besitzen. M und N mögen zwei beleuchtete Punkte, etwa ultramikroskopische Teilchen, vorstellen, welche in der Brennebene der Strahlen von geringerer Apertur bh' liegen. Die dem Bündel mit dem Hauptstrahl iT TV angehörenden Strahlen höherer Apertur AP und BP treffen wohl das Teilchen N nicht, dafür beleuchten sie aber seitlich von N gelegene Teilchen. So trifft der Strahl BP in seiner Verlängerung das Teilchen il/, dessen Ort mit dem Schnitt- punkt der Strahlen CM und DM zusammenfällt, die einem Bündel mit dem Hauptstrahl KM angehören. Der demselben Bündel an- gehörende Strahl OA trifft verlängert den Punkt iV, welcher somit auch von Strahlen höherer Apertur (X:) getroffen wird. Durch ein anderes Bündel, dessen Hauptstrahl zu 3IK symmetrisch liegt, werden dem Punkt N Strahlen von derselben höheren Apertur, aber ent- XXV, 2. Ileimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. 193 gegengesetzter Neigung zugeführt. Für jeden Punkt in jeder Ebene zwischen bb' und cc' läßt sich das nämliche beweisen. Es folgt daraus, daß die Beleuchtung irgendeines Objektpunktes nicht durch einen Punkt oder eine punktförmige Fläche der Lichtquelle geschieht, sondern durch eine Fläche von endlicher Ausdehnung, deren Größe von den sphärischen Aberrationen des Systems abhängig ist. Eine Einbuße an Intensität der Bestrahlung hat man nicht. Nur in einem besonderen Falle können die sphärischen Fehler der Spiegellinse die Helligkeit beeinträchtigen, nämlich dann, wenn als Lichtquelle die Sonne ohne Vor Schaltung von Beleuchtungslinsen ge- wählt wird. Wie wenig Wert auf die aberrationsfreie Vereinigung der be- leuchtenden Strahlen selbst von Herrn Dr. Siedentopf gelegt wird, zeigt klar seine Gebrauchsanweisung zum Paraboloid-Kondensor. Nach dieser wird das Bild der Lichtquelle durch eine Schusterkugel von bedeutender Größe auf den Spiegel des Mikroskopes konzentriert. Erstens verlassen bei dieser Anordnung die Lichtbündel die Schuster- kugel mit erheblichen Aberrationen, und zweitens verliert das Paraboloid seine Fähigkeit, einen einzigen auf der Achse gelegenen Punkt scharf abzubilden, infolge der geringen Ent- fernung der Lichtquelle. Als solche muß das von der Schusterkugel auf dem Spiegel des Mikroskopes entworfene Bild gelten. Auch beim Paraboloid-Kondensor findet die Beleuchtung des Ob- jektes unter ähnlichen Verhältnissen statt wie beim Spiegelkondensor. Der erstere liefert ebenfalls kein aberrationsfreies Bild, wenn seine Fehler auch anderer Natur und durch die mangelnde Konstanz der Brennweiten begründet sind. Der dadurch verursachte Fehler ist so enorm, daß man von einer punktförmigen Ab- bildung selbst achsennaher Objekte nicht sprechen kann, worauf Herr Dr. Siedentopf selbst einmal hingewiesen hat (5). Schon äußerlich macht sich diese Abnormität dadurch bemerkbar, daß bei einer Verkleinerung der freien Öffnung des Paraboloids zuerst die Strahlen geringerer, dann die Strahlen höherer Apertur aus- geschaltet werden. Dieses Hilfsmittel kann geradezu als Schulbeispiel eines optischen Systems gelten, das der Abbe-Helmholtz scheu Sinus- bedingung stracks zuwiderläuft. Doch beeinträchtigt dieser Fehler die Wirkung des Paraboloids als ultramikroskopischer Beleuchtungs- apparat nicht , ebensowenig wie den sphärischen Aberrationen des Spiegelkoudensors ein Einfluß auf desseu Wirkungsweise zuzuschreiben ist. Ein experimenteller Vergleich des Paraboloid-Kondensors mit dem Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. ;j.3 194 Heimst ä dt: Spiegelkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Plattenkondensor, welcher mit Rücksicht auf größte Lichtstärke kon- struiert ist, kann diese Darlegungen leicht bestätigen. Die Spiegelkondensoren sind vor allen Dingen in den Fällen wertvoll, in welchen es sich nicht allein um die Sichtbarmachung ultraraikroskopischer Teilchen handelt, sondern auch mikroskopische Objekte, Bakterien, Blutkörperchen u. s. f. gleichzeitig beobachtet werden sollen. Sie haben ihr Gebiet für sich und sind nicht dazu bestimmt, die älteren Anordnungen, besonders nicht die von Zsigmondy und SiEDENTOpp gemeinsam ausgearbeitete, zu verdrängen, sondern zu ergänzen. Zur quantitativen Bestimmung der ultramikroskopischen Teil- chen in festen Körpern und Flüssigkeiten wird die Methode des „opti- schen Dünnschnittes" immer ihren Vorrang behaupten. Zum Studium von Bewegungsvorgängen in kolloidalen Lösungen eignet sich dagegen besser der Spiegelkondensor, weil er lichtstärker ist und die Anwendung stärkerer Vergrößerungen gestattet. Ich weise darauf hin, daß Cotton und MouTON mit ihrem „primitiven Ultramikroskop", welches dem Spiegelkondcnsor zwar verwandt, aber wegen der einseitigen Beleuch- tung im Nachteile ist, wertvolle Beobachtungen verötfentlicht haben. Der zweiten von Herrn Dr. Siedentopf herrührenden Einrich- tung der Beleuchtung durch den Spezialkondensor und Abbiendung an der Frontlinie des Immersionsobjektivs ist der Spiegelkondensor unbedingt überlegen. Vor allem durch die Fähigkeit, mikrosko- pische und ultramikroskopische Objekte ohne Beugungsringe abzu- bilden. Ich gebe zu, daß es besondere Objekte geben mag, bei deren Beobachtung dieser Fehler zum Vorzug wird. Im allgemeinen wird er aber als Nachteil und sehr störend empfunden. So sagte z. B. Dr. L. Michaelis vor etwa 2^/, Jahren (6) : „Statt einer ein- fachen, kreisförmigen Kontur sehen wir mehrere konzentrische Ringe, die Beugungsringe ; ihr Konturen sind alle wie mit einer Rundschrift- feder gezogen , verdoppelt oder verdreifacht. Zwei sich fast be- rührende Kreise erscheinen im Ultramikroskop wie eine mehrfach konturierte 8-Figur, und andere, nur um weniges kompliziertere Ob- jekte geben infolge der gegenseitigen Überdeckung der Beugungs- ringe unentwirrbare Figuren. Für solche Objekte schafft das Ultra- mikroskop nur Verwirrung, nicht Klarheit." Aus diesen Ausführungen geht hervor, daß die Spiegelkonden- soren sehr wohl als ultramikroskopische Behelfe angesehen werden müssen und daß die Spiegellinse in mindestens demselben Maße wie das Paraboloid als geeignetes Mittel zur Erzielung von Dunkelfeld- beleuchtung gelten kann. XXV, 2. Siedentopf: Über Spiegelkondensoren. I95 Zitierte Literatur. 1) Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, H. 2, p. 104. 2) Dr. H. Siedentopf: Über die physikalischen Prinzipien u. s. f. (Berl. klin. Wochenschr. 1904, No. 32). 3) A. CoTTON u. H. Mouton: Les ültramicroscopes. Les Objets ultra- raicroscopiques. Paris 1906. p. 47. 4) Vom Verf.: Spiegelkondensor für ultramikroskopische Beobach- tungen (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide, 1907, H. 9). 5) II. Siedentopf : Dunkelfeldbeleuchtung und Ultramikroskopie (Diese . Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, H. 1, p. 13). 6) Dr. L. Michaelis: Über das Ultramikroskop und seine Anwendung in der Chemie (Zeitschr. f. angew. Chemie, Jahrg. XIX, H. 21). [Eingegangen am 21. Mai 1908.] Über Spiegelkondensoren. Erwiderung an Herrn O. Heimstädt^ von H. Siedentopf in Jena. Der Artikel „Spiegelkondensor und Paraboloid" von 0. Heim- STÄDT beschäftigt sich mit meiner Arbeit über die Vorgeschichte der Spiegelkondensoren , welche ich im XXIV. Band dieser Zeitschrift, p. 382 , veröffentlicht habe. Dieser Artikel des Herrn H. enthält mehrere sachliche Irrtümer, von denen ich einige im folgenden richtig stellen möchte. Auf die persönlichen Anspielungen und Vermutungen des Herrn H. einzugehen, lehne ich ab. Die Antithese in der Überschrift des Herrn H. „Spiegelkondensor und Paraboloid" ist geeignet, die unrichtige Meinung zu erwecken, als ob der Paraboloidkondensor kein Spiegelkondensor wäre. Der Spiegelkondensor von Reichert zeichnet sich gegenüber andern durch zwei optische Fehler zu seinem Nachteile aus, näm- 1) Um die Diskussion noch im vorliegenden Heft schließen zu können, sandte ich im Einverständnis mit Herrn 0. Heimstädt die Korrekturbogen seiner Arbeit an Herrn Dr. Siedentopf zur Einsicht. Küster. 13* 19G Siedentopf: Über .Spiegelkondensoren. XXV, 2. lieh durch seinen Astigmatismus und durch seine sphärische Aberra- tion in der Achse. Herr H. versucht den Astigmatismus dadurch unschädlich zu machen, daß er erklärt, der Astigmatismus hänge von den Neigungs- winkeln der beleuchtenden Büschel gegen die Achse ab. Da dieser Winkel klein bleibt, soll es auch mit dem Astigmatismus nichts auf sich haben. Jedoch hängt der Astigmatismus nicht von diesem Winkel ab, sondern von dem Einfallswinkel 93 an der Kugeltläche, welcher beim Spiegelkondensor von R. im Mittel etwa 30 '^ beträgt. Die schiefen Schnittweiten im meridionalen und im sagittalen Schnitt sind nicht annähernd gleich, sondern verhalten sich wie 1 : cos^ 9?. Es re- sultiert also eine ganz merkliche, astigmatische Differenz von etwa einem Drittel der Brennweite des Kondensors für Paraxialstrahlen. Den zweiten Fehler der sphärischen Aberration in der Achse sucht Herr H. dadurch für die Praxis unschädlich zu machen , daß er ausgedehnte Lichtquellen zu Hilfe nimmt und den eintretenden Strahlenverlauf diskutiert. Mit derselben Argumentation kann man aber auch beweisen , daß man überhaupt keine Spiegelkondensoren braucht, sondern mit gewöhnlichen Linsenkondensoren auskommen kann. Denn bei ausgedehnten Lichtquellen können auch die Aberrationen im sogenannten Abbe sehen Kondensor von 1"4 Apertur unschädlich werden. Wenn es nicht auf äußerste Lichtstärke ankommt, kann man durch eine Zentralblende im sogenannten Abbe sehen Kondensor von 1"4 Apertur eine recht brauchbare Dunkelfeldbeleuchtung er- zielen, wie ich schon früher auseinandergesetzt habe (Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 13). Herr H. behauptet, daß der Spiegelkondensor von R. gestattet, „ultramikroskopische Objekte ohne Beugungsringe abzubilden". Nach den Gesetzen über die Beugung des Lichtes müssen jedoch die Beugungsscheibchen, in denen die ültramikronen sich abbilden, stets von Beugungsringen umgeben sein. Wenn diese Ringe im Spiegel- kondeusor von R. nicht sichtbar sein sollten , wäre das nur ein Beweis für seine geringere Lichtstärke. Daß diese Beugungsringe bei allen Kondensoren, welche durch Zentralblende das Dunkel- feld verwirklichen, nicht so auffallend deutlich auftreten, wie in- folge der ganz anders wirkenden „Ötfnungsbcnigung" bei der Dunkel- feldbeleuchtung durch Zentralblende im Objektiv, berechtigt doch noch nicht zu der physikalisch unhaltbaren Aussage , „die Spiegel- kondensoren von R. bilden ultramikroskopische Teilchen ohne Beugungsriuge ab". XXV, 2. Siedento])!': Ül)er Spiegelkondensoren. I97 Die Diinkelfeldbilder, wie sie der Spiegelkondensor von R. zeigt, sind nicht diesem allein eigentümlich , sondern waren schon längst bei jeder ^lethode der Zentralblende im Kondensor bekannt (vgl, E. Abbe, Ges. Abh. Bd. I, p. 111). Weshalb die R. sehen Spiegelkondensoren liclitstärker als andere sein sollen, wird von Herrn H. nicht begründet. Der Leser muß sich darauf beschränken, Erklärungen anzunehmen, wie „vor allen Dingen zeichnen sicli die Spiegelkondensoren vor den Einrichtungen der älteren englischen Optiker dadurch aus, daß bei ihnen die Intensität der Beleuchtung höher ist" und der „Plattenkondensor, welcher mit Rücksicht auf größte Lichtstärke konstruiert ist" und „der Spiegelkondensor, weil er lichtstärker ist". Solche nicht weiter bewiesenen Behauptungen können wohl kaum auf allgemeine Aner- kennung rechnen. Noch weniger Beifall wird vermutlich folgende Erklärung des Herrn H. finden : „Last not least unterscheiden sich die Spiegel- kondensoren von den Einrichtungen für Dunkelfeldbeleuchtungen nach Wenham und Stephenson hauptsächlich durch die Objekte, welche damit untersuclit werden." In der Abhandlung über die Vorgeschichte der Spiegelkondensoren habe ich gezeigt, daß der Spiegelkondensor von Stephenson aus dem Jahre 1879 identisch ist mit dem REicHERTSchen. Herr H. unterscheidet also last not least zwei gleiche Apparate auch durch die Objekte , die man damit ansieht. Herrn H. laufen leider einige falsche Zitate unter. In der Ab- handlung dieser Zeitschr. Bd. XXIV, p. 104, soll ich die Spirochaete pallida als „meist ultramikroskopisch" bezeichnet haben , was nicht der Fall ist. Ich habe nicht die ganze Spirochaete so bezeichnet, sondern nur ihre Querdiraension. Ich soll darauf hingewiesen haben, daß man von einer punktförmigen Abbildung selbst achsennaher Objekte beim Paraboloid nicht sprechen könne. Ich habe nur aus- gedrückt, daß das Paraboloid wegen seiner verschieden vergrößern- den Zonen kein so präzises Bild wie ein Mikroskopobjektiv entwirft. Herr IL legt besonderen Nachdruck darauf, die Spiegelkonden- soren für Dunkelfeldbeleuchtung als etwas unbedingt Neues hin- zustellen, und glaubt die älteren englischen Optiker damit abtun zu können , daß er sie für längst vergessen erklärt. Die Verhältnisse liegen so : Das Vollparaboloid von Wenham stammt aus dem Jahre 1856, der Spiegelkondensor von Stephenson aus dem Jahre 1879. Im Jahre 1903 veraulaßte Abbe die Herstellung von Paraboloid- 198 Siedentopf: Über Spiegelkondensoren. XXV, 2. kondensoren für Dunkelfeldbeleuclitung durch Zeiss. Daß er damit nichts Neues anzugeben glaubte , geht daraus hervor , daß er das Paraboloid von Wenham zitiert und die Verhältnisse bei Dunkelfeld- beleuchtung diskutiert (vgl. Ges. Abh. Bd. I, p. 111). Das neu auf- tauchende Bedürfnis der Sichtbarmachung lichtschwacher Bakterien, wie Spirochaete i)allida, veranlaßte Verfasser, für Zeiss ein zweites Herstellungsverfahren für diese Paraboloide auszuarbeiten, das vor allem möglichste Genauigkeit der Form, daneben aber auch eine erhebliche fabrikatorische Verbilligung mit sich brachte, so daß die Paraboloide von Zeiss im Jahre 1907 zum mäßigen Preise in den Handel gebracht werden konnten. Die Firma Zeiss bezeichnete die Paraboloide nach dem Verfasser und nicht nach Wenham, um dieselben von den prak- tisch wenig brauchbaren Wenham sehen Paraboloiden zu unterscheiden und zugleich mit Rücksicht auf das neue Herstellungsverfahren. In der Genauigkeit der Formgebung unterscheiden sich also die Zeiss- schen Paraboloide von denen „nach W^enham". Insofern bedeuten sie einen neuen Fortscliritt gegenüber jenen älteren Paraboloiden. Der Spiegelkondensor von R. ist dagegen in seinen optischen Be- standteilen, insbesondere der spiegelnden Kugelfläche, identisch ge- blieben mit der von Stepiienson angegebenen Form. Herr H. müßte denn behaupten, daß man vor 29 Jahren noch nicht so gute Kugel- flächen herstellen konnte wie heute. Zu Eingang seines Artikels erklärt Herr H. , daß meine Vor- geschichte der Spiegelkondensoren geeignet sei, irrige Vorstellungen über die Wirkungsweise und Leistungsfähigkeit des Spiegelkondensors von R. zu erwecken. In jener 14 Seiten langen Vorgeschichte kommen nur folgende Sätze über den sphärischen Spiegelkondensor von R. vor (loc. cit. p. 392). „Seit dem Jahre 190G macht ein weiterer Dunkelfeldkoiidensor von sich reden , der noch im vorher- gehenden Hefte dieser Zeitschrift trotz seiner sphärischen Aberra- tionen ,als das Vollkommenste auf dem Gebiet der Ultramikroskopie' angepriesen wird, der Spiegelkondensor von Reichert. Auch dieser ist keine originale Eriindung, sondern bereits im Jahre 1879 von Stephenson in genau derselben Form als ,catoptric immersion con- denser' bekannt gegeben." Ich glaube im vorstehenden gezeigt zu haben, daß die Aberrationen des R. sehen Kondensors durch die Diskussionen des Herrn H, nicht beseitigt wurden, und gegen die Tatsache , daß schon vor etwa 30 Jahren J. W. Stepiienson den gleichen Apparat angab, hat Herr H. nichts beibringen können. Es ist also nicht zu sehen, wie aus jenen beiden zitierten Sätzen irrige XXV, 2. llofmann: Zur Injektion mit Serumtusche. I99 Vorstelhingcn über den R. sehen Kondensor erzeugt werden sollen, wie Herr H. behauptet und als Grund für seine Polemik vorgibt. Da es bei der Aufgabe der Sichtbarmachung lichtschwacher Bakterien u. dgl. wesentlich auf die " Lichtstärke der Dunkelfeld- anordnung ankommt, ist es von Interesse, einen objektiven Maßstab für die Lichtstärke verschiedener Kondensoren zu besitzen. In dem nächsten Heft dieser Zeitschrift hotie ich über ein» einfaches Ver- fahren zu berichten , das jedem Laien eine bequeme Kontrolle der 8trahlenkouzeutration in katoptrischen und dioptrischen Kondensoren ermöglicht. Ich denke, daß damit der Streit um die Lichtstärke der Kondensoren auf eine leicht diskutierbare Basis gestellt wird. t3^ Jena, am 1. August 1908. [Eingegangen am 3. August 1908.] Zur Injektion mit Serumtusche. Von Dr. Max Hofmann, Primararzt iu Meran (Tirol), Bezugnehmend auf die Mitteilung von Herrn Prof. J. Hamburger: „Injektionen mit Eiweiß- und Serumtusche zu mikroskopischen Zwecken" in dieser Zeitschrift, Bd. XXV, H. 1, erlaube ich mir mitzuteilen, daß ich die Verwendung von Serum an Stelle von Hühnereiweiß be- reits 1901 in meiner Arbeit: „Zur vergleichenden Anatomie der Gehirn- und Rückenmarksvenen der Vertebraten" , Zeitschrift für Morphologie und Anthropologie, Bd. III, p. 240, empfahl und mit dieser Blutserumtusche die für meine Arbeit notwendigen Injektionen ausgeführt habe. -'o^ [Eingegangen am 20. Juli 1908.] 200 Referate. XXV, 2. Keferate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. Federici, F., L'ether sulphurique comme liquide inter- media ire pour rinclusion u la paraffine et 1 ' i 11 cl 11 s i 0 11 mixte a 1 a c e 1 1 o i d i n e et paraffine (Anat. Anz. Bd. XXXI, 1907, No. 21, 22, p. 601—604). Verf. hebt hervor, daß von den beiden Haupteinbettiingsmethoden in Celloidin und in Paraffin jede ihre Vorteile und Nachteile besitze und daß man schon mehrfach den Versuch gemacht habe, beide mit- einander zu verbinden, daß indessen die bisher angegebenen Methoden noch nicht hinreichend praktisch seien. Er fand nun bei seinen Untersuchungen, daß der Äther, der bei gewöhnlicher Temperatur nur Spuren von Paraffin löst, bei steigender Temperatur sehr viel mehr löst, so bei 30^ in dem Verhältnisse von einem Volumen zu einem Volumen, bei 38° in dem Verhältnisse von einem Volumen zu zwei Volumina. Er hat ihn daher an Stelle des von Heidenhain empfohlenen Schwefelkohlenstoffes zur Paraffineinbettung verwendet : nach Entwässerung in absolutem Alkohol kommen die Präparate für einige Stunden in Äther und dann in die erste Ätherparaffinmischung (Äther 5 cc , Paraffin von 50 ^ Schmelzpunkt 4 g) , dann in eine zweite ebensolche Mischung, wobei die Präparate in jeder 3 bis 4 Stunden in einem Ofen von 39 ° verweilen. Man erhält nach Verf. leicht und schnell die Ätherparaffinraischung , wenn man die beiden Substanzen, das Paraffin in Stücken, in einem wohlverschlossenen Glase bei 38 bis 40° in den Ofen bringt. Die Mischung kann mehr- XXV, 2. Referate. 201 mals angewendet werden. Die Gefahr, daß die Ätherdämpfe sicli entzünden, ist g-eringer, wenn man sich hütet, das Gefäß der Flamme zn nähern. Es genügt nun ein Verweilen von einer halben bis einer Stunde in reinem Paraffin von 50^, um eine gute Einbettung zu erhalten. Diese Methode ist auch sehr geeignet, um in sehr hartes Paraffin einzubetten (so im Sommer), denn der Aufenthalt der Präpa- rate in der hohen Temperatur wird auf diese Weise ein möglichst kurzer. Vor dem Schwefelkohlenstoffe hat der Äther den Vorzug, schneller einzudringen und schneller aus dem reinen Paraffiubade zu verdunsten. Da nun der Äther auch ein ausgezeichnetes Lösungs- mittel für Celloidin ist, so hat Verf. versucht, beide Methoden mit- einander zu verbinden, was ihm auf folgende Weise gelungen ist: Aus dem absoluten Alkohol kommen die Präparate für 12 bis 24 Stunden in Äther und dann in eine Lösung von Celloidin in Äther von 3 bis 4 Prozent, dann sofort in die erste Paraffinäther- mischung usw. , wie oben angegeben. Man erhält so sehr feine Bänderschnitte, die man, wie Paraffiupräparate , aufkleben kann; anderseits sind die Schnitte sehr elastisch , und die Form wie die Lagerbeziehungen der Teile werden in ihnen durch das Celloidin erhalten. Man schneidet mit trockenem Messer. Hört man auf, zu schneiden, so ist es allerdings praktisch, die Oberfläche des Blockes mit geschmolzenem Paraffin zu bedecken, um ein Austrocknen der oberflächlichsten Partien zu vermeiden. Die Methode hat dem Verf. ausgezeichnete Resultate , besonders auch für Embryonen , ergeben, da sie ja auch den Vorteil besitzt, daß der größte Teil des Ver- fahrens sich bei einer Temperatur von o9^ vollzieht, während die Durchtränkuug mit reinem Paraffin bei 48 bis 50 ^^ sich während 15 bis 30 Minuten ausführen läßt. Sckiefferdecker {Bo?ni). 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere, Duesberg, J. , Sur l'existence de mitochondries dans laiuf et l'embryon d'Apis mellifica (Anat. Anz. Bd. XXXII, 1908, No. 9, 10, p. 261—265 m. 4 Figg.). Die Fixierung der Bieneneier und der Embryonen ist sehr schwierig wegen der Anwesenheit einer Chitinhaut, welche das Ein- 202 Referate. XXV, 2. dringen der Reagentien hindert; auf dieser befindet sich außerdem noch eine fettige Masse, und infolgedessen scliwiiumt das Ei auf der Oberfläche der stark wasserhaltigen Fixierungsflüssigkeiten. Es ist daher zu empfehlen, alkoholische Fixierungsflüssigkeiten anzuwenden, so die Flüssigkeit von Petrunkewitsch , doch ist dies nicht absolut nötig; Verf. hat den größten Teil seines Materials fixiert mit Essig- säuresublimat und den Osmiummischungen: HEUMANxscher, Flemming- scher und Bexda scher Flüssigkeit. Schieffe)xlecker {Bonn). Hotfmaim, R. W., Über die M o r p li o 1 o gi e und die Funktion der Kauwerkzeuge und über das Kopfnerven- system von Tomocerus plumbeus L. 3. Beitrag zur Kenntnis der CoUembolen (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 598—689 m. 18 Figg. u. 5 Tfln.). Beim Einfangen der Tiere muß auf drei ihrer Eigenschaften besonders Rücksicht genommen werden, nämlich auf ihre leichte Verletzlichkeit, ihre Empfindlichkeit gegen Trockenheit und ihre Licht- scheu. Zum Studium der Kopforgane ist neben der Schnittmethode die Präparation am Totalobjekt unerläßlich. Plattenmodelle wurden mit Vorteil für das Nervensystem und das Tentorium angewandt. Diese Technik bietet indessen viel Schwierigkeiten, da bei der Klein- heit des Objektes sehr starke Vergrößerungen und ziemlich dünne Schnitte angewandt werden müssen, was bei der Rekonstruktion in mangelhafter Genauigkeit des Modelies zum Ausdruck kommt. Für die Herstellung lückenloser Serien ist es nötig, entweder ziemlich junge Tiere oder solche auszuwählen, die sich gerade gehäutet haben. Als Fixierungsflüssigkeit empfiehlt Verf. nach vielen wenig befriedi- genden Versuchen mit den gebräuchlichsten Stoßen eine eigene Mischung, die aus 10 Teilen einer einprozentigen Platinclioridlösung, 5 Teilen konzentrierter wässeriger Sublimatlösung, 5 Teilen absoluten Alkohols und einem Teil Eisessig besteht. Die Objekte werden zur schnellen Fixierung in die auf 60^ C erwärmte Flüssigkeit gebracht und nach einigen Minuten für 2^/2 bis 3 Stunden in die kalte Lösung gebracht, um dann durch die gewöhnlichen Alkoholstufen geführt zu werden. Sollen nur die Chitinteile benutzt werden, genügt einfache Konservierung in TOprozentigem Alkohol. — Zur Färbung der Schnitt- serien diente ausschließlich die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylin- Methode. Für die Zergliederung des Objektes in toto ist außer viel Übung eine binoculare Lupe unbedingt erforderlich. Bei der Präpa- ration der Weichteile — besonders des Muskeln — leistet die an- XXV, 2. Referate. 203 gegebene Fixierungsflüssigkeit recht gute Dienste. Sie läßt nämlich die Muskelelemente mit großer Deutlichkeit hervortreten ohne sie brüchig zu machen. Als Farbstoft' für die zur Zergliederung be- stimmten fleischigen Teile ist Alaunkarmin zu empfehlen. Um die Vorteile der binokularen Lupe ganz auszunützen, konstruierte sich Verf. einen kleinen Apparat, der es erlaubt, jede beliebige Seite des Gegenstandes einer gewissen Beleuchtung auszusetzen, ohne Ge- fahr zu laufen, daß durch Strömungen, die in der Flüssigkeit, in der das zu untersuchende und eventuell weiter zu präparierende Ob- jekt liegt, durch die Wärmestrahlen der Beobachtungslampe entstehen, seine Lage verändert wird. Der Apparat besteht aus einem kleinen runden Glasschälchen von etwa 6 cm Durchmesser, in welchem hori- zontal ein dünnes rundes Eisenstäbchen verläuft, das auf der einen Seite durch die Schälchenwand hindurch geht, so daß es von außen bequem in seinem Lager gedreht werden kann. Die Glasdurch- bohrung ist mit einem Lederscheibcheu gedichtet. Auf der Mitte des Stäbchens ist eine plane Fläche angeschliffen, die zur Aufnahme des Objektes dient. Das Aufkleben des letzteren wird auf folgende Weise bewerkstelligt. Man bringt das Objekt zunächst aus Wasser auf ein winziges Tröpfchen dicken Fischleim, das sich auf der ebenen Fläche der Drehachse befindet. Wichtig ist dabei, daß der Leim nur die Stelle benetzen darf, an welcher das Objekt festkleben soll. Es wird dann zunächst flüchtig unter der einfachen Lupe im Trockenen orientiert und dann das Gefäß mit schwachem Alkohol (35- bis öOprozentigj angefüllt. In diesem bleibt der Fischleim noch lange Zeit weich, so daß man genügend Zeit hat, das Objekt unter der binokularen Lupe in die definitive gewünschte Lage zu bringen. Ist dies geschehen, so füllt man starken Alkohol nach. Die Be- festigung ist dann nach einiger Zeit so stark, daß man sogar noch Präparationen vornehmen kann. Als Beleuchtungsquelle für die Lupenuntersuchung benutzt Verf. eine NERXST-Lampe, die in einer Blechhülse steckt, welche im Innern mit einer weißen nicht spiegeln- den Masse gestrichen ist und die nur durch eine kleine runde Öffnung einen Lichtkegel nach außen sendet. Bei der Präparation der chitinigen Mundwerkzeuge ist Färbung notwendig. Die meisten Farben greifen aber selbst bei tagelanger Einwirkung diese Chitin- teile gar nicht an, andere wieder geben nur eine ganz diffuse Fär- bung, die keinerlei Vorteile gewährt. Recht gut geeignet ist für diesen Zweck aber ungereinigter Holzessig. Die Objekte bleiben mindestens 24 Stunden in dieser Flüssigkeit. Oft erweist sich selbst 204 Referate. XXV, 2. ein Aufenthalt von einigen Tagen als wünschenswert. Immer ent- fernte Verf. vor dem Studium der Chitinteile die fleischigen Elemente, und zwar ausschließlich durch Präparation mit Nadeln, da Kalilauge gar nicht selten sogar die gröberen Chitinteile angreift und die feineren oft gänzlich zerstört. E. Schoehel (Neapel). Reichensperger, A., Zur Kenntnis des Genus Ophiopsita. FoRB. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 173 — 192 m. 3 Figg. u. 1 Tti.). Da die Entkalkung in Alkohol mit Zusatz von Salpetersäure, ferner auch die in Chromsäure u. a. trotz aller Vorsicht meist nur unbe- friedigende Resultate gab, wandte Verf. mit geringer Abänderung das von Rousseau vorgeschlagene Verfahren (vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, p. 270), nach einer Einbettung in Celloidin rasch zu ent- kalken, an. Er setzte auf 100 Teile Alkohol etwa 20 bis 25 Teile 25prozentiger Salpetersäure zu. Nach dem Auswaschen in 95pro- zentigera Alkohol unter Zugabe von Kalziumkarbonat wurde in abso- luten Alkohol überführt und dann das Celloidin bis auf geringe Spuren entfernt; dann folgte in üblicher Weise Behandlung mit Chloroform, Chloroform-Paraffin, Paraffin. Dieses Verfahren hat die Vorteile sicheren Entkaikens, guter Erhaltung der Gewebe und be- ((uemen Schneidens. Gefärbt wurden die Schnitte vorzugsweise mit Eiseuhämatoxyliu- Rubin und mit Thiuoniu- Eosin. Auch Pikrokarmin und Triacidgemische lieferten je nach der Fixierung mehr oder we- niger günstigere Resultate. E. Schoehel {Neapel). Popoff, M., Eibildung bei Paludina vivipara und Chro- midien bei Paludina und Helix (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXX, 1907, p. 43—129 m. 1 Fig. u. 5 Tfln.). Es wurden Ovarien von Tieren in verschiedenem Alter und zu verschiedenen Jahreszeiten fixiert , um möglichst alle Stadien der Eieutwicklung zu erhalten. Zur Fixierung wurden hauptsächlich und mit sehr gutem Erfolg die Gemische von Zenker , Petrunkewitsch und Flemming angewandt. Letzteres gab bei Paludina ausgezeichnete Resultate für die Kerne , schwärzte aber wegen des hohen Fett- gehaltes das Plasma; ganz besonders günstig erwies es sich aber bei Helix. Seltener wurde außerdem noch die HERMANNSche Flüssig- keit, konzentrierte wässerige Sublimatlösung, Sublimat- Alkohol u. a. m. angewandt. Zur Färbung diente am häufigsten die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylinmethode ; zur Kontrolle wurde aber noch — und XXV, 2. Referate. 205 zwar besonders für die Nukleolusfrage — mitDELAFiELos HämatoxjMin, Hämatoxylin-Eosiu, Häraatoxylin-Säurefuclisin, Flemmings Zweifacli- tinktioii, Berlinerblau, Boraxkarmin, Gentianaviolett ii. a. m. gefärbt. Gute Dienste leisteten auch mit Boraxkarmin gefärbte und in Nelkenöl untersuchte Zupfpräparate. Schließlich behandelte Verf. noch Zwitter- drüse und Gehirn von Helix nach der Osmiumsäuremethode von Kopsch und dem Formol-Osmiumsäureverfahren von Sjövall, wobei sich zeigte, daß sich die Chromidien der Geschlechtszellen genau wie die „Osmium- netze" der Ganglienzellen darstellten. E. Sckoebel (Neapel). Popoff, M., Die Gametenbildung und die Konjugation von Carchesium poIypinumL. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 478—524 m. 6 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung diente konzentrierte warme Pikrinsäurelösung. Da es bei der Abtötung von Wichtigkeit ist, daß die Tiere sich nicht an den Stielen zusammenziehen und dadurch die ganze Ko- lonie zu einem unentwirrbaren Klumpen wird , bringt man die zur Fixierung bestimmte Carchesium -Kolonie in ein Uhrschälchen mit wenig Wasser und neigt das Schälchen so, daß man nach erfolgter Streckung der Tiere rasch mit einem kräftigen Guß das Fixatif über- gießen kann. Die Carchesien kommen dadurch plötzlich in reine Fixierungsflüssigkeit und sterben meist vollständig ausgestreckt. Die durch das Übergießen fortgeschwemmten Kolonien sammelt man in einer zu diesem Zweck untergestellten Glasschale. Gefärbt wurde mit Boraxkarmin, und der Einschluß der Objekte erfolgte in toto in Nelkenöl. E. Sckoebel {Neapel). Müller, H., Untersuchungen über Eibildung bei Clado- nemiden und Codoniden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 28—80 m. 3 Tfln.). Zur Fixierung des Materials wurde Sublimat, Pikrinschwefelsäure, Pikrinessigsäure, Chromessigsäure und Hermann sehe Flüssigkeit mit Erfolg verwandt. Formol erwies sich wenig brauchbar. Zur Fär- bung wurde meist Eisenhämatoxylin, zum Teil mit den üblichen Vor- und Nachfärbungen benutzt. E. Sckoebel {Neapel). Nusbaiim, J., Weitere Regenerationsstudien an Poly- chäten. Über die Regeneration von Nereis di- versicolor (0. F. MtJLLER) (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 109 — 163 m. 3 Tfln.). 206 Referate. XXV, 2. Verf. rühmt Nereis als vorzügliches Material für Regenerations- studieu. Erstens sind die Tiere leicht zu beschaifen und zweitens sind sie äußerst kräftig und lebenszäh. Operierte Exemplare leben in kleinen Aquarien sehr gut monatelang zwischen Ulvablätteru und ertragen sogar eine längere Reise. Wesentlich ist ferner noch, daß diese Würmer in der freien Natur oft Verletzungen unterliegen und danach sehr energisch regenerieren, so daß man unter den ge- fangenen Exemplaren zahlreiche Individuen trifft, die mit Regenerations- kegeln von verschiedener Größe versehen sind, man kann also bequem die künstlichen Regenerate mit natürlichen vergleichen. E. Schoebel {Neapel). Merton, H., Über den feineren Bau der Ganglienzellen aus dem Zentralnervensystem von Tethys lepo- rina Cuv. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 327—357 m. 2 Tfln.). Für Übersichtsbilder, speziell bei beabsichtigter Kernfärbung sind zur Fixierung des Materials Sublimatgemische verwendbar, zur Untersuchung der feineren Plasmastruktur aber unbedingt Osmium- säuregemische vorzuziehen. Die besten Resultate wurden in letzter Beziehung mit der Hermann sehen Platinchlorid-Osmium-Essigsäure erzielt. Die schlechte Färbbarkeit derartig fixierter Objekte läßt sich teilweise durch Bleichmittel beseitigen. Während Sublimatessig- säure meist den Kern intakt erhält, den Zelleib aber schrumpfen läßt, ist bei Hermann scher Flüssigkeit das Umgekehrte der Fall. Fixierung in lOprozeutigem Formol gibt vakuolisiertes Plasma. Diese Art der Fixierung wurde deshalb auch nur dann verwandt, wenn die Objekte nach der Bielschowsky sehen Versilberungsmethode behandelt werden sollten. Bei dieser Methode erwies es sich not- wendig, die 2prozentige Silberlösung 3 bis 4 Wochen einwirken zu lassen , wenn eine gute Imprägnation des inneren Netzwerkes er- zielt werden sollte. Nicht so elektive, dafür aber vollständigere Bilder des inneren Netzwerkes wurden mit der Versilberungsmethode von Nabias erzielt, wonach die Schnitte erst mit einer Jod -Jod- kaliumlösung (Jod 1, Jodkalium 2, Wasser 300) bis zur Gelbfärbung behandelt, dann nach Abspülen in destilliertem Wasser in eine einprozentige Goldchloridlösung gebracht und nach abermaligem Ab- spülen in Wasser in Anilinw^asser (1:40 bis 100) reduziert werden. Bei Anwendung von Tannin-Brechweinsteinlösung an Stelle von Jod- Jodkalilösung konnte eine wesentlich deutlichere Färbung des Netz- XXV, 2. Referate. 207 Werkes erreicht werden. Zur Färbung- des Plasmas im allgemeinen und auch des Hüllgewebes wurden Anilinfarben benutzt, und zwar mit dem besten Erfolge Toluidinblau-p]rythrosin nach den Angaben von HoLMGiiEN. Zur Darstellung der chromophilen Bestandteile des Endoplasmas ist die NissLSche Schollenfärbung zu empfehlen, für die fasrigen Elemente unter anderem auch die IlEiDENHAiNSche Elisen- hämatoxylinmethode, zur Kernfärbung Boraxkarmin und Hämalaun. E. Schoebel {Neapel). Wassilieff, A., Die Spermatogenese von Blatta germa- nica (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXX, 1907, p. 1—42 m. 1 Fig. u. 3 Tfln.). Da die Geschlechtsdrüsen von Blatta das ganze Jahr hindurch funktionieren, sind immer alle Stadien der Entwicklung der Ge- schlechtsprodukte leicht zu haben. Gute Fixierung der Hoden ergab Sublimat, Sublimat-Essigsäure, ferner Flemmings und Hermanns Ge- misch. Unbrauchbare Resultate wurden im vorliegenden Falle mit den Flüssigkeiten von Carnoy, vom Rath und Rabl erhalten. Bei der Färbung ist zu berücksichtigen, daß es unerläßlich ist, mehrere Methoden in Anwendung zu bringen, und die Resultate zu kombi- nieren. Eisenhämatoxylin färbt nach Sublimatlixierung die Centro- somen, nach Flemmings Gemisch dagegen die Mitochondrien vorzüg- lich. Magenta-Iudigokarmin und Pikrinsäure nach Ramon y Cajal ist für das Studium der Chromosomen geeignet. Letztere Farbe färbt auch die Centrosomeu gut, läßt aber die Mitochondrien ganz ungefärbt. E. Schoebel (Neapel). Stei'zinger, J., Ü b e r d a s L e u c h t v e r m ö g e n v o n A m p h i u r a s quam ata Sars (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIH, 1907, p. 358—384 m. 2 Tfln.). Als Reizmittel, um das Leuchten hervorzurufen, wurde Süß- wasser, absoluter Alkohol, Essigsäure oder Salzsäure benutzt. Me- chanische Reize, wie Berühren der Tiere, Schütteln des Behälters u. a. erwiesen sich gewöhnlich als unwirksam. Zur Feststellung des Ortes, wo das Licht auftritt, ist unbedingt Beobachtung unter dem Mikroskop notwendig. Um für Präparate die Füßchen gut ausge- streckt zu erhalten, ist Lähmung der Amphiuren vor der Fixierung fast unbedingt notwendig, wozu sich langsames Zugeben von Mag- nesiumsulfat gut eignet. Zur Fixierung selbst wurde 70prozentiger Alkohol oder ^/j prozentige Osmiumsäure benutzt, zur Entkalkung 208 Referate. XXV, 2. essigsaurer Alkohol. Salzsaiirer Alkohol ist hierzu ungeeignet, da der Schleim, der das Leuchten hervorruft, von ihm aufgelöst wird. Zur Färbung der Schnitte und Totopräparate eignet sich sehr gut Thionin in schwacher wässeriger Lösung. Außerdem kam noch Muchämatein, Mucikarmin und Delafields Hämatoxylin zur Ver- wendung, Mazerationsjiräparate lassen sich herstellen, indem man die Tiere 2 bis 3 Minuten in ein Gemisch von gleichen Teilen ^/goprozentiger Osmiumsäure und -^Z- prozentiger Essigsäure und dann 1 bis 2 Tage in ^/j^prozentige Essigsäure bringt. Nach solcher Be- handlung lassen sich durch Klopfen auf das mit Wachsfüßchen ge- stützte Deckglas die Zellen des darunter liegenden Objekts leicht aus ihrem Verbände Jösen. E. Schoebel {Neapel). Lorleberg, 0. Untersuchungen über den feineren Bau des Nervensystems der Ascidien (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 212—248 m. 2 Tfln.). Von spezifischen Nervenfärbungen wurde zunächst die GoLtusche Chromsilbermethode angewandt, aber ohne jedes brauchbare Resultat. Bei achttägigem Verweilen der Stücke — es kam ausschließlich Styelopsis grossularia zur Verwendung — im Silberbad trat eine Imprägnation überhaupt nicht ein, bei längerem Verweilen darin manchmal zwar eine solche stellenweis , aber durchaus für Unter- suchszwecke ungenügend. Stücke aber, die 5 Wochen im Silberbad gelegen hatten, waren vollständig mazeriert. Mit der von Kodis beschriebenen Methode mit molybdänsaurem Hämatoxylin und Mallorys phosphormolybdänsaurem Hämatoxylin wurde zwar ein positives Re- sultat erzielt, aber durchaus nicht etwa spezifische P'ärbung der nervösen Elemente. Die gleichmäßig blaugefärbten Präparate ließen nur dann Nervenfasern als solche mit Sicherheit feststellen, wenn ihr Zusammenhang mit dem Gehirn oder den peripheren Nerven nachzuweisen war. Immerhin ergab die Methode recht brauchbare Präparate. Es wurden entweder nach den Angaben von Kodis die frischen Objekte auf 48 Stunden in eine gesättigte Lösung von Quecksilbercyanid gelegt, dann auf 48 Stunden in Formol (1:10) gebracht und schließlich in molybdänsaurem oder phosphormolybdän- saurem Hämatoxylin in der Verdünnung 1 : 20 gefärbt, oder aber es wurde, und zwar mit recht gutem Erfolge in Formol fixiertes Ma- terial ohne vorherige Wässerung, auf 5 Stunden in molybdänsaures Hämatoxylin in der Verdünnung 1 : 5 gebracht , dann direkt in 95prozentigen Alkohol überführt und unter öfterem Wechsel des- XXV, 2. Referate. 209 selben so lange hierin belassen, bis keine Farbabgabe mehr er- folgte. Da das molybdänsaure Hämatoxylin sehr schwer in die Tiefe dringt, müssen die zu färbenden Stücke möglichst klein genommen werden. Zur Färbung des Plasmas der Ganglienzellen erwies sich Hämatoxylin -|- Orange Gr als das geeignetste Mittel. Es empfiehlt sich hierbei mit Orange G recht intensiv zu färben, so daß das Häma- toxylin fast ganz verdeckt wird. Für den gleichen Zweck ist weiter auch Doppelfärbung mit Methylenblau (1 : 100) und Orange G zu empfehlen. Gute Dienste leisteten ferner Osmium-Holzessig-Präparate, Heidenhains Eiseuhämatoxylinfärbung und die Ameisensäure-Gold- methode nach Apathy. Für letztere wurde aber nicht, wie im all- gemeinen verlangt wird, frisches Material verwandt, sondern altes, in Formol (1 : 10) konserviertes. Es kamen die Stücke, bei denen das Gehirn möglichst frei gelegt sein muß, aus dem Formol auf ^1^2 Stunde in einprozentige Ameisensäure, darauf eine Stunde im Dunkeln in eine reichliche Menge von einprozentigem Goldchlorid. Hieraus wurden die Stücke nach Abspülen in einprozentiger Ameisen- säure in eine große Quantität derselben Säure gelegt und hierin 24 Stunden dem diffusen Tageslicht ausgesetzt, um schließlich nach Spülen in destilliertem Wasser auf gewöhnliche Weise zum Schneiden in Paraffin vorbereitet zu werden. — Im Interesse einer guten Fixierung und Färbung ist es immer ratsam, den Tieren die Dorsalseite zu entfernen, um das Ganglion den Flüssigkeiten besser zugänglich zu machen, um hierbei allzu starke Kontraktionen zu vermeiden, ist Narkotisierung der Tiere zu empfehlen. E. Schoebel {Neapel). Weygandt, C, Beiträge zur Ken ntnisd er Spermatogenese bei Plagiostoma Girardi (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 249—290 m. 8 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung der der Untersuchung dienenden Turbellarien wurde teils gesättigte Lösung von Sublimat in Seewasser, teils Pikrinschwefelsäure verwandt. Letzteres Reagens gab vielleicht die besseren Resultate. Zur Färbung diente fast ausschließlich Eisen- hämatoxylin mit Eosin-Nachfärbung. E. Schoebel {Neapel). Schepotieif, A., Die Echinoderiden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 291—326 m. 4 Tfln.). Die Konservierung des Materials ist wegen der geringen Durch- lässigkeit des Panzers und der Kleinheit der Tiere äußerst schwierig. Zeitsehr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 14 210 Referate. XXV, 2. Zur Herstellung von brauchbaren Schnitten muß man die Tiere vor dem Einbetten unbedingt quer durchschneiden, da der Panzer für Paraffin undurchlässig ist. Nach längeren Versuchen fand Verf., daß für ganze Tiere nur die Fixierung mit heißem Sublimatalkohol oder mit GiLsoNScher Flüssigkeit (etwa 35*^ C) geeignet ist. Die Tiere sterben darin in ausgestrecktem Zustande. Vor der Über- tragung in Alkohol muß entweder das Endsegment oder der Rüssel abgeschnitten werden. Da die ungefärbten Tiere wegen ihrer ge- ringen Dimensionen in Paraffin geradezu unsichtbar sind, wurden sie in toto sehr stark gefärbt, wozu sich Kleinenbergs Hämatoxy- lin am geeignetsten erwies. E. Schoebel {Neapel). Schepotieff, A., Über den feineren Bau der Gordiuslar- ven (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 230— 241 m. 1 Tri.). Die Untersuchungen wurden hauptsächlich an möglichst dünnen Schnitten ausgeführt, dickere Schnitte als 3 jx zeigten sich schon als nicht brauchbar. Als beste Färbungsmethoden wurde Toluidin- blau mit Hämatoxylin oder Safranin mit Blochmann schem Gemisch gefunden. E. Schoebel (Neapel). Deineka, D., Das Nervensystem von Ascaris (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 248—307 m. 7 Figg. u. 9 Tfln.). Trotzdem ,, bisher keine mit der Methylenblaumethode angestellte Arbeit über das Nervensystem der Nematoden vorhanden ist" und trotzdem es dem Verf. gelang, „bei diesem scheinbar ungünstigen Objekt eine volle und intensive Färbung des Nervensystems mit Me- thylenblau zu erzielen", macht er doch so gut wie keine positiven Angaben, wie er seine Resultate erzielte. Er sagt nur: ,,Die Me- thylenblaumethode, welche auf einer chemischen Verwandtschaft des Farbstoffes zur Nervensubstanz beruht", wurde nur unwesentlich ge- ändert. Verf. „kombinierte bloß die Bedingungen für sein Objekt günstig, unter welchen die Verwandtschaft sich oftenbart. . . . Die zu berücksichtigenden Bedingungen sind : Konzentration der Lösung, Temperatur, Dauer der Färbung, die Art des Aufschneidens des Tieres, die Art der Fixierung in molybdänsauren Ammon u. a. m, . . . Eine unumgängliche Bedingung für die Aufnahme der Farbe ist stets das lebende Gewebe." Das ist alles was Verf. von seinem Geheimnis verrät. E. Schoebel (Neapel). XXV, 2. Referate. 211 Ude, J., Beiträge zur Anatomie und Histologie d er S iiß- wassert r icia de n (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 308 — 370 m. 3 Figg. u. 3 Tfln.). Das Uutersuchsraaterial war teils in Alkohol, teils in Sublimat und teils in Chrom-Osmium-Essigsäure fixiert worden und die Prä- parate wurden meist mit Eisenhämatoxylin oder Häraatoxylin- Eosin tingiert. E. Schocbel {Neapel). Bendel, W. E., Beiträge zur Kenntnis des Genus Rhyn- chodemus (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 525—554 m. 2 Tfln.). Das zur Verfügung stehende Material war wohl ausschließlich in Alkohol fixiert. Zum Zweck der anatomischen Untersuchung wurden die Objekte in Schnitte von 5 /* Dicke zerlegt und meist mit Ehrlich s Hämatoxylin kombiniert mit Eosin tingiert. Nur für das Studium der Muskulatur der Kopulationsapparate wurde auch noch die Van GiEsoNSche Färbung herangezogen. E. Schoebel (Neapel). Janicki, C. V., Über den Bau von Amphilina liguloidea DiEsiNG (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 568—597 m. 8 Figg. u. 2 Tfln.). Zur Untersuchung lagen vier in Formol fixierte Tiere vor. War auch bei der angewandten Konservierung der Gesamthabitus gut er- halten, so ließ doch die feinere Struktur der Gewebe manches zu wünschen übrig. Die Färbung der Schnitte erfolgte mit Delafields Hämatoxylin kombiniert, teils mit Bordeauxrot, teils mit Van Gieson- schem Gemisch. E. Schoebel {Neapel). Becher, S., Rhabdomolgus ruber Keferstein und die Stammform der Holothurien (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 545—689 m. 12 Figg. u. 5 Tfln.). Das Material war größtenteils in Alkohol konserviert. Dieser Konservierungsart gebührt der Vorzug vor allen anderen, wenn es sich um die Untersuchung der gegenseitigen Lage der Organe han- delt. Alkohol erhält auch die Kalkkörper und gestattet immer eine beliebige Färbung. Außerdem wurde aber noch mit Flemmings und Hermanns Flüssigkeit und mit Sublimat-Eisessig (konzentrierte Subli- matlösung 4 Teile, Eisessig ein Teil) fixiertes Material untersucht. Die beiden erstgenannten Geraische sind für Kernstrukturen und 14* 212 Referate. XXV, 2. Zellformenstudien geeignet, letzteres für sonstige feinere histologische Untersuchungen. Pikrinschwefelsäure und Sublimat-Alkohol-Eisessig leisten bedeutend weniger. — Als Färbungsmittel eignen sich Borax- karmin oder Hämalaun zur Stückfärbung. Dieselbe reicht aber für dünne Schnitte (5 jut und weniger) nicht aus. Zur Schnittfärbung ist daher für Kerne Thionin, Hämatoxylin [welches ?] oder Eisenhämatoxylin zu empfehlen. Thionin kann man in konzentrierter oder verdünnter wässeriger Lösung verwenden. Da derselbe weder in Wasser noch in stärkerem Alkohol (95prozentig) viel ausgezogen wird, so kann man die Schnitte nach dem Färben in Wasser gut abspülen, dann in schwachem Alkohol (TOprozentig) differenzieren und den ge- wünschten Grad der Färbung dann in starkem Alkohol fixieren. Thionin liefert sehr gute Kerntinktion, färbt aber gleichzeitig die Klebdrüsen der Tentakeln und das Bindegewebe (besonders die Grund- substanz) tief rot, Methylgrün ist nicht besonders zu empfehlen, nur zur Hervorhebung der Schlauchdrüsen der Haut leistet es gute Dienste. Thionin läßt sich im allgemeinen nicht gut mit anderen Farbstoffen kombinieren. Nur mit Eosin erhält man eine gute Doppelfärbung. Man kanu zwar auch mit Pikrinsäure gelöst in Xylol nachfärben und erhält damit eine gute Differenzierung der verschiedenen Gewebebestandteile (die Kerne sind tiefblau, das Bindegewebe rot und alles übrige gelb), aber die Pikrinsäure zerstört in sehr kurzer Zeit erst die rote und dann die blaue Färbung des Thionins. Wie Thionin, liefert auch Hämatoxylin neben einer guten Kernfärbung recht brauchbare Bilder vom Bindegewebe, freilich ohne verschiedene Farbtöne. Sehr deutlich treten bei Hämatoxylinfärbung Schlauchdrüsen und Kutikularbildungen hervor. Zur Nachfärbung verwendet man am besten solche Farbstoffe, die von der Muskulatur stark aufgenommen werden, also in erster Linie Eosin und Orange, Während Thionin und Hämatoxylin neben dem Kern auch das Binde- gewebe hervorheben, die Muskeln aber so gut wie ungefärbt lassen, zeigt Eisenhämatoxylin eine starke Neigung zur Muskulatur, während es vom Bindegewebe gar nicht zurückgehalten wird. Zu Doppel- färbungen verwendet man daher bei diesem Farbstoff am zweck- mäßigsten Bindegewebsfarbstoffe, wie Wasserblau und Säurefuchsiu. Handelt es sich um den Nachweis histologisch schwer darstellbarer Strukturen, wie Wimpern, Basalkörner, Stützfaserndes Nervensystems, so empfiehlt es sich mit Pikrinsäure gelöst in Xylol nachzufärben, weil diese die Gewebe außerordentlich durchsichtig läßt, so daß die vom Eisenhämatoxylin tiefschwarz fingierten Elemente um so schärfer XX\ , 2. Referate. 213 hervortreten. Beabsichtigt man nicht in erster Linie die Kerne, sondern das Plasma und seine Produkte färberisch zu differenzieren, so kombiniert man zweckmäßig einen Bindegewebs- und einen Muskel- farbstoff. Sehr günstige Resultate erhält man mit Eosin und Wasser- blau, ersteres in konzentrierter, letzteres in verdünnter wässeriger Lösung und am besten mit einem Zusatz von konzentrierter wässeriger Pikrinsäurelösung im Verhältnis 1 : 5. Wasserblau ist ein Bindege- websfarbstolf, der fast ausschließlich die Bindegewebsfasern, nicht aber die Grundsubstanz färbt. Kombiniert man denselben mit Safra- nin, so kann man leicht die Färbuugsdauer so abmessen, daß das Wasserblau sonst überall verdrängt ist und nur von den Binde- gewebsfasern zurückgehalten wird. Handelt es sich aber um die Untersuchung der Bindegewebsgrundsubstanz, so benutzt man besser Thiouin, Hämatoxylin oder Dahlia. Der letztgenannte Farbstoff ist, seiner außerordentlich kräftigen Wirkung halber , dort mit Vorteil anzuwenden, wo die Anwesenheit oder das Fehlen einer feinen Bindegewebslamelle nachgewiesen werden soll. Säurefuchsin ist zum Studium des Bindegewebes das Holothurien wenig geeignet, wird aber hier wie bei anderen Tiergruppen mit Vorteil zur Untersuchung des Nervensystems angewendet. JE. Sclioebel {Neapel). Dogiel, T., Catenata, eine neue Mesozoengruppe (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 417—477 m. 1 Fig. u. 3 Tfln.). Die dem Darm des Wirtstieres entnommenen Parasiten halten sich im Uhrschälchen etwa 5 bis 6 Stunden, auf dem Objektträger unter dem Deckglas dagegen aber nur höchstens eine bis 2 Stunden am Leben. Zum Fixieren kam schwache FLEMMiNGSche Lösung, Sublimat mit Essigsäure und das CARNOvsche Gemisch zur Verwen- dung. Für Totalpräparate erwies sich das erste und letzte P^ixatif als die geeignetsten, da die Gestalt der Parasiten in ihnen am besten erhalten bleibt, für Schnittserien ist aber Sublimat-Essigsäure vorzuziehen, weil nach dieser Fixierungsmethode die Eiseuhämatoxy- linfärbung, die fast ausschließlich benutzt wurde, am besten gelingt. Die mit FLEMJiiNGSchem Gemisch fixierten Totalpräparate wurden meist mit Safraniu, seltener mit Pikrokarmin gefärbt, während nach Carnoys Gemisch Hämalaun die besten Resultate gab. E. Schoebel (Neapel). 214 Referate. XXV, 2. B, Wirheitiere, Herzog, F., Über das Vorkommen von Bliitkörperchen- schatten im Blutstrom und über den Bau der roten Blutkörperchen fArch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI^ 1908, p. 492—50.3 m. 9 Tfln.). Außer fixierten, mit Giemsa scher Lösung gefärbten Trocken- präparaten untersuchte Verf. unter anderem auch solche, auf denen künstlich die Schatten erzeugt waren. Nach zahlreichen Versuchen fand er im Karbol-Fuchsin, wie er zur Färbung der Tuberkelbazillen gebraucht wird (Fuclisin 4, absoluter Alkohol 40, Karbolsäure 20, destilliertes Wasser 200), eine hierzu geeignete Farbe, indem die- selbe gleichzeitig das Hämoglobin auslaugt und die Zellen fixiert und färbt. Nach möglichst dünnem Ausstrich des Blutes wuirden die Präparate 2 Stunden bei Zimmertemperatur getrocknet und dann ohne vorheriges Fixieren während 24 Stunden in verdünntem Karbol- Fuchsin (1 : 9) gefärbt. Nach Abspülen und Trocknen wurden dann die Präparate in Kanadabalsam eingeschlossen. E. Schochel {Neapel). Butterfield , E. E. , Über die u n g r a n u 1 i e r t e n Vorstufen der M y e 1 0 c y t e n und ihre Bildung in Milz, Leber und Lymphdrüsen. [Ein Beitrag zur Histogenese der myeloiden Umwandlung bei Leukämie und Anämie] (Deutsch. Arch. f. klin. Medizin Bd. XCII, 1908, H. 3, 4, p. 3.36—369 m. 4 Tfln.). Verf. hebt hervor, daß die Hauptaufgabe einer liämatologisch- histologischen Untersuchung die Feststellung der Art der im Blute vorkommenden Zellen und ilire Identifizierung mit den in den blut- bildenden Organen vorliandenen Zellformen ist. Es ist hierzu not- wendig, die nach verschiedenen Methoden gefärbten Ausstrichpräparate des Blutes mit den entsprechenden der blutbildenden Organe zu ver- gleichen und ferner sie mit den Zellen des Schnittpräparates zu identifizieren. Die Untersuchung der Organabstriclie ist wertvoll, weil sie manche Färbungen und verschiedene Difterenzierungen ermöglicht, die im Schnitte nicht ausgeführt werden können. Es wurden die Blutpräparate und Abstriche des Knochenmarkes, der Milz, der Leber und der Lymphdrüsen nach dem Verfahren von May- Grünwald, mit XXV, 2. Referate. 215 der Triacidlösung von Ehrlich, mit Eosm-Hämatoxylin, nach Roma- xowsKY-GiEMSA Und mit Pyroninmethylg-rün von Pappenheim gefärbt. Mit solchen Metlioden läßt sich bei richtiger Herstellung der Organ- abstriche bereits ein Überblick über die numerische Verteilung der einzelnen Blutzellen gewinnen , die dann durch das Verhalten der Schnittpräparate einer Nachprüfung unterliegt ; der eigentliche Zweck der letzteren ist es aber , die Lage der Blutzellen oder ihrer Vor- stufen zu den fixen Gewebszellen darzustellen. Die Identifizierung der Zellen des Schnittpräparates mit denen der Ausstriche kann viel weniger nach ihrem allgemeinen Zellhabitus als nach Anordnung der einzelnen Zellbestandteile, wie Verteilung und Größe der Chromatin- bälkchen, Zahl und Größe der Kernkörperchen usw. getroflfen werden. In erster Linie kommt die spezifische Granulafärbung, vor allem die Darstellung der neutrophilen Granula, dann die Basophilie des Proto- plasmas und die feinere Kernstruktur, Anordnung des Chromatins, Zahl und Größe der Kernkörperchen bzw. das Gesamtvolumen der Xukleolarsubstanz in Betracht. Gran ulafä rhu ng im Schnitte. Die Triacidlösung von Ehrlich in der von Arnold angegebenen Methodik ergibt manchmal sehr schön gefärbte Schnittpräparate, doch ist die Kernfärbung sehr schwach und das basophile Protoplasma nimmt das Fuchsin, das im Überschusse vorhanden ist, sehr begierig auf, so daß es besonders bei mit Sublimat fixierten Geweben oft sehr schwer zu unterscheiden ist, ob eine Zelle homogenes oder teil- weise granuliertes Protoplasma hat. Mit dem panoptischen Triacid von Pappenheim (Methylenblau statt Methylgrün als Base) hat Verf. weder intensive Kernfärbung noch Blaufärbung des basophilen Proto- plasmas erreicht, da auch hier das Rot in das Lymphocytenproto- plasma eindringt. Eine Methode , die alle Ansprüche zu erfüllen scheint, ist eine wenig modifizierte mit dem May -Grünwald sehen bzw. Jenner sehen Farbgemische: Fixierung in 4prozentiger Formol- lösung, Paraffineinbettung, Schnitte etwa 5 /< dick, Aufkleben auf den Objektträger, Entfernen des Paraffins in Xylol, Alkohol, destil- liertes Wasser. Färbung auf dem Objektträger. Die Schnitte werden mit einer dicken Schicht der May -GRtJNWALo sehen Farblösung be- deckt. Man läßt stehen, bis die methylalkoholische Lösung des Farbstoffes das Gewebe gründlich durchdrungen hat (2 bis 5 Minuten). Dann setzt man zu der Farblösungsschicht .3 bis 5 Tropfen destil- lierten Wassers und bläst leise, bis der Methylalkohol und das Wasser gleichmäßig gemischt sind. Es entsteht ein feiner Niederschlag und die Oberfläche zeigt einen metallischen Glanz. In diesem Zustande 216 Referate. XXV, 2. färbt man weiter 5 bis 10 Minuten. Dann läßt man das Farb- gemisch abfließen und trocknet das Präparat sorgfältig mit Fließ- papier ab. Dann möglichst schnelle Entwässerung in absolutem Alkohol (2- bis 3mal) , Xylol , Einbettung in Kanadabalsam rectific. neutrale. Die neutrophilen Granula werden rotviolett , die eosino- philen meist leuchtend rot, die Mastzellengranula schwarzblau gefärbt. Kerne tiefblau, Lymphocytenprotoplasma hellblau. Den Unterschied zwischen der eosinophilen und der neutrophilen Granulation erkennt man eher aus der physikalischen Beschatfenheit der Granula als aus der Farbreaktion. Die neutrophilen Granula sind fast staubartig in ihrer Feinheit , sind von matterem Farbentone , unregelmäßig , oft klumpig in ein deutlich basophiles Protoplasma eingelagert, während die eosinophilen immer grob leuchtend und so gleichmäßig dick an- geordnet sind, daß man keinen blauen Untergrund sieht. Die Halt- barkeit der Präparate ist sehr verschieden. Im Dunklen aufbewahrte Präparate halten sich ein halbes bis ein Jahr, manchmal blassen die Präparate aber auch schon innerhalb von 2 Wochen ab. Es hängt dies wohl mit der Beschaffenheit des Kanadabalsams zusammen. Die von ScHRiDDE angegebene Anwendung der GiEiisA-Färbung zur Dar- stellung der neutrophilen Granula im Schuittpräparate ist Verf. nie gelungen (wegen des näheren siehe Original). Die Darstellung der Granula im Ausstriche ergibt beim Studium des Blutes und der Organ- abstriche von Embryoneu und von atypischen myeloiden Leukämien, wo viele jugendliche Zellformen vorhanden sind, bei den Auszählungen der nach verschiedenen Methoden gefärbten Präparate konstante große Abweichungen , die weit außerhalb der Fehlergrenze liegen. Das MAY-Präparat dient als ein gutes Orientierungspräparat, gibt aber die niedrigste Zahl der granulierten Zellen ; im Triacidpräparate findet man neben der gewöhnlichen neutrophilen eine ganz feine staubartige Granulierung auch in Zellen, die ein rosa gefärbtes Proto- plasma zeigen. Bei Giemsa- Färbung werden die reiferen neutrophilen Granula nicht gut gefärbt , dagegen a\ erden die unreiferen Granula in Zellen sichtbar gemacht, die nach anderen Methoden untersucht, überhaupt nicht der neutrophilen Reihe anzugehören scheinen. Wegen weiterer Details wird auf das Original verwiesen. Man benutzt des- halb zweckmäßig das JENNER-MAV-Präparat zur ersten Orientierung, das Triacidpräparat zur Darstellung der reiferen und feineren neutro- philen Granula und das Giemsa- Präparat zur Entdeckung von Granulis in Zellen mit stark basophilem Protoplasma. Schiefferchclier {Bonn). XXV, 2. Referate. 217 Pry 111 , 0., Zur Blutentnahme aus dem Kanin chenoLr (München, med. Wochenschr. 1907, No. 14). Man kann sich die Blutentnahme aus dem Kaninchenohre, welche manchmal bei größeren Mengen schwierig ist, auf folgende Weise erleichtern: Das Tier kommt in einen den BiERSchen Heizkästen ähnlichen Kasten , der Kopf sieht durch eine passende Öffnung her- aus, die durch einen in jeder Lage feststellbaren Schieber mit halb- kreisförmigem Ausschnitte beliebig verengt werden kann. Man stellt die Öffnung so enge , daß , bei Vermeidung eines Druckes auf den Hals, der Kopf nicht mehr zurückgezogen werden kann. Dann vor- sichtiges Anheizen des Kastens auf 40^ bis 70*^; die Ohrvenen schwellen enorm an, man kann leicht punktieren ; das Tier braucht nicht von einer zweiten Person gehalten zu werden. Schiefferdecker {Bonn). Eiigelmann, M. , Untersuchungen über die elastischen Fasern der Lymphknoten von Pferd, Rind, Schwein und Hund und über die an ihnen ab- laufenden Altersveränderuugen (Inaug.-Diss. Leip- zig, 1907, 60 pp. m. 3 Tfln.). Die Lymphknoten wurden direkt oder nur wenige Stunden nach dem Tode dem Körper entnommen und in steigendem Alkohol bei 24stündigem Wechsel fixiert und gehärtet. Kleine Lymphknoten wurden im ganzen fixiert, die größeren in kleine Stücke zerlegt. Einbettung nur in Paraffin: aus absolutem Alkohol für 2 Stunden in reines Chloroform , 4 Stunden in Chloroform-Paraffin (zu gleichen Teilen) im Thermostaten bei 57^ und 2 bis 3 Stunden in reines Paraffin bei derselben Temperatur. Schnittdicke durchschnittlich 7 fx. Um Schnitte aus möglichst verschiedenen Teilen eines Knotens zu erhalten, wurde stets zwischen den einzelnen Schnitten eine große Reihe von Schnitten ausgelassen, bevor einer davon verwendet wurde. Mit warmem Wasser wurden die Schnitte auf die mit Alkohol und Äther abgeriebenen Objektträger aufgeklebt und dann mehrere Stunden in dem Thermostaten bei 37^ getrocknet. Abspülen des Paraffins mit Xylol. Die Orceinmethode wurde bald verlassen und es wurde nur noch mit Weigerts Resorcinfuchsin gefärbt. Die Schnitte wurden der konzentrierten Farblösung etwa eine Stunde lang ausgesetzt; waren sie etwas überfärbt, so wurde mit einprozentigem Salzsäurealkohol differenziert, dann Karbolxylol und Kanadabalsam. Die so hergestellten Präparate genügten für die Untersuchung der 218 Referate. XXV, 2. elastischen Fasern vollkommen , trotzdem wurde zur Kontrolle noch die künstliche Verdauung angewendet ; die aufgeklebten Schnitte kamen in eine schwach alkalische Trypsinlösung , die bei einer Temperatur von 37^ eine bis mehrere Stunden einwirkte. Dann Auswaschen des Schnittes längere Zeit in destilliertem Wasser; Färbung in der oben angegebenen Weise ; Einschluß in Kanadabalsam. Es ergab sich , daß die verdauende Wirkung des Trypsins nicht immer zuverlässig und gleichmäßig war; man mußte sämtliche Präpa- rate dauernd kontrollieren. Nur ein Resultat ließ sich fesstellen: Die durch künstliche Verdauung erhaltenen Präparate von Lymph- knoten ganz junger Tiere ließen meist nur noch die Kapsel und das Hilusstroma wahrnehmen, während die Schnitte von Lymphknoten älterer Tiere deutliche Retikulumpräparate ergaben, und zwar um so bessere, je älter die betreffenden Tiere waren. Die WEiGERT-Färbung gelang bei diesen Präparaten nicht so gut wie bei den Schnitten ; mitunter färbten sich die Fasern fast gar nicht oder gar nicht. Es folgt daraus, daß durch den Verdauungsprozeß auch die elastischen Fasern mehr oder weniger stark angegriffen wurden. Aus allen diesen Gründen untersuchte Verf. daher später nur noch an Schnitten. Schicffcrdeclxcr {Bonn) . Wolfruni , M. , Beiträge zur Anatomie und Histologie der Ader haut beim Menschen und bei höheren Wirbeltieren (Arch. f. Ophthalmologie Bd. LXVII, 1908, H. 2, p. 306—359 m. 2 Tfln. u. 2 Figg. im Text). Sämtliche Augen waren in ZENKERScher Lösung bei Körper- temperatur fixiert worden , in langsam steigendem Alkohol gehärtet und dabei mit Lugol scher Lösung von Sublimat befreit worden. Die angewendete Zenker sehe Flüssigkeit hatte die folgende Zu- sammensetzung : Sublimat 3*5 Kalium bichromicum 1"5 Natrium sulfuricum l'O Acidum aceticum glaciale 3*0 Destilliertes Wasser 1000 Formol 05. Essigsäure und Forraol werden erst vor dem Gebrauche zugesetzt. Diese Modifikation der Zenker sehen Lösung stammt aus dem Erlanger Anatomischen Institute und ist dort bereits seit über 10 Jahren in Anwendung. Sie hat dem Verf. stets gleich gute, vorzügliclie Re- XXV, 2. Referate. 21i) sultate in der Fixierung ergeben. Bei dem steigenden Alkohol muß man sehr vorsichtig verfahren : ]\Ian überschichtet das Wasser , in dem der Bulbus sich noch befindet, im Glase mit 96prozentigem Alkohol. Es tritt nun eine ganz allmähliche Mischung von Alkohol und Wasser ein, die in ungefjihr 2 bis 3 Wochen beendet ist. Wieder- holt man nun unter Abgießen eines Teiles der Flüssigkeit den Prozeß noch einmal, so hat man, wenn man jedesmal doppelt soviel Alkohol wie Wasser genommen hat, bereits ungefähr 75prozentigen Alkohol. Solche Präparate sind fast vollständig frei von Schrumpfung. Die schrumpfende Wirkung des Alkohols macht sich außerdem um so weniger geltend, je besser die Bulbi fixiert sind. Verf. hat sie des- halb bis zu 48 Stunden in der ZENKERSchen Lösung belassen. — Um die Dicke der Aderhaut zu messen, wurde die Fixierungsflüssig- keit direkt unter Blutdruck in das Gefäßsystem eingespritzt. So wurde bei einem Neugeborenen die linke Carotis communis frei prä- pariert, es wurden 150 cc physiologischer Kochsalzlösung bei Körper- temperatur eingespritzt und sogleich etwa 350 cc auf die Hälfte mit destilliertem Wasser verdünnter Zenker scher Lösung unter Blutdruck der ersten Lijektion nachgeschickt. Nach der Lijektion wurden so- wohl Arterien wie Venen unterbunden. Etwa nach einer Stunde wurde dekapitiert. Der ganze Kopf blieb in unverdünnter , öfters gewechselter Zenker scher Lösung noch eine Woche liegen und wurde nach Auswaschen in Brunnenwasser in ganz allmählich steigendem Alkohol gehärtet. Schnittserien durch die ganze Orbita nach Celloidin- einbettung. — Zur Färbung der Basalmembran verwendete Verf. eine Protoplasmafärbung von Held (soll an anderer Stelle ver- öff'entlicht werden), die sehr gerühmt wird. Mit der Mallory- Methode läßt sich Protoplasma und Kollagen zugleich färben. — Säure- rubin in alkoholischer Lösung (96prozentiger Alkohol, man benutzt am besten eine schwach rote Lösung) ergibt für kollagene Elemente eine ebenso scharfe Färbung wie Weigert sehe Lösung für elastische Fasern. Nach vorausgegangener HEiDENHAiN-Färbung und nach Be- handlung mit Rubin S sind auch zahlreiche feinste Fasern nachweis- bar , welche sich genau so verhalten , wie die elastischen Fasern, Die WEiGERTSche Lösung hat Verf. nach den Angaben der mikro- skopischen Technik von Lee und Mayer 2, Auflage 1901 selbst hergestellt unter Berücksichtigung der von Mayer in Paragraph 881 gemachten Zusätze; außerdem setzte er der fertigen alkoholischen Lösung noch Aceton zu (auf 200 cc etwa 20 bis 30 cc) , wodurch die Färbefähigkeit und vor allem die Schärfe der Bilder noch 220 Referate. XXV, 2. etwas verbessert wird. Diese Färbung ist der OrceinfärbuDg vor- zuziehen. Schiefferdecker {Bonn). Allen, A. R., The connective tissue character of the septa of spinal cord as studied by a new stain (Journ. of Nerv, and Ment. Dis. 1906, Dec. Ref. n. Ref. in Neurol. Centralbl., Jahrg. XXVII, 1908, Xo. 2, p. 67). Verf. hat mit der folgenden Färbemethode nachzuweisen ver- mocht, daß das hintere Septum, sowie eine Anzahl Septa der Seiten- stränge Bindegewebe enthalten, das mit der Pia in Zusammenhang steht, was mit der Annahme, daß diese Septa ausschließlich aus Neu- roglia bestehen, in Widerspruch steht. Methode: 1) Härtung, wie für NissL-Methode ; 2) Auswaschen der Schnitte in destilliertem Wasser, Einlegen in O'öprozentige wässerige Lösung von Azur II oder I. Er- wärmen für 2 bis 3 Minuten, Abkühlen 15 Minuten; 3) Auswaschen in destilliertem Wasser; 4) Einlegen in absoluten Alkohol und leicht in diesem bewegen, bis keine blauen Wolken mehr abgehen; 5) Einlegen für eine Minute in eine Mischung von Karbolsäure 20 Teile und Toluol (Siedepunkt 110^) 80 Teile; 6) Einlegen in eine Lösung von Eosin (Grübler) 0"02 bis 0*05 zu 60*0 absoluten Alkohols, bis die dunkelblaue Färbung deutlich purpurn wird ; 7) Ein- legen in 25prozentiges Karbolxylol und Herausnehmen, bevor der Schnitt rötlich wird; 8) reines Xylol ; 9) Aufheben in Xylolbalsam. Die Schwierigkeit der Färbung liegt nur in 6 und 7 und muß durch Übung überwunden werden. Schiefferdecker {Bonn). Masur, A., Beiträge zur Histologie und Entwicklungs- geschichte der Schmelzpulpa (Anat. Hefte, H. 105 [Bd. XXXV, H. 1], 1907, p. 265—292 m. 6 Tfln.). Als Material diente eine Reihe von Schweineembryouen von 4 bis 22 cm Länge. Fixierung in ZENKERScher Flüssigkeit, Ent- kalkuug in 5prozentiger wässeriger Salpetersäure (Schaffer). Außer- dem wurden Kaninchenembryonen von 3'2 und 6*4 cm Länge unter- sucht und Neugeborene vom Menschen ; Härtung zum Teil in Zenker- scher, zum Teil in Tellyesnicki scher Flüssigkeit. Sämtliche Embrj'onen wurden vorgefärbt in Alaun-Kochenille und eingebettet in Paraffin. Serienschnitte von 5 bis 8 /* Dicke durch den Unterkiefer, Färbung nach verschiedenen Methoden. Um über die Beschaffenheit der Protoplasmafaseruug in der Schmelzpulpa ins klare zu kommen, wurden Bindegewebsfärbungen benutzt , hauptsächlich die Methoden XXV, 2. Referate. 221 vou Mallouy ^. Sehr gute Resultate ergibt die folgende Methode : Nach Fixierung in ZENKERScher Flüssigkeit und Paraffineinbettung werden die Schnitte mit Wasser auf dem Objektträger aufgeklebt. Nach Entfernung des Paraffins durch Xylo! und dieses durch Alkohol Färbung der Schnitte: 1) 0'05- bis O'lprozentige Lösung von Fuchsin S (eine bis 3 Minuten). 2) Kurzes Auswaschen in Wasser. 3) Ein- legen in eine einprozentige Lösung von Phosphormolybdänsäure (eine Minute oder länger). Mau hüte sich, mit der Pinzette oder einem sonstigen metallenen Gegenstande in die Lösung zu kommen. 4) Aus- waschen in zweimal gewechseltem Wasser. 5) Einlegen für 2 bis 20 Minuten oder länger in folgendes Farbgemisch: Anilinblau (wasserlöshch, GrIjbler) .... 0'5 g Orange (GrIjeler) 2-0 „ Oxalsäure 2-0 „ DestiUiertes Wasser 100"0 cc. 6) Kurzes Auswaschen in Wasser. 7) Alkohol 96 Prozent bis zur richtigen Differenzierung. Noch bessere Resultate erhält man mit der vou Mall ^ angegebenen Modifikation der eben angegebenen Methode: Die Schnitte kommen ohne Auswaschen aus der 0"05- bis O'lprozentigen Lösung von Fuchsin S. direkt in eine auf den 10. Teil verdünnte konzentrierte Lösung von Phosphor molybdänsäure für wenige Minuten; dann Auswaschen in 95prozentigem Alkohol und sehr kurze Färbung in folgender Lösung: Anilinblau (wasserlöslich, Grübler) .... 1*0 Orange (Grübler) 2*0 „ Oxalsäure 2-0 Wasser (kochend) lOO'O cc ö n Dann Differenzierung in 95prozeutigem Alkohol. Sehr schöne Bilder und eine sichere Färbung der Fasern erhält man mit dem Mallory- schen phosphorwolframsauren Hämatoxylin {^j^ bis 2 Stunden) ; der Hergang dabei ist derselbe, wie bei den gewöhnlichen Hämatoxylin- färbungen, welch letztere Verf. nach Hansen oder Delafield allein oder mit Eosin anwendete. Zum Studium der Genese der Fasern benutzte Verf. die Verdauungsmethode, und zwar hauptsächlich die Schnittverdauungs- methode nach HoEHL : Fixierung der Gewebsstücke in steigendem Alkohol, Entkalkung, wenn nötig, nach von Ebner. Li ZENKERscher 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 505. -) Vgl. diese Zeitschr. ßd. XIX, 1903, p. 260. 222 Referate. XXV, 2. Flüssigkeit fixierte Embryonen eignen sich für die Verdauungsmetliode nicht, ebenso dürfen zur Entkalkung keine Mischungen benutzt wer- den , die Salpetersäure enthalten. Einbettung der Präparate in Paraffin, möglichst dünne Seriensclmitte (3 bis 5 fj). Aufkleben der Schnitte mit absolutem Alkohol auf den Objektträger (24 Stunden im Ofen). Nach Auflösung des Paraffins in Xylol und absolutem Alkohol kommen die Schnitte für 24 bis 72 Stunden in Benzin auf den Thermostaten (37^). Dann kommen die Präparate erst in abso- luten, dann in 90prozentigen und 70prozentigeu Alkohol, werden in fließendem Wasser ausgewaschen und kommen schließlich in die Ver- dauungsflüssigkeit. Als solche erwiesen sich die folgenden Flüssig- keiten sehr geeignet : Trypsin sicc 0'25 Natrium carbonicum 150'0 Pankreatin- Glyzerin 10"0 Natrium carbonicum, Ooprozentige Lösung . . 100"0 Pepsin -Glyzerin 100 Salzsäure, 0'2prozentig lOO'O Papayotin 1*5 Natrium carbonicum, OSprozentige Lösung . . lOO'O. Es ist zweckmäßig, einige Tropfen Chloroform in das Verdauungs- gefäß zu tun, um der Fäulnis während der Verdauung vorzubeugen. Die Zeit der Verdauung schwankt zwischen 15 Minuten und 24 Stunden. Nach der Verdauung vorsichtiges Auswaschen der Präparate, Fixie- rung in Alkohol, Färbung nach den verschiedenen Methoden, haupt- sächlich nach denen von Mallory. Schicfferdccker [Bonn). Rothfeld, J. , Über das Verhalten der elastischen Ele- mente in den kavernösen Körpern der Sexual- organe (Anat. Anz. Bd. XXXIl, 1908, No. 9, 10, p. 248 —256 m. 1 Tfl.i. Das Material wurde den Leichen spätestens 6 bis 7 Stunden nach dem Tode entnommen. Die Objekte, vorzugsweise Penis, wurden in kleine Stücke von weniger als 1 cm Dicke zerlegt. Jedes Stückchen wurde in einem besonderen Gefäße zur Einbettung vorbereitet, um genau zu wissen , aus welchem Teile des Penis es herstammte. Fixierung in Zenker scher Flüssigkeit oder einer öprozentigen Formol- lösung. Färbung der elastischen Fasern mit Resorzinfuchsin , Difte- renzierung in 96prozentigem Alkohol, dann Karbol -Xylol. Xylol allein verursacht Schrumpfung und Entfärbung. Zur Gruudfärbung XXV, 2, Referate, l>23 benutzte Verf. Häraatoxylin, Bismarckbrauii, die Bindegewebsfärbung von Hansen ; die elastischen Fasern traten jedoch am besten ohne Grundfärbuug hervor. Schieffcrdecker {Bonn). Landströin , J. , Über Morbus Basedowii [Eine chirur- gische und anatomische Studie] (Diss. Stockholm [Norstedt & Söner] 1907; 196 pp., 8 Tfln. u. 2 Textfigg.)- Verf. hat einen glatten Muskel entdeckt, der nach seiner An- sicht den Exophthalmus bei Morbus Basedowii infolge von Reizung des Halssympathikuä hervorbringt. Er ist zylinderförmig um den vorderen Teil des Bulbus angeordnet , entspringt bindegewebig vom Septum orbitale und setzt sich am Äquator an. Um ihn darzustellen, schneidet man den ganzen Orbitalinhalt, am besten horizontal. Das Präparat gewinnt man, indem man zunächst entlang dem Orbitalrand einen Schnitt durch Haut und Periost führt, darauf das Orbitaldach entfernt und den ganzen Orbitalinhalt in seiner PeriosthüUe heraus- hebt. Härtung in Forraalin , Einbettung in Celloidin , Färbung nach VAX GiESON. Eisler {Halle a. S.). Ochs, A., Die intrauterine Entwicklung des Hamsters bis zum Beginn der Herzbildung (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 193—229 m. 15 Figg.). Die trächtigen Tiere wurden mit Chloroform getötet und ihnen dann der Uterus herausgeschnitten. Traten die Auheftungsstellen des Eies wenig hervor, oder waren solche äußerlich überhaupt noch nicht erkennbar, so wurden die Uterushörner in toto in die Fixierungs- flüssigkeit gebracht. Im anderen Falle wurde der Uterus nach dem Verschwinden der Muskelstarre durch Einschnitte in der Mitte zwischen je zwei Anschwellungen unter physiologischer Kochsalz- lösung in seine Abteilungen zerlegt und dann fixiert. Als Fixierungs- flüssigkeiten sind besonders Eisessig-Sublimat und ZENKERSche Flüssigkeit zu empfehlen bei einer Einwirkungsdauer von 24 Stunden. Zur Färbung der Schnitte dienten dünne wässerige Lösungen von Hämatoxylin nach Böhmer oder Delafield, eventuell mit Eosinnach- behaudlung. E. Schoebel {Neapel). Schridde, H., Die Entwicklungsgeschichte des mensch- lichen Speiseröhrenepitheles und ihre Bedeu- tung für die Metaplasielehre. Wiesbaden (Berg- mann) 1907; 101 pp., 6 Tfln. 4 M. 224 Referate. XXV, 2. Der Verf. fixiert sein Material iu Pikrinsäure-Sublimat, Formalin- Alkoliol, Formalin und Formalin-MtJLLER und färbt entweder nach der ÜNNASchen Wasserblau- Orceinmethode oder nach verbessertem Altmann- ScHRiDDESchem Verfahren. Bei Unna sollen die Schnitte violett aussehen: die Zellengrenzen, Flimmerhaare mit ihrem basalen Knötcheusaume, besonders auch die Protoplasmafasern der sogenannten Stachelzellen sind gut fingiert. Paraffinschnitte von 5 /^ mit Eiweiß- Glyzerin aufgeklebt. Noch bessere Faserfärbung ergibt sich nach der zweiten Methode. In 4prozentiger wässeriger Formalinlösung lebenswarm fixierte Gewebsstücke werden nachträglich noch 24 Stunden bei Bruttemperatur in Formalin -MtJLLER gelegt, wenn sie nicht gleich frisch in letztere Mischung gekommen waren. Darauf sorgfältige Wässerung, Entwässerung, Toluol oder Chloroform, Paraffin. Die Schnitte , die nicht über 2 fx dick sein sollen , kommen aus destil- liertem Wasser heraus auf 30 Minuten in einprozentige Überosmium- säure bei Lichtabschluß , werden dann sorgfältig in destilliertem Wasser abgespült und über der Spiritusflamme nach der Altmann- schen Anilinwasser- Säurefuchsinmethode in üblicher Weise gefärbt. Die Protoplasmafasern heben sich karmoisinrot scharf gegen das leicht gelblich-bräunliche Protoplasma ab. Eisler {Halle a. S.). Ognew , S. J. , Materialien zur Histologie des Bidder- schen Organs der Kröten (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1908, p. 467—491 m. 1 Tfl.). Als die geeignetsten Fixierungsflüssigkeiten erwiesen sich im allgemeinen Längs, Gilsons und Zenckers Gemisch. Für jüngere Kröten, besonders dann, wenn mit dem Bidder sehen Organ zugleich die Hoden fixiert werden sollten, ergab vor allem die Hermann sehe Flüssigkeit gute Resultate. Bei der Färbung ergab die Heiden- hain sehe Eisenhämatoxylinmethode recht instruktive Bilder, die häufig mit Bordeaux- oder Lichtgrünnachfärbung kombiniert wurde. Ferner gaben gute Resultate Hämalaun und Delafields Hämatoxylin kom- biniert mit Eosin, dann noch Safrauin allein oder mit Lichtgrün oder Pikrinsäure. Boraxkarmin, als Stückfärbung angewandt, gab weniger gute Resultate. E. Schoebel (Neapel). Schmidt, E., Über die Stützsubstanz der Leber im nor- malen und pathologischen Zustande (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XLH, H. 3, p. 606 — 615 m. 6 Figg. im Text). XXV, 2. Referate. 