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ANNALES 


DE L'INSTITUT PASTEUR 


cie. N 


SCEAUX, — IMPRIMERIE CHARAIRE ET 


ANNALE 
DE L'INSTITUT PASTEUR 


(JOURNAL DE MICROBIOLOGIE) 


PUBLIÉES SOUS LE PATRONAGE DE M. PASTEUR 


PAR 


ÉReDUGE AUX 
MEMBRE DE L'INSTITUT 
PROFESSEUR A LA SORBONNE 


Et un Comité de rédaction composé de : 
MM. 


CHAMBERLAND, chef de service à l’Institut Pasteur. 

Dr GRANOHER, professeur à la Faculté de médecine, 
METCHNIKOFF, chef de service à l’Institut Pasteur. 
NOCARD, professeur à l'École vétérinaire d’Alfort. 

Dr ROUX, chef de service à l’Institut Pasteur. 

Dr STRAUS, professeur à la Faculté de médecine. 


TOME SEPTIÈME 
1893 


AVEC QUINZE PLANCHES 


PARIS 
G. MASSON, ÉDITEUR 
LIBRAIRE DE L’ACADÉMIE DE MÉDECINE 


120, BOULEVARD SAINT-GERMAIN 


EN FACE DE L'ÉCOLE DE MÉDECINE 


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7me ANNÉE JANVIER 1893. N° 4: 


ANNALES 


DE 


L'INSTITUT PASTEUR 


LE JUBILÉ DE M PASTEUR 


Le 27 décembre 1892, a été célébré avec éclat, en 
présence de M. le Président de la République, le 70+ anni- 
versaire de la naissance de M. Pasteur. Des médailles, des 
adresses, des télégrammes ont apporté de tous les points du 
monde des témoignages de reconnaissance, des compliments 
et des souhaits. 

Cette belle solennité laissera de longs souvenirs chez 
tous ceux qui yont assisté. C’est qu’elle n’était pas seulement 
la fête d’un savant, si glorieux soit-il ; c’était aussi une fête 
de la Science, qui a le droit de s’enorgueillir que les noms 
qu'elle illustre soient les seuls que puissent célébrer à 
l'envi et sans arrière-pensée tous les peuples civilisés. La 
rédaction des Annales tient à honneur de rester fidèle à 
cette science sans frontières, qui accueille avec reconnais- 
sance la vérité, d’où qu'elle vienne ; mais elle est fière de 
posséder à sa tête le savant illustre et vénéré pour lequel 
l'amour de la science à toujours été une forme élevée du 
patriotisme, et qui, dans les hommages dont on l’a comblé 
dans l'amphithéâtre de la Sorbonne, voyait surtout éclat 
qui en rejailissait sur son pays. 


SUR LES PHOSPHATES DU EAIT 


Par M. DUCLAUX. 


Les phosphates du lait sont pour beaucoup dans la valeur 
alimentaire de ce liquide. C’est avec eux que le jeune animal 
en lactation constitue son système osseux; d’une manière plus 
générale, Bunge a démontré que la matière minérale d’un jeune 
chien, incinéré en entier, avait à peu près la même composition 
que les cendres du lait de chienne. 

Les sels minéraux du lait exercent en outre une influence 
considérable sur les propriétés de la caséine, sur sa coagulation, 
sur son degré de cohésion, sur sa digestibilité. O. Hammarsten 
a cherché à expliquer théoriquement cette influence en admet- 
tant que, sous l’action de la présure, la caséine se dédouble en 
deux nouvelles substances. L'une, qui est en quantité de beau- 
coup prédominante, est insoluble dans la solution de phosphate 
calcique que présente le lait, et se précipite, sous forme de 
coagulum, en entraînant une proportion plus ou moins grande 
de chaux et d'acide phosphorique. L'autre corps azoté, qui se 
forme en quantité très minime dans le dédoublement, constitue 
la protéine du sérum, et reste en solution. 

Cette théorie a été reprise tout récemment, avec des argu- 
ments nouveaux, par MM. Arthus et Pagès, pour lesquels la 
présure dédouble la caséine du lait en deux substances : une 
albumose qui reste dans le petit lait, et une substance caséogène 
qui donne avec les sels de calcium un composé insoluble, le 
caséum. C’est la théorie d’O. Hammarsten, sauf que la forma- 
tion d’un coagulum est considérée, non comme le résultat d’un 
phénomène d'insolubilité dans un liquide contenant du phos- 
phate calcique, mais comme le résultat de la combinaison 
chimique d’une substance dite caséogène avec le calcium pour 
donner la substance insoluble, dite caséum. MM. Arthus et 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 3 


Pagès considèrent en effet ce caséum comme un composé 
chimique, parlent de caséum calcique, barytique, sans avoir du 
reste cherché à démontrer que la composition de ces corps était 
constante, ni rien fait pour justifier le nom qu'ils leur donnaient. 

A ces théories du dédoublement pendant la coagulation, 
j'ai fait deux objections principales. En premier lieu, lorsqu'on 
filtre comparativement, sur une bougie de porcelaine, du lait 
normal et du lait coagulé, pour bien y distinguer ce qui est en 
solution véritable et passe au travers du filtre, de ce qui est en 
suspension et qui reste à sa surface, on ne trouve pas plus de 
matière albuminoïde dissoute dans un cas que dans l’autre, ce 
qui prouve que, daus les limites de précision de la mesure, il ne 
se forme aucune nouvelle matière soluble par suite de la coagu- 
lation. En second lieu, les sels de chaux jouent un rôle passif, 
au lieu de jouer un rôle actif dans la coagulation, comme le 
veulent les théories précédentes. Le phosphate de chaux du 
caséum est en simple suspension dans le lait et s’en sépare par le 
repos. Îl ne fait pas plus partie du caséum, que ne font partie de 
l’eau les limons qui s'en déposent. On n’a pas le droit de le con- 
sidérer comme faisant partie des cendres de cette substance. On a 
encore moins le droit de compter, sans autre informé, le phos- 
phore trouvé dans ces cendres comme élément du caséum. En se 
formant, le coagulum enferme dans ses mailles le phosphate de 
chaux en suspension dans le lait, et ne s’en sépare ensuite que 
difficilement. La proportion de sel de chaux soluble est en outre 
la même, avant ou après coagulation, dans la portion qui filtre 
au travers d'un diaphragme de porcelaine, ce qui est contraire 
à l’idée d’une combinaison calcique, se produisant pendant la 
coagulation. | 

Ces faits, publiés en 1883, n'ont pas été contredits par 
M. Hammarsten, et MM. Arthus et Pagès, qui, depuis, ont fait leur 
travail sur le lait, semblent les avoir ignorés. On aurait pour- 
tant pu me reprocher que ma démonstration n’était pas tout à 
fait correcte. Ma première objection résulte d'un dosage 
comparatif de la matière albuminoïde dans le liquide filtré du 
lait coagulé et non coagulé. Cette filtration n’est pas quelque 
chose d'aussi simple que la filtration d’un précipité cristallin, et 
il y a de ce fait des difficultés sur lesquelles je reviendrai. 
Telle quelle est, et avec les renseignements que j'ai donnés, la 


4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


démonstration est suffisante. On a le droit de se montrer un 
peu plus difficile au sujet de la seconde objection, relative au 
dosage comparatif du phosphate de chaux. 

Je m'étais contenté, pour aller vite, de dissoudre dans l'acide 
acétique, mélangé au besoin d’une goutte ou deux d’acide 
chlorhydrique dilué, les cendres provenant du lait entier ou du 
lait filtré, et de précipiter par l’ammoniaque. Les cendres du lait 
contiennent toujours plus d'acide phosphorique qu'il n’en faut 
pour former avec la chaux du phosphate tribasique; il y a en 
outre dans ces cendres de l’alumine, du sesquioxyde de fer, 
de la magnésie. Le précipité obtenu par l’'ammoniaque contenait 
donc, mélangé au phosphate de chaux, des phosphates de fer, 
d'aluminium, et du phosphate ammoniaco-magnésien que la 
calcination transforme en pyrophosphate. Tous ces phosphates 
mélangés au phosphate de chaux sont en assez faible quantité 
pour que les conclusions à tirer des dosages soient encore 
valables, et c'est dans ce sens que je les ai données. Mais il y 
aurait évidemment intérêt à serrer la question de plus près. 

Il n'est pas douteux aujourd’hui que le lait ne contienne des 
éléments en suspension et des éléments en solution. Dans les 
éléments en suspension, en laissant de côté les globules gras, il 
faut compter surtout la caséine et les phosphates. Quels sont 
ces phosphates, et, lorsqu'on a recombiné par le calcul, à l’état de 
phosphates tribasiques, les quantités des diverses bases trouvées 
par l'analyse avec la quantité voulue d'acide phosphorique, y 
a-t-il un excédent d'acide phosphorique ou de phosphore impu- 
table au caséum lui-même, et entrant dans sa constitution au 
même titre que le carbone ou l’azote? Comme les matériaux en 
suspension comprennent les 7/8 de la caséine et un peu moins 
de la moitié des éléments salins, ils se prètent bien mieux à 
cette étude que le lait entier, parce que, d’un côté, l'évaluation de 
l'excédent d’acide phosphorique est plus sûre, et que, de l’autre, 
cet excédent est à répartir sur une quantité de caséine presque 
égale à celle qui existe dans ce lait. 

Si nous passons maintenant aux sels en solution, nous ren- 
controns d’autres questions qui se posent. Dans les cendres du 
lait filtré au travers de la porcelaine, nous trouvons encore de 
l'acide phosphorique et de la chaux. Dans quelle proportion sont 
ces deux éléments, et à quelétat a-t-on le droit de les supposer en 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 5 


suivant les règles, arbitraires il est vrai, qui servent à transformer 
une analyse élémentaire en analyse immédiate? Le phosphate 
tribasique de chaux est insoluble, le phosphate bibasique l'est 
aussi; seul le phosphate monobasique peut se dissoudre, mais il 
est acide. L’acidité qui en provient est-elle du même ordre que 
l'acidité normale du lait? Les citrates dont on a signalé la pré- 
sence dans le lait jouent-ils un rôle dans la solubilisalion des 
phosphates ? 

Ce n’est pas tout. Le phosphate de chaux y est à l’état d’élé- 
ments fins, presque muqueux, se dissolvant très facilement dans 
les acides les plus faibles. Cet état de division muqueuse, cette 
facile solubilité assurent sa circulation dans l’organisme du jeune 
animal, soit qu'il y entre en nature, ce que lui permet sa division 
extrême, soit qu'il y entre en solution acide facile à précipiter. 
Pour donner aux phosphates naturels des propriétés alibiles, on 
a songé de divers côtés à les faire passer par l'organisme de la 
vache, à laquelle on les sert à l’état pulvérisé, dans l'espoir de 
les voir reparaître dans son lait sous une forme plus digestible. 
Ceci revient à demander à la vache ce travail préliminaire qu'on 
n'ose pas demander à un enfant qu'on veul soumettre à une 
alimentation phosphatée. Mais la vache en est-elle capable? Le 
lait qu'elle fournit dans ces conditions d'alimentation ren- 
ferme-t-il plus de phosphates que le lait naturel? Si oui, sont-ils 
à l’état de phosphates solubles ou de phosphates en suspension? 
Une réponse à cette question est d'autant plus utile qu'il y a un 
moyen très simple d'augmenter, sans passer par la vache, la 
richesse d’un lait en phosphates, et de justifier par celte augmen- 
tation l’augmentation du prix. Il suffit d'y ajouter des os pulvé- 
risés ou du phosphate de soude, suivant qu’on voudra accroître 
la proportion des phosphates en suspension ou en solution. 
Y a-til des moyens de se mettre en garde contre cette fraude? 

Toutes ces questions forment l'objet d’un travail considérable 
dont je ne publie en ce moment que la première partie, celle qu'il 
est possible de faire dans un milieu aussi hostile aux études 
laitières que l’est Paris. La seconde partie, qui exige des expé- 
riences sur des animaux, a été interrompue quand j'ai quitté la 


Station laitière du Cantal ; j'espère pouvoir les reprendre bientôt 


dans la même région. 


6 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


L'étude de tous ces problèmes exige une analyse exacte des 
cendres, analyse dont les procédés sont bien connus. J'ai tou- 
jours opéré sur 100 c. c. de lait, que j’évaporais au bain-marie, 
et que je calcinais dans une capsule de platine, à une aussi 
basse température que possible. Les cendres, pesées lorsqu'elles 
sont bien blanches, sont reprises par l'acide chlorhydrique 
étendu où elles se redissolvent intégralement, ce qui démontre 
qu'il n’y à jamais de silice en proportions sensibles. On ajoute 
de l’ammoniaque jusqu’à formation d’un commencement de 
précipité, puis de l’acide acétique ajouté goutte à goutte et en 
léger excès, de façon à ne laisser indissous que les phosphates 
de fer et d’alumine. 

C'est ici qu’on trouve le bénéfice de n’avoir pas trop chauffé 
pendant la calcination. Le phosphate de chaux porté à un rouge 
trop vif se redissout plus péniblement dans l'acide chlorhydrique, 
et cette dissolution, ne semble pas lui faire perdre sa cohésion et 
son degré de résistance aux acides, car, précipité par l’ammo- 
niaque, il est encore très résistant à l'attaque par l'acide acé- 
tique, et peut refuser de se dissoudre. Si on chauffe, on ne réussit 
qu’à le rendre plus insoluble, et en plus on précipite une partie de 
celui qui s'était déjà dissous. On évite toute difliculté, en calei- 
nant au rouge naissant dans les portions les plus chaudes de la 
capsule de platine. Quand on dépasse ce terme, on est exposé à 
compter une partie du phosphate de chaux des cendres comme 
du phosphate de fer et d’alumine. 
= Le fait a dû se produire souvent, car les quantités de phos- 
phate de fer et d’alumine que j'ai trouvées daus mes analyses 
n’ont jamais dépassé 5 milligrammes pour 100 c. c. de lait. Cela 
correspond à 10 milligrammes environ de sesquioxyde de fer 
par litre de lait. Or la majorité des analyses publiées en donnent 
30 à 50 milligrammes. 

D'ordinaire le poids de phosphate de fer et d’alumine pro- 
venant des cendres de 100 c. c. de lait ne dépasse pas 2 milli- 
grammes. La teneur en acide phosphorique de ces deux phos- 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 7 


phates est à peu près la mème, et voisine de 50 0/0. On ne 
commet qu'une erreur négligeable en comptant comme acide 
phosphorique la moitié du poids des phosphates trouvés, dout il 
est inutile de pousser plus loin l'étude. Dans le liquide filtré on. 
précipite à la façon ordinaire lachaux par l’oxalate d’'ammoniaque, 
puis la magnésie à l’état de phosphate ammoniaco-magnésien, 
en ajoutant un excès d’'ammoniaque au liquide de filtration et 
de lavage de l’oxalate de chaux, convenablement évaporé au 
bain-marie, s’il est trop étendu. On concentre à nouveau les 
liquides de filtration et de lavage du phosphate ammoniaco- 
magnésien, et on y précipite les dernières portions d'acide 
phosphorique en y ajoutant du chlorure de magnésium et de 
l’ammoniaque. Les éléments autres que l’alumine, le fer, la 
magnésie, la chaux et l’acide phosphorique, ne nous intéressent 
pas pour le moment, et nous les confondrons sous la dénomina- 
tion d'éléments non dosés. Ils sont formés presque exclusive- 
ment de chlore, de potasse et de soude. 

Pendant que ces opérations s’accomplissent, une autre por- 
tion du même lait est filtrée sous pression au travers d’une bou- 
gie Chamberland. On recueille une centaine de centimètres 
cubes du liquide limpide. Il importe que pendant les vingt- 
quatre heures nécessaires à cette filtration, le lait ne se coagule . 
ni ne s’acidifie pas, pour éviter qu'une partie du phosphate de 
chaux en suspension ne passe en solution, et que la répartition 
qu'on veut surprendre ne soit ainsi modifiée. Il faut pour cela 
soit stériliser le lait sur lequel on opère, soit, ce qui est préfé- 
rable, le refroidir en y mettant un nageur rempli de glace. Il n'y 
a pas à craindre de voir se peupler le liquide filtré, si on le 
reçoit dans un vase stérilisé et si la bougie filtrante a été 
bien flambée. On évapore au bain-marie 100 centimètres cubes 
de ce liquide filtré et on le traite absolument comme on fait du 
lait, tant pour la calcination que pour l'analyse des cendres. 

Les analyses terminées, il n’y a plus qu’à comparer les 
deux séries de chiffres. Pour être tout à fait exact, il faudrait 
tenir compte de ce que 100 centimètres cubes du liquide filtré ne 
correspondent pas à 100 centimètres cubes de lait. Ils représen- 
tent la partie liquide de 100 centimètres cubes de lait, plus la 
caséine et Ja matière grasse restées sur le filtre. Mais, dans une 
première approximation et pour simplifier, nous admettrons la 


8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


correspondance exacte des deux volumes de liquide. Dès lors, 
en retranchant pour chacun des éléments étudiés la quantité 
trouvée dans le lait filtré de la quantité trouvée dans le lait com- 
plet, on a la quantité de cet élément existant en suspension dans 
le lait, et on peut faire pour le détail des sels, ce que j'ai com- 
mencé à faire dans mes études sur le laït, à propos de la caséine 
et du phosphate de chaux, distinguer les éléments en suspen- 
sion des éléments en solution. 

Prenons comme exemple un lait de Norvège conservé par la 
méthode de Dahl. La composition des cendres du lait complet 
et du lait filtré, telle qu’elle a été fournie par l’analvse, était la 
suivante : 


Lait complet Lait filtré 


Alumine et fer....... re Aer I 0,005 0,002 
MABNÉSIO NN PR RER 0,017 0,011 
Cha LEE RER EL TERRE 0,178 0,051 
Acide DA boire ne ETS 0,213 0,088 
Autres éléments non dosés ....... 0,339 0,302. 
TOTALE ENTRER EE ue. 0,752 0,454 


En retranchant les nombres correspondants des deux 
colonnes, on a pour les éléments en suspension dans ce lait les 
chiffres suivants : 


AlUOINE TEL TOTALE TE EEE EE 0,003 
MASnSIe. ARR ru see EC LL Meet 0,006 
Chaux ce Ne A pa RL SO UDC DS LE 0,127 
Acide note RE cc So Ne ee 2807120 
Autres éléments, ...... RUE RRES ÉCRES Ae2 al 087 

TOTAL RSR Er NE NE 0,298 


Ces nombres correspondent aux éléments du lait qui, comme 
Je phosphate tribasique de chaux, sont insolubles et ne peuvent 
exister qu’à l’état de suspension dans ce liquide. Ils correspon- 
dent aussi à ceux des éléments solubles ou insolubles qui sont 
retenus, par voie d’affinité capillaire, dans les mailles du caséum 
resté à la surface du filtre. On sait, en effet, que les corps géla- 
tineux, colloïdaux, exercent d'ordinaire une action de collage sur 
les substances qu’ils rencontrent dans le liquide qui les con- 
tient. Ils en retiennent quelques-unes, de préférence celles qui 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 9 


se rapprochent de l’état colloïde. Ils en repoussent d’autres, et 
c’est en partie à ce choix, à celte sélection, qu'il faut attribuer les 
37 milligrammes d'éléments non dosés, fournis comme éléments 
en suspension, bien qu'ils soient en majorité formés de chlo- 
rures alcalins très solubles; ce chiffre s’augmenterait encore si 
on tenait compte de ce que 100 centimètres cubes de liquide 
fillré représentent, non pas 100, mais environ 104 centimètres 
cubes de lait, d’après la richesse de ce lait en caséine. Ce lait 
avait été écrémé avant l'étude. 

Tous les éléments dosés sont donc en partie à l’état de sus- 
pension, en partie à l’état de solution. L'étude de ces derniers 
est délicate. L'analyse indique bien leur présence, mais ne nous 
dit rien sur les combinaisons qu’ils forment entre eux. Il n’en 
est pas tout à fait de même pour les substances en suspension. 
Il y en a au moins une dont l’état ne laisse aucun doute. C'est 
le phosphate de chaux qu’on voit et qu’on peut recueillir par 
le repos. On peut donc admettre que les 0#,127 de chaux de l’a- 
nalyse ci-dessus sont à l’état de phosphate tribasique, et immo- 
bilisent de ce fait 0,108 d'acide phosphorique. L’alumine, le 
fer, la magnésie accompagnent le phosphate de chaux et sont 
aussi à l’état de phosphates insolubles. Cela exige encore 3 milli- 
grammes d'acide phosphorique pour l’alumine et le sesquioxyde 
de fer, 7 milligrammes pour la magnésie, et en somme, avec 
ces hypothèses sûrement très voisines de la réalité, la compo- 
sition des sels en suspension peut être écrite de la façon sui- 
vante : 


Phosphates de fer et d’alumine..... SR De 18042 0,006 
Phosphate de magnésie.......... RES RTE = Ent 0,013 
PRosphale Aer: Me ee ete 0:20 
Phosphates insolubles.............. PRET 0,254 


Le phosphate de chaux en suspension dans le lait est donc mélangé 
de phosphates de magnésie, de fer et d'alumine. 

Ce n’est pas tout. Nous avons compté ces phosphates comme 
tribasiques, ce qui revient à dire que nous avons attribué aux 
bases présentes la quantité minimum d’acide phosphorique: 
Nous n’en avons ainsi distribué que 0:',118 sur les 0*,125 trou- 
vés, à savoir 0%',108 pour le phosphate de chaux et 0,010 pour 
les autres phosphates. Il nous en reste done un petit excédent 


10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


de 7 milligrammes qui nous prouve que nous avons eu raison 
de nous arrêter à des phosphates tribasiques, car il n’y aurait 
pas eu assez d'acide phosphorique pour des phosphates biba- 
siques. Mais nous avons à nous demander d'où provient cet 
excédent. 

Nous verrons bientôt qu’on a toute raison de l’attribuer à 
un peu de phosphate soluble retenu par le caséum en même 
temps que les chlorures alcalins. Maïs pour faire la part belle 
à la théorie que nous voulons discuter, nous admettrons que 
tout cet acide phosphorique trouvé dans les éléments en sus- 
pension provient du phosphore de la caséine en suspension 
restée à l'extérieur du filtre. Il y en avait environ 4 grammes 
pour 100 centimètres cubes de lait. D'un autre côté, les 7 milli- 
grammes d'acide phosphorique excédent contiennent environ 
3 milligrammes de phosphore. Si ce phosphore appartient 
tout entier à la caséine, cette substance n’en contient donc 
que 0,75 0/00. C’est dix fois moins que la proportion de 0,85 0/0 
donnée par Hammarsten dans son Traité de chimie physiologique, 
et cette évaluation de Hammarsten est encore inférieure à celles 
qui l'ont précédée, inférieure surtout à celles qu’on donne pour 
d’autres albuminoïdes, car Ritthausen a été jusqu’à faire entrer 
1,4 0/0 de phosphore dans la constitution de la légumine du 
pois. Il est clair que dans les études faites jusqu'ici, on a trop 
souvent considéré comme provenant de la molécule albumi- 
noïde le phosphore contenu dans les phosphates de chaux ou de 
magnésie qui accompagnent les corps protéiques des êtres 
vivants. Tous ces phosphates sont colloïdaux, sont retenus avec 
persistance par les matières albuminoïdes, mais en sont absolu- 
ment distincts. On n’a aucun droit de faire entrer dans la cons- 
litution de la molécule albuminoïde tout le phosphore qu'on y 
trouve à l’état de phosphate, mème quand on croit l'avoir conve- 
nablement purifiée. Les faits qui précèdent montrent qu’ane 
revision s'impose à ce point de vue pour les diverses matières 
albuminoïdes, et lorsqu'elle sera commencée, on verra qu’elle 
n'est pas moins nécessaire pour le soufre que pour le phosphore, 
comme je le montrerai bientôt. 

Avant de commencer l'étude des éléments minéraux en sus- 
pension, je voudrais montrer d'abord que l'exemple ci-dessus 
n’est pas isolé. J'ai analysé de même un lait du Cantal, et voici 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 11 


les nombres que j'ai trouvés. Je ne cite, pour abréger, que la 
composition élémentaire. 


Phosphates de fer et d’alumine................. 0,002 
Phosphate de magnésie........... tas ec EU:00 
Phosphatetde”"Chaux..1".:.. 12 Re esse, Dale 
Acide, phosphorique.en excès. ......%2. 2. 0,014 
Autres éléments non dosés.............. LORE 0,024 

0,262 


Les nombres sont en moyenne un peu inférieurs à ceux qui 
précèdent, mais j'ai quelques raisons de croire que ce lait avait 
été additionné d’une petite quantité d’eau. L’acide phosphorique 
en excès prédomine plus que dans le lait qui précède, mais nous 
retrouverons tout à l’heure cette question. 

Les deux laits que nous venons d'étudier sont de régions 
bien différentes. En voici un autre, provenant d'une région voi- 
sine du Cantal, et qui se distingue des précédents en ce que les 
animaux qui l'ont fourni sont, au dire du producteur, soumis à 
une alimentation surphosphatée destinée à augmenter la pro- 
portion d'acide phosphorique dans leur lait. En ce qui concerne 
les éléments en suspension, la composition de ce lait était la 
suivante : 


Prrosphatessde fertetid'alumimen te es 0,002 
_— GE ES MR OR RES PE de NC OR ESS 0,008 
ne ORCH URO ANA SD ea Rate A CR PT RSR 0,222 
A'éde DHosphorique en ExCbs TA A entend 0,006 
ATESPOIEIHEILESE RON AOSES A LL 22 deu con na ee 39 0,042 
MOTARD be M era E Ne à . 0,280 


On voit que pour ses éléments en suspension, comprenant 
environ les 2/3 du phosphate, ce lait est moins riche que le lait 
de Dahl. Mais nous le retrouverons tout à l'heure ; contentons- 
nous pour le moment de remarquer que tous ces laits, de régions 
et d'origines diverses, présentent les plus grandes ressemblances. 
Nous les verrons s’accuser encore plus dans ce qui va suivre. 


IT 


Nous en sommes arrivés à l'étude des éléments à l’état de 
solution. Voyons d’abord ce que fournit l'analyse pour les trois 
laits étudiés ci-dessus. 100 c. c. du liquide de filtration de 


12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


chacun de ces laits sur la porcelaine contiennent les quantités 
suivantes des éléments dosés. 


Lait de Lait du Lait 
Norvège. Cantal. phosphate, 
Oxyde de fer et alumine............. 0,002 » » 
Mans At Ne BR RE 0,011 0,014 0,016 
CHAR NE SOS MR NENE TEE OR 0,051 0,058 0,061 
ACIde HROSDROETIQUE SRE LEE FETE 0,088 0,096 0,100 
Autres éléments non dosés............ 0,302 0.287 0,398 
LOTAUX: Re ee een 0,434 0,459 0,500 


La première remarque à faire, c’est que tous ces laits filtrés 
contiennent un phosphate de chaux soluble. Il est même remar- 
quable que si on fait abstraction de la magnésie et des autres 
bases métalliques, toujours en très petite quantité, et si on n’en- 
visage que la chaux et l'acide phosphorique, la quantité d’acide 
phosphorique est à peu près double de celle qu’il faudrait pour 
constituer du phosphate tribasique avec toute la chaux pré- 
sente. 

