Z F Immunitätsforsch Exp Therap Originale 17.1913

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EX LIBR.1S

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M EPICAL SCHOOL
LlffinRAKY

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Zeitschr ift

fur

Immunitatsforschung

und experimentelle Therapie

1. Teil: Originate

unter Mitwirkung von

H. Apolant, Frankfurt a. M., M. Ascoll, Catania, V. Babes, Bukarest, 0. Bail, Prag,
E. F. Bashford, London, E. t. Behring, Marburg, 8. Belfantl, Mailand, A. Beared ka,
Paris, J. Bordet, Brfissel, A . Breinl, Liverpool, L. Brleger, Berlin, A. Calmette, Lille,
A. Dieudonng, Muncben, R. Boerr, Wien, M. Dorset, Washington, E. v. Dungern,
Heidelberg, P. Ehrlich, Frankfurt a. M., 8. Flexner, New York, U. Frledemann,
Berlin, P. Froseh, Berlin, G. Gaffky, Berlin, M. von Gruber, Miinchen, M. Hahn,
KOnigsberg i. Pr., A. Heffter, Berlin, L. Hektoen, Chicago, M. Jacoby, Berlin, C. 0.
Jensen, Kopenhagen, 8 . Kltasato, Tokio, W. Kolle, Bern, W. Kruse, Bonn, K. Land*
ateiner, Wien, C. Levaditi, Paris, L. von Liebermann, Budapest, F. Loefller, Greifs-
wald, Th. Madsen, Kopenhagen, C. J. Martin, London. E. Metschnikoff, Paris, L.
Mlehaelis, Berlin, B. Muir, Glasgow, C. Moreschl, Pavia, P. Th. Mtiller, Graz,
M. Nelsser, Frankfurt a. M., F. Neufeld, Berlin, F. Nuttall. Cambridge, B. Oster-
tag, Berlin, B. Paltauf, Wien, A. Pettersson, Stockholm, B. Pfeiffer, Breslau, E. P.
Pick, Wien, P. Bffmer, Marburg, C. J. Salomonsen, Kopenhagen, A. Schattenfrob,
Wien, CL Schilling, Berlin, Th. Smith, Boston, G. Sobernheim, Berlin, Y. C. Yaugban,
Ann Arbor, A. t. Wassermann, Berlin, W. Weichardt, Erlangen, A. Wladimiroff,
St. Petersburg, A. E. Wright, London, D. Zabolotny, St. Petersburg

herausgegeben von

L FRIEDBERGER R. KRAUS H. SACHS P. UHLENHUTH

(Berlin.) (Wien. 1 ) (Frankfurt a. M.) (Stra&burg i. E.)

Siebzehnter Band.

Mit 2 Tafeln, 13 Figuren, 35 Kurven im Text und 21 Tabellen auf Tafeln.

Jena

Verlag von Gustav Fischer
1913

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Alle Rechte vorbehalten.

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h

Inhaltsverzeichnis.

Heft L (Ausgegeben am 1. M&rz 1913.)

Soito

Browning, C. H., and Mackle, T. J., The relationship of the com¬
plementing action of fresh serum along with immune body to
its haemolytic effect with cobra venom — a contribution on the
structure of complement. [From the Pathological Laboratoires

of the University and Western Infirmary, Glasgow]. 1

Kashiwabara, M., Ueber die Inaktivierung der Komplemente durch
Schutteln. [Aus dem Biochemischen Laboratorium des Kranken-

hauses Moabit in Berlin] . 21

Bessemans, A., De importance respective des deux eonstituants de
Palexine dans le ph£nom£*ne de l’h^molyse. [Institut de Bact^rio-
logie de Louvain (Directeur: Prof. J. Denys). Laboratoire du

Prof. R. Bruynoghe] . 36

Znnz, Ed gar d, Recherches sur les modifications physico-chimiques du
sang au cours de Panaphylaxie. [Travail de Plnstitut de th£ra-
peutique de PUniversit£ de Bruxelles]. 47

Sata, A., Passive Uebertragbarkeit der Tuberkulinempfindlichkeit durch
Tuberkuloseserum und dessen Wertbestimmung durch dieselbe

Wirkung. [Aus dem Pathologisch-bakteriologischen Institut zu

Osaka, Japan.] Mit 5 Kurventabellen im Text. 62

Sata, A^, Untersuchungen fiber die spezifischen Wirkungen des Tuber-
kuloseserums durch Anaphylatoxinversuche. [Aus dem Patho¬
logisch-bakteriologischen Institut zu Osaka, Japan] ...... 75

Sata, A*, Untersuchungen iiber die spezifischen Wirkungen des Tuber-
kulosesemms durch Mischungsversuche von Tuberkulin und
Tuberkuloseserum. [Aus dem Pathologisch-bakteriologischen In¬

stitut zu Osaka, Japan.] Mit 1 Kurventafel. 84

Goss, W. J., Eine neue Methode zur Gewinnung des Antigens fur
die Wassermannsche Reaktion. [Aus der pathologisch-ana-
tomischen Abteilung des Institutes fur experimentelle Medizin

zu St. Petersburg]... 99

Weicbardt, Wolfgang, Ueber Proteotoxikosen. Ergiinzungen zu den

Bemerkungen Hermann Pfeiffers, Bd. 16, No. 1 dieser Zeitschrift 101

IV

Inhaltsverzeichnis.

Heft 2. (Ausgegeben am 15. M&rz 1913.)

Seite

Edmunds, Charles The action of the Protein Poison on Dogs:

A Study in Anaphylaxis. [From the Pharmacological Laboratory,

University of Michigan.] With 4 Curves in text.105

Adsersen, Vald., Ueber die angebliche Tetanustoxin neutralisierende
Wirkung des Neurins und des Betai'ns. |Aus dem Serum-
laboratorium der Kgl. Veteriniir- und Landwirtschaftlichen Hoch-
schule in Kopenhagen (Direktor: Prof. Dr. med. C. O. Jensen)] 135
Well, Rickard, and Coca, Arthur F., The nature of Anti-Anaphylaxis.
[From the Departments of Experimental Therapeutics and of

Experimental Pathology in the Medical College of Cornell Uni¬
versity, New York].141

v, Hellens, 0., Das Verhalten des Kaninchenserums zu der Wasser-
mannschen Reaktion. [Aus dem diinisehen Staats-Seruminstitut

zu Kopenhagen] .156

Bergel, S., Weitere expenmentelle Untersuchungen fiber Wesen und

Ursprung der Hamagglutination; die Entstehung der Spezifizitat 169

Prinzing, F., Ueber Meiostagminreaktion bei Typhus. [Aus dem
stiidtisclien Krankenhaus Charlottenburg-Westend. (Dirigierender

Arzt: Professor Dr. Umber)].176

Galli-Valerio, B., et Bornand, M., Note sur un serum precipitant
pour Falbumine d’Agaricus muscarius Linn. |Institut d’Hygitme
et de Parasitologie de l’Universite de Lausanne).. . 180

Metalnikov, S., et Strelnikov, J., Sur 1'origine des spermotoxines.

[Laboratoire Biologique de St-Petersbourg].186

Hara, K., Untersuchungen fiber die Eigenheinmung der Sera. [Aus
der Biologischen Abteilung (Prof. v. Dun gem) des Institutes
fur Krebsforsehung (Gcheimrat Prof. Czerny, Exzellenz).] Mit
4 Kurven im Text.209

Apolant, H., Ueber die Beziehungen der Milz zur aktiven Geschwulst-
immunitiit. [Aus der Abteilung fur Krebsforsehung (Prof.

H. Apolant) des Konigl. Institutes fur expenmen telle Therapie
in Frankfurt a. M. (Direktor: Wirkl. Geheimer Rat Prof. Dr.

P. Ehrlich).] Mit 9 Tabellenfiguren im Text.219

Lurk, A., Anaphylatoxin, Peptotoxin und Pepton in ihren Beziehungen
zur Anaphylaxie. Erganzungen und Richtigstellungen zu der
gleiehnamigen Arbeit von A. Besredka, H. Strobel und F. Jupille 233

Heft 3. (Ausgegeben am 3. April 1913.)

Zunz, Edgard, Reeherehes sur le pouvoir proteoclastique du 6ang au
cours de l’anaphylaxie. Premiere communication. Experiences
chez le cobaye. [Travail de l’lnstitut de thdrapeutique de l’Uni-
versitG de Bruxelles.] Avec 2 figures dans le texte.241

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Inhalts verzeichnis.

V

Zunz, Edgard, Recherches sur le pouvoir protfioclastique du sang au
cours de Panaphylaxie. Seconde communication. Experiences
chez le lapin. [Travail de PInstitut de th£rapeutique de PUni-
versite de Bruxelles.] Avec 1 figure dans le texte.265

Zunz, Edgard, Recherches sur le pouvoir prot^oclastique du sang au
cours de Panaphylaxie. Troisifeme communication. Experiences
chez le chien et considerations generates. [Travail de lTnstitut
de therapeutique de PUniversite de Bruxelles.] Avec 1 figure
dans le texte.279

Emmerich, Emil, Untersuchungen mit Eigelbantiseren, zugleich ein
Beitrag zu den Beziehungen der verschiedenen Eigelbarten zu-
einander. [Aus dem Institut fiir Hygiene und Bakteriologie der
Universitat StraBburg (Direktor: Geheimrat Prof. Dr. Uhlen-
huth)].299

Suklennlkowa, N., Ein experimenteller Beitrag zur „Anaphylatoxin“-
Frage. [Aus dem Institut Pasteur, Paris; Direktor: Prof. Dr.

E. Metschnikoff (Leiter: Prof. Dr. A. Besredka)] .... 304

De Waele, Henri, Inaction thromboplastique est g<5n6rale et commune

h toutes les substances introduites dans le sang. [Travail du
Laboratoire de Physiologie de PUniversite de Gand.] Avec
17 courbes dans le texte.314

Bessemans, A., Contribution h Petude de Panaphylaxie. [Institut de
Bacteriologie de Louvain (Directeur: Prof. J. Denys). Labo¬
ratoire du Prof. R. Bruy nog he]. 333

Isabolinsky, M., Salvarsan bei Milzbrand und Wut. [Aus dem

Bakteriologischen Laboratorium zu Smolensk] ..353

Armand-Delille, P., et Launoy, L., A propos des travaux recents de

MM. Bernstein et Kaliski sur les h£maties formolees.361

Heft 4. (Ausgegeben am 14. April 1913.)

Landsteiner, Karl, und Prasek, Emil, Ueber die bindenden und
immunisierenden Substanzen der roten Blutkorperchen. II. Mit-
teilung liber Blutantigene. [Aus der Prosektur des k. k.
Wilhelminenspitales in Wien].363

Bail, Oskar, und Rotky, Karl, Versuche fiber die Bildung von
bakteriolytischen Immunkfirpern. [Aus dem Hygienischen Institut
der deutschen Universitat Prag].378

Marie, A., Glandes surrSnales et Toxi-infections.420

Rondont, Pietro, und Oorettl, Guido, Ueber einige biologische Eigen-
schaften der Milz bei experimenteller Naganainfektion. [Aus dem
Laboratorium ffir allgemeine Pathologie der k. Hochschule Florenz
(Direktor: Prof. A. Lustig)].432

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VI

Inhaltsverzeichnis.

Seite

Hidaka, S., Zur Frage der Beziehungen zwischen Syphilis- und
Recurrens-Immunitat. [Aus der Koniglichen dermatologischen
Universitatsklinik zu Breslau (Direktor: Geheimrat Prof. Dr.

A. Neisser)] .443

Hirvisalo, K. F., Zur Agglutinationsresistenz der sogenannten Exsudat-
bakterien. [Aus dem Hygienischen Institut der Universitat
Helsingfors].449

Pfeiffer, Hermann, und de Crinis, M., Zur Kenntnis der Hamolysin-
vergiftung. [Aus dem Institute fur allgemeine und experimentelle
Pathologie der K. K. Universitat Graz (Vorstand: Hofrat Prof.

Dr. R. Klemensiewicz).] Mit 5 Kurven im Text.459

Nathan, Ernst, Ueber Anaphylatoxinbildung durch Agar. [Aus der
experimentell-biologischen Abteilung (Prof. H. Sachs) des Konigl.
Institute fur experimentelle Therapie in Frankfurt a. M. (Direktor:
Wirklicher Geheimer Rat Prof. Dr. P. Ehrlich)].478

Heft 5. (Ausgegeben am 3. Mai 1913.)

Surface, Frank M., The inhibiting effect of excess cow serum in

complement fixation with infectious abortion.487

Friedberger, E., Mita, S., und Knmagai, T., Ueber Anaphylaxie.
XXXIV. Mitteilung. Die Bildung eines akut wirkenden Giftes
(Anaphylatoxin) aus Toxinen (Tetanus, Diphtherie, Schlangen-
gift). [Aus dem Pharmakologischen Institut der Universitiit
Berlin; Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung
fiir Immunitiitsforschung und experimentelle Therapie; Leiter:

Prof. Dr. E. Friedberger)] .506

Jonas, Willy, Ueber die Wirkung verschiedener Serumarten auf das
durch Cobragift inaktivierte Komplement. [Aus der experimentell-
biologischen Abteilung (Prof. H. Sachs) des Konigl. Institutes
fiir experimentelle Therapie in Frankfurt a. M. (Direktor: Wirk¬
licher Geheimer Rat Prof. Dr. P. Ehrlich)] .539

Lippniann und Plesch, Sind die Leukocyten die Quelle der Kom-
plemente? [Aus der zweiten medizinischen Klinik der Charity zu

Berlin (Direktor: Geh. Med.-Rat Prof. Dr. Kraus)] .548

Rotky, Karl, Ueber die Spezifitat der von sensibilisierten Bakterien
abgesprengten bakteriolytischen Immunkorper. [Aus dem Hygie¬
nischen Institut der Deutschen Universitiit in Prag (Vorstand:

Prof. O. Bail)].555

Bail, Oskar, und Rotky, Hans, Gewinnung hamolytischer Fliissig-
keiten aufierhalb des Tierkorpers. [Aus dem Hygienischen In¬
stitute der Universitiit Prag].• . 566

Reyniann, G. C., Versuche fiber Antivibriolysinbildung neugeborener
Ziegen. (Anhang zur Abhandlung „Ueber Antikorperbildung neu¬
geborener Ziegern* im Bd. 12 dieser Zeitschrift.) [Aus dem Statens
Seruminstitut, Kopenhagen (Direktor: Dr. Th. Madsen)] . . . 575

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Inhalts verzeichn is.

VII

Seite

t. Sarnowski, Ueber Anaphylaxie und Antianaphylaxie bei weiSen
Mausen. [Aus dem Hygienischen lnstitut der Konigl. Tierarztl.
Hochschule zu Hannover (Leiter: Prof. Dr. Miessner)] .... 577
Mlta, Sadanori, und I to, Tetsuta, Ueber Schwankungen in der
Giftigkeit artfremden Normalserums fur das Meerschweinchen.

[Aus dem Pharmakologischen lnstitut der Universitiit Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fur Im¬
munitatsforschung und experimentelle Therapie; Leiter: Prof.

Dr. E. Friedberger)].586

Knmagai, T., Ueber Anaphylaxie. XXXV. Mitteilung. Ueber das
Verhalten der roten Blutkorperchen bei der Anaphylaxie und
Anaphylatoxinvergiftung. [Aus dem Pharmakologischen lnstitut
der Universitat Berlin; Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter
(Abteilung fur Immunitatsforschung und experimentelle Therapie;
Leiter: Prof. Dr. E. Friedberger)!.602

Heft 6. (Ausgegeben am 19. Mai 1913.)

Kamagrai, T., Ueber Anaphylaxie. XXXVI. Mitteilung. Die Lungen-
blahung bei der Anaphylatoxinvergiftung und bei einigen ahnlich
wirkenden Giften. [Aus dem Pharmakologischen lnstitut der
Universitat Berlin; Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter

(Abteilung fur Immunitatsforschung und experimentelle Therapie;

Leiter: Prof. Dr. E. Friedberger).] Mit 1 Tafel.607

Bindseil, Ueber die sogenannte Operationsimmunitat (bei einem Mause-
carcinom). Aus dem lnstitut fur Hygiene und Bakteriologie
an der Universitat StraBburg (Direktor: Geh.-Bat Prof. Dr.

P. Uhlenhuth).] Mit 21 Tabellen auf Tafeln.639

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Autorenverzeichnis.

Adsersen, V. 135.

Apolant, H. 219.

Armand-Delille und Launoy 361.
Bail und Rotky, K. 378.

Bail und Rotky, H. 566.

Bergel, S. 169.

Bessemans, A. 36, 333.

Bindseil 639.

Browning und Mackie 1.

Edmunds, Ch. W. 105.

Emmerich, E. 299.

Friedberger, Mita und Kumagai 506.
Galli-Valerio und Bornand 180.
Goss, W. J. 99.

Hara, K. 209.
v. Hellens, O. 156.

Hidaka, S. 443.

Hirvisalo, K. F.

Isabolinsky, M. 353.

Jonas, W. 539.

Kashiwabara, M. 21.

Kumagai, T. 602, 607.
Landsteiner und Prasek 363.
Lippmann und Plesch 548.
Lurk, A. 233.

Marie, A. 420.

Metalnikov und Streinikov 186.
Mita und Ito 586.

Nathan, E. 478.

Pfeiffer, H., und de Crinis 459.
Prinzing, F. 176.

Rcymann, G. C. 575.

Rondoni und Goretti 482.
Rotky, K. 555.
v. Sarnowski 577.

Sata, A. 62, 75, 84.
Sukiennikowa. N. 304.

Surface, Frank M. 487.

De Waele, H. 314.

Weichardt, W. 101.

Weil und Coca 141.

Zunz, Edg. 47, 211, 265, 270.

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Zeitsctihit £ Inummitatsforschnng. Original! Bd.HFD.lfaL

Nachdruck verboten.

[From the Pathological Laboratories of the University and
Western Infirmary, Glasgow.]

The relationship of the complementing action of fresh
serum along with immune body to its haemolytic effect
with cobra venom — a contribution on the structure of

complement*) *).

By C. H. Browning, M. D., and T. J. Maokie, M. B., Ch. B.

(Eingegangen bei der Redaktion am 26. November 1912.)

The fact that normal serum may aid the haemolytic action of
various snake venoms has long been established (Stephens, 29).
Lecithin has a similar action (Kyes, 10), and a mixture of
venom with serum or with lecithin may produce lysis of cer¬
tain species of blood corpuscles, which are quite insusceptible
to venom by itself.

The phenomena of serum-venom haemolysis have been more closely
analysed and compared with lecithin-venom haemolysis by several workers
[Flexner and Noguchi (7), Kyes (10), Kyes and Sachs (11),
Morgenroth and Kay a (16)] and a variety of conclusions have been
reached. With regard to the haemolytic action of lecithin along with
cobra venom, it appears to be definitely determined (Manwaring, 14)
that a constituent of the native venom of ferment character (lecithinase)
acts on lecithin by splitting off acid radicles, and that an altered lecithin
results (cobra lecithid). This lecithid is an extremely powerful haemolytic
agent, being many hundred times more active than the original substance
from which it was derived. After the lecithid has been formed its action
is quite independent of constituents of the venom and it can be entirely
freed from the latter. The results of earlier observers require now to be
interpreted in the light of these facts. Conclusions based on analogies
existing between the process of lecithin venom haemolysis and haemolysis
due to immune-body and complement must be regarded as merely superficial.

1) Eine kurze Mitteilung fiber die Hauptresultate dieser Arbeit wurde
schon publiziert in der Biochem. Zeitschr., Bd. 43, 1912, p. 229 und Joum.
of Path, and Back, Vol. 17, 1912, p. 120.

2) We have much pleasure in acknowledging our indebtedness to the
Carnegie Trust for grants toward the expenses of this research.

Zeitschr. f. Immunitauforcchung. Orig. Bd. XVII. 1

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2

C. H. Browning and T. J. Mackie,

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Sera from different species vary in their behaviour (Kyes, 10); accor¬
dingly, we shall restrict ourselves to the results bearing on the action of
guinea-pig’s serum which we have ourselves investigated. Kyes and
Sachs found that (1) the haemolytic effect of guinea-pig’s serum along
with cobra venom for blood corpuscles which are insusceptible to cobra
venom by itself (ox, sheep, goat) occurs at 37° but not a 0° C. (whereas
lecithin causes lysis with venom at 0°) and is destroyed by procedures which
destroy haemolytic complement, but do not affect lecithin, e. g., by heating
at 56° C., and by digestion with papain or treatment with HC1 or NaOH;
(2) the action of fresh serum is unaffected by agents which inhibit the
effect of lecithin; thus cholesterin inhibits the action of lecithin to a much
greater extent than it inhibits the effect of serum; (3) although fresh serum
in a sufficient dose causes haemolysis along with cobra venom, a smaller
amount of serum will prevent the haemolytic action of a dose of lecithin.
These observations, along with the facts that (1) a laked solution of blood
which by itself undergoes lysis in the presence of cobra venom, causes
haemolysis of insusceptible blood along with venom, owing to lecithin
contained in the susceptible stromata being “available” (endocomplement)
and that (2) guinea-pig’s serum by itself has a certain degree of haemolytic
action for the species of blood under consideration, led Kyes to conclude
that the weight of evidence is in favour of the activating effect of fresh
sera being indirect, that is, due to their action in liberating endocomple¬
ment from the red blood corpuscles. In this connection, it may be noted
that recent work on haemolysis due to immune body and complement has
led to the conception that the complement acts on the complex, red cor¬
puscle plus immune body, and that little evidence has been brought forward
in favour of the view that immune body acts as the intermediary between
the complement and the cell receptor (Muir, 17). Bezzola (1) found that
a mixture of antigen and antibody which was able to absorb both lecithin
and complement, when saturated with one of these bodies was still able
to absorb the other and hence concluded that the lytic action of fresh
serum with venom was not due to the presence of lecithin in the serum.

Morgenroth and Kay a showed that a solution of cobra venom
in normal saline when heated at 70° C by itself or at 100° C in the
presence of n/20 HCl, lost the property of causing haemolysis along w T ith
fresh guinea-pig’s serum, but retained almost unaltered its activity with
lecithin. We have demonstrated by this method the lecithin character of
“endocomplement”, since on the addition of laked guinea-pig’s blood, haemo¬
lysis of ox blood suspension occurs with venom heated at 70° C. practi¬
cally to the same extent as with unheated venom.

Ross (22) observed that ox’s serum inhibited the haemolytic action
of guinea-pig’s serum with cobra venom, but not with immune body.

When cobra venom is allowed to act on lecithin for some hours and
blood is subsequently added, almost instantaneous lysis occurs; but if any
other arrangement is made in mixing the components haemolysis takes
place slowly. The explanation is that the haemolytic action is due to the
altered lecithin (lecithid) and in the first case the venom acts on the loci-

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 3

thin and produces lecithid, which when formed is very rapid in its haemo¬
lytic action. Analogous experiments have been carried ont with mixtures of
complement-containing serum and venom; but the results are very different,
since the mixture losos its haemolytic property. This aspect of the subject
has been investigated by Morgenroth and Kaya, Sachs (23), Braun
(3), Omorokow (20), Sachs and Omorokow (26), and Ritz (21).
The general results are that cobra venom deprives fresh serum of its
lytic action for blood along with both immune body and cobra venom. The
rate of destruction of complementing action depends directly on the con¬
centration of serum in the mixture with venom (Braun, Omorokow).
The complementing action for immune body is restored quantitatively by
the addition of either middle-piece or end-piece and for venom by the
addition of middle piece (Sachs and Omorokow). Finally, Ritz
has pointed out in the case of serum treated with venom, that the com¬
plementing action for immune body is restored by the addition of heated
guinea-pig’s serum (7 2 hour at 54° C.), “third component”, which does not
act either as middle-piece or end-piece.

Thus it is evident that the question of the relationship
of the complementing action of fresh serum for haemolytic
immune body to its effect in causing lysis in the presence of
cobra venom is still very complicated.

The following investigations have been carried out with
a view to throwing further light on the relationship between
the haemolytic complements which act with specific immune
body and the bodies which cause lysis with venom. Special
attention has also been paid to the part played by the so-
called middle-piece and end-piece of complement in the
reactions.

In the first place, complement-containing serum was
treated with various substances which remove complementing
action for immune body and then the treated serum was
compared with the untreated as regards its effect with venom,
the effect with immune body being tested in parallel series
by way of control. Secondly, complement-containing serum
was split by carbon di-oxide gas and the action of the frac¬
tions along with immune body and with venom was compared.
In addition, the effect of the serum fractions in restoring the
complementing action of serum which had been treated with
the various complement absorbers was tested. Also, the
views held as to the constitution of complement have been
examined in the light of the facts which have been elicited.

l*

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C. H. Browning and T. J. Mackie,

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The aetion of serum which has been treated with agents
which remove complement.

Stromata of red blood corpuscles along with the
corresponding immune body.

The stromata were prepared by heating a 5 per cent, suspension of
washed blood corpuscles over night at 55° C. The fluid was removed and
the sediment after being washed several times with 0.85 per cent NaCl
solution was suspended in the original volume. Excess of homologous
immune body (10 doses) was added, and after the mixture had stood for
an hour the fluid was removed and replaced by NaCl-solution. Into each
of a series of tubes 1.0 c.c. of suspension of sensitised stromata was mea¬
sured out and then varying amounts of guinea-pig's complement were
added. The tubes were placed in the incubator at 37° C for l 1 / 2 hours,
being frequently shaken during that time; they were then centrifugalised;
the supernatant fluid was pipetted off and divided into two equal portions;
to the one half 0.5 c. c. of suspension of washed ox blood sensitised with
5 doses of immune body was added, and to the other a similar amount
of suspension along with cobra venom (0.01 c.c. 10 per cent, solution of
cobra venom in 0.85 per cent, salt solution to each 1 c.c. of blood sus¬
pension).

As complement-absorbers the following combinations were
employed, ox blood and sheep blood with the homologous
immune bodies from the rabbit, rabbit’s blood with immune
body from the goat. Representative experiments are shown
in Table I A. The results were remarkably constant and
showed that the treated serum had undergone practically no
alteration in its action with venom, while, as is well known,
the complementing effect for immune body was abolished.
A composite complement consisting of guinea-pig’s end-piece
plus rabbit’s middle-piece (v. later) behaved in the same
manner. By way of controls the following experiments were
carried out, (1) the sensitised stromata were digested at 37° C
with 0.85 per cent, salt solution, and the fluid was then added
to corpuscles along with venom; no lysis occured, thus showing
that no “activating” body diffused out of the stromata; (2) the
treated serum did not lyse corpuscles along with heated venom
(1 per cent, of venom in 0.85 per cent. NaCl solution exposed
at 70° C for half an hour according to the procedure of
Morgenroth and Kaya) whereas lecithin did cause lysis; thus
it was clear that the treated serum did not differ in its action
from the native serum in this respect (v. Table IB, Control).

Gck igle

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 5

On one occasion the complement-containing serum after being
treated with sensitised stromata, as described above, was then
subjected to a second treatment with the same amount of sen¬
sitised stromata. Such double treatment has been found espe¬
cially efficient in removing complement (Muir and Martin, 19).
The wice treated serum still retained its lytic action with cobra
venom practically unchanged (v. Table I A).

Table I A.

The action of complement-containing serum (guinea-pig) after treatment with

sensitised stromata.

Date of Lysis of 0.5 c. c. suspension of ox- Lysis of 0.5 c. c. suspension of ox-
experi- jhlood + 5 doses of immune body blood + 0.0005 gr. cobra-venom

ment j un ^ reatec i serU m| treated scrum untreated serum treated serum

A. Serum treated with sensitised ox stromata.

30.1.12)0.0075 c.c. = 0.15 c.c. marked 0.01 c. c. = com- 0.01 c.c. = corn-

complete plete plete

24.1.12 0.01 c. c. = com- 0.1 c. c. — trace 0.01 c. c. = com- 0.01 c. c. = com-

! plete plete plete

21.II.12|0.005 c.c. = com- 0.1 c.c. = trace 0.005c.c. = com- 0.01 c.c. = com¬
plete plete plete

8. II. 12 0.01 c. c. = com- 0.1 c. c. = trace 0.01 c. c. = com- 0.01 c. c. = com-
| plete plete plete

B. Serum treated twice with sensitised ox stromata.

22.11.12 0.01 c.c. = com-0.1 c.c. = trace 0.01 c. c. = com-0.02 c.c. = com-

I plete plete plete (smallest

amount tested)

C. Serum treated with sensitised sheep stromata.

27.11.120.01 c.c. = com-,0.1 c.c. = nil 10.01 c.c. = com-iO.Ol c.c. = com-

j plete I I plete | plete

D. Serum treated with sensitised rabbit stromata.

14.11.120.005c.c.“Com-|0.04 c.c. = dist-,0.005c.c. = com-0.01 c.c. = com-
j plete j inct | plete | plete

Table IB.

The action of complement-containing serum (guinea-pig) treated with

sensitised ox stromata.

Date of
ex- |

periment

j Lysis of 0.5 c.c. ox-
blood suspension+

5 doses of immune
bodies

Lysis of 0.5 c. c. ox-
blood suspension +
0.0005 gr. cobra ve¬
nom (fresh)

Lysis of 0.5 c. c. ox-blood
suspension + 0.0005 gr.

heated cobra venom
(1 per cent, solution he¬
ated V, hour at 70° C)

untreated

serum

treated

serum

untreated

serum

treated

serum

treated serum

25. VI. 12

0.0075 c.c.
=compl.

0.05 c. c.
= nil

0.01 c. c.
=compl.

0.01 c. c.
= compl.

0.05 c. c. = nil

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6

C. H. Browning and T. J. Mackie,

Control.

0.5 c.c. ox blood suspension + 0.01 c.c. 1:10000 fresh cobra venom + excess
of lecithin = marked lysis.

0.5 c.c. ox blood suspension + 0.01 c.c. 1:10 000 cobra venom 70° C +
excess of lecithin = marked lysis.

Red blood corpuscles sensitised with immune body.

The corpuscles were sensitised with 10 doses of immune
body and the procedure adopted was the same as that em¬
ployed above. The guinea-pig’s serum was treated with ox,
sheep and guinea-pig’s corpuscles along with homologous im¬
mune body from the rabbit With the last named combination
only slight haemolysis occurred, but complement was actively
absorbed as Muir and Browning have shown (Muir, 18).
We found that large amounts of ox’s laked blood corpuscles
and, to a less extent, sheep’s blood caused lysis of ox blood
along with cobra venom (endocomplement action). This action
is markedly inhibited by serum; but to avoid fallacies we
always tested, as a control, the effect of an amount of ox’s
and sheep’s corpuscles equivalent to that employed in the
absorption experiments, the corpuscles being laked with water
and then made up to 0.85 per cent. NaCl with 10 per cent. NaCl.
It was found that in from 2 to 4 hours the treated serum
had caused practically its full lytic effect with cobra venom,
whereas the action of the laked blood (endocomplement) was
not marked till much later (24 hours). Accordingly, the
results were read after 2 to 4 hours. In the case of guinea-
pig’s blood, which undergoes only partial haemolysis, the fluid
was separated from the remaining corpuscles by centrifuga-
lising and was then pipetted off. Laked guinea-pig’s blood
has a powerful endocomplement action; the effect of laked
blood in amounts equivalent to the lysis which had occured
in the serum tubes was always tested, and it was found
that endocomplement played no part in the lysis of the
test ox corpuscles. The results of such experiments with
sensitised blood corpuscles are shown in Table II. They are
in complete agreement with those obtained with sensitised
stromata.

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 7

Table II.

The action of complement-containing serum (guinea-pig) treated with
sensitised red blood corpuscles.

1

Date of
ex¬

Lysis of 0.5 c. c. ox-blood
suspension + 5 doses of
immune body, after

2 hours at 37° C

Lysis of 0.5 c.c. ox-blood susjDension 4-
0.0005 gr. cobra venom after 2 hours at
37° C

periment

untreated

serum

treated

serum

untreated

serum

treated

serum

Contr.: laked
blood without
serum

A. Serum treated with sensitised ox’s blood.

21.II. 12 0.005 c.c. = ,0.06c.c. = 0.005 c.c. =10.01 c.c. = I
| complete | trace | complete | complete |

B. Serum treated with sensitised sheep’s blood.

27.11.12 jO.Ol c.c. =
j complete

0.01 c.c. =
complete

nil

nil

0.1 c.c. =10.01 c.c. =
no lysis | complete

C. Senim treated with sensitised guinea-pig’s blood.

0.1 c.c. laked
guinea-pig’s
blood caused
lysis of less
than 0.1 c.c.
of ox-blood
suspension
in 24 hours

15. III.12

0.005 c.c. =

0.05 o. c. =

0.005 c.c. =

0.01 c.c. =

complete

j

i

t

distinct

complete

complete

Control to C.

The initial lysis caused by 0.01 c.c. serum = 0.1 c.c. guinea-pig’s
blood suspension.

The fact that serum which has been treated in the manner
above described, and which as a result is practically devoid
of haemolytic action along with immune body, still retains
almost unaltered its power of causing haemolysis along with
venom, does not support the view that the serum acts simply
in virtue of its partial lytic property by itself. The results
indicate that the complement of serum which acts along with
immune body is certainly not identical with that which causes
haemolysis with venom. From the nature of the processes
under consideration, it is obvious that a marked difference
which is elicited by such procedures, affords a proof of the
dissimilarity of the two effects this proof is much more con¬
vincing than is a conclusion as to their identity based on
similarity of behaviour towards physical and chemical agents
which abolish complementing action altogether.

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8

C. H. Browning and T. J. Mackie,

Bacterical Emulsion.

Bacterial emulsions are known to have a powerful effect
in depriving serum of its complementing action. Staphylococcus
aureus was employed.

Agar slope-cultures of Btaphylococcus aureus after 24 hours at 37 0 C
were suspended in 0.85 salt solution and washed several tiroes by centrifugali-
sing. The sediment was then resuspended (the culture of three or four tubes
being emulsified in 1 c. c.) and killed by boiling for several minutes. The
killed emulsion was mixed with an equal volume of serum and the mixture
was incubated at 37° C for 1'/, hours, after which the organisms were
removed by centrifugalising.

Table III.

The action of complement-containing serum (guinea-pig) treated with
staphylococcus emulsion.

No. of
experiment

Lysis of 0.5 c. c. ox blood
suspension + 5 doses of
immune body

Lysis of 0.5 c.c ox blood sus¬
pension + 0.0005 gr. cobra venom

untreated ser.

treated serum

untreated serum

treated serum

I

0.01 c.c. =

0.1 c. c. = nil

0.01 c. c. = com-

0.1 c. c. = nil

complete

plete

II

0.005 c. c. =

0.02 c. c. = com-

0.005 c. c. —

0.08 c. c. = very

complete

plete

complete

marked

III

0.005 c. c. =

0.06 c. c. = dis¬

0.005 c. c. =

0.02 c.c. = almost

complete

tinct

complete

complete

The results of a series of such experiments are shown in
Table III. It is clear that the effect of treatment has been
very variable, and that there is no constant correspondence
between the behaviour of the treated serum along with immune
body and with cobra venom respectively; thus in experiment 1
the treated serum was practically deprived of its haemolytic
action along with both venom and immune body; in experiment
2 there was marked action with immune body but little with
venom; and in experiment 3 the action of the serum was the
reverse of that in 2.

Treatment with water.

Sachs and Ter uuchi (27) found that if guinea-pig serum
was diluted with water its complementing power for immune
body disappeared.

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 9

Fresh guinea-pig’s serum was diluted with 9 volumes of water and
incubated at 37° C for 1 1 / 2 hours; the NaCl-content was then restored to
0.85 per cent.

The results obtained on testing the treated serum in
parallel series with immune body and with venom are shown
in Table IV. As in the case of treatment with staphylococcus
emulsion, here also the results were remarkably variable and
there was a lack of correspondence between the action of the
treated serum with immune body and with venom in the
various experiments.

Table IV.

The action of complement-containing serum treated with water.

Lysis of 0.5 c. c. ox blood
No. of I suspension + 5 doses of
experiment* immune body

| Lysis of 0.5 c. c. ox blood sus-
| pension + 0.0005 gr. cobra serum

I

II

III

IV
V

untreated ser.l treated serum (untreated serum! treated serum

0.02 c. c.

complete
0.02 c. c.
complete

0.02 c. c.
complete
0.01 c. c.
complete

marked
,0.1 c. c. = trace

plete
0.02 c. c.
plete

very

= 0.1 c. c. = very 0.02 c. c. = com-0.1 c. c. ==

, marked

= com-0.02 c. c. = com¬
plete

0.1 c. c. = nil
| (the only
; amount tested)
com- 0.02 c.c. — cora-
! plete

com- 0.02 c. c. = dis-
| tinct

.0.04 c. c. = com-
I plete

0.1 c. c. = com-
j plete (the only
amount tested)

0.02 c. c. = com-,0.02 c. c.
| plete plete

0.04 c. c. = trace U01 c. c.
,0.1 c.c. = marked! plete

Filtration through a Berkefeld filter.

10 c. c. of a mixture of fresh serum with an equal volume
of 0.85 per cent NaCl solution were filtered through a new,
alkali-free Berkefeld filter in the manner described by Muir
and Browning (v. Muir 18).

Filtered serum was found te be inactive with venom just
as with immune body.

The action of the serum fractions obtained by
precipitation with carbonic acid gas.

The procedure adopted was that followed by Lief-
m a n n (13) which consists in the precipitation of a portion
of the globulins by passing carbonic acid gas through serum

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10

C. H. Browning and T. J. Mackie,

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dilated with water. It is possible by this means to separate
the serum into two fractions each of which by itself has very
little complementing action for immune body, but which
together act like the original serum. This “splitting” of com¬
plement is referred to later.

Serum diluted with 9 volumes of ice-cold distilled water was split by
passing carbonic acid gas through the mixture for a period of 10 minutes
and then allowing the whole to stand for some time, the tube containing
the fluid being kept cool by immersion in chopped ice. The precipitate
which formed was removed by centrifugalising. The clear supernatant
fluid constitutes the albumin-fraction (end-piece), the NaCl-content of
which was made up to 0.85 per cent. The precipitate (globulin-fraction,
middle-piece) was washed once with water and dissolved in an amount
of 0.85 per cent salt solution equivalent to twice the volume of the
original serum.

The globulin solution was always used within an hour of
its preparation so as to avoid complications due to its under¬
going alteration [Brand’s (2) modification of middle-piece].

Under favourable conditions it is found that an amount
of either component by itself equivalent to many times that
present in the haemolytic dose of native serum, fails to cause
lysis of sensitised corpuscles; but a mixture of the two com¬
ponents in the original proportions is almost as active in its
complementing action as the native serum (Table V). This
result, however, is not constantly attained and frequently one
fraction on the other has a marked complementing effect by
itself. In a series of experiments the haemolytic action of
each serum constituent was tested along with immune body
and cobra venom. Examples are shown in Table V.

Table V.

The art ion of serum fractions (guinea-pig) obtained by C0 2 .

Date of I Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension + 5 doses of immune body
expeiimentj un j rea ^ e( j ser. globulin fraction albumin fraction mixed fractions

9. V. 12 1 0.005 c. c. = 0.1 c. c. = nil ,0.1 c. c. = nil jO.Ol c. c. = corn-

complete j ! I plete

18. IV. 1210.005 c. c. = 0.00 c. c. = mar-i0.02 c.c. = com-0.005 c. c. = al-

| complete j ked j plete j most complete

19. IV. 12 0.005 c. c. =;0.1 c.c. = very 0.02 c.c. = very 0.01 c.c. = very

complete

marked l marked I marked

|0.04 c. c. = com- 0.02 c. c. =com-
! plete | plete

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. H

Date of

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension + 0.0005 gr. cobra venom

experiment

untreated ser.

globulin fraction

albumin fraction

mixed fractions

9. V. 12

i

18. IV. 12

0.005 c. c. =
complete
0.005 c. c. —

0.1 c. c. = trace 0.1 c. c. = trace

j

0.06 c. c. = trace 0.06 c. c. = trace

0.01 c. c. = com-
1 plete

,0.02 c. c. = al-

complete j most complete

19. IV. 12i0.01 c. c. = |0.02 c. c. = com- 0.1 c. c. - tracej0.005 c.c. = com-
| complete | plete I | plete

Note: In this and in subsequent tables the amounts of the serum
fractions are indicated by the quantities of the whole serum from which
they are derived.

It is clear that the effects are variable. Where separation
is not successful there is no constant relationship between
the action of a particular fraction with immune body and
with venom. The most uniform result is that the globulin
fraction is without action either with immune body or with
venom. The haemolytic action with venom, as with immune
body, is usually practically completely restored on mixing the
two fractions.

The complementing action can also be restored both for
immune body and for venom by adding to the albumin
fraction of guinea-pig’s serum, globulin of rabbit, horse and
ox serum (v. Table VI p. 12). This has already been
noted by Braun with regard to the complementing of im¬
mune body.

The restoration of complementing action by the addition of
serum fractions to treated serum.

Serum deprived of its complementing action by the pro¬
cedures described above was mixed with (1) the globulin frac¬
tion (middle-piece) and (2) the albumin fraction (end-piece) of
the same specimen of serum; the degree of restoration of
complementing effect was then tested. By way of control, the
action of each constituent by itself and of the mixture of the
two was always observed at the same time.

In the tables which illustrate our results we have as a
rule shewn the action of only one or two quantities of the
various components. Thus, in the case of inactive fractions

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12

C. H. Browning and T. J. Mackie,

Table VI.

Effect of globulin fractions of the sera of rabbit, horse and ox in causing
haemolysis along with the albumin fraction of guinea-pig’s serum.

Date
of ex¬
peri¬
ment

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension + 5 doses
of immune body

Whole

guinea-pig

i Albumin

8erum | fraction of

rabbit guinea-pig |

Globulin j Mixture of
fraction of | the two
rabbit | fractions

1. IV.
1912

0.01 c. c. —
complete

0.12 c. c. = 0.08 c. c* ='
complete i almost cora-
1 plete

0.08 c.c. = nil 0.01 c. e. =
complete

guinea-pig ■ horse guinea-pig ! horse mixture

1. V.
1912

0.0075 c. c. =
complete

0.25 c. c. = nil 0.02 c. c. =

I trace

,0.1 c. c. = al-
| most com-
, plete

0.1 c. c. —- nil

0.005 c. c. =
marked

0.04 c. c. =
almost com¬
plete

| guinea-pig

ox

guinea-pig

0.1 c. c. =
trace

OX

0.1 c. c. = nil

mixture

2. V.
1912

0.005 c. c. =
complete

0.5 c. c. = nil

0.02 c. c. =
very marked
0.04 c. c. =
complete

Date
of ex¬
peri¬
ment

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension + 0.0005 gr.
cobra venom

Whole

guinea-pig

serum

rabbit

Albumin
fraction of
guinea-pig

Globulin
fraction of
rabbit

Mixture of
the two
fractions

l.IV.

1912

0.01 c. c. =
complete

1.0 c. c. = nil 0.08 c. c. = 0.08c.c, = nil!

| trace i j

0.01 c. c. —
complete

1. V.
1912

guinea-pig

0.005 c. c. =
complete

horse 1 guinea-pig i horse mixture

0.25 c. c. = 0.1 c. c. = dis-i0.1 c. c. =
almost com-j tinct | trace

plete 1 |

0.005 c. c. =
complete

mixture

guinea-pig

ox 1 guinea-pig

ox

2. V.
1912

0.005 c. c. =
complete

0.5 c. c. = nil 0.06 c. c. =
distinct

0.1 c. c. =
t marked

0.1 c. c. = nil 0.02 c. c. =
complete

1

Controls: The mixtures of serum components by themselves, in the
absence of immune body or venom, had no lytic effect on the test blood
suspension.

Note: In the case of the mixtures, 0.01 c. c., 0.02 c. c. indicate the
mixtures of the globulin fraction derived from 0.01 c. c., 0.02 c. c. whole
serum along with the albumin fraction derived from the same amounts
of whole serum respectively.

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 13

or combinations we have only set down the absence of effect
with the largest amounts tested. Of course, in every instance
the action of varying amounts of the constituents was tested,
starting with small quantities equivalent to the amounts pre¬
sent in about one dose of the most active sera. In no instance
has a zone effect been seen under the conditions which we
have observed, similar to that described byLedingham and
Dean (12) when studying haemolysis due to a constant amount
of end-piece along with varying amounts of middle-piece. Ac¬
cordingly, there is no fallacy of this description concealed in
the tables.

Serum treated with stromata and immune body.

Table VII shows the results. Activation for immune body
was brought about in some experiments (1) by end-piece alone,
(2) by both middle-piece and end-picee.

Table VII.

The effect of serum fractions in restoring the action of serum after treat¬
ment with sensitised ox stromata.

Date of
experiment

13. II. 12

Lysis of 0.5 c.c. ox blood suspension + 5 doses of immune body

untreated ser.0.006c.c.= cmpl.
treated serum 0.1 c. c. = trace
globulin fract. 0.1 c. c. = nil
albumin fract. 0.1 c. c. — nil

0.025 c. c. treated serum
+ globulin fract.j-f albumin fract.
0.1 c. c. = nil jO-01 c.c. = compl.

6. II. 12

untreated ser. 0.01 c.c. = compl.
treated serum 0.05 c. c. = trace
I 0.1 c.c. = mark.

Iglobulin fract.0.04 c.c. = nil
0.1c.e. = dist.
albumin fract.0.1 c. c. = nil

0.025 c. c. treated serum

+ globulin fract. + albumin fract.
0.01 c. c. — com- 0.01 c. c. — com¬

plete lysis , plete lysis

Serum treated with red corpuscles and immune

body.

In some cases (Table VIII, Exp. No. I) neither component
effected activation [this is considered to be the rule by
Skwirsky (28)]; in other experiments end-piece alone caused
restoration (No. II) or again, end-piece had marked and
middle-piece slight action (No. III).

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14

C. H. Browning and T. J. Mackie.

Table VIII.

Effect of serum fractions in restoring the action of serum after treatment
with sensitised ox blood corpuscles.

No. of
experiment

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension + 5 doses of immune body

I

untreated ser. 0.005 c.c.=compl.
treated serum 0.05 c. c = trace
0.08 c. c. = mark,
globulin fract. 0.1 c.c. = trace
jalbumin fract. 0.1 c. c. = nil

treated serum 0.025 c. c.

+ globulin fract. + albumin fract.
0.1 c. c. — nil 0.1 c. c. = nil

II

'untreated ser.0.006c.c.=^compl
itreated serum 0.1 c. c. = nil
globulin fract. 0.1 c. c. = nil
I albumin fract. 0.1 c. c. = nil

treated serum 0.025 c. c.

+ globulin fract. + albumin fract.
0.1 c. c. = nil 0.01 c. c. = com¬
plete

III

untreated ser. 0.005 c.c.=compl.
treated serum 0.1 c.c. = distinct
globulin fract. 0.1 c.c. = distinct
albumin fract.0.1 c.c. = distinct

i

treated serum 0.025 c. c.

+ globulin fract. + albumin fract.
0.06 c. c. = al- 0.01 c. c. = corn-

most complete

plete

Serum treated with staphylococci.

Here also the results showed variation and there was no
correspondence between the restoration of complement action
for immune body and for venom (Table IX p. 15). Thus in
one experiment (No. I) both middle-piece and end-piece
restored the complementing action for immune body but not
for venom, and in another experiment (No. II) middle-piece
restored the action markedly for immune body but not for
venom. Similar irregularities have been noted by Sachs
and Boikowska (25) in the effect of the serum fractions in
restoring the complementing action of serum which has been
treated with water.

Filtered serum.

Filtered serum was not activated for immune body or
venom by either component.

The constitution of complement.

Originally complement was regarded merely as an in¬
separable property of fresh serum. Later observers have found,
however, that when a portion of the globulin is precipitated
by various procedures [dialysis — Ferrata (6), Brand (2);
the addition of HC1 — Sachs and Altmann (24); carbonic

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. ]5

Table IX.

Effect of serum fractions in restoring the action of serum after treatment
with staphylococcus emulsion.

No.
of ex-1
peri-
ment.

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension
4- 5 doses of immune boay

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension
4- 0.0005 gr. cobra venom

II

treated serum 0.025 c. c.

+ globulin
fraction
0.04c.c.=
, very

fraction marked,
0.06 c. c.—
complete

4- albumin
fraction
0.01c.c.=
complete

untreated serum
0.01 c. c. = com-
| plete

treated serum 0.1
I c. c. = nil
globulin
0.1 c. c. = nil
albumin fraction
0.06 c. c. = dis-i
| tinct j

globulin + albu-l
min fractions 0.01
c. c. of each =
complete !

untreated serum treated serum 0.025 c. c.

untreated serum
0.01 c. c. = com- globulin
pl ete fraction

treated serum 0.1 n 1 e c
c.c. = nil j tmee

globulin fraction
0.06 c. c. = dis¬
tinct, 0.1 c. c. =1
complete
albumin fraction
0.1 c. c. = nil
globulin 4- albu¬
min fractionsO.Ol
c. c. of each =
complete

0.007 c. c. = com¬
plete

treated serum 0.05
c. c.= very mark¬
ed

globulin fraction*
0.025 c. c. = trace
0.05 c. c. = mark¬
ed

albumin fraction
0.025 c. c. = com-

! plete |

+ globulin
fraction
0.025 c. c.
= com¬
plete

4- albumin
fraction
0.025 c. c.
= com¬
plete

untreated serum
0.007 c. c. = com¬
plete

treated serum
0.05 c. c. = trace,
0.1c.c.=distinct|
globulin fraction
0.05 c. c. = nil,
O.lc.c. —marked
albumin fraction
0.1 c. c. = trace

treated serum 0.025 c. c.

4- albumin
fraction
0.1 c. c. =
trace

treated serum 0.025 c. c

+ globulin
fraction
0.1 c. c. =
marked

4- albumin
fraction
0.05 c. c.
= very
marked

acid gas — Liefmann (13)] the two resulting fractions of
the serum may separately have no haemolytic action on im¬
munised corpuscles at all comparable with that of the whole
serum, but on mixing the two components in the original
proportions the complementing activity is quantitatively re¬
stored. The component of complement which is present in
the globulin precipitate becomes attached to red corpuscles in
the presence of immune body. Similarly, red corpuscles along
with a large amount of immune body remove the same com¬
ponent from whole serum at 0° C (Sachs and Bolkowska);
or the fixation of this constituent may be effected at a higher
temperature in the presence of a mixture containing acid

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16

C. H. Browning and T. J. Mackie,

sodium phosphate which prevents the combination of the whole
complement and consequently inhibits haemolysis (Michaelis
and Skwirsky, 15, 28). Even in the absence of immune
body isotonic cane sugar solution may cause the middle-piece
component to become attached to red corpuscles (Guggen¬
heim er, 8). Corpuscles thus treated do not spontaneously
undergo lysis at 37° C, but are haemolysed on the addition
of the albumin fraction of serum. Thus, the globulin fraction
has been termed “middle-piece” and the albumin fraction
“end-piece”, and the sensitised corpuscles which have fixed
middle-piece are said to be “persensitised”.

It has already been seen that precipitation of the globulin
does not always result in two fractions each of which is by
itself inactive. This has frequently been noted. The simultaneous
employement of two criteria for testing the action of the serum
fractions, namely blood plus immune body and blood plus
venom, has brought out the striking fact that there is no
constant correlation between the effects of the globulin and
the albumin fractions by themselves. It has also been seen
that the effect of the serum fractions in restoring the activity
of complement which has been treated with various absorbing
agents is quite irregular. Accordingly it is evident that such
a method for the analysis of complementing action does not
yield a satisfactory insight into the nature of the processes
involved. It has been found that the variations noted above
are not due to minute differences in the procedure of pre¬
paring the serum-fractions. The cause of such differences is
at present being investigated. If any conclusion may be drawn
from the experiments described above it is that the com¬
plementing power of a serum depends on the interaction of
many factors and that the so-called middle-piece and end-
piece do not represent constant entities. The complexity of
complement action is further supported by the observations
of Cruickshank and Mackie (5). These workers shewed
that if a preparation of egg-yolk lecithin in alcoholic solution
is added to guinea-pig’s serum which is then split by car¬
bonic acid gas, the resulting lecithin-albumin fraction pos¬
sesses quantitatively the complementing power of the original
serum and at the same time the lecithin-globulin fraction

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 17

retains its power of restoring the haemolytic action of ordinary
end-piece.

Ritz, as above noted, has recently observed that serum
which has been deprived of its complementing effect for
immune body by digestion with cobra venom, is reactivated
by the addition of guinea-pig’s serum or serum fractions
heated at 54° C. (see also Husler, 9). We have confirmed
this and have found further that the albumin ft action (end-
piece) of rabbit’s serum which along with the globulin fraction
of guinea-pig’s serum did not complement immune body (as
other workers have also found, v. Braun) also restored the
action of guinea-pig’s serum which had been treated with
venom. This result was obtained even when the rabbit’s
albumin fraction had been heated at 54 0 C. (v. Table X).

1 c. c. of fresh rabbit’s serum was diluted with 9 c. c. of distilled
water, the globulin fraction was then separated by passing carbon di-oxide
gas through the cooled mixture as described above. The % NaCl content
of the albumin fraction was made up to 0.85 per cent and it was then
heated for 7* hour at 54° C. The complementing action of 0.5 c.c. guinea-
pig’s serum was removed by adding 0.2 c. c. */,. per cent, solution of cobra
venom and incubating for V/ 4 hours at 37° C. The mixture was then
diluted with 4.5 c. c. 0.85 per cent NaCl-solution to prevent further action
of the venom.

Table X.

Lysis of 0.5 c. c. ox blood suspension + 5 doses of immune body

Untreated serum

Serum treated
with cobra venom

Albumin fraction of
rabbit’s serum
(7* hour 54° C)

Mixture of treated
serum -f heated
albumin fraction
(Rabbit’s serum)

0.005 c. c. = com¬
plete

0.1 c. c. == distinctjo.25 c. c. = nil

0.01 c. c. of each com¬
ponent = complete

Ritz ascribes this effect of heated serum to a “third
component” which is destroyed by venom. It is doubtful,
however, if the assumption of an additional “third com¬
ponent” can explain all the phenomena above described.

The latest hypothesis regarding the “splitting” of com¬
plement is that of Bronfenbrenner and Noguchi (4).
The whole complement is supposed by them to be present in
the albumin fraction, but in an inactive form, owing to the

ZeiUchr. f. ImmonittUforechung. Orig. B<L XVII. 2

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18

C. H. Browning and T. J. Mackie.

action of carbonic acid in combining with the amphoteric
molecules in which the complement activity resides. They
claim that the complementing activity of the end-piece by it¬
self may be restored by the addition of alkali. We, however,
have repeatedly failed to restore the action of the albumin
fraction by alkali, although at the same time the mixture of
globulin and albumin fractions produced an effect as active
as that of the whole serum (v. table XI); the controls
Nos. 4 and 5 shewed that the lysis in the highest
tubes was due to the alkali present.

Table XI.

In each tube 0.25 c. c. ox blood suspension + 5 doses of immune
body, along with 0.25 c. c. albumin fraction of guinea-pig’s serum (diluted
1:10) and with varying amounts of NaOH solution (normal NaOH
diluted with 0,85 per cent. NaCl-solution).

Amounts of caustic soda

n/ 100 0.015 c. c.

n/ )00 003 c.c.

n/ 100 0.05 c. c.

n/ 100 0.075 c.c.

n/ioo 0-1 c. c.

faint trace

| faint trace

faint trace

trace |

trace

n/,, 0.015 c. c.

Amounts of caustic
n/ 10 0.02 c. c.|n/ (u 0.035 c.c.

soda

n/ l0 0.05 c. c.

n/ 1# 0.08 c. c.

trace

distinct

marked

i

almost

complete

complete

Controls.

No. 1: albumin fraction 0.25 c. c. + 0.25 c. c. ox blood suspension + 5 doses
of immune body = trace of lysis.

No. 2: globulin fraction 0.025 c. c. + 0.25 c. c. ox blood suspension +
5 doses of immune body = trace of lysis.

No. 3: albumin fraction 0.25 c. c. + globulin fraction 0.01 c. c. +
0.25 c. c. ox blood suspension 4- 5 doses of immune body =
complete.

No. 4: albumin fraction 0.25 c. c. + n/ !0 NaOH 0.05 c. c. + 0.25 c. c.
ox blood suspension (no immune body) = almost complete lysis

No. 5: albumin fraction 0.25 c. c. + n/ 10 NaOH 008 c.c. + 0.25 c. c
ox blood suspension (no immune body) = complete lysis.

Zusammenfassung.

1) Die Behandlung von Meerschweinchenseruin mit sen-
sibilisierten Blutkorperchen oder sensibilisierten Stromata, die

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The relationship of the complementing action of fresh serum etc. 19

die Komplementwirkung fttr Immunkdrper entfernt, lfiBt die
Fahigkeit zusammen mit Cobragift HSmolyse zu bewirken,
fast ungeandert. Dieses Resultat liefert den Beweis, daB das
mit Immunkdrper zusammenwirkende Komplement und die
Serumkomponente, die mit Cobragift H&molyse hervorruft,
sicberlich nicht identisch sind.

2) Komplementhaltiges Serum, das mit Bakterienauf-
schwemmung oder mit Wasser behandelt wurde, zeigt nachher
keine konstante Korrelation zwischen seiner Immunkdrper
komplettierenden Wirkung und seiner hamolytischen Kraft zu¬
sammen mit Cobragift.

3) Die Filtrierung des frischen Serums durch eine Berke-
feldkerze beraubt es seiner hamolytischen Wirkung mit Cobra-
gift sowie mit Immunkdrper.

4) Durch KohlensEurespaltung kann das Serum in zwei
Fraktionen zerlegt werden, von denen jede in grofien Dosen
zusammen mit Cobragift keine hSmolytische Wirkung zu ent-
falten vermag, aber beide zusammen quantitativ wie das native
Serum wirken. Die Immunkdrperkomplettierung und die
Cobragifth&molyse zeigen einen engen Parallelismus in dieser
Beziehung.

5) Die restituierende Wirkung der Serumfraktionen auf
mit komplementabsorbierenden Mitteln behandeltes Serum
ist eine unregelmaBige.

6) Falls die nach der Kohlensauremethode gewonnenen
Fraktionen nicht jede an und fiir sich ganz unwirksam sind,
zeigt sich kein konstantes Verhaltnis zwischen der Immun¬
kdrper komplettierenden Wirkung und der Cobragifth&molyse
jeder Fraktion.

7) Die Restitution der Komplementwirkung durch Alkali-
zusatz zu der mit Kohlens&ure gewonnenen Albuminfraktion
des Serums gelang nicht.

8) Die oben geschilderten Versuche, zusammen mit
den Beobachtungen von Cruickshank und M a c k i e,
deuten darauf hin, daB mehr Faktoren bei der Komplement¬
wirkung des Serums beteiligt sind als bisher angenommen
wurde.

2 *

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20 Browning and Mackie, Complementing action of fresh serum.

References.

1) Bezzola, Centralbl. f. Bakt., Abt. I, Orig., Bd. 46, 1908, p. 433.

2) Brand, Berl. klin. Wochenschr., 1907, No. 34.

3) Braun, Biochem. Zeitschr., Bd. 31, 1911, p. 65.

4) Bronfenbrenner and Noguchi, Journ. of Exper. Med. New York,
Vol. 15, 1912, p. 598.

5) Cruickshank und Mackie, Biochem. Zeitschr., Bd. 42, p. 414; und
Journ. of Path, and Bact., Vol. 17, 1912, p. 116.

6) Ferrata, Berl. klin. Wochenschr., 1907, No. 13.

7) Flexner and Noguchi, Journ. of Exper. Med., Vol. 2, 1902, p. 277.

8) Guggenheimer, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 8, 1910, p. 295.

9) Husler, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 15, 1912, p. 157.

10) Kyes, v. Ehrlich’s Studies on Immunity, New York, 1910, p. 291,
also Journ. of Infect. Diseases, Chicago, Vol. 7, 1910, p. 181.

11) Kyes and Sachs, v. Ehrlich’s Studies on Immunity, New York,
19i0, p. 443.

12) Ledingham and Dean, Journ. of Path, and Bact., Vol. 16, 1912,
p. 386, and Journ. of Hygiene, Vol. 12, 1912, p. 152.

13) Liefmann, Munch, med. Wochenschr., 1909, p. 2097.

14) Manw T aring, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 6, 1910, p. 513.

15) Michaelis und Skwirsky, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 4, 1909,
p. 357 and Bd. 4, 1910, p. 629.

16) Morgen roth und Kay a, Biochem. Zeitschr., Bd. 8, 1908, p. 379;
Ibid., Bd. 25, 1910, p. 88.

17) Muir, Journ. of Path, and Bact., Vol. 16, 1912, p. 523.

18) — Studies on Immunity, Oxford 1909.

19) — and Martin, v. Muir, Studies on Immunity, Oxford 1909.

20) Omorokow, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 10, 1911, p. 285.

21) Ritz, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 13, 1912, p. 62.

22) Ross, Journ. of Mental Science, Vol. 57, 1911, p. 34.

23) Sachs, Miinch. med. Wochenschr., 1908, p. 437.

24) — und Altmann, v. Sachs, Handbuch der Tcchnik und Mcthodik
der Immunitiitsf., Bd. 2, 1909, p. 969.

25) — und Boikowska, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 7, 1910, p. 778.

26) — und Omorokow, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 11, 1911, p. 710.

27) — und Teruuchi, Berl. klin. Wochenschr., No. 16, 17 and 19, 1907.

28) Skwirsky, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 5, 1910, p. 538.

29) Stephens, Journ. of Path, and Bact., Vol. 6, 1900, p. 273.

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Kashiwabara Inaktivierung der Komplemente durch Schiitteln. 21

Nachdruck verboten.

[Aus dem Biochemischen Laboratorium des Krankenhauaes Moabit

in Berlin.]

Vcber die Inaktivierung der Komplemente darch Schiitteln.

Von Dr. M. Kashiwabara aus Takamatsu (Japan).

(Eingegangen bei der Redaktion am 2. Dezember 1912.)

Die Beobachtung von Jacoby und SchQtze*), daB das
hamolytische Komplement des Meerschweinchenserums durch
Schiitteln inaktiviert wird, ist von zahlreichen Autoren bestatigt
worden. Der Mechanismus der Inaktivierung ist bisher noch
nicht hinreichend aufgeklart. Jacoby und SchQtze hatten
gefunden, daB das inaktive SchQttelserum sowohl durch die
EndstQck- wie durch die MittelstQckfraktion aktivierbar ist.
Inzwischen haben Sachs und seine Mitarbeiter entdeckt, daB
bei der Komplementfunktion auBer dem EndstQck und dem
MittelstGck noch eine dritte Komponente mitwirkt. So lag es
nahe, zu prQfen, ob vielleicht diese dritte Komponente durch
das SchGtteln ausgeschaltet wird. Bei meinen Untersuchungen,
welche den Mechanismus der SchOttelinaktivierung weiter kl&ren
sollten, habe ich zunQchst auf diesen Punkt mein Augenmerk
gerichtet. Wenn ich jetzt, obgleich ich eine befriedigende Ana¬
lyse des Mechanismus der Schuttelinaktivierung nicht geben
kann, Qber meine Resultate kurz berichte, so geschieht das
im Hinblick auf eine soeben erschienene Arbeit von Ritz,
welche sich in wesentlichen Punkten mit meinen Beobachtungen
deckt, aber auBerdem nach verschiedenen Richtungen die Frage
der SchOttelinaktivierung fordert.

Ritz 1 2 ) bestatigt die Inaktivierung durch SchOttelung so-
wie die Aktivierbarkeit des Schuttelserums durch EndstQck
und MittelstOck. Er fand ferner, daB die von Jacoby und
SchQtze angewandte, zehnfache Serumverdunnung die opti-
male Verdunnung fGr die SchOttelinaktivierung darstellt. Auch

1) Berlin klin. Wochenschr., 1909, No. 48 und Zeitschr. f. Immunitiitsf.,
Ed. 4, 1910, No. 6.

2) Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 15, 1912, H. 2 und 3.

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22

M. Kashiwabara,

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flberzeugte sich Ritz in Uebereinstimmung rait den Autoren
davon, dafi eingefrorenes Serum seine Schiittelinaktivierbarkeit
nicht verlorenhat. Ritz hat die Schflttelung in Uhlenhuths
Kinotherm, also im Wasserbade vorgenommen, wobei bereits
in 25 Minuten eine vollkommene Inaktivierung erfolgte. Es
zeigte sich, daB die Inaktivierung des Komplementes von dem
GrdBenverhfiltnis zwischen Inhalt des GefaBes und der Menge
der geschflttelten Flflssigkeit abhSngig ist. Diese Beobachtung
kann ich best&tigen. Wahrend nSmlich Jacoby und S c h fl t z e
nur ganz ausnahmsweise MiBerfolge bei der Schiittelinakti-
vierung hatten, ebenso ich selbst im Anfange, miBlang mir
in einer spateren Versuchsserie mehrfach die Inaktivierung.
Bei diesen Versuchen hatte ich relativ groBe Serumquantitaten
in den einzelnen GefaBen geschiittelt. Als ich wieder zu
kleineren Quantitaten zurflckkehrte, hatte ich wieder gleich-
maBige Resultate. Ich habe allerdings den Eindruck gewonnen,
als ob es vereinzelte Sera gibt, deren Inaktivierung iiberhaupt
etwas abnorm verlauft. Wahrend Jacoby und Schiitze von
acht darauf beziiglichen Versuchen nur bei zwei Fallen in
Jenenser Kolben eine Schiittelinaktivierung erreichten, miBlang
sie Ritz nie.

Besonders wichtig erscheint die Feststellung von Ritz,
daB bei Kinothermschiittelung die Schiittelinaktivierung in
zwei Phasen verlauft. Bereits in der ersten wird das Komple-
ment schon inaktiv. Wahrend es aber in der ersten Phase
noch durch Endstiick und Mittelstiick aktivierbar ist, ist das
in der zweiten Phase nicht mehr der Fall. Ritz hat auch
Versuche mit der dritten Serumkomponente angestellt und
„erzielte in einigen Versuchen eine gewisse Aktivierung durch
thermoinaktives Serum 14 . Da Ritz diesen Punkt noch nicht fur
gekiart ansieht und iiber diese Frage keine Protokolle mitteilt,
so mochte ich einige meiner Protokolle bier wiedergeben.

I.

A11 g e in e i n e Versuchsanor d n u n g.

Frisch gewonnencs Meerschwei lichen sera m wird mit 0,85-proz. Koch-
salzldsnng je nach dem einzelnen Versuche auf das 10- odcr 20-fache ver-
diinnt, die Fliissigkeit in entsprechendc I’ortionen gcteilt, von welchen einige
I',, oder 2 Stundcn im Hrutschrank geschiittelt warden, wahrend dieanderen
in demselhen Brntschrank ruhig standen.

Go^ 'gle

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Ueber die Inaktivierung der Kompiemente durch Schiitteln. 23

Die Brutschranktemperatur iiberstieg nie 38,5° C. Die Hitzeinaktivierung
wurde bo vorgenommen, das frisch gewonnenes Meerschweinchenserum mit
0,85-proz. Kochsalzlosung auf das 10-oder 20-fache verdiinnt und 30 Minuten
lang im Wasserbade, bei der im einzelnen Versuche angegebenen Temperatur
gehalten wurde,

A Is Ambozeptor benutzte ich ein bereits langere Zeit im Laborstorium
aufbewahrtes Immunserum, welches schon friiher Herr Dr. Ohta fiir Hamo-
lysinversuche verwendet hatte. Anfangs benutzte ich die Ambozeptorver-
diiunung 1:10 000, spater 1:5000.

Versuch L

Schiittelzeit 2 Stunden. Verdiinnung 1:20. Inaktivierung 30 Minuten
bei 50,7—51° C. Verdiinnung 1:20. Auffiillung uberall auf 3 ccm.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm (1:20) Schiittelserum.

Inaktiv. Serum 1:20

Resultat

Inaktiv. Serum 1:20

0,0

0

0,4

0,1

0

0,5

0,2

Spur

0,6

0,3

in kornplett

0,7-1,0

Tabelle B.

Kontrollserum 1:20

Resultat

Kontrollserum 1:20

0,0

0

0,3

0.1

0

0,4

0,2

inkomplett

0,5—1,0

Tabelle C.

Inaktiv. Serum 1: 20

Resultat

Inaktiv. Serum 1:20

o

o

1

o

0

0,8

0,5

inkomplett

0.9

0,6

fast kornplett

0.1

0,7

yy yy

Resultat
fast kornplett

>> »>

kornplett

Kesultat
fast kornplett

V 99

kornplett

Resultat
fast kornplett

** yy

kornplett

Versuch II.

Schiittelzeit 2 Stunden. Verdiinnung 1 :20. Inaktivierung 30 Mi¬
nuten bei 51,7—52° C. Verdiinnung 1:20. Auffiillung uberall auf 4 ccm.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm (1 :20) Schiittelserum.

Inaktiv. Serum 1:20

Resultat

Inaktiv. Serum 1:

: 20 Resultat

0,0—02

0

0,7

fast kornplett

0,3

inkomplett

yy

0,8

yy yy

0,4

0,9

yy yy

0,5

fast kornplett

1,0

kornplett

0,6

yy yy

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24

M. Kashiwabara,

Tabelle B.

Kontrollserum 1:20

Resultat

Kontrollserum 1:20

0,0

0

0,3

0,1

0

0,4

0,2

Spur

0,5-1,0

Resultat

inkomplett

11

komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

D. Schiittelserum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

Versuch III.
Anordnung wie Versuch II.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm (1:20) Schiittelsemm.

Inaktiv. Serum 1:20

Resultat

Inaktiv. Serum 1:

20 Resultat

0,0

0

0,6

fast komplett

0,1

Spur

0,7

» »

0,2

»

0,8

V M

0,3

inkomplett

0,9

11 11

0,4

1,0

komplett

0,5

u

Tabelle B.

Kontrollserum 1:20

Resultat

Kontrollserum 1

: 20 Resultat

0,0

0

0,3

inkomplett

0,1

0

0,4

fast komplett

0,2

Spur

0,5-1,0

komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

D. Schiittelsemm 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

Versuch IV.
Anordnung wie Versuch II.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm (1:20) Schiittelserum.

Inaktiv. Serum 1:20

Resultat

Inaktiv. Serum 1:20

Resultat

0,0

0

0,6

fast komplett

0,1

Spur

0,7

ii ii

0,2

11

0,8

ii ii

0,3

gerin g

0,9

ii ii

0,4

inkomplett

1,0

komplett

0,5

fast komplett

•

Tabelle B.

Kontrollserum 1:20

Resultat

Kontrollserum 1:20

Resultat

0,0

0

0,4

fast komplett

0,1

0

0,5

i> ii

0,2

inkomplett

0,6

ii n

0,3

fast komplett

0,7 -1.0

komplett

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Ueber die Inaktivierung der Komplemente durch Schiitteln. 25

Tabelle C.

Inaktiviertes Serum 1:20 Resultat

0,1-08 0

0,9 Spur

1,0 inkomplett

D. Schiittelserum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

Versuch V.

Inaktivierung 30 Minuteu bei 51,7—52,0° C. Verdunnung 1:10. Auf-
fiillung auf 3 ccm.

Tabelle.

Inaktiv. Serum 1:10 Resultat Inaktiv. Serum 1:10

0,0-0,2

0

0,7

0,3

Spur

0,8

0,4

tf

0,9

0,5

1,0

0,6

inkomplett

Wiederholung des Versuches ergab das gleiche Resultat.

Resultat

inkomplett

fast komplett

Versuch VI.

Bchiittelzeit 1 */, Stunde. Verdunnung 1:10. Inaktivierung 30 Min. bei
52,2—52,5° C. Ambozeptor 1:5000 (abgeschwacht). Auffiillung auf 3 ccm.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm (1:10) Schiittelserum.

Inaktiv. Serum 1:10 Resultat Inaktiv. Serum 1:10

0,0

0,2

0,4

Inaktiv. Serum 1:
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0

fast komplett

0,6

0,8

1.0

Resultat
fast komplett

Tabelle B.

10 Resultat Inaktiv. Serum 1:10 Resultat

1,2 Spur

0

0

0

0

Spur

1,4

1,6

1,8

2,0

inkomplett
fast komplett

Versuch VII.

Inaktivierung 30 Minuten 52,8—53,0° C. Verdunnung 1:10. Auf¬
fullung auf 3 ccm.

Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—2,0 keine Hamolyse.

Versuch VIII.

Bchiittelzeit 2 Stunden. Verdunnung 1:20. Inaktivierung 30 Minuten
bei 52,8—53,0° C. Verdunnung 1:10. Auffullung auf 3 ccm.

A. Jede Probe enthalt 1 ccm (1:20) Schiittelserum.

Inaktiviertes Serum 1:10 0,0—1,0 keine Hamolyse.

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26

M. Ka8hiwabara

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Tabelle B.

Use rum 1:20

Resultat

Kontrollserum 1:20

0,0

0

0,4

0,1

Spur

0,5

0,2

0,6-1,0

0,3

inkomplett

C. Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—1,0 keine Hamolyse.

D. Schiittelserum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

Besultat
fast komplett

it tt

komplett

Versuch IX.

Anordnung wie Versuch VIII.

Jede Probe enthiilt 1 ccm (1:20) Schiittelserum.

A. Inaktiviertes Serum 1:20 0,2—1,0 keine Hamolyse.

Tabelle B.

Kontrollserum 1:20

Resultat

Kontrollserum 1:20

Resultat

0,0

0

0,4

inkomplett

0,1

Spur

0,5

fast komplett

0,2

0,3

i*

inkomplett

0,6-1,0

komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—1,0 keine Hamolyse.

D. Schiittelserum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

Versuch X.

Schiittclzeit l 1 /? Stunde. Verdiinnung 1:10. Inaktivierung 30 Min.
bei 52,8—53,0° C. Verdiinnung 1:10. Auffiillung iiberall auf 3 ccm.

Tabelle A.

Jede Probe enthiilt 1 ccm (1:10) Schiittelserum.

Inaktiviertes Serum 1:10 Resultat

0,0 0

0,2 inkomplett

0,4

0,6—1.0 fast komplett

Tabelle B.

Kon t roll ser u m Result at

0,0 0

0,2 0

0,4 —1,0 komplett

Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—2,0 keine Hamolyse.

Schiittelserum 0,2—1,0 keine Hamolyse.

Versuch XI.
Anordnung wie Versuch X.

Tabelle A.

Jede Probe enthiilt 1 ccm (1:10) Schiittelserum.
Inaktiviertes Serum (1:10) Resultat

0,0 0

0,2—1,0 fast komplett

Gck igle

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Ueber die Inaktivierung der Komplemente durch Schiittcln. 27

Tabelle B.

Kontrollserum (1:10) Resultat

0,0 0

0,2 fast komplett

0,4—1,0 komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—2,0 keine Hamolyse.

D, Schuttelserum 1:10 0,2—1,0 keine Hamolyse.

Versuch XII.

Anordnung wie Versuch X.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm (1:10) Schuttelserum.

Inaktiviertes Serum 1:10 Resultat

0,0 0

0,2—1,0 fast komplett

B. Inaktiviertes Serum 1:10 0.2—2,0 keine Hamolyse.

C. Schuttelserum 1:10 1,2—2,0 keine Hamolyse.

W&hrend in den eben geschilderten Versuchen Serum,
das auf 60 °C erhitzt war, eine deutliche Reaktivierung des
Schflttelserums bewirkte, erhielt ich in 5 anderen Versuchen hur
ein ganz geringftigiges Oder sogar ein negatives Resultat, ohne
daB ich den Grund angeben kbnnte.

Nach der inzwischen erschienenen Arbeit von Ritz muB
man daran denken, daB in diesen Versuchen die Schiittelung
eine intensivere Einwirkung auf das Komplement hatte als in
den frflheren Versuchen. Hervorzuheben wfire auBerdem, daB
in diesen 5 Versuchen der Ambozeptor etwas abgeschwacht
war und daher seine Dosis verstarkt werden muBte. Jedoch
muB es dahingestellt bleiben, ob das einen EinfluB auf die
Resultate ausgeflbt hat.

Versuch XIII.

Schiittelzeit l‘/ 2 Stunde. Verdiinnung 1:10. Inaktivierung 30 Min.
bei 53,7—54,0° C. Verdiinnung 1:10. Auffullung iiberall auf 3 ccm.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ecm (1:10) Schuttelserum.

Inaktiviertes Serum 1:10 Resultat

0,0 0

0,2 gering

0,4 — 1,0 in komplet t

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28

M. Kashivvabara,

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Tabelle B.

Kon trollseru m Resultat

0,0 0

0,2—1,0 komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—0,1 keine Hamolyse.

D. Schiittelserum 1 :10 0,2—1,0 keine Hamolyse.

Versuch XIV.
Anordnung wie Versuch XIII.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 cem (1:10) Schiittelserum.

Inaktiviertes Serum

Resultat

0,0

0

0,2

0

0,4

Spur

0,6-1,0

inkomplett

Tabelle B.

Kontrollserum 1:10

Resultat

0,0

0

0,2-1,0

komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:10 0,2—1,0 keine Hamolyse.

D. Schiittelserum 1:10 0,2—1,0 keine Hamolyse.

Versuch XV.

Anordnung wie Versuch XIII.

A. Jede Probe enthalt 1 ccm (1 :10) Schiittelserum.

Inaktiviertes Serum 1:10 Resultat

0,0 0

0.2—1,0 fast komplett

Tabelle B.

Kontrollserum 1:10 Resultat
0,0 0
0,2 fast komplett

0,4—1,0 komplett

Versuch XVI.

Schiittelzeit 2 Stunden. Verdiinnung 1:20. Inaktivierung 30 Mi-
nuten bei 54,5—55,0° C. Verdiinnung 1:20. Auffiillung auf 4 ccm.

A. Jede Probe enthalt 1 ccm (1:20) Schiittelserum.

Inaktiviertes Serum 1:20 0,0—1,0 keine Hamolyse.

Tabelle B.

Kontrollserum 1 :20

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4-1,0

Resultat

0

Spur

inkomplett
fast komplett
komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse

Gck igle

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Ueber die Inaktivierung der Komplemente durch Schiitteln. 29

Versuch XVII.
Anordmmg wie Versuch XVI.

A. Jede Probe enthalt 1 ccm (1:20) Schiittelserum.
Inaktiviertes Serum 1:20 0,0—1,0 keine Hamolyse.

Tabelle B.

Kontrollserum 1:20
0.0
0,1
0,2
0,3

0,4—1,0

Resultat

0

Spur

inkomplett
fast komplett
komplett

C. Inaktiviertes Serum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

D. Schiittelserum 1:20 0,1—1,0 keine Hamolyse.

Wir haben also wie Ritz eine ganz unverkennbare Akti-
vierung des Schflttelserums durch thermoinaktives Serum in
einer Reihe von Versuchen erzielt, die aber, wie erw&hnt, in
einigen Versuchen durchaus zu vermissen war. Bei dieser
Inkonstanz der Versuchsergebnisse mochten wir durchaus
Ritz beistimmen, daB das Wesen der Schiittelinaktivierung
noch nicht vflllig gekl&rt ist, daB man jedenfalls noch nicht
berechtigt ist die Schiittelinaktivierung in einer Beseitigung
der dritten Komponente mit Sicherheit zu suchen. Daftir,
daB in den positiven Versuchen das sicher thermoinaktive
Serum eine durch Schiitteln verloren gegangene komplementSre
Serumfunktion ersetzt hat, spricht der Umstand, daB das
thermoinaktive Serum durch Schiitteln seine aktivierende
Eigenschaft verliert, wie ich in besonderen Versuchen fest-
gestellt habe.

II.

In weiteren Versuchsreihen habe ich gepriift, ob bei der
SchGttelung der isolierten Endstuck- Oder Mittelstiickfraktion
ihre Fflhigkeit, Schflttelserum zu aktivieren, durch das Schiitteln
verloren geht. Zun&chst konnte ich wie Ritz die Beobachtung
von Jacoby und Schiitze best&tigen, daB Endstflck- und
Mittelstflck Schflttelserum aktivieren.

Versuch XVIII.

Nach den Angaben von Sachs wurde 1,5 ccm frisches Meerschwein-
serum mit 12,3 ccm '/. 100 n.Salzsaure gemischt. Das Gemisch wird eine
Stunde bei Zimmertemperatur belassen und dann zentrifugiert. Der Ab-
gufl wird durch ein trockenes Filter filtriert und dann durch Zusatz von

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30

M. Kashi w a bar a.

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1,2 ccm 10-proz. Kochsalzlosung, welche l / ;{0 n. Natronlauge enthalt, neu-
tralisiert und dann mit 0,85-proz. Kochsalzlosung auf 15 ccm aufgefiillt.

Das Sediment wurde mit 5 ccm destiilierten Wassers versetzt und
dann durch Zusatz von 1,05 ccm 5-proz. Kochsalzlosung auf isotonischen
Salzgehalt gebracht, endlich mit 0,85-proz. Kochsalzlosung auf 15 ccm
aufgefiillt.

Aus 1,5 cm Serum wurde somit je 15 ccm Endstiick und 15 ccm
Mittelstiick dargestellt.

AuSerdem wurde frisches Meerschweinchenserum 1:10 \ v j 7 Stunden
im Brutschrank gesehiittelt.

Auffiillung auf 3 ccm.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm Endstiick = Endstiick aus 0,1 ccm Serum.
Mittelstiick Resultat

0,0 0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

0

Spur

inkomplett
fast komplett

Tabelle B,

Jede Probe enthalt 1 ccm Mittelstiick = Mittelstiick aus 0,1 ccm

Serum.

Mittelstiick

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Resultat

Spur

inkomplett

»»

fast komplett

Tabelle C.

Jede Probe enthalt 1 ccm Schiittelserum 1:10.

Mittelstiick Resultat

0,0 0

0,2 fast komplett

0,4—1,0 komplett

Tabelle D.

Jede Probe enthalt 1 ccm Schiittelserum 1: 10.

Endstiick

0,0

0,2

0,4

0 , 6 — 1,0

Kontrollserum

0,0

0,2-1,0

Resultat

0

0

Spur

inkomplett

Tabelle E.

Resultat

0

komplett

Gck igle

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Ueber die Inaktivierung der Komplemente durch Schiitteln. 31

Versuch XIX.

Anordnung wie Versuch XVIII.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm

Endstiick = Endstiick aus 1 ccm Serum.

Mittelstiick

Resultat

0,0

Spur

0,2

fast komplett

0,4

M 11

0,6-1,0

komplett

Tabelle B.

Jede Probe enthalt 1 ccm

Mittelstiick = Mittelstiick aus 0,1 Serum.

Endstiick

Resultat

0,0

0

0.2

inkomplett

0,4-1,0

komplett

Tabelle C.

Jede Probe enthalt 1 ccm

Schiittel serum 1 :10.

Mittelstiick

Resultat

0,0

0

0,2

inkomplett

0.4

komplett

0,6

n

0,8

fast komplett

1,0

komplett

Tabelle D.

Jede Probe enthalt 1 ccm

Schiittelserum 1 : 10.

Endstiick

Resultat

0,0

0

0.2

fast komplett

0,4

ii ii

0,6-1.0

0

Versuch XX.

D&rstellung des Mittelstiicks und des Endstiicks wie in Versuch XVIII.

Anteile der Endstiick- und Mittelstiickfraktion, bevor sie auf isotonischen

Salzgehalt gebracht werden und bevor die Endstiickfraktion neutralisiert
war, l 1 /, Stunden im Brutschrank geschiittelt und dann erst wie friiher
mit ihnen verfahren. Nach dem Schiitteln war in diesem Versuche die
Endstiickfraktion klar geblieben, die Mittelstiickfraktion blieb triibe.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm

Endstiick = Endstiick aus 0,1 ccm Serum

Mittelstiick

Resultat

0,0

0

0,2

inkomplett

0,4-1,0

fast komplett

Digitized by (^Oi KljlC

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32

M. Kashiwabara,

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Tabelle B.

Jede Probe enthalt 1 ccm Mittelstiick = Mittelstuck aus 0,1 ccm Serum.
Endstiick Resultat

0,0 0

0,2 inkomplett

0,4—1,0 fast komplett

Tabelle C.

Jede Probe enthalt 1 ccm geschiitteltes Endstiick = Endstiick aus
0,1 ccm Serum.

Mittelstuck Resultat

0,0—1,0 0

Tabelle D.

Jede Probe enthalt 1 ccm geschiitteltes Mittelstuck = Mittelstuck aus
0,1 ccm Serum.

Resultat
0
0
0
0

Spur

Endstiick

0,0

0,2

0.4

0,6

0,8

1,0

Tabelle E.

Jede Probe enthiilt 1 ccm geschiitteltes Endstiick = Endstiick aus
0,1 ccm Serum.

Geschiitteltes Mittelstiick Resultat

0,0-1,0 0

Tabelle F.

Jede Probe enthiilt 1 ccm geschiitteltes Mittelstiick = Mittelstiick aus
0,1 ccm Serum.

Geschiitteltes Endstiick Resultat

00 — 1,0 0

Versuch XXL

Anordnung wie in Versuch XVIII und XX. Nur entspricht 1 ccm
der Endstiick- und Mittelstiickfraktion sowie der Schiittel-Endstiick- und
Schiittel-Mittclstuckfraktion 0,2 ccm Serum, da die Verdiinnung hier anstatt
10-fach nur 5-fach gewiihlt wurde. Das Endstiick triibte sich in diesem
Versuche sehr beim Schiitteln.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm Endstiick = Endstiick aus 0,2 ccm Serum.
Mittelstiick Resultat

0,0 0

0,2—1,0 komplett

Tabelle B.

Jede Probe enthalt 1 ccm Mittelstiick = Mittelstuck aus 0,2 ccm Serum.

Endstiick

0,0

0,2

0,4

0,6-1,0

Resultat

0

inkomplett
fast komplett
komplett

Gck igle

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Ueber die Inaktivierung der Komplemente durch Schiitteln. 33

Tabelle C.

Jede Probe enth&lt 1 ccm geschutteltes Endstiick = Endstiick aus
0,2 ccm Serum.

Mittelstiick Eesultat

0,0 0

0,2 gering

0,4—1,0 inkomplett

Tabelle D.

Jede Probe enth&lt 1 ccm geschutteltes Mittelstiick = Mittelstiick aus
0,2 ccm Serum.

Endstiick Eesultat

0,0 0

0,2 0

0,4 inkomplett

0,6—1,0 fast koraplett

Tabelle E.

Jede Probe enthalt 1 ccm geschutteltes Endstiick = Endstiick aus
0,2 ccm Serum.

Geschiitteltes Mittelstiick Eesultat

0,0—1,0 0

Tabelle F.

Jede Probe enthalt geschiitteltes Mittelstiick == Mittelstiick aus 0,2 ccm
Serum.

Geschiitteltes Endstiick Eesultat

0,0-1,0 0

Tabelle G.

Kontrollserum Eesultat

0,0 0

0,2—1,0 komplett

Versuch XXII.

In diesem Versuche wurden die Fraktionen nach Lief mann durch
Kohlensaureeinleitung hergestellt: 1,5 ccm frisches Serum werden mit 6 ccm
destillierten Wassers yerdiinnt, dann 5 Minuten Kohlensaure eingeleitet,
endlich zentrifugiert. Der Abgufi wird mit 1,5 ccm 5-proz. Kochsalzlosung
versetzt und dann mit 0,85-proz. Kochsalzlosung auf 15 ccm aufgefiillt.
Das Sediment wird in 3 ccm Wasser aufgeschwemmt, 0,6 ccm 5-proz.
Kochsalzlosung zugefiigt und schlieBlich wird mit 0,85-proz. Kochsalzlosung
auf 15 ccm aufgefiillt. Die Schiittelung der Fraktionen erfolgt wie friiher.

Tabelle A.

Jede Probe enthalt 1 ccm Endstiick = Endstiick aus 0,1 ccm Serum.

Mittelstiick Eesultat

0,0 Spur

0,2 inkomplett

0,4—1,0 fast komplett

Zeitschr. f. Immanitttaforgchang. Orig. Bd. XVII. 3

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34

M. Kashiwabara,

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Tabelle B.

Jede Probe enthalt 1 ccm Mittelstuck = Mittelstuck aus 0,1 ccm

Serum.

Endstiick

Resultat

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

0

0

inkomplett
fast komplett
komplett

tt

Tabelle C.

Jede Probe enthalt 1 ccm geschiitteltes Endstiick = Endstiick aus
0,1 ccm Serum.

Mittelstuck Resultat

0,0

0,2

0,4-1,0

Spur

gering

inkomplett

Tabelle D.

Jede Probe enthalt 1 ccm geschiitteltes Mittelstuck = Mittelstuck
aus 0,1 ccm Serum.

Endstiick

Resultat

0,0

0

0,2

0

0,4

Spur

0,6

gering

0,8

fast komplett

1,0

tt tt

Tabelle E.

Jede Probe enthalt 1 ccm geschiitteltes Endstiick = Endstiick aus
0,1 ccm Serum.

Geschiitteltes Mittelstiick Resultat

0,0—1,0 0

Aus diesen Versuchen geht mit Sicherheit hervor, dafi
jede Komplementwirkung aufgehoben ist, wenn sowohl das
isolierte Mittelstuck wie das isolierte Endstiick geschflttelt
wird. Wird nur die eine Fraktion geschflttelt, so war meistens
Komplementwirkung zu erhalten, namentlicb wenn hinreichend
groBe Konzentration der Fraktionen gewflhlt wurde. Aus
diesen Versuchen kann man entnehmen, daB ein Faktor der
Komplementfunktionen, der von dem Endstiick und Mittel¬
stuck als solchen unabhflngig ist, durch das Schfltteln auBer
Funktion gesetzt wird. Ist eine der Funktionen intakt, so
genflgt die Beimengung dieses Faktors zu der betreffenden
Fraktion urn die Wirkung zu ermoglichen.

Gck igle

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Ueber die Inaktivierung der Kom piemen te durch Schutteln. 35

Ohne daB diese ErklSrung endgiiltig sein soli, ist es
vielleicht doch nfitzlich, sie durch ein Schema zu erl&utern.
Wir nennen Endstfick a, MittelstQck b und nehraen an, daB
beiden ein beim Schutteln verloren gehender Faktor beige-
mengt ist; es besteht also die Endstiickfraktion aus a + c,
die Mittelstfickfraktion aus b + c. Wird nun nur eine Fraktion
geschtittelt, so kann eventuell das c der anderen zur H&molyse
ausreichen, werden aber beide geschiittelt, so geht alles c
verloren und die H&molyse unterbleibt.

Es sei aber ausdrficklich betont, daB vielleicht auch andere
Deutungen der Befunde moglich sind.

Die Untersuchung muB nach verschiedenen Richtungen
fortgesetzt werden. Weitere Versuche sind im hiesigen Labo-
ratorium im Gange, fiber die vielleicht sp&ter wird berichtet
werden.

Zusammenfassung.

1) Thermoinaktives Serum aktiviert in vielen Fallen
Schfittelserum. Da diese Aktivierung jedoch nicht ganz kon-
stant erfolgt, ist man, in Uebereinstimmung mit der Ansicbt
von Ritz, noch nicht berechtigt, die Schfittelinaktivierung als
eine Beseitigung der dritten Komponente des Komplementes
aufzufassen. Die Inkonstanz der Aktivierungsversuche erkl&rt
sich vielleicht aus der von Ritz gefundenen Tatsache, daB
die Schfittelinaktivierung in zwei Etappen erfolgt.

2) Mittelstttck- und Endstiickfraktion aktiviert SchOttel-
serum, wie in Bestatigung von Jacoby und Schfitze, sowie
von Ritz gefunden wurde.

3) Isolierte Schfittelung der MittelstQck- und Endstfick-
fraktionen bewirkt, daB die vereinigten Fraktionen inaktiv
sind. Bei Mischung einer geschflttelten Fraktion mit der
anderen ungeschfittelten Fraktion kann bei hinreichender Kon-
zentration noch aktives Komplement entstehen. Offenbar muB
eine von Endstfick und MittelstQck als solche unabhangige
Serumfraktion, die durch Schfitteln zerstort wird, erhalten
bleiben.

4) Serum, welches nacheinander geschiittelt und dann auf
53° erhitzt wurde, ist nicht imstande Schfittelserum zu akti-
vieren.

3*

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36

A. Bessemans,

Nachdruck verbolen.

[Institut de Bact6riologie de Louvain (Directeur Prof. J. Denys).

Laboratoire du Prof. R. Bruynoghe.]

De Wmportance respective des deux constituants de
l’alexine dans le ph6nom£ne de l’hlmolyse.

Par le Dr. A. Bessemans,

Assistant k PInstitut.

(Eingegangen bei der Kedaktion am 2. Dezember 1912.)

Introduction.

Historique: Ferrata 1 ), le premier, signala la possibility de diviser
le compiyment ou alexine en deux parties nettement distinctes; en dialysant
du syrum frais de cobaye, il obtint un prycipity renfermant les globulines
et un liquide clair renfermant les albumines. L’auteur, en dymontrant
que pour obtenir le phynomfene de l’hymolyse ii fallait ajouter aux globules
rouges sensibilisys non pas Tune ou Pautre des fractions obtenues mais
les deux k la fois, dymontrait par le fait m^me que sa division du syrum
concernait aussi le compiyment c. a. d. qu’une partie de celui-ci ytait passye
dans le prycipity, une autre restant dans le liquide clair.

Peu de temps aprys, il fut trouvy par Brand 2 3 ) que la partie du
complememt renfermey dans le prycipity se fixe, employed isoiyment, d’une
fa$on assez stable sur les globules sensibilisys; que Pautre partie, au
contraire, renfermye dans le liquide clair, ne se fixe que sur des globules
dits persensibilisys, c. k d. ayant fixy dyjk, en plus de Phymolysine, la fraction
globuline du compiyment. C’est pour cette raison que le m^rae auteur
donna le nom d’Endstiick ou piece terminale k la partie albumine du
compiyment; Pautre fut appeiye Mittelstiick ou pi&ce intermydiaire.

Depuis lors, divers auteurs, tels que Hecker*), Sachs et Alt-
mann 4 5 ), Sachs et Bolkowska 6 ), Liefmann etCohn 6 ), Michaelis
et S k w i r s k y 7 ), Fr an k e 1 8 ) et d’aut res ont repris et confirmy les recherches

1) Ferrata, Berl. klin. Wochenschr., 1907, No. 13.

2) Brand, Berl. klin. Wochenschr., 1907, No. 34.

3) Hecker, Arb. a. d. Inst. f. exp. Ther., 1907, H. 3.

4) Sachs et Altmann, Handb. d. Techn. u. Meth. d. Immunitatsf.,
Bd. 2, p. 969. — Berl. klin. Wochenschr., 1908, p. 522.

5) Sachs et Bolkowska, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 7, H. 6.

6) Liefmann et Cohn, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 7, H. 6.

7) Michaelis et Skwirsky, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 4,
p. 138.

8) Frank el, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, H. 5—6.

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De Fimportance respective des deux constituauts de Falexine etc. 37

de leurs predccesseurs, s’efforgant toutefois de trouver un procede de
division plus pratique et plus simple. Mise k part la possibility indique
par Michaelis et Skwirsky 1 2 ), Hecker 3 ), Sachs et Bolkowska 8 ),
de fixer le M. 4 ) k froid sur les globules trfcs sensibilis^s et d’isoler ainsi
la pfece terminale, deux nouvelles methodes de separation ont suivi celle
de Ferrata: la procede de Sachs et Altman n k Facide chlorhydrique
et celui de Liefmann et Cohn au Co 3 .

Une fois ces donnees fondamentales bien 6tablies, entre-
voyant de nouvelles lumifcres sur la nature intime et la fagon
d’agir du complement — lequel, depuis les communications
de Bordet 5 * ) et d’autres sur les h6mo- et bact6riolysines,
jouit d’une importance capitale en immunity — on s’est mis
k etudier de divers cotes k la fois les earactfcres et propri£t6s
des deux parties de l’alexine et k rechercher leur importance
respective dans les nombreux ph£nom£nes oil le complement
lui-m&me entre en jeu.

Dans un premier travail nous nous sommes proposes de
determiner cette importance respective au point de vue du
phenomena de rh6molyse.

Technique: Avant d’aborder cette etude, nous faisons suivre quel-
ques notes sur la methode suivie, dabord pour obtenir la division du com¬
plement, ensuite pour proeeder au phenomkne de Fhemolyse.

Division du complement: C’est, en somme, le procede de
Liefmann et Cohn. A travers du serum frais de cobaye, dilue au IO
avec de Feau distillee, nous faisons passer de Fanhydride carbonique; celui-
ci nous est fourni, k volonte, par un appareil Kipp charge avec du marbre
et du HC1 dilue. Au bout de 5 k 10 min., le trouble produit dans notre
dilution d’alexine ayant atteint son maximum d’intensite, nous centrifugeons
rapidement le liquide lactescent ou laiteux obtenu; le decantage nous
donne alors FE au 10* dans de Feau distillee. Nous lavons le culot avec
de Feau distillee, centrifugeons k nouveau et deversons la partie limpide
qui surnage; diluant alors le fond autant d'eau physiologique que nous
avions de liquide lactescent au debut, nous obtenons une solution de M
au 10*: cette solution est employee aussitOt. Pour avoir notre E dans de
Feau physiologique, nous diluons au moment de Femploi sa solution dans

1) Michaelis et Skwirski, loc. cit.

2) Hecker, loc. cit.

3) Sachs et Bolkowska, loc. cit.

4) M = Mittelstiick, E = Endstiick.

5) Bordet, Ann. de FInst. Pasteur, T. 12, 1898; T. 13, 1899;

T. 14, 1900; T. 15, 1901; T. 20, 1906.

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38

A. Bessemans,

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Peau distill6e avec une quantity equivalente d’eau hypersalee k 16 °/ 00
— E au 20.

H^molyse: Bauf indications sp6ciales, nous mettons en presence,
d’abord du complement frais de cobaye ou ses fractions, ensuite 2 c. c.
d’un melange constitue d’un volume de globules rouges de mouton dilues
au 20 et d’un volume ana d’une dilution d’hemolysine de lapin telle que
chaque c. c. renferme environ 10 fois son titre. Aprks avoir ramene toutes
les quantites au meme volume — 5 c. c. d’ordinaire — nous portons tous
les tubes 1 heure k Petuve (37°) et examinons alors lee resultats obtenus.

Voici, une fois pour toutes, Interpretation des signes adoptes pour
inscrire les resultats hemolytiques:

c = dissolution complete;

pr c = dissolution presque complete;

/ =5 dissolution incomplete ou demi-dissolution;

tr ou? = traces de dissolution;

0 = absence complete d’hemolyse.

Par bon 1 nous indiquons une dissolution intermediaire entre pc et I;
par peu Pin termed iaire entre 1 et tr.

Premiere Partie.

Historique: H. Sachs 1 ) relate le fait que la solution d r E obtenue
par la methode de la dialyse donne souvent, k elle seule, Phemolyse de
globules tree sensibilises; il attribue ce phenomene k la division incomplete
du complement.

D’autre part, H. R. Marks 2 ) constate que pour obtenir de Pherao-
lyse complete en meiangeant E et M frais, le rapport quantitatif du M k
PE ne peut depasser une certaine limite et doit, en general, £tre ap-
proximativement de 1 k 1. II donne corame regie qu’en augmentant forte-
ment la quantite de M on peut, non seulement diminuer Phemolyse, mais
m&me Pemp&cher.

Les r4sultats de Frank el 3 ) sont tout autres; cet auteur, en effet
conclut qu’en augmentant une fraction du complement on peut diminuer
Pautre et que la diminution du M peut 6tre poussee plus loin que celle
de PE.

Recherches personnelles: Devant des affirmations
aussi divergentes, nous avons cru int^ressant d’examiner la
question avec methode, en 61iminant toute cause d’erreur.

1) H. Bachs, Handbuch der Technik und Methodik der Immunitats-
forschung, Bd. 2, 1909, p. 969.

2) H. R. Marks, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, p. 508. —
Studies from the Rockefeller Inst., Vol 14, No. 6.

3) Friinkel, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, p. 781.

Gck igle

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De Pimportance respective dee deux constituants de Palexine etc. 39

Le probleme se pose comme suit: quels sont, dans le
pbdnomfene hdmolytique, les rapports quantitatifs ndcessaires
entre les deux morceaux du complement?

Or, puisqu’il s’agit ici de recherches quantitatives exactes,
un premier contrSle est k faire: est-ce que, par notre procddd
de separation, nous ne perdons rien quantitativement des
deux constituants et est-ce que ni l’un ni l’autre ne subit,
durant cette operation, une alteration qualitative quelconque
en perdant de son activite specifique?

Nous procedons comme suit: nous comparons l’activite
de l’alexine, dosee avant sa division, k celle des solutions de
M et E meiangeds en quantite ddcroissante correspondante;
deux temoins, renfermant respectivement une forte dose de
E et de M, nous assurent d’une bonne separation.

Tableau I.

Dosage 1 ) avant separation |

Dosage aprfcs separation

Quantity prise de
complement

Resultats

Quantity pri»

du M

e des constit.

de I’E

Resultats

VfO C.

C

/,o

c. c.

7,o

c. c.

c

7.0

>1

c

7,40

yy

7«

yy

c

7,o

V

c

7.0

yy

/so

yy

c

1/

'f.0

pr c

V 00

yy

7,0

yy

pre

V 70

yy

bon I

7,o

yy

7„

yy

bon I

7«o

yy

bon 1 !

7,.

yy

/ 80

yy

I

1,

1 90

yy

I

7„o

yy

7oo

yy

I

/ 100

»>

I

7lOO

yy

7,00

yy

I

7„o

yy

tr

7,40

yy

7,40

yy

tr

l i

1 180

yy

?

7, so

yy

7,80

yy

?

Temoins: E seul V, 0 0 M seul ’/io 0

Nous constatons qu’apr&s toutes les manipulations subies
nos deux fractions sont encore aussi actives que dans le
complement intact; Ton ne pourra done faire de ce chef au-
cune objection k nos resultats ulterieurs.

Pour rechercher alors les rapports quantitatifs entre E
et M, nous avons adopte la mdthode suivante qui nous semble

1) Cette experience fute refaite plusieurs fois: avec du complement
fraifl, avec du complement age de quelques jours et avec diverges hemo-
lysines.

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40

A. Bessemans,

tr6s exacte: aprfcs un dosage pr^alable du complement, nous
faisons deux series d’expdriences; dans la premiere, nous
mettons en presence diverses doses constantes de M et des
doses d6croissantes d’E, dans la seconde nous faisons l’inverse.
Un exemple rendra cela trfcs clair.

Tableau II.

sine I.

S4rie II.

JUOS.

C l

E.d 6 cr.

M.c. 7 40

M.c. V 20

s

p

o

M.c. 7»

M.d 6 cr.

E.c. V 40

E.c. V J0

E.c. V,«

7*0

c

Vto

C

c

c

c

7..

c 1

C

c

1 40

c

/,o

c

c

c

c

/so

c

c

c

y»

?

7.0

c

c

c

I C

,/40

C ' I

1 c

c

/l 60

0

/*«

peu

I

c

c

/ro

pr c

c

c

1 /l60

0

0

peu

pr c

V 160

I

i pr c

c

;/,, 0

0

0

0

?

»/

1320

0

i ?

I

V 040

0

0

0

0

1/

>610

0

, 0

0

Teinoins: M. i L 0 E. Vio 0

'/« 0 V. 0

L’experience cit6e a 6t£ faite avec de l’alexine fraiche;
nous l’avons rep6t6e une douzaine de fois avec des resultats
analogues. D’autrefois, nous avons travailie avec du comple¬
ment age de 24 & 48 heures: les r6sultats comparatifs ne
diff6raient gufcre. Void, k titre d’exemple, un tableau concer-
nant une alexine &gee de plus de 24 heures.

Tabeau III.

Dos. ct

S<*rie I

S4rie 11

E.d 6 cr. j

M.c. 7„

M.c. V,o

M.c. 7,„

[m.c. 7 ,

M.d£cr.

E-C. V 40

E.c. 7,0

E.c. 7,o

7,0 c

7,o

pr c

c

c

C

7,0

1

c

C

/40 I

7«

tr

pr c

c

C

7,0

tr

prc

c

U 0 0

V 80

0

0

?

pr c

7*o

0

tr

prc

Vieo 0

/160

0

0

0

0

1 /

^/lGO

0

0

tr

v

/ 320

0

0

0

0

/320 1

0

0

0

T&noins: M. ‘/ 6 0 E. l / l0 0

7,« 0 7s 0

En examinant ces deux tableaux, on arrive facilement
k conclure que si Ton augraente, d’une part, les quantites de
M, on peut diminuer dans une certaine mesure les quantites
d’E; que si, d’autre part, on augmente les doses d’E, on

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De Pimportance respective des deux constituants de Palexine etc. 41

peut diminuer aussi, jusqu’k une certaine limite. les doses
de M. Les deux morceaux du complement, tout en etant tous
deux n4cessaires dans le phenomfcne de l’hemolyse, peuvent
done, dans une certaine mesure, se substituer et se remplacer
l’un l’autre.

Mais s’agit - il bien d’une veritable substitution et ne
pourrait-on pas expliquer nos resultats en admettant que notre
division du complement n’a pas ete tout k fait complete, c. a. d.
que notre solution d’E renferme encore des traces de M et
vice-versa? Non. Car dans ce cas les t6moins auraient dft
nous donner de l’bemolyse.

Pour ne pas compliquer cette demonstration, nous choi-
sissons k dessein une experience plus simple:

Tableau IV.

S4rie I

S4rie II

E.d£cr.

M.c. V.o

M.c. V 10

M.d^cr.

Ec l > :

E.c. •/,«

;/,

c

1

1 c

V.o

i

c

c

ao

c

c

/ao

c

c

1

1 40

c

c

J, 40

c

c

/bo

?

c

/so

pre

c

J.

> 100 1

0

?

1 /

/100

tr

c

1 /

! a?o 1

1 0

0

1 /

/3ao

0

I

T&noins: M. J / 5 0 E. */ 6 0

Supposons un instant qu’il n’y ait pas de substitution
possible mais que notre E p. ex. renferme encore des traces
de M de sorte qu’il faille uniquement attribuer k cela qu’en
augmentant les constantes d’E du simple au quadruple on
peut diminuer le M & peu pres dans la mSme proportion:
nous constatons en effet, dans l’exemple pr6c6dent, que i i i0
de notre E demande V40 de M pour donner la dissolution
complete alors que 4 fois cette dose ou Vio E n’exige plus
qu’ Vi6o M. La difference entre les deux constantes employees
soit Vio—V 40 = 3 Uo E devrait done renfermer une quantite de
M egale k la difference entre les doses limites respectives
soit V 40 —Vieo — 3 /i6o M. Mais, si & / i0 d’E renferment 3 /ieo
de M, la dose contrdle, c. a. d. V 6 E ou 8 / 40 devrait renfermer
8 /i«o ou 7*o de M. Cette dose contrSle devrait done donner

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42

A. Bessemans,

de l’h6molyse complete. Or, jamais nous n’avons constate la
moindre trace de dissolution dans nos temoins.

Comme nous pouvons prouver, par un raisonnement
analogue, que notre solution de M ne renferme plus trace
d’E, nous devons considSrer la substitution r^ciproque comme
une chose demon tree.

On peut se demander maintenant si dans cette sub¬
stitution r6ciproque il existe un certain rapport; en d’autres
termes, quand on augmente la dose constante d’un constituant,
peut-on r6duire la dose de l’autre d’une quantity fixe?

Au cours des nombreuses experiences faites dans ce sens,
nous n’avons pas trouv6 ce rapport; nous avons observe, au
contraire, que la substitution se fait suivant des proportions
assez variables.

Toutefois un autre fait nous a frappe: c’est qu’on peut,
d’une fa$on constante, diminuer beaucoup plus la dose de M
pour une augmentation de l’E qu’on ne peut reduire celui-ci
pour une augmentation du M. En effet, examinons l’exp6ri-
ence IV p. ex.; nous voyons qu’en augmentant la dose de M
du simple au quadruple nous ne pouvons diminuer la dose
d’E que du simple k la moiti6 k peu pr&s alors qu’on peut
diminuer le M du simple au quart quand on augmente l’E
du simple au quadruple.

Remarquons que si nous donnons ici des chiffres ce
n’est que pour fixer les iddes; nous n’avons pas toujours con¬
state preeminent les memes proportions.

Les tableaux precedents suffiraient k prouver ce que nous
venons d’avancer; nous ne pouvons cependant nous empecher
de faire suivre encore une experience typique, faite avec du
serum age de plus de 24 heures.

Tableau V.

Dos. c*

S6rie X

S4rie II

E.decr. I

M.c. */ 40

M.c. */, 0

M.c. V I0

M.c. V„

M.d6cr.

E.c. */«,

| E.c. 7,„

E.c. 7, 0

[E.c. Vjo

^20 C

i 7,o

C

c 1

c

c

7,o

pr c

C

C

c

1 / A

40 C

i 7 <0

c

c

c

c

/,«

peu

! c

c

c

L Peu
7,«o o

7*o

I

c

c

c

\L

0

I

pr c

c

7,00

0

0

?

peu

l lfiO

0

1 0

tr

pre

hv20

0

0

0

0

1/

l[\9 0

0

1 o

0

0

T&noins: M. V 2 , 6 0 E. ’/c 0

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De l’importance respective des deux constituants de l’alexiue etc. 43

Nous sommes done forces d’admettre non seulement quo
la substitution rlciproque des deux fractions du complement
est possible dans une certaine limite, mais encore que l’E se
substitue plus facilement au M que vice-versa. Pas plus ici
que plus haut l’on ne peut objecter que la cause reside dans
le fait hypothetique que notre E renfermerait encore des traces
de M: nos doubles doses t£moins constituent la refutation.

En finissant cette question, nons tenons encore & remar-
quer qu’il ne s’agit pas ici d’un dosage quantitatif de la
richesse du serum en M et E; nos recherches ont unique-
ment pour but de determiner dans quelle mesure la substitution
peut se faire. C’est pour avoir meconnu cette derniere dans
les analyses quantitatives de la constitution de Talexine que
beaucoup d’auteurs ne peuvent pr6tendre k des resultats
irr6prochables.

Deuxdeme Partie.

Historique: Morgenroth et Sachs 1 ) ont constate le fait sui-
vant: lorsque, dans le ph<5nomene h6tnolytique, on augmente la dose de
l’ambocepteur, on peut, dans une certaine mesure, assez variable du reste,
diminuer la dose du complement.

Recherches personnelles: Devant ce fait, constate
du reste au cours de nous propres experiences, nous nous
sommes demand£s si cette possibility de diminuer Talexine
concernait ses deux parties et dans quelle proportion. Cette
id6e nous fut suggeree d’abord par la remarque de Sachs
relatee dans la l re partie de ce travail; ensuite cette recherche
n’est qu’un achfevement de nos experiences ant6rieures: car
puisque nous avons toujours travailie avec 10 fois environ
le titre de l’hemolysine, nous devions absolument examiner si
la facility de substitution preponderate de l’E n’6tait pas sim-
plement une r£gle constante pour la dose hemolytique em¬
ployee, r^gle qui ne serait peut-§tre plus vraie pour d’autres
quantit6s d’ambocepteur.

Yoici comment nous avons precede: connaissant, par un dosage prca-
lable, le titre exact de l’h4molysine avec l / J0 de complement, nous commen-

1) Morgenroth et Sachs, Berl. klin. Wochenschr., 1902, No. 35
(aus dem KgL Inst. f. exp. Ther. in Frankfurt a. M.).

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44

A. Bessemans,

90 ns par refaire ^experience de Morgenroth et Sachs, c. a.d. par deter¬
miner la plus petite quantity de complement necessaire pour avoir la disso¬
lution complete avec diverses doses d’h^molysine. Alors, avec les memes
globules ± fortement sensibilises, nous faisons les experiences suivantes:
nous prenons une constante d’E et de’M representant (pour la dose d’h&no-
lysine correspondante) la dose limite du complement ou le double de cette
dose et nous y ajoutons des quantites decroissantes de l’autre element de
l’alexine. Pour chaque dose d’hemolysine employee, nous faisons le con-
tr 6 le des doubles doses, comme plus haut.

Prenons de suite un exemple: le titre de l’hdmolysine en cause est
aux environs de , / 1600 -

Tableau VI.

Dos. c*

V* c
V*. c
'L c
M P™

Voo oonl

Vf.0 tr

■t ?

St'rie I; dose hemol. l j H00 .

S<^rie II; dose hdmol. 1 / IK0

Reconstitution du O

Dos. C*

Reconstitution du O

E. decr.jM.c. ’/^ M.deor.

E.c. V 20

E. d4cr.

M.c. V.,o

M.ddcr.

E-c. '/go

V,„

c

! 1 1

I '20

c

" 20 c

Voo

c

Voo

c

Vao

c

1 0

c

VsO C

Vso

c

Voo

c

/<o

c

1 Vso

c

Vso c

V 40

c

V 40

c

/;'»0

c

/ :»o

c

V. 0 c

Voo

c

Uo

c

‘A*.

c

j y «0

c

Vgo c

Voo

c

Voo

c

1 sO

pr c

Vso

c

/go P*"®

’/go

pr c

Vso

c

V 100

bon I

! Vi 00

pre

V 100 bon I

v

/100

pr c

v

j/lOO

c

Vho

0

^140

tr

Vu* 0

7,4.

I

/140

pre

/iso

0

1 1 ,

180

0

'/,«« '

I

V i

/ 1R0

bon I

1 f

0

! 7« 0

0

V,*o

tr

1/

' 220

peu

I /*> HO

0

1 '2S0

0

1 ••

0

V J80

?

1 1 /

. / ;u;o

0

! 1 /r(?0

0

t ‘2 SO
/ 300

0

W

i /a go

0

Temoins M

7,0 0

Temoins M V' 0

E 1

10 0

E V, 6 0

On constate, dans cette experience, qui’en augmentant
la dose d’hemolysine d u / 80 o & Vigo 00 peut diminuer l’alexine
d’Vio & Veo- Dans les m£mes conditions, on peut r6duire l’E
(vis-4-vis d’une dose constante de M) d’Veo & Vso et le M (vis-
k-vis d’une m@me dose de E) d’V 8 o & Vioo*

L’on peut done, en augmentant les doses d’hemolysine,
r6duire l’E et le M & peu pr£s dans la meme proportion; de
plus, ce rapport Concorde sensiblement avec celui de la reduc¬
tion du complement dans les memes circonstances.

Dans l’experience qui pr6cMe nous n’avons augmente la
dose d’hemolysine que du simple au quintuple; en voici une

«

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De ^importance respective des deux constituants de Talexine etc. 45

autre ofr nous l’avons augments de 1 k 20: il s’agit d’une
h6molysine r6cente dont le titre est environ Vsooo-

Tableau VLL

S£rie I; dose h6moL 1 / h

Dos. c*

Reconstitution

E. d6cr.

M.c. V s0 M. d6cr.

E.c. 7,o

c

7*

C

V 4 O C

c

740

c

7oo c

prc

7eo

c

VsO C

bon I

7so

c

/,oo Prc

peu

1/

■100

pr c

7,40 boo

0

l /

J 140

peu

7,80 pe»

0

7,so

tr

7,40 0

0

/j40

0

0

7,80

0

0

7mo

0

86rie II; dose h6mol. l / 1{

Dos. ct

Reconstitution

E. d4cr. M.c. 7 4 o , M.d6cr. E.e. l / i

;/;. c
7« c
/«* P rc
V. tr

-

/HO U

\'r

'Iso

1 /

l/ 100

1 140
j/180

1 240

w

1 '280
I320

T&noins M 7to 0
E */,o 0

'/ 4 °

/so

/,oo

/140

;/,so

^240

/r

I *20
l / 860
7 4 oo

C

c

c

prc

I

I

peu

peu

0

0

T&noins M 7 20 0
E 7,0 0

•r

1 /

>

, ,0 °

'140 '

;/,so

l Jr

Jr

Jr
1 800
t /

'400

0

c

c

c

c

c

prc

I

peu

tr

?

La mdme conclusion ressort de ce tableau: on voit en
effet qn’en augmentant 20 fois le titre de l’Mmolysine on pent
diminuer le complement, l’E et le M & peu pr£s dans la mgme
proportion, c’est k dire c. a. d. de 1 k Vs*

A noter, comme plus haut, que ces rapports ne sont
pas constants; les chiffres ne servent qu’ k rendre clairs nos
exemples.

Pour bien nous assurer de l’exactitude de nos rdsultats
nous avons refart des experiences semblables un tr£s grand
nombre de fois; nous avons travailie avec diverses h6molysines
comme avec diverses constantes. Nos resultats furent toujours
concordants: la diminution possible de l’alexine, quand on
augmente la dose hemolytique, concerne ses deux constituants;
de plus, les rapports, suivant lesquels cette reduction est pos¬
sible, sont sensiblement les mgmes.

Nous faisons suivre, pour finir, un tableau concernant
une hgmolysine dont le titre est aux environs de Vtooo, nous
y avons pris comme doses constantes de M et d’E non pas
des quantites doubles mais des quantites correspondantes k la
dose limite de l’alexine.

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46 Bessemans, De rimportance respective des deux constituants etc.

Tableau VIII.

Serie II; dose h6mol. 7#

S^rie I; dose h£mol. J /a.

Dos. c*

Reconstitution

E. deer. M.c. 7 40 M.d6cr. E.c. l / i

Dos. c*

Reconstitution

E. d^cr. M.c. V^jM.d^cr. E.c. i / l

190

V 10

:f

•r

/ 60

1

' 80
V.OC

C

C

C

C

I

peu

tr

•r

l /

/:io

l °

Voo

1/

' 80
1 '

i 100
1 /

1 140
>/

/180
1/

• 240

c

c

c

c

pr c
I

peu

tr

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0

T6moins

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7,o

V 4 o

1 ,

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Voo

‘/so

V,„0

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1/

/1 80
1 /

/ 240

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c

c

c

c

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peu

peu

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0

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1/

'»20

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7.00

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c

c

c

c

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peu
tr
0
0
0

M 1
E 1

V,o o

</

ho

,'r

loo
7oo
‘/100
7 mo

7.00

/ 080
/*? 0

0

0

I

c

c

c

c

I

tr

tr

0

0

0

Zusammenfassung.

1) Beziiglich der h&molytischen Wirkung kann M durch
E und E durch M gewissermaBen ersetzt werden.

2) Doch unterschieden sich die zwei Stflcke des Kom-
plementes hierdurch, daB M leichter durch E ais E durch M
ersetzbar ist.

3) VergrbBerte Ambozeptormengen gestatten kleinere
Komplementdosen (Morgenroth und Sachs). Unsere
Untersuchungen zeigen, daB diese Verminderung sich fast in
demselben Verhaltnis auf M und E bezieht.

En finissant ce travail, nous tenons k remercier vivement Monsieur
le Professeur R. Bruynoghe des pr^cieux conseils qu’il n’a cess£ de nous
prodiguer au cours de nos recherches.

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Zunz, Recherches sur les modifications physico-chimiques etc. 47

Nachdruck verboten.

[Travail de PInstitut de thdrapeutique de 1’University de Bruxelles.]

Recherches sur les modifications physico-chimiques du
sang au cours de l’anaphylaxie.

Par Edgard Zunz.

(Eingegangen bei der Redaktion am 2. Dezember 1912.)

I. Introduction.

8 egale l ) a etudie les modifications physico-chimiques du sang au
cours du choc anaphylactique provoque par une injection intraveineuse de
serum de boeuf chez des cobayes, des lapins et des chiens prepares par une
injection intrap4riton&ile du mkme serum 15 k 25 jours auparavant.

Chez les cobayes et les lapins, morts de fa$on aigue, le point de
congelation du serum s’est abaisse. II correspondait en moyenne pour le
serum sanguin avant Pinjection dechainante k A = — 0.57 chez le cobaye,
k A = — 0.63 chez le lapin. H est descendu dans le sang recueilli dans
le coeur immediatement avant le decks k A = — 0.67 chez le cobaye,
k A = — 0.71 chez le lapin. Ces modifications du point de congelation
du serum ne sont pas dues k un accroissement de la teneur du sang en
acide carbonique; celle ci est au contraire inferieure k la normale dans le
sang preieve dans le coeur immediatement avant la mort.

L’indice refractometrique s’est accru lore du choc anaphylactique aigu
chez le cobaye et le lapin. II a passe chez le cobaye de 1.34308 avant
Pinjection dechainante k 1.34722 aprks celle ci, chez le lapin de 1.34431 k
1.34597.

Chez les chiens, la mort ne s’est produite que quelques heures aprks
Tinjection dechainante de serum bovin. Le point de congelation du serum
a subi d’abord un accroissement fugace, soit de suite aprks Pinjection, soit
seulement au bout de 40 k 50 minutes. Plus tard est survenu un abaisse-
ment notable qui s’est accentue jusqu’au decks. Le point de congelation
du serum est ainsi descendu de —0.61 avant Pinjection dechainante k —0.80
au moment de la mort.

L’indice refractometrique a d’abord diminue, par suite de la dilution
du serum, peu de minutes aprks Pinjection dechainante chez un chien
avant succorabe k celle ci. Cette diminution s’est ensuite accentuke pour
faire brusquement place k un accroissement peu avant l’issue fatale. L’in-
dice refractometrique a ainsi pass6 de 1.34564 avant Pinjection dechainante
k 1.34806 au moment de la mort.

1 ) M. Segale, Pathologies, T. 3, 1911, p. 323—326; ibid., T. 4, 1912,
p. 12—13.

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48

Edgard Zunz,

Chez un chien, qui a pr6sent£ des ph^nomfenes fort accentufe de choc
anaphylactique pendant la premiere heure consecutive h, la reinjection intra-
veineuse de Berum bovin, mais s’est ensuite vite remis, l’indice r^fracto-
metrique s’est d’abord eieve en 40 minutes de 1.34764 h 1.35001 pour des-
cendre ensuite peu h peu et ne plus atteindre que 1.34530 deux heures
40 minutes aprfes 1’injection dechainante.

Segale n’a pas constate de variations appreciates de la conducti-
bilite eiectrique du serum sanguin chez le chien. II attribue les modifica¬
tions du point de congelation du serum et les phenomfcnes du choc ana¬
phylactique h la mise en liberte de cristalloides non electrolytes lore de
la scission in vivo des molecules proteiques chez Tanimal en etat d’ana-
phylaxie.

Dans ses intgressantes recherches, Segale ne s’est gukre
prgoccupg de l’influence bien connue de saignges successives
sur la composition et les proprigtgs du sang. D’autre part,
il s’en est tenu chez le cobaye et le lapin k l’anaphylaxie avec
mort suraigug. Ainsi que Segale le met lui mgrne fort bien
en lumikre, il vaut peut etre mieux choisir pour l’gtude du
mgcanisme de l’anaphylaxie des cas oti les phgnomknes du
choc anaphylactique ont le temps de se dgrouler plus lentement.

Or, chez les animaux sensibilisgs au moyen d’hgtgro-
albumose ou de protoalbumose, le choc anaphylactique provoqug
par l’injection dechainante de ces protgoses est, en ggngral,
moins intense et plus tardif que dans l’anaphylaxie sgrique 1 ).
Ceci m’a engagg k gtudier les modifications physicochimiques
du sang au cours de l’anaphylaxie par les protgoses. Je me
suis borng jusqu’k prgsent k l’examen de la densitg, de l’indice
de rgfraction et de la tension superficielle du sgrum sanguin

t

chez des lapins soumis k des injections sensibilisatrices d’bgtgro-
albumose ou de protoalbumose. J’ai fait, en outre, une ex-
pgrience chez le chien au cours de l’anaphylaxie sgrique; dans
ce cas, j’ai gtudig la densitg, l’indice de rgfraction, le point de
congglation et la tension superficielle du sgrum et du sang
defibring.

n. Technique.

La den ait/: a et/ d/terminZe au moyen de la balance de Westphal.

L’indice de refraction a Zt/: rnesurZ au moyen du r/fractomZtre k
immersion d’Ab be-Zeiss en opdrant les lectures k la temperature de
17.5° C. et en proccdant aux corrections ndcessaires.

1 ) E. Zunz, diese Zeitschr., Bd. 16, 1913, p. 580.

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Modificat. physico chimiques du sang au cours de l’anaphylaxie. 49

La determination du point de congelation a ete effectuee au moyen
de Pappareil de Beckmann en employant le thermomfetre de Frieden-
thal 1 ) et en prenant les precautions indiquees par Hamburger 2 ).

La tension euperficielle a ete recherchee au moyen de la methode
stalagmometrique de Traube 3 ). J’ai utilise 2 stalagmomfetres donnant
k 15° C. respectivement 55.6 et 60.8 gouttes d’eau distiliee et j’ai ramene
les resultats aux chiffres qu’on aurait observes avec un appareil donnant
a 15° C. 100 gouttes d’eau distiliee. On obtient ainsi Pindice stalagmome¬
trique 4 5 ). J’ai, de plus, calcuie la tension superficielle d’une part en dynes
par centimetre k la surface limite avec l’air en me basant sur la densite et
l’index stalagmometrique 6 ), d autre part par rapport it la tension super¬
ficielle de Peau ramenee k 1000.

Je me suis servi chez le lapin, pour les diverses injections et pour les
melanges effects au moyen des ediantillons de serum preieves k divers
moments, de liquide de Ringer soit tel quel, soit additionne de 1 %
d’heteroalbumose de Pick, de protoalbumose de Pick ou de deutero-
albumose de Kuhne. J’ai employe dans ce meme but chez le chien soit
du serum de boeuf, soit du liquide de Ringer.

Les injections preparantes ont ete effectuees dans le peritoine ou dans
la jugulaire chez le lapin, dans la jugulaire chez le chien. Les reinjections
ont toujours eu lieu dans la jugulaire.

Les saignees ont ete pratiquees de fayon aseptique dans la carotide.
Le sang a etc soit immediateraent soumis k une centrifugation rapide pour
en recueillir le serum, soit defibrine.

3H. Experiences chez le lapin.

Les tableaux I k III resument les resultats des trois experiences
faites chez le lapin.

Dans la premiere, on a examine la densite, Pindice de refraction et
Pindice stalagmometrique du serum sanguin de 4 lapins de 600 grammes
environ. On a ensuite injecte dans le peritoine du lapin A 1 c. c. d’hetero-

1 ) H. Friedenthal, Centralbl. f. Physiol., Bd. 14, 1900, p. 157—100.

2) H. J. Hamburger, Osmotischer Druck und Ionenlehre, Wies¬
baden 1902 u. 1904, Bd. 1, p. 63 u. Bd. 3, p. 305.

3) J. Traube, Emil Abderhaldens Haudb. d. biochem. Arbeits-
methoden, Bd. 5, 1912, p. 135—137.

4) E. Zunz, Arch, di Fisiol., T. 7, 1909, p. 137—148.

5) Si F et F' represented respectivement la tension superficielle de
Peau et du liquide examine, D' la densite de ce dernier et N' son indice

100

stalagmometrique, on a F' = FD' . La constante capillaire de Peau

a 15° C. correspond k 746, ce qui donne d’aprfcs les physikalisch-chemische
Tabellen de Landolt et Bornstein 73,26 dynes comme tension super¬
ficielle de Peau k 15° C. k la limite de contact extre Pair et Peau.

ZeiUchr. f. Immunftatsforschung. Orig. Bd. XVII. 4

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50

Edgard Zunz,

albumose, dans celui du lapin C 1 c. c. de protoalburaose, dans ceux des
lapins temoins B et D 1 c. c. de liquide de Ringer.

21 jours aprfes Tinjection intrap£riton£ale, chaque lapin a ete saigne.
On a reeueilli tout le sang obtenable par incision des carotides au cou.
On Ta de suite centrifuge. On a ainsi obtenu les 4 scrums a, b, c et d.

On a injects 3 c. c. de chacun d’entre eux dans le p^ritoine d’un lapin

neuf (E, F, G, H). D’autre part, on a ajoute 8 c. c. du serum a ou du
serum b k 2 c. c. de solution k 1 °/ 0 d’heteroalbumose et Ton a maintenu

ces melanges 2 heures k 38—40° C. en vase clos. On a procede de la

m&me manfere avec les scrums c et d, dont on a melange 8 c. c. k 2 c. c.
de solution k 1 °/ 0 de protoalbumose. On a prepare? ainsi les 4 melanges

a, b, c et d. Le restant de chacun des scrums a, b, c et d a 6t6 additionne
d’un volume de liquide de Ringer; on en a examine la density, l’indice
de refraction et Tmdice stalagmometrique.

On a effectu£ ces memes determinations la veille de Tinjection de
serum chez les 4 lapins E, F, G et H. 24 heures aprfcs Tinjection intra-
peritoneale de serum, on a injecte dans la jugulaire 0.6 c. c. de solution
k 1 °/ 0 d ? heteroalbumose chez les lapins E et F, 0.6 c. c. de solution kl °/ 0
de protoalbumose chez les lapins G et H. 1 heure aprfcs cette injection,
on a preieve du serum sanguin k ces animaux et Ton en a determine la
densite, Tindice de refraction et Tindice stalagmometrique. Le lapin E a
presente des convulsions qui ont debute 2 1 /, heures aprfes Tinjection intra-
veineuse d'heteroalbumose et ont cesse 3 heures environ aprfcs cette injection;
le lendemain, il etait entterement remis. Chez le lapin C, les convulsions
ont debute au bout d’une heure et demie; Tanimal est n&ort 2 l / 9 heures
environ aprfcs Tinjection intraveineuse de protoalbumose. Ces 2 lapins ont
done presente les symptomes du choc anaphylactique. Chez les lapins F
et H, traites par les serums temoins b et d, Tinjection intraveineuse d’hetero-
albumose ou de protoalbumose n’a amene ni convulsions ni autres pheno-
menes du choc anaphylactique.

On a determine la densite, Tindice de refraction et Tindice stalagmo¬
metrique du serum de chacun des 4 lapins I, J, K, L avant tout traite-
ment et deux heures aprfcs Tinjection intraveineuse de 2 c. c. du melange a,

b, c ou d. 1 / 4 heure aprfes cette injection, le lapin I, qui a refu le me¬
lange a, a presente des convulsions qui ont persiste pendant une demi
heure; le lendemain, cet animal etait comptetement retabli. Le lapin K
s’est raontre abattu et somnolent 2 heures aprfcs Tinjection intraveineuse du
melange c; un peu plus tard sont survenues des secousses aux membres,
puis des convulsions generalisees; il a succombe 3 1 /, heures aprks Tinjection
du melange c. On a, par consequent, constate des manifestations du choc
anaphylactique chez les lapins I et K. Les lapins J et L n’ont, au con-
traire, montre k aucun moment de convulsions ou d’autres sympt6mes du
choc anaphylactique.

Le tableau I indique un leger accroissement de Tindice
de refraction du s6rum 21 jours apr&s Tintroduction intra-
p6ritoneale d'hSt^roalbumose ou de protoalbumose, mais on

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Modificat. physico-chimiques du sang au cours de Fanaphylaxie. 51

Tableau I.

Indice

de

refraction

Indice

stalagmo-

metrique

Tension superficielle
calcuiee

Melange employe: liquide de Ringer -f
meme volume de s£rum du lapin

Density

en dynes par,
centimetres k
la surface li-
mite avec Fair

par

rapport
k l’eau
= 1000

A. Avant toute injection

1015

1.34233

117.8

63.11

860.1

21 jours aprfes Finjection intrapdri-
toneale d’heteroalbumose (s^rum a)

1013

1.34294

119.2

62.66

849.8

E. Avant toute injection

1012

1.33926

113.9

65.09

888.5

1 heure aprt?s Finjection intraveineuse
d'heteroalburnose pratiqu£e elle raeme
24 heures apres 1 injection intrap^ri-
toneaie de serum a

1012

1.34075

116.2

63.80

870.9

I. Avant toute injection

1012

1.33843

110.1

67.34

919.2

2 heures apr&s Finjection intravei¬
neuse de 2 c. c. de melange a (8 c. c.
de s£rura a -f 2 c. c. d’heteroalburnose,
maintenus 2 heure9 k 38—40° C)

1013

1.33873

112.6

65.91

899.7

B. Avant toute injection

1016

1.34052

118.6

62.76

856.7

21 jours aprfcs rinjection intraperi-
toneale de liquide de Ringer (s£rum b)

1015

1.34082

120.8

61.56

840.3

F. Avant toute injection

1014

1.33945

116.8

63.60

868.1

1 heure aprte Finjection intraveineuse
d’heteroalbumose pratiqu^e elle m&rne
24 heures apres Finjection intrap&ri-
toneaie de serum b

1012

1.34036

119.3

62.15

848.3

J. Avant toute injection

1009.5

1.34017

113.4

65.22

890.3

2 heures aprfcs l’injection intravei¬
neuse de 2 c. c. de melange b (8 c. c.
de s£rum b -f 2 c.c. d’heteroalburnose,
maintenus 2 heures k 38—40° 0)

1011

1.33972

115.7

63.03

860.4

C. Avant toute injection

1014

1.34086

113.8

64.75 ,

883.8

21 jours apr&s Finjection intrap^ri-
ton6ale de protoalbumose (serum c)

1012.5

1.34115

112.0

66.23

904.0

G. Avant toute injection

1009

1.34199

114.5

64.56

881.2

1 heure apr&s Finjection intraveineuse
de protoalbumose pratiqu^e elle m&me
24 heures aprbs Finjection intrap^n-
r toneale de serum c

1012

1.3-1017

115.7

65.00

887.3

K.Avant toute injection

1010

1.33926

111.3

66.48

907.5

2 heures aprks Finjection intravei¬
neuse de 2 c.c. de melange c (8 c. c.
de f^rum c + 2 c.c. protoalbumose,
maintenus 2 heures k 38—40° C)

1012

1.33968

113.9

65.09

888.5

D.Avant toute injection

1012

1.33987

114.8

64.58

881.5

21 jours aprfcs Finjection intrap^ri-
toneale de liquide de Rmger (serum d)

1013

1.34018

117.9

62.78

856.8

H.Avant toute injection

1011

1.34070

111.4

66.49

907.6

1 heure apres Finjection intraveineuse
de protoalbumose pratiqu^e elle m^me
24 heures aprks Finjection intraperi-
toneale de serum d

1012

1.33991

114.2

64.92

886.2

L Avant toute injection

2 heures aprks Finjection intravei¬
neuse de 2 c. c. de melange d (8 c. c.
de s£rum d -f 2 c. c. de protoalbumose,
maintenus 2 heures k 38—40° C)

1011

1.341)59

115.3

63.28

850.1

1011.5

1.34094

118.2

62.69

855.7

4*

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52

Edgard Zunz,

observe la m@me chose chez les t6moins injects au moyen
du liquide de Ringer. La tension superficielle s’est quelque
peu abaissSe chez le lapin A trait6 par l’hStSroalbumose et
chez les t£inoins B et D; elle a subi une 16ghre 616vation
chez le lapin C traits par la protoalbumose. La density a
l^g&rement diminu6 chez les lapins A, B, C et augments chez
le lapin D. Les minimes modifications de l’indice de refraction,
de la density et de la tension superficielle constates chez les
lapins A et C sensibilis6s par l’h6t6roalbumose ou la proto¬
albumose, dont les sdrums ont amen6 l’anaphylaxie passive
chez les lapins E et G, ne sont done nullement caract6ristiques
de l’etat d’anaphylaxie.

On ne d6c£le pas davantage, dans l’exp6rience I, de
variations typiques de la density, de l’indice de refraction et
de la tension superficielle du serum au cours du choc ana-
phylactique provoque soit par la voie de l’anaphylaxie passive
(lapins E et G), soit par Introduction intraveineuse de com¬
poses toxiques formes in vitro aux depens de l’heteroalbumose
ou de la protoalbumose. En general, la densite a legfcrement
augmente, l’indice de refraction s’est quelque peu accru, la
tension superficielle s’est 16g6rement abaissee. Ces diverses
modifications ne se sont toutefois manifestees que dans des
limites tr&s restreintes, et cela pas davantage chez les lapins
(E, I, G, K) en proie au choc anaphylactique que chez les
t6moins (F, J, H, L) n'ayant montre aucun des ph6nomenes
du choc.

Dans 1’experience II, on a recherche la density, l’indice de refraction
et la tension superficielle, aprfes 2 heures de sejour a 38°, du serum sanguin
additionne de son volume de liquide de Ringer chez 10 lapins de 900 h
1600 grammes. On a ensuite injecte a 5 d’entre eux (F, G, H, I, J) dans
le peritoine 0.2 c. c. de solution a 1 °/ 0 d’lteteroalbumose, e’est a dire 2 milli¬
grammes de proteose, par 100 grammes de poids. Les 5 autres (K, L, M,
N, O) ont reyu une injection intrap<5ritoneale de 0.2 c. c. de solution a
l"/o de protoalbumose, e’est a dire 2 milligrammes de proteose, par
100 grammes de poids.

On a sacrifte un animal de chaque seric pax saignee carotidienne 6.
12, 18, 24 et 30 jours aptes l’injection intraperitoneale. On a partage en
4 portions le serum recueilli par centrifugation bnergique de chaque
echantillon de sang. 3 d’entre elles ont <5te additionnecs respectivement de
leur volume de liquide de Ringer, de solution a 1 “/„ d’hoteroalbumose et
de solution a 1 °/ 0 de protoalbumose. On en a determine, apres 2 heures

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Modificat. physico-chimiques du sang au cours de l'anaphylaxie. 53

Tableau II.

Melange employe

Heteroalbumose
Protoalbumose
Serum
du lapin
triuoin A

f liquide de Ringer
liquide de Ringer

Serum
du lapin
F

Serum

du lapm

K

4- li<|iiidede Ringer
+ heteroalbumose
-p protoalbumose

avant traitement -f liquide de Ringer
6 jours a pres Tin- j + liquide de Ringer
jection u'hetoro- : + heteroalbumose
albumose ( -f protoalbumose
avant traitement + liquide de Ringer
6 jours apres Fin- | + liquide de Ringer
jeetion de proto- { + heteroalbumose
albumose ( -p protoalbumose

Heteroalbumose + liquide de Ringer
Protoalbumose -p liquide de Ringer j

Serum | -f liquide de Ringer
du lapin J ~p heteroalbumose
-f protoalbumose

avant traitement + liquide de Ringer
12 jours a pres Tin- | + liquide de Ringer
jeetion d’hetero- + heteroalbumose
albumose | -p protoalbumose
avant traitement + liquide de Ringer
12 jours apr< N *s Fin- | + liquide de Ringer
jeetion de proto- + heteroalbumose
albumose ( + protoalbumose

Heteroalbumose -p liquide de Ringer
Protoalbumose -p liquide de Ringer
Serum j -p liquide de Ringer
du lapin J -p heteroalbumose
temoiii C ( -f protoalbumose

avant traitement + liquide de Ringer
18 jou rs apres Tin- j + liquide de Ringer
jection d'h^tero-! + heteroalbumose ,
albumose ( + protoalbumose
avant traitement + liquide de Ringer
18 jours apr&s Tin- j + liquide de Ringer,
jection de proto- < + heteroalbumose j
albumose | + protoalbumose

Heteroalbumose + liquide de Ringer
Protoalbumose -P liquide de Ringer
Serum j + liquide de Ringer
du lapin 4* heteroalbumose
temoinD ( -p protoalbumose

temoin 13

Serum
du lapin
G

St* rum
du lapin
L

S'* rum
du lapin

M

Indice de
refraction

Indice stalagmo-
metrique

Tension super-
ficielle calculee

*tc

o

o

■

en dynes par
centimetre a
la surface li-
mite avecTair

! ,*Q

& ii

cc

M -

y s

1010

I 1.33555

i

130.0

56.86

776.1

1008

! 1.33598

; 128.5

! 58.84

703.2

1016

1.34135

118.9

92.70

867.2

1015

1.34021

120.2

61.86

844.4

1015

1.31067

119.3

(>2.55

850.8

1024

1.34078

113.2

i 66.27

904.6

1017

1.34105

1 112.1

00.64

909.6

1016

1.31124

115.4

64.50

,880.4

1015

1.34211

119.7

| 63.72

809.8

1016

1.34017

117.5

63.35

864.7

1012

1.33*85

112.6

65.84

898.7

1011

1.34124

120.2

61.62 ,

841.1

lull

1.34075

113.4

65.31

891.5

1009

1.33724

128.3

57.61 ;

785.0

1008

1.33578

126.2

54.51 ,

744.1

1016

1.34014

115.1

64.50 1

1 880.4

1015

1.34026

120.2

61.86

S44.4

1015

1.31086

122.7

60.60

827.2

1021

1.33953

129.8

58.99

805.2

1019

1.33960

115.4

95.82

898.4

1017

1.33949

118.0

63.14

861.9

1016 ,

1.33994

119.5

92.10

851.8

1012 ;

1.33843

110.1

67.34

, 919.2

1U14 1

1.33972

111.2

66.80

i 911.8

1019

1.34044

120.4

61.67

i 841.8

1012

1.34025

122.7

60.42

824.8

1009

1.33999

130.4

56.67

773.5

1007

1.33517

127.9

57.67

781.2

1016

1.34033

119.2

62.44

852.3

1015

1.34162

121.2

61.34

837.3

1014 ■

1.34217

123.6

60.10

820.4

1018

1.33904

111.7

66.77

925.1

1018

1.33937

111.4

66.95

913.9

1017

1.34011

114.5

65.07

888.2

1017

1.34109

117.6

63.35

; 864.7

1010

1.33976

112.8

65.60

895.4

1013

1.33953

110.8

67.01

914.7

1012

1.34044

119.7

02.75

856.5

1012

1.34025

118.3

62.62

854.8

1009

1.33501

131.8

56.08

765.5

1008

1.33517

127.9

57.74

788.2

1015

1.33991

113.1

65.75

897.6

1013

1.34006

115.1

64.51

880.6

1014

| 1.34075

116.2

63.93

872.6

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54

Edgard Zunz,
Tableau II (Suite).

Melange employ^

Indice stalagmo-
m£trique

en dynes par ,
centimetre k 2 §
la surface li-
mite avec Fair | ® §

super-

»lcul£e

✓as Q
><

£-

§■»

s

o-r.

117.8

63.00

858.6

114.5

66.72

910.7

121.2

61 26

836.2

119.3

62.24

849.6

117.5

63.35

864.7

112.6

63.78

897.9

122.7

60.30

823.2

123.4

59.90

817.6

125.4

59.00

805.4

131.7

56.13

766.2

112.6

66.10

902.3

110.3

67.32

918.9

121.7

61.10

834.0

110.4

67.15

916.6

115.5

64.29

877.6

119.7

61.77

843.2

118.0;

62.87

858.2

, 110.3

67.01

914.7

116.2

63.74

870.1

117.3

63.08

861.0

120.2 |

61.56

340.3

’indice

stalagmo

i.

8£rum
du lapin

avant traitement + liquide de Ringer 1014
94 irmra onrha Pin_ J _L ImniHo Ho T?in nr or* 1014

24joursaprbsl’in- j + liquidede Ringer
jection d’h<5t£ro- J + het<5roalbumose
albutnose | 4- protoalbumose i
avant traitement + liquide de Ringer |
24 joursaprfesl’in- j + liquidede Ringer
jection de proto- J -j- het^roalbumose i
albumose | + protoalbumose j

H£t6roalbumose + liquide de Ringer i

Protoalbumose + liquide de Ringer I

Serum
du lapin
N

8£rum
du lapin
t£moin E

S^rum
du lapin
I

S£rum
du lapin
O

+ liquidede Ringer
+ htHt'roalbumose
+ protoalbumose

avant traitement + liquide de Ringer 1
30 joursanresl’in- j -f liquidede Ringer
jection a’het4ro-j +het4roalbumose
albumose | + protoalbumose
avant traitement + liquide de Ringer
30joursapres l’in- | + liquidede Ringer
jection de proto- J -fheteroalbumose |
albumose | + protoalbumose

1013

1013

1016

1011

1010

1009

1010

1009
1016
1013
1015
1012
1013
1012
1012
1013
1011

1010
1010

1.34014
11.34209
1.34221
I 1.34267
1.34245
1.34256
11.34271
I 1.34399

! 1.33945
1.33544
i 1.33999
! 1.34109
1.34105
1.33.999
j 1.34094
1.34193
1 1.34216
1.34109 ,
. 1.33995
1 1.34207
1.34225

de sejour & 38°, la density, l’indice de refraction et Findice stalagmo-

mdtrique. On a proc&ie a cos memes recherches dans 3 melanges prepares
par addition d'un volume du serum d ? un lapin neuf t£moin (A, B, C, D, E)
k du liquide de Ringer, a de FhtffiSroalbumose ou h de la protoalbumose et
dans 2 melanges d’h&eroalbumose ou de protoalbumose et du m£me volume
de liquide de Ringer, maintenus 2 heures k 30—40° C en m£me temps
que les autres liquides examines.

La quatrieme ]>ortion de serum recueillie lors du sacrifice des lapins
prepares au moven d ? h£t6roalbumose ou de protoalbumose, a et£ inject£e
dans le p6ritoine de lapins neufs, de 500 a 6(X) grammes, qui ont re$u le
lendemain line injection intraveineuse de 2 centigrammes d’het^roalbumose
ou de protoalbumose selon le cas par 100 grammes de poids. On n’a con¬
stat^ aucun symptfime de choc anaphylactique chez les animaux qui ont
reyu le s6rum provenant des lapins (F, G. K, L) sacrifice 6 ou 12 jours
aprfes Finjection preparante. 11 en est de meme lore de Finjection intra¬
veineuse d’het^roalbumose chez Fanimal traits 24 heures auparavant par le
s£rum du lapin H, sacrifie 18 jours apr&s Fintroduction intrap£riton6ale
de cette meme proteose. Les serums des autres lapins (I, J, M, N, O) ont

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Modificat. physico-chimiques du sang au coure de l’anaphylaxie. 55

ament? de l’anaphylaxie passive. Celle ci n’a toutefois entrain^ d’issue fatale
que chez l’animal ay ant 1-6911 le s4rum du lapin N, soumis 24 jours aupara-
vant a une injection intrap4riton£ale de protoalbumose. Cet animal a
succomb£ 26 heures environ aprbs l’introduction intraveineuse de proto¬
albumose. Les lapins sacrifi^s 24 et 30 jours aprbs l’injection d’h6t£ro-
albumose se trouvaient par consequent en etat d'anaphylaxic. Tel 6tait
aussi le cas de ceux sacrifies 18, 24 et 30 jours aprbs l’introduction intra-
peritoneale de protoalbumose.

Des rSsultats rassembl6s dans le tableau II d^coulent les
donnSes suivantes: La densitd des divers melanges se rapproche
davantage de celle du s6rum que de celle du liquide qui y a dtd
ajoutd. La density du s£rum est un peu moindre lors de la
seconde saignde que lors de la premibre chez 5 lapins (F, G,
K, N, 0), un peu supdrieure chez 3 autres (J, L, M); elle
est restee la m§me chez les 2 derniers (H, I).

L’indice de refraction des divers melanges prepares au
moyen des s6rums des lapins soit neufs, soit traitds par l’het6ro-
albumose ou la protoalbumose, subit un accroissement par
rapport k ses deux constituents. Sauf pour les melanges
prepares avec le serum du lapin temoin A, l’indice de re¬
fraction depasse celui du sdrum qui entre dans la constitution
du melange examine. Ceci est plus accuse pour les melanges
prepares avec les serums des lapins traites par l’heteroalbu-
mose ou la protoalbumose que pour les autres. On n’observe
pas de differences k cet egard selon que le serum consider
ambne ou non l’anaphylaxie passive et selon le laps de temps
ecouie depuis l’injection intraperitoneale de proteose. L’indice
de refraction du serum s’est 16g&rement accru lors de la
seconde saignee, sauf chez les lapins K, M et 0, chez lesquels
il a au contraire quelque peu diminu6.

La tension superficielle des divers melanges est inter¬
mediate & celles des deux constituants, tout en se rapprochant
d’ordinaire davantage de celle du serum. On n’observe pas
de differences k ce propos entre les animaux temoins et ceux
traites par l’h6teroalbumose ou la protoalbumose. Sauf chez
les lapins L, J et 0, la tension superficielle du s6rum est plus
basse lors de la premiere saign6e que lors de la seconde.

3 lapins A, B et C, pesant respectivement 2050, 2150 et 2150 grammes
ont servi k la troisi&me experience. On a procede & intervalles de 10 jours
k 4 injections intraveineuses de 2 c. c. de liquide de Ringer chez le

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56

Edgard Zunz,

premier, de solution & 1 % d’h^tcroalbumose chez le second, de solution a
1 °/ 0 de protoalbumose chez le troisibme. On a pro love avant chaque in¬
jection 40 k 50 c. c. de sang dans la carotide et Ton en a s£par6 le s£rum.
On a introduit lors des deux dernieres saigntfes une partie du s£rum dans
le peritoine cPun lapin de 500 k GOO grammes, auqucl on a injects le
lendemain par voie intraveineuse 5 c. c. de liquide de Ringer, de solution
k 1 °/ 0 d’heteroalbumose ou de solution k 1 % de protoalbumose. On a
partage le restant du s<$rum ou tout le s^rum selon le cas en 4 portions,
auxquelles on a ajoute le meme volume soit de liquide de Ringer, soit
de solution k 1 % d’Wteroalbumose, de protoalbumose ou de deut^ro-
albumose. On a maintenu 2 heures a 38 % C les 4 melanges ainsi pr^par£s
aux depens de chaque serum en meme temps que des melanges temoins
de volumes £gaux de liquide de Ringer et de solution k 1% d’hetero-
albumose, de protoalbumose ou de deut^roalbumose. On s’est born6 k
determiner l’indice de refraction de ces divers melanges. 4 heures apres
la derniere injection, on a de nouveau preleve du st*rum sanguin, qu’on a
examine de la meme manure que les autres echantillons de s£rum.

Aucun des 3 lapins A, B, C n’a presente de symptomes du choc
anaphylactique k la suite des seconde et troisierne injections. La quatrieme
n’a pas davantage entrain^ de phenomenes speciaux chez les lapins traites
par la protoalbumose ou par le liquide de Ringer. 5 heures */., apres la
dernikre injection, le lapin traite par l’het£roalbumose a commence a montrer
des seeousses musculaires aux membres posterieurs, auxquelles ont succede
d'abord des convulsions gen oral i sees, puis de rabattement. L’animal
paraissait n^anmoins dejk enticrement retabli le lendemain.

On n’est parvenu a obtenir de symptGmes, d’ailleurs pas tres accuses,
du choc anaphylactique dans les essais d’anaphylaxie passive que chez les
lapins injectes lc jour precedent au moyen du s^rum recueilli avant la
quatrieme injection d’heteroalbumose ou de protoalbumose. On ne semble
done avoir realise l’etat d’anaphylaxie qu’apres la troisierne injection de
proteose.

Le tableau III ne permet pas de d6celer d’influence bien
nette des saignees et des injections successives sur l’indice de
refraction du serum. II est, chez les 3 lapins examines,
legerement inferieur lors de la saignee faite 4 heures aprfes
la derni^re injection au chiffre trouve lors de la saignee
effectuee avant celle ci. Rien ne permet de distinguer sous
ce rapport le lapin C, qui parait etre & ce moment en proie
au choc anaphylactique des 2 autres.

L’indice de refraction des divers liquides prepares au
moyen des serums des lapins A, B et C et d’het6roalbumose
ou de protoalbumose depasse ceux des 2 constituants du melange
examine. L’indice de refraction des liquides obtenus par ad¬
dition de volumes egaux de deuteroalbumose et de serum d’un

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Modificat. physico-chimiques du sang an cours de 1’anaphylaxie. 57

Tableau III.

Indice de refraction

Melange employe

avant la

avant la

avant la

avant la

quatre

heures

premiere

seconde

troisieme

quatrieme

apres la

injection

injection

injection

injection

cjuatrifeme

injection

Heteroalbumose

-b liquide de Ringer

1.33567

1.335S2

1.33559

1.33563

1.33555

Protoalbumose

4- liquide de Ringer

1.33521

1.33574

1.33555

1.33540

1.33547

Deuteroalbumose -b liquide de Ringer

1.33517

1.33598

1.33559

1.33521

1.33525

Serum du lapin A rece-

1+ liquide de Ringer

1.34029

1.34063

1.33919

1.34033

1.33972

vant tons les 10 jours.

+ heteroalbumose

1.34286

1.34192

1.34203

1.34188

1.34025

des injections de li¬

+ protoalbumose

1.34120

1.34226

1.34177

1.34143

1.33999

quid e de Ringer

deuteroalbumose

1.33972

1.33858 !

1.34088

1.34097

1.33955

Serum du lapin B rece-

-f liquide de Ringer
+ heteroalbumose

1.34184 1

1.34071 i

1.34067

1.34097

1.33972

vant tous les 10 jours

1.34203

1.34264 '

1.34260

1.34249 !

1.34037

des inject, d’hetero-

-b protoalbumose

1.34207

1.34229 !

1.34207

1.34184 !

1.34014

albumose

-b deuteroalbumose

1.34207

1.33919 i

1.83904

1.33865 !

1.33723

Serum du lapin Crece-

-b liquide de Ringer
+ heteroalbumose

1.34029

1.34056

1.33919

1.34109

1.34002

vant tous les 10 jours

1.34275

1.34275

1.34267

1.34256

1.34166

des inject, de proto-^

-b protoalbumose

1.34139

1.31181

1.34188 1

1.34229 :

1.34162

albumose

-f deuteroalbumose

1.33964 j

1.33976

1.33885 |

1.33976 |

1.33944

des lapins B ou C est intermediate 4 ceux des 2 constituants
du melange, mais plus proche de celui du serum. C’est aussi
le cas, 3 fois sur 5, pour les melanges de deuteroalbumose et
de serum du temoin A; les 2 autres fois, l’indice de refraction
du melange depasse ceux de ses 2 constituants. L’indice de
refraction de chacun des melanges prepares avec le serum
recueilli avant la derniere injection intraveineuse est legerement
superieur k celui du melange correspondant prepare avec le
serum recueilli 4 heures apr&s celle ci. La diminution de
l’indice de refraction due soit k la derniere saign6e, soit k
la derniere injection, est parfois un peu plus accusee dans les
melanges que dans le serum correspondant; d’autres fois,
elle Test au contraire moins.

Les resultats des experiences II et III cadrent fort bien
ensemble dans leurs grandes lignes. On n’observe pas de
modifications caracteristiques de l’indice de refraction du sdrum
pendant l’6tat d’anaphylaxie ou le choc anaphylactique. L’in¬
dice de refraction des melanges d’het6roalbumose ou de proto-
albumose et de serum de lapin neuf ou sensibilise par l’une
ou l’autre de ces proteoses s’accroit sous l’influence d’un sejour
de 2 heures k 38—40° C.

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Chien B Chien

58

Edgard Zunz,

IV. Experiences chez le chien.

On a injects 20 c. c. de s6*rum de bceuf dans la jugulaire d’un
chien A de 8‘/ a kilogrammes. On a introduit le m6me jour 20 c. c. de liquide
de Ringer dans la jugulaire d’un chien t£moin B pesant 8700 grammes.
On a rdjx'N? ces injections au bout de 28 jours. Lore de la reinjection, le
premier chien a montr£ d’abord une vive excitation, puis un abattement
trfes profond qui a d^bute 2 heures aprfcs ^introduction intraveineuse de
serum de bmuf, a atteint son plus fort degre au bout de 4 k 5 heures,
existait encore au bout de 8 heures et avait entiferement disparu le len-
demain. La temperature rectale du chien A est tombee de 39.7 avant la
reinjection a 37.2 au bout de 2 et k 36.4 au bout de 4 heures, pour remonter
a 36.9 au bout de 6 et h 38.2 au bout de 8 heures. La temperature
rectale du chien temoin B s’est. legerement accrue (0.6°) aprfcs la reinjection;
elle a passe de 39.5 avant la reinjection k 39.8 au bout de 2, 40.1 au bout
de 4, 39.7 au bout de 6, 39.9 au bout de 8 heures. Get animal n’a pas
presente d’autres sympt/mies spedaux. I^e lendemain de la reinjection,
la temperature rectale du chien A eorrespondait a 39.2, celle du chien
B a 39.3.

On a preievd du sang it chacun des 2 chiens avant Finjection ou la
reinjection et 6 heures apri>s celles ci. On a prepare du serum et du sang
detibrine aux depens de chaque prise de sang. On a recherche la densitc*,
l’indice stalagmometrique et le point de congelation de ces divers liquides.
On n’a pu determiner l’indice de refraction que pour les echantillons de
serum. J^e tableau IV indique les divers chiflres ainsi obtenus.

Tableau IV.

<

Tension super-
ficielle calculee

!

£ P ar

£ g % rapport
f St 4 it I’eau

-o'l 2 si= iooo

_ s lol

avant la premiere in-1 serum 1024 1.34884 0.56 119.6 I 62.72 ' 864.3

jection de scr. de bauif J sang detibrine 1048 1 — 0.00 122.4 ’ 62.73 864.5

6 hrs. apres la premiere \ serum ‘ 1023 1.34707 0.575 120.8 62.04 j 846.8

injection de ser. de Ixeuf | sang detibrine 1019 — 0.61 123.7 62.13 j 848.1

28 jours apres la premie-) serum ( 1025 1.34922 0.58 118.9 , 63.07 I 860.9

re inj. de ser. de bumf j sang detibrine 1052 ( — 0.565 125.3 61.51 839.5

6 hrs. apres la seeonde \ serum 1028 4.34855 0.595 | 120.3 62(>0 I 854.5

injection deser.de bceuf | sang defibrinG 1 1055 , — 0.58 127.1 60.81 830.1

avant la premiere inj. 1 serum , 1021 1.34605 f 0.57 117.8 63.40 | 865.4

de liquide de Ringer J sang detibrine. 1047 — j 0.585 j 126.3 60.73 i 829.0

6 hrs. apres la premiere ( serum 1020 1.34489 ! 0.59 119.2 62.69 I 855.7

inj. dejupiide de Ringer j sang detibrine 1049 — 0.60 i 129.6 59.30 809.4

28 jrs. apres la premiere \ serum 1025 1.34809 0.58 118.4 63.41 865.5

inj. de liquide de Ringer f sang detibrine; 1050 — I 0.59 | 126.6 (>0.76 829.4

6 hrs. apres la seeonde \ serum 1024 1.347021 0.6)0 121.7 j 61.56 840.3

inj. de liquide de Ringer j sang delibrinc?| 1054 | — j 0.595 125.8 | 61.44 838.7

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Modificat. physico-chimiques du sang au cours de l’anaphylaxie. 59

La density du serum et celle du sang defibrine sont
devenues un peu plus considerables 6 heures aprfcs 1’injection
ou la r6injection qu’avant celle ci. Tel n’est toutefois pas le
cas pour le serum du chien A lors de la premiere injection
de serum de boeuf.

Apres chaque injection ou reinjection, l’indice de refraction
du sdrum a leg^rement diminu6, l’abaissement du point de
congelation du serum et du eang defibrine se sont quelque
peu accentues et la tension superficielle du serum s’est
legfcrement abaissee. II en a 6te de mdme de la tension
superficielle du sang defibrine, sauf pour le chien B lors de
la reinjection.

Ces legfcres modifications de la densite, de l’indice de
refraction, du point de congelation et de la tension superficielle
dependent plutot de la saign6e qui a precede l’injection ou
la reinjection que de ces dernieres.

La densite du serum et celle du sang defibrine ont quel¬
que peu augmente 28 jours aprfcs l’injection intraveineuse de
serum de bceuf ou de liquide de Ringer. L’indice de refraction
du s6rum s’est legerement accru dans ces conditions.

Le point de congelation et la tension superficielle du
serum et du sang defibrine n’ont pas subi de variations chez
le chien ternoin B sous l’influence de l’injection de liquide de
Ringer. On obtient les memes chiffres & peu prfes avant l’in¬
jection et avant la reinjection pratiquee 28 jours plus tard. Chez
le chien A soumis 4 une injection intraveineuse de serum de
boeuf, l’abaissement du point de congelation du serum s’est
legerement accentue et la tension superficielle du s6rum s’est
quelque peu eievee 28 jours apr£s cette injection. Par contre,
l’abaissement du point de congelation du sang defibrine a
legerement diminue et la tension superficielle du sang defibrine
s’est quelque peu abaissee. II ne s’agit toutefois 1&, en realite,
que de fort minimes modifications.

L’experience, dont les resultats sont relates dans le tabl. IV,
ne met pas en evidence de differences nettes concernant les pro-
priet.es pbysicochimiques du serum et du sang defibrine entre le
chien A traite par le serum de boeuf et le ternoin B. L’etat
d’anaphylaxie provoque chez le chien par une injection intra¬
veineuse prealable de serum bovin n’entraine point de modi-

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00

Edgard Zunz,

fications caract^ristiques des propriety physicochimiques du
serum et du sang d6fibrin6. II semble en etre de meme du
choc anaphylactique.

Peut etre serait oil cepcndant parvenu a deceler certaines diffe¬
rences a ce dernier point de vue si Ton avait examine le sang des 2 ani-
maux en experience plus tot apres 1’injection et la reinjection, de fajon a
prelever le sang du chien A lors du maximum des phenomfcnes du choc
anaphylactique. Cela n’est neanmoins guere problable, si l’on se base sur
les donnees obtenues chez ees memes animaux par l’etude du pouvoir
proteoclastique du serum et du sang defibrine, dont il sera question dans
une communication ulterieurc. On observe, en efl'et, des differences tres
curactcristiques a cet egard entre les chiens A et B lore des saignees pra-
tiqiiees G hen res apres la reinjection.

V. Considerations generates.

Les leg&res modifications des propri6tes physicochimiques
du sang, observes chez le lapin et chez le chien aprtis l’in-
jection parenterale d’hetdroalbumose, de protoalbumose ou de
serum de boeuf, ne caract^risent nullement l’dtat d’anaphylaxie
ou le choc anaphylactique, car on les retrouve au meme degr6
chez les animaux temoins. Elies paraissent siraplement tra-
duire les effets des saignees ant6rieures et peut §tre aussi de
l’introduction intraperitoneale ou intraveineuse d’un certain
volume de liquide.

On serait peut etre arrive a des constatations plus im-
portantes en prGlevant les prises de sang & d’autres moments,
en examinant le plasma au lieu du serum ou du sang de¬
fibrine, en s’occupant de la viscositd, de la deviation de la
lumi&re polaris6e ou de la conductibilit6 fHectrique.

Quoi qu'il en soit, on ne doit pas s etonner outre mesure
des resultats des pr6sentes recherches. En effet, des qu’on
ne part plus d’un compose chimique bien defini et relativement
simple, mais d’un milieu aussi complexe que le serum ou le
sang defibrin6, les m6thodes physicochimiques se bornent 4
indiquer la r6sultante d’une s6rie de processus fort diffdrents
les uns des autres et de sens parfois opposes 1 ).

L’indice de refraction des melanges d’h6t6roalbumose ou
de protoalbumose et de s6rum de lapin neuf ou traits par

1) E. Zunz, Emil Abderhaldens Handb. d. bioehem. Arbeitsmethod.,
Bd. 3, 1910, p. 251-252.

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Modificat. physico-chimiques du sang au cours de l’anaphylaxie. 61

Tone de ces proteoses, maintenus 2 heures k 38—40° C,
s’accroit par rapport k ses constituants et d^passe meme l’indice
de refraction le plus 61ev£, c’est k dire celui du serum. L’indice
de refraction des melanges de deuteroalbumose et de serum
de lapin reste en general dans ces conditions intermediaire &
ceux de ses 2 constituants, tout en se rapprochant davantage
de celui du serum; il depasse n6anmoins parfois ce dernier.
La densite et la tension superficielle des divers melanges de
serum et de proteose se rapprochent d’habitude davantage de
celles du serum que de celles de la solution d’heteroalbumose
ou de protoalbumose ajoutee au serum.

L’accroissement de l’indice de refraction et les autres
minimes variations des proprietes physicochimiques des me¬
langes de s6rum et de proteose, observees apr&s 2 heures de
sejour & 38—40° C, ne permettent pas d’etablir de distinctions
entre les lapins en etat d’anaphylaxie ou de choc anaphylacti-
que et les animaux normaux. On ne parvient pas £t se ren-
seigner de cette manure sur les modifications du pouvoir
proteoclastique du sang au cours de 1’anaphylaxie. En presence
des nombreuses difficultes, auxquelles se heurte l’emploi des
methodes physicochimiques k l’etude de la digestion des pro-
teines, il vaut certes mieux recourir & la recherche directe du
pouvoir proteoclastique par des methodes appropriees.

Zusammenfassung.

1) Bei mittels Heteroalbumose oder Protoalbumose vor-
behandelten Kaninchen erleiden die Densitat, die Refraktions-
zahl und die Oberfl&chenspannung des Serums keine charakte-
ristischen VerSnderungen wahrend des praanaphylaktischen
Stadiums, des anaphylaktischen Zustandes oder des anaphy-
laktischen Shocks.

2) Beim mittels Ochsenserum vorbehandelten Hunde
weisen die Densitat, die Refraktionszahl, die Oberflachen-
spannung und der Gefrierpunkt sowohl des Serums als des
defibrinierten Blutes keine charakteristischen Veranderungen
wahrend des anaphylaktischen Zustandes oder des anaphy¬
laktischen Shocks auf.

3) Nach 2-stfindigem Verbleiben bei 38—40° C zeigen
Gemische von Heteroalbumose oder Protoalbumose und vom

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62

A.

gleichen Serumvolumen eines normalen Oder eines mittels
Heteroalbumose Oder Protoalburaose vorbehandelten Kanin-
chens eine hohere Refraktionszahl als beide ungemischten Be-
standteile.

4) Die Refraktionszahl der Gemische von Deuteroalbumose
und vom gleichen Serumvolumen eines normalen Oder eines
mittels Heteroalbumose Oder Protoalbumose vorbehandelten Ka-
ninchens nahert sich gewohnlich mehr der Refraktionszahl des
Serums als der der Deuteroalbumoselbsung; manchmal tiber-
steigt sie sogar die Refraktionszahl des Serums.

5) Die Densit&t und die Oberflachenspannung der ver-
schiedenen Serum-Heteroalbumose- und Serum-Protoalbumose*
gemische liegen zwischen denen beider Bestandteile des Ge-
misches, nahern sich aber meistens denen des Serums mehr
als denen der zugefugten Proteosenlosung.

Nachdmck verboten.

[Aus dem pathologisch-bakteriologischen Institut zu Osaka, Japan.]

Passive Uebertragbarkeit der Tuberkulincmpfindlichkeit
durch Tuberkuloseserum and dessen Wertbestimmung
durch dieselbe Wirkung.

Von Professor A. Sata.

Mit 5 Kurventabellen im Text.

(Eingegangen bei der Redaktion am 17. Dezember 1912.)

Nachdem die passive Uebertragbarkeit der Anaphylaxie zu-
erst von Pirquet und Schick nachgewiesen und von Otto
als passive Anaphylaxie bezeichnet worden ist, fiihrten die
spateren Untersuchungen vonNicolle,Friedmann,Fried-
berger und Doerr einerseits und Braun, Kraus und No¬
votny andererseits nicht zu einem libereinstimmenden Re-
sultat.

Was die passive Uebertragbarkeit der Tuberkuliniiberempfindlichkeit
betrifft, so sind die Angaben der Autoren auch nicht iibereinstimmend.
Yamanouchi glaubte zwar, passive Uebertragbarkeit bei Tuberkulose fest-
gestellt zu haben, wahrend jedoch die Nachpriifungen von Eitner und
Stoerk, sowie Roepke, Busch und Friedmann negativ ausfielen.

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Passive Uebertragbarkeit der Tuberkulinempfindlichkeit etc. (33

Helmholz glaubte mit der Pirquetschen kutanen Tuberkulinreaktion
die passive Uebertragbarkeit. der Tuberkulinuberempfindlichkeit auf das ge-
sundeTier bewiesen zu haben, doch fiihrteOnakas Untersuchung in der-
selben Versuchsanordnung zu negativem Resultat. Also scheint die passive
Uebertragbarkeit der Tuberkulinuberempfindlichkeit durch eine Uebertragung
des tuberkulfisen Serums bei den Versuchen der meisten Autoren nicht
nachgewiesen zu sein. Dagegen gelang es sowohl Bail als auch On aka,
normale Meerschweinchen durch tuberkuloses Gewebe vom infiziertcn Tiere
gegen eine Tuberkulininjektion empfindlich zu machen. Im Gegensatz hier-
zu erzielten Joseph und Kraus, Lowenstein und Volk nur in einem
sehr geringen Bruchteil ihrer Versuche eine positive Uebertragung der Tuber¬
kulinuberempfindlichkeit, und siebetrachten, wie auch Neufeld undDold,
die Frage der Mdglichkeit einer passiven Tuberkuloseiiberempfindlichkeit
als noch durchaus unentschieden.

RegelmSBige positive Resultate sind von Friedberger
und Mita in den Verhandlungen der V. Tagung der raikro-
biologischen Vereinigung mitgeteilt. Die Autoren zeigen, daB
sowohl fiir die aktive wie die passive Tuberkuloseanaphylaxie
die gleichen GesetzmaBigkeiten gelten wie fiir die Serumanaphy-
laxie. Speziell gelang es ihnen durch intraperitoneale Injektion
von Antituberkelserum regelmfiBig eine Erapfindlichkeit gegen-
uber sonst tbdlichen Dosen zu erzielen.

Bei diesen widersprechenden Angaben verschiedener
Forscher interessierte es mich, den betreffenden Gegenstand -
nochmals einer eingehenden Nachpriifung zu unterziehen, um
festzustellen, ob die passive Uebertragbarkeit der Tuberkulin¬
uberempfindlichkeit durch eine Uebertragung meines Tuber-
kuloseserums wirklich erzielbar ist. Nun konnte ich durch
eine groBe Reihe von Versuchen an Meerschweinchen nicht
nur die passive Uebertragbarkeit derselben aufs sicherste nach-
weisen, sondern es ergab sich auch die Moglichkeit, damit die
Wirkungen des Tuberkuloseserums zu priifen.

Wir haben einer Anzahl Meerschweinchen erst Tuberkulose-
serum in verschiedenen Mengen von 0,1, 0,5 Oder 1,0 ccm intra-
venos oder intraperitoneal, sowie subkutan eingespritzt, und
nach einem, zwei und drei Tagen jeder einzelnen Reihe von
Versuchstieren das Alttuberkulin der Reaktionsdosis in 0,05 ccm
oder tddliche Dosen in 0,5 ccm injiziert und die Temperatur
vor und nach der Injektion genau gemessen. Unerw&hnt mochte
ich nicht lassen, daB die hier angewandten Versuchstiere iramer
frisch gelieferte kerngesunde Meerschweinchen waren, daB die

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64

A. Sata,

s&mtlichen Tiere nach den Versuchen getdtet und obduziert
wurden, urn etwaige natflrliche Infektion der Tuberkulose zu
kontrollieren.

Die folgenden Versuche wurden in der Zeit von Anfang
Februar bis zum Beginn des Mai 1912 von meinem Assistenten
Herrn Dr. M. T an aka nach meinem Plan auf das sorgfaltigste
bei zahlreichen mittelgroBen Meerschweinchen mit Tuberkulose-
serum ausgefuhrt.

I. Versuch A (mit Tuberkuloseserum).

a.

1) Es wurden am 1. Tage 6 Meerschweinchen (a; IA und B, IIA
und B, III A und B) 0,1 ccm Tuberkuloseserum (No. 22) intravenos inji-
ziert und eine halbe Stunde vorher und nachher 10 Stunden lang ihre
Temperatur stiindlich gemessen.

2) Am niichsten Tage, genau nach 24 Stunden, wurde zwei davon
(I A und B) 0,05 Alttuberkulin subkutan eingespritzt und mit alien anderen
Meerschweinchen ihre Temperatur ebenso gemessen wie gestern. Zu er-
warten war die Temperatursteigerung als Tuberkulinreaktion bei den Tieren
(I A und B), welchen Tuberkulin eingespritzt wurde, wenn ihnen durch
eine vorangehende Einspritzung des Tuberkuloseserums eine Tuberkulin-
iiberempfindlichkeit passiv ubertragen worden war. Es war geradezu priizis
eine deutliche Temperatursteigerung zu beobachten, was nicht der Fall war
bei den unten zu erwahnenden Kontrolltieren, welchen das Normalpferde-
serum vorher eingespritzt worden ist.

3) Am 3. Tage, also genau nach 48 Stunden. wurde noch 2 (IIA
und B) der iibrigen 4 Meerschweinchen wieder 0,05 ccm Alttuberkulin
subkutan eingespritzt und ihre Temperatur ebenso gemessen wie das vorige
Mai. Wieder eine deutliche Temperatursteigerung, im Gegensatz zu den
Kontrolltieren.

4) Am 4. Tag, genau nach 72 Stunden, wurde den letzten 2 Meer-
sehweinchen (III A und B) wieder 0,05 Alttuberkulin subkutan eingespritzt
und ihre Temperatur genau ebenso gemessen, wie das andere Mai.

Wieder eine merkliche Temperatursteigerung.

Diese Versuche (iberzeugen uns mit aller Sicherheit, dafi
eine einmalige intravenose Einspritzung des angewandten Tuber¬
kuloseserums von 0,1 ccm auf Meerschweinchen eine deutliche
Tuberkulinuberempfindlichkeit gegen eine subkutane Injektion
von Alttuberkulin in einer Reaktionsdosis (0,05 ccm) passiv
zu ubertragen vermag, daB diese passiv iibertragene Tuber-
kulinempfindlichkeit schon nach 24 Stunden entsteht und bis
nach 3 Tagen anhalt.

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Tabelle

66

A. Sata,

b.

Es wurde wieder 6 Meerschweinchen (b; IA und B, IIA und B,
III A und B) genau in derselben Anordnung am 1. Tag das Tuber-
kuloseserum in der Menge von 0,1 ccm intraperitoneal eingespritzt und
am niichsten Tage 2 davon Alttuberkulin 0,05 ccm subkutaninjiziert,
am 3. Tage wieder 2 von den iibrigen, und am 4. den iibrigen 2 Meer¬
schweinchen gleichfalls Tuberkulin subkutan injiziert.

Hier war wieder eine Temperatursteigerung so deutlich,
dafi eine passive Uebertragbarkeit auch durch eine einraalige
intraperitoneale Einspritzung des Tuberkuloseserums sicher ist.

c. 4

Das 3. Mai wurden die Versuche genau in derselben Anordnung, nur
mit einem einzigen Unterschied, namlich der subkutanen Einspritzung des
Tuberkuloseserums ausgefiihrt. Es ist klar zu ersehen, dafi die genannte
Uebertragung auch durch eine einmalige subkutane Einspritzung des Im-
munserums mdglich ist (c; IA und B, IIA und B, III A und B).

I. Versuche B (Kontrolle mit Normalserum).

Es wurden Kontrollversuche genau in derselben Anordnung mit einem
Normalpferdeserum von 0,1 ccm bei 6 Meerschweinchen durch intravenose
Einspritzung desselben, wieder bei 6 Meerschweinchen durch intraperitoneale
Einspritzung, und das 3. Mai bei 6 Meerschweinchen durch subkutane Ein¬
spritzung ausgefiihrt (a, b, c; IA und B, IIA und B, III A und B) und
es wurde nachgewiesen, dafi eine einmalige Einspritzung des Normalpferde-
serums in der angewandten Dosis die Versuchstiere gegen spatere Tuber-
kulininjektion nicht zu beeinflussen imstande ist.

n. Versuche A (mit Tuberkuloseserum).

In genau derselben Anordnung wurden die Versuche aber nur mit
dem Tuberkuloseserum No. 22 in Dosis von 0,5 ccm bei im ganzen 18 Meer¬
schweinchen in ebenso drei Reihen (a, b, c; IA und B, IIA und B, III A
und B) ausgefiihrt und wurde wieder nachgewiesen, dafi das Tuberkulose¬
serum in Dosis von 0,5 durch eine einraalige intravenose, intraperitoneale
oder subkutane Einspritzung den Versuchstieren sowohl nach 24 Stunden,
als auch nach 2 oder 3 Tagen eine deutliche Ueberempfindlichkeit ver-
leihen kann.

EL Versuche B (Kontrolle mit Normalserum).

Bei diesen Kontrollen in derselben Versuchsanordnnug mit einem
Normalpferdeserum bei 18 Meerschweinchen in drei Reihen war eine merk-
liche Temperatursteigerung nach einer spatcren Tuberkulininjektion nicht
zu beobachten, ein Zcichen, dafi das Normalpferdeserum im Gegensatz zum
Tuberkuloseserum in der angewandten Dosis keinen Einflufi auf Meer¬
schweinchen gegen Tuberkulin ausuben kann (a, b, c; IA und B, IIA und
B, III A und B).

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Tabelle II.

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Passive Uebertragbarkeit der Tuberkulinempfindlichkeit etc. 67

68

A. Sata,

TTT. Versuche A (mit Tuberkuloseserum).

Els wurden hier nochmals mit Tuberkuloseserum (No. 22) von 1,0 ccm
genau dieselben Versuche bei 18 Meersehweinchen in drei Reihen wieder-
holt und wurde konstatiert, daB das Serum in dieser Dosis auch die Ver-
suchstiere gegen spiitere Injektion von Tuberkulin beeinflussen kann (a, b,
c; I A und B, IIA und B, III A und B).

in. Versuohe B (Kontrolle mit Normalpferdeserum).

Bei diesen Kontrollen in derselben Versuchsanordnnng, mit dem Nor-
malserum in Menge von 1,0 ccm bei 18 Meersehweinchen in drei Reihen
war das Resultat aber abweichend von den oben erwalinten zwei Kontrollen.
Es war eine sichtliche Temperatursteigerung gegen spiitere Tuberkulinin-
jektion zu bemerken. Els ergibt sich also, dafi das Normalpferdeserum in
grofier Menge (1,0 ccm) gerade wie das Immunsemm eine Ueberempfindlich-
keit gegen Tuberkulin den Meersehweinchen zu verleihen imstande ist.

Es wurden auBerdem die Versuche mit einer noch gerin-
geren Dosis von Tuberkuloseserum (0,05 ccm) wiederholt, aber
dann war die Reaktion schon nicht mehr deutlich.

Wenn man die Fieberreaktion nach Tuberkulininjektion
sowohl bei vorhergehender intravenbser als auch intraperito-
nealer wie subkutaner Einverleibung des Tuberkuloseserums
bei den gesamten Versuchstieren vergleichsweise betrachtet,
so bemerkt man, daB die Reaktion bei intravenbser Einspritzung
des Immunserums vom ersten Tage bis nach dem dritten Tag
allm&hlich sich ahschwacht, w&hrend dieselbe bei subkutaner
Einspritzung gerade im Gegenteil sich vom ersten Tag bis zu
dem dritten verst&rkt. Die Reaktion bei intraperitonealer
Einspritzung nimmt gerade eine Mittelstellung ein, so daB
sich hier in 3 Tagen kein groBer Unterschied zeigt.

Auch bei der Einspritzung einer groBeren Dosis von
Immunserum (1,0 ccm) ist der Unterschied der Reaktion
zwischen verschiedenen Verabreichungsweisen nicht groB und
es ist ja fast selbstverstandlich, weil die eingespritzten wirk-
samen Substanzen hier nicht rasch ausgeschieden werden
konnten.

Nach meiner Feststellung von der Entstehung der Tuber-
kulinuberempfindlichkeit durch eine passive Uebertragung mei-
nes Tuberkuloseserums war es naheliegend, auf diese Weise

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Tabelle III.

70

A. Sata,

die Wirksamkeit der Immunsera zu messen. TatsSchlich
scbeint mir das gelungen zu sein und ich hoffe, im weiteren
Verlaufe die Methode zur Wertmessung der Immunsera in
dieser Weise vervollkommnen zu konnen.

IV. Wertbestimmung der Tuberkulosesera.

Es wurden drei verschiedene Tuberkulosesera (No. 22, 25 u. 48) in
bestimmter Dosis (0,1 ccm) genau in derselben Versuchsanorduung 18 Meer-
8chweinchen in drei Reihen (a, b, c; IA und B, II A und B, III A und B)
subkutan eingespritzt und nach einem Tag eouie nach 2 und 3 Tagen
je zwei Meerechweinchen 0,05 ccm Tuberkulin subkutan injiziert, und die
darauf folgende Reaktion in jeder Reihe in Vergleich gestellt, so dab man
durch graduelle Unterschicde der aufgetretenen Reaktionen die Intensitiit
der spezifischen Wirksamkeit der Immunsera messen kann.

Tabelle IV.

IV. Versuche iiber die Wertbestimmung des Tb.-Scrums durch passive
Tuberkulinempfindlichkeit.

Die Tuberkuloseseren No. 22 und 25 sowie 48 stammen
von den Pferden mit denselben Nummern. Das Pferd No. 22
wurde seit 2 Jabren (seit Februar 1010) durch subkutane wie
intravenose Einspritzungen meistens von Alttuberkuliu, selten
von abgetoteten Tuberkelbacillen, immunisiert und bei Pferd

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Passive Uebertragbarkeit der Tuberkulinempfindlichkeit etc. 71

No. 25 wurde meist intravenose und nur sehr selten subkutane
Einspritzung von Alttuberkulin allein seit Mai 1910 wiederholt
ausgefuhrt, w&hrend Pferd No. 48 die lebenden Tuberkelbacillen
vom Typus humanus von 0,1—0,5 g seit August 1911 14mal
intravends eingespritzt wurden.

Aus den Kurven ist wohl ersichtlich, daB bei den obigen
Versuchen die Temperatursteigerung bei Serum No. 22 am
starksten ausgesprochen ist, wahrend sie bei Serum No. 48
am schwfichsten aufgetreten ist. Das Serum No. 25 nahm
eine Mittelstellung ein.

Nachdem die passive Ueberempfindlichkeit mittels einer
Reaktionsdosis von Alttuberkulin festgestellt worden ist, liegt
es nahe, daB die hier entstandene Ueberempfindlichkeit mittels
einer todlichen Dosis von Tuberkulin durch den bekannten Tuber -
kulintod in eklatanter Weise nachgewiesen werden kbnnte.

In dieser Hinsicht wurden folgende Versuche angestellt:

V. Feststellung der passiven Ueberempfindlichkeit duroh

Tuberkulintod.

1) Wieder in derselben Anordnung wurde von dem Tuberkuloseserum
No. 22 je 1,0 ccm 6 Meerschweinchen (a; I A und B, IIA und B, III A
und B) intravenos, 6 Meerschweinchen (b; I A und B, II A und B, III A
und B) intraperitoneal, 6 Meerschweinchen (c; IA und B, II A und B,
III A und B) subkutan injiziert und je 2 davon nach 24 Stunden, je 2
anderen nach 2 Tagen und den 2 letzten nach 3 Tagen das Alttuberkulin
in todlicher Dosis von 0,5 ccm subkutan eingespritzt.

Aber der erwartete Tuberkulintod ist hier nicht einge-
treten, wenn auch die s&mtlichen Tiere nach der Tuberkulin-
injektion jedesmal mit einer bedeutenden Temperatursteigerung
Oder mit einem Sturz nebst folgender Steigerung der Korper-
temperatur antworteten.

2) Deshalb wurden nochmals dieselben Versuche mit einer vermehrten
Dosis des Tubcrkuloseserums von 1,5 ccm angestellt. Die Menge wurde
6 Meerschweinchen (a; I A und B, II A und B, III A und B) intravenos
und 6 Meerschweinchen (b; I A und B, II A und B, III A und B) intra¬
peritoneal eingespritzt und gleichfalls 0,5 ccm Alttuberkulin nach jedem
der folgenden Tage subkutan eingespritzt.

Das Resultat war wieder negativ; d. h. ein typischer
Tuberkulintod ist trotz heftiger Reaktion nicht aufgetreten.

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72

A. Sata,

3) Dana warden die Versuche in einer klcinen Modifikation aus-
gefiihrt derart, daB das Alttuberkulin in einer Dosis von 0,5 ccm intravenos
eingespritzt wurde, naehdem 6 Meerschweinchen (a; I A und B, IIA und
B, III A und B) vorher Tuberkuloseserum (je 1,0 ccm) intravenos, 6 Meer-
Bchweinchen (b; IA und B, II A und B, III A und B) intrapcritoneal und
ebenfalls 6 Meerschweinchen subkutan eingespritzt worden war.

Nun war das Resultat erst eklatant, indem die gesamten
Tiere, welche sowohl 24 Stunden als auch 2 wie 3 Tage nach
der intravenosen, intraperitonealen Oder subkutanen Serura-
injektion das Tuberkulin erhielten, nach einer intravenosen
Injektion von 0,5 ccm desselben einen stiirmischen Tempe-
raturabfall, heftige Krampfe, plotzlichen Oder innerhalb einiger
Stunden eintretenden typischen Tuberkulintod zeigten. Die Tiere
(a; I A und B, II A und B, III A und B), denen das Serum
intravenos eingespritzt worden war, gingen nach der Tuber-
kulininjektion sofort zugrunde, 2 (b; III A und B) von den
Versuchstieren, denen eine intraperitoneale Seruminjektion ge-
macht worden war, starben ebenfalls plotzlich, wahrend 4 davon
(b; IA und B, IIA und B) nach einer Stunde, und 2 (c; I A
und B) von den Meerschweinchen mitvorhergehender subkutaner
Seruminjektion nach 4V 2 Stunden, 2 (c; IIA und B) weitere nach
8 V 2 Stunden und die 2 iibrigen (c; III A und B) gleich nach
der Tuberkulininjektion zugrunde gingen.

Damit ist der Beweis erbracht, daB die durch Tuberkulose¬
serum tibertragene passive Tuberkulinuberempfindlichkeit in
dem Grad zu erreichen ist, daB ein typischer Tuberkulintod
hervorgerufen werden kann.

V. Versuche B (Kontrolle fiir obige Versuche).

Es bleibt zu priifen iibrig, ob ein solcher Tod auch nach
einer vorangehenden Injektion des Normalpferdeserums durch
Tuberkulin wurde hervorgerufen werden.

Zu diesern Zwecke wurden die Kontrollversuche in gennu derselben
Anordnung mit einem Normalpferdeserum gleichfalls bei 6 Meerschweinchen
(a; IA und It, IIA und B, III A und B) nach einer intravenosen Injektion
des Normalserums, bei 6 Meerschweinchen (b; IA und B, IIA und B,
II A und B, III A und B) nach intraperitonealer Seruminjektion und bei
6 Meerschweinchen (c; IA und B, IIA und B, III A und B) nach sub¬
kutaner Injektion ausgefiihrt. Nun war die Reaktion nach einer folgenden
intravenosen Injektion von 0,5 ccm des Tuberkulins bei den samtiichen
Tieren leicht und nur ein Temperatursturz zu sehen, a her ein Tuberkulintod
nicht bei einem einzigen Tiere zu beobaebten.

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Tabelle

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UNIVERS

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74 Sata, Passive Uebertragbarkeit der Tuberkulinempfindlichkeit etc.

Aus den oben erw&hnten 5 verschiedenen Versuchen mit
dem Tuberkuloseserum und Normalpferdeserum geht hervor,
daB das angewandte Tuberkuloseserum durch eine einmalige
intravenose, intraperitoneale Oder subkutane Einspritzung in
der Dosis von 0,1, 0,5 und 1,0 ccm den gesunden Meer-
schweinchen eine deutliche Tuberkuliniiberempfindlichkeit zu
verleihen imstande ist, welche nicht nur gegen eine Reaktions-
dosis von 0,05 des Alttuberkulins mit einer merklichen
Temperatursteigerung antwortet, sondern auch bei einer
tbdlichen Dosis von 0,5 den typischen Tuberkulintod zur
Folge hat.

Zum UeberfluB sei noch hinzugefiigt, daB alle Neben-
erscheinungen bei der Tuberkulinreaktion und dem Tuberkulin¬
tod in bekannter Weise ausgesprochen waren.

Alle Kontrollversuche mit dem Normalpferdeserum gaben
einen ausschlaggebenden Beweis dafiir, daB dasselbe nicht
derartiges hervorzurufeu imstande ist. Nur dann kommt dem
Normalpferdeserum eine Slmliche Wirkung zu, wenn dasselbe
in groBerer Dosis (1,0 ccm) eingespritzt wird. AuBerdem ver-
mag das Tuberkuloseserum auch nicht in relativ zu geringer
Dosis (0,05 ccm) derartige Ueberempfindlichkeit hervorzurufen,
was nattirlich von der YVirksamkcit des angewandten Immun-
serums abhangig seiu wiirde.

Interessant ist das Resultat der vcrgleichenden Unter-
suchung mit verschiedenen Immunseren in bestimmter Dosis
in Bezug auf die passive Uebertragbarkeit der Tuberkulin-
empfindlichkeit. Man kann damit eine Wertmessungsmethode
der Tuberkulosesera herausbilden.

Wenn man nun das gesamte Resultat nnjiner Versuche
mit dem anderer Untersucher vergleicht, so fiillt es auf, daB
die Ergebnisse sehr abweichend waren. Nacli meiner Meinung
liegt der Grund fur so abweichende Resultate zweifellos darin,
daB man das Serum der tuberkulosen Menschen angewandt
hat, welches ja in seiner spezifischen Wirkung sehr abweichend
und offers gar nicht stark genug sein kann. Mit Antituber-
kuloseserum Hochst und Marburg haben auch Friedberger
und Mita positive Resultate erhalten. Diesen Autoren ge-
lang es sogar, die Fieberdosis von Tuberkelbacillen nach den
Gesetze der Multipla mit Immunserum zu neutralisieren.

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A. Sata, Spezifische Wirkungen des Tubeikuloserums etc.

75

Zusanimenfassung.

1 ) Die Tuberkulinuberempfindlichkeit ist durch eine ein-
malige Uebertragung des Tuberkuloseserums auf das gesunde
Meerschweinchen sicher erzielbar.

2 ) Die dadurch entstandene passive Tuberkuliniiberempfind-
lichkeit zeichnet sich nicht nur durch eine typische Temperatur-
steigerung gegen Tuberkulininjektion bei Verwendung einer
Reaktionsdosis aus, sondern es ist dabei auch ein typischer
Tuberkulintod durch eine Injektion tbdlicher Tuberkulindosen
erzielbar.

3) Darait ist die passive Uebertragbarkeit der Tuberkulin-
Qberempfindlichkeit durch Tuberkuloseserum aufs sicherste
nachgewiesen.

4) Es ergibt sich noch die Moglichkeit, damit die Wirkung
des Tuberkuloseserums zahlenmaCig zu prufen.

Nac ltd ruck verbotcn .

[Aus dem Pathologisch-bakteriologischen Institut zu Osaka, Japan.]

Untersuchungen fiber die spezifischen Wirkungen des
Tuberkuloseserums durch AnaphylatoxiiiYcrsuchc.

Von Professor A. Sata.

(Eingegangen bei der Redaktion am 17. Dezember 1912.)

Nachdem die Erscheinungen der Anaphylaxie sowohl durch EiweiB-
arten als auch durch tierisehe und pflanzlirhe Gifte sowie Bakterien von
Kichet, Behring, Arthus, Pirquet und Wolff-Eisner gefunden
und damit verschiedene Versuche iit>er aktive und passive Anaphylaxie von
Rist, Axamit, Otto, Rosen a u und Anderson, Kraus und Doerr
sowie Friedberger angestellt worden sind, hat der letztere mit seinen
Mitarbeitern in umfassender system at ischer Untersuchung festgestellt, dab
bei gc'eigneter Kombination von Antigen. Antikorper und Komplement ein
Gift „Aiiaphvlatoxin u enteteht, welches aber l>ei weiterer Behandlung
schlieblich in ungiftige Spaltprodukte abgebaut wird. Diese Angaben
Fried bergers iiber die Darstellung des Anaphylatoxins aus Bakterien
im Reagenzglas wurden durch R. Kraus und besonders durch F. Neu-
feld und Dold bestatigt. Allerdings bedurfte Kraus zur Erzeugung des
Giftes bedeutend groBerer Mengen von Bakterien als Friedberger, Neu-
feld und Dold.

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76

A.. Sata,

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Was die Versuche mit Tuberkelbacillen anbetriflt, so hat vor allem
Friedberger mit Goldschmidt und Schiitze durch geeignete Mengen-
und Zeitverhaltnisse das Anaphylatoxin dargestellt, wahrend Neufeld und
Dold trotz variierender Menge keine regelmiiBige Giftwirkung erzielten.
Schliefilich ist Aronson im Gegensatz zu Neufeld und in Ueberein-
stimmung mit Friedbergers Annahrae die Herstellung des Anaphyla-
toxins aus Tuberkelbacillen stets gelungen. Nach ihin liegt das meist
negative Resultat Neufeldsan der geringen Menge der Bakterien, wahrend
es nach Neufeld vielleicht an der vcrschiedenen Beschaffenheit der Kul-
turen liegt. Nun konnte Friedberger das Anaphylatoxin durch die Ein-
wirkung des MeersehweinchenkomplementB allein erzielen, was auch Aron¬
son bestiitigt. Zahlreiche Versuche Aronsons ergaben noch, ,,daS der
Ambozeptor bei der Giftbildung aus Bakterien sicher keine Rolle spielt“,
daft bei den mit Immunserum behandelten Bakterien eine schnellere Ent-
giftung nicht eimvandfrei konstatiert wurde (bei Typhus- und Milzbrand-
bacillen), wiihrend bei den Versuchen von Friedberger und Schiitze
erst eine Giftabspaltung, dann aber eine rasche Giftzcrstdrung so gut wie
regelmaBig erfolgt.

Nachdem ich das von mir hergestellte und klinisch mit
Erfolg angewandte Tuberkuloseserum einer eingehenden Anti-
kbrperpriifung unterzogen hatte, lag es nahe, mit diesem Serum
eine Reihe von Versuchen bezuglich einer Anaphylatoxinbildung
auszufiihren, urn erstens die vielfach bestrittene Frage einer
Nachprufung zu unterziehen, und um zweitens damit die Wir-
kung meines Serums festzustellen. Nach zahlreichen Vorver-
suchen in mannigfach wechselnder Anordnung kam ich schlieC
lich zuin folgenden Resultat, welches zunachst tabellarisch,
dann kurz im Text zusammengestellt werden soil, w&hrend die
sich auf mehrere Monate erstreckenden V'orversuche der Kiirze
halber unerwahnt bleiben.

Die vorliegenden Versuche wurden von mir im Laufe des
Februar und Marz 1912 in groBer Reihe und an zahlreichen
Meerschweinchen angestellt, von denen hier nur fiber einige
berichtet werden soil.

Meine Anaphylatoxindarstellung wurde nach Friedberger aufs
sorgfiiltigste in folgcnder Weise ausgefiihrt: Die von ea. 30-tagigen Agar-
kidturen stanimenden Tuberkelbacillen wurden zwischen reichlichem FlieB-
papier abgepreBt und ca. 8 Stunden im Brutofen getrocknet, danach in
bestimrnten Quantitiiten abgcvvogen und erst fur sich, dann mit einer be-
stimmten Menge von Komplement im Achatmorser verrieben. Wenn die
Bakterien mit Immunserum vorbehandelt werden sollten, so wurde hier die
abgewogene Bakterienmasse erst fiir sich und dann mit abgemessenen

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■

Ueber die spezifischen Wirkungen des Tuberkuloseserums etc. 77

Quantitaten Kochsalzlosung sorgfiiltig in der Achatschale verrieben und in
einzelne Keageuzglaser verteilt und dann bestimmte Mengen Immunserum
und Kochsalzlosung zugesetzt, so dafi das Gesamtquantum 3,0 oder 5,0 ccm
betrug. Dann wurden sie schliefilich mit Komplement digeriert.

Natfirlich wurden die Versuche unter den verschiedensten
Bedingungen angestellt und konnten schliefilich bestimmte
Mengen- und Zeitverhaltnisse festgelegt werden, wobei die
angenommenen Einflusse des Immunserums gegeniiber der
Giftspaltung im Vergleiche mit Normalserum ermittelt werden
konnten.

Versuch IA.

Anaphylatoxinbildung aus Tuberkelbacillen durch Komplement.

Datum

Versuch

o

Tb.

Kom¬

plement

Bei

38°

Std.

%£

o

l|

Keaktionen

Ausgang

Sektionsbefund

13.IL

i

1

0,05

4,0

2

Dyspnoe, sitzt

uberlebt

wie tot, lauft

nach 7 Min.

2

0,1

4,0

2

100

dgl., nur leichter

tot 14. II.

Lungenblahung

3

0,2

4,0

2

120

Dyspnoe

IIUCUIS

tot nach

leichte Lungen-

2 Min.

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amie

12.11.

2

4

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2

120

Dyspnoe, leichte

iiberlebt

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5

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dgl.

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120

Dyspnoe, sitzt

tot 15. II.

Lungenblahung

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1

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6 Std.

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120

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120

dgl.

dgl.

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4

11

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4,0

2

120

dgl.

Lungenblahung

(56° 300

4,0

2

120

dgl.

dgl.

12

0,3

(56° 300

24.11.

5

13

0,2

2,0 (56°

2

120

Dyspnoe

tot nach

starke Lungen¬

300 + 2,0

3 Min.

blahung

(CINa-Los.)

14

0,3

2,0 (56°

2

120

fast reaktionslos

uberlebt

300 + 2,0

(ClNa-L6s.)

Digitized by Go gle

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

78

A. Sat a,

Versuch I B.

Anaphylatoxinbildung aus Tuberkelbacillen durch Koraplement.

Da, *

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Tb.

Kom-

plement

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38°

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9. III. 1

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1

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tot nach starke Lungenbliih-

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7 Std. ung mitHyperainie

, kriimpfe

und Ekehym.

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11

5

5

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iiberlcbt

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Abzugs

1

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von

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No. 5

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110 schwach

iibcrlebt

9

0,3

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2 l ,V, J

115 ; heftige Dyspn.

sof. tot leichte Lungenbliih-

Kompl. j und Krumpfe i I ung

Aus den obigen Versuchen geht hervor, daC die opti-
malen Mengenverhaltnisse von Tuberkelbacillen und Koraple¬
ment bei 0,2 und 4,0 liegen (heftige Reaktion und plotzlicher
Tod), wahrend bei den iibrigen Mengenverhaltnissen eine so
eklatante Reaktion nicht zu sehen war (Versuch I A, 1, 2, 3).

Merkwiirdig ist es, dad das heftig wirkende Anaphylatoxin
auch mit inaktiviertem Koraplement oder dessen Kochsalz-
verdtinnung darstellbar war (Versuch I A, 4, 5).

Wenn man Tuberkelbacillen von 0,1, 0,2 oder 0,3 mit
Komplement von 4,0 2‘/ 2 Stunden oder 5 Stunden digeriert,
so erzielt man Anaphylatoxin in verschiedener Starke (Ver¬
such I B).