225 Zur Darstellung des reichen Stützgewebes der Leber, der Radiär- nnd Gittertasern von Kupffer hat sich Maresch ^ einer Methode bedient , die Bielschowsky ursprünglich zur Färbung der Neurofibrillen angegeben hat, und die in einer Silberimprägnation der in Formol fixierten und mit dem Gefriermikrotom geschnittenen Ob- jekte besteht. Bei genauer Beobaclitung der von Maresch ausführ- lich wiedergegebenen Vorschrift mißlingt nach Verf. die Im- prägnation nur selten. Die besten Resultate erhält man nach ihm bei Gefrierschnitten, die nicht dicker als 12 /i und aus einem mög- lichst frisch und nicht zu kurze Zeit fixierten Materiale herstammen. Der Einbettung in Kanadabalsam , die zwar ebenfalls brauchbare Bilder ergibt, hat Verf. meist den Einschluß in Glycerin vorge- zogen, besonders bei dünnen Schnitten, da durch die Behandlung mit Alkohol und Xylol leicht Schrumpfuugsvorgänge auftreten , die zu falschen Deutungen führen können. Schiefferdecker {Bonn). Arnold , J. , Haben die L e b e r z e 1 1 e n Membranen und Binnennetze? (Anat. Anz. Bd. XXXII, 1908, No. 9, 10, p. 257—260). Verf. wandte folgendes Verfahren an , um die Leberzellen zu isolieren: Frischen Lebern entnommene feine Schabsei werden mit einer genügenden Menge reifer (gelber) lOprozentiger Jodkaliumlösung geschüttelt; nach Zusatz von Eosin oder Säurefuchsin in Substanz, bis intensive Färbung des Gemenges erfolgt ist, bringt man die mit diesem gefüllten , gutschließenden Gläschen für 48 Stunden oder länger in den Wärmeschrank. Bei längerer Einwirkung (6 bis 10 Tage) verschwindet das Bindegewebe fast vollständig und es bleiben haupt- sächlich die Leberzellen, deren Plasmosomen und Spongiosabälkchen zurück. Hiervon wird ein Tropfen mit einem Deckglase , das mit Vaseline umrandet ist, eingedeckt. Die Methode bietet keinerlei Schwierigkeiten dar, ist sehr leistungsfähig und bei der Untersuchung mancher Strukturen unentbehrlich ; so bei dem Nachweise der Mem- bran der Leberzellen, Plasmosomen, Granula usw. Seh ieff'e) -decke i • {Bonn) . Srtlmko, 0. V., Beiträge zur Kenntnis der Nebenniere der Knochenfische: Über die. erste Anlage der 1) Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905, No. 16, 17 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XXIII, 190G, p. 356—358. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 15 226 Referate. XX Y, 2. Stannius sehen Körperelien der Lopliobraiichier (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1908, p. 325—332 m. 1 Tfl.). Zur Untersuchung dienten Entwicklungsstadien von Syngnathus und Hippocampus. Die mit Sublimat fixierten Objekte wurden zu- nächst in toto mit Boraxkarmin und die Schnitte nachträglich ver- schieden, größtenteils mit Lichtgrün gefärbt. Vor dem Einbetten in Paraffin wurde der Dottersack geöflfnet und der verhärtete Dotter vorsichtig entfernt. E. Schoebel (Neapel). Landau, E., Zur Morphologie der Nebenniere. IV (Blut- gefäße) (Intern. Monatsschr. f. Anat. u. Physiol., Bd. XXIV. H. 10—12, 1908, p. 431—446 m. 1 Tfl.). Verf. gibt in dieser Arbeit Vorschriften über die Bereitung der roten und blauen transparenten Gelatinemassen, Die ausführlichsten Angaben über die Anfertigung solcher Massen findet man bei HoYER jR. ^. Die Versuche des Verf. zielten darauf ab, für die blaue und rote Masse solche Rezepte zu finden, daß beide von derselben Konzentration sind; er erreichte dieses Ziel auf folgende Weise: A. Rote Masse: 1) 10 g bester französischer Gelatine werden für 2 Stunden in destilliertem Wasser aufgeweicht; 2) die Gelatine wird vorsichtig aus dem Wasser gehoben , zwischen den Händen ausge- preßt und im Thermostaten bei 58 bis 60 ^^ in einer Schale aufgelöst; 3) zugleich werden 5 g Karmin in 10 cc destillierten Wassers ver- rieben; 4) um diese Farbe transparent zu machen, mengt man dazu Ammoniaklösung. Verf. benutzt hierzu einen Liquor ammonii caustici vom spezifischen Gewichte O'l, da 12 cc desselben genau von 8 cc 30grädiger Essigsäure (destilliertes Wasser 100*0, Acid. acet. glac. [96*^] 30*0) neutralisiert werden. Man setzt also zu Nr. 3 2 cc von diesem Liquor ammonii caustici und verreibt ordentlich; 5) dieses dunkelkirschrote Gemisch wird ebenfalls im Thermostaten erwärmt und dann in die aufgelöste Gelatine gegossen und vermischt; ß) die so präparierte, alkalisch reagierende Masse ist für die Injektion un- brauchbar, da die Farbe durch die Gefäßwände diffundiert. Zur Neutralisierung gießt Verf. 8 cc der 30prozentigen Essigsäure zu ; 7) Filtrieren des heißen flüssigen Gemisches durch Flanell. Hat man versehentlich zuviel Essigsäure genommen, so bilden sich in der ^) HoYER ,iR., Injektion der Blut- und Lymphgefäße in „Enzyklopädie der mikroskopischen Technik" 1903, p. 546—614. XXV, 2. Referate. 227 M.isse undurcbsichtig-e Ballen, die jedoch leicht dadurch zu beseitigen sind, daß man in das noch nicht erstarrte Gemisch bei schnellem Umrühren die Ammoniaklösung tropfenweise vorsichtig zugießt , bis das trübe Gemisch sich wieder klärt. — B. Blaue Masse: 1) Es werden wieder 10 g im Laufe von 2 Stunden im Wasser gequollener und nachher ausgepreßter Gelatine im Thermostaten bei 60^ auf- gelöst ; 2) zugleich werden daselbst 20 cc vorher schon präparierter, gesättigter, wässeriger Berlinerblaulösung ordentlich erwärmt. Man gießt bei schnellem Umrühren die Farblösung langsam in die Gelatine. Niemals bildeten sich Gerinsel dabei. Filtrieren der Mischung. Schie/ferdecker (Botin). SchaflFer, J., Zur Histologie der Unterkieferspeichel- drüsen bei Insektivoren (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 1—27 m. 2 Tfln.). Für das Studium der histologischen Vorgänge bei der Schleim- sekretion ist aut folgendes hauptsächlich zu achten : Die Objekte, in deren schleimhaltigen Zellen man Granula nachweisen will, dürfen vor der Fixierung nicht chemischen oder physikalischen Einwirkungen oder gar postmortalen Veränderungen ausgesetzt werden und immer muß der physiologische Zustand der betreffenden Drüse oder Schleim- haut in Betracht gezogen werden, denn nicht jederzeit enthält die schleimbereitende Zelle Granula. Vor allem aber muß die richtige Fixierungsflüssigkeit gewählt werden. Am geeignetsten erscheint Verf. ein Gemisch von 2 Teilen 90prozentigem Alkohol und einem Teil käuflichem Formol, das man einen bis 2 Tage einwirken läßt, um dann das Präparat unmittelbar in 95prozentigen Alkohol zu übertragen. Bei der weiteren Behandlung ist jede Berührung mit Wasser oder wässerigen Farblösungen zu vermeiden. — Für das allgemeine histologische Studium der Drüse ist Hämalaun- Eosinfärbung zu empfehlen ; das gegenseitige Verhalten der tubu- lösen und der sie einschließenden Drüsenmassen tritt indes besonders deutlich an Schnitten hervor, welche mit Delafields Hämatoxylin ziemlich stark vorgefärbt, dann in Brunnenwasser gebläut und mit einer gesättigten Lösung von Chromotrop 2 R in 95prozentigem Alkohol 5 bis 6 Stunden nachgefärbt werden. Die umgebenden Alveolen sind wegen ihrer dichten Aneinanderpressung schwer von- einander abzugrenzen ; am besten gelingt es noch an Schnitten, die der Mallory sehen Bindegewebsfärbung unterzogen worden sind. Für Schleimtärbung ist vor allem Mucikarmin zu empfehlen. Die 15* 228 Referate. XXV, 2. Pyrogallolreaktion von Merkel für den Nachweis von Kalk im Drüsensekret führte Verf. so aus, daß er Celloi'dinschnitte 10 bis 15 Minuten in eine ein- bis zweiprozentige Pyrogallollosung legte^ dann stundenlang in Leitungswasser auswusch. Es erschienen dann schließlich die Zellen, welche sich auffallend stark mit Hiimalaun färbten, schwarzbraun bis schwarz. Die Reaktion unterblieb, wenn man die Schnitte vor dem Einbringen in Pyrogallol mit einprozentiger Salzsäure behandelt und gut ausgewaschen hatte, oder wenn man Schnitte verwendete, die von Material aus ZEXKERScher Flüssigkeit stammten. Versuche, diese Zellen mittels Purpurin oder mittels- Salpetersäuren Silbers zu färben, mißlangen ; da diese Färbungen zum Nachweise von phosphorsaurem Kalk dienen, ist anzunehmen,, daß es sich im vorliegenden Falle um ein Kalziumkarbonat handeln dürfte. E. Schoebel (Neapel). Wilson , 0. J. , The n e r V e s and n e r v e - e n d i n g s in t h e membrana tympani (Journ. of comp. Neurol. a, PsychoL vol. 17, 1907, no. 6, p. 459—468 w. 1 pl.). Im Trommelfelle ist es besonders schwierig, die Nerven dar- zustellen. Osmiumsäure ist nicht anwendbar, da viele von den Nerven marklos sind, und da an der Hautseite eine Menge von fett- haltigen Zellen liegen. Goldchlorid- und GoLoi-Methode ergaben keine befriedigenden Ptcsultate. Am besten wirkt die intravitale Methylenblau- methode, besonders wenn die Injektion in eine Arterie gemacht wird und wenn in Ammoniummolybdat fixiert wird. Die DociiELsche Methode ist weniger gut. Bei dem mensclilichen Trommelfelle, das nicht unmittelbar nach dem Tode behandelt werden kann, hat Verf, 6 bis 8 Stunden nach dem Tode gute Resultate mit der folgenden Methode erhalten : Man taucht das Präparat in eine Mischung von Methylenblau und schwacher Osmiumsäurelösung für 2 bis 4 Stunden ein, dann wird es direkt in die Lösung des Ammoniummolybdats übertragen, Hiernacii erscheinen die markhaltigen Fasern dunkel- braun mit blauem Achsenzylinder und die marklosen blau ; der Grundton des Gewebes ist hellbraun. AVenn diese Methode auch nicht immer gelingt, so ergibt sie doch mitunter überraschend schöne Bilder. Schieffenlecker (Bonn). Michailow, S. , Die Nerven des Endocardiums (Anat. Anz. Bd. XXXII, 1908, No. 3, 4, p. 87—101 m. 7 Abb.). Verf. behandelt in dieser Arbeit die Nerven des Endocardiums XXV, 2. Referate. 229 aus dem Herzen des Pferdes. Das Endocardium wurde mit der untergelagerten Schicht des Myocardiums abgeschnitten in verhältnis- mäßig- dünnen Stücken von verschiedener Größe und dann nach der von Verf. veränderten Methylenblaumethode von Ehrlich-Dogiel be- handelt: das Methylenblau rectiticatum (nach Ehrlich von Grübler in Leipzig) wird nicht in physiologischer Kochsalzlösung aufgelöst, sondern in der Flüssigkeit von Ringer-Locke, welch letztere über- haupt bei allen Manipulationen während der Methyleublaufärbung statt der physiologischen Kochsalzlösung angewendet wird. Die Präparate werden in einer 7- bis 8prozentigen Lösung von molybdänsaurem Ammonium in destilliertem Wasser fixiert, dann, nach vorhergehendem sorgfältigem Auswaschen und möglichst kurzer Entwässerung in ab- solutem Alkohol und Aufhellung in Xylol, in Xylol-Damarlack ein- ^geschlossen. Schieff'erdecker {Bonn). Wunderer , H. , Über Termin alkörperchen der Anam- nien (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1908, p. 504—569 m. 2 Tflh.). Als üntersuchungsmethoden kamen hauptsächlich Vergoldung, OoLGische und CAJALsche Imprägnation, Methyleublaufärbung, Be- handlung mit Osmiumsäure und Sihlers Verfahren zur Verwendung. — Für die Vergoldung kommen die Gewebsstücke, deren Durchmesser etwa 2 cm betragen kann, bis zur leichten Braunfärbung in 5prozen- tige Ameisensäure , die auf 100 cc etwa 10 cc einer 2prozentigen Osmiumsäurelösung enthält. Nach dem Auswaschen bringt man die Gewebsstücke in eine einprozentige Goldchloridlösung, worin sie im Dunkeln 2 bis 6 Stunden, nämlich bis sie einen ausgesprochenen gelben Farbton angenommen haben, verbleiben. Nachdem die Stücke dann gut abgespült worden sind, werden sie in 20- bis 25prozentige Ameisensäure übertragen, worin sie zuerst im Dunkeln etwa 12 Stun- den, dann noch im Tageslicht bis zur vollständigen Reduktion des Goldchlorids etwa 24 Stunden verbleiben. Der Flüssigkeit wird schon hierbei von Zeit zu Zeit Glyzerin zugesetzt und schließlich werden die reduzierten Stücke in einer Mischung von gleichen Teilen Glyzerin und Wasser mit Zusatz von einprozentiger Ameisensäure aufbewahrt , um nach beliebig langer Zeit untersucht zu werden. Verf. erhielt aber auch gute Resultate , wenn die Präparate statt mit einem Osmium-Ameisensäure-Gemisch mit einem solchen von je b Teilen käuflichen Formols und konzentrierter Ameisensäure und 100 Teilen Wasser 15 bis 20 Minuten lang vorbehandelt wurden. 230 Keferate. XXV, 2. — Zur Xervenförbimg mit Osmiumsäure läßt man das oben bei der Vergoldung angegebene Gemisch von Osmium- Ameisensäure im Dunkeln so lange einwirken , bis die markhaltigen Fasern auch in den tieferen Schichten sich schwarz gefärbt haben (unge- fähr 2 Stunden). Die so behandelten Stücke werden dann in das mit Ameisensäure versetzte Glyzerin, die Aufbewahrungs- und Unter- suchsflüssigkeit, übertragen und einige Zeit im Dunkeln belassen. Sobald die Flüssigkeit eine braune Farbe angenommen hat, wird sie gewechselt. — Die Silbermethode von Ramün y Cajal wurde in folgender Weise ausgeführt : Frische Gewebsstücke wurden nach etwa 24 stündiger Vorbehandlung mit 96prozentigem Alkohol mit oder ohne Zusatz von einprozentigem Ammoniak und darauffolgendem Aus- waschen in destilliertem Wasser gewöhnlich in einer Sprozeutigen Lösung von Silbernitrat einer Temperatur von etwa 30^ C bei Licht- abschluß ausgesetzt. Nach ein bis 3 Tagen waren die Stücke in der Regel gut imprägniert. Nach sorgfältigem Auswaschen in destilliertem Wasser wurden sie dann entweder sofort mit dem Gefriermikrotom in Schnitte zerlegt und diese in die Reduktions- tlüssigkeit gebracht oder aber in toto reduziert und je nach der weiteren Untersuchsart behandelt, d. h. sie wurden entweder nach dem Auswaschen direkt nach Gefrierenlassen oder nach Celloidineinbettung mikrotomiert oder behufs Anfertigung von Isolationspräparaten in die oben bei der Vergoldung angegebene Mischung von verdünntem Glyzerin und Ameisensäure gebracht. In dieser Flüssigkeit tritt nach Wochen eine Mazeration ein, so daß an vielen Objekten ohne weitere Behandlung die Isolation gelingt. Handelt es sich aber um die Zerlegung derberen Gewebes oder ist eine sofortige Untersuchung wünschenswert, so empfiehlt es sich, die ausgewaschenen reduzierten Stücke zu erwärmen. Dies kann nach beliebig langem Verweilen in dem erwähnten Mazerationsgemisch entweder mehrere Stunden lang bei einer Temperatur von etwa 40*^ C in 25prozentiger Ameisensäure oder aber ^j^ bis ^/„ Minute lang in kochender 25prozentiger Amei- sensäure erfolgen. Zur Reduktion wurde der bekannte Rodinal-Eut- wickler in 10- bis löfacher Verdünnung benutzt. Derselbe dringt rasch ein, so daß für kleinere Stücke eine Einwirkungsdauer von wenigen Minuten genügt und größere Stücke jedenfalls nach ^j^ bis 2 Stunden vollkommen reduziert sind. Das Gewebe wird übrigens durch diesen Entwickler derart erweicht, daß man an Quetschprä- paraten die Stücke leicht auf die Güte der Imprägnation prüfen, nötigenfalles die Untersuchung im Entwickler selbst vornehmen kann. XXV, 2. Referate. 231 Auch an älterem Material von Squatina und Scyllium konnten noch gute Resultate erzielt werden. Die Stücke waren 2 Jahre früher nach ein- bis 2 stündigem Verweilen in einer Mischung von 10 Teilen Formol, 5 Teilen Ameisensäure und 100 Teilen Wasser in eine Mischung von konzentriertem Glyzerin und 2prozentiger Ameisensäure zu gleichen Teilen mit geringem Formolzusatz übertragen und dann in der reinen Mischung ohne diesen Zusatz aufbewahrt worden. Aus dieser Aufbewahrungsflüssigkeit wurden sie nach mehrstündigem Auswaschen! mit gewöhnlichem Wasser auf 12 Stunden in eine solche mit Zusatz von einem Prozent Ammoniak übertragen, dann für 12 Stunden in 96prozentigen Alkohol gebracht und nach abermaligem Auswaschen mit destilliertem Wasser 24 Stunden mit 3 prozentiger Silbernitratlösung behandelt. Übrigens gelang die Methode auch ohne Alkoholbehandlung imd an Formolmaterial ergab sie nach vorhergehender Behandlung der Stücke mit ammoniakalischem (l^/o) 50 prozentigem Alkohol und Alkohol — Äther (3:1) gute Resultate. — Die Färbung mit Methylenblau wurde durch Bestreichen oder Injektion mit einer ^/jQ bis einprozentigen Methylenblaulösung ausgeführt. Die gefärbten Gewebsstücke konnten erfolgreich, wenn eine Untersuchung in kon- serviertem Zustande wünschenswert erschien, mit einer gesättigten Lösung von pikrinsaurem Ammoniak, welcher 1/20 bis ^/^q des Vo- lumens 2 prozentige Osmiumsäure zugesetzt war, eine bis mehrere Stunden behandelt und dann in eine Mischung einer gesättigten Lösung von pikrinsaurem Ammoniak und Glyzerin zu gleichen Teilen über- tragen werden. Die Untersuchung erfolgte in dieser Flüssigkeit oder die Präparate wurden in mit pikrinsaurem Ammoniak versetzte Glyzerin-Gelatine eingeschlossen. Schnitte wurden nötigenfalls nur mit dem Gefriermikrotom angefertigt. — Die SiHLERSche Methode, die besonders zur Auffindung der Endkörperchen gute Dienste leistet, wurde in folgender Weise ausgeführt : Die Stücke kamen auf ^/.^ bis 2 Stunden in ein Formol-Ameisensäure-Gemisch (10: 5-\- 100 Wasser) und dann bis zur Färbung in das angesäuerte Glyzerin. Zur Fär- bung dienten verschiedene der gebräuchlichen Hämatoxyline. Diesen wurde eine gleiche Menge Glyzerin, welchem 1^/^ Ameisensäure bei- gefügt war, zugesetzt. In diesem Gemisch verblieben die Stücke etwa 24 Stunden. Aus der Farbe wurden die Objekte in die öfters zu wechselnde Aufbewahrungs- und Untersuchsflüssigkeit, aus gleichen Teilen Glyzerin imd Wasser mit I^Jq Alaun, übertragen. E. ScJwebel {Neapel). 232 Referate. XXV, 2. Pesker, D. J., ZurLehrevouderHistogenesederNeuro- fibrillen (Arch. f. mikrosk. Auat. Bd. LXXI, 1908, p. 333—349 m. 1 TU.)- Die Untersuchung wurde au Embryonen der weißen Maus mittels der Ramüx y Cajal sehen Neurofibrillenfärbung' ausgeführt. Fixiert wurden die Objekte in ammoniakälischem Alkohol, 2 Tage, bei ein- maliger Erneuerung der Flüssigkeit. Nach Verlauf des ersten Tages wurden auch die größeren Embryonen durch Quer- und Längsschnitte in mehrere Stücke zerlegt. Die mit Wasser ausgewaschenen Objekte kamen dann für 3 bis 4 Tage im 36 bis 37^ warmen Thermostat in eine l'öprozentige Silbernitratlösung, um dann nach sorgfältigem Abtrocknen mit Fließpapier 24 Stunden im zerstreuten Licht mit dem Reduktionsgemisch aus 2 Teilen Pyrogallol, 5 Teilen Formol, 100 Teilen destillierten Wassers behandelt zu werden. Nach der üblichen Weiterbehandlung wurde in Paraffin eingebettet und mikro- tomiert. Die vom Paraffin befreiten durch Alkohol in Wasser ge- brachten Schnittserien kamen dann für 5 bis 15 Minuten (abhängig von der Frische der Lösung) in eine einprozentige Goldchloridlösung, aus welcher sie direkt für 10 bis 12 Minuten in eine öprozentige Lösung von unterschwefligsaurem Natron übertragen wurden. Nacli längerem Auswaschen in Wasser wurde in Kanadabalsam einge- schlossen. E. Sclioebel {Neapel). Athias , 31. , Sur certains corpuscules colorables du cytoplasma des cellules des ganglions spiuaux desMammiferes. 1 Tfl. (Arch. do Real Instituto bacteriol. camara pestana t. II, fasc. 1, Lisbonne , Janvier 1908, p. 1 — 18). Athias hat bei einer großen Zahl von Säugetieren im Cyto- plasma der Spinalganglienzellen sphärische Körperchen gefunden. Die Fixation der Stücke kann mit Sublimat (gesättigt, ohne oder mit ein- bis öprozentigem Eisessig), GiLsoNscher oder FLEMJiixGScher Flüssigkeit geschehen. Die Körperchen nehmen in Flemmixg scher Flüssigkeit eine gelbgrünliche Farbe an. Kräftige Färbung mit Dela- FiELDSchem Hämatoxylin oder Hämalaun gibt ihnen einen bläulichen Ton, Eisenhämatoxylin färbt sie schwarzblau. Safranin und Magenta- rot rosa, Säurefuchsin rot (manchmal nur an der Peripherie) ; Eosin und Erythrosin verdrängt aus ihnen die llämatoxyline. Ganz un- gefärbt bleiben sie in allen basischen Anilinfarbstoft'en. Sie sind also ausgesprochen acidophil. Eisler {Halle a. S.). XXV, 2. Referate. 23.3 Björkeuheim, E. A., Zur Kenntnis der Schleimhaut im Uterovaginalkanal des Weibes in denverschie- de n e n A 1 1 e r s p e r i 0 d e n (Anat. Hefte, H. 105 [Bd. XXXV, H. 1], 1907, p. 5—239 m. 3 Tfln. u. 16 Figg. im Text). Verf. bemerkt zunächst, daß das Leichenmaterial, namentlich im kalten Winter, für die Untersuchung ausreicht, und daß das Cürettenmaterial ihm gegenüber manche Nachteile besitzt. Uterus uud Vagina wurden baldmöglichst nach dem Tode herausgenommen und frei präpariert ; sie wurden bis zum Fundus hinauf und ebenso- oft längs der vorderen wie längs der hinteren Wand aufgeschnitten. Von diesem Medianschnitte aus wurde im Uterus ein Seitenschnitt nach beiden Ostia tubae uterina hin gelegt. Auf einer Korkscheibe wurde das Präparat mit Igelstacheln befestigt, und zwar so, daß die aufgeschnittenen Wände durch eine mäßige Spannung beiseite ge- zogen wurden, so daß die Uterushöhle so viel wie möglich sichtbar wurde. Zur Entfernung von Schleim und Blut wurde das Präparat möglichst gründlich mit physiologischer Kochsalzlösung abgespült. Dann wurde es fixiert und nach der von Zilliacus^ angegebenen Methode gefärbt , um makroskopisch zwischen Plattenepithel und Zylinderepithel unterscheiden zu können. 1) 24stündiger Aufenthalt in einer Fixierungsflüssigkeit, bestehend aus : Sublimat, konzentrierte wässerige Lösung . . 1 Teil Pikrinsäure, konzentrierte wässerige Lösung . 1 „ Destilliertes Wasser 2 Teile. 2) Einstündiges Auswaschen in fließendem Wasser; 3) zwei- bis drei- tägiges Verweilen in gesättigter wässeriger Pikrinsäurelösung ; 4) Aus- spülen in Wasser während einiger Minuten ; 5) Färbung in Häm- alaun (P. Mayek) l^/.., — 2^/« Minuten; während der Färbung muß man das Präparat öfters herausnehmen und mit Wasser abspülen, um den Verlauf der Färbung zu kontrollieren ; 6) einstündiges Ver- weilen in einprozentiger Sodalösung. Nach dieser Färbung nimmt das Präparat überall da, wo Plattenepithel oder verhorntes Epithel vorhanden ist, eine rein gelbe Farbe, oder wenn keine rein gelbe, so doch eine Reihe verschieden stark ins Gelbliche übergehender Färbungen an, an allen anderen Teilen aber eine dunkle grünschwarze Farbe. Falls die oberen Schichten des Plattenepithels abgestoßen ^) ZiLLiACUS, W. , Utbredningen af skif-och cj'linder-epitelet i män- niskans struphufvud under olika äldrar. Helsingfors 1905. 234 Referate. XXV, 2. waren, oder sich eine dicke Schleimscbicht über dem Plattenepithel befand , nahmen diese Stellen ebenfalls eine dunkle Farbe au. Un- mittelbar nach der Färbung kann man die Präparate makroskopisch photographieren, am besten in RANviERSchem Alkohol, später ver- wischen sich die Farben. Aus dem Präparate wurde ein Stück der Vagina in Längsrichtung herausgeschnitten, ein anderes in derselben Richtung vom Übergange von der Vagina zum Cervix, und ein drittes aus der Mitte des Corpus uteri gewöhnlich in Querrichtung ausge- schnitten. Zeigte das makroskopische Bild des Corpus uteri nach der Färbung Verschiedenheiten in den Farbennuancen, so wurden außerdem Stücke vom Übergange zwischen diesen Stellen ausge- schnitten. Einbettung in Paraffin, Schnitte von 6 bis 8 /t Dicke. Zur Rekonstruktion der Grenzlinie des Überganges des Plattenepithels in das Zylinderepithel des Cervix wurde durch zwei parallele Schnitte oberhalb und unterhalb des Os uteri externum in sechs Fällen ein Stück ausgeschnitten. Die Stücke wurden in Serien geschnitten und die Grenzlinien auf Millimeterpapier rekonstruiert. Zum Färben der Präparate wurden benutzt : Eisenhämatein (Haxsex) ^, Eisenhämatein nach VAN Giesox, Eisenhämatein-Eosin, Unnas polychromes Methylen- blau, Färbung nach Biondi-Heidenhain, Triacid nach Ehrlich und nach Pappexheim (die letztere Triacidfärbung gelang weit weniger gut, als die beiden vorhergenannten), Eisenhämatoxylin nach Heiden- hain und für den Nachweis von Schleim Mucikarmin nach P. Mayer- Rawitz. Da es dem Verf. mit der Eisenhämatein -Eosin -Methode nicht immer gelang, die eosinophilen Zellen deutlich darzustellen, ver- suchte er eine von Dominici ^ angegebene Methode , die er aufs wärmste empfiehlt : Eosin-Orange-Toluidinblau : einstündige Färbung mit einer Lösung von Eosin W. (Grübler) oder gewöhnliches wasser- lösliches Eosin , Auswaschen während 1 ^j.^ bis 2 Minuten in abso- lutem Alkohol, dann 15 Minuten lange Färbung in einprozentiger wässeriger Lösung von Toluidinblau , dann Auswaschen in Wasser, dann in Alkohol, Xylol, Cedernholzöl. — Das elastische Ge- webe wurde mit AVeigerts Resorcin-Fuchsin nebst Doppeltärbung mit Boraxkarmin oder der Färbung von van Gieson dargestellt. Mit- unter auch Orceiu mit Thiouin. — Das Bindegewebe wurde ent- weder nach Mallory nach vorhergeliender Beizung mit lOprozentiger ^) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 145. -) Dominici, H. , Sur un procede de technique histologique applique k Tetude des cellules conjonctives (Folia haematologica, II. Jahrg., No. 4, Berlin 1905). XXV, 2. Keferate. 235 wässeriger Lösung von Pliosphormolybdänsäure während 1^/.^ Minuten mit nachfolgendem Ausspülen in Wasser dargestellt oder auch durch Pankreatinverdauung, durch die man das ganze kollagene Gewebe zu isolieren rermag. Verf. verwandte diese Methode in folgender Weise : Die Objektträger , auf welche die Schnitte gelegt werden sollen, müssen ganz rein und vor allem vom Fett befreit sein, damit sich die Schnitte bei der Verdauung nicht loslösen: drei- bis vier- tägige Aufbewahrung der Objektträger in einer Seifenlösung ist das einfachste und zugleich sicherste Mittel hierfür. Die Schnitte wer- den dann auf die Objektträger gelegt und, nachdem diese getrocknet sind , von Paraffin befreit , indem man sie bei Zimmertemperatur bringt a) 3 bis 4 Stunden in Xylol, b) in absoluten Alkohol, c) in Benzin, um das Fett zu entfernen; die Verdauung geht leichter vor sich, wenn die Schnitte längere Zeit (gewöhnlich 6 bis 7 Tage) in dieser Flüssigkeit gelegen haben; d) absoluter Alkohol, e) Alkohol 96 Prozent, f) einige Minuten hindurch mit Wasser abspülen, g) 24 Stunden in Barytwasser, um die Schnitte etwas aufzulockern und dadurch die Verdauung zu erleichtern (Kolster), h) Spülen in tließendem Wasser, i) Verdauungstlüssigkeit : einprozentige Sodalösung 40 bis 45 CO , hierzu eine Messerspitze Pancreatinum siccum dep. (Grübler) bei einer Temperatur von 35 bis 37 ^ 6 Stunden bis einige Tage, k) vorsichtiges Auswaschen in destilliertem Wasser (ein paar Stunden), 1) Hämatoxylin nach Mallory 5 bis 6 Minuten, m) vorsichtiges Ausspülen in destilliertem Wasser, n) absoluter Alko- hol usw. , Balsam. Die Zeit für die Dauer des Aufenthaltes der Schnitte läßt sich nicht angeben. Sie hängt ab sowohl von der Dicke des Schnittes, wie von der Festigkeit des Gewebes, die in den ver- schiedenen Altersperioden verschieden ist. Schnitte von fötalen Uteri halten kaum eine sechsstündige Verdauung aus, während Schnitte von der Vagina greisenhafter Weiber selten vor einer dreitägigen Ver- dauung völlig rein sind. Manche Schnitte hat Verf. sogar sechs Tage lang in der Verdauungsflüssigkeit liegen lassen müssen , ehe sie ganz klar und rein waren. Bevor die Präparate gefärbt werden, kann man mit dem Mikroskope kontrollieren , wie weit die Ver- dauung vorgeschritten ist. Die Schnittdicke darf nicht 10 ^^ über- steigen, sonst sind die Bindegewebsfasern zu dick , und das Bild wird undeutlich. Zu dünne Schnitte haben eine größere Neigung, sich vom Objektträger loszulösen; am besten sind Schnitte von 6 bis8/i. Das Deckglas muß vorsichtig aufgelegt und jeder stärkere Druck vermieden werden. — In allen Fällen, in denen das makroskopische 236 Referate. XXV, 2. Bild des Uterus nach der ZiLLiAcus-Färbung an einer oder mehreren Stellen eine hellere Farbennuance zeigte, als der Uterus gewöhnlich annimmt, hat Verf. Schnitte von diesen Stellen in Pepsinlösung verdaut, um zu ermitteln, ob das Epithel verhornt war, oder nicht. Verwandt wurde hierzu die Pepsinverdauungsmethode von Unna nach der Beschreibung von Max Joseph ■'^: Bevor die Schnitte der Ver- dauung unterworfen werden, machen sie eine vorbereitende Behand- lung durch , ähnlich der bei der Trypsinverdauungsmethode be- schriebenen: Nachdem die Schnitte 24 Stunden in Barytwasser ge- legen haben, und gründlich mit Wasser ausgespült sind, kommen sie a) bei 37 bis 40^ in die Verdauungsflüssigkeit, die aus O'öprozen- tiger Lösung von Pepsinum Langebeck in einprozentiger Salzsäure- lösung besteht. Hierin bleiben die Schnitte liegen, bis alles verdaut zu sein scheint (einen bis 6 Tage), b) Auswaschen in Wasser, c) Ab- trocknen mit Filtrierpapier, d) Färbung in erwärmtem polychromem Methylenblau (eine Minute), e) Abtrocknen mit Filtrierpapier, f) Über- gießen mit einprozentiger wässeriger Lösung von rotem Blutlaugen- salz, g) Abtrocknen mit Filtrierpapier, h) Salzsäurealkohol, Bergamottöl, Balsam. Alles was hierbei unverdaut bleibt und blau gefärbt bleibt, ist Keratin. Schiefferdecker {Bonn). Rubaschkin, W., Über das erste Auftreten und die Migra- tion der Keimzellen bei Vögelembryonen (Anat. Hefte, H. 105 [Bd. XXXV, H. 1], 1907, p. 243—261 m. 3 Tfln.). Als Material dienten Hühner- und Entenembryonen in der Zeit vom 2. bis zum 5. Bebrütungstage. Zur Fixierung wurde meist ZENKERSche Flüssigkeit benutzt, zum Teil auch ZENKEu-Formol (Zenker- sche Flüssigkeit, in der die Essigsäure durch dieselbe Menge Formol ersetzt wurde) und die FLEiniiNGSche Flüssigkeit. Zur Färbung diente meist Hämatoxj'lin nach Heiuenhaix. Schiefferdecker {Bonn). Grochmalicki, J. , Über die Linsenregeneration bei Knochenfischen (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 164—172 m. 6 Figg.). Zur Untersuchung dienten kleine soeben aus dem Ei ausgeschlüpfte Forellen. Junge Goldfische und Plötze eigneten sich nicht, da die ^) Joseph, M., Dermatohistologische Technik, Berlin 1905. XXV, 2. Referate. 237 Tiere immer frühzeitig nacli der Operation zugrunde gingen. Bei der Operation kam das gewöhnlicli übliche Verfaliren zur Verwen- dung: Dem in ein Leinwandläppchen gewickelten Tiere wurde durch einen Linearschnitt an der Cornea das Auge geöffnet und durch einen leichten seitlichen Druck auf den Bulbus die Linse hervorzugleiten gezwungen. Die operierten Fische wurden zunächst in einen Brut- kasten gesetzt , später in mehrere Aquarien verteilt und mit Leber gefüttert. A'on Zeit zu Zeit wurden einzelne Tiere in einem Gemisch von gleichen Teilen konzentrierter Sublimatlösung und Sprozentiger Salpetersäure fixiert, dann entkalkt, in Paraffin eingebettet und ge- schnitten. Zur Färbung diente Hämatoxylin nach Delafield und das VAN GiESONSche Gemisch. E. Schoebel (Neapel). C. 31ikroorganisnien. Reichert, II., Beobachtung der Geißeln von Bakterien im ungefärbten Zustande mit Hilfe des Spiegel- kondensors. [Vorläufige Mitteilung] (Hygien. Rundsch. Jahrg. XVII, 1907, p. 1121). Nach Verf. gelingt es mit Hilfe der Dunkelfeld-Beleuchtungs- vorrichtung die Geißeln von Bakterien, deren Größe ins ultramikro- skopische Gebiet fällt, auch in ungefärbtem Zustande zu sehen. Verf. unterscheidet Vibrionen, deren polare einzelne Geißel direkt mit Hilfe der Dunkelfeld-Beleuchtungsvorrichtung zu sehen ist, und mehrfach begeißelte Bakterien, deren zarte Geißeln für sich auch durch obige Methode nicht sichtbar gemacht werden können, an denen aber unter Umständen eine Absorption oder Abscheidung von gelösten Substanzen der Aufschwemmungsflüssigkeit eintritt, wodurch dieselben beobachtet werden können. Zu diesem Zwecke werden die Bakterien im Kondens- wasser von Agar oder in einer Mischung gleicher Teile Nährgelatine und Bouillon gezüchtet, auf sorgfältig gereinigte Objektträger ge- bracht und mit Deckglas bedeckt, das zur Vermeidung von Strömungs- erscheinungen mit Vaseline umrandet wird. Verf. gibt dann seine hierbei erzielten Beobachtungen wieder, die er an Spirillen, Stäbchen- bakterien, Vibrionen und Spirochäten gemacht hat. Die Geißeln abgestorbener oder abgetöteter Bakterien kann man mit Hilfe von Beize nach Zettxow, mit vermehrtem Tanninzusatz hergestellt, sicht- bar machen. Die Geißeln erscheinen dann helleuchtend auf dunklem 238 Referate. XXV, 2. Grunde. Bei Spirillum volutans, B. 367; vgl. diese Zeitschr. Bd. XXV, 1908, p. 252). Nichols, M. L. , The developiuent of thc pollen of Sarracenia (Botan. Gaz. Bd. XLV, 1908, No. 1, p. 31; vgl. diese Zeitschr. Bd. XXV, 1908, p. 2.54). Niemann, G., Über das Sammeln und Präparieren der Kieselalgen [Diato- maceen] (Mikrokosmos Bd. I, 1907/1908, H. 8). Raciborski , M. , Einige Chemomorphosen des Aspergillus niger (Bull, de r Acad. de Sc. de Cracovie 1906, p. 764; vgl. diese Zeitschr. Bd. XXV, 1908, p. 257). 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Helligkeit der Kondensoren für Dunkelfeldbc- leuchtung. — Für die Leistungsfähigkeit moderner Dunkelfeld- kondensoren ist in erster Linie ihre Lichtstärke bestimmend. Unter Voraussetzung aplanatischer Strahlenvereinigung, d. h. gleicher Schnitt- weite und gleicher Brennweite für alle Zonen und Farben, gibt das Quadrat der wirksamen Apertur des Kondensors ein Maß für seine Lichtstärke. Diese Voraussetzung bedingt freilich eine Strahlenver- einigung von solcher Güte , wie sie bei den besten Mikroskopobjek- tiven nur annähernd erreicht wird. An die Kondensoren werden aber in bezug auf Güte der Strahlenvereinigung im allgemeinen weit geringere Anforderungen gestellt und realisiert; es kann daher der obige theoretische Wert nicht zur Bestimmung ihrer Lichtstärke ver- wendet werden. Man könnte nun subjektiv verschiedene Kondensoren unter mög- lichst gleichen Bedingungen prüfen. Ein solcher Vergleich kann aber keinen Anspruch auf besondere Genauigkeit erheben , da die gleichen Bedingungen im allgemeinen nicht erfüllbar sind. Es muß also auch darauf verzichtet werden , die Kondensoren etwa photo- graphisch zu vergleichen durch Bestimmung der Expositionszeiten, die gleiche Objekte benötigen würden. Immerhin könnte eine solche Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 3. 18 274 Siedentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeldbeleuchtung. XXV, 3. Methode wenigstens einen Anhalt für den Vergleich verschiedener Kondensoren liefern. Wenn man sich aber vorlänfig nur mit einem solchen Anhalt beschränken muß, gibt es folgenden einfacheren Weg, der durch direkte Sichtbarmachung des Verlaufes der aus den Kondensoren austretenden Strahlen das Ziel erreicht. Die Sichtbarmachung läßt sich bewirken, wenn man die Strahlen aus einem Immersionskoudensor in eine Flüssigkeit treten läßt, die mit seiner Frontlinse genau gleichen Brechungsexponent besitzt und fluoresziert. Die in Figur 1 abgebildete Fluoreszenzküvette ist zu diesem Zweck geeignet. Als Vergleichskondensor ist in der Zeichnung das ZEisssche Paraboloid P für Dunkelfeldbelenchtung gewählt (Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 104). An ein Deckglas D sind ein schwarzes Glas G und ein kleines Ablenkungsprisma A gekittet, welche zwischen sich einen rechteckigen Hohlraum von 15 mm Länge, 3 mm Höhe und 2 bis 3 mm Breite zur Aufnahme der fluoreszierenden Immersionsflüssigkeit lassen. Als Flüssigkeit kann Zedernöl gewählt werden, das bei Beleuchtung mit Bogenlicht schon ohne weiteren Zusatz genügend fluoresziert. Die Küvette wird mit ihrem Hohlraum ungefähr zeutrisch auf den Kondensor gelegt. Den Dunkelfeldkondensor legt man so auf den Mikroskop- tisch, daß die Mitte des Prismas A etwa in der Mikroskopachse liegt. Das Zedernöl wird von den freien Seitenflächen aus in den Hohl- raum kapillar angesogen. Unter dem Kondensor befestigt man einen schmalen Spalt S (Fig. 3) von etwa 2 mm Breite aus Karton ungefähr zentrisch über der Zentralblende C. Da die Kondensoren Rotations- körper sind , genügt es , in einem die Rotationsachse enthaltenden, ebenen Schnitt die Strahlenvereinigung zu untersuchen. Eine solche Partie wird durch den Spalt S herausgeblendet. Läßt man die Längsrichtung der Küvette mit der des Spalts zusammenfallen, so kann man durch das Prisma A hindurch den Strahlenverlauf direkt mit einer Lupe oder einem schwachen Mikroskop- system betrachten. Man erhält gleichzeitig zwei Bilder des Strahlen- verlaufs , neben dem Prisma von oben , durch das Prisma wie von der Seite gesehen. Figur 2 , welche einen Querschnitt parallel zum Spalt darstellt, gibt eine schematische Darstellung dieser Strahlen i^, welche außerhalb der Zentralblende C durch den Spalt S in den Kondensor annähernd parallel eingetreten sind , sich hierauf im Fokus F^ der im Hohlraum der Fluoreszenzküvette liegt, schneiden und dann am Deckglas total reflektiert werden. Das schwarze Glas er- XXV, 3. Siedentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeldbeleuchtung'. 275 mügliclit die Beobachtung dieser Strahlen durch das Prisma Ä vor schwarzem Hintergrund. Zur Beleuchtung dient Bogeulicht. Die Lampe steht in 1 bis 2 m Entfernung. Die horizontal einfallenden Strahlen werden nicht durch den Mikroskopspiegel, der meistens Doppelbilder gibt, in das ver- 1. 2. Querschnitt senkrecht zum Spalt. Querschnitt parallel zum Spalt. / 1 \ ( \ v. 'S.» — \ \ C; , -' / / y 3. Ansicht von unten. Fig. 1 — 3. Fluoreszenzküvette zur Sichtbarmachung der Strahlen- vereinigung von Mikroskopkondensoren. tikal stehende Mikroskop geleitet, sondern durch ein rechtwinkliges totalrefiektierendes Glasprisma. Die Kondensoren wurden doppelt untersucht, ohne und mit vor- geschalteter Sammellinse. In letzterem Falle erhält man ein größeres beleuchtetes Sehfeld und eine viel intensivere Dunkelfeldbeleuchtung, weil die Aberrationen des Kondensors nicht so stark wie bei punkt- förmiger Lichtquelle helligkeitsmiudernd zur Geltung kommen können. 18* 276 Siedentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeldbeleuchtung. XXV, o. Um einen objektiven Vergleich zu ermöglichen, sind die Bilder des Strahlenverlaufs mikrophotographisch bei etwa siebenfacher Vergröße- rung aufgenommen und im folgenden reproduziert (Figg. 4 — 12). Mißt man an den Bildern mit einem Goniometerokular die Winkel 7^ der beleuchtenden Büschel mit der Achse, so erhält man aus ilinen durch Multiplikation von sin cp mit dem Brechungsexponenten des Immersionsmediums die numerische Apertur der beleuchtenden Büschel. Als katoptrische Dunkelfeldkondensoren sind zum Vergleicli herangezogen ein Dunkelfeldkondensor von Leitz (Diese Zeitschr. Bd. XXV, 1908, p. 66), zwei Spiegelkondensoren von Reichert (Diese Zeitschr. Bd. XXV, 1908, p. 195), Plattenform und Form mit ein- klappbarer Blende, ein Paraboloidkondensor, ferner als dioptrische ein gewöhnlicher Immersiouskondensor 1*4 num. Apertur, mit Zentral- blende für Dunkelfeldbeleuchtung (Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 13) und von Zeiss ein aplan atischer Kondensor gleicher Apertur. In Figuren 4 bis 9 sind die Aufnahmen ohne Beleuchtungslinse vor der Bogenlampe hergestellt. Infolgedessen treten Einzelheiten in den Aberrationen deutlich hervor und ermiiglichen einen p r a k - tischen Vergleich der verschiedenen Typen in Ergänzung zu dem theoretischen Vergleich der Aberrationen, den W. v. Ignatowsky vor kurzem in dieser Zeitschrift (Leitz, loc. cit.) angestellt hat. Die beste Strahlenvereinigung zeigt hiernach der neue a p 1 a n a t i s c h e , dioptrische Kondensor 1'4 Apertur (Fig. 7). Derselbe ist übrigens nicht speziell für Dunkelfeldbeleuchtung hergestellt, — dazu sind Linsenkondensoren wegen der störenden inneren Re- flexionen zwischen den Linsen weniger geeignet als die speziellen katoptrischen Kondensoren für Dunkelfeldbeleuchtung — ; seine Über- legenheit infolge präziser Strahlenvereinigung kommt vornehmlich bei Mikroprojektionen in Frage. Die präzise Strahlenvereinigung erstreckt sich übrigens über seine ganze Öffnung, ist also nicht nur auf die äußere Partie beschränkt. Die Figuren 10 bis 12 sind mit Beleuchtungslinse vor der Bogen- lampe hergestellt. Die Überlegenheit des parabolisch geschliffenen Dunkelfeldkondeusors (Fig. 10) ist ebenfalls deutlich. Auffällig ist die Zweiteilung der Büschel in dem sonst brauchbar korrigierten Kondensor von Leitz (Fig. 11). Sie beruht darauf, daß der Kondensor aus zwei Teilen hergestellt ist , deren äußere , konvexe Kugeltläche in praxi nicht, wie theoretisch verlangt ist, nur einen Mittelpunkt hat , sondern zwei M^ und M^ für die treppenartig anstoßenden Kalotten 1 und 2 (vgl. Fig. 13). XXV, 3. Siedentopf: Über lieobaclitungen bei Dunkelfeldbeleuclitung-. 277 Die Aberrationen in den Spiegelkondensoren von Reichert (Figg. 12, 4, 5) beruhen auf der starken sphärischen Aberration und dem Astigmatismus, den ein schief gestellter, sphärischer Hohlspiegel besitzt (Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 392 u. Bd. XXV, 1908, p. 195). Die Strahlen divergieren bereits beim Austritt aus dem Kondensor, an- statt sich im Fokus zu schneiden. Die Aufnahme mit vorgeschalteter Sammellinse (Fig. 12) läßt kaum noch einen Strahlengang erkennen. Wo es nicht auf die Erzielung äußerster Lichtstärke ankommt, gibt ein geringes Maß von Aberrationen den Vorteil, daß mau nicht nötig hat, die Objektträgerdicke auf etwa Yioo ™™ genau einzuhalten, 13. sondern innerhalb mehrerer Zehntel mm ein Spielraum zur Verfügung bleibt, in dem ein Teil des infolge der zugelassenen Aberrationsreste räumlich ausgedehnten Fokus noch richtig zwischen Objektträger und Deckglas im Präparat liegt. Kriterium für Über- und U nt e r korr ek tion bei D u n k e 1 f e 1 d b e 1 e u c h t u n g. — Bekanntlich treten bei Dunkelfeld- beleuchtung Fehler und Verunreinigungen in den Präparaten weit mehr hervor als bei mikroskoi>ischen Beobachtungen im durchfallenden Licht. Auch die chromatischen und sphärischen Fehler der Mikroskop- objektive offenbaren sich viel deutlicher. Sehr oft sind aber schlechte Mikroskopbilder nicht auf diese Ursachen zurückzuführen , sondern beruhen auf der Benutzung falscher Deckglasdicke oder Tubuslänge, wobei sonst gute Mikroskopobjektive eine das mikroskopische Bild merklich verschlechternde Über- oder Unterkorrektion zeigen. 278 Siedentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeldbeleuchtung. XXV, o. Nun besteht bei Duukelfeldbeleuclitung folgendes Kriterium, das ein sicheres Urteil über die Inne- lialtung der richtigen Korrektionsbedingungen für das jeweils benutzte Objektiv an die Hand gibt. Hat man nämlich bei einem sonst guten Mikroskopobjektiv bei richtiger Tubuslänge ein zu dünnes Deckglas, so geben ultramikroskopische Objekte bei Dunkelfeld eine charakteristisch verschiedene Unscharfe, je nachdem man mit der Mikrometerschraube des Mikroskops zu hoch oder zu tief einstellt. Stellt man zu tief ein, so entstehen zahlreiche deutliche Interferenzringe , welche die Beugungsscheibchen umgeben. Entfernt man jetzt durch mikrometrisches Heben des Tubus das Mikroskopobjektiv vom Präparat, so passiert man zunächst die Stel- lung größter relativer Schärfe. Bei weiterer Entfernung wird das Beugungsscheibchen unscharf, ohne daß es wie vorher zur Bildung deutlicher Kinge kommt. Die Unscharfe bei extrafokaler Einstellung ist also unsymmetrisch gegen die Stellung größter relativer Schärfe (Annalen d. Physik [4] Bd. X, 1903, p. 13). Umgekehrt liegen die Verhältnisse, wenn man ein zu dickes Deckglas verwendet. Stellt man bei zu dickem Deckglase zu tief ein, so erhält mau ein unscharfes Beugungsscheibchen ohne Ringe; das Bild wird bei mikrometrischem Heben des Objektivs scharf, um bei weiterem Heben , also zu hoher Einstellung , von vielen Ringen umgeben zu werden. Zahl und Deutlichkeit der Ringe wachsen mit der Helligkeit des Beugungsscheibchens. Diese Interferenz- ringe erscheinen also bei zu dickem Deckglas und zu hoher Einstellung oder bei zu dünnem Deckglas und zu tiefer Einstellung. Deckglaskorrekt iou durch Tubus Verschiebung. — Man kann bekanntlich durch Veränderung des Tubusauszugs die Fehler durch falsche Deckglasdicke vermindern, und zwar bei zu dünnem Deckglas durch Verlängerung des Tubusauszugs und bei zu dickem Deckglas durch Verkürzung desselben. Die annähernd rich- tige Korrektion der falschen Deckglasdioke durch Veränderung des Tubusauszugs erkennt man daran , daß das mikroskopische Bild des Beugungsscheibchens sowohl bei wachsender zu tiefer als bei wachsen- der zu hoher Einstellung in nahezu gleicher Weise unscharf wird, indem es zunächst nur von \v e n i g e u Ringen umgeben und dann unscharf wird. Nach diesem Kriterium ist bei Dunkelfeld die folgende Tabelle zur D e c k g 1 a s k 0 r r e k t i 0 n durch T u b u s v e r s c h i e b u n g XXV, 3, Siedentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeldbeleuchtiing. 279 experimentell bestimmt und nachträglich auch für durchfallendes Liclit als richtig befunden. Tubus länge 160 mm, Objektive von Zeiss. Mittlere Deckglasdicke 0'16 mm. Interferenzringe bei zu Trocken- Apochromate tiefer Einstellung F 1-8 E 2-8 3 mm 4 mm DD 4-3 5 ^ -j-14 mm + 12 mm + 10 mm + 5 mm + 4 mm Deckglas 10 „ + ■21 „ + 22 „ + 18 „ + 9 „ + 9 ., zu dünn < 15 „ r> + 35 „ + 27 „ + 14 „ + 12 „ um : 20 . ;5 r' + 40 „ + 18 „ + 16 „ l30„ :i •? n + 30 „ + 27 „ Interferenzringe bei zu hoher Einstellung 5 u — 9 mm — 8 mm — 7 mm — 4 mm — 3 mm Deckglas 10 '„ -20 „ -15 „ -14 „ - 8 ., — 6 „ zu dick ' 15 „ '1 -22 „ -17 ., -11 . - 9 „ um: 20 „ n n " v -14 „ -12 „ . 30 , ?5 n 5) -21 „ -19 „ Tabelle zur Deckglaskorrektion durch Tubus- verschiebung. Ein Plus -Zeichen in dieser Tabelle bedeutet Verlängerung, ein Minus -Zeichen Verkürzung des Tubus. Hinter den Bezeichnungen der Objektive durch große lateinische Buchstaben stehen Ziffern, welche die Brennweite der betreffenden Objektive in mm angeben. Die Un- sicherheit der Korrektionszahlen ist etwa 2 mm (bei F mehr). Wie die Tabelle lehrt, wird die Tubusverschiebung bei größeren Brennweiten kleiner, entsprechend der größeren Empfindlichkeit solcher Systeme gegen die Tubuslänge, und um so größer, je kleiner die Brennweite des Mikroskopobjektivs ist. Außerdem ist es nicht gleich, ob das Deckglas zu dick oder zu dünn ist. Wenn man, wie es meist der Fall ist, mit angeschraubtem Revolver be- obachtet, so beträgt die Möglichkeit, den Tubus zu verkürzen, oft nur wenige mm. Bei zu dickem Deckglase und kurzbrennweitigen Systemen kann man dann fast nichts mehr durch Tubusverschie- 280 Sieclentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeldboleuchtung. XXV, 3. bung korrigieren (vgl. auch die leergelassenen Rubriken in der Tabelle). Man gewinnt bekanntlich einen größeren Spielraum in der Korrek- tion auf Deckglasdicke , wenn man die Mikroskopobjektive in einer Fassung mit Korrektionsschraube benutzt. Diese gestattet durch Drehung eines Rändeis das hintere Linsensystem gegen das vordere des Objektivs mikrometrisch zu verändern und dadurch die Korrektion zu verschieben , und zwar in einem Spielraum der Deckglasdicken von O'l bis 0*2 mm. Bei Benutzung von Deckglastastern und Objektiven mit Korrektionsfassuug hat mau also, um das beste mikroskopische Bild bei Dunkelfeldbeleuchtung (oder im durchfallenden Lichte) zu er- halten nur nötig, die Deckglasdicken mit dem Taster auf ^J^^q mm genau zu bestimmen, auf diese Zahl den Index der Korrektionsfassung zu stellen und bei der Tubuslänge von 160 mm zu beobachten. Die letztere muß eventuell um den Betrag der Dicke der verwendeten Objektivwechselvorrichtungen vermindert werden. Beobachtungen mit Imraersionssystemeu bei Dunkel- f eldbeleuchtung. — Die jetzt meist üblichen Methoden für Dunkelfeldbeleuchtung realisieren dieselbe durch Zentralblende im Immersionskondensor. Besser als die durch innere Reflexionen stark verschleiernden dioptrischen Kondensoren eignen sich die speziell für Dunkelfeldbeleuchtung konstruierten katoptrischen Konden- soren. Die beleuchtenden Strahlen haben dabei eine Apertur von über Eins, sind also in Luft unmöglich. Die beleuchtenden Strahlen erleiden Totalreflexion am Deckglas , wobei Bedingung ist, daß sich zwischen Deckglas und Kondensor keine Luft befinden darf. Beob- achtet man mit Trockensystemen, so ist ohne weiteres die Dunkelfeld- beleuchtung gegeben. Bei Beobachtung mit Immersionssystemen kann am Deckglase keine Totalreflexion der beleuchtenden Strahlen ein- treten , da die Immersion über dem Deckglase ihnen ungehinderten Weitergang gestattet. Um dennoch Dunkelfeldbeleuchtung zu erzielen, muß man die Randzone der Immersionssysteme auf geringere Apertur abblenden. Dies läßt sich auf zweierlei Weise bewerkstelligen. Entweder hängt man eine Randblende (keine Sternblende !) von oben her in den Trichter des Mikroskopobjektivs, oder man schraubt das Objektiv vorsichtig auseinander und legt zwischen die Linsen eine passende ringförmige Randbiende. In ersterem Falle muß man weiter, in praxi iiuf etwa 0"8 Apertur abblenden, da die vielen inneren Reflexionen Spiegelkondensor \ on Reichert rPlattefiforrai. Spiegelkoudensor von Reioiiert ''Form mit einklappbarer Blende). o. Paraboloidkondensor von Zeili. Spiegelkondensor von Leitz. Aiilanatischer Kondensor von ZeilÄ. Gewöhnlicher Imniersionskondensor. 8. Fjo-. 4_9. Mikrophotogramme der «trahlenvereinigung von Kondensoren für Dunkelfeldbeleuchtiing olnie üelouchtungslinse. (Vergrr.ßerung cn. 7 mal.) Paraboloidkoiidonsor von Zeiß. 10. Spiegelkondensor von Leitz. 11. Spiegelkondensor von Reichert. 12. Fig. 10 — 12. !\Iikrop]iotograniiue der Strahlenvereinigung- von Kondensoren für DunkelfcldI)eleiK'litiing mit Beleuchtungslinse. (Vergr/ißerung ca. 7 mal.) XXV,3. Siedentopf: Über Beobachtungen bei Dunkelfeklbeleuchtung. 281 zwischen den zahlreichen Linsen eines starken Immersionssystems, welche den Untergrund wie bei den dioptrischen Dunkelfeldkonden- soren störend aufhellen , sonst niclit genügend unschädlich gemacht werden können. Bei den zwischen den Linsen liegenden Blenden hat man den Nachteil, daß entweder nur die optischen Fabriken dieses Einsetzen und Wiederherausnehmeu ohne Gefährdung des Objektivs vornehmen können, oder man läuft Gefahr, durch Über- drehen des feinen Gewindes, durch Eindringen eines Staubkörnchens zwischen die sich fast berührenden Linsen oder durch Verbiegen der dünnen Blende das Objektiv schwer zu verletzen. Die Benutzung von Immersionsobjektiven bei Dunkelfeldbeleuch- tung bietet außer der eventuell etwas höheren Vergrößerung als Vorteile größere Unabhängigkeit von Deckglasdicke und ein wenig- geringere Schädlichkeit von Verunreinigungen der Deckglasoberfläche, dagegen in praxi meist überwiegende Nachteile der unbequemeren und eventuell für das Objektiv gefährlichen Manipulation und eines merklich geringeren Kontrastes infolge Aufhellung durch innere Reflexionen im Objektiv gegenüber den Trockensystemen. Zu- dem wird das Auflösungsvermögen der Immersionsobjektive auf das yon Trockensystemen erniedrigt. Es sind daher für diese Untersuchungen starke Trocken -Apochromate meist V 0 r z u z i e h e n. Vorteile d er Dunkelf eldbel euchtung bei gefärbten Präparaten. — Zum Schluß will ich kurz darauf hinweisen, daß jn manchen Fällen auch bei gefärbten Präparaten die Dunkelfeld- beleuchtung gute Bilder liefert und gewisse Details leichter zu er- kennen gestattet, als die Beobachtung im durchfallenden. Dies kann besonders bei mit fluoreszierenden Fai'bstotfen wie Fuchsin usw. ge- färbten Bakterien deutlich werden. Die Färbung kann hierbei viel schwächer sein als bei durchfallendem Lichte. — Abweichungen in der Abbildung bei Dunkelf el d- ;b eleu cht ung. — Auf die Möglichkeit verschiedener Abbildung .eines und desselben Objektes bei Dunkelfeldbeleuchtung, z. B. bei Spirochaete pallida, als fortlaufender Linienzug oder als Kette ge- trennter Beugungsscheibchen habe ich in dieser Zeitschrift schon früher hingewiesen (Bd. XXIV, 1907, p. 108). Zur Erklärung dieser Erscheinung kann außer der loc. cit. gegebenen auch die Theorie von K. Strehl über das räumliche Lichtgewebe in mikroskopischen Bildern herangezogen werden (Zeitschr. f. Instrumentenkde. Bd. XVIII, 1898, p. 301). Ich beabsichtige demnächst hierauf näher einzugehen. 282 Braus: Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr-Köhler. XXV, 3. Auch die Unterschiede in den Dimensionen von Bakterienbildern bei durchfallendem Lichte (positives, schmales Bild) und bei Dunkel- feld (negatives, breiteres Bild) habe ich bereits an anderem Orte (Berliner klinische Wochenschr. 1904, No. 32) besprochen. [Eingegangen am G. November 1908.] Das neue orthomorphe Stereoskop von V. Kohr- Köhler und seine Anwendung in der Rekonstruktionstechnik/ Von H. Braus in Heidelberg. Hierzu eine Textabbildung. Das Mißliche vieler Zergliederungsmethoden — gröberer wie feinerer, besonders auch des Mikrotomierens — ist häufig darin ge- legen, daß zwar eine unmittelbare Einsicht in die Detailstruktur auf diesem Wege gewonnen wird , daß aber zum Verständnis derselben wieder die Kenntnis des Ganzen und des Zusammenhanges mit dem- selben erforderlich ist. Man fertigt deshalb vor der Zerlegung des Präparates (z. B. eines Embryo) Skizzen oder Photographien an, um die äußere Form im Bilde festzuhalten, und bedieut sich verschiedener Rekonstruktionsmethoden , um nachträglich aus den künstlich her- gestellten Teilen wieder das Ganze zu rekonstruieren oder Stücke des Ganzen rekonstruktiv zu isolieren. Die Prozeduren sind in vielen Fällen hinreichend sicher, um eine genaue Vorstellung von der Form des Gesamtobjektes oder einzelner Teile desselben zu vermitteln. Bei komplizierteren Gegen- ständen ist es aber von großem Vorteil eine möglichst weit reichende Kontrolle darüber zu besitzen, ob eine solche Wiedergabe wirklich *) Nach einem Vortrag mit Demonstration im naturh. - med. Verein Heidelberg am 23. .luni 1908. XXV, 3. Braus : Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr-Köhler. 283 (lern bei der Zergliederung geopferten Original konform ist. Man kann sich zu diesem Zweck der stereoskopischen Photographie be- dienen, welche mit Hilfe der neueren, von der Firma Zeiss her- gestellten Apparate orthomorphe Bilder festzulegen ermöglicht. Ehe ich auf diese Apparate selbst eingehe, mochte ich kurz angeben, wie sich die Benutzung der von ihnen gelieferten Bilder im einzelnen gestaltet. Sehr häufig genügt es von dem Objekt eine Aufnahme zu machen, welche dasselbe in solcher Stellung zeigt, daß die Plastik der später zu modellierenden Teile direkt erkennbar oder durch Vermittlung- benachbarter Hautreliefs indirekt zu kontrollieren ist. Im letzteren Fall muß dann die betreffende Partie der äußeren Oberfläche, wenn sie auch für den eigentlichen Zweck nicht in Betracht kommt, mit modelliert werden. Namentlich bei der Methode der graphischen Isolation nach Kastschenko, welche vor der plastischen Methode manche Vorzüge besitzt^ und dabei viel weniger umständlich ist, wird die Herstellung der endgültigen Abbildung des Modells sehr erleichtert, wenn dem Zeichner zur Kontrolle der Tiefenverhältnisse eine plastische orthomorphe Abbildung des Originals zur Verfügung steht. Ja diese Methode wird unter dieser Voraussetzung selbst in Fällen von komplizierterer Plastik der Formen anwendbar, in welchen sie bisher versagte. Ist die Oberfläche des Objektes für den besonderen Zweck der Rekonstruktion nicht verwendbar , so ist es sehr vorteilhaft sich ein orthomorphes Bild der inneren Skelettverhältnisse zu verschaffen, bevor man die Zergliederung oder Mikrotomierung beginnt. Es ist dies besonders für Embryonen möglich durch die von van Wyhe^ u. a. gegebenen Anweisungen über die Färbung des Skeletts und nach- folgende Aufhellung der Objekte bis zur völligen Transparenz. Ich habe mich überzeugt, daß die Schnittfähigkeit und der Konservierungs- zustand guter, mit Zenker konservierter Objekte bei schonender An- wendung dieser Methoden nicht leidet. Das Verfahren ist folgendes : Man bringt die aufgehellten Objekte in eine solche Lage , daß die 1) Vgl. hierzu H. Braus, 1904, p. 462. ^) Van Wyhe, 1902. Sehr hübsche Bilder gibt die kombinierte Knochen- Knorpelfärbung nach Lundvall 1905. Leider ist es mir bisher nicht ge- lungen bei pigmentierten Amphibienembryonen Präparate zu erhalten, welche zur späteren Rekonstruktion geeignet wären , da die Depigmentie- rungsverfahren zu eingreifende sind. Dagegen eignen sich alle übrigen Objekte, die ich versuchte, besonders entwicklungsgeschichtliches Material vom Hühnchen (s. Kaufmann-Wolf, 1908). 284 Braus: Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr-Köhler. XXY, ;j. Front , welche später nach Anfertigung des Modells die wichtigste für den Beschauer ist, sich dem photographischeu Apparat zuwendet und fertigt von dieser Ansicht eine stereoskopische Aufnahme des Skeletts bei durchfallendem Licht au. Eventuell werden mehrere Ansichten photographiert. Darauf wird das Objekt eingebettet und mit Richtuugslinien so geschnitten, daß bei der graphischen Isolierung nach Kastschenko dieselbe Ansicht zustande kommt wie bei der photographischen Aufnahme. Es können auf diese Weise Skelett- teile als Kontrolle für die Richtigkeit der Rekonstruktion benach- barter Weichteile (Muskeln , Gefäße , Nerven usw.) benutzt w^erden. Die Methode gestattet in verhältnismäßig kurzer Zeit sehr genaue Bilder selbst verwickelter Nerven- oder Gefäßbahneii zu erhalten. Selbstverständlich ist diese Kontrolle auch für die zeitraubenderen plastischen Rekonstruktionsmethoden von hohem Wert. Die Apparate, welche das orthomorphe Bild liefern und da- durch zur Verbesserung der Rekonstruktionsmethoden beitragen, sind gewiß auch für viele andere spezielle technische Maßnahmen von Wichtigkeit. Kompetente Beurteiler werden dies leicht ausfindig machen können. Ich beschränke mich hier auf die mitgeteilte An- wendbarkeit für anatomische , speziell embryologische Zwecke und wende mich jetzt zu den Apparaten selbst. Es handelt sich um eine ganze Reihe von optischen Einrich- tungen, deren Anfertigung imd Ausgestaltung sich die Firma Zeiss in bekannter wissenschaftlicher Uneigennützigkeit angelegen sein ließ. Dieselben gehen aus von dem Greenough sehen binokularen Mikroskop und haben einen gewissen Abschluß in dem jetzt vorliegenden Stereo- skop nach v. Rohr-Köhler gefunden (v. Rohr, 1907, p. 186). Die Vorteile , welche die Präparationsmethoden und das bloße Betrachten kleiner Objekte durch die Einführung des binokularen Mikroskops gewonnen haben ^, lassen sich für die bildliche Wieder- gabe fertiger Objekte auf demselben Weg photographisch durch die DRüNERSche Camera erzielen-. Dieselbe liefert in zwei voneinander getrennten Hälften je ein Bild, besteht also aus zwei miteinander verbundenen kleinen Cameras und gleicht darin den gewöhnlichen Stereoskopcameras; doch unterscheidet sie sich von diesen dadurch, daß die Achsen der beiden Cameras konvergent zueinander stehen. ^) Siehe die Arbeiten von Dküner und mir 1895, 1897. ■-) Drüner, 1900. Als sehr vorteilhaft für Momentaufnahmen und für die Kontrolle der richtigen Einstellung hat sich der von mir angegebene Sucher bewährt (1908, p. 2077, Aniii. 1). XXV, 3. Braus : Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr-Köhler. 285 Darin liegt wie bei dem Greemough sehen Doppelmikroskop der prin- zipielle Vorteil für die Herstellung ortliomorpher, d. h, die plastische Ansicht des Originales exakt reproduzierender Bilder. Doch geht bei der Betrachtung solcher Aufnahmen mittels gewöhnlicher Stereo- skope, welche für Aufnahmen mit der parallelachsigen Doppelcamera konstruiert sind, dieser Vorteil verloren. Man erhält zwar ein sehr deutliches plastisches Bild , doch ist die Plastik meistens eine über- triebene und jedenfalls nie die richtige. Die Orthomorphie kann nur dann für unser Auge erlialten bleiben, wenn das Stereoskop so kon- struiert ist, daß die Bilder für unsere Bildvorstellung unter demselben Winkel erscheinen, unter welchem die Objektivachsen bei dem Auf- nahmeapparat miteinander konvergieren , und daß sich gleichzeitig die Bilder in normaler Sehweite befinden. Dies ist in dem v. Rohr- Köhler sehen Apparat (s. Abb.) durch Anwendung derselben Kon- struktion wie beim Wheatstone sehen Spiegelstereoskop erreicht. Der Beschauer sieht mit geradeausgerichtetem Blick auf zwei Spiegel, welche so gestellt sind, daß die rechts und links in besonderen Bildrahmen angebrachten Photographien unter dem richtigen Winkel betrachtet werden. Vor den Spiegeln sind Ringe zum Anlehnen der Augen- ränder an dieselben angebracht, so daß die richtige Entfernung der Photographien vom Auge leicht innegehalten werden kann. Eine Schraube rechts unten vom rechten Spiegel gestattet den Abstand der Spiegel und Stützringe voneinander zu regulieren und dadurch den Apparat für den Augenabstand eines jeden Beobachters einzustellen. Die Konstruktion des Apparates erfordert es , spiegelverkehrte vergrößerte Kopien nach den Originalaufnahmen , welche ihrerseits in der verschiedensten Größe mit denselben Linsenpaaren wie beim Greenough sehen Mikroskop^ gemacht werden können, anzufertigen. 1) Vgl. Hartixg, 1898 und Drüner, 1900. 286 Braus: Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr-Köhler. XXV, 3. Da die Vergrößerung nach dem Negativ immer dieselbe ist (zweifach), bediene icli mich einer Vergrößerungseinrichtung, welche für diesen Zweck fest eingestellt bleibt. Es macht die Anfertigung der ver- größerten Kopien auf diese Weise kaum mehr Arbeit als die Herstellung von Kontaktdruckeu. Von besonderem Vorteil sind Diapositive, welche, ganz abgesehen von der größeren Klarheit der Bilder, auch die sonst notwendige Umkehrung des Bildes bei der Herstellung des Diapositivs überflüssig machen. Man braucht nur die fertigen Dia- positive im Apparat von der Rückseite anstatt von der Vorderseite zu betrachten, um ein richtiges Bild zu erhalten. Diapositive gegen den Himmel mit dem v. RoHR-KöHLEuschen Stereoskop zu beobachten , ist deshalb lästig , weil in geschlossenen Räumen selten Fenster so zueinander liegen, daß die Diapositive gleichmäßig erhellt werden ; man muß deshalb ins Freie gehen. Zweckmäßiger ist es künstliche Beleuchtung anzuwenden. Ich hänge zu dem Zweck an jeden der Diapositivträger ein kleines Kästchen, in welchem zwei Kerzen brennen ; das Licht genügt zur gleichmäßigen Erhellung des Bildes. Diese einfache Einrichtung ließe sich leicht durch eine vollkommenere (z.B. durch Anbringen von Glühlämpchen) ersetzen. Die Bilder, welche auf diesem Wege gewonnen werden, zeichnen sich, mit dem Original verglichen, durch eine äußerst exakte Wieder- gabe der Plastik aus und haben sich mir für alle Fälle, wo Grenauig- keit erforderlich ist, als unentbehrlich erwiesen. Wenn es sich nur darum handelt, für Demonstrationszwecke dem Beschauer oder einem größeren Auditorium durch Herumreichen von Stereoskopen eine plastische Vorstellung komplizierterer Objekte im allgemeinen zu ver- mitteln , wird meistens das gewöhnliche Stereoskop trotz der damit verbundenen Fehler A^orzuziehen sein, weil es billiger, kompendiöser und leichter zu handhaben ist. • Literatur. Braus u. Drüner, Über ein neues Präpariermikroskop und über eine Methode größere Tiere in toto histologisch zu konservieren (Jenaische Zeitschr. Naturw. Bd. XXIX, 1895, p. 434— 442). Braus, H. , Versuch einer experimentellen Morphologie (München, med. Wochenschr. 1903, No. 47, p. 2076—2077). Braus, H., Tatsächliches aus der Entwicklung des Extremitätenskelettes usw. Festschrift für Ernst Häckel (Jenaische Denkschriften XI, Jena 1904, p. 402). Drüner u. Braus , Das binokulare Präparier- und Horizontalmikroskop (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XIV, 1897, p. 5—10). XXV, 3. Koenigsberger: Prismau. Apparat z. Projektion v. Spektren. 287 Drüner, L. , Über Mikrostereoskopie und. eine neue vergrößernde Stereo- skopcamera (ibid. Bd. XVII, 1900, p. 281—293). Harting, H. , Über einige optische Vervollkommnungen an dem Zeiss- Greenough sehen stereoskopischen Mikroskop (ibid. Bd. XV, 1898, p. 299—303). Kaupmann - Wolf , M. , Erubryologische und anatomische Beiträge zur Hyperdactylie. Braus, Experimentelle Beiträge zur Morphologie, H. 3. Leipzig 1908. LuNDVALL , H. , Weiteres über Demonstration embryonaler Skelette (Anat. Anzeiger Bd. XXVII, Jena 1905, p. 520—523). Rohr, M. v.. Die binokularen Instrumente. Berlin 1907. VAN Wyhe, A new method for demonstration cartilaginous microsceletons (K. Akad. Wetenschappen Amsterdam 1902, p. 47 — 51). [Eingegangen am 11. Oktober 1908.] Geradsichtiges Prisma und Apparat zur Projektion von Spektren und zur Beleuchtung mit spektralem Licht. Von Joh. Koenigsberger in Freiburg i. B. Das im folgendeu beschriebene geradsichtige Flüssigkeitsprisma hat dieselbe Stärke der Dispersion und daher ein gleich großes Spektrum wie die besten Prismen nach Wernicke. Alle geradsich- tigen Prismen haben vor den gewöhnlichen Prismen den Vorzug, daß weißes Licht mir spektral zerlegt, aber nicht abgelenkt wird. Deshalb kann die Projektion eines Spektrums mit geradsichtigem Prisma sich in jedem Raum bequem ausführen lassen. In der Her- stellung ist das neue Prima einfacher als die Prismen ■"■ nach Wernicke, die zwei Glasprismen und ein Flüssigkeitsprisma erfordern. Daher sind die Herstellungskosten bei gleicher Größe und Leistungsfähigkeit weniger als die Hälfte derer anderer Prismen. Wenn hohe Licht- stärke verlangt wird , z.B. in großen Sälen ein weithin sichtbares ^) Die Prismen, sowie die im folgenden beschriebene Projektionsvor- richtung werden von der Firma F. Hellige & Co. in Freiburg i. Br. (D. R. G. M.) hergestellt. 288 Koenigsb erger: Prismau. Apparat z. Projektion v. Spektren. XXV, 3. Spektrum entworfen werden soll, so können ohne große Kosten Prismen mit 100X100 mm oder 200X200 mm angefertigt werden. Ein säurefest bei 500 ^^ gekitteter, nahezu rechtwinkliger Flüssigkeitstrog ist in drei Prismen geteilt, von denen die beiden äußeren mit einer Flüssigkeit von geringer Dispersion, das Innere mit einer Flüssigkeit von viel größerer Dispersion und ähnlichem Brechungsindex gefüllt sind. Die Flüssigkeiten bleiben in dem zugekitteten Prisma und verändern sich nicht ■'^, während Zimtäthyl oder -aldehyd der Wer- xiCKE- Prismen oder der Schwefelkolilenstotf anderer Prismen nach Gebrauch zurückgegossen werden muß und leicht unbrauchbar wird. Die Füllung wurde so gewählt, daß das Spektrum bis 400 i^iia, reicht, also weit länger als z. B. bei Zimtaldehydfüllung. Wird sehr starke Dispersion etwa doppelt so groß wie bei den WERNiCKE-Prismen gewünscht, so werden zwei Prismen fest zu einem System verbunden". Da die Prismen wegen ihrer Größe sehr licht- stark sind , so konnte ein einfacher Spektralprojektionsapparat kon- struiert werden, der vor jede Bogenlampe oder Zirkonlampe^, die mit Kondenserlinse versehen ist, gesetzt werden kann. Auf dem Apparat wird die gewünschte Entfernung in Metern , in welche das Spektrum scharf projiziert werden soll, eingestellt. Der Spektral- apparat kann durch Vertauschen der Linse und Vorsetzen eines zweiten Spaltes mit geeichter Wellenläugenskala zur Belichtung von Mikroskopen, Trögen mit Pflanzen oder Tieren mit einfarbigem Licht verwandt werden. Die Wellenlänge des Lichtes wird direkt am Spalt in /, es birgt in seinem Innern das eigens für diesen Zweck konstruierte Dewar- XXV, Ö. Krause: Neue Gefrier- u. Külilvuniclitiing- für das Mikrotom. 293 gefäß c von etwa 30 mm licliter Weite. Zum Schutze des letzteren ist zwischen Dewargefäß und Metallzylinder der Filzmantel d ein- geschoben. Der die obere Öffnung des Metalizylinders verschließende Deckel setzt sich aus drei Ringen zusammen, einem äußeren und inneren Metailring und einem zwischen beide eingeschobenen Hartgummi- ring. Der äußere Metallring e ist mit dem oberen Rande des Metallzylinders verschraubt. Der Hartgummiring f liegt auf dem vorigen auf, er schließt nach außen mit ihm ab , überragt ihn aber nach innen zu und ist mit seiner oberen Fläche durch die tief versenkten Schrauben h fest verbunden. Der innere Metallring g lagert sich in einen Falz des vorigen ein und trägt in seiner Mitte eine weite Bohrung zum Einschrauben des eigentlichen Objekt- tisches 0. Zu seiner festen Verbindung mit dem Hartgummiring dienen die Schrauben /. Außerdem ist dieser innere Metallring an seinem unteren, zapfen- förraigen Ende mit dem Metallzylinder k verschraubt, der eine Weite von 2.5*5 mm hat und in einer Länge von 60 mm in das Innere des Dewargefäßes hineinragt. Unten sitzt dem Zylinder mittels Bajonettverschluß der Boden / auf. Der Zylinder dient zur Aufnahme der festen Kohlensäure, welche in entsprechend große, massive Zylin- der gepreßt wird. Diese Kohlensäurepatronen verzehren sich während des Gefrierprozesses, sie werden durch Vergasung der festen Säure immer kleiner, sie liegen dann auf dem Boden des Zylinders und die Käitewirkung wird mit abnehmender Größe immer geringer. Um dem entgegen zu arbeiten , brachte ich auf dem Boden / die Spiralfeder 7n an , mit deren oberem Ende die Platte ii verbunden ist. Es wird nun durch diese Feder die Kohlensäurepatrone immer gegen den Deckel gedrückt und kann bis zum letzten Rest aus- genutzt werden. Durch diese Einrichtung muß die gesamte von der verdampfen- den Kohlensäure gelieferte Kälte in den Objekttisch o und damit in das auf ihm liegende Präparat geleitet werden. Die Isolation ist dabei eine so vorzügliche , daß während des Frierens der äußere Metallring und mit ihm der äußere Metallzylinder kaum nennenswert kalt werden. V,s werden dem Apparat zwei Objekttische beigegeben , ein kleiner von 40, ein größerer von 60 mm Durchmesser für kleinere und größere Objekte. Für große Objekte, wie z. B. ganze Gehirne, soll noch ein besonderes Modell konstruiert werden. 294 Krause: Neue Gefrier- u. Kühlvoniclitung für das Mikrotom. XXV, 3. Die von dem Apparat gelieferte Kälte ist sehr beträchtlich und verteilt sich ganz gleichmäßig über den ganzen Objekttisch. Man kann so Präparate bis zu 60 mm Durchmesser rasch und gleich- mäßig durchfrieren lassen. Was die Dicke der Stücke anlangt, so scheint auch darin der Apparat einen wesentlichen Fortschritt zu bedeuten, denn es gelingt z. B. mit Leichtigkeit im Verlauf von 20 bis 30 Mimiten einen menschlichen Bulbus vollkommen schnittfähig durch- zufrieren und es steht dem bei entsprechend größeren Konstruktionen 2. sicherlich nichts im Wege , ein ganzes menschliches Gehirn durch- zufrieren. Was nun die mögliche Dauer des Gefrierprozesses anlangt, so wäre darüber folgendes zu bemerken. Eine einzelne Füllung des Apparates gestattet bei Verwendung des kleinen Objekttisches ein dreiviertel- bis einstündiges Frieren. Da man sich nun beliebig viele solcher Kohlensäurepatronen herstellen kann und die Neufüllung nur wenige Sekunden beansprucht, ohne daß der Gefrierprozeß irgendwie unterbrochen zu werden braucht, so kann man den letzteren natür- lich auch beliebig lange ausdehnen. Die Kosten des Verfahrens sind bei richtiger Handhabung nur sehr gering. Aus einem Zylinder tlüssiger Kohlensäure lassen sich XXV, 3. Krause: Neue Gefrier- u. Kühlvorrichtung für das Mikrotom. 295 30 bis 40 feste Kohlensäurepatronen herstellen, so daß jede der- selben , d. h. mit anderen Worten ein einstündiges Frieren sich un- gefähr auf 10 Pfennige stellen würde. Der Apparat, wie ihn Figur 2 darstellt, kann mit ganz geringen Kosten an jedem Mikrotom mit senkrechter Hebung des Objektes angebracht werden. Figur 3 zeigt ihn in Verbindung mit einem der neuen Leitz sehen Schlittenmikrotome. Im folgenden soll nun die Handhabung des Gefrierapparates genau beschrieben werden. Was zunächst die Herstellung der festen Kohlensäure anlangt, so seien dazu folgende Details angegeben. Zur Verdichtung der flüssigen Säure benutzte ich einen Sack aus bestem, stärksten Seidensammet. Der billigere Wollsammet ist ungeeignet, da er zu viel Säure durchläßt und deshalb unökonomisch arbeitet, außerdem auch schon nach kurzem Gebrauch in Stücke geht. Aus dem Sammet wird ein Beutel von 20 : 30 cm , Sammetseite nach außen zusammengenäht, der an einer Schmalseite offen bleibt und sich hier mittels zweier Schnüre, ähnlich wie ein Tabaksbeutel zu- sammenziehen läßt. Nachdem die die Bombe verschließende Mutter abgeschraubt ist, wird der Sack fest um die Bombenöffnung herum gebunden, die Bombe wagerecht auf einen Stuhl gelegt und mit dem Vorderende geneigt, so daß die flüssige Kohlensäure direkt in den Sack ein- 296 Krause: Neue Gefrier- u. Kühlvorrichtung für das Mikrotom. XXV. o. strömen kann. Man öffne das Ventil immer vollständig und wird dann nach 10 bis 15 Sekunden langem Ausströmen so viel feste Kohlensäure in dem Sack vorfinden, wie für 4 bis 5 Füllungen aus- reicht. Die feste Säure wird nach Abbinden des Sackes auf einem Tuch gesammelt und zu den Patronen zusammengepreßt. Zu letzterem Zweck wird dem Apparat eine Preßform (Fig. 3, rechts) beigegeben, welche aus einem starken Holzklotz besteht, der in seiner Mitte eine entsprechende Bohrung besitzt, in welche wiederum ein Holzstempel hineinpaßt. Diese Form wird auf ein beliebiges Brett aufgesetzt, mit dem Kohlensäureschnee gefüllt und dieser mittels des Stempels und eines kräftigen Hammers möglichst fest zusammen- geschlagen, so lange bis der ganze Hohlratim der Form fest gefüllt ist. Je fester man die Patronen zusammenhämmert, um so länger werden sie beim Frieren vorhalten. Die fertigen Patronen kann man dann mit dem Stempel leiclit aus der Form herausstoßen. Um nun solche fertig gepreßte Kohlensäurepatronen auch mehrere Stunden ohne allzu großen Verlust aufbewahren zu können, habe ich dem Apparat noch ein besonderes Aufbewahrungsgefäß beigegeben (Fig. 3, links). Fs ist das ein mit Pappe umgebenes und auf hölzernem Fuße montiertes Dewargefäß. Es hat zylindrische Form mit einer lichten Höhe von etwa 250 mm und einer lichten Weite von 25 mm und wird oben einfach mittels eines Korkstöpsels leicht verschlossen. Dieses Gefäß faßt 5 Patronen, so daß man einschließlich einer Füllung des Apparates Material für ein 5- bis 6 stündiges Frieren vorrätig halten kann. Die ganze Prozedur der Herstellung der Patronen ist viel rascher ausgeführt als beschrieben. Sie dürfte kaum eine Viertelstunde be- anspruchen. Die Füllung des Apparates ist im Moment besorgt. Der Deckel wird mit dem ihm unten anhängenden Gefrierzylinder abgeschraubt, der deckelartige Boden des letzteren entfernt und die Patrone in den Zylinder geschoben. Dann wird der Boden wieder unter Kom- pression der sich vollkommen in sich zusammenschiebenden Spiral- feder aufgesetzt, der Deckel aufgeschraubt und der Apparat ist gebrauchsfertig. Die Abkühlung des Objekttisches erfolgt fast momentan. Die Dicke der zu frierenden Stücke ist eine fast unbegrenzte. Daß mit zunehmender Dicke die Dauer des Durchfrierens wächst, braucht wohl kaum erwähnt zu werden. Dünne (2 bis 3 mm) Stücke frieren in 3 bis 5 Minuten vollkommen durch, ein 10 bis 15 mm dickes XXy, o. Krause: Neue Gefrier- u. Kühlvorrichtung für das Mikrotom. 297 Stück braucht dazu iniudestens 15 Minuten. Um bei solchen dicken Stücken das Frieren zu beschleunigen, stülpe ich über sie eine pas- sende Glasschale herüber, die mit ihrem Kand auf dem Gefriertisch aufsteht. Ist das Stück durchgefroren, so setze ich rund um den kleinen freien Rand herum einige Tropfen Wasser oder physiologische Koch- salzlösung, damit das Objekt fester auf dem Objekttisch haftet. Ähn- lich muß man verfahren bei kugeligen Objekten, wie bei dem Augapfel, die nur eine kleine Auflagetläche besitzen. Hier muß man letztere vergrößern dadurch, daß man das Objekt mit einer in der Kälte erstarrenden Flüssigkeit umgibt. Vorzüglich eignet sich filtriertes Hühnereiweiß oder 5- bis lOprozentige Gelatine. Der Gefrierprozeß kann, einmal eingeleitet, beliebig lang weiter geführt werden. Merkt man , daß die Kältewirkung nachläßt, was daran leicht zu erkennen ist, daß die Bereifung des Objekt- tisches an einzelnen Stellen zu schmelzen anfängt, so schraubt man rasch den Deckel ab und schieJbt eine neue Patrone in den Zylinder. Sollte der wohl seltene Fall eintreten , daß ein derartiges gefrorenes Präparat am nächsten Tag oder zu einem beliebigen anderen Termin weiter verarbeitet werden soll , ohne vorher auf- zutauen, so läßt sich auch dieser Forderung leicht entsprechen. Man bringe in das Aufbewahrungsgefäß zunächst eine Patrone, dann ein passendes mit Kork verschlossenes Glasgefäß und darauf wieder eine Patrone. Soll nun das gefrorene Objekt für spätere Verwen- dung aufgehoben werden, so löst man es mit dem Messer vom Ob- jekttisch los, bringt es in jenes gekühlte Glasgefäß und dieses wieder zwischen die beiden Patronen in das Aufbewahrungsgefäß zurück. Die beiden Patronen genügen vollkommen, um das Objekt über Nacht gefroren zu halten und können am nächsten Tag durch neue ersetzt werden. Die Schnittkonsistenz der mittels unseres Apparates gefrorenen Objekte ist eine ganz vorzügliche. Ich habe selbst noch von größeren Objekten tadellose Schnitte von 5 jjl Dicke erhalten. Allerdings muß in diesem Falle auch noch das Messer stark gekühlt werden, um ein sofortiges Auftauen der Schnitte zu vermeiden. Eine solche Messerkühlung läßt sich in bequemster Weise folgendermaßen durch- führen. Ich verwende ein Mikrotommesser mit recht starkem Rücken und lasse den letzteren in seiner ganzen Länge so ausschleifen wie es Figur 4 zeigt. 298 Krause : Neue Gefrier- u. Kühlvorrichtung für das Mikrotom. XXV, 3. In die entstandene Rinne wird ein entsprechend dickes und langes dünnwandiges Glasrohr gelegt, welches mit fester Kohlensäure ganz ähnlich wie der Gefrierzylinder gefüllt wird. Zu diesem Zweck enthält der zur Herstellung der Kohlensäurepatronen benutzte Holz- klotz außer der mittleren weiten Bohrung noch mehrere enge Bohrungen, die sich zur leichteren Einfüllung des Kohlensäureschnees nach oben trichterförmig erweitern. In sie paßt ein dünner Stempel , mittels dessen man sich nun dünne Kohlensäurepatronen zur Messerkühlung in beliebiger Zahl herstellen kann. Man erreicht damit eine so intensive Messerkühlung, daß selbst ganz dünne Schnitte nicht mehr auftauen. Um das leidige Rollen der Schnitte hintanzuhalten, bediene ich mich ganz wie beim Paraffinschneiden eines feinen Pinsels, mit dem der Schnitt gehalten wird , sobald er anfängt sicli zu rollen. Mit demselben Pinsel erfolgt auch der Transport des Schnittes vom Messer in die Aufbewahrungsflüssigkeit. Als solche verwende ich die RiNGERSche Lösung in der von Locke angegebenen Zusammen- setzung (NaCl 8-0 g, KCl 0*1 g, CaCl„ 0*2 g, Wasser 1000 g). Hier breiten sich die Schnitte tadellos aus und können einfach mit unter- gehaltenem Objektträger aufgefangen werden. Noch vorteilhafter ist es statt der Objektträger Deckgläser zu benutzen. Man legt die- selben dann, natürlich mit dem Schnitt nach oben, auf Fließpapier, saugt die Flüssigkeit möglichst herunter und wartet so lange, bis die Schnittränder eben anfangen trocken zu werden. Dann haftet der Schnitt meist so fest , daß er bei entsprechend vorsichtiger Hand- habung alle weiteren Prozeduren verträgt , ohne sich vom Deckglas loszulösen. J XXV, 3. Krause: Neue Gefrier- u. Kühlvorrichtung für das Mikrotom. 