Ainsi, avec le lait de Norvège, on trouve que 51 milligrammes 
de chaux exigeraient 43 milligrammes d’acide phosphorique ; il 
y en a 88. Pour le lait du Cantal, les chiffres sont 49 et 96. 
Voici deux autres laits pour lesquels on s’est contenté de 
doser la chaux et l'acide phosphorique. 


Lait du Lait de Neuchâtel- 


Cantal. en-Bray. 
RS 5 Lis re Le PR APN LE EM ER EE 0,055 0,070 
AGidesphosphoriques ere ere 0,090 0,131 


Ce dernier lait s’était un peu acidifié pendant la filtration, 
ce qui a augmenté les quantités de chaux et d’acide phosphorique 
dans le liquide filtré. Mais on peut voir que le rapport est à peu 
près le même que dans les autres, et que partout les proportions 
de chaux et d’acide phosphorique sont telles qu’envisagées sépa- 


5 


rément, elles donneraient un corps de formule, 3 Ca 0, 2 P' O*. 

La formule de ce corps fait venir à l'esprit l’idée d’un 
mélange de phosphate bibasique et de phosphate monobasique 
de chaux, mais alors les cendres devraient être acides. Or elles 
sont constamment alcalines, et leur alcalinité, dans tous les 
laits du Cantal que j'ai étudiés, correspond à peu près à la moitié 
de l'acide phosphorique présent. Dans le cas du lait analysé 
plus haut, et contenant dans sa partie filtrée 0,096 d'acide phos- 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 13 


phorique, les cendres ont élé lavées, et le liquide de lavage exi- 
geait, pour être amené à saturation, l'équivalent de 0f,045 
d'acide phosphorique. Il y avait donc de l’aleali libre, soit de la 
potasse, soit de la soude, et comme le phosphate tribasique de 
soude est précisément alcalin, et se comporte vis-à-vis de la tein- 
ture de tournesol comme s’il contenait environ le tiers de sa 
soude à l’état libre, c’est-à-dire une molécule de soude pour une 
molécule d'acide phosphorique, cette coïncidence paraîtra sans 
doute suffisante pour faire admettre, dans les cendres du lait 
filtré, la présence du phosphate tribasique de soude. 

La quantité de ce phosphate tribasique correspondant à 
02,045 d'acide phosphorique est de ü:r,104. A l’aide de la 
réaction du chromate de potasse, on a trouvé en outre 0,140 de 
chlorure de sodium ; nous retrouvons donc, sur les 05,455 de 
cendres provenant de la calcination du liquide filtré: 


Bhosphatenderchaux eee st RE A ee en sr,107 
— DOS OU OR RS RE RE RU 08r,104 
Gnorurerde SOU ARE ER RE M RE een 246 Osr,140 
SOUTENUE AR Me ep Un, LES CARTIER ER O8r,351 


Nous sommes donc à peu près fixés sur la nature des 3/4 des 
éléments salins du lait filtré. Il est bien entendu que nous ne 
voulons pas dire que tous ces sels existent en nature dans le 
lait, car le mode de groupement des éléments nous est inconnu, 
mais seulement que les cendres du lait se comportent, non seu- 
lement quant à leur composition, mais quant à leur réaction 
sur les papiers colorés, comme contenant, dans les proportions 
indiquées, trois sels qui sont très répandus dans le monde vivant 
et dans les végétaux alimentaires de la vache. 

Cette interprétation à son tour n’est pas complète : elle est 
passible de deux objections. En premier lieu, elle fait intervenir 
du phosphate de soude qui estalcalin, en proportions qui ne sont 
pas négligeables, car elles atteignent un gramme par litre. Le 
lait devrait dès lors avoir une réaction alcaline ; or il est légè- 
rement acide. De plus nous ne comprenous pas comment le 
phosphate tribasique de chaux de la formule ci-dessus peut être 
en solution dans le liquide de filtration. Cette double objection 
disparaît quand on se souvient que Soxhlet a démontré dans le 
lait l’existence d’un peu d’acide citrique, dont les proportions 


14 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sont voisines de { gramme par litre. C'est évidemment cet acide 
citrique qui, combiné avec la soude que nous retrouvons libre 
après calcination, maintient en solution le phosphate tribasique 
de chaux. Dès lors, le phosphate tribasique de soude de nos 
cendres repasse dans le lait à l’état de phosphate bibasique, et 
nous arrivons à cette conclusion que le lait analysé ci-dessus 
contient dans sa partie soluble des nombres à peu près égaux 
de molécules de phosphate tribasique de chaux, de phosphate 
bibasique de soude et de citrate de soude. Telle est au moins 
l'interprétation la plus légitime des nombres qui précèdent. Il 
restera à voir si elle est vraie pour tous les laits, 

En résumé, si on généralise les notions fournies par cette 
étude, nous voyons que le lait contient, comme éléments inso- 
lubles, des phosphates de fer, d’alumine, de magnésie et de 
chaux. Sa partie soluble se comporte comme si elle contenait le 
même nombre de molécules, ou à peu près, de phosphate triba- 
sique de chaux, de phosphate neutre de soude, et de citrate de 
soude. Il est très remarquable aussi que dans tous les laits étu 
diés, il y ait environ deux fois plus de chaux dans la partie 
insoluble que dans la partie soluble, et que le phosphate de 
chaux en solution soit environ la moitié du phosphate de chaux 
en suspension. 

Il est clair qu'aucune de ces dernières relations ne peut être 
bien précise, puisque la proportion de phosphate de chaux en 
solution et en suspension varie suivant le degré d’acidité. Mais il. 
n’en est pas moins curieux de les voir approximativement réali- 
sées : cela témoigne, pour le lait, d’une constance de composition 
minérale sur laquelle nous allons revenir tout à l'heure. 

Il y a à tirer de là une conclusion pratique, c'est que l’addi- 
tion au lait d’un phosphate soluble ou insoluble troublerait cet 
équilibre en faisant prédominer soit le phosphate en suspension, 
soit le phosphate en solution. Un gramme par litre de phos- 
phate de soude ordinaire ferait varier du simple au doubie le 
rapport du phosphate de chaux à celui du phosphate de soude 
dans le lait filtré. Du phosphate de chaux pulvérisé, introduit 
en nature dans le lait, tomberait rapidement au fond, et serait 
reconnaissable au microscope. On est donc armé vis-à-vis de 
ces deux formes de falsification. 

Voyons maintenant ce que donnent, au point de vue de leurs 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 15 


sels en solution, les laits phosphatés dont nous avons parlé tout 
à l'heure, et dans lesquels on s’est appliqué,en modifiant la nour- 
riture de la vache, à changer la composition des cendres du lait. 
L'analyse citée, pp. 11 et 12,montre que celaitestun peuplusriche 
quele lait du Cantal, mais dans une proportion très faible. Ce qui 
semble y avoir le plus augmenté, ce sont les sels solubles de 
potasse ou d2 soude. Deux autres laits, vendus comme laits 
phosphatés naturels, se tiennent au niveau de celui qui précède, 
ou même à un niveau inférieur. Je n'ai pas fait leurs aaalyses 
complètes. Je me suis contenté de déterminer la chaux et l'acide 
phosphorique dans le lait entier et dans le lait filtré. Il ne s’est 
révélé, par comparaison avec les laits normaux, aucune diffé- 
rence marquée dans la compositon générale, ce qui met hors de 
doute la bonne foi des producteurs. Mais en même temps ces 
laits n’ont montré, en ce qui concerne leurs phosphates solubles 
ou insolubles, aucune supériorité sur les laits naturels. Pour 
qu'on en puisse juger, je donne la richesse en chaux et en 
acide phosphorique de 100 c. c. de chacun de ces laits, pris dans 
leurs flacons de vente. Je place à côté un lait du Cantal, diffé- 
rent de celui dont il a été question plus haut. 


Lait no {. Lait no 2. Lait no 3. Lait du Cantal 


CHAUX PAPE MN, RS 0,182 0,189 0,168 0,182 
Acide phosphorique ....... 0,227 0,224 0,194 0,220 
Éléments non dosés ....... 0,347 0,337 0,388 0,346 

HOTATE APE RS Ee 0,756 0,750 0,750 0,748 


Deux de ces laits phosphatés sont un peu plus riches que 
celui du Cantal, un est plus pauvre. Mais tous sont infidèles aux 
promesses de leur étiquette: aucun ne justifie les hauts prix 
auxquels ils sont vendus, et quelle que soit la conscience avec 
laquelle les producteurs font avaler à leurs vaches des phos- 
phates pulvérisés, il n’est aucan de ces laits qui ne puisse être 
argué, devant un tribunal, de tromperie sur la nature de la mar- 
chandise vendue. 

Rien que le chiffre relatif à la proportion de cendres avertit 
du reste que la composition de ces laits n’est pas éloignée de la 
composition normale ; ce chiffre de 0,75 0/0 de cendres présente 
une grande constance dans les laits que j'ai étudiés, et dont 
j'étais sûr. Ses variations sont beaucoup plus faibles que celles 
de l’un quelconque des autres éléments du lait, si bien que ce 


16 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


serait peut-être par l'étude des cendres qu’on serait le plus sûr 
d'atteindre les falsifications. Cette régularité dans la richesse en 
cendres se retrouve dureste dans la composition de ces cendres. 
Pour le démontrer, je rassemble dans un tableau commun tous 
les laits analysés dans le présent travail, phosphatés ou non. Et 
comme la discussion faite ci-dessus nous autorise à considérer 
comme étant à l’état de phosphate de chaux toute la chaux con- 
tenue dans le lait, j'ai inscrit ce sel dans mes analyses. L’acide 
phosphorique excédent est en grande partie, nous le savons, à 
l’état de phosphate d’alumine, de fer, de magnésie et de soude: 
quant aux autres matières minérales, elles sont comptées en 
bloc dans tous les laits, même dans ceux pour lesquels l’analyse 
en a été faite. 


Lait du Lait de Lait de Lait Lait 
Cantal. Norvège. Normandie. phosphaté 1. phosphaté 2. 
Phosphate de chaux...... 0,337 0,329 0,311 0,336 0,350 
Ac. phosph. en excès .... 0,065 0,062 0,051 0,073 0,063 
AUILES :S61S 2 ere 0,346 0,379 0,388 0,357 0,337 
MOTAUX PRE he 0,748 0,750 0,750 0,766 0,750 


Des laits de diverses provenances et ayant subi des traite- 
ments divers ont donc de grandes analogies de composition. 
Je pourrais trouver d’autres exemples, en puisant dans les 
travaux déjà publiés sur la matière, dans ceux de Süldner, en 
particulier, qui a poussé le détail des analyses plus loin qu’au- 
cun de ceux qui l'ont précédé, et avec lequel je m’accorde sur 
les chiffres moyens fournis par l'analyse. Si je m'en sépare tout 
à fait au point de vue de l’interprétation à donner à ces chiffres, 
j'attribue la différence à ce que Süldner, au lieu d'opérer com- 
parativement sur le lait entier et sur le lait filtré à la bougie, a 
opéré sur le lait et sur son sérum après coagulation, ce qui change, 
dans une large mesure, la distribution des éléments en solution 
et en suspension. 

Il me reste, pour terminer, à relier les résultats qui pré- 
cèdent à ceux de mes travaux antérieurs dans lesquels je me 
contentais de précipiter par l’ammoniaque la liqueur acide 
obtenue en dissolvant les cendres dans l'acide acétique addi- 
tionné d’une goutte ou deux d’acide chlorhydrique étendu. Dans 
les trois laits dont l’étude complète a été faite, on aurait dû 
avior, dans ce précipité : 


SUR LES PHOSPHATES DU LAIT. 17 


Lait du Lait de Lait 

Cantal. Norvège. phosphaté. 
Phosphate de fer et d’alumine.......... 0,002 0,010 0,002 
— de'rhapnésie. otre ni 0,039 0,037 0,042 
== (8 LEE ET PCA TR TE TE 0,320 0,329 0,336 
MAOTAUET SN ANR Rte Et de 0,361 0,376 0,380 


Or. le traitement par l’'ammoniaque a donné les nombres suivants : 
0,350 0,375 0,375 


Le précipité par l'ammoniaque, obtenu dans les conditions 
indiquées, contient donc des phosphates de magnésie, de fer et 
d'alumine mélangés au phosphate de chaux. On peut donc se 
contenter de cette méthode simple de dosage pour apprécier la 
rapidité avec laquelle les phosphates en suspension se dissolvent 
dans un lait qui s’acidifie peu à peu. En recueillant pour ce lait 
le liquide qui s'écoule au travers du filtre, on peut assister à 
l'augmentation progressive du précipité obtenu par l’ammo- 
niaque dans le résidu de la calcination dissous dans un acide, 
et quand ce précipité est devenu aussi abondant que dans le lait 
total, c’est que tout ce qui était en suspension est arrivé à l’état 
de solution. Avec un lait de Paris, j'ai trouvé qu'il n’y avait 
plus que des traces de phosphate en suspension, quand le liquide 
filtré contenait seulement 05,45 d'acide lactique par litre. Le 
lait devaiten contenir un peu plus; mais n'importe, ces chiffres 
témoignent qu'il suffit d’une très faible acidité pour changer 
notablement le rapport entre le phosphate en suspension et le 
phosphate dissous; et voilà pourquoi il est nécessaire de suivre 
la recommandation que j'ai faite plus haut, de n’opérer que sur 
du lait maintenu au froid ou gardé stérile. 


19 


ÉTUDE BACTÉRIOLOGIQUE DU CHOLÉRA 


OBSERVE À L'HOPITAL SAINT-ANTOINE EN 1892 


Par MM. LESAGE ET MACAIGNE. 


Durant la dernière épidémie de choléra, qui sévit sur Paris 
et ses environs, 251 malades furent soignés à l'hôpital Saint- 
Antoine, dans le service de M. le professeur Hayem. 

Nous avons pu étudier, au point de vue bactériologique, 201 de 
ces cholériques. Nous diviserons notre travail en trois parties : 
dans un premier chapitre, nous étudierons les caractères des 
matières fécales, la nature des microbes qu’elles contenaient, 
ainsi que leurs formes et leurs associations ; dans un second 
chapitre, nous relaterons l’analyse des cas suivis de guérison, 
et dans un troisième chapitre, l'analyse des cas suivis de mort, 
soit dans la période d’algidité, soit dans la période de réaction. 


I 


CARACTÈRES DES MATIÈRES FÉCALES 


Celles-ci présentaient les caractères suivants, dans ces 
201 cas : 

52 fois, elles étaient riziformes, tantôt très aqueuses, conte- 
nant en suspension des flocons grisätres, tantôt formées d’une 
bouillie grise, dont les éléments épithéliaux étaient la base ; 

56 fois, elles étaient vertes, biliaires, cette couleur étant due 
à la biliverdine, ainsi que nous avons pu nous en assurer par 
les réactions chimiques ; 

83 fois, elles n'avaient aucun caractère spécial : elles étaient 
de coloration jaune et d'aspect fréquemment glaireux : 

10 fois, elles présentaient une teinte rouge, dysentérique, 
due à du sang en nature. 


ÉTUDE BACTÉRIOLOGIQUE DU CHOLÉRA. 19 


La réaction de ces matières, quel qu’en soit l'aspect. est dans 
la majorité des cas légèrement alcaline, quelquefois neutre, 
exceptionnellement légèrement acide au début de la maladie. 

Nature des microbes. — Quel que soit l'aspect de ces matières 
fécales, l'étude bactériologique montre que la faune microbienne 
varie et n’a aucune relation avec cette coloration. 

Nous pouvons cependant réunir sous quatre types principaux 
les divers microbes observés chez ces cholériques. 

Mais auparavant, ajoutons que jamais le bacille virgule n'a été 
observé en culture pure, dans ces matières fécales. Dans beaucoup 
de cas, ilest vrai, ce microbe y existait en grande quantité, 
mais {oujours avec lui on notait la présence d’autres microbes. 


1e type. — Coexistence du B. virgule et du B. coli, à l'exclu- 
sion de tout autre microbe. 

2e type. — Coexistence du B. virqule, du B. coli, et d’autres 
microbes, en quantité minime par rapport aux deux premiers. 

3e type. — Présence du B. coli pur, à l'exclusion de tout 
autre microbe et du B. virqule. 

4e type. — Coexistence du B. coli et de divers microbes, à 


l'exclusion du B. virqule. 

Dans les deux premiers groupes, le B. virgule existait en 
quantité variable : tantôt prédominant sur tous les autres, {en- 
dant à la culture pure, tantôt en quantité moyenne, tantôt en 
quantité minime, et dans ce cas, sa recherche est des plus diffi- 
ciles, tant sur les lamelles qu’en culture. 

De l'absence de relation entre le nombre des bacilles virgules et la 
gravité de la maladie. K n'existe aucun rapport entre le nombre 
de bacilles virgules et la gravité de la maladie. 

Ainsi, en prenant la totalité des cas observés, sur 201 cas, 
tant suivis de guérison que de mort, nous en avons noté 20 où 
le B. virgule était en très grande quantité, et qui ont donné 
14 guérisons et 6 morts. 

109 fois, ce bacille était en quantité moyenne : 61 guérisons 
et 48 morts. 

24 fois ce microbe était en pelite quantité (recherche difficile) : 
16 guérisons et 8 morts. 

On voit done qu'il n'existe aucun rapport entre le nombre 
des bacilles virgules et la gravité de la maladie. De même, au 
sujet de la forme clinique et de la durée de l'affection. Rien n'est 


20 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


fixe à ce sujet. Nous avons observé des formes algides prolongées, 
des formes foudroyantes et des formes algides courtes, chacune 
avec beaucoup ou moyennement de B. virgules. 

Bien plus, nous avons observé des formes légères de cho- 
léra (3 fois), de véritables diarrhées cholériformes, qui présen- 
taient une très grande quantité de bacilles virgules, à tel point 
que la lamelle en était couverte, et que l’on aurait pu croire à 
une culture pure de ce microbe. Inversement, comme nous le 
disons plus bas, dans bon nombre de décès cholériques, nous 
avons noté peu de B. virqules. 

De cela nous pouvons conclure: 4) que le nombre de ces 
microbes n’est pas en relation avec la gravité de la maladie: 
b) que l’on observe des cas graves ou légers, avec une grande 
quantité de ces bacilles; c) et des cas graves ou bénins, avec ce 
microbe en minime quantité. 

De ces faits, nous rapprochons volontiers les expériences 
récentes que MM. von Pettenkofer et Emmerich : ont faites sur 
eux-mêmes, et qui ont consisté dans l'ingestion de cultures 
pures de bacilles virgules venant de Hambourg. M. von Petten- 
kofer a avalé, deux heures et demie après son premier déjeuner, 
1 centimètre cube d'une culture pure récente de B. virgules 
dans un verre d’eau contenant 1 gramme de bicarbonate de 
soude, destiné à neutraliser l’acide chlorhydrique, qui, se 
trouvant encore dans l'estomac, aurait pu empêcher le dévelop- 
pement des bacilles. A la suite de cette ingestion, il ne survint 
chez lui qu’une légère diarrhée avec gargouillements, mais sans 
coliques, sans nausées ni vomissements, et sans aucun trouble 
de l’état général. Et pourtant l'examen bactériologique des 
déjections y décela la présence de bacilles cholériques en grand 
nombre. Mèmes résultats dans l'expérience de Emmerich. 

Ces savants concluent de ces faits, que le bacille virgule de 
Koch ne produit pas, en se développant dans l'intestin, le virus 
spécilique du choléra asiatique. Guttmann relate aussi des faits 
de diarrhée simple contenant des bacilles virgules nombreux. 

Ces faits montrent qu’en matière de choléra, il ne faut pas 
compter avec la quantité de bacilles, et qu'une culture abon- 
dante peut ne donner qu'une diarrhée simple, alors qu'une cul- 


1. Société de médecine de Berlin, 1892. 


ÉTUDE BACTÉRIOLOGIQUE DU CHOLÉRA. 21 


ture légère peut provoquer des accidents graves. Tout semble 
dépendre de la virulence et non du nombre des microbes pré- 
sents. De cela n'avons-nous pas un exemple net, avec le B. coli qui. 
en prenant de la virulence, peutoccasionner de graves accidents. 

Il y a donc, dans le choléra avec présence du bacille virgule, 
une inconnue qui n’est pas encore dégagée. Si la gravité de la 
maladie n’a aucun rapport avec le nombre de B. virqules, de 
quoi ressortit-elle? Est-ce de la virulence variable de ce 
microbe ? Est-ce de l'association du B. virgule et du B. coli, ou 
du staphylocoque, ou du streptocoque? Est-ce de la virulence 
variable de chacun de ces microbes mélangés? Nous l’ignorons 
totalement. 

En tout cas, le fait qui nous a frappé le plus est tiré de 
l'observation clinique. La gravité, d’une façon générale (à part 
la question du choléra sec), est fréquemment en relation intime 
avec l'intensité de la diarrhée et des vomissements, et à propos 
de ces derniers, dépend non pas tant de la quantité de liquide 
rejeté, que des efforts et des troubles secondaires qu'ils entrai- 
nent. Nous n’étudierons pas ces faits cliniques dans ce travail, 
qui est purement bactériologique. Notre conclusion actuelle est 
qu'iln'existe cucun rapport entre le nombre des bacilles virqules et la 
gravité de la maladie. Ceci est un point démontré, tant par nos 
recherches que par les expériences récentes de Pettenkofer, 
Emmerich et Guttmann. L'’explication de ces faits sera fournie 
probablement par l’étude de la virulence du bacille virgule. 
Virulence et végétabilité sont en effet deux choses différentes, 
pouvant exister séparément. 

De l'absence du bacille virgule dans un certain nombre de cas. — 
Sur 201 cas, nous avons constaté 45 fois l’absence du bacille 
virgule, bien que nous l’ayons recherché avec soin el à plusieurs 
reprises chaque fois. Et ces cas ont été suivis de mort ou de 
guérison, sans qu'au point de vue clinique, on puisse les diffé- 
rencier des précédents. Nous avons observé des formes graves 
ou légères, sans bacille virgule, comme nous avons plus haut 
relaté des cas graves ou légers avec présence de ce microbe. 
Tantôt nous trouvons le B. coli seul (15 cas); tantôt ce microbe 
associé à du staphylocoque, à du streptocoque, à du bacille pyo- 
cyanique, pour ne citer que les priucipaux (30 cas). 

De quoi relève, dans ces cas, la maladie cholérique ? Quand 


22 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


le B. coli existe seul, nous pouvons admettre que les cas de 
choléra de cette variété sont, en tous points, identiques aux 
cas étudiés dans ces dernières années‘, et intitulés: choléra 
à B. coli. Nous ne revenons pas sur ces faits, que l’on attribue à 
une augmentation de la virulence du B. coli normal. Mais pour 
les formes polybactériennes de choléra sans virgule, à quoi est 
due la maladie? Au B. coli, au staphylocoque, au streptocoque ? 
Nous l'ignorons. Peut-être dans ces cas, le bacille virgule avait-il 
une vitalité faible, et avait-il disparu au moment de l'examen. 
Ce qu'il faut retenir de ces faits, c'est que ces variétés de 
choléra sans B. virgule peuvent être légers ou graves, suivis de 
guérison ou de mort. 

Nous voulons insister d'autre part sur ce qui suit : les cas 
de choléra sans B. virqule ont été observés en même temps et 
durant toute l'épidémie, à côté des cas où existait le B. virgule. 
La clinique était impuissante à distinguer ces deux variétés 
de choléra; seul l’examen bactériologique pouvait établir la 
distinction. 

Et ceci a son importance. On a dit en effet: le choléra est 
d'origine asiatique, quand le B. virgule se rencontre dans 
l'intestin. Il est choléra du pays, ou nostras, quand ce microbe 
manque. S'il en est ainsi, quelle est la nature de l'épidémie que 
nous avons observée? Ces mots d’asiatique, de nostras, masquent 
notre ignorance, et au lieu de dire : l'épidémie de 1892 est un 
mélange de choléra asiatique et de choléra nostras, comme 
nous pourrions le déduire de nos recherches, disons simplement : 
cette épidémie est une épidémie de choléra, qui semble relever 
de plusieurs types bactériens : choléra à B. virgule, choléra à 
B. coli, choléra polybactérien, toutes variétés que la clinique 
ne nous permet pas de dépister, car toutes se ressemblent dans 
leurs diverses formes, foudroyantes, légères et graves. 

Étude des vomissements. — On y trouve le plus souvent le 
B. coli, assez souventle Z. virgule, et parfois le B. fluorescens, qui 
donne une teinte verte aux déjections. 

Morphologie. — Le bacille virgule, que nous avons observé, 
affecte des formes variables. Tantôt petit et court, tantôt allongé, 


1. Macaigne. Etude sur le Baclerium coli, 1892. — Lesage. Société médicale des 
hôpitaux, 1892. 


ÉTUDE BACTÉRIOLOGIQUE DU CHOLÉRA. 23 


il présente une épaisseur variable, mais il affecte toujours une 
disposition arquée, soit en son milieu, soit à une de ses extré- 
mités. En un mot, il est variable au point de vue de sa largeur 
el de sa longueur, mais malgré ces variations, il reste bacille vir- 
qule dans tous les cas. Si nous nous contentions de la forme, 
nous serions obligés, d’après nos examens, de faire six variétés 
de bacille virgule. La forme n'a aucune valeur dans l'espèce, 
sauf toutefois la disposition arquée. 

Dans un certain nombre de cas, nous avons trouvé le bacille 
virgule en S; dans d’autres, la forme allongée, filamenteuse 
avec ondulations. 

Lebacille virgule a toujours présenté ses caractères classiques 
de culture, qui sont stables. Cependant dans quelques cas le 
bacille présentait une vitalité faible, suivie de mort rapide. 

Même polymorphisme pour le B. coli, qui ne présente ic 
aucun caractère spécial. Cependant, dans bon nombre de cas, 
le B. coli isolé poussait à peine, et donnait de faibles cultures. 

Parmi les microbes que l’on rencontre unis au précédent, 
avec ou sans B. virqule, nous signalons le plus fréquent, le 
staphylococcus albus, rarement l'aureus. Avec le B. coli et le 
B. virqule, on peut dire que c'est le microbe le plus fréquemment 
observéchezlescholériques.[Ine présente aucun caractère spécial. 

Signalons, dans lescas de choléra polybactérien, la présence, 
outre le B. coli et le staphylococcus, qui forment la base de la 
bactériologie du choléra, le streptocoque à gros grains, qui dans 
un cas était très abondant (ce cas peut être rapproché de faits 
observés en Allemagne, où on ne trouva que le streptocoque). 
Dans notre observation, il était accompagné par le B. coli. 

Signalons la présence dans quelques cas, du B. pyocyanique. 
du B. fluorescens liquefaciens, du B. fluorescens non liquefaciens où 
putridus. Ces divers microbes existaient en minime quantité, dans 
quelques cas, surtout dans les formes polybactériennes. 