Es wurden einmal die Tuberkelbacillen erst mit Kochsalz-
lbsung fur 2V 2 Stunden im Brutofen gelassen, dann deren Abzug
und Bodensatz jedes fur sicli mit Komplement digeriert und
dabei wieder eine Anaphylatoxinbildung nachgewiesen (IB).

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Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

V miphvhitoxii) bildun^ huh den mit TutH^rkiiioHCseniiu beludenen Tuberkullnioillen dtireli Koniplcment.

Ueber die spezifischen Wirkungen des Tuberkuloseserums etc. 79

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

80

A. S& ,

Versuch

Anaphylatoxinabspaltung und -zerstorung aus den mit Tuberkulosescrum

Gesamt-

—

+9

—

o

Datum

Versuch

6

Tb.

quantum
von ClNa-
Losung
mit Tb. u.

Tb.-Serum
(55° 30 Min.)

Normal-
pferdeserum
(55° 30 Min.)

Bei

38°

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a

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5

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5

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77

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90

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Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Ueber die spezifischen Wirkungen des Tuberkuloseserums etc. 81

HB.

oder Normalpferdeserum beladenen Tuberkelbacillen durch Komplement.

Reaktionen

Ausgang

Sektionsbefund

heftige Krampfe u. Dyspnoe
wie So. 1, nur leichter
leichte Krampfe u. Dysp., lebhaft,
plotzlich gefallen, Krampfe
anfangs lebn., dann plotzl. Krampfe
heftige Dyspnoe

tot nach 1 Std. 3 M.
tot nach 49 Min.
tot nach 1 Std. 15 M.

tot nach 31 Min.
tot nach 3 Min.

an fangs lebh., dann ruhig wie gelahmt

'tot nach 3 Std. 12 M.

schwere Dysp., dann: sitzt u. lauft
leichte Dyspnoe

leichte Dyspnoe, liiiift, lebhafte Spr.,
heftige Krampfe
dgl.

tot nach 5 Std. 42 M.
tot nach 5 Std. 20 M.
tot nach 10 Min.

tot nach 11 Min.

Lungenblahung

99

99

starke Lungenblah. mit leichter
Blutung

Lungenblahung mit leichten
Ekchym.
dgl.

it

starke Lungenblahung

Lungenblahung mit leichten
Ekchym.

leichte Kriirapfe, starkes Herzkl. und
Dvspnoe, aber lebhaft, sitzt
wie So. 11, ruhig, leicht. Herzkl. u.

Dyspnoe, lauft sofort lebhaft
schwere Dysp. u. Spriinge, heftige Kr.
schwere Kriimpfe u. Dyspnoe, wie tot,
atniet wieder, sitzt ruhig
lebhaft, lauft sofort
leichte Dysphoe und Krampfe, sitzt
ruhig

starke Dvspnoe, wie gelahmt, Spr.,
heftige Krampfe

heftige Dysp., fast Stillstand, schw.

Krampfe, legt sich, fast tot
heftige Krampfe u. Dyspnoe, einige
Agonal atmung

heftige Krampfe u. DyspnoS, Nasen-
bluten, liegt wie tot

iiberlebt

tot nach 8 Min.
iiberlebt

99

99

tot nach 10 Min.
iiberlebt

tot nach 3 Min.
iiberlebt

hochradige Lungenblahung

hochgrad. Lungenblahung mit
-blutung.

hochgrad. Lungenblahung mit
leichten Ekchym.
dgl.

heftige Krampfe und Dyspnoe, fast
tot, erholt sich aber
lebhaft, lauft sofort
leichte Dyspnoe, lauft lebhaft
reaktionslos, unbedeutende Spriinge
und Dyspnoe
leichte Dyspnoe, lebhaft

heftige Krampfe und Dyspnoe
dauernd heftige Krampfe u. Dysp.,
Buckenlage

heftige Krampfe und Dyspnoe
dgL

iiberlebt

99

99

99

sofort tot

tot nach 5 Min.

tot n. 17 Std. 15 M.

tot nach 5 Min.
dgl.

ganz leichte Lungenblahung
hochgradige Lungenblahung
leichte Blkhung

hochgradige Lungenblahung
leichte Lungenblahung

ZeiUchr. f. ImmaniUtsfoncbonf. Orig. Bd. XVII.

6

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

82

A. Sata,

Bei diesen Versuchen wurden die Tuberkelbacillen erst
mit Immunsernm in verschiedenem Zeitraum vorbehandelt,
dann mit Komplement digeriert und zur Kontrolle mit Koch-
salzl5sung Oder mit Normalpferdeserum vorbehandelt. Das
Resultat war ein bischen variabel, aber stets ein bestimmter
EinfluB des Immunserums klar ersichtlich, so daB die Kontroll-
tiere immer pldtzlich starben, wShrend die fibrigen viel lSnger
lebten. Es erweist sich also in Uebereinstimmung mit
Friedberger, daB das Anaphylatoxin durch die Vorbe-
handlung des Immunserums rasch zum weiteren Abbau gefiihrt
wird (Versuch II A, siehe p. 79).

Wie oben dargestellt, wurden dann weitere Versuche vor-
genommen, um Einfltisse des Immunserums im Vergleiche mit
Normalserum in noch ausgedehnterer Weise festzustellen. Zu
erwarten war, daB die mit Immunserum-Anaphylatoxin be-
handelten Tiere viel l&nger leben wurden, w&hrend die mit
Normalserum-Anaphylatoxin behandelten Kontrolltiere rasch
zugrunde gehen sollten. Allerdings war das Resultat der
ersten Versuchsreihe ziemlich variabel und das der zweiten
auch nicht sehr eklatant, aber hier ist der EinfluB des
Immunserums doch augenscheinlich, so daB ein ersichtlicher
Unterschied in den Reaktionen zwischen den beiden Gruppen
besteht, wenn man die Erscheinungen nach der Injektion in
Betracht zieht.

Eklatant war das Resultat der dritten Reihe, in der alle
Versuchstiere, nur mit einer einzigen Ausnahme, fast reaktions-
los blieben, w&hrend die Kontrolltiere mit einer einzigen Aus¬
nahme sofort starben. Auf Grund dieser Versuche wird man
kaum Zweifel hegen an dem EinfluB der Vorbehandlung mit
Immunserum auf die Giftzerstdrung.

Wenn die Tuberkelbacillen in gewissen Mengen (Optimum
0,2 g) nach einer Beladung mit dem Immunambozeptor
(Tuberkuloseserum) durch Komplement (frisches Meerschwein-
chenserum) unter bestimmter Bedingung digeriert werden, so
entsteht erst ein typisch wirkendes Gift (Anaphylatoxin-
abspaltung).

Wenn die Tuberkelbacillen aber bei sonst derselben Be¬
dingung noch starker beladen werden, so wird das entstandene

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Gck igle

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Ueber die spezifischen Wirkungen des Tuberkuloseserums etc. 33

Gift rasch zum zweiten Abbau gefuhrt(Anaphylatoxinentgiftung),
wahrend das Gift noch in voller Wirksamkeit bei den Kon-
trollversuchen besteht, bei welchen die Tuberkelbacillen bei
sonst derselben Bedingung nur mit dem Normalpferdeserum
beladen werden.

Daraus kann man wohl eine spezifische und giftzerstOrende
Wirkung des Tuberkuloseserums ersehen.

Zum SchluB will ich nicht unerwahnt lassen, dafi die
Reaktionen nach der intravenosen Einspritzung des digerierten
Abzuges sehr mannigfaltig aufzutreten pflegten. Sie bestehen
im wesentlichen aber in den bekannten Dyspnogn, Zuckungen,
SpringkrSmpfen, Lahmungen und spater Atemstillstand. Die
Tiere gehen 8fter pldtzlich Oder binnen einiger Minuten zu-
grunde. Die Lungen sind charakteristisch ad maximum dila-
tiert, oft mit Hamorrhagien.

Zusammenfassung.

1) Das Anapbylatoxin ist aus Tuberkelbacillen in Fried-
bergers Sinne bei Innehaltung gewisser optimaler, quan-
titativer und zeitlicher Bedingungen leicht herzustellen.

2) Das Anaphylatoxin wird entweder durch einfache
Behandlung der Bacillen mit Komplement, Oder durch Vor-
behandlung mit Normalpferdeserum sowie Immunserum leicht
hergestellt.

3) Ein weiterer Abbau des Anaphylatoxins in niedere un-
giftige Spaltprodukte ist durch eine Modifikation der Versuchs-
bedingungen herzustellen.

4) Bestimmte EinflQsse des Immunserums auf diese
GiftzerstSrung wurden nachgewiesen.

6 *

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84

A. Sat a

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Nachdruck verboten .

[Ails dem Pathologisch-bakteriologischen Institut zu Osaka, Japan.]

Untersuchungen fiber die spezifischen Wlrkungen des
Tuberkuloseserums durch Mlschungsversuche you Tuber-
kulin and Tuberkuloseserum.

Von Professor A. Sata.

Mit 1 Kurventafel.

(Eingegangen bei der Redaktion am 18. Dezember 1912.)

Auf Grund der M5glichkeit einer Bildung des Anaphyla-
toxins aus Tuberkelbacillen und besonders der giftabspaltenden
wie -vernichtenden Wirkung meines Tuberkuloseserums er-
scheint mir naheliegend, daB man durch eine einfache Mischung
von Gift und Imunserum, bei geeigneten Zeit- und Mengen-
verhaitnissen und in bestiramter Temperatur, auch in vitro
erst einen giftigen Stoff, dann aber wieder dessen Abbaustoff
herstellen kbnnte. Tatsachlich ist es uns nach zahlreichen
Versuchen gelungen, durch eine bestimmte Mischung von
Alttuberkulin, eventuell Tuberkelbacillenpulver-Emulsion einer-
seits und Tuberkulose-Imunserum andererseits (1:1 oder
1:9) nach einem bestimmten Zeitraum bei Bruttemperatur
einen Giftstoff herzustellen, welcher bei Meerschweinchen,
durch intrayenSse Oder subkutane Injektion, eine Temperatur-
steigerung oder einen Temperatursturz nebst anderen Sym-
ptomen, sowie auch anaphylaktischen Tod hervorzurufen
imstande ist. Dieser Stoff geht aber dann zugrunde, wenn
man die genannte Mischung noch eine Zeitlang bei Bruttem¬
peratur stehen l&Bt.

In der neueren Literatur gibt es genau dieselben Ver-
suche wie von mir iiberhaupt nicht; nur Rupp el und
Rickmann haben vor zwei Jahren bei den Studien mit ihren
Tuberkuloseseren Versuche angestellt, um zu entscheiden, ob
der spezifische Ambozeptor die Giftwirkung des Tuberkulins
zu neutralisieren vermag, so daB die Mischung bestimmter
Menge Tuberkulin und Tuberkuloseserum fflr tuberkulose
Tiere indifferent ist. Aus diesen Versuchen ergab sich, daB

Gck igle

Orifinal from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Mischungsvereuche von Tuberkulin und Tuberkuloseserum. 85

die Neutralisierung des Tuberkulosegiftes in den Tuberkel-
bacillen und in dem albumosenfreien Tuberkulin gelingt,
w&hrend eine Entgiftung des Alttuberkulins scheinbar mid-
lungen ist, respektive erst nach einer llingeren Erwdrmung
von 4—5 Tagen stattfindet. Sie nahmen aber ihre Versuche
natflrlich nur an tuberkulosen Meerschweinchen vor, wahrend
Moro und Tomono, sowie Kiralyfi im vorigen Jahre die
Einwirkung des frischen Serums von tuberkulinpositiven
Menschen gegen Alttuberkulin an gesunden Menschen und
Tieren erprobten. Moro und Tomono konnten nach 1-bis
2-tagiger Einwirkung des aktiven Serums vom Menschen mit
stark positiver Tuberkulinreaktion auf Alttuberkulin in vitro
aus letzterem keine Stoffe erzielen, die normalen, tuberkulin-
negativen Menschen kutan verimpft, eine EntzQndungsreaktion
hervorrufen. Die Versuche von Kiralyfi, welche mit einer
Mischung von gleichen Teilen Tuberkulin und Serum, nach
24-stflndiger Einwirkung im Brutofen, sowohl bei Kaninchen
(Ophthalmoreaktion) als auch bei Meerschweinchen (intra-
kutane und intraperitoneale Injektion) angestellt wurden, fielen
verschiedenartig aus, doch ist wahrscheinlich gemacht, dad
das Serum Tuberkuldser eine Substanz enthalt, welche dem
Tuberkulin, auch in vitro, toxische Eigenschaften verleiht. Eine
entgiftende Einwirkung auf das Tuberkelbacilleneiweid durch
Tuberkuloseimmunserum gelang Friedberger und Mit a.

Wir haben nach verschiedenen Vorbereitungsversuchen
mein Tuberkuloseserum mit Alttuberkulin gemischt und sofort,
dann aber nach 24-stflndigem Oder 2-, 3-, 4-, 5-, 6-tSgigem
Aufenthalt in Bruttemperatur, einer Reihe von gesunden
Meerschweinchen sowohl intravenos als auch subkutan in-
jiziert, deren Temperatur vor wie nach der Injektion genau
gemessen war. Auch die sonstigen Symptome wurden be-
obachtet. Wie gesagt, habe ich mich da von iiberzeugt, dad
das tuberkulose Gift durch die Einwirkung des Tuberkulose-
serums ganz regelmadig beeinfludt wird, so dad es erst eine
giftige Wirkung auf gesunde Tiere entfaltet und sie spdter
wieder verliert.

Die folgenden Versuche wurden im Laufe vom 20. Marz
bis zum 26. Juni 1912 von meinem Assistenten Herrn
Dr. S. Matsumura nach meinem Plan ausgefuhrt.

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Gck igle

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

86

A. Sata,

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Versuch I (s. Kurventafel).

Zur Orientierung, ob das Tubcrkuloseserum Tuberkulin auf irgend-
eine Wei8e durch die Mischung und bei Bruttemperatur beeinflussen kann,
stellten wir eret eine Mischung von gleichen Teilen Tuberkulin und
Tuberkuloseserum her und lieflen sie ini Brutofen bei 38° C stehen, und
injizierten nach 24 Stunden, 2 Tagen, 3, 4 und 5 Tagen jedesmal 4 Meer-
schweinchen (160—200 g) sowohl intravenos als auch subkutan. Die In-
jektionsdosis betrug 0,1 ccm, also der darin enthaltene Tuberkulingehalt
0,05 ccm. Die Tiere wurden einen Tag vor bis 5 Tage nach der Injektion
beobachtet und ihre Temperatur tiiglich 4—7mal gemessen (s. I A).

Das zweite Mai wurde die Mischung von 1 Teil Tuberkulin und
9 Teilen Tuberkuloseserum hergestellt, und die Injektionsdosis in 0,5 (Tuber¬
kulingehalt 0,05) angewandt; sonst genau dieselbe Anordnung wie das
vorige Mai (s. I B).

Man kdnnte den Einwand erheben, daB die scheinbare
Beeinflussung des Tuberkulins auf dem darin enthaltenen
Peptongehalt beruhe. Um diesen Einwand zu widerlegen,
nahmen wir einen Versuch in derselben Anordnung mit albu-
mosenfreiem Tuberkulin in der Mischung von einem Teil des-
selben und 9 Teilen Tuberkuloseserum vor (s. IC).

Zum Schlusse stellten wir als Kontrolle noch einen Ver¬
such mit einer Mischung von Alttuberkulin (1,0) und Normal-
pferdeserum (9,0) an, um die spezifischen Wirkungen des
Tuberkuloseserums bei den oben genannten Versuchen nach-
zuweisen (s. I D).

Aus alledem geht hervor, daB das angewandte Tuber¬
kuloseserum das Tuberkulin in bcstimmter Weise beeinflussen
kann; die Mischung ruft namlich nach 24-stiindigem Aufent-
halt im Brutofen eine langsame schwache Temperatursteigerung
an deni gesunden Meerschweinchen hervor. Diese Wirkung der
Mischung auf das gesunde Meerschweinchen nimmt mit der
Zeit zu, wenn dieselbe 2—5 Tage im Brutofen verbleibt, so
daB die Injektion allmahlich eine akute und starke Temperatur¬
steigerung hervorruft. Es kommt oft vor, daB ein heftiger
Temperatursturz mit. weiterer Steigerung nach der Injektion
folgt. Die Tiere sterben dabei auch nicht selten. Hinsicht-
lich der Reaktion herrscht kein groBer Unterschied zwischen
Alttuberkulin und albumosenfreiem Tuberkulin. Bei den Kon-
trollversuchen benierkt man zwar eine leichte Temperatur-
schwankung, aber niemals so deutlich und regelmaBig.

Gck 'gle

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Mischungsversuche von Tuberkulin und Tuberkulosesemm. 87

Versuch II.

Aus den obigen Versuchen waren gewisse EinflOsse des
Immunserums gegen Tuberkulin in vitro wohl ersichtlich, aber
das Resultat der Versuche war noch nicht eklatant genug, so
dafi man mit aller Sicherheit die erwarteten Einflflsse des
Serums in exakter Weise h&tte demonstrieren kSnnen. In
dieser Absicht nabmen wir eine zweite Reihe von Versuchen
vor, wie folgt:

Hier wurde die Mischung, nach bestimmten Zeitraumen in Brut-
temperatur, den Meerschweinchen (160—200 g) intravenos eingespritzt, mit
dem Erfolg, dafi die injizierten Tiere mit bestimmten Erscheinungen in
kurzer Zeit starben. Ferner sei bemerkt, daS die nachfolgend verwendeten
Sera 30 Minuten lang bei 55° C inaktiviert wurden.

Versuch II, 1. Zur Gewinnung der Orientierung, welche Dosis von
Tuberkulin, allein intravenos eingespritzt, ein gesundes Meerschweinchen
in kurzer Zeit toten kann, wurde das reine Tuberkulin in 0,8 und in
0,6 je einem Meerschweinchen, in 0.5 4 Meerschweinchen und in 0,4
2 Meerschweinchen eingespritzt (180 —200 g). Die ersten 2 Gruppen starben
sofort nach der Injektion und 3 von der 3. sowie 1 von der 4. ebenso,
wahrend je eines von der 3. und 4. am Leben blieb. Die Sektion ergab
natiirlich keine Tuberkulose. Daraus sieht man, dafi das junge gesunde
Meerschweinchen intravenose Einspritzungen von Tuberkulin von 0,4 kaum
vertragen kann.

Versuch II, 2. Es wurde Alttuberkulin mit physiologischer Koch-
salzlosung in gleiehen Teilen gemengt und in Dosis von 2,0 (alle tot),
1,5 (alle tot), 1,0 (1 tot, das andere lebt), 0,8 (alle tot) und 0,6 (idle lebend)
je 2 Meerschweinchen eingespritzt. Daraus crsieht man, dafi das Meer¬
schweinchen die Losung in 0,6 gut vertragen kann.

Versuch II, 3. Das Normalpferdeserum w'urde in je 2,0 2 Meer¬
schweinchen eingespritzt; sie waren munter. Dann fiigte man dem Nor¬
malpferdeserum Alttuberkulin zu gleiehen Teilen hinzu und diese Mischung
wurde in 1,0 3 Meerschweinchen (alle tot), in 0,8 (alle tot), in 0,6 (alle
tot), 0,5 (1 tot), 0,4 (alle munter), 0,3 (alle munter) je 2 Meerschweinchen
intravenos eingespritzt.

Versuch II, 4. Hier wurde eine Mischung von Tuberkulosesemm
und Alttuberkulin in gleiehen Teilen in Dosis von 0,4 2 Meerschweinchen
direkt nach der Mischung eingespritzt, und sie waren alle munter. Diese
Mischung bis 9 Tage bei Bruttemperatur stehen gelassen, ergab, in Dosis
von 0,4 je 4 Meerschweinchen eingespritzt, nach 24 Stunden: 3 tot, 1 lebt,
nach 2 Tagen: alle tot, nach 3 Tagen: 1 tot, 3 lebten, nach 6 Tagen: alle
tot, nach 7 Tagen: alle tot, nach 8 Tagen: Hiilfte tot, nach 9 Tagen: alle
munter, nach 10 Tagen: alle munter. Daraus ergibt sich aufs deutlichste,
dafi die Mischung durch das mehrtiigige Stehenlassen in Bruttemperatur
erst giftig, dann aber nach 9 Tagen wieder entgiftet wird.

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88

A. Sata,

Versuch II, 4 (42 Meerschweinchen).
Mischungsverhaltnis: Alttuberkulin und Tuberkuloseserum No. 48
( 1 , 0 : 1 , 0 ).

Einwirkungsdauer des Serums: von sofort bis nach 10 Tagen bei 38°.
Injektionsweise und -dosis: intraveno9 in je 0,4 ecm.

Aufenthalt
im Brutofen

Tier

No.

Korper-

gewicht

Reaktion

Aus-

gang

Zeitraum
bis zum
Tod

Sektionsbefund

sofort nach
Mischung

1

170

keine besond. Reaktion

keine besond. Reaktion

lebt

2

170

77

1

i

1 Tag

1

170

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

5'

Kontrakt. d. Herzkammer,

i

|

Lungenbliihung, Blutung
in Nebenniere

2

170

sofort u. wieder nach

lebt

1

15' Krampfe u. Dysp.

tot

1

3

160

sof. Krampfe u. Dysp.

! 5 ‘

Kontrakt. d. 1. Herzkamm.,
Lungenbliih. u. -ekchym.

4

160

sof. Krampfe u. Dysp.

77

5'

Lungenblah.ohne Ekchym.

2 Tage

5

170

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

, 10'

Kontrakt. d. 1. Herzkamm.

6

170

»»

1

10'

Lungenbliih. u. -ekchym.
Blutung der Nebenniere,

sof. Krampfe u. Dysp.

Kontrakt. d.l.Herzkamm.,
Lungenbliih. u. -ekchym.

7

170

sof. Krampfe u. Dysp.

77

5'

Lungenbliih. u. -ekchym.

8

170

sof. Krampfe u. Dysp.

77

10'

Lungenblah. u. -ekchym.

3 Tage

9

160

sof. u. nach 10' Kriimpfe

77

u. Dyspnoe

lebt

10

170

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

5'

Kontrakt. d. 1. Herzkamm.,
Lungenbliihg.u. -ekchym.,
Blutung

wie oben sonst Blutung d.

!

11

170

sof. Krampfe u. Dysp.

10'

Nebenniere

12

170

gleichfalls sof. u. nach
10'

lebt

4 Tage

13

160

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

5'

Lungenbliihung, Stauung

14

160

sof. u. nach 17' Krampfe

lebt

der Niere

15

160

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

5'

Kontrakt. d. 1. Herzkamm.,

Lungenblah. u. -ekchym.,
Blutung der Nebenniere

16

170

sof. Krampfe u. Dysp.

77

5'

Kontrakt. d. Herzkammer,
Lungenblah. u. -ekchym.

5 Tage

17

170

sof. u. spater Krampfe
sof. u. nach 15' Krampfe

lebt

18

170

f7

19

170

sof. u. nach 10' Krampfe

77

!

20

170

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

5'

Lungenbliih. u. -ekchym.

6 Tage

21

160

sof. Kriimpfe u. Dy9p.

tot

10'

Kontrakt. d. Herzkammer

Lungenblah. u. -ekchym.

22

150

sof. Krampfe u. Dysp.

77

5'

Lungenblah. u. -ekchym.

23

150

sof. Krampfe u. Dysp.

77

5'

Lungenblah. u. -ekchym.

24

150

sof. u. nach 10' Kriimpfe!

77

48' i

Lungenblah. u. -ekchym.

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Mischungsversuche yon Tuberkulin und Tuberkuloseseium. 89

Aufenthalt
im Brutofen

Tier-

No.

Korper-

gewicht

Reaktion

Aus-

gang

Zeitraum
bis zum
Tod

Sektionsbefund

7 Tage

25

150

sof. u. nach 15' Krampfe

tot

22'

Kontrakt. d. Herzkammer,
Lungenblah. u. -ekchym.

u. Dyspnoe

26

150

sof. u. nach 20' gleich-

V

3 Tage

Lungenblahung u. Blutung

falls

der Nebenniere

27

165

sof. Krampfe u. Dysp.

?>

10'

Kontrakt. d. Herzkammer,
Lungenblah. u. -ekchym.

28

150

sof. Krampfe u. Dysp.

11

5'

Lungenblah. u. -ekchym.

8 Tage

29

160

sof. Krampfe u. Dysp.

tot

5'

Lungenekchymose

30

180

lebt

1

31

170 •

I

11

32

170

sof. u. nach 17'Kriimpfe

tot

2 Tage

u. Dyspnoe

9 Tage

33

180

lebt

34

160

»♦

35

170

!

11

36

170

11

10 Tage

37

170

lebt

39

190

ii

39

180

ii

40

i 170

ii 1

1

Versuch II, 5. Zur Kontrolle der vorangehenden Versuche wurde eine
Mischung von Normalpferdeseriim und Alttuberkulin zu gleichen Teilen,
in Dosis von 0,4, nach 24 Stunden, nach 2 Tagen und nach 3 Tagen bei
Bruttemperatur, je 4 Meerschweinchen eingespritzt. Alle Tiere waren
munter.

Ein Versuch, bei welchem die Mischung sofort nach der
Herstellung eingespritzt wurde, wurde hier nicht angestellt,
weil derartige Versuche schon bei Versuch II, 3 ausgefuhrt
worden sind. Aus den obengenannten Versuchen geht her-
vor, daB die Mischung hier, nach mehrt&gigem Stehenlassen
bei Bruttemperatur doch keine Giftigkeit erwirbt.

Versuch II, 5 (8 Meerschweinchen).

Mischungsverhaltnis: Alttuberkulin und Normalpferdeseriim (1,0:1,0).

Einwirkungsdauer des Serums: von sofort bis 3 Tagen bei 38°.

Injektionsweise und -dosis: intravenose in je 0,4 ccm.

Aufenthalt im Brutofen

Tier-No.

Korpergew.

Reaktion

Ausgang

sofort nach Mischung

1

170

keine besondere

lebt

2

180

i » ii

ii

1 Tag

3

180

V 11

ii

4

180

11 11

if

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90

A. Sata,

Aufenthalt im Brutofen

Tier-No. |

Korpergew.

Reaktion

Ausgang

2 Tage

5

180

keine besondere

lebt

5

180

11

11

3 Tage

7

170

*>

11

11

8

i 170

91

11

11

Versuch III.

Weitere Versuche in derselben Anordnung wurden mit
einer Mischung von 1 Teil Tuberkulin und 9 Teilen Serum
ausgefuhrt.

Versuch III, 1. Es wurde zuniichst eine Mischung von Tuberkulin
und Norraalpferdeserum (1 :9) in Mengen von 2,0, 2,5, 3,0 je 2 Meer-
echweinchen sofort nach der Herstellung eingespritzt, und alle waren
munter.

Versuch III, 2. Hier wurde eine Mischung von Alttuberkulin und
Tuberkuloseserum (1:9) in Dosis von 1,0, 1,5, 2,0 und 2,5 je 2 Meer-
schweinchcn gleich nach der Herstellung eingespritzt. Zwei Meerschwein¬
chen, welche 2,5 eingespritzt erhielten, starben sofort, wiihrend alle andern
munter blieben.

Versuch III, 3. Zur Ergiinzung der obigen Versuche wurde wieder
eine Mischung von Alttuberkulin und Tuberkuloseserum (1:9) in 1,5
nach 24 Stunden bei Bruttemperatur 3 Meerschweinchen (1 tot, 2 munter),
nach 2, nach 3, nach 4 Tagen je 2 Meerschweinchen eingespritzt; sie
alle waren munter. Daraus ergibt sich, dad die Mischung durch die Ein-
wirkung mehrtagiger Bruttemperatur nicht bcfahigt wurde, in 1,5 Meer¬
schweinchen zu to ten.

Versuch III, 4. Deshalb wurde die genannte Mischung wieder in 2,0
nach 24 Stunden 3 Meerschweinchen (alle munter), nach 2 Tagen 2 Meer¬
schweinchen (1 tot), nach 3 Tagen 2 Meerschweinchen (1 tot) eingespritzt.

Versuch III, 5. Aus den erwahnton Versuehen geht hervor, dad die
Mischung von Tuberkulin und Tuberkuloseserum in Dosis unter 2.0 selbst
nach mehrtagiger Einwirkung von Bruttemperatur nicht sicher Meerschwein¬
chen toten kann, wiihrend aber mit 2,5 das Tier sofort nach der Mischung
schon getotet wird (s. Versuch III, 1). Deshalb wurde hier die Mischung
in Dosis von 2,5

nach 24
„ 2
„ 3

„ 4

„ 5

„ 6
„ 7

Stunden

Tagen

(1 tot)

(1 „)
(alle tot)

( „ „ )

( „ munter)

U v )

je 2 Meerschweinchen eingespritzt. Es ergibt sich, dafi die Mischung durch
das Stehenlassen von 24 Stunden bis 5 Tagen bei Bruttemperatur eine giftige
Eigenschaft erwirbt, welche aber nach 6—7 Tagen wieder vernichtet wird.

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Mischuugsversuche von Tuberkulin und Tuberkuloseserum.

91

Versuch III, 5 (16 Meerschweinchen).

Mischungsverhaltnis: Alt-Tb. und Tb.-Serum No. 48 (1,0:9,0).
Einwirkuugsdauer: von sofort bis nach 7 Tagen.
Injektionsweise und -dosis: intravenose in 2,5 ccm.

Aufenth.

im

Brutofen

Tier

No.

Korper-

Gewicht

Reaktion

Aub-

gang

Zeitraum

bis

zum Tod

Sektionsbefund

sofort n.

1

180

sofort Krampfe und

tot

Lungenbliihung u.

Mischung

Dyspnoe.

-ekchymose.

2

170

sofort Krampfe und

11

Lungenblahung u.

Dyspnoe.

-ekchymose.

1 Tag

1

170

sofort Krampfe und

11

10'

Kontrakt. der Herz-

1

Dyspnoe in 3' nach
der Injektion.

lebt

kammer. Lungen-
blah. u. -ekchym.

2

170

Nach der Injekt. 2'

Krampfe, Dyspnoe
nach 20' Wiederh.

2 Tage

3

170

nach der Injekt. 2'

tot

5'

Kontrakt. der Herz-

4

170

Krampfe u. Dyspn.
nach aer Injekt. 2'
Krampfe, Dyspnoe
nach 20' Wiederh.

lebt

kammer, Lungen-
blah. u. -ekchym.

3 Tage

5

170

sofort Kriimpfe und

tot

10'

Kontrakt. der Herz-

Dyspnoe.

kammer, Lungen-
bliih. u. -ekchvm.

6

170

nach der Injekt. 2'

11

15'

Kontrakt. der Herz-

Kriimpfe u. Dyspn.

kammer, Lungen-
bliih. u. -ekchym.

4 Tage

7

180

nach der Injekt. 3'

11

10'

I Kontrakt. der linken

Krampfe u. Dyspn.

Herzkamm.; Stau-
ung d. Lunge; Lun-

genekchymose.

8

180

nach der Injekt. 2‘

11

Kontrakt. der Herz-

Krampfe u. Dyspn.

kammer, Staining
d. Lunge, Lungen-

l

i

:

ekchymose.

5 Tage

9

180

nach der Injekt. 2 1

11

10'

Kontrakt. der Herz-

Krampfe u. Dyspn.

kammer, Blutung
d. N eben n iere,Stau-

ung der Lunge.

10

180

sofort Krampfe und

11

5'

Kontrakt. der Herz-

Dyspnoe.

; kammer, Lungen-
: bliihung.

6 Tage

11

180

nach der Injekt. 3'

lebt

Krampfe, Dyspnoe
nach 10' Wiederh.

12

170

sofort Kriimpfe und
Dyspnoe nach der
Inj.; 15' Wiederh.

11

7 Tage

! 13

180

, 14

180

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92

A. Sata,

Versuch III, 6. Zur Kontrolle der letzten Versuche wurde hier eine
Mischung von Alttuberkulin und Normalpferdeserum (1:9) in Dosis von
2,5 nach 24 Stunden und 2, 3, 4, 5, 7 Tagen eingespritzt; aile Tiere
waren munter.

Versuch III, 6 (13 Meerschweinchen).
Mischungsverhaltnis: Alt-Tb. und Normalpferdeserum (1,0:9,0).
Einwirkungsdauer: von sofort bis nach 6 Tagen.

Injektionsweise und Dosis. intravenos in 2,5 com.

Aufenthalt im Brutofen

Tier No.

Korpergewicht

Reaktion

Ausgang

sofort nach Mischung

1

170

lebt

2

170

>>

nach 1 Tage

1

180

q

2

170

2

yy

nach 2 Tagen

3

180

a>

u

jy

4

170

O)

yy

nach 3 Tagen

1 5

170

G

o

n

0

180

1

yy

nach 4 Tagen

7

180

yy

8

180 1

*S

yy

nach 5 Tagen

9

180 !

M

yy

10

180 |

yy

nach 6 Tagen

11

180 I

yy

Versuch IV.

Nachdem die bestimmten Einfliisse des Tuberkuloseserums
gegen Alttuberkulin durch die erw&hnten Versuche festgestellt
worden sind, schien es mir noch wichtig, weiter zu prflfen,
ob das Tuberkulosegift in Pulvern von Tuberkelbacillen auch
durch Immunserum beeinfluBt wird. Zu diesem Zwecke wurden
die 30-tiigigen Agarkulturen von Tuberkelbacillen zwischen
einer reichlichen Lage von FlieBpapier gedriickt und mehrere
Tage im Brutofen getrocknet, dann einige Wochen hindurch
in Kugelmiihlen gerieben, so daB darin mikroskopisch keine
geformten Tuberkelbacillen mehr gefunden werden konnten.
Dieses Pulver von Tuberkelbacillen wurde prazis abgewogen,
in bestimmten Quantitaten Kochsalzlbsung aufgeschwemmt und
sofort oder nach mehrtagigem Stehenlassen bei Bruttemperatur,
gesunden Meerschweinchen injiziert.

Versuch IV, 1. Die so hergestellten Tuberkelbacillenpulver von 0,001 g
wurden in 1,0 ccm Kochsalzlosung aufgeschwemmt und 1,0 ccm Tuberkulose-
serum hinzugefiigt und gut verrieben und sofort die gesamte Menge (also
2,0 ccm) je einem von 2 Meerschweinchen intravenos injiziert; beide blieben
lebend. Es wurde noch dieselbe Mischung nach 24-stiindigen, nach 2- und

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Mischungsversuche von Tuberkulin und Tuberkuioscserum. 93

3-tagigem Aufenthalt im Brutofen je 2 Meerschweinchen (also 6 im ganzen)
injiziert, aber alle blieben lebend.

Versuch IV, 2. Dieselben Versuche wurden mit einer Vermehrung
des Tuberkelbacillenpulvers nochmals wiederholt, derart, daS 0,01 g in
1,0 ccm Kochsalzlosung aufgeschwemmt und mit 1,0 ccm Tuberkuloseserum
versetzt und je einera Meerschweinchen injiziert wurde. 2 Meerschweinchen,
deren jedem 2,0 ccm genannter Aufschweramung sofort nach der Her-
stellung eingespritzt wurde, blieben am Leben. Die Mischung wurde nach
24-stiindigem Aufenthalt im Brutofen je 2 Meerschweinchen (beide tot),
nach 2 Tagen (eins tot), nach 3 Tagen (beide tot), nach 4 Tagen (beide
lebend), nach 5 Tagen (beide tot), nach 6 Tagen (beide tot), nach 7 Tagen
(beide tot), nach 8 Tagen (beide lebend), nach 9 Tagen (beide munter),
nach 10 Tagen (beide munter), injiziert.

Es ist also nachgewiesen, daB die Mischung, welche erst gleich
nach der Herstellung ungiftig war, nach einem Aufenthalt im
Brutofen von einigen Tagen eine Giftigkeit erhielt, welche aber
nach l&ngerem Aufenthalt von 8—10 Tagen wieder verschwindet.

Versuch IV, 2 (22 Meerschweinchen).

Mischungsverhaltnis: Tuberkelbacillenpulver in Kochsalzlosung und
Tuberkuloseserum No. 48 (0,01 T.-B.-P. in 1,0 CINa-Losung und Tb.-S. 1.0).
Injektionsweise und -dosis: intravenos in 2,0 ccm.

Aufenthalt
im Brutofen

Tier

No.

jKorper-

gewicht

Reaktion

Aus-

gang

Zeitraum
bis z. Tod (

Sektionsbefund

sof. n. Misch.

1

170

lebt

2

170

11

nach 1 Tage

1

170

tot

8Std.

Lungenbliihung und

2

180

11

UStd.

-ekchym.

Lungenblahung und

Blutung

nach 2 Tagen

3

180

lebt

4

180

tot

24Std.

Lungenbliih. u.Blut.

nach 3 Tagen

5

180

11

7-18 Std.

6

180

n

7-20 Std.

Lungenblahung,-ek-

i

chymos.u.Stauung,
Kontraktion der

Herzkammer,Blut.
der Nebenniere

nach 4 Tagen

7

170

i

lebt

8

170

ii

nach 5 Tagen

9

170

tot

6 Std.

Lungenekchymose,

10

170

ii

3 Std. 45'

Blut. d. Nebenniere
Lungen blutung

nach 6 Tagen

11

170

ii

10 Std.45'

Stauung der Lunge

12

180

i

ii

i

10 Std.

Blut. a. Nebenniere
Lungenblahung und

-blutung. Blutung
der Nebenniere

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94

A. Sat a

Aufenthalt Tier jKorper-
im Brutofen j No. gewicht

j Reaktion

Aus-

gang

Zeitraum
bis z. Tod

Sektionsbefund

nach 7 Tagen ! 13

• 190

tot

7-21 Std.

Lungenblahung und

i

-ekchym.

i 14

1

1

, f
|

190

!

ff

7-21 Std.

Lungenbliihungund
-ekchym, Blutung
der Nebenniere

nach 8 Tagen i 15

180

, 16

180

nach 9 Tagen 17

185

' 18

180

nach 10 Tagen 19 j

190

20 |

195

Versuch IV, 3. Zur Kontrolle der obigen Vereuche wurde eine
Mischung von Tuberkelbaeillenpulver-Kochsalzaufschwemmung und Normal-
pferdeserum hergestellt und in genau derselben Anordnung sofort nach
der Mischung, nach 24 Stunden, 2, 3, 4, 5, 6, 7 und 8 Tagen je 2 Meer-
schweinchen injiziert und die samtlichen Tiere blieben lebend mit einer
einzigen Ausnahme von einem Meerschweinchen, welches nach 24 Stunden
injiziert worden war und dann starb. Es ergibt sich also, dafi das Normal-
serum nicht imstande ist, das Tuberkulosegift in Pulverform auf irgend-
eine Weise zu beeinflussen, wie folgt:

Versuch IV, 3 (18 Meerschweinchen).

Mischungsverhaltnis: Tuberkelbacillenpulver in Kochsalzlosung und
Normalpferdeserum (0,01 T.-B.-P. in NaC.-Losung und N.-P.-S. 1,0).

Einwirkungsdauer: von sofort bis nach 8 Tagen.

Injektionsweise und -dosis: intravenose in 2,0 ccm.

Aufenthalt
im Brutofen

Tier-

No.

Korper-

gewicht

Reak¬

tion

Aus-

gang

Zeitraum
bis z. Tod

Sektionsfund

Bof. nach Misch.

1

180

lebt

2

180

ff

nach 1 Tage

1

180

If

2

180

tot

Lungenekchymose u.

nach 2 Tagen

3

180

lebt

Stauung

4

180

yy

nach 3 Tagen

5

185

ty

6

180

V

nach 4 Tagen

7

185

ff

8

180

ff

nach 5 Tagen

9

190

ff

10

185

ff

nach 6 Tagen

11

180

ff

■ 12

190

ff

nach 6 Tagen

13

190

ff

14

185

ff

nach 8 Tagen

15

190

ff

16

190

ff

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Mischungsversuche von Tuberkulin und Tuberkuloseserum. 95

Versuch V.

Versuch V, 1. Um die genannten Versuche mit einer Mischung eines
anderen Beimengungsverhaltnisses nochmals zu wiederholen, wurde das
Tuberkelbacillenpulver von 0,001 g in 0,2 ccm Kochsalzlosung aufgeschwemmt
und 1,8 ccm Tuberkuloseserum hinzugefiigt und nach 24stiindigem, nach
2- und 3-tagigem Aufenthalt je 2 Meerschweinchen injiziert. Alle Tiere blieben
aber am Leben.

Versuch V, 2. Bier wurde das Tuberkelbacillenpulver von 0,01 g in
sonsdemselben Verhaltnisse beigemengt und ebenfalls nach 24-stiindigera,
nach 2-, 3- und 4-tagigem Aufenthalt je 2 Meerschweinchen injiziert. Alle
Tiere blieben wieder lebend.

Versuch V, 3. Das Tuberkelbacillenpulver von 0,01 g wurde in 0,5 ccm
Kochsalzlosung und 1,4 ccm Tuberkuloseserum aufgeschwemmt und nach
24-stiindigem, 2- und 3-tagigem Stehenlassen je 2 Meerschweinchen injiziert.
Alle iiberlebten.

Versuch V, 4. Die Versuche wurden mit einer grofieren Menge von
Tuberkelbacillenpulver wiederholt, so dafi die Mischung aus 1,4 ccm Koch¬
salzlosung mit 0,01 Tuberkelbacillenpulver und 0,6 ccm Tuberkuloseserum
besteht. Die Mischung wurde sofort nach der Herstellung injiziert, so daB
jedes Tier 2,0 ccm der genannten Mischung erhielt. Beide blieben lebend.

Die Mischung wurde nun je 2 Meerschweinchen nach 24-stiindigem,
(beide Tiere tot), nach 2-tagigem (eins tot), nach 3-tagigem (beide lebend),
nach 4-tagigem (beide tot), nach 5-tagigem (beide lebend), nach 6-tagigem
Aufenthalt im Brutofen (beide munter) injiziert. Es beweist diese Versuchs-
reihe, dafl das Tuberkuloseserum in genannten Mischungsverhaltnissen das
Tuberkelbacillenpulver nach einigen Tageu giftig macht, daS das entstandene
Gift aber nach 5—6 Tagen wieder zerstort wird.

Versuch V, 4 (14 Meerschweinchen).

Mischungsverhaltnis: Tuberkelbacillenpulver in Kochsalzlosung und
Tuberkuloseserum No. 48 (0,01 T.-B.-P. in 1,4 CINa-Losung und Tb.-S. 0,6).

Einwirkungsdauer: von sofort bis zu 8 Tagen.

Injektionsweise und -dosis: intravenos in 2,0 ccm.

Aufenthalt
im Brutofen

Tier

No.

Korper-

gewicht

Ilea lo¬
tion

Aus-

gang

Zeitraum
bis z. Tod

Sektionsbefund

sofort n. Miseh.

1

180

lebt

2

180

11

1 Tag

1

170

tot

30'

Lungenekchymose,

Kontraktion d. link.
Herzkammer

2

180

91

8'

Lungenekchymose,

Kontraktion d. link.
Herzkammer

2 Tage

3

170

180

11

lebt

24'

Lungenekchymose,
Stauung in d. Lunge

4

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96

A. Sata,

Aufenthalt
im Brutofen

Tier 1
No.

Korper-

gewicht

Reak-

tion

Aus-

gang

SJeitraum
bis z. Tod

Sektionsbefund

3 Tage

5

170

lebt

6

170

”

1

4 Tage

7

! 180

tot

00

r

Lungenblahung und

l

-ekchymose, Kon-
traktion der linken

Herzkammer

8

170

k

j

00

Lungenblahung und
-ekchymose

5 Tage

9

180

lebt

10

185

11

6 Tage

11

195

11

12

200

11

i

Versuch Y, 5. Zur Kontrolle wurden dieselbcn Versuche in genau
derselben Anordnung, nur mit Normalpferdeserum ausgefiihrt. Die Mischung
wurde nach 24 Stunden, nach 2 und 3 Tagen je 2 Meerschweinchen injiziert
und alle Tiere blieben ganz munter. Es beweist also, da6 das Normal serum
hier das Tuberkelgift nicht beeinflussen kann.

Versuch V, 5 (10 Meerschweinchen).

Mischungsverhaltnisse: Tuberkelbacillenpulver in Kochsalzlosung und
Normalpferdeserum (0,01 T.-B.-P. in 1,4 NaCl-Losung und N.-P.-S. 0,6).

Einwirkungsdauer: von sofort bis nach 4 Tagen.

Injektionsweise und -dosis: intravenos in 2,0 ccm.

Aufenthalt im Brutofen

Tier No.

Korpergewicht

Reaktion

Ausgang

sofort nach Mischung

1

180

lebt

2

180

1

V

nach 1 Tage

1

180

2

180

JS

S3

nach 2 Tagen

3

185

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V

4

185

11

nach 3 Tagen

5

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11

6

190

<v

.2

11

nach 4 Tagen

7

195

M

11

8

195

11

Durch die erwiihnten 5 verschiedenen Versuche wurde
festgestellt:

1) Eine Mischung, welche aus Alttuberkulin und Tuber-
kuloseserum zu gleichen Teilen oder zu 1 gegen 9 besteht
und gleich nach ihrer Herstellung fiir das gesunde Meer¬
schweinchen ungiftig ist, erhalt bei Temperatur von 38° C

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MischungBversuche von Tuberkulin und Tuberkuloseserum. ' vJ 97

nach 24 Stunden bis 5 Tagen eine allmShlich zunehmende
Giftigkeit, welche durch intravenfise Oder subkutane Jnjektion
an gesunde Tiere eine typische Tuberkulinreaktion mit einer
Temperatursteigernng hervorzurufen imstande ist Diese
Reaktion tritt anfangs langsam zutage, wahrend dieselbe
spSter rasch eintritt, wenn die Mischung einige Tage (1—5)
im Brutofen gehalten wird.

2) Wenn die Mischung in noch grOBerer Dosis intravenos
eingespritzt wird, so geht das gesunde Meerschweinchen unter
typischer Reaktion rasch zugrunde. Eine solche Giftigkeit
erhalt die Mischung erst nach einigen Tagen bei Bruttempe-
ratur; sie verliert aber diese giftige Eigenschaft bald wieder,
wenn sie noch mehrere Tage darin gehalten wird. Es handelt
sich hier ohne Zweifel um zwei verschiedene Stufen eines
Umsetzungsvorganges; Giftabspaltung und Giftzerstorung aus
Antigen und Ambozeptor.

3) Eine solche Umwandlung des Antigens durch das
Immunserum ist sowohl bei Alttuberkulin als auch bei Tuberkel-
bacillenpulver nachweisbar.

4) Eine Giftigkeit, durch welche gesunde Meerschweinchen
pldtzlich getotet werden konnen, erhalt die Mischung von
Alttuberkulin mit Immunserum zu gleichen Teilen binnen 1 — 8
Tagen und dieselbe zu einem gegen 9 Teile binnen 1—5 Tagen,
wahrend diese Giftigkeit bei der ersteren Mischung nach
8—9 Tagen und bei der letzteren nach 6—7 Tagen ver-
schwindet.

5) Die eben erwahnten Verhaitnisse sind bei der Mischung
von Tuberkelbacillenpulver und Immunserum ahnlich; nam-
lich eine Mischung, welche aus 0,01 g Tuberkelbacillen¬
pulver in 1,0 ccm Kochsalzlosung und 1,0 ccm Immunserum
besteht und erst ungiftig ist, erhalt nach 1—8 Tagen die
bezeichnete Giftigkeit und die andere Mischung von 0,01 g
Tuberkelbacillenpulver in 1,4 ccm Kochsalzlosung und 0,6 ccm
Immunserum erhalt die Giftigkeit binnen 1—4 Tagen, wahrend
die erstere Mischung nach 8—10 Tagen und die letztere nach
5—6 Tagen wieder ungiftig wird.

6) Bei alien Kontrollversuchen wurde festgestellt, daB das
Normalpferdeserum niemals imstande ist, das Antigen auf die
genannte Weise zu beeinflussen.

ZeiUchr. f. ImmunitaUforachung. Orig. Bd. XVII. 7

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98 Sat a, Mischungsversuche von Tuberkulin und Tuberkuloseserum.

Aus alledem geht hervor, daB das Alttuberkulin oder das
Tuberkelbacillenpulver durch das Tuberkuloseserum in be-
stimmten Beimengungs- und Zeitverhfiltnissen bei der Terape-
ratur von 38 0 C in vitro derart umgewandelt wird, daB es bei
gesunden Meerschweinchen erst typische Tuberkulinreaktion
hervorruft, dann aber die entstandene Giftigkeit wieder
verliert. Es handelt sich hier offenbar um eine Giftab-
spaltung und eine Giftzerstorung. Die entstandene Giftigkeit
zeichnet sich bei den gesunden Tieren sowohl durch eine
typische Temperatursteigerung, als auch durch einen ana-
phylaktischen Tod nebst anderen Reaktionen aus. Diese Giftig¬
keit tritt wahrscheinlich durch die Mitwirkung von Komplement
im gesunden Organismus erst zutage, w&hrend das mit
Immunambozeptor stark beladene Gift im Organismus durch
seine Komplementwirkung plbtzlich zerstort wird.

Zusammenfassung.

1) Es ist moglich, durch eine einfache Mischung von
Tuberkelgift (Alttuberkulin und Tuberkelbacillenpulver) und
Tuberkuloseserum unter gewissen optimalen, quantitativen
und zeitlichen Bedingungen bei einer bestimmten Temperatur
(38 0 C) ein Gift in vitro herzustellen, welches bei gesunden
Meerschweinchen die bekannten Tuberkulinreaktionen hervor-
zurufen imstande ist.

2) Die dadurch hervorgerufenen Reaktionen zeichnen sich
vor allem durch eine Temperatursteigerung und einen ana-
phylaktischen Tod typischer Art aus.

3) Das entstandene Gift wird aber nach weiterem Vor-
gange wieder zerstort, so daB die Mischung bei gesunden
Meerschweinchen nicht mehr typische Reaktionen verursachen
kann.

4) Es handelt sich hier offenbar um eine Giftabspaltung
und Giftzerstorung, welche zwei Stufen ein und desselben Ab-
spaltungsvorganges darstellt.

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Zeitschrift fiir JmmnnitatsfbrschuiuiI.Teil-Orig.fid. XVII.

A Safa, Tvberkulin unci Taberkulosesenim.

■•TO'nrrOT

Ztichen 0
Kitufir
InjeKlion

Versuch I

•ichrr m Jena

Photohth v.A Clinch, Jena.

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W. J. Goss, Eine neue Methode zur Qewinnung des Antigens etc. 99

Nachdruck verboten.

[Aus der pathologisch-anatomischen Abteilung des Institutes ftir
experimentelle Medizin zu St. Petersburg.]

Eine nene Methode zur Gewinnung des Antigens fUr die
Wasserraaiinsche Reaktion.

Von Dr. W. J. Goss.

(Eingegangen bei der Redaktion am 19. Dezember 1912.)

Wie bekannt, wurde anfangs fflr die Wasserman nsche
Reaktion das wasserige Extrakt aus syphilitischer Leber vor-
geschlagen. Sp&ter stellte es sich heraus, daB nicht nur wSs-
serige, sondern auch alkoholische Extrakte aus syphilitischen,
aber auch aus normalen Organen als Antigen fur die Wasser-
mannsche Reaktion dienen konnen. Die Natur dieser extra-
hierten Stoffe blieb jedoch unbekannt. Ihre Losbarkeit weist
auf ihren lipoiden Charakter hin. Weiter kennen wir aber nichts
fiber die Reagentien bei der Wassermannschen Reaktion.

Als man die alkoholischen Antigene in die Praxis ein-
fflhrte, tauchte natfirlich die Frage auf, welchen Antigenen
man den Vorzug geben sollte, welche von ihnen die sichersten
Resultate geben? Es stellte sich heraus, daB, obwohl die al¬
koholischen Antigene groBe Vorzfige vor den wfisserigen be-
sitzen, da sie ein mehr konstantes, unverfinderliches Reaktiv
darstellen, die wasserigen Reaktive trotzdem, wie es viele
hervorragende Forscher gefunden haben, eine viel starkere
spezifische Wirkung ausfiben und daher viel zuverlfissiger sind.

Vor kurzem wurde von Kolle und Stiner 1 ) eine neue
Methode der Antigenbereitung vorgeschlagen: sie benutzten
ein Acetonextrakt aus syphilitischer Leber. Diese Autoren
empfehlen anfs w&rmste ihre Methode der Antigengewinnung,
und wirklich ist das Acetonantigen ein ausgezeichnetes Reagens
bei der Wassermannschen Reaktion.

Diese Autoren haben auch mit anderen Lfisungsmitteln
fflr Lipoide experimentiert, jedoch lieBen sich mit Chloroform
und Aether keine befriedigenden Resultate erzielen.

1) W. Kolle und Stiner, Deutsche med. Wochenschr., 1911, No.21.

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Go^ 'gle

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100 W.J. Goss, Eine neue Methode zur Gewinnung des Antigens etc.

In dieser kurzen Mitteilung mdchte ich auf eine andere
Methode der Antigengewinnung fiir die Wassermannsche
Reaktion aufmerksatn zu machen, eine Methode, deren ich mich
in letzter Zeit bedient habe.

Das Glyzerin ist, wie bekannt, ein vorzfigliches Extraktions-
mittel fiir verschiedene Fermente. Ich habe den Versuch ge-
macht, diese Eigenschaft des Glyzerins fiir diejenigen Stoffe
zu verwenden, welche bei dem Wassermannschen Verfahren
in Reaktion treten. Und in der Tat hat es sich erwiesen, dafi
das Glyzerin aus syphilitischen Organen (Leber) diejenigen
Stoffe extrahiert, die bei der Wassermann schen Reaktion
eine Rolle spielen.

Ich habe das Glyzerinantigen in folgender Weise zuberei-
tet: frische oder getrocknete Leber einer syphilitischen Frucht
wurde sorgfSltig in einem Mfirser mit 5—10-facher Menge (fiir
getrocknete Leber mit 15—30-facher Menge) Glyzerins ver-
rieben, dann fiir einige Tage in den Thermostaten bei 37 0 C ge-
stellt, wobei dieses Gemisch von Zeit zu Zeit geschiittelt wurde,
darauf zentrifugiert. Die dicke braunliche Fliissigkeit, die sich
fiber dem Bodensatz ansammelte, wurde als Antigen verwendet.

Die wirksame Dosis belief sich gewohnlich auf 0,05—0,1 ccm,
aber zuweilen schwankte sie zwischen 0,02—0,2. Diejenige
Dosis, die an und fiir sich die H&molyse hemmte, war ver-
schieden bei verschiedenem Ausgangsmaterial; gewfihnlich
fiberstieg sie 0,5 ccm, oft sogar 1,0 ccm. Also war diejenige
Dosis, die eine selbstandige Hemmung der Hamolyse bewirkte,
bedeutend groBer (manchmal mehr als ums 10-fache) als die
fiir die Reaktion gebrauchte Dosis. Ebenso waren diejenigen
Dosen, die eine Hemmung der HSinolyse beim Titrieren mit
Normalserum gaben, ums Mehrfache groBer, als diejenigen
Dosen, die spezifisch reagierten.

Was die Bestandigkeit des Glyzerinantigens anbetrifft, so
bin ich mit der Priifung dieser Frage nocli nicht zu Ende.
Jedenfalls ist die Bestandigkeit des Glyzerinantigens bedeutend
hoher als diejenige des wasserigen Antigens: es behalt bei
Zimmertemperatur seine wirkende Kraft zirka einen Monat.

Das mit Wasser verdunnte Glyzerin extrahiert ebenso gut
die fur die Wassermannsche Reaktion charakteristischen
Stoffe, jedoch ist die Bestandigkeit eines solchen Antigens be¬
deutend gerlnger. v .

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Wolfgang Weichardt, Ueber Proteotoxikosen.

101

Ich habe das Glyzerinantigen bei kranken und gesunden
Seris geprfift und gcfunden, dafi die Resultate bei der An-
wendung von Acetonantigenen und Glyzerinantigenen fast vOllig
flbereinstimmten.

Die hier von mir angeffihrte Methode der Gewinnung des
Antigens fflr dieWasserraannsche Reaktion weist auf einen
neuen Strich hin, [der das in Reaktion mit dem Blut von
Syphilitikern eintretende „x“ charakterisiert. Das Glyzerin
steht als Losungsmittel dem Wasser viel naher als Spiritus
Oder Aceton. Im Gegensatz zum Spiritus und Aceton lost
es weder die Fette, noch die Lipoide. Es scheint auch, dafi
die ffir das Antigen spezifischen Stoffe weder in Wasser, noch
in Glyzerin eigentlich gelost werden; sie befinden sich dort
in suspendiertem (kolloidalen) Zustande und in diesem Zu-
stande scheinen sie sich in Glyzerin linger als in Wasser
zu halten. Dank dieser Eigenschaft unterscheiden sich die
Glyzerinextrakte vorteilhaft von den wisserigen Antigenen.

GewiB kann ein nfiheres Urteil fiber das Glyzerinantigen
nur nach ausffihrlichen vergleichenden Untersuchungen mit
diesem Antigen und dessen Prfifung an einem zahlreichen
klinischen Material geffillt werden.

Zusammenfassung.

Glyzerinextrakt aus syphilitischer Leber ist ein gutes
Antigen ffir die Wassermannsche Reaktion.

Nachdruck verboten.

Ueber Proteotoxikosen.

Ergfinzungen zu den Bemerkungen Hermann Pfeiffers,
Bd. 16, No. 1 dieser Zeitschrift.

Von Prof. Dr. Wolfgang Weichardt.

Auf p. 44 dieser Zeitschrift bekiimpft Hermann
Pfeiffer in einer scharfen polemischen „Anmerkung“ die
Feststellungen in meinen Ermudungsstoffen, daB durch sein
fleifiiges Vorgehen Anschauungen verifiziert worden sind,
die klipp und klar von meinen Mitarbeitern und mir auf
Grund unserer Studien mit EiweiBspaltprodukten von Er-
mtidungstoxincharakter niedergelegt waren.

L

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102

Wolfgang Weichardt,

Daran wird Hermann Pfeiffer nicht das geringste
Sndern. Wenn durch seine Arbeiten Befunde und Anschau-
ungen, die zum Teil mit anderen Methoden gewonnen wurden,
sich nunmehr als richtig erweisen, so ist das meines Erachtens
nur erfreulich und liegt im Interesse wissenschaftlicher Er-
kenntnis und wir selbst sind der Ansicht, dafi erregte Debatten
ebenso wie Prioritatsstreitigkeiten dem Fortschritte selten
dienen.

Deshalb lagen sie mir ganz feme, wohl aber wird uns
Hermann Pfeiffer weder jetzt noch in Zukunft daran
hindern konnen, bereits friiher Festgestelltes mit neuen Er-
rungenschaften zu vergleichen und erfreuliche Ueberein-
stimmungen zu konstatieren.

Bekanntlich arbeiteten wir selbst jahrelang mit hochmole-
kularen EiweiBspaltprodukten und den sie entgiftenden anti-
korperartig wirkenden PrSparaten. DaB Forscher, welche an-
fangen sich mit EiweiBzerfallstoxikosen zu beschaftigen, mit-
unter auf ahnliche Befunde stoBen, wie wir selbst, ist nur
zu erklarlich, und Hermann Pfeiffers Verwunderung
dariiber, daB schnelles Fallen der Korpertemperatur nach Ein-
fiihrung von hochmolekularen EiweiBspaltprodukten mit dem
Temperatursturz anaphylaktisch gemachter Versuchstiere in
Parallele gestellt wird, ist nicht recht verst&ndlich.

Uebrigens veranlaBt mich der Hermann Pfeiffersche
Angriff, der nur beweist, daB er die friihere Literatur auf
diesem Gebiete nicht kennt, auch in dieser Zeitschrift die be-
treffenden Feststellungen kurz niederzulegen.

Es war festgestellt:

1) Vorher indiflferente EiweiBe werden durch leichte Auf-
spaltung mit verschiedenen Agentien (Elektrolyse, NaOH T
H.,0 2 usf.) so verandert, dafi sie nach Wegdialysieren der
weniger hochmolekularen Spaltprodukte, parenteral einverleibt,
Temperaturerniedrigung, Sopor und Atemverlangsamung
hervorrufen, Erscheinungen, die bei Kontrolltieren, welche mit
unseren antikorperartig wirkenden acetonloslichen Hemmungs-
korpern (Retardinen) behandelt sind, nicht auftreten.

2) Es konnte ferner gezeigt werden, dafi die gleichen Er¬
scheinungen: Temperaturerniedrigung, Sopor und
Atemverlangsamung, auftreten, wenn die allerverschiedensten

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Ueber Proteotoxikosen.

103

chemisch different wirkenden Stoife in minimalen Dosen in
kurzen Zwischenr&umen injiziert werden. Dagegen bleiben
Tiere, welche mit unseren Antikorpern behandelt sind, auch
nach wiederholter Injektion kleiner Dosen von Chemikalien
munter.

Ich schloB daraus, daB auch bei wiederholter Einverleibung
chemisch different wirkender Stoffe im Tierkdrper sekund&r
EiweiBspaltprodukte entstehen, da wir ja nur diese, nicht
die Chemikalien, mit unseren Retardinen entgiften konnen.
Alle diese Befunde, also die parenterale Einverleibung primar
entstandener EiweiBspaltprodukte und die dadurch hervor-
gerufenen Erscheinungen, sowie die sekund&re Entstehung
von EiweiBspaltprodukten im Tierkdrper nach Injektion different
wirkender Stoffe, waren also klipp und klar niedergelegt und
nach den verschiedensten Richtungen hin studiert.

Gellhorn z. B. untersuchte das vermehrte Auftreten
unserer die Temperatur erniedrigenden EiweiBspaltprodukte in
den Exkreten (Munch, med. Wochenschr., 1908, No. 16).

Auch wurde Herrn Hermann Pfeiffer bei uns in Er¬
langen nicht ein Thermometer und dessen Anwendung gezeigt,
wie es nach seiner Schilderung den Anschein haben kfinnte,
sondern mittels biologischer Versuche der Tem-
peraturabfal 1 nach parenteraler Einverleibung
derbeschriebenen, ausEiweiBhergestellten Spal t-
produkte.

Nachdem ich den Endotoxinbegriflf auf ungefornites, nicht
bakterielles EiweiB ubertragen hatte und nachdem durch zahl-
reiche Arbeiten der verschiedensten Autoren der Zerfall des
vorher ungiftigen EiweiBes in eine Reihe von Spaltprodukten
erhdhtes Interesse gewonnen hatte, lag ein Vergleich mit
unseren frilheren Injektionen von kiinstlich in vitro aufge-
spaltenen EiweiBen und ihrer die Temperatur erniedrigenden
Eigenschaften nahe, und wir konnen nur wiederholen, daB es
sehr erfreulich ist, wenn Hermann Pfeiffer, besonders
was die sekundare Entstehung von EiweiBspalt¬
produkten im Tierkbrper anbetrifft, jetzt Anschau-
ungen gewinnt, die sich von meinen friiheren nicht mehr
wesentlich unterscheiden.

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104 Wolfgang Weichardt, Ueber Proteotoxikosen.

Was endlich die Frage der Kenopr&zipitation anbetrifft,
so ist sie l&ngst in meinem Sinne entschieden; denn es war
nach dem Pfeifferschen Hinweis bald gelungen, absolut Ca-
freie Retardine herzustellen, die dennoch mit hbhermolekularen
EiweiBspaltprodukten von Kenotoxincharakter Niederschlfige
gaben.

Jetzt, nachdem es gegliickt ist, aus den Retardingemischen
einzelne Snbstanzen chemisch zu isolieren, kann eine ganze
Reihe von organischen Praparaten angegeben werden, die
Kenoprazipitate veranlassen, obschon bei ihnen jede Ca-Bei-
mengung ausgeschlossen ist. Das seit langem bekannte
Clupeinsulfat Kossels, das Buschsche Nitronsulfat u. a.
haben die ausgesprochene Eigenschaft, mit unseren EiweiB-
produkten Fallungen zu geben.

Hermann Pfeiffer wird derartige PrSparate selbst
herzustellen leicht in der Lage sein. s

Schliefilich beklagt sich der Autor ganz zu Unrecht, daB
ihm in meinem Jahresbericht fiber die Ergebnisse der Im-
munitiitsforschung eine MeinungsauBerung abgeschnitten sei.

Es ist jederzeit mein Ziel gewesen, daB in diesem Jahres¬
bericht die aktuellen Fragen von den verschiedensten
Standpunkten aus behandelt werden. Auch Hermann
Pfeiffer stehen die Spalten unseres Jahresberichtes zu einer
gemaBigten, sachlichen und vor allem unpersonlichen
Behandlung des Stoffes jederzeit ofifen.

Llteratur.

Weichardt, W., I'eber Krraiidungsstoffb, 2. Aufl. Stuttgart, Ferd. Enke,
1911 (s. dasclbst das ausfiihrliche Literaturverzeichnis).

Froromamsche Bnchdruckerei (Hermann Pohle) in Jena. — 4273

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Zeitschrift £ ImniMtsforsotnmg. Original BilTD. Ha 2.

Nachdruck verboten ,

[Prom the Pharmacological Laboratory, University of Michigan.]

The action of the Protein Poison on Dogs:

A Study in Anaphylaxis.

By Charles W. Edmunds,

Professor of Materia Medica and Therapeutics, University of Michigan,

Ann Arbor.

With 4 Curves in text.

(Eingegangen bei der Redaktion am 24. November 1912.)

For some years Vaughan and his pupils have been
engaged in the study of protein poisons.

Employing a large number of proteins obtained from different sources,
bacterial and others, they were able tho show that all true proteins could
be split into two parts — one of which was toxic while the other was non¬
toxic. This cleavage of the protein molecule was secured by subjecting it
to the action of 2 % sodium hydrate in absolute alcohol, at 78 degrees,
for a number of hours. The toxic portion of the molecule which was split
off remained in solution in the alcohol, while the non-poisonous constituent
formed a residue which was insoluble in alcohol. With the non-poisonous
body I am not concerned at the present time, for a study of its nature
and properties reference may be made to the various papers of Vaughan
and his co-workers.

As stated, the toxic portion is soluble in alcohol, less freely in water,
and insoluble in chloroform, benzene, ether, etc. It responds to the biuret
and Mill on tests, and is therefore regarded at present as still a protein,
but of comparatively simple structure.

When a fatal dose of the free poison is administered to a guinea-pig
the symptoms resulting therefrom may be divided into three stages —
that of peripheral irritation, as shown by restlessness and itching — a
stage of partial paralysis, and finally, failure of the respiration, accom¬
panied by violent clonic convulsions. As the heart beats for a time after
the respiration has stopped the cause of the death was at first ascribed to
an action of the poison upon the cells of the respiratory center.

A comparison of the effects produced in guinea-pigs by an injection
of this protein poison with those seen in sensitized animals when the second
or intoxicating dose of the protein is given led Vaughan 1 ) to formulate

1) Vaughan and Wheeler, Journ. Infect. Dis., May, 1907.

ZelUchr. f. Immunittitsforschung. Orig. Bd. XVII. 8

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106

Charles W. Edmunds,

his well known theory of anaphylaxis or allergy. Briefly stated, this ex¬
planation is as follows: When a foreign protein is introduced into the
blood and is not taken care of by the ordinary proteolytic ferments it is
deposited in some tissue the cells of which develop a specific ferment which
splits up this foreign protein. This ferment, being specific, only reacts
when brought into contact at some later time with the same kind of pro¬
tein which originally caused its formation. When this takes place it splits
up the protein and frees the toxic portion of the molecule, giving rise to
the symptoms peculiar to anaphylactic shock.

On account therefore of their suggested relation to ana¬
phylaxis these split protein products have gained an increased
importance, and it was thought that a more detailed study of
their physiological action would be of value not only for their
own sakes but also for the possible light it might throw on
the much disputed question of the mechanism of anaphylaxis
itself. It was of course understood from the beginning of
the work that it was not necessary that the symptoms pro¬
duced by the protein poison and those seen in anaphylaxis
should be identical, because the poisons are produced in quite
different ways — one by simple chemical manipulations, while
the other is presumably due to ferment action. The end
products therefore would quite likely differ in certain respects,
and accordingly produce more or less dissimilar symptoms.
However, a comparison of the effects must be of great interest.

I therefore undertook such a study, being able through
the kindness of Vaughan to secure from him a supply of
the toxic portion of the protein molecule — the protein in
this case being casein. The different chemical reactions which
it possesses have been described fully in the various papers
published by Vaughan, and so need not be given again here.

The substance was a light brown powder and possessed a penetrating,
unpleasant odor. For use I prepared a solution in distilled water in which
the poison is quite freely soluble, forming a clear, dark yellow solution,
with a reaction quite strongly acid to litmus. As this acid reaction inter¬
fered with its intravenous administration I added to it a sodium carbonate
solution until the reaction was neutral, when tested with red or blue litmus
paper. During the process of neutralization carbonic acid was given off
and a heavy precipitate was formed. When the neutral point was reached
this precipitate was filtered off and the filtrate diluted with water until it
was of such a strength that 1 c. c. contained the soluble portion from
100 mgr. of the original toxic part of the casein molecule. The solutions
were made up at short intervals, rarely being kept more than two or three

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The action of the Protein Poison on Dogs. 107

days, but were made up fresh, usually in amounts of 2 gr., which, as
stated, gave a solution ready for use, measuring 20 c. c.

In the coarse of this paper the doses referred to will
mean the amounts of the toxic substance which were used,
no deduction being made for the precipitate which was filtered
off, the loss of which did not lessen the toxicity of the solution.

In the present work I used dogs as experimental animals
almost exclusively, for the reason that the effects of the poison
had scarcely been studied in these animals at all, and also
because the mechanism of anaphylaxis is not so well under¬
stood in dogs as it is in guinea-pigs, thanks especially to the
important researches of Auer and Lewis. I hope to study
the effects of the poison on guinea-pigs a little later.

My first experiments were carried out upon the intact
animal, to which the drug was given intravenously.

Under local anaesthesia a short cut was made through the skin over
a superficial vein, and then the drug injected into the vein by means of
a hypodermic needle.

The symptoms can be given best by the reproduction of
the following typical protocol:

March 25, 1912. Small dog. — Very active.

3 4# Respiration 60.

3 4S 150 mgr. casein poison intravenously.

. 3 4 ’ Respiration 56. Dog stands quiet, with lowered head.

3 4 * Vomits.

3 60 Eyes closed. Attempts at defecation.

3 6a Respiration 68. Irregular.

3 s8 Defecates.

3* 5 Lies down. Little attention to surroundings. Some difficulty in
control of legs.

4 h Respiration 68. Labored expiration.

4 M Respiration 52. Labored expiration. Gradual return to normal.

The most prominent symptoms were therefore a marked
depression, disturbance of the alimentary canal, and some
respiratory disturbances, the latter consisting of slight accele¬
ration with a slightly labored expiration. In some animals
the respiratory symptoms, with the exception of the slight
acceleration, were scarcely noticeable. A study of these
symptoms shows that they resemble very closely those ex¬
hibited by dogs which are suffering from anaphylactic shock,

8 *

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108

Charles W. Edmunds,

although they are milder than those described by Pearce
and Eisenbrey and others.

Effect on the Circulatory System.

The action of the poison upon the circulatory system was examined
in a small dog which was anaesthetized with morphine and paraldehyde,
the former being given by hypodermic two hours before the animal was
to be used, and 8 c. c. paraldehyde by the stomach tube at the time of
the experiment. The blood pressure was measured from the carotid artery
and the respiration recorded by a tambour resting against the chest wall
and connected with a second tambour which registered the movements
upon the blackened paper.

An injection into the jugular vein of the filtrate obtained,
as described earlier from 100 mgr. of the casein poison, pro¬
duced the following changes in blood pressure, viz. immediately
following the injection and lasting about 20 seconds, there
was a very slow decline in pressure, amounting to 6 or
8 mm Hg, and this passed on into a sudden and rapid fall,
during which from a normal height of 72 mm the pressure
reached about 20 mm Hg.

During these changes in pressure the heart rate was
altered also. From a normal rate of 138 to 140 it was
slightly accelerated (144) during the stage of slow decline,
but it was considerably slowed during the stage of low pres¬
sure, the rate dropping to 92 per minute.

The respiration showed little change in rate beyond a
slight slowing during the progress of the blood pressure fall,
the main change being in the strength which was considerably
decreased, neither inspiration nor expiration being as com¬
plete as normal.

The blood pressure showed very little tendency to recover,
this depending somewhat upon the dose given the individual
animal. In some cases there was a slow rise, while in others
an interval of 30 minutes or more only saw an increase of
a few millimeters.

During this stage of low pressure I stimulated the cen¬
tral end of the cut sciatic, but secured a rise of only three
or four millimeters Hg, demonstrating an almost complete
paralysis of the vasomotor system at some point. After a

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The action of the Protein Poison on Dogs.

109

farther injection of 100 mgr. of the poison, sciatic stimula¬
tion produced no effect upon the blood pressure. I now
dissected free the great splanchnic nerve and stimulated it
with the induced current, but got no response, showing there
was a peripheral paralysis of the vasomotors.

In order to confirm the view that the fall in pressure
was peripheral in origin experiments were carried out on
other dogs in which the central nervous systems had been
completely destroyed by pithing. This was done under com¬
plete anaesthesia, destroying the cerebrum and then pass¬
ing a wire down the spinal canal, and manipulating it so as
to completely disorganize the structure of the cord. In such
animals the results following injection of the poison were
essentially the same as in normal animals. The fall in pressure
was smaller on account of the low initial pressure of 30 mm
which after the injection fell to 24 mm.

That the action was peripheral to the ganglia along the
course of the constrictor fibres was proved by the use of
large doses of nicotine, sufficient being given to paralyze
them. When this stage was reached the injection of the
casein poison still produced its characteristic fall.

The localization of the point of action of the drug upon
nerve ending, receptive substance, or muscle wall was studied
with the aid of nicotine, epinephrin and digitalis. The action
of nicotine was greatly weakened by the previous injection of
casein poison. Where before the poisoning, nicotine had
given a marked increase in pressure in the characteristic
manner, following 300 mgr. of the poison 5 mgr. nicotine
raised the pressure from 16 mm Hg, to only 62 mm. The
heart rate was increased by the nicotine in the usual manner,
from 120 per minute to 216. The pressure curve from the
nicotine was not only lower than that usually seen with such
doses but was much altered in shape, there being a very
slow rise in place of the precipitous increase commonly ob¬
tained. The injection of nicotine was followed after a short
time by a dose of epinephrin which raised the pressure from
18 mm. to 225 mm. These experiments seemed to point
conclusively to the nerve endings as being the structures
primarily acted upon by the poison, as evidently the receptive

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110

Charles W. Edmunds,

substance which is stimulated by the epiuephriu had not been
paralyzed by the poison.

In addition to epinephrin both digitalis and barium chlorid
raised the lowered blood pressure very satisfactorily, demon¬
strating that the muscle cell in these cases was not affected
by the doses of poison given.

In some animals, however, the use of large doses of the
poison was followed by a lessened response to epinephrin and
digitalis, thus showing that while the nerve ends are first
affected, the effect of large doses is not necessarily confined
to these structures, but may spread to the receptive sub¬
stance and contractile substance proper.

The following protocols will illustrate the action described. The dogs
were anaesthetized in the usual manner, and the vagi paralyzed by atro¬
pine. The figures given are obtained by averaging three or four readings,
the dose of epinephrin being 1 c. c. of a 1—20 M. solution.

Nov. 28, 1911. Dog Epinephrin

Normal blood pressure blood pressure Increase
91 211 132%

Injected 600 mgr. casein
poison

36 86 139%

In this experiment, figured on the percentage basis the
epinephrin response was a little greater after the poison than
it was before.

Nov. 27, 1911. Dog Epinephrin

Normal blood pressure

blood pressure

Increase

98

149

52%

Injected 800 mgr. casein

poison

57

76

33°/°

In this animal the poison apparently produced some
change in the receptive substance as well as in the nerve
ending, as the adrenalin response was considerably weakened.
In connection with this animal it may be pointed out that
the blood pressure after the casein was not lowered as mar¬
kedly as was usually the case. It only reached 57 mm. after
100 mgr. of the poison had been given and showed a marked
tendency toward recovery, the pressure beginning to rise
almost at once, to be lowered again slowly by the subsequent
larger doses.

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The action of the Protein Poison on Dogs.

Ill

Several other points in relation to the action of the casein
poison upon the circulation were also examined, viz the effect
produced by the paralysis of the splanchnics upon the volume
of the internal organs; the effect of the poison upon the
vessels of perfused isolated organs and also its effect upon
the heart.

The effect upon the volume of the kidney and intestine
was first studied, employing pletbysmographs in the usual
manner and registering the changes with piston recorders.
The results obtained from each organ coincided exactly, viz.
with the fall in blood pressure occuring as soon as the casein
was injected the volume of the organ diminished.

This decrease in volume which was encountered in both
kidney and intestine was surprising, as a fall in blood pressure
associated with paralysis of the splanchnic nerves would cer¬
tainly lead an observer to connect the two phenomena, and
also to ascribe the fall to the paralysis and consequent loss
of tone in the vessels of the abdominal organs. Evidently,
however, in this case there must be other factors such as
possibly an action upon the heart.

Action npon the Heart.

The action upon the heart, apart from changes in rate
differs slightly in different animals, but in the main the
effects are much alike. Small doses, such as 25 mgr., had
no marked influence beyond a temporary increase in systole
and diastole in both auricle and ventricle. This increase in
strength is followed in about a minute by some weakening
in both chambers, but most marked in the auricle, both
systole and diastole being decreased. The weakening with
such doses is not sufficient to lower the blood pressure, as
the latter may be found to retain its normal height

With larger doses, such as 100 to 150 mgr. the same
changes are produced as with the smaller amounts, the only
difference being one of degree (Tracing 1). The increase in
systole in both auricle and ventricle is quite marked in
some cases, while the change in the extent of dilatation is
not so great, but is present in almost every case. These

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112 Charles W. Edmunds,

changes lead to an increased amplitude of beat which usually
lasts for from one to two minutes — that is, until the blood
pressure has reached its lowest limits. The fall in blood
pressure coming on therefore while the strength of the heart
is increased finds no explanation of its origin in this organ.
Likewise these heart changes do not explain why the kidneys

Tracing 1. Jan. 24, 1912. Dog. Heart exposed. Upper tracing — Rt.
auricle; middle — Rt. ventricle; lower — carotid blood pressure. Time in
seconds. 200 mgr. casein poison injected. No atropine nad been given.

and intestine become smaller, while the blood pressure is
dropping. The diminution in volume is certainly not due to
cardiac weakness.

The changes which the heart undergoes, following the
increase in systole described, consist in a weakening in both
chambers, while the extent of dilatation may be still further

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The action of the Protein Poison on Dogs.

113

increased, or it may show little change. Two factors come
in to complicate the changes produced by the poison. First,
the great fall in blood pressure produced by it decreases the
resistance against which the heart has to contract; and second,
the changes in the respiration which at times produced a
mild degree of asphyxia. It happened that in some cases
where before the poison was given, the artificial respiration
had seemed entirely adequate, after its administration the
lungs did not inflate so well and the blood showed signs of
deficient aeration. The heart changes where therefore studied
further in animals in which all the other organs were excluded
from the circulation except the lungs.

This experiment was carried out on a large bull dog anaesthetized
in the usual way. Under artificial respiration the sternum was cut length¬
wise, the two halves of the chest pulled apart, and the heart exposed.
The large vessels at the base of the heart were dissected free and a
damp placed in position on the aorta just below the origin of the left sub¬
clavian artery, the latter artery being tied, as was also the right sub¬
clavian. A loose clamp was also placed on the inferior vena cava just
above the diaphragm. Cannulas were now placed in both common carotids
and in both external jugular veins. The cannula in the left carotid and
right jugular were paraffined and connected by a short piece of paraffined
rubber tube, thus providing a channel for the blood to flow from the left
to the right heart The cannula in the right carotid was connected with
the mercury manometer to record the blood pressure, and that in the
left jugular was used to inject the poison. The clamps on the aorta and
vena cava were now closed, thus shutting of the circulation to all parts
of the body except the heart and lungs. The pericardium was opened
and sewn to the sides of the chest to form a sort of cradle for the
heart. The myocardiograph was attached to the right auricle and ventricle
in the usual manner, and arranged to record their movements on the
kymograph.

The blood pressure which had been very high following
the closure of the clamps had undergone some readjustment,
and was averaging 106 mm Hg. The heart was greatly
dilated.

Injection now of 150 mgr. casein poison produced a
transient weakening of the heart and a fall of 2 or 3 mm Hg.
but these slight effects were very quickly recovered from,
and were followed by a return to conditions which closely
resembled normal, the only noticeable difference being an in-

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114

Charles W. Edmunds,

crease in auricular systole and slight decrease in diastole in
both chambers (Tracing 2).

'fracing 2. June 3, 1912. Bull dog. Heart-Lung circulation. Vagi
cut. Aorta clamped just beyond origin of left subclavian artery which
was tied. Inf. vena cava clamped above diaphragm. Branches of inno¬
minate artery tied except carotids. Left carotid joined to jugular vein by
tubing.

Lower tracing — blood pressure; middle — Rt. ventricle; upper — Rt.
auricle. Lever moves down in systole. Time in seconds.

The blood pressure after its slight primary fall due to
the injection also returned to normal and remained there,
thus excluding the heart and lungs from responsibility for

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The action of the Protein Poison on Dogs.

115

the great fall usually seen in experiments where the entire
animal is used.

In general, then, the action upon the heart is primarily an
increase in systole and diastole of both chambers, this increase
being followed later by a weakening which is possibly due not
so much to the action of the poison itself as to the low blood
pressure and perhaps to some asphyxia. It is less marked
in those animals in which the circulation is confined to the
heart and lungs alone.

Effect on Heart Bate.

In animals with vagi intact the injection of a dose of caBein poison
is followed by slowing, as the following figures show:

Bate before

Dose of poison

Bate after

Exp. 1/11,12 186

200 mgr.

174

„ 1/24/12 212

200 „

176

If the vagi are cut or paralyzed before the poison
acceleration occurs instead of slowing.

is injected a slight

Bate before

Dose of poison

Bate after

Exp. 11/3/11 112

25 mgr.

116

112

50 „

120

„ 11/27/11 144

100 „

150

In dogs with the spinal cord and brain pithed the injection
of the poison is not followed by any change in rate, nor does
any change occur in the dogs in which the heart-lung circu¬
lation is used, showing clearly that the acceleration is of central
origin and probably a reflex resulting from the lowered blood
pressure. This action is obscured in non-atropinized animals
by the stimulation of the vagi.

On account of the close relationship found to exist be¬
tween the action of this poison and the symptoms seen in
anaphylactic shock I studied further the effect of the poison
upon the circulation in the lungs because in sensitized cats
the fall in blood pressure following the second injection of
protein is said to be due to the fact that the pulmonary ar¬
teries are constricted and form an obstruction which prevents
the blood from reaching the left auricle. As the phenomena
in both cat and dog are much alike it became of interest to

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116

Charles W. Edmunds,

see whether such a change could be found in the latter animal
when the protein poison was injected.

The fact that the pulmonary vessels may be constricted
receives some support from the fact that the right heart fre¬
quently shows some dilatation, as has been described earlier,
but on the other hand the experiments upon the dog with
“heart-lung” circulation speak against the view, as in these
animals no fall in aortic pressure was found, which should
follow if the blood was prevented from reaching the left heart
by encountering an obstruction in the lung vessels. Never¬
theless 1 measured the changes in the pulmonary blood pres¬
sure, carrying out the work in the following manner:

A dog was prepared with the chest opened and heart exposed as usual.
The heart was pulled to the right somewhat, so as to leave as much room
as possible between it and the left chest wall. The pulmonary artery was
now traced from the right ventricle until the large branch given off to the
left upper lobe of the lungs was found. After freeing this branch for a
sufficient distance a paraffined glass cannula was inserted into it pointing
toward the heart. This cannula was connected by rubber tubing with a
Hurthle membrane manometer. One of the pulmonary veins from the lower
left lobe was then isolated, and a cannula inserted into it and connected
with a water manometer.

When these cannulas were inserted all the connections made and the
clamps on the vessels removed the heart was allowed to return to its nor¬
mal position and secured in the usual manner by sewing the split peri¬
cardium to the sides of the chest The myocardiograph was now attached
to the right ventricle bo as to record its movements. A record of the
carotid blood pressure was also taken. If the view is correct that the
systemic blood pressure falls because less blood reaches the left side of the
heart this should be shown by a fall in pulmonary venous pressure, as less
blood would pass through the supposedly constricted pulmonary arteries.
The changes found in the heart and systemic pressure agreed, of course,
with those described earlier.

In the pulmonary artery following the injection there was
an increase in pressure, but this increase was slight and limited
to the time during which the systole of the ventricle was
strengthened. When the stage of lessened systole came in the
pressure fell to normal, or slightly below the normal level.
In all the tracings taken the pressure changes in the artery
seemed to be very closely connected with the strength of the
systole — with increased systole an increased pressure, and
vice versa.

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The action of the Protein Poison on Dogs.

117

The changes taking place in the pulmonary arterial pres¬
sure would not point to any constriction in the pulmonary
vessels as the increase in pressure found after the injection
was very slight, and may be easily explained by the strength¬
ened beat of the ventricle. Even allowing for distention of
the pulmonary vessels it would seem that a constriction of
the arterioles sufficient to prevent the blood entering the left
auricle in adequate quantities should also show a considerable
increase in the pulmonary arterial pressure, which certainly
was not present.

The pulmonary venous tracing showed the following
changes, viz. an increase in pressure which lasted for the
entire time during which the systemic pressure was falling,
and even for a short time after the general pressure had
reached its lowest point. These changes were synchronous
with those found in the pulmonary arterial pressure, and it
would seem that they could be referred back to the same
source, that is, to the heart itself. In other words, the pul¬
monary vessels apparently play a passive part, and the changes
in the lung circulation are due to the heart alone, for with
an increased ventricular action we find a slight increase in
pulmonary arterial pressure and a heightened venous pressure.
When the heart weakens, the pulmonary arterial pressure
falls, and as a result of this the venous pressure falls also.

• The important point is that the systematic pressure falls and
remains at a low level, while the left auricle is receiving an
increased amount of blood, as is shown by the heightened
pulmonary venous pressure. A comparison of these changes
produced by the protein poison with those seen in anaphy¬
lactic shock will be given a little later.

Casein Poison on Isolated Perfused Organs.

The action of the poison upon the isolated organs was
now examined.

These experiments were carried out in the usual way, by inserting a
cannula in the artery of the organ under examination, and washing the
blood out of its vessels with Ringer’s solution, and then under constant
pressure perfusing it first with Ringer’s solution, and then with Ringer’s
to which 2 c.c. of casein poison solution (100 mgr. to 1 c.c.) had been
added for each 100 c.c. of Ringer’s.

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118

Charles W. Edmunds.

Jan. 31/12. Dog’s kidney perfused. Time recorded indicates time
required for successive amounts of 10 c.c. to flow from the veins.

Ringer’s solution
3 min. 50 sec.

3 „ 27 „

3 „ 16 „

Casein poison 200 mgr. to
100 c.c. Ringer’s
2 min. 35 sec.

2 „ 13 „

1 „ 40 „

1 38

Pure Ringer’s
1 min. 37 sec.

1 „ 45

2 „ 1

2 „ 3

1 „ 58

1 „ 58 .

Ringer’s plus

epinephrin

2 min. 4 Bee.

2 „ 15 ..

Febr. 1/12. Hind leg of dog. Amounts of fluid flowing from veins
in 90 second periods.

Ringer’s solution.

Time Amount

3:10 to 3:11:30 77 c.c.

3:11-30 to 3 :13 81 „

3:13 to 3:14-30 81 „

Casein 2 c.c. to 100 c.c. Ringer’s solution.

3:14:30 to 3:16 95 c.c.

3 :16 to 3:17: 30 94 „

3:17 :30 to 3 :19 94 ,,

These results which were confirmed by experiments upon
other organs point to the same action, namely a dilatation of
the vessels, probably due to a paralysis of the vasomotor
nervous mechanism.

The isolated vessels after paralysis by the casein did not
show any very decided improvement when subsequently washed
out with Ringer’s solution, but they responded promptly to
epinephrin. For instance, from the veins of a perfused hind
leg of a cat from 25 to 28 c.c. of fluid were obtained every
two minutes. Under casein poison this amount was increased
to 40 c.c., 44 c.c., and finally 57 c.c. This amount was not
reduced by Ringer’s, but the addition of epinephrin promptly
contracted the vessels, decreasing the amount to 35 c.c., and
finally to 6.5 c.c. in 2 minutes. It would appear therefore
that the receptive substance was not strongly affected by the
poison.

All the perfusion experiments therefore point to a local
paralyzing effect upon the vessel walls.

The question as to the distribution of the blood as the
systemic pressure is falling, however, still remained unsettled.

(

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The action of the Protein Poison on Dogs.

119

An action on part of the heart or lungs is eliminated by the
experiments in which these organs were utilized alone. It
does not appear that the intestine or kidneys store the blood,
as the volume of these organs lessens as the pressure is
dropping. The condition of the liver and the part it might
play remained to be investigated. That this organ might be
involved was made the more likely by the fact that Pearce
and Eisenbrey 1 ) say that in acute anaphylactic shock they
observed an accumulation of blood in the liver and large
veins of the abdomen, and a slight increase of pressure in the
inferior vena cava. Pearce and Eisenbrey apparently
made no graphic records of the volume of the liver, relying
upon inspection of the organ, which in such a case might not
be very conclusive. Doubt is also cast upon the answer to
the question by the work and views of Schultz 2 3 ) who it
would seem appears almost to doubt that the splanchnic paral¬
ysis plays any part in the fall in pressure. On the other
hand, the view of Pearce and Eisenbrey receives support
from the researches of M a n w a r i n g 8 ), and still later V o e g t -
1 in and Bernheim 4 5 ) who found that in dogs with the liver
excluded from the circulation no typical picture of acute shock
appeared.

I accordingly studied the changes in volume in the liver
produced by an injection of the poison, and then compared
them with those seen in sensitized animals. The technic was
as follows, and consisted principally in devising an oncometer
for the organ:

Following the example of Thomson 6 ) I utilized the left lobe of the
dog’s liver, as this is well suited for the purpose by reason of the ease
with which it can be separated from outside connections — the only vessel
it is necessary to tie is one passing from the diaphragm to the liver lobe
at its posterior angle. When this is ligated and cut the lobe is free, only
being connected with the main part of the organ at the hilus of the lobe

1) Pearce and Eisenbrey, Journ. Inf. Dis., VoL 7, 1910, p. 571.

2) Schultz, Joum. Pharm. and exp. Ther., Vol. 3, 1912, p. 299.

3) Man waring, Bull. John Hopkins Hosp., Vol. 21, 1910, p. 275.
— Zeitschr. f. Immunitatsi, Bd. 8, 1910, H. 1.

4) Voegtlin and Bernheim, Journ. Pharm. a. exp. Ther., Vol. 2,
1911, p. 507.

5) Thomson, Journ. Phys., Vol. 25, 1899, 1.

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120

Charles W. Edmunds.

which is perhaps 3 cm. wide by 1.5 cm. thick. Taking now this lobe from
an animal 1 had used for other purposes 1 hammered out of lead sheeting
two discs with flanges which when placed together roughly enclosed the
lobe. Over these plates I moulded dental impression material which be¬
comes soft in hot water, but hardens on cooling. Stout copper wire was
bent into the form of an ellipse so as to fit the outer edge of each disc,
and over these wire rings was stretched loosely peritoneal membrane fastened
in place with shellac. After this had dried these peritoneal plates were
embedded in the discs and made air tight by melting the waxy material
around them with a hot wire. Each disc consisted now of a double walled
chamber after the manner of the well known Roy kidney oncometer. The
interior of each chamber was reached by means of a glass tube which was
embedded in the wax. This tube served to fill the chambers with warm
salt solution when the apparatus was desired for use, after which rubber tubes
were placed on each glass tube, and these were connected by means of
a tube which in turn was connected with a piston recorder. The flanges
of the two halves were spread apart at the point where the hilus of the
lobe was located, so that there was no pressure on the vessels. During the
experiments the piston recorder showed a well marked pulse.

When the apparatus was to be used all operative'proce¬
dures in regard to insertion of tracheal, arterial and venous
cannulas were carried out first. A longitudinal incision was
then made in the abdominal wall in the epigastric region, and
a transverse cut along the left costal margin — in some cases
the lower ribs on the left side were cut away. The remains
of the costal border were pulled out of the way and the sto¬
mach and intestines pulled down and covered with warm,
moist towels. The lobe was freed and then the two discs
which had meantime been filled with warm water were fitted
on either side of it and fastened together with rubber bands.
Connections were now made with the piston recorder. Trial
tests made with epinephrin injections showed a well marked
constriction of the organ. The casein solution was now injected
and the record showed that at the time the blood pressure
was falling the volume of the liver underwent an increase.

This change would seem then to settle the question of the
distribution of the blood at the time of the fall in systemic
pressure. This fall is due primarily to a peripheral paralysis
of the vasomotors running in the splanchnic nerves. It is not
due to heart weakness, as the cardiac contractions are more
powerful at this stage than under normal conditions; neither
is it due to failure of the left side of the heart to receive

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The action of the Protein Poison on Dogs.

121

blood, as the pulmonary venous pressure is increased, showing
more blood is supplied to the left auricle.

The spleen, kidneys and intestine do not show an in¬
creased volume for the reason that (doubtless due to the anato¬
mical arrangement of the hepatic vessels) the blood is drained
from these organs into the capacious blood channels of the
liver. The conditions appear to be identical with those de¬
scribed by Thomson, as following an injection of Witte’s
peptone. Doubtless other factors come in which play a part in
lowering the blood pressure, or in keeping it down. For in¬
stance, the weakening of the heart which I have described
aids, and in itself is probably a result of low pressure and
not the cause. Then other vascular areas are also affected
than those innervated by the splanchnics. This has been shown
very clearly in the case of several white dogs I have used.
Before the injection of casein poison the skin over the ven¬
tral side of the body was white, or perhaps faintly pink. After
the poison had been given it was noticed in every case that
the skin over the abdomen and even extending well up over
the thorax and down on the legs was a bright pink, a very
marked change from the normal. If an injection of epinephrin
was given, a blanching over this area took place, which was
easily discernable even to untrained observers.

The fact that other areas than that of the liver are con¬
cerned is shown also by the injection of the poison when the
liver is excluded from the general circulation.

This was carried out in a dog in the following manner.

An incision was made along the edge of the right rectus muscle
The intestines were pulled to the left and the portal vein isolated, and
a paraffined cannula inserted into it. This was connected by a paraffined
tube with a cannula in the right external jugular vein. The hepatic
artery was now clamped and the blood pressure being measured from the
carotid the poison was injected into the left jugular vein.

This was followed by the usual fall in pressure, the main
difference being that the descent was more gradual, as it took
about 90 seconds to reach 48 mm. from a normal height of
88 ram. Evidently in this animal the abdominal organs other
than the liver, together with the skin vessels, accommodated

Zeitichr. f. ImmunitSttfor&chung. Orig, Bd. XVII. 9

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122

Charles W. Edmunds,

the blood, and the same fall in pressure took place bat coming
on more slowly, which difference would be expected as the
blood channels of the liver in the other animals could fill with
blood very quickly.

Bespiration.

The respiratory changes produced by the poison were
not very marked even where the blood pressure had under¬
gone a fall of 75 or 100 mm. Hg. The usual effect was a
weakening and some acceleration. It sometimes happened
that just as the pressure was dropping there might be a tem¬
porary slowing in rate, to be followed by the weakened, rapid
breathing. In one lightly anaesthetized dog a normal rate of
17 to the minute gave way to 24 after the poison was given.

In the normal non-anaesthetized dog described in the
protocol given earlier the respiration increased in rate from
56 to 68 per minute, and became irregular in strength, and later
on the respiratory movements were labored and it seemed to
be the expiratory phase which was concerned.

In animals with the chests open and the lungs exposed
and responding rhythmically to artificial respiration the blood
meantime being well aerated, after the poison was injected
the animals frequently began to show signs of beginning
asphyxia, and upon examining the lungs it would be found
that they were not responding so well to the movements of
the bellows as before. A slightly stronger stroke of the latter
would usually remedy the trouble.

This disturbance of the lungs is very interesting not only
because it explains the slightly labored respiration in the un¬
anaesthetized dog and because it may explain some of the
weakening of the heart which is seen rather late, but also be¬
cause the respiratory system shows the most marked symptoms
in the guinea-pig in acute anaphylactic shock. Respiratory
disturbance of this sort has also been described by Schultz
as occuring in cats.

Blood.

Among the characteristic symptoms produced in dogs by
the anaphylactic poison is a lack of coagulability of the blood

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The action of the Protein Poison on Dogs.

123

which may remain fluid for hours, or even days. Also the
blood picture changes, the polynuclears are decreased in num¬
ber, while the mononuclears and blood platelets appear more
numerous. Much the same effects are produced by the in¬
jection of Witte’s peptone.

I accordingly examined the blood in several animals, taking
specimens both before and after the casein poison was injected,
to see if there was any change in the coagulation time, but I
was unable to detect any difference. Even after large doses
of the poison the drawn blood clotted as quickly as the con¬
trol specimens.

Blood counts were made in the animal that had been
injected intravenously — the protocol of which was given
earlier:

March 25, 1912.

3:00 P.M.

The differential count showed the following:

Polynuclear Lymphocytes Eosinophile an dSsSSal

°/ 0 Number % Number % Number °/o Number

3:00 67 19128 15.2 4350 8.4 2415 9 2566

3 :46 150 mgr. casein poison.

3:58 72 19253 19.2 5137 1.4 374 7 1871

As is seen by the above figures, the changes in the blood
picture were not very great, although the animal had shown
well marked symptoms of intoxication. Accordingly, a week
later the same animal was used again, with the following
result:

April 3, 1912. Hog.

2 :45 P.M. Total leucocytes, 33 867

4:02 „ 350 mgr. casein poison intravenously

4:25 „ Total leucocytes, 23 937

The differential count showed the following:

Polynuclear

Lymphocytes

Eosinophile

Mononuclear
and Transitional

°/ 0 Number

°/ 0 Number

°/ 0 Number

°/ 0 Number

2:45

69.2 23 435

14.6 4944

8.4 2846

7.4 2506

4:02

350 mgr. casein

poison.

4:25

78.6 18 744

15.2 3638

0.8 191

5.0 1196

9*

Small dog.

Total leucocytes, 28 520

150 casein poison intravenously

Total leucocytes, 26 737

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124

Charles W. Edmunds

In this instance the changes were more distinct, but while
polynuclears and lymphocytes were decreased in total number
yet their relative percentages did not alter greatly. The most
marked change was in the eosinophiles which were greatly
diminished not only in number but also in relative percent¬
ages.

Effect on the Pancreas.

As is well know, Popielski 1 ) has shown that Witte’s
peptone will call forth a secretion of the pancreas which begins
in about one minute and lasts for from four to six minutes.
Likewise Modrakowski 2 ) has recently shown that in sensi¬
tized dogs when the second or intoxicating injection was given
a secretion of the pancreas also occurred. This secretion began
in about a minute and according to the protocols given lasted
for more than ten minutes. As I had found that the action
of the casein product resembled in many respects both peptone
and the anaphylactic poison I examined its effect upon the
pancreas in the usual way. A dog was anaesthetized and
through an abdominal incision a cannula was inserted into the
pancreatic duct This cannula was connected with a graduated
glass tube. The injection of the usual doses of casein poison,
however, failed entirely to have any effect upon the activity
of the gland. Control injections of secretin given both before
and after the poison were followed by the usual secretion.
This experiment which was carried out on more than one
animal but always with the same negative results was of
considerable interest and importance, as it proved to be one
of the ways in which the action of the protein poison differed
from that of the poison of anaphylaxis.

Effect of a second Injection of Casein Solution.

The effect of a second dose of casein solution was in
striking contrast to that of the original, as it had no effect
upon blood pressure, or did not lower it more than two or
three millimeters.

1) Popielski, Pfliigers Arch., Bd. 126. 1909, p. 483.

2) Modrakow ski, Arch. f. exp. Path. u. Pharin., Bd. 69, 1912,
p. 67.

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The action of the Protein Poison on Dogs. 125

It might accelerate the heart for a brief period, but with moderate
doses (100 mgr.) its effect on the respiration was nil. In other words, if
the initial dose had been adequate (75 to 125 mgr.) secondary injections
of moderate amounts produced no changes beyond some transient cardiac
acceleration. This fact and the action of small doses were well shown in
the following protocol:

Not. 3, 1911. Dog. Weight 4 kg. Morphine and Paraldehyde. Can-
nulae in carotid artery, jugular vein and trachea. Atropin 2 mgr. Vagus
stimulation had no effect on heart

Blood Pressure

Heart Rate

Respiration
rate per min.

3:20

56

112

57.

3:21

3:22

25 mgr. casein poison

54

116

57,

3:23

3:23*

50 mgr. casein poison

44

112

6

3:24

20

112

8

3:25

25

120

3:27*

26

124

10

3:31

3:32

100 mgr. casein poison

30

128

As is seen, the poison is relatively non-toxic. After a
sufficient amount has been given to paralyze the vasomotors,
further doses have little effect even when quite large amounts
are given.

Summary of Casein Poison Action.

The action of the protein product then is mainly that of
a poison which paralyzes the vasomotor endings in the blood
vessels. This paralysis results in a dilatation of the blood
vessels, with consequent marked fall in blood pressure. Failure
of the heart, or obstruction in the pulmonary circuit is not
responsible for the fall in pressure, as the heart may be
beating more strongly and the pulmonary venous pressure
raised at this stage, showing that the left auricle is getting
sufficient blood.

The organ mainly responsible for the fall in pressure is
the liver which on account of the anatomical arrangement of
its vessels allows the blood to accumulate in its interior, thus
increasing its volume at the expense of the kidney and intest¬
ine, which it drains of blood thus reducing their size even
though their vasomotor nerves are paralyzed also. The poison
does not prevent coagulation of the blood. It produces some

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126

Charles W. Edmunds,

acceleration of the respiration which probably is secondary to
the circulatory disturbance, and it also interferes to a limited
degree with the rhythmic movements of the lungs.

Relation of Protein Poison Symptoms to those
of anaphylactic Shook.

In considering now the relation of the action of this split
protein poison to the symptoms of acute anaphylactic shock
in dogs it is not necessary to abstract the very abundant
literature concerning the various views held upon the physio¬
logical mechanism by which it is brought about, as this has
been done very completely recently by Anderson 1 ), Schultz
and others. It is sufficient to point out that there are two
main views upon the question. One held by B i e d 1 and
Kraus, and also by Pearce and Eisenbrey, and the
other upheld by Schultz himself.

The former view is that the fall in blood pressure which
is characteristic of this condition is produced by a high grade
peripheral vasodilatation due to an action probably upon the
nerve endings in the blood vessels. This affects principally
the splanchnic area and these nerves are found to be para¬
lyzed. Some believe the action is upon nerve end proper,
while others locate the point of attack as being upon the
myoneural junctions.

The other view which is put forward by Schultz applies
primarily to the cat, but as he says, the reaction in this animal
resembles that of the dog, differing chiefly in intensity. His
idea is that the circulatory disturbance is not primarily due
to the splanchnic paralysis, but that there is a block in that
part of the circulation occupied by the right heart and pul¬
monary arteries. This block is brought about by a constric¬
tion of the pulmonary arteries which prevents the blood from
reaching the left side of the heart in sufficient quantities to
supply the general vascular areas. A second factor is the
effect of over distention and the action of the serum upon the

1) Anderson, Harvey Lectures, 1908—09, p. 117.

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The action of the Protein Poison on Dogs. 127

right ventricle. He says farther that the vascular dilatation
is not an important factor in causing the preliminary fall in
pressure.

Before discussing further these opposing views I will give
the results of my experiments, and then try to offer some
explanation for this difference in views.

Experimental Work.

After I had obtained the results with the casein poison
which I have outlined earlier in this paper I employed the
same methods in studying the changes in acute shock in
sensitized dogs.

These animals were sensitized with egg-white, dilated one half with
water, three subcutaneous injections of 5 c. c. egg-white being given at
intervals of about a week. The animals were anaesthetized and prepared
in the same way as were those used in the earlier work on the casein
product.

The part played by the liver as shown by changes in its
volume was first investigated to see whether the observations
described by Pearce and Eisenbrey without the aid of
graphic methods could be demonstrated by means of the
oncometer. The result obtained is shown in tracing No. 3. Here,
after an injection of epinephrin to see if the apparatus was
in good recording condition 7 c. c. of egg-white diluted with
an equal amount of water were injected into the jugular vein.
An increase in systemic blood pressure due to the bulk of
fluid injected was followed by a return to normal in 15 seconds.
This was followed by a second slow rise of 12 mm. as is
frequently seen before the characteristic fall in blood pressure
which began 45 seconds later. The fall in this animal was
not very marked, from a normal of 66 it fell to 46, but as
is seen in the tracing, at the moment the blood pressure
passed the normal height on its downward path the volume
of the liver began to increase and it continued to do so during
the entire time the pressure was falling and even for a short
time beyond this stage.

It is clear therefore that we have here a similar condition
to that found with the casein poison and that Pearce and

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128

Charles W. Edmunds,

Eisenbrey’s observations made upon the liver are con¬
firmed by the graphic method. Here too the kidney and other
organs do not increase in volume with splanchnic paralysis

Tracing 3. May 24, 1912. Dog. Sensitized to egg-white by three
injections of 5 c. c. each. Carotid blood pressure. Liver in oncometer.
Cross lines are drawn to show when blood pressure started on its ana¬
phylactic fall and its relation to the liver tracing. 7 c. c. egg-white diluted
with equal volume of water injected. Time in seconds.

because the blood is drained off into the liver. Doubtless the
large veins of the abdominal cavity are also concerned as
Pearce and Eisenbrey state in their writings.

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The action of the Protein Poison on Dogs.

129

Following the injection of egg-white a second control in¬
jection of epinephrin was given, with the typical rise in blood
pressure and marked constriction of the liver.

In anaphylactic shock other vascular areas than the
splanchnic participate in the vascular paresis. Even as I
showed with casein poison I found the same phenomenon in
sensitized dogs upon injection of the intoxicating dose, namely,
that white dogs show over their abdomens and the adjacent
portions of their bodies a marked congestion due to dilatation
of their skin vessels. This is not nearly so marked over the
skin in other parts of their bodies as in the area named.

Examination was now made of the changes taking place
in the pulmonary circulation — of particular interest being
the changes in the venous pressure — to see whether there
was evidence of a deficient blood supply to the left side of
the heart.

Here too the order of the experiment was the same as
has been described earlier in this paper. Cannulas were in¬
serted in the carotid, pulmonary artery and vein, and a record
of the contractions of the right ventricle taken simultaneously.
Tracing No. 4 shows the result of the injection of 4 c. c. of egg-
white diluted with three times its volume of water. All three
pressure tracings show a rise*, lasting about 30 seconds, and
due to the bulk of fluid injected. After its return to the
normal height the carotid pressure continued on downwards
upon its typical anaphylactic fall.

The pressure in the pulmonary artery underwent a di¬
stinct increase, beginning at the time of the fall of the carotid
pressure and simultaneously with the rise in the pulmonary
arterial pressure that in the veins of the lungs also increased
and remained considerably above normal all the time the
carotid pressure was falling. During this phase which lasted
about 30 seconds the heart changes were important. The
extent of dilatation might be lessened, but the systole was
increased. This agreement in time between the heart changes
and the increase in pulmonary arterial and venous pressure
would point to a connection between them, and it would look
as if the increase in venous pressure following as it does the

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130

Charles W. Edmunds,

Tracing 4. April 30, 1912. Dog sensitized to egg-white by three in¬
jections of 5 c. c. each.

Upper tracing — carotid blood pressure recorded by mercury manometer;

Second tracing — pulmonary venous pressure recorded by water mano¬
meter.

Third tracing — Rt. ventricle. Lever moves down in systole.

Fourth tracing — pulmonary arterial pressure recorded by Hurthle
membrane manometer.

Time in seconds. Parallel lines are drawn to show normal height of
each tracing. All pointers were in line except that of the venous tracing
which was 0.5 cm. to right of others.

4 c. c. egg-white diluted 1—4 were injected into the jugular vein.

rise in pulmonary arterial pressure depended upon it and the
arterial pressure in turn upon the increased contraction of

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The action of the Protein Poison on Dogs.

131

the right ventricle, the blood vessels of the lungs meantime
being merely passive. With the weakening of the ventricular
systole the pulmonary arterial pressure dropped below normal
and following it exactly the venous pressure came down too,
but this was after the carotid pressure had reached its minimum.
It is clear therefore that in anaphylaxis in dogs, at least, an
obstruction in the pulmonary vessels is not responsible for
the fall in systemic pressure, as at the time the fall is taking
place the pulmonary venous pressure is considerably above
the normal height, and there is no evidence of any scarcity
of blood reaching the left auricle.

My results then confirm the views advanced by Biedl
and Kraus and by Pearce and Eisenbrey and speak
against those of Schultz 1 ). It is important therefore to
see if any explanation can be found for this discrepancy, and
it would seem that the trouble is not far to seek. A careful
study of Schultz’s paper shows several sources of error,
some of which are of fundamental importance. He says that
in spite of the contentions of Biedl and Kraus and nearly
every other worker that horse serum causes vaso dilatation,
it can be shown not to do so, but to cause constriction.
He proves this by testing its effect upon various organs by
perfusion and otherwise getting in each case contraction of
the tissue affected. Since all smooth muscle then contracts,
the systemic blood pressure, he says, should rise were the
blood not prevented from reaching the left auricle by failure
to pass the lung capillaries. The error seems to lie in Schultz
carrying over the results obtained with horse serum and
applying them to the explanation of the symptoms of acute
anaphylactic shock. Neither Biedl and Kraus, Pearce
or the others ever said, as far as I know, that horse serum
per se caused dilatation in this condition, but that in ana-

1) 1 want to emphasize again that I realize that Schultz’s work was
carried out on cats while Biedl and Kraus and Pearce and Eisenbrey
and I all worked with dogs, and that there is great danger in carrying
over results obtained in one animal to explain the symptoms seen in the
other, and this is one thing which it seems to me has been done, but in
the remarks I have to make I believe this criticism will not be valid, as
they would hold good whichever animal Schultz had worked upon.

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132

Charles W. Edmunds,

phylaxis dilatation occured with a resulting fall in pressure.
But this dilatation is not caused by the horse serum itself,
but by the anaphylactic poison (anaphylatoxin) whatever that
may be, and this toxin is quite a different substance from
horse serum. The reaction to horse serum itself in such a
case has nothing to do with it, and yet Schultz seems to
think they are identical. The identity of this anaphylactic
poison is not known. It may be an enzyme, antibody, or
something else. It seems to be contained in the casein pro¬
duct I worked with, but I realize that the casein product is
not a pure substance, and some of the impurities may be
partially responsible for vascular dilatation I obtained. However
this may be the poison in anaphylaxis certainly is not horse
serum itself, and results obtained with it while interesting
and important in themselves may miss the mark widely when
they come to solve the anaphylactic question.

Then again, the perfusion experiments of Schultz are
far from conclusive and convincing; at least the only proto¬
cols which he gives of such an experiment are. For instance,
the lungs of a cat were perfused with Ringer’s solution,
and then with a solution composed of horse serum, 1 part
and Ringer’s 4 parts, with a result that the out-flow was
diminished, which he ascribes to constriction of the vessels.
But he does not take into account the difference in viscosity
of the two fluids, which as Wiggers 1 ) has shown, may play
a considerable part even to the extent of obscuring a con¬
striction of vessels by epinephrin.

Again after using this diluted serum he changes to
Ringer’s, plus sodium nitrite, and gets an increase in rate
of outflow. The question arises whether the slightly increased
rate of flow is due to true vascular dilatation or to lessened
viscosity. Also in records of perfusion experiments he draws
conclusions from results obtained from tissues perfused until
they are “decidedly oedematous and the abdominal wall is
bulged with retained fluid”. Results obtained from such ex¬
periments would need very careful control.

1) Wiggers, J. Pharm. and Exp. Therap., Vol. 1, 1909, p. 341.

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The action of the Protein Poison on Dogs.

133

Further, Schultz working with cats devotes some little
space to a consideration of the antidotal action of atropine
against acute anaphylactic shock, and concludes that it is only
of academic interest and of little practical value in treating
such cases. Here again he seems to overlook the fact that
Auer and Lewis introduced the alkaloid for the treatment
of affected guinea-pigs because the drug paralyzed the nerves
in the constricted bronchial muscles. Atropine, however, could
not be expected to have any effect in anaphylaxis of cats, as
it has no influence on the vasomotor endings which are para¬
lyzed in this animal. There is evidence in both the cat and
dog of some action on the lungs, as they do not dilate so
well after the poison (or horse serum) has been given,
and it is possible that this phase of the poisoning in these
animals may be influenced by atropine, but up to the
present time this has not been demonstrated, although such
an action is rather probable; but an action in the lungs is
quite different from one against the circulatory disturbance,
which is the characteristic difficulty in anaphylactic dogs
and cats.

The main cause therefore for the difference in views con¬
cerning the essential physiological changes undergone in acute
anaphylactic shock seems to me to lie in the fact that Schultz
assumed apparently the identity of action of horse serum and
the hypothetical substance, anaphylatoxin.

Finally, the great difference which it seems to me exists
between my results with the split casein product and the
symptoms and changes seen in sensitized dogs lies in the
necessity for the presence of the liver in the latter case, in
order possibly for it to free in some way the toxin responsible
for the anaphylactic phenomena. With the protein product,
however, the poison is already in a free state and can
immediately attack the vasomotor endings without the neces¬
sity of any preliminary action upon it by the liver. Possibly
this lack of participation on the part of the liver is re¬
sponsible for the absence of any deleterious action upon
the coagulation of the blood which is seen in anaphylactic
shock.

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134 Ch. W. Edmunds, The action of the Protein Poison on Dogs.

Zusammenfassung.

Das in dem Spaltprodukte der ProteinmolekQle enthaltene
Toxin Vaughans bringt, intravenos gegeben, in der Haupt-
sache dieselben Symptome bei Hunden hervor, die bei ihnen
im Zustande des akuten anaphylaktischen Shocks beobachtet
sind.

Eine Analyse der Zirkulationsstbrungen ergab denselben
aullerst schnellen Fall des Blutdruckes, hauptsachlich infolge
einer Paralyse der Enden der „Nervi splanchnici“. Zur Zeit
des Druckabfalls staut sich das Blut nicht im Darm und in
den Nieren, sondern flieCt von da in die Leber und die grofien
Bauchvenen ab; weder Konstriktion der Pulmonalgef&Be, noch
ungenflgende Blutzufuhr zur linken Herzkammer wurden be¬
obachtet.

In dieser Hinsicht stimmt die Wirkung des Proteintoxins
mit den Ph&nomenen flberein, die unter dem Namen „ana-
phylaktischer Shok“ beschrieben sind; jedoch mit dem Unter-
schiede, dafi im letzteren Falle das Blut seine Koagulations-
fahigkeit verlieren kann, was bei den Spaltprodukten nicht
der Fall ist.

Since the above was written the paper by Pearce and Eisenbrey •)
regarding the action of the dog’s heart in anaphylactic shock has appeared,
and a perusal of their results shows that they agree in practically every
detail with those I obtained with the casein product and in anaphylaxis
itself. Some of my tracings show early more dilatation of the heart cham¬
bers, but I believe this is mainly a question of arrangement of tension in
the recording levers. The late weakening is the same in all cases, and
an important factor in the causation of this weakness they believe is the
difficulty the heart experiences in getting enough blood from the dilated
veins in order that it may fill itself satisfactorily.

1) Pearce and Eisenbrey, Journ. Pharm. and exp. Therap., Vol. 4,
1912, p. 21.

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Adsersen, Angebl. Tetanustoxin neutralisierende Wirkung etc. 135

Nachdruck verbotcn.

[Aus dem Serumlaboratorium der Kgl. Veterin&r- und Land-
wirtschaftlichen Hochschule in Kopenhagen (Direktor: Prof.

Dr. med. C. 0. Jensen).]

Veber die angebliche Tetanustoxin neutralisierende
Wirkung des Neurins und des Detains.

Von Tierarzt Vald. Adsersen, Assistenten am Laboratorinm.

(Eingegangen bei der Redaktion am 29. November 1912.)

Im 18. Jahrgang von „La semaine m6dicale“ veroffent-
lichten Roger und JosuS 1 2 ) das Ergebnis einiger Unter-
suchungen, wonach sie dem Neurin eine neutralisierende
Wirkung auf Tetanustoxin zuschreiben zu kSnnen meinten.

Bei ihren Versuchen totete das Neurin allein bei Injektion unter die
Haut in einer Dosis von 12 mg im Laufe von einigen Stunden ein Meer-
schweinchen von 400 g, wahrend eine Dosis von 6 mg nur einen heftigen,
schnell voriibergehenden lokalen Schmerz verursachte und die Tiere nicht
erkrankten. Ein bestimmtes Tetanustoxin ergab in einer Dosis von 0,05
bis 0,1 ccm subkutan an Meerschweinchen von 400—500 g injiziert im
Laufe von 48 Stunden tetanische Kontraktionen und totete die Tiere am
3.—4. Tag; ein Geraisch von 0,1—0,15 ccm dieses Toxins und 6 mg Neurin
verursachte keine Kontraktionen, und alle damit behandelten Tiere
iiberlebten die Injektion. Wurde aber ein Gemisch von 0,25 ccm des
Toxins und 6 mg Neurin injiziert, so starben die Versuchstiere, jedoch
spater als die mit einer 4—5mai kleineren Toxindosis behandelten Kon-
trolltiere. Daraus schliefien die Verfasser, dafi das Neurin eine neutra¬
lisierende Wirkung auf Tetanustoxin ausiibt.

Etwas spater teilten dieselben Verfasser mit 3 ), dafi sie eine Reihe
chemischer Verbindungen gegeniiber Tetanustoxin gepriift und dafi sie
darunter eine mit besonders intensivem Neutralisations vermogen gefunden
hatten, namlich das Chlorhydrat von Betain. So iiberlebte ein
Meerschweinchen von 370 g die Injektion eines Gemisches von 12 eg Be-
tainum hydrochloricum und 15 Tropfen Toxin von einer solchen Giftig-
keit, dafi 8 / 4 Tropfen davon ein Meerschweinchen von 550 g im Laufe von
7 Tagen toteten. Es wird angegeben, dafi genauere Untersuchungen zeigten,
dafi 1 Tropfen Toxin sich von 1 eg Betain neutralisieren liefi.

1) Roger et Josu6, Action neutralisante de la nevrine sur la
toxine t^tanique. La semaine m&licale 1898, p. 141.

2) Roger et Josu<5, Action neutralisante du chlorhvdrate de betaine

sur la toxine tetanique. La semaine m4dicale 1898, p. 486.

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136

Vald. Adsersen,

Wfihrend in Betreff des Neurins mitgeteilt wird, dafi die
neutralisierende Wirkung nur durch eine Mischnng aufierhalb
des tierischen Organismus erzielt wird, wird fiber das Betain
in der Beziehung keine Mitteilung gegeben, und die Mfiglich-
keit wSre soniit nicht ausgeschlossen, dafi dieser Stoff thera-
peutische Anwendung gegenfiber Tetanus fin den kdnnte.

In der humanen Therapie sind denn auch Versuche in der Richtung
angestellt worden; so teilt Pelicaud 1 ) einen heftigen Fall von Tetanus
mit, der dureh Anwendung von subkutanen Injektionen von Betainum
hydrochloricum (Dosis 0,2—1,0 g pro die) in Yerbindung mit Tetanus-
antitoxin und Chloral geheilt wurde. Verf. scheint jedoch a priori fiir das
Betain stark eingenommen, da er trotz grofier Dosen Antitoxin uud Chloral
(16—24 g pro die) dennoch dem Betain allein die Ehre fiir den gliicklichen
Erfolg beimiflt.

Um ffir eine etwaige therapeutische Verwendung des
Betai'ns eine experimentelle Grundlage zu finden, wurde es
mir tibertragen, die franzfisischen Untersuchungen zu wieder-
holen und sie eventuell fortzusetzen und zu erweitern. Als
Versuchstiere wurden zu Anfang weifie Mause angewandt, und
es war daher notwendig, die Wirkung des Betai'ns an ihnen
zu untersuchen, weshalb eine Reihe Mfiuse subkutan mit ver-
schiedenen Dosen einer 5-proz. Losung von Betainum hydro¬
chloricum 2 ) geimpft wurden. Nur die Minderzahl davon tiber-
lebte die Injektion bei Dosen von 0,1 ccm und darfiber,
wfihrend die Mehrzahl im Laufe von wenig Tagen zugrunde
ging. Ferner bekamen alle Mfiuse an der Injektionsstelle
groGere oder kleinere Aetzungen. Die genauere Untersuchung
der Lfisung ergab, dafi diese stark sauer war; 1 ccm derselben
erforderte 3,3 ccm Vio n * NaOH zur Neutralisation (mit
Phenolphtalei'n als Indikator). Bei Anwendung einer 5-proz.
Losung, zu der so viel Natriumhydrat gesetzt war, dafi die
Losung neutral reagierte, ertrugen die Mause sogar eine
Dosis von 1 ccm ohne jegliche Reaktion.

Das angewandte Tetanustoxin war dem Laboratorium von
„Statens Seruminstitut 44 in Kopenhagen uberlassen worden
und hatte eine solche Starke, dafi 0,01 ccm, weifien Mfiusen
& 20 g injiziert, im Laufe von 48 Stunden Kontraktionen ver-

1) Presse medicale, 1905, p. 485.

2) Betainum hydrochloricum von E. Merck, Darmstadt.

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Angebl. Tetanustoxin neutralifl. Wirkung dee Neurins u. Betaine. 137

ursachte and die Tiere am 3.-4. Tage tQtete. Durch die
eben genannte Beobachtung der stark sauren Reaktion der
Betainldsung x ) war die Aufmerksamkeit ganz natttrlich auf die
Mdglichkeit hingelenkt worden, daB es sich urn eine SSure-
wirkung handeln konnte, da die Toxine bekanntlich gegen-
flber SSuren sebr empfindlich sind, und es wurden daher
3 Reihen von weiBen M&usen in verschiedener Weise be-
handelt.

1. Reihe.

Maue a. Inj. eubk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,4 ccm neutralisierte
5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum
„ b. Inj. eubk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,3 ccm neutralisierte
5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum
„ c. Inj. subk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,2 ccm neutralisierte
5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum
„ d. Inj. subk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,1 ccm neutralisierte
5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum

Die Mischung von Toxin und Betainldsung fand statt ca. x / 4 Stunde
vor der Injektion.

Nach ca. 2 Tagen wiesen alle M&use Symptome von Tetanus
au£ und sie starben im Laufe von 2%—3 1 /* Tagen. Die
neutralisierte Betainldsung gewShrt also den MiLusen nicht den
geringsten Schutz.

2. Reihe.

Maus a. Inj. subk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,4 ccm nicht neutrali¬
sierte 5-proz. Losung von Betainum hydrochloricum
„ b. Inj. subk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,3 ccm nicht neutrali¬
sierte 5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum
„ c. Inj. subk. 0,02 ccm Tetanustoxin -f 0,2 ccm nicht neutrali¬
sierte 5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum
„ d. Inj. subk. 0,02 ccm Tetanustoxin + 0,1 ccm nicht neutrali¬
sierte 5-proz. Ldsung von Betainum hydrochloricum

Die Mischung von Toxin und Betainldsung fand statt ca. */« Stunde
vor der Injektion.

Maus a und b erkrankten nicht, bekamen aber beide um
die Injektionsstelle ca. einpfenniggroBe Hautnekrosen, die im
Laufe von ca. 14 Tagen abgestoBen wurden. Maus c starb
nach 4 Tagen, ohne Symptome von Tetanus aufgewiesen zu
haben, wahrscheinlich an Saurevergiftung. Maus d starb nach
10 Tagen, aber nicht an Tetanus.

1) Betainldsung hier und im folgenden = 5-proz. Ldsung von Betainum
hydrochloricum.

ZeiUchr. f. Immunitatsforschung. Orig. Bd. XVII. XQ

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138

Vald. Adsersen,

3. Reihe.

Diese Reihe war eine genaue Wiederholung der 2. Reihe ;
nachdem die saure Betal'nldsung ca. V 4 Stunde mit dem Toxin
vermischt gewesen war, wurden die Mischungen aber vor der
Injektion neutralisiert, um die Aetzungen an den Impfstellen
sowie die Komplikationen der S&urewirkung zu verhttten.

Das Resultat war, daB alle M&use vollkommen gesund
blieben.

Die Versuche wurden an Meerschweinchen wiederholt.

4. Reihe.

2 Meerschweinchen von ca. 450 g bekamen bzw.

0,1 ccm Tetanustoxin, gemischt mit 0,7 ccm neutral 5-proz. Betainlos.
0,075 „ ,, „ ,, 0,5 „ ,, ,, ,,

Im Laufe von 2 Tagen waren sie heftig von Tetanus an-
gegriffen, und sie starben fast zur selben Zeit wie ein Kontroll-
tier, das 0,08 ccm Tetanustoxin erhalten hatte.

5. Reihe.

2 Meerschweinchen von ca. 400 g bekamen bzw.

0,1 ccm Tetanustoxin, gemischt mitO,7 ccm nicht neutral. 5-proz. Betainlos.
0,075 ,, ,, „ „ 0,5 „ „ ,, „ ,,

Beide Tiere blieben gesund.

Es zeigt sich also, daB, w&hrend eine neutralisierte
Betainlosung dem Tetanustoxin gegenOber ohne
Wirkung ist, eine saureLdsung bei ca. 15 Minuten
dauernder Einwirkung in vitro auf dasToxin dies
zu zerstbren vermag, so daB alle Versuchstiere die In¬
jektion Oberleben.

Durch diese Ergebnisse war es in iiberwiegendem Grade
wahrscheinlich geworden, daB die angebliche Toxinneutralisation
eine S&urewirkung sei; um dies endgiiltig zu entscheiden, war
nur noch erforderlich, daB man auch mit derselben Wirkung
imstande war, bei den „Neutralisationsversucben“ die Beta'in-
losung durch eine Chlorwasserstofflosung derselben Aziditat
zu ersetzen. Wie oben angefiihrt, erforderte 1 ccm Betain-
losung zur Neutralisation 3,3 ccm Vio n - NaOH; aber diese
titrimetrische Bestimmung teilt nichts mit iiber die „wahre
Aziditat u der Losung, ihre Wasserstoffionenkonzentration;
durch elektrometrische Messung ergab sich diese als 10 -1,3

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Angebl. Tetanuetoxin neutralis. Wirkung des Neurins u. Be tain a. 139

= 5 X 10~*. Es wurde deswegen folgende Versuchsreihe an-
gestellt.

6. Reihe.

2 Meerschweinchen k 450 g erhielten bzw.

0,1 ccm Tetanustoxin, mit 0,5 ccm 1 / w n. Chlorwasseretofflosung gemischt
0,05 ,, *, ,, 0,5 ,, /20 ^■ » ,,

Beide Meerschweinchen blieben gesund, wfihrend ein Kon-
trolltier, das 0,05 ccm Toxin allein erhielt, nach 4 1 /* Tagen starb.

Da [H'J von V20 n * HC1 = 0,94 X 5 X 10 -2 (0,94 = dem
Dissoziationsgrad von 7«o n - HC1) ist, d. h. etwas kleiner als
[H*] der Betainlfisung ist, so ist hiermit nachgewiesen, dafi
die angebliche Neutralisation als einfacheSfiure-
wirkung erklfirt werden kann.

Wenn Rehns 1 ) nach einer Besprechung von Roger and
Jo8u6s Beobachtungen fiber Betaln diese durch die Annahme
zu erkl&ren sucht, dafi das Betaln das Toxin im Verh&ltnis
zum Nervensystem aufgelost halten sollte, so ist diese An¬
nahme also tlberflfissig, und sein negatives Resultat des Ver-
suches, im Blute von Tieren, die mit der BetaKn-Toxinmischung
vorbehandelt worden waren, Antitoxin nachzuweisen, ist eine
einfache Folge davon, dafi das Toxin vor der Injektion vom
Chlorwasserstoff destruiert war.

Das Neurin 2 ) ist eine Starke Base. Die Wasserstoff-
ionenkonzentration der beim Versuche verwendeten 2,5-proz.
Neurinlbsung wurde nicht gemessen; aber aus Bredigs 3 )
Angaben fiber das Leitungsvermbgen der Neurinlfisungen,
mit Kohlrausch und Holborns 4 ) Zahlen fiber das der
Natriumhydroxydlosungen verglichen, geht hervor, dafi Neurin
in wasseriger Losung am stfirksten dissoziiert ist, mit anderen
Worten, dafi Neurin eine stfirkere Base ist als Natrium-
hydroxyd, und die Annahme lag somit nahe, dafi die Ein-
wirkung auf das Toxin eine Alkaliwirkung sei; dies wurde
denn auch durch Versuche bestatigt.

1) C. R. 80 c. Biol., 1904, p. 693.

2) Neurin in Losung von 25 Proz. von E. Merck, Darmstadt.

3) G. Bredig, Ueber die AffinitiitegroBen der Basen. Zeitschr. f.
physical. Chemie, Bd. 13, p. 300.

4) F. Koh 1 rau 8 ch und L. Holborn, DasLeitvermogen der Elektro-
lyte, p. 160.

10 *

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140 Adsersen, Angebl. Tetanustoxin neutralisierende Wixkung etc.

7. Reihe.

Meerschw. a (Gew. 400 g). Inj. subk. 0,05 ccm Tetanustoxin + 0,25 ccm

2,5-proz. Neurinlosung = 6 l /« mg Neunn
„ b (Gew. 410 g). Inj. subk. 0,07 ccm Tetanustoxin + 0,25 ccm

2,5-proz. Neurinlosung = 6‘/ 4 mg Neurin
,. c (Gew. 400 g). Inj. subk. 0,1 ccm Tetanustoxin + 0,25 ccm

2,5-proz. Neurinlosung = 6‘/ 4 mg Neurin

Keines der Tiere erkrankte, wShrend die Kontrolltiere,
die 0,03—0,07 ccm Toxin erhalten hatten, im Laufe von 4 bis
5 Tagen starben. Derselbe Schutz lieB sich aller-
dings auch erzielen, wenn man die Neurinlbsung
dnrch eine fiquimolekulare Lbsung von Natrium¬
hydroxyd, wie folgt, ersetzte:

8. Reihe.

Meerschw. a (Gew. 370 g). Inj. subkutan 0,07 ccm Tetanustoxin + 0,25 ccm
iiquimoleK. Natriumhydroxyd

„ b (Gew. 380 g). Inj. subkutan 0,1 ccm Tetanustoxin + 0,25 ccm
aquimolek. Natriumhydroxyd

Beide Tiere blieben gesund.

Setzt man aber zu der Neurinlbsung verdiinnten Chlor-
wasserstoff bis zu neutraler Reaktion, so kann man mit dieser
Lbsung die Wirkung des Toxins nicht aufheben:

9. Reihe.

Meerschw. a (Gew. 450 g). Inj. subk. 0,05 ccm Tetanustoxin + neutralis.
Neurinlosung, 6 mg Neurin entsprechend
„ b (Gew. 440 g). Inj. subk. 0,07 ccm Tetanustoxin + neutralis.
Neurinlosung, 6 mg Neurin entsprechend

Beide Tiere waren nach ca. 48 Stunden heftig von Tetanus
angegriffen und starben bzw. 5 und 3 Tage nach der Injektion.

Zusammenfassung.

Aus unseren Untersuchungen geht hervor, daB man wohl
imstande ist, das Tetanustoxin durch Zusatz von Losungen
von Neurin oder Beta'inum hydrochloricum zu „neutralisieren tt ;
es handelt sich aber hier um keine spezifische Wirkung der
betreffenden chemischen Verbindungen, dagegen bzw. um eine
Alkali- und Saurewirkung, indent einerseits die „Neutralisation“
bei Anwendung neutraler Losungen unterbleibt, wbhrend
andererseits dieselbe Wirkung bei Anwendung von Saure-
und Alkalilosungen entsprechender Aziditat bzw. AlkalinitSt
erzielt wird.

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R. Weil and A. F. Coca, The nature of Anti-Anaphylaxis. 141

Nachdruck verbolen.

[From the Departments of Experimental Therapeutics and of
Experimental Pathology in the Medical College of Cornell
University, New York.]

The nature of Anti-Anaphylaxis.

By Richard Weil and Arthur F. Coca.

(Eingegangen bei der Redaktion am 22. Dezember 1912.)

„ Anti-anaphylaxis" is the term, first used byBesredka,
that designates that condition of lost hypersensitiveness to the
so-called ^second injection" of a foreign proteid, which is pro¬
duced in the anaphylactic animal by the injection, into any
part of the body, of sublethal quantities of the proteid. Ana¬
phylactic animals have been rendered anti-anaphylactic, also,
by the administration of the proteid per os or per rectum.
The application of the term was later extended to the non¬
sensitiveness of animals in which the development of the ana¬
phylactic condition has been interfered with by repeated in¬
jection of the proteid during the so-called preanaphylactic
period; that is, during the 10 or 12 days immediately following
the primary injection. It was further extended to the relative
non-sensitiveness that is produced in sensitized animals by
the injection of substances other than the proteid used for
the sensitizing injection, such as W itte’s peptone and con-
concentrated salt solution.

Among the various theories that have been proposed to
explain the mechanism by which the condition of „anti-ana-
phylaxis", using the word in its original sense, is brought
about in sensitized animals, that of Friedberger has been
received with most favor. Friedberger at first (following
Besredka) explained „anti-anaphylaxis" as due to a gradual
neutralization of „sessile“ antibodies, which he thought were
identical with the precipitins. Upon giving up his idea that
the anaphylactic reaction takes place in the cells, he modified
his explanation of anti-anaphylaxis only by changing the site
of the gradual neutralization, that is, from the cells to the

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142

Bichard Weil and Arthur F. Coca,

body fluids. Later, in order to explain the observation of
Gay and Southard 1 ) and of Otto 2 3 ) that the serum of
„refractory" animals can be used passively to sensitize normal
animals, Friedberger again modified his explanation by
assuming a partial neutralization of the antibodies. For
this theory there exists, at the present time, no published
experimental verification.

Several objections have been brought against Fried -
berger’s explanation, the most important of which is the
repeatedly published and experimentally supported statement
that sensitized animals can be made „anti-anaphylactic" by
injections of heterologous proteids and even by the injection
of Witte’s peptons. This objection is, in part, disposed of
by some experiments of Rosenau and Anderson 8 ) and of
H. G. Wells 4 5 ), who demonstrated clearly the specificity
of the anaphylactic state. Wells found, also, that the injection
into a sensitized guinea-pig of a heterologous proteid could
diminish the severity of the anaphylactic shock produced by
the subsequent injection of the homologous proteid.

Bessau 6 ) (apparently unaware of this earlier work) on
the basis of some experiments in simultaneous, double sensi¬
tization, reached the conclusion that the condition of „anti-
anaphylaxis" is not due to antibody absorption, but is an
aspecific condition due to lowered sensitiveness to „ana-
phylaktisches Gift". Bessau injected normal guinea-pigs
simultaneously with horse-serum and ox-serum (0.5 c.c. sub¬
cutaneously) and after 16 days introduced a sublethal quantity
(1 c.c.) of ox-serum by intraperitoneal injection into the same
animals. After ahother interval of several days, the intra¬
venous injection of a multiple lethal quantity (0.5 c.c.) of
horse-serum caused only slight symptoms.

Our own experience with double sensitization in guinea-
pigs leads us to conclusions that do not agree with those of
Bessau. We sensitized a series of guinea-pigs simultaneously

1) Journal of Med. Bes., Vol. 16, 1907, p. 152.

2) Munch, med. Wochenschr., 1907, No. 34, p. 1667.

3) Journal of Infect. Dis., Vol. 4, 1907.

4) Journal of Infect. Dis., Vol. 6, 1909.

5) Centrnlbl. f. Bakt., Bd. 60, 1911.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

143

to horse-serum and to crystalline egg-albumen and found that
then, after a sublethal injection of egg-albumen, whereas the
animals were insusceptible to the intravenous injection of 10
lethal quantities of that antigen, they were still highly hyper¬
sensitive to the injection of horse-serum. The results of this
experiment are shown in Table I.

Technical considerations.

The whites of fresh eggs (laid on the previous day) were shaken vigo¬
rously with two volumes of distilled water and the resulting solution was
filtered through absorbent cotton. The filtrate was mixed with an equal
volume of a saturated solution of ammonium sulphate and the precipitated
globulin was separated by filtration through hardened filter-paper. The
globulin fraction was freed from albumen by repeated precipitation with
% saturated ammonium sulphate, and the ammonium sulphate was finally
removed by dialysis against 0.4 % NaCl solution. To the albumen fraction
was added just sufficient ammonium sulphate to cause beginning preci¬
pitation. The precipitate was redissolved by the addition of a little distilled
water and 10°/ o acetic acid was added drop by drop until a permanent
precipitate was again produced. After standing for an hour or more, this
precipitate (in which we where unable to find any crystalline bodies) was
collected upon a hardened filter paper and reprecipitated four times out
of distilled w r ater with ammonium sulphate. At the second precipitation
and thereafter, the substance was typically crystalline in form. The am¬
monium sulphate was removed by dialysis against running tap-water and
the resulting cloudy fluid centrifugalized. After the addition of 0.9% of
NaCl, the solution was sterilized by passing it through a Berkefeld filter.

Whenever, in the following experiments, egg-albumen is mentioned
a 2 % solution of the crystalline albumen of the hen’s egg is meant.
4.0 c.c. of this solution produced no symptoms when injected into nor¬
mal or anti-anaphylactic guinea-pigs. For the active sensitization of
guinea-pigs we have always used 0.05 c.c. of the solution injected sub¬
cutaneously. The minimal lethal dose for sensitized guinea-pigs was found
to be about 0.1 c. c. when injected intravenously. For rendering sensitized
animals anti-anaphylactic we have always injected 0.05 c. c. of the solution
subcutaneously. The relative purity of the albumen and globulin prepara¬
tions is demonstrated in Table II a. Guinea-pig 888, which had been acti¬
vely sensitized to egg globulin, was not hypersusceptible to our egg albumen
preparation (10 lethal doses). Guinea-pig 145, which had been passively
sensitized to egg albumen, was not hypersensitive to egg globulin (40 lethal
doses).

For convenience of description, especially in arranging the tables, the
following abbreviations have been employed:

E.A. = a 2 °/ 0 solution of crystalline albumen of hen’s egg in 0.9 °/ 0
NaCl,

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144

Richard Weil and Arthur F. Coca,

E.G. = a solution of hen’s egg globulin (concentration unknown) in
4°/ 0 NaCl,

H.8. = horse-serum,

Lv. = intravenously,

Lp. = intraperitoneally,
s.c. = subcutaneously.

By “typical anaphylactic death” we mean death within a few minutes
following more or less violent convulsions, together with characteristic post¬
mortem findings.

Table 1.

Showing the specificity of anti-anaphylaxis.

Normal

guinea-pig

April 10

April 29

May 1

Result

876

0.02 c. c. H.8.
and 0.05 c.c.
E.A. s.c.

0.4 c. c. E.A. i.v.

—

typical anaphy¬
lactic death.

870

idem

0.1 c.c. H.S. i.v.

—

idem

868

0.05 c.c. H.S. i.v.

—

yy

848

yy

0.05 c.c. E.A. s.c.

4.0 c. c. E.A. i.v-

no symptoms.

883

idem

1.0 c.c. E.A. i.v.

twitchings; not
sick.

878

)>

0.05 c. c. H.S. i.v.

typical anaphy¬
lactic death.

866

yy

yy

0.03 c.c. H.S. i.v.

idem

877

M

0.02 c.c. H.S. i.v.

873

yy

0.018c.e.H.8.i.v.

yy

874

yy

fJ

0.018c.c.H.S.i.v.

slight symptoms.

Analysis.

It was shown with guinea-pig No. 876 that the series had been sensitized
to egg-albumen; with No. 870 and 868, that the series had been sensitized, also,
to horse-serum; with No. 848 and 883, that the second subcutaneous injection
of 0.05 c.c. of egg albumen had rendered the remainder of the series anti-
anaphylactic to egg-albumen; and with No. 878, 866, 877, 873, that those
animals that had been made anti-anaphylactic to egg-albumen were still
highly hypersensitive to injections of horse-serum. We did not make a
complete quantitative comparison in this experiment, hence the experiment
does not show whether or not in rendering the doubly sensitized animals
anti-anaphylactic to the one antigen we diminished their sensitiveness to
the other. However, it is demonstrated that the animals can be made
quite insusceptible to ten lethal doses of one antigen and yet remain to
such a degree hypersensitive to the other antigen that they succumb to
about two minimal lethal doses of it 1 ).

1) According to Lewis the minimal lethal dose of horse-serum for
actively sensitized guinea-pigs is 0.01 c.c. injected intravenously.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

145

A similar experiment, the results of which are given
Table II, was carried out with the crystalline albumen and
the globulin of the hen’s egg. In this experiment it can be
seen that in rendering doubly sensitized guinea-pigs anti-
anaphylactic to one antigen the lethal dose of the other an¬
tigen for those animals is actually though only slightly in¬
creased 1 2 ).

Table II a.

Normal
guinea-
pig 1

April 10

April 30

Result

888

886

0.1 c. c. E.G. s.c.
idem

1.0 c. c. E.A. i.v.
0.2 c. c. E.G. i.v.

twitchings; not sick,
typical anaphylactic death.

May 11

May 14

Result

145

146

!

0 3 c. c. serum rabbit
No. 965 3 ) i.p.
idem

2.0 c. c. E.G. i.v.

1.0 c. c. E.A. Lv.

no symptoms.

typical anaphylactic death.

Analysis.

Guinea-pigs No. 888 and 886 were actively sensitized to egg-globulin, as
shown by the typical result of the intravenous injection of a small quantity
of the egg-globulin solution in No. 886. Guinea-pig No. 888, however,
was not affected by the intravenous injection of a relatively large amount
of the egg-albumen preparation — ten lethal doses. Guinea-pigs No. 145
and 146 were passively sensitized to egg-albumen as seen by the typical
result of the intravenous injection of egg-albumen in No. 146. Guinea-
pigs No. 145, however, was not affected by the intravenous injection of
a large quantity — 40 lethal doses — of the egg-globulin solution.

The two foregoing experiments are introduced here to
show that the preparations of globulin and albumen which
were used in the experiment that follows, represented these
two proteids in a degree of isolation sufficient for the purpose
of the experiment.

1) The independent investigations of Friedberger and Szyma¬
nowski (Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 14, 1912) have produced results
that are identical with ours.

2) Rabbit No. 965 had received three intraperitoneal injections of

1.0 c. c. of E.A. Last injection April 24.

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146

Richard Weil and Arthur F. Coca,

Table II b.

Showing the specificity of anti-anaphylaxis.

Normal

1

....

-- - -

guinea-

May 7

May 27

May 29

Result

pig

i

131

i

0.1 c. c. E.G. and
0.05 c. c. E.A. B.c.

0.05 c. c. E.G. i.v.

!

typical anaphylactic
death.

128

id.

id.

—

idem

137

11 1

—

it

130

11

0.03 c. c. E.G. i.v.

—

marked anaphylactic
sympt.; recovered.

138

11

0.025 c. c. E.G. i.v.

—

slight symptoms.

141

T)

0.5 c. c. E.A. i.v.

—

typical anaphylactic
death,
idem

142

ff

id.

_

133

j j

0.05 c. c. *) E.A. s.c.

0.05 c. c.

very sick; no convul¬

IE.G. i.v.

sions; recovered.

136

If

id.

id.

slightlv sick.

132

11

n

17

convulsions; dead
after one hour.

135

11

11

0.075 c. c.
E.G. i.v.

typical anaphylactic
death.

Analysis.

With guinea-pigs No. 131, 128, 137, 130 and 138, it was shown that the
minimal lethal quantity of egg-globulin for the animals of this series on
the 20th day after the primary or sensitizing injection was 0.05 c. c. of our
egg-globulin preparation. With guinea-pigs No. 141 and 142, it was shown
that the same series were sensitized also to egg-albumen. With guinea-pigs
No. 133, 136 and 132, it was shown that after these animals had been
made anti-anaphylactic to egg-albumen, the minimal lethal quantity of
the egg-globulin, as determined with the first five animals of the series,
was not always sufficient to kill them. Finally with guinea-pig No. 135, it
was shown that after these animals were made anti-anaphylactic to egg-
albumen they were still highly hypersensitive to egg-globulin. In short,
by rendering the doubly sensitized animals specifically anti-anaphylactic
to one antigen, we had slightly increased the minimal lethal dose of the
other antigen.

The experiments of Wells and of Friedberger and
Szymanowski, Kumagai and Odaira 1 2 ) as well as those
that we have just described illustrate a non-specific and
also a specific interference with the anaphylactic reaction.
The intermediate injection of heterologous proteids causes a

1) In many series of experiments 0.05 c. c. of the egg albumen pre¬
paration has never failed to render actively sensitized guinea-pigs “anti-
anaphylactic” to that proteid.

2) Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 14, 1912.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

147

non-specific interference with the reaction, whereas the
injection of the homologous proteid interferes specifically
with the production of the anaphylactic shock. The non¬
specific interference merely increases slightly the minimal
lethal dose of the proteid that was used for the sensitization;
the specific interference results in a complete abolishment of
the hypersensitiveness.

It was not our purpose to investigate the mechanism of
the non-specific interference with the anaphylactic reaction;
the purpose of our experiments was to investigate further the
nature of specific “anti-anaphylaxis”.

If, as is postulated by the theory of Besredka-Fried-
berger, specific anti-anaphylaxis is produced by a neutrali¬
zation of the “anaphylactic antibodies”, it should be possible,
immediately after an animal has been made specifically anti-
anaphylactic, to resensitize it to the same antigen by pas¬
sively restoring the sensitizing antibodies.

Our experiments, which follow, show, in fact, that passive
resensitization is possible in antianaphylactic animals that have
been primarly sensitized either by the active or by the passive
method; they indicate, also, that the sensitized animals, in
being rendered anti-anaphylactic, are not affected by that
process in such a manner as specifically to interfere with the
passive restoration of a hypersensitiveness to the same proteid.

A preliminary experiment with horse-serum seemed to
show that it is possible passively to resensitize an animal that
recently has been made anti-anaphylactic to the same antigen.
However, since horse-serum represents a mixture of several
antigenic bodies, we could not be certain that the “resensiti¬
zation” was made against the identical antigen against which
the animal had been primarily sensitized. In order, there¬
fore, to obviate this objection, we have used, for the sub¬
sequent experiments, the isolated crystalline albumen of the
hen’s egg.

Anti-anaphylaxis after active sensitization.

In resensitizing actively sensitized guinea-pigs after they
have been made specifically anti-anaphylactic, three modes of
passive sensitization have been employed; that is, the serum that

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148

Richard Weil and Arthur F. Coca,

was used for the purpose was obtained, first from an immunized
animal of a foreign species; secondly, from an immunized ani¬
mal of the same species, and thirdly, from an actively sensi¬
tized animal of the same species.

In the experiment shown in Table III the serum used
for the resensitization was obtained from an immunized rabbit.

Table III.

Resensitization with immune rabbit’s serum in anti-anaphylactic guinea-
pigs that primarily had been actively sensitized.

Normal

guinea-

pig

Sept. 27

Oct. 11

Oct. 12

Oct. 14

Result

237

0,1 c. c.
E.A. s.c.

0.4 c. c.
E.A.i.v.

—

—

typical anaphylactic death.

209

id.

0.05 c. c.
E. A. s. c.

4.0 c. c. E.A.
i.v.

—

twitchings; not sick.

228

»

id.

0.2 c. c. serum
No. 513 x ), i.p.

0.8 c. c.
E.A.i.v.

typical anaphylactic death.

207

yy

0.3 c. c. serum
No. 513, i.p.

id.

very sick at once; dead
after */* hour.

218

yy

yy

0.4 c. c. serum
No. 513, i.p.

yy

typical anaphylactic death.

240

yy

yy

0.6 c. c. serum
No. 513, i.p.

yy

id.

300

—

—

0.15 c. c. serum
No. 513, i.p.

yy

yy

302

—

—

0.2 c. c. serum
No. 513, i.p.

yy

yy

303

1

i

—

0.3 c.c. serum
No. 513, i.p.

% y

y

Analysis.

On Sept. 27th guinea-pigs No. 237, 209, 228, 207, 218 and 240 received
each 0.1 c. c. of the egg-albumen preparation by subcutaneous injection.
Two weeks later they were found to be actively sensitized — guinea-pig
No. 237. The remaining guinea-pigs were then rendered anti-anaphylactic
by the subcutaneous injection of 0.05 c.c. of the egg-albumen solution, the
lost hypersensitivenss being demonstrated on the following day — guinea-
pig No. 209. Guinea-pig No. 228, 207, 218 and 240 then received different
amount of the serum of rabbit No. 513 which had been immunized against
egg-albumen with repeated large injections of egg-white. On the day following
these last injections all of the animals were found to have been resensitized.

1) Serum No. 513 was obtained on Oct. 12 from a rabbit that had
received six intraperitoneal injections of the white of hen’s egg, four of
1 c. c. and the last two of 7 c. c. each. The last injection had been given
on Oct. 1.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

149

The attempt to determine the minimal sensitizing quantity of serum No. 513
for normal guinea-pigs — guinea-pigs No. 300, 302 and 303— and for
the anti-anaphylactic guinea-pigs failed, since the sensitizing strength of
the serum was much greater than was anticipated.

In the experiment shown in Table IV the serum used
for the resensitization was obtained from immunized guinea-
pigs.

Table IV.

Resensitization with immune guinea-pig’s serum in anti-anaphylactic
guinea-pigs that primarily had been actively sensitized.

Normal
gu inea-
Pig

May 11 to
June 12

June 18

June 20

June 21

Besult

780

869

249

252
251

253

254

r 0.4—0.7 )
c.c. E.A. 4>
[ times i.p. )

,

j

bled to death,
idem

0.1 c.c. mixed sera
780 a. 869 i.p.
idem

0.2 c.c. id.

idem

0.4 c. c. id.

0.5 c. c.
E.A. i.v
id.

11

11

11

convulsions; recov¬
ered.

no symptoms,
typical anaphylactic
death,
idem

»>

May 29

225

226
227

229

0.05 c. c.
E.A. s.c.
idem

11

11

0.5 c. c.
E-A.s.c.
idem

11

11

o.i „ „

0.2 „ „

0.4 „ „

0.6 „ „

11

11

11

11

no symptoms.

ii ii

typical anaphylactic
" death,
idem

Analysis.

Within a period of one month, guinea-pigs No. 780 and 869 had
received four injections of from 0.4 c. c. to 0.7 c. c. of the egg-albumen pre¬
paration. Eight days after the last injection both animals were bled to
death and the mixed serum was tested upon normal guinea-pigs No. 249,
252, 251, 253 and 254 as to its sensitizing strength. It was found that
0.2 c. c. was the minimal sensitizing dose of the mixed serum. On May
29th, guinea-pigs No. 225, 226, 227 and 229 received, for the purpose of
active sensitization, 0.05 c.c. of the egg-albumen solution. Twenty days
later they were rendered anti-anaphylactic by the subcutaneous injection
of 0.05 c.c. of the same solution. After another interval of 48 hours, the
minimal sensitizing dose of the mixed serum of the immunized guinea-pigs
No. 780 and 869 was determined for these anti-anaphylactic animals, and
was found to be greater than the dose for normal animals, i. e., 0,4 c. c.
instead of 0.2 c.c.

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150

Richard Weil and Arthur F. Coca,

In the experiment shown in Table V the serum used for
the resensitization was obtained from actively sensitized
guinea-pigs.

Table V.

Resensitization with sensitized guinea-pig’s serum in anti-anaphylactic
guinea-pigs that primarily had been actively sensitized.

Normal

guinea

Pig

First

day

24th

day

26th day

27th

day

Result

119

0.5 c. c. 0.5 c. c.
E.A. s.c. E.A. i.v.

—

—

typical anaphylactic
death.

122

idem

idem

—

—

idem

825

tt

—

—

tt

846

0.05 c.c.
E.A. s.c.

2.0 c. c. E.A. i.v.

—

twitchings; not sick.

861

ft i

idem

idem

—

no symptoms.

849

—

bled to death.

—

—

865

ft

—

idem

—

_

827

tt

0.05 c. c.
E.A. s.c.

4.5 c.c. mixed sera
849 and 865 i.p.
5.0 c. c. serum 849,

2.0 c. c.
E.A.i.v.

typical anaphylactic
death.

832

*t

idem

idem

idem

862

tt

tt

4.i) > c. c. normal gui¬
nea-pig serum i.p.

tt

no symptoms.

i

Analysis.

All the animals of this series received a primary sensitizing injection
of 0.05 c. c. of the egg-albumen preparation and 24 dayB later were shown
to be actively sensitized, — guinea-pigs 119, 122 and 825. On the 24th day
guinea-pigs 846, 861, 827, 832 and 862 were made anti-anaphylactic in
the usual manner, the lost hypersensitiveness being demonstrated two days
later (26th day) in guinea-pigs 846 and 861. On the 26th day the actively
sensitized guinea-pigs mixed 849 and 865 were bled to death and their
serum injected into the anti-anaphylactic guinea-pigs 827 and 832. After
another interval of 24 hours, both of these animals were shown to have
been resensitized. The injection of 4.5 c. c. of normal guinea-pig’s serum
into guinea-pig 862, after this animal had been made anti-anaphylactic to
egg-albumen, failed to restore the condition of hypersensitiveness.

Anti-anaphylaxis after passive sensitization.

In Table VI are given the results of an experiment in
which guinea-pigs that had been rendered anti-anaphylactic
after passive sensitization with the serum of an immunized
rabbit, were resensitized with the serum of the same immu¬
nized rabbit.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

151

Table VI.

Resensitization with immune rabbit’s serum in anti-anaphylactic guinea-pigs
that primarily had been passively sensitized with the same immune

rabbit’s serum.

Normal

guinea-

pig

May 11

May 13

May 14

May 15

May 16

Result

CO

rH

0.3c.c. ser.
965 *) Lp.

—

—

1.0 c. c.
E.A. i.v.

—

typical anaphylac¬
tic death.

155

idem

0.05 c. c.
E.A. s.c.

0.5 c.c. ser.
965 i.p.

2.0 c. c.
E.A. i.v.

i -

no symptoms.

156

idem

idem

0.5 c. c.
E.A. i.v.

—

idem

158

V

1

jy

1.0 c.c. ser.
965 i.p.

1.0 c. c.
E.A. Lv.

—

typical anaphylac¬
tic death.

160

1 »

!

r *

idem

1.0 c. c.
E.A. i.v.

—

idem

161

—

|

—

0.3 c.c. ser.
965 i.p.

0.5 c. c.
E.A. i.v.

slight symptoms.

162

i

—

—

0.5 c.c. ser.
965 i.p.

idem

1

very sick; reco¬
vered.

Analysis.

Guinea-pigs 146, 155, 156, 158 and 160 were passively sensitized to
egg-albumen by the intraperitoneal injection of 0.3 c. c. of the serum of
rabbit 965, which had been immunized against egg albumen. The success
of this primary sensitization was demonstrated four days later — guinea-pig 146.
Two days after the primary sensitization the remaining four animals were
made anti-anaphylactic in the usual manner and after another interval of
24 hours they received injections of different quantities of serum 965, which
meanwhile had been kept in the ice-box. On the following day the two
animals that had received the larger reinjection of the immune rabbit’s
serum were found to have been resensitized — guinea-pigs 158 and 160. In
view of the fact that the serum No. 965 that was used for the injections
of May 14 had been obtained one week previously, it was believed probable
that its sensitizing power had diminished since May 11. It was, therefore,
tested again on May 15. The result of that test is given in the table
(guinea-pigs No. 161 and 162). Whereas, on May 11, 0.3 c. c. of the serum
was sufficient fully to sensitize a normal guinea-pig, on May 15 the same
degree of sensitiziation was not produced with nearly twice that quantity.
It is evident, then, that the considerable increase in the amount of serum
No. 965 required for the resensitization of the anti-anaphylactic animals
(as compared with the minimal sensitizing dose for normal animals) was
due, in part, to a deterioration of the sensitizing power of the serum.

In order to see whether the process, by which passively sen¬
sitized animals are rendered anti-anaphylactic, interferes speci-

1) Serum 965 was obtained on May 7th from rabbit No. 965.

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152

Richard Weil and Arthur F. Coca,

fically with the replacement of the sensitizing substances of
the immune serum, the following experiment was carried out.
The minimal sensitizing quantity of the immune (rabbit’s)
serum was determined for passively sensitized guinea-pigs
that had been rendered anti-anaphylactic, and also for control
animals whose preliminary treatment differed from that of the
anti-anaphylactic guinea-pigs only in the substitution of normal
rabbit’s serum for the immune rabbit’s serum used for the
primary sensitization. The results of this experiment are
shown in Table VII.

Table VII.

Resensitization with immunized rabbit’s serum in anti-anaphylactic guinea-
pigs that primarily had been passively sensitized with the serum of a

different immunized rabbit.

Normal

guinea-

pig

Sept. 16

Sept. 17

Sept. 18

Sept. 19

Resultat

242

—

0.1c.c.ser.
No. 3, i.p.

0.8 c. c.
E.A. i.v.

—

very slight sym¬
ptoms.

256

—

0.3 c.c. ser.
No. 3, i.p.

idem

—

typical anaphylac¬
tic death.

291

0.5 c. c. normal
rabbit’s ser. i.p.

0.05 c. c.
E.A. s.c.

0.2 c.c. ser.
No. 3, i.p.

0.8 c. c.
E.A. i.v.

no symptoms.

292

idem

idem

0.3 c.c. ser.
No. 3, i.p.

idem

sick; recovered.

293

idem

yy

idem

294

yy

yy

0.4 c.c. ser.
No. 3, i.p.

yy

typical anaphylac¬
tic death.

295

jj

yy

idem

yy

very sick; recovered

296

yy

yy

0.6 c.c. ser.
No. 3, i.p.

yy

typical anaphylac¬
tic death.

2-70

0.5 c. c. serum
! No. 4, ip.

0.8 C.C.
E.A. s.c.

—

—

idem

271

idem

0.05 c. c.
E.A. s.c.

1.5 c. c.
E.A. i.v.

—

no symptoms.

278

I

idem

0.3 c.c. ser.
No. 3, i.p.

0.8 c.c.
E.A. i.v.

sick; recovered.

279

I

yy

idem

idem

idem

280

yy

yy

0.4 c.c. ser.
No. 3, i.p.

yy

typical an aphylac¬
tic death.

281

1

yy

idem

yy

idem

282

1 ”
yy

yy

0.6 c.c. ser.
No. 3, i.p.

yy

yy

1) Rabbits No. 3 and 4 had received intraperitoneal injections of one
cubic centimeter of the white of hen’s egg on August 15th, 22nd and 30th,
and on September 9th.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

153

Analysis.

Guinea-pigs 270, 271, 278, 279, 280, 281 and 282 each received 0.5 c. c.
of the serum of immunized rabbit No. 4 by intraperitoneal injection. At
the same time the control animals No. 291, 292, 293, 294, 295 and 296
each received an equal amount of the serum of a normal rabbit by the
same route. On the following day the guinea-pigB that had received the
immune serum were shown to be sensitized to egg-albumen — guinea-pig
No. 270 — and the remaining animals of that group as well as all of the
animals of the control group then received 0.05 c. c. of the egg-albumen
preparation by subcutaneous injection. After a second interval of 24 hours,
the sensitized animals were shown to have become anti-anaphylactic to
the egg-albumen — guinea-pig No. 271 — and the remaining animals of both
groups were then given different quantities of the serum of immunized
rabbit No. 3 by intraperitoneal injection. By a preliminary test 0.3 c. c.
of serum No. 3 had been found to be sufficient passively to sensitize
normal guinea-pigs — guinea-pigs No. 242 and 256. The final test carried
out after a third interval of 24 hours showed that the minimal sensitizing
dose of the immune serum No. 3 was identical for the two groups of
animals; that is, 0.4 c.c. which is slightly greater than the minimal sen¬
sitizing dose for untreated guinea-pigs.

This experiment shows, first, that by their previous treat¬
ment the control animals have been influenced in such a way
as to make necessary for their passive sensitization a larger
quantity of the immune serum than is required for the sensi¬
tization of untreated animals; and secondly, that for animals
that recently have been rendered anti-anaphylactic after pas¬
sive sensitization the sensitizing dose of the immune serum
is also increased, but not more than it is for the control
animals.

We are justified, therefore, in concluding that the process
by which passively sensitized animals are rendered anti-
anaphylactic does not interfere specifically with the subsequent
passive restoration of hypersensitiveness to the same proteid.

Having found that in the condition of anti-anaphylaxis
after both forms of sensitization it was necessary, in order to
resensitize the animals, only to introduce into them the minimal
sensitizing amount of the specific antibodies, we are forced to
the conclusion that the condition of specific “anti¬
anaphylaxis” is due solely to a neutralization of
the “anaphylactic antibodies”.

ZeiUchr. f. Immunitdtsforachung. Orig. Bd. XVII. H

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154

Richard Weil and Arthur F. Coca,

We have already referred to the observations of Otto
and of Gay and Southard that the blood of “refractory”
animals contains substances capable of passively sensitizing
other animals. The observation would seem to contradict the
assumption that the condition of anti-anaphylaxis, in which
animals have become “refractory” to injections of the proteid
against which they were sensitized, is due to a neutralization
of the sensitizing antibodies.

The difficulty presented by this observation is, however,
only an apparent one and it is dissipated by an analysis of
the protocols of the experiments referred to. It appears,
namely, that both Otto, and Gay and Southard used, as
“refractory” animals, not sensitized animals that recently had
been rendered anti-anaphylactic, but animals that had been
immunized with repeated injections. It is hardly necessary
to point out that those experiments did not throw any light
on the nature of anti-anaphylaxis in the sense in which we
have used that term.

As a matter of fact, it has been shown by Rosenau
and Anderson 1 ) and by Anderson and Frost 2 ) that for
several days after actively sensitized guinea-pigs have been
made anti-anaphylactic their blood does not contain substances
capable of passively sensitizing other guinea-pigs.

In one experiment, in which actively sensitized guinea-
pigs were made anti-anaphylactic with a very small sub¬
cutaneous injection (0.1 c. c.) of the proteid (egg-albumen),
we were able to confirm these observations. According to
this experiment, whereas, after an interval of 18 days follow¬
ing the primary sensitizing injection, the passive transference
of the hypersensitiveness was completely successful in three
out of six animals, the same method of transference from
animals of the same series that had been rendered specifically
“anti-anaphylactic” resulted in a partial sensitization in only
one out of six animals. While we are not in a position to

1) Bulletin No. 45. Hygienic Laboratory, U. S. Publ. Health and
Marine Hosp. Service, Washington, June 1908, p. 65.

2) Bulletin No. 64. Hyg. Lab., U. S. Publ. Health and Mar. Hosp.
Serv., June 1910. Table 17.

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The nature of Anti-Anaphylaxis.

155

offer an explanation for the result of the experiment in this
one animal, we believe that the experiment, as a whole, lends
support to the assumption that the state of specific “anti-
anaphylaxis” is due to a lack of the necessary immune sub¬
stances.

Since it has been shown that “anti-anaphylaxis” is due to
a neutralization of the “anaphylactic antibodies”, the term by
which the condition has been known must be recognized as
an inappropriate designation.

An accurate name for the condition has already been sug¬
gested byBesredka; namely, a condition of “desensitization”.

Zusammenfassung.

1) Durch quantitative Experimente wird gezeigt, daB die
„Antianaphylaxie u , in Uebereinstimmung mit Rosenau und
Anderson. Wells, Friedberger und Szymanowski,
strong spezifisch ist.

2) Meerschweinchen, welche entweder nach aktiver oder
passiver Sensibilisation „antianaphylaktisch“ gemacht worden
sind, kSnnen mit voller Sicherheit sofort passiv resensibilisiert
werden; und zwar gelingt dies mit alien Methoden, die zur
passiven Sensibilisation erforderlich sind.

3) Um „antianaphylaktische u Meerschweinchen zu resensi-
bilisieren, braucht man genau dieselbe Menge des Antiserums,
welche n6tig gefunden wurde, um die Kontrolltiere prim&r zu
sensibilisieren.

4) Es wird gefolgert, daB die „Antianaphylaxie“ aus-
schliefilich durch die Neutralisation der spezifischen Antikorper
bedingt ist; und, da die „antianaphylaktischen“ Tiere sich
gegen die passive Resensibilisation quantitativ genau wie die
Kontrolltiere verhalten, daB irgendwelche andere Faktoren
(Komplementverbrauch, n Umstimmung“) keine Rolle spielen.

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156

0. v. Hellens,

Nachdruck verboten.

[Aub dem d&nischen Staats-Seruminstitut zu Kopenhagen.]

Das Yerhalten des Kaninchenserums zn der
Wassermannschen Reaktion.

Von Dr. O. ▼. Hellens,

Dozenten der Hygiene an der Univereitfit Helsingfors.

(Eingegangen bei der Redaktion am 23. Dezember 1912.)

In einem kiirzlich verbffentlichten Aufsatze gibt Halberstadter 1 2 3 )
an, daB, den Ergebnissen seiner Untersuchungen zufolge, Kaninchensera,
bei Anwendung eines alkoholischen Extraktes von syphilitischer Leber als
Antigen, im aktiven Zustande in der Regel keine Wassermannsche
Reaktion, nach Inaktivierung dagegen gewohnlich eine ausgesprochene
positive geben. Die gleiche Beobachtung ist schon friiher von Hessberg*)
sowie von Browning und M’Kenzie 8 ) erwahnt worden, indes ver-
scbiedene Forscher, wie Michaelis 4 5 6 7 ), Fleischmann*), Landsteiner
und Muller®), Blumenthal T ), Friedemann 8 ) u. a. die Eigenschaft
der Kaninchensera, im inaktivierten Zustande positive Wassermann-
Reaktion zu geben, hervorgehoben baben.

Urn das Verhalten des Kaninchenserums zu der genannten
Reaktion n§her zu studieren, habe ich im d&nischen Staats-
Seruminstitut zu Kopenhagen sowohl mit aktivem als auch
mit wfihrend V* Stunde bei 56° C inaktiviertem Serum von
80 Kaninchen eine Reihe von Untersuchungen angestellt Von
zweien der Tiere wurden je zwei verschiedene Male mit zwei-
t&giger Zwischenzeit Blutproben entnommen, so daB die Zahl
der untersuchten Serumproben 82 betrug.

Die Versuche wurden stets an demselben Tage ausgefflhrt,
an dem die betreffende Blutprobe entnommen worden war.
Eine Ausnahme bildeten nur gewisse Versuche mit inakti¬
viertem Serum bei Anwendung eines alkoholischen Extraktes

1) Berliner klin. Wochenschr., 1912, p. 594.

2) Biochem. Zeitschr., Bd. 20, 1909, p. 349.

3) Journ. of Pathol, and Bact., Vol. 15, 1910, p. 127, 182.

4) Berliner klin. Wochenschr., 1907, p. 1103.

5) Berliner klin. Wochenschr., 1908, p. 490.

6) Wiener klin. Wochenschr., 1908, p. 230.

7) Berliner klin. Wochenschr., 1908, p. 618 und 1911, p. 1462.

8) Zeitschr. f. Hyg. u. Infektionskrankh., Bd. 67, 1910, p. 279.

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Verhalten des Kaninchenser. zu der Wassermannschen Beaktion. 157

von syphilitischer Leber als Antigen, bei welchen Versuchen
das inaktivierte Serum w&hrend einiger Tage im Eiskeller
(_l_ 40 (j) aufbewahrt blieb, ehe die Untersuchung vorgenommen
wurde.

Bei den Untersuchnngen habe ich das in dem genannten
Institnt (lbliche Verfahren befolgt, so wie dieses von
0. Thomsen 1 ) ausfiihrlich beschrieben worden ist.

Das Resultat wurde kolorimetrisch vermittels einer je von
der betreffenden BlutkSrperchenaufsch wemmun g bereiteten
Skala abgelesen, auf welcher die Zahl 100 eine totale Hamolyse
(100 Proz.), der Nullpunkt dagegen das vollstandige Ausbleiben
der Hamolyse anzeigte. Den im Seruminstitut gewonnenen
Erfahrungen gem all habe ich die Reaktion als positiv be-
trachtet, wenn der Grad der Hamolyse weniger als 70 Proz.
betrug. Falls dagegen die die Hamolyse ausdrttckende Prozent-
zahl 70 oder mehr betrug, so hat, der von mir befolgten Auf-
stellung gemaB, keine Reaktion stattgefunden.

Als eine mdgliche Ursache dafflr, dad aktive Kaninchen-
sera keine positive Wassermann-Reaktion geben, wahrend
bei denselben Sera, wenn sie inaktiviert werden, die genannte
Reaktion eintritt, nehmen Browning und M’Kenzie 8 ) das
im Kaninchenserum enthaltene Komplement an, welches etwa
genflgen kbnnte, um eine Hamolyse herbeizufiihren. Um in
Erfahrung zu bringen, ob dies tatsachlich der Fall ist, habe
ich fttr jede einzelne Serumprobe durch genaues Titrieren
besonders festgestellt, welcher Quantitat des bei den resp.
Versuchen benutzten Meerschweinchenkomplementes die in
0,1 ccm des betreffenden aktiven Kaninchenserums vorhandene
Komplementmenge entsprach. Mit jeder Probe von aktivem
Serum habe ich alsdann Parallelversuche angestellt, sowohl
mit Zusatz der ganzen, far jedes Mai durch Titrage ermittelten
Dosis des Meerschweinchenkomplements als auch mit Zusatz
einer um so viel geringeren Dosis des letzteren, als, der vorhin
erwahnten Vorprobe zufolge, der Gehalt des angegebenen
Quantums des betreffenden Kaninchenserums an Komplement
betrug. Bei Versuchen mit inaktiviertem Serum habe ich stets
die voile Dosis Meerschweinchenkomplement angewandt.

1) Zeitachr. 1 Immunitatsf. u. exp. Therapie, Bd. 7, 1910, p. 889.

2) L c.

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158

O. v. Hellene,

S&mtliche 82 Serumproben wurden sowobl im aktiven als
auch im inaktivierten Zustande, unter Anwendung eines alko-
holischen Extraktes von normalem Menschenherzen als Antigen,
untersncht. AuBerdem wurden 50 von ihnen in inaktiviertem
nnd von diesen wiederum 30 auch im aktiven Zustande, unter
Anwendung eines alkoholischen Extraktes von syphilitischer
Leber als Antigen, geprGft.

Von den 32 sowohl im aktiven als im inaktivierten Zustande
nur mit Herzextrakt als Antigen untersuchten Serumproben
ergaben 29, unter 20 in inaktiviertem Zustande auch mit syphili-
tischem Leberextrakt als Antigen untersuchten Proben 5, und
von den Qbrigen 30 im aktiven und im inaktivierten Zustande
sowohl mit Herz- als auch mit Leberextrakt als Antigen unter¬
suchten Proben 2 ein vollstfindiges Ausbleiben der Was ser¬
in an nschen Reaktion.

Die auf die Qbrigen 46 Proben bezQglichen Versuchs-
ergebnisse habe ich in den Tabellen I—III zusammengestellt,
welche die bei je einer der oben angefQhrten 3 Versuchsgruppen
erhaltenen positiven Resultate umfassen. In diesen Tabellen
zeigt 0 an, daB keine Wassermann-Reaktion eingetreten
ist (100—70 Proz. Hfimolyse), -f- (— 70—50 Proz. Hfimolyse)

Tabelle I.

No.

des

Ver-

suches

Semra-

dosis

Alkoholischer Her
als Antigei

Aktivea Serum

zextrakt

i

Inakti-

viertes

Serum

Berner kungen

Berech-
nete Dosis
Kom-
plement

Voile

Dosis

Kom-

plement

5

0,25

—

—

0

Serum von demselben

0,1

++

0

+

Kaninchen wie im Ver-

0,05

+++

=

0

such No. 20, Tab. II.

0,025

0

=

0

8

0,25

—

—

+

Serum von demselben

0,1

0

0

++

Kan in chen wie im Ver-

0,05

0

=

++

such No. 21, Tab. II.

0,025

++ +

=

0

15

0,25

—

=:

0

0,1

+ + +

0

0

0,05

0

0

0

0.025

0

0

0

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Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Tabelle II.

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Verhalten des Kaaincbenser. zu der Wassermannschen Reaktion. 159

ouiuag 89^91Al^UJ

•ua8puy spi iaqaq
laqaspqiqdis uoa
^[B a^xa la’qasqoqoqjy

O+U 00 + + +i+i + + + + 0 +i +

+X+ ++ + xxx ++++ +++

Alkoholischer Herz-
extrakt als Antigen

uuuag

sa^jaupqBuj

oooo oooo oooo oooo oooo

Aktives Serum

)a3tna{dni03
SISOQ 3U0A

II ooo || ooo || ooo || oo o || ooo

^uamaidaioa

SISOQ

a^auqoajag

ll+oo II ooo II ooo II ooo II ooo

\

saqonaia^ sap *oji

39

41

42

44

48

raruag sa^iaupqBui
*ua8puy sre jaqaQ
jaqospqiqaAs uoa
jqBi^xg jVqosqoqoqiv

o:+to++=o++oott+=o+o

Alkoholischer Herz-
extrakt als Antigen

ramag

sa^iaupqBuj

oooo oooo oooo oooo oooo

Aktives Serum

jaamajdcnoji

sisoa an°A

II ooo II ooo II ooo II ooo II ooo

;uauia|diuoa

SISOQ

ajauqaaiag

0

0

0

o’

0

0

++

0

0

+++

0

0

0^

0

0

saqonsiaA sap *°N

25

31

32

33

37

umjag sa^raiApqBuj
•uaSpuy stb iaqaQ
jaqospiqqdis uoa
cpjBJixa jaqasqoqoqjy

1 , + + + , 1++ J. + + +

o+JII T + + + tooo oJ + + ? + + +

+ + + + + + + + + + + + +

Alkoholischer Herz-
extrakt als Antigen

uuuag

sa^iaiApqBUi

oooo oooo oooo oooo oooo

Aktives Serum

ia9tu3|dtno^
sisoa ai[OA

II OOO ||ooo n ooo || ooo II ooo

^uauia|dmo3

SISOQ

a^auqoajag

ll+oo II ooo II ooo II ooo II ooo

saqousaa^ sap *o^

10

16

18

20

21

sisopuinjag

tO tO tO tO tO

iO tO 03 tO VO Cvi tO lOOl to tO Oj to to 00

(MHOO (MHOO 03 rH OO NHOO whoo

ooo"o' o"oo'o‘ d'd'o'd o'o"o"o oooo

Gck 'gle

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160

O. v. Hellene,

Tabelle III.

1

1

s

6

A

Serum-

dosis

Alkoholischer Herzextrakt
ale Antigen

Alkoholischer Extrakt von
eyphilitischer Leber ale Antigen

Aktives Serum

In-

aktiviertes

Serum

Aktives Serum

In-

aktiviertes

Serum

Be-

rechnete

Doeis

Eompl.

Voile

Doeis

Kom-

plement

Be-

rechnete

Doeis

Eompl.

VoUe

Doeis

Korn-

plement

53

0,25

__

—

0

=

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0

0,1

0

0

0

0

0

0

0,05

0

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0

. +

+ +

+

0,025

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0

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+ +

0

54

0,25

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55

0,25

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0

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56

0,25

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57

0,25

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0

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+++

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58

0,25

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0

=

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o’

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0

0

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0,05

0

0

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0

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+++

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0

0

0

+ + -F

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+++

59

0,25

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0

—

=

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0

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0

+++

0,05

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0

0

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+++

+++

61

0,25

—

—

0

=

_

0

0,1

0

o

0

0

o’

0

0,05

0

0

0

0

0

0

0,025

0

0 !

0

+++

+ +

++

62

0,25

=

_

0

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0

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0

0

0,05

0

0

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0

0

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0,025

0

0

0

+

+

++

63

0,25

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=3

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0

++ +

0,05

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0

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0

+ + +

0,025

+

0

0

+ + +

+++

++ +

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Verhalten dee Kaninchenser. zu der Wassermannschen Reaktion. IgJ

1

1

8

T3

6

fc

Serum-

dosifl

Alkoholiecher Herzextrakt
als Antigen

Alkoholischer Extrakt von
syphilitischer Leber ate Antigen

Aktives Serum

In-

aktiviertes

Serum

Aktives Serum

In-

aktiviertee

Serum

Be-

rechnete

Dosis

Kompl.

Voile

Doeis

Kom-

plement

Be-

rechnete

Doeis

KompL

Voile

Dosis

Kom-

plement

64

0,25

=

0

_

0

0,1

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0

0

0

0

+ + +

0,05

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0

0

0

0

+ + +

0,025

0

0

0

+ +

+ +

+ +

65

0,25

=

—

0

—

—

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0

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0

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0

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0,025

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0

0

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+++

+ +

66

0,25

=

—

0

—

0

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0

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0

0,025

0

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0

0

67

0,25

=

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0

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++

+++

68

0,25

=

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0

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0

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0

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++

0,025

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0

+++

+++

++

69

0,25

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0

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0

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0

0

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0

0

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70

0,25

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=

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0

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0

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0

71

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1

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0

72

0,25

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73

0,25

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0

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0

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0

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0

75

0.25

—

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0

—

—

0

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0

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0

0

0,025

0

0

0

0

0

0

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162

O. v. Hellene,

No. dee Vereuchea

Serum -
dosis

Alkoholiecher Herzextrakt
ale Antigen

Alkoholiecher Extrakt von
eyphilitiecher Leber als Antigen

Aktives Seram

In-

aktiviertes

Serum

Aktives Serum

In-

aktiviertes

Serum

Be-

rechnete

Dosis

Eompl.

VoUe

Dosis

Kom¬

plement

Be-

rechnete

Dosis

Kompl.

Voile

Doeis

Kom¬

plement

76

0,25

—

-

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—

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0

0

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0

0

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0

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0

0

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0

0

77

0,25

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78

0,25

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79

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0

0

80

0,25

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0

0

81

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82

0,25

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0

0

0

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++

+

++

0,025

0

0

0

0

0

0

bezeichnet eine schwache, ++ (= 50—20 Proz. H&molyse)
eine raittelstarke, -f—)—|- (= 20—0 Proz. H&molyse) eine starke
positive Reaktion, und =, dafi mit der betreffenden Serumdosis
kein Versuch stattgefunden hat. „ Voile Dosis Komplement 44 ist
die filr jedesmal durch Titrieren ermittelte kleinste lOsende
Dosis Meerschweinchenkomplement und „Berechnete Dosis
Komplement“ eine um so viel geringere Dosis Meerschweinchen¬
komplement als, der vorhin erw&hnten Vorprobe zufolge, der
Gehalt des angegebenen Quantums des betreffenden Kaninchen-
serums an Komplement betrug.

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Verhalten des Kaninchenser. zu der Wassermannschen Reaktion. ]03

Die Anzahl der bei den verschiedenen Versuchsserien
beobachteten Reaktionen ergibt sicb aus der Tabelle IV. Unter
die Rubrik starke positive Reaktion habe ich hier diejenigen
Serumproben zusammeogefiihrt, von denen wenigstens eine
der angewandten Dosen eine starke positive Reaktion ergeben
hat, unter die Rubrik mittelstarke positive Reaktion wiederum
diejenigen Proben, welche wenigstens in irgend einer Dosis
eine mittelstarke, dagegen in keiner Dosis eine starke Reaktion
ergaben; endlich fallen unter die Rubrik schwach positive
Reaktion alle fibrigen, positiv reagierenden Proben.

Tabelle IV.

Beaktion

Alkoholischer Herzextrakt
als Antigen

Alkoholischer Extr&kt
von syphilitischer Leber
als Antigen

Aktives Serum

Inaktivi-

viertes

Serum

Aktives

Serum

Inakti-

viertes

Serum

Berechnete

DosisKom-

plement

Voile Dosis
Kom-
plement

i a-
|

Voile Dosis
Kom-
plement

Starke positive

6

_

2

n

8

24

Mittelstarke positive

7

2

8

n

6

15

Schwache positive

2

—

2

2

4

1

Summe

15

2

12

24

i is

40

Keine

67

: 80

! 70

6

12

! io

Summe der Proben

82

1 82 |

82

30

| 30

| 50

Wie aus den Tabellen I—III hervorgeht, haben 46 —
also fiber 50 Proz. — der untersuchten Serumproben ent.weder
im aktiven oder im inaktivierten Zustande bei Versuchen mit
dem einen oder anderen der von mir angewandten Antigene
eine mehr oder weniger starke positive Wassermann-
Reaktion ergeben. Indessen bieten diese Reaktionen durch-
aus nicht die gleiche RegelmSGigkeit dar wie die bei Syphilis
zu beobachtenden Reaktionen. So hat z. B. nach Thomsen
und B j a r n h j e d i n s o n l ) die im Staats-Seruminstitut zu Kopen-
hagen auf Grund von ca. 6000 Reaktionen gewonnene Erfahrung
gelehrt, daft die Intensity der Reaktion bei Syphilis stets, bei
Anwendung inaktivierten Serums und alkoholischen Herzextrakts,
der angewandten Serummenge proportional ist. Bei den hier

1) Zeitschr. £. Immunitiitsf. u. exp. Therapic, Bd. 7, 1910, p. 414.

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164

O. v. Hellens,

in Rede stehenden Versuchen dagegen worde sehr oft, sowohl
bei aktivem als auch bei inaktiviertem Serum, mit einer klei¬
neren Serumdosis eine ebenso starke Oder st&rkere Reaktion
erzielt als mit einer grbBeren Dosis. Nur in einzelnen FSllen
trat das entgegengesetzte Verh&ltnis ein.

Bei Versuchen mit inaktiviertem Serum machte sich das
eigentQmliche Verhalten geltend, daB mit 0,1 ccm oder einer
noch geringeren Dosis Serum eine st&rkere Reaktion eintrat
als mit 0,25 ccm. Unter 40 mit Leberextrakt als Antigen positiv
reagierenden inaktivierten Serumproben ergaben 23 bei An-
wendung von 0,25 ccm Serum keine Reaktion, und in 12 von
den ilbrigen 17 Fallen war die Reaktion bei Anwendung einer
kleineren Serumdosis starker als mit 0,25 ccm. Nur in einem
von diesen 40 Fallen wurde mit 0,25 ccm Serum positive
Reaktion erhalten, indes die anderen versuchten Serumdosen
negatives Resultat ergaben. In 4 Fallen endlich war die
Reaktion mit 0,25 ccm Serum ebenso stark, wie mit 0,1 ccm.

Auch bei Anwendung von Herzextrakt als Antigen trat,
wenngleich weniger regelm&Big, dieselbe Eigenttimlichkeit
hervor. Die Ursache dieses Verhaltens habe ich nicht n&her
ermittelt.

Ein ahnliches Verhalten haben Madsen und W alb urn 1 )
bei H&molyseversuchen mit Saponin beobachtet, indem kleinere
Dosen manchmal starker h&molysierend wirkten als grOBere.

Ein konstanter Unterschied zwischen der Intensit&t der
Reaktion bei Versuchen mit aktivem und mit inaktiviertem
Serum hat sich nicht feststellen lassen. In einem Teil der
F&lle war die Reaktion bei Versuchen mit aktivem Serum
starker oder die positive Reaktion trat hier bei Anwendung
einer kleineren Serumdosis ein als bei Versuchen mit inakti¬
viertem Serum; indessen war ungef&hr ebenso oft das Gegen-
teil der Fall, und in verschiedenen Fallen konnte kein nennens-
werter Unterschied bemerkt werden. Auch in dieser Beziehung
unterscheidet sich die bei diesen Versuchen beobachtete Re¬
aktion entschieden von der bei Syphilis auftretenden Wasser-
mannschen Reaktion, denn bei dieser Krankheit wird ja, wie

1) Overs, over det Kgl. Danske Vidensk. Selskabs ForhandL, 1905,
No. 1.

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Verhalten dea Kaninchenser. zu der Wasserman nschen Reaktion. 165

Sachs und Altmann 1 ), Boas 2 ) u. a. nachgewiesen haben,
mit aktivem Serum in der Regel eine st&rkere und feinere
positive Reaktion erhalten als mit inaktiviertem.

Eine eingehendere Prtifung der obigen
Tabellen lfifit erkennen, daB, bei Anwendung der
beiden verschiedenen Antigenarten, voneinander
sehr abweichende Resultate entstanden sind,
w&hrend doch bei den in demselben Institut mit
diesen Antigenen in bezug auf Syphilis ange-
s tell ten Versuchen untereinandervOlligflberein-
stimmende Resultate sich ergeben baben.

Die Einwirkung der beiden Antigenarten in den ver¬
schiedenen Versuchsserien geht aus der Tabelle V hervor,
welche die Resultate s&mtlicher Versuche umfaBt, bei denen
die Serumproben mit beiden Antigenen untersucht worden sind.

Tabelle V.

Reaktion

Alkoholischer Herzextrakt
als Antigen

Alkoholischer Extrakt von
syphilitischer Leber als
Antigen

Aktives Serum

Inakti¬

viertes

Serum

Aktives Serum

Inakti¬

viertes

Serum

Berechnete
Dosis Kom-
plement

Voile Dosis
Kom-
plement

Berechnete

DosisKom-

plement

Voile Dosis
Kom-
plement

Starke positive

2

_

2

ii

8

24

Mittelstarke positive

4

2

7

ii

6

15

Schwache positive

2

—

1

2

4

1

Summe

8

2

10

24

18

40

Keine

22

28

40

6

12

10

Summe der Proben

30

30

| 50

30

30

j 50

Sowohl aktives als auch inaktiviertes Serum ergab, wie
aus der Tabelle V ersicbtlicb ist, bei Anwendung eines alko-
boliscben Extraktes von syphilitischer Leber als Antigen be-
deutend 6fter positive Reaktion als bei Anwendung eines Ex¬
traktes von normalem menschlicben Herzen. Von 50 unter-
suchten inaktivierten Serumproben reagierten dementsprechend
mit Herzextrakt als Antigen nur 20 Proz. positiv, wahrend,

1) Berl. klin. Wochenschr., 1908, p. G99.

2) Ibid., 1909, p. 400.

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166

O. v. Hellene,

bei Anwendung syphilitischen Leberextraktes als Antigen,
80 Proz. derselben Serumproben positive Reaktion gaben.
Auch in bezug auf die Starke der Reaktion war ein deutlicher
Unterschied zu konstatieren, indem, bei Anwendung des Herz-
extraktes, nur in 2 Fallen (= 20 Proz. der positiven Reaktionen)
eine starke Reaktion eintrat, indes eine solche, bei Anwendung
des syphilitischen Leberextraktes, in 24 Fallen (= 60 Proz.
der positiv reagierenden Proben) zustande kam.

Ungefahr entsprechende Resultate — positive Reaktion
in 27 bzw. 80 Proz. der Falle — wurden bei Untersuchung
von 30 aktiven Serumproben erzielt, wenn nur die berechnete
Dosis Komplement zugefiigt wurde. Beim Zusatz der vollen
Komplementdosis wurde der Unterschied noch grSBer, indem
namlich hierbei ca. 7 bzw. 60 Proz. der untersuchten Serum¬
proben positive Reaktion ergaben.

Samtliche Serumproben, welche im inaktivierten Zustande
mit Herzextrakt als Antigen positiv reagierten, haben dies
auch mit Leberextrakt-Antigen getan. 1m aktiven Zustande
wiederum ergab eine Serumprobe, bei Zusatz der berechneten
Komplementdosis, mit Herzextrakt als Antigen positive, mit
Leberextrakt dagegen keine Reaktion, wahrend in 17 Fallen
das entgegengesetzte Verhalten konstatiert werden konnte.

Auch aus diesen Versuchsresultaten ergibt sich ein wesent-
licher Unterschied zwischen der bei Untersuchung von Ka-
ninchensera zu erzielenden Reaktion und der bei Syphilis auf-
tretenden Wassermannschen Reaktion, indem bei dieser
Krankheit mit den von mir angewandten Antigenen, wie bereits
erwahnt, untereinander vOllig iibereinstimmende Resultate er-
halten worden sind.

Von 82 mit Herzextrakt als Antigen untersuchten Serum¬
proben gaben im inaktivierten Zustande 12, entsprechend ca.
15 Proz., im aktiven Zustande wiederum, bei Zusatz der be¬
rechneten Menge des Komplementes, 15 (= ca. 18 Proz.), und
bei Zusatz der vollen Dosis des Komplementes 2 (== ca. 2 Proz.)
positive Reaktion. Nur 6 von diesen Proben jedoch reagierten
sowohl im inaktivierten als auch im aktiven Zustande positiv.

Bei Untersuchung von 30 Serumproben mit syphilitischem
Leberextrakt als Antigen wurde wiederum bei Anwendung
inaktivierten Serums in 25 Fallen (= ca. 83 Proz.) positive

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Verhalten des Kaninchenser. zu der Wassermannschen Reaktion. 167

Reaktion erhalten. Bei Anwendung aktiven Serums trat bei
Zusatz der berechneten Dosis des Komplementes in 24 Fallen
(= 80 Proz.) und bei Zusatz der vollen Dosis Komplement
in 18 Fallen (= 60 Proz.) positive Reaktion ein. Auch hierbei
reagierte das Serum nicht immer gleichzeitig im inaktivierten
und im aktiven Zustande positiv, indessen geschah dies bei
den letzterwahnten Versuchen bedeutend haufiger, nSmlich in
21 Fallen.

Positive Reaktion trat somit, wie aus den soeben mit-
geteilten Zahlen hervorgeht, bei Anwendung inaktivierten
Serums nahezu ebenso oft ein wie bei Anwendung aktiven
Serums mit Zusatz nur der berechneten Dosis des Komple¬
mentes. Es erscheint infolgedessen bdchstwahrscbeinlich, daB
die von anderen Autoren beobachtete groBe Verscbiedenheit
in bezug auf das Eintreten positiver Wassermannscher
Reaktion in aktiven und in inaktivierten Kaninchensera auf
der Einwirkung des im Kaninchenserum befindlichen Komple¬
mentes berubt. Gegen diese Annabme spricht zwar scheinbar
der Umstand, daB aucb bei Zusatz der vollen Dosis des Kom¬
plementes, wenn syphilitischer Leberextrakt als Antigen be-
nutzt wurde, verhaitnismaBig haufig positive Reaktion zu¬
stande kam. Aus meinen Versuchsprotokollen geht indessen
hervor, daB in 14 von diesen 18 positiv reagierenden Fallen
die Reaktion bei Zusatz nur der berechneten Komplement-
dosis starker war als bei Zusatz der vollen Dosis, wahrend
das umgekehrte Verhalten nur in einem Falle beobachtet
wurde. Auch dieser Umstand spricht ja gewissermaBen ffir
die Annabme, daB das im Kaninchenserum befindliche Kom¬
plement auf die Starke der Reaktion einen EinfluB ausflbt.

Von 2 Kaninchen wurden je zweimal, mit 2-tagiger
Zwischenzeit, Blutproben entnommen. Die Untersuchung der
je von ein und demselben Kaninchen stammenden verschiedenen
Serumproben hat indessen, wie aus den Tabellen I und II
hervorgeht, ganz verschiedene Resultate ergeben. Die erste
Probe, welche nur mit Herzextrakt als Antigen untersucht
wurde, ergab fflr beide Kaninchen in tibereinstimmender
Weise, sowohl im aktiven Zustande — bei Zusatz nur der
berechneten Dosis des Komplementes — als auch im inakti¬
vierten Zustande positive Reaktion, wobei jedoch in dem einen

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163 v. Hellens, Verhaltendee Kanincheaser. zu der Waseerm.Beaktion.

Falle nur eine ganz schwache und io dem anderen nur eine
mittelstarke Reaktion entstand. Die zweite Serumprobe da-
gegen ergab fflr beide Eaninchen bei Anwendung von Herz-
extrakt als Antigen ein vollst&ndig negatives Resultat; allein
dasselbe Serum reagierte in beiden Fallen bei Anwendung
syphilitischen Leberextraktes als Antigen stark positiv. Dieses
Verhalten bestatigt die von anderen Forschern schon frtiher
gemachte Beobachtung, dafi ein und dasselbe Kaninchen das
eine Mai die Wassermannsche Reaktion geben kann, ein
anderes Mai aber dieses nicht tut.

Zusammenfassung.

Aus meinen Versuchen geht hervor, dafi Kaninchensera
sowohl im aktiven wie im inaktivierten Zustande positive
Wassermannsche Reaktion geben kbnnen. Wenn nicht
die voile Dosis Komplement zugefflgt wird, sondern diese
Dosis mit Abzug der im Kaninchenserum vorhandenen Kom-
plementmenge, so wird mit aktivem Serum etwa ebenso oft
wie mit inaktiviertem positive Reaktion erzielt.

Ein konstanter Unterschied zwischen der St&rke der
Reaktion bei Versuchen mit aktivem und mit inaktiviertem
Serum hat nicht festgestellt werden konnen.

Die mit Kaninchenserum entstehende Wassermannsche
Reaktion ist der angewandten Serummenge nicht proportional,
sondern mit geringeren Serumdosen wird sehr oft eine stfirkere
Reaktion erzielt als mit grofieren, auch wenn das Serum
wfihrend Va Stunde auf 56° C erw&rmt worden ist. Die
Reaktion ist somit keine typische Wassermann¬
sche Reaktion.

Die von verschiedenen Forschern gemachte Beobachtung,
dafi aktive Kaninchensera in der Regel keine positive Reaktion
geben, beruht, soweit meine Versuche daruber ein Urteil er-
lauben, wahrscheinlich auf einer Einwirkung seitens des im
Kaninchenserum vorhandenen Komplements.

Das Eintreten oder Ausbleiben der Reaktion bei Ver¬
suchen mit Kaninchensera ist in hohem Grade von der Natur
des angewandten Antigens abhfingig. Bei Anwendung eines
alkoholischen Extraktes von syphilitischer Leber tritt viel
haufiger eine positive Reaktion ein als bei Anwendung eines

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Bergel, Ueber Wesen und Ureprung der Hemagglutination. 169

ebensolchen Extraktes von normalem Menschenherzen, und
zwar selbst wenn mit diesen Extrakten, bei Untersuchung
von Sera syphilitischer Menschen, einander ganz gleiche
Resultate erzielt werden.

Zum SchluBse spreche ich dem Direktor des Seruminstituts, Herm
Dr. Th. Madsen, fiir das lebhafte Interesse, welches er meiner Arbeit
entgegengebracht hat, und fiir die wertvollen Ratschlage, die ich von ihm
erhalten habe, meinen tiefempfundenen Dank aus.

Nachdruck verboten.

Weltere experimentelle Untcrsnchnngen fiber Wesen and
TJrsprung der HSmagglutinatlon; die Entstehung der

Spezlfizitftt.

Von Dr. S. Bergel, Hohensalza.

(Eingegangen bei der Bedaktion am 27. Dezember 1912.)

In einer friiheren Arbeit (diese Zeitschr., Bd. 14, Heft 3)
habe ich den Nachweis gefiihrt, dafi die Hemagglutination
einen chemischen Vorgang darstellt, der auf einer Verklebung
der Lipoidhfllle der Erythrocyten beruht und bedingt ist durch
die Einwirkung des fettlosenden Fermentes der einkernigen
ungranulierten basophilen weifien Blutkdrperchen und ihrer
sekund&r in die Blut- und Gewebsflfissigkeit ergossenen Lipase.
Es wurde dort bereits hervorgehoben, dafi die Lymphocyten-
lipase die FHhigkeit besitzt, sich nach mehrfacher Vorbehand-
lung mit der gleichen Blutkdrperchenart spezifisch gegen
dieses betreffende Lipoid einzustellen.

Die Entstehung dieser VorgSnge soil hier genauer ge-
schildert werden. Man kann nSmlich unter dem Mikroskop
direkt die Entwicklung der spezifischen Einstellung, das
Phflnomen der allmahlich sich herausbildenden SpezifizitSt der
Lipase der einkernigen weiBen Blutkdrperchen gegen das
Lipoid der jeweiligen Erythrocyten system atisch von den ersten
AnfSngen bis zur vdlligen Ausbildung verfolgen und so einen
Blick in das Dunkel des Spezifizitatsbegriffs hineintun.

Oft schon 1—2 Tage nach der ersten Injektion von roten
Hammelblutkorperchen in die Bauchhdhle von weifien Mausen

Zeitschr. f. Immanit&tsforschung. Orig. Bd. XVII. 12

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170

S. Bergel,

beobachtet man nach Entnabme eines Tropfens Peritoneal-
exsudat und Vermischung mit einem Tropfen der betreffenden
Blutkdrperchenart im frischen Praparate eine schwache Um-
lagernng der einkernigen weiBen Zellen mit einigen Oder einer
Reihe von Erytbrocyten, eine Erscheinung, welche in den
spfiteren Tagen allmahlich starker wird, deutlicher ausgepr&gt
| ist und auch schneller znstande kommt. Oft sieht man schon
nach etwa 5—6 Tagen eine oder sogar mehrere Reihen von
roten Blutkdrperchen um eine oder eine Anzahl von ein¬
kernigen weiBen kranzfOrmig herumgelagert. Nach mehrfacher
Vorbehandlung mit der gleichen Blutart sind diese Erschei-
nungen voll entwickelt und in die Augen fallend. Es kommt
dann nicht bloB mikroskopisch zn einer viel schnelleren und
starkeren Zusammenballung der roten Blutkdrperchen nm die
einkernigen weiBen, sondern auch schon makroskopisch nimmt
man dentliche Agglutination wahr. Unter dem Mikroskop
sieht man im frischen Praparate geradezu, wie die weiBen
Blutkdrperchen es schon besser gelernt haben, die roten an
sich zu ziehen, wie sie fdrmlich auf sie abgerichtet sind, wie
die Erythrocyten gierig von den einkernigen weiBen, die sich
meist zahlreich im Exsudat finden, angezogen werden.

Daftir, daB es sich bei der Hamagglutination, wie ich in
der ersten Arbeit schon ausgesprochen habe, um ein unter
dem Einfiusse des lipolytischen Fermentes der einkernigen
weiBen Zellen zustande gekommenes Klebrigwerden der Lipoid-
hfllle der roten Blutkdrperchen handelt, spricht ebenfalls die
direkte Beobachtung unter dem Mikroskop.