299 Über die Weiterbehandlung- solcher Schnitte, ilire Fixation und Färbung und die dabei erzielten Resultate soll an anderer Stelle austülirlicli gehandelt werden. Es war natürlich ein sehr naheliegender Gedanke , den be- schriebenen Apparat auch für die Paraffinschneidetechnik dienstbar zu machen. Bei der Parathneinbettung bildet ja die beträchtliche Erwärmung (auf 55 bis 58^ C), der wir unsere Präparate unter- ziehen müssen, wenn wir auf die Herstellung dünner Schnitte Wert legen, einen Punkt, auf dessen schädigende Wirkung schon von den verschiedensten Seiten hingewiesen worden ist. So kann man sich z. B. leicht überzeugen, daß Bulbi, die man in toto in Paraffin ein- betten will, Temperaturen bis 45*^ C ohne jede Schrumpfung ver- tragen. Steigt aber die Temperatur bis auf 50^ C, so erfolgt immer Schrumpfung, die bei 58^ C einen solchen Grad erreicht, daß der Bulbus vollkommen zusammenfällt. Mau hat deshalb auch schon wiederholt vorgeschlagen , subtile Objekte nur in Paraffin von 40 bis 45° Schmelzpunkt einzubetten und dann während des Schneidens Block und Messer mit Eis oder Kältemischungen zu kühlen. Daß der oben beschriebene Apparat hier eine recht vorteilhafte Verwendung finden kann, leuchtet ohne weiteres ein. Man braucht nur an die Stelle des Objekttisches eine Paraffinklammer einzuschrauben und dfk Kühlvorrichtung ist fertig. Ich habe mit dieser Vorrichtung vielfach gearbeitet und in folgender Weise auch in der tropischen Hitze der diesjährigen Hundstage vorzügliche Resultate erhalten. Ich bette meine Objekte in ein Paraffin von 88 ° Schmelzpunkt ein bei einer Ofentemperatur von 40*^ C. Das hat auch den Vor- teil, daß man unter öfterem Paraffinwechsel beliebig lang im flüssigen Paraffin lassen und so eine gründlichere Durchtränkung erzielen kann. Ist das Paraffin in die Blockform ausgegossen, so muß es, wenig- stens im Sommer, unbedingt in Eiswasser rasch zur Erstarrung ge- bracht werden. Verwendet man gewöhnliches Leitungswasser, so erhält man keinen homogenen Block mehr. Ist der letztere in passender Weise zurecht geschnitten, so wird er in die Klammer eingespannt und letztere auf den mit einer Kohlensäurepatrone beschickten Gefrierzylinder aufgeschraubt. Hier wird er mit einer passenden Glasschale bedeckt und ist dann nach 10 bis 15 Minuten so weit durchgekühlt, daß man mit dem Schneiden 300 Kruuse: Ein Waschglas für iriikrotechnische Zwecke. XXV, 3. beginnen kann. Will man Schnitte von 5 fx und darunter erzielen, so ist es unumgiinglich nötig, auch das Messer iu der besprochenen Weise zu kühlen. Das Trocknen der zunächst mit Eiweiß -Glyzerin und Wasser und dann mit den Schnitten beschickten Objektträger nehme ich auf dem Paraffinofen, der wie oben bemerkt, auf 40*^ C steht, unter einer Glasglocke vor. ' [Eingegangen am 1(3. August 1908.] Ein Wasch ülas für mikrotechDische Zwecke. Von Prof. Rudolf Krause in P.eiiin. Hierzu eine Textabbildung. In der Enzyklopädie der mikroskopischen Technik habe ich eine Vorrichtung zum Auswaschen von Präparaten mit folgenden Worten beschrieben: „Solche Präparate, welche in gewöhnlichem Wasser gewaschen werden sollen, schließt man am besten* an die Wasserleitung an. Man soll das Wasser aus dem Hahn dabei nicht direkt in das das Präparat enthaltende Glas leiten , sondern ein etwas größeres Glas als Keservoir dazwischen schalten. Um ein t'berlaufen des Präparatenglases zu vermeiden , muß dasselbe etwas höher stehen , als das Reservoir. Beide verbindet man durch einen kleinen Heber , den man sich leicht aus einem Stück dünnen Glas- rohres zurecht biegen kann. Ein zweiter Heber, der in dem Prä- paratenglas hängt, sorgt für einen kontinuierlichen Ablauf des Wasch- wassers. Derselbe soll mit seinem einen Schenkel bis auf den Boden des Präparatenglases reichen. Da es sich ja meist um Fixations- lösungen handelt, die schwerer wie Wasser sind, so wird sich am Boden, um das hier befindliche Objekt herum, eine stark fixations- flüssigkeithaltige Wasserschicht bilden , die abgeführt werden muß. L'm ein Ansaugen des Präparates zu vermeiden, soll das Ende des Hebers höchstens 1 mm vom Boden des Glases entfernt sein. Handelt I XXV, 3. Krause: Ein Waschglas für mikroteclmische Zwecke. 301 es sich um sehr kleine Präparate oder dünne Fasern , so umbindet man zweckmäßig das im Präparatenglas befindliche Ende des Hebers mit einem Stückchen Gaze. Man kann auf diese Weise eine beliebige Anzahl von Präparaten zu gleicher Zeit auswässern, da man an das Reservoir eine beliebige Anzahl von Hebern anhängen kann, nur muß dann der Wasserzufluß gehörig reguliert werden. Ganz in gleicher Weise können natürlich auch Schnitte ausgewässert werden. Soll anstatt mit Leitungswasser mit destilliertem Wasser oder Alkohol ausgewaschen werden , so tritt an die Stelle der Wasser- leitung ein höher stehendes Gefäß mit der betreffenden Flüssigkeit." Die vorstehend beschriebene Vorrichtung hat sich hier und anderwärts trefflich bewährt, nur ein Mißstand macht sich bei ihr häufig recht unangenehm geltend. Hier in Berlin, und anderwärts wird es wohl ähnlich sein, unterliegt der Druck in der Wasserleitung recht erheblichen Schwankungen. Hat man eben den Wasserzufluß so geregelt, daß gerade so viel zufließt, als abgeführt wird durch die Heber, so wird bei einer plötzlich eintretenden Druckverminde- rung, vielleicht durch starke Wasser- entnahme an einer anderen Stelle des Instituts , der Zufluß beträchtlich geringer werden , es wird mehr durch die Heber abgeführt, als zufließen kann, und wenn man nach einiger Zeit die Präparate kontrolliert, findet man sie fast trocken oder nur ungenügend mit Wasser bedeckt, während das Reservoir überläuft. Gegen das gänzliche Auslaufen der Präparatengläser kann man sich einfach durch zweckmäßige Länge des freien Schenkels des Ab- laufhebers schützen, und den Stillstand des ganzen Waschprozesses verhütet man so, daß man an den im Reservoir hängenden Schenkel des Zulaufhebers noch ein Kniestück anbiegt. Um nun die ganze Vorrichtung handlicher zu machen, habe ich das folgende Waschglas herstellen lassen, das seinen Zweck vor- trefflich erfüllt. Ich habe die beiden Heber, Zulauf- und Ablauf- heber gleich mit dem Präparatenglas fest verbunden. Aus tech- nischen Gründen ließ sich leider die Anbringung eines Halses nicht umgehen. Der Zulaufheber reicht mit einem Kniestück in das 302 Krause: Ein Waschglas für mikrotechnische Zwecke. XXV, 3. Reservoir hinein. Sein zweiter Schenkel ist mit dem Präparatenglas verschmolzen und ragt ein Stück weit in letzteres hinein. Der innere Schenkel des Ablanfhebers ist an seinem Ende abgeschliffen und steht unmittelbar auf dem flachen Boden des Präparatenglases auf. Zwischen Boden und Glasrohr befindet sich nur ein kapillarer Spalt, der aber zum Abführen des Waschwassers vollkommen genügt. Der freie Schenkel des Ablaufhebers endet 3 bis 4 cm über dem Boden des Glases. Auch der Ablaufheber ist mit Glaswand fest verschmolzen. Der Scheitel des Zulaufhebers steht etwas höher als der des Ab- laufhebers. Zum Gebrauch kehrt man das Gefäß um, füllt aus der Leitung das Kniestück mit Wasser und hängt nun das Waschglas an das gefüllte Reservoir an. Es fließt dann das Wasser in das Gefäß ein. Hat der Wasserstand den Scheitel des Ablauf hebers erreicht , so fließt selbsttätig das Wasser ab. Ein Überlaufen des Glases ist selbstverständlich ausgeschlossen. Sinkt der Druck in der Leitung, so daß mehr abläuft wie zuläuft, so wird natürlich auch der Wasser- stand im Reservoir sinken, ein gänzlicher Stillstand kann aber niemals eintreten , da das Kniestück stets mit Wasser gefüllt bleibt. Ein gänzliches Leerlaufen des Glases ist ebenfalls ausgeschlossen, da das Wasser nur so lange ablaufen kann, bis der Wasserspiegel die Höhe des Ausflusses erreicht, d. h. mit dem freien Ende des Ablauf- hebers gleiche Höhe hat. Auch ein Ansaugen der Präparate findet nicht mehr statt, wenigstens nicht in störender Weise. Der kapillare Spalt zwischen Ablaufheber und Glasboden gestattet auch den kleinsten und dünn- sten Objekten den Durchtritt nicht mehr. Man kann Celloidinschnitte, ja sogar auch Gefrierschnitte von fixiertem Material unbesorgt aus- waschen. Nur Gefrierschnitte von frischem Material können noch eventuell angesaugt werden. Dabei ist die Wässerung eiue so intensive, wie kaum bei einer anderen Vorrichtung. (Zu beziehen durch E. Leitz, Berlin NW., Luisenstr. 45 ; Preis etwa 2 M.) [Eingegangen am 3L Oktober 1908.] XXV, 3. Lendviii: Wie kann man Thermostaten mit Alkoliol lieizen? 303 Wie kann man die Thermostaten mit Alkohol einfach heizen? Von Prof. J. Leiidv.ai in Märamarossziget. Hierzu zwei T e x t a 1» b i 1 d u n g e n. In jenen Laboratorien, wohin die Gasröhre nicht eingeführt ist, kann man die mit folgender Einrichtung versehene Alkohoilampe und Thermoregulator zweckdienlich benützen, wenn unser Zweck ist, den Thermostat auf einem gewissen beständigen Wärmegrad zu er- halten. Der kleine Thermostat von Neapel, ebenso wie die großen ApATHYSchen , kijnnen auf gleiche Art dermaßen adjustiert werden, daß die Flamme sie weder höher heizt als bis zu dem erforderlichen Wärmegrad, noch sie auskühlen läßt. Nach der beigelegten Skizze (Fig. 1) lassen wir uns eine ent- sprechende Spirituslampe anfertigen. Die Lampe befindet sich auf einem Gestell «S, an welches sie mit Hilfe der Schraube F befestigt werden kann, gemäß der Höhe der Basis der Thermostaten in verschiedener Höhe. Der Docht der auf das Gestell befestigten Lampe kommt zwischen zwei Zylinder a und b , welche Zylinder unten mit einem gemeinsam schließenden Boden c versehen sind ; der innere Zylinder hat aber keinen Boden, daher ist der innere Zylinder eine an beiden Seiten offene Röhre , in welcher die Luft frei strömen kann. Ein geeigneter Dochtheber und -senker ist in der an die Lampe an- gelöteten Büchse K untergebracht, wo mit Hilfe der Schraube /' eine gezähnte Stange gehoben oder gesenkt werden kann. An die ge- zähnte Stange ist befestigt in dem Zylinder a eine auf und ab bewegliche, mit Haken versehene Platte, welche nach den Bewegungen der Schraube f sich herauf oder hinab bewegt, und den Docht mit sich trägt. Auf der unteren Seite der K Büchse ist für ein Gummi- rohr eine 8 cm lange Metallröhre, durch welche der Alkohol in die 304 Lendvai: Wie kann man Thermostaten mit Alkohol heizen? XXV, 3. Büchse fließt, von dort zu dem Lampendocht. Zu der, durch die zwei Zylinder gebildeten Lampenbrenner , des inneren h Zylinders unteren Öffnung kommt eine Klappe Ä", deren Durchmesser mit dem Durchmesser des äußeren Zylinders gleich ist. Die Klappe hängt mit einem Scharnier mit dem Rande des äußeren Zylinders zusammen, und schließt den Raum des inneren Zylinders oder öffnet ihn , je nachdem wir den auf die Klappe angebrachten Hebel 1 drücken 1. oder den letzteren heben. Das Drücken und Heben bewerkstelligt automatisch der Thermoregulator. Der Thermoregulator besteht aus einer auf dem einen Ende geschlossenen Glasröhre (Fig. 2), in deren unterem Drittel darin an- geschmolzen ist eine kegelförmig ausgezogene kleinere Glasröhre r. Die ausgezogene Röhre löten wir so in die äußere Röhre an , daß ihr schmales Ende nahe dem Boden der äußeren Röhre sei. Den an dem unteren Ende der Röhre, d. h. den zwischen den zwei Röhren beflndlichen Raum F füllen wir mit einer, einen niederen Siedepunkt besitzenden, Flüssigkeit. Die Füllung muß geschickt bewerkstelligt XXV, 3. Lendvai: Wie kann man 'l'hermostatcii mit Alkohol heizen V :;()5 werden, mit Hilfe einer langen ausgezogenen (UasriUire, Gummirohrs und eines Trichters ; die äußere Röhre halten wir bei der Füllung mit dem Unterteil etwas schräg aufwärts. Uann füllen wir Hydrar- gyrum liinein, so viel, bis die Oberfläche nicht bis zu dem Ab- zeichen r reicht. Auf das Ilydrargyrum gießen wir eine dünne Schicht Ol, auf das Öl legen wir eine durchlöcherte Holzscheibe x. Auf diese Holzscheibe ist ein Stängelchen 4 befestigt, welches mit einem zweiarmigen Hebel H zusammenhängt , dieser letztere kann mit der Hilfe eines Stabes 2 die auf den zweiarmigen Hebel 1 be- festigte Klappe k heben oder senken. Durch das Öffnen oder Schließen der Klappe wird die Flamme reguliert. Wenn die Klappe die Öffnung des inneren Zylinders ver- schlossen hat , so kann die Flamme des Alkohols weniger Wärme entwickeln, weil die Flamme reduzierend ist. Wenn aber die Klappe sich geöffnet hat, so strömt in den inneren Zylinder Luft, und ge- staltet die Flamme oxydierend , welche eine viel größere Wärme entwickelt. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopif. XXV, 3. 20 3()6 Lunghetti: Metodi di coloruzione della cartilagine fibrosa. XX^', 3. Daß wir zu der durcli die Klappenscliläge entstandeneu Wärme- ditTerenz die Flamme anpassen, müssen wir erfahrungsmäßig bestimmen durch das Bewegen der f Schraube die Höhe des Dochtes, Die Flüssigkeit niederen Siedepunktes kommt bei einem etwas }ii»heren Siedepunkte zum Sieden, wegen der auf sie schwerer werden- den Quecksilbersäule. Das macht insgesamt eine Differenz von einem bis 2 Grad aus. Die Flüssigkeit (Chloroform, Äther, Chlor- äthyl) erhebt bei dem Sieden das sich auf ihr befindende Queck- silber, und dieses die Holzscheibe x. Öl gießen wir nur darum, daß wir das Dunsten des Quecksilbers verhindern. [Eingegangen am 2. November 1908.] [Istituto di Anatomia Umana Nonnale della R» Universitä di Bologna. Diretto dal Prof. G. Valenti.] Su alcuni inetodi di colorazioiie della cartilagine fibrosa e sulla loro applicazione pratica. Nota del Dr. B. Luüghetti, Assistente. Con una tavola (Tab. II). Le ricerche di Boll, Renaut, Ranvieu, Apolant, Schaffeu, Studnicka ecc. sulla struttura della cartilagine fibrosa hanno rivelato Tesistenza di un tessuto speciale caratterizzato dalla presenza di grosse cellule vescicolari, il quäle talvolta assume un aspetto tanto simile a quello della fibro-cartilagine che spesso riesce molto difficile distinguerlo da essa. Questo tessuto che e stato diversamente denominato dai vari autori [tessuto fibro-ialino (Renaut), connettivo condroide (Apolant), cartilagine connettiva (Disse), pseudo-cartilagine (Stadelmann), pre- cartilagine (Studnicka), tessuto di sostegno vescicolare (Schaffer)]. e diffusissimo nella scala zoologica. XXV, o. Luiii^iietti: Metodi di cüloraziune dclla caitilagine tibrosa. ;;()7 Oltre che in molti invertebrati, nci vertebrati lo si trova a far parte di nuraerosi organi della piü varia natura : cosi in alcuni pezzi scheletrici dei petromizonti e mixinoidi (Renaut, Schaffer), in certe valvole arteriöse dei teleostei (Laguesse), nei tendini di anfibi, rettili, iiccelli e mammiferi (Gegenbaur, Rollet, Ciaccio, Renaut, Tillmann, Leydig, Raxvier, Apolant, Tandler, Schaffer) , in molti legamenti e foi-mazioni fibröse analoglie (Apolant), in alcuni nervi (Renaut). II tipo piü puro della sua forma oondroide, ebe e quella che c'interessa piü da vicino, e rappresentato dal nodulo sesamoide dei tendine di Achille della Rana. E questo un piccolo inspessimento biancastro dei tendine, situato in prossimita dell'articolazione tibio- tarsica (Ecker-Wiedersheim), il quäle fn per molto tempo considerato come costituito da vera cartilagine (Lehmann, Gegenbaur, Adickes, Ponfick, Török). In esso si osservano, immerse tra i f'asci fibrosi dei tendine, numerose grosse cellule vescicolari, chiare, le quali. tino a un certo punto hanno l'aspetto delle cellule cartilaginee. La loro vera natura fu dimostrata da Boll, Ciaccio, Renaut, Ranvier ecc. i quali riconobbero ad esse una struttura molto diversa da quella delle cellule della cartilagine. I caratteri distintivi che dai vari autori sono stati attribuiti a questo tessuto sono sopratutto i seguenti. Le sue cellule non si colorauo coU'iodio, non contengono grasso, non si retraggono in pre- senza di quegli agenti che raggriuzano le cellule cartilaginee ; inoltre di fronte ai fasci fibrosi circostanti esse non esercitano alcuna Influenza, sieche questi a loro contatto non appaiono atfatto modificati. In seguito pero si e veduto che molti di questi caratteri non hanno quella specificitä che si volle loro attribuire. Cosi ad es. si e costatato che le cellule dei noduli sesamoidi dei tendini flessori di alcuni uccelli, quantunque indubbiamente di natura vescicolare, possono contenere numerose goccie di grasso. Altri poi si mettono in evi- denza solo con molta difticoltii e in condizioni speciali. Cosi la colorazione dei protoplasma per mezzo delliodio, essendo legata alla presenza dei glicogene , si ottiene solo in tessuti freschi : in quelli tissati coi soliti metodi a base di liquidi acquosi , o in quelli presi da un aminale morto da tempo, il glicogene si ditfonde e anche nella cartilagine si ottengono risultati negativi. Ter conseguenza i soli caratteri delle cellule vescicolari che avrebbero un valore reale, secondo lo Schaffer, si limiterebbero alla mancanza della retratti- litä delle cellule e dei loro potere assimilatorio di fronte ai fasci connettivi. 20* 308 Lunghetti: Metodi di eolorazione della cartilagine fibrosa. XXV. o. Si coiiii)reude da ciö corae, data ]a iudeterminatezza e la scarsitä di questi caratteri distiutivi degli elementi cellulari del tessuto vescicolare , imite alla difficoltä che sincontra nel rilevarli. la diaguosi del tessuto vescicolare, gia difficile quando si disponga di raateriale fresco sul quäle si possano praticare Ic indagini necessarie, diviene assolutameute impossibile quando la si debba eseguire su pezzi gia fissati e trattati con uno dei metodi comuni. Ed e facile pure spiegarci non solo come regniuo ancora taute discrepanze sulla natura del tessuto vescicolare e sui rapporti che lo legano alla tibro- cartilagine colla quäle e di frequente associato, nia anclie perche molti trattatisti, auche moderni, non lo ricordiiio aflatto o lo confondano colla cartilagine fibrosa. La ragioue principale della ditiicoltä di riconoscere il tessuto vescicolare deve , a parer mio , ricercarsi nel fatto che la raaggior parte degli autori che lo hanno studiato si sono sforzati di ritrovare i suoi caratteri distintivi esclusivamente uegli elementi cellulari, senza considerare abbastanza la sostanza fondameutale : la quäle iuvece nei tessuti di natura connettiva ha la massima iniportanza nel determinare i caratteri morfologici e chiraici del tessuto stesso. Nel caso nostro il carattere distintivo piü importante della fibro- cartilagine di fronte al tessuto vescicolare e che in essa, attorno agli elementi cellulari, esiste uua Capsula speciale e una sostanza fondameutale di particolare composizione ciumica e con reazioni cromatiche proprie : la quäle, come dimoströ Apolaxt e confermarouo in seguito lo Studxicka e lo .Schaffer, non manca neppure in quelle varieta che si descrivevano come cartilagine a stronia capsulare , o cartilagine senza sostanza fondameutale. Per conseguenza se potessimo disporre di metodi di eolora- zione che riuscissero a mettere in evidenza le capsule cartilaginee e le minime quantita di sostanza fondamentale cartilaginea, avremmo un mezzo sicuro per giungere iudirettamente alla diaguosi del tessuto vescicolare. Ora basta consultare i comuni trattati di tecnica istologica per convincersi come a proposito della libro-cartilagine essa sia oltremodo deticiente e si limiti a pochi metodi di eolorazione , i quali inoltre esigono l'uso di fissatori determinati e non sono privi d'incouvenienti. Spronk lissa i pezzi in un liquido composto di Ac. croiuicü 0,5 g Glicerina 25,0 cc Alcool ^60» 150,0 , XXV. o. Lunglietti: Motodi di colorazione della c;ivtila»ine fibrosa. ;]()9 lava per (lue ore in acqua, passa in alcool progressivo, celloidina e colora con ematossilina-eosina o coirematossilina ferrica. Fra i trattatisti, Garbini propone come fissatore il Ii(iuido di Klkinenbkrg e come sostanze eoloranti il carminio boracico o l'azzurro di anilina associato alla satfranina. Rubenthaler consiglia del pari di iissare in aeido picrieo e colorare coli' ematossilina-eosina. Ho creduto percio che nou fosse privo d' Interesse intrattenermi brevemente sui risultati di alcune ricerche che ho intrapreso all«» scopo di trovare dei metodi di colorazione i quali per la buona riuscita nou esigessero Timpiego di iissatori speciali e di una tecnica diversa da quella comunemente seguita. I frammenti di cartilagine fibrosa (disco intervertebrale; che prendevo a questo scopo dal cadavere 36 — 48 ore dopo la morte. li tissavo in due liquidi scelti appositamente tra i piü comuni e i piü tacili ad usarsi, quali souo la soluz. acq. satura di sublimato e la formaliua al 10^ q. Fatti poi i soliti passaggi, riuclndevo in celloidina e sottoponevo le sezioni all'azione delle varie sostanze eoloranti. Come termine di paragone col tessuto vescicolare usavo poi delle sezioni di vari organi ove esso e riccamente rappresentato (nodulo sesamoide del tendine di Achille della rana, e noduli di vari tendini delluomo e altri mammiferij, che trattavo in modo perfettamente identico. Tutti i metodi di colorazione che verro in seguito esponendo souo stati da nie provati anche su pezzi in parte ossiiicati e che j>reventivamente avevo sottoposto alla decalcificazione coUa soluz. acquosa di acido uitrico al 5 ^/q. Diro subito che essa uon ha avuto alcuna iuHuenza sulla buona riuscita delle varie colorazioni. Tra le sostauze che sono state fin ora usate per colorare la sostanza fondamentale cartilaginea occupa il primo posto lematossilina la quäle ha per quest'ultima una straordinaria affinitä. Perö non tutte le sue formnle danno buoni risultati applicati alla cartilagine tibrosa. Cosi ad es. lematossilina di Hansex, ottima per rivelare l'esistenza della cartilagine ialina, non eorrisponde bene nella fibrosa in quanto colora coUa stessa intensitä le zolle cartilaginee e le fibre ad esse interposte : e, per quanto ho veduto , non e possibile ottenerne una birona differenziazione. Benissimo invece corrispondono le ematossiline acide (Ehrlich, Apathy, DSlafield) le quali, dopo pochi minuti di colorazione, pongono in evidenza attorno alle cellule cartilaginee un alone piü o meno largo di sostanza fondamentale che si colora ;U0 Lunghetti: Metodi di colorazione della cartilagine fibrosa. XXV, o. fortemente e spicca siii l'asci connettivi, che hanno una tinta piii pallida. Questa colorazione , dimostrativa e facile ad ottenersi, ha jterö r inconveniente che, se le sezioiii sono iin po grosse, aiiche i fasci connettivi si colorano intensaraente e le zolle di sostanza cartilaginea rimangono piü o meno nascoste. Di piü, siccome 1' ematossilina oltre alla cartilagine colora intensamente anclie i tessuti in via di calciti- cazione, spesso di fronte a una parte tinta dalF ematossilina si riniane in dubbio se si tratti di una inipregnazione di sostanza fondamentale ialina o di sali calcarei. Per conseguenza in niolti casi e consigliabilc di j)raticare, oltre a questa, altre colorazioni e tra queste sono molto buone quelle clie si ottengono coi colori di anilina. La colorazione del tessuto cartilagineo per mezzo dei colori di anilina , giä usata da molto tempo con vari obiettivi e risultati diversi (Landois, FtJRBRiNGER, Flesch, Ranvier, Spina ecc.) ha assunto in questi Ultimi tempi una grande importanza , specie nello studio della cartilagine ialina ove e stato fecondo di notevoli risultati. Ciö e dovuto non solo alla straordinaria affinita che questi colori presentano in genere per la sostanza fondamentale cartilaginea ricca di sostanze condroeromatiche (Renaut) , quauto perche di fronte ad essa spiegano dei fenomeni di elettivitä molto interessanti. Cosi come hanno dimostrato Bouma, Wolters, Mörner, Terrazas, Mora- wiTz , Schaffer ecc. alcuni di essi colorano molto intensamente le capsule connettive e aH'intorno una zona piü o meno estesa di sostanza fondamentale (che rappresenta la Chondrinballe di Mörneh) non colorando o solo debolmente i tratti interposti. Altri invece colorano tutta la sostanza fondamentale , molti inline danno delle metacromasie spiccate e interessanti. Assai si e discusso sul valore di questi fatti (Schaffer, Hansen i i quali sono stati posti in rapporto colle diverse affinita cromatiche di quei costituenti che la chimica (Morocuowetz ecc.) ha svelato nella sostanza fondamentale della cartilagine (condromucoide, acido condr oitinsolfori CO, albumoide, collageuo) e coUa loro diversa distribuzione. Comunque e innegabile come queste osserva- zioni abbiano notevolmente contribuito ad accrescere le nostre cogni- zioni sulla struttura della cartilagine ialina. Riguardo alla cartilagine fibrosa, oltre al giä ricordato metodo del Garbini alla satfranina e azzurro di anilina, lunico che abbia usato i colori di anilina e stato il Varai.di. XXV, o. Lunghetti: Metodi di colorazione »lelhi i-artilagine fibroaa. ;;il Questi ha segiiito un raetodo che consiste iiel colorarc in massn col bleu di metilene i pezzi preventivamente fissati in alcool e sezionarli col microtomo a congelazione , quando sono completamente colorati. Per colorare i niiclei nsa immergere per 12 — 24 ore le sezioni cosi ottenute in carminio allumiuoso addizionato col 5 ^Iq di tintnra di cam- peggio. Ora basta conoscere le diihcolta che s'incoutrano per ottenere delle buone colorazioni in toto coi colori di anilina e quelle non minori che presenta il sezionare col microtomo congelatore dei tessnti duri, quali sono di solito quelli in cui si eseguono queste ricerche, per comprendere la scarsa praticita del metodo. Nelle mie indagini, eseguite sperimentando coi colori di anilina piü comuni, ho] cercato di determinare quali tra essi dessero i migliori risultati fatti agire sulle sezioni ottenute coi soliti metodi. Da queste ho potuto vedere come molti di essi riescano a dare discrete colo- razioni della cartilagine fibrosa, ma che i migliori risultati si otten- gono dal bleu di metilene, dal bleu di toluidina, dalla tionina. Le sezioni da colorare vanno aecuratamente liberate dalla celloidina facendo dei passaggi in alcool metilico o in miscela di alcool assoluto ed etere : quindi vengono poste in uua soluzione molto di- luita della sostanza colorante. Di solito basta un c. c. della soluzione acquosa all'l'^/Q allungato cou 5 c. c. di acqua distillata. In queste condizioni, specie se le sezioni sono sottili, gia dopo 2 — 3 ore d'immersione si vedono nettamente colorate le capsule carti- laginee e gli aloni di sostanza fundamentale circostanti, i quali spiccano sul fondo pallido. Tuttavia non e consigliabile di servirsi di questo metodo di colorazione progressiva perche e molto instabile, onde spesso accade che durante la disidratazione le sezioni si decolorino piü o meno completamente. Risultati molto migliori si ottengono prolungando l'immersione Hno a 24 ore e decolorando le sezioni fino al punto voluto. Ciö si ottiene facilmente tenendo le sezioni in alcool a 70*^ debolmente acidulato con acido cloridrico (0,5 ^/q), il quäle si fa agire Hnche la sezione non ha preso una tinta pallida sulla quäle spiccano le zolle cartilaginee sotto forma di piccoli puutini scuri. Si passano allora in alcool comune, assoluto, xilolo, balsamo. Con questo metodo le capsule cartilaginee appaiono fortemente colorate e, specie colla tionina, che le colora metacromaticamente in violetto, spiccano suU' alone circostante di sostanza ialina, coloratu piii debolmente (fig. 1"). Ha pero l'inconveniente, comune alla ematossilina , che se le sezioni sono un pö spesse anche i fasci 312 Lunghetti: Metodi di colorazione della cartilagine fibrosa. XXV, 3. (•()unettivi si coloraiio inteiisameute tino a nascondere le zolle carti- laginee : per consegueuza esso da buoni risultati solo uelle sezioni luolto sottili. Allo scopo di ottenere preparati sempre piii dimostrativi e di evitare gl' inconvenienti ora accennati ho tentato anche diverse coio- razioni doppie cercando di dare al fondo una tinta di contrasto. Perö iion tutti i colori che comimemente si usano a questo scopo daiino egualmente buoni risultati. Cosi l'eosina e l'ac. picrico esigouo che il fondo sia incoloro : altri poi lo tingono troppo fortemente. I colori che mi hanno corrisposto meglio di tutti sono il violetto di metile associato alla tropeolina 000 usati, tranne lievi modificazioni, secondo il processo seguito dal Volters per la colorazione di sezioni di cartilagine ialina fresca. Le sezioni, liberate dalla celloidina, si tengono per mezz'ora in soluzione acquosa di tropeolina all' 1 ^j^. Quindi si lavano in acqua e s'immergono in una soluzione di violetto di metile al 0,20 ^/^ ove si tengono finche le sezioni non siano intensamente colorate, il che avviene dopo 1 — 5 minuti. Si lavano allora rapidamente in acqua distillata, quindi s'immergono in ac. acetico 10*^/o per 5 minuti e si procede alla decolorazione. Questa si ottiene guadualmente e lenta- meute mediante passaggi in alcool conuine che si ripetono finche la differenziazione tra il fondo arancioue e le zolle cartilaginee , che appaiono in forma di punticini scuri , non sia completa : si passa allora in alcool assoluto xilolo, balsamo. Talora accade che, poste le sezioni nell' alcool comune, scom paia in parte la colorazione violetta : ciö dipende dal fatto che limmersione nel violetto di genziana fu troppo breve e non per- mise al colore di penetrare nella sezione. Si rimediera all' incon- veniente tornando a tingere la sezione e a farle subire i soliti passaggi. Durante questi bisogna guardarsi assolutamente dall'usare liquid i anche debolmente acidi che guastano la colorazione : come pure non si usi per la diafanizzazione il carbol-xilol che agisce come energico decolorante. Altra pratica molto bnona e quella di porre le sezioni colorate , prima di passarle in xilolo , per alcuni secondi in miscela di alcool assoluto ed etere , onde togliere anche le minime traccie di celloidina che spesso si trovano a forma di reticolo colorato a deturpare il preparato. Con questo processo le zolle e le capsule cartilaginee appaiono fortemente colorate in violetto (Hg. 2*''), e spiccano molto nettamente XXV, o. Liin.ülietti: Mctodi tli colorazione della cartilagine tibrosa. 3i;j t^ui fasci di iibre connettive interposte , colorate in arancio : tale colore viene assunto anche dai corpi cellulari. Natura Im ente questo metodo iion va eseiite dall' iuconveniente, («imune ai metodi di colorazione coi colori de aniliua, di essere alquando fallace nei suoi risultati. Ma posso affermare che nel caso nostro Taspetto che assume la sezione al giusto grado di de- colorazione e cosi caratteristico che subito si riesce a riconoscerlo e per conseguenza ad arrestarlo al punto voluto. D'altra parte ha il grande vantaggio che esso da ottime colorazioni anche su sezioni molto spesse ove cogli altri metodi non si riesce a ottenere nuUa di buono. Quali sono i risultati clie questi metodi danno applicati al tessuto vescicolare V Quantunque in questo per le ragioni gia dette manchi completa- mente la sostanza fondamentale ialina della cartilagine, lematossilina spesso colora ditfusamente la sostanza intercellulare dandole una colo- razione che a mo di quella della cartilagine ialina non avviene dopo Tazione dei sali cromici. Per conseguenza la colorazione coll'ematossi- lina non e un elemento sicuro di diagnosi tra i due tessuti. Rispetto poi alle fibre interposte agli elementi cellulari essa da a tutte una tinta uniforme, qualunque sia la loro natura. Non e cosi dei colori di anilina, sopratutto di alcuni che danno dei fenomeni di metacromasia e di elettivita molto interessanti. Cosi ad es. colorando colla tionina una sezione dei sesamoide della raua gici ricordato si vede che, meutre le fibre dei tendine si colorano in bleu brillante, le fibre interposte (fig. S'^) alle cellule vescicolari si colorano in violetto , dimosti-ando cosi di possedere una natura molto diversa che altri metodi non riescono a svelare. Similmente colla doppia colorazione tropeolina -violetto di genziana le fibre dei tendine si colorano in aranciato, quelle adiaceuti alle cellule vescico- lari in violetto intenso. Nessuna differeuziazione invece si ottiene con (juesti stessi metodi in altri orgaui dei pari costituiti da tessuto vescicolare. Da ciö che son venuto brevemente esponeudo mi sembra di poter concludere che, quantunque con molti metodi si possano ottenere buone colorazioni della cartilagine fibrosa, ottimi sono i risultati che si conseguouo dai colori di anilina. Come il loro uso sia raccoman- dato sopratutto dal fatto che costituiscono il mezzo migliore e piii delicato per rivelare la diversa natura delle fibre della sostanza fondamentale, sia della cartilagine fibrosa, sia dei tessuto vesci- 314 Lunghetti: Metodi di colorazione della cartilagine fibrosa. XXV. o. colare. Come iiinne per questo loro potere riescano di somma utilitä. non solo nello studio della struttnra di questi tessuti , ma aiiclie iieirindagine dei rapporti e dei termini di passaggio che li uniscoiio agli altri tessuti. Bibliografia. Adickes, Zur Histologie des Bindegewebes dnaug.-Diss. (TÖttingen 1871 1. Apolant, Über Faserknorpel (Inang.-Diss. Berlin 1890). BoLiL, Untersuchungen über den Bau und Entwicklung der Gewebe. II. Der Knorpel in der Achillissehne des Frosches (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. VII, 1871, p. 301). BouMA, Über Knorpelfiirbung mit Öaffranin (Zbl. med. Wiss. 1883, p. 865j. 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Königsberg 1878.) — , Die Histologie des „Pseudoknorpels" in der Achillissehne des Frosches und dessen Veränderungen bei entzündlicher Reizung. (Virchows Arch. Bd. LXXX, 1880, p. 105). Stöhr, Lehrbuch der Histologie. 8. Aufl. Jena 1898. Studnicka, Über die Histologie und Histogenese des Knorpels der Cyclosto- stomen. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XLVIII, 1897, p. 606.) — , Histologische und histogenetische Untersuchung über den Knorpel, Vor- knorpel und Chordagewebe. (Anat. Hefte, Abt. 1, Bd. XXI, 1903, p. 339.) Tandler, Beiträge zur Mechanik des peripheren Blutgefäßsystems. (Zen- tralbl. f. Phys. Bd. XIII, 1899, p. 246.) Terrazas, Metodos de la coloracion de la substancia fundamental carti- laginosa. (Rivista trimestral microgr. vol. I, Madrid 1896, p. 113j. Tillmanns, Beiträge zur Histologie der Gelenke. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. X, 1874, p. 401.) TÖRÖK, v. , Der feinere Bau der Achillissehne des Frosches. (Zentralbl. 1872, p. 66.) Varaldi, Sulla frequente presenza di elementi cartilaginei nello spessore dei tendini negli animali domestici. Parma, 1901. 316 Fleischmann: Darstellung d. Bestandteile d. Zahnschmelzes. XXV, 3. Wolters, Zur Kenntnis der Grundsubstanz und der Saftbahnen des Knorpels. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXXVII, 1891, p. 492.) Spiegazione della tavola. Fig. la. Sezione di un disco intervertebrale dell" uomo , colorata con solu- zione acquosa di tionina. Zeiss, Ob. DD, Oc. 3. Fig. 2a. Idem colorata con tropeolina — violetto di metile. Kokistka, Ob. 8* Oc. 2. Fig. 3a. Sezione longitudinale del nodulo sesamoide del tendine di Achille della Rana, colorata con tionina: c. t. cellule tendinee: c. v. cellule vescicolavi. Zeiss, Ob. DD. Oc. 3. [Eingegangen am 23. August 1908.] [Aus dem Wiener histologischen Universitäts-lnstistut. Vorstand: Prof. Victor v. Ebxer.] Eine einfache Methode zur Darstellung der organischen Bestandteile des Zahnschmelzes. Von Priv.-Doz. Dr. Leo Fleischmann in Wien. C. F. Bödecker^ hat eine Methode zur Darstellung der orga- nischen Bestandteile des Zahnschmelzes in situ beschrieben , die im Avesentlichen darin besteht, daß ein kleines Stück des Zahnes nach üblicher Vorbehandlung in eine dicke Celloidinlösung kommt , der, 8- bis lOprozentig, konzentrierte Salpetersäure zugesetzt wird. Ist der Schmelz durcli den Säurezusatz vollständig entkalkt, so läßt man das Celloidin erstarren und bettet den Celloidinblock in Paratlin ein. um dünne Schnitte zu erhalten. ^) Bödecker, C. f., Eine Entkalkungsmcthode für Oewebe, welche wonig organische Substanzen enthalten Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXII, p. 190). — Derselbe: Celloidin- Entkalkungs- und Entkieselungsmethode (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXV, p. 21;. XXV, o. Fleisehmann: Dai-stellung d. Bestandteile d. Zahnschmelzes. 317 Gegen diese Methode läßt sich vor allem einwenden, daß beim Erstarren des Celloidins die sehr zarten, organischen Reste des Schmelzes verschoben werden müssen, und daß es nur Sache des Zufalles sein kann, wenn ein oder das andere Mal tatsächlich die Reste in situ erhalten bleiben. Aber abgesehen von diesem Einwände , ist die Methode recht kompliziert und sehr langwierig. Braucht doch nach Bödeckers Angabe ein 1 mm dicker Querschnitt eines Bicuspidaten über 2 Monate zur Entkalkung. Das kommt daher, daß, wie Schapfer (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XIX, p. 327) experimentell nachgewiesen hat, salpetersäurehaltiger Alkohol um so weniger Kalksalze zu lösen im- stande ist, je höher der Prozentgehalt des Alkohols ist. Nach Tabelle VII löst 50/0HNO3 in H,0 4-5 g Knochenasche „ ., öO'^/f, Alk. nicht mehr 3-56 g Knochenasche . '<00/o . . ., 2-05 „ .,95*>/o ., , „ 0-8 ., so daß die Säure mit ganz wasserfreiem Alkohol (wie ihn das dicke Celloidin enthalten soll) wahrscheinlich überhaupt keine entkalkende Wirkung auszuüben vermag. Daß Bödecker für die kleinen Stücke trotzdem Entkalkung erzielt , dürfte darauf beruhen , daß bei der langen Dauer der Prozedur seitens des Äther -Alkohol -Gemisches Wasser angezogen wird. Außerdem dürfte aber die Entkalkung keine vollständige gewesen sein. Dafür spricht auch der Umstand, daß es Bödecker nicht gelungen ist, die Schnitte dünner als 10 bis 15 /i herzustellen. Die Methode scheint daher nach mehreren Richtungen unzweck- mäßig zu sein. Prof. Schaffer gab mir daher den Rat, die Darstellung der organischen Schmelzbestaudteile in situ so zu versuchen , daß ein sehr dünner Schmelzschliif zunächst in Celloidin eingeschlossen und dann entkalkt wird. Diese Idee erwies sich für den gedachten Zweck als eine sehr glückliche, und es gelang mir nach mehrfachen Versuchen auf ihrer Grundlage eine ebenso einfache als gute Methode auszuarbeiten. Man fertigt sich einen möglichst dünnen Schliff an , der sich über die ganze Breite des Schmelzes und die angrenzenden Partien des Dentins erstreckt. Der Schliff wird in Alkohol mit harten Pinseln von allen Schleifresten sorgfältig mechanisch gereinigt, wobei ein früheres Glattpolieren der Oberfläche nicht notwendig ist, weil ja die Schleifspuren bei der nachfolgenden Entkalkung eo ipso ver- 318 Fleiscliinann : Darstellunf? d. Bestandteile d. Zahnschmelzes. XXV, 3. loren gehen. Der gereinigte Schliff kommt für je einige Stunden in absoluten Alkohol, Ather-Alkohol und eine dünne Celloidin- Lösung (Sprozentig). Aus dieser Lösung kommt der Schliff auf einen mit Äther-Alkohol gut gereinigten Objektträger, dem man eine leicht ge- neigte Lage gibt. Hierauf schüttet man sehr rasch , so lauge der Schliff noch feucht ist, einige Tropfen einer .5prozentigen Celloidin- lösung auf den Objektträger. Das Celloidin fließt auf dem geneigten Objektträger über den Schliff hinweg und umgibt ihn von allen Seiten. Man läßt dann das Celloidin durch einige Minuten lufttrocken werden und legt den Objektträger hierauf in 85prozentigen Alkoliol bis zur völligen Erstarrung des Celloidins , das jetzt in Form eines dünnen Häutchens den Schliff allenthalben umgibt. Aus dem Alkohol kommt der Objektträger in Wasser: dabei löst sich der eingebettete Schliff von selbst von dem Objektträger ab und kann jetzt weiter behandelt werden. Man bringt ihn in eine öprozeutige Salpetersäurelösung; nach Avenigen Minuten nimmt der Schmelz in der Säure ein milchig ge- trübtes Aussehen an , um nach ungefähr einer halben Stunde oder später , je nach der Dicke des Schliffes , vollständig durchsichtig zu werden. Dies ist das Zeichen, daß die Kalksalze vollständig gelöst und nur die organischen Reste zurückgeblieben sind. Man beschneidet jetzt das Celloidinhäutchen auf die gewünschte Oröße , wäscht das Präparat in Wasser gut aus und kann es jetzt einer beliebigen Färbung unterziehen. Mir hat sich Safranin als sehr geeignet dazu erwiesen. Die Methode erlaubt das ganze Schmelzoberhäutchen und alle organischen Schmelzbestandteile in ihrem Zusammenhange und in situ in ausgezeichneter Weise darzustellen. -"o^ [Eingegangen am 19. November 1908.] XXV, 3. Referate. ;3l;i Referate. 1. Lehr- und Handbücher. Behrens , W. , Tabellen zum Gebrauch bei mikroskopi- schen Arbeiten. 4., verbesserte Aufl.; herausgeg. von E. Küster. Leipzig (S. Hirzel) 1908. VIII u. 245 pp. 7 M. Auch die neue, vom Herausgeber dieser Zeitschrift besorgte Auf- lage dieses für den wissenschaftlichen Mikroskopiker jeder Forschungs- richtung empfehlenswerten Hilfsbuches zeigt wieder eine Reilie von Verbesserungen : veraltete Methoden sind ausgemerzt , dafür neue, dem Fortschritt der mikroskopischen Technik entsprechende Zusätze aufgenommen worden. Die Anzahl der Tabellen ist auf 77 vermehrt durch Einfügung einer Tabelle über Fixierung und Färbung der Proto- zoen, insbesondere der pathogenen (Dr. Prowazek -Hamburg), eines Schemas zur Untersuchung von homogenen Kristallen und Mineralien der Gesteinsschliffe mittels des Polarisationsmikroskops und der Be- stimmung der Feldspate durch Beobachtung der Becke sehen Linie (Prof. Sommerfeldt - Tübingen). Da der Wert eines Nachschlage- buches zu einem großen Teile vom Sachregister abhängt, so hat der Herausgeber diesem besondere Sorgfalt gewidmet und es auf bequeme Benutzbarkeit umgearbeitet. Die gute typographische Ausstattung der 3. Auflage ist beibehalten. Eisler {Halle a. S.). Berg, W., Die Fehlergröße bei den histologischen Me- thoden. Berlin (A. Hirschwald) 1908. 48 pp. 1*20 M. In dieser kleinen , aber inhaltsreichen Schrift stellt Verf. die Resultate seiner Arbeiten über die Veränderungen der Organe durch die angewandten Reagentien zusammen. Das Thema ist ja für jeden Histologen von großer Bedeutung. Es treten verschiedene Verände- 320 Referate. XXV, .;. rungen des Gewebes ein, die Verf. näher analysiert und dvircli zaLl- reiche Tabellen illustriert. Der Ansiebt, daß zur Vermeidung- von Abänderungen der Struktur es notwendig ist, isotoniscbe Hxations- flüssigkeiten zu verwenden, geben die Resultate des Verf. keine Stütze, Auch die beste Methode der exaktesten Wissenschaft hat Fehler- quellen, es kommt darauf an, die Größe dieser zu kennen und das Anbringen von Korrektionen zu ermöglichen. Das hat Verf. durch die Angaben in seiner Arbeit für die Plistologie erzielen wollen. Seine ff er decke r (Bonn] . Klopstock, 31., u. Kowarsky, A. , Praktikum der klini- schen, c h e m i s c h - m i k r 0 s k 0 p i s c h e n und bakte- riologischen U ut ersuchungsmethoden. Berlin u. Wien (Urban & Schwarzenberg) 1908. 2. Aufl.; ;543 pp., 43 Abb. u. 16 färb. Tfln. 5 M. Die Verff. haben ihr Thema in 12 Kapiteln in übersichtlicher Weise behandelt. Mau findet die Untersuchungsmethoden der Sekrete und Beläge des Mundes und Rachens, der Nase, der Conjunctiva, von Sputum, Mageninhalt, Fäces, Harn, Harnröhren- und Prostata- sekret, Blut, Punktionsflüssigkeiten, Eiter und Schuppen und Pilzrasen der Haut. Das Schlußkapitel bringt eine Übersicht der gebräuch- lichen bakteriologischen üntersuchungsmethoden . Farbrezepte und Nährböden. Die Darstellungsvveise ist bündig und klar. Die bei- gegebenen Tafelbilder stammen zum größeren Teil von anderen Au- toren. Die Darstellung der Harnsäure- und Ammoniumurat-Kristalle könnte vielleicht in einer nächsten Auflage technisch etwas vervoll- kommnet werden. 0. Levy {Leipxig). Szymouowicz, Ladisl., n. Krause, ßud., Lehrbuch der Histo- logie und der mikroskopischen Anatomie mit besonderer Berücksichtigung des menschlichen Körpers einschließlich der mikroskopischen Technik. Würzburg (Gurt Ivabitzsch) 1909. 2. Aufl.: 536 pp., 201 Illustr. im Text u. 60 teils färb. Tflu. 15 M. Der technische Teil des klar geschriebenen und schön aus- gestatteten Buches gibt in gedrängter Kürze eine gute Anleitung zum histologischen Arbeiten für den Anfänger. In einem allgemeinen Teil wird das Wesen des Mikroskopes erläutert und einige wichtige praktische Winke für seinen Gebrauch gegeben; ferner werden in diesem Abschnitt besprochen die Untersuchung frischer Objekte, die XXV, 3. Referate. 321 Isolationsmittel einschließlich der Gefriermikrotome, die Fixation, die Einbettung in Celloidin und Paraffin, das Schneiden mit dem Mikrotom, das Aufkleben der Schnitte. Ein längeres Kapitel ist der Färbung und den Farbstoifen gewidmet. Hier findet auch der Erfahrenere manchen guten Rat. Den Schluß bilden Anweisungen für Injektion und Entkalkung. In dem speziellen Teil wird für die Untersuchung der Zelle, der einzelnen Gewebe und der Organe Anleitung gegeben ; es wird dabei die für das Studium gerade am meisten geeignete Methode hervorgehoben und dem Anfänger gezeigt, woher er die am meisten geeigneten Gewebstücke zu entnehmen hat. 0. Levy {Leipxig). Böhm, A. , u. Oppel, A. , Taschenbuch der mikroskopi- schen Technik. Kurze Anleitung zur mikroskopischen Untersuchung der Gewebe und Organe der Wirbeltiere und des Menschen unter Berücksichtigung der embryologischen Technik. Mit einem Beitrag (Rekonstruktiousmethodenj von G. BoRX. 6. , durchges. u. verm. Aufl. von Alex. Böhm. VIII, 339 pp. 8^. München (R. Oldenbourg). 5*80 M. Es wird genügen auf das Erscheinen der neuen, wiederum von Böhm allein besorgten Auflage des allbekannten und beliebten Büch- leins hinzuweisen. Die Literatur ist bis zum letzten Jahre berück- sichtigt. Ein kurzes, wieder aufgenommenes Kapitel über das Mikro- skop enthält die wesentlichsten Fingerzeige für den Anfänger. Der noch von Born verfaßte Abschnitt über Rekoustruktionsmethoden ist unverändert geblieben. Eisler {Halle a. S.). Brugsch, TIi., u. Schlittenhelm, A., Lehrbuch klinischer Untersuchungsmethoden für Studierende und Ärzte. Mit einem Beitrag: Klinische Bakteriologie, Proto- zoologie und Immunodiagnostik von Dr. J. Citron. Mit 341 Textabb. , 5 schwarzen u. 4 farbigen Tfln. , 940 pp. Berlin-Wien (ürban & Schwarzenberg) 1908. 20 M. Das vorliegende Lehrbuch behandelt naturgemäß vorwiegend Methoden, welche vom Mikroskop und mikroskopischer Technik un- abhängig sind. Den Interessen unserer Zeitschrift entsprechend, ver- weisen wir hier auf diejenigen Abschnitte , welche die Technik der Blutuntersuchung behandeln — Technik der Blutentnahme , mikro- skopische Untersuchung des ungefärbten und gefärbten Blutes, Zählung der Blutkörperchen — und über bakteriologische Methoden — Züch- Zeitsehr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 3. 21 322 Referate. XXV, 3. tung , mikroskopische Untersuchung usw. — berichten. Der über klinische Bakteriologie handelnde Abschnitt ist von Dr. J. Citron verfaßt. Küster {Halle a. S.). Ostwald, W., Der Werdegang einer Wissenschaft. Sieben gemeinverständliche Vorträge aus der Geschichte der Chemie. 2., vermehrte u. verbess. Auflage d. „Leitlinien der Chemie". Leipzig (Akademische Verlagsgesellschaft m. b. H.) 1908. 316 pp. 6-60 M. In sieben Kapiteln gibt Verf. gleichsam sieben Querschnitte aus den Kenntnissen von der Entwicklung der Chemie. Das Werk, das man mit stets gleich bleibendem Literesse oder gar mit Spannung durchlesen wird, bringt viele bekannte Dinge in neuartiger Auffassung und nennt manchen Namen, mit dem nur die eingeweihtesten Spezia- listen die der Bedeutung seines Trägers entsprechenden Vorstellungen verbinden dürften. Die einzelnen Abschnitte beginnen immer mit den frühesten Anschauungen, die über irgendwelche Erscheinungen und Erfahrungen geäußert worden sind und schließen mit den Darlegungen der jüngsten Errungenschaften : Das die Elemente behandelnde Kapitel beginnt mit der griechischen Naturphilosophie und berichtet am Schluß über Ramsays Entdeckungen an Radium usw. Das Buch sei bestens empfohlen. Küster (Halle a. S.). 2. Mikrophotographie und Projektion. Herzog, A., M i k r o p h o t o g r a p h i s c h e r A 1 1 a s der technisch wichtigen Faserstoffe. Handbuch der mikro- skopischen Untersuchungsmethoden für Tax til-, Papier-, Seiler-, Stopf- und Bürste nmaterialien. L Teil: Pflanzliche Rohstoffe. Text: 80 pp. mit 14 in den Text gedruckt. Holzschnitten. Atlas: 222 Mikrophotogramme, 1 Dreifarbenaufnahme. München (J. B. Obernetter) 1908. Mit einem Vorwort von F. v. Höhnel. Das vorliegende Tafelwerk wurde mit Unterstützung des Mini- steriums für Handel und Gewerbe in Berlin und mehrerer industrieller Verbände herausgegeben. Es ist sehr erfreulich, daß solche Unter- stützungen den Verf. in den Stand gesetzt haben , seine wertvollen XXV, 3. Referate. 323 Arbeiten auf dem Gebiete der Faseruntersuclmugen in so vorzüg- licher äußerer Gestalt erscheinen zu lassen. Jeder , der sich mit mikrophotographischen Aufnahmen von Fasern und Geweben beschäf- tigt hat , weiß zur Genüge , welche Schwierigkeiten dem Gew^innen guter und instruktiver Bilder entgegenstehen. In der Einleitung deutet der Verf. auf einige dieser Schwierigkeiten hin und sagt mit Recht, daß in der Textilliteratur zwar oft genug auf die große Wichtigkeit der mikroskopischen Untersuchungsmethoden hingewiesen werde, daß aber trotzdem die sachgemäße Benutzung des Mikroskops und der mikrophotographischen Einrichtungen bei der Untersuchung der Textil- fasern sehr wenig verbreitet sei und die makroskopischen Erkennungs- methoden in den Kreisen der Praktiker mehr Vertrauen fänden. Es ist zu hofteu, daß gerade dieser Atlas wesentlich dazu beiträgt, die den mikroskopischen Untersuchungsmethoden oft entgegengebrachte Abneigung zu vermindern. Daß dabei außerdem die allgemeinere Einrichtung von mikroskopischen Kursen an den Fachschulen für Textilindustrie kräftig mitwirken werde , ist zweifellos , zumal wenn für den Unterricht in diesen Kursen so gute Grundlagen wie der Herzog sehe Atlas geschaffen werden. Der Text enthält einen kurzen Abschnitt über das Instrumen- tarium , der allerdings nur das Notwendigste über die Apparate für die mikroskopischen Untersuchungen bringt. Es ist zu bedauern, daß Verf. nicht auch einen Abschnitt über die von ihm angewandten mikrophotographischen Apparate und Methoden aufgenommen liat. Die wenigen Worte, die in der Einleitung darüber gesagt werden, können doch nur als Andeutungen gelten. Gerade über die mannigfachen Erfahrungen, die Verf. bei seinen mikrophotographischen Aufnahmen gewonnen hat , einiges zu hören , würde wohl vielen Benutzern des Werkes recht erwünscht gewesen sein. Der zweite Abschnitt bringt eine alphabetische Zusammenstellung der zu Faseruntersuchungen be- nutzten Reagentien , wobei zahlreiche praktische Anweisungen über Herstellung und Anwendung eingefügt sind. Die übrigen Abschnitte des Textes sind der Beschreibung der Fasern gewidmet. Einige Tabellen geben gute Übersichten über das mikrochemische und das mikrophysikalische Verhalten der ver- schiedenen Fasern , sodann folgen Angaben über Querschnittsgrößen ebenfalls mit instruktiven Tabellen. Die quantitativ-mikroskopischen Untersuchungen , die sich im wesentlichen auf die Methoden der Zählungen stützen , behandeln die gemengten Gespinnste , die sogen. Melierungen, d. h. Mischungen von gefärbten und ungefärbten Fasern 21* 324 Referate. XXV, 3. verschiedenster Art, die Papiere und den Holzschliff. Daran schließt sich noch eine Anweisung zur mikroskopischen Bestimmung des Dralls, d. h. der schraubenlinigen Drehungen , die die Fasern bei der Ver- arbeitung zu Garnen, Zwirnen u. dgl. erhalten. Reichhaltige Literatur- angaben sind sowohl den bereits erwähnten Abschnitten wie auch den Kapiteln über die morphologischen Betrachtungen der verschie- denen Fasergruppen beigefügt. Auf die einzelnen Beschreibungen der Mikrophotogramme kann in einem kurzen Referat nicht näher eingegangen werden , nur so viel möge ausdrücklich hervorgehoben werden, daß die Gruppierung übersichtlich getroffen ist, und daß die charakteristischen Eigenschaften der Fasersorten kurz und treffend beschrieben werden. Daß dabei die Hinweise auf die Abbildungen die Klarheit der Diagnosen außerordentlich erleichtern , ist selbst- verständlich. Einige recht übersichtliche Tabellen geben auch in diesen Kapiteln die Möglichkeit einer raschen Orientierung , wenn auch die Zusammenstellungen, wie Verf. in der Einleitung ausdrück- lich hervorhebt , keineswegs als eigentliche Bestimmungstabellen an- zusehen sind. Daß die für die Papierprüfung hauptsächlich in Betracht kommenden Fasern am Schlüsse noch besonders zusammengefaßt werden, ist für alle, die sich mit derartigen Prüfungen zu befassen haben, jedenfalls sehr erwünscht. Der vorzüglichen Reproduktion der Mikrophotogramme, die von der Firma J. B. Obernetter ausgeführt wurde, ist alle Anerkennung zu zollen, auch die Dreifarbenaufnahme mit der Wiedergabe der charakteristischen Additions- und Subtraktionsfarben im polarisierten Lichte ist gut gelungen. H. Ambro?in (Jena). 3. Präparationsmethoden im allgemeinen. Posch], V., Einführung in die Ko lloi d ch e m ie. Ein Abriß der Kolloidchemie für Studierende, Lehrer und Fabriksleiter. Dresden (Th. Steinkopff) 1908; 48 pp. 1'50 M. Verf. gibt eine allgemeine Charakteristik der Kolloide, bespricht ihr Verhältnis zu Lösungen und Suspensionen, gibt die Methoden für ihre Darstellung an, behandelt die Untersuchungsmethoden und dis- kutiert die neuereu Anschauungen über die Natur des Kolloidzustandes. Wir verweisen hier besonders auf den die Untersuchungsmethoden behandelnden Abschnitt, in welchem die Verdienste Zsigmondys und XXV, 3. Referate. 325 Siedentopf s um die mikroskopische bzw. ultramikroskopische Er- forschung der Kolloide gewürdigt werden. Küster {Halle a. S.). Argaud , Recherches sur l'histotopographie des Cle- ments coutractiles et conjonctifs des parois arterielles cliez lesmollusqueset lesvertebres (Journ. de FAnat. et de la Physiol. Annee XXXXIV, 1908, no. 4, p. 328—354). Hauptsächlich bezieht sich die Arbeit auf Vertebraten (be- sonders Acanthias vulgaris, ferner Petromyzon marinus, Acipenser sturio , Anguilla vulgaris , Chrysophrys aurata , Esox lucius usw. ; ferner Rana esculenta; Vipera aspis, Zamenis viridiflavus, Tropido- notus natrix, Tropidonotus viperinus usw.; ferner Varanus arenarius, Iguana tuberculata, Gongylus arenarius, Uromastyx acanthinurus, Lacerta viridis , Chameleo vulgaris. Ferner Testudo mauritanica. Ferner Aquila fulva, Passer domesticus, Fuligula cristata usw. Ferner Mensch, Löwe, Bär, Pferd, Hund, Meerschweinchen, Maulwurf, See- hund, Kamel, Gürteltier usw.). Im allgemeinen wurden alle oder fast alle Arterien untersucht, wenigstens bei den Haupttypen. Die Arterienstücke wurden, wenigstens soweit möglich, unmittelbar nach dem Tode entnommen. Sie wurden fast immer in lOprozentigem Formol fixiert, seltener in den Flüssigkeiten von Flemming, Tellyes- xizKY und Alkohol. Wenn die Größe es erlaubte, wurden die vor- her eröffneten Tiere als Ganzes fixiert. Gefärbt wurde mit: 1) dem Ranvier sehen Pikrokarmin; die Schnitte blieben hierin etwa eine Viertelstunde und wurden dann mit neutralem Karmin nachgefärbt. Auf diese Weise trat eine schärfere Differenzierung zwischen dem Muskelgewebe und dem Bindegewebe ein. Aufheben in Glyzerin. 2) Hämatoxylin und Eosin, Erythrosin, Orange. 3) Eiseuliämatoxylin nach Heidexhaix. 4) Der Mischung von van Gieson, allein oder mit Hämatoxylin. b) Dem Pikro-Bleu von Dubreuil. 6) Orcein. Zur elastischen Faserfärbung wurde eine gesättigte Lösung von Orcein in 100 g 50grädigen Alkohols mit Zusatz von 2 cc Salzsäure verwendet. Diese Lösung mußte 8 Tage lang reifen , dann trat die Färbung fast augenblicklich ein. Dann Entfärbung und Auf- heben in Balsam oder Glyzerin oder noch besser in einem stark mit Pikrokarmin versetzten Glyzerin. Mitunter wurde auch die Orceinfärbung mit der nach van Gieson oder mit Hämatoxylinfärbung verbunden. 7) Dem Fuchsin-Resorcin nach Weigert ; es färbt dieses elektiver als das Orcein. Schiefferdecl^er {Bonn). .S'2G Referate. XXV, 3. Cepede , Cas. , 8 u r u u e n o u v e 1 1 e c u v e 1 1 e ;\ c o 1 o r a t i o n a rainur es mobiles (CR. Soc. Biol. Paris, t. LXIII, 1907, 110. 33, p. 485—487, av. 2 figg.). Verf. beschreibt eine neue Färbewanne mit beweglichen Ein- sätzen, welche die Rinnen tragen. Die Wanne sowohl wie die Ein- sätze bestehen aus Glas oder Porzellan und lassen sich leicht mit einer Bürste reinigen. Die Wannen werden geschlossen durch einen überhängenden Deckel. Der Preis wird nicht angegeben, ebenso- wenic: die Handlung, von der diese Wannen zu beziehen sind. Schiefferclecker {Bonn). 4. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere. Mencl, E., Über die Histologie und Histogenese der sogenannten P u n k t s u b s t a n z L e y d i g s in dem Bauchstrange der Hirudineen (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 371). Die Untersuchungen wurden größtenteils an Glossiphonia sexo- culata angestellt, außerdem an Nephelis und vergleichsweise noch an Lnrabriculus und Rhynchelmis. Als Fixieruugsmittel wurde größtenteils ein Gemisch aus gleichen Teilen konzentrierter Sublimat- lösung und destilliertem Wasser mit Zusatz von ^j^ bis I^/qo ff'ster Chromsäure und einer Spur Eisessig benutzt. Obwohl dasselbe als „sehr vorteilhaft" speziell für Enchytraciden gerühmt wird, zeigte es sich für das Material des Verf. als , .gewissermaßen unzulänglich". Für früheste Entwicklungsstadien — [und wohl ganz allgemein] — ist der Zusatz von Chromsäure besser wegzulassen. Die Einwirkungs- dauer des Fixatifs soll immer mindestens 24 Stunden betragen. Was die Hirbung betritft, so wurde vielfach Eisenhämatoxylin mit und ohne Nachfärbung benutzt, welche Methode aber für die jungen dotterreichen Stadien wenig brauchbar ist. Als recht empfehlens- wert muß hierfür Pikromagnesiakarmin genannt werden. Viel wurde auch Delafields Hämatoxylin, kombiniert mit Orange G oder VAN GiESON scher Färbung, angewandt, außerdem Karmintinktioneu und von spezifischen Nervenfärbnngen die ApathyscIic Goldniethode XXV, 3. Referate. 327 und das Ramon y CuALSche Silberverfaliren mit Pyrogallolreduli- tion. E". Schoebel {Neapel). Perez, Ch., et Geudre, E., Procede de coloration de la n^vroglie eliez les Ichthyobdelles (Keun. Bio). Bordeaux, 4 avril 1905, C. R. Soc. Biol. Paris t. LVIII, 1905, 110. 14, p. 675—676). Das technische Verfahren , welches den Verif. im allgemeinen die besten Resultate ergeben hat bei der histologischen Untersuchung der Ichthyobdellier , besteht in der Fixierung der Stücke mit der Chrom -Platin -Osmium -Mischung von Borrel, dann in der Färbung der Schnitte mit Magentarot und in der Differenzierung mit Pikro- Indigo- Karmin. Auch für das Nervensystem gibt diese Methode ausgezeichnete Resultate. Die einzige Schwierigkeit besteht nur darin, daß man durch Versuche die Zeitdauer der Färbung fest- stellen muß. Bei einer Färbung mit einer einprozentigen Lösung von Magentarot genügt für die Schnitte von Branchellion eine Fär- bung während 30 Minuten und eine Differenzierung von etwa ebenso langer Dauer; für die Schnitte von Pontobdella muß man dagegen eine Stunde lang färben und 10 bis 15 Minuten lang differenzieren. Von den Nerveuelementen färben sich eigentlich nur die Zellkerne. Dagegen hat der Stützapparat des Nervensystems, das Neuroglianetz, eine starke Affinität für das Magentarot, stärker selbst als das Chromatin und ähnlich der Affinität, welche das Blutfibrin oder die kleinen Ansatzsehnen der Muskeln am Tegumente besitzen. Es ist also eine ganz spezifische Neurogliafärbung, durch welche die Stütz- elemeute in allen Feinheiten scharf hervortreten. Dieser Färbungs- prozeß erinnert in seinen Hauptzügeu (Beizung mittels Osmiumsäure, Färbung mit einem basischen Farbstofte und Differenzierung) an die Methode von Anglade, die so elektiv für die Neuroglia der Wirbel- tiere ist. Schiefferdecker {Bonn). Sivaiiow, N., Acanthob della peledina Grube, 1851 (Zool. Jahrb. Abt. f. Anat. u. Ontogen. Bd. XXII, 1906, p. 637 — 686 m. 10 Tfln.). Die Untersuchsmethoden waren die allgemein üblichen. Fixierung — hauptsächlich in Sublimat — Eisessig (3:1) und HERMANNScher Flüssigkeit, doppelte Einbettung in Photoxylin und Paraffin und Färbung entweder in toto oder in Schnitten, vor allem mit Hämalaun, Eisenhämatoxylin oder Boraxkarmin-Indigo. E. Schoebel {Neapel). 328 Referate. XXV, 3. Marshall, W. S. , Contributions towards the Embryo- logy and Anatora y of Polistes pallipes. 2. The early History of the ceUular Elements of the Ovary (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 173 —213 w. 3 plts.). Von Fixierungsflüssigkeiten kamen die beiden FLEMMiNGSchen Flüssigkeiten, das Heumann sehe, TowEiische und GiLSONSche Gemisch, schließlich heißes Wasser mit folgender Sublimatbehandlung zur Ver- wendung. Die Ovarien wurden immer in der Fixierungsflüssigkeit herauspräpariert. Gefärbt wurde mit Flemmings Dreifarbengemisch, Ehrlich s Hämatoxylin , Heidenhains Eisenhämatoxylin , Hämalaun, Alaunkarmin, Säurefuchsin und Safranin. Für die jüngsten Stadien gab Hämalaun und Ehrlich s Hämatoxylin die besten Resultate, im übrigen E^isenhämatoxylin und Safranin. E. Schoehel {Neapel). Guieyesse , A., Etüde des organes digestifs chez le s corpion ' (Arch. d'Anat. microsc. -t. 10, 1908, fasc. 1, p. 123—139 av. 2 ^^^^.). Zur Fixierung erwiesen sich am besten Zenker sehe Flüssigkeit und besonders Essigsäure-Sublimat; FLEMMiNGSche Lösung war ziem- lich gut, die Flüssigkeit von Bouin und Alkohol waren nicht brauchbar. Gefärbt wurde mit Hämatein und Eosin ; mit Eisenhämatoxylin, Eosin und Lichtgrün unter Verwendung des Liquor ferri sulfurici oxydati. Die Schnitte aus P^lemming scher Flüssigkeit wurden mit Safranin, sowie mit Indigkarmin und Pikrinsäure gefärbt. SchiefferderMer {Bonn). B. Wirbeltiere. Marcliand , Über die natürliche Fixierung von B 1 u t - Präparaten (Med. Ges. zu Leipzig [Offizielles Protokoll], Sitzung 17. Dez. 1907; Münch. med. Wochenschr. Jahrg. LV, 1908, No. 8, p. 423). Die allgemein gebräuchliche Methode der Antrocknung der Blut- präparate mit nachträglicher Fixierung durch Erhitzung oder chemische Agentien hat für die gewöhnlichen klinischen Zwecke sehr große Vor- züge. Indessen ist die Antrocknung zur Konservierung feiner histo- logischer Strukturen keineswegs ein geeignetes Mittel. Ganz besonders XXV, 3. Referate. 329 gilt dies von den Strukturen der Kerne ; von diesen scheinen die Kerne der Lymphozyten am emplindlichsten zu sein. Es resultieren aus solchen Veränderungen starke Größenschwankuugen und scharfe Begrenzungen und Formveränderungen. Der Verf. hat schon seit Jahren , um die feineren Zell- und Kernstrukturen besser zu erhalten , die Antrock- nung durch eine Fixierung ersetzt, die der bei den Geweben üblichen entspricht : Die Abstrichpräparate (Deckgläser oder Objektträger) werden sofort in die Fixierungstiüssigkeit geworfen , und dann nach den üblichen Prozeduren (Auswaschen, Färben, Entwässern in Alkohol, Karbolxylol , Xylol) in Kanadabalsam eingebettet. Ein Antrocknen muß dabei sorgfältig vermieden werden (besonders vor erfolgter Fixierung). Als P'ixierungsflüssigkeit eignet sich das FLEMMiNGSche Osmiunigemiscb, ZENKERSche Lösung (mit und ohne Essigsäure), Formol, Alkohol, während bei Anwendung reiner Sublimatlösung leichter die fixierte Schicht sich ablöst. Zur Färbung eignet sich für die Flemming- Präparate Safranin (auch mit Pikrinsäure) , für Zenker - Präparate Hämatoxylin- Eosin ; auch Färbungen der Granula lassen sich aus- führen. Die Erhaltung der Präparate ist eine weit bessere als bei den Trockenpräparaten und entspricht den Schnittpräparaten. — Die- selbe Art der Fixierung (ohne Eintrocknung) läßt sich sehr vorteil- haft auch au den in Wanderung am Deckglase begritfenen Ex- sudatzellen, z. B. vom Konjunktivaleiter vom Kaninchen benutzen. Gewebsabstriche, z. B. von leukämischem Knochenmarke, lassen sich mit gutem Erfolge ebenso behandeln. Schiefferdeclier {Bonn). Thoma, R., Über die netzförmige Anordnung der quer- gestreiften Muskelfasern (Virchows Arch. Bd. CXCI, 1908, H. 2, p. 192—202 m. 1 Tfl.). Verf. hat für seine Untersuchungen den Gastrocnemius des Frosches oder der Kröte von der Aorta her mit 9Gprozentigem Alkohol in- jiziert und sodann auf Querschnitten von 10 fx Dicke untersucht. Man nimmt dazu 96prozentigen Alkohol bei einem konstanten Injektions- drucke von 14 bis 16 cm Quecksilber. Vor der Injektion werden die Extremitäten des kurarisierten Tieres in einer solchen Lage ge- fesselt , daß die zu untersuchenden Muskeln zum mindestens eine mittlere Spannung aufweisen. Nach der Injektion Entfernung der Haut und Eingeweide und Härtung der Muskulatur in wiederholt erneuertem Alkohol von 96 Prozent, wobei die Stellung der Glieder auch nicht vorübergehend geändert wurde. Celloidineinbettung, Hä- matoxylin-Eosin , Kanadabalsam. Man erhält ditferente Färbungen 330 Referate. XXV, 3. der Primitivfibrillen und Miiskelkerne. In anderen Fällen hat Verf. in der gleichen Weise statt des Alkohols eine öprozentige Formol- lösung, die zugleich 0"75 Prozent Kochsalz enthielt, eingespritzt. Nach Entfernung der Haut und der Eingeweide wurden dami die immobilisierten Präparate in Formollösung derselben Stärke gelegt und 24 Stunden später direkt in 96prozentigen Alkohol überführt. Bei diesem Verfahren quellen die Primitivfibrillen etwas auf und treten nicht mehr so deutlich hervor. Die Muskelfasern erscheinen daher nach der Färbung gleichmäßiger mit Eosin rot gefärbt, während doch die Querstreifung sehr deutlich erhalten bleibt. Schieff'erdecker {Bonn) . GfUilliermond, A., et Mawas, Charactereshisto-chimiques des g r a n u 1 a t i 0 n s des M a s t z e 1 1 e n et r a p p o r t de ces Corps avec la volutine des protistes (C. K. Soc. Biol. Paris t. LXIV, 1908, no. 7, p. 307—309). Der histochemische Charakter und die Bedeutung der Granula- tionen der Mastzellen sind noch wenig bekannt. Die Verff. haben ihre Untersuchungen ausgeführt an dem Mesenterium des Hundes und besonders dem der Ratte : 1) Vitale Färbung. Die Granula- tionen der Mastzelleu färben sich elektiv mit Neutralrot in isoto- nischer Lösung. Während in den rhagiokrinen Bindegewebszellen von Renaut die Vakuolen das Neutralrot aufnehmen, werden bei den Mastzellen die Körnchen rot gefärbt, was zur Unterscheidung der beiden Zellarten dienen kann. Methylenblau in sehr verdünnter Lösung färbt die Körnchen deutlich und leicht metachromatisch. Untersucht man die Mastzellen im lebenden Zustande, so erkennt man leicht Größenverschiedenheiten zwischen den Körnern : Die einen etwas größeren färben sich weniger stark, die anderen kleineren stärker. 2) F ä r b u n g nach F i x i e r u n g. Die meisten Fixierungstlüssigkeiten lassen die Körnung der Mastzellen hervortreten ; die von Perenyi be- wirkt eine deutliche Veränderung der Körner. Wie man seit lauger Zeit weiß, färben sich die Körnchen mit den meisten basischen Anilin- farben (blauen oder violetten) metachromatisch, so mit Methylenblau, dem polychromen Methylenblau von Unna, Dahlia, Thionin, Toluidinblau, Methylviolett , Gentianaviolett , Kresyl RR , Kresylblau BB , Brillant- kresylblau. Die VerfF. haben noch mehrere andere Farbstoffe ver- sucht : Das M e t h y 1 g r ü n färbt violettrot , aber nicht so stark wie die anderen Farbstoffe. Safranin und Karbolfuchsin von Ziehe, Rutheniumrot färben intensiv. Hämatein, Eisen- und XXV, 3. Referate, 331 Kupfer-Hämatoxyliii färben die Körnchen niemals. 3) Mikroclie- mische Reaktionen: a. Entfärbt man ein Metliylenblanpräparat mit einer wässerigen einprozentigen Schwefelsäurelösiing, so entfärben sich sofort alle Elemente des Mesenteriums mit Ausnahme der Mast- zellenkörnung- , die ihre dunkelblauviolette Färbung behält, b. Das- selbe geschieht bei einem nach Ziehl gefärbten Präparate, c. Färbt man mit Methylenblau und behandelt dann mit Jod-Jodkaliumlösung, so wird das Mesenterium hellgelb , die Mastzellenkörnchen zeigen eine charakteristisch dunkelbraune Färbung, die langsam verschwindet bei Zusatz von einer 5prozentigen wässerigen Lösung von kohlen- saurem Natrium, d. Kochendes Wasser löst in etwa 10 Minuten die Körnchen auf; färbt man die Mastzellen nach dieser Behandlung mit Methylenblau, so zeigen sie eine diffuse, homogene, leicht meta- chi'omatische Färbung: Körnchen sind nicht mehr vorhanden. Weitere Reaktionen waren an den Mesenterien schwer ausführbar; die Verff. erinnern daran, daß Levaditi^ nachgewiesen hat, daß die Körnchen in kaltem Wasser in Alkalien und Säuren löslich sind. Die Verft'. selbst fanden, daß die Körnchen sich in einer öprozentigen Schwefelsäurelösung innerhalb weniger Minuten auflösten. Die Verff. heben zum Schlüsse hervor, daß die angeführten charakteri- stischen Färbungen sehr wichtig sind, da sie die Mastzellenkörnchen den basophilen Sekretkörnern nähern, die bei Protisten (Pilzen, Cyano- phyceen, Bakterien, Trypanosomen) sehr häufig vorkommen und unter dem Namen der „metachromatischen Körperchen" bekannt sind. Schieffenlecker {Bonn). Dieulafe, L., et Hcrpin, A., Histogenese de l'os inaxil- laire inferieur (Journ. de l'Anat. et de la Physiol. Annee XLIII, 1907, no. 6, p. 580—592). Benutzt wurden Schafembryonen nach Fixierung in lOprozen- tiger Formollösung und menschliche Embryonen nach Fixierung in steigendem Alkohol oder ebenfalls in lOprozentiger Formollösung. Entkalkuug in einer 20prozentigen Lösung von Ameisensäure 24 Stun- den lang. Auswaschen in Wasser, Härtung in 25prozentigem Alkohol, Paraffineinschluß. Die menschlichen Embryonen wurden im ganzen gefärbt mit Alaunkarmin und dann in Serienschnitte zerlegt; einige Schafembryonen wurden entsprechend mit Boraxkarmin gefärbt; die meisten Schafembryonen wurden in Serienschnitte zerlegt und diese *) Levaditi, These de doctorat en medecine, Paris 1902, 332 Referate. XXV, 3. wurden dann mit verschiedenen Methoden gefärbt: 1) Hämatoxylin- Eosin ; 2) Bismarckbraiin , Bleu de Lyon oder mit Methylblau ; 3) Hämalaun- Eosin. Die verknöcherten Teile oder die vor der Ver- knöcheruug stehenden werden durch Eosin und Bismarckbraun fast elektiv gefärbt; die Einwirkung dieser Farbstoffe darf dabei nicht zu stark sein. Bei den im ganzen mit Boraxkarmin oder Alaun- karmin gefärbten Stücken erscheint der Knochen rosa gefärbt. Schiefferdecker {Bonn). Rodenwaldt, Eine Vereinfachung der NissLschen Fär- bung und ihr e Anwendung bei Beri-Beri (Monats- schrift f. Psych, u. Neurol, 1908, April; Ref. nach Ref. in Neurol. Zentralbl. Jahrg. XXVII, 1908, No. 10, p. 455 — 456j. Verf. hat eine Vereinfachung der Nissl sehen Färbemethode ge- funden. Eine Lösung von Azur II im Verhältnisse von 1 g auf 750 cc destillierten Wassers, zu der unmittelbar vor dem Gebrauche auf je 10 cc Azurlösung 4 Tropfen einer gesättigten Lösung von Kalium- karbonat zugefügt werden, gibt eine absolut sicher dosierte Farbflotte. Schiefferdecker (Bonn). WossidlO, E., Experimentelle Untersuchungen über Ver- änderungen der NissLschen Granula bei Lum- balanästhesie (Arch. f. klin. Chirurgie Bd. LXXXVI, 1908, H. 4, p. 1017 — 1053 m. 2 Tfln.). Die Untersuchungen des Verf. wurden an Kaninchen angestellt. Wegen der Injektionsflüssigkeiten und des Verfahrens bei der Ein- spritzung wird auf das Original verwiesen. Das Lumbaimark aller Tiere und bei Todesfällen auch das verlängerte Mark wurde nach 1, 2, 6, 12 und 24 Stunden untersucht. Die Tiere wurden durch Verbluten getötet. Das Rückenmark wurde nach der sofortigen Heraus- nahme eine halbe Stunde lang in der Lösung von Carnoy (absoluter Alkohol 60, Chloroform 30, Eisessig 10) fixiert. Dann Härtung des Materials in absolutem Alkohol, der mehrfach gewechselt wird, Auf- hellung in Chloroform, Einbettung in Paraffin. An den 5 fi dickeu Schnitten wurde eine NissL-Färbung vorgenommen. Färbung der Schnitte nach Entfernung des Paraffins 5 Minuten in Toluidinblau, dann Differenzierung in Anilinöl-Alkohol (9 5prozentiger Alkohol 90 Teile, Anilinöl 10 Teile), Cajeputöl, Kanadabalsani. Schiefferdecker {Bonn). Referate. 333 Takahashi , K. , Some conditions wliicli determiue the leugth of the internodes found on the nerve fibers of the leopard frog, Raua pipiens (Journ. of comparative Neurol. a. Psychol. vol. XVIII, 1908, no. 2, p. 167—197 w. 7 figg.). Verf. hat die Länge der Internodien bei Rana pipiens unter- sucht. Ein kurzes Stück des frischen Nerven wurde ausgeschnitten und auf ein keilförmiges Stück Karton gelegt, wobei der Nerv in normaler Länge gestreckt wurde. Er wurde so fixiert und zugleich mazeriert, indem er für 24 Stunden iu die folgende Lösung (A) ge- bracht wurde. Osmiumsäure, einrozentige Lösung 5 Teile Chromsäure, 0"25prozentige Lösung .... 3 „ Salzsäure, O'lprozentige Lösung 2 „ Nach 24stündigem Auswaschen in fließendem Wasser kam das Prä- parat für 24 Stunden in die folgende Lösung (B): Glyzerin 10 Teile Alkohol, .50prozentig 20 „ Salzsäure 009 7) Nach dieser Behandlung wurden die Präparate aufgehoben in der folgenden Lösung (C) : Glyzerin 10 Teile Alkohol, öOprozentig 20 „ Diese letzte Lösung (C) soll in Zwischenräumen von 24 Stunden ein- oder zweimal erneuert werden. Dicke Nerven werden der Länge nach mit einem Rasiermesser durchschnitten, nachdem sie 2 bis 3 Stunden in Lösung (A) verweilt haben. Es geschah dies , damit die Flüssigkeit besser eindrang. Die Präparate wurden dann in Lösung (C) zerzupft. Die eben angegebene Technik genügte nicht zu guten Resultaten bei den Nervenwurzeln des IIL und IX. Nerven, da die Fasern brüchig und mißgestaltet wurden. Ferner mußten die Wurzeln des III. Nerven wieder anders behandelt werden als die des IX. Für den IX. Nerven benutzte Verf. zunächst die folgende Lösung ( D) : Osmiumsäure, einprozentige Lösung .... 4 Teile Chromsäure, 002prozentige Lösung .... 1 Teil. Das Präparat wurde in dieser Lösung 24 Stunden belassen, dann 24 Stunden in fließendem Wasser ausgewaschen und schließlich auf- 334 Referate. XXV, 3. gehoben und zerzupft in einer öOprozentigen Glyzerinlösung (E), die mehrfach erneuert wurde. Später benutzte Verf. statt der Lösung (D) die folgende Lösung (F) : Osmiumsäure, O'lprozentige Lösung .... 5 Teile Chromsäure, 0025prozentige Lösung .... 1 Teil Essigsäure, O'lprozentige Lösung 1 „ Diese letztere ergab etwas bessere Resultate als Lösung (D) , keine von beiden Lösungen aber wirkte auf die Wurzeln des III. Nerven so günstig ein, daß eine ausgedehnte Untersuchung desselben mög- lich war 5 so wurde diese Nervenwurzel nur einmal untersucht. Um die Einwirkung der Flüssigkeiten auf Länge und Dicke des Nerven festzustellen, wurden während der Behandlung mit den verschiedenen Flüssigkeiten fortdauernde Messungen vorgenommen : Es ergab sich ein durchschnittlicher Verlust an Länge von 3*6 Prozent und ein durchschnittlicher Verlust an Dicke von 12*8 Prozent. Messungen bei den Nervenwurzeln des III. und IX. Nerven ergaben einen Ver- lust an Länge von einem Prozent und einen Verlust an Dicke von 8"6 Prozent. Verf. ist der Meinung, daß der verhältnismäßig große Verlust an Dicke der Hauptsache nach zurückzuführen ist auf eine Verdünnung der bindegewebigen Scheide und auf ein engeres Zu- sammenliegen der Fasern , so daß der normale Durchmesser der Nervenfaser nicht so stark verändert worden ist. Schiefferdecker (Bonn). Curreri , G., Ricerche intorno alla natura delle spine collaterali dei prolungamenti dendritici delle cellule nervöse (Anat. Anz. Bd. XXXII, 1908, No. 17, 18, p. 429—441 m. 5 Figg.). Verf. hat an Hühnerembryonen von einer Woche an, und an jungen Hühnchen bis zu 3 Monaten gearbeitet. Von den verschie- denen für die Golgi- Färbung angegebenen Methoden hat sich dem Verf. die von L.\chi^ am besten bewährt: Kaliumbichroraat 3 g Formol 10 cc Destüliertes Wasser 100 „ In diese Mischung kommen die Gehirne der eben getöteten Tiere ^) Lachi, Mon. Zool. Ital. Anno VI, no. 1, p. 15— IG; vgl. diese Zeitschr. Bd. XII, 1895, p. 32—33. XXV, 3. Referate. 