Isolement. — Le B. virgule, dans les cas où il est très abon- 
dant, est facile à isoler; mais il n’en est pas de même s’il l’est 
peu. Dans ce cas, son isolement nécessite un travail continu et 
rapide. En effet, il faut alors compter avec la rapidité et l’in- 
tensité de la culture du B. coli, d’une part, et d’autre part avec 
les microbes liquéfiants (staphylococcus, etc.), qui entravent la 
culture du B. virgule. 


[RS 
re 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


En premier lieu, nous avons suivi la méthode classique : 
rejeter le liquide diarrhéique, où le B. virgule est noyé dans la 
masse des autres microbes, et ne prendre, pour la culture, que 
les grumeaux et les flocons riziformes. Nous avons employé la 
méthode de Koch : isolement par dilution; mais les résultats 
que nous avons obtenus sont inférieurs aux résultats que 
nous donne la méthode dite de Schüttelius. Celle-ci nous paraît 
préférable, surtout durant une épidémie, pendant laquelle on 
est surchargé de travail. 

Nous avons employé ce procédé de la manière suivante : 

Dans un cristallisoir ou verre à pied, on verse un tiers de 
matières fécales (parties solides, grains riziformes), et deux tiers 
de bouillon ordinaire ou de jus de viande légèrement alcalin. 
On place le tout à l’étuve à 37°. Le bacille virgule étant très 
avide d'oxygène, donne rapidement, en 6 à 12 heures, une pelli- 
cule superficielle qui est formée en grande partie de bacilles vir- 
gules, quelquefois même d’une culture pure. À ce moment, on 
prend une partie minime de ce voile, et on l’ensemence alors 
par étalement, avec les précautions d’asepsie requises, soit sur 
gélatine, soit sur gélose. Cette dernière est préférable pour le 
premier isolement. On obtient ainsi des cultures de bacilles de 
Koch. 

Nous avons fréquemment fait une seconde épreuve, dite de 
Schüttelius, en prenant la totalité du voile et en le mélangeant 
avec du bouillon, suivant le procédé sus-indiqué. Ce second 
voile ainsi obtenu est souvent plus pur que le premier. 

Il est bon de reprendre le voile dans les douze heures, sinon 
d'autres microbes (B. coli, etc.) viennent infecter la culture de 
B. virgules. Une pellicule, bonne à la douzième heure, perd de ses 
qualités dans la suite. Tel est le procédé qui nous paraît être le 
meilleur, dans l’état actuel des choses. 


Il 


ÉTUDE DES CAS DE CHOLÉRA SUIVIS DE GUÉRISON 


Dans le chapitre précédent, nous sommes restés dans Îles 
généralités qui s'appliquent à toute notre étude. Nous allons 
maintenant étudier en détail les cas de choléra suivis de guéri- 


ÉTUDE BACTÉRIOLOGIQUE DU CHOLÉRA. 25 


son ou de mort. Nous avons étudié 95 cas suivis de décès et 
106 cas suivis de guérison. Ces 106 cas se divisent de la façon 
suivante : 


à UQUIE CUBE ICO RE NES ANS 29 cas 


B 

B:oviroules:B':cohr'et'divers 722 MR Et 62 — 
D COUT. SR RS PERTE Tor Rs 3 — 
B. coli et divers, sans B. virgule. ........ 12 — 


D'après ce tableau, on voit que le bacille virgule a été 
observé dans la majorité des cas. Ainsi que nous l’avons dit 
plus haut, ce bacille est en quantité variable et, dans 3 cas, il 
existait en {rès grande quantité. 


Ill 


ÉTUDE DES CAS MORTELS 


Nous avons étudié 95 cas suivis de mort; 47 cas ont été étu- 
diés seulement au point de vue de l'intestin. Aucune recherche 
n'a pu être faite, faute de temps, sur l’état d’envahissement des 
autres organes. Ces 47 cas se décomposent de la façon sui- 
vante : 


B. virgule et B. coli seul, ou uni à divers microbes 34 cas 
BCCOPSDAETS CRE RE CE RCA RES EN T1 — 
B. coli et divers, sans bacille virgule... ......... 6 — 


48 cas ont été étudiés plus complètement, c'est-à-dire que 
nous avous recherché l’état de l’envahissement, par les microbes, 
des organes en dehors de l'intestin. Les résullats varient, sui- 
vant que l’autopsie a été faite de suile après la mort (temps néces- 
saire pour transporter le cadavre à l’amphithéâtre), ou quelques 
heures après; d'autre part, suivant que le cholérique est mort en 
période d'algidité où en période de réaction. Sur ces 48 cas, 
14 étaient des cholériques morts en algidité et autopsiés de 
suite après la mort. L'intestin contenait : 

71 fois le B. virgule uni au B. coli ou à divers microbes; 

3 fois le B. coli pur; 

4 fois le B. coli et divers microbes sans B. virquie. 

Quel que soit l’état bactériologique de l'intestin, les organes 
ne présentaient aucun microbe décelable par les procédés ordi- 


26 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


naires. En un mot, aucun envahissement cadavérique (bile, foie, 
sang, rate). L'intestin est le seul milieu où existentles microbes. 

Donc, à la période d’algidité et à la mort, il n'existe pas 
d’envahissement des organes, quelle que soit la durée de l’al- 
gidité. 

En regard de ces cas, voici 31 autopsies de cholériques morts 
en période d’algidité, faites à partir de deux heures après la 
mort. Ces 31 cas se divisent de la façon suivante : 

21 fois le B. virgule était uni au B. coli seul ou à d’autres 
microbes; 

8 fois on constatait le B. coli et divers microbes, sans 
B. virgule : 

2 fois le B. coli existait seul. 

Quand l’autopsie a été pratiquée 2 heures après la mort et 
avant 4 heures (13 cas), nous avons trouvé un envahissement 
cadavérique localisé au foie et à la bile, alors que les autres 
organes étaient indemnes de toute culture. Dans ces cas, le foie 
et la bile contenaient le B. coli: dans deux cas, la bile était sté- 
rile cependant, alors que le foie était envahi, comme si la voie 
sanguine était plus rapide que la voie biliaire. Après 4 heures 
(18 cas), nous avons toujours noté l’envahissement cadavérique 
de tous les organes : 8 fois par le B. coli seul ; 3 fois par le B. coli 
et le staphylocoque : À fois par le B. coli et le B. pyocyanique : 
3 fois, outre ces divers microbes, nous avons noté l’envahisse- 
ment total du corps par le B. virgule. Dans 3 autres cas, alors 
que l’envahissement total du corps (sauf la bile) était dû au 
B. coli, nous avons noté un envahissement, localisé à la bile, 
exclusivement par le B. virqule, qui était en culture pure. 

Concluons en disant : Chez les cholériques algides, l’enva- 
hissement commence, dès deux heures après la mort, par le foie 
et la rate, puis devient total dès la quatrième heure. Dans cet 
envahissement cadavérique, le B. coli et le staphylocoque sont 
les microbes rencontrés, soit isolément, soit réunis, quel que 
soit le milieu bactériologique de l'intestin. 

En tout cas, les microbes d’envahissement étaient toujours 
en grande quantité dans l'intestin et appartiennent au groupe 
des microbes mobiles. 

Quant au bacille virgule, on le trouve exceptionnellement dans 
les organes, en dehors de l'intestin. La bile en coutient parfois, 


ÉTUDE BACTÉRIOLOGIQUE DU CHOLÉRA. 97 


mais rarement. On voit donc par ces faits l'importance du temps 
écoulé depuis la mort, pour l'étude de l’envahissement cadavé- 
rique. 

Étude de la réaction cholérique.— Nous avons pu pratiquer, de 
suite après la mort, trois autopsies de cholériques morts en 
période de réaction, et, dans chacun de ces cas, nous avons ob- 
servé l’envahissement des divers organes par le B. coli. Or, 
nous avons vu plus haut que le cholérique mort en état d'algi- 
dité ne présentait aucun envahissement des organes quand 
l’autopsie était pratiquée immédiatement après la mort. 

Qu'il y ait ou non du B. virgule dans l'intestin, les organes, 
durant la période de réaction, sont envahis par le B. coli. C’est 
de cette infection secondaire que paraissent relever les symp- 
tômes dits de réaction (fièvre, etc.). Durant la vie, nous avons 
étudié le sang de ces malades : nous n'avons pu y déceler la pré- 
sence de microbes. 


CONCLUSIONS 


1° Il a existé, dans l'épidémie de choléra observée à l'hôpital 
Saint-Antoine, plusieurs variétés microbiennes de choléra 
qu'il était impossible de distinguer cliniquement (choléra à 
B. virgule, choléra à B. coli, choléra polybactérien sans B. vir- 
qule) ; 

2° Dans la première variété, le B. virqule n’a jamais été 
observé pur. Il était uni au B. coli ou à divers autres microbes; 

3° Un certain nombre de cas peuvent être rapprochés des cas 
décrits sous le nom de choléra à B. coli : 

49 Il n'existe aucun rapport entre le nombre des bacilles vir- 
gules et la gravité de la maladie. Une diarrhée simple peut con- 
tenir une culture abondante de bacilles virgules ; 

5° La gravité et la légèreté de la maladie sont observées dans 
ces diverses variétés bactériologiques. La présence du bacille 
virgule n’est pas nécessaire ; 

6° L’envahissement cadavérique se fait progressivement dès 
les premières heures après la mort (choléra algide) ; 

1° La réaction cholérique parait être une infection secon- 
daire par le B. coli, dont on constate la présence immédiate- 
ment après la mort dans les divers organes. 


NUR LES ÉCHANGES D'ACIDE CARBONDQUE ET D'OXYHÈNE 
ENTRE LES PLANTES ET L'ATNOSPHÈRE 
Par M. TH. SCHLOESING rizs () 


On a beaucoup étudié les échanges d'acide carbonique et 
d'oxygène ayant lieu entre les plantes et l'atmosphère. D'émi- 
nents physiologistes ont produit sur ce sujet, il y a longtemps 
déjà et aussi 1l y a quelques années, des travaux considérables 
et bien connus, dans lesquels ils ont tantôt cherché à distinguer 
Ja respiration el l'assimilation de carbone, tantôl considéré 
l’ensemble de leurs effets. Leurs expériences ont toujours été, à 
ma connaissance, exécutées non sur des plantes entières, mais 
sur des parties de plantes, plus ou moins étendues, le plus 
souvent séparées des sujets auxquels elles appartenaient ; très 
généralement elles n’ont eu et n’ont pu avoir qu’une durée fort 
limitée ; de plus il est arrivé qu’elles ont conduit à des résultats 
contradictoires. Pour ces raisons, il ne serait pas possible d’en 
tirer la réponse à une question qui intéresse à un haut dégré la 
nutrition végétale : quelle est, pour une plante entière et pour 
une longue période ou mème toute la durée de son existence, la 
résultante des échanges d'acide carbonique et d'oxygène qu’elle 
effectue avec l’air ambiant ? Combien d'oxygène dégage-t-elle 
pour un volume donné d’acide carbonique qu’elle fait disparaître ? 

Telle est la question à laquelle se rapportent les recherches 
qui vont être exposées. Je l’ai abordée par la méthode qui m'a 
paru la plus directe et qui consiste à faire vivre des plantes en 
vases clos et à étudier les variations de l’acide carbonique et de 
l’oxygène enfermés avec elles. 


ExPÉRIENCES I Er II. 


J'ai d'abord employé aux expériences l'appareil qui nous a 
servi, à M. Laurent et moi, dans nos recherches sur la fixation 


1. Comptes rendus des séances de l’Académie des Sciences, t. CXV, p. S81 et 1047. 


ÉCHANGES GAZEUX DES PLANTES ENTIÈRES. 29 


de l'azote libre par les plantes ‘. Mais, dans ces recherches, on 
n'avait à mesurer, en fait de gaz, que l'azote. Ici, il fallait aussi 
déterminer l'oxygène et l'acide carbonique. De là de notables 
modifications dans la manière d'opérer. 

Les graines une fois semées, l'appareil est clos hermétique- 
ment et le vide y est fait. On ne peut, pour en enlever les 
dernières traces d’air, recourir à des lavages à l'acide carbonique, 
comme dans les recherches qui viennent d'être rappelées, 
parce qu'il serait plus fâcheux encore d'y laisser de l'acide 
carbonique que de l’air. On pousse donc le vide aussi loin que 
possible (et, avec les pompes à mercure dont je dispose, il est 
possible de ne laisser ainsi dans l’appareil qu'une bien faible 
quantité d'air), puis on purge avec la vapeur d'eau dégagée par 
le sol à la température de 28 à 30°. On introduit ensuite des 
volumes rigoureusement mesurés d'oxygène et d'azote, dans 
la proportion d'environ 20 du premier gaz pour 80 du second, et 
finalement une petite quantité, également bien déterminée, 
d'acide carbonique. 

La végétation apparaît. Dès que les parties vertes ont pris 
un développement sensible, on commence à surveiller par de 
fréquentes analyses la composition de l'atmosphère interne *. 
Par les additions d'acide carbonique et des absorptions d'oxy- 
gène, dont les analyses indiquent l'opportunité, on la maintient 
dans les limites convenables pour la vie végétale. L'acide car- 
bonique introduit est mesuré avec une très grande précision. 
Je me suis servi à cet effet, d’un petit volumètre spécial, d'une 
capacité d'environ 190 c. c., permettant d'évaluer le gaz à une 
très petite fraction de centimètre cube près. 

4. Annales de l’Institut Pasteur, février 14892. — Au fond d’une grande allonge 
en verre se trouve le sol sur lequel se déveiopperont les plantes au cours de 
l'expérience. L'allonge communique d’une part avec la partie supérieure d’une 
trompe à mercure, d'autre part avec un tube de Bohème renfermant de la tour- 
nure de cuivre et placé au-dessus d’une rampe à gaz; ce tube est lui-même reli 
avec une sorte de longue cloche qui coiffe l’orifice inférieur de la trompe. Les 
gaz puisés à la partie supérieure de l’allonge sont appelés dans la trompe, quand 
on fait fonctionner celle-ci, et renvoyés ensuite à travers le tube à cuivre à la 
partie inférieure de l’allonge ; si le tube à cuivre est alors chauffé, de loxygène 
s’absorbe: on fait ainsi disparaître l'excès de ce gaz produit par la végétation. 
Quant à l'acide carbonique nécessaire aux plantes, on lintroduit, quand il y à 
lieu, par le bas de la longue cloche. 

2. Les analyses sont faites sur des échantillons d’environ 1 c. €. de gaz; elles 


consistent à doser l’acide carbonique et l’oxygène; après chacune d'elles, on fait 
repasser dans l’appareil l’azote restant. 


30 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


A la fin d'une expérience, on extrait les gaz contenus dans 
l'appareil et l’on achève le vide en s’aidant, comme au début, 
de la vapeur d’eau émise à 30° par le sol. On recueille et lon 
mesure avec la plus grande précision la totalité des gaz; puis 
on détermine leur composition par des analyses eudiométriques 
très soignées. 

Une partie de l’oxygène ayant appartenu à l'atmosphère 
interne se trouve finalement fixée sur le cuivre. Il faut la con- 
naître avec précision. Dans ce but, le tube à cuivre est séparé 
de l’appareil; son contenu est débarrassé de toute humidité par 
un courant d'azote sec aidé d’une douce chaleur; puis l'oxyde 
de cuivre est réduit par l’hydrogène pur et l’eau formée est 
recueillie et pesée exactement; du poids de cette eau, on déduit 
celui de l'oxygène qui avait été retenu par le métal. On vérifie 
que le tube à cuivre a même poids, après la réduction de 
l'oxyde, qu’au moment où il a été mis en expérience. À ce pro- 
pos, on doit rappeler que le cuivre s’oxyde assez rapidement au 
contact de l’air humide; il est bon, pour les pesées qu'on a à 
faire du tube à cuivre au début et à la fin, de ne pas perdre le 
fait de vue. Pendant l'expérience, le cuivre a pu fixer non 
seulement de l'oxygène, mais aussi un peu d’acide carbonique; 
cet acide ne doit pas être négligé. On le recueille lors de la 
réduction finale, en faisant passer l'hydrogène dans un petit 
absorbeur à potasse, placé à la suite du tube à cuivre, et l’on 
en détermine le poids. 

Les gaz, qui ont été introduits dans l'appareil, ont éprouvé 
le contact du mercure. Ils sont loin de s’être pour cela chargés 
d’une quantité sensible de vapeur de ce métal. Il est néanmoins 
prudent d’absorber cette vapeur, pour éviter sa fâcheuse influence 
sur la végétation. À cet elfet un bâton de soufre, d'environ 
20 grammes, a été placé à l'intérieur du récipient à culture; 1l 
était suspendu par un fil de platine à l’un des tubes existant dans 
ce récipient. Les plantes n’ont jamais paru souffrir de la pré- 
sence de vapeur mercurielle. Mais on pourrait craindre que le 
soufre, subissant une faible oxydation, ne consommät de l’oxy- 
gène gazeux. Afin d'être fixé sur ce point, on a pesé, au début 
et à lafin, le bâton de soufre. On a constaté que son poids avait 
varié demoins de 4msr,5 (une fois en plus, l’autre foisen moins). Le 
soufre a donc été sans action sensible sur le volume de l'oxygène. 


ÉCHANGES GAZEUX DES PLANTES ENTIÈRES. 31 


D'après les résultats des différentes déterminations effec- 
tuées, il est facile de connaître, à la fin d’une expérience, la 
quantité totale de l'acide carbonique pris par les plantes et 
celle de l'oxygène qu'elles ont émis; on a le premier volume 
en retranchant de l'acide carbonique total introduit celui qu’on 
retrouve à la fin dans l'appareil, et le second en retranchant 
l'oxygène introduit de la somme obtenue en ajoutant celui qu’on 
retrouve finalement à l’état gazeux et celui que le cuivre a fixé. 
Mais une condition doit être satisfaite; c’est que le sol ne soit 
pas intervenu pour modifier la composition de l’atmosphère 
gazeuse en donnant, par combustion lente de sa matière orga- 
nique, de l'acide carbonique, et absorbant de l’oxygène. C'est 
pourquoi j'ai pris comme sol un sable quartzeux presqueabso- 
Jument exempt de matière organique. 

Dans chacune des expériences [ et If, on a mis en œuvre 
2,500 grammes de ce sable. On y a mêlé intimement 2%,5 de car- 
bonate de chaux et 3:,5 de phosphate bicalcique, puis 350 c. c. 
d'une solution nutritive contenant des sulfates de potassium et 
de magnésium, une très pelite quantité de sulfate ferreux et de 
l'azotate de potassium. Avant l’addition de cette solution, on a 
prélevé sur le sable 100 grammes, qui ont été stérilisés par la 
chaleur et qu’on a, après l'introduction des graines, étendus sur 
le sol en une couche uniforme; cette précaution avait pour but 
d'empêcher la production des algues ou autres végétaux infé- 
rieurs à la surface du sol. 

En réalité, le sol n’a pas été tout à fait sans action sur 
l'atmosphère interne. Une recherche ultérieure (expérience IV) 
a montré que, pendant les six semaines qu'ont duré ces expé- 
riences, 1l avait dù fournir à très peu près 12 c. c. d'acide carbo- 
nique et faire disparaître autant d'oxygène; j'ai tenu compte, 
dans les chiffres donnés ci-après, de cette petite correc- 
tion. 

Les premières expériences faites (I et 1[) ont porté sur le 
cresson à larges feuilles et la houque laineuse. Voici les chiffres 
qui s'y rapportent. 


1. Sable de Bonnevault, lavé à l'acide chlorhydrique, puis à l’eau distillée et 
chauffé vers 1000. Ce sable renferme à très peu près 99 0/0 de silice (débris de 
cristal de roche), un peu de fer, de chaux et des traces de magnésie. 


32 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Il ii 
Cresson à larges feuilles, Houque laineuse, 
semé Le 28 avril, semée le 28 avril, 
récolté le 14 juin. récoltée le 14 juin. 
Poids des grammes ele 43mer,7 Omer 
Azote gazeux mis en œuvre, 2.815 2.712500 
GOMnirolIbReEPeLPACERe ARS TACCO MIN AE RER 4,546cc,0 } , 
Lu dégagé par le sol! A 126 0 1.3830c,8 A2cc,0 j .bb8cc, 0 
EXC PR MARS NN TRES nee Re 219cc,3 570C,0 
— disparu par le fait des plantes..  1.171cc,5 1.501cc,0 
O extrait à l’état gazeux... 1.142cc,0 971ce,4 | 
— fixé par le cuivre...... 1.32500,4 } 9,479c%,4 1,763cc,8 } 2,.747cc,2 
— absorbé par le sol ..., 42cc,0 12cc,0 
— introduit au début... 915cc,7 911cc,9 
— apparu par le fait des plantes...... 1.56300,7 1.836cc,9 
vol. CO? disparu # 
SRE TEE 0,75 0,82 


vol. O apparu 


Les volumes 212,3 et 57%,0 d'acide carbonique extrait 
comprennent les petites quantités de 0,12 et 0,04 de gaz 
absorbées dans les analvses de l’atmosphère interne. Pareille- 
ment, les volumes 1,142%,0 et 974,4 d'oxygène extrait com- 
prennent 1°,96 et 1e°,50 perdus par la même cause. 

Comme conclusion des chiffres figurant dans le tableau qui 
précède, bornons-nous à constater, pour le moment, la diffé- 
rence existant entre l'acide carbonique disparu et l’oxygène 
apparu par le fait des plantes expérimentées au bout des six 
premières semaines de leur végétation; le volume du premier 
gaz a été très notablement inférieur à celui du second. 


Expériences III Er IV. 


J'ai fait une nouvelle recherche sur la Houque laineuse avec 
l'idée d’en tirer des résultats plus complets. 

J’ai adopté une disposition telle qu’on pût obtenir, non plus 
seulement à la fin, mais à un moment quelconque, le volume de 
l'acide carbonique disparu et celui de l’oxygène apparu par le 
fait de la végétation. J’ai dü, pour satisfaire à cette condition, 
renoncer à l'emploi du tube à cuivre, qui précédemment servait 
à absorber de temps en temps l'oxygène gazeux en excès. J'y ai 
renoncé pour diverses raisons, parmi lesquelles je citerai seule- 
ment la suivante. Le cuivre, même à froid, s’oxydait lente- 
ment et fixait aussi un peu d'acide carbonique; cette double 


ÉCHANGES GAZEUX DES PLANTES ENTIÈRES. 33 


action faisait varier d'une manière indéterminée la composition 
de l'atmosphère interne, dont on ne pouvait plus dès lors appré- 
cier les variations dues à la seule influence des plantes. Mais, 
remarquons-le bien, cet inconvénient n'empêchait nullement une 
exacte évaluation, en fin d'expérience, des quantités de gaz 

cherchées, puisqu’alors, ainsi qu’il a été dit, l'oxy- 

| gène et l'acide carbonique retenus par le cuivre 
| étaient récupérés et dosés. 

L'appareil que j'ai employé consiste sim- 


= plement en un récipient de verre A, au fond 
si duquel se trouve le sol de culture et qui porte à 

: son extrémité supérieure un tube B, 

ci deux fois recourbé à ‘angle droit, s’é- 

dB largissanten GC et venant plonger dans 

D | le mercure d'une petite cuve pro- 

_, G D [II | 

f |E fonde D. Le bouchon de caoutchoucE 

2) 


que traverse le tube B, est noyé dans 
B Qu mercure. Il laisse passer un second 
tube, G, servant à faire le vide et à 
introduire l'oxygène et l'azote. Ce tube 
est, pendant l'expérience, fermé par un 
| caoutchouc et un obturateur qui plon- 
le gent dans du mercure: lorsqu'on fait 
| le vide, au début et à la fin, on envoie 
de l’eau fraiche dans le manchon qui 
l'enveloppe, de manière qu’il serve de 
réfrigérant. La partie inférieure du 
$ récipient À occupe le milieu 
| . Le. d'un bassin F qui est rem- 
00000 NW 


À 
EM, pli, lorsqu'on procède au vide, 
d’eau à 30° et, en temps ordinaire, de terre humide. 

Un bâton de soufre S est suspendu à l’entonnoir à longue 
queue H. Ce dernier sert à conduire dans l'intérieur du sol l’eau 
de condensation fournie par le réfrigérant GG: il évite que 
cette eau ne bouleverse dans sa chute la surface du sol; ce qui, 
lorsqu'on fait le vide au début de l'expérience, détruirait l'effet 
attendu de la couche de sable calciné. 

L'acide carbonique s’introduit par la partie inférieure de C, 
au moyen du petit volumètre spécial employé pour le mesurer. 
3 


34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Les prises de gaz pour analyses se font également en C. Il faut 
être certain que ces prises représentent bien l'atmosphère con- 
tenue en A. Avant de prélever une prise, on commence donc par 
amener en C les gaz de À. Il suffit, pour y parvenir, d'élever la 
cuve D verticalement, de manière que C s'y enfonce compiète- 
ment, puis de l'abaisser et de renouveler deux ou trois fois cette 
manœuvre. Le volume du gaz ainsi appelé en C étant beaucoup 
plus grand que le volume du tube B, celui-ci se trouve entière- 
ment purgé des gaz qu'il renfermait et l’on peut prendre en C un 
échantillon fidèle de l’atmosphère de A. 

Dans la nouvelle disposition que j'indique, on n’absorbe 
plus d'oxygène au cours d’une expérience. On laisse la propor- 
tion de ce gaz s'élever peu à peu à mesure que la végétation se 
développe. Je craignais un peu qu’elle ne devint bientôt nuisible 
aux plantes; mais celles-ci ont paru jusqu’au dernier moment 
parfaitement portantes, bien que le taux d'oxygène ait atteint 
42,5 0/0. Puisqu'on n’absorbe pas l'oxygène produit et qu’on 
ajoute de temps à autre de l'acide carbonique, la pression 
totale des gaz à l’intérieur de l'appareil doit augmenter progres- 
sivement. Aussi faut-il, pour éviter toute sortie de gaz au 
dehors, commencer l'expérience avec une pression assez faible. 
Cette pression a crû 1ci de 55 à 70 centimètres de mercure 
environ. Elle a toujours été, comme on voit, inférieure à la 
pression externe, condition qu'il est nécessaire d'observer si 
l'on veut être absolument certain d’éviter toute fuite par les 
joints. 

L’azote gazeux mis en œuvre est mesuré avec précision, de 
même que l'oxygène et l'acide carbonique introduits au début 
ou en cours d'expérience. Comme il ne varie pas (on le vérifie 
finalement), il fournit une base très utile pour le calcul des 
quantités d'oxygène et d'acide carbonique qu'on veut avoir. 
En effet, l'analyse de l'atmosphère interne indique la propor- 
tion centésimale de chacun des trois gaz. Le volume de l'azote 
gazeux étant connu, on en déduit celui de l'oxygène et celui de 
l’acide carbonique existant dans l'appareil au moment du 
prélèvement de l'échantillon analysé et, par suite, le volume de 
chacun de ces deux gaz apparu ou disparu depuis le commen- 
cement de l’expérience. 