Man kann namlich bei Betrachtung des frischen, ungefarbten
Praparates, d. h. des Gemisches von 1 Tropfen Bauchhdhlen-
exsudat einer Maus und der ziir Vorbehandlung benutzten
roten Blutkdrperchenart, besonders bei etwas schrager Stellung
des Objekttisches, beobachten, wie rote Blutkdrperchen beim
VorbeiflieBen an anderen, einkernige weiBe Zellen bereits nm-
kranzenden Erythrocyten kleben bleiben und von spater vorbei-
strdmenden Zellmassen nicht wieder losgerissen werden kdnnen.

Diese Befunde werden oft schon mehrere Tage nach der
ersten Injektion erhoben, sind aber Oberaus deutlich und fast
in jedem Praparate zu konstatieren einige Zeit nach mehr¬
facher Vorbehandlung mit der gleichen Blutart.

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Exp. Unters. fiber das Wesen u. Ursprung der Hamagglutination. 171

Ueber das weitere Schicksal der unter dem Einflusse der
einkernigen weifien Zellen agglutinierten roten Blutkdrperchen,
das allm&hliche Zerscbmelzen der Lipoidhflllen zu einer form-
losen Masse and das vdllige Verschwinden derselben bis zur
kompletten H&molyse, habe ich in der zitierten Arbeit Mit-
teilungen gemacht Ob noch eine zweite, besondere Substanz
den durch das Lymphocytenferment bedingten Agglutinations-
zustand in die H&molyse flberffthrt, und welcher Art diese
sei, ob vielleicht die roten BlutkSrperchen durch opsoninartige
Substanzen so ver&ndert werden, daft sie von den einkernigen
weifien besser agglutiniert bzw. h&molysiert werden, dartlber
sind weitere Untersuchungen im Gange. Das fettspaltende
Ferment der einkernigen ungranulierten basophilen weifien
BlutkSrperchen gelangt nicht nur innerhalb ihres Zellleibes zur
Wirksamkeit, sondern wird auch in ihre Umgebung sezerniert.
Daftir spricht die direkte mikroskopische Beobachtung, welche
lehrt, dafi die roten Blutkdrperchen von den einkernigen weifien
nicht blofi einverleibt, phagocytiert und verdaut werden kOnnen,
sondern dafi die Agglutination der Erythrocyten immer nur
aufierhalb des KOrpers der einkernigen weifien Zellen, meist
kranzfdrmig um diese herum, vor sich geht. Ferner werden
bei der sp&ter eintretenden H&molyse zuerst die rings urn die
einkernigen weifien gelagerten bzw. in ihrer n&chsten Um¬
gebung befindlichen roten Blutkdrperchen in eine formlose
Masse umgewandelt und schliefilich aufgelost, wfihrend die
weiter entfernt liegenden zun&chst noch in ihrer Form er-
halten bleiben und erst sp&ter zerschmelzen.

In mancher Beziehung interessante Resultate erh&lt man
nach Vorbehandlung von weifien M&usen mit mehrfachen intra-
peritonealen Injektionen von G&nseblut. Weifie M&use eignen
sich ffir diese Versuche nach meinen Erfahrungen besser als
z. B. Meerschweinchen. Beim Zusammenbringen von Bauch-
hdhlenexsudat der vorbehandelten Mause mit roten G&nseblut-
korperchen konstatiert man prinzipiell dieselben Vorg&nge, wie
wir sie beim Hammel- Oder Rinderblut beschrieben haben,
aber infolge der verschiedenen anatomischen Beschaffenheit
der G&nseblutkdrper, z. B. des Vorhandenseins eines Kernes,
sind doch manche Differenzen zu beobachten, die hier nicht
ausffihrlich geschildert werden sollen.

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172

S. Bergel,

Da all diese Tatsachen mir von Wichtigkeit zu sein
schienen nicht bloB fiir unsere Kenntnisse von dem Wesen und
dem Ursprung der Agglutination, sondern auch fflr das Ver-
standnis des rStselvollen Phan omens der spezifischen Ein-
stellung des AntikOrpers gegen das Antigen, so wurden nach
mehreren Richtungen hin die Untersuchungen verfolgt und
erweitert, und es wurde die Tatsache konstatiert, daB die ein-
kernigen weiBen Blutkdrperchen nicht blofi die FHhigkeit be-
sitzen, sich nach mehrfacher Vorbehandlung mit der gleichen
roten Blutkorperchenart mit ihrer Lipasenbildung spezifisch
gegen dieses bestimmte Lipoid einzustellen, sondern daB es
auch gelingt, durch gleichzeitige Vorbehandlung von Tieren,
z. B. weiBen M&usen und Meerschweinchen, mit zwei ver-
schiedenen roten Blutkorperchenarten spezifische Ferment-
einstellung gegen diese beiden Arten von Lipoiden zu erzielen.

Wenn man z. B. weiBe Manse mehrfach gleichzeitig mit
Hammelblut und Ganseblut vorbehandelt und einige Tage
etwa nach der 3. Injektion Bauchhohlenexsudat gesondert mit
Hammelblut und Ganseblut zusammenbringt, so sieht man
schon nach ganz kurzer Zeit auch makroskopisch in beiden
Fallen Agglutination eintreten, die gewOhnlich bei den GBnse-
blutkOrperchen noch schneller und deutlicher ausgesprochen
ist, als beim Hammelblut. Mikroskopisch beobachtet man
dieselben Erscheinungen, wie sie in der zitierten Arbeit von
mir beschrieben wurden. Bringt man Bauchhohlenexsudat
einer mehrfach mit Hammel- und Ganseblut vorbehandelten
Maus mit Rinderblut zusammen, so tritt weder Agglutination
noch Hamolyse ein. Interessant ist es aber, daB man bei
mikroskopischer Betrachtung des PrBparates doch hin und
wieder eine geringe Umlagerung von einkernigen weiBen Blut-
korperchen mit einzelnen oder mehreren roten BlutkOrperchen
beobachtet. Das Bemerkenswerte an diesem Befunde scheint
mir der Umstand zu sein, daB er eine Erklarung abgeben
kann fiir die nicht in alien Fallen absolut strenge Spezifizitat
der Agglutination und die Ursache derselben.

Wenn man das Bauchhohlenexsudat einer mit Hammel-
und Rinderblut gleichzeitig mehrfach vorbehandelten Maus
gesondert mit Hammel- und Rinderblut zusammenbringt,
so bekommt man mit beiden Agglutination bzw. manchmal
Hamolyse in der bereits beschriebenen Art; mischt man die

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Exp. Enters, tiber das Wesen u. Ursprung der Hemagglutination. 173

Bauchhbhlenflussigkeit mit GSnseblut, so kommt zwar eine
makroskopisch wahrnehmbare Agglutination fast nie zustande,
aber unter dem Mikroskop sieht man doch, daB um einzelne
weiBe Blutkdrpercben sich manchmal rote G&nseblutkOrperchen
mehr oder weniger gruppieren, also mikroskopisch eine An-
deutung von Agglutination, eine chemotaktische Einwirkung
der Lymphocytenlipase auch auf das Lipoid der roten G&nse-
blutkorperchen statthat. Jedenfalls mbchte ich dem Eintreten
dieser nicht spezifischen Reaktion von seiten der lymphoiden
Zellen gegenuber dem Lipoid auch der G&nseblutkdrperchen
eine gewisse Bedeutung beimessen, da &hnliche Verhaltnisse
wahrscheinlich in der klinischen Medizin beim Zustandekommen
der Gruppenreaktionen eine Rolle spielen.

Bei Mfiusen sind diese Verhaltnisse besser zu studieren
als z. B. bei Meerschweinchen; bei ersteren kommt es nach
entsprechender Vorbehandlung verhaitnismaBig schnell zu einer
mikroskopisch und dann makroskopisch sichtbaren Agglutination
der roten Blutkbrperchen durch das Bauchexsudat. Bei Meer¬
schweinchen liegen die Verhaltnisse, wenn auch prinzipiell
gleich, so doch in mancher Beziehung verschieden bzw. weniger
deutlich; doch darauf kann ich hier nicht nfiher eingehen.
Auch bei diesen Versuchen ist aber der ProzeB der Immuni-
sierung, der spezifischen Antistoffbildung, in den einzelnen
Stadien zu beobachten, und zwar zeigt es sich auch hier, daB
das Lipoid der roten Blutkbrperchen als Antigen wirkt, daB
die einkernigen weiBen BlutkOrperchen, zum Teil wenigstens,
die Antistoffbildner sind, daB diese Antikorperbildung auf
einer Lipasenwirkung beruht, und daB diese Lipasen die
Ffihigkeit besitzen, sich spezifisch gegen bestimmte, auch
mehrere Lipoide einzustellen.

Dieses Vermogen der spezifischen Einstellung des Lympho-
cytenfermentes gegen bestimmte Lipoide ist nichts etwa nur
fiir die lymphoiden Zellen Charakteristisches und Eigentiim-
liches; dieses Phanomen ist nicht vereinzelt, sondern wird auch
anderweitig in analoger Weise beobachtet. So nehmen be¬
stimmte Bakterienarten, je nachdem man den Nahrboden, auf
dem sie wachsen, in gewisser Weise modifiziert, verfinderte
biologische Eigenschaften an; so kann man ferner Hefezellen
durch Fiitterung mit bestimmten Zuckerarten dahin bringen,
daB sie gerade gegen diese Kohlehydrate gerichtete Fermente

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174

S. Bergel,

produzieren, so stelleo sich weiterhin die Drdsenzellen des
Pankreas in der Sekretion ihres Fermentes ganz auf die be-
sondere Art der l&ngere Zeit dargereichten Nahrung ein.

Ich halte die F&higkeit der spezifischen Einstellung des
lipolytischen Lymphocytenfermentes gegen bestimmte Lipoide
fflr ein wichtiges Gesetz, das in der klinischen Medizin eine
Gberaus bedeutsame Rolle spielt

Dieses Eindringen in das Wesen der spezifischen Ein¬
stellung gegen Lipoide von seiten der lipolytischen lympho-
iden Zellen, dieses Verst&ndnis des Zustandekommens der
Spezifizit&t der Antistoffe gegen lipoide Substanzen ist nicht
blofi fQr die H&magglutination und H&molyse, sondern far die
Immunit&tsvorg&nge Qberhaupt von grOBter Bedeutung, speziell
bei denjenigen Erkrankungen, deren Erreger ein lipoidartiger
ist. Wir wissen, daB in diese Kategorie von Krankheiten die
Lues, die Tuberkulose, die Lepra usw. gehdren; wir wissen,
daB bei diesen Krankheiten eine Lymphocytose und vielfach
ein erhdhtes Fettspaltungsvermogen der Blut- bzw. K8rper-
flussigkeit beobachtet wird, eine Erscheinung, die als eine
AbwehrmaBregel, als eine Reaktion des Organismus aufzu-
fassen ist, urn die Krankheitserreger abzubauen, unschfidlich
zu machen. Wir kdnnen uns jetzt erklSren, waruin die lipo¬
lytischen Antistoffe, die sich im Kdrper gegen die lipoiden
Antigene bilden, immer nur speziell gegen diese gerichtet
sind, und wie diese spezihsche Antikdrperbildung zustande
kommt; wir kdnnen nun aber auch andererseits begreifen,
warum gewisse Beziehungen zwischen den Antistoffen der
einen Krankheit und den Antigenen anderer, verwandter, be-
stehen und worauf sie beruhen. Je nach der Spezifizitat der
lipoidhaltigen Antigene hat sich auch die reaktiv erzeugte
Lymphocytose mit ihrem fettspaltenden Fermente spezifisch
eingestellt. Diese Anpassung ist aber nicht absolut genau,
wie wir gesehen haben, und so finden wir denn, daB chemisch
sehr nahe miteinander verwandte Antigene die Veranlassung
geben zur Bildung von Antikorpern, die als spezifische Re-
aktionsprodukte ebenfalls einander sehr fihnlich sind, und so
kommt es, daB innerhalb einer sehr nahen Verwandtschafts-
gruppe die verschiedenen Antikdrper mit den verschiedenen
Antigenen gewisse Gruppenreaktionen geben.

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Exp. Unters. uber Wesen und Ursprung der Hamagglutination. 175

Ich habe in einer frflheren Arbeit (Miinch. med. Woch.,
1912, No. 20) auf Grund experimenteller Untersuchungen die
Ansicht ansgesprochen, dafi die Wassermannsche Reaktion
auf dieser spezifiscben Einstellung des als Antikfirper wirken-
den, in das Serum fibergegangenen lipolytischen Lymphocyten-
fermentes gegen das Lipoid des Lueserregers beruht. Wir
kfinnen uns nun vorstellen, wie es mfiglich ist, daB die Was¬
sermannsche Reaktion unbeschadet ihrer biologischen Spe-
zifizitfit in gewissem Grade auch bei solchen Erkrankungen
vorkommen kann, deren Erreger ein dem Luesantigen sehr
fihnlich gebautes Lipoid enthalten, deren AntikOrper infolge-
dessen auch sehr fthnlich gebaute Lipasen sind. Nichtsdesto-
weniger mufi aber biologisch die Wassermannsche Reaktion
als eine spezifische Antikfirperbildung gegen fiber dem Lues-
antigen gelten.

Zusammenfassung.

Man kann unter dem Mikroskop die Entstehung der
Hfimagglutination bzw. auch der Hfimolyse, der Verklebung
und des Schmelzens der Lipoidhfille der roten Blutkdrperchen
unter dem Einflufi des fettlfisenden Fermentes der Leuko-
cyten direkt beobachten.

Die Spezifizitat der Hamagglutinine entsteht durch all-
mfihliche Einstellung der Lymphocytenlipase gegen das be-
treffende Lipoid der Erythrocyten, und ist von den ersten
Andeutungen bis zur vfilligen Ausbildung direkt unter dem
Mikroskop zu verfolgen.

Die spezifische Fermenteinstellung kann auch gegen zwei
Lipoide durch gleichzeitige Vorbehandlung mit zwei roten
Blutkdrperchenarten erzielt werden; die Spezifizitat ist aber
nicht absolut genau, da chemisch nahestehende Lipoide durch
die gleiche Lipase in .geringem Grade auch beeinfluBt werden.

Diese Vorgfinge spielen klinisch eine wichtige Rolle; die
Wassermannsche Reaktion z. B. ist als spezifische Anti-
kftrperbildung gegenfiber dem Syphilisgift, als spezifische
Lipasenbildung gegenfiber dem Lueslipoid aufzufassen und
kann unbeschadet ihrer Spezifizitat in gewissem Grade auch
bei Erkrankungen vorkommen, deren Erreger dem lipoiden
Luesantigen chemisch sehr nahe stehen, alse auch ahnliche
lipolytische Antistoffe produzieren.

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176

F. Prinzing,

Nachdruck verboten.

[Aus dem st&dtischen Krankenhaua Chariottenburg*Westend.

(Dirigierender Arzt: Prof. Dr. U m b © r.)]

Ueber Meiostagmihversuche bei Typhus,

Von Dr. P. Prinzing.

(Eingeg&ngen bei der Redaktion am 1. Januar 1913.)

Ueber die Meiostagminreaktion wurde im Jahre 1910 von
M. Ascoli in Deutschland publiziert. Seine Versuche er-
streckten sich zuerst auf Typhus abdominalis, Echinococcus,
Ankylostomum duodenale, Tuberkulose, Syphilis. SpSter wandte
Ascoli sich auch dem Gebiet der Geschwiilste, besonders
dem Krebs zu. Die Resultate, welche Ascoli angab, waren
meist positiv und auch von anderer Seite wurden die Ver¬
suche mehrfach mit Erfolg wiederholt (Micheli, Catoretti,
Vigano, Kelling, Stammer u. a.).

Auf Veranlassung von Herrn Oberarzt Dr. W. Schultz
stellte ich eigene Versuche bei Typhuskranken an. Meine
Technik war folgende:

Ich verwendete Traubes Stalagmometer von Gerhardt-Bonn;
dasselbe war geeicht auf 52,0 Tropfen Aq. dest. bei 15° C. Durch meine
Versuche stellte ich fest, daB 24 Teilstriche des Apparates einem Tropfen
des verdiinnten Blutserums bei Zimmcrtemperatur von 18° C entsprachen.
Bei Vorversuchen mit dem Stalagmometer mit Aq. dest. konstatierte ich
eine Abhangigkeit der Tropfenzahl von der augenblicklichen Zimmertempe-
ratur. Bei einer Differenz der Temperatur von 9° C bestand ein Unter-
Bchied der Tropfenzahl von 1,2 Tropfen; bei den Hauplversuchen bestand
eine annahernd gleichmiiBige Zimmertemperatur von 18° C. Das Stalagmo¬
meter wurde vor jedem Versuche mit Wasser, Alkohol und Aether ge-
reinigt und lufttrocken gemacht. Das Schalchen, in das die Fliissigkeit
abtropfte, war in derselben Weise behandelt. Die einzelnen Mischungen
wurden in trocken sterilisierten Reagenzglasern mit sterilen trockenen
Pipetten vorgenommen.

Das Blut wurde in der Ellenbeuge steril entnommen. Nachdem das
Serum sich abgesetzt hatte, wurde es zentrifugiert. Es wurde je 1 ccm
Blutserum mit 9 ccm steriler, 0,85-proz. Kochsalzlosung verdiinnt; davon
wurden zu einem Tropfversuche 9 ccm verwendet.

Im ganzen hatte ich drei von verschiedenen Typhusstammen ge-
wonnene Bacillenextrakte. Extrakt I war mir von auBerhalb zur Ver-

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Ueber Meiostagminversuche bei Typhus.

177

fugung gestellt; es war ein wafiriger Extrakt, der keine Typhusbacillen
enthielt. Extrakt II und III hatte ich an dem bakteriologischen Institute
des Krankenhauses (Prof. Dr. Dietrich) genau nach den Angaben
Ascolis hergestellt. Dieser empfiehlt Neisser-Shigas Verfahren
(Deutsche med. Wochenschr., 1903, p. 61): von zwei verschiedenen Stiimmen
hochvirulenter Typhusbacillen — das Testserum agglutinierte in beiden
Fallen die fraglichen Bakterien in 24 Stunden bis zur Titergrenze (1:8000)
— wurde eine 1-tagige Agarkultur in 20 ccra steriler, 0,85-proz. Kochsalz¬
losung aufgeschwemmt, 2 Tage bei 37° C im Brutofen gehalten, dann
durch Berkefeldfilter filtriert. Damit die Extrakte nicht zu konzentriert
wurden, nahm ich mehr Kochsalzlosung als Neisser-Shiga angeben;
eine geringere Extraktverdiinnung bei einigen Versuchen glich dieses Vor-
gehen wieder axis. Entsprechend Ascolis Vorschrift unterblieb eine Er-
hitzung des Extraktes auf 60° C. Die Extrakte wurden ganz frisch ver-
wendet und fur die nachsten Versuche lichtgeschlitzt und kiihl aufbewahrt;
zu jedem Versuche wurden sie frisch verdiinnt mit steriler 0,85-proz.
Kochsalzlosung auf 1:10, 1:100, 1:1000, 1:30000, 1:100000, 1:1000000
in 1 ccm Fliissigkeit.

Die einzelnen Mischungen bei meinen Versuchen waren demnach

1) 9 ccm auf x j XQ verdiinntes Serum + 1 ccm sterile, 0,85-proz. Koch¬
salzlosung (Kontrollversuch),

2) dgl. + 1 ccm Typhusbacillen extrakt verdiinnt 1:10, 1:100 usw.
bis 1:1000000.

Die Mischungen, verdiinntes Serum + Extrakt, wurden in der Weise
hergestellt, dafi in das Reagenzglas zuerst der verdiinnte Extrakt gebraeht
wurde; dazu wurde unter leichtem Umschiitteln das verdiinnte Serum
gegossen.

Meine Tropftechnik war folgende: Vor Anstellung des Versuchs
liefi ich die Fliissigkeit das Stalagmometer blind passieren; dann lieB ich
jede Fliissigkeit 2—3mal durchtropfen und notierte alle Tropfzahlen l ).
Zuerst wurde verdiinntes Serum + Kochsalzlosung getropft, darnach ver-
diinntes Serum mit zugesetztem Extrakt. Siimtliche Losungen standen
darauf 2 Stunden im Brutschrank bei 37° C und wurden nach allmiihlicher
Abkiihlung auf Zimmertemperatur wieder untersucht; die Abkiihlung der
Fliissigkeit war noch gewiihrleistet durch geniigend lange Dauer des
Versuchs.

Zu den Versuchen wurde Blutserura von Patienten ver-
wendet, die an Typhus abdominalis erkrankt waren;
die Diagnose war in alien Fallen einwandsfrei festgestellt,
teils durch klinische Zeichen, teils durch Blutuntersuchung:

1) Der Einfachheit wegen ist in der Tabelle jeweils nur eine Zahl
angegeben; genauere Angaben finden sich in meiner im November 1912 in
Tiibingen erschienenen Dissertationsarbeit.

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178

F. Prinzing,

Fall !

i

2

3

4

5 1

6

7 u. 9

8

10 1

11

Fickers Diagnostik
f iirTy phus abdom.

1:10000

1:1000

1:1000

i

1:100001:1000

■1:100

1:10001:100000

1:10000

Krankheitstag der
Blutentnahme

74

51

60

33

55

48

9 u. 38

77

21

31

Bei Fall 11 war zwar der Agglutinationsversuch negativ
ausgefallen, jedoch lieB der klinische Verlauf keine andere
Deutung zu, auch wurden im Stuhl Typhusbacillen nach-
gewiesen. Bei einem 12. Versuche mit dem Serum eines ge-
sunden Menschen trat selbstverstandlich keine Agglutination ein.

Bei den erwShnten 12 Fallen stellte ich Versuche mit
der Meiostagminreaktion an. Verwendet wurde Extrakt I bei
Fall 1, 2; Extrakt II bei Fall 3—7, 11, 12; Extrakt III bei
Fall 8, 9, 10. Bei jedem Versuch wurden 9 ccm von dem
auf 1:10 mit physiologischer Kochsalzlosung verdiinnten Serum
verwendet; dazu wurden zugesetzt entweder 1 ccm verdiinnter
Extrakt Oder — als Kontrollversuch — 1 ccm Kochsalzlbsung.
Die Resultate sind in der Tabelle zusammengestellt.

0,85 •/. 1 ccm Tropfenzahl

0,85%

1 ccm

Tropfenzahl

13

NaCI- verdiinnter L? a j

ej

NaCI-

verdiinnter

1 nach

Losung 1 Extrakt sofort 2 Hid.
fe | bei 37°

lasting

Extrakt

sofort.2 Std.
|bei 37"

1

1

ccm

—

5 1 f 1

54,3

6

—

1

1000

54,1

54,3

_

1

10000

53,8

54,2

—

1

100000

54,0

54,3

n

—

1

1000000

53,9

54,2

(

2

1

ccm

_

54,3

54,7

8

—

1

1000

54,4

54,5

—

1

10000

54,4

54,5

—

1

100000

54.2

54,5

—

1

1000000

i 54,3

| 54,5

3

1

ccm

_

51.5

54,8

9 :

—

1

1000

, 54,3

54,6

—

1

10000

! 54,5

54,7

1 A

—

1

100000

54.3

54,7

1U

_

1

1000000

54,3

54,9

11

4

1

ccm

—

54,5

54,8

—

1

: 1000

54,6

54.9

—

1

: 100000

54,6

55,0

5

! i

ccm

_

54,3

54,5

—

4

: 1000

54,1

! 54,6

12;

—

1

: 100 000

1 54,1

1 54,4

1 ccm — 54,3 54,5

1:10 54,3 54,6

— 1:1000 54,2 54,5

1 ccm 1:100 54,6 54,8

1:100000 J 54,5 54,8

1 ccm — 54,5 54,8

— 1:10 54,1 54,3

1:1000 54,0 54,1

11:100 000 54,5 54,8

1:1000 000 54,4 54.8

1 ccm i 1:1000 54,3 55,0

1:100 000 54,5 54,7

1 ccm 1 1:100 54,1 54,8

1:100 000 54,0 54,3

1 ccm — 54,5 54,6

— 1:1000 54,5 54,6

— | 1:10000 , 54,4 54,5

1:100 000 54,5 54,6

1:1000 000 54,6 54,6

1 ccm — 53,9 54,2

| 1:1000 | 54.0 | 54,2

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Ueber Meiostagmin versuche bei Typhus.

179

Die Ergebnisse sind durchweg eindeutig im nega¬
tive n Sinne: sie lassen von den von Ascoli gemachten
Angaben nichts erkennen. Eine Erhdhung der Tropfenzabl
derjenigen Blutsera, welche nach Bescbickung mit antigen-
haltigem Extrakt 2 Stunden bei 37° C im Brutscbrank ge-
balten waren, konnte ich in keinem Falle in nennenswerter
Weise feststellen. Eine geringe Vermehrung der Tropfenzahl
ist allerdings durchweg aus der Tabelle ersichtlich; die grdfite
Dififerenz, die ich gefunden habe, betrfigt aber nur 0,7 Tropfen,
w&hrend Ascoli als positiven Ausscblag 1—3 Tropfen ver-
langt. Hervorzuheben ist, dafi diese Unterschiede aucb bei
den Kontrollproben mit physiologischer KochsalzlQsung auf-
traten, sowie bei dem Serum des gesunden Individuums. Von
einer spezifischen konstanten Reaktion kann nach den von
mir gemachten Beobachtungen nicht die Rede sein. Da trotz
genauer Befolgung der bekannten Vorschriften ein positives
Resultat nicht erzielt wurde, so kann die Ursache nur in
Technizismen liegen, deren Details aus der Beschreibung der
Autoren nicht gentigend bestimmt hervorgeht. Es kann wohl
eine Aussicht ftir die Verbreitung der Untersuchungsmethode
unter Klinikern nur dann bestehen, falls dieses Hindernis
in klarer und jedem Untersucher zuganglicher Form be-
seitigt wird.

Zusammenfassung.

1) Die Versuche bestatigen die von Ascoli gemachten
Angaben nicht.

2) Ursachen hierfflr lassen sich nicht auffinden.

3) Es mOssen also Technizismen sein, die aus der Be¬
schreibung des Autors nicht hervorgehen.

Llteratur').

Ascoli, M., und Izar, G., Munch, med. Wochenschr., 1910, p. 62, 403,
842, 933, 954, 1170, 2129; 1911, p. 1347, 1748, 2118.

Gasharini, Wien. klin. Wochenschr., 1910, p. 1206.

1) Genauere Angaben sind in der oben erwahnten Dissertation zu
linden.

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180 B. Galli-Valerio et M. Bornand,

Agostini, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 23; Med. Klinik, 1910,
p. 1143.

Stabilini, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 32.
d’Este, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 19.

Ascoli, A., Deutsche med. Wochenschr., 1910, p. 1997.

Vigano, Munch, med. Wochenschr., 1910, No. 32.

Micheli und Catoretti, Munch, med. Wochenschr., 1910, p. 1122;

Wien. klin. Wochenschr., 1910, No. 44; 1911, p. 637.

Stammler, Munch, med. Wochenschr., 1911, p. 1643, 1957.

K el ling, Wien. klin. Wochenschr., 1911, No. 3, 44.

Nachdruck verbolcn.

[Institut d’Hygifene et de Parasitologie de TUniversit^ de Lausanne.]

Note snr un 86mm precipitant pour l’albumine d'Agaricus

muscarius Linn.

Par B. Galli-Valerio et M. Bornand.

(Eingegangen bei der Redaktion am 3. Januar 1913.)

Le prix des champignons secs, 6tant tr&s 61ev6, il est
bien naturel qu’on ait essay6 de m61anger aux champignons
les plus recherch6s, des champignons de mauvaise quality.

Or, parini les champignons secs les plus recherch6s, nous
avons Boletus edulis Bull dont le prix & l’6tat sec varie
entre 10 et 15 frs. le kg.

L’attention d’un de nous a 6t6 attiree sur le fait qu’on
melange & Boletus edulis les tiges de la fausse oronge
(Agaricus muscarius Linn.); tiges qui une fois dess6ch6es
gardent le meme aspect blanchatre des bolets dess£ch6s.

La fausse oronge 6tant un des champignons les plus
v6neneux, et la toxicit6 des champignons persistant meme apr&s
dessication, comme Pellegrini l’a d6montr£ *), il est tr&s
important de pouvoir, cas ech£ant, prouver la presence d’Aga-
ricus muscarius dans un lot de Bolets dess6ch6s.

Il est vrai que les cas d’empoisonnement par les cham¬
pignons dessech6s sont extrSmement rares; probablement par
le fait mis en avant par Pellegrini 1 2 ) que dans la grande

1) Rivista d’lgiene e Sanitk pubblica, 1900, p. 121.

2) Rivista d’lgiene e Sanit.\ pubblica, 1900, p. 304.

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S6rum precipitant pour Talbumine d’Agaricus muscarius Linn. 181

majority des cas, les champignons secs sont utilises en petite
quantity et presque exclusivement pour relever le gotit des
aliments.

Nonobstant cela, ces cas peuvent se verifier et il est
done, important au point de vue du contrble des denies ali-
mentaires, de disposer de moyens pour d6celer la fraude.

Un diagnostic par l’examen des caract&res botaniques des
champignons secs, ne peut pas dans le cas particular donner
un r£sultat, car on a bien soin de ne pas utiliser pour le
melange le chapeau de la fausse oronge, dont des restes de
lamelles pourraient faire soup^onner la fraude.

Pellegrini 1 2 ) a propose de rechercher la presence de champignons
v6n6neux au milieu de champignons secs, par rinoculation de l’extrait
aqueux des champignons sous la peau des cobayes ou des lapins: inocu¬
lation qui determine la mort S'il s’agit de champignons v6n6neux. Dans
ce but, il propose de prendre 5 gr. de champignons secs, de les faire
mac^rer quelques heures dans 50 c. c. d’eau et d’inoculer sous la peau des
cobayes ou des lapins 10 c. c. de la solution ainsi obtenue. La mort arrive
dans une p^riode de temps qui ne d^passe pas les 24 heures, en utilisant l’ex-
trait dAmanita phalloides. Il a pu par ce proc6d6, d6celer dans des
champignons secs, la presence de 1 °/ 0 en poids d’A. phalloides
m£lang6e avec B. 6dulis.

Nous nous sommes demand6s, s’il ne serait pas possible
de faire le diagnostic par le proc6d6 des pr6cipitines.

Les pr6cipitines pour l’albumine des champignons, si
nous faisons exception de celles des Blastomycfctes et
des Schizomycfctes, n’ont pas form6 l’objet de beaucoup
de travaux.

Dans toute la literature nous n’avons pu en trouver que deux. Le
premier est celui de Magnus et Friedenthal 1 ). Ces deux auteurs se
sont proposes de verifier si Saccharomyces cerevisiae et Tuber
brumale (Ascomycfetes) sont rapprochGs entre eux et dans quel rapport
ils se trouvent avec un Basidiomy cfcte (Agaricus campestris).
Dans ce but, ils ont pr£par6 3 lapins avec Textrait de ces trois champignons,
et en employant 1 c. c. d’antisSrum pour 0.02 c. c. d’extrait, ils ont con-
stat£, les faits suivants:

L’antis^rum pour S. cerevisiae determine un trouble immMiat et
fort dans l’extrait de S. cerevisiae et de T. brumale, la formation de
tres petits flocons dans Pextrait d’A. campestris.

1) Travaux cit£s.

2) Benchte der Deutsch. Bot. Ges., 1906, p. 601.

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182

B. Galli-Valerio et M. Bornand,

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L'antisSrum pour T. brum ale d6termine un trouble imm^diat et fort
dans l’extrait de T. brumale, tfger dans celui de S. cerevisiae et laisse
presque complktement clair l’extrait d’A. campestris.

L’antis^rum pour A. campestris determine un trouble imm&Iiatet
fort dans l’extrait d’A. campestris tandis qu’il laisse presque complfcte-
ment clair les extraits de T. brumale et de S. cerevisiae.

Magnus et Friedenthal en concluent done que T. brumale est
plus rapproch£ de S. cerevisiae que d’A. campestris et qu’il entre
done r4ellement dans les Ascomycfctes.

Le second travail est celui de Cat as t ini 1 ), travail dont malheureuse-
ment nous n’avons pas pu avoir l’origmal et que nous citons d’aprfes une
analyse du Centralblatt fur Bakteriologie. Cet exp^rimentateur a not6 que
le s^rum d’un lapin immunise avec l’extrait d’un champignon donn£ est
fortement precipitant pour le champignon correspondant tandis qu’il l’est
trfo peu pour les autres. II ajoute qu’il est assez difficile d’obtenir ce
serum precipitant

Pour nos recherches, nous nous sommes proposes d’im-
muniser un lapin avec l’albumine d’Agaricus muscarius.
Nous nous sommes servis de fausses oronges dessfcchSes dont
la quantity d’albumine, dos6e d’aprfcs la m6thode de Kj eldahl,
6tait de 28 %•

Pour pouvoir pratiquer l’inoculation du lapin, il 6tait
n6cessaire de faire disparaltre la toxicit6 des solutions d’Aga-
r i c u 8 muscarius et dans ce but, nous avons proc£d6
comme suit:

5—10 gr. d’A. muscarius desstSch^s £taient finement pulv<$ris& et
melange* k 75 ou 150 c. c. d’eau distillee. Aprks 6 k 10 h. de maceration
on precipitait avec du sulfate d'ammonium pulverulent et en exeks, on
filtrait et on pla^ait l’albumine sur un dialyseur pendant 12 h. en renouvel-
lant souvent l’eau. L’albumine ainsi dkbarasske par dialyse de l’excks de
sulfate d’ammonium et de la Bubstance toxique, ktait delayke dans un peu
d’eau distillke (4—5 c. c.) et inoculke sous la peau de la cuisse d’un lapin
alternativement k droite et k gauche.

Cet animal, du poids de 3100 gr., a re$u successivement
les doses suivantes d’albumine: 2 XI. 12. 0,65 gr.; 9 XI. 1 gr.;
13 XI. 0,78 gr.; 16 XI. 0,52 gr.; 20 XI. 0,65 gr.; 30 XI.
0,65 gr., done au total 4,25 gr. d’albumine. Le lapin n’a pr6sent6
qu’une diminution de poids de 100 gr. et un peu d’engorgement
aux points inocul^s. Des prises de sang k l’oreille de ce lapin
ont 6t6 faites: le 27 XI. 12; le 5 XII. et le 16 XII.

1) Centralbl. f. Bakt., I. Abt.. Ref., Bd. 40, 1907, p. 83.

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S4rum precipitant pour 1'albumine d’Agaricus muscarius Linn. J83

Le s6rum obtenu par ces prises de sang a 6t6 ajout6 k
des extraits d’albumine des champignons suivants, que nous
disposons dans l’ordre botanique pour que Ton puisse plus
facilement constater le rapprochement de ces diffgrents cham¬
pignons entre eux. Pour cette disposition, nous avons utilise
la classification donn£e par L e u b a 1 ).

Fungi.

HymenomycMes.

Basidiomycfetes.

Ordre: Agaricin£s.

Tribu: Amanite.

Leucospores: Agaricus muscarius Linn.

Tribu: Gymnope.

Thcholoma: Agaricus iridum L.

Tribu: Pratelle.

Agaricus campestris Linn.

Tribu: Cortinaire.

Dermocybe: Agaricus nudum L.

Tribu: Chanterelle.

Cantharellus cibarius Fr.

Ordre: Polypores.

Tribu: Bolets.

Ochrospores: Boletus eduliB Bull.

Ordre: Hydnes.

Mesopus: Hydnum repandum Linn.

Thecospores.

Ordre: Morchelles.

Morchella esculents Pers.

Gasteromycetes.

Ordre: Tuberaces.

Tuber cibarium BulL

Tous ces champignons ont 6t6 s6ch6s et pulv6ris6s. Un
gramme de la poudre 6tait alors traits par 50 c. c. de solution
physiologique pendant 10 heures et on en faisait des dilutions
correspondant approximativement k 1:500; 1:1000; 1:5000 et
1:10 000; ces solutions 6taient neutralises avec une solution
de carbonate de soude & 0,1 °/ 0 *

Comme solutions de contrSle, on a utilise la solution
physiologique, une solution d’albumine de cheval et une d’al-
bumine de graines de tournesol (Helianthus annuus).

1) Les champignons comestibles et les espfeces v<m6neuses. Neu-
chatel 1890.

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184

B. Galli-Valerio et M. Bornand,

Toutes lee experiences ont ete faitee dans lee petites eprouvettes
coniques, que nous avons utilise dans nos recherches precedentes sur les
precipitines; eprouvettes dans leequelles on introduisait */io de c. c. dee
differentes solutions, et on y ajoutait des doses variables de 1 goutte k
Vjo et Vio de c. c. du serum precipitant ou d’un serum de lapin normal.
Les recherches ont ete faites k la temperature de la chambre (18 °—20°)
et dans certains cas comparativement k 37®. Sauf Papparition plus rapide
de la reaction k 37® qu’k 18°—20®, nous n’avons pas constate de differences
dans les resultats obtenus.

Dans une experience, nous avons utilise la methode
capillaire de Carnwath 1 ), qui nous a donnd des resultats
identiques.

Les rdsultats de toutes ces experiences pratiquees suc-
cessivement le 24 XI. 12; 3 XII.; 6 XII.; 7 XII.; 10 XII.;
17 XII. peuvent etre ainsi resumes:

L’antiserum pour Agaricusmuscarius que nous avons
obtenu:

1° fitait encore actif dans des solutions d’albumine de ce
champignon k 1:5000; faiblement actif k 1:10000.

2° II ne determinait aucun trouble ni dans la solution
physiologique, ni dans les solutions d’albumine de tournesol
(1:500; 1:1000; 1:5000; 1:10000) ni dans celles d’albumine
de cheval (1:500; 1:1000).

3° II determinait un trouble rapide suivi de formation
de flocons et de ddp&t, dans des solutions d’albumine d’Agari-
cus muscarius & 1:500 et 1:1000 ajoute 4 la dose
d’une goutte, V 20 de c. c. et Vio de c. c., 4 2 / 10 de c. c. de la
solution. Rdsultats identiques en l’ajoutant k l’extrait de
melanges de Boletus edulis et A. muscarius dans la
proportion de 1:1, 3:1, 7 :1.

4° II ne determinait aucun trouble dans l’extrait d’A.
muscarius chauffe l / a heure & l’etuve de Koch.

5° II ne donnait aucun trouble dans les solutions
d’A. iridum, A. campestris, A. nudum, C. cibarius,
Boletus edulis, H. repandum,Morchellaesculenta,
Tuber cibarium. Ce n’est qu’apriss 24—48 heures qu’on

1) P. Uhlenhuth und O. Weidanz, Praktische Anleitung zur
AuBfiihrung des biologischen Eiweifidifferenzierungsverfahrens. Jena 1909,
p. 53.

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Serum precipitant pour l’alburaine d’Agaricus muscarius Linn. 185

apercevait un 16ger trouble dans les solutions des esp&ces du
genre Agaricus.

6° 11 ne donnait aucun trouble dans un extrait de potage
Knorr aux champignons.

Des essais faits avec les m§mes solutions, mais en em-
ployant un s6rum de lapin normal, n’ont donn6 avec toutes
qu’un r6sultat absolument n6gatif.

Les r^sultats que nous avons obtenu, d6montrent done que
par l’inoculation d’albumine d’Agaricus muscarius sous
la peau du lapin, il est possible d’obtenir un s6rum pr6cipitant
sp4cifique pour l’albumine de ce champignon; s6rum precipi¬
tant, qui permet de deceler la presence d’Agaricus mus¬
carius dans des melanges d’une partie sur sept parties de
Boletus edulis. Ce s6rum a une valeur sp6cifique trfcs
nette, car il ne donne pas de trouble ni de pr£cipit6 dans les
albumines d’autres champignons sauf un 16ger trouble, n’ayant
pas d’importance au point de vue du diagnostic, apparaissant
aprfcs 24—48 heures dans les solutions d’albumine de cham¬
pignons du genre Agaricus. Les albumines des champignons
sup6rieurs, k difference de celles des phan^rogames, se laissent
plus facilement difterencier entre elles et d^montrent une sepa¬
ration plus grande entre les diff^rentes esp&ces de champi¬
gnons de ce qu’on pourrait penser au premier abord.

Cette sp£cificite se rapproche beaucoup de celle qui a 6t6
constat^e par de nombreux expSrimentateurs pour les albu¬
mines des Schizomycfctes. Cela s’accorde du reste avec
Ie fait que dans les cryptogames, les classes qu’on a cr££es au
point de vue botanique, sont bien plus nombreuses des classes
des phan^rogames, et nous savons que Haeckelavait meme
propose de s£parer les champignons du r6gne v6g6tal pour les
placer dans celui des protistes.

Zusammenfassung.

Die Immunisierung von Kauinchen mit EiweiB von Aga¬
ricus muscarius erlaubt, spezifische Prtizipitine fur diesen
Pilz zu praparieren.

1) Histoire de la creation. Paris, p. 343.

Zeitschr. f. Immunitatsforschung. Orig. Bd. XVII.

13

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186

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

Nachdruck verboten.

[Laboratoire Biologique de St-Petersbourg.]

Sur Torlglne des spermotoxines.

Par S. Metalnikov et J. Strelnikov.

(Eingegangen bei der Kedaktion am 3. Januar 1913.)

Les spermotoxines, de meme que toutes les autres cyto-
toxines ayant une structure complexe, c’est k dire 6tant com¬
petes d’alexines et d’ambocepteurs, le problfcme de l’origine
des spermotoxines est le problbme de l’origine de l’ambo-
cepteur sp^cifique et de alexine.

Dans quels organes et quels tissus se torment ces deux
principes qui jouent un role si important dans le ph6nombne
de l’immunitS?

Ce problbme est d’un grand int6r£t tant au point
de vue th^orique qu’au point de vue pratique. Ce n’est
qu’aprfcs avoir r^solu ce problbme et aprfcs avoir 6ludi6 les
phenombnes ayant lieu au cours de l’immunisation, que nous
pourrons utiliser dans des buts th^rapeutiques toutes les pro-
pri6t6s gu6rissantes que l’organisme poss^de. C’est pourquoi
beaucoup de chercheurs ont essay6 depuis longtemps d’aborder
la solution de ce problbme.

D’un c6t6 il existe une s6rie de travaux qui ddmontrent
que les anticorps se torment dans des organes d6termin6s,
principalement dans la rate, dans la moelle osseuse et dans
les organes heinatopoi6tiques.

Pfeiffer et Marx (1), qui out op6re sur des vibrions du
cholera, ont montre que chez dee lapins immunises contre le cholera les
auticorp6 se trouvent dans la moelle osseuse, dans la rate et dans les
glandes lymphatiques en plus grande quantity que dans le serum.
Ces observations ont confirmees par Wassermann, Castel-
lani, Jatta et par beaucoup d’autres chercheurs. D’un autre cote
il y a des travaux qui infirment la th£se selon laquelle les anticorps ne
se forment pas dans des organes determines et qui demontrent que la
production d’anticorps a lieu dans les endroits meme oh l’on injecte
l’antigene.

Il faut d’abord citer le travail deDeutsch, qui a montre que chez
les aniinaux qui ont subi l’ablation de la rate la production d’anticorps

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Sur l’origine des spermotoxines.

187

n’est pas gen6e, c’est pourquoi cet auteur conclut: „I1 n’y a pas d’organe
formateur, il n’y a que des endroits de formation" (2).

Romer (3) a fait une experience int^ressante qui confirme cette
conception. II a immunise des lapins en leur injectant dans Tceil de
Tabrine et il a constate que la conjonctive de l’ceil qui a re§u l’injection
protege des souris contre une dose mortelle d’abrine, tandis que l’autre
ceil ne possfcde pas cette propriete.

Des experiences analogues out ete faites pas Dungern (4). Cet
auteur injecta dans la chambre anterieure de Poeil droit du sang du
crabe Maja squinada. Huit jours apr&s, le liquide de la chambre
anterieure de Pceil droit donna un precipite avec le serum du crabe,
tandis que le liquide de Pceil gauche et le serum du lapin ne formaient
pas encore de pr6cipite. Le lendemain les prScipitines ont apparu
dans Pceil gauche et dans le serum.

Sous ce rapport il est interessant de citer les experiences de
Wassermann et Citron (5). Ils ont immunise trois lapins avec des
bacilles typhiques vivants. Un lapin a ete injecte par voie intraveineuse,
le deuxifeme par voie intrapleurale, le troisteme par voie intra-
peritoneale. Neuf jours aprfes on a examine les serums et les exsudats
(peritoneal et pleural) au point de vue de leurs propreietfe bacteri¬
cides et on a constate que le serum du lapin injecte par voie
intraveineuse presentait les proprietes bactericides les plus prononc^es.
L’exsudat pleural presenta le pouvoir bactericide le plus eieve chez le
lapin auquel on avait injecte les bacilles dans la plfcvre; on a observe
Pexsudat peritoneal le plus bactericide chez le lapin immunise par voie
intraperitoneale. Tous ces faits semblent plaider en faveur de la thfcse
selon laquelle lee anticorps se forment Ik oh des bacteries ou d’autres
antigfcnes se trouvent en contact avec des cellules de Torganisme.

Le sang, les exsudats de diverses cavit4s du corps et les differents
organes nontenant des phagocytes en grande quantite, on doit ee
demander si ce ne sont pas les phagocytes qui jouent le role principal
dans la formation des anticorps. Cette supposition parait d’autant plus
probable que les bacteries et les autres 6l6ments cellulaires sont englobes
par les phagocytes et digerSs par eux. Si Ton se place k ce point
de vue, les anticorps ne sont pas autre chose que des ferments de la
digestion intracellulaire des phagocytes. Tel est le point de vue de
Metschnikoff (6) et de ses 61&ves. Beaucoup de chercheurs ont
signal^ que les propri6t6s bactericides du s6rum dependent des leuco¬
cytes. Gengou a montr6 qu’un volume ddtermind de microphages
contient plus de substances bactericides que le m£me volume de serum.
Les macrophages, au contraire, ne contiennent pas de substances sem-
blables. Gengou a etabli aussi que le plasma sanguin (c’est a dire
la partie liquide du sang obtenue dans des conditions qui permettent de
s^parer les leucocytes sans les ddtruire) ne contient pas de substances
bactericides. Ce fait a 6t6 confirm^ par Levaditi, qui s’est servi
d’une m&hode qui se distingue de celle de Gengou. Il faut enfin
mentionner les travaux de Tarassevitch (7), qui a travail^ sur les

13*

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188

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

hemolysines au laboratoire de Metschnikoff. Cet auteur dit notam-
ment: „Les extraits de microphages sont bactericides, mais ne sont pas
hemolytiques, meme l’addition d’un hemofixateur sptcifique n’est pas
capable de les activer . . . c’est le contraire quia lieu pour les extraits
de macrophages.

Les proprietes respeetives des organes et des exsudats macro-
phagiques et celles des organes microphagiques doivent etre attributes k
deux cytases differentcs: la macrocytase active vis-il-vis des cellules
animales daus le premier cas et la microcytose active vis-k-vis des
microbes dans le second; ces deux cytases ne passent dans le humeurs
que par suite de la destruction des leucocytes correspondants.“

Les rtsultats de ces experiences n’ont pas ett pleinement con-
firmts par d’autres auteurs. C’est ainsi qu’on a constatt que les cytases
que Ton extrait de leucocytes ne sont pas identiques avec celles que
Ton trouve dans le strum. Heim (8) arrive k la conclusion que dans
rimmunisation contre les pneumocoques les muscles sont particulierement
saturts d’anticorps.

Bezzola (9) dtmontre, au contraire, que dans Pimmunisation
contre le cholera le strum contient 16 fois plus de principes bacteri¬
cides que Pextrait des muscles.

On a essayt de rtsoudre ce probleme en Pabordant par d’autres.
voies. Friedberger et Girgolaff (10) out immunise des lapins
contre le vibrion de Metschnikoff. Apres un certain temps, lorsque
le strum de Panimal agglutinait k une dilution de x / 64 o plus, ils
saignaient Panimal a blanc. On lavait les tissus avec une solution
physiologique et on transplantait de petits morceaux de la rate et
des reins dans la cavite pcritoneale d’autres lapins. Plusieurs jours
aprts Poperation on examinait le serum au point de vue de son
pouvoir agglutinant.

II s’est vtrifit que les animaux opCres posstdent un pouvoir agglu¬
tinant vis-a-vis du vibrion de Metschnikoff, bien qu’ils n’aient
pas ttt infectts par ce microbe. Les morceaux d’organes d’un animal
immunise continuent ainsi de produire des anticorps meme dans le cas
oil on les transporte dans un autre organisrne. La greffe de morceaux
des reins a donnt dans ce cas les mimes rtsultats que le greffe de
morceaux dc la rate. II rtsulte ainsi de ces experiences que les reins
de meme que la rate prennent part k la production d’anticorps.

En d6pit de la quantity 6norme de travaux qu’il a sus-
cite, le probleme de savoir quel est l’origine des anticorps et
oil ils se trouvent dans l’organisme reste ouvert. C’est pour-
quoi il nous a sembl6 int6ressant d’entreprendre une s6rie
d’experiences dans cette direction, d’autant plus que les spermo-
toxines pr^sentent certains avantages en comparaison avec les
hemolysines.

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Sur l’origine des spermotoxines.

189

II m’a sembl6 d’abord n6cessaire de s6parer le probl&me
de savoir oil se trouvent les anticorps du problfcme de leur
origine. En effet, le fait que les alexines se trouvent toujours
dans le sang ne prouve pas encore qu’ils se forment aussi dans
le sang; de m6me la teneur en anticorps d’un organe ne prouve
encore rien, un organe peut produire des anticorps sans les
accumuler, l’accumulation d’anticorps peut avoir lieu dans le
s£rum ou dans d’autres tissus ou organes.

Nous avons op6re dans nos experiences non seulement
sur des animaux k autospermotoxines, mais aussi sur des
aniinaux a h6t6rospermotoxines. Vu leurs h6t6rospermotoxines
plus fortes, ceux-ci se sont months plus appropri6s & nos
experiences.

Pour obtenir des h6t§rospermotoxines nous avons injects
aux lapins les spermatozoides de cobaye. Deux k trois injections
suffisaient pour provoquer de fortes spermotoxines. Inex¬
perience presentait cette complication que le serum normal
de lapin est toxique pour les spermatozoides de cobaye. Mais
il suffit de chaulfer ce serum & 56° pour le priver de ces
proprietes toxiques, qu’il ne r§cup&re plus (ou ne recup&re qu’en
tr&s faible proportion) si on ajoute de l’alexine (serum normal
de cobaye). Le serum chauffe d’un lapin immunise melange
d’alexine agit immediatement sur les spermatozoides, ce qui
prouve que ce serum contient un ambocepteur specifique. Les
experiences ayant en vue de determiner la teneur en ambo-
.cepteurs ont ete ainsi faites d’apriss le schema suivant: Serum
chauffe 4 56° de lapin -j- serum normal de cobaye + sperme
de cobaye.

Pour determiner la teneur cn ambocepteurs des tissus et des
organes d’un animal immunise on prenait de petits morceaux (d’un
poids del ermine) de ces organes et. on les broyait dans un mortier avec
un peu de sable ou de verre fin; on ajoutait ensuite une petite quantity
de solution physiologique (3 gouttes de solution plivsiologique pour
1 centigr.). On gardait le melange k la glaeiere jusqu’au lendemain, on
le centrifugeait et on examinait l’extrait transparent en vue de de¬
terminer la teneur en ambceepteurs d’aprks le schema indique.

Nous nous sommes servis pour la preparation des extraits de leuco¬
cytes (polynucl&iires ainsi que mononucleaires) de methodes de A.
Petterson et de C. Kling. On ajoute au bouillon un melange
d’aleurone, de farine de pomme de terre et d’une petite quantite de
farine de forment, on fait bouillir jusqu’k ce que le melange ait form6

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190

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

une masse uniforme, pas trop 6paisse. On sterilise 15 minutes k l’auto-
clave. La masse est alors prete pour Pinjection. On injecte aux lapins
10 c.c. dans le p^ritoine ou dans la plfcvre. Les cobayes refoivent
des doses un peu plus petites. On r6pkte Pinjection 12—24 heures
plus tard. 12 heures apr£s la seconde injection Panimal est sacrifie, on
ouvre le p^ritoine et on le lave avec une solution physiologique k
oxalate de sodium (1—4 pour 1000). On recueille Pexsudat en se
servant d’une pipette sterile, on le centrifuge et on le lave plusieurs
fois dans la solution physiologique. Les leucocytes lav6s sont broy^s
dans un mortier, places pour 1 / 2 heure k l’etuve, ensuite gardes k froid.
C’est ainsi que Ton prepare Pexsudat des polynucleaires.

Pour preparer Pexsudat mononucl^aire on injecte dans le p6ri-
toine une emulsion de blanc d’ceuf. On fait Pemulsion en diluant le
blanc d’ceuf dans 4—10 volumes de solution physiologique et en le
chauffant k petit feu jusqu’k ce que ce blanc d’ceuf ait forme une*
Emulsion fine. On sterilise Pemulsion durant 15 minutes k 100 °.
On injecte dans le p£ritoine 10—20 c.c., on r6p6te Pinjection 24 heures
plus tard. Le 4ieme jour aprfcs la premiere injection on sacrifie l’ani-
mal et on recueille Pexsudat en se servant de la technique indiqu^e plus
haut. L’exsudat que Pon obtient dans ce cas contient principalement
des mononucieaires.

Avant de commencer les experiences sur les animaux
immunises, il fallait voir comment agissent les extraits d’or-
ganes d’un lapin normal sur les spermatozoides de cobaye.

Experience No. 1. Action des extraits de lapin normal
sur les spermatozoides de cobaye.

Extrait de la moelle osseuse

-f sperme de cobaye

plus de 20 heures

„ de la rate

+

yy

yy

yy

yy

» 20 „

„ du foie

+

yy

yy

yy

yy

20 „

„ des reins

+

yy

yy

yt

yy

„ 20 „

„ du coeur

+

yy

yy

yy

yy

» 20 „

„ des poumons

+

yy

yy

yy

yy

„ 20 „

„ du pancreas

+

yi

yy

yy

yy

11 minut.

„ du mesenterc

+

yt

yy

yy

,, 20 heures

„ des polynucleaires

+

yy

yy

yy

yy

„ 20 „

Essai des memes ex traits

+

a 1 e x i n e

c. k

d. s^rum normal

de cobaye.

Extrait de la moelle osseuse + al6xine + sperme de cobaye plus de 2 heures

yy

de la rate

+

>>

+

yy

yy

yy

yy

yy ^ „

yy

du foie

+

yy

+

yy

y*

yy

O

yy “ yy

des reins

+

yy

+

yy

yy

yy

yy

y: 2 „

yy

du cceur

+

yy

+

yt

yy

ty

yy

yy 2 „

yy

des poumons

+

yy

+

yy

yy

yy

yy

yy 2 „

„ 1 h. 30 min.

yy

du pancreas

+

yy

+

yy

yy

yy

•y

yy

du mesentere

+

yy

+

yy

yy

yy

yy

yy 1 yy 30 »

yy

des polynucleaires

+

yy

+

yy

yy

yy

yy

„ 1 „ 30 „

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Sur l’origine des spermotoxines.

191

Experience No. 2.

On a injecte au lapin No. 22 k trois reprises des spermatozoides
de cobaye. Deux semaines aprfcB la premiere injection on a pris k
Foreille quelques gouttes de sang et on en a prepare un serum qui a
ete chauffe durant une demi heure k 56°, on a examine ensuite le
s6rum au point de vue de son action sur lea spermatozoides de cobaye
d’aprfes le schema suivant: serum de lapin chauffe k 56° -f- aiexine
sperme de cobaye.

Ce melange tue le sperme en 5 minutes. Le 9 et 10 mai le
lapin k re$u des injections de blanc d’oeuf. Le 12 mai il a 6t6 sacrifie
et Fexsudat que Fon a obtenu etait presque exclusivement mono-
nucleaire. Les extraits des leucocytes et d’autres organes ont ete pre¬
pares d’aprfes la methode de Petterson.

On a examine d’abord Faction des extraits, puis Faction des memes
extraits -f- aiexine.

Mononucieaires + sperme de cobaye plus de 5 heures
Rate +

Moelle osseuse +

Foie +

Rein +

Mesentfere +

Muscles +

Cerveau -f-

Les m£mes extraits -f serum normal de cobaye.

Mononucieaires + aiexine + sperme de cobaye plus de 4 heures

Rate

yt

+

19

yy

yy

yy

yy

1 h. 40 min.

Moelle osseuse +

u

+

yy

yy

yy

yy

yy

40 „

Foie

+

•>

+

yy

yy

yy

yy

yy

2 h

Rein

+

+

yy

yy

yy

yy

1 „

Mesentfcre

+

+

yy

yy

yy

yt

yy

2 „

Muscles

+

yy

+

yt

yy

yy

yy

yy

45 min.

Cerveau

+

99

+

yy

yy

ty

yy

yy

2 h. 45 „

Serum

+

V

+

yy

yy

yy

yy

yy

12 „

Experience No. 3. Action des extraits de mononucieaires
sur les spermatozoides de cobaye.

On a injecte au lapin No. 25 le sperme de cobaye. Aprfes Fappari-
tion des spermotoxines on a injecte au meme lapin k deux reprises,
dans le peritoine et dans la plfevre, une emulsion de blanc d’oeuf. Le
lapin a ete sacrifie, on Fa saigne k blanc et on a recueilli les exsudats.
On constata dans les exsudats environ 90 °/o de mononucieaires.

Action des extraits:

Moelle osseuse

+

sperme

plus de 5 heures

Rate

+

yy

yy

yy b ,,

Foie

+

yy

99

99 5 ,,

Rein

+

yy

yy

,, 5 „

Mesentfere

+

yy

yy

„ 8 min.

Mononucieaires

+

>>

ft

„ 5 heures

»9

yy

yy

99

99

99

99

yy

ty

99

yt

yy

yy

yy

9'

99

99

yy

99

99

99

99

99

99

99

99

>9

99

99

99

99

99

99

99

5 „

5 „

5 „

5 „

8 minut.
5 heures
5 „

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192

S. Metalnikov et J. Strelnikov

Les memes extraits + alexine:

Moelle osseuse

+

alexine

+

sperme

40 min.

Rate

+

+

n

20 „

Foie

+

+

y*

20 „

Rein

+

yy

+

yy

1 heure

Mononucleaires

+

yy

+

yy

plus de 4 hrs.

Experience No. 4.

On a injecte au lapin No. 23 des spermatozoides de cobaye, apres
Tapparition des spermotoxines on lui a fait une injection d’aleurone, il
a et<5 sacrifie ensuite et on a prepare des extraits de scs organes.
Extraits sans alexines:

Moelle osseuse -f sperme

plus de

5 heures

Comr

4~ yy

y*

5

Rein

+

yy •?

5

M

Rate

+ yy

yy yy

5

>>

Pou moil

+ yy

yy yy

5

yy

Foie

+ yy

yy yy

5

yy

Polynucleaires + „

nes extraits + alexine:

•* yy

5

yy

Moelle osseuse

4 - alexine

1

~r

sperme

yy

13

min.

Cfcur

+

+

12

>»

Rein

+ yy

+

yy

15

yy

Rate

+ n

+

yy

IS

yy

Pou m on

+ yy

+

yy

13

yy

Foie

+ yy

+

yy

12

V

Polynucleaires

+ yy

+

yy

2 heures

Nous avons fait des experiences analogues sur des ani-
maux & autospermotoxines, c’est k dire sur des cobayes qui
eiaboraient des toxines pour leurs propres spermatozoides.

Dans 2 cas nous avons obtenu des r^sultats identiques
5. ceux des experiences pr6cedentes sur des lapins, dans deux
autres cas les rtisultats furent moins nets, les toxines ont 6te
dans ces cas plus faibles et moins stables.

Vu cette constatation, nous avons oper£ dans nos experi¬
ences concernant ce problfcme principalement sur des lapins
que Ton iminunisait contre les spermatozoides de cobaye.

Nous donnons ci-dessous une description d6taill6e de
l’exp6rience sur un cobaye k autosperomtoxines.

Experience No. 5. Action des extraits d’un cobaye a
autospermotoxines sur les spermatozoides de cobaye.

On a injects au cobaye No. 6 iJ, trois reprises des spermatozoides
de cobaye. Apres Papparition des spermotoxines le cobaye a 6t6 sacrifie,
on Pa saign<$ a blanc et on a lav£ les organes avee la solution physio-
logique. Ou a prf'pard des extraits d'apres la methode de Petterson.

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Sur l’origine des spermotoxines.

193

Le lendemain on a examine tous les extraits au point de vue
de leur action sur les spermatozoides de cobaye. Les spermatozoides
sont rest& vivants tr&s longtemps dans ces extraits.

Extrait du poumon

50 heures

„ du foie

27 „

„ des muscles

138

„ du mesentfere

i

„ de Tut^rus

50 „

„ de la moelle osseuse

45 .,

de la rate

4 „

„ du camr

60 „

„ du cerveau

122 „

Les memes extraits m61ang6s d’alexine (s6rum normal de
cobaye) tuent les spermatozoides:

Extrait du poumon

+ alexine + sperme

23 min.

„ du foie

+

4" yy

25 „

„ des muscles

+

yy

+ yy

1 hr. 45 min.

„ du mfeentfere

+

yy

+ yy

50 min.

„ de la niatrice

+

yy

+ yy

30 „

„ de la moelle osseuse +

yy

4" yy

30 „

„ de la rate

+

yy

+ yy

40 „

„ du coeur

+

yy

+ yy

35 „ ,

„ du cerveau

+

V

+ yy

10 hrs.

Cette experience pr^sente un int^rSt & plusieurs points
de vue. On voit tout d’abord que les spermatozoides gardent
leur vitality d’une fa^on bien prononc£e dans des extraits de
plusieurs organes. Tandis que les spermatozoides ne restent
vivants dans une solution physiologique ou dans le liquide de
Locke que durant 24 heures ou un peu plus, ils vivaient
dans les extraits du cerveau et des muscles environ 5 jours.
II 6tait aussi int6ressant de constater que les ainbocepteurs
pdnetrent dans tous les organes, le cerveau except^; dans le
.. cerveau les ambocepteurs ne se trouvent qu’en petite quantity.

De toutes les experiences cities il se d6gage la con¬
clusion que les extraits de divers organes ne contiennent pas
de spermotoxines completes, de spermotoxines qui auraient
pu exercer une action spermatoicide analogue a Taction des
s6rums des m§mes animaux.

Mais d&s qu’on ajoute k ces extraits du serum normal
de cobaye, c’est k dire de Talexine, ils deviennent aussitot
toxique pour les spermatozoides de cobaye. II s’ensuit que
la substance sp&nfique de la spermotoxine, c’est k dire l’ambo-
cepteur, est transport^, k mesure qu’elle se forme, dans toutes

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194

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

les parties de l’organisme, qu’elle pen^tre dans toutes les
cavit6s, dans tous les organes, le cerveau except^.

Les extrait d’organes ne contiennent pas, & ce qu’il parait,
la seconde substance de la toxine, l’alexine.

L’autre particularity que l’on constate, c’est l’absence
d’ambocepteurs dans les extraits de leucocytes (polynucieaires
ainsi que mononucieaires). Cette constatation parait d’autaut
plus Strange que ces cellules auraient dft, semble-t-il, jouer le
r61e principal dans la preparation des divers anticorps.

Mais avant de conclure d’une faqon definitive sur le role
des leucocytes dans la preparation des ambocepteurs, nous
. avons voulu verifier nos resultats en nous servant de la
methode de Stenstrom qui a travailld au laboratoire de
A. Pettersson.

Stenstrom, comme on le sait, injectait sous la peau ou dans
le p^ritoine des bactories mdlangdes de leucocytes (polynucieaires et
mononucieaires). Aux animaux de controle on injectait la merae
quantity de bacteries sans leucocytes.

On examinait ensuite le sang de l’animal au point de vue de sa
teneur en agglutinines. On a constate que chez les animaux .de
controle la production d’agglutinines etait quatre fois plus forte que cliez
Les animaux auxquels on a injects un melange de bacteries et de
leucocytes. „On voit ainsi, dit M. Stenstrom, que les leucocytes ne
jouent pas non seulement de role dans l’eiaboratiou d’agglutinines, mais
leucocytes. „On voit ainsi, dit M. Stenstrom, que les leucocytes non
seulement ne jouent pas de role dans l’elaboration d’agglutinines, mais
qu’au contraire une phagocytose trop prononc6e gene la production d’ag¬
glutinines. C’est pourquoi lorsqu’on veut en se servant d’injections
reitdrees obtenir une production plus forte d’antioorp3, il ne faut pas
reptiter trop souvent les injections, puisque dans ce cas 1’afflucnce de
leucocytes provoquee par l’injection de 1’antigene ne peut pas disparaitre
a temps."

Nous avons repete les experiences de Stenstrbm sur
8 lapins. Nous avons injecte k quatre lapins une emulsion
de spermatozoides dans le peritoine, & quatre autres lapins
on a injecte la meme quantity de spermatozoides meiangee
de leucocytes de lapin. Nous avons obtenu les leucocytes
d’apr^s la methode indiquee plus haut. On centrifugeait
l’exsudat polynucieaire, on le lavait plusieurs fois avec de la
solution physiologique, on le m41angeait avec des spermato¬
zoides de cobaye et on injectait le melange dans le p6ritoine

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Sur l’origine des spermotoxines.

195

da lapin. D6jk in vitro les spermatozo'fdes sont rapidement
phagocytes, d’ordinaire le leucocyte englobe d’abord la tete du
spermatozoide, tandis que la queue s’agite encore longtemps
en dehors du phagocyte.

On rdp4tait les injections 3—4 fois. A des intervalles
determines nous faisions des prises de sang aux oreilles des
lapins, or en prdparait ensuite du serum que Ton chauffait
k 56° et que Ton examinait au point de vue de son action
sur les spermatozoides de cobaye; ce sdrum exergant une
action trop forte sur le sperme de cobaye, il 6tait difficile
de constater la difference entre les divers serums, c’est pourquoi
nous avons dilud les serums, en ajoutaut 4 une partie de
s6rum neuf parties d’eau physiologique.

Le lecteur trouvera ci-dessous le tableau oil les rdsultats
des examens des serum sout exprimes par des chiffres. Les
chiffres indiquent le nombre de minutes necessaires pour tuer
les spermatozoides de cobaye par le serum donne. On essayait
les sdrums tous les 4—5 jours.

Action des scrums des lapins auxquels on a injecte

le sperme seul.

Lapin 5. 11, 26, 10 = 47:3 = 16.6.

„ 7. 11, 15, 9, 5, 9, 30, 23, 40, 10 = 162:9 = 18.

„ 13. 20, 25, 16, 35, 8 = 104:3 = 20.8.

„ 16. 17, 22, 16, 8 = 63:4 = 15.75.

Action des scrums des lapins auxquels on a inject^ un
melange de sperme et de leucocytes.

Lapin 9. 11, 17, 9, 8 = 45:4 = 11.2.

„ 10. 7, 16. 8, 8, 6, 14. 10, 10, 9 = 88:9 = 9.7.

„ 14. 14,10,15=39:3 = 13.

„ 15. 38, 22, 45, 8 = 110:4 = 27.5.

Afin de faciliter la comparaison j’ai calcuie le chiffre
moyen pour chaque lapin, en additionant les nombres repre-
sentant la force d’action du serum dans chaque essai et
en divisant la somme ainsi obtenue par le nombre d’essais.
Ainsi par exemple, le serums du lapins a ete essayd 3 fois; la
premiere fois il a tu6 les spermatozoides en 11 minutes, la
deuxieme fois en 26 minutes, la troisieme fois en 10 minutes,
en additionant on obtient le total de 47 et en divisant
par 3 — 15.6.

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196

S. Metalnikov et J. Strelnikov

En comparant ces chiffres moyens, on voit que les s6rums
ties lapins (9, 10, 14, 15) auxquels on a inject^ le melange
de sperme et de leucocytes agissent un peu plus vite que les
scrums des lapins auxquels on a inject^ le sperme seul (5, 7,
13, 16). II n’y a qu’une seule exception c’est, le lapin 15; ce
lapin a produit un s6rum tr£s faible, bien qu’il ait 6te injecte
avec. un melange de sperme et de leucocytes.

En se basant sur ces experiences, il est vrai, peu nom-
breuses, on pourrait arriver k la conclusion que les leucocytes
jouent un certain role dans l’61aboration des ambocepteurs.
Mais il nous & paru que les differences entre les serums
des animaux auxquels on a injecte le sperme seul et les
serums des animaux auxquels on a injecte le melange de
sperme et de leucocytes n’est pas assez considerable pour per-
mettre de se prononcer d’une manure definitive sur le role des
leucocytes dans la production d’ambocepteurs. C’est pour-
quoi nous ne nous sommes pas contentes de ces experiences
et nous nous sommes decides k chercher des voies nou-
velles.

Dans les cas ou nous introduisons dans le peritoine un
antigene quelconque, par exemple les spermatozokles, seuls
ou en melange avec des leucocytes, les antigenes ne restent
pas longtemps dans l’exsudat peritoneal, mais sont englobes
vite par les leucocytes, qui se fixent en partie sur le mes-
entere et passent en partie dans d’autres organes internes.
En provoquant ensuite k l’aide de l’injection d’aleurone ou
d’albumine dans le peritoine l’affluence des leucocytes, nous
ne trouvons plus les leucocytes qui ont englobd et dig6r6 les
spermatozokles, mais d’autres leucocytes. D6s lors il est tr&s
nature! que les extraits prepares des leucocytes semblables
ne contiennent pas d’ambocepteurs. Pour obtenir des ambo¬
cepteurs des leucocytes, nous aurions du retenir d’une manure
quelconque les leucocytes qui ont mange les spermatozoides
dans le peritoine, ne pas permettre aux leucocytes de passer
dans les organes internes, ou plus simplement, nous aurions
du faire la prise d’exsudat peu de temps apr&s l’injection de
l’antigfene. C’est de cette manure que nous avons voulu
elucider le problfeme du role des leucocytes dans la production
des ambocepteurs.

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Sur l’origine des spermotoxines.

197

On injectait aux lapins des spermatozoides de cobaye.
Plus tard on injectait de l’aleurone et puis de l’aleurone
m61ang6 de spermatozoides. Quelques heures apr&s cette
seconde injection on sacrifiait l’animal et l’exsudat 6tait extrait
comrae d’ordinaire.

Experience No. 6. Action des extraits d’organes d’un
lapin sperraotoxique sur le sperme de cobaye.

On a inject^ au lapin sperinotoxique No. 19 le 16 avril, un
melange de sperme de cobaye, et daleurone. Le 17 avril on a injects au
lapin dans le p^ritoine un melange d’aleurone et de sperme de cobaye.
On a injects dans la plfevre de Taleurone sans sperme. Le 18 avril le
cobaye a 6i6 sacrifie, on a 61oigne le sang et les exsudats et on a pre¬
pare des ex traits de ses organes.

Action des extraits simples:

Rate

+ sperme

in

heures

Foie

+

ij

16

ii

Rein

+

ii

16

ii

Cceur

+

ii

16

ii

Muscles

+

iy

16

ii

Ovaire

+

ii

16

ii

Moelle osseuse -j-

ii

16

ii

Cerveau

+

it

16

ii

Mesentfae

+

ii

16

ii

Leucocytes

+

I*

15

I*

Leucocytes

+

ii

15

ii

Action de memes extraits + al6xine:

Rate

+ alexine + sperme

15 min.

Foie

+

ii "T

ii

24 „

Rein

+

* i +

it

25. „

Coeur

+

„ +

ii

20 „

Muscles

+

ii +

ii

1 heu re

Ovaire

+

I* +

16 min.

Moelle osseuse

+

„ +

ii

25 „

plus de 5 heures

Cerveau

+

ii +

ii

Leucocytes de la plcvre
Leucocytes du peritoine

+

+

it

plus de 5 heures

+

ii +

ii

1 heure 20 min.

Experience No. 7. Action des extra its d’organes d’un
lapin spermotoxique sur sperme de cobaye.

On a injects au lapin No. 17 des spermatozoides de cobaye. Lors
que le lapin est arrive h. produire une spermotoxine forte, on lul a
injects dans la pl&vre une Emulsion d’aleurone et dans le peritoine un
melange d’aleurone et de spermatozoides de cobaye, 24 heures plus
tard l’animal a 6t6 eacrifi6, on a eloign<§ le sang et les exsudats et on a
pr£par6 des extraits des organes lav6s. On a essay 6 d’abord l’action des
extraite simples sur le sperme de cobaye, puis Taction des extraits -f-
al^xine.

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198

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

Action des extraits fraichement prepares sur le sperme de cobaye.

Mesentere
Cceur
Rein
Foie

Rate +

Ovaire +

Muscles +

Cerveau 4-
Moelle osseuee +
Polynucieaires +
Polynucieaires +

+ Sperme de cobaye
-f* id.

+

8 min.

15 heures
15 „

15 „

15 „

20 „

20 „

plus de 20 hrs.

17 heures
1 hr. 30 min.
17 heures

Les memes extraits -f* alexine:

Mesentfere + alexine -f sperme 17 min.

Cceur

+

If

+

„ 25

if

Rein

+

If

+

„ 18

if

Foie

+

If

+

17

ff

Rate

+

If

+

„ 20

Ovaire

+

If

+

„ 16

if

Muscles

+

If

+

„ 32

it

Cerveau

+

11

+

„ 61

a

Polynucieaires du peritoine +

If

+

„ 15 heures

Polynucieaires

+

11

+

„ 30 min.

Experience No. 8.

Action des

extraits d’organes d’un

lapin spermotoxique sur le sperme de cobaye.

On a injecte au lapin No. 14, de meme que dans Pexperience pr6-
cedente un melange d’aleurone et de sperme de cobaye.

Action des extraits simples:

Mesentfere + sperme

2 heures

Moelle osseuse +

20

If

Rate 4-

a

20

If

Cerveau 4-

a

40

II

Muscle8 +

if

40

If

Polynucieaires +

40

If

Les memes extraits -f- alexine:

Mesent^re 4- alexine + sperme

16 min.

Moelle osseuse +

n

+

ii

15

Rate 4-

ii

+

ii

i

hr. 28 min.

Cerveau +

a

+

a

2

ii

Muscles +

if

+

a

2

a 15 a

Polynucieaires -f-

ii

+

a

30 min.

Experience No. 9. Action des extraits des mononucl6-
aires sur les spermatozoides de cobaye.

On a injecte au lapin No. 18 du sperme de cobaye. Apres
I’apparition de la spermotoxine, on a injecte au lapin k deux reprises
de Pemulsion d’albumine d’oeuf. On a injecte dans le p6ritoine un
melange d’albumine et de sperme de cobaye. L’exsudat obtenu con-
tenait environ 80 °/o de mononucieaires.

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Sur 1’origine des spennotoxines.

199

Action dee extraits sans a!6xine:

Globules rouges du sang + sperme

20

heures

Moelle osseuse

+

99

20

99

Rate

+

99

10

99

Muscles

+

99

20

99

Mononucieaires

+

99

plus de 2

99

Mononucieaires

+

9 »

2

9 ’

Les mfemes extraits + al£xine:

Moelle osseuse

+ aiexine + sperme

20 min.

Rate

+ u

+

99

40 „

Muscles

+ »

+

2 „

Globules rouges

+ 99

+

99

20

Mononucieaires

+ 99

+

99

plus de 2 hrs.

Mononucieaires du peritoine + „

+

99

1 hrs. 30 min.

En nous basant sur les experiences cities nous pouvons
arriver & la conclusion suivante: chez les lapins qui produisent
une spermotoxine, l’ambocepteur p£nfetre dans les organes et
tissus.

Cette fois-ci nous trouvons dans les extraits de pplynucl6-
aires l’ambocepteur en grande quantity.

Les experiences No. 6 et 7 presentent un int6r£t parti¬
cular. Les lapins No. 17 et 19 ont re$u dans la plfcvre des
injections d’aleurone seule, dans le peritoine des injections de
melange d’aleurone et de spermatozoldes.

La difference entre les leucocytes de la cavite peritoneale
et les leucocytes de la cavite pleurale a 6t6 trfcs prononcee.

Tandis que les spermatozoldes restaient encore vivants
aprfcs un sejour de 15 heures dans les extraits de leucocytes
de la plfcvre, ils ne supportaient qu’un sejour de 30 minutes
dans les extraits de la cavite peritoneale.

Nous n’avons constate d’ambocepteurs qu’en petite quan-
tite dans les extraits de mononucieaires (exp. No. 9). Ces ex¬
periences montrent que les leucocytes jouent un role dans la
formation des ambocepteurs. On pourrait certainement objecter
que les preuves directes de ce que les ambocepteurs sont
produits par les leucocytes et que les leucocytes ne se sont
pas impregnes d’ambocepteurs, comme les autres organes et
tissus, font n4anmoins ddfaut. Afin d’6lucider ce problfcme
nous avons fait une s6rie d’exp6riences.

Tout d’abord nous avons tach£ d’isoler l’antig&ne, c’est k
dire les spermatozoldes, de tous les autres organes de l’orga-

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200

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

nisme, afm de nous convaincre que nul autre organe ne prend
part k la production d’arabocepteurs.

A cet effet nous avons introduit dans le p6ritoine des sacs
de collodion contenant une Emulsion de spermatozoides.
Beaucoup de ces experiences n’ont pas rdussi, les sacs ayant
crev6 et leur contenu ayant p6n6tr6 dans le p6ritoine de
l’animal; il est aussi arrive que les sacs se sont contamines
par d’autres microbes. Plusieurs experiences ont cependant
pleinement reussi et ont donne des resultats interessants.

Experience No. 10.

Le 10 janvier on a introduit dans la cavite periton6ale de la lapine
No. 54 un sac de collodion contenant du sperme de cobaye. On a
cssaye k plusieurs reprises le serum de l’animal en vue de determiner
sa teneur en ambocepteurs d’apres le schema suivant:

Serum chauffe a 50° -J- alexine (serum normal de cobaye) -J-
sperme de # cobaye.

24 janvier plus de 30 minutes

Jf

„ arr6t complet

jy
•>

Cette experience nous montre que le sperme ambocepteur
est apparu chez le lapin k peu pr&s un mois apr&s l’intro-
duction de spermatozoides et que dix jours plus tard c’est k
dire le 28 f6vrier il a commence d6j& k s’att£nuer.

Le 25 fevrier 1’animal a sacrifk*. On a pris le sang et
Texsudat de la cavite peritou&Ue. On a pr£par<§ des ex traits de plusieurs
organes et des leucocytes.

Le sac de collodion n’a pas crev6, il a £te entour6 d’une capsule
en tissu conjonctif. Nous avons constate dans le sac beaucoup de
spermatozoides, il faut signaler qu’ils dtaient immobiles. On a examine
le contenu du sac et Textrait de la capsule au point de vue de leur
action sur le sperme de cobaye.

Contenu du sac

+ sperme de cobaye

3 heures

Capsule

+

id.

2

Jf

10

min.

Kein

+

)f

2

yy

15

yy

Moelle osseuse

+

jf

2

yy

10

yy

Ca*ur

+

yy

3

yy

—

yy

Kate

+

yy

15

yy

—

yy

Polynucleaires

+

yy

15

—

yy

Exsudat

+

yy

—

40

yy

Serum

+

yy

—

5

Jf

7 fevrier

14 „

21 „

25 „

jj ?>

jf fj

if if

ff ff

30

10

G

20

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Sur l’origine dee spermotoxines.

201

Les m£mes extraits + al4xine:

Contenu du sac + aiexine + sperme
Capsule + „ + „

1

heure

30

min

99

Rem

+

99

+

99

1

99

30

99

Coeur

+

99

+

99

2

»9

—

99

Rate

+

99

+

99

14

99

—

99

Moeile OBseuse

+

99

+

99

1

99

—

99

PolynucMaires

+

99

+

99

14

99

—

99

Cette experience montre que les ambocepteurs peuvent
86 former m§me dans le cas oil l’antigfcne (les spermatozoides
dans notre cas) est isold par nne enveloppe de collodion de tous
les autres organes et cellules. L’ambocepteur qni se forme
dans ce cas a une force d’action presque 4gale a celle de l’ambo-
cepteur produit par l’organisme apr&s l’injection d’une emulsion
de spermatozoides dans le peritoine ou sous la peau. II est
intdressant que l’ambocepteur se forme en depit de l’absence
de phagocytose. A I’intdrieur du sac et aussi dans la capsule
en tissu conjonctif, nous trouvons une quantite assez grande
d’ambocepteurs, l’extrait des polynucldaires ne contient pas
d’ambocepteurs.

La technique des sacs de collodion prdsentant beaucoup
de difficultes et d’incommodites, nous avons eurecours 4 d’autres
methodes. Nous avons essayd d’introduire dans la cavite
p6riton6ale non des sacs de collodion mais des testicules
entiers. II fallait voir si en introduisant dans la cavite p6ri-
toneale le testicule d’un autre animal ou du m£me animal on
arrive & provoquer la production d’anticorps. A cet effet on
ouvrait la cavite peritoneale de l’animal, on enlevait le
testicule et on le laissait dans la cavite peritoneale de 1’animal
mSme ou on le transportait dans la cavite peritoneale d’un
autre animal. Dans plusieurs cas nous avons pr6f6r6, au lieu
d’enlever le testicule, de ligaturer les vaisseaux et les vas
deferens afin d’isoler le testicule et de faire ainsi l’experience
sans soumettre l’animal k une operation chirurgicale.

Experience No. 11.

Le 24 octobre on a introduit dans la cavite peritoneale du lapin
No. 30 (c’etait un male) le testicule de cobaye. On a essay4 & plusieurs
reprises le serum en vue de determiner sa teneur en ambocepteurs
d’aprbs le schema suivant:

Zeitschr. f. Immanittttsforschung. Orig. Bd. XVII. J4

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202

S. Metalnikov et J. Strelnikov,

Serum du lapin chau£f6 k 56° -f" serum normal de cobaye
(al4xine) -f- sperme de cobaye.

7 novembre 14 min. arr6t complet
10 „ 13

23 6

28 „ 15

Le 28 novembre le lapin a et 6 sacrifie. On a enleve le tesfcicule
de oobaye de la cavity pdriton&le. Le testioule 6tait entourd d’une
capsule assez epaisse et d’une petite quantity de pus. On a prdparS
des extraits du contenu de la capsule, du pus et de la capsule elle-meme.
On a aussi prepare des extraits du poumon de la moelle osseuse. Le
lendemain on a examine les extraits au point de vue de leur teneur en
ambocepteurs d’aprfcs le schema habituel:

Contenu de la capsule + al£xine + sperme

Capsule et pus + „ + „

Moelle osseuse + „ + „

Poumon + „ + „

Testicule de lapin + „ + „

— hr. 20 min.

- „ 20

1 „ 20
1 „ 15 ..

plus de 2 hre.

Experience No. 12.

Le 8 novembre on a enleve d’une fa^on sterile le testicule au
cobaye No. 31 et on l’a transports dans la cavite p4riton4ale du meme
animal. A des intervalles determines on examinait le serum du cobaye
au point de vue de son action sur les spermatozoides.

10 novembre

17 „

23 „

29 „

5 decembre
19 „

2 janvier
9 „

1 heure 30 min.
37
10
35
40

1 heure 35
3 beures 30

2

>1

>*

Le 16 janvier le cobaye a peri. On n’a pas retrouve dans sa
cavity p6riton6ale le testicule; il a et 6 resorts.

Experience No. 13.

Le 10 novembre on a enleve au cobaye No. 35 un testicule, les
vaisseaux et les vas deferens de I’autre testicule out 6t6 ligatures par
un fil de aoie. L’examen du serum a donne les resultats suivants:

17 novembre
23

29 A ” ,

5 decembre
19 „

2 janvier
9

20 min.
40 „

1 heure 20 „

3 heures 30 min.
1 heure 30 „

3 heures

Le 13 fevrier le cobaye a peri. Au lieu du testicule on a trouve
dans la cavite peritoneale un petit corps grand comme un pois et soude
de au mesentere.

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Bur l’origine des spermotoxines.

203

Les experiences sur les testicules couverts d’une enveloppe
en collodion pr£sentent un inter£t plus grand. On enlevait
des testicules & des lapins et k des cobayes avec toutes les
precautions d’asepsie, on plongeait les testicules k plusieurs
reprises dans une solution de collodion jusqu’i ce qu’une
enveloppe assez epaisse se soit formee, toute la surface du
testicule etait ainsi couverte de collodion. On pla^ait ensuite
le testicule dans la cavite peritoneale du nieme animal ou
d’un autre animal. Nous avons opere de cette mani&re
environ 10 animaux, 2 ont peri, les autres ont bien supports
l’operation et sont restes vivants durant 2 mois ou plus.
De m£me que dans les experiences decrites plus haut, il se
formait autour du testicule d6jit deux mois apr&s l’operation
une capsule en tissu conjonctif assez epaisse qui adherait
d’ordinaire au mesent&re, on pouvait observer dans les parois
de la capsule une grande quantite de vaisseaux ramifies.
Dans les cas oil l’operation n’etait pas faite avec toutes les
precautions d’asepsie parfaite on trouvait entre la capsule en
tissu conjonctif et l’enveloppe en collodion du pus. Dans la
plupart des cas cependant la capsule en tissu conjonctif adhe¬
rait bien & la coucbe de collodion. Dans les cas oil le testi¬
cule se trouvait trop longtemps k l’interieur de la capsule, il
etait 6videmment autolyse. Son volume diminuait consi-
derablement et on observait l’apparition d’un liquide. Paralieie-
ment it ces experiences nous avons place des testicules couverts
de collodion dans des tubes it essai fermes et contenant un
melange de serum et de solution physiologique, les tubes ont
ete gardes it l’etuve it 37° pendant l’intervalle que duraient
les autres experiences. L’6tude des produits d’autolyse se
poursuivait paralieiement it l’etude des serums et des extraits
d’organes des animaux operes.

Pour l’etude des changements subis par les testicules dans
des capsules en collodion nous avons examine leur structure
histologique sur des sections transversales. Les resultats de
cette etude seront exposes dans un memoire special.

Dans tous les cas les testicules enfermes dans des envelop-
pes en collodion ont provoqu6 l’apparition, dans le sang des
animaux operes, des spermotoxines dont la force d’action n’etait
pas inferieure k celle des spermotoxines qui se forment aprfcs
l’injection d’une emulsion de spermatozo'ides.

14*

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

204

8- Metalnikov et J. Strelnikov,

Experience No. 14.

Le 17 novembre on a introduit dans la cavite peritoneal© du
lapin No. 40 un testicule de cobaye couvert de collodion. On a essaye
k plusieurs reprises le serum du lapin au point de vue de son action
sur les spermatozoides de cobaye d’apr&s le schema suivant:

Serum chauffe k 56 0 aiexine + sperme:

17 novembre

plus de 60 min.

23 „

„ „ 30 „ arrfet complet

29

II II If

5 decembre

„ „ 10

7

if ff 10 ff

Le 7 decernbre le lapin a ete tue. Le testicule de cobaye
introduit dans la cavite peritoneale etait couvert d’une capsule en tissu
conjonctif. Le contenu de la capsule, c’est k dire le testicule de cobaye,
la capsule, de m£me que plusieurs organes out ete broyes dans la
solution physiologique. On a prepare des extraits, dont on a essaye
faction.sur les spermatozoides de cobaye.

Contenu de la capsule + sperme de cobave

plus de 20 min.

Capsule

+ fi

II II

„ ,, 3 hrs.

Moelle osseuse

+ f>

11 II

n ii 3 ,,

Bate

+ n

II II

ii ii 3 ,,

Poumon

+ ff

II >1

Q

ii ii u il

Les monies extraits + aiexine:

Contenu de la capsule + aiexine + sperme

12 min. arret complet

Capsule

+ „ +

II

5 „

Moelle osseuse

4 - ,i +

||

13 „

Rate

+ M +

||

18 „

Poumon

"F » +

II

15 „

Experience No. 15.

Le 17 novembre on a introduit dans la cavite peritoneale du
lapin No. 41 un testicule de cobaye couvert d’une couche dpaisse de
collodion. On a examine k plusieurs reprises le serum:

23 novembre 32 min.

29 „ 60 „

5 decern bre 10 „

Le 5 decembre le Ihpin a ete tue. On a enleve le testicule de
cobaye couvert d’une capsule, on a prepare des extraits du testicule et de
la capsule:

Contenu de la capsule + sperme plus de 2 heures
Capsule + „ „ 2 „

Les memes extraits + aiexine + sperme:

Contenu + aiexine + sperme 12 min.

Capsule + 16 „

Experience No. 16.

Le 8 novembre on a introduit dans la cavite peritoneale du
cobaye No. 32 un testicule d’un autre cobaye couvert d’une couche

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Sur l’origine des spermotoxines.

205

6paisse de collodion.. A des intervalles d6termin6s on
au point de vue de son action sur les spermatozoides

ff

ff

10 novembre
17
23

29 „

5 d6cembre
19 „

2 janvier

68 min.
15

18

1 heure 15
1 „ 20

2 heures

3 „ 30

essaye le sdrum
de cobaye.

Le 12 janvier le cobaye a etd tu6. On a ouvert la cavitd peri-
ton&ile et on a trouvd qua le testicule adhdrait complfetement k l’intestin.

Experience No. 17.

■

Le 17 novembre on a introduit dans la cavity p^riton^ale du cobaye
No. 38 le testicule couvert de collodion d’un autre cobaye. A des
intervalles determines on essayait le serum au point de vue de son
action sur les spermatozoides.

23 novembre

50

rain.

arrfit

complet

29 „

45

id.

5 d4cembre

20

jy

19

1 h. 40

fj

ff

2 janvier

3 hrs.

ff

18 „

1 h. 30

»

ff

24 „

1 >.

if

ff

30 „

40

ty

ff

7 f4vrier

2 hrs.

jf

14 „

24 „

ff

21 „

32

?f

ff

24 „

34

ft

ff

Experience

No.

18.

Le 20 d&embre on a introduit dans la cavity p6riton6ale du lapin
No. 42 2 teeticules d’un autre lapin. Un de ces testicules a 6t6 couvert
de collodion, l’autre n’a pas eu d’enveloppe en collodion. Les essais

du s^rum ont donne les

r6sultats suivants:

6 janvier

1 heure

arret complet

9 „

10 min.

id.

20 „

15 „

• •

3 mars

1 heure 10 „

9f

Toutes les experiences cities montrent d’une manure bien
nette que les spermotoxines peuvent se former chez des ani-
maux mfime dans le cas oil l’antigfene est complfctement isol6
dans l’organisme de tous les organes et de toutes les cellules,
m§me dans le cas oil la phagocytose fait tout k fait d£faut.
Le fait que l’ambocepteur apparalt & l’int^rieur mfime de la
capsule oil aucune cellule de l’organisme ne pgnbtre et oil il
n’y a que des cellules de l’antig&ne m6rite un int6rSt parti-
culier. Nous pouvons choisir entre deux suppositions: ou bien

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

206 S. Metalnikov et J. Strelnikov,

l’ambocepteur s’est form6 de l’antigfene memo, comme resultat
de l’action exerc6e sur l’antig6ne par les tumeurs de l’organisme,
on bien l’ambocepteur s’est form6 en dehors de la capsule et
a p£n6tr6 ensuite, entrain^ par les forces de diffusion de la
m£me mani&re qu’il p^nfetre dans les autres organes et tissus.

Tous nos essais pour prouver que l’ambocepteur se forme
de l’antigfene par voie d’autolyse ou comme resultat de Taction
des humeurs sur l’antig&ne n’ont pas donnd jusqu’k present
de r6sultats positifs.

Quant k la seconde supposition, suivant laquelle l’ambo-
cepteur se forme en dehors de la capsule et ne p6nfetre
qu’ensuite k l’int^rieur, elle doit certainement aussi encore
£tre prouv6e. On doit d’abord admettre que l’antigfene
(c’est k dire les sperm atozoYdes) peut se dissoudre, c’est k
dire subir l’autolyse et que les produits d’autolyse peuvent
passer k travers l’enveloppe en collodion. Ce n’est qu’en
presence de ces conditions que peut avoir lieu la formation
de l’ambocepteur en dehors de la capsule.

Quel role jouent dans ce cas les leucocytes? Vu la pr6-
sence d’une enveloppe en collodion qui s6pare l’antigfcne des
leucocytes de la cavity p6riton6ale, on doit exclure la possibility
d’une phagocytose, c’est k dire d’un englobement et d’une
digestion des parties solides, mais il reste la possibility d’un
englobement de liquides. II est possible que les produits
dissous d’autolyse passent & travers l’enveloppe en collodion
et soient absorbys par les leucocytes, qui prennent part indubi-
tablement a la formation de la capsule.

Le fait que les extraits de la capsule contiennent toujours
une grande quantity d’ambocepteurs plaide aussi en faveur de
cette supposition, qui toutefois doit encore Stre prouvye par
une ytude approfondie et dytailiye.

Mais quel que soit Ten droit oil se forme l’ambocepteur,
comme nous l’avons vu, il pynfctre dans tous les organes et
tissus de l’organisme.

On aurait pu certainement supposer que le sang trans¬
pose les ambocepteurs dans les organes; c’est pourquoi, 1&
ou il y a du sang, devraient se trouver aussi des ambocepteurs.
Mais ce n’est pas le cas. Avant la pryparation des extraits
nous lavons soigneusement les organes broyys pour yioigner
le sang. Si la prysence de l’ambocepteur dans un organe

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Sur l’origine des spermotoxines.

207

pouvait §tre expliqu6e par la presence du sang qui n’est pas
61imin6 compl&tement par le lavage, 1’extrait devrait agir
comme le sang lui m6me ou comme le s6rum, c’est 4 dire
qu’il devrait tuer les spermatozoides. L’extrait devrait contenir
de l’ambocepteur et de l’al6xine. Mais 1’extrait n’agit qu’apr&s
1’addition du s6rum frais de cobaye, on doit par consequent con-
clure que c’est l’ambocepteur seul qui se trouve dans l’extrait.

L’examen des extraits d’organes d’un animal normal et
d’un animal immunise ont pleinement confirm6 le fait que ces
extraits ne contiennent pas d’aiexine. Nous avons proc6d6
dans ces experiences de la manure suivante.

Au serum spermotoxique de lapin chauffe & 56 0 on ajoute
dans une proportion determinee du serum, de l’exsudat et
des extraits de divers organes du cobaye normal. Si le
melange obtenu tue les spermatozoides de cobaye, il s’ensuit
qu’il contient de l’aiexine ainsi que le serum; dans le cas
contraire il ne contient pas d’aiexine.

Experience No. 19.

On a injects au cobaye No. 24 de Faleurone dans la plfcvre et du
blanc d’oeuf dans le p£ritoine. Le cobaye a 6t£ tu6, on lui a pris le
sang et ces exsudata et on a prepare des extraits des organes. Pour
la determination de la teneur en aiexine, on prenait le serum spermo¬
toxique chauffe h 56° (ambocepteur) et on le meiangeait avec 1’extrait
On ajoute ensuite des spermatozoides et on determine & quel moment
les mouvements des spermatozoides s’arretent.

Extrait des polynucleaires

4- ambocepteur

plus

de

2

hrs.

„ des mononucieaires

+

n

11

11

2

11

„ de la rate

+

n

11

11

2

11

„ de la moelle osseuse +

91

11

11

2

11

„ du foie

+

>9

11

11

2

11

„ du corps thyroide

+

71

11

11

2

11

„ du coeur

+

V

11

* 1

2

11

„ du cerveau

+

91

11

)•

2

11

„ du mesent£re

+

19

11

11

2

11

„ des muscles

+

11

11

11

2

11

Serum

+

11

11

11

10

min. arret

Exsudat

+

11

11

11

50

ii

On a r6p6t6 la m§me experience sur d’autres animaux.
Dans tous les cas nous avons constate que les extraits de
divers organes ne peuvent pas activer le s6rum spermotoxique
chauffe, comme le fait le serum normal de cobaye; il s’ensuit
qu’ils ne contiennent pas d’aiexines. Les extraits de poly-
nucldaires et de mononucieaires ne contiennent pas non plus

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208 Metalnikov et Strelnikov, Bur l’origine des spermotoxines.

d’al6xines. On ne trouve des alSxines qne dans le s6rum et
dans les exsudats, dans la plupart des cas le s6rum est plus
riche en al6xines que les exsudats.

Zusammenfassung.

1) Durch die Untersuchung der Extrakte der Organe
spermatoxischer Tiere kann man immer die Anwesenheit von
Spermaambozeptoren im Gekrose (Mesenterium), in der Milz,
in der Leber, in den Nieren, im Knochenmark, in den Lungen,
im Herzen und in anderen Organen feststellen. In den Mus-
keln und im Gebirn gibt es am wenigsten Ambozeptoren.

Diese Extrakte wirken nur in dem Fall, wo man ibnen
Alexin, d. h. frisches, normales Meerschweinchenserum zusetzt.
Ohne Alexin wirken die Extrakte nicht, was darauf hinweist,
dafi diese Organe keine Alexine enthalten.

2) Extrakte aus Mononukle&ren und Polynukle&ren sperma¬
toxischer Tiere enthalten gewdhnlich weder Ambozeptoren
noch Alexine.

3) Extrakte aus Polynuklefiren, die durch die Einspritzung
von einem Gemisch von Aleuronat mit Spermatozoen hervor-
gerufen werden, enthalten Spermaambozeptoren.

4) Ffihrt man in die 6auchh5hle eines Kaninchens ein
Kollodiums&ckcben mit einer Spermatozoenemulsion ein, so wird
ein Spermatoxin gebildet, das ebenso krfiftig wirkt, wie ein
Spermatoxin, das nach einer subkutanen Oder intraperitonealen
Einspritzung von Spermatozoen gebildet wird.

5) Die Spermatoxine werden auch in dem Falle gebildet,
in dem man in die Bauchhbhle eines Kaninchens einen ganzen
Meerschweinchen- Oder Kaninchenhoden einfiihrt (einn&ht). Der
Hode wird dabei von einer Bindegewebekapsel umwachsen
und dann allm&hlich resorbiert.

6) Die Bildung von Spermatoxinen wird auch in den
Fallen, in welchen der in die Bauchhbhle eingefuhrte Hode von
einer dicken Kollodiumschicht bedeckt wird, beobachtet.

7) Ira Gegensatz zum Ambozeptor dringt das Alexin
nicht in alle Organe und Gewebe ein, sondern findet sich nur
im Serum und in Exsudaten, wobei der Alexingehalt der Exsu-
date immer geringer ist als derjenige des Serums.

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K. Hara, Untersuchungen iiber die Eigenhemmung der Sera. 209

Naehdruck verboten.

[Ana der Biologiachen Abteilung (Prof. y.Dungern) des Institutes
for Kxebsforschung (Geheimrat Prof. Czerny, Exzellenz).]

Untersuchungen fiber die Eigenhemmung der Sera.

Von Dr. K. Hara.

Mit 4 Kurven im Text

(Eingegangen bei der Redaktion am 5. Januar 1913.)

Die Eigenhemmung des Serums, welche bei alien Korn-
plementbindungsreaktionen zu beobachten ist und daher prak-
tische Bedeutung besitzt, kann unter gewissen Bedingungen
eine Steigerung erfahren. Nach gelegentlicher Beobachtung
im Laboratorium und entsprechend einigen Angaben in der
Literatur kommen verschiedene Ursachen in Betracht.

Einerseite wild veretarkte Eigenhemmung der Sera nach der Vor-
behandlung der Tiere mit fremden protoplasmatischen Substanzen beobachtet,
wie Ehrlich und Morgenroth und v. Dungern zuerst gesehen haben.
Zur Erklarung hat Moreschi 1 ) angenommen, dafi zuriickgebliebene
Antigenreste mit neu auftretendem Antikorper zusammentreten und dadurch
Komplementbindung bedingen; in diesem Falie muB auch das Komplement
des antikorperliefernden Tieres aus dem Scrum verschwinden.

An eine ganz andere Ursache muBte man denken, wenn mit der Zeit
beim einfachen Stehenlassen der Sera, die Vermehrung der Eigenhemmung
auftritt.

Ich war bestrebt, diese beiden Arten der vermehrten
Eigenhemmung weiter aufzuklfiren.

Da die Sera, wenn sie l&ngere Zeit aufbewahrt werden,
leicht mit Mikroorganismen yerunreinigt werden kdnnen, so
war es notwendig, zunSchst den EinfluB der Bakterien auf die
antiMmolytische Wirkung des Serums zu untersuchen. Ich
habe daher eine Anzahl Sera von Menschen, Kaninchen und
Ziegen sowohl unter aseptischen Kautelen, wie auch ohne
diese entnommen, und nach Tagen, Wochen und Monaten auf
ihre antih&molytische Wirkung geprQft. Gleichzeitig wurde
durch Agarkultur der Bakterien gehalt festgestellt.

1) Berl. klin. Wochenschr., 1905.

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210

K. Hara,

Zur Bestimmung der Eigenhemmung verwandte ich die gewohnliche
Versuchsanordnung. Das hamolytische System bestand in 1,0 ccm 5-proz.
Rinderblutkorperchen-Aufschwemmung, die mit der doppelt ausreichenden
Menge Ambozeptor sensibilisiert waren, und aus frischem Meerechweinchen-
serum als Komplement, welches ich in doppelt losender Menge, 0,03—0,05 ccm
verwandte. Zur Priifung der antihamolytischen Eigenschaft des Serums
wurde dieses in abgestuften Mengen entweder unerwarmt oder 1 / 2 Stunde
auf 56° erwarmt, mit komplementhaltigem Serum zusammengebracht und
2 Stunden bei Zimmertemperatur gelassen, darauf wurde sensibilisierte
Blutkorperchen-Aufschwemmung zugefiigt und das Besultat nach 2 Stunden
abgelesen.

Ich habe zunSchst bei drei Menschen Sera steril ent-
nommen, auf 56° erwarmt und steril aufbewahrt. Sie blieben
absolut unver&ndert, 0,6 ccm war nicht imstande, die Kom-
plementh&molyse aufzuheben. Genau ebenso verhielten sich
zwei Kaninchensera und drei Ziegensera, die steril aufbewahrt
wurden. Bei eiuem Ziegenserum zeigte sich sogar nach
6 Monaten keine Steigerung der antihamolytischen Eigenschaft.
Im Gegensatz dazu entwickelte sich die Starke Eigenhemmung
der Sera, wenn sie nicht steril entnommen waren, wie z. B.
die folgenden Protokolle zeigen.

Im Eisschrank aufbewahrtes, nicht steril entnommenes Ziegenserum C

(erwarmt).

Menge

des

Serums

Direkt
nach der
Entnahme

Nach einer
Woche
mehrere
Kolonien
auf Agar-
niihrboden

Nach

2 Wochen

Erwarmt
30' auf 56°

Nach

3 Wochen
Trubung
durch
Bakterien

Erwarmt

Nach

4 Wochen

Erwarmt

0,6

Hemmung

Hemmung

Hemmung

Hemmung

Hemmung

Hemmung

Hemmung

Hemmung

0,4

komplett

Hemmung

komplett

ii

komplett

ii

komplett

0,2

komplett,

nicht kom¬

17

ii

ii

ii

sehrlangsam

plett

0,1

komplett,

komplett,

11

komplett,

ii

ii

ii

i

langsam

sehrlangsam

sehr langs.

Ich konnte auch nachweisen, dafi die im Serum mit starker
Eigenhemmung vorhandenen Bakterien dem steril entnommenen
Serum die antihiimolytische Eigenschaft schon nach kurzer
Zeit verleihen, wie folgende Protokolle zeigen.

Steriles erwiirmtes Ziegenserum A mit Bakterien infiziert, nach 3-t;igiger
Aufbewahrung im Eisschranke energisch zentrifugiert und auf Eigen¬
hemmung gepriift.

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Untersuchungen fiber die Eigenhemmung der Sera.

211

Menge des
Serums

Steriles

Serum

Infiziertes Serum

Infiziertes
Serum,
erwarmt 30'
auf 56°

0,6

komplett

Hemmung

komplett

0,4

11

partieUe Losung

11

0, 2

11

langsame Losung

11

0.1

11

dgl.

11

5,0 ccra erwarmtes steriles Ziegenserum C mit 5 Oesen Bakterien
gemischt, 3 Stunden in den Brutechrank gestellt, dann lange Zeit zentri-
fugiert, bis es ganz klar wurde. Ein Teil davon ist 1 / 3 Stunde auf 56°
erwarmt. Als Kontrolle 5,0 ccm Nahrbouillon genommen, die auch mit
5 Oesen Bakterien gemischt, 3 Stunden in den Brutschrank gestellt war,
aber nicht zentrifugiert wurde.

Menge des
Serums

Steriles

Ziegenserum

Mit Bakterien
behandeltes Serum

Infiziertes
Serum,
erwarmt 30'
auf 56°

Nahrboden
mit Bakterien
als Kontrolle

0,6

Hemmung

Hemmug

Hemmung

komplett

0,4

komplett

ii

komplett

ii

0,2

ii

nicht komplett

ii

ii

0,1

ii

komplett, sehr langsam

ii

ii

Ich habe spater dann noch mit Reinknlturen gearbeitet
und Colibacillen, Heubacillen, Pyocyaneus, Prodigiosus, Staphylo-
kokken und Proteus vulgaris dem steril entnommenen Serum
zugesetzt. Durch wiederholte Versuche wurde nachgewiesen,
dafi alle diese Bakterien auch mehr Oder minder Starke anti-
hfimolytische Eigenschaft erzeugen, und zwar Colibacillen und
Proteus vulgaris am stfirksten, Staphylokokken am schwachsten.
Man mufite daran denken, ob nicht die Bakterien selbst das
Komplemente binden. Es ist seit den Versuchen v. Dungerns
1 angst bekannt, dafi die Bakterienemulsionen antihfimolytische
Eigenschaft haben. Es sind dazu aber viel dichtere Emul-
sionen notwendig, als ich verwandte, und aufierdem sind in
meinem Versuche die Bakterien auch durch Zentrifugieren so
gut wie moglich aus dem antih&molytischen Serum entfernt
worden, ohne dafi dieses seine komplementbindende Wirkung
dadurcb einbflfite.

Die Eigenhemmung des Serums durch Bakterien ist durch
die Ver&nderung chemischer Substanzen des Serums bedingt.
Es lag nahe, an Lipoide zu denken. Es ist schon von mehreren

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212

K. Hara,

Autoren beobachtet worden, daB die durch Aether extrahier-
baren Substanzen des Serums antih&molytisch sind. Der
folgende Versuch zeigt, daB diese Substanzen unter der Ein-
wirkung von Bakterien eine viel st&rkere antihamolytische
Eigenschaft gewinnen.

10 ccm Bteriles Zicgenseram wurden mit ungefahr 30 ccm Aether
V* Stunde geschiittelt; dieaer Aetherextrakt wurde im Brutachranke ab-
gedampft und der Riickatand wieder in 10 ccm ateriler phyaiologiacher
Kochaalzldsung aufgenommen. 5 ccm von dieaer feinen Lipoidemulsion
wurden mit eincr Oese Bakterien gemischt und nach 24 Stunden energiach
zentrifugiert.

Menge

der

Emulsion

Sterile

Emulsion

Infizierte Emulsion

Infizierte

Emulsion

erwarrat

0,8

Hemmung

Hemmung

Hemmung

0,6

komplett

if

komplett

0,4

tt

sehr langsame Losung

0,2

11

langsame Losung

1

Die starke antihamolytische Eigenschaft wird durch die
Erwarmung aufgehoben, und genau ebenso verschwindet auch
die antihamolytische Wirkung des Serums, die durch Bakterien
erzeugt ist, nach halbstQndiger Erwarmung auf 56°. Es ist
nicht mOglich, diese Eigenhemmung des Serums durch Schfltteln
mit Aether zu entziehen.

Es hat sich demnach gezeigt, daB die anti¬
hamolytische Eigenschaft der normalen Sera,
welche mit der Aufbewahrung sich entwickelt,
ausschliefilich durch das Wachstum von Bakterien
zustande koramt, und diese entsteht, wie es
scheint, dadurch, daB die Lipoide verandert
werden.

Das Bakterienwachstum vernichtet auch das Komplement,
im sterilen Serum bleibt das Komplement viel langer erhalten.
Die antikomplementare Wirkung des infizierten Serums er-
streckt sich nicht nur auf Meerschweinchenkomplement, son-
dern auch auf Kaninchenkomplement.

Wenn man die antikomplementare Eigenschaft des Serums
studieren will, die wahrend der Immunisierung auftreten kann,
ist es somit durchaus notwendig, das Bakterienwachstum sicher

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Untersuchungen iiber die Eigenhemmung der Sera.

213

auszuschalten. Alle Versuche, die mit dieser Fehlerquelle
nicht gerechnet haben, k6nnen nicht mehr als beweisend an-
gesehen werden. Ich habe daher in den folgenden Versuchen
nur sterile Sera benutzt, und diese auch bald nach der Ent-
nahme untersucht.

Zun&chst habe ich bei zwei Kaninchen, denen 5,0 ccm
Hammelserum, und bei zwei anderen Kaninchen, denen 2,0 ccm
Hammelserum intravends injiziert wurde, jeden Tag nach der
Injektion ganz steril Blut enlnommen und sowohl auf Pr£-
zipitingehalt wie Antigengehalt untersucht und gleichzeitig
die Eigenhemmung in der oben angegebenen Weise bestimmt.
Zur Bestimmung des Antigengehaltes wurde ein anderes Pr&-
zipitinserum benutzt, derart, dad 0,1 ccm dieses Serums mit
1,0 ccm der verschiedenen Verdflnnungen des Antigens ver-
einigt wurde; es war so stark, dad eine Verdflnnung des
Hammelserums 1:50000 noch eine Trflbung ergab. Es zeigte
sich, dad die Verstfirkung der Eigenhemmung kritisch auf-
tritt, einige Tage anh&it und dann wieder plotzlich verschwindet.
Bei einem Kaninchen trat diese Erscheinung am 9. Tage ein,
war am 10. und 11. wieder verschwunden und setzte dann
am 12. wieder ein und hielt sich 3 Tage (Kurve 1). Bei
einem anderen Kaninchen bestand sie vom 12.—15. Tage nach
der Injektion (Kurve 2). Bei zwei anderen trat die starke
Eigenhemmung nicht auf (Kurve 3 und 4).

Kurve 1.

Kurve 2.

Tage

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214

K. Hara,

Kurve 3.

Kurve 4.

Ein Zusammenhang mit dem ersten Auftreten des Anti-
kOrpers ist nicht erkennbar. Eigenhemmung tritt erst sp&ter ein.

Ich habe dann noch weiter mehrere Kaninchen mit Pferde-,
Hammel- und Ziegenserum behandelt und den Zusammenhang
von AntikSrperentstehung und Vermehrung der Eigenhemmung
geprflft, wie die folgenden Protokolle zeigen.

8. IX.

Kaninchen No. 326 (-®K3 g)J jq ccm pferdeserum intravends injiziert.
Kaninchen No. 351 (2250 „jj ^ q ccm pf erc [eserum intravends injiziert.

Kaninchen No. 302 (1800 „)1 3,0 ccm Pferdeserum intravends, nach 3 Tagen
„ „ 109 (1750 „)/ wieder 3,0 ccm Pferdeserum intravends injiziert.

Komplementgehalt 351 0,1 Los. 0,05 part. Lds.

187 0,1 Lds. 0,05 lost nicht

326 0,1 Lds.

302 0,1 Lds.

100 0,1 Lds.

109 0,1 Lds.

0,3 ccm von jedem erwarmten Serum zeigte keine Eigenhemmung.

14. IX. Am 7. Tage nach der Impfung.

Komplementgehalt 351

0,1 Lds.

0,05

part Lds.

187

0,1 Los.

0,05

lost nicht

326

0,1 Los.

302

0,2 Lds.

0,1 keine Lds.

109

0,1 Lds.

100

0,1 Lds.

Prazipitingehalt

351

1:1000

+

189 1:1000 +

326

1:5000

+

100 1:5000 +

302

1:10 +

109 1:10 +

Eigenhemmung

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Untersuchungen iiber die Eigenhemmung der Sera.

215

Bei Kaninchen No. 351, 187, 302 und 109 wurde Antigen noch im
Serum nachgewiesen.

16. IX. Am 9. Tage.

Komplementgehalt 351 0,1 Los. 0,05 part. Los. 187 0,1 Los. 0,05 part I/ds.

326 0,5 Los. 0,1 keine Los. 100 0,2 Los. 0,1 keine Los.

302 0,2 Los. 0,1 keine Los. 109 0,1 L6s. 0,05 lost nicht

Prazipitingehalt 351 1:10 000 + 187 1:10 000 +

326 1:10000 + 100 1:10000 +

302 1:100 + 109 1:100 +

Bei Kaninchen No. 351, 302, 187 und 109 wurde noch Antigen im
nachgewiesen.

0,3 ccm von jedem erwarmten Serum zeigte keine Eigenhemmung.

18. IX. Am 11. Tage.

Komplementgehalt 351 0,1 Los. 189 0,1 part L6s.

326 0,2 L6s. 0,1 keine Los. 100 0,2 keine Los.
302 0,1 Los 0,05 keine Los. 109 0,1 part Los.
Prazipitingehalt 351 1:10000 + 187 1:10000 +

326 1:10000 + 100 1:10000 +

302 1:10000 + 109 1:1000 +

Eigenhemmung nur bei Kaninchen No. 100 0,1 H. 0,05 H.

20. IX. Am 13. Tage.

Komplementgehalt 351 0,1 Los. 187 0,1 L6s.

326 0,1 Los. 100 0,1 Los.

302 0,2 keine Los. 109 0,2 Los. 0,1 Los.

0,3 ccm von erwarmten Sera keine Eigenhemmung.

22. IX. Am 15. Tage.

Komplementgehalt 351 0,1 Los. 187 0,1 Los.

326 0,1 Los. 100 0,1 Los.

302 0,1 Los. 0,05 part. Los. 109 0,1 Los.

Eigenhemmung nur bei 326 0,1 H. 0,05 H.

24. IX. Am 17. Tage.

Komplementgehalt 351 0,1 Los. 187 0,1 Los.

326 0,2 Los. 0,1 keine Los. 100 0,2 Los. 0,1 part. Los.
302 0,1 Los. 109 0,1 Los.

Eigenhemmung nur bei 326 0,05 H. 100 0,05 H. 189 0,1 part. Los.

5. VII. Kaninchen No. 460 (3500 g) hat 6,0 ccm Pferdeserum intra-
ven6s bekommen.

Komplementgehalt 0,2 Los. 0,1 part. Los.

Beim Kontrollkaninchen No. 180 0,1 Los. 0,05 Los.

0,3 ccm erwarmtes Serum zeigte keine Eigenhemmung.

12. VII. Der 8. Tag nach der Injektion.

Komplementgehalt 460 0,2 Lds. 0,1 Lds.

180 0,1 Los. 0,05 Los.

Prazipitingehalt 1:1000 +. Antigen noch nachweisbar.

Eigenhemmung 0,2 H. 0,1 H. 0,05 Los.

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216

K. Hara y

4. III. Em Prazipitin serum gegen Hammeleiweifi ist yon Kaninchen
ganz steril entnommen und teils erwarmt, toils nicht erwarmt im Eisschrank
aufbewahrt worden.

Komplementgehalt 0,05 L 6 s.

Pr&zipitingehalt 1 :10000 +.

Eigenhemmung l j i0 ccm H. 1 / ao ccm Los.

20. III. Nach 16 Tagen. Ganz steril.

Komplementgehalt 0,05 Los.

Prazipitingehalt 1 :10000 +.

Eigen nemm ung l / AQ ccm H. i / B0 ccm L5s.

6 . IV. Nach 22 Tagen. Ganz steril.

Komplementgehalt 0,1 L5s. 0,05 keine L 6 s.

Prazipitingehalt 1:10000 +.

Eigenhemmung l / i0 ccm H. l / so ccm Los.

26. IV. Nach 42 Tagen. Ganz steriL
Komplementgehalt 0,3 keine Los., starke Agglutination der Blutkorper.
Prazipitingehalt 1:10000 +.

Eigenhemmung V 40 ccm H. 7*0 ccm Los.

Mit der doppelten Dosis von Kaninchenkomplement zeigten 0,3 ccm
Serum keine Eigenhemmung.

9. X. Kaninchen No. 331 und 301 haben je 5,0 ccm Ziegenserum
intravenos bekommen.

Komplementgehalt 331 0,1 Los. 0,05 keine Los.

301 0,1 Los. 0,05 keine Los.

180 0,1 Los. (Kontrolle.)

0,3 ccm Sera zeigten keine antihamolytische Eigenschaft.

17. X. Am 8 . Tage.

Komplementgehalt 331 0,1 Los. 301 0,1 Los. 180 0,1 Los.

Priizipitingehalt 331 1 : 5000 + 301 1: 5000 +.

Eigennemmung 331 0,1 H. 0,05 H. 1 / i0 ccm Los.

301 0,3 Los. 180 0,3 Los.

18. X. Am 9. Tage.

Komplementgehalt 331 0,2 Los. 0,1 keine Los.

301 0,2 Los. 0,1 Los.

180 0,1 Los.

Eigenhemmung 331 0,1 H. 0,05 H. 1 / 40 Los.

301 0,2 H. 0,1 Los.

180 0,3 Los.

Mit Kaninchenkomplement zeigten 0,3 ccm keine Eigenhemmung.

21. X.

Kaninchen 0 ^ 109j 4^3 ccm Ziegenserum intravenos.

” No. 480 als Kontrolle.

Komplementgehalt 109 0,1 Los. 0,05 part. Los.

ohneNo. 0,1 Los. 0,05 part. Los.

180 0,1 Los. 0,05 part. Los.

0,4 ccm hatten keine antihamolytische Eigenschaft.

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Untersuchungen fiber die Eigenhemmung der Sera.

217

28. X. Am 8. Tage.

Komplementgehalt 109 0,2 H.

ohneNo. 0,2 L5s. 0,1 L6s.

180 0.1 Loe. 0,05 part. Los.

Prazipitingehalt 109 1:10 000 + ohne No. 1:1000 +
Eigenhemmung —.

29. X. Am 9. Tage.

Komplementgehalt 109 0,2 H.

ohne No. 0,2 Los. 0,1 Los.

180 0,1 Los.

Eigenhemmung 109 0,2 H. 0,1 H. 0,05 Los.

ohne No. 0,3 H. 0,2 Los.

180 0,4 Los.

Prazipitingehalt 107 1:10000+ ohne No. 1:10000 +.

Die Eigenhemmung wurde beim Serum von Kaninchen No. 109 mit
doppelt losenden Mengen von Meerschweinchen-, Kaninchen- und Hunde-
komplement geprfift.

Menge des Serums

7 I
/10

v,«

i/

lio

V.o

Mit Meerschweinchen-
komplement 0,03

Mit Hundekomplement

1 0,2

Hemmung

Hemmung

Hemmung

langsame

Ldsung

Los.

Hemmung

langsame

Hemmung

Ldsung

Ldsung

Los.

Mit Kaninehenkomple-
ment 0,2

Loeung

Losung

Losung

Ldsung

Los.

Normale Kaninchen sera [besitzen in der Menge von 0,6 ccm keine
antihamolytische Eigenschaft gegen Hundekomplement.

2. XI. Ein Kaninchen ist mit 4 ccm Pferdeserum intravenos injiziert.
Komplementgehalt: 0,2 keine Ldsung. Eigenhemmung: 0,3 ccm Losung.

11. XI., 13. Tag.

Komplementgehalt: 0.2 keine Losung. Eigenhemmung mit Meer-
schweinchenkomplement: 0,05 Hemmung. Mit Kaninchenkomplement;: 0,3
keine Hemmung. Prazipitingehalt 1:100+, 10000 ±.

Es zeigte sich, daS starke antikomplement&re Wirkung
nicht bei jedem PrSzipitinserum vorkommt und daC das Auf-
treten dieser Erscheinung weder von der injizierten Antigen-
men ge noch von der Antikdrpermenge des betreffenden Serums
abhangt.

Auch der Komplementgehalt kann sicb verschieden ver-
halten. Manchmal war das Serum stark antihSmolytisch nach
der Erwarmung gegenflber Meerschweinchenserum als Kom-
plement und zeigte doch ann&hernd normalen Komplement¬
gehalt, wenn es aktiv mit der sensibilisierten Rinderblut-
kdrperchenaufschwemmung geprtift geworden ist. In anderen
Fallen war der Komplementgehalt herabgesetzt. Man muBte

Zdtschr. f. ImmunJUtsforechung. Orig. Bd. XVII. J5

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218 K. Hara, Untereuchungen fiber die Eigenhemmung der Sera.

daran denken, ob die antikomplement&re Wirkung nicht erst
dann zustande kommt, wenn Meerschweinchenserum zugefflgt
wird. Ich habe daher die antih&molytischen Sera aoch mit
anderem Komplement geprtift. Es zeigte sich in der Tat, daft
die Eigenhemmung gegentlber der doppelt lbsenden Dosis von
Kaninchenkomplement vollkommen fehlen kann.

Das eigenartige Phanomen der plbtzlich auftretenden
starken Eigenhemmung ist daher vielleicht so zn erkl&ren, dafi
einige Antikbrper, die durch fremde Sera ausgelost werden,
auch gegen Substanzen des Meerschweinchenserums gerichtet
sind und mit diesen Komplementbindungsreaktion geben.

Die antikomplement&re Wirkung der Pr&zipitinsera bleibt
konstant, wenn das Wachstum von Bakterien ausgeschlossen
ist Wenn die Bakterien hinzukommen, so kommt es zu
einer weiteren Steigerung, die durch halbstandige Erw&rmung
auf 56° verschwindet.

Zusammenfassung.

1) Die antihftmolytische Eigenschaft der normalen Sera,
welche sich bei der Autbewahrung ohne aseptische Kautelen
entwickelt, kommt durch das Wachstum von Bakterien zu¬
stande. Durch ErwSrmen wird die Eigenhemmung dieser Sera
aufgehoben.

Die Eigenhemmung beruht auf einer Ver&nderung der
chemischen Substanzen des Serums, wahrscheinlich der in
Aether loslichen.

2) Das Bakterien wachstum vernichtet auch das Komplement,
im sterilen Serum bleibt das Komplement viel lfinger erhalten.

Die antikomplementare Wirkung des infizierten Serums
erstreckt sich nicht nur auf Meerschweinchenkomplement,
sondern auch auf Kaninchenkomplement.

3) Nach der Einspritzung von fremdartigem Serum kommt
es auch zu einer Steigerung der antihamolytischen Wirkung,
aber nicht immer. Die Verst&rkung der Eigenhemmung er-
folgt kritisch einige Zeit, nachdem das PrSzipitin im Serum
nachweisbar ist und halt nur wenige Tage an. Ein Zusammen-
hang mit dem ersten Auftreten des Antikorpers und dem Zu-
sammentreffen desselben mit noch zirkulierendem Antigen ist
nicht nachweisbar. Auch die Schwankungen des Komplement-

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Apolant, Beziehungen der Milz zur akt. Greschwulstimmiinitat 219

gehaltes zeigen keine Abhangigkeit von der Eigenhemmung
des Serums, die mit Meerschweinchenkomplement geprfift wird;
gegenuber Kaninchenkomplement trat in den untersuchten
Fallen keine VerstSrkung der Eigenhemmung ein. Beim Er-
warmen bleibt diese Art der Eigenhemmung bestehen. Es
dfirfte sich daher um partielle AntikOrper gegen Substanzen
des Meerschweinchenserums handeln.

Es sind demnach zwei Arten der Eigenhemmung prin-
zipiell zu trennen; bei alien Untersuchungen fiber antikomple-
mentfire Wirkung des Serums mfiBte der Bakteriengehalt be-
rficksichtigt werden.

Nachdruck vcrboten.

[Aus der Abteilung ffir Krebsforschung (Prof. H. Apolant) des
Konigl. Institutes ftir experimentelle Tberapie in Frankfurt a. M.

(Direktor: Wirkl. Geheimer Rat Prof. Dr. P. E h r 1 i c h).]

Ueber die Beziehungen der Milz zur aktlven Geschwulst-

immunitftt.

Von H. Apolant.

Mit 9 Tabellenfiguren im Text.

(Eingegangen bei der Bedaktion am 19. Januar 1913.)

Die Mdglichkeit, MSuse durch Vorbehandlung mit aviru-
lenten Tumoren, Blut, Embryonen oder normalen Organen
gegen das Angehen einer folgenden Impfung mit virulentem
Geschwulstmaterial resistent zu machen, ist, wenn auch die
Angaben fiber den Grad der so erzeugten Immunitfit differieren,
eine allseitig anerkannte Tatsache. Im Gegensatz hierzu herrscht
fiber die Natur dieser aktiven Tumorimmunitfit noch keines-
wegs Klarheit.

Es lag zunfichst gewifi nahe, an die Bildung echter Anti-
kfirper zu denken, doch fand diese Auffassung experimentell
keine Stfitze, da sich alle Angaben fiber positive Prfizipitation,
Komplementbindung und passive Immunisierung, wenigstens
soweit Mfiuse-, Ratten- und Hundegeschwfilste in Betracht
kommen, als hinfallig erwiesen.

15*

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220

H. Apolant,

v. Dun gem *) ist auf Grund seiner gemeinsam mit Coca
gemachten Erfahrungen an Hasensarkomen geneigt, das Wesen
der Geschwulstimmunitat in einer lokalen Anaphylaxie zu sehen
und die ihm bei diesen Tieren gelungene passive Immunisierung
auf die Uebertragung des anaphylaktischen Antikdrpers zu
beziehen. Ohne die Berechtigung einer derartigen Auffassung
ftir diese besondere Geschwulstform leugnen zu wollen, kann
ich ihre allgemeine Gflltigkeit nicht anerkennen, da flhnliche
lokal-anaphylaktische Erscheinungen weder bei Mfluse- noch
Rattentumorimpfungen beobachtet werden.

Bashford und Russel 2 ) fflhren die aktive Geschwulst-
iramunitat darauf zurflck, daB der Organismus die Fahigkeit
verloren hat, das fflr die Entwicklung der geimpften Geschwulst-
zellen notwendige Stroma nebst Gef&Ben zu liefern. Dem-
gegenflber hat Goldmann 3 ) mit seiner vorzflglichen In-
jektionstechnik den Nachweis fflhren konnen, daB die Stroma-
und GefaBreaktion auch bei immunen Tieren in reichem MaBe
stattfindet. Der Einwand Russels 4 ), daB die Resultate einer
derartigen GefaBaufpumpung keine normalen Verhaltnisse dar-
stellen, ist nicht stichhaltig, da selbst durch maximalste In-
jektion immer nur vorhandene GefaBe sichtbar gemacht, aber
keine neuen erzeugt werden konnen. Aber selbst wenn die
Bashford-Russelsche Auffassung in beschranktem Grade
zu Recht bestehen sollte, so bildet sie keine Losung, sondern
eine Umschreibung des Problems, da sich sofort die Frage
erhebt, welche Momente veranlassen eine so merkwflrdige
Umstimmung des Organismus, daB er die Fahigkeit der Stroma-
reaktion verloren hat?

Den Versuch da Fan os 5 ), das Problem durch celluiare
Analyse zu losen und in der massenhaften Ansammlung von
Plasmazellen am Orte der Impfung sowie an den verschie-
densten Korperstellen die Ursache der Resistenz zu sehen,
laBt Goldmann ebenfalls nicht gelten, da er speziell in der
Peripherie intraperitoneal wachsender Chondrome eine sehr
starke Ansammlung von Plasmazellen beobachten konnte.

1 ) Zeitschr. f. Immunitiitsf., 1909.

2) Proceed, of the Roy. Soc., 1910.

3) Beitr. z. klin. Chir., Bd. 72.

4) Fifth scient. report of the Imperial Sane. res. Fund, 1912.

5) Zeitschr. f. Immunitiitsf., 1910.

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Beziehungen der Milz zur aktiven Geschwulstimmumtat. 221

In der Literatur findet sich mehrfach die irrtfimliche
Meinung, daB Ehrlich die zur Disknssion stehende Form
der aktiven Tumorimmunitfit auf Athrepsie zurfickffihrt. Ich*)
habe schon vor kurzem diese namentlich in amerikanischen
Arbeiten spukende Ansicht zurfickgewiesen, glaube jedoch,
auch bei dieser Gelegenheit betonen zu mfissen, daB weder in
den Arbeiten Ehrlichs noch in denen seiner Schuler ein
Wort zu finden ist, aus dem ein Zusammenhang zwischen der
durch avirulente Tumoren oder norinale Organe erzeugten
aktiven Resistenz und der athreptischen Immunit&t entnommen
werden kfinnte. Hat doch Ehrlich im Gegenteil von jeher
den scharfen Gegensatz betont, in dem beide Immunit&ts-
formen zu einander stehen.

Aus dieser kurzen Uebersicht ergibt sich wohl hinreichend,
daB wir noch weit davon entfernt sind, die aktive Geschwulst-
immunit&t irgendwie befriedigend erklaren zu kdnnen. Es be-
darf offenbar noch eines grofieren Tatsachenmaterials, um eine
sicherere Unterlage fOr spatere Erklarungen zu gewinnen.

Unter den hier gangbaren Wegen schien mir einer nicht
ganz aussichtslos, der durch mehrere Arbeiten der letzten Zeit
vorgebahnt war und das Ziel verfolgt, die Beziehungen der
Milz zum Tumorwachstum aufzuklaren.

Wir kennen fiber derartige Beziehungen bereits eine
Summe von Tatsachen, die zum Teil direkt in das Immunitfits-
gebiet fibergreifen.

So ist es eine den Pathologen wohlbekannte Erscheinung,
daB die Milz trotz ihrer reichen Vaskularisation nur selten
Geschwulstmetastasen aufweist und sich hierin in scharfem
Gegensatz zur Leber befindet. Dies gilt keineswegs bloB ffir
die menschliche, sondern auch fflr die experimentelle Tier-
onkologie. Freilich liegen hier die Verhfiltnisse, wenigstens
bei den Mfiuse- und Rattentumoren, insofern etwas anders,
als infolge der fast ausschliefllichen Metastasierung dieser
Geschwfilste auf dem Blutwege die Lungen das enorm fiber-
wiegende Kontingent ffir sekundfire Knoten abgeben. Andere
Organe werden nur ausnahmsweise befallen, und Milz-
metastasen, von denen ich selbst nur zwei Ffille gesehen
habe, gehfiren zu den Raritfiten. Erklfirt sich daher hier

1) Journ. of exper. Med., 1911.

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222

H. Apolant,

die Seltenheit der Milzmetastasen aus mechanischen Be-
dingungen, so muB ftir den Nachweis des eventuellen Milieu-
einflusses, der in der menschlichen Onkologie auch nach dem
Urteil erfahrener Pathologen nicht zu entbehren ist, das Ex¬
periment eintreten, und zwar in Gestalt direkter Geschwulst-
implantationen in die Organe. Es liegen hierflber Angaben
besonders von Goldmann 1 ), Graf 2 ) und aus neuester Zeit
von Brancati 8 ) vor. Goldmann beobachtete in Versuchen,
die im Ehrlichschen Institut ausgefflhrt wurden, daB die
direkte Organimpfung von Erfolg begleitet war, daB dagegen
nach einfacher intraperitonealer Geschwulstinjektion Knoten
nur auf der Oberfl&che der Organe, speziell der Milz und
Leber, aber nicht im Parenchym gefunden wurden. Graf
konstatierte ebenfalls ein sehr gutes Angehen des verriebenen,
filtrierten und mit der sechsfachen Menge physiologischer
Kochsalzlosung verdflnnten Geschwulstbreies nach direkter
Injektion in die Organe. Demgegenflber betont Brancati,
der den Impferfolg auch histologisch kontrollierte, daB ein
erheblicher Unterschied zwischen den Impfungen in die Milz
und den in andere Organe wie Leber, Hoden, Pankreas, Niere
etc. besteht. WShrend die letzteren einen vorziiglichen Boden
ftir das Geschwulstwachstum abgeben, das zu einem schnellen
Parenchymuntergang ftthrt, bleibt die Tumorproliferation im
Milzparenchym beschrankt, so daB die Neubildung sich zwar
nach auBen stark entwickeln kann, aber nicht sehr groBe
Partien des Organs selbst zerstSrt. Er erblickt in dieser
relativen lokalen Immunitat geradezu eine Sonderstellung
der Milz.

In diesem Zusammenhang ist es nicht ohne Interesse,
auf die bekannte, zuerst von Bridr6 4 ) festgestellte und oft
bestatigte Tatsache hinzuweisen, daB die Milz unter den Or-
ganen eine besonders hohe immunisatorische Kraft besitzt,
die z. B. dem Hoden ganzlich fehlt, einem Organ, das nach
Brancati einen besonders giinstigen Boden fur die lokale
Impfung abgibt.

1 ) Beitr. z. klin. Chir., Bd. 72, 1911.

2) Centralbl. f. allg. Path, etc., Bd. 21, 1910.

d) Tumori, Anno I, fasc. 2. p. 189.

4) Ann. de l’lnst. Pasteur, 1907.

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Beziehungen der Milz zur aktiven Geschwulstimmunitat. 223

Ein weiteres, ffir unsere Betrachtungen nicht unwichtiges
und in letzter Zeit besonders von Brancati 1 ) hervorgehobenes
Moment besteht in der unzweifelhaften Tatsache, daB die Milz
bei Geschwulsttieren durchschnittlich vergrOBert ist. Diese
Vergrdfierung beruht keineswegs, wie man zunfichst vermuten
konnte, auf Ulzerationen und Sekund&rinfektionen, denn in
zahlreichen F&llen konnte ich mich davon fiberzeugen, daB
gerade bei sehr alten, tief ulzerierten Tumoren, besonders
Sarkomen, auffallend kleine Milzen bestanden. Auch Cimo-
roni 2 ), der warm fflr die Vergrdfierung der Milz beim Tumor*
wachstum eintritt, erw&hnt, daB die Milz bei kachektischen Tieren
der Atrophie verfallt. Andere Tatsachen sprechen ebenfalls
daffir, daB hier direkte Beziehungen zum Tumor vorhanden sind.

Schon vor 1 lingerer Zeit war mir aufgefallen, daB sich
zwiscben den einzelnen GeschwulststSmmen hinsichtlich der
MilzgrdBe mefibare Differenzen nachweisen lassen. WShrend
z. B. in unserem frflhzeitig ulzerierenden Sarkomstamm 7 das
Durchschnittsgewicht der Milz nur wenig fiber 0,2 g betr&gt,
habe ich in dem sehr solide wachsenden Carcinomstamm 11
wiederholt Durchschnittsgewichte von 0,35 und mehr be-
obachtet Medigreceanu 8 ), dem wir sehr genaue Angaben
fiber die OrgangrdBe bei Tumortieren verdanken, ist zwar der
Meinung, daB die Gewichtsschwankungen der Milz sowohl bei
normalen wie bei Tumortieren zu grofie sind, um absolut
gfiltige Schlfisse zuzulassen. Doch gibt er selbst zu, manchmal
auBergewdhnlich grofie Milzen bei Geschwulsttieren gesehen
zu haben. Insbesondere gilt dies ffir Mause mit spontan ent-
standenen Tumoren, deren Milzgewicht nach den Tabellen
Medigreceanus zwischen 0,3687 und 0,6056 schwankt. Ich
selbst habe bei einer Spontantumormaus den allerdings wohl
singular dastehenden Fall einer 2,0 g schweren Milz gesehen.
Die genauen MaBe des stark gekrfimmten und den grdfiten
Teil der Bauchhfihle ausffillenden Organs betrugen in Zenti-
metern 4,3 L&nge, 1,0 Breite und 0,6 Dicke. Leuk&mie be-
stand nach der allerdings erst post mortem vorgenommenen
Blutuntersuchung nicht.

1 ) Tumori, Anno I, fasc. 5.

2) Tumori, Anno I, fasc. 6.

3) Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 13.

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224

H. Apolant,

GewiB wird man Medigreceanu darin beistimmen
mflssen, daB fflr die GroBe der MHz zahlreiche Faktoren in Be-
tracht kommen, deren Bedeutung im einzelnen nicht immer
klar zu erweisen ist. Es scheint mir aber zu weit gegangen
wegen dieser Schwankungen einen EinfluB des Tumors auf die
MilzgrflBe flberhaupt leugnen zu wollen. Der gleichen An-
sicht ist Brancati, der diese Frage an Batten sehr ein-
gehend studiert hat und angibt, daB sich das Durchschnitts-
gewicht der Milz zu dem des normalen Kflrpers wie 1:169, zu
dem des Tumortieres dagegen wie 1:60 verh&lt.

Neben den erw&hnten Differenzen zwischen den einzelnen
Geschwulststammen halte ich vor allem den Umstand fflr be-
achtenswert, daB analoge Volumenzunahmen der Milz aucb be
Nullern, also mit negativem Erfolg vorgeimpften M&usen sowie
bei, sei es mit avirulentem Tumormaterial oder mit normalen
Organen immunisierten Tieren angetroffen werden. Bei gleicher
Lange des Tieres, die fflr das nicht exakt bestimmbare Alter
herangezogen wurde, habe ich wiederholt ein gegen die Norm
verdoppeltes Durchschnittsgewicht der Milz konstatieren
kflnnen.

Aehnliche Gedanken leiteten schon Braunstein 1 ) bei
seinen vor mehr als Jahresfrist verflffentlichten Versuchen, die
die Rolle der Milz in der Geschwulstimmunit&t beweisen
sollten. Braunstein geht aber von der meiner Ansicht
nach unrichtigen, wenigstens bisher durch nichts bewiesenen
Voraussetzung aus, daB die Geschwulstimmunit&t auf der
Bildung echter Antikorper beruht und daB eiue Hauptbildungs-
st&tte derselben ebenso wie bei zahlreichen bakteriellen In-
fektionen in die Milz zu verlegen ist. Einen Beweis fflr die
Richtigkeit dieser Anschauung erblickt er darin, daB Ratten
und Meerschweinchen, die er gleich nach erfolgter Splenek-
tomie mit M&use- resp. Menschenkrebs geimpft hatte, sehr oft
zugrunde gingen, wie er meint, weil der milzlose Organismus
nicht imstande ist, gegen die bdsartigen Geschwfllste ahnlich
wie gegen Infektionen erfolgreich anzuk&mpfen.

Zunachst ist es ein groBer Fehler dieser Versuchs-
anordnung, daB die Impfung mit artfremdem Krebsmaterial
geschah; denn damit fallt jede Berechtigung, die Resultate

1) Bed. klin. Wochenschr., 1911.

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Beziehungen der Milz zur aktirea Geschwulstimmunitat. 225

zur Bestimmung der Rolle zu verwenden, die die Milz bei der
eigentlichen Geschwulstimmunitat innerhalb der gleichen Species
spielt Das ist aber der springende Punkt auch in den Ueber-
legnngen Braunsteins. Es liegt offenbar an seiner dnrch
keine Tatsache gestiitzten Ueberzeugnng von der Antikorper-
natnr der gewbhnlichen aktiven Geschwulstimmunitat, daB er
die notwendige scharfe Unterscheidung zwischen der Impfung
mit artfremdem und arteigenem Krebsmaterial nicht macht.
Ferner ist es schwer zu entscheiden, wie weit die Todesfalle
vielleicht auf die Splenektomie selbst zu beziehen sind, da
Braunstein anscheinend stets die Impfung sofort der
Splenektomie folgen lieB und von Kontrollsplenektomien ohne
folgende Impfung nichts berichtet. Diese Vermutung drangt
sich mir urn so mehr anf, als ich bei meinen allerdings etwas
anders angestellten Versuchen den Tod splenektomierter Tiere
im Anschlufi an eine Geschwulstimpfung nie gesehen habe,
und auch die gleich zu erwahnenden Versuche Brancatis
nichts davon enthalten.

Diese neueste Arbeit Brancatis 1 ) kommt dem eigent¬
lichen Problem nun schon erheblich naher. Bran cati kon-
statierte namlich bei Ratten, daB schwach virulente Tumoren
auf entmilzten Tieren erheblich besser angingen als auf nor-
malen. Dabei war es gleich, ob die schwache Virulenz eine
natfirliche Eigenschaft des verwandten Materials Oder ktknstlich
hervorgerufen war. Bei hochvirulenten Tumoren bestand ein
solcher Unterschied nicht, nur wenn ein gr5Beres Zeitintervall
zwischen Entmilzung und Impfung gesetzt wurde, machte sich
auch hier ein gegenttber den Kontrollen beschleunigtes Wachs-
tum geltend. Von besonderer Bedeutung scheint mir aber
die einmal von B ran cat i gemachte Beobachtung zu sein,
daB bei sieben 1 und 2 Monate vorher mit hochvirulentem
Material eingeimpften Ratten, nach der Splenektomie ebenso
wie bei zwei anderen entmilzten und zehn normalen Tieren
die neue Impfung anging, so daB also hier eine offenkundige
Immunitat durch die Entmilzung gebrochen wurde.

Ich war noch ohne Kenntnis dieser Arbeit, als ich meine
eigenen Versuche begann, die die Frage zu entscheiden such ten,
ob sich die aus den angefiihrten Tatsachen ergebende Be-

1 ) Tumori, Anno II, fuse. 1 , p. 74.

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226

H. Apolant,

teiligung der Milz an dem Zustandekommen der sogenannten
aktiven Geschwulstimmunitfit, korrekter ausgedrfickt, der Re-
sistenzerhfihung des Organismus gegen eine Impfung mit Ge-
schwulstmaterial durch Ausschaltung der Milz auch experi¬
mental! nachweisen l&Bt. Mit anderen Worten: Lassen sich
Tiere, denen die Milz exstirpiert wurde, ebenso leicht wie
normale gegen das Angehen von Impfgeschwfilsten resistent
machen? Diese Frage hat zun&chst mit der Natnr der Resi-
stenz nichts zu tun. Denn AbwehrmaBregeln der Milz sind
auch ohne Bildung von Antikdrpern denkbar.

Bevor ich die Protokolle der bisher nur an MSusen an-
gestellten Versuche bespreche, mfichte ich die Technik der
von mir gefibten Operationsmethode, mit der ich ausgezeichnete
Resultate erhielt, kur» beschreiben.

Die Maus wird in einem nicht zu groBen aber breiten
Prfiparatenglas bis zum Umfallen fitherisiert und auf ein
Lautenschlagersches Mfiusebrett aufgespannt. An letzterem
habe ich die unbequemen Schrauben durch federnde Klemmen
ersetzt, an denen die FiiBe des Tieres mittels dicker Seiden-
schlingen im Augenblick befestigt werden kfinnen. Das Tier
liegt auf dem Rficken, aber, was von Wichtigkeit ist, so, daB
der linke HinterfuB fiber den rechten gekreuzt wird. Dadurch
wolbt sich das linke Hypochondrium vor, dessen Kuppe nun-
mehr die Milz einnimmt. Diese Kuppe wird im Umfange
eines Markstfickes mit den Fingern epiliert, eine Methode, die
an Sauberkeit und Schnelligkeit alien chemischen Epilations-
methoden Uberlegen ist. Die Milz schimmert jetzt deutlich
als blaulicher Korper durch die Haut. Letztere wird mit
Alkohol abgetupft, mit Jodtinktur eingepinselt und der Milz
entsprechend in einer Lange von etwa 1—l 1 /* cm mit der
Schere durchschnitten. 2 kleine Klemmen halten die Wund-
rfinder auseinander. Nun macht man unter sorgfaltiger Ver-
meidung der langsverlaufenden GefaBe einen etwa 3 mm langen
Schlitz in Muskulatur + Peritoneum — bei sehr groBen Milzen
kann er etwas langer sein —, geht mit einer Unterbindungs-
nadel, die einen langen Seidenfaden trfigt, unter die Milz und
hebelt sie behutsam aus der Wunde heraus. Der Faden wird in
der Mitte durchschnitten, und erst der untere, dann der obere
Pol der Milz unterbunden. Letztere laBt sich nunmehr leicht

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Beziehungen der Milz zur aktiven Geschwulstimmunitat. 227

von dem stets anhaftenden Pankreas ldsen. Abschneiden der
F&den, Versenkung des Pankreas mittels eines kleines Spatels,
eine Knopfnaht durch die Muskulatur sowie Anlegung zweier
Michelscher Klammern.

In der Beschreibnng erscheint die Operation etwas kompli-
ziert, in Wirklichkeit ist sie tiberaus einfach und dauert im
ganzen 2—3 Minuten. Fflr die Vorbereitung bedarf man aller-
dings etwas mehr Zeit, doch ist es bei gescbulter Assistenz
moglich, in einer Stunde 8 Milzen zu exstirpieren. Unter
genau 100 operierten Tieren habe ich nnr ein einziges an der
Operation selbst verloren, und zwar infolge einer sofort er-
kannten Nierenverletzung. Sonst erfolgte die Heilung aus-
nahmslos per primam. Wichtig ist nur, dafi die operierten
Tiere auf Watte gelegt und im Glase an einen warmen Ort
gestellt werden.

Betrachten wir nunmehr die Versuchsprotokolle (cf. Tab. I
bis IX): In Versuch I fand die Entmilzung am 19. Mai statt,
die Immunisierung mit 0,2 Spontantumor subkutan am 27. Mai,
die Nachimpfung mit 0,05 Carcinom am 21. Juni.

In alien Tabellen geben die Zahlen der obersten Reihe das Alter der
Geschwulst in Tagen an.

entrnilzte und immuni-
sierte Tiere.

Tabelle I.

Entmilzung 19. V., Immunisierung
27. V., Impfung 21. VI.

nur immunisierte Tiere.

unvorbehandelte Kon-
trollen.

54

Uf

3+.0-

100 *

0000000 iff f

5+,6-

45%

Tabelle II.

Entmilzung Serie I 17. VI., Serie II 19. VI., Immunisierung 20. VI..

Impfung 6. VII.

21

28

37

42

96

000 •«///#/

7t.3-

70S

*

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7+1-

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0

13+9-

60?

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228

H. Apolant,

Die drei entmilzten Tiere zeigten ein gutes Geschwulst-
wachstum, zwei weitere entmiizte Tiere dieser Serie sind nicht
eingezeichnet, weil sie bereits wenige Tage nach der Impfung
starben. Doch zeigten beide schon zu diesem Zeitpunkt eine
deutliche Geschwulstentwicklung, so dafi bei der seltenen

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Beziehungen der Milz zur aktiven Geschwulstimmunitat. 229

TabeUe VI.

Entmilzung 5. XI., Immunisierung
6. XL u. 22. XI., lmpfung 2. XII.

u

22

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77%

1

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4+.5-

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1

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100 %

Tabdle VII.

Entmilzung 1. XI., Immunisierung 2. XI. u. 18. XL,
lmpfung 29. XI.

35

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8t,1-

90%

o

o

GO

=3.

6+,2*

75%

14+.0-

Tabdle VIII.

Immunisierung 10. X. u. 23. X. u. 4. XI.,
Entmilzung 14. XI., lmpfung 15. XI.

33

12+.0*

100%

Efl

m%

- M HS

6 + , 0-

100%

Tabdle IX.

Erste lmpfung 28. TV., Entmilzung 1. VII., zwdte
lmpfung 6. VII.

a

32

01

52

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1

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a

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#

ooooooo

8+8*

spontanen Tumorrflckbildung in dem hier benutzten Stamm 5
die Ausbeute von 100 Proz. sich kaum ge&ndert h&tte, wenn
die Tiere am Leben geblieben w&ren. Die 11 nicht ent-
milzten, aber immunisierten Kontrollen zeigten eine Angangs-
ziffer von nur 45 Proz., wobei noch zu bemerken ist, dafi das
Wachstnm der einen Geschwulst ein sehr geringes war.

In Versuch II geschab die Entmilzung am 17. resp.
19. Juni, die Immunisierung mit 0,2 Spontantumor 1 resp.
3 Tage spftter am 20. Juni, die lmpfung mit 0,05 Carcinom
am 6. Juli.

Die entmilzten Tiere zeigen eine Ausbeute von 70 und
87 Proz. Oder, bei Berflcksichtigung der Zahl der Tiere, zu-
sammen eine Durchschnittsausbeute von 78 Proz. gegen 60 Proz.
der nicbt entmilzten, nur immunisierten Kontrollen.

Noch deutlicher ist die Differenz in Versuch III. Hier
geschah die Entmilzung am 15. resp. 16. August, die Im¬
munisierung mit 0,2 Spontantumor am 17. August, die Nach-
impfung mit 0,05 Carcinom am 28. August.

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230

H. Apolant,

Die Ausbeute der entmilzten und immunisierten Tiere
betrug 100 Proz. und 91 Proz. (Durchschnitt 95 Proz.), die
der nur immunisierten Kontrollen 60 Proz. und die der nicht
immunisierten normalen Kontrollen 87V 2 Proz.

Hier war also die Ausbeute bei den entmilzten Tieren
sogar grOBer als bei den unvorbehandelten Kontrollen.

In den beiden folgenden Versuchen wurde Embryonenbrei
zur Immunisierung verwendet.

In Versuch IV wurde am 31. Oktober entmilzt, am

I. November mit 0,3 Embryonenbrei immunisiert und am

II. November mit 0,1 Carcinom geimpft.

Auch hier ist eine, wenn auch geringere Differenz vor-
handen, da die entmilzten Tiere 80 Proz., die nicht ent¬
milzten 71 Proz. und die normalen Kontrollen 87V* Proz.
Ausbeute lieferten.

Versuch V. Entmilzung am 2. November, Immunisierung
mit 0,3 Embryonenbrei am 4. November, Nachimpfung mit
0,1 Carcinombrei am 19. November.

Ausbeute bei den entmilzten sowohl wie bei den unvor¬
behandelten Kontrolltieren 90 Proz., bei den nur immuni¬
sierten Kontrollen 66 1 /* Proz.

In dem folgenden Versuch VI, bei dem die Entmilzung
am 5. November geschah, wurde doppelt immunisiert, am
6. November mit Embryonenbrei und am 22. November mit
Spontantumor. Impfung mit Carcinom am 2. Dezember.

Vermutlich ist hier infolge der doppelten Immunisierung
die Resistenz starker ausgesprochen, aber auch wieder unter
Wahrung einer betrachtlichen Differenz zwischen den ent¬
milzten Tieren (77 Proz.) und den nicht entmilzten (44 Proz.)
bei 100 Proz. normaler Ausbeute.

In dem Versuch VII wurde ebenfalls 2mal immunisiert,
mit Embryonenbrei am 2. November, mit Spontantumor am
18. November — die Entmilzung geschah am 1. November —
doch war hier der Immunisierungseffekt nicht so stark wie im
vorhergehenden Versuch; denn einer Ausbeute von 90 Proz.
bei den Entmilzten steht eine solche von 75 Proz. bei den
nur Immunisierten gegeniiber. Normale Kontrollen geben
100 Proz.

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Beziehungen der Milz zur aktiven Geschwulstimmunitiit. 231

Endlich teile ich noch zwei Versuche mit, die nach der
inzwischen erfolgten Veroffentlichung Brancatis als Be-
statigung seiner Angabe aufzufassen sind, daB durch die Ent-
milzung eine vorhandene Immunit&t gebrochen werden kann.
Hier ging die Immunisierung also der Entmilzung voraus.

Versuch VIII. Erste und zweite Immunisierung mit
Spontantumor am 10. und 23. Oktober, dritte Immunisierung
mit Embryonenbrei am 4. November. Entmilzung am 14. No¬
vember. Impfung mit Carcinom am 15. November.

Der Erfolg ist eklatant. Ausbeute bei den entmilzten
Tieren ebenso wie bei den unvorbehandelten Kontrollen
100 Proz., bei den nur immunisierten 66 Proz.

Der letzte Versuch IX schlieBlich ist der einzige, in dem
die Ausbeute bei den entmilzten Tieren mit 46 Proz. etwas
geringer war als die der nur immunisierten mit 50 Proz.
Diese unbedeutende Differenz wird aber wohl dadurch auf-
gewogen, daB die gewachsenen Tumoren bei den entmilzten
Tieren unzweifelhaft grOBer waren. Im tlbrigen erkl&rt sich
das von alien anderen Versuchen abweichende Resultat dieser
Serie vermutlich dadurch, dafi hier keine weitere Immuni¬
sierung stattfand, sondern dafi lediglich Tiere benutzt wurden,
die am 28. April mit einem nicht sehr gut angehenden Sarkom-
stamm ergebnislos vorgeimpft waren und am 6. Juli mit 0,05
Carcinom nachgeimpft wurden. Hier lagen also zwischen erster
und zweiter Impfung fast 27 2 Monate, eine Zeit, innerhalb
der auch andere Organe des Korpers ihre Resistenz erhdhende
Tatigkeit so entwickelt haben konnen, daB der Ausfall der
Milz nicht mehr in die Erscheinung tritt.

Sehen wir daher von dieser Serie ab, so ergibt sich als
durchgehendes Resultat, daB entsprechend unserer theoretischen
Voraussetzung die Resistenzerhohung gegen Impfgeschwiilste
durch Entfernung der Milz tatsiLchlich deutlich erschwert wird.
Zuweilen scheint die Immunisierung, wenigstens nach ein-
maliger Vorbehandlung, ganzlich zu versagen. In anderen
Fallen ist ein geringer, nach zweimaliger Vorimpfung deut-
licherer Immunisierungseffekt vorhanden, der aber niemals
den bei den nicht entmilzten, immunisierten Kontrollen er-
reicht. DaB die Resistenz eines entmilzten Tieres, wenn auch
schwerer als die eines normalen, Gberhaupt erhoht werden

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232 Apolant, Beziehungen der Milz zur akt Geschwulstimmunitat.

kann, spricht keineswegs gegen die Rolle, die wir nach
den mitgeteilten Ergebnissen der Milz bei der Immunisiernng
zuerkennen mflssen. Denn selbstverstflndlich ist die Milz nicht
das einzige Organ, dem in dieser Frage eine Bedeutung zu-
kommt, wohl aber ist sie das einzige, dessen Anteil durch
Exstirpation experinientell festgestellt werden kann.

Die Wahrscheinlichkeit, daB noch andere Organe an der
Resistenzerhohung beteiligt sind, bat mich bestimmt, das
Intervall zwischen Entmilzung und Immunisierung mSglichst
zu verkflrzen, um den anderen Organen keine Zeit zu kom-
pensatorischem Eintreten zu lassen. Um in dieser nicht un-
wichtigen Frage klarer zu sehen, dflrften sich weitere Ver-
suche mit stark variierten Intervallen empfehlen.

Das Resultat des Versuches VIII, in welchem die Im¬
munity noch bei einem Intervall von mehr als 1 Monat
zwischen erster Vorimpfung und Entmilzung durch letztere
vollstflndig gebrochen werden konnte, spricht fflr die domi-
nierende Bedeutung der Milz. Es wird aber ebenfalls weiterer
Versuche bedflrfen, um den moglichen EinfluB individueller
Verhaltnisse in dieser interessanten Frage festzustellen.

Es liegt natiirlich nahe, das Ergebnis dieser Unter-
suchungen in Beziehung zu den Heilwirkungen zu bringen,
flber die Braunstein und spflter Lewin und Meidner 1 )
mit der Injektion von Milzen geimpfter Tumortiere berichtet
haben. Ich halte jedoch weder die Natur der aktiven Ge¬
schwulstimmunitat noch das Wesen dieser Heilwirkungen fflr
weitgehende Schlflsse gentigend geklart. Keinesfalls kann ich
in den zur Zeit vorliegenden Tatsachen einen zwingenden
Beweis fur die Produktion echter Geschwulstantikflrper in der
Milz erblicken.

Zusammenfassung.

Das Zustandekommen einer aktiven Resistenz des Korpers
gegen das Angehen geimpfter Geschwulstzellen kann durch
eine Milzexstirpation verhindert oder zum mindesten erheblich
erschwert werden.

1 ) Zeitsckr. f. Krebsf., Bd. 11, 1912.

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Lurk, Anaphylatoxin, Peptotoxin und Pepton zur Auaphylaxie. 233

Nachdruck verboten.

Anaphylatoxin, Peptotoxin nnd Pepton In ihren Be-
zlehnngen znr Anaphylaxle.

Erganzungen und Richtigstellun gen zu der
gleichnam igen Arbeit von A. Besredka, H.Strbbel

und F. Jupille.

Von A. Lura,

Assistent der Medizinischen Klinik (Prof. Fori an ini) Pavia.

In der unter dem obigen Titel in Bd. 16, Heft 3 dieser
Zeitschrift erschienenen Arbeit bezwecken Besredka,
Strobel und Jupille, wie sie in der Einleitung bemerken,
„dem Siegeslauf der Anaphylatoxinlehre etwas Einhalt zu
tun“ und die Vorstellung zu widerlegen, „die sich Fried-
berger flber den Ablauf der Anaphylaxie zurecht gemacht
hat“ (sic!) 1 ). Ob die Mitteilung der genannten Autoren bei
dem sachkundigen Leser diesen Etfekt hat, kann fiiglich be-
zweifelt werden. Sofern bei dem fernerstehenden aber ein
derartiger falscher Eindruck erweckt werden konnte, w&re es
lediglich darauf zuriickzufiihren, daC Besredka, StrSbel
und Jupille in einer bei wissenschaftlichen Publikationen sonst
nicht ublichen Weise die zahlreichen alteren Arbeiten, die
ihren Befunden widersprechen und deren Deutung widerlegen,
mit keinem Wort erwahnt haben.

Die Ergebnisse, die in der vorliegenden Arbeit der ge¬
nannten Autoren mitgeteilt werden, sind bereits im wesent-
lichen in einer Reihe von vorl&ufigen Mitteilungen in den
„Comptes rendus de la Soci6t6 de Biologie 1911“ veroffent-
licht. Dort heiBt es unter anderen Bd. 71, p. 599 (Sitzung
vom 9. Dezember 1911):

1) Eine derartige etwas vmgewohnliehe Ausdrucksweise you Seiten
Besredkas und seiner Mitarbeiter niufi um so mehr Verwunderung er-
regen. als doch gerade die Anaphylaxietheorie Besredkas und seine
dualistische Auffassung zweier Korper im EiweiS (Sensibilisinogen und
Antisensibilisin), wie Doerr, Friedberger u. a. gezeigt haben, mit den
Tatsachen nicht im Einklang steht und von Besredka selbst in den
wesentlichen Punkten aufgegeben werden muSte.

Zeitochr. f. ImmaniUtUfortchuog. Orig. Bd. XVII. 10

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234

A. Lura.

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„0r, ce pouvoir toxique doit tenir a l’adsorption de la peptone par
des bacilles typhiques; car d’une part, une injection pr&ilable de peptone
(VA, c. c. de solution k 10 p. 100) dans les veines preserve le cobaye, dix
minutes aprcs, contre une dose surement morteile de cette substance dite
anaphylatoxine typhique; d’autre part, cette dernicre n’apparait pas lorsque,
toutes conditions ^gales d’ailleurs, on fait usage des bacilles typhiqucs
,,non peptones" c’est-k-dire de bacilles typhiques ayant pousse sur gelose
ne renfermant pas de peptone.

Und ferner ibid. p. 691 (Sitzung vom 23. Dezember 1911):

Dans une note r<?cente, nous avons montre que les bacilles typhiques
cultivi's sur gelose pepton^e, adsorbent la |*eptone et donnet lieu, sous
l’inthience du serum frais de cobaye, a un poison que nous avons appelle
peptotoxine.

Nous avons observe depuis le meme phcnomene pour les ni6ningo-
co<|iies et les bacilles diphteriques. Nous avons vu notamment que suivant
que Ton a affaire a des meningocoques „peptoncs“ ou „apeptoncs“, on
produit ou on ne produit pas de ]>eptotoxine.

11 en est de meme des bacilles de la diphtcrie que l’on cultive sur
gelose a ponnnes de terre, avec ou sans peptone: les bacilles diphteriques
]*eptones additionnes de serum de cobaye (3 e. c.) donnet lieu a la pepto-
toxine morteile en une ou deux minutes; la meme dose ou memo une dose
plus forte de bacilles eultives sur gelose exemptc de peptone, ne produit
pas le moindre trouble, dans les conditions identiques.

Hier behaupten also Besredka und seine Mitarbeiter
klipp und klar, daB die Anaphylatoxinbildung nur aus Bak-
terien gelingt, welche auf peptonhaltigeu Nahrboden gewachsen
sind, und sie sind geneigt, das von den Bakterien aufge-
nommene Pepton dieser Nahrboden fiir die Muttersubstanz
des Anaphylatoxins zu halten. Wir batten also im Bakterien-
anaphylatoxin lediglich ein Kunstprodukt vor uns, das nur
aus Kulturbakterien entsteht und nicht, wie Friedberger
annimmt, ein Gift, das auch unter den naturlichen Verhalt-
nissen des Gescheliens, also bei der Infektion im Organismus
sich bildet.

Durch eine ganze Reihe von Autoren wurde
alsbald die Unrichtigkeit der von Besredka a u f -
gestellten Behauptungen dargetan.

Leider aber scheinen Besredka und seinen Mitarbeitern
diese Arbeiten entgangen zu sein.

Bereits in der Sitzung der Mikrobiologischen Gesellschaft
vom 9. Januar 1912 J ) konnte Friedberger iiber Versuche

1) Berliner klin. Woehenschr., 1912, p. 275/76.

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Anaphylatoxin, Peptotoxin und Pepton zur Anaphylaxie. 235

berichten, denen zufolge auch Bakterien, die auf pep ton-
freiem Agar und auf Kartoffeln gewachsen waren, Ana¬
phylatoxin bildeten. Uebrigens sprachen, wie auch an anderer
Stelle bereits betont worden ist, schon die Slteren Versuche
von Fried berg er und Nathan 1 ), die aus Exsudatbakterien
und Versuche von Friedberger Und Szymanowski 2 ),
die aus im Meerschweinchenorganismus gewachsenen und
durch fraktionierte Zentrifugierung vom Blut befreiten Trypano-
somen Anaphylatoxin erhielten, gegen die Richtigkeit der
Besredkaschen Annahme. In diesen Versuchen kommt
doch ein Pepton aus irgendeinem Nahrboden tiberhaupt nicht
in Frage.

In einer weiteren Arbeit habe ich 8 ) alsdann die vor-
erw&hnten Versuche fortgesetzt und gefunden, daB Pro-
digiosusbacillen und Typhusbacillen, die auf peptonfreiem
Agar gewachsen sind, im strikteu Gegensatz zu den Angaben
von Besredka und seinen Mitarbeitern ebensogut und
ebensoviel Anaphylatoxin bilden, wie gleiche Mengen der be-
treffenden Bakterien, die auf gewohnlichem peptonhaltigen
Agar geziichtet waren. Ich faBte damals das Resultat meiner
Arbeit wie folgt zusammen:

„Es wird gezeigt, dafi die Anaphylatoxinbildung aus Bakterien nicht
durch das I’epton des Nahrbodens bedingt sein kanu.

Im Gegensatz zu Besredka und Strobel gelnng uns die Anaphyla-
toxinabspaltung aus Kulturen, die auf peptonfreiem Nahrboden gewachsen
waren. Ferner ist an die Versuche zu erinnern, in denen das Gift aus
Mikroorganismen abgespalten wurde, die nur im Tiere geziichtet sind.“

Zu vollkommen analogen Resultaten kam Bierbaum und
Boehncke 4 ), Boehncke 5 ) 6 ) in einer Reihe von Arbeiten
aus dem Ehrlichschen Institut. Sie haben das Bakterien-
material zu ihren Versuchen von Nahrboden mit normalem
und vermehrtem Peptongehalt, von peptonfreien und eiweiB-

1) Diese Zeitschr., Bd. 9, p. 444.

2) Diese Zeitschr., Bd. 9, p. 379.

3) Lurk, diese Zeitschr., Bd. 12, p. 701.

4) Bierbaum und Boehncke, Berl. tierarztl. Wochenschr., 1912.
No. 14.

5) Boehncke, Zeitschr. f. Hyg., Bd. 72, p. 305.

6) Boehncke und Bierbaum, C'entralbl. f. Bakt., Bd. 65. 1912,

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236

A. Lurk,

freien Nahrboden gewonnen. Ihre Resultate ergeben sich
aus nachstehenden Zitaten.

Boehncke schreibt (Zeitschr. f. Infektionskrankh., Bd.72,
p. 313):

,,Aus dein Versuche diirfte einwandfrei hervorgehen, da6 auch aus
Meningokokken, die auf pcptonfreiem Agar gewachsen sind, die Abspaltung
des Anaphylatoxins gelingt, danach die Anaphylatoxinbildung aus Bak-
terien nicht durch das Pepton des Nahrbodens bedingt sein kann und
somit der von den franzosischen Au toren fUr das Anaphyla-
toxin gewiihlte Ausdruck „Peptotoxin“ den tatsachlichen
Verhiil t n issen nicht entspricht 1 ).^

In der jflngsten Arbeit (Boehncke und Bierbaum,
Centralbl. f. Bakt, Orig., Bd. 65) heiBt es p. 505:

„Bei der Nachpriifung der Versuche der franzosischen Autoren
konnten Lura, ferner Bierbaum und Boehncke sowie Boehncke
zeigen, daC dem Pepton nicht die entscheidende Rolle bei
der Abspaltung des Bakterienanaphylatoxins zuzuschreiben
ist, wie dies von Besredka und Strobe] geschieht 1 ). Die
genannten Autoren fanden bei der Darstellung des Anaphylatoxins in vitro
aus den verschiedensten Bakterien (Typhus-, Prodigiosus- und Milzbrand-
bacillen sowie Meningokokken), da6 ein Peptongehalt des Niihrbodens
vollig irrelevant ist fur die Moglichkeit einer Abspaltung des Bakterien-
anaphylatoxins. Ihre Versuche zeigten, daB sich aus Bakterien, die auf
peptonfreiem Agar geziichtet waren, ebensogut Anaphylatoxin abspalten
liefi, wie aus Kulturen von ])Optonhaltigem Agar. Ebenso lieS eine Er-
hohung des Peptongehaltes des Nahrmediums Erseheinungen vermissen,
die im Sinne einer vermehrten Bildung des anaphylaktischen Giftes zu
deuten gewesen waren, wie dies naeh der Hypothese vpn Besredka und
Strobel vermutet werden konnte (Boehncke)/ 4

Weiterhin berichtet dann Friedberger in der Sitzung
der Berliner mikrobiologischen Gesellschaft vom 28. Mfirz 1912
(Berl. klin. Wochenschr., 1912, No. 21, p. 1008) mit Joachi-
moglu liber die Anaphylatoxinabspaltung aus auf albumose-
freien Nahrboden gewachsenen Tuberkelbacillen.

Auch bei dieser Bakterienspecies war kein Unterschied
zwisclien den auf peptonfreiem Nahrboden gewachsenen Mikro-
organismen und den auf gewohnlichen Nahrboden geziichteten
bezliglich der Anaphylatoxinbildung. Alle dieseArbeiten
waren geraume Zeit vor dem Eingang der vor-

1) Im Original nicht gesperrt.

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Anaphylatoxin, Peptotoxin und Pepton zur Anaphylaxie. 237

liegenden Mitteilung von Besredka und seinen
Mitarbeitern erschienen. Die jeglicher literarischen
Gepflogenheit widersprechende g&nzliche Ignorierung dieser
seinen frtiheren Angaben direkt entgegen-
gesetzten Befunde seitens Besredka und seiner Mit-
arbeiter ist um so verwunderlicher und unerkl&rlicher, als
doch speziell meine Arbeit von Besredka selbst in dem
^Bulletin des Annales de l’lnstitut Pasteur 14 *) besprochen
worden ist und sie weiterhin den Gegenstand eines literarischen
Streites zwischen dem einen der Mitarbeiter von Besredka
(St rob el) und mir war 1 2 ).

Auch sSmtliche Arbeiten, die w&hrend der Drucklegung
der Arbeit von Besredka, Strbbel und Jupille er¬
schienen sind, wenden sich strikte gegen die in den „Comptes
rendus“ mitgeteilten Befunde dieser Autoren.

Sowohl Joachimoglu 3 ) wie auch Szymanowski 4 )
leugnen, daB auf peptonfreien N&hrboden gewachsene Bak-
terien schlechter Anaphylatoxin bilden als die auf pepton-
haltigen gewachsenen. (Szymanowski ist sogar geneigt,
die auf peptonfreien NShrbdden gewachsenen Bakterien fiir
geeigneter zur Giftbildung zu halten.) Und endlich konnten
Friedberger und Kapsenberg 5 ) auch zeigen, daB
langere Zeit von Tier zu Tier fortgezflchtete Bakterien
(„tierische Bacillen 14 Bails) gleichfalls ausgezeichnetes Ana¬
phylatoxin liefern.

Aus alien diesen Arbeiten geht also hervor,
daB das Pepton des N&hrbodens mit der Ana-
phylatoxinbildung nichts zu tun hat. Alle diese
von Besredka nicht zitierten Autoren erkl&ren
einmhtig seine Befunde als unzutreffend. Nun
sagt allerdings Besredka in seiner jetzigen Arbeit (1. c.
p. 258) beziiglich des Anaphylatoxins aus Bakterien, nachdem
er die Frage der Bildung aus dem Pepton erortert hat, noch
folgendes:

1) Bd. 10.

2) Diese Zeitsehr., Bd. 13, p. 123, 124.

3) Diese Zeitsehr., Bd. 14, p. 280.

4) Diese Zeitsehr., Bd. 16, p. 13.

5) Ibid., p. 152.

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23S

A. Lurk,

„Auch eine andere Erklarung ist nicht ganz von der Hand zu weisen
Wie wir friiher bereits gezeigt baben, so entsteht Peptotoxin auch bei Ein-
wirkung des Komplementes auf prazipitiertes Serum, d. h, einen Eiweili-
korper, der noch vollstandig unaufgespalten ist; es ist nicht ausgeschlossen,
dafl das Komplement auf den im Bakterium enthaltenen EiweiUkorper
einwirkt und ihn zu Peptotoxin aufspaltet. Wird also der Agar noch so
griindlich von seinem Pepton befreit, so bildet sich trotzdem wieder etwas
Peptotoxin infolge der Aufspaltung des BakterieneiweiSes.“

Danach scheint Besredka also jetzt, soweit ich die
nicht sehr klare Fassung verstehe. in Ueberein-
stimmung mit den vorzitierten Autoren, auch an
die Bildung des Anaphylatoxins aus Bakterien ohne Inter¬
vention des NShrbodenpeptons zu glauben. Dazu haben ihn
vielleicht doch die Resultate der vorerw&hnten Arbeiten, soweit
sie ihm bekannt waren, was fiir die nieinige ja sicher
der Fall ist, veranlaBt. Denn die Tatsache, daB sich aus
Pr&zipitaten akut wirkendes Gift bildet, war ja schon jahre-
lang vor der ersten Mitteilung Besredkas iiber das
Peptotoxin und nicht etwa durch ihn bekannt. Nur sei noch
einmal beziiglich des Bakterienanaphylatoxins hervorgehoben,
daB, wenn der Agar von seinem Pepton befreit ist, sich nicht
„trotzdem immer wieder etwas Peptotoxin infolge der Auf¬
spaltung des BakterieneiweiBes bildet“, sondern daB eben die
Anaphylatoxinbildung ganzlich unabhangig von
dem Pepton des Nahrbodens erfolgt. Es ware sicher
fiir die Klarung des ganzen Problems zweckmaBiger, wenn
auch Besredka, anstatt unsere Befunde ganzlich
auBer acht zu lassen, einfach erklaren wollte,
daB seine Angaben, wonach die Anaphylatoxin¬
bildung aus Bakterien vom Pepton des Nahr¬
bodens abhangig ist, auf einem Irrtum beruht,
und daB seine diesbeziiglichen friiher verbffent-
lichten Angaben keine allgemeine GOltigkeit be-
anspruchen kdnnen.

Auf die Frage der Verschiedenheit des Anaphylatoxins
vom Endotoxin brauche ich nicht weiter einzugehen, da ich die
Divergenzen bereits in der friiheren, Besredka ja bekannten
Arbeit klargestellt habe. Hiervon haben die Autoren auch jetzt
keine Notiz genommen. DaB das BakterieneiweiB (Endotoxin)
an sich nicht giftig ist und lediglich als die Muttersubstanz

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Anaphylatoxin, Peptotoxin und Pepton zur Anaphylaxie. 239

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ties Anaphylatoxins anzusehen ist, hat Friedberger 1 ), wie
an dieser Stelle hinl&nglich bekannt sein dflrfte, seit Jahren
auf Grund von Versuchen ausfiihrlich dargetan. In besonders
sinnfailiger Weise beweisen es die im Vorjahr auf dem Mikro-
biologentag demonstrierten Darmkurven von Friedberger
undKumagai 2 ). Wenn also Besredka erneut darauf hin-
weist und darauf, daB das Anaphylatoxin nicht spezifisch ist,
daB es nicht durch Antiserum neutralisiert wird usw., so ist
das nur eine Wiederholung lSngst bekannter Tatsachen.

Wenn Besredka und seine Mitarbeiter aus Pepton allein
nur dann ein Anaphylatoxin erhielten, wenn sie die Losung
auf Agar ausgossen, und wenn sie daraus schlieBen, daB
„zur Darstellung des Peptotoxins die Anwesenheit von Pepton
noch nicht geniigend ist, daB letzteres sich vielmehr in einem
ganz besonderen physikalischen Zustand befinden muB, wenn
es vom Komplement digeriert werden soll“, so ist das gleich-
falls irrtiimlich. Schon vor Qber 2 Jahren haben Fried¬
berger und Mita 3 ) gezeigt, und Abderhalden hat es be-
statigt, daB sich aus Pepton und Komplement allein Anaphyla¬
toxin bildet. Auch diese Angaben muBten Besredka bekannt
sein, da sie in meiner vorzitierten, von ihm referierten Arbeit
ausfiihrlich diskutiert sind 4 ).

1) Berl. klin. Wochenschr., 1910; Zeitschr. f. lmiiiunitatsf., 1910—12;
Fortschr. der deutschen Klinik, Bd. 2, 1911; Bakterizide Sera in Kolle-
Wassermanns Handbuch, 1L Aufl.

2) Friedberger und Kumagai, Verhandl. der Mikrobiol. Ver-
einigung 1912. Centralbl. f. Bakt., Rdf., Bd. 54, p. 39.

3) Deutsche raed. Wochenschr., 1911, No. 7—9, No. 11 (Vortrag im
Verein fur innere Medizin Berlin).

4) Anmerkung bei der Korrektur: Neuerdings hat Bordet (Comptes
rendus Soc. de Biol., T. 74, 1913, No. 5) auch Anaphylatoxin aus reinem
Agar durch Meerschweinchenserum erhalten. Es diirfte sich danach in
den Versuchen Besredkas nicht um einen „ganz besonderen physi¬
kalischen Zustand des Peptons“ handeln, sondern einfach um eine Sum¬
mation, d. h. die Bildung einer todlichen Giftdosis aus an sich ungeniigenden
Peptondosen mit gleichfalls an sich unwirksamen Mengen von Agar. Was
iibrigens die Ursache der Giftbildung aus Agar anlangt, so braucht sie
nach der mir von Herrn Prof. Friedberger mitgcteilten Ansicht nicht
mit Bordet (im Sinne von Sachs und Ritz, Doerr usw.) als eine
physikalische Adsorption erkliirt zu werden. Es konnte sich vielmehr um
eine Giftabspaltung aus dem im Agar nach den vorliegenden Analysen

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240 Lurk, Anaphylatoxin, Peptotoxin und Pepton zur Anapbylaxie.

Auch die Bestrebungen von Besredka und seinen Mit-
arbeitern, einen Unterschied zwischen Anaphylatoxinvergiftung
und Anapbylaxie auf Grund von Antianaphylaxieversuchen
zu konstruieren, sind nicht als beweisend anzusehen. Ihre
diesbezuglichen Mitteilungen decken sich ini wesentlichen
mit den den Autoren wiederum anscbeinend unbekannten
Slteren Versuchen von Friedberger, Szymanowski,
Kumagai, Odaira und mir 1 ). Nur tibersehen sie die von
Friedberger und seinen Mitarbeilern aufgedeckten kom-
plizierten Beziehungen zwischen echter Antianaphylaxie und
einer allgemeinen Resistenz, wie sie durch Pepton, Anaphyla¬
toxin usw. hervorgerufen wird. Besredka best&tigt wohl
die Angaben dieser Autoren, daB Anaphylatoxin gegen Pepton
schtitze und umgekehrt, aber er iibersieht, was schon vor
Jahren von De Waele, Biedl und Kraus festgestellt und
wegen Nichtberiicksichtigung der quantitativen Beziehungen von
letzteren irrttimlich gedeutet worden ist, daB Pepton auch
eine geringe Resistenz bedingt gegen aktive Anaphy-
laxie und umgekehrt. Wenn also Besredka aus wechsel-
seitigem Schutz zwischen Anaphylatoxin, Pepton und Peptotoxin
auf die Identit&t dieser Substanzen zu schlieBen geneigt ist,
so mflBte er logischerweise aus der von ihm nicht berflck-
sichtigten Tatsache, daB diese Substanzen annfihernd im gleichen
Grad auch gegen aktive Anaphylaxie schiitzen, auch die aktive
Anaphylaxie mit diesen Vergiftungen identifizieren.

enthaltenen Eiweifi handeln, dessen Mengen nach Friedberger liin-
liinglich denen entsprechen, mit ^elclien Friedberger und Nathan
Anaphylatoxin aus Hammelserum, Pferdeserum usw. durch normales Meer-
schweinchenserum erhielten. Die Giftabspaltung gelingt ubrigens nach
Friedberger auch rnit verflussigtem und bei 45° in Normalmeer-
schweinchenserum fliissig eihaltenem Agar.

1) Tagung der Freien Vereinigung fur Mikrobiologie. Sitzung vom
1. .luni 1912. Diese Zeitschr., Bd. 14, p. 371.

Froinmannsche Buchdruckerei (Hermann Pohle) In Jena. — 4273

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Zeitschrift £ Immnnitatsforschiuig. Originala BdlTO. No. 3.

Nachdruck verboten.

[Travail de l’Institut de thgrapeutique de l’Universitg de Bruxelles.]

Aeeherches sur le pouvoir proteoclastique dn sang an
eonrs de l’anaphylaxle.

Premiere communication.

Experiences chez le cobaye.

Par Edgard Zunz.

Avec 2 figures dans le texte.

(Eingegangen bei der Redaktion am 10. Dezember 1912.)

I. Introduction.

On s’est d£j& occupd k plusieurs reprises des modifications
du pouvoir prot6oclastique du sang au cours de l’dtat d’ana-
phylaxie et du choc anaphylactique.

Pfeiffer et Mita 1 2 3 ) n’ont pas rgussi k dgceler de produits biuxgtiques
incoagulables (proteoses et peptones) dans le sgrum de cobaye prglevg en plein
choc anaphylactique ou immgdiatement aprfes la raort par anaphylaxie.
Mais si I’on maintient du sgrum de cobayes en gtat d’anaphylaxie un jour
a 37 0 avec lee protgines sensibilisatrices, il se forme des composgs biurgti-
ques incoagulables. Le sgrum d’animaux en gtat d’antianaphylaxie per-
drait ce pouvoir pendant un trks court laps de temps pour le voir ensuite
reparaitre. Friedberger*) et Kammann 8 ) ont confirmg lee rgsultats
de Pfeiffer et Mita. Kammann fait toutefois remarquer qu’on observe
dans ces conditions une faible rgaction du biuret danB les tubes tgmoins.
Rgcemment Abderhalden 4 * * )est parvenu k dgceler des produits biurgtiques
incoagulables et dialysables dans le sgrum prglevg 30 k 90 minutes aprks
la rginjection de blanc d’ceuf chez des cobayes sensibilisgs 18 jours aupara-
vant par ce mgme produit.

1) H. Pfeiffer und S. Mita, diese Zeitschr., Bd. 6,1910, p. 18—87.

2) E. Friedberger, Deutsche med. Wochenschr., Bd. 37, 1911,
p. 428; diese Zeitschr., Bd. 9, 1911, p. 381.

3) Kammann, diese Zeitschr., Bd. 11, 1911, p. 659—672.

4) E. Abderhalden, Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 82, 1912,

p. 109-112.

ZeiUchr. f. ImmnnitKUforschung. Orig. Bd. XVII. 17

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242

Edgard Zunz,

Abderhalden et Pincussohn 1 2 3 ) se 8ont servi de la methode op-
tique propos^e par Abderhalden*). Si Ton injecte de la solution k l°/ 0
de serum de cheval sous la peau ou dans le p^ritoine d’un cobaye, le serum
de cet animal n’acquiert qu’au bout de 6 jours environ la propriete de
scinder la peptone de soie „Roehe“ ou le serum de cheval. Le pouvoir de
clivage du serum de cobaye ne s’accrolt pas de manikre manifeste les jours
suivants. II ne semble pas subir de modifications appr6ciables pendant le
choc anaphylactique ou imm&liatement aprks celui-cL Sans nier toute
relation entre Papparition de peptidases dans le sang et Panaphylaxie
s&rique, Abderhalden et Pincussohn estiment que la production du
choc anaphylactique lore de l’injection d4cha!nante ne depend pas directe-
ment des enzymes d6sint4grants apparus dans le plasma aprfes l’intro-
duction parents rale de proteines dans Porganisme. Cette opinion se base
surtout sur Papparition du pouvoir de scindage du plasma k une epoque
oil l’on ne parvient pas encore k provoquer le choc anaphylactique.

Pfeiffer et Mita ont deceie une notable augmentation de la deviation
de la lumikre polaris^e dans des melanges de serum de cobayes sensi-
bilis& et de la substance sensibilisatrice. Gruber 8 ) rapporte des faits
analogues.

Les poisons cellulaires derives de Pantigkne introduit lore de Pinjection
d^chainante sont trks probablement des produits intermediates de disinte¬
gration des proteines. Leur faible quantity et leur rapide disparition du
torrent circulatoire permettent de comprendre les r^sultats, en apparence
discordants, des experiences d’Abderhalden et Pincussohn d’une part,
de Pfeiffer et Mita d’autre part

Eammann reproche k la methode optique son application malaisee
d^ qu’on opkre avec des concentrations de serum superieures k 1 %. Selon
cet auteur, le grand nombre de substances con tenues dans le serum et leur
complexite entraineraient des processus secondaires qui influenceraient dans
une assez grande mesure Paction principale recherchee.

Kammann a applique la methode de Muller et Jochmann 4 * * * ) k
retude du pouvoir proteoclastique du serum d’animaux en etat d’anaphy-
laxie serique. II n’est pas arrive de cette fa$on k des donnees bien nettes.
Ceci n’a rien d’etonnant en presence des nombreuses causes d’erreur du

1) E. Abderhalden und L. Pincussohn, Zeitschr. f. physiolog.
Chemie, Bd. 61, 1909, p. 200-204; ibid., Bd. 62, 1909, p. 243—249; ibid.,
Bd. 64, 1910, p. 100—109, 433—435; ibid., Bd. 66, 1910, p. 88—105; ibid.,
Bd. 71, 1911, p. 110-119.

2) E. Abderhalden, Handb. d. biochem. Arbeitsraeth., Bd. 5, 1911,
p. 575-583.

3) G. B. Gruber, diese Zeitschr., Bd. 7, 1910, p. 762—777.

4) E. Muller und G. Jochmann, Munch, med. Wochenschr.,

Bd. 53, 1906, p. 1393-1395, 1507—1510, 1552; ibid., Bd. 53, 1906, p. 2002

—2001. — Marcus, Berl. klin. Wochenschr., Bd. 45, 1908, p. 1349—1351;

ibid., Bd. 46, 1909, p. 156-160.

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Pouvoir prot^oclastique du sang au cours de Panaphylaxie. 243

proc£d4 pr6conis£ par Muller et Jochmann 1 2 3 ), qui me parait de loin
inferieur k la m£thode optique cPAbderhalden.

Celle ci rend de trks grands services sans offrir de difficult^ sp^ciales,
du moment oii Ton suit strictement les prescriptions d’A bderhalden et
oil Ton n’en exagfere pas la valeur. Ainsi que le savant physiologists de
Halle Pa fort bien mis en lumikre „ist die optische Methode nur als eine
Pfadfinderin aufzufassen. Sie darf nie allein zur Entscheidung eines be-
stimmten Problems verwendet werden. Die Verfolgung reap. Feststellung
des Drehungsvermdgens von Korperfliissigkeiten mit und ohne Zusatz be-
stimmter Substrate ergibt in vielen Fallen Einblick in Vorg&nge, auf die
wir sonst nicht so leicht aufmerksam werden. Sind einmal bestimmte
Beobachtungen gemacht, dann miissen direkte Methoden den ganzen Vor-
gang analysieren“ *).

Segale“) est le seul auteur qui se soit jusqu’k present, k ma con-
naissance du moins, pr£occup£ d^tudier directement le pouvoir prot£oclas-
tique du sang au cours de Panaphylaxie. H a d£termin£ la teneur en
azote des acides amines par la m4thode au formol de SSrensen avant et
aprks Pinjection ctechainante intraveineuse de s^rum de boeuf chez un chien
sensibilis4 par une injection intrap4riton^ale de ce mfeme s6rum 25 jours
auparavant. Pendant les ph^nomfcnes du choc anaphylactique la teneur en
azote amin£ du s^rum sanguin de cet animal s’est accrue de moitiA Le
lendemain de la reinjection, le chien £tait entiferement remis et la teneur
en azote amine du serum etait revenue k la normale.

Les considerations pr6c6dentes montrent le grand int£r§t
de la determination directe des variations du pouvoir protdo-
clastique du sang au cours de l’anaphylaxie. Elies m’engagent
4 communiquer d&s k present, malgre leurs nombreuses lacunes,
les resultats des recherches que j’ai poursuivies jusqu’h present
dans cette voie 4 ). J’indiquerai dans le premier memoire tout
ce qu’est relatif k la technique suivie au cours de ces ex¬
periences pour ne plus devoir y revenir par la suite.

n. Technique.

Ainsi qu’Emil Fischer l’a montrt, les prottines sont essentiel lenient
constitutes par des chalnes d’acides amints analogues k cedes rencontrtes

1) E. Zunz, Mtm. de l’Acad. de Mtdec. de Belgique, T. 20, 1909,
fasc. 1, p. 18.

2) E. Abderhalden, 1. c., p. 583.

3) M. Beg ale, Pathol., Vol. 4, 1912, p. 12—13.

4) J’ai fait des communications prtliminaires k ce sujet aux stances
du 27 Mai 1911 et du 25 Octobre 1912 de l’Acadtmie royale de Mtdedne
de Belgique (Bud. 1911, p. 455—456, 1912, p. 623—639). Mes recherches
ttaienfe dtja depuis longtemps en cours lorsqu’a paru l’inttressante note
de M. Be gale sur le mtme sujet.

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244

Edgard Zunz,

dans les polypeptides synthetiques obtenus par Imminent chimiste berlinois.
On doit, par consequent, considerer les radicaux peptidiques — CONH —
comme la partie principal© des molecules proteiques, Toute scission de
proteines constitue, en realite, une hydrolyse avec formation de groupes
carboxyles et amines en nombre 4gal aux depens des radicaux peptidiques.
On se rend aisement compte du degre de Phydrolyse par le nombre de
radicaux peptidiques scindes. Pour cela, il suffit d’dtablir la teneur en
azote amine du liquide examine avant et aprfes hydrolyse totale par l’acide
chlorhydrique bouillant et de calculer le rapport entre ces 2 chiffres.

Deux methodes permettent de doser Pazote amine. Ce sont cel les de
Sorensen 1 2 3 ) et de van Slyke*). Toutes deux presentent des avantages
et des inconvenients.

Le procede de Sorensen exige un traitement prealable du liquide
examine afin de le debarrasser de Pammoniaque. Le point de neutralite k
partir duquel on doit comraencer le titrage au formol n’est pas toujours
fort aise k determiner 8 ) dans un milieu aussi complexe que les melanges
de serum ou de sang defibrine et de proteose ou serum de boeuf. Leur
coloration assez foncee necessite souvent leur traitement prealable de la
fagon indique par Sorensen et Jessen-Hansen 4 5 ).

Ces divers motifs m’ont amene k renoncer, aprfes quelques experiences
preiiminaires, k Pemploi de la methode de Sdrensen etkme servir plut6t
du procede gasometrique de van Slyke.

D’ordinaire, Pacide nitreux a agi pendant 5 minutes sur les divers
melanges examines. Dans Pexperience dont les resultats sont rassembies
dans le tableau V, la methode de van Slyke a ete, en outre, appliquee
aussi en laissant Pacide nitreux agir pendant 10 minutes. J’ai utilise un
appareil de van Slyke un peu modifie de manikre k augmenter la pre¬
cision des lectures des volumes de liquide soumis k Paction de Pacide ni¬
treux et de gaz degage 6 ). J’ai dfl recourir k Paddition d’alcool amylique
lore du traitement par Pacide nitreux des melanges renfermant du serum
et surtout de ceux contenant du sang defibrine. Malgre cette precaution,
je ne suis pas toujoure parvenu k eviter le passage de quelques gouttes du
liquide examine du vase k desamination jusque dans Peprouvette gaso¬
metrique. De plus, bien que Pagitation du melange ait ete frequemment
repetee pendant Paction de Pacide nitreux, on n’est pas toujoure absolument
certain d’observer endeans le mdme laps de temps le m&rae degagement

1) E. Zunz, Emil Abderhaldens Handb. d. biochem. Arbeitsmeth.,
Bd. 3, 1910, p. 227—230.

2) D. D. van Sly ke, E. Abderhaldens Handb. d. bioch. Arbeitsmeth.,
Bd. 5, 1911, p. 995-1002.

3) E. Zunz, Bickels Beitr., Bd. 2, 1910, p. 372—412.

4) S. P. L. Sorensen und H. Jessen-Hansen, Bioch. Zeitschr.,
Bd. 7, 1908, p. 407-420.

5) E. Zunz, Bull, de PAcad. roy. de Medec. de Belgique, 4« serie,

T. 26, 1912, p. 282—319.

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Pouvoir proteoclastique du sang au coure de l’anaphylaxie. 245

d’azote amm6 aliphatique. Aussi n’ai je parfois pas obtenu de chiffres
identiques dans les 2 determinations effectu6es avec chaque melange examine.
Une troisifeme et m£me une quatrifeme determination ont ete effectuees dans
ces cas lorsque le volume total du melange envisage le permettait. Je n’ai
tenu compte que des 2 resultats les plus concordants et j’en ai pris la
moyenne.

Pour la facilite des calcuh, j’ai ramene les chiffres d’azote amine ali¬
phatique trouves dans les divers melanges par la methode de van Slyke
et ceux d’azote total determines par la methode de Kjeldahl aux quan-
tites de ces 2 espkces d’azote con tenues dans 10 c.c. de chaque melange.
J’ai ensuite calcuie combien de % de l’azote total existe dans chaque
melange h l’etat d’azote amine aliphatique.

Les differents melanges soumis k l’hydrolyse ont ete additionnes
d’acide chlorhydiique concentre en quantite suffisante pour realiser une
solution 5-normale de cet acide. Ils ont ete chaufles pendant une heure
et demie k 150° C k Pautoclave sous 8 atmospheres de pression. On s’est
debarrasse de l’acide chlorhydrique par evaporation au bain-marie. On a
redissout le residu dans 20 c.c. d’eau distiliee bouillie. Aprfes filtration, on
a determine dans des quantites appropriees de filtrat l’azote total et l’azote
amine aliphatique. On a ramene ces chiffres k 10 c.c. de filtrat On a
calcuie combien de °/o 4e l'azote total se trouve dans chaque liquide
hydrolyse k l’etat d’azote amine aliphatique. En divisant par ce chiffre la
teneur centesimale en cet azote du mfime liquide non hydrolyse multipliee
par 100, on obtient le degre d’hydrolyse.

Par suite des causes d’erreur mentionnees plus haut et d’autres si-
gnalees recemment par van Slyke 2 ), on ne peut attribuer qu’une valeur
relative aux chiffres d’azote amine aliphatique.

Pour obtenir des resultats precis par la methode de van Sly ke dans
Pexamen du sang, il faut debarrasser au prealable les liquides examines
des proteines, maintenir une agitation continuelle pendant Paction de
Pacide nitreux, verifier de la fafon indiquee par vanSlykesila reaction
est bien achevee et effectuer les 16gfcres corrections dues k la presence
d’uree et de traces d’ammoniaque dans le sang. Pour emp&cher la for¬
mation d’ecume, il vaut mieux substituer l’alcool caprylique k Palcool
amylique. On doit avoir soin d’employer toujours le m&me volume, aussi
restreint que possible d’alcool caprylique.

Le memoire dans lequel van Slyke expose ces diverees modifications
k la methode de dosage gasometrique de l’azote amine aliphatique et decrit
le nouvel appareil necessaire k cet effet n’a paru qu’aprbs Pachfevement des
presentes recherches. Je n’ai done malheureusement point pu tenir compte
des nouvelles donn6es etablies par van Slyke. Or, j’ai pu me rendre
compte par moi-mftme de leur extreme importance.

1) D. D. van Slyke, Journ. of biol. Chem., Vol. 12,1912, p. 275 —284.
— D. D. van Slyke and G. M. Meyer, Journ. of biol. Chem., Vol. 12,
1912, p. 399—410.

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246

Gdgard Zunz,

La methode de van Slyke est, d’ailleurs, d’une application extr^me-
ment delicate. On doit utiliser une solution de nitrite de soude fraiche.
II faut faire pr4c6der et suivre chaque serie de determinations d’ess&is-
temoins destines k etablir avec precision le facteur de correction k soustraire
des chiffres d’azote amine constates. On doit renouveler souvent Feau ou
Facide sulfurique dilue contenu dans Feprouvette gasometrique. Ces con¬
siderations et d’autres encore demontrent la necessite d’une extreme prudence
dans Fappreciation des resultats donnes par la methode de van Slyke.
Ainsi que Abderhalden et Pettibone 1 ) Font fort bien mis en lumi&re,
on ne peut tenir compte que des donnees obtenues en operant de fagon
tout k fait identique dans les diverses determinations d’une m^me serie
experimentale.

II y a done bien de multiplier les recherches et de se preoccuper
dans celles ci des nombreuses causes d’erreur signaiees ci-dessus. Avant
de disposer des nouvelles donn6es aissi recueillies, il convient d’etre trfes
reserve sur Fimportance reelle des resultats obtenus jusqu’k present par la
methode de van Slyke chez les animaux sou mis k des injections sensi-
bilisatrices de proteines ou de proteoses. Ceux ci ne me paraissent n6an-
moins pas entiferement depourvus de toute valeur.

Les experiences dont il est question dans cette premiere communication,
ont ete effectuees chez le cobaye. Les injections preparantes ont eu lieu
dans le peritoine, les injections dechainantes dans la jugulaire, soit au
moyen d’une solution k l°/ 0 de protoalbumose de Pick dans du liquide
de Ringer, soit au moyen de serum de boeuf.

Le sang a ete recueilli de fagon aseptique dans la carotide. Il a ete,
en partie ou entiferement, centrifuge de suite energiquement de manure a
obtenir un serum incolore. Dans quelques experiences, une partie du sang
a ete defibrinee.

On a fait agir, pendant 2 ou 6 heures k 38—40° C, le serum ou le
sang defibrine soit sur du liquide de Ringer, soit Bur une solution a
1% de protoalbumose de Pick dans du liquide de Ringer, soit sur du
serum de boeuf.

m, Experiences.

Les tableaux I a TV relatent les resultats des deux series d’experiences
faites chez le cobaye. Les figures 1 et 2 en resument les principaux
resuliats.

Dans la premiere serie d’experiences (tableaux I et II, figure 1), huit
lots de six cobayes de 250 k 300 grammes ont regu dans le peritoine 0.1 c. c.
de solution k 2 °/ 0 de protoalbumose dans du liquide de Ringer, soit deux
milligrammes de proteose, par 100 grammes d’animaL Au bout de 5, 10,
15, 20, 25, 30, 45 et 60 jours, on a injecte k un cobaye de chaque lot dans
la jugulaire 0.5 c. c. de solution k 2 °/ 0 de protoalbumose, soit un centi-

1) E. Abderhalden und C. J. V. Pettibone, Zeitschr. f. physiol.
Chemie, Bd. 81, 1912, p. 458—472.

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Pouvoir prot4oclastique du sang au cours de Panaphylaxie. 247

gramme de proteose, par 100 grammes d’animal. On a releve des symp-
t6mes nets du choc anaphylactique (chute de la temperature rectale, con¬
vulsions puis abattement consecutif, etc.) chez les cobayes reinjectes au bout
de 15 jours ou davantage. Le cobaye r&njecte au bout de 25 jours a suc-
combe en 28 k 32 heures. Les cobayes reinjectes au bout de 15, 20, 30,
45 et 60 jours paraissaient au bout de 24 heures entikrement remis des
suites du choc anaphylactique. On peut done admettre que re tat d’ana-
phylaxie n’existait pas encore 10 jours aprks Pinjection preparante, mais
bien par contre au bout de 15 jours.

On a 8acrifie par saignee des carotides les cinq autres cobayes de
chaque lot. Leur sang a servi a preparer un echantillon de serum et un
echantillon de sang defibrine. Quelques cobayes ayant succombe au cours
de Pexperience, j’ai dti me borner k examiner le sang defibrine pour les
lots de cobayes sacrifies 15, 25 et 60 jours aprfcs Pinjection de protoalbu-
mose. On a partage en deux moities chacun des echantillons de serum ou
de sang defibrine. On a ajoute un volume de liquide de Ringer k Pune des
deux portions de serum ou de sang defibrine, un volume de solution k 1 °/ 0
de protoalbumose k Pautre. On a partage en trois portions chacun des
quatre liquides ainsi prepares et un melange temoin de volumes egaux de
solution de protoalbumose et de liquide de Ringer. On a maintenu k 38°
pendant deux heures la premiere portion, pendant six heures la seconde.
On a soumis la troisifeme k Phydrolyse par Pacide chlorhydrique. On a
determine les quantites d’azote total et d’azote amine aliphatique renfermees
dans ces trois portions de liquide, puis on a calcuie leurs teneurs en azote
amine et le degre d’hydrolyse des divers melanges aprks deux et aprks six
heures de sejour k 38°. On a compare les resultats ainsi obtenus k ceux
donnes dans les m£mes conditions par des melanges de volumes egaux de
solution k 1 °/ 0 de protoalbumose et de serum ou de sang defibrine de
cobayes normaux.

Dans une seconde serie d’experiences (tableaux III et IV, figure 2), con-
duite de la mSme fa$on que la premiere, huit lots de six cobayes de 250 k 300
grammes ont re$u dans le peritoine 0.2 c. c. de serum de boeuf. On a
injecte k un cobaye de chaque lot 2 c. c. de serum de boeuf dans la jugu-
laire au bout de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 45 ou 60 jours. On a divise chaque
echantillon de serum ou de sang defibrine en deux moities, dont Pune a ete
additionnee d’un volume egal de liquide de Ringer, Pautre d’un volume
egal de serum bovin. Pour les lots de cobayes sacrifies 25 et 60 joure aprks
Pintroduction intraperitoneale de serum de boeuf, Pexamen du pouvoir
proteoclastique n’a porte que sur le sang defibrine.