335 fiir '2 Tage ; nach raschem Auswasclien in destilliertem Wasser kommen die Präparate in eine einprozentige Lösung von Silbernitrat. Hieraus kommen sie nach 24 Stunden nach sclinellem Auswaschen in destilliertem Wasser entweder in die alte Formol-Bichromat-Miscliuno: oder in eine neue solche , die mit dem gleichen Volum destillierten Wassers verdünnt wird. Nach weiteren 24 Stunden wiederum schnelles Auswaschen in destilliertem Wasser und dann Übertragen in eine neue einprozentige Lösung von Silbernitrat ; in dieser können die Stücke beliebig lange bleiben , bis sie benutzt werden , wenigstens aber 24 Stunden lang; gleich Golgi hat auch Verf. gefunden, daß ein längeres Verweilen in dieser Flüssigkeit nicht nur nicht schädlich, sondern eher nützlich ist für eine gute Konservierung der Stücke. Sollten die Präparate benutzt werden, so trennte Verf. die Groß- hirnhemisphären von den übrigen Gehirnteilen ab, befestigte sie auf einem Kork mit Hilfe eines Tropfens einer sehr konzentrierten Gummi- lösung und legte die so befestigten Präparate in 95prozentigen Alkohol, um den Gummi zu härten, um die Stücke besser schneidbar zu machen, und um sie von dem Überschusse an Silbernitrat zu be- freien. Auch in dem 95prozentigeu Alkohol können die Stücke be- liebig lange verbleiben. Geschnitten wurde mit einem senkrecht zur Längsachse des Mikrotoms gestellten und mit 95prozentigen Alkohol befeuchteten Quermesser. Die 10 bis 14 /t dicken Schnitte wurden in 95prozentigem Alkohol aufgehoben. Montiert wurden die Schnitte nach der von Golgi (1885) gegebenen Vorschrift ohne Deckgläschen. — Weiter hat Verf. eine neue Methode zur Reduktion ausfindig ge- macht ; er benutzte dazu die folgende Mischung : Salzsaures Diamidophenol lg Natriumsulfit, wasserfrei 3 „ Absoluter Alkohol 10 cc Destilliertes Wasser 90 „ Sehr gut waren auch die Resultate mit der Hydrochinonlösung von Kallius (1892) und mit der folgenden: Destilliertes Wasser 100 cc Natriunisulfit, kristallisiert ^'5 g Hydrochinon 1 „ wobei man darauf achtgeben muß, zuerst das Xatriumsulfit und dann das Hydrochinon aufzulösen. Die erste dieser Lösungen zersetzt sich leicht und kann nur in den ersten Tagen nach der Herstellung an- gewendet werden, die letztere dagegen ist sehr haltbar und wirkt alt besser als frisch. Die oben angegebenen Lösungen sind zu kon- 336 Referate. XXV, 3. zentriert, um eine gute Reduktion herbeizufüliren , man verdünnt sie daher mit dem 5- bis lOfachen Volumen von destilliertem Wasser. Man kann auch, nach dem Rate von Kallius, zu 2 cc der Stamm- lösung 23 cc destillierten Wassers und 25 cc absoluten Alkohols setzen, um die starken Diffusionsströme zu vermeiden, welche sonst bei dem Übertragen aus dem 95prozentigen Alkohol in die wässerige Lösung eintreten. Sind die Schnitte in der Reduktionslösung nach einigen Minuten braun oder schwarzgrau geworden, so werden sie in destilliertem Wasser abgewaschen. Kallius rät, die Schnitte statt in destilliertes Wasser in TOprozentigen Alkohol zu übertragen, Verf. hat das überflüssig gefunden. Sodanu kommen die Schnitte in eine 20- bis 25prozentige Lösung von Nati-iumhypersulfit, um das nicht reduzierte Silber zu entfernen. Nach 30 Minuten bis höchstens 3 bis 5 Stunden , je nach ihrer Dicke , werden die Schnitte in eine reichliche Menge Wassers übertragen , die innerhalb einer Stunde mehrfach erneuert wird, wenn man nicht 24 Stunden warten will, wie Kallius es vorschreibt, um die völlige Ausscheidung des Über- flusses an Natriumhyposulfit zu erreichen , welcher den Präparaten schaden kann. Verf. rät sehr eine Vergoldung mit der folgenden Lösung an : Goldchlorid lg Natriumacetat 30 „ Destilliertes Wasser 1000 cc. Aus diesem Bade werden die Schnitte herausgenommen , sowie sie einen blauen oder violetten Ton zeigen. Dieses Goldbad kann auch vor der Behandlung mit dem Natriumhyposulfit angewendet werden. Nach dem Goldbade schnelles Abwaschen der Schnitte in Wasser, dann Übertragen in die Fixierungsflüssigkeit: 10- bis 12prozentige Lösung von Natriumhyposulfit für 30 Minuten bis 3 Stunden. Nach Auswaschen in mehrfach erneuertem Wasser während einer Stunde können die Präparate montiert werden. Um die Schnitte weiter zu färben, schlägt Verf. vor, sie zuerst in der folgenden Lösung zu beizen : Zitronensäure 5 g Kalialaun 5 „ Destilliertes Wasser 100 cc, während 10 bis 15 Stunden, dann Färbung in einer wässerigen Lö- sung von Methylenblau. Die so behandelten Schnitte zeigen eine sehr scharfe und klare Färbung und sind sehr haltbar. Schiefferdecker [Bonn) . XXV, 3. Referate. 337 Miehtiilow, S. , Zur Fraj^-e über den feineren Bau des intrakardialen Nervensystems der Säugetiere (Intern. Mouatssclir. f. Anat. u. Physiol. Bd. XXV, 1908, H. 1—3, p. 44—89 in. 3 THn.). Als Material diente zuerst das Herz von weißen Mäusen und Hatten, Kaninchen und hauptsächlich Katzen, ferner auch von Aft'en. Später jedoch wählte Verf. als alleiniges Untersuchungsobjekt das Herz des Pferdes, da es große Bequemlichkeiten für die Präparation bietet. Das von dem Pferdeschlachthof bezogene Herz kam l^/g bis 2 Stunden nach dem Tode des Tieres in das Laboratorium. Es wurden verschiedene Teile aus dem rechten und linken Vorhofe, den Herzohren , dem rechten und linken Ventrikel von seiner Basis bis zur Spitze in der Größe von 10:5 bis 60 : 50 mm entnommen, wobei diese Stücke in Form von Platten mittlerer Dicke vom Visceralblatte des Pericardiums aus herausgeschnitten wurden. Die Färbung der Xervenelemente wurde stets mit Methylenblau ausgeführt. Aus den Arbeiten von Locke ^ und Kuliabko^ sowie anderer ist bekannt, daß eine bestimmte Salzlösung, die jetzt gewöhnlich Ringer -Locke sehe Flüssigkeit genannt wird , ein ausgezeichnetes Mittel darstellt , um tierische Elemente lange Zeit lebendig zu erhalten. Verf. hat daher die bei der Methylenblaufärbung angewendete physiologische Kochsalz- lösung durch die genannte Flüssigkeit ersetzt. Außerdem führte Verf. der Lösung Sauerstoff zu. Er erreichte es so , daß das iso- lierte Katzenherz arbeitend, d. h. sich mehr oder weniger zusammen- ziehend , zugleich auch gefärbt wurde. Zu diesem Zwecke ließ er durch die Gefäße des isolierten und zuerst sorgfältig ausgewaschenen Herzens der Katze die genannte Salzlösung, die auf 38 bis 39^ C erwärmt war, mit Methylenblau und Sauerstoffgehalt hindurchüießen : Eine schwache Lösung von Methylenblau in der Ringer -Locke sehen Flüssigkeit wurde in eine Bürette gegossen ; aus einem Kolben wurde durch eine Glasröhre, die bis zum Boden der Bürette reichte, reiner Sauerstoff hindurchgelassen, der ununterbrochen in Form von Bläschen durch die Färbeflüssigkeit hindurchtrat und sie sättigte. Aus der Bürette trat die Flüssigkeit in ein erwärmtes Schlaugenrohr, worauf sie bis zu 38 bis 39^ C erwärmt in die Aorta trat, von wo sie direkt in das Arteriensystem der eigentlichen Herzwand gelangte. 1) Locke, F. S., Zentralbl. f. Physiol. Bd. XIV. ") Kuliabko, Arch. f. d. gesamte Physiol. Bd. XC, XCVII; Zentralbl. f. Physiol. Bd. XV, XXI. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 3. 22 338 Referate. XXV, 3. Auf diese Weise gelang es Verf. , eine weit größere Anzahl von Elementen des intrakardialen Nervensystems zu färben, als es sonst möglich gewesen wäre. Es wurden Methylenblaulösungen von ^/g bis ^/i2 Prozent verwendet. Die vitale Färbung ergab weniger gute Resultate , es müssen hier noch viel schwächere Lösungen benutzt werden (-^/-q bis ^/j^q Prozent), wobei auch die Zeit der Färbung bis zu 10 Minuten abgekürzt wird. Auch bei der supravitalen Färbung wurde bei Benutzung der oben angegebenen Methode die Zeit für die Färbung der Nervenelemente stark abgekürzt. War die Nerven- färbuug eingetreten, so wurden die Präparate in einer Tprozentigen Lösung von molybdänsaurem Ammoniak fixiert und weiter, nach ge- nügendem Auswaschen, Entwässern und Aufhellen, in Xylol-Damarlack eingeschlossen. Schiefferdecker {Bonn). Meiklejohn, S. J., On the development of tlie plexiform nerve mechanismof the alimentary canal (Jourii. of Physiol. Cambridge vol. XXXVI, 1908, no. 6, p. 400 — 404 w. 5 ^^^.). Säugetierembryonen konnten nicht in hinreichend frühen Stadien erhalten werden. Bei Schweineembryonen von 2*5 cm Länge wurde der Plexus im Magen und Darme bereits gut entwickelt gefunden und durch reichliche Verbindungen mit dem Zentralnervensystem ver- knüpft. Kaulquappen wurden ebenfalls untersucht und können viel- leicht brauchbar sein, doch wird bei Anwendung der Cajal scheu Methode der Dotter so brüchig, daß Verf. von ihrer Verwendung absah. Er hat schließlich Hühnerembryonen benutzt. Am 7. Tage der Bebrütung war der Plexus in der Darmwand bereits gut ent- wickelt und mit dem Zentralnervensystem verbunden; es wurden daher Hühnerembryonen von 2 ^/^ bis 7 Tagen untersucht. Was die Cntersuchungsmethoden anlaugt, so gab Goldchlorid gute Resultate, wenn es möglich war , den Darm zu entfernen und auszubreiten , in den jüngeren Stadien aber nicht. Methylenblau gab bei jüngeren Embryonen überhaupt keine Färbung. Die Cajal sehe Silbermethode ergab gute Resultate vom 3. Tage an und wurde daher auch haupt- sächlich benutzt. Die erste Formel, direkte Fixierung in Silbernitrat, ergibt für junge Embryonen die besten Resultate. Mit der zweiten, vorhergehende Fixierung in Alkohol oder in Alkohol mit Ammoniak, hat Verf. von der Mitte des 4. Tages au Färbungen erhalten und auch nur in einem Falle. Vom 5. Tage an gibt diese Formel schöne Resultate mit weit deutlicherer Darstellung der Fasern und Zellen als XXV, 3. Referate. 339 mit der ersten Methode. Eine Schwierigkeit besteht darin, daß die Oberfläche der Embryonen durch das Silber geschwärzt wird. Verf. hat daher eine Einbettung in Agar versuclit und hält diese Methode für nützlich. Schiefferdecker {Bonn). Walter, F. H. , Zur Kenntnis der peripheren mark- haltigeu Nervenfasern (Deutsche Zeitschr. f. Nerven- heilk. Bd. XXXV, 1908, H. 1, 2, p. 152—164 m. 6 Abb.). Verf. gibt eine neue Methode an, um die Fibrillen und Nerven- fasern deutlich zu färben: 1) Fixierung in einer 0'2.5prozentigen Lösung von Osraiumsäure in physiologischer Kochsalzlösung. 2) Ein- bettung in Paraftin. 3) Bedecken der möglichst dünnen, aufgeklebten und von Paraffin befreiten Schnitte mit der gleich zu beschreibenden Hämatoxylinlösung. 4) Färben unter der Glasglocke 5 Minuten bis eine Stunde. 5) Abspülen mit Wasser. 6j Einbetten in Kanadabalsam. Zur Herstellung der Färbeflüssigkeit braucht man 3 Lösungen : a. eine Lösung von 1*0 g kristallisierten Hämatoxylins (Verf. hat das Präparat von Grübler und das von Hausmann — St. Gallen — benutzt, das letztere scheint im allgemeinen noch bessere Resultate zu ergebenj in 10 cc absoluten Alkohols, b. eine lOprozentige wässerige Alaun- lösung und c. eine wässerige einprozentige Lösung von Kalium hypermanganicum. Man mischt b cc von a. mit 100 cc von b. Diese Mischung und die einprozentige Lösung des Kalium hypermanganicum sind die Stammlösungen , aus denen die definitive Färbeflüssigkeit vor jedem Gebrauche neu hergestellt wird. Dabei kommt es darauf an, dem Gemische a -j- b soviel Kalium hypermanganicum zuzusetzen, als ohne das Auftreten von Niederschlägen möglich ist. Da die Hämalaunlösung (a -|- b) sich beim Stehen fortwährend durch Oxy- dation ändert , so richtet sich natürlich auch die Menge des zu- zusetzenden Kalium hypermanganicum nach dem Alter, resp. dem Oxydationsgrade derselben. Verf. kann daher keine absoluten Zahlen dafür angeben. Für die ganz frische Lösung a -]- b sind etwa je 2 Tropfen aus einer Augentropfpipette auf 1 cc nötig. Nach Zusatz schüttelt man einige Male kräftig um. In wenigen Minuten nimmt die Flüssigkeit eine dunkelviolette Färbung an und kann nun benutzt werden. Bei ganz frischen Lösungen ist es ziemlich schwierig, genau die richtige Menge von Kalium hypermanganicum zu trefl'en, da sich bei dem geringsten Zuviel ein flockiger Niederschlag bildet, der nicht abzuspülen ist und die Präparate natürlich leicht unbrauch- bar macht, während bei ungenügendem Zusätze von Kalium hyper- 340 Referate. XXV, 3. manganicum nur eine ganz schwache und diffuse Färbung eintritt. Die Färbung geht desto schneller je frischer die Stammlösungen sind. Viel leichter werden diese Fehler vermieden, wenn man die Hämalaunlösung (a -|- b) einige Wochen bei offener Flasche und bei öfterem Umschütteln an der Luft oxydieren läßt, bis sie eine ganz dunkelrote Farbe angenommen hat. Man braucht dann nur etwa einen Tropfen der Kaliumpermanganatlösung zu 2 bis 3 cc hinzu- zusetzen und die Gefahr des Zuviel oder des Zuwenig ist bei weitem nicht mehr so groß. Auch nach dem Zusätze von c sieht jetzt die Flüssigkeit statt violett mehr purpurrot aus. Bei einiger Übung kann man der Farblösung übrigens schon ansehen, ob sie brauchbar ist. Eine Überfärbung tritt nur bei Benutzung einer frischen Häm- alaunlösung (a -\- b) etwa nach 10 Minuten ein, oder nur bei stunden- langem Färben. Das Färberesultat ist eine dunkelviolette Färbung der Schwann sehen und Henle sehen Scheide mit ihren Kernen und der Fibrillen, während die Interfibrillärsubstanz fast ganz farblos bleibt oder einen hellbläulicheu Ton annimmt. Ist eine Überfärbung eingetreten, so kann man mit ganz dünner wässeriger Salzsäurelösung difi'erenzieren. Vorteile dieser Färbung gegenüber der Kupffer sehen und Bethe sehen Methode sind die Sicherheit des Erfolges und vor allem die intensivere Färbung der Fibrillen. Etwaige Verklebungen der Fibrillen sind auf ungenügende Fixierung zurückzuführen. Die physiologische Kochsalzlösung ist für die Färbung nicht unbedingt nötig, doch scheinen tiefer gelegene Teile dabei besser fixiert zu werden. Als Material diente der N. ischiadicus und die Nerven der Cauda equina von Rana esculenta und der N. ischiadicus von Mäusen. Die Nerven der Cauda equina haben den Vorteil, daß ihnen ein Perineurium fehlt und dadurch die Herstellung feiner Schnitte erleichtert wird. Um möglichst viele Markrohre anzu- schneiden, ist es vorteilhaft, mit der Längsrichtung der Nerven zu schneiden, nicht von der Seite her. Verf. hält es für unmöglich, einen herausgenommenen Nerven in natürlicher Spannung zu fixieren. Er hat daher die Nerven in situ fixiert in der Weise, daß er den Ischiadicus der Maus einfach durch Spaltung von Haut und Muskel freilegte und nun, ohne ihn von seiner Unterlage loszulösen, mit der Fixierungsflüssigkeit betropfte. Nach Verlauf von etwa 2 Stunden, während welcher Zeit nach Bedarf getropft wurde, tritt eine Ver- kürzung nach Durchschneidung nicht mehr ein und ein Teil der Fasern ist schon völlig fixiert. Der Nerv wurde nun vorsichtig ausgelöst und, ohne ihn weiter aufzuspannen, zu Ende fixiert. XXV, 3. Referate. 341 Verf. meint auf diese Weise wirklich normale Fasern erhalten zu ^^^®"- Sckiefferdecker {Bonn). Ayers, H., a. Worthington, J., The finer anatomy of the braiu of Bdellostoma Domeyi. I. The acustico- lateral system (The Americ. Journ. of Anat. vol. VIII, 1908, no. 1, p. 1 — 16 w. 8 pl.). Das Gehirn muß möglichst frisch fixiert werden. Die besten Resultate ergaben die schnelle GoLGi-Methode und die Silbermethoden von Cajal mit absolutem Alkohol allein und absolutem Alkohol mit Zusatz von Ammoniak. In manchen Gegenden wurde auch intra- vitale Färbung mit Methylenblau erfolgreich angewendet. Die Resul- tate wurden kontrolliert an Gehirnen , die in situ gehärtet waren, und mit Karmin, Hämatoxylin gefärbt wurden. Die WEiGERxsche Methode ergrab keine o-uteu Bilder. IQCVV, ^^^^^ j,. Schiefferdecker (Bonn). Michailow, S. , Die Neurofibrillen der sympathischen Ganglienzellen bei Säugetieren (Folia Neuro- Biologica Bd. I, 1908, No. 5, p. 637—655 m. 2 Tflu.). Verf. hat zur Färbung des Neurotibrillenapparates in den sym- pathischen Nervenzellen der Säugetiere die folgende Modifikation der dritten Form der CAjALschen Silbermethode angewendet: 1) Fixie- rung vollkommen frischer , lebendiger , sympathischer Ganglien in absolutem Alkohol (Methylalkohol) 100 cc, Ammoniak 0'3 bis 0*5 cc während 24 bis 48 Stunden. 2) Auswaschen in destilliertem Wasser 20 bis 30 Minuten lang, bis die Stücke auf den Boden des Gefäßes sinken. 3) Behandlung mit einer l*5prozentigen wässerigen Lösung von Silbernitrat 4 bis 5 Tage lang im Thermostaten bei 37 bis 38^ C. 4) Schnelles Auswaschen (eine Minute) mit destilliertem Wasser. 5) 24stündiges Verweilen in der folgenden, frisch bereiteten Lösung : Pyrogallol 1 bis 2 g, Formol 5 bis 10 cc, destilliertes Wasser 100 cc. 6) Längeres Auswaschen , Einbettung usw. Es wurden untersucht die sympathischen Ganglien des Hundes, der Katze, des Kaninchens, des Pferdes usw., wobei sich die Katze als besonders geeignet er- wies. Jedoch imprägnieren sich auch bei der Katze die meisten sympathischen Ganglienzellen diffus und nur an einzelnen Zellen er- scheint der neurofibrilläre Apparat deutlich ausgeprägt. Schiefferdecker {Bonn). ;U2 Referate. XXV, 3. Immisch, K. B., Untersuchungen über die mechanisch wirkenden Papillen der Mundhöhle der Haus- säugetiere (Anat. Hefte, H. 107 [Bd. XXXV, H. 3], 1908, p. 761—859 m. 21 Abb. im Texte). Fixierung der Objekte in einer 4prozentigen wässerigen Lösung von Formaldehyd 12 bis 24 Stunden, Nachhärtung in steigendem Alkohol. Die Formaldehydlösung wurde so hergestellt, daß das offizielle Formaldehydum solutum mit der achtfachen Menge Wassers verdünnt wurde , so daß die Lösung ungefähr 4 Prozent (genau 3*89 Prozent) Formaldehyd enthielt. Das Formaldehydum solutum techuicum der chemischen Fabriken enthält gewöhnlich 40 Prozent, mitunter bis zu 50 Prozent an Formaldehyd. Einige Objekte wurden auch mit einer heißgesättigten Lösung von Sublimat in O'ßprozentiger Kochsalzlösung fixiert, mit Zusatz von ein Prozent Eisessig zur Ver- minderung der Schrumpfung; Nachhärtuug wieder in steigendem Alkohol. Diese Methode war nicht günstig für die kutane Schleim- haut der Mundhöhle, da sich nur schwer gute Schnitte anfertigen ließen. Eine unvergleichlich viel bessere Schnittfähigkeit der Objekte wurde mit der Flüssigkeit von Tellyesniczky (Kaliumbichromat 3*0 g, Essigsäure 5 cm, Wasser 100 cm) erzielt. Auch die Flüssigkeit von Carnov (Alkohol-Eisessig) lieferte bei kurzer P^ixierungsdauer (höch- stens 20 Minuten für die kutane Schleimhaut der Mundhöhle) recht gute Präparate. Die Stücke können aus der Fixierungsflüssigkeit direkt in absoluten Alkohol übertragen werden. Einbettung in Paraffin oder Celloidiu. Die Paraffinobjekte wurden im wesentlichen bei schräger Messerstellung in Serien geschnitten. Schnittdicke 5 /.t. Sie wurden ausschließlich durch die Kapillarattraktionsmethode auf dem mit Alkohol gründlich gereinigten Objektträger befestigt. Infolge der derben Konsistenz des Materials hatten sich die Schnitte teil- weise so energisch zusammengerollt, daß es nicht genügte, sie auf warmes Wasser zur Ausbreitung zu legen. In solchen Fällen wurde in das Lumen der SchuittröUchen eine feine Präpariernadel eingeführt, parallel über den Wasserspiegel gebracht und dann vorsichtig auf diesen herabgesenkt, so daß der zusammengerollte Schnitt mit seinem äußeren freien Ende nur leicht auflag. Unter rollender Bewegung des Nadelgrifi"es zwischen den Fingern in der der EinroUungsrichtung des Schnittes entgegengesetzten Richtung wurde dann der Schnitt aufgerollt und breitete sich vollkommen glatt auf dem Wasser aus. So umständlich und langwierig diese Methode auch anfangs zu sein schien, so lieferte sie doch sehr gute, gleichmäßig dünne Präparate, XXV, 3. Referate. 343 so daß auf die Anwendung- des BouNSchen Schnittstreckers beim Schneiden verzichtet werden konnte. Da sich Schnitte von über 10 fi Dicke nur schwierig- und meist nur unter Zuhilfenahme einer zweiten Präpariernadel zum Festhalten des freien Schnittes aufrollten, so kann diese Aufrollmethode die Schnittstärke von über oder unter 10 ju mit ziemlicher Sicherheit bestimmen helfen. Die auf dem warmen Wasser ausgebreiteten Paraffinschnitte wurden auf den direkt in die Flüssigkeit eingetauchten , vorher mit Alkohol gründlich ge- reinigten Objektträger mit einer Präparieruadel gebracht. Getrocknet wurden die Schnitte in einem Zeiträume von uicht unter 4 Stunden in einem Ofen bei 35 bis 37*^ C. Die Schnitte haben sich bei dieser Behandlung später niemals abgelöst, mit Ausnahme einiger mit Aceton behandelter Objekte. Nach der „japanischen Aufklebemethode" (Glyzerin-Eiweiß) wurden diejenigen Paraffinschnitte befestigt, die mit alkalireichen FarbstotFlösungeu, z. B. Lithionkarmin, behandelt worden sollten, da die Schnitte in der Färbung mit solchen Lösungen infolge des großen Alkaligehaltes mehr oder weniger stark aufquellen und bei Befestigung- durch Kapillarattraktion sehr leicht vom Objektträger abschwimmen. So auch bei der Färbung mit Ranvier schem Pikro- karmin. Auch die Celloidinschnitte wurden mit Eiweißglyzerin auf dem Objektträger aufgekebt, und zwar wurden sie aus dem Alkohol erst in Wasser übertragen und dann auf den Objektträger gebracht und aufgepreßt, sonst lösen sie sich leicht ab. Verf. empfiehlt sodann sehr die von Olt angegebene „Gelatine -Formolmethode" zum Auf- kleben mikroskopischer Schnitte. Besonders auch für das Aufkleben von Celloidinschnitten und von Gefrierschnitten. — Um bei etwa auftreten- den Eigentümlichkeiten bei der Färbung bestimmter Gewebselemente sofort mit Sicherheit entscheiden zu können, ob eine Zufälligkeit oder eine tatsächliche Besonderheit vorliegt, wurden 4 bis 15 unmittelbar aufeinander folgende Schnitte auf einem Objektträger aufgeklebt ; so hatte man sogleich Vergleichsmaterial bei der Hand. — Gefärbt wurde im allgemeinen mit Böhmer schem Alaunhämatoxylin und Eosin in so starker Verdünnung, daß die Färbedauer 18 bis 24 Stunden betrug. Für Bindegewebe und glatte Muskulatur wurde Pikrinsäure-Säurefuchsin nach VAN Gieson verwendet, oder auch RANViERSches Pikrokarmin. Die elastischen Fasern wurden mit Resorcinfuchsin und Orcein gefärbt ; beides gleich gut. Zum Nachweise der acidophilen Leukocyten im Ge- webe der Schleimhautpapillen wurden mehrere der von Zietschmann^ ^) Zietschmann, 0., Über die acidophilen Leukocyten (Körnerzellen i 344 Referate. XXV, 3. angegebenen Färbungen angewendet, so das Gemisch von Biondi- Ehrlich- Heidenhain, das Triacidgemisch von Ehrlich und das von Pappenheim, ferner Pikrinsäure allein und die Methode von van Giesox. Das Vorhandensein eines Kittleistennetzes Avurde durch die Färbung mit Eisenalaun- Hämatoxylin nach M. Heidenhain festgestellt. Das Eleidin wurde mit der Hämatoxylin- Kougorot- Färbung nach Buzzi dargestellt (Eleidin rot, Keratohyalin blau). Mit Ranvier s Pikro- karmin färbt sich das Keratohyalin rot. Schieff erdecke r [Bonn). Lelievre, A., Recherches experimentales sur l'evolu- tion et le fonctionnement de la cellule renale. n*^ partie. Influence du regime sur l'evolu- t i 0 n de 1 a cellule renale (Journ. de l'Anat. et de la Physiol. Annee XLHI, 1907, no. G, p. 593—651 av. 3 pl.). Verf. geht genauer auf die angewendete Technik ein. 1. Das Herausnehmen der Objekte. Die Organstücke wurden heraus- genommen unmittelbar, nachdem das Tier durch Verletzung des ver- längerten Markes getötet war, und zwar wurden a) die Stücke einmal herausgenommen, ohne daß mau mit der Hand daran kam : es wurden mit dem Rasiermesser schnell parallele Einschnitte gemacht, sodann andere , welche senkrecht zu den ersten lagen ; so konnte man mit einem tiefen Rasiermesserschnitte eine große Menge von kleinen Würfeln auf einmal herausnehmen, die dann sofort in die Fixierungs- flüssigkeiten gebracht wurden ; die Dicke der so herausgenommenen Stücke betrug nicht mehr als 2 mm , ihre Oberfläche 3 bis 4 mm. b) In einigen Fällen wurde die folgende von Retterer angegebene Technik befolgt : nach Erötfuung der Bauchhöhle beim lebenden Tiere legt man an einer Niere um die Arterie und Vene eine Ligatur, nimmt die Niere dann heraus und legt sie in die Fixierungsflüssigkeit. 2. Fixierung. Um Einseitigkeit zu vermeiden, wurden die folgen- den vier Fixierungsflüssigkeiten verwendet (wurde die ganze Niere nach Unterbindung der Gefäße fixiert, so wurde stets die Zenker sehe Flüssig- keit verwendet): a) Die Flüssigkeit von van Gehuckten: Absoluter Alkohol 12 cc Chloroform 6 „ Eisessig 2 „ des Pferdes (Intern. Monatsschr. f. Anat. u. Physiol. Bd. XXII, 1905, H. 1- vgl. diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 429). XXV, 3. Referate. 345 Hierin verbleiben die Stücke 3 bis 3^/^ Stuntleu, dann absoluter Alkohol 15 bis 20 Stunden, wobei der Alkohol ein- bis zweimal gewechselt wird, um jede Spur des Chloroforms zu vertreiben, b) ZENKERSche Flüssigkeit: Sie wurde verwendet nach der in dem Laboratorium von Retterer üblichen Methode. Die Stücke kommen in eine große Menge von der Flüssigkeit, die so hergestellt worden ist, daß man Sublimat in heißer Müller scher Flüssigkeit bis zur Sättigung löst. Beim Gebrauche wird Eisessig zu 3 Prozent zugesetzt. Die Stücke verbleiben im Ofen bei 37^ etwa 12 Stunden in der Flüssigkeit; Auswaschen in fließendem Wasser etwa 8 bis 12 Stunden; dann Über- tragen in 30grädigen Alkohol mit Zusatz von Jodtinktur, dann steigen- der Alkohol bis zu absolutem (15 bis 20 Stunden), c) ItABLSclie Flüssigkeit: Sie ergab sehr gute Resultate. Platinchlorid, wässerige einprozentige Lösung . 10 cc Sublimat, konzentrierte wässerige Lösung . . . 10 ., Destilliertes Wasser 20 ,, Die Stücke bleiben hierin 12 Stunden, dann mehrstündiges Aus- waschen in Wasser, Weiterbehandlung wie bei Zenker scher Flüssig- keit, d) Flüssigkeit von Dominici: Sublimat, bei 37*' gesättigte Lösung 20 cc Offizinelle Jodtinktur 2 „ Filtrieren, dann Hinzufügen von Formaldehyd (soll wohl Formol sein. Ref.) . . 2 „ Hierin verbleiben die Stücke ungefähr eine Stunde, werden in steigen- dem, mit Jodtinktur versetztem Alkohol (70^, 90*^, 9b^) entwässert und kommen schließlich in absoluten Alkohol. 3. Einbettung. Nach der Entwässerung kommen die Stücke bis zum Durchsichtig- werden in Xylol, dann in eine Mischung von gleichen Teilen Xylol und Paraffin im Ofen bei 37 '^ für etwa eine Stunde; dann in ge- schmolzenes Paraffin von 48^, dann durch mehrere derartige Paraffin- bäder bis zum Einschlüsse ; die Zeit des Aufenthalts in Paraffin war immer nur sehr kurz, durchschnittlich 30 bis 40 Minuten; mit- unter wurde die Einbettung im luftverdünnten Räume ausgeführt. 4. Färbung. Nachdem die Serienschnitte von 3 bis 6 bis 10 ju Dicke (die beiden letzteren wurden für Studien des Bindegewebes verwendet) mit Eiweißwasser auf dem Objektträger fixiert worden waren, wurde gefärbt, wobei die folgenden Methoden die besten Resultate ergaben : a) Eisenhämatoxylin nach M. Heidenhain : Die Schnitte kommen für 12 Stunden in eine 2prozentige Lösung von 346 Referate. o. Eiseualauu, Abwaschen in Wasser, 12 Stunden in einprozentige reife Hämatoxylinlösung , längeres Auswaseben und Entfärbung in der ersten Alaunlösung, b) Hämatoxylin nach Retterer: Mehrstündige Färbung in Hämatoxylin, 12- bis 20 stündiges Auswaschen in fließen- dem Wasser, c) Hämalauu nach P. Mayer , nach Beizung mit Kaliumbichromat : Die Protoplasmafärbung wurde ausgeführt mit Eosin oder Aurantia oder auch mit Säurerubin in schwacher alkoho- lischer Lösung (Sauer) : Rubin S, gesättigte, wässerige Lösung . 1—2 Tropfen Alkohol von 70 oder 95 Prozent ... 12 cc, schließlich wurde mitunter auch gefärbt mit den Mischungen von VAN GiESON oder Schaffer nach Kernfärbung mit Hämatein oder dem Eisenhämatoxylin von Heidenhain. Einschluß in Damarlack oder Zedernholzöl. Schiefferdecker {Bonn). Grilber, Gr. B., Über die Beziehung von Milz und Knochen- mark zueinander. Ein Beitrag zur Bedeutung der Milz bei Leukämie (Arch. f. exp. Pathol. u. Pharmak. Bd. LVIII, 1908, H. 3, 4, p. 289—318 m. 1 Tfl.). Die Ausstrichpräparate wurden meist gefärbt mit eosinsaurem Methylenblau nach Jenner-May. Triacidfärbung ist für das Kaninchen- blut von untergeordneter Bedeutung, da es keine Zellen enthält, die rein neutrophile Granulationen führen. Zum Studium der Kernstruk- turen ist Hämatoxylinfärbung nötig, die GiEMSASche Azur-Eosinfärbung sehr empfehlenswert. Die Pappenheim sehe Pyronin-Methylgrünfärbung ist anzuwenden, wenn es sich darum handelt, die Lymphocytennatur einer Zelle auszuschließen. Schiefferdecker {Bonn). 3Iottrain , T. H. , Granules of mammalian liver cells (Proc. of the Physiol. Soc. June 22, 1907, Journ. of Physiol. vol. XXXVI, 1907, no. 1, p. 4). Eine bequeme, schnelle Methode mit dauerhafter Färbung für die Darstellung der Körnchen in der Säugetierleber ist die folgende : Kleine Stücke werden 4 Stunden lang in 40prozentiger Formaldehyd- lösung fixiert , Frostschnitte in Formolgummi , Färbung in Formol- fuchsin, Auswaschen, steigender Alkohol, Aufheben in Balsam. Gegen- färbung eventuell mit Anilinblau oder Methylenblau. Man erhält die Körnchen sehr bequem bei Meerschweinchen, Igeln, Kaninchen und Ratten ; Präparate von den beiden ersteren Tieren waren nach XXV, 3. Referate. 347 9 Monaten noch unv^erändert. Man läßt die Tiere am besten einen bis 2 Tage ohne Xahrnng-, um das Glykogen zu entfernen. Die Körnchen stimmen genau überein mit denen, die man in der leben- den Zelle findet, oder in Präparaten nach anderen Fixierungsmitteln, z. B. Sublimat, Bichromat- Osmiumlösung und Formol-Bichromat. Scliiefferdecker {Bonn). Herxheimer, G. , Zur Pathologie der Gitter fasern der Leber. Zugleich ein Beitrag zur Frage der sogenannten „Stauungsc irr hose" (Beitr. z. pathol. Anatomie u. z. allgem. Pathol. Bd. XLIII, 1908, H. 2, p. 284—327 m. 3 Tfln.). Verf. hat ganz wie Maresch die Bielschowsky- Methode zur Darstellung der Gitterfasern angewendet, indem er ebenfalls die Reduktion in Formol abkürzte. Er verwandte lediglich Gefrier- mikrotomschnitte , meist von 5 /t Dicke ; es ist wesentlich , daß die Schnitte recht dünn sind. Zur Kontrolle wurden einige Schnitte stets nach VAX Gieson gefärbt. Scliiefferdecker (Bonn). Nathan, M. , La cellule de Kupffer (cellule endo- theliale des capillaires veineux du foie), ses reactions experimentales et pathologiques. L La cellule de Kupffer ä Tetat normal (Journ. de lAuat. et de la Physiol. Annee XXXXIV, 1908, no. 3, p. 208—247 av. 3 pL). Verf. bespricht zunächst die verschiedenen bisher zur Dar- stellung der Kupffer sehen Zellen angegebenen Methoden: Die erste Methode von Kupffer (1876), die Methode von Rothe (1882), die von Berckley (1893), die zweite Methode von Kupffer (1899), die Methode von Browicz (1899), die von Cohn (1904). Die Impräg- nationsmethoden (Kupffer und Rothe) lassen sich bei zoologischen und embryologischen Studien über das Endothel schwer anwenden, da bei ihnen Paraffineinschluß schwierig ist, da sie leicht den Bau der Orgaue verändern, und da sie dadurch, daß sie das Fett ebenso färben wie die Kupffer sehen Zellen, bei der Fischleber leicht zu gefährlichen Irrtümern Veranlassung geben können. Die Methode von CoHN ist nur beim lebenden Tier anwendbar, und paßt nur für bestimmte Tiere 5 beim Kaninchen hat Verf. die Leber des Fötus durch Kollargolinjektionen , die dem Muttertiere gemacht wurden, nicht imprägnieren können. Die gewöhnliche Fixieruugs- und Fär- 348 Referate. XXY, 3. bungstechuik genügt zum Studium der Kupffer scheu Zeilen, voraus^ gesetzt, daß die Schnitte hinreichend dünn sind (5 bis 10 /*). Es ist oft schwer, die Kupffer sehen Zellen aufzufinden, und man muß starke Vergrößerungen verwenden. Verwendbar sind zur Fixierung: TOprozentiger Alkohol, die Flüssigkeiten von Bouin und von Zenker; als Färbemittel: Hämatein- Eosin, polychromes Methylenblau, Hämatoxylin von Heidenhain und Lichtgrün, die GiEMSA-Färbung. Eingebettet wurde in Paraffin von 48*^, schnelle Methode (25 Minuten). Schiefferdecker {Bon n) . Nathan, M., La cellule de Kupffer (cellule endotheliale des capillaires veineux du foie), ses reactions experimentales et pathologiques (Journ. de l'Anat. et de la Physiol. Anuee XXXXIV, 1908, no. 4, p. 271—328). Die Untersuchungen wurden beim Kaninchen ausgeführt. Die Collargolinjektion wurde in der Dosis von 1 bis 2 cc einer ein- prozentigen Lösung in die Ohrvene ausgeführt. Nach 5 bis 6 Tagen verschwindet das Collargol aus den Kupffer sehen Zellen, man muß daher die Injektionen ziemlich häufig erneuern. Betreffs anderer Gifte wird auf das Original verwiesen. Um die Reaktionen in der Leber zu verfolgen , wurden dem lebenden Tiere operativ Leber- stückchen entnommen. Die blutende Leberfläche wurde mit dem Thermokauter behandelt. Nach der Fixierung Einbettung von Ideinen Stückchen in Paraftiu von 48 Grad. Scliiefferdecker {Bonn). Scliumaiiu, P., Beiträge zur vergleichenden Histologie des Enddarmes und des Überganges des Mittel- darmes in den Enddarm der Haussäugetiere (Inaug.-Diss. Zürich, 1907, 84 pp. m. 4 Tfln.). Aus den in Betracht kommenden Stellen des Darmes der soeben getöteten Tiere wurden kleine Stücke herausgeschnitten. Diese wurden in physiologischer Kochsalzlösung sehr vorsichtig gereinigt, von dem etwa der Oberfläche anhaftenden Schleime befreit, und dann mög- lichst schnell in die Fixierungsflüssigkeit gebracht. Zur Fixierung wurden benutzt : Heißgesättigte Sublimatlösung , der etwas Eisessig zugesetzt wurde, 4prozentige Formollösung und CARNOvsche Flüssig- keit. In den beiden ersten Flüssigkeiten verblieben die Stückchen 24 Stunden. Dann Auswaschen während 24 Stunden in fließendem Wasser, steigender Alkohol. In der Carnoy sehen Flüssigkeit (abso- luter Alkohol 60 Teile, Chloroform 30 Teile, Eisessig 10 Teile) ver- fe XXV, 3. Referate. 349 blieben die Stücke 2 Stunden, dann 2 Tage lang absoluter Alkohol. Kleinere Stücke wurden in Paraffin, größere in CelloTdin eingebettet. Durchschnittliche Schnittdicke 10 bis 15 /«, Aufkleben der Paraffin- schnitte mit warmem Wasser, 12stündiges Trocknen im Ofen. Färbung mit Hämatoxylin (Delapield) und Eosin oder Kongorot, oder mit Eisenhämalaun (Heidenhaix). Schleimfärbung mit Hämatoxylin (Dela- field), Mucikarmin, Muchämatein, Bismarckbraun. Nachweis glatter Muskelfasern mit Säurefuchsin- Pikrinsäure (van Gieson). Färbung der elastischen Fasern mit Resorcin-Fuchsin ; um zu unterscheiden, ob die elastischen Elemente in der Muskulatur oder im Bindegewebe sich befanden, wurde nach der Resorcin-Fuchsin-P'ärbung eine Nach- färbung mit Säurefuchsin-Pikrinsäure angewendet. Schiefferdecker {Bonn) . Trailtmanil, A., Beiträge zur vergleichenden Histologie des Dünndarmes der H a u s s ä u g e t i e r e (Inaug.-Diss. Zürich, 1907, 158 pp. m. 7 Tfln.). Untersucht wurden einzelne Teile des Dünndarmes von Pferd, Rind, Kalb, Schaf, Ziege, Schwein, Hund und Katze. Den soeben getöteten Tieren wurde möglichst schnell der Dünndarm heraus- genommen und aus diesem lebenswarm die zur Untersuchung nötigen Stückchen. Fixiert wurde in 4prozentiger Formollösung, CARNOYScher Flüssigkeit und hauptsächlich in einer heißgesättigten Sublimat-Koch- salzlösung mit einigen Tropfen Eisessig. Nach 24stündiger Fixierung in Sublimat wurden die Stücke 24 Stunden lang in fließendem Wasser ausgewaschen und in steigendem Alkohol mit Jodzusatz gehärtet. Einbettung hauptsächlich in Celloidin , daneben auch in Paraffin. Letzteres wurde ausschließlich bei den Untersuchungen über die Identität der Pylorus- und Duodenaldrüsen angewendet. Zum Nach- weise des Muskelgewebes wurde gefärbt mit Hämalauu-Säurefuchsin- Pikrinsäure und mit Hämatox3^Iin (Delafield) - Eosin. Die elastischen Fasern wurden dargestellt durch Resorcin-Fuchsin und Orcein nach Unna. Bei der Prüfung des färberischen Verhaltens der Pylorus- und Duodenaldrüsen wurde außer den Schleimfarben , wie Mucikarmin, Bismarckbraun, Muchämatein, Thionin, Toluidinblau eine große Reihe von sauren, basischen und neutralen Anilinfarben angewendet. Schiefferdecker {Bonn). Hocke , M. , Beiträge zur vergleichenden Histologie des Pankreas der wichtigsten Haussäugetiere 35Ü Referate. XXV, 3. (Hund, Katze, Schwein, Schaf, Ziege, Rind, Pferd) mit besonderer Berücksichtigung des „Ausführenden Apparates" und der „Pankreas- in sein" (Inaug.-Diss. Zürich, 1907, 126 pp. m. 25 Abb. im Text). Das in kleine Würfel von nicht über 5 mm Seite zerschnittene Material wurde in die bereitstehenden FixierungsÜüssigkeiten gelegt : Heißgesättigte Sublimatlösung mit Essigsäure , 4prozentige Formol- lösuug, Aceton, CARNOYSche Flüssigkeit. Einbettung in Paraffin nach Chloroform, Schnittdicke 5 bis 8 fx. Aufkleben der Schnitte auf den Objektträger mit Wasser; 24stündiges Trocknen im Ofen bei 35^. Zur Feststellung des Schleimgehaltes der Drüsenzellen Färbung mit Hämatoxylin (Delafield) und Eosin. Zur Darstellung der Sekret- kapillaren Färbung mit Eisenhämatoxylin nach Heidenhain meist mit Nachfärbung mit dünner wässeriger Eosinlösiing. Um die Affinität der Paukreas-Inseln zu prüfen, wurden Schnitte aus dem Pankreas ver- schiedener Tierarten mit verschiedenen Kern-, Plasma- und Schleim- farben gefärbt, wie Hämalaun, Pikrokarmin (Weigert), Säiirefuchsiu- Pikrinsäure, Nigrosin, mit den Methoden von Heidenhain und Ogata, Eosin, Safranin, Erythrosin, Kongorot, Toluidinblau, Orange, Resorcin- Fuchsin, Bismarckbraun, Mucikarmin und Hämatoxylin (Delafield). Die Schnitte von den Ausführungsgängen und Papillen der Pars intestinalis färbte Verf. mit Hämatoxylin (Delafield) und Eosin oder Kongorot, Hämalaun-Bisraarckbraun, Hämalaun-Mucikarmin, Hämalaun- Säurefuchsin-Pikrinsäure , Fuchsin-Resorciu , endlich auch nach der Methode von Heidenhain. Alle diese Färbungen ergaben sehr be- friedigende Resultate. Schiefferdecker {Bo7in). Shikiuaui, J,, Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Gallenblase (Anat. Hefte, H. 110 [Bd. XXXVI, H. 3], 1908, p. 555—599 m. 4 Tfln.). Untersucht wurden von Menschen: Erwachsener, Neugeborener, ein 4^/2 monatiger und ein 7 monatiger Fötus, ferner Triton cristatus, Schildkröte, Schwein, Schaf, Kalb, Kaninchen, Hund und Katze. Am brauchbarsten wurden die Präparate, wenn Verf. in der folgen- den Weise verfuhr : Die aus dem Körper sofort nach dem Tode entfernte Gallenblase der Tiere, sowie die bei der Sektion erhaltenen menschlichen Gallenblasen wurden , ohne sie aufzuschneiden , in Zenker sehe Flüssigkeit gebracht. Nach einer Stunde wurden die Gallenblasen in der Längsrichtung geöffnet und verblieben alsdann XXV, 3. Referate. 35 1 bis nach Ablauf von 24 Stunden in der Zenker sehen Flüssigkeit. Nachdem sie unter fließendem Wasser ausgewaschen waren, kamen sie in die aufsteigende Alkoholreihe. Die Gallenblasen der kleinen Wirbeltiere (Triton , Schildkröte , sowie der menschlichen Föten) wurden während des Verweilens in der Fixierungsflüssigkeit nicht angeschnitten. Stückchen , die in möglichst senkrechter Richtung zur Längsachse der Gallenblase aus derselben herausgeschnitten waren, wurden in Paraffin oder Celloidin eingebettet. Die Paraffin- schnitte waren gewöhnlich 5 bis 7"5 /t, die Celloidinschnitte 12*5 /t dick. Zur Färbung wurden verschiedene Methoden benutzt. Am besten waren die nach van Gieson und die Hämatoxylin-Eisenlack- färbung von M. Heidenhain. Weiter wurden alle gangbaren Me- thoden der Schleimfärbung benutzt, besonders mit Hämatoxylin (Delafield), Mucikarmin, Mucihämatin oder Rubin S (Disse). Schiefferdecker (Bo?in). Szily, A. V., Über d a s E n t s t e h e n eines f i b r i 1 1 ä r e n S t ü t z - gewebes im Embryo und dessen Verhältnis zur Glaskörper frage (Anat. Hefte, H. 107 [Bd. XXXV, H. 3], 1908, p. 651 — 757 m. 12 Tfln.). Da es sich in der vorliegenden Arbeit um die Feststellung von Interzellularbrücken und von anderen feinsten protoplasmatischen Ver- bindungen handelte , so lag die Hauptschwierigkeit auf technischem Gebiete. Untersucht wurden Schnittserien von Teleostiern, Sauro- psiden, Amphibien und Säugern (Kaninchen, Katze, Hund, Mensch). Für die jüngeren Stadien ist außer einer passenden Fixiernngsflüssig- keit auch hauptsächlich die Fixierungsdauer von großer Wichtigkeit. Die richtige Zeitdauer für die Fixierung zu trefi'en, ist nicht leicht und es bedarf stets einer nachträglichen Beurteilung unter dem Mikro- skope. Die Gefahr einer Überfixieruug mit ihren nachteiligen Folgen, wie Schrumpfung und körniger Zerfall der Fasern, ist stets eine größere als die der Unterfixierung. Bei jungen Stadien z. B. kann der Aufenthalt in der Fixierungsflüssigkeit oft nicht kurz genug be- messen werden (eine bis mehrere Minuten). Unter Berücksichtigung dieser Vorsichtsmaßregeln hat Verf. mit den drei hauptsächlich von ihm benutzten Fixierungsflüssigkeiten: Flejmming scher Mischung, Zenker- scher Flüssigkeit, von Lenhossek scher Lösung, fast immer gute Re- sultate erzielt. Die letztere^ hat die folgende Zusammensetzung: ^) Lenhossek, M. v. , Untersuchungen über Spermatogenese (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LI, 1898, p. 215). 352 Referate. XXV, 3. Konzentrierte Sublimatlösung (in einprozentig. Kochsalzlösung gelöst) 75 Teile Absoluter Alkohol 25 „ Eisessig 5 „ Verf. macht weiter darauf aufmerksam, daß es oft von großem Vor- teile ist, zur Einbettung Paraffin mit niedrigem Schmelzpunkte (46 ^'j zu nehmen und den Aufenthalt in dem Thermostaten möglichst zu verkürzen. Der schädliche Einfluß höherer Temperaturen auf die feinste Struktur der Gewebe war gerade bei diesen Untersuchungen überaus auffallend. Verf. teilt einen kleinen Kniff von von Kittlitz mit, dessen er sich namentlich fiir größere Objekte gerne bedient. Er bestellt darin, daß man das schwierige Objekt mit SpEESchem (überhitztem) Paraffin durchtränkt und später, direkt vor der end- gültigen Einbettung in die mit härterem weißem Paraffin gefüllte Form (Papierkästchen) überträgt. Diese kombinierte Methode ver- einigt alle günstigen Eigenschaften der beiden Paraffinarten in sich, ist leicht ausführbar und auch mit Rücksicht auf die Orientierung und Schnittfähigkeit bestens zu empfehlen. Die Schnittdicke variierte nach der Größe der Objekte, betrug durchschnittlich 10 /i. Gefärbt wurde anfangs mit Hämatoxylin (Delafield), Mayer schem Hämalaun oder Rubin S in der von von Lenhossek^ empfohlenen Überfärbung. Da jedoch bei dieser Methode die feinere Gewebsstruktur verloren geht, resp. unsichtbar wird, hat Verf. später immer darauf gesehen, gut differenzierte Schnitte zu bekommen, was auch stets möglich war unter Zuhilfenahme der üblichen Kontrastfärbungen , ohne daß die Faserfärbung dadurch wesentlich beeinträchtigt wurde. Als spezi- fische Färbung der Zellverbindung hat Verf. auch die von Schuberg" (1888, p. 192) empfohlene Methode (Färbung mit Dahlia und nach- trägliche Behandlung mit Tannin und Brechweiustein) mit gutem Er- folge versucht. Schieferdecker {Bonn). Klinge, E., Die inneren Irisschichten der Haussäuge- tiere (Anat. Hefte, H. 110 [Bd. XXXVI, H. 3], 1908, p. 603—710 m. 24 Figg. im Text). Untersucht wurde die normale Iris der Haussäugetiere (Pferd. Rind, Schaf, Ziege, Schwein, Hund und Katze). Es kam darauf an, ^) Lenhossek, M. V., Die Entwicklung des Glaskörpers. F. C. W. Vogel, Leipzig 1903. -) Schuberg, A., Untersucliungen über Zellverbindungen. I. Teü. (Zeitschr. f. wiss. Zoologie Bd. LXXIV, H. 2, p. 155-326.) XXV, o, Referate. 353 die inneren (hinteren) Irisscliicliten bei verschiedenem Stande der Pupille zu untersuchen. Je nach der erwünschten Pupillenweite hat Verf. verschiedene Tiere kurz vor der Tötung mit Mydriaticis bzw. ^[yoticis vorbehandelt. Um Präparate von maximaler Pupillenweite zu ei'halten, enukleierte Verf. die Bulbi nach der Tötung meist ohne vorherige Benutzung von pupillenerweiternden Mitteln. Bei durch Hirnschlag betäubten Tieren erweitert sich die Pupille nach der allgemeinen Blutentziehuug derart, daß mit wenigen Auisuahmen die gleichen Resultate zu erzielen sind , wie nach Applikation der von HoTTA benutzten Atropin-Cocaiu-Eintröpfelung (Atropin 1 Prozent und Cocain 2 Prozent) in den Lidsack und wie nach Anwendung der Chloroformnarkose. Verf. geht dann auf die Schwierigkeit ein, eine Myosis zu erzeugen : es wird deshalb auf das Original verwiesen. Die Fixierung der stets lebenswarm eingelegten Objekte geschah in Sublimat-Eisessig-Kochsalzlösung, Formaldehyd 4 Prozent und Form- aldehyd-Alkohol 4 Prozent. Das letztere Gemisch wurde in der Weise hergestellt, daß Verf. mit 30prozeutigem Alkohol das käufliche Formalin (40 Prozent Formaldehyd) bis auf 4 Prozent verdünnte. Ferner in Zenker scher Flüssigkeit und in Carnoy scher Flüssigkeit (absoluter Alkohol 3 Teile und Eisessig 1 Teil, oder auch: absoluter Alkohol 6 Teile, Chloroform 3 Teile, Eisessig 1 Teil ; oder in der Modifikation nach VAN Beneden und Neyt: absoluter Alkohol und Eisessig zu gleichen Teilen). Obwohl die einzelneu Gewebsteile nach der Carnoy- schen Methode vorzüglich fixiert waren, war absolut keine Depigmen- tierung der Schnitte zu erzielen, resp. es war nach der Depigmentieruug keine Kernfärbung zu erzielen. Auch Sublimat -Eisessig -Kochsalz- lösung wirkte recht unzuverlässig, da nach der Depigmentierung die Kerne die Farbe entweder gar nicht oder nur sehr mangelhaft auf- nahmen. Formaldehyd -Alkohol und ZenkerscIic Flüssigkeit ergaben dagegen in jeder Hinsicht zufriedenstellende Resultate. Einbettung meist in Celloidin. Die Paraffinmethode ließ sich nicht verwenden, da die auf dem Objektträger aufgeklebten Schnitte bei der Behand- lung mit den zur Depigmentieruug dienenden Flüssigkeiten sich stets vom Objektträger ablösten oder durch Zerstörung der Gewebsteile unbrauchbar wurden. Von jedem Objekte wurden Radiär-, Tangential- und Flächenschnitte angefertigt; stets wurde eine größere Anzahl derselben der Depigmentierung nach der von Grunert angewandten Methode von Alfieri^ unterworfen: Nach Abspülen in Wasser bringt ^) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 372—373. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 3. 23 354 Referate. XXV, 3. mau die Schnitte 24 bis 36 Stunden lang in eine Lösung von Kalium hypermanganicum von' 1:2000, Sonnenlicht vermag den Depigmen- tierungsvorgang nicht unwesentlich zu beschleunigen. Nachdem die Schnitte eine braune Farbe angenommen haben , bringt man sie bis zur vollkommenen Entfärbung in eine Oxalsäurelösuug von 1 : 300. Bei den untersuchten Haustieren war namentlich das Pigment der Wiederkäuer-Iris (Kind, Schaf, Ziege) besonders schwierig zu ent- fernen; Schnitte von diesen Tieren mußten wenigstens 36 Stunden in der Lösung von Kalium hypermanganicum verbleiben und selbst Sonnenlicht bewirkte keine Abkürzung. Es ist übrigens vorteilhafter für die Schnitte, wenn sie länger in der Lösung von Kalium hyper- manganicum verbleiben , sie brauchen dann nur kurze Zeit in der Oxalsäure zu liegen (wenige Minuten) und werden nicht so spröde. Kernfärbung mit Hämatoxylin, Nachfärbuug mit Eosin, Säurefuchsin- Pikrinsäure nach VAN Gieson und Resorcin-Fuchsin zur Färbung des elastischen Gewebes. Die depigmentierten Schnitte, die jede Farbe schwer annehmen, wurden nur mit Hämatoxylin gefärbt 5 das Heidex- HAiNSche Eisenhämatoxylin bot keine Vorteile. Nachdem die Schnitte mindestens 48 Stunden in Weigerts Hämatoxylin gelegen hatten, hat Verf. auch ihre Ditferenzierung in der von Grunert^ angegebenen Säurefuchsin -Pikriusäuremischung vorgenommen; die besten Resultate ergab aber immer nach der Depigmentierung die einfache Hämatoxylin- färbung , vor allem auch deshalb , da bei dieser Methode stets die Dilatatorschicht sich deutlich von dem Stroma einerseits und der Epithelschicht anderseits abhob. Eine Nachfärbung mit Eosin war bei solchen Schnitten ohne besondere Wirkung. Schiefferdecher {Bonn). Read, E. A. , Contribution to the knowledge of the olfactory apparatus in dog, cat and man (The Americ. Journ. of Anat. vol. VHI, 1908, no. 1, p. 17 — 17 w. 17 pl. a. 1 tig.). Verf. hat zu seiner Untersuchung die folgenden Methoden ver- wendet: 1) Die schnelle GoLGi-Method e: Das frische Ge- webe wurde eingelegt in eine Mischung von einer Sprozentigen Lösung von Kaliumbichromat 2 Teile und einer einprozentigen Osmium- säurelösung ein Teil für 3 bis 4 Tage im Dunkeln. Die Flüssigkeit wurde wenigstens einmal gewechselt. Dann kamen die Präparate 1) Arch. f. Augenheilk. Bd. XXXVI, 1898. XXV, 3. Referate. 355. für 3 bis 4 Tage in eine •'^/^prozentige Lösung- von Silbernitrat, die in der ersten halben Stunde 3- bis 4-mal gewechselt wurde, bis sich keine Niederschläge mehr bildeten. Entwässerung so schnell wie möglich, dann Übertragen in eine l'öprozentige, 3prozentige und Sprozentige Celloidinlösung. In der letzteren konnte das Präparat ohne Schaden einen halben Tag bleiben, und wurde dann in ihr auch weiter eingebettet. Härtung in Chloroformdämpfen innerhalb von 2 bis 12 Stunden. Beim Schneiden wurde zur Befeuchtung 95prozentiger Alkohol verwendet. Schnittdicke 60 bis 80 jx. Bei Hund und Katze waren die Resultate sehr gut: Riecbzellen mit ihren Achsenzylindern, ihren peripheren Fortsätzen und den Riech- härchen waren sichtbar ; sensorische Zellen fanden sich in dem Jakobson sehen Orgaue der Katze. Beim Menschen waren die Resultate infolge des nicht ganz frischen Materiales weniger be- friedigend, immerhin konnten die nötigen Beobachtungen gemacht werden. 2) Die gemischte GoLoi-Methode: Gute Resultate bei Hund und Maus. Das Gewebe wurde ebenso behandelt wie bei der vorigen Methode, nur wurde es vorher in Müller scher Plüssig- keit fixiert. Die Nerven konnten auf weite Entfernung hin, selbst durch die Siebplatte bis zu dem Bulbus olfactorius hin verfolgt werden. Riechzellen waren deutlich und sensorische Zellen in dem Jakobson scheu Organe der Maus. 3) Goldchlorid: Sowohl die Ranvier sehe Goldchlorid-Ameisensäure-Methode wie auch die Modi- fikation von Hardesty wurden verwendet. Die Schwierigkeit bei der Anwendung der ersteren Methode liegt darin, daß das Epithel bei frischem Materiale leicht abfällt. Von menschlichem Materiale wurdeu mit dieser Methode gute Präparate erhalten. Die Modi- fikation von Hardesty ergab gute Resultate bei Hund und Katze. Das Material von Hund war 8 Jahre lang in lOprozentigem Formol gewesen , das von der Katze nur wenige Wochen. Sclmittdicke 1 bis 20 fJi. Die Stützzellen färbten sich ebensogut, wie die Riech- zellen , ja es war die ganze Schleimhaut gefärbt. Die dickeren Schnitte waren für die Riechzellen unbrauchbar. Bei einer Schnitt- dicke von 1 bis 3 /i zeigten sich die Riechzellen und in einigen Fällen ein sehr kleiner Teil des Achsenzylinders. Der Verlauf dieses ist wellenförmig und kann nur in dicken Schnitten verfolgt werden. Der periphere Fortsatz war leicht aufzufinden. 4) Die Methylenblaumethode. Es wurde die HuBERSche Modifikation angewendet. Riechzellen mit ihren beiden Fortsätzen wurden sicht- bar bei Hund und Katze. Auch hier fiel, wie bei der Goldchlorid- 23* 356 Referate. XXV, 3. methode, das Epithel leicht ab. 5) Macerationsmethode. Vergoldete Stücke uud frische Stücke kamen in eine Mischimg von Formol 2 cc und physiologischer Kochsalzlösung 1 Liter auf 40 Minuten. Riechzellen mit ihren beiden Fortsätzen wurden bei Hund und Katze erhalten. Schiefferdecker {Bonn). C. 31ikroorg anisinen, CfUilliermond , A. , Contribution ä l'etude cytologique des Bacillus endospores (Arch. f. Protistenkunde Bd. XII, 1908, H. 1, 2, p. 9). Verf. probierte sehr zahlreiche Fixierungsmittel und verfuhr im "wesentlichen nach ähnlichen Methoden wie bei seinen Untersuchungen an Cyanophyceen^. Die Mehrzahl der angewandten Fixierungsmittel gab gute Resultate, insbesondere die von Mann und Lavdovsky emp- fohlenen Gemische, Pikroformol, Formalin, Lenhosseks, Tellyesnickys, Zenkers, Flemmings und Perenyis Flüssigkeit. Zu bevorzugen sind für die Differenzierung der Chromatingranula die Flüssigkeitsgemische nach Perenyi, Lenhossek und Zenker. Behandlung mit Alkohol und selbst Fixierung in der Flamme genügen für die Differenzierung der metachroraatischen Körnchen ; um gute Differenzierungen von ihnen zu erhalten, bediene man sich des Formols und der Lavdovsky sehen und Lenhossek sehen Flüssigkeiten. — Zahlreiche Färbemittel wurden geprüft. Methylenblau, Tolui- diublau, Kresylblau BB, Thionin, Hämalaun und Unnas Blau geben zu- weilen brauchbare Resultate, heben aber die Chromatinkörnchen nicht genügend hervor ; zum Nachweis der metachromatischen Körnchen sind sie ausreichend, — besonders Kresylblau BB färbt sie gut. Die besten Färbemittel sind Eisenhämatoxylin, Kupferhämatoxylin, Safranin, Borrels Blau und Giemsas Flüssigkeit. Bei Verwendung von Eisen- hämatoxylin färben sich die Chromatinkörnchen schwarz. Das Cyto- plasma nimmt einen grauen Ton an ; es empfiehlt sich Nachfärbung des Plasmas mit Erythrosin , Eosin oder Lichtgrün. Auch Kupfer- hämatoxylin gibt gute Differenzierungen, allerdings nicht so gute wie Eisenhämatoxylin ; die Chromatinkörnchen färben sich weniger klar ; dafür färben sich die metachromatischen Granula sehr schön. 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXIII, 1906, p. 496. XXV, 3. Referate. 357 Safranin färbt sehr gut die Chromatinkörncben und die Körnchen, welche die ersten Anlagen der Sporen darstellen. Mit Safranin und Lichtgrün kann man sogar — allerdings nur bei vorsichtigem Arbeiten — eine Ditferenzierung derart erhalten, daß die Chromatinkörncben sich rot und die anderen Teile der Zelle grün färben ; doch ist die Färbung schwer zu erreichen und die Methode daher nicht zu emp- fehlen. BoRRELs Blau und Giemsas Flüssigkeit geben fast ebenso gute Resultate wie Eisenhämatoxylin. Das Cytoplasma färbt sieh blau und Chromatinkörncben dunkelviolett. Die von A. Meyer augewandten Methoden gaben dem Verf. keine guten Resultate. Die nach den angeführten Methoden hergestellten Präparate sind gut haltbar in Kanadabalsam. Es empfiehlt sich , über absoluten Alkohol und Xylol in Balsam zu übertragen, da bei direkter Ein- bettung trocken gewordener Objekte doch Schrumpfung der Zellen eintritt. Versuche , die Bakterien intravital in Lösungen von Neutralrot zu färben, lieferten keine befriedigenden Resultate. Küster {Halle a. S.). Harrisou, F. C, Eine neue Geißelfärbung für Pseudo- monas radicicola (Zentralbl. f. ßakteriol. Abt. 2, Ref. Bd. XL, 1907, No. 11, 12, p. 352). Von der Agarkultur wird eine Öse abgehoben und auf dem Objektträger ausgestrichen; nachdem das Material lufttrocken ge- worden, begießt man es einen Augenblick mit gesättigter alkoholischer Lösung von Gentianaviolett, spült unter der Wasserleitung ab, trocknet zwischen Fließpapier und untersucht mit Ölimmersion. Der Schleim, in welchem die Zellen liegen, erscheint alsdann tief und gleichmäßig gefärbt, die Zellen in ihm sind fast farblos ; die unregelmäßige Dichtig- keit des Protoplasmas ist dabei deutlich sichtbar. Die einzige polare Geißel bleibt ebenfalls farblos und tritt als heller Streifen hervor, wenigstens an denjenigen Stellen des Präparates, an welchen das Material sehr dünn ausgestrichen ist. Anstatt Gentianaviolett kann man auch Methylenblau, Fuchsin u. a. verwenden. Durch Behandlung der Objekte mit Lugol scher Lösung nach der Färbung mit den Anilinfarben wird der Farbton noch Küster (Halle a. S.). 358 Referate. XXV, 3. Heinemanil, P. G., Ein Ersatz für Kartoffeln als Kultur- boden (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 2, Ref. Bd. XL, 1907, No. 11, 12, p. 361). In 600 cc Wasser werden 10 g Agar gelöst. Ferner wurden in 200 cc Wasser je 2 g von Kalium- und Xatriumbiphospbat, Magne- siumsulfat , Kalziumchlorid , Ammouiumlaktat und Asparagin gelöst. Beide Lösungen werden beiß miteinander gemischt; dann werden in dem Gemiscb nocb 10 g Pepton gelöst. Hiernacb wird filtriert und neutralisiert. Zu dem Filtrat werden 30 g gut gereinigte , fein zerriebene Stärke zugesetzt. Küster (Halle a. S.). Jurewitsch, W., Kartoffeluäbrbouillon zur Züchtung der Tuberkelbazillen (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1 , Orig. Bd. XLVII, 1908, No 5, p. 664). Es werden Kartoffeln auf dem Reibeisen zerrieben, und der er- haltene Brei wird — je nach seinem Saftreichtum • — mit der gleichen oder der doppelten Quantität Wasser vermischt. Die Masse bleibt bis zum nächsten Tage kalt stehen ; dann wird die Flüssigkeit nach Abpressen durch Leinewand mit dem gleichen Volumen Fleischinfus gemischt. Hierzu 0"5 Prozent Pepton (Chapoteau oder Witte) und 0"25 Prozent Kochsalz oder Monokaliumphosphat. Nach Kochen bis zu völliger Lösung des Peptons heiß filtriert, mit 3 Prozent Glyzerin versetzt, mit Soda ausgesprochen alkalisch gemacht, ^j^ bis "^j^ Stunde bei 118 bis 120^ gekocht, in Gläser verteilt und sterilisiert. Verf. beschreibt eingehend seine Methoden, auf schwimmenden Kartoflelstück- chen die Tuberkelbakterien auszusäen. Küster {Halle a. 8.). Betegh, L. V. , Neue dif fer ential-diagnostische Färbe- methode für Tuberkel-, Perlsucht- und andere säurefeste Bazillen, nebst Strukturstudien bei verschiedenen säurefesten Bakterienarten (Zen- tralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVII, 1908, H. 5, p. 654). Folgendes Verfahren beschreibt Verf. als „b -Tolin- Methode" : Material aus einer Reinkultur wird dünn aufgestrichen , lufttrocken über der Flamme fixiert, mit 2 bis 3 Tropfen löprozentiger Salpeter- säurelösung gebeizt und über der Flamme erhitzt, bis außerhalb derselben feine Dämpfe emporsteigen ; Abspülen mit Wasser. Hier- nach wird ein großer Tropfen Methylenblau nach Löffler (oder XXV, 3. Referate. 359 Methylenviolett nach Löfflers Methode blau hergestellt) mit 2 bis 3 Tropfen Karbolfuchsin oder beide Farben ää aufgetragen ; dann wieder Erhitzen über der Flamme, bis leichte Dämpfe emporsteigen. Gründliches Abwaschen und Entfärben mit 60prozentigem Alkohol, bis keine Farbe mehr abgeht. Abwaschen mit Wasser, Trocknen, Kauadabalsam. Das Verfahren macht in Tuberkel-, Perlsucht- und Vogeltuberkulose- bazillen, sowie in anderen säurefesten Bakterien Strukturunterschiede erkennbar, welche im Sputum die verschiedenen Mikroorganismen zu unterscheiden gestatten. Küster {Halle a. S.). Hendersou, L. J., a. Webster, H. B., The preservation of neutrality in culture media with the aid of Phosphates (Journ. of med. research. vol. XVI, 1907; vgl. Ref. in Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XIX, 1908, Xo. 19, p. 814). Um schwach alkalische oder schwach saure Nährböden zu neu- tralisieren setzen die Verff. einige cc einer mäßig konzentrierten sauren bz^w. alkalischen Phosphatlösung zu. Küster {Halle a. S.j. SeifFert , 0. , Vorrichtung zur qualitativen und quanti- tativen Gasbestimmung bei gasentwickelnden anaeroben Bakterien (München, med. Wocheuschr. 1907, No. 46, p. 2285). Verf. gießt in das bis zu bestimmter Höhe mit Gelatine gefüllte Reagenzglas sterilisiertes Paraffin (Schmelzpunkt 45 bis 50^) auf. Bei der Gasentwicklung wird der Paraffinpfropf in die Höhe ge- trieben. Verf. beschreibt eine Vorrichtung zum Auffangen des an- gesammelten Gases. Küster {Halle a. S.). Fehrs u. Sachs-Müke, Beitrag zur Züchtung und Isolie- rung von Anaerobiern (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVIII, 1908, No. 1, p. 122). Verff. verfahren ähnlich wie Liefmaxn"'^, legen aber anstatt Glimmerplatten gewöhnliche große Glasplatten (z. B. von Photographienj auf die Nährböden und gewinnen dadurch eine sehr große , dem Sauerstoff nicht zugängliche Zone ; in dieser gedeihen die Anaeroben auch ohne Zusatz reduzierender Mittel. Küster {Halle a. S.). 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXV, 1908, p. 121. 360 Referate. XXV, 3. Le Dantec, Xouveau procede pour la culture des anae- robies (Compt. Rend. Soc. Biol. t. LXIII, 1907, p. 135: vgl. Ref. in Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XIX, 1908, No. 19, p. 813). Verf. kultiviert anaerobe Bakterien in Kapillaren, in welche er die geimpfte Bouillon aufsteigen läßt: Sauerstoff diffundiert in ka- pillaren Flüssigkeitsschichten nur langsam. Küster {Halle a. S.). Rüzicka , Yl. , D e p r e s s i o n s z u s t ä n d e und R e g ii 1 a t i o n s - Vorgänge bei dem B a c t. a n t h r a c i s (Arch. f. Pro- tistenkunde Bd. X, 1907, p. 247). Die Sporoidmassen, die Verf. bei Kultur des Bacterium authracis auf glyzerinlialtigem Agar sich bilden sah, fixiert und färbt man auf folgende Weise. I. Man mischt gleiche Teile einer konzentrierten wässerigen Sublimatlösung und einer mit Wasser verdünnten alkoholischen Fuchsin- lösung. Der sich bildende Niederschlag behindert die Färbung nicht, da er beim Abspülen mit Wasser weggeschwemmt wird; Gemisch, das schon lange stehen geblieben ist, soll man nicht benutzen. Die Flüssigkeit fixiert und färbt gleichzeitig das lufttrockene Präparat: ein Teil der sporoiden Körper wird dabei rot. Im Zentrum ist die Rotfärbung am stärksten ; bei manchen Kernen läßt sich eine dünne, ungefärbte , peripherische unter dem umhüllenden Chromatinsaum liegende Zone erkennen. II. Verf. fixiert das lufttrockene Material mit konzentrierter wässeriger Sublimatlösftng und färbt mit verdünnter Fuchsinlösung : hiernach Behandlung mit Lugol scher Lösung. Nur wenige Sporoid- körper bleiben ungefärbt. — Die sich färbenden werden rein blau, bläulich oder dunkelviolett, vermutlich entsprechend ihren verschie- denen Eutwicklungsstadien. III. In Lugol scher Lösung ohne weiteren Zusatz färben sich die Sporoidkörper gelb bis braun. IV. Auch die von Dietrich und Liebermeister vorgeschlagene Methode ist empfehlenswert : kurz nach der Vermischung des Dimethyl- paraphenyleudiamins und a-Naphthols mit dem die Bakterienprobe enthaltenden hängenden Tropfen tritt sattblaue Färbung der Sporoid- körper ein. — Verf. gibt weiterhin Mitteilungen über das mikrochemische Ver- halten der Sporoidkörper und ihr Löslichkeitsverhalteu. Küster {Halle a. S.). XXV, 3. Referate. 361 Nonotte, M., et Demaiiche, R., Dosage de Tindol dans les cultures microbiennes (Compt. Reud, Soc. Biol. t. LXIV, 1908, p. 658; vgl. Bull. Inst. Pasteur t. VI, 1908, p. 578). Nonotte, M., et Demauche, R., Sur la rech er che de l'indol dans les cultures microbiennes (Compt. Rend. Soc. Biol. t. LXIV, 1908, p. 494; vgl. Bull. Inst. Pasteur t. VI, 1908, p. 578). Zu einer Kultur (Peptonwasser) setzten die Verff. 1 cc einer Lösung vonKNOo (^/j^prozentig) und 8 Tropfen konzentrierte Schwefel- säure. Die Reaktion ist dann besonders empfindlich (Indolverdünnung 1:4000000), wenn mau den oberen Teil der Flüssigkeit bis zu Siedetemperatur erhitzt (Indolnachweis in 4 Stunden alter Colikultur). Küster {Halle a. S.). Buard , G. , Recherche de l'indol dans les cultures microbiennes (Compt. Rend. Soc. Biol. t. LXV, 1908, p. 158; vgl. Ref. in Bull. Inst. Pasteur t. VI, 1908, p. 855). Eine besonders empfindliche Methode, Indol in Bakterienkiüturen nachzuweisen, ist nach Verf. folgende. Zu 10 cc einer 15 bis 20 Stunden alten Kultur (Peptonwasser) werden 5 bis 6 cc absoluter Alkohol zugefügt, dann nach Mischung noch 1 cc einer alkoholischen Vanilliulösung (0'02prozentig) und schließ- lich 3 cc reiner Salzsäure. Wenn Indol vorhanden ist, entwickelt sich sogleich Rosafärbung, die in den darauf folgenden Stunden noch dunkler wird. Küster {Halle a. S.). D. Botanisches, Bachmaiiu, E. , Die Rhizoidenzone granitbewohnender Flechten (Jahrb. f. wiss. Bot. Bd. XLIV, 1907, p. 1). Über die Einzelheiten der Beziehungen zwischen granitbewohnen- den Flechten und ihrem Substrat sind wir noch sehr ungenügend unterrichtet. Die Undurchsichtigkeit der meisten Silikate erschwert allen Kieselflechten gegenüber die Untersuchung sehr; Dünnschliffe lieferten keine brauchbaren Resultate. 362 Referate. XXV, o. Befriedigende Ergebnisse lieferte die Untersuchung der Glimmer- kristalle flechtenbewohnter Granitstücke (Lesesteine von den Weg- rändern oder frisch vom Fels geschlagene Proben) : Grobkörniger Granit liefert bessere Aufschlüsse als feinkörniger; weißer Glimmer ist dem braunen Magnesia- und Eisenglimmer weit vorzuziehen. „Der Glimmerkristall kann senkrecht zur Gesteinsoberfläche und zugleich zur Ausbreitung des Thallus gerichtet sein oder ihr parallel laufen und an der Oberfläche liegen oder endlich eine Zwischenstellung einnehmen. Im ersten und dritten Fall breitet sich die Flechte auf den Kristallrändern, sozusagen auf den ,Schiclitenköpfen', im zweiten Fall auf der , Schichtungsfläche' des Glimmerkristalls aus. Mit Leichtig- keit läßt sich konstatieren, daß es den Flechtenkomponenten weit schwerer gelingt, auf den glatten Glimmerflächen Fuß zu fassen, als auf den fein gerieften Außenrändern der Kristalle. Deshalb findet man nicht selten inmitten eines ausgebreiteten Flechtenthallus einzelne noch gar nicht oder nur teilweise vom Rand her überwachsene, glänzende Kristallflächen. Sie sind zur mikroskopischen Untersuchung besonders geeignet und müssen zu diesem Zweck mit dem Skalpell sorgfältig Blatt für Blatt abgehoben werden. Meistens werden sich diese Blätter noch weiter spalten lassen zu möglichst dünnen La- mellen, die serienweise auf dem Deckglase anzuordnen sind und dann in der Reihenfolge ihrer ehemaligen Aneinauderlagerung untersucht werden müssen , wenn man feststellen will , in welchem Grade der Kristall von Flechtenbestandteilen befallen ist." Die senkrecht ge- lagerten Glimmerkristalle , die man durch Zerschlagen des Granit- stücks der Untersuchung zugänglich machen muß, sind ohne Ausnahme von Hyphen durchsetzt und meist auch mit Gonidien erfüllt. Bei starker Durchwucherung mit Hyphen verliert der Glimmer sein charakteristisches Aussehen und wird kreideartig weiß. Über die chemische Wirkung der Pilzhyphen auf den Glimmer geben die au den Glimmerlamellen sichtbaren Ätzfiguren Aufschluß, Avelche besonders schön von den torulösen Hyphen des Protothallus. manchmal auch vom Paraplektenchym und dem strangartigen Gewebe gebildet werden. „Paraplektenchymatische Zellgruppen sind oft durch größere oder kleinere Lücken voneinander getrennt, welche durch einzelne Verbindungshyphen überbrückt werden. Verfolgt man den Verlauf einer solchen, so bemerkt man, wie ihr Bild um so unschärfer wird, je näher man beim Verschieben des Präparates ihrem anderen Ende kommt, und daß durch Senkung oder Hebung des Tubus . . . das Bild wieder scharf wird", mit anderen Worten : die Verbindungs- XXV, 3. Referate. 363 byphen sind unter spitzem Winkel durcli den Glimmer liindurcli- gewacbsen , was nur möglich ist , wenn die Hyphen den Glimmer chemisch lösen können. Küster [Halle a. 8.). Docters van Leeuwen-Reijnvaan, W. n. J., Über das Färben der jüngsten Zellwände in Vegetationspunkten (Ber. d. d. bot. Ges. Bd. XXV, 1907, p. 470). Die Schwierigkeit, in Schnitten durch Vegetationspunkte die jugendlichen Zellmembranen hinreichend deutlich zu machen, suchen Verff. mit Hilfe folgender beiden Methoden zu beheben. 1) Kernschwarz-Methode. — Sie gab bei Untersuchung von Wurzelspitzen u. a. gute Resultate. Die Schnitte werden l^/g Stunden lang mit Kernschwarz (Grübler) und 24 bis 48 Stunden mit Safranin- lösung nach Pfitzner : Safranin lg Alkohol absol 100 cc Wasser 200 n gefärbt. Hierauf Differenzierung in Alkohol oder Salzsäurealkohol. Das Chromatin wird schwarz, die Nukleoleu rot, das Plasma rosa- farbig, die Zellwäude hellrot und gut zu sehen. Die Färbung ist gut haltbar. Ein Nachteil der Methode liegt darin, daß die Präpa- rate oft nicht gut genug gelingen, indem der Grad, in welchem das Safranin auszuziehen ist, schwer zu treffen ist. Eine Kombination von Kernschwarz mit Hansens Hämatoxylin gab ebenfalls gute Resultate : Mit Kernschwarz werden die Schnitte eine halbe Stunde , mit Hämatoxylin 5 Minuten gefärbt. Leider wird auch das Cytoplasma dunkel, so daß man mit hellem Licht arbeiten muß. 2) Lichtgrün-Methode. — Lichtgrün färbt die Wände gut, als Plasmafarbstoff aber gleichzeitig auch den Inhalt der Zellen. In einprozentiger oder schwächerer alkoholischer Lösung färbt Lichtgrün sehr schnell , so daß man die Präparate vielfach nur einzutauchen braucht. Verff. nahmen folgende Mischung: Ol g Lichtgrün in 100 Teilen Wasser, Formalin (40 "/o) 4 Teile; wie jeder sieht, ist aus ihrer Angabe nichts über die Zusammen- setzung der Lösung zu entnehmen. Safranin-Lichtgrün färbt alles grün außer den Nukleolen, welche rot werden. Gute Resultate lieferte eine Kombination von Lichtgrün 364 Referute. XXV, 3. mit Hansens Hämatoxylin : Die Präparate blieben 3 bis 10 Minuten in Hämatoxylin, kamen auf 4 bis 6 Minuten in Licbtgrün-Lösung und wurden in TOprozentigem Alkohol abgespült. An gut gelungenen Präparaten sind die Zellkerne dunkel, das Cytoplasma grünblau, die Zellwände dunkelviolett oder (bei geringerer Einwirkung des Hämat- oxylins) dunkelgrün und deutlich wahrnehmbar. Am deutlichsten sind die Präparate, wenn die Zellwände violett gefärbt sind. — Über die Haltbarkeit der nach dem Lichtgrün -Verfahren gefärbten Präparate können Verflf. noch keine Auskunft geben. Küster {Halle a. S). Nestler , A. , Die hautreizende Wirkung der Primula m 0 1 1 i s Hook, und P r. A r e n d s i i P a x (Ber. d, d. bot. Ges. Bd. XXVI a, 1908, H. 7, p. 468). Nestler, A., Über „hautreizende" Pflanzen (Lotos Bd. LVI, 1908, H. 6). Verf. schildert neben anderem die mikrochemischen Eigenschaften der von Primeln und anderen hautreizenden Pflanzen gelieferten Sekrete. Hebt man das Sekret von Primula obconica und Pr. mollis auf einem Objektträger ab, so zeigt sich, daß das Sekret der erstgenannten Spezies sehr leicht in schönen großen Kristallen auskristallisiert, das der anderen Art niemals Kristalle bildet. Wird das Sekret von Pr. mollis in Äther gelöst, so bilden sich nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erst nach 24 Stunden Kristalle, die im Gegensatz zu denen des Obconica -Sekrets in Alkohol unlöslich zu sein scheinen. Das Sekret von Pr. Arendsii kristallisiert ähnlich wie das von Pr. obconica auf dem Objektträger aus : läßt man zu der mit einem Deckglas bedeckten Substanz einen Tropfen konzentrierter Schwefel- säure zufließen, so Averden die homogene Grundsubstanz, sowie die Kristalle sofort mit anfangs grünlich gelber , dann smaragd- oder dunkelgrüner Farbe gelöst ; nach 10 Minuten , in anderen Fällen später entwickeln sich sehr lange blaue Kristalle, daneben tiefblaue, aus feinen blauen Nadeln gebildete Kugeln. Ebenso verhält sich das Sekret von Pr. obconica. Sekretmasse, die man von den Blättern des Cypripedium specta- bile gewinnt, bildet niemals Kristalle, färbt sich kräftig mit Safranin, Anilinblau, Lackmus u. a. und bildet nach Zusatz von 2prozentiger Kalilauge schöne Myelinformen; diese Eigentümlichkeit spricht für den Gehalt des Sekrets an Ölsäure. Nach Zusatz von Ammoniak färbt sich das Sekret karminrot bis violettrot, ähnlich wie die Chinone. Küster {Halle a. S.). XXV, 3. Referate. 3G5 Recueil de l'Institut botanique (Universite de Bru- X eil es) publie par L. Errera. T. III et VII. Bru- xelles 1908. Das Erscbeiuen der zwei weiteren^ Bände des botanischen Brüs- seler „Recueil" veranlaßt uns, auf einige schon früher in belgischen oder französischen Zeitschriften veröffentlichte Abhandlungen ein zugehen, die bisher in dieser Zeitschrift noch nicht besprochen wor- den sind. De Wildeman (Recherches au sujet de Finfluence de la tempe- rature sur la marche , la duree et la frequence de la caryocinese dans le r^gne vegetal 1891") fixierte Cosmarium vorzugsweise mit der Kleinenberg sehen Flüssigkeit und färbte mit Boraxkarmin ; nach dem Auswaschen kommen die Objekte in allmählich eindickendes Glyzerin. Der Nukleolus ist rot, der übrige Teil des Kernes rosa gefärbt. Closterium wurde mit Alkohol oder besser mit Chromeisessig fixiert, dann mit Karmin oder Pikronigrosin gefärbt ; Auswaschen 5 Alko- hol steigender Konzentration, Nelken- oder Cajeputöl, Kanadabalsam. Laurent (Recherches sur les nodosites radicales des Legumi- neuses, 1891) bringt Angaben über die Kultur der KnöUchenbakterien, de Wevre (Recherches experimentales sur le Phycomyces nitens Kunze 1891, Recherches experimentales sur le Rhizopus nigricans Ehrenberg 1892) Angaben über die der Schimmelpilze, Ensgh (Notes sur les Myxomycetes 1899) kultivierte Chondrioderma. Küster {Halle a. S.). Kauffman, C. H. , A contribution to the physiology of the Saprolegniaceae with special reference to the variations of the sexual organs (Ann. of Bot. vol. XXII, 1908, p. 361). Bei der Isolierung von Saprolegniaceen verfährt Verf. — ähn- lich wie Hörn '^ u. a. — in der Weise, daß er auf festen Nährböden das Pilzmyzel sich ausbreiten läßt. Bei dem schnellen Wachstum des letzteren werden die mit ihm ausgesäten Bakterien schnell von ihm überholt. Von dem Saum der Myzelplatte wird ein Stückchen entnommen und in Wasser übertragen. In diesem kann man die 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 204. 2) Über den ersten Teü der Arbeit wurde bereits referiert in Bd. VIII, 1891, p. 533. ^) Vgl. Annales mycologici, 1904. 366 Referate. Myzelstücke leicht zur Zoosporeiibildung kommen sehen. Die Zoo- sporen trennt man voneinander auf dem Wege der Verdünnung, so daß man schließlich zu einer Kultur aus einer Zoospore kommt. Küster {Halle a. S.). Olive, F. W. , Sexual cell fusions and vegetative nu- clear divisions in the rusts (Ann. of Bot. vol. XXII, 1908, p. 331). Für die Fixierung des üredineenmaterials bewährten sich be- sonders Flemmings Chromosmiumessigsäure und Juels Ziukchorid- Chlorideisessig-Alkohol ; die JuELSche Mischung macht besonders die Zellfusionen deutlich und gestattet eine kräftige P'ärbung der Zell- wände. Zum Färben wurde Flemmings Dreifarbengeraisch genommen. Küster (Halle a. S.). 3Ioliscli , H. , Über einige angeblich leuchtende Pilze (Wiesners Festschrift, Wien 1908, p. 19). Polyporus sulfureus läßt sich auf künstlichen Nährsubstrateu leicht kultivieren, wenn man von kleinen Stückchen des noch wachsenden Hutes ausgeht. Fruchtkörper beobachtete Verf. nie ; dagegen wurden in den Kulturen Konidien in außerordentlich reichlicher Menge be- obachtet. Konidientragendes Myzel liefert in Alkohol unter dem Deck- glas zahlreiche farblose Kristalle und Aggregate von Kristallnädelchen. Collybia cirrhata wächst auf Brot gut und bildet darauf große Mengen von Sklerotien. Küster {Halle a. S.). E, llineralog isch - Petvographisch es, Physikalisch es. Heß , E. , Das mikroskopische Aussehen von gehärte- tem und übersättigtem Stahl (Metallurgie Bd. V, 1908, p. 324—326). Die Abhandlung besteht aus einem vorläufigen Bericht über die von Arnold, Mg. Williams und Howe mit den Mitteln der Carnegie- Stiftimg ausgeführten Untersuchungen bezüglich der Mikrostruktur des Stahles bei verschiedenen Temperaturen. Danach scheint der erhitzte Stahl oberhalb seines kritischen Punktes aus Austenit (einer XXV, 3. Referate. 367 festen Lösung- von Kohlenstoff in Eisen) zu bestehen , während er unterhalb derselben nach langsamer Abkühlung in Ferrit und Zementit zu zerfallen pflegt. Da am Rande der Proben die Abkühlungs- geschwindigkeit der. Proben höher als in der Mitte ist, lassen die Mikrophotographien am Rande annähernd dasjenige Gefüge, welches den hohen Temperaturen entspricht, erkennen, in der Mitte hingegen ist der Zerfall in Ferrit und Zementit sichtbar. Trotz schneller Ab- schreckung pflegen Hardenit- und Zemeutitkristalle (Fe.^^C resp. FCgC) in gehärtetem übersättigtem Stahl mikroskopisch nachweisbar zu sein ; weniger sicher und nur als Übergangsstrukturen zwischen Austenit einerseits und Ferrit-Zementit anderseits erscheinen Martensit, Troostit und Sorbit in den untersuchten Proben, deren Kohlenstoff mehr als 0'9 Prozent betrug. E. Sommerfeldt (Tübhigen). Leiß , C, Über einen justierbaren Objekttisch für me- tallurgische Mikroskope (Metallurgie Bd. V, 1908, p. 268 m. 2 Figg.). Der Objekttisch enthält auf seiner drehbaren Grundplatte einen Justierapparat, welcher vollkommen demjenigen der Reflexionsgonio- meter gleicht (d. h. aus zwei mikrometrisch bewegbaren Zylinder- schlitten besteht). Hierdurch wird es ermöglicht, das Präparat genau senkrecht zur Instrumentachse zu stellen. Sehr erleichtert wird diese Operation durch ein „Justierlineal", welches eine an Stelle des Ob- jektivs an den Tubus ansetzbare horizontale Schneide enthält. Diese Schneide wird einmal längs und einmal quer zum Hauptschuitt des Mikroskops gestellt und in beiden Lagen das Objekt in die zur Linealsehneide parallele Stellung hineinjustiert. E. Sommerfeldt (Tübingen). Krogh, A., Über Mikroanalyse von Gasen (Skand. Arcli. f. Physiol. Bd. XX, 1908, p. 279—288). Der Verf. hat einige Apparate konstruiert, welche zum Studium des Respirationsvorganges von Mikroorganismen geeignet sein sollen, nämlich Apparate zur mikrotonemetrischen Ermittelung von Gastensionen und zur genauen Bestimmung sehr kleiner Gasquantitäten. (Nach Chem. Zentralbl. Bd. I, 1908, p. 1085). E. Sommerfeldt (Tübingen). Jlügge, 0., Über einige Demonstrationsversuche an Leucit, Kryolitli, Perowskit, Gadolinit, Quarz 368 Referate. XXV, 3. uud Quarzglas mit dem Lehmann sehen Er- hitzungsmikroskop (Zentralbl, f. Mineral, u. Geol. 1908, p. 34—38). Der Verf. beschreibt einige Verbesserungen des Lehmann sehen Kristallisationsmikroskops, durch welche er die Möglichkeit, bei sehr hohen Temperaturen Mineralpräparate mikroskopisch zu beobachten, gewinnt. Es werden Objektträger aus Quarzglas oder Platindrahtnetz benutzt und auch die Linsen des Mikroskops werden durch Quarz- glasplatten, zwischen denen Wasser strömt, vor Erhitzung geschützt. Mittels eines derartig modifizierten Erhitzungsmikroskops läßt sich beim L e u c i t beobachten, daß die beim Erhitzen eintretende Isotropie (nicht wie früher angenommen wurde) eine ganz vollkommene ist. Kryolith läßt sich unter dem Mikroskop zum Schmelzen bringen und erstarrt zu isotropen Kristallaggregaten von schneesternartigem Aussehen. Die Umwandlung des gewöhnlichen anisotropen Kryolith in den regulären ist reversibel. Perowskit läßt eine auffallende Änderung der Interferenzfarben beim Erhitzen erkennen. Gadolinit zeigt einen teilweisen Übergang der amorphen Modifikation in die kristallinische durch Entglasungserscheinungen. Quarz läßt sich in den schon früher bekannten /S-Quarz überführen (zweckmäßigerweise erhitzt man hierzu parallel der Achse geschnittene Quarzpräparate auf Platindrahtnetz). Im Quarzglas weist der Verf. kristallinische Partien nach , deren Doppelbrechung beim Erhitzen verschwindet, und zwar ist auch diese Umwandlung des kristallinischen in amorphen Quarz reversibel. E. SommerfeJdt {Tübingen). Yorländer, D., Über durchsichtig klare, kristallinische Flüssigkeiten (Chem. Ber. Bd. XLI, 1908, p. 2033— 2052 m. 7 Figg.). Die bisher bekannten liquidkristallinen Stoffe waren sämtlich trübe und wurden großenteils aus diesem Grunde von manchen Be- obachtern für unrein oder uneinheitlich (für Emulsionen) gehalten ; nunmehr ist jedoch dem Verf. der wesentliche Fortschritt gelungen, klare liquidkristalliue Substanzen aufzufinden, und zwar gehören dieselben größtenteils zu einer Gruppe sehr komplizierter Zimtsäure- derivate. Auch lassen manche dieser neuen Stoffe durch Verreiben zwischen Objektträger und Deckglas sich nach Belieben in den klaren oder trüben Zustand umwandeln. Schichten von mehr als 0"3 mm Dicke (etwa) bleiben jedoch stets trübe. Manche der Derivate haben vier kristallin-flüssige Phasen , die teils trübe , teils klar sind und XXV, 3. Referate. 