Comme sol, j'ai employé 2 kilogrammes du mème sable 


ÉCHANGES GAZEUX DES PLANTES ENTIÈRES. 35 


quartzeux que précédemment. Je n'y ai point, cette fois, ajouté 
de carbonate de chaux. Ce sol entraîne, en effet, une complication 
pour l'extraction finale du gaz carbonique, parce qu'il donne du 
bicarbonate qui, pour être entièrement décomposé, exige le 
maintien prolongé du vide ! 

Au sable ont été ajoutés 350c d’une solution contenant par 
litre : 


Sulfate de calcium... 1...  Ogr3 

Azotate de potassiun........... 12r,500 (exactement pesé, soit 08r,0728 
d’azote dans 350cc); 

Phosphate bicalcique....... . 02,5 (dissous ou en suspension); 

Sulfate de magnésium Le Ogr,3 : 

Sesquioxyde de fer............. Osr,020 à Ogr,025 (à l’état d’hydrate en 


suspension). 


Pour mesurer exactement l'influence du sol dans les varia- 
tions de la composition de l’atmosphère interne, j'ai institué 
une expérience iémoin (expérience IV), disposée el exécutée 
comme celle qui vient d’être décrite, avec les mêmes poids de 
sable et de sels et un volume de gaz moindre pour qu’il se 
mesuräi mieux, mais sans culture. L'expérience a duré du 
21 juillet au 6 octobre. L'examen des gaz, fait au début et à la 
fin, a appris que, pendant ce temps, le sol avait absorhé 
1£c. ce. d'oxygène et dégagé à très peu près autant d'acide carbo- 
nique *; l’azote gazeux n’a pas varié sensiblement (azote 
initial 624cc,2, azote final 626.1 ; différence 1°°,9); du moins, 
la variation a été de l’ordre des erreurs permises, étant donné 
surtout qu’on a eu à faire non pas seulement des mesures volu- 
métriques, mais aussi l’analyse eudiométrique des gaz extraits 
finalement. 

Les plantes obtenues ont été de très belle apparence. Les 
parties aériennes étaient bien vertes, sans une feuille flétrie ou 
décolorée : elles ont atteint de 22 à 35 centimètres de hauteur au- 
dessus du sol. 

1 Bien qu'on n’ait pas ajouté, comme dans les expériences I et IT, du carbo- 
pate de chaux, on a rencontré, à un bien moindre degré, il est vrai, la difficulté 
qui vient d’être signalée, par suite de la formation du bicarbonate fourni par 
Paction de lacide carbonique sur le phosphate bicalcique. 

2, À supposer que le caoutchouc du bouchon E ait agi sur la composition de 
l'atmosphère, par exemple en absorbant des traces d'oxygène, ou encore que le 
mercure contenu en C ait fixé quelque peu du même gaz, ces actions ont été 
vraisemblablement les mêmes pour les expériences III et TV, les deux appareils 


étaient identiques ; leurs effets sont compris dans les 14 c. c. dont il s’agit et 
corrigés plus bas en même temps que l’action du sol lui-même, 


96 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


Le tableau suivant présente les données et les résultats numé- 
riques de l’expérience II. 


III 

Houque laineuse, semce le 7 juillet, récoltée le 6 septembre. 

Poids des graines.....,... ETS # 20mer 

Azote gazeux mis en œuvre...  3.995cc 
COZMNITOUNIE MEME RER CE Lo cr leo ADCE US) e 
—Idépasé parle SOL. PR AN RE 14ce,0 | LbS1£e0 
—NEX (TANT. LAINE A NT RE AN PRE a er #2 23cc,6 
— disparu par le fait des plantes. ................ 1.527cc,4 
ONEXITAIR EE RPC PORT RENE ce AAC OS CCE ARS 
— absorbé par lesol Are Atce,0 2.909ce,1 
a CNTOQUT AU TE DU EPP E EEE PERS ASE RER A .174cc,9 
— apparu parle faltfdesiplantes Tree PTS 4L0,9 


18 août 18 août 26 août 4er septembre 6 septembre 
vol. CO? disparu : pa 
— 0,87 0,88 0,88 0,91 0,89 
vol, O apparu 

Je présenterai, relativement à ces chiffres, quelques explica- 
tions. 

Les 1,540cc,0 d'acide carbonique introduit ont compris 9 vo- 
lumes variant de 164,52 à 176c,59. 

On a tiré les 11 c. c. d'acide carbonique et d'oxygène, corres- 
pondant à l’action du sol, des résultats de l'expérience témoin IV, 
en ayant égard à la différence des durées des deux expériences. 

Les volumes d’acide carbonique et d'oxygène extraits ont 
été obtenus, comme on l’a indiqué déjà, par la mesure du total 
des gaz retirés de l'appareil et par l'analyse de leur mélange. 
Les gaz ont été mesurés en plusieurs fois dans le même volu- 
mètre qui avait été employé au début de l'expérience. Chaque 
portion mesurée a été l’objet d’une analyse eudiométrique à 
laquelle on a apporté les plus grands soins. Ces analyses n'ont 
jamais fait reconnaître la présence, en proportion appréciable, 
de gaz combustibles. Comme vérilication des mesures et apa- 
lyses, on a retrouvé finalement l’azote gazeux mis en œuvre 
dans les limites des erreurs admises (4 ou 5 c. c., le volume total 
des gaz extraits étant de près de 7 litres). 

Les volumes d'acide carbonique et d'oxygène extraits, 23c,6 
et 2,898c,1, comprennent, comme plus haut, les petites quan- 
tités de ces gaz absorbées dans les analyses de l'atmosphère 
interne, soit respectivement 0,01 et 2°°,40. 


ÉCHANGES GAZEUX DES PLANTES ENTIÈRES. 37 


J'ai fait l'analyse élémentaire des plantes récoltées. 

Les plantes entières se composaient, en réalité, de trois por- 
tions : 

1° Les parties vertes, coupées à un demi-centimètre au- 
dessus du sol, parfaitement exemptes de sable et pesant, après 
dessiccation, 1:,834; 

2 Les racines, qu’on avait séparées du sol avec le plus de 
soin possible, mais qui contenaient néanmoins une forte pro- 
portion de sable ; défalcation faite de ce sable, elles pesaient à 
l’état sec 0:r,1924 : ; 

3 Les débris végétaux, très petits, restés dans le sol. 

Quant à ces débris, on en a seulement déterminé le carbone; 
on l’a obtenu en dosant cet élément à la fin des expériences dans 
le sable de IIT (expérience avec culture) et dans le sable de IV 
(expérience témoin), et retranchant le second résultat du pre- 
mier. On a supposé aux débris la même composition qu'aux 
racines, hypothèse qui, si elle n’est pas tout à fait exacte, ne 
saurait entrainer une erreur sensible pour l’ensemble des plantes, 
vu la proportion des matières. D’après cela on a calculé, par 
le poids de carbone, le poids de chaque élément et le poids 
total (05,090) des débris. 

Les poids de carbone, hydrogène, azote, cendres et oxygène 
donnés ci-après pour la composition des plantes entières, repré- 
sentent la somme des trois portions qui viennent d’être indiquées. 


Composition des plantes entières de houque laineuse. 


Garonne eR UN tre EE O SRE AE CE ESS Ogr,827 39,0 
Hy ATOS NE PRE AE EN ARE TE 0gr,106 5,0 
AZOTORE EE AN Eu RS RAT PR EE 03r,060 9,9 
Gendres rs Rene Most: SE TUE ADS gr,421 49,9 
Oxyoene (DARNONIEreNCE) ME ACER CRE CC ET 037,704 39,2 
Plantes entières sèches............. RE PE 9gr, 118 100,0 


On a dosé l’acide carbonique contenu dans les cendres: il 
n'y en avait qu'une proportion très faible, correspondant à 
2 mer. de carbone. Dans le poids de carbone de 827 mgr., ces 
2 mgr. sont compris. Le poids de 421 mgr. représente, au con- 
traire, les cendres sans leur acide carbonique. 


1. Les parties vertes et les racines ont été desséchées immédiatement après 
leur sortie de l'appareil. Il importait, en effet, qu’elles ne pussent continuer à 
assimiler du carbone ou à respirer, ce qui aurait modifié leur composition. 


38 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


J'ai vérifié les résultats obtenus relativement au carbone et à 
l'azote, en établissant ce qu'on peut appeler le bilan de chacun 
de ces deux éléments. 


BILAN DU CARBONE DE L'EXPÉRIENCE III 
Carbone mis en œuvre. 


DANS IC ISOLER RE TR EEE 2580 LOIR ve æ 58mgr 1 
Dans les A TaInes PRET AMP RER ERA EPA RL RE TR 8mgr, 0 
Introduits dans les 1.540cc,0 d’acide carbonique...... S26mgr,0 


892mgr 1 


Carbone retrouvé finalement 


DARSSIE OL PRES SR AE PE ARE SUR ANT 88mgr,7 
Dans Hes:plantés PCT REA OL MM TER EMI 788mgr,5 
Dans les 23cc,6 d’acide carbonique extrait. .......... 19mgr,7 

SS9mar,9 


Les 78827, 5 ci-dessus correspondent seulement aux parties 
vertes et aux racines, c’est-à-dire aux deux premières des trois 
portions citées plus haut comme composant les plantes entières ; 
ils ne comprennent pas le carbone des débris que le sol a 
gardés, carbone déjà compté dans les 88", 7 du sol. 


BILAN DE L’AZOTE DE L'EXPÉRIENCE III 


Azole au debut. 


Dans le sol additionné de solution nutritive... ........ 67mgr,2 
Dans Ales PeTAnes ECC RARE UNE re AE EE Omer, 


GTmgr,7 


DABETE SOLAR Der IRL PERS APR AR AT QE ES RE Jmer,9 
Danses iniantentess Meet ee EE LR RE De 59mer,3 


69mgr, 2 | 


Les 59°%,3 correspondent aux parties vertes et aux racines, 
sans les débris laissés dans le sol, lesquels sont compris dans le 
chiffre de 96,9. 

Ainsi, on retrouve à la fin, dans les limites d'erreur permises, 
le carbone et l'azote mis en œuvre. Les vérifications sont tout 
à fait salisfaisantes. 


CoNcLUSIONS. 


1° Le rapport R du volume de l’acide carbonique disparu à 
celui de l'oxygène apparu par le fait des plantes examinées 


ÉCHANGES GAZEUX DES PLANTES ENTIÈRES. 39 


pendant les six ou huit premières semaines de leur végétation, a 
été trouvé notablement inférieur à l'unité ". 

On pourrait reprocher à l'expérience [IT d’avoir comporté 
des tensions anormales d'oxygène (jusqu'à 42, 5 0/0). Mais elle 
a donné un résultat du mème ordre que l'expérience IT, où la 
proportion d'oxygène a été entretenue au voisinage de 20 0/0. 
Et, de plus, les expériences de Boussingault, de MM. Dehérain 
et Maquenne, de MM. Bonnier et Mangin, ont fait voir que les 


rapports r = %#%°" pour l'assimilation du carbone et r' = 22m 


O0 apparu O disparu 


pour la respiration étaient, dans des limites très étendues, indé- 
pendantsde la pression desgazcarboniqueet oxygène. Il est donc 
à penser qu'ici notre rapport R, sorte de résultante de r et r', n’a 
pas été sensiblement altéré par la présence d’un excès d'oxygène. 

2° Dans l'expérience IE, le rapport R n'a pas notablement 
varié au cours de la végétalion. 

Je n’oserais donner ce résultat comme parfaitement établi; 
car il faut noter qu'au début de l'expérience la détermination de 
R se fait avec un degré d’exactitude laissant quelque peu à 
désirer, à cause de la petitesse des deux termes de la fraction. 

3° [l entre dans la composition de la matière organique d'une 
plante entière (et en particulier de notre Houque) un poids 
d'hydrogène supérieur à celui qui, avec l'oxygène de cette 
matière, formerait de l’eau. Pour rendre compte de ce fait impor- 
tant, on a été conduit, comme on sait, à admettre que la plante 
élimine de l'oxygène sous une forme ou sous une autre, et 
MM. Dehéraiu et Maquenne, ayant trouvé que, dans la respira- 
tion, le rapport r' était fréquemment plus grand que l'unité, ont 
bien fait remarquer qu'il y avait là une cause de déperdition 
d'oxygène par départ d’une cerlaine quantité d'acide carbonique 
dont les deux éléments seraient fouruis par la plante même; mes 
expériences s'accordent avec cette manière de voir. En dehors de 
toute hypothèse sur le mode d'élimination de l'oxygène, elles 
permettent de constater le fait de cette élimination par des 
mesures directes. 


4. Quant aux valeurs mêmes de R trouvées dans les expériences I et IL (0,75 et 
0,82), elles sont peut-être entachées d’une légère erreur provenant de la difficulté 
qu’il y a eu à extraire absolument la totalité de l'acide carbonique hors de 
l'appareil, par suite de la formation d’une assez grande quantité de bicarbonate 
calcaire. 


7 


LA 


Au a nt Ch Des LS D 2e RS D Aer à € 


à lie 5 


40 ANNA°ES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


4° La houque de l'expérience IIT à puisé de loxygène pour 
constituer sa substance organique, non pas seulement dans l’eau 
et les gaz acide carbonique et oxygène de l’atmosphère, suivant 
ce qu’on indique d'ordinaire, mais aussi, eten proportion impor- 
tante, dans les sels minéraux oxygénés qui ont pénétré par les 
racines. Cette conclusion ressort du tableau suivant, qui pré- 
sente le calcul, d’après les chiffres donnés plus haut, de la quan- 
üité d'oxygène gagnée par les plantes dans leurs rapports 
1° avec l'eau et 2° avec l'atmosphère, et la comparaison de cette 
quantité avec le total de l’oxygène acquis pendant la végétation. 

19 Hydrogène des plantes........... ..  A06megr 

— des graines 1 


— pris à l’eauparlesplantes.  4105mer 
Oxygène emprunté par les plantes 
A EAU PRE ee 105mer X 8 — 840 mer 


20 Oxygène libre dégagé parles plantes., 1.734cc,9 


— contenu dans l’acide carbo- 
nique absorbé par lJes 
DIANTES RER ATEN TR Re 1.527cc.4 
— perdu par les plantes dans 
leurs rapports avec l’atmo- 
SPHÈRES UC Re LA 207mgr,5 — 2)7msr 


Oxygène gagné par les plantes dans leurs rapports avec | 
Heu AA EMOESDREE REP ELEC Re D43mer 
D'autre part, il y a dans les plantes : 
: 3e c es S Ame 
Oxygène total de la matière organique.  704mgr ) 154mer 
— provenant des graines T 


= acquis par les plantes en de- 


hors des graines 697mer 697mer 


La matière organique des plantes contenant 697 milligrammes 
d'oxygène acquis en dehors des graines et n’en tenant que 543 de 
ses rapports avec l’eau et l'atmosphère, il faut qu’elle ait pris 
697 milligrammes — 543 milligrammes ou 154 milligrammes à 
une autre source. Cette source réside dans les sels oxygénés 
venant du sol, sulfates, phosphates et avant tout azotates. On a 
dit souvent que la plante verte était un appareil réducteur. Elle 
apparaît nettement 1c1 sous cet aspect. 

5° Des expériences telles que notre expérience IT, fondées à 
ja fois sur la mesure et l'analyse des gaz au sein desquels les 
plantes ont vécu et sur la détermination de la composition de 
ces plantes, semblent devoir fournir de très précieux renseigne- 
ments pour l'étude de la synthèse végétale. 


DE LA FORMATION D'ALDÉHYDE 
DANS LA FERMENTATION ALCOOLIQUE 


Par M. ROESER 
Pharmacien-major de 2e classe. 


————— —————— 


En 1854, M. Magnes-Lahens signalait la présence de l’aldé- 
hyde dans le vin et l’eau-de-vie. MM. Maumené, Bouchardat, 
I. Pierre, Ordonneau, Claudon et Morin, confirmaient ce résultat 
soitpourle vin, soitpourdeseaux-de-vieauthentiques. MM. Gayon, 
Martinand, Riche et Bardy, Mohler, Claudon et Morin, retrou- 
vaient et dosaient l’aldéhyde dans les produits de tête de recti- 
fication d'’alcools de fermentations industrielles (betteraves, 
grains ou autres matières sucrées ou amylacées). MM. Schutzen- 
berger et Destrem étendaient cette production d’aldéhyde à 
toute fermentation alcoolique faite à l'abri de l'air avec de la 
levure lavée. Toutes ces fermentations n’élaient pas, il est vrai, 
à l'abri de contaminations el de fermentations secondaires, et 
ne pouvaient être considérées comme faites avec des levures 
absolument pures. Se plaçant dans ces dernières conditions, 
M. Duclaux trouvait de l’aldéhyde dans la fermentation alcoo- 
lique du lactose. MM. Linossier et Roux observaient le même 
résultat dans la fermentation alcoolique du glucose sous l'in- 
fluence de la forme levure du champignon du muguet, levure 
d’ailleurs fort peu active comme ferment alcoolique. 

Il pouvait donc être intéressant, aujourd’hui surtout, où on a, 
pour déceler l'aldéhyde, des réactions très sensibles, de recher- 
cher si ce corps est un produit constant de la fermentation 
alcoolique, d'en doser les quantités, d'examiner quelques 
facteurs qui peuvent faire varier ces quantités, et d'essayer d'en 
expliquer l'origine. 


42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Nous dirons un mot, en commençant, sur les procédés de 
recherche et de dosages des aldéhydes, surtout de l’aldéhyde 
éthylique et de ses homologues. Le plus sensible, et celui 
auquel nous nous sommes arrêté, est le procédé colorimétrique 
de Schiff, basé sur la coloration violacée que prend une solution 
de fuchsine décolorée par l'acide sulfureux. 

Nous avons suivi, pour préparer cette solution, la formule de 
M. Gayon. Les dosages ont été effectués dans des tubes à essais 
étroits et calibrés à 10 c. c., dans lesquels le liquide de distilla- 
tion, où il s'agissait de doser l’aldéhyde, était mis en compa- 
raison avec d’autres liquides contenant des doses connues et 
graduellement croissantes d’aldéhyde. Le volume était de 
10 €. c. pour toutes ces liqueurs, et le titre alcoolique était amené 
à être le même partout à l’aide de petites quantités d'alcool 
absolu ne donnant qu’une teinte à peine sensible avec le réactif. 
Dans chaque tube, nous ajoutions 0 ce. c. 50 de la solution de 
fuchsine ; nous avions ainsi, au bout de 15 minutes environ, une 
échelle colorimétrique permettant de conclure à la teneur en 
aldéhyde. L'emploi d'un colorimètre eût peut-être donné un peu 
plus d’exactitude à nos résultats : tels qu'ils sont, ils restent 
comparables entre eux. 

Nous avons souvent contrôlé la présence de l’aldéhyde par 
le procédé colorimétrique d'Ebrlich au diazobenzosulfonate de 
sodium. La préparation de ce sel est longue et délicate : sa 
solution s’altère rapidement. Nous l’obtenions facilement au 
fur et à mesure des besoins en mettant, dans le tube à essai 
contenant l'aldéhyde, 3 à 4 gouttes d’une solution d’acide sulfa- 
nilique à 1 0/0, autant de gouttes d’une solution récente d’azotate 
de sodium à 1/500, plus une goutte d'acide chlorhydrique. 
Après agitation et contact de quelques minutes, l'addition de 
quelques gouttes d’une solution de soude caustique à 1/10 fai- 
sait apparaître à la longue la coloration rose violacée. Le procédé 
est plus long et moins sensible que le précédent. Quant aux 
autres procédés basés, soit sur l'emploi du chlorhydrate de 
méta-phénylène-diamine (Vindisch), soit sur la réduction du 
nitrate d'argent ammoniacal, ils sont encore moins sensibles. 


ALDÉHYDE DANS LA FERMENTATION ALCOOLIQUE. 43 


Si l’aldéhyde est un produit constant de la fermentation 
alcoolique, on doit en trouver dans des produits courants de 
fermentation, les vins par exemple ; on doit en trouver aussi 
dans les fermentations provoquées dans des conditions diverses, 
mais surtout indemnes de tout germe étranger. 

Sur 30 échantillons de vins, examinés sous ce rapport, j'ai 
trouvé partout une quantité appréciable d’aldéhyde : 25 étaient 
des vins de coupages commerciaux et contenaient 0f',010 à 
05,040 d'aldéhyde par litre, leur titre alcoolique oscillant de 
109 5 à 11° 5; 5 autres échantillons renfermaient les doses 
suivantes d’aldéhyde par litre : 


Aldéhyde par litre. 


MinsSIACRAnVLTONS TE NPATIS MEME EMMA ER NE ETENE ü3r,160 
DRATEINE RS PR ARR Lier Le RE en Re) moins de 0gr,001 
BARS QUAI) RO AIN UE = Osr,001 
CAMES OT AE A RL PLE ERA DT AURAS re ARTE usr,100 


De re sas de ee pete A réneçe I pet 0sr,020 


31 fermentations faites au laboratoire, soit avec de petites 
quantités de raisin (250 à 3005) écrasé dans des cristaliisoirs 
de verre, soit avec des marcs de pressurage de moûts, délayés 
dans de l’eau, largement ensemencés avec des cultures pures de 
levures, ont donné des quantités d’aldéhyde variant de 0%,010 à 
05", 170 par litre. 

11 fermentations pures ont été faites de même, au laboratoire, 
dans des moûts de raisin filtrés au papier et stérilisés à l’auto- 
clave, ou filtrés à la bougie Chamberland. Ces moûüts stériles, 
répartis en petite quantité dans des ballons, placés dans des 
conditions variées qui seront examinées plus loin, ont été ense- 
mencés avec des cultures pures de diverses races de levures. 
Toutes ces fermentations ont donné comme produits, à côté de 
l'alcool, des quantités très variables d’aldéhyde, même dans les 
cas où le milieu se prètait peu au développement des levures, et 
où la fermentation ne tardait pas à s'arrêter, après une faible 
production d’alcool, comme cela est arrivé avec des moûts de 
raisin Muscat. 

Comme les moûts de raisin renferment, à côté des matières 


44 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sucrées, d’autres matières complexes, auxquelles on pouvait 
rapporter la formation d’aldéhyde, il devenait nécessaire de 
chercher si l’aldéhyde se retrouvait dans les fermentations de 
glucose dans des milieux artificiels, pauvres en matières orga- 
niques, et ne contenant l’azote qu’à l’état de sel ammoniacal. 
Ces milieux ont été l’eau de levure à 10/100 et le liquide de 
M. Laurent', additionnés de glucose. Les levures se sont facile- 
ment développées après 3 passages dans le premier milieu; 
il n’en a pas été de même pour le second; au 5° passage, la 
levure de Champagne et le Saccharomyces Pastorianus donnaient 
seuls des cultures peu abondantes, ayant fait disparaitre la 
presque totalité d’une petite quantité de glucose. 

Dans ces milieux artificiels, 42 fermentations ont été provo- 
quées par les mêmes levures que ci-dessus. Nous y avons toujours 
trouvé plus ou moins d’aldéhyde. 

L'ensemble de ces résultats, portant sur des analyses de vin 
ou de produits de fermentation, soit de moût de raisin, soit de 
glucose, exemptes de tout germe étranger aux levures, confirme 
le fait de la formation de petites quantités d'aldéhyde dans les 
fermentations alcooliques effectuées par ces levures. 


Il 


La quantité d’aldéhyde, produite dans ces fermentations, est 
toujours petite, mais elle est aussi variable. Quelle est dans ces 
variations la part de la race de levure et quelle est celle du 
milieu ? Pour étudier cette question, nous avons ensemencé, dans 
des moûts de raisin variés et dans de l’eau de levure sucrée, 
diverses races de levure que je dois à l’obligeance de MM. Fern- 
bach, Kayser et Rietsch. Ce sont des levures de : Champagne, 
Santenay, Vougeot, Thann, Saint-Émilion, Jurançon, Tokay, 
Algérienne, Lactose, Pale-ale et le Sacc. Pastorianus. Le tableau 
suivant résume mes résultats. Les quantités d’aldéhyde indi- 
quées dans les six dernières colonnes sont exprimées en milli- 
grammes par litre. 


1, Annales de l'Institut Pasteur, t. LI. 


DURÉE ET TEMPÉRATURE = Se É 

2 Z z 8 

NATURE DES MOUTS. de la UNE INSEE 
Ca À En 5 


FERMENTATION, 


I. Raisin blanc....... > jour s à 20° 470 | 1440 | 435 | 1435 » » 
IT. Raisin noirenvirons 
He PATIS Re re 5 — 45°-170| » 4160 | 040 | 035 » » 
III. Raisin noir environs 
JePars sn a 1% — 150-170] 072 | 170 | 040 | 058 » » 
IV. Raisin blanc chas- 
SOL SEURERE aires 44 — 150-170! 410 » » » 090 | 0101 
M. Raïsin noir 2... 15 — 15-47! 055 | 050 | 030 | 040 | 095 | 028 
VI. Raisin blanc chas- 
SIRET ESC ES 4% —  14A50-17°| 038 » » 080 | 050 » 
VII. Eau de levure 10/100| 8 — 9250 055 | 060 » 035 | 120 » 
VIII. Liquide Laurent ...| 12 — 250 0201 » » » | 040 


1. Fermentation incomplète, il reste une grande quantité de glucose. 
2. Moût très acide. Acidité en SH?04 10.878 par litre. 


I! restait dans la fermentation des trois derniers moûts, IV, 
V et VI, de notables quantités de glucose. Pour l’eau de levure 
VIL, qui contenait 6,66 0/0 de glucose, les levures avaient subi 
trois passages dans le milieu, pour s'y acclimater, et cinq pas- 
sages pour le liquide VII de M. Laurent, glucosé à 2,50 0/0; 
toutes ces fermentations out été faites dans des matras Pasteur. 
De l'examen de ces résultats, il ressort que la quantité d’al- 
déhyde varie d’une façon très notable pour un même moût 
d'une race de levure à l’autre, et, pour une même race, d’un 
moûl à l’autre. Il y a donc là tout à la fois question de semence 
et question de terrain. 

Parmi les circonstances qui peuvent influer sur la formation 
de l’aldéhyde, la question d'aération pouvait être considérée 
comme un des facteurs les plus importants, d'autant plus que 
MM. Schutzenberger et Destrem rapportaient cette formation à 
la fermentation effectuée à l'abri de l'air par de la levure lavée. 