Les cobayes reinjectes au moyen de serum de boeuf 5 ou 10 jours
aprfes Pinjection preparante n’ont pas manifeste de sympt6mes du choc ana¬
phylactique. L’injection intraveineuse de serum de boeuf a en traine une
mort rapide des cobayes sensibilises 20, 25 et 30 jours auparavant. Les
animaux reinjectes au bout de 15, 45 et 60 jours ont succombe en 18 k
24 heures. L’etat d’anaphylaxie s’est, par consequent, manifeste au bout
de 15 jours. II existait probablement chez les divers cobayes sacrifies
15 k 60 jours aprks Pinjection preparante de serum bovin.

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Tableau

248

Edgard Zunz

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Pouvoir prot6oclastique du sang au coure de l’anaphylaxie. 249

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

256

Edgard Zunz,

Figure 1. Cobayes trait£s par la protoalbumose.

En abscisse le nombre de jours depuis rinjectiou intra-
p^ritoneale de protoalbumose, en ordonn^e les °L d’azote
amin£ aliphatique aprfes 2 heures de s^jour k 38° C de
melanges de volumes 6gaux de sang d6fibrin6 ou de
s6rum de cobayes traites par la protoalbumose et de
solution k 1 % de protoalDumose de Pick dans du
liquide de Ringer.

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phatique calculus

..

% d’azote aming ali¬
phatique trouv^s

Sang d6fibrin6
+ protoalbumose

% d’azote amin6 ali¬
phatique calculus

S4rum

+ protoalbumose

% d’azote amin6 ali¬
phatique trouv^s

\\\\\\V Accroissement du j>ouvoir protSoclastique
\\W\W du sang defibrin^ pour la protoalbumose

Accroissement du pouvoir protSoclastique
du serum pour la protoalbumose

Epoaue k partir de laauelle l’6tat d’ana-
— — • • — phylaxie existe chez les cobayes traites

par la protoalbumose

IV. Besultats.

Le s6rum de cobaye ne renferme pas ou
gu&re d’azote amin6 aliphatique. A 38°, il
s’en d6veloppe rapidement une quantity re-
presentant au bout de 2 heures en moyenne
0.47 % (0,22 k 0.85) de l’azote total. La teneur
du s6rum en cette esp&ce d’azote dScroit en-
suite peu & peu. Le sang d6fibrin6 de cobaye
ne contient pas une quantity sup^rieure d’azote
amin6 aliphatique k celle trouvee dans le
s6rura du meme animal maintenu pendant le
meme laps de temps k 38°.

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Pouvoir prot4oclastique du sang au corns de l’anaphylaxie.

257

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Figure 2. Cobayes trails par le s4rum de bceuf.

En abscisse le nombre de jours depuis l’injection intra-
p6riton6ale de s4rum de bceuf, en ordonn6e les °L d’azote
amin4 aliphatique aprfes 2 heures de s4jour h 38° C de
melanges de volumes 6gaux de sang d4fibrin4 ou de s4rum
de cobayes trait4s par le s4rum die bceuf et de ce dernier
s4rum.

% d’azote amin4 aliphati¬
que calculus

% d’azote amin4 aliphati¬
que trouv4s

% d’azote amin4 aliphati¬
que calculus

% d’azote amin4 aliphati¬
que trouv4s

Sang d4fibrin4
-f- serum bovin

86rum

+ s4rum bovin

Accroissement du pouvoir prot4oclastique du
sang d4fibrin4 pour le serum bovin

Accroissement du pouvoir prot4odastique du
s4rum pour le serum bovin

£poque k partir de laquelle l’4tat d’ana-

{ >hylaxie existe chez les cobayes trait4s par
e s4rum de bceuf

L’injection intrap4riton4ale de protoalbumose ou de
s4rum de bceuf n’augmente pas la teneur en azote amin4
du s4rum main ten u 2 ou 6 heures h 38°. II en est de
m&me du sang d4fibrin4 recueilli chez les cobayes sacrifice
5 et 10 jours aprbs l’injection de protoalbumose, 5, 10 et
15 jours aprfes celle de s4rum bovin. Tout au contraire,
la teneur en azote amin4 aliphatique du sang d4fibrin4
s’accrolt chez les cobayes sacrifice 15 h 60 jours apr4s
l’injection de protoalbumose ou 20 k 60 jours aprbs celle
de s4rum bovin. Elle peut arriver ainsi au double ou
mfime au triple de la normale et atteindre 1.40 h 1.56 %
de l’azote total.

L’injection intraperiton6aIe de protoalbumose ou de s4rum de
bceuf n’augmente pas la teneur en azote amin4 du s4rum maintenu 2 ou

Zeitschr. f. Immunltituforschung. Orig. Bd. XVII. |g

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60 Jours

258

Edgard Zunz,

6 heures k 38°. II en est de raSme du sang defibrine recueilli chez
les cobayes sacrifice 5 et 10 jours aprfes [’injection de protoalbumose,
5, 10 et 15 jours aprfes celle de serum bovin. Tout au oontraire, la
teneur en azote amine aliphatique du sang defibrine s’accroit chez les
cobayes sacrifi^s 15 & 60 jours aprfes l’injection de protoalbumose ou
20 k 60 jours aprfes celle de serum bovin. Elle peut arriver ainsi au
double ou mfime au triple de la normals et atteindre 1,40 k 1,56 %
de l’azote total.

La teneur en azote amine aliphatique du serum dee cobayes
prepares au moyen de protoalbumose (tableau I) est moindre aprfcs
6 heures de s^jour k 38° qu’aprfcs 2, sauf pour les cobayes sacrifife au
bout de 20, de 30 et de 45 jours. Dans ces derniers cas, elle s’est
accrue de 2 k 6 heures. La teneur en azote amine aliphatique du
sang defibrine est moindre aprbs 6 heures qu’aprfes 2, sauf pour les
cobayes sacrifice au bout de 10 ou de 60 jours. La teneur en azote
amine aliphatique du serum est infcrieure k celle du sang defibrine
correspondant, k Fexception des liquides maintenus 2 heures k 38°
provenant de cobayes normaux et de ceux maintenus 6 heures k 38°
provenant de cobayes traites 5 jours auparavant par de la protoalbu¬
mose. La teneur en azote amine aliphatique du sang defibrine augmente
avec le laps de temps ecouie depuis Introduction intrap4riton6ale de
protoalbumose; elle atteint son maximum 20 jours aprfes l’injection pr4-
parante et se maintient ensuite k un niveau quelque peu inferieur. On
n’observe par contre pas de variations r6elles de la teneur en azote
amine du serum des cobayes traites par la protoalbumose.

La teneur en azote amine aliphatique de la solution de proto¬
albumose diminue par le sSjour k l’etuve k 38°. Cette diminution n’est
souvent appreciable qu’au bout de 6 heures; d’autres fois, elle est
d6jk trka nette au bout de 2 heures.

Calculons la teneur en azote amine aliphatique des divers melanges
de serum ou de sang defibrin6 de cobaye et de protoalbumose en nous
basant sur la teneur en cette espfcce d’azote de leurs constituants main¬
tenus isoiement pendant 2 ou 6 heures k 38°. Comparons ces chiffres
a ceux obtenus pour ces melanges aprfes la m£me dur6e de sejour k
38°. Les melanges prepares au moyen de serum ou de sang defibrine
de cobayes .normaux contiennent un peu moins d’azote amine ali¬
phatique que les chiffres calcuies. II en est aussi ainsi des melanges
prepares au moyen du serum ou du sang defibrin6 des cobayes sacri-
ties 20 ou 60 jours aprfcs l’injection preparante de protoalbumose. Au
contraire, les melanges prepares au moyen du serum ou du sang de¬
fibrine des cobayes sacrifies 5, 10, 15, 25, 30 et 45 jours aprfes Finjection
preparante de protoalbumose montrent un accroissement de leur teneur
en azote amine aliphatique par rapport aux chiffres calcuies, plus
accuse pour le melange prepare avec le sang defibrine que pour celui
prepare avec le serum correspondant. La figure 1 permet de se rendre
aisement compte de ces faits.

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Pouyoir proteoclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 259

La teneur en azote amine aliphatique eat plus considerable au
bout de 2 heures de sejour & 38° que de 6 pour lee melanges de
serum et de protoalbumose, sauf pour oeux prepares au moyen du
serum des cobayes sacrifies 45 jours aprfes l’injection de protoalbumose.
Lee chiffres absolus d’azote amine aliphatique sont plus eieves dans
lee melanges prepares au moyen des serums des cobayes sacrifies 5
et 10 jours aprbs l’injection de protoalbumose que dans ceux prepares
au moyen du serum de cobayes normaiuc; ils. ne different gufere de
ces derniers pour les autree melanges.

La teneur en azote amine aliphatique est plus forte aprbs 2 heures
de sejour & 38° qu’aprbs 6 pour les melanges prepares au moyen du
sang defibrine des cobayes normaux ou sacrifies 30, 45 ou 60 jours
aprfes l’injection intraperitoneale de protoalbumose; elle l’emporte au
bout de 6 heures pour les melanges prepares au moyen du sang de¬
fibrine des cobayes sacrifies au bout de 5 & 25 jours. Les chiffres ab¬
solus d’azote amine aliphatique sont plus eieves dans les melanges de
protoalbumose et de sang defibrine provenant des cobayes injectes 5
& 45 jours aupanavant au moyen de cette proteose que dans les me¬
langes de sang defibrine de cobayes normaux et de protoalbumose. II
n’en est plus ainsi des melanges prepares au moyen du sang defibrine
dee cobayes ayant re$u 60 jours auparavant une injection intraperi¬
toneale de protoalbumose.

La teneur en azote amine aliphatique des melanges de serum et de
protoalbumose est inferieure & celle des melanges correspondants de
sang defibrine et de cette proteose, & l’exception des melanges main-
tenup 2 ou 6 heures k 38° prepares au moyen du sdrum ou du sang
defibrine des cobayes normaux ou traites 5 jours auparavant par la
protoalbumose et des melanges maintenus 2 heures h 38° prepares
au moyen du serum ou du sang defibrine des cobayes injectes 10 jours
auparavant.

Le degre d’hydrolyse des divers melanges de protoalbumose et de
serum ou de sang defibrine (tableau II) donne les mimes indications
que la teneur en azote amine aliphatique. Toutefois le melange de serum
normal et de protoalbumose maintenu 2 heures & 38°, les melanges
de sang defibrine normal et de protoalbumose maintenus 2 et 6 heures
& 38°, les melanges de sang defibrine provenant des cobayes injectes
depuis 20 jours et de protoalbumose maintenus 2 et 6 heures k 38°
montrent un degre d’hydrolyse superieur aux chiffres calcuies, alors
que c’est l'inverse pour la teneur en azote amine aliphatique.

Le degre d’hydrolyse des melanges de protoalbumose et de serum
tend & diminuer au fur et & mesure que le sdrum provient de cobayes
injectds depuis plus long temps par la protoalbumose. Ceci depend
uniquement de l’affaiblissement graduel de la teneur en azote amine
aliphatique de la solution de protoalbumose soumise k la temperature
de 38®.

Le degri d’hydrolyse du serum est moindre que celui du sang
defibrine correspondant, sauf pour le serum et le sang defibrine mainte-

18*

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260

Edg&rd Zunz,

nus 6 heures k 38° des cobayes sacrifice 5 et 45 jours apr&s ^injection
intrap6riton6ale de protoalbumose. Le degr6 d’hydrolyse dee melanges
pr6par& au moyen de sang d6fibrin6 et de protoalbumose I’emporte sur
celui des melanges analogues pr6par6s au moyen du s6rum correspondent,
sauf pour lee melanges pr6par& au moyen du strain ou du sang d6-
fibrinS des cobayes normaux ou sacrifice 5 jours aprfes Tinjection de
proteose.

ArrivonB en k la s6rie d’exp^riences faite chez des cobayes
pr6par& par une injection intrap6riton6ale de s6rum bovin (tableaux III
et IV, figure 2). Chez ces animaux, la teneur en azote amin6 aliphati-
que du s6rum et celle du sang d6fibrin6 (tableau III) sont moindree
apr& 6 heures de s£jour k 38° qu’aprfes 2, sauf pour le s6rum des co¬
bayes sacrifice 30 jours aprfes I’injection et pour le sang dSfibrinS des cobayes
sacrifice au bout de 25, de 30 ou de 60 jours. La teneur en azote
aminS aliphatique du s6rum est infdrieure k celle du sang dlfibrinl
correspondant, sauf pour les liquides maintenus 2 heures k 38° prove-
nant de cobayes normaux et pour ceux restfe 6 heures k 38° provenant
de cobayes trait£s 5 jours auparavant par le s£rum de boeuf. La
teneur en azote amin£ aliphatique du sang d£fibrin6 tend k augmenter avec
le laps de temps 6coul6 depuis ^injection prfiparante de s£rum bovin.
On ne constate par contre pas de modifications appr&nables de la teneur
en azote amin£ du s6rum des cobayes trait4s par le s6rum de boeuf.

Le s6rum de boeuf fraichement recueilli ne renferme pas d’azote
amin6 aliphatique. U n’en contient souvent que des traces, mdme aprfcs
2 et 6 heures de s6jour k 38°. On y constate parfois de l’azote amin6
seulement au bout de 6 heures, et cela dans une proportion corres¬
pondent de 0,34 k 0,74 o/o de l’azote total. Dans d’autres cas>
l’azote amind existe d6j k au bout de 2 heures et repr&ente alors
0,14 k 0,84 o/o de Tazote total; il s’accroft ensuite pour atteindre
0,27 k 1,20 o/o au bout de 6 heures. Le degr6 d’hydrolyse du s6rum
de boeuf maintenu 2 ou 6 heures k 38° montre des r&ultats entiferement
parallfeles k ceux donnas par la teneur en azote amin£ aliphatique.

Le melange de volumes 6gaux de s6rum de cobaye et de s6rum de
boeuf possfcde, aprfcs 2 et aprds 6 heures de s6jour k 38°, une teneur
en azote amin6 aliphatique sup6rieure k celle donn6e par ces 2 s6rums main-
tenus sSpardment pendant le meme nombre d’heures k la infime tem¬
perature. On observe la meme chose, mais k un bien moindre degr6,
qu’aveo le sdrum normal de cobaye si Ton part du s6rum de cobayes
injectfe 5 ou 10 jours auparavant au moyen de s6rum de boeuf. Au
contraire, la teneur en azote amin6 aliphatique dee melanges de sdrum
de boeuf et de s6rum de cobayes injects 15, 20, 30 ou 45 jours
auparavant au moyen de serum de boeuf est 16gfcrement interieure aux
chiffres calculus en se basant sur les teneurs en azote amin6 respectives
des 2 constituants de chaque melange apr&s la meme dur6e de s^jour
k la meme temperature. Ces constatations resortent nettement de Texamen
de la figure 2.

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Pouvoir prot6oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 261

Lorsqu’on maintient k 38° un melange de volumes 6gaux de sang
defibrine de cobaye normal et de serum de boeuf, sa teneur en azote
amine aliphatique 1’emporte d’abord (au bout de 2 heures) sur celle
de l’ensemble de ses constituante rest6s isol&nent pendant le meme
laps de temps k 38°, mais bientdt (au bout de 6 heures) inverse se
produit. C'est ee que d&felent fort bien les r^sultats obtenus avec
dee 2 oonstituants de chaque melange aprfcs la m£me dur6e de s6jour
a la meme temperature. Ces eonstations resortent nettement de l’examen
de la figure 2.

La teneur en azote amine aliphatique des melanges prepares avec
le sang defibrine des oobayes injectes 5 ou 10 jours auparavant au
moyen de serum de beeuf est sup6rieure aux chiffres calcuies. Elle
leur est par contre inferieure pour lee melanges prepares avec du sang
defibrine de cobayee sacrifi6s 15 k 60 jours aprfcs injection intra¬
peritoneale de serum de beeuf, sauf pour le melange maintenu 2 heures
a 38° de serum de beeuf et de sang defibrine provenant des cobayss
sacrifies 45 jours aprfcs Tinjection sensibilisatrice. La diminution de la
teneur en azote amine aliphatique s’accentue avec le laps de temps
ecoul6 depuis injection preparante. Les differences entre les chiffres
trouves et calcuies sont bien plus nettes pour les melanges prepares
au moyen de sang defibrine que pour oeux prepares avec les serums
correspondents.

La teneur en azote amine aliphatique des melanges de serum ou
de sang defibrine de cobaye et de serum bovin est plus forte au bout
de 2 heures de sejour k 38° qu’au bout de 6, sauf pour les melanges
prepares avec les serums des cobayes sacrifies 15, 20 ou 45 jours aprfcs
Tinjection intraperitoneale de serum de beeuf et pour ceux prepares
avec le sang defibrine des cobayes sacrifies 10 jours apr£s cette in¬
jection.

Les chiffres absolus d’azote amine aliphatique sont moins eieves
dans les melanges prepares au moyen des serums des cobayes sacrifies
5 k 45 jours apr&s Introduction intraperitoneale de serum de beeuf
que dans ceux prepares au moyen du serum des cobayes normaux.
Les chiffres absolus d’azote amine aliphatique sont plus considerables
dans les melanges prepares au moyen du sang defibrine des cobayes
sacrifies 5 k 10 jours aprfes injection intraperitoneale de serum de
beeuf que dans ceux prepares au moyen du sang defibrine des cobayes
normaux; ils deviennent ensuite moindres que ces derniers chez les
cobayes sacrifies 15 k 60 jours aprfcs cette injection preparante, kTexception
du melange maintenu 2 heures k 38° de serum bovin et du sang de¬
fibrine des cobayes sacrifies 45 jours aprks injection intraperitoneale
de serum de boeuf.

La teneur en azote amine aliphatique des melanges de serum
de cobaye et de serum bovin maintenus 2 heures k 38° est inferieure
k celle des melanges correspondants de sang defibrine et de serum de
boeuf, sauf pour les melanges prepares avec du serum ou du sang de-

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262

Edgard Zunz,

fibrin4 de cobayee normaux. Oa observe l’inverse pour les melanges
maintenus 6 heures & 38°, k l’exception des melanges pr4par4s avec
le s4rum ou le sang d4fibrin4 des cobayes sacrifice 5 ou 10 jours apres
l’injection pr4parante de s4rum de boeuf.

Le degr4 d’hydrolyse (tableau IV) varie dans le meme sens que
la teneur en azote amin4 pour le s4rum et le sang d4fibrin4 des cobayes
traitds par le s4rum de bceuf et pour lee m41anges de s4rum ou de sang
d4fibrin4 de cee cobayes et de s4rum bovin, It l’exception de ceux
pr4par4e avec le sang d4fibrin4 des cobayes sacrifice 10 jours aprfes
l’introduction intrap£ritoneale de scrum de bceuf.

Le degr4 d’hydrolyse du sang d4fibrin4 tend It augmenter avec
le laps de temps 4coul4 depuis l’injection de s4rum de bceuf. Le degre
d’hydrolyse l’emporte dans le sang defibrin6 sur le s4rum du meme
cobaye sauf pour les liquides xnaintenua 6 heures k 38° provenant des
cobayes sacrifies 5 jours aprbs l’injection pr6parante de s4rum bovin.

Le degr4 d’hydrolyse des m41anges de s4rum de cobaye et de
s4rum de bceuf maintenus 2 heures h 38° est moindre que celui des
melanges correspondents pr4par4s au moyen de sang d4fibrin4,
sauf pour les cobayes normaux. Apr&s 6 heures de s4jour & 38°, le
degr4 d’hydrolyse est par oontre mo ins accus4 dans les melanges de
sang d4fibrin4 et de s4rum. de bceuf que dans les autres, sauf pour
ceux pr4par4s avec le s4rum ou le sang d4fibrin4 des cobayes sacrifi4s
5 ou 10 jours apr&s l’injection pr4parante de s4rum de bceuf.

V. Considerations generales.

Les 2 s6ries d’exp6riences effectu4es le cobaye amfcnent
en definitive aux constatations suivantes:

L’injection intrap£riton4ale d’une dose sensibilisatrice de
protoalbnmose ou de serum de boeuf ne modifie gufcre le
pouvoir prot4oclastique du s6rum de cobaye pour ses propres
prot4ines. II tend n4anmoins k diminuer quelque peu avec le
laps de temps 4coul6 depuis l’injection pr£parante.

Apr4s l’introduction intrap4riton4ale de protoalbumose, le
pouvoir proteoclastique du sang d4fibrin6 pour ses propres
prot4ines diminue d’abord 14g4rement. II subit ensuite un
accroissement relativement notable qui d4bute au bout de
10 jours, atteint son maximum au bout de 20 jours, puis
s’att6nue lentement.

Le pouvoir prot6oclastique pour ses -propres proteines du
sang defibrin6 des cobayes traites par le serum de bceuf ne varie

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Pouvoir prot^oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 263

gufere pendant les 15 premiers jours cons6cutifs 4 l’injection
intrap6riton£ale. II d^passe la normale au bout de 20 jours
et atteint son maximum au bout d’un mois et demi k
deux mois.

Le pouvoir proteoclastique du serum et du sang d6fibrin6
pour la protoalbumose s’accroit 5 & 15 jours aprfes l’intro-
duction intrap6riton6ale de cette proteose, diminue vers le
vingtifeme jour, puis s’accroit k nouveau 25 k 45 jours apr&s
l’injection pr6parante et subit enfin au bout de 60 jours une
notable diminution par rapport k la normale.

Le pouvoir proteoclastique du serum et du sang defibrin6
des cobayes trait6s par le serum de bceuf pour les prot&nes
de ce serum diminue graduellement au fur et it mesure qu’on
s’eioigne de l’6poque de l’injection pr6parante. On d6cfcle
toutefois dans le sang defibrine des cobayes sacrifies & jours
apr&s cette injection une legfcre augmentation du pouvoir
proteoclastique pour les proteines du s4rum de boeuf. Mais
k partir du dixifeme jour cons4cutif k l’injection sensibilisatrice,
le pouvoir proteoclastique du sang defibrine pour les proteines
du s6rum de boeuf diminue dans une plus forte proportion
que celui du serum correspondent.

On peut n6anmoins se demander si un autre facteur
n’intervient pas lorsqu’on met du serum de boeuf en presence
de sang defibrine ou de serum de cobaye. Le serum bovin
renferme, en effet, des substances qui entravent l’action des
agents prot6oclastiques. Or, des experiences x ) faites chez des
chiens non sounds k un traitement pr£alable m’ont amene k
constater que dans les melanges de sang total ou defibrine
de chien et de serum de boeuf, ces substances inhibitrices
entravent dans une beaucoup plus grande mesure Faction des
agents prot4oclastiques que ne le font, dans les melanges des
serums de chien et de boeuf, les substances inhibitrices de
ces serums. D£s lors l’intervention de ces substances inhibi¬
trices doit certes entrer en ligne de compte dans l’explication
des resultats quelque peu diff6rents obtenus chez le cobaye

1) E. Zunz, Bull, de la Soc. cbimiq. de Belgique, T. 26, 1912,
p. 188—193.

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264 Znn z, Pouvoir proteoclastique du sang au cours de l’an&phylaxie.

seloo la nature de l’injection prdparante et selon le milieu
(s6rum ou sang d6fibrin6) ajout6 aux prot6ines ou aux pro¬
teoses sensibilisatrices.

On parviendrait peut 6tre k se rendre compte jusqu’a un
certain point du rdle des agents prot6oclastiques et des sub¬
stances inhibitrices dans la diminution graduelle du pouvoir
prot£oclastique du sang des animaux sensibilis£s par le s£rum
de boeuf pour les protdines de ce s£rum en comparant les
modifications du pouvoir prot6oclastique du s£rum et du sang
defibrine de ces animaux, d’une part pour le s4rum sensibili-
sateur, d’autre part pour une proteose (heteroalbumose, proto-
albumose) capable de dechalner le choc anaphylactique chez
un animal sensibilise.

Zusammenfassung.

1) Bei den mittelst einer intraperitonealen Protoalbumose-
einspritzung behandelten Meerschweinchen steigt das proteo-
klastische Vermogen des Blutes ffir Protoalbumose wahrend
des praanaphylaktischen Stadiums schon 5 Tage nach der
Sensibilisierung. Diese Zunahme des proteoklastischen Ver-
mbgens des Blutes far die sensibilisiereude Proteose ver-
schwindet aber zeitweise (20 und 60 Tage nach der Sensibili¬
sierung) wahrend des Anaphylaxiezustandes.

2) Bei den mittelst einer intraperitonealen Ochsenserum-
einspritzung vorbehandelten Meerschweinchen sinkt das proteo-
klastische Verm6gen des Blutes fflr die Proteine des Ochsen-
serums allmahlich wahrend des praanaphylaktischen Stadiums,
um wahrend des Anaphylaxiezustandes zu verschwinden.

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Zunz, Pouvoir prot4oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 265

Nachdruck verboten.

[Travail de l’Institut de thdrapeatiqae de 1’University de Braxelles.]

fteoherches sar le poaroir protfoclastique da sang an
cours de l’anaphylaxle.

Seconds communication.

Experiences chez le lapin.

Par Bdgard Znns.

Avec 1 figure dans le texte.

(Eingegangen bei der Redaktion am 10. Dezember 1912.)

L Introduction.

Si Ton ajoute de l’hgtgroalbumose ou de la protoalbumose
au s£rum d’un lapin sensibilisg 10 k 15 jours auparavant par
cette mSme proteose et si Ton determine par la m£thode de
S5rensen la teneur en azote amine de ce melange aprfcs
2 heures de sejour k 38°, on constate son augmentation. Si
Ton fait la mgme experience en prenant du serum d'un lapin
neuf ou injecte seulement depuis 2 & 6 jours, on ne remarque
pas d’accroissement de la teneur en azote amine du melange.
Ces resultats semblent indiquer que l’injection preparante
d’hetgroalbumose ou de protoalbumose fait r6ellement appa-
raitre, aprgs quelques jours, un certain pouvoir protgoclastique
dans le serum des animaux ainsi traitgs.

La mdthode de Sorensen presente malheureusement assez bien
d’ineonv&iients lorsqu’il s’agit de determiner la teneur en azote amine
de melanges de serum et de proteines ou de proteoses maintenus 2 ou
6 heures k 38°. Ainsi que je Pai fait remarquer dans une precedente
communication 1 ), la methode de Van Slyke me parait preferable
dans ce cas, quoique loin d'etre k l’abri de tout reproche.

J’ai choisi dans mes premieres experiences le cobaye, parce que
cette esp£ce animale est tres sensible aux phenomenes d’anaphylaxie.
Mais la faible quantite de sang fournie par un cobaye ra’a oblige a
sacrifier un nombre considerable de ces animaux et ne m'a permis de
controler Pexistenoe de Fetat d’anaphylaxie que chez un temoin in¬
jecte au moyen de protoalbumose ou de serum de boeuf lors du sacrifice

1) Diese Zeitschr., Bd. 17, p. 241.

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266

Edgard Zunz,

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des autres animaux du mSme lot 8ensibilb6s depub le meme laps de
temps que le temoin.

Ces diverses considerations m’ont amene k rechercher par la m£-
thode de van Slyke de la fa 9 on d&rite precedemment si le pouvoir
proteoclastique du sang pour la proteose sensibilisatrice subit chez le
lapin dee variations analogues k celles observdes chez le oobaye.

Lee proteoses employees (heteroalbumose de Pick, protoalbumose
de Pick, deuteroalbumose de Kflhne) ont ete dissoutes dans du
liquide de Ringer. Les injections preparantes ont eu lieu dans le
peritoine lors d’une premiere serie d’experiences, dans la jugulaire lore
d’une seconde. Les injections dechainantes out ete effectuees par voie
intraveineuse.

IL Premiere serie d’experienees.

L’experience dont le tableau I donne les resultats, a porte sur
15 lapins de 900 k 1600 grammes. Cinq d'entre eux (F, G, H, I, J)
ont ete sacrifies par saignee carotidienne respectivement 6, 12, 18,
24 et 30 jours aprfcs Pinjection intraperitoneale de 0.2 c. c. de solution
k 1 o/o d’heteroalbumose, soit 2 milligrammes de proteose, par 100
grammes de poids. Cinq autres (K, L, M, N, O) ont ete sacrifies 6,
12, 18, 24 et 30 jours aprfes Pinjection intraperitoneale de 0.2 c. c. de
solution k 1 % de protoalbumose, c’est k dire 2 milligrammes de pro¬
teose, par 100 grammes de poids. On a determine avant Pinjection
intraperitoneale Pazote total et l’azote amine aliphatique du serum
de chacun de ces 10 lapins additionne de son volume de liquide de
Ringer et maintenu 2 heures k 38—40° C.

On a partage en 4 portions chacun des serums recueillb 6, 12,
18, 24 ou 30 jours aprfcs Pinjection intraperitoneale de proteose. 3
d’entre elles ont ete additionnees respectivement de leur volume de
liquide de Ringer, de solution k 1 °/o d’heteroalbumose ou de solution
k 1 % de protoalbumose. Aprfcs 2 heures de sejour k 38° C, on a re¬
cherche les quantites d’azote total et d’azote amine aliphatique ren-
fermees dans ces divers liquides. On a procede k ces kn£mes determina¬
tions dans un melange de volumes egaux d’heteroalbumose et de liquide
de Ringer, dans un melange de volumes egaux de protoalbumose et
de liquide de Ringer et dans 3 melanges prepares en partant du
serum d’un lapin normal temoin et de liquide de Ringer, d’hetero-
albumose ou de protoalbumose, maintenus k 38—40° C pendant le m£me
laps de temps que les 3 melanges analogues prepares en partant
du serum de Panimal soumb depths 6 k 30 jours k Pinfluence d’une
injection sensibilisatrice de proteose.

La quatri&me portion de serum, recueillie lore du sacrifice des la¬
pins traites par Pheteroalbumose ou la protoalbumose, a ete in jectde dans le
peritoine de lapins neufs, de 500 k 600 grammes, qui ont re 9 U le lende-
main une injection intraveineuse de 2 centigrammes d’heteroalbumose

Gck igle

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Pouvoir prot^oclastique du sang au cours de Fanaphylaxie. 267

Tableau I.

Aprfes deux heures de sejour h
38 0 C, 10 centimetres cubes du
melange renferment

chiffres trouves I chiffras calcuies

Melange employe

£

is

11
a s

§

azote
amin6 ali-
phatique

a

a

&

a

1

c

41

■ «2

§ 2

is

3 o

i —4

a

4 )

--a

3 a

5

11

39

azote
amin£ ali-
phatique

CD

a

H I fl o

M

g~

g

*ii

in

, s is

N*S o

«J5
i S « «
pi .9 a
I 0) § w

i-dSaj

Isg.f

'll!

Si's

S^rum
du lapin
F

S6rum
du lapin
K

Heteroalbumose +
Protoalbumose +

I +

S<?rum du lapin temoin A < +

1 +

avant traitement +
6 jours aprfes Pin- [ +
jection <rh6t4ro -1 +
albumose \ +
avant traitement +
6 jours apr&s Pin-l-f
jection ae proto- < +
albumose | +

Heteroalbumose +
Protoalbumose +

Serum
du lapin-
G

Serum
du lapin.
L

16.78

19.69

48.30

64.29

66.15

49.35

55.62

71.74

74.96

54.50

59.68

75.19

80.45

Serum du lapin temoin B ■{ +

avant traitement +
12 jours aprt» l*in-1 +
jection crhetero- | +
albumose l +
avant traitement +
12 joure aprbs l’in- f +
jection de proto- < +
albumose [ +

liquide de Ringer
liquide de Ringer!
liquide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose
liquide de Ringer:
liquide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose |
uquide de Ringer!
liquide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose

liquide de Ringer! 16.8-1
liquide de Ringer 1 19.73
liquide de Ringer! 47.67
heteroalbumose ! 62.89

( jrotoalbumose i 67.71
iquide de Ringer 49.70
liquide de Ringer 56.10
heteroalbumose 71.48
protoalbumose 74.36
liquide de Ringer 1 58.46
liquide de Ringer 55.82
heteroalbumose 71.15
protoalbumose i 75.13

Heteroalbumose + liquide de Ringer
Protoalbumose + liquide de Ringer
| -|- liojuide de Ringer

| + protoalbumose
(avant traitement + liquide de Ringer
18 jours aprhs Fin- [ + liquide de Ringer
jection (rhetero- < + heteroalbumose
albumose 14- protoalbumose

Serum du lapin temoin C {4- heteroalbumose

Serum
du lapin
H

0.97
10.49
! 0.76
1.54
1.09
0.15
0.29
1.18
0.62
0.73
0.54
1.92
1.25

0.86
0.43
0.74
1.37
1.28
0.32
0.47
1.73
1.19
0.33
0.30
0.80
0.97

0.74
0.37
51.87 | 0.47

67.38 ! 1.36
69.80 1.08
56.03 0.25

56.38 0.33
73.48 i 1.76
74.26 i 0.62

5,78
2.49
1.57
2.40' 65.08
1.65 67.99
0.30' .

0.52; .

1.64; 72.40

16.75

19.60

0.82.

1.34

0.90

2.55
i 1.55

! 5.11
2.18

1.55
2.18
1.89
0.64
0.84

2.42
1.60
0.56
0.54
1.12
1.31

4.42
1.89

'0.91

2.02

1.55

0.45

0.59

2.39

75.31

76.46

79.37

64.51

67.40

72.94

75.83

72.16

75.55

68.62

71.47

73.13

1.73

1.25

1.26

0.78

1.51

1.03

1.60

1.17

1.33

0.90

1.16

0.72

1.21

0.84

1.07

2.67

1.84

1.74

1.04

1.97

1.30

-0.26

—0.19

- 0.10

- 0.22

+0.58

+0.25

2.48^ -0.30
1.74; +0.15

0.94; 75.98 | 0.70

1.81

1.19

1.60

0.97

1.76

1.18

1.47

0.92

+0.61

+0.41

—0.48

+0.34

+0.26

+0.37

+0.92

- 0.08

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268

Edgard Zunz,

Tableau 1 (Suite).

Aprfes deux heures de 8<$jour k
38° C, 10 centimetres cubes du
melange renferment

chiffres trouv6s I chiffres calculus

Melange employ^

I

' fl.E „

. ®

ui

Serum
du lapin
M

avant

tion de proto- + heteroalbumose
albumose | + protoalbumose

Heteroalbumose +
Protoalbumose +

( +

Serum du lapin temoin D {+

1 +

(avant traitement -f

lan nJ 24 Jours apr ^ l ’ in ' ( +

{f pm | jection d’hetSro- +

l albumose ( +

avant traitement -f

24 jours aprfcs Tin-1 +

jection de proto- {+

albumose 1 +

Serum
du

Semm
du lapin
N

Heteroalbumose +
Protoalbumose -h

I

Serum du lapin temoin E -f

1 +

avant traitement +
30 jours aprfcs Tin- j -f
jection d’hetero- +
albumose | +

avant traitement -f
30 jours aprfes Tin-1 -f
jection de proto- {-f
albumose | +

Serum
du lapin
J

Serum
du lapin
O

liquide de Ringer
liquide de Ringer

protoalbumose
liquide de Ringer
liquide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose
liquide de Ringer
liquide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose

liquide de Ringer
liquide de Ringer
liauide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose
liquide de Ringer
liauide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose
liquide de Ringer
liauide de Ringer
heteroalbumose
protoalbumose

azote total,
en milligrammes

en milligrammes cr§. p

}te

S ali-
ique

©

p2

u

gj

a ~
©

azote total,
en milligrammes

g

en milligrammes erg. p

5te

5 ali-
ique

©

^3

S 2

iS

G O

a |

G ^
©

pour-cent de l’azote total
plus ou en moins k l¥tat d’
aliphatique que les chifln

49.76

0.79

1.59

52.02

0.61

1.17

#

68.73

1.21

1.91

68.77

1.35

1.96

—6.05

71.13

1.76

2.47

71.62

0.98

1.37

+ 1.10

16.81

0.73

4.34

19.53

0.40

1.63

#

48.93

0.80

2.05

,

64.65

1.68

2.60

65.74

1.43

2.i8

+6.42

67.92

1.16

1.71

68.46

1.20

1.75

-0.04

57.28

0.69

1.24

#

,

54.31

0.81

1.49

#

.

68.62

1.76

2.56

71.12

1.54

! 2.i8

+0.38

72.90

1.64

2.25

73.84

1.21

1.63

+0.62

57.40

0.58

1.01

•

.

53.72

0.71

, 1.31

.

.

60.46

1.57

2.26

70.53

1.44

2.04

+6.22

72.68

1.98

2.72

73.25

1.11

1.55

+1.20

16.72

0.48

2.87

m

m

.

19.36

0.43

2.22

.

.

56.24

0.52

0.92

,

.

.

70.43

0.72

1.02

72.96

1.00

1.37

—0.35

74.18

0.89

1.20

j 75.60

0.95

1.26

-0.06

53.17

0.37

0.70

,

55.75

0.50

0.90

.

.

.

72.25

1.14

1.86

72.47

0.98

1.21

+6.65

7460

1.25

1.68

| 75.11

0.93

1.24

+0.44

53.99

0.55

1.02

.

.

.

54.06

0.95

1.76

1 #

.

70.49

2.01

2.86

1 70.78

1.41

1.99

1 +0.87

72.61 |

1.92

2.64

! 73.42

1.36

1.85

1 +0.79

ont re£u le serum provenant des lapins (F, G, K, L) sacrifife 6 ou
12 jours apr&s l’injection pr^parante. II en est de ineme lors de re¬
jection intravemeuse d’h&eroalbumose chez l’animal traite 24 heures
ou de protoalbumose selon le cas par 100 grammes de poids. On n’a

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Pouvoir prot£oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 269

constate aucun symptdme de choc anaphylactique chez les animaux qui
auparavant par le sdrum du lapiu H, sacrifid 18 jours aprds l’intro-
duction intrapdritondale de cette mime proteose. Les scrums des
autree lapins (I, J, M, N, O) oat amend de l’anaphylaxie passive.
Celle ci n’a toutefois entraind d’issue fatale que chez l’animal ayant
reyu le sdrum du lapin N, soumis 24 jours auparavant & une injection
intrapdritondale de protoalbumose. Cet animal a succombd 26 heures en¬
viron aprds l’introduction intraveineuse de protoalbumose. Les lapins
sacrifids 24 et 30 jours aprds l’injection d’hdtdroalbumose se trouvaient
par consdquent en dtat d’anaphylaxie. Tel dtait aussi le cas de ceux
sacrifids 18, 24 et 30 jours apr&s [’introduction intrapdritondale de
protoalbumose.

Apr&s 2 heures de s6jour k 38 le s4rum de lapin normal
contient, d’aprfcs le tableau I, 0.30 k 2.05% de l’azote total
k l’4tat amin6 aliphatique. La proportion d’azote amin4 mis
en liberty par le s6rum maintenu 2 heures k 38 0 s’accroit k
la suite de l’injection d’h6t6roalbumose. A la suite de l’in¬
jection de protoalbumose, elle augmente 2 fois (lapins N et 0),
mais diminue par contre les 3 autres fois (lapins K, L, M).
Ces modifications de la teneur en azote amin6 aliphatique
du s6rum sous l’influence des injections de proteoses sont
comprises entre les chiffres extremes obtenus avec le s6rum
de lapin neuf. Elies reprgsentent 0.14 k 0.25% de l’azote
total pour les lapins trait4s par l’h4t6roalbumose, 0.02 k 0.74 %
pour ceux trait4s par la protoalbumose. On ne peut done
point en conclure avec certitude k une influence de l’injection
pr6parante sur le pouvoir prot6oclastique du s4rum de lapin
pour ses propres prot6ines.

Sauf chez les lapins L, I et N, les chiffres absolus d’azote total
du sdrum sont plus dlevds dans le second dchantillon de sdrum que dans
le premier. Les chiffres absolus d’azote amind aliphatique augmen-
tent aussi de la premidre saignde a la seconde, a l’exoeption des
' lapins K, L et M.

Les mdlanges de protoalbumose ou d’hdtdroalbumose et du sdrum
des lapins tdmoins, main bonus 2 heures k 38°, offrent 6 fois sur 10
des chiffres un peu infdrieurs (0.04 a 0.35 °/o de l’azote total), 4 fois des
chiffres ldg&rement supdrieurs (0.15 a 0.42 °/o de l’azote total) a ceux
donnds par les 2 constituants du mdlange restds sdpardment pendant
le mdme laps de temps a la meme tempdrature.

Le sdrum du lapin F ayant re?u 6 jours auparavant une injection
intrapdritondale d’hdtdroalbumose donne, apres 2 heures de sdjour a
38°, avec un volume dgal de solution a 1 °/o d’hdtdroalbumose ou de

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270 Edgard Zunz,

protoalbumose des chiffres d’azote amind l^gferement interieurs (0.10
a 0.22 °/o de l’azote total) k ceux calculus en partant des 2 constituents
du melange aprfes la mfeme dur6e de s^jour k la meme temperature.

II en est de mSme du melange de protoalbumose et de serum du lapin
H traite 18 jours auparavant par l’h6t4roalbumose, tandis qu’au con-
traire le melange de ce serum et de protoalbumose renferme une pro¬
portion d’azote amine qui depasse de 0.92 o/o de l’azote total celle
calcuiee d’aprfes les teneurs en azote amine du serum et de la proteose
maintenu9 separement 2 heures k 38°. Les melanges d’h£teroalbumose
ou de protoalbumose et du serum de l’un des 3 autres lapins traites
par TheteroalbumoBe donnent des chiffres d’azote amine legferement
superieurs k ceux obtenus par l’addition des teneurs respectives en cette
esp&ce d’azote du serum et de la proteose apr&e 2 heures de sejour k 38°.

L’injection pr6parante d’h6t6roalbumose fait apparaitre ou
accroit dans une certaiue mesure le pouvoir prot6oclastique
du sang pour la proteose sensibilisatrice d&s la p6riode pr6-
anaphylactique (lapins G, H). Puis, lorsque l’6tat d’anaphylaxie
s’est install^, le pouvoir prot£oclastique du s£rum vis-it-vis
de l’h6t6roalbumose sensibilisatrice redescend dans des limites
normales (lapin I) pour les d6passer 16ghrement par la suite
(lapin J) sans atteindre nlanmoins un niveau aussi 61ev6 que
chez le lapin H pendant la p6riode pr6anaphylactique. Le
pouvoir prot6oclastique pour la protoalbumose du s£rum des
lapins trails par l’h6t6roalbumose est rest4 dans les limites
normales pendant la periode preanaphylactique et l’6tat d’ana¬
phylaxie, sauf chez le lapin I, chez lequel il d6passe 16g6rement
la normale et l’emporte sur le pouvoir prot6oclastique du
m§me s6rum pour l’h6t6roalbumose sensibilisatrice, alors qu’on
observe sinon toujours l’inverse. L’injection pr£parante d’het6ro-
albumose a done une influence nette, quoique peu considerable,
sur le pouvoir prot6oclastique du sang pour la substance
d6chainante. Cet accroissement du pouvoir protSoclastique se
manifesto d6j& pendant la pSriode preanaphylactique et dis- •
parait au d6but de l’etat d’anaphylaxie pour reparaitre ensuite.
Ces variations du pouvoir prot£oclastique du sang sont k
rapprocher des faits analogues signals chez les cobayes traites
par la protoalbumose, tout en etant moins marquees que dans
ce cas.

Passons aux lapins traites 6 & 30 jours auparavant par de la
protoalbumose. Les melanges de strain et de protoalbumose possfedent,
apres 2 heures de sejour h 38°, une teneur en azote amin6 aliphatique

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Pouvoir protdoclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 271

supdrieure & cello prdvue. L’accroissement de la teneur en azote amind
rentre pour Ies scrums des lapins K et L, sacrifids 6 et 12 jours aprks
1’injection prdparante, dans les limites dee variations observdes avec les
sdrums dee lapins normaux. Au oontraire ohez les 3 lapins M, N, 0,
sacrifice en dtat d’anaphylaxie 18, 24 et 30 jours aprks l’introduction
intrapdritondale de protoalbumose, la teneur en azote amind aliphatique
dee melanges de sdrum et de la proteose sensibilisatrice ddpasse de 0.79
k 1.20 o/o de l’azote total les ohiffres calculus d’aprks les teneurs respec-
tives en azote amind des 2 constituents de cheque melange maintenus
sdpardment 2 heures k 38°.

II semble done bien quo, cbez les lapins inject4s au moyen
de protoalbumose, le s4rum voit s’accroitre pendant l’4tat
d’anaphylaxie son pouvoir prot4oclastique pour la proteose
sensibilisatrice; il devient alors 2 & 3 fois plus considerable
qu’i l’4tat normal. Cet accroissement ne d4bute pas d4j&
pendant la p4riode pr4anaphylactique comme chez les lapins
trait4s par l’h4t4roalbumose ou les cobayes trait4s par la
protoalbumose; il ne pr4sente pas non plus les variations
constat4es dans les 2 cas pr4c4dents.

Lee melanges d’hdtdroalbumose et de sdrum des lapins prdpards au
moyen de la protoalbumose renferment dans 2 cas (lapins L, N) moins
d’azote am in 4 aliphatique (0.05 k 0.48 °/o de l’azote total) que les
ohiffres calculds en additionnant lee teneurs respectives en cette espkee
d’azote des 2 constituents du mdlange maintenus sdpardment 2 heures
k 38°. Dans les 3 autree cas, la teneur en azote amind aliphatique de
ces mdlanges s'est accrue de 0.22 k 0.87 o/o de l’azote total. Elle a
ddpassd k 2 reprises (lapiqp K et O) la proportion d’azote amind trouvde
dans les mdlanges du mdme sdrum et de protoalbumose.

Les modifications du pouvoir prot4oclastique pour l’h4t4ro-
albumose du s4rum des lapins trait4s par la protoalbumose
ne sont en rapport ni avec le laps de temps 4coul4 depuis
l’injection pr4parante ni avec l’absence ou l’existence de l’4tat
d’anaphylaxie chez ces aniroaux.

m. Deiurieme eerie d’experienoes.

3 lapins A, B, C, pesant respectivement 2050, 2150 et 2150 gr.
ont servi k la seconde expdrience, dont le tableau II indique les rdsultats.
On a proeddd k intervalles de 10 jours k 4 injections intraveineuses de
2 c.c. de liqufde de Binger chez le premier, de solution k 1 o/o
d’hdtdroalbumose chez le second, de solution k 1 o/ 0 de protoalbumose
chez le troisikme. On a prdlevd avant chaque injection 40 k 50 c.c.

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272

Edgard Zunz,

de sang dans la carotide et Ton en a s6par6 le s6rum. On a introduit
lors des 2 derni&res saign6es une partie da s6rum dans le p^ritoine
d’un lapin de 500 a 600 grammes, auquel on a injects le lendemain
par voie intraveineuse 5 c. c. de liquide de Ringer, de solution a
1 o/o d’hdt^roalbumose ou de solution a 1 o/o de protoalbumose. On a
partage le restant du s^rum ou tout le s6rum selon le cas en 4 portions,
auxquelles on a ajoutd le meme volume soit de liquide de Ringer, soit
de solution a 1 o/o d’hdt^roalbumose, de protoalbumose ou de deut^ro-
albumose. On a maintenu 2 heuree h 38—40° C. les 4 melanges ainsi
prepares aux d6pens de chaque serum en meme temps que des melanges
t&noins de volumes 6gaux de liquide de Ringer et de solution h 1 %
d’h^roalbumose, de protoalbumose ou de deutSroalbumose. On a alors
d6termin6 les quantity d’azote total et d’azote amin6 aliphatique ren-
fermSes dans ces divers liquides. 4 heures aprfes la dernifere injection,
on a de nouveau pr61ev6 du s6rum sanguin qu’on a examine de la
meme manure que les autres Schantillons.

Tableau

Melange employ^

Avant la premiere injection

i e N £>

10 centimetres cubes de melange S.S^ 1
renferment aprfes deux heures jg E "3
de sSjour h 38° C

chiflres trouv^s chiffres calculus

► cfl «
3 V 8J

£ o °

- a

1

3

a

azote
amin6 ali¬
phatique

i

1

azote
amine ali¬
phatique

£

3

|

0

c <£s

2 «

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21.10

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1.08

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#

21.60

1.13

5.36

.

.

53.93

0.90

1.63

#

.

.

.

74.20:

2.54

3.42

75.03

2.38

3.17

+

0.25

70.31

1.65

2.35

71.19

1.98

2.78

0.43

74.98

1.85

2.47

75.53

2.03

2.70

_

0.23

52.06

1.28

2.46

.

73.10

3.38

4.62

73.16

2.76

3.77

+

6.85

69.27

3.49

5.04

69.32

2.36

3.41

+

1.63'

73.67

2.82

3.88

73.66

2.41

3.27

+

0.61

48.73

0.83

1.70

.

69.76!

3.18

4.56

69.83

2.31

3.32

+

i.24

65.89

2.62

3.22

65.99

1.91

2.91

+

0.31

168.45

1.72

2.51|

69.33

1.96

2.83

0.32!

Hetdroalbumose
Protoalbumose
Deut&oal bu mose
Serum du lapin A rece-
vant tous les 10 jours^
des injections de
liquide de Ringer
S6ru m du lapin B rece-
vant tous les 10 jours
des injections d’h6t£-
roalbumose
Serum du lapin C rece-
vant tous les 10 jours
des injections de pro-^
toalbumose

+liquide de Ringer
+liquide de Ringer
+liquide de Ringer
4-liauide de Ringer
+ heteroalbumose
-[-protoalbumose
+ d eu teroal bu mose
+liquide de Ringer
+heteroal bu mose
-f protoalbumose
+aeuteroalbu mose
+liquide de Ringer
+heteroalbu mose
+ protoalbumose
+deut^ roalbumose

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Pouvoir proteoclastique du sang au cours de Panaphylaxie. 273

Auciin des 3 lapins A, B, C n’a presente de symptomes du
choc anaphylactique k la suite des seconde et troisifeme injections.
La quatri&me n’a pas davantage entraind de phenomfcnes sp&iaux chez
les lapins traitSs par la protoalbumose ou par le liquide de Ringer.
5 heures 1 / 2 aprfes la dernfere injection, le lapin traits par l’hetero-
albumose a cotnmenc6 k montrer des secousses musculaires aux raembres
posterieurs, auxquelles ont succede d’ abord des convulsions g6n6ralis6es,
puis de l’abattement. L’animal paraissait n&inraoins d6jk enticement
retabli le lendemain.

On n’est parvenu k obtenir des symptomes, d’ailleurs pas trfcs
accuses, du choc anaphylactique dans les essais d’anaphylaxie passive
que chez les lapins injects le jour precedent au moyen du serum
recueilli avant la quatriCne injection d’heteroalbumose ou de proto*
albumose. II semble done que l’etat d’anaphylaxie n’a 6t6 realise
qu’aprfcs la troisifcme injection de proteose. La figure ci-contre illustre
la marche des phenomfcnes chez le lapin C traits par la protoalbumose.

II.

Avant la seconde injection

Avant la troisifeme injection

10 centimetres cubes de melange
renferment aprfcs deux heures de
eejour k 38° C

pour-cent de Pazote total trouves en
plus ou en moins k l’etat d’azote amine
aliphatique que les chiffres calcuies

10 centimetres cubes de melange
renferment aprfes deux heures de
s6jour a 38° C

pour-cent de Pazote total trouves en
plus ou en moins k Petat d’azote amine
aliphatique que les chiffres calcuies

chiffres trouves

chiffres calculus

chiffres trouves

chiffres calcuies

azote total, en milli¬
grammes

azote
amine ali-
phatique

azote total, en milli¬
grammes

azote
amine ali-
phatique

azote total, en milli¬
grammes

azote
amine ali¬
phatique

azote total, en milli¬
grammes

azote
amine ali¬
phatique

en milli¬
grammes

en pour-cent de
1’azote total

en milli¬
grammes

en pour-eent de
l’azote total

en milli¬
grammes

en pour-cent de
1’azote total

en milli¬
grammes

en pour-cent de
Pazote total

21.00

1.52

7.24

21.00

1.49

7.10

17.20

1.06

6.16

•

,

17.22

1.12

6.50

#

21.00

1.10

5.24

#

20.77

1.12

5.39

#

#

55.30

0.88

1.59

#

#

52.03

0.85

1.63

76.07

2.05

2.69

76.30

2.40

3.15

— 0.46

69.78

2.22

3.18

73.03

2.34

3.20

-0.02

72.80

2.29

3.14

72.50

1.94

2.68

, + 0.46

68.17

1.95

2.86

69.25

1.97

2.84

+ 0.02

74.60

1.18

1.58

76.30

1.98

2.60

— 1.02

72.45

1.66

2.39

72.80

1.97

2.71

— 0.32

49.80

1.94

3.89

52.96

1.50

2.83

#

70.00

2.60

3.91

70.80

3.46

4.89

— 6.98

73.80

2.81

3.81

73.96

2.99

4.04

-0.23

66.95

3.47

5.18

67.00

3.00

4.48

+ 0.70

69.40

3.42

4.93

70.18

2.62

3.73

+ 1.20

69.82

1.50

2.15

70.80

3.04

4.29

1— 2.14

73.52

2.16

2.94

73.73

2.62

3.55

— 0.61

48.30

1.35

2.79

9

9

49.07

0.73

1.49

#

#

69 65

2.56

3.68

69.30

2.87

4.14

— 0.46

70.02

2.07

2.96

71.07

2.22

3.12

— 0.16

65.50

3.03

4.63

65.50

2.41

3.68

+ 0.95

! 66.18

1.34

2.03

66.29

1.85

2.79

— 0.76

67.94

1.59

2.34

69.30

1.64

2.36

— 0.02

i 68.97

1.59

2.31

69.84

1.85

2.65

-0.36

Zeitschr. f. Immunitiitsforschung. Orig. Bd. XVII.

19

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

274

Edgard Zunz

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1.05 6.07
0.87 4.16
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1.94 2.73

I. 70 2.54

II. 54 2.20
2.08 5.15
4.23 6.88
3.41 5.96
2.38 3.90
i 1.58 3.73
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85

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Pouvoir prot^oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie.

275

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I

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276

Edgard Zunz,

%

Aprfcs 2 heures de s^ouT k 38°, le serum additionne de son volume
de liquide de Ringer renferme chez les 3 lapins A, B, C ayant servi
k l’experience r6sum6e dans le tableau II 1.63 k 2.46 °/o de i’azote
sous forme amin6e aliphatique.

La proportion d’azote amine mis en liberty par le serum presente
des variations assez notables chez le meme lapin lors des 4 saign6es'
pratiques avant chaque injection intraveineuse de liquide de Ringer,
d’heteroalbumose ou de protoalbumose. Chez le lapin t&noin A, elle
oscille entre 1.19 et 1.63 % de i’azote total, chez le lapin B entre 2.46
et 3.86 %, chez le lapin C entre 1.49 et 2.79 o/o.

La teneur en azote amin6 aliphatique du serum augmente chez
les lapins B et C k la suite de la premiere injection de proteose,
diminue k la suite de la seconde et remonte k la suite de la
troisfeme k peu prfes au mfime niveau que lors de la seconde
saign^e. Ces oscillations d6passent 1 % de l’azote total et la moitie de
la teneur initiale en azote amine. Elies ne sont nullement parallfeles
aux trfcs faibles modifications constat4es chez l’animal temoiu A. Elies
dScfelent peut etre des variations du pouvoir prot6oclastique du serum
pour ses propres proteines en relation avec l’etablissement de l’etat
d’anaphylaxie.

Lors de la saignSe pratiqu6e 4 heures apr&s la dernifcre injection,
la teneur en azote amine du serum des 3 lapins A, B, C s’est accrue
par rapport k la saign6e effectu6e avant l’injection. Cet accroissement
rentre chez le lapin t£moin dans les iimites des oscillations normales.
Au contraire, pour les lapins trait6s par l’h6t4roalbumose ou la proto¬
albumose, on obtient alors des chiffres d’azote amin6 depassant reepec-
tivement de 1.29 et 1.07 % de l’azote total les chiffres obtenus avant
la quatrifeme injection, de 2.32 et 2.24 % ceux constates avant la
troisifcme injection, de 1.26 et 0.97 % ceux observes avant la seconde
injection, de 2.69 et 2.03 °/o ceux trouv6s avant tout traitement. Cette
augmentation relativement considerable de la teneur en azote amine
du serum pour ses propres proteines est plus marquee chez le lapin B
traite par l’heteroalbumose et qui a montr6 1 heure 1 / 8 aprfcs la saignee
les phenomfcnes d’un choc anaphylactique attenue que chez le lapin A
traite par la protoalbumose et chez lequel, bien qu'U fdt en etat d’ana-
phylaxie, la dernifcre injection n’a pas entraine de manifestations
speciales.

Leg melanges de serum et de deuteroalbumose, maintenus 2 heures
k 38°, ont une teneur en azote amine aliphatique inferieure k celle
donnee par les 2 constituants du melange maintenus separement dans les
memes conditions, k l’exception du melange prepare au moyen du serum
du lapin B avant tout traitement.

Les melanges de serum du lapin temoin et d’heteroalbumose ou
de protoalbumose pr4sentent 7 fois des chiffres d’azote amin6 legferement
inferieurs k ceux calcu!6s, 3 fois des chiffres quelque peu superieurs.
Les oscillations en les deux sens sont comprises entre 0.02 et 0.46 o/o

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Pouvoir protdoclastique du sang au cours de Panaphylaxie. 277

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de l’azote total; elles ne semblent nullement ddpendre du nombre de
saigndes ou d’injections subies par l’animal.

Les melanges d’hdtdroalbumose et de sdrum du lapin B ou du
lapin C traitds par les protdosos donnent des chiffres d’azote amind
supdrieurs 4 ceux calculus, sauf lors des deuxidme et troisidme saigndes.
II en eet de m&me dans to us les cas des melanges de protoalbumose et
de sdrum du lapin B et, 4 Pexoeption de la troisidme saignde, des
melanges de protoalbumose et de sdrum du lapin C. Sauf pour les
mdlanges de protoalbumose et de sdrum du lapin B, la proportion d’azote
amind aliphatique de ces divers mdlanges ddpasse les chiffres calculds
dans de bien plus grandee limites lors des saigndes pratiqudes avant
et 4 heures aprds la dernidre injection d’hdtdroalbumose ou de proto¬
albumose que lors des saigndes antdrieures. Les differences entre les
chiffres trouvds et calculds sont plus considerables pour le mdlange de
la protdose sensibilisatrice et du sdrum du lapin traitd par celle ci que
pour le mdlange de oe meme sdrum et de 1’autre protdose. Lors de
la saignde faite 4 heures aprds la dernidre injection, les differences
entre les chiffres trouvds et calculds diminuent pour les melanges de
protoalbumose ou d’heteroalbumose et de sdrum du lapin B, s’accentuent
par contre encore pour les melanges de protoalbumose ou d’hetero¬
albumose et de sdrum du lapin C.

La teneur en azote amind des melanges d’hdtdroalbumose ou de
protoalbumose et de sdrum ne subit que des variations peu considerables
lors des 3 premieres saigndes chez le lapin B. On observe des variations
un peu plus accusdes de la teneur en azote amind pour les melanges
d’hdtdroalbumose ou de protoalbumose et des dchantillons de sdrum
recueillis lors des 3 premieres saigndes chez le lapin C. La teneur
en azote amind s’accroit nettement lors de la quatridme saignde chez
les 2 lapins B et C, et oela davantage pour le melange contenant la
proteose sensibilisatrice et le sdrum correspondant que pour l’autre.

La teneur en azote amind aliphatique du melange d’hdtdroalbumose et
de sdrum du lapin B recueilli lors de la quatridme saignde ddpasse de
2.00 4 2.81 % de 1’azote total les chiffres antdrieurs, celle du melange
de protoalbumose et de sdrum du lapin B de 0.63 4 1.08 °/o, celle
du mdlange d’hetdroalbumose et de sdrum du lapin C de 0.87 4 2.47 %,
celle du mdlange de protoalbumose et de sdrum du lapin C de 1.06 4
3.66 °/o. De la quatridme 4 la cinquidme saignde, la teneur en azote
amind aliphatique des mdlanges de sdrum du lapin B ou C et d’hdtdro-
albumoee ou de protoalbumose s’accroit encore, surtout pour les

mdlanges prdpards avec le sdrum du lapin C. Elle atteint lors de la

dernidre saignde 6 4 7 o/o de l’azote total.

En r6sum6, la teneur en azote amine aliphatique des

melanges d’h6t6roalbumose ou de protoalbumose et de s6rum
des lapins trails par Tune ou l’autre de ces substances ne
se modifie gudre aprds les deux premidres injections intra-

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278 Zunz, Pouvoir proteoclastique du sang au coure de l’an&phylaxie.

veineuses. Elle s’accrolt par contre notablement apr£s la
troisifcme injection et d6passe de 1 k 2°/o les chiffres cal¬
culus en additionnant les teneurs en azote amind des deux
constituants du melange rest6s s6par6ment 2 heures & 38°.
Cette augmentation de la teneur en azote amin£ est plus con¬
siderable pour les melanges de sdrum et de proteose sensibili-
satrice que pour ceux du m&me serum et de l’autre proteose.
Elle s’accentue encore aprfcs la quatrieme injection.

Ces resultats d^cfclent un accroissement manifeste du
pouvoir proteoclastique du serum des lapins en etat d’ana-
phylaxie pour la proteose sensibilisatrice et k un bien moindre
degr6 pour l’autre proteose capable de dechainer le choc ana-
phylactique chez un animal sensibilise. On constate, en outre,
au cours de l’etat d’anaphylaxie, un accroissement tardif du
pouvoir proteoclastique du s6rum de lapin pour ses propres
proteines et pendant la p6riode preanaphylactique des varia¬
tions de ce pouvoir, jusqu’k un certain point en relation avec
l’etablissement de l’etat d’anaphylaxie.

Zusammenfassung.

1) Die intraperitonealen Oder intravendsen Heteroalbumose-
oder Protoalbumoseeinspritzungen bewirken beim Kaninchen
eine minder oder mehr ausgeprftgte Zunahme des proteo-
klastischen VermSgens des Blutes ffir die sensibilisierende
Proteose sowie, wenn auch in viel geringerem Grade, fflr die
andere den anaphylaktischen Shock erzeugende Proteose.

2) Bei den entweder mittels einer intraperitonealen Proto-
albumoseeinspritzung oder mehreren intravenOsen Heteroalbu-
mose- oder Protoalbumoseeinspritzungen vorbehandelten Ka¬
ninchen erscheint diese Zunahme des proteoklastischen Ver-
mbgens des Blutes erst w&hrend des Anaphylaxiezustandes.
Sie besteht hingegen schon w&hrend des pr&anaphylaktischen
Stadiums bei den mittels einer intraperitonealen Heteroalbu-
moseeinspritzung vorbehandelten Kaninchen, bei welchen sie
zeitweise w&hrend des Anaphylaxiezustandes verschwindet.

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Zunz, Pouvoir prot^oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 279

Nachdruck verboten.

[Travail de Plnstitut de thdrapeutique de l’Universit^ de Bruxelles.]

Recherches sar le pouvoir protloclastiqne da sang aa
cours de l’anaphylaxle.

Troisi^me communication.

Experiences chez le chien et considerations generates.

Par Edgard Zunz.

Avec 1 figure dans le texte.

(Eingegangen bei der Redaktion am 10. Dezember 1912.)

L Introduction.

Dans deux communications pr£c6dentes 1 ), j’ai 4tudi6 les
modifications du pouvoir prot4oclastique du sang au cours de
l’anaphylaxie provoqu4e chez le cobaye et le lapin par Intro¬
duction intrapdritoneale ou intraveineuse d’h£t6roalbumose, de
protoalbumose ou de sdrum de bceuf. II m’a paru utile de
proc4der aussi 4 quelques recherches chez le chien. Les r6-
sultats ainsi obtenus sont encore fort incomplete. Ils appellent
de nouvelles experiences qui exigeront un laps de temps assez
considerable. On doit neanmoins d6jk en tenir compte et les
mettre en relation avec les donndes observ4es chez le lapin et
chez le cobaye. C’est pourquoi je me suis cru autorise &
rapporter les constatations effectu6es jusqu’d. present chez le
chien & la suite de Introduction intraveineuse de sdrum
de bceuf.

n. Experiences chez le chien.

On a inject^ 20 c.c. de sSrum de bceuf dans la jugulaire d’un
chien A de 8Vs kilogrammes. On a introduit le meme jour 20 c. c. de
liquide de Ringer dans la jugulaire d’un chien tSmoin B pesant
8700 grammes. On a rSpStS ces injections au bout de 28 jours. Lors
de la reinjection, le premier chien a montrS d’abord une vive excitation,
puis un abattement trSs profond, qui a dSbutS 2 beures aprfes l’intro-
duction intraveineuse de sSrum de bceuf, a atteint son plus fort degrS
au bout de 4 & 5 heures, existait encore au bout de 8 heures et avait
entiferement disparu le lendemain. La temperature rectale du chien A

1) Diese Zeitschr., Bd. 17, p. 241, 265.

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Tableau

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280

Edgard Zunz,

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282

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Pouvoir proteoclastique du sang an cours

de l’anaphylaxie.

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284

Edgard Zunz,

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Injection Reinjection

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Pouvoir prot&xdastique du sang ftu cours de l’anaphylaxie. 285

Gck igle

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286

Edgard Zunz,

est tombee de 39.7 avant la reinjection k 37.2 au bout de 2 et k 36.4
au bout de 4 heures pour remonter a 36.9 au bout de 6 et k 38.2 au
bout de 8 heures. La temperature rectale du chien temoin B s’est
legfcrement accure (0.6°) aprfcs la reinjection; elle a passe de 39.5
avant la reinjection k 39.8 au bout de 2, 40.1 au bout de 4, 39.7 au
bout de 6, 39.9 au bout de 8 heuree. Cet animal n’a pas presente
d’autres symptomes speciaux. Le lendemain de la reinjection, la tem¬
perature rectale du chien A correspondait k 39.2, celle du chien B
a 39.3.

On a preieve du sang k chacun des 2 chiens avant I’injection
ou la reinjection et 6 heures aprfes celles ci. On, a prepare du serum
et du sang defibrine aux depens de chaque prise de sang. On a partage
chaque echantillon de serum ou de sang defibrine en 2 portions aux-
quellee on a ajoute le meme volume soit de liquide de Ringer, soit
de serum de boeuf. Ces 4 melanges et un melange temoin forme par
du serum de boeuf additionne de son volume de liquide de Ringer
sont maintenus pendant 6 heures k 38—40°C, mais on en a preieve
la moitie au bout de 2 heures. On a determine les quantites d’azote
total et d’azote amine aliphatique continues dans ces divers melanges
aprfes 2 et aprfcs 6 heures de sejour k 38—40° C. Les tableaux I et II
mentionnent les chiffres ainsi obtenus. La figure ci-oontre reproduit les
donnees recueillies aprfcs 2 heures de sejour k 38° des divers melanges
qxamines.

Le serum renferme chez les 2 chiens A et B moins d’azote amine
aliphatique que le sang defibrin6 provenant de la meme saignee. On
observe la plus forte teneur en azote amine au bout de 2 heures de
sejour k 38° pour le serum du chien A tant avant toute injection

qu’avant et aprfcs la reinjection, pour le sang defibrine du chien A
aprfcs Tinjection et la reinjection. Dans tous les autres cas, le serum et
le sang defibrine renferment plus d’azote amine apr£s 6 heures de
sejour k 38° qu’aprfcs 2. La teneur en azote amine aliphatique ne

presente pas toujours son maximum au meme moment dans le serum et
dans le sang defibrine provenant d’une meme saignee.

L’injection de serum de bceuf amfene au bout de 28 jours un
notable accroissement du pouvoir proteoclastique pour ses propres proteines
du serum du chien A ainsi trait6. II est k ce moment 5 fois plus fort

qu’auparavant pour retomber k peu prbs k la normale 6 heures aprfcs

la reinjection. La teneur en azote amine aliphatique du sang defibrine
atteint le double du chiffre initial 6 heures aprfcs la premiere injection
de serum bovin. Elle ddpasse au bout de 28 jours le triple ou le
quadruple du chiffre initial pour redescendre ensuite considerablement,
sans avoir neanmoins encore regagne tout k fait la normale 6 heures
apr£s la reinjection.

On observe chez le chien temoin B 28 jours aprfcs Tinjection de
liquide de Ringer un accroissement de la teneur en azote amine
aliphatique du sang defibrine, mais pas du serum. L’injection et la
reinjection de liquide de Ringer entrainent une augmentation de la

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Pouvoir prot&xslastique du sang au cours de Panaphylaxie. 287

teneur en azote amine aliphatique du serum, une diminution au contraire
de celle du sang defibrine.

Le melange de serum de chien et de serum de bceuf eontient
moins d’azote amine que le melange correspondant prepare au moyen
de sang defibrine, sauf pour les melanges maintenus 6 heures k 38°,
prepares au moyen des 6chantillons de sang pr61ev& au chien B
avant et aprfcs la premiere injection de liquide de Ringer.

Les melanges de serum bovin et de serum ou de sang defibrine
de chien pr&entent une plus forte teneur en azote amine au bout de
6 heures qu’au bout de 2, k Pexception de ceux prepares au moyen du
serum du chien A avant ou aprfes la premiere injection et avant la
reinjection, du serum du chien B avant la reinjection, du sang defibrine
du chien A avant la premiere injection.

La teneur en azote amine aliphatique des melanges de serum
bovin et de serum ou de sang defibrine recueiili avant tout traitement
depasse, tant aprfcs 2 qu’aprfes 6 heures de sejour k 38 °, les chiffres
calcuies en partant des 2 constituants du melange maintenus separement
pendant le meme laps de temps k 38°, sauf pour le melange du sang
defibrine du chien temoin et de serum bovin aprfcs 6 heures de sejour
k 38°.

La teneur en azote amine de ces melanges s’accroit par rapport
aux chiffres calcuies 6 heures apr&s la premiere injection de serum
de bceuf, soit sous son influence, soit sous celle de la saignee, sauf
pour le melange de sang defibrine et de serum de bceuf maintenu
2 hcures k 38°, dont la teneur en azote amine, quoique plus eievee
qu’avant l’injection, n’atteint pas le chiffre calcuie en partant des 2
constituants envisages isolSment. 28 jours apr£s Pinjection de serum
de bceuf, la teneur en azote amine aliphatique des melanges de serum
ou de sang defibrine et de serum bovin a beauooup augmente; elle atteint
pr^s du quadruple au sextuple des chiffres initiaux et depasse de 1 k
2 % les chiffres calcuies en additionnant les teneurs en cette espece
d’azote des 2 constituants examines separement apres la meme duree
de sejour k 38°. Les melanges de serum de bceuf et de serum recueiili
6 heures aprfes la reinjection serique ayant entraine le choc ana-
phylactique presentent k peu pr£s la m£me teneur en azote amine
aliphatique, tr£s faible d’ailleurs, que celles donnees par leurs 2 con¬
stituants maintenus isoiement pendant le m£me laps de temps 4 38°.
La teneur en azote amine aliphatique dee melanges de serum de bceuf
et de sang defibrine recueiili 6 heures aprfes la reinjection serique est
inferieure aux chiffres calcuies en partant des 2 constituants envisages
separement. Les melanges de serum de bceuf et de serum ou de sang
defibrine recueiili pendant le choc anaphylactique dechaine par la
second© introduction intraveineuse de serum bovin ont des teneurs en
azote amine aliphatique analogues k celles obtenues avant toute injection
et par consequent fort inferieures k celles constatees pendant P6tat d’ana-
phylaxie avant la reinjection serique.

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288

Edgard Zunz,

Lee scrums recueillis apr4s la premiere ou la deuxidme reinjection
de liquide de Ringer foment avec le serum de bceuf des melanges
dont lee teneurs en azote amine depassent lSg&rement, au bout de 2
et de 6 heures de sejour k 38°, les chiffres calcuies d’aprfcs les teneurs
en cette espfcce d’azote des 2 constituants du melange maintenus isoie-
ment pendant le meme laps de temps k 38°. Les melanges de serum bovin
et de sang defibrine recueilli dans ces memes conditions presentent au
contraire des teneurs en azote amine inferieures aux chiffres calcuies.
Lee melanges de s6rum bovin et de serum ou de sang defibrine recueilli
28 jours apr£s la premiere injection de liquide de Ringer possfedent
des teneurs en azote amine aliphatique legfcrement superieures aux
chiffres calcuies aprfcs un sejour de 2 heures k 38°, tegfcrement in-
ferieures par contre aprfcs un sejour de 6 heures k 38°.

Les r&sultats precedents d4c61ent des differences notables
entre les 2 chiens en experience. Chez celui soumis & l’in-
fluence d’une injection preparante de serum de bceuf, on
constate un accroissement considerable du podvoir proteo-
clastique du serum et du sang defibrine pour les proteines
du serum sensibilisateur. II atteint un niveau relativement
eiev6 pendant l’etat d’anaphylaxie et diminue dans une forte
mesure pendant le choc anaphylactique. Le pouvoir proteo-
clastique du serum et du sang defibrine pour ses propres
proteines subit des variations analogues. Chez le chien temoin,
on n’observe par contre pas de modifications bien nettes du
pouvoir proteoclastique du serum et du sang defibrine pour
leurs propres proteines et pour celles du serum de boeuf.

m. Considerations generates.

Si l’on fait abstraction des variations du pouvoir proteo¬
clastique du serum et du sang defibrine pour leurs propres
proteines, on peut r6sumer de la fagon suivante les principaux
faits mis en lumibre par les recherches dont les resultats
ont ete relates dans cette communication et dans les deux
precedentes:

1° Sauf chez les cobayes traites par le serum de bceuf,
le pouvoir proteoclastique du sang pour les proteines ou
proteoses sensibilisatrices s’accroit dans une plus ou moins
grande mesure aprfcs l’injection ou les injections pr6parantes.

2° Cet accroissement du pouvoir proteoclastique ne s’ob-
serve qu’aprfcs l’etablissement de l’etat d’anaphylaxie chez les
lapins soumis soit 4 une injection intraperiton6ale de proto-

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Pouvoir prot£oclastique du sang au cours de Panaphylaxie. 289

albumose, soit k plusieurs injections intraveineuses de cette
propose ou d’h6t6roalbumose. II se constate par contre d6j&
k la pdriode pr6anaphylactique chez les lapins soumis 4 une
injection intrap^ritondale d’h6t6roalbumose et chez les cobayes
traitds de la m§me manifcre par la protoalbumose pour dis-
paraltre k certains moments pendant l’dtat d’anaphylaxie.

3° L’augmentation considerable du pouvoir prot£oclastique
du chien en 6tat d’anaphylaxie s^rique disparait pendant le
choc anaphylactique.

4° Chez les cobayes trails par le s6rum de bceuf, le
pouvoir protgoclastique du sang diminue pendant la p£riode
pr£anaphylactique et disparait pendant l’6tat d’anaphylaxie.

Ces constatations ne permettent pas de se rendre compte pour le
moment avec precision des relations entre l’4tat d’anaphylaxie ou le
choc anaphylactique d’une part et les modifications du pouvoir protdo-
clastique du sang d’autre part. Bien des points restent encore & 41ucider
auparavant. En voici les plus importants:

Quelle part prennent les substances inhibitrices du s4rum bovin
k la diminution graduelle du pouvoir prot4oclastique du sang des
cobayes traites par le s4rum?

A quel moment apparait l’accroissement du pouvoir protdoclastique
du sang chez le chien sounds & une injection prdparante de s4rum?

Le pouvoir prot4oclastique du sang des chiens et des autres
animaux en 4tat d’anaphylaxie subit-il d’habitude des variations sembla-
bleei it celles constat4es chez les cobayes traites par la protoalbumose et
dans certaines conditions chez les lapins traites par l’h4t4roalbumose,
c’eat it dire disparait-il it certains moments?

Le pouvoir prot6oclastique revient-il k la normale pendant le choc
anaphylactique chez le cobaye et chez le lapin? Ce retour it la normale
survient-il seulement lors du choc d4chaln4 par l’introduction intra-
veineuse de s4rum) ou bien aussi lors du choc provoqu4 soit par l’injection
intrap4riton4ale de s4rum, soit par 1’injection intraveineuse ou intra-
p4riton4ale d’h4t4roalbumose ou de protoalbumose?

Que se passe-t-il chez les animaux ayant surv4cu au choc ana¬
phylactique? Le pouvoir prot4oclastique reparatt-il et s’accroit-il de
nouveau au bout d’un certain laps de temps? Quel effet exerce sur le
pouvoir prot4oclastique du sang d’un animal en 4tat d’antianaphylaxie
ou d’ananaphylaxie une nouvelle injection intravemeuse des proteoses
sensibilisatrices?

Tant qu’on ne disposera pas de donn4es suffisantes relativement k
ces diverB points, on ne pourra gukre donner une interpr4tation ration-
nelle des modifications du pouvoir prot4oclastique du sang au cours
de l’anaphylaxie. Certains rapprochements s’imposent n4anmoins des
a pr4sent entre les r4sultats de mes recherches et des donn4es obtenues
par d’autres m4thodes exp4rimentales.

ZelUchr. f. ImmunittUforachung. Orig. Bd. XVII. 20

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290

Edgard Zunz,

Le pouvoir proteoclastique du sang apparait chez le cobaye
et parfois aussi chez le lapin au stade pr4anaphylactique.
Ceci est enti&rement d’accord avec les observations faites au
moyen de la m6thode optique par Abderhalden et ses
collaborators.

D’aprfes Heilner 1 2 ), lorsqu’on introduit sous la peau chez
le lapin de grandes quantity de proteines etranghres k l’or-
ganisme, leur combustion s’accomplit en 3 jours gr&ce 4
l’apparition dans l’economie d’un ferment sp6cifique ad hoc.
Un tel ferment protecteur ou immunisant, selon l’heureuse
expression de Heilner adoptee par Abderhalden*), ap¬
parait dans l’organisrae peu de temps aprfcs la premiere in¬
jection de petites quantity de proteines het£rologues. Ce
ferment protecteur manifesto une grande activity pendant le
stade pr6anaphylactique. Si l’on injecte k ce moment pour
la seconde fois les m£mes proteines, elles sont trfcs vite brftiees.
Mais si l’on ne procfede k la reinjection qu’au stade ana-
phylactique proprement dit, c’est k dire au moment oh les
ph£nomfenes du choc anaphylactique sont d£chain£s par cette
rdinjection, on constate une forte diminution dans la destruction
des prot6ines etranghres introduites dans l’organisme. Heil¬
ner pense que le m£me ferment proteolytique forme les
m£mes produits de scindage des proteines au stade pre-
anaphylactique et pendant l’etat d’anaphylaxie, mais que les
modifications ulterieures de ces composes ne sont pas identiques
pendant ces 2 periodes. Les phenom&nes du choc anaphylactique
seraient done dils selon Heilner non pas h la production
de produits intermediaires de desintegration nocifs pour l’or-
ganisme, mais bien plutdt k la persistance relativement longue
de ces composes toxiques dans l’organisme lors de retat d’ana¬
phylaxie.

Les variations du pouvoir proteoclastique du sang observ£es
chez les cobayes trait£s par la protoalbumose et chez les
lapins traites par l’heteroalbumose viennent & l’appui des
constatations si int6ressantes faites par Heilner chez le

1) E. Heilner, Zeitschr. f. Biol., Bd. 50, 1907, p. 26—37; ibid.
Bd. 56, 1911, p. 75—86; ibid. Bd. 58, 1912, p. 333—354.

2) E. Abderhalden, Schutzfermente des tierischen Organismus,
Berlin 1912.

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Pouvoir proteoclastique du sang au coure de l’anaphylaxie. 291

lapin. De Waele 8 ) signale des variations oscillantes ana¬
logues dans le temps de coagulation chez le chien et chez
le lapin 4 la suite de l’injection d’extraits d’organes, de venin
de cobra et de toxine diphth6rique, additionn6s ou non d’alexine.
Selon De Waele, ces oscillations dans la reaction de l’or-
ganisme k une introduction parent£rale de proteines Strangles
exprimeraient la predominance alternative de l’eflfet thrombo-
plastique et de la secretion d’antithrombine. S’il en est bien
ainsi, les variations du pouvoir proteoclastique du sang au
cours de la periode preanaphylactique proviendraient de la
coexistence de deux actions antagonistes, celle des agents
proteoclastiques et celle d’agents inhibiteurs de ceux ci.

Mes experiences tendent k faire croire que le pouvoir
proteoclastique se manifeste peu k peu sous l’influence de l’in-
jection sensibilisatrice pour atteindre son degre le plus eieve
k l’epoque oil l’organisme est parvenu k l’6tat d’anaphylaxie
et oil l’on peut dechainer le choc anaphylactique. Si la re¬
injection des proteines ou des proteoses sensibilisatrices pro-
voque alors des effets nocifs, cela provient du rapide envahis-
sement de l’organisme par des produits toxiques, formes eu
grande quantity au cours de la desintegration soit de ces
proteines ou proteoses, soit d’6iements proteiques renferm6s
dans le sang de l’animal en etat d’anapbylaxie. Eien ne nous
permet, en effet, de conclure avec certitude au scindage
de l’antigbne, quelque tent6 qu’on en soit & premiere vue.
Le clivage des elements proteiques propres k l’organisme
sensibilise permettrait mSme de mieux concevoir comment,
malgrd l’extr§me diversite des antigbnes, les sympt&mes du
choc anaphylactique restent pour ainsi dire identiques dans
la m£me espbce animate. Quelle que soit, du reste, leur
origine, ces composes dangereux pour l’economie se foment
sans .doute deji lors d’une reinjection effectu6e au stade
preanaphylactique quelques jours apres l’injection preparante,
mais ou bien leur quantite est moindre k ce moment que lorsque
l’etat d’anaphylaxie est realise, ou bien les agents inhibiteurs
de la desintegration des proteines exercent alors des effets
plus considerables qu’&. une epoque plus eioignee de l’injection
sensibilisatrice. Dans ces conditions, l’organisme parvient k

1) H. De Waele, diese Zeitschr., Bd. 14, 1912, p. 200—220.

20 *

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292

Edgard Zunz,

desintoxiquer, par des processus de sciudage ou de synthase,
ces composes nocifs suffisamment vite pour qu’ils n’aient
pas le temps d’exercer leurs funestes effets dans T6conomie.
Au contraire, pendant l’etat d’anapbylaxie, l’accroissement
d’intensite du pouvoir prot6oclastique du sang am£ne l’en-
vahissement de 1’organisme par une telle masse de produits
toxiques de la disintegration soit des protiines ou des proteoses
sensibilisatrices, soit d’elements protiiques propres k l’organisme
mime de l'animal riinjecti, que les processus disintoxiquants
de scindage ou de syntbise ne riussissent plus k protiger
l’organisme contre l’action nifaste de ces composes nocifs
que dans de faibles limites.

Pendant le choc anaphylactique, le pouvoir protioclastique
du sang subit une diminution marquee ou disparait mime
entierement. Ceci est d’accord avec des observations de
H. Pfeiffer, d’apris lesquelles les proprietis enzymatiques
du plasma disparaitraient pendant quelque temps lors du
stade d’antianapbylaxie consicutif au choc anaphylactique pour
reparaitre ensuite. Cette disparition du pouvoir proteoclasti-
que du sang pendant le choc anaphylactique me parait pre¬
senter une grande importance. Est-elle due 4 Tutilisation des
agents protioclastiques par Tantigfene sensibilisateur riinjecti,
soit par la formation d’un complexe colloidal entre l’antig&ne
et une partie des protiines du plasma sanguin *) ou d’autres
elements de celui ci, soit par l’action sur Tantigine d’un com¬
plexe acides aminis-alexine ayant pris naissance & la suite de
l’injection priparante *), soit par tout autre processus non
encore ilucidi? Traduit-elle plutot une disparition ou une
diminution reelle de la teneur du sang en agents proteoclasti-
ques due & une inhibition de l’activite de certaines cellules,
provoquee par Tebranlement considerable de tout l’organisme
lors du choc anaphylactique. S’git-il au contraire de la predomi¬
nance dans le tonent circulatoire k ce moment des agents
inhibiteurs de la desintegration des proteines. II serait pre¬
mature de se prononcer k ce sujet, alors que nous ignorons si

1) P. Nolf, Arch. int. de Physiol., T. 10, 1910, p. 37—77; Bull, de
la Cl. des Sc. de PAcad. roy. de Belgique, 1910, p. 669—688.

2) H. De Waele, diese Zeitschr., Bd. 12, 1912, p. 605—666; ibid.,
Bd. 15, 1912, p. 193-200.

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Pouvoir protdoclastique du sang au cours de l’anaphylaxie. 293

la r6apparition 4ventuelle du pouvoir protioclastique du sang
apr&s le choc anaphylactique est brusque ou graduelle et dans
quel dilai elle survient.

Les travaux de Pfeiffer, de Schittenhelm, de
Weichardt 1 ) et de leurs collaborateurs apportent de puis-
sants arguments en favour de la riapparition du pouvoir protio-
clastique du sang quelque temps apris la cessation des effets du
choc anaphylactique et de la disintoxication de plus en plus
parfaite et rapide des produits de disintegration nocifs pour
l’organisme par des processus appropriis de synthise ou de
clivage. II ne faut cependant pas perdre de vue la caractire
hypothitique des considerations pricidentes, surtout pour ce
qui concerne le stade d’antianaphylaxie ou d’ananaphylaxie.
Des experiences actuellement en cours au moyen de la mithode
optique d’Abderhalden et du procidi gasomitrique de
van Slyke fourniront peut §tre des iliments nouveaux au
sujet des modifications du pouvoir protioclastique du sang au
cours de la piriode prianaphylactique, de l’itat d’anaphylaxie,
du choc anaphylactique et de 1’itat d’antianaphylaxie ou d’an¬
anaphylaxie *).

Ainsi qu’Abderhald en le fait remarquer 4 juste titre,
il ne faut pas attacher pour le moment une trop grande im¬
portance k l’apparition dans le sang d’un ferment protio-
clastique k rdle immunisant ou protecteur k la suite d’une
premiere injection de proteines ou de‘proteoses sensibilisatrices
et aux variations du pouvoir protioclastique nouvellement
acquis ou considirablement accru. Le tableau III montre, en
effet, que la teneur maxima en azote amini aliphatique des

1) H. Pfeiffer und S. Mita, diese Zeitschr., Bd. 6, 1910, p. 18
—87. — A. Schittenhelm und W. Weichardt, Munch, med. Wochen-
schrift, Bd. 57, 1910, p. 1769—1771; ibid., Bd. 58, 1911, p.841—844; ibid.,
Bd. 59, 1912, p. 67—69, 1089—1092; diese Zeitschr., Bd. 14, 1912, p. 609
—636; Zeitschr. f. exp. Pathol, u. Therap., Bd. 11, 1912, p. 69—101. —
A. Schittenhelm, W. Weichardt und W. Grisshammer, ibid.,
Bd. 10, 1912, p.412—447. — A. Schittenhelm, W. Weichardt und
F. Hartmann, ibid., Bd. 10, 1912, p.448—478. — A. Schittenhelm
und H. Strobel, ibid., Bd. 11, 1912, p. 102—117. — A. Schitten¬
helm, Deutsche med. Wochenschr.. Bd. 38, 1912, p. 489—493.

2) Des it present, elles permettent de conclure a la reapparition du
pouvoir protioclastique du sang chez les chiens qui survivent au choc
anaphylactique.

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294

Edgard Zunz,

melanges de s£rum ou de sang d£fibrin6 et de liquide de
Ringer, de s6rum de bceuf, de protoalbumose ou d’h6t6ro-
albumose n’atteint pas 2% de l’azote total dans les ex¬
periences effectu6es chez le cobaye et ne d6passe pas 6 & 7 %
de l’azote total dans les recherches faites chez le chien et le
lapin. L’accroissement de la teneur en azote amine aliphatique
sous l’influence d’une injection preparante de proteines ou de
proteoses sensibilisatrices correspond au maximum k un peu
plus de 1 % de l’azote total chez le cobaye, & prfcs de 3 °/ 0
chez le lapin et k un peu plus de 4% chez le chien.

Tableau III.

Melange examine

Teneur
maxima en
azote amin£
aliphatique, en
pour-cent de
Pazote total

Accroisseraent
maximum de
la teneur en
azote am in 6
aliphatique, en
pour-cent de
Pazote total

S6rum de cobaye + protoalbumose

1.20

0.38

Sang d£fibrin£ de cobaye + liquide de Ringer

1.40

0.93

Sang defibrin£ de cobaye + protoalbumose

1.80

1.25

86rum de lapin + liquide de Ringer

5.15

2.69

S4rum de lapin + het<$roalbumose

6.88

2.26

S£rum de lapin + protoalbumose

6.18

2.96

S4rum de chien + liquide de Ringer

1.55

1.21

S£rum de chien + s6rum de bceuf

1.97

1.61

Sang d4fibrin6 de chien + liquide de Ringer

5.46

4.24

Sang d6fibrin6 de chien + s£rum de bceuf

5.05

4.15

Peut etre serait on parvenu k d6celer un poiivoir prot6oclastique
plus consid4rable en op4rant avec du plasma au lieu de s4rum ou de
sang d4fibrin6, en faisant varier les proportions respectives des deux
ooustituants de chaque melange envisage et en maintenant ces melanges
& 38° pendant des laps de temps plus ou moins considerables que ceux
choisis dans les pr6sentes recherches d’aprfes les donn4es d’exp4riences
ant4rieures effectu4es chez des animaux normaux. II y a lieu de tenir
compte de ces divers facteurs dans les nouvelles recherches entreprises
au sujet des modifications du pouvoir prot4oclastique du sang au cours
de l’anaphylaxie.

Quoi qu’il en soit, les modifications du pouvoir prot6o-
clastique du sang ne suffisent certes pas 3t expliquer tous les
ph6nom&nes de l’anaphylaxie. On ne peut que se rallier aux
justes reserves 6mises k ce propos par Abderhalden 1 ).
Les modifications du pouvoir prot6oclastique du sang refl&tent

1) E. Abderhalden, Die Schutzfermente, p. 56 et suiv.

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Pouvoir prot^oclastique du Bang au cours de l’anaphylaxie. 295

peut fit re settlement de fatjon plus ou moins attfinufie l’ant-
agonisme, dfijk signalfi plus haut, entre les agents protfio-
clastiques et les agents inhibiteurs de cette activity enzymati-
que spficiale de l’organisme.

Les agents protfioclastiques ne sont peut fitre nullement
spficifiques, comme on tend d’babitude k le croire. Ils prfi-
existent peut fitre dans le sang circulant, comme les principes
actifs qui entrent en jeu lors de la coagulation. A l’fitat
normal, Faction des uns et des autres est entravfie par des
agents antagonistes. L’injection de protfiines ou de proposes
fitrangfires provoque dans l’organisme des troubles profonds
qui retentissent sans doute sur la production et la repartition
dans l’ficonomie des agents dfisintfigrante et de leurs anta¬
gonistes. Les variations du pouvoir protfioclastique du sang
pendant le stade prfianapbylactique traduisent ces modifications
du chimisme in time de 1’organisme.

No If a attirfi l’attention sur la part prfipondfirante prise par le
foie, „organe producteur de la trfis grosse masse des albuminoides du
sang et rfigulateur de la constitution protfiique du milieu interne" 1 2 ),
dans la genfise de 1’fitat d’anaphylaxie et du choc anaphylactique.
D’aprfes No If 3 ), l’organisme du lapin rfiagit moins Yite et de fa$on
moins intense que celui du chien dans ce qua a trait aux transformations
de la coagulation du sang. Selon De Waele, le lapin sficrfite l’anti-
thrombine plus lentement et surtout moins abondamment que le chien.
Les differences, nullement essentielles d’ailleurs, observfies dans mee
experiences entre le lapin et le chien pour ce qui ooncerne les modi¬
fications du pouvoir protfioclastique du sang pendant l’fitat d’ana¬
phylaxie et apr&s la reinjection des proteineB ou proteoses sensibili-
satrices, proviennent peut fitre du degrfi d’intensitfi et de rapidite de
(’intervention spficiale du foie dans ces 2 espfioee animates.

On a attribufi de divers cfitfis un rdle important dans l’fitat d’ana¬
phylaxie et le choc anaphylactique h l’alexine envisagfie soit comme
un ferment protfioclastique, soit comme un dissolvant"). On a aussi

1) P. Nolf, Arch, di FiBiol., Vol. 7, 1909, p. 16.

2) P. Nolf, Arch. int. de Physiol., T. 3, 1905, p. 218—228.

3) L. Bnrkhardt, diese Zeitschr., Bd. 8, 1910, p. 87—106. — H.
De Waele, loc. cit. — E. Friedberger, ibid., Bd. 2, 1909, p. 208—214;
ibid., Bd. 3, 1909, p. 133—143; ibid., Bd. 8, 1911, p. 239-294; Berl. klin.
Wochenschr., Bd. 48, 1910, p. 1490—1492,1922—1927, 2303-2307; Munch,
med. Wochenschr., Bd. 57, 1910, p. 2628--2633, 2699—2701. — E. Fried¬
berger und G. Castelli, diese Zeitschr., Bd. 6, 1910, p. 279 —283. —
E. Friedberger und Goldschmidt, ibid., Bd. 6, 1910, p.299—304.—
E. Friedberger und O. Hartoch, ibid., Bd. 2, 1909, p. 208—214. —

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296

Edgard Zunz,

fait intervenir dans ces ph^nomfenes des transformations des conditions
de coagulation du sang dues soit h des modifications des protdines du
plasma 1 ) soit & des coagulations sur l’endoth^lium vasculaire sous
l’influence de l’antigfene r6inject6 agissant comme substance thrombo-
plastique 2 ).

Selon Bauer 3 ), Doerr 4 ), Heilner 5 ), Ritz et Sachs 6 ),
Traube 7 ), Turro 8 ), des troubles de T^quilibre osmotique et physieo-
chimique de l’organisme se produisent au oours de Tanaphylaxie et
contribuent au tableau symptomatique du choc anaphylactique lors de
la reinjection de l’antigfcne sensibilisateur. Des phenomenes d’ad-
sorption, des modifications de la tension superficielle paraissent se pro-
duire dans ces conditione. II est inutile de s’6tendre davantage sur les
diverses conceptions 6mises k propos de l’anaphylaxie. Peut etre
plusieurs d’entre elles renferment elles une part de v^ritA

En tout cas, on doit admettre avec No If Tabsence
d’antagonisme entre Tanaphylaxie et l’immunit^ 9 ). L’6tat d’ana-

E. Friedberger und E. Jerusalem, ibid., Bd. 7, 1910, p. 748—761. —
E. Friedberger und C. Vallardi, ibid., Bd. 7, 1910, p. 94—151. —
U. Friedemann, ibid., Bd. 2, 1909, p. 591—643; ibid., Bd. 3, 1909,
p. 726—730; Berl. klin. Wochenschr., Bd. 47. 1910, p. 2198-2200; Fol.
serol., Bd. 7, 1911, p. 365—366. — F. C. Loffler, diese Zeitschr., Bd. 8,
1910, p. 129—144. — J. G. Sleeswijk, ibid., Bd. 2, 1909, p. 133-158;
ibid., Bd. 7, 1910, p. 661—664. — A. Wassermann und C. Bruck,
Deutsche med. Wochenschr., Bd. 32, 1006, p. 449 —454.

1) R. Doerr und J. Moldovan, Biochem. Zeitschr., Bd. 41, 1912,
p. 27-50.

2) P. Nolf, Arch. int. de Physiol., Bd. 3, 1905, p. 1—43; ibid.,
Bd. 6, 1908, p. 1—72; ibid.; Bd. 9, 1910, p. 204-261, 407-549; Bull, de la
Cl. des Sc. de l’Acad. de Belgique, 1911, p. 71—83.

3) J. Bauer, Berl. klin. Wochenschr., Bd. 49, 1912, p. 344—345. —
J. Bauer und K. Wiisthoff, Deutsche med. Wochenschr., Bd. 38, 1912,
p. 894-895.

4) R. Doerr und R. Pick, Centralbl. f. Bakt., I. Abt., Orig., Bd. 62,
1912, p. 146—159. — R. Doerr und V. K. Russ, ibid., Bd. 63, 1912,
p. 243-257.

5) E. Heilner, Zeitschr. f. Biol., Bd. 50, 1908, p. 476—487.

6) H. Ritz und H. Sachs, Berl. klin. Wochenschr., Bd. 58, 1911,
p. 987; Centralbl. f. Bakt., I. Abt., Ref., Bd. 51, 1911, Supplementheft,
p. 43-49.

7) I. Traube, diese Zeitschr., Bd. 9, 1911, p. 246-274; Munch, med
Wochenschr., Bd. 59, 1912, p. 1020—1027.

8) R. Turro und P. Gonzalez, diese Zeitschr., Bd. 9, 1911,
p. 556—561.

9) P. Nolf, Bull, de la Cl. des Sc. de l’Acad. de Belgique, 1910,
p. 669 - 688.

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Pouvoir protdoclaetique du sang au cours de l’anaphylaxie. 297

phylaxie et le stade d’antianaphylaxie on d’ananaphylaxie re-
pr6senteut tons deux des stades diflf6rents de la defense de
l’organisme contre l’introduction parentSrale de proteines
etrangfcres.

Dans le tube digestif, les proteines subissent une dis¬
location progressive assez profonde. La resorption azot6e
porte probablement surtout sur des fragments assez simples
de la molecule albuminolde et, par consequent, d6j& fort
eioign4s de celle ci 1 ). Cette decomposition des albumines
alimentaires en fragments assez simples me parait indispensable
pour permettre aux processus de synthfese cons4cutifs d’assurer
le maintien de l’integrite de la constitution chimique des pro-
teines sp6ciales k chaque organisme 2 ).

Les differences qui existent entre les diverses matures
proteiques s’att4nuent au fur et & mesure des progrfes de leur
desintegration. Les memes acides amines constituent, en
effet, la charpente commune des diverses proteines. Celles ci
different les unes des autres surtout par leur teneur en cbacun
de ces acides amines et par la fa^on dont ceux ci se combi-
nent entre eux. Les premiers termes de la dislocation des
proteines varient, par consequent, davantage d’une proteine k
l’autre que les suivants. Les derniers produits de clivage

1) E. Abderhalden und Fr. Sarauely, Zeitschr. f. physiol.
Chem., Bd. 46, 1906, p. 193—200. — E. Abderhalden, C. Funk und
E. S. London, ibid., Bd. 51, 1907, p. 269—273. — E. Abderhalden,
K. Kautzsch und E. S. London, ibid., Bd. 48, 1906, p. 549—556. —
E. Abderhalden, L. Baumann und E. 8. London , ibid., Bd. 51, 1907,
p. 384 —390. — E. Abderhalden, K. von Korosy und E. S. London,
ibid., Bd. 53, 1907, p. 148—163. — E. Abderhalden, E. S. London
und B. Oppler, ibid., Bd. 55, 1908, p. 447—454. — E. Abderhalden,
E. S. London und E. B. Reemlin, ibid., Bd. 58, 1909, p. 432—434. —
E. Abderhalden, F. Medigreceanu und E. S. London, ibid., Bd. 58,
1909, p.435—437. — E. Abderhalden, A. Gigon und E. S. London,
Bd. 53, 1907, p. 113—118. — E. Abderhalden, O. Prym und E. S.
London, ibid., Bd. 53, 1907, p. 326—333. — E. Abderhalden, E. 8.
London und C. Voegtlin, ibid., Bd. 53, p. 334—339. — E. Abder¬
halden, W. Klingemann und Th. Pappenhusen, ibid., Bd. 61,
1911, p. 411—420. — 0. Prym, C. Oppenheimere Handb. d. Biochemie,
Bd. 3, 2. Halfte, 1909, p. 95-123. — E. H. Starling, ibid., Bd. 3,
2. Hiilfte, 1909, p. 206-242.

2) E. Zunz, Rev. de l’Univ. de Bruxelles, T. 8, 1903, p. 755—770;
M6m. de l’Acad. roy. de Med. de Belgique. T. 20, 1908, fasc. 1.

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298 Zuu z, Pouvoir prot4oclastique du sang au cours de l’anaphylaxie.

(polypeptides k structure mol6culaire assez simple, acides
amines) sont ndcessairement les mSmes pour toutes les pro-
t4ines. Si les proteoses «primates* ne sont pas ou gu&re
toxiques, cela tient peut Stre k leur nature colloi'dale, 4 leur
grandeur molSculaire assez considerable, k la presence de
certains acides amin6s ou de certaines chalnes d’acides amines
dans leurs molecules. Les proteoses, les peptones et les
polypeptides qui en d6rivent directement, ne poss£dent plus
ces caract&res k un degr£ suffisant pour att6nuer ou entraver
la nocivite due aux differences de composition qu’ils presentent
par rapport aux composes analogues rencontr6s dans l’orga-
nisme. D6s lors, on con^oit ais6ment la faible nocivite ou
m@me l’innocuite absolue des termes ultimes du scindage des
proteines, la toxicite relativement eiev6e des produits inter¬
mediates, derives des premiers composes issus de la d6-
sintegration des substances albuminoldes.

Zusammenfassung.

1) Nach einer intravendsen Ochsenserumeinspritzung be-
sitzt das Blut des im Anaphylaxiezustande befindlichen Hundes
ein relativ erheblich vermehrtes proteoklastisches VerraSgen
fOr die Proteine des Ochsenserums. Diese Zunahme des
proteoklastischen VermSgens des Blutes verschwindet w&hrend
des anaphylaktischen Shocks.

2) Mit Ausnahme der intraperitonealen Ochsenserumein-
spritzungen beim Meerschweinchen bewirken die sensibili-
sierenden Einspritzungen eine mehr Oder minder ausgepr&gte
Zunahme des proteoklastischen VermSgens des Blutes far die
sensibilisierenden Proteine oder Proteosen.

3) Diese Zunahme des proteoklastischen VermSgens er-
scheint, je nach den Fallen, entweder erst w&hrend des Ana-
phylaxiezustandes Oder w&hrend des pr&anaphylaktischen Sta¬
diums. Sie verschwindet aber in letzterem Falle manchmal
zeitweise w&hrend des Anaphylaxiezustandes.

4) Die Ver&nderungen des proteoklastischen VermSgens
des Blutes gendgen keineswegs zur vSlligen Erkl&rung der
Anaphylaxieerscheinungen. Ueber ihre eigentliche Deutung
last sich zurzeit noch nichts Sicheres behaupten.

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Emil Emmerich, Untersuchungen mit Eigelbantiseren etc. 299

Nachdruck vcrbotcn.

[Aus dem Institut ftir Hygiene nnd Bakteriologie der Universit&t
StraCburg (Direktor: Geheimrat Prof. Dr. Uhlenhuth).]

Untersuchungen mit Eigelbantiseren, zugleieh eln Beitrag
zu den Bezlehungcn der verschledenen Eigelbarten

zuelnander.

Von Dr. Emil Emmerich.

(Eingegangen bei der Bedaktion am 12. Januar 1913.)

Die grofie Bedeutung der Uhlenhuthschen Pr&zipitations-
metbode fOr Blut- und Fleischuntersuchungen ist heute Oberall
anerkannt und oft gewfirdigt worden; doch ist es merkwGrdig,
dafi sie sich nicht auch bei den Untersuchungen von Eier-
prflparaten, worauf Uhlenhuth schon 1900in richtiger
Erkenntnis ihres Wertes namentlich fflr den Nahrungsmittel-
chemiker hinwies, mehr eingebflrgert hat. In seiner ersten
Arbeit aus diesem Gebiet befafit sich Uhlenhuth mit dem
spezifischen Nachweis von Eiereiweifl und kommt zu dem
Schlufi, dafi es gelingt, Hflhnereiweifi durch die Pr&zipitation
nachzuweisen, dafi aber die Reaktion fflr Hflhnereiweifi nicht
absolut spezifisch ist, da auch das Eiweifi verwandter Vogel-
arten eine, wenn auch abgeschwfichte, positive Reaktion gibt.
Uhlenhuth war jedenfalls imstande, mit Hilfe des spezifischen
Eierklar- Antiserum, das Eiereiweifi vom Serum eiweifi der ver- *
schiedensten Tiere zu unterscheiden, andererseits auch wieder
im Handel befindliche Eiereiweifiprftparate als solche biologisch
festzustellen und in anderen das Fehlen von Eiereiweifi nach¬
zuweisen. Diese Tatsache beanspruchte fflr die Nahrungs-
mittelchemie ein grofies praktisches Interesse, zumal da Uhlen¬
huth auch feststellen konnte, dafi die Reaktion aufierordentlich
fein und empfindlich ist, so dafi der spezifische Nachweis von
Eiweifi noch mflglich war bei Verdflnnung von 1:100 000,
w5.hrend die gebr&uchlichen chemischen Eiweifireaktionen schon
bei Verdflnnungen Qber 1 :1000 versagten. Nach weiteren

1) Deutsche med. Wochenschr., 1900, No. 46.

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300

Emil Emmerich,

Untersuchungen wurde dann von Uhlenhuth und Otto-
lenghi festgestellt, daB es mit Hilfe der Pr&zipitation auch
einwandfrei gelingt, Eidotter auch unter den verschiedensten
Verhaitnissen der Praxis (Margarine, Nudeln etc.) nachzuweisen.

Bei Durchsicht der Literatur fand ich, abgesehen von den
eben zitierten Arbeiten, nur eine Mitteilung von Schfitze 1 )*
der auch bei Untersuchungen verschiedener Eigelbmargarine-
sorten auf Eigelb mittels der Pr&zipitation smethode positive
Resultate bekam und der ebenso bei Prtlfung von Eiernudeln
auf ihren Eigelbgehalt unter 12 Sorten 10 positiv fand; auBer-
dem eine Arbeit aus der allerletzten Zeit von Galli-Valerio
und Born and 2 ), die eine Prtlfung der Brauchbarkeit der
„Ovosera“ zum Zweck hat. Selbst in dem ausgezeichneten
Buche von Nuttall vermisse ich ein Eingehen auf die Ver-
wendbarkeit der Eier- und namentlich der Eigelbantisera. Ich
habe deswegen auf Veranlassung des Herrn Geheimrat Uhlen¬
huth einige Versuche mit Eigelbantiseren gemacht, fiber deren
Ergebnisse ich kurz berichten mochte.

Das pr&zipitierende Serum stellte ich mir in der Weise
her, daB ich einem Kaninchen dreimal in Zwischenr&umen von
je 3 Tagen je 2 ccm einer Hfihnereigelbaufschwemmung in
einer Verdfinnung von 1:50 in physiologischer Kochsalzlosung
intravenfis injizierte. Auch bediente ich mich mit Vorteil der
von Uhlenhuth angegebenen Methode, um Eigelb rein zu
gewinnen: Man gieBt das Ei vorsichtig in flussig gemachte
Gelatine, l&Bt sie erstarren und schneidet dann die Kuppe der
hartgewordenen Gelatinemasse ab, bis man auf die Kuppe des
Eigelbes kommt, das man dann mittels Pipette bequem auf-
saugen kann.

3 Tage nach der letzten Injektion wurde aus der Ohrvene
eine Probeblutentnahme gemacht. Die Titration des Serums
ergab in einer Eigelbverdunnung von 1:100000 nach 5 Mi-
nuten eine Pr&zipitation. Erwahnt sei, daB es sich nach
meinen Erfahrungen empfiehlt, zur Gewinnung hochprSzi-
pitierender Sera junge Tiere zu nehmen, da diese meistenteils
ein hoherwertiges Serum liefern als altere Tiere.

1) Zeitschr. f. Hyg., Bd. 47, 1904.

2) Zeitschr. f. Imnuinitiitsf., 1912.

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Untersuchungen mit Eigelbantiseren etc.

301

Das durch Entbluten des Tieres in die Brusthohle ge-
wonnene Serum wurde vor der Benutzung im Uhlenhuth*
schen Apparat filtriert.

Ein Vorversuch mit Htihnereiweifiaufschwemmung ergab
vollst&ndig negative Resultate. Neben dem selbsthergestellten
Antiserum benutzte ich bei den folgenden Versuchen ein von
den S&cbsischen Serumwerken bezogenes hochwertiges Eigelb-
antiserum (Titer 1:20 000).

Ich prtifte zun&chst zahlreiche kfiufliche Teigwaren, so
Nudeln, Sp&tzle, Maccaroni, ABC. Als Kontrolle und gleich-
zeitig zur quantitativen Sch&tzung des enthaltenen Eigelbes
dienten mir selbsthergestellte Nudeln.

Die verschiedenen PrSparate wurden fein zerkleinert, mit
der dreifachen Menge 0,85-proz. Kochsalzlosung versetzt und
dann zur Extraktion fiber Nacht in den Eisschrank gebracht.
Am n&chsten Tage wurden dann die Extrakte durch gehfirtete
Filter filtriert und in den verschiedenen Verdiinnungen der
Versuch angesetzt; dabei zeigten die selbsthergestellten Nudeln
noch in der Verdiinnung 1:60 nach 2 Minuten starke Pr&zi-
pitation, wahrend die anderen Nahrmittel nur in einer Ver-
dfinnung 1:15 nach 2 Minuten schwache Pr&zipitation gaben.
Bei Maccaroni fiel einmal auch im unverdiinnten Extrakt die
Reaktion vollst&ndig negativ aus, ein anderes Mai trat nur
ganz schwache Pr&zipitation auf.

Protokoll des Versuches vom 8. XL 1912.

I. Selbsthergestellte Nudeln (Extrakt).

Salpetersaure, Kochprobe: Prazipitation:

1:60 positiv 1:60 nach 2 Min. positiv

1:120 negativ 1:120 negativ

II. Gekaufte Nudeln (Extrakt).

1:6 positiv
1:15 schwach positiv

III. Spatzle.

1:15 positiv
1:30 negativ

IV. ABC.

1:10 positiv

V. Maccaroni.

1:5 schwach positiv

positiv

schwach positiv nach 2 Min.

positiv nach 2 Min.
negativ

negativ

1:5 positiv nach 2 Min.
negativ

Kontrollen mit Normalkaninchenserum und Kochsalzkontrolle waren negativ.

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302

Emil Emmerich,

Die Untersuchungen wurden nun auf eine grofie Reihe
von Nahrmitteln ausgedehnt, die zum Teil als Eiereigelb-
prSparate in den Handel kommen. Die stark alkoholhaltigen,
angeblich Eigelb enthaltenden Eisenweine wurden vor An-
stellung der Reaktion im Vakuum alkoholfrei gemacht. Die
Extrakte wurden in der Verdflnnung angewandt, daB die Sal-
petersfiure-Kochprobe eine deutliche Trflbung zeigte. Alle
untersuchten Praparate zeigten mit Ausnahme von Ovomaltin
vollstandig negativen Befund. Das berechtigt natfirlich nicht
zu dem SchluB, daB die Praparate kein Eigelb enthielten,
sondern es ware mdglich, daB entweder nur die Extraktivstoffe
des Eigelbs (Lecithin, Vitellin) darin enthalten waren, oder
daB die Vorbehandlung der Praparate das bei der Herstellung
verwandte Eigelb nach irgendeiner Seite hin verandert hatte,
Es ware denkbar, daB man durch anaphylaktische Versuche
prazisere Resultate nach dieser Richtung hin bekame. In dem
untersuchten Eierkognak, der ebenfalls vorher im Vakuum
alkoholfrei gemacht war, gab der Extrakt noch in der Ver-
dfinnung 1:200 mit Eigelbantiserum nach 5 Minuten starke
Ringbildung.

Uhlenhuth hat seinerzeit schon, wie oben erwahnt,
darauf hingewiesen, daB es auf dem Wege der Prazipitation
nicht gelingt, Htlhnereiereigelb von dem der Ente und Gans
zu trennen. Auch Galli-Valerio und Born and bekamen
bei ihren Versuchen mit „Vogeleiern“ (!) immer eine deutliche,
wenn auch schwache Prazipitation. Mich interessierte nun,
ob vielleicht auch die Eier anderer Tierarten mit Hflhnereier-
eigelbantiserum prazipitierten; zunachst wurden verschiedene
Fischeier untersucht.

Kaviarextrakt in der Verdflnnung 1:1000 (d. h. es wurde
ein Extrakt aus 10 g Kaviar und 90 ccm physiologischer Koch-
salzlSsung hergestellt, der fiber Nacht im Eisschrank stand
und hiervon wurde nochmals eine Verdflnnung 1:100 zum
Versuch verwendet) gab mit beiden Eigelbantisera eine starke
Prazipitation, wahrend die Kontrollen mit Normalkaninchen-
serum absolut negativ waren. Daraufhin wurden mehrere
Kaviarsorten untersucht und alle bis auf eine gaben noch in
der Verdflnnung 1:200 eine starke Prazipitation. Der Ge-

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Untersuchungen mit Eigelbantiseren etc.

303

danke, daB bei Herstellung des Kaviars vielleicht ein Eigelb-
zusatz verwendet wurde, lieB sich dadurch widerlegen, daB
auch Eier von Karpfen und Rotaugen mit HQhnereigelbanti-
serum eine deutliche Prftzipitation gaben, w&hrend Lachs-
sowie Schleien- und Brasseneier eine vollst&ndig negative
Reaktion zeigten.

Protokolle der Versuche vom 20. und 23. XI. 1912.

Samtliche Fischeierextrakte wurden in der Verdunnung 1:1000 ver-
wandt (siehe oben).

Salpeteraaure-Kochprobe bei alien gleich stark positiv.

Kaviar I

Lachs

Karpfen

Schleien

Brassen

Botauge

Prazipitation:
stark positiv
negativ
positiv
negativ
negativ
positiv

Kaviar II (Verdunnung 1:200) fraglich

„ III ( „ 1:200) sehr stark positiv

„ IV ( „ 1:200) stark positiv

Kontrollen mit Normalkaninchenserum negativ.

Da Herr Dr. Kodama in unserem Institut zu dieser
Zeit gerade zum Nachweis von Kaviarverf&lschungen ein
Eaviarantiserum herstellte, so prflfte er dieses Serum gegen
Htihnereigelb, doch waren seine Befunde durchweg negativ.
Diese auffallenden Ergebnisse bedtirfen noch der weiteren
AufklBrung.

Ein interessanter Befund lieB sich noch bei der Prtifung
von SchildkrOteneigelb (Testudo graeca) erheben, indem dieses
noch in einer Verdflnnung von 1:1000 mit Hfihnereigelb-
antiserum deutliche Prazipitation gab, wahrend eine Auf-
schwemmung vom Eierstock der Schildkrdte zu absolut nega-
tiven Resultaten filhrte. Daraus geht wohl unschwer hervor,
daB sich wesentliche Unterschiede in der Zusammensetzung
des unreifen und reifen Eies finden; diese interessanten Er¬
gebnisse sollen, sobald das Material leichter zu beschaffen ist,
noch genauer nachgeprflft werden, ebenso die Beziehungen
der verschiedenen Eigelbsorten zueinander.

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304

N. Sukiennikowa,

Zusammeafassung.

Durch ein hochwertiges Eigelbantiserum gelingt es, in
k&uflichen Teigwaren das Eigelb nacbzuweisen.

Bei den untersuchten Nahrpr&paraten kann der Nachweis
des vorhandenen Eigelbs durch die Pr&zipitation nur aus-
nahinsweise geffihrt werden.

Mehrere Fischeiersorten, so Kaviar, Karpfen und Rot-
augen, geben mit Hflhnereigelbantiserum positive Pr&zipitation,
ebenso Schildkroteneigelb, wahrend das Eigelb des Eierstockes
der Schildkrdte vollst&ndig negative Resultate lieferte.

Nachdruck verboten.

[Aus dem Institut Pasteur, Paris; Direktor Prof. Dr. E. Me-
tschnikoff (Leiter: Prof. Dr. A. Besredka).]

Ein experimenteller Beltrag znr „Anaphylatoxln“-Frage.

Von IT. Sukiermikowa.

(Eingegangen bei der Bedaktion am 20. Januar 1913.)

Die zahlreichen Ergebnisse und Beobachtungen, welche
man beim Studium der Infektionskrankheiten sammelte, haben
als Material ffir die Immunitfitslehre gedient. Die Gesetz-
m&Bigkeiten, welche siebeherrschen, werden allgemein anerkannt
und es stfitzen sich darauf in gleicher Weise Anh&nger von
beiden* Hauptschulen der Immunitfitslehre — der humoralen
und der phagocyt&ren.

Sorgfaltige Untersuchungen fiber den Anaphylaxiemecha-
nismus haben es erlaubt, die Anaphylaxie unter die Immunit&ts-
erscheinungen zu bringen. Man darf trotzdem wohl kaum das
Anaphylaxiekapitel als ein abgeschlossenes auffassen, denn
jeder kommende Laboratoriumstag kann neues Licht auf die
unklaren Seiten dieser Frage werfen und in sie neue Gesichts-
punkte tragen.

Noch weniger genau sind unsere Kenntnisse zurzeit fiber
die Natur und die Eigenschaften jenes kfinstlich zusammen-
gestellten Giftes, das im Anaphylaxiesinne spezifisch sein soli
und fiber welches, wie bekannt, von Friedberger (1) be-

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Em experimenteller Beitrag zur „Anaphylatoxin“-Frage. 305

richtet worden ist. Mit dem Erscheinen dieser Mitteilung hat
die Anaphylaxielehre eine neue Entwicklungsphase betreten.
Das ohnedies an mannigfaltigsten Experimenten reiche Material
erweiterte sich durch neue Versuchsreihen und die spezielle
Literatur wuchs bedeutend.

Es gestattet leider weder der Umfang noch das unmittel-
bare Ziel dieses Beitrages, bei alien interessanten Betrach-
tungen, Theorien, Thesen und Antithesen, welche auf Veran-
lassung verschiedenster Anaphylatoxin e gemacht wurden,
ISngere Zeit zu verweilen. Einiges muB dennoch berflcksichtigt
werden. Da es sich aber um Wiederholen schon ausge-
sprochener Gedanken und um Paraphrasieren fremder Worte
handelt, so verweise ich auf die Originalquelle. Ich meine
denjenigen Artikel von Do err und Russ (2), in welchem
die Autoren im Vorflbergehen auch einige Beispiele und
Meinungen pro et contra Anaphylatoxin erwflhnen und be-
sprechen. Sie vertiefen sich nicht in alle diese Fragen, indem
sie sich auf das Studium der einen beschrflnken: der Bedeutung
des Komplementes fflr die Anaphylatoxinherstellung. Aber sie
halten es fflr angebracht, jene Forderungen vorzuftihren, welche
an das Anaphylatoxin gestellt werden mflssen, weil es ein
spezifisches, in vitro hergestelltes Gift ist. Es ist klar, daB
die Reihe derartiger Forderungen sich in demselben MaBe
vergrflBert und wechselt, wie sich die Versuche flndern und
der Wunsch wflchst, die Natur des verwickelten Prozesses
aufzuklaren.

Indem wir die feinere chemische Struktur des Giftes bei-
seite lassen und es nur vom rein biologischen Gesichtspunkte
studieren, dflrfen wir von ihm mit vollem Rechte erwarten,
daB das Anaphylatoxin sich demjenigen Tatsachenkomplex fflgt,
dem auch die typische klassische Anaphylaxie unterworfen ist.
Dieser leitende Gedanke hat die Anstellung jener weiter zu
beschreibenden Versuche gefordert, deren Plan und Ausftthrung
mir auf liebenswflrdige Weise von Herrn Prof. Besredka
flberlassen wurde.

Das zu untersuchende Anaphylatoxin sollte aus dem
Hflhnereiklar hergestellt werden. Ueber ein solches sind bis
jetzt in der Literatur — soviel mir bekannt — keine Angaben

Zeitschr. f. Immunitatsforschung. Orig. Bd. XVII. 21

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306

N. Sukiennikowa,

vorhanden gewesen. Die Art einer Anaphylatoxinherstellung
nach Friedberger ist vom Verfasser in seiner vierten Ana-
phylaxiearbeit (1) verOffentlicht und in der IX. Mitteilung kurz
rekapituliert.

Es sei an dieser Stelle die Angabe in ihren Hauptziigen wiederholt #
Prazipitierendes Serum+Antigen gibt einen Niederschlag, weleher von der
Fiiissigkeit befreit und mit dem Komplement versetzt wird. Es entsteht
das Anaphylatoxin I. Nachdem dasselbe abzentrifugiert wird, versetzt man
den zuriickgebliebenen Niederschlag abermals mit Komplement: Anaphyla¬
toxin II. Die Einzelheiten sind im ersten der ebengenannten Artikel zu
finden.

Als Antigen diente fiir meine Versuche Htthnereiklar, in
steriler Weise entnommen und 10-fach mit KochsalzlOsung
verdttnnt. FQr den in-vitro-Vorgang habe ich das Eiereiweifi
durch einfache Trichter und Filter filtriert, die vorher sterilisiert
waren. Fiir sfimtliche Injektionen aber ist das EiweiBklar
unfiltriert in derselben Verdflnnung genommen worden.

Es geschah dies aus folgendem Grunde: 1) Es befinden sich, wie be-
kannt, im unfiltrierten Hiihnerei-Eiweifi grobere und dichtere Partikelchen.
Sie konnen nun sehr leicht ein Prazipitat vortauschen, wenigstens was seine
Menge betrifft. Es diente also das Filtrierpapier gewissermafien als ein
mechanisches Sieb, was 2) von Bedeutung erschien, weil ja nicht alle
Hiihnereiklare im Eiweifigehalt Equivalent sind (Ess b achsche Probe). Ja es
hat auch dasselbe Ei in verschiedenen Stellen verschiedene Eiklarkonsistenz.

Dafi das Filtrierpapier dabei wirklich die Rolle eines regulierenden
Siebes spielte, geht aus folgendem Versuche hervor: Es sind zwei Ver-
diinnungen 1:5 und 1:10 hergestellt worden, beide filtriert und darauf
1 ccm von jeder mit 1 ccm Antiserum versetzt worden. Die entstandene
Prazipitatmenge war in beiden Versuchsrbhrchen diegleiche. Nun ist unfil-
triertes Eiereiweifi 1:10 — je 0,5 — hinzugekommen. Es vermehrte sich der
Niederschlag, aber es wurde die Menge in beiden Rohrchen verschieden.
Dieselbe elektive Rolle eines solchen Siebes spielt bei Injektionen die diinne
Spritzennadel, allerdings in einem noch groberem Mafie als das Filtrierpapier.

Der Mitteilung von Do err und Russ (2) zufolge fiber
die komplementfreie Herstellung der Anaphylatoxine habe ich
nicht nur das typische, nach Friedberger erhaltene Ana¬
phylatoxin, d. h. Prfizipitat I + Komplement untersucht, son-
dern auch jene Fiiissigkeit ffir Versuche verwendet, die nach
der ersten Reaktion, d. h. nach der ersten Ausffillung, zurttck-
bleibt. Da ich aber kein spezielles Ziel fiber Aufklfirung der
Komplementrolle verfolgte, habe ich weder das Antiserum

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Ein experimenteller Bcitrag zur „Anaphylatoxln“-Frage. 307

noch die zu untersuchende Flflssigkeit lflngerem Stehen unter-
worfen; diese letztere ist auBerhalb der Versuche im Eis-
schrank aufbewahrt worden.

Es hat nun diese Nebenuntersuchung, die keine unmittel-
bare Beziehung zu meiner Aufgabe hatte, ein interessantes
Resultat ergeben. Es stellte sich heraus, daB in alien Fallen,
ohne Ausnahme — im ganzen habe ich prazipitierendes Serum
von 7 Kaninchen untersucht — diese Flflssigkeit giftiger wirkte
als das Toxin, welches aus dem Niederschlag -f Komplement
hergestellt wurde. So genflgten z. B. Dosen von 3 ccm und
von einem Kaninchen 2,5 ccm, urn, intravenfls injiziert, ein
Meerschweinchen von 200 g Gewicht akut zu tdten. Der be-
treffende Niederschlag -h Komplement war insofern schwacher,
als gleiche Dosen bei den Tieren kaum merkbare Zeichen von
Unbehagen erweckten. Erst mit der DosisvergroBerung etwa
um 1—1,5 ccm konnte man dasselbe blitzartige Resultat er-
reichen. Als das Serum von anderen Kaninchen genommen
wurde und die Dosis letalis der nach der ersten Pr&zipitat-
ausfallung zurflckgebliebenen Flflssigkeit 4 und 5 ccm dar-
stellte, muBte auch die fflr den tSdlichen Ausgang erforderliche
Menge des betreffenden Niederschlages + Komplement auf 5
und 6 ccm vergrflBert werden. Dieses letzte Anaphylatoxin
aber habe ich als ein fflr die Arbeit ungeeignetes gehalten
und nur in jenen Fallen Versuche angestellt, wo die Dosis
letalis 5,5 ccm nicht uberschritt.

Auf diese Weise wurde die Frage nach der Mdglichkeit,
aus HQhnerei-Eiweifi ein toxisches Produkt zu bekommen, im
positiven Sinne gelSst. Nun konnte ich zur Ausfflhrung des
Hauptteiles meiner Arbeit — zum Studium der anaphylakti-
schen Eigenschaften des Giftes — flbergehen.

Als Ausgangspunkt diente die Tatsache, daB sich Tiere
gegen Anaphylaxie immunisieren lassen (3, 4, 5, 6), daB man
der Anaphylaxieerscheinung diejenige der Antianaphylaxie
gegenflberzustellen vermag.

Wie Antianaphylaxie eigentlich entsteht, welches der Mechanismus
dieses Prozesses ist, wird nicht von alien Autoren auf gleiche Weise erklart.
So teilt z. B. H. Pfeiffer (7) die Ansichten von Besredka nicht. Fur
uns aber spielt in dieser Frage nicht die Erklarang eines Prozesses, der
jedenfalls in die Iramunitatserscheinungen eingereiht wird, eine Rolle, son-

21 ♦

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308

N. Sukiennikowa

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dern die Tatsache selbst, dafl die Antianaphylaxie existiert und dafl sie
beim Erflillen gewisser Bedingungen mit konstanter Begularitat wieder-
kommt. Anders gesagt, ist also von Wichtigkeit jene Gesetzmafligkeit,
welcher sich die Antianaphylaxie unterwirft

Kaon man nun auch gegen Anaphylatoxinwirkung immu-
nisieren? Gehoren die Anaphylatoxinreaktionen zu den Immu-
nittitsreaktionen? Mit anderen Worten: Kann jene spezifische
Reaktion in vitro stattfinden, welche — in Form des ana-
phylaktischen Shocks Oder, im Gegenteil, als Verhtitling des-
selben — dem lebenden Organismus eigenttimlich istV

Um die Wiedergabe einer langen Anzahl von Versuchs-
reihen zu vermeiden, die alle zu einer negativen Antwort
ftihrten, begntige ich mich mit der Aufstellung der zwei unten
wiedergegebenen Tabellen. Sie dienen zugleich als Versuchs-
protokolle und sind einer groBen Anzahl von Notizen ent-
nommen. Nach diesem Schema sind alle Versuche entworfen
worden und sie sollten alle, wie schon betont, die Frage be-
antworten, ob von dem aus Htihnerei-EiweiB -j- Antiserum zu-
sammengestellten Gifte wahre Anaphylaxie hervorgerufen
wird, weil das Gift Meerschweinchen akut zu ttiten und tihn-
liche Symptome herbeizuftihren vermag, wie sie beim typiscben
anaphylaktischen Shock zu beobachten sind. Sollte dieses
starkwirkende Gift ein wirkliches Anaphylatoxin sein, so
mtiBte es nur unvaccinierte Meerschweinchen ttiten. Vaccinierte
Tiere aber werden darauf ebensowenig reagieren wie auf die
Antigeninj ektionen.

Man hat also im Versuche einerseits vaccinierte, anderer-
seits unvaccinierte Meerschweinchen. Zwei andere dienen als
Kontrolle; auch von diesen wird das eine vacciniert. Anstatt
des Anaphylatoxins bekommen die Kontrolltiere letale Dosen
von Antigen (intravenose Injektionen). Die ttidlichen Dosen
eines jeden Anaphylatoxins werden vor dem Versuche in einer
Serie von Meerschweinchen bestimmt. In den ersten Serien
hat man einige Schwankungen im Auftreten der Todeszeit
bemerken konnen. Das hing offenbar mit der verschiedenen
Starke eines jeden gegebenen Giftes zusammen und damit,
dafi im Anfang die letalen Dosen tastend gesucht werden
muBten. In der Mehrzahl der letzten Versuche trat der Tod
momentan ein. Was nun die Wirkung des Antigens betrifft,

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Ein expenmen teller Beitrag zur „Anaphylatoxin“-Frage.

309

so sind menials Abweichungen beobachtet worden, und es
geschah kein einziges Mai, dad ein vacciniertes Tier nach
intravenSser Antigenzufuhr (HUhnereiklar 1:10 + Kochsalz-
losung) einging oder auch nur erkrankte.

Tabelle I.

| No. 41, 215 g | No. 32, 175 g | No" 33, 180 g No. 69, 210g~

10. Passive Sensibiliserung.

VIII. Intraperitoneale Injektionen von Antiei-Eiweifiserum vom Kaninchen

No. 2

11. 1,0 Hiihnerei- Vaccination mit Hiihnerei-Eiweifi 1:10

VIII. eiweifi 1:10 iv, intraperitoneal

I f Bofort [ 4,0 ccm | 4,0 ccm I 5,0 ccm

12. 1,0 ccm Eiklar 4,5 ccm Anaphyl. 4,0 ccm der nach

VIII. 1:10 intravenos I nach Fried- id. ersten Fallung

Das Tier zeigt berger intraven.jzuriickgeblieben.
keine Svmptome Dyspn.,Krampfej Flussigkeit.

u. bleibt normal und andere ana- Starke Dyspnoe,
phylaxieiihnliche Urinentleerung
Svmptome. Am usw. In
anderen Morgen l L Stunde Para-
wurde das Tier lyse und Tod
tot aufgefunden

Die Dosis letalis ist vorher als
4,0 und 4,5 ccm bestimrat worden

Tabelle II.

iNo. 38, 230 g No. 39, 290 g No. 35, 250 g No. 36, 250 gjNo. 100,215 g

21. Passive Sensibilisierung.

IX. Intraperitoneale Injektionen von Antiei-Eiweifiserum vom Kaninchen

No. 6

22. 1,0 ccm I Vaccination mit Hiihnerei-Eiweifi 1:10 intraperitoneal

IX. Hiihnerei- | je 5,0 ccm

eiweifi 1:10 iv.!
t in l 1 /* Min.!

23. | 1,0 ccm | Je 5,5 ccm Anaphylatoxin I 4,5 ccm des

IX. Hiihnereiklar nach Friedberger intraven. nach d.ersten

1:10 intrav. Beide Tiere werden krank Fallung zu-
|Das Tier rea- f ^ 1 Std. I f wiihrend riickgeblieb.
'giert nicht u. | aer Nacht Toxins iv.

bleibt gesund j Tod auf der

| Stelle

Die Dosis letalis ist vorher als 4,0 und
4,5 ccm bestimmt worden

Wie das Resultat der angestellten Experiment© ansge-
fallen ist, ergibt sich aus den oben angefiihrten Tabellen. Sie

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310

N. Sukiennikowa,

sprechen gegen die Identifizierung der Anaphylatoxinreaktion
mit deo Erscheinungen typischer Anaphylaxie im lebenden
Organismus. Durch diese Versuche wird das Fehlen einer
biologischen Gleichheit der beiden Prozesse festgestellt. Die
einzige Analogic, vielmehr dip einzige Aehnlichkeit zwiscben
dem wahren anaphylaktischen Shock und dem durch Ana-
phylatoxin hervorgerufenen Tode — es ist zunSchst nur von
Hfihner-EiweiBanaphylatoxin die Rede — besteht also in den
gemeinschaftlichen klinischen Symptomen, die in beiden Fallen
bei den erkrankten Tieren zutage treten. Man darf aber wohl
kaum irgendwelche Schlfisse allein auf Grund dieser Syraptome
ziehen. Dieser Gedanke ist so klar von Do err und Russ (2)
ausgesprochen, daB ich mich veranlaBt fiihle, ihre Worte buch-
st&blich zu zitieren:

„Nun genfigt aber die rein pharmakodynamische Identitat
nicht, um die von Friedemann und Friedberger dar-
gestellten vitro-Gifte mit dem im anaphylaktischen Shock wirk-
samen Agens zu identifizieren. Es ware daher, da wir fiber
die chemische Natur des wahren anaphylaktischen Giftes einer-
seits, fiber die vitro-Gifte andererseits nichts wissen, zumindest
die Forderung zu erfflllen, daB ein vitro-Gift nur dann als das
wahre Anaphylaxiegift erklfirt wird, wenn es sich in der
Eprouvette aus denselben Komponenten bildet und nach den-
selben Gesetzen entsteht, die im anaphylaktischen Experiment
kooperieren."

Unser „anaphylaktisches Experiment" hat nun gezeigt,
daB das Anaphylatoxin, wenigstens das Hfihner-EiweiBana-
phylatoxin sich einem derjenigen Immunitfitsgesetze nicht
unterwirft, welches fflr die typische Anaphylaxie als gfiltig
erscheint. Es ist also in diesem Falle der Tod nicht durch
Anaphylaxie, sondern durch irgendeine andere Erscheinung
hervorgerufen.

Wodurch ist nun die Giftigkeit verschiedenartiger Ana-
phylatoxine verursacht? Wovon ist speziell die Toxizitat der
aus Hfihner-EiweiB entstandenen Gifte bedingt? Die oben be-
schriebenen Versuche geben kein Recht dazu, irgendwelche
Vermutungen zu auBern. Sie haben alle ein bestimmtes Ziel
verfolgt und waren deswegen streng schematisiert. Ich mfichte

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Em experimen teller Beitrag zur „Anaphylatoxin“-Frage. 311

rair aber trotzdem erlauben, einige wfihrend der Arbeit ge-
machte Beobachtungen zu erw&hnen. Vielleicht kdnnte das
nicht ganz ohne Nutzen bleiben und im Zusammenhang mit
der schon vorhandenen Literatur oder in neuen Versuchs-
anordnungen kflnftig als Material dienen.

So wurde z. B. von Anfang an die Tatsache notiert, daB
die Stftrke des Anaphylatoxin s immer in direkter Proportion
zu der Toxizitfit des betreffenden Kaninchenserums fflr ein
normales Meerschweinchen stand.

Vor der Anaphylatoxinherstellung wurde normalen Meerschweinchen
1 ccm des Antiserums intravenos injiziert. Es totete diese Dosis fast
immer die Meerschweinchen, meist auf der Stelle, manchmal erst in
einiger Zeit. Nur einmal ist ein Kaninchen vorgekommen, dessen Serum
nach dem Praparieren fur Meerschweinchen vollig indifferent erschien.
Aber auch das aus diesem Serum hergestellte Anaphylatoxin ist so wenig
wirksam gewesen, daB sogar Dosen von 7 ccm bei Versuchstieren krank-
hafte Symptome kaum erregten, so daB dieses Anaphylatoxin nicht weiter
benutzt wurde.

Eine andere Erscheinung, die augenscheinlich mit der
ersten in gewissem Zusammenhange steht, ist bemerkt worden,
als fOr die Herstellung von Antiserum keine Kaninchen,
sondern, um zu vergleichen, Meerschweinchen genommen
wurden. Dieses Antiserum gab sehr schnell mit Huhner-EiweiB
einen groBen Niederschlag 1 ), aber das aus ihm hergestellte
Anaphylatoxin erwies sich als ganz un wirksam fiir Meer¬
schweinchen. Diese Beobachtung leitet den Gedankengang
auf die Bedeutung heterologer Sera.

Von dem eben beschriebenen Anaphylatoxin haben bei Meerschweinchen
intravenose Injektionen von 7 ccm kaum merkbares Unbehagen hervor-
gerufen. Dieses entstand moglicherweise auf mechanischem Wege, weil
eine groBe Menge von Fliissigkeit plotzlich in die Zirkulation hinein-
gebracht wurde — es wogen namlich die Versuchstiere selten mehr als
275 g, meist aber 250 g. Es soil nicht unerwahnt bleiben, daB diese ver-
einzelte Beobachtung im Widerspruch zu Friedbergers Angaben steht,
welche im 2. Kapitel seiner Arbeit iiber Anaphylatoxine veroffentiicht sind.

1) Es gehort vielleicht hierher auch das folgende Phanomen, das im
Sinne unserer Aufgabe nebensachlich war und darum unkontrolliert ge-
blieben ist. Je geringer die Menge des Niederschlages nach der Reaktion
Antiserum + Antigen gewesen ist, um so starker wirkten die beiden Gifte,
sowohl dasjenige, welches nach der ersten Ausfallung zuriickblieb, als auch
das nach Fried be rgerschem Modus hergestellte Anaphylatoxin.

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312

N. Sukiennikowa

Aber schon in seiner VI. Mitteilung (8) Bagt dereelbe Forecher, daB die
giftige Wirkung der Antisera bei artfremden Tieren bedeutend starker ist,
als bei artgleichen. Eine ahnliche Meinung wird von Doerr und Wein-
furter (9) geauBert, was alles den angestellten Vergleichungsversuch be-
statigt Als allerletzte Veroffentlichung, welche wiederum die Bedeutung
des Komplementes betrifft, sei der Artikel von Heilner und Schneider
(10) genannt, erst vor einigen Wochen erschienen. Auch hier besteht eine
Ungleichheit der Resultate nach Injektionen von artgleichen Sera einerseits,
artfremden andererseits. Die Verschiedenheit hat sich in einem ungleichen
EiweiBstoffwechsel gezeigt, als bei den Versuchstieren die Harnmenge ver-
glichen wurde.

Unwillktlrlich dr&ngt sich ein Vergleich zwischen prim&rer
Toxizitfit von Kaninchenantiserum fflr Meerschweinchen und
der Gift wirkung des Anaphylatoxins auf. Was nun die pri-
ra&re ToxizitSt betrifft, so ist sie, bekannterweise, zu den A n a -
phylaxieerscheinungen gerechnet worden. Sehr wertvolle
Angaben in dieser Frage sind in der grofien Arbeit von
E. Friedberger und S. Castelli (8) zu finden. Von den
neuen Veroffentlichungen ist die Arbeit von Doerr und
Weinfurter (9) aus einem anderen AnlaS schon zitiert
worden.

Es ist natflrlich unmoglich, in dieser kurzen Notiz die
Lehre von der primaren Toxizitat ihrem Grunde nach zu be-
sprechen. Sollte sie aber als bewiesene Tatsache angenommen
sein, so haben wir eben das Recht, zu fragen, ob die prim&re
Toxizit&t des Antiserums wirklich da endet, wo die Wirkung
des Anaphylatoxins anf&ngt. Nehmen wir an, das „Ana-
phylatoxin“ sei wirklich ein wahres spezifisches Gift. Auch
in einem solchen Falle ist vielleicht bei letal wirkenden In¬
jektionen nicht eine, sondern Verschmelzung zweier Imrauni-
t&tsreaktionen vorhanden, die beide nebeneinander verlaufen.
Oder aber — sollte nur eine der beiden stattfinden —
welche der beiden ist es also? Endlich kbnnte diese letale
Wirkung vielleicht ein Ph&nomen aus einer ganz an¬
deren Erscheinungsordnung sein, welche nichts
mit der Immunit&tserscheinung zu tun hat. Als
ein solches konnte z. B. eine Vergiftung durch peptonartiges
Eiweifigift dienen, demjenigen Toxin verwandt, welches sich
beim wahren anaphylaktischen Shocke bildet (11). Daher
Aehnlichkeit in den Symptomen.

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Ein experimenteller Beitrag zur „Anaphylatoxin u -Frage. 313

Als eine Antwort auf eine dieser Fragen — soweit es
mdglich — erscheinen die experimentellen Ergebnisse der vor-
liegeoden Arbeit.

Ich halte es fiir meine angenehrae Pflicht, an dieser Stelle
Herrn Professor Besredka meinen verbindlichsten Dank
auszusprechen filr seine st&ndige LiebenswQrdigkeit und un-
ermfldliche Bereitwilligkeit, rair durch Rat und Tat bei Aus-
fiihrung dieser Arbeit behilflich zu sein.

Zusammenfassung.

1) Beim Gebrauche des Hflhner-EiweiCes als Antigen ge-
lingt es aus dem Kaninchenantiserum und Antigen in vitro
ein Gift zu bekommen, welches dem Friedbergerschen
Anaphylatoxin entspricht.

2) Das HOhner-EiweiBanaphylatoxin unterwirft sich nicht
den Gesetzen — n&mlich der Vaccination — welche den Ana-
phylaxieerscheinungen eigen sind. Es ist infolgedessen mbg-
lich, daB die von ihm hervorgerufenen Erscheinungen nicht
in die Reihe der Anaphylaxiereaktionen gehoren, sondern
durch andere, noch unbekannte Bedingungen verursacht werden.

Literatur.

1) Friedberger, E., Zeitschr. f. Immunitiitsf. etc., Bd. 4.

2) Doerr und Russ, Centralbl. f. Bakt. etc., Bd. 63, H. 2/3.

3) Besredka, A., et Steinhardt, Ed., Annales de l’lnst. Pasteur,
1907, F6vrier.

4) -Ibid., 1907, Mai.

5) — Ibid., 1908, Juin.

6) Biedl und Kraus, Wien. klin. Wochenschr., 1909, No. 11.

7) Pfeiffer, H., Das Problem der Eiweiflanaphylaxie. Jena, Gustav
Fischer, 1910.

8) Friedberger und Castelli, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 6.

9) Doerr und Weinfurter, Centralbl. f. Bakt. etc., Bd. 63, H. 4/6.

10) Heilner und Schneider, Zeitechr. f. Biol., Bd. 59, 1912, H. 8.

11) Besredka, A., Strobel, H., und Jupille, F., Zeitschr. f. Im¬
munitiitsf. etc., Bd. 16, 1913. H. 3.

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314

Henri De Waele,

Naehdruck verbolen.

[Travail du Laboratoire de Physiologic de l’Universit6 de Gand.]

L’action thromboplastique est generate et commune &
toutes les substances Introduites dans le sang.

Par le Dr. Henri De Waele,
m<5decin-adjoint a l’HApital civil de Gand.

Avec 17 courbes dans le text*.

(Eingegangen bei der Redaktion am 27. Januar 1913.)

Dans une note publiee dans cette revue (Bd. 16, p. 311) sur
la coagulation du sang, nous avons eu l’occasion d’annoncer en
ces termes les recherches qui font l’objet du present travail:
«non seulement les proteines, mais toute substance capable
de se combiner plus ou moins directement aux elements or-'
ganiques du sang, ou m§me simplement capable de rompre
l’6quilibre colloidal, d^veloppe d£s qu’elle est introduite dans
le plasma sanguin, une action thromboplastique dont l’inten-
sit6 varie.»

Cette introduction qui resume en somme ce qui va suivre,
nous permet d’exposer les experiences dans un ordre different
de celui dans lequel nous avons 6t6 conduits h les faire et de
les grouper d’aprfcs la complexity progressivement plus grande
de leur composition chimique.

Nous employerons successivement:

1° un m4tal colloidal: l’eiectrargol, soit des ions (negatifs);
2° des electrolytes: l’acide chlorhydrique,

3° l’iodure de potassium;

une serie de substances de plus en plus complexes:

4° le chlorhydrate de quinine,

5° le chlorhydrate de cocaine,

6° le salvarsan ou chlorhydrate de dioxyaminoarsenobenzol,
ainsi que son sel de sodium (solution neutralisee),

7° l’atoxyl ou sel sodique de l’acide paraaminophenyl-
arsenique,

8° l’antipyrine ou dimethylphenylpyrazolone;

9° le coniine, un alcalo'ide soluble dans l’eau;

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L’action thromboplastique est gen ('Yale etc.

315

10° l’alcool ethylique;

11° le saccharose;

12° l’huile d’olives.

Toutes ces substances peuvent etre rapprochdes des deux
premieres, si l’on considfcre que toute combinaison chimique
peut etre envisag6e comme constitute d’ions complexes
(par ex. un alcaloide correspond k un ion NH 8 substitut)
et il est d’ailleurs de notion courante que les colloides, done
m£me les prottines et leurs constituents peuvent agir comme
tlectropositifs ou ntgatifs.

A ce point de vue et en rapprochant ces considerations
du fait que toutes ces substances sont thromboplastiques, la
coagulation du sang pourrait peut-ttre dans l’avenir £tre
ramente & la precipitation de colloides plasmatiques normale-
ment en tquilibre ou dissous Tun dans l’autre (nous avons
dtj& considtrt la possibility d’une dissolution du fibrinogtne
dans le complement).

Ceci n’est cependant qu’une fa^on difftrente de presenter
le probltme sans cependant le simplifier, car il y a lieu de
citer ici la remarque de Michael is qui rel£ve, Apropos d’un
travail de Feinschmidt, toute l’importance de la constatation
que le maximum de floculation d’une colloide par l’ion H est
influence par la presence dans le m§me melange, d’autres
colloides, soit prottiques soit lipoidiens. Combien complexe
s’annonce ainsi cette precipitation d’un ou des colloides plas¬
matiques par les ions complexes des nombreuses substances
qui peuvent arriver & agir sur eux.

M§me consider ainsi le mdcanisme chimique de la coa¬
gulation reste evidemment un probl£me complique et de la
plus grande importance. Dans nos recherches nous nous
sommes limites plus spedalement au point de vue des sub¬
stances injectees.

Nous insistons sur la gdneralite du pouvoir thrombo¬
plastique des diverses substances, c. A d. du pouvoir d’inter-
venir comme agents determinants capables de troubler l’£qui-
libre colloidal plasmatique, sur les consequences de ce pouvoir
thromboplastique en tant qu’elles influencent la fixation des
substances injectees et l’intoxication qu’elles determinent; enfin
sur les secretions secondaires que ces processus provoquent.

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Henri De Waele,

Lapin 1,
dans la veine

I. Electrargol (Clin, Paris).

revolt 2.5 e.c. cTelectrargol isotonisd au moment de Pemploi,
de loreille.

Avant Pinj.

Press.

60

mm

Cong.

en

4

min.

AussitGt aprfjs

• 11

64

ii

15 sec. „

19

53

ii

2 min. „

11

53

ii

ii

7,

1

ii

3 „

11

53

ii

11

n

ii

8 ,, „

11

50

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11

ii

20

ii

15 „

11

50

ii

11

ii

7

ii

20 „

11

50

ii

ii

2

ii

20 „

11

50

ii

11

ii

7;

ii

3b ,, ,,

11

50

it

11

ii

1

ii

41 „

50

ii

ii

1

ii

45 „ „

11

47

ii

11

ii

—

*i

hrs.

48

11

ii

2

58 „ „

11

45

ii

11

ii

25

min.

68 „

,,

48

ii

11

ii

2

91

7S ,, ,,

11

18

11

ii

4

V

84 ,, ,,

V

51

•>

11

ii

6

11

Lapin 2,

reyoit 7

.5 c. c. d

Ylectrargol.

Avant Finj.:

Press.

58

mm

Coag.

en

3

min.

Conrtes hausses de la pres-
sion de 15 mm

Oscillations respiratoires
tres petites

i Oscill. resp. plus grandes,
fr<$quentes hausses de
.1 pression de 15 mm

Oscill. resp. deplusen plus
petites

1 min. aprfes: „ 65 „ „ „ 1 „

2 „ „ Hausse de pression pendant 20 sec., de 30 mm

4 „ „ Idem

6

11

11

Press. 58

mm

Coag. en

3

min.

18

11

11

ii

—

>>

3

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26

11

..

ii

—

ii

ii ii

4

ii

35

11

11

ii

56

ii

ii n

IV,

„ i

Oscill. resp. plus grandes,

45

11

11

ii

58

ii

ii ii

35

.. j

pouls un peu plus lent

47

11

11

ii

—

ii

ii

—

ii

Hausse de press, ae 30 mm

49

11

11

ii

—

ii

ii ii

—

ii

Idem, penaant 20 sec.

55

11

11

54

ii ii

6

ii

57

11

ii

—

11

ii ii

5

ii

Oscill. resp. et pulsat. pet.

67

11

11

ii

46

11

ii i *

35

ii

11. L’acide chlorhydrique.

Lapin 3, de 2 kgr., re^oit, dans la veine de loreille, 0.03 gr. d’acide en
5 e.c. de liquide physiologique.

Avant Finj.: Press. 58 mm Coag. en 11 min.

AussitOt hausse k 67 „ suivie d’une baisse trbs rapide k 55

30 see. apr^s: Press. 55 „ Coag. en 1 hr. l / 4 Ampl. resp. plus forte

2 min. „ „ 38 „ „ „ 30 min. Ampl. resp. plus petites

4 i, „ „ 30 „ „ „ 1 hr. l / 7

9 „ „ „ 58 „ „ „ 6 min. Ampl. resp. plus grand

L) >> yj jf 55 ,, ,, „ 8 ,,

16 „ „ „ 50 „ „ „ — „ Ampl. resp. plus petites

30

see.

apr^s:

Press. 55

ii

Coag.

en

1

hr. */ 4

»>

min

ii

„ 38

ii

ff

ii

30

min.

4

ii

ii

„ 30

ii

11

ii

1

hr. 7 t

y

ii

u

„ 58

ii

11

ii

6

min.

15

ii

ii

„ 55

ii

11

ii

8

ii

16

ii

ii

„ 50

ii

11

ii

—

ii

18

ii

ii

„ 49

ii

11

ii

1

91

29

ii

ii

„ 50

ii

11

ii

1

hr. 7,

36

ii

ii

„ 50

ii

11

ii

1

min.

Digitized b}

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Inaction thromboplastique est gendrale etc.

317

Chien 4, de 4.5 kgr., re$oit 0.05 gr. d’acide en 25 c. c. de liquide
physiologique.

Avant Pinj.: Pres6. 65 mm Pouls 60 mm Ampl. 15 mm Cong, en 5 min.

40 sec. aprfes:

11

67 „

» 60 „

„ 15 „ „ immed.

3 min. „

11

— ,,

» 11

„ — „ „ en 2 min

6 „ „

71

66 „

„ 54 „

ii 10 ,. ,, „ 2

10 „

77

65 „

„ 64 „

11 13 yy yy yy 20

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77

60 „

» 66 „

20 9 5

„ ., ,, ,, Jt

33 „ „

77

11

» *i ii ii 10 *y

38 iy ft

71

11 1>

1. 71 11 11 3

43 „ „

17

11

1i

_ Q

11 _ 11 11 11 °

58 „ „

11

63 „

60 „

11 13 iy yy yy ^ ••

Lapin 5,

III. Iodure de Potassium,
rejoit 0.05 gr. en 8 c. c. de liquide physiologique, dans h

veine de Poreille.

Avant l’inj.: Press. 53 mm

Coag. en 5

min.

2(J sec. aprite:

97

10 „

„ „ immediate. L’animal succombe

Lapin 6,
Avant l’inj.

reyoit 0.025 gr.
Press. 36 mm

Coag. en 4 min.

AussitAt aprfcs
30 sec. ,,

3 min. „

* 91

11

11

51

44 „
42 „

ii ii 2

ii

6 „ „

1i

48 „

„ 30

„ Plusieurs hausses de pres

0 tt tt

11

49 „

ii ii ^

sion de 10 mm

ii

Lapin 7, re 9 oit 0.025 gr.

Avant Pin}.: Press. 55 mm, coag. en 25 min.

10 sec. aprfcs: Hausse &. 70 mm pendant 20 sec.
30 „ „ idem.

5

min.

ii

Press. 44

mm

Coag. en 1 min.

Oscill. resp. petites

15

ii

ii

ii

40

ii

„ „ 30 ? ,

Oscill. resp. prog, plus
grandes

25

ii

71

19

36

ii

Incoagulable

35

ii

11

11

40

ii

Coag. en 1 heure

Oscill. resp. grandes

45

ii

If

11

36

ii

„ 8 min.

55

ii

11

11

33

ii

Fj

ii ii u 11

58

ii

If

11

—

11 11 ii

Oscill. resp. grandes

65

ii

11

11

32

ii

4

ii ii 1 'i

Incoagulable

75

♦»

If

11

34

ii

Oscill. resp. grandes

85

ii

>♦

11

36

ii

Coag. en 2 hrs.

IV. Chlorhydrate de Quinine.

Lapin 8, re$oit 0.05 gr., en 8 c. c. de liquide physiologique dans la
veine de Poreille.

Avant l’inj.: Press. 50 mm. coag., en 6 min.

AussitAt aprfes: Chute a 9 mm, coag. immediate. L'animal succombe.
Lapin 9, refoit 0.025 gr.

Avant l’inj.: Press. 56 mm Coag. en 4 min.

ImmAd. aprks: chute a „ 28 „ „ „ — Fouls tivs acceleiv

1 min. apr£s: „ 30 „ .. „ 6 Oscill. resp. ties grandes

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318

Henri De Waele,

La pression commence k remonter par poussAes convulsives k 55 mm

4 min.
6 „

apri^s:

Press. 54 mm

Coag. en 3 min.
„ immediate

11

11

11

„ 50

11

Incoagulable

16

11

11

„ 52

11

Coag.

en 1 heure

24

11

11

11

„ 30 min.

31

11

11

” 54

11

1*

„ 11 „

36

11

11

1 *

11

ii

38

11

11

11

11

11

4

ii ^ ii

46

It

11

„ 50

11

11

„ 10 „

56

11

11

„ 47

11

11

„ 10 „

Le pouls devient petit
Pulsations plus grandes

Quelques courtes hausses
De 7 k 20 mm
Chute progr. k 52 mm
L^p^re dyspn^e
Petites hausses frAquentes
par mouvements con-
vulsifs

V. Chlorhydrate de Cocaine.

Lapin 10, de 2 kgr., reyoit 0.015 gr. en 5 c. c. de liquide physiologique.

Dyspn4e forte, irr^gul.
FrAquentes hausses con-
yulsives

Fin des convulsions
Oscill. respirat. petites

Convulsions; osc. petites
Convulsions

Fin des convulsions;
chute k 55 mm remonte
bientAt

Convulsions dyspn£e
Descend progr. a 54
Convulsions; Oscill.pet.

} Convulsions fortes pro-
longees

Convulsions diminuent

Avant Pin

j.:

Press. 55

mm

Coag. en 10 min.

AussitAt cl

tiute k

44

‘i ii

i 1 /.

min.

apres:

ii

48

ii

„ „ 2 hrs.

4 1 /,

ii

ii

ii

56

ii

ii ii min*

8 V,

ii

n

ii

—

ii

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9'/,

ii

ii

ii

70

,, immediate

12

ii

ii

ii

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ii

ii ii ~~

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ii

it

73

ii

„ ,, 2 hrs.

14

ii

ii

ii

—

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11 11

18

»»

ii

ii

_

ii

„ „ 10 min.

19

ii

ii

ii

65

ii

„ „ 10 min.

21

ii

ii

ii

—

ii

11 11

22

ii

ii

ii

60

ii

Incoagulable

29

ii

ii

ii

55

n

—

307,

ii

ii

ii

—

11

Incoagulable

38

ii

ii

ii

—

11

Coag. en —

39

ii

ii

ii

51

11

„ „ 20 min.

48

ii

ii

ii

—

11

ii ii

49

ii

ii

ii

60

11

,, „ 1 hr.

51

ii

ii

ii

—

11

ii ii

56

ii

ii

ii

irr^g.

„ „ 30 min.

59

ii

ii

ii

11

ii ii

63

ii

ii

ii

45

11

,, „ 15 min.

— Oscill. plus grandes

Convulsions avec hausses
et baisses irr^gulifcres

Convulsions continues,
irrtfgul., pouls irr^gulier

VI. Salvarsan.

Lapin 11, de 2 kgr., reyoit 0.05 gr. en solution neutralist dans 5 c.c.
de liquide physiologique.

Avant Pinj.: Press. 39 mm, coag. en 27 min.

AussitAt hausse k 50, suivie aussitAt d’une chute k 40.

1 min. apres: Press. 37 mm Coag. en 10 min.

34
36

3

9

12

15

n

»

3

7

36

35

2

10

Oscill. resp. petites; reap.
acc6L ae 2 en 2 min.
courtes hausses

Oscill. resp. plus grandes

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L’action thromboplastique est gfenferale etc.

319

Lapin 12, de 2 kgr., reyoit 0.05 kgr. en solution neutre de 5 c. c.
Avant Finj.: Press. 41 mm; Coag. en 25 min.

Aussit6t courte chute k 38 mm.

1 min. aprfes: Press. 40 mm Coag. en 3 min.

37 99 99 yy 3

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99

99

yy

yy

yy

yy

yy

yy

9?

yy

yy

yy

yy

Oscill. reap, petites
Oscill. resp. plus grandes

Lapin 13, de 2 kgr., re^oit 0.15 gr. en 7 c. c.
Avant Fini.: Press. 54 mm, coag. en 10 min.
Aussit6t chute k 11 mm, coag. immediate, mort.

Lapin 14, de 2 kgr., re 9 oit 0.05 gr. en 5 c. c. de solution acide.
Avant Finj.: Press. 54 ram; Coag. en 13 min.

AussitGt hausse k 66 mm.

6

8

11

30

min. aprfes:

yy yy

yy yy

yy yy

yy yy

yy yy

Press. 62 mm immediate

99

42

99

Coag.

en

1 heure

99

47

9>

99

99

1 min.

99

43

99

99

99

—

99

48

99

99

99

5 „

99

48

99

99

99

7 „

Oscill. resp. petites
Oscill. resp. plus grandes
Mouvements convulsifs
Oscill. resp. plus petites

Chien 15, de 4 kgr., rejoit 0.125 kgr. en 15 c. c. solution neutre.
Avant Finj.: Press. 43 mm, pouls 84, ampl. 10, coag. en 25 min.
AussitGt hausse k 80 mm pour redescendre rapidement k 52.

i

min.

aprfcs:

Press

. 48 mm

Pouls 66

Ampl. 12

mm

Coag

en

13

min

4

99

99

99

48

99

»9

66

99

12

99

99

99

I 1 /.

99

8

99

99

99

48

99

99

56

99

15

99

99

99

1

99

13

99

99

99

52

99

99

60

99

10

99

99

99

4

99

18

99

99

99

46

99

99

70

99

10

99

99

99

3

99

20

99

99

99

46

99

99

70

99

10

99

99

19

3

99

24

99

99

99

—

99

99

—

99

—•

99

99

99

7,

99

28

99

99

99

45

99

99

70

99

10

99

99

99

10

99

Chien 16, de 4 kgr., reyoit 0.125 gr. en 15 c. c. solution neutre addi-
tionnfes de 0.4 gr. de peptone de Witte en 10 c. c. neutralises. Ce melange
devient immfediatemcnt colloidal, gfelatineux.

Avant Fini.: Press. 55 mm, pouls 50, ampl. 16 mm, coag. en 10 min.
Aussitdt chute k 45 mm.

1 min. aprfes:
3
8
10
13
19
23
27

99

99

yy

yy

y*

yy

yy

Press. 45 mm
55

99

99

99

99

99

99

99

50

99

99

99

99

99

99

99

Pouls 165
62

Ampl.

1 mm
12

74

99

99

99

99

99

99

10

99

99

99

99

99

99

99

Coag. en 4 min.
4 „

99

99

99

99

99

99

99

15

13

6

12

4

4

On constate que le salvarsan est tr&s actif comme agent
thromboplastiqne, moins comme excitant de la secretion d’anti-
thrombine.

La difference tr&s appreciable entre le salvarsan acide et
neutre parait due, si l’on s’en reffcre k ce que nous avons

ty Google

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

320

Henri De Waele,

decrit plus haut pour l’acide chlorhydrique, k la fonction acide
du salvarsan non neutralist; la courbe obtenue parait rtsulter
de Taddition des courbes individuelles du salvarsan et de
l’acide. Cette interpretation se trouve confirmte par l’exptrience
(Chien 16) oil manifestement, les courbes du salvarsan et de
la peptone se sont superposees.

VII. Atoxyl.

Lapin 17, de 2 kgr., re$oit 0.05 gr. d’atoxyl.

Avant l’inj.

Press. 45

mm

Coag. en 20 min.

2

min.

aprfes:

11

48

ii

11 11

5 „

Oscill. resp. tres petites

5

n

ii

11

56

ii

ii ii

2 „

8

11

ii

11

44

ii

ii ii

2 „

10

11

ii

11

32

ii

ii ii

2 7, „

12

ii

ii

11

45

ii

ii n

Ascill. resp. plus grandes

15

yy

ii

11

45

ii

Incoag.

18

yy

ii

11

42

ii

Coag. en

3 min.

Oscill. resp. petites con¬

vulsions

23

yy

ii

11

50

ii

ii ii

1 heure Oscill. plus grandes

30

ii

11

44

ii

ii ii

—

Delire cardiaque avec

courtes hausses

33

li

ii

11

47

ii

ii ii

6 min.

33

ii

ii

11

44

ii

ii ii

8 min.

FrSquentes hausses;

oscill. resp. petites

40

ii

ii

11

46

ii

VIII. Antipyrine.

Lapin 18, re^oit 0.025 gr. en 5 c. c. d’eau distillfe, additional de
5 e. c. de liquide physiologique.

Avant l’inj.: Press. 57 mm, coag. en 20 min.

Aussitdt aprt's l’animal present* des mouvements convulaifs avec arrets res-

2

piratoircs et courtes baisses
min. apr£s: Press. 58 mm

de pression.

Coag. en 11 min.

Amplit. resp. trfcs petites

5

ii ii ii

00 „

ii

11

10

ii ii ii

54 „

ii

immediate

25

52 „

*1

en

35 min.

30

>• ii ii

52 „

ii

»

2 hrs.

Ampl. resp. plus grandes

36

i* ii ii

52 „

ii

ii

35 min.

5o

•i ii ii

52 „

ii

ii

10 „

6u

ii ii ii

52 „

ii

ii

5 „

04

ii ii ii

47 „

ii

ii

5 „

Lapin 19, re$oit 0.025 gr
Avant l’inj.: Press. 47 mm

Coag.

en

3 min.

2

min. aprfes: „

47 „

1>

ii

2 „

AmpL resp. plus petites

6

ii ii ii

47 „

11

ii

1 hr.

13

ii ii ii

48 „

11

ii

1 „

Ampl. resp. plus grandes

22

ii ii ii

47 „

11

ii

7 min.

24

ii v ii

46 „

11

i>

8 „

Ampl. resp. plus petites

3<)

v ii ii

42 „

11

ii

3 11

Ampl. resp. plus petites

34

42 „

11

ii

1 „

Ampl. resp. augmentent

42

jy ii ii

42 „

•1

»>

2 „

AmpL assez grandes

47

ii ii

43 „

11

ii

Digitizedl by

Gck 'gle

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

L’action thrombopiastique est g4n4rale etc.

321

IX. Coniine.

Lapin 20, re§oit 0.01 gr. en 5 c. c. de liquide physiologique.
Avant l’inj.: Press. 58 nun Coag. en 3 min.

20

on/i

UVVt

aprfes:

99

68

99

2

min. ,,

9)

60

99

99

M I M

4

99

99

99

58

99

If

immediate

47,

9%

99

99

63

99

pendant 10 sec.

6

99

99

99

58

99

Coag.

immediate

7

9f

99

99

64

99

pendant 10 sec.

9

99

99

99

59

99

Coag.

en 2 min.

14

99

99

99

59

99

99

99 2 „

23

99

99

99

56

99

99

99 3 ,,

30

99

99

99

54

99

99

99 10 99

39

99

99

33

99

99

99 1 99

Lapin 21, re 9 oit 0.015 gr. en 5 c. c.

Avant l’inj.: Press. 54 mm Coag. en 15 min.

Aussit6t aprfcs la press, monte it 60 mm. Acc6L resp. avec ampL petite
2 min. aprfes: Press. 60 mm Coag. en 40 min. Sang asphyct.

4 „ „ „ 59 „ „ „ 10 „ „ rouge

6 „ „ „ 59 „ „ „ 2 „ Amplit reap, plus petites

® »l 99 99 55 II 99 99 1 99

13 ,, ,, ,, 56 „ „ „ 35 „

16 „ „ „ 56 „ Incoagulable. Amplit resp. plus grandes

19 „ „ „ 54 „ „ Amplit. resp. grandes

25 „ „ „ 54 „ „ Fr&juentes convulsions

33 „ „ „ 54 „ Coag. en 30 min.

Lapin 22, re$oit 0.02 gr. en 5 c.c.
Avant Pinj.: Press. 46 mm Coag. en 3 min.
AussitAt aprfes: „ 52 „

1 min. „ 58 „ ,, ,, 3 ,,

de 30

en

30 sec.

convulsions

2

min.

apr&s:

Coag.

en

1 min.

5

99

„ Press. 36

mm „

it

17.

II

8

99

99

99

30

99

It

ii

30

99

10

99

99

99

40

99

11

99

99

99

99

It

99

3

99

18

99

99

99

30

97

99

99

3

77

22

1*

99

97

27

99

99

H

2

97

Oscill. resp. moindres, pouls
ralenti, sang asphyctique

Chute progr. de la pression

Sang moins asphyctique; la
resp. et le pouls s’acc&fereflt

Sang plus asphyctique

Animal mourant

Lapin 23, re$oit 0.02 gr. en 5 c. c. de liq. physiol., contenant en
Emulsion 0.05 gr. de 16cithine.

Avant Pinj.: Press. 46 mm, coag. en 3 min.

30 sec. apr&s: Ascension lente k 63 mm avec dyspn^e
3 min. aprfe: Press. 61 mm Coag. en 12 min. Dyspn^e, pouls ralenti, fort

sang asphyctiaue

6 „ „ „ 60 „ „ „ 5 „ Pouls plus petit, plus frequent

8 „ „ „ — „ „ „ 2 „ Chute progr.de la pres, sang.,

moins asphyctique

99 97 99 4(5 ,, „ „ 2 „

13 ,, „ „ 44 „ „ „ 10 „ Pouls ralenti, sang rouge

19 „ „ „ 40 „ Incoagulable

25 „ „ „ — „ Coag. en 30 min.

35 99 99 99 33 „ „ „ 8 „

ZeitM-hr. f. ImraunltStsforsehung. Ori*. Hd. XVII. 22

Digitized

bv Google

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

322

Henri De Waele,

Lapin 24, revolt 0.015 gr. en 5 c. c. contenant en Emulsion 0.05 gr’
de ldcithine.

Avant l’inj.: Press. 67 mm, coag. en 17 min.

Aussitdt quelques oscillations; amplit. resp. ne change pas.

3 min. aprfes: Press. 67 mm, coag. en 1 min . Sang pas asphyctique

4 n » Quelques oscill. sans mouvements convulsifs de 8 a 10 ram

6 „ „ Press. — mm Coag. en 11 min. Amplit respirat plus petites

8

12

it

yt

yy

yy

yy

66

60

a

yy

Incoagulable

16

a

yy

yy

—

yy

Coag. en 50 min,

22

ti

yy

yy

43

? y

Incoagulable

Chien 25, de 4 kgr., re$oit 0.03 gr. de Coniine en 12 c. c. de liq. physiol.

Avant l’inj.: Press. 38 mm, pouls 60, ampl. 15, coag. en 18 min.

Aussitdt la pression monte k 110 pour 10 Becondes et retom be & 90

2

min.

aprfes: Press. 83

mm

Pouls 76

AmpL 12

Coag. en 15 min.

4

yy

yy yy

67

yy

yy

84

yy

9

J3

00 v-H

1

8

yy

yy yy

50

yy

yy

130

yy

2,5

21

44

yy

. yy

yy yy

yy yy

53

V

yy

yy

yy

86

yy

yy

8

Incoagulable

1 heure

yy *y

—

yy

yy

—

yy

—

Coag. en 1 heure

1‘

L heure

yy

—

yy

yy

—

yy

—

„ „ 40 min.

21

ire.

yy yy

62

yy

yy

104

yy

10

yy yy 10 yy

2

yy 5 min. .. „

63

yy

yy

—

yy

—

Q

yy yy u yy

2

„ 20 „

yy yy

—

yy

yy

—

yy

—

yy yy ® yy

2

yy ,,

*> yy

58

yy

yy

104

yy

4

yy yy ® yy

Les diverges courbes obtenues avec la coniine montrent
qu’one dose faible d6veloppe une action thromboplastique,
laquelle est suivie d’une phase antithrombique peu accus6e.
Avec une dose plus forte la phase antithrombique devient trfes
manifeste, et nous retrouvons tous les 614ments des courbes
sur lesquelles nous avons appel6 l’attention dans notre travail
antdrieur (Bd. 15, p. 200). Enfin avec une trfcs forte dose on
provoque une phase thromboplastique tr&s violente et tr&s
rapide, k laquelle l’animal succombe par choc.

Les courbes sont done tout k fait semblables k celles
que nous avons obtenues avec des toxines et des venins, et
avec des prote'ines.

X. Alcool dthylique.

Lapin 26 de 2 kgr., re$oit 5 c. c. d’alcool h 94°, soit 4.7 gr. d’alcool
en 5 c. c. de liquide, soit dilud k 47 %•

Avant l’injeetion Press. 55 mm Coag. en 10 min.

30 sec. apres „ 10 „ „ „ l'/ t „ L’animal succombe

Lapin 27, de 2 kgr., re<;oit 2 c. c. d’alcool h 94 # , soit 1.18 gr. en 6 c. c.
de liq. physiol., soit dilut* a 23.5 %•

Avant l’inj.: Press. 52 mm, coag. en 13 min.

Aussitdt pendant l’injection la pression tom be it 28

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

L’action thromboplastique est g4n4rale etc. 323

20 sec.

aprfes: Press. 65 mm Coag. en — min. O sc ill. resp. fortes, pouls acc^l.

2 min. „ „ 60

yy

„ „ 2 hrs.

4 „

yy yy 50

yy

„ „ 40 min.

9 „

„ „ 48

yy

„ „ 5 „ Oscill. resp. moindres

H7. »

„ ” 4 5

yy

„ „ l 1 /. „ Oscill. resp. trfes petites

15 „

yy yy 50

yy

i

yy yy x »

17

brusque chute 40

yy

yy yy »

177. »

apr&: Press. 62

yy

yy yy »

22 „

yy yy 53

yy

„ „ 25 „ Oscill. resp. granaes

32 „

„ hausse 73

tt

pendant 10 sec., puis chute rapide

Coag. en 12 min. Oscill. resp. plus petites, mais
pouls fort

33 „

„ Press. 49

yy

44 ,.

yy yy 51

yy

»* n 5 „

56 „

yy >* 57

yy

» >» 1 i*

57 „

„ hausse 66

yy

pendant 15 sec., puis chute rapide k 56

Coag. en 12 min.

67 „

„ Press. 52

yy

XI. Saccharose.

Chien 28, de 5 kgr., re$oit, aprks avoir subi une saign£e de 25 c. c.,
une injection intraveineuse de 55 c. c. d’une solution isotonique de sac¬
charose (c’est k dire k 7.8 gr. °/ 0 dans l’eau distill4e), soit 4.3 gr. en tout
et 0.8 gr. par kgr. d’animal.

Avant Pinj.: Press. 48 mm
30 sec.

40 „

VI. rain

57,

10
17
19
27
60

Pouls 100 AmpL 2 mm Coag. en 20 min .

»

yy

ff

yy

yy

yy

yy

35

yy

Pouls

90

AmpL 4

mm

Coag.

yy

en

—

min.

yy

yy

50

yy

yy

150

„ 5

yy

>»

4

yy

yy

yy

yy

yy

53

yy

yy

yy

v

yy

yy

yy

yy

yy

yy

4

2

yy

yy

yy

yy

yy

yy

51

yy

yy

yy

yy

—

yy

yy

*y

yy

yy

yy

yy

3

1

*y

yy

yy

yy

50

yy

yy

130

” 4

yy

y*

yy

5

yy

yy

yy

47

yy

yy

130

„ 3

yy

yy

yy

10

Chien 29, de 5 kgr., reyoit 40 c. c. d’une solution de saccharose k
17 °/ 0 , soit hypertonique du double. Cette dose correspond k 6 gr. en tout,
et 1.2 gr. par kgr. d’animal

Avant Pinj.:

Press. 46

mm

Pouls 94

AmpL 6

mm

Coag.

yy

en 30 min.

19

sec.

aprfes:

35

yy

—

yy

—

yy

yy yy

40

yy

41

%y

yy

88

yy

8

yy

yy

„ 2 hrs.

2'/,

min. „

'y

41

yy

yy

78

yy

8

yy

yy

1'/

yy x I* yy

47,

yy

yy

yy

45

yy

yy

70

yy

9

yy

yy

„ 20 min.

18

’ yy

yy

yy

—

yy

—

—

yy

yy

yy ^ t*

28

yy

yy

yy

41

yy

yy

—

yy

—

yy

yy

yy 2 „

36

yy

v

yy

yy

43

yy

yy

52

yy

12

yy

yy

imm&i.

36

yy

yy

38

•y

yy

52

6

yy

yy

en 1 min.

52

yy

yy

yy

43

yy

yy

56

yy

10

yy

yy

,* 6 „

62

• y

43

yy

yy

—

yy

—

yy

yy

„ 8

73

yy

yy

yy

45

yy

yy

72

yy

6

yy

yy

yy 7 „

83

yy

yy

yy

50

yy

yy

—

yy

—

yy

yy

4

yy ’ yy

88

95

>«

yy

yy

yy

*y

yy

54

50

yy

yy

yy

yy

—

yy

yy

—

yy

yy

yy

yy

, 7, „

„ 11 „

Comme

on

le

voit,

la

saccharose

a

surtout

une action

thromboplastique.

22 *

Digitized by

Gck igle

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

324

Henri De Waele,

Dans la seconde experience la solution inject£e est bien
plus fortement hypertonique que dans aucune des experiences
qui ont pr£c6de. Cette hypertonie ne parait pas provoquer de
symptomes bien sp6ciaux; le ralentissement du pouls ainsi
que le renforcement de son amplitude ne peuvent 6tre attri-
bu6s k l’hypertonie puisque on la retrouve partiellement dans
l’expSrience oil la solution employee est exactement isotonique,
mais oil la dose est plus faible.

XII. Huile d’olive.

Chien, de 4 kgr., rejoit 1,5 gr. d’huile d’olives 4mulsionn6s dans
25 c.c. de liquide physiologique, k Paide de 0.01 gr. de savon sodique.

A rant Pinj.: Press. 47 mm, pouls 46, ampl. 25 mm, coag. en 30 min.
AussitAt aprfes: Courte chute k 36 mm pendant 15 sec.

1 7.

min.

11

Press. 49 mm Pouls 48

Ampl. 25 mm

Coag. en

10 min.

4

»

11

„ 49 „ „ 44

ii 25 „

ii ii

13 „

9

tt

11

« 50 „ „ 42

ii 30 „

ii ii

20 „

16

V

11

11 ""

—

ii ii

1 1 /, heure

24

11

11

11

—

ii ii

7 min.

25

11

11

Courte chute k 35 ram

pendant 15 sec.

27

11

11

Press. 49 mm Pouls 46

Ampl. 30 mm

ii ii

45 .,

30

11

11

Seconde injection pareille k la premftre

32

11

11

— —

—

ii ii

4 „

33

11

11

Courte chute k 35 mm

pendant 10 sec.

38

11

11

— —

—

ii

10 „

47

11

11

Press. 43 mm Pouls 36

Ampl. 55 mm

ii ii

10 ,.

Chien, de 5 kgr., reyoit 5 c.c. d'huile d’olives Smulsionnes dans 25 c.c.
de liquide physiologique k Paide de 0.02 gr. de savon sodique.

Avant Pinj.: Press.

35 mm

Pouls 56

Ampl. 12 mm

Coag. en 20 min.

4 min. aprfcs: „

36

11

„ 50

„ 16 „

ii » 2 hrs.

7

* ii ii ii

36

11

„ 40

,, 20 „

ii ii I h.

» ii ii

—

11

11 11

>i » 2 hrs.

31 ii ii ii

—

11

11

11 11 l l /2

46 ii ii ii

35

11

„ 40

„ 18 „

„ „ 2 hrs.

1 h. 13 min. „ „

37

11

„ 58

„ 13 „

„ Incoagulable
Coag. en 2 hrs.

1 ,, 26 „ ,, ,,

—

11

11

11 ~~~ 11

1 ii 49 ,, ,, „

34

11

„ 60

„ 13 „

„ „ 2 min.

2 hrs. „ „

34

11

trks rapide et trbs faible

„ immediate

2 ii 7 m. „ ,,

2 15 ,, ,,

34

11

Pouls 130

Ampl. 3 mm

„ en 15 min.
40

ii ii ii

Courbes voir p. 326—327.

Les temps des prises de sang sont indiqu^s suivant les abcisses; les
temps de coagulation suivant les ordonn<5s.

La courbe pointill^e indique la pression sanguine correspondante.

L’amplitude des oscillations de second ordre de nos traffe (amplitude
respiratoire et concurrement des pulsations) est indiqu6e sch^matiquement
par des lignes marquees R.

Les taches noires sous les courbes de la coniine, renseignent le degre
de veinosit4 du sang, consdquemment Pintensitd de Pintoxication.

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L’action thromboplastique est g6n6rale etc.

325

Les traits indiqufe par C, sous la courbe du lapin 10 repr&entent
les moments oil Panimal pr&entait des convulsions, ainsi que leur intensity.

On voit par les deux courbes de Tantipyrine, obtenues
avec la m£me dose, que le temps de coagulation chez l’animal
avant Texp6rience influence la courbe en ce sens que dans le
second cas la courbe de l’antipyrine s’est superpos6e k une
courbe k oscillations assez grandes, qui se d6roulait chez
Tanimal consid^re comme normal: il se trouvait 4 une phase
thromboplastique qui allait 6tre suivie d’une phase anti-
thrombique, laquelle a contrarie la premiere phase thrombo¬
plastique de Tinjection d’antipyrine.

Comme nous Tavons fait remarquer k propos de la coniine,
les courbes dounees par cette substance, tout comme celles du
salvarsan, du chlorhydrate de quinine etc., montrent que des
doses faibles sont deja thromboplastiques, mais faiblement.
Elies excitent done tr6s peu la s6cr6tion d’antithrombine, qui
d’ailleurs ne se traduit que par des inflexions faibles de la
courbe de coagulation.

Avec des doses plus fortes les deux phases sont nettes
et on retrouve dans les courbes obtenues tous les 616ments
k l’Stude desquels nous nous sommes appliques dans plusieurs
de nos travaux.

Avec des doses tr&s fortes on observe une action thrombo¬
plastique intense et rapide, 4 laquelle l’animal succombe par
choc.

Afin de ne pas encombrer nos protocoles, nous avons
laiss6 de c6t6 les experiences oil les doses etaient trop fortes,
et par consequent Taction thromboplastique tellement intense
qu’elle etait immediatement mortelle.

Rappelons enfln que Taddition de lecithine 4 la coniine,
comme nous le savons, par un travail anterieur sur Tinfluence
des lipoides sur les alcaloides, ralentit et diminue Teflfet toxi-
que; dans les presentes courbes cette intervention se traduit
tr&s nettement.

Toutes ces substances poss^dent done la fonction thrombo¬
plastique, soit que cette fonction s’exerce par une combinaison
directe, soit qu’elle doive se faire par Tinterm6diaire de
lipoides ou d’autres dissolvants communs.

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W [1)1

‘A«£ILs

■Mi

Lapin 10. Lapin 9.

Chlorhydrate de Cocaine Chlorhydrate de Quinine

a m i\ n nyf> m*

(Sang normalement
tree coagulable avant
l’injection.)

(Sang normalement
peu coagulable avan
l'injection.)

Lapin 18 et 19. Antipyrine 0.085 gr.

Inc *-1-1—

Lapin 23.
Coniine 0.02 +
Iddthine 0.05 gr.

Lapin 27.

Alcool 6thylique 1.18 gr.

Chien 28. Chien 29.

Saccharose 0.8 gr. pro kgr. Saccharose 1.2 gr. pro kgi
Solution isotonique. Solution hypertonique.

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328

Henri De Waele,

Sans essayer pour le moment d’eiucider le m6canisme
chimique intime de cette action, nous la consid6rons comme
suffisamment caract6ris6e par la constatation que le sang
devient plus coagulable.

A tout trouble de l’equilibre des colloides plasmatiques,
dans le sens d’une augmentation de la coagulability l’or-
ganisme r6pond par une s6cr6tion d’antithrombine. Cette
secretion est caracteris^e par le fait qu’il suffit d’ajouter de
ce sang riche en antithrombine k du sang frais & parties
6gales, pour rendre ce sang frais incoagulable ou tout au
moins retarder notablement son temps de coagulation: nous
avons fr6quemment, au cours de ces experiences, pratique ce
contr61e.

Cette secretion d’antithrombine est, dans ses grandes
lignes proportionnelle k l’intensite de la phase thrombo-
plastique qui l’a prec6d6e.

Avec les substances bien actives ces phases thrombo-
plastique et antithrombique se succkdent assez rapidement et
se r6petent ensuite en donnant les courbes oscillantes sur
lesquelles nous avons appeie l’attention. II suffit que ces
oscillations soient assez fortes et assez rapprochees pour que
l’on puisse les observer.

Les quelques courbes que nous donnons ici, et qui r6su-
ment certaines des experiences decrites plus haut, montrent
toute l’identite du phenomena avec celui que nous avons appris
k connaitre pour les prot6ines.

Seulement ces substances sont directement actives, tandis
que les proteines, si inattendu que cela puisse paraitre, le sont
trfcs peu, 4 moins bien entendu de se trouver dans les con¬
ditions favorables, c. k. d. quand elles trouvent l’intermediaire
oblige que nos recherches anterieures ont appris 4 connaitre.

La marche du phenomfcne observe avec ces diverses sub¬
stances repond exactement au programme que nous y avons
demeie et que nous avons formuie dans notre note: «Sur les
rapports entre la coagulabilite du sang et la pression sanguine
dans l’anaphylaxies-, paru dans cette revue (Bd. 16, p. 318).

La pression sanguine suit la courbe de la coagulabilite:
elle baisse quand la coagulabilite est forte et qu’il se produit
des precipitations thromboplastiques parietales et des vaso-

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L’action thromboplastique est generate etc.

329

dilatations.. La pression reinonte quand la s6cr6tion d’anti-
thrombine a lib6re les parois vasculaires.

Mais bientot l’action thromboplastique prddomine de nou¬
veau et ainsi de suite.

Parfois, et ce surtout quand la secretion d’antithrombine
est brusque, la courbe de pression ne remonte pas aussi vite
que celle de la coagulability.

Enfin, en presence de la generality absolue du ph6nomene,
il est evident que constamment il doit se produire et se
d£verser dans le sang des substances qui provoquent k un
degrd plus ou moins fort des oscillations que Ton pourrait
appeler nor males du d61ai de coagulation.

L’expdrience que Ton fait introduit un nouveau facteur
qui va provoquer de nouvelles oscillations. Si la dose n’est
pas forte, oh si 4 ce moment l’animal se trouve avoir son
sang riche en antithrombine, la courbe que Ton pourrait appeler
normale peut influencer et alterer la courbe que l’on attend
du fait de l’injection exp6rimentale.

C’est ainsi que pratiquement l’anesthesie et plus sp6ciale-
ment la morphinisation des chiens en experience peuvent, par
les oscillations propres qu’elles determinent, avoir une certaine
repercussion sur les rdsultats de l’injection exp6rimentale qui
suit. Il faut done morphiner au moins une heure & l’avance,
afin que les oscillations dues a la morphine soient dejit de-
venues faibles.

C’est en raison de ces faits que nous avons surtout em¬
ploye des lapins pour les recherches qui pr6cMent.

Malheureusement, en raison de sa petite taille, aprfcs une
s6rie de prises de sang, cet animal ne se pr§te pas bien k
rechercher si une premiere injection d’une des substances
quelconques dont il est question, developpe un etat analogue
k l’immunite propeptonique.

Il est cependant probable qu’il en est ainsi. Nous savons
que pour les proteines cette immunity dite propeptonique
depend de la richesse du sang en antithrombine. Ici aussi
nous savons qu’il existe des periodes analogues mais courtes,
qui doivent surement se traduire par une resistance augmentee
vis it vis de l’action thromboplastique d’une nouvelle injection.

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330

Henri De Waele,

D’ailleurs on trouve dans la bibliographie des indications
pr^cieuses k cet 6gard: elles ont 6t6 obtenues avec des mdtaux
collo'idaux par Fo4 e Aggazzotti: Ces auteurs ddmontrent
que l’argent colloidal k petits grains inject4 k des chiens pro-
voque une chute de la pression, puis retour k la normale;
pendant cette p6riode il existe un 6tat d’immunit6 qui fait
qu’une nouvelle injection ne produit plus de chute de la pres¬
sion. Cette immunity due & l’argent, qui est 61ectron6gatif,
s’6tend m£me k 1’arsenic colloidal, qui est 6galement 61ectro-
n6gatif, mais pas au fer colloidal, qui est 61ectropositif; cette
immunity est trfcs courte et passag^re.

Bref., la fonction thromboplastique est g6n£rale et commune
4 toutes les substances. Elle est suivie d’une s6cr6tion
d’antithrombine, et 1’ensemble du phSnombne se traduit par
une courbe oscillante analogue k celle que nous avons pu
d^montrer pour les prot6ines, les toxines, les venins, les
extraits d’organes.

Peut-on, pareeque toutes ces substances d6ve-
loppent cette action thromboplastique parler en¬
core dans ces cas de syndrome anaphylactique et
rendre en quelque sortecemot synonyme d’action
thromboplastique. Elargir ce concept & ce point
serait, nous semble-t-il, lui faire perdre toute
son utility.

II y a au contraire tout avantage k lui maintenir sa signi¬
fication premiere, pr6cis6e de la f&qon suivante.

Tandis que d’une part les substances chimiques employees
dans les recherches qui pr6c&dent et qui peuvent se combiner
avec le plasma sanguin d6veloppent une activity immediate
(IK, Ag colloidal, antipyrine, alcaloides et leurs sels etc.,
puis les toxines, les venins 1 ), on voit d’autre part que les
prot^ines n’ont qu’un faible pouvoir thromboplastique et qu’elles
nc troublent que lentement l’4quilibre colloidal du plasma, 4
moins de trouver des conditions particulifcrement favorables,

1) Meme les symptomes anaphylactiques obtenus par Rich et avec la
congestine sont h s^parer des manifestations toxiques proprement dites et
reposent sur le melange intime de ces produits toxiques avec des prot&nes
(E. Pick).

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L’action tbromboplastique est g4n6rale etc.

331

en l’espfcce les interm6diaires obliges que nous leur avons
reconnus, sous la forme d’acides amines sp^cifiques.

C’est cette sensibilisation sp4cifique due & la
presence de ces interm6diaires qui cr6e l’ana-
phylaxie: tontes les substances sont thrombo-
plastique mais l’anaphylaxie n’existe que pour
les prot6ines (ou 6ventuellement d’autres sub¬
stances) qui ont besoin d’in ter mSdiaires sp6ci-
fiques pour se combiner facilement et vite au
plasma sanguin.

Ainsi limits, le concept <anaphylaxie» conserve toute
son utility il dSsigne des circonstances sp^ciales, surtout impor-
tantes par le rdle 6norme qui est d6volu aux prot&nes dans
les ph6nom&nes vitaux.

Nous avons vu que cet 6tat peut 6tre r£alis6 par:

1) l’alimentation, c’est 1’anaphylaxie naturelle vis & vis des
prot6ines alimentaires;

2) les s6cr6tions et les mat6riaux d’usure des tissus: c’est
l’anaphylaxie naturelle vis k vis des extraits d’organes;

3) par les produits des parasites: c’est l’anaphylaxie anti-
microbienne etc.;

4) par toutes sortes de prot&nes inject6es exp6rimentale-
ment.

Les rapports entre cet 6tat et l’immunit6 feront l’objet
de recherches ult6rieures.

Zusammenfassung.

I. Jede beliebige Substanz, welche in das Blutplasma
hineingebracht wird und sich dort zu verbinden f&hig ist, wirkt
thromboplastisch. Auf diese thromboplastische Phase folgt
eine antithrombische usw. Die ganze Erscheinung l&Bt sich
durch Kurven darstellen, welche die vollste Aehnlichkeit
besitzen mit den schon in einer vorigen Arbeit von mir
beschriebenen (ftlr Proteine, Toxine, Schlangengifte, Organ-
extrakte).

Eine zu geringe Dosis wirkt thromboplastisch, ruft aber
nur eine geringe Antithrombinsekretion hervor. Eine zu groBe
Dosis dagegen wirkt so heftig und so schnell thromboplastisch.
daB das Tier an dem Iktus akut zugrunde geht.

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I

332 Henri De Waele, L'action thromboplastique est generate etc.

II. Obwohl die thromboplastische Wirkung dieser Sub-
stanzen das anaphylaktische Syndrom nachahmt, ist man nicht
berechtigt, das Wort „Anaphylaxie u hier anzuwenden. Denn
diese Substanzen verbinden sich direkt, wahrend die Proteine
nur sehr wenig wirksam sind, und zur Entfaltung ihrer Wir¬
kung das Vorhandensein eines spezifischen ZwischenkSrpers
(Aminosaure) vorzufinden brauchen, wie wir schon friiher
gezeigt haben.

Gerade in dessen Bestehen Oder dessen Hervortreten im
Organismus besteht der ^status anaphylacticus tt .

III. Dieser Status anaphylacticus ist auBerst wichtig durch
die enorm groBe Rolle, welche die Proteine in den Lebens-
prozessen spielen.

Er ist bekanntlich hervorgerufen durch:

1) die Ernahrung: natiirliche Anaphylaxie gegen die ver-
schiedenen Nahrungsproteine, welche das betreffende Tier ge-
wohnlicherweise zu sich nimmt;

2) die Sekretions- resp. die Abbauprodukte der Gewebe:
das ist unter anderen die Anaphylaxie gegen Gewebsextrakte
und gegen die Kenotoxine Weichardts;

3) parasitare Produkte: natiirliche Oder pathologische Ana¬
phylaxie gegen Bakterienprodukte usw.;

4) allerhand Proteine. welche experimentell angewandt
werden: experimentelle Anaphylaxie.

Bibliographie.

Foa et Aggazotti, Ueber die physiologische Wirkung der kolloidalen
Metalle. Biochem. Zeitschr., Bd. 19, 1909.

Feinschmidt, Biochem. Zeitschr., Bd. 38, 1912.

Nos traveaux dans cette revue: Bur les alcaloides, Bd. 3, 1909; Bur l’anaphy-
laxie, Bd. 13, 1912, Bd. 15, 1912, Bd. 16, .1913.

*

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A. Bessemans, Contribution k Petude de Panaphylaxie. 333

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Xachdrurk verboten .

[Institut de Bact^riologie de Louvain (Directeur Prof. J. Denys).
Laboratoire du Prof. R. Bruynoghe.]

Contribution & i’ltude de Panaphylaxie.

Par le Dr. A. Bessemans.

(Eingegangen bei der Redaktion ajn 31. Januar 1913.)

Dans ces dernikres ann6es, on s’est effort de faire rentrer le pheno-
mbne de Panaphylaxie dans le groupe des reactions complexes de l’immunite.

A la suite d’interessantes recherches sur la production, par injection
de scrums normaux, d’anticorps capables de favoriser Phemolyse*) et la
cytolyse*), Friedberger etses eifeves furent frapp^s de Fanalogie qui sem-
blait exister entre leurs experiences et Phypersensibilite. Cet auteur 1 2 3 ) en
vint bientto k considerer Panaphylaxie comme un cas particulier des reactions
albumino-antialbuminoides: ce serait une combinaison in vivo, possible
aussi in vitro, de Pantigkne k Panticorps sp^cifiques avec participation plus
ou moins active du complement.

Vers la m&me epoque parurent les recherches de S1 e e s w i j k 4 )
entreprises, k FInstitut Pasteur, independamment des travaux precites. Chez
le cobaye activement anaphylactise avec du serum de cheval, Pauteur mit
en evidence une diminution du complement aprks la seconde injection provo-
catrice du choc. Cette reduction de Palexine ne serait decelable que plusieurs
minutes aprks Pinjection massive pour atteindre son maximum au bout
d M / a heure environ; commencee in vivo, elle peut continuer k se faire in vitro.

La theorie nouvelle sur Phypersensibilite ne tarda pas k trouver de
nouveaux appuis dans les travaux de Doerr et Russ 5 ), Braun 6 ) et autres.

La diminution du complement durant la crise anaphylactique avait
dejk ete signaiee par Michaelis et Fleischmann 7 ), travaillant sur des
lapins hypersensibilises avec du serum de bceuf; toutefois, les recherches
d’Otto 8 ) avaient nie le fait.

1) Friedberger undMoreschi, Centralbl. f. Bakt., Abt. II, Bd. 45,
1907, p. 346.

2) Friedberger und Bezzola, ibid., Bd. 46, p. 412.

3) Friedberger, Zeitschr. f. lmmunitatsf., Bd.2,1909, H.2, p.208;
ibid., Bd. 3, 1909, H. 7, p. 692.

4) Sleeswijk, Zeitschr. f. lmmunitatsf., Bd. 2, 1909, H. 2, p. 133.

5) Doerr und Russ, Zeitschr. f. lmmunitatsf., Bd. 3, H. 2, p. 181;
H. 7, p. 706.

6) Braun, Munch, med. Wochenschr., 1909, No. 37.

7) Michaelis und Fleischmann, Med. Klin., 1906, No. 21.

8) Otto, Munch, med. Wochenschr., 1907, No. 34, p. 1665.

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334

A. Bessemans,

Friedemann 1 2 3 ), plus tard, s’occupa sp^cialement de 1’anaphvlaxie
passive; il put constater aussi une reduction de l’alexine durant le choc.

Vinrent ensuite les travaux complymentaires de Friedberger et de
ses collaborateurs: ex penmen tant avec toutes les raesures de precaution
desirables, ils *) constatirent une diminution constante de l’alexine, des le
debut de la symptomatology morbide. Des recherches ulteneures') con-
firmferent le fait pour les formes les plus variables de l’anaphylaxie.

D’autres auteurs encore aboutirent aux m&mes conclusions; citons
notamment les experiences de Doerr et Moldovan 4 ), puis cedes, plus
recentes, de Bacher et Wakushima 5 ).

Le phenombne en cause suscita cependant des controverses, surtout
au point de vue de son interpretation. Nous ne voulons pas nous attarder
ii ces longues discussious, auxquelles surtout Kraus et Friedberger
prirent une part active: elles n’offrent, au point de vue du present travail,
aucun intent particular. A noter cependant les recherches recentes de
Busson et Takahashi 6 7 ), d’accord avec les resultats anterieures d’Otto
et de Tsuru: les auteurs n’admettent pas comme phenombne constant la
reduction du complement et la considferent comme nuUement essentielle ni
caracteristique du choc.

Nous avons, dans nos recherches, repris la question;
toutefois, nous l’avons 6tudi6e k un point de vue nouveau, du
raoins 4 notre connaissance. Voici ce que nous avons tach6
d’Sclaircir: au cas oh il existe rSellement une reduction de
l’alexine durant le choc anaphylactique, faut-il l’attribuer k une
diminution de l’Endstiick, & une diminution du MittelstQck ou
a une diminution simultan£e des deux constituants du com¬
plement?

Pour la technique employe dans la reaction hemolytique et la division
de l’alexine, se rapporter k notre communication anterieure parue dans cette
revue-meme ’); de rmMne que le premier, le present travail ne concerne que
le cobaye et n’etudie le complement qu’au point de vue de I’hemolyse.

1) Friedemann, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 2, 1909, p. 591.

2) Friedberger und Hartoch, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 3,
H. 6, p. 581.

3) Friedberger, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 4,1910, H. 5, p. 635.

4) Doerr und Moldovan, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 5, H. 2/3,
p. 161; Bd. 7, 1910, p. 223.

5) Bacher und Wakushima, Centralbl. f. Bakt., Bd. 61, 1911,
H. 3, p. 238.

6) Busson und Takahashi, Centralbl. f. Bakt., Bd. 65, H. 13,
p. 146.

7) Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 17, 1913, H. 1.

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Contribution & l’dtude de l’anaphylaxie. 335

Voici, d’ane faqon g6n6rale, notre fa$on d’exp^rimenter:
ay ant, depuis plusieurs semaines, hypersensibilise des animaux
au moyen d’une injection sous-cutan4e de serum de cheval it
faible dose, nous leur soustrayons une quantity minimale de
sang en leur ouvrant une des petites veines superficielles du
cou; cette quantity ne d6passe jamais 2 c.c. Aprbs avoir
soigneusement recousu la petite plaie et assure une h£mostase
aussi parfaite que possible, nous attendons quelques minutes
pour nous assurer que l’animal ne prgsente aucun ph6nomfene
morbide. Nous lui injectons alors dans la cavit6 p6riton6ale,
a l’aide d’une aiguille mousse, une dose massive de s6rum
variant de 2 it 5 C.C. 1 ). L’animal est observe; Ton note le
moment exact de l’injection ainsi que tous les symptdmes
d’anaphylaxie qui se prGsentent. A un moment donn£, variable
d’apr&s l’intensite du choc, on prgl&ve, une second fois, une
petite quantity de sang et on referme la plaie. Au cas oh
l’animal succombe, visiblement h la suite de l’intoxication
anaphylactique, nous faisons son autopsie en nous assurant
encore que la mort n’est pas la suite d’une h6morrhagie 6ven-
tuelle dans le tissu cellulaire du cou; dans quelques cas, nous
avons enfonc6 une aiguille dans la coeur mis & nu et nous
avons aspire dans une seringue sterile tout le sang qu’il con-
tenait encore.

Nous avons de la sorte du m§me animal tantdt 2 tantot 3
echantillons de sang qui seront soumis en m§me temps it
l’analyse.

Pour 6viter toute cause d’erreur, nous faisons subir les
mSmes operations it un animal temoin c’est-it-dire non encore
employe; m^me nous lui injections dans la cavit6 peritoneale
une quantite plus grande de serum identique it celui injecte au
cobaye hypersensible.

Quant it l’analyse des divers echantillons preieves, nous
les conservons it la glaciere, laissant le caillot se retracter
durant un temps variable ne depassant jamais 24 heures.
Nous decantons alors le serum surnageant 2 ) et dosons tout

1) Quelquefois nous avons fait l’injection massive sous la peau.

2) Remarquons, en passant, que le fait suivant, dt'jk signnle par
Friedberger et Sleeswijk, nous a toujours frapp4: le 6^ruin sanguin

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336

A. Bessemans,

d’abord son activity au point de vue hSmolytique. Ensuite
nous le soumettons k la separation et nous d&erminons,
comme suit, l’activitS de ses deux constituants: aprbs avoir
divis6 un serum frais, de force connue par un dosage prealable,
nous en prenons des doses constantes de M et d’E pour y
ajouter des quantites decroissantes d’E et de M des serums
k examiner.

De rndme que dans notre travail anterieur, nous avons
soin de verifier chaque separation en faisant pour chaque E
et chaque M un tube controle renfermant le double de la
dose maximale employee.