369 verschieden große aber selir starke Zirkularpolarisation besitzen (z. B. 200- bis 300 mal so groß als Quarz!). Es existieren sehr zähflüssige (harzähuliche) kristallinische Flüssigkeiten. E. Sommerfeldt {Tübingen). ßotarski, Th., Übersehene Angaben betreffs flüssiger Kristalle (Ber. d. d. ehem. Ges. Bd. XLI, 1908, p. 1994 — 1998). Bei folgenden Substanzen hat der Verf. das liquidkristalline Ver- halten beobachtet : Diauisyl-Tetrylen (CH3O • CgH^C : CH)2 , Methoxy- Zimtsäure, Methylamidobenzol-Phenylhydrazin (CHgNHCgH^CH: N-NH •CßH. [para]), Diäthylbenzidin (CoH-NH- CeH^)2, Bis-Diphenylmethylol- Biphenyl ([C\jH5]2C[0H] «CgH^ — )^ (bei dieser letzteren Substanz sprechen die Beobachtungen nur mit Wahrscheinlichkeit nicht mit ab- soluter Sicherheit für die Existenz einer flüssig-kristallinen Phase), Methoxyzimtaldaziu (CH3O • CgH^ • CHNCH • CHNN —\. E. Sommerfeldt (Tübingen). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 3. 24 370 Neue Literatur. XXV Neue Literatur 1. Lehr- und Handbücher. Behrens , W. , Tabellen zum Gebrauch bei mikroskopischen Arbeiten. 4., verbess. Aufl.; herausgeg. von Ernst Küster. Leipzig (S. HirzeL 1908. YIII u. 245 pp. (Vgl. diese Zeitschr. Bd. 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Es ist sonderbar, daß eines der mächtigsten Fällungsmittel der EiweißstofFe, die Phosphor wolframsäur e, bisher in der mikro- skopischen Technik noch keine Verwendung zur Fixierung tierischer Organe und Gewebe gefunden hat. Es ist dies um so auffallender, als diese Säure in einer mit ihren chemischen Effekten ganz unver- einbaren Weise zur Bereitung eines Hämatoxylins und in Kombination mit einer Anilinfarbe empfohlen wurde. Als ich das , übrigens un- benutzbare, MALLORYSche Wolframhämatoxylin vor mehreren Jahren prüfte, fielen mir bei mannigfachen Modifikationen der MALLORYSclren Vorschrift Eigentümlichkeiten in den Präparaten auf, die nur durch die Phosphorwolframsäure hervorgebracht sein konnten und die mir schon damals ein Studium der Wirkung der Säure auf tierische Ge- webe als aussichtsreich erscheinen ließen. Vor Jahr und Tag nahm ich nach langer Unterbrechung dies Studium wieder auf und bin dadurch zu der Überzeugung gekommen, daß wir in der Phos- phorwo 1fr am säure ein ü heraus wertvolles Fixierun gs- mittel besitzen, welches die größte Beachtung seitens der Histologen Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. 25 386 Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsiuethoden. XXV, 4. verdient. Das in folgenden Zeilen von mir empfohlene Rezept ist sicherlich nicht die einzige Verwendungsart der Säure, deren fixierende Kraft entschieden einer mannigfachen Ausnutzung fähig sein dürfte. Bevor ich zur Schilderung meiner Methode übergehe, möchte ich auf eine Eigenschaft aufmerksam machen, wodurch sich die Phos- phorwolframsäure von allen anderen Fixierungs reagentien auf das schärfste und sonderbarste unterscheidet. Es ist eine alte Erfahrungs- tatsache, welche beinahe dogmatische Geltung erlangt hat, daß die Reagentien in konzentriertem Zustande fixieren bzw. härten, in ver- dünntem mazerieren. Alkohol, Chromsäure, Osmiumsäure, Pikrin- säure iisw, sind stringente Beweise dafür. Die Phosphorwolfram- säure aber zeigt das umgekehrte Verhalten: die konzentrierte Säure mazeriert, die verdünnte Säure fixiert. Bringt man in das von mir benutzte unverdünnte Kahlbaum sehe Präparat irgendein Organ , z. B. eine Kaninchenniere , so braucht man nach 24stündiger Einwirkung die Niere nur leicht zu schütteln und sofort zerfällt sie in ihre einzelnen Bestandteile. Die Kanäle sind vortreft- lich isoliert , jedoch nur auf kürzeste Strecken erhalten , so daß die Präparate einen nur geringen Wert haben. Offenbar ist die maze- rierende Einwirkung eine allzu stürmische. Dabei ist es gleich- gültig, ob man viel oder wenig Flüssigkeit nimmt; der Effekt bleibt derselbe. Ich habe die mazerierenden Eigenschaften der Säure nicht weiter studiert , möchte aber dringend zu derartigen Unter- suchungen raten. Zur Fixierung verwende ich die von der Firma C. A. F. Kahl- baum (Berlin) in den Handel gebrachte „Phosphorwolframsäure in Lösung", und zwar in folgender Kombination : Fhosphorwolframsäure in Lösung (Kahlbaum) . 40 cc Alkohol (93- bis 95prozentiger) 50 „ Eisessig 10 „ Man bereitet das Gemisch entweder zum jedesmaligen Gebrauche frisch oder hält sich die alkoholische Verdünnung der Säure vor- rätig und setzt den Eisessig erst unmittelbar vor dem Gebrauche zu. Ich habe mir die Lösung bisher jedesmal frisch angefertigt, glaube aber, daß die zweite Herstelhingsweise vielleicht die bessere sein dürfte. In dem frisch bereiteten Gemisch steigen nämlich in den ersten Stunden Luftblasen auf, welche ein zeitweiliges Schwimmen der Objekte bewirken. Und dies könnte ängstliche Gemüter er- schrecken, obgleich es völlig gleichgültig ist, da es bald schwindet XXV, 4. Rawitz: Neue Fixicrungs- und Färbungsmethoden. 387 und außerdem den fixierenden Eflekt nicht im geringsten alteriert. Bei der zweiten Anfertigungsweise treten vielleicbt keine Luft- blasen auf. Man beläßt die Objekte , welche nicht allzu klein zu sein brauchen, in der reichlich genommenen Flüssigkeitsmenge 24 Stunden und führt dann direkt in TOprozentigen Alkohol über. Nach sorg- fältigem und langsamem Härten — die Sorgfalt besteht in häufigem Wechsel des Alkohols, die Langsamkeit darin, daß man jeden Kon- zentrationsgrad mindestens 48 Stunden einwirken läßt — wird in 9.3 bis 95prozentigem Alkohol aufbewahrt. Fast alle Organe, auch knochenhaltige , werden sehr gut fixiert. Nur die Leber und die Speicheldrüsen geben insofern ungünstige Resultate, als die zentralsten Partien auch bei kleinen Stücken nicht immer befriedigen , während der Erhaltungszustand der peripheren Abschnitte der Leber ein geradezu tadelloser ist. Ob die Phosphorwolframsäure zur Fixierung von Zentralnervensystem und Sinnesorganen geeignet ist , habe ich nicht geprüft. ^'ergleiche ich die Resultate, die mit meiner Fixierungsflüssig- keit zu erzielen sind , mit anderen Fixierungsmitteln , so ziehe ich sie selbst der Pikriusalpetersäure vor. Auch die CARNOYSche Flüssig- keit, die ich seit dem Erscheinen meines „Lehrbuch der mikrosko- pischen Technik" geprüft und die ich als ein ganz vorzügliches Reagens kennen gelernt habe , ist nicht besser. Ja , wenn es sich um Fixierung des Verdauungstraktes handelt, halte ich meine Lösung für die wirksamere. Die mikroskopischen Bilder, die man vom Darmkanal nach ihrer Anwendung erhält, übertreften nach meinen Erfahrungen bei weitem diejenigen nach allen anderen Fixierungen. Man sieht hier alles so, wie es in den Lehr- und Handbüchern schematisch abgebildet wird. Zuweilen ist es vorgekommen, daß nach längerer oder kürzerer Zeit das Material in dem Aufbewahrungsalkohol rosafarben wurde. Welches die Ursache dafür war, vermag ich nicht zu sagen. Mög- lich, daß der Kork, mit welchem das die Präparate enthaltende Ge- fäß verschlossen war, schlecht war, möglich auch, daß eine zu intensive Wirkung des Tageslichtes vorlag. Ich kann hier nur diese vagen Vermutungen aussprechen, zumal gleichzeitig fixiertes und kon- serviertes Material in dem einen Glase die Verfärbung annahm , in dem anderen nicht. Im übrigen ist diese Farbenänderung bedeutungs- los, da sie auf die Färbungsfähigkeit der Objekte ohne jeden Einfluß ist und den Fixierungseft'ekt nachträglich nicht ändert. 25* 388 Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsmethoden. XXV, 4. Was die Färbungsfähigkeit anlangt, so ist sie für alle Farbstoffe und alle Kombinationen vortrefflich. Aber freilich muß man einige Vorsichtsmaßregeln beachten. Wenn mau nämlich die Schnitte von so fixiertem Material — Einbettung in Paraffin und die üblichen weiteren Prozeduren — in die Farbflotten bringt, so geht entweder gar kein Farbstoff an die einzelnen Teile oder doch nur so wenig, daß sie als ungefärbt zu betrachten sind. Dies rührt, wie ich glaube, daher, daß durch das fixierende Reagens das Material zu sauer geworden ist. Man muß daher die Säure abstumpfen und dies geschieht, indem man die aufgeklebten Schnitte in ein Wasser bringt, dem ein aliquoter Teil (5 bis 10 Tropfen) einer öprozentigen Lösung von essigsaurem Calcium (Kahlbaum) zugesetzt ist^. Darin bleiben die Schnitte 2 bis 24 Stunden, werden dann sehr sorgfältig in wiederholt gewechseltem destilliertem Wasser gewaschen und nun erst in die Farbflotte gebracht. Nunmehr gehen die ein- zelnen Farbstoffe leicht und gut an das Material. In folgendem will ich an einzelnen Organen den fixierenden Wert der Phosphorwolframsäure schildern. Icli habe mich dabei auf Amphibien beschränkt, weil mir an der Größe der zelligen Elemente lag. Denn ich wollte nicht bloß den Einfluß des Reagens auf die Textur der Organe und Gewebe, sondern eventuell auch auf die Struktur der Zellen studieren. Und hierfür liefern die Amphibien die geeignetsten Objekte. Ich benutzte Organe von Rana esculenta, Siredon pisciformis (jugendliches albinotisches Exemplar) , Triton taeniatus und Salamandra maculosa. Oesophagus. Die Fixierung der Schleimhaut ist eine ganz vorzügliche , namentlich sind die Cilien des Epithels vortrefflich er- halten. Besonders gut sind auch die unter dem Epithel gelegenen iiitraoesophagealen Drüsen bei Rana fixiert, die bekanntlich den urodelen Amphibien fehlen. Magen. Gerade an diesem Organ zeigt es sich, daß die Phos- phorwolframsäure, wie vorhin gesagt wurde, schematische Bilder liefert. Ich wenigstens habe Bilder, wie Figur 1 (Tfl. III) eines wiedergibt, bei der gewählten Schnittdicke (5 jii) von keinem anderen Fixierungs- mittel, mit Ausnahme der PYemming sehen Lösung, erhalten. Das eigenartige Epithel des Amphibienmagens, die am Eingang oder An- ^) Da die Lösungen des Calciumacetats fast sofort nach der Her- stellung faulen, so gibt die Firma Kahlbaum auf Wunsch öprozentige keimfreie Lösung ab. XXV, 4. Kawitz: Neue Fixierung«- und Färbungstnethoden. 389 fang der Drüsen des Anuren- Magens gelegenen bläschenförmigen Zellen, welche den Urodelen zu fehlen scheinen, die Drüsen selber, die Muscularis mucosae, das Gewebe der Mucosa und Submucosa sowie die Muscularis: alles macht, wie gesagt, einen geradezu sche- matischen Eindruck. Das heißt: die Konfiguration der Magenwand zeigt in jedem gut geführten Schnitte ein Aussehen, wie man es sonst nur aus mehreren Schnitten sich konstruieren muß. Darmkanal. Wie beim Magen ist auch das Fixierungs- resultat beim Darmkanal vom Pylorus bis zum After ausgezeichnet. Besonders schöne und lehrreiche Bilder erhält man von der Kloaken- drüse des Salamandermännchens. Pankreas. Hier versagte das Mittel völlig. Mich nimmt dies nicht wunder , denn das Pankreas ist eines jener Organe , an denen man nur sehr selten wirklicli gute Fixierung erhält. Leber. Die Fixierung der Froschleber befriedigte mich nicht; dagegen war die der Urodelenleber gut. Allerdings hat hier meine Flüssigkeit keinen Vorteil vor anderen Reagentien. Niere. Fixierung ausgezeichnet (Fig. 4, Tfl. III) , besonders da die gegenseitigen Grenzen der Zellen, vor allem bei der Urodelen- niere , sehr deutlich waren. Bei Anwendung homogener apochro- matischer Immersion erscheint die Zellsubstanz etwas homogenisiert. Ob dies ein Kunstprodukt ist oder nicht, vermag ich natürlich nicht zu sagen. Ebensowenig wie ich imstande bin zu entscheiden, ob die von anderer Seite beschriebene weitgehende Spezialisierung der Nierenzelle ein Ausdruck innerer Struktur oder künstlicher Zer- störung ist. Milz. Bei der Salamandermilz zeigten die zahlreichen Ery- throcyten einen mich nicht befriedigenden P^ixierungszustand. Da- gegen waren die Lymphzellen tadellos erhalten. An ihnen konnte man in der Milz des Axolotl zahlreiche Zellteilungen sehen, die iu einer selten schönen Weise erhalten waren. Zunge. Auch bei diesem Organ hat sich das neue Fixierungs- raittel in jeder Beziehung bewährt. Haut. Die Fixierung ist besser als nach jedem anderen Reagens. Ganz besonders läßt sich dies an den Hautdrüsen er- kennen. Bekanntlich kommen in der Amphibienhaut zwei Arten von Drüsen vor, die beide nach dem FLEMMiNGSchen Schema als einfache Alveoli zu betrachten sind. Die einen sind seröse oder Giftdrüsen, die anderen sind Mucindrüsen. In den Zellen der letzteren sieht man nun bei Rana — bei Salamandra dagegen nicht — eigentüra- 390 Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsmethoden. XXV, 4. liehe feine Körnungen, welche nach Anwendung des nachher zu be- schreibenden Nitrohämatein eine dunkelblauschwarze Färbung an- genommen haben (Fig. 2, Tfl. III). Daß es sich hier nicht um amorphe Niederschläge des Farbstoffes handelt, geht zur Evidenz daraus her- vor, daß die Nachbarschaft, also sowohl das fädig geronnene Sekret als auch das ganze übrige Gewebe inkl. Epidermis, derartige Körnungen nicht enthält. Sie erinnern etwas im Aussehen an BendascIic Mito- chondria — ob sie mit ihnen identisch sind , vermag ich nicht zu sagen — und sind alle ziemlich von der gleichen Größe. Sie stellen relativ weit auseinander und verleihen der Zelle ein grob granuliertes Aussehen. Der Zellkern ist frei von Körnchen. Dadurch , daß letztere nicht über die Zellgrenze hinausgehen , bewirken sie eine scharfe Abgrenzung des Drüsenepithels gegen den fädig geronnenen Mucininhalt. Nach anderen Fixierungen — Pikrinsalpotersäure , Sublimat, PYEMMiNGSche Lösung — habe ich diese Körnchen in den betreft'en- den Drüsen nicht gesehen. Ist hier das Plus artifiziell oder nicht ? Eine exakte Entscheidung wäre erst zu fällen, wenn wir die wirk- liche Struktur der lebenden Zelle kennen würden. Aber wenn man bedenkt, daß die Phosphorwolframsäure besser als die meisten anderen Reagentien die Organe fixiert, dann wird man die Körnchen in den genannten Drüsenzellen für ein Strukturelement halten dürfen. Besonderes Interesse beansprucht ferner die Fixierung der Haut des jugendlichen albinotischen Axolotl. In ihr kommen eigentüm- liche, einzellige Drüsen vor, deren merkwürdiger Bau sich nach keinem anderen Fixierungsmittel, auch nicht nach I'lemming scher Lösung, in solcher Deutlichkeit und zugleich Zartheit zeigt, wie nach Anwendung der Phosphorwolframsäure. (Ich gab die vorhergehende und gebe die folgende ausführliche Schilderung, um die Brauchbarkeit des Reagens ins rechte Licht zu setzen.) Bei Anwendung von apochromatischer Immersion sieht man folgendes (Fig. 3, Tfl. III) : Unter der zweiten Lage der Epidermiszellen findet sich, umhüllt von einer allseitig geschlossenen, ziemlich dicken Tunica propria, an welcher eine feinere Struktur nicht zu erkennen ist , eine mächtige Zelle. Sie hat eiförmige Gestalt und ist mit ihrem längsten Durch- messer so orientiert, daß sie parallel zur Haut liegt. Das soll heißen: der betreffende Durchmesser reicht nicht von außen in das subepidermoidale Gewebe hinein. Der sehr große, nicht immer kreis- runde Kern liegt stets genau zentral und wird in dieser Lage ge- wissermaßen festgehalten von den an seine Membran sich ansetzenden XXV, 4. Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsinethodcn. 391 Fäden der Zellsubstanz. Die Anordnung dieser Fäden ist eine ganz merkwürdige und n u r nach Fixierung in Phospliorwolframsäure in dieser Deutlichkeit zu sehen. Am spitzen Pole des Eirundes der Zelle sind die Fäden dicht zusammengefaßt (Fig. 3, TU. III). Von hier strahlen sie aus. Ein Teil von ihnen geht zur direkt gegen- überliegenden Stelle des Kerns und setzt sich hier an dessen Membran an. Ein zweiter Teil geht tangential vom Kern nach dem gegen- überliegenden Drüsenpole hin und setzt sich unterwegs an die Kern- membran au. Ein dritter Teil endlich strahlt divergierend vom Knotenpunkte aus , geht an beiden Seiten am Kern vorbei , füllt so den von der Tunica propria umschlossenen Raum aus und setzt sich an deren innerer Circumferenz an verschiedenen Stellen an. Von den dem Knotenpunkte gegenüberliegenden Zellpole gehen parallele Fäden zum Kern. So ist ein eigentümliches Fadengerüst geschaften, das aus wellig gebogenen , sich niemals kreuzenden allerfeinsten Fäden besteht (Fig. 3, Tfl. III). Die Deutlichkeit, mit welcher dieses feine Detail zu sehen ist, spricht für die Leistungsfähigkeit meiner Flüssigkeit. Hoden. Die Fixierung dieser Organe von Kana , Triton und Salamandra ist eine ganz ausgezeichnete. Sie ist mindestens so gut, wenn nicht besser als nach der Carnoy sehen Flüssigkeit. Auf den feineren Bau der ruhenden und sich teilenden Hodenzelle habe ich nicht geachtet, weil ich zurzeit nicht die daran sich knüpfenden Probleme bearbeiten wollte. Nur so viel möchte ich bemerken, daß die Zellteilungsformen alle nur wünschenswerten Einzelheiten zeigen. Alles in allem genommen : Die Phosphor wolframsäure ist eines der besten Fixierungsmittel, das in der von mir empfohlenen Zusammensetzung ganz ausgezeich- nete Resultate gibt. Und ich kann nur wiederholen , was ich eingangs schon gesagt : es wäre zu wünschen , daß die Leistungs- fähigkeit dieser Säure nach verschiedenen Richtungen auch von anderen Forschern gründlich ausprobiert würde. B. Neue Färbungsmethoden. 1) Nitrohämatein. Hämatein lg Aluminiumnitrat (Kahlbaum) 10 „ Aqua destillata 250 cc Glyzerin (chemisch rein) 250 „ 392 Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsiuethoden. XXV, 4. Man l()st das Aluminiumnitrat in der Kälte im destillierten Wasser, was bei der großen Löslichkeit dieses Salzes sehr schnell erfolgt. Dann wird das Hämatein hinzugefügt und das Gemisch auf dem Sandbade erhitzt. Man kocht einmal auf, läßt langsam erkalten und setzt, da ein Filtrieren nicht nötig, sofort das Glyzerin zu. Die so erhaltene Farblösung hat einen großen Vorzug vor dem Hämalaun Paul Mayer s und auch vor meinem Glyzerinalaun- hämatein. Und der besteht darin, daß sie niemals üb er färbt, selbst dann nicht, wenn man die Schnitte — und nur für Schnitt- färbung empfehle ich das Nitrohämatein — 24 Stunden in der unverdünnten Farbflotte läßt. Die Lösung setzt nicht ab, was übrigens mein Glyzerinalaunhämatein auch nicht tut, und ist, dank dem Zusatz von Glyzerin , unbegrenzt haltbar. Sie ist nach jeder Fixierung anwendbar, nur nach Flejimixg scher Lösung versagt sie, wie alle Alaunhämateine und -hämatoxyline. Der mit ihr erzielte Farbenton ist etwas rötlicher als bei den bisherigen Hämateinen; sie färbt, wie diese, mucinhaltige Zellen sehr intensiv. Kombiniert mau die Färbung mit der von Weigert modifizierten van Gieson sehen Mischung von Säurefuchsin und Pikrinsäure , dann verschwindet das Blau aus dem P^irbenton und es bleibt ein Rot zurück , das an die Alaunkarmine erinnert. Wegen seiner Eigenschaft, nicht zu überfärben, glaube ich das Nitrohämatein empfehlen zu sollen. Noch ein Wort über den Namen. Daß dieser chemisch falsch ist, weiß ich ; denn selbstverständlich ist aus der Verbindung von Hämatein und Aluminiumnitrat keine Nitro- verbindung geworden. Ich wollte und will durch den Namen nur zum Ausdruck bringen, daß das verwendete Alaunsalz das salpeter- saure ist, und ich habe den Namen außerdem gewählt, weil er kurz und bezeichnend ist. 2) N i t r 0 c 0 c h e n i 1 1 e. Cochenille 4 g- Aluminiumnitrat (Kahlbaum) 4 ., Aqua destillata 100 cc Glyzerin (chemisch rein) 100 ., Wie beim Nitrohämatein löst man zunächst das Aluminiumnitrat im kalten Wasser. Die im Mörser sorgfältig zu einem möglichst feinen Pulver zerriebene Cochenille wird darauf zugesetzt und das Ganze auf dem Sandbade erhitzt. Man läßt 5 Minuten bei brennen- XXV, 4. Ilawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsmethoden. 393 der Flamme kochen, löscht aus und wartet, bis die Lösung sich fast völlig abgekühlt hat. Dann filtriert man und setzt dem Filtrat das Glyzerin zu. Die Nitrocochenille ist nur für S chnittfärb ung verwertbar. Im färberischcn Etfekt gleicht sie , sowohl was Farbenton als auch Art der Färbung anlangt, vollkommen der Partsch-Czokor sehen Alauncochenille, Paul Mayers Cochenilletiuktur, Grekachers Alaun- karmin und den Karmalaunen von Paul Mayer und mir. Aber ich ziehe die neue Kombination für Schnittfärbung allen anderen vor, weil die Haltbarkeit der Lösung eine unbegrenzte ist. .3) K 0 b a 1 1 c 0 c h e n i 1 1 e. Cochenille 4 g Kobaltammoniumsulfat (Kahlbaum) 4 „ Aqua destillata 100 cc Glyzerin (chemisch rein) 100 „ Man löst zunächst das Kobaltammoniurasulfat im destillierten Wasser in der Wärme auf, fügt die gut gepulverte Cochenille hinzu und läßt auf dem Sandbade kochen. Nach dem Erkalten filtriert man und setzt das Glyzerin zu. Die Haltbarkeit der Lösung ist eine unbegrenzte und die Vorzüge dieser Kombination gegenüber den alten, vorhin aufgezählten Vorschriften sind die glei- chen , wie bei der Nitrocochenille. Nur der Farbenton geht etwas mehr nach dem Purpur hinüber. Eine Überfärbung findet bei der Kobaltcochenille ebensowenig wie bei der Nitrocochenille statt, auch dann nicht, wenn man die konzentrierten Lösungen 24 Stunden lang auf die Schnitte einwirken läßt. Verdünnte Lösungen haben außer- dem bei beiden Cochenille -Kombinationen den konzentrierten gegen- über den Nachteil, daß sie zu blasse Färbungen liefern. Selbstver- ständlich versagt die Färbung an Material, das in Flemming scher Lösung fixiert war. 4) Säure- Alizar in blau BB (Höchst). Waren die bisher empfohlenen Farblösungen nur neue Kom- binationen alter, längst bewährter Farbstofte, so möchte ich mit der jetzt zu gebenden Vorschrift einen Farbstoff neu in die histologische Färbetechnik einführen. Er hat bei der von mir benutzten Anwen- dungsweise so manche Vorzüge vor Alizarinen und Anilinen voraus, ;j9-1: Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsmethoden. XXV, 4. daß er meines Erachtens alle Beachtung verdient. Und vielleicht gelingt es anderen Forschern, durch andere Kombinationen die außer- ordentliche Färbekraft der Substanz noch besser auszunutzen, als ich es vermochte. Das Säure-Alizarinblau BB, welches die Höchster Farbwerke in den Handel bringen , ist ein dunkelbraunes , sehr feines Pulver, das allerdings gelegentlich, aus mir unbekannten Gründen, eine körnige Beschaffenheit annimmt und dann rötlich aussieht. Letzteres schadet freilich nicht das geringste. Folgende Kombination hat sich mir ganz ausgezeichnet bewährt : Säure-Alizarinblau BB (Höchst) lg Aluminiuiuammoniumsulfat . , 10 » Aqua destillata 100 cc Glyzerin (chemisch rein) 100 r> Man bringt Farbstoff und Alaun zusammen ins Wasser, kocht auf dem Sandbade , läßt langsam abkühlen und gießt die erhaltene purpurne Flüssigkeit aus dem Glaskolben in die Aufbewahrungs- flasche. Ein Filtrieren ist nicht nötig, da bei gutem Kochen sich aller Farbstoff löst. Dann fügt man das Glyzerin hinzu. Nach allen Fixierungen, mit Ausnahme der Flemmixg sehen Lösung, zu ge- brauchen. Eine Anwendung der verdünnten Farbflotte ist nicht zu emp- fehlen , da alles zu gleichmäßig wird. In der konzentrierten Farb- tlotte bleiben die Schnitte — und nur für Schnittfärbung sei die Korabination empfohlen — •'/o bis 2 Minuten , dann wird sorg- fältig in destilliertem Wasser abgewaschen. Nun kann man ent- weder in der üblichen Weise montieren oder - — und dieses Verfahren ist das bessere — mau bringt zimächst aus dem Waschwasser in das VAN GiESONSche, von Weigert modifizierte Säurefuchsiu - Pikrin- säure-Gemisch (vgl. mein Lehrbuch der mikroskop. Technik p. 197, No. 120). Man läßt die Schnitte darin genau so lange wie in der eigentlichen Farbflotte , bringt dann direkt in Alkohol und montiert in der gewöhnlichen Weise. Der Effekt ist ein ganz vortrefflicher (Fig. 4, Tfl. HI). Die Zellsubstanz ist rosa, der Kern purpurn gefärbt und das Kerngerüst deutlich. In Kernteilungsformen erscheint das Chro- matin leuchtend hochrot bis purpurn , die achromatischen Spindeln sind blaßrosa. Der Vorzug vor den Anilin en besteht in der Echtheit der Färbung, denn vom Säure-Alizarinblau BB wird im Wasch- und Entwässerungsalkohol nichts gelöst. Wenn in letzterem Farbstoffwolken entweichen , so rühren sie von den Kom- XXV, 4. Rawitz: Neue Fixierungs- und Färbungsmethoden. 395 poneuten der van GiESONSclien Flüssigkeit lier. Eine Wirkung der letzteren zeigt sich nur im Hoden, auf sie soll erst nach Beschreibung des nächsten Farbstoffes hingewiesen werden. Vor den bisher ver- wendeten Alizarinen besteht der Vorteil dieses Farbstoffes in seiner überaus einfachen Verwendung, da er keiner Vorbeizung bedarf. Von Zeit zu Zeit mußte ich die erste Lösung, die ich ange- fertigt, filtrieren, da sich Farbstoffpartikel an der Oberfläche der Flüssigkeit, nicht am Boden der Flasche ansammelten. Neuerdings ist dagegen ein solches Nachfiltrieren nicht nötig geworden. 5) S ä u r e - A 1 i z a r i n g r ü u G (Höchst). Dieser ebenfalls neu einzufülirende Farbstoff, den die Höchster Farbwerke fabrizieren, hat genau denselben tinktorialen Effekt wie der vorige. Nur daß natürlich, was dort blaßrosa war, hier blaß- grün, was dort purpurn oder hochrot, hier dunkelgrün erscheint. Die Farblösung wird auf folgende Weise hergestellt: .Säure-Alizaringrün G lg Aluminiumammoniumsult'at 10 „ Aqua destillata 100 cc Glyzerin (chemisch rein) 100 „ Man kocht Farbstoff*, Ammonalaun und W^asser zusammen auf dem Sandbade, läßt abkühlen und filtriert. Letzteres ist darum nötig, weil das Säure -Alizaringrün sich nicht so rein löst, wie das Säure- Alizarinblau , sondern beim Erkalten absetzt. Dem Filtrat wird das Glyzerin hinzugefügt. Die Schnitte werden ^j^ bis 2 Minuten ge- färbt und nach gründlichem Abwaschen in destilliertem Wasser mit VAN GiESONSchem Gemisch ebensolange nachgefärbt. Dann Überführen in Alkohol und Montieren. Auch dieser Farbstoff färbt echt. Ich sagte vorhin, daß das zur Nachfärbung verwendete van Gie- soNSche Gemisch nach meinen bisherigen Erfahrungen nur an Hoden- präparaten sich bemerkbar macht. Hierüber ist noch einiges anzu- führen. An Salamanderhoden, der in Phosphorwolframsäure fixiert und mit Säure- Alizarinblau BB gefärbt war, ließ sich folgendes be- merken : Der Hoden, der im März eingelegt wurde, zeigt reife Sper- matosomen , sowie sehr spärliche Zellteilungen. Ich gebe natürlich keine Histologie des Salamanderhodens, kann auch über die Bedeutung des Farbstoffes für das Studium der Spermatogenese nichts bestimmtes aussagen, da sie in meinem Frühjahrsmaterial sich nicht findet. Von nm so größerem Interesse ist daher das, was mein Material zeigt, 396 Kawitz: Neue Fixierungs- und Fiirbungsmethoden. XXV, 4. nämlich das tinktoriale Verhalten der im Hoden vorhandenen reifen Spermatosoraen. Ilire Köpfe sind hellgelb (Fig. 5, TU. 111), haben also die Pikrinsäure aus der van Gieson sehen Mischung angenommen. Die Mittelstiicke sind leuchtend purpurn, zeigen demnach den Farbenton der Kerne, und die Schwänze sind blaßrosa oder blaßpurpurn. Die Köpfe derjenigen Spermatosomen, welche dem Zellabschnitt des Hodens benachbart sind, erscheinen oft, nicht immer, purpurn, während die weiter entfernten immer, wie oben erwähnt, gelb werden. Dies ist ein Färbungsresultat so eigener Art, daß ich daraufhin die Be- hauptung glaube aussprechen zu dürfen, daß das Säure-Ali- zarinblauBB sich als ein zum Studium der Zellteilung und der Spermatogenese sehr geeigneter Farbstoff erweisen wird. Erklärung der Figuren auf Tafel III. Sämtliche Figuren staiuiuen von Material, das in Phosphorwolfraui- säure fixiert war, die Figuren 4 u. 5 sind nach Präparaten gezeichnet, die mit Säure-AIizarinblau BB wie oben angegeben gefärbt waren. Fig. 1. Magen vom Frosch; gezeichnet bei Zeiss 2 D. Fig. 2. Hautdrüse vom Frosch; gezeichnet bei Zeiss 2D; Detail bei 41). ep. =^ Epidermis (nur angedeutet). Färbung: Nitrohämatei'n. Fig. 3. Einzellige Drüse aus der Haut des Axolotl; gezeichnet bei Apochrom. lo; Kompensationsokular (3. Fig. 4. Niere vom Salamander; gezeichnet bei Zeiss 3 D, Detail 4 D. Fig. 5. Hoden vom Salamander; Teil einer Cyste mit reifen Spermatosomen. Gezeichnet bei Zeiss 2D, Detail 4 D. Berlin, November 1908. [Eingegangen am 14. November 1908.] Zeilsclir. f. wiss. Mikrosk. XXV, 4. Tafel III. Fig ^ia\ .' r ''4/ '»r Fi^. 2. ^■^^^•^^^ ^^.J ! \ \ Fü;f.J. Fi^.^ Rawitz del. Lilliograptiie u. Druck vou Siiif^e] »Sc Cu , *». iii , t.. H-, Oetzscli-l^t^ipziK. Verlag von S. Hirzel. Leipzig. XXV. 4. Ileidenhain: Über die Ualtbaikeit mikroskopisch. Präparate. 397 Über die Haltbarkeit mikroskopischer rräi)arate, insbesondere über die Nachbehandlung jodierter Gewebe mit Natriumthiosulfat. Von Martin Heidenliaiu in Tübingen. Die meisten Mikroskopiker , welche zu wissenschaftlichen oder Unterrichtszwecken Dauerpräparate in großen Mengen aufsammeln, werden die üble Erfalirung hinter sich haben, daß viele Färbungen, wenn nicht sofort, so doch später, zum Teil erst nach Jahren, er- blassen und fade werden. Zwar haben wir glücklicherweise eine Reihe von Tinktionen , welche ganz oder fast ganz konstant sind, doch zeigt sich, daß leider gelegentlich selbst die solidesten Farb- stoffe aus unbekannten Gründen zurückgehen und die Bildwirkung sich verschlechtert. Da ich selbst eine große Zahl von Präparaten, welche in der ersten Hälfte der 90er Jahre hergestellt waren, durch allmähliche Bleichung verloren habe, jetzt aber einen sehr großen Stamm anscheinend durchaus dauerhafter Präparate besitze, so möchte ich mich über die Frage der Haltbarkeit und was man etwa dafür tun kann, kurz aussprechen. Bekannt ist, daß schon die Fixierungsmethode wesentlich in Betracht kommt. So sind mir fast alle Schnittfärbungen, welche Gewebe aus MtiLLEii scher Flüssigkeit betrafen, etwa mit Ausnahme der AVeigert- Präparate, allmählich eingegangen, — trotz richtiger Behandlung. Auch die Injektionen mit Berlinerblau hielten sich in derartig behandelten Geweben recht schlecht. Ich führe diese Miß- erfolge auf den Umstand zurück, daß die in den Geweben zurück- bleibenden Chromverbindungen oxydierend wirken. Ich habe daher auf die Verwendung der MIjller sehen Flüssigkeit verzichtet, so weit sie wenigstens irgend zu vermeiden ist. Bekannt ist ferner, daß die Pflanzenfarben (Delafields Häma- toxylin) saure Fixierung nicht vertragen , so daß die Schnitte vor dem Übertragen in Balsam neutralisiert oder alkalisch gemacht 398 Heidenhain: Über die Haltbarkeit mikroskopisch. Präparate. XXV, 4. werden müssen. Andere Färbungen wiederum vertragen die Alka- leszenz nicht , wie z. B. die Triphenylmethaufarben (alle Fuchsine, Methylviolette usw.) , so daß man die Schnitte schwach sauer ein schließen muß. Viel verwendet wird als Fixierungsmittel das Sublimat, allein oder in Gemischen (mit Essigsäure, Osmiumsäure, Trichloressig- säure , ZENKERSche Flüssigkeit usw.). Da nun Sublimat intensiv sauer ist, müssen die resultierenden Schnitte alkalisch gemacht werden. Dies ist allerseits bekannt, jedoch ein anderer Umstand, welcher bei der Sublimatfixieruug in Betracht kommt , nämlich die Notwendigkeit der J o d b e li a n d 1 u n g zur Lösung der bekannten „Niederschläge", ist bisher in Rücksiclit auf die Haltbarkeit der Präparate nicht näher gewürdigt worden. Eine sorgfältige Unter- suchung identischer Sublimatpräparate, also solcher Schnitte, welche von demselben Paraffinblock stammend in gleicher Weise jodiert und gefärbt wurden, hat mir nun gezeigt, daß sie nach Jahren öfters einen überaus wechselnden Grad der P^ntfärbung zeigen. Diese Er- scheinung kann meiner Meinung nach nur durch einen wechselnden Jodgehalt bedingt sein ; ich muß also annehmen , daß , obwohl die jodierten Schnitte jedesmal mit Alkohol extrahiert wurden, dennoch eine äußerst geringe Menge von Jod in den Schnitten haften blieb. Dies ist wiederum erklärlich , weil die Eiweißkörper Jod chemisch zu binden vermögen. Da Jod anderseits nach dem Ausdruck eines mir befreundeten Chemikers „Gift" für alle Anilinfarben ist, so ist es ebenso erklärlich, daß nach meinen Beobachtungen in den typisch behandelten Sublimatpräparaten selbst die besten Anilinfarben im Lauf der Jahre zurückgehen; konstatiert wurde dies bei den Methyl- violetten, Dahlia, Genziana, Methylgrün, in besonderem Grade ferner bei Thionin, Toluidinblau und seinen Verwandten , ferner aucli bei Anilinblau, Thiazinrot, Thiazinbraun, bei den Kongofarben und Benzo- purpurinen , in geringerem Grade bei den stark dunklen , hochmole- kularen Körpern : Blauschwarz und Brillantschwarz. Daher bin ich seit einigen Jahren dazu übergegangen , alle jo- dierten Sublimatpräparate mit Natrium thiosulfat zu dejodieren, denn nur auf diese Weise kann man das Jod aus den Sclmitten, auf chemischem Wege , in absolut vollkommener Weise entfernen. Ich fertige eine wässerige Stammlösung von 2*5 Prozent an und verdünne sie beim Gebrauch zehnmal mit Wasser. Die jodgelben Schnitte werden durch dieses Mittel sofort gebleicht und in wenigen Minuten ist der Prozeß vollendet. XXV, 4. Heidenliain: Über die Haltbarkeit mikroskopisch. Präparate. 399 Die Resultate in bezug auf die Haltbarkeit sind erstaunlich. Ich erwähne beispielsweise, daß mir früher alle Toluidinblau- färbungen (Nissl- Präparate usw.) in kurzer Zeit eingegangen sind; nunmehr halten sie sich unverändert. Das gleiche gilt von den Kongofarbstoften und Benzopurpurinen. Diese letzteren Körper gelten bekanntlich in der industriellen Teclinik als lichtunecht und ich glaubte in früheren Jahren die geringe Haltbarkeit der bezüg- lichen Tinktionen aus diesem Grunde heraus erklären zu müssen ; indessen zeigt es sich nun, daß die Farben der genannten Art nacli völliger Dejodierung der Schnitte in unseren Präparaten durchaus konstant sind. Ja ich habe in den letzten Jahren nach Einführung des neuen Verfahrens von einem Zurückgehen der Anilinfarben in den Sublimatpräparaten überhaupt nichts mehr bemerken können. Freilich muß ich hinzufügen , daß mir neuere Erfahrungen über die Triphenylraethanfarben fehlen. Nunmehr komme ich auf einen anderen Punkt von erheblicher Bedeutung zu sprechen. Es ist nämlich eine ganz oftenbare Tat- sache, daß der Kanadabalsam an sich den Farben schädlich ist. Es sind drei Momente, welche hierbei in Betracht kommen, nämlich 1) sind alle Harze Säuren , 2) schlucken sie Luft und wirken oxy- dierend und 3) löst "wenigstens der Kanadabalsam manche Farben, z. B. Safranin, in recht flotter Weise. Ich benutze nun der Vorsicht halber nur den sogen, „neutralen" Balsam von GRtJBLER, habe aber keine Kenntnis davon, wie dieser behandelt wurde und ob er wirk- lich in chemischem Sinne neutral ist. Am meisten jedenfalls kommen für uns die oxydierenden Eigenschaften in Frage und es erwächst uns daher die selbstverständliche Aufgabe, beim p]indecken der Präparate die Möglichkeit der nachfolgenden Oxydation tun- lichst zu beschränken. Aus diesem Grunde soll man immer ein recht großes Deckglas nehmen, damit der Rand desselben in weiter Entfernung von der Peripherie des Schnittes befindlich ist; denn die Luft dringt seitlich ein und das Abblassen der Schnitte erfolgt bei Oxydation immer von ihren Randteilen aus. Aus diesem Grunde benutze ich seit vielen Jahren die bekannten Deckgläser zu 18 mm Seite überhaupt nicht mehr und dulde dies auch nicht bei meinen Schülern ; die von uns hierorts gewöhnlich verwandten Deck- glasgrößen sind die von 21/26 und 25/32 mm Seitenlänge, Außerdem soll man meiner Meinung nach so wenig wie m ögli eil Kanadabalsam zwischen Deckglas und Objektträger haben. Denn wenn wir schon genau wissen, daß der Balsam nachteilig auf 400 Heidenhain: Über die Haltbarkeit mikroskopisch. Präparate. XXV, 4. die Haltbarkeit der Farben einwirkt , dann ist es mir rationell , die Balsamschicbt auf ein Minimum zu reduzieren. Diesen Zweck er- reicht man leicht, wenn man das Deckglas in bekannter Art mit einem Spitzgeschoß belastet, wie dies allgemein üblich ist, um die Schnitte flach zu pressen. Bei dieser Gelegenheit wird der überschüssige Balsam seitlich herausgepreßt und das Deckglas sinkt auf die Oberfläche des Schnittes herunter, besonders dann, wenn man den Objektträger auf dem Thermostaten legt. Dieser letztere Punkt, daß die Oberfläche des Schnittes der ünter- fläche des Deckglases anliegen soll, ist auch optisch wichtig. Denn auf Grund vieler Erfahrungen hat sich mir gezeigt, daß eine dicke Kanadabalsamschicht ähnlich wirkt, wie ein zu dickes Deckglas, welches , wie bekannt , die feineren Details des Schnittes unerkenn- bar macht. Es nützt daher nichts, wenn man Deckgläser von rich- tiger Dicke benutzt, dann aber, beim Eindecken, zu viel Balsam nimmt. Das Belasten der Deckgläser mit Spitzgeschossen ist eine pri- mitive Methode, welche unsauber wird, sobald der Balsam auf das Deckglas tritt und die Basis des Geschosses benetzt. Daher benutze ich zum Niederpressen des Deckglases besondere Deckglas -Klemm- pinzetten , welche früher schon einmal im Handel erhältlich waren und jetzt wieder von dem Instrumenteumacher Dubois , Tübingen, Neckarhalde, angefertigt werden. — Auch über die lösenden Eigenschaften des Kanada- balsams habe ich mehrfach bemerkenswerte Erfahrungen gemacht; so verlor ich eine Reihe von Safraninprä paraten dadurch , daß der Balsam die Farbe in ganzen Wolken aufnahm. Man wird sich hierbei auch dessen erinnern, daß der Balsam das Chromsilber gut löst, weswegen es allgemein üblich ist, die Golgi- Präparate nicht einzudecken, damit nämlich die völlige Austrocknung des Präparates möglichst rasch vonstatten geht. Weniger bekannt dürfte es sein, daß der Balsam auch das reduzierte Osmium zur Lösung bringt : leider sind mir auf diese Weise mehrere feine Präparate über Fett- resorption zugrunde gegangen. Ich habe indessen gegenwärtig einen Versuch gemacht, das Osmium durch Verwandlung in das Sulfid zu fixieren und verspreche mir davon einen vollen Erfolg. Zu diesem Behuf habe ich das osmierte Gewebestück in ein geschlossenes Ge- fäß mit 70 Prozent Alkohol übertragen und ein kleines Stückchen Na2S hinzugegeben. Die Osmiumschwärzung wird auf diese Weise sichtlich intensiver und da die Sulfide im allgemeinen Körper von XXV, 4. Heiden liain: Vanadhimhäinatoxylin, Pikroblauschwarz usw. 4.0 1 sehr geringer Veränderliclikeit sind, so darf ich erwarten, daß der Erfolg der Absicht entspricht. [Eingegangen am 28. November 1908.] Über Yanadiumhäinatoxvlin, Pikroblauschwarz und Kongo -Korinth. Von Martin Heidenhain in Tübingen. Seit dem Jahre 1893 verwende ich das Vanadiumhämatoxylin in der feineren Histologie , besonders zum Zwecke der Plasma- und Schleimtarbungen. Die Methode ließ ich durch meinen Schüler Th. Cohn kurz publizieren ^, doch ist sie von anderen Autoren nur selten gehandhabt worden , weil die Resultate unsicher waren . auch die geringe Haltbarkeit der Farbstofflösung einer systemati- schen Verwendung im Wege stand. Da es sich jedoch um eine progressive , polychrome , im Schnitt selbst ungemein haltbare und in ihrer Eigenart kaum ersetzliche Methode handelt, so habe ich sie doch immer wieder von Zeit zu Zeit in Anwendung gebracht und erheblichen Nutzen daraus gezogen. Hierbei wurden dann all- mählich auch neue Erfahrungen gewonnen, welche schließlich ge- statteten das Verfahren erheblich zu verbessern. Der zufällige Um- stand , daß Herr Dr. Lams von Gent im letzten Sommer auf dem hiesigen Institute unter meiner Leitung mit Vanadiumhämatoxylin ge- arbeitet und dabei auch recht gute Resultate gehabt hat, ist für mich die äußere Veranlassung gewesen , die früheren Erfahrungen zu sammeln, alte Präparate von neuem zu durchmustern und aber- mals neue anzufertigen, um in dieser neuen Mitteilung die speziellen Bedingungen der Färbung genauer klarlegen zu können. Ich gebe ^) CoHN , Th. , Über Interzellularbrücken und Kittsubstanz (Anat. Hefte Bd. V, 1894). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. 26 402 Heidenhain: Vanadiumhämatoxylin, Pikroblauscliwarz usw. XXV, 4. zu, daß es früher recht schwierig war, das Verfahren mit Glück aus- zuüben, heute aber , auf Grund meiner neuen Angaben , wird es ein leichtes sein, die typischen Bilder ohne weiteres zu reproduzieren. Man erhält die von mir benutzte Vanadiumhämatoxylinlösung, wenn man eine frisch bereitete ^/gprozentige Lösung von Häraatoxy- linum purissiraum mit dem halben Volumen einer ^/^ prozentigeu Lösung von Ammoniumvanadat versetzt. Es enteteht sofort eine in- tensiv cyanenblaue Mischung, welche nicht sogleich verwendbar ist. sondern erst nach einigen Tagen die bewußten polychromen Fär- bungen ergibt, wobei sich Bindegewebe, Knorpelgrundsubstanz und Schleimstoffe blau, rote Blutkörperchen, Nucleolen und allerhand Granula gelb bis orange, Muskulatur meist goldbraun, Zellprotoplasma sepiafarbig tingieren. Allein, wenn nun nicht besondere Vorkehrungen getroffen werden, ist nach etwa 8 bis 10 Tagen die Lösung bereits verdorben und histologisch nicht mehr verwertbar. Es entsteht daher die Frage, warum muß die Lösung „reifen", warum färbt sie nach der Reifung polychrom , und wie kann man die Lösung in ihrem günstigen Zustande dauernd aufbewahren , so daß sie sich für systematisches Arbeiten eignen würde? Alles dies beantwortet sich durch die Feststellung der Tatsache, daß die Vana- diumsalze typische Sauerstoft'überträger sind , welche naturgemäß durch diese ihre Eigenschaft den im Moment des Zusamraengießens ent- standenen blauen Farbkörper weiterhin verändern, so daß die Lösung zunächst im histologischen Sinne reift, später aber durch die Fort- dauer des gleichen Prozesses ihrer Färbekraft wiederum beraubt wird. Wenn also die Flüssigkeit zu einer gewissen Zeit bei histo- logischer Verwendung differenziert blau, gelb, braun usw. färbt, so müssen wir daraus schließen, daß sie in diesem Momente ein Ge- misch diverser Farben enthält, welche aus dem anfänglich gegebenen blauen Farbkörper durch sukzessive Oxydation entstanden sind. Dabei haben alle diese Farbstoffe den Charakter saurer Farbkörper, da sie neben einer starken Plasmafärbung doch nur eine schwache Färbung des Basichromatins, dagegen eine bedeutend kräftigere des Oxychromatins ergeben. Für den gewandten Mikroskopiker ist also die Richtschnur des Handelns gegeben. Man muß darauf hinzuwirken suchen, daß die anfänglich erhaltene Lösung bis zu dem richtigen Grade veroxydiert wird, und wenn sie darauf die gewünschten wertvollen Eigenschaften entwickelt hat, muß man sie unter vollkommenem Luftabschluß auf- bewahren. XXV, 4. Heitlenhain: V'anadiuuihämatoxylin, Pikroblauschwarz usw. 403 Es kommt also zunächst darauf an , den Oxydationsprozeß zu regeln. Die Schnelligkeit und Intensität dieses Vorganges wird natur- gemäß davon abhängen, wie groß das Volumen der P\arbstofffliissig- keit ist und welche Ausdehnung die mit der Luft in Berührung stehende freie Oberfläche hat, durch welche der Sauerstott hindurch- zutreten vermag. Wenn wir dasselbe Flüssigkeitsvolumen das eine Mal in einem hohen Maßzylinder, das andere Mal in einer flachen Schale der Luft aussetzen, erhalten wir naturgemäß gänzlich ver- schiedene Resultate. Die mit der Luft in Berührung stehende Farb- stotfschicht verwandelt ihre Nuance in gesetzmäßiger Weise von blau über indigo nach braun ; die braunen Farbstoffe wiederum nehmen allmählich hellere , gelblichere Tönungen an. In jenem hohen Maß- zylinder wird nun während mehrerer Tage die Oberflächenschicht er- heblich verändert werden, während die tieferen P'arbstoftmassen wesentlich unverändert bleiben ; in der flachen Schale dagegen dringt der Oxydationsprozeß schnell in die Tiefe und wir erhalten alsbald eine braune Lösung, Um den Hergang konstant zu machen, ver- fahre ich nun ein für allemal in der nämlichen Weise wie folgt: Zu 200 ccm einer frischbereiteten ^/g prozentigen Hämatoxylinlösung werden 100 ccm der ^/^ prozentigen Lösung von Aramoniumvanadat hinzugegossen. Diese 300 ccm Flüssigkeit setze ich in einer ott'eneu Kochflasche von 500 ccm Inhalt der Oxydation aus; hier kommt also dasselbe Flüssigkeitsvolumen immer mit demselben Luftvolumen in Berührung und die Ausdehnung der Trennungsfläche wird immer die gleiche sein. Je nach 24 Stunden schüttele ich die Flüssigkeit ein- mal um. Man wird nun in den ersten Tagen noch keinerlei Ver- färbung bemerken; darauf jedoch zeigt sich bei genauem Zusehen an der Oberfläche eine bräunliche Schicht, welche somit täglich ein- mal untergeschüttelt wird. Ist dies letztere mehrere Male geschehen, so mache man die erste Probefärbung (über Fixierung, Schnitt- dicke usw. siehe unten). Als Objekt nimmt man am besten Quer- oder Langschnitte durch eine Amphibienlarve , damit man die ver- schiedensten Gewebeformen beieinander hat. Die Lösung muß bei typischer Wirkung das Bindegewebe prachtvoll blau , die Mus- kulatur goldbraun bis hochorange , die Epithelien dunkler braun zeigen. Geringe Variationen in den Tönungen sind natürlich immer vorhanden. Die Muskulatur kann sich z. B. auch bei einer guten Lösung dunkler braun darstellen, man wird aber dann die gelben Tönungen mindestens in den Blutkörperchen, Nucleolen und in ver- schiedenen Granulaformen vorfinden; besonders soll man die Lösung 26* 4Ö4 Heidenhain: Vanadiumhämatoxylin, Pikroblauschwarz usw. XXV, 4; nicht für gut halten, wenn nicht das Bindegewebe von den Muskehi und Epithelien scharf und deutlich in der Nuance abweicht. Die Probefärbungen werden von da ab alle 24 Stunden wiederholt, ge- wöhnlich pflegt man in einigen weiteren Tagen am Ziele zu sein. Neuerdings habe ich, wenn ich einmal bei der Arbeit war, an meh- reren aufeinander folgenden Tagen mehrere frische Quantitäten der Lösung angesetzt und habe mir dann schließlich diejenige behalten, welche mir die besten Resultate gab. Das Färben selbst ist das einfachste Ding von der Welt. Die Schnitte werden in die Lösung hineingesteckt und fortdauernd kontrolliert. In 5 bis 10 Minuten pflegt die Färbung fertig zu sein. Schwach zu färben hat bei dieser Tinktion, welche auf dünne Schnitte (5 fA) angewendet wird, keinen Wert. Man wäscht die Präparate gut aus, entwässert und bringt sie schnell durch Xylol hindurch in Balsam. Es geht nämlich bei längerem Stehen in Xylol die Färbung stark zurück. Dies hat darin seinen Grund , daß , wie wir durch Michaelis wissen . die freien Farbsäuren in Xylol löslich sind ; das Vanadiumhämatoxylin hat aber nach allen färberischen Erscheinungen saure Eigenschaften und es ist daher zu vermuten, daß der saure Charakter des reinen HämatoxyUns durch die Behandlung mit Vanadiumsalzen keine wesentliche Ver- änderung erfährt. Hat man *sine gut färbende Lösung , so ist es ein Vergnügen damit zu arbeiten ; jeder Versuch gelingt. Die Färbungen wickeln sich mit solcher Präzision ab , daß ich zu Kurszwecken im letzten Sommer Massenfärbungen auf Glimmerplatten in großer Menge pro- duziert habe. Die Aufbewahrung unter Luftabschluß läßt sich leicht erzielen, wenn man sich einen ,,Scheidetrichter" von 500 ccm Inhalt besorgt, die Lösung hineinfüllt und den übrigbleibenden Raum mit Paraffiuum liquidum oder einem indift'erenten Fette füllt. Ätherische Öle (Ter- pentin usw.) müssen selbstverständlich vermieden werden, da sie Sauerstoff schlucken und oxydierend wirken; Xylol ist ebenso un- brauchbar, weil, wie schon erwähnt, die Farbe sich darin löst. Für diejenigen, welche das erwähnte Instrument, den Scheidetrichter, zu- fälligerweise nicht kennen sollten, bemerke ich, daß es sich um ein kugliges Glasgefäß handelt, mit einem unteren, durch einen Glashahn verschließbaren Ablauf und einem oberen Tubus mit eingeschliffenem Pfropfen. Den Scheidetrichter setze ich vertikal in den eisernen Eine: eines gewöhnlichen Laboratorium - Stativs ein und entnehme zu Pärbczweckeu nur eine geringe Quantität der Flüssigkeit. Diese XXV, 4. Heidenhain: Vanadiuiahämatoxylin, Pikroblauschwarz usw. 405 habe icli unmittelbar nacli dem Gebrauch wiederum von oben her durch die Paraftinschiclit zurückgegossen. Sollten in der abgezapften Jjösung Paraflintriipfclien schwimmen, so muß man filtrieren. Die Farbstotfmischung hält sich unter diesen Umständen lange. Wie lange, kann ich genau nicht sagen. Eine Quantität von 300 ccm stand 3 Monate und lieferte dann noch die typische, wenngleich selir viel schwächere Tinktion. Die Vanadiumliämatoxylinfärbung wende ich an auf Präparate, die in Sublimat, Trichloressigsäure oder in einer Mischung aus beiden mit einem Zusatz von Essigsäure konserviert wurden. Das hier er- wähnte Gemisch aus konzentrierter Sublimatlösung 100, Trichlor- essigsäure 2 und Eisessig 1 wende ich seit dem Jahre 1894 an; es geht auf dem hiesigen Laboratorium unter dem Phantasienamen „Subtriessig'''. Was die Fixierungsresultate anlangt, so sind sie sicherlich durchschnittlich besser, als bei Anwendung reiner Sublimat- lösung: man darf nur mit Rücksicht auf die Trichloressigsäure die Stücke nicht in reinem Wasser auswaschen , sondern muß sie sofort in einen starken Alkohol, mindestens 90prozentigen , übertragen. Dieses Gemisch durclidringt leicht größere Stücke, fixiert gleichartig in allen Teilen und macht die Gewebe stark widerstandsfähig. Vor- züglich bewährt hat es sich bei drüsigen Organen, bei lymphatischen Gewebeformen, bei Amphibienlarven und Embryonen. Die Färbbar- keit ist ausgezeichnet. Einen Teil meiner besten Präparate ver- danke ich diesem Gemisch. Eigenartig ist, daß die blaue Binde- gewebsfärbung nach Vanadiumhämatoxyliu bei Anwendung des ,,Subtriessig" viel intensiver und leuchtender wird , als bei reiner Sublimatfixierung. — Ich lasse die Spezialbeschreibung einiger weniger Präparate folgen, damit der Leser von der Art der Polychromie einen näheren Eindruck bekomme. Larven vom Salamander und Triton, quer- und langgeschnitteu, aus Subtriessig : Muskulatur prachtvoll goldfarben ; Myosepten und Cutislage schön schwarzblau, Knorpelgrundsubstanz (Primordialkranium und Rippen) hellblau, sämtliche Arten von Schleimsubstanz ebenfalls blau, Protoplasma der Epithelien sepiafarben. Besonderheiten: eine günstige Darstellung der Querstreifung ließ sich nicht erzielen ; es war sehr auffallend , daß der Z - Streifen , welcher nach Sublimat- fixierung bei gleicher Technik am menschlichen Herzen und bei an- deren Objekten sehr schön ausgefärbt wird, hier nicht sichtbar war; 406 Ueidenhain: N'anadiurahämatoxylin. Pikroblauschwarz usw. XXV, 4. dagegen zeigten die Querschnittsbilder der Muskulatur eine sehr feine Diflerenzierung. Ferner wurden die Sarkolemme scliwarzblau gefärbt und traten prächtig hervor. Knorpelkapsehi gleichfalls dunkelblau, Vakuolen der LEVDiGSchen Zellen hellblau (schon von Dr. Lams beobachtet), Pankreas -Granula gelb. Zunge , Hund , Trichloressigsäure : Epithel in den tiefen Teilen braun, in den haibverhoniten Teilen bläulich, die stark verhornten Papillensi)itzen gelb, Eleidinkörner goldgelb. Muskeln braun, Z-Streifen indigofarben. Zungenepitliel vom Menschen nach Sublimat: prächtig differenziert in der beschriebenen Art. Eleidin ebenfalls goldgelb. Froschdarm, Subtriessig: das Objekt ist prachtvoll konserviert. Epithel schön braun, Schleimgranula und Becherzellen überall intensiv blau, Bindegewebe der Schleimliaut dunkelschwarzblau ; glatte Mus- kulatur braun, das zugehörige Bindegewebe. Längs- und Querlamel- len, blau. Magen, Katze, Fundusteil. Sublimat: Plasma der Epithelzellen wie gewöhnlich braun, Belegzellen dunkler; Schleimkelche des Ober- flächenepithels blau. Außerdem zeigen sich in der Halsgegend der Drüsen zahlreiche blaugefärbte Schleimzellen , welche im Drüsen- körper immer noch reichlich sind , aber gegen das blinde Ende der Schläuche hin nur noch vereinzelt zwischen den Hauptzellen auf- treten. Im Fundusteil des menschlichen Magens (Sublimat) färben sich die Schleimkelche des Obertiächenepithels prachtvoll dunkelblau. Auch hier sind im Halsteil der Drüsen, abgesehen von den Beleg- zellen, alle oder fast alle Epitlielzellen blau gefärbt; die blau färb- baren Zellen nehmen aber gegen den Drüsenkörper hin ab und treten hier nur noch vereinzelt zwischen den echten Hauptzellen auf. Das Protoplasma der Epithelien ist im übrigen wie immer braun gefärbt. Die spezifischen Zellen der Pylorusdrüsen werden beim Menschen (nach Sublimat) durchgeheuds blau gefärbt (schon von Dr. Lams be- obachtet). Milz der Katze, Subtriessig. Das Präparat befand sich in aus- gezeichnetem Erhaltungsznstande. Von diesem bekannten Objekte der histologischen Kurse fertige ich nur noch Flachschnitte an, weil auf diesen sich eine gewisse Orientierung der Struktur zeigt. Man durch- quert nämlich dabei einen größeren Teil der gröberen Milzbalkeu mit ihren Gefäßen und ebenso einen sehr großen Teil der Schweigger- Seidel sehen Arterienhülsen. Letztere treten schon bei schwacher Vergrößerung als eine Unmasse rundlicher Scheibchen hervor, in deren Zentrum je ein dunkler Fleck, der Gefäßdurchschnitt, liegt. XXV, 4. Heidenhain: Vanadiumhämatoxylin, Pikroblauschwarz usw. 407 Die Milzbalken sind im ganzen dunkel gefärbt und zerlegen sich an besseren Präparaten leicht in Muskelzellen (braun) und interstitielles Bindegewebe (blau). Der Hauptvorteil solcher Präparate liegt in einer ausgedehnten Retikulumfärbung und in der sehr deutlich her- vortretenden Blutverteilung (Blutkörperchen goldgelb). Die Reti- kulumfiiserchen sind dunkel färbbar und bilden in der Pulpa leicht kenntliche dreidimensionale, engmaschige Netze. In der Peripherie der Malpighi sehen Körperchen sieht man die tangentiale Streckung der hier derberen Retikulumfasern. Sehr schön treten die Venen- kapillaren hervor; man kann leicht ihre Einmündung in die weiten Venen der Milzbalken und anderseits den Übergang ihrer Wände in das Retikulum der Pulpa beobachten. Die roten Blutkörperchen sieht man überall in den Retikulum-Maschen herumliegen und man bemerkt, wie sie sich beim Übergang in die Venenkapillaren zusammendrängen und in diese eintreten. Gute Resultate ergaben ferner die gemischten Speicheldrüsen wegen der Differenzfärbung zwischen serösen und Schleimzellen. Auch sollte die Tränendrüse von neuem untersucht werden, da die sezernierenden Zellen zum Teil blaue Farbe (Schleimstoffe V) an- nahmen. Eine hübsche und sehr nützliche Bindegewebsfärbung habe ich mit einer pikrinsäurehaltigen Lösung des B lausch war z B erhalten. Auch diese Färbung übe ich schon seit Jahren aus und verwende sie vielfach für Kurszwecke. Meine Vorschrift lautet: Blauschwarz ß 1 Pikrinsäure, konz -100 Methylalkohol 80 Wasser . 'ÖO Diese Farblösung hält sich unbegrenzt und wird entweder unver- dünnt oder besser nach Zusatz des gleichen Volumens Wasser in Gebrauch genommen. Sie färbt bei Präparaten aus Sublimat, Subtri- essig , Trichloressigsäure , Alkohol usw. in ausgezeichnetem Grade die fibrillären und membranösen Bestandteile des Bindegewebes, und zwar bei erwachsenen Geschöpfen ebenso wie bei Embryonen. Lehr- reiche Präparate erhielt ich unter anderem von dem Retikulum in den Lymphdrüsen und in der Milz, ferner von den Basalmembranen der Epithelien und von der Entwicklung der leimgebenden Fibrillen bei Embryonen. 408 Heidenhain: Vanadiuiuhämatoxylin, Pikroblauschwarz usw. XXV, 4. Da die Pikroblauschwarzfärbung nur eine „Nachfärbung" ist, so tingiere ich zunächst alle Präparate, auf welche diese Technik angewendet werden soll, sehr intensiv mit Paul Mayer schem Karm- alaun. Hierbei braucht man eine anfängliche Überfärbung nicht zu scheuen, da das nachfolgende pikrinsäurehaltige Gemisch auf das Karmin differenzierend wirkt. Die Blauschwarzlösung wirkt ferner verhältnismäßig rasch, so daß man die Einwirkung des Farbstoffes gut kontrollieren muß. Als ein besonders schönes Objekt zur Darstellung der Basal- membranen empfehle ich die Nierenpapille vom Kaninchen ; aber auch die Rindensubstanz läßt die in Betracht kominenden Verhältnisse immerhin noch in deutlichem Grade erkennen. Sehr demonstrative Präparate erhielt ich unter anderem auch von einer menschlichen Niere, welche mit Trichloressigsäure gehärtet worden war. Was das Binde- gewebsretikulum anlangt, so läßt sich an der Hand dieser Methode nachweisen, daß die Retikulumfäserchen in der Tat innerhalb der Zellenleiber liegen. Dies wird in der Marksubstanz der Lymphdrüsen leicht erkennbar, und zwar bemerkt man, daß die Fäserchen der Oberfläche der Retikulumzellen von iimen her anliegen , ein Lage- verhältnis, welches freilich beim Übergang in die feinen anastomosieren- den Zellausläufer allmählich undeutlich wird. Protoplasmatische Zell- fortsätze und Retikulumfasern fallen hier gleichsam in eins zusammen. Sucht man sich jedoch den optischen Querschnitt eines etwas dickeren Bälkchens aus , so lassen sich Zellplasma und Retikulumfasern von- einander trennen ; man gewahrt, daß die Faser allseitig von Plasma umhüllt wird und daß ihr Querschnitt exzentrisch innerhalb der Plasma- masse liegt. Viele Retikulumzellen sind ferner derartig gelagert, daß mehrfache unter sich verbundene Fäserchen an verschiedenen Seiten des Zellkörpers entlang laufen; dann sieht es so aus, als ob die Zellen in einem Körbchen ruhen , wobei jedoch immer deutlich bleibt, daß die Fäserchen der Zelloberfläche von innen her aufliegen. Die Pikroblauschwarz-Präparate scheinen völlig konstant zu sein; ich konnte ein Zurückgehen der Farbe nicht beobachten. An dritter und letzter Stelle wünsche ich meine früheren Mit- teilungen über die Behandlung der Kongofarbstoffe zweckmäßig zu ergänzen. Bekanntlich war es früher nicht Sitte , aus rein alkoho- lischer Lösung zu färben, und es war dies auch nicht möglich, denn XXV, 4. Heidenliain: Nanadiumhäiuatoxylin, Pikroblauschwarz; usw. 499 die bis dahin bekaunteu Farblcörper verloren ihre Tinktionsfähigkeit bei Auflösung" in absolutem Alkohol vollkommen. Indessen schien es mir wünschenswert, bei voraufgehender Färbung in Delapield- schem llämatoxylin aus rein alkoholischen Farblösungen nachzufärben, und durch vieles Experimentieren fand ich schließlich in gewissen Kongo färben , sowie in den Chromotropen die geeigneten MittelJ Nach meinem Verfahren werden die durch Brunnenwasser oder Alkali bereits gebläuten Hämatoxylinschnitte in der alkoholischen Farbstoft- lösung tingiert, darauf in absolutem Alkohol abgewaschen und sofort durch Xylol in Balsam gebracht. Da ich nun seit Jahren in der Tat Tausende von Schnitten in dieser Weise gefärbt habe, so bin ich nunmehr in der Lage, meine früheren Angaben in einigen Punkten berichtigen zu können. Was die Chromotrope anlangt , so sind sie sehr leicht zu be- handeln und habe ich demgemäß keine Veranlassung, noch einmal auf diesen Gegenstand einzugehen ; ich erwähne nur, daß besonders der Chromotrop 2R sich als ein äußerst toleranter Farbstoff er- wiesen hat, welcher niemals versagt und aus diesem Grunde sehr zu empfehlen ist. Von den Amidoazokörpern verwende ich das Azokarmiu nicht mehr, weil es oftmals unzuverlässig gefunden wurde. Ebenso bin ich bei den Kongo farbstoffen gelegentlich auf Hinder- nisse gestoßen, von denen ich hier sprechen will. Ich benutzte bis- her das Benzopurpurin 6 B und das Kongokorinth G. Es stellte sich nun zunächst heraus , daß nach Anfertigung einer konzentrierten Lösung des Farbkörpers in absolutem Alkohol die Lösung nicht über dem überschüssigen Farbstoflfsedimente stehen bleiben darf, weil in diesem Falle der Farbstoff die Neigung hat, aus der Lösung aus- zufallen. Ich lasse also die durch kräftiges Umschütteln konzentrierte Lösung nur 24 Stunden lang über dem Farbstoffpulver stehen, damit dieses sich vollständig zu Boden senkt, und filtriere alsdann sorg- fältig. Die reine Lösung des Kongokorinth bleibt nunmehr ganz und gar konstant und ist jedesfalls durch viele Monate hindurch in gleicher Weise verwendbar. Anders die Lösung der Benzopurpurine; diese sind sehr empfindlich und der Farbstoff fällt oft auch unter diesen Umständen teilweise aus. Ja noch mehr : die Benzopurpurine fallen oft in dem Momente aus, in welchem sie mit den Schnitten in ^) Siehe diese Zeitschr. Bd. XX, 1903: Über die zweckmäßige Ver- wendung des Kongo und anderer Amidoazokörper usw. ; sowie Bd. XXII, 1905: Über die Anwendung des Azokarmins und der Chromotrope. 410 Ssobolew: Zur ('elloülintechnik. XXV, 4. Berührung gebracht werden. Ich bin daher immer mehr und mehr von der Verwendung dieser Farbkörper zurückgekommen und bin bei dem Kongokorinth G stehen geblieben, welches in leichter Weise gute Resultate liefert. Da jedoch die Benzopurpurine einen stark gelbroten Ton haben, welcher sehr geeignet ist, die bläuliche Grund- farbe vieler Häraatoxylinpräparate vollständig zuzudecken, wodurch die Kernfärbung reiner hervortritt, so habe ich doch nicht vollständig auf ihre Anwendung verzichtet. Fällt der Farbkörper über den Schnitten aus, so ist ja das Präparat nicht verloren, denn in Alkohol oder Wasser ist das Präzipitat sofort löslich ; man erhält daher die Schnitte in demselben Zustande zurück, in welchem sie in die Farb- stofflösung hineingebracht wurden. Es verlohnt daher immerhin ein Versuch, besonders bei gewissen Organen, die mit Benzopurpurin be- sonders schöne Bilder liefern ; dazu würden beispielsweise die Milz und die Fundusschleimhaut gehören. [Eingegangen am M. November 1908.] Zur Celloidintechnik. Von Dr. L. W. SsoboleAv, Prosektor am pathol.-anat. Institut d. k. medizinischen Militär-Akademie in St. Petersburg. Direktor: Prof. A. Moissejeff. Das Celloidin als Einbettungsmittel ist schon längst bei den Pathologen beliebt und dem Paraffin vorgezogen. An den patho- logisch veränderten Geweben, die meist auch von den nicht ganz frischen Leichen herstammen, sind die Vorzüge der Celloidinmethode besonders klar in die Augen fallend. In der letzten Zeit scheint das Celloidin auch beim Studium normaler Histologie das Parattin zu verdrängen und es wird viel darüber gearbeitet, um die der Methode anhaftenden Nachteile zu beseitigen. Diese Nachteile liegen wohl in der Schwierigkeit: 1) Sehr feine Schnitte zu machen, 2) Serien- schnitte bequem zu bearbeiten und 3) die Schnitte tadellos aus- zubreiten. Den zwei erstgenannten Nachteilen versuchen zwei im letzten Hefte der Zeitschrift für wissenschaftliche Mikroskopie ver- XX\,4. Ssobolew: Zur (Jelloidintechnik. 411 ötfentlichte Verfahren abzulielfen. Ich möchte hier kurz über die Weise, wie ich mich schon Uin.irst gegen das letztgenannte Übel jichiitze, berichten. Die schon fertig gefärbten Schnitte fische ich in einer größeren .Schale voll Wasser mit dem Objektträger auf und beseitige gröbere Falten mit der Nadel. Dann gieße ich mit einer Tropfflasche zwei- mal 96prozentigen Alkohol darauf und gleich ab, nun gieße ich aber einen stärkeren etwa 98prozentigen (nicht absolutenj Alkohol darauf. In diesem soll das Celloidiu erweicht aber keineswegs ge- löst werden. Ich drücke jetzt die erweichten Schnitte gegen den Objektträger mit einem weichen Pinsel; Alkohol wird dabei ein- bis zweimal erneuert. Alle trotzigsten Falten geben dabei nach , der Schnitt wird ganz glatt. Jetzt lege ich 3 bis 4 Schichten von P'ließ- papier darauf und fahre darüber mit den Fingerspitzen beim starken Druck. Die Schnitte haften jetzt an der Glasfläche durch Kapillar- attraktion. Gleich darauf werden die Schnitte aufgehellt mit einem (M, welches mit Alkohol keine starken Diffusionsströme gibt — z. B. Kreosot, Bergamottöl oder (für feine Färbungen mit Anilinfarben wie Methylenblau usw.) nicht optisches Zedernholzöl. Erstens verlangen diese Öle keinen absoluten Alkohol und zweitens reißen sie die lose angeklebten Schnitte nur wenig ab. Nach der Aufhellung wird das Öl abgegossen und der etwas gelockerte Zusammenhang der Schnitte mit dem Objektträger durch wiederholtes festes Andrücken mit Fließ- papier verstärkt. Erst jetzt darf man Xylol darauf gießen und die Schnitte damit von Öl und Spuren Alkohols befreien. Dann kommen wie gewöhnlich auf die Schnitte Balsamtropfen und Deckgläschen. Da die Schnitte ganz glatt liegen, so braucht man nachher das Deck- gläschen nicht zu beschweren. Die erforderliche Alkoholkouzentration erreicht man meist durch Mischen von etwa 1^2 bis 2 Teilen 96prozentigen Alkohols und einen Teil absoluten. Für das gute Ausbreiten der Schnitte aus den schon lange Zeit in schwachem Alkohol aufbewahrten Celloidinblöcken ist im allgemeinen etwas stärkerer Alkohol notwendig, als für die frisch eingebetteten. Manchmal, aber doch selten, gelingt es die Schnitte auch direkt mit Xylol, ohne Öl, aufzuhellen. Es reißt sich doch immer ein kleiner Teil des Schnittes vom Objektträger ab. Im ganzen ist die Ausführung der Methode sehr schnell und sicher. Ich möchte nebenbei bemerken, wie ich das Celloidin vollständig ausnütze. Mit der Zeit wird das Celloidin wasser- und fetthaltig und dadurch unbrauchbar. Wasser kann man austrocknen, Fett ist 412 Hoyer: Eine neue Vorrichtung zu Injektionen. XXV, 4. aber schwierig wegzubriugeu. Für den letzten Zweck lege ich die Celloidiuabfälle in den billigen Brennspiritus (Methyl oder sogen, denaturierten Äthyl-Alkohol). Flüssiges Celloidin lasse ich erst durch Austrockuung etwas erhärten. Es ist nicht empfehlenswert . das Celloidin vollständig auszutrocknen, da viele Salze und das Fett, ein- mal im Alkohol-Äther gelöst, viel besser durch den Spiritus aus- gewaschen werden. Ich wechsle Spiritus ein- bis zweimal — die letzte Portion gebrauche ich wieder — und trockne das Celloidin aus. Nach der Lösung sinken die Staub- und andere Partikelcheu auf den Boden des Gefäßes. [Eingegangen am 21. November 1908.] Eine neue A^orriehtung zu Injektionen. Von Prof. H. Hoyer in Krakau. Hierzu drei Textabbildungen. Von den zahlreichen in frühereu Jahren konstruierten Injektions- apparaten für konstanten Druck ist in neuerer Zeit kaum noch einer in Gebrauch. Auch die in neuester Zeit von Huber (Americ. Journ. of Anat. V. 6, 1906 — 7) und Lindemann (diese Zeitschr. Bd. XXIII, 1906} empfohlenen, den früheren ähnliche Apparate dürften sich, soweit ich dies aus den Beschreibungen und Abbildungen beurteilen kann , kaum einer allgemeinen Anerkennung erfreuen . weil mittels derselben ein sich völlig gleich bleibender und länger andauernder Druck nicht erzielt werden kann. Wie jedoch aus den zahlreichen Angaben solcher Apparate hervorgeht, macht sich immer wieder das Bedürfnis nach einem guten Druckapparat geltend, einerseits weil es unter Umständen notwendig ist, bei Injektionen den natürlichen Druckverhältnissen möglichst nahe zu kommen , anderseits weil die geringen Dimensionen der zu injizierenden Objekte die Anwendung XXV. 4. lloycr: Eine neue Vorrichtung zu Injektionen. 413 von Injektionsspritzen außerordentlich erschweren. Auch ich empfand bei meinen Untersuchungen das Bedürfnis nach einem geeigneten Druckapparate, doch kam es mir dabei weniger auf den konstanten Druck an als gerade auf den zweiten Punkt, nämlich auf eine ge- sonderte von der Hand unabhängige Druckkraft. Nachdem ich mich bei meinen Injektionen längere Zeit hindurch sehr primitiver Ein- richtungen , die nicht immer zum Ziele führten , bedient hatte , ging ich daran, eine Vorrichtung zusammenzustellen, welche das Arbeiten bequemer, leichter und sicherer gestaltete. Im folgenden gebe ich die Beschreibung dieser Vorrichtung, die ich bereits seit zwei Jahren in Gebrauch habe und die ich warm empfehlen kann. Obwohl ich dieselbe speziell zu Injektionen von Blut- und Lymphgefäßen von Larven und Embryonen benutze, kann dieselbe auch eine allgemeinere Verwendung finden z. B, in Fällen, wo es sich um einen ganz bestimmten konstanten Druck handelt, der längere Zeit ohne Unterbrechung einwirken soll. Die wesentlichsten Bestandteile dieser Vorrichtung bildet ein Stahlzylinder mit komprimierter Luft und ein sogenanntes Druck- reduzierventil, Die Stahlzylinder werden von verschiedenen Firmen in ver- schiedener Größe geliefert. Ein Zylinder von 1 m Höhe und lO'ö Liter kubischen Inhalts, welcher bei 100 Atm, Druck ungefähr 1050 Liter komprimierte Luft enthält (derselbe ist auf 250 Atm. amtlich geprüft), ist vollkommen ausreichend und für den vorliegen- den Zweck am bequemsten. Sein Preis stellt sich ohne Füllung auf 45 M, Der Zylinder wird mit gereinigter atmosphärischer Luft gefüllt, was wohl in jedem physikalischen Institut, das einen Kom- pressor besitzt, leicht bewerkstelligt werden kann. Der zweite unumgänglich notwendige Bestandteil der Vorrichtung ist das Druckreduzierventil. Derartige Ventile werden gegenwärtig in der Technik vielfach benutzt und verfolgen den Zweck, den im Zylinder herrschenden Druck auf jeden beliebigen geringeren Druck zu reduzieren und auf demselben konstant zu erhalten. Dieselben werden in verschiedener Form und Ausführung von der Firma „Drägerwerk" in Lübeck geliefert und stellen sich auf oO bis 40 M. Für meine Untersuchungen hat sich das als „Drägers X- Automat, Modell X" No. 1 bezeichnete Druckreduzierventil (Fig, 1) am ge- eignetsten erwiesen. Dasselbe ist ein Präzisionsinstrument, welches eine genaue Regulation des Arbeitsdruckes innerhalb einer Atmo- sphäre ermöglicht. Der Arbeitsdruck wird au dem auf Zehntelgrade 414 Hoyer: Eine neue Vorrichtung zu Injektionen. XXV, 4. eingeteilten Manometer M abgelesen. Doch gibt es auch Druck- rednziervcntile für V» : ^Va: 2 bis 5 Atm. Arbeitsdruck. Mittels der Regulierschraube R kann der Druck, unter welchem die Luft ausströmt, auf eine beliebige Höhe (bei Automat Nr. 1 also aut Zehntel einer Atmosphäre) eingestellt werden. An dem Druck- reduzierventil ist ferner ein sogenanntes Finimeter F angebracht, welches mittels eines Zeigers auf einer Skala den im Stahlzylinder vorhandenen Atmosphärendruck angibt. Derselbe läßt durch Multi- plikation mit dem Inhalt des Stahl- zylinders den noch vorhandenen Vorrat an Luft leicht berechnen. In der Figur 1 bedeutet noch N die Ausfluß- röhre 1 S das Sicherheitsventil , A die Anschlußverschraubung, V das Zylinder- verschlußventil. Ist der Stahlzylinder mit kompri- mierter Luft gefüllt und das Druckredn- zierventil an denselben angeschraubt, so braucht behufs Vornahme einer Injektion die Ausflußröhre N mittels eines Gummi- schlauches nur mit einem die Injektions- masse enthaltenden Gefäß und dieses ebenfalls mittels eines Gummischlauches mit der Kanüle verbunden zu werden. Wird nun die Regulierschraube unter Kontrolle des Manometers geöfi^'net, bis der gewünschte Druck erreicht ist, so fließt di€ Masse aus der Kanüle kontinuierlich aus. Für sehr kleine und zarte Objekte, wie Larven und Embryoneu, ist jedoch eine so einfache Vorrichtung nur dann verwendbar, wenn man sich beständig eines Gehilfen bedient, welcher auf Kommando die Regulierschraube öfi'net oder schließt. Da eine solche Assistenz oft störend wirkt, so müssen andere Vorkehrungen getroffen werden. Bei derartigen Injektionen kommen, wie gesagt, ganz andere Ge- sichtspunkte in Betracht. Da bei den geringen Dimensionen der Objekte von einem Einbinden der Kanüle nicht die Rede sein kann, so kommen bei der Injektion von Blut- und Lymphgefäßen nur sehr feine Einstichkanüleu zur Verwendung. Dieselben müssen an ge- eigneter Stelle in das Gefäß eingestochen, womöglich in demselben weiter vorgeschoben und in dieser Lage möglichst ohne jede Be- 1. XXV. 4. Iloyer: Eine neue Vorrichtung zu Injektionen. 41;') we2), der mit Hilfe des Mikroskops die Intensität und Polarisation des an Kanten gebeugten Lichtes untersuchte. Nur in dem Buch von J. Fröhlich, „Über die Polarisation des von Glasgittern gebeugten Lichtes" (Teubuer, Leipzig 1907) findet sich eine ausführliche Berücksichtigung der Ab- hängigkeit der gebeugten Strahlen A'om Azimut der Beleuchtung. Es beschränkt sich jedoch der Autor auf Glasgitter und stellt außerdem die Lage der Polarisationsebenen in dem abgebeugten Büschel niclit die relative Helligkeit des gebeugten Lichtes in den Vordergrund. Es ist nicht meine Absicht, hier eine ausführliche experimentelle Untersuchung über die Eigenschaften des räumlichen Beugungsfächers an Kanten zu geben, das Avürde über den Kahmen dieser Zeitschrift hinausgehen. Von fundamentaler Bedeutung für alle mikrosko- pischen Beobachtungen ist aber das Hauptresultat einiger dahiu- zielender einfacher Versuche bei einer speziellen Lage der Achse des abgebeugten Kegels, nämlich senkrecht zur Kante, wie es der normalen mikroskopischen Anordnung entspricht. Danach er- gibt sich, daß die Intensität des Beugungsfächers an Kanten in der Richtung senkrecht zur Kante gemessen ein Maximum erreicht, wenn das relative Azimut der Beleuchtung zur Kaute 90^ oder 270" beträgt. Das Maximum ist außerordentlich scharf aus- geprägt, so daß die Intensität des Beugungsfächers schon bei geringer Änderung des relativen Azimuts erheblich sinkt, um je nach der relativen Öfinung des beleuchtenden Büschels schon bei 10 bis XXV, 4. Siedentopf: Sichtbarmachung- von Kanten im mikrosk. Bilde. 4-21 20^ Änderung des relativen Azimuts schnell gegen Null, oder wenig- stens äußerst geringe Intensitätswerte zu konvergieren. Die Beuguug an Kanten u. dgl. Gebilden, welche also nach zwei zueinander senkrechten Dimensionen ultramikroskopische und nur nach der dritten Richtung mikroskopische Ausdehnung haben, ver- läuft danach ganz anders wie bei Ultramikronen , die nach allen Richtungen hin ultramikroskopisch sind. Während bei letzteren eine einfallende ebene Welle Veranlassung zu einer von dem Teilchen ausgehenden Kugelwelle gibt , gehen von den Punkten einer Kante nur in einem engen Kegelraum abgebeugte Lichtstrahlen von für mikroskopische Sichtbarmachung ausreichender Intensität aus. Wir können dieses einfache experimentelle Resultat über die Beugung an Kanten in folgendem Satz zusammenfassen : Kanten u. dgl. Objekte im mikroskopischen Prä- parat beugen in zu ihnen senkrechter Richtung, d.h. in Richtung der Mikroskopachse nur dann Licht in merklichem Betrage ab, wenn das Azimut der Beleuch- tung annähernd senkrecht steht zu der Ebene, welche die Kante und die Mikroskopachse enthält. Die Erscheinung ist in der hinteren Brennebene des Mikroskop- objektivs bei herausgezogenem Okular wie auch am Präparat leicht zu studieren. Sie zeigt sich ganz gleich bei durchsichtigen wie bei absorbierenden Körpern, ferner an mikroskopischen und ultramikroskopischen Kanteudicken. Objekte mit ultramikro- skopischen Kanten sind viele Bakterien , ferner feine Kristallnadeln, die man in Räumen von ultramikroskopischer Dicke nach dem Ver- fahren von H. Ambronn (diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 350) aus- kristallisieren lassen kann. Die letzteren Fälle sind von Bedeutung, um etwaigem Zweifel zu begegnen, wonach man meinen könnte, daß es sich hierbei im wesentlichen um Brechung des Lichtes in der Nähe der Kante handele, die etwa wie ein sehr spitzes Prisma wirken könnte. Um also Kanten im mikroskopischen Bilde sichtbar zu machen, ist es erforderlich, daß im relativen Azimut von 90^ oder 270^ zu ihnen die Beleuchtung liege. Solleu alle unter beliebigem Azimut im Präparat vorhandenen Kanten im Bilde auftreten, so müssen auch die beleuchtenden Strahlen in allen Azimuten liegen. Es ist daher sorgfältig darauf zu achten, daß alle Azimute der beleuchteten Kondensoröffnung von Licht erfüllt sind. Dabei macht es natürlich nichts aus, wenn wir etwa zum Zwecke einer Dunkelfeldbeleuchtung die wirksame Apertur durch eine Zentralblende im Kondensor I)e- 428 Siedentopf: Sichtbarmachung von Kanten im raikrosk. Bilde. XXV, 4. schränken, wenn nur die übrigbleibende ringförmige Öffnung gleich- mäßig von Licht erfüllt wird. Beschränkt man aber das Azimut der Beleuchtung durch eine unter dem Kondensor in den Abbe sehen Diaphragmenträger ein- gelegte Schlitzblende (Fig. 1), so können im mikroskopischen Bilde nur diejenigen Kanten erscheinen, deren relatives Azimut zum Schlitz etwa 90^ oder 270*^ beträgt. Dreht man den Schlitz unter dem Kondensor mit Hilfe des Griffes an dem Abbe sehen Diaphragmen- träger, so werden nach der jeweiligen Stellung der Schlitzblende zum Präparat immer andere Kanten in demselben sichtbar gemacht. Als besonders geeignet zur Demonstration dieser Erscheinung erwies sich ein Planktonmaterial aus dem Mittelmeer, das ich der Güte des Herrn Dr. Nathansohn verdanke. Von den feinen darin enthaltenen Diatomeennadeln wurde in Kanada- balsam ein Streupräparat gemacht, in welchem die Nadeln an jeder Stelle des Feldes ganz beliebig durcheinander orientiert erscheinen. In Figur 2 (Tab. IV) sind sie bei etwa 45facher Vergrößerung mikrophotographisch abgebildet. Die Dunkelfeld- beleuchtung wurde realisiert durch einen gewöhn- 1- liehen Linsenkondensor von etwa 1*4 num. Apertur, auf den das Präparat mit Öl verbunden gelegt wurde, während im Diaphragmenträger eine Zentralblende von 20 mm Durchmesser eingelegt war (diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 13).. Wurde jetzt an Stelle der runden Zentralblende die in Figur 1 abgebildete Schlitzblende im Azimut 90^ eingelegt, so zeigen sich an derselben Stelle im Präparat wie in Figur 2 jetzt nur noch Nadeln, deren Azimut nicht viel von 0*^ abweicht (Fig. 3, Tab. IV). Entsprechend erscheinen ebenfalls an der gleichen Stelle im Präparat wie in Figur 2 nur noch von links nach rechts im Azimut 90^ ver- laufende Striche, wenn das Azimut der Beleuchtung durch Drehen der Schlitzblende nach 0^ verlegt wurde (Fig. 4, Tab. IV). Eine äußerlich sehr merkwürdige, aber nach dem Vorstehenden natürlich leicht erklärliche Erscheinung ergibt sich , wenn man den Kondensor nicht in der vorgeschriebenen festen Anschlagsstellung in der Schiebhülse beläßt , sondern mit Hilfe des Kondensortriebes die Beleuchtung merklich extrafokal einstellt. Das beleuchtete Sehfeld ist dann bei kleinen Lichtquellen nicht mehr ein Kreis, sondern ein ringförmiges Gebiet. Die Zentralpartie des Sehfeldes erscheint bei dieser extrafokalen Einstellung des Kondensors dunkel, weil die XXV, 4. Siedentopf: Sichtbarmachung von Kanten im mikrosk. Bilde. 