Nous avons donc provoqué des fermentations dans les 
ballons à deux tubulures, largement aérés, employés par M. Fern- 
bach, et dans lesquels le liquide est en large surface sur une 


46 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


faible épaisseur, dans des matras Pasteur et dans des matras 
scellés où nous avions fait le vide; ces derniers étaient ouverts 
de temps à autre, de façon à diminuer la pression due au déga- 
gement d'acide carbonique. Dans les résultats résumés au tableau 
qui suit, nous avons introdait un nouvel élément, le poids de 
levure obtenue. Les quantités d’aldéhyde sont toujours des 
milligrammes par litre, 


oo 


: ; CULTURES 
DURÉE ET TEMPÉRATURE = 
RACES PA te er DANS LE VIDE 
NATURE DES MILIEUX. de la | —— 
Re TRRe Poids de | Quantité | Poids de | Quantité 
FERMENTATION. CAES levure |d'aldéhyde| levure |d'aldéhyde 
obtenue. |pour 1000 | obtenue. |pour 1000 
| PRES En RES 
| Ogr Ogr 
Champagne 083 110 » 050 
IX Moût de raisin À . : Santenay ; 180 035 040 
DOI PEL R IE 11-15 jours 25° $ 
Pasteurianus.| 069 115 028 050 
: de | Voug 060 | 3 046 | 080 
X Moùt de raisin À MOTS : pol à 
NOIRE 2e cr 11-15 jours 25°{ Jurançon 064 060 » » 
Champagne 060 170 025 050 
XI Moût de raisin dr | Jurançon 075 | 120 | 043 | 010 
Diancéee" 2e 11-15 jours 25°! 
| Thann o19 | 9240 | 037 | 030 
|! Champagne 404 | 490 | 057 | 040 


Santenay 090 | 220 | 025 | 040 
| Jurançon 086 160 015 | 060 
XII Moût de raisin / 
D'OITÉPRE RE ALE [49-45 jours 25°, Tokay 13 060 045 030 
St-Émilion 118 | 9260 | 022 | 080 
| Aloérienne 102 | 070 | 025 | 030 
| Champagne 055 | 4140 | 021 | 030 
$ Santenay 048 | 9280 | 030 | 050 
XIIT Eau de levure à 
10/1400, gluco- / Jurançon 040 150 021 030 
sée à 14/100..112-45 jours25° ; 
St-Emilion 048 | ! 280 030 050 
| Algérienne 066 090 037 050 
Pasteurianus.| 03 220 031 |T 030 
XIV Eau de levure Vougeot 07 040 | 044 030 
à 10/4100, glu- 2 
A VE | glu- Thann 042 | 150 | 030 | 020 
Tokay 059 » 027 050 
Lactose 039 280 031 050 


RE 


ALDÉHYDE DANS LA FERMENTATION ALCOOLIQUE. 47 


Contrairement à l’opinion de MM. Schutzenberger et Des- 
trem, c’est donc dans les cutures anaérobies qu'il y a le moins 
d'aldéhyde, et dans les matras Pasteur qu’elle est au maximum. 

Les cultures en matras Fernbach ne figurent pas dans ce 
tableau ; le poids de levure y était supérieur à ce qu'il était dans 
les matras Pasteur. La teneur en aldéhyde y était généralement 
élevée et toujours supérieure à celle des cultures dans le vide; 
mais elle ne pouvait entrer en ligne de compte : une grande 
quantité d'aidéhyde avait pu s'évaporer. 

En comparant, dans le tableau, le poids de levure et la 
quantité d’aldéhyde formée, on trouve entre ces deux facteurs 
une certaine relation. Il sembie que la cellule levure, en évo- 
luant, oxyde une petite portion de l'alcool produit et le trans- 
forme en aldéhyde, et que cette faculté ne soit pas au même 
niveau chez toutes, car nous retrouvons là encore, pour un même 
milieu, une question de races pour les levures. 

Pour appuyer cette explication, on pouvait essayer de 
reproduire l'expérience de MM. Linossier et Roux : supprimer 
à la levure le sucre comme aliment ternaire et le remplacer 
par l'alcool. Le milieu a été l’eau de levure additionnée de 
petites quantités d'alcool. Les diverses races, déjà acclimatées 
dans l’eau de levure, l'ont été dans ce milieu par trois passages. 
Elles ne se sont pas toutes prètées à cette nouvelle adaptation, 
et même pour celles qui se sont développées d’une façon appré- 
ciable, les quantités de levure étaient trop faibles pour être 
recueillies et pesées, même comparativement. Ces cultures ont 
été faites en matras Pasteur. 


oo 


DURÉE ET TEMPERATURE QUANTITÉ 
RACE DES LEVURES. de la ire emo 
: } d'alcool 0/0 | d'aldéhyde 
FERMENTATION, : 
en volume, | par litre. 
| l 
Champagne es 20 jours 45-170 4.2 120 
VOUSED LE TRE 4,2 160 
Saint-Émilion.......... 4.9 180 
Bicériennes 7-4 4 050 
Pale-ale...... ee E 4.9 050 
Témoin laissé dans les mêmes conditions Traces à peine 
de temps et de température. .......... 4.6 sensibles. 


—————— —….….…"….". "| 


48 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


Nous n'avons pas fait figurer au tableau les cultures en matras 
Fernbach pour les mêmes raisons que ci-dessus; leur teneur en 
aldéhyde se rapprochait de celle en matras Pasteur; une levure 
ne s'y est pour ainsi dire pas développée, c’est celle de pale-ale. 
Dans les matras Pasteur, l'acidité du milieu avait notablement 
augmenté, celle du témoin était de 05,294 en SH°0* par litre, 
elle avait presque doublé pour les trois premières levures. 

La levure peut donc se développer dans un milieu alcoolique 
sans trace de sucre, oxyder l'alcool et le transformer partielle- 
ment en aldéhyde. 

Les cultures ont été ici très languissantes, et on pourrait 
croire que l’aldéhyde est un produit de souffrance. Ceci n’est 
en désaccord avec aucun des faits rapportés dans ce travail; 
car, dans les fermentations les plus prospères, il y a toujours 
des cellules vieillies ou entourées de mauvaises conditions 
d'existence. Mais aucun fait n’étaye non plus cette opinion; c’est 
une question à étudier à part en même temps que l'influence 
de la température, qui n’est pas apparente dans les cas qui pré- 
cèdent, mais qui ne doit pas être nulle. 

Un point sur lequel nous appelons l'attention, c'est que 
certains produits de distillation de ces fermentations ont donné 
très nettement la coloration rose violacée de Legal avec le nitro- 
prussiate de soude; cette coloration coïncidait avec une teneur 
élevée en aldéhyde; elle n’était cependant pas constante là où 
existaient les plus fortes proportions d’aldéhyde, et semblait 
plutôt dépendre des races de levure. Est-ce un produit acéto- 
nique ? Nous opérions sur de trop faibles quantités pour essayer 
de nous en rendre compte. Nous n'avons jamais obtenu les 
réactions colorées du furfurol. Enfin, dans les tâtonnements 
pour trouver un milieu artificiel, nous avions essayé une solu- 
tion de peptone à 1/1000; dans cette solution, certaines levures 
ont immédiatement donné des spores; les autres s'y sont mal 
développées. 


LIT 


On peut rapporter le fait de la production de l’aldéhyde à 
plusieurs causes : 

A une oxydation äirecte de l'alcool par l’oxygène. Qu'il s’en 

forme dans ces conditions particulières, cela est fort possible, 


ALDÉHYDE DANS LA FERMENTATION ALCOOLIQUE. 49 


l’aldéhyde de cette provenance ne fait que s'ajouter à celle 
existant du fait de la fermeutation; 

A la dislocation de la molécule sucrée, comme l’avançaient 
MM. Schutzenberger et Destrem, et au même titre que l’acide 
succinique et la glycérine de la fermentation alcoolique. L’al- 
déhyde provient-elle du sucre ou de l'alcool? L'alcool se pro- 
duisant en présence et aux dépens du sucre, la question semble 
difficile à résoudre. Nous avons pourtant, comme argument, 
l'expérience où nous avons observé une formation d’aldéhyde 
par la levure, dans des milieux où il y avait absence complète 
de glucose, remplacé par de l'alcool ; 

A l’action de la levure sur des substances organiques, autres 
que les sucres, qui se trouvent dans les moûts naturels et artifi- 
ciels. Pour l'alcool, nous rentrons dans le cas précédent. Pour 
les autres substances, nous pouvons nous reporter aux milieux 
artificiels, où n’entraient que des sels cristallisés et du glucose, 
et où 1l yavait formation d’aldéhyde. Nous ferons entrer tous ces 
faits dans un même ordre, peut-être provisoire, en nous repré- 
sentant la formation d’aldéhyde comme résultant de l’élabora- 
tion vitale de la cellule de levure, comme un produit de travail 
intérieur comparable à l'acide acétique et à la leucine. 

Dans les vins et eaux-de-vie, l’aldéhyde est généralement en 
petite quantité. Cela peut tenir aux oxydations qui se produisent 
dans le chapeau lors de la fermentation, à l’évaporation pendant 
l’encuvage et surtout le soutirage, aux combinaisons consécu- 
tives que l'alcool forme avec les acides pour donner les éthers, 
avec l’aldéhyde pour donner l’acétal, que l’on a signalé parmi 
les produits volatils du vin. 

Si l’on considère que l’aldéhyde, dans le tableau de MM. Du- 
jardin-Beaumetz et Audigé, arrive en première ligne comme 
pouvoir toxique (la dose moyenne, par kilo d'animal, étant de 
4 à 1,25; celle de l’alcool butylique étant de 1,28, celle de l’al- 
cool amylique 1,10 à 1 50), l’on ne peut que se ranger à l’avis 
émis par M. Riche, lors de la longue discussion sur le vinage 
à l’Académie de Médecine : les eaux-de-vie peuvent être et sont 
dangereuses autant et plus que les alcools d'industrie; c’est 
d’ailleurs la conclusion tirée aussi par M. Mobhler des coefficients 
d'impureté des eaux-de-vie naturelles et artificielles. 


REVUES ET ANALYSES 


LA THÉORIE DES ALEXOCYTES 


REVUE CRITIQUE. 


HaxxiN. Sur l’origine et la présence des alexines dans l’organisme, 
Centralbl. für Bakteriol. T. XII, n° 22 et 23, pp. 777 et 809. — 
Hanxix et KANTHACK. Sur la fièvre produite par l’injection des cul- 
tures stérilisées de Vibrio Metchnikovi, Proceedings of the Cambridge 
Philosophcal Society, 1892, Mars, p. 311.— KanrHack. Leucocytose 
aiguë, provoquée par des produits bactériens, Brit. med. Journal. 
— Kanruack. Immunité, phagocytose et chimiotaxie, Zbid., p. 985. 


M. Hankin est entré dans une voie nouvelle dans l'étude de cette 
question si compliquée de l’immunité. Depuis plusieurs années il cher- 
chait un moyen de réconcilier la théorie cellulaire de l’immunité avec 
la théorie humorale en général, et les théories des phagocytes et du 
pouvoir bactéricide des humeurs en particulier. Ces tentatives Pont 
amené à formuler une théorie nouvelle qui peut être désignée sous le 
nom de « théorie des alexocytes ». 

Les alexocytes sont des cellules du sang, décrites par M. Ehrlich 
sous le nom de leucocytes éosinophiles. Ces éléments sécrètent des 
alexines, ou substances bactéricides qui se répandent dans le plasma 
sanguin et dans d'autres liquides de l'organisme. D’après M. Hankin, 
« les cellules de organisme luttent contre les microbes non seulement à 
l’aide de leur propriété phagocytaire; il existe encore d’autres cellules, 
caractérisées par la présence des granulations éosinophiles, qui sécrè- 
tent des substances bactéricides » (Centralbl., p. 824). La démonstration 
de cette conclusion résulte, pour M. Hankin, d’une série d'expériences, 
en partie fort compliquées, et tendant à prouver que le sang des lapins 
est d’autant plus bactéricide qu’il renferme plus de leucocytes éosino- 
philes. M. Hankin a cru avoir aussi établi que l'augmentation du pou- 
voir bactéricide du sang est surtout marquée lorsque les cellules éosi- 
nophiles se sont débarrassées d’un grand nombre de leurs granulations. 

L'étude du sang et du sérum des chiens et des rats n’ayant donné 
à ce point de vue que des résultats incertains, M. Hankin a concentré 
toute son attention sur les humeurs des lapins. Il s’est tellement fié à 
cette méthode d’expérimentation in vitro, qu'il n'a pas jugé à propos 
d'étudier les phénomènes qui se passent dans l’animal vivant. 


REVUES ET ANALYSES. 51 


Il est vrai que dans une étude antérieure, faite en collaboration 
avec M. Kanthack, M. Hankin a abordé la question du rapport qui 
existerait entre les leucocytes du sang et le pouvoir bactéricide de ce 
liquide. D’après ces recherches, l'augmentation dans le nombre des 
leucocytes amènerait un renforcement de la propriété bactéricide du 
sang, quoique ce pouvoir ne se trouve pas en proportion directe avec 
le degré de la leucocytose. 

Mais il est évident que si l’on veut se faire une idée des éléments 
de la lutte de l’organisme contre les microbes, il faut avant tout ana- 
lyser les phénomènes qui l’accompagnent. Il est donc indispensable 
d’étudier les choses comme elles se passent dans les exsudats, provo- 
qués par les microbes. Cette question a été abordée par M. Kanthack'. 

Ce savant ne s'exprime pas d'une façon précise sur le rôle 
bactéricide des sécrétions éosinophiles et on n’a par conséquent pas 
le droit de confondre ses idées avec la théorie des alexocytes de 
M. Hankin; néanmoins les opinions des deux auteurs anglais présen- 
tent beaucoup d’analogie. 

Pour M. Kanthack ?, la lutte de l'organisme contre les microbes est 
surtout préparée parles celluleséosinophiles, c’est-à-dire par cette variété 
des leucocytes qui se distinguent par l’absence complète de propriété 
phagocytaire. Les microbes et les produits microbiens provoquent la 
leucocytose du sang, qui est suivie de la diapédèse inflammatoire. Mais 
cette réaction n’est accomplie que par les éléments non phagocytaires. 
Même le pus est presque exclusivement composé de cellules éosino- 
philes, incapables d’englober les microbes. Les phagocytes n'inter- 
viennent que plus tard, et terminent le combat qui a été commencé et 
conduit en dehors d’une action phagocytaire quelconque. Les cellules 
éosinophiles, constituant l'exsudat en général et le pus en particulier, 
agissent en détruisant les microbes. Le pus est un milieu très destruc- 
tif non seulement pour les microbes, mais même pour des corps beau- 
coup plus résistants. 

Les expériences qui servent de base à cette théorie ont été faites 
sur la grenouille et le lapin; mais M. Kanthack, dans ses publications, 
leur attribue uné importance générale. Il insiste sur ce que les phéno- 
mènes phagocytaires dépendent de l’action préalable des éléments 
éosinophiles, et reproche à plusieurs reprises aux auteurs qui se sont 
occupés de la p}l 1gocytose d’avoir ignoré les leucocytes éosinophiles, 
non phagocytaires. 

Commençons à répondre à ce dernier reproche, car il nous con- 

1. La partie du mémoire de ce savant concernant la destruction des bactéries 


dans l'organisme de la grenouille sera discutée ailleurs. 
2. Ses vues on été exposées dans le Journal des Conn. méd., 1892, pp..417, 425. 


»2 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


duira à résumer les connaissances acquises sur le rôle des différentes 
variétés de leucocytes dans la lutte contre les microbes. 

Dans le résumé que nous avons donné dans nos Leçons sur la 
pathologie comparée de l'inflammation ‘, nous avons insisté sur ce fait 
que les leucocytes non éosinophiles, ou neutrophiles, qui constituent 
la grande majorité des globules blancs dans le sang et dans le pus, 
sont de vrais phagocytes, tandis que les cellules éosinophiles, quine 
représentent qu’une infime minorité des leucocytes, ne le sont pas. 
Ce résultat général était basé sur les recherches d’un grand nombre de 
savants, ainsi que sur des investigations personnelles. 

Dès les premiers travaux de M. Ehrlich et de ses élèves, il avait 
été établi que l'augmentation du nombre des leucocytes éosinophiles 
ne se manifeste que dans des cas exceptionnels. Voici comment 
M. Ehrlich résume ses observations dans un de ses premiers mémoires ? 
sur le sang, paru il y a plus de douze ans. « Dans toutesles leucocytoses 
aiguës, il n’y a augmentation que des formes mononucléaires et poly- 
nucléaires ; les cellules éosinophiles semblent tout au contraire dimi- 
nuées. » M. Schwarze * confirme, dans sa thèse, cette manière de voir 
et ajoute : « Nous n’avons pu constater d'augmentation de leucocytes 
éosinophiles ni dans les leucocytoses aiguës (p. ex. dans la fièvre 
récurrente), ni dans les leucocytoses chroniques (posthémorrhagiques). 
Le seul processus pathologique dans lequel les cellules renfermant des 
granulations éosinophiles soient notablement augmentées, c’est la leu- 
cémie. » 

Ceci est pour l’homme. Pour les animaux, une constatation ana- 
logue a été pour la première fois fournie par M. Ribbert #. Ge savant a 
démontré que dans la leucocytose et la diapédèse provoquées chez le 
lapin par l'injection des spores de champignons, ce sont seulement les 
leucocytes polynucléaires ordinaires, non éosinophiles, qui manifes- 
tent la réaction. 

Les recherches de ces dernières années, s'étendant à la leucocytose 
du sang et à la formation des exsudats, c’est-à-dire visant le début et la 
fin de la réaction leucocytaire, ont été très nombreuses. Je ne citerai 
que quelques exemples pour démontrer que cette voie d'investigation 
a été suivie avec succès avant les travaux de MM. Hankia et Kanthack. 

M. Fink° a examiné à ce point de vue le pus de l’homme dans 
diverses affections aiguës et chroniques. Son résultat général est que 


. Paris, Masson, 1892. 

. Zeitschrift für Klinische Medicin, 1880, p. 560. 

. Ueber eosinophile Zellen. Diss. Berlin, 1880. 

. Untergang pathogener Schimmelpilze im Kôrper. Bonn, 1887, p. 77. 
. Beitr. z. Kenntn. d, Eiters u. d. Sputums. Elberfeld, 1890. 


© à © RO 


REVUES ET ANALYSES, 53 


« les cellules éosinophiles dans le pus sont comparativement rares » 
(p. 15). Sur 18 cas, étudiés par lui, 12 ont fourni un pus privé de 
cellules éosinophiles: dans d’autres il ne les a trouvées qu’en petit 
nombre. M. Fink, presque en même temps que MM. Gollasch et Ga- 
britchevsky, a fait cette constatation intéressante que les crachats des 
asthmatiques renferment beaucoup de leucocytes éosinopiles. 

Cette notion, que le pus de l'homme contient presque exclusive- 
ment des cellules neutrophiles, a passé dans les traités généraux‘, Le 
fait que, dans la leucocytose de homme, ce sont encore les cellules 
neutrophiles qui prédominent de beaucoup sur les autres espèces de 
leucocytes, a été, d’une façon générale, élabli par M. Rieder? dans sa 
monographie soigneuse de la leucocytose. 

Dans les recherches sur la leucocytose provoquée par linjection 
de la tuberculine, on a vu une augmentation du nombre de toutes les 
formes leucocytaires, mais ce sont surtout les neutrophiles qui pren- 
nent part à Ja leucocytose. Les éosinophiles ne présentent qu’une aug- 
mentalion de peu d'importance, n'atteignant même pas la limite nor- 
male (5-10 0/0 d’après Gollasch). 

D'après M. Tchistowitch® « la leucocytose aiguë (après tuber- 
culine) dépend surtout de l’augmentation du nombre des éléments 
polynucléaires, et souvent aussi de celui des leucocytes mononucléaires 
possédant un noyau lobé. Pour ce qui concerne les autres espèces de 
leucocytes *, leur nombre absolu augmente aussi dans laleucocytose très 
prononcée. D’autres fois ils restent sans changement notable et 
peuvent même diminuer ». M. Botkin5 a confirmé d’une façon géné- 
rale ces résultats; ce n’est que dans les cas où la réaction après la 
tuberculine était accompagnée d'éruption cutanée que le nombre 
des éosinophiles présentait une augmentation plus considérable. 

Toutes ces données, auxquelles on pourrait en ajouter d’autres, 
démontrent d’une façon très nette que les éosinophiles ne se rencon- 
trent en général qu'en très petit nombre dans les processus réaction- 
nels de l’organisme. Ce n’est que dans des cas tout à fait particuliers 
(leucémie, asthme bronchial, exanthèmes) que cette variété de leuco- 
cytes se présente avec une grande fréquence. 

Cette conclusion est corroborée par l'étude de la répartition des 
éosinopiles dans la série animale. Rares en général, ces cellules pré- 
sentent chez certaines espèces de vertébrés à sang froid un dévelop- 
pement considérable. Assez fréquentes chez la grenouille (surtout en 


. V. Limbeck. Grundr. d. Klin. Pathol. d. Blutes, 1892, p. 133. 
. Beitr. z. Kennt. d. Leucocytose, 1892, p. 200. 

. Berl. Klin. Woch., 1891, p. 838. 

. Entre autres les éosinophiles. 

. Deutsche med. Woch., 1892, p. 321. 


CE H O9 RO > 


D4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


hiver), elles le sont beaucoup plus chez les couleuvres, comme cela 
a été démontré par M. Saint-Hilaire dans mon laboratoire. 

Ainsi la rareté des cas de développement considérable des éosino- 
philes dans les maladies et chez les animaux, ne permet pas d’attri- 
buer à ces cellules un rôle d’une portée aussi générale que le veulent 
MM. Hankin et Kanthack. Il est vrai que ces savants s’appuient sou- 
vent sur l'exemple du lapin, chez lequel les vraies éosinophiles consti- 
tuent, d’après leurs recherches, la grande majorité des leucocytes. Ainsi 
M. Hankin (Centralbl., p. 781) affirme que le plus grand nombre des 
leucocytes du lapin qui apparaissent pendant la leucocytose sont des 
cellules éosinophiles d’'Ehrlich. Il faut cependant observer que déjà 
en 1880 il a été établi par MM. Ehrlich et Schwarze que le sang du 
lapin et du cobaye est très riche en leucocytes pseudo-éosinophiles, ou 
amphophiles, qui ne doivent point être confondus avec les vraies 
éosinophiles, et qui correspondent aux leucocytes neutrophiles de 
l'homme. Ces cellules amphophiles et polynucléaires, sont en 
même temps des phagocytes très accusés. Par contre les leucocytes 
éosinophiles sont très rares dans le sang des deux espèces de rongeurs 
mentionnées. Il est donc inexact d’affirmer que le pus de ces animaux 
soit constitué par des éléments éosinophiles, non phagocytaires. Cet 
exsudat, comme tant d’autres, est composé presque exclusivement par 
des phagocytes qui dans certains cas (homme) renferment des grains 
neutrophiles, dans d’autres (lapins, cobaye) des granulations pseu- 
do-éosinophiles, ouamphophiles. Chez beaucoup d'animaux, ces cellules 
ne paraissent point renfermer de granulations, ou bien celles-ci n'ont 
pu encore être révélées par nos méthodes de coloration. L'essentiel, ce 
n’est pas le genre de granulations, mais bien la propriété phagocytaire 
des globules de l’exsudat. 

Le résultat auquel nous conduit cet examen des faits acquis au 
sujet des granulations leucocytaires est tout à fait conforme avec celui 
qui découle de la recherche des phénomènes phagocytaires. Contrai- 
rement à l'affirmation de M. Kanthack, que la phagocytose ne débute 
que tardivement et à la suite d'une action préalable des éosinophiles, 
il est solidement établi que l’englobement des microbes par les 
phagocytes s'effectue avec une grande rapidité. Chez la grenouille, 
l'animal qui a servi aux recherches de M. Kanthack, les leucocytes 
renfermant des microbes ont été constatés par M. Trapeznikoff® (et je 
puis confirmer ses observations, faites dans mon laboratoire) déjà trois 
quarts d'heure après l'injection sous-cutanée. Chez le pigeon, 
M. Czaplewsky', (que l’on ne saurait accuser de sympathie pour la 


4. Annales de l’Inst. Past., 1891, p. 367. 
2. Zeits. chr. f. Hyg., 1892, p. 348. 


REVUES ET ANALYSES. D9 


théorie des phagocytes) a vu des leucocytes renfermant des bactéridies 
une demi-heure après l’inoculation sous la peau. Trois heures après 
l'introduction de spores charbonneuses sous la peau de la poule, 
M. Trapeznikoff a observé une accumulation considérable de leuco- 
cytes, dont un grand nombre étaient remplis de spores. Bien plus 
vite s'effectue l’englobement dans les cas où le virus a été introduit 
directement dans le sang. M. Werigo' a vu que l’englobement par 
les phagocytes commence aussitôt après l'injection des microbes. 

Souvent on observe dans un exsudat encore séreux, développé à 
la suite d’une injection récente de bactéries, une masse de leucocytes 
chargés de microbes, et sans qu'il y ait de cellules éosinophiles, même 
en petit nombre. Comment admettre alors cette action préalable des 
sécrétions éosinophiles supposée par M. Kanthack? 

La constatation faite tant de fois?, que les microbes se développent 
avec une grande rapidité dans les exsudats retirés de l’organisme 
réfractaire et transportés dans une étuve, plaide aussi contre les 
théories de MM. Kanthack et Hankin. Ces exsudats, au moment de 
leur extraction de l'organisme, ne renferment que des microbes englo- 
bés par les leucocytes, ou bien contiennent une quantité inappréciable 
de bactéries libres. Ils devraient donc être remplis par les sécrétions 
éosinophiles bactéricides, et cependant, dès que les bactéries ne sont 
pas gênées par les phagocytes, elles se reproduisent dans les cellules 
et envahissent l’exsudat. 

Ce fait, comme tant d’autres qui ont été invoqués contre la théorie 
du pouvoir bactéricide des humeurs, prouve en même temps l’impos- 
sibilité d'accepter la théorie des alexocytes. De quelque côté que nous 
envisagions cette tentative d'expliquer les phénomènes de résistance 
de l’organisme contre les microbes, toujours nous nous heurtons à 
des difficultés insurmontables. Avant de rechercher les sources des 
alexines, il aurait fallu d’abord prouver l'existence réelle de ces corps 
et démontrer leur rôle dans l’immunité. Or, plus on a étudié et appro- 
fondi la question du pouvoir bactéricide des humeurs, plus on a dû 
se persuader qu'il est impuissant à expliquer les phénomènes de l’im- 
munité. Même dans les exemples les plus classiques de ce pouvoir 
bactéricide, on a constaté que l’immunité est due à une action cellu- 
laire. Il a été notamment prouvé que ce sont les phagocytes qui 
détruisent les bactéridies vivantes chez le rat blanc et les vibrions 
avicides vivants chez les cobayes vaccinés. 

Après cette critique générale, qui suffit à démontrer que les cellules 
éosinophiles sont loin de présenter la fréquence nécessaire pour expli- 


4. Ces Annales, 1892, p. 505. 
2. Ann. de l'Inst. Pasteur. 1891, p. 471; 1892, p. 303. 


56 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


quer les phénomènes de la lutte de l'organisme contre les microbes, 
il est inutile d'entrer dans les détails du travail de M. Hankin. Il 
suffit du reste de comparer les expériences de cet auteur entre elles 
pour voir que les résultats qui en découlent sont dépourvus de la 
netteté et de la conformité indispensables dans une question si délicate. 
Le nombre des colonies qu’on peut tirer d’un même liquide de 
semence, quand on le sème sur des plaques de gélatine, est assez va- 
riable pour qu'on accueille avec une grande réserve les conclusions 
tirées de cette méthode de travail. Il est évident aussi qu'une théorie 
qui a la prétention d’avoir une portée générale, ne doit pas être basée 
sur l’étude d’une seule espèce animale, d'autant plus que le lapin, 
choisi par M. Hankin, se distingue par cette particularité que la 
grande majorité de ses phagocytes renferment des granulations pseudo- 
éosinophiles. 