Prenons aussitot un exemple, d’abord d’un cobaye ana-
phylactis6, ensuite d’un animal temoin.

Cobaye I. His to ire.

Poids: 350 gr. Injecte la l re fois, sous la peau, avec 1 / 20Q c. c. de
s£rum de cheval.

25 jours d’attente.

Temp.: avant la l re saigitee 38.4° (temp, rectale). On lui pr£l£ve
environ l l / s k 2 c. c. de sang. Apres 10 min. on lui injecte 2 c. c. de s£rum
de la cavite p£riton£ale.

La 7® min. aprfes cette injection: Fanimal se gratte.

Puis ptesente de l’inquietude, du hoquet, des contractions expiratoires
cloniques.

La 15® min.: troubles respiratoires intenses. Puis semble se remettre.

La 30® min.: le grattage recommence, la dyspn^e reprend.

De nouveau une courte p^riode d’accamie. Temp, k ce moment: 35.4°.

La 70® min.: crise convulsive; therraomfctre n’atteint pas 35.

La 100® min.: on fait une 2® saignde.

La 110® min.: dyspn^e devient intense; expiration impossible; apn<$e;

mort.

Autopsie: poumons, fortement insuffles, ne reviennent gufere sur eux-
ntemes. Pkles.

Pas de liquide dans le p^ritoine.

Pas d’ltemorrhagie au niveau de la plaie. On fait la ponction du
cceur k d&ouvert. Le sang est conserve k la glacifere durant 20 h. environ *).

pr61ev6 pendant le choc est plus rouge que celui pr£lev6 avant Finjection
massive. Nous ne faisons que noter le pltenom&ne sans chercher k Finter-
pteter.

1) Nous ajoutons ce detail parce que la plupart des auteurs, entre
autres Friedberger et Sleeswijk, ont constate que la reduction de
Falexine commenc4e in vivo continue ulterieurement k se faire in vitro. Le
moment de Fexamen a done son importance.

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Contribution h l’4tude de l’anaphylaxie.
Dosage dee alexines non encore divis4es.

337

S4rum avant choc

86rum durant choc

84rum du cosur

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Dosage des constituents,
a) De leur Endstiick.

Dose constant* de M frais employee: Vm*)*
Doses d^croiseantes de:

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V*oo 0

1,00 Q

/t«0 0

T4moins:

T4moin: E id. seul

T4moin: E id. seul

E id. seul l / l0 0
M frais seul 7* . 0

*A.o

‘/i. o

b) De leur Mittelstuck.

Dose cons tan te d’E frais employee: 1 / M .
Doses d4croissantes de:

M avant choc

M durant choc

M du ccbut

1 /* 0 C

Vss c

y.. c

Vo. c

Vo. C

Vos c

V.. c

V.o bon I

V«. bo n 1

1 / 1 0 0 c

‘/,..peu

Viool

l /,oo c

Vi..?

Vw.peu

Vu. c

y i o ° ^

Vi «° Jr

V. 00 I

/too 2

1,00 0

Vss. pen

V t 8 0 ^

Vss.O

‘/..o ‘

Vs 6 0 0

V* «» o

T4moins:

T6moin: M id. seul

T6moin: M id. seul

M id. seul 7,o 0

E frais seul 1 / M 0

Vie 0

‘A. o

1) Nous indiquons simplement, en c. c., la quantity employee. Les
signes conventionnels de l’hgmolyse sont les mfemes que dans notre com¬
munication ant4rieure.

2) Le s4rum frais dont le M et l’E ont servi de constantes avait
comme activity 1 / eo c, ‘/too P°> Viao tr -

Zei\«rhr. f. IromunltHt>»for*chuntf. Ori*. Bd. XVII. 23

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338

A. Besseraans,

Si nons examinons le dosage des alexines avant leur
s6paration nous constatons que l’activit6 hdmolytique du com¬
plement est descendue de 1 / 80 4 V 8 o aprks un choc de 1 l j s h.
environ; que cette reduction du complement est encore sensible-
ment la mSme (V40) dans le sang pr 61 ev 6 aprks la mort de
l’animal.

Le tableau du dosage des constituants est plus in-
t6ressant. II nous montre en effet que la diminution de
l’alexine concerne surtout le M; celui-ci en effet perd de
son activity du x /ieo au V40 tandis que l’E ne saute que du
Vso au Veo-

Avant de reprendre une experience semblable, il importe
de faire suivre les mSmes tableaux concernant un cobaye
temoin. Une objection en effet se presente d’elle-m6me: les
diminutions constatees ne sont-elles pas la consequence tout
d’abord de la saignee ensuite de la resorption du liquide in-
jecte, resorption qui doit etre d’autant plus active que l’animal
vient de perdre une certaine quantite de sang.

Nous choisissons & desein un cobaye de meme poids
auquel nous avons injecte, k peu prfcs dans des conditions
identiques, 3 fois plus de liquide c’est k dire 6 c. c. de serum
dans la cavite peritoneale.

Cobaye n. Histoire.

Poids: 350 gr. N’a jamais 4te injects.

Temp.: avant la 4 re saignee 38.9°.

On lui preifeve environ l l f t k 2 c. c. de sang. Aprfes 15 min. on lui
injecte 6 c. c. de serum dans la cavity peritoneale. L’animal ne presente
aucun phenornkne morbide.

Temp.: prise la 2O' min. aprks l’injection: 38.3 °.

La 80 6 min.: l’animal est saignd une 2® fois. H se remet com-
pletement.

Le sang est conserve k la glacifere durant 20 h.

Dosage des alexines non encore divisees.

Avant Pinjection

Aprfes Pinjection

Vao c
V 40 c
Veo PC
Veo f

Vi 00 peu
‘/mo 0
‘/ 180 0

*/* 0 C

Veo C

Veo bon I
Veo peu

I V100 £

I V

V 180 0

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Contribution & 1’etude de l’anaphylaxie.

339

Dosage des constituants.

a) De leur E:

Dose constante de M frais employee: 1 / a0 *).
Doses dicroissantes de

E avant l’injection

E apres l’injection

;/»o c

V ? o c

L pc

7«o pc

/(JO I

Vao Peu

Ao tr

V„ 0 ?

V iou 0

‘/too 0

Temoins: E id. seul V 10 0

Tdmoin: E id. seul V l0 0

M frais seul l / 10 0

b) De leur M:

Dose constante d’E employee: Vso-

Doses d^croissantes de

M avant Tinjection

M aprfes l’injection

*Ao c

Veo C
l U c

'l,o 0 PC
'/,«« bon I
l l I

i /20 ° ?

8 RO *

T^moins: M id. seul '/jo 0
E frais seul l / 10 0

V« c
7 « c

‘/so C

Vi 00 P c

;/,e° I

/j»o

‘L 0

Temoin: M. id. seul 1 / M 0

Comme on le voit, le cobaye t6moin ne pr^sente rien de
semblable k ce que nous avons constat6 chez l’animal hyper-
sensible. En effet, l’activit6 de son alexine ne change gu&re
aprfcs l’injection massive; la diminution leg&re qu’on pourrait
lui trouver tombe dans la limite des erreurs de technique et
devrait, du reste, §tre attribute aux deux causes signal6es plus
haut puisqu’elle concerne, insignifiante aussi, k la fois le M
et l’E.

Pour consolider d’avantage nos conclusions nous voudrions
encore transcrire en detail l’une ou l’autre de nos recherches.
Mais comme ce serait inutilement allonger ce travail, nous
avons pr6f6r6 r6sumer, dans un tableau d’ensemble (Planche I)

1) Activity du complement dont les constituants ont servi de con
stantes. /, 0 c pc .mo 1 /100 tr.

23*

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340

A. Bessemans,

Planehe I. Resume

Histoire du cobaye 1 )

Num^ro

de

Fanimal

Dose de
la l r * in¬
jection

Moment
voie et
dose de
la 2* in¬
jection

Symptomes pr6sentes et moment dee
saign^es (2* et 3 # )

Dosage du Compl. non
encore divise

avant

pendant ap. mort

2

t&noin

4

t4moin

6

temoin

1 /*00

/ 30 o

^300

/»00

25 jours
d’attente
2 c. c. dans
peritoine

6 c. c.

dans

peritoine

5 c. c.

dansperit.

2 mois
d’attente

5 c. c.

dans

peritoine

4 c. c.
dans perit

2 mois
d’attente

Debut la 7 e minute aprfes l’injection.
Grattage. Inquietuae, hoquet. Trou¬
bles respiratoires. Crise convulsive, la
70 5 rain. Temp, avant 38.4°, aprfcs 35°.

La 100e min.: 2 de saignee. llO min.:
mort par apn^e. Autopsie: pouraons
insuffles. Prise de sang dans cceur k
decouvert.

Aucun ph£nomfcne morbide. Temp, avant
38.8°; apres 38.3°.

La 80 min. 2 de saignee; animal survit.

Debut la 8 e min. Grattage, inquietude.
La 25 e minute paresie.

Saignee une 2 de fois apres 90 min.;
survit.

Rien.

Seconde saignee aprfes 60 min.

Debut la lO min. Inquietude, grattage.
Respiration difficile. Contractions
cloniques.

La 30 min. 2 d « saignee. Meurt la 35 e
min. Autopsie: poumons nettement
insuffles. Prise de sang dans le conir
mis k nu.

10 c. c. |Aucun phenomfene morbide.

dans 2 d « saignee apres 40 min.; survit.
peritoine

24 jours
d’attente
5 c. c.
dans
peritoine

Debut apri^s 2 minutes. Inquietude,

g rattage, toux. Apr£s 5 min. dyspnee,
oquet, convulsions, apnee.

2 d e saignee apres 5 min. Mort durant
saignee. Autopsie: poumons ne re-
viennent pas sur eux-memes et gardent
nettement Tempreinte de la cage thora-
cique. Encore 2 c. c. de liquide dans
la peritoine. Pris sang du coeur mis
k decouvert.

Vso C
Vioo P c
l / 166 peu

\' r \

V»0

r

V,o c
1 /

I BO

Vso

Vioo PCU
‘/so c

Vbo P ®

Voo

I

•r

V*.

1 /l 00 0

y 8 . c

V, 00 P C

V« 0 c
V «0 bon I
V 8 . peu

‘A 00 tr

1 f A

iV n I

i SO A

V«„ Peu
Voo°

‘A, c

Voo I

;/ $0 ryu

/lOO *

Voo C
Voo tr

V.. c

v: i

Voo peu

■A. c

Voo c

'so P c

Voo PC

Voo bon I

Voo 1

1

Voo 1

Vioo P« u

Vioo ^

1

V.o C

Voo I

Voo pc

‘Vo o

Voo peu
Voo y
V.ooO

VooO

V..c

Voo tr

1) Tous les cobayes de ce tableau etaint k peu prbs de poids egal: 350 gr.

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Contribution h l^tude de Panaphylaxie.

341

d’6xp4riences sur l’anaphylaxie.

Dosages

Remarques

Dosage des constituants

de l’Endstuck

du Mittelstuck

Moment de
Pexamen des
alexines

Dosage de
Palexine
dont E et M
servent de

Const,
de M
frais

Doses d£croissantes de P

Const.

d’E

frais

Doses d6croissantes du

E avant

E apres

E cceur

M avant

, M aprbs

M cceur

constantes

v* !

;/„. c
/lOO P ®
7teo tr
7,00 0

Jr i

Iso x

7,oo pen
l l ?

/iflO *

7,0 C
/,. I
l /100 t r

/,.o 0

7„

Vieo C

1-200

\'r r

/ 380 1

7,0 c

7,o bon I
7... peu

/lflO *

7« 0

7,o bon I

7,00 I
/,* tr

aprfes 20 hrs.
de glaciere

7.0 c

7,00 P c
7t,o tr

v„

;/»'

:«r

/BO 1

/go tr

7,o c

7,o P c

JrT

ISO 1

7*

1/ p

/ on U

:!■» f c

/900 A

11 ?

/ 280 *

V 80 C

;/,o° p c
/200 A

V280 0

idem

;/««
:-r

190 L

V 100 ^

7,o

7,o c

7.o pc

Veo
/100 0

7«0 c

7,0 Pe’i

,'( M o

/lOO u

Vao

7,80 c

7,00 P C

7,o c

7* Peu

7* tr

7,o.O

aprfes 24 hrs.
de glacifere

7„ c

7* Peu

7,o

7*. c

7,0 p c

/.o I

7*0

7,o c

7«o tr
7*0

7,.

VlOO C

VlBO P C

/*oo 1

1/100 C
V l60 bonl

VjOO 1

idem

7.0 c

7.0 Peu

7*o

7.. c

7,o P«*u
7.o o

7,o c

7,o Peu

7,0 c

7,0 peu
7* tr

7*

7,00 C

7 160 A

7«oo peu

7,0 c

7* Peu

7,* tr

X

/ 80 A

7,* Peu

idem

‘to Peu

7»

7«o C

:h c

Til pe«

7,o c

> ? c
/too A

7 t,o peu

7»

1 A>40 C

Vaeo c

7,40 C

/,«0 C

apr^s 20 hrs.
de glacifere

7*5

7* Peu

7«o

7,0 P c

7.o tr
7*o

7,0 P c
7,0 pe u
7*0

7,o bon 1
7*0

7*

l /80 C

Vioo P C

:H c
/18° A
/,* tr

/ 860 V

H
£1
/too tr

/l* 0

7,o I

7* Peu

7* tr
/100 0

idem

Jr c

7,oo tr

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342

A. Bessemans,

Hli mhnvp

'

NumSro

de

l’animal

Dose de
la 1” in¬
jection

Moment
voie et
dose de
la 2* in¬
jection

Symptomes prison tes et moment des
saign^es (2* et 3*)

Dosage du Compl. non
encore divisd

avant

pendant

ap. mort

■ 8

\U c. C.

18 jours
d’attente
2 c. c.
s6r. dans
peritoine

D4but aprfes 6 rain, Grattage, agitation,
Toux r6p£t£e. Aprfes 24 min. respir.
difficile. La 44^ min. paraplegie, con¬
vulsions legeres. Temp, avant 37.8°,
aprite: moins de 35°.

2 de saign£c la 50« min. Meurt pendant
la saigmSe. Autopsie: rien de special.

7m C T

7eo 1)0111

7so P°u

V.oo?

*/,0 I

7,0 0

9

VlOO C *

18 jours
d’attente

1 c. c.
dans
peritoine

D6but k la 8e min. Grattage intense.
Apres 32 min. agitation, inquietude.
Apres 34 min. paraplegic, suivie de
paralvsie. Temp, avant 39°; apres
35.3°:

Apres 40 min. 2 de prise de sang. Mort.
Autopsie: rien d’anormal, un ]>eu de
liquiae dans la cav. abd.

Jr r

li JO x

7.0 tr
7l00 7

i

H

40 V

10

t/'inoin

•

10 c. c.

dans

peritoine

Rien. Temp, avant 38.6°; apres 39°.
2 de saign6e apres 60 min.

7,° c

7«o P 11

7*0

/,o C

7,» Pe°

7«u o

11

1 /*00

44 jours
dattente

1 c. c. 1
dans
peritoine

Ddbut apr&s 15 min. Grattage intense.
La 45^ minute respiration difficile.
Contractions cion, du diaphragme.
Se couche sur le c6t6. Convulsions.
Se meurt.

2 d « saignee la 50 e min. Mort Temp.

! avant 38.4°, apr&s: moins de 35°.
Autopsie: poumons pfiles et insuffl^s.

7,0 c

Jr pc

L peu

7,00 0

7,o c

7.,o tr

12

V100

44 jours
d’attente
5 c. c. sous
la peau

D6but apr^s 40 min. Grattage. Dys-
pn£e aprks 45 min. Convulsions.

2 d « saignee k ce moment. Mort. Au¬
topsie: poumons ne reviennent nulle-
ment et gardent l’empreinte de la
cage thoracique. Plus de liquide
sous la peau k l’endroit de l’in-
jection.

7eo C

Jr r

rJ

\

7,o c

'Jr \ c

7*o tr

13

Vaoo c *

28 jours
d’attente
5 c. c.
sous peau

DGlmt apres 15 min. Grattage intense.
Paresie.

2 ( ie saignee aprfcs 40 min. Meurt apr&s
50 min. Pris sang du coeur mi6 k nu.
Autopsie: rien de special.

7.o 0

7s. pc

7,00 peu
7,40 ?

7,o C

7.o pc

7e<. tr I
7,0 0

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Contribution & l’4tude de l’anaphylaxie.

343

Dosages

■n _

Dosage dee constituants

xvem&rqut»

de l’Endstuck

du Mittelstuck

Moment de
l’examen des
alexines

Dosage de
l’alexine
dont E et M
eervent de
constantes

Const,
de M
frais

Doses d4croissantes de 1’

Const.

d’E

frais

Doses d4croissantes du

E avant

E aprfes

M coeur

M av&nt

M aprfes

M coeur

7*o

p°

■fco

! c

/so i

Vi 00 0

7*.

7*0 c

‘/so peu

7,so 0

7* peu
‘Aotr
‘/to tr
7*o?

‘/soO

aprfes 24 hrs.
de glacifere

Vao C

r

7,00 peu

7*o

'/« c

1“ s*
/160 *

'/to C

7*o I

\U tr

U 80 0

7*.

JrV

1 no i

7*00 0

0

r

*r.o

idem

‘/so c

•: r*

7,oo Peu

7*.

7*0 c
Veobonl
Vieo 0

*£.o

7<o

7so C

1/ T

/l60 A

1 / fl«

/ 820

‘/ 80 1

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idem

V«0 C

‘/ioo peu

V*

40 P 0
7*0 peu

/40 A
‘/so tr

*/*o

‘/*o c

7,so tr

7,o c

7*o bon I

idem

x /r 1

/lOO x

7*.

7*o c

7** pc
7,0. bon I
7, w tr

7*o c

Vao I

1/ T

l /°° tr
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7*0

:k

‘/too Peu

7m* Peu

v" 1

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7, bo Peu

idem

/100 A

7*.

7 m c

7m 1

‘/too Pe«

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7*. c

7.00 bon I
7, «. tr

7*0

7.00 c

7, so P c

7,00 peu
V?ao tr

1 “ X
l / 100 ?

/160 1

yl 1

7, so ?

idem

7,0 c

7.00 P c

7. so tr

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

344

A. Bessemans,

quelques unes de nos experiences: elles represented divers
cas de choc anaphylactique tant pour la forme de la crise
que pour son intensity. Quand on examine cette planche, on
constate nettement ce qui nous a d6jk frapp£ dans les exemples
ant6rieurs, et cela tant pour l’anaphylaxie par injection sous-
cutan 4 e que pour celle par injection intraabdominale: alors
que I’animal temoin ne presente gufcre de modi¬
fications dans son serum sanguin (voir Nos. 2 , 4 , 6
et 10), il se produit chez le cobaye anaphylactis6
une r6elle diminution de l’alexine durant le choc;
cette reduction concerne surtout le M et n’est
vraie pour l’E que dans de faibles proportions 1 2 3 ).

Ces r£sultats ne nous semblent pas d 4 pourvus d’int£r&t
quand on les rapproche de certaines recherches sur l’utilisation
des deux parties de l’alexine dans les ph£nom&nes d’absorption
du complement par les combinaisons d’antigfene & anticorps.
Si divers auteurs, tels que Mich a el is et Skwirsky*),
Hecker 8 ), Sachs et Bolkowska 4 5 ) parlent d’une utilisation
exclusive du M, les experiences recentes de Gen gou 6 ) mettent
en lumifere non seulement un emploi du M mais aussi un
emploi, quoique partiel, de l’E.

Ne nous trouvons-nous pas ici en presence d’un pheno¬
mena analogue et ne pourrait-on pas interpreter la nature
intime de la diminution de l’alexine durant le choc anaphy¬
lactique comme une deviation du complement in vivo sem-
blable k celle que Ton produit in vitro? La diminution de
l’alexine ne serait done pas la consequence d’une destruction
mais simplement d’une utilisation analogue & celle provoqu 4 e
par les pr 4 cipites sp6cifiques.

1) A noter que le ph^nomhne est d’autant plus frappant que certains
animaux anaphylactis£s (voir No. 9 et 11) n’ont reju que 1 c.c. de s4rum,
alors que certaines tcmoins (voir No. 6 et 10) ont reyu une dose 10 fois
plus forte.

2) Michaelis et Skwirsky, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 4,
p. 138; Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 4, H. 5. — Skwirsky, Zeitschr.
f. Immunitatsf., Bd. 5, H. 5.

3) Hecker, Arb. a. d. Inst. f. exp. Ther., 1907, H. 3.

4) Sachs et Bolkowska, Zeitschr. t Immunitatsf., Bd. 7, H. 6.

5) Gengou, Zeitschr. t Immunitiitsf., Bd. 9, H. 3, p. 344.

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Contribution k P4tude de Panaphylaxie.

345

A la suite de nos reeherches sur Tanaphylaxie, nous avons
tout naturellement song6 k les 6tendre k T6tude (Tun 6tat
morbide experimental tr&s serablable c. a. d. de l’intoxication
par peptones.

Ce sont Biedl et Kraus 1 2 ) qui ont signals les premiers, tant chez
le chien que chez le cobaye, Panalogie curieuse entre ces deux 4tats patho-
logiques. Les auteurs se placent surtout au point de vue de la sympto-
matologie ext^rieure et affirment une „identit£ complete 1 ' entre Paction des
peptones Witte sur le cobaye normal et celle de Phypoth^tique toxine ana-
phylactique. Leurs reeherches sont confirmees par celles d’A chard et
Aynaud 3 ). DiffSrents auteurs reprennent la question mais en Petudiant
chacun sous un aspect nouveau: Pfeiffer et M ita 3 ) s’occupent des troubles
de la temperature; Karsner etudie les lesions anatomo-pathologiques du
poumon 4 ); Bacher et Wakushima 5 6 7 ) Pactivite du s^mm en opsonine,
Bus son et Takahashi 0 ) sa teneur en alexine. Tous affirment une par-
faite analogie entre le choc anaphylactique et Pintoxication par peptones;
les derniers auteurs cites constatent notamment une m&me reduction du
complement heraolytique et trouvent, dans les deux etats, le moment de
la prise sanguine du grande importance.

Nous n’avons 4 tudi 4 la question qu’au point de vue du
complement. Appliquant la mSine m6thode de reeherches
que celle expliqu6e au d6but de ce travail, nous avons tach6
d’eiucider le point suivant: se produit-il, dans l’intoxication
par peptones, la m£me utilisation des constituants de l’alexine
que dans le choc anaphylactique?

L’injection est faite d’ordinaire dans la veine jugulaire
externe k raison de 1 k 3 c.c. d’une solution de peptones
Witte & 10 % chauff 4 e au bain-marie k une temperature de
39 07 ). L’animal t 4 moin regoit, dans la meme veine, 1 si. 5 c.c.
de s 4 rtim chauff6 de cheval.

Prenons aussitbt un exemple:

1) Biedl et Kraus, Wien. klin. Wochenschr., 1909, No. 11, p. 363;
Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 7, 1910, H. 2, p. 205.

2) Achard et Aynaud, C. R. 8. Biol., T. 67, p. 83.

3) Pfeiffer und Mita, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 4, H. 4, p. 410.

4) Karsner, Centralbl. f. Bakt., Bd. 61, 1912, H. 3, p. 247.

5) Bacher und Wakushima, L c.

6) Busson und Takahashi, 1. c.

7) Ceci pour ne pas devoir tenir compte, dans la prise des tempera¬
tures, de la cause d’erreur que constitue (’introduction dans le sang d’une
quantity assez notable de liquide froid.

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346

A. Beseem ans,

Cobaye a. Histoire.

Cobaye normal pesant environ 400 gr. 10 minutes aprbs une l re saign£e
de 2 c.c., il re£oit dans la veine jugulaire externe 2 1 / a e.e. d’une solution
k 10°/ 0 de peptones (chauffee k 38°).

Apr^s 1 minute, contractions cloniques. Se couche sur le c6t£ —
dyspn^e — apn6e.

saignGe aprks la 5 e minute. Mort durant la prise de sang.

Temp, avant: 37.8°, apri>s 37.5°.

Autopsie: les poumons sont trbs pdles et ne reviennent nullement sur
eux-m&mes. Les grosses veines sont distendues et remplies de sang. Le
cceur est dilate.

Nous aspirons le sang du coeur avec une seringue.

Les ^chantillons de sang sont conserves k la glacibre et examines
aprfes 24 heures.

Dosage des alexines non encore divis^es.

Serum avant injection

Pendant la crise

S£rum du cceur

ho C

V.0 c

7 S o c

7« c

7,0 c

7 S0 c

7.0 c

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/ISO 0

7. SO pen

i 1 iso

Dosage des constituants.

a) De leur Endstuck.

Dose constante de M frais employee: l / 40 l ).
Doses d^croissantes de

E avant injection

E durant crise

E du cceur

7 2 , c

7,o c

7.0 c

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Temoins: E id. seul l / l0 0

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7,00 0

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T£moin: E id. seul l i l0 0

i

M frais seul l / v0 0

1) Activity du serum frais l / 80 c 1 / l00 I 1 / 10O peu.

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Contribution & l’dtude de Panaphylaxie.

347

b) De leur Mittelstuck.

Dose constante d’E frais employee : 7«-
Doses d&roissantes de

M avant injection

M durant crise

M du

coeur

c

1

Vso

c

Vso

c

Vso

c

Vso

c

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V 40

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tr

Temoins: M id.seul V, 0

0

Temoin: M id. seul0

T 6 moin: M

id. seul 7,0 0

E frais seul A / 20

0

i

II s’agit done ici d’un animal, pr^sentant, k la suite d’une
injection intraveineuse d’une dose d6termin6e de peptones, une
symptomatology morbide analogue 4 celle de l’intoxication
anaphylactique grave.

Le premier tableau nous montre qu’il se produit ici, comme
dans la crise anaphylactique, une reduction du complement
h6molytique; celui-ci, en efFet, a comme limite d’activite 1 /eo
avant l’injection intraveineuse, V 40 durant la crise et Vso aprbs
la mort.

Seulement en examinant le dosage des constituants nous
ne retrouvons plus la diminution pr6pond6rante du M que nous
avons constat£e chez les animaux hypersensibles. Le M, en
effet, ne semble se r6duire ici que d’une faible quantity, alors
que l’E tombe de Vso & 1 / i0 .

Avant de formuler une conclusion quelconque examinons
un cobaye t£moin.

Cobaye b. Histoire.

Cobaye normal pesant environ 350 gr.

20 minutes aprfcs une l re saign^e de 2 c. c. de sang, il rejoit dans la
veine jugulaire exteme 3 c. c. de s 6 rum de cheval chauff 6 k 38°.

Sauf une legfcre acceleration de la respiration, l’animal ne presente
rien de particulier.

Temp, avant: 36.9°, aprfes 37.3°.

La 2 de saign^e est faite aprfcs 30 minutes.

Les serums sont conserves 24 heures a la glaciere.

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348

A. Bessemans,

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Dosage des alexines non encore divis6es.

S£rum avant injection

S6rum 2 dc saign^e

7,0 c

7,o c

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Dosage des con stituan ts.

a) De leur E.

Dose constante de M frais employee: 1 / 80 l ).
Doses d^croisantes de

E avant

E apr&s

1 /

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40

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C

C

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0

0

0

Temoins: E id. seul l / 10 0
M frais seul V l5 0

T£moin: E id. seul 1 / 10 0

b) De leur M.

Dose constante d’E frais employee: Vso*
Doses d^croissantes de

M avant

M aprfes

,7,0 c

7.0 c

7,o c

7/0 c

l Uo C

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7,00 peu

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A 4oo tr

Temoins: M id. seul */ |0 0

T6moin: M id. seul l / 10 0

E frais seul */ 1# 0

Comme on le constate, le cobaye t£moin se comporte k
peu pr£s de la merae fagon que le cobaye intoxiqu6, tant au
point de vue du dosage de l’alexine totale que de celui de
ses deux constituants. Le complement en effet descend de

1) Activity du s£rum frais: 1 / 60 c i / so p c Vioo P eu *

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Contribution k l’4tude de I’anaphylaxie.

349

V40 ^ Vso 5 le M ne subit qu’une trbs faible reduction et l’E
saute du V40 au Vso-

Dans la planche II (p. 350 — 353 ) nous avons resume quelques
unes de nos experiences sur l’intoxication par peptones. Quand
on l’examine avec attention, on voit le fait suivant s’en degager
nettement: il se produit une r6elle reduction du
complement hemolytique durant la crise qui
succbde l’injection intraveineuse de peptones;
cette reduction est d’ordinaire encore plus mar¬
quee dans le sang preiev6 aprbs la mort de l’ani-
mal. Cependant cette diminution ne semble pas
caracteristique de cette intoxication puisque les
animaux t6moins (injectes par voie intraveineuse) 1 a
presentent egalement et & un degre tout aussi
eiev6 (voir cob. b, e, g). Pour ce qui concerne le dosage
des constituants — mis 4 part un seul cas (cob. h) oil nous
avons en une forte diminution du M et de l’E, correspondante
sensiblement k celle du complement — nous n’avons con¬
state que peu ou pas de reduction du M et une
reduction plus forte quoique faible encoredel’E;
cette constatation peut se faire chez les animaux
temoins, aussi bien que chez les cobayes intoxi-

ques 1 )-

Nous n’essayerons pas d’interpreter ces resultats; nous
nous proposons, du reste, de reprendre la question en tra-
vaillant sur d’autres animaux.

Si nous comparons cependant nos experiences sur l’ana-
phylaxie k celles sur l’intoxication par peptones, nous pouvons
affirmer que, malgre la frappante analogie entre la sympto¬
matology des deux etats pathologiques, il semble exister une
difference reelle dans la nature intime des reactions qu’ils
provoquent dans l’organisme. En effet, dans le choc ana-
phylactique on peut mettre en evidence une re¬
duction predominante du M, phenombne que nous
ne sommes pas parvenus k constater dans la crise
de l’intoxication par peptones.

1) Une seule fois nous avons inject^ une solution de peptones dans
la cavit4 abdominale; quelques symptomes d’intoxieation se sont produits
mais le s£rum n’a guere changd de composition (cob. j).

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350

A. Bessemans,

Planche II. R£sum6 d’exp&iences

Histoire des cobayes 1 )

I^ettre de

Moment, voie et

Symptomes et moment des

Panimal

dose de ^injection

2 e et 3 C saignSes

Dosage de l’alcxine totale

avant

pendant

aprfes

mort

2 l A

c. c. solution|Apres 1 min. contractions cloniques,
de peptones 10% I Dyspnee — apnee.
chautfee k38° dans 5 e min.: 2 tle saignee. Mort. Temp, avant
la veine jugul. 10! 37.8°, apr£s 37.5°. Autopsie: poumons

min.

gn6e,

aprfcs

b

temoin

1^ sai-| pales, fortement insuffies; cceur et
veines voisines distendus. Prise de
sang dans lc cceur mis a nu.

i

3 c. c. S(5rum ehaufte Respiration accfleree.
k 38° dans la veinei2 dc saignee aprfcs 30 min. Temp. 36.9°

jugul. 20 min. apres
l re saignee.

avant, 37.3 apres. Survit.

1

c. c. solution de Apr^s 9 min. grattage, inquietude; aprfcs
—I- 29 min. legures contractions cloniques;

apres 45 min. convulsions, soubresauts
— secousses expiratoircs. Temp, avant
38.7°, apres 37.9°.

2 de saignee apres 60 min. Survit.

D6but aprfcs quelques secondes. Con¬
vulsions suivies de paralysie.
veine jugul. 1 heure2rie saignee apr&s 1 min. Mort. Temp.

peptones dans la
veine jugul. 35 min.
apres Ire saign6e.

3 c. c. solution de
peptones dans la

apres Ire saignfe. | avant 39.2°, apr&s 37.2°. Autopsie:

coeur surdistendu, §norme; poumons
ne reviennent guere et pr<$sentent des
hemorrhagies capillaires. Pris sang
dans coeur k nu.

e 4 c. c. s£rum dans Respiration acc£16r£e. Apr£s 30 min.
temoin j veine jugul. 15 min.I quelques contr. cloniques. Temp, avant
I apres l re saignee. I 39°, apres 36°.

'2de saignee aprfes 60 min. Survit.

f

g

temoin

l 1 /, c. c. solution de|Dyspn6e apres 10 min. Agitation,
peptones dans veine 2^e saignee apres 60 min. Temp, avant
jugul. 10 min. apr^si 38.2 u , aprfes 36.3°. Survit.
l rt * saignee. j

2 c. c. e£rum dans Rien. Temp, avant 38.3°. apr^s 37.3°.

veine jugul. 2 nun.
apres l r ^ saignee.

Aprils 70 min.: 2 <ie saignee. Meurt aprfo
85 min. Autopsie: poumons normaux.
Cceur presque vide; vaisseaux r£-
tractfe. Pris sang du coeur.

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1) Tons les cobayes renseign^s dans ce tableau pesaient de 350 k 400 gr. environ-

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Contribution k FStude de /’anaphylaxie.

351

sur l’intoxieation par peptones.

Dosages

Dosage des deux constituants

de l’E

du M

Moment de 1

Dosage du
compl. dont
E et M
servent de

Const,
de M
frais

Doses d£croissantes de

Const.

d’E

frais

Doses d^croissantes de

Pexamen des
alexines

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E durant

E coeur

M avant M durant

M cceur

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Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

352 A. Bessemans, Contribution it l’&ude de l’anaphylaxie.

TTistm’rp Hps pnhnvpc

j

1

Lettre de

Moment, voie et

SymptAmes et moment des

Dosage de Palexine totale

P animal

dose de Pinjeetion

2 e et 3 C saignees

avant

pendant

aprfes

mort

h

3 l /, c. c. solution de

Apr^ 2 min. tombe sur le flanc. Apn£e;

/ 80

V,o»

7,o o

peptones dans veine
jugul. 90 min. apres
l re saign^e.

suffocation apr&s 3 min.

Apres 4 min.: 2 dc saignee. Meurt. Temp,
avont 38.2°, apres 36.8°. Autopsie:
coeur tres dilate; poumons p&les ne
revenant nullement. Pris sang du
coeur.

V. oo peu

t/no 0

V,o o

7,o o

i

i

1

I 1 /, c. c. solution de
peptones dans veine
jugul. 8 min. apr&s
Ire saign^e.

Aprfes 10 min. troubles respiratoires.
JPar^sie des membres post^rieurs. Se-
cousses expiratoires.

Apres 40 min.: 2 de saignee. Survit.

VlJpeu

l ‘r i

7.00 peu

j

4 c. c. solution de
peptones dans ptfri-
toine 20 min. apres
l re saignee.

Aprfo 20 min. grattage.

2 ( fe saign6e aprfcs 90 min. Temp, avant
38.6°, apr&s 37.2°. Mort d’h^mor-
rhagie. Autopsie: rien de special.
Encore 1 c. c. de liq. de p^ritoine.

% c
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v ' 00 o

/140 W

Zusammenfassung.

Es ergibt sich im Verlauf der anaphylaktischen Krise eine
Abnahme des Alexins. Diese Verringerung beeinfluBtbesonders
das Mittelstflck, eine Tatsache, welche die AnnBherung des
innersten Verh&ltnisses der anaphylaktischen Krise mit der
Erscheinung der Komplementablenkung bedingt.

Im Verlaufe der Peptonvergiftung geht ebenfalls eine
Verringerung des Komplementes vor sich; diese ist jedoch
nicht auf denselben ProzeB zurOckzufflhren. Denn wenn man
sie naher betrachtet, l&Bt sich feststellen, daB dieselbe sich
nicht nach demselben Schema ergibt wie die durch Anaphylaxie
verursachte; in der Tat bezieht sich die Abnahme auf beide
Bestandteile des Alexins, w&hrend sie sich vorzugsweise im
Endstiick BuBert.

Nos sincfcres remerc^nents it Monsieur le Prof. R. Bruynoghe pour
son aide desinteressce et ses precieux conseils.

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■V Google

Original fro m

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

M. Isabolinsky, Salvarean bei Milzbrand und Wut.

353

Dosages

Dosage des deux constituants

J bCI llall|UCa

de l’E

dll M

Moment de

Dosage du
compl. dont
E et M
servent de

Const,
do M
frais

Doses deeroissantes de

Const.

d’E

Doses decroissantes de

l’examen des
alexines

E avant E durantj E cceur

frais

M avant M durant] M cceur

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Nachdruck verboten.

[Aus dem Bakteriologischen Institut zu Smolensk.]

Salrarsan bei Milzbrand und Wut.

Von Dr. M. Isabolinsky.

(Eingeg&ngen bei der Red&ktion am 4. Februar 1913.)

Seitdem das Salvarsan nicht nur bei Syphilis, sondern
auch experimentell bei anderen Spirillosen und Trypanosomen-
erkrankungen mit Erfolg angewandt war, w&chst das Interesse
fflr dieses PrSparat aufierordentlich und regt die Forscher zu
neuen Experimenten an. Es ist der Wunsch seitens einiger
Forscher, die chemotherapeutische Wirkung des Salvarsans bei
vielen akuten Infektionskrankheiten, wo die Serotherapie noch
fehlt oder keine befriedigende Resultate gibt, nachzuprflfen,
ganz begreiflich. Bisher sind einzelne Ffille bekannt, wo das

Zdtichr. f. ImmunlliUfonchuDj. Orig. Bd. XVU. 24

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

354

M. Isabolinsky,

Salvarsan bei schwer verlaufenden akuten Infektion skrank-
heiten einen auBerordendlichen Effekt hervorrief. Die F&lle
sind aber nicht zahlreich, es sind im Gegeoteil F&lle bekannt,
wo das Mittel versagte. Neuerdings warden gflnstige Resultate
von Anwendung des Salvarsans bei Milzbrand und Schweine-
rotlauf veroffentlicht.

Zuerst hat Becker einen Fall von volliger Heilung von Milzbrand-
sepsis beim Menschen nach intravenoser Infusion von 0,6 g Salvarsan be-
richtet. Diese Beobachtung veranlafite viele Forscher eine ganze Reihe
von Tierversuchen anzusteilen, um entscheiden zu konnen, ob das Salvarsan
imstande sei, das Tier gegen eine todliche Milzbranddosis zu schiitzen.

Schuster war der erste, dem es gelungen ist, Kaninchen gegen tod¬
liche Milzbranddosen zu retten, aber nur in den Fiillen, wo gleichzeitig mit
der Milzbrandinfektion eine intravenose Salvarsaninfusion von 0,04 pro Kilo
vorgenommen war. Nur in einem Fall, wo die Salvarsan in jektion sogar
12 Stunden nach der Infektion erfolgte, wurde das Kaninchen vora Tode
gerettet. Gleichzeitig und unabhangig von Schuster stellten Lauben-
heimer und Bettmann, nachdem sie vollige Heilung von 2 Hautmilz-
brandfiillen beim Menschen durch 0,3 g und 0,4 g Salvarsaninfusion er-
zielt hatten, an Meerschweinchen Versuche an. Die genannten Autoren
infizierten Meerschweinchen mit todlichen Milzbranddosen, nachdem inji-
zierten sie ihnen nach bestimmten Zeitraumen 0,1 g Salvarsan pro Kilo.
Diese Versuche haben gezeigt, da0 man die Meerschweinchen nur dann
vom Tode retten konnte, wenn das Salvarsan nicht spater als 20 Minuten
nach der Infektion einverleibt wird. Doch wurden auch einige Tiere,
denen das Salvarsan sogar 6 Stunden nach der Infektion eingefiihrt war,
gerettet. Aehnliehe Versuche wurden vor kurzem von Bierbaum im
Ehrlichschen Institut angestellt. Aus diesen Versuchen ist ersichtlich,
daB die Einfiihrung von 0,1 g pro Kilo Gewicht einer alkalischen Salvarsan-
losung die Meerschweinchen nur dann zu schiitzen vermag, wenn das Sal¬
varsan sofort nach der Infektion eingefiihrt wird. Wenigcr wiinschenswerte
Resultate bekam Bierbaum, wenn er das Salvarsan 2—4 Stunden nach
der Infektion einverleibte.

In solehen Fallen konnte man die Meerschweinchen noch retten, wenn
gleichzeitig mit dem Salvarsan intraperitoneal 3 ccm von Milzbrandheil-
serum eingefiihrt wird. Sehr giinstige Resultate bekam er bei Anwendung
des Salvarsans an Miiusen, die mittels Schweinerotlauf infiziert waren.
Diese Beobaehtungen veranlafiten mich, eine Reihe von Versuchen anzu-
stcllen, um bei exi>erimentellem Milzbrand der Kaninchen das Salvarsan
anzuwenden. Gleichzeitig priifte ich noch die Salvarsanwirkung bei experi-
menteller Kaninchenwut.

1. Milzbrand.

Bei der Untersuchung gebrauchte ich 2 Milzbrandbouillonkulturen.
Die subkutane In jektion von 0,5 ccm einer hochvirulenten Kultur totete

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Salvarsan bei Milzbrand und Wut.

355

das Kaninchen nach 36 Stunden; die subkutane Injektion von 0,5 ccm
einer durch mehrfache Ueberimpfungen auf kiinstlichen Nahrbbden abge-
schwachten Kultur totete das Kaninchen nach 76 Stunden.

Die SalvarsanlSsung bereitete ich, indern ich 0,6 g Salvarsan in
30—40 ccm destillierten Wassers ohne Schiitteln mit Glasperlen loste, dann
bis 100 ccm Waeser hinzusetzte und 3,6 ccm Normalnatronlauge beifiigte.
Die Losung war gelblich, vollig durchsichtig. Manchmal hellte sich die
Losung nach Hinzufiigen von 3,6 ccm Natron nicht auf, es geniigten aber
einige Tropfen |der Natronlauge, um eine vollstandige Aufhellung zu er-
zielen. Aus dieser alkalischen Losung injizierte ich, ohne sie zu erwarmen,
den Kaninchen in die Ohrvene je 10 ccm pro Kilo Gewicht, was 0,06 g
reinen Salvarsans entspricht.

Die ersten Versuche bestanden darin, daB ich durch sub-
kutane Injektionen von 0,5 ccm reiner Milzbrandbouillonkultur
die Kaninchen infizierte und dann nach gewissen Zeitintervallen,
die 20 Stunden nicht flberschreiten, ihnen intraven6se Salvar-
saninfusionen machte.

Tabelle I.

-4->

C

5,0

Zeit der 1 Zeit der
Milz- Sal-

brand- varsan-

infektion infusion

Mengeder

Salvars.-

losung

ccm

Menge des
reinen
Sal¬
varsans

!

Resultat

1 1200i

2 |l400

3 1 750i

4 ! 950

5 j 850

6 1450

17. X. l h m. 18. X. 8“ m.
17. X. 2 b m. dgl.

dgl. 18. X. 10 h m.

17. X. 3 h m.j dgl.

17. X. 4 b m.,l8. X. 8“ m.|
dgl. Kontr

ii

9

10

8,5

olle

0,072

01082

0,054

0,066

0.051

fnach 38 Std.
fnach 39 Std.
dgl.

t wiihrend der Infus.
f nach 37 Std.
t nach 36 Std.

Aus der obigen Tabelle sehen wir, daB alle Kaninchen
zugrunde gingen. Aus dem Herzblute der verendeten Tiere
bekam ich eine reine Milzbrandkultur. Ich muB noch hinzu-
ftigen, daB die Salvarsaninfusion in dem Moment gemacht
worden ist, als an der Injektionsstelle ein ausgesprochenes
Oedem mit reichem Milzbrandbacillengehalt zu beobachten war;
im Blute werden keine Bacillen gefunden. Die Tatsache, daB
die Versuchskaninchen etwas spater zugrunde gingen als das
Kontrolltier, kann noch vorlfiufig keine Veranlassung zu einer
bestimmten SchluBfolgerung geben.

Im folgenden Versuch ist die Dauer zwischen der In-
fektion und Salvarsaninfusion kurzer.

24*

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M. 1 3 a b o I i n s k y,

.'556

Tabelle II.

A l!l J Zeit dor
'S c Milzbrand-

•2 - | infektion

Zeit der
Salvarsan-
infusion

Men ge der
Salvars.-
losung
ccm

Men ge des
reinen
Sal¬
varsans

Resultat

1 *1270*31. X. 8 h m.

31. X. 7 b a.

12,7

13

0,076

t nach 38 Std.

2 1-500131. X. 10” m.

dgl.

0,078

t nach 44 Std.

3 11320 31. X.ll- m.

?♦

13

0,078

t nach 53 Std.

4 1400 31. X. l h m.

1 >»

14

0,082

f nach 63 Std.

’ 5 1 920 31. X. 3“ m.

1

9

0.054

■ t nac ^ 60 Std.

6 1470 31. X. 5 b m.

' 14,7

0.088

lebt

7 1120 1. XI. 7" a.

1. XI. 7- a.

■ 11

; 0,066

lebt

8 1000 1. XI. 8 h a.

1 1. XI. 10” a.

10

0,006

lebt

9 12K) 1. XI. 9 h a.

| dgl.

12

1 0.072

lebt

10 litoo 1. XI. 10»a.

!

10

! 0,006

!

1 lebt

11 ,1120 31. X. 8 b a.

Kontrolle

| f nach 37 Std.

Die Ergebnisse dieser Versuchsreihe zeigen, daB das
Salvarsan die Tiere nur dann gegen die todliche Milzbrandosis
schtitzen kann, wenn es nicht spater als 2 Stunden nach der
Infektion einverleibt wird. Wird Salvarsan sp&ter infundiert,
so ist es nur imstande, den Tod zu verzogern.

Aus dem Herzblute vou 5 verendeten Kaninchen bekam
ich eine Milzbrandreinkultur. Was die am Leben gebliebenen
Kaninchen anbetrifft, so ist zu bemerken, daB an den In-
jektionsstellen der Milzbrandkultur ein geringftigiges Oedem
sich bildete, in dessen Inhalt ich die ersten Tage Splitter
von Bacillen fand, sp&ter aber volligen Zerfall wohl moglich,
daB es sich um die Wirkung des Salvarsans handelt, das
bakterizide Eigenschaften besitzt. Die Mehrzahl der am Leben
gebliebenen Tiere zeigte ein Krankheitsbild, das sich durch
Apathie, Appetitlosigkeit, Durchfall und SpeichelfluB auBerte.

Nach 3—4 Tagen verschwinden gewohnlich diese Er-
scheinungen, die Oedeme gehen zuriick und die Tiere erholen
sich vollstandig. Drei dieser Kaninchen waren nach 6 Wochen
mittels einer abgeschwachten Milzbrandkultur nochmals infi-
ziert ( 0,5 ccm toteten das Kaninchen nach 72 Stunden), zwei
dieser Kaninchen gingen nur nach 7 Tagen an Milzbrand zu-
grunde; ein Kaninchen blieb am Leben.

Auf Grund dieser Beobachtung ist es selbstverst&ndlich
schwer, bestimint von einer akquirierten Resistenz oder etwa
einer aktiven Immunity des Kaninchens zu sprechen. Es

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Salvarsan bei Milzbrand und Wut.

357

steht noch die Frage offen, ob es sich um die chemothera-
peutische Wirkung des Salvarsans selbst handelt Oder das
Salvarsan nur einen Reiz dem Organismus zu einer grdBeren
Antikorperproduktion gibt. Die Losung dieser Frage soil die
Bedeutung der Immunitat bei Milzbrandtieren, denen Salvar¬
san einverleibt wird, aufkl&ren.

In den weiteren Versuchen stellte ich mir die Aufgabe,
die Wirkung des Salvarsans bei intravenoser Milzbrandinfektion
der Kaninchen nachzuprtlfen. Zur Versuchsanstellung ge-
brauchte ich eine abgeschw&chte Milzbrandkultur (0,3 ccra toten
bei intravenoser Infektion das Kaninchen nach 72 Stunden).

Tabelle III.

e ; ^

O vr

.a ^
* §■ la
•h:o

Zeit der
Milzbrand¬
infektion

Zeit der
Salvarsan-
in fusion

Menge der
Salvars.-
Losung
ccm

Menge des
remen
Sal-
yarsans

Resultat

!

1 1 1750

2 jmo

3 ; 14:10

4 i i:if)0

5 1500

2. XI. 9 h a.
2. XI. 5 h a.
2. XI. 9 1 ' a.
2. XI. 0 h a.

! dgl.

2. XI. 10 h a. j 17.5

2. XI. 6 h a. 1 U.5

2. XI. 9” a. ; 14,0

2. XI. 6 h a. ; 13,5

Kontrolle

1 0,12
: o.osi
0.082
0,081

jt nach 78Std.
t nach72Std.
lebt
lebt

if nach 70Std.

Aus der oben angegebenen Tabelle ist es ersichtlich, daB
bei intravenoser Infektion das Salvarsan nur dann imstande
ist. die Kaninchen vom Tode zu schutzen, wenn die Salvarsan-
infusion nicht spater als 10—15 Minuten nach der Infektion
erfolgt. Wenn die Infusion 1 Stunde nach der Infektion er-
folgt, dann ist kein Effekt zu beobachten — das Tier geht
zugrunde.

Ganz gfinstige Resultate habe ich bei kombinierter Heilung
der Milzbrandinfektion der Kaninchen mittels Salvarsan und
Milzbrandheilserum bekommen. Das von mir gebrauchte Serum
stammt aus dem hiesigen bakteriologischen Institut und besitzt
groBe Aktivitat: 2 ccm desselben schutzen bei intravenoser
Injektion, die 15—20 Minuten nach der subkutanen todlichen
Milzbranddosisinfektion erfolgt, das Kaninchen vom Tode.

Die Kaninchen wurden subkutan mittels 0,5 ccm einer
Milzbrandbouillonkultur infiziert und bekamen dann nach ge-
wissen Zeitintervallen Injektionen von Salvarsan und dem
oben erwahnten Heilserum.

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358

M. Isabolinsky,

Tabelle IV.

s

•s

.5

c

cU

1«
1 c

Zeit der
Milzbrand-
infektion

Zeit der
Salvarsan-
in fusion

Menge

der

Salvars.-

Losung

ccm

Menge

des

reinen

Sal-

varsans

Menge des
Milzbrand¬
heil¬
serum s

ccm

Resultat

i

1430 6. XII. 2 k m.

6. XII. 6“ a.

14,5

0,087

2

debt

2

16306. XII. l h m.

dgl.

16,5

0,1

3

llebt

3

1700 6. XII. 11“ m.

!J

17,0

0,1

3

'lebt

4

1500 6. XII. 9 b m.

JJ

15,0

0,09

3

!fn.73Btd.

5

1400 6. XII. 11“ m.

.

3

tn.56Std.

6

1500 6. XII. 2 b m.

Kontrolle

!

|tn.38Std.

Diese Versuche zeigen, daB sogar nach 7 Stunden, wenn
das Salvarsan oder das Serum allein ftir sich keine Wirkung
Sufiern, die gleichzeitige Anwendung beider Mittel die Ka-
ninchen vom Tode rettet. Eine Shnliche Beobachtung machte
vor kurzem Bierbaum. Diese Beobachtung verdient grofie
Aufmerksamkeit, da sie uns Hoffnung schafft, spate und
schwere Milzbrandinfektionen beim Menschen mit Erfolg zu
heilen. Das letzte Wort muB meiner Meinung nach der Klinik
gehoren, die jetzt mit vollem Recht die Resultate des Ex-
perimentes verwerten kann.

Vor kurzem sind zwei interessante Arbeiten von Roos
und Reiter veroffentlicht worden. Auf Grund zahlreicher
Versuche beweisen die Verfasser, daB das Salvarsan bakterizide
Eigenschaften gegenuber dem Milzbrandbacillus in vitro wie
auch in vivo besitzt. Wenn diese Schliisse noch weitere Be-
statigung finden, so wird man vielleicht die Verinutung, daB
das Praparat nur einen Reiz zur Ausarbeitung von Schutz-
stoffen gibt, aufgeben miissen und annehmen, daB es allein
ftir sich bakterizid wirkt.

In dieser Hinsicht habe ich eine Reihe von Versuchen
angestellt, deren Resultate hoffe ich in nSchster Zeit mitteilen
zu konnen. Auf Grund meiner Versuche komme ich zu dem
Schlusse, daB das Salvarsan ohne Zweif^l thera-
peutische Eigenschaften in bezug auf die Milz-
bran dinfektion bei Kaninchen besitzt. Am besten
ist der therapeutische Effekt bei gleichzeitiger
Anwendung von Salvarsan und dem spezifischen
Milzbrandheilserum.

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Salvarsan bei Milzbrand und Wut.

359

Ich wiederhole noch einmal, daB bei schweren Milzbrand-
infektionen beim Menschen die kombinierte Therapie notwendig
ist. Die Tatsache, daB der Mensch weniger empfindlich gegen
Milzbrand ist, und andererseits, daB das Salvarsan beim Men¬
schen ein kr&ftigeres Heilmittel ist als beim Kaninchen, muB
uns Hoffnung erwecken, beim Menschen einen ausgepr&gten
Effekt zu erwarten.

n. wut.

Der von Ton in verbffentlichte Fall von Heilung von Wut
bei einem M&dchen nach 0,3 Salvarsaninfusion veranlaBte mich,
die Wirkung des Salvarsans bei experimenteller Kaninchenwut
nachzupriifen.

Zuerst stellte ich mir die Aufgabe, aufzukl&ren, ob das
Salvarsan imstande ist, die schon ausgebrochenen Krankheits-
erscheinungen bei den mit dem Virus fixe infizierten Kaninchen
zum Stillstand zu bringen.

Zu diesem Zwecke wurde eine ganze Reihe von Kaninchen
subdural mittels Hirnemulsion eines Kaninchens, das am
7. Tage an experimenteller Wut zugrunde ging, injiziert. Am
5. Tage, als sich die ersten Krankheitserscheinungen SuBerten,
wurde eine intravenose Injektion von 0,08 pro Kilo einer
alkalischen Salvarsanlosung vorgenommen. Die Krankheit
entwickelte sich aber auf dem gewohnlichen Wege und die
Kaninchen verendeten, wie gewohnlich, am 7. Tage. Die
Sektion ergab das gewohnliche pathologisch-anatomische Bild
der Wut.

In der Vermutung, daB das Salvarsan zu spfit infundiert
war, injizierte ich einer anderen Kaninchenreihe das Salvarsan
3 Tage nach der Infektion mit dem Virus fixe. Auch in diesem
Falle erkrankten die Kaninchen, wie gewohnlich, am 5. Tage
und gingen am 7. Tage unter Erscheinungen von paralytischer
Wut zugrunde.

Endlich war einer dritten Kaninchenserie das Salvarsan
am Tage der Infektion mit dem Virus fixe intravenos infundiert
mit ebenfalls negativem Resultot.

Aus diesen Versuchen sehen wir, daB das Salvarsan
weder zu schiitzen noch die Entwickelung der
experimentellen Wut aufzuheben imstande ist.

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360 M. Isabolinsky, Salvarsan bei Milzbrand und Wut.

Urn so weniger kfinnte das Salvarsan bei Men-
schenwut helfen. Tonins Fall kann wahrscheinlich als
ein Zufall betrachtet werden und kann kaum, wie auch viele
andere einzelne Beobachtungen fiber die gfinstige Salvarsan-
wirkung bei vielen Infektionskrankheiten, eine praktische Be-
deutung haben.

Zusammenfassung.

1) Das Salvarsan besitzt ohne Zweifel therapeutische
Eigenschaften bei Infektion der Kaninchen mit todlichen Milz-
branddosen.

2) Der therapeutische Effekt des Salvarsans ist bedeutend
starker bei gleichzeitiger Anwendung des spezifischen Milz-
brandheilserums.

3) Die Versuche anderer Autoren wie auch die Meinungen
zeigen, daB in alien schweren Milzbrandinfektionen beira
Menschen auch das Salvarsan zur Therapie zugezogen werden
mufi.

4) Bei Wut besitzt das Salvarsan weder prophylaktische
noch therapeutische Wirkung.

Literatnr.

Schuster, Miinch. med. Wochenschr., 1912, No. 7.

Laubenheimer, Dtsche med. Wochenschr., 1912, No. 8.

Bettmann, Deutsche med. Wochenschr.

Becker, Med. Klinik, 1912, No. 44.

Bier bau m, Deutsche med. Wochenschr., 1912, No. 43.

Reiter, Zeitschr. f. Immunitiitsf. u. exp. Ther., Bd. 15, H. 2/3.

Roos, Zeitschr. f. Immunitiitsf. u. exp. Ther., Bd. 15, H. 6.

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Armand-Delille et Launoy, A propos dea travaux r6cents etc. 361

Nachdruck verboten.

A propos des travaux rgcente de MM. Bernstein et Kaliski
snr les h^maties formoldes.

Par MM. P. Armand-Delille et L. Launoy.

Nous avons apport6 k la Soci6t6 de Biologie, le 2 juillet
1910, les r£sultats de nos recherches, faites dans le labora-
toire de M. Delezenne, k l’lnstitut Pasteur, sur la stabili¬
sation des h6maties par des doses minimes de formol 1 ). Le
detail de notre travail a 4t4 public dans les Annales de l’ln-
stitut Pasteur, en mars 1911 2 ).

Nous venous d’avoir connaissance de deux travaux, l’un
de M. Bernstein et Kaliski, public dans le Zeitschrift
ffir ImmunitStsforschung de juin 1912 3 ), dans lequel ces auteurs
s’expriment ainsi:

„We conceived the idea that by utilizing a substance
which would sterilize and preserve the blood and perhaps also
render the corpuscles more refractory to dissolution without
interfering with hemolysis or fixation of complement we would
have a method of distinct value to laboratory workers. This
was our aim in conducting the following experiments.

The first problem concerned itself with the question
whether formalin when added to sheep-cells #ould influence
the result of the Wassermann reaction.* 4

1) Stabilisation des globules rouges par les solutions trfcs dilutes de
formol, par P. Armand-Delille et L. Launoy, Soci6t4 de Biologie,
1910, T. 2, p. 40 (2 juillet).

2) Etude sur la stabilisation des globules rouges des mammifferes (du
mouton en particulier) par les solutions trfes dilutes de formol, par P.
Armand-Delille et L. Launoy, Annales de l’lnstitut Pasteur, T. 25,
p. 222, mars 1911.

3) The use of formalinized sheep cells in complement fixation tests

by E. P. Bernstein and David J. Kaliski, Zeitschr. f. Immunitiitsf.,
Bd. 13, Heft 5, p. 490, 22 juin 1912.

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362 Armand-Delille et Launoy, A propoe des travaux r£cents etc.

Or ces auteurs partent du meme point de vue que nous
et aboutissent k des r£sultats absolument identiques, sur les
globules de mouton, test que nous avions 6galement choisi.

Nous sommes surpris que ces auteurs n’aient pas pris
8oin de faire la bibliographic de la question; ils publient
comme originales des experiences qui ont 6t6 enti&rement
faites par nous deux ans auparavant.

Krommanntche Buchdruckerei (Hermann Pohle) in Jena. — 4273

ty Google

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Mschiift f Immiitiitskschimg. Original! Bd. UHL la 4

Nachdruek verboten.

[Aus der Prosektur des k. k. Wilhelminenspi tales in Wien.]

Ueber die bindenden und immunlsierenden Substanzen
der roten Blutkbrperchen.

II. Mitteilung fiber Blutantigene 1 ).

Von Karl Landsteiner und Emil Prasek.

(Eingegangen bei der Redaktion am 6. Februar 1913.)

I. Einwirknng von S&uren und Bason anf Stromata.

In Fortsetzung unserer vorhergehenden Untersuchung
haben wir die Einwirkung von S&uren und Basen auf das
Bindungsvermfigen der Biutstromata geprfift.

Je 5 ccm der ebenso wie friiher bereiteten Stromata wurden mit einem
gleichen Volumen Normal- bzw. Zehntelnormal-Salzsaure und Natron-
lauge zusammengebracht, 24 Stunden bei Zimmertemperatur gelassen, dann
genau neutralisiert, abzentrifugiert, auf das urspriingliche Volumen gebracht.
Verluste an fester Substanz, die im Verlauf der Manipulationen eintraten,
wurden nicht beriicksichtigt.

Das Aussehen der einzelnen Proben bei einem Versuch mit Pferde-
stromata war das folgende:

n/ 10 HC1: partiell gelbst, die Fliissigkeit triibe, schmutzig braun; beim
Neutralisieren entsteht ein flockiger Niederschlag.

n. HC1: Fliissigkeit mit feinverteiltem, schwer sedimentierendem
Niederschlag.

n/ lo NaOH: Stromata gelbst, Fliissigkeit braun, etwas triibe; nach
der Neutralisation grobilockiger brauner Niederschlag.

n. NaOH: gelbst, beim Neutralisieren grobflockiger Niederschlag.

JBezuglich der Einzelheiten der Versuchsanordnung vgl. die friihere
Mitteilung.

1,5 ccm ‘/ Abrin + 0,3 ccm Pferdestromata

1,5 „ '/lo Crotin -f 0,3 „ Schweinestromata

Abrin

Crotin

Kontrolle

64

32

Stromata

2

2

1 n/,„ HC1

4

_

Behandelt mit j ^LoH

< 2

4

4

4

(n.kaOH

16

16

1) Siehe die I. Mitteilung, diese Zeitschr., Bd. 13, 1912, p. 403.

Zeitachr. f. Immnnitltsforschung. Orif. Bd. XVII. 25

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364

Karl Landeteiner und Emil Praiek,

2,5 ccm V,o Hflhnereerum inaktiv + 0,25 ccm Pferde- reap. Kaninchen-
stromata.

Abrin

Crotin

Kontrolle

48

128

j

1 Stromata

2

64

Pferdeblut \

n. HCl-Stromata

3

128

| n. NaOH-Stromata

6

128

[ Stromata

8

8

Kaninchenblut ■

n. HCl-Stromata

12

12

[ n. NaOH-Stromata

16

16

Titriert fiir

Titriert fiir

Pferdeblut

Kaninchenblut

1,5 ccm ‘/s inaktiviertea normalea Kaninchenserum (= KNS) reap.
1 l t00 Immunpferdeagglutinin (Lysin) vom Kaninchen (= IS) + 0,5 ccm
Pferdestromata. (Bei Lyse Zusatz von Meerech weinchenkomplement. Ab-
lesung nach 35 Minuten.)

Agglutination.

KNS I

KNS II

IS

Kontrolle

16

8

48

( Stromata

4

2

4

] n/„ HCl-8tromata

1

—

16

Aus Pferdeblut j n. HCl-Stromata

4

2

8

I n/y, NaOH-Stromata

8

—

32

' n. NaOH-Stromata

4

4

48

Lyse (IS).

Kontrolle

64

n. HCl-Stromata

8

Stromata

2

n/ lfi NaOH-Stromata

16

n/ l0 HCl-Stromata

8

n. NaOH-Stromata

24

2 ccm Vmj Arachnolysin + 0,2 ccm
Kanin chen stromata

Kontrolle

Stromata

n/joHCl-Stromata
n. HCl-Stromata
n/,o NaOH-Stromata
n. NaOH-Stromata

16

2

4

8

16

16

Titriert fiir
Kaninchenblut

1 ccm 0,2 # / 0# Histon + 0,05 ccm
Pferdeatromata

Kontrolle
Stromata
n. HCl-Stromata
n/ 1# NaOH-Stromata
n. NaOH-Stromata

16

6

e

6

1

Titriert fiir
Pferdeblut

Die V ersuche ergeben Obereinstimmend mit unseren frflheren
Erfahrungen eine recht betr&chtliche Resistenz der bindenden
Stoffe 1 ). Dabei ist im allgeraeinen die sch&digende Wirkung

1) Vgl. Landsteiner in Oppenheimer, Handbucb der Bioch.,
Bd. 2, 1009, p. 427.

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Bindende u. immunisierende Subs tan zen der roten Blutkdrperchen. 365

der Lauge bei gleicher Konzentration eine groBere als die
der SSure. Eine weitergeheDde, znr Zerlegung der Stromata
fQhrende Einwirkung der S&ure nnd Lauge und eine Prfifung
des Immunisierungsvermdgens wurde nicht vorgenommen.

Was das Verhalten der ver&nderten Stromata gegentlber
verschiedenen Agglntininen und Lysinen anlangt, so zeigten
sich wieder ganz Ehnliche Verh&ltnisse, wie wir sie in der
frOheren Mitteilung beschrieben haben, so daB den gefundenen
Unterschieden wohl eine generelle Bedeutung zukommt.

II. Einwirkung von Salpeter- nnd salpetriger SEnre.

Von besonderem Interesse war es, die Einwirkung von
salpetriger und Salpetersaure auf Blutstromata zu unter-
suchen, da Oberraayer nnd Pick 1 ) durch diese Agentien
merkwflrdige Veranderungen der Antigeneigenschaften von
EiweiBkSrpern erhielten. Diese Autoren fanden bekannt-
lich, daB durch Nitrierung, Diazotierung und Jodierung von
EiweiB dessen Artspezifitat verloren gehe und dafOr eine
neue, nur von dem betreffenden chemischen Eingriff abhangige
Spezifizitat entstehe, so daB ein AntinitroeiweiB auf die ver-
schiedensten nitrierten Proteine prazipitierend wirkt. Dem-
gemaB konnte an die Mdglichkeit gedacht werden, auch durch
Nitrierung von Stromata eine Beeintlussung der Artspezifizitat
zu bewirken.

Wir immunisierten Kaninchen mit Stromata, die durch
HN0 8 in verschiedenen Konzentrationen und dnrch HNO, ver-
andert waren.

1) Scharf abzentrifugierte Pferdestromata wurden mit einem Volumen
(auf das urspriingliche Blutvolumen bezogen) fiinffach-normaler HNO s bei
Zimmertemperatur zusammengebracht und 24 Stunden im Eiskasten Btehen
gelassen, dann neutralisiert, abzentrifugiert, gewaschen und auf das ur-
spriingliche Volumen gebracht (Stromata griinlichgelb).

2) Die scharf abzentrifugierten Stromata wurden unter Hamstoffzusatz
(s. Obermayer und Pick) in das 3-fache Volumen eisgekuhlter, kon-
zentrierter HN0 8 (10,5-norraal) eingetragen, 1 Stunde bei Zimmertempe¬
ratur stehen gelassen, durch Eintragen yon Eis und Wasser ausgefallt,

1) Wien. klin. Wochenschr., 1906, No. 12. — Pick, Biochemie der
Antigene. Jena, G. Fischer, 1912. Handb. d. pathog. Mikroorg. yon Kolle-
Wassermann, 2. Aufl.

25*

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366 Karl Landeteiner und Emil PraSek,

abzentrifugiert, neutralisiert, gewaschen, auf das urspriingliche Volumen
gebracht (Stromata griinlichgelb).

3) Ebenso, 20 Stunden bei Zimmertemperatur digeriert (Stromata
griinlichgelb).

4) MSglichst Bcharf abzentrifugierte Stromata wurden gekuhlt and in
das doppelte Volumen in einer Kaltemischung gekuhlter roter rauchender
HNO, langsam unter gutem Umriihren eingetragen. Die Stromata Ibsen
sich vollstandig. Die Lfeung wurde 20 Stunden in Eiskochsalzmischung
aufbewahrt, mit Eis und Wasser ausgefallt, abzentrifugiert, neutraliaiert,
gewaschen, auf das urspriingliche Volumen gebracht (Stromata orangegelb).

5) Eintragen in das 10-fache Volumen einer 2-proz. NaNO,-L5sung,
der genugend HC1 zugesetzt ist, um alle HNO, freizumachen. Digestion
24 Stunden bei Zimmertemperatur. Die Stromata wurden abzentrifugiert,
neutralisiert, gewaschen, auf das urspriingliche Volumen gebracht (Farbe
der Stromata schmutzigbraun).

Die Immunisierung wurde mit denselben Men gen und in denselben
Zeitabstanden wie in der I. Mitteilung ausgefiihrt, ebenso die Titration (bei
Lyse mit 1,5 Tropfen Meerschweinchenkompiement, Ablesung nach 1 Stunde
bei 37°).

“ '

Vor der

Nach der

Immunisierung

Immunisierung

No.

Immunisierung

Aggluti¬

nation

Lysis

Aggluti¬

nation

Lysis

337

338

339

1 5-fach Normal- 1
r HNO, nach 1) j

10

20

10

20

10

40

320

160

320

320

80

160

374

1 Konzentr. HNO. f

10

10

20

20

275

/ l k nach 2) \

80

80

80

80

373

1 Konzentr. HNO, /

10

20

30

40

377

/ 20* nach 3) \

20

20

80

40

326

J HNO, nach 5) J

<10

<10

320

320

327

10

20

160

40

328

20

40

160

80

Nach den angefQhrten Zahlen war die immunisierende
Wirkung der mit 5-fach norraaler HN0 8 behandelten Stromata
noch erhalten, wenn auch abgeschw&cht 1 ). Die entstandenen
Lysine und Agglutinine hatten einen spezifischen Charakter,
denn bei der Prflfung auf Agglutination und Lyse mit Meer-
schweinchen-, Schweine-, Hammel- und Hdhnerblut wirkten die

1) Siehe die wegen der iibereinstimmenden Art der Immunisierung
vergleichbare Tabelle unserer I. Mitteilung p. 417.

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Bindende u. immunisierende Subetanzen der roten BiutkOrperchen. 367

Sera nach der Immunisierung zwar zura Teil etwas starker als
vorher, aber die Verstftrkung war betr&chtlich geringer als bei
der Prflfung mit Pferdeblut.

Die Einwirknng von konzentrierter HN0 8 (Verfahren 2,
3 und 4) ver&nderte die Stromata so stark, dafi sich bei je
zwei Kaninchen die Entstehung spezifischer AntikOrper nicht
mehr sicher nachweisen liefi. Zwar war der Agglutinin- und
Lysintiter bei 3 von den Tieren auf das 2—4-fache gestiegen,
aber auch bei der Prflfung mit Schweineblut zeigte sicb eine
fthnliche Steigerung des Agglutininwertes wie gegenfiber dem
Pferdeblut.

Die Immunisierung mit HN0 2 -Stromata gab bei 2Immuni-
sierungsversuchen mit je 3 Tieren nicht ganz flbereinstimmende
Resultate, da bei der einen Gruppe von Tieren nur eine sehr
geringe Steigerung des Titers fflr Pferdeblut eintrat, die beim
Vergleich mit der Wirkung auf andere Blutarten sich nicht als
sicher spezifisch erwies, w&hrend bei den Tieren der II. Serie
(s.Tabelle) eine spezifische Titerzunahme erfolgte, die allerdings
noch ein wenig hinter der bei der Immunisierung mit HNO s -
Stromata (No. 1) erreichten zurflckblieb. Eine wesentliche
Steigerung der Isoagglutinin wirkung Oder das Auftreten von
Isolysinen war weder bei der Immunisierung mit HNO s -
noch HN0 2 -Stromata nachweisbar. Auch bei der Immuni¬
sierung je eines Kaninchens mit Stromata aus seinem eigenen
Blute, die mit HNO s (wie bei 1 und 4) und mit HN0 2 (wie
bei 5) behandelt waren, war eine deutliche Steigerung des
Isoagglutiningehaltes Oder ein Auftreten von Isolysinen nicht
zu bemerken.

Bei der Immunisierung von Kaninchen mit den Stromata aus
eigenem Blut, und zwar unveranderten, gekochten, mit Alkohol oder
Formaldehyd behandelten (je 1 Tier; Preparation der Stromata wie in
der I. Mitteilung) entstanden eben falls keine Isolysine. Die Isoagglutinine
waren etwas vermehrt (auf das 2—3-fache), ebenso auch die Agglutinine
fiir Meerschweinchen- und Pferdeblut.

Unsere Versuche zeigen, dafi durch Behandlung mit
HNO s oder HNO* die spezifische Antigen wirkung der Blut-
stromata je nach der Konzentration verloren geht oder abge-
schwficht wird. Es bleibt unentschieden, ob dieser Effekt durch

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368

Karl Landsteiner und Emil Prasek,

bloBe S&urewirkung bedingt ist, da wir solche Versuche
nicht angestellt haben. Es ist auch mSglich, daB die Schft-
digung der Antigenwirkung entweder auf die oxydierenden
Eigenschaften der Stickstoffs&uren oder auf eine Nitrierung
bzw. Diazotierung zu beziehen ist. Der Nachweis unspezifisch
wirkender Agglutinine Oder Lysine war nicht zu erbringen,
allerdings wegen der Unmdglichkeit, homologes Antigen zum
Nachweis zu verwenden, auch kaum zu erwarten.

Nfiheren AufschluB tlber die Beschaffenheit der Immun-
sera, die nach Injektionen mSBig stark mit HNO s bebandelter
Stromata entstanden sind, versuchten wir durch Absorptions-
versuche zu erhalten.

Wir schicken die Resultate der Absorption von Pflanzen-
agglutininen und gewdhnlichen Serumagglutininen voraus.

Abrin.

1,5 ccm '/.coo Abrin + 0,3 ccm Stromata.

Pferde-

stromata

behandelt

mit

Kan.-

Stromata

behandelt

mit

Kontrolle
Pferdestromata
5-fach normal HNO.,
konz. HNO, l h
konz. HNO, 20"
rauch. HNO,

HNO,

Kan inchenstrom ata
5-fach normal HNO.
konz. HNO, l"
konz. HNO, 20”
rauch. HNO,

HNO,

128

4

8

24

24

128

32

e

I «

l

4

96-128

0

Titriert fur
i Pferdeblut

Crotin.

1,5 ccm V 60 Crotin + 0,3 ccm Schweinestromata.

behandelt I
mit l

Kontrolle

Stromata

5-fach normal HNO,
konz. HNO, l h
konz. HNO. 20"
rauch. HNO,

HNO,

32

4

6

6

8

32

6

Titriert fur
I Schweineblut

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Bindende u. immunisierende Substanzen der roten Blutkdrperchen. 369

2,5 ccrn ‘/ 60 inaktives Hiihnerserum -f- 0,3 ccm Stromata.

Kontrolle

32

64

Pferdestromata

2

32

Pferde- r

5-fach normal HN0 3

8

64

stromata

konz. HNO. l h

9

48

behandelt 4

ranch. HNO a

16

64

mit

HNO,

4

48

Kan i nchens tromata

12—16

4

Kan.-

5-fach normal HNO a

32

6

Stromata

konz. HNO, l h

16

12

behandelt

konz. HNO, 20

—

16

mit

rauch. HNO a

24

64

HNO,

16

4

Titriert fur

Titriert fur

1

Pferdeblut

Kan.-Blut

0,5 ccm Stromata aus Pferdeblut + 1,5 ccm der Serumverdiinnungen.
Immunserum (= IS) No. 299 50-fach verdiinnt, Kaninchen-Normalsera (=

KNS) 5-fach verdiinnt.

IS No. 299

KNS 1

KNS 2

KNS 3

Kontrolle

16

12

16

4

Pferdestromata

e

1-2

4

2

5-fach normal HNO,

16

4

2

*£

konz. HNO. 1“

9

2

1

konz. HNO., 20"

.

#

4

©

i

rauch. HNO,

16

8

HNO,

16

4

•

•

Aus diesen Ergebnissen ist hervorzuheben, daB die Stro¬
mata fflr Pflanzenagglutinine und Agglutinine von normalem
Serum auch dann noch ziemlich gutes und spezifisches Ab-
sorptionsvermogen besitzen, wenn sie mit HN0 2 Oder HNO s
so intensiv behandelt wurden, daB sie die Bildung von
Immunagglutininen und Lysinen nur in sehr geringem MaBe
oder gar nicht hervorrufen. Dieses Verhalten steht offenbar
mit jenem Teil der Ehrlichschen Konzeption des Immuni-
sierungsvorganges, der die IdentitSt der Rezeptoren fflr Anti-
korper normaler Sera und derjenigen, die Immunit&t auslflsen,
voraussetzt, nicht im Einklang.

Bei der Prflfung auf etwa vorhandene Besonderheiten der
entstandenen Antikorper suchten wir die schon erwahnte
Schwierigkeit dadurch zu umgehen, daB wir ahnlich wie bei
unseren frflheren Versuchen die Absorption prflften.

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370

Karl Landsteiner und Emil Pragek,

2 ccm der Serumverdiinnungen + 0,6 ccm Pferdeblutstromata.
Verwendete Immunsera: No. 276 7*o#» Vioo! No. 299 ‘/ 50 ; No. 261
7„; No. 164 '/», 7.0 ; No. 228 >/„; No. 300 »/», No. 338 ‘/ 10 , '/„

V«; No. 339 Voo. 7..; No. 337 7,*.

Die benutzteD Konzentrationen Bind nach der Reihenfolge in der Ta-

belle angegeben.

Kaninchen No.

Immunsera nach
Injekt. von unver-
anderten Pferde¬
blutstromata oder
Blut

Immunsera nach
Injektion von l h
gekochter Pferde¬
blutstromata

Immunsera nach In¬
jektion von Pferdeblut¬
stromata, die mit 5-fach
normaler HNO s be-
handelt waren

276

276

299

261

299

164228

300

164

164

338339 337

339

338

i

338

Kontrolle

6

8

16

16

i 16

32

8

16

8

16

8

8

8

8

16

16

Pferdeblutstromata

e

e

e

1 4

1 -

e

e

e

e j

—

e

6

e

0

4

_

l k gekochte Pferdeblut¬

i ;

!

stromata

4

4

8

- '

—

e

e

e

e

—

i

e

i

e

4

_

5-fach normal HNO a

\ 1

Pferdeblutstromata

4

3

8

16

16

6

4

4

3

2

2

0

e

0

2

2

Kanincbenblutstromata

—

—

16

16

—

—

16

8

—

—

—

—

8

16

_

l h gekochte Kaninchen-

blutstromata

—

6

16

16

—

4

8

2

—

—

—

4

3

16

_

5-fach normal HNO, Ka-

ninchenblutstromata

—

6

16

32

16

—

8

8

8

8

—

i

1

2

12

6

Die Absorptionsversuche zeigen wieder, daB ein Unter-
schied zwischen den Immunseren besteht, die nach Injektion
unver&nderter und ver&nderter Stromata entstehen. Die
Immunsera der ersten Art werden, wie wir schon in der
frflheren Mitteilung erw&hnten, von den verfinderten Stromata
im allgemeinen nur schlecht aufgenommen, zum Unterschied
von den Seren der zweiten Art. Ein Unterschied zwischen den
gekochten und den mit HNO s behandelten Stromata besteht
nach den von uns angestellten Versuchen insofern, als die
homolog ver&nderten Stromata verh&ltnism&fiig etwas starker
binden. Dieser Unterschied im Sinne einer Spezifizitat ist aber
nicht sehr groB, und es bleibt auffallend, dafi die Stromata
durch so verschiedene Eingriffe wie Kochen und Einwirken
von HN0 8 derart verandert werden, daB sie bei der Prflfung
mit Immunseren bis zu einem gewissen Grad gemeinsame
Eigenschaften zeigen. Aehnlich lagen die Verhaitnisse auch
bei dem friiher von uns angestellten Vergleich erhitzter, mit
Alkohol und Formaldehyd behandelter Stromata. Es laBt sich
demnach nicht annehmen, daB die maBgebende Veranderung
bei der Behandlung mit HN0 8 in der Nitrierung bestehe.

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Bindende u. immunisierende Substanzen der roten BlutkSrperchen. 37 1

Was die ArtspezifizitSt der Sera anlangt, so fand bei den
Salpetersfiureseren mehrmals eine ganz deutliche Absorption
durch Salpeter-Kaninchenstromata statt, obwohl die Sera mit
SalpetersSure-Pferdestromata hergestellt waren und von Kanin-
chen stammten. Hier schiene also eine Aenderung der Artspezi-
fizitat vorzuliegen, die an die Resultate von 0 berm ay er und
Pick erinnert.

Diese Aehnlichkeit wird aber dadurcb beeintrachtigt, dad
erstens auch gekochte Kaninchenstromata die Agglutinine der
Salpetersauresera merklicb, wenn auch nicht stark, absor-
bieren und zweitens bei Koktoseren durch gekochte Kaninchen-
stromata eine Absorption stattfindet. Es scheint demnach
durch die angewendeten Eingriffe die Artspezifizit&t wirklich
eine EinbuBe zu erleiden, doch laBt sich dieser Effekt nicht als
eigentUmliche Folge der Nitrierung ansehen. Aehnliche Er-
gebnisse bezQglich einer gewissen Herabsetzung der Artspe-
zifizitat sahen wir flbrigens auch bei der Pr&zipitation von ge-
kochtem EiweiB durch Koktoprazipitinsera.

BetrSchtlich abweichende Resultate hatten wir bei der
Untersuchung der Immunseren, wenn wir sie mit Stromata
zusammenbrachten und die Bindung des zugefQgten Komple-
mentes untersuchten, eine Methode, bei der auch andere
Immunstoffe als Hamagglutinine und H&molysine zur Wirkung
gelangen kbnnen. Wir fanden bei solchen Versuchen bei Kokto¬
seren keine unspezifische Komplementbindung, bei Salpeter-
s&ureseren (No. 337, 338, 339) hingegen stark positive
Reaktion sowohl mit Salpetersaure-Pferde- als auch Salpeter-
saure-K a n i n c h e n stromata, und keine ausgesprochene Kom¬
plementbindung bei Pferde- oder Kaninchen - Koktostromata,
entsprechend den Befunden von Obermayer und Pick.

Diese Resultate lassen den SchluB zu, daB die Lysine mit
den komplementbindenden Substanzen nicht zu identi-
fizieren sind.

UL Behandlung der Stromata mit Aoetanhydrid, aohwefel-
saurem und salzsaurem Alkohol.

Die bisher mitgeteilten Beobachtungen lehren, daB die
bindenden Substanzen der roten Blutkbrperchen eine ziem-
lich groBe Resistenz gegen solche Eingriffe besitzen, die

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372

Karl Landsteiner und Emil Prasek,

keine weitgehende Zersetzung hervorrufen. Mit ROcksicht auf
die Hypothese einer Verwandtschaft der Farbstoff- und Im-
munkorperbindung haben wir auch noch die Wirkung von
Reagentien untersucht, die das Bindungsvermfigen tierischer
Gewebe far Farbstoffe stark beeinflussen, ohne diese Gewebe
— Schafwolle, Seide — abzubauen.

Versuche dieser Art wurden von Suida 1 2 ) und seinen
Mitarbeitern ausgefiihrt. Es zeigte sich, daB durch Behandeln
von Schafwolle mit Acetylchlorid, Acetanhydrid, alkoholischer
H 2 S0 4 Oder HC1 die F&rbbarkeit durch basische B’arbstoffe
stark vermindert Oder aufgehoben, die F&rbbarkeit durch saure
Farben verst&rkt wurde. Sicheres fiber die Art der hier statt-
findenden Ver&nderungen lieB sich noch nicht feststellen.
Suida dachte an die Mfiglichkeit, daB Acylierungen, Alkylie-
rungen oder Anhydrisierungen eintreten. Sicher wird Sfiure
gebunden, aber in einer anderen Art als bei der Einwirkung
w&sseriger Sfiuren, und gegen eine einfache S&urewirkung
spricht auch der Effekt des Acetanhydrides im Gegensatz zur
Unwirksamkeit der Essigs&ure.

Im AnschluB an diese Untersuchungen haben wir schon
frfiher analoge Experimente fiber die Aufnahme von Abrin
durch Kasein angestellt*) und batten ganz fihnliche Ergebnisse
wie Suida. Das Aufnahmevermogen des Kaseins ffir Abrin
wurde fihnlich wie ffir Kristallviolett durch Acetanhydrid und
alkoholische Schwefelsfiure stark vermindert, durch Acetyl¬
chlorid aufgehoben und die Verfinderung durch Acetylchlorid
lieB sich analog wie in den Versuchen von Suida durch Be¬
handeln mit einer warmen Losung von Ammoniumkarbonat
zum Teil wieder rfickgfingig machen. Wir zogen seinerzeit
den SchluB, daB diese Uebereinstimmungen wohl ffir eine
Verwandtschaft der Vorg&nge bei der Bindung von Farbstolfen
und von Immunkorpern zu sprechen scheinen.

1) Sitzungsber. d. Kais. Akad. d. Wissensch. in Wien, math.-naturw.
Kl., Abt. IIb, Bd. 114, Januar 1905 und Mai 1905 (Suida und Gelmo)
Bd. 115, Januar, Oktober 1906 (Suida und Gelmo).

2) Landsteiner und Stankovic, Centralbl. f. Bakt., Bd. 41, 1906,

p. 108.

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Bindende u. immunisierende Substanzen der roten Blutkorperchen. 373

Es lag nahe, Ver&nderungen wie die eben erwahnten auch
an den Blutstromata vorzunehmen und ihren EinfluB auf die
Bindung von Hamagglutininen zu untersuchen.

Behandlung mit H,S0 4 -Alkohol. 4 ccm Stromata werden
roit absolutem Alkohol auf der Zentnfuge gewaschen'), mit 20 ccm 1 Proz.
Schwefelsaure enthaltendem Alkohoi 48 Stunden bei 60° digeriert, abzentri¬
fugiert, nach Zusatz von NaCl-Losung neutralisiert, nochmals abzentrifugiert
und dann im ursprunglichen Volumen 1-proz. NaCl-Losung aufgeschwemmt.

Behandlung mit HCl-Alkohol. Mit absolutem Alkohol ge-
waachene Stromata werden 24 Stunden bei Zimmertemperatur mit dem
doppelten Volumen HC1 gesattigten absoluten Alkohols oder geringeren
Konzentrationen alkoholischer Salzsaure digeriert. Sonst wie oben.

Behandlung mit Acetanhydrid. 4 ccm der Stromata wurden
mit absolutem Alkohol und dann mit wasserfreiem Aether gewaschen, mit
20 ccm Essigs&ureanhydrid 24 Stunden am Ruckfluflkiihler auf dem Wasser-
bade erhitzt (eventuell das Anhydrid abgegossen, neues aufgegossen und
nochmals 24 Stunden erwarrat). Dann wird abzentrifugiert, mit absolutem
Alkohol gewaschen, in NaCl-Losung aufgeschwemmt, neutralisiert, abzentri¬
fugiert und im ursprunglichen Volumen Kochsalzldsung aufgenommen.
Die Emulsion mufl neutral reagieren.

0,3 ccm Pferdestromata + 1,5 ccm
0,2 ccm Pferdestromata + 1,5 ccm

Kontrolle Abrin
Native Stromata

H a S0 4 -Alkohol

Stromata

behandelt

mit

'/. HCl-Alkohol
HCl-Alkohol
cetanhydrid

128

8

4

2

2

128

I, iooo Abrin.

7,0 inaktiviertes Hiihnerserum.

Kontrolle Hiihnerserum
Native Stromata

H, SO,-Alkohol 1
v, HCl-Alkohol '

Stromata

behandelt

mit

l / 6 HCl-Alkohol
Acetanhydrid

0,3 ccm Schweinestromata + 1,5 ccm ‘/iooo Abrin.

ccm Vio Hiihnerserum.

0 4 ccm Schweinestromata + 1,5

Kontrolle Abrin
Native Stromata

ELS0 4 -Alkohol
HCl-Alkohol

Stromata

behandelt

mit

7 , HCl-Alkohol
Acetanhydrid

12

3

2

O

2

12

Kontrolle Hiihnerserum

Native Stromata

f H,S0 4 -Alkohol
Stromata I H ’ cl . Alkoho i

| V 8 HCl-Alkohol

behandelt
mit

0,3 ccm Kaninchenstromata + 1,5
0,2 ccm Kaninchenstromata +1,5

Kontrolle Abrin
Native Stromata

f H„S0 4 -Alkohol
H'Cl-Alkohol
7, HCl-Alkohol
Acetanhydrid

Stromata

behandelt

mit

64

e

e

e

e

32

l Acetanhydrid

ccm Viooo Abrin.
ccm */ J0 Hiihnerserum.

Kontrolle Hiihnerserum
Native Stromata

H,S0 4 -Alkohol
HCl-Alkohol

Stromata

behandelt

mit

7, HCl-Alkohol
Acetanhydrid

16

2

12

16

16

16

16

2

16

16

6

16

128

4

32

128

32

128

1) Beim Waschen der Stromata mit Alkohol darf nur sehr schwach
zentrifugiert werden, um ein Zusammenbacken der Stromata zu verhindem.

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374

Karl Landsteiner und Emil Prasek,

Histon.

1 ccm 0.2-proz. Losung + 0,1 ccm Pferdeblutstromata.

Kontrolle
Native Stromata
Stromata f H 2 S0 4 -Alkohol
behandelt i i / s HC1-Alkohol
mit \ Acetanhydrid

16

e

8

8

4

Titriertfiir

Pferdeblut

Die Ergebnisse entsprachen unserer Erwartung, da es
wirklich gelang, die Bindungsf&higkeit fQr Agglutinine durch
dieselben Eingriffe aufzuheben, die auch die F&rbung tierischer
Fasern verhindem, und die wohl, wie Suida annimmt, das
SalzbildungsvermSgen beeintr&chtigen. Hervorzuheben ist, daB
die Effekte verschiedenen Agglutininen gegenflber nicht
gleich sind. So verursachten alkoholische S&uren zwar eine
Aufhebung oder bedeutende Schw&chung der Bindung von
Serumagglutinin des HOhnerserums, aber keine Hinderung,
eher eine Begflnstigung der Absorption von Abrin, w&hrend
die Behandlung mit Acetanhydrid die Bindung beider Agglu¬
tinine aufbob. Dieses Verhalten spricht fflr einen wesentlichen
Unterschied der fQr die Bindung des Abrins und der normalen
Serumagglutinine raaBgebenden chemischen Strukturen.

Dafi diese beiden Reaktionen zu ungleichartigen Produkten
fiihren konnen, dafur spricht schon die Angabe von Suida,
daB die Einwirkung von Acetanhydrid oder Acetylcblorid die
FSrbbarkeit von Seide im Gegensatz zu dem Verhalten der
Schafwolle nicht verhindert, w&hrend schwefelsaurer Alkohol
in beiden F&llen den gleichen Effekt hat. Ein Unterschied
der von uns erhaltenen Produkte aus Stromata zeigt sich
Qbrigens auch bei der Behandlung mit S&uren und Basen.
Die Emulsion der nativen Stromata (Pferd, Kaninchen) wird beim
Zusatz gleicher Volumina sowohl von n/ 10 HC1 als n/ l0 NaOH
aufgehellt. Die Stromata, die mit Acetanhydrid behandelt
werden, losen sich in n/ 10 NaOH, bleiben aber in n/ 10 HC1
unver&ndert, wahrend die mit salzsaurem Alkohol behandelten
Proben (Pferd) auch nach mehreren Stunden weder in der
SSure noch in der Lauge eine deutliche Aufhellung oder Auf-
losung zeigen. Auch diese Aenderungen des Verhaltens gegen
Saure und Basen sind im Sinne einer Beeinflussung des Salz-
bildungsvermogens zu deuten.

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Bindende u. immunisierende Substanzen der roten Blutkorperchen. 375

Wir haben mit den ver&nderten Stromata auch F&rbungs-
versuche angestellt und gefunden, daB die Behandlung mit
Acetanhydrid die Ffirbbarkeit durch basische Farbstoffe (Saf-
ranin, Toluidinblau) verst&rkt, die F&rbung durch saure Farben
(Bordeaux R, Diaminreinblau) abzuschwSchen scheint. Die Eiu-
wirkung von saurem Alkohol schwllchte die F&rbung durch
Sa£ranin und Toluidinblau und verstfirkte saure F&rbungen
(Bordeaux R, Eosin, Diaminreinblau). Das Verhalten der
Stromata ist demnach ein etwas anderes als bei Schafwolle
und Seide, die sich tibrigens, wie eben erw&hnt, auch unter-
einander unterscheiden. Gemeinsam ist in alien Fallen eine
wesentliche Aenderung der Farbstoffbindung durch die an-
gewendeten Verfahren und in unserem Falle parallel dazu
die Ver&nderung der Agglutininbindung.

IV. Behandlung der Stromata mit Osmiumsaure.

Anhangsweise berichten wir noch fiber einige Versuche mit osmierten
Blutkfirperchen. DerEfl'ektdieserEinwirkung wurde von Coca 1 2 3 ), v. Szily*),
Busson 8 ), Rosenthal 4 ) studiert. Das Ergebnis der Arbeiten war, daB
Osmiumsawe bei genfigend starker Einwirkung die Arteigenschaft der Blut¬
korperchen aufhebt und auch das spezifische Bindungsvermogen nicht, wie
man zuerst glaubte, intakt lafit. Das Bindungsvermogen erlischt viel-
mehr parallel zu dem Immunisierungsvermogen (v. Szily). Die Blutzellen
erhalten wohl durch die Osmierung die Eigenschaft, die Wirkung zuge-
setzter Immunlysine aufzuheben, aber dieser Efl'ekt ist nach den Angaben
der Autoren ein unspezifischer, da er ebensogut durch heterologes als durch
homologes Blut hervorgebracht werden kann. v. Szily und BusBon
nehmen deshalb eine unspezifische Adsorption durch das Osmiumblut an.

Als wir das Experiment wiederholten, fan den wir, wie wir erwar-
teten, die zitierten Resultate bestatigt, bemerkten aber, daB das von uns
verwendete Immunserum nach dem Kontakt mit Osmiumblut nur die
hiimolytisehe Wirkung zum groftten Teil oder ganz verloren hatte, wahrend
das Agglutinationsvermogen nicht oder nicht stark vermindert wurde.
(DaB osmierte Bacillen kein Agglutinin binden, erwahnt Busson.)

2 ccm gewaschenes, auf das urspriingliche Volumen gebrachtes Blut
wurden mit 2 ccm 2-proz. Osmiumsaure (mit einem Gehalt von 1 Proz.
NaCl) 1 Tag lang bei Zimmertemperatur stehen gelassen, dann viermal mit
je 10 ccm NaCl-Losung gewaschen.

1) Biochem. Zeitschr., Bd. 14, 1908, p. 125.

2) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 3, 1909, p. 451.

3) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 11, 1911, p. 515.

4) Biochem. Zeitschr., Bd. 46, 1912, p. 225.

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376

Karl Landsteiner und Emil Prasek,

1,5 ccm o Pferdeblutimmunserura von Kaninchen + 0,5 ccm des
osmierten Blutes von Kaninchen und Taube.

Agglutination

32
24
32

Titriert fiir
Pferdeblut

Hamolyse

32
4
e

Titriert fur
Pferdeblut

Kontrolle

Osmiertes Kaninchenblut
Osmiertes Taubenblut

Kontrolle

Osmiertes Kaninchenblut
Osmiertes Taubenblut

Das Versuchsergebnis ist insofern auffallend, als die Behandlung mit
osmiertem Blut anscheinend die Trennung zweier Gruppen von Immun-
Bubstanzen erraoglicht, wahrend alle bisher gepriiften Adsorptionsmittel
gegeniiber differenten Antikorpern aus Immunseren wenigstens kein
durchgreifend verschiedenes Verhalten zeigen. Die Vermutung, dafi bei
der Behandlung mit OsmiumKlut Stoffe in die Fliissigkeit iibergehen kfinnten,
die die Komplementwirkung hemmen, erwies sich nicht als zutreffend.

Wir behandelten parallel inaktives verdiinntes Hammelhiimolysin und
ebensolches Pferdehamolysin (Kaninchenseren) mit osmiertem Kaninchenblut
und setzten zu dera Abgufi des Hammellysins unverandertes verdiinntes
Pferdelysin und umgekehrt zu dem abgegossenen Pferdelyein unverandertes
Hammellysin. Bei der Priifung der beiden Mischungen sowohl mit Hammel-
als mit Pferdeblut unter Zusatz von Komplement zeigte es sich, dafi die
Heramung jedesmal gegeniiber dem Haraolysin betrachtlich starker eintrat,
da6 mit osmiertem Blut in Beriihrung war. Man mufl deshalb schliefien^
dafi die Wirkung auf das Immunlysin selbst stattfindet, so wie die oben-
genannten Autoren es meinen. Wahrscheinlicher als die Voraussetzung
einer Adsorption nur der Lysine scheint zunachst die Annahme, dafi bei
der Beriihrung mit osmiertem Blut nicht eine Bindung, sondern eine Ver-
anderung der Immunkorper stattfindet derart, dafi zwar die Agglutination
nicht gestort wird, aber jene Reaktionen, die unter Komplementwirkung
stattfinden, eine Hemmung erfahren. Diese Deutung konnte dadurch unter-
stiitzt werden, dafi ein analoger Fall von v. Dungern und Hirschfeld 1 )
beschrieben wurde, niimlich eine Veriinderung hamolytischer Immunsera
durch Jod, die zur Schwachung oder Aufhebung der Lysinwirkung fiihrt,
wahrend der Agglutinationseflekt erhalten bleibt. Gegen diese Auslegung
spricht aber vielleicht die Amgabe von Rosenthal, dafi von dem Osmium-
blut aufgenommene Lysine wieder abgegeben werden konnen. Wir halten
demnach zur Aufklarung unserer Beobachtung neue Versuche fiir notig.

Zusammenfassung.

1) Bei der Einwirkung von Sauren und Basen «uf Blut-
stromata erweist sich wieder die betrfichtliche Widerstands-
fahigkeit der bindenden Stoffe der roten BlutkOrperchen. Ent-
sprechend den in einer vorhergehenden Mitteilung gegebenen

1) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 11, 1911, p. 557.

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Bindende u. immunisierende Subetanzen der roten Blutkorpercben. 377

Daten ist der Effekt der Einwirkung je nach der Art des an-
gewendeten Agglutinins Oder Lysins verschieden groB.

2) Werden Tiere mit Stromata, die mit HNO, bebandelt
wurden, immunisiert, so bilden sich bei konzentrierter S8ure
keine Agglutinine und Lysine, wohl aber entstehen solche
Stoffe, wenn auch in geringerem AuBmaBe, bei schwficheren
Konzentrationen von HNO s .

A us Absorptionsversuchen mit diesen Seren ergibt sich
eine Herabsetzung der artspezifischen Bindung, die aber in
Shnlicher Weise, wenn auch etwas weniger ausgesprochen, bei
Coctoseren und gekochten Stromata nachweisbar war. Das
Ergebnis dieser Versuche l&Bt sich demnach mit den Resultaten
von Obermayer und Pick fiber die Ver&nderung der prfizi-
pitablen Substanz durch Nitrieren nicht in Parallele stellen.
Die in den Seren enthaltenen komplementbindenden Anti-
kfirper zeigten hingegen ein anderes Verhalten als die Agglu¬
tinine und Lysine, da hier ein Verlust der Artspezifizitfit ganz
konform den Angaben von Obermayer und Pick einge-
treten war. Aus diesem Ergebnis ist eine Verschiedenheit
der lytischen und komplementbindenden Stoffe zu
erschliefien.

3) Behandlung der Stromata mit Agentien, die von wesent-
lichem Einflufi auf das Bindungsvermfigen der Pro-
teinsubstanzen ffir Farbstoffe sind — nftmlich die Ein¬
wirkung von Acetanhydrid Oder saurem Alkohol — bewirkt
auch die Inaktivierung des Vermogens, Agglutinin zu
bin den, und zwar stfirt die Einwirkung von Acetanhydrid
die Bindung sowohl von Pflanzenagglutinin (Abrin) als auch
von normalem Serumagglutinin, die Behandlung mit saurem
Alkohol nur die Bindung von Serumagglutinin. Dadurch er-
scheint auf chemischem Wege eine Differenzierung
verschiedener, die Agglutininbindung bedingen-
der Strukturen gegeben.

4) Bei der Behandlung eines auf Pferdeblut wirkenden
Immunserums von Kaninchen mit osmierten Blutkfirperchen
wurde, wie schon andere Autoren beobachteten, die h&molytische
Wirkung des Immunserums hochgradig reduziert Nach
eigenen Versuchen nimmt auffallenderweise im Gegensatz
dazu der Agglutininwert nur wenig ab.

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378

Oskar Bail und Karl Rotky,

Naehdruek verboten.

[Aus dem Hygienischen Institut der deatscben Universit&t Prag.]

Yersuche fiber die Bildung Ton bakteriolytfsehen
ImmnnkOrpern.

Von Oskar Bail und Karl Botky.

(Eingegangen bei der Redaktion am 7. Februar 1913.)

In zwei frfiheren Arbeiten von Bail und Tsuda 1 2 3 ) war
nachgewiesen worden, daB es gelingt, von Choleravibrionen,
welche mit entsprechenden Mengen inaktiven, normalen Kinder-
serums sensibilisiert sind, die aufgenommenen Immunkftrper
durch Digestion in physiologischer KochsalzlSsung wieder ab-
zusprengen. Man erhalt dadurch Fltissigkeiten, die, an sich
stets ohne jede bakteriolytische Wirkung, eine solche sofort
und oft in stfirkstem Grade nach Zusatz von Meerschweinchen-
serum als Komplement entfalten.

Im Grunde genommen ist dies nur eine Wiederholung und Erweite-
terung alterer Experimente von Pfeiffer und Friedberger*), in denen
gezeigt worden war, daB Meerschweinchen, die eine gewisse Menge von
Choleravibrionen mit Hilfe spezifischen Immunserums in ihrer BauchhOhle
aufgelfist hatten, imstande waren, noch weitere Vibrionen ohne neuerliche
Anwendung von Immunserum zu zerstbren. In Beagenzglasversuchen
hatten Morgenroth fiir Hiimolysine 8 ), Landsteiner und Jagifi fiir
Agglutinine 4 ) eine fthnliche Ablosung des bereits gebundenen Antikorpers
von seinem Antigen in wirksamer Form beobachtet

Bail und Tsuda studierten die naheren Umstande, unter denen die
Absprengung des normalen Rinderserumimmunkorpers von damit beladenen
Choleravibrionen stattfindet und stellten fest, daB dafiir einerseits die
Temperatur, andererseits das Medium von Bedeutung sei. Fiir die Immun-
kdrperablosung in Kochsalzldsung wurde gefunden, daB sie zwar wahr-
scheinlich bei jeder Temperatur, die anwendbar ist, erfolgt, am besten aber
bei Graden, die etwas fiber Korpertemperatur, etwa bei 42° liegen. Be-
zfiglich des Mediums ergab sich, daB die Absprengung in Meerschweinchen-
oder Rattenserum (aktiv und inaktiv) ahnlich gut gelingt, wie in Koch-
salzlosung, daB hingegen in Rinder-, Pferde-, Schaf- und Bchweineserum

1) Diese Zeitschr., Bd. 1, No. 4 u. 6.

2) Centralbl. f. Bakt., Bd. 34, 1903, p. 77.

3) Mfinch. med. Wochenschr., 1903, No. 2.

4) Mfinch. med. Wochenschr., 1903, p. 764.

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Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 379

in inaktivem Zustande eine solche nicht zu beo bach ten ist, indem die
sensibilisierten Vibrionen, statt Immonkfirper abzugeben, noch neue aus
diesen Seren aufnehmen.

Es konnte weiter gezeigt werden, daB nicht nur Cholera-
vibrionen, welche mit inaktivem Rinderserum sensibilisiert
waren, solcbe Immunkdrper an Kochsalzldsung abgeben, sondern
auch Granularfickst&nde, wie sich dieselben nach Anwendung
aktiven Serums bilden. Daraus und aus der Tatsache, daB
die Absprengung der gebundenen Immunkdrper aus inaktivem
Serum in ganz indifferenten Flttssigkeiten erreicht werden
kann, mufite der SchluB gezogen werden, daB die Intervention
des Komplements, also die Vollendung des durch die Immun-
kOrperbindung erst eingeleiteten bakteriolytischen Aktes, fflr
das Wiederfreiwerden des Immunkdrpers nicht von ent-
scheidender Bedeutung sein kdnne.

Die genauere Untersuchung del 1 in Kochsalzldsung von
mit Rinderserum sensibilisierten Vibrionen abgeldsten Immun¬
kdrper ergab eine gewisse, ganz unverkennbare Spezifit&t
ihrer Wirkung.

Es wurde schon damals angedeutet, daB in derartigen
Versuchen mdglicherweise ein Weg zur Erkl&rung der Anti-
kdrperbildung ttberhaupt gewiesen sein kdnnte. Denn diese
hat vor allem zwei Punkte, mit denen sich jeder Erkl&rungs-
versuch vor allem anderen zu befassen hat: die Spezifit&t der
Antikdrper und das MiBverh&ltnis, das ziemlich regelm&Big
zwischen der geringen Menge injizierten Antigens und der
groBen Menge der gebildeten Antikdrper besteht.

Die Frage der Spezifit&t findet zweifellos ihre beste Ldsung
in der &lteren Annahme, daB die Antikdrper nichts anderes
als direkte oder indirekte Abkdmmlinge der injizierten Anti¬
gene seien. Der Anerkennung dieser Lehre stand aber vor
allem der zu erkl&rende zweite Punkt, das MiBverh&ltnis
zwischen Antigen und Antikdrpermenge, entgegen und ebenso
der Umstand, daB bisher genauere Angaben fiber die Art der
Abkunft zweier so gegens&tzlicher Dinge nicht gemacht, ja
nicht einmal Analogien daffir gegeben werden konnten.

Aus diesen Grfinden wohl haupts&chlich hat die Ehr-
lichsche Theorie der Antikdrperbildung eine wenigstens
prinzipiell fast allgemeine Anerkennung gefunden. Gleichwohl

ZeiUchr. f. Immunltaufortchung. Orig. Bd. XVII. 26

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380

Oskar Bail und Karl Rotky,

ist leicht zu sehen, daB sie die eine der Hauptfragen, die nach
der Spezifitfit, mehr umgeht als lost, indem sie von vornherein
eine ttberaus grofie Mannigfaltigkeit der Immunkorper schon
im normalen Serum annimmt und eine ebensolche fttr den an
Zellen sitzenden Rezeptorenapparat postuliert, welcher spfiter
die eigentliche Grundlage fttr die neuentstehenden AntikOrper
abgeben soil. Hingegen gibt die Theorie fttr die grofie Zahl
der entstehenden AntikOrper durch unbegrenzte Ueberregene-
ration der Zellrezeptoren eine befriedigende Erklarung, aller-
dings um den Preis, dafi sie die eigentlich bestimmenden Vor-
gttnge aus dem Blute weg in Zellen verlegt und das Blut nur
noch als den relativ fttr die AntikOrperbildung irrelevanten
Trfiger der AntikOrper ansieht. Aber gerade diese Verbindung
humoraler Lehren mit cellulfirer Bjldungsweise der wirksamen
Stoffe der KOrperflttssigkeiten mufite bestechend sein.

Die eingangs kurz bSsprochenen Versuchsresultate ftthrten
hingegen bereits Bail und Tsuda zu der Vermutung, dafi
wohl eine andere Erklarung der AntikOrperbildung mOglich
sein kOnnte. Es sei gestattet, die Anschauung in den all-
gemeinsten Ausdrflcken wiederzugeben, welche die Wieder-
aufnahme dieser Versuche leitete und die sich im ganzen als
brauchbar, und, was wichtiger ist, auch als experimentell be-
weisbar erwies. Injiziert man einem Tiere, dessen Blut schon
normal ImmunkOrper gegen Choleravibrionen hat, solche in
die Blutbahn, so mufi es zu einer Bindung derselben kommen,
die aber nicht stabil ist, sondern sich unter noch genauer zu
bestimmenden Umstanden wieder lOst. Die abgelOsten Im¬
munkorper sind aber, und zwar im Sinne der Spezifitfit, ver-
andert; sie haben, wie man sich vorstellen kann, mit der
Cholerasubstanz Bestandteile ausgetauscht, beispielsweise haben
sie aus der Substanz der Vibrionen einen Bestandteil x auf-
genommen. Der von der Cholerasubstanz danach ttbrig-
bleibende Rttckstand ist nicht mehr imstande, an diese ver-
anderten Immunkorper heranzutreten, wohl aber besitzt er
noch Bindungsfahigkeit fttr die normalen Immunkorper, die
wieder neu aufgenommen und nach Erlangung der Spezifitat
abgegeben werden. Die Folge davon ist eine bestfindige An-
reicherung des Blutes mit verfinderten, eine Verarmung an
normalen Immunkorpern. Da diese aber wohl eine notwendige

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Vereuche iiber die BilduDg von bakteriolytischen Immunkorpern. 381

Funktion im TierkSrper zu erfQllen haben, die von den
spezifisch verfinderten nicht mehr geleistet werden kann, so
tritt Ersatz derselbeo ein. Die neugebildeten aber verSndern
sich wieder durch Herantreten an die Rtickst&nde des An¬
tigens, und zwar so lange, als diese noch reaktionsfahig sind,
also im obigen Beispiele die austauschbare Substanz x ent-
halten. So ist es denkbar, daB eine sehr geringe Antigen-
men ge zu groBartigen Veranderungen im Blute Veranlassung
gibt, ohne daB dabei etwas anderes als die im Blute schon
vorhandenen normalen Funktionen intervenieren mflBten: die
Bildungsstatte der Antikorper sind lediglich die K5rperflttssig-
keiten. Wie sehr aber Antigene, z. B. Choleravibrionen, im-
stande sind, normales Blut zu beeinflussen, das zeigt die
jedermann bekannte Erfahrung. Es wird sich im Verlaufe
der Darstellung zeigen, daB diese Anschauung im Prinzip
richtig war, im Detail mancher Aenderung bedurfte.

Die Technik der aiteren Versuche von Bail und Tsuda
benutzte als Reagens auf die Anwesenheit und Wirksamkeit
von bakteriolytischen Kraften den mikroskopischen Versuch,
die Granulabildung. Diese Methode wurde nunmehr durch
die Zahlenwerte liefernde Methode des bakteriziden Platten-
versuches ersetzt. Deshalb war es zuerst notwendig, die
friiheren Versuche zu wiederholen.

Die beiden anfangs zu Versuchen vorwiegend benutzten Cholera-
stamme verdanken wir dem liebenswiirdigen Entgegenkommen von Prof.
Kraus in Wien, sie Bind als Cbol. Kraus und Konstantinopel bezeichnet
Der friiher verwendete Staram Pfeiffer war nicht mehr zu brauchen, da
er, otienbar infolge der fortwahrenden saprophytischen Zuchtung, eine der-
artige Empfindlichkeit angenommen hatte, daS das als Komplement benutzte
Meerschweinchenserum ihn allein schon in sehr kleinen Dosen abtbtete.
Spater wurde vorwiegend der Cholerastamm 74, fur den wir Herm Prof.
Neufeld zu Dank verpflichtet sind, verwendet.

Tabelle I.

Eine iippig gewachsene Kultur von Choi. Kraus wurde mit inaktivem
Kinderserum 1 Stunde bei 40°, dann 15 Stunden bei Zimmertemperatur
gehalten, die stark agglutinierte Bakterienmas.se sorgfaltig gewaschen und in
1 ccm NaCl-Losung 1 Stunde bei 42° extrahiert. Nach Zentrifugieren
wurde der erhaltene Extrakt gleichzeitig mit dem als Kontrolle dienenden
Rinderserum */» Stunde auf 56° erwarmt und zu den einzelnen Proben je
0,05 ccm frisches Serum eines kleinen Meerschweinchens in 0,4 ccm NaCl-
Losung zugesetzt. Einsaat Cholera Kraus = 65000.

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382

Oskar Bail und Karl Rotky.

Nach 4 Stunden

0.15 ccm Extrakt + 0,4 ccm Komplementverdiinnung 1240

0,075 „ „ +0,4 „ „ 72

0,025 „ „ + 0,4 „ „ 52

0,15 „ inaktiviertes Rinderserum 24

0,075 ,, „ ,, 5

0,025 „ ,. „ 0

0,15 „ Extrakt + 0,4 ccm NaCl-Losung unzahlbar

0,15 „ Rinderserum inaktiv. + 0,4 NaCl-Losung „

0,15 „ NaCl-L 6 sung + 0,5 ccm Komplementverdiinnung 60 000

Der gleichzeitig und mit denselben Fliissigkeiten ausgefiihrte mikro-
skopische Versuch zeigte bei Extrakt und Rinderserum bis zu der letzten
Dosis (0,01 ccm) herab vollstandige Granulabildung; ohne Komplement
war beides wirkungslos.

Tabelle II.

Eine Kultur von Choi. Konstantinopel wurde mit 15 ccm inaktivem
Rinderserum 1 Stunde bei 37°, dann 15 Stunden bei Zimmertemperatur
gehalten, zentrifugiert, gewaschen und mit 1 ccm NaCl-Losung 1 Stunde
bei 42° extrahiert. Einsaat 73000.

1 ) 0,15 ccm Extrakt + 0,05 ccm Komplement 1732

2) 0,075 „ „ + 0,05 „ „ 532

3 0,025 „ „ + 0,05 „ „ 912

4) 0,15 ccm Rinderser. + 0,05 ccm Komplement 39

5) 0,075 „ „ + 0,05 „ „ 127

6 ) 0,025 „ „ + 0,05 „ „ 132

7) 0,15 „ Extrakt + 0,4 com NaCl-Losung unzahlbar

8 ) 0,15 „ Rinderser. 56° + 0,4 ccm NaCl-Los. „

9) 0,15 „ NaCl-Los. + 0,05 ccm Komplement ca. 100 000

Der gleichzeitige mikroskopische Versuch ergab in den Extraktproben
bis zur letzten Dosis herab (0.01 ccm) Granulabildung, ahnlich im Rinder¬
serum.

Es genflgt, diese beiden Versuche als Beispiel der Me-
thodik anzuftihren. Die Wirkung der Kochsalzextrakte er-
kennt man ebensogut in den zahlreichen folgenden Versuchen,
welche sich zunachst damit befafiten, nachzuweisen, daB diese
Extrakte ahnlich wie das inaktivierte Rinderserum durch
Choleravibrionen zu erschOpfen seien. Gleichzeitig wurden
aber auch andersartige Mikroorganismen zu diesen Er-
schopfungsversuchen benutzt

TabeUe III.

Aus 2 Kulturen von Choi. Kraus wird in der gewohnlichen Weise
mit 2 ccm NaCl-Losung ein Extrakt hergestellt. Die eine JLalfte desselben
wird mit einer halben Kultur Choi. Kraus '/, Stunde bei 37° behandelt und
zentrifugiert (Extrakt b), die andere bleibt unveriindert (Extrakt a). Vor
dem Versuche werden die beiden Extrakte ‘/ 2 Stunde bei 58° erwarmt.
Einsaat: Choi. Krau 6 = 20 000.

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen lmraunkdrpern. 383

0,2 ccm + 0,05 ccm Kompl. (in 0.4 ccm)

0,1 „ +0,05 ., „ dgl.

0,075 „ + 0,05 ,, „

0,025 „ +0,05 „ ,.

0,2 „ + 0,4 „ NaCl-Ldsung

99

99

Eztrakt a
4000
800
800
3000

unzahlbar

Extrakt b
unzfihlbar

»

99

99

99

TabeUe IV.

Aub 3 Kulturen von Choi. Kraus wird in der gewdhnlichen Weise
mit 3 ccm NaCl-Ldsung ein Extrakt hergestellt, in drei Teile verteilt und
a) unverandert belassen, b) mit ChoL Kraus, c) mit Vibrio Finkler-Prior
bei 37* behandelt. Die behandelten Extrakte werden sorgfaltig zentrifugiert
und alle vor dem Versuche */* Stunde bei 58° erwarmt. Einsaat ChoL
Kraus = 10000.

0,15 ccm + 0,05 ccm Kompl. (in 0,4 ccm)
0,075 „ +0,05 „ „ dgl.

0,025 „ +0,05 „ „

0,15 ,. + 0,4 „ NaCl-Ldsung

Extrakt a
800
100
100

Extrakt b
8000
8000
10000

Ex trakt c
800
2000
100

Vermehrung uberall

TabeUe V.

Drei Kulturen Choi. 74 werden iiber Nacht mit einer Mischung von
10 ccm aktivem und 30 ccm inaktiviertem Serum behandelt, dann ge-
waschen und mit 3 ccm NaCl-Ldsung 1 Stunde bei 42° extrahiert; un-
mittelbar vor dem Zentrifugieren wird 1 ccm aktires Meerechweinchen serum
zugesetzt. Der gewonnene klarzentrifugierte Extrakt wird a) unverandert
belassen, b) mit 3 Oesen lebender ChoL 74, c) ebensoviel ChoL Konstauti-
nopel, d) Vibrio b, e) Typhus 1 Stunde bei 37° behandelt, zentrifugiert
und hierauf */* Stunde auf 56° erwarmt (je 0,75 ccm) Einsaat Cholera 74
= 97 000.

Extrakt a Extrakt b Extrakt c
0,075 ccm + 0,05 ccm Kompl. (in 0,4 ccm) 5280 unzahlig unzahlig

0,025 „ +0,05 „ „ dgl. 1324

Extrakt d Extrakt e

0,075 ccm + 0,05 ccm KompL (in 0,4 ccm) 4240 3128

0,25 „ +0,05 ., „ dgL 1256 1440

Inaktives Rinderserum ergab unter den gleichen Verhaltnissen 92 und
968 Kolonien. die entsprechende Verdunnung von 3 ccm NaCl-Ldsung
mit 1 ccm Meerschweinchenserum unzahlbar viele Kolonien, ebenso die
KomplementkontroUe.

Tabelle VI.

5 Kulturen ChoL 74 werden iiber Nacht mit 65 ccm inaktivem +
10 ccm aktivem Rinderserung behandelt, zentrifugiert, gewaschen und mit
4 ccm NaCl-Ldsung 1 Stunde bei 37 0 extrahiert. Der durch Zentrifugieren
geklarte Extrakt wird in Dosen von je 0,8 ccm a) unverftndert belassen,
b) mit V« Kultur bei 60* abgetoteter ChoL 74, c) Vibrio 134, d) Vibrio b,
e) Typhus Stunde bei 37° behandelt Nach sorgfaldgem Zentrifugieren
werden aUe Proben Stunde auf 58 s erwarmt und in den Dosen von

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384

Oskar Bail und Karl Rotky,

,1, 0,05 und 0,01 ccm mit je 0,05 Komplement versetzt. Einsaat Choi. 74

= 62000.

Extrakt a

Extrakt b

Extrakt c

Extrakt d Extrakt e

Binders.

68

iiber 100000

35

3 588

0

1928

dgl.

12

15 1296

0

2064

1040

1400 4800

128

Komplementkontrolle fiber 100000.

Die Versuche zeigen ganz klar, dafi sich Kochsalzextrakte
aus in verschiedener Art mit Rinderserum sensibilisierten
Vibrionen durch Behandlung mit den zugehdrigen Vibrionen
unwirksam machen lassen. Ohne eigens Versuche anzufiihren,
sei, was ja danach selbstverstfindlich ist, erwfihnt, dafi sich
normale Vibrionen, welche dem Einflusse eines solchen an sich
nie bakteriziden Extraktes ausgesetzt waren, als sensibilisiert
erweisen und nach Zusatz von blofiem Meerschweinchensernm
als Komplement der Bakteriolyse unterliegen.

Ebenso deutlich geht aus den erwahnten Versuehen hervor, dafi die
Extrakterschopfung durch Bakterien in spezifischer Weise verlauft, was
mit den friiher durch blofie mikroskopische Untersuchung erh&ltenen Re-
sultaten, wonach aus sensibilisierten Vibrionen hergestellte Extrakte nur
fur die gleichen Vibrionen iiberhaupt oder doch nur maximal wirksam sind,
gut fibereinstimmt. Es soli jedoch in der gegenwartigen Arbeit auf die
Frage der Spezifitat nicht im Detail, sondern nur wo dies unbedingt not-
wendig erscheint, eingegangen werden. Genauere Untersuchungen sollen
einer eigenen Arbeit vorbehalten sein, wie es die Wichtigkeit des Gegen-
standes wohl verdient. Vorlaufig nahm die Ermittlung der Bedingungen,
unter denen die Ablosung der von Bakterien aufgenommenen normalen
Rinderimmunkorper erfolgt, alle Aufmerksamkeit in Anspruch und er-
forderte so ausgedehnte und teilweise schwierige Versuche, dafi daneben
die Untersuchung der Spezifitat in eingehender Weise ganz unmoglich
war. Mindestens eine quantitative, wenn auch nicht immer absolute
Spezifitat war aber durchaus unverkennbar.

Untersucht man das BindungsvermOgen der extrahierten
RuckstSnde von sensibilisierten Choleravibrionen auf die er-
haltenen Kochsalzextrakte, so ist dasselbe sehr gering oder
gar nicht vorhanden.

Tabelle VII.

Eine iippige Kultur von ChoL Konstantinopel wurde fiber Nacht mit
25 ccm inaktiviertem Rinderserums behandelt, zentrifugiert, gewaschen und
mit 1,5 ccm NaCl-Losung 1 Stunde bei 42° extrahiert. Nach dem Ab-
zentrifugieren des erhaltenen Extraktes I wurde der Ruckstand neuerlich
mit 1,5 ccm NaCl-Losung extrahiert, wodurch der Extrakt 11 erhalten

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Versuche tiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkorpern. 385

wurde. Der in zwei Teilen gewaschene Riickstand wurde nun einerseita
mit 0,75 ccm von Extrakt I, andereraeita mit ebenaoviel inaktivem Rinder*
serum '/> Stunde bei 37 0 behandelt. Die danach klarzentrifugierten
Fliissigkeiten werden als Extrakt la und Rinderserum a bezeichnet. Vor
dem mit einer Einsaat von 90000 Vibrionen begonnenen Versuche wurden
alle Proben 7* Btunde auf 58 4 erhitzt

Extrakt I Extrakt la Extrakt II

0,15 ccm + 0,05 ccm Kompl.
0,075 ,. +0.05 „ „

0,025 ,, + 0,05 „ ,,

0,15 „ +0,4 „ NaCl-L6s.

6280 4128

6880 5 640

7264 90000

liberal! unzahlbar

27 000
3 848
11000

Rinderser. 56° Rinderser. a 56°

0,15 ccm + 0,05 ccm Kompl.
0,075 „ +0,05 „

0,025 ,, + 0,05 ,, „

0,15 „ + 0,5 „ NaCl-L6s.

1456

1616

832

iiberall unzahlbar

unzahlig

Tabelle VIII.

Zwei Eulturen Choi. Konst, wurden mit 40 ccm inaktivem Rinderserum
iiber Nacht behandelt und daraus in der gewohnlichen Weise mit 2,4 ccm
NaCl-Losung ein Extrakt gewonnen. Nach Abzentrifugieren desselben
wurde der verbleibende Bodensatz neuerlich mit 2,4 ccm NaCl 1 Btunde
bei 42° extrahiert; die erhaltenen Extrakte sind als Extrakt I und II be¬
zeichnet. Der Riickstand wurde hierauf in 2 Teilen gewaschen, der eine
mit 0,8 ccm Extrakt I, der andere mit ebensoviel inaktivem Rinderserum
v 2 Btunde bei 37° behandelt Die abzentrifugierten Fliissigkeiten werden
als Extrakt la und Rinderserum a bezeichnet. Andere je 0,8 ccm von
Extrakt I und inaktivem Rinderserum werden in der gleiehen Weise mit
je einer Oese lebender Choi. Konst, behandelt (Extrakt I b und Rinderser. b).
Alle Versuchsfliissigkeiten werden vor Einsaat 7 a Stunde auf 56° erwarmt
Einsaat Konst. = 90000. Angewendet werden die Dosen von 0,15,0,075 und
0,025 ccm mit je 0,05 ccm Kompl. in 0,4 ccm Fliissigkeit.

Extr. I Extr. Ia Extr. Ib Extr. II Hinders. 56° Rinders. a Binders, b
12300 8 680 14 000 20 000 9 000 unzahlbar 80000

3448 8040 12000 ca.60000 5840 „ 30000

3 920 14 000 50000 dgl. 16000 „ 30000

Die Kontrollproben ohne Komplement und mit Komplement allein
wiesen eine unzahlbare Menge von Kolonien auf.

Tabelle IX.

3 Kulturen Choi. Konst, werden mit 25 ccm inaktivem Rinderserum
iiber Nacht sensibilisiert und daraus in der gewdhnlichen Weise 2 ccm
Extrakt I hergestellt; der zum zweiten Male mit 2 ccm NaCl extrahierte
Bodensatz ergibt den Extrakt II. Je 0,6 ccm dieser beiden Extrakte sowie
von inaktivem Rinderserum werden in den mit a bezeichneten Proben mit
je 7s des nach der zweiten Extraktion gebliebenen Satzes, in den mit b
bezeichneten Proben mit je 7 4 Kultur bei 60° abgetoteter Choi. 7* Stunde

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386

Oskar Bail and Karl Rotky,

bei 37* behandelt Verwendet werden die Doeen von 0,1,0,05 and 0,02 ccm
der klarzentrifugierten, dann '/» Stunde auf 55° erhitzten Fliissigkeiten.
Einsaat Choi. Konst. *= 90000.

Extr. I

Extr. Ia

Extr. lb

Extr. II

Extr. II a

Extr. II b

3

4600

4 520

3928

10100

27 000

1296

3968

7 300

3800

316

42 000

1356

7840

ca. 40000

972

3 840

ub. 600 000

Rinderser. 56° Rinderser. a Rinderser. b
1760 lib. 300000 unzahlbar

6800 „ 50000 „

7760 dgl.

Komplementkontrolle ca. 500000

Obwohl die erhaltenen Extrakte in den meisten dieser
Versuche relativ ebenso schwach wirkten wie das Rinderserum,
aus dem sie hergestellt wurden, ist doch nicht zu verkennen,
daB sie durch die von der Extraktion herrGhrenden Rflck-
st&nde nur in geringerem MaBe beeinfluBt werden, was beim
Rinderserum in hohem Grade der Fall ist. Wohl aber unter-
liegen sie der ErschOpfung durch die nicht sensibilisierten,
lebenden oder toten Vibrionen. Im Versuch der Tabelle IX
zeigt besonders der zweite Extrakt diese EigentQmlichkeit,
w&hrend der erste, der viel starker ist als das Rinderserum,
aus dem er hergestellt wurde, sie nicht so deutlich ergibt.

Wollte man diese Versuche als beweisend und fflr den
TierkOrper in analoger Weise gQltig ansehen, so wire der
SchluB tlberraschend und bestechend einfach. Es wflrde dann
auf das Studium der Sensibilisierung der injizierten Vibrionen
ein Stadium der Absprengung der aufgenommenen Immun-
kdrper folgen. Diese losgelbsten ImmunkOrper wtlrden von
den Vibrionenresten nicht mehr gebunden, wohl aber warden
diese noch andere normale Immunkdrper an sich reiBen. Fttr
den Fall, daB auch diese dann wieder abgesprengt warden,
maBte eine bedeutende Verarmung an normalen ImmunkOrpern
die Folge sein, gleichzeitig auch deren Ersatz durch solche,
welche schon einmal mit Vibrionen in Berhhrung waren und
dadurch ihren Charakter ge&ndert haben, soweit bekannt im
Sinne einer mehr weniger ausgesprochenen Spezifitfit.

DaB SchlOsse in dieser Form nicht zul&ssig sind, zeigte
sich schon, als versucht wurde, wenigstens den einen der
Faktoren, die im Tierkorper tatig sind, das Komplement, mit

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 387

in Rechnung zu ziehen. Weitere Schwierigkeiten ergaben
sich dann, als es sich darum handelte, die in Kochsalzldsung
so leicht erfolgende AblOsung der Immunkdrper von den
Vibrionen in dem Serum herbeizufilhren, das znr Sensibili-
sierung gedient hatte.

Die erste Frage war, ob die im Reagenzglasversuche zu
beobachtende Immunkdrperabldsung auch im Tiere erfolgen
kdnne. Ftir Versuche in der Peritonealhdhle mit kQnstlichem
Immunserum ist dies bereits durch Versuche von Pfeiffer
und Friedberger, sowie Bail und Tsuda nachgewiesen.
Jetzt handelte es sich darum, von mit Rinderserum sensi-
bilisierten Vibrionen die Immunkdrper in der Blutbahn des
lebenden Tieres abzusprengen. Am Meerschweinchen gelangen
die Versuche sofort, wie auch aufierhalb des Tierkdrpers der
normale Rinderiromunkdrper mit Leichtigkeit an frisches Meer-
schweinchenserum abgegeben wird.

Tabelle X.

Serum aus frisch entnommenem Meerschweinchenblut wird teils un-
verandert (Serum b), teils nacb 1-stundiger Behandlung mit einer Kultur
Cholera Kraus, die mit 20 ccm inaktiviertem Rinderserum sensibilisiert war,
bei 37° (Serum a) */» Stunde auf 56° erhitzt. Einsaat 160000 Cholera
Kraus.

Serum a Serum b

0,15 ccm + 0,05 ccm Kompl. in 0,4 ccm 6240 unzfihlbar

0,075 „ +0,05 „ „ „ 0,4 „ 1952

0,025 „ + 0,05 ,, « ,, 0,4 ,, 656 „

0,15 „ + 0,4 „ NaCl-Ls. unzahlbar „

Komplementkontrolle: unzahlbar.

Es sei bier gleich eine auch in vielen frfiheren und
spftteren Versuchen mehr Oder minder deutlich hervortretende
Eigentflmlichkeit erw&hnt, die darin besteht, dafi hdhere Dosen
der immunkdrperhaltigen FlQssigkeit schlechter als geringere
wirkten. Eine TrQbung der Versuchsdeutlichkeit brachte
dieses als Komplementablenkung bekannte, tlbrigens nicht
ganz regelm&Bige Phanomen meist nicht hervor.

Tabelle XI.

Einem ca. 400 g schweren Meerschweinchen wird zunachst aus der
Carotis Blut entnommen, welches das Serum a und iiberdies das Komple-
ment fur den Versuch liefert. Gleich darauf erhalt es in die Jugularis eine
Injektion von l 1 /, Kulturen Cholera Kraus, die mit ca. 25 ccm inaktivem
Rinderserum 1 Stunde lang bei 40° sensibilisiert, gewaschen und in NaCl-

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388

Oskar Bail und Karl Rotky,

Losung verteilt waren. Das schon durch die zu starke Blutentnahme sehr
entkraftete Tier starb etwa 10 Minuten nach der Injektion; aus dem Herzen
lieli sich noch geniigend Blut gewinnen, welches das sterile Serum b lieferte.
Beide Sera wurden vor der Herstellung der mit 60 000 Cholera Kraus bzw.
20000 Typhus besaten Proben l / 2 Stunde auf 56° erwarmt.

Einsaat Choi. Kraus Einsaat Typhus

0,15 ccm

Ser.

a + 0,05 ccm KpL in 0,4

unziihlbar

30000

0,075

tt

tt

+ 0,05

ft

,, n 0,4

tt

9000

0,025

ft

+ 0,05

ft

„ ,, 0,4

it

11000

0,15

ft

tt

+ 0,4

ft

NaCl-Ls.

unzahlbar

0,15

ft

Ser. b + 0.05

ft

Kpl. in 0,4

200

20000

0,075

ft

+ 0,05

V

„ ,, 0,4

200

8000

0,025

ft

ft

+ 0,05

ft

„ ,, 0,4

NaCl-Ls.

3000

25000

0,15

ft

+ 0,4

ft

unzahlbar

unzahlbar

Tabelle XII.

Einera groBen Meerschweinchen werden 7 ccm Blut aus der Carotis
entnommen, die das Serum a liefern. Gleich darauf werden dem Tiere in
die Jugularis V/ 2 Kulturen Konstantinopel injiziert, welche iiber Nacht mit
25 ccm inaktivera Rinderserum sensibilisiert und darauf gewaschen waren.
Das nach f / 4 Stunden ohne besondere Krankheit verblutete Tier gab das
Serum b. Beide Sera wurden */ 2 Stunde auf 56° erhitzt. Als Komplement
diente Serum eines jungen Meerschweinchens. Die Einsaat hetrug fiir Choi.
Konstantinopel ca. 1 Million, fur Typhus 80000.

Einsaat Choi. Einsaat Typhus

0,1 ccm

Serum a + 0,05

ccm

Kpl. in 0,4

unziihlbar

90000

0,05 „

„ + 0,05

tt

,, 0,4

tt

iiber 100000

0,01 „

tt 4* 0,05

ft

„ „ 0,4

tt

dgl.

0,005 „

„ + 0,05

tt

„ 0,4

tt

tt

0,1 „

NaCl-Ls. + 0,4

tt

NaCl-Le.

204

*t

0,1 „

Serum b + 0,05

tt

Kpl. in 0,4

32 000

0,05 „

„ + 0,05

tt

» » 0,4

3808

50 000

0,01 „

„ + 0,05

it

„ 0,4

5040

fiber 100000

0,005 „

„ + 0,05

it

„ „ 0,4

9CX)0

dgl.

0,1 „

„ + 0,4

tt

NaCl-Ls.

unzahlbar

It

Tabelle XIII.

3 Kulturen von Choi. Konstantinopel wurden mit 30 ccm inaktivem
Rinderserum iiber Nacht sensibilisiert und in 2 Teilen gewaschen. Der eine
Teil wird mit 1 ccm frischem Meerschweinchenserum l 1 /* Stunde lang bei
37° gehalten, dann als Extrakt Ms. zentrifugiert. Den anderen Teil erh3.lt
ein Meerschweinchen von 380 g, dem vorher aus der Carotis Blut genommen
war (Serum a) in die Jugulaiis; das nach V/ 4 Stunde ohne besondere
Krankheit verblutete Tier lieferte das Serum b. Alle Versuchsflussigkeiten
wurden 1 / 2 Stunde auf 56 0 erhitzt. Einsaat Choi. Konstantinopel = 70 000.

Serum a Serum b M.-Serextr. Mschw.-Ser.
0,1 ccm + 0,05 ccm Kpl. unzahlbar 412 1344 unzahlbar

0,05 „ + 0,05 „ „ „ unziihlbar 3000 „

0,01 „ +0,05 „ „ „ „ 30 000

Komplementkontrolle = unzahlbar.

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkorpern. 389

Tabelle XIV.

4 Kulturen Cholera Konstantinopel wurden iiber Nacht mit 40 ccm
inaktivem Rinderserum behandelt und hierauf in 4 Teilen gewaschen. Ein
Teil wird in NaCl-Losung verteilt einem Meerschweinchen von 400 g, dem
vorher aus der Carotis Blut (liefert Serum a) genommen war, in die Jugular-
vene injiziert. Das Tier wird nach 2 Stunden ohne besondere Krankheit
verblutet (Serum b). Inzwischen war mit dem bereits abgeschiedenen, ganz
frischen Serum a (1 ccm) ein anderer Teil der sensibilisierten Vibrionen
aufgeschwemmt worden. Diese Aufschwemmung blieb 2 Stunden bei 37°
stehen, wobei alle Vibrionen in Granula zerfielen. Dann wurde die Fliissig-
keit als Extrakt abzentrifugiert. Alle Fliissigkeiten wurden vor dem Ver¬
suche l /* Stunde auf 56 0 erwarmt Einsaat ChoL Konstantinopel = 9200.

0,15 ccm + 0,05 ccm Kompl.
0,075 „ + 0,05 „ ,,

0,025 „ + 0,05 ,, „

0,01 „ -j- 0,05 „ „

Serum a M.-Serextrakt
unzahlbar 2120

n

3768

7100

Komplementkontrolle = unzahlbar.

Serum b
1728
1240
5300
19 000

Es unterliegt, obzwar die Versuche einige Schwankungen
aufweisen, doch keinem Zweifel, dafi auch innerhalb der Blut-
bahu des lebenden Meerschweinchens, und zwar, wie Tab. XI
lehrt, schon in der kfirzesten Zeit eine Anreicherung mit
bakteriolytischen Immunkdrpern eintritt, die gar nicht anders
als durch eine Abldsung der von den Vibrionen aufgenommenen
RinderserumimmunkOrper zu erklfiren ist, wie sie auch auBer-
halb des Tieres in dessen frisch abgeschiedenen Serum ein¬
tritt. Man hat also einiges Recht, aus Reagenzglasversuchen,
wenigstens wenn sie mit aktiven FIGssigkeiten, wie sie im
Tiere sich finden, angestellt werden, SchlGsse fflr das Verhalten
im TierkOrper zu ziehen.

Allerdings gilt das, was fGr das Meerschweinchen gefunden
wurde, schon nicht mehr fGr das Kaninchen, auch wenn man
unter ganz analogen Verh&ltnissen operiert.

Tabelle XV.

Zu dem Versuche werden die gleichen Vibrionen wie im Versuche
der Tabelle XIV verwendet; er wird gleichzeitig mit diesem angestellt.
Dafiir wird einem Kaninchen von 1100 g Blut genommen, welches das
Serum a liefert. Hierauf erhalt es in die Ohrvene einen Teil der im vorigen
Versuche erwahnten sensibilisierten Vibrionen, wahrend ein anderer Teil
mit 1 ccm des frisch abgeschiedenen und aktiven Serum a 2 Stunden bei
37° gehalten und dann als Extrakt zentrifugiert wird. Dem Kaninchen

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390

Oakar Bail and Karl Rotky,

wird nach 1 Stunde neuerlich Blut entnommen (Serum b), nach 2 Stunden
wird ea verblutet. Es hatte achon nach einer Stunde achwerate profuse
Di&rrhoe und wurde aehr matt. Daa Blut b und c dea Tierea waren ateriL
AUe Fliiasigkeiten wurden vor dem Verauche */ a Stunde auf 58° erwarmt.
Einaaat Choi. Konstantinopel = 9200.

Serum a Serum b Serum c Extrakt

0,15 ccm + 0,05 ccm Kompl. unzahlbar unzahlbar unzahlbar 130000
0,075 „ +0,05 „ „ „ „ „ 62 000

0,025 „ +0,05 „ „ „ „ „ 8800

0,01 „ + 0,05 „ „• „ „ „ 11200

Es hatte aich also aua den gleich aensibiliaierten Vibrionen, welche
ein Meerachweincheneerum stark wirkaam gemacht hat ten, im Kaninchen*
vereuche nichta gewinnen las sen; nur der in vitro hergestellte Extrakt wies
eine geringe Wirksarakeit auf. Unterauchungen iiber die Griinde dieser
Erscheinung wurden zunachat nicht angestellt

Da offenbar im MeerschweinchenkOrper mit Rinderserum
sensibilisierte Choleravibrionen ihreo Immunkdrper in fthnlicher
Weise abgeben, wie auBerhalb desselben an aktives Meer-
schweinchenserura, so wurden solche Extrakte zun&chst dazu
benutzt, die in den Tabellen VII—IX mit Kochsalzextrakten
angestellten Versuche zu wiederholen.

Tabelle XVI.

3 Kulturen Cholera Kraus wurden mit je 25 ccm inaktivem Kinder*
serum dreimal nacheinander sensibilisiert, gewaschen und mit einer Mischung
von 1,5 ccm NaCl-Losung + 1 ccm frischem Meerachweincheneerum 1 Stunde
bei 42° behandelt. Es erfolgte dabei maasige Agglutination unter voll-
atandiger Granulabildung. Nach Abzentrifugieren dea Extraktes 1 wurde
der Bodensatz neuerlich in gleicher Weiae zur Gewinnung dea Extraktes II
behandelt. Ala Kontrolle diente eine Mischung von 1,5 ccm inaktivem
Rinderserum + 1 ccm aktivem Meerachweinchenaerum. Nachdem alle
Proben */» Stunde auf 56° erwarmt waren, wurden je 0,8 ccm derFliiaaig*
keiten mit je ‘/« dea zweimal abgeaprengten Kuckstandea und je '/, Kultur
bei 60° getoteter Cholera */» Stunde bei 37° behandelt. Nach Zentrifugieren
ergeben aich die Extrakte la, IIa, lb, lib, Kontrolle a und b. Einaaat
Cholera Kraus = 86 000.

0,1 ccm + 0,05 ccm Kompl.

0,05 „ +0,05 „ „

0,02 „ +0,05 „

Extr. II a Extr. II b

0 10000

3440 11000

3600 30000

Extr. I
0
0
0

Extr. Ia
0
0
17

Extr. Ib
0

Rdserkontr.

580

1392

?

8

2

Extr. II
4

3776

3136

Bdser. a

84

936

11670

Rdaer. b
unzahlbar

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Vereuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkorpern. 391

Tabelle XVn.

3 Kulturen Cholera Konstantinopel werden zweimal mit je 40 ccm
inaktivem Binderserum sensibilisiert, gewaschen und mit je 1,5 ccm NaCl-
L5sung + 1 ccm frischem Meerechweinchenserum zweimal nacheinander
extrahiert. Die Extraktion erfolgte bei 37 0 durch je eine Stunde. Die auf
diese Weise gewonnenen Extrakte I und II wurden ebenso wie eine aus
1,5 ccm inaktivem Binderserum und 1 ccm aktivem Meerechweinchenserum
bestehende Kontrolle im Verhaltnis 1:2 mit NaCl-L5sung verdfinnt und
je 1 ccm davon mit */ 3 des abzentriiugierten Bodensatzes und je ‘/ 2 bei
60° getdteter Agarkultur von Cholera Konstantinopel s / 4 Stunden bei 37°
behandelt. Die zentrifugierten Extrakte 1 a, II a, I b, II b und Binderserum a
und b wurden vor dem Vereuche V* Stunde auf 56° erwarmt. Einsaat
Choi. Konstantinopel = 23 000.

Extr. I

Extr. Ia

Extr. lb

Extr. II

0,15 ccm

+

0,04

KpL

in 0,4 ccm

0

68

96

3

0,075 „

+

0,04

yy

0

0

0

1

0,03 „

+

0,04

»»

»> 0,4 „

24

0

60

5720 (?)

0,015 „

+

0,04

»>

,.0,4 „

320

2

6320

16

Extrakt II a Extrakt II b Bdserkontr. Bdser. a Bdser. b

81 1840 228 3280 unzahlbar

0 2960 112 3400

103 2800 2964 8400

27 10 000 5600 5200

Proben aller Flfissigkeiten ohne Komplement und die Komplement-
kontrolle ergaben ungehindertes Wachstum.

Was in den Versuchen zun&chst auffallt, ist die groBe
Menge von bakteriolytischen Immunkdrpern, die von stark
mit Rinderserum sensibilisierten Vibrionen abgegeben werden
kbnnen; denn auch die zweite Extraktion liefert noch fiberaus
wirksame Flfissigkeiten. Die Extrakte werden durch die Rilck-
stfinde, von denen sie gewonnen sind, gar nicht mehr ver-
findert, aber auch durch normale Vibrionen nur wenig; immer-
hin ist in den schw&cheren zweiten Extrakten die Absorption
durch Normalvibrionen unverkennbar, die geringere der ersten
Extrakte kann durch ihre hohe bakteriolytische Wirksamkeit,
die die des Rinderserums, aus dem sie ja eigentlich hergestellt
sind, weit tlbertrifft, erkl&rt werden, so dafi bezttglich der Ex¬
trakte der Satz, daB sie nur durch Normalvibrionen zu beein-
flussen sind, aufrecht bleiben kann. Im Gegensatze aber zu
den Rflckst&nden der Extraktion mit NaCl-L8sung absorbieren
die RdckstUnde nach Serum extraktion auch die normalen
Rinderimmunkdrper nur noch in geringem Grade oder nicht
mehr. Da diese Ruckst&nde durch das aktive Meerschweinchen-

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392

Oskar Bail und Karl Rotky,

serum in Granula umgewandelt sind, muB diese Ver&nderung
als die Ursache des AufhOrens der Bindungsf&higkeit an-
gesehen werdeu.

Sollen die Versuche mit Abldsuug der an Vibrionen ge-
bundenen Normalimmunkorper zur Erklarung der Bildung
kflnstlicher Bakteriolysine im Tier verwendet werden, so mufi
sich zunachst noch zeigen lassen, dafi und unter welchen Um-
stfinden die Immunk5rper eines und desselben Serums das
eine Mai an Vibrionen herantreten, dann sich wieder im gleichen
Serum abldsen kdnnen; es muB also mdglich sein, mit dem-
selben Rinderserum Vibrionen zu sensibilisieren und die ge-
bundenen Iramunkdrper ohne Wechsel des Mediums wieder
in wirksamer Form abzuldsen. Die Aufgabe war naturgem&B
schwierig, lieB sich aber vollstSndig ldsen.

Allerdings konnte die bisherige Methodik, die bei der
Sensibilisierung vorwiegend inaktives Serum anwendete, nicht
zum Ziele fUhren. Denn es war schon frflher bekannt, daB
mit inaktivem Serum behandelte Vibrionen an neues inaktives
Serum nicht nur keine Immunkorper abgeben, sondern daraus
sogar itnmer weiter Immunkdrper binden. Dies bestStigte sich
auch jetzt ausnahmslos und es sei deshalb nur ein Versuch
angefiihrt, der zeigt, wie der Zusatz von inaktivem Rinder-
serum die Extraktion sensibilisierter Vibrionen durch NaCl-
Losung beeintrSchtigt.

Tabelle XVIII.

4 Kulturen Choi. Konstantinopel wurden mit inaktivem Rindersemm
3mal sensibilisiert und in 4 Teilen gewasehen. Die Riickstande wurden
1 Stunde bei 42° behandelt mit:

a) 1 ccm NaCl-Losung

b) 0,95 „ „ + 0,05 ccm inakt. Rinderserum

c) 0,85 „ „ + 0,15 „ „ „

d) 0,6 „ „ + 0,4 „ „ „

Die abzentrifugierten Flussigkeiten wurden in den Dosen 0,075 und
0,025 ccm mit 0,05 ccm Komplement, gleichzeitig mit unbehandelten Rinder-
serumkontrollen mit einer Einsaat von 7000 untersucht.

Extrakt a Extrakt b Extrakt c Extrakt d
63 112 568 3120

61 408 4760 7000

inakt. Rdserkontr. a inakt. Rdserkontr. b inakt. Rdserkontr. c
10-10 41 16

2400 848 136

Komplementkontrolle: unzahlbar.

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Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 393

Man kann sehr deutlicb verfolgen, wie die Extrakte um so schlechter
werden, je mehr die Extraktionsflussigkeit Rinderseram enthalt: gegenfiber
dem sehr wirksamen Extrakte a mit reiner NaCl-L6sung ist schon der
Extrakt b schwficher, ist aber immer noch mehr bakterizid als die Kon-
trollverdunnung a des Rinderserums, ein Zeichen, dafl noch Immunkorper
von den Vibrionen her fibergegangen sind. In den folgenden Proben kehrt
sich das Verhaltnis gerade um.

Nimmt man reines inaktives Rinderserum oder auch solches, welches
vorher mit Vibrionen behandelt und dadurch seiner natfirlichen Immun¬
korper beraubt ist, zur Extraktion inaktiv sensibilisierter Vibrionen, so er-
halt man niemals wirksame Extrakte, und das reine Rinderserum erweist
sich mehr oder weniger als erschopft. Versuche eigens anzuffihren ist nicht
notig, da dieses Verhalten gelegentlich der Mitteilung anderer Versuche
hervortreten wird.

Eine genauere Ueberlegung lieB bald erkennen, daB filr
die Verhfiltnisse im Tierkfirper Versuche mit inaktivierten
Flfissigkeiten tlberhaupt nicht zum Vergleich herangezogen
werden konnen: im Tiere mag gelegentlich eine unwirksame
Flfissigkeit vorkommen, Verfinderungen wie sie durch hohe
Teraperatur zustande kommen, sind aber ausgeschlossen.
Reagenzglasversuche haben also nur dann Brauchbarkeit, wenn
sie mit moglichst unverfindertem Serum ausgefiihrt werden.
In der Tat werden dann die erhaltenen Resultate ganz anders.

Tabelle XIX.

5 Kulturen Choi. Konstantinopel werden fiber Nacht mit ca. 80 ccm
inaktivem Rinderserum sensibilisiert, in 5 Teilen gewaschen und die Vibrionen
1 Stunde bei 42° extrahiert mit

1 ) 1 ccm NaCl-Losung

2) 0,9 „ „ + 0,1

3j 0,75 |, „ -f 0,25

4) 0,5 „ „ + 0,5

5) 1 „ akt. Rinderserum

akt. Rinderserum

yy yy

yy yy

Die nach der Extraktion verb] ei ben den, abzentrifugierten Riickstande
wurden dann mit je 1 ccm inaktivem Rinderserum 1 Stunde bei 42° be¬
handelt und wieder entfernt. Vor dem Versuche wurden alle Fliissigkeiten,
auch das zur Kontrolle dienende aktive Rinderserum, */* Stunde auf 58°
erwarmt. Einsaat 56000,

Extr. 1

0,1 + 0,05 Kplt 82

0,05 + 0,05 „ 22

Extr. 2 Extr. 3
160 729

1832 4240

Extr. 4 Extr. 5
22 19

682 0

Rdser. 1 Rdser. 2 Rdser. 3 Rdser. 4 Rdser. 5
0,05 + 0,05 Kplt. 11600 9800 4160 1048 1732

Aktives Rinderserum lieferte in den Dosen von 0,1, 0,05, 0,025 und
0,01 ccm mit dem gleichen Komplement, das an sich Vermehrung zulieS,
0, 112, 2800, 2160 Kolonien.

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394

Oskar Bail und Karl Rotky,

Bis auf die UnregelmaGigkeit im Extrakt 3, fur welche eine Ursache
nicht aufzufinden ist, sieht man sofort, dafi die Extrakte mindestens ebenso
stark, wie das Rinderserum selbst wirken; von einer Immunkorperabsorption
durch sensibiiisierte Vibrionen ist also bei aktivem Serum keine Rede, im
Gegenteil, es wird durch Behandiung mit solchen merkbar verstarkt. Die
daraus gewonnenen Riickstande vermdgen dann ein inaktives Serum um so
weniger zu absorbieren, je mehr aktives Serum fur die Extraktion genommen
worden war. Diese Beobachtung bildete den Fingerzeig fur die folgenden
Versuche.

Tabelle XX.

4 Kulturen Choi. Kraus wurden iiber Nacht mit ca. 50 ccm inaktivem
Rinderserum sensibilisiert, in 4 Teilen gewaschen und mit 1) 1 ccm NaCl-
Losung, 2) 1 ccm inaktivem, 3) 1 ccm aktivem Rinderserum 1 Stunde bei
42° behandelt und abzentrifugiert; die gewonnenen Extrakte wurden vor
dem mit 17000 Choi. Kraus angesetzten Versuche */, Stunde bei 56*
erwarmt.

Extr. 1 Extr. 2 Extr. 3 Rinderser. 56
0,15 ccm + 0,05 Kplt. 0 992 0 70

0,075 „ +0,05 „ 0 1084 0 0

0.025 „ +0,05 „ 0 2768 0 4

Kontrollproben ohne Komplement und Komplement allein ergaben
Vermehrung.

»

Die inaktiv sensibilisierten Vibrionen geben also mit
NaCl-Ldsung tadellos wirksamen Extrakt, erschbpfen inaktives
Rinderserum unzweideutig, wenn auch gerade in diesem Ver¬
suche nicht so stark wie sonst, lassen aber das gleiche aktive
Serum unverfindert. Bedenkt man nun, daB wahrend der Be¬
handiung mit aktivem Serum typische Bakteriolyse, von der
man sich jederzeit fiberzeugen kann, erfolgen muB, so liegt
es nahe, diese ftir die ge&nderte AbsorptionsfShigkeit der
sensibilisierten Vibrionen verantwortlich zu machen. Dann
war aber auch vorauszusetzen, daB sich mit aktivem Serum
behandelte und dabei bakteriolysierte Vibrionen fiberhaupt
und von vornherein anders verhalten mJissen, als inaktiv
sensibiiisierte.

Tabelle XXI.

Je 27, Kulturen Choi. Kraus wcrden mit je 25 ccm a) aktivem, b) in¬
aktivem Rinderserum 1 Stunde bei 37® behandelt und dann iiber Nacht bei
Zimmertemperatur stehen gelassen. Die Vibrionenmassen beider Proben
werden in je 3 Teilen gewaschen und mit 1 ccm NaCl-Losung, 1 ccm inaktivem
und 1 ccm aktivem Rinderserum 1 Stunde bei 42° behandelt; daraus ergeben
sich die Extrakte I—III, bezw. IV—VI. Vor dem mit einer Einsaat
von 18000 Choi. Kraus angestellten Versuche werden alle Proben 1 / 2 Stunde

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Versuche fiber die Bildnng von bakteriolytischen Immunkfirpern. 395

auf 58° erwarmt. Die Vibrionen fur den Extrakt III zeigten tot wie
nach der Extraktion lediglich dichte Haufen von Oranula in „Grund-
Bubatanz“, die von Extrakt VI zeigten yor der Extraktion nur agglutinierte
Vibrionen, nach derselben viel Oranula in Haufen, neben einzelnen freien
Vibrionen. Der Versuch ist mit den Dosen von 0,1, 0,05 und 0,01 ccm
jeder Flussigkeit und 0,05 ccm Kompiement angesetzt.

Extr. I Extr. II Extr. HI Extr. IV Extr. V Extr. VI Rdser. 56 0

196 5000 0 15 2400 0 0

2 ? 0 0 2432 0 0

1328 1344 62 0 9000 0 6412

Kontrollproben ohne Komplement zeigten ungehemmte Vermehrung,
die Komplementkontrolle ergab 4000 Kolonien.

TabeUe XXII.

Genaue Wiederholung des vorigen Vereuches mit Choi. Konstantinopel;
der einzige Un terse hied besteht darin, dafi die Extraktion nicht mit 1,
sondern nur mit 0,75 ccm von NaCl-Losung, aktivem und inaktivem Rinder-
serum durchgeffihrt wurde. Einsaat 7800 Choi. Konstantinopel.

Extr. I Extr. II Extr. HI Extr. IV Extr. V Extr. VI Rdser. 56°

0 3248 848 1120 unzMhlbar 1848 2

4 2960 92 73 „ 3120 12

36 412 2896 1128 „ 27 000 624

Die samtlichen Kontrollproben zeigen ungehemmte Vermehrung.

Trotz der die Beurteilung etwas stdrenden Eigenwirkung
des Komplements im Versuche der Tabelle XXI l ) ist die
Uebereinstimmung der beiden Versuche eiue vollst&ndige.
Das aktive Serum wird durch sensibilisierte Vibrionen nicht
Oder nur wenig verfindert, gleichgtlltig ob die Sensibilisierung
mit aktivem Oder inaktivem Serum vorgenommea worden war.
Wfihrend aber inaktiv sensibilisierte Vibrionen frisches in-
aktives Serum total oder stark unwirksam machen, verandern
es aktiv sensibilisierte und dabei bakteriolysierte nur in wesent-
lich geringerem Grade oder wie in sp&teren Versuchen auch
gar nicht. Hingewiesen sei auch auf die starke Wirksamkeit
der Kochsalzextrakte, sowohl aus aktiv wie inaktiv sensibili-
sierten Vibrionen, sowie auf die besonders in Tabelle XXI

1) Schon in alteren Vereuchen war beobachtet worden, da£ ein Cholera-
etamm (Choi. Pfeiffer) schlieBlich bo empfindlich fur die Bakteriolyse wird,
dafi er wegen der meistenB eintretenden Eigenwirkung des Komplementa
nicht mehr zu brauchen ist. Aehnliches zeigte sich hier fur Choi. Kraus
und auch Choi. Konstantinopel wurde spater unverliifilich, bo dafi der Cholera-
stamm 74, den wir Herrn Prof. Neufeld yerdanken, das Hauptvereuchs-
objekt wurde. •

Zfitschr. f. InnnunitStsforschung. Ohg. Bd. XVII. 27

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396

Oskar Bail und Karl Rotky,

hervortretende eigentflmliche Abh&ngigkeit der optimalen Bak-
terizidie von quantitativen Verhfiltnissen. Ueber das mikro-
skopische Aussehen der mit aktivem Rinderserum behandelten
Vibrionen, sowie fiber die eigentfimliche Form der Agglu¬
tination in solchem ist scbon in frfiheren Arbeiten des In¬
stitutes ausreichend berichtet worden 1 ).

Die Bedeutung des Komplementes ffir das verschiedene
Verhalten aktiv and inaktiv sensibilisierter Vibrionen liefi sich
durch Extraktionsversuche mit inaktivem Rinderserum, aber
unter Zusatz von frischem Meerschweinchenserum demon-
strieren.

TabeUe XXIII.

3 Kulturen Choi. Konstantinopel wurden iiber Nacht mit 30 ccm
inaktivem Rinderserum sensibilisiert, in 3 Teilen gewaschen und 1 Btunde
bei 42° behandelt mit 1) 0,75 ccm NaCl-LOsung + 0,25 ccm inaktivem,
2) 0,75 ccm inaktivem Rinderserum + 0,25 ccm inaktivem und 3) 0,75 ccm
inaktivem Rinderserum + 0,25 ccm aktivem Meerschweinchenserum. Fur
die abzentrifugierten Extrakte dienten in analoger Weise hergestellte Proben
ohne Bakterienbehandlung als Kontrollen. Alle Fliissigkeiten wurden vor
dem Versuche, der mit einer Einsaat von 19000 Choi. Konstantinopel an-
gestellt wurde, */* Stunde auf 56° erwarmt. Verwendet wurden die Dosen
0,075 und 0,025 ccm mit je 0,05 Komplemenk

Extrakt Extrakt Extrakt Kontrolle Kontrolle Kontrolle
I II III zu Extrakt I zu Extrakt II zu Extrakt III

26 16000 2 3216 632 716

54 12 600 6 5288 412 192

Die Komplementkontrolle lieferte nur 848 Kolonien.

Obwohl aucb in diesem Versuche mit Choi. Konstantinopel
das Komplement allein sich bereits als wirksam gezeigt hatte,
ist doch bei Vergleich der beiden Extrakte II und III aufs
klarste zu erkennen, wie nur die Intervention des fremden Kom-
plements das ge&nderte Verhalten der gleichm&Big sensibili-
sierten Vibrionen zu dem inaktivierten Rinderserum bedingt
haben kann.

TabeUe XXIV.

Je 4 Kulturen Choi. Konstantinopel wurden mit je 40 ccm inaktivem
Rinderserum und einer Mischung von 30 ccm dieses mit 10 ccm des
gleichen aber aktiven Serums iiber Nacht bei Zimmertemperatur behandelt
und in je 4 Teilen gewaschen. Zur Extraktion wird teUs unverandertes
inaktives Rinderserum benutzt, teils solches, welches durch ‘/j Stunde bei

1) Diese Zeitschr., Bd. 1, No. 6. •

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 397

37° mit einer Kultur Choi. Konstantinopel (8 ccm) behandelt und dann
wieder abzentrifugiert war. Die Anordnung ist also:

1 ) inakt. sens. Vibr. + 0,75 ccm inakt Rind.-S. + 0,25 ccm inakt. Meerschw.-S.

2) ,, „ ,, -f- 0,75 „ „ „ + 0,25 ,, akt. ,,

3) „ „ „ + 0,75 „ erachSpft. „ + 0,25 „ inakt. „

4) ,, „ ,, ■+■ 0,75 „ ,, » 0^5 „ akt. „

Nach 1-stiindiger Behandlung bei 42° werden die Extrakte 1—4 er-
halten. Die vdllig analog behandelten, aktiv seneibilisierten Vibrionen
liefern die Extrakte 5—8. Kontrollen 1—4 sind die Extraktionsfiiissigkeiten,
ohne jede Vibrionenbehandlung gelassen. Alle Versuchsflussigkeiten werden
vor der Einsaat von 34000 Choi. Konstantinopel ‘/j Stunde auf 56° er-
warmt und in den Dosen von 0,075 und 0,025 ccm verwendet, mit 0,05
aktivem Meerschweinchenserum als Komplement.

Extrakt I Extrakt II Extrakt III Extrakt IV Extrakt V Extrakt VI

unzahlbar 0 unz&hlbar 24 3680 2

„ 2 „ 1800 228 1928

Extrakt VII Extrakt VIII Kontr. I Kontr. II Kontr. Ill Kontr. IV
73 55 7 19 unzahlbar unzahlbar

26 80 25 21

Die Komplementkontrolle allein ergab 80000 Kolonien.

Tabelle XXV.

Genaue Wiederholung des Versuches in* Tabelle XXIV, die gleichen
Bezeichnungen. Einsaat Choi. Konstantinopel = 120000.

Extrakt I Extrakt II Extrakt III Extrakt IV Extrakt V Extrakt VI

unzahlbar 3 840 unzahlbar 648 6 23

„ 1764 „ 1440 18 20

„ 11000 „ 2232 204 9

Extrakt VII Extrakt VIII Kontr. Rinder-Ser. 0,75 + Meerschw.-Ser. 0,25
0 480 4

12 75 28

93 36 70

Kontrolle mit erschopftem Rinderserum 4 - Meerschweinchenserum:

11000

40000

70000

Die Komplementkontrolle ergab 97000 Kolonien.

Beide Versuche, wenn auch natOrlich in den absolnten
Zahlenangaben etwas variierend, sprechen vdllig beweisend ira
gleichen Sinne. Inaktiv sensibilisierte Vibrionen lassen unter
dem Einflusse eines fremden Komplements ein frisch zuge-
setztes inaktives Rinderserum unverSndert, welches sonst durch
die gleichen sensibilisierten Vibrionen ganz erschdpft wflrde.
Werden aber Vibrionen statt mit inaktivem mit aktivem Rinder-

27*

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398 Oskar Bail und Karl Rotky,

serum vorbehandelt, so verm5gen die verbleibenden Rflckst&nde
von vornherein nicht mehr, inaktives Rinderserum unwirksam
zu machen.

Die Bedeutung der Versuche in den letzten Tabellen geht
aber weiter. Bei beiden wurde aufier gewdhnlichem inakti-
vierten Rinderserum auch noch solches verwendet, welches
durch Behandlung mit Bakterien der gleichen Art g&nzlich
unwirksam geworden, seiner Immunkdrper beraubt war. Dieses
wird, wie schon Bail und Tsuda bekannt war, durch inaktiv
sensibilisierte Vibrionen nicht verfindert, hdchstens vollst&ndiger
erschOpft, wenn es dies noch nicht war. Setzt man aber aufier
den sensibilisierten Vibrionen Komplement zu, so wird es
wieder wirksam und das gleiche tritt ohne Komplement ein,
wenn man von vornherein mit aktivem Rinderserum behandelte
Vibrionen verwendet. Damit ist das Problem, die durch
Vibrionen gebundenen ImmunkOrper eines Normalserums im
gleichen Serum wieder zur Abspaltung zu bringen und neuer-
lich wirksam zu machen, gelOst: die gleichen Vibrionen,
welche ein Rinderserum erst s einer ImmunkOrper
berauben, sind auch imstande, unter Intervention
des Komplements, dasselbe wieder wirksam zu
machen; Immunkdrperabsorption und Immun-
kOrperabgabe kOnnen nach und jedenfalls auch
nebeneinander in derselben aktiven KGrper-
flflssigkeit stattfinden.

Ueber Regeneration eines durch Bakterienbehandlung un¬
wirksam gewordenen, seiner ImmunkOrper beraubten Serums
ist in der Literatur kaum etwas zu finden. Abgesehen von
den Arbeiten Pfeiffers und Friedbergers und Bails und
Tsudas, welche dies mehr indirekt erschliefien lassen, ist
Verff. nur eine viele Jahre zurflckreichende Angabe von Bail 1 )
bekannt, bei welcher mit toten Bacillen behandeltes aktives
Kaninchenserum spontan, unter nicht genauer studierten Um-
standen, einen Teil seiner Wirkung zuriickgewann.

Es sollte nun zun&chst untersucht werden, ob auch die
Riickst&nde, welche einmal den aufgenommenen ImmunkOrper
abgegeben haben, wieder imstande seien, neuen zu binden,

1) Arch. f. Hyg., 1899.

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Versuche fiber die Bildung tod bakteriolytischen Immunkdrpern. 399

wobei naturgem&fi zwischen den normalen und den schon ab-
geldsten zu unterscheiden war.

Tabelle XXVI.

6 Eulturen Choi. Konstantinopel wurden in einer Miachung tod
20 ccm aktivem und 40 ccm inaktivem Rinderseram fiber Nacht belassen
und hieraut die gesamte gewaschene Bakterienmasse mit 5 ccm eines in-
aktiven Rinderserums, welches mit 1 Eultur lebender Choi. Eonstantinopel
erschopft war, in der gewohnlichen Weise 1 Stunde bei 42 0 extrahiert. Die
abzentrifugierte Flussigkeit bildet den Extrakt A. Der verbliebene Vibrionen-
rfickstand wurde in Tier Teilen gewaschen und wie gewohnlich extrahiert
mit: 1) 0,75 ccm Extrakt A + 0,25 ccm inaktiTem Meerschweinchenserum,
2) e ben so mit 0,25 ccm aktivem Meerschweinchenserum, 3) mit 0,75 ccm
inaktiTem Rinderseram mit 0,25 inaktiTem und 4) ebenso mit aktivem
Meerschweinchenserum. Als Eontrolle diente 0,75 ccm Extrakt A, be-
ziehungBweise inaktives Rinderseram mit je 0,25 aktivem Meerschweinchen-
seram. Alle Proben wurden vor dem mit 97 000 Choi. Eonstantinopel und
in den Dosen 0,075 und 0,025 mit 0,05 Eomplement angesetzten Versuche
V, Stunde bei 56° erwarmt.

Extr. A

Rinderser. erschopft

Extr. 1

Extr. 2

Extr. 3

Extr. 4

0

unzahlbar

0

0

0*

0

0

4

0

0

8

Eontrolle 1 Kontrolle 2 Inakt. Rinderseram Eomplementkontrolle
0 4 2 ca. 200000

0 2 0

Als Erg&nzungsversuch eines an sich sehr wirksamen,
durch Bakterienbehandlung aber total erschdpften Rinderserums
ist der Versuch, wie so viele andere seiner Art, vbllig flber-
zeugend. Die nach der Abldsung der gebundenen Immun-
korper Qbrig bleibenden Vibrionenrhcksttlnde vermdgen aber
nicht mehr, weder normales, noch kQnstlich reaktiviertes
Rinderserum zu beeinflussen. In der Meinung, dafi man, um
eine neuerliche Binduogsfahigkeit solcher RQckstfinde sichtbar
zu machen, erst alle vorher gebundenen Immunkdrper ab-
gelost haben masse, wurden Versuche mit der wiederholten
Extraktion eines und desselben VibrionenrQckstandes unter-
nommen.

Tabelle XXVII.

5 Eulturen Choi. Eonstantinopel wurden fiber Nacht bei Zimmer-
temperatur mit 50 ccm inaktivem Rinderseram sensibilisiert, in zwei Teilen
gewaschen und a) mit 1 ccm NaCl-Losung + 1 ccm inaktivem, b) 1 ccm
NaCl-Losung + 1 ccm aktivem Meerschweinchenserum 1 Stunde bei 42°
extrahiert, was die Extrakte a und b liefert. Die abzentrifugierten Rfick-

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400

Oskar Bail und Karl Rotky,

stande werden hierauf neuerlich mit der doppelten Menge der vorigen
Mischungen 1 Stunde extrahiert und ergeben die Extrakte al und bl.
Die verbhebenen Riickstande wurden in je zwei Teilen gewaschen und
1 Stunde bei 42° behandelt mit:

1 ) Riickst. nach al + 0,5 ccm Rind.-S. inakt. -f 0.25 Meerschw.-S. inaktiv.

2) „ „ a 1 + 0,5 „ „ „ + 0,25 „ aktiv.

3) „ „ b 1 + 0,5 „ ., „ +0,25 „ inaktiv.

4) ,, „ bl + 0,5 „ „ „ +0,25 „ aktiv.

Die durch Zentrifugieren erhaltenen Extrakte 1—4 wurden wie alle
iibrigen Proben, samt den Kontrollen a (0,5 ccm NaCl-Losung + 0,5 ocm
Meerschweinchenserum aktiv) und b (0,5 ccm Rinderserum inakt + 0,25 ccm
Meerschweinchenserum aktiv) vor dem mit 62 000 Choi. Konstantinopel in
den Dosen von 0,075 und 0,025 ccm mit 0,05 ccm Komplement angesetzten
Versuche V* Stunde auf 58° erwarmt.

Extrakt a

Extrakt b

Extrakt a 1

Extrakt b 1

Kontr. a Extrakt 1

0

0

8

0

100000 6

29

0

14

0

100000 31

Extrakt 2

Extrakt 3

Extrakt 4

Kontrolle b

Komplementkontrolle

6960

0

31

0

ca. 200000

1224

. 52

117

20

Tabelle XXVIII.

3 Kulturen Choi. Konstantinopel wurden mit aktivem + inaktivem
Rinderserum im Verhaltnisse 1:3 1 Stunde bei 40° sensibilisiert (Bakterio-
lyse), hierauf in drei Teilen gewaschen. Gleichzeitig w*ar „ersch6pfte8
Serum 44 durch Behandlung von 15 ccm inakt. Rinderserum mit 1 Kultur
Konstantinopel hergestellt worden. Die sensibilisierten Vibrionen wurden
nun 1) mit 2 ccm NaCl-Losung, 2) ebensoviel inaktivem Rinderserum,
3) ebensoviel erschopftem Serum versetzt und jeder Probe je 0,5 ccm aktives
Meerschweinchenserum zugefiigt. So blieben die Proben iiber Nacht bei
Zimmertemperatur und lieferten nach dem Zentrifugieren die Extrakte 1—3.
Dann wurden die Riickstande mit den gleichen Mengen derselben Fliissig-
keiten (Extrakte 4—6) und noch ein drittes Mai mit der doppelten Menge
davon je 1 Stunde bei 42° extrahiert (Extrakt 7—9). Die schliefilich ver-
bleibenden, einmal gewaschenen Riickstande wurden sodann mit je 0,5 ccm
inaktivem Rinderserum + 0,5 ccm NaCl-Losung 1 Stunde bei 40° be¬
handelt und lieferten dadurch nach Zentrifugieren die Rindersera 1—3.
Dosen von 0,075 und 0,025 ccm mit 0,05 ccm Komplement und Einsaat
= 70000.

Extrakt 1

Extrakt 2

Extrakt 3 Extrakt 4

Extrakt 5

Extrakt 6

0

19

0 14

0

7

202

57

124 408

60

216

Extrakt 7

Extrakt 8

Extrakt 9 Kindcrser. 1

Rinderser. 2

Rinderser. 3

31

1324

12 300 3

9

12

716

680

56 000 14

4088

196

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Vereuche fiber die Bildung tod bakteriolytischen Immunkorpern. 401

NaCl + Mschw.-S. Rind.-S. + Mschw.-S. Erechopft. Rind.-S. + Mschw.-S.
ca. 200000 0 11200

ca. 200000 0 78000

Rindereerum + NaCl-Losung Komplementkontrolle
240 unzahlbar

0

TabeUe XXIX.

3 Kulturen Choi. Konstantinopel wurden mit 120 ccm inaktiveru
+ 10 ccm aktivem Rindereerum l‘/ 4 Stunde bei 42° gehalten, wobei voll-
standige Granulabildung eintrat und die Bakterienmasse in drei Teilen ge-
waechen; dabei wurde die Beobachtung gemacht, dafi das Waschwasser, ffir
sich mit Komplement vereetzt, normale Vibrionen stark zur Granulabildung
brachte. Je ein Teil der sensibilisierten Vibrionen wurde mit 1) 2 ccm
NaCl-Losung, 2) 2 ccm in aktivem Rindereerum, und 3) 2 ccm erschopftem
inaktiven Rindereerum (1 Kultur auf 16 ccm) versetzt und alien Proben
0,5 ccm aktives Meerechweinchenserum zugesetzt. Nach 1-stfindiger Ex-
traktion bei 42 0 wurde abzentrifugiert (Extrakte 1 —3), die Satze neuerlich
in den gleichen Flfissigkeitsmengen fiber Nacht bei Zimmertemperatur ge¬
halten (Extrakte 4—6), dann noch zweimal je 1 Stunde bei 42° extrahiert
(Extrakte 7—12). Die zuletzt verbliebenen Rfickstande wurden eodann
nach Waschung mit je 0,75 ccm inaktivem Rindereerum + 0,25 ccm aktivem
Meerechweinchenserum 1 Stunde bei 40 0 gehalten und liefera nach Zentri-
fugieren die Rindereeren 1—3. Kontrolle 1 ist 2 ccm NaCl-Ldsung + 0,5
aktives Meerechweinchenserum, Kontrolle 2 ist 2 ccm inaktives, 3 2 ccm
erech5pftes Rindereerum mit je 0,5 ccm Meerechweinchenserum, Kontrolle 4
ist 0,75 ccm inaktives Rindereerum + 0,25 ccm aktives Meerachweinchen-
eerum. Vor dem in den Dosen von 0.075 und 0,025 ccm mit 0,05 ccm
Komplement und einer Einsaat von 70000 ChoL Konstantinopel angesetzten
Vereuche werden alle Proben */> Stunde auf 56° erwarmt.

Extraktl Extrakt 2 Extrakt 3 Extrakt 4 Extrakt 5 Extrakt6 Extrakt7
0 0 1368 4640 6 872 216

8 45 840 2736 156 896 224

Extrakt 8 Extrakt 9 Extrakt 10 Extrakt 11 Extrakt 12 Rindereer. 1
12 166 5 664 72 12000 86

30 3760 30 000 118 70000 512

Rindereer. 2 Rindereer. 3 Kontr. 1 Kontr. 2 Kontr. 3 Kont. 4
1928 74 fiber 100000 0 ■ fiber 100000 0

2560 2148 „ 100000 6 „ 100000 102

Was somit die Bindungsffihigkeit der RGckstfinde betrifft,
so fehlt eine solche zwar nicht ganz, sie ist aber unter alien
Urastfinden gering und mit deijenigen, welche normale Vibrionen
ausflben, nicht zu vergleichen. Auf diesen Gegenstand wird
fibrigens weiter unten mit gefinderter Metbodik noch zurdck-
zukommen sein.

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402

Oskar Bail und Karl Rotky,

Die Bedeatang der angeffihrten Versuche liegt aber fiber-
dies darin, daB sie, abgeseheo von einigen Zahlenschwankungen,
zeigen, welch grofie Mengen von Immunkorpern durch die
sensibilisierten und daneben bakteriolysierten Vibrionen ab-
gegeben werden kfinnen. Noch vierte Extrakte aus ihnen
zeigen eine erkennbare, wenn auch schon geringe Wirksamkeit,
und wie leicht die Abgabe erfolgt, beweist der Befund, daB
schon im Waschwasser ein gewisser Gehalt an Immunkfirpern
nachweisbar werden kann.

Ffir die Ausbildting und Anwendung einer neuen Ver-
suchsmethode war eine Ueberlegung bestimmend, welche
wieder von der Betrachtung der Verh&ltnisse bei der intra-
venfisen Immunisierung eines Tieres mit Cholera ausging.
DaB ffir die Versuche aktives Serum verwendet werden mufi,
ist oben ausreichend begrfindet. Im Tiere wirkt aber nicht,
wie in den Reagenzglasversuchen, eine immer gleichbleibende
und dabei eine relativ Oder absolut geringe Menge Serum auf
eine relativ grofie Menge von Vibrionen ein. Vielmehr kommt
dabei eine relativ oder absolut kleine Menge von Vibrionen
auf eine sehr grofie und wenigstens in der ersten Zeit infolge
der Zirkulation stets erneute Menge von Blut. Vollst&ndig
nachzuahmen dfirfte dieses Verhalten allerdings im Reagenz-
glase nicht sein, immerhin mufite zunfichst festgestellt werden,
wie der Einflufi des Choleravibrio sich auf aktives Serum bei
mdglichst kurzer Einwirkungsdauer gestaltet.

Wie bereits wiederholt hervorgehoben wurde, ist die Reaktion zwischen
Choieravibrionen und aktivem Rinderserum eine iiberaus schnelle. Dies
erkennt man ohne weiteres an der Agglutination, die bei vorgewarmtem
Serum unter Umstanden in 1 Minute und selbst Bruchteilen einer solchen
voll ausgebildet sein kann. Im allgemeinen wurde so vorgegangen, da6
die Kulturmasse von Agarrohrchen so schnell als moglich im Serum
verteilt und sofort in die Zentrifuge mit hoher Tourenzahl gegeben
wurde. Eine Vorwarmung des Serums wurde in besonderen eigens
bezeichneten Fallen vorgenommen. DaB auch dann und bei moglichst
schnellem Arbeiten eine Reaktion zwischen Serum und Bacillen eingetreten
sein muB, erkennt man an der Leichtigkeit, mit der das Zentrifugieren
gelingt und iiberdies an mikroskopischen Praparaten. Diese zeigen wohl
Haufenbildung, aber in der Regel iiberhaupt keine Bakteriolyse oder nur
die Bildung sehr sparlicher Granula. Und doch erweisen sich derart
behandelte Sera in mehr oder weniger hohem Grade als unwirksam fur
neue Bakterizidie.

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Versuche fiber die Bildung yon bakteriolytischen Immunkorpern. 403

Tabelle XXX.

3 Kulturen ChoL Konst, wurden in 24 ccm aktivem Rinderserum auf-
geschwemmt, sofort in Rohrchen zu je 8 ccm verteilt und zentrifugiert,
ehe noch irgend deutliche Agglutination zu sehen war. Die gewonnenen
Rfickstande wurden, ohne Waschung a) mit je 2 ccm NaCl-Los., b) aktivem,
c) dem eben abgegossenen erschopften Rinderserum */« Stunde bei 38°
extrahiert (Extrakte 1—3). Die Extraktion wurde dann in der gleichen
Weise mit denselben Mengen der erneuten Flfissigkeiten durch ‘/ 3 Stunde
(Extrakt 4—6) und */ 4 Stunde wiederholt (Extrakt 7—9). SchlieBlich
wurden die fibrig bleibenden Rfickstande mit je 1 ccm Mischung. aus
0,5 ccm inakt Rinderserum und 0,5 ccm NaCl-L6sung 1 Stunde bei 37®
behandelt (Extrakte 10—12). Alle Froben wurden vor dem mit einer Ein-
saat von 11000 ChoL Konst in den Dosen von 0,075 und 0,025 ccm mit
0,05 ccm Komplement angesetzten Versuche */* Stunde auf 56° erwarmt

Extr. 1

Extr. 2

Extr. 3

Extr. 4

Extr. 5

Extr. 6

Extr. 7

2948

98000

2 532

6700

3120

7900

1856

8200

4600

56 000

2088

5800

10000

4240

Extr. 8

Extr. 9

Extr. 10

Extr. 11

Extr. 12 Rinders. aktiv

172

80000

2256

3

0

128

1624

24000

2160

984

5240

72

Rinders. erschopft

Rinders.

+ Meerschw. aa

Komplementkontrolle

120000

7

unzahlbar

170000

0

Von den Schlflssen, welche dieser erste, noch nicht ganz
vollkommene Versuch zul&fit, sei zunSchst die vollst&ndige
ErschOpfung des aktiven Rinderserums bei der ganz kurzen
Beriihrung mit Vibrionen erw&hnt, die noch zu keinerlei Er-
scheinungen der Bakteriolyse gefflhrt hatte. Es muB somit
die Sensibilisiernng in aktivem Serum ganz momentan erfolgen
und dabei sehr wirksam sein, da die erhaltenen Rfickstande
dreimal hintereinander an NaCl - Losung sehr ansehnliche
Immnnkdrpermengen abgeben. Ebenso deutlich ist die
wenigstens teilweise Reaktivierung des erschopften Rinder¬
serums erkennbar. Was ihr Verhalten zu aktivem Serum be-
trifft, so scheinen sie anf&nglich noch Immunkdrper aus diesem
herauszunehmen, urn bei Wiederholung der Behandlung schlieB-
lich den EinfluB darauf zu verlieren.

Ftir die folgenden Versuche wurden stets derart „momen-
tan u mit aktivem Serum behandelte, dabei aber nicht bakterio-
lysierte Vibrionen verwendet. Die Abgabe von Immunkbrpern
an Rinderserum lieB sich jederzeit leicht nachweisen.

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404

Oskar Bail und Karl Rotky,

Tabelle XXXI.

3 Kulturen Choi. 74 wurden in 48 ccra akt Rinderserum aufge-
schwemmt, sofort zentrifugiert und 1 Stunde bei 42° behandelt mifc

1 ) 1 ccm NaCl-L6sung, 2) 1 ccm inakt. Rinderser., 3) 0,75 ccm des abge-
gossenen erechopften Serums + 0,25 ccm inakt Rinderser., 4) 1 ccm akt.
Rinderser., 5) 0,75 ccm erechdpftem u. 0,25 ccm akt Rinderser., 6) 1 ccm
erechfipftem Rinderserum. Zur Kontrolle dienen 1) inakt Rindereerum,

2) Mischung von diesem mit erschdpftem im obigen Verhaltnis, 3) akt
Rinderser., 4) Mischung von diesem mit erschopftem und 5) erechopftes
Serum allein. Samtliche Proben wurden vor dem mit 0,05 ccm Komple-
ment in den Dosen von 0,1, 0,05 und 0,01 ccm angesetzten Versuche
*/ 9 Stunde auf 56 0 erhitzt. Einsaat Choi. 74 = 130 000.

Extrakt 1

Extrakt 2

Extrakt 8

Extrakt 4

Extrakt 5

Extrakt 6

0

880

81

168

100

23

8

264

27

96

52

160

2960

6000

1224

210

3848

120

Kontr. 1 Kontr. 2 Kontr. 3 Kontr. 4 Kontr. 5 Komplementkontr.

48 2280 72 148 5900 unzahlbar

136 2500 800 6700 8000

5000 5000 284 6800 unzahlbar

Der Vereuch beweist klar, daU das bei der hohen Einsaat sehr stark
wirksame Rinderserum durch die kurze Vibrionenbehandlung namentlich in
den nicderen Dosen vollstandig erschopft ist; es laflt sich nur recht un-
vollkoramen durch Zusatz von J / 4 seines Volumens an inaktivem oder
aktivem Serum wieder erganzen. hingegen tadellos durch die gleichen
Vibrionen, welche es kurz vorher seiner Immunkorper fast ganz beraubt
hatten. Nicht vollkommen klar ist das Verhalten der Riickstande zu
reinem aktivem oder inaktiviertem Rinderserum, die aber jedenfalls beide
nur wenig beeinflufit werden. Die beiden folgenden Tabellen urafassen
Versuche, bei denen die momentan aktiv sensibilisierten Vibrionen in be-
standiger Beriihrung mit aktivem Serum standen, so dafi man sehr gut
beobachten kann, wie sie das Serum zuerst unwirksam machten, um es
nachher wieder zu reaktivieren.

Tabelle XXXII.

2 Kulturen Choi. 74 wurden in 28 ccm akt Rinderser. aufgeschwemmt,
zu je 7 ccm verteilt und sofort zentrifugiert. Danach wurde die oben-
stehende Fliissigkeit von der Probe 1 vollstandig abgegossen und durch
1,5 ccm NaCl-Losung ereetzt, von den anderen Proben wurde nur ein Teil
der Fliissigkeit oder gar nichts entfernt, so dafl der Bodensatz in 2 in
1,5, in 3 in 3 und in 4 in 7 ccm 1 Stunde bei 42° (nach sorgfaltiger Ver-
teilung) gehalten wurde. Vor dem mit den Dosen 0,075 und 0,025 ccm
und 0,05 Komplement und einer Einsaat von 98 000 Choi. 74 angesetzten
Versuche wurden alle Proben */* Stunde auf 56° erwarmt.

Extr. 1 Extr. 2 Extr. 3 Extr. 4 Rinderser. akt. Rinderser. erechOpft

92 14 198 3916 23 3720

61 47 288 3120 0 4264

Kom piemen tkon trolle: u n ziihl bar.

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkorpem. 405

Tabelle XXXIII.

Genau wie der in der Tabelle XXXII wiedergegebene Vereuch, nur
dafl statt 2. 3 Kulturen von Choi. 74 in 28 ccm aktivem Rinderserum auf-
geschwemmt worden war. Einsaat Choi. 74 = 50000.

Extr. 1 Extr. 2 Extr. 3 Extr. 4 Rinderser. akt. Rinderser. erschdpft
104 350 104 2500 7 ca. 200000

56 96 400 5200 250 unzahlbar

Komplementkontrolle: unzahlbar.

Die beiden Versuche variieren nur in den quantitativen Zahlen, indem
namentlich in Tabelle XXXII die Erachflpfung dee aktiven Serums
zwar sehr deutlich hervortritt, aber keine ganz vollstandige war. Die
Vibrionen aber, die die Immunkdrperverarmung bewirkt haben, verraogen
ohne jeden Wechsel des Mediums das erst erschopfte Serum wieder zu
reaktivieren, was am beaten in der kleineren Flussigkeitsmenge hervortritt.

Kaon man aus diesen Reagenzglasversuchen, wogegen ja
nichts spricht, auf die Verh&ltnisse im TierkOrper Rflckschlflsse
ziehen, so ergibt sich, daB in der gleichen aktiven K8rper-
flflssigkeit nach und vielleicht auch nebeneinander sowohl
Immunkdrperbindung als auch Immunkdrperabldsung statt-
finden konnen. Es bleibt zun&chst zu untersucben, welches
Moment fQr die Abgabe der erst gebundenen Immunkbrper
bestimmend ist, da jetzt von einem Wechsel des Mediums
keine Rede mehr ist und die bei der Ablbsung eingehaltene
hdhere Temperatur nur erleichtemd, aber keineswegs aus-
schlaggebend wirkt; denn auch im Wasserbade von 37° kann
man etwas langsamer analoge Ergebnisse erzielen.

Von vornherein war daran zu denken, daB die Inter¬
vention des Komplements irgendwie bedeutungsvoll sein mflsse.
Daftir spricht ja schon das total verschiedene Verhalten inaktiv
sensibilisierter Vibrionen bei der Extraktion mit inaktivem
Serum, welches auch im folgenden Versuche sehr deutlich
hervortritt.

Tabelle XXXIV.

2 Kulturen Choi. 74 werden in 2 ccm NaCl-Ldsnng aufgeschwemmt; je
. 0,3 ccm der Aufschwemmung kommen in je 3 Rohrchen mit 5 ccm akt. und
5 ccm inakt. Rinderserum, werden fiir ganz kurze Zeit in das Wasserbad von
37 0 gestellt und sofort, ohne dafi noch Agglutination sichtbar geworden
, ware, zentrifugiert. Die auf diese Weise aktiv und inaktiv sensibilisierten
Vibrionensatze wurden hierauf mit je 1 ccm NaCl-Losung, 1 ccm des zur
Sensibilisierung verwendeten und dadurch erschOpften aktiven und inaktiven
Serums 1 Stunde bei 42 0 belassen; also Extrakt I aus aktiv sensibilisierten

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406

Oskar Bail und Karl Rotky,

Vibrionen mit 1 ccm NaCl, II mit akt. erschbpftem, III mit inaktiv er-
schopftem Rinderserum. Die Extrakte IV—VI sind ebenso aus den
inaktiv sensibilisierten Vibrionen erhalten. Alle Versuchsproben warden
vor der Einsaat von ca. 100000 Choi. 74 l / f Stunde auf 56° erwarmt. Der
Vereuch ist mit den Dosen 0,05 und 0,01 ccm und 0,05 ccm Komplement
angesetzt.

Extrakt I Extrakt II Extrakt III Extrakt IV Extrakt V Extrakt VI
3000 2500 21 90000 20000 unzahlbar

1800 8000 6000 21 000 40000

Rinderser. akt. erschdpft Rinderser. inakt. erschopft Rinderser. akt.
17000 1 232 216

100000 21000 1824

Komplementkontrolle: unzahlbar

In hohem Grade ist in diesem Versuche auffallend, wie viel mehr das
aktive Rinderserum durch die gleiche Vibrionenmenge erschopft wird als
das ioaktive. Weiter bemerkt man, wie inaktiv erschopftes Serum durch
aktiv sensibilisierte Vibrionen erganzt, durch inaktiv sensibilisierte hingegen
absolut unwirksam geraacht wird. Die Erganzung geht sogar hier besser
als beim aktiv erschopften Serum. Ganz analoge Befunde bietet folgender
ausfuhrliche Versuch.

Tabelle XXXV.

4 Kulturen Choi. 74 werden in 2 ccm NaCl-Losung aufgeschwemmt
und je 0,2 ccm davon mit je a) 5 ccm aktivem, b) ebensoviel inaktivem
Rinderserum versetzt und sogleich zentrifugiert. Die so erhaltenen Vibrionen-
riickstande werden mit 1) NaCl-L6sung, 2) aktivem, 3) aktiv erschbpftem
(Abgufi von der Sensibilisierung), 4) inaktivem, 5) inaktiv erschbpftem Rinder¬
serum versetzt und 1 Stunde bei 42° belassen. Aus den aktiv sensibilisierten
Vibrionen ergeben sich danach die Extrakte 1—5, aus den inaktiv sensibili¬
sierten die Extrakte 6—10. Alle Versuchsproben werden vor dem in den
Dosen von 0,075 und 0,025 ccm mit 0,05 ccm Komplement und einer Ein¬
saat von 60000 angestellten Versuchen */* Stunde auf 56 u erwarmt.

Extr. 1 Extr. 2 Extr. 3 Extr. 4 Extr. 5 Extr. 6 Extr. 7 Extr. 8
2 0 1 500 5 48 176 3 000 80 000

0 0 13 000 11 200 212 18000 50000

Extrakt 9 Extrakt 10 Rinderser. akt. Rinderser. akt. erschbpft
60000 60000 78 39000

100 000 80000 56 60000

Rinderser. inakt. Rinderser. inakt. erschopft Komplementkontrolle
1312 1800 unzahlbar

1348 5000

Wie iin vorigen Versuche ist auch in diesem die Er-
schopfung des aktiven Serums durch Vibrionen unter sonst
ganz gleichen Umstanden viel starker ausgesprochen als die
des inaktiven. Da die Vibrionen nur ganz kurze Zeit mit

Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkorpern. 407

den Seren in BerQhrung waren, scheint auch fflr die blofie
Bindung die Intervention des Kompleraentes von grttfiter Be-
deutung zu sein. In dieser Hinsicht sollen noch eingehendere
Untersucbungen angestellt werden. Im Qbrigen bemerkt man
leicht, wie Kochsalzldsung sowohl mit aktiv wie inaktiv sen-
sibilisierten Vibrionen gute Extrakte gibt, w&hrend sonst nur
die aktiv sensibilisierte Cholera an alle Flflssigkeiten die auf-
genommenen Immunkdrper mehr Oder weniger gut abgibt,
wShrend die inaktiv sensibilisierten wesentlich nur erschflpfend
wirken.

Es wurde sodann untersucht, wie sich aktiv sensibilisierte
Vibrionen verhalten, wenn sie mit dem Serum, das sie eben
erschdpft hatten, einmal im aktixen Zustande, das andere Mai
nach vorheriger Erhitzung behandelt werden.

Tabelle XXXVI.

2 Kulturen Cholera 74 werden in 32 ccm vorgewarmtem aktiven
Rindereerum aufgeschwemmt, in 4 Rohrchen verteilt und sofort zentrifugiert.
Das abgegoeBene Serum wird zum Teil gleichzeitig mit einer Probe unver-
anderten aktiven Serums ‘/ t Stunde auf 56° erwarmt Die 4 Vibrionen-
rfickstande werden dann wie folgt 1 Stunde bei 38° behandelt:

1) mit 2 ccm aktiv erschopftem Serum,

2)

n

8

11

11

11

11

3)

V

2

11

11

11

11

Idann erhitztem

4)

8

11

11

11

11

j Serum

Nach dem Zentrifugieren wurden alle Proben vor dem in den Dosen
von 0,1, 0,05 und 0,01 ccm mit 0,05 ccm Eomplement und einer Einsaat
von 53000 angesetzten Versuche */, Stunde auf 56° erwarmt.

Extrakt 1

Extrakt 2

Rdser. akt ersch.

Rdser. akt.

Extrakt 3

Extrakt 4

102

2048

19000

37

976

1792

384

1932

10400

15

824

1872

2856

10200

12 000

218

588

1840

Ser. akt. ersch. 56° Rdser. inakt. 56° Kompl.-Kontr.

27 000 61 27000

30 000 20

19 000 196

Es scheint also bis auf weiteres die Komplementwirkung
fflr das Eintreten der Immunkorperabspaltung nicht unbedingt
erforderlich zu sein. Wohl aber ist sie erforderlich, um die
Vibrionen in denjenigen Zustand zu versetzen, in dem die
Abspaltung in jedera Medium, auch in dem vorher erschSpften
Serum selbst, moglich wird. Dafl sie dabei in Granula zer-

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408

Oskar Bail and Karl Rotky,

fallen, scheint wieder nicbt notwendig zu sein, da ja eine
irgend erhebliche oder nur merkbare Bakteriolyse w&hrend
der momentanen Sensibilisiernng nicht eintritt. Es liegt hier
zweifellos ein der weiteren Untersucliung dringend bedflrftiger
Punkt vor, der vorl&ufig unerledigt gelassen wurde, weil jetzt
alle Bestrebungen darauf gerichtet warden, die gewonnenen
Resultate zur Herstellung 6ines kfknstlichen Imraunserums
ohne Zuhilfenahme des lebenden Tieres zu benutzen. Eine
beil&ufige Untersuchung quantitativer Verb&ltnisse lieferte den
Fingerzeig dafflr noch mehr, als er schon durch die bisherigen
Versuche gegeben war.

Es war schon mehrmals aufgefallen (die Versuche sind hier nicht
eigens angefiihrt), daS die Wirksamkeit der aus momentan aktiv sensibili-
sierten Vibrionen gewonnenen Extrakte Schwankungen aufwies, fur welche
als Grand nur die Menge des Serums, welches zur Sensibilisierung ver-
wendet war, als wahrscheinlich angeseben werden konnte. Das veranlafite
systematische Versuche, deren aber nur einer hier angefiihrt sei.

Tabelle XXXVII.

2 Kulturen Cholera 74 wurden in 8 ccm aktivern Rinderseram auf-
geschwemmt und a) in 4 Rohrchen zu je 1 ccm gebracht, b) zu je 1 ccm
in 4 Rohrchen mit je 9 ccm aktivern Rinderseram gegeben. Alle Proben
wurden dann sogleich zentrifugiert und die erhaltenen Bodensiitze mit je
0,75 ccm NaCl-Losung, aktivern Rinderseram, dem von den Vibrionen a
und dem von den Vibrionen b abgegossenen erschopften Seren 1 Stunde
bei 42 s behandelt. Die aus den Bodensatzen von a gewonnenen Extrakte
werden als 1—4, die aus denen von b als 5—8 bezeichnet. Die Extrakte,
sowie die Kontrollfliissigkeiten wurden diesmal nicht erhitzt, sondern in den
Dosen von 0,075, 0,025 und 0,0075 ccm mit je 0,05 ccm Komplement aktiv
verwendet bei einer Einsaat von 36000 Cholera 74.

Extrakt 1 Extrakt 2 Extrakt 3 Extrakt 4 Extr. 5 Extrakt 6 Extrakt 7

212

5

38 77

3

0 0

1240

1084

2960 416

0

1 59

1792

4240

2840 952

0

19 12

Extrakt 8

Rdser. akt. Rdser. a akt.

Rdser. b akt.

Komplementkontr.

1

0

lib. 100000

1824

unzahlbar

40

3

unzahlbar

560

92

232

if

848

In je 0,1 ccm der Versuchsfliissigkeiten waren lebende Vibrionen von
vornherein enthalten, in der gleichen Reihenfolge, wie oben angefiihrt:
12 000, 976, 296, 528, 182, 204, 544, 328, 0, 2160, 65.

Es ist auf das deutliehste zu erkennen, dafi die Extrakte, welche aus
den mit viel Serum sensibilisierten Vibrionen gewonnen waren, weitaus die

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 409

Btarksten Bind, ja sogar, soweit die nicht vollstandige Austitrierung derselben
einen Schlufl erlaubt, das aktive Rindereerum in bakterizider Wirkung zu
iibertreffen scheinen. Die momentane Behandlung relativ geringer Bakterien-
mengen mit relativ sehr viel Serum erschien also als der verheiflungBvollste
Weg zur Erlangung hochBtwirksamer Extrakte.

Vorher sei aber noch in Kiirze einer unschwer zu erklarenden, aber
sehr interessanten Beobaehtung bei der momentanen aktiven SensibiliBierung
von Choleravibrionen gedacht. Fiihrt man namlich eine solche aus, so ist
das von den Vibrionen abzentrifugierte Serum vollst&ndig klar. Nach
einiger Zeit aber wird es, bei 42 0 schneller, aber auch bei Zimmertemperatur,
triib, wobei sich die Trubung verstarkt und schliefilich in typische Prkzi-
pitation mit Ausflockung iibergeht. Mikroskopische Praparate zeigen die
formlosen Massen, wie sie bei Prazipitationen entstehen, hie und da, je
nach der Intensitat des Zentrifugierens, mit mehr oder sehr wenig einge-
streuten Vibrionen oder Kornchen. Extraktion derartiger Prazipitate in
NaCl-Losung bei 42° ergab in einer Reihe von Fallen recht wirksame
bakterizide Extrakte. Bei der langer dauernden Behandlung gro^erer
Kulturmengen von Vibrionen mit Serum ist somit ein Uebergang geldster
Cholerasubstanz in das Serum ohne jede Bakteriolyse radglich und nach-
weisbar, was fur die Frage der Serumerschopfung nicht ohne Bedeutung
ist. Woher diese Substanz stamrat, kann kaum zweifelhaft sein, wenn
man bedenkt, wie leicht aus Bakterienkulturen Substanz auch in NaCl-
Lbsung iibergeht, die vielleicht aus Bakterien stammt, die wahrend der
Kulturdauer absterben, vielleicht iiberhaupt einen Teil des Leibes auch noch
lebensfahiger Vibrionen ausmacht. Dementsprechend wird auch das be-
schriebene Phanomen gaDz wesentlich schwacher, wenn man die Kultur-
massen vorher mit Eochsalzlosung ausgiebig wascht. Doch entsteht auch
dann noch, freilich erst nach langerer Zeit und schwach eine Trubung des
anfangs ganz klaren Serums. Daraus folgt, dafl man bei Vibrionen, die
langere Zeit mit aktivem Serum in Beriihrung gestanden haben, mit den
gebildeten agglutinierten Haufen auch die prazipitierte, gelost gewesene
Substanz, die ja auch mikroskopisch im gefarbten Praparate gesehen werden
kann, entfemt und dafi die Erechopfung eines Serums durch Bakterien
durchaus kein einfacher, nur auf ImmunkOrperbindung beruhender Prozefi
zu sein braucht.

Aus dem Versuche in Tabelle XXXVII ergab sich die
MOglichkeit, wirksame Extrakte zu gewinnen, indem Vibrionen
mit viel aktivem Rinderserum sehr kurze Zeit vorbehandelt
und dann in relativ kleinen Mengen einer anderen Fltissigkeit
abgesprengt wurden.

Tabelle XXXVIII.