429 Zeiitralstrahlen zur Erzielung der Dunkelfeldbeleuchtung bereits im Kondensor abgeblendet sind. Das Azimut der Beleuchtung ändert sich bei einer solchen Fo- kussierung der Beleuchtung au allen .Stellen im Sehfeld. Das verrät sich im ultramikroskopischen Bilde der Kanten dadurch , daß die Beugungsstreifen karussellformig angeordnet erscheinen (Fig. 5, Tab. IV). An jeder Stelle des Sehfeldes treten nur die Kanten auf, welche je- weilig rechtwinkelig zum Azimut der Beleuchtung dieser Stelle liegen. Alles andere bleibt unsichtbar. Im gleichen Sinne , wenn auch nicht ganz so stark wie in Figur 5 dargestellt , muß es wirken , wenn nicht der ganze Kon- densor extrafokal eingestellt wird, sondern nur einzelne Partien des- selben infolge starker sphärischer Aberrationen größere oder kleinere Schnittweite als andere Partien haben. Es kann dies besonders deut- lich werden, wenn man ohne Beleuchtungslinse vor dem Kondensor oder ohne vorgeschaltetes Mattglas mit kleinen entfernten Lichtquellen ^Bogenlicht, Sonne) und Zentralblende beleuchtet. Aber auch bei sonst brauchbar korrigierten Kondensoren kann diese Erscheinung des „Karussellbildes" deutlich werden, wenn mau Objektträger benutzt, deren Dicke oder deren Brechungsexponent von dem für die Kondensoren vorgeschriebenen Werte ganz erheblich abweichen. Wir können noch einige weitere praktisch wichtige Folge- rungen aus dem oben aufgestellten Satze über die Beugung an Kanten ziehen , die zum Teil Avohl bekannt sind , meines Wissens aber noch nicht prägnant genug in Beziehung zu diesem Satze ge- stellt wurden. Man kann sich z. B. dieser Erscheinung bedienen, um mit ihrer Hilfe bei Objekten , die vorwiegend aus nach b e - stimmten Richtungen verlaufenden Strichen bestehen, uner- wünschtes Detail im Bilde zum Verschwinden zu bringen, indem man die beleuchtenden Strahlen nur in solchen Azimuten zuläßt, welche für die Sichtbarmachung der vorherrschen- den Richtungen notwendig sind. Bemerkenswert sind ferner einige Eigentümlichkeiten in der Abbildung von Bakterien, die ebenfalls auf die räumlich be- schränkte Ausdehnung des an ihnen wie an Kanten abgebeugten Lichtes zurückzuführen sind. Ich wähle als Beispiel Spirochaete pallida. Figur Qa stellt ein Bild hiervon dar, wenn für vollkommen ringförmige Beleuchtung wie in Figur 2 Sorge getragen ist. Es 430 Siedentopf: Sichtbarmachung von Kanten im mikrosk. Bilde. XXV, 4. fehlen in dem Liuienzug aber bestimmte Richtungen, wenn das Azi- mut der Beleuchtung- etwa vorherrschend unter 45 ^ lag (Fig. 6 b). Beträgt das Azimut der Beleuchtung vorherrschend 90^, so bleiben nur die Umkehrpunkte der Windungen als völlig getrennte Beugungs- scheibchen sichtbar (Fig. 6 c). Es erscheinen nur die in Figur Qb fehlenden Richtungen, wenn das Azimut der Beleuchtung vorherrschend 135^ war fFig. ßd). Es sei bemerkt, daß die Figuren 6 nicht etwa schematisch konstruiert sind 5 sie sind vielmehr möglichst getreu nach dem mikro- a b o / C 0 " O o o 0 0 0 \ 6. skopischeu Bilde gezeichnet, das an einem schwach mit Fuclisin ge- färbten Präparat bei Dunkelfeldbeleuchtung mit ZEissschemParaboloid- Kondensor (diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 104 u. Bd. XXV. 1908, p. 276; unter etwa löOOfacher Vergrößerung bei subjektiver Beobachtung erhalten wurde. Auch im durchfallenden Licht macht sich das Gesetz über die Beugung an Kanten bemerkbar an der jedem Mikroskopiker zur Genüge bekannten empfindlichen Abhängigkeit in der Sichtbarmachung vieler Strukturdetails von der jeweiligen Spiegelstellung. Denn die Abbildung von Strukturen hat ihre Sichtbarmachung zur Voraussetzung. Es müssen zunächst überhaupt wirksame Beugungsstrahlen vom Objekt ausgehen, damit durch Interferenz aus den Beugungsspektren in der hinteren Brennebene der Mikroskop- Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXV, 4. Taf. IV. Abhängigkeit der Sichtbarmachung vom Azimut der Beleuchtung. Die Fig. 2—4 geben dieselbe Stelle (in 45 xVergr.) wieder. Das Azimut der Beleuchtung liegt in Fig. 2 in allen Punliten des Sehfeldes allseitig, in Fig. 3 von links nach rechts, in Fig. 4 von oben nach unten, in Fig. 5 radial. Verlag von S. Hirzel in Leipzig. Lichtdruck von F. Bruckmann A.-G., München. XXV, 4. Siedentopf: Sichtbarmachung von Kanten im mikrosk. Bilde. 431 objektive die Abbildung- zustande kommt. Wenn man aber durch die Spiegelstelliing- ein Azimut der Beleuchtung wirken läßt, das für die Beugung an den für die Struktur charakteristischen Kanten ungünstig ist, so müssen natürlich die betreuenden Struktnrlinien verschwinden. Bei Beobachtung undurchsichtiger Objekte oder in auf- fallendem Licht läßt sich die gleiche Erscheinung konstatieren. Zur Demonstration eignen sich feine Schleif- oder lineare Ätzspuren auf polierten Oberflächen. Es ist deshalb eine rein einseitige Beleuchtung, wie sie ott bei der Mikrophotographie von Metall- schlitfen unter schwacher Vergrößerung benutzt wird , nicht ge- eignet, alle S t r u k t u r d e t a i 1 s auf einmal sichtbar zu mache n. Makroskopisch läßt sich die Abhängigkeit der Intensität des an feinen Kanten u. dgl. gebeugten Lichtes sehr gut an polierten Holzflächen demonstrieren. Schaut man bei einseitiger Beleuch- tung, die z. B. durch ein seitlich gelegenes Fenster gegeben wird, senkrecht auf eine solche Holzfläche, so erscheint die Maserung viel heller, wenn sie senkrecht zum Azimut der Beleuchtung steht, als wenn sie nur in kleinerem Winkel dagegen geneigt ist, oder gar ihr parallel liegt. — Der oben angegebene Satz über die Beugung an Kanten bezieht sieh , wie ich ausdrücklich angegeben habe , auf eine spezielle Lage der Hauptachse der abgebeugten Strahlen, nämlich parallel der Mikro- skopachse. Diese Lage hat für mikroskopische Beobachtungen das Hauptinteresse: ich habe es deshalb unterlassen, hier diejenigen Modifikationen zu diskutieren, die bei allgemeiner schiefer Lage der Kante gegen die Mikroskopachse zu berücksichtigen sind, und die u. a. bei kleiner Neigung der Kante gegen die Mikroskopachse das entgegengesetzte Resultat ergeben. Vielleicht bietet sich später hierzu Gelegenheit. -'&'■ [Eingegangen am 14. Januar 1909.] 432 Heusner: Ein einfaches Hilfsstativ für Vertikalaufnahme. XXV, 4. Ein einfaches Hilfsstativ für Yertikalaufnahme makro- und mikroskopischer Objekte. Von Hans L. Hensner in Gießen. Hierzu eine Textabbildung. Liegt es auch nicht in meiner Absicht, die zahlreichen Spezial- apparate für die Aufnahme raikro- oder makroskopischer Objekte um eine Neukonstruktion zu vermehren , so möchte ich doch in nach- stehendem ein einfaches Hilfsstativ beschreiben , welches mir bei derartigen Aufnahmen in vielen Fällen gute Dienste geleistet hat und zudem den Vorzug besitzt , daß es jeder geschickte Schlosser ohne Mühe in kürzester Zeit herstellen kann. Wie die Abbildung zeigt , sind die einzelnen Teile der Vor- richtung auf einer Eundeisenstange a von 20 bis 25 mm Durchmesser und 100 bis 150 cm Länge angebracht. Diese Rundeisenstange steht mit ihrem unteren Ende in einem schweren Fuß ö, wie ihn die ge- bräuchlichen Tischlampen besitzen. Das obere Ende ist U -förmig umgebogen. Der freie Teil dieses Endes gleitet in einem gut passen- den Rohransatz , welcher an einer kräftigen Schraubzwinge c be- festigt ist. Die Schraubzwinge läßt sich also nach Bedarf verschieben und so das Stativ an einem festen Tische beliebiger Höhe leicht be- festigen. An dem Rohransatz befindet sich eine Schraube zum un- verschieblichen Feststellen des Rundeisens in der Hülse. Ebenso läßt sich dasselbe in dem Fuße verschieben und beliebig feststellen. Auf dieser Rundeisenstange gleitet zunächst ein Schieber, welcher mit einem Schraubengewinde für die Camera versehen ist. Dieser Schieber besteht, wie auch die übrigen, aus einem einfachen kubi- schen Eisenstück mit einer dem Durchmesser des Rundeisens ent- sprechenden Bohrung und einer Flügelschraube zum Feststellen, sowie der Stativschraube für die Camera. XX\',nl. IJeusni'r: Ein eint'iiches llilfsstativ für Vertikiilaufnaliiiio. 4;};! An dem Schieber wird also, wie aus der Abbildung- ersichtlich ist, die Camera mit senkrecht nach unten gerichtetem Objektiv be- festigt. Der in entsprechender Weise konstruierte Schieber 2 trägt einen beweglichen, d. li. um seine Achse drehbaren Metallrahmen mit aufgeboge- nem Rand. In diesen läßt sich je nach Bedarf eine durchsichtige Glasplatte, eine Milchglasplatte oder undurchsichtige Plat- ten aus Metall oder Pappe einlegen. Außerdem läßt sich an einem Gelenk- arm d eine elektrische Glühlampe e oder (. ein Auerbrenner zur künstlichen Beleuch- tung der aufzunehmenden Objekte an- bringen. Zur Erleuchtung von unten dient bei durchsichtigen Objekten ein auf dem Schieber 3 allseitig beweglich angeord- neter Planspiegel d. Größere Objekte wie Embryonen, Gehirnschnitte usw. lassen sich auf der Schieberplatte 2 auf- gelegt leicht in passender Weise von unten oder seitlich beleuchten und auf- nehmen. Sollen Aufnahmen unter Benutzung des Mikroskopes gemacht werden , so dreht man die Schieber 2 und 3 zur Seite , und stellt das Mikroskop senkrecht unter der Camera auf, wie bei den sonstigen Vertikalapparaten. Etwaige w^eitere Hilfs- apparate lassen sich unter Anwendung von Schiebern leicht an- bringen. Somit läßt sich das Stativ unschwer allen besonderen Wünschen anpassen. [Eingegangen am 7. Dezember 1908.J Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. 28 434 Ignatowsky: Beleuchtungselnrichtung f. d. Metallmikroskop. XXY, 4. Eine Beleuchtungseinrichtuiig für das Metall- mikroskop. Von W. T. Ignatowsky in Gießen. Hierzu drei Textabbildungen. Bei der Beleuclitimg von Metalloberflächeu zwecks mikroskopi- scher Beobachtung , resp. mikrophotographischen Aufnahmen stößt man auf gewisse Schwierigkeiten, falls man zu mittleren und starken Vergrößerungen übergeht. Man hat es hier mit einer besonderen Art episkopischer Beleuchtung zu tun. Im Unterschied zu der ge- wöhnlichen makroskopischen Projektion, wo hauptsächlich diffuses Liclit in Betracht kommt , müssen wir bei der Beleuchtung von polierten und geätzten Metalloberflächen damit rechnen, daß diese Oberflächen eine ziemlich ausgeprägte Reflexion aufweisen. Infolgedessen hängt die Güte des Bildes in viel höherem Maße vom Winkel ab, unter dem die beleuchtenden Strahlen auf die Metalloberfläche fallen, als bei der gewöhnlichen episkopischen Projektion. Außerdem aber, und dies ist das Wichtigste , wird bei mittleren und starken Vergröße- rungen das Objektiv so nahe an die Metalloberfläche herangerückt werden müssen, daß eine Beleuchtung der entsprechenden Stelle der Oberfläche nur durch das Objektiv hindurch geschehen kann. Um die hierbei entstehenden Schwierigkeiten zu erläutern , wenden wir uns zu P'igur 1. M sei das zu lieobachtende Metallstück und 0 das Objektiv. Die von der Lichtquelle kommenden Strahlen gehen in der Pfeil- richtung durch das Prisma P und von dort aus, nach der Reflexion, in das Objektiv 0, um durch dasselbe die betreft'ende Stelle der Metalloberfläche zu beleuchten. Das Prisma verdeckt ungefähr nur die Hälfte der hinteren Linse L des Objektivs , die andere Hälfte bleibt frei für die von der beobachteten Stelle reflektierten Strahlen 1). Die erwähnte Schwierigkeit bei dieser Art der Beleuchtung besteht XXV, 4. Ignatüws k y : Beleuchtungseinrichtung f. d. Metallraikroskop. 435 in der Vermeidung der hierbei auftretenden Reflexe. Dieselben ent- stehen von den durch das Prisma P liindurchgegangenen und an dem Objektiv 0 reflektierten Strahlen. um diese Strahlen zu vermeiden, half man sich auch unter anderem dadurch, daß man zwischen P und L eine Blende einlegte, die das in das Objektiv einfallende Büschel so einschnürte, daß die reflek- tierten Strahlen durch das Prisma P, resp. die Blende selbst abgeblendet wurden und nicht in den Teil D ge- langen konnten. In der Hauptsache hängen die Reflexe von der Ober- fläche der hinteren Linse des Objek- tives , d. h. von L ab. Es ist des- halb klar , daß von der Art dieser Fläche, ob konkav oder konvex, und auch von der Entfernung derselben vom Prisma P die Lage und Größe der einzuschiebenden Blende abhängen muß. Je nach dem Objektiv müssen verschiedene Blenden verwandt werden. Die Einstellung dieser Blenden erfordert eine ziemliche Geduld und Übung seitens des Beobachters. Nachfolgend ¥:-B soll eine Methode beschrieben werden, die ich angewandt habe, um die Reflexe zu vermeiden und zugleich die Einstellung bedeutend zu erleichtern. Es sei wieder (Fig. 2) M das zu beobachtende Metallstück, 0 das Objektiv, L dessen hintere Linse und P das Prisma. B ist die Lichtquelle, / eine Iris und L^ eine kleine Linse. Das Prinzip 28* 436 Ignatowsky: Beleuchtungseinrichtung f. d. Metallmikruskop. XXV, 4. der Einrichtung ist folgendes : Statt eine materielle Blende zwischen P und L einzuschieben, wird die Irisötfnung / mit Hilfe von L^ un- gefähr an der Stelle E abgebildet und vertritt demnach die Stelle der materiellen Blende. Durch Verschieben von L^ längs der Achse AB, resp. Veränderung der Irisöfthung I liegt es in der Hand die Öffnung der Blende E zu variieren. Außerdem ist die Größe von L^ so bemessen, daß die (Jtfnung des durch die Blende E gehenden Strahlenbüschels eine geringe ist. Das Büschel selbst ist von sehr geringem Querschnitt. Außerdem ist das Prisma P ver- schiebbar längs AB und drehbar um eine zur Figur 2 senkrechten Achse gemacht. Dadurch ist man imstande, je nach der Beschaffen- heit der Linse L , das von P kommende auf L auffallende feine Strahlenbündel so einzustellen, daß die von L reflektierten Strahlen beiseite geworfen , resp. durch das Prisma P selbst aufgefangen werden. Das letztere dient in diesem Falle als Blende für die reflek- tierten Strahlen. Die Einstellung geschieht leicht und schnell. Der ganze Apparat (Fig. 3) ist nach dem Prinzip von Le Chate- LiER gebaut, d. h. der Gegenstand wird einfach oben auf den Tisch T aufgelegt und die Einstellung geschieht durch Verschiebung des Tisches selbst, während die anderen Teile des Apparates unbeweglich bleiben. Durch ein zweites Prisma P^ (Fig. 2) werden die zur Beobaclitung dienenden Strahlen nach links abgelenkt und man kann mit Hilfe des Okulars (Fig. 3) und einem entsprechenden Prisma beobachten oder indem man dieses herauszieht , mikrophotographische Aufnahmen inachen. Als Beleuchtungsquelle dient eine kleine Gleichstromlampe mit Handregulierung und 4 Ampere Stromstärke, die an jede Haus- leitung angeschlossen werden kann. Der Apparat wird ausgeführt von der Firma E. Leitz, Wetzlar. Zum Schluß mijchte ich noch mit einigen Worten der Beleuch- fungsai't bei schwachen Vergrößerungen erwähnen. Der beschriebene Apparat gestattet nämlich Übersichtsaufnahmen bis zu etwa 15 mm objektivem Durchmesser zu erhalten, wozu Objektive bis zu 42 mm Brennweite benutzt werden. Hierbei ist die Entfernung der Metalloberfläche von dem Objektiv groß genug, um eine direkte Beleuchtung mit Hilfe einer planparallelen Glasplatte zu gestatten. Das Plättchen ii wird (Fig. 3} unter 45^ zwischen Metall und Objektiv eingeschaltet und die Lampe mit den Linsen entsprechend gehoben. Diese Beleuchtungsart ist an und für sich nichts neues. Ich erwähne sie deshalb nur, um den bei der Metallbeobachtung not- XXV, 4. Ignatowsky: Beleuchtungseinrichtung f. d. Metalliuikiosko]). 4:57 wendigen Strahlengang zu erläutern. Denn bei dieser Belenchtungs- art machen sich die retlektierenden Eigenschaften der Metalle be- sonders bemerkbar. Genau so Avie bei der Projektion von Diajjositivon das vom Kondensor kommende Büschel konvergent sein muß, mit dem Konvergenzpunkt im projizierenden Objektiv, damit dasselbe alle vom Kondensor kommenden Strahlen aufnehmen kann, muß auch liier das von der Linse L (Fig. 3) konvergierende Büschel mög- 438 Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. XXV, 4. liehst ganz von dem Objektiv aufgenommen werden. Deshalb muß das vom Metall reflektierte Büschel die genaue geometrische Ver- längerung des von der Linse L kommenden konvergenten Büschels bilden. Ist dies nämlich nicht der Fall , beleuchtet man z. B. eine entsprechend große Fläche des Metalles aber mit solchen Strahlen, die nach der Reflexion nicht in das Objektiv gelangen können, so wird man nie ein gleichmäßig beleuchtetes Feld auf der Mattscheibe erhalten. Denn in diesem Falle wird nur das diffuse Licht die Abbildung erzeugen uud dies ist gerade bei Metallen im Vergleicli zum reflektierten Licht sehr schwach. [Eingegangen am 7. Januar 1909.] Ein neuer Spiegelkondensoi*. Von W. V. Ignatowsky in Gießen. Auf Seite 64, Bd. XXV, dieser Zeitschrift ist ein von mir kon- struierter Spiegelkondensor beschrieben worden. Derselbe zeichnet sich dadurch aus, daß zu der Korrektion der Strahlenvereinigung zwei spiegelnde Flächen angewandt worden sind. Es ist deshalb sehr bemerkenswert, daß die amerikanische Firma : Williams, Brown & Earle, Philadelphia, Pa. , ohne sich auf diese Zeitschrift zu be- ziehen , in ihrem Prospekt nicht nur die zwei spiegelnden Flächen als Eigenart dieses Kondensors angibt , sondern auch die Figur 1 , p. 65, bei der Erklärung des Strahlenganges, direkt abdruckt. Durch diesen Prospekt wird man in den Glauben versetzt, obige Firma propagiere eine eigene Konstruktion. [Eingegangen am 9. .Tanuar 1909.] XXV, 4. Materna: Ein neuer Vakuum -Paraftinofen. 439 Ein neuer Vakuum -Paraffinofen. Von Dr. Loys Materna, I. Assistent am k. k. pathologisch-anatomischen Institut der Universität Crraz. Hierzu zwei Textabbildungen. Die Notwendigkeit, viele histologische Untersuchungen besonders rasch und dennoch exakt ausführen zu können, um hauptsächlich den Wünschen der Kliniker nach schneller Diagnosenstellung, z. B. probeexcidierter oder curettierter Gewebspartikel nachkommen zu können, führte mich auf den nachstehend beschriebenen Apparat. Wie ja allgemein bekannt, gibt die durch die Einführung der flüssigen Kohlensäure so sehr vereinfachte Gefriermethode nur in einem Teile der dem pathologischen Histologen unterkommenden Fälle gute Resultate — dort nämlich, wo es sich um a priori festere, in sich gut zusammenhängende Gewebsteile handelt. Bei brüchigem Material, das obendrein vielleicht nur in kleinsten Partikeln zur Untersuchung kommt, ist eine Einbettung kaum zu umgehen. Da besonders die Celloidin- aber auch die Paraffineinbettung längere Zeit erfordern, wenn man auf gute Fixation und geringe Schnittdicke Wert legt, und bei Verwendung von Paraffin die Schä- digung durch länger andauernde Erhitzung noch in Rechnung zu ziehen ist , lag es nahe , die mir im Prinzipe bereits bekannte Ein- bettung im Vakuum zu versuchen. Die bis jetzt beschriebenen Vakuum -Paraffinöfen sind jedoch, soweit sie mir bekannt geworden, mehr oder weniger unhandlich und gebrechlich, so daß sie gerade für den Betrieb eines größeren Instituts und für den Gebrauch durch oft wenig manuell veranlagte und geübte jüngere Arbeitskräfte weniger geeignet sind. Um vieles praktischer erscheint mir ein Apparat, den in etwas einfacherer Art zuerst der hiesige Zoologe, Privatdozent Dr. Stummer V. Traunfels konstruiert hatte und der in seiner jetzigen, ihm von mir gegebenen Form von der Grazer Firma G. Eger (Zinzendorf- gasse) verfertigt und verkauft wird. 440 Materna: Ein neuer Vakuum -Paraffinofon. XXV, 4. Sein Hauptbestandteil ist ein kleiner, auf einem Vierfuß stehen- der, 18 cm hober, 23 cm breiter und ebenso tiefer Thermostat aus Kupfer, mit Linoleum bekleidet, der einen kurzzylindrischen Binnen - räum von 11 cm Höhe und 14 cm Querschnittsdurchmesser umschließt. Der Mantelraum ist mit destilliertem "Wasser gefüllt , welches ich dem oft sauren und dann das Kupfer angreifenden Glyzerin vor- ziehe. Für Thermometer \mä Thermoregulator sind an beiden hinteren Ecken der oberen Fläche Tubuli angebracht , seitlich befindet sich ein Wasserstandsrohr. Die Heizung erfolgt mit einem Mikro-Bunsenbrenuer. Es ist vorteilhaft, diesen, um die Flamme vor dem Auslöschen oder Rück- schlagen durch Zug zu bewahren, in ein weites Glasrohr zu stellen und den Boden des Thermostaten zum Verhüten des Durchbrennens mit einer Tafel von Asbestpappe zu unterlegen. In dem kurzzylindrischen Innenhohlraum des Paraffinofens be- findet sich nun ein weiter Exsikkator mit exakt aufgeschliffener, starker, tubulierter Glasplatte. In den Tubulus ist mittels Gummi- stöpsel ein kurzes Glasrohr , mit einem Hahn versehen , eingefügt. Der enge Zwischenraum zwischen dem Exsikkator und der inneren Wand des Thermostaten wird mit geschmolzenem Paraffin ausgefüllt und der Exsikkator mit Kork- oder Asbestpappestreifen festgeklemmt, um ein Scliwanken zu verhindern. Um die Abkühlung des Luftraumes im Exsikkator möglichst zu vermeiden , ist erstens der Heizmantel auf drei Seiten der oberen Fläche des Thermostaten überhöht und zweitens über der Glasplatte des Exsikkators ein doppelteiliger Deckel angebracht, der, mit Knöpfen zum bequemen Abheben versehen, ebenfalls aus Kupfer gefertigt, außen mit Linoleum belegt, innen mit Filz gefüttert ist. (Auf der einen Abbildung erscheint die eine Deckelhälfte abgehoben und neben dem Apparat liegend.) Die Überhöhung des Heizmantels war an der Vorderseite nicht anbringbar, weil die Deckplatte des Exsikkators, wenn sie gut auf- geschliffen ist, sich nicht immer leicht abheben läßt, sondern nach vorne abgezogen werden muß. Durch einen Druckschlauch ist der Exsikkator mit einer Mano- metervorrichtung verbunden, die vom Thermostaten getrennt, auf einem Eichenbrettchen montiert und an der Wand aufgehängt ist. Die Anbringung dieses gebrechlichen Teiles auf dem Exsikkator selbst bildet einen Fehler früherer Konstruktionen. Wie aus der Abbildung ersichtlich, setzt sich der kürzere Schenkel des geschlossenen Queck- XXV, 4. Matorna: Kin neuer \'ak mim -Paraffinofen. 441 silberraanometers in ein wagereclites Glasrobr fort, das mit drei Hähnen und zwei nach abwärts führenden Abzweigungen versehen ist. In das dem Manometer näher liegende Zweigrohr führt die Schlauch- verbindung zum Exsikkator. In diese ist eine Waschflasche ein- 1. schaltet, die dem wichtigen Zwecke dient, die Manoraetervorrichtung vor Verschmutzung durch die Kondensation der aus dem Parafiin aus- gepumpten Dämpfe der Vormedien zu schützen. Zu diesem Zwecke füllt mau sie zum Teil mit Glas- oder Porzellanperlen, über welche man vorteilhaft noch feingeschabtes Hartparaffin mehrere Zentimeter hoch schichtet. In das (dem Exsikkator näher gelegene) bis auf den Boden der Waschflasche reichende Kohr wird ein dünner Glas- 442 Materna: Ein neuer Vakuum -Paraffinofen. XXV, 4, Stab oder ein Draht eingeführt, um zu verhindern, daß beim Ein- lassen von Luft in das System Glasperlen usw. eventuell in den Exsikkator gerissen werden. Vom zweiten Zweigrohr der Manometervorrichtung führt nun wieder ein Druckschlauch zu einer einfachen Wasserstrahlluftpumpe, die an einem nahen, kräftigen Wasserleitungsliahn gut befestigt ist, welch letzteren man vorteilhaft mit einer sogenannten Holländer- Verschraubung versehen läßt , um die Pumpe bei eventueller Ver- unreinigung aus dem Leitungswasser rasch abmontieren zu können. p]s ist geboten, besonders für den mit dem Apparat noch nicht ganz Vertrauten, in den von der Luftpumpe zum Manometer führen- den Schlauch ein Rückschlagventil einzufügen, das bei falscher Hahn- stellung oder einem plötzlichen Absinken des Wasserdrucks ein Ein- strömen des Wassers in die Manometervorrichtung oder den Exsikkator automatisch verhindert. Die links am Manometerbrett befindlichen beiden, dem Mano- meter selbst benachbarten Hähne dienen nur zur Kontrolle der Dichtig- keit der einzelnen Schlauchverbindungen, ferner, bei Abschluß des Manometers vom übrigen Apparat, zur Erprobung, ob der Wasser- druck genügend groß sei ; sie kommen also nur selten in Anwendung und haben stets geötfnet zu sein. Der Hahn an der Wasserstrahl- luftpumpe jedoch, sowie der über dem Exsikkator angebrachte, bleiben geschlossen , solange der Apparat nicht arbeitet , während der an der Manoraetervorrichtung ganz rechts gelegene Hahn nur behufs Luftzufuhr nach dem Auspumpen geötfnet wird. Die Ansatzstellen der möglichst kurz zu wählenden Schlauch- verbindungen, sowie die Guramipfröpfe werden mit einer dicken Celloidinlösung, der man ein wenig Rizinusöl zusetzt, gedichtet. Es sei noch bemerkt, daß mau das Parattin am besten in kleinen, auf einem Drahtgerüst ruhenden Porzellan-Abdampfschälchen im Exsik- kator hält, und daß eine Beimischung von weißem Wachs im Aus- maß von 3 bis 5 Prozent zum Parattin sich vorteilhaft erweist. Als Vormedium verwende ich , wenn Lile geboten ist , nach Henke-Zeller vollkommen wasserfreies Aceton. Die frischen, natür- lich möglichst kleinen Gewebsstückchen werden auf Watte im Brutofen ungefähr eine halbe Stunde in reichlichem Aceton gehalten, das mau mindestens einmal wechselt und kommen dann gleich in das Parattin im Exsikkator. Sonst verwende ich gewöhnlich Chloroform, seltener Xylol nach Formolfixierung , Härtung in absolutem Alkohol und Vorbehandlung XXV, 4. Materna: Ein neuer \'akuura-Parat'finot'('n. 443 in wasserfreiem Anilin. Mit Osmium oder Silber behandelte Präpa- rate vertragen weder Anilin noch Xylol und haben aus absolutem Alkohol direkt in Chloroform übertragen zu werden. Beim Gebrauch von Aceton oder Chloroform wechsle ich das Paraffin nach 15 bis 20 Minuten einmal, bevor ich auspumpe, um die Bildung eines gar zu reichlichen Schaumes bei der Evakuierung zu vermeiden. Die Anweisung für letztere läßt sich kurz in folgen- den Sätzen geben ; 444 Materna: Ein neuer A":ikiuuu- Paraffinofen. XXV. 4. 1) Nach Öffnung- des Hahnes am Exsikkator und an der Luft- pumpe bestreicht mau den Rand des Exsikkators mit geschmolzenem Paraffin und dreht, während man die Exsikkatorplatte mit einer Hand leicht aufpreßt, den Wasserleitungshahn ad maximum auf. 2) Nach einer halben Stunde wird zuerst der Glashahn an der Pimipe gesperrt, dann die Wasserleitung abgedreht und endlich der Luftzuführungshahn am Manometerbrett langsam und vorsichtig geöffnet, bis das Quecksilber den geschlossenen Schenkel des Mano- meters vollkommen erfüllt. 3) Nach Herstellung des atmosphärischen Druckes im System, das heißt sobald sich die Exsikkatorplatte leicht abziehen läßt, wird der Hahn an der Pumpe kurz geöffnet und wieder geschlossen, so- dann erst der Hahn am Exsikkator und der Luftzuführungshahn gesperrt. Es können nun die Paraffinschälchen dem Exsikkator entnommen werden. Da das evakuierte Paraffin auch bei langsamem Erstarren nicht zur Kristallisation neigt , ist eine rasche Abkühlung nicht er- forderlich und man kann die Erstarrung auch in den Abdampfschäl- chen selbst erfolgen lassen , von deren glatter Innenfläche sieh der Paraffinklotz . sobald er einmal vollkommen erhärtet ist , meist ohne Schwierigkeit ablösen läßt, vorausgesetzt, daß man das Paraffin bis auf eine schmale Zone um das Präparat sehichtenweise abgetragen hat, worauf der Klotz — namentlich, wenn der Boden der Schale leicht erwärmt wird — einem geringen Fingerdrucke weicht. Wälirend der Evakuierung soll natürlich ein etwa demselben Leitungsrohr angeschlossener Wasserhahn nicht geöffnet werden, um nicht ein brüskes Absinken des Druckes und damit ein Einsaugen des Wassers in den Apparat hervorzurufen. Die Temperatur im Exsikkator ist möglichst nieder zu halten, um sich des Hauptvorteiles des Apparates nicht zu begeben , der darin besteht . daß die Einwirkung der Hitze und damit ihre unan- genehmen Folgen auf die intimere Gewebsstruktur möglichst beschränkt werden, t^ine Temperatur von 62° bis 65^ im Wasserraum des Thermostaten genügt, um ein Paraffingemisch mit einem Schmelz- ])unkt von etwa 55 ** im Exsikkator gerade noch flüssig zu erhalten. Sobald der Deckel des Thermostaten und die Exsikkatorplatte länger als es unbedingt erforderlich ist. abgehoben werden, soll sich ein Häufchen an der (»berfiäche des Paraffins bilden. Natürlich darf ein solches während der Evakuierung nicht vorhanden sein und ist eventuell mit einem erhitzten Spatel zu entfernen. XXV,4. Materna: Ein neuer \'akiiiiiii-Paraftinot"en. 44.') Der Apparat hat sich bei mehr als einjähriger Verwendung im pathologisch-anatomischen Institut und auf mehreren Kliniken durch- aus bewährt. Für ein gutes Gelingen der Paraltineiubettiing ist es natürlich auch von Bedeutung, daß der zur Härtung verwendete Alkohol, sowie das Aceton und die dann eventuell noch von den Gewebsstückchen zu passierenden Flüssigkeiten vollkommen säure- und wasserfrei sind. Da der Kupfersulfatalkohol immer freie Schwefelsäure enthält, ziehen wir vor, uns den absoluten Alkohol derart zu bereiten, daß wir 96prozentigen Alkohol mit reichlichen Mengen von gutem un- gelöschten Kalk in einer, mit Rückfiußkühler versehenen Kupferblase durch o Stunden am Wasserbade kochen und ihn sodann (nach Um- schaltung des Kühlers) abdestillieren. Das aus der Apotlieke bezogene Aceton wird in großen Glas- kolben über geglühtem Chlorkalzium 1'4 Stunden stehen gelassen, das Chlorkalzium dann erneuert und das Aceton endlich ebenfalls am Wasserbade mit Verwendung eines Kugelkühlers von ihm ab- destilliert. Ebenso wird, nach zweimaligem Wechsel des Chlorkalzinms, mit dem Chloroform verfahren , das man zur Neutralisierung früher noch im Scheidetrichter mit konzentrierter Sodalösung geschüttelt hat. Das Anilin wird einfach über der Flamme aus einem Fraktionier- kolben mit angesetztem langen Rohr unter Luftkühlung abdestilliert. Natürlich läßt sich so auch schon gebrauchtes Anilin wieder zu neuer Verwendung reinigen, indem man nur die zwischen 180*^ und 182 '^ C übergehenden Anteile verwertet. Auch die für die Herstellung von absolutem Alkohol, Aceton und Chloroform angegebenen Methoden lassen sich mutatis mntandis zur Reinigung bereits gebrauchter solcher Flüssigkeiten verwenden, was ein sehr sparsames Arbeiten mit diesen recht kostspieligen Sub- stanzen ermösrlicht. ^O" [Eingegangen am 9. Dezember 1908. 446 Scheffer: Über das Arbeiten mit dem Paraboloid-Kondensor. XXV. 4. Einiges über das Arbeiten mit dem Paraboloid- Kondensor. Von Dr. W. Scheffer. Hierzu eine Tafel (Tab. V). Die Anordnung der Objektbeleuchtung für Beobachtungen sowie photographische Aufnahmen mit dem Zeiss sehen Paraboloid-Kondensor wird nach denselben Grundsätzen ausgeführt, die für die Beobachtung und Photographie mit durchfallendem Licht gelten. Es wird ent- weder die Lichtquelle selbst, oder die Austrittspupille eines Kollektors im Präparat abgebildet. Im letzteren Falle muß natürlich ein reelles Bild der Lichtquelle in der Eintrittspupille des Mikroskop-Kondensors entworfen werden. Die Größe dieses Lichtquellenbildes muß so be- messen sein, daß dasselbe die ganze Eintrittspupille des betreffenden Mikroskop -Kondensors gleichmäßig mit Licht erfüllt. Für mikro- photographische Aufnahmen mit dem Paraboloid-Kondensor hat sich folgende Anordnung für Bogenlicht bewährt : Auf der optischen Bank des Projektionstisches wird die Linse I des lichtstarken Sammel- linsensystems so aufgestellt, wie dies für Aufnahmen mit kurzbrenn- weitigen Mikroskop -Objektiven nötig ist. Hinter die Linse I kommt die Wasserkammer und an das andere Ende der optischen Bank, in die Nähe des Mikroskopes, kommt die Irisblende auf Reiter. Die Lichtquelle, der Krater der Bogenlampe, wird auf dem Paraboloid- Kondensor abgebildet. Man stellt sich am bequemsten die Beleuchtung so her, daß man hinter die Irisblende des Abbe sehen Beleuchtungs- apparates ein Stückchen dunkelgrnues Papier legt. Auf diesem Papier bildet man zentrisch zur Irisblende den Krater ab. Die Linse I hat gerade die richtige Brennweite hierfür. Mit den Stellschrauben am Lampengehäuse bringt man den Krater und somit auch sein Bild in die richtige Stellung. Die Zentrierung des Paraboloids wird auf folgende Weise vorgenommen : Voraussetzung ist , daß die Mi- kroskop-Objektive bereits zentriert sind. Das wird mit Hilfe von XXV, 4. Scheffer: Über das Arbeiten mit dem Paraboloifl-Kondensor. 447 Sehlittenobjektivwechsleru am genauesten erreiclit. Man zentriert ein schwächeres System auf die Mitte der Irisblende , und hiernach mit Hilfe eines Strichkreuzes die anderen Objektive, Das Paraboloid wird in eine zentrierbare Kondensorhülse eingeschraubt. Als Objekt wird für die Zentrierung ein mattgeschliifener Objektträger auf den Objekttisch gelegt und auf die übliche Weise mit dem Paraboloid- Kondensor durch einen Öltropfen verbunden. Der Lichtschein auf der Mattscheibe wird nun mit Hilfe der Stellschrauben des zentrier- baren Kondensors in die Mitte des Gesichtsfeldes gebracht. Hiermit ist die richtige Anordnung der Beleuchtung vollendet. Um auf be- queme "Weise während der Arbeiten das Kraterbild gut zentrisch zu der Eintrittspupille des Paraboloid - Kondensors zu erhalten , bedient man sich der am Ende der optischen Bank dicht vor dem Mikroskop aufgestellten Irisblende auf Reiter. Dieselbe wird soweit zugezogen, daß gerade die äußersten Ränder des Kraterbildes auf ihr sichtbar sind. Wenn sich dann die Stellung der Kohlenspitzen irgendwie ändert, sieht man sofort das exzentrische Kraterbild auf der Iris- blende. Diese einfache Anordnung hat sich bei den Arbeiten in unserem Laboratorium als zweckmäßig erwiesen. Als Objektive kommen für Arbeiten mit dem Paraboloid-Kondensor der Apochromat 3 mm als Trockensystem und der Apochromat 2 mm als 01-Immersion in Frage, Beide Objektive werden zu diesem Zweck mit Einhänge- blenden versehen, die ihre numerische Apertur in geeigneter Weise verkleinern. Während diese Einhängeblende bei der Öl -Immersion unbedingt nötig ist, kann sie bei dem Apochromaten 3 mm, Trocken- system , unter Umständen wegbleiben , so daß die ganze numerische Apertur vom Werte 0'95 ausgenützt wird. Da man mit dem Paraboloid - Kondensor häufig Aufnahmen be- weglicher Objekte, etwa lebender Bakterien macht, bringt man zweck- mäßig am Stirnbrett der Kamera einen Momentverschluß an. Wir haben einen THORNTOx-PicKARD-Verschluß mit gutem Erfolge benutzt. Auf diesen Verschluß wird der Verschlußtrichter für die lichtdichte Verbindung des Mikroskops aufgeschraubt. Die Vergrößerung und die Kameralänge müssen in der üblichen Weise dem Objekt an- gepaßt werden. Man muß aber Rücksicht darauf nehmen, die schwächste Vergrößerung anzuwenden , die für den vorliegenden Zweck noch ausreicht. Da die Plattenempfindlichkeit und die Be- wegungsgeschwindigkeit lebender Objekte , sowie der Glanz der Lichtquelle gegebene Größen sind, muß man besonders bei sehr zarten Objekteinzelheiteu die passende Bildhelligkeit durch Ver- 448 Scheffer: Übei- das Arbeiten mit dem Paraboloid-Kondensor. XXV, 4. änderung der Bildvergrößerung- herstellen, soweit das Objekt das erlaubt. Die Herstellung der Präparate muß etwas sorgfältiger geschehen als das im allgemeinen üblich ist. Die Präparate müssen in mög- lichst dünner Schicht, und nicht zu eng beieinander liegend zwischen Objektträger und Deckglas ausgebreitet sein. Das erreicht man am besten, wenn man dünne Deckgläser benutzt, wie sie z. B. zur Her- stellung von Blutpräparaten gebraucht werden. Die Objektträger müssen besonders bei der Verwendung des Trockensystems tadellos sauber sein. Die üblichen , im Pappkästchen aufgehobenen Objekt- träger haben sehr häufig auf ihrer Oberfläche Beschläge, die bei der Beobachtung mit durchfallendem Licht nicht stören. Bei der Be- obachtung und besonders bei der Mikrophotographie mit dem Para- boloid-Kondensor stören auch die kleinsten Oberflächenfehler des Deckglases erheblich. Für diese Zwecke läßt man sich das ganz frisch aus der Hütte bezogene Glas so rasch wie möglich schneiden. Manche Gläser, besonders die für Deckgläser verwendeten Glasarten, beschlagen sehr leicht. Beim Schneiden sollen die Deckgläschen nicht mit den Fingern berührt werden. Sogleich nach dem Schneiden kommen die Gläschen in Alkohol, in dem sie sich unbegrenzt lange beschlagfrei halten. Die Öl-Immersion ist etwas weniger empfindlich für Oberflächenfehler des Deckglases , aber es empfiehlt sich auch hier, nur ganz einwandfreie Deckgläser zu verwenden. Wenn man die Öl-Immersion benutzt, braucht man auf die Dicke der Deckgläser nicht besonders sorgfältig zu achten. Indessen ist die Immersion nicht so reflexfrei wie das mit der Einhäugeblende versehene Trocken- system. Ich verweise auf die Angaben des Herrn Dr. Siedentopf in Heft No. 99 dieser Zeitschrift, Seite 281, Absatz 2. Das Trocken- system muß besonders bei Aufnahmen mit dem Paraboloid-Kondensor auf das sorgfältigste für die Deckglasdicke mit der Korrektions- fassung korrigiert werden. In dieser Hinsicht ist die Immersion be- quemer in Verbindung mit dem Paraboloid zu gebrauchen, als das Trockensystem, mit letzterem ist jedoch ein etwas höheres Auflösungs- vermögen zu erreichen , wenn man es ohne Einhängeblende benutzt. Die Helligkeit des Bildes auf der Mattscheibe hängt außer von anderem auch von der Größe der Objekte ab. Sehr häufig wird es vorkommen, daß größere und kleinere Körper in demselben Präparat vorkommen. Wenn möglich soll man das vermeiden. Bei der Be- lichtung hat man darauf zu achten, daß die Belichtungszeit gerade für die Objekteinzelheit richtig ist, auf die es ankommt. Größere Zeitschr./^MT/^s A/ikrosk JM.XXV. '^:^. 7cn(el ziL ■ £inz^&s über das ^\rbei6erL mii dc/n Para-öolo/ld. /ujrule/isor ^yorh Z>r W^Schef^r. \^laa^o.S.//ir7:el, /jcip7t4^. A/erser^/MTrÄ /^i^/A rfe C9Beriirt. XXV, 4. Scheffer: l'ber das Arbeiten mit dem Paraboloid-Kondensor. 449 Objekttoilchen kömieii unter Umständen stark überbelichtet und sehr feine unterbelichtet sein. Für diese Arbeiten sind lichthoffreie Platten dringend zu empfehlen. Wenn es auf kürzere Belichtungen zarter Objekte ankommt , deren Bilder natürlich lichtschwach sind , nimmt man am besten höchst empfindliche Moraentplatten , die man durch Bestreichen der Glasseite mit Rotlack -Bayer lichthoffrei macht. Die meisten bereits lichthoffrei präparierten Platten des Handels sind weniger lichtempfindlich , als die entsprechenden nicht lichthoffreien Plattensorten. Über die Belichtungszeiten kann natürlich keine all- gemeine Angabe gemacht werden. Das ist ganz Sache des Ver- suches. Die richtige Belichtungszeit wird am besten mit Hilfe der Schiebekassette festgestellt. Die Verbindung des Objektträgers mit dem Paraboloid- Kondensor wird am besten so hergestellt, daß man auf die Unterseite des Objektträgers 2 bis 3 Tropfen Zedernholzöl bringt. Dann kehrt man den Objektträger rasch um , so daß das Zedernholzöl eine nach unten hängende Kuppe bildet. Nun legt man das Präparat auf den Objekttisch des aufrechtstehenden Mikroskopes und hebt den vorher etwas heruntergeschraubten Paraboloid -Kon- densor mit der Triebbewegung vorsichtig in die Höhe, bis seine obere Fläche den Objektträger berührt. Auf diese Weise wird das Entstehen von Luftblasen zwischen Paraboloid und Objektträger vermieden. Luft- blasen im Immersionsöl lassen sich leicht mit einer heißen Nadel ent- fernen. Beim Anfertigen der Präparate ist noch darauf zu achten, daß der auf den Objektträger gebrachte Tropfen der zu unter- suchenden Flüssigkeit nicht zu groß ist. Wenn sich am Rande des Präparates einige Luftblasen bilden, so schadet das viel weniger, als wenn der Flüssigkeitstropfen zu groß war und die Schicht zwischen Objektträger und Deckglas zu dick ist. Das Präparat wird zweck- mäßig mit Paraffin oder Wachs umrandet. Eine Reihe von Unter- suchungen hat gezeigt, daß man mit dem Paraboloid -Kondensor vor allem die Umrisse der Objekte in ihren feinsten Einzelheiten erkennen kann. Sehr häufig dringt aber auch genügend viel Licht in das Innere der Objekte ein, so daß auch Einzelheiten des inneren Aufbaues untersucht werden können. Es hängt von der Oberflächenbeschaffen- heit des Objektes ab, wieviel Licht in das Innere desselben eindringt. Tafelerklärung (Tab. V). Figur 1 stellt isolierte Zellen , aufgenommen mit dem Paraboloid- kondensor dar. Figur 2 ist dasselbe Präparat aufgenommen in durchfallendem Licht. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV. 4. 29 450 Wunderer: Verwendungsarten v. Gaslicht-Papieren u. -Platten. XXV, 4. Figuren 3 u. 4 sind Momentaufnahmen freilebender Spermatozoen. Figur 5 zeigt Blut im Stadium der Auflösung; neben den helleren Blutkörperchen sind Blutschatten zu sehen. Figur G zeigt Hühnerblut im Beginne der Hämtdyse. Die Aufnahmen o — G sind Momentaufnahmen mit etwa ^/j^ Sekunde Belichtungszeit. Die Objekte dieser Aufnahmen waren in rascher Bewegung. [Eingegangen am 22. Dezember 1908.] Einige Yervvendungsarten von Gaslicht -Papieren und -Platten. Von Dr. med. Hans Wunderer in Lienz (Tirol). Lichtpausprozesse finden zur Vervielfältigung von Zeichnungen. Schriftstücken usw. eine ausgedehnte Verwendung, wo Zeichnung und Schrift auf sehr dünnem Papier angebracht sind. Es Avird wie von einer photographischen Negativplatte auf lichtempfindliche Kopier- papiere je nach der Eigenschaft der zur Sensibilisierung verwendeten Lösung ein negativer oder positiver Abzug erzielt. Nach dem all- gemein üblichen Verfahren ist es aber nicht möglich, in kurzer Zeit auch von Abbildungen auf dickem Papier oder auf Karton Abzüge zu erhalten. Geleitet vom Wunsclie , von Abbildungen namentlich schwer zugänglicher Werke möglichst rascli und genau Kopien zu erhalten, habe ich vermittelst photographischer Entwicklungspapiere in dieser Richtung Versuche angestellt , deren Resultate vom ersten Anbeginn zufriedenstellten. Vorzüglich verwendbar fand ich z. B. das Lentapapier der „Neuen photographischen Gesellschaft A.-G., Berlin-Steglitz", weil es unabhängig von einer Dunkelkammer Ver- wendung finden kann. Für Arbeiten bei Tageslicht sind die Sorten Ä bis K^ bei künstlichem Licht L und M sehr geeignet. Bei sehr schwacher Lichtquelle dürften liöher empfindliche Bromsilberpapiere oft nicht zu umgehen sein. Das Verfahren ist folgendes: Das lichtempfindliche Papier (icli nehme Lentapapier Sorte C oder D) wird bei gedämpftem Lichte XXV, 4. Wunderer: Verwendungsaiten v.(J;islicht-Papierenu.-Flatten. 451 oder in der Dunkelkammer (bei Anwendung hoch empfindlicher Papiere) mit der Schichtseite auf die zu kopierende Abbildung gelegt; aui" die Rückseite des Papieres legt man mit Vorteil behufs Erzielung eines guten Anschlusses eine Kantschukplatte (Cofferdara der Zahn- ärzte). Wird nun die der Zeichnung abgewandte Seite des Blattes belichtet (Lentapapier Ä bis K erfordert bei Tageslicht je nach l^ipierdicke ^4 '^^is -^ Min.), so erhalt man ein vorläufig unsichtbares Negativ, das erst in bekannter W\Mse entwickelt und fixiert werden muß. Vom getrockneten Papiernegativ lassen sich auf die beschriebene Weise im Kopierrahmen beliebig viele positive Abzüge machen. Wenn das Blatt, welches die Abbildvmg trägt, beiderseits be- druckt ist, so kopiert, wenn auch schwächer, die Druckschrift durch, wodurch das gewonnene Bild meistens mehr oder weniger verun- staltet wird; allein der Zweck, einen in seinen Dimensionen genau der Originalabbildung entsprechenden Abzug zu erzielen, wird doch auch hier in jedem Falle erreicht. Nimmt man zur Herstellung des Positivs Papier mit abziehbarer Folie oder kopiert man auf Diapositivplatten, so lassen sich mühelos ohne Verwendung eines photographischen Apparates Laternenbilder anfertigen, die neben guten Kopien jedenfalls auch als Lehrbehelfe Anwendung finden könnten. Es kann kaum einem Zweifel unterliegen, daß ein derartiges Verfahren ferner die Reproduktion von Abbildungen aus Original- abhaudlungen etwa für Lehrbücher usw. erleichtern wird. Auf Entwicklungspapieren lassen sich mit Vorteil auch direkt photographische Aufnahmen machen, die umkopiert statt Skizzen oder als Unterlage für Zeichnungen usw. Verwendung finden können. Zweifellos ließe sich dieses Verfahren besonders auch für Re- konstruktionen vorteilhaft verwenden ; wenn man sich die lichtempfind- lichen Papiere selbst herstellt, dürfte hierbei auch der Kostenpunkt nicht in Frage kommen. Erschöpft ist die Anwendungsweise von Entwicklungspapieren für den Mikroskopiker und wissenschaftlichen Arbeiter durch diese für Photographen vielleicht selbstverständlichen Erörterungen nocli lange nicht; jedoch' kann sich jeder die Tatsache, daß auch Papiere selbst von Kartonstärke dem Durchtritt des Lichtes kein wesent- liches Hindernis bieten, leicht auch anderweitig zunutze machen. [Eingegangen am 18. Januar 1909.] -;i)* 452 Gebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. XXV, 4. Aus o])tischeii und mechamschen Werkstätten \[\ Von Prof. Dr. W. Gebliardt in Halle a. S. Hierzu zehn Textabbildungen. Das vergangene Jahr zeichnet sich weniger durch epocliemachende Neukonstruktionen oder durch das Finden neuer Wege für die mikro- skopische Forschung aus. Dagegen zeigt sich auf allen Gebieten und in allen Werkstätten mehr oder weniger das Bestreben, die in den letzten Jahren zunächst mehr theoretisch und im Prinzip gewonnenen Fortschritte auf dem Gebiete der Dunkelfeldbeleuchtung und Ultra- mikroskopie, der Photographie mit ultraviolettem Licht, der Mikro- stereoskopie, die alle noch immer im Vordergrunde des Interesses stehen, durch einen sorgfältigen, teilweise mit Erfolg auf universellere Verwendbarkeit gerichteten Apparate -Ausbau zu sichern und den Kreis ihrer Anwendungen und auch ihrer Anwender zu erweitern. In dieser Beziehung müssen auch manche ursprünglich wohl melir polemisch gedachte Erörterungen der in den aufgezählten Gebieten interessierten konstruierenden Vertreter der verschiedenen Firmen als förderlich sowohl für die Sache selbst als auch besonders für die Erziehung des kaufenden Interessenten zur Beurteilung der be- reits recht zahlreich von den verschiedenen Werkstätten angebotenen Konstruktionen bezeichnet werden, insbesondere bezüglich der modernen Beleuchtungsapparate für Dunkelfeldbeleuchtung, — man vergleiche diesbezüglich z. B. die im heurigen Jahrgang vorliegender Zeitschrift und auch an anderen Orten verötientlichten Aufsätze über Spiegel- kondensoren, vor allem den mit sehr interessanten mikrophotographi- schen Aufnahmen der Strahlenvereinigung durch die verschiedeneu Dunkelfeldkondensoren ausgestatteten Aufsatz Siedentopps eingangs des dritten Heftes. 1) Vgl. Bd. XXV, 1907, p. 36. XXV, 4. Gebhardt: Aus optischen und niechanischen Werkstätten II. 453 Was sonst das Mikrosko}) und seine Nebenapparate anbetrifft, so scheint nach der vor nunmehr 1 2 Jahren dnrch das bei Zeiss, Jena, herausgekommene BEROEHSche große Stativ eingeleiteten Hoch- flut von Neukonstruktionen aUmählich eine gewisse Beruhigung im Stativbau eingetreten zu sein, was aus mehreren gewichtigen Gründen sowohl im Interesse der Werkstätten wie auch des Mikroskope be- nützenden Publikums erfreulich erscheinen muß , auch insofern sich darin eine seitdem eingetretene Bewährung der ziemlich allgemein, auch selbst im Auslande angenommenen Bekger sehen Bauprinzipien ausprägt. So hat diese Anregung in der Tat zu einer dauernden Veränderung des bis dahin ziemlich unverändert beibehaltenen von Hartxack- Oberhäuser seinerzeit in klassischer Form aufgestellten kontinentalen Mikroskoptypus geführt, wenigstens für die großen und ganz großen Stative. Erfreulich ist ferner das nunmehr bei einer ganzen Reihe von Werkstätten zu verzeichnende Bestreben, wenigstens einen Stativ- typus mitanzubieten , der bei verhältnismäßig geringen erstmaligen Anschaffungskosten eine Vervollständigung bis zu dem Grade der technischen Vollkommenheit auch der größten angebotenen Stative ermöglicht. Es ist begreiflich , daß gerade der Gedanke an eine daraus entstehende scharfe Konkurrenz dieser Stative mit den gleich von Anfang an aufs vollkommenste ausgerüsteten, schon aus Gründen der fabrikmäßigen Erzeugung, die Werkstätten nur allmählich mit diesem wichtigen Wunsche gerade der werdenden Forscher sich be- freunden läßt. Immerhin liegt gerade in der durch die außerordent- liche Vermehrung der nachträglich auswechselbaren Teile nunmehr erforderlich werdenden Genauigkeit der Übereinstimmung in Form und Größe außer einer gewissen Garantie gleichmäßiger Güte auch ein starker Anstoß zur möglichst automatischen Massenfabrikation, die schließlich auch wieder die Herstellungskosten vermindert. Das Bedürfnis nach solchen Stativen hat sich übrigens seitdem durch die starke Nachfrage nach den bereits vorhandenen durchaus erwiesen. An Zahl der Neukonstruktionen mit Bezug auf das Mikroskop- stativ scheint mir unter den kontinentalen Werkstätten Reichert in Wien diesmal obenan zu stehen. Nicht weniger als 7 Stative, näm- lich AI, All, B, C, Ale, Alllc und No. 52 befolgen im wesent- lichen in der Ausbildung der fest mit dem Objekttisch verbundenen Tubusträger als elegante und bequeme Handhabe, der dadurch ge- wonnenen weiten Ausladung des Tubusträgers ausreichend zur Be- nützung selbst größter Objektträger , der ferner so ermöglichten 454 Gebhardt: Aus optischen und meclianischen Werkstätten IT. XXV, 4. Entlastung der gleichzeitig erheblich verfeinerten Mikroraeterbewegung (Fig. 1), die nicht melir die ganze Säule, sondern nur noch den Tubus mit seinem Zahntrieb unter Vermittlung einer Schlittenfiihrung zu tragen hat, die nach Bergers Vorgange für die großen Stative der meisten kontinentalen^ Werkstätten typisch gewordenen Bau- prinzipien. Die neue Reichert sehe Mikrometerbewegung (Fig. 1) „be- steht aus einer Spindel *S', die mit zwei Triebknöpfen ui und iit' 1. versehen ist und in ein Schneckenrad E eingreift, auf dessen Stirn- Häche eine schraubenförmige Erhebung und Senkung eingefräst ist. Beim Drehen der Triebknöpfe w wird eine Rolle und der auf der- selben aufgelagerte Tubus beliebig gehoben oder gesenkt und es wird eine Einstellung erzielt, die sich durch außerordentliche Fein- heit, Exaktheit und Dauerhaftigkeit auszeichnet. Da nur das geringe ^) In England und Amerika waren schon viel länger Stative mit festem Tubusträger und an der Tubusführung direkt angreifender Mikro- raeterbewegung in fJebraueh. XXV', 4. Gebliardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. 455 Gewicht des Tubus und eine schwache Feder nach unten drücken, so ist die Behistung der Mikrometerschraube eine minimale und eine Beschädigung des Deckghises erscheint selbst dann fast ausgeschlossen, wenn es von dem Objekt berührt wird. Alle Berührungsflächen sind aus Stahl nnd der ganze Mechanismus der Schraube ist geschützt und verdeckt im Oberteil des Mikroskopes eingelagert. Die Grad- teilung am Kopf der Mikroraeterschraube ist so gewählt, daß die Verstellung um einen Teilstrich eine Erhebung oder Senkung um 0*001 mm ergibt." — Ich habe bereits in meinem vorjährigen Keferat (vgl. diese Zeitschr., a. a. 0.) konstatiert, daß die neuen verfeinerten Mikrometerbewegungen der kontinentalen Stative funk- tionell im wesentlichen zwei Typen repräsentieren, den Zeiss sehen, mit beschränkter Beweglichkeit in ein und derselben Richtung, aber gerade dadurch ohne weiteres für Dickenmessungen zu verwenden, weil die Drehungsrichtuug des Kopfes ohne weiteres über Hebung oder Senkung des Tubus Auskunft gibt, und den Leitz sehen, bei dem sich bei unbeschränkter Beweglichkeit in beiden Richtungen seitens des Schraubenkopfes nach einem gewissen endlichen Drehungs- betrag der Effekt auf Hebung oder Senkung des Tubns von selbst umkehrt, wodurch zwar ein absoluter Schutz gegen Überdrehen ge- geben ist, anderseits aber Dickeumessungen mit Hilfe der Mikrometer- bewegung nur nach Feststelhmg der jcAveils einer Drehungsrichtuug des Schraubenkopfes entsprechenden Tubusbewegungsrichtung aus- zuführen sind , gleichzeitig genügende Entfernung des jeweiligen Tubusstandes von den Endpunkten der Vertikalbewegung voraus- gesetzt. Die hier vorliegende Mikrometerbewegung gehört nach Figur und Beschreibung also dem zweiten dieser Typen an. — Dem Be- dürfnis nach einer bequemen und sicheren Handhabe beim Transport der Instrumente , durch welche gleichzeitig die beim älteren konti- nentalen Mikroskopstativ mit Prismenführung in der Säule unvermeid- liche irreguläre Beanspruchung des Tubusträgers und der empfind- lichen Mikrometerbewegung ausgeschlossen werden soll , wird bei mehreren der nach altem Typus weitergebauten Instrumente durch Anbringung einer besonderen mit dem Tischträger fest verbundenen Handhabe hinter der Mikrometersäule älterer Konstruktion Rechnung getragen. Auch bei einigen kleineren Mikroskopstativen ist der Tubusträger unter Verlegung der Mikrometerbewegung an sein oberes Ende zu einer fest mit dem Tisch verbundenen Handhabe ausgebildet. Ein gleiches gilt von dem Tubusträger des Demon- strationsmikroskopes nach Istvaxffy, ferner von den Stativen ver- 456 Gebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. XXV, 4. schiedener Präpariermikroskope und der binokularen Brücke sehen Lupe, welche alle besondere Handhaben für den Transport im Labo- ratorium aufweisen. Unter den neuen Präparierstativen fällt No. 131 durch die auch bei Präparierstativen anderer Provenienz (Winkel, Bausch & Lome usw.) zur Bildaufrichtuug verwendeten Porro sehen Prismen auf, welche hier durch die mit ihrer Verwendung verbundene starke Tubusverkürzung die Anwendung des dem Simplex in bezug auf gleichzeitig großes Gesichtsfeld und großen Objektabstand weit überlegenen zusammengesetzten Mikroskopes am Präparierstativ er- möglichen. Damit ist der Übergang zu den Neukonstruktionen auf speziell optischem Gebiete gegeben, deren der neue Katalog der Firma gleich- falls eine ganze Anzahl anführt, und zwar sowohl auf dem Gebiete der eigentlichen Mikroskopobjektive unter den Achromaten und in Gestalt mehrerer neuer semiapochromatischer ()l-Immersionen, als auch in Form neuer , besonders lichtstarker Objektive zur Mikro- photographie und Mikroprojektion , welche die Firma als Mikro- polare bezeichnet. Dieselben werden bei einer relativen Lichtstärke von F:4 in den Brennweiten von 30, 50, 75 und 100 mm augeboten. Von Konstruktionen zu besonderen Zwecken erscheinen besonders bemerkenswert : Ein neues großes Reisemikroskop , das neue ganz große mineralogische Stativ, ein Mikroskop nach J. A. Brinell zur Bestimmung der Härte und Festigkeit von Metallen und anderen Objekten durch Messung des Eindruckes einer in den betreffenden Körper eingepreßten Stahlkugel (Fig. 2). Auch ein Mikrosko]) mit extra großem Tisch zur Durchmusterung besonders großer Präparate (Gehirnschnittej findet sich unter den Neukonstruktionen der Firma. Avelchen sich noch eine große Beihe von Verbesserungen bereits bekannter Apparate anreihen . die hier nicht besonders aufgezählt werden sollen. Hier mag eine Veröffentlichung von Marktaxner-Turneretscher Erwähnung finden: „Über die Verwendung von Mikroskopen als Demonstrationsmittel an (»tfeutlichen Museen" (Museumskunde Bd. V, H. 1). Sie enthält beherzigenswerte Winke bezüglich der Konstruk- tion derartiger, vom Publikum ohne sachverständige Hilfe oder Kontrolle und ohne jede Vorkenntnis zu benützender Instrumente. Vieles, was an einem gewöhnlichen guten Mikroskop zum fast selbstverständlichen Erfordernis geworden ist, kann hier beim Museumsmikroskop in Fort- fall kommen, während die besondere Ver\vendungsart wieder anderes, besonders Schutzmaßregeln gegen unerwünschte Eingriffe, nötig macht. XXV. 4. (iebliardt : Au.s optischen uml ineclianisclien Werkstiitten II. 457 woran beim jjjewöhnliclieii (k'brauch des Mikroskopes niemand denkt. Icli ftihre hier außer dem ini),i,^liclist vollkommenen Abschluß des eigentlichen Meclianismus und der Präparate noch besonders die nach den Entwicklungen des Verfassers sehr einleuchtende Verlegung der (nur in gröberer Form erforderlichen) Einstellung in eine Höheu- verschiebung des Präparatenträgers, durch Hebel und Schnecken- mechanismus von außen zu betätigen, um den Tubus durch starre Micrometpr Ocular. Auszug- Befestigung allen unerwünschten und eventuell das Instrument oder die Präparate gefälirdeuden Verschiebungen unzugänglich machen zu können, — eine Art der .Scharfstellung, die bei den Mikroskopen ge- wöhnlicher Verwendung mit Recht längst abgekommen ist. Der zitierte Aufsatz enthält auch sonst Ratschläge für die Konstruktion des Präparatenträgers selbst, für die Einrichtung des Schutzkastens und den Einbau der notwendig vom Beschauer zu betätigenden Be- wegungsorgane des Instrumentes, ferner über die Beleuchtung der Objekte, sowohl im durelifallenden wie im auffallenden Licht, wobei 458 Gebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. XXV, 4. sogar der Anwendung automatisch mit der Präparatverschiebung aus- imd einzuschaltender Glühlämpchen das Wort geredet wird. Für die Betrachtung erst mit schwächerer, dann mit stärkerer Verstärkung werden zAvei nacheinander vom Präparat zu passierende Tuben, mit Objektiv und Okular jeder ausgerüstet, in Vorschlag gebracht. Die Firma Reichert, Wien, übernimmt die Ausführung von mikroskopi- schen Ausrüstungen nach den Ausführungen des Verfassers. Von neuen Katalogen inländischer Firmen über Mikrosko])e und mikroskopische Apparate liegt ferner vor ein solcher von Winkel, Göttingen. Bei dem in den Mikroskopstativen I a — e vertretenen Typus mit seitlich an dem (auch hier zu fest mit dem Tisch ver- bundener Handhabe ausgebildeten) Tubusträger angebrachter neuer Mikrometerschraube macht die Firma besonders auf die Stative I d und le aufmerksam, da sie nahezu alle Vorteile der größeren In- strumente bieten, im Preise aber erheblich niedriger sind. Es wurde das durch verschiedene Vereinfachungen in Bau und Ausstattung erreicht , ohne daß dadurch die Leistungsfähigkeit der Instrumente irgendwie beeinträchtigt würde. Statt des teureren Mahagonischrankes wird diesen Stativen ein solcher aus poliertem Erlenholze beigegeben. Von optischen Neukonstruktionen der Firma wurden bereits im vorjährigen Referat die komplanatischen Okulare, die Mikroluminare, ein Tubus mit eingebautem PoRROSchem Prisma zum Präpariermikro- skop No. I erwähnt. Der vorliegende diesjährige Katalog enthält ferner ein Mikroskop für Metalluntersuchungen (Fig. 3). Das Stativ besitzt seitliche oder auf Verlangen gewöhnliche Mikrometerschraube. Um Objekte von in weiten Grenzen beliebiger Dicke untersuchen zu können , ist er in der Höhe verstellbar. Der der Natur der zu untersuchenden Objekte nach häufig entbehrliche Spiegel ist abnehm- bar. Zur Beleuchtung undurchsichtiger Objekte dient ein Vertikal- lUuminator , der sein Licht unter Vermittlung einer mit Irisblende versehenen Beleuchtungslinse von einer Gasglülilichtlampe oder anderen ausreichenden Lichtquelle erhält. Auch bei der in Figur ?} dar- gestellten WixKELSchen Anordnung empfiehlt es sich, die mit dem Vertikal-Illuminator zu verwendenden Objektive in besonders kurzer Fassung und zur Verwendung ohne Deckglas korrigiert zu beziehen. Bei Verwendung von homogenen Ol -Immersionen ist dies nicht er- forderlich. Unter den von der Firma Winkel angebotenen Mikroskopobjek- tiven stellen sich in der Reihe der Achromate die Nummern 3a, 4a, 5 a, 7 a als Systeme von höherer Apertur als die älteren Nummern XXV. 4. Gebhartlt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten Tl. 459 3, 4, i) und 7 dar, und nimmt die Firma für sie „infolge ihrer eigenartigen Konstruktion — Bilder von hervorragender Schärfe imd Helligkeit" in Anspruch. Das neue schwache Achromatsystera ABC ist auseinanderschraubbar und ergibt so drei verschiedene Brenn- weiten: 32, 20 und 14 mm. Seine Glieder Ä und AB können auch einzeln geliefert und benutzt werden. Bezüglich der Mikrolurainare mögen hier noch die im neuen Katalog verzeichneten Brennweiten, nämlich 16, 26, 36, 50 und 70 mm, mit angeführt sein. Unter der Erwägung, daß zur Vermeidung „leerer Bilder" von zellig gebauten, namentlich gefärbten Objekten erfahrungsgemäß selbst bei den schwachen Vergrößerungen dieser Objektive für photographische Zwecke die relative Öffnung eine möglichst hohe sein soll, ist die Steigerung derselben auf F: 3*6 bei dem 16 mm -System als erfreu- licher Fortschritt erwähnenswert. Ein neuer billiger Scheibenrevolver, eine neue SxEiNHKiL-Lupe von 5-, 30- und 40facher Vergrößerung, ein Apparat zur Herstellung runder Lackringe und Lackzellen mögen der Vollständigkeit wegen auch noch unter den Neuerungen au- geführt werden. Seitens der optischen Werkstätte von Carl Zeiss , Jena , liegt die zweite Ausgabe des bereits in vorigem Referat besprochenen Prospektes über den SiEDEXTOPFSchenParaboloidkondensor vor. Ferner 460 Gebliardt: Aus optischen und niechanischen Werkstätten IL XXV, 4. eine Arbeit von N. Gaidukov : l'ber die Anwendung des Ultramikro- skops nach Siedentopf und des Mikrospektralpliotometers nacli Engel- mann in der Textil- und Farbstoff Industrie, welcher eine Tafel mit 26 ultramikrophotographischen Aufnahmen der wichtigsten Gespinst- fasern beigegeben ist. Die Arbeit ist ausführlich erschienen in „Zeit- schrift für angewandte Chemie" und „Zentralblatt für technische Chemie", Jahrg. XXI. 190;^. H. 9. p. 393ff. 4. Die Werkstätte gibt ferner einen Prospekt heraus über neue Meßmikroskope in verschiedenen, den einzelnen Anwendungs- arten besonders angepaßten Formen , welche als Modell A — E be- zeichnet werden. Die beiden Modelle A (Fig. 4 u. ;) ) und B dienen den beson- deren Zwecken der Metallprüf iing , soweit dabei rein messende Ver- fahren in Frage kommen. Sie sind, eben wie das nachher zu erwähnende Modell C\ zum Messen kui'zer Strecken (bis 20 bis 50 mm-^) mit ^) Die Modelle A, B, C werden seit kurzem auf Wunsch auch mit XW, 4. (Tcbhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten 11. 461 einer Genanigkeit von O'Ol mm bestimmt. Der den erwähnten drei ;Modellen gemeinsame Oberbau besteht im wesentlichen aus einem Mikroskope mit Zahn und Trieb, das auf einem horizontalen Schlitten mittels einer Schraube von genau 1 mm Ganghöhe verschoben werden kann. Die Schraubeuspindel wird um ihre Längsachse durch eine ■"-iv-.-Tr;^ tr T»"!"^'-:,,- -: '-'-\ .■"■■' > --^ " Mikrometertrommel gedreht, deren Umfang in 100 Teile geteilt ist. Jeder Teil entspricht also einer Verschiebung des Mikroskopes um 0*01 mm. Die Vergrößerung kann durch Auswechseln von Objektiv und Okular dem Objekt angepaßt werden. Das Modell Ä (Fig. 4 u. 5j, hauptsächlich zu Härtebestimmungen von Metallgegenständen nach längerer Schraube ausgerüstet, die bis zu 50 mm zu messen gestaltet ; dies ist namentlich beim Ausmessen von Spektren angenehm. 462 Grebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten IL XXV, 4. der BiuNELL sehen Methode bestimmt (Messungen der Größe und Tiefe des Eindrucks , den eine ihrer Oberfläche eingepreßte Stahl- kugel hinterläßt), ermöglicht die Messung auf drei verschiedene Weisen: Kleinere Objekte werden erstens dem von einer Ebonitplatte ge- bildeten Tisch einfach aufgelegt. Ist das Werkstück , an dem die Messung vorgenommen werden soll , dagegen groß genug und an- nähernd eben, so kann man zweitens das Mikroskop selbst darauf setzen und nach Entfernung der Tischplatte mit Zahn und Trieb auf die Werkstückoberfläche einstellen. Endlich ist das ganze Mikroskop- oberteil nur mit Hilfe eines kräftigen horizontalen Zapfens in dem Unterbaue des Mikroskopes befestigt, der in eine starke, geschlitzte und festklemmbare Hülse endigt. Dadurch kann man also drittens mit einem Handgriff das Oberteil des Mikroskopes herausziehen, und nunmehr mittels seines Zapfens an irgendeinem Laboratoriumsstativ in jeder gewünschten Weise vor, neben oder über einem Werkstück befestigen. — Das Modell B soll besonders zum Messen zweier in der Objektebene aufeinander senkrechter Strecken dienen , was dann wichtig wird, wenn wegen unebener Objektoberfläche der Stahl- kugeleindruck kein regelmäßig kreisförmiger war. Dazu ist hier bei gleichem Oberteil ein anderer Unterbau angeordnet. Der eben- falls hufeisenförmige Fuß ist kräftiger gehalten und trägt einen ein- fachen drehbaren Objekttisch, der am Rande zwei um 90 '^ versetzte Nuten hat, in die eine Feder einschnappt. Nach Messung der ersten Strecke wird der Objekttisch um 90^ gedreht, dann folgt die zweite Messung. Der Tisch kann in seiner Mitte Vertiefungen oder auf- setzbare Ringe erhalten, die der Form der vorwiegend zu messenden Objekte (z. B. Stahlkugeln), angepaßt werden. Mit einem Handgriff kann man den Objekttisch aus den innen zu einer Schlittenführung ausgebildeten Armen des Unterbaues herausziehen , um das ganze Mikroskop genau wie das Modell A auf große Gußstücke aufzusetzen. Das oben bereits erwähnte Modell C (Fig. 6) weist besondere Einrichtungen für die Ausmessung von Photographien physikalischer Erscheinungen auf, für die es in erster Linie bestimmt ist, z. B. von Spektren, Interferenzfiguren u. dgl. Der quadratische feste Mikro- skoptisch ist an der rechten und linken Seitenfläche so bearbeitet, daß diese einem metallenen auf der Tischfläche gleitenden Rahmen als Führung dienen können. Auf dem Rahmen wird die zu messende Platte durch zwei Federn festgehalten, nachdem sie an eine gleich- zeitig als Anlage dienende Millimeterteilung angeschoben ist. Der Rahmen kann auf diese Weise senkrecht zur Schiitteuführung des XXV, 4. Gebharclt: Aus optisrlieii und ineclianischen Werkstätten II. 4G;> genau wie bei Ä und B beschaffenen Oberteils verschoben werden, was den Vergleich entsprechender Bezirke in übereinanderliegenden Spektren erleichtert. Anßer der eben erwähnten ist noch eine zweite zu jener senkrechte Millimeterteilung angeordnet, und zwar auf der Tischfläche selbst, welche durcli ein mit Index versehenes Fenster 6. des Rahmens abgelesen wird. Beide Teilungen zusammen dienen als Koordinaten für das Wiederauftinden einer Stelle auf der Platte. Auch hier ist im Interesse einer allgemeineren Verwendbarkeit des Instrumentes im Laboratorium die leichte Abnehmbarkeit des Ober- teiles vorgesehen. Zwei weitere Modelle von Meßmikroskopen, Modell D und E, dienen als Kapillaren Meßmikroskope , letzteres auch allgemeineren Zwecken als Ablesemikroskop. Sie dienen dazu, an einem Endquer- 4G4 Grebhai'dt: Aus optischen und mecluinischen Werkstätten IL XXV, 4. f^chnitt einer horizontal liegenden Kapillarröhre von beliebiger Länge den inneren Dnrchmesser der eigentlichen Kapillare auf ^J^qq mm Durchmesser genau zu bestimmen. Sie ermöglichen durch ihre Hilfs- einrichtungen das schnelle Sortieren großer Mengen von Röhren nach ihren Kapillardurchmessern. Das mit Zahn und Trieb einstellbare Mikroskop besitzt etwa lOOfache Vergrößerung. Im Okular befindet sich eine Skala, deren Teilstriche je ^/j^q mm im Objekt entsprechen. XXV, 4. Gebliardt: Aus optisclien und mechanischen Werkstätten II. 4(3.> • Hei Modell D i Fig. 7 ) wei'den die beispielsweise 1 '/■> »i hingen l\()lireu auf ein am Mikroskop befindliches Brett gelegt und man be- ginnt etwa mit der Messung der Röhren der untersten Schicht. Da das Mikroskop leichter zu bewegen ist als die schweren Röhren, hat es zu diesem Zweck eine durch Handrad zu betätigende Schlitten- bewegung parallel dem Brettanschlag erhalten, wodurch man ohne Miilie der Reihe nach jede Röhre der untersten Reihe nach der .inderen ins Gesichtsfeld bringen kann, wo die Ablesung ihrer Dicke mittels Okularmikrometers erfolgt. — Das Modell E besteht einfach aus dem wie beim vorigen ausgerüsteten und mit seiner Zahn- und Triebbewegung auf Stift fest montierten Tubus, der sich im runden Stativfuß mit Hülse von Hand hoch und tief und in beliebiger Drehungs- lage um den Stift als Achse ausrichten läßt. Auch seitens der o])tischen Werkstätte E. Leitz, Wetzlar, liegt ein Prospekt vor über den bereits im laufenden Jahrgange vorliegen- der Zeitschrift ausführlich beschriebenen Spiegelkondensor nach V. Ignatowskv. Die vereinfachte Form dieses Kondensors , welche ihren Platz ohne jede besondere Anpassung auf dem Tisch eines beliebigen Mikroskopstatives findet , dürfte hervorragend geeignet sein, zur Verbreitung der modernen Dunkelfeldbeleuchtungsmethoden beizutragen. Der neue Katalog von W. i<: H. Seibert, Wetzlar, enthält von Neukonstruktionen zunächt vier weitere mit der neuen Mikrometer- bewegung ausgerüstete, gleichzeitig auch wieder mit einem als starre Handhabe ausgebildeten Tubusträger versehene Mikroskopstative. Den Einrichtungen für Fltramikroskopie und für Dunkelfeldbeleuchtung- wurden in Gestalt zweier Paraboloidkondensoren, von denen sich gleichfalls der eine jedem beliebigen Mikroskoptisch ohne jede be- sondere Anpassung einfach auflegen läßt, weitere P>gänzungen zuteil. Ein neukonstruierter , für gewisse Zwecke , z. B. zum Sichern und bequemen Durchmustern großer Präparate und regelmäßig aufgelegter Schnittserien, recht bequemer beweglicher Objekttisch, welcher die jedesmalige Verschiebung in einer der beiden gekreuzten Bewegungs- richtungen durch Index und Einschnappvorrichtung der Breite des jeweiligen Objektivsehfeldes anzupassen gestattet, ist im letzten Hefte des vorliegenden Jahrganges dieser Zeitschrift bereits ausführlich von Engel beschrieben worden. Auch die optische W^erkstätte von Otto Himmler , Berlin , teilt in einem besonderen, als Nachtrag zu dem letzterschienenen Katalog herausgegebenen Prospekt die Ausdehnung des Mikroskoptubus mit Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. 30 466 C^ebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. XXV, 4. starrem weitaiisladeudem Tubusträger und neuer seitlicher an seinem Oberende angebrachter Mikrometerschraube auf zwei weitere Stative mit. Von derselben Firma liegt ein weiterer Prospekt vor über einen mikrophotographischeu Apparat mit besonderen Einrichtungen für stereoskopische Mikroaufnahmen, Dieselben bestehen erstens in einer stereoskopischen Wijjpe nach dem zuerst von G. Fritsch in Anwendung gebrachten Prinzip , ferner in einem Kameraansatz , der jeder beliebigen Kamera angepaßt werden kann, wobei er an Stelle der gewöhnlichen Kassette verwendet wird. Derselbe gestattet die Aufnahme beider Bilder auf einer Platte, und zwar in solcher Weise, daß weder beim Negativ noch beim Positiv ein Umsetzen der Bilder nötig wird. Außer der Verwendung der im Handel befindlichen Million-Blechkassetten erlaubt derselbe ferner eine Änderung in der Entfernung beider Bilder in den gegebenen Grenzen von 64 bis 80 mm. so daß die Aufnalimen jedem Betrachtungsapparate für stereoskopische Bilder angepaßt werden können. Die neue stereoskopische Wippe, wie der Kameraansatz von Schmehlick konstruiert und durch Ge- brauchsmuster geschützt, kann in jedes größere für mikrophoto- graphische Aufnahmen geeignete mit herausnehmbarem Objekttiscli versehene Stativ eingesetzt werden. Der Ausschlag der Wippe ist regulierbar und der Objektträger achsial und in der Richtung des tJrafanges verstellbar, so daß allen Wünschen in bezug auf die Xeigungsrichtung Rechnung getragen werden kann. Der Neigungs- winkel kann mittels eines auf dem Apparat montierten Zeigerwerkes bis auf 0"l'^ genau abgelesen werden. Im l^rospekt werden für schwache Vergrößerungen die erforderlichen Winkeldifferenzen größer angegeben als für stärkere. Dazu ist zu bemerken, daß im allge- meinen gerade umgekehrt mit der wachsenden Apertur der Aufnahme- objektive stärkere Winkeldifferenzen zur Erzielung ausreichender Plastik erforderlich werden. Die praktisch allerdings nötige Be- schränkung, die eben den Hauptmangel der stereoskoi)ischen Wippe bei starken Vergrößerungen bildet, ist aber durch die P^mpfindlich- keit stärkerer Objektive gegen Niveaudifferenzen im Objekt rein äußerlich gegeben (vgl. „Über Mikrostereogramme bei starken Ver- größerungen" von W. Gebhardt, in Pliotographische Rundschau. Herbst 1898, wie auch Neuhauss, Lehrbuch der Mikrophotographie. '2. Aufl.). Übrigens sind die angegebenen Ausschläge von 1*5^ für schwächere, 0*5*' für stärkere Objektive, auch absolut genommen nach den Erfahrungen des Ref. mit Mikrostereogrammen nach diesem und anderen Prinzipien viel zu klein, vielleicht liegt das nur in XXV, 4. Gebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. 4(37 einem Druckfeliler des Prospektes. Von der Firma liegen nämlicli eine Anzahl recht guter stereoskopischer xVufnahmen in schwaclien und Luponvergrößerungen vor , die gewiß gut geeignet sind , die Brauchbarkeit gerade der schwach vergrößerten Stereogramme für den Unterricht zu demonstrieren (Ref. scheint dieses Hilfsmittel über- haupt ganz besonders geeignet, um vor allem in Schulen in bequem- ster, Zeit, Kosten und Aufbewahrungsmühen ersparender Weise den Anschauungsunterricht zu f(»rdern). 