Il est incontestable que la question du rôle et de l’origine des gra- 
nulations éosinophiles est très intéressante à plusieurs points de vue. 
Mais le manque de nos connaissances à ce sujet ne doit nullement 
faire obstacle à l'appréciation des phénomènes phagocytaires. Très 
répandus parmi les invertébrés complètement privés d'éléments éosi- 
nophiles, les phagocytes présentent une extension si générale qu'ils 
ne peuvent même pas de loin être comparés avec les cellules éosino- 
philes, si rares en général, et ne se développant abondamment que 
dans quelques cas isolés. 

L'étude du pouvoir bactéricide des humeurs parle de son côté 
contre l'hypothèse d’une sécrétion alexique des éosinophiles. Jai déjà 
fait observer à M. Hankin en 4891 (ces Annales, p.54) que toute théorie 
d’origine cellulaire des substances bactéricides des humeurs doit 
avant tout tenir compte de ce fait que l'humeur aqueuse, liquide 
dépourvu d'éléments cellulaires, possède une propriété bactéricide 
très prononcée. D'après tout ce que nous savons et sur l'humeur 
aqueuse et sur les cellules éosinophiles, nous n'avons pas le moindre 
droit d'admettre un rapport quelconque entre les deux. 

Après tout ce qui a été brièvement exposé dans cette revue, il ne 
reste qu'à conclure que la théorie des alexocytes, malgré son ingé- 
niosité, ne peut être admise ni comme prouvée, ni comme probable. 

EL. METCHNIKOFF. 


SUR LE MÉCANISME DE LA COAGULATION 


REVUE CRITIQUE 


Dans les travaux déjà nombreux qui ont porté sur les substances 
albuminoïdes et coagulables, iln’enestencoreaucun, à maconnaissance, 
où se trouve abordée d’une façon directe l’étude des causes du phé- 
nomène de la coagulation. Presque partout on l’a assimilé, en gros, 
au dépôt d’un sel dans une liqueur où il est devenu insoluble, et on 
s'est cru autorisé, par cette analogie, à considérer comme différentes 
les matières albuminoïdes qui se coagulaient dans des conditions dif- 
férentes, à des températures inégales, ou sous l'influence de divers 
réactifs, ou de doses inégales du même réactif. 

Des corps ainsi séparés, on s’est hâté de faire l’analyse élémentaire, 
oubliant que cette analyse ne peut avoir de signification précise que 
lorsqu'elle porte sur un corps déjà bien défini, dont elle donne la com- 
position. L'idée de chercher dans l’analyse élémentaire un complément 
d'information, un caractère distinctif qu’on ne trouvait pas ailleurs, 
cette idée, disons-nous, était d’autant plus fâcheuse que ces matières 
coagulables, on le savait, s’entraînent facilement les unes les autres en 
se déposant, et que par conséquent, rien ne garantissait d'avance Kho- 
mogénéité du produit obtenu. En fait, l'expérience s’est chargée d’aver- 
tir les savants de l'erreur commise, en donnant des compositions iden- 
tiques pour des précipités obtenus dans des conditions diverses, des 
compositions différentes pour des corps obtenus dans des conditions 
en apparence identiques. C'est du pur fétichisme que d’accorder, dans 
ces conditions, une créance quelconque à l’analyse. 

L'échec tenait à ce que la réaction de coagulation n’est pas une 
réaction définie. C’est ce que j’ai démontré d’une façon irréfutable, je 
crois, en me servant du sulfate de quinine. Les raisons qui ont paru 
suffisantes pour distinguer les matières albuminoïdes en nucléines, 
globulines, albumines, permettent avec tout autant ou tout aussi peu de 
raison de distinguer des sulfates d’albumoquinine, de globuloquinine, 
de nucléoquinine, etc., et on pourrait en dire autant pour d’autres sels 
d’alcaloïdes. Comme cela est manifestement impossible, ces raisons 
sont donc illusoires, et tout se trouve remis en question au sujet de la 
distinction des diverses matières albuminoïdes. Nous trouverons, dans 


D8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


la suite de ce travail, un nouvel argument concluant dans le même 
sens. 

Tout ceci nous dit bien que la coagulation n’est pas un phénomène 
comparable à la précipitation du sulfate de baryte ou du chlorure d’ar- 
gent, ou même du phosphate ammoniaco-magnésien, bien que ces der- 
niers précipités ressemblent un peu à ceux des matières albuminoïdes. 
Mais où sont les différences ? A quoi la coagulation doit-elle son carac- 
tère spécial? Pourquoi est-elle à la fois un phénomène banal et très 
particulier, banal en ce qu'il peut être provoqué par les causes les 
plus diverses, particulier en ce sens qu’il ne se présente que dans cer- 
taines substances, lesquelles ne semblent pas pouvoir subsister sans 
le présenter! Voilà des points essentiels sur lesquels la science ne nous 
ditrien, ou ne nous fournit que des réponses vagues et contradictoires. 

La plus nette en apparence est celle qui voit dans la coagulation 
un phénomène de soudure moléculaire. On sait ou on croit savoir 
depuis longtemps que les matières .albuminoïdes ont un poids molécu- 
lairetrèsélevé, c’est-à-dire contiennent un très grand nombre d’atomes: 
on pense aussi, surtout depuis les travaux de Graham, qu’elles ont 
aussi une grosseur moléculaire considérable, c’est-à-dire que leurs 
molécules peuvent se souder de façon à former des complexes volu- 
mineux. C’est par la grosseur de la molécule des colloïdes que Graham 
expliquait comment ces substances ne passent pas par les pores des 
membranes organiques et ne sont pas dialysables. Mais cette idée 
n’était évidemment pas nette dans son esprit. La preuve c’est qu’il 
croyait que ces substances colloïdes pouvaient entrer en solution par- 
faite comme les sels. Comment comprendre dès lors que la grosseur 
des molécules fût différente dans une solution de gomme non dialy- 
sable et dans une solution de sel marin de même concentration. Pour 
que la grosseur des groupements d'une même quantité de matière fût 
beaucoup plus grande dans le cas de la gomme, il fallait évidemment 
que la matière fut autrement distribuée, et que l'homogénéité de la 
solution cessât d’être absolue, au moins dans l’un des liquides. 

Quoi qu’il en soit, cette soudure moléculaire une fois admise dans 
le liquide, on pouvait admettre qu’elle se continuait et produisait des 
groupements de plus en plus volumineux à mesure que le liquide se 
coagulait, de sorte qu’à pousser les choses à l'extrême, toute la caséine 
d’un lait formait une masse unique, résultant de la soudure de toutes 
les molécules, lorsque le lait s'était caillé. 

Toutefois, cette conception, très simple en apparence, n’expliquait 
pas tout le phénomène. Dans une solution saline qui cristallise, tous 
les éléments présents dans la liqueur se réunissent en masses de plus en 
plus volumineuses, et on peut, avec quelques précautions, assembler en 


REVUES ET ANALYSES. D9 


un seul cristal régulier tout l’alun contenu dans une liqueur. Personne 
ne consentira pourtant à assimiler la coagulation et la cristallisation. 
Le mode d'union des éléments, de soudure si on veut, n'est pas le 
même. Les éléments d'un cristal se dissocient facilement et rentrent en 
solution : une matière coagulée est plus résistante, devient parfois 
tout à fait insoluble. La soudure qui en a réuni les particules semble 
être plus forte, et, de là à l’envisager comme un phénomène chi- 
mique, il n'y avait qu'un pas, facile à franchir avec nos idées 
actuelles. Il suffisait, par exemple, d'admettre que deux molécules se 
soudent, soil par leurs atomicités libres, si ce sont des chaines 
ouvertes, soit avec élimination d’une molécule d'eau, si ce sont des 
chaînes fermées. Et c’est ainsi que s’est constituée l’explication la plus 
généralement acceptée des phénomènes de coagulation. 

Je pourrais me dispenser de la discuter, car elle est restée jus- 
qu'iei purement hypothétique. Il n’est pas facile d’observer les effets 
du départ d’une molécule d'eau dans la soudure de deux molécules 
lorsque celles-ci sont déjà compliquées, à plus forte raison lorsque les 
deux groupements qui se soudent sont déjà des complexes molécu- 
laires. Mais je voudrais pourtant montrer que lorsqu'il s’agit des 
matières albuminoïdes ou plus généralement des corps colloïdes, tous 
les raisonnements dans le genre de celui qui précède sont viciés par 
une cause d'erreur, l'oubli de l’un des caractères principaux de ce 
même corps colloïdal sur lequel on raisonne. 

Pour le faire, je prendrai un exemple dans un travail, très intéres- 
sant du reste, de MM. Linder et Picton ‘ sur quelques hydrosulfures 
métalliques. MM. Linder et Picton ont observé que beaucoup de sul- 
fures métalliques, quelle que soit la façon de les préparer, retiennent 
obstinément un peu d'hydrogène sulfuré en excès, qui ne se laisse 
éliminer ni par les lavages ni par un courant d'hydrogène, ni même 
quelquefois par la chaleur. Au moins dans ce dernier cas, l'élimination 
de l'hydrogène sulfuré en excès est souvent lente. C’est ainsi que du 
sulfure de mercure sec, chauffé dans l'hydrogène sec, n'avait pas 
encore perdu tout son hydrogène sulfuré au bout de 17 heures. 

MM. Linder et Picton n’hésitèrent pas à considérer cet hydrogène 
sulfure, si obstinément retenu, comme combiné avec le sulfure métal- 
lique, toutes les fois au moins que la proportion conservée est cons- 
tante ou à peu près constante, et ils arrivent ainsi à admettre comme 
démontrée l’existence de composés dans lesquels, pour prendre 
l'exemple cité plus haut, il y aurait une molécule d'hydrogène sul- 
furé combinée avec 31 ou même 62 molécules de sulfure de mercure. 
Le lien de ces phénomènes avec ceux que nous étudions est évident. 


1. Journal of Chem. Soc., février 1892, p. 144. 


60 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le premier précipité obtenu est un sulfure (MS)’,H°S où n a une 
valeur relativement petite. Sous certaines influences, ce composé 
élimine de l'hydrogène sulfuré, comme les matières albuminoïdes 
en se coagulant éliminent de l’eau; on a ainsi un nouveau composé 
(MS)"‘,H#20, où n'est plus grand que n, et ainsi de suite. Avec le 
cuivre, l’hydrosulfure 7CuS,H?S passe, sous l’action des acides, par 
des états successifs exprimés plus ou moins approximativement par 
les formules 9CuS,HS, et 22CuS,HS, jusqu'à arriver finalement à la 
molécule composée de (CuS)” seule, où n est probablement plus grand 
que 22, résultat qui confirme les autres preuves du caractère com- 
plexe des sulfures... Avec le mercure, en supposant que le précipité 
soit un composé défini, la molécule (H4S)’ serait certainement com- 
posée d’au moins 62 molécules d'HyS. 

Notons que ces molécules complexes ont, comme l'ont très bien 
montré MM. Picton et Linder, quelques-unes au moins des principales 
propriétés des colloïdes, ne sont ni diffusibles ni diaiysables, sont 
coagulables soit par les acides, soit par les sels, soit par l'ébullition, 
donnent la réaction de Tyndall, etc. Voilà donc en action sous nos 
yeux, et accessible en apparence à l'expérience, un mécanisme de 
soudure moléculaire analogue à celui que nous avons admis tout à 
l'heure pour l'explication des phénomènes de coagulation. 

Mais l’objection est toujours la même : rien ne prouve que les 
hydrosulfures de MM. Linder et Picton soient des composés définis. 
Quand on les étudie sans idées préconçues, voici ce qu’on voit. Il y a 
des métaux, comme l’arsenic, avec lesquels il n’en est pas question. 
« Pour ce corps, après un grand nombre d'essais et l’emploi de 
méthodes variées, toutes les tentatives pour obtenir des résultats con- 
cordants ou définis ont dù être abandonnées » (/. c., p. 27). Pour le 
cuivre, au contraire, chaque mode de préparation a, pour ainsi dire, 
fourni son hydrosulfure, à composition à peu près constante. Entre ces 
deux extrêmes se placent les autres métaux étudiés. Là où la composi- 
tion était à peu près constante, il était toujours facile de trouver une 
formule chimique représentant à peu près les résultats. Quand on 
consent à mettre 62 molécules de sulfure de mercure dans une molé- 
cule d’hydrosulfure, le calcul peut serrer de près l’expérience : mais 
ce calcul, par lui-même, ne signifie rien si le corps auquel il s'applique 
n'est pas défini par ailleurs. | 

Le seul caractère signalé pour ces hydrosulfures, c'est qu’ils don- 
nent des résultats concordants à l’analyse, quandils sont préparés dans 
les mêmes conditions, et qu’ils sont ordinairement assez stables. Or, 
c'est là aussi le caractère de toutes les actions de teinture, de tous les 
phénomènes d'adhésion moléculaire. Là où les sulfures de MM. Linder 


REVUES ET ANALYSES. 61 


et Picton sont colloïdaux, ils ont pu entrainer, en se précipitant, un 
peu de l'hydrogène sulfuré de la liqueur, contracter avec lui une union 
plus ou moins stable, mais qui diffère d’une combinaison véritable par 
son caractère mal défini, par la disproportion entre le poids du sulfure 
et le poids de l'hydrogène sulfuré, par la variabilité dans les propor- 
tions suivant les conditions de précipitation, bref, par tous les carac- 
tères que MM. Picton et Linder signalent avec soin dans leurs hydro- 
sulfures, et qu'ils s’attachent à oublier pour en faire ensuite des 
composés définis. 

Il est clair ici qu'il ne faut pas pousser les choses à l’extrème et 
voir partout des adhésions moléculaires. Il est sûr, pour ne pas sortir 
de notre sujet, que les métaux alcalins, par exemple, donnent des 
hydrosulfures bien définis. B’une manière générale, les adhésions 
moléculaires se rattachent par un bout de la chaîne aux actions chi- 
miques vraies, si par l’autre elles confinent aux simples mélanges 
physiques. Je ne demande donc pas qu’on voie partout des adhésions 
moléculaires, je voudrais seulement qu’on ne voie pas partout des 
combinaisons chimiques *. 

Concluons donc que rien ne nous autorise à voir dans la coagula- 
tion une série continue de condensations moléculaires. Cette concep- 
tion semble plus invraisemblable encore quand on l’applique au sulfate 
de quinine. Voici un sel cristallisé, défini, soluble dans l’eau. Sa 


4. Uà exemple, qui nous ramène à l’objet de ce travail, va nous montrer 
nettement la différence des deux points de vue. Dans l’hémoglobine cristal- 
lisée, on trouve des quantités de fer un peu variables, mais qui oscillent autour 
du chiffre de 0,42 { dans l’hémoglobine de chien. En voulant faire entrer 
cette minime quantité de fer dans la molecule, Preyer s’est trouvé conduit à 
la formule empirique C900 H96° Az154 FeS2017. Le poids moléculaire est peut- 
être encore plus grand, mais il n’y a pas de formule plus simple dans laquelle 
entrent 0,42°/, de fer. Eh bien! je crois qu’on n’a pas le droit d'admettre, sans 
plus ample informé, que le fer, le soufre de l’hémoglobine, de même que celui des 
autres matières albuminoïdes, sont du fer, du soufre combinés, plutôt que du fer, 
du soufre, appartenant à une combinaison colloïdale ou non, entraînée par l’albu- 
mine, l’hémoglobine, qui, elles, sont des corps colloïdaux. Il y aurait alors adhésion 
moléculaire, non pas combinaison, et on s’expliquerait alors comment dans 
l’'hémoglobine du sang de chien, Hoppe-Seyler a pu trouver 0,39 e/, de soufre et 
0,43 °/, de fer, tandis que Jacquet y trouvait 0,57 °/, de soufre et 0,33 °/, de fer; 
comment dans l'hémoglobine du cheval, Kossel a trouvé 0,65 ,/° de soufre et 
0,47 °{, de fer, tandis que Zinoffsky y trouvait 0,39 0/, de soufre et 0,33 0}, de fer. 
De pareilles différences dans le sang d’une même espèce ont de quoi surprendre, 
surtout quand on songe à la modification énorme qui en résulte dans la formule 
de l’hémoglobine, quand on y veut faire entrer à toute force la quantité de fer 
constatée par l'expérience. C’est ainsi que pour Hufner, l’hémoglobine de sang de 
bœuf, qui contient 0,40 0}, de fer, doit être représentée par la formule C636 H1026 
A7z164 FeS3 0181, En cherchant bien, on trouverait sûrement, en suivant ces erre- 
ments, que l’hémoglobine d’un animal qui digère a une formule tout à fait diffé- 
rente de celle d’un animal qui est en appétit, et que les tissus d’un être vivant 
varient aussi aisément que les images d’un kaléidoscope, en ce qui concerne l’ar- 
rangement de leurs molécules. 


EAN ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


solution, qui contient 2 grammes environ de sel par litre lorsqu'elle 
est saturée à la température ordinaire, est dialysable, et passe sans y 
rien laisser au travers des filtres de porcelaine. C’est donc une solution 
parfaite, dont les éléments salins auraient, d’après la théorie de la 
condensation moléculaire, un long chemin à parcourir pour passer de 
leur état de dilution à celui de complexes moléculaires se déposant 
sous forme de cristaux, et pourtant l’introduction de un ou deux 
millièmes de sulfate d’ammoniaque suffit à amener ce changement 
profond, et à déterminer ces soudures successives aboutissant à lappa- 
rition de cristaux visibles à l'œil nu. Ceux qui ont la foi peuvent ne 
pas trouver cela surprenant, mais les autres ont le droit de crier à 
l'invraisemblable. 

Il resterait, pour terminer, à envisager une autre théorie de la 
coagulation dans laquelle on admet que la substance qui se coagule 
ne le fait que parce qu’elle quitte une combinaison déjà faite, ou 
qu'elle entre dans une combinaison nouvelle. C’est ainsi, par exemple, 
que pour Hammarsten, la caséine du lait, qu’il considère comme soluble, 
se dédouble sous l'influence de la présure en coagulum insoluble et en 
protéine soluble. Pour MM. Arthus et Pagès, l'insolubilité du caséum 
résullerail d’une combinaison avec les sels de chaux. J’ai combattu 
ces deux théories dans mes travaux sur le lait; jy reviens encore dans 
ce numéro, et les ohjections que je leur ai faites peuvent s'appliquer 
à toutes les théories semblables; c’est qu'aucune d'elles n’est démon- 
trée par les faits qu’on cite à son appui. J'aurai du reste l’occasion de 
les retrouver quand j'étudierai prochainement la coagulation des trois 
matières albuminoïdes les mieux connues, l’albumine, la caséine et la 


fibrine. 
E. DucLAUx. 


PERSONNES MORTES DE RAGE. 63 


INSTITUT PASTEUR 


Personnes mortes de rage après le traitement : 


ScxircH Louis, 32 ans, de Djdjelli (Algérie), mordu au poignet droit 
{5 morsures pénétrantes), le 22 août, par un chien que M. Dupuy, vétéri- 
aaire à Djidjelli, a reconnu enragé. 

Traité à l'Institut Pasteur du 28 août au 11 septembre; mort le 
24 octobre. Le 2 octobre, à la suite d’une marche sous une pluie battante, 
Schirch avait été pris de fièvre et avait dû s’aliter. Les premiers symptômes 
rabiques sont apparus le 22. 

SCHERR ÉMILE, 35 ans, d'Oran, mordu le 9 octobre à la main droite (une 
morsure peu pénétrante), par un chien que M. Bremond, vétérinaire à 
Oran, a reconnu enragé. 

Traité à l’Institut Pasteur du 16 octobre au 30 octobre, mort le 
9 décembre. 

D’ALMEinaA Joap-Joacxim, d’Aveiro (Portugal), mordu le 28 novembre 
(7 morsures pénétrantes situées sur la joue et sur la paupière gauche, cau- 
térisées à l'eau-forte un quart d'heure après), par un chien reconnu enragé 
à ses allures et à ses méfaits. (Lettre du consul de Portugal à Paris.) 

Traité à l’Institut Pasteur du 7 décembre au 27 décembre. Les premiers 
symptômes rabiques se sont manifestés dans le trajet de Paris à Bordeaux. 
L'enfant est mort le 30 décembre à l’hospice de Bordeaux. 


Personne prise de rage pendant le traitement : 


GUILLON AUGUSTINE, 17 ans, de Voiron (Isère); mordue le 13 décembre 
(deux morsures pénétrantes situées sur les deux faces de la lèvre inférieure), 
par un chien inconnu qui à parcouru le pays en mordant sur son passage 
un grand nombre d'animaux et qu’on n’a pu rejoindre. 

La jeune Guillon est arrivée à l’Institut Pasteur le 16 décembre. Le 
2 janvier, au cours du traitement, se sont manisfestés les premiers symp- 
tômes rabiques, la mort est survenue le 4 janvier. 


64 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE, — DECEMBRE 1892. 


A B C 
à ? | | | 
Morsures à la tête ( simples... ..| | , Lg l’itu 
et à la figure multiples... .| >|») |» | 3 | » | 
Cautérisations efficaces . . : . . :. . . »| » a ES ICS 
= inef, ficaces D Abe to tee »| » s D| » » 11» » 
PAS CLULETISQUOT ERP D 'ERILe 41» | » 1 D 
| : simples. :°. 4. | » | » |20) »|[181 
D Ne multiples... .| »| 1] dre 20\+0 » [10123 
». Le . D 
Cauterisations efficaces . . . . . . . . . »» |? LME DE SL MEET PS 
— inefficaces .…. : . .. : 2. OO NEO DE 10) DOS 197 1 ES De 
Pas de cuutérisation. . . . . .. . . .. >,» | ? log! » > H9l»|, 
Morsures aux mem- ( simples... ..| »| 4 13 |» [1498 |?” 2) 
bres et au tronc multiples... .| »| 2 | » [44 »| 68 
Gautérisations efficaces... "0.0. A PE A NE de ei OA 
— inefficaces... el es Pol MIAGE IE 
Pas de cautérisation. . . . . . . . . .. 3» [D | 44] » | » | 2)» |» 
QD ASIA ECITÉS RENE RCE. 2| » 7 20! » » 7|» » 
MOrSUres uns NE TERRA NES EN A EE A ER LT 
Morsures multiples en divers points du 
COF DS NL ERA MIS Se LUE PI A fee Re Eat RS » [» 
Cautérisations efficaces . . . . .. ELU De 1 LE PA AE dr ces ETUDE EE LU LE 
— nef NCACEs ETES 2 RE DEN On DO ES) Ca 
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ETLDUSAT ÉCRITES EN RENE PE ) » » »| » » 
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Français et Algériens . 4)5 58) 31) 
Totaux, Etrangers 1 1.00 1 | 18/ LE 1 js 
| 
A B C 
EEE ——_— mm 
TOTALIGENÉRADIE RENE NE 113 


Les animaux mordeurs ont été: chiens, 112 fois ; âne, 
1 fois : 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Ci. 


7me ANNÉE FÉVRIER 1893. . No 2. 


ANNALES 


DE 


L'INSTITUT PASTEUR 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS 


PRÉVENTION ET TRAITEMENT PAR LE SÉRUM ANTITOXIQUE 


Par MM. 
E. ROUX, L. VAILLARD, 
Chef de service à l'Institut Pasteur. Médecin-major de {re classe, 
Professeur au Val-de-Grace, 
I 


La découverte des propriétés thérapeutiques du sérum des 
animaux, immunisés contre certaines maladies virulentes, est, 
assurément, une des plus intéressantes qui aient été faites en 
médecine dans ces dernières années. Il est juste de rappeler 
que ce sont MM. Richet et Héricourt qui ont signalé, les premiers, 
le pouvoir préventif du sang des animaux rendus réfractaires 
contre une septicémie spéciale qu'ils ont étudiée. Mais, c’est 
seulement depuis la note de MM. Behring et Kilasato, insérée 
en décembre 1890, dans le n° 49 de la Deutsch. Med. Woch., que 
la sérum-thérapie s'est révélée avec toute son importance. Les 
expériences de MM. Behring et Kitasato ont été faites sur deux 
maladies toxiques par excellence, la diphtérie et le tétanos ; elles 
sont surtout démonstratives pour cette dernière affection. Dans 
leur première communication, ces savants établissent les propo- 
sitions suivantes : 

« 4° Le sang d’un lapin réfractaire au tétanos est capable de 
détruire les toxines du tétanos. 

« 2° Cette propriété peut se démontrer pour le sang extrait 
des vaisseaux et pour le sérum, débarrassé de toute cellule, qui en 
provient. 


Ds te 


© 
(ær] 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


« 3° Cette propriété est si durable, qu'elle persiste même 
après Ja transfusion dans l'organisme d’autres animaux; elle 
permet ainsi un traitement de l'affection. 

« 4° Cette propriété manque dans le sang d’animaux non 
réfractaires, et le poison tétanique peut se retrouver après leur 
mort dans le sang et les autres humeurs. » 

Les auteurs ne donnent qu’un bref résumé de leurs expé- 
riences : « On injecte dans Le péritoine de six souris 0,2 de sérum, 
on les inocule 24 heures après en même temps que des souris 
témoins. Celles-ci meurent au bout de 48 heures, les six souris 
vaccinées n’éprouvent rien. — On peut employer ce sérum d’une 
facon thérapeutique, en inoculant d’abord les animaux avec le 
liquide virulent et en leur injectant ensuite le vacein. Les ani- 
maux ainsi traités survivent. — Nous avons constaté que ce 
sérum est capable de détruire une quantité énorme de poison 
tétanique.— Toutes les souris survivantes sont devenues réfrac- 
taires d’une façon durable. Plus tard nous leur avons injecté des 
cultures de bacilles vivants sans les rendre malades. » 

Quelques jours après la publication de cette note si impor- 
tante, M. Behring terminait un travail sur la vaccination des 
animaux contre la diphtérie (Deutsch. Med. Woch, n° 50) par 
les phrases suivantes : « Dans notre travail en commun avec 
Kitasato, nous n'avons peut-être pas été suffisamment explicites 
sur l'influence curatrice de la transfusion du sang de lapins 
réfractaires. Je précise : Les souris ne sont pas seulement rendues 
réfractaires elles-mêmes, non seulement elles n’éprouvent pas 
d'accidents tétaniques, si, aussitôt après l'infection, elles 
reçoivent dans le péritoine du sang de lapin réfractaire, mais 
elles peuvent être guéries par la transfusion quand les accidents 
sont déjà très accentués. Une souris a plusieurs de ses extrémités 
très contracturées, elle semble devoir mourir en peu d'heures : il suffit 
alors de lui faire cette transfusion pour la guérir presque à coup sûr, 
et cela si rapidement que, quelques jours après, elle ne parail pas 
avoir été malade. Quant à la possibilité d'une guérison dans les cas 
suraiqus, il ne peut en être question. » 

En mars 1891, MM. Tizzoni et Caltani (Sur la manière de 
conférer à certains animaux l’immunité contre le tétanos, 
Archives italiennes de Biologie), confirment la propriété anti- 
toxique du sang des animaux immuuisés. Mais, ajoutent-ils, 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 67 


« pour ce qui concerne le pouvoir thérapeutique des injec- 
tions de sérum du sang d’un animal réfractaire, nous avons vu 
que, non seulement chez les lapins, mais encore chez les rats, 
même quand l’intoxication tétanique a été déterminée par une 
petite dose de poison {1 à 2 gouttes), et que l'injection du sérum 
est exécutée avant que les phénomènes tétaniques apparaissent, 
4 heures par exemple après l'injection du poison, on ne parvient 
pas à empècher ni à arrèter le développement du tétanos. » 

Dans la même année 1891, l’un de nous (Sur les propriétés 
du sérum des animaux réfractaires au tétanos, Soc. de Biologie) 
confirme la découverte de MM. Behring et Kitasalo, sur le pou- 
voir antitoxique et immunisant du sérum des lapins rendus 
réfractaires au tétanos, mais il ne peut vérifier ses propriétés 
thérapeutiques. Il mentionne en outre que, contrairement à l’as- 
sertion de MM. Behring et Kitasato, l'immunité qui suit les 
injections de sérum n'est pas durable, qu’elle diminue et peut 
même disparaître après le quinzième jour. 