1 Kultur Cholera 74 wurde mit 72 ccm aktiven Rinderserums auf-
geschwemmt und sogleich zentrifugiert. Der zunachst in 8 Eprouvetten
abgesetzte Bodensatz wurde mit dem anhaftenden Serum in einer Eprouvette
vereint, durch Zentrifugieren isoliert und darauf sofort in 1 ccm des ab-

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410

Oskar Bail und Earl Rotky,

gegossenen Serums, welches zur Sensibilisierung gedient hatte, verteilt und
so 1 Stunde bei 42° gehalten. Der so gewonnene Extrakt wurde gleich-
zeitig mit aktivem Rindereerum und dem Serum a, welches zur Sensibili-
sierung und dann auch zur Extraktion gedient hatte, */* Stunde auf 56°
erwarmt.

A. Einsaat Cholera 74 = 56 000.

Extrakt

Rdser. a

Rdser. akt.

0,05 ccm + 0,05 ccm Eompl.

46

688

548

0,01 ,, 4- 0,05 „ ,,

55

10200

5 600

0,005 „ + 0,05 „ ,,

320

70000

6 200

0,001 „ +0.05 „

512

ub. 100000

10000

0,0005,, +0,05 „ „

19 000

unzahlbar

28000

B. Einsaat Vibrio b = 24 000.

0,05 ccm + 0,05 ccm Eompl.

11000

30

22

0,01 „ +0,05 „

20000

13 000

5800

0,005 „ +0,05 „

iib.20000

ca. 50000

8000

0,001 „ +0,05 „

dgl.

dgl.

ub. 20000

Die Eomplementkontrolle fur ChoL 74 ergab unzahlbare Vermehrung,
die fiir Vibrio b ergab nur 9200 Kolonien.

Tabelle XXXIX.

1 Kultur Cholera 74 in 80 ccm aktivem Rindereerum momentan
sensibilisiert, der Satz in 1 ccm des abgegossenen „ersch6pften“ Serums a
1 Stunde bei 42°. Alle Proben vor dem Vereuche */, Stunde auf 56°
erwarmt.

A. Einsaat Cholera 74 = 50 000.

0,05 ccm + 0,05

ccm

Kompl.

Extrakt

0

Rdser. a

1080

Rdser. akt
4

0,01 „ + 0,05

*»

jt

7

23 000

7 000

0,005 „ +0,05

tt

424

27 000

23000

0,001 „ +0,05

>»

v

3824

60000

41000

B. Einsaat Vibrio 134 = 50 000.
0,05 ccm + 0,05 ccm Eompl.

ca. 20 000

18000

9000

0,01 ,, + 0,05

u

tt

dgl.

ca. 20000

9 800

0,005 „ + 0,05

tt

91

dgl.

ca. 20000

Die Eomplementkontrolle ergab bei Teil A ca. 150000, bei B 82000
Kolonien.

Es ist also in den angeffihrten Versuchen nicht nur die
Erganzung eines vorher mit Vibrionen behandelten Serums
tadellos gelungen, die erg&nzten Sera sind sogar wesentlich
starker bakterizid als die zur Sensibilisierung verwendeten
unverSnderten Sera selbst. Diese Verstarkung der Wirkung,
die nach der ganzen Versuchsanordnung lediglich durch ver-
mehrten Immunkorpergehalt bedingt sein kann, bezieht sich
aber nur auf den Vibrio, mit dem der „Extrakt“ hergestellt

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Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 4X1

ist, auf andere Vibrionen ist er ohne Wirkung, welche dagegen
das Kontrollserum, wenigstens in den hdheren angewendeten
Dosen, sicher erkennen lfiBt. Dieses fiber Erwarten gflnstige
und fiberzeugende Resultat war die Veranlassung, vorlfiufig,
unter Beiseitelassung aller interessanten Detailfragen, nur auf
die Gewinnung mdglichst wirksamer Extrakte, die dann den
Charakter kflnstlich, ohne Verwendung des Tierkorpers her-
gestellter Immunsera haben mfissen, hinzuarbeiten.

Es wurde hierffir die Sensibilisierung von Vibrionen mit groBen
Mengen aktiven Einderserums wahrend kurzer Zeit beibehalten. Dabei
erfolgte wohl Haufenbildung, niemals aber irgendeine hervortretende Granula-
bildung. Die Extraktion bei 40—42° wurde sodann mit aktivem Serum
selbst vorgenommen, das ja auch im Tierkorper vergleichbar zur Wirkung
kommen muB. Bei dieser Extraktion bildeten sich dann Grauula in mehr
oder minder starkem AusmaBe. Der abzentrifugierte Extrakt wirkte dann
in alien Fallen starker als Rinderserum und wirkte, soweit dies bisber
untersucht wurde, spezifisch.

Tabelle XL.

1 Kultur Cholera Konstantinopel ffir 72 ccm aktives Binderserum.
Extrahiert mit 1,5 ccm aktivem Rinderserum. Vor dem Versuche Er-
warmung durch 1 / i Stunde.

Einsaat Choi. Konst.

Einsaat Vibrio 34

= 12000

= 9800

0,01 ccm

Extrakt + 0,03 ccm Kompl.

84

4800

0,005

99

„ + 0,05

99

99

536

3 760

0,001

99

„ + 0,05

99

J9

4100

12 000

0,0005

99

„ + 0,05

99

99

9 600

15000

0,001

«9

Bdser. + 0,05

9)

99

384

15

0,005

99

„ + 0,05

99

99

2 240

1128

0,001

99

„ + 0,0g

99

99

27 000

3 600

0,0005

<9

„ + 0,05

99

99

50 000

5 200

Komplemen tkon trolle

40000

30000

Tabelle XLI.

1 Kultur Cholera 74 ffir 80 ccm aktives Binderserum. Extrahiert in
1 ccm aktivem Binderserum durch 1 Stunde bei 38—40°. Auf 56® er-
warmt. Angewendet wurden die Dosen 0,01, 0.005, 0,001 und 0,0005 ccm
mit 0,05 ccm Komplement.

Die erste Zahl bezeichnet die Kolonienzahl im Extrakt, die zweite
eingeklammerte die im Rinderserum.

Einsaat Cholera 74 = 42 000.

30 (1080), 50 (60000), 4 (unzahlbar), 7000 (unzahlbar).

Einsaat Cholera 70 = 16 000.

1324 (22). 0 (82), 0 (3900), 37 (40000).

Einsaat Vibrio a = 26 000.

22 000 (17 300), 30 000 (18 000), 70 000 (37 000), unzahlb. (unzahlb.).

ZeiUchr. f. ImmunitHtsforschung. Orig. Bd. XVII. 28

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412 Oskar Bail and Karl Rotky,

TabeUe XLII.

1 Kultur fur 80 ccm aktives Rindereerum, in 1,5 ccm aktivem Rinder-
seram 1 Stunde bei 42° extrahiert, vor dem Versuche Inaktivierung.

Einsaat Cholera 74 = 27 000 mit 0,05 ccm Komplement in den Dosen:
0,05, 0,01, 0,005, 0,001 und 0,0005 ccm; die enteprechenden Zahlen mit
Rindereerum eingeklammert. 0 (0), 64 (92), 5 (4880), 45 (43000), 1920
(unzahlbar), Komplementkontrolle: unzahlbar.

Einsaat Vibrio g = 97 000 mit 0,05 ccm Komplement in den Doeen:
0,15, 0,075, 0,025, 0,01 und 0,005 ccm; die Zahlen mit Rindereerum ein¬
geklammert. 70000 (1760), ca. 100000 (3200), ca. 100000 (9800), ca. 100000
(26000), unzahlbar (21000); Komplementkontrolle: unzahlbar.

TabeUe XLIII.

3 Kulturen Choi. 74 fur 200 ccm akt Rindereerum; in 3 ccm akt.
Rindereerum 1 Stunde bei 42° extrahiert. Inaktivierung.

Einsaat Choi. 74 = 120000 mit je 0,05 ccm Komplement in den Dosen:
0,05, 0,01, 0,005, 0,001, 0,0005 und 0,0001 ccm (Zahlen filr Rindereer. ein¬
geklammert). 0 (0), 0 (0), 0 (31), 131 (45), 67 (1280), 102 (2896).

Einsaat Vibrio g = 97000 in den Dosen von 0,2, 0,1, 0,05 und 0,01 ccm.
In den Extraktproben uberall 70000 bis iiber 100000, im Rindereerum:
1920, 776, 4200, 8000.

Einsaat Vibrio a = 16000, in den gleichen Dosen wie Vibrio g; in
den Extraktproben uberall 50000—100000, in Rindereerum: 74,1640,2700,
20000.

Die KomplementkontroUen liefern fur Choi. 74 unzahlbare, fur Vibrio g
80000, fur Vibrio a 27000 Kolonien.

TabeUe XLIV.

3 Kulturen Choi. 74 auf 280 ccm akt. Rindereerum; in 3 ccm Rinder-
serum 1 Stunde bei 42° extrahiert. Inaktivierung.

Einsaat Choi. 74 = 32000 mit 0,05 ccm Komplement in den Dosen:
0,01, 0,005, 0.001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 ccm (Zahlen fur Rindereer. ein¬
geklammert). 0 (3920), 72(2888), 26(27000), 85 (unzahlb.), 720 (unzahlb.),
3528 (unziihlb.).

Einsaat Choi. Konstantinopel = 95000, dieselben Dosen. 0 (1862),
0 (4300), 87 (9200), 37 (47000), 212 (unzahlb.), 4640 (unzahlb.).

Einsaat Vibrio 34 = 9700 in den Dosen: 0,2, 0,1, 0,05, 0,01 ccm.
2400 (0), 9800 (2), 8500 (632), 16000 (9200).

KomplementkontroUe bei Choi. 74 unzahlbar, bei Choi. Konst 82000,
bei Vibrio 34 unzahlbar.

Tabelle XLV.

3 Kulturen Choi. 74 in 240 ccm akt Rindereerum; extrahiert in
2 ccm akt. Rindereerum, 1 Stunde bei 42°. Inaktivierung.

Einsaat Choi. 74 = 9800 mit 0.05 ccm Kompl. in den Dosen: 0,01,
0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 ccm. KomplementkontroUe = 52000.
0 (616), 0 (480), 24 (2648), 33 (6400), 26 (5900), 896 (52000).

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Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkdrpern. 413

Einsaat Vibrio El Tor = 2080 in den gleichen Dosen. Komplement-
kontrolle = 15000. 0 (0), 0 (2), 0 (0), 0 (0), 0 (2800), 0 (7000).

Einsaat Vibrio 1 = 10000 in den Dosen 0,2, 0,1, 0,05,0,01,0,005 ccm.
Komplementkontrolle = 4200. 2248 (248), 5300 (79), 12000 (208), 13000
(1920), 21000 (7300).

Tabelle XLVI.

2 Knlturen Choi. 74 in 160 ccm akt. Rinderser.; Extraktion in 1,5 ccm
akt. Rinderserum 1 Stunde bei 42°. Inaktivierung.

Einsaat Choi. 74 = 80000 mit 0,05 ccm Komplement in den Dosen
0,01, 0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 und 0,00001 ccm. Komplement¬
kontrolle: unzahlbar. 3280 (12000), 20000 (19000), 22000 (70000), 11000
(unzahlb.), 20000 (unz&hlb.), weiter fiberall unzahlbar.

Einsaat Vibrio El Tor = 24000 in gleichen Dosen; Komplementkon¬
trolle: unzahlbar. 0 (7), 12 (984), 126 (480), 0 (92000), 61 (unzahlb.),
12000 (unz&hlb.), weiter unzahlbar.

Einsaat Vibrio g = 12000 in den Dosen 0,2, 0,05, 0,01 und 0,05 ccm.
Komplementkontrolle: unzahlbar. 90000 (20000), unzahlb. (57000), unzahlb.
(60000), weiter unzahlbar.

Tabelle XLVII.

Je 1 Kultur Choi. 74 und El Tor werden mit je 80 ccm akt. Rinder¬
serum momentan behandelt, die Satze mit je 1 ccm akt. Rinderserum
1 Stunde bei 42° extrahiert. Inaktivierung.

Einsaat Choi. 74 = 98000 mit den Dosen 0,01, 0,005, 0,001, 0,0005,
0,0001 und 0,00005 ccm der Extrakte von ChoL 74, El Tor und Rinderser.
Die zusammengehdrigen Zahlen sind ffir jede Dosis in dieser Reihenfolge
eingeklamraert. (384, 63, 2968), (376, 116, 7100), (560, 108, 7000), (624,
1840, 7300), (288, 4600, fiber 100000), (2160, 4800, unzahlb.), Komplement¬
kontrolle: unzahlbar.

Einsaat El Tor = 95000 fur die gleichen Dosen. (7, 0, 0), (8, 0,
2280), (5, 8, 3700), (4300, .1352, 9000), (3264, 3856, 40000), (8200, 6500,
unzahlb.), Komplementkontrolle: unzahlbar.

Einsaat Vibrio b = 3128 fur die Dosen: 0,15, 0,075, 0,025, 0,01 und
0,005 ccm. Die Extraktproben ergaben samtlich Vermehrung von 8—40000
Kolonien, wahrend im Rinderserum gezahlt wurden: 18, 9, 3080, 5100,
7000; die Komplementkontrolle ergab 26000 Kolonien.

Die mit den No. 34 und 134 bezeichneten Vibrionenstamme ver-
danken wir Herrn Prof. Neufeld; die anderen, hier mit Buchstabeu be¬
zeichneten Stamme sind Elbvibrionen, welche die Herren Prof. Dunbar
und Trauttmann uns zu uberlassen so giitig waren. Ihre Hamburger
Sammlungsbezeichnung ist Vibrio a = 10875/11, Vibrio b = 9042/11,
Vibrio g = 11608/11, Vibrio 1 = 15111/12. Die Vibrionen a, b, 1 waren
Leuchtvibrionen.

28*

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414

Oskar Bail und Karl Rotky,

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Die abgekflrzt und in gedr&ngtester Form mitgeteilten
Versuchsbeispiele sollen ein Urteil fiber den erzielten Erfolg
ermflglichen. Ganz ohne Ausnahme war der aus ganz kurze
Zeit mit aktivem Serum sensibilisierten Vibrionen erhaltene
Extrakt mit aktivem Rinderserum wesentlich starker als das
ursprungliche Serum selbst. Auch dann, weun dieses an sich
recht wenig wirksam ist, kann der Extrakt an bakteriziden
Fahigkeiten mit einem kttnstlichen Immunserum in Rivalitat
treten (Tabelle XLIV), Oder, wenn er zum Teil versagt, so
bleibt er doch nocb starker als das Rinderserum, aus dem er
hergestellt ist und verrat seine Fahigkeiten deutlicher gegen
einen empfindlicheren Stamm (Tabelle XLVI). Es ist somit
unverkennbar eine stets nachweisbare und oft sehr erhebliche
Verstarkung der Bakterizidie durch Anreicherung an Immun-
korpern eingetreten. Dabei ist diese Anreicherung aber ganz
deutlich spezifisch. Es ist zwar fflr den bakteriziden Reagenz-
glasversuch nicht ganz leicht, Mikroorganismen aufzufinden,
die genau so empfindlich sind, wie die benutzten echten
Cholerastamme; man ist daher vielfach gezwungen, die Serum-
dosen hOher zu nehmen oder sonst zu variieren; die sflmt-
lichen angestellten Versuche zeigten aber aufs klarste, dafi
durch die in vitro hergestellten Extrakte nur echte Cholera-
vibrionen und der auch hier sich wie ein echter Cholerastamm
verhaltende El Tor beeinfluBt wurden, wahrend andere Vibrionen
in den Extrakten stets besser als im nativen Rinderserum
gedeihen.

Wir stehen nach diesen Resultaten nicht an, den Schlufi
zu ziehen, dafi eine Herstellung von kflnstlichem Im¬
munserum, genauer gesagt, die Umwandlung eines nor-
malen aktiven Serums in ein solches mit hflher-
wertigen und dabei unverkennbar spezifischen
bakteriziden Wirkungen Oder die Anreicherung
und Umformung des normalen Immunkdrper-
gehaltes ins Spezifische moglich und in den zitierten
Versuchen auch gelungen ist Als Agens dafttr dienen einzig
und allein die Mikroorganismen, welche fflr das betreffende
Normalserum empfindlich sind und die die Fahigkeit haben,
sowohl die Normalimmunkorper aus demselben zu binden, als
sie nachtraglich wieder in wirksamer, und wie die Spezifitats-

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Versuche iiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkorpern. 415

versuche lehren, in ver&nderter Form abzugeben. Gs koramt
nur auf die ira Versuche ermittelbaren Umstfinde an, wann
das eine und das andere geschieht.

Hat aber dieser Schlufi Berechtigung, so folgt daraus
zun&chst weiter, daB der Tierkdrper fQr die Herstellung eines
Immunserums keine unerlfiBliche Bedingung ist und ferner,
daB die AntikOrperbildung ein rein humoraler
V or gang, wenn nicht immer ist, so doch sein kann, daB
die Annahme von Rezeptoren, die an Organzellen sitzen, als
Grundlage der sp&ter ins Blut abzugebenden Immunkorper,
QberflUssig wird. Es lafit sich auch behaupten, dafi die Immun-
korper bildung dann wirklich, wie die Qltere Theorie annahm,
dadurch spezifisch wird, dafi der anfangs mit dem Antigen
verbundene Immunkorper bei der Ablosung durch dasselbe
ver&ndert wird, z. B. um ein Bild zu geben, mit dem Antigen
einen Teil von dessen Substanz austauscht. Die Untersuchung
aller dieser Verh&ltnisse, die zum Teil schon begonnen ist,
IfiBt wesentliche Fortschritte der serologischen Studien er-
warten.

Hat man aber das Recht, die nach der beschriebenen
Methode hergestellten bakteriolytischen Serumextrakte wirklich
als vollkommene Analoga eines Immunserums zu betrachten?
Soweit die beiden Kennzeichen eines solchen in Betracht
kommen, erhohte und dabei spezifische Wirksamkeit, ohne
Zweifel, und ein Untersucher, der die Herkunft der Extrakte
nicht kennt, wQrde sie gewiB als Immunsera ansprechen.

Die Bereitung derselben lehrt aber, dafi relativ sehr
grofie Mengen normalen Serums notig sind und es ist daher
die Frage, ob man die ganze Methodik nicht nur als eine
solche ansehen soil, welche bloB zu einer Konzentrierung der
schon normal vorhandenen Immunkbrper in ein kleines Serum-
quantum ftthrt. Dem wfire schwer zu widersprechen, wenn
nicht die Untersuchung der Spezifit&t aufs deutlichste zeigen
wiirde, daB die erhohte Bakterizidie gerade nur fQr den Mikro-
organismus gilt, der zur Extraktdarstellung gedient hat. Es
sind vielmehr die Extrakte fQr fremde Vibrionen stets deutlich
unwirksamer als das native Serum, meist erscheinen sie als
total erschopft. Um eine einfache Immunkbrperkonzentration
kann es sich sornit nicht handeln.

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416

Oskar Bail und Karl Rotky,

Es ware aber an folgendes zu denken. Bekanotlich
rechnet die Ehrlichsche Theorie von vornherein mit einer
sehr groBen Pluralitat von Immunkdrpern schon im normalen
Serum. Sind also in einem solchen die fflr Cholera und einen
fremden Vibrio getrennt vorhanden, so wird bei der Behand-
lung mit Cholera natflrlich nur der dazu gehdrige Immun-
kdrper gebnnden und spater wieder abgeldst werden, wahrend
die sonstigen Immunkorper gar nicht tangiert werden: es
wflrde sich um eine relative Konzentrierung bestimmter Im-
munkdrper handeln.

Dem widerspricht die Tatsache, daB, wie bereits erwahnt,
die Extrakte mit aktivem Serum auf fremde Vibrionen gar
nicht oder doch wesentlich schwacber wirken als das native
Serum; wflrden andersartige als Choleraimmunkdrper gar nicht
beeinfluBt, so mflBte die Bakterizidie der Extrakte der des
Rinderserums fflr fremde Vibrionen ungefahr gleich sein.
Dazu kommt, daB man bei der kurzen Erschdpfung des aktiven
Rinderserums mit Bakterien von einer spezifischen Erschdpfung
nichts merkt, indem ein wirklich mit Cholera erschopftes
aktives Rinderserum auch ftir alle untersuchten anderen Bak¬
terien mehr weniger unwirksam geworden war.

Fflr die Annahme einer groBen Vielheit bakteriolytischer
Immunkorper in Normalseren hat man keinen anderen Beweis
als die anscheinend spezifische Erschopfung, die bisher fast
immer mit zuvor inaktiviertem Serum ausgefflhrt wurde und
im Falle des Gelingens auch absolut beweisend aussieht. In
Wirklichkeit kann man aber diese Beweiskraft ernsthaft an-
zweifeln. Es ist zuzugeben, daB der Gehalt eines Rinderserums
an Immunkdrpern wirklich sehr groB ist, daB aber diese unter-
einander tats&chlich verschieden sind, bleibt erst besser als
durch den Absorptionsversuch zu beweisen. Gesetzt, es ginge
bei der Behandlung eines solchen Serums mit irgendwelchen
Bakterien ein Teil der Bakteriensubstanz in Ldsung, so kann
leicht nur dadurch eine Abnahme der urspriinglichen bakteri-
ziden Kraft herbeigefflhrt werden, die dann natflrlich am
st&rksten fflr die gleichnamige Bakterienart sichtbar sein wird.
Das spezifische Moment liegt dann nicht im Serum a priori
begrttndet, sondern es wird erst sekundflr durch die Bakterien

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Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen Immunkfirpem. 4X7

selbst ins Serum eingefdhrt. Die oben kurz erw&hnten Ver¬
suche fiber das Auftreten spontaner Pr&zipitationen im mo-
men tan erschdpften aktiven Rinderserum geben bereits mehr
als nur Anhaltspunkte fflr diese Annahme und zeigen klar,
wie vielerlei noch in den grundlegenden Versuchen der Sero-
logie zu'verbessern sein kdnnte.

Es ist wiederholt erwfihnt, wie die Reagenzglasversuche
sich immer mehr den im Tierkdrper herrschenden Verh&lt-
nissen anzupassen such ten und wie nur dadurch das zun&chst
unldsbar scheinende Problem, Immunkdrper erst aus einem
Serum binden zu lassen und dann im gleichen Serum wieder
abzusprengen, doch seiner Ldsung zugefflhrt werden konnte.
Es ist aber klar, dall die Annftherung an den Tierkdrper
schlieOlich unubersteigbare Grenzen finden mull; denn die zum
Versuch genommene Kdrperfliissigkeit, das Serum, ist ja als
solches im Tiere gar nicht vorhanden und fiberdies ist in vitro
niemals ein Ersatz der verloren gegangenen Immunkdrper
durch Neubildung normaler mdglich. Dadurch kann aber das
Endresultat sehr wesentlich verfLndert werden, wenn man die
folgende provisorische Theorie der Antikdrperbildung Qberlegt.
Auf eine etwa intravendse Injektion von Vibrionen erfolgt
auch im Tiere zun&chst die Bindung der Normalimmunkdrper,
wobei bei der gewdhnlichen und bew&hrten Immunisierungs-
technik stets eine relativ Oder absolut geringe Bakterienmenge
auf grolle Mengen aktiver Kdrperfliissigkeit kommt. Neben
Oder kurz nachher erfolgt aber die Ablosung derselben, so
dall das Blut an Normalimmunkdrpern verarmt ist, in gleichem
Grade aber mit den abgeldsten und jetzt spezifisch gewordenen
verseben wird. Es ist mdglich und wahrscheinlich, dall die
an die Vibrionen herantretenden und dann ver&ndert abge¬
ldsten Normalimmunkdrper den grdllten Teil der ttberhaupt
vorhandenen ausmachen, sei es, dall eine wiederholte Bindung
mdglich ist, sei es, dall die Bindung von vornherein in grdHtem
MaCstabe auf einmal erfolgt. Ist der Abldsungsprozell be-
endet, so erscheint das Serum des Tieres quantitativ so wirk-
sam wie vorher, da die absolute Zahl der darin vorkommenden
Immunkdrper keine wesentliche Ver&nderung erfahren haben
kann. Eine negative Phase braucht also im Serum niemals

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418

Oskar Bail und Karl Rotky,

einzutreten, wie ja auch Pfeiffer und Friedberger*) sie
im TierkOrper nicht gefunden haben. Qualitativ wird aber
ein solches Serum schon eine gewisse Spezifitat verraten.
SchlieBlich wird es aber zu einer Neubildung, und zwar der
normalen Immunkdrper kommen mOssen, da die von den
Vibrionen abgelSsten kbrperfremd durch ihre Spezifitat ge-
worden sind. Sollte, was freilich bisher nicht nachzuweisen
war, die Bindungskraft der Vibrionen eine sehr hohe und
langer anhaltende sein, so ware auch eine bestandige Inan-
spruchnabme der neugebildeten Normalimmunkdrper durch
die Vibrionen und Umformung derselben nach ihrer Abldsung
denkbar. So muB es immer mehr zu einer Anreicherung des
Serums an spezifischen Immunkdrpern kommen, ohne daB
dafflr etwas anderes als die Neubildung der normalen ndtig
ware, die ja wohl ohnedies standig im Gange ist.

Die vorstehend skizzierte Theorie kann erst auf der
sicheren Basis neuer Experimente weiter ausgeftihrt werden;
die kurze Darstellung genflgt zur Erlauterung der folgenden
Versuchspiane, fflr die bestimmend ist: 1) die Auffassung der
Antikdrperbildung als eines rein humoralen Vorganges, 2) die
Entstehung der Spezifitat der Antikbrper durch wechselseitige
Beeinflussung von Antigen mit den humoralen normalen
Kraften, 3) die Anhaufung der spezifischen Immunkdrper
lediglich infolge der Neubildung normaler, die dann wieder
durch das Antigen verandert werden.

Nur beilaufig sei darauf hingewiesen, daB auch andere
serologische Reaktionen einer ahnlichen Bearbeitung zugang-
lich sind, wie sie hier flir die bakteriolytischen durch gefQhrt
wurde. So gelingt es, auch aus Blutkdrperchen mit normalem
Serum hamolytisch wirkende Extrakte zu erhalten. Bezflglich
der Agglutination sei im AnschluB an die Tabelle XXXIII
mitgeteilt, daB der daselbst verwendete Choleraextrakt bis zur
Dosis 0,005 ccm mit 0,025 ccm Meerschweinchenserum als
Komplement vollstandige Agglutination hervorrief, wahrend
das Rinderserum dies nur bis zur Menge 0,05 unter den
gleichen Bedingungen vermochte. Der Extrakt der Tabelle
XXXV agglutinierte ohne Komplement mit 0,05 ccm voll-

1) Centralbl. f. Bukt., Orig., Bd. 47, p. 503.

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Versuche iiber dieBildung von bakteriolytischen Imraunkorpem. 419

standig, das Rinderserum in der Dosis 0,1 ccm nur schwach,
mit 0,025 ccm aktivem Meerschweinchenserum war im Extrakte
noch deutliche Agglutination bei 0,00005, bei Rinderserum
eine gleich starke bei 0,001 ccm. Selbstverst&ndlich soli mit
den obigen Ausfflhrungen nicht gesagt sein, dafi im TierkOrper
sich der ProzeB der Antikdrperbildung genau so abspiele, wie
dies im Reagenzglasversuche mit seinen naturgemaBen Ueber-
treibungen der Verhaitnisse nachweisbar ist, aber der Weg
soli gezeigt werden, den die Untersuchung der Antikorper-
bildung auch ffir den Tierkdrper einhalten will.

Zusammenfassung.

Es gelingt durch den bakteriziden Plattenversuch nach-
zuweisen, daB mit inaktivem Normalserum sensibilisierte
Choleravibrionen die aufgenommenen Immunkdrper an Koch-
salzldsung abgeben konnen.

An inaktives Normalserum erfolgt diese Abgabe nicht.

Hingegen sind mit aktivem Rinderserum bebandelte
Vibrionen imstande, auch an das gleiche Serum Immunkdrper
abzugeben.

Auf diese Weise gelingt die Reaktivierung eines vorher
durch Bakterienbehandlung erschdpften Normalserums ohne
Milhe.

Auch sehr kurze Behandlung von Vibrionen mit aktivem
Normalserum, bei welcher noch keine sichtbare Bakteriolyse
eintritt, fuhrt bereits zur Sensibilisierung; von solchen Vibri¬
onen lassen sich mit den verschiedensten Flilssigkeiten bakterizid
wirksame Extrakte gewinnen.

Behandelt man Vibrionen mit relativ groBen Mengen
aktiven Normalserums und laflt sie sodann in geringen Mengen
des gleichen aktiven Normalserums bei 40—42 0 digerieren, so
erhalt man Sera, welche wesentlich starker wirken als das be-
treffende Normalserum selbst und deren Wirkung dabei offen-
kundig spezifisch wird. Solche werden als kiinstlich darge-
stellte Immunsera zu bezeichnen sein.

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420

A. Marie,

Naehdruck verboten.

Glandes surrenales et Toxi-infectlons.

Par le Dr. A. Marie,

Professeur k l’lnstitut Pasteur (Paris).

(Eingegangen bei der Eedaktion am 9. Februar 1913.)

Les lesions congestives, souvent intenses, notdes au cours
de diverses maladies microbiennes, telles que la dipht6rie, la
tubercnlose, le tetanos, ainsi que les alterations histologiques,
d4crites dans les glandes surrenales, ont depuis long-
temps conduit k se demander si elles ne jouaient pas un rdle
dans la defense de Torganisme vis-it-vis des agents infectieux
et de leurs secretions. Mais en d6pit de ces constatations si
souvent faites, les fonctions multiples des capsules surrenales
et en particulier l’une d’elles, lafonction adrenalinique,
ont fait l’objet seulement d’un trfcs petit nombre de recherches
expert men tales dans leurs rapports avec les infections et in¬
toxications de l’organisme.

Des deux procedds qui s’offrent k l’experimentateur pour
etudier le role d’une glande 4 secretion interne en physio¬
logic pathologique, ablation de l’organe ou etude de Taction
de ses produits, nous nous sommes d’abord applique au
dernier, en ayant surtout en vue 1’alcaloYde que Ton a extrait
des capsules et ensuite pr6par6 par synth6se.

Dans cette etude, nous desirons done exposer nos recher¬
ches sur Taction de l’adrenaline et d’autres preparations
des glandes surrenales, d’abord vis-il-vis des toxines
bacteriennes, dont nous prendrons comme types les toxines
tetanique et diphterique.

I. Aotion de Padr4naline sur la toxine tetanique (1).

Si Ton expose pendant quelques heures it la temperature
de 37 °, dans un trfcs petit tube ferme k la lampe, un melange
en proportions convenables de toxine et d’adrenaline naturelle,
il se montre tout ii fait inoffensif pour une espfcce aussi sen¬
sible au tetanos que la souris. Un centime de milligramme
d’adrenaline naturelle peut neutraliser environ cinquante doses
mortelles de toxine pour cet animal. La m£me quantite de

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Glandes surr&iales et Toxi-infections.

421

toxine, dilu4e dans l’eau physiologique et soumise aux m£mes
conditions, a conserve ses propri4t4s pathog^nes.

Les solutions mill4simales de suprar4nine syntheti-
que gauche (tartrate), de suprar£nine droite (bitartrate),
de suprar£nine rac£mique (chlorhydrate), toutes £galement
neutres au tournesol, se sont aussi montr4es actives sur la
toxine tetanique et la suprar4nine synthetique gauche 1 ), en
particulier, exerce son pouvoir neutralisant sur la t£tanotoxine
aux mgmes doses que l’adr£naline naturelle.

Tableau L

Neutralisation de la toxine tetanique par Padr&ialine.

Melanges injects aprfes exposition de
20 heures k 37°

Jours

1 |

2

3

4

. , 5 ..

6

7

Souris 1 . Tt. 0.0002 c. c.

——

—

-I

! t

Souris 2. Tt. 0.01 c. c. + Adr. nat.

1 %o 0.01 c. c.

0

0

0

0

0

0

0

Souris 3. Tt. 0.01 c. c. + Adr. syn. g.

1%0 0.01 c.c.

0

0

0

0

0

0

0

Souris 4. Tt. 0.005 c. c.

—

—

= t

Souris 5. Tt. 0.005 c. c. + 0.10 c. c.

Bitartr. suprar. dr. 1 °/»o

0

0

0

0

0

0

0

Souris 6 . Tt. 0.005 c. c. + 0.10 c. c.

Chi. suprar. rac. 1 °/ 00

0

0

0

0

0

0

0

Souris 7. Tt. 0.01 c. c.

—

—

EE t

Souris 8 . Tt. 0.01 c. c. + 1 c. c. Chi. de

Dioxybenzylmethylamine 1 %o

0

o

0

0

0

0

0

(Tt. = toxine tetanique.)

Dans ce tableau I, qui pr6sente quelques exemples choisis
par mi de nombreuses experiences, nous avons fait figurer un
produit alcaloldique, le chlorhydrate de dioxybenzylm4thylamine
qui lui aussi peut neutraliser, k la dose de 0.001 gr., environ
cinquante doses mortelles de toxine. Cette substance qui est
un ph4nol k chaine lat6rale aminee repond k la formule

OHv

NCH 8 —CH*—NH-CH*
OH/

celle de l’adrenaline 6tant
OH

oh ^>C 6 H*-CH(OH)CH s - nhch*

1 ) D’aprfcs Arthur R. Cushny (Joum. of Phys., Vol. 37, fasc. 2,
p. 130), l’action de l’adrt'inaline naturelle sur la pression sanguine, chez le
chien, serait deux fois plus forte que celle de son isom&re synthetique.

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422

A. Marie

Etudid par Tiffeneau (2) surtout au point de vue des
conditions de structure moldculaire qui jouent un r61e impor¬
tant dans son action physiologique, cet alcaloide, oil la fonction
alcool se trouve supprimde, est doud d’une action vaso-con-
strictive tout & fait comparable 4 celle de I’adrdnaline et dont
elle ne diffdre qu’au point de vue quantitatif, puisque c’est
seulement aux doses de 0.005 gr. par kilo d’animal que l’on
peut avec ce produit rdaliser les mdmes effets physiologiques
qu’avec des doses d’adrdnaline environ cent fois plus faibles.

Quelle idde pouvons-nous nous faire de cette neutralisation
de la toxine tdtanique?

On sait que l’activite des toxines, corps auxquels on
reconnalt aujourd’hui les attributs des collo'ides, passe pour dtre
lide d’une faqon trds dtroite & leurs propridtds physiques. C’est
ainsi que Ton tend k expliquer Taction de certains corps
chimiques sur les toxines bactdriennes: leur activite se trou-
verait plus ou moins affaiblie ou meme ddtruite toutes les
fois que l’addition de substances cristallo'ides bien ddtermindes
viendrait modifier 1’dtat physique du solvant. De ce nombre
sont prdcisdment certains corps, alcalol'diques comme l’adrd-
naline, tels que les sels de quinine, de morphine.

A la dose de 0.001 gr. le chlorhydrate neutre de quinine
neutralise in vitro cinq doses mortelles de toxine tdtanique.

Tableau II.

Action du chlorhydrate neutre de quinine sur la toxine tdtanique.

Melanges injects aprfcs exposition de
18 heures t\ 37°

Jours

i

2 |

3

4 |

5 |

6 |

7

Souris 1. Tt. 0,001 c.c. + Eau dist. 1 c. c.

_

t

1

Souris 2. Tt. 0.005 c. c. + 1 c. c. d’eau

dist., contenant 0.001 gr. de chi. de

quinine

0

0

0

0

0

0

0

Souris 3. Tt. 0.007 c. c. + 1 c.c. d’eau dist.

contenant 0.001 gr. de chi. de quinine

0

0

—

—

—

—

—

Si, dans la neutralisation de la toxine tdtanique par
l’adrenaliue, celle-ci intervient pour modifier l’dtat physico-chi-
mique, k son tour ce dernier peut favoriser les rdactions
chimiques des corps en presence. Ainsi, c’est un fait connu
que les corps oxydants exercent une influence destructive sur

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Glandes surrenales et Toxi-infections.

423

la t£tanotoxine. D’aprfcs les recherches anciennes de Si ebert(3),
trfes actif est sur elle le p^roxyde de calciam dout 0.50 gr.
suffisent pour neutraliser 1000 doses mortelles de toxine
t6tanique. L’eau oxyg6n6e, des oxydases, la laccase, se sont
montrSes aussi plus ou moins actives sur ce poison qui parait
Stre tout 4 fait d£truit par ces substances, puisqu’il est devenu
inapte k provoquer la formation d'anticorps.

Si la neutralisation de la toxine t6tanique par l’adr6naline
parait aussi £tre li6e k une question de constitution chimique,
en quoi consiste-t-elle?

La solution de l’alcalolde n’a pas besoin d’etre fraiche
pour exercer son action neutralisante. Si, par exemple, on
la fait passer k travers une bougie, elle s’oxyde fortement et
en sort avec une couleur brune plus ou moins fonc6e: dans
cet 6tat d’oxydation, l’adr6naline a perdu une grande partie
de son pouvoir toxique, et une souris de 15 gr. qui meurt
avec 0.0002 gr. de cet alcaloide peut alors en supporter 10 fois
plus. Cependant l’adr6naline devenue ainsi trfcs peu toxique
exerce la mSme action neutralisante sur la poison t£tanique
qu’avant d’etre oxyd6e.

Preparons maintenant un melange toxine-adr6naline en
proportions neutralisantes et exposons en la moiti6 k la
glaci&re et l’autre k 37°, la premiere conservera toute son
activity t6tanig&ne, tandis que la seconde sera devenue in¬
offensive pour la souris.

Tableau III.

Adrenaline oxydee. Action de la temperature.

Melanges inject4s

Jours

1

1 2

3

1 4

1 5

! 6

Souris 1. Tt. 0.0002 c. c.

„ 2. Tt. 0,01 c. c. + 0.10 c. c. Adr.

syn. fraiche l°/ 0 o

0

0

0

0

0

0

Souris 3. Tt. 0.01 c. c. + 0.10 c. c. Adr.
syn. oxyd6e l%o

0

0

0

0

0

0

Souris 4. Adr. syn. 1 °/oo fraiche 0,20 c. c.

,, 5. ,, ., 1 oxydde 1 c. c.

„ 6. Tt. 0.01 c. c. + 0.10 c. c. Adr.

syn. 1 °/qo (glaci&re)

Souris 7. Tt. 0.01 c. c. + 0.10 c. c. Adr.
syn. l°/oo (6tuve 37°)

f en 2-
0

0

0

0

0

0

0

0

t

0

0

1

1

0

0

ty Google

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424

A. Marie,

Le phenom&ne de la neutralisation de la tetanotoxine
par l’adr6naline est done independant de l’etat de fraicheur
de l’alcaloide, mais la reaction entre celui-ci et la toxine a besoin
pour se faire d’une temperature de 37°.

II s’opkre en effet entre les deux substances une veritable
reaction chimique ainsi qu’on peut s’en convaincre au moyen
des reactifs colorants de 1’adrenaline.

On sait que cet alcalolde donne avec les oxydants des
reactions colorees: ainsi le perchlorure de fer dilu6 k 15 %
fournit une coloration verte si le melange est acide, violette
s’il est neutre.

Une reaction beaucoup plus sensible que celle de Vulpian
est obtenue avec le chlorure d’or: en solution kip. 300, il
permet de reveler la presence de l’adrenaline mSme dans des
dilutions kip. 100000 et au delk, en produisant une colo¬
ration mauve.

Preparons done et exposons k 37 0 des melanges de toxine
tetanique et d’adrenaline k doses neutralisantes; au bout de
quelques heures l’alcaloide se sera oxyde mais ne donnera plus
dans ces melanges la reaction du chlorure d’or, tandis que les
tubes temoins ok l’alcalo'ide se sera aussi oxyd6 en l’absence
de la toxine continueront k donner la reaction.

De ces faits nous pouvons conclure que l’adrenaline reagit
k 37° sur la toxine tetanique.

Les phenomknes de neutralisation de la toxine tetanique
par l’adrenaline ne s’accomplissent pas en presence de certaines
substances trks oxydables, telles que 1’hemoglobine.

Une solution d’hemoglobine se montre d6pourvue de toute
action neutralisante sur la toxine tetanique; mais si k un
melange toxine-adrenaline prepare en proportions neutrali¬
santes on ajoute une petite quantite de cette solution d’hemo¬
globine, la toxine ne sera plus neutralisee par l’adrenaline.

D’autre part, nous avons vu que l’adrenaline oxyd6e avait
perdu en grande partie son pouvoir toxique. Or, si l’on ex¬
pose k l’etuve des tubes fermes k la lampe et contenant cet
alcaloide oxyde, melange avec un exeks de toxine tetanique,
on peut voir le melange devenir de nouveau toxique pour des
souris qui succombent en quelques heures aprks avoir pr6sente

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Glandes surr&iales et Toxi-infections.

425

les symptSmes de l’empoisonnement par l’adrenaline, comme
si cet alcaloi'de avait recouvrd sa toxicity en se d&pouillant
sur la toxine d’une partie de l’oxyg^ne qu’il avait absorbd.

Nous concluerons done de l’expos6 de ces faits interessants
en disant qu’ils font penser k des phdnom^nes d’oxydation
qui auraient pour r^sultat, dans les reactions entre l’adr6naline
et la toxine tetanique, d’enlever k celle-ci une grande partie
de son 6nergie sp6cifique 1 ).

Tableau IV.

Action de l’hlmoglobine. Toxicity des melanges adrenaline oxyd4e + toxine.

Melanges injects aprfes une exposition

Jours

de 20 heures k 37°

1

1 2

3

4

5

6

Souris 1. Tt. 0.01 c. c. + 0.50 c. c. Sol.
d’h&noglobine

Souris 2. Tt. 0.01 c. c. + 0.10 c. c. Sol.
adr. syn. 1 °/ 00

0

t

0

0

0

0

0

Souris 3. Tt. 0.01 o. c. + 0.10 c. c. Sol.

adr. syn. 1 %o + 50 c. c. Sol. h4mogl.
Souris 4. Sol. adr. oxyd6e 1 °/ 00 1 c. c.
» 5. ,, „ „ 1 o /o 0 1 c. c.

+ 0.10 c. c. Tt.

t en 3“

i

0

0

0

0

n. Action de la glande surrenale sur la toxine tetanique (4).

Tandis que un centime de milligramme d’adr^naline est
dou6 du pouvoir de neutraliser in vitro au moins cinquante
doses de toxine tetanique, des quantity beaucoup plus con¬
siderables (0.03 gr.) de glandes surr4nales dess4ch4es dans le
vide sont incapables de neutraliser m£me une seule dose de
toxine. Et pourtant cette poudre contient toute l’adr4naline
de la glande; l’injection aux animaux d’une quantity convenable
de son emulsion provoque chez eux les accidents mortels de
1’intoxication par son alcalolde. Si, malgrd cela, la glande
totale se montre sans action sur la toxine, e’est qu’k cote de
l’adrenaline elle renferme des corps qui n’empechent pas son

1) La neutralisation de la toxine par l’adr£naline s’est faite ausei k
37° dans des tubes anaerobies de Pasteur oil le vide avait 4t6 pouss4 trks
loin au moyen de la trompe k mercure, de mime que dans d’autres tubes
oil l’on avait chass£ l’air par de l’azote, avant de m41anger la toxine avec
Padr6naline.

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426

A. Marie,

pouvoir toxique mais s’opposent & ses propridtt neutra-
lisautes.

Pr6parons dans l’eau physiologique une Emulsion de la
poudre de surrtale et filtrons-la & travers une bougie, elle
va s’y oxyder et en sortir avec une teinte brun&tre; or il
suffira d’ajouter une petite quantity de ce filtrat au melange
toxine-adr6naline pour empther la toxine d’etre neutralist.
On peut encore prtipiter par l’alcool la glycerine oil on a
fait matrer pendant plusieurs jours des glandes sur r tales
broyts; en lavant it l’alcool puis k lather et en dessthant
le prtipitd sous le vide sulfiirique, on obtient une poudre
qui Smulsionnt dans l’eau jouit du pouvoir de s’opposer k
Taction antittanique d’un thantillon de suprartine syn-
th&ique ou naturelle, mais ne parvient pas k empecher la
reaction de la toxine sur Tadrtaline, si le mdlange de ces
deux substances a 6t6 expos6 d’abord quelques heures it
l’6tuve.

Tableau V.

Action de la glande surr^nale complete.

Melanges injectes apres 20 heures

Jours

k 37®

i

2

1 3

Ll.

1 6

7

Souris 1. Filtrat de poudre de sur-

r^nale 2 c. c. + eau phys. 1 c. c.
Souris 2. Filtrat de poudre 2 c. c.

0

0

0

0

0

0

0

+ adr. syn. 1 °/ 00 1 c. c.

Souris 3. Eau phys. 2 c. c. + adr.

t en l h

I

syn. l%o 1 c.c.

Souris 4. Poudre surrenale 0.03 gr.

t en 45'

1

-F 0.0002 c. c. Tt.

Souris 5. Tt. 0.01 c. c. + 0.05 c. c.

=

=

=

t

adr 1

Souris 6. 09 Tt. 0.01 c.c. + 0.05 c.c.

0

0

0

0

o

0

0

adr. 1 °/oo + 1 c. c * filtrat poudre

surrenale

Souris 7. Tt. 0.01 c. c. + 0.01 c. c.
adr. 1 °/ 0 - + 1 c. c. filtrat d’extrait
glycerine de capsules surrdnales

lh+

0

-

—I

t

Ce fait que la toxine t&anique n’est plus neutralist par
Tadrtaline en prtence d’autres substances contenues dans
la glande surrenale est inttessant, mais il n’est pas spti-
fique: des extraits h^patiques, des filtrats de tissu cttral,
enfin des corps tels que la ltithine, poss&dent un pouvoir

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Glandes surrgn&les et Toxi-Lnfections.

427

analogue, et il est possible qu’il soit dft & une substance
comme la 16cithine, si r6pandue dans les elements cellulaires,
des capsules ou bien k l’un de ses derives 4galement trfcs
oxydable.

Maintenant que nous avons essay6 de montrer le caractfcre
chimique ou physico-chimique de la neutralisation de la toxine
tetanique par l’adr4naline, etudions le c6t6 physiologique de
la question.

La toxine tetanique, dans ses melanges avec l’alcaloide,
ne lui enlfeve pas son pouvoir toxique; au contraire, ainsi que
nous l’avons vu, elle peut en s’oxydant aux d6pens de l’adre*
naline permettre k celle-ci de recouvrer la toxicite que l’oxy-
dation lui avait fait perdre.

Done, additionn6e ou non de toxine tetanique, l’adr6naline
fraiche tuera un animal aux monies doses, ou bien provoquera
les m£mes reactions physiologiques, en particulier l’isch&nie
transitoire due & ses propri6t6s vaso-constrictives, tellement
puissantes qu’il suffit d’une partie d’adrenaline dans 10000
parties d’eau pour blanchir la conjonctive en une minute.

D’autre part, on sait que la t6tanotoxine est adsorb6e par
les terminaisons nerveuses: Wassermann et Bruck (5)
ont mis 4 profit ces deux propriet6s, celle de l’adsorption
nerveuse de la toxine, et celle de la vasoconstriction par
l’adr6naline pour essayer de demontrer que l’antitoxine fixe
seulement la toxine, mais ne la detruit pas. Les auteurs pr6-
paraient un melange exactement neutre toxine-antitoxine t6ta-
niques et, quelques minutes avant l’injection, ils determinaient
une vaso*constriction au moyen de l’adr6naline; alors ils ino-
culaient le melange en question. Indifferent pour des cobayes
t6moins non prepares, il provoquait chez l’animal adrenaline
un tetanos typique et mortel: l’antitoxine ne pouvant 6tre
r6sorb6e par suite de la contraction des capillaires, la toxine
avait ete adsorbee par les terminaisons nerveuses p6ripheriques
et del& transportee jusqu’aux centres. Une telle experience,
difficile k realiser puisqu’elle necessite un melange toxine-
antitoxine exactement neutre, ne reussissait qu’k la condition
qu’il fiit prepare recemment: d6ja au bout de 2 heures, la

Zeitschr. f. ImmuniWUforschunf. Orig. Bd. XVII. 29

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428

A. Marie,

combinaison entre la toxine et sod anticorps 6tait devenue
trop solide poor £tre d£faite dans l’organisme.

D’une fagon comparable se comportent nos melanges
toxine-adrenaline, et nous avons vu que le sdjour k une tem¬
perature basse ne suffit pas pour permettre la reaction des
deux substances, k laquelle il faut une exposition de plusieurs
heures & 37°. Dans ce cas, la neutralisation de la tetano-
toxine se trouve assume d’une fagon definitive et les elements
nerveux de l’organisme ne reagissent plus 4 son contact.

Mais, de m£me que des melanges toxine-antitoxine teta-
niques, neutres pour une espfcce animale, ne le sont plus pour
une autre, de m£me une preparation toxine-adrenaline in¬
offensive pour la souris ne Test pas pour le cobaye.

Diluons dans 3 c. c. d’eau physiologique un melange de
0.02 c.c. de toxine tetanique et de 0.20 c.c. d’adr£naline k
1 % 0 ; aprfcs 18 heures de s£jour k 37°, la moitie est in-
jectee sous la peau de la patte k un cobaye de 320 gr., et
l’autre moitie & une souris de 16 gr.: le premier succombera
it un tetanos typique 5 jours aprfcs (’inoculation, tandis que
la souris n’aura pas manifeste le plus ldger signe de tetanos
local.

L’etude, chez le cobaye, de l’action des melanges toxine-
adrenaline presente une double difficult^ en raison de la sensi-
bilit6 tr£s grande de cette esp£ce vis-i-vis de l’adrenaline,
comme de la toxine tetanique. Un cobaye de 300 gr. suc-
combe rapidement aprfcs une injection de 0.0008 gr. de
l’alcalol'de dont une souris de 15 gr. supporte 0.0001 gr.;
de plus, on n’ignore pas qu’il faut six k sept fois moins de
toxine par gramme d’animal pour tuer un cobaye que pour
tuer une souris. II resulte de ces affinit£s differentes qu’un
melange toxine-adrenaline, neutre pour la souris, se montrera
tetanigfcne pour le cobaye, son organisme modifiant la reaction
produite, k moins qu’il ne succombe 4 l’intoxication adrd-
nalinique, si la dose de l’alcaloi'de a ete augmentee. Dans ces
conditions, on s’explique comment le cobaye tolfcre la neutra¬
lisation par I’adrenaline seulement de 5—6 doses de toxine,
mortelles pour lui, soit d’une quantite 10 fois moindre que
pour la souris, bien que les proportions redproques de toxine
et d’alcalo'ide soient k peu pr&s les mSmes.

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Glandes surrenales et Toxi-infections.

429

Tableau VI.

Melanges toxine tetanique — adrenaline chez le cobaye.

Melanges injects aprfes

Jours

20 heures k 37°

1

2

3

L 4

5

6

7

1* Cobaye 45 (460 gr). 0.01 c.c. Tt +

1 c.c. Eau phys.

2° Cobaye 44 (560 gr). 0.01 c.c. Tt. +
0.50 c.c. Aar. 1 °/ ()0 + 0.50 c.c. Eau
phys.

3° Cobaye 52 (390 gr). 0.05 c.c. Tt +
0.50 c. c. Aar. 1 ®/oo + 0.50 c. c. Eau
phys.

0

0

t

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

4° Cobaye 47 (530 gr). 0.10 c.c. Tt. +
0.50 c.c. Aar. 1 °/ tt0 + 0.50 c. c. Eau
phya.

0

_

—

—

t

m. Action de l’adrenaline but la toxine diphterique.

La toxine tetanique n’est pas la seule toxine bact4rienne
qui soit neutralis4e par l’adr4naline, mais cet alcalolde exerce
de mSme sur la toxine diphteriqne an action assez com¬
parable.

En effet, en pr6parant et exposant & la temperature de
37° differents melanges de toxine diphterique et d’adrenaline
en solution millesimal, nous avons constate que cet alcalolde
pouvait neutraliser environ 5 k 6 doses de toxine mortelles
pour le cobaye.

Tableau VII.

Neutralisation de la toxine diphterique par l’adrenaline.

Melanges injects aprfes 20 heures & 37 0

Joure

1

2 |

1 3

4

5

6 !

7

1 ° Cobaye de 325 gr. 0.01 c.c. Tox.
dipht. + 1 c. c. Eau phys.

2° Cobaye de 435 gr. 0.06 c. c. Tox.
dipht. + 0.50 c. c. Adr. 1 %o + 0.50
c.c. Eau phys.

3* Cobaye ae 630 gr. 0.10 c. c. Tox.
dipht. + 0.50 c. c. Adr. 1 °/ 00 + 0.50
c. c. Eau phys.

0

0

t

0

0

0

0

0

0

0

0

t

Qu’il s’agisse de la toxine diphterique ou de la toxine
tetanique, Taction de l’adrenaline sur elles est toujours une
action de contact et ne s’opbre jamais k distance. On peut,

29*

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430

A. Marie.

aprfcs une injection de 1’alcaloTde, ou m§me d’un melange
neutre toxine-adr6naline, inoculer dans la meme region une
dose mortelle de la toxine pure, les animaux succomberont 4
l’intoxication splcifique et dans le meme temps que les
t£moins.

Toutefois il se peut qu’une fois introduite dans l’organisme
une toxine bactarienne exerce sur les glandes surr6nales une
action directe, ou indirecte par l’interm^diaire du systame
nerveux dout l’influence sur la fonction secretaire des capsules
est un fait bien demontr£.

En effet, si l’on se reporte aux recherches entreprises
par Luksch (6) au laboratoire de Julius Pohl sur les
troubles fonctionnels de ces organes dans les intoxications
exp£rimentales, on voit que chez des animaux, des lapins,
inocul4s avec de la toxine diphtarique, on a pu noter d’une
fagon constante une diminution 6norme du pouvoir hypertensif
de leurs capsules, comme si ces glandes avaient 6puis6 toute
leur reserve d’adrenaline. Pour qu’il en fut ainsi, l’intoxication
devait etre d’une duree assez longue: en pareil cas, et sur-
tout chez les animaux pr^sentant des accidents paralytiques,
cet 6tat de d6ch6ance physiologique des surr6nales put Stre
bien 6tabli, en d£pit des resultats contradictoires en apparence
de Ehrmann qui, operant avec des doses trop fortes de
toxine diphtarique, provoquait la mort des animaux d&s la
30 ii!me heure.

Des observations analogues ont 6t6 faites chez des ani¬
maux infect6s par un colibacille, des staphylocoques, le microbe
de la tuberculose.

R6cemment, R. Porak (7), etudiant l’activita fonction-
elle des glandes surr£nales chez des lapins inocul£s sous les
meninges avec du virus rabique (virus fixe) a constate qu’elle
paraissait normale pendant les premiers jours de l’incubation,
mais que vers la fin de la maladie cette activity fonctionnelle,
estim6e d’apr&s l’action de l’adr^naline, se montrait extrSme-
inent diminu6e. sinon aneantie.

Si des observations analogues se trouvaient confirmees
pour les toxi-infections, on serait conduit logiquement &
rattacher les accidents d’asthenie cardiaque, si frequents dans
les maladies infectieuses, 4 une insuffisance de la fonction

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Glandes surrgnales et Toxi-infections.

431

adr£nalinique et k l’affaiblissement cons6cutif du syst&me
vasculaire.

On n’ignore pas combien de tels accidents apparaissent
fr6quemment an cours des diff^rentes manifestations de la
dipht6rie et nous rappellerons qu’on a souvent pr6conis6
contre eux l’emploi de l’adr&ialine qui, inject6e trfcs lentement
dans les veines, pourrait, d’apr&s von Fiirth et Straub (8),
relever pour longtemps la pression sanguine.

Zusammenfassung.

1) Natflrliches oder synthetisches Adrenalin neutralisieren
in vitro das Tetanustoxin.

2) Leicht oxydierende Substanzen stbren die Neutralisation
(Hemoglobin).

3) Die Nebennieren in verschiedener Form, sei es als
emulsioniertes Pulver oder als Glyzerinextrakt, ttben trotz der
Anwesenheit des Alkaloids keine Wirkung auf das Tetanus-
toxin aus; auBerdem storen diese Nebennierenausziige die
Neutralisation des Toxins durch das Adrenalin.

4) Das Alkaloid der Nebenniere neutralisiert auch das
Diphtherietoxin.

5) Diese neutralisierenden Wirkungen werden nie in vivo
beobachtet; sie verlangen eine Temperatur von 37 0 und einen
dauernden Kontakt zwischen den beiden Substanzen.

OuTrages cIMs.

1) Marie, A., C. R. Soc. BioL T. 72, p. 864.

2) Tiffeneau, M., Thfese de Paris, 1910.

3) Siebert, Zeitschr. f. phys. Chemie, 1901.

4) Marie, A., C. R. Soc. Biol., T. 73, p. 39.

5) Wassermann, A., und Bruck, Deuteche med. Wochenschr., 1904,
No. 21, p. 764.

6) Luksch, Wien. klin. Wochenschr., 1905, No. 18, p. 345.

7) Porak, R., C. R. Soc. Biol., T. 73, p. 601.

8) Straub, Miinch. med. Wochenschr., 1911, p. 1388.

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432

Pietro Rondoni und Guido Goretti,

Nachdruck verboten.

[ Aus dem Laboratorium fiir allgemeine Pathologic der k. Hoch-
schule Florenz (Direktor: Prof. A. Lustig).]

Ueber einlge biologische Elgenschaften der Milz
be! experimenteiler Naganainfektlon.

Von

Priv.-Doz. Dr. Pietro Rondoni und Dr. Quido Goretti,

Assistenten.

(Eingegangen bei der Redaktion am 14. Februar 1913.)

Da bei experimenteiler Infektion der Laboratoriumstiere
mit Trypanosoma Brucei die mehr oder weniger aus-
gesprocbene Milzschwellung eine der h&ufigsten Erscheinungen
bildet, und da andererseits die Ansichten fiber die Bedeutung
der Milz ffir den Schutz des Organismus und ffir die Ent-
stehung des Krankheitsbildes noch sehr geteilt sind, haben
wir es als nicht unnfitzlich betrachtet, einige biologische Eigen-
schaften dieses Organes wfihrend der Infektion zu studieren.
Und zwar haben wir erstens das Vorkommen von trypaniziden
Stoffen und die Anhfiufung von spezifischen Trypanosomen-
stoifen in der Milz untersucht und zweitens das Verhalten der
hamolytischen Wirksamkeit der Milz selbst auf der Hdhe der
Infektion. Da unsere Ergebnisse ausfOhrlicher in der italieni-
schen Zeitschrift „LoSperimentale“ (Florenz) verfiffentlicht
werden sollen, werden wir uns hier nur mit einer zusammen-
fassenden Uebersicht begnfigen.

I. Trypanizide Stofle and Trypanosomenantigene in der Mils.

Die Frage, ob trypanolytische oder irgendwie trypanizide Stoffe in der
Milz vorkommen, ist verechieden beantwortet worden. Nach Bradford
und Plimmer, Sauerbeck, Rodet und Vallet, Yakimoff sollte
die Milz sowohl in vivo wie in vitro trypanizid wirken; wahrend
Laveran und Thiroux und Massaglia eine trypanizide Wirksamkeit
der Milz ausschlieSen. Jaff4, der eine der besten Arbeiten auf diesem
Gebiete (unter Schillings Leitung) ausgefiihrt hat, findet eine aus-
gesprochene trypanizide Wirkung bei der Milz von kiinstlich immunisierten
Ratten (infiziert, dann mit Arsenophenylglyzin geheilt, und in der Weise
immun geworden); er hat aber nicht untersucht, ob die Milz der Tiere,

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Biologische Eigensch&ften der Milz bei experim. Naganainfektion. 433

die einfach infiziert worden Bind, also von jedem Immunisierungsverfahren
unabhangig, trypanolytisch zu wirken imstande ist, d. h. ob die Milz bei
der naturlichen Verteidigung des Organismus eine Rolle spielt; er hat nur
in eingehender Weise die trypanolytische Wirkung von Autolysaten und
Trockenextrakten von Organen der normalen Tiere untersucht und ge-
funden, dafi diese Wirkung mit der Mmolytischen Wirkung derselben
Autolysate und Organextrakte in Parallele zu setzen sei. — Lanfranchi
miBt in mehreren Arbeiten der trypanosomenabtotenden bzw. -ab-
schwachenden Wirkung der Milz eine grofie Bedeutung bei. Das Nagana-
virus sollte in der Milz so abgeschwacht werden, dafi die Hunde durch
intrasplenische Impfung von Naganavirus sogar immunisiert werden konnten.

Mutermilch hat besonders die Frage studiert, ob wahrend der In-
fektion trypanizide Stofle in der Milz mehr ale in anderen Organen und
im Blute vorkommen; er nimmt an, dafi die Antikbrper, die beim Meer-
schweinchen die charakteristischen Krisen (Schwund der Trypanosomen
aus dem peripheren Blut) hervorrufen, in der Milz gebildet werden, daB
aber die Antikorperbildung plotzlich einsetzt und die Antikorper rasch in
die Blutbahn ausgestoBen werden, so daB der Nachweis eines hohen Anti-
kbrpergehaltes in der Milz schwer gelingt.

Schon aus diesem Auseinaudergehen der Meinungen der
Verfasser, die die Frage behandelt haben, glauben wir ent-
nehmen zu diirfen, dafi der Nachweis von trypaniziden Stoffen
in der Milz nicht leicht sein mufi; trotzdem haben wir ihn
in einigen Fallen deutlich fuhren kdnnen.

Es seien einfach einige Versuchsprotokolle angefflhrt.
Zuerst haben wir mit Meerschweinchenmilzen gearbeitet, und
aus solchen mit physiologischer KochsalzlSsung einfache Ex-
trakte hergestellt, die man in vitro auf Trypanosomen ein-
wirken liefi, um dann die Abschwachung der Trypanosomen
durch Mauseimpfung nachzuweisen. Es wurden 6 Milzen von
mit Nagana infizierten Meerschweinchen und 2 von normalen
Meerschweinchen zu verschiedenen Zeiten verarbeitet. Die
normalen Milzen gaben stets negative Resultate, die Extrakte
auf Milzen der infizierten Tiere (zu verschiedenen Infektions-
perioden) waren manchmal mit geringem trypaniziden Vermdgen
versehen; aber in folgendem Versuche war das Ergebnis sehr
deutlich positiv.

22. XI. 1912. Em Nagana-infiziertes Meerschweinchen (10. Infektions-
tag) wird entblutet; Blut, ungefahr 15—20 Trypanosomen im Gesichtsfeld
enthaltend, mit Citratbouillon gemischt (die Aufschwemmung enthiilt
4—5 Trypanosomen im Gesichtsfeld). Die Milz ist steril entnommen;
Gewicht 1,8 g; sie wird mit 5,4 ccm physiol. Kochsalzlosung zerrieben

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434

Pietro Rondoni und Guido Goretti,

(unter Zusatz von Glaspulver); der Milzbrei bleibt 15 Minuten bei Zimmer-
temperatur; dann wird dekantiert, um die groben Gewebepartikel zu be-
seitigen. Dieser Extrakt (Menge ungefahr 5 ccm) wird mit 5 ccm der
trypanosomenhaltigen Blutaufschwemmung gemischt: Gemisch A.

Andererseits werden 5 ccm derselben Blutaufschwemmung mit 5 ccm
Kochsalzlosung (anstatt des Malzextraktes) gemischt: Gemisch B.

Die zwei Gemische werden auf Eis aufbewahrt; von Zeit zu Zeit
Impfung auf Mause (0,5 ccm pro Maus intraperitoneal).

Die Mause werden jeden der folgenden Tage untersucht; folgende
Tabelle zeigt den Verlauf der Infektion der Mause, die mit Gemisch A
(Trypanosomen + Milz) und mit Gemisch B (Trypanosomen + N'aCl-Losung)
injiziert worden sind.

Hier, wie bei anderen Versuchen, bedeutet 0, daB das Blut trypano¬
somen frei ist, + sparliche Trypanosomen im Blut, ++ vide Trypanosomen
im Blut, + + + aufierst starke Infektion (Blut von Trypanosomen wimmeind).
t bedeutet Tod des Tieres.

TabeUe I.

Mause in¬
jiziert nach

Tage

23. XI.

24. XI.

25. XI.

26. XI.

27. XI.

28. XI.

29. XI.

17, Std. |

mit Gem. A

0

+

+

+ +

+ + +

t

mit Gem. B

+

1 + +

+ + +

j t

5 Std. J

mit Gem. A

• 0

+

+ +

+ +

+ +

+ + +

t

mit Gem. B

+

+ +

+ + +

t

9 Std. {

mit Gem. A

+

+

+

+ +

+ + +

t

mit Gem. B

+ i

+ 4*

+ + +

t

+ + ^

i

Aus diesem Versuche ist also deutlich zu sehen, daB der
Kochsalzextrakt aus der Milz eiue deutliche Abschwachung
der Virulenz der Trypanosomen, schon nach l 1 /* Stunden,
bewirkt hat.

Bei Ratten, bei denen die Naganainfektion rascher verl&uft,
ohne Remissionen oder Krisen, haben wir nie so deutliche
Resultate erhalten konnen; wir kbnnen aber annehmen, daB
auch mit Rattenmilzen ebenfalls eine gewisse, obwohl leichte,
trypanizide Wirkung zu erreichen ist. Folgender Versuch mag
als Beweis dafiir dienen, daB vielleicht auch bei Ratten auf
der Hohe der Infektion eine gewisse Wirksamkeit der Milz-
extrakte nachzuweisen ist.

11. XII. 1912. Zwei stark infizierte Ratten getotet (durch Entblutung);
Milz steril entnommen; die zwei Milzen wiegen zusammen 1,7 g. Sie
werden mit 8,5 ccm Kochsalzlosung zerrieben. Nach ‘/j-stundigem Ver-
weilen in Zimmertemperatur wird die Emulsion dekantiert: der Extrakt
aus der Milz der infizierten Ratten ist fertig.

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Biologische Eigenschaften der Milz bei experim. Naganainfektion. 435

Gleichzeitig ist eine normale Ratte getotet und ihre Milz, die 0,5 g
wiegt, mit 2,5 ccm zerrieben worden usw.: auch der Extrakt aus normaler
Milz ist fertig.

Dann werden folgende Gemische hergestellt:

A 1,5 ccm Extrakt aus der infizierten Milz + 1,5 ccm einer Aufschwem-
mung vom Blut einer infizierten Maus mit Citratbouillon, die ungelahr
10 Tiypanosomen im Gesichtsfeld enthalt.

B 1,5 ccm Extrakt aus normaler Milz + 1,5 ccm derselben Mausblutauf-
schwemmung.

C 1,5 ccm physiol. Kochsalzlosung + 1,5 ccm derselben Mausblutauf-
schwemmung.

Ueber Nacht auf Eis. Am nachsten Morgen Impfung auf Mause
(0,5 pro Maus intraper.). Tabelle II zeigt den Verlauf der Infektion der
Mause.

Tabelle U.

Mause
injiziert mit

Tage

13. XII.

14. XII.

15. XII.

a

M

CO
»—1

17. XII.

18. XII.

19. XII.

ri

X

g

1

Maus 1

0

+

4 -

++

+++

t

Gemisch A <

Maus 2

0

0

+

+

+

+ +

+ + +

t

l

Maus 3

0

+

+

++ +

t

frPmiRph R /

Maus 1

0

4-

++

+ + +

t

Maus 2

0

0

++

++ +

t

Maus 1

0

+

+ +

+ + +

t

VJCiiliPvll \

Maus 2

0

+

+

++

+ +

+ + +

t

Der Unterschied ist etwas deutlicher, wenn wir Reihe A
mit Reihe B vergleichen, d. h. die Wirkung der Extrakte aus
den infizierten Ratten mit denjenigen aus den normalen Tieren:
am 15. Dezember, dem dritten Tage seit der Infektion, ist der
Unterschied zwischen den 2 Mfiusen B und den 3 Mausen A
besonders deutlich. In der Reihe C scheint die Kochsalz-
losung an und ftir sich etwas die Trypanosomen geschfidigt
zu haben; obwohl die auffallende Resistenz einer Maus auch
auf individuellen Eigenschaften beruhen kdnnte.

Auch bei Ratten kann es also wohl gelingen, den Nach-
weis einer gewissen leichten trypanoziden Wirkung der Milz
w&hrend der Infektion zu fflhren, und solche Wirkung darf
nicht auf das Serum, das noch in den Milzextrakten enthalten
ist, zurtlckgefiihrt werden, weil wir bei unseren Versuchen
nie eine trypanozide Wirkung des Serums der Ratten w&hrend
der Infektion nachweisen konnten. Es scheint sogar, daB das
Serum der normalen und der infizierten Tiere dieselbe lebens-

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436

Pietro Rondoni und Guido Goretti,

verl&ngernde Wirkung auf Trypanosomen hat, die Schern,
Mesnil und Brim on t im Serum selbst und in der Leber
gefunden haben.

Eine andere Frage, die wir zu entscheiden suchten, war
folgende: Sind in der Milz wfihrend der Infektion Trypano-
somenantigene aufgespeichert, d. h. ist eine immunisierende
Wirkung der Milz nachzuweisen, die mehr Oder weniger die
immunisierende Wirkung anderer Organe und des Blutes selbst
fibertrifft? Wenn in der Milz der Ort des Zugrundegehens
der Parasiten (M. Meyer) ist, dfirfte die Vermutung wohl
berechtigt sein, daB in diesem Organe viele Leibesstoffe der
Trypanosomen angehfiuft sind: geht nun die Zerstdrung der
Trypanosomen so weit, daB diese spezifischen Stoffe ihren
Antigencharakter verlieren oder bleiben die spezifischen an-
tigenen Eigenschaften erhalten, so daB in der Milz, mehr als
in anderen Organen, Immunantigene im Sinne Schillings
vorhanden sind? Wenn letztere Annahme richtig ist, sollte
der Milzbrei imstande sein, mehr als ein Extrakt aus anderen
Geweben und mehr als Blut selbst (wo die Trypanosomen
nicbt so massenhaft zugrunde gehen), Immunitfit auszulfisen.

Nun haben unsere Versuche immer zu negativen Ergeb-
nissen geffihrt: Milzbrei, der */ 4 — Vs Stunde bei 45° erhitzt
wurde, um die eventuell vorhandenen Trypanosomen abzutoten
(es wurden immer stark infizierte Ratten benutzt), konnte gar
nicht Mause immunisieren, auch nicht eine Verlfingerung der
Inkubationsperiode hervorrufen. Es wurde auch eine andere
Methode benutzt, um steriles Milzgewebe aus infizierten Ratten
zu gewinnen — das Organ wurde steril entnommen, fiber
Nacht bei 37° aufbewahrt (dann sterben die Parasiten sicher-
lich), am n&chsten Tage mit weniger Kochsalzlosung zerrieben
und der Saft zur Impfung angewandt: bei der nachtrfig-
lichen Infektion erwiesen sich die Mause nicht als immun.

Es sei nebenbei bemerkt, daB wir in einem Kontrollver-
suche mit bei 45° erhitztem Leberbrei eine ziemlich aus-
gesprochene immunisierende Wirkung dieses Organs (die die-
jenige des Blutes selbst tibertraf) gefunden haben (betr&chtliche
Verlangerung der Inkubationsperiode). Wir konnen also zu
dem Schlusse kommen, daB die Milz eine gewisse trypanozide
Wirksamkeit manchmal besitzen kann, obwohl der genaue

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Biologische Eigenschaften der Milz bei experim. Naganainfektion. 437

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Nachweis nicht immer gelingt; dafi andererseits eine AnhSufung
von Immunantigenen in ihr nicht anzunehmen ist, dafi also
die Trypanosomenstoffe beim Zugrundegehen der Parasiten
so denaturiert werden, dafi sie nicht mehr imstande sind, als
Antigene zu wirken.

n. Hamolytische Eigenschaften der Milz wahrend der
Naganainfektion.

Wir wollen hier nicht die zahlreichen Arbeiten fiber die hamolytische
Wirkung der Organextrakte resumieren. Es sei nur darauf hingewiesen,
dafi auch die neuesten Forschungen die Ergebnisse der klassischen Arbeit
von Korschun und Morgenroth bestatigen, dafi die hamolytische
Wirksamkeit der Organextrakte auf den Gehalt an Lipoiden (Toxolecithiden
nach Friedemann, ISeifen nach Schafer) zurfickzufuhren ist, dafi sie
also nichts mit den komplexen Serumhamolysinen zu tun hat.

Nur ffir einige Organe wird von manchen Forschern eine besondere
Art der hamolytischen Wirkung angenommen, so z. B. fur die Bauch-
speicheldrfise und die Milz: hier soil ten besondere Hiimolysine auch intra
vitam von Bedeutung sein.

Was die Milz anbetriffl, weifi man schon lange, dafi dieses Organ
eine zerstorende Wirkung auf rote Blutkorperchen schon physiologisch
ausfibt. Man weifi aber nicht bestimmt, ob phagocytare Eigenschaften der
Milzzellen allein eine Rolle dabei spielen oder ob auch besondere eigen-
artige Milzhamolysine existieren, die normalerweise auf die eigenen Blut¬
korperchen (autohamolytisch) einzuwirken vermfigen. Diese Frage ist m
den letzten Jahren besondere von franzosischen Verfassern eingehend be-
handelt worden und die Ansichten sind noch sehr geteilt. Um nur wenige
Forecher zu erwahnen, wollen wir auf die Arbeiten von Gilbert, Cha¬
brol und B6nard hinweisen, die eine hamolytische Wirkung des Hunde-
milzextraktes auf die roten Blutkorperchen desselben Individuums annehmen
zu dfirfen glauben. Diesen Forschern entgegen haben A chard, Foix und
Salin behauptet, dafi frische Milzextrakte nicht autohamolytisch wirken,
dafi solche nur dann losende Eigenschaften ffir rote Blutkorperchen er-
werben, wenn sie in nicht sterilem Zustande 2—3 Tage lang aufbewahrt
werden. Diese spat erecheinende hamolytische Fahigkeit ware wohl auf
Bakterien zurfickzufuhren.

Auch Widal, Abrami und Brul6 kommen zu ahnlichen Schlfissen:
frische Hundemilzextrakte sind nicht hamolytisch ffir frische Blutkfirperchen
desselben Hundes. Eine hamolytische Wirkung, wenn sie fiberhaupt vor-
kommt, setzt sehr spat ein, als Folge von autolytischen Zereetzungs-
vorgiingen, die im Milzbrei stattfinden, und solche hamolytische Wirkung
hatte deshalb keine besondere intravitale Bedeutung. Auch Kindborg
und Cain haben keine auto- bzw. isolytische Fahigkeit von exstirpierten
menschlichen Milzen nachweisen konnen.

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438

Pietro Rondoni und Guido Goretti,

Trotz einer nicht unbetrfichtlichen Verwirrung, die auf
diesem Gebiete herrscht, dflrfen wir aber im grofien und ganzen
annehmen, daB die normale Milz eine deutliche h&molytische
Fahigkeit nicht Oder nur in geringem Grade besitzt; daB aber •

der Nachweis von Milzh&molysinen leichter gelingt, wenn die
Milz von unter der Einwirkung einiger h&molytischer Gifte
stehenden Tieren untersucht wird (Gilbert und Mitarbeiter,

Wolf usw.), und daB auch klinische Bilder in der mensch-
lichen Pathologie bekannt sind, die auf einer gesteigerten
hamolytischen Funktion der Milz beruhen (Banti). Auch die
H&moglobinurie bei Affenmalaria sollte nach den schonen
Untersuchungen von G on der und Rodenwaldt mit der
Milz in Zusammenhang stehen.

Es erschien uns wichtig, bei Naganainfektion die hamo-
lytische Wirksamkeit der Milzextrakte zu erforschen, um so
mehr, als, wie bekannt, schwere anSmische Zust&nde bei Try-
panosomenkrankheiten vorkommen kdnnen und die Rolle der
Milzfunktion dabei unbekannt ist.

Wir haben die Milzen von 29 (meist stark) infizierten
Ratten und von 3 infizierten Meerschweinchen und von 25 *

normalen Ratten und 2 normalen Meerschweinchen benutzt.

Es war natfirlich fflr uns von Bedeutung, einen Vergleich
zwischen normalen und trypanosomierten Milzen zu machen;
wir haben deshalb am selben Tage immer 1—2 normale und
1—2 infizierte Milzen verarbeitet, so daB Unterschiede in der
Resistenz der zum Versuche verwandten Blutaufschwemmung
(5-proz. gewaschenes Ratten- und Meerschweinchenblut), die
von Tag zu Tag verschieden war, auszuschlieBen sind.

Wir haben Milzen von infizierten Tieren auf BlutkSrperchen
desselben Individuums, auf Blutkorperchen eines anderen (in¬
fizierten oder normalen) Individuums derselben Art und auf
heterologe Blutkorperchen einwirken lassen und auch Milzen
von normalen Tieren in derselben Weise untersucht, so daB
alle moglichen Kombinationen beobachtet worden sind.

Die wasserigen Extrakte wurden in der gewbhn-
lichen Weise hergestellt: die Milzen waren mit der 4—10-fachen
Gewichtsmenge Kochsalzlosung zerrieben (selbstverstandlich
fur jede Milzengruppe dieselbe Verdiinnung, und in jeder Gruppe
war wenigstens eine normale Milz vorhanden); der Brei wurde

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Biologische Eigenschaften der Milz bei experim. Naganainfektion. 439

nach kurzer Zeit dekantiert und der dekantierte Extrakt ent-
weder sofort oder nach hfichstens 24 Stunden verwandt.

Aus 6 infizierten Milzen und aus 5 normalen sind alko-
holischeExtrakte hergestellt worden: jede Milz wurde mit
der 2-fachen Gewichtsmenge Kochsalzlfisung zerrieben, dann
mit der 20-fachen Menge Alkohol (absol. oder 90°) versetzt;
nach einem 7—8-stflndigen Verweilen bei Zimmertemperatur
war der Extrakt durch Papier abfiltriert, die filtrierte Fliissig-
keit bei 37° abgetrocknet, der Riickstand in Kochsalzlfisung
vollst&ndig aufgenommen, und zwar in eine Menge Kochsalz¬
lfisung, die dem 10-fachen Gewicht der Milz entsprach. Die
alkoholischen Extrakte aus infizierten Milzen waren meistens
trfiber als diejenigen aus normalen Milzen: man konnte
fitters deutlich sehen, daB die alkohollfislichen Stoffe in den
infizierten Milzen in grfifierer Menge als in den normalen
vorhanden zu sein pflegen.

Die Ergebnisse lassen sich kurz zusammenfassen: die
wfisserigen Extrakte aus den Milzen der naganainfizierten
Tiere waren fast immer mehr h&molytisch wirksam als die¬
jenigen aus den normalen Milzen. Die Naganamilzextrakte
wirkten in der Mehrzahl der Falle gleich stark auf die eigenen
Blutkfirperchen (autohSmolytisch) wie auf die Blutkfirperchen
anderer Tiere derselben oder anderer Art (iso- und hetero-
hSmolytisch). Die Kontrollen mit normalen Milzen ergabeu
stets entweder eine ganz schwache oder keine hSmolytische
Wirksamkeit, so daB wir fflr die Milz von Ratten und Meer-
schweinchen uns mehr an die Meinung von Widal, Abrami
und Brul6 anschlieBen als an die von Gilbert, Chabrol
und Benard, d. h. ein normales Milzhamolysin bis jetzt als
unbewiesen erachten.

Aber daB die wSsserigen Extrakte aus den Milzen der
naganakranken Meerschweinchen und Ratten eine ausge-
sprochene h&molytische Wirksamkeit besitzen, das steht fur
uns auBer jedem Zweifel. Manchmal waren schon Dosen von
0,5—0,25 eines 1:10-Extraktes stark h&molytisch (Testdosis
der Blutaufschwemmung 0,5 einer 5-proz. Aufschwemmung).
Die Haupteigenschaften dieses HSmolysins (wir sagen jetzt so,
ohne auf dessen Bedeutung und Wesen vorgreifend eingehen
zu wollen) sind folgende:

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440

Pietro Rondoni und Quido Goretti,

1) Die hamolytische F&higkeit der w&sserigen Extrakte
ist durch Erhitzen bis 56° mehr oder weniger abgeschw&cht,
nie vollstUndig aufgehoben.

2) Die Sauren (HC1) und Alkalien (NaOH) in an und fttr
sich nicht Idsenden Dosen haben keinen deutlichen EinfluB
auf die Hamolyse.

3) Das normale Rattenserum hat einen deutlichen, obwohl
nicht ausgesprochen hemmenden EinfluB.

4) Die Wirksamkeit der Extrakte nimmt mit dem Alter
etwas zu; wir haben nie Extrakte gebraucht, die mehr als
24 Stunden alt waren.

5) Die Hamolyse geht langsam vor sich; manchmal ist
sie nach 2 Stunden Aufenthalt der Rdhrchen bei 37° nicht
sehr deutlich und wird stark nach der Nacht auf Eis.

Was nun die alkoholischen Extrakte anbetrifft,
haben wir gefunden, daB von den 6 Milzen, die aus infizierten
Tieren stammten, 5 stark hamolytisch wirkende Extrakte ge-
liefert haben; von den 5 normalen Milzen war nur eine eben-
falls hamolytisch. Es scheint also, daB es mit Alkohol leichter
und dfter gelingt, aus den Milzen der naganakranken Tiere
hamolytische Stoffe zu extrahieren, als es bei normalen Milzen
der Fall ist. Es hat uns sogar geschienen, daB die Menge der
hamolytischen alkoholloslichen Stoffe mit der Schwere der In-
fektion in Zusammenhang steht. Man darf also behaupten,
daB die Stoffe, die in den wasserigen Extrakten wirksam sind,
auch in die alkoholischen gewdhnlich ilbergehen; daB also das
Hamolysin der infizierten Milzen einen alkohollbslichen Stoff
oder wahrscheinlicher ein Gemisch von Stoffen darstellt, von
denen viele grbBtenteils alkoholloslich sind.

Wir glauben, daB wir es in den Milzen der Naganatiere
mit lipoidalen Stoffen zu tun haben: die Charaktere der
Hamolyse sind grbfitenteils diejenigen der Lipoidhamolyse, die
Alkoholloslichkeit der hamolytischen Stoffe und die Hemmung
durch Serum sprechen gleichfalls dafiir. DaB die Sauren und
Alkalien die Hamolyse nicht beeinflussen, wie es gewbhnlich
bei der Lipoidhamolyse der Fall ist, das soil uns nicht be-
fremden: denn die kleiuen Mengen von HC1 und NaOH, die
zugesetzt werden miissen (um die eigene hamolytische Wir-
kung der Saure und des Alkalis zu vermeiden), von den vielen

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Biologische Eigenschaften der Milz bei experim. Naganainfektion. 441

Proteinen und Proteiden der stark eiweiBhaltigen wfisserigen
Extrakte gebunden werden und kflnnen so auf die wirksamen
h&molytischen Substanzen keinen EinfluB ausflben.

Das Verhalten der Warme gegenflber spricht auch fflr
eine Lipoidhamolyse: die hamolytische Wirkung der reinen
Lipoide ist zwar ganz koktostabil (und koktostabil war wirk-
lich die hamolytische Wirkung unserer alkoholischen Extrakte),
aber man weiB, und H. Sachs hat nachdrflcklich darauf hin¬
ge wiesen, daB die Wirkung der Lipoide, die mit EiweiBstoffen
gemischt bzw. gebunden sind, auch thermolabil sein kann:
und die Liebermannsche Theorie der Seifennatur der Kom-
plemente beruht auch eben auf dieser Tatsache. In unserem
Falle glauben wir annehmen zu dflrfen, daB das nicht gleich-
maBige Verhalten der Naganamilzextrakte der Erhitzung gegen¬
flber ein Ausdruck der verschiedenen Festigkeit der Bindung
der aktiven Lipoide an die EiweiBbestandteile der Extrakte
sein kann. Wir wollen auch erwahnen, daB aus histologischen
Untersuchungen, die noch im Gange sind, ein erhOhter Gehalt
der Milz an Fettsubstanzen wahrend der Infektion hervorzu-
gehen scheint und daB mit dem Polarisationsmikroskop eine
Zunahme der doppeltbrechenden Korper oft in solchen Milzen
nachzuweisen ist. Solche Befunde, die wir spater zu er-
weitern und bestatigen beabsichtigen, sprechen durchaus fflr eine
Anhaufung von Lipoiden in der Naganamilz, die sich sehr gut
mit der ausgesprochenen hamolytischen Fahigkeit in Einklang
bringen lafit.

Wir glauben nicht, daB der grOBte Teil dieser hamo¬
lytischen lipoidalen Stoffe von den Trypanosomenleibern
stamme; von Landsteiner und Raubitschek ist zwar
eine leichte hamolytische Wirkung der Trypanosomen nachge-
wiesen worden, und wir selbst konnten in einigen durch eine
besondere Methode hergestellten Extrakten eine leichte hamo¬
lytische Fahigkeit in Erscheinung treten sehen; aber die
Wirkung vieler Milzen war zu stark, um sie nur auf die
Trypanosomen zurflckfflhren zu konnen. Wir glauben eher,
daB die Lipoide als Ausdruck der komplizierten Zersetzungs-
und Reaktionsvorgflnge und der tiefen Storungen des Stoff-
wechsels vorkommen, die sicherlich auf der Hdhe der Infektion
in diesem Organe vor sich gehen.

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442 R o n d o n i und G o r e 11 i, Biologische Eigenschaften der Milz etc.

Die intravitale Bedeutung dieser h&molytischen Wirk-
samkeit wird nicht groB sein; es ist flbrigens zu bezweifeln,
nach den Untersuchungen von LSwenstein, ob wirklich bei
der akuten Infektion der kleinen Laboratoriumstiere wahre
anatnische Zustande vorkommen; und jedenfalls waren solche
mit einer hamolytischen Wirkung von in der Milz aufge-
speicherten Lipoiden schwer in Zusammenhang zu bringen,
da man weiB, daB die Lipoidhamolyse durch das Serum und
durch viele Eiweifistoffe gehemmt wird, so daB hier die Milz-
hamolyse mehr als ein in vitro-Phanom en zu betrachten
ist, welches auf tiefe Veranderungen im Stoffwechsel der Ge-
webe wahrend der Infektion hindeutet.

Zusammenfassung.

1) Die Milz der mit Nagana infizierten Meerschweinchen
und Ratten kann eine nachweisbare trypanolytiscbe Fahigkeit
besitzen; eine deutliche Anhaufung von aus den Trypano-
somen stammenden Immunantigenen ist in der Milz nicht
nachzuweisen.

2) Die Milz derselben Tiere auf der H6he der Infektion
hat in vitro eine ausgesprochene hamolytische Wirksamkeit
(auto-, iso- und heterolytisch), die auf einen vermehrten Ge-
halt an Lipoiden zurQckzufhhren ist; diese Milzhamolyse hat
wahrscheinlich keine Oder kaum eine intravitale Bedeutung.

Literatur.

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Hid aka, Beziehungen zw. Syphilis- und Recurrens-Immumtat. 443
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Schilling, Centralbl. f. Bakt., I. Abt, Ref., Beil, zu Bd. 54, 1912.
Widal, Abrami et Brul4, Compt rend, de la Soc. de Biologie, 4mai 1912.

Nachdruek verbolen.

[Aus der Kbniglichen dermatologischen Universit&tsklinik zu
Breslau (Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Neisser).]

Zur Frage der Beziehungen zwischen Syphilis* und
Beeurrens-lmmunitSt.

Von Dr. S. Hidaka (Japan).

(Eingegangen bei der Redaktion am 15. Februar 1913.)

Zu den wertvollsten Errungenschaften, die wir der modernen
Syphilisforschung verdanken, gehbrt ohne Zweifel auch die
Kl&rung der Frage der Immunit&t bei der Lues. Nach alien
den Schwankungen und Irrtiimern, denen dieses Problem so
lange Zeit hindurcb unterworfen war, stehen wir heute auf dem
haupts&chlich durch die experimentellen Arbeiten Neissers
und seiner Schiller klar und einwandfrei begriindeten Stand-
punkt, daB es eine echte Immunitat bei der Syphilis nicht
gibt, daB man vielmehr nur von einer sogenannten „Anergie u
sprechen kann, d. h. von einem Refrakt&rsein gegen neue
spezifische Impfungen, solange der Kbrper noch Syphilisgift
beherbergt. Da also dieser Zustand der Anergie zugleich mit

Zeitschr. f. ImmunttStUforschung. Orig. Bd. XVII. 30

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444

S. Hidaka,

der Krankheit schwindet, so kann es nach v511iger Ausheilung
der Syphilis zu einer echten Reinfektion kommen.

Neisser erklart das Zustandekommen der Anergie so, dali von den
im Organismus sich aufhaltenden Parasiten eine dauemde Schutzwirkung
ausgeht, entweder durch Beeinflussung der Gewebe und Zelien, so dafi
diese auf die Spiroch&ten schwer oder gar nicht reagieren, oder durch Ver-
mittlung des Serums. Dieses wirke entweder direkt spirochatenabtotend
oder entfalte seine antiparasitiiren Eigenschaften dadurch, dafi es (durch
Opsonine oder Neufelds bakteriotrope Substanzen) die Phagocytose be-
gunstige. Was nun die Anergie speziell bei der Syphilis betnffl, so scheint
sie nach Neisser nur eine relative zu sein, insofern als noch wahrend des
Bestehens der Krankheit, hauptsachlich in ihrem spateren tertiaren Stadium,
Superinfektionen mdglich sind.

Bei dem Bestreben, uns von dem Begriff der „Anergie“
mbglichste Klarkeit zu verschaffen und ihn auf sichere wissen-
schaftliche Basis zu stellen, mufite auch die Frage nach der
Spezifizit&t dieses Zustandes laut werden, d. h. es mufite sich
die Forderung ergeben, festzustellen, ob sich diese Anergie
nur gegen den spezifischen Erreger richte, oder ob wahrend
ihres Bestehens auch ein Refraktfirsein des Organismus gegen
andersartige, vielleicht dem Syphiliserreger nahe verwandte
Giftstoffe zu konstatieren sei.

Von Neisser selbst zusammen mit Baermann und Halber-
s tad ter sind in dieser Ricbtung Versuche angestellt worden, und zwar
bezogcn sich diese auf die wechselseitigen Immunitatsverhaltnisse bei Lues
und der der Syphilis weitaus am nachsten stehenden Infektionskrankheit,
der Frambbsie. Uebereinstimmend mit schon vorher von Charlouis
angestellten Beobachtungen fanden Neisser, Baermann und Halber-
s tad ter, daS mit Lues infiziert gewesene Ticre fiir Frambosie wohl-
empfanglich sind, und umgekehrt. Demgegeniiber waren Levaditi und
Nattan-Larier nicht imstande, syphilitischen Aden Frambosie einzu-
impfen und halten die Versuche der anderen Autoren nicht fiir voll be-
weisend; sie geben aber zu, daS Tiere, die Frambosie iiberstanden haben,
fiir Syphilis noch empfiinglich sind.

Wahrend diese Untersuchungen ursprflnglich nur den
Beweis zum Ziele hatten, dafi es sich bei der Lues und der
Frambbsie, diesen klinisch so uberaus Shnlichen Erkrankungen,
um zwei artverschiedene Affektionen handele, wurden von mir
weiterhin Versuche angestellt, die lediglich zur Entscheidung der
vorhin erwahnten Frage nach der Spezifizit&t der Anergie
bei Syphilis beitragen sollten. Ich wahlte zu diesem Zwecke

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Beziehungen zwischen Syphilis- und Recurrens-Immunitat. 445

gleichfalls einen der Syphilisspirochfite vielleicht nahestehenden
Mikroorganismus, die Spirochaete Duttoni, den Erreger der
afrikanischen Recurrens, eine Erkrankung, deren Uebertragung
auf das Tier, speziell auf den Affen, sehr leicht gelingt, wie
Breinl, Kinghorn und Todd und nach ihnen Mathis
und Leger gezeigt haben.

Was die Immunitfit bei Recurrens nach dem Ueberstehen
der Infektion betrifft, so konnten Breinl, Kinghorn und
Todd bei Versuchen an Affen und Ratten eine — allerdings
nur relative — aktive Immunitfit nachweisen, die bei Affen
fiber 4, bei Ratten iy 2 Monate dauerte, wfihrend nach Man-
teufel die Immunitfitsdauer bei Ratten nur 4, beim Menschen
bis 4V* Monate betrfigt.

Es liegen also beim RQckfallfieber die Immunitfitsver-
haltnisse wesentlich anders als bei der Lues. Durch das Ein-
dringen der Spirocbaeta Duttoni in den tierischen Organismus
wird nicht nur eine „Anergie“, sondern es werden echte, den
Krankheitszustand relativ lange fiberdauernde Immunitfits-
vorgfinge erzeugt, welche nach der Ansicht von Metschni-
koff und Soudakewitsch durch phagocytfire Prozesse zu-
stande kommen, wfihrend Gabritschewsky durch seine
Versuche nachgewiesen hat, daB sich im Laufe der Infektion
gegen die Spirochaeta Duttoni echte bakterizide Substanzen
bilden.

Gerade wegen dieser Verschiedenheit in den Immunitfits-
verhfiltnissen schien es mir der Mfihe wert, bei meinen Unter-
suchungen das Ruckfallfieber zum Vergleich mit der Lues
heranzuziehen und die Frage zu entscheiden, ob die durch
Recurrens erzeugte echte Immunitfitsreaktion
auch gleichzeitig gegen Syphilis sich richte.

Meine Versuche wurden daher in der Weise angestellt,
daB ich einen frisch mit Syphilis infizierten Affen mit Re-
currensmaterial, und umgekehrt einen frisch mit Recurrens
infizierten Affen mit Syphilismaterial impfte.

Das Syphilistier, ein Pavian, war vorher schon einmal
mit Lues infiziert und dann mit Salvarsan behandelt und ge-
heilt worden. DaB die Heilung eine vollkommene war, be-
wies die erfolgreiche Reinokulation, die am 31. Mai 1911 mit

30*

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446

S. Hidaka,

Menschensyphilismaterial vorgenommen wurde. Am 27. Juni
zeigte das Tier wieder typische Primfiraffekte, nfimlich ent-
zflndliche, schuppende Infiltrationen an den Augenbrauen, in
denen sich aJlerdings Sp. pallidae nicht nachweisen lieBen.
Am 28. Juli erfolgte bei noch vorbandenem Primfiraffekt eine
subkutane Einspritzung von Recurrensspirochfiten-haltigem
Mfiuseblut. Am 3. Tage nach der Infektion trat hohes Fieber
auf, welches aber nur einen Tag anbielt. Nacbdem ich 9 Tage
lang das Blut untersucht hatte, ohne Recurrens-Spirochfiten
zu finden, impfte ich am 10. Tage eine Maus mit 0,5 des
Affenblutes. Diese Impfung ergab nach 7-tfigiger erfolgloser
Untersuchung am 8. Tage das Vorhandensein von typischen
Sp. Duttoni.

Der Recurrensaffe, gleichfalls ein Pavian, der zunSchst
als Kontrolltier fflr den Syphilisaffen diente, zeigte genau wie
dieser nach der ersten Impfung mit Recurrens-Mfiuseblut
Fieber und positiven Spirochfitenbefund im Blute. Um eine
starke Immunitfit zu erzeugen, machte ich dann 40 Tage nach
der ersten Infektion eine zweite Einspritzung mit Recurrens-
Mfiuseblut. Dieses Mai zeigte sich kein Fieber, auch blieb
der Spirochfitenbefund negativ, wahrscheinlich infolge der be-
reits eingetretenen Immunitfit. 37 Tage nach der letzten Re-
currensinfektion impfte ich nun das Versuchstier mit Menschen¬
syphilismaterial. Die Impfung wurde in der Weise vor¬
genommen, daB die vorsichtig rasierten Augenbrauen grflnd-
lich skarifiziert wurden, und daB dann das Impfmaterial
10 Minuten lang eingerieben wurde. Nach 25 Tagen zeigte
sich der beginnende Primfiraffekt, n&mlich schwach entzfind-
liche Schuppenbildung, die jedoch nur 10 Tage lang bestand
und dann langsam zurfickging. Spirochaeta pallidae fanden
sich in dem Krankheitsherde nicht, obgleich dieser das fflr
einen Primfiraffekt durchaus typische Aussehen darbot.

Es dflrfte demnach durch diese beiden Ver-
suche der Beweis erbracht sein, daB ein mit
Syphilis infizierter Organismus voll empffinglich
gegen die Infektion mit Recurrensvirus bleibt,
und daB umgekehrt die durch Recurrens im Tier-
korperausgelosten Immunitfitsvorgfingein keiner

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Beziehungen zwischen Syphilis- und Recurrens-Immunitat.

447

Weise gegen das erfolgreiche Eindringen des
Syphiliserregers Schutz gewahren.

Aehnliche Versuche hat schon Uhlenhuth angestellt.
In Gemeinschaft mit Woithe hat er mit artverwandten
Protozoeo (auch mit aviruleoten) gegen Spirochaten and
Trypanosomen zu immunisieren versucht. Die Immunisiernng
oder ResistenzerhOhung mit Tryp. Lewisii und mit der Re-
currens-Spirochate gegen Dourine gelingt aber an Ratten nur
ausnahmsweise. Das MiBlingen der Immunisierung gehdrt
zur Regel. Ebenso erwerben mit Hfthnerspirochaten vor-
behandelte Ratten keine Immunitat gegen Recurrens und
umgekehrt. Auf die vielen interessanten Beobachtungen im
Verlaufe dieser Versuche kann hier nicht eingegangen werden.

Die Versuche, Kaninchen mit wiederholten subkutanen
Injektionen hoher Dosen spirochatenhaltigen HQhnerblutes
gegen Syphilis zu immunisieren, gelangen Uhlenhuth und
Mulzer nicht. Meine Versuche an Affen best&tigen die
von Uhlenhuth an Kaninchen gewonnenen Resultate.

Um zum SchluB noch auf die negativen Spirochaten-
befunde bei den syphilitischen Primaraffekten unserer beiden
Versuchstiere kurz einzugehen, so dfirften diese ihre Erklarung
in den flbereinstimmenden Angaben von Prowazek,
Metschnikoff und Neisser finden, nach denen bei Affen-
syphilis die Sp. pallidae seltener als bei Menschensyphilis
nachweisbar sind. Neisser hat aber gefunden, daB auch
bei negativem Spirochatenbefund eine Weiterimpfung von den
verd&chtigen Stellen durchaus erfolgreich sein kann, daB also
in solchen Fallen wirklich Syphilis vorliegt. DaB der Primar-
affekt, der das fmpfresultat bei dem RecurrensafFen war, auf-
fallig leicht und schnell verlief, hangt wohl sicher nicht mit
der vorhergehenden Recurrensimpfung zusammen, sondern
hat vielmehr seinen Grund in dem jugendlichen Alter des
Versuchstieres. Neisser sagt darQber: „Fiir die an den
Augenbrauen-Primaraffekten beobachteten Differenzen scheint
mir am wahrscheinlichsten das Alter, also das Ausgewachsen-
sein der Tiere und die damit verbundenen anatomischen
Differenzen der Brauen der jungen und alten Tiere ent-
scheidend zu sein. Alte Tiere zeigen Offer sehr schOne, nach

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448 Hidaka, Beziehungen zw. Syphilis- und Recurrens-Immunitiit.

der Breite und Tiefe gut entwickelte Indurationen, wfihrend die
kleinen Tiere h&ufig nur ganz kleine papelartige, schuppende,
distinkt stehende Effloreszenzen aufweisen. u Da unser Re-
currensaffe selir jung war, zeigte er also nur einen leichten,
abortiv verlaufenden Prim&raffekt, wthrend der alte Syphilis-
affe starke, monatelang anhaltende Primaraffekte aufwies.

Zusammenfassung.

Es wird experimentell nachgewiesen, daB die sogenannte
„Anergie“ bei Syphilis (d. h. das Refraktarsein gegen eine
Neuinfektion bei noch bestehender Krankheit) vor einer In-
fektion mit deni Spirillum Duttoni und umgekehrt, eine Im-
munitat nach Ueberstehen des afrikanischen Recurreusfiebers
vor einer Syphilisinfektion nicht schlltzt.

Die „Anergie“ bei Syphilis ist nach den bisherigen
Forschungen spezifisch.

Literatur.

1) Breinl, Kinghorn und Todd, Centralbl. f. Bakt... Refer., Bd. 39,
1907, p. 350.

2) Gabritschewsky, M., AnnaL Pasteur, T. 10, 1896.

3) Levaditi et Nattan-Larrier, Annal. Pasteur, T. 22, 1908, p. 260.

4) Manteufel, Arb. a. d. Kais. Gesundheitsamt, Bd. 27, 1900, H. 2.

5) Mathis und Leger, Bull Soc. de PathoL exot., I, III, 1910, p.422.

6) Metschnikoff und Soudakewitsch, Virch. Arch., 1887, p. 109.

7) Neisser, Beitrage zur Pathologie und Therapie der Syphilis. Berlin
(Jul. Springer) 1911.

8) Neisser, Baermann und Halberstadter, Miinch. med. Wochen-
schrift, 1906, No. 28.

9) v. Prowazek, Arb. a. d. Kais. Gesundheitsamt, Bd. 26, 1907, H. 1.

10) Uhlenhuth und Woithe, Arb. a. d. Kais. Gesundheitsamt, Bd. 29,
H. 2.

11) Uhlenhuth und Mulzer, Berl. klin. Wochenschr., 1191, No. 15.

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Hirvisalo, Agglutinationsresistenz der sog. Exsudatbakterien. 449

Nachdruck verboten.

[Aus dem Hygienischen Institut der Universit&t Helsingfors.]

Znr Agglutinationsresistenz der sogenannten Exsndat-

bakterien.

Von K. F. Hirvisalo,

Assistenten am Institut.

(Eingegangen bei der Redaktion am 20. Februar 1913.)

Wie bekannt, verdffentlichte Bail (1) im Jahre 1902 eine umf&ngreiche
Abhandlung, in welcher er die Erscheinung, „dafi Typhusbakterien aus
dem Exsudate intraperitoneal infizierter Meerschweinchen viel weniger
Neigung zeigen, auf Zusatz eines Immunserums zu Haufen zusammen-
zutreten als gewfihnliche, etwa in Bouillon geziichtete“, zu erklaren sucht
Nachdem er in verschiedenen Richtungen nach der Lfisung dieser Frage
gesucht hat, kommt er schliefilich bei der Untersuchung der Agglutinin-
konstitution zu der Auffassung, dafi die Typhusbakterien im Peritoneum
der Meerschweinchen die Agglutininkomponente, das sogenannte Aggluti-
nophor, binden und infolgedessen weniger agglutinationsfahig werden.
Bails Versuche, welche nachweisen soli ten, dafi die Agglutinine die gleiche
Konstitution besitzen wie die Hamolysine und die Bakteriolysine, d. L dafi
das Agglutinophor sich mit Hemiagglutinin komplettiert, waren nach
Joos (4) 1 ) zu wenig beweisend. Paltauf (2) halt es nicht fur moglich,
die Agglutinationsfahigkeit eines Serums wieder herzustellen, nachdem sie
durch Erhitzung zerstort worden ist 2 ); auch sind die Komplettierungs-
versuche spaterer Autoren nicht immer gelungen. Nach Eisenberg (5)
ist die Sache nicht sicher bewiesen, obwohl man mit ihrer Mdglichkeit zu
rechnen hat. Shibayama (6) halt das in einem von ihm beobachteten
Falle von Agglutinationshemmung auftretende Verschwinden der Agglu-
tinoidzone unter Zusatz von normalem Kaninchenserum fur eine Agglutinoid-
ablenkung, wobei die intakten Agglutinine wirksam werden. Brauns (7)
Untersuchungen fiber den agglutinierenden Einflufi von normalem Rinder-
serum auf Choleravibrionen fuhrten zu dem Ergebnis, da6 die Reaktion

1) Bail stfitzt seine Auffassung auf einen Versuch, wo auf V t o ver *
dfinntes Immunserum, auf 75° C erhitzt, seine Agglutinationsfahigkeit in-
bezug auf Typhusbacillen vollkommen verliert. Ich habe in meinen Ver-
suchen mit dem Serum gegen Typhus immunisierter Kaninchen beobachtet
dafi die Agglutinationsfahigkeit unter den erwahnten Verhaltnissen nicht
total verschwunden ist. Aufierdem ist es leicht denkbar, dafi das im
Kaninchenserum vorhandene Konglutinin die Ausflockung zustande bringt.

2) Auch in seiner spateren Darstellung (3) ist seine Auffassung noch
dieselbe.

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450

K. F. Hirvisalo,

durch zwei Faktoren hervorgerufen wird, welche synergetisch wirken und
von denen der eine thermostabil, der andere thermolabil ist. Dieses Re-
sultat wurde durch Komplettierungsversuche unter Benutzung zweier ver-
schiedener Verfahren erhalten: durch Aktivierung eines Rinderserums,
dessen thermolabile Komponente durch Erhitzen auf 60° zerstbrt ist, mit
einem solchen Rinderserum, dessen thermostabile Komponente mit Hilfe
von Bakterien absorbiert wurde. Auf solche Art erhielt Braun Ofters ein
positives Ergebnis. Indessen sagt er in diesem Zusammenhang (1. c. p. 138):
„Doch miissen wir ausdriicklich hervorheben, daB ein miBgliickter Versuch
keine Ausnahme bildet und das Ergebnis nie vorausgesagt werden kann.
Wir halten uns deswegen nicht fur berechtigt, die Agglutination durch
normales Rinderserum in jedem Falle von zwei Komponenten abhangig
anzusehen und suchten deshalb nach anderen Versuchsanordnungen, um
uns voile Sicherheit zu verschaffen, ob es in jedem Rinderserum zwei
wirksame Faktoren gibt.“ Zu diesem Zweck benutzte er nachher Kalber-
serum zur Aktivierung des Rinderseruras, weil ersteres komplementhaltig
war, aber verhaltnismaBig wenig Agglutinine fiir Choleravibrionen, deren
er sich bediente, enthielt Ein solches Verfahren ergab immer ein posi¬
tives Resultat. Bayer (8) kommt in seinem eben erschienenen Aufsatz
zu dem SchluB, daB das Komplement die Agglutinationserscheinung
giinstig beeinflufit, und daB diese agglutinationsfordernde Wirkung von
seiner Globulinfraktion (Mittelstiick) ausgeht.

Im Widerspruch mit den vorhergehenden steht die Beobachtung v. Lo-
ghems (9), daB das Komplement die Agglutinationserscheinung hemmend
beeinflusse. Dieselbe Auffassung hat Streng (10, 11), welcher bekanntlich
auflerdem nachgewiesen hat — wie Bordet und Gay (12), Bordet und
Streng (13) fiir die Blutkbrperchen —, daB eine Flockenbildung der Bak¬
terien vorkommt, bei deren Entstehung Alexine ndtig sind, ebenso wie der
der Bakterie entsprechende Sensibilisator und irgendein Kolloid, welches im
Rinderserum ziemlich reichlich vorhanden ist, wie man es auch, obwohl
in geringerem MaBe, in vielen anderen Serumarten findet. Diese sogenannte
Konglutinationserscheinung ist wenigstens zunachst von der Agglutination
zu unterscheiden, weil jene unbedingt die Mitwirkung der Alexine ver-
langt, diese jedoch nicht. Hochstwahrscheinlich hat Braun bei der Aus-
fiihrung seiner letztgenannten Komplettierungsversuche es gerade mit der
Konglutinationserscheinung zu tun gehabt, denn offenbar sind hier alle
Faktoren der erwahnten Flockenbildung zugegen gewesen. Auch ist es
nicht unmoglich, daB die Konglutination in den erwahnten Versuchen
Bayers (1. c.) mitgespielt habe, oder daB seine Ergebnisse von der Sum¬
mation der normalen Agglutinine beeinfluBt worden seien. Uebrigens hat
Gengou (14) nachgewiesen, daB gerade das Mittelstiick des Komplements
in der Konglutinationsreaktion wirksam ist.

Da es ohne Zweifel deutlich bewiesen ist, daB die Alexine
die Entstehung der Agglutinationserscheinung hemmen und
da die Exsudatbakterien wahrend ihres Verweilens im Peri-

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Zur Agglutinationsreaiatenz der sogenannten Ezsudatbakterien. 451

toneum diesera EinfluB ausgesetzt werden, so ist es denkbar,
daB die von Bail in der angeftlhrten Erscheinung wahr-
genommene Agglutinationsverzdgerung gerade anf den Ein-
fluB der Alexine zurQckzufBhren sei. Die Typhusbakterien
wflrden also w&hrend ihres Aufenthalts im Peritoneum eines
Meerschweinchens sensibilisiert werden und zugleich das
Alexin an sich verankern. Ist dieses wirklicb der Fall, so
mttssen sich solche Bakterien zu dem inaktiven, von den ent-
sprechenden Agglutininen befreiten Rinderserum ebenso ver-
halten wie tiberhaupt die sensibilisierten und alexinierten
Bakterien. zum inaktiven Rinderserum. Um dieses zu unter-
suchen, habe ich folgenden Versuch angestellt:

Tabelle I.

Tube 1. 1 ccm Exsudatbakt.-Susp. + 0,20 ccm inakt. erechopft. Rinderser.

„ 2. 1 „ Nat. Bakt.-Su8p. + 0,20 „ „ „ „

Die Reagenzgl&ser werden auf 2 Stunden in den Brut-
schrank bei 37° C gestellt und von Zeit zu Zeit geschttttelt.
Schon nach V 4 Stunde zeigen die Bakterien der Tube 1 eine
bemerkenswert Starke Ausflockung, die im Laufe der ersten
halben Stunde weiter zunimmt, w&hrend an der Tube 2 keine
VerSnderung wahrzunehmen ist. Nach Verlauf von 2 Stunden
sowie nach weiteren 24 Stunden langem Stehen in Zimmer-
temperatur ist das Resultat noch dasselbe.

Zum agglutinierenden Typhusimm unserum verhalten sich
die Bakterien in dem gleichzeitig angeftlhrten Versuche wie
folgt:

Tabelle II.

1 ccm Serumverdunnung 1 ccm Exsudatbakt.-Susp.

1 ccm nat. Bakt.-Susp.

!(•«

+ + 1 )

+ + +

Vx.0

+

+ +

y?6o

(+)

++

7*00

—

+

1 / 100 ° 1

! —

+

'2000

—

(+)

1) + + + GroAkornige Ausflockung, klare Fliissigkeit, ++ mittel-
kSrnige Ausflockung, opaleszierende Fliissigkeit, + kleinkornige Aus¬
flockung, (+) bloA mit der Lupe sichtbare Ausflockung, — keine Aus¬
flockung.

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452

K. F. Hirvisalo,

Die Probiergl&ser werden 2 Stunden bei 37 0 C im Brut-
schrank gehalten und von Zeit zu Zeit geschttttelt. Das mit-
geteilte Resultat wird binnen l /j Stunde erzielt und ver&ndert
sich kaum wfihrend der Beobachtungszeit.

Dieim Peritoneum gewesenenBakterien sind
also auffallend resistent gegen Typhusaggluti-
nine, treten aber in derselben Zeit mit Hilfe in-
aktiven, von den ensprechenden Agglutininen
befreiten Rinderserums zu Flocken zusammen,
welches nicht vorbehandelte Bakterien nicht tun.

Ich babe die obenerw&hnten Versuche sehr vielfe Mai und
stets mit gleichem Resultat ausgefGhrt, jedoch mit dera Unter-
schiede, daB die mit Hilfe von Rinderserum der genannten
Art nur an Exsudatbakterien erhaltene Ausflockung einmal
sehr stark war, wie in dem oben angefilhrten Falle, ein
anderes Mai schwficher, bisweilen sogar so schwach, daB man
sie nur mit der Lupe wahrnehmen konnte. Doch war das
Resultat stets ein positives, w&hrend der mit nativen Bakterien
angestellte Kontrollversuch immer negativ ausfiel, wenn die
normalen Agglutinine nur genau entfernt waren. Die Deut-
lichkeit der Reaktion wird bedeutend befordert, wenn die
Bakterien aus dem Exsudat sorgf&ltig ausgewaschen sind und
wenn das Konglutininserum nach der Entfernung der normalen
Agglutinine tadellos klar ist.

Die zu den Vereuchen benutzten Meerechweinchen wogen 300—700 g.
Von den Typusbakterien kamen drei verechiedene Stamme zur Anwendung
(Stamm Wien L-r, Berlin H. J. und Hamburg Br.). Den Meerechweinchen
wurden verechiedene Bakterien mengen eingespritzt: in 3 ccm 0,85-proz.
NaCl-Lbsung wurde reap. '/, 1 U, 1 / 2 , 1,2, 4 (24 Stundeu alte) Agarkulturen
suspendiert und von dieser Mischung bei jedem einzelnen Versuche etwa
2 ccm injiziert. Die kleineren Mengen schienen eine deutlichere Beaktion
zu geben. Einigemal liefi man ein Meerechweinchen sterben und entnahm
ihm gleich nach dem Tode (14—18 Stunden nach der Infektion) Exsudat.
Meistens wurden jedoch die Tiere 8—10 Stunden nach der Infektion ge-
totet. Von dem bakterienreichen und haufig etwas Blut enthaltenden
Exsudat erhielt man 3—8 ccm; es wurde aseptisch entnommen, mit dem
Platindraht von Fibrin befreit und in die Zentrifuge getan. In einigen
Minuten wurde der Bodensatz von der noch ganz triiben Fliissigkeit ge*
schieden und enthielt dann rote und weifie Blutkorperchen sowie Bakterien
mit geronnenem Fibrin vereinigt. Es wurde so lange zentrifugiert, bis die
Fliissigkeit klar war; der Ruckstand wurde in der gleichen Menge Koch-

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Zur Agglutinationsresistenz der sogenannten Exeudatbakterien. 453

salzloeung suspendiert, durch steriles Filtrierpapier filtriert, um die zuriick-
gebliebenen Blutkorperchen zu entfernen (bei mikroskopischer Priifung
wurde dort kein Blut mehr bemerkt), aufs neue zentrifugiert, nochmals
mit Kochsalzlosung gewaschen und schlieBlich in einer der urepriinglichen
Exsudatmenge entsprechenden Kochsalzlosung suspendiert. Aus den
nativen Bakterien wurde eine ebenso triibe Kochsalzsuspension bereitet,
weil man nur in dieser Weise in beiden Mischungen ungefahr die gleiche
Bakterienmenge erhielt Zu den Kontrollversuchen wurde stets eine
24 Stunden alte Agarkultur desselben Stammes, mit dem das Meerchweinchen
infiziert worden war, benutzt. — Behufs der Absorption der Normal-
agglutinine aus dem Rinderserum kamen im Durchschnitt 15 Typhusagar-
kulturcn auf 3 ccm Rinderserum zur Anwendung. Die Mengen des Kinder*
serums schwankten in den einzelnen Versuchen zwischen 0,05 und 0,25 ccm,
doch wurden meistens 0,2—0,25 ccm benutzt. Die Probierglaser wurden
2 Stunden bei 37° C im Brutschrank gehalten und hin und wieder ge-
schiittelt. Diese Versuche und die entsprechenden Agglutinationsversuche
wurden so gleichzeitig und unter so gleichen Umstanden wie mbglich aus-
gefiihrt. In den Agglutinationsversuchen wurde einige Mon ate altes Typhus*
immunkaninchenserum verwendet.

Um die Gegenwart des Alexins im Exsudat mit Hilfe der
bekannten Alexinreaktion und zugleich mittels der Kongluti-
nationsreaktion nachweisen zu k6nnen, wurde einigemal ein
Versuch mit Peritonealexsudat in vitro angestellt. Ich teile
im folgenden einen dieser Versuche mit.

Einem Meerschweinchen von 400 g Gewicht werden 7 ccm 1-proz.
Aleuronatsuspension in 0,85-proz. Kochsalzlosung intraperitoneal injiziert.
Nach 15 Stunden werden dem Meerschweinchen 5 ccm 0,85-proz. Koch-
salzldsung ins Peritoneum eingespritzt, worauf das Tier auf solche Weise
getOtet wird, daB man alles Blut aus der Carotis ausflieUen laBt; die
Bauchhfthle wird aseptisch gedffnet, eine kleine Menge triiber Fliissigkeit
aus dem Peritoneum gesammelt und die Hohle nochmals mit etwas Koch¬
salzlosung, die mit der vorigen vereinigt ward, gespiilt. Man erhalt im
ganzen etwa 7—8 ccm triibe Fliissigkeit. Diese wird zentrifugiert, bis sie
klar geworden ist, in zwei ganz gleich grofie Teile geteilt, deren einer
Vt Stunde in 56° C gehalten wird. Von beiden Teilen werden genau
2 ccm genommen, mit je 2 normalen Oesen voile 24 Stunden alter
Typhusagarkultur suspendiert und auf 3—4 Stunden in den Brutschrank
gestellt.

Die in oben beschriebener Weise dargestellten Bakterien mischungen
wurden dann folgendermafien untersucht:

Tabelle III.

Tube 1. 1 ccm Typhusbakt-Susp. in akt. Exs. 0,25 ccm inakt. ersch. Rinders.
yy 2. 1 ,, „ in inakt. ,, 4* 0,25 „ ,, ,, ,,

„ 3. 1 „ Kochsalzsusp. der nativ. Bakt. + 0,25 „ „ „ ,,

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454

K. F. Hirvisalo,

Die Reagenzglfiser werden 2 Stunden bei 37° C ira Brut-
schrank gehalten and von Zeit za Zeit geschQttelt. Im Ver-
laufe dieser Zeit ist in keinem der Glaser eine Verfinderung
bemerkbar; erst nach 12 Stnnden zeigt sich in Tube 1 eine
leichte Ansflockung, die nach 24 Stunden recht deutlich hervor-
tritt; die Tuben 2 und 3 sind unverandert. Beim Wiederholen
der Versuche ergibt sich einmal ganz dasselbe, ein anderes
Mai ein negatives Resultat.

Die Agglutinationsversuche liefern nicht die „Bailsche
Erscheinung“, sondern es bilden sowohl die in inaktivem als
aktivem Serum gewonnenen Bakterien gleich den nichtvor-
behandelten Flocken. Gleichzeitig wurde mit dem hamolytischen
System die Gegenwart des Alexins im nicht erhitzten Exsudat
nachgewiesen, und zwar war es in alien Versuchen positiv,
obwohl schwach. — Um Hamolyse zu bekommen, mufitcn
namlich recht groBe Exsudatmengen und kraftige Ambozeptoren
verwendet werden. Die im Reagenzglas befindlichen Mengen
des Alexins waren also ofTenbar unzureichend, um eine deut-
liche und schnelle Reaktion hervorzubringen, namentlich weil
die Bakterienmenge wahrend der Beobachtungszeit bedeutend
zunimmt. Doch ist die erst nach 24 Stunden wahrgenommene
kraftige Konglutinationsreaktion der im aktiven Exsudat ge-
wesenen Bakterien zu beachten, welches darauf hinweist, daB
diese faktisch, wenn auch schwach, das Alexin an sich ver-
aukert hatten.

Wie ersichtlich, verhalten sich die Exsudatbakterien zum
inaktiven, von den entsprechenden Agglutininen befreiten
Rinderserum ebenso wie die sensibilisierten und alexinierten
Typhusbakterien.

Spaterhin wurde untersucht, wie die ErwSrmung der
Exsudatbakterien in dieser Beziehung wirken wilrde, weil sie
moglicherweise die Art der an der Reaktion beteiligten Sub-
stanzen andeuten konnte.

Die auf gewohnliche Weise in der Peritonealhdhle des
Meerschweinchens behandelten Typhusbakterien werden erst
in inaktives, von Agglutininen befreites Rinderserum getan,
um zu erfahren, wie sie sich zu dem erwahnten Serum gleich
nach dessen Entnahme aus dem Peritoneum und vor der Er-
warmung verhalten.

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Zur Agglutinationsresistenz der sogenannten Exsudatbakterien. 455

Tabelle IV.

Tube 1. 1 ccm Exsudatbakt-Busp. + 0,20 ccm inakt. erech. Rinderser. (+ + +)
„ 2.1 „ nat. Bakteriensuspension + 0,20 ccm inakt erech. Rinderser. (—)

Tube 1 zeigt bereits each Stunde eine starke Aus-
flockung, Tube 2 bleibt trfibe, ohne die geringste Andeutung
dazu. Dieselben, im vorigeu Versuche benutzten Bakterien-
mischungen werden nun 2 Stunden lang im Wasserthermostat
bei 56° C gehalten und jede halbe Stunde wird der EinfluB
von Rinderserum auf dieselben geprflft.

Tabelle V.

Ver-

euchs-

zeit

1 ccm Exsudat¬
bakterien (56 °C)
+ 0,2 ccm inakt.
erechopftes
Rinderserum

1 ccm nat. Bakt.
(56 # C) + 0^ ccm
inakt. erschopft.
Rindereerum

1 ccm Exsudat¬
bakterien (nicht
erwarmt) +

0,2 ccm inakt.
erechopftes
Rindereerum

1 ccm nat. Bakt.
(nicht erwarmt)
+ 0,2 ccm inakt.
erechopftes
Rindereerum

*/. Std.

+

—

+++

_

1 „

—

+++

—

1'/, „

<+

1

+++

2 „

(+?

—

+++

Wie aus diesem Versuch bervorgeht, wirkt die gewohn-
liche Komplement-Inaktivierungswarme schon binnen V 2 Stunde
dermafien auf die Exsudatbakterien ein, daB die obenerw&hnte
Flockenbildung mit inaktiv erschopftem Rinderserum recht
bedeutend gehemmt wird.

V o r dem Erhitzen verhalten sich die Exsudatbakterien
zum Typhusimmunserum folgendermaBen:

Tabelle VI.

1 ccm
Bakterien-
mischung

1 ccm Immunserumverdunnung

1:10

1:100

1

1:250

1:500

1:1000

! 1:2000

Exsudatbakt.
Nat. Bakter.

+

+ + +

(+)

+ + +

(+) 1
+ + 1

(+)

+

( + )?

+

+

2 Stunden 37 0 C. Die nach der ersten halben Stunde
erhaltene Reaktion besteht bis zum Ende der Vcrsuchszeit.

Nach der Erhitzung verhalten sich die obengenannten
Bakterien zum Typhusimmunserum wie folgt. (Diese Versuche
wurden zu gleicher Zeit ausgefuhrt wie die vorhergehenden
Versuche mit Rinderserum und mit erwfirmten Bakterien.)

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456

K. F. Hirvisalo,

Tabelle VII.

Agglut.-Serum- j
verdunnungen

'/, Stunde
56° C

Nicht ,
erwarmt

1 Stunde
56° C

Nicht erw.

H

i

Std.

C

Nicht I
erwarmt j

2 Stunden
56° C

1

Exsudat-

bakterien

2

PQ

"8

Exsudat¬

bakterien

Exsudat¬

bakterien

M

£

*

z

«*»

•a

«

i

Exsudat¬

bakterien

Nat. Bakt

Exsudat¬

bakterien

Exsudat¬

bakterien

M

£

as

1

k

1:10

+ + +

+ + +

+

+++

+ + +

4-

+++

+ + +

+

+++

+++

+

1:100

+ + +

+++

(+)

+++

+++

(+)

+++

+ + +

(+)

+++

+ + -h

(+)

1:250

+ +

+ + +

(+)

++

++

(+)

++

+ +

(+)

+ + -F

++

(+)

1:500

+

+ +

(+)

+

++

(+)

+

+ +

(+)

+ +

++

(+)

1:1000

(+)?

+

(+)?

+

+

(+)

(+)

+

(+)?

( + )

+

(+jr

1:2000

+

-

(+)?

+

—

(+)

+

(+)?

(+)

—

Auf 56° C erhitzt verlieren die Exsudatbak-
terien ihre Konglutinationsf&higkeit, erhalten
aber in auffallendem Grade ihre Agglutinations-
f&higkeit wieder.

Die zuletzt angefiihrten Versuche mit Rinderserum und
mit Typhusimmunserum legen dar, daB Agglutination und
Konglutination ihrem Mechanisraus nach deutlich verschiedene
Erscheinungen sind. Besonders bemerkenswert ist die Tat*
sache, daB die betreffende Agglutinationsresistenz der Typhus-
bakterien verhaltnism&Big rasch, schon innerbalb der ersten
halben Stunde, verschwindet.

Erneute Versuche lieferten dasselbe Ergebnis. Wurde
die Temperatur auf 60° C erh8ht, war das Resultat das gleiche,
bloB mit dem Unterschiede, daB der EinfluB des inaktiven
Rinderserums auf die Bakterien relativ noch schw&cher war.
In der Wirkung des agglutinierenden Serums war kein Unter-
schied bemerkbar, wenn man sie mit dem Resultat verglich,
welches beim Erhitzen der erw&hnten Bakterien auf 56° C
erhalten wurde.

Vergleichen wir das Verh&ltnis der alexinierten und sensi-
bilisierten Typhusbakterien (Streng, 1. c.) einerseits, der
Exsudatbakterien andererseits zu dem von den entsprechenden
Agglutininen befreiten inaktiven Rinderserum und Typhus¬
immunserum, so linden wir, daB die entsprechenden Reaktionen
vollkommen analog sind. Alle beide bilden leichter Flocken

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Zur Agglutinationsreeistenz der sogenannten Exsudatbakterien. 457

mit dem erwkhnten Rinderserum und schwerer mit Typhus-
immunserum als die zu den Kontrollversuchen benutzten
nativen Typhusbakterien. Dieses berechtigt uns zu dem SchluB-
satz, dafi auch die Exsudatbakterien io entsprechender Weise
sensibilisiert und alexiniert sind. Und ist dieses einmal der
Fall, so hat man die von der Erhitzung bewirkte Ver&nderung
der Exsudatbakterien als durch die ZerstQrung der Alexin-
wirkung — schwerlich infolge der Ver&nderung der Agglu-
tinine — entstanden anzuseben, besonders weil sie schon bei
der Temperatur, wo die Alexinwirkung auch aus dem Serum
verschwindet, eintritt.

Dieser Umstand ist auch darum bemerkenswert, weil er
darlegt, dafi selbst gebundenes Alexin noch inakti-
viert werden kann und weil er zugleich die Gelegenheit
gibt, die VerhSltnisse, unter welchen eine derartige Inakti-
vierung stattfindet, nfiher zu prtlfen.

Wie bekannt, vernichtet Aqua destillata die Komplement-
wirkung des Serums. Es war daher interessant, zu sehen, in
welcher Weise die Exsudatbakterien sich nach einer Behand-
lung mit destilliertem Wasser zu dem von mir benutzten
Rinderserum und Typhusimmunserum verhalten wflrden. Um
dieses zu untersuchen, verfuhr ich folgendermafien:

Das auf gewdhnliche Weise aus dem Peritoneum mit
Typhusbakterien infizierter Meerschweinchen erhaltene Exsudat
wurde in zwei gleichgrofie Teile geteilt. Die Bakterien wurden
gesondert zentrifugiert, worauf man den einen Teil mit Aqua
destillata, den anderen mit 0,85*proz. NaCl-Ldsung wusch.
Die Bakterien blieben 4 Stunden in den betreffenden LSsungen
und wurden alle Stunden auf Rinderserum und Typhusimmun¬
serum untersucht. Bei diesem Versuch wurden auch die in
destilliertem Wasser gewesenen Bakterien in Kochsalzlosung
suspendiert. Aus diesen Versuchen ging hervor, dafi Aqua
destillata nach 3 und deutlicher nach 4 Stunden in der Weise
auf die Exsudatbakterien einwirkt, dafi diese mit inaktivem,
von den entsprechenden Agglutininen befreiten Rinderserum
eine schwfichere Ausflockung zeigen als die ebensolange in
Kochsalzldsung gewesenen Exsudatbakterien. Der Unterschied
ist allerdings lange nicht so deutlich wie bei den erhitzten
und nichterhitzten Exsudatbakterien, jedenfalls aber bemerkbar.

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458 Hiryisalo, Agglutinationsresistenz der sog. Exsudatbakterien.

Zum Typhusimmunserum verhalten sich beide ganz ebenso,
indem sie deatlich die „Bailsche Erscheinung 44 zeigen. Einige
erneute Versuche lieferten dasselbe Resultat. Obwohl der
Unterschied minimal ist, dflrfte er doch darauf hinweisen, daB
die Abnahme der Komplementwirkung die Entstehung der
Konglutinationsreaktion teilweise gehemmt hat.

Zusammenfassung.

1) Die mit den Eigenschaften der sogenannten Exsudat¬
bakterien ausgerQsteten Typhusbakterien geben mit inaktivem
Rinderserum, aus welchem die Normalagglutinine bei einer
grofien Menge von Typhusbacillen vorher entfernt sind, eine
auffallend starke Ausflockung, wogegen die nativen Typhus¬
bakterien keine Flocken bilden.

2) Wenn man die Exsudatbakterien erhitzt, verlieren sie
schon bei 56° C in recht anschaulichem MaBe ihre erwShnte
Ausflockungsf&higkeit mit Rinderserum, indem sie zugleich mit
Typhusimmunserum leichter agglutinierbar werden.

3) Ebenso wie die Erhitzung scheint auch Aqua destillata
auf die FShigkeit der Exsudatbakterien, mit inaktivem, von
normalen Typhusagglutininen befreiten Rinderserum Flocken
zu bilden, einzuwirken, wenngleich dieser EinfluB ein ziemlich
schwacher ist. Eine Zunahme der Agglutination mit Typhus¬
immunserum ist an den auf solche Weise behandelten Bak-
terien nicht wahrzunehmen.

4) Der obenerw&hnte ausflockende EinfluB des inaktiv
erschSpften Rinderserums auf die Exsudatbakterien berechtigt
uns, einstweilen auf der Grundlage bekannter Tatsachen die
Ausflockung der Exsudatbakterien fflr eine Konglutinations¬
reaktion zu halten.

5) Die Agglutinationsresistenz der Exsudatbakterien rflhrt
wahrscheinlich davon her, daB diese im Peritoneum der Meer-
schweinchen sensibilisiert und alexiniert werden und dadurch
die Wirkung der Agglutinine widerstehen vermdgen.

6) Es laBt sich mit Hilfe der Konglutinationsreaktion
nachweisen, daB die Wirkung der gebundenen wie der nicht
gebundenen Alexine schon bei 56° C verschwindet.

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H. Pfeiffer und de Crinis, Kenntnis der Hamolyeinvergiftung. 459

Llterator.

1) Bail, Arch. f. Hyg., Bd. 42, 1902, p. 307.

2) Paltauf, Handb. d. pathog. Mikroorg. tod Kolle-Wassermann, Bd. 4,
1904, p. 740.

3) — ebenda, II. Aufl., Bd. 2, 1912, p. 581.

4) Joos, zit. nach Paltauf, Handb. d. pathog. Mikroorg. von Kolle u.
Wassermann, Bd. 4, 1904, p. 740.

5) Eisenberg, Centralbl. f. Bakt., Abt. I, Orig., Bd. 41, 1906, p. 253.

6 ) Shibayama, ebenda, Bd. 42, 1906, p. 64, 144.

7) Braun, Arch. f. Hyg., Bd. 68, 1909, p. 116.

8 ) Bayer, Zeitschr. f. lmmunitatsf., Orig., Bd. 15, 1912, p. 220.

9) van Loghem, Centralbl. f. Bakt., Abt. I, Orig., Bd. 45, 1908, p. 539.

10) Streng, ebenda, Bd. 50, 1909, p. 47.

11) — Zeitschr. f. lmmunitatef., Orig., Bd. 4, 1909, p. 515.

12) Bordet-Gay, Ann. de l’Inst. Pasteur, 1906.

13) Bordet-Streng, Centralbl. f. Bakt., Abt. I, Orig., Bd.49,1909, p.260.

14) Gengou, Zeitschr. f. lmmunitatef., Orig., Bd. 11, 1911, p. 725.

Nachdruck verboten.

[Aus dem Institute fflr allgemeine und experimentelle Pathologic
der K. K. Universit&t Graz (Vorstand: Hofrat Prof. Dr.

R. Klemensiewicz).]

Znr Kenntnis der Hamolyslnrergiftmig.

Von Prof. Dr. Hermann Pfeiffer und Dr. M. de Crinis.

Mit 5 Kurven im Text.

(Eingegangen bei der Kedaktion am 27. Februar 1913.)

Die grundlegenden Untersuchungen tod E. Rosenthal haben dar-
getan, daS die sogenannte antitryptische, besser die antiproteolytische
Wirkung normaler und pathologischer Seren bedingt ist durch ihren natiir-
lichen Gehalt an Eiweifispaltprodukten. Auf dieser Arbeit aufbauend und
auf den alteren Erfahrungen Ton H. Pfeiffer und S. Mit a fufiend,
wonach die anaphylaktische Erkrankung verursacht wird durch das Auf-
treten ernes immunisatorisch gebildeten, proteolytischen Fermentes, konnte
Rusznjak zeigen, dafi in der ersten Periode des anaphylaktischen
Shocks Ton mit Eiereiweifi Torbehandelten und nachgespritzten Meer-
schweinchen das HemmungsTermogen der Seren jenes normaler Tiere
um ein Mchrf aches iibertrifft. Er hatte dam it dargetan, dafi tatsiichlich
das proteolytische Ferment dem Antigen der Vorbehandlung gegeniiber
in Wirksamkeit tritt und sich im Organismus seiner letal erkrankten
Versuchstiere Eiweifispaltprodukte, deren toxische Wirkung ja heute

Zeitschr. f. ImmunitMsforschung. Orig. Bd. XVII. 31

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460

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,

echon genau studiert ist und sich bis in alle Einzelheiten mit den
Vergiftungseracheinungen der Eiweifizerfallstoxikosen deckt, in quantitativ
hoherem Ausraafle nachweisen lassen, als in der Norm. H. Pfeiffer und
A. Jarisch, welche in orientierenden Vorvereuchen diese Beobachtung
Rusznj&ks bestatigen konnten, vermochten auch fiir den Fall einer Ver-
giftung mit naturlichem Rinderhamolysin diesen primaren Anstieg des so-
genannten antitryptischen Serumtiters nachzuweisen, fanden aber sowohl
hier als auch ebenso fiir den Fall der klassischen Anaphylaxie, dafl der
anfanglichen Vermehrung sehr bald ein rasches Absinken des Hemmungs¬
vermogens, demnach ein Absinken des Gehaltes der Seren an Eiweiflspalt-
produkten, also ein subnormaler Tiefstand des parenteralen Eiweifistoff-
wechsels folgt *)•

Von der Vermutung ausgehend, dafl dieser Absturz die Folge des
wahrend der ersten Vergiftungsperiode durch einen explosionsartigen Abbau
entstandenen Giftes sei, untersuchten sie die Wirkung von Pepton Witte,
Harn und Ergamin auf das Hemmungsvermbgen der Seren von Tieren,
die toxische Dosen davon erhalten hatten. Sie fanden, dafl hier ohne
prim&ren Anstieg sofort ein Riickgang des Hemmungsvermogens auf sub-
normale Werte in die Erscheinung trete. Sie folgerten daraus, dafl der
eigentiimliche Verlauf der Antitrypsinkurve im anaphylaktischen Shock
und bei der Hamolysinvergiftung die Resultante zweier, in entgegengesetzter
Richtung auf den parenteralen Eiweiflstoffwechsel einwirkender Kompo-
nenten sei, deren eine der fermentative Abbau von Eiweifl im Sinne einer
Steigerung, deren andere die Wirkung des in der ersten Phase entstan¬
denen Zerfallsgiftes sei. Solange in der allerersten Vergiftungsperiode das
— immunisatonsch gebildete oder von auflen einverleibte — Ferment in
seiner Wirksamkeit iiberwiegt und der Organismus noch nicht Zeit ge-
funden hat, auf die durch diese Wirkung freiwerdenden Gifte zu reagieren,
wird ein Ansteigen des Hemmungsvermogens beobachtet Spater, wenn
die Wirkung des Giftes sich in einer schweren Erkrankung. in einem
schweren Darniederliegen aller Stoffwechselvorgange des Versuchstieres
dokumentiert, iiberwiegt iiber die Zerfallsvorgange die dem Gifte eigentum-
liche Bremsung des Eiweiflstoffwechsels. Es folgt das sekundare Absinken
der Antitrypsinkurve.

Aus AnlaB von derzeit noch unverOffentlichten Studien, die
der eine von uns (H. Pfeiffer) fiber das quantitative Ver-
halten der im Serum kreisenden EiweiBspaltprodukte bei
anderen Toxikosen des akuten parenteralen EiweiBzerfalls,
speziell bei dem Verbrfihungstode anstellte, hatten wir Ge-
legenheit, die von H. Pfeiffer und A. Jarisch aufge-
deckten Verhaltnisse bei der Hfimolysinvergiftung nochmals
zu prufen.

1) Vergleiche auch die wesensgleiche, nicht naher verfolgte Beobach¬
tung von E. Seligmann in dieser Zeitschrift, Bd. 14, Heft 4, p. 422.

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Zur Kenntnis der H&molysinvergiftung.

461

Hinsichtlich der yon uns bei alien einschlagigen Versuchen verwen-
deten Technik hielten wir uns in alien Einzelheiten an die Angaben, die
in der Arbeit von H. Pfeiffer und A. Jarisch fiber die Ausffihrung
der Fould-Grossschen, von E. Rosenthal modifizierten Methode ge-
macht wurden. Mit fortschreitender Uebung brachten wir es dahin, immer
mit Systemen von 0,2, nur ausnahmsweise mit 0,3 ccm Trypsin zu arbeiten
und fanden in Uebereinstimmung mit Rusznjdk den Serumtiter des
normalen Meerschweinchens (und Kaninchens) im Gegen-
satz zum Menschen als absolut konstant. Er betrug, wie auch
aus den folgenden Tabellen hervorgeht, in beilaufig 100 Kontrollversuchen
konstant 20 AE. f so dafl wir Seren mit 30 AE. als sicher erhoht ansprechen
durften. Gegenteilige Angaben in der Literatur, die dieses Verhalten des
Meerschweinchenserums leugnen, sind nach unseren vielfachen einschlagigen
Erfahrungen auf Fehler in der Versuchstechnik zurfickzuffihren, die wohl
nicht schwierig ist, aber immerhin Uebung und ein peinlich sauberes Ar¬
beiten verlangt. Nichtsdestoweniger wurden die nachfolgenden Befunde
zur Sicherheit des Urteiles ausnahmslos in der Weise erhoben, daB einmal
grfiBere Reihen von Seren gleichzeitig untersucht, die Ergebnisse gegen-
einander abgeschatzt wurden, ferner bei jeder Versuchsreihe mindestens ein
normal es Meerschweinchenserum zur Kontrolle diente. Nicht ganz ein-
deutige Resultate wurden durch neuerliches Anstellen der Probe fiberprfift
und nur absolut feststehende Werte in die Tabellen eingesetzt. Nachdem
. wir nunmehr in nahezu einjahriger Uebung in weit fiber tausend einzelnen
Untersuchungen die Methodik nach Fould-Gross vollkommen beherr-
schen, mfissen wir unser abschlieflendes Urteil darfiber als ein vorzfigliches
bezeichnen. Sie gibt — Uebung und Exaktheit des Arbeitens vorausgesetzt
— nicht nur scharfe, sondern auch quantitativ gut verwertbare Resultate.

Tabelle I.

Ver-

BUCh

No.

Datum

Injektion

Reaktion
in 7 I0 » C

Ge-

totet

nach

Titer

Anmerkung

1

28.XI.1912

10 ccm R.-S. a. ip. 48^ 0/

15 Min.

50

2

dgl.

dgl.

18/ 0/

15 „

30

.250-300 g,

3

tf

18/ 0/

15 „

40

tddliche Doeis

4

}t

”

36/ 0/

15 „

45

5

20.XI.1912

4 ccm R.-8. a. ip.

16/ 0/

15 Min.

30

1300 g, tddliche

6

dgl.

dgl.

17/ 0/

15 „

30

j Doeis

7

20.XI.1912

2,5 ccm R.-S. a. ip.

23/ 0/

30 Min.’10

8

dgl.

dgl.

26/ 0/

30 „

30

9

'

24/ 0/

60 Min.

20

350-400 g,
'stark toxische
Dosis

10

11

1

99

r *

»>

24/ 0/
20/ 14/

60 „ 20
3 Std. 10

12

99

18/ 10/

3 „

20

13

1

*>

52/ 10/

6 „

10

14

99

48/ 18/

6 „

10

15, 16

0

0

0

0

20

Zeichenerklarung: R.-S. a. = Rindersemm aktiv; ip. = intraperitoneal;
/ = Temperatur fallend; / = steigend.

31*

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462

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,

Wie aus Tabelle I und mancher spfiter mitgeteilten hervor-
geht, konnten wir zun&chst die frQheren Erfahrungeo flber den
primfiren Anstieg des proteolytischen Hemmungsvermflgens be-
statigen. So fanden wir 15 Minuten nach der intraperitone-
alen Einverleibung von 10 und 4 ccm aktiven Rinderserums
wesentlich flber die Norm erhflhte Werte. Wie rasch aber
unter Umstanden dieser Anstieg einem sekundflren Absinken
des Hemmungsvermdgen Platz machen kann, ergibt sich aus
den Versuchen 7—14 der Tabelle, wo schon 30 Minuten nach
der Injektion nur mehr eines der Tiere eine schwache, wenn
auch deutliche Erhdhung von 30 AE. aufwies, das andere
schon ein vermindertes Hemmungsvermdgen zeigte. Diese
Hemmung hielt nun auch wflhrend der 6-stflndigen Dauer des
Versuches an.

Es erscheint also nach diesen und sp&ter mitzuteilenden
Erfahrungen zum Nachweis der primflren Steigerung bei der
Vergiftung mit • Rinderh&molysin nicht unr notwendig, daB
man unmittelbar nach der Injektion, am besten nach der ersten
Viertelstunde, das Serum des Tieres prflft, dann aber auch,
daB man groBe Dosen, am besten sicher tddliche dem Tiere
peritoneal einverleibt 1 ). Bei spflterer Blutentnahme und bei
mittleren Dosen kann sonst dieser Nachweis Schwierigkeiten be-
reiten und nur mehr die sekundflre Senkung in die Erscheinung
treten.

H. Pfeiffer und A. Jarisch hatten bei ihren Studien
flber den antitryptischen Serumtiter bei der Hamolysinver-
giftung nur innerhalb der ersten 6 Stunden nach Einver¬
leibung des toxischen Agens untersucht und zu dieser Zeit
ausnahmslos den Tiefstand des EiweiBstoffwechsels an der
Herabsetzung des Serumtiters ihrer noch schwerkranken
Versuchstiere wahrgenommen. Als wir, andere Ziele ver-
folgend, nun Sera von Meerschweinchen untersuchten, welche
24 und 48 Stunden frtther mit 2,5 und 4,0 ccm, bzw. 3,0 und
4,5 ccm aktiven Rinderserums intraperitoneal in 24-stflndigen
Intervallen vorbehandelt waren, wurden wir durch das auf
Tabelle II wiedergegebene Resultat flberrascht. W&hrend die

1) In jiingster Zeit bekaraen wir auch bei Verwendung ausgewach-
eener, 500—600 g schwerer Tiere ausgesprochene und anhaltende primare
Ti tersteigerun gen.

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Zur Kenntnis der Hamolysinvergiftung.

463

normalen Kontrollen (12—15 der Tabelle) den konstanten
Wert von 20 AE. des gesamten Meerschweinchens aufwiesen,
waren bei den Versuchstieren, die sich aus jenen schweren
toxischen Shocks schon vollkommen erholt hatten, meist aber
wohl noch in Form von leichtem Fieber in mildester Art er-
krankt waren, wesentlich erhShte Werte bis zu 50 AE. nach-
weisbar. War, wie in Versuch 7 und 8, ein l&ngerer Zeitraum
(72 Stunden) nach der letzten Einspritzung verstrichen, so
erschienen wieder die dera normalen Tiere entsprechenden
Werte von 20 AE.

Tabelle II.

Ver¬

such

No.

Datum

I. Injektion

Re¬

aktion

Inter-

vall

II. Injektion

Re¬

aktion

Ge-

totet

nach

Hemmunga-

vermogenaei

Serums

1

11. XI. 1912

2,5 ccm
R.-S. a. ip.

12960

24Std.

4,0 ccm
R.-8. a. ip.

660048 8td.

30

2

dgl.

dgl.

18600

dgl.

dgl.

18000148 „

50

3

yy

>>

?

11960 24 „

50

4

15. XI. 1912

3,0 ccm
R.-S. a. ip.

7 560

4,5 ccm
R.-8. a. ip.

450 48 „

1

40

5

dgl.

dgl.

5 710

yy

dgl.

96048 „

50

6

yy

! ”

7 080

yy

8140

48 „

40

7

yy

!•>

8140

yy

yy

9 720

48 „

30

8

yy

u

1200

y*

yy

720

72 „

20

9

yy

yy

5 460

yy

2 400

72 „

20

10

jy

10200

! •>

2160

72 „

30

11

yy

4 620

I

1 yy

9 600

72 „

20

12—15

11. XI. 1912

! o

0

1 o

1 o

0

0

20

Erklarung der Abkiirzungen: R.-S. a. = Rindereeram aktiv; ip. =
intraperitoneal. Reaktion: Die Ziffem wurden durch Auswertung des Tem-
peratursturzes nach der Formel H. Pfeiffers gewonnen.

Es war also die zweite, den schweren Vergiftungs-
erscheinungen entsprechende Periode der sekundSren Senkung
des antiproteolytischen Hemmungsvermogens zur Zeit der
Erholung von einer dritten Phase gefolgt, in der neuerlich
eine recht bedeutende und, wie es schien, konstante und
l&ngerdauernde AnhSufung von EiweiBspaltprodukten im
Serum wahrnehmbar wurde. Unsere erste Vermutung richtete
sich darauf, ob nicht vielleicht die zweimalige Injektion
toxischen Rinderserums zu der Erscheinung in urs&chlicher
Beziehung stehen konnte. Wir untersuchten daher, wie
Tabelle III wiedergibt, an einer Serie von 12 Versuchstieren
und zwei Kontrollen nach einmaliger intraperitonealer Ein-

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464

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,

verleibung von 2,5 ccm aktiven Rinderserums zu den in der
Zusammenstellung angegebenen Zeiten das Hemmungsver-
mbgen von je zwei Seren. Da erst 30 Minuten nach der
Injektion die Untersuchung begann, konnte nach dem Vor-
hergesagten nur an einem Tiere die primfire Anhaufung der
Spaltprodukte wahrgenommen werden. Es folgte dann das
sekundare Absinken, welches auch noch in der sechsten Ver-
suchsstnnde sehr deutlich war. Die beiden Tiere, die nach
48 Stunden getbtet wurden, wiesen ganz wie die frfiher er-
brterten und zweimal gesprilzten 50 und 40 AE. in ihrem
Serum auf, also eine ganz wesentliche Vermehrung ihres
hemmenden VermOgens.

Tabelle III (20. XL 1912).

”

Vere.

No.

Injektion von

Getotet

nach

Tempera tur-
reaktion zur
ZeitdesTodes

Hemmungs-
vermogen der
Seren

Durch-

schnitt

1

2,5 ccm R.-S. a. ip.

30 Min.

23/ 0/

10 AE.

i

OA /t)A\

2

dgl.

30 „

26/ 0/

30 „

i

6\) (oUj

3

yy

60 „

24/ 0/

20 „

l

4

yy

60 „

24/ 0/

20 „

5

3 Std.

20/ 14/

10 „

i

l

6

yy

3 „

18/ 10/

20 „

J 0

7

6 „

52/ 10/

10 „

10

8

yy

6 »

48/ 18/ ,

10 „

Iv

9

yy

24 „ |

•14/ 44/

i

nicht be-

10

yy

24 „

36/ 42/

j

stimmt!

11

48 „

46/ 46/

50 AE.

i

A

12 j

"

48 „

42/ 42/ 1

40 „

i

13, 14

0

0 !

20 „ !

Zeichenerklarung siehe Tabelle I.

Aus diesem Befunde, sowie aus den folgenden Tabellen
IV—IX konnte demnach gefolgert werden, daB der tertiare
Anstieg des antitryptischen Serumtiters nach
Einverleibung toxischer Dosen von Rinderhamo-
lysin nicht mit der Wiederholung der Injektion
zusammenhangt, sondern daB schon die einmalige Ein-
spritzung einer krankmachenden Menge geniigt, ihn hervor-
zurufen.

Zur Erklarung dieses, wie uns schien, fiir die ganze
Frage prinzipiell wichtigen Verhaltens standen von vornherein
verschiedene Moglichkeiten offen: 1. einmal konnte a priori
der Gedanke nicht von der Hand gewiesen werden, daB un-

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Zur Kenntnis der Hamolysinvergiftung.

465

abh&ngig von der Wirkung des Hemolysins, also unabhfingig
von der toxischen Erkrankung der Versuchstiere dieser tertifire
Anstieg erfolge als Reaktion auf die Einverleibung des art-
fremden EiweiB Qberhaupt. Es wSre m&glich gewesen, daB
wir daria den ersten Ausdruck der beginnenden Sensibili-
sierung der Versuchstiere durch das RindereiweiB vor uns
hatten, wenn auch der Zeitpunkt des Auftretens unseres
Ph&nomens — 24 Stunden nach der Injektion — recht sehr
mit den Erfahrungen liber das erste Auftreten von Anti-
kbrpern kontrastierte. Sollte diese Moglichkeit weiterhin im
Versuche diskutierbar sein, so muBte sich zeigen: daB a) ganz
unabh&ngig von der Wirkung von Hamolysin auch atoxisches,
also inaktives Rinderserum zur fraglichen Zeit einen Anstieg
des antitryptischen Serumtiters bedinge, da ja erfahrungs-
gem&B unter diesen Versuchsbedingungen sein sensibilisierendes
Vermdgen voll erhalten bleibt; daB auch anderes, an sich
schwach giftiges oder ungiftig gemachtes artfremdes EiweiB,
z. 6. Pferdeserum in demselben Sinne und zur selben Zeit
den EiweiBstoffwechsel beeinflusse; c) daB der tertiSre An¬
stieg urn die 48. Stunde nicht ein Maximum des PhSnomens
bilde, sondern sich durch eine ISngere Zeitperiode, mindestens
bis zum 10. bis 12. Tage nach der Injektion, also bis zum
Eintritt hoherer Grade von Ueberempfindlichkeit sich nicht
nur erhalte, sondern steigere. Denn war der tertiSre Anstieg
eine Folge des ersten Auftretens von AntieiweiB, so stand zu
erwarten, daB mit seiner Zunahme im SSftestrome auch das
davon hypothetisch unabhSngige und gesteigerte Hemmungs-
vermSgen der Seren mindestens anhalte.

Als zweite ErklSrungsmdglichkeit wSre zu prfifen ge¬
wesen, daB wir in dem tertiSren Anstieg den Ausdruck einer
Nierenerschopfung durch den Shock, einer passageren UrSmie
vor uns haben, die ja (fOr den Fall der reinen Retentions-
urSmie) nach H. Pfeiffer und A. Jarisch gleichfalls mit
einer Steigerung des Serumtiters einhergeht und nach Slteren
Erfahrungen des einen von uns liber die Harngiftigkeit bei
der HSmolysinvergiftung nicht auszuschlieBen war. Sollte
solch eine ErklSrung genflgen, so muBte sich zeigen, a) daB
bei fehlender Vergiftung, also nach Injektion von atoxischem
Serum das tertifire Ansteigen ausbleibe, b) daB bei schwachen

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466

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,

Vergiftungen mit kleinen Mengen von H&molysin es gleich-
falls nicht wahrnehmbar sei und daB es vor allem c) unter
den sub b) genannten Versuchsbedingungen, wenn Qberhaupt,
nicht frflher, sondern sp&ter eintrete als bei stSrkeren Ver¬
giftungen, da vernunftgemflB diese eine NierenschSdigung und
die damit hypothetisch in Verbindung gebrachte Titersteigerung
rascher zum Erscheinen bringen mufite, als eine schw&chere.

Drittens schien es uns notwendig, zu untersuchen, ob
nicht bei der in Rede stebenden Erscheinung der neuerliche
Anstieg nichts anderes sei, als der Ausdruck der eingetretenen
Erholung von der Giftwirkung, die, wie schon frflher nach-
gewiesen wurde, den EiweiBstoffwechsel herabdrflckt und
so die Wesenheit der an der Vergiftung urs&chlich beteiligten
Stoffwechselvorginge verdeckt. Diese Erkl&rungsmflglichkeit
hatte von vornherein die grflfite Wahrscheinlichkeit fflr sich.
Sie konnte vielleicht auch mit der Erscheinung der, von
H. Pfeiffer und S. Mita zuerst nachgewiesenen Unter-
empfindlichkeit eines h&molysinvergifteten Tieres gegen eine
nachfolgende neuerliche und wesensgleiche Vergiftung, also
mit dem unspezifischen, nicht auf Antikflrperverlust basierenden
Anteile der Unterempfindlichkeit in ursflchlichem Zusammen-
hange stehen, da wir heute wissen, daB proteolytische Fermente
durch die Spaltprodukte des abgebauten Substrates gehemmt
werden. Sollten wir demnach im tertiflren Anstieg nichts als
ein Symptom der Erholung vor uns haben, wodurch ein
neuerlicher Beweis fflr die Richtigkeit unserer Anschauung
fiber die Wesenheit der fermentativen Zerfallstoxikosen zu
erwarten stand, so muBte: a) bei fehlender Erkrankung, dem¬
nach auch bei fehlender „Erholung“, also bei Einverleibung
inaktivierten, atoxischen Rinder- oder Pferdeserums der tertiare
Anstieg ausbleiben; b) nach grflBeren, eben subletalen Dosen
sp&ter eintreten und langer anhalten als nach kleineren;
c) bei kleinsten Giftmengen die tertiare Steigerung vor der
24. bzw. 48. Stunde — entsprechend der rascheren Er¬
holung — sich zeigen; d) bei minimalen Schadigungen mit
einem Ausbleiben der sekundflren Senkung prim&rer und
tertiarer Anstieg zeitlich zusammenfallen.

Endlich muBte es sich e) zeigen lassen, daB unter Ver¬
suchsbedingungen, wo eine Unterempfindlichkeit der Ver-

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Zur Kcnntnis der Hamolysinvergiftung.

467

sochstiere gegen das H&molysin besteht, also bei einer zweiten
Iojektion die Erkrankung bei gleichbleibender Dosis geringer
ist, die Antitrypsinkurve eine l&nger dauernde prim&re
Steigerung und eine schw&chere sekund&re Senkung zeigt.

TabeUe IV (2.-4. H. 1913).

Vers.

Injektion von 1 )

Getotet

Hemmungs-

Durchschnittliches

No.

nach

vermogen des
Serums

Hem m un gs vermogen

M. 1
M. 2

2 ccm R.-S. inakt. ip.
dgl.

24 Std.
24 „

20 25 AE.

20 „

► 20 AE.

M. 3
M. 4

V

ff

48 „

48 „

20 „

20 „

. 20 AE.

M. 5

JJ

72 „

20 „

M. 6

fl

72 „

20 „

20 AE.

M. 7,8

o

20 „

j

Wie sich aus Tabelle IV und Kurve 1 ergibt, konDten
wir zun&chst feststellen, daB der terti&re Anstieg des Serum-
titers abh&ngig ist davoa, daB
das Versuchstier an HSmolysin-
vergiftung iiberbaupt erkranke und
daB es nicht die Einverleibung des
artfremden Serums an sich ist,
welcher ihn bedingt. 6 Versuchs-
tiere wurden mit je 2,0 ccm exakt
inaktivierten, auch im Sinne der
Temperaturreaktion vollig wir-
kungslosen Rinderserums intra-
peritoneal gespritzt und ihr Serum,
sowie jenes von unvorbehandelten
Kontrollen 24, 48 und 72 Stunden nach der Injektion, also
zur kritischen Zeit untersucht. Die sechs Tierseren boten
durchaus den normalen Wert von 20 AE.

Eine zweite, in Tabelle V wiedergegebene Versuchsreihe,
die sich von der 3. bis zur 120. Versuchsstunde ausdehnte
und nach der vbllig wirkungslosen Injektion von 2,0 ccm
inaktiven Pferdeserums gewonnen wurde, zeigte, der 8. und
24. Stunde entsprechend, einen ganz leichten, den Ergebnissen
mit gleich grofien Mengen aktiven Rinderserums gegenftber

1) Kem Temperatursturz.

Versuch vom 2.—4. II. 1913.
Kombmierte Antitrypsinkurve
bei 2 ccm R.Se. inaktiv, intrap.
(Meersch weinchen.)

50 .

40 . 2 cm 5 R.Se. inakt. ip.

30 . J.

20 --

10 .

0 .

25 30 35 40 45 S0 h

Kurve 1.

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468

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,
Tabelle V (28. I. bis 2. II. 1913).

Vere.

No.

Injektion von 1 )

Getotet

nach

Heramungs-
vermogen aer
Seren

1

2 ccm Pf.-S. inakt.

3 Std.

20 AE.

2

dgl.

3

20 „

3

yy

8 „

30 „

4

yy

8 „

20 „

5

24 „

20 „

6

yy

24 „

30 „

7

yy

48

20 „

8

yy

48 „

20

9

ty

48 „

20 „

10

yy

72 „

20 „

11

yy

| 72 „

20 „

12

yy

96 „

25 „

13

96

20 „

14

yy

120 „

20 „

15

yy

,120 „

20 „ i

16-20

0

i —

20 „

Durchachnittliches

Hemmungsvermogen

. 20 AE.

25 AE.

25 AE.

20 AE.

20 AE.

20 AE.

• 20 AE.

20 AE.

aber unwesentlichen Anstieg der Titer bei einzelnen Tieren,
am die 48. Stunde hingegen und fiber diese hinaus durcbaus
normaie Werte. Dadurch ist ebenso wie in Tabelle IV
dargetan, 1) daB zum Zustandekommen des tertifiren An-
stieges das Ueberstehen einer Hflmolysinvergiftung not-
wendig ist, 2) daB er unabh&ngig ist von der Tatsache der
Einverleibung artfremden, an sich aber ungiftigen EiweiBes
und endlich 3) daB er nach dem frflher Gesagten unmflglich
der erste Ausdruck einer beginnenden Sensibilisierung der
Versuchstiere sein kann.

Diese letzte Folgerung wird tibrigens auch durch die Er-
gebnisse der in Tabelle VI, Kurve 2 zusammengestellten Ver-
suche erhartet, die zum Ziele hatten, festzustellen, wie die
Antitrypsinkurve nach einer intensiven Vergiftung mit aktivem
Rinderserum fiber den von uns schon frflher untersuchten
Zeitpunkt hinaus sich verhalt, mit anderen Worten: wie lange
Zeit die tertiflre Anreicherung des S&ftestromes an EiweiBspalt-
produkten unter den gewflhlten Versuchsbedingungen wflhre.
Wir ersehen daraus, daB Versuchstiere, die mit 2,0 ccm aktiven
Rinderserums auf intraperitonealem Wege vergiftet wurden,
schon nach 24 Stunden, also mit Eintritt der Erholung, eine
wesentlich erhohte Steigerung ihres antitryptischen Titers er-

1) Kein Temperat-ursturz.

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Zur Kenntnis der Hamolysinvergiftung.

469

Tabelle VI (27. I. bis 2. II. 1913).

Vera.

No.

Injektion von

GetStet

nach

fiemmungs-
venndgen des
Serums

Durchschnitt

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17, 18

2 ccm B.-S. akk ip.
dgl.

JJ

V

i yy

yy

yy

yy

yr

yy

0

24 Std.
24 „
48 „
48 „
48 „
48 „
48 „
48 „
72 „
72 „
96 „
96 „
120 „
120 „
144 „
144 „

0

40 AE.

35 „

50 „

40 „

40 „

40

40 „

20 ,.

20 „

20 .,

20 „

20 „

20 „

20 „

20 „

20 „

} 35 AE.

• 40 AE.

} 20 AE.

} 20 AE.

[ 20 AE.

20 AE.

kennen lassen, dafi dieser innerhalb der nachsten 24 Stunden,
also 48 Stunden nach dem Shock, noch eine nicht unwesent-

liche Zunahme
erfahrt, dafi aber
vom 3. Tage ab
wieder normale
Verhaitnisse ein-
treten und min-
destens bis zum
6. Tage nach der
Vergiftong an-
halten.

Kombinierte Antitrypainkurve nach intraperitonealer
Einverleibung von 2 ccm Rinderaerum aktiv.

50

40

50

20

10

25 SO 55 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 h

Kurve 2.

Da somit die erste der frflher erOrterten ErklSrungs-
mOglichkeiten ausgeschaltet werden konnte, blieb noch flbrig
zu entscheiden, ob der tertiare Anstieg im Sinne einer passa-
geren Niereninsuffizienz gedeutet werden mufi, gegen die schon
das Wohlbefinden der Tiere zur Zeit dieser TitererhShung
sprach, oder ob wir es mit einem Symptom der Erholung
vom Shock zu tun haben, welches uns erst einen Einblick in
die wesentlichen Stoffwechselvorgange wahrend der Vergif-
tung gestattet. Wie frflher angedeutet, stand diese Entschei-
dung von der Anwendung kleinerer Giftdosen zu erwarten,

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470

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,

wobei den quantit&tiven Verh&ltnissen und insbesondere dem
zeitlichen Auftreten des terti&ren Anstieges besonderes Augen-
raerk zngewendet werden mufite.

Die eben erw&hnte Tabelle VI und die folgenden VII,
VIII und IX enthalten die Zusammenstellung unserer Be-
obacbtungen, die wir nach intraperitonealer Einverleibung
von 2,0, 1,0, 0,5 und 0,25 ccm aktiven Rinderserums in Meer-
schweinchen des Durcbschnittsgewicbtes von 300— 400 g zu
verschiedenen Zeiten machten. Wie aus Tabelle VI uud III
hervorgeht, setzt die terti&re Titererhdhung noit der 24. Stunde
ein und ist nach der 72. Stunde aus dem Symptomenbilde
verschwunden. Setzt man durch Einverleibung von 1,0 ccm
eines aktiven Rinderserums eine Sch&digung geringeren Grades,
die nur zu Temperaturabnahmen von 3—4° C. fflhrt und nach
beil&ufig 4 Stunden einer leicbten Fieberbewegung Platz ge-
macht hat, so bemerkt man, wie Tabelle VII und Kurve 3
lehren, dafi innerhalb der ersten 3 Stunden nicht der von den

Tabelle VII (4.-6. II. 1913).

Vers.

No.

Injektion von

Getotet

nach

Temperatur
zur Zeit des
Todes

Hemmungs-
vermdgen des
Serums

Durch-

schnitt

1

1,0 ccm R.-S. a. ip.

30 Min.

36^°

20 AE.

1

■ 20 AE.

2

dgl.

30 „

36,0°

20 „

3

4

77

60 „

60 „

35,8°

35,2°

20 „

20 „

20 AE.

5

6

„

77

3 Std.

3 „

39,2°

38,8°

20 „

20 „

20 AE.

7

8

» 1
77

8 „

8 „

39.6°

39,0°

30 „

20 „

25 AE.

9

10

1

77

12 „

12 „

39.2°

39,6"

40 „

50

145 AE.

12

12

•7

7J j

24 „

24 „

39,0®

38,6®

50 „

50 „

I

150 AE.

13

77

48 „

38,4®

30 „

14

77

48 „

39,0®

40 ,,

1

► 35 AE.

15, 16

0

0

0

20 „

i

schweren Vergiftungen her bekannte Titerabfall unter die Norm
in die Erscheinung tritt, sondern das Hemmungsverm&gen
innerhalb dieser Zeitperiode*) trotz subnormaler Temperatur

Nach dem prim&ren Anstieg nach 15 Minuten wurde in diesen und
den folgenden Versuchen nicht gesucht.

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Zur Kenntnis der Hamolyainvergiftung.

471

der Norm entspricht. Schon am die 8. Stunde beginnt nunmehr
der tertiftre Anstieg sich bemerkbar zu macheo, ist nach
12 Stunden stark ausge-
pr&gt, erreicht nach 24 Stun-
den sein Maximum und ist
nach 48 Stunden wohl noch
deutlich nachweisbar, aber
wesentlich schwScher als
tags vorher. Es ist also bei
dieser schwachen Ver-
giftung von dem sekundfiren
Titerabfall unter die Norm
keine Rede mehr, der ter-
tiftre Anstieg ist quantitativ
ebenso deutlich wie frflher,
tritt hingegen zeitlich stark verfrtlht zwischen der 8. und
12. Stunde auf. Seine Zeitdauer ist ann&hernd so groB, wie
nach starken Vergiftungen.

Wahlt man, wie es in Tabelle VIII und Kurve 4 darge-
stellt wurde, noch kleinere Sch&diguugen, 0,5 ccm aktiven
Rinderserums, so liegt der tertiire Anstieg wieder in der
12. bis 24. Stunde. Wenn er auch deutlich nachweisbar
bleibt, so ist er doch nicht mehr so intensiv, wie unter den

Vereuch vom 4.—6. II. 1913.
Kombinierte An ti trypainkurve bei 1 ccm
R.!5er. aktiv t intraperitoneal.
(Meerscbweinchen, 400 g.)

1 em s R.Se. ». ip.

0 .

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 n

Kurve 3.

Tabelle VIII (4.-6. II. 1913).

Vere.

No.

Injektion von

GetStet

nach

Temperatur
zur Zeit dee
Todes

Hemmungs-
vermdgen aer
Seren

Durch-

schnitt

1

2

0,5 ccm R.-S. a. ip.
dgL

n

30 Min.
30 „

36,2°

36,0°

20 AE.

20 ,.

1

1

. 20 AE.

3

4

60 „

60 „

36.2°

38,6°

20 „

25-30 AE.

i

j

20-25

5

6

3 Std.

3 „

37,2°

38,4°

25—30 „

20 AE.

1

J

20-25

7

8

1 ::

39.8°

39,8°

20 ,.

20

1

J

20 AE.

9

10

>1

12 „

12 „

38,8°

39,2°

30 „

30 „

1

1

30 AE.

11

12

24 „

24 „

40,0°

40,0°

40 „

30 „

1

j

j 35 AE.

13

»

48 „

39,0°

20 „

1

1

14

ft

48 „

39,2°

20 „

1

20 AE.

15, 16

0

0

0

20 „

1

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472

Hermann Pfeiffer und M. de Crinia,

frflher gew&hlten Versuchsbedingungen. Vor allem aber ist
sein Eintritt nicht nur zam Augenblicke der Injektion hin ver-
schoben, sondern auch seine Zeitdauer deutlich verkflrzt, indem

nach 48 Stunden schon
wieder vdllig normale
Titerwerte beobachtet
wurden. Erw&hnung ver-
dient der Umstand, daB
auch hier von einer se-
kund&ren Senkung unter
die Norm keine Rede ist,
ja sogar nach 60 Minuten
und 3 Stunden gelegent-
lich erhdhte Werte an*
getroffen werden, die als
Residuen des initialen
Anstieges gedeutet wer¬
den mtissen, da zwischen ihnen und dem terti&ren Anstieg
die beiden normalen Werte von 20 AE. um die 8. Versuchs-
stunde liegen.

Noch deutlicher wird dieses Gesetz, dafi mit fallen-
den Dosen von Aktivserum der terti&re Titeran-
stieg gegen den Zeitpunkt der Injektion zu ver-

Verauch vom 4.-6. II. 1913.
Kombinierte Antitryjpainkurve bei 0,5 ccm
R.Se. aktiv, mtraperitoneal.
(Meerechwein chen, 350 g.)

5 10 1 5 20 25 30 3 5 40 4 5 50 h

Kurve 4

Tabelle IX. (7.-9. II. 1913.)

Vere.-

No.

Injektion von

Getotet

nach

Temperatur
zur Zeit
jes Toden

Hemmungs-
vermogen
der Seren

Durch-

schnitt

1

2

0,25 ccm R.-8. akt. ip.
dgL

30 Min.
30 „

37,2®

36,8®

20 AE.

20 „

J 20 AE.

3

4

99

60 „

60 „

38,0"

39,6®

20 „

20 „

J 20 AE.

5

6

99

99

3 Std.

3 „

39,0°

40,2“

30 „

30 „

J30 AE.

7

8

99

99

8

8 „

38.8®

38,6°

30 „

30 „

J30AE.

9

10

99

99

12 „

12 „

25 „

30 „

J30AE.

11

12

99

99

24 „

24 „

38,6°

39,0°

20 „

20 „

|20AE.

13, 14

0

0

—

20 „

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Zur Kenntnis der Hamolysinvergiftung.

473

schoben ist, ktirzer dauert und weniger intensiv
wird, wenn man Tabelle IX betrachtet, welche die Ergeb-
nisse nach intraperitonealer Einverleibung von 0,25 ccm
Rinderserum enth&lt. Da sehen wir diesen Anstieg in der
dritten Versuchsstunde, zu welcher Zeit schon Erholung ein-
getreten ist, deutlich ausgepragt. Er halt bis zur 12. Ver¬
suchsstunde an, aber schon nach 24 Stunden sind wieder
normale Verhaitnisse gegeben.

Diese Versuche insgesamt haben also gezeigt, dafi: 1) bei
fallender Schadigung der sekundare Abfall des antitryptischen
Titers unter die Norm ausbleibt; 2) die tertiare Anhaufung
von Spaltprodukten im Serum mit dem rascheren Eintritt der
Erholung frfiher eintritt und kiirzere Zeit dauert; 3) in
quantitativer Beziehung die Titersteigerung, wenn sie auch
deutlich ausgesprochen bleibt, geringer wird.

Diese Tatsachen beweisen endlich 4) in Erwagung des
friiher Erlauterten, dafi wir in der tertiaren Anhaufung von
Eiweifispaltprodukten im Serum derartiger Versuchstiere es'
nicht mit einem Symptom passagerer Niereninsuffizienz, sondern
mit einer, die Erholung begleitenden Erscheinung zu tun
haben. Mit dem Nachlassen der schwersten Vergiftungs-
erscheinungen, mit der Wiederkehr in normale oder die Norm
hberschreitende Temperaturverhaltnisse wird abermals der
dem ganzen Prozefi zugrundeliegende Stoffwechselvorgang, der
gesteigerte parenterale Eiweifizerfall, fiir die sogenannte Anti-
trypsinmethode nachweisbar. Dabei ist besonders hervorzu-
heben, dafi eben diese Steigerung der parenteralen Zerfalls-
vorgange am EiweifimolekQl nicht etwa ein, der Einverleibung
artfremden (an sich aber atoxischen) Eiweifies eigenttimliches
Phanomen darstellt, sondern dafi es die Einverleibung eines
gegen das Eiweifi des Meerschweinchens wirksamen Hfimo-
lysins, also die toxische Schadigung des Versuchstieres zur
Voraussetzung hat und deshalb mit dem Zustandekommen der
Vergiftung in ursachlichem Zusammenhange stehen mufi.

Endlich mochten wir in Tabelle X und Kurve 5 noch auf
eine Versuchsreihe hinweisen, welche dartut, dafi die Anti-
trypsinkurve von Meerschweinchen, die zweimal nach einem
Intervall von 24 Stunden mit grofien Dosen (2,5 ccm) aktiven

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474

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis.

Tabelle X.

Beaktion auf

Beaktion auf

Hemmungs-
vermdgen
der Seren

Vera.-

I. Injektion

II. Injektion

Getdtet

Durch-

No.

in Zehntel-
graden

znr Zeit des
Todea

nach

schnitt

1

40/

18/ 0/

30 Min.

20 AE.

i

20 AE.

2

20/

15/ 0/

30 „

20 „

i

3

22/

13/ 0/

60 „

30 „

i

30 AE.

4

36/

23/ 0/

60 „

30 „

j

5

6

20/

36/

41/ 0/
35/ 0/

3 Std.

3 „

30 „

10 „

i

j

20 (30) AE.

r*

4

28/

9/ 7/

6 „

30 „

i

: 30 AE.

8

50/

14/ 8/

6 „

30 „

j

9

30/

28 / 26/

10 „

20 „

i

30 AE.

10

42/

28/ 27/

10 „

25 „

j

11

24/

34/ 34/

24 „

35 „

i

25 AE.

12

42/

23 / 23/

24 „

20 „

j

13

30/

34 / 34/

48 „

40 „

i

145 AE.

14

60/

42 / 42/

48 „

50 „

j

15

32/

10/ 10/

72 „

20 „

i

[35 AE.

16

60/

18/ 16/

72 „

50 „

j

17

18

0

0

0

0

—

20 „

20 „

1

j

(20 AE.

Rinderserums gespritzt wurden, also scbon einen gewissen,
wenn auch noch Dicht vollstfindigen Schutz gegen diese zweite

50 .?

1 I M S I n » 10 II 84 1 as 4 6 6’ 6 9 10 1 2 84 48 *8

Kurve 5.

Einspritzung erworben haben, das zweite Mai anders verlauft
als das erste Mai.

Die Versuchstiere wurden gleichzeitig mit den gleich
schweren der Tabelle III zum ersten Male mit 2,5 ccm Rinder-
serum gespritzt, der Serumtiter der Versuchsreihe Tabelle III,

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I

Zur Kenntnis der Hftmolysinvergiftung.

475

wie dort angegeben, innerhalb von 30 Minuten bis 48 Stunden
bestimmt. Die Versuchstiere der Tabelle X erhielten 24 Standen
spfiter neuerdings dieselbe Menge aktiven Rinderserums und
reagierten, wie dies den Erfahrungen von H. Pfeiffer nnd
S. Mita entspricht, auf diese Injektion meist schwficher, als
auf die erste 1 ), nicht nur was die Intensitfit des Temperatur-
stnrzes und der allgemeinen Krankheitserscheinungen, sondern
auch was die zur Erholung notige Zeitdauer anlangt. Ver-
gleicht man nun die von ihnen erhaltene Antitrypsinkurve mit
jener der erstmalig injizierten Versuchstiere (Kurve 4), so
sieht man, dafi nicht nur die primfire Titersteigerung bei den
mehrmals gespritzten Tieren lfinger (bis zur 6. Stunde) anhfilt,
wfihrend sie bei den erstmals injizierten Meerschweinchen
schon nach 1 Stunde verschwunden ist, sondern auch, dafi
die sekundfire Senkung unter die Norm hier vollstfindig fehlt,
ja dafi wir zu Zeiten, wo diese bei den anderen Versuchs-
reihen sehr intensiv ausgesprochen ist (zwischen der 6. und
10. Versuchsstunde), hier gelegentlich noch fibernormale Werte
antreffen konnen. Ueber Verschiedenheiten im Eintreten der
tertifiren Steigerung kann hier leider nichts ausgesagt werden,
da durch ein Versehen die 24-stfindigen Seren der Versuchs¬
tiere von Tabelle III nicht untersucht wurden. Um die 48.
Stunde ist sie jedenfalls unter beiden Versuchsbedingungen
deutlich ausgeprfigt.

Zusammenfassend kdnnen wir also fiber diese Versuchs-
reihen sagen, dafi dann, wenn eine 2 Stunden vorausgehende
Injektion von aktivem Rinderserum eine verminderte Empfind-
lichkeit der Versuchstiere gegen eine neue Einspritzung ge-
schaffen hat, der primfire Anstieg des proteolytischen Hem-
mungsvermfigens der Seren intensiver ist und lfingere Zeit
anhfilt, als nach der ersten Injektion, und der sekundfire Ab-
fall — immer die gewfihlten Versuchsbedingungen voraus-
gesetzt — nicht unter normale Werte geht Auch in diesem
Verhalten der Antitrypsinkurve, somit also des Gehaltes der

1) Ein vollstiindiger Schutz, der erst nach mehrmaligen Hamolysin-
injektionen und meist erst nach einem 48-stundigen Intervall bei intra-
peritonealer Applikation eintritt, war nach den Erfahrungen dieser Autoren
nach 24 Stunden noch nicht zu erwarten!

ZeiUchr. f. lmmunitlUiforschung. Orig. Bd. XVII. 32

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476

Hermann Pfeiffer und M. de Crinis,

Tierseren an Eiweifispaltprodukten, sehen wir eine Bestfitigung
unserer frflher auseinandergesetzten Anschauung fiber das
Wesen der Hfimolysinvergiftung. Es ist sehr wohl mfiglich,
daB dieses gefinderte Verhalten nicht allein ein Ausdruck,
sondern vielleicht auch eine Ursache der hier schon deutlich
merkbaren Unterempfindlichkeit der Versuchstiere ist. Aus
frflher mitgeteilten Versuchen wissen wir, daB schon um die
24. Stunde die terti&re Titersteigerung einsetzt, daB zu dieser
Zeit die nichtspezifische Unterempfindlichkeit deutlich wird,
und es wfire im Sinne von S. Rusznyfik wohl denkbar, daB
die zu dieser Zeit im Sernm angehfiuften EiweiBspaltprodnkte
die neuerliche Wirkung des einverleibten Hfimolysins bremsen.
Um dies mit Sicherheit zu entscheiden, sollen weitere Ver-
suche unternommen werden.

SchlieBlich sei noch hervorgehoben, daB nach dem bis
hente vorliegenden Materiale wir bei den Zerfallstoxikosen
folgende wichtige Verhfiltnisse in dem Gehalte der Seren an
EiweiBspaltprodukten vorfinden konnten: 1) Der prim fire
Anstieg, unmittelbar nach Einsetzen der parenteralen Zer-
fallsvorgfinge bei beginnender Erkrankung des Versucbstieres
und fallender Kfirpertemperatur. 2) Der sekundfire Ab-
fall bei schwerer Erkrankung der Versuchstiere, Tiefstand
der KQrpertemperatur auf der H6he der Giftwirkung. 3) Die
tertifire TitererhOhung bei oder nach Eintritt der Er-
holung. Wiederkehrendes Wohlbefinden der Tiere, leicht sub¬
normal oder erhOhte Temperatur mit Tendenz zur Temperatur-
steigerung. 4) Scheinbar normale Titer bei schwach
vergifteten oder unterempfindlichen Tieren mit leichten all-
gemeinen Vergiftungserscheinungen, geringen Temperatur-
stflrzen unmittelbar nach einer prim fir en Titersteigerung; sie
geht fiber in die tertifire Steigerung. 5) Der prim fire
Titerabfall unmittelbar nach Einverleibung eines prft-
formierten Zerfallsgiftes, z. B. Pepton Witte. 6) Der ago-
nale Titeranstieg (wohl zu unterscheiden von dem ter-*
tifiren, der ein Ausdruck der Erholung des Tieres ist!) bei
schwerster Erkrankung der Tiere, enormem Tiefstand der
Temperatur unmittelbar vor dem Ende; bisher beobachtet bei
der reinen Retentionsurfimie von H. Pfeiffer und A. Jarisch,
sowie in noch unverbffentlichten Versuchen von H. Pfeiffer

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Zur Kenntms der HamolyBinvergiftung.

477

and M. de Crinis beim protrahierten VerbrOhungstode von
Meerschweinchen and Kaninchen 1 ).

Zusammenfas8ung.

1) In dieser Arbeit werden altere Erfahrungen von
H. Pfeiffer and A. Jarisch fiber den primftren Anstieg
and den sekundaren Abfall des Gebaltes von Tierseren nach
Hamolysinvergiftung (aktives Rinderserum) in neuen Versuchs-
reihen bestatigt.

2) Es wird darauf hingewiesen, daB an diese beiden
Perioden sich regelmaBig noch ein Zeitabschnitt des „tertiaren
Titeranstieges“ anschliefit, der zeitlich mit der Erholung der
Tiere von der Vergiftung zusammenfallt.

3) Diese Anreicherung an Spaltprodukten h&ngt wesent-
lich von der Setzung der Hamolysinvergiftung ab, da inaktives
(atoxisches) Rinderserum und inaktives Pferdeserum nicht zu
dieser Erscheinung ffihren.

4) Da nach der 48. Stunde die Periode des tertiaren An-
stieges abgelaufen ist, normalen Verhaltnissen Platz macht, sie
ferner durch artfremdes, dabei aber atoxisches Material nicht
hervorgerufen wird, so kann es sich dabei anch nicht um eine
Erscheinung beginnender Sensibilisierung, also nicht am die
Folge einer beginnenden Antikdrperbildung handeln.

5) Da bei schw&cheren Vergiftungen die tertiare Titer-
steigerung frflher eintritt als bei starkeren, kann es sich dabei
auch nicht um den Ausdruck einer passageren Niereninsuffizienz,
sondern es muB sich um ein Symptom der Erholung handeln,
welches die Wesenheit der Hamolysinvergiftung als Toxikose
des akaten parenteralen EiweiBzerfalls neuerdings dartut.

6) Bei zweimal gespritzten, hamolysinunterempfindlichen
Tieren ist der primare Anstieg des antitryptischen Serumtiters
deutlicher ausgepragt und halt langere Zeit an als nach einer
ersten Injektion. Der sekundare Abfall erreichte dort, unter
den gewahlten Versuchsbedingiingen, im Gegensatz zu hier
niemals subnormale Verhaltnisse. Die Moglichkeit eines

1) Anmerkung bei der Korrektur: Einen derartigen agonalen
Titeranstieg haben wir mittlerweile auch bei letal verlaufender Uran-
nephritis geseheu, die gleichfalls als reine Eetentionsuramie zu deuten ist

32*

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478

Ernst Nathan,

inneren Zusammenhanges zwischen diesem Verhalten und der
nichtspezifischen Unterempfindlichkeit im Sinne einer Bremsung
weiterer ZerfallsvorgSnge durch angeh&ufte Spaltprodukte
(Hemmung einer proteolytischen Fermentwirkung durch die
Spaltprodukte) wird betont.

7) Es werden die bisher bekannten Formen der Abweichung
des antitryptischen Serumtiters von der Norm bei den Zerfalls-
toxikosen zusammengestellt.

Literatur.

Pfeiffer, H., und Jarisch, A., Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 16, H. 1.
Pfeiffer, H., undMita,S., ebenda, Bd.5, H.2; Bd.6, H. 1; Bd.6, H. 5.
Rosenthal, E., Folia serologica, Bd. 6, 1910, p. 285.

Rusznyak, Deutsche med. Wochenschr., 1912, No. 4.

Nachdruck verboten.

[Aus der experimentell-biologiachen Abteilung (Prof. H. Sachs)
des K5nigl. Institute fiir experimentelle Therapie in Frankfurt a. M.

(Direktor: Wirklicher Geheimer Rat Prof. Dr. P. Ehrlich).]

Ueber Anaphylatoxinblldung durch Agar.

Von Dr. Ernst Nathan,

Assistent am Institut.

(Eingegangen bei der Redaktion am 28. Februar 1913.)

In einer vor kurzem erschienenen Arbeit hat Bordet 1 )
die interessante Tatsache mitgeteilt, daB es durch einfaches
Digerieren von Meerschweinchenserum mit Agar ohne weiteren
Zusatz gelingt, ein Gift zu erhalten, das nach den Eigenthm-
lichkeiten seiner Entstehung und Wirkungals „Anaphylatoxin“
anzusprechen ist. Bei dem nicht geringen Interesse, welches
dieser Feststellung zukommen dilrfte, darf ich mir vielleicht
erlauben, im folgenden fiber einige im AnschluB an die Bor-
detschen Befunde ausgefiihrten Versuche zu berichten. Wenn
dieselben auch nicht zu neuartigen Ergebnissen geffihrt haben,
so erscheint eine kurze Wiedergabe der im wesentlichen nur
eine Bestatigung unter quantitativen Variationen darstellenden

1) Compt. rend. Soc. Biol., T. 74, 1913, No. 5.

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Ueber Anaphylatoxinbildung durch Agar. 479

Untersuchungen insofern gerechtfertigt, als bei manchen Formen
der Anaphylatoxindarstellung augenscheinlich die Bedingungen
durch geringfflgige, vorl&ufig nicht exakt zu beherrschende
Umstfinde beeinfluBt werden, so daB die ErfahruDgen der ein-
zelnen Autoren mehr Oder weniger difFerieren kdnnen.

DaB es prinzipiell mbglich ist, durch Behandeln von Meer-
schweinchenserum mit Agar Anaphylatoxin zu gewinnen, daran
konnte natflrlich nach den Angaben Bordets nicht ge-
zweifelt werden. In der Tat konnte ich dieselben, wie nicht
anders zu erwarten war, vollkommen best&tigen, und es ge-
lang mir bisher die Anaphylatoxingewinnung durch Agar mit
einer solchen RegelmaBigkeit, wie wir sie sonst nur bei der
namentlich von Friedberger und seinen Mitarbeitern x )
studierten Darstellung von Anaphylatoxin mit Bakterien zu
sehen gewohnt sind.

Die Herstellung der Agarlosung geschah entsprechend den Angaben
von Bordet. 0.5 g Agar wurden in 100 ccm 0,85-proz. NaCl gelost, und
die Losung sterilisiert. Nach dem Erkalten resultierte eine leicbt opale-
szente gelatindse Masse, die sich durch kriiftiges Schiitteln verfliissigen liefl.

Als Komplementlieferanten dienten Meerschweinchen im Gewicht bis
zu 400 g. Innerhalb jeder Versuchsreihe wurde die gleiche Koroplement-
mischung benutzt.

Die zu den Versuchen verwendeten Mengen von Agar und Kom-
plementserum, sowie die Zeit der Digestion bei 37° sind aus den TabeUen
ersichtlich.

Die Priifung des nach ’/,-stundigem Zentrifugieren vom Agar ab-
gegossenen Komplementserums geschah an Meerschweinchen von 220 bis
250 g Gewicht durch lnjektion des Abgusses in die freigelegte Vena jugu-
laris. In jedem Fall wurde sofort nach dem Tod des Vereuchstieres, der
immer unter den klassischen Symptomen der Anaphylaxie (Unruhe, Dys-
pnoe, Spriinge, Kriimpfe, agonale Atmung) erfolgte, die Sektion vor-
genommen. Sie ergab regelmaBig die fur die akute Anaphylaxie typischen
Veranderungen (starke Lungenblahung, Weiterschlagen des Herzens, Ver-
• zogerung der Blutgerinnung).

Nachdem in einer Reihe von Versuchen, entsprechend
den Angaben Bordets, die Bildung einer todlichen Giftdosis
aus 1,0 ccm Agar und 5 ccm normalem Meerschweinchenserum
nach 2—3-stOndigem Aufenthalt im Brutofen festgestellt war,
wurde die minimale tbdliche Dose des derart gewonnenen
Giftes bestimmt (s. Tabelle I).

1) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 9, 1911.

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480

Ernst Nathan,

Tabelle L

Ee werden je 1 ccm Agar mit je 5 ccm normalem Meersch weinchenserum
gemischt Die Mischungen werden nach 3-stiindigem Aufenthalt bei 37®
*/, Stunde lang zentrifugiert und die Abgiisse miteinander vereinigt (A).

In gleicher Weise wird mit Mischungen von je 1 ccm Agar und 5 ccm
inaktiviertem Meerscbweinchenserum (*/, Stunde 55°) verfahren (B).

Mischung

Ge-

wicht

8

Injiz.
Dosis
in ccm

Symptome

Ausgang

A

1 220

4,5

i

Schwere Anaphylaxie

Tod in 2 Min.

>t

i 220

3,0

dgl.

Tod in 4 Min.

'

•J

i 245

3,0

Anaphylaxie

Bleibt am Leben

ft

j 230

2,5

Dyspnoe

dgL

ft

220

2,5

dgl.

dgl.

B

240

4,5

Keine Symptome

dgl.

ft

230

5,0

dgl.

dgl.

Wie die Tabelle zeigt, ist die Anaphylatoxinge-
winnung durch Agar nur mit aktivem, nicht mit
inaktivemMeerschweinchenserum gelongen. 3ccm
desGifteswarennochimstande.MeerschweincheD
von 220 g zu tbten, wahrend bei einem schweren Tiere
(245 g) die gleiche Menge nicht mehr zum letalen Ausgang
ausreichte.

Ferner wurde der EinfluB der Agarmenge bei konstanter
Komplementdosis ermittelt. Tabelle II gibt hierffir ein Ver-
suchsbeispiel.

Tabelle II.

Mischungen von fallenden Mengen von Agar mit je 5 ccm normalem
Meersch wein chenserum kommen iiir 2 Stunden in den Brutschrank und
werden hierauf V, Stunde lang zentrifugiert. Prufung der Abgusse durch
intravenose Injektion.

Mengen
des Agars
in ccm

Ge-

wicht

8

Injiz.
Dosis
in ccm

Symptome

Ausgang

2,5

250

4,5

Anaphylaxie

Bald erholt, bleibt
am Leben.

1,0

250

4,5

Schwere Anaphylaxie

Tod in 2 Min.

0,5

250

4,5

dgl.

tf 5 ||

0,25

250

4,5

Q

» tf ° ft

0,1

i 250

4,0

ft

ft M ^ ft

0,05

250

4,5

A naphylaxie

Leichte Anaphylaxie

Bleibt am Leben

0,025

250

3,5

Nach 2 Min. erholt
Bleibt am Leben

0,01

250

3,5

Geringe Dyspnoe

Bleibt am Leben

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Ueber Anaphylatoxinbildung durcb Agar.

481

Der Versuch zeigt, daB man noch bei Verwen-
dung von 0,1 ccm 7s *P roz * Agarldsung, entsprechend
einem absoluten Gehalt von 0,0005 g Agar, eine
tddliche Dosis Gift enth&lt, daB aber selbst noch
bei Verwendung von 0,025 ccm Agarldsung, ent-
sprechend einer absoluten Menge von 0,000125 g
Agar, deutliche A n ap hy 1 ax i e e r sc h e in u n g e n
(Kr&mpfe) sich ausldsen lassen.

Aus der Tatsache, daB mit 2,5 ccm Agarldsung nicht
mehr ein tddliches Gift gewonnen wurde, mdchte ich wegen
der resultierenden Verdfinnung und der entsprechenden Re-
duktion der injizierten absoluten Serummenge keine Schlufi-
folgerungen ziehen. Nicht unerwfihnt soli aber bleiben, daB
in manchen Versuchen auch die mit 1,0 ccm Agarldsung her-
gestellten Anaphylatoxine weniger giftig waren, als die mit
0,5 ccm Agar erhaltenen, so daB vielleicht auch hier, wie es
bei der Anaphylatoxingewinnung im allgemeinen die Unter-
suchungen Friedbergers und seiner Mitarbeiter gezeigt
haben, ein UeberschuB des Giftbildners ungflnstig wirkt. In
anderen Versuchen gelang auch bei Verwendung von 1,0 ccm
Agar die Giftbildung fast regelm&Big, wie es das folgende,
den Einflufi der Zeit auf die Giftbildung illustrierende Ver-
suchsbeispiel zeigt (Tabelle III).

Tabelle HI.

Je 1 ccm Agar wird mit 5,0 ccm normalem Meerschweinchen serum
verschieden lange Zeit bei 37° digeriert, dann werden die Mischungen
1 / t Stunde zentrifugiert. Kontrolle: 1,0 ccm Agar + 5 ccm inaktives Meer-
schweinchenserum ( ! / 2 Stunde 55°).

Zeit der
Digestion

Ge-

wicht

g

Injiz.
Dosis
in ccm

Krankheitsverlauf

Ausgang

0

220

4,5

Keine Symptome

»/« Std.

220

4,5

Anaphylaxie

Nach 2 Min. erholt,
bleibt am Leben

% »

220

4,5

Schwere Anaphylaxie

Tod in 3 Min.

i ”

220

3,0

Anaphylaxie

Leicnte Anaphylaxie

Nach 2 Min. erholt

2 „

220

4,5

Bald erholt

3 „

220

4,5

Schwere Anaphylaxie

Tod in 2 Min.

6 „

230

4,5

dgl.

M

2

ft ft “ 91

24

220

4.5

yy yy yy

Kontrolle
3 Std. 37°

220

4,25

Keine Symptome

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482

Ernst Nathan,

Der Versuch zeigt, daB schon nach 1 / i Stunde eine
krankraachende, nach 8 / 4 Stunden Digestion eine tOdliche
Menge Gift gebildet worden ist. Dabei ist allerdings die Zeit,
welche das Zentrifugieren erforderte, zu berilcksichtigen, so
daB man wohl 1—1 */ 4 Stnnden des Zusammenwirkens von
Agar und Meerschweinchenserum fQr die tddliche Giftwirkung
als erforderlich erachten muB.

Was nun die Deutung der Entstehnng eines Anaphyla-
toxins beim Digerieren von Meerschweinchenserum mit Agar
anlangt, so schlieBt Bordet aus seinen Versuchen, daB der
Ursprung des Anaphylatoxins im Meerschweinchenserum selbst
gelegen sei, und daB es sich bei der Bildung des Giftes um
ein AdsorptionsphSnomen handele. Damit gelangt Bordet
zu einer Auffassung, die in wesentlichen Punkten bereits vor
2 Jahren von Ritz und Sachs 1 ) formuliert wurde, und die
in neuerer Zeit auch von Bauer 2 3 ), besonders aber von
Do err 8 ) und seinen Mitarbeitern vertreten worden ist. Zwar
wurden schon frflher von einzelnen Autoren [F r i e d e m a n n 4 5 ),
Pfeiffer und Mita 6 ), M. Neisser 6 ), Neufeld und
Dold 7 ), Fuld 8 ), Wassermann und Keysser 9 ), Citron 10 )]
Bedenken dagegen geauBert, daB die Matrix des Giftes im
Antigen Oder allein im Antigen zu suchen ist. Citron hatte
dabei die Moglichkeit diskutiert, daB das Eliminieren des

1) Berl. klin. Wochenschr., 1911, No. 22; Centralbl. f. Bakt., Ref.,
Bd. 50, 1911, Beiheft, p. 43; Centralbl. f. Bakt., Ref., Bd. 54, 1912, Beiheft,
p. 248.

2) Berl. klin. Wochenschr., 1912, No. 8.

3) Wiener klin. Wochenschr., 1912, No. 9; Kolle-Wassermann, Handb.
der pathogenen Mikroorganismen, II. Aufl., Allergie und Anaphylaxie,
p. 947.

4) Fol. serol., Bd. 7, 1911, p. 366; Med. Klinik, 1910; CentralbL f.
Bakt., 1910.

5) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 6, 1910. ,J)as Problem der Eiweifl-
anaphylaxie‘‘, Jena 1910.

6) Diskussionsbemerkungen auf der Konigsberger Naturforscherver-
sammlung.

7) Berl. klin. Wochenschr., 1911, No. 2.

8) Deutsche med. Wochenschr., 1911, p. 379.

9) Fol. serol., Bd. 7, 1911, Heft 3.

10) Fol. serol., Bd. 7, 1911, p. 352.

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Ueber Anaphy la toxin bildung durch Agar.

483

Komplementes aus dem Serum fflr die Giftbildung bereits ge-
nflgt, eine Vorstellung, die freilich, wie Friedberger bereits
erdrtert hat, in dieser Form nicht angangig erscheint, und
Wassermann und Keysser hatten eine fermentative
Komplementwirkung auf den durch Adh&sion physikalisch-
chemisch alterierten Ambozeptor angenommen. Ritz und
Sachs haben dann wohl zum ersten Mai einige Moglichkeiten,
welche fflr die Entstehung des Anaphylatoxins aus dem Serum
ohne die Annahme der Interferenz einer fermentativen Ambo-
zeptor-Komplementwirkung in Betracht kommen kflnnen, in dem
Sinne prflzisiert, daB entweder das Gift im Serum pr&formiert
ist und nur durch antagonistische Faktoren, welche bei der Ana-
phylatoxinbildung eliminiert werden, normalerweise in seiner
Wirkung verhindert wird, Oder aber daB das Gift durch einen
Abbau nichtspezifischer Serumbestandteile erzeugt wird, fflr
dessen Eintritt die Entfernung antagonistisch wirkender Ein-
flflsse maBgebend ware. Doerr ist dann besonders dafflr
eingetreten, daB die Umwandlung des normalen Serums zu
einem Anaphylatoxin die Folge physikalischer Adsorptions-
vorgflnge ist, und erblickt die Ursache der Giftwirkung wesent-
lich in einer Stflrung des Gleichgewichts der Kolloide [vgl.
hierzu auch Mu ter milch 1 )]. Indessen haben die bisherigen
Versuche, Meerschweinchenserum durch Behandeln mit ad-
sorbierenden Stoffen giftig zu machen, zu denen an erster
Stelle Kaolin verwendet wurde (vgl. Wassermann und
Keysser, Ritz und Sachs, Doerr, Bauer, Muter-
milch) insofern nicht zu befriedigenden Ergebnissen gefflhrt,
als die Gewinnung todlicher Gifte nur in Ausnahmefflllen ge-
lang, und man muB wohl Friedberger darin Recht geben,
daB das bisher vorgelegene Material zur experimentellen
Begrflndung der Theorie der Anaphylatoxinbilduug ohne
Ambozeptor-Komplementwirkung nicht ausreicht. Gleichwohl
sind die negativen Ergebnisse hierbei insofern weniger bewei-
send, als, worauf insbesondere Sachs und Ritz hingewiesen
haben, gerade beim Kaolin Entgiftungsvorgflnge interferieren
konnen und als, wie auch Doerr bemerkt, bei gewissen Formen

1) Annal. de FInst. Pasteur, T. 27, 1913, No. 1.

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484

Ernst Nathan,

der Giftgewinming die Anaphylatoxindarstellung durchaus nicht
so regelm&fiig gelingt, wie das bei Bakterien der Fall ist.
1st die Theorie richtig, dad das Anaphylatoxin aus dem Serum
entsteht, so mull man offenbar annehmen, dad gerade die
Bakterienemulsionen die geeignetste Beschaffenheit besitzen,
urn das Serum mit gr9liter Regelmadigkeit giftig zu machen.
Die Bakterien in vitro wflrden dann an und ftir sich den Be-
dingungen gleichkommen, welche bei der aktiven und passiven
Anaphylaxie in vivo durch das Zusammenwirken von Antigen
und Antik5rpern entstehen. Sollte nun die Bordetsche
Auffassung der Agarversuche zutreffen, dad es sich bierbei
lediglicb um Erscbeinungen physikalischer Adsorption handeln
k9nne, so wflrde die Herstellung des „Agaranaphylatoxins“
in der Tat die Anschauung von Ritz und Sachs, Doerr,
Mutermilch, Bordet in einwandfreier Weise best&tigen.
Bei den fiuBerst geringen Agarmengen, welche zur Anaphyla-
toxinbildung noch hinreichen (0,0005 g Agar genflgen sicher
ftir ein tSdliches Gift), mud es bereits im hochsten Grade frag-
lich erscheinen, ob der Agar als Matrix des Giftes in Betracht
kommen kann, wenn man auch berflcksichtigen mud, dad mini¬
male Serum- (Friedberger und Nathan) 1 ) Oder Bakterien-
mengen (Friedberger und Goldschmidt) 2 3 * * * * ) gleichfalls fflr
die Anaphylatoxinbildung genflgen 8 ). Auderdem enthait ja
Agar relativ sehr geringe Eiweidmengen, und es erscheint
demnach zunt mindesten sehr fraglich, ob man von einem
Eiweidabbau im Sinne Friedbergers sprechen kann. Auch
wdrde es wohl immerhin Schwierigkeiten machen, dem mehr-
stdndig im Dampftopf sterilisierten Agar (auch l&ngeres
Kochen der Agarl5sung im Wasserbad nach dem Sterilisieren
schddigt die Anaphylatoxinbildung nicht) Antigennatur zu vindi-
zieren. Wenn man daher dberhaupt einen Abbau von Agar-

1) Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 9, 1911, p. 567.