30* 468 Gebharclt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten 11. XXA^, 4. Die englische Urma W. Watson & Sons, London, WC 313, High Holborn, gibt ein kleines Schriftchen heraus, betitelt „The choice of a Microscope", welches einerseits zwar dazu bestimmt ist, dem Anfänger und den in P^ngland so außerordentlicli verbreiteten Lieb- haber-Mikroskopikern die zur geeigneten Auswahl eines Instrumentes nötigen Fingerzeige zu geben, das aber für den kontinentalen Mikro- skopiker anderseits auch in mehr als einer Hinsicht gerade dadurch Interesse bietet, daß es auf den innigen Konnex ein Streiflicht wirft, der in England zwischen den Wünschen der Benutzer und den Kon- struktionen der Werkstätten viel mehr als bei uns besteht. Ich führe als Beispiel nur die sehr weitgehende und keineswegs auf die Er- zeugnisse ein und derselben P^'irma beschränkte Auswechselbarkeit und Nachbezugsmöglichkeit selbst solcher Teile au , wie spezieller, dem „substage" einzufügender Beleuchtungsapparate ii. dgl. Es wird diese Auswechselbarkeit durch die Beobachtung der von sämtlichen Firmen angenommenen Normalien der Royal Microscopical Society bei der Dimensionierung der einschlägigen Teile ermöglicht. In dem gleichfalls vorliegenden Mikroskop-Katalog der Firma wer- den neben den großen und teilweise sehr kostspieligen Stativen spezi- fisch englischer Bauart (Fig. 8) auch eine Anzahl billigerer Stative an- geboten, die sich in ihrem Habitus stark den kontinentalen Formen annähern, — wohl auch hier eine Konzession an die Erscheinung der allmählichen Verdrängung der luxuriösen, aber wegen ihrer Kom- pliziertheit, ihrer Höhe und nicht zuletzt wegen ihrer Kostspieligkeit für den wenig sclionenden und vor allem rasches Arbeiten fordernden Laboratoriumsgebrauch weniger geeigneten großen englischen Stative durch den kontinentalen Typus überall da, wo es sich um regelmäßig- rasch zu erledigende größere Arbeitspensen handelt , wie fast bei allen Berufsmikroskopikern, während erklärlicherweise gerade der zu seinem Vergnügen mikroskopierende, in England sehr stark vertretene Amateur mit Vorliebe die stattlichen, und wenn es auf die Zeit nicht ankommt, auch gerade dem weniger Geübten viele Bequemlichkeiten bietenden typisch englischen Stativformen wählt. Unter den Mikro- skopen für spezielle Zwecke seien die verschiedenen Formen der mineralogischen Stative, ferner ein dem Martens sehen mikrophoto- graphischen Stativ in der allgemeinen Anordnung sehr ähnliches Metallmikroskop , ferner zwei vollständig in Glaskästen eingebaute Museumsmikroskoi)e mit Scheiben- bzw. trommeiförmige ra (Fig. 9) Objektträger, endlich ein Reisemikroskop angeführt, die sich alle durch sehr zweckdienliche und originelle Konstruktionsdetails aus- XXV, 4. Gebhardt: Aus optischen und uieclianisclien Werkstätton II. 4(59 zt'iclineii. Unter den Neben- und Hilfsappnraten sehen wir einen sehr hübschen Küvettentyp für Lichttilter u. dgl. mit (Jummizwischen- lage zwischen zwei ihr beiderseits einfach augedrückten runden Glas- platten (also ganz das gleiche Prinzip, wie der von Nehhauss emp- fohlene U- förmig gebogene Gummischlauch zwischen zwei durch photographische Klammern zusammengehaltenen Glasplatten. Vorteil bei beiden: die bequeme gründliche Reinigung). Interessante Kon- zessionen an den Ungeübten finden sich auch unter den Nebenappa- 9. raten: fast ergötzlidi wirkt z.B. der Anblick des „Sicherheitsobjekt- trägers", der gegen die Folgen unbeabsichtigten Aufstoßens mit dem Objektiv aufs Präparat schützen soll, indem bei ihm der Objektträger auf zwei schwache Querfedern zu liegen kommt, die ihn gegenüber ihm befindliche , zur Tischfiäche parallel angeordnete Anschläge an- drücken. Auch mit den am Stativ anzubringenden Haltezangen für wider- spenstige Objekte hat sicli in den seit ihrer Erfindung verstriclienen mehr als 100 Jahren der kontinentale Mikroskopiker nie befreundet. Mikrophotographische Apparate werden in mehreren Ausfüh- rungen angeboten, darunter aucli der massive Kastenapparat nach VAX Heurck. Hierbei sei auch gleich auf die verscliiedenen auf- 470 Grebhardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten II. XXV, 4. geführten Mikroskopierlampeu, besonders auf die recht praktisch er- scheinenden, freilich nach unseren Begriffen ziemlich teuren Petroleum- lampen des Kataloges hingewiesen. Von anderen ausländischen Firmen liegen von Bausch & Lomh Optical Company ein Katalog über Mikroskope und Nebenapparate und eine Anzahl Druckschriften vor. In dem ersteren zeigt sich, wie auch bei anderen amerikanischen Firmen , die durchgehende An- näherung an die kontinentalen Konstruktionsnormen in bezug auf die rsoiv L scn lo^o^m 10. Dimensionierung der Stative. Dagegen ist für die neue feine Mikro- meterbewegung der von englischen und amerikanischen »Stativen älterer Konstruktion her bekannte und z. B. bei Watson in den englischen Stativen einfach und doppelt (vgl. Fig. 10) noch ver- wendete Hebel statt der kontinentalen Schneckenübertragung der neueren Mikrometerkonstruktionen gewählt worden. Die übrigen Sta- tive der Firma haben die bewährte Prismenführung und Mikrometer- schraube des älteren kontinentalen Typs beibehalten. Sowohl die Stative wie auch viele der angebotenen Nebenapparate sind durch einfache und elegante Form und Konstruktion ausgezeichnet , dies gilt z. B. von einem Demonstrationsmikroskop, einem geradezu klas- sisch einfachen Taschen - Präpariermikroskop , einem justierbaren Zeichentisch und selbst von einer mit einer erhöhten und verstell- baren oft sehr erwünschten Handstütze ausgerüsteten Drehseheibe XXV, 4. Gebliardt: Aus optischen und mechanischen Werkstätten 11. 471 für Lackriiige und Lnckzelleiihcrstelhin^-. Für die Präpariermikro- skope ist aucli hier ein äußerlich außerordentlich kurzer Tubus mit bildumkelirendem Porro sehen Prisniensatz vorhanden. Unter den Objektiven werden die neuen in den Typus der Zeiss sehen Tessare gehörigen neuen „Mikrotessare" an Stelle der älteren Mikroplanare angeboten. Die Brennweiten derselben betragen 72, 48 und 32 mm, die relative Öffnung F:4'5, das mit Mikro- schärfe nutzbare Feld .55*'. Die kleineren Druckschriften der Firma bestehen einmal in mehreren Nummern der periodisch ausgegebenen Heftchen, „Prism"" betitelt, von denen die mir vorliegenden einen kurzen Abriß der Geschichte des Mikroskops und einen Artikel über Lichtbilder ent- halten , ein drittes und letztes endlich einen kurzen Abriß der Ge- schichte der drei Werkstätten von Bausch & Lomb, Carl Zeiss und G. N. Saegmüller, deren Vereinigung zu dem neuerlichen Wortlaut der Firma als „Bausch & Lomb Optical Company" geführt hat. Dieser Vereinigung zur Vertretung der gemeinsamen Interessen ist noch ein besonderes .Schriftchen unter dem Titel: A Triple AUiance in Optics gewidmet. [Eingegangen am -21. Januar 1909.] 47 li Referate. XXV, 4. Referate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. Brückner, F., Une modification pratique du procedr de RoMANOWSKv, pour le sang et le treponeme (Compt. Rend. Sog. Biol. t. LXIV, 1908, p. 968—969). V'erf. gibt folgende Vorschrift: Man löst warm 1 g Methylen- l)lau in 100 cc destilliertem Wasser, fügt nach dem Erkalten 0*06 g Ätznatron gelöst in 10 cc destilliertem Wasser zu, läßt im Thermo- staten von 37^ C 5 Tage reifen, setzt dann 0"5 g Eosin gelöst in .')0 cc destilliertem Wasser zu, schüttelt um und läßt dann 2 Stunden ruhig stehen. Der gebildete Niederschlag wird auf einem Filter ge- sammelt, mit 500 cc destilliertem Wasser gewaschen, bei 37** C getrocknet und schließlich in 100 cc Methylalkohol gelöst. Nach '24 Stunden wird die Lösung filtriert. Zur Färbung von unfixierten Bluttrockenpräparaten verdünnt man 1 cc der Stammlösung mit 5 cc Methylalkohol, gießt davon auf das Präparat und fügt nach 10 Minuten 10 bis 12 Tropfen destilliertes Wasser zu, nach weiteren 5 Minuten wird gewaschen, getrocknet und in Zedernholzöl eingeschlossen. Ver- dunstet infolge großer Wärme der Methylalkohol während der Färbung zu rasch, so muß man von Zeit zu Zeit einige Tropfen Methylalkohol aufträufeln , um Niederschläge zu vermeiden. Haben sich solche trotzdem gebildet, so bringt man das Präparat nach dem Abspülen mit Wasser für eine bis 2 Sekunden in Methylalkohol und spült wieder mit Wasser ab. Mit Alkohol fixierte Präparate färbt mau. Schichtseite nach unten, während 20 bis 30 Minuten in einer Mischung von 1 cc Stammlösung und 20 cc destilliertem Wasser. Weiter- behandlung wie oben. Auch die Rapidfärbung von Spirochaeta pallid.i XXV, 4. Referate. 473 gelingt, wenn man zu 10 cc üprozentiges Glyzerin 10 bis 12 Tropfen Stammlüsung- fügt, das Gemisch einige Sekunden kocht imd noch kochend auf das mit Alkohol fixierte Präparat gießt ; nach 3 Minuten folgt dann Waschen, Trocknen und Einschluß in Zedernholzöl. E. Schoebel (Neapel). Carreras , ß. , 1/ i m p r e g n a z i 0 n e a r g e n t i c a a s s 0 c i a t a all'uso deUa piridiua per la colorazione del tessuto nervoso (Monitore Zool. Ital. Anno XIX, 1908, p. 177—179). Kleine Stückchen Rückenmark werden zunächst 5 bis 6 Tage in Pyridin fixiert und dann nach 24stündiger Wässerung in eine 4prozentige wässerige Lösung von Ammoniuramolybdat, die pro g Molybdat einen Zusatz von einem Tropfen Salzsäure enthält, gebracht. Nach kurzem nur wenige Minuten dauerndem Auswaschen wird durcli Alkohol in Xylol übergeführt und in gewöhnlicher Weise in Paraffin eingebettet. Zur Weiterbehandlung kommen dann die dünnen (3 bis 6 (X) an das Deckgläschen mit Wasser aufgeklebten entparaffinierten und mit absolutem Alkohol behandelten Schnitte in ein Gemisch, das durch Zusammengießen folgender beider Lösungen erhalten wird : 1) Ale. abs. 50 g, Jodammonium 2 g, Jodcadmium 2 g, Bromcadmium 2 g und 2) Aqua dest. 50 g, Gelatine 0-5 g. Die Lösung der Gelatine wird durch W^ärme bewirkt. Nach dem Erkalten wird dann Lösung 1 und 2 zusammengegossen und der flockige Niederschlag absetzen gelassen. Nachdem die Schnitte in diesem klar abgegossenen Ge- misch 2 bis 3 Stunden verweilt haben , bringt man sie , ohne vor- herige Wasserspülung in der nur mit rotem Licht erhellten Dunkel- kammer in eine 3- bis 3^/3prozentige Silbernitratlösung, welcher man in dem Moment, in dem man die Schnitte eintaucht, 2 oder 3 winzige Kristalle Jodkalium zusetzt. Nach '^^ bis l^/g Stunde, je nach der Zimmertemperatur, überträgt man die Schnitte unmittelbar in eine einprozentige wässerige Lösung von Pyrogallol, worin sich die Reduk- tion fast augenblicklich vollzieht. Nach sorgfältigem Abspülen mit Wasser wird vorteilhaft noch vor dem Verlassen der Dunkelkammer in einer 20prozentigen Lösung von Natriumthiosulfat das unreduzierte Halogensilber entfernt. Hierauf folgt abermalige gründliche Wässe- rung der Schnitte und nach Alkoholbehandlung Einschluß in Kanada- balsam. In den verschiedenen Flüssigkeiten müssen die Deckgläschen immer so zu liegen kommen, daß die Schnitte sich auf der oberen Seite befinden. E. Schoebel (Neapel). 474 Keferate. XXV, 4. Priilgsheini , E. J u n. , Über die H e r s t e 1 1 u u y von Gel 1» - filtern und ihre Verwendung zu Versuchen mit lichtreizbaren Organismen (Ber. d. d. botan. Ges. Bd. XXVI a, 1908, H. 8, p. 5ö6). Gelbfilter stellt Verf. folgendermaßen her. Glasplatten, z. B. von alten photographischen Platten , werden mit einer Lösung von Kaliumbichroraat in konzentrierter Schwefelsäure gewaschen , unter der Wasserleitung abgespült und mit der zu beschickenden Fläche nach unten schräg auf Fließpapier aufgestellt. Nun löst man in einer beinahe gesättigten, tiefrotbraunen, filtrierten Lösung von Methylorange in destilliertem Wasser 20 Prozent Gelatine , filtriert im Dampftopf oder mit Heißwassertrichter und setzt zu je 100 cc einen Tropfen Glyzerin, damit später die getrocknete Schicht nicht zu spröde wird, und etwa ^/jq g Borsäure, damit keine Schimmelpilze aufkommen. Die Gelatinelösung wird heiß auf die Glasplatten ausgegossen. Zweck- mäßig ist es , immer zwei Platten mit dünner Schicht zu versehen, mit der Schichtseite aufeinander zu legen und sie am Rande mit- einander zu verkitten. Verf. verwendet seine Gelbplatten bei Versuchen mit heliotropisch sich krümmenden Pflanzen und mit heliotaktisch sich einstellenden Mikroorganismen. Die hier wiedergegebene Figur veranschaulicht das Verfahren, eine „Lichtfalle" für Euglenen usw. herzustellen. Die XXV, 4. Referate. 475 ohue weiteres aus der Abbiklnng- sich erklärende Modifikation der KxGELMANN sehen Methode gestattet die Organismen in einem weißen Lichtflecke zu fangen, der sich von einem gelben (anstatt lichtlosen 1 (resichtsfeld abhebt. Küster (Halle a. S.). 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere. Meves, F., u. Duesberg, J., Die .Spermatozytenteilungen bei der Hornisse (Vespa erabro L.) (Arch. f. raikrosk. Anat. Bd. LXXI, 190.S, p. 571—587 m. 2 Tfln.). Zur Fixierung dienten hauptsächlich Hermann sches und Flem- MiNGSches Gemisch (einprozentige Platinchlorid- bzw. einprozentige Ohromsäure 15 cc . 2prozentige Osmiumsäure 2 cc, Eisessig 1 cc), welches mit dem gleichen Quantum destillierten Wassers verdünnt war. Die von diesem Material hergestellten Schnitte wurden vor- wiegend mit pjisenhämatoxylin nach Heidenhain gefärbt. Ein Teil der Hoden wurde für die ^litochondriendarstellung nach Benda in Flemming sches Gemisch von folgender Zusammensetzung eingelegt: einprozentige Chrorasäure 15 cc , 2prozentige Osmiumsäure 4 cc. Eisessig 3 Tropfen und dann nach der von Benda angegebenen Vor- schrift weiter behandelt, nämlich nach einstündiger Wässerung auf 24 Stunden in ein Gemisch aus gleichen Teilen von rektifiziertem Holzessig und einprozentiger Chromsäurelösung gebracht, dann auf 24 Stunden in eine 2prozentige Lösung von doppelt chromsaureni Kalium, um nach 24stündigem Wässern durch Alkohol steigender Kon- zentration geführt und in üblicher Weise in Paraflin eingeschmolzen zu werden. Die Färbung des auf diese Weise vorbehandelten Mate- rials geschah nach Benda durch Eisenalizarin und Kristallviolett mit nachfolgender Säuredifterenzierung. Dieses neuerdings von Benda selbst geänderte Verfahren ist in folgender Weise auszuführen : Die etwa 5 ju dicken, auf das Deckgläschen oder den Objektträger auf- geklebten Schnitte kommen zunächst auf 24 Stunden in eine 4pro- zentige Lösung von Eisenalaun bei gewöhnlicher Zimmertemperatur und werden dann nach Abspülen in destilliertem Wasser 24 Stunden in eine Lösung von sulfalizarinsaurem Natron gebracht, welche durch 476 Referate. XXV, 4. Verdümiimg von 1 cc einer gesättigten wässerigen Lösung mit 80 bis 100 CG destillierten Wassers hergestellt wird. Nach abermaligem Abspülen werden die Schnitte in einem Scliälchen mit Kristallviolett- lösung erwärmt, bis Dämpfe aufsteigen und dann noch weitere 3 bis ö Minuten darin gelassen. Die Kristallviolettlösung ist eine 3pro- zentige alkoholische Lösung, welche mit dem gleichen Volumen Anilinwasser verdünnt ist. Hierauf wird eine bis 2 Minuten in SOprozentiger J^ssigsäure differenziert und 5 bis 10 Minuten in fließen- dem Wasser ausgewaschen. Schließlich werden die Schnitte mit Fließpapier abgetrocknet, rasch in absoluten Alkohol getaucht, in Bergamottöl gebracht und nachdem dies durch Xylol ersetzt ist, in Kanadabalsam eingeschlossen. E. Schoebel (Neapel). Nowikoff, M., Über den Bau des Medianauges der Ostra- coden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XCI, 1908, p. 81 — 92 m. 1 Fig. u. 1 Tfl.). Die Untersuchungen wurden an einer Reihe verschiedener Cypris- arten ausgeführt. Als beste Fixierungsflüssigkeiten erwiesen sicli konzentrierte wässerige Sublimatlösung und das GiLsoNsche Gemisch ^46prozentige Salpetersäure 15 cc, Eisessig 4 cc, Sublimat 20 g. «lOprozentiger Alkohol 100 cc, Wasser 880 cc) und als bestes Tink- tionsmittel die MALLOiiysche Dreifachfärbung und Boraxkarmin mit folgender Behandlung mit einprozentiger Osmiumsäure und Holzessig. E. Schoebel {Neapel). Widmann, E., Über den feinerenBau derAugen einiger Spinnen (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XC, 1908, p. 258 —312 m. 4 Figg. u. 3 Tfln.). Zur Fixierung leisteten Sublimatgemische, die Gieson sehe Flüssig- keit und die FLEsiMiNGSche Lösung, gleichgültig ob heiß oder kalt angewandt, gute Dienste. Immer aber ist es unbedingt nötig, um leichtes Eindringen der Flüssigkeiten zu ermöglichen , den Ocellen tragenden Teil des Cephalothorax abzupräparieren. Um die Hinder- nisse , die die Cuticula dem Mikrotomieren in den Weg legt , nach Möglichkeit zu beseitigen, wurde entweder nach dem Vorschlage von Hesse die Linse teils mit einem feinen Messer, teils mit dem Mi- krotom entfernt und dann nochmals eingebettet, oder aber, wenn es sich darum handelte , die Linsenstruktur und die Zusammenhänge der Linse mit dem Nachbargewebe zu studieren, das Gewebe vor dem Einbetten entsprechend erweicht. Zu letzterem Zwecke kam XXV, 4. Keferate. 477 ein Gemisch von 10 Teilen Oöprozentigen Alkohols und 1 bis l^/.^ Teil . Salpetersäure (von 63 Prozent an HNO.) bei einer Einwirkung von 12 bis 36 Stunden zur Verwendung. — Da das Zwischengewebe aller Spinuenaugen stark mit Pigment erfüllt ist, ist es nötig, pig- mentierte Schnitte mit solchen zu vergleichen, aus denen das Pigment entfernt ist. Zum Bleichen der Schnitte , was dem Bleichen in tot<> vorzuziehen ist, diente Wasserstoffsuperoxyd oder ein Gemisch von 3 Teilen 95prozentigen Alkohols und einem Teil frischen Chlorwassers. Nach eiustündigem Verweilen darin sind die Schnitte in der Regel gut gebleicht und können dann nach sorgfältigem Auswaschen in Wasser mit beliebiger Farbe tingiert werden. Von Färbungen eignet sich zu Übersichtsbildern Hämatoxylin- Eosin oder der WEiGERTSche Hämatoxylin- Eisenlack kombiniert mit Säurefuchsin. Zum Studium der feineren Strukturen ist Eisenhämatoxylin nach Bütschli oder Heidenhain oder die ScmiBERGSche Dahliafjirbung zu empfehlen. E. Sckoebel (Neapel). Schröder , 0. , Die Sinnesorgane der Skorpions kämme (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XC, 1908, p. 436—444 m. 1 Tfl.). Zur Fixierung wurden die den lebenden Tieren abgeschnittenen Kämme teils in die kalte , teils erwärmte Fixierungsflüssigkeit : GiESONSche Flüssigkeit, Sublimat- Alkohol -Essigsäure, konzentrierte wässerige Sublimatlösung, Flemmings und Hermanns Gemisch sowie einprozentige Osmiumsäurelösung geworfen. Die drei zuerst genannten Reagentien gaben die besten Resultate , während die übrigen wegen schlechten Eindringens nur mangelhaft fixiert hatten. Für das Schneiden erwies sich eine Vorbehandlung zum Erweichen des Chi- tins vor der Parafiineinbettung unnötig. Zur Vorfärbung der ganzen Kämme diente Boraxkarmin , Parakarmin oder Salzsäurekarmin, in diesen Farben müssen die Objekte mindestens 48 Stunden verweilen, und zwar empfiehlt es sich , die Färbung im Wärmeschrank vor- zunehmen. Trotzdem dringt der Farbstoff oft ungleichmäßig ein und auch die Differenzierung mit Salzsäure -Alkohol fällt nicht immer gleichmäßig aus. Die Schnittserien wurden mit Delafields Häma- toxylin kombiniert mit Eosin gefärbt, oder mit Eisenhämatoxylin nach VAN Gieson- Weigert, mit der MALLORYSchen Methode, oder endlich mit der von Blochmann modifizierten van Gieson sehen Me- thode (O'Oöprozentige Lösung von triphenylrosanilintrisulfosaurem Natron in gesättigter wässeriger Pikrinsäurelösung) nach 24- bis 48- 478 Referate. XXV, 4. stündiger Vorfärbuug in Safraniu. Vor Anwendung- aller angeführten Schnittfärbungen erwies sich eine mehrstündige Behandlung der Schnitte mit einprozentiger Osmiumsäure mit oder ohne nachfolgender Einwirkung von Holzessig als günstig zur Darstellung der Nerven- fasern und Nervenfibrillen. E. Sclioebel {Neapel). Young , R. Th. , The Histogenesis of Cysticercus pisi- formis (Zool. Jahrb., Morph. Abt., Bd. XXVI, 1908, p. 183—254 m. 4 Tfln.). Eine größere Anzahl von Fixierungs- und Färbemethoden wurden versucht, aber nur wenige gaben befriedigende Resultate. Als die beste FixierungsHüssigkeit erwies sich die starke Chromosmium- essigsäure-Mischung nach Flemming bei einer Einwirkungsdauer von 2 bis 3 Stunden. Die nächstbesten Resultate gab eine konzentrierte Sublimatlösung in TOprozentigen Alkohol mit Zusatz von ein Prozent Eisessig, bei einer Fixierungsdauer von einer Stunde. Für die Färbung erwies sich besonders geeignet Heidenhains Eisenhämatoxylin allein oder kombiniert mit Eosin, Bordeauxrot oder konzentrierter wässeriger Lösung von Wasserblau und Pikrinsäure. Von Spezialmethoden wurde die ApÄTHYSche Vorvergoldung, die schnelle GoLoische Methode und die Methylenblaufärbung versucht. Die erstere versagte vollständig, die zweite gab einige gute Imprägnationen der Ausführgänge, die dritte einige brauchbare Färbungen der Myoblasten , keine aber ge- nügende Darstellung nervöser Elemente. E. Schoebel (Neapel). Ortmann, W., Zur Embryo ualentwicklung des Leber- egels [Fasciola hepatica] (Zool. Jahrb., Morph. Abt.. Bd. XXVI, 1908, p. 255—292 m. 3 Tfln.). Von Fixierungsmitteln gab für die Eier nur die IlEioiANNSche Lösung brauchbare Resultate. Andere Gemische verursachten stets grobe Schrumpfungen der Eier. Eingebettet wurde in Nelkenöl- Kollodium, weil die Überführung von Alkohol absolutus in Xylol oder Chloroform ohne Schrumpfung kaum möglich war. Auch die Sprödig- keit der verhältnismäßig dicken Eischale ließ die Anwendung der genannten Einbettungsmethode geraten erscheinen. Eine Schnittdicke von 3 fJL zeigte sich am vorteilhaftesten für die Untersuchung. Da eine Orientierung der Objekte infolge der Schwärzung durch die Osmiumsäure unmöglich war und dann auch nur ein geringer Teil der Eier sich für die Untersuchung geeignet zeigte, so wurde immer eine größere Anzahl von Eiern zugleich geschnitten. Gefärbt wurde XXV, 4. Referute. 479 mit Heidenhains Eisenhäinatoxyliii. Doppelfärbunyeii mit Bordeaux- rot, Liclitgrün, Eosin, Methylenblau und Kubinammoniumpikrat lieferten keine brauchbaren Resultate. — Ausgeschlüpfte Miracidien wurden nach dem Verfahren von Coe mit Osmiumsäure abgetötet, 48 Stunden in 2"5prozentige Silbernitratlösung gebracht und in der Sonne diflfe- renziert. E. Schoebel {Neapel). Uoldschiuidt , K. , Das Nervensystem von A s c a r i s 1 u m - bricoides und megalocephala. 1. Teil (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd.XC, 1908, p. 73 — 136 m. 22 Figg. u. 3Tfln.). Für diesen ersten Teil , der die topographische Beschreibung des Nervensystems enthält und die Schilderung der mikroskopischen Anatomie, also der Ganglienzellen und Nervenfasern und ihren ana- tomischen Zusammenhang, mit Ausnahme der Verbindungen, welche innerhalb des eigentlichen Nervenringes vor sich gehen , kam vor- wiegend für histologische Zwecke fixiertes Material in Betracht. Konzentrierte Sublimatlösung mit oder ohne Zusatz von Eisessig erwies sich als gut geeignet. Der Färbung legt Verf. nur geringen Wert bei, einfaches DELAFiEi.DSches Hämatoxylin genügt ihm im allgemeinen, wenn natürlich gelegentlich auch Spezialpräparate unter- sucht wurden. Für unerläßlich hält Verf. den ständigen Vergleich von Totalpräparaten des Nervensystems mit Schnittserien. Zur Her- stellung der ersteren wird folgende Methode empfohlen: Man schneidet mit einem feinen Messerchen den Hautmuskelschlauch des Vorder- endes des Wurmes bis auf den Oesophagus durch, und zwar je nach Bedürfnis lateral oder dorsal; der Schnitt wird dann bis zu den Lippen geführt und vorsichtig der Hautmuskelschlauch im Präparier- becken maximal auseinander gesteckt. Zieht man nun mit einer Pinzette den Oesophagus nach vorn heraus, so bleibt bei geschickter Handhabung das ihn umschließende Nervensystem auf der Unterlage liegen. Gelungene Präparate färbt man vorteilhaft mit Nissls Seifen- methylenblau derart, daß man die Präparate darin (i bis 8 Stunden im Thermostaten von 60^ C färbt, dann abspült und in ausge- spanntem Zustande mit Alkohol steigender Konzentration härtet, um sie schließlich in Nellvenöl zu übertragen, in dem sie so lange ver- bleiben, bis keine Farbe mehr ausgezogen wird (2 bis 3 Tage). In einem solchen Präparat treten die Ganglienzellen je nach ihrem Gehalt an Tigroidsubstanz dunkel- oder hellblau hervor und heben sich von dem gelben Ton des Hautmuskelschlauches deutlich ab. Alle Kerne sind intensiv blau, aber auch die vier Körperlinien zeigen 480 Referate. XXV, 4. sich gefärbt. Die Nervenfasern bleiben ungefärbt, treten aber meist durch ihre scharfen Konturen gut hervor. Zu erwähnen ist nocli. daß solche Totalpräparate aber nur bei altem Spiritusmaterial ge- lingen , nicht aber bei frisch konserviertem. Mazerationspräparati^ geben nur sehr bescheidene Resultate. Um einen Einblick in die Zusammensetzung der einzelnen Nervenstämme wie der Kommissuren zu erhalten , bleibt aber nichts anderes übrig , als die Methode der Rekonstruktion aus Querschnittserien. K. Schoehel (Neapel). Balß , H. H. , Über die Entwicklung der Geschlechts- gänge bei Cestoden, nebst IJemerkungen zur Ectoder mfr age (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XCI, 1908, p. 266—296 m. 1 Fig. u. 2 Tfln.). Als das geeignetste Material erwies sich die im Pferde vor- kommende Anoplocephala magna. Die zur Verfügung stehenden Tiere waren scheinbar in Sublimat oder irgendeiner Sublimat ent- lialtendcn Mischung fixiert. Zur Färbung der Schnitte diente außer Delafields Hämatoxylin. kombiniert mit Eosin, noch eine Doppel- tarbung mit Methylenblau - Safranin , besonders zur Darstellung des Plasmas der Zellen und die Dreifachfärbung nach Mallory zur Darstellung der Basalmembran, Für die Methylenblau - Safranin- Doppelfärbung werden die Schnitte aus destilliertem Wasser auf dem Objektträger ungefähr ^j.-, Minute mit Nissls Seifenmethylenblau er- wärmt und nach Abspülen in destilliertem Wasser rasch durch 40pr(i- zentigen Alkohol in eine Safraninlösung (200 cc dest. Wasser, 0*5 g Safranin, 79 cc [?] abs. Alkohol) gebracht, in der sie je nach der Dicke 15 Sekunden bis eine Minute unter Bewegung gefärbt werden, Avorauf sie sehr rasch durch die Alkoholreihe in Xylol und schließ- lich in Kanadabalsam zu übertragen sind. Für die Mallory sehe Dreifachfärbung wird zunächst etwa zwei Minuten mit Säurefuchsin vorgefärbt, nach Abspülen in destilliertem Wasser mit einer ein- l)rozentigen Lösung von Phosphormolybdänsäure etwa eine bis 2 Mi- nuten gebeizt , dann 2 bis 5 Minuten in einer Lösung von 0'5 g Anilinblau , 2 g Orange G , 2 g Oxalsäure in 100 cc destillierten Wassers gefärbt und schließlich nach abermaligem Spülen in Wasser kurz in 40prozentigen Alkohol überführt, in dem erst die blaue Farbe hervortritt. Sollte die Färbung dann noch nicht die gewünschte In- tensität besitzen , so kann man die Schnitte nochmals in die Farb- mischung zurückbringen, anderenfalls wird durch die Alkoholreihe in Xylol und Kanadabalsam überführt. Thionin und Bleu de Lyon- XXV, 4. Referate. 4R1 Ammoniumpikrat, das ebenfalls angewandt wurde, gab weniger gute Resultate. E. Schoebel {Neapel). KassiailOW, N., Untersuchungen über das Nervensystem der Alcyonaria (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XC, 1908, p. 478—535 m. 2 Figg. u. .3 Tfln.). Zur Untersuchung dienten Schnittserien und Mazerationspräparate von Alcyonum digitatum L. und Alcyonum palmatum Fall. Zur Fixierung des Materials diente vorzugsweise das HERTwiosche Ge- misch aus gleichen Teilen 0*2prozentiger Essigsäure und O'Oöprozen- tiger Osmiumsäure. Um die Tiere in ausgestrecktem Zustande fixieren zu können, müssen sie betäubt werden, was am besten durch Zusatz von etwa 3 Prozent Magnesiumsulfat zum Seewasser, in dem die Tiere sich befinden, geschieht. Nach einigen Stunden ist der gewünschte Effekt meist erreicht. Die Schnitte wurden mit Boraxkarmin kom- biniert mit Bleu de Lyon, oder mit Ilämatoxylin kombiniert und mit Eosin fingiert. Die erstere F'ärbung dürfte im allgemeinen vorzuziehen sein. Zur Mazeration diente die HERxwiGSche Methode, d. h. kurze Fixierung (eine bis 2 Minuten) in einem Gemisch von gleichen Teilen 0"04prozentiger Osmiumsäure und O'lprozenfiger Essigsäure in See- wasser und darauffolgende Mazeration für 24 Stunden mit O'lprozen- tiger Essigsäure. Durch Klopfen auf das Deckgläschen ist die Iso- lierung der Zellen dann leicht zu erzielen. Um die Färbbarkeit der Kerne, die bei Osmiumsäurebehandlung immer stark leidet, zu er- halten , wurde das Mazerationsmaterial nach dem Fixieren und vor dem Einlegen in die Mazerationsflüssigkeit kurze Zeit mit schwacher Salzsäure behandelt. E. Schoebel {Neapel). Selensky, W. , Untersuchungen über die sogenannten Urnen der Sipunculiden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XC, 1908, p. 536 — 595 m. 6 Figg. u. 4 Tfln.). Um eine große Anzahl freier Urnen zu erhalten, schneidet man einen Sipunculus oder eine Phymosoma auf und läßt die Leibes- flüssigkeit in eine Glasdose ablaufen. Nach etwa 10 bis 15 Minuten sinken die Geschlechtsprodukte , membranösen Blasen , die Mehrzahl der Blutkörperchen und sonstige in der Blutflüssigkeit suspendierte Elemente zu Boden , während die Urnen sich in großen Mengen in oberflächlichen Schichten mit nur relativ wenig anderen Elementen vermischt , sammeln. So können die Urnen ohne Schädigung ein paar Tage lang erhalten werden. Isoliert man sie aber möglichst Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. 31 482 Referate. XXV, 4. sorgfältig von den übrigen Bestandteilen der Cölomfliissigkeit und bringt sie ins Dunkle, so können sie auch längere Zeit am Leben bleiben. Für die Untersuchung der Entwicklung der Urnen von Sipunculus nudus wurde der Oesophagus nebst Tentakelkranz mit den sogenannten Blutgefäßen herauspräpariert, in ausgestrecktem Zustande mit Kaktus- stacheln festgesteckt und so fixiert. In ähnlicher Weise wurde auch der aufsteigende Darmteil von Phymosoma und Aspidosiphon be- handelt, um die fixen Urnen dieser Sipunculiden zu studieren. Zu- nächst wurde aber der Darm 3 bis 5 Minuten lang in Seewasser mit feiiv verriebenem Karmin oder Tusche gebracht, welche Farbstoffe die Urnen gierig aufspeichern und sich so leicht kenntlich machen. Zur Fixierung wurden verschiedene Reagentien verwendet. Die besten Resultate lieferten die osmiumsäurehaltigen Gemische Flemmings xmd Hermanns. Auch die Kleinenberg sehe Pikrinschwefelsäure er- wies sich für die freien Sipunculus-Urnen recht brauchbar. Die ver- schiedenen Sublimatlösungen ergaben im allgemeinen keine guten Resultate , nur für die am Darm sitzenden Urnen von Phymosoma und Aspidosiphon erwies sich die GiEsoNSche Lösung als günstig. Für die Gefäße mit den fixen Urnen von Sipunculus nudus lieferte Alkohol-Essigsäure nach Carnoy sehr gute Resultate. Die Urnen wurden sowohl lebend als an Dauerpräparaten in Wasser, Glyzerin oder Kanadabalsam eingeschlossen und in Schnitt- serien untersucht. Bei Kanadabalsam - Totalpräparaten wurde das Deckgläschen mit feinen Glasfäden gestützt, um durch Verschieben des Deckgläschens die Urnen drehen und von allen Seiten betrachten zu können. Zur Überführung durch die Alkohole, Xylol bis in Kanada- balsam, bzw. zur Einbettung in Paraffin, bediente sich Verf. kleiner Glasröhrchen , die an einem Ende mit Müller- Gaze verschlossen werden, so daß die Flüssigkeiten frei hindurchdringen können, während die Objekte durch das feine Seidennetz zurückgehalten werden. Da die raembranöse Kuppel der Urnen leicht zusammenschrumpft , so müssen die Objekte mit größter Vorsicht und ganz allmählich durch die Alkohole , Xylole und besonders in Paraffin überführt werden ; auch die Steigerung der Temperatur bei der Einbettung darf nur ganz langsam vorgenommen werden. Zur Färbung wurden folgende Methoden verwendet : Für Total- präparate nach Fixierung mit FLEMMiNGSchem oder Hermann schem Gemisch 0*25prozentige Osmiumsäure mit Holzessignachbehandlung: für die Schnitte Delafields Hämatoxylin kombiniert mit Eosin oder XXV, 4. Referate. 483 dem VAX GiESONSchen Säurefuchsin-Pikrinsäure-Gemiscli, ferner Eisen- liämatoxylin nach Heidenhain oder Weigert- van Gieson. Um scharfe Kernfärbnnj^ und gleichzeitig die erforderliche Differenzierung des Plasmas, Bindegewebes und der Muskelfasern zu erhalten, wurde, da Karminfärbung nach Fixierung mit FlemmIngs oder Hermanns Ge- misch wenig geeignet ist, mit Safranin vor- und mit Blochmann scher Flüssigkeit nachgefärbt. Zu diesem Zweck kamen die Schnitte zu- nächst für 24 Stunden in eine alkoholische Safraninlösung (Safranin ;533 mg, 95prozentiger Alkohol 86 cc, Wasser 33 cc) und wurden dann in Wasser, eventuell auch in Alkohol diff"erenziert , jedoch nur soweit, daß noch eine leichte Überfärbung bestehen blieb. Hierauf wurden sie 4 bis 7 Minuten mit der BLocHMANNSchen Flüssigkeit behandelt, in Wasser ausgewaschen und dann rasch durch die ver- schiedenen Alkohole in Xylol mit einem geringen Pikrinsäurezusatz überführt. Diese Methode gibt sehr instruktive Präparate , welche besonders beim Studium der Entwicklungsgeschichte der Urnen gute Dienste leistet. Die Färbung gelang sowohl nach Fixierung mit FLEMMiNGSchem und Hermann schem Gemisch, als auch nach Alkohol- Essigsäure. Außerdem wurde nach der Safraninfärbnng noch die MALLORYSche Tinktion mit Erfolg angewendet, doch standen diese Präparate den mit Safranin -Blochmann scher Lösung gefärbten weit nach. E. Schoebel {Neapel). Reicliensperger , A. , Die Drüsengebilde der Ophiuren (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XCI, 1908, p. 304—350 m. 5 Figg. u. 2 Tfln.). Soweit Untersuchungen am lebenden Objekt in Frage kamen, wurden die Tiere nach der Vorschrift von Östergrkn (s. diese Zeitschr. Bd. XIX, p. 300) mit Ätherwasser betäubt. Als Fixierungs- mittel kam mit bestem Erfolg heiße und kalte konzentrierte Sublimat- lösung, sowie Sublimat-Alkohol zur Verwendung. Auch sehr langes Verweilen in diesen Flüssigkeiten bringt den Objekten keinen Schaden, falls nachher das Auswaschen unter Zusatz von Jodjodkalium sorg- fältig geschieht. FLEMMiNGSche und Hermann sehe Lösung sind nur in seltenen Fällen mit sicherem Resultat anwendbar, da man bei ihrer Anwendung Gefahr läuft , daß eine zu plötzliche Entkalkung und damit Zerreißung der Gewebe eintritt. Bei ganz kleinen Ob- jekten bewährt sich auch Alkohol gut , man muß aber mit relativ schwachem Alkohol (35 bis 40 Prozent) beginnen und ganz allmäh- lich in stärkeren bis endlich in 80prozentigen. in dem die Objekte bis 31* 484 Referate. XXV, 4. zur Verarbeitung verbleiben, überfüliren. Besonderer Wert ist dem Entkalken beizumessen. Es bewährte sich auch hier die etwas mo- difizierte RoussAusche Celloidinmethode (s. diese Zeitschr. Bd. XXV, p. 204). Zur Färbung kamen für den vorliegenden Zweck hauptsächlich Schleim färbende Farben zur Verwendung: Mucikarniin, Muchämatin und Thionin. Für die allgemeine Plasmafärbung ist bei Thionin vor allem Säurefuchsin zu empfehlen. Man überfärbt ein wenig im Säure- fuchsin und bringt durch destilliertes Wasser ins Thionin. Außer- dem fanden noch Anwendung Hämalaun, Delafields Hämatoxylin und Eisenhämatoxylin mit Nachfärbung in Rubin. E. Sehoebel (Neapel). B, Wirbeltiefe. Meyes , F. , Die Chondriosomen als Träger erblicher Anlagen. Cytologische Studien am Hühner- embryo (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 816 bis 867 m. 4 Tflii.). Zur P'ixierung der Kmbryonen kam hauptsächlich eine modifi- zierte FLEMMixGSche Chromosmiumessigöäure zur Verwendung, näm- lich ^/„prozentige Chromsäure (mit Zusatz von ein Prozent Kochsalz) 15 cc, 2prozentige Osmiumsäure 3 bis 4 cc, Eisessig 3 bis 4 Tropfen. Für ganz junge Keimscheiben (bis zu etwa 36 Stunden) gab auch das schwache P'LEMMiNGSche Gemisch mit Zusatz von ein Prozent Kochsalz gute Resultate. Zur Färbung der Chondriosomen wurde die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylinnietliode bevorzugt. Für beste Resultate ist eine ältere, gut ausgereifte llämatoxylinlösung erforder- lich. Die Tinktion mit Eisenhämatoxylin steht der von Benda emp- fohlenen mit Kristallviolett durchaus nicht nach. Letztere Färbung gelingt übrigens an Material, welches mit FLEMMiNGSchem Gemisch obiger Zusammensetzung fixiert ist auch dann, wenn die von Benda vor- geschlagene Nachbehandlung der fixierten Olijckte mit einer Mischung von Holzessig und einprozentiger Chromsäure und mit einer 2pro- zentigen Lösung von Kaliumbichromat unterblieben ist. E. Sehoebel (Neapel). XXV, 4. Referate. 485 ReicheiiOW , E. , Die Rückbildungserscheinungen am Anurendarm während der Metamorphose und ihre Bedeutung für die Zellforschung (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 671—718 m. 5 Figg. u. 1 TH.). Zur Untersuchung dienten hauptsächlich Larven von Rana escu- lenta. Der Darm wurde herausgenommen und in den Gemischen von Hermann, Zenker oder Carnov fixiert. Hermanns Gemisch eignet sich wegen seines Gehaltes an Osmiumsäure gut zur Dar- stellung der in manchen Epithelzellen aufgespeicherten Inhaltsmassen : eine durch das ZENKERSche Gemische hervorgerufene leichte Schrump- fung macht in schwierigen Fällen die Zellgrenzen oft besser sichtbar. Zur Färbung wurde in erster Linie Hämatoxylin nach Weigert kom- biniert mit VAN GiESONSchem Gemisch angewandt; sie ergab die deutlichsten Bilder. Daneben kamen zur Verwendung: Eisenhäma- toxylin nach Heidenhain, Safranin, Magenta und Pikroindigokarmin, Stückfärbung mit Boraxkarmin verbunden mit Schnittfärbung in Delafields Hämatoxylin. E. Schoebel {Neapel). Yamada , K. , Ein Beitrag zu den Untersuchungs- methoden über Erythrozyten formen (München, med. Wochenschr. Jahrg. LV, 1908, No. 37, p. 1934 bis 1935). Sehr störend bei der Untersuchung der Erythrocytenformen ist die bald nach der Entnahme des Blutes aus den Gefäßen auftretende Agglutination der roten Blutkörperchen; auch bei defibriniertem Blute tritt bald Agglutination auf, so daß die genaue Beobachtung der Formen unter dem Mikroskope verhindert oder sehr erschwert wird. Schon die Art und Weise der Reinigung des Deckglases und des Objektträgers bewirkt eine Verzögerung oder Beschleunigung der Agglutination. Reinigt man ein Deckglas mit gewöhnlichem Brunnen- wasser, so tritt mit Menschenblut schon sehr bald, spätestens nach 4 bis 5 Minuten , beim Glimmer nach 7 bis 8 Minuten die Agglu- tination auf; wäscht man aber das Deckglas mit 40 prozentigem Alkohol und nachher noch mit 96prozentigem Alkohol, so zeigt sich die Agglutination erst nach 7 bis 8 Minuten, beim Glimmer nach 12 Minuten. Verf. hat daher den Glimmer verwendet. Dieser muß in möglichst dünner Schicht abgetrennt werden, dann schneidet man ihn in der Größe der gewöhnlichen Deckgläser. Zwei derartige Deckplättchen werden aufeinander gelegt und 2 Kanten mit Paraffin 486 Referate. XXV, 4. verklebt , zwischeu beiden bleibt ein Kapillarraum. Wenn man nun zwei so aufeinander gelegte Deckgläschen in einen Tropfen Blut taucht, so wird eine dünne Schicht in den Kapillarraum hinein- gesaugt ; dann werden sofort die beiden anderen Kanten mit Paraffin geschlossen. Je mehr Blut in den Kapillarraum hineingesaugt wurde, desto schneller tritt die Agglutination auf. Man läßt deshalb mög- lichst wenig Blut in den Kapillarraum hinein , so daß nur etwa ein Viertel des Raumes gefüllt ist. In den Fällen, in denen das Blut mit hypisotonischeu oder mit hyperisotouischen Lösungen behandelt wird, muß man, um den Kapillarraum zu vergrößern, zwischen die beiden Glimmerplättchen an 2 Kanten 2 cm lange und 3 mm breite Seidenpapierstreifen legen, dann werden diese 2 Kanten mit ParafÖn verklebt und in den nun größeren Kapillarraum Blut hineingesaugt, darauf werden die beiden anderen Kanten ebenfalls wieder verklebt. Durch die verschiedenen Konzentrationen der Lösung werden nämlich die Blutkörperchen geschwellt oder zusammengezogen und dadurch wird in dem Gesichtsfelde die Menge der Blutkörperchen vermehrt oder vermindert. Die Rinderblutkörperchen agglutinieren am schnell- sten, langsamer die des Menschen, noch langsamer die des Kaninchens und am langsamsten die des Schweines. Außer den oben ange- gebenen Umständen wird das Agglutinationsvermögen der Blutkörper- chen auch durch die verschiedene Konzentration der Ringek- Lösung vermindert oder vermehrt. Mischt man das Blut zweier gleicher Tierarten, so agglutiniert das Gemisch noch schneller. Die Blut- körperchen eines Embryo von l^/j bis 2 Monaten agglutinieren sehr langsam. Man muß nach den Beobachtungen annehmen , daß die Verzögerung der Agglutination zusammenhängt mit der Stärke des Alkaligehaltes der Blutkörperchen ; je weniger Alkali, um so schnellere Agglutination. Schiefferdecker {Bonn). Aßmailll, G., Das eosiusaure Methylenblau und Me- thylenazur in seiner Bedeutung für die Blut- färbung (Inaug.-Diss. Leipzig 1908, 38 pp.). Das Eosin hat eine besondere chemische Affinität zum Proto- plasma der Erythrocyten und zu den acidophilen Granulationen der Leukocyten, das Methylenblau eine solche zur Chromatinsubstanz der Zellkerne , zu den basophilen Granulationen der sogen. Mastzellen und zum Protoplasma der großen und kleinen einkernigen Leuko- cyten (Myelocyten und Lymphocyten) ; das Protoplasma der pol}^- morphkernigen („polynucleären") Leukocyten und die darin ein- XXV, 4. Referate. 487 gebetteten sogen, „neutrophileu" Granulationen haben anscheinend ebenfalls eine , wenn auch wesentlich geringere Verwandtschaft zum Eosin , verbinden sich aber mit diesem so locker (es gilt dies vor- wiegend von den neutrophilen Granulationen , in geringerem Grade aber auch von allen eosinophilen Elementen , besonders , wenn mit wässeriger Eosinlösung gefärbt wurde) , daß ihnen das Eosin bei nachträglicher Färbung mit Methylenblau fast regelmäßig wieder ent- zogen wird , so daß sie zum Schlüsse ganz oder doch nahezu un- gefärbt erscheinen. Es ist dies einer der wesentlichsten Nachteile aller zweizeitigen Färbungsniethoden, bei denen zuerst mit Eosin vor- gefärbt und dann mit Methylenblau nachgefärbt wird, und somit der Hauptgrund dafür, daß sich die zweizeitigen Eosin - Methylenblau- Färbung niemals die Stellung einer gleichmäßig brauchbaren Uni- versalblutfärbung hat erringen können. Verf. bespricht dann ein- gehend die historische Entwicklung der Färbung. Bei der Roma- xowsKY- Färbung bildete sich ein Niederschlag, eben das neutrale eosinsaure Methylenblau. Bremer löste diesen Niederschlag 1895 zuerst in 95prozentigem Alkohol und erhielt mit dieser Lösung eine bestimmte helle Färbung , die sich daraus erklärt , daß in dem 95prozentigen Alkohol eben nur sehr wenig Wasser enthalten war: Das neutrale eosinsaure Methylenblau äußert seine färbende Wirkung in alkoholischer Lösung nur bei Verdünnung mit Wasser und färbt am intensivsten in starker Avässeriger Verdünnung. Im übrigen wird wegen der Betrachtung der Literatur auf das Original ver- wiesen. Sodann geht Verf. auf seine eigenen Versuche ein und ver- sucht die Ergebnisse der Färbung theoretisch zu erklären. Auch dieserhalb wird auf das Original verwiesen. Die von dem Verf. ausgearbeitete Methode ist die folgende: A. Für Trocken präpa- rate: 1) Übergießen des eben lufttrocken gewordenen, untixierten Ausstriches mit 40 Tropfen der methylalkoholischen Farblösung im PETRi-Schälchen, so daß die Lösung nicht über den Rand des Objekt- trägers überläuft. 2) Nach einer halben Minute Übergießen mit 20 cc destillierten Wassers, dem 5 Tropfen einer Lösung von Kalium carbonicum von 1 : 1000 zugesetzt wurden. Eine Minute langes Färben in der gleichmäßig klaren, von Niederschlägen freien Lösung. 3) Herausnehmen , kurzes Abspülen in destilliertem Wasser , Ab- trocknen mit Fließpapier. B. Für Gewebsschnitte: 1) Wie bei A. Die Lösung bleibt im zugedeckten Schälchen eine Stunde auf dem Präparate. 2) Ebenfalls wie bei A , nur ist dem Wasser ein Zusatz von 5 Tropfen einer Essigsäurelösung von 1:1000 zu- 488 Referate. XXV, 4. gefügt worden. Dauer der Färbung 15 Minuten. 3) Herausnehmen und sofortiges Einlegen in weitere 20 cc destillierten Wassers wieder- um mit dem gleichen Essigsäurezusatze. Sobald der rote Eosinton im Präparate schon makroskopisch deutlich zu erkennen ist, heraus- nehmen , sorgfältiges Abwaschen in einem Strahle von destilliertem Wasser, Abtupfen mit Fließpapier etwa eine Minute lang. 4) Kurzes Entwässern in absolutem Alkohol, Xylol. Einbetten in neutralem Kanadabalsam. Da zwecks guter Halt- barkeit der Präparate die absolute Neutralität des Kanadabalsams äußerst wichtig ist, so hat die Firma Grübler in Leipzig solche Balsampräparate , die einen besonderen geeigneten Neutralitätsgrad haben, hergestellt: „Kanadabalsam I" und „Kanadabalsam H". Die bei der Methode des Verf. erzielten Färbungsresultate unterscheiden sich von denjenigen Jenners vor allem durch das viel schärfere, satter gefärbte Hervortreten der neutrophileu Granula und die tief- blaue , den Bau des Chromatingerüstes sehr schön zeigende Kern- färbung. Die eosinophilen Granula erscheinen leuchtend rot, die basophilen tief dunkelblau , ebenso alle Arten von Bakterien sowohl in Ausstrichen wie in Gewebsschnitten. Die Chromatinkörperchen der Malariaparasiten bleiben ungefärbt, da kein Azur vorhanden ist. — Verf. teilt sodann den ganzen Hergang der Anfertigung eines Blut- Trockenpräparates mit, wie er es seit einer Reihe von Jahren macht. In einem Glasgefäße , das mit einer Mischung von gleichen Teilen von absolutem Alkohol und Äther angefüllt und fest zugedeckt ist, wird eine Anzahl von Objektträgern mit geschliffenem Rande vorrätig gehalten. Im Gebrauchsfalle werden daraus 2 Objektträger ent- nommen, mit entfetteter Watte abgetrocknet, ohne dabei die schmalen Ränder mit den Fingern zu berühren, und wird von dem mit Benzin gereinigten Ohrläppchen ein kleiner Blutstropfen durch einfaches Be- rühren auf Objektträger I nahe dessen einem Ende gebracht. Dann wird ohne Zeitverlust Objektträger II mit seinem Rande auf Objekt- träger I schräg nach oben so aufgesetzt, daß der stumpfe Winkel dem Blutstropfen abgekehrt , der spitze Winkel ihm zugekehrt ist. Dann wird Objektträger II unter gleichzeitiger Verkleinerung des spitzen Winkels so lange gesenkt, bis er den Blutstropfen berührt und dieser sich im spitzen Winkel entlang dem unteren Rande des Objektträgers II gleichmäßig ausgebreitet hat, worauf sofort Objekt- träger II auf Objektträger I unter nur ganz leichtem Aufdrücken in der dem Blutstropfen abgewandten Riclitung entlang geschoben wird. Auf diese Weise folgt der Blutstropfen dem sich verschiebenden XXV, 4. Referate. 489 Objektträger lediglich durch Adhiision, so daß jede Quetschung der Bluteleraente mit Sicherheit vermieden wird. Auch ist es von Wichtigkeit, daß der Blutstropfen ganz ausgestrichen wird und nicht etwa ein dicker, unausgestrichener Rand oder Zackenbildungen am Rande zurückbleiben, da in solchen Randverdickungen erfahrungs- gemäß die Leukocyten sich in dichten Haufen zusammenballen und in den übrigen Teilen des Ausstriches nur in verschwindend kleiner Zahl gefunden werden, wodurch leicht eine Leukopenie vorgetäuscht werden kann. Ein gleichmäßiges und vollständiges Ausstreichen er- reicht man am einfachsten und sichersten durch Verwendung eines möglichst kleinen Blutstropfens. Der so erhaltene Blutausstrich muß nun mehr in ganz frischem Zustande, unmittelbar nachdem er luft- trocken geworden ist, mit der methylalkoholischen Farblösung, die ja zugleich die Fixierung besorgt, Übergossen und weitergeführt werden , bei untixiert liegen gebliebenen oder etwa vorher ander- weitig fixierten Präparaten darf eine zufriedenstellende Färbung nicht erwartet werden. Bei sorgfältiger Beobachtung dieser Kautelen, die bei einiger Übung keine Schwierigkeiten bereitet, wird das Verfahren niemals versagen und die ganze Herstellung des Präparates , Blut- entnahme-Ausstreichen und -Färben nicht länger als etwa 4 Minuten in Anspruch nehmen ; nimmt man zu dieser Kürze der Zeit noch die äußerst einfache erforderliche Ausrüstung hinzu, die lediglich in der gebrauchsfertig gekauften, lange haltbaren, methylalkoholischen Farb- lösung und einer Lösung von Kalium carbonicura von 1 : 1 000 besteht, beides in gut verschlossenem, die Farblösung auch in einem dunklen Tropffläschchen bereit gehalten, so kann nach Meinung des Verf. die Methode gegebenen Falles auch dem vielbeschäftigten praktischen Arzte mit gutem Gewissen empfohlen werden. Schiefferdccker {Bonn). Weidenreich, F., Beiträge zur Kenntnis der granulier- ten Leukocyten. 5. Fortsetzung der Studien über das Blut und die blutbildenden und -zer- störenden Organe (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXH. 1908, p. 209—325 m. 5 Tfln.). Nach Ansicht des Verf. ermöglicht das Ehrlich sehe Trocken- präparat zwar eine rasche Orientierung über die freien Zellformen und eine leichte Feststellung des färberischen Charakters einer Gra- nulation , kann auch in der Hand des Geübten zur Darstellung einiger morphologischer Details Verwendung finden, ist aber zu spe- 490 Referate. XXV, 4. zielleu Zellstudien und vor allem zur Erforschung der genetischen Beziehungen nicht geeignet oder bedarf doch jedenfalls der sorg- fältigsten Kontrolle durch andere Methoden der allgemeinen histo- logischen Technik. Sehr viel mehr als die Trockenmethode leistet schon die Fixierung des feuchten Ausstrichpräparates durch Ein- tauchen in einige der üblichen histologischen Fixierungsmittel und die vom Verf. empfohlene Osmiumdampf- Fixation des feuchten Prä- parates, besonders mit nachfolgender GiEJisA-Färbung. Noch bessere Resultate gibt aber für Untersuchungen des Blutes, der Lymphe imd der Flüssigkeiten der serösen Höhlen die nur wenig modifizierte ÜEETJENSche Agarmethode zur Darstellung der Blutplättchen. Man stellt sich eine einprozentige Lösung von Agar in 0"8 prozentiger Kochsalzlösung her, die man zweckmäßig zu je 3 bis 5 cc in sterile Reagenzgläser abfüllt ; die erstarrte Masse läßt sich im gut ver- schlossenen Glase auf diese Weise längere Zeit aufheben , aber es ist dringend zu raten, nicht länger als 4 Wochen. Zur Untersuchung der in Betracht kommenden Flüssigkeit bringt man den Agar im Glase zunächst durch Erwärmen in kochendem Wasser zum Schmelzen und gießt ihn dann auf einer reinen , völlig ebenen Glasplatte in nicht zu dünuer Schicht aus. Ein Zusatz phosphorsaurer Salze, wie es Deetjen angibt, ist direkt schädlich. Ist der Agar wieder vollständig erstarrt und gut schneidbar geworden , so schneidet man kleine viereckige Plättchen aus der Schicht aus , die allseitig ein gutes Stück kleiner als die zur Benutzung kommenden Deck- gläser sein müssen. Diese Plättchen bringt man in größeren Ab- ständen auf eine ebene reine Glasplatte. Dann tupft man mit einem aufs sorgfältigste gereinigten Deckglase rasch einen nicht zu großen, aber auch nicht allzu kleinen Tropfen Blut oder andere Unter- suchungsflüssigkeit ab und legt das Glas mit dem hängenden Tröpf- chen nach unten, vorsichtig und ohne zu drücken oder zu schieben, auf das Agarplättchen, worauf sich die Flüssigkeit in dünner Schicht zwischen Agar und Deckglas ausbreitet. Bis zu der erst später er- folgenden Abnahme des Glases hat man sorgfältig darauf zu achten, daß man das Glas nicht berührt oder gar verschiebt. Will man die Zellen zur amöboiden Bewegung bringen, so legt man die Glasplatte mit den beschickten Agarplättchen in einen Thermostaten von etwa 37*^ C und läßt sie etwa 5 bis 10 Minuten darin; eben so lange Zeit wartet man, wenn man die Präparate in gewöhnlicher Zimmer- temperatur beläßt. Hierauf gibt mau mit einer Pipette, ohne jedoch das Deckglas zu berühren , einige Tropfen einer einprozentigen XXV, 4. Referate. 49 1 Osmiumsäurelösung' von der Seite her unter das Deckglas und sorgt dafür, daß die Flüssigkeit den freigebliebenen Rand zwischen Agar und Glas allenthalben ausfüllt. Is'ach Ablauf von etwa 5 Minuten hebt mau das Deckglas vorsichtig von dem Agarplättchen ab und übergießt nach Abspülung mit gewöhnlichem Wasser, ohne das Prä- parat trocken werden zu lassen , die auf der Unterseite des Deck- glases haften gebliebene Blutschicht mit einer frisch bereiteten Ver- dünnung der GiEMSA sehen Farblösuug für Romanowsky- Färbung (eineu Tropfen Farbe auf 1 cc destilliertes Wasser). Man färbt 10 bis 15 Minuten oder länger, spült dann mit Wasser ab, trocknet mit Fließpapier in der üblichen Weise und schließt in säurefreien Ka- nadabalsam ein. E. Schoebel (Neapel). Schmidt, P., Über Jugendstadieu der roten Blutkörper- chen (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 497 — 515 m. 1 TU.). Nach Ansicht des Verf. hat die von Weidenreich empfohlene Fixierung mit Osmiumsäuredämpfen bei Blutstudien vielleicht Vor- züge vor der Trocknungs- und Alkoholfixierungsmethode , wenn es nicht darauf ankommt, besonders dünne zarte Ausstriche zu bekommen und wenn beabsichtigt ist, ursprüngliche Gestalt und Form der roten Blutkörperchen zu erhalten, für die Darstellung und Diflerenzierung von Granulationen, Kernkonturen usw. ist die Methode aber ungeeignet. Verf. hat zahlreiche Präparate nach Weidenreich angefertigt und nach GiEMSA mindestens eine Stunde gefärbt, wobei sich herausstellte, daß diese Präparate durchaus schlechter gefärbt waren als die Parallel- präparate mit gewöhnlicher Alkohol fixierung. Es tritt stets eine Überfärbung nach Blau hin ein und eine feinere Differenzierung von Granulationen und Kernbröckelu durch die Farbnuance wird schlechter- dings oft unmöglich. Die Osmiumsäurefixierung eignet sich einfach nicht für Färbungen nach Gikmsa. E. Schoebel (Neapel). Nowikoff, M., Beobachtungen über die Vermehrung der K n 0 r p e 1 z e 1 1 e n , nebst einigen Bemerkungen über die Struktur der hyalinen K uorpels üb- st auz (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XC, 1908, p. 205—257 m. 5 Figg. u. 4 Tfln.). Als Untersuchuugsmaterial dieute vorwiegend der Kopfknorpel von Embryonen von Lacerta muralis sowie der Wirbel- und Schulter- gürtelknorpel von jungen Fröschen, Tritonen- und Bombinatorlarven ; 492 Referate. XXV, 4. außerdem kamen einige Präparate von Ammocoetes und Spiuax niger zur Untersuchung. Fixiert wurde mit gleich gutem Erfolge entweder in konzentrierter wässeriger Sublimatlösung oder in Hermann scher Flüssigkeit. Die besten Bilder der Zellteilungsfiguren wurden nach Fixierung in Hermann scher Flüssigkeit durch Färbung auf dem Objektträger erhalten, und zwar entweder durch Behandlung der Schnitte mit ^/2prozentigem wässerigem Hämatoxylin und einprozen- tiger Lösung von neutralem chromsauren Kali oder mit Safranin und Blochmann scher Flüssigkeit. Die letztere Methode, die sich übrigens auch sehr gut zum Studium des Zentralkörpers eignet, wurde so ausgeführt, daß die Schnitte zunächst etwa für 24 Stunden in eine alkoholische Safraninlösung (1 g Safranin, 100 ccm Wasser, 250 ccm 95prozentigen Alkohol), dann nach kurzem Abspülen mit Wasser für 20 bis 40 Minuten in das Blochmann sehe Gemisch (O'Olprozentige Lösung von triphenylrosanilintrisulfosaurem Natrium in gesättigter wässeriger Pikrinsäurelösung) gebracht und schließlich nach aber- maligem kurzen Abspülen rasch durch Alkohole steigender Konzen- tration und Xylol in Kanadabalsam übergeführt wurden. In den auf diese Weise behandelten Präparaten sind alle Kernelemente stark rot, das Zellplasma, der Zentralkörper und die Grundsubstanz intensiv blau gefärbt. Die gleichen Schnitte, besonders wenn sie nicht in Kanadabalsam, sondern in Wasser eingeschlossen werden, eignen sich auch sehr gut zum Studium der Strukturen der Grundsubstanz. — Die mit Sublimat fixierten Objekte wurden zur Untersuchung ruhender Kerne mit einer Lösung von Jodgrün -Säurefuchsin nach Erlangek behandelt. (Jodgrün und Säurefuchsin im Verhältnis 2 : 1 in lOpro- zentigera Glyzerin gelöst.) Diese Flüssigkeit färbt nach kurzer Ein- wirkung, einige Minuten genügen meist, die chromatische Kernsubstanz grün und die Nucleolen rot. Zum Studium der Kernteilungsfiguren, insbesondere zum Zählen der Chromosomen ist jedoch Färbung mit Eisenhämatoxylin am meisten zu empfehlen. Neben der von Hansen empfohlenen Methode zur Untersuchung der Knorpelgrundsubstanz (Methylenblau, Pikrinsäure -Fuchsin, Essigsäure), welche jedoch für den embryonalen Knorpel nicht besonders geeignet ist, da die Schnitte eine fast ausschließlich blaue Farbe annehmen, wurde mit gutem Erfolg Dreifachfärbung mit Boraxkarmin, Bleu de Lyon und Bismarck- braun angewendet. Hierbei werden die Objekte zunächst vor der Einbettung in toto etwa 24 Stunden mit Boraxkarmin gefärbt und dann etwa 30 Minuten lang mit salzsaurem Alkohol ausgezogen. Die aus solchem Material angefertigten Schnitte werden zuerst mit XXV, 4. Referate. 493 '/„prozentigei' alkoholischer Lösung von Bleu de Lyon und dann mit einer ebenfalls ^/„prozentigen wässerigen Bismarckbraunlösung einige Minuten bis V4 Stunde behandelt und eventuell zum Schluß nochmals für einige Minuten in die Bleu de Lyon -Lösung gebracht. Selbst- verständlich sind die Präparate nach jeder Färbung mit Wasser resp. TOprozentigem Alkohol kurz abzuspülen. Die so behandelten Schnitte zeigen gut differenzierte Bilder des hyalinen Knorpels: Die Zellkerne sind rot , das Plasma blau und die Grundsubstanz des jungen Knorpels braun ; im älteren Knorpel jedoch, wo eine partielle chemische Umbildung der Grundsubstanz auftritt , werden die um- gebildeten Regionen (coUageue Fasern Hansens) blau gefärbt. Ein- gebettet wurde teils in Paraffin, teils in Celloidin, ersteres ist jedoch nur für den jüngeren, noch ganz weichen Knorpel geeignet. E. Schoebel {Neapel). Krauß , F. , Über die Genese des Chordaknorpels der Urodelen und die Natur des Chordagewebes (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXIII, 1908, p. 69— 116 m. 3 Tfln.). Die Untersuchungen wurden hauptsächlich sowohl an Larven als auch an Erwachsenen von Siredon, Salamandra und Triton aus- geführt. In erster Linie erwies sich Siredon als geeignetes Unter- suchungsmaterial, besonders für die feineren histologischen Verhältnisse der Chorda und ihrer Verknorpelung, weil hier die zelligen Elemente am größten sind und auch bei der weiteren Umbildung der Wirbel- säule die Verhältnisse sich weniger komplizieren als bei Salamandra und Triton. Zur Ergänzung der Untersuchung wurde außerdem noch die Chorda von Esox und bei Siredon- und Trutta- Embryonen die Verhältnisse der Chordaneubildung bei der Regeneration des Schwanzes nach Amputation desselben in verschiedenen Stadien unter- sucht. Schließlich wurden mehrfache Transplantationen der Chorda von etwa 3 cm langen Siredonlarven unter die Rückenhaut erwach- sener Tiere vorgenommen und ihr Schicksal studiert. Die Objekte wurden meist in Pikrinsublimatessigsäure, zuweilen auch im Gemisch von Carnoy oder Flemming fixiert. Letztere Flüssigkeit hat den Nach- teil, daß sie keine genügende Knorpelfärbung zuläßt. Die Einbettung geschah durchweg in Paraffin. Zur Färbung der Schnitte leistete das Kresylviolett RR der Farbwerke Mülheim, vormals A. Leonhard & Co., die besten Dienste. Es färbt die Knorpelgrundsubstanz, sowie auch das Mucin rosarot, die Kerne hellblau. Vorteilhaft schickt man eine 494 Referate. XXV, 4. Färbung mit Hämalaun voraus, da die Kernfärbiing des Hämalauns besser haltbar ist und ihr Blau besser zu dem Rot des Kresylvioletts kontrastiert. Wegen der leichten Ausziehbarkeit des letzteren Farb- stoffes muß die Alkoholbehandlung rasch und gründlich sein. Ist dies berücksichtigt worden, kann man die Präparate ruhig in Kanada- balsam einschließen. Als weitere Knorpelfärbung wurde noch Methylen- blau und Bismarckbraun angewandt, und zwar ersteres in der von Hansen angegebenen Form mit einem geringen Zusatz von Salzsäure. Verf. hat die Methylenblaufärbung mit Ammoniummolybdat fixiert und dann zuweilen noch die van GiEsoNSche Bindegewebsfärbung in der HANSENSchen Modifikation nachfolgen lassen. Das Bismarckbraun wird vorteilhaft mit Lichtgrün kombiniert. Sehr gute Bilder gibt eine Dreifachfärbung in der Reihenfolge: Boraxkarmin, Bismarck- braun (ganz schwach) und Lichtgrün. Man erhält dabei die Kerne rot, die Knorpelgrundsubstanz braun, das Bindegewebe grün, andere Teile , wie Muskulatur , in einer mehr grauen Mischfarbe. Weiter fand noch Verwendung die van GiESONSche Färbung, Heidenhains Eisenhämatoxylin (dieses meist nach Fixierung des Materials in Flemmings Flüssigkeit) und Hämalaun-Eosin, letzteres in progressiver Färbung (einige Tropfen konzentrierte wässerige Eosinlösung auf ein Farbglas destilliertes Wasser und 2-J stündige Färbdauer). E. Schoebel {Neapel). Disse, J., Über die Bildung des Knochengewebes (Sitzungs- ber. d. Ges. z. Beförd. d. ges. Naturw. Marburg 1908, No. 5. p. 111—121). Man vermag die Knochenbildung von selten der Osteoblasten direkt zu beobachten, es gehören nur geeignete, gut konservierte Objekte und wirklich feine Schnitte dazu. Am günstigsten sind menschliche Embryonen der früheren Zeit. Verf. hat die Knochen- bildnng in Membranen der Angesichtsknochen eines Embryo von 25 mm Länge untersucht und die enchondrale Knochenbildung an der Tibia eines Embryo aus dem 4. Monate verfolgt. Die Embryonen waren in Formal- Alkohol fixiert; die Knochen wurden in lOpro- zentiger Kochsalzlösung mit Zusatz von 2 Prozent Salzsäure entkalkt, in Hämalaun durchgefärbt, und in Schnitte von 5 ^ Dicke zerlegt. Auf dem Objektträger färbt man 1 Minute lang in folgender Lösung: Rubin S 1"0; Orange 0*5; Alkohol 95prozentig 90'0; Glyzerin lO'O. Es wird in starkem Alkohol (95prozentig) differenziert, entwässert und in Ol. Origani aufgehellt. Schiefferdecher {Bomi). XXV, 4. Referate. 495 Dreiiw , H. , Dermatohistologisclie Technik der Unna- schen Färbemethode für den Praktiker (Med. Klinik 1907, No. 27, 28). Verf. gibt in dieser kurzen, im Separatabdrucke 16 Seiten um- fassenden Arbeit eine Ü^bersicht über die dermatohistologische Technik nach Unna, die in ihrer ganzen Form und Kürze für den Praktiker bestimmt ist. Es werden darin behandelt: 1) Die Gewinnung des Materiales. 2) Die Vorbereitung desselben bis zu dem Färbeakte, d. h. bis zum fertigen Mikrotomschnitte. 3) Der Färbeakt selbst bis zu dem Aufheben des Schnittes in Kanadabalsam. 4) Die mikroskopische Untersuchung des gefärbten Präparates. Die kleine Arbeit wird jedem Interessenten empfohlen. Schiefferdecker {Bonn). Schuberg , A. , Beiträge zur vergleichenden Anatomie und zur Entwicklungsgeschichte der Leder- haut der Amphibien (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XC, 1908, p. 1—72 m. 1 Tfl.). Das Material wurde teils mit Sublimat, Sublimatessigsäure, Her- mann scher Flüssigkeit u.a., teils einfach in Alkohol fixiert. Als Färbungen dienten im wesentlichen die gleichen Methoden, die Verf. bei seinen Untersuchungen über Zellverbindungen (s. diese Zeitschr. Bd. XXV, p. 77) anwandte. Für die kollagenen Elemente bewährte sich vor allem die van GiEsoNSche Methode (auch in der von Wei- gert angegebenen Modifikation) und die MALLORYsche Färbung. Elastische Fasern wurden nach Unna -Tänzer oder Weigert, die zelligen Elemente des Bindegewebes mit Verf. Dahliamethode nach- gewiesen. Zur Einbettung diente außer Paraffin auch in ausgedehnter Weise Celloidin, und zwar bei Untersuchung des Coriums der aus- gebildeten Amphibien fast ausschließlich. E. Schoebel {Neapel). Schreiber, L. , u. Schneider, P. , Eine Methode zur Dar- stellung von Pigmenten und ihrer farblosen Vorstufen mit besonderer Berücksichtigung des Augen- und Hautpigments (München, med. Wochenschr. Jahrg. LV, 1908, No. .^,7, p. 1918—1921 m. 2 Abb.). Nach Verf. lassen sich auch die farblosen Vorstufen der Pigment- zellen durch die Silbermethoden von Levaditi und Bertarelli, die ursprünglich für die Spirochäten angegeben sind , darstellen. Es 496 Referate. XXY, 4. wurden die erste von Levaditi angegebene (C. R. Soc. Biol. Paris, t. 59) und die neuere Methode Bkrtarellis (Zentralbl. f. Bakteriol. Bd. XXXXI, H. 1, 1906) angewendet: Beide Methoden leisten gleich Vorzügliches. Vorbedingung ist peinliche Sauberkeit der Reagentien und sofortiges Wechseln derselben bei eintretender Trübung. Das Hauptgewicht wurde auf die Dauer der Versilberung gelegt: Bei frischen Objekten 6 bis 8 Tage, bei älteren sogar 10 bis 12 Tage, während die Gewebsstücke in der Reduktionsflüssigkeit meist 48 Stun- den, ab und zu noch länger verblieben. Gerade die zu kurze Im- prägnationszeit halten die Verff. für die Ursache, daß die Bedeutung dieser Methode für die Darstellung des Pigments bisher nicht erkannt worden ist. Schiefferdecker {Bonn). Tliulili, I., Studien über den Zusammenhang granu- lärer, interstitieller Zellen mit den Muskel- fasern (Anat. Anz. Bd. XXXIII , 1908, No. 8, 9, p. 193 bis 205 m. 8 Abb.). Verf. verwandte zu seinen Untersuchungen einen in Schweden sehr seltenen Käfer, Krgates faber Fabr. Fixierung in dem Osmium- Bichromatgemische, Kinbettung in Paraffin. Sehr dünne Schnitte (2 bis 3 fx) wurden mit Hilfe von Mastix gemacht und mit Kiweiß auf- geklebt. Zuerst färbte Verf. mit Kisenhämatoxylin und Thiazin, seine schönsten Präparate aber erhielt er mit folgender Methode : Kosin in Iprozentiger alkoholischer Lösung 24 Stunden, Eisenalaun 24 Stunden, Weigerts Hämatoxylin 24 Stunden, Differenzierung und dann Licht- grün (O'öprozentige wässerige Lösung) etwa 1 Minute. Schiefferdeckei' {Bonn). Becker, J., Über Zungenpapillen. Ein Beitrag zur phy- logenetischen Entwicklung der Geschmacks- organe (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XLIII, 1908, p. 537—618 m. 44 Figg. u. 1 Tri.). Das für die mikroskopische Untersuchung bestimmte Material wurde möglichst frisch in die Fixierungsflüssigkeit eingelegt. Als solche kam teils eine Mischung von lOprozentiger Salpetersäure, 0"5prozentiger Chromsäure und 96prozentiger Alkohol im Verhältnis 4:3:3, teils eine Mischung von 10 Teilen käuflichen Formols mit 100 Teilen MüLLERscher Flüssigkeit zur Anwendung. Zur Färbung diente eine Mischung von Boraxkarmin mit Bleu de Lyon im Ver- hältnis 7:1. E. Schoebel {Neapel). XXV, 4. Referate. 497 UainiiKir, J. A., Zur Kenntnis der T el e os t i er t li y mu s (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. I.XXIII, 1908, p. 1 — 6^ m. 10 Figg. u. ;5 Tfln.). Untersucht wurden eine größere Anzahl Fische verschiedenster Altersstufeu. Die Fixierung des Materials erfolgte vorzugsweise und mit gutem Erfolg mit Kaliurabichromat-Eisessig nach Tellyesniczky und Chromosmium -Essigsäure nach Flemming. In einzelnen Fällen kam noch Formol bzw. Formol -Alkohol zur Verwendung. Von Fär- bungen zeigten sich besonders brauchbar Hämatoxylin-Eosin, Bendas Kristallviolett, Mallorys Säurefuclisin-Orange-Anilinblau und nach Fixierung in Flemming scher Flüssigkeit Safranin allein oder mit nach- folgender Lichtgrünbehandlung oder Flemming s Dreifarbenverfahren. Zum Einschluß wurde das von Gilson empfohlene Euparal nicht ohne Vorteil benutzt. E. Schoebel {Neapel). Nireiistein , E. , Über den Ursprung und die Entwick- lung der Giftdrüsen von Salamandra maculosa nebst einem Beitrage zur Morphologie des Sekretes (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 47 bis 140 m. 3 TÜn.). Von den versuchten FixierungsHüssigkeiten bewährte sich am besten Zenker sehe Lösung und einprozentige Osmiumsäure, letztere besonders mit einem Zusatz von 0*6 Prozent Kochsalz. In der Dar- stellung gewisser , allerdings ganz spezieller Verhältnisse übertraf die Gefriermethode mit vorausgehender Osmiumfixieruug jedes andere Verfahren. Gefärbt wurde meist mit Hämatoxylin-Orange , Eisen- hämatoxylin und zur Darstellung des Schleimes mit Mucikarmin. E. Schoebel (NeMpel). Stoerk, 0., u. Haberer, H. v., Beitrag zur Morphologie des Nebenaierenmarkes (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 481—496 ra. 8 Figg. u. 2 Tfln.). VerflF. haben sowohl die Chrom- wie auch die Eisenchloridreaktion des Nebennierenmarkes nachgeprüft und können zwar bestätigen, daß die Markzelleu eine diffuse Färbung dabei annehmen, halten aber für vollständig ausgeschlossen, daß die Granula der Markzellen mittels dieser Methoden distinkt und selbständig zur Darstellung zu bringen sind. Nach ihrer Ansicht ist vielmehr das flüssige Sekretionsprodukt der eigentliche Träger der Chromreaktion der Markzellen und die Granula nur in der sekretorischen Phase, wo sie eben chromaffine Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. 32 498 Referate. XXV, 4. Substanz bilden. Eine voll befriedigende Färbung der Granula ist mit keiner Methode zu erzielen. Auch die Eisenhämatoxylinfäi'bung ergibt an ihnen nur ein fast schattenhaftes Blaßgrau. Am besten erkennbar sind sie noch im ungefärbten Zustande in MtJLLER-Formol- und Osraiumpräparaten. Nach Anwendung der ZENKERSchen Fixation gelingt es zuweilen eine gute Eosinfärbung der feinen Granula zu erzielen, jedoch ergibt die ZEXKERSche Lösung fiir das flüssigkeits- reiche Markzellenprotoplasma insofern eine ungünstige Fixation (noch ungünstiger wirken andere Sublimatgemische), als sie zu einer bis- weilen fast an Verklumpung reichenden Störung in der Anordnung der Granula führt, ("brigens zeigen die vorwiegend randständigen gröberen Protoplasmaelemente gegenüber den feinen Granulis ein auf- fallend differentes Verhalten zu den Farbstoffen : sie färben sich sehr intensiv mit Eisenhämatoxylin und Eosin. Durch Mallory- Färbung sind aber die dem Eosin und Eisenhämatoxylin gegenüber sich gleich verhaltenden Elemente weiter zu differenzieren, indem nämlich die mehr rundlichen Körnchen blau, die mehr stäbchenförmigen aber orange gefärbt werden. Zur Darstellung des flüssigen Marksekretes sind nur chromhaltige Fixationsflüssigkeiten und unter diesen, wie es scheint , ausschließlich die Chromformolgemische verwendbar , mit Chromsublimatgemischen und Chromosmiumgemischen zuwenigst sind keine befriedigende Resultate zu erzielen. E. Schoebel (Neapel). Albraild, 31., Die Anlage der Zwischenniere bei den Urodelen (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 353— .S85 m. 2 Tfln.). Zur Untersuchung diente Amblystoma tigrinum Green, forma albina. Die Pigmentarmut dieses Tieres erleichtert das Studium des Peritoneal- Epithels und seiner Derivate ganz wesentlich. Zur Fixierung diente Pikrinsäure- Sublimat- Eisessig, ZENKERSche Flüssigkeit, das Gemisch von Carnoy und MüLLERSche Flüssigkeit -|- Forniol , zur Färbung Alaunkarmin, Hämatoxylin- Eosin oder Häraatoxylin- Orange. E. Schoebel (Neapel). Oerini, C, Quehiues recherches sur les premieres phases de developpement des neuro fibrilles primitives c h e z 1' e m b r y o n du p o u 1 e t (Anat. Anz. Bd. XXXIII, 1908, No. 6, 7, p. 178—189). Verf. hat mehr als 200 Hühnerembryonen zwischen 1 8 und 2 K) Stunden untersucht, zum Teile nach der Methode von Cajai. in XX \'. 4. Referate. 499 ihrer ursi)rini.ulit'heji Form , ziiin Teile iiaoh den von Cajal aiiye- gebeneu Modilikatioiieii oder iiaeli der vou Lugauo : Fixierung in ver- dünntem Formol oder in Alkohol von ;>o Prozent, verdünntem Pyri- din usw. mit nachfolgender Silberimprägnation. Außer dem Silbernitrat hat Verf. angewendet das Nitrit, das Hyponitrit, das Fiuorür. Vou diesen Salzen ergab nur das letztere gute Resultate. Auch die Im- prägnierung nach vorheriger Fixierung in Alkohol , Formol , Pyridin ergab nichts Brauchbares. Für die Silbermethode nach Cajal hat Verf. zur Fixierung der Embryonen eine 2 prozentige Silbernitrat- lösung verwendet. Für Embryonen unter 48 Stunden genügte die Einwirkung von 2 Tagen bei 37^; bei älteren Embryonen wurde die Einwirkungsdauer verlängert je nach dem Alter bis zu 6 Tagen, so für Embryonen von 240 Stunden, die in 2 bis 3 Stücke zer- schnitten wurden. Da die Reduktion des Silbersalzes bei den P^m- bryonen bei der von Cajal angegebenen Vorschrift (Pyrogallol 1 Pro- zent, Formol 5 Prozent) zu schnell vor sich ging, so hat Verf. die Lösung verdünnt , und so eine weniger starke und schnelle , aber doch vollständige Wirkung erzielt. Die so erhalteneu Resultate waren sehr befriedigend, um so mehr, da der Hauptfehler der metallischen Imprägnationen, der der unzureichenden Durchdringung, bei embryo- nalen Geweben weit weniger stark hervortritt , als bei völlig ent- wickelten Geweben. In den ektodermalen Elementen des MeduUar- rohres, das in der 24. Stunde noch nicht immer geschlossen ist, ist eine besondere Struktur noch nicht nachweisbar. Die ersten wirk- lichen Neurofibrillen treten etwa in der 40. Stunde auf. Schieff'erdecker (Bonn). Michailow, S., Die feinere Struktur der sympathischen Ganglien der Harnblase bei den Säugetieren (Arch. f. mikrosk. Auat. Bd. LXXII, 1908, p. 554—574 m. 2 Tfln.). Zur Färbung der Nervenelemente wurde Methylenblau verwendet, aber nicht in einfacher physiologischer Kochsalzlösung gelöst, sondern in der Ringer- Lockk scheu Flüssigkeit. Diese wurde in verschiedener Zusammensetzung gebraucht , teils in der von Locke empfohlenen (Kalium chloratum 0*02 Prozent, Natrium bicarbonicum 0*02 Prozent, Calcium chloratum 0'02 Prozent, Sacharum uricum 0*1 Prozent, Natrium chloratum 0*9 Prozent), teils mit abgeändertem Gehalt an Kai. chlorat., Natr. bicarb. und Calc. chlorat. entsprechend der Zusammensetzung des Blutserums beim entsprechenden Tier nach den von Kuljabko 32* 500 Referate. XXV, 4. oder Abderhalden gemachten Angaben. Nach dem Eintritt des wünschenswerten Grades der Färbung wurde das Gewebe mit 7-, 8-, lOprozentiger Lösung von molybdänsaurem Ammonium, während 12, 20, 24 Stunden fixiert, und sodann der üblichen Weiterbehand- lung unterzogen. Die Schnitte wurden aus freier Hand mit dem Rasiermesser hergestellt, in absolutem Alkoliol entwässert und stets in Xylol-Dammar eingeschlossen. E. Schoebel (Neapel). Kallius, E., Über die Entfernung der Gallert hülle des Amphibienlaiches (Anat. Anz. Bd. XXXIII, 1908, No. 1, p. 31), Verf. gibt eine sehr einfache Methode zur Entfernung der Gallert- hülle der Amphibieneier an, die er schon seit vielen Jahren benutzt : Die Eier oder kleinere Teile des Laichballens werden in die ge- wöhnliche Zenker sehe Flüssigkeit (ohne Formolzusatz) eingelegt. Nachdem am 2. oder 3. Tage die Flüssigkeit gewechselt ist, ver- l)leiben die Eier in der Flüssigkeit, die nicht mehr gewechselt wird, etwa 8 bis 10 bis 14 Tage. Es ist nur nötig, die Eier gegen das Ende der angegebenen Zeit umzuschüttein oder vorsichtig umzurühren. Gewöhnlich ist dann die Gallerthülle soweit aufgelöst, daß die nackten Eier auf dem Boden des Glases liegen. Bei dem dann folgenden Auswaschen werden die Reste der Hüllen durch etwas kräftige, aber vorsichtige Spülung entfernt. Sollte die angegebene Zeit des Auf- enthaltes in der Zenker sehen Flüssigkeit nicht genügen, so läßt man die Eier länger darin liegen, eine Schädigung tritt nicht ein. Auch für Kurse ist diese Methode sehr bequem , da man große Mengen von Eiern so auf einmal behandeln kann. Schiefferdecker ( Bonn) . Schmitt -Marcel, W., Über Pseudo-Hermaphroditisraus bei Rana temp. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII, 1908, p. 516—539 m. 4 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung wurde ausschließlich, und zwar mit gutem Erfolg konzentrierte wässerige Sublimatlösung angewendet. Verf. verfuhr dabei so, daß er nach Abtötung mit Chloroform jedem Fröschchen die Leibeshöhle öffnete , mit einer Pinzette dasselbe tüchtig in der Sublimatlösuug herumschüttelte und dann für einige Stunden in mehr- mals erneuerter Lösung beließ. Die Weiterbehandlung war die übliche. Die Vorfärbung der Stücke geschah mit Borax-Karmin, die Schnitt- färbung mit Delafields Hämatoxylin. E. Schoebel (Neapel). XXV, 4. Keterate. 501 Sonnen brodt , Die Wachstumsperiode der Oocyte des Huhnes (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXII , 1908, p. 415—480 m. 4 Tfln.). Für die Ovarien jüngerer Tiere fand Verf. Sublimat -Eisessig als das beste Fixierungsmittel, für Ovarien mit großen Follikeln aber eine Mischung von 2prozentiger Lösung von Calcium bichrom., 2pro- zentige Lösung von Sublimat und Eisessig im Verhältnis 20:10:1. Die Einbettung geschah in Paraffin , wobei die Entwässerung der Präparate meist mit Aceton ausgeführt wurde. Die Schnitte kleinerer Follikel wurden auf erwärmtem Wasser gestreckt und dann auf die Objektträger gebracht , für größere aber die Auf klebmethode mit Phenolgelatine nach Olt (vgl. diese Zeitschr. Bd. XXIII, 1906, p. 323) angewandt. Andrücken der Schnitte war aber nicht emp- fehlenswert. Die überschüssige Gelatine wurde nur mit Fließpapier abgesaugt, die Serien in geneigter Lage stehend, bei Wärmetempe- ratur getrocknet und nach dem vollständigen Trocknen mit lOpro- zentiger Formollösung nachbehandelt. Als Färbung erwies sich Eisen- hämatoxylin zum Teil kombiniert mit einem Plasmafarbstoff am geeignetsten. E. Schoebel (Neapel). C. llikroorganisjnen. Koch , A. , Jahresbericht über die Fortschritte in der Lehre von den Gärungsorganismen. 16. .Jahrg. 1905. Leipzig (S. Hirzel) 1908. 592 pp. 24 M. Der neue Jahresbericht, den wir schon früher erwartet hatten, bringt die Referate über die im Jahre 1905 erschienenen Arbeiten. Die meisten, welche durch ihre Mitteilungen über Arbeitsverfahren, Kulturmethoden usw. für die Interessen unserer Zeitschrift in Betracht kommen, sind in ihr seiner Zeit schon besprochen worden. Von be- sonderem Interesse sind außerdem namentlich noch folgende. Camus und Pagniez (Proprietes acido-resistantes des acides gras du bacille tuberculeux, Compt. Rend. Soc. Biol. t. LIX, 1905, p. 703) färben Tuberkelbazillen nach Hitzefixierung und Vorbehandlung mit basischem essigsaurem Kupfer durch Behandlung mit einprozentiger Hämatoxylinlösung ; entfärbt wird mit einer sehr verdünnten Lösung von Ferricyankali und Borax. Entfettete Tuberkelbazillen erwiesen Ö02 Referüte. XXV. 4. sich nicht als säurefest; die Säurefestigkeit wird bedingt durch den Grehnlt an Fettsäuren. — Untersuchungen über die fettartigen Substanzen in den Tuberkel- bazillen und deren Säurefestigkeit verötfentlichen ferner Ritchic (The wax of tubercle bacilli in relation to their acid-resistance, Journ. of Pathol. a. Bacteriol. \ol. X, 1905, p. 334). — Anthoeyanreiche Kartoffeln empfiehlt Rodt?iguez (De Femploi de la pomme de terre violette comme milieu de culture. Arch. de Med. Exper. t. XVII, 1905, p. 713) als Bakteriennährböden für differential- diagnostische Untersuchungen : durch Bact. coli wird die Kartoffel grün. Küster (Halle a. S.). AmatO, A. , Über die feine Struktur der Bakterien (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVIII . 1908, H. 4, p. 385). Verf. bediente sicli zum Färben der Bakterien des Brillant- kresylblaus und verfährt nach der von Cesaris-Demel vorgeschlagenen Methode. Auf einem Objektträger breitet mau eine dünne Schicht einer alkoholischen Lösung des genannten Farbstoffs aus, läßt den Alkohol abdunsten und bringt dann auf dieselbe Stelle einen Tropfen aus der Bouillonkultur oder einen Tropfen steriler Bouillon . in den man das zur Untersuchung bestimmte Bakterienmaterial einträgt. Bei zahlreichen Bakterienarten fand Verf. bei Untersuchung junger Zellen ein intensiv färbbares Körnchen , das nach Verf. als Zellkern anzusprechen ist ; diese Kerne sind zu direkter Teilung be- fähigt. In erwachsenen Bakterienzellen liegen mehrere Granula, die von dem soeben erwähnten Zellenkern abstammen. — Durch diese Unterschiede zwischen ungleich alten Bakterienzellen ;,iiid nach Verf. die verschiedenen Meinungen der Autoren von der Kernhaltigkeit der Bakterienzelle zu erklären. Küster {Halle a. S.). Eisenberg, Ph., Über Fetteinschlüsse bei Bakterien. Färb che mische Untersuchungen (Zentralbl. f. Bak- teriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVIII, 1908, H. 3. p. 257). Die von verschiedenen Autoren sehr verschieden gedeuteten J'etteinschlüsse untersuchte Verf. nach zahlreichen Methoden. Die in den Bakterien liegenden Körnchen geben nach Dittkich und Liebermeister die Naphtholblaureaktion : werden Milzbrandbazillen in einer einprozentigen wiisserigen Lösung von Paraphenylendiamin XXV, 4. Ketenite. 50:3 (Base oder Chlorhydrat, niclit zu alte Losungj verrieben und mit alkalischer Naphtholblaulösun«? (in einprozentiger Sodalösung) versetzt, so bildet sich an der Luft Naphtholblau, das in Form blauer Flöck- chen ausfällt; die Körner der Bakterienzellen färben sich blau. Zusatz von oxydierenden Mitteln (Ferricyankalium , Salze der Über- osmiumsäure , Chloranil) beschleunigt die Naphtholblausynthese in vitro , sowie die Färbung der Körnchen , desgleichen Wasserstoft- superoxyd, wenn durch Zusatz von Hämoglobin Sauerstoff entbunden wird; dieselbe Zersetzung bewirken die Bakterienzellen selbst, so daß in diesem Fall der Hämoglobinzusatz überflüssig ist. Anstatt a-Naphthol kann auch ;ö-Naphthol (in einprozentiger Sodalösung) ver- wandt werden ; desgleichen Phenol in alkalischer Lösung (5 Prozent in Normallauge) unter Zusatz von Ferricyankali. Urcin und Resorcin in alkalischer Lösung und bei Ferricyankalizusatz ergeben keine Färbung, obwohl in vitro Naphtholblausynthese erfolgt; ebensowenig- führten Nitrosodimethylanilin in wässeriger Lösung und alkalisches a-Naphthol zu Köruchenfärbung. Muscarin (Ghltblerj (hydroxyliertes Naphtholblau) läßt die Granula ungefärbt und färbt den Rest der Zelle; ebenso verhält sich Nilblausulfat (amidiertes Naphtholblau, Grübler), während von der orange-rötlichen Nilblaubase die Körnchen deutlich und elektiv gefärbt werden. Man kann z. B. die Bakterien in Nilblausulfatlösung aufschwemmen und einprozeutiges Soda zu- setzen; durch das schwache Alkali wird nur ein Teil des Sulfats in die Base verwandelt ; letztere färbt die Granula rötlich, während der übrige Teil der Zellen mit dem Sulfat sich blau färbt. Gute Doppel- färbung erhält man auch, wenn man nach Färbung mit der Nilblau- base mit Methylenblaulösung nachfärbt. Ähnlich wirkt Brillantkresyl- blau (Grübler), das die Zellen gut färbt und die Granula ungefärbt läßt; die Base des Farbstoffes aber färbt die letzteren rötlich. Doppelfärbung wird auch mit Brillantkresylblau erzielt, indem man die Bakterien in verdünnter Farblösung verreibt und dann ein- prozentige Sodalösung zufügt. Die von A. Meyer und seinen Schülern eingeführten nitro- chemischen Fettreaktionen wurden geprüft. Die Dimethylamidoazo- benzolreaktion (Merck) fiel allerdings nicht so prägnant aus wie bei A. Meyer und Grimme; ähnlich verhielt es sich mit Sudan HL Chrysoidin (Kahlbaum), Vesuvin und Bisraarckbrauu (Grübler) färben die Körnchen, wenn man durch Alkalizusatz die Basen aus den Chlor- hydraten frei macht; man schwemmt daher die Bakterien erst in einprozentiger Sodalösung auf und läßt dann die Farbstoffe in was- 504 Referate. XXV, 4. seriger Lösung zutreten; Nachtarbung mit Fuchsin gibt brauchbare Doppelfärbungen. Alkoholisches Indophenolblau (Merck), das Herxheimer zur Fett- färbung empfohlen hat, färbt die Bakterieneinschlüsse. Auch Echt- blau (Merck) — ein Gemisch aus Diphenyl- und Triphenylrosanilin- sulfat — gibt Färbung. Fuchsin, Methylenblau oder Wasserblau eignen sich hier zur Nach- und Doppelfärbung. • Bei Doppelfärbungsversuchen bemerkte Verf., daß mit Naphthol- blau gefärbte Körnchen mit nachträglich zugesetztem Fuchsin (wäs- serige Lösung) sich leuchtend rot färbten. Dieselbe Fuchsinfärbung läßt sich erzielen nach Vorbehandlung mit alkalischer a-Naphthol- lösung. Bei genügend reichlicher Farbstoffzufuhr stellt sich heraus, daß die Granula an Umfang zunehmen, — entweder durch Quel- lung (wie die Volutinkugeln bei Methylenblaufärbung) oder wegen Färbung einer sie umgebenden Plasmarindenschicht. Schließlich nehmen auch die übrigen Teile der Bakterienzellen den Farbstofl" auf. „Es ist nun ein ziemlich überraschender Anblick, nach Naphtholbeizung dasjenige elektiv gefärbt zu sehen, was bei derselben Färbung ohne Beize allein dem Farbstoff widersteht, während die sonst gefärbten Bestandteile die Farbe nicht annehmen. Es tritt also unter dem Einfluß des Naphthol eine völlige Umkehruug der färberischen Eigen- schaften der diversen Zellbestandteile auf. Recht auffallend gestaltet sich die Färbung, wenn man zunächst die Bakterien in stark ver- dünnter (O'lprozentiger) Fuchsinlösung verreibt und, nachdem der ganze Zellinbalt mit Ausnahme der Fetteinschlüsse sich deutlich ge- färbt hat , nun seitlich unter das Deckglas einen Tropfen Naphthol- lösung zufließen läßt ; langsam ändert sich das Bild, indem das früher Gefärbte sich gradweise entfärbt und die bisher ungefärbten Granula in demselben Maße die Farbe aufnehmen. Wir haben hier also das Phänomen der , Inversion' vor uns fPAPPENHEm), wie es auch bei mit basischen Anilinfarben gefärbten Mastzellen durch Glyzerin oder bei Am- phibienblut durch Wasser oder Essigsäure sich hervorrufen läßt." Dauer- hafte Doppelfärbungen konnte Verf. auf diesem Wege nicht erzielen. Fuchsin läßt sich hinsichtlich seiner Farbwirkung auf die Granula von keinem einzigen der zahlreichen sauren Farbstoffe , die Verf. prüfte und mit a-Naphtholvorbehandlung kombinierte, ersetzen. Gute Resultate gaben von den basischen Mitteln z. B. die Rosaniliubase (Grübler), Resorcinfuchsin nach Weigert (Grübler), die Pararosanilin- base (Kahlbaum), Pararosaniliuchlorhydrat (Fuchsin, Kahlbaum;, Magentarot und Dahlia (Grübler). XXV, 4. Referate. 505 a-Naphtliol kann durch /^-Naphthol (in alkalischer Löaungj er- setzt werden. Auch die mit Lugol scher Lösung- vorbehandelteu Granula nehmen Fuchsin auf. Hierzu reichen sehr geringe .lodmengen schon aus; es empfiehlt sich, verdünnte LuGOLsche Lösung zu nehmen, damit in der Flüssigkeit nicht allzu reichliche Niederschläge ent- stehen. Formolfuchsin färbt ebensogut wie Fuchsin; die sauren Farbstofte sind auch nach Vorbehandlung nach Jod nicht zu ver- wenden , von den basischen Farbstoffen wiederum nur einige , doch ist die Auswahl etwas größer als nach a-Naphtholbehandlung. Statt Lugol scher Lösung- kann auch Jodtinktur oder Jodglyzerin verwendet werden — letzteres gibt keine Niederschläge. Nachdem Claudius gezeigt hatte, daß mau bei einer dem Gram- schen Verfahren analogen Behandlung das Jod durch Pikrinsäure er- setzen kann, zeigte Verf., daß die Granula auch nach Vorbehandlung mit Pikrinsäure mit Fuchsin gefärbt werden können. Formolfuchsiu versagt hier. Wie Pikrinsäure wirken auch zahlreiche andere aro- matische Nitroverbindungen. Ferner läßt sich Färbung erzielen, wenn man die Bakterien in Salpetersäure aufschwemmt und dann den Farb- stoff", von dem stets ein Teil durch die Salpetersäure entfärbt wird, hinzusetzt; analoge Wirkung läßt sich durch salpetrige Säure erzielen, die man am besten aus wässeriger Kaliumnitritlösung und verdünnter Salzsäure im Präparat selbst sich entwickeln läßt. — Auf fixiertes Bakterienmaterial lassen sich die geschilderten Methoden nicht ohne weiteres übertragen ; die meisten Verfahren versagen. Als geeignet wird folgendes Verfahren vom Verf. ge- schildert: Das fixierte Material wird mit LuGOLScher Lösung (nach A. Meyerj behandelt, nach einer bis 2 Minuten in Wasser abgespült und mit lOfach verdünntem Karbolfuchsin behandelt; der Zellenleil) färbt sich rosa, die Granula werden intensiv rot gefärbt. „Bessere Resultate bekommt man im allgemeinen, wenn man die ganze Färbuug oder wenigstens die Beizung an frischem in Wasser suspendiertem Material vornimmt, sodann den Tropfen ausstreicht und entweder an der Luft oder in der Hamm sehen Fixationsröhre in Osmiumdämpfeu austrocknen läßt. Auf diese Weise kann man alle eben beschriebenen Farbreaktionen der Granula fixieren , wenn sie auch im Trocken- präparat weniger intensiv und leuchtend zur Geltung kommen als an frischem Material. Diese Methode bietet noch den Vorteil, daß man am sekundär ausgetrockneten Präparat Nachfärbungen vornehmen kann «am besten mit Methylenblau oder Wasserblau bei roten oder orangefarbenen Granulis , mit stark verdünntem Fuchsin bei blauen. 50(i Referate. XXV, 4. j^rüueii oder violetten;, ohue daß hier die Nacbfärbung' zu einer Ent- färbung der Granula führt, wie im frischen Präparat." — Des weiteren beschreibt Verf. folgende Modifikation des Gram- schen Verfahrens : Das fixierte Trockenpräparat wird mit einprozen- tiger wässeriger Lösung von Viktoriablau B (Grüblerj 3 bis 5 Minuten lang behandelt, mit Wasser gewaschen, eine bis 2 Minuten mit Lugol- scher Lösung gebeizt, dann mit NicoLLESchem Acetonalkohol diffe- renziert , bis kein Farbstoti' mehr abgegeben wird , in Wasser ge- waschen und kurz mit lOfach verdünntem Karbolfuchsin gefärbt. Die kleineren Granula färben sich dabei dunkelviolett ; bei den größeren nimmt man nur eine gefärbte Randzone wahr, welche das ungefärbte Granulum umgibt. Dieses Färbungsresultat wurde am besten an Milz- l)randbakterien erzielt. Das Ergebnis spricht nach Ansicht des Verf. dafür, daß das die Fetteinschlüsse umgebende Plasma, das sich hier färbt, besondere physikalisch-chemische Eigentümlichkeiten hat. Küster \ Halle a. S.j. Yanianioto, J. , Eine 8ilberimprägnationsmethode zur L n t e r s c h e i d u n g von Lepra- und Tuberkel- bazillen (Zeutralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVIL 1908, No. 5, p. 570j. Bei Behandlung mit Silbermitteln wird ein auffallender Unter- schied zwischen Lepra- und Tuberkelbazillen erkennbar : Die Lepra- bazillen erscheinen hell als Negative auf dem goldbraun gefärbten Grund, während die Tuberkelbazillen sich dunkler gefärbt von relativ hellem Grund abheben. — Verf. arbeitet in der Weise, daß Lepra- bazillen (aus Lepraknoten möglichst blutfrei entnommen) oder Tuberkel- bazillen (aus Sputum oder Reinkulturen) ausgestrichen , an der Luft getrocknet und in der Flamme vorsichtig fixiert werden. Dann werden die Präparate 10 Minuten in öprozentiger Silbernitratlösung bei 55 bis 60^ C erwärmt und auf 5 Minuten mit folgender redu- 'b^ zierender Lösung behandelt : Pyrogallussäure -? g Tannin . 1 „ Aqua destiilata 100 „ Die Deckgläschen erscheinen dann mit schwarzem Niederschlag be- deckt. „Man entfernt diesen auf das sorgfältigste , indem man mit einem zusammengefalteten , mit Wasser erweichten Stück Filtrier- papier mehrmals darüberfährt." Trocknen, mit Kauadabalsam ein- schließen und mit Öl-Immersion untersuchen. Die so hergestellten XX\', 4. Hetoiutt!. ,",((7 Präparate weisen im ganzen einen goldbriumen Glanz auf. Die 'ruberkelbaziilen sind tiefschwarz tingiert, während die Leprabazilh'n durchsichtig' und hell erscheinen. Die hellen Leprabazillen können nach der Silberirapriignation mit dem Ziehl seilen Karbolfuchsin unter Säurealkoholbehnndlung- nachgefärbt werden. Kfistpf (Hallr a. S.). Yaiiiiiuioto, J. , i'ber das Verhalten des Milzbr;ind- bazillus bei der Silberimprägnation (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVIII, 1908, H. 2, p. 253). Im vorangehenden Referat sind die ersten Beobachtungen des Verf. über „silbernegative" (Leprabazillen) und „silberpositive" Mikroben TTuberkelbazillen) wiedergegeben. Als silbernegativ wurden ferner noch die Milzbrandbazillen , als silberpositiv die Colibazillen erkannt. Wenigstens sind die jungen vegetativen Milzbrandzellen silbernegativ; anders verhalten sich Bakterien solchen Alters, bei dem der Beginn der Sporenbildung zu erwarten ist. „Man sieht dann in den im ganzen ditfus gefärbten Bazillenkörpern meist nahe dem Zentrum, aber auch an andern Stellen einen schwarzen Fleck auftreten, welcher später etwas größer, mehr kreisförmig und weniger scharf umgrenzt als eine Spore erscheint." Über den Zusammen- hang dieser Gebilde mit den Sporen vermag Verf. noch nichts Sicheres anzugeben. Je größer der schwarze Fleck in den Bakterienzellen wird, um so mehr hellt sich der übrige, sonst diffus gefärbte Teil der Zellen auf. — Alter und Kulturart sind auf das Verhalten der Bak- terien bei der Silberimprägnation von großem Einfluß. Setzt man die Bakterien vor der Silberbehandlung 10 Minuten lang Osmium- dcämpfeu aus oder behandelt sie mit 4prozentiger Antiforminlösung (nach Uhlenhuth) bis fast zur Auflösung der Zellen , so verhalten sie sich silberpositiv. — Kapseln des Milzbrandbazillus, von Diplo- coccus pneumoniae und Bacillus pneumoniae verhalten sich silber- negativ. Küster (Halle a. S.). Eisenberg, Ph., Studien zur E k t o p 1 a s m a t h e o r i e. L Ü b e r die Kapselbildung beim Milzbrandbazillus rZentralbl. f. BakterioL Abt. 1, Orig. Bd. XLVII, 1908, H. 4, p. 415). Um bei Untersuchung der Kapseln die auflösende Wirkung des Wassers zu umgehen, wurden die Ausstriche, sofern es sich nicht um flüssige Serumkulturen handelte , mit Rinderserum oder Ascites her- 508 Referate. XXV, 4. gestellt. Bei der Fixierung ergaben Methylalkohol und Osmiumsäure ungefähr gleich gute Resultate ; Hitzefixation bringt die Kapseln zum Schrumpfen und wurde daher vermieden. Bei Untersuchung von tierischen Organen bewährte sich die Anfertigung von Klatschpräpa- raten (nach Streit) anstatt der Ausstriche, da man durch jene sehr gute Übersichtsbilder der Verteilung der Bazillen im Gewebe erhält. Zur Färbung bediente sich Verf. verschiedener Mittel : verschiedene Pararosanilinviolette in stark verdünnten Lösungen, verschiedene Schleimfarbstotfe (nach Heim), Methylgrün -Pyroninmethode (nach Saathof), verschiedene rotstichige Methylenblaulösungen und Methylen- blau-pjosingemische. Vorzugsweise wandte Verf. gelagerte MANSONSche Borax -Methylenblaulösung sowie schwache, kurze Giemsa- Färbung an. Zuweilen gelingt es bei Färbung nach Gram oder Claudius die GRAM-negativen Kapsel mit Eosin oder Safranin schön nachzufärben. Außerdem färbte Verf. mit verdünntem Fuchsin nach Vorbehandlung mit LuGOLScher Lösung. Küster (Halle a. S.i. Mühleus, P., u. Lohe, 1 " b e r Z ü c h t u n g s v e r s u c h e'd er Spiro- chaete pallida (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVII, 1908, H. 4, p. 487). Die Mitteilungen der Verft". berichten im wesentlichen nur über negative Resultate : Levaditis Säckchenmethode führte zu keinem positiven Ergebnis; sämtliche Versuche mit zahlreichen künstlichen, flüssigen und festen Medien mißlangen ; in Kapillarröhrchen mit Affeuserum blieben die Spirochäten zwar tagelang beweglich: ob eine Vermehrung stattgefunden, konnte aber nicht mit Sicherheit er- mittelt werden. Küster (Halle a. S.). Padlewsky, L., Eine neue Anwendungsmethode des M a 1 a c h i t g r ü n a g a r s zum Nachweis v o u Bazillen der Typhusgruppe (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Orig. Bd. XLVII, 1908, H. 4, p. 540). Verf. schlägt folgende Modifikationen des Löfflek sehen Malachit- grünnährbodens vor, welche ein üppigeres Wachstum der Typhus- bazillen gestatten. Zu dem oprozentigen Nähragar kommen 2 Prozent Pepton, 3 Prozent Ochsengalle und ein Prozent chemisch reiner Milchzucker ; letzterer muß zuvor in einer kleinen Menge destillierten Wassers gelöst werden. Die Galle muß mit heißem Dampf im Koch sehen Apparat gebrüht und durch Watte filtriert werden. Die Reaktion XXV, 4. Referate. -)09 der Mischung- soll schwach alkalisch sein. Der Agar wird in Kölbchen zu je 100 bis 200 cc verteilt und sterilisiert. Zu je 100 cc des auf 60 bis 65^ abg-ekühlten Agars kommen dann Einprozentige wässerige MKlacliitgrünlösung . 05 ce Galle 0-5 „ lOprozentige wässerige Lösung von schweflig- saurem Natrium (pro analysi) 0"75 bis 10. Die Natriumsultitlösung und die soeben genannte Mischung müssen immer frisch angefertigt werden. — Nachdem die Malachit- grünmischung zum Agar gesetzt worden ist, wird er nach guter Durchmischung in Schalen gegossen , die man offen stehen läßt bis der Agar erstarrt ist; dann werden sie im Brutschrank getrocknet, indem man sie ca. 15 Minuten mit dem Boden nach oben stellt. Küster (Halle a. S.). Hüne, Antiformin zur Anreicherung der Tuberkel- bazillen im Auswurf, Stuhl, Urin usw. (Hygien. Rundschau .Jahrg. XVIII, No. 18, p. 1090). Verf. empfiehlt das Präparat Antiformin auf Grund eingehender Versuche , dessen Wirkung Bakterien mit Ausnahme von Tuberkel- bazillen schnell aufzulösen Uhlenhuth bereits erkannt hatte , als Homogenisierungs- und Lösungsmittel für Sputa. Das erhaltene Sedi- ment eignet sich gleichzeitig noch besonders für den Tierversuch, da nach Abtötung der anderen Mikroorganismen die Tuberkelbazillen noch virulent bleiben. Das Sputum wird in einem gleichen Volumen Wasser aufgefangen und ihm soviel Antiformin hinzugefügt, daß das Gemisch 2 Prozent enthält ; oder zu dem aus gleichen Mengen Sputum und Wasser bestehenden Gemenge werden 25 Prozent Antiformin gegeben ; das Gemenge wird zentrifugiert, der überstehende wässerige Anteil abgegossen , das Röhrchen von neuem mit Wasser aufgefüllt und nochmals zentrifugiert. Das nunmehr durch Abgießen erhaltene Sediment kann zur Färbung und zum Tierversuch benutzt werden. Bei einem Gehalt von mehr als 2 bis 4 Prozent Antiformin ist das Sediment schwer fixierbar. W. Reidemeister (Halle a. S.). Kypke-Buchardi, Über die Brauchbarkeit des Conradi- schen Brillantgrün-Typhusnährboden (Hygien. Rundschau Jahrg. XVIII, No. 21, p. 1261). N'ersuche mit von Conradi empfohlenem Brillantgrün (krist.J, extra rein Höchst, auf einem 2prozentigen Peptonfleischextraktagar mit 510 Referate. XXV, 4. 3 Prozent Säuregehalt, ergaben deutliche Wachstumshemniung des Bacterinm coli (P^ntwicklung 0*2 Prozent einer Reinkultur, 7 Prozent einer Misehkultur). Gegenüber der Drigalski- Platte gleiche Anzahl der Typhuskeime (70 bis 73 Prozent), auch etwa gleiche Menge Proteus und Fluorescens und Pyocyaneus. Subtilis und Alkaligenes- platte blieben steril. W. Rddemeister (Halle a. S.). Nakao , A. , Der Nachweis des Tuberkelbazillus im Sputum (Arch. f. Hygiene Bd. LXVI, H. 4, p. 373). Gleichzeitige Desinfektion und Homogenisierung der Sputa er- reicht Verf., indem er 5 bis 10 cc Sputum mit 15 bis 30 cc einer Lösung von 2 g Sublimat und 10 g Kochsalz in 1 Liter destillierten Wassers versetzt und 10 Minuten schüttelt, und 15 cc dünnflüssiges Sputum 10 Minuten zentrifugiert. TP". Reidemeister (Halle a. S.). Nießeil, 31. V., Der Syphilisbazillus. Seine Geschichte, Literatur, Kultur und spezifische Pathogeni- tät für Tiere und Menschen. Wiesbaden 1908. Mit 37 Tfln. (davon 4 in Farbendruck). Anspruch auf eine ernsthafte Kritik hat das Buch eigentlich nicht. Verf. bringt auf 11 Tafeln mit durchschnittlich 17 bis 18 Photo- grammen eine Zusammenstellung seiner aus dem Blut, zum Teil auch aus angeblich syphilitischen Prozessen vom Menschen gezüchteten Syphilisbazillen. Man sucht hier vergeblich nach einer Spirochäten- form, dagegen findet man eine Sammlung der verschiedensten, ich möchte sagen, beinahe der meisten uns bekannten Kokken- und Bazillenformen. Nach Verf. sollen diese alle verschiedene Wuchs- formen seines Syphilisbazillus darstellen, die er in Bouillongelatine oder Bouillon bei Brutteniperatur reingezüchtet haben will. Zur An- legung der Kulturen empfiehlt Verf. folgendes Verfahren: 5 bis 10 cc Blut aus der V. mediana in fortgeschrittenen Fällen tertiärer Syphilis, auf der Höhe der Ernptionsperiode usw. zu aspirieren und sogleich mit dünngestehender Bouillongelatine oder Bouillon in 3 bis 4 Röhr- chen im Verhältnis von 1 Blut zu 2 bis 3 Nährflüssigkeit zu mengen und einige Tage bis Wochen im Brutschrank schräg gelagert liegen zu lassen. Den Beweis für die Spezifität seines Syphilisbazillus er- blickt Verf. in pathologischen Veränderungen angeblich spezifischer Natur, die er durch Verimpfung bei einem Schwein, Aften, Pferd. Fröschen und Kaninchen erzielt hat. Er bringt davon auf etwa XXV, 4. Referate. all 15 Tafeln ziuu Teil sehr ^ute l'liotograinme. Es mag- genügeu. hervorzuheben, daß die Orgaaveränderungen , die Verf. z.B. beim Pferd und Kaninchen beschreibt (Lebercirrhose, Pleuritis und knötchen- förmige Peritonitis), durchaus niclit eindeutig sind, und daß insbeson- dere die histologischen Bilder, die er davon gibt, sehr unklar sind, nichts Charakteristisches für Lues erkennen lassen, einige sogar eine verdächtige Ähnlichkeit mit Tuberkulose haben. Meyer {Halle a. S.\. D. Botanisches. Brand , F. , Weitere Bemerkungen über P o r p h y r i d i u m cruentum (Ag.j Naeg. (Ber. d. d. botan. Ges. Bd. XXV a, 1908, H. 8, p. 540). Das „ Pyrenoid" von Porphyridium cruentum hat mit den Pyrenoiden der Grrünalgen kaum etwas zu tun: mit Jod ließ sich keine Färbung erzielen. Versuche, auf färberischem Wege einen Zellkern nachzu- weisen, mißlangen. Küster (Halle a. S.). Neinec, B. , Über die Natur des B a k t e r i e n p r o t o p 1 a s t c u (Ber. d. d. botan. Ges. Bd. XXVI a, 1908, p. 809). Verf. kritisiert Ruzickas Angaben über die Kernnatur der Bak- terienzellen und bringt in Erinnerung, daß das Cytoplasma reichliche Mengen von unverdaulichen Substanzen (Behandlung mit Pepsin!) enthält. Überträgt man z. B. Wurzelspitzen von Vicia faba , Pisum sativum, Sinapis alba, Lilium candidum u.a. aus Alkohol in die Verdauungsflüssigkeit, so schrumpfen Kern und Cytoplasma in gleichem Maße. Bei Lilium candidum wurde festgestellt , daß die achroma- tischen Spindelfasern der Kernteilungsfiguren wohlerhalten bleiben. Material, das durch heißes Wasser (96 bis 98*^ C) getötet oder lebendig in die Verdauungsflüssigkeit gelegt worden war, verhielt sich ähnlich. - — In Eiern von Ascaris megalocephala (fixiert mit Alkohol, Alkohol- sublimat oder Alkoholeisessig) blieb vom Cytoplasma in Pepsinsalz- säure der größte Teil ungelöst ; ganz erhalten erschienen nach 6 bis 24 Stunden die Chromosome, die Spindelfasern und Centriolen, sowie die ruhenden Kerne. Küster (Halle a. S.). 512 Referate. XXV, 4. Laibach, F., Zur Frage nach der Individualität der Chromosomen im Pflanzenreich (Beih. z. botan. Zentralbl. Abt. 1, Bd. XXII, 1907, p. 191). Verf. untersuchte eine große Anzahl von Kruziferen. Fixiert wurde das Material teils in Flfmmings Gemisch, teils in Carnoys Alkohol-Eisessig (3 Teile Alkohol -\- 1 Teil Eisessig). Das letztere wurde dann bevorzugt, wenn es sich um stark behaarte Objekte handelte, bei welchen ohne besondere Maßregeln eine vollkommene Durchdringung mit Flemming scher Lösung nicht zu erreichen war. Nach Chloroform Einbettung in Paraffin. Färbung nach Flemming s Dreifarbenverfahren oder mit Heidenhains Eisenhämatoxylin. Wenn es sich um Zählung der Chromosome in der typischen oder allo- typischen Teilung handelte , war wegen der Kleinheit der Chromo- some und ihrer dichten Lagerung die letztere Methode besser, da sie klarere Bilder lieferte. Küster (Halle a. S.). XXV, 4, Neue Literatur. 51;; Neue Literatur. 1. Lehr- und Handbücher. Abel, R., u. Fioker, 31.. Einfaclio Hilfsmittel zur AustuhruuiJ Itakterio- logisclier Untersuchungen. 2. Auflage. Würzburg (Kabitzsch) 1909. .57 pp. 80. 1-20 M. Bartleleben, K. v., Die Anatoiaio des Menschen (Aus Natur und Geistes- welt, No. 201, 202, 203, 204). Leipzig (B. G. Teubner) 190S. Jedes Bändchen 1-25 M. Koch, L., Die mikrosk(»pische Analyse des Drogenpulver. Ein Atlas für Apotiieker, Drogisten und Studierende der Pharmazie. \'ierter Band (Schlußband) : Die Samen und Früchte. Mit 14 lithograph. Taf. u. 16 Holz- schnitten. 4". Berlin (Gebr. Bornträgerj 1908. 18-50 M., geb. 23 M. Pardi, F., Compendio di Istologia (dottrina della cellula e dei tessuti). Con 74 fig. e 2 tav., Pisa 1909. XI u. 170 pp. Rubenthaler, G., Precis de Technique histologique et cjtologique. Avec preface par .V. Prexant. Paris. 408 pp. 12 Mikrophotograph. u. 48 Figg. so. Schoofs. F., Traite d'hygieno pratique. Paris, Bailliere et tils, 1908. S". 216 Figg. 10-80 M. Tigerstedt, R., Handbuch der physiologischen Methodik. Leipzig (S. 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Deraanche, R., 3()1. Dieulafe, L., 331. Disse, J., 494. Docters van Leeuwen- Reijnvaan, W. u. J., 254, 3G3. Dogiel, V., 213. Donau, J., 129. Dreuw, H., 495. Dürken, B., 81. Duesberg, J., 201, 475. Dumanski, A.. 258. il*isenberg , Fb., 502. 507. Elsler, E., 87. Engel 60. Engelmann, M., 217. Federici, F., 200. Fehrs 359. Fischel, A., 154. Fleischmann, L., 316. Fraenkel, E., 107. Funck, Ch., 53. Gage, S. Fb., 74. Gäle§escu, F., 422. Gandolfi 421. Gates, R. R., 256. Gebhardt, W., 452. Gendre, E., 327. Gerini, C, 498. Gierlich, N., 105. Giltay, E., 163. Goldschmidt, R.. 479. Goris, A., 254. Gottberg, M., 238. Gow, J. E., 254, 256. Grohs, W., 107. Grochmalicki, J., 236. Gruber, G. B., 346. Guieysse, A., 71, 328. Guiliiermond, A., 330, 356. oaberer, H. v., 497. Hager, H., 70. Hahn, H., 184. Hamburger, C, 80. Hamburger, H. J., 1. Hammar, J. A., 497. Hansen, Fr. C. C, 145. Harrison, F. C, 357. Hata, J., 247. Heidenhain, M., 397, 401. Heidinger, W., 253. Heimstädt, 0., 188. Heinemann, F. G., 358. Heinzerling, 0., 125. Henderson, L. J., 359. Henderson, W. D., 83. Herman, M., 118. llerpin, A., 331. Herxheimer, G. , 105, 347. Herzog, A., 322. Herzog, F., 214. Heß, E., 366. Heusner, H. L., 62, 432. Hocke, M., 350. Hofmann, M., 199. Hoffmann, R. W., 202, 240. Hofsten, N. v., 85. Hoyer, H., 412. Hüne 509. Autoren - Reiiister. 525 Ignatowsky, W. v., 64, '434, 438. Iinniisch, K. B., 342. Janicki, V. v., 87, 211. Jurewitsch, W., 358. Kallius, E., 500. Karsten, G., 251. Kassianow, N., 481. Katz, L., 109. Kauffraan, C. H., 365. Klinge, E., 352. Klopstock, M.. 320. Koch, A., 501. Köhler, A., 81. Königsberger, J., 287. Kohl, F. G., 250. Kowarskv, A., 320. Krause, R.. 289, 300. 320. Krauß, F.. 493. Kreibich 118. Krogh, A., 367. KruyflF, E. de, 242. Kürsteiner, J., 245. Kutscher, K., 120. Kypke-Buchardi 509. -Laibaeh, F., 512. Lams, H., 108. Landau, E., 226. Landram Mc. Farland, W., 244. Landström, J., 223. Lane, M. A., 96. Larionoff, W., 103. Larrier, N., 95. Le Dantec 360. Leiß, C, 367. Lendvai, J., 303. Lelievre, A., 344. Letulle, M., 95. Liefmann, H., 121. Lohe 508. Loewit, M., 88. Lorleberg, 0., 208. Lubenau, C, 242, 243. Lunghetti, B., 306. 3landelbaum, N., 115. Marchand 328. Marino, F., 121. Marpmann, G., 126, 127. Marshall, W. S., 328. Martini, E., 85. Masur, A., 220. -Materna, L., 439. Mawas 330. Meiklejohn, S. J., 338. Mencl, E., 326. Merton, IL, 206. Meves, F., 475, 484, Meyer, A., 116. Mez, C, 248. Michailow, S.. 228, 337, 341, 499. Mie, G., 131. Molisch, H., 366. Moll, J. W., 122. Mottram, V. H., 346. Mücke, M., 252. Mügge, 0., 367. Mühlens, P., 508. Müller, H.. 205. Nakao, A., 510. Nathan, M., 347, 348. Nemec, B., 511. Nestler, A., 364. Neumann, G., 245. Neumayer, L., 38. Nichols, M. L., 254. Nießen, 31. v., 510. Nirenstein, E., 497. Nonotte, M., .361. Nowikotf, M., 85, 476, 491. Nusbaura, J., 205. (3chs, A., 223. Oes, A., 127. Ognew, S. J., 224. Olive, F. W., 366. Oppel, A., 321. Ortmann, W., 478. Ostwald. W., 322. r adlewsky, L., 508. Peabody, F., 119. Perez, Ch., 327. Perroncito, A., 97. Pesker, D. J., 232. Pesta, 0., 83. Petermann, W., 107, Petersen, 0. V. C. E., 97, Philiptschenko, J., 84. Pöschl, V., 324. Pollitzer, IL, 89. PopoJr, M., 204, 205. Porodko, Th., 240. Pratl, J., 119. Pringsheim, E. jun., 474. Prym, 0,, 217*. Lv-achmanott", A. W., 1» I2. Itaciborski, M., 257. Rawitz, B., 385. Read, E. A., 3.54. Reichenow, E., 485. Reichensperger, A.,2u4. 483. Reichert, K., 237. Reidemeister, W., 42. Rodenwaldt 332. Röthig, P., 68. Rohland, P., 130. Rosam, A., 117. Rosenblatt, 8t., 239. Rosenhauch, E., 76. Rotarski, Th., 369. Rothe 121, Rothfeld, J., 222. Rubaschkin, W., 2.36. IJfizicka, VI.. 360. bachs-Müke 359, .Sainmont, G., 157. Saling, Th., 79. Salomon, E,, 241, Schaffer, J,, 227. Scheffer, W,, 446, Schepotieff,A., 209,211). Schlittenhelm, A., 321. Schmidt, E., 224. Schmidt, P., 491. Schmitt-Marcel, W., 5(»0. Schneider, P., 495. Schoorl, N., 72. Schreiber, L., 495. Schridde, H., 223. Schuberg, A., 77, 495. Schumann, P., 348. Seiffert, G., 359, Selensky, W., 481. Senft, E., 255. Shikinani, J., 350. Siedentopf, H., 130, 195, 273, 424. Sineff, A., 76. Sivanow, N., 327, Sonnenbrodt, .501, Srdinko, 0. V., 225. Ssobolew, L. W., 410. 526 Autoren - Register. Staiaer, A., 92. Standfuß, R., 95. StaufFacher, H., S4. Stein, R., 242. Sterzinger, J., 207. Stockhausen, F., 114. Stoerk, 0., 497. Swellengrebel , N. H., IKi. Sykes, M. G., 254. Szily, A. V., 351. Szymonowicz, Ladisl.. 320. lakahashi, K., 333. Takayasu, R., 94. Teague, 0., 258. Thoma, R.. 329. Thulin, J., 49(i. Trautmann, A., 349. Trincas, L., 118. Tröster, C. 75. Ude, J., 211. Verzär, F., 94. Vial, F., 244. Viefhaus, Th., 109. Vorländer, D., 3(i8. Walter, F. H., 339. Wassilieft; A., 207. Webster, H. B., 359. Weidanz, 0., 240. Weidenreich, F., 489. Weygandt, C, 209. Widmann, E., 476. Wilson, G. J., 22S. Winiwarter, H. v., 157. Wirtz, R., 239. Wislicenus, H., 257. Wisselingh, C. v.. 124. 12G. Wolff, M., 169. Wolfrum, M., 218. Worthington, J., 341. Wossidlo, E., 332. Wunderer, H., 229. 450. Yamada, K., 485. Yamamoto, J., 506, 507. Yamanouchi, Sh. , 250, 251. Young, R. Th., 478. Zettnow, E., 239. Zimmermann, A., 8. Sa ch- Register . Acanthobdella, Fixierung und Fär- bung 327. Achlya, Fixierung und Färbung nach Mücke 252. Aderhaut des Auges, Untersuchung nach. Wolfrum 218. Äther, Übergangsmedium zur Pa- raffineinbettung 200. Ätherspray für Gefriermikrotom 290. Äthylchlorid, Benutzung für Gefrier- mikrotom 170. Agar, Durchsichtigkeit 241. — , Filtrieren mit Glaswolle 240. — , Konsistenz 42. Alaunkarmin, Färbung von Collem- bolen 203. Albrands Methode, Zwischenniere der Urodelen zu untersuchen 498. Alcyonaria, Nervensystem 481. Alfieris Depigmentierungsverfahren 354. Alkalisieren von Nährböden 359. Alizarin, Nervenfärbung nach Fischel 154. Alkohol, Fixierung von Blut 329. — , — — Ophiuren 483. — , Wirkung auf Metachromasie 150. Aliens Methode, Bindegewebe zu färben 220. Amatos Bakterienfärbung 502. Amnion, Huhn, Untersuchung 94. Amphibien, Laich 500. — . Lederhaut 495. Amphilina, Präparation 211. Amphiura, Leuchtvermögen 207. — , Mazeration 208. — , Untersuchung nach Sterzinger 207. Amyloid, Metachromasie 149. Anaerobe, Gasbestimmung 359. Anaerobe, Isolierung nach -Fehrs- Sachs-Müke 359. — , Kultur nach Fehrs-Hachs-Müke 359. — . — — Hata 247. — , — — Le Dantec 3G0. — , — — Liefmann 121. — . — — Marino 121. — , — Wright-Burri 245. Anästhol für Gefriermikrotom 290. Anamnien, Terminalkörperchen 229. Anilinblau - Orange - Oxalsäure , Fär- bung von Bindegewebe 221. Anoplocephala, Fixierung und Fär- bung 480. Anthocyan, Veränderung durch Bak- terien 502. Antiformin , Tuberkelanreicherung 509. Apäthys Vergoldungsmethode 209. Apis s. Biene. Apterygoten, Präparation 84. Methoden der Arterien- untersuchung 325. Arisaema, Embryo 254. Arnolds Methode, Leberzellen zu isolieren 225. Arterien, Fixierung und Färbung 325. Artoras Methode, Ascaris-Eier zu fixieren 3. Ascaris, Eier, Fixierung 3. — , — , Verdauungsversuche 511. — , Nerven 479. — , Nervensystem 210. Ascidien, Nervensystem 208. Aspergillus, Chemomorphosen 257. Assmanns Methoden der Blutunter- suchung 486. Athias' Verfahren, Granula in den Spinalganglien zu färben 232. Argauds 528 Sach- Register. Aut'klebemethode, japanische 043. Aufkleben mit Glyzerineiweiß 343. — — Olts Flüssigkeit 343. — von Celloidinschnitten nach 01t 343. — — Gefrierschnitten nach 01t 343. 501. Auge, Pigmentuntersuchung 495. Aurantia, Färbung von Erythro- cytenmembranen 88. Axolotl, Haut. Fixierung nach Rawitz 390. Jjachmanns Methode, granitbewoh- nende Flechten zu untersuchen 3Ü1. Balß' Methode , Geschlechtsorgane der Cestoden zu untersuchen 480. liakterien, Chromatinbänder 239. Chromatinkörnchen 356. Gasbestimmung 359. (ieißeln, Beobachtung mit .Spiegel- kondensor 237. — , Silberiraprägnation 118. Färbung nach Amato 502. — — Betegh 358. — — Eisenberg 502. — — Guiliiermond 350. — — IJ. Hoffmann 240. — — Jenner- May 240. — — Rosani 107. — — Wirtz 239. Fettgehalt 502. metachromatische Körnchen 356. — — , Färbung nach Trincas 108. Sporenfärbung nach Trincas 108. — — Wirtz 239. tSporoidmassen 360. Versilberung nach Yamamoto 506, 507. Zellkern, Färbung 502. Zellkernfärbung nach Meyer 116. Bdellostoma, Gehirn 341. Bechers Methode, Rhabdomolgus zu präparieren 211. Beckers Methode, Zungenpapillen zu untersuchen 496. Beijerincks Reinzuchtmethoden 115. Bendas Methode, Mitochondricn zu untersuchen 475. Beneden-Neytsche Modifikation der Carnoyschen Flüssigkeit 353. Benzoesäure, Mikrochemisches 127. Bcnzopurpurine, Haltbarkeit der ge- färbten Schnitte 398, 399. Benzopurpurin 6B, Färbung mit alkoholischer Lösung 409. Berliner Blau, Haltbarkeit in mikro- skopischen Präparaten 397. Bertarellis Versilberungsmethode, Nachweis der Pigmentzellen 496. Betäubung nach iistergren 483. Beteghs differential - diagnostische Färbemethode säurefester Bak- terien 3.58. Biddersches Organ, Kröte, Präpara- tion 224. Biederts Sedimentierungsmethode 245. Bielschowskys Methode, Bindege- websfibrillen darzustellen 8. — — , Neurofibrillen darzustellen 105. Bielschowsky-Brühlsches Verfaiu-cn, periphere Nervenfasern zu fär- ben 100. Biene, Ei, Fixierung 201. Bindegewebe, Färbung mit Pikro- blauschwarz nach Heidenhain 407. — . — nach Allen 220. — , — — Björkenheim 235. — , — — Hansen 151. — , — — Mall 221. — , — — Mallory 234. — , — — Masur 220, 221. — , Fibrillen, Darstellung nach Zim- mermann 8. — , 3Ietachromasie, akzessorische 151. Björkenheims Methode, Schleimhaut des Uterovaginalkanals zu färben 233. Blatta, Spermatogenese 207. Blochmannsche Flüssigkeit, Färbung von Knorpel 492. — — , — — Sipunculiden 483. Blochmanns Modifikation der Gieson- schen Färbung 478. Blut, Entnahme nach Pr\ m 217. — , Färbung 346. — , — nach Butterfield 214. Giemsa-Schrid (le !l(i. — , — — Jenner 215, — , — — May-Grünwald 215. — , — — Romanowsky- Brückner 472. — . Fixierung nach Marcliaud 328. — . Untersuchung nach Pollitzer S9. — . — — Schmidt 491. — , — — Yamada 485. Blutkörperchen, Färbung nach Flem- ming 161. — , rote, s. Erythrocyten. Sach - Register. 529 Bödeckers Entkalkuiigsmetlioik' i'l. — Entkiesclungsmethüde 21. Boraxkarmin, Färbiini;- von Alcyo- num 481. — , — — üstracoden 47G. Boraxkarmin - Bismarckbiaun - Liclit- griin, Färbuno- von Knorjjel nach Krauß 4;»4. — -Bleu de Lyon-Bisuiarckbraun, Färbung- von Knorpel 492. Braus' Methode, Rohr-Köhlers Stereo- skop bei Rekonstruktionen zu verwenden 282. Breckners Celloidin - Paraftineinbet- tung 29. Brillantgrün-Typhusnährböden nach Conradi 509. Brillantkresylblau, Färbung von Bak- terien 502, 503. Brinells Mikroskop zur Bestimmung der Härte und Festigkeit von Metallen u. a. 456. Brückners Modiiikation der Koma- nowskyschen Färbung- 472. Buards Methode, Indol nachzuweisen 361. l'iuchholz' Methode, Typhus zu kul- tivieren 120. Burris Modifikation der Wrigiitschen Anaerobenkultur 245. Butterfields Methoden der Blutunter- suchung 214. v^ajals Methode, den Golgi-Hohu- grenschen Apparat zu färben 104. — Versilberung. Hühnerembryonen 338, 499. — — , modifiziert von Michailow 341. — — , Wunderer 230. Calloplaca, Physciongehalt 256. Camus-Pagniez' Methode, Tuberkel- bazillen zu färben 501. Carchesium, Fixierung nach Popoff 205. — , Gameten 205. Carcinom, Untersuchung naeli Flem- mings Dreifarbengemisch 162. Carnoysche Flüssigkeit , Fixierung der Iris 353. Carnoys Flüssigkeit, Fixierung der Mundhöhlenschleimhaut 342. — — , — von Pflanzenzellen 512. C'arreras' Versilberungsmethode 473. Catenata,Präparation nach Dogiel213. (avazzas Methoden, Tannin mikro- chemisch nachzuweisen 13. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 4. Celloidin, Einbettung nach Neuniayer 38. — , — — Ssobolew 410. ("elloidin -Paraffineinbettung nach Breckner 29. Celloidinserien nach Dantschakoff 32. — — Rubaschkin 33. Centrosomen, Blatta, Färbung 207. Cepedes Färbewanne 326. Cestoden, Geschlechtsorgane 480. Chitinisierte Organe, Untersuchung nach Hoffmann 203. (hlorpalladium für Entkalkung 112 ff. Chondriosomen, Fixierung und Fär- bung 484. Chorda, Siredon 493. ('hromhämatein-Eosin nach Petersen 99. — -Säurerubin nach Petersen 99. Chromidien, Helix und Paludina 204. Chromosome, Autolyse 128. Chromotrope, Färbkraft alkoholischer Lösungen 409. Chromotrop 2R, Färbkraft 409. Chromsäure, Fixierung von Pflanzen- gewebe 123. — , Lösung des Kernes 124. Chromsilber, löslich in Kanadabalsam 400. Chrom-Sublimat nach Lane 96. Chrysoidin, Färbung der Bakterien- sporen 118. (ladoceren, Nervenfärbung 154. Cladonemiden, Eibildung 205. Claussens Methode, Saprolegnia zu untersuchen 251. Codoniden, Eibildung 205. CoUargol, Darstellung der Kuptter- schen Zellen nach Nathan 348. Collembolen 202. CoUybia, Kultur 366. Conradis Brillantgrün - Typhusnälir- böden 509. Ctenolepisma, Präparation 84. Curreris Reduktionsgemisch 335. — Vergoldungsmethode 336. ("ypris, Fixierung und Färbung- 476. Cvsticercus, Fixirung und Färbung 478. Cytomikrosomen, Färbung nach Lams 109. Cytoplasma, Pflanzenzellen, Ver- dauungsversuche 511. Czaplewskis Sedimentierungsverfah- len 245. 34 O.H Sach- Realster. Dahlia, Färbung nach Beclier 213. Dunkelfeldkondensor, .Strahlenver- — , Nachweis der Zellverbindungen einigung 273 ff. nach Schuberg 78. — . Theorie 273. Dantschakoffs Methode, Celloidin- — von Leitz 27G ff. Serien herzustellen 32. — — lleichert 276 ff. Darm, Fixierung nach Rawitz 389. — — Zeiß 273 ff. — , — und Färbung nach Schumann Dytiscus, Spermatogenese 83. 348, 349. — , — — Trautmann 349. xLchinoderiden. Präparation nach — , Frosch, Färbung nach Heiden- Schepotieff 209. liain 40G. Echtblau, Färbung von Bakterien Deckglasklemmpinzetten nach Hei- 504. denhain 400. Eigelbnährböden nach Lubenau 243. Deckglasmarkierungsmethodc nach P^ileiter-Eier, Fixierung nach Röthiü' Pollitzer 91. 68. Deetjens Färbung von Blut 490. Einbettung nach Kittlitz 352. Dejodierung von Sublimat- Jodprä- — s. auch Celloidin und Paraftin. paraten nach Heidenhain 398. Eisenalaunhämatoxylin nach Heiden- Depigmentierung der Iris 3.'')4. hain, Färbung der (iallenkapil- Desmidiaceen, Färbung nach de Wil- lare 9ö. deman 365. Eisenbergs Bakterienfärbungen 502. destilliertes Wasser, Bedeutung seiner — Methode, Milzbrandkapseln zu Reinheit für Farblösungen usw. 90. untersuchen 507. Diatomeen, Färbung nach Heinzer- Eisenhämatei'n nach Hansen 99. ling 125. Eisenhämatoxj'lin nach Hansen, Fär- — , marine, sammeln 126. bung von Spirochäten 238. — , Pyrenoide 12(;. — — lleidenhain . l'"'ärbung der — . Untersuchung nach Siedentopf Cliondriosomen 484. 428. — — — , Niere 345. — , Volutin 125. _ _ _^ — von Spirochäten 238. Dichroismus, künstlicher, an Stein- — — — , — — Trypanosomen 23)-i. salz 130. — — — , Fixierung von Cysticer- Dimethylazobenzol. Behandlung von cus 478. Bakterien 503. — — — , — — Fasciola 479. Diphtherie, Kultur nach Lubenau 243. Eisenhämatoxylin - Rubin , Färbung Diplococcus, Versilberung 507. von Ophiopsita 204. Disses Methode, Knochen zu unter- Eisenhydroxydhydrosol, Ultramikrd- suchen 494. skopisches 258. Dogiels Methode, Catenata zu prä- Eisentrioxyhämatein nach Hansen, parieren 213. Färbung von Herzpräparaten 93. Dominicische Flüssigkeit. Fixierung Eiweißtusche, Injektionsmittel 1. der Niere 345. elastische Fasern. Färbung nach Dominicis Eosin - Orange - Toluidin- Björkenheim 77. blau, Färbung eosinophiler Zellen — — , — — Schuberg 234. 234. — — , Lymphknoten 217. Donaus Untersuchungen mit der — — , Penis 222. Phosphorsalzperle 129. Embryonen, Hüliner, Untersuchung Doppelplatten der Diatomeenzellen in Agar 339. 125. Endocardium, Nerven 228. Dürkens Methode, Ephemeriden zu Engels Kreuztiscii mit automatischer präparieren 81. Einrichtung 60. Duesbergs Metlutde, Bieneneier und Engelmanns Methoden. Lymphknoten Bienenembryonen zu untersuchen zu untersuchen 217. 201. Entchitinisierung nach Saling 80. Dunkelfeldkondensor, Aberration Entkalkung nacli Bödecker 21. 276 ff. — — Katz 111. — , Helligkeit 273. — — Ueichensperger 204. Sach-Reffister. 531 Entkalkiing nach Rousseau 204. Entkieseluiig nach Bödecker 21. Entpigiuentierung , Spinnenaugen 477. Entwässerungsmittel, AVirkung auf Metachroiuasie 150. Eosin, Färbung von Blutzellen 48(j. Eosin-Orange-Toluidinblau, Färbung eosinophiler Zellen nach Domi- uici 234. — -Wasserblau - Pikrinsäure , Fär- bung nach Becher 21o. eosinophile Zellen, Färbung nach Dominici 234. Epheaieridien, Tracheenkicraenmus- kulatur 81. Ergates, Muskelfasern 49(3. Erinaceus s. Igel. Erlangers Jodgrün-Säurefuchsin 492. Erythrocyten. Jugendstadien 491. — . 3Ierabran, Färbung nach Loewit 88. — , Schatten, Untersuchung nach Herzog 214. — , Untersuchung nach Aßmann 48G. — , — — Yamada 486. Euglenen , Lichtfallenuntersuchung 474. r ärbewanne nach Cepede 326. Fasciola, Fixierung und Färbung 478. Faserknorp'el , Färbung nach Lun- ghetti 306. Faserstoife, Mikrophotographien 322. Fasertonerde , Mikrophvsikalisches 257. Federicis Methode, Äther als Über- gangsmedium vor Paraffinein- bettung zu benutzen 200. Fehrs-Sachs-Mükes Kultur anaerober Bakterien 359. Festigkeitsbestimmung nach Brinell 456. Fibrillen, koUagene, s. unter koUagene Fibrillen. Filtrierapparat nach Uhlenhuth-Wei- danz 240. Fischeis vitale spezifische Nerven- färbung 154. Fischers Theorie der Metachromasie 147. Flechten, granitbewohnende 361. — , Physciongehalt 255. Fleischraan nsDarstellung der orga- nischen Bestandteile des Zahn- schmelzes 316. Flemmings Dreifarbengemisch 157. — Flüssigkeit, Fixieren feiner Plas- mastrukturen 351. — — , Fixierung von Blut 329. — — , — — Cysticercus 478. — — , Helix 204. — — , — — Hühnerembryonen 484. — — . — — Mitochondrien 475. — — , — — Sipunculu.s 482. — — , Modifikation nach Katz 111. " — . Meves 484. — — , Wirkung 158. Flüssigkeiten, kristallinische 368. Fluorür, Nachweis von Nerven 499. Fluorwasserstoffsäure, Fixierung von Pflanzengewebe 123. — , Gefäße dafür 123. Flußspat, Färbung durch Kathoden- strahlen 130. Formalin-Eisessig , Müller- Verfahren nach Katz 113. Formol, Fixierung von Blut 329. — . — ~ Iris 353. — , - — Labyrinth 109 ff. — , Untersuchung von Spirochäten 237. Formol - Ameisensäure -Vergoldungs- verfahren nach Wunderer 229. Fuchsin, Färbung von Bakterien 504. Funcks Mikrotomkonstruktion 53. Funkia, Zellteilung 254. (jadolinit , Mikroskopische Unter- suchung 368. Gages Rekonstruktionsmethode 73. Gälesescus Neurogliafärbung 422. Gallenkapillare, Färbung nach Le- tuUe-Larrier 95. Gandolfis Paraffin - Celloidineinbet- tung 421. Ganglien, Untersuchung nach Michai- low 499. Gasbestimmung bei Bakterienkul- turen nach Seiffert 359. Gase, Bakterien 367. — , Mikroanalyse 367. Gaslicht-Papiere 450. — -Platten 450. Gefriermikrotom. Allgemeines 289 ff. — , Benutzung nach Wolft' 169. Gefriertisch nach Wolff 169. Gefriervorrichtung von Krause 289. Gehirn, Färberaethode nach Lario- noff 102. 34* 532 Sach- Register. Gehuchtensche Flüssigkeit, Fixierung der Niere 344. Geißelfärbung nach Harrison 357. (ielatine, Einbettung von Wirbel- losen 178. Gelatine -Formol, Aufkleben von Schnitten 343. Gelbfilter nach Pringsheim 474. Gerinis Methode, Nerven der Hühner- embryonen zu untersuchen 498. Gewebsflüssigkeiten , koagulierte, akzessorische Metachroraasie 152. Giesons Färbemittel, modifiziert von Blochmann 477. Giesonsche Flüssigkeit , Fixierung von Sipunculus 482. — — , — — koUagenen Elementen 495. ( xieson - Blochmann - Schubergs Me- thode zur Färbung der koUage- nen Fibrillen 77. < Ülsonsche Flüssigkeit, Fixierung der Echinoderiden 210. — — , — von Ostracoden 476. (xiltays Methode , Mikrotoramesser abzuziehen 124. — Mikroskoplampen 1(J3. Gitterfasern der Leber, Färbung 347. Glaswolle, Filtrieren von Agar 240. Glia, Färbung nach Bielschowsky 106. Glomeruli der Niere, Untersuchung nach Takayasu 94. Glyzerin, Wirkung auf Metachroma- sie l.m Glyzerineiweiß, -\uf kleben von Schnit- ten 343. Gold, Nachweis durch Phosphorsalz- perle 129. Goldchlorid-Osmiumsäure , Fixierung des inneren Ohres 110. Goldlüsungen , kolloidale , optische Eigenschaften 131. Goldschmidts Methode, Nervensystem von Ascaris zu untersuchen 479. Golgis Methode, Färbung des Riech- organs 354. — — , Modifikation von Lachi 334. — — . — — Larionoff 103. Golgi Holmgrenscher Apparat, Fär- bung nach Cajal 104. (Gonokokken, Gärvermögen 121. — , Kultur nach Rothe 121. Gordius, Larven 210. Gottbergs Methoden der Spirochäten- untersuchung 238. gradsichtiges Prisma nach Königs- berger 287. Gramsche Färbung, Modifikation \(>n Dreyer 239. — — , NicoUe 239. Grochmalickis Methode , Linsenrege- neration der Knochenfische zu untersuchen 236. Guilliermond-Mawas' Methoden, Gra- nula der Mastzellen zu färben 330. Hämalaun, Färbung von Knorpel 494. — , — — Niere 346. Hämalaun-Eosin, Färbung der Unter- kieferspeicheldrüse 227. Hämatoxylin , Färbung depigmen- tierter Irisschnitte 354. — , Metachromasie 146. — , molybdänsaures, Färbung der Nerven nach Kodis 208, 209. — nach Hansen , Färbung von Pflanzenzellkernen 364. — — Retterer, Färbung der Niere 346. — - Walter 339. Hämatoxylin-Orange G, Färbung von Ganglienzellenplasma 209. Härtebestimmung nach Brinell 456. Hahns Paraffineinbettung 184. Haltbarkeit mikroskopischer Präpa- rate 397. Hamburgers Injektionsmethode 1. Hammars Methode, Thymus der Teleostier zu untersuchen 497. Hamster , intrauterine Entwicklung 223. Hansens Bindegewebsfärbung 151. — Eisenhämatein , s. Eisenhäma- toxylin. — Knorpelfärbung 151, 492. — Methylenblaufärbung 494. — Theorie der Metachromasie 147 tit". Hardestys Modifikation des Ran- vierschen Vergoldungsverfahrens 355. Harnblase, Ganglien 499. Harrisons Geißelfärbung 357. Hatas Anaerobenkultur 247. Hausschwamm, Kultur 248. — , Nachweis 248. Haut, Fixierung nach Rawitz 389. — , Pigmentuntersuchung 495. — . Untersuchung nach Unna 495. Hefe, Kristalloid 250. — , Untersuchung nach Kohl 2.50. — , Zellkern 250. Sach- Register. ,533 HeklenhainsDeckglaskleiumpinzetten 400. — Dejodierungsverfahren 398. — Kongo-Korinth 40l. — Methode, Osmium in Dauerprä- paraten zu erhalten 400. — Pikroblauschwarz 401. — Yanadiumhämatoxylin 401. Heidingers Methode, Vaucheria zu untersuchen 253. Heinemanns Kartoffelersatz für Bak- terienkulturen 358. Heinzerlings Methoden . Diatomeen zu untersuchen 125. Helds Plasmafärbung 21ii. heliotaktische Organismen . Licht- fallenuntersuchung 474. Helix, Chromidien 204. Hemipteren, Ovarium 81. Hendersons Methode, Dytiscus zu untersuchen 83. Hermans Methode, Tuberkelbacillus zu färben 118. Hermanns Flüssigkeit, Fixierung von Fasciola 478. — — , Knorpel 492. — — , — — Rana, Darmepithel 485. — — , — — Sipunculus 482. — — , Tethys 206. — — , Modifikation von Katz 111. Hertwigs Flüssigkeit, Fixierung von Alcyonum 481. Herz, Färbung 93. — , Präparation nach Stamer 92. — , supravitale Untersuchung nach Michailow 337. — , Z-Streifen 405. Herzogs Methode, Erythrocyten zu färben 214. Heusners Objekttisch mit auswechsel- baren Tischplatten 62. — Stativ für Vertikalaufnahmen 432. Himmlers mikrophotographischer Ap- parat 465. — Mikroskope 465. Hirudineen, Bauchstrang 326. Hoden, Fixierung nach Rawitz 3iil. Höckes Methode, Pankreas zu unter- suchen 349. Hoehls Schnittverdauungsmethode 221. Hoffmanns Methode, chitinisierte Or- gane zu untersuchen 203. — — , Tomocerus zu präparieren 202. — Mikroskopierlampe 203. — Nelkenölkollodium 79. 80. 81. Hoffmanns Platinchlorid - Sublimat- Eisessig- Alkohol, Fi.xiermittel 202. Hofstens Methode, Turbellarien zu untersuchen 85. Holothurien, Färbung nach Becher 2 11 ff. Holzessig, Präparation von chitini- sierten Organen nach Hoft'mann 203. Hornisse, Spermatozyten 475. Hoyers Injektionstechnik 112. Hubersche Methylenblaufärbung, Un- tersuchung des Riechorgans 355. Hünes Methode der Tuberkelan- reicherung 509. Huhn, Amnion, Untersuchung 94. — , Embryonen 338, 484. — , Oocyte 501. Hund, Zunge, Färbung nach Heiden- hain 406. Hvdrochinonlösung nach Curreri 335. — — Kallius 335. hydrolvtische Spaltung der Farb- stoffe 147 ff. Ichthyobdellien, Neuroglia 327. Igel, Ei 107. Ignatowskys Beleuchtungseinrich- tung für Metallmikroskope 434. — Spiegelkondensor 64, 438. Immischs Methode, Schleimhaut der Mundhöhle zu untersuchen 342. Indol, Nachweis nach Buard 361. — , — — Nonotte-Demanche 361. Indophenolblau , Färbung von Bak- terien 504. Injektion mit Serumtusche 199. Injektionsapparat Hoyers 112. Injektionsmassen nach Hamburger 1. — — Landau 226. Inversion der Färbung bei Bakte- rienzellen 504. Iris, Depigmentierung nach Alfieri 353. — , Untersuchung nach Klinge 352. Japanische Aufklebemethode 343. Jennersche Mischung, Färbung von Blutzellen 215. Jenner- Maysche Flüssigkeit, Färbung von Bakterien 240. Jodbehandlung von Sublimatpräpa- raten, Einfluß auf die Haltbar- keit 398. Jodgrün-Säurefuchsin, Färbung von Knorpel 492. 534 Sach-Eegister, Färbung von Blut- Juels Flüssigkeit, Fixierung von Uredineen 366. .Turewitschs Kartoffelbouillon 358. — Tuberkelkultur 358. Justierlineal nach Leiß 367. Kalk, Nachweis nach Merkel 228. Ivallius' Methode, Amphibienlaich zu untersuchen 500. — Reduktionsverfahren 335. Kanadabalsam, entfärbende Wirkung 399. — . neutraler, Wirkung auf Schnitt- färbungen 399. — , optische Wirkung 400. Kanten , ultramikroskopische , Sicht- barmachung 424 ff. Kapillare, Kultur von Bakterien 360. — . Untersuchung von Blut 486. Karbolfuchsin körperchenschatten 214. Kartoffeln, rote, Nährboden für Bak- terien 502. Kartoft'elersatz für Bakterienkulturen 358. Kartoffelnährbouillon nach Jurewitscli .358. Kassianows Methode. Alcyonum zu untersuchen 481. Katz' Entkalkungsflüssigkeit 111 ff. — Fixierungstlüssigkeit 111 ff". — Methode, inneres Ohr zu unter- suchen 109. Kaufmans Methode, Saprolegniaceen zit kultivieren 365. Keimdrüsen von Tenebrio 79. Kernschwarz, Färbung der Zellwände 363. — -Safranin, Färbung von Pflanzen- zellen 363. Kittlitz' Einbettungsverfahren 352. Kleinenbergsche Flüssigkeit, Fixie- rung von Sipunculus 482. Klinges Methode, Iris zu untersuchen 352. Knochen, P^ntwicklung 494. — , Untersuchung nach Disse 494. Knochenfische , Linsenregeneration 236. — , Nebenniere 225. — , Thymus 497. Knorpel, Färl)ungen, Theoretisches 151, Anm. — , Untersuchung nach Hansen 492. — , — - Krauß 493. Knorpel, Untersuchung nach Nowi- koff 491. Ivnorpelgrundsubstanz, Metachroma- sie 146, 149 ff". Kobaltcochenille nach Rawitz 393. Kodis" Methode der Nervenfärbung 208. Königsbergers gradsichtiges Prisma 287. Kohls Methoden, Hefe zu untersuchen 250. Kohlensäure, feste, für Gefriermikro- tom 290. Kohlensäurepatronen nach Krause 293. koUagene Elemente, Färbung mit Säurerubin 219. — — , Fixierung und Färbung 495. — Fibrillen, Färbung nach Gieson- Blochmann-Schuberg 77. — — . Mallory 77. Kolloide, Ausflockung 259. Kolossowsche Färbemethode , Fär- bung von Herzpräparaten 93. Kongofarben, Färbkraft alkoholischer Lösungen 409. — , Haltbarkeit der gefärbten Schnitte 398, 399. Kongokorinth G, Färbung mit alko- holischer Lösung 409. Kopschs Fixierflüssigkeit, Präparation von Helix 205. Krauses Gefrier- und Kühlvorricli- tung für das Mikrotom 289. — Waschglas für mikrotechnische. Zwecke 300. Krauß' Methode, Knorpel zu unter- suchen 493. Kreibichs Silberimprägnation von Bakteriengeißeln 118. ivresylviolett RR, Färbung von Chordaknorpel von Siredon 493. ivreuztisch mit automatischer Ein- stellung nach Engel 60. Kristalle, flüssige 369. Kristallisationsmikroskop Lehmanns, modifiziert von Mügge 367. Kristall violett -Ammoniumkarbonat, Färbung des Tuberkelbacillus 119. Kröte, Biddersches Organ 224. Kroghs Methode, kleine Gasmengeu zu untei'suchen 367. Kruziferen, Fixierung 512. Kryolith , mikroskopische Unter- suchung 368. Kühlvorriclitung von Krause 289. Sach- Register. 535 Kiilit'erliäni.'Vtoxylin, Färbung- von Tiiberkelbazillen 501. Kupfforsche Zellen , Naclnveis 347, 348. Kutschers Methode , Mcningococcus zu züchten 120. Ijabyrinth , Priiparation nach Katz 111. Lachis Modifikation der (iolgi- Fär- bung 334. Lacinularia, Untersuchung" nach Ham- burger 80. Lactarien, Milchsaftzellen 254. Laich, Amphibien, Entfernung der Gallerthülle 500. Lampe nach Giltay 1(33. — — Hoftmann 203. — — Tröster 75. Lams' Verfahren, Froscheier zu unter- suchen 109. Landaus Injektionsmassen 226. Lanes Chromsublimat 96. — Methoden , Langerhanssche In- seln zu untersuchen 96. Längs Gemisch zum Fixieren 85. Langerhanssche Inseln, Untersuchung nach Lane 96. Larionoffs Modiükation der Golgi- schen Methode 103. Leber, Fixierung nach Rawitz 389. — . Gitterfaserfärbung 347. — , Granulafärbung .346. — . Isolierung der Leberzellen 225. — -, Kupffersche Zellen, s. diese. — , Stauungscirrhose 347. — , Stützsubstanz , Untersuchung nach Maresch 225. Leberegel, Fixierung und P^ärbung 478. Le Dantecs Kultur der Anaeroben 360. Lederhaut, Amphibien 495. Leeuwen-Reijnvaans Methode. Zell- wände zu färben 363. Lehmanns Kristallisationsmikroskop, modifiziert von Mügge 367. Leiß' Justierlineal 367. — Objekttisch für metallurgische Mikroskope 367. Lehevres Methode, Niere zu unter- suchen 344. Lendvais Thermostatenheizung 303. Lenhosseks Fixierungsgemisch, Fixie- rung feiner Plasmastrukturen 351. — — , — des Amnions des Hühn- chens 94. Lepra, Versilberung 506. Letulle-Larriers Methode, Gallen- kapillare zu untersuchen 95. 1 .eucit, mikroskopische Untersuchung 368. Leukocyten, amöboide Bewegungen, Beobachtung 490. — , Färbung mit Eosin 486. — . — nach Aßmann 486. — , — — Flemming 162. — , — — Weidenreich 489. — , Präparation nach Pollitzer 89. Levaditis Versilberungsmethode, Nachweis der Pigmentzellen 496. Lichtfalle, Methodik nach Prings- heim 474. Lichtgrün, Färbung, der Zellwände 363. Liefmanns Kultur anaerober Mikr(»- ben 121. Linse, Regeneration bei Knochen- fischen 236. — , Spinnenaugen, Behandlung nach Widmann 476. Lithionkarmin, Aufkleben der damit gefärbten Schnitte 343. Lockes Modifikation der Ringerschen Lösung 499. Löslichkeitsbestimmungen . ultra- mikroskopische 73. Loewits Methode, Erythrocytenmem- bran zu färben 88. Lorlebergs Methode , Nervensystem der Ascidien zu färben 208. Lubenaus Eigelbnährböden 243. — Typhusanreicherung 242. Luft, flüssige, für Gefriermikrotom 290. Lumbalanästhesie, Einfluß auf Nissi- sche Granula 3.32. Lunghettis Methode, Faserknorpel zu färben 306. Lymphknoten, elastische Fasern 217. Magen, Fixierung nach Rawitz 388. Magenta-Indigkarmin, Färbung von Blatta-Chromosomen 207. Magentarot, Färbung der Ichthyob- dellier .327. Magnesiumsulfat , Fixierung von Meerestieren 481. M.alachitgrün , Färbung von Bakte- riensporen 239. Malaehitgrünagar nach Neumann 245. 536 Sach- Register. Malachitgrünagar nach Padlewski 508. — — Peabody-Pratl 119. — — Vial 244. Mails Modifikation der Mallor3sclien Bindegewebsfärbung 221. Mallorys Färbung, Cestoden-Genita- lien 480. — — , koUagene Fibrillen 77. — — , modifiziert von Mall 221. — — , Nowikoif 85. — — , Nebennierenmark 498. — — , Nerven 208. — — , Ostracoden 47G. Malpigliische Körperchen der Niere, Präparation 95. Mandelbaums Spirochätefärbung, x\- tale 115. Marchands Blutfi.\ierung 328. Mareschs Methode, Stützsubstanz der Leber zu untersuchen 225. Marinos Methode, Anaerobe zu iso- lieren 121. Marktanner-TurneretschersMuseums- mikroskope 456. Marpmanns Methode , Benzoesäure nachzuweisen 127. — — , marine Diatomeen zu sam- meln 126. Martinis Metiiode. Nematoden zu untersuchen 85. Mastzellen, Färbung nach Flemming 162. — , — — Guiliiermond -Mawas 330. — , Mikrochemie der Granula 331. Mastzellenkörner, Färbung. Theore- tisches 146, 149, 150.' — , — mit Safranin 161. Masurs Methoden, Schmelzpulpa zu untersuchen 220. — Verdauungsflüssigkeit 222. ^laternas Vakuum -Paraffinofen 439. May - Grünwalds Gemisch . Färbung von Blutzellen 215. Meerschweinchen, Gehörorgan 100. Meiklejohns Methode, Hühnerembryo- nen zu untersuchen 338. Mencls Methoden , Hirudineen zu untersuchen 326. — Safranin-Methylenblau 117. Meningokokken, Gärvermögen 121. — , Kultur nach Kutscher 120. -Merkels Kalknachweis 228. Mertons Methode, Tethys zu präpa- rieren 206. Merulius, s. Hausschwaram. Meßmikroskope von Zeiß 460. Metachromasic , akzessorische 151 ff. — , Fischers Theorie 147. — . Hansens Theorie 147 ff. — , Michaelis' Theorie 146. — , Röthigs Theorie 146, Anm. metachromatische Ktirnchen , Bak- terien 118. — — , Mastzellen 331. Metallmikroskop , Beleuchtungsein- richtung nach Ignatowsk}^ 424. — , Objekttisch von Leiß 367. — von Winkel 458. Methylenblau, Färbung von Knorpel nach Hansen und Krauß 494. — , — — Mastzellen 330. — , — — Nerven 154, 156, 210. — . — — Riechorgans nach Huber 355. — . — — Terminalkörperciien nach Wunderer 231. — , eosinsaures, Färbung von Blut 487. Methylenblau-Orange G, Färbung von Ganglienzellenplasma 209. — -Safranin, Färbung von Cestoden- Genitalien 480. Methylorange, Herstellung von Gelb- filtern 474. Metlij^lviolett, Metachromasie 146. Meves' Methode, Chondriosomen des Hühnerembryos zu untersuchen 484. — Modifikation der Fleuiraingschen Flüssigkeit 484. Meyers Methoden, Zellkern der Bak- terien zu färben 116. Michaelis" Theorie der Metachroma- sie 147. Michailüws Methode, Ganglien der Harnblase zu untersuchen 499. — — , Herzen supravital zu unter- suchen 337. — — , Nerven dos Endocardiums zu färben 228. — Modifikation der Cajalschen Ver- silberung 341. mikrochemische Methoden Schoorls 72. Mikroluminare von W^inkel 459. Mikrometerschraube Watsons 470. Mikrophotographie mit Paraboloid- kondensor 447. uiikrophotographischer Apparat von Himmler für stereoskopische Auf- nahmen 4(55. Sach- Register. ;^.j . Mikropolare von Reichert 45G. Mikroskope von Himmler 465. — — Seibert 465. — — Watson 467. — — Zeiß 460. Mikroskopierlampen nach Giltay 163. — — Hoflfmann 203. — — Tröster 75. Mikrotom, Benutzung nach Funck 53. Mikrotommesser, Abziehen nach Gil- tay 124. Milz. Färbung nach Heidenhain 406. — , Fixierung nach Rawitz 389. Milzbrand, Kapseln 507. — , Kultur nach Riizicka 360. — , .Sporoidmassen 360. — , Untersuchung nach Ruzicka 360. — . Versilberung 507. mineralogisches Mikroskop von Reichert 456. Mitochondrien, Biene, Ei und Embryo 201. — . Blatta, Färbung 207. — , Fixierung nach Benda 475. Mitosen, Autolyse 127. MoUs Präparate „zweiter Ordnung" 124. Moose, Zentrosome 254. Morbus Basedowii 223. Mückes Methode, Achlya zu unter- suchen 252. Mügges Verbesserungen an Leh- manns Kristallisationsmikroskop 367. MühlhäusersSedimentierungsmethode 245. MüUersche Flüssigkeit, Einfluß auf die Haltbarkeit der Präparate 397. Mundhöhle, Schleimhautpapillen, Un- tersuchung nach Immisch 342. Museumsmikroskope nach Marktan- ner-Turneretscher 456. — von Watson 469. Muskelfasern, Färbung nach Tlioma 329. — , glatte, akzessorische Metachro- masie 451. Muskulatur, gestreifte, Färbung nach Petersen 99. Myelocyten, Untersuchung nacli Butterfield 214. Mytilicola, Präparation 83. Myxococcus, Kultur 242. Myxomyceten, Kultur 250. JNabias' Versilberungsverfahren 206. — — , modifiziert von Merton 206. Nachets Schaukelmikroskop bei ste- reoskopischen mikrophotographi- schen Aufnahmen 71. Nakaos Nachweis der Tuberkel- bazillen 510. Naphtholblau, Färbung von Bakte- rien 502. Nathans Verfahren, Kupffersche Zel- len nachzuweisen 348. Natriumthiosulfate zum Dejodieren nach Heidenhain 398. Nebenniere, Injektion nach Landau 226. — , Knochenfische 225. — , Mark 497. Nelkenölkollodiuni nach Hoffmann 79, 80, 81. Nematoden, Präparation 85. Nephrodium, Sporogenesis 250, 251. Nereis, Regeneration 205. Nerven, Endocardium 228. — . Färbung nach Curreri 334. — , — — Fischel 154. — , Fixierung nach Takahashi 333. — , Nachweis mit Fluorür 499. — , — nach Gerini 498. — , Regeneration, Untersuchung nach Perroncito 97. — , Trommelfell 228. — , Versilberung nach Carreras 47.'). Nervenfasern, Färbung nach Biel- schowsky 105. — , - — Cajal 232. — , — — Rachmanoft' 102. — , periphere, Färbung nach Biel- schowsky-Brühl 100. Nerventibrillen. Färbung nach Michai- low 341. — , — — Walter 339. Nervensystem der Ascidien 208. Nervenzellen , chromatophile Sub- stanz, Färbung nach Rachmanoff 102. Neumanns Malachitgrünagar 245. Neumayers Celloi'dineinbettung 38. Neuroglia , Färbung nach Gälesescu 422. — , IchthyobdeUier , Färbung naLÜ Perez-Gendre 327. Neutralrot, Färbung von Mastzellen 330. — , Metachromasie 146. Niere, Fixierung nach Rawitz .389. — , Glomeruli, Untersuchung nacli Takayasu 94. 538 Sach- Register. Niere, Malpigliisclie Körperchen, Prä- paration 95. — , Präparation nach Lelievre 344. — , — Ketterer 344. Nierenpapille, Kaninchen, Färbung nach Heidenhain 408. Nilblau, Hydrolyse 147, Anm. Nielblausulfat , Färbung von Bakte- rien 503. Nirensteins Methode. Giftdrüsen der Salamander zu untersuchen 497. Nissls Färbemethode, modifiziert von Rodenwaldt 332. — Granula , Einfluß der Lumbal- anästhesie 332. — Seifenmethylenblau, Färbung von Nerven 479, 480. Nitrocochenille nach Rawitz 392. Nitrohämatein nach Rawitz 391. Nonotte-Demanches Methode, Indol nachzuweisen 3G1. NowikofFs Methode, Cypris zu unter- suchen 476. — — , Knorpel zu untersuchen 491. — Modifikation der Malloryschen Färbung 85. Nymphen von Ephemeriden , Präpa- ration nach Düi'ken 81. Objektive von Winkel 4.58, 459. Objekttisch für Metallmikroskope nach Leiß 367. — mit auswechselbaren Tischplatten nach Heusner 62. Oedogonium, Untersuchung mit Wis- selinghs Lösungsmethode 124. — , Zellwandbildung 126. Oenothera, Pollenuntersuchung 256. Oes' Verfahren, Autolyse der Mitosen zu beobachten 127. Oesophagus, Fixierung nach Rawitz 388. Ostergrens Betäubungsmethode 483. Ognews]\lethoden, Biddersches Organ der Kröte zu untersuchen 224. (»hr, Untersuchung nach Katz 109. Olives Methode, Uredineen zu fixie- ren und zu färben 366. Olts Aufklebemethode 343, ,5ol. Ophiopsita, Entkalkung 204. Ophiuren, Drüsen 483. Orange G. Färbung von Erytliro- cytenmembranen 88. orthomorphes Stereoskop von Bohr- Köhler 282. Ortmanns Methode, Fasciola zu unter- suchen 478. OS maxillare, Untersuchung 331. Osmium, reduziertes, löslich in Ka- nadabalsam 400. Osmium - Holzessig , Färbung \(in Ganglienzellen 209. Osmiumnetze der Ganglienzellen 205. Ostracoden, Medianauge 476. Ovarium, Hemipteren 81. radlewskis Malachitgrünagar 508. Pagetkrebs, Färbung nach Flemming 162. Paludina, Chromidien 204. — , Eibildung 204. Pankreas, Fixierung nach Rawitz 389. — , Untersuchung nach Hocke 349. Paraboloid, Historisches 188. Paraboloidkondensor , Mikrophoto- graphie 446. — von Seibert 465. — — Zeiß 459. Paraffin, Einbettung nach Hahn 1S4. Paraffin-C'elloidin, Einbettung nach Gandolfi 421. Paraphenylendiarain , Färbung von Bakterien 503. Parietin, Mikrochemisches 255. Peabody-Pratls Methode, Typhus zu kultivieren 120. Penis, elastische Fasern, Färbung 222. Perez-Gendres Methoden, Ichthyob- dellior zu untersuchen 327. l^erowskit, mikroskopische Unter- suchung 368. Perroncitos Methode, Regeneration der Nerven zu untersuchen 97. Pestas Methode, Mytilicola zu unter- suchen 83. Petersens Chromhämateinfärbungen 99. — Metliode, vesicula seminalis zu untersuchen 97. Pferd , Herz , Nervenuntersuchung 337. Pflanzengewebe,Fixierung mit C'hroni- säure 123. — , — — Fluorwassorstolfsäure 123. Phosphorsalzperle , Metallnachweis 129. Phosphorwolframsäure- Eisessig , Fi- xiormittel 385. Phylloxera, Präparation 84. Sach - Kcgister. 539 l'hyscion, Mikrochemisches 255. I'rotoplasiuafärbnng' nacli Petersen 99. IMs'mentzellen , Untersuchung nacli Schreiber Schneider 495. Pilcrinsäure nach Cajal, Färbung von Blatta-Chromosomen 207. Pikrinsäure -Fuchsin, Färbung von Balvterien 505. — -Xyloi, Nachfärbung nach Becher 2P2. 1 'ikrinsublimatessigsäuro . Fixierung von Knorpel 493. l'ikrobhiuschwarz nach Heidenhain 401. IMkromagnesiakariuin . Färbung von liirudineen 326. Pilze, Kultur 248. Pinguicula, Gehalt an Benzoesäure 127. Placentaagar für Meningococcus 120. Placophoren, Präparation 85. Plagiostoma, Spermatogenese 209. Plasma, Färbung nach Heidenhain mit Vanadiumhämatoxvlin 401. — , — — Held 219. — , Fixiermittel 20(). Plasmaverbindungen, Färbung nach Schuberg 351. — , — — Szily 350. Plasmazellen, Färbung nach Fleni- ming 162. Platin, Nachweis durch Phosphorsalz- perle 129. Platinchlorid-Sublimat-Eisessig-Alko- Jiol, Fixiermittol nach Hotfmann 202. Polistes, Fixierung und Färbung 328. Pollitzers Deckglasraarkierungsme- thode 91. — Methoden der Blutuntersuchung 89. Polychäten, Regeneration 205. Polyporus, Kultur 366. Popoffs Methode, Carchesium zu untersuchen 205. — — , Helix und Paludina zu unter- suchen 204. Porodkos Methode, Agar zu tiltrieren 240. Porphyridium, Pyrenoid 511. Präparierstative von Reichert 456. Friraula, hautreizende Stoffe 364. Pringsheims Gelbfilter 474. — Lichtfallenmethode 474. Prisma, gradsichtiges, nach Königs- berger 287. Pryms Metliode der Blutentnahme 217. Pseudohermaphroditismus, Rana 500. Pseudomonas. Färbung 357. l'unktsubstanz , Hirudineenbauch- strang 326. Pyrenoide, Diatomeen 12(). — , Porphyridium 511. Pyronin -Methylgrün nach Pappen- lioim, Färbung von Blut 346. Quarz, mikroskopische Untersuchung 368. rvablsche Flüssigkeit. Fixierung der Niere 345. Rachmanoffs Methode, Nervenfasern zu färben 102* Rana, Darm, Rückbildung 485. — , Ei 108. — , Fixierung nach Rawitz 388. — , Ovarium 108. — , Pseudo-Hermaphroditismus 5Stereo- skop 282. Romanowskys Färbung, Blut 487. — — , Modifikation von Brückner 472. Romanowsky-Leishmansche Färbung, Blutuntersuchung 90. Rosams Mikrobenfärbung 117. Rosenblatts Versuche über Gram- Färbung 239. Rosenthals Methode, Schleimzellen zu untersuchen 76. Rothes Methode , Gonokokken zu kultivieren 121. Rubaschkins Methode, Celloidinserien herzustellen 33. — — , Vogelembryonen zu unter- suchen 236. Russula, Milchsaftzellen 254. Rilzickas Methode, Milzbrand zu färben 360. oachs-Mükes Sedimentierungsverfali- ren 245. Safranin, Allgemeines 160, 161. — . Färbung von Sipunculiden 483. — . löslich in Kanadabalsara .399. — , Metachromasie 146. Safranin - Blochmannsches Gemisch, Färbung von Gordius 210. — -Lichtgrün, Färbung von Pflanzen- zellen 3()3. Salamandra, Fixierung nach Rawitz 388. — . Giftdrüse 497. — , Larven, Fixierung und Färbung nach Heidenhain 405. Salings Entchitinisierung 80. — Methode , Tenebrio zu unter- suchen 79. Salomons Methode , Streptokokken zu kultivieren 241. Saprolegnia, Fixierung und Färbung 251. Saprolegniaceen, Kultur nach Kautf- man 365. Sarkom , Untersuchung nach Flem- mings Dreifarbengemisch 162. Sarracenia, Pollen 254. Sauers Säurerubin 346. Säure-Alizarinblau BB nach Rawitz 393. — -Alizaringrün G nach Rawitz 395. säurefeste Bakterien , Färbung nach Betegh 358. Säurefuchsin, Färbung von Erythro- cytenmembranen 88. Säurefuchsin -Pikrin, Färbung des Bindegewebes, Theoretisches 151. Säurerubin, Färbung der koUagenen Elemente 219. — nach Sauer, Protoplasmafärbung 346. Schaifers Methode, Unterkieferspci- cheldrüse zu untersuchen 227. Schaukelmikroskop nach Nachet 71. Schepotieffs Methode, Echinoderiden zu untersuchen 209. — — , Gordiuslarven zu präparieren 210. Schläfenbein, Untersuchung nach Katz 109 ff. Schleim, Färbung nach Heidenhain mit Vanadiumhämatoxylin 401. — , Metachromasie 146, 149 ff. Schleimhaut, Färbung nach Zilliacus 233. — , Uterovaginalkanal 233. Schleimzellen, Untersuchung nach Rosenhauch 76. Schmelzpulpa , Untersuchung nacli Masur 220. Schmidts Methode der Blutunter- suchung 491. Schnittverdauungsmethode Hoehls, Untersuchung der Schmelzpulpa nach Masur 221. Schoorls mikrochemische Methoden 72. Schreiber -Schneiders Methode, Pig- mentzellen nachzuweisen 495. Schriddes Methode , Speiseröhren- epithel zu untersuchen 223. Schröders Methode. Skorpionskämme zu untersuchen 477. Schubergs Methode, Zellverbindungen zu untersuchen 77. — Modifikation der Gieson-Bloch- mannschen Färbung 77. Schumanns Verfahren, Darm zu fixit- ren und zu färben 348, 349. Sacli - Reff ist er. )41 .Schweteltropten , Mikrochemisches 257. Schwefelzink^ Einhigerung in Zell- wiinde "255. Setlimentierungsraethodc nach Bie- dert 245. — — Cziiplewski 245. — — Mühlhäuser 245. — — Sachs-Müke 245. Seiberts Mikroskope 465. — Objekttisch 465. — Paraboloidkondensor 465. Seifenmethylenblau nach Nissl. Ner- ventarbung 479, 480. Seiflferts Gasbestimmung bei Bakte- rienkulturen 359. Sekrete, akzessorische Metachromasie 152. Selenskys Methode, Sipunculus zu untersuchen 481. Serumtusche. Injektionsmittel 1, 199. Sexualorgane, kavernöse Körper 222. Sichtbarmachung im Mikroskop, All- gemeines 424 fF. Sihlers Verfahren, Färbung der End- körperchen nach Wunderer 231. Silber, Nachweis durch Phosphor- salzperle 129. silbernegative Bakterien 506, 507. silberpositive Bakterien 506, 507. Sineffs Thermostat 7(i. Sipunculiden, Urnen 481. Sjövalls Fixierungsflüssigkeit. Präpa- ration von Helix 205. Skorpion, Fixierung und Färbung 328. — , Kamm 477. Sonnenbrodts Methode, Oocyte des Huhns zu untersuchen 501. Spathyema, Antheren, Ovarien 25(5. Speesches Paraffin zum Einbetten 352. Speiseröhre, Epithel 223 Spektrum, Projektion nach Königs- berger 287. Spermatogenese, Blatta 207. — , Dytiscus 83. Spiegelkondensor, Beobachtung von Bakteriengeißeln 237. — . Historisches 188, 195. — von Leitz nach Ignatowsky 64, 438, 465. Spinalganglien, Plasmakörnchen 232. Spinnen, Augen 476. — , Entpigmentierung 477. Spirillum volutans. Chromatinbänder 239. Spirochaete, Färbung mit Eisenhä- matoxylin 238. — , — — Giemsa-Lösung 238. — , — nach Romanowsky-Bruckner 472. — , Untersuchung nach Gottberg 238. — , — — Siedentopf 429. — , Vitalfärbung 115. — , Züchtungsversuche 508. Spirogyra, Zygoten 251. Spirorbis, Präparation 87. Sporoidmassen, Milzbrand 360. Ssobolews Celloidineinbettung 110. Stahl, Struktur 366. Stamers Methoden das menschliche Herz zu untersuchen 92. Stanniussche Körperchen der Lopho- branchier 226. Stative, Allgemeines 453. — von Reichert 453. — — Winkel 458. Stauffachers Methode, Phylloxera zu untersuchen 84. Steins Methode, Streptobazillen zu kultivieren 242. Steinsalz, künstlicher Dichroismus 130. stereoskopische Mikroaufnahmen, Himmlers Apparat 465. — Mikrophotographien nacli (iui- eysse 71. Sterna, Primitivrinne 107. Sterzingers Methode, Amphiura zu untersuchen 207. Streptobazillen, Kultur nach Stein 242. Streptococcus, Färbung nach Hott- mann 240. — , -- — Jenner-May 240. — . Kultur auf kohlehydrathaltigen Nährboden 241. Striegauer Ton, Zusammensetzung 130. Stützsubstanz der Leber, Unter- suchung nach Maresch 225. Sublimat, Fixierung der Echinoderi- den 210. — . — von Knorpelgewebe 492. — , — — Ophiuren 483. — , — — Ostracoden 476. Sublimatalkohol , Fixierung von Ophiuren 483. Sublimat - Eisessig . Fixierung von Hühnerovarien 501. — — -Kochsalz, Fixierung der Iris 353. — -Pikrinsäure nach Zilliacus 233. 542 Sach- Register. Subliiuat-Trichloressigääure -Eisessig-, Fixierung nach Heidenhain 405. Sublimatpräparate, Dejodierung nach Heidenhain o98. — , Jodbehandhmg. EintiuÜ auf die Haltbarkeit 39S. Subtriessig, Fixiermittel nach Heiden- hain 405. Szilys Methode, Plasmaverbindungen darzustellen 351. iaenia, p]ml>rvonen, Untersuchung 87. rakahashisFixiermittelfiirNerven33o. Takayasus Methode, Nieren zu un- tersuchen 94. Tammes Fixierungsmittel für l'Han- zengewebe 123. Tannine, Mikrochemisches 13. Tee, Prüfung auf Echtheit 127. Teein, Mikrocliemisches 127. Teleostier, s. auch Knochenfische. Tellyesnickys Flüssigkeit, Fixierung der Mundhöhlenschleirahaut 342. Tenebrio, Entchitinisierung nacli Sa- ling SO. — . Keimdrüsen 79. rerminalkörperchen, Anamnion 22ft. Tetanus, Sporenfärbung 239. l'ethys, Ganglienzellen 206. Thermostat, Heizung nach Lendvai 303. — — — Öineif 76. Thionin, Färbung bei Rhabdomolgus 212. — , Metachromasie 146 ff., 150 ff. Thionin-Eosin, Färbung von Ophiop- sita 204. Thomas Methode, ^luskelfasern zu färben 329. J'hulins Methode , Muskelfasern (Er- gates) zu untersuchen 496. Thymus, Teleostier 497. Toluidinl)lau, Färbung der Bakterien 118. — , Haltbarkeit der gefärbten Schnitte 398, 399. — , Metachromasie 146, Toluidinblau-Hämatoxylin , Färbung von Gordius 210. Tomocerus , Kauwerkzeuge . Kopf- nervensystem 202. Ton, Absorptionsfähigkeit 130. Tonerde, faserähnliche 257. Tracheenkiemenmuskulatur, Epheme- riden 81. Trautmanns Methode, Dünndarm zu fixieren und zu färben 349. Triacidlösung, Modifikation von Ar- nold, Färbung der Blutzellen 215. — , panoptische, Färbung von Blut- zellen 215. Trincas Methoden, Bakterien zu fär- ben 118. Trikladen, Präparation 211. Triton , Fixierung nacli Kawitz 388. — , Larven, Fixierung und Färbung nach Heidenhain 405. Trösters Mikroskopierlampe 75. rroramelfell, Nervenfärbung 228. Tropidonotus, s. Ringelnatter. Trj^panosomen, Färbung nach Gott- berg 238. Tuberkel, Anreicherung nach Hüne 509. — . Färbung nach Betegh 358. — , — — (Jamus-Pagniez 501. — , - — Herman 118. — . Kultur nach Jurewitsch 358. — , — — Lubenau 243. — , Nachweis nach Nakao 510. — , Versilberung 506, 507. Turbellarien, Präparation 85. Typhus, Anreicherung nach Lubenau 242. — , Coffei'nanreicherungsverfahren 242. — , Nachwei? nach Buchholz 120. — , — — Conradi 509. — , — — Neumann 245. — , — — Padlewsky 508. -. — — Peabody-Pratl 119. — . — — Vial 244. \j hlenhuth - Weidanzscher Filtra- tionsapparat 240, Ulcus molle, Streptobazillen- Kultur 242. L'nnas dermatohistologische Metho- den 495. — Pepsinverdauungsmethode 236. Unterkieferspeicheldrüse , Untersu- chung nach Schaffer 227. Uredineen, Fixierung 366. Urnen der Sipunculiden 481. Urodelen, Zwischenniere 498. Uterovaginalkanal , Schleimhaut 233. Uterus senilis, Arterienuntersuchung 107. Saeh - Keg'ister. o43 V akuuni-I'araftinofen nach Materna 439. Vanadiuiuhäraatoxylin nach Heiden- hain 401. Vauclieria , Fixierung und Färbung •253. Vegetationspunkte. Färbung der Zellwände 3G3. Verattis Modifikation des Cajalschen Verfahrens 97. Verdauung, künstliche, Präparation von Lymphknoten 218. Verdiiuungstiüssigkeit nach Masur •222. Verdauungsmethode nach Hoehl, Untersuchung der Schmelzpulpa nach Masur 221. — — Unna 23G. Verdauungstrakt , Fixierung mit Phosphorwolframsäure -Eisessig 387. Verdauungsversuche an Pflanzen- zellencytoplasma öll. Vergoldung nach Wunderer 229. Versilberung des Golgi-Holmgren- schen Apparates nacli Cajal 104. — nach Carreras 473. — — Nabias 20(;. — — Wunderer 230. — — Yamamoto 50G, 507. — von Bakteriengeißeln 118. \'ertikalaufnahmen , Heusners Stativ 432. Verzärs Methode, Amnion des Hühn- chens zu untersuchen 94. Vesicula seminalis, Untersuchung nach Petersen 97. Vials Malachitgrünagar 244. Viktoriablau B , Färbung von Bak- terien 506. Vögel, Embryonen , Keimzellen 236. Volutin, Diatomeen 125. >V alters Hämatoxylin 3-39. — Methode, Nervenfibrillen zu fär- ben 339. Waschglas nach Krause 300. Wasserblau, Färbung von Binde- gewebe 213. Wasserblau-Safranin. Färbung nach Becher 213. Wassilieffs Verfahren , Blatta zu untersuchen 207. Watsons Mikrometerschraubo 470. — Mikroskope 467. — Museurasmikroskop 469. Weidenreichs Methode der Blut- untersuchung 489. Widmanns Methode , .Spinnenaugen zu untersuchen 476. Wildemans Färbung der Desmidia- ceen 365. Wilsons Methode, Nerven des Trom- melfells zu färben 228. Winiwarter-Sainmonts Methode nach Flemmings Verfahren zu färben 1.57. Winkels Metallmikroskop 458. — Mikroluminare 459. — Mikroskope 458. — Objektive 458, 459. Wirbellose, Einbettung in Gelatine 178. Wirtz' Bakteriensporenfärbung 239. Wisselinghs Lösungsmethoden 124. Wittmaacksche Fixierungsmethode 110. Wulffs Gefriertisch 169. — Methode, Gefrierschnitte zu be- handeln 178. Wolfrums Methode, Aderhaut des Auges zu untersuchen 218. Wrights Methode der Anaeroben- kultur, modifiziert von Burri 245. AVunderers Gaslichtpapiere und Gas- lichtplatten 450. — Methode, Terminalkörperchender Anamnien zu untersuchen 229. — Vergoldungsmethode 229. Versilberungsverfahren 230. X. Aanthoria, Physciongehalt 256. 1 amadas Methode , Blut zu unter- suchen 485. Yamamotos Methode der Bakterien- versilberung 506, 507. Youngs Methode, Cysticercus zu untersuchen 478. Zahnschmelz, organische Bestand- teile, Darstellung nach Fleisch- mann 316. Zeiß' Meßmikroskope 460. — Paraboloidkondensor 459. Zellkerne, Autolyse nach Oes 127. — . Färbung nach Flemming 161. — , ruhende , akzessorische Meta- chromasie 152. Zelluloidgefäße für Fluorwasserstotl- säure 123. 544 Sach- Register. Zellveibindungen,Uiitersuchungnach Schuberg 77. Zellwände, Färbung nach Leeuwen- Reijnvaan 3(33. — , — mit Schwefelzink 255. Zenkersche Flüssigkeit , Fixierung von Amphibieneiern 500. — — . Blut 329. — — , — — Iris 353. — — , — — Nebennierenmark 49H. — — . Niere 344, 345. — — . Ohr 110. — — , — — Plasmastrukturen 351. — — . — — Salamandergiftdrüsen 497. — — , Trypanosomen 238. Zenkers Flüssigkeit, Erlanger Modi- fikation 218. — — , Untersuchung auf Spirochä- ten 238. Zenker-Formol, Fixierung von Vögel- embryonen 236. Zentrosome, Moose 254. — . Untersuchung nach Leeuwen- Reijnvaan 254. Zilliacus, Schleimhautfiirbung 233. — , Sublimat-Pikrinsäure 233. Zimmermanns Modifikation der Biel- schowskischen Methode zur Dar- stellung derBindegewebsfibrillenS. Zunge, Fixierung nach Rawitz 389. — , Papillen 49G. Zwischenniere, Urodelen 498. Druck von Fischer & Wittig in Leipzig. ^ i ÜJH 1 ^