Au Congrès d'hygiène tenu à Londres, en août 1891, M. Kita- 
salo, aux applaudissements de toute la section de bactériologie, 
a affirmé de nouveau les merveilleux effets du sérum antitoxique, 
qui guérit les souris tétaniques, même lorsqu'elles sont déjà très 
malades. 

Une méthode, ainsi présentée à l'attention des médecins, ne 
devait pas tarder à être appliquée à l’homme. M. Kitasato fit lui- 
même, il est vrai dans de mauvaises conditions, un essai qui 
ne réussit pas, sur un enfant alteint de tétanos, dans la clinique 
de M. Baginsky. Puis fut publiée en Italie toute une série 
d'observations de tétanoshumain, guériavecl'antitoxine préparée 
par MM. Tizzoni et Cattani. 

En France, M. Rénon a rapporté dans ces Annales (avril 1892) 
deux cas de tétanos traités par des injections de sérum de lapins 
immunisés. Les malades de M. Rénon avaient reçu de fortes doses 
d'un sérum très actif(57 c.e.et 80 c. c.), représentant une quantité 
d’antitoxine supérieure à celle qui avait été donnée aux malades 
italiens; ils succombèrent cependant à un tétanos caractérisé. 

Le traitement qui avait si merveilleusement réussi à 
MM. Bebriog et Kitasato, sur les animaux, ne se montrait donc 
pas toujours aussi efficace chez l’homme. Ces différences dans 
les résultats pouvaient s'expliquer par une application défec- 


68 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 


tueuse de la méthode. On ne savait, en effet, ni le pouvoir 
antitoxique que doit avoir le sérum, ni les doses qu'il en faut 
injecter pour obtenir un effet utile. Les renseignements sur le 
traitement des animaux faisaient presque complètement défaut : 
les inventeurs de la thérapie par le sérum s'étaient bornés aux 
détails très brefs que nous avons rapportés; ils n'avaient donné 
aucune élude détaillée qui püt fournir une base solide pour le 
traitement du tétanos humain. | 

C'est seulement au mois d'août 1892, que M. Kilasato a 
publié, dans le Zeits. f. Hyg., un travail sur la thérapeutique 
du tétanos chez les animaux tels que les souris et les cobayes. 
Une partie des expériences ont trait à la prévention de la 
maladie ; elles montrent que les animaux qui reçoivent le sérum 
avant la toxine ou aussitôt après sont préservés d’une manière 
constante, même si la dose est faible. Mais le tétanos survient 
toujours quand le sérum est injecté dans les 12 à 24 heures qui 
suivent l'injection ; il est le plus souvent curable, parfois il est 
mortel. La quantité de sérum nécessaire pour prévenir le tétanos 
est d'autant plus forte que l’on intervient plus tard après l’in- 
fection. Sur le traitement du tétanos déclaré, M. Kitasato ne cite 
que deux expériences ; une, qui a été faite sur les cobayes, est 
plutôt, à notre avis, un essai de prévention que de guérison du 
télanos ; nous la discuterons plus loin. Il reste donc une expé- 
rience sur 12 souris infectées par une écharde de bois, imprégnée 
de sporeschauffées à 80°, introduite sous la peau. Tous ces ani- 
maux présentent, déjà 35 heures après, des symptômes detétanos; 
deux serventde témoins et meurent tétaniques après 55 heures. 
Dix souris sont traitées et reçoivent à la 48° heure 1c. c. desérum 
dans le péritoine : l’activité de ce sérum est de 600,000 environ. Le 
lendemain les symptômes se sont aggeravés: nouvelle injection 
de 1c. c. de sérum. Cinq des souris succombent après 80 heures. 
Aux autres on pratique une troisième injection de 1 c. c. Les 
symptômes de tétanos s'arrêtent, et les animaux se rétablissent 
après avoir conservé pendant des semaines de la contracture 
des membres alteints. 

Tel est le document le plus circonstancié publié par M. Kita- 
sato sur le traitement des animaux tétaniques. Il n’y est plus 
question de guérir « les souris dont plusieurs extrémités sont 
contractées et qui semblent devoir mourir en peu d'heures »; il 


Live 


bat, di: 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 69 


en ressort au contraire que le sérum n’est efficace que s’il est 
très actif, que si le tétanos a une marche lente, et que si le 
traitement estappliqué dès l'apparition des premiers symptômes. 

Récemment, M. Behring aconsacré à la « sérum-thérapie » une 
importante monographie (Das Tetanusheilserum, Leipzig, 1892). 
Il rappelle qu'il a pu guérir des souris atteintes de tétanos très 
avancé, et il relate des expériences nouvelles sur la guérison de 
moutons, d'un cheval, et aussi d’un homme atteints de tétanos. 

Les expériences sur le mouton sont au nombre de quatre. 
L'une d’elles est une expérience de prévention (Exp. n° 4) : une 
brebis de 50 kilog. reçoit 20 ce. ec. de culture tétanique et en 
mème temps 50 ce. c. d’un sérum dont l’activité est 10 millions ; 
elle reste bien portante. Dans une autre expérience (n° 1), l’inter- 
vention est trop tardive pour être efficace : une brebis, atteinte 
de tétanos très avancé, meurt malgré l'injection de 100.c. c. de 
sérum. Deux moutons (Exp. n° 2 et n° 3) sont inoculés avec 
1 c. c. d'une culture tétanique traitée par le chloroforme, et qui 
tue la souris au 1/2000° de centimètre cube; trois jours après 
les animaux ont les muscles abdominaux rigides, et la démarche 
raide; on leur injecte 50 c. c. de sérum. Les symptômes dispa- 
raissent entre le 5° et le 8 jour, et Le 9 jour tout signe de con- 
tracture a disparu. Ces derniers faits seraient tout à fait démons- 
tratifs si on avait inoculé en même temps des animaux témoins. 
Le mouton est, en effet, un animal assez résistant au tétanos, 
et sa réceptivité varie avec les individus. M. Behring dit bien 
que la dose injectée était sûrement mortelle pour des animaux 
de même âge et de même poids; nous en serions plus certains 
encore s'il avait pris deux animaux de contrôle. Nous avons vu 
des moutons ne pas prendre le tétanos après l'injection de 2 €. c. 
d’une culture qui tuait le cobaye au 1/3000° de centimètre cube. 
Cette réserve que nous faisons sur la sévérité du tétanos donné 
aux brebis de M, Behring est encore appuyée par la rapidité de 
la disparition des contractures. Elles avaient cessé dès le 5° jour. 
Cela est tout à fait exceptionnel. Dans les expériences de 
M. Kitasato, les souris qui guérissent restent pendant des 
semaines avec les membres raïdis; il en esttoujours ainsi. Mème, 
quand l'injection du sérum est faite aussitôt après celle de la 
toxine, la rigidité du membre inoculé persiste longtemps. 
M. Bebring lui aussi, dans une conférence qu'il vient de faire 


70 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


et dont nous trouvons une analyse dans le Berliner Klinische 
Woch., n° 4, 1893, p. 104, nous avertit que les guérisons ne sont 
point instantanées, que les contractures durent un temps assez 
long. Il faut donc regretter que l'absence de témoins enlève un 
peu de sa rigueur à cette intéressante expérience. 

L'essai fait sur le cheval est moins probant encore; il s’agit 
d’un cheval en cours d’immunisation depuis quelques semaines, 
et chez lequel une injection que l’on supposait vaccinale déter- 
mine des symplômes tétaniques. L’immunisation avait été com- 
mencée le 22 août; le 16 septembre on fait une injection de 
2c. c. de culture traitée par le chloroforme; le 19 septembre 
surviennent de la raideur des muscles, de l’écartement des 
membres, du redressement de la queue. de la contracture du 
corps clignotant, etc. Du 19 au 21 septembre l'animal reçoit un 
litre de sang délibriné antitoxique, sous la peau. Les phéno- 
mènes tétaniques décroissent et le 27 la guérison est complète. 

Plusieurs fois, chez des animaux en cours d'immunisation, 
nous avons observé, à la suite d'une injection de toxine un peu 
forte, des symptômes graves de tétanos qui, dans la majorité des 
cas, disparaissaient sans traitement aucun. 

L'observation de tétanos humain contenue dans la monogra- 
phie de M. Behring a été prise par M: Rotter. Le patient a recu 
250 grammes d'un sérum dont l’activité était d'un million. La 
maladie était de gravité moyenne, et M. Rotlter croit qu’elle aurait 
guéri avec les traitements ordinaires. 

A Ja lecture de toutes ces dernières publications sur la sérum- 
thérapie du tétanos, on est frappé de ce que les guérisons 
semblent devenir plus difficiles à mesure que les essais se 
multiplient et que l’activité du sérum augmente. Au début, avec 
le sérum de lapins simplement rendus réfractaires au tétanos et 
non hypervaccinés, les résultats élaient excellents avec de très 
faibles doses. Aujourd’hui, avee un sérum thérapeutique d’une 
activité de 10 millions, ils sont moins satisfaisants. Ce que nous 


disons ici n’est pas une critique adressée à une méthode dont la 


découverte a excité notre admiration : nous voulons seulement 
faire sentir combieu actuellement est nécessaire une étude 
expérimentale et systématique. Il faut savoir, d'une façon précise, 
ce que donne la sérum-thérapie sur les animaux, pour pouvoir 
l'appliquer à l’homme dans les meilleures conditions. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 71 


Il 


PRÉPARATION DU SÉRUM ANTITÉTANIQUE. 


Avant d'exposer nos expériences sur la prévention et le 
traitement du tétanos, nous devons dire quels sont les meilleurs 
procédés pour obtenir le sérum antitoxique. 

C’est un fait aujourd'hui bien établi que le sérum des ani- 
maux, naturellement réfractaires au télanos, n’a aucun pouvoir 
antitoxique. La poule ne prend pas le télanos, soit qu’on lui 
injecte de fortes doses de toxine, soit qu'on l’inocule avec des 
bacilles purs ou associés à d’autres microbes; cependant, son sang 
mélangé avec du poison tétanique n’exerce aucune action sur 
celui-ci, alors même quele contact est prolongé et que la quantité 
du sang esttrès grande par rapport à celle de la toxine. L’immu- 
nité de la poule contre le tétanos n’est donc point due à une 
propriété antitoxique du sang. Il est facile, toutefois, de rendre 
le sang d’une poule antitoxique ; pour cela il suffit d'introduire 
dans son-corps une forte dose de poison tétanique (30 à 40 ce. ec. 
dans le péritoine). Pendant les trois ou quatre jours qui 
suivent immédiatement l'opération, le sang est toxique, il donne 
le tétanos aux souris; le poison circule dans les vaisseaux avec 
le liquide sanguin, mais bientôt il disparaît, et après 14 jours 
environ, le sérum fourni par la poule manifeste un énergique 
pouvoir antitoxique. 

Chez les animaux sensibles au tétanos, comme les lapins, on 
peut créer un état réfractaire sans donner à leurs humeurs une 
propriété antitoxique appréciable. L’un de nous a montré qu’un 
lapin quiareçu dans le tissu cellulaire sous-cutané de petites doses 
de spores télaniques privées de loxine et additionnées d’un peu 
d'acide lactique, reste bien portant quand, dans la suite, on lui 
injecte une quantité de poison télanique supérieure à celle qui tue 
sûrement des lapins de même poids. L’immunité ainsi établie est 
très persistante et cependant, si les inoculations de spores et 
d'acide lactique n’ont pas été trop multipliées, le sang de l'animal 
n'a pas de pouvoir anlitoxique saisissable (100 vol. de sang pour 
4 vol. de culture filtrée). Pour le faire apparaître, faisons, comme 
chez la poule, une injection de culture tétanique filtrée (3 à 3 c. c. 


72 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


suffisenl), et après quelques jours nous pourrons constater que le 
sang du lapin, mélangé à de la toxine tétanique, larend inoffensive. 

Ces expériences prouvent done que l’immunité pour le 
télanos peut exister indépendamment d’une propriété anti- 
toxique du sang, et que celle-ci apparaît seulement chez les ani- 
maux quiont reçu des doses notables de poison tétanique. La 
propriété antitoxique du sérum est d’autant plus marquée que la 
quantité de toxine introduite dans le corps est plus grande. 
Telles sont les données qui doivent nous guider pour la prépa- 
paration du sérum antitoxique. 

Au début de leurs recherches, MM. Behring et Kitasato con- 
féraient l’immunité aux lapins en leur inoculant une culture de 
tétanos., puis en leur injectant unesolution de trichlorure diode. 
Aujourd'hui ils préfèrent ajouter le trichlorure d’iode à la toxine 
télanique, et, après un contact suffisant, introduire sousla peau des 
doses croissantes de ce mélange, qui est d'autant moins dange- 
reux qu'il contient plus de trichlorure d’iode. Ce procédé n’est pas 
inoffensif : 11 faut graduer les injections avec prudence pour 
éviler que les animaux ne deviennnent tétaniques au cours de la 
vaccination. MM. Behring et Wernicke ont ainsi immunisé des 
lapins, des brebis et des chevaux (avec l’aide de M. Schutz) : tous 
ces animaux ont donné un sérum très antitoxique. MM. Brieger, 
WassermannetKitasato conseillentun autre moyen de vaccination 
qui réussirait, à tout coup, sur les lapins, et qui consiste à injecter 
des doses graduellement croissantes d'un mélange de culturetéta- 
nique sans spores ({ partie) et de bouillon de thymus (2 parties). 

Dès l’heure où MM. Bebring et Kilasato annonçaient leurs 
premiers résultats, nous étions en possession de méthodes sim- 
ples et sûres pour donner rapidement l’immunité contre le téta- 
nos aux diverses espèces animales (V. ces Annales, t. VI, p. 224). 

Dans celle que nous avons adoptée, on se sert de cultures téta- 
niques en bouillon peptonisé, âgées de quatre à cinq semaines ; 
ces cultures, filtrées sur terre poreuse, fournissent un liquide 
clair qui esl notre toxine tétanique extrêmement active, puisque 
1/4000 de c.c. tue une souris. Cette toxine, mélangée à une solu- 
tion iodée, perd en grande partie ses propriétés nuisibles, et cons- 
Utue le liquide vaccinal, qui n'est nullement caustique. Pour fixer 
les idées,nous citerons comme exemple la vaccination d’un lapin 
du poids de 2 kilog. 500. 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 13 


Le premier jour de l'expérience, le lapin reçoit sous la peau 
un mélange de 3 c. e. de toxine et de 1 c. c. de solution de Gram. 

Le cinquième jour de l'expérience, le lapin reçoit sous la 
peau un mélange de 5 c. c. de toxine et de 2 c. c. de solution 
de Gram. 

Le neuvième jour de l'expérience, le lapin reçoit sous la 
peau un mélange de 12 c. c. de toxine et de 3 c. c. de solution 
de Gram. 

Huit jours après cette troisième injection, l'animal donne un 
sérum qui, mélangé à son volume de toxine, rend celle-ci inoffen- 
sive. Dès ce moment, on peut, sans danger, injecter de la toxine 
pure, soit successivement : 5 c. c., 10 c. c., 45 c. c., 20 c. c., 
30 c. c., 40 c. c., en ayant soin de laisser un intervalle de huit 
jours entre chaque opération. Dans la suite, on rapprochera les 
injections, et on les fera dans le péritoine ou dans le sang lors- 
qu'on en sera arrivé à introduire d'un seul coup de grandes 
masses de toxine. Des lapins, ainsi immunisés, reçoivent en une 
seule fois, sans manifester autre chose qu’une élévation de tem- 
pérature de quelques dixièmes de degré, 100 c. ec. ou même 
120 c. c. d’une culture filtrée dont 0 c. c. 00025 suffisent à tuer 
une souris. 

Ce procédé d'immunisation est rapide et sans inconvénient : 
il réussit également bien sur le cobaye, le cheval, la brebis, la 
vache. Dans les documents qui font suite à ce mémoire, le 
lecteur trouvera des exemples de vaccination d’un cheval et 
d'une vache pratiquées par M. Nocard. Plus l'animal que l’on 
veut vacciner est sensible au tétanos, plus on prolongera les 
injections de toxine iodée. Ainsi, on ne commencera à injecter 
au cheval de la toxine pure que lorsqu'on aura constalé que son 
sang est antitoxique. 

Nous ne connaissons pas la modification que l’iode fait subir 
à la toxine : la réaction se produit pour ainsi dire instantanément 
dès que le mélange est fai! ; il estinutile d'attendre que la teinte 
de l’iode ait disparu. Beaucoup d’autres agents modifient le 
poison tétanique ; la chaieur, l’acide carbonique sous pression, . 
le permanganate de potasse, etc., diminuent son activité et peu- 
vent servir à préparer des liquides vaccinaux, mais aucun n’est 
d'un maniement aussi facile que l’iode et ne donne de meilleurs 
résultats, 


74 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Pour exalter le pouvoir antitoxique du sérum de son cheval 
immunisé, M. Bebhring lui injecte sous la peau, en une seule 
séance, jusqu'à 100 ce. c. de culture complète, c’est-à-dire non 


débarrassée des bacilles. Ces injections causent une tuméfaction 


locale et une réaction fébrile qui dure un à deux jours. Les 
mêmes quantités de culture, introduites dans le tissu cellu- 
laire, déterminent une faible élévation de température et des 
phénomènes locaux insignifiants, si elles ont été filtrées. Il 
semble donc que dans les cullures tétaniques il y ait, outre la 
toxine, des substances pyrétogènes qui sont retenues par la terre 
poreuse. Celles-ci paraissent, d’ailleurs, ne jouer aucun rôle dans 
la vaccination, car le sérum d’un cheval, traité par des cultures 
filtrées, est tout aussi antitoxique que celui de l’animal qui a reçu 
la culture avec les bacilles, et qui a eu beaucoup de fièvre et des 
tumeurs. 

La notation proposée par M. Behring pour indiquer l'activité 
d’un sérum est très commode et nous l'avons adoptée. Comme 
lui, nous mesurons celle activité d’après la quantité de sérum 
nécessaire pour immuniser un gramme de souris. Quand nous 
disons d’un sérum qu'il est actif au millionième, cela signifie 
qu'un centimètre cube de ce sérum suffit à immuniser mille 
kilogrammes de souris: ouencore, qu'une souris de 20 grammes 
sera rendue réfractaire par l'injection de 2 cent-millièmes de c. €. 
du même sérum. Les souris doiventtoujours êtreéprouvées avec 
la même dose de toxine, qui leur sera injectée, non pas immé- 
diatement, mais seulement dix à douze heures après le sérum, 
afin que celui-ci ait eu tout le temps d’agir. En effet, la quantité 
de sérum qui immuuise pour une dose fixée de poison est 
impuissante contre une dose plus forte; il faut donc bien con- 
naître l'énergie de la toxine d’épreuve ‘, et comme la résistance 
individuelle des souris est variable, il est préférable d'employer 
une dose de toxine supérieure à la dose mortelle minima, et d’o- 
pérer chaque fois sur plusieurs sujets. C'est ce que nous avons 
fait : aussi les chiffres qui indiquent l’activité de nos sérums sont 
plutôt au-dessous de la réalité. Malgré ces précautions, et l’ap- 
parence mathématique de la notation, celle-ci n’a pas une 
valeur absolue : elle donne des indications suffisamment exactes 


1. Nous conservons la toxine à l'abri de l'air et de la lumière, à basse EnE 
rature : dans ces conditions, son affaiblissement est très lent. 


és bé pt 0 à - nd + n : 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 75 


et surtout faciles à comparer ; c'est tout ce que l’on peut lui 
demander. Les jeunes cobayes, qui sont très sensibles à l’action 
du poison télanique, peuvent aussi servir pources mesures : nous 
avons constaté, à maintes reprises, que la dose de sérum qui 
immunise un gramme de sourisrendaussi réfractaire un gramme 
de cobaye. 

Le pouvoir antitoxique se mesure, in vitro, d'après la quan- 
lité de sérum nécessaire pour rendre inoffens'f un volume donné 
d'une toxine dont l’activité est connue‘. La propriété immuni- 
sante du sérum croît avec la propriété antitoxique. 

L'immunité persiste, chez les animaux, longtemps après la 
cessalion des injections vaccinantes; ainsi, des lapins immuni- 
sés, 11 y a près de deux aus, par l'introduction de 50 c. e. de toxine 
iodée et de 15 c. c. de toxine pure, et qui n’ont rien reçu depuis, 
résistent encore aujourd'hui à des doses de poison tétanique 
mortelles pour des lapins neufs de même poids. Le pouvoir 
anlitoxique de leur sang est très affaibli, mais il est encore appré- 
ciable. Cette décroissance est, d’ailleurs, constante dès que l’on 
suspend les injections de toxine; elle est déjà manifeste dans 
les quinze à vingt jours qui suivent la dernière injection vacci- 
nale, et elle s'accuse de plus en plus*. Il importe donc, pour 
avoir un sérum très actif, de faire périodiquement des injections 
de toxine aux animaux qui le fournissent. Non seulement on 
empêche ainsi l’affaiblissement des pouvoirs aptitoxiques et 
immunisants, mais on l’accroît sans cesse en proportion des 
quantités de toxine injectée*. Chaque nouvelle introduction de 


4. Il y aurait avantage, pour désigner l’activité d’une toxine, à employer une 
notation analogue à celle de M. Behring pour le pouvoir immunisant du sérum. 
Ainsi, une toxine d'une activité de dix mille serait une toxine dont 1 c. c. tue- 
rait 10 kilog. de souris. La toxine type pour la mesure du pouvoir antitoxique 
serait préparée par dilution, de manière que 0£t,0001 fasse périr 1 gramme de 
souris. 

2. Exp. — Le sérum d’un lapin vacciné manifeste, douze jours après la der- 
nière injection de toxine, une activité de 100,000, un mois après, celle-ci n’est 
plus que de 5,000; quinze jours plus tard, elle est tombée à 2,000. 

Un autre lapin donne un sérum d’une activité de 16,000 : vingt jours après l’in- 
terruption des injections de toxine, l’activité du sérum n’est plus que de 10,000. 

3, Après avoir reçu 220 c, c. de culture filtrée à toxicité entière, un lapin 
fournit un sérum d’une activité de 16,000. Dans les vingt jours qui suivent, on 
injecte à ce lapin 100 c. c. de culture filtrée; une semaine après, le pouvoir 
immunisant du sérum est de 50,000. L'animal reçoit, dans les cinquante-six jours 
qui suivent, 200 c. c. de culture filtrée; l’activité du sérum passe à 300,000 pour 
atteindre 1,000,000 quarante-cinq jours après, à la suite de l'injection de 200 c. c. 
de culture filtrée. 


76 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


poison létanique exalte l’activité du sérum, et il semble que 
l'expérimentateur puisse ainsi l’augmenter indéfiniment. 

M. Behring insiste sur ce que chaque injection de toxine 
amène une diminution du pouvoir immunisant du sérum, une 
partie de l’antiloxine du sang étant utilisée aussitôt pour la des- 
truction de la toxine qui vient d'y pénétrer. Si la dose de poi- 
son introduite d'un seul coup est très considérable, ou si les 
injections sont abondantes et renouvelées tous les jours, la pro- 
priété antitoxique du sang disparaîtra momentanément. D’après 
les observations que M. Behring a faites sur le cheval, il peut 
même arriver que le sang, d’immunisant qu'il était, devienne 
toxique. Ce savant a, en effet, constaté qu'à la suite de ces 
injections massives et répétées, l'urine de l'animal, d'abord pré- 
ventive, faisait mourir les souris. Il faut alors attendre une 
quinzaine de jours pour que le pouvoir antitoxique du sérum 
alteigue le taux ancien qu’il dépassera ensuite. Un point à signa- 
ler dans cette intéressante expérience, c’est qu'au moment où 
le sang ne contient plus d’antitoxine, mais au coutraire charrie 
de la toxine, le cheval ne prend point le tétanos. Son immunité 
ne peut cependant pas être attribuée au pouvoir antiloxique de 
son sérum, puisque celui-ci a momentanément disparu. Ses 
cellules sont insensibles au poison tétanique ; il existe donc, à 
côté de l’immunité antitoxique, une autre immunité qui est 
l’accoutumance au poison. 

Nous avons également remarqué cette diminution du pou- 
voir immunisant du sérum chez les animaux auxquels on injecte 
des doses massives de toxine; mais, dans nos expériences, elle 
n’était pas aussi considérable que dans celles de M. Behring. 
Ainsi, l'urine de notre cheval, recueillie après l'introduction, en 
une seule fois, de 250 c. c. de culture tétanique filtrée, n’était 
pas toxique pour les souris à la dose de 4 c. ce. À un lapin 
immunisé, du poids de 3,300, qui fournit un sérum dont l’acti- 
vilé est de 300,000, on injecte dans une veine, et d’un seul coup, 
100 c. c. de toxine. Le sang extrait trente minutes après l'injec- 
tion donne un sérum dont l'activité est de 200,000. La diminu- 
tion est petite, surtout si l'on tient compte de la dilution produite 
par l'apport, dans la circulation, d’une masse de liquide égale 
environ au tiers de celle du sang. 

En procédant par injections massives (30 c. c. pour un lapin, 


OST 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 71 


200 à 300 c. c. pour un cheval) espacées de dix en dix jours, 
on élèvera continuellement le pouvoir antitoxique, et l’on pourra 
puiser le sérum une dizaine de jours après l'opération. Les pro- 
cédés que nous venons d'exposer nous ont servi à immuniser 
un certain nombre d'animaux, lapins, chevaux, vaches. Nous 
avons imilé M. Behring en nous adressant à des espèces de 
grande taille qui fournissent assez de sérum pour entreprendre 
le traitement de l’homme. M. Nocard a bien voulu nous prêter 
son concours pour la vaccination des chevaux et de la vache. 
L'activité du sérum d'un des chevaux dépasse aujourd'hui 
10,009,000; c’est ce degré d'activité que M. Bebring regardait 
comme particulièrement favorable aux essais thérapeutiques. 
Le lait de la vache est aussi une source d’antitoxine très 
active. 

Pour garder le sérum en provision, nous le desséchons dans 
le vide et nous le conservons à l’état sec; au moment de s’en 
servir, il est dissous dans six fois son poids d’eau distillée 
stérile. La dessiccalion ne diminue pas son eflicacité et permet 
de le conserver indéfiniment. 


III 


PROPRIÉTÉS DU SÉRUM ANTITOXIQUE. 


Les propriétés si remarquables du sérum sanguin des ani- 
maux immuuisés contre le télanos, se manifestent par des faits, 
faciles à vérifier, et devenus classiques depuis les mémoires de 
MM. Behring et Kitasato. Mélangeons parties égales de cesérum 
et de toxine tétanique mortelle pour le cochon d'Inde à la dose 
de 0 ec. c. 003, etinjectons des volumes de ce mélange contenant 
2 c.c.,3 c.c,5c. c., de culture filtrée à des cobaves;ceux-ci ne pré- 
senteront, dans la suite, aucun symptôme de tétanos. L'action du 
sérum s'exerce aussi bien dans l'organisme vivant que dans les 
verres à expériences, Chez un lapin immunisé, introduisons, 
d'un seul coup, 120 c.c. de culture tétanique filtrée, par une veine 
de l'oreille, etrecueillons le sang trente minutes après l'opération; 
non seulement il n’est pas toxique pour les souris, mais il leur 
donne l’immunité. Il est facile d'obtenir des sérums dout l’activité 
paraît véritablement extraordinaire. Un de nos chevaux immu- 


78 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


nisés donne un sérum dont une partie rend inoffensives, in vitro, 
trente parties de toxine. 

La substance antitoxique contenue dans ce sérum contracte-t- 
elle une combinaison définie avec la toxine, à la manière d’un 
acide qui sature un alcali, ou se comporte-t-elle comme un fer- 
ment qui provoquerait un dédoublement encore inconnu de la 
toxine? Il semble qu’un corps qui agit en proportions si faibles 
ne puisse être comparé qu'aux enzymes auxquels il ressemble 
d'ailleurs sous beaucoup d’autres rapports. Mais il faut remar- 
quer que nous n'avons aucune idée de la quantité réelle d’anti- 
toxine contenue dans un volume de notre sérum, non plus que 
de celle de toxine renfermée dans 30 volumes de notre culture 
filtrée ; ces quantités sont peut-être justement équivalentes et 
capables de s’unir en une combinaison définie. 

Dans l'état actuel de nos connaissances, la question est 
d'autant plus difficile à résoudre, qu’en dehors de l’action surles 
animaux, nous n'avons pas de moyen de déceler la toxine et 
l'antitoxine. Jusqu'ici aucun artifice ne nous a réussi peur séparer 
la toxine et l’antitoxine versées l’une dans l’autre; ni la filtration 
sur terre poreuse, ni la dialyse, ni les précipitations ne nous ont 
donné de résultats'. D'ailleurs, les propriétés de ces deux 
substances sont très semblabies, et les agents physiques ou 
chimiques qui altèrent l’une détruisent également l’autre. Dans 
de pareilles conditions, il est donc très malaisé de savoir si un 
animal qui reçoit un mélange de sérum et de culture filtrée reste 
indemme parce que le poison n'existe plus dans le liquide inoculé, 
ou bien parce que le sérum immunisant a rendu ses cellules 
insensibles à la toxine qui reste alors sans effet. Nous citerons 
quelques expériences qui, sans dévoiler le mécanisme de l’action 
de la toxine sur l’antitoxine, montrent que tout se passe comme 
si ces deux corps se détruisaient mutuellement. 

* L'action de l’antitoxine sur la toxine est instantanée : dès que 
le mélange est fait, il est inoffensif pour les animaux. Quand on 
verse des quantités graduellement croissantes de toxine dans un 
volume donné de sérum, il arrive un moment où le pouvoir 
autitoxique de celui-ci est anéanti; le liquide contient de la 


1. La toxine tétanique, qui passe en partie à travers le parchemin quand elle 
est dans du bouillon, ne dialyse plus sielle est mélangée à un liquide albumineux. 


RL ee à à) 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 19 


toxine libre et donne le tétanos aux animaux qui le reçoivent. 

Le sérum d’un lapin en cours de vaccination est très anli- 
toxique in vitro, 1l rend inoffensif son volume de culture filtrée, 
mais son pouvoir préventif est faible. { ©. ce. n’immunise pas un 
cobaye de 250 grammes contre 1/15° de c. c. de culture filtrée. 
On verse dans un verre parties égales de ce sérum et de la culture 
filtrée. Après une heure de contact, on injecte à un cochon d'Inde, 
une quantité du mélange contenant exactement 1/15° de c. c. de 
l’un et de l’autre. Or, 0c,003 de la toxine suffisent à donner au 
cobaye un tétanos fatal: la quantité de poison injectée dépasse 
donc de beaucoup la dose mortelle. D'autre part, la proportion 
de sérum est trop minime pour immuniser, puisque cet effet n’est 
pas obtenu avec 1 e. ©. Cependant l'animal ne présente aucun 
symptôme de tétanos. Il semble donc que la toxine ait été véri- 
tablement détruite par l’antitoxine. 

Exagérant la preuve, injectons à plusieurs cobayes des 
volumes du même mélange renfermant 2, 3, 4, 5 c. c. de la 
culture filtrée et un égal volume de sérum. Aucun d’eux ne 
devient tétanique. Il est certain, cependant, que les doses. de 
sérum qu'ils ont reçues sont absolument impuissantes à pré- 
munir ces animaux contre les fortes quantités de toxine qui 
leur étaient associées. En effet, un cobaye auquel on injecte 
3 ©. ©. de ce même sérum, el immédiatement après et dans un 
point voisin, seulement 1/2 c. c. de culture filtrée, prend un 
tétanos très grave dont il finit pourtant par guérir. 

Le fait suivant est de même ordre : le sérum d'un lapin est 
antitoxique in vitro, mais son pouvoir préventif n’est pas encore 
très élevé, puisqu'il en faut environ 1 c. c. pour immuniser un 
cobaye contre une dose moyenne de toxine. Ce sérum est 
mélangé à un volume de culture filtrée égal au sien ; après trente 
minutes de contact, on ajoute de l’eau stérile, et on injecte à un 
cobaye une quantité telle de la dilution, que l'animal recoit 1/300e 
de c. c. de culture, dose plus que suffisante pour le tuer, et 
1/300° de c. ce. de sérum, dose impuissante à l’immuniser. Ilreste 
bien portant, tandis qu’un cobaye, de même poids, auquel on in- 
jecte 1/150° de c. c. du même sérumet douze heures après 1/600€ 
ce c. c. de toxine, succombe au tétanos le 5° jour. Si le premier 
cobayeestrestéindemne,ce n’estpas parce qu'il aétéimmunisé par 
le sérum, mais parce que la toxine n'existait plus dans le mélange, 


80 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


L'injection d’un peu de sérum à un animal sensible, si elle 
est faite quelques heures avant l'infection, lui permet de résister 
à une dose de culture sûrement mortelle pour les animaux de 
même poids. On peut obtenir des sérums qui immunisent à des 
quantités infiniment petites. Nous avons dit que nous possé- 
dions un cheval dont le sérum est actif au dix-millionième de ce. ce. 
Cette minime portion n’est préventive que pour une dose déter- 
minée de toxine, elle serait insuffisante pour une dose plus 
grande. En augmentant le volume du sérum injecté propor- 
tionnellement à celui de la toxine que l’on veut employer, on 
rendra les animaux insensibles à des masses de poison tétanique. 
Le sérum confère donc aux animaux une immunité véritable, 
comme l'ont établi MM. Behring et Kitasato; mais, contraire- 
ment à l'opinion de ces auteurs, l’immunité ainsi donnée n’est 
pas durable, elle diminue rapidement quelle que soitlaquantité de 
sérum injectée, et elle disparaît dans un délai qui, dans nos expé- 
riences, n'a guère dépassé 50 jours. Ainsi, un cobaye, du poids 
de 530 grammes, reçoit dans le péritoine 20 c. c. d’un sérum 
actif à O0c,00002; 37 jours après, l'inoculation d’une quantité 
modérée de culture filtrée provoque chez ce cobaye un tétanos 
sévère dont il finit par guérir. Une souris du poids de 15 grammes 
reçoit 1 c.c. d'un sérum actif au millionième; éprouvée au bout 
de 24 jours avec une petite dose de toxine, elle meurt tétanique. 
Parfois même, chez les cobayes auxquels on n’a donné que 2 à 
3 ©. c. de sérum, l’immunité prend fin dès le 15° ou le 20° jour. 

Cette immunité est acquise immédiatement après l’intro- 
duction du sérum antitoxique, elle est proportionnelle à la dose 
de celui-ci. Elle est bien différente de l’immunité lente à s'établir, 
mais persistante, que l’on obtient par l'injection de la toxine 1odée 
ou chauffée, ou encore par l'injection dans le tissu cellulaire de 
spores tétaniques et d'acide lactique. Chaque fois que les cellules 
de l’organisme ont subi l’action de la toxine tétanique, elles con- 
servent longtemps leur résistance vis-à-vis d'elle, alors même 
que le sang ne manifeste pas de propriétés antitoxiques. Cela 
prouve bien que l’immunité dans le tétanos n’est pas tout 
entière dans le pouvoir antiloxique des humeurs. Il y a en réalité 
plusieurs sortes d'immunités contre le tétanos, et l’immunité 
antitoxique est celle qui apparaît en dernier lieu quand on 
vaccine les animaux par les procédés que nous avons décrits. 


tu nfions 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 81 


Comment se forme l'antitoxine dans le corps des animaux? 
Elle est abondante dans le sang seulement après l'injection de 
grandes quantités de toxine.N'est-elle qu’une modification de celle- 
ei, ou bien est-elle sécrétée par certaines cellules du corps excitées 
par la toxine? Ce sont là des questions du plus hant intérêt; 
elles éveillent la curiosité de l’expérimentateur, comme d’ailleurs 
tout ce qui touche à cette merveilleuse propriété antitoxique des 
sérums qui nous a été révélée par M. Behring ; mais elles sont 
difficiles à résoudre etnécessitent encore beaucoup de recherches. 
On sait cependant que la substance antitoxique existe surtout 
dans le sang ou plus exactement dans le sérum : le caillot n’en 
renferme pas, comme l’a prouvé M. Behring. D’autres liquides de 
l'organisme possèdent les mêmes propriétés que le sérum : la 
sérosité, limpide et privée d'éléments cellulaires, de l’œdème 
provoqué chez un lapin vacciné par une ligature temporaire 
placée à la base de l'oreille, est aussi antitoxique que le sang. 
L'humeur aqueuse d’un animal très fortement immunisé est 
autitoxique, mais à un plus faible degré. L’urine et la salive 
manifestent un pouvoir antitoxique très petit, même quand elles 
sont fournies par des animaux hyperimmunisés. Le lait, au con- 
traire, est riche en antitoxine et agit comme le sérum. M. Ehrlich, 
à la suite d'une série d’expériences qui sont un modèle d’ingé- 
niosité, attribue au lait le rôle principal dans la transmission 
dite héréditaire de l'immunité. 

Comme il est difficile d'expurger complètement les organes 
du sang qu'ils renferment, on ne sait pas d’une façon précise si 
leurs éléments anatomiques contiennent de l’antitoxine. Chez 
certains animaux immunisés, nous avons vu que les ganglions 
lymphatiques, la rate, le foie, le thymus, les capsules surrénales, 
le pancréas, les glandes salivaires et lacrymales détruisaient, in 
vitro, la toxine tétanique, tandis que les muscles étaient sans 
action. Chez d’autres, le foie s’est montré antitoxique, tandis que 
la rate et les capsules surrénales ne l’étaient pas. Il ne semble 
pas que la substance antiloxique soit concentrée dans un organe 
déterminé qu'on puisse considérer comme son générateur; elle 
se rencontre un peu partout, mais nulle part en aussi grande 
abondance que dans le sang. 

M. Botkin a vu que les leucocytes, puisés dans un foyer de 
suppuralion chez un animal immunisé, possèdent la propriété 
6 


82 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


antitoxique. Le faitest exact; provoquons, chez un lapin vacciné 
contrele tétanos, la formation d’un abcès, sans microbes vivants, 
eninjectantdans le tissu cellulaire des spores tétaniques chauffées 
à 115°, et insérons un peu de ce pus caséeux sous la peau d’une 
souris. Celle-ci résistera ensuite à une dose de toxine tétanique 
supérieure à celle qui d'ordinaire détermine lamort. Mais ce pus est 
bien moins préventif que le sérum de l'animal qui l'a fourni; pour 
immuniser le mème poids de souris, il faut 6 et 8 fois plus de 
malière caséuse que de sérum. On peut donc se demander si son 
action immunisante n’est pas due à la petite quantité de sérosité 
qui se trouve avec les leucocytes. En effet, si on lave soigneu- 
sement à diverses reprises les amas purulents dans une solution 
physiologique de chlorure de sodium, leur propriété préventive 
diminue beaucoup. 

La substance antitoxique s’élimine constamment par le rein, 
et aussi par le lait chez les femelles. Malgré ces causes de déper- 
diion, on en trouve encore dans le sang des animaux immu- 
nisés longtemps après la cessation des injections vaccinantes. 
Puisqu’elle est surtout contenue daus le sang, on pourrait croire 
que des saignées fréquemment répétées sur un lapin vacciné 
font baisser rapidement le pouvoir immunisant de son sérum. 
I n’en est rien, et l’on peut extraire de ses vaisseaux, en quelques 
jours, une quantité de sang égale à la masse totale de ce liquide 
sans que l’activité du sérum soit sensiblement diminuée. Deux 
lapins sont prélevés dans unlot en cours d'immunisation; l’un, A, 
pèse 2kilogr.200, l’autre,B,2kilogr.600.0nsuspendlesinjections 
de toxine chez ces animaux, et on constale que le 14 juillet 4892, 
l’activité de leur sérum est de 0‘“,00003 pour le lapin À et de 
0c,00005 pour le lapin B. Du 14 juillet au 3 août on soustrait 
au lapiu À 200 grammes de sang. Le 5 août on pratique une 
saignée sur les deux animaux, le sérum provenant de A est 
aclif à 0°,0000% et celui de B, le lapin non saigné, est actif à 
0,00006. L’affaiblissement du pouvoir antitoxique, constaté 
chez les deux animaux est celui qui s’observe quand on 
cesse les injections de toxine. Les saignées ne l’ont point 
augmenté chez le lapin A. Cette expérience répétée plusieurs fois 
ayant donné les mêmes résultats, il faut bien en conclure que 
l’antitoxine enlevée à chaque saignée a été remplacée. Nous ne 
reliendrons, pour le moment, de cette expérience que sa signi- 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 83 


ficalion pratique. Chez un animal fournisseur de sérum, les 
saignées peuvent être fréquentes et copieuses, sans que de ce fait 
le pouvoir antitoxique soit notablement diminué. 


IN 


DE LA PRÉVENTION DU TÉTANOS. 


MA. Behring et Kitasato ont proposé d'employer le sérum 
antitoxique à la prévention du tétanos et au traitement de la 
maladie déclarée. Guérir le tétanos est évidemment de la plus 
grande importance ; chercher à le prévenir peut sembler moins 
pratique, si on considère qu'il est peu fréquent et qu'il survient 
à la suite des traumatismes les plus différents, sans qu'aucun 
signe puisse faire prévoir son imminence. L'étude de la préven- 
on, par le sérum immunisant, mérite cependant d'être faite, 
parce qu'elle peut fournir des données utiles sur la manière dont 
agit l’'antitoxine, et aussi parceque, dans quelques circonstances, 
elle peut être appliquée à l’homme. 

Chez les animaux d'expérience, nous pouvons provoquer le 
tétanos soit en leur injectant de la toxine toute préparée, soit en 
leur inoculant le microbe tétanique. Dans les deux cas, c’est le 
poison tétanique qui produit fa maladie : mais, dans le premier, 
la dose de toxine introduite est fixée et ne se renouvelle pas, 
tandis que dans le second (qui se rapproche davantage des con- 
ditions de la maladie naturelle), la toxine est produite en quantité 
indéterminée par le microbe qui se développe au point d’inocula- 
tion Ces deux modes d'infection doivent être étudiés séparément. 

1° INFEGTION PAR LA TOXINE. — Envisageons d’abord le cas le 
plus simple, celui de la prévention du tétanos provoqué par l'in- 
jection sous la peau d'un peu de culture télanique filtrée, c’est- 
à-dire privée de microbes. Sur quels éléments anatomiques agit 
le poison ainsi introduit? Nous ne le savons pas d’une façon pré- 
cise, et nous ne pourrons pénétrer complètement le mécanisme 
de l’immunité que lorsque notre ignorance sur ce point sera dis- 
sipée. Nous savons, toutefois, que le poison tétanique est très 
rapidement absorbé, ainsi que le prouve l’expérience suivante 
bien connue : on injecte une dose mortelle de toxine, à la partie 
moyenne de la queue d’un certain nombre de rats, et ensuite on 


84 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sectionne les queues, à la base, après des temps variables ; tous 
les rats dont la queue aura été coupée plus de 40 minutes après 
l'infection mourront tétaniques dans le même temps que les 
témoins. La toxine se trouve dans le sang, chez les animaux 
empoisonnés avec des doses un peu notables, de même que chez 
l'homme atteint de tétanosintense. Malgré la rapidité de l’absorp- 
tion, les effets du poison tétanique ne sont pas immédiats; entre 
le moment où il est introduit dans le corps et celui où apparais- 
sentles premiers symptômes, il s'écoule de 16 à 24 heures pour 
la souris, le rat et le cobaye, de 18 à 60 heures pour le lapin. 
Ces périodes d’incubation se rapportent à des doses moyennes 
de toxine, elles sont raccourcies pour des doses plus fortes et 
allongées pour des doses moindres. Il est évident que la préven- 
tion du tétanos sera d'autant plus difficile que Pon interviendra plus 
longtemps après l'introduction du poison, celui-ci ayant eu le 
temps d’altérer les éléments sensibles à son action. 

Cherchons maintenant si l’antitoxine se répand aussi vite 
dans le corps et à quel moment nous la retrouvons dans le sang. 
Dans le péritoine d’un cobaye de 450 grammes, on fait pénétrer 
4 ce. ©. d’un sérum actif au dix-millionième, et on retire du sang 
d’une veine de l'oreille, 35 minutes après l’opération. Ce sang 
manifeste des propriétés antitoxiques in vitro, à raison de 15 par- 
ties pour une partie de culture filtrée. Une heure plus tard, cinq 
volumes de sang neutralisent un volume de la même toxine. Un 
autre cobaye de 345 grammes, reçoit 1 c. e. du sérum précédent 
sous la peau; après # heures, 25 parties de son sang rendent 
inoffensive une partie de culture filtrée. A un lapin de 2K 300, 
nous injectons, dans le péritoine, 15 c. c. d’un sérum actif à 
Occ. 00002; soixante minutes après nous retirons d'une veine de 
l'oreille un sang très antitoxique : il neutralise son volume de 
culture filtrée, et son pouvoir immunisant pour la souris est de 
1/5000. 

Il suffit done d'injecter à un animal une quantité de sérum 
représentant la 345° partie de son poids (cobaye), pour donner 
très rapidement à son sang une propriété antitoxique manifeste: 
avec une dose égale à la 150° partie du poids de l'animal (lapin), 
non seulement la propriété antitoxique du sang est très marquée, 
mais le pouvoir immunisant est très notable. 

Cette propriété antitoxique du sang persiste pendant plusieurs 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 85 


semaines. Le sang du lapin dont nous venons de parler, neutra- 
lisait encore son volume de toxine, 22 jours après l'injection ; 
40 jours après, son action était affaiblie, mais encore appréciable. 
En rapprochant ce fait de celui que nous avons déjà établi, à 
savoir que l'immunité conférée par le sérum est passagère, qu’elle 
diminue dès le quinzième jour pour disparaître du quarantième 
au cinquantième, nous sommes conduwæts à admettre que les ani- 
maux qui ont reçu le sérum sont réfractaires pendant tout le 
temps que leur sang possède, à un degré suflisant, la propriété 
antitoxique. Aussitôt que l’antitoxine a disparu, l'animal redevient 
sensible comme avant au poison tétanique. 

Les notions que nous venons d'acquérir nous indiquent les 
conditions à réaliser pour la prévention du létanos. On peut 
espérer qu'une quantité de sérum qui rend le sang de l’animal 
antitoxique ou même immunisant sera plus que suffisante. Il est 
certain aussi que chaque fois que le sérum sera injecté de 40 à 
45 minutes avant la toxine, celle-ci sera détruite dès qu'elle péné- 
trera dans le sang, puisque l'antitoxine circule déjà dans les vais- 
seaux. L'expérience montre qu'il en est ainsi : 


A quatre cobayes du même poids, de 280 à 350 grammes environ, on 
injecte d’abord sous la peau du flanc, 1 c. c. de sérum actif au millionième 
de e. ce, puis, 10’, 20’, 30’, et 40’ après, 1/150 c. c. de culture filtrée, dose 
qui tue le cobaye témoin en 48 heures. Le cobaye qui a reçu ce sérum 40’ 
avant la toxine n'éprouve aucun accident; les trois autres présentent, 
36 heures, 6 et 7 jours après, un pleurosthotonos accentué : l'apparition de la 
contracture a élé d'autant plus tardive et son intensité d'autant moindre 
que les animaux avaient reçu le sérum plus longtemps avant le poison. 
Dans les conditions de l'expérience, la prévention du tétanos n’est complète 
que si le sérum est administré 49 minutes avant la toxine. 


Injectons presque simultanément et dans le mème tissu, mais 
en des points différents, de l’antitoxineet delatoxine :les deux sub- 
stances ne diffuseront pas avec la même vitesse; le poison, qui se 
répand plus rapidement, agira d’abord: malgré que l’antidote 
vienne bientôt arrêter ses effets, les cellules atteintes réagiront, et 
nous observerons un tétanos limité au point où nous avons intro- 
duitla toxine. Un cobayereçoitsousla peau duflane2 c. c.de sérum 
aclif au millionième de cent. cube, puis immédiatement après et 
au flanc opposé 1/150 de c. ec. de culture filtrée ; il présente au 
bout de 30 heures du pleurosthotonos et de la rigidité d’une patte 


86 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


antérieure. On observe toujours les mêmes effets quelle que soit 
la quantité du sérum que lon emploie. 


Dix cobayes sensiblement du même poids (290 à 300 grammes) sont 
infectés à la cuisse gauche avec 1/150 de c. ce. de culture filtrée. L'un sert 
de témoin et meurt 48 heures après. Aux cinq autres, aussitôt après l'infec- 
tion, on injecte 4 c. c., à e.c., 10 ec. c. sous la peau, 10c. c.et 15 c. c. dans 
le péritoine, d'un sérum dont le pouvoir immunisant est supérieur à dix 
millions. Ces cinq animaux présentent, à la même heure que le témoin, un 
tétanos qui reste localisé à ia patte inoculée et qui persiste longtemps. 


D’après ce que nous venons de dire, on peut prévoir qu'il 
sera plus difficile de prévenir le tétanos si on intervient seule- 
ment après l'injection de la toxine, pendant la période d’incu- 
bation. 


A des cobayes du poids de 350 grammes on injecte, 1/150 de c. ec. de 
culture filtrée sous la peau de l'abdomen, puis 15, 25, 30, 45, 60 minutes, 
15,30 et 2 heures après, 3 c. c. de sérum actif au millionième. Lesanimauxqui 
ont reçu le sérum de 15 à 45 minutes et celui qui l’a reçu 4h,30 après la 
toxine ont un tétanos modéré, les deux autres ont un tétanos mortel. 


Il semble que chez les souris on puisse intervenir utilement 
pendant un temps plus long : 


On injecte à des souris, à la base de la queuc, 1/2000° de c. c. de culture 
filtrée et, 7,8 et 14 heures après, 1c°,5 de sérum actif au millionième; la 
souris qui à reçu le sérum à la 14° heure succombe, les deux autres ont un 
tétanos très sévère mais qui guérit. 


En employant de plus grandes doses de sérum préventif, ou 
un sérum plus actif, on peut intervenir efficacement plus long- 
temps après l'injection de la toxine. 


11 cobayes, du poids de 290 grammes à 310 grammes, sont inoculés 
dans la cuisse gauche par l'injection de 1/150 de c. c. de toxine. Un des 
cobayes qui sert de témoin meurt en 48 heures. Les 10 autres reçoivent : 


N° 1.45 minutes après l'infection. 3° de sérum sous la peau. Mort en à jours. 


N°9; — — ace — — Tétanos limité à 
patte. 
Nom — — J0cce — — Mort en {1 jours. 
Never — — 10c€ dans le péritoine. Tétanoslimité à la patte. 
N°25: — — 20ce — — — 
N° 6.2 heures après l'infection. 20cc —— — — 
No 7. 3 heures — A8cc — — — 
No 8.4 — — 48cc — — — 
Nore9 5 — — 3cc — — Se 
N° 10.5 — — 15cc —- Tétanos limité à la patte 


pendant à jours, puis 
pleurosthotonos quine 
s'aggrave pas. 


CONTRIBUTION A L’ÉTUDE DU TÉTANOS. S7 


Le sérum employé a un pouvoir immunisant de dix millions. 
Cette expérience montre bien l'influence des quantités de sérum 
injectées; mème 5 heures après l’infection, on peut prévenir le 
télanos en donnant de grandes doses, de préférence dans le 

) » P 
péritoine. Après 12 heures, la mort survient le plus souvent. 

Il faut aussi tenir compte du lieu où l’on introduit le poison. 

Une mème dose de toxine injectée à la patte est en général moins 
O 

rapidement meurtrière que si elle est injectée au thorax ou sous 

la peau de l'abdomen. Dans le premier cas, ce sont les muscles 

de la palte qui sont contracturés tout d’abord ; dans le second, 

la rigidité débute par les muscles respiratoires, ce qui est plus 

dangereux. 


Neuf cobayes du même poids (290 grammes à 300 grammes), sont 
inoculés avec 1/150 de c. c. de toxine, 4 à une patte postérieure, à sous 
la peau de l'abdomen près des côtes. Un cobaye de chaque série sert de 
témoin, les autres sont traités par l'injection d'une même dose de sérum 
dans le péritoine après des temps variables. Le sérum employé a un pou- 
voir immunisant supérieur à dix millions. 


INOCULÉS A LA PATTE. 
Témoin meurt en trois jours. 


N° 1. Reçoit 9 heures après linfection 18c°:. Mort en trois jours. 
No2. — 12 — —_ 18ce. Mort en trois jours. 
No 3 — 15  — — A8ec. Mort en 6 jours. 
No 4% — 924 — — 18:c. Mort en 43 jours. 


INOCULÉS A L'ABDOMEN. 


Témoin meurt en moins de A8 heures. 


N° 1. Reçoit