2) Ebenda, Bd. 9, 1911, p. 398.

3) Anmerkung wiihrend der Korrektur: In diesem Sinne

„konnte es sich“ nach Friedberger, wie Lurk in einer soeben er-

schienenen Arbeit (diese Zeitschr., Bd. 17, 1913, p. 239) mitteilt, „um eine

Giftabspaltung aus dem ira Agar nach den vorliegenden Analysen ent-

haltenen EiweiS handeln".

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I

Ueber Anaphylatoxinbildung durch Agar.

485

bestandteilen fflr die Giftbildung verantwortlich machen will,
so wflrde es n&her liegen, eine fermentative Wirkung (ohne
Interferenz von Ambozeptoren) anznnehmen.

Wie dem aber auch sei, so verdient es doch hervorge-
boben zu werden, daB der Agar bisher neben den Bakterien
der einzige StofF ist, mit dem die Anaphylatoxinbildung mit
derartiger Regelm&fiigkeit gelingt, and selbst wenn man eine
Fermentwirkung in Betracht ziehen will, wflrde man nicht
umbin kdnnen, auBer dem Vorhandensein des Substrates auch
den physikalischen Zustand, in welchem sich das letztere be-
findet, wesentlich fflr die Giftbildung verantwortlich zu machen.
Dafflr sprechen im flbrigen auch die Versuche von Fried -
berger und Nathan, Neufeld und Dold 1 2 ), in denen
sich bei der Anaphylatoxinbildung durch normales Serum das
inaktivierte Serum augenscheinlich geeigneter erwies als das
aktive, sowie die Befunde von Wassermann und Keysser,
Neufeld und Dold, nach denen die Adsorption von Serum
an Kaolin die Bedingungen fflr die Anaphylatoxinbildung bei
weitem gflnstiger gestaltet.

Gleichgflltig, ob man nun einen unspezifischen fermenta-
tiven Abbau oder eine einfache Verfinderung des Serums als
Ursache der Anaphylatoxinbildung annimmt, in beiden Fallen
wflrde sich, wie das von Sachs ausgefflhrt worden ist, als
wesentlich ergeben, „dafi wir dem Antikflrper bei der Ana-
phylaxie keine direkt funktionelle Rolle zuschreiben, daB wir
vielmehr der Ansicht sind, daB der Antigen-AntikOrperkomplex
indirekt auf die Blutbeschafifenheit derart einwirkt, dafi eine
schwere Noxe entsteht“ *). So schliefit auch Bordet aus seinen
interessanten Untersuchungen: „L’anaphylaxie n’est pas le
contraire de l’immunit6; c’est un fait secondaire, cons6cutif,
c’est un accident qui peut resulter de la manifestation des
phdnom&nes d’immunit6 et notamment de la reaction de l’anti-
corps avec I’antig&ne."

1) Centralbl. f. Bakt., Ref., 6d. 50, 1911, Beiheft, p. 49.

2) Sachs, Diskussionsbemerkung auf der 6. Tagung der Freien Ver-
einigung fur Mikrobiologie in Berlin 1912. Centralbl. f. Bakt., Ref., Bd. 54,
1912, Beiheft, p. 248.

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486 Ernst Nathan, Ueber Anaphylatoxinbildung durch Agar.

Zusammenfassung.

1) Es gelingt mit grofier Regelm&fiigkeit, durch Dige-
rieren von Agar mit Meerschweinchenserura in Best&tigung
der Angaben Bordets akut tddliches Anaphylotoxin zu er-
halten.

2) Zur Anaphylatoxindarstellung erwies sich die Kom-
bination von 0,1 ccm Vs‘P roz - Agarldsung mit 5 ccm Meer-
schweinchenserum als ausreichend.

3) Ein tddlich wirkendes Anaphylatoxin wurde bereits
nach 1—lV 4 -stflndigem Zusammenwirken von Agar und Meer*
schweinchenserum erhalten.

4) Die Bedeutung der Befunde fflr die Theorien der Ana-
phylaxie wird diskutiert. Wenn auch manche Ueberlegungen
fflr den Ursprung des durch Agar und Meerschweinchenserum
entstehenden Anaphylatoxins aus dem Meerschweinchenserum
sprechen, so erscheint es doch noch zweifelhaft, ob man in
dem durch Agar erzeugten Anaphylatoxin einen hinreichenden
experimentellen Beweis fflr diese Anschauung erblicken darf.

Drackfehler-Berichtlguog.

In der Arbeit von Kashiwabara, diese Zeitschr., Bd. 17, Heft 1,
p. 27, mufl es in der 2. Reihe des Textes nach den Protokollen 68° C
anstatt 60° C heiflen.

Fromroannsche Buchdruckerei (Hermann Pohle) in Jena, — 4273

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Zeitsctnift t Inunnuitatsfbrsohnng. Originala BiXVH Ha 5.

Nachdruck verboten.

The inhibiting effect of excess cow serum in complement
fixation with infectious abortion 1 ).

By Dr. Prank M. Surface.

(Eingegangen bei der Redaktion am 19. Februar 1913.)

In the routine testing of the blood of a large number of
cows for infectious abortion by means of complement fixation,
we have not infrequently encountered a curious behavior with
the blood of certain cows. This phenomenon consisted in the
fact that tubes containing the larger quantities of the cow’s
serum, together with the specific antigen, did not show fixation
of the complement while tubes containing smaller amounts of
serum and the same amount of antigen gave complete fixation.
For example, in the routine testing of cows we have ordinarily
used four tubes containing respectively 0.2, 0.1, 0.05, and
0.02 c. c. of the cow’s serum. The first tube is run as a
control to which no antigen is added. With the serum of
some cows the tube containing 0.1 c. c. of serum, together
with the antigen gave 100 per cent haemolysis, the tube
with 0.05 c.c. serum gave say 50 per cent haemolysis, while
the last tube with only 0.02 c.c. serum showed complete
fixation.

A similar phenomenon has been noted by other workers,
but, so far as I am aware, the matter has never received a
satisfactory explanation. As we shall see in a moment, the
Neisser-Wechsberg “Komplementablenkung” will not
explain this phenomenon. The following work was unter-
taken with the hope of getting nearer to the actual expla¬
nation.

1) From the Biological Laboratory of the Kentucky Agricultural Ex¬
periment Station, Lexington, Ky. U. S. A., Paper No. 5.

Zeitschr. f. ImmunitHtsforschung. Orig. Bd. XVII. 33

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488

Frank M. Surface,

Before describing the succeeding experiments, a word
should be said regarding the technic employed. This has been
described in a previous paper *), and only the essential points
are mentioned here.

The blood from the cow to be tested is drawn from the jugular vein
and the serum allowed to separate over night in the refrigerator. Imme¬
diately before the test, the serum is inactivated by heating in a water bath
at 56° C for thirty minutes.

The antigen has been prepared in various ways. In the earlier work,
a bouillon culture of the Bacillus abortus Bang, was used. In later
work, an antigen obtained by washing the growth from agar tubes with
salt solution has been employed. With either antigen, the results are the
same so far as the present work is concerned. In all cases, the antigen
is titrated with an immune serum of known strength and five times the
titre is the dose employed for each tube. It is also established that double
the dose used, will not, of itself, prevent haemolysis. In the following
work, unless otherwise stated, the antigen is from washed agar cultures
diluted with salt solution until the titre is 0.05 c.c., and the amount added
to each tube is 0.25 c. c.

The haemolytic system employed iB sheep’s blood vs. rabbit. The
sheep’s corpuscles are washed four times and 2 c.c. of the dense mass of
corpuscles added to 100 c.c. of 0.85 per cent, salt solution making what we
have called a 2 per cent suspension. Onehalf c. c. of this suspension is added
to each tube. Just before using, the corpuscles are loaded with five
units of haemolytic rabbit serum. This haemolytic serum has a titre of
0.001 c.c. of the undiluted serum when titrated with 1.5 units of guinea-pig
complement.

Fresh guinea-pig serum is used for complement. This is carefully
titrated and 1.5 times the minimal lytic dose used.

The principal portion of the work reported in this paper has
been done with the serum of one cow. This cow aborted about two
months before this work was undertaken. On testing her blood,
she showed the phenomenon referred to in the first paragraph
above. This cow will be known in the following paper as Cow
No. 1.

In the following table, the extended test of this cow’s
blood is given with reference to infectious abortion.

1) Surface, F. M., Ann. Rep. Ky. Agricultural Exper. Station, 1912,
p. 303-360, Bull. No. 166.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

489

Table No. I 1 ).

Titration of serum of Cow No. 1, for abortion amboceptors.

Cow
serum
56°, 30 m.
c. c.

NaCl
0,85 %

c.c.

Compl.

diluted

1 to 3

c. c.

Antigen

c. c.

Haem.

diluted

1 to 25

C.C.

Sheep

corps

C.C.

Result

0.5

1.0

0.06

0.25

0.15

0.5

+ + + + *)

0.4

1.1

11

If

11

„

+ + + +

0.3

1.2

11

11

11

11

+ + + +

0.2

1.3

11

11

11

J7

+ + + +

0.15

1.4

11

If

o

11

11

+ + +

0.1

1.4

11

11

o

t>

11

o

l>

+ +

0.05

1.5

11

>1

CO

11

CO

+

0.03

1.5

11

11

+3

aj

11

tc

0

0.01

1.5

11

11

u

11

E

0

0.005

1.5

11

11

1

11

”

g

0

0.001

1.5

11

11

A

11

A

0

0.0008

1.5

11

1*

tH

1

11 1

<M

0

0.0005

1.5

11

11

11

+

0.0003

1.5

11

11

11

11

+ +

0.0001

1.5

If

11

11

11

+ + + +

From this table we note:

1) That in tabes with quantities of cow serum of 0.2 c.c.
or greater, there is no fixation of the complement. The cor¬
puscles in these tubes dissolve almost as readily as with only
complement and haemolysin.

2) In the tubes containing 0.15 c.c. to 0.05 c.c. there is
only partial fixation of the complement.

3) Tubes containing from 0.03 c. c. to 0.0008 c. c. of serum
show complete fixation of the complement without a trace of
solution.

4) With quantities of serum less than 0.0008 c.c., the
complement is either only partially fixed or not at all.

The usual explanation offered for this phenomenon is
similar to that devised by Neisser and Wechsberg 8 ) to

1) In order to save space the results of control tubes are not shown
in the tables. It is to be understood, however, that in every instance suf¬
ficient controls were run to insure the proper action of each ingredient.

2) In this and the following tables, + + + + means complete haemo¬
lysis; + + + means partial haemolysis (ca. 70 per cent); ++ means
approximately 50 per cent haemolysis; + trace of haemolysis, and 0, no
haemolysis whatever.

3) Neisser, M., und Wechsberg, F., Munch, med. Wochenschr.,

1901.

33*

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490

Frank M. Surface,

explain the effect of an excess of immune serum in bactericidal
test tube experiments. It will be recalled that if an excess
of immune serum is added no bacteriolysis will result. The
explanation offered by the above writers is that the free ambo¬
ceptors absorb the complement and do not allow it to unite
with the bacteria. On first thought, the phenomenon described
above appears to be a similar instance. A moment’s consi¬
deration will show that such an explanation will not suffice
in the present instance, at least not without important modi¬
fication. If, in the present case, we assume that the free
abortion amboceptors have absorbed the complement in the
first part of the reaction, it is still necessary to further assume
that after the addition of the sensitized corpuscles the com¬
plement changes its affinity and is freed from the abortion
amboceptors and then attaches itself to the sensitized cor¬
puscles producing the haemolysis.

Such an explanation is perhaps not impossible, but at the
present time we hardly possess sufficient facts to warrant such
assumptions regarding substances of which we know so little.
It is not an easy matter to obtain direct evidence for or against
this hypothesis. But the following experiment makes it practi¬
cally certain that such an explanation does not hold in the
present instance.

Cow No. 2 is a grade cow which has never aborted, so
far as her history is known. Eight tests of her blood, by
means of agglutination and complement fixation, have been
made at intervals extending over a year. These tests have
never shown the slightest trace of any abortion antibodies.
The blood used in the following experiment was first sub¬
jected to the same test as detailed in table I, for Cow No. 1.
With the serum of Cow No. 2 every tube showed complete
haemolysis. Consequently, we may assume that the blood of
this cow does not contain abortion amboceptors.

From table I, it will be seen that 0.005 c.c. of the serum
of Cow No. 1, is sufficient to cause complete fixation of the
complement. Accordingly, the following experiment was set
up in which 0.005 c.c. of the serum of Cow No. 1 was added
to each tube and then decreasing amounts of the serum of
Cow No. 2. Since this latter blood did not contain abortion

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The inhibiting etiect of excess cow serum etc. 491

amboceptors, the question of an excess of free abortion ambo¬
ceptors, is out of the question. The other ingredients in the tubes
were added in the same quantity and manner as given in table I.

Table No. II.

To test the effect of an excess of cow serum without abortion amboceptors.

Tube

Number

Serum from
Cow No. 1,
heated at 56 °C
for 30 miu.

c.c

Serum from
Cow No. 2,
heated at 56 °C
for 30 min.

c. c.

Result

i

0.005

0.5

++++

2

0.4

++++

3

ff

0.3

++++

4

0.2

++++

5

0.1

++++

6

0.05

++

7

0.02

“h

8

0.01

0

9

ft

0.005

0

10

” !

—

0

From this table we note:

1) That in those tubes which contained relatively large
amounts of the serum of Cow No. 2, there was complete
solution of the corpuscles. Tubes 1 to 5.

2) When only a small amount of the serum of Cow No. 2
was added (tubes 6 to 9), or when none at all was used (tube 10)
we obtained fixation of the complement due to the serum of
Cow No. 1.

It is thus clear that this phenomenon is not due to an
excess of the specific amboceptor. Similar experiments have
been run using the blood of other cows in various combi¬
nations, and always with a similar result. Consequently, so
far as our evidence goes, the essential point in inhibiting the fixa¬
tion of the complement is to have an excess of cow serum. Appa¬
rently, the serum of one cow will answer as well as that of another.

According to the Ehrlich-Morgenroth hypothesis,
the Neisser-Wechsberg phenomenon is essentially an
anticomplementary action. That is, an anticomplement is
assumed to be of the nature of a free amboceptor which has
been cast off into the blood. Hence, we can see at once, that
the objection cited above, viz: that the complement must be
freed from its anticomplement in order to accomplish the
haemolysis, is pertinent to any anticomplementary hypothesis.

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492

Frank M. Surface,

Before discussing further explanations of this phenomenon,
we may consider certain checks upon our technic, in order to
be sure that the result is not an artifact.

In the first place, the amount of antigen added to the
tubes has a considerable influence upon the titre of the serum.
As shown in the following table, if we add various amounts
of our standard antigen to tubes containing decreasing amounts
of reacting cow serum, we can vary the point at which the
fixation of the complement is inhibited.

Table No. III.

Effect of the amount of antigen upon complement fixation.

Serum of ...

Cow No. 1,
56°, 30 min.
c. c.

Amount of antigen

I

| 0.05 c. c.

0.1 c. c. |

0.2 c. c. ]

0.3 c. c. j

0.5 c. c.

0.5

++++

++++

+ + + + |

4--F4-4-

++++

0.3

H—1—1—h

+ + + 4-

4- -f + 4-

+ 4- 4" 4-

++

0.2

4- -f 4- 4-

-f + + +

+ + + -f

4-4-4-

+

0.1

+ + 4- +

+ + + +

+ + + +

4-4-

0

0.05

H—|—|—h

+ + + +

4-4-

+

0

0.03

4- 4- 4- 4-

+ + +

+

0

0

0.01

4-4-4-

+

0

0

0

0.005

+ 4-

0

0

0

0

0.001

0

0

0

o

0

From this table we note, that as we increase the amount of
antigen we may also increase the amount of serum and still
obtain complete fixation. It is, however, evident that the only
effect of varying the amount of antigen is to vary the apparent
titre of the serum. With any amount of antigen which will
not of itself prevent haemolysis, we can find an amount of
cow serum which will prevent the fixation of the complement.
The strength or the amount of antigen is in no sense a cause
of this failure to fix the complement with large amounts of serum.

It is well known that in order for fixation of the com¬
plement to take place readily, it is necessary that a salt should
be present, and, further, that the concentration of the serum
has some effect upon the reaction. If the concentration of
the serum in itself, were the cause of the inhibition of the
fixation, we ought to be able to at least vary the point at
which the inhibition takes place by the addition of varying
amounts of salt solution.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

493

Table No. IV.

The effect of salt solution upon the inhibition of complement fixation.

Serum Cow No. 1,
56°, 30 min.
c. c.

Amount of 0.85 °/ 0 NaCl

1.5 c. c.

2.5 c. c.

3.5 c. c.

5.0 c. c.

0.2

+ + + +

+ + + +

++++

++++

0.1

+ + +

H—1—1-

H—1—h

+++

0.05

+ +

+ +

++

++

0.03

0

0

0

0

0.01

0

0

o

, 0

—

+ + + +

++++

++++

! ++++

From this table, it is clear that it is the actual amount
of serum and not its concentration which prevents the fixation.
1.5 c. c. is the amount of salt solution ordinarily added to our
tubes. There is not the least change in the titre of the serum
if we add more than three times this amount of salt solution.

In the majority of the experiments, I have added 1.5
times the solving titre of the complement. It might of course
be assumed that I have added too much guinea-pig complement,
and that some remained after the saturation of the complement
fixing amboceptors. Since the same amount of complement is
added to each tube, it is not clear just why haemolysis should
occur only in tubes with large amounts of cow serum, unless
there is a complement still remaining in the cow serum after
inactivation. This question will be considered in succeeding
paragraphs, but in that discussion it will be of advantage to
know just how much complement it is necessary to add in
order to saturate the complement fixing amboceptors.

From table I (p. 489), we note that 0.005 c. c. of the
serum of Cow No. 1, will cause complete fixation of the com¬
plement, and that further, it appears about midway between
the two limits beyond which fixation will not occur. In the
following table are shown the result of adding increasing
amounts of guinea-pig complement to tubes containing 0.005 c. c.
of the inactivated serum of Cow No. 1. A simultaneous titration
of the complement showed that for the dose of haemolysin
and corpuscles employed, 0.04 c. c. of a 1 to 3 dilution was
just sufficient to cause complete haemolysis. 0.25 c. c. of the
standard antigen was added to each tube and the tubes were
incubated l 1 /* hours before adding the haemolytic system.

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494

Frank M. Surface,

Table No. V.

Serum of Cow No. 1.
56°, 30 min.

Guinea-pig
complement
diluted 1—3

Result

0.005 c. c.

0.04 c. c.

0

id.

0.06 „

0

0.08 „

0

jf

0.1 „

0

>*

0.13

+

0.15 „

+ +

V

0.18 „

+++

yy

0.2 „

++ + +

From this table, we see that with 0.005 c. c. of the cow
serum and its antigen, it is necessary to add 0.2 c. c. of the
complement dilution in order to produce complete haemolysis.
Without the complement fixing system, 0.04 c. c. of the com¬
plement, will produce complete solution. Thus, this amount
of cow serum is able to fix five times the titre of the com¬
plement, or, expressed quantitatively, that amount of serum
will fix 0.16 c. c. of the complement dilution. If there is a
complement in the inactivated cow serum, then we see by
comparing table 1, that 0.2 c. c. of this cow serum must con¬
tain an amount of complement equal to at least 0.16 c. c. of
the 1 to 3 guinea-pig serum. This matter will be considered
further in the succeeding paragraphs.

We may note in passing, also, that if we use 1.5
times the complement titre, in this case 0.06 c. c., we still
have a wide margin before the bacteriolytic system is satur¬
ated with complement.

In the preceding pages, we have shown that the failure
to fix the complement with large amounts of cow serum is
not due to the linking of the complement by free abortion
amboceptors, i. e., it is not a Neisser-Wechsberg pheno¬
menon. We have further shown that this inhibition of fixation
is not dependent upon the strength or amount of the anti¬
gen, nor upon the concentration of the serum. Further, it
is not due to a surplus of guinea-pig complement. We
may now turn to the consideration of other possible expla¬
nations.

In the preceding pages it has been shown that there is
something in normal cow serum which prevents the fixation

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

495

of guinea-pig complement by sensitized abortion antigen. We
may next consider whether any of the guinea-pig complement
is bound when large amounts of cow serum are present. To
test this, I prepared three large tubes — A, B and C, each
containing cow serum, antigen, salt solution and complement
in the proportions used in regular tests. These proportions
were as follows:

Tubes

Serum Cow No. 1,
56°, 30 min.

Antigen

NaCl

Complement

A

0.5 c. c.

0.25 c. c.

1.5 c. c.

0.05 c. c.

B

o.oi „

id.

id.

id.

C

—

>>

II

The titre of the complement, without antigen, was 0.03 c. c.
These tubes were incubated one and one-half hours and then
varying amounts of the fluid, corresponding to definite amounts
of complement, were placed in small tubes and sensitized
sheep’s corpuscles added. The results are shown in the fol¬
lowing table:

Table No. VI.

Fluid corresponding
to the following j
amounts of
complement

j Tube No.

i A

t B . .

c

Serum

Antigen

NaCl

Complement

2.5 c. c.
1.25 „

7.5 „

0.25 „

0.05 c. e.
1.25 „

7.5 „

0.25 „

1.25 c. c.

7.5 „

0.25 „

Result after adding sensitized
corpuscles

0.01 c. c.

i

0

0

0

0.02 „

+ +

0

+ +

0.03 „

+ + + +

0

+ + + +

0.04 „

+ + + +

o

4- 4- 4- 4-

0.08 „

+ + + 4

0

4- + + +

From this table we note that when serum in the pro¬
portion of 0.5 to 0.25 c. c., of antigen (Tube A) is used no
guinea-pig complement whatever is absorbed by the mixture.
The titre is the same as in the control (Tube C), with an¬
tigen alone. If a smaller amount of serum is employed as
in Tube B, all the complement is absorbed.

If we persist in interpreting this phenomenon on the
basis of Ehrlich’s theories the most plausible explanation

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496

Frank M. Surface,

is to be found in the assumption of ar antiamboceptor in the
cow’s serum. That is, the results so far given could very
easily be explained if there is something in normal cow serum
which is able to unite with the abortion antigen-ambo¬
ceptor complex and thus prevent the absorption of the
guinea-pig complement It is further necessary that this sub¬
stance should have a greater affinity for the abortion ambo¬
ceptor than has the guinea-pig complement. Such a sub¬
stance would be of the nature of a complement or comple-
mentoid.

It will be remembered that in all these experiments we
have used cow serum heated to 56° C for thirty minutes.
Such a procedure ought to destroy all the complement
However in one of his earlier publications Ehrlich 1 ) found
a thermostable complement in the sera of certain cows as well
as of a few other animals. I have tested the sera of a large
number of cows for the presence of a haemolytic complement.
The unheated sera of some cows at least, will dissolve sensi¬
tized sheep corpuscles when sufficient serum is added
(ca. 1.0 c. c). However I have never been able to produce
the slightest haemolysis of sensitized sheep corpuscles with
inactivated cow serum even in doses of 2.5 c. c. serum
to 0.5 c. c. of 2 per cent sheep corpuscles. There is
then no thermostable haemolytic complement, for the system
employed, in the sera of the cows used in these experi¬
ments.

Continuing to reason upon Ehrlich’s hypothesis we
may assume that by heating cow serum to 56° for 30 minutes
we have simply injured or destroyed the toxophore group of
the complement, but left the haptophore group intact. That
is, we have in place of a complement a complementoid. This
complementoid would then be able to unite with the sensi¬
tized bacteria and prevent the union of the guinea-pig com¬
plement. If such were the case we ought also to obtain a
union of this complementoid with sensitized sheep corpuscles.
In this connection I give the two following experiments. The
serum used was from Cow No. 2 (cf. p. 490).

1) Ehrlich und Morgenroth, Berl. klin. Wochenschr., 1899.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc. 497

Table No. VII.

Serum Cow
No. 2
unheated.

c. c.

NaCl.

c. c.

Haem.

c. c.

Corps.

c. c.

Result

Compl.
(Titre
0.03)
c. c.

Result

0.5

1.1

0.25

0.5

Compl. aggl.

0.045

0

0.3

1.3

11

id.

D

0

0.2

1.4

11

Nearly completed

+

0.1

1.5

11

Partial aggl.

+ +

0.05

1.5

11

id.

+ + +

0.02

1.5

11

11

Same serum

i

56 °C, 30 min.

c

2

x;

0.8

0.8

0.25

0.5

Slight aggl.

0.045

03

;+ + + +

0.5

1.1

11

id.

ii

Ih

!++ + +

0.3

1.3

n

11

u

O

No aggl.

ii

«8

+ + + +

0.2

1.4

u

11

id.

ii

o

+ + + +

0.1

1.5

*y

9*

G

i 91

ii

©

++■+■ +

0.05

1.5

yy

11

©

c>

I ii

ii

co

+ + + +

0.02

1.5

ii

11

co

1 V

19 \

+ + + +

From this table we note:

1) That sensitized sheep corpuscles will become saturated
with cow complement when as much as 0.3 c. c. of unheated
cow serum is used.

2) With the larger amounts of unheated cow serum we
get very marked and rapid agglutination of the sensitized
corpuscles (Conglutination of Bordet and Streng).

3) On the other hand there is practically no agglutination
with the inactivated serum and further the corpuscles
dissolve very rapidly on the addition of guinea-pig comple¬
ment. Solution was complete in all tubes at the end of ten
minutes.

It is thus clear that so far as haemolysis is concerned
there is no complementoid in inactivated cow serum capable
of preventing the action of the guinea-pig complement. This
is an argument against the existence of such a substance in
connection with the abortion amboceptors.

We may next discuss the effect of heating reacting cow
serum to various temperatures. Holth 1 ) has shown that the
abortion amboceptors may be heated as high as 65° C with

1) Holth, Halfdan, Zeitschr. f. Infektionskrankheit. usw., Bd. 10,

1911.

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498

Frank M. Surface,

only a slight loss of complement fixing ability but that 70° C
is about the critical point.

Table No. VIII.

Effect of heat upon the inhibition of complement fixation.

Serum of Cow
No. I

Heated 56° C
for '/, hr.

Heated 62° C
for */* hr.

Heated 65° C
for 7, hr.

0.8

+ + + +

+ + + +

0

0.5

+ + + + 1

H-+ + +

0

0.3

+ + + +

H—j—|—

0

0.2

+ + + + 1

+++

0

0.1

+ + 1

++

0

0.05

+

-f-

0

0.02

0

0

0

0.01

o 1

0

0

0.001

0

0

0

0.0008

0

0

+ +

0.0005

+ 1

+

+ + + +

From this table it is seen:

1) That heating to 62° C does not preceptably change
the titre of the serum from what it is when heated to 56° C.
The points between which complete fixation occur are the
same in either case.

2) If the serum is heated to 65° C for 30 minutes the
inhibition of fixation with large amounts of serum is comple¬
tely locking.

3) There is a slight loss of amboceptors in serum

heated to 65 0 C. Thus 0.0005 c. c. serum heated to 56 0 or

62° had sufficient amboceptors to bind practically all the com¬
plement, but when heated to 65° C this amount of serum
permitted complete haemolysis.

Undiluted cow serum heated to 65° for 30 minutes shows
considerable cloudiness, due to partial coagulation. Control
tests however show that such serum without the abortion
antigen will not fix the complement. Further, if we first dilute
the serum in the proportion of 1 part of serum to 5 parts of
salt solution, no such coagulation takes place on heating to
65°. On testing such serum with antigen the results are the
same as shown above (Table VIII). The fixation with serum
heated to 65° C is due to the presence of abortion ambo¬
ceptors and not to any change in the serum caused by the

heating.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

499

These results can be readily interpreted as due to an
antiamboceptor in the cow serum which has a special affinity
for the abortion amboceptor but which will not unite with the
haemolytic system used. This antiamboceptor will withstand
heating to 62° C but is destroyed by heating at 65° C for
30 minutes. Whether this antiamboceptor is of the nature of
a thermostable bacteriolytic complement, or a complementoid,
has not been determined.

If this antiamboceptor of the cow serum is destroyed by
heating to 65° C and the amboceptor alone remains, we ought
to be able to again inhibit the fixation by adding decreasing
amounts of normal cow serum (56° C, 30 min.) to tubes
containing small doses of serum heated to 65 0 C. The follow¬
ing table shows the result of such an experiment. It will
be remembered that the serum of Cow No. 2 does not contain
abortion amboceptors.

Table No. IX.

Serum of Cow No 1
65°, 30 min.
c. c.

Serum of Cow No. 2
56°, 30 min.
c. c.

Result

0.01

! 1.5

++++

0.01

1.0

++++

0.01

0.5

0

0.01

0.3

0

0.01

0.2

0

0.01

0.1

0

0.01

!

0

Thus we see that it is entirely possible to bring about
the inhibition of haemolysis by adding inactivated (56° C)
serum to reacting serum which has been heated to 65°. The
behavior is exactly what would be expected if we were adding
an antiamboceptor.

If this inhibition of fixation is due to the presence of an
antiamboceptor we ought to be able to absorb this from the
serum along with the abortion amboceptors. The following
tables give the results of such experiments. The antigen used
in these cases was a rather dense suspension of the abortion
bacilli in salt solution. This antigen had a titre of 0.02 c. c.
when tested with 0.005 c. c. of the serum of Cow No. 1. Six
15 c. c. centrifuge tubes were made up as indicated at the
heads of the columns numbered A, B etc. (cf. tables X and XI).

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500

Frank M. Surface,

These tubes were incubated one and one-balf hours and then
were centrifuged hard (ca. 6000 rev. p. m.) for 40 minutes.
This threw down almost all the suspended bacteria. There
were no doubt a few remaining but the supernatant fluid was
perfectly clear. This fluid was carefully pipetted off and tested
for its amboceptor content as well as for its power to inhibit
fixation. 0.25 c. c. of the regular antigen was added to each
tube, together with 0.05 c. c. complement. After one hour
sensitized corpuscles were added. Sufficient quantities of the
fluid were taken in each case to be equivalent to the actual
amount of serum shown in column 1 of table X. The volume
in the tubes were made equal except in cases where the total
volume of the fluid was over 3 c. c. The serum in every case
was from cow No. 1 and inactivated at 56° for 30 minutes.

Table No. X.

Titration of cow serum previously treated with abortion antigen.

Amount of
serum. (Al¬
lowance made
for the dilu¬
tion in each
case)

c. c.

Tube No.

A

B

c

D

E

Serum

I Antigen
NaCl

5.0 c. c.
2.0 „

7.0 „

2.5 c. c.
2.0 „

9.5 „

1.0 c. c.
2.0

11.0 „

0.3 c. c.
2.0 „
11.7 „

2.5 c. c.

11.5 c. c.

Result of testing centrifuged fluid. 0.25
added to each tube.

c. c. regular antigen

0.3

+ +

0

+

_

+ + + +

0.2

+

0

+ + +

++++

+ + +

0.1

0

0

+ + +

+ 4- 4- +

+

0.05

0

0

+ + + +

+ + + +

0

0.03

0

0

+ + + +

+ + + +

0

0.01

1

0

0

+ + + +

+ + + +

0

0.005

+ +

+ + + +

+ + + +

+ + + -f

0

0.001

++++

+ + + +

+ + + +

+ + + +

+++

From this table we note:

1) By comparing column A with column E we see that
treating the serum with antigen has lowered the amboceptor
content. In the control tube E, 0.005 c. c. of serum gave
complete fixation while in A, 0.005 c. c. gave only partial
fixation.

2) We further note from these two colums that a portion
of the antiamboceptors have also been absorbed. Thus in A,
0.3 c. c. serum gives only partial haemolysis, while in E it
gives complete solution.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

501

3) In B where a smaller amount of serum was digested
with the same amount of antigen, we find that relatively more
amboceptors and antiamboceptors have been absorbed.

4) In columns C and D practically all the amboceptors have
been absorbed, giving complete haemolysis in nearly all tubes.

We may next test this treated antigen from the above
centrifuge tubes. This antigen should be saturated, in some
tubes at least, with the abortion amboceptors. Further it
should have absorbed a considerable amount of the anti¬
amboceptor in the tubes with the larger amounts of serum.

As noted above this antigen was removed from the
serum by centrifuging. It was then washed twice with
10 c. c. of salt solution to remove all traces of serum. After
the last washing the antigen was resuspended in 10 c. c. of salt
solution making a dilution of the original antigen of 1 to 5.

Decreasing amounts of this treated antigen from each
centrifuge tube were added to test tubes containing salt
solution and complement. After incubating l 1 /* hours, sen¬
sitized sheep corpuscles were added. The results are shown
in the following table.

Table No. XT.

Titration of antigen previously treated with various amounts of reacting

cow serum.

Antigen cen-j
trifuged from 1
tubes and |
washed twice

Tube No.

A

B

C

D

F

Serum

Antigen

NaCl

d

0

OOO
iocq t>

2.5 c. c.
2.0 „

9.5 ,.

1.0 c. c.
2.0 „
11.0 „

0.3 c. c.
2.0 „
11.7

2.0 c. c.
12.0 „

Amount of
original
Antigen
c. c.

0.05 c. c. guinea-
following tubes, i

pig complement added to each of the
Sensitizea sheep corpuscles added after
l 1 /* hours

0.1

0

0

0

0

0 l )

0.08

+

0

0

0

0

0.06

++

+

0

0

0

0.05

+++ 1

+ +

0

0

0

0.04

++++

+ + + +

+

+ +

+

0.03

++++

+ + + +

+ + +

+ + + +

+ +

0.02

++++

+ + + +

+ + + +

+ + + +

+ + + +

0.01

++++

+ + + +

+ + + +

+ + + +

+ + + +

0.005

++++

+ + + +

+ + + +

+ + + +

+ + + +

1) 0.005 c. c. inactivated serum of Cow No. 1 added to each tube in
this column. Controls without serum gave complete haemolysis in very tube.

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502

Frank M. Surface.

From this table we note:

1) That it is necessary to add the equivalent of 0.1 c. c.
of the original antigen from tube A in order to get complete
fixation.

2) In tube C where the same amount of antigen was
digested with only one fifth the serum used in tube A it is
necessary to add only one-half the amount of antigen, viz:
0.05 c. c., to get complete fixation.

3) In tube D where a still smaller amount of serum was
used the results are similar to C, except that here apparently
there were not sufficient amboceptors to saturate the rather
large amount of antigen.

4) The control tube F indicates that in tube C the antigen
was saturated with amboceptors but that there were not enough
anti-amboceptors to interfere with the fixation of the complement.

5) These results are best explained by assuming that the
antigen, in addition to absorbing the specific amboceptor, has
also absorbed the anti-amboceptor. In those tubes where
sufficient serum was present the complementophile groups of
the amboceptors have been plugged by the anti-amboceptor.

In the preceding paragraphs we have shown that an
excess of cow serum will prevent the fixation of guinea-pig
complement by sensitized abortion antigen. We have shown
that this occurs independently of whether the cow is or is not
infected with the disease. We have further shown that the
phenomenon can readily be explained by the assumption of a
thermostable anti-amboceptor in cow serum having a marked
affinity for the abortion amboceptor.

We may now consider briefly whether this phenomenon
may not also be explained on some other hypothesis.

So far as the writer can see the facts, the hypothesis of
Neufeld and H&ndel 1 ) that the fixation of complement is
due to a special amboceptor (Bordet amboceptor) does not
aid us in interpreting the above results.

According to the view of Bordet and his school the
complex formed by the union of antigen and antibody is ca-

1) Neufeld und Handel, Arb. a. d. Kais. Ges.-Amt, Bd. 28, 1908,
p. 197—213.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

503

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pable of absorbing the complement after the method of mole¬
cular adhesion. They do not admit the existence of a chemical
interbody with two affinities. Thus Bordet believes that the
complement is fixed by means of the specific precipitate formed
by the union of antigen and antibody. Further Bordet does
not admit the existence either of more than one kind of com¬
plement or of complementoids.

That complement can be absorbed by specific precipitates is no longer
doubted but there is a great difference of opinion as to whether this is the
explanation of all complement fixation. Moreschi 1 ) and M or esc hi
and Pfeiffer 2 ) in 1906 advanced the view that complement fixation was
due to the precipitate. In the previous year Gay 3 ) had shown that the
Neisser-Wechsberg phenomenon was capable of explanation in this
manner. Muir and Martin 4 5 ), Klein 6 7 ) and others advanced views
which tended to show the relation of precipitation and complement
fixation.

On the other hand Neisser and Sachs 6 ), Friedberger*) and
others were able to obtain fixation under conditions in which no visible
precipitate was formed. Dean 8 ) has recently reviewed this subject and
studied the relationship between precipitation and complement fixation.
Dean has been able to show 1) that there is a definite relationship bet-
w T een these two phenomena, especially when precipitating sera and their
antisera are used. He has always found that when fixation occurs there
is also a precipitate formed. In many cases this precipitate is very slight
in amount and unless special care is taken it may easily escape observation.

2) He has further shown that the conditions which are most favorable for
the formation of a rapid and large precipitate are not favorable for com¬
plement fixation. He believes that the most favorable conditions for com¬
plement fixation are where slow and incomplete precipitation occurs. In
such cases the individual particles of the precipitate are extremely small
and he suggests that there may be a relationship between the increased
surface thus offered and the fixation of the complement.

1) Moreschi, C. ? Centralbl. f. Bakt., Abt. I, Ref., Bd. 38, 1906,
Beiheft, p. 96.

2) Moreschi und Pfeiffer, Berl. klin. Wochenschr., 1906, p. 35.

3) Gay, F. P., Ann. de l’lnst. Pasteur, T. 19, 1905, p. 593; Centralbl.
f. Bakt., Abt. I, Orig., Bd. 39, 1905.

4) Muir, R., and Martin, W. B. M., Journ. of Hyg., Vol. 6, 1906.

5) Klein, A., Wiener klin. Wochenschr., 1905, p. 1261.

6) Neisser, M., und Sachs, H., Berl. klin. Wochenschr., 1905,
p. 1388.

7) Friedberger, E., Deutsche med. Wochenschr., 1906, p. 578.

8) Dean, H. R., Zeitschr. f. Immunitiitsforseh., Teil I, Orig., Bd. 13,
1912, p. 84.

Zeitschr. f. ImmuniUtsforschung. Orig. Bd. XVII. 34

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504

Frank M. Surface,

In my experience, infectious abortion is not a good sub¬
ject for the study of precipitation, at least with the antigens
I have used. There is, however, very marked agglutination
and to some extent precipitation even using serum heated to
56° C. I have attempted to see if I could discover any relation
between the inhibition of fixation and precipitation. So far I
have not been able to do this to any marked extent. Thus if
we prepare several tubes containing salt solution and reacting
cow serum (Cow No. 1 — 56° C, 30 minutes) in the proportion
of 0.5, 0.3, 0.2, 0.1, 0.05 and 0.02 c. c. together with 0.25 c. c.
of the antigen, we find that agglutination begins to show after
about 2 hours incubation but it appears almost simultaneously
in all the tubes.

Further it is probable from the data given in table No. II
(p. 491) that a specific precipitate, at least, is not responsible
for the inhibition. It was shown there that fixation could be
inhibited by the addition of a non-reacting serum. We have
no reason to believe that the addition of a non-reacting serum
will increase either the rapidity or the amount of the specific
precipitate or that it would cause the formation of larger floculi.

It would appear, therefore, that the cause of this inhibition
is to be found in some property inherent in cow serum and
is not dependent upon the presence or absence of the specific
abortion antibodies.

We know that cow serum possesses certain peculiar
properties not found in the majority of other sera. One of
these is the conglutinin first discovered by Bordet and Gay 1 )
and studied more especially by Bordet and Streng and
others. It is not impossible that the phenomena described in
this paper may bear some relation to conglutination. This
phase of the subject is now being studied and will be reported
in a subsequent paper.

One further point of some practical importance in the
use of complement fixation for the diagnosis of this disease
may be pointed out As has been noted already, the amount
of serum necessary to inhibit fixation varies with different

1) Bordet, J., and Gay, F. P., Annales de l’Inst. Pasteur, T. 22,
1908, p. 625.

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The inhibiting effect of excess cow serum etc.

505

cows. We further know that the sera of different cows differ
in their content of complement fixing amboceptors. From this
it follows that if we use either too much or too little serum
we will get a negative reaction, whereas with the proper amount
of serum the cow would have shown a positive reaction. The
following table is selected from tests of a large number of cows.

Table No. XII.

Titration of the sera from different cows.

Amount
of serum

Cow No.

ccm

I

II

III

IV 1

V

VI

vn

vin |

1 IX

0.8

+ + + +

++++

++++

++++

++++

++++

++++

++++++++

0.5

+ + + +

++++

++

++++

+ 4- + +

++++

+++

++++ ++++

0.4

+ + + +

++++

+

++

++

++++

0

+++

4- + 4-4-

0.3

+ + + +

+++

0

0

+

+ + + +

0

++

++++

0.2

+ + +

++

0

0

0

++

0

+

++++

0.1

+

0

0

0

0

0

0

0

+ + + +

0.08

0

0

+

0

0

0

0

0

+ +

0.05

0

0

+++

0

++ +

0

0

0

+

0.03

0

0

++++

0

++++

0

0

0

0

0.01

0

0

++++•

0

■++++

++

0

0

0

0.008

0

0

+ + + +

0

1 +■ + + +

+++

++

0

0

0.005

0

+

++++

0

+ + + +

++++

++++

0

0

0.003

0

+ +

0

++

++

0.001

+

+ 4- + + I

0

+++ +

++++

0.0008

+ + +

++++

++

++++■++++

0.0005

+ +++

++++

!

+++

1

++++,++++

From this table we see that in order to be certain as to
whether a cow shows any reaction or not it is necessary to
use a number of tubes with different amounts of serum.

It further shows that the use of tubes containing 0.2, 0.1,
0.05 and 0.02 c.c. of serum, which we have adopted in our
routine work, will be very likely to show any trace of a posi¬
tive reaction if such exists.

Zusammenfassung.

Ein UeberschuB des Euhserums in der Komplement-
ablenkungsreaktion bei infektidsen Abortus wirkt hemmend:
es werden die Ursachen dieser Hemmungswirkung und die
dabei in Betracht kommenden quantitativen Verhaltnisse naher
untersucht.

34*

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Qrigiral from

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506

E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

Xaclulruck verboten.

[Aus dem Pharmakologischen Institut der Universit&t Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung f(lr Im-
munitatsforschung und experimentelle Therapie, Leiter: Prof.

Dr. E. Friedberger).]

Die Bildung eines aknt wirkenden Giftes (Anaphylatoxin)

aus Toxlnen (Tetanus, Diphtheric, Schlangengift).

(Ueber Anaphilaxie. XXXIV. Mitteilung.)

Von E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai.

(Eingegangen bei der Redaktion am 10. Februar 1913.)

I. Einleitung.

Auf der Naturforscherversammlung in Konigsberg 1 ), auf
der Friedberger auf Grund umfassender Versuche fiber
den engen Zusammeuhang zwischen Ueberempfindlichkeit und
Infektion berichtete und die „Anaphylaxie als eine
akutereForm der Infektion, dielnfektion als eine
protrahierte mildere Form der Anaphylaxie 14
auffaBte, glaubte er ausdrucklich noch die Toxikosen, Diph¬
theric und Tetanus, fur diese Betrachtungsweise ausschlieBen
zu sollen.

Im folgenden Jahre konnte aber bereits wiederum fiber
Versuche berichtet werden 2 3 ), auf Grund deren die friiher ge-
machte Einschrankung nicht als unbedingt notwendig erschien.
Naheres fiber diese Versuche ist auf der Naturforscherver¬
sammlung in Karlsruhe im September 1911 mitgeteilt 8 ).

Friedberger berichtete hier fiber Versuche mit S. Mita,
in denen es gelungen war, regelmaBig aus gewissen Dosen
von Tetanustoxin durch die Bebrfitung mit normalem Meer-
schweinchenserum ein fiir die gleiche Tierspecies akut tod-
liches Gift vom Charakter des Anaphylatoxins zu erhalten.

1) Vgl. auch BerL klin. WooheDschr., 1910, No. 32 u. 42; Milnch.
med. Woehenschr., 1910, No. 50; Deutsche med. Wochenschr., 1911, No. 4,
7ff. (Verhandlg. d. Vereiiis f. inn. Med.); Zeitschr. £. Immunitiitsf., Bd. 10,
1911, Heft 1, 2 (18. Mitteilung, ^chluBbetmchtung).

2) Friedberger u. Schiitze, Berl. klin Wochenschr., 1911, No. 9.

3) Berl. klin. Wochenschr., 1911, No. 42.

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Go>. >gle

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Die Biklung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen. 507

Die Giftabspaltung gelang nicht bei Verwendung inaktiven
Serums. DaB das Gift tatsiichlich aus dem „Toxin“ selbst, d. h.
jenern Bouillonkulturfiltrat, das der Tr&ger der charakteristi-
schen Giftwirkung ist, stammt, konnte experimentell erwiesen
werden.

Es lag ja zunachst nahe, die Anaphylatoxinbildung auf die
sekund&re Verunreinigung mit saprophytischen
Bakterien zuriickzufiihren, wie das von Dold und Unger¬
man n 1 ) geschehen ist, die bei entsprechenden Versuchen nur
dann eine Giftbildung sahen, „wenn stSrkere bakterielle Ver¬
unreinigung der Flussigkeit vorlag“. Unter anderen Be-
dingungen erhielten sie das Gift nicht, und sie wenden sich
daher gegen die Ansicht, „dafi es sich bei der Einwirkung des
Komplementserums auf das Toxin um einen tiefergreifenden
Eiweifiabbau, wie er fur die Anaphylatoxinbildung aus EiweiB
angenommen wird, handelt u . [Diese Autoren beobachteten aber,
in Uebereinstimmung mit Slteren Versuchen von de Waele 2 ),
daB durch Digerierung von Toxin mit Komplement die In-
kubationszeit verkiirtzt wird, was sich auch aus denjenigen
unserer Versuche ergibt, in denen akuter Tod nicht eintritt.]
Da aber, wie bereits in der vorerwiihnten Arbeit (Berl. klin.
Wochenschr. 1911 No. 42) von uns mitgeteilt wurde, die Ana¬
phylatoxinbildung auch unter aseptischen Kautelen gelingt, so
ist der Einwand von Dold und Ungermann hinfallig.

In dem zitierten Vortrag Friedbergers ist ferner be¬
reits die Moglichkeit diskutiert, daB das Anaphylatoxin sich
aus dem Pep ton des Niilirbodens bildet, daB dem Bakterien-
toxin anhaftet. Wie niimlich Mita und Friedberger 3 ) zu-
erst gezeigt haben, gelingt es aus Wittepepton akut wirkendes
Anaphylatoxin abzuspalten 4 .

Auch Besredka hat aus Pepton Anaphylatoxin erhalten;
jedoch merkwiirdigerweise nur, wenn er es vorher mit Nahr-

1) diese Zeitschr., Bd. 11, 1911, p. 86.

2) Ibid., I’d. 3, 1909, p. 478.

3) Deutsche med. Wochenschr., 1911; Vortr. Verein f. innere iled.,
9. Jan. 1911, Diskussion.

4) Besredka teilt diese Tatsache in Unkenntnis unserer Versuche
2 .Jahre spiiter als neu mit; Doerr schreibt sie zu Unrecht gleichfalls diesem
Alitor zu (C'entralbl. f. Bakt., Bd. 67, H. 1/2).

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Go^ 'gle

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508 E. Friedberger, S. Mita and T. Kumagai,

agar mischte. Die Annahme, daB zur Giftabspaltung eine
Bindung an Agar notwendig ist, entspricht aber, wie sich aus
den Versuchen von Friedberger und Mita ergibt, nicht
den Tatsachen. Die Peptonmengen, die notwendig sind, urn
Anaphylatoxin abznspalten, sind bedeutend h8her, als die-
jenigen Dosen des Tetanustoxins, aus denen die Anaphyla-
toxinbildung gelingt.

Aronson 1 ), der im tibrigen unsere Versuche bestfitigte,
gibt an, nur aus erheblich groBeren Mengen von Tetanusgift
Anaphylatoxin erbalten zu haben. Bei ihm gaben dann auch
entsprechende Mengen von Trockenbouillon ein akutes Gift.
Es dttrfte das darauf zurttckzufflhreu sein, daB vielleicht in
den Versuchen von Aronson nur ein relativ schwach wirk-
sames Tetanusgift zur Verwendung kam, so daB also seine
getrocknete Tetanusbouillon sich nicht sehr unterscheiden
mochte von der gewShnlichen N&hrbouillon. Wenn das Gift
wirklich aus dem NShrmedium stammte, so w&re es nicht zu
verstehen, weshalb bei etwas groBeren Dosen der Giftmatrix, bei
denen der akute Tod ausbleibt, regelmaBig eine Beschieu-
nigung der spezifischen Giftwirkung eintritt, die docli nur
schwerlich durch das N&hrsubstratund die VerSnderungen, die es
unter dem EinfluB des Komplements erleidet, eine Erkl£rung
findenkann. Aber der ganze Einwand wird, wie Friedberger
schon bei anderer Gelegenheit hervorgehoben hat 2 ), dadurch
widerlegt, daB die Giftbildung nicht nur aus Tetanusgift und
Diphtheriegift gelingt, sondern auch aus Schlangengift, bei
dem ja die Intervention eines Nahrmediums iiberhaupt aus-
geschlossen ist.

Es kann also kein Zweifel dariiber bestehen, daB im
Reagenzglas aus den sogenannten Toxinen durch die Ein-
wirkung des normalen Blutserums sich ein akut todliches
Anaphylatoxin abspalten liiBt, das nun bei iSngerer Ein-
wirkung des Serums in vollig atoxische Komponenten ab-
gebaut wird. Dabei miissen wir es freilich dahingestellt sein
lassen, welcher Bestandteil in jenem Gemenge von Bakterien-

1) Bed. klin. Wockenschr., 1012.

2) Ibid., Verhandl. der Bed. Mikrobiol. Ges. Sitzung v. 28. Marz
1912 ibid.

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Die fiildung ewes akut wirkenden Giftes aus Toxin en.

509

stoffwechselprodukten in Bouillonkulturen, das wir mit dem
Namen Toxin bezeichnen, es ist, aus deni sich das Ana*
phylatoxin bildet. Diese Frage muB so lange unentschieden
bleiben, als wir fiber die wahre Natur des Toxins nichts
wissen.

Ebenso wenig vermdgen sie zu sagen, welche Anteile des
als „Gift“ bezeichneten Sekrets der Speicheldrfise der Cobra-
schlange als Muttersubstanz des Giftes in Frage kommen.

Friedberger hat schon in seinem vorerw&hnten Vor-
trag darauf hingewiesen, wie sehr die Bedingungen im Tier-
korper denen im Reagenzglas bei unserer Versuchsanordnung
entsprechen, und so dfirfen wir annehmen, dafi auch bei den
echten Toxikosen das Anaphylatoxin eine Rolle spielt. Es
wurde dabei offen gelassen, „ob daneben noch besondere
spezifische Gifte bestehen, oder ob auch die ffir die einzelnen
Toxine charakteristische differente Wirkung, wenigstens zum
Teil, nur durch die besonderen Bedingungen der Giftbildung
und durch besondere biologische Verhaltnisse der Erreger ver-
ursacht ist. tt

Es wurde damals der Versuch unternommen, die Anti-
toxinwirkung befriedigend unter den gleichen Prinzipien zu
erklfiren, wie die Wirkung der AntieiweiBsera im allgemeinen,
und Friedberger glaubte auf Grund der Versuche an¬
nehmen zu sollen, daB der scharfe Unterschied, den man bisher
zwischen antitoxischen und antibakteriellen Seris gemacht hat
und dementsprechend auch zwischen den homologen Anti-
genen, nicht berechtigt erscheint. Der ProzeB der Einwirkung
eines Antiserums auf das homologe EiweiB besteht unter
Mitwirkung des Komplements darin, daB zunfichst ein Gift
gebildet wird und dies wieder in ungiftige Spaltprodukte weiter
zerlegt wird.

„Es ist nun ohne weiteres klar, daB die Entgiftung fiber
ein besonderes giftiges Zwischenprodukt hinaus zu ungiftigen
Spaltprodukten um so leichter gelingen muB, je kleiner bei
einer gewissen konstanten Antiserummenge die Antigendosis
ist. Daher ist die Entgiftung, so paradox das zunfichst er-
scheinen mag, am vollstandigsten gerade bei den besonders
toxischen EiweiBkorpern, bei denen die als todliche Dosis im

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510

E. Friedberger. IS. Mita und T. Kumagai,

biologischen Versuch Oder in natiirlichen Infektionsverhalt-
nissen in Frage kommende EiweiBmenge eine sehr geringe ist.

Denn die Leichtigkeit der Entgiftung hSngt ja nicht von
der primSren Giftigkeit ab, sondern von der relativen Menge
des zu entgiftenden EiweiBkomplexes. Je kleiner die toxische
EiweiBmenge ist (und geratle bei giftigem Eiweifi ist sie
immer ja sehr klein), um so leichter ist die Entgiftung, die
hier sogar ganz gesetzmaBig verlaufen kann, namlich nach
dem bekannten Ehrlichschen Gesetz der multiplen Pro-
portionen.

Bei an sich relativ ungiftigem EiweiB aber (Bakterien-
leiber, artfremde Sera hbherer Tiere usw.) ist die todliche
Dosis natiirlich eine enorm viel hohere und dementsprechend
die Entgiftung durch Immunserum viel schwieriger.

Hier kommt es meist nur bis zum partiellen Abbau in
die akut toxischen Spaltprodukte (Anaphylatoxin).“

„Je ungiftiger jedoch ein EiweiB an sich ist, um so groBere
Dosen man dementsprechend zur toxischen Wirkung nbtig hat,
um so schwerer ist die Entgiftung des dann reichlich ent-
stehenden Anaphylatoxins auch durch groBe Mengen von
Immunserum. u

„Deshalb kann man wohl gegeniiber Bakteriengiften,
Scldangengift, Aalserum usw. mit Antiserum leicht eine anti-
toxische Wirkung nach dem Gesetz der Multipla erzielen,
nicht aber z. B. gegeniiber Hammelserum. Wenn man aber
bei relativ wenig giftigem EiweiB nicht die todliche Dosis
zum MaBstab nimmt, sondern mit den minimalen, fieber-
erzeugenden Mengen arbeitet, so gelingt es auch, derartiges
Antiserum zu entgiften. Solche Versuche haben wir z. B. mit
der fiebererzeugenden Dosis von Tuberkelbacillen und Anti-
tuberkuloseserum angestellt. Es ergab sich, daB es durch das
Immunserum gelingt, allerdings bei Verwendung groBer Mengen,
die tiebererregende Wirkung ganz nach denselben Gesetz-
miiBigkeiten zu neutralisieren, wie wir das bezuglich der tod-
lichen Dosis von Toxin durch das Antitoxin kennen. tt (Berl.
klin. Wochenschr. No. 42.)

Im Nachsteuden lassen wir nun die Versuche folgen, die
ndt verschiedeuen „Toxinen“ angestellt wurden.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen. 511

II. Ueber die Anaphylatoxinabspaltung aus Tetanusgift und

Diphtheriegift.

Von E. Friedberger und S. Mita.

Zu den Versuchen, fiber die im nachstehenden berichtet
wird, diente ein Tetanusgift des Frankfurter Instituts fiir
experimentelle Therapie, das wir der Liebenswiirdigkeit von
Exzellenz Ehrlich verdanken.

Es handelt sich urn ein Trockengift, das wir in Kochsalz¬
losung gelost und durch Chamberlandkerzen filtriert benutzten.
Es folgt zun&chst eine Versuchsreihe iiber Abspaltung des
akut . wirkenden Anaphylatoxins aus diesem Tetanustoxin.
In den Kontrollproben wurden gleiche Mengen des gleichen
Giftes anstatt mit normalem Meerschweinchenserum mit
physiologischer Kochsalzlosung behandelt.

I. Versuch der Anaphylatoxinabspaltung aus Tetanustoxin.

0,2 g trockenen Tetanustoxins wurden in 20 ccm physiologischer
Kochsalzlosung aufgelost, dann durch eine Kerze filtriert. Von diesem
Filtrat wurden zwei Reihen mit je folgenden Mengen hergestellt:

0.01 0,00001

0.005 0.0OG005

0.0001 0.000001

0.00005 0,0000005

Die eine von diesen zwei Reihen wurde je mit 4,0 ccrii Komplement
und die andere je mit 4,0 ecm physiologischer Kochsalzlosung versetzt,
1 Stunde bei 37° C und dann 24 Stunden in Zimmertemperatur stehen
gelassen. Diese Mischungen wurden alsdann zentrifugiert und auf ihre
Giftigkeit gepriift.

A u s w e r t u n g. 18. II. 11.

Meerschweinchen M 394, 200 g.

12' i4 0,01 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Keine ernsten Er-
scheinungen nachder Injektion. Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 396, 180 g.

12 :,r ' 0,005 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Sofort Rrampfe
und Spriinge.

12 :i7 Legt sich. Reflexe erloschen.

12 38 Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht; Herz schliigt noch 20 Mi¬
nn ten nach dem Tode; Herzblut flussig.

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512

E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

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Meerschweinchen M 398, 200 g.

12™ 0,0001 g Toxin + 4,0 ccra Komplement iv. Sofort Kriimpfe
und Spriinge.

12 6a Legt sich, Schaum aus der Naae.

12 w Reflexe erloschen. Agonale Atmung.

12 56 Tot

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht, hyperiimisch, Herz schliigt
noch 10 Mniuten nach dem Tode; Herzblut fliissig.

Meerschweinchen M 400, 180 g.

I 9 0.00005 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Sofort Kriimpfe
und Spriinge.

1 10 Legt sich. Reflexe erloschen.

1 11 Agonale Atmung.
l ,5r Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht; Herz schliigt noch 10 Mi-
nuten nach dem Tode; Herzblut fliissig.

Meerschweinchen M 402, 200 g.

I 20 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Sofort sehr
dyspnoisch und deutlich krank.

Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 405, 190 g.
l a7 0,000005 g Toxin -f 4,0 ccm Komplement iv. Gleich nach
der Injektion sehr dyspnoisch und deutlich krank.

Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 406, 190 g.

P 5 0,000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Keine schweren
Erscheinungen.

Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 392, 180 g.

10™ 0,0000005 g Toxin -f 4,0 ccm Komplement iv.

10™ Sehr dyspnoisch, striiubt die Haare.

Tod in der Nacht zum 19. II.

Kontrollversuche. 18. II. 11.

Meerschweinchen M 393, 180 g.

11°°0,01 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung iv. Sofort sehr
dyspnoisch.

II 02 Striiubt die Haare, ab und zu Kriimpfe. Tod in der Nacht
zum 19. II.

Meerschweinchen M 395, 200 g.

12 :J0 0,005 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung iv. Keine Erschei¬
nungen. Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 397, 180 g.

12 45 0,0001 g Toxin -f 4,0 ccm NaCl-Losung iv. Keine Erschei¬
nungen. Tod in der Nacht zum 19. II.

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Die BilduDg eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen.

513

Meerschweinchen M 399, 200 g.

12® 6 0,00005 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Ldsung iv. Keine Erschei-
nungen. Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 401, 190 g.

l l ® 0,00001 g Toxin -f 4,0 ccm NaCl-Losung iv. Keine Er-
scheinungen. Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 403, 190 g.

I* 6 0,000005 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-L5sung iv.

I* 7 Sehr dyspnoisch, deutlich krank. Tod in der Nacht zum 19. II.

Meerschweinchen M 404, 190 g.

1 8# 0,000001 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Ldsung iv. Tier ganz mun-
ter nach der Injektion. Im Verlauf von 2 Stunden gestorben.

Sektionsbefund: Lunge ziemlich stark aufgeblaht, stark ekchymosiert,
Herzblut flussig, Totenstarre nicht deutlich.

Meerschweinchen M 391, 180 g.

10 48 0,0000005 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung iv. Keine
erosten Erscheinungen. Tod in der Nacht zum 19. II.

Id der nachstehenden Tabelle sind die Resoltate der Ver-
suche noch einmal flbersichtlich zusammengestellt; aus ihr
ergibt es sich, daB durch Digerierung mit Komplement sich
aus gewissen, nicht zu groBen und nicht zu kleinen Mengen
von Tetanustoxin ein akut wirkendes Gift abspalten l&Bt.
Ohne vorherige Digerierung mit Komplementserum gelingt das
dagegen in keinem Fall. Nur bei einem Tier (Meerschwein¬
chen M 404) haben wir einen subakuten Tod zu verzeichnen.

I. Versuch.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Doeis des
Tetanusgiftes
(Trockengift)

Zusatz zum
Gift

Resultat

M 394

200

0,01

4,0 Kompl.

tot in 1 Tag

M 396

180

0,005

dgl.

tot in 4 Mm.

M 398

200

0.0001

99

tot in 5 Min.

M 400

180

0,00005

99

tot in 3 Min.

M 402

200

0,00001

99

tot in 1 Tag

M 405

190

0,000005

99

dgl.

M 406

190

0,000001

99

99

M 392

180

0,0000005

97

M 393

180

0.01

4,0 NaCl

tot in 1 Tag

M 395

200

o;oo5

dgl.

dgl.

M 397

180

0,0001

99

9 *

M 399

200

0,00005

99

99

M 401

190

0.00001

99

99

M 403

190

0,000005

99

99

M 404

190

0,000001

1 tot in 2 Std.

M 391

180

0,0000005

99

, tot in 1 Tag

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514

E. Fried berger, Mita und T. Kumagai,

Die folgende Versuchsreihe entspricht in ihrer Anordnung
im wesentlichen der voraufgehenden; nur wurde in der Kon-
trollserie an Stelle von physiologischer Kochsalzlosung inakti-
viertes Meerschweinchenserum zur Digerierung benutzt.

EL. Versuch der Anaphylatoxinspaltung aus Tetanustoxin.

0,2 g trockenen Tetanusgiftes wurden in 20 com physiologischer Koch-
salzlbsung aufgelbst, dann durch eine Kerze filtriert. Von dem Filtrat
warden zwei Reihen mit je folgenden Mengen hergestcllt:

0,01 0,00X15

o.u‘5 o.ouooi

0.001 OAiOuOS

0,1" K >5 0,0 HX.K )1

u.uooi ommx

Die eine von diesen zwei Reihen wurde je mit 4,0 ccm Komplement
und die andere je mit 4,0 inaktiviertem Meerschweinehen serum (gleiche
Mischung) versetzt, dann 1 Stunde bei 37° G und danach 24 Stunden in
Zimmertemperafur stehen gelassen. Alsdann wurden diese Mischungen
zentrilugiert und die obenstehende klare Fliissigkeit auf Giftigkeit gepriift.

22. II. 11. Meerschweinehen M 422, 200 g.

4 2: * 0.01 g Toxin -f 4,0 ccm Komplement iv. Tier zeigt keine
erlisten Erseheinungen, bis auf Dyspnoe.

23.11.11. 12™ Tod unter dem typischen JBild von Tetanus.

Sektionsbefund: Lunge nieht aufgebliiht, innere Organe stark hyper-

iimisch, starke Totenstarre, Herzblut fliissig.

Meerschweinehen M 421, 200 g.

4- ,t Toxin 0,0 0 g + 4,0 ccm Komplement iv.

4 ? ‘ Hiipfen und Kriimpfe.

4* 6 Neue Kriimpfe, fc?ekaum aus der Xase.

4 ;l Rellexe erloschen.

4 T * Tot.

Sektionsbefund: Lungen stark aufgebliiht, ekchymosiert; Herz schliigt
noch 10 Minuten nach dem Tode; Herzblut fliissig.

Meerschweinehen M 420. 190 g.

4 1 ' 1 0,(301 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Keine ernsten
Erseheinungen.

24.11.11. 5™ p. m. Tod unter dem Bild von Tetanus.

Sektionsbefund: Lunge nieht aufgebliiht; Herzblut fliissig.

Meerschweinehen M 419, 190 g.

4 12 0.0X35 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Nach der In-
jektion keine Erseheinungen, bis auf Dyspnoe, Tod im Laufe
der Xaeht zurn 23. II.

Sektionsbefund: die Leichenstarre nieht ausgepriigt; Lunge wenig auf¬
geblaht, stark hvperiimisch, Herzblut fliissig.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen.

515

Meerschweinchen M 418, 190 g.

4° 0,0001 g Toxin + 4,0 cem Komplement iv. Keine ernsten
Erscheinungen nach der Injektion. Tod irn Laufe der Nacht
zum 25. II.

Bektionsbefund: Lunge blaO, liicht aufgebliiht; Herzblut koaguliert;
deutliche Totenstarre.

Meerschweinchen M 417, 190 g.

4 00 0,00005 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv. Nach der In¬
jektion keine ernsten Erscheinungen, bis auf Dyspnoe.

23. II. 11. 12 s0 Tod unter dem Bild von Tetanus.

Bektionsbefund: Lunge nicht aufgebliiht; hyperiimisch, Herzblut
fiiissig.

Meerschweinchen M 416, 190 g.

3 65 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv.

3 : ' 6 Behr dyspnoisch, sonst keine weitere Erscheinung.

24.11.11. 5 00 p. m. Tod unter dem Bild von Tetanus.

Bektionsbefund: Lunge stark hyperiimisch, nicht aufgebliiht; Herz¬
blut fliissig.

Meerschweinchen M 415, 190 g.

3 5a 0,000005 g Toxin + 4.0 ccm Komplement iv. Keine ernsten
Erscheinungen.

I 00 p. m. Tod unter dem Bild von Tetanus.

Sektionsbefund: Lunge stark hyperiimisch, nicht aufgebliiht; Herz¬
blut fliissig.

Meerschweinchen M 413, 190 g.

3 12 0,000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement iv.

3 48 Behr dyspnoisch, striiubt die Haare.

4 13 Knimpfe.

4 14 Liegt auf der Seite, Schaum vor der Nase, Reflexe erloschen.

4 15 Agonale Atmung, Tod.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht, ekchymosiert; Herz schliigt.
10 Minuten nach dem Tode; Herzblut fliissig.

Meerschweinchen M 411, 200 g.

3" 0,0000005 g Toxin -f 4,0 ccm Komplement iv. Keine ernsten
Erscheinungen bis auf Dyspnoe. Tier bleibt gesund.

Kon trollversuch.

Meerschweinchen M 430, 180 g.

6 00 0,01 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meersclnveinchenserum
iv. Keine ernsten Erscheinungen.

23.11.11. 12™ Tod unter dem Bild von Tetanus.

Bektionsbefund: Lunge wenig aufgebliiht, hyperiimisch. Herzblut
fliissig.

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516

E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

Meerschweinchen M 429, 180 g.

5 f ’ 6 0,005 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum
iv. Keine ernsten Erscheinungen.

24. II. 11. Tier starb im Laufe der Nacht zum 24. II.

Sektionsbefund: ausgepragte Totenstarre; Lunge nicht aufgeblaht,
stark hyperiimisch; Herzblut fliissig.

Meerschweinchen M 428, 180 g.

5 37 0,001 g Toxin + 4,00 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine ernsten Erscheinungen.

Typisches Bild von Tetanus; in der Nacht zum 25. II. gestorben.

Sektionsbefund: ausgepragte Totenstarre; Lunge nicht aufgeblaht,
blafi; Herzblut koaguliert.

Meerschweinchen M 427, 180 g.

5 W 0,0005 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine ernsten Erscheinungen nach der Injektion.
23.11.11. Typisches Bild von Tetanus; Tod in der Nacht zum 24. II.

Sektionsbefund: Lunge wenig aufgebliiht, sehr hyperamisch, ekchymo-
siert; Herzblut fliissig; starke Totenstarre.

Meerschweinchen M 426, 200 g.

5 1 * 0,0001 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine ernsten Erscheinungen.

12 80 Tod unter dem typischen Bild von Tetanus.

Sektionsbefund: starke Totenstarre; Lungen wenig aufgeblaht, stark
hyperiimisch; Herzblut fliissig.

Meerschweinchen M 425, 180 g.

5 01 0,00005 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine ernsten Erscheinungen nach der Injektion.
28. II. 11. Bild von Tetanus. In der Nacht zum 1. III. gestorben.

Sektionsbefund: starke Totenstarre; Lunge kollabiert, hyperamisch;
Herzblut koaguliert.

Meerschweinchen M 424, 180 g.

5 05 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine ernsten Erscheinungen nach der Injektion.
In der Nacht zum 23. II. gestorben.

Sektionsbild: Lunge nicht aufgebliiht, stark hyperamisch; Herzblut
fliissig; starke Totenstarre.

Meerschweinchen M 423, 190 g.

4 50 0,000005 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine ernsten Erscheinungen. Das Tier bleibt
am Leben und gesund.

Meerschweinchen M 414, 190 g.

3 4:> 0,000001 g Toxin 4- 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen¬
serum iv. Keine Erscheinungen.

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Die Bildung ernes akut wirkenden Giftes aus Toxinen. 51 7

25. II. 11. Tetanus. Tod in der Nacht zum 28. II.

SektionBbefund: Leichenstarre stark; Lunge nicht aufgeblaht, hyper-
amisch, Herzblut fliissig.

Meerschweinchen M 412, 200 g.

3 87 0,0000005 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchen-
serum iv. Keine Erscheinungen. Das Her bleibt am Leben
und ist gesund.

No. des
Tieres

Kdrper-

gewicht

Dosis des
Tetanustoxins
(Trockengift)

Zusatz zum
Gift

Besultat

M 422

200

0,01

4,0 Eompl.

tot in 1 Tag

M 421

200

0,005

dgl.

tot in 9 Min.

M 420

190

0,001

yy

tot in 2 Tagen

M 419

190

0,0005

yy

tot in 1 Tag

M 418

190

0,0001

yy

tot in 3 Tagen

M 417

190

0,00005

yj

tot in 1 Tag

M 416

190

0,00001

y?

tot in 2 Tagen

M 415

190

0,000005

jj

tot in 2 Tagen

M 413

190

0,000001

yy

tot in 23 Min.

M 411

200

0,0000005

»

lebt, gesund

M 430

180

0,01

4,0 inakt. Ser.

tot in 1 Tag

M 429

180

0,005

dgl.

tot in 2 Tagen

M 428

180

0,001

yy

tot in 3 Tagen

M 427

180

0,0005

yy

tot in 2 Tagen

M 426

200

0,0001

tot in 1 Tag

M 425

180

0,00005

)j

tot in 7 Tagen

M 424

180

0,00001

yy

tot in 1 Tag

M 423

190

0,000005

yy

lebt, gesund

M 414

190

0,000001

tot in 6 Tagen

M 412

200

0,0000005

yy

lebt, gesund

Auch in diesem Versuch sehen wir, dafi unter Verwendung
von inaktivem Meerschweinchenserum in keinem einzigen
Fall der akute Tod des Tieres eingetreten ist. Aber auch
durch die Digeriernng mit Komplement haben wir in dieser
Versuchsreihe eigentlich nur in einem Fall akuten Tod bei einer
Dosis, die auch in der ersten Versuchsreihe getdtet hat. Bei
kleineren Men gen, die dort gleichfalls auch akutes Gift lieferteni
sehen wir jetzt keinen entsprechenden Effekt. Worauf das
zurfickzufflhren ist, mSchten wir dahingestellt sein lassen.
Vielleicht war die Komplementmischung in dieser Versuchs¬
reihe weniger wirksam.

Die voraufgehenden Versuche waren ohne streng asep-
tische Eautelen durchgefflhrt worden, obwohl auch hier mSg-
lichst steril gearbeitet wurde. Doch war nicht zu vermeiden,
daB bei der linger dauernden Digerierung ein geringes Bak-

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

518

E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai

terienwachstum eintrat. Wir haben in der Mehrzahl der FSlle
die nach dem Zentrifugieren zurtickbleibenden Bodensatze auf
ihren Bakteriengehalt mikroskopisch untersucht. Die Menge
der vorhandenen Keime war so gering, daB es von vorne,
herein ausgeschlossen erschien, sie als Muttersubstanz des
Giftes anzunehmen. AuBerdem bestand kein Parallelismus
zwischen Bakterienmenge und Wirksamkeit des Abgusses.
Wir hatten nicht selten in solchen Fallen, in denen relativ
mehr Bakterien im AusstrichprSparat vorhanden waren, keine
Anaphylatoxinbildung geselien und andererseits in Rohrchen,
in denen mikroskopisch keine oder nur ganz vereinzelte Keime
im Sediment nachgewiesen werden konnten, wieder die Bildung
eines hochwirksamen Giftes beobachtet. Um aber den Ein-
wand, daB das Anaphylatoxin aus saprophytischen verunreini-
genden Bakterien herstammen konne, gBnzlich zu beseitigen,
haben wir die nachstehenden Versuche unter streng aseptischen
Kautelen durchgefuhrt. Wir (iberzeugten uns durch jedes-
malige reichliche Aussaat aus den Giftmischungen auf N&hr-
bbden von der Sterilitat. Nur in einem Fall haben wir eine
geringe Verunreinigung konstatieren kSnnen, aber gerade
hier (Meerschweinchen No. 16) handelt es sich um ein Tier,
das nicht akut einging.

Die Versuche wurden wiederum mit normalem Meer-
schweinchenserum und zur Kontrolle mit physiologischer
Kochsalzlosung angestellt. Wir suchten fernerhin die akut
toxische Dosis unseres Tetanusgiftes an sich in Kochsalzlosung
gelost zu ermitteln.

III. Versuch der Anapbylatoxinabspaltung aus Tetanustoxin.

Von Tetanustoxin wurde 10-proz. Lbsung hergestellt, alsdann durch
eine Kerze filtriert. Mit diesem Filtrat wurde die minimale todliche Dosis
des Tetanustoxins bestimmt.

A. Die Bestimmung der minimalen tbd lichen
Dosis des Tetanustoxins.

22. IX. 11. Meerschweinchen P 4, 230 g.

10 58 0,12 g = 0,05 g pro 100 g Tier iv. Keine Erscheinungen.

Tod in der Nacht zum 23. IX.

Sektionsbefund: Totenstarre sehr ausgepragt.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen. 519

Meerschweinchen P 10, 230 g.

11 08 0,23 g = 0,1 g pro 100 g Tier iv.

II 08 Krampfe, Urinabgang.

11 10 Legt sich.

11 11 Reflexe erloschen, agonale Atmung.

11 12 Tot.

Sektionsbefund: Lunge blafl, stark aufgebliiht; Herz schlagt 10 Min.
nach dem Tode; Herzblut fliissig.

Meerschweinchen P 6, 210 g.

11 16 0,15 g = 0,07 g pro 100 g Tier iv. Keine Erscheinungen.

Tod in der Nacht zum 23. IX. Ausgepriigte Totenstarre.
Meerschweinchen M 12, 200 g.

IP 1 0,14 g = 0.07 g pro 100 g Tier iv.

IP 2 Krampfe.

IP 6 Reflexe sehr trage.

12 00 Erholt sich wieder. Tod in der Nacht zum 23. IX. Ausge-
priigte Totenstarre.

Meerschweinchen M 13, 200 g.

11 87 0,20 g = 0,1 g pro 100 g Tier iv.

11 st * Krampfe, legt sich.

11 89 Reflexe erloschen, agon ale Atmung.

1P° Tot.

Sektionsbefund: Lungen ganz blafi, stark aufgeblaht; Herz schlagt
10 Minuten nach dem Tode.

Meerschweinchen 14, 200 g.

IP 6 0,14 g = 0,07 g pro lOOg Tier iv. Sofort beschleunigte Atmung.
II 49 Seitenlage.

II 64 Erholt sich wieder. Tod in der Nacht zum 23. IX. Aus-
gepragte Totenstarre.

Meerschweinchen M 15, 220 g.

ll 5 * 0,22g = 0,1 g pro 100g Tier iv. Sofort Krampfe und Spriinge.
IP 3 Seitenlage.

11 64 Reflexe erloschen.

11 65 Agonale Atmung.
ll 86 Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgeblaht; Herz schlagt 10 Minuten
nach dem Tode; Herzblut fliissig.

B. Darstellung des Anaphylatoxins aus
Tetanusgift.

Von der hergestellten Giftlosung wurden zwei Reihen mit folgenden
Mengen angesetzt:

0,01 0.000001

0,001 0,0000001

0,0001 0,00000001

0,00001

Zeiticbr. f. ImmuniUiUfortchung. Orif. Bd. XVII. 35

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620

E. Friedberger, 8. Mita und T. Eumagai,

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Diese Verdiinnungen wurden aile zum Volumen von 1,0 ccm aufge-
fiillt; eine Reihe davon je mit 4,0 ccm Komplement, die andere mit je
4,0 ccm physiologischer Kochsalzlosung versetzt, 1 Stunde bei 37 0 C, d&nn
24 Stunden in Zimmertemperatur gehalten, Kultur angelegt, d&nn zentri-
fugiert. Der Bodensatz wnrde mikroskopisch auf Bakterien untersucht

22. IX. 11. 1) 0,01 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. 30 Keime in
einer Oese Auseaatmaterial zur Entwicklung gekoipmen; mikroskopisch
Stabchen und Kokken.

Meerschweinchen M 16, 210 g.

12 17 Intravendse Injektion. Keine Erscheinungen. Tod in der
Nacht zum 23. IX.

Sektionsbefund: Tetanus; keine Lungenblahung.

2) 0,001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Kultur steril; Bodensatz

steril.

Meerschweinchen M 17, 210 g.

12* 6 Injektion.

12* 7 Krampfe. Seitenlage.

12 31 Reflexe erloschen, agonale Atmung

12 3f Tot

Sektionsbefund: Lunge stark aufgeblaht, hyperamisch; Herz schlagt
10 Minuten nach dem Tode.

3) 0,0001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. 1 Keim in einer Oese
Aussaatmaterial zur Entwicklung gekommen. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 18, 210 g.

12 32 Injektion, sofort Krampfe.

12 83 Seitenlage. Schaum vor der Nase.

12 34 Reflexe erloschen, agonale Atmung.

12 36 Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgeblaht, hyperamisch; Herz schlagt
10 Minuten nach dem Tode; Herzblut flussig.

4) 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Kultur steril; Boden¬
satz steril.

Meerschweinchen M 19, 200 g.

12 36 Injektion, sofort starke Krampfe und Spriinge.

12 38 Reflexe erloschen, agonale Atmung.

12 89 Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark geblaht, hyperamisch; Herz schlagt
10 Minuten nach dem Tode; Herzblut flussig.

5) 0,000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Strichkultur steril;
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 20, 210 g.

12 38 Injektion.

12 40 Sehr dyspnoisch, sonst keine Erscheinungen. Tod in der
Nacht zum 23. IX.

Sektionsbefund: Tetanus, keine Lungenblahung.

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Die Bildung eines akut wirkendeu Giftes aus Toxinen. 521

6 ) 0,0000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Strichkultur eterii
Bodensatz steril.

Meerschwein chen M 21, 210 g.

12 M Injektion.

12 54 Hiipfen. Das Tier bleibt am Leben und gesund.

7) 0,00000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement Strichkultur steril;
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 29, 220 g.

1 °° Injektion. Keine Erscheinungen. Das Tier bleibt am Leben
und gesund.

Kontrollversuch.

22. IX. 11. Meerschweinchen M 22 200 g.

1 00 0,2 g Toxin = 0,1 g pro 100 g Tier mit 4,0 ccm NaCl-
Losung iv.

1 01 Sofort Krampfe, Seitenlage.

I 03 Reflexe erloschen, agonale Atmung.

1 03 Tot.

1 ) 0,01 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung. Strichkultur steril; Boden¬
satz steril.

Meerschweinchen M 23, 210 g.

1 04 Injektion. Keine Erscheinungen. Tod in der Nacht zum
23. IX.

Sektionsbefund: Keine Lungenblahung; Tetanus.

2) 0,001 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung. Strichkultur steril. Boden¬
satz steril.

Meerschweinchen M 24, 180 g.

I 08 Injektion. Keine Erscheinungen.

23. IX. 11. 12 45 Tod unter typischem Bild von Tetanus.

Sektionsbefund: Lunge nicht gebliiht.

3) 0,0001 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung. Strichkultur steril. Bo¬
densatz steril.

Meerschweinchen M 25, 210 g.

I 16 Injektion. Keine Erscheinungen. Tod in der Nacht zum
23. IX.

Sektionsbefund: Lunge nicht aufgeblaht, Tetanus.

4) 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung. Strichkultur steril;
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 26, 210 g.

I 18 Injektion. Keine Erscheinungen.

35*

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522 E. Friedberger, S. Mita uud T. Kumagai,

27. XX. 11. 4 00 p. m. Tod unter dem typischen Bild von Tetanus.

Sektionsbefund: Lunge nicht aufgeblaht, Totenstarre ausgepragt.

5) 0,000001 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung. Strichkultur steril:
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 27, 200 g.

I 22 Injektion. Keine Erscheinungen. Das Tier bleibt am Leben
und gesund.

6) 0,0000001 g Toxin + 4,0 ccm NaCl-Losung. Strichkultur steril;
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 28, 230 g.

I 27 Injektion. Keine Erscheinungen. Das Tier bleibt am Leben
und gesund.

III. Versuch.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Dosis des
Tetanus-
toxins

(Trockengift)

Zusatz
zum Gift

Result&t Bemerkungen

P 4

230

0,12

_

tot

in 1 Tage

M 12

200

0,14

—

dgl- ,

P 6

210

0,15

—

99

M 14

200

0,14

—

99

M 15

220

0,22

—

tot

in 4 Min.

P 10

230

0,23

—

dgl.

M 13

200

0,20

—

tot

in 3 Min.

M 16

210

0,01

4,0 Kompl.

tot

in 1 Tage 30 Keime (Stab-

chenu.Kokken)

M 17

210

0,001

dgl.

tot

in 6 Min. steril

M 18

210

0,0001

}|

tot

in 3 Min. 1 Keim

M 19

200

0,00001

99

dgl. steril

M 20

210

0,000001

99

tot

in lTage, „

M 21

210

0,0000001

99

lebt „

M 29

220

0,00000001

99

M 22

200

0,20

99

tot

in 3 Min.

M 23

210

0,01

99

tot

in 1 Tage steril

M 24

180

0,001

99

dgl- „ *

M 25

210

0,0001

99

M *»

M 26

210

0,00001

tot in 5 Tagen „

M 27

200

0,000001

lebt „

M 28

230

0,0000001

99

99 1 99

Auch in dieser Versuchsreihe sehen wir namentlich in
volliger Uebereinstiramung rait Versuchsreihe I, daB nur das
Komplement, aus gewissen mittleren Dosen des Te-
tanustoxins, ein akut wirkendes Gift (Anaphylatoxin) abspaltet.
Die mit physiologischer Kochsalzlbsung digerierten entsprechen-
den Giftquoten ergaben keinen akuten Tod.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen.

523

Analog der vorigen verlief die folgende Versuchsreihe IV f
in der in den Kontrollversuchen wiederum inaktiviertes nor-
males Meerschweinchenseram verwandt wurde.

IV. Versueh der Anaphylatoxinabspaltung aus Tetanustosdn.

10-proz. Tetanustoxinlosung hergestellt, durch Kerze filtriert. Dieses
Filtrat wurde als Ausgangsmaterial fiir die Versuchsreihe yerwendet.

A. Bestimmung der minimalen tSdlichen Dosis
der TetanustoxinlOsung.

25. IX. 11. Meerschweinchen M 59, 230 g.

1 1G 0,23 g = 0,1 g Toxin pro 100 g Tier iv. Keine Erscheinungen.
Tod in der Nacht zum 26. IX.

Sektionsbefund: Lunge nicht aufgeblaht; Tetanus.

Meerschweinchen M 60, 230 g.

1 30 0,35 g = 0,15 g Toxin pro 100 g Tier iv. Sofort Kriimpfe
und Spriinge, Seitenlage.

1 31 Reflexe erloschen. Agonale Atmung.

I 33 Tot.

Sektionsbefund: Lunge aufgeblaht; Herz schliigt noch 20 Minuten
nach dem Tode.

B. Darstellung des Anaphylatoxins aus
Tetanusgift.

Von der hergestellten Tetanustoxinlosung wurden zwei Reihen mit
folgenden Mengen angesetzt.

0,01 0,00001

0,001 0,000001

0,00001 0,0000001

Diese Verdiinnungen wurden alle zum Volumen von 1,0 ccm auf-
gefiillt; eine Reihe je mit 4,0 ccm Komplement, die andere je mit 4,0 ccm
inaktivierten Meerschweinchenserums versetzt, 1 Stunde bei 37°, dann
24 Stunden in Zimmertemperatur gehalten, Strichkultur angelegt, dann
zentrifugiert. Der Bodensatz wurde auch mikroskopisch auf Bakterien
untersucht.

1) 0,01 g Toxin -f 4,0 ccm Komplement. Strichkultur steril. Boden
satz vereinzelte Kokken.

25. IX. 11. Meerschweinchen M 47, 220 g.

12 1S Injektion iv. Sofort sehr dyspnoisch.

12 21 Starke Spriinge. Schaum vor der Xase, Seitenlage.

12” Reflexe erloschen.

12 3 * Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgeblaht, stark byperiimisch; Herz
schliigt noch 10 Minuten nach dem Tode.

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524 E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

2) 0,001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Strichkultur steril. Boden
satz steril.

Meerschweinchen M 48, 210 g.

12 17 Injektion iv.

12 18 Krampfe und Spriinge.

12*° Seitenlage, Schaum vor der Nase.

12 22 Beflexe erloschen.

12 24 Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht; Herz sehliigt noch 10 Mi-
nuten nach dem Tode.

3) 0,0001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Strichkultur steril. Boden-
satz steril.

Meerschweinchen M 49, 210 g.

12 21 Injektion iv. Sofort Krampfe. Schaum vor der Nase.

12 23 Reflexe erloschen. Agonale Atmung.

12 24 Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht, hyperamisch; Herz sehliigt
noch 10 Minuten nach dem Tode.

4) 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement Strichkultur steril.
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 50, 220 g.

12 26 Injektion iv. Sofort Krampfe und Spriinge.

12 28 Reflexe erloschen. Agonale Atmung.

12™ Tot.

Sektionsbefund: Lunge stark aufgebliiht, hyperiimisch; Herz sehliigt
noch 10 Minuten nach dem Tode.

5) 0,000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Strichkultur steril.
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 51, 220 g.

12 29 Injektion iv. Etwas dyspnoisch, sons! keine Erscheinungen
Tier bleibt immer am Leben und gesund.

6) 0,0000001 g Toxin + 4,0 ccm Komplement. Strichkultur steril.
Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 52, 230 g.

12 33 Injektion iv. Keine Erscheinungen. Tier bleibt am Leben.
Kontroll versuch.

25. IX. 11. Meerschweinchen M 61, 240 g.

I 26 4,0 ccm Komplement iv. Keine Erscheinungen.

1) 0,01 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum. Strich¬
kultur steril. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 58, 230 g.

12*" 7 Injektion iv. Keine Erscheinungen.

Tod in der Nacht zum 26. IX.

Sektionsbefund: Lunge nicht aufgebliiht; Tetanus.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen. 525

2) 0,001 g Toxin = 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum. Strich-
kultur steril. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 57, 230 g.

12 56 Injektion iv. Keine Erscheinungen.

26. IX. 11. 3 00 Tod unter dem Bild von typischem Tetanus.

Sektionsbefund: Lunge nicht aufgeblaht.

3) 0,0001 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum.
Strichkultur steril. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 56, 230 g.

12 48 Injektion iv. Keine Erscheinungen.

27. IX. 11. Typischer Tetanus.

3 00 p. m. tot.

Sektionsbefund: Tetanus. Lunge nicht aufgeblaht.

4) 0,00001 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum.
Strichkultur steril. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 55, 210 g.

12 4r ‘ Injektion iv. Keine Erscheinungen. Tier bleibt am Leben.

5) 0,000001 g Toxin -f 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum.
Strichkultur steril. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 54, 230 g.

12 41 Injektion iv. Keine Erscheinungen. Tier bleibt am Leben.

6) 0,0000001 g Toxin + 4,0 ccm inaktiviertes Meerschweinchenserum.
Strichkultur steril. Bodensatz steril.

Meerschweinchen M 53, 210 g.

12 38 Injektion iv. Keine Erscheinungen. Tier bleibt immer am
Leben.

IV. Versuch.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Dosis des
Tetanustoxins
(Troekengift)

Zusatz zum
Gift

Resultat

Be-

merkung.

M 59

230

0,23

tot in 1 Tage

M 60

230

0,45

tot in 3 Minuten

M 47

220

0,01

4,0 Kompl.

tot in 11 Minuten

steril

M 48

210

0,001

dgl.

tot in 7 Minuten

})

M 49

210

0,0001

tot in 3 Minuten

99

M 50

220

0,00001

,,

tot in 4 Minuten

99

M 51

220

0.000001

tt

lebt

99

M 52

230

0,0000001

lebt

99

M 61

240

—

4,0 Kompl.

keine Erscheing.

M 58

230

0,01

4,0 inakt. Ser.

tot in 1 Tage

steril

M 57

230

0,001

dgl.

dgl.

99

M 56

230

0,0001

99

tot in 2 Tagen

99

M 55

210

0,00001

*J

lebt

99

M 54

230

0,000001

1 9

ilebt

99

M 53

210

0,0000001

99

lebt

99

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526

E. Friedberger, 8. Mita und T. Kumagai,

Aus alien den vorhergehenden Versuchen ergibt es sich,
dafi Dosen von Tetanustoxin, die an sicb nicht mehr oder nnr
nach mehreren Tagen giftig wirken, ein akut todliches Gift
abspalten, sobald sie mit normalem Meerschweinchensernm
digeriert werden. Da die Giftabspaltung auch gelingt, wenn
die Mischungen absolut steril gehalten sind, so kbnnen sekun-
dare bakterielle Verunreinigungen nicht als Muttersubstanz
des Anaphylatoxins hier in Frage kommen.

In einer Reihe weiterer Versuche wollten wir nun er-
mitteln, ob sich Toxin-Antitoxingemische bei vorheriger Dige-
riernng mit Komplement anders verhielten als ohne dieses.
Zu diesem Zweck wurde zun&chst die innerhalb 24 Stunden
todliche minimale Dosis von Tetanusgift und die neutralisierende
Dosis von Antitoxin bestimmt.

Alsdann wurde untersucht, wie sich die gleichen Tetanus-
antitoxingemische bei Digerierung mit Komplement verhalten.

Multiplaversuche mit Tetanustoxin.

I. Ermittelung der minimalcn Dosis, welche den Tod des Tieres unter
typischem Bild des Tetanus in 24 Stunden hervorruft (intravenos).

4. X. 1911.

No. des
Tieres

Korper-
gevvicht
in g

Dosis des
Tetanustoxins
pro Tier
in g

Er-

scheinung

Ausgang

M 77

220

0,05

Tetanus

tot in 24 Std.

M 78

240

0,01

dgl.

M 79

220

0,001

>>

M 80

240

0,0001

tot in 48 Std.

Aus diesen Versuchen ergibt es sich, daB die minimale Tetanustoxin-
dosis, welche den Tod des Tieres unter typischem Bild des Tetanus in
einem Tage hervorruft, 0,001 g ist.

II. Ermittelung der Mengenverhiiltnisse, in welchen 0,001 g Tetanus¬
toxin mit Antitoxin, bzw. mit Antitoxin und Komplement neutralisiert wird.

0,001 g Tetanustoxin einerseits einfach mit fallender Menge von Anti¬
toxin, anderseits mit fallender Menge des Antitoxins und Komplements
versetzt, zum Volumen von 4,7 com aufgefiillt, 2 Stunden bei 37® C ge¬
halten und intravenos injiziert.

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Die Bildung eines akut wixkenden Giftes aus Toxinen. 527

5. X. 1911.
A.

No. des
Tieres

Kdrper-
gewicht
in g

Tetanustoxin
in g

Tetanus-
antitoxin
in g

Ausgang

M 81

230

0,001

_

tot in 1 Tag

M 109

260

0,001

tot in 1 „

M 106

190

if

0,005

tot in 12 Tagen

M 82

220

11

0,010

tot in 7 „

M 83

210

11

0,100

tot in 12 „

M 84

220

t>

0,400

tot in 4 „

M 85

220

11

0,700

tot in 3 „

B.

No. des
Tieres

Korper-
gewicht
in g

Tetanustoxin
in g

Tetanus-
antitoxin
in g

Kom¬
plement
in ccm

Ausgang

M 111

280

0,001

0.001

4,0

tot in 1 Tag

M 110

260

>9

0,005

1 akuter Tod

M 86

220

11

0,010

1

tot in 3 Tagen

M 87

230

If

0,100

tot in 17 „

M 88

230

If

0,400

i 11

tot in 12 „

M 89

240

i If

0,700

'

tot in 15 „

Aus dem Yersuch ergibt sich, dafi bei konstanter Gift-
dosis und wechselnder Antitoxindosis bei einer bestimmten
Menge von Tetanusantitoxin (0,005) ein akutes Gift in Freiheit
gesetzt wurde, nicht aber bei grofieren oder kleineren Dosen.
Im tibrigen besteht kein wesentlicher Unterschied, ob die
Toxin-Antitoxingemische mit Komplement digeriert worden
sind oder nicht.

Aus den vorstehenden Versuchen ergibt es sich, daB die
Menge von Antitoxin, welche 0,001 g Tetanustoxin, das ist
die in 24 Stunden todliche Dosis, bei intravenbser Zufuhr
neutralisiert, 0,1 g Antitoxin betr£gt. Wir haben nun eine
Reihe von Versuchen angestellt, in denen wir Multipla von
Toxin und Antitoxin einmal mit und einmal ohne Komplement
aufeinander einwirken liefien.

Bei der Mischung von Toxin und Antitoxin verfuhren wir
stets so, dafi wir einen Ueberschufi von Antitoxin gegenttber*
dem sich rechnerisch ergebenden Multiplum anwandten. Die
Mischungen von Toxin und Antitoxin mit bzw. ohne Kom¬
plement (und dann mit entsprechenden Mengen von Koch-

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528

E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

salzldsung) blieben bei 37° 2 Stunden in Kontakt. Danach
erfolgte die intravendse Einspritzung. Nachstehend bringen
wir die entsprechenden Versuche.

19. X. 1911.
A.

No. dee
Tieres

Kbrper-
gewicht
in g

Tetanus-
antitoxin
in g

Tetanustoxin
in g

Mul-

tipla

Ausgang

M 153

230

_

0,001

1 Kontr.

tot in 1 Tage

M 154

250

0,1

0,001

1 -fach

tot in 7Tagen

M 155

240

0,1X2,5 0 2)

0 ,001X2 = 0,002

2 -fach

tot in 6 Tagen

= 0,25

M 156

230

0,1X7.5 0 5)

|0,001 X 5 = 0,005

5-fach

lebt noch

= 0,75

•

i nach 7 Tag.

M 157

250 j

0,1 X 15 (> 10)

O

X

r—«

8

O

10 -fach

dgl.

= 1,5 i

= 0,010, ]

B.

No.

des

Tieres

:0 & E
M &

Tetanustoxin
in g

Tetanus-
antitoxin
in g

Kompl.
in ccm

Mul-
tipla ,

Ausgang

M 158

210

0,001

0,1

4,0 |

1 -fach

lebt noch
nach 7 Tag.

M 159

220

0.001 X 2
= 0,002

0,1X2,5(> 2)

= 0,25

4,0

2 -fach

tot in 7 Tag.

M 160

220

0,001 X 5
= 0,005

0,1X7,50 5)

= 0,75

4,0

5-fach

tot in 7 Tag.

M 161

200

0,001 x io
= 0,010

10,1 x 15 (> 10 )

1 = 1,5

4,0

10 -fach

tot in 6 Tag.

Wie sich aus diesen Versuchen ergibt, ist die vorherige
Digerierung mit Komplement ohne nachweisbaren EinfluB auf
die Toxin-Antitoxinmischungen. Sie verhalten sich bei nach-
tr&glicher Einspritzung in das Tier nicht anders wie die ohne
Komplement stehen gelassenen. Es ist das an sich ja auch
nicht weiter verwunderlich, denn wir miissen annehmen, daB
ini Tierkorper in den Kontrollversuchen das Komplement ja
gleichfalls in Aktion tritt und ohne weiteres die mit dem Anti-
korper verbundenen kleinen Toxinkomplexe abzubauen
vermag.

Wir haben nun analoge Versuche auch mit Diphtherie-
•toxin angestellt; sie folgen im nachstehenden. Die Versuchs-
anordnung entsprach vollkommen der bei den Tetanusversuchen.
Wir benutzten dazu ein unter Toluol aufbewahrtes fliissiges
Diphtherietoxin.

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Die Bildung eines akut wirkeoden Giftes aus Toxinen.

529

Multiplaversuche mit Diphtherietoxin.

I. Ermittelung der minimalen Doeis des Diphtherietoxins, welche in
einem Tage den Tod dee Tieres hervorruft (intravends).

12. X. 1911.

No. des
Heres

Korper-
gewicht
in g

Diphtheric-
toxin menge
in g

Ausgang

Sonstige Bemerkungen

M 112

200

0,001

tot in 8 Tagen

M 113

210

0,005

tot in 4 Tagen

i

venose Stauung der in-
neren Organe; Hydrops
der Pleurahdhle

M 114

200

0,01

tot in 2 Tagen

Hydrops der PleurahOhle;
vendee Stauung der in-
neren Organe

M 115

200

0,05

tot in 1 Tag

dgl.

• M 116

200

0,07

dgl.

Aus diesem Versuch ergibt sich, dafi die minimale Diphtherietoxin-
dosis, welche den Tod des Tieres in einem Tage hervorruft, 0,05 g ist.

II. Ermittelung der Mengenverhaltnisse, in welchem 0,05 g Diphtherie-
toxin mit Antitoxin, bzw. mit Antitoxin und Komplement neutralisiert
werden.

Die folgenden Mischungen wurden 2 Stunden bei 37° C in Kontakt
gelassen (alle zum Volumen von 5,0 ccm aufgefullt) und dann intravends
injiziert

14. X. 1911.
A,.

No. des
Tieres

Kdrper-
gewicht
in g

Diphtherie-
toxin
in g

Diphtherie-
antitoxin
in g

Ausgang

M 117

210

0,05

tot in 1 Tag

M 118

210

yr

0.10

tot in 3 Tagen

M 119

220

1

0,05

tot in 10 Tagen

M 120

220

0,01

tot in 3 Minuten

M 121

220

B,.

0,005

tot in 1 Tag

No. des
Tieres

Korper-
gewicht
in g

Diphtherie-
toxin
in g

Diphtherie-
antitoxin
in g

Kom¬
plement
m ccm

Ausgang

M 126

200

0,05

tot in 1 Tag

M 122

200

yy

0,10

4^0

tot in 10 Tagen

M 123

210

yy

0,05

yy

dgl.

M 124

200

yy

0,01

yy

tot in 1 Tag

M 125

200

y »

0.005

yy

tot in 6 Minuten

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530

E. Friedberger, S. Mita uud T. Kumagai,

16. X. 1911.

No. des
Tieres

Korper-
gewicht
in g

Diphtherie¬
toxin
in g

Diphtherie-
anti toxin
in g

Ausgang

M 127

200

! 0.05

tot in 1 Tag

M 129

ff

: 0,10

! tot in 9 Tagen

M 130

1

1 *f

ff

0,05

tot in 10 Tagen

M 131

l

1 »J

0,01

tot in einigen Stunden

M 132

1

i "

0,005

d g i.

B r

No.

des

Tieres

Korper-
gewicht
in g

Diphtherie¬
toxin
in g

Diphtherie-
anti toxin
in g

Kom-
plement
in g

Ausgang

M 128

200

| 0.05

tot in 1 Tage

M 133

210

1

0.10

, tot in 4 Minuten

M 134

210

1

0.05

ff

j tot in einigen Stunden

M 135

210

Of

0.01

[ ff

tot in 6 Tagen

M 136

; 220

0,005

ff

j tot in 11 Tagen

Aus diesen Versuchen ergibt sich die Tatsache, daC
die Mischungen von Diphtherietoxin und Antitoxin auch
ohne vorherige Komplementdigerierung in gewissen Mengen
akut oder subakut toxisch wirken kdnnen. Bei der vor-
herigen Bebandlung mit Kompleraent sehen wir akutes
Gift unter etwas anderen MengenverMltnissen entstehen.
Wir mfissen annehmen, daB in dem ersteren Falle sich das
akute Gift im Organismus des Tieres durch dessen Komple-
ment bildet, und zwar mit Mengen des Antitoxins, die mit
denen im Vitroversuch nicht vollig iiber einzustimmen
brauchen.

Wir haben nun entsprechende Versuche auch mit Viel-
fachem der todlichen Diphtherietoxindosis und entsprechenden
Mengen von Antitoxin angestellt und hier wiederum, wie
in den analogen Versuchen mit Tetanustoxin, jeweils geringe
Ueberschiisse von Antitoxin fiber die rechnerisch ermittelten
Mengen zugesetzt. Die Mischungen blieben, wie in den vorauf-
gegangenen Versuchen, 2 Stunden bei 37° stehen und wurden
dann intravenos injiziert.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen.
17. X. 1911.

531

No. des
Tieres

Korper-
gewicht
in g

Diphtherie-
toxin
in g

Diphtherie- M ,

Antitoxin tipla Au9 g an g

xn g

M137 200 0,05 I — | Kontr. tot in 1 Tag

M138 210 0.05 ' 0,05 j 1-fach tot in 9 Tagen

M 139 200 0,05 V2 = 0,10 0,05 X2,5 (>2) 2-fach tot in 3 Tagen

I =0,125 1

M 140 230 0,05 X 5 = 0,25 0,05 X ? (> 5) ! 5-fach tot in 14 Tag.

I = 0,35 1

M 141 230 0,05 X10 = 0,50 0,05 X 15 (> 10) 10-fach tot in 17 Tag.

= 0,75

M 142 200 0,05 | — ! Kontr. Jtot in 1 Tag

M 144 210 0,05X2 = 0,10 0,05X2,5 02) 2-fach tot in 5 Tagen

= 0,125

M 151 210 0,05 X 5 = 0,25 0,05 X 7 (> 5) 5-fach lebt noch

= 0,34 nach 8 Tag.

M 146 ' 250 0,05 X10 = 0,5 0.05 X 15 O 10) 10-fach , tot in 14 Tag.

I ; — 0,75 |

B.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

ing

Diphtherie-
toxin
in g

Diphtherie-
Antitoxin
in g

Kompl.
in ccm

tipla A » 8 S a "g

M 147

250

0,05

0,05

4,0

1-fach tot in 8 Tagen

M 148

230

0,05X2 = 0,10

0,05X2,502)
= 0,125

2 -fach lebt noch

nach 8 Tag.

M 152

230

0,05X5 = 0,25

0,05X7 05)

= 0.35

yy

5-fach lebt noch

nach 8 Tag.

M 150

250

0,05X10 = 0,5

0,05 X 15 (> 10),
=0,75 |

yy

10-fach tot in 4 Tagen

Wie aus dem vorstehenden Versuch ersichtlicb ist, besteht

eine ausgesprochune Differenz zwischen den zuvor mit Kom-
plement behandelten Toxin-Antitoxingemischen und den Kon-
trollgemischen nicht.

Ueber die Anaphylatoxinbildung aus Cobragift.

Von E. Friedberger und T. Kumagai.

Im AnschluB an die voraufgegangenen Versuche von
Friedberger und Mita fiber die Anaphylatoxinbildung aus
Tetanusgift und Diphtheriegift haben wir entsprechende
Versuche angestellt mit Verwendung von Cobragift. Es ge-
schah das, um die Untersuchungen auf eine Reihe von weiteren

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532

E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

Giften auszdehnen, zugleich aber boten die Versuche mit einem
Gift tierischen Ursprungs den Einwand, dafi etwa Bakterien-
toxinen anhaftende NShrsubstrate als Quelle des Giftes in
Frage k&raen, ohne weiteres zu widerlegen. Wir benutzten zu
diesem Versuch Cobragift, das uns in dankenswerter Weise
von Herrn Prof. Faust in Wttrzburg zur Verfttgung gestellt
war. Dieses Gift wurde in KochsalzlOsung gelbst benutzt, die
Injektionen geschahen stets intravenos. Zun&chst rauBte die
tftdliche Dosis des Cobragiftes ermittelt werden.

D&rstellnng dea Anaphylatoxins aua Cobragift.

I. Bestimmung der todlicben Dosis tod Cobragift bei der intravenfeen
Injektion (12. III. 12).

0,1 g Cobragift (Wurzburg) wurde in 100 ccm physiologischer Koch¬
salzlosung aufgelost. Von dieser Stammlosung wurden verschiedene Ver-
diinnungen bereitet.

Meerschweinchen J 388, 200 g. 12*’ 0.00006 iv. Lebt.

Meerschweinchen J 371, 190 g. 12 60 0,00009 iT. Lebt.

Meerschweinchen J 380, 200 g. 12 i7 0,0001 iv. Krank, bleibt leben.
Meerschweinchen J 402, 230 g. 12® 0,0002 iv. 3 h Tot.

Meerschweinchen J 370, 240 g. I s 0,0003 iv. 3 h Tot.

Meerschweinchen J 372, 220 g. 1* 0,0005 iv. I s Kriimpfe, Seitenlage.
I 4 Tot.

Uebersichtstabelle.

Dosis

Resultat

0,0005

tot in 2 Minuten

0.0003

tot nach 1 Std. 55 Min.

0,0002

tot nach 1 Std. 54 Min.

0.0001

lebt

0,00008

lebt

0,00006

lebt

Nach Ermittelung der akut tddlichen Dosis des Cobra¬
giftes stellten wir entsprechende Versuche an wie mit Tetanus-
gift, d. h. wir digerierten gewisse Cobragiftmengen mit nor-
malem Meerschweinchenserum und in Kontrollversuchen mit
entsprechenden Mengen physiologischer Kochsalzldsung. Nach-
stehend bringen wir eine derartige Versuchsanordnung.

II. Bereitung des Anaphylatoxins aus Cobragift (12. III. 1912).

Fallende Mengen von Cobragift wurden mit je 4 ccm dea frischen
Meerchweinchenserums 1 Stunde bei 37° C digeriert. Zur Kontrolle wurden
dieselben Mengen von Gift an Stelle des Komplemente mit je 4 ccm physio¬
logischer Kochsalzlosung ebenfalls 1 Stunde bei 37° gehalten. Nach
1 Stunde wurde sie Meerschweinchen intravenos injiziert.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toiinen. 533

Meerechweinchen K 222, 190 g.

6 00 0,0003 Cobragift + 4 ccm Komplement iv.

6 16 Krampfe.

6 M Seitenlage.

6 9S Reflexlos.

Sektion: Lunge etwas aufgeblaht, rot, Herzblut fliissig.
Meerechweinchen K 223, 210 g.

6 1 * 0,0003 Cobragift + 4 ccm NaCl 1 ) iv.

6 45 Krampfe.

6 80 Tot.

Sektion: Lunge kollabiert, rot, Herzblut geronnen.
Meerechweinchen K 224, 210 g.

6 45 0,0002 Cobragift + 4 ccm Komplement iv. Sofort schwer krank.
9 00 Tot.

Sektion: Lunge aufgeblaht, rot, Herz schlagt.

Meerechweinchen K 225, 190 g.

6 4S 0,0002 Cobragift + 4 ccm NaCl.

7 00 Krampfe, am folgenden Tag tot.

Sektion: Lunge kollabiert. hamorrhagisch, Herzblut geronnen.
Meerechweinchen K 226, 190 g.

7 00 0,00015 Cobragift + 4 ccm Komplement.

7 46 Sehr krank. am folgenden Tag tot.

Sektion: Lunge aufgeblaht, Blut fliissig.

Meerechweinchen K 227, 190 g.

7 14 0,00015 Cobragift + 4 ccm NaCl. Bleibt gesund.
Meerechweinchen K 228, 190 g.

7 30 0,000075 Cobragift + 4 ccm Komplement. Bleibt gesund.
Meerechweinchen K 229 A, 210 g.

7“ 0,000075 Cobragift + 4 ccm NaCl. Bleibt gesund.

Uebereicht6tabelle.

Tier No.

Gewicht
in g

Cobragift
in g

Komplement

NaCl

AuBgang

K 222

190

0,0003

4 ccm

0

n. 35' f

K 223

210

19

0

4 ccm

n. 1" 15' f

K 224

210

0,0002

4 ccm

0

n. 2“ 30* t

K 225

190

0

4 ccm

folg. Tag f

K 226

190

0,00015

4 ccm

0

dgL

K 227

190

0

4 ccm

gesund

K 228

190

0,000075

4 ccm

0

19

K 229 A

190

1 11

0

4 ccm

19

Wie die Uebersichtstabelle ergibt, gelingt es bei dem in
Anwendnng gebrachten Mengenverhflltnis unter den von uns
eingehaltenen Versuchsbedingungen, die Cobragiftwirkung
durch die Behandlung mit Komplement bedeutend zu be¬
ll NaCl = physiologische Kochsalzlosung.

t

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534 E. Friedberger, S. Mita und T. Kumagai,

schleunigen und schliefilich bei Dosen noch einen Tod herbei-
zufflhren, welche ohne Komplement bereits indifferent sind.
Der folgende Versuch entspricht in der Anordnung dem voraus-
gehenden; nur wurde die Behandlung des Cobragiftes mit
Komplement bei 37° 2 Stunden lang durchgeftihrt und dann
die Rdhrchen noch 20 Stunden bei Zimmertemperatur vor der
intravendsen Einspritzung stehen gelassen.

III. Bereitung dee Anaphylatoxins aus Cobragift (13. III. 1912).
Meerschweinchen K 229 B, 190 g.

11 1# 0,0008 Cobragift + 4 ccm Kompl. Sofort Krampfe, Seitenlage.
11 “ Reflexlos, tot.

Sektion: Lunge aufgeblaht, hamorrhagisch. Herz schliigt.
Meerschweinchen 230, 190 g.

11“ 0,0008 Gift + 4 ccm NaCl.

11“ Krampfe.

11” Seitenlage.

11* Tot.

Sektion: Lunge leicht gebliiht, rot, Herzblut fliissig.
Meerschweinchen K 231, 190 g.

11*° 0,0006 Gift + 4 ccm Komplement.

11 ” Krampfe, Seitenlage.

11” Tot.

Sektion: starke Lungenblahung, odematos, Herz schliigt.
Meerschweinchen K 232, 190 g.

11 ” 0,0006 Gift + 4 ccm NaCl.

11“ Krampfe, schwer krank.

11” Straubt Haare.

11 8T Spriinge.

11“ Tot.

Sektion: Lunge gebliiht, Herz schliigt.

Meerschweinchen K 233, 190 g.

11 ” 0,0005 Gift -f- 4 ccm Komplement. Sofort Seitenlage.

11“ Tot.

Sektion: stark geblahte Lungen, Herz schliigt, Blut fliissig.
Meerschweinchen K 234, 190 g.

12 40 0,0005 Gift + 4 ccm NaCl.

12 41 Hiipfen.

12” Seitenlage, Schaum aus dem Mund.

12 s ® Tot.

Sektion: Lunge miiSig gebliiht, hiimorrhagisch, odematos, Herz schlagt.
Meerechweinchen K 235, 180 g.

II 46 0,0004 Gift + 4 ccm Komplement. Sofort Krampfe.

11 44 V* Spriinge, Seitenlage.

11 46 Tot.

Sektion: Lunge stark gebliiht, Herzblut fliissig.

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Die Bildung eines akut wirkenden Giftes aus Toxinen.

535

Meerschwemchen E 236, 180 g.

11“ 0,0004 Gift + 4 ccm Nad
12 18 Seitenlage.

12*° Tot.

Sektion: Lunge geblaht, Here schlagt.

Meerschwemchen K 237, 190 g.

11“ 0,0003 Gift + 4 ccm Komplement. Sofort Hupfen, Sprunge.
11“ V* Seitenlage.

11“ Tot.

Sektion: Lunge stark geblaht, Herz schlagt.

Meerschwemchen E 238, 190 g.

11“ 0,00003 Gift + 4 ccm NaCL
12“ Erank.

12“ Seitenlage.

12“ Tot.

Sektion: Lunge stark geblaht, hamorrhagisch, Herz schlagt.
Meerschwemchen E 239, 180 g.

12“ 0,0002 Gift + 4 ccm Eomplement. Sofort Sprunge, Hupfen,
Seitenlage.

12“ Tot.

Sektion: starke Lungenblahung, Blut fiussig.

Meerschwemchen E 240, 180 g.

12‘ 4 0,0002 Gift + 4 ccm NaCL Etwas krank, lebt.
Meerschwemchen E 241, 180 g.

12“ 0,0001 Gift + 4 ccm Eomplement. Sofort Erampfe.

12“ Seitenlage.

12“ Tot.

Sektion: starke Lungenblahung, Herz schl&gt, Blut fiussig.
Meerschwemchen E 242, 180 g.

12“ 0,0001 Gift + 4 ccm NaCl. Gesund.

Uebersichtstabelle.

Tier No.

Gewicht
in g

Cobragift
in g

Komplement

NaCl

Ausgang

E 229 B

190

0,0008

4 ccm

0

tot in 2'

E 230

190

99

0

4 ccm

tot in 10'

E 231

190

0,0006

4 ccm

0

tot in 2'

E 232

190

99

0

4 ccm

tot in 13'

E 233

190

0,0005

4 ccm

0

tot in 1'

E 234

190

9f

0

4 ccm

tot in 13'

E 235

180

0,0004

4 ccm

0

tot in 1'

E 236

180

99

0

4 ccm

tot in 30'

E 237

190

0,0003

4 ccm

0

tot in 1'

E 238

190

99

0

4 ccm

tot in 14'

E 239

180

0,0002

4 ccm

0

tot in 1'

E 240

180

99

0

4 ccm

lebt

E 241

180

0,0001

4 ccm

0

tot in 1'

E 242 A

180

IJ

0

4 ccm

lebt

Zdtschr. f. ImmualtlUforechung. Orig. Bd. XVII. 36

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536

E. Friedberger, 8. Mita und T. Kumagai,

Wir sehen aus diesen Versuchen mit einem etwas wirksameren
Cobragift bei groBeren Mengen wiederum die ansgesprochene
Beschleunigung der Giftwirkung im Sinne von de Waele.
Aber bei kleineren Mengen, welche an sich Meerschweinchen
nicht mehr zn tSten vermdgen, tritt dentlich unter dem Ein-
fluB des Komplementes die Bildnng des aknt wirkenden Giftes
zutage.

Noch deutlicher tritt diese Wirkung im folgenden Versuch
hervor, in dem entsprechend kleinere Dosen von Cobragift zur
Verwendung kamen. Die Versuchsanordnung entsprach im
fibrigen vollkommen der im vorigen Versnche, d. h. es warden
die Mischungen von Cobragift mit Komplement bzw. physio-
logischer Kochsalzldsnng 2 Stunden bei 37° nnd 20 Stnnden
bei Zimmertemperatur vor der intravendsen Einspritzung
stehen gelassen.

IV. Bereitung des Anaphylatoxins aus Cobragift (14. III. 1912).
Meerschweinchen K 242 B, 210 g.

6 ,s 0,0002 Gift + 4 ccm Komplement iv.

6 16 ’/, Krampfe, Spriinge, Seitenlage.

6 1 * Reflexlos, tot

Sektion: Lunge stark geblaht, rotlich, Herz schlagt.
Meerschweinchen K 24S, 200 g.

6 18 0,0002 Gift + 4 ccm NaCl iv.

6 80 Krampfe, schwer krank, lebt
Meerschweinchen K 244, 190 g.

6 86 0,0001 Gift + 4 ccm Komplement iv.

6 s * Krampfe.

6" Tot

Sektion: starke Lungenblahung, Herz schlagt.

Meerschweinchen K 245, 200 g.

6 45 0,0001 Gift + 4 ccm NaCl. Gesund.

Meerschweinchen K 246, 210 g.

6 48 0,00008 Gift + 4 ccm Komplement. Sofort Krampfe, Spriinge

6 49 Seitenlage.

6 6# Tot.

Sektion: starke Lungenblahung, Herz schliigt.

Meerschweinchen K 247, 200 g.

6 D2 0,00008 Gift + 4 ccm NaCL Gesund.

Meerschweinchen K 248, 200 g.

6 65 0,00006 Gift + 4 ccm Komplement Sofort Krampfe.

6“ V, Seitenlage.

6 M Richtet sich auf, am folgenden Tage tot
Sektion: Lunge kollabiert

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Die Bildung ernes akut wirkenden Giftes aus Toxinen. 537

Meenchweinchen K 249, 200 g.

7 01 0,00006 Gift + 4 ccm NaCl. Ohne Symptome, lebt.
Meerschweinchen K 250, 190 g.

7 08 0,00004 Gift + 4 ccm Komplement. Ohne Symptome, lebt.
Meerschweinchen E 251, 200 g.

7 08 0,00004 Gift + 4 ccm NaCl. Ohne Symptome, lebt.

Uebersichtstabelle.

Tier No.

Gewicht
in g

Cobragift
in g

Eomplement

NaCl

Ausgang

K 242 B

210

0,0002

4 ccm

0

tot in 1 '

K 243

200

ft

0

4 ccm

lebt, krank

K 244

190

0,0001

ft

4 ccm

0

tot in 4'

K 245

200

0

4 ccm

gesund
tot in 2 '

E 246

210

0,00008

4 ccm

0

K 247

200

»

0

4 ccm

gesund

E 248

200

0,00006

4 ccm

0

am folg. Tag tot

E 249

E 250

200

190

0,06004

0

4 ccm

4 ccm

0

gesund

lebt

E 251

200

0

4 ccm

Aus dieser Tabelle ergibt sich besonders eklatant die Tat-
sache, daB Dosen des Cobragiftes, die an sich fttr das Meer-
schweinchen indifferent sind, d. h. Dosen von 8 / 10 — 6 /ioo mg
noch ein akut tddliches Gift liefern, w&hrend unter 4 /ioo mg
auch nach der Komplementdigestion keine Giftwirkung mehr
erkennen lieBen.

Zusammenfassung.

Es gelingt aus trocknem Tetanustoxin, Diphtherie- und
Cobragift durch Digerierung mit normalem Meerschweinchen-
serum ein akut tddliches Anaphylatoxin zu erhalten. Speziell
fdr das Tetanusgift konnte gezeigt werden, daB nur inner-
halb gewisser Mengenverhfiltnisse ein Anaphylatoxin sich
bildet. Ein UeberschuB des Tetanustoxins hemmt die Ana-
phylatoxinbildung.

Beim Cobragift tritt durch Digerierung mit Komplement
die bereits von de Waele beobachtete Beschleunigung der
spezifischen Giftwirkung zutage. Daneben aber finden wir,
daB, wie beim Tetanusgift, an sich unterschwellige Dosen
durch Digerierung mit Komplementserum zu akut toxischen
werden.

36*

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538 Friedberger, Mita u. Kumagai, Bild. akut wirkenden Giftes.

Es wird speziell fflr das Tetanustoxin gezeigt, dafi als
Muttersubstanz fflr das Anaphylatoxin nicht sekund&re Bak-
terienverunreinigungen in Frage kommen.

Auch das Pepton des N&hrbodens kann mit Rflcksicht auf
die Mengenverh&ltnisse nicht die Matrix des Giftes sein.

In Anbetracht dessen, dafi man durch Digerierung mit
dem Komplement alle UebergSnge von einer beschleunigten
spezifischen Giftwirkung bis zu der typischen akuten Ana-
phylatoxinwirkung erh&lt, mochten wir annehmen, dafi es die
spezifischen Giftkomponenten sind, aus denen sich das Ana¬
phylatoxin bildet. Eine endgiiltige Entscheidung ist aber
natfirlich nicht mdglich, solange wir keines der untersuchten
Toxine chemisch rein darzustellen vermogen.

Aus Toxin- und Antitoxingemischen entsteht unter ge-
wissen Mengenverhaltnissen bei intravenoser Injektion gleich-
falls Anaphylatoxin, sowohl bei vorheriger Digerierung mit
Komplement als auch unter gewissen Verhaltnissen ohne diese.
Es dfirfte das darauf beruhen, dafi aus den kleinen Toxin-
Antitoxinkomplexen auch im Organismus schnell und leicht
sich eine akut tOdliche Giftdosis bilden kann, w&hrend das bei
Pr&zipitaten aus atoxischem Eiweifi und Antieiweifi in der
Regel nicht der Fall ist.

Nachtrag bei der Korrektur. Mit Aalserum ist in neueren
Versuchen (Friedberger und Ichikawa) die Bildung einer akut tod-
lichen Anaphylatoxindosis aus untertodlichen Giftmengen im Gegensatz zu
Tetanus- und Cobragift bisher nicht gelungen.

Dagegen konnen an sich neutralisierte Aalserum-Antiaalserumgemische
durch Digerierung mit Komplement akut toxisch werden.

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Jonas, Wirk. versch. Seramart. auf d. durch Cobragiftinakt. Kompl. 339

Nachdruck verboten.

[Aus der experimentell-biologischen Abteilung (Prof. H. Sachs)
des Konigl. Institutes far experimentelle Therapie in Frankfurt a. M.
(Direktor: Wirklicher Geheimer Rat Prof. Dr. P. Ehrlich).]

Ueber die Wirkung versehiedener Sernmarten auf das
darch Cobragift inaktivierte Komplement.

Von Dr. Willy Jonas,

Assistent an der Universitiitsfrauenklinik in Greifswald.

(Eingegangen bei der Kedaktion am 1. Marz 1913.)

Durch die Untersuchungen von Omorokow 1 ), Sachs
und Omorokow 2 ), Ritz 3 ) fiber die Wirkung des Cobra-
giftes auf die Komplemente ist gezeigt worden, daB das durch
Cobragiftwirkung inaktivierte Meerschweinchenserum durch
jede der beiden als „Mittelstfick“ und „Endstfick“ bezeichneten
Serumfraktionen die komplettierende Kraft wiedererlangt. Nach-
dem bereits Sachs und Omorokow vermutet hatten, daB
dieser Vorgang durch die Annahme eines dritten Faktors
bei der Komplementwirkung eine Erklarung linden kfinnte,
ergaben sich aus der von Ritz fortgesetzten Analyse des
eigenartigen Phfinomens gewichtige Anhaltspunkte ffir diese
Annahme. Es konnten namlich einerseits aus dem durch
Cobragift inaktivierten Serum mittels Kohlensaureffillung Glo¬
bulin- resp. Albuminfraktionen gewonnen werden, welche
sich wie Mittelsttick und Endstflck verhielten, ohne aber zu-
sammen komplettierend zu wirken. Andererseits gelang es
nicht nur durch Zusatz von Mittelstfick und Endstflck des
normalen Meerschweinchenserums eine Restitution des durch
Cobragift inaktivierten Serums zu erzielen, vielmehr auch
durch das V 2 Stunde lang bei 54° inaktivierte (thermoinakti-
vierte) Serum. Auf Grund dieser Tatsachen, die inzwischen
durch die interessanten Untersuchungen von Browning und

1) L. Omorokow, diese Zeitsehr., Bd. 10, 1911, p. 285.

2) H. Sachs und LOmorokow, diese Zeitsehr., Bd.ll, 1911. p.710.

3) H. Ritz, diese Zeitsehr., Bd. 13, 1912, p. 62.

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540

Willy Jonas,

Mackie 1 2 3 ), sowie E. Weil*) eine vollst&ndige Bestfitigung er-
fahren haben, ergab sich die Anschauung, daG filr die Kom-
plementfunktion das Zusammenwirken von 3 Komponenten
mafigebend ist, und zwar der beiden thermolabilen als Mittel-
sttlck und Endsttlck bezeichneten Agentien, sowie einer
dritten durch relative Therm ostabilitfit charakterisierten Kompo¬
nente. Obwohl auch dem Mittelstfick im nativen Serum eine
gewisse Thermostabilit&t zukommt (Friedemann, Muter-
milch, Marks, Husler), haben die Untersuchungen Hus-
lers 8 ) insbesondere gezeigt, daB die dritte Komponente durch
die erheblich hQhere Thermostabilitfit von dem MittelstQck
des Meerschweinchenserums markant zu differenzieren ist.
Fttr die isolierte Funktion der dritten Komponente erwies
sich dabei einviertelsttlndiges Erhitzen des Meerschweinchen¬
serums auf 55° an erster Stelle geeignet.

Zweck der Untersuchungen, fiber welche ich mir im
folgenden zu berichten erlaube, war es, die Sera verschiedener
Tierarten in bezug auf ihren Vorrat an der dritten Kompo¬
nente zu vergleichen. Methodisch bin ich dabei wesentlich
den Angaben von Ritz und Husler gefolgt.

Als Reagens auf die dritte Komponente diente sensibilisiertes Hammel-
blut im Verein mit Meerschweiuchenserum, das mit Cobragift vorbehandelt,
demnach also nur noch Mittelstuck und Endstiick enthielt. Zur derartigen
Inaktivierung des Meerschweinchenserums wurden nach dem Vorgang von
Omorokow, Sachs und Omorokow 1 Teil Meerschweinchenserum mit
0,4 Teilen 1 / e -proz. Cobragiftes V/ 4 Stunden im Brutschrank (bei 37°)
digeriert. Sodann wurde mit physiologischer Kochsalzlbsung auf 2 Teile
aufgefullt, so dafl das derart erhaltene „Cobra-Meerschweinchenserum“
V ? *verdunntem nativen Meerschweinchenserum entsprach. Zur Prlifung
der Sera auf dritte Komponente wurden absteigende Mengen der einzelnen
Serumsorten mit je 1 ccm sensibilicsierter Hammelblutaufschwemmung unter
Zusatz von 0,2 und auch 0,1 ccm Cobra-Meerschweinchenserum (ent-
sprechend 0,1 und 0,05 ccm Original-Meerschweinchenserum) digeriert
(Gesamtvolumen 2,2 ccm). Die Beurteilung der Ergebnisse erfolgte nach
zweistiindigem Verweilen bei 37° oder am nachsten Morgen nach Aufent-
halt im Eisschrank. Naturlich wurden stets die erforderlichen Kontrollen
ausgefiihrt, insbesondere die Priifung der verschiedenen Warmeeinfliissen

1) C. H. Browning und T. I. Mackie, diese Zeitschr., Bd. 17,
1913, p. 1, cf. auch Bioch. Zeitschr., Bd. 43, 1912 p. 229 und Journ. Path,
and Bact., Vol. 17, 1912, p. 120.

2) E. Weil, Bioch. Zeitschr., Bd. 48, 1913, p. 347.

3) J. Husler, diese Zeitschr., Bd. 15, 1912, p. 157.

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Wirk. versch. Seruraarten auf das durch Cobragift inakt. Kompl. 541

unterworfen gewesenen Serumproben auf Koraplementwirkung ohne
weiteren Zusatz, auf etwaige Cobragift aktivierende Funktion, sowie, wenn
zweckmafiig erscheinend, auch auf Mittelstuck- oder Endstiickfuuktion.

Zor UnterSuchung auf das Zusammenwirken mit dem
dnrch Cobragift inaktivierten Meerschweinchenserum („C 0 b r a-
Meerschweinchenseru m“) gelangten Kaninchen-, Pferde-
Ziegen-, Rinder-, Hammel-, Schweine- and Menschenserum.
Eine stfirende Interferenz von Komplementwirkungen kam
bei diesen Semmarten nicht in Betracht, da unter den be-
nutzten Bedingungen jedenfalls die 5 Minuten lang auf 55°
erhitzten Sera in der Menge von 0,1 ccm (grSBere Dosen ge¬
langten nicht zur Verwendung) an und ftir sich nicht kom-
plettierend wirkten.

Was das Pferdeserum anlangt, so erwies es sich
bereits nach nur 5 Minuten langem Erw&rmen auf 55°
nicht bef&higt, die Komplementfunktion des Cobra-Meer-
schweinchenserums zu restituieren oder verursachte im Verein
mit letzterem nur eine minimale Mmolytische Wirkung, welche
zudem auf Grund der Kontrollversuche auf eine gering-
gradige Cobragiftaktivierung bezogen werden konnte. Im
Pferdeserum istalso, wenigstens in 4 untersuchten Blut-
proben, die dritte Komponente nicht oder nur in sehr
geringer Menge nachgewiesen worden, was im ttbrigen
bei dem ja nur geringen Grade der dem Pferdeserum zu-
kommenden komplettierenden Funktionen nicht ilberraschen
konnte. Dagegen flbt das Pferdeserum, wie durch Bordet
und Gay (vgl. hierzu auch die Arbeiten von Sachs und
Bauer, Bordet und Strong, Streng, Geng 0 u) bekannt
ist, im Verein mit inaktivierten Seris, und zwar an erster
Stelle mit inaktiviertem Rinderserum wesentliche Komplement¬
wirkungen aus, und Ritz hat bereits darauf hingewiesen, daft
mfiglicherweise das native Pferdeserum in gewisser Hinsicht
dem mit Cobragift behandelten Meerschweinchenserum ent-
spricht. Allerdings ist die bereits durch Gen gou bekannte
Aktivierung des Pferdeserums durch thermoinaktiviertes Meer¬
schweinchenserum mit derjenigen des Cobra-Meerschweinchen-
serums insofern nicht ohne weiteres zu vergleichen, als er-
heblich st&rkere Sensibilisierungsgrade fflr den Eintritt der
HSmolyse erforderlich sind. Jedoch diirften zur Erklfirung

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542

Willy Jonas,

dieser Differenz Unterschiede im Verhalten, resp. in der
Quantitfit an Mittelstfick und Endstflck hinreichend erscheinen
(cf. Ritz). Jedenfalls lassen die von mir erhobenen Befunde
fiber das Fehlen der einer dritten Komponente zugeschriebenen
Fnnktion im Pferdeserum es wahrscheinlich erscheinen, daB die
schlechte Eignung des Pferdeserums als Komplement wenigstens
zu einem wesentlichen Teil durch den Mangel dieser ffir
die Komplementwirkung erforderlichen Qualitat verursachtjist.

Im Gegensatz zu dem Verhalten des Pferdeserums babe
ich in den Qbrigen untersuchten Serumarten die Fahigkeit, im
thermoinaktivierten Zustande zusammen mit Cobra-Meer-
schweinchenserum komplettierend zu wirken, mehr oder
weniger stark ausgesprochen gefunden. Bei alien heran-
gezogenen Serumsorten erwies sich die Thermostabilitat der
dritten Komponente, wie das auch ffir das Meerschweinchen-
serum gilt, als eine relative, und dementsprechend nahm die
Starke der das Cobra-Meerschweinchenserum restituierenden
Wirkung mit der Dauer des Erwarmens auf 55° sukzessive
ab. Das Hammelserum fibte nur eine relativ geringgradige
Wirkung aus. In einem Versuche war eine komplette Hfimo-
lyse im Verein mit Cobra-Meerschweinchenserum fiberhaupt
nicht zu erzielen, in einem anderen bewirkten 0,01 ccm des
5 Minuten lang und 0,05 ccm des 15 Minuten lang auf 55°
erhitzten Hammelserums vollstandige HSmolyse. In starkerem
MaBe erwiesen sich Ziegen- und Rinderserum geeignet,
die Funktionen der dritten Komponente zu tibernehmen. Die
beiden Serumarten besaBen in dieser Hinsicht eine ziemlich
bedeutende Thermostabilitat, indem die Unterschiede bei
sukzessivem Erwarmen nur geringe waren. So betrugen die
komplett losenden Dosen ffir Ziegenserum nach 5 Minuten
langem Inaktivieren in 3 Versuchen 0,015—0,015—0,025 ccm,
nach 30 Minuten langem Inaktivieren 0,025—0,025—0,05 ccm,
und fur Rinderserum (2 Versuche) nach 5 Minuten langem Er¬
warmen auf 55° 0,005 und 0,015 ccm, nach 30 Minuten
langem Erwarmen 0,01 und 0,025 ccm. Beim Rinderserum
ist dabei die Interferenz einer geringgradigen Cobragift akti-
vierenden Wirkung zu berucksichtigen *).

1) Ziegenserum besaB dagegen in den vorliegenden Kombinationen
keine Cobragift aktivierende Funktion und iibte auch im Verein mit
Cobra-Meerschweinchenserum ohne Zusatz von Immunambozeptor nicht

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Wirk. versch. Serumarten auf das durch Cobragift inakt. Kompl. 543

Auch im inaktivierten Kaninchenserum wurden ziem-
lich reichliche Mengen des als dritte Komponente bezeichneten
Faktors nachgewiesen. In 3 Versuchen bewirkten nach 15 Mi-
nuten langem Erhitzen noch 0,01—0,005 ccm im Verein mit
dem inaktiven Cobra-Meerschweinchenserum komplette H&mo-
lyse, bei der Untersuchung einer vierten Kaninchenserumprobe
waren 0,05 ccm erforderlich. Bei linger dauerndem Inaktivieren
nahm die Wirkung allerdings nicht unbetrachtlich ab, und der
Vergleich mit Meerschweinchenserum dfirfte daftir sprecben,
daB das thermoinaktivierte Kaninchenserum in seiner Eignung,
als dritte Komponente bei der Komplementwirkung zu dienen,
etwa dem Meerschweinchenserum gleichkommt oder das letztere
auch (lbertrifft. Dieses Ergebnis entspricht den jiingst von
Browning und Mackie mitgeteilten Befunden, nach denen
auch die thermoinaktivierte Albuminfraktion des Kaninchen-
serums imstande ist, die Wirkung von Cobra-Meerschweinchen¬
serum zu restituieren, also im Sinne der dritten Komponente
zu fungieren.

Die VersuchemitMenschenserum, zu denen 15Serum-
proben herangezogen wurden, ergaben nicht unerhebliche
Variationen, ohne daB, zumal bei der Geringfflgigkeit des
Materials, eine diagnostisch verwertbare Scheidung moglich
war. Erwahnt sei aber, daB bei der Prflfung der durch
15 Minuten langes Erhitzen auf 55° inaktivierten Menschen-
sera 4 Proben, welche von 2 Nephritis- und 2 Ur&mief&llen
herrflhrten, die einzigen waren, welche im Verein mit Cobra-
Meerschweinchenserum komplette H&molyse herbeifiihrten; die
komplett losenden Dosen betrugen dabei 0,01—0,05—0,05—
0,025 ccm. In den flbrigen Fallen (1 Uramie, 1 Thrombo¬
phlebitis, 1 Dilatatio cordis, 3 Lues, 1 multiple Sklerose, 1 Myo¬
carditis, 3 ohne Diagnose) wurde auch mit 0,1 ccm nur eine

die geringste aktivierende Wirkung aus. Es verdient das vielleicht inso-
fern hervorgehoben zu werden, als in Parallel versuchen das thermo¬
inaktivierte Meerschweinchenserum zusammen mit dem Cobra-Meerschwein¬
chenserum auch ohne Ambozeptor eine hamolytische Wirkung verursachte,
obwohl es auf sensibilisiertes Blut im Verein mit Cobra-Meerschweinchen¬
serum weniger stark wirkte, als entsprechend inaktiviertes Ziegenserum.
Man darf hieraus wohl auf eine Difl'erenz im Zusammenwirken des
Meerschweinchenserums mit Cobragift einerseits, mit Immunambozeptoren
andererseits bei der Hiimolyse schlieBen (vgl.-hierzu auch Browning und
Mackie, 1. c.).

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544

Willy Jonas.

mehr oder weniger unvollst&ndige Hfimolyse erzielt. Nach
30 Minuten langem Erhitzen war die Funktion, als dritte
Komponente zu wirken, in alien untersuchten Fallen erheblich
reduziert, w&hrend nach nnr 5 Minuten langer Dauer des
Erw&rraens stets komplette Hfimolyse in den Dosen von 0,05
bis 0,01 ccm bewirkt werden konnte. Im letzteren Falle wird
man aber wohl eine Interferenz von Mittelstdckwirkungen zu
berticksichtigen haben.

Durch flberraschend starke Eignung, als dritte Kom¬
ponente zu wirken, ausgezeichnet erwies sich das Schweine-
serum. Ffir die auBerordentliche aktivierende Funktion,
welche das Schweineserum gegen fiber dem durch Cobragift
inaktivierten Meerschweinchenserum auszuGben imstande ist,
darf vielleicht im folgenden ein Versuchsbeispiel angefflhrt
werden.

Je 1 ccm sensibilisierten Hammelblutes wurden mit je 0,2 ccm Cobra-
Meerschweinchenserums und absteigenden Mengen aktiven reap, durch 15
und 30 Minuten langes Erhitzen auf 55°, durch 30 Minuten langes Er¬
hitzen auf 60° inaktivierten Schweineserums digeriert. Das Ergebnis zeigt
die folgende Tabelle.

M dos Hiimolyse von 1 ccm sensibilisierten Hammelblutes durch

~ . 0 9 fO ppm Pnhrfl-Mppraphwpiriptipnaprnm nnH nhcifpionpnHp

Schweine¬

serums

Mengen Schweineserums; letzteres:

ccm

i a .

! aktiv

b

! 15' 55° |

c

30' 55°

d

30' 60°

0,001

komplett j

komplett

komplett

komplett

0,0005

»

11 i

fast komplett

0.00025

u

11

stark

0.00015

n

\

11

»»

maSig

O.OCOl

jj

11

fast komplett

0,00005

fast komplett

11

11

0,000025

stark

stark

wenig

0,000015

stark

11

11

Spur

0,00001

r

miiBig

1 0

0 !

0

0

0 '

! 0

Wie die Tabelle zeigt, erweisen sich nach 15 Mi¬
nuten langem Erhitzen auf 55 ° noch V20000 ccm
Schweineserum, nach 30 Minuten langem Er-
wfirmen noch V10000 ccm als ausreichend, um die
Komplementwirkung des durch Cobragift inakti¬
vierten Meerschweinchenserums vollstfindig zu
restituieren. Erst nach 30 Minuten langem Erwarmen

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Wirk. versch. Serumarten auf das durch Cobragift inakt. Kompl. 545

auf 60° ist eine 10-fache Abnahme der Wirkung zu konstatieren,
wobei noch immer Viooo ccm zur Restitution hinreicht. Wenn
auch die Zahlen quantitativ variierten, so war doch in alien
untersochten Schweineserumproben die Wirkung eine auBer-
ordentlich starke (mindestens Viooo ccm nach V 8 -stttndigem
Erwfirmen auf 55°). Bemerkt sei, daB mit Cobragift allein
das Schweineserum bis zur Menge von 0,1 ccm in der be-
nutzten Anordnung keine aktivierende Funktion besaB. Ebenso
war jede h&molytische Wirkung zu vermissen, wenn Schweine¬
serum mit inaktivem Meerschweinchenserum, das zuyor mit
Cobragift bebandelt worden war, digeriert wurde.

Bei der ungewbhnlich starken F&higkeit des Schweine-
serums, als dritte Komponente zu wirken, muBte es von In-
teresse erscheinen, auch die tibrigen dem Schweineserum zu-
kommenden Komplementfunktionen (Mittelstiick und EndstQck)
etwas n£Lher zu analysieren. Dabei erwies sich zun&chst die
Eignung des Schweineserums zum Komplement (ohne weiteren
Zusatz) im aktiven Zustande als relativ geringgradig, und
bereits nach 5 Minuten langem Erhitzen auf 55° war eine
Komplettierung durch Schweineserum allein nicht mehr zu
erzielen. Ebenso konnte schon in dem durch 5 Minuten
langen Erw&rmen (55°) inaktivierten Schweineserum Endsttick
(bei Zusatz von Meerschweinchenmittelstiick) nicht nachge-
wiesen werden. Dagegen waren im Schweineserum betracht-
liche Mengen der Mittelstfickkomponente von nicht unerheb-
licher ThermostabilitSt festzustellen.

Zur Priifung auf Mittelstiickfunktion wurden absteigende Mengen
Schweineserums mit einer nach Vorversuchen geeignet erscheinenden End-
stiickdosis digeriert und mit sensibilisiertem Hammelblut gemischt. Die
Endstiickfraktion wurde (ebenso wie das Mittelstiick bei der Priifung auf
Endstiick) aus Meerschweinchenserum mittels des Liefmannschen CO,-
Yerfahrens in iiblicher Weise gewonnen. Das derart erhaltene Endstuck
entsprach demnach 5-fach verdiinntem Meerschweinchenserum.

Jedoch zeigte es sich, daB nicht etwa die starke Eignung
des Schweineserums zur Restitution des Cobra-Meerschwein-
chenserums durch den hohen Gehalt an Mittelstiick erkl&rt
werden kann. Denn es gelang ohne weiteres, zwischen den
Funktionen des' Schweineserums im Sinne des Mittelstiickes
und der dritten Komponente zu differenzieren. Einerseits
tibertraf nach relativ geringgradiger Thermoinaktivierung des

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546

Willy Jonas,

Schweineserums die Wirkung auf Cobra-Meerschweinchenserum
sehr erheblich diejenige auf Endstflck, andererseits konnte bei
geniigenden Warmeeingriffen ein ErlQschen der Mittelstflck-
funktion bei Erhaltenbleiben ernes wesentlichen Teils der
dritten Komponente beobachtet werden. Immerhin schien
aber ein gewisser Parallelismus in der St&rke der beiden
Funktionen zn bestehen. So war eine besonders stark wirk-
same Schweineserumprobe nach Vz'Stttndigem Erhitzen auf 55°
noch imstande, in der Menge von ^oooo ccm Cobra-Meer-
schweinchenserum zu aktivieren und in der Menge von Vioo ccm
komplette Hamolyse im Verein mit MeerschweinchenendstQck
hervorzurufen, w&hrend im aktiven Zustande bei gleichem Titer
der dritten Komponente V2000 ccm ffir die Mittelsttlckwirkung
ausreichte. Ein weiteres Versuchsbeispiel, das ein weniger
wirksames Schweineserum betrifft, zeigt die folgende Tabelle.

Absteigende Mengen

1) aktiven,

2) 15 Minutcn auf 55 °,

3) 30 „ „ 55°,

4) 30 „ „ 60°

erhitzten Schweineserums wurden unter Zusatz von

a) 0,1 ccm Cobra-Meerschweinchenserums (entsprechend 0,05 ccm Meer-
schweinchenserums);

b) 0,4 ccm Mcerschweinchen-Endstiicks (entsprechend 0,08 ccm Meer-
schweinchenserums) mit je 1 ccm sensibilisierten Hammelblutes digeriert.

Mengen d.
Schweine¬
serums

Hamolyse von 1 ccm sensibilisierten Hammelblutes durch Cobra-
serum (a) resp. Endstiick (b) und absteigende Mengen
Schweineserums

aktiv 15 1

55°

| 30'

55° |

| 30' 60

0

ccm

a

1 b I a I

b 1

a 1

b

a |

b

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VVirk. versch. Serumarten auf das durch Cobragift Lnakt. Kompl. 547

DieTabelle zeigt einerseits die starke Mittel-
stiickfunktion, welche das Schweineserum im ak-
tiven Zustande auszuiiben imstande ist, anderer-
seits aber die erhebliche Disproportionalitat,
welche zwischen der Wirkung des Schweine-
serumsalsMittelstttckundalsdritteKomponente
beim Inaktivieren wahrzunehmen ist. Es ergibt
sich mithin, daB auch fflr das Schweineserum zwischen dritter
Komponente und Mittelstiick scharf zu unterscheiden ist.
Beachtenswert ist immerhin der auffSllige Parallelismus,
welcher in qnantitativer Hinsicht zwischen beiden Funktionen
besteht. So ist in anderen Serumarten, welche, wie das ftlr
Meerschweinchenserum gilt, nur flber einen relativ geringen
MittelstOckgehalt verfiigen, auch die Eignung zur dritten
Komponente in erheblich niedrigerem MaBe ausgesprochen,
als im Sch weineserum. Vielleicht darf man dabei aber in
Betracht ziehen, daB die restituierende Wirkung des Mittel-
stficks durch den Gehalt an dritter Komponente wesentlich
beeinfluBt wird, zumal wenn man berttcksichtigt, daB die dritte
Komponente bei der Zerlegung des Serums in die Albumin-
und Globulinfraktion zum iiberwiegenden Teil in letzterer
enthalten ist (Ritz).

DaB die aus Schweineserum gewonnene Mittelstflckfraktion
im Verein mit Meerschweinchenendstuck besonders starke
Komplementwirkung auszuiiben imstande ist (0,01 ccm kom-
plett), hatte sich bereits aus Versuchen von E. Fr fink el er-
geben (cf. hierzu auch Marks und Braun). Die von Fr&nkel 1 )
vorgenommene nShere Analyse ergab aber. daB die dem
Schweineserum zukommende, die Komplementwirkung for-
dernde Funktion kaum allein dem Mittelstuck zugeschrieben
werden dfirfte, und FrBnkel laBt daher die Frage, ob es
sich allein um Mittelstiickwirkung handelt oder nicht, offen.
Nach den von mir erhobenen Befunden wird man wohl nicht
fehlgehen in der Annahme, daB in den Versuchen Fr&nkels
eine erhebliche VerstSrkung der h&molytischen Kraft durch
die dritte Komponente interferiert hat, welche eben im
Schweineserum in ganz besonderer Starke enthalten ist.

1) E. Frankel, diese Zeitschr., Bd. 10, 1911, p. 388.

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548

Lippmann und Pleach,
Zusammenfassung.

1) Bei der Untersuchung verschiedener Serumarten er-
wies sich Pferdeseram nicht Oder nur in geringem Mafie
geeignet, Cobra-Meerschweinchenserum zu aktivieren (Funktion
der dritten Komponente), wahrend die anderen geprflften
Serumarten (Kaninchen, Ziege, Rind, Hammel, Mensch, Schwein)
in mehr oder weniger hohem Grade die Fnnktion der dritten
Komponente austibten.

2) Die dritte Komponente besafi in alien Serumarten eine
relative Thermostabilitat, indem ihre Wirkung mit der Dauer
des Erwarmens sukzessive abnahra.

3) Von 15 untersuchten Proben menschlichen Blutserums
waren nach 15 Minuten langem Erhitzen anf 55° nur 4
(2 Nephritis- und 2 UrSmiefaile) imstande, im Verein mit Cobra-
Meerschweinchenserum komplette Hamolyse hervorzurufen.

4) Als am starksten wirksam erwies sich das Schweine-
serum, das nach 15 Minuten langem Erhitzen auf 55° gelegent-
lich noch in der Menge von Vsoooo - V40000 ccm zur kompletten
Hamolyse ausreichte. Auch die Mittelsttickfunktion ist im
Schweineserum besonders stark ausgeprkgt.

Nachdruclc verboten .

[Aus der zweiten medizinischen Klinik der Ch&ritd zu Berlin
(Direktor: Geh. Med.-Rat Prof. Dr. Kraus).]

Sind die Leukocyten die Quelle der Komplemente ?

Von Dr. Lippmann und Dr. Pleach,

Privatdozenten.

(Eingegangen bei der Redaktion am 3. Marz 1913.)

Bis in die allerjflngste Zeit vertritt Metchnikoff 1 ) den
Standpunkt, dafi „die in den Makrophagen der Lymphdrflsen,
des Epiploon und der Milz befindliche Makrocytase sich auch
in den mononuklearen Leukocyten des Blutes, der Lymphe
und der Exsudate vorfindet und mit der hamolytischen Cytase
des Blutserums identisch ist“. Und zwar ist Metchnikoff

1 ) Metchnikoff, Die Lehre von den Phagocyten und deren ex-
perimentelle Grundlage. In Kolle u. v. Wassermann, Handbuch der
pathogenen Mikroorganismen, Bd. 2, p. 652, Januar 1913.

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Sind die Leukocyten die Quelle der Komplemente? 349

weiter der Ansicht, daB diese in den Leukocyten befindlichen
Cytasen der Komplemente erst bei der ZerstQrung der Leuko¬
cyten, Oder „Phagolyse“ frei werden, daB „die hflmolytische
Substanz der ExsudatflQssigkeit aus Leukocyten der Bauch-
hohle stammt, die durch Phagolyse stark besch&digt wurden“.

Gegen diese Anschauung sind eine Anzahl Arbeiten 1 )
erschienen, die im wesentlichen darauf beruhen, die Inkongruenz
yon Leukocytenextrakten und Blutserum nachzuweisen, und
weiter darauf hinweisen, daB Blutserum und Blutplasma (also
ohne Phagolyse entstandene Blutflflssigkeit) in gleicher Weise
Cytase enthalten. Metchnikoff hat diese Einwfinde nicht
als flberzeugend anerkannt. Er rechnet mit der Mdglichkeit,
daB diese Inkongruenzen zwischen Serum und Leukocytenextrakt
auf der Verschiedenheit der Medien beruhen, aus denen sie er-
halten werden 2 ), ferner damit, daB die Extraktion aus den Leu¬
kocyten nicht nur fordernde, sondern auchhemmendeSubstanzen
extrahiert. Auch auf die sch&digende Wirkung des mehrmaligen
Waschens der Leukocyten hat er als Fehlerquelle hingewiesen.

Gegen die Annahmen, nach welchen Serum und Plasma in
gleicher Weise Komplemente enthalten, wendet Metchnikoff
ein, daB auch die besten kflnstlich erhaltenen Blutplasmen nicht
mit der Blutflflssigkeit des lebenden KOrpers flbereinstimmen.

Unter diesen Umstflnden studierten wir die Frage nach
der Herkunft des Komplements aus den Leukocyten von neuem.

Wir bedienten uns dazu der Eigenschaft des Thorium X
in groBen Dosen, alle Leukocyten aus dem Organismus zu
extingieren. Diese Wirkung des Thoriums hatten Pappen-
heim und Plesch 8 ) bei ihren Studien fiber die Ein wirkung
des Thoriums X auf den h&molytischen Apparat neben der
totalen Zerstdrung des Knochenmarks festgestellt

Wir versuchten zuerst Meerschweinchen mflglichst lange
mit einer mdglichst geringen Leukocytenzahl am Leben zu
erhalten und prflften, ob das hamolytische Komplement vor
der Thoriuminjektion und, als die Thiere einen moribunden
Eindruck machten, eine Verminderung des Titers zeigte.

1) Genaue Literaturangaben bei E. Friedberger, Die bakteri-
ziden Sera, und Hans Sachs, Hamolysine des Blutserum, im selben Bande.

2) Wir sehen ja auch in der Tat erhebliche Unterschiede, ob wir den
„hamolytischen Vorversuch“ mit 3 oder 5 ccm Gesamtvolumen anstellen.

3) Zeitschr. f. exper. PathoL u. Ther., Bd. 12, H. 1.

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550

Lippmann und Pleach,

V ersuchstechni k.

5. XII. 1912. Meerschweinchen 1, 2, 3, 4. Je 2 ccm Blut
durch Herzpunktion entnommen, sofort nach Gerinnung zentri-
fugiert, Serum im Frigo eingefroren. Meerschweinchen 1 und
2 erhalten intracordial je 185000 Macheeinheiten in 2 ccm
Flfissigkeit. Meerschweinchen 3 und 4 erhalten intracordial
2 ccm KochsalzlOsung.

Leukocytenbestimmung.
Tabelle I. Leukocytenzahlung.

Datum

Tier 1

Tier 2

Tier 3

Tier 4

Thoriumdoeis 5. XII. 1912

185 000 ME.

185 000 ME.

0

0

5. XII. 1912

13 500

10800

11500

9 800

6 . XII. 1912

4200

4600

10700

9260

7. XII. 1912

3 800

3900

8 .XH. 1912

3 600

4000

9. XII. 1912

2 800

2400

10. XII. 1912

1200

1400

9 900

10200

11. XII. 1912

400

480

12. XII. 1912

0

0

13. XII. 1912

0

0 1

i 8750

9900

13. XII. 1912. Meerschweinchen 1 und 2 extrem abge-
magert, machen einen moribunden Eindruck und werden ent-
blutet, ebenso werden Meerschweinchen 3 und 4 entblutet.

Zur Feststellung des Einflusses, den das Einfrieren und
die Aufbewahrung des Serums und die Blutverdflnnung durch
Blutentnahme und Ersatz durch gleiche Mengen Kochsalz-
ldsung gehabt hatte, wurde von den unbehandelten Meer¬
schweinchen 3 und 4 das Serum vom 5. XII. und 13. XII.
auf seinen Gehalt an h&molytischem Eomplement untersucht.

Tabelle II.

Berummenge

Meerschweinchen 3

Meerschwein chen 4

Serum vom

Serum vom

5.xn.

13. XII.

5. XII.

13. xn.

0,1

0,08

0,05

0,04

0,025

0,02

0,0125

0,01

0,1 Koi

k. L.
k. L.
k. L.
k. L.
k. L.
Schleier
f. k. L.
t k. H.
mplement alle

k. L.
k. L.
k. L.
f. k. L.
f. k. L.
f. k. L.
f. k. L.
f. k. H.
in bewirkt kei

k. L.
k. L.
k. L.
k. L.
f. k. L.
f. k. L.
kL Kuppe
gr. Euppe
ine Spur H&n

k. L.
k. L.
k. L.
f. k. L.
kl. Kuppe
kL Kuppe
gr. Kuppe
gr. Kuppe
lolyae.

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Sind die Leukocyten die Quelle der Komplemente?

551

Konstant waren HSmolysinverdunnung 1 : 100 eines
Serums, das gewohnlich in 2 Stunden in der Verdtinnung
1:2000 noch komplett ldste; 5-proz. Hammelblutaufschwem-
mung; Auffullen auf 5 ccm mit Kochsalzlosung, Ablesen nach
2 Stunden bzw. am n&chsten Morgen.

Somit war festgestellt, daB etwaige groBe LOsungsdifferenzen
nicht Folgen der Blutabnahme Oder der Fliissigkeitsinjektion
als solcher sein konnten. Wir machten also denselben Ver-
such mit den beiden mit Thorium X behandelten Tieren 1
und 2 bei gleicher Technik.

Tabelle III.

Serummenge

Meerschweinchen 1

Meerschweinchen 2

0,1

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,08

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,05

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,04

k. L.

k. L.

f. k. L.

kl. Kuppe

0,025

k. L.

f. k. L.

f. k. L.

kl. Kuppe

0,02

Schleier

f. k. L.

f. k. L.

kl. Kuppe

0,0125

f. k. L.

f. k. L.

kl. Kuppe

gr. Kuppe

0,01

gr. Kuppe

f. k. H.

kl. Kuppe

gr. Kuppe

0,1 Komplement ailein bewirkt keine Spur von Hiimolyse.

Somit war nachgewiesen, daB Tiere, die 1 Tag lang
mit sehr wenigen und 2 Tage lang ganz ohne Leukocyten
gelebt hatten, dieselben Komplementverh&ltnisse aufwiesen
wie Tiere mit intaktem hamatopoetischen und Leukocyten-
apparat.

Diese Versuche waren aber nicht beweisend. Wir wissen,
daB die Tiere eine groBe Neigung zur Konstanz ihres Komple-
mentgehaltes haben. Zeigten docli Tiere, denen man das
Komplement absorbiert hatte, bereits nach 2—4 Stunden in
den Versuchen von Scheller und Schiitze 1 ) eine Re¬
generation des Komplementes.

Wir Snderten infolgedessen die Versuchstechnik dahin,
daB wir durch sehr groBe Thoriumdosen eine gewaltige Phago-
lyse binnen ganz kurzer Zeit bewirkten. Wenn wirklich die
Leukocyten die Ursprungsstatte des Komplements waren, so

1) Zeitschr. f. Hyg., Bd. 36.

Zeitschr. f. linmunitatsforschung. Orig. Bd. XVII. 37

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552

Lippmann und Pleach,

muBte jetzt eine Steigerung des Komplementes auftreten, da
aus den Versuchen von Fas sin 2 ) hervorgeht, daB die Ver-
mehrung des Komplements erst nach 2—3 Tagen verschwindet.
Diese Steigerung blieb aus, wie das folgende Protokoll zeigt:

Meerschweinchen 5 (410 g).

12. XII. 1912, 2 Uhr, W — 13000, Herzpunktion. Entnahme von 2 ccm
Blut, Injektion von 2 ccm Thorium X rait 6400000 Macheeinheiten.

12. XII. 1912, 5 Uhr, W = 2900. Im gefarbten Praparate enveist
sich, daB auch die Zahl der groBen mononuklearen Zellen entaprechend
reduziert ist. Entnahme von 2 ccm Blut durch Herzpunktion.

13. XII. 1912, 12 Uhr, W =- 2500. Entnahme von 2 ccm Blut durch
Herzpunktion.

Meerschweinchen 6 (430 g).

12. XII. 1912, 2 7 , Uhr, W = 10200, Blutentnahme. Injektion von
5720000 Macheeinheiten.

12. XII. 1912, 5 1 /, Uhr, W = 3400, Blutentnahme, qualitativ unver-
andertes Leukocytenbild.

13. XII. 1912, 12*/, Uhr, W = 3000, Blutentnahme.

Um den EinfluB der verschiedenen Blutentnahmen und
der Aufbewahrung im Frigo auf den Komplementgehalt zu
kontrollieren, wurde wieder den gleich schweren normalen Meer¬
schweinchen 7 (425 g) und 8 (440 g) zu gleichen Zeiten Blut
entnommen und an Stelle der Thoriuminjektion die gleiche
Menge (2 ccm) Kochsalzlosung injiziert.

Tabelle IV.

Mtxirschweinchen 5 I Meerschweinchen 6

S*rum menge

vor der
Thor.-l nj.

3 Ptd.
danach

22 Std.
danach

vor der
Thor.-Inj.

3 Std.
danach

22 Std.
darnach

0.1

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,08

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,05

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0.04

k. L.

1 k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,< >25

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0.O2

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

k. L.

f. k. L.

Schleier

0.0125

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

k. L.

f. k. L.

f. k. L.

0,01

1 f. k. L.

! f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

2) Comptes-rendus de la Soci6t6 de Biologie, 1907.

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Sind die Leukocyten die Quelle der Komplemente ?

553

Serum menge

Meerschweinchen 7 (normal)

Meerschweinchen 8 (normal)

Blutentnahme

Blutentnahme

sofort

| 3 Std.

22 Std.

sofort

| 3 Std.

22 h spiiter

0.1

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

' k. L.

k. L.

0.08

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,05

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

0,04

k. L.

f. k. L.

k. L.

k. L.

Schleier

k. L.

0,025

Schleier

f. k. L.

k. L.

f. k. L.

f. k. L.

k. L.

0,02

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

0,0125

f. k. L.

f. k. L.

f. k. L.

kl. Kuppe kl. Kuppe

kl. Kuppe

0,01

gr. Kuppe

f. k. L.

f. k. L.

gr. Kuppe gr. Kuppe

gr. Kuppe

0,1 Komplement bewirkte nirgends allein Hiimolyse.

Aus diesen Tabellen geht hervor, daB die Phagolyse
jedenfalls keine Steigerung des Komplementgehaltes bewirkt
hat und daB die Faktoren der Blutentziehung ohne wesent-
lichen EinfluB auf die Komplementverhaitnisse sind.

Wir fuhrten diesen Versuch auch in der Weise aus, daB
wir bei konstanter Komplementdosis mit fallenden Hamolysin-
mengen arbeiteten. Wir suchten zu diesem Zweck 4 Tiere
aus, bei denen die Komplementtitration mit fallenden Kom-
plementmengen untereinander identische Hamolysin-komplet-
tierende Fahigkeit aufwies.

Meerschweinchen 9 wurde unbehandelt sofort entblutet.

Meerschweinchen 10 wurde mit 7000000 Macheeinheiten
gespritzt und nach 24 Stunden entblutet.

Meerschweinchen 11 wurde mit 7000000 Macheeinheiten
gespritzt und nach 24 Stunden entblutet.

Meerschweinchen 12 wurde zur Kontrolle 24 Stunden nach
Injektion von 2 ccm Kochsalz entblutet.

Tabelle V.

Hiimolysin-

verdunnung

Tier 9

Tier 10

Tier 11

Tier 12

Normaltier

6 Std. nach
Injektion von

7 000000 ME.

24 Std. nach
I njektion von
7000000 ME.

24 Std. nach
Injektion von
2 ccm NaCl

1:200

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

1:400

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

1:800

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

1:1600

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

1:3200

k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

1 :6400

f. k. H.

k. H.

f. k. H.

gr. Kuppe

1:12800

k. H.

k. H.

k. H.

f. k. tT

Koeh6alzkontrolle

k. H.

k. H.

k. H.

k. H.

Komplementkontr.

k. H.

k. H.

k. H.

k. H.

37*

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554 Lippmann u. Pleach, Sind Leukocyten d. Quelle d. Kompl.?

Der Versuch zeigte also auch keine Differenz zwischen
den normalen und akut phagolysierten Tieren.

Um aber alle Fehlerquellen zu umgehen, schlossen wir
noch folgende Versuche an. Wir prilften die Regeneration des
Komplements bei Tieren, denen wir durch hohe Thoriumdosen
Knochenmark und Leukocyten zerstdrt hatten und verglichen
diese mit Normaltieren.

Meerschweinchen 13 und 14 erhielten am 10. II. 13 eine
Injektion von 3200000 Macheeinheiten. Am 13. II. 13 war
bei beiden, wie durch zwei Untersuchungen im Abstand von
3 Stunden festgestellt wurde, ein vdlliges Verschwinden der
Leukocyten aus dem Blute aufgetreten. Beide Tiere erhielten
nun gleichzeitig mit zwei Kontrolltieren 2 ccm sensibilisiertes
Hammelblut (unverdunnten Hammelerythrocytenbrei und Ham-
melbluthamolysinverdiinnung 1:10 zu gleichen Teilen, nach
Vi-stiindigem Sensibilisieren im Brutschrank bei 37°) ins Herz
gespritzt. Nach 2 Stunden und nach 24 Stunden wurde Blut
zur Komplementbestimraung entnommen. Der Versuch verlief
folgendermaBen:

Tabelle VI. Tiere ohne Knochenmark und Leukocyten.

Tier 13

Tier 14

Serummenge

vor

2 h nach | 24 h nach

vor

| 2 b nach

24 h nach

der Einspritzung von sensibilisiertem Hammelblut

0.1

k. L.

k. L. k. L.

k. L.

k. L.

k. L.

■ O.08

k. L.

k. L. 1 k. L.

k. L.

gr. Kuppe
f. k. H.

k. L.

0.05

k. L.

f. k. L. ' k. L.

k. L.

k. L.

0,04

k. L.

gr. Kuppe k. L.

k. L.

f. k. H.

k. L.

0.025

0.O2

0.0125

k. L.
k. L.
f. k. L.

gr. Kuppe" k. L.
f. k. H. k. L.
k. H. f. k. L.

gr. Kuppe
gr. Kuppe
f. k. H.

k. H.
k. H.
k. H.

gr. Kupiie
gI k H* 1 *

0,01

f. k. L.

k. H. gr. Kuppe|

k. H.

k. H. |

k! h!

Normal tiere.

j Tier 15 ; Tier 16

Serummenge! vor j 2 h nach 1 24 h nach 1 vor j 2 h nach | 24 k nach

der Einspritzung von sensibilisiertem Hammelblut

0.1

k. L.

k. L.

k. L.

k.

L.

k.

L.

k.

L.

0.08

k. L.

k. L.

k. L.

k.

L.

f gr. Kuppe

k.

L.

0.05

k. L.

Schlcier

k. L.

k.

L.

k.

fl.

k.

L.

0.01

k. L.

kl. Kuppe

k. L.

k.

L.

k.

EL

k.

L.

0,025

k. L,

f. k. H.

k. L.

gr. Kuppe

k.

H.

f. k

. H.

0.02

k. L.

k. H.

Schleier

f. k

. H.

k.

H.

f. k

. H.

0,0125

f. k. L.

k. H.

f. k. L.

k.

H.

k.

H.

k.

H.

0,01 1

f. k. L.

k. H.

Kupjie

k.

H.

k.

H.

k.

H.

i

Bei Tier 11

$ und 15

Hlimolysinverdunnung 1 :

100.

Bei Tier 14 und 10 Hamolysinverdiinnung 1:1000.

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Karl Rotky, Die Spezifitat der bakteriolytiechen Immunkorper. 555

Somit war erwiesen, daB die Tiere, die keinen Leukocyten
und kein Knochenmark mehr hatten, in gleicher Weise Kom-
pleraent zu regen erieren vermochten wie die Normaltiere.

Zusammenfassung.

1) Durch Thorium X aleukocytfir gemachte Meerschwein-
chen besitzen in gleicher Weise h&molytisches Komplement
wie Normaltiere.

2) Akute im TierkSrper bewirkte Phagolyse macht keine
Steigernng des Gehaltes an hfimolytischem Komplement.

3) Der Leukocyten und des Knochenmarks beraubte Tiere
vermdgen in gleicher Weise das ihnen durch Einspritzung von
sensibilisiertem Blut absorbierte h&molytische Komplement zu
regenerieren wie Normaltiere.

Danach kSnnen also weder Leukocyten noch Knochenmark
als Ursprungsstatte des hamolytischen Komplementes ange-
sprochen werden.

Nachdruck verboten .

[Aus dem Hygienischen Institut der Deutschen Universit&t in
Prag (Vorstand: Prof. 0. Bail).]

Ueber die Spezifitat der von senslbilislerten Bakterlen

abgesprengten bakteriolytischen Immunkorper 1 ).

Von Karl Rotky.

(Eingegangen bei der Redaktion am 11. Marz 1913.)

Im AnschluB an die Untersuchungen fiber die Absprengung
der bakteriolytischen Immunkorper 2 3 ) von Choleravibrionen,
die in normalem Rinderserum sensibilisiert waren, wurden ein-
gehende Versuche fiber die Art des so gewonnenen Immunkdrpers
angestellt, da es von Anfang an sich ergeben hatte, daB diese
abgesprengten nun ein vom normalen Immunkorperabweichendes
Verhalten zeigen. Wie die zahlreichen diesbzflglichen Ver¬
suche nunmehr mit vollstfindiger Eindeutigkeit ergaben, handelt
es sich dabei um eine Verfinderung im Sinne der Spezifitat.

Sehon Bail und Tsuda*) haben eine gewisse Spezifitat der Wirkung
in Extrakten aus sensibilisierten Choleravibrionen gefunden, aber erst die

1) Ausgefuhrt mit Unterstiitzung der „ Gftdbchaft zur Fordeni
Deutscher Wissenschaft, Kunst und Literatur in Bohmen“.

2) Bail und Rotky, Versuche fiber die Bildung von bakteriolytischen
Immunkorpern. Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 17.

3) Bail und Tsuda, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 1. No. 3.

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556

Karl Rotky.

bedeutenden technischen und methodischen Verbesserungen, die sich irn
Verlauf der in der obenerwahnten Arbeit gemachten Versuche ergaben und
die neben der Heranziehung dea bakteriziden Flatten vers uches namentlich
darin bestandern, daB es gelang, Fliissigkeiten von vielfach starkerer Wir-
kung zu erhalten, als das zur Herstellung verwendete Normalserum, er-
inoglichten auch jetzt den Nachweis der Spezifitiit.

Gegen den denkbaren Einwand, man habe es in alien
derartigen Versuchen nicht mit einer wirklichen Verfinderung
der normalen Immunkorper, sondern nur mit einer Isolierung
bzw. Konzentration spezifischer, von Anfang an im Normal-
serum nebeneinander vorhandener zu tun, wurden schon von
Bail und Tsuda, sowie von Bail und Rotky Gegengrfinde
geltend gemacht und ich verweise deshalb nur noch besonders
auf die in einigen der nachstehenden Versuche sehr deutlich
zutage tretende Erscbeinung, daB die als „kttnstliche Immun-
sera u bezeichneten, durch Absprengung in aktivem Serum
hergestellten bakteriziden Flfissigkeiten, gegen heterologe
Bakterien deutlich „erschopft u sind: sie wirken viel schw&cher
als das normale Serum. Zun&chst wurden Extrakte unter-
sucht, die in der Weise hergestellt waren, daB die Vibrionen
in Rinderserum, das toils aktiv, teils inaktiv verwendet wurde,
sensibilisiert, gewaschen und in NaCl-Losung Oder verdunntem
Meerschweinchenserum abgesprengt wurden.

Versuch I.

2 Kulturen Cholera 74 werden fiber Nacht mit 15 ccm inaktivem
Rinderserum sensibilisiert, einmal gewaschen und mit 1 ccm NaCl-Losung
1 Stunde bei 42° extrahiert. Vor dem Versuch wurde der Extrakt und
das als Kontrolle verwendete Rinderserum A / ? Stunde auf 56° erhitzt.

Die Menge des Extraktes war 0,075, 0,025, 0,01 ccm, die Komplement-
menge 0,05 ccm Meerschweinchenserum.

Einsaat 0,075 Extr. 0,025 Extr. 0,01 Extr.
Cholera 74 17 000 224 88 23

Vibrio c 17 000 unzahlbar unzahlbar unzahlbar

Vibrio 134 50 000 50 000 30 000 50 000

Die Kontrolle mit Komplement allein ergab bei Cholera 74 und bei
Vibrio c unbeschrankte Vermehrung, bei Vibrio 134 16 000 Kolonien.

Das Rinderserum ergab in den gleichen Verdiinmingen folgende Zahlen :

Cholera 74 96 0 800

Vibrio c 16000 50 000 100000

Vibrio 134 54 4000 13 000

Versuch II.

2 Kulturen Cholera Konstantinopel w'erden fiber Nacht mit 20 ccm
inaktivem Rinderserum sensibilisiert, zw'elmal gewaschen und mit 1-fach

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Die Spezifitat der bakteriolytischen Immunkorper.

557

verdiinntem Meerechweinchenserum (2 ccm) 1 Stunde bei 42° extrahiert.
Vor dem Vereuche werden Extrakt und das zur Kontrolle verwendete, mit
der gleichen Menge Meerechweinchenserum verdiinnte Rinderserum */ 2 Stunde
auf 56° erwarmt. Die Komplementmenge betrug auch in diesem Versuche
sowie in alien folgenden, wo nicht auBdriicklich anderes erwahnt ist, 0,05 ccm
Meerechweinchenserum in 0,4 NaCl-Losung.

Einsaat

0,1 Extr.

0,05 Extr.

0,01 Extr.

Cholera

21000

144

280

290

Vibrio b

20000

50000

80000

22000

Vibrio g

8000

unzahlbar

unzahlbar

unziihlbar

0,1

Binders. 0,05 Binders. 0,01 Binders.

Cholera

5

768

20000

Vibrio b

160

726

4000

Vibrio g

11

144

8000

Komplementkontrolle, Cholera Konstantinopel und Vibrio g oc, Vi¬
brio b 30000.

Vereuch III.

1 Kultur Vibrio 134 liber Nacht mit 20 ccm inaktivem Rinderserum,
dann mit frischem inaktiven Rinderserum durch 25 Minuten bei 37° be-
handelt, in 1 ccm 1-fach verdiinntem aktiven Meerechweinchenserum
1 Stunde bei 37° abgesprengt.

Als Kontrolle Rinderserum 56 0 mit der gleichen Menge Meerechwein-
chenserum verdiinnt Alle Proben wurden 1 / 2 Stunde auf 56° erwarmt.

Vibrio 134 Choi. Konstpl.

0,1

Extrakt + 0,05 Kompl.

3

16000

0,05

1

17 000

0,01

»♦ 4~ a

0

38000

0,1

Rindere. + „ „

72

31

0,05

» 4~ ti v

96

40

0,01

4" H

48

3000

Komplementkontrolle

656

21000

Obwohl dieser Vereuch durch die Eigenwirkung des Komplements auf
den Vibrio 134 etwas beeintrachtigt wird, ist er doch durch die fast voll-
stiindige Unwirksamkeit desselben Extraktes auf die Cholera bemerkenswert.

Vereuch IV.

2 Kulturen Cholera Kraus werden mit 25 ccm inaktivem Rinderserum
a / 4 Stunden bei 42° sensibilisiert, einmal gewaschen und mit 2 ccm NaCl-
Ltfsung + 0,5 ccm aktivem Meerechweinchenserum 1 Stunde bei 42 0 ex¬
trahiert. In der gleichen Weise mit Meerechweinchenserum verdiinntes
inaktives Rinderserum dient als Kontrolle; beide Fliissigkeiten J / 2 Stunde
bei 56°.

Einsaat Choi. Kraus Choi. Konstpl. Vibr. 11 El Tor

0,075 Extrakt + 0,05 Kompl. 1712 768 unziihlb. 72

0,01 „ + „ „ 2224 3116 „ 12 000

0,075 Rindere. + „ „ 528 84 100 000 48

0,01 „ + „ „ 612 96 250000 1416

Komplementkontrolle 200 000 uberall unzahlbar

Die Einsaat betrug beim Vibrio 11 250000, bei alien anderen 200000.

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558

Karl Rotky,

Versuch V.

1 Kultur Vibrio 134 wurde fiber Nacht bei Zimmertemperatur mit
25 ccm inaktivem + 15 ccm aktivem Rinderserum sensibilisiert, einmal ge-
waschen und in 1 cem 1-fach verdiinntem aktiven Meerschweinchenserum
1 Stunde lang bei 42 0 abgesprengt. Ebenso wie das als Kontrolle verwendete,
mit der gleichen Menge Meerschweinchenserum gemischte Rinderserum
Vj Stunde bei 56°. Dieser Versuch wurde mit einer Koraplementmenge
von 0,06 ccm angesetzt.

Eins. Vibr. 134

Eins. Choi. Konstpl.

Eins. Vibr. m

= 7000

= 200000

= 832

0,1 Extrakt

432

100000

4000

0,035 „

304

30000

9000

0,005 „

1962

unziihlbar

17 000

0,1 Rinders.

5

1172

208

0,035 „

3000

80000

730

0,05

2100

11000

624

Kompl.-Kontr.

23000

unziihlbar

25000

Im folgenden seien einige Versuche angefflhrt, in denen
die Spezifitat auf dem Wege der Extraktersch5pfung gezeigt
wird; es handelt sich namlich darnm, zu zeigen, dafi die
ImmunkOrper des Extraktes nur durch die entsprechenden
Bakterien gebunden werden, wahrend fremde Bakterien den
Extrakt unverandert lassen.

Versuch VI.

4 Kulturen Cholera 74 werden mit 30 ccm inaktivem + 10 ccm aktivem
Rinderserum 1 Stunde bei 37 0 sensibilisiert, 1 mal gewaschen und in 3 ccm
1-fach verdiinntem Meerschweinchenserum 1 Stunde lang bei 42° abge-
gesprengt, Extrakt A; zu 0,3 ccm Extrakt A werden 0,7 ccm NaCl-Losung
zugesetzt.

Der Extrakt wird durch 7* Stunde bei 37° mit den Bakterien be-
handelt, die hierauf durch Zentrifugieren entfernt werden.

1 ccm verd. Extr. A + 1 Kult. Choi. 74 gibt den Extr. I

1 ,, ,, »♦ A -f- 1 ,, ,, Konst. ,, ,, ,, II

1 „ ,, „ A + 1 „ Vibr. 134 „ „ „ III

Der unbehandelte Extrakt ist als Extrakt A bezeichnet. Als Kontrolle
0,3 (Rinderser. + Meerschweinchenser. aa) + 0,7 NaCl. Alle Flussigkeiten
wurden 7, Stunde auf 58° erwarmt. Das Komplement ist hier nur in
einer Menge von 0,025 ccm verwendet und hat allein gar keine bakterizide
Wirkung. Die Extrakte erwiesen sich als steril. Einsaat Choi. 74 = 50000.

Extr. A

„ I
„ II
„ III
Rinderser.

0,15 ccm
112

100 000
150000
5 000

19

0,075 ccm
112
150 000
150 000
168
96

0,01 ccm
240

200000
200000
2 000
8 000

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Die Spezifitat der bakteriolytischen Immunkorper.

559

Vereuch VII.

Hersteilung des Extraktes wie im vorigen Vereuch.

0,3 Extr. A + 0,7 NaCl + 1 Kult. Choi. 74 = Extr. I

„ „ A + „ „ + 1 ,, Vibrio 134 = „. II

>» »* A + „ „ 4” 1 ,, ,, 6 = »» 111

3 / a Stunden bei 42° behandelt, hierauf zentrifugiert. Alle Fliissigkeiten
V, 8tunde auf 56° erwarmt, wodurch sie, wie Ausstriche auf Agarergeben,
vollkommen steril werden.

Extrakt I

II

III

0,1 Extr. 4- 0,035 Kompl.

4000

80

112

0,075 ,, 4- » ,»

15000

0

2

0,01 • „ 4- „

200000

992

1056

Der unbehandelte Extr. A ergab mit der gleichen Korn piemen tmenge
und Einsaat folgende Zahlen:

Extrakt A Rindereerum 56°

0,05 0 3

0,01 240 5

0,005 736 9

0,0025 752 17

0.001 376 144

0,0005 3000 13 000

0,0001 3000 16000

0,00001 1008 40 000

Die Komplementkontrolle ergab 150000 Kolonien, die Einsaat betrug
5000 Keime.

DaB die Spezifitat auch dann zutage tritt, wenn die Ab-
sprengung derartig sensibilisierter Vibrionen im Korper des
lebenden Meerschweinchens erfolgt, zeigt der folgende Ver-
such (abnliche Versuche sind auch in der bereits mehrfach
zitierten Arbeit von Bail und Rotky angefflhrt).

Vereuch VIII.

Einem Meerechweinchen wird aus der Carotis Blut entnommen, welches
das Serum A liefert; sodann wird dem Tier eine 2mal hintereinander mit
je 10 ccm inaktivem Rindereerum sensibilisierte und gewaschene Kultur von
Cholera 74 intravenos injiziert. Das Tier starb 1 Stunde nach der In-
jektion. Sein Blut gab das sterile Serum B; beide Seren wurden 1 / i Stunde
bei 56° inaktiviert. Die Komplementmenge betrug 0,05 ccm.

0,1 Ser. A

Eins. Choi. 74
= 20000
unzahlbar

Eins. Vibr. 134
= 30000
150000

Eins. Tvphus

= ioo'ooo

50000

0.05 „ A

200000

100000

0.01 „ A

>>

unzahlbar

109000

0,1 Ser. B

4000

unzahlbar

unzahlbar

0,05 „ B

21000

If

jf

0,01 ., B
Komplementkontr.

23 000

fj

150 000

unziihlbar

150000

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560

Karl Rotky,

Versuch IX.

In ahnlicher Weise wie im vorhergehenden Versuch wird einem Meer-
schweinchen eine mit 10 ccm inaktivem Rinderserum iiber Nacht sensibili-
sierte Kultur von Cholera Konstantinopel in die Jugularvene injiziert und
das Tier, das keine besonderen Krankheitssymptome zeigt, nach 2 Stunden
verblutet: Ser. B.

Eine Blutentnahme vor der Injektion gab das Ser. A. Je 0,3 ccm
Ser. B wurden durch 1 Stunde mit einer Oese Choi. Konstantinopel (Ser. I),
Vibrio b (Ser. II) und Typhus (Ser. Ill) bei 38° behandelt. Alle Sera
*/ s Stunde auf 56° erhitzt. Die Komplementmenge betrug 0,05 ccm.

Eins. Choi.
= 150000

0,1 Ser. A unzahlbar

0,05 „ A

0.1 „ B 2 500

0,05 „ B 3 000

0.1 Rinderser. (56°) 5

0,05 dgl. 124

Eins. Vibr. b Eins. Typhus

= 60000

= 100 000

60000

100 000

60000

100 000

100 000

100000

80000

100000

50 000

45 000

1 568

32 000

Komplementkontrolle liber all unzahlbar.

Die Sera I—III ergaben mit dereelben Komplementmenge und der-
selben Einsaat Choi. Konstautinopel folgende Werte:

Ser. I Ser. II Ser. Ill

0.1 unzahlbar 7000 4000

0,05 „ 9000 4000

Bemerken8wert ist bei diesem Versuch die Erscheinung, dafi der
choleraahnliche Vibrio immerhin eine gewisse Menge der Immunkorper aus
dem Serum herausnimmt, wahrend der Typhus es nahezu unverandert liifit.

In einer weiteren Versuchsreihe soli nun noch gezeigt
werden, daB die gleiche Spezifitat der Wirkung auch dann
hervortritt, wenn als Absprengungsmittel dasselbe Serum ver-
wendet wird, das zur Sensibilisierung diente. Wie Bail und
Rotky gezeigt haben, ist eine solche Absprengung nur bei
Verwendung aktiver Flflssigkeiten moglich, sei es, daB die
sensibilisierten Bakterien mit aktivem Serum extrahiert werden,
oder daB schon zur Sensibilisierung aktives Serum genommen
wird. In den folgenden Versuchen wurde der technische Fort-
schritt der „momentanen tt Sensibilisierung in Anwendung ge-
bracht, die darin besteht, daB die Vibrionen in aktivem Rinder¬
serum aufgeschwemmt und sofort, meist ehe eine sichtbare
Agglutination eintrat, in eine Zentrifuge von holier Touren-
zahl gebracht wurden; das Zentrifugieren ging rasch vor sich,
und es trat dabei in der Regel keine oder nur sehr geringe
Bakteriolyse ein. Bemerkenswert ist die Erscheinung, daB

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Die Spezifitat der bakteriolytischen Immunkdrper. 561

auf diesem Wege von cholera&hnlichen Vibrionen wirksame
Extrakte flberhaupt schwer und nur dann erhalten wurden,
wenn die Sensibilisierung etwas verl&ngert, am besten bis zu
den ersten auftretenden Spuren von Agglutination (2—10
Minuten) vorgenommen wurde. Es h&ngt diese Erscheinung
jedenfalls mit der geringeren Empfindlichkeit dieser Vibrionen,
die eine Verl&ngerung der Reaktionszeiten zur Folge hat, zu-
sammen.

Versuch X.

Eine Kultur Cholera Konstantinopel wird mit 10 ccm aktivem Rinder-
serum bei 37° bis zu starker Agglutination (5 Minuten behandelt, zentri-
fugiert und mit 1 ccm aktivem Rinderserum 1 Stunde bei 40° extrahiert.
Als Kontrolle dient aktives Rindereerura. Vor dem Versuch, der mit einer
Komplementmenge von 0,05 ccm angesetzt wird, werden Extrakt und
Kontrollserum 7? Stunde auf 56° erwarmt.

Die Einsaat betrug fiir Cholera Konstantinopel 50000, fur Vibrio 134

100000; die Zahlen

in der Klammer gelten

fur den Vibrio 134.

Extrakt

Rinderserum

0,1

40 (100000)

32 (0)

0,05

1500 ( 20000)

25 12)

0,01

2000 (100000)

100000 (96)

Komplementkontrolle Cholera: 50000, fur Vibrio: 100000

Sehr auffallend ist hier die vollstandige Unwirksamkeit des Extraktes
auf den Vibrio 134 zu erkennen, wahrend das zur Extraktbereitung ver-
wendete Serum selbst sehr stark auf ihn wirkt. In der niedrigsten Dosis
tritt auSerdem die erhohte Wirksamkeit des Extraktes gegeniiber dem
Rinderserum auf Cholera deutlich hervor.

Versuch XI.

2 Kulturen Cholera 74 mit 20 ccm aktivem Rinderserum kurz sensi-
bilisiert, in 2 Teilen zentrifugiert; der eine Teil mit 1 ccm aktivem, der
andere mit 1 ccm des uberetehenden („erschflpften“) Serums 1 Stunde bei
37° abgesprengt. Als Ser. I und II bezeichnet. Als Kontrollen aktives
und erschopftes Serum.

Alles 7 a 8tunde auf 56°. Komplementmenge = 0,05 ccm.

Eins. Choi. 74 Eins. Choi. Konst. Eins. Vibrio 134

= 500000

= 75 000

= 100 000

0,025 Ser. I

19 000

208

50000

0,005 „ I

5 000

4 000

48000

0.025 „ 11

5 000

380

13 000

0,005 „ II

23 000

6 000

28000

0,025 akt Rindcreer.

7000

17 000

304

0,005 dgl.

12 000

18000

6 000

0.025 ersch. Ser.

50 000

75 000

10000

0,005 dgl.

unzahlbar

75 000

21 000

Komplernentkontr.

unziililbar

9 000

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562

Karl Rotky,

Das aktive Serum, welches in den gewahlten Doeen auf die Cholera-
stamme nur schwach wirkt, wird durch die kurze Behandlung mit Cholera
fiir Cholera wie fiir den Vibrio 134 unwirksam, das erschSpfte Serum wird
nur fiir beide Cholera erganzt, das Serum I wirkt nur auf die beiden
Cholerastamme.

Versuch XIL

Wiederholung des vorigen Vereuches mit Vibrio 134. Gleiche Be-
zeichnungen. Der Vereuch wird mit einer Komplementmenge von 0,05 ccm,
einer Einsaat Vibrio 134 = 60000, Cholera 74 = 150 000 angesetzt. Die
Zahlen in der Klammer beziehen sich auf die Cholera.

Serum I

0.05 3000 (13000)

0,01 2100 (15000)

0,005 2000 (18000)

Serum II
6000 (12000)
3000 (14000)
2000(15000)

akt. Serum

224 (24)
240 (1408)
784 (7000)

ersch. Serum
60000(17000)
31000(28000)
21000(45000)

Die Komplementkontrolle ergab fiir Vibrio 134: 14000, fiir Cholera
74: unzahlbar.

Auch hier fallt vor allem neben der Spezifitiit der Sera I und II
die nichtspezifischc Erschopfung des aktiven Rinderserums auf.

In noch viel schonerer Weise trat aber die Erscheinung
der spezifischen Wirkungsweise bei den als „kflnstliche Immun-
sera“ bezeichneten Extrakten hervor. Diese wurden in der
Weise hergestellt, dafi die Vibrionen in groBen Mengen
aktiven Serums (meist 50—80 ccm pro Kultur) „momentan
sensibilisiert und in wenig aktivem Serum (ca. 1—2 ccm pro
Kultur) extrahiert wurden.

Versuch XIII.

1 Kultur Cholera 74 in 72 ccm aktivem Rinderserum „momentan“
sensibilisiert, in 1 ccm aktivem Rinderserum 1 Stunde long bei 42°
digeriert. Mit dem als Kontrolle verwendeten aktiven Rinderserum
1 /„ Stunde auf 56° erwiirmt. Die Einsaat von Cholera 74 betnig 16000,
die des Vibrio b, auf den sich die Zahlen in Klammern beziehen, 5000
Keime. Komplementmenge = 0,05 ccm.

Extrakt akt. Rinderserum
0.01 12 (7000) 514 (864)

0,005 0 (4000) 5 (896)

0,001 0 (4000) 15000 (1032)

0,0005 112 (40000) 12000(30000)

Die Komplementkontrolle ergab fiir die Cholera 300000, fiir den
Vibrio unzahlbar viele Keime.

Versuch XIV.

1 Kultur Vibrio 134 wurde mit 50 ccm aktivem Rinderserum bis
zur Agglutination (ca. 3 Minuten) behandelt und in 1 ccm aktivem Rinder-
serum 1 Stunde lang bei 38° digeriert; vor dem mit 0,05 ccm Komple-

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Die Spezifitat der bakteriolytischen Immunkorper.

563

ment angesetzten Vereuch wurde Extrakt und aktives Kontrollrinderserum
*/, Stunde bei 56° inaktiviert.

Zur Einsaat wurde Vibrio 134 und Cholera 74 verwendet. Die
Zahlen in der Klammer beziehen sich auf Cholera.

Extrakt akt. Rinderserum

0,2

0 (104)

248 (15)

0,1

0 (96)

144 (9)

0,01

48 (6000)

3000 (5000)

0,001

560 (150000)

9000(14000)

0,0001

8000 (unzahlbar)

8000 (150000)

Die Einsaat Vibrio 134 betrug 45000 Keime, die Einsaat Cholera 74
16000, die Komplementkontrolle ergab die Zahlen 9000 und unziihlbar.

Das Rinderserumextrakt ist somit gegen Vibrio 134 unter Beriick-
siehtigung der Komplementwirkuug in seiner Wirkung erhoht, gegen die
Cholera deutlich abgeschwacht.

Da bei diesen Versuchen dem Nachweis der Spezifitat
insofern Schwierigkeiten erwuchsen, als es nicht recht geiang,
einen Vibrio za finden, der vom normalen Rinderserum in
gleicher Weise beeinfluBt wurde, wie die Cholera, und andere
Bakterien dessen Einflufi meist nur in sehr hohen Dosen
unterlagen, war auch hier die Methode der Extrakterschopfung
der gfinstigste Weg, nm zum Ziele zu gelangen. Im folgenden
seien daher noch einige derartige Versuche mitgeteilt.

Versuch XV.

Eine Kultur Cholera 74 wird mit 10 ccm aktiveni Rinderserum, das
auf 37° vorgewarmt war, momentan sensibilisiert und zentrifugiert; der
Bodensatz wird in 2,5 ccm des uberstehenden, erschopften Serums durch
s / i Stunden bei 40° abgesprengt, dieser Extrakt I mit verschiedenen
Bakterien, die vorher bei 60° abgetotet wurden, behandelt.

0.5 ccm Extrakt I behandelt mit 7* Kultur Cholera 74 ergibt den
Extrakt II, dieselbe Extraktmenge behandelt mit Typhus den Extrakt III,
mit Vibrio 134 den Extrakt IV. Die Komplementmenge betrug 0,05 ccm
und lieS fur sich allein unzahlbare Vermehrung zu, die Einsaat der
Cholera 74 war 75000 Keime. Alle Extrakte, so wie das aktive und das
erschopfte Rinderserum die als Kontrolle dienten, wurden 7* Stunde l>ei
56° inaktiviert.

0,075 ccm
0,025 „

0,075 „
0,025 „

akt. Rinderserum ersch. Rinderserum Extrakt I

96 21000 7000

1008 60000 15000

Extrakt II
200000

unzahlbar

Extrakt III

7000

16000

Extrakt

18000

19000

IV

Der Extrakt ist, wohl infolge der geringen zur Sensibilisierung l>e-
niitzten Serummenge, schwach und zeigt ebenfalls die bereits erwiihnte
Erscheinung, dafi der choleraiihnliche Vibrio 134 immerhin eine gewisse

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564

Karl Rotky,

Absehwiichung dee Extraktes zur Folge hat, wiihrend der Typhus den
Extrukt vollkommen unbeeinfluBt liifit.

Versuch XVI.

1 Kultur Cholera 74 in 54 cem kaltem aktiven Rinderserum momentan
sensibilisiert und in 1,6 com aktivem Rinderserum 1 Stunde lang bei 40°
digeriert, ergibt den Extrakt I; je 0,5 ccm davon mit 3 Oesen a) Cholera 74,
b) Vibrio g */* Stunde bei 40° behandelt, seien als Extrakt II und III
bezeichnet. Alle Extrakte sowohl, wie auch das als Kontrolle verwendete
aktive Rinderserum werden ! / f Stunde bei 56° inaktiviert und sterilisiert.
(Letzteres wurde durch Agarplatten kontrolliert.)

Zum Versuch wurde eine Komplementmenge von 0.05 ccm bei einer
Einsaat Cholera 74 = 11000 verwendet.

0.1

Extrakt I

Extrakt II
unzahlbar

Extrakt III

56

akt. Rinderserum
5

0.O5

—

99

98

496

0,01

—

99

120

336

0.0 )5

1500

5T6

815

0.0(1

180)

9 »

2300

11 000

0,0005

50 K)

99

7000

15 000

Derselbe Extrakt ergab bei emer Einsaat von 10000 Vibrio g mit
der gleichen Komplementmenge in den Dosen 0,15 und 0,1 folgende Werte;
die Zahlen in Klammern gel ten fur die entsprechenden Mengen Rinder¬
serum: 496 (72) und 1056 (64). Die Korn piemen tkontrolle war unzahlbar.

Versuch XVII.

1 Kultur Cholera 74 mit 60 ccm aktivem Rinderserum momentan
sensibilisiert und in 2 ccm aktivem Rinderserum 8 / 4 Stunde lang bei
40° abgesprengt: Extrakt I. Je 0,5 ccm dieses Extraktes mit 7» Kultur
Cholera 74 (Extrakt II), Cholera Konstantinopcl (Extrakt III) und Vibrio b
(Extrakt IV) \ 4 Stunde bei 40° behandelt ; Extrakte und Kontrollrinder-
serum J ? Stunde bei 56° inaktiviert und sterilisiert. Komplement¬
menge = 0,05 ccm. Einsaat Cholera 74 — 10UX) Keime.

Extrakt I Extrakt II Extrakt III Extrakt IV akt. Rinderserum
0,1 5 unziihlbar unzahlbar 10 000 2

0.01 7 „ „ 6000 14 000

0,0oi 12 „ „ 1200 9 000

0,0001 52 „ „ 5 000 80 COO

Das Komplement allein liefi unendliche Vermehrung zu.

In diesern Versuche ist besonders die ungleich hohere Wirkung des
Extraktes gegeniiber dem zu seiner Herstellung verwendeten Rinderserum
eklatant, der choleraiihnliehe Vibrio b nimmt nur einen Teil des Immun*
korpergehalts aus dem Extrakt, durch beide Cholerastiimme wird derselbe
aber total erschopft.

Versuch XVIII.

1 Kultur Cholera 74 mit 80 ccm aktivem Rinderserum momentan
sensibilisiert, in 3 ccm aktivem Rinderserum 3 / 4 Stunde bei 38° digeriert,
gibt den Extrakt I.

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Die Spezifitiit der bakteriolytischen Immunkorper.

565

0,5 Extrakt I behandelt mit ’/* Kultur Cholera 74 Extrakt II

dgl. ,, „ „ „ Vibrio 134 ,, III

„ „ „ „ „ Typhus murium „ IV

Die Behandlung wird bei 40° eine halbe Stunde lang vorgenommen;
alle Extrakte und die Rinderserumkontrolle l /j Stunde bei 56° inaktiviert
Einsaat Cholera 74 = 80000, Komplement in einer Menge von 0,05 ccm.

Extrakt I Extrakt II Extrakt III Extrakt IV akt. Rinderserum

0,1 0 200000 28 5 7 000

0.01 0 300000 20 72 7 000

0,001 3 unzahlbar 1200 12 80 000

0,0001 80000 „ 80000 unzahlbar 200000

0,1 Extrakt I enthielt 0 Keime, 0,1 Extrakt II: 0, 0,1 Extrakt III:
136 Keime und 0,1 Extrakt IV: 120 Keime. Das erklart die anscheinend
geringe Abschwachung der Extraktwirkung im dritten und vierten Extrakt
vollkommen. Auch hier ist die Wirkung des Rinderserums unvergleichlich
schwacher als die des Extraktes 1 ).

Zusammenfassung.

Von Cholera und choleraShnlichen Vibrionen, die in
normalem Rinderserum sensibilisiert wurden, lassen sich durch
Absprengung in physiologischer Kochsalzlosung und verdttnntem
Meerschweinchenserum Extrakte herstellen, die unter Zusatz
von Komplement bakteriolytisch wirksam sind. Die Wirkungs-
weise derartiger Extrakte ist eine spezifische; die Spezifitat
ist zwar nicht absolut, aber der von Immunserum vollkommen
analog.

Die von Bail und Rotky als „kunstliche Immunsera u
bezeichneten Extrakte mit aktivem Rinderserum zeigen nicht
nur eine um das Vielfache erhQhte Wirksamkeit fur die
Bakterienart, mit der sie hergestellt wurden, sie sind vielmehr
auch so spezifisch, das sie auf heterologe Bakterien im wesent-
lichen viel schwacher als das Rinderserum selbst wirken.

1) Die Cholera Konstantinopel verdanken wir Herrn Prof. Kraus,
die Cholera 74, Cholera 70 und Vibrio 134 Herrn Prof. Neufeld, die
mit Buehstaben bezeichneten Vibrionen wurden dem Institut von den
Herren Proff. Dunbar und Trautmann iiberlassen; es sind Elb-
vibrionen, deren Hamburger Sammlungsbezeichnung folgende ist:

Vibrio a «= 10875/11, Vibrio b = 9042/11, Vibrio c = 11184 11,
Vibrio g = 11 608/11, Vibrio m = 7747/11.

Die Vibrionen a, b und m waren Leuchtvibrionen.

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566

Oskar Bail und Karl Rotky,

Nachdruck verboten.

[Aus dem Hygienischen Institute der Universitat Prag.]

Gewinnung h&molytischer Flfissigkeiten auBerhalb des

TIerkOrpers.

Von Prof. Dr. Oskar Bail und Priv.-Doz. Dr. Hans Rotky.

(Eingegangen bei der Redaktion am 11. Miirz 1912.)

Die nachfolgend kurz mitzuteilenden Versuche stellen eine
Erweiterong der kflrzlich in dieser Zeitschrift veroffentlichten
Experimente dar, auBerhalb des Tierkorpers Flilssigkeiten aus
Normalserum zu gewinnen, welche als Analojga der im Tier-
korper durch spezifische Vorbehandlung gewonnenen Iramun-
kSrper zu betrachten sind.

Indem beziiglich der Literaturangaben und aller Details der einge-
haltenen Methodik auf die daselbst 1 ) gegebene Darstellung verwiesen sei.
moge hier nur eine kurze Darlegung der gezogenen SchluBfolgerungen ge-
geben werden. Es war in Verfoigung iilterer Arbeiten von Bail und
Tsuda, die sich wieder hauptsiichlich an Ermittelungen von Pfeiffer
und Friedberger anlehnten, gelungen, aus Normalserum, welches zur
Sensibilisierung von Choleravibrionen gedient hatte, Fliissigkeiten zu er-
halten, welche starker als das Ausgangsserum und dabei spezifisch bak-
teriolytisch waren. Daraus wurde der SchluB gezogen, daB eine kiinstliche
Dai*stellung bakteriolytischer Sera auBerhalb des Tierkdrpers moglich sei
und die genaue Verfoigung von deren Entstehungsweise fiihrte zu einer
Theorie der Antikorperbildung iiberhaupt, welche in wesentlichen Punkten
von der zurzeit meist herrschenden Ehrlichschen Anschauungsweise ab-
wich. Der fur die kiinstliche Immunserumgewinnung eingeschlagene Weg
bestand darin, daB Choleravibrionen mit aktivem Normalrinderserum ganz
kurz, so daB noch keine sichtbare Bakteriolyse eintrat, behandelt wrurden.
Wurden solche dann in frischem aktiven Rinderserum einige Zeit lang,
meist unter Granulabildung gehalten, so gaben sie, wie der bakterizide
Plattenversuch lehrte, an dieses die vorher aufgenommenen Immunkorper^
und zwar otfenkundig in veranderter Form ab, denn jetzt war eine Spe-
zifitat ihrer Wirkung unverkennbar.

Unter der Voraussetzung, daB im Tiere sich bei z. B. intravenoser Vor¬
behandlung analoge VerhiQtnisseergeben, wurde daraus gefolgert, daB auch
dort sich erst eine Immunkorperbindung, dann eine Ablosung derselben er-
eigne. Als Folge des zeitweiligen Aufeinanderwirkens von Antigen und
Normalimmunkorper ergibt sich das Spezifischwerden der neuen Immun-
kbrper, die also tatsiichlich bis zu einem gewissen Grade Abkommlinge des
injizierten Antigens sind. So klar die Punkte, in denen eine auf 6olche
Auffassungen gestiitzte Theorie der Antikorperbildung sich von der Ehr-

1) Diese Zeitschr., Bd. 17.

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Gewinnung hiimolytischer Fliissigkeiten auGerhalb d. Tierkorpers. 567

lichschen unterscheiden muB, auch sein mogen, so diirfte es doch nicht
ohne Zweck sein, etwas genauer darauf einzugehen. Die Seitenkettentheorie
erklart durch Annahme einer Ueberregeneration von Zellrezeptoren als
Grundlage der spater ins Blut iibertretenden Immunkorper das quantitative
Verhiiltnis zwischen injiziertem Antigen und gebildetem Antikorper sehr
befriedigend, gibt aber fur die iiberaus wichtige Frage der Antikorper-
spezifitiit genauer genommen uberhaupt keine Erklarung. Sie weicht einer
solchen vielmehr aus, indem sie eine groBe, fast unerschopfliche Menge von
Zellrezeptoren als von vornherein gegeben postuliert. Dadurch kommt sie
konsequent zu der von Anfang an sehr schwer zu akzeptierenden Vor-
stellung, dafi schon im normalen Blute soviet verschiedene Immunkorper
vorhanden sein miifiten als es Antigene gibt, mit denen das Versuchstier
zu reagieren vermag.

Im Gegensatz dazu nimmt die vorgelegte Theorie an, daB zwar sehr
viele Immunkorper schon im Normalblute vorhanden seien; aber diese sind
noch durchaus undeterminiert, konnen ebenso gut gegen das Antigen a
wie gegen b und c in Tatigkeit treten. In welchem MaBe das geschieht,
hangt einzig von der Reaktionsfahigkeit des verwendeten Antigens ab.
Sind aber einraal Normalimmunkorper mit dem Antigen in Reaktion ge-
treten, welche vorliiufig zunachst im Ehrlichschem Sinne als gegenseitige
Bindung angenommen wird, so ist die Reaktion jederzeit unter den Be-
dingungen, wie sie im aktiven Serum, wo das Komplement intervenieren
kann, herrschen, wieder auflosbar, wenn auch nicht im eigentlichen Sinne
umkehrbar. Denn der wieder frei gewordene Immunkbrper ist spezifisch
geworden, jetzt auf ein ganz bestimmtes Antigen determiniert. Vermuthch
geht auch das Antigen aus einer solchen Reaktion nicht unverandert
hervor, wahrscheinlich beruht die Veranderung auf einer Verminderung der
Reaktionsfahigkeit mit dem Immunkorper. Um ein Bild zu haben, konnte
man sich vorstellen, daB wahrend der Bildung ein Austausch zwischen Be-
standteilen des Antigens und der stofflichen Grundlage des Immunkorpers
stattfindet.

Die Umwandlung des normalen zum spezifischen Immunkorper
empfindet aber der Tierorganismus als einen Ausfall, da angenommen
werden kann, daB die im Blute so reichlich vorhandenen Immunkorper fur
den Organismus eine Leistung zu erfiillen haben, welche von den ver-
anderten nicht mehr ausgefuhrt werden kann. Der Ausfall wird dann
idurch Regeneration, vielleicht auch Ueberregeneration gedeckt, >vobei aber
irnmer normale, nicht determinierte Immunkorper gebildet werden. Diese
konnen dann sekundiir, sobald noch reaktionsfahiges Antigen vorhanden
st oder neu zugefiigt wird, wieder Spezifitiit erlangen. Ein Blut, in dem
sieh ein solcher Vorgang abgespielt hat, wird also auBer den normal
wiederersetzten noch spezifisch determinierte Immunkorper erhalten, d. li¬
es wird mit dem gleichen Antigen starker reagieren als das Normalblut
und dabei spezifisch sein. Die Antikorperbildiing ist somit ein rein humo-
raler Vorgang, bei dem Zellen nur insofern in Bctracht kommen, als sie
bei der Neubildung von Normalimmunkorpern vielleicht beteiligt sind; das
spezifische Moment der Antikorperbildung ist nicht im Organismus von

ZeiUrhr. f. ImmunitiiMorachung. Ori^. Bd. XVII. 38

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568

Oskar Bail und Hans Rotky,

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vorneherein gegeben, sondern es entsteht erst durch Wechselwirkung des
Normalimmunkorpers mit dern gewaltsam eingefiihrten Antigen, die unter
Umstanden zu einer gewaltigen Anhaufung determinierter Immunkorper
durch sekundare Umwandlung regenerierter normaier fiihrt. Die letzten
Versuche von Bail und K. Rotky fiber Bakteriolyse haben erkennen
lassen, wie diese Theorie der Antikorperbildung der experimentellen Be-
arbeitung zuganglich ist. Dafi es noch zahlreicher neuer, vielleicht
schwieriger, jedenfalls aber durchfuhrbarer Versuche bedarf, um die Theorie
vollstandig zu*stutzen, steht aufier Frage. Zunachst handelte es sich aber
darum, an verschiedenen Antigenen die Richtigkeit der Theorie zu unter-
6uchen und da gerade die haraolytischen Reaktionen ffir die Ausbildung
der Vorstellungen fiber Antikorperwirkung und Bildung von besonderer
Bedeutung waren, muBte die Heranziehung von Blutkorperchen als An¬
tigen fur die Wirkung von Normalserum von besonderem Interesse sein.

Bereits im Jahre 1909 hatte K. Tsuda 1 ) Versuche fiber die Ablosung
von an Blutzellen gebundenen normalen und immunisatorisch erzeugten
ImmunkOrpern angestellt. Seine Methodik bestand darin, dafi er Blut¬
korperchen mit inaktivem Normalserum oder verdunntem Immunserum
behandelte und dann in Kochsalz digerierte. Der erhaltene „Extrakt“
wirkte mit geeignetem Komplement zusammen hiimolytisch, ohne dafi
Tsuda mit Bestimmtheit eine Spezifitat dieser Wirkung klarstellen konnte.

Die Erfahrungen, welche Bail und K. Rotky bei ihren
Versuchen fiber Vibriolyse durch Normalserum gewonnen
hatten, konnten nun mit Vorteil auch ffir die Untersuchung
der Normalhfimolysine angewendet werden. Besonders gait es
das Ergebnis zu benutzen, daB die Behandlung des Antigens
mit groBen Mengen aktiven Serums wfihrend einer so kurzen
Zeit, daB dabei keine vollendete Reaktion (Granulabildung
bei Vibrionen, Losung bei Blutkorperchen) entsteht, eine Sen-
sibilisierungsmethode darstellt, die ffir die Ablfisung der vorher
gebundenen Immunkorper die besten Bedingungen darbietet.

NaturgemaB bildet bei solchen Versuchen mit Normalserum die Auf-
findung eines geeigneten hiimolytischen Systems gewisse Schwierigkeiten,
da bekanntlich fur gewisse Blutkorperchen nicht jedes inaktive Serum als
Immunkorper und jedes aktive dabei als Komplement verwendet werden
knnn. Gleichwohl wurden im Verlauf der Experimente eine ganze Reihe
der verschiedensten Kombinationen durchgepriift und bei alien gelang es
ohne Ausnahme, Blutkorperchen mit einem geeigneten Normalserum in der
unten angegebenen Weise zu sensibilisieren und dann den aufgenommenen
Immunkorper in wirksamer Form zur Abldsung zu bringen. Um nicht
allzuviel Material anzufiihren,.sei fur die folgenden Mitteilungen vorwiegend
nur eine Kombination benutzt, bei welcher Menschenserum den Immun¬
korper, Kaninchenserum das Komplement lieferte. Diese Kombination

1) Diese Zeitschr., 1909, Bd. 2, p. 244.

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Gewinnung hamolytischer Fliissigkeiten auflerhalb d. Tierkdrpers. 569

empfahl sich besonders deshalb, weil sie in gleicher Weise fur zweierlei
Blutkorperchen, die des Pferdes und des Meerschwein chens, verwendet
werden kann, wodurch Spezifitatsuntersuchungen sehr erleichtert wurden.

Die grofien Mengen des dazu erforderlichen Menschenserums
hatten natiirlich nicht leicht beschafft werden kbnnen, wenn es sich nicht
gezeigt hatte, dafl man ohne jeden Nachteil das sogenannte retroplacentare
Serum verwenden kann, das von Gebaranstalten jederzeit ohne Schwierig-
keit zu erhalten ist und fiir dessen Ueberlassung wir dem Vorstande der
geburtshilflichen Klinik, Herrn Prof. Kleinhans, zum groflten Danke
verpflichtet sind. Dafl solches Serum nicht ganz steril ist, war bei der
Kiirze der jedesmaligen Versuchsdauer ohne Nachteil; ubermaflig grofl
wurde iibrigens der Keimgehalt bei gelegentlicher Untersuchung nicht be-
funden.

Bei Anfiihrung von Versuchstabellen ist meist auch der zeitliche Ver-
lauf der Hamolyse ungefahr notiert, was besonders im Anfang der Ver-
suche, wo es noch nicht gelungen war, die ftfters vorhandene, wenn auch
nur schwache Eigenlosung des Komplements auszuschlieflen, sehr klare Er-
gebnisse beziiglich der Starke der hamolytischen Wirkung lieferte.

Tabelle I.

Blutkorperchen von 2 ccm Pferdeblut werden nach sorgfaltiger
Waschung mit 8 ccm aktivem Menschenserum aufgeschwemmt, sofort ohne
Erwarmung zentrifugiert; die obenstehende Flussigkeit wird abgegossen,
durch neues aktives Menschenserum in gleichen Mengen ersetzt und nach
Verteilung der Blutzellen wieder abzentrifugiert. Die gleiche Prozedur
wird noch ein drittes Mai wiederholt. Hamolyse trat dabei nicht auf. Dafl
aber gleichwohl eine Reaktion zwischen Serum und Blut stattgefunden
hatte, bewies die sehr leichte Zentrifugierbarkeit der Blutkorperchen und
das Aussehen des von ihnen gebildeten Bodensatzes, der eine festanhaftende
etwas schleimige Masse bildete. Nach einmaliger Waschung mit 10 ccm
NaCl-Losung wurde der Bodensatz in 1,5 ccm NaCl-Losung 1 Stunde bei
40° gehalten und sodann abzentrifugiert. Der so erhaltene Extrakt war
rot uud wurde ebenso wie das zur Kontrolle dienende unver&nderte
Menschenserum */, Stunde auf 56° erwarmt. Absteigenden Mengen davon
wurde je 0,25 ccm aktives Kaninchenserum und je 1 ccm 5-proz. Pferde¬
blut zugesetzt.

Extrakt 56 0

Menschenserum

1 1 Stunde

2 Stunden

1 Stunde

2 Stunden

0,5

ccm

f. k.

k.

St.

s. st.

0,25

f. k.

k.

dtl.

dtl.

0,1

f. k.

k.

0

dtl.

0,05

>>

s. st.

f. k.

0

Sp.

Komplementkontrolle nach 1 und 2 Stunden ungelost 1 ).

1) Es bedeutet in alien Versuchen k. und f. k. vollstandige oder fast
vollstandige (Schleier) Hamolyse, s. st., st., dtl. sehr starke, starke, deutliche
Losung, Beg. beginnende, Sp. spurweise Hamolyse.

38*

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570

Oskar Bail und Hans Rotky,

Der Versuch beweist die M6glichkeit der Abldsung der
vom Antigen aufgenommenen Immunkorper in einer indif-
ferenten FlQssigkeit aufs klarste und zeigt gleichzeitig, daB
die gewonnenen „Extrakte u an Wirksamkeit das Serum iiber-
treffen konnen, aus dem sie hergestellt worden sind.

Der folgende Versuch soli zeigen, daB nicht nur aucli
andere Blutkdrperchen in fthnlicher Weise benutzt werden
konnen, sondern daB auch in dem gleichen Serum, das zur
aktiven Sensibilisierung der Blutzellen gedient hatte, die
Wiederablosung der Immunkdrper mOglich ist.

Tabelle 11.

Die Blutkorperchen von je 2 ccm Schafblut werden dreimal naeh-
einander mit je 6 ccm aktivem Menschenserum mo men tan sensibilisiert
und sodann (es war keine Losung eingetreten) einmal mit je 10 ccm NaCl-
Losung gewaschen. Die sensibilisierten Blutzellen wurden sodann mit
1) 1 ccm NaCl-Losung, 2) 1 ccm bei 56° inaktiv. Menschenserum, 3) 1 ccm
des bei der ersten Sensibilisierung abgegossenen und dann */* Stunde bei
56° inaktivierten Serums 1 Stunde bei 40° extrahiert. Die erhaltenen Ex-
trakte sind maSig rot. Angewendet werden die Dosen von 0,3, 0,15, 0,075
und 0,025 ccm der Extrakte und der Kontrollseren, mit je 0,1 ccm Meer-
schweinchenserum als Komplement.

Extrakt a j

Extrakt b

Serum 56°

Extrakt c

Ser. erschopft 56°

7,std.

2Std.

‘A Std.

2 Std.

7* Std.

2 Std.,

7k Std.

2 Std.

7, std.

2 Std.

k.

k.

dtl.

k.

Beg.

f. k.

k.

k.

0

0

k.

k.

dtl.

k.

1 0

St.

k.

k.

0

0

f. k.

k.

Sp.

k.

1 0

miifiig

f. k.

k.

0

0

dtl.

k.

f

f. k.

0

Sp.

f. k.

k.

i 0

0

Die Kompleraeiitkontrolle loste erst nach 2 Stunden mafiig.

Tabelle III.

Blutkorperchen von je 2,5 ccm Pferdeblut in 2 Eprouvetten wurden
zuerst mit je 5 ccm aktivem Menschenserum momentan sensibilisiert, das
iiberstehende Serum abgegossen und J / a Stunde auf 56° erhitzt; es diente
spiiter zur Herstellung der Extrakte. Der Blutkorperchenzusatz wurde
hierauf noch zweimal mit je 7 ccm aktiv. Serum momentan sensibilisiert;
bei der letzten Behandlung trat geringe Losung auf. Nach einmaligem
Waschen der Blutkorperchen wurden dieselben a) mit 1,25 ccm NaCl-
Ldsung, b) 1,25 ccm des erschopften und inaktivierten Serums 1 Stunde
bei 40° extrahiert. Die erhaltenen Extrakte waren rot. Angewendet wurden
die Dosen von 0,3, 0,15, 0,075 und 0,025 ccm der Extrakte bzw. der Kon-
trollen. AJs Komplement dienten 0,2 ccm aktiv. Kaninchenserums; da
diese Menge aber nach l 1 /, Stunden selbst zu losen begann, wurde der
Versuch um diese Zcit beendet.

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Gewinnung hamolytiseher Fliissigkeiten auSerhalb d. Tierkorpers. 571

Extrakt a

Serum 56°

Extrakt b

Serum erschopft 56 0

l /._, Std.

V/ t Std.

, 'k Std.

1V 4 Std.

V* Std.

l'/ 4 Std.

l / 2 Std.

i 1 /. std.

Sp.

8t.

dtl.

k.

St.

f. k.

0

0

dtl.

8. St.

0

St. J

f. k.

k.

0

0

s. st.

k.

0

Sp.

f. k.

k.

0

0

S. St.

k.

0

o

f. k.

k.

! o

0

Man sieht die Ergiinzungsmoglichkeit eines vorher durch kurze Be-
handlung mit dem Antigen erschopften, an sich schon nicht starken Serums
aufs deutiichste. Die im Versuche der Tabelle III hervortretende Er-
scheinung, dafl hohere Extraktdosen deutlich schwacher, mindestens lang-
samer Ibsen als niedrige, wurde gelegentlich auch sonst beobachtet. — Ge-
rade bei Verwendung des Systems: Blutkorperchen vom Pferde, Menschen¬
serum, Kaninchenserum als Komplement trat fast regelmaBig die interessante
Erscheinung auf, daB der aus dem Menschenserum gewonnene hamolytisehe
Extrakt wesentlich starker wirkte als das Serum selbst, aus dem er ge-
wonnen war. Ja es kam sogar oft der Fall vor, da8 das Serum so gut
wie gar nicht loste bei sehr guter Wirkung der Extrakte. Dies trat ins-
besondere hervor, als nicht mehr unverandertes aktives Kaninchenserum
als Komplement benutzt wurde, sondern solches, welches vorher ganz kurze
Zeit mit Pferdeblut behandelt war. Dadurch wird der geringe, aber sehr
oft vorhandene Gehalt des Kaninchenserums an normalen Pferdebluthiimo-
lysinen ausgeschaltet, wiihrend die Komplemcntwirkung in geniigender
Weise hervortritt. Es war dadurch moglich, mit groBen Dosen solchen
Komplements zu arbeiten.

Die Spezifitat der hamolytischen Extrakte wurde zun&chst
auf dem Wege der Absorption gepriift.

Tabelle IV.

Die Sensibilisierung mit aktivem Menschenserum wurde in der Weise
vorgenommen, daB die Blutkorperchen von je 0,5 ccm Pferdeblut mit je
10 ccm Serum in 8 Eprouvetten einmal momentan behandelt wurden. Die
dadurch erhaltenen Satze wurden bei der einmaligen Waschung mit NaCl-
Losung in 4 Itbhrchen vereint und sodann mit je 1,25 ccm NaCl-Losung
1 Stunde bei 40° extiahiert. Die so erhaltenen, mafiig roten Extrakte
wurden sodann vereint und wie folgt verteilt:

a) Extrakt unverandert,

b) „ 1 ccm + Satz von 3 ccm Pferdeblut,

c) „ 1 ,, + „ ,, 3 „ Schafblut,

d) „ 1 „ + „ „ 3 „ Menschenblut.

In gleicher Weise wird zur Kontrolle auch inaktives Menschenserum
behandelt.. Nach ‘/^-stiindiger Behandlung bei 37° werden die Blutkorperchen
wieder abzentrifugiert. Der Versuch wird mit den Dosen 0,2, 0,1, 0,05 und
0,5 ccm frischem Kaninchenserum als Komplement angesetzt, welches auf
14 ccm mit den Blutkorperchen von 4 ccm Pferdeblut momentan behandelt
war. Je 1 ccm 5*proz. Pferdeblut.

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572

Oskar Bail und Hans Rotky,

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Extrakt a Extrakt b | Extrakt c Extrakt d

3

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3

X

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3 | 3

36 ! ^

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k. k.
k. i k.
k. | k.
er hochsten

Dosis sehwach, die behandelten Sera und das Komplement iiberhaupt nicht.

Was den Versuch so besonders interessant machte, war
die fast fehlende Wirkung des Menschenserums auf Pferde-
blutkbrperchen, wodurch die eklatante Losungskraft des aus
dem gleicben Menscbenserum gewonnenen Extraktes klar
hervortritt: aus dem erst mit 0,2 ccm ganz unvollstandig
Ibsenden Menschenserum war die Gewinnung einer Flflssig-
keit gelungen, welche mit 0,05 ccm noch nicht die untere
Grenze ihrer Losungskraft erreicht hatte. Einen analogen
Versuch bringt

Tabelle V.

Anordnung und Extraktgewinnung wie ini Versuche der Tabelle IV.
Der erhaltene Extrakt bleibt a) unverandert und wird mit je 1 ccm Blut-
korperchen b) vom Pferde, c) vom Schafe, d) vom Kaninchen behandelt.
Dosen von 0,3, 0,15 und 0.075 ccm mit je 1 ccm 5-proz. Pferdeblut und
0,5 com Kaninchenserum, das auf 15 ccm mit dem Satze von 2 ccm Pferde¬
blut momentnn behandelt worden war.

Extrakt a

Extrakt b

Extrakt c

! Extrakt d

Menschens. 56°

1 Std.

j 2Std.

1 Std.

2 Std.

IStd.

2 Std.

1 Std.

2 Std.

1 Std. j

2 Std.

k.

k.

f. k.

f. k.

k.

k.

k.

k.

0

schw.

k.

k.

Sd.

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k.

k.

k.

k.

0

0

k.

k.

<5

Sp.

f. k.

f. k.

k.

k.

0

0

Die als Kontrolle ebenfalls mit d

len obenerwahnten Blutkorperchen be-

handelten inaktiven Menschensera sowie das Komplement allein losten nicht.

In beiden Versuchen wurden die Extrakte nur durch jene
Blutkorperchen mehr oder minder unwirksam gemacht, mit
denen der Extrakt selbst gewonnen war, nicht aber durch Blut
anderer Tiere, von denen nocli die Blutkorperchen von Rind
und Meerschweinchen verwendet wurden. Dabei ist die Menge
Blut, die zur Erschopfung erforderlich ist, ziemlich hoch; im
Versuche der Tabelle V war 1 ccm nicht vollst&ndig hin-

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Gewinnung hamolytischer Fliissigkeiten auSerhalb d. Tierkorpers. 573

reichend, nach der Anwendung von 3 ccm Blut bleiben nur
noch Reste der frtiheren H&molyse zurttck.

In analoger Weise zeigt sich die Spezifitfit der „ Extrakte*,
wenn man versucht, mit fremden Blutkorperchen solche her-
zustellen.

Tabelle VI.

Aus je 4 ccm Pferde- und Schafblut, welche mit je 40 ccm aktivem
Menschenserum momentan sensibilisiert sind, werden je 2,5 ccm Extrakte
mit NaCl-Losung in der gewohnlichen Weise gewonnen:

1) Extrakt aus Pferdeblut unverandert j

2) „ „ „ 1 ccm mit 3 ccm Pferdeblut l

3) „ „ „ 1 „ „ 3 „ Schafblut j

4—6 sind die ganz entsprechend behandelten Extrakte aus Schafblut,
welche wahrend des mit je 1 ccm 5-proz. Pferdeblut in den Dosen 0,25,
0,1 und 0,05 ccm angesetzten Versuches keinerlei Losung herbeifiihrten.
A Is Komplement diente je 0,5 ccm Kaninchenserum, das auf 14 ccm mit
deru Satze von 1,5 ccm Pferdeblut momentan behandelt war.

Extrakt 1

Extrakt 2

Extrakt 3

Menschenser. 56°

1 Stunde

2 Stund.

1 Stunde

2 Stund.

1 Stunde|2 Stund.

1 Stunde|2 Stund.

k.

k.

st.

st.

k.

k.

Sp. 1 st.

k.

k.

Bp.

dtl.

k.

k.

0 1 0

k.

k.

<5

0

st.

f. k.

0 1 0

Der folgende Versuch zeigt als Beispiel von 4 anderen,
gleichartig verlaufenen zugleich die Erschfipfungs- wie Losungs-
spezifitat der Extrakte unter Anwendung von Meerschweinchen-
und Pferdeblut, welche sich beide ftir inaktives Menschenserum
durch Kaninchenserum als Komplement erganzen lassen.

Tabelle VII.

Je 0,5 ccm Pferde- und Meerschweinchenblut werden in je 8 Eprou-
yetten gewaschen und der Satz mit je 7 ccm aktivem Menschenserum
momentan sensibilisiert. Beim Waschen mit NaCl-Losung wurden die
Pferde- und Meerschweinchenblutkorperchen in je 4 Rohrchen vereint und
zu jedem 1 ccm einer Mischung von 8 ccm NaCl-Ldsung mit 2 ccm in-
aktivem Menschenserum zugesetzt. So erfolgt wahrend 1 Stunde bei 40°
die Extraktion. Die von jeder Blutart gewonnenen, maSig roten Extrakte
werden vereint und daraus hergestellt:

Extrakt 1) Pferdeblutextrakt unverandert,

„ 2) „ 1 ccm + Blutkorp. von 2,5 ccm Pferdeblut,

„ 3) „ 1 + „ „ 2,5 „ Meerschw.-Bl.

Extrakte 4—6 sind die ganz entsprechend behandelten Meersehweinchen-
blutextrakte.

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574 Bail u. Rotky, Gewinnung hiimolyt. Fliissigkelt aufierh. d. Tierk.

A. Dosen von 0,2, 0,1 und 0,05 ccm auf je 1 com 5-proz. Pferdeblut
mit je 0,5 ccm Kaninchensenim als Komplemen t, das auf 14 ccm mit den
Blutkorperchen von 2 ccm Pferdeblut momentan bebandelt war.

Extrakt 1 j

Extrakt 2

Extrakt 3

Extrakt 4

Extrakt 5

Extrakt 6 Msch.-S.56 0

*2 2

X X

H | (M

2

oo

1—»

2

X

CM

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CM

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2

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k. k.

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0

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0

dtl. | f. k.

0

i 0

dtl. ;

f. k.

0

o

0

0

0 0

0

i 0

Die Komplementkontrolle lbste nicht.

B. Dosen von 0,2, 0,1, 0,05 und 0,01 ccm auf je 1 ccm 5-proz. Meer-
schweinchenblut; als Komplemennt dient Kaninchensenim, das fi'ir 7 ccm
mit 1 ccm Meerschweinchenblut momentan bebandelt ist, in der Dosis von
0,2 ccm.

Extrakt 1

Extrakt 2

Extrakt 3

| Extrakt 4

Extrakt 5

I Extrakt 6 Msch.-S.56°

2

2

2

2

2

2

j

2

2

2

2

2

2

X

X

X

X

X

X

( X

X

X

X

! x

Xj

X

X

CM

CM

t-H

CM

CM

CM

; 1—1

CM

i-H

CM

o 1

0

0

0

1 0

0

k.

k.

k.

k.

Sp.

dtl.

Sp.

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f. k.

k.

f. k.

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f. k.

f. k.

f. k.

0

0

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0

0

0

i O'

0

1 0

0

Sp.

dtl.

o

dtl.

0

0

0 |

0

in i

diesem Versucl

le hatte d

[as Menschenserum an sich weder fiir

Pferde- noch fur Meerschweinchenblut nennenswerte Lbsungskraft, 60 da 13
die Extraktharoolyse rein und scharf hervortritt; in anderen Versuchen
vermochte das Menschenserum Meerschweinchenblut starker zu beeinflussen,
doch war es in seiner Wirkung stets schwiicher als die daraus auf die be-
schriebene Art hergestellten Extrakte.

Wie die friiheren Versuche die Spezifitat der Extrakt-
wirkung durch spezifische Erschopfung gezeigt haben, so be-
weisen diese die determinierte Extraktwirkung sowohl durch
Erschopfung als dadurch, daB ein mit Blutkbrperchen des
Tieres a hergestellter Extrakt nur diese, nicht aber die Blut¬
korperchen des Tieres b lost. Bis auf weitere Versuche muB
also die spezifische Wirkung der hamolytischen Extrakte fest-
gestellt werden, was in Widerspruch mit den alteren Angaben
von Tsuda steht. Diese unterscheiden sich von den ange-
fiihrten in der Technik, da Tsuda nur mit inaktivem Serum
sensibilisierte und in der Wahl der Blutkorperchen, da Tsuda
seine abweichenden Resultate an Meerschweinchen- und Ka-
ninchenblutkorperchen bei Verwendung von Rinderserum er-
hielt. Es durfte interessant sein, die Versuche wieder auf-

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Rey mann, Versuche iiber Antivibriolysinbildung neugeb. Ziegen. 575

zunehmen, da unter anderem die Wirkung des Rinderserums
auf Meerschweinchenblut mit zu den st&rksten gehort, die man
an normalen Seren beobachten kann.

Zusammenfassung.

Aus Pferde- und Meerschweinchenblutkdrperchen, welche
mit normalem aktiven Menschenserum sensibilisiert sind, lassen
sich durch Digestion in Kochsalzlosungen hSmolytisch wirkende
Fliissigkeiten gewinnen; die durch sie unter Zusatz von Kom-
plement veranlaBte H&molyse erwies sich als spezifisch.

Nachdmck verboten.

[Aus dem Statens Seruminstitut, Kopenhagen (Direktor:

Dr. Th. Madsen).]

Versuche fiber Antivibriolysinbildung neugeborener Ziegen.

(Anhang zur Abhandlung „Ueber Antikdrperbildung neu¬
geborener Ziegen“ im Bd. 12 dieser Zeitschrift.)

Von G. C. Beymano,

Assistenten am Institut.

(Eingegangen bei der Redaktion am 10. Miirz 1913.)

In der oben erwShnten Abhandlung in dieser Zeitschrift
babe ich einen einzelnen Versuch mit Vibriolysin veroffent-
licht, in dem ich gefunden habe daB eine neugeborene Ziege kein
Antivibriolysin nach einer Injektion am Geburtsdatum bildete,
wohl aber nach einer ebenso groBen Injektion 22 Tage sp&ter.
Da es von Interesse war, den Versuch zu wiederholen, weil
er den anderen damals erzielten Resultaten zum Teil wider-
sprach, habe ich es im Frtihjahr 1912 mit einem grbfieren
Versuchsmaterial getan.

Zu meiner Verfflgung standen 8 neugeborene Ziegen, von
denen 5 unmittelbar nach der Geburt mit bzw. 1, 2, 3, 4 und
5 ccm Vibriolysin (von Vibrio Nasik) und ferner am 22.—23.
Lebenstage mit denselben Dosen injiziert wurden; die 3 fibrigen
wurden dagegen erst am 20.—25. Lebenstage zum erstenmal
mit bzw. 1, 3 und 5 ccm Vibriolysin injiziert, um zu unter-
suchen, ob das Reaktionsvermbgen bei den ersteren moglicher-
weise wegen der Injektion am ersten Lebenstage bedeutend
gesteigert worden war.

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576 Reymann, Vereuche iiber Antivibriolysinbildung neugeb. Ziegen.

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Die Antikbrperkurven hatteii bei schwacher Antilysin-
bildung eine flache Form, in der der Zeitpunkt der Akme
nicht mit Sicherheit bestimmt werden konnte, bei st&rkerer
Antilysinbildung stellte die Akme sich in den meisten Fallen
am 10.—11. Tage ein, in wenigen Fallen jedoch erst am
18. Tage, welches Verhalten im grofien ganzen nicht von
dem bei Erwachsenen abweicht. Der Kdrze wegen wird
das Kurvenmaterial flbrigens in tabellarischer Form angefdhrt.

Bei samtlichen Versuchstieren, mit Ausnahme von No. 31,
wurde eine negative Phase im unmittelbaren AnschluB an die
erste Injektion konstatiert, und bei No. 25 war die Anti-
lysinmenge wahrend der ganze Beobachtungszeit niedriger als
vor der Injektion, bei der zweiten Injektion stellte sich die
negative Phase weniger ausgesprochen und konstant ein. Die
Korpertemperaturen waren wahrend des Versuches normal.

Tabelle.

Injektion gleich nach der Geburt.

6

u Geburtsdatum

O ;

Pj

Gewicht
in kg gleich
nach der
Geburt

Vibriolysin-

injektion

Datum | ecm

Antilysineinheiten
pr. ccm Serum
gleich nach der
Geburt

Antilysin-
einheiten
in der
Akme

1

25

7. III. 12

3,1

7. III.

1

7 1

9. in. bis

1

3. IV.<5')

26

8 . III. 12

2.75

8 . III.

2

ca. 10

25

27

13. III. 12 abends

5,2

14. III.

3

ca. 10

65

28

13. III. 12 „

5,0

14. III.

4

< 5

50

29 14. III. 12 „ |

5.5

15. III.

5

< 5

< 5

Spiitere Injektion.

6 |

V ibrioly si n in jek tion

Gewicht in
kg am
Injektions-
tage

A n tilvsi n ei n hei ten

Antiivsin-

u 1

o

P

Datum

ccm

Tage nach
der Geburt

pr. ccm Serum
am Injektionstage

einheiten in
der Akme

25

30. III.

i

23

4,75

< 5

150

26

30. III.

2

22

4,75

35

300

27

6 . IV.

3

23

0.5

<: 5

40

28

6 . IV.

1 4

23

5,3

< 5

50

29

6 . IV.

1 5

22

8,0

< 5

333

30

20. IV.

5

20-25

!

1

< 5

15

31

20. IV.

3

20-25

< 5

< 5

32

20. IV.

1

20-25

| —

< 5

30

1) Das Tier zeigt somit wahrend der ganzen Immunisierung einen
geringeren Antikorpergehalt als vor derselben.

Gck 'gle

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v. Sarnowski, Anaphylaxie und Antianaphylaxie bei Miiusen. 577

Aus der Tabelle geht hervor, daB von den zweimal be-
handelten Tieren 2 (No. 25 und 29) auf die erste Injektion
ttberhaupt nicht reagiert haben und 3 (No. 26, 27 und 28) nur
mit einer sehr schwachen Antilysinbildung; auf die wieder-
holte Injektion von denselben Vibriolysinmengen reagierten
sie alle, obwohl mit verschiedener Intensitat. Es stellte sich
ferner heraus, daB 2 von den Tieren, die nur eine Injektion,
und zwar am 20.—25. Lebenstage erhielteu, schwach reagierten
und das dritte flberhaupt nicht.

Es zeigt sich somit, daB die Reaktion unmittelbar nach
der Geburt eine schwache war, und daB sie etwas starker nach
22—23 Tagen war, und ferner, daB die Tiere, welche die erste
Injektion 20—25 Tage nach der Geburt erhielten, schwflcher
reagierten. Die starkere Wirkung der wiederholten Injektion
rflhrt vielleicht von einer auf Grund der ersten Injektion ver-
finderten Reaktionsweise her.

Zusammenfassung.

Neugeborene Ziegen sind imstande Antivibriolysin zu
bilden, die Antilysinbildung war aber in den untersuchten
Fallen eine geringe.

Nachdruck verboten.

[Aus dem hygien. Institut der Kdnigl. Tier&rztl. Hochschule zu
Hannover (Leiter: Prof. Dr. Miesaner).]

Ucber Anaphylaxie and Antianapbylaxie bei welfien

Miiusen.

Von Dr. v. Sarnowski.

(Eingegangen bei der Bedaktion am 18. Miirz 1913.)

Bei Mausen lafit sich nach Braun die Anaphylaxie nur
durch mehrmalige Vorbehandlung sicher hervorrufen. Ritz
dagegen hat festgestellt, daB auch bei weiBen Mausen in der
Regel nach einmaliger Vorbehandlung mit geringen Mengen
Antigen hochgradige Krankheitserscheinungen ausgelflst werden,
vorausgesetzt, daB die Reinjektion intravenos erfolgt. Nach
zweimaliger Vorbehandlung mit geeigneten Dosen und intra-
venoser Reinjektion ist es fast konstant gelungen, typische
Anaphylaxiesymptome auszulflsen.

ty Google

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578

v. Saruowski,

Durch seine Vorversuche im Reagenzglasc gelang es Ritz zu er-
mitteln, daft das Serum des Miiuseblutes Komplementfunktionen in nach-
weisbarer Form nieht besitzt, wiihrend diese im Meerschweinchenserum
doch in so groBer Menge vorhanden sind. In einer Reihe von Versuehen
erfolgten daher die Reinjektionen unter Zufuhr von frisehem Meer-
sehweinchenserum; jedoch erwies sich die Notwendigkeit gleichzeitiger
Komplementzufuhr nicht als gesetzmiiBig.

Durch diese Versuche zeigen sich einige Abweichungen in dem Auf-
treten und dem Verlaufe der Anaphylaxie der Miiuse von der anderer
Tiere. Schon dafi die Reinjektion nur auf intravenosem Wege erfolgte,
war ein Abweichen von der gewohnten Ausfiihrung. Ferner konnten die
Erscheinungen verhiiltnisniiiBig friih (schon nach 14 Tagen) sicher aus-
gelost werdcn. SchlieBlich war ein Unterschied auch durch die Symptome
selbst gegeben: Sie traten langsamer auf und nahmen einen weniger
sturmischen Verlauf, wiihrend von einem ausgesprochenen Unruhestadium,
wie es bei Meerschwcinchen regelmiiSig ist, nicht die Rede war. Von der
Antianaphylaxie wurde nur festgestellt, daB sie nachzuweisen war.

Die folgenden Untersuchungen sollten nun in diesen
Fragen genauere Feststellungen machen.

1. Anaphylaxie.

Bei Meerschwcinchen gclingt die Sensibilisierung nach den bisherigen
I’ntcrsuchnngen in der Regel bei Anwendung sehr kleiner Serummengen,
wiihrend groCere Doscn den Eintritt der Anaphylaxie verzogern. Dagegen
haben die Versuche von Ritz, der ausschlieSlich mit grbISeren Mengen
vorbehandelte, bewiescn, daB eine derartige Verzogerung in dem Auftreten
der Anaphylaxie bei weifien Miinsen nicht eintritt. Um den EinfluB der
Vorbehandlungsdosis auf das Zustandekommcn der Anaphylaxie zu priifen,
sind zur Sensibilisierung von 0,01 ccm bis 0,5 ccm Serum verwendet worden.
Die Reinjektion erfolgte dnrchweg mit grolleren Dosen.

Um zu ermitteln, ob die Applikationsmethode des Antigens
auf den Eintritt der Anaphylaxie von wesentlichem EinfluB ist,
wurden die Antigene einmal subkutan, dann intraperitoneal
und schlieBlich intravenos zur Vorbehandlung injiziert.

Zunachst wurde eine Reihe von Mausen einmalig mit ver-
schiedenen Mengen Pferde- und Rinderserum subkutan vor-
behandelt und nach 8 und 19 Tagen mit 1 und 0,5 ccm Serum
reinjiziert. In dem Befinden der Versuchstiere war hiernach
keine Veranderung festzustellen. Ebenso ergebnislos verlief
eine zweite Reihe von Versuehen mit intraperitoneal vor-
behandelten Mausen, bei denen die Reinjektion nach 14 bis
16 Tagen mit 1 und 0,5 ccm auf intraperitonealem und sub-

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Ueber Anaphylaxie und Antianaphylaxie bei weiSen Mausen. 579

kutanem Wege erfolgte. SchlieBlich wurden einmalig sub-
kutan vorbehandelte Tiere intravenos reinjiziert.

Eine Anzahl von Miiuson erhalten verschiedene Mengen von Pferde-
serum subktan injiziert. Die Probe findet 15 bis 31 Tage danach mit
0,2—0,5 com Serum intravenos statt.

Tabelle I.

Maus

No.

Dosis der

1. Injektion
subk.

In ter vail
(Tage)

Dosis der
Reinjektion
iv.

Erscheinungen

1

0,01

21

0,5

Leichte Liihmung

2

0,01

21

0,5

Leicht krank

3

0,025

15

0,2

t in mehreren Stunden

4

0,025

21

0,3

Liihmung

5

0,05

15

0,2

Leicht krank

6

0,05

21

0,5

f nach 35'

7

0,1

15

0,5

f nach 35'

8

0,1

15

0,3

Krank

9

0,2

21

0,5

t nach T

10

0,5

15

0,4

t nach 15'

Die Tabelle laBt zweifellos erkennen, daB alle Tiere mit
deutlichen Ueberempfindlichkeitserscheinungen reagiert haben.
Die Reihenfolge der eintretenden Symptome gestaltet sich
etwa folgendermaBen:

Gewisse Zeit nach der Reinjektion beginnt die Maua angestrengt zu
at men und bleibt ruhig auf einem Fleck sitzen. Bewegt man das Tier zum
Gehen, so sieht man es die Hinterbeine nach sich schleppen; der Gang 1 st
steif, froschartig. Schliefilich tritt eine vollstiindige Liihmung der Hinter-
schenkel ein, die in sehweren Fallen allmahlich sich nach vorn ausbreitet.
Der Lahmungszustand wird zeitweise durch mehr oder weniger heftige
Krampfanfalle unterbrochen, die auch selbstiindig auftreten konnen und
oft bei Beriihrungen ausgeldst werden. Allmahlich tritt der Tod ein; die
Atraung sistiert, das Herz hort langsam auf zu schlagen.

Man ersieht weiter aus der Tabelle, daB die Heftigkeit
der ausgelosten Symptome mit der Menge der Sensibilisierungs-
dosis steigt. Die mit 0,01 ccm vorbehandelten Tiere zeigen
nur leichtere Erscheinungen, wahrend die mit groBeren Dosen
injizierten M&use schwere Erscheinungen aufweisen und daran
zugrunde gehen.

In einem ahnlichen Versuche wurde nun intraperitoneale
Vorbehandlung mit intravenoser Probe kombiniert. Es ergab
sich, daB auch diese Methode sich dazu eignet, Anaphylaxie
bei weiBen Mausen zu erzeugen. Auch hier stiegen die

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580

v. SSarnowski,

Symptome unverkennbar mit der GroBe der Vorbehandlungs-
dosis. Ferner konnte in Uebereinstimmung mit dem vorher-
gehenden Versuche festgestellt werden, daB es fiir die Re-
injektion einen optimalen Zeitpunkt geben muB. So zeigten
in obiger Tabelle die nach 21 Tagen reinjizierten M&use No. 6
und 9 hochgradigere Krankheitserscheinungen als No. 7 und 10
bei einem Intervall von 15 Tagen. Diese Beobachtung wird
auch durch spatere Versuche bestatigt.

Die zum Zwecke der Vorbehandlung injizierte Serummenge
bewirkt im Organismus Veranderungen, die Ritz kurz mit
dem Ausdruck „die veranderte Reaktionsfahigkeit des Mause-
blutes“ kennzeichnet. Der Grad dieser Veranderungen hBngt
nun ab von der Menge des zur Vorbehandlung injizierten
Serums und der Lange der Zeit, in welcher das Serum in
dem MausekSrper wirkt. Beides iibt einen sichtbaren EinfluB
auf das Zustandekommen der Anaphylaxie aus. Nach den
Versuchen von Ritz wirken schon kleine Reinjektionsdosen
von 0,025 ccm meist todlich, wahrend 0,01 und 0,02 ccm noch
deutliche Erscheinungen hervorrufen. Fruhere MiBerfolge auf
dem Gebiete der Anaphylaxie der Mause sind daher meines
Erachtens nicht darauf zuruckzufiihren, daB eine optimale
Reinjektionsdosis nicht getroffen wurde, sondern hauptsachlich
ist dafiir die veranderte Reaktionsfahigkeit des Blutes verant-
wortlich zu machen. Ein Fehlgehen jener Versuche ist leicht
erklarlich aus der Tatsache heraus, daB man von der Ana¬
phylaxie der Meerschweinchen ausging. Diese Tiere kdnnen
mit ganz minimalen Mengen (nach Rosenau und Anderson
Vioooooo ccm) Serum iiberempfindlich gemacht werden, wahrend
groBe Dosen den Eintritt der Anaphylaxie direkt st5ren. Wie
aus den Tabellen ersichtlich ist, zeitigen dagegen bei Mausen
0,01 ccm kaum Erscheinungen. Letztere werden vielmehr
erst bei hbheren Vorbehandlungsdosen regelmaBig und deut-
lich erkennbar. Zudem muBte hier die Reinjektion intra-
venos erfolgen, wahrend sie bei den Versuchen mit Meer¬
schweinchen fast ausschlieBlich subkutan und intraperitoneal
geschah.

Die folgenden Versuche hatten die intravenose Vorbe¬
handlung zur Grundlage. Neben der intravenosen Reinjektion
wurde auch die intraperitoneale angewendet.

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Ueber Anaphylaxie und Antianaphylaxie bei weiSen Mausen. 581

Eine Reihe von 7 Mausen werden mit 0,01 —0,2 cem Rinderserum,
eine zweite von 8 Mausen mit den gleichen Mengen Schafserum intravenos
vorbehandelt. Die Reinjektionen erfolgten nach 10—13 Tagen teils intra¬
venos, teil intraperitoneal.

Tabelle II.

Maus

No.

Dosis der

1. Injektion
iv.

I nter vail
(Tage)

Dosis der
Reinjektion

iv. ip.

Erscheinungen

1

0,01

10

0,3

0

2

0,01

11

.

1,0

0

3

0,025

13

0,1

t

nach

30'

4

0,025

12

1,0

t

nach

67'

5

0,05

10

0,2

t

nach

10 *

6

0,1

8

0 >

Leichte

Symptome

7

0,2

10

0,2

t

nach

17'

8

0,01

13

0,3

,

0

9

0,01

13

0,3

.

0

10

0,01

13

1,0

0

11

0,025

11

0,05

t

nach

30* •

12

0,025

13

0,05

t

nach

42'

13

0,05

11

0,1

#

t

nach

10 '

14

0,05

13

0,3

in mehreren Stunden

15

0,05

13

0,05

.

Schwere Lahmung

Durch den Versuch ergibt sich, daB durch intravenbse
Vorbehandlung mit verschiedenen Mengen von Serum und
nachfolgende intravenose Reinjektion nach 10—13 Tagen sicher
Anaphylaxie hervorgerufen wird. Dagegen lost die intra-
peritoneale Reinjektion nur sehr unsicher und meist leichte
Symptome aus.

Bei der Verwendung der verschiedenartigen Sera in den
verschiedenen Versuchsreihen war kein Unterschied zu ver-
zeichnen. Nach dem Beispiele von Ritz wurde, da derselbe
die Frage noch nicht fur geklart halt, mehrmals zu einzelnen
Versuchen das fur die Reinjektion bestimmte Serum mit Meer-
schweinchenserum vermischt. Es wurde dadurch jedoch kein
erkennbarer EinfluB auf den Ausgang des Versuchs im Ver-
gleich zu den Tieren, die ohne Meerschweinchenserum reinjiziert
wurden, ausgetibt.

Das Hauptmerkmal der Ueberempfindlichkeit bei weiBen
Mausen ist also die intravenbse Reinjektion. Dabei kommt
es auf die Art der Vorbehandlung gar nicht an. Die Vermutung
von Ritz, welcher meint, daB intraperitoneal vorbehandelte
Tiere die Erscheinungen vielleicht besser zeigen, als intravenbs

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582

v. Sarnowski,

vorbehandelte, trifft also nicht zu. In alien Versuchen steigen
die Symptome unverkennbar mit der Vorbehandlungsdosis.
Diese Steigerung geschieht allmahlich und bleibt dann auf
ihrer Hohe, die den Tod der Tiere bedeutet. Auffallend ist
das friihe Eintreten des anaphylaktischen Zustandes. Die teil-
weise schon 10 Tage nach der Sensibilisierung erfolgenden
Reinjektionen losen prompt anaphylaktische Erscheinungen aus.

Die vorliegenden Versucbe haben, wie auch Ritz gefunden
hat, gezeigt, daB die Ansicht, weiBe Miiuse seien der Ana-
phylaxie gegenttber refraktar, unrichtig ist. Die Grflnde hierfflr
sind in der Gr5Be der Vorbehandlungsdosis und in den ver-
schiedenen Arten der Applikation des die Symptome aus-
losenden Serums zu suchen. Man war von den Versuchen am
Meerschweinchen her gewohnt, nach Sensibilisierung mit ge-
ringen Mengen durch subkutane und intraperitoneale Injektion
den anaphylaktischen Shock auszulbsen. Man wuBte auch, daB
sich die Ueberempfindlichkeit bei subkutaner Reinjektion nicht
nur in der akuten Allgemeinaffektion, sondern haupts&chlich
in der mehr oder weniger schwer verlaufenden lokalen Form
SuBerte. Diese beiden am meisten in die Augen springenden
Tatsachen haben fiir die Anaphylaxie der weiBen MSuse eben
keine Gflltigkeit.

2. Antianaphylaxie.

Auf Grund der theoretischen ErwSgungen war von vorn-
herein anzunehmcn, daB bei den anaphylaktischen MSusen auch
Antianaphylaxie erzeugt werden konnte. So ist es Ritz ja
auch gelungen, diesen Zustand hervorzurufen. Ein Unter-
schied der Anaphylaxie der weiBen MSuse zu der der anderen
Tiere konnte hbchstens in der Schnelligkeit des Auftretens und
dem Andauern ihres Bestehens vorhanden sein. Die folgenden
Versuche sollen zeigen, wie lange nach der Ausldsung der
anaphylaktischen Erscheinungen Antianaphylaxie eintritt und
wie lange sie anhSlt.

Eiue Anzahl von Miiusen wurde teils subkutan, teile intravenos vor-
behandelt und darauf intravenos reinjiziert. Bei den iiberlebenden Tieren
warden nun nach 1 ’/ 2 —2 Stunden, nach 24 Stunden, nach 2, 3, 4 usw.
Tagen intravenose Injektionen gemacht, um sie auf ihren Zustand zu
priifen.

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Ueber Anaphylaxie und Antianaphylaxie bei weiBen Miiusen. 583

Tabeile III.

o

S5

Dosis der
1. Injekt.

Intravenose Reinjektion nach

Dosis der
Reinjekt.

Erscheinung

02

CM

.

3

si

g

Sf

H

a

<D

t£

c

Sd

g

SF

H

Q

<D

bC

Q

V

hC

§

H

G

o

bfi

as

Er-

scheinungeu

s

sbk.

intravenos

1

H

H

H

H

H

s

iv.

CM

CM

CO

CO

00

05

o

1-H

7

0,01

0,2n.l5Tg.

leicht krank

0,50,3

0,5

t durch Luft

2

0,025

0,3 n. 13 Tg.

krank

#

0,3

9

0,3

0,3

,

0,5

t n. 12'

30,025

dgl.

leicht krank

0,3

#

0,3 0.5

0,5

t n. 5'

40,05

0,3n.l5Tg.

leichte Lahmung

0,3

.

,

0,3

0,4 0,5

t n. 18'

5 0,1

0,2n.llTg.

dgL

.

0,4

0,3

,

0,5

f durch Luft

6 0,1

0,4n.21Tg.

leicht krank

! i

•

0,4

*

t n. 65'

7

.

0,01

0,5n.l9Tg.

leichte Lahmung

.

0,4 0,4

1

0,4

0,4

t

| *

t n. 20'

8

0,01

dgl.

0

,

0,4 0,5

.

t n. 35'

9

#

0,025

0,3 n. 19 Tg.

Lahmung

,

• 0,5

.

0,4

t n. 13'

10

0,05 |

0,2 n,13Tg.

krank

0,2

0,3

0,30,5

.

0,4

t n. 15'

Durch die Versuche an Maus No. 1, 3 und 10 sehen wir
best&tigt, was auch schon das Experiment an Meerschweinchen
gezeigt hat: Die Antianaphylaxie tritt sehr rasch ein. Nach
Ablauf von 2 Stunden schon bewirkt selbst eine groBere
Dosis, die nach l 1 /* Stunden noch Symptome, wenn auch
in abgeschwfichtera MaBe, hervorgerufen hat, keine Reaktion
mehr.

Wie man ersieht, hat die Antianaphylaxie nach 8 bzw.
9 Tagen ihr Ende erreicht; wenigstens zum grofien Teil, denn
da die Tiere fast alle trotz der grofien Reinjektionsdosis erst
nach l&ngerer Zeit dem Anfall erliegen, mufi man annehmen,
daB die Ueberempfindlichkeit noch nicht voll wieder einge-
treten ist. Das schnelle Verschwinden unterscheidet die Ana¬
phylaxie der M&use wesentlich von der der Meerschweinchen,
die erfahrungsgem&fi Wochen und selbst Monate lang an-
dauert. Man kbnnte bei dieser Tatsache vergleichend an einen
Unterschied der Anaphylaxie der M&use und der anderer
Tiere denken, n&mlich an das frtihe Auftreten der Ueber¬
empfindlichkeit nach der Sensibilisierung. Wenn man der
Theorie von Otto folgt, l&fit sich ein Zusammenhang
zwischen diesen beiden Eigentfimlichkeiten der M&use-Anaphy¬
laxie und -Antianaphylaxie finden. Nach der Reinjektion be-
finden sich die Tiere wieder im Stadium 1, d. h. in dem Zu-
stand, in dem das Blut frei ist von anaphylaktisierenden
Korpern und auch die Tiere selbst nicht fiberempfindlich sind.

Zeitschr. f. ImmuoitfUfortchung. Orig. Bd. XVII. 39

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584

v. Sarnowski,

Die die Anaphylaxie ausldsenden Serummengen wirken nun
gleichzeitig als Vorbehandlungsdosen. Wftbrend nun bei M&usen
grSBere Mengen zur Vorbehandlung notwendig sind, schieben
diese bekanntlich bei Meerschweinchen den Eintritt der Ueber-
empfindlichkeit hinaus, weshalb auch die Meerschweinchen-Anti-
anaphylaxie langer anh&lt.

Bemerkenswert w&re noch an den Versuchen, daB auch
die M&use, die nach intraperitonealer Reinjektion keine ana-
phylaktischen Symptome zeigten, antianaphylaktisch wurden,
eine Erscheinung, die auch Ritz in seiner Arbeit hervorhebt.

Die Versuche haben bestatigt, daB auch bei weiBen M&usen
zum Wesen der Anaphylaxie die Antianaphylaxie geh$rt. Gleich¬
zeitig hat sich ein Merkmal gefunden, das die Antianaphylaxie
der M&use wesentlich von der anderer Tiere unterscheidet:
die kurze Dauer. Als Gesamtresultat ergibt sich zugleich mit
einer Best&tigung der Ritzschen Versuche, daB die Anaphy¬
laxie und Antianaphylaxie bei weiBen M&usen ebenso gut
hervorzurufen ist wie bei anderen Tieren, daB aber eine An-
zahl von Unterschieden in Entstehung und Verlauf der beiden
bestehen, weil sich die Entwicklung der Reaktionen der M&use-
Anaphylaxie nicht ganz in denselben Bahnen bewegt, wie
z. B. die Ueberempfindlichkeit der Meerschweinchen. Es hat
sich aber aus den Versuchen einwandfrei ergeben, daB die
weiBe Maus als Versuchstier auf diesem Gebiete keinen hervor-
ragenden Platz einnehmen kann, da die technischen Schwierig-
keiten groB sind und die feineren Symptome nicht genilgend
hervortreten.

Zusammenfassung.

1) Die Anaphylaxie der weiBen M&use kann durch ein-
malige Vorbehandlung hervorgerufen und durch Reinjektion
des gleichen Serums ausgelost werden. Die Art des Serums
spielt keine Rolle.

2) Sensibilisierung. Es hat sich ergeben, daB es gleich-
giiltig ist, welchen Weg man bei der Sensibilisierung ein-
schlagt. Subkutane, intraperitoneale und intravenbse Injek-
tionen fiihren stets und sicher zum Ziele. Nicht ohne Ein-
fluB ist die Grofie der Vorbehandlungsdosis. Mit ihr steigt
die Heftigkeit der Symptome. Dosen von 0,01 ccm zeitigen

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Ueber Anaphylaxie und Antianaphylaxie bei weifien Mausen. 585

nur schwer festzustellende oder gar keine Symptome. Die
Tiere werden aber trotzdem anaphylaktisch. Der Beweis ist
durch das Auftreten der Antianaphylaxie erbracht. Die
anaphylaktischen Symptome kSnnen am 10. Tage nach der
Sensibilisierung stets ausgel8st werden.

3) Reinjektion. Zur Auslosung der anaphylaktischen
Symptome ist die intravenSse Reinjektion erforderlich. Die
subkutane sowohl als auch die intraperitoneale Probe sind
nicht geeignet, regelm&Bige und deutliche Erscheinungen aus-
zulosen. Die GroBe der Reinjektionsdosis hat innerhalb
weiter Grenzen keinen EinfluB auf die Heftigkeit der ausge-
lSsten Symptome.

4) Symptome. Die anaphylaktischen Symptome selbst
sind in ihrer leichten Form bei den Mdusen nur unsicher
festzustellen. Das geringste dentlich positive Symptom ist
das Auftreten der Tr&nenaugen. AeuBern sich die Erschei¬
nungen heftiger, so bemerkt man beim Gehen eine leichte
Lahmung der Hinterbeine, die sich in einem froschartigen
Gange aufiert. Darauf tritt eine vollstandige Lahmung ein,
die sich allmahlich nach vorn zu ausbreitet. Dieser Zustand
wird durch Krampfe unterbrochen. SchlieBlich tritt langsam
der Tod ein.

5) Die Antianaphylaxie tritt l 1 /*—2 Stunden nach der
Reinjektion auf, vorausgesetzt, dafi die anaphylaktischen Er¬
scheinungen ihr Ende erreicht haben und halt nur 8—9 Tage
an. Sie tritt auch ein, wenn die Tiere nach der Reinjektion
keinen anaphylaktischen Anfall gezeigt haben.

Lfteratur.

1) Doerr, Die Anaphylaxie. Handbuch der Technik und Methodik der
Immunitatsf. von Kraus und Levaditi, Bd. 2, 1909.

2) — und Russ, Zeitsehr. f. Immunitatsf. u. experim. Therapie, Teil I,
Bd. 1, 1910.

3) Friedemann, Zeitsehr. f. Immunitatsf. und experim. Therapie, Teil I,
Bd. 2, 1910.

4) Otto, Ueber Anaphylaxie und Serumkrankheit, im besonderen iiber
experimentelle Serumuberempfindlichkcit. Handb. der pathog. Mikro-
organismen, 2. Ergiinzungsband, 1908.

5) Pick und Yamanouchi, Zeitsehr. f. Immunitatsf. u. experim. Thor.,
Teil 1, Bd. 1, 1909.

6) Ritz, Zeitsehr. f. Immunitatsf. u. experim. Ther., Teil I, Bd. 9, 1911.

39 *

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586

Sadanori Mita und Tetsuta lto,

Nachdruck verboten.

Aus dem Pharmakologischen Institut der Universit&t Berlin;
Direktor: Gekeimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung ftir Im-
munitatsforschung und experimentelle Therapie; Leiter: Prof.
Dr. E. Friedberger).]

Ueber Schwankungen in der Giftlgkett artfremden Normal-
serums fQr das Meerschweinchen.

Von Dr. Sadanori Mita und Dr. Tetsuta I to aus Tokio.

(Eingegangen bei der Redaktion am 11. Februar 1913.)

DaB das artfremde aber auch das arteigene frisch de-
fibrinierte Blut sowie das Plasma besonders bei intravendser
Zufuhr giftig wirkt, ist aus den Untersuchungen von K 6 hler 1 ),
Boggs 1 3 ), Morawitz 8 ), Weber 4 ), Studzinski 5 ),
Schenk 6 ), Blaizot 7 ), Moldovan 8 ), Doerr 9 ) bekannt.

In jflngster Zeit hat besonders Moldovan dieses Ph&-
nomen n&her studiert. Die giftige Wirkung des defibrinierten
Blntes ist nach Moldovan bereits innerhalb V*— 8 / 4 Stnnde
geschwunden, w&hrend nach Doerr das in Hirudinl&sung
aufgefangene Blut l&ngere Zeit giftig bleibt. Die Giftigkeit
des frisch defibrinierten Blutes wird nach den meisten Autoren
auf intravasale Gerinnungen bei der Injektion zurflckgefflhrt.
Moldovan fand auch, daB abzentrifugiertes Serum im frischen
Zustande giftig ist und teilt mit, daB auch hier die Giftwirkung
auBerordentlich labil ist.*)

1) Kohler. Inaug.-Diss., Dorpat 1877.

2) Boggs, Deutsch. Arch. f. klin. Med., Bd. 79.

3) Morawitz, Miinch. med. Wochenschr., 1907.

4) Weber, Deutsch. Arch. f. klin. Med., Bd. 46.

5) Studzinski, Centralbl. f. Physiol. Bd. 23.

6) Schenk, Miinch. med. Wochenschr., 1910.

7) Blaizot, Compt. rend. Soc. Biol., Bd. 68ff.

8) Moldovan, Deutsch. med. Wochenschr., 1910.

9) Doerr, Wien. klin. Wochenschr., 1912.

*) DaB im Serum spontane Veriindemngen auftreten, haben auch
neuerdings Pick und Handowsky (Arch. f. exp. PathoL, Bd. 71, 1913)
mitgeteilt.

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norm.-Ser. f. d. Meerechw. 587

Auf Veranlassung von Herrn Prof. Friedberger haben
wir es unternommen, zu untersuchen, ob die mit begin-
nender Gerinnung eintretende Giftigkeit tats&chlich mit ihrer
Vollendung beendigt ist oder ob auch die Giftigkeit des
Sernms noch weiterhin eine Aenderung erf&hrt.

TatsSchlich erfolgt dann anch noch eine weitere Abnabme
der Giftigkeit in den meisten Fallen innerhalb der folgenden
Stunden. Es ist also keineswegs die Giftigkeit mit voll-
endeter Gerinnung konstant geworden (das gilt wenigstens fttr
das artfremde Serum).

Die Giftigkeit des frischen Serums tritt nicht nur im
Tierversuch hervor, sondern sie macht sich nach den Unter-
suchungen von Schulz 1 2 3 * * * * ) sowie Dale*) auch am isolierten Organ
(Uterus, Darm) bemerkbar. Aber auch diese Giftigkeit ver-
schwindet beim einfachen Lagern des Serums.

In den Versuchen von Friedberger und Kumagai 8 )
z. B., in denen das 24 Stunden mit Bakterien in Kontakt ge-
wesene anaphylatoxinhaltige Serum mit einer entsprechenden
Quote desselben normalen Meerschweinchenserums von gleichem
Alter verglichen wurde, zeigte letzteres keinen EinfluB auf die
Darmbewegung*).

Wir untersuchten zunachst einmal die Veranderung in
der Giftigkeit des normalen Kaninchenserums fiir das
Meerschweinchen zu verschiedenen Zeiten nach der Entnahme.
Wir verfuhren dabei so, daB wir bei mittelgrofien gesunden
Kaninchen das Blut aus der Carotis auffingen, sofort nach der
Entnahme zentrifugierten und das bei Zimmertemperatur im
Dunkeln aufbewahrte Serum zu verschiedenen Zeiten auf seine
Giftigkeit am Meerschweinchen auswerteten.

Nachstehend folgt eine Reihe derartiger Versuche.

1) Hygien. Laboratory Bulletin No. 80 1912.

2) Journ. of Pharm. and exp. Therap. Bd. 4, 1913 No. 3.

3) Friedberger und Kumagai, Verhandlg. der 6. Tagung der
freien Vereinigung fiir Mikrobiologie, Berlin, 30. Mai 1912; Centralbl. f.

Bakt., Bd. 54, Ref., Beiheft, p. 39.

*) Anmerkung: Die Abnahme der Giftigkeit des normalen Serums gegen-

iiber dem isolierten Darm und Uterus ist in der jiingsten Zeit von Fried¬

berger und Nathorff niiher studiert worden. Herr Nathorff wird

dariiber in seiner Dissertation ausfiihrlich berichten.

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588

Sadanori Mita und Tetauta Ito,
Versuch L Kaninchen No. 28.

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No. dee
Tiere8

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit')

Aaagang

317

180

1,50

22'

in 4' tot

321

190

1.25

20'

dgl.

320

190

1,00

31'

leicht erkrankt

319

200

1,25

60'

in 3' tot

328

200

1,25

90'

stark erkrankt

330

200

1,50

105'

sehr stark erkrankt

331

230

; 1.75

IKY

dgl.

322

200

J 2,00

120'

in 7' tot

333

200

2,00

150'

stark erkrankt

335

180

2,25

157'

in 3' tot

336

190

2,25

180*

stark erkrankt

337

190

2,50

195'

in 3' tot

*338

200

2,50

315'

stark erkrankt

339

190

2,75

330'

sehr stark erkrankt

340

180

3.00

340'

in 2' tot

343

180

3,00

390*

in 4' tot

351

180 j

3,00

ca. 24 h

stark erkrankt

352

180 |

3,25

ca. 24 k

in 6' tot

Versuch II. Kaninchen No. 10.

No. dee
Tierea

KOrper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ansgang

274

200

0,5

20'

stark erkrankt

275

190

0,75

25'

sehr stark erkrankt

276

190

1,0

30'

in 6' tot

279

170

1,0

60'

stark erkrankt

280

170

1,25

70'

in 4' tot

281

190

1,25

90*

sehr stark erkrankt

282

200

1,5

105'

in 4' tot

277

220

1.5

120'

in 4' tot

278

210 j

1,5

150*

in 5' tot

283

160 !

1,5

260'

sehr stark erkrankt

284

190

1,75

265'

in 2' tot

285

180

1,75

320'

in 2' tot

286

190 I

1,75

390-

dgl

287

180 ;

1,5

395'

stark erkrankt

1) Hierunter ist die Zeit verstanden von der Entnahme beim Kanin¬
chen bis zur Injektion beim Meerschweinchen.

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norra.-Ser. f. d. Meerschw. 589
Versuch III. Kaninchen No. 30.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

366

170

1,5

20*

in */.' tot

367

170

1,25

25'

in IV,' tot

368

170

1,0

30'

in 9' tot

369

180

0,75

45'

9tark erkrankt

370

190

1,0

60'

leicht erkrankt

371

190

1,25

70'

in 7' tot

372

180

1,25

100'

stark erkrankt

273

180

1,5

105'

dgl.

>•

274

174

1,7

130*

275

160

2,0

130'

in l 1 /,' tot

376

170

2,0

270'

stark erkrankt

377

180

2,25

280'

in 5' tot

378

180

2,25

o

l>-

co

stark erkrankt

366

170

2,5

380'

in 5' tot

Versuch IV. Kaninchen No. 29.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

344

170

1,5

22'

in 2' tot

345

180

1,0

27'

stark erkrankt

347

190

1,25

30'

in 2 * tot

346

190

1,25

60'

stark erkrankt

348

180

1,50

67'

in 2' tot

349

180

1,5

90'

in 4' tot

350

180

1,5

120'

in 10' tot

353

190

1,5

150'

in 2 * tot

354

190

1,5

300'

in 4' tot

364

200

1,5

ea. 18 h

stark erkrankt

365

200

1,75

ca. 18 b

in 4' tot

Versuch V. Kaninchen No. 2,

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

| Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

.

Zeit

Ausgang

58

170

1,5

30'

in 2 * tot

57

160

1,0

35'

leicht erkrankt

59

150

1,5

55'

in 3' tot

60

170

1,5

220'

stark erkrankt

61

150

1,75

235'

sehr stark erkrankt

62

150

2.0

245'

in 3' tot

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Go gle

Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

590

Sadanori Mita und Tetsuta Ito,

Versuch VI. Kaninchen No. 3, <J.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 200 g Tier

Zeit

Ausgang

79

200

1,5

1 30'

stark erkrankt

80

190

2,0

40'

in 2' tot

81

190

2,0

125'

stark erkrankt

82

190

2.5

135'

sebr stark erkrankt

83

150

3,0

140'

in 2' tot

84

150

3.0

>3,0

240'

leicht erkrankt

Versuch VII. Kaninchen No. 27, $.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
semmmenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

161

160

1,0

25'

in 2‘/j' tot

162

170

1.0

30'

leicht erkrankt

165

165

1,5

230'

stark erkrankt

It 16

160

1 2.0

j 237'

dgl.

167

160

i 2,5

240'

M

168

160

3.0

250'

in 2' tot

Versuch VIII. Kaninchen No.

26.

No. des
Tieres (

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serumtnenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

129

180

1,5

25'

in 4' tot

130

160

1,0

29'

leicht erkrankt

131

190

1.5

60'

in 5' tot

1

134

200

1.5

240'

1 schwer erkrankt

135

200

i 2,0

243'

j in 12' tot

V e r s u <

ch IX. Kaninichen No. 28.

No. des
Tieres

Korper-
gewicht '

Kaninchen-
seriirmnenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

163

160

1,5

22'

stark erkrankt

164

160

2,0

30'

in 2' tot

169

140

j 2,5

230'

in 2' tot

170

i 150

2.5

235'

stark erkrankt

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Original from

UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Schwankungen in d. Giftigkeit artfreroden Norm.-Ser. f. d. Meerechw. 591

Versuch X. Kaninchen No. 3, $.

No. dee
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
senunmenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgaug

113

160

3,0

25'

in 2' tot

114

160

2,5

30'

leicht erkrankt

117

180

3,0

65'

leicht erkrankt

118

150

3,5

70'

stark erkrankt

119

150

4,0

75'

in 3' tot

120

140

40

245'

leicht erkrankt

121

140

4,5

250'

in 2 1 /,' tot

Versuch XI. Eaninchen No. 31.

No. des
Tieres

KOrper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

453

140

1,0

30'

stark erkrankt

454

140

1,25

35'

in 3 1 /,' tot

458

170

1,25

240'

in l 1 /,' tot

459

170

1,25

ca. 24 k

stark erkrankt

461

160

1,5

ca. 24 k

in l 1 /,' tot

Versuch XII. Kaninchen No. 9.

No. des
Tieres

K8rper-

gewicht

Kaninchen-
semmmenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

396

170

1.5

20*

in 2' tot

397

170

1,0

23'

dgl.

399

160

0,75

‘ 45'

stark erkrankt

404

160

1,0

185'

stark erkrankt

405

160

1,25

lOO'

in 7' tot

407

190

1,25

ca. 19 h

in 2' tot

Versuch XIII. Kaninchen No.

24.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

303

180

1,5

23'

in 1'/,' tot
in 2' tot

310

180

1,0

30'

306

180

0,5

35'

in 2' tot

307 ,

200

0,25

37'

leicht erkrankt

308 1

200

0,5

60'

in 4' tot

309

200

0,5

100'

in 6' tot

311

200

0,5

130'

in 2' tot

312

200

0,5

160'

in 8' tot

313

200

0,5

300'

in l 1 /,' tot

Das Serum inaktiviert und nach 5 h auf Giftigkeit gepruft

314 | 190 t 0,5 | 300* | in 5' tot

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592

Sadanori Mita und Tetsuta Ito,

Versuch XIV. Kaninchen No. 4.

No. des
Tieree

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro lOOg Tier

Zeit

Ausgang

86

170

1,5

30'

leicht erkrankt

85

170

2,0

35'

stark erkrankt

87

170

2,5

40*

sehr stark erkrankt

88

160

3,0

45'

in 3' tot

89

150

3,0

60'

in 7' tot

90

150

3,5

235'

in 2' tot

91

150

3,0

240'

in 2' tot

93

170

3,0

ca. 24‘

in 4' tot

Versuch XV. Kaninchen No. I 10.

No. dee
Tieree

Kdrper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Auegang

63

190

1,5

30'

in 1' tot

65

170

1,0

40-

in 2' tot

64

180

0,5

45'

leicht erkrankt

66

190

1,0

247'

in l 1 /,' tot

Versuch XVI. Kaninchen No. 2, $.

No. des
Tieree

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro lOOg Tier

Zeit

Ausgang

46

180

1,5

| 40'

etark erkrankt

47

190

2,0

45'

in l 1 /*' tot

48

200

2,0

250'

in 2' tot

Uebersichtstabelle I.

Zeitliche Abnahme der Giftigkeit dee Kaninchenserums pro 100 g Meer-

schweinchen.

Kan.

No.

ca.

V, Std.
ccm

ca.

2 Std.

ccm

ca.

3 Std.
ccm

ca.

4 Std.

ccm

ca.

6 Std.

ccm

ca.

18 Std.

ccm

ca.

24 Std.

ccm

28

1,25

2,0

2,5

3,0

3,25

10

1,0

1.5

1,75

30

1,0

2,0

2,5

29

1,25

1,5

1,5

1,75

2

1,5

2,0

3

2,0

3,0

>3,0

27

1,5

3,0

26

1,5

2,0

28

2,0

2,5

|

3

3,0

4,5

31

1,25

1,25

1,5

9

1,0

1,25

1,25

24

0.5 j

0,5

4

3,0

3,0

3,0

110

1,0

1,0 j

2

2.0

2*0 |

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norm.-Ser. f. d. Meerschw. 593

Wie sich aus der zusammenfassenden Tabelle I ergibt,
erfahrt die Giftigkeit des normalen Kaninchenseruins auf das
Meerschweinchen im Verlaufe weniger Stunden in vielen Fallen
eine ganz betrachtliche Abnahnie, die schon innerbalb von
4 Stunden 50 Proz. der urspriinglichen Giftigkeit betragen kann.

Im weiteren Verlaufe bis zu 24 Stunden geht die Giftig¬
keit noch weiterhin betrachtlich zurttck.

Dagegen haben wir doch eine Reihe von Fallen beobachtet
(4 Versuchstiere in Tabelle I), bei denen diese Abnahme der
Giftigkeit ausblieb. Schon diese UnregelmaBigkeit des Pha-
nomens schien uns schwer mit der von Moldovan ange-
nommenen Deutung vereinbar. Dann aber erklarte die Hypo-
these von Moldovan keineswegs die Tatsache, weshalb nicht
nur in der ersten Zeit nach der Blutentnahme, in der man sehr
wohl Gerinnungsvorgange noch intra vitam annehmen kann, son-
dern auch noch zu den spateren Zeiten, von der 6. Stunde ab
bis zu 24 Stunden die Giftigkeit des Serums weiterhin abnahm.

Wir haben, um die Ursache der Giftigkeitsabnahme zu
erforschen, noch Versuche zu verschiedenen Zeiten angestellt
mit aktivem Kaninchenserum wie bisher, und zum Vergleich
mit einer inaktiven Quote desselben Serum.

Diese Versuche folgen nachstehend.

Versuch XVII. Kaninchen No. 26,

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen¬
serum men ge
pro 100 g Tier

Zeit

Au6gang

I. Aktives Serum.

129

180

1,5

25'

| in 4' tot

130

160

1,0

29'

leicht erkrankt

131

190

1,5

60'

in 5' tot

134

200

1,5

240'

schwer erkrankt

135

200

2,0

243'

in 12' tot

0

>2,0

1

. Inaktiviertes Serum.

132

160

1,5

64'

stark erkrankt

133

160

2,0

74'

in 3' tot

136

190

2,0

257'

stark erkrankt

138

130

2.0

267'

stark erkrankt

Wir suchten durch Absattigung der gegen das normale
MeerschweincheneiweiB gerichteten AntikSrper im Kaninchen¬
serum die Giftigkeit zu beeinflussen. Zu diesem Zwecke
wurden 10 ccm des auch im vorigen Versuch verwendeten
Kaninchenserums No. 26 mit 7 ccm wiederholt in physio-

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594

Sadanori Mita und Tetsuta Ito,

logischer Kochsalzldsang gewascbener Meerschweinchenblut-
kOrperchen versetzt, 1 Stunde in Kontakt gelassen and dann
abzentrifugiert. Es ergab sicb jedoch, datt durch diese Proze-
dur eine nachweisbare Verringerung der Giftigkeit nicht ein-
getreten ist.

III. 10 ccm aktives Kanin chenserum mit 7 g wiederholt mit physiologischer
Kochsalzlosung gewaschenen Meerschweinchenblutkorpercben vereetzt, 1 Std.
lang bei 38° C digeriert, dann zentrifugiert und auf Giftigkeit gepriift

134

160

1,5

90'

in 3' tot

137

150

1,5

274'

stark erkrankt

139

150

2,0

280'

in 2' tot

Versuch XVIII. Kaninchen No.

3, S'

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

I. Aktives Serum.

113

160

3,0

1 25'

in 2' tot

114

160

2,5

30'

leicht erkrankt

117

180

3,0

65'

leicht erkrankt

118

150

3,5

70'

stark erkrankt

119

150

4,0

75'

in 3' tot

120 i

140

4,0

245'

leicht erkrankt

121 |

140

4,5

250'

in 2y t ' tot

I]

[. Inaktiviertes Serum.

115 1

170

3,0

i 50'

in 2' tot

116 :

150

2,5 j

60'

schwer erkrankt

122

140

3,0 ;

295'

in 4' tot

Uebersichtstabelle II.

Giftigkeitsanderung des normalen aktiven und normalen inaktivierten

Serums mit der Zeit

1

Minimale todliche
Dosis pro 100 g Tier

Minimale todliche
Dosis pro 100 g Tier

Minimale todliche
Dosis pro 100 g Tier

i Aktives Serum

Inaktiviertes Serum

Mit Meerschweinchen-
blutkorperchen
digeriertes Serum

Kaninchen

: ca - 7-, h

ca. 4 h

ca. */,“

ca. 4 h

ca. I 1 /, 1 * ca. 4 h

No. 26

1,5 ccm 1

2 .() ccm

2,0 ccm

> 2,0 ccm

1,5 ccm | 2.0 ccm

Kaninchen

ca. V

ca. 4 b

[ ca. Vj h

ca. 5 h

i

No. 3

3,0 ccm

4,5 ccm

3,0 ccm

3,0 ccm

Kaninchen

ca. 1 /' J h

i

ca. 5 h

ca. 5 h !

| |

No. 24

i

0,5 ccm

0,5 ccm

0,5 ccm

1

Es ergibt sicb aus diesen Versuchen die Tatsache, daB
innerhalb von 4 Stunden das aktive Serum deutlich an Giftig¬
keit abninimt, das inaktive sich aber meist konstant erh&lt.

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norm.-Ser. f. d. Meerschw. 595

Wir haben weiterhin die Giftigkeit von aktiven Kaninchen -
immunseris, die durch Vorbehandlung der Kaninchen mit
Hammelserum gewonnen waren, untersucht.

Wir lassen im nachstehenden die Versuche folgen.

Versuch XIX. Kaninchen No. 9.

No. des
Tieres

I Korper-
gewicht

Kaninchen-
serum menge
pro 100 g Tier

Zeit

1

Ausgang

1. Normalserum.

396

170

1,5

20 *

in 2 * tot

397

170

1,0

23'

in 2' tot

399

160

0,75

45'

stark erkrankt

404

160

1,0

185'

stark erkrankt

405

160

1,25

190'

in 7' tot

407

190

1,25

19 h

in 2' tot

II. Eine Woche nach der intraperitonealen Vorbehandlung mit 5 ccm

Hammelserum.

451

140

0,6

20'

in 1' tot

452

140

0,3

25'

stark erkrankt

455

170

0,6

80'

stark erkrankt

456

170

0,6

245'

stark erkrankt

467

170

1,0

240'

in 3' tot

462

160

1,0

24-

leicht erkrankt

463

160

1,25

24 k

stark erkrankt

464

150

1,5

24 h

in 2' tot

Versuch XX. Kaninchen No. 5.

No. des
Tieres

Kdrper-

gewicht

Kanin chen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

! Ausgang

i

I. Normalserum.

92

180

1.5

30-

in 6' tot

94

180

1,5

ca. 24 b

stark erkrankt

95

160

2,0

ca. 24 k

in 5' tot

U. Das Tier je 2 Tage mit 2 ccm Hammelserum intravenos viermal vor-
behandelt. Am 10. Tage nach der letzten Injektion Blut entnommen und
auf die Giftigkeit des Serums untersucht.

A. Aktives Serum.

140

160

1,0

30'

in 2' tot

141

180

0,5

34'

schwer erkrankt

142

170

1,0

60'

in 2' tot

144

180

1,0

240'

in 1' tot

B. Inaktiviertes Serum.

142

180

1,0

70'

in 4' tot

145

170

1,0

250' |

in 4' tot

Prazipitation: 1:

10000 +.

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596

Sadanori Mita und Tetsuta Ito,

Versuch XXL Kaninchen No. 28, <$.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

, Kaninchen-
serum men ge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

I. Normalserum.

163

160

1,5

1 22'

stark erkrankt

164

160

2,0

30*

in 2' tot

169

140

2,5

2,0 j

230'

in 2' tot

170

150

235'

stark erkrankt

II. Dreimal eine urn denandern Tag mit 2,0 ccm Hammelserum intravenos
vorbehandelt. Am 7. Tage nach der letzten Injektion Blut entnommen.

A. Aktives Immunserum.

192

150

I i,o

30'

stark erkrankt

193

170

1,5

35'

in 6' tot

195

170

1,5

60'

in 2' tot

196

200

I 1,5

240' |

in 2' tot

B. Inaktives Immunserum.

194

150

1,5

60'

: in 3' tot

197

190

1 1,5

245'

stark erkrankt

198

180

2,0

250'

dgL

199

160

1 2,5

265'

in l 1 /,' tot

Versuch XXII. Kaninchen No. 48.

Viermal in Intervallen von 1—4 Tagen mit 1,5 ccm Hammelserum intravenos
vorbehandelt. Am 30. Tage nach der letzten Injektion Blut entnommen.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

A. Aktives Immunserum.

65 !

190

0,5

25'

stark erkr., in 60' tot

221

170

1,0

30'

in 2' tot

39

190

1,0

240'

in 1' tot

60 i

170

0,5

245'

stark erkrankt

B.

Inaktives Immunserum.

36

190

0,5

68'

stark erkrankt

35

180

1,0

61'

in 4' tot

40

190

1,0

230'

in 10' tot

Versuch XXIII. Kaninchen No. 41.

Viermal in Intervallen von 1—4 Tagen mit 1,5 ccm Hammelserum intravenos
vorixdmndelt. Am 80. Tage nach der letzten Injektion Blut entnommen.

No. des
Tieres

Korper-
1 gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

A. Aktives Immunserum.

61

180

0,5

30'

in 6' tot

62

170

025

33'

in 15' tot

63

190

0,1

40'

leicht erkrankt

37

200

0.25

240'

stark erkrankt

82

200

0,15

270'

in 5' tot

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norm.-Ser. f. d. Meerschw. 597

No. des
Tieres

Kftrper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro l(X)gTier

Zeit

Ausgang

64

B.

180

Inaktives Immunserum.

1 0,25 I 60'

in 10' tot

220

180

0,1

70'

leicht erkrankt

38

190

0,1

244'

in 12' tot

59

190

0,25

255'

leicht erkrankt

Uebersichtstabelle III.

Giftigkeitsanderung des aktiven und inaktiven Immunserums mit der Zeit.

Minimale todliche
Dosis pro 100 g Tier

Minimale todliche Dosis pro 100 g Tier

normales Serum

Immunserum

aktives

inaktiviertes

Kan.

ca. 30'

j ca. 4 h

| ca. 30'

ca. 4 h

| ca. l h

j ca. 4 k

No. 28

2,0 ccm

i 2,5 ccm

1,5 ccm |

1,5 ccm

1,5 ccm

, 2,5 ccm

Kan.

ca. V," |

ca. 24 h

j ca. 2 h

ca. 4 h

ca. V,"

ca. 4 h

No. 5

1,5 ccm

2,0 ccm

1,0 ccm

i I

1,0 ccm

1,0 ccm i

1,0 ccm

Kan.

ca. 1 a h j ca.

3 h j ca. 19-

: ca. l /., h i

ca. 4 k

No. 9

1,0 ccm l,25ccmjl,25 ccm

0,6 ccm

0,6 ccm

Kan.

i i

! ca. ‘/, b

ca. 4 h

ca. l h

ca. 4"

No. 41

i

; 0,25 ccm

0,5 ccm

0.25 ccm

0,25 ccm

KanT
No. 48

1,0 ccm

j 1,0 ccm

| 1,0 ccm

j 1,0 ccm

Es ergibt sich zunachst die Tatsache, daft, im Gegensatz
zum normalen Serum, das Immunserum der Kaninchen seine
Giftigkeit meist innerhalb 4 Stunden nicht wesentlich ver&ndert.
Auch das inaktive Serum verhielt sich entsprechend. In je
einem Falle haben wir allerdings eine scheinbare Abnahme
der Giftigkeit zu verzeichnen. Doch mochten wir darauf hin-
weisen, daB auch hier dasjenige Tier, das die vorher todliche
Dosis spfiter erhielt, schwere Krankheitssymptome zeigt. Die
Differenz dOrfte also kaum allzu hoch angeschlagen sein.

Herr Professor Friedberger vermutete, daB die Giftig¬
keit der Kaninchensera vielleicht darauf beruhe, daB gewisse
toxiscbe intermedia™ Spaltprodukte der Verdauung im Blut
zirkulieren. Man mtiBte dann, um die allm&hliche Giftigkeits-
abnahme zu erkl&ren, annehmen, daB beim langeren Stehen
des Serums, namentlich im aktiven Zustand, ein weiterer Ab-

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598

Sad&nori Mita und Tetsuta lto,

bau dieser Zwischenstufen statthatte. War diese Annahme
richtig, so muBte bei einem lfingeren Hungern der Tiere die
Giftigkeit gegen die Ffltterungsperiode abnehmen x ) und anderer-
seits war zu erwarten, dafi das Serum aus im Hungerzustand
entnoramenen Blut seine Toxizitfit konstant erhalten wfirde. Zur
Entscheidung dieser Frage haben wir eine Reihe von Ver-
suchen an gestellt, fiber die im nachstehenden berichtet ist.

Wenn wir zunfichst die Giftigkeit beim geffitterten und
beim fastenden Tier vergleichen, so ergibt sich entgegen
unserer ursprfinglichen Erwartung keine deutliche Abnahme
der Giftigkeit in der Hungerperiode; ja im Gegenteil bei Ka-
ninchen No. 2 und beim Hund eine deutliche Zunahme. Auch
in der auf die Fastperiode folgenden neuen Ffltterungsperiode
findert sich die Giftigkeit beim Kaninchen No. 2 nicht merk-
lich. Beim Kaninchen No. 1 haben wir eine geringe Zunahme,
beim Kaninchen No. 31 eine geringe Abnahme der Giftigkeit
(Vergleich des V* Stunde alten Serums).

Versuch XXIV. Kaninchen No. 2 , $.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

i

Kaninchen-
serummenge Zeit

pro 100 g Tier

Ausgang

I. Morrnalserum.

46

180 !

1,5

40'

stark erkrankt

47

190

2,0

45'

in 1 l / f ' tot

48

200

1,0

250'

in 2' tot

II. 3 Tage lang hungern gelassen.

50

190

2,0

30'

1 in 2 * tot

51

150

1 »*>

34'

in 1 L' tot

49

190

1,0

40'

stark erkrankt

52

190

0,5

50'

leicht erkrankt

53

210

1,5

240'

leicht erkrankt

54

ISO

2,->

235'

in 1' tot

55

190

2,0

245'

stark erkrankt

III. 24

Stunden lang reichlich gefiittcrt und wieder gepriift.

56

ISO 1

1,5

30*

in 5' tot

57

170 1

1,0

35'

leicht erkrankt

60

200 |

1,5

230'

leicht erkrankt

61

180

2,5

235'

stark erkrankt

62

160 |

3,5

2-14'

in 2' tot

1) Eine Zunahme der Toxizitiit wiihrend des Hungems findet naoh
Versuchen von Docrr an 2 Kaninchen (Centralbl. f. Bakt., Bd. 67, H. 1/2)
nicht statt, im einen Fall war sogar eine Abnahme zu konstatieren.

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norm.-Ser. f. d. Meerschw. 5 99
Versuch XXV. Kaninchen (I. 10).

So. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

I. Normalserum.

63

190

1,5

30'

in 1' tot

65

170

1.0

40'

in 2' tot

64

180

0,5

45'

leicht erkrankt

66

190

1,0

247'

in l*/ 3 ' tot

II. 3 Tage lang hungern gelassen

.

67

180

1,0

26'

in 2' tot

68

190

0,5

31'

leicht erkrankt

69

170

1,5

270'

in 3' tot

70

200

1,0

276'

dgl.

71

190

0,5

283'

leicht erkrankt

Versuch XXVI. Kaninchen No. 1.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

I. 3 Tage lang hungern gelassen

34 |

200

1.5 |

35'

stark erkrankt

35

190

2,0

40'

in 6' tot

36

180

2,0

250'

stark erkrankt

37

210

2,5

255'

dgl.

38

180

3,0

265'

in 3' tot

II. 6 Stunden nachher wieder Blut entnommen, nachdem das Tier

gefiittert worden war

39

170

2,0 |

25'

in l 1 /,' tot

40

150

1,5

35'

in 3' tot

41

190

1.0

40'

leicht erkrankt

42

200

1,5

150'

stark erkrankt

43

180

2,0

156'

dgl.

sehr stark erkrankt

44

170

2,5

163'

45

1 170

3,0

>3,0

173'

dgl.

III. Das Tier 7 Tage lang reichlich gefiittert und dann wieder
das Serum untersucht

in 2' tot
stark erkrankt

stark erkrankt
in 3' tot

fceltschr. f. Immunitaisforschung. Orlg. Bd. XVII. 40

58

180

1,5

30'

59

170

1,0

36'

62

190

1,5

270'

61

ISO

2,0

275'

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600

Sadanori Mita und Tetsuta Ito,

Versuch XXVII. Kaninchen No. 31.

No. des Kdrper-

Tieres gewicht

Kaninchen-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

I. 2V f Tage hungern gelassen

409

170

1,5

22'

in 2' tot

410

160

1,0

37'

in 2 7/ tot

411

160

0,75

BO 7

stark erkrankt

412

170

1,0

240'

leicht erkrankt

413

180

1,25

245'

stark erkrankt

414

190

1,5

250'

dg!

in 2' tot

415

160

II. ]

1,75

Sach 5-tagige

255'

r Fiitterung

453

140

1,0

30 7

stark erkrankt

454

140

1,25

35'

in 3*/,' tot

458

170

1,25

240'

in l 1 /,' tot

459

170

1,25

ca. 24"

stark erkrankt

461

160

1,5

ca. 24“

in l 1 /,' tot

Versuch XXVIII. Hund.

No. des
Tieres

Korper-

gewicht

Hunde-
serummenge
pro 100 g Tier

Zeit

Ausgang

i.

Im normalen

Zastand

298 1

2O0

1,5

40'

in 3' tot

299 |

190

1,0

35'

in 24' tot

307

190

1,0

390'

stark erkrankt

308

170

1,*>

400'

in 3' tot

II. 2 Tage lang hungern gelassen

325

190

1,'>

40'

in 4' tot

326

170

1,0

47'

dgl.

327

170

0,5

52'

leicht erkrankt

328

170

1,0 1

217'

in 3' tot

III. Xoch weitere 16 Tage !

lang hungern gelassen

333

230

1,0

30'

in 4' tot

334

220

0 ,f>

35'

in 10' tot

335

240

0,25

45'

leicht erkrankt

336

270

1,0

275'

in 4' tot

337 |

270

0,5

285'

leicht erkrankt

IV. Naeh 13-tiigiger Fiitterung

383

200

1,0

20'

leicht erkrankt

38-1

210

1.5

25'

in 3' tot

386

210

1,5

330'

sehr stark erkrankt

387

190

2,0

340'

in 4' tot

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Schwankungen in d. Giftigkeit artfremden Norm.-Ser. {. d. Meerschw. 601

Uebersichtstabelle IV.

Beziehungen zwischen Serumgiftigkeit und Emahrung.

Minimale
tddliche Dosis
pro 100 g Tier

Minimale
tddliche Doeis
pro 100 g Tier

Minimale
tddliche Doeis
pro 100 g Tier

Minimale tddliche Doeis
pro 100 g Tier

Norm

Hungem

Hungern

Fiittera

Kan.
No. 2

3 Tage

24*

ca. V

ca. 4 b

ca. V» h

ca. 4 b

ca. 7» h ca. 4 s

2,0 ccm

2.0 ccm

1,5 ccm

2,5 ccm

1,5 ccm

3,5 ccm

Kan.
1.10

ca. 4 h

1

ca. 7, k

ca. 7 a h

ca. 4 h

1,0 ccm

1,0 ccm

1,0 ccm

1,0 ccm

Kan. 1
No. 1

3 Tage

6 b

7 Tage

j i ca. l /» k ca. 4 h j

ca. 7,“

ca. 4 b

i

2,0 ccm

3,0 ccm j

1,5 ccm

2,0 ccm

Kan.
No. 31

I 3 Tage j

5 Tage

_

ca. 7* h ca. 4 b

ca. 7 # fc

ca. 4"

ca. 24 h

1,0 ccm

1,75 ccm

1,25 ccm 1,25 ccm

1,5 ccm

Hund

2 Tage

16 Tage

13 Tage

ca. */,-

ca. 6 b | ca. 7a h

ca. 3“

ca. 7, h

ca. 4 h

ca. 7, h

ca. 5 h j

1,0 ccm 1,5 ccm 1,0 ccm 1,0 ccm 0,5 ccm 1,0 ccm

1,5 ccm 2,0 ccm

Jedenfalls zeigen diese Versuche, dafi die geringen and
nicht einmal eindeutigen Schwankungen in der Giftigkeit eine
Abh&ngigkeit von der Verdauung nicht erkennen lassen.

Wenn wir nun die zeitliche Abnahme der Giftig¬
keit bei den einzelnen Tieren vergleichen, so sehen wir, daB
auch im Hungerzustand ebenso wie bei der Fattening eine
Abnahme der Giftigkeit mit der Zeit erfolgen kann, die freilich
ebensowenig wie bei geffltterten Tieren konstant ist.

Zusammenfassung.

Die Giftigkeit frisch gewonnenen Kaninchenserums ffir
das Meerschweinchen bei intravendser Zufuhr erf&hrt nicht
nur innerhalb der kurzen Zeit bis zur vollendeten Gerinnung
ein Abnahme. Vielmehr schreitet die Abnahme der Giftigkeit
in den meisten Fallen mindestens noch von der ersten halben
Stunde weiter fort.

40*

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602

T. Kumagai,

Inaktiviertes Serum zeigt iunerhalb eines Zeitraumes von
4 Stunden, in denen das aktive Serum meisteus betrSchtlich
an Giftigkeit abnimmt, keine deutliche Verminderung der
Toxizit&t.

Prim&r giftige Antisera halten sowohl im aktiven wie im
inaktiven Zustand ihre Giftigkeit von V 2 bis zur 4. Stunde
ann&hernd bei.

Die Verminderung der Toxizitat von Kaninchenseris er-
folgt in gleicher Weise wie bei gefiitterten Tieren auch hSufig
bei hungernden.

Nachdruck vcrbotcn.

[Aus dem Pharmakologischen Institut der Universitat Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fiir Im-
munitatsforschung und experimentelle Tlierapie; Leiter: Prof.
Dr. E. F r i e d b e r g e r).]

Ueber Anaphylaxie.

XXXV. Mitteilung.

Ueber das Verhalten der roten Blutkorperchen bei der Anaphylaxie
und Anaphylatoxinvergiftung.

Von T. Kumagai aus Tokio.

(Eingegangen bei der Redaktion am 18. Februar 1913.)

Bereits im Jahre 1909 hat Sleeswijk^gelegentlich seiner
Anaphylaxieversuche die Beobachtung gemacht, daB das wahrend
des anaphylaktischen Shocks beim Meerschweinchen ent-
nommene Blut beim Zentrifugieren geringe H&molyse zeigt.
Friedberger und Hartoch 2 ) konnten diese Beobachtung
von Sleeswijk alsbald bestatigen. Sie verglichen das wMhrend
der gewohnlichen Erstickung durch Zuschniiren der Trachea
entnommene Blut mit dem im anaphylaktischen Erstickungs-
shock gevvonnenen und fanden das Serum des ersteren bei
vorsichtigem Zentrifugieren stets farblos, das des letzteren, in
Uebereinstimmung mit Sleeswijk, stets mehr Oder weniger
rotlich gefarbt.

Eine Reihe von Autoren hat nachdem die gleiche Be¬
obachtung gemacht; nur Biedl und Mtiller 8 ) geben merk-
wiirdigerweise an, daB das im anaphylaktischen Shock des

1 ) Diese Zeitschr., Bd. 2, 1909, p. 133.

2) Ibid., Bd. 3, 1909, p. 581.

3) Ibid., Bd. 8, 1911, p. 414.

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Verhalten der roten Blutkorperchen bei der Anaphylaxie etc. 603

Meerschweinchens entnommene Blut beim Zentrifugieren ein
farbloses Serum liefere, wfihrend im Gegensatz dazu das bei
der primfiren Antiserumgifttigkeit in der Agone entzogene
Blut beim Zentrifugieren ein rotgefarbtes Serum ergebe. Die
Autoren glaubten hierin einen weiteren Unterschied zwischen
Anaphylaxie und dieser Vergiftung zu erblicken. Da es aber
durch die vorausgegangenen Beobachtungen festgestellt war,
daB auch bei der aktiven Anaphylaxie wahrend des Zentri-
fugierens ein Hamoglobinaustritt statt hat, so eriibrigt es sicli
fiiglich auf diese Einwande weiter einzugehen.

Die Tatsache, daB das im anaphylaktischen Shock ent¬
nommene Blut beim einfachen Zentrifugieren Hamoglobin
abgibt, ist augenscheinlich auf eine Schadigung der roten Blut¬
korperchen zuriickzuftihren. Auf Veranlassung von Herrn
Prof. Friedberger habe ich Versuchefiber Art und Grad der
Schadigung der Erythrocyten beim anaphylaktischen Shock vor-
genommen, fiber die ich im nachstehenden berichten will. Die
Versuche wurden an aktiv prfiparierten Meerschweinchen bei der
Reinjektion und bei normalen Tieren, die mit Anaphylatoxin ver-
giftet waren, angestellt. Zu den Kontrollversuchen wurden Meer¬
schweinchen benutzt, die durch Zuziehen der Trachea erstickt
wurden.

Bei den Tieren beider Gruppen wurdezunachstnachder Auf-
spannung die Carotiden freigelegt, aus der einen etwa 2 ccm Blut
entnommen und mit Glasperlen geschfittelt. Danach wurde bei
den mit Hammelblutserum praparierten Tieren eine sicher tod-
liche Dosis in die Vena jugularis reinjiziert, bei den anderen
Tieren eine entsprechend grofie Dosis Anaphylatoxin und bei
den Kontrollen wurde die Trachea mittels einer Schnur zugezogen.
In der Agone erfolgte die zweite Blutentnahme aus der anderen
Carotis. Das Blut wurde wiederum mit Glasperlen defibriniert.
Dann wurden jeweils die beiden Blutquoten dreimal mit
0,85-proz. physiologischer Kochsalzlosung gewaschen und in
5-proz. Aufschwemmung auf ihre Resistenz gegenfiber Saponin
und Wasser untersucht. Die Resistenzbestimmung gegenfiber
hypotonischen Losungen geschah in der tiblichen Weise derart,
daB zu Rohrchen mit fallendem Kochsalzgehalt und gleichem
Flflssigkeitsvolumen gleiche Mengen Blutkorperchenaufschwem-
mung zugesetzt wurden (1 ccm der 5-proz. Blutaufschwemmung).
Die Ablesung des Resultates erfolgte nach 2 Stunden beim

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604

T. Kuraagai,

Aufenthalt der R8hrchen in Ziramertemperatur. Als Beispiel
einer groBen Reihe vollkoinraen iibereinstimmender Versuche
sei die nachstehende Tabelle angefUhrt.

Meerechweinchen K 8 am 1. VII. mit 0.02 Hammelsenim prapariert,
Reinjektion 0,05 Hammelsenim am 18. VII., Normaltier (Kontrolle) durch
Eretiekung getfitet.

14

4->

bC
• G

J2 £

bC
u G

01 G

■°:8

e a

Hiimolyse

■go

8

-o

« 6
. 0)
§ i?

Anaphylaxie-Tier K 8

Normaltier

A .
c- n:

u*

<

CA

n: t

oa

vor

nach

vor

nach

<2 £
CO ^

* 3
a

Injektion

Injektion

Erstiekung

Eretiekung

1,8

0,2

1,0

0,453

fast farblos l )

rotlich,
gr. Kuppe
dgl.

fast farblos

fast farblos

1,7

0,3

0,443

fast farblos,
leicht gelblieh

leicht gelb

leicht gelb

1,0

0,4

0,434

tief gelb

rot, kl. Kuppe

etwas rotlich,
gr. Kuppe

etwas rotlich,
gr. Kuppe

1,5

0,5

0,425

etwas rotlich,
gr. Kuppe
rot,

kl. Kuppe

dgl.

dgl.

dgl.

1,4

0,6

0,415

tiefrot,

Hauch

rotlich,
kl. Kuppe

rotlich,
kl. Kuppe

1,3

0,7

ft

i 0,406

tiefroth,

Hauch

dgl.

fast komplett

dgi.

dgl.

1,2

0,8

tt

0,396

dgl.

rot, Hauch

rot, Hauch

1,1

0,9

tt

0,387

ti

V

dgl.

dgl.

1,0

1,0

ty

1 0,378

fast komplett

komplett

fast komplett

fast komplett

0,9

i 1,1

1 tt

0,368

komplett

dgl.

komplett

komplett

Aus dieser Tabelle ergibt es sich, daB die Resistenz der
Blutkorperchen gegeniiber hypotonischen Kochsalzlosungen
wahrend des anaphylaktischen Shocks eine deutliche Abnahme
erfahrt. Bei dem durch Unterbinden der Trachea erstickten
Tier ist dagegen hiervon nichts zu bemerken.

Wir haben dann des weiteren entsprechende Versuche mit
Anaphylatoxin angestellt. Hier hatten schon Friedberger
und spater alle Mitarbeiter unseres Laboratoriums stets die
Beobachtung gemacht, daB beim Zentrifugieren des im Ana-
phylatoxinshock entDonnnenen Blutes das Serum ebenso rotlich
gefarbt erschien wie bei der aktiven und passiven Anaphylaxie.
Das Gift wurde in der ublichen Weise aus Prodigiosusbacillen
(vier Oesen auf 4 ccm normalen Meerschweinchenserums
1 Stunde Brutschrank, 24 Stunden Zimmertemperatur) ge-
wonnen. Die Technik entsprach im iibrigen vollkommen der

1) Die Farbenangabcn beziehen sich natiirlieh auf die obenstehende
Fliissigkeit.

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Verhalten der roten Blutkorperchen bei der Anaphylaxie etc. 605

bei den voraufgegangenen Versuchen. Auch hier begniigen
wir uns, von unseren ubereinstimmenden Versuchsreihen eine
in der nachstehenden Tabelle mitzuteilen.

29. VII. 1911. Meerschweinchen K 122, 200 g. Anaphylatoxin aus
Prodigiosusbacillen 4 ccm intravenos injiziert. Vor und nach der Injektion
Blutentnahme. K 123 zur Kontrolle eretickt, Blutentnahrae vorher und in
der Agonie.

1C .§

0^7

to

tc

i G

s 3

-G G

be

i~< £

a> G

Hiimolyse

•O j

35 e

• Cj
N >■

W :0

c3 13

A n aphy latoxin -Tier

Normaltier

3-fach

proz.

CT 1

2

a

N CD

043
JH v

Ph o

M

vor

Injektion

nach

Injektion

vor

Erstickung

nach

Erstickung

1,8

0,2

1,0

0,453'

farblos

gelb

farblos

farblos

1,7

0,3

yy

0,443

gelb

etwas rotlich

gelb

gelb

1,6

0,4

n

0,434

etwas rotlich

rotlich,
gr. Kuppe
tiefrot,
kl. Kuppe

dgl.

dgl.

1,5

0,5

yy

0,425

rotlich,
gr. Kuppe

etwas rotlich

etwas rotlich

1,4

0,6

yy

0,415

rot,

gr. Kuppe

dgl.

dgl.

dgl.

1,3

0,7

yy

0,406

dgl.

yy

rot,

gr. Kuppe

rot,

gr. Kuppe

1,2

0,8

yy

0,396

tiefrot,
kl. Kuppe

tiefrot,

Hauch

dgl.

dgl.

1,1

0,9

yy

0.387

dgl.

dgl.

tiefrot,
kl. Kuppe

tiefrot,
kl. Kuppe

1,0

1,0

yy

0,378

>y

yy

tiefrot,

Hauch

tiefrot,

Hauch

0,9

1,1

yy

0,368

tiefrot.

Hauch

komplett

komplett

komplett

Bei der Anaphylatoxinvergiftung ergibt sich
also einVerhalten der roten Blutkorperchen, das
vollig mit dem bei der aktiven Anaphylaxie iiber-
einstimmt. Bei dem durch Erstickung getoteten Tier
waren wiederum keine Unterschiede in der Resistenz der
Blutkorperchen vorher und in der Agone nachzuweisen.

Wir haben dann weiterhin die Blutkorperchen anaphylak-
tischer und mit Anaphylatoxin vergifteter und mechanisch
erstickter Tiere gegenuber Saponin untersucht. Es wurde
wiederum das vorher und in der Agone entnommene ge-
waschene Blut in 5-proz. Aufschwemmung mit fallenden
Saponinmengen im gleichen Fliissigkeitsvolum zusammenge-
bracht. Im iibrigen war die Versuchsanordnung vollkommen ent-
sprechend der in den voraufgehenden Versuchen. Beispiele

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(50G Kumagai, Verh. d. rot. Blutkorperchen b. d. Anaphylaxie etc.

fur die wiederum vbllig eindeutigen Resultate sind in den
folgenden Tabellen gegeben.

28. XII. Meerschweinchen K 12 und K 13 mit Hammelserum prapariert.
Reinjektion mit 0,5 Hammelserum.

■o

£ So

~ * rM

’ ® !

_ ° /o

Hiimolvsc

1

Cj

Blutauf-

Rehwem-

K 12

K 13

j ‘

C3 * •
71 ^

i 51

!»i

inung

vor Injektion

agonal

vor Injektion, agonal

i.n

l :
0,0

1,0

komplett

komplett

komplett

komplett

0.9

0.1

V

,,

„

0.8

0,2

genng

goring

gering

goring

0,7

(U

o

0

«

0,6

0,4

yy

0

0

0

f *

- ar'

/

3,

•

50 :

Blutauf-

Anapkylatoxin-Tier K 122

Krsticktes Tier K 123

•— o ^

*£ Z

3

schwem-

niung

vor Injektion| agonal

vor Injektion

agonal

1.0

0,0

1,0

komplett

komplett

komplett

komj>lctt

0.9

0.1

yy

d-i.

dgl.

dgl.

dgl.

0.8

0,7

o.r>

. 0,2
(V 't

yy

yy

yy

U,.)

0.4

yy

ty

V

yy

yy

. yy

inkomplett

dgl.

inkomplett

0.5

j 0 ,:»

yy

in komplett

inkomplett

dgl.

0.4

\>,6

yy

Spur

Spur

Spur

Sjmr

0.3

0,7 1

yy

e

e

0

e

0.2

, 0 , 8 ,

yy

e

e

e

0

Aus

dieser Tabelle ergi

ibt es sich, daB die im anaphylak-

tisclien Shock entnommenen Blutkorperchen gegeniiber Saponin
keine Resistenzverniinderung zeigen. Die SaponinhSmolyse
beruht bekanntlich nach den Untersuchungen von Meyer und
Ransom auf einer Vereinigung des Saponins mit dem Chole-
stearin der Blutkorperchen. Unsere Versuche zeigen
also,daB dieseSubstanz der roten Blutkfirperchen
(lurch das anaphylaktische Gift nicht beeinfluBt wird.

Zusammenfassung.

Die Rotfiirbung des Serums aus dem im anaphylaktischen
Shock und auf der Hohe der Anaphylatoxinvergiftung ent¬
nommenen Blut ist durch eine Schadigung der roten Blut¬
korperchen bedingt. Diese laBt sich gegeniiber hypotonischen
Kochsalzlbsungen, nicht aber gegeniiber Saponin nachweisen.
Daratis kann man schlieBen, daB das Cholestearin der Blut¬
korperchen durch das anaphylaktische Gift nicht beeinfluBt wird.

Frommanti&che Buchdruckerei (Kermann Pohle) in Jona— 4J73.

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Mschriit £ Iminimitatsfbrschimg. Originak Bi ITU Ha 6.

Naehdruck verboten.

[Aus dem Pharmakologischen Institut der Universit&t Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fflr Im-
munitatsforschung und ezperimentelle Therapie, Leiter: Prof.

Dr. E. Friedberger).]

Ueber Anaphylaxle.

XXXVI. Mitteilung.

Die Lungenbl&hung bei der AnaphylatoxinvergHtung und bei einigen

Shnlich wirkenden Giften.

Von T. Enmagal ana Tokio.

Mit 1 TafeL

(Eingegangen bei der Redaction am 19. Februar 1918.)

Das auffallendste Merkmal bei der Obduktion von Meer-
schweinchen, die an irgendeiner Form der anaphylaktischen
Vergiftung eingegangen sind, ist die Starre der Lunge. Gay
und Southard 1 ) warendie ersten, diediesencharakteristischen
Befund beschrieben baben. N&her ist das Ph&nomen dann
von Auer und Lewis 2 3 * * ) studiert worden, deren Resultate von
Biedl und Kraus best&tigt worden sind. Heute wird die
Konstanz des Vorkommens der Lungenbl&hung beim akuten
anaphylaktischen Tod des Meerschweinchens einstimmig aner-
kannt Von Biedl und Kraus 8 ) wurde das Symptom als spezi-
fisches pathognomonisches Merkmal angesehen, jedoch zu Un-
recht. Man hat n&mlich, wie eine Reihe von Autoren gezeigt
haben (Doerr, Friedberger, Raubitschek usw.), durch
intravendse Injektion der verschiedensten akut totenden Sub-
stanzen von Ricin, Saponin, Oelsanre, Blaus&ure, Solanin,
Hirudin usw. dieselbe Starre und Bl&hung der Lunge hervor-
rufen konnen.

1) Journ. Med. Research, Vol. 19, p. 17.

2) Journ. of the Amer. Assoc., 1909; the Journ. of exper. Med.,
Vol. 12, 1900.

3) Verhandl. der Mikrobiol. Vereinigung, 1910. Centralbl. f. Bakt.,

Ref., Bd. 47, Beih. p. 93; diese Zeitschr.. Bd. 7.

Zeitschr. f. ImmunitJitsforechung. Orig. Bd. XVII. 41

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608

T. Eumagai,

Nach neueren Versuchen von Grbber im hiesigen In-
stitut kann die Lungenbl&hung aucb durch intravendse In-
jektion von Morphium, Codein, Strophantin und Cocain erzeugt
werden. Es ist aber selbstverstSndlich, daB diese Vergiftungen
mit der Anaphylaxie keinen unmittelbaren Zusammenhang haben.
Noch viel weniger gilt das fiir Versuche in denen durch rein
mechanische Momente, EindrQcken des Nasenbeines, Schlag
der Tiere auf das Schadeldach, eine Lungenbl&hung erzielt
wurde (Friedberger und Groeber). Ferner hat
H. Pfeiffer 1 ) bereits gegenflber den ersten Arbeiten von
Biedl und Kraus darauf hingewiesen, daB bei subakutem
Tod an Anaphylaxie die Lungenblahung regelm&Big fehlt.
Das Charakteristische ist bei der Anaphylaxie wie bei vielen
Krankheiten und Vergiftungen nicht der Symptomkomplex
allein, sondern dieser in Verbindung mit seiner Aetiologie.
Aber immerhin ist dieser Sektionsbefund bei durch Anaphy¬
laxie akut gestorbenen Meerschweinchen die auffallendste Er-
scheinung. Die Lungen sind dabei so erweitert, daB sie sich
dicht an die innere Brustwand anschmiegen.

Biedl und Kraus 2 ) prUzisierten diesen Befund naher und
behaupten, die Lunge eines an Anaphylaxie zugrunde ge-
gangenen Meerschweinchens sei von der eines auf sonstige
Weise akut gestorbenen Tieres, speziell durch Anaphylatoxin
und primar giftiges Antiserum vergifteten, makroskopisch und
mikroskopisch leicht zu unterscheiden. Die anaphylaktische
Lunge ist nach den Autoren aufgeblasen, kollabiert nicht nach
Eroffnung des Thorax, ist dabei blutarm und blaB. Histo-
logisch erweisen sich die Alveolen maximal erweitert, die
Lumina der grbfieren und kleineren Bronchien stark verengt,
die Schleimhaut der Bronchien in Falten gelegt, die Kapillaren
nicht besonders blutreich. Bei der passiven homologen und
heterologen Anaphylaxie zeigen sich die gleichen klinischen und
anatomischen Veranderungen am Respirationsapparat der Meer-
schweinchen wie bei der aktiven. Das Wittepepton soli ebenfalls
ganz dieselben klinischen und anatomischen Erscheinungen
hervorrufen.

1 ) Das Problem der EiweiSiiberempfindlichkeit, Jena 1910; diese
Zeitsckr., Bd. 11, 1911, p. 133.

2) 1. c.

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 609

Auch die Lungen der durch Rinderserum and Anaphyla-
toxin Friedbergers zugrunde gegangenen Tiere sind ver-
grbfiert. Doch soil der Unterschied der Lunge gegenfiber
einer anaphylaktischen ein auffSlliger sein. Die ungleichm&fiig
geblahte Lunge soil hier fleckig rot, hyper&misch sein und mehr
oder weniger ausgesprochenes Lungenodem zeigen. Bei der
mikroskopischen Untersuchung sollen diese Differenzen noch
genauer sich feststellen lassen.

Im schroffen Gegensatz zu diesen Angaben stehen die
Befunde von Friedberger selbst, die von alien fibrigen
Autoren, die in dieser Richtung Untersuchungen angestellt
haben, mit einer einzigen Ausnahme (Karsner) best&tigt
worden sind. Ich erw&hne nur Graetz 1 ), Neufeld und
Dold 2 ), Moreschi und Cesa-Bianchi, Sachs und
Ritz 3 ) u. a.

Karsner 4 ) allein bat die Angaben von Biedl und
Kraus insoweit bestStigt, als er bestimmte anatomische
Differenzen zwischen Anaphylaxie und Peptonvergiftung einer-
seits und giftiger Wirkung von Normal- und Antiseris anderer-
seits* beobachtete; mit Anaphylatoxin hat er (iberhaupt keine
Versuche angestellt. Eine wesentliche Bedeutung kann diesen
Versuchen nicht beigemessen werden, da es aus Protokollen
nicht ersichtlich ist, ob die fGr Vergleichsversuche notwendigen
Forderungen beztiglich eines gleichen Volumens und einer
gleichen Injektionsfltissigkeit erfflllt ftaren.

Schon Friedberger 5 ) hat auf die vdllige Identit&t der
Symptome bei Anaphylaxie und Anaphylatoxinvergiftung hin-
gewiesen und hervorgehoben, daB unter diesen Umst^nden
auch der gleiche anatomische Befund zu erwarten sei.

Er hat das auch in seinen Versuchen bestatigt ge-
funden und auf Grund von daraufhin angestellten besonderen
Experimenten zur ErklSrung der abweichenden Befunde von
Biedl und Kraus angenommen, daB diese Autoren nicht-
identische Versuchsbedingungen fflr die einzelnen Formen der

1) Diese Zeitschr., Bd. 8, p. 740.

2) Berl. klin. Wochenschr., 1911, p. 55.

3) Berl. klin. Wochenschr., 1911, No. 23.

4) Diese Zeitschr., Bd. 14, p. 81.

5) Diese Zeitschr., Bd. 7, p. 152; Bd. 8, p. 257; Bd. 9, p. 236.

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T. Kumagai,

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anaphylaktischen Vergiftung gewfihlt h&tten, eine Ansicht, der
sich auch Neufeld, Sachs und Ritz u. a. angeschlossen
haben.

Um nan die Frage nicht nur fflr Anaphylaxie und Ana-
phylatoxinvergiftung, sondern auch fQr eine Reihe von anderen
Vergiftungen, bei denen es zu einem Volumen pulmonum
auctum kommt, mdglichst zu entscheiden, habe ich systematisch
eine grofie Anzahl von Lungen untersucht, die in unserem
Institut bei Anaphylaxie, Anaphylatoxinvergiftung, primarem
Antiserumtod, Tod durch Injektion grfiBerer Dosen von art-
fremdem EiweiB beim Normaltier und durch gewisse akut
wirkende chemische Substanzen gewonnen wurden.

Ein groBer Teil des Materials wurde mir zu meinen
Untersuchungen von meinen Herren Kollegen am Institut
freundlichst tiberlassen; ich mdchte ihnen hierffir meinen ver-
bindlichsten Dank auch an dieser Stelle aussprechen.

Technik: Gleich nach dem Tode der Meerechweinchen wird ihnen
die Trachea unterbnnden. Dann wird die BruBthohle geoffnet, die Trachea
oberhalb der Unterbindung&Btelle durchschnitten und mit Lungen und
Herz als Ganzes herausgenommen. Die eine Lunge wird am Hilus
unterbunden, die andere Halfte abgetrennt und diese einige Minuten in
kochendes Wasser gebracht, um eventuell vorhandenes intraalveolares
Oedem zu fixieren. Darauf wird sie in absoluten Alkohol eingelegt, die
nicht gekochte Hiilfte kommt in 10-proz. Formalinlosung. Nach voll-
endeter Hiirtung wurde in Paraffin eingebettet und geschnitten. Die
6—10 Mikra dicken Schnitte wurden mit Eisenhamatoxylin allein oder
Hiimatoxylin und Eosin gefiirbt.

Im folgenden wollen wir alle untersuchten Lungen (es han-
delt sich um fiber 100 Ffille) in verschiedene Gruppen ein-
teilen und die Resultate innerhalb der einzelnen Gruppen
kurz darstellen.

Aktive Anaphylaxie. Akut todliche Dosis in 1 com physio-
logischer Kochsalzlosung intravenos gegeben.

Diese Gruppe umfaBt die samtlichen Ffille der Meer-
schweinchen, die an der typischen aktiven Serumanaphylaxie
zugrunde gegangen sind. Untersucht wurden im ganzen 33
Falle. Das Volumen der Reinjektionsflfissigkeit war immer
konstant gewahlt, es betrug 1 ccm. In den meisten FSllen
ist die einfach todliche Dosis bekannt In einigen Ffillen

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Die Lungen blahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 611

konnte sie wegen der Versuchsanordnungen nicht ermittelt
werden.

Wir bringen auf p. 612—615 zun&chst eine Uebersichts-
tabelle.

Beim Oeffnen des Brustkorbes fallt die starke Ausdehnung
der Lungen auf, die fast das gauze Herz mit Ausnahme
eines kleinen Teiles der Vorderflachen flberlagern. Ihre Farbe
ist bald stark rdtlicb, bald rosa, bald ganz blaB. Schueidet
man das meist noch schlagende Herz an, so flieBt dunkles
ungeronnenes Blut heraus.

Betrachtet man die gef&rbten Lungenschnitte unter dem
Mikroskop, so sind die Alveolen ad maximum erweitert, die
Alveolarscheidewfinde zum Teil zerrissen und mehrere Alveolen
sind zu einer Blase verschmolzen. Bei genauer Betrachtung
sieht man ohne Ausnahme Blutungen meist steck-
nadelkopfgroB oder darunter. Sie gehen meist von Kapillaren
aus. Die Bronchien sind in der tlberwiegenden Mehrzahl
sehr eng, die Mucosa ist in Falten gelegt. Im Lumen der
Bronchien findet man zuweilen Exsudatmasse, die serdser
Natur ist und sehr wenig Formelemente enthalt. Diese
Faltenbildung fehlte in einigen typischen Fallen,
andererseits sah ich sie in der Lunge eines Meerschwein-
chens, welches zur Kontrolle durch Unterbindung der Trachea
erstickt worden war. An dieser Lunge war keine Spur von
Emphysem, trotzdem fand sich eine starke Faltung und Kon-
traktion der Bronchien vor. Die Frage, ob die Kontraktion der
Mucosa prim&r ist oder nachtr&glich entstanden, lasse ich
dahingestellt sein.

Was die BlutgefaBe und ihre Fflllung betrifft, so sind
die Kapillaren in der Regel blutleer — vielleicht durch
Kompression der aufgebl&hten Alveolen. Die Fiillung der
mittleren und grdfieren BlutgefaBe ist sehr verschieden.
Bald sind sie strotzend gefflllt, bald ganz blutleer. Das
Vorkommen von Oedem, welches von Bied 1 und
Kraus 1 ) bei aktiver Anaphylaxie geleugnet wird, war in
6 Fallen (18,1 Proz.) unter 33 untersuchten Lungen zu
konstatieren, in den fibrigen 27 Fallen war keine Spur von

1) 1. c.

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Die Lungenbliihung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 615

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

616

T. Kumagai,

Oedem nachzuweisen. Das Oedem, welches in diesen akut-
anaphylaktischen Fallen vorgefunden wurde, war meist perivas-
kuiar beschrankt. Ausgedehnte Exsudation, diemehrere Alveolen
ganzlich ausfQllt, war onter den Bedingungen dieser Versuche
bezGglich Volum- und Suspensionsflussigkeit des Reinjektions-
gutes niemals beobachtet worden. AuBerdem war das Oedem
in einigen Fallen nur zirkumskript in einzelne Partien der
Lunge vorhanden.

Bei den Meerscbweinchen, die etwas langsamer zugrunde
gingen, war die Lunge weniger aufgebiaht. Was die Zeit-
dauer betrifft, innerhalb der die Lungen noch deutlich auf¬
gebiaht werden, so ist unter den untersuchten Fallen 8 Minuten
etwa das Maximum. Von drei Tieren (115, 123 und 126),
welche nach 8 Minuten starben, wies eines typische Aufbiahung
auf, wahrend sie in 2 Fallen vermiBt wurde. Bei 116 (nach
13 Minuten tot) und K116 (nach 20 Minuten tot) fanden wir
keine Spur von Lungenblahung. Im allgemeinen findet man
mehr Hamorrhagien bei den langsamer gestorbenen Tieren als
bei den pldtzlich zugrunde gegangenen. Die Hamorrhagie
geht nicht immer mit der Exsudation parallel. Zuweilen sieht
man starke Blutung ohne Oedem. Unter 33 Fallen dieser
Gruppe fanden sich in 7 Fallen (21 Proz.) starke bis mittel-
mafiige Hamorrhagien.

Vergiftung durch Anaphylatoxin.

Das Anaphylatoxin war entweder von Prodigiosusbacillen
oder Vibrio Metschnikoff durch Digerieren mit frischem
Meerschweinchenkomplement, 1 Oese pro 1 ccm, bereitet. Von
5 Fallen waren in 2 die Lungen ganz blaB, von sehr spar-
lichen Hamorrhagien durchsetzt, in den andern 3 waren sie
ziemlich rot und zeigten deutliche Blutungen. Davon hatten 2
Lungen starkes resp. mittelmafiiges Oedem, wahrend eine ganz
geringfiigiges Oedem aufwies. Bei einer fehlt es durch-
a u s. Somit ersieht man, daB unter den gewahlten Versuchsbe-
dingungen bezQglich Volums und SuspensionsflQssigkeit, die
von den Versuchen der vorigen Reihe erheblich
abweichen, das Oedem etwas haufiger und starker auftritt als

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Vergiftung durch Anaphylatoxin.

Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. Q \7

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618

T. Kumagai

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 619

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620

T. Kumagai,

bei der akuten Serumanaphylaxie 1 ). Ebenso ist es mit den
Hamorrhagien, aber die Hamorrhagien und die Exsudation waren
in keinero Fall so ausgedehnt, daB damit die Aufblahung der
Lnngen erklart werden konnte. Das volumen auctum
war auch in diesen Fallen dem vermehrten Luft-
gehalt der Lungen zuzuschreiben: Oedem und
Blutungen kommen als Begleiterscheinung hinzu.

Aktive Anaphylaxie. Akut tddliohe Dosis in grdfierem
Volumen physiologischer Kochsalzlosung.

Um den EinfluB des Volumens der Injektionsflflssigkeit
auf den anatomischen Befund der Lungen zu eruieren, nahmen
wir nun die Reinjektion der totlichen EiweiBmenge Oder
geringer Multipla nicht wie sonst in 1 ccm physiologischer
Kochsalzlosung, sondern in grbBerem Volumen vor. Wir
wahlten, um die Versuche mit denen der Anaphylatoxin-
vergiftung vergleichen zu kdnnen, die Menge von ca. 4 ccm,
das entspricht dem Volum, das von Anaphylatoxin meist in-
jiziert wurde. Die sonstige Versuchsanordnung war ganz die-
selbe wie bei den friiheren Versuchen. Schon frflher hat
unter diesen Bedingungen Friedberger ein haufigeres Auf-
treten des Oedems beobachtet. Meine eigenen Versuche fiihr-
ten zu einer vollkommenen Bestatigung. Ich lasse zunfichst
zur Uebersicht die Tabelle folgen (siehe p. 618/19).

Von 11 Fallen, bei denen die Reinjektion in grSBerem
Volumen der physiologischen Kochsalzlosung vorgenommen
wurde, waren die Lungen in 5 Fallen mehr oder minder
stark gerotet, hamorrhagisch. Die anderen 6 waren ganz
blaB. Das Oedem war in 2 Fallen stark ausgesprochen, in
7 Fallen geringfiigig und perivaskuiar beschrankt. In nur
2 Fallen wurde es ganzlich vermiBt.

Hier war also das Vorkommen von Hamor-
rhagien und Oedem beinahe so haufig wie bei
der Anaphylatoxinvergiftung. Damit failt, wie auch
Friedberger hervorgehoben hat, schon die Behauptung von

1) Esist jedoch zu beriicksichtigen, daB die Ungleichheit des Volumens
und der Suspensionsfliissigkeit eine wesentliche Rolle spielt, s. u.

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 621

Biedl und Kraus, dafi zwischen beiden Vergiftungen ein
prinzipieller Unterschied besteht, in sich zusammeu.

Die Bronchien waren ausnahmslos stark verengt uud
die Mucosa gefaltet. Das Meerschweinchen K 66, welches
nach 8 Minuten zugrunde ging, zeigte eine typische Lungen¬
blahung, wahrend am nach 1 Stunde gestorbenen Meer¬
schweinchen K 108 keine Spur davon zu sehen war, trotzdem
diese Lunge starke Hamorrhagien und Oedem aufwies. Dieser
Fall zeigt, dafi das Oedem und die Hamorrhagien in recht erheb-
lichem Grade an sich allein keine merkbare Ausdehnung der
Lungen hervorrufen kdnnen, jedenfalls nicht die, wie wir sie
bei anaphylaktisch und durch in vitro hergestelltem Ana-
phylatoxin eingegangenen Tieren sehen.

Aktive Anaphylaxie. Akut todliche Dosis in grSfierem Volum
N ormalm e era ehw einehens erum.

Wir untersuchten nun weiter, wie sich die Lunge ver-
hait, wenn man die Reinjektion nicht in grdBerem Volu-
men der physiologischen Kochsalzlosung, sondern im ent-
sprechenden Volumen des Meerschweinchenserums vor-
nimmt, wobei die Bedingungen noch mehr denen bei der
Anaphylatoxinvergiftung entsprechen. Diese Meerschweinchen
waren alle mit 0,02 Hammelserum prapariert und erhielten
dasselbe Serum im aktiven oder inaktivierten Meerschweinchen-
serum. Hier hat gleichfalls bereits Friedberger schon
starkere Oedembildung beschrieben. Wir kdnnen das be-
statigen. Das Resultat unserer Versuche sei in der folgenden
Tabelle mitgeteilt.

Wie sich aus der Tabelle (p. 622) ergibt, ist das Oedem
hier besonders haufig. In alien 7 Fallen war es vorhanden,
und zwar in 3 Fallen mittelmaBig bis stark, in den anderen
4 Fallen war es gering. So bleibt die Haufigkeit des Vor-
kommens von Oedem und Blutungen hier bei aktiver Ana¬
phylaxie gar nicht hinter den bei der Anaphylatoxinvergiftung
zurttck. Nur durch die abweichenden Bedingungen bezuglich
Flilssigkeitsvolumen und Verdttnnungsflttssigkeit des Reinjek-
tionseiweifies bei der gewdhnlichen Versuchsanordnung der
aktiven Anaphylaxie laBt sich also der scheinbare Unterschied in

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622

T. Kumagai

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 623

dem anatomischen Bild, welcher allerdings nur gradueller Natur
ist, erkl&ren. Das Anaphylaxiegift, einerlei ob es
sich bei EiweiBreinjektion im pr&parierten Tier
bildet oder im Reagenzglas bereitet und dann
injiziert wird, bedingt durch seine akute Wir-
kung Lungenblahung. Geringes Oedem und
H&morrhagien konnen sich hinzugesellen. Durch
EinfluB des Flttssigkeitsvolumens und der Be-
standteile des Serums kflnnen zugleich hoch-
gradige H&morrhagien und Exsudationen ent-
stehen.

Vergiftung durch Witte-Pepton.

De Waele 1 2 3 ) hat 1907 zuerst auf die Analogie des ana-
phylaktischen Shocks mit der Peptonvergiftung hingewiesen,
Biedl und Kraus 9 ) fanden dann, daB auch beim Hund die
Injektion von Witte-Pepton das gleiche Krankheitsbild bedingt
wie die Reinjektion bei pr&parierten Tieren. Seitdem hat
das Witte-Pepton in der Anaphylaxielehre eine gewisse Rolle
gespielt. Am Hunde ruft es starkes Absinken des Blut-
druckes, begleitet von einer peripheren Vasodilatation, hervor.
H. Pfeiffer und Mita 8 ) fanden, daB das Pepton beim Meer-
schweinchen Temperatursturz und lokale Nekrose bedingt. In
tddlicher Dosis intravenfls injiziert, bewirkt es eine typische
Lungenblahung. De Waele hat schon die Antianaphylaxie
mit der merkwflrdigen „Immunit&t“ verglichen, die mit Pepton
in untertQdlichen Dosen behandelte Tiere gegenttber einer
Reinjektion von Pepton zeigen. Biedl und Kraus glaubten,
daB Antianaphylaxie Schutz gegen Pepton verleihe und Pepton-
immunit&t gegenflber Eiweifiinjektion nnempfindlich mache.
Wie Friedberger, Kumagai und Odaira 4 * ) nachgewiesen
haben, trifft das nicht zuf Aber auch wenn das Pepton mit
dem Anaphylaxiegift nicht identisch ist, schien es uns doch
von Interesse, die anatomischen Bilder bei der Vergiftung

1) Bulletin de 1’Academic royale de Belgique, 1907; zit. nach Doerr
in Kolle-Wassermann, Bd. 2, p. 1053.

2) Wiener klin. Wochenschr., 1909, No. 11.

3) Diese Zeitechr., Bd. 4. p. 439.

4) Ibid., Bd. 14, 1912, Heft 4.

Z«ftschr. f. lmmaalUUfortchanf. Orig. Bd, XVII, 42

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Vergiftung durch Pepton Witte.

624

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 625

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626

T. Kumagai,

(lurch das Witte-Pepton mit denen bei der Anaphylaxie und
Anaphylatoxinvergiftung zu vergleichen.

Wir lbsten Witte-Pepton zu 10 Proz. in physiologischer
Kochsalzldsung auf. Dann wurde gekocht und filtriert Von
dem Filtrat injizierten wir dem Meerschweinchen 1,5—4 ccm.
1,5 ccm, also 0,075 g Pepton pro 100 g Tier, war die ein-
fache tOdliche Dosis. (Siehe Tabelle p. 624/25.)

Der Symptomenkomplex bei der Vergiftung normaler Tiere
mit Pepton war nicht vom dem bei der Anaphylaxie zu unter-
scheiden. In 5 unter 11 Fallen waren die Lungen ganz rot
h&morrhagisch. Oedem fand sich in 6 Fallen, in 2 stark aus-
gesprochen. In den fibrigen 5 Fallen wurde es vermifit Der
Angabe von Karsner, dafi die Blutung mikrosko-
pisch nicht nachzuweisen sei, kann ich nicht zu-
stimmen. Bei genauer Betrachtung fehlte sie in
in keinem Falle. Man sieht das Oedem bei der Pepton-
vergiftung weit haufiger als bei der akuten Anaphylaxie
(Reinjektion von 1 ccm Volumen), aber weniger haufig
als bei der Vergiftung durch das Anaphylatoxin, so dafi
die Peptonvergiftung zwischen der akuten Anaphylaxie und
der Anaphylatoxinvergiftung steht Hierbei ist allerdings
zu berllcksichtigen, dafi Anaphylaxie und Peptonvergiftung bei
Injektion von 1 ccm Volumen mit der Anaphylatoxinvergiftung
bei Einspritzung von erheblich grbfierem Volumen verglichen
sind. Dadurch dflrften die scheinbaren geringen Differenzen
zwischen Peptonvergiftung und Anaphylatoxinvergiftung sich
erklaren. Die grOfiere Hfiufigkeit des Oedems bei der letzteren
ist eben allein auf das vermehrte Flflssigkeitsvolumen und
die Art der FlQssigkeit zurlickzufflhren.

Vergiftung duroh verschiedene Seren.

_ Diese Gruppe umfaBt die Falle der Vergiftungen durch
artfremde Normalsera und das primar giftige Antiserum.
Doerr 1 ) hat darauf hingewiesen, dafi die Symptome bei der
Vergiftung normaler Meerschweinchen durch artfremdes Serum,

1 ) Diese Zeitschr., Bd. 7, p. 223.

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Vergiftung durch verschiedene Seren.

Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 027

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Spriinge, nach
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1' Seitenlage,
nach 2* tot.

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628

T. Kumagai,

sowohl die allgemeinen wie die lokalen, dieselben sind wie die
der Anaphylaxie. Nach Friedberger und Doerr ist der
Obduktionsbefund identisch mit dem bei spezifischer Anaphy¬
laxie. Friedberger hat daraus gefolgert, daB auch die Ver-
giftung normaler Tiere durch das Serum ein anaphylaktischer
ProzeB sei; durch die Praparierung erfolgt eine spezifische
Steigerung, wie wir das bei alien Immunitatsreaktionen kennen.
Der Quotient zwischen Empfindlichkeit des nornialen Tieres
und des praparierten bezeichnen Friedberger und Mita
als anaphylaktischen Index. Biedl und Kraus finden jedoch
Differenzen in dem Obduktionsbefund. Nach diesen Autoren
sind die Lungen bei der Vergiftung durch Normalserum und
prim&rgiftiges Antiserum ungleichmaBig geblaht, fleckig rot,
hyperamisch und zeigen mehr oder minder ausgesprochenes
Lungenodem. Mikroskopisch soli die Differenz noch auffallender
sein. Friedberger fand speziell zwischen der Lunge der
durch prirnar giftiges Antiserum getbtete Tiere und der von
Tieren, die an aktiver Anaphylaxie eingegangen waren, keine
Unterschiede. GrStz fand das anatomische Bild der Rinder-
serumvergiftung etwas anders als das der echten Anaphylaxie,
aber er behauptet, er habe bei der Untersuchung den Eindruck
gewonnen, daB das Vorherrschen des einen oder des anderen
der die Lungenbl&hungen begleitenden Symptome, wie z. B.
Anamie, Hyperamie, Blutungen oder Oedem, seinen Grund in
dem individuellen Verhalten einzelner Versuchstiere hat, daB
es sich also nicht um prinzipielle, sondern lediglich um
graduelle Differenzen in einem an sich einheitlichen Sym-
ptomenkomplex handelt. Mir standen nur 2 F&lle von Rinder-
serumvergiftung zur Verfugung, bei welchen die Tiere mit
3 Tage im Frigo aufbewahrtem Serum getotet waren. Die
Lungen waren nicht sehr h&morrhagisch, das Oedem gering.
(Siehe Tabelle p. 627.)

Die anderen 2 F&lle waren mit frischem Kaninchenserum
vergiftet. Die Lungen waren ganz blaB, zeigten nur ganz
geringfiigige Blutung und geringes Oedem, welch letzteres
nur mikroskopisch zu finden war.

Ein weiterer Fall war mit Hammel-Kaninchenantiserum
intravenos vergiftet. Hier war die Lunge ziemlich hyper&misch,
aber nicht mit viel Hamorrhagien versehen. Das begleitende

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiflung etc. 629

Oedem war nur ganz geringfflgig und perivaskulflr be-
schr&nkt.

Vergiftung duroh organische und anorgansiohe chemiach
deflnierte Substanzen.

Wie die Tabelle (p. 630/31) zeigt, haben wir ftinf FSlle von
Vergiftung mit P-Imidazolylathylamin (Histamin), ein Fall
von Metbylimidazolvergiftung, je einen Fall von Vergiftung
mit Antipyrin, Chininhydrochlorid und Kaolin untersucht. Wie
Barger und Dale 1 2 ) festgestellt haben, ist das Vergiftungs-
bild durch (3-Imidazolylathylamin ganz ahnlich dem der Ana-
phylaxie. Auf gewisse Abweichungen haben Friedberger,
Friedberger und Moreschi, Lur£ sowie Schitten-
helm und Weichardt aufmerksam gemacht. Was das ana-
tomische Bild betrifft, so waren die Lungen meistens blaB,
ein Fall zeigte rote Lunge, Oedem war in zwei Fallen SuBerst
geringfflgig nachzuweisen. Das anatomische Bild entspricht
ganz und gar dem der akuten Anaphylaxie. Die Ver¬
giftung durch Methylimidoazol liefert einen anderen Lungen-
befund als der bei der Anaphylaxie. Hier waren keine
Alveolen aufgeblaht, GefaBe waren blutarm, Oedem fehlte
ganzlich.

Was die Lungen der Meerschweinchen, die durch die
intravenflse Injektion von Antipyrin und Chininhydrochlorid
vergiftet waren, anlangt, so glichen sie denen bei der Jod-
vergiftung (s. unten). Sie waren kolossal ausgedehnt, rot,
hflmorrhagisch. Mikroskopisch waren keine lufthaltigen Hohl-
r&urae in den Lungen zu sehen. Die Alveolen waren alle
mit Oedemflflssigkeit und Blut geftillt. Hier scheint die
Exsudation und Blutung die Ursache der Ausdehnung der
Lungen zu sein.

Die Lungen der durch Kaolin vergifteten Tiere waren, wie
schon Friedberger 8 ) gezeigt hat, ganz geschrumpft, klein.
Trotzdem waren sie ziemlich h&morrhagisch und ddematds.
Auch in diesen Fallen waren die Bronchien verengt, ihre
Mucosa gefaltet

1) The Journ. of Physiology, Vol. 40, p. 38.

2) Diese Zeitsehr., Bd. 9, 1911, Heft 3.

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Vergiftung dureh organische und anorganische Substanzen bekannter chemischer Konstitution.

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T. Kumagai,

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Die LuDgenbliihung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc.

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632

T. Kumagai,

Vergiftung durch Bakterienprodukte.

Wir haben Versuche angestellt mit Alttuberkulin (von den
Hochster Farbwerken) und Tetanustoxin. Die Lungen dieser
Gruppe, welche typisch stark aufgeblaht waren, zeigten etwas
haufiger Oedem als bei der Serumanaphylaxie. Auch waren
Blutung und Hamorrhagien starker ausgepriigt. Sie ent-
sprechen ungefahr dem Bild bei der Vergiftung durch Witte-
Pepton. Man niuB wohl daran denken, daB hier zu der
Wirkung des Toxins noch die der anhaftenden NShrboden-
bestandteile hinzukoinmt (Pepton etc.). (Siehe Tabelle p. 633.)

Vergiftung durch Jod und JodeiweiB.

Die Lungen riihren von der Arbeit von Friedberger
und I to 1 ) her, die den EinfluB der Reinjektion von Jod bei
praparierten Tieren im AnschluB an die Untersuchungen von
Bruck fiber die Jodidiosynkrasie untersuchten*). Die Meer-
schweinchen waren teils mit Lugollosung, teils mit JodeiweiB
vorbehandelt. Nach einer gewissen Zeit wurden sie reinjiziert
mit jodiertem EiweiB resp. Lugollosung. Hier waren die ana-
tomischen Bilder ganz anders als bei der akuten Anaphylaxie.
Die Lungen waren voll von Oedem und Blutung. Man hat hier
den Eindruck, als ob die Lungen wirklich etwas durch Oedem
und die Blutungen ausgedehnt werden. Diese Wirkung dfirfte
auf das Jod als solches zuruckzufflhren sein; das kolossale

1) Deutsche med. Woehcnscbr., 1911, p. 483 (FuBnote 2); Mikro-
biologentag Dresden 1911, Sitzung vom 9. Juni; CentralbL f. Bakt., Abt.
Kef., Bd. 50, Bciheft; diese Zeitschr., Bd. 12, p. 241.

2) Spiiter haben 8 chit ten helm und 81 rob el gleich falls interes-
sante Versuche mit JodeiweiB mitgeteilt. Die Autoren fi'ihren dariiber
Klage, daB ihre vermeintliche Prioritiit von Friedberger und Ito nicht
beriicksichtigt werde (Zeitschr. f. exp. Path., Bd. 11). Die ereten Angaben
fiber die Untersuchungen von Schittenhelm und Strobel sind in der
Erlanger Med. Gesellschaft (Sitzung vom 8. Juli), Miinch. med. Wochenschr..
1911. No. 35 vom 29. August, veroffentlicht, also ‘/ t Jahr nach der ereten
Mittcilung von Friedberger und Ito. In der bereits friiher in der
Frage der Anaphylatoxindarstellung aus Bakterien und der Frage des
anapbylaktischen Ficbers geriigten Weise (Miinch. med. Wochenschr., 1911,
p. 1190) wild eine Prioritiit lediglich dadurch konstruiert und dabei der
Vorwurf un genii gen der Zitierung gegeniiber anderen nur dadurch scheinbar
begriindet, daB die Autoren sich nicht gegen die erete Publikation, sondem
gegen eine spiitere idler den gleichen Gegenstand wenden.

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UNIVERSITY OF CALIFORNIA

Vergiftung durch vcrechiedene Bakterienprodukte.

Die Lungenbliihung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 633

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eng, Mucosa gefaltet.

Vergiftung (lurch Jod und JodeiweiS.

634

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Die Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc. 635

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636 T. Kumagai,

Oedem verdeckt die eventuell vorhandene Lungenbiahung.
(Siehe Tabelle p. 634).

Zum SchluB sei der Befund an den Lungen eines Meer-
schweinchens angefdhrt, welches zur Kontrolle durch Unter-
bindung der Trachea erstickt worden ist (Tabelle p. 635). Die
Lungen waren geschrumpft, hier and da zeigten sie Petechien,
welche mikroskopisch deutlicher sichtbar waren. Nur wenige
Alveolen waren lnfthaltig. Auffallend war die starke Faltung der
Bronchialschleimhaut. Diese scheinbare Verengung
und Faltung der Bronchialschleimhaut war nicht
nur bei diesem Fall, sondern auch bei Vergiftung
durch Kaolin und Methylimidoazol vorhanden,
also boi F&llen, in denen die Lungenbl&hung
g&nzlichfehlte. So kbnnen wir diesem anatomischen Be¬
fund keine groBe Bedeutung beilegen.

Endlich seien hier noch die Versuche erwfihnt, in denen
wir Kaninchen mit Pepton vergifteten (Tabelle p. 635).
Die letale Dosis liegt hier viel hSher als beim Meerschweinchen.
Fflr ein Meerschweinchen betrfigt sie 0,075—0,1 Proz. des
Korpergewichts. Fflr das Kaninchen betrug sie 0,3-0,4 Proz.
Die Lunge des durch Pepton vergifteten Kaninchens zeigte
keine Spur von LungenblShung. Sie wies spBrliche Petechien
auf. Oedem fehlte vollst&ndig.

Uebereichts tabelle der Haufigkeit der Hamorrhagien und Oedeme in den
Lungen bei einigen der untersuchten Substanzen.

Art der Vergiftung

Zahl

der

F&Ue

Falle mit
mafiigen reap.

starken

Hamorrhag.

Falle mit
Oedem

^ Grad der
| Oedeme

i

Aktive Anaphylaxie,
Reinjektion in 1 ccm

33

7 = 21,2 Proz.

6 = 18,1 Proz.

alle 6 leicht

Anaphylatoxin

5

3 = 60 Proz.

3 = 60 Proz.

1 leicht,

2 stark

Aktive Anaphylaxie,
Reinj. in 4 ccm NaCl

11

5 = 45,3 Proz.

9 = 81 Proz.

7 leicht,

2 stark

Aktive Anaphylaxie,
Reinj. in 4 ccm M.-S.

7

5 = 71,4 Proz.

7 = 100 Proz.

3 leicht,

4 stark

Witte-Pepton

17

5 = 45,3 Proz.

6 = 54,5 Proz.

4 leicht,

2 maftig

P-Amidoazolyliithylamin

5

0 = 0 Proz.

2 = 40 Proz.

2 leicht

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Die Lungenblahung bei der AnaphylatoxLn vergiftung etc. 637

Zusammenfassung.

Es wurden nach Untersuchungen an einem groBen Material
die Angaben von Friedberger best&tigt, wonach im ana-
tomischen Bild der Lunge bei aktiver Anapbylaxie Anaphyla-
toxinvergiftung und prim&rer Antiserumwirkung keinerlei
Unterschiede bestehen.

Soweit sie behauptet wurden (Biedl und Kraus,
Karsner), liegt das abweichende Resultat daran, daB nicht
die gleichen Versuchsbedingungen eingehalten wurden.

Die Vergiftung durch Witte-Pepton bedingt fthnliche
Lungenveranderung wie die Anaphylaxie (Biedl und Kraus),
Blutungen sind entgegen den Angaben von Karsner regel-
ro&fiig nachzuweisen.

Prim&r giftiges Antiserum erzeugt den gleichen Lungen-
befund wie die Anaphylaxie (Friedberger).

Das gilt auch fiir die tddlichen Dosen von Normalserum
und Histamin (Barger und Dale).

Bei Jod, Antipyrin und Chininvergiftung ist das volumen
pulmonum auctum im wesentlichen durch Oedem und Blu¬
tungen bedingt.

Beim Kaolintod ist die Lunge nach Erdffnung des Thorax
kollabiert wie nach der Erstickung (Friedberger).

Die Verengerung und Faltung der Bronchialschleimhaut
ist nicht ftir die verschiedenen Formen der Anaphylaxie cha-
rakteristisch; sie findet sich auch bei der Erstickung, sowie
bei der Vergiftung mit Kaolin und Methylimidazol.

Bei dem mit Pepton vergifteten Kaninchen zeigt die
Lunge weder Blahung noch Oedem.

TafelerkUtrung.

Fig. 1. K 109. Akute Anaphylaxie, Reinjektion in 1 ccm. Starkes
Emphysem, Alveolarwande teils zerrissen. Man sieht zwei Bronchioli, deren
Mucosa stark gefaltet ist. Kein Oedem.

Fig. 2. Sekt. No. 26. Tier No. 145. Akute Anaphylaxie mit Oedem,
Reinjektion 1 ccm. Alveolen stark erweitert, mafiiges Oedem, besonders
perivaskular, etwas Blutung.

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638 K u m a g a i, Lungenblahung bei der Anaphylatoxinvergiftung etc.

Fig. 3. K 126. Akute Anaphylaxie, Eeinjektion in 4 ccm. Alveolen
maflig erweitert, tails aber mit Oedemfliissigkeit gefiillt, besonders peri-
vaskular starkes Oedem. Verengter Bronchiolus mit gefalteter Mucosa.

Fig. 4. K 124. Akute Anaphylaxie, Eeinjektion in 4 ccm Serum.
Starkes Oedem, mit dem die Alveolen teils gefiillt sind. Maflige Blutung.
Ein Bronchiolus mit gefalteter Schleimhaut.

Fig. 5. K 82. Anaphylatoxin. Alveolen mittelmaflig erweitert, meist
mit Blut und Oedemfliissigkeit gefiillt. Am Rand ein mittelgrofles Gefafl
mit starkera perivaskularem Oedem.

Fig. 6. K 65. Anaphylatoxin. Alveolen stark erweitert, kleine
Blutungen, hier und da Bronchien verengt und ihre Mucosa stark
gefaltet.

Fig. 7. Z 18. Erstickungstod. Eeine Spur von Emphysem, Alveolen
im Gegenteil fast alle kollabiert. Gefafle gefiillt. Man sieht einen stark
verengten Bronchiolus mit stark gefalteter Mucosa.

Fig. 8. L 136. Vergiftung durch Histamin. Alveolen kolossal auf-
gebliiht, Alveolarwiinde teils zerrissen. Gefafle gefiillt. Kein Oedem.

Fig. 9. J 38. Pepton Witte. Alveolen mittelmaflig erweitert, starke
Blutung und mittelstarkes Oedem, besonders perivaskular, vorhanden.
Bronchien mit gefalteter Mucosa.

Fig. 10. J 180. Pepton Witte. Alveolen stark erweitert. Ein mittel-
grofler Blutungsherd. Kein Oedem.

Fig. 11. J 126. Antipyrin. Starkes Oedem und Blutungen.

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Zeitschrift fur Immunitatsforschung /. Teil: Orig. Bd. XVII.

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T. Kuviagai, Ueber Anaphylaxte.

Fischer in Jena.

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Bindseil, Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc. 639

Nachdruck verbotciu

[Aus dem Institut ftir Hygiene und Bakteriologie an der Uni¬
versity Strafiburg (Direktor: Geh.-Rat Prof. Dr. Uhlenhath).]

Ueber die sogenannte Operatlonsimmnnitftt
(bei einem M&usecarcinom).

Von Oberarzt BindseiL
Mit 21 Tabellen auf Tafeln.

(Eingegangen bei der Redaktion am 5. Januar 1913.)

Im Jahre 1910 gaben Uhlenhuth, Handel und Steffen ha gen (1)
die bei ihren Versuchen mit Rattensarkom (Bashford) gefundene, in-
teressante Tatsache an, dafi Ratten, denen gut ausgewachsene, ca. 3 Wochen
alte Turaoren durch rezidivfreie Operation entfernt worden waren, sich
Nachimpfungen gegeniiber imraun erwiesen, und zwar sowohl wenn die
Nachimpfung sofort oder erst nach einiger Zeit erfolgte. Kam es dagegen
an der Operationsstelle zu einem Rezidiv, so ging auch bei der Nach¬
impfung der Tumor an. Die Annahme, dafi das Nichtangehen der sekun-
daren lmpfung auf natiirlicher Resistenz beruhe, dafi also alle Ratten, bei
denen die Nachimpfung nicht anging, von Natur aus immun waren,
wiesen die Autoren dadurch zuriick, dafi man es ganz in der Hand habe,
ein Angehen der sekundaren lmpfung durch absichtliches Erzeugen eines
Rezidives an der ersten Impfstelle zu erzielen. Das Zuriicklassen einer
geringen Menge Tumorgewebes bei der Operation geniige, um ein Rezidiv
und damit ein Angehen der zweiten lmpfung zu bewirken. Aehnliche
Versuche, die freilich zum Teil zu anderen Results ten fuhrten, sind bereits
vorher angestellt worden.

So kam Sticker (3), der mit einem anderen Material, mit einem
Lymphosarkom, beim Hunde experimentierte und dessen Befunde daher
nicht ohne weiteres zu vergleichen sind, zu dem Ergebnis, dafi nach opera¬
te ver Entfernung des primaren Tumors die zweite, am selben Tage oder
spfiter vorgenommene lmpfung anging, gleichgiiltig, ob rezidivfrei oder
nicht rezidivfrei operiert worden war.

Schone (5) fand bei seinen an einer grofieren Zahl von Mausen an-
gestellten Versuchen, dafi eine nach Abschlufi der Wundheilung 8 Tage
bis 3 Wochen nach der Operation vorgenommene zweite lmpfung ebenso
gut anginge wie bei normalen Miiusen, dafi also 8 Tage bis 3 Wochen nach
der Operation keine nachweisbare Imnmnitat bestehe. Dagegen fand
Gay (7), dafi nach der Exstirpation 16—30 Tage (prametastatische Periode
nach Gay) alter Flexnerscher Rattentumoren die zweite lmpfung meist
nicht anging. Nach der operativen Entfernung 30 Tage alter Turaoren, wo
Metastasen gefunden wurden, ging die zweite lmpfung bei einigen Tieren an.

Zeltschr. f. lmmanitutsforschang. Orif. Bd. XVII. 43

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640

Bindseil,

Die Uhlenhuthsche Veroffentlichung veranlafite nun eine Reihe
von Nachpriifungen.

So k&m Apolant (8) auf Grund seiner zahlreichen, an Ratten und
Miiusen angestellten Versuche zu detn Ergebnis, dafl das Uhlenhuthsche
Gesetz scheinbar in einera hohen Prozentsatz der Faile stimint, daB aber
keine gesetzmiifiige Beziehung zwischen dem Resultat der Operation und
dem Angehen nachgeimpfter Tumorzellen besteht Auf seine Einwande
und seine Erklarung der gefundenen Resultate wird weiter unten ein-
gegangen werden, es sei hier nur auf die Erklarung Uhlenhuths (9)
hingewiesen, daS in den Resultaten der Apolantschen Versuche eher
eine Bestiitigung als eine Widerlegung der Operationsimmunitat zu finden
seL Nach Abzug der zu friih operierten Ratten und eines Tieres, bei dem
Lungenmetastasen gefunden wurden, sind von 31 operierten Ratten 22
rezidivfrei operiert worden. Von diesen erwiesen sich 19 = 86,2 Proz. bei
der Nachimpfung refraktiir. Bei alien 9 Ratten, bei denen es zu einem
Rezidiv kam, ging auch die Nachimpfung an = 100 Proz. Von 32 ope¬
rierten Miiusen blieben 17 rezidivfrei. Von diesen erwiesen sich 13 = 76,5 Proz.
bei der Nachimpfung refraktiir. Die iibrigen 15 Miiuse bekamen ein Rezidiv,
und bei siimtlichen 15 Tieren, also in 100 Proz., kam es zu einem Wachs-
tum der sekundiiren Impfung.

Meidner(lO) priifte die Angaben Uhlenhuths mit einem Sarkom-
stamm an Berliner Ratten und kam zu einer vollkommenen Bestatigung.
Von 32 rezidivfrei operierten Ratten erwiesen sich 26 von Anfang an als
vollkommen refraktiir = 81,2 Proz. Von den iibrigen 6 Ratten zeigten
2 Tiere ein gutes Waehstum des Nachimpftumors = 6,3 Proz., wahrend
bei 4 Tieren die entstandenen etwa bohnengroflen Tumoren in langstens
4 Wochen restlos resorbiert wurden, so dafi auch diese Tiere zu denen ge-
rechnet werden konnen, die durch die radikale Operation eine lmmunitat
gegen Nachimpfung bekommen haben, wodurch sich der Prozentsatz der
rezidivfrei operierten Ratten, bei denen es zu keinem anhaltenden Wachs-
tum des Nachimpftumors kam, auf 93,7 Proz. erhoht. Bei 8 Ratten, bei
denen es nach der Operation zu einem Rezidiv kam, kam es in 7 Fallen
= 87,5 Proz. zu einem Angehen der zweiten Impfung.

Infolge der Apolantschen Angaben wurden von Uhlenhuth und
Dold (11) und von Handel und Schonburg(12) erneute Nachpriifungen
mit Bashf ordschem Sarkom an Ratten vorgenommen, welche die friiheren
Befunde bestiitigten.

So waren bei den Strafiburger Versuchen von 15 rezidivfrei ope¬
rierten Ratten 12 = 80 Proz. bei der Nachimpfung refraktiir, wahrend bei
den Tieren, bei denen es zu einera Operations rezidiv kam, die Nachimpfung
stets erfolgreich war. Handel und Schonburg operierten 31 Sarkom-
ratten. 21 rezidivfrei operierte Ratten erwiesen sich samtlich bei der Nach¬
impfung refraktiir = 100 Proz., wahrend bei 10 Tieren, bei denen es zu
einem Operation srezidiv kam, die Nachimpfung stets anging = 100 Proz.

Morpurgo und Donati (13) haben diese Befunde insofem be-
stiitigt, als sie die besondere Haufigkeit des Angehens der zweiten Impfung

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Ueber die sogen&nnte Operationsimmunitat etc.

641

bei Ausbildung eines Operationsrezidivs hervorheben und die Schlufifolgerung
ziehen, dafi das Eintreten der Rezidive die Entwicklung dee zweiten Tumors
begiinstigt. Von 16 Ratten, bei denen es nach der Operation zu einem
Rezidiv kara, bekamen 15 = 93,8 Proz. einen Nachimpftumor; nur einmal
= 6,2 Proz. ging trotz vorhandenen Rezidive die Nachimpfung nicht an.
Von den 19 rezidivfrei operierten Tieren erwiesen sich 4 = 21 Proz. refraktar.
Da, wie bereits Uhlenhuth hervorgehoben, eine Angabe des Alters der
operierten Tumoren fehlt, lassen sich aus diesem Befund keine ver-
gleichenden Schliisse ziehen.

Im Bashfordschen Institut wurde von Russell (14) in einer aus-
gedehnten Reihe von Versuchen an Mausen und Ratten das Verhalten der
Nachimpfung an Tieren untersucht, denen durch Operation der primare
Tumor entfernt worden war. Russell behauptet, dafi vollstandige Oder
unvollstandige Operation nicht der ausschlaggebende Faktor (the factor
determining) dafiir ist, ob die Nachimpfung erfolgreich ist oder nicht.
Seine Befunde, die er mit verschiedenen Maustumorstiimmen erhalten hat,
sind insofern interessant, als er auf das verschiedene Verhalten der einzelnen
Tumorstamme beziiglich ihrer Fahigkeit, das Tier resistent gegen nach-
folgende Impfung zu machen, aufmerksam macht. So hat er einen Stamm
besehrieben, bei dem trotz radikaler operativer Entfernung 19 Tage alter
Tumoren die folgende Nachimpfung in alien Fallen anging, einen anderen,
wo von 12 rezidivfrei operierten Tieren nur 4 Mause sich bei der Nach¬
impfung refraktar zeigten, und bei den iibrigen 8 die Nachimpfung zu
gut wachsenden Tumoren fiihrte, wahrend andererseits sein Versueh mit
Jensens Rattensarkom ergab, dafi von 7 rezidivfrei operierten Ratten
sich 6 Tiere = 85,7 Proz. gegen die Nachimpfung refraktar erwiesen. In
alien Fallen, wo es bei seinen Versuchen zu einem Rezidiv nach der
Operation kam, ging die Nachimpfung an. In einer Reihe von 7 Ratten
wurde die Operation mit Absicht unvollstandig gemacht, doch kam es nur
bei 2 Tieren zur Ausbildung eines Rezidivs. Die Nachimpfung ging bei
diesen Tieren an. Bei 5 Ratten kam es trotz des mit Absicht zuriick-
gelassenen Tumorrestes zu keinem Rezidiv, die Nachimpfung ging nicht an.
Aus welchen Ursachen der zuriickgelassene Tumorrest, dessen Vaskulari-
sation, wie der Autor hervorhebt, nicht geschadigt war, zu keinem Rezidiv
auswuchs, liifit sich nicht feststellen, jedenfalls sind diese Tiere nicht zum
einwandfreien Beweis fiir die Behauptung zu verwerten, dafi unvollstandige
Operation kein ausschlaggebender Faktor dafiir ist, ob die Nachimpfung
angeht oder nicht. Uhlenhuth hebt doch hervor, dafi die Nachimpfung
dann erfolgreich sei, wenn es an der Operationsstelle zu einem Rezidiv,
sei es spoil tan oder kiinstlich erzeugt, komme. Wiichst der absichtlich
zuriickgelassene Tumorrest zu keinem Rezidiv aus, sondern wird aus irgend-
einer Ursache resorbiert, so ist der Einwand berechtigt, dafi das Nicht-
angehen der zweiten Impfung auf die Ausbildung einer aktiven Immunitiit,
entstanden durch Resorption des zuriickgelassenen Tumorrestes, zuriick-
zufiihren ist. Die anderen Versuche, welche Russell gemacht hat, indem
er die Nachimpfung mit einem anderen Tumors tarn m als dem des primaren
Tumors ausfiihrte, lassen sich unseres Erachtens nicht ohne weiteres

43*

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642

Bindseil,

mit den vorliegenden Vereuchen vergleichen, bei denen zur Impfung des
primaren Tumors und zur Nachimpfung deraelbe Tumorstamm verwendet
worden ist.

Id den folgenden Versuchen habe ich, der Anregung des
Herrn Geheimrat Uhlenhuth folgend, die Frage nach dem
Vorhandensein ond der eventuellen Dauer der sogenannten
Operationsimmunitat bei einem Mfiusecarcinom einer experi-
mentellen Prfifung unterzogen. Es mag hervorgehoben werden,
dafi die in dieser Arbeit mitgeteilten Ergebnisse sich nur auf
das von uns untersuchte Ehrlichsche M&usecarcinom mit
grOBtenteils alveolfirem Bau beziehen.

Die Impfausbeute, welche dieses Carcinom bei seiner
Ueberimpfung auf hiesige StraBburger Mfiuse ergab, betrug
in den ersten Serien nur etwa 15—20 Proz., stieg dann aber
allmfihlich an und hielt sich schlieBlich in einer nahezu kon-
stanten Hfihe von 75—90 Proz., ja in manchen Serien sogar
von 100 Proz.

Nur einmal wurde ein Abfallen der Impfausbeute aus
unaufgeklarter Ursache beobachtet, doch gelang es, bei fort-
gesetzter weiterer Impfung die frilhere, ann&hernd konstante
H6he der Impfausbeute wieder zu erreichen. Eine Spontan-
resorption grfiBerer Tumoren wurde bei diesem Carcinom-
stamm niemals beobachtet. Unter 350 geimpften Tieren trat
in 6 Proz. ein Zuriickgehen und vfilliges Verschwinden kleiner
Tumoren, deren grOBter kaum erbsengroB war, in etwa 14 bis
20 Tagen ein; grfiBere Tumoren zeigten niemals irgendeine
Neigung, sich spontan zurflckzubilden Oder im Wachstum still-
zustehen. Das zu den Versuchen benutzte Tiermaterial ent-
stammte eigener Zucht, so daB nach Moglichkeit der von
vielen Autoren — Albrecht und Hecht(15), Apolant (16),
Bashford (17), Ehrlich (18), Gierke (19), Haaland(20),
Lurje (21), Uhlenhuth und Weidanz (22) — hervor-
gehobene EinfluB der Resistenz der fremden Rasse ausge-
schaltet werden konnte. Es wurde Wert darauf gelegt, m6g-
lichst Tiere gleichen Alters zu verwenden, auch wurde die
Fiitterung gleichmaBig durchgefflhrt. Von groBer Wichtigkeit
sind bei der Beurteilung der Versuche fiber Tumorimmunitfit
zahlreiche und gleichaltrige Kon troll tiere. Es wurden ffir jede
Nachimpfung 10—20 Kontrollmause angesetzt und der Versuch

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Ueber die sogenannte Operationsimmunitiit etc.

643

als nicht einwandfrei angesehen, wenn die Impfausbeute bei
den Kontrolltieren unter 60 Proz. betrug.

Die erste Impfung geschah unter aseptischen Kautelen in
die linke Axilla unter ausschlieBlicher Anwendung derBash-
fordschen Stflckchenmethode. Die Stflckchen wurden m6g-
lichst gleichgroB den Randpartien der zur Verimpfung ge-
langenden Tumoren entnomraen. Die Breimethode wurde
nicht angewandt, um dem Einwand B o r r e 1 s (23) und Clowes
(24) zu begegnen, die das Nichtangehen der zweiten Impfung
mit einer aktiven Immunisierung erkl&ren, die nur bei der
Breimethode wegen der Resorption gentigend groBer immuni-
sierender Mengen, nicht bei der Stflckchenmethode deutlich
sei. Das Impfmaterial zu der zweiten Impfung stammte jedes-
mal von einem gut gewachsenen, ca. 2—3 Wochen alten Tumor
einer ca. 6—8 Wochen alten Maus, die aus besonders zu diesem
Zweck angesetzten Serien ausgewflhlt wurde, Mit diesem
Material wurden dann gleichzeitig ca. 10—20 Kontrolltiere
desselben Alters geimpft.

Die zweite Impfung geschah in derselben Weise in die
rechte Axilla. Kartographisch sind die Resultate in V 2 natttr-
licher GrflBe auf den beigefflgten Tabellen in durchschnittlich
achttagigem Zeitintervall eingetragen, und zwar in der linken
Spalte die primflren Tumoren bzw. die Operationsrezidive
oder die negativen Zeichen mit schwarzer Farbe, in der
rechten Spalte die sekundflren Tumoren in schraffierter Aus-
fflhrung*).

Das Alter der Versuchstiere betrug bei der primflren
Impfung:

ca. 4—6 Wochen bei 80 Tieren
„ 6-8 „ „ 27 „

„ 8—10 „ „ 6 „

Bei den hiesigen Mflusen dieses Alters wuchs der tiber-
impfte Tumor im allgemeinen mit der Schnelligkeit, daB die
Impftumoren nach 14 Tagen etwa Bohnengrofie, nach 3 bis
4 Wochen etwa HaselnuBgroBe erreichten. Die Operation
wurde nicht zu frflh vorgenommen, meist erst nach ca.
21-tagigem Wachstum der Tumoren.^ W T ie Uhlenhuth

1) Aus aufleren Griinden muBte die Wiedergabe eiuzelner Tabellen
unterbleiben.

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644

Bindaeil,

hervorhebt, darf nicht zu frtih operiert werden, da die Gefahr
besteht, daB bei einer zu frtkhzeitigen Operation die „Abwehr-
8toffe“ nocb nicht stark genug ausgebildet sind. Bei dem
manchmal exzessiven Wachstum dieses M&usecarcinoms und
bei der relativen Kleinheit der Versuchstiere muBte in mehreren
Fallen bereits eher zur Operation geschritten werden, da bei
zu stark entwickeltem Tumor die Operation schlecht tiber-
standen wurde, insbesondere bei den dann schon stark ent-
wickelten GefaBen der Tod leicht an Verblutung erfolgte. So
ist in 12 Fallen die Operation bereits nach einem Tumoralter
von 14 Tagen vorgenommen worden. In einzelnen Fallen
zeigte der Tumor ein langsames Wachstum, so daB erst bei
einem hdheren Tumoralter operiert wurde. Stellt man fttr
unsere Versuche das Tumoralter zusammen, so ergibt sich,
daB dasselbe betrug:

14 Tage bei 12 Tieren 39 Tage bei 1 Tier

16—21 Tage bei 73 Tieren 45 „ „ 2 Tieren

22—33 „ „ 21 „ 53 „ „ 1 Tier

33 Tage bei 2 Tieren 82 „ „ 1 „

Die Operation wurde in folgender Weise vorgenommen:
Das Operationsgebiet wurde von den Haaren sorgfaitig befreit
und mit Alkohol abs. abgewischt. Dann wurde die Haut
rings urn den Tumor durchtrennt und dieses Hautstfick mit
dem daran anhaftenden Tumor abprapariert. Zur Blutstillung
muBten in einigen Fallen die stark entwickelten Gef&Be vorher
unterbunden werden. Der VerschluB der Wunde erfolgte mit
Seidenknopffaden; die Wundheilung erfolgte glatt unter Bildung
einer linearen Narbe. Die Operation wurde verhaitnismafiig
gut vertragen, wenn man den bei der Kleinheit des Versuchs-
tieres und der relativen TumorgrbBe immerhin nicht ganz
kleinen operativen Ein griff bedenkt.

Es wurden im ganzen 161 Tiere auf diese Weise operiert
Davon starben gleich nach der Operation Oder kurze Zeit
nachlier 31 = 19,7 Proz. In dem Zeitraum zwischen Operation
und zweiter Impfung, der bis zu 127 Tagen betrug, gingen
17 Tiere meist an einem sich entwickelnden Rezidiv ein.

Es blieben also zur Beobachtung noch 113 Tiere, von
denen das Ergebnis in den beigefugten Tabellen aufgefdhrt ist.

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Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc.

645

Im ersten Teil der vorliegenden Arbeit, der die ersten
59 Tiere der Tabellen umfafit, sollte die Frage nach dem
Vorhandensein der Operationsimmunitat im Sinne Uhlen-
huths bei diesem Mausecarcinom einer Prflfung unterzogen
werden. Die Zwischenzeit zwischen Operation und zweiter
Impfung betrug bei diesen 59 Tieren:

2—4 Tage bei 27 Tieren
6-8 „ „ 21 „

14-16 „ „ 11 „

Bei den ersten 47 Tieren wurde durdh Radikaloperation
alles Tumorgewebe entfernt. Von diesen blieben 29 Tiere =
61,7 Proz. rezidivfrei, w&hrend bei 18 Tieren = 38,3 Proz.
ein Rezidiv eintrat. Trotz der „radikalen u Operation kam es
also in einem ziemlich hohen Prozentsatz doch zu einer
Rezidivbildung. Es entspricht dieser Befund denen anderer
Autoren wie C1 u n e t (25), der bei 22 radikal operierten Tieren
16mal ein Rezidiv eintreten sah, und Apolant (26), der
ebenfalls das haufige Rezidivieren post radikaler Operation
betont. Ebenso heben Uhlenhuth, Handel und Steffen-
hagen bei ihren Versuchen mit Rattensarkom das nicht
seltene Auftreten von Rezidiven an der Operationsstelle trotz
radikaler Operation hervor. Bei den 29 rezidivfrei operierten
Tieren ging die Nachimpfung in 25 Fallen = 86,2 Proz. nicht
an (= positive operationsimmune Tiere im Sinne Uhlen-
huths). Bei 4 Tieren (No. 1, 2, 16, 17 der Tabellen) ging
die Nachimpfung an = 13,8 Proz. Bei 2 Tieren, No. 10 und
12 der Tabellen trat eine von Apolant anscheinend haufiger
beobachtete Spontanresorption angegangener Nachimpftumoren
ein-, bei Tier No. 10, wo gleichzeitig mit dem Impf-
knOtchen sich auch an der Operationsstelle ein kleines Kn8t-
chen zurtickbildete, und bei Tier No. 12, wo ein eben noch
palpables Impfkndtchen sich 14 Tage nach der Impfung zeigte
und kurz darauf verschwand. Beim Tier No. 16 zeigte sich
neben dem gut wachsenden Impftumor ein kleines Rezidiv an
der Operationsstelle, das die Gr6Be einer kleinen Erbse er-
reichte und im Verlauf von 5 Wochen restlos resorbiert wurde.

Bei den 18 Tieren, welche nach der Operation ein spon-
tanes Rezidiv bekamen [siehe Tabellen No. 13, 22, 23, 24,

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646

Bin deeil,

26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 34, 36, 37, 38, 40 1 ), 44 l ), 47 % ging
die Nachimpfung in 17 Fallen = 94,4 Proz. an. Bei einem Tier
No. 36 ging die zweite Impfung neben dem gut wachsenden
Rezidivtumor zuerst bis zur GrSBe einer kleinen Erbse an,
doch wurde der kleine Impftumor im Verlauf von 3 Wochen
restlos resorbiert, wahrend der Rezidivtumor im Verlauf von
2V* Monaten die GroBe einer kleinen WalnuB erreichte.
Von wie groBer Wichtigkeit eine moglichst langdauernde Be-
obachtung der Versuchstiere ist, sofern nicht die relativ geringe
Lebensdauer der Mause der Beobachtung ein frtihzeitiges Ziel
setzt, zeigt die Tabelle VI Tier No. 26. Hier trat sowohl
an der Operations- als auch an der Nachimpfungsstelle erst
nach ca. 10 Wochen beiderseits ein Knotchen auf, das sich
wahrend einer Dauer von ca. 8 Wochen an der Operations-
stelle zu HaselnuBgrQBe, an der Nachimpfungsstelle zu Bohnen-
groBe entwickelte. Die von Uhlenhuth und seinen Mit-
arbeitern hervorgehobene besondere Wachstumsenergie der
Rezidive ihres Rattensarkoms wurde auch bei diesem Mause-
carcinom beobachtet, wie Tabelle III, 13, Tabelle V, 22, Tabelle
VI, 28 und 29 zeigt.

Bei 12 Tieren, No. 48—59, wurde bei der operativen
Entfernung des Tumors absichtlich ein kleiner Rest zurflck-
gelassen, der bei samtlichen Tieren zu einem gut wachsenden
Rezidiv fiihrte. Die 3 bzw. 6 Tage nach der Operation vor-
genomraene zweite Impfung fiihrte in alien Fallen = 100 Proz.
zu einem Angehen der Impftumoren, die hinter dem Operations-
rezidiv an GroBe nicht zuriickblieben.

Als Kontrollen sind nach Abzug der zu fruhzeitig gestorbenen
im ganzen 142 Tiere fQr diesen ersten Teil beobachtet worden.
Bei 124 Tieren ging die Impfung an = 87,3 Proz., wahrend
18 Tiere = 12,7 Proz. sich refraktar verhielten. Das Alter der
Kontrolltiere betrug entsprechend dem Alter der Versuchstiere
durchschnittlich 7—8 Wochen, nur bei einem Versuch in Ta¬
belle IV war das Alter der Kontrolltiere infolge des langsamen
Wachstums der Impftumoren bei den Versuchstieren ca. 18 bis
20 Wochen und die Ausbeute betrug bei diesen Kontrolltieren
= 72,7 Proz. Die Impfausbeute der fiir die einzelnen Ver-

1) Nicht abgcbildet.

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Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc.

647

suche jeweils angesetzten Kontrollen ist auf den Tabellen in
Prozenten angegeben.

FaBt man das Ergebnis der vorliegenden Versuche zu-
sammen, so verlief die Radikaloperation bei 47 Tieren:

Rezidivfrei:

Mit Rezidiv:

29 Tiere

18 Tiere

Die Nachimpfung

Die Nachimpfung

ging nicht an:
bei 25 Tieren

= 86,2 »/o 1

ging an :
bei 4 Tieren

1 = 13,8 7o

ging nicht an: |
bei 1 Tier i

= 5,6% 1

ging an:
bei 17 Tieren
i =94,4%

Die unvollstfindige Operation mit spfiter sich entwickeln-
dem, gut wachsendem Rezidiv lieB bei 12 Tieren die Nach-
impfung angehen in 12 Fallen = 100 Proz.

Wahrend also der untersuchte Carcinomstamm auf nor-
malen Tieren eine positive Ausbeute von 87,3 Proz. ergab
und nur 12,7 Proz. sich als refraktar erwiesen, ergab die
Nachimpfung von rezidivfrei operierten Tieren nur eine positive
Ausbeute von 13,8 Proz. und 86,2 Proz. erwiesen sich gegen
die Nachimpfung refraktar.

Vergleicht man die ffir dieses Mausecarcinom gefundenen
Resultate mit den Ergebnissen anderer Versuche fiber die
Operationsimmunitat, so ergeben sich folgende Zahlen.

Es fanden

Rezidivfrei

operierte

Tiere

Bei der Nach¬
impfung
refraktar

Rezidivtiere
(spontan oder
kiinstlich)

Nach¬

impfung

erfolgreich

Uhlenhuth , Handel
und Steffenhagen

55 Ilatten

49 = 89.1 %

21 Ratten

21 = 100 %

Gay

8 »

6 = 75 „

Meidner

32 „

26 = 81,2 „

8 Ratten

7 = 87,5 „

Apolant

o>

IJ

19 = 86,2 „

9 „ ;

9 = 100 „

yy

17 Miiuse 1

13 = 76,5 „

15 Miiuse 1

15 = 100 „

Handel u.Schonburg

21 Ratten

21 = 100 „

10 Ratten

10 = 100 „

Uhlenhuth u. Dold

15 „

12 = 80 „

8 „

8 = 100 „

vorhegender Versuch

29 Miiuse

25 = 86,2 „

30 Miiuse ,

29 = 96,7 „

In dem zweiten Teil der Arbeit sollte die Dauer der
Operationsimmunitat bei diesem Mausecarcinom gepriift werden.
Uhlenhuth, Handel und Steffenhagen gaben als
Ifingste bei ihren Versuchen festgestellte Dauer der Immunitfit
operierter Ratten gegen Nachimpfungen 49 Tage an, schlieBen
aber die Moglichkeit nicht aus, daB nach langeren Fristen die

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648

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Immunitfit nachlSBt oder aufhdrt. Bei der Operation der zu
diesem Versuch verwendeten 82 Tiere wurde aufs sorgffiltigste
der ganze Tumor entfernt. Abzflglich der zu frflh gestorbenen
bekamen trotzdem 14 Tiere ein Rezidiv und es blieben im
ganzen 54 Tiere in genflgend langer Beobachtung [siehe Ta-
bellen No. 60—113 1 )]. Die Zwischenzeit zwischen Operation
und der zweiten Impfung betrug bei diesen Tieren:

24—25 Tage bei 14

Tieren

46

n

„ 6

11

61

V

„ 11

H

82—25

„ 12

122—127

11

„ 11

1i

Bei der Prfifung der Dauer der Operationsimmunitfit er-
gibt sich nun eine Schwierigkeit, die einer weitgehenden
Prfifung eine gewisse Schranke setzt. Die Tiere werden w&hrend
der Wartezeit von der Operation bis zur Nachimpfung zum Teil
erheblich alter und damit sinkt in gewissem Grade die Impf-
ausbeute an sich. Bashford (27) hat besonders auf diese
Altersresistenz beim Mfiusecarcinom hingewiesen. Er fand bei
17 Monate alten Mfiusen, die mit einem sonst gut wachsenden
Carcinomstamm geimpft wurden, tatsfichlich bei keiner ein
progressives Wachstum der Impfstficke. Die kleinen gebildeten
Knotchen verfielen nach 4 Wochen einer restlosen Spontan-
resorption. Bashford (27) betont, daB hohes Alter fflr sich
allein gentige, urn den Mfiusen eine vollkommene Resistenz
gegen das Krebswachstum zu gewfihren und hfilt den Unter-
schied der Impfung bei jungen und alten Mfiusen fQr ein
sehr wichtiges, technisches Moment, das bei der Deutung der
Immunitfitsexperimente berficksichtigt werden mfisse. Wenn
nun auch bei unseren Versuchen nicht derartig hohe Alters-
grade bei den Mfiusen eintraten, so zeigt sich doch in ge¬
wissem Sinne die vorhandene Altersresistenz in einer niedrigeren
Impfausbeute der filteren Kontrolltiere im Gegensatz zu den
jungeren Kontrolltieren des I. Teils, die mit demselben Stamm
geimpft durchschnittlich 87,3 Proz. positive Ausbeute ergaben.
Durchschnittlich ergaben die filteren Kontrolltiere nur eine
Ausbeute von 65.9 Proz. Zur besseren Uebersicht m5ge

1) No. 112 und 113 nicht abgebildet.

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Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc. 649

eine Zusammenstellung der Impfausbeute dieser Kontrolltiere
folgen.

Zahl der Tiere

Alter in Wochen

Ausbeute

in Prozenten

13

12-13

69,2 % positiv

30.8 ° 0 negativ

10

15-17

70,0 „

30,0

12

16—18

66,7

33,3 ,, jy

10

18-20

70,0 „ „

30,0 „

10

23-25

1 60,0 „ „

40.0 „

11

24-26

63,6 „ „

36,4 „

16

26-28

! 62,5 „

37,5 ,, . „

8a. 82

j 65,9 °/„ positiv

34,1 % negativ

Es ist deshalb der Versuch nicht fiber die Wartezeit von
127 Tagen ausgedehnt worden, da dann die Ausbeute der
Kontrolltiere aller Voraussicht nach unter 60 Proz. gesunken
wire. Damit ware aber eine einwandfreie Beurteilung der
Ergebnisse im Sinne Bashfords (28), der als Mindestaus-
beute bei den Kontrollen 60 Proz. verlangt, nicht mbglich
gewesen. Es wirken also bei hSheren Altersgraden der Ver-
suchstiere Altersresistenz und Operationsimmunitat zusammen,
beide verhindern ein Angehen der Impfung, so daB sich nicht
genau trennen l&Bt, welcher von beiden Faktoren bei den ge-
fundenen Resultaten ausschlieBlich oder hauptsachlich maB-
gebend gewesen ist. Da bei unseren Versuchen die Mindest-
ausbeute bei den Kontrollen 60 Proz. betrug, so lassen die
gefundenen Resultate immerhin eine Deutung zu.

Tabelle IX, X ond XI zeigen die Ergebnisse bei
14 Tieren, die 24—25 Tage nach der Operation geimpft
wurden. Bei 4 Tieren ging die Nachimpfnng an, 10 Tiere
erwiesen sich refraktar. Zwar kam es bei Maus No. 72 nach
10—14 Tagen zu einem kleinen, eben palpablen Knotchen,
doch verschwand dieses kurze Zeit darauf vollstandig. Bei
den 14 rezidivfrei operierten Tieren ging also die Nachimpfung
nach einem Zeitraum von 24—25 Tagen post operationem bei
10 Tieren = 71,4 Proz. nicht an.

Bei dem folgenden Versuch (Tabelle XII und XIII), wo
die Nachimpfung 46 Tage nach der Operation vorgenommen
wurde, blieben leider nur 6 Tiere genfigend lange am Leben.
Bei 2 Tieren, No. 75 und 76, kam es zu einem Rezidiv; bei
beiden ging die Nachimpfung an. Der bereits oben erwiihnte
Wert einer moglichst langen Beobachtung zeigte sich bei

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Bindseil,

Maus No. 75. Erst nach 7 Wochen zeigte sich an der Ope-
rationsstelle ein palpables Knotchen, das im Verlauf von
weiteren 8 Wochen ca. BohnengroBe erreichte. Zur gleichen
Zeit ging auch die Nachimpfung an und fiihrte zu einem hinter
dem Operationsrezidiv nur wenig an Gr8Be zurtickbleibenden
Impftumor. Bei Maus 76 ist der Unterschied in der GroBe
des Operationsrezidivs und des Nachimpftumors evident und
wflrde dieser Fall nach Meidner zu denen zu rechnen sein,
wo die Athrepsie Ehrlichs „eine sekundare Rolle spielen
k6nnte“, wenn bei friihzeitigem groBen Rezidiv das Wachstum
des Nachimpftumors mehr oder weniger beeintrachtigt wird.
4 Tiere blieben rezidivfrei; wiihrend bei zweien die Nachimpfung
anging, erwiesen sich die zwei anderen Mause der Nachimpfung
gegeniiber refraktar. Es UlBt sich jedoch dieser Versuch wegen
der geringen Zahl der Tiere nur bedingt verwerten.

11 rezidivfrei operierte Tiere wurden nach einem Zeit-
raum von 61 Tagen post operationem geimpft (s. Tabelle XIV 7 ,
XV und XVI). Bei 4 Tieren ging die Nachimpfung an,
die 7 iibrigen erwiesen sich refraktar = 63,6 Proz. Bei
Maus No. 83 und 86 bildete sich 8 Tage nach der Impfung
ein kleines Knotchen, wurde aber in kurzer Zeit wieder re-
sorbiert. Nach 61-tagigem Zeitraum zwischen Operation und
Nachimpfung sind also 7 von 11 Tieren refraktar = 63,6 Proz.

Nach 82—85-tagigem Zeitraum sind 12 rezidivfrei operierte
Tiere nachgeimpft worden (s. Tabelle XVII, XVIII und XIX).
Bei 4 Tieren ging die Nachimpfung an, 8 Tiere erwiesen sich
bei der Nachimpfung immun. Nach 82—85-tagiger Dauer
post operationem geht also die Nachimpfung bei 8 von 12
rezidivfrei operierten Mausen nicht an = 66,7 Proz.

11 rezidivfrei operierte Tiere wurden nach einem Zeit-
intervall von 122—127 Tagen nachgeimpft. Bei 4 Tieren ging
die Nachimpfung an, 7 Tiere blieben refraktar = 63,6 Proz.

FaBt man die Ergebnisse der Versuche fiber die Dauer
der Operationsimmunitat zusammen, so sind gegen Nach-
impfung refraktar:

nach *J4—25-tiigigem Zeitraum post operationem = 71,4 Proz. der Tiere

„ 46

i' .

yy yy

= 50

»> »

n 61 ,,

J?

•' yy

= 66,6 ,.

yy yy

.. S2-S5

yy

yy yy

= 66,7 „

•? yy

v 122-127 „

•»

yy yy

= 63.6 „

yy yy

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Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc.

651

Wie aus den Versuchen hervorgeht, lfifit sich also die
Operationsimmunitfit noch nach 122—127 Tagen nachweisen.
Wfihrend bei gleichaltrigen Kontrolltieren die Impfausbeute
= 62,5 Proz. betrligt, geht die Impfung bei rezidivfrei ope-
rierten Tieren in 63,6 Proz. nicht an. Es lfiBt sich ferner
ersehen, daB nach Ifingerem Zeitintervall post operationem die
prozentuale Ausbeute an refrakt&ren Tieren, wenn auch nicht
in erheblichem Grade, sinkt, daB also die Operationsimmunitfit
nach Ifingerer Zeitdauer zwischen Operation und Nachimpfung,
wenn auch nicht in hohem Grade, nachlfiBt. Die vorhandene
Altersresistenz kann bei unseren Versuchen nicht als Er-
klfirung herangezogen werden, da bei den gleichaltrigen Kon¬
trolltieren die Impfausbeute meist fiber 60 Proz. betrug.

Zur Deutung der bei den Versuchen fiber Operations¬
immunitfit gefundenen Resultate sind nun verschiedene Theorien
aufgestellt worden. Uhlenhuth nimmt an, daB es nach der
Implantation von Geschwulstgewebe zu Wechselbeziehungen
zwischen den wuchernden Geschwulstzellen und dem Orga-
nismus kommt, und dafi sich der Kdrper den ersteren gegen-
fiber durch Bildung von Abwehrstoffen zu schfitzen sucht.
Wird der Korper des Versuchstieres durch Radikaloperation
auf einmal von der Geschwulst befreit, so sind die wfihrend
der Geschwulstentwicklung gebildeten Abwehrstoffe frei ver-
ffigbar und vermSgen fiber neu implantiertes Tumorgewebe
Herr zu werden: die Tiere sind immun. Wird aber durch
die Operation nicht alles Tumorgewebe entfernt, so bleibt der
Kampf zwischen Tumorgewebe und Organismus bestehen, die
Abwehrstoffe werden durch das sich entwickelnde Rezidiv so
in Anspruch genommen, daB sie nun das Wachstum eines
zweiten implantierten Tumors nicht zu hindern vermfigen.
Das schnellere Wachstum der Rezidive wird dadurch ver-
stfindlich, daB die Geschwulstzellen durch Gewfihnung eine
gewisse Anpassungsffihigkeit (Serumfestigkeit) den Abwehr¬
stoffen gegenfiber erlangt haben. Sie konnen trotz der Ab-
wehrbestrebungen weiter wuchern und sogar rascher als zuvor
wachsen, da ihnen durch die Operation, durch Entfernung des
zu betrfichtlicher GroBe gewachsenen Tumors bessere Er-
nfihrungsbedingungen geschaffen sind.

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652

Bindseil,

Mit der Annahme einer athreptischen Immunit&t, wie sie
bekanntlich von Ehrlich aufgestellt ist, l&Bt sich nach
Uhlenhuth das Nichtangehen der zweiten Impfung nach
rezidivfreier Operation des prim&ren Tumors nicht erklSren,
da die Impfung nicht angeht, trotzdem nach Entfernung des
ganzen prim&ren Tumors relativ groBe Mengen der spezifischen
N&hrstoffe den implantierten Geschwulstzellen zur Verffigung
stehen.

Apolant kam bei seinen Nachprufungen fiber die Ope-
rationsimmunitfit zu anderen SchluBfolgerungen. Er verneint
eine gesetzm&Bige Beziehung zwischen dem Resultat der
Operation und dem Angehen der sekund&ren Impfung und
erkl&rt das Angehen der Nachimpfung bei Rezidivtieren
dadurch, daB nach Entfernung der Hauptmasse des prim&ren
Tumors genfigend spezifische N&hrstoffe im Sinne der Ehr-
lichschen Athrepsie vorhanden seien und weil keine Zell-
resorption von seiten des Rezidivtumors stattgefunden habe.
Zur ErklSrung des Nichtangehens der sekund&ren Impfung
nach rezidivfreier Operation nimmt er verschiedene Grfinde an.

Abgesehen von dem Hinweis auf die bei Rattentumoren
haufige Spontanresorption selbst groBer Geschwfllste, die ffir
unseren Versuch nicht die Bedeutung hat, da, wie bereits
erw&hnt, unter einer groBen Zahl geimpfter M&use nur eine
geringe Spontanheilung kleiner,hochstens erbsengroBerTumoren
innerhalb 14 Tagen beobachtet wurde und Tumoren derartiger
Kleinheit niemals operiert worden sind, hebt Apolant die
krankmachende, und damit Immunitat erzeugende Schadigung
der Operation hervor. Es ist ohne weiteres zuzugeben, daB
die Operation bei Mausen einen manchmal recht bedeutenden
Eingriff darstellt, daB eine Anzahl der Tiere die Operation
groBerer Tumoren nicht fibersteht, resp. eine gewisse Zeit
braucht, um sich von der Schadigung zu erholen. Anderer-
seits ist es aber uberraschend und wird auch von Apolant
angegeben, wie gut dieser operative Eingriff von den meisten
Tieren vertragen wird, wie schnell sich die M&use, manchmal
in sehr kurzer Zeit, wieder erholen. In unseren Versuchen
ist nun die Nachimpfung allgemein erst dann vorgenommen
worden, wenn das Tier sich vollig munter zeigte. Meidner
hat in seiner Arbeit hervorgehoben, daB es bei zweien seiner

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Ueber die sogen&nnte Operationsimmunitat etc.

653

rezidivfrei operierten Ratten trotz AusglQhens der Wunde zu
gut wachsenden Nachimpftumoren kam. Auch bei unseren
Versuchen kam es zu manchen gut wachsenden Nachimpf-
tumoren bei rezidivfreier Operation, wie besonders Maus
No. 1 zeigt.

Russel] verneint ebenfalls irgendeinen direkten EintiuB
der Operationssch&digung auf die Empf&nglichkeit eines Tieres
bei der Nachimpfung, da er nach der operativen Entfernung
von Tumoren eines bestimmten Stammes alle Nachimpfungen
angeben sah, w&hrend er das entgegengesetzte Resultat nach
der Entfernung von Tumoren eines anderen Stammes erhielt.

Die immunisierende Wirkung der Operationssch&digung kann
also unseres Erachtens nach nicht zur Erkl&rung herangezogen
werden.

Den Hauptgrund ffir das Nichtangehen der Nachimpfung
bei rezidivfreier Operation sieht Apolant in der Ausbildung
einer aktiven Immunit&t, die durch Resorption „kleiner, dem
Auge entgangener Tumorreste 44 verursacht werde. Grdflere
Geschwulststttcke, die breitere Verbindung mit der Zirkulation
haben, seien dieser Gefahr nicht so ausgesetzt. Deshalb ginge
die Nachimpfung bei rezidivfreier Operation dann an, wenn
die Operation ohne sonstige Sch&digung der Tiere wirklich
radikal ausgefiihrt worden sei, sie sei erfolglos, wenn Ge-
schwulstpartikel durch Hautspannung oder sonstige Sch&digung
nekrotisch werden und zur Resorption gelangen, d. h. wenn
die Operation nicht wirklich radikal ausgefiihrt worden sei.

Mit dieser Erkl&rung Apolants stehen zwei bei unseren
Versuchen gefundene Tatsachen nicht recht im Einklang.
Wird mit der Moglichkeit gerechnet, dafi bei jeder noch so
radikalen Operation „kleine, dem Auge entgangene Tumor¬
reste 44 zuriickbleiben, wie erkl&ren sich dann die h&ufigen *
Rezidive nach radikaler Operation, die bei unseren Versuchen
insgesamt in ca. 31,4 Proz. beobachtet wurden? In diesen
Fallen sind doch sicher unabsichtlich kleine Tumorreste zurtick-
geblieben, die aber nicht der Resorption verfallen, sondern zu
Rezidiven ausgewachsen sind. Wenn nun in Vs der Falle
kleine, unabsichtlich zuriickgebliebene Tumorpartikelchen zu
Rezidiven auswachsen, so ist nicht recht einzusehen, warum
sie in der hbrigen Zahl der F&lle trotz gleicher Bedingungen

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654

Bindseil,

nicht zu Rezidiven auswachsen, sondern resorbiert warden.
Der Schlufi erscheint doch ebenso naheliegend, dafi in diesen
Fallen es zu keiner Rezidivbildnng kotnmen konnte, weil eben
radikal operiert worden war.

Ebenso spricht gegen die Ansicbt Apolants die Beob-
achtung bei absichtlich unvollst&ndiger Operation. Das Zurflck-
lassen eines kleinen Restes Tumorgewebes hat hier in s&mt-
lichen 12 Fallen zu gut wachsenden Rezidiven gefflhrt. Sind
nun auch, wie Apolant hervorhebt, derartig grdfiere Ge-
schwulststflckchen deswegen der Gefahr der Resorption nicht
so ausgesetzt, weil sie breitere Verbindung mit der Zirkulation
haben, so werden doch beim Abtrennen des zurfickzulassenden
Geschwulststtickchens mit der Schere eine Menge kleiner
Tumorpartikelchen losgelost, die den Bedingungen der Re¬
sorption genau so leicht ausgesetzt sind wie bei radikaler
Operation. Trotzdem kann ihre Resorption, wenn sie statt-
findet, nicht nur nicht das Angehen des Rezidivs verhindern,
sondern l&Bt sogar ein gutes Wachstum des Rezidivs zu.

In der Regel filhrt das Zuriicklassen eines kleinen Tumor-
restes, wie das auch aus Apolants Versuchen hervorgeht,
zu einem Rezidiv. Mit der Ausnahme, wie sie im Russell-
schen Versuch bereits oben erwahnt wurde, dafi nach absicht-
lichem Zuriicklassen von Tumorgewebe keine Rezidivbildnng,
sondern Resorption eintritt, ist filr das Nichtangehen der Nach-
impfung die Apolantsche Erklarung einer aktiven Immuni-
sierung gut vereinbar.

Als einen weiteren Einwand gegen die Theorie Uhlen-
huths filhrt Apolant die bei seinen Versuchen gefundene
Tatsache an, dafi die Nachimpfung zun&chst gewOhnlich angehe
und die Neubildung erst nach einiger Zeit allm&hlich resorbiert
werde. Dieses von Apolant bei 33 Mausen llmal beob-
achtete Zuriickgehen angegangener Impftumoren tritt bei
unseren Versuchen nicht in dem Grade hervor. Nur 4mal
ging eine deutlich angegangene Nachimpfung wieder zurfick,
in 3 Fallen war die Deutung zweifelhaft.

Auf der Entwicklung einer aktiven Immunitfit beruht nach
Ru ssell die Resistenz eines Tieres gegen eine zweite Impfung,
doch hat nach seiner Ansicht auch die Beschaffenheit des Impf-
bodens bei dem geimpften Tier einen gewissen Einflufi. Russell

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Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc.

655

erkl&rt die scheinbaren Widersprflche, die anf dem Gebiete
der Tumorimmunit&t vorhanden sind, durch das Differieren
der verschiedenen Tumorparenchymgewebe in ihrem VermOgen,
Resistenz gegen Tamorwachstum zu erzeugen. Es wQrde sich
also bei unseren Versuchen im Russellschen Sinne um einen
Tumorstamm handeln, der in bohem Made befahigt ist, bei
unseren MSusen eine Resistenz gegen nachfolgende Impfung
herbeizufflhren. Ob andere Stamme sich bei unseren Ver-
suchstieren anders verhalten, konnte von uns nicht nachgeprflft
werden, da uns nur dieser eine Tumorstamm zur Verfflgung
stand.

Zusammenfassung.

Die vorliegenden Versuche haben zu Ergebnissen gefflhrt,
die rait denen von Uhlenhuth, Handel und Steffen-
hagen fibereinstimmen.

1) Bei rezidivfrei ausgefflhrter Radikaloperation gut aus-
gewachsener Tumoren unseres Mausecarcinoms sind die Tiere
in einem hohen Prozentsatz (= 86,2 Proz.) gegen eine Nacb-
impfung mit demselben Stamm refraktar.

2) Bei nicht rezidivfrei ausgefflhrter Operation kam es in
fast alien Fallen (= 94,4 Proz.) zu einem Angehen der zweiten
Impfung.

3) Bei absichtlich unvollstflndig ausgefflhrter Operation
bekamen samtliche Tiere ein Rezidiv und die Nachimpfung
ging in alien Fallen an.

4) Die Dauer der Operationsimmunitat liefi sich bei
unseren Versuchen noch bis zu 127 Tagen nachweisen. Bei
grofierem Zeitintervall stort die Altersresistenz der alter
werdenden Tiere eine Prttfung der Dauer der Operations¬
immunitat.

Literatnr.

1) Uhlenhuth, Handel und Stef fen hagen, Arb. a. d. Kais. Ges.-
Amt, Bd. 36. H. 4.

2) -Zeitechr. f. Immunitataf., Bd. 6, 1910.

3) Sticker, Munch, med. Wochenschr., 1906, No. 3.

4) — Deutsche med. Wochenschr., 1907, No. 21.

5) Schoene, Verhandlungen der Deutschen Gesellschaft f. Chir., 1907.

6) — Deutsche med. Wochenschr., 1907, No. 21.

ZtiiUchr. f. ImmunitftsforKhung. Orig. Bd. XVII. 44

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656 Bindseil, Ueber die sogenannte Operationsimmunitat etc.

7) Gay, zitiert nach Uhlenhuth.

8) Apolant, Zeitechr. f. Immunitatef., Bd. 10, 1911.

9) Uhlenhuth, Med. Klinik, 1912, No. 37.

10) Meidner, Zeitechr. f. Krebeforsch., Bd. 11, H. 3.

11) Uhlenhuth, Dold und Bindseil, Vortrag, 6. Tag, Freie Ver-
einigung fiir Mikrobiologie, Berlin 1912.

12) Handel und Schdnburg, Vortrag, 6. Tag, Freie Vereinigung fOr
Mikrobiologie, Berlin 1912.

13) Morpurgo und Donati, Atti del L Congresso internaz. dei Patologi,
Turin 1911.

14) Russell, V. Scicnt Report on the Invest, of the Imp. Cane. Research
Fund, 1912.

15) Albrecht und Hecht, Wiener klin. Wochenschr., 1909, No. 50.

16) Apolant, Sitzung des deutschen Zentralkomitees zur Erfonch. und
Bekampfung der Krebskrankh., Berlin 1911.

17) Bashford, Murray and Bowen, Ref. Centralbl. f. Bakt., 1909.

18) Ehrlich, Nederl. Tijdschr. v. Genesk., Bd. 1. Ref. Centralbl. f.
Bakt., 1909.

19) Gierke, Zeitechr. f. Krebsf., Bd. 7, 1909.

20) Haaland, fieri, klin. Wochenschr., 1907, No. 23.

21) Lurje, Russkij Wratsch, 1909, No. 48. Ref. Zeitechr. f. Immunitate-
forsch., 1909.

22) Uhlenhuth und Weidanz, Arb. a. d. Kais. Ges.-A., Bd. 30, 1909.

23) Borrel, Le Problbme de Cancer, Paris 1907, zit nach Uhlenhuth,
Handel und 8teffenhagen.

24) Clowes, Brit. med. Journ., 1906, zit. nach Apolant.

25) Clunet, Recherchesexp&imentalessurlestumeurs malignes, Paris 1910.

26) Apolant, Berl. klin. Wochenschr., 1912, No. 11.

27) Bashford, Berl. klin. Wochenschr., 1909, H. 36 u. 37.

28) — Murray and Cramer, Ref. Centralbl. f. Bakt, Bd. 43, 1909.

Fronmuinnsche BuchdruckerH (Hermann Pohle) Id Jena— 4279.

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Tabellel.

Zeitschrift fUr Immunitatsforschung I. Teil: Orig. Bd.XER.

Controlled = 90 o/ # pos.

i. 2. 3.

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Veriag to# CtasUv Fitrhcr ta J«m.

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Zeituhrift fur Immunitatsforschmng I. Teil: Orig. Bd.XZH

Controllers 76,9 °/o p°s*

8 . 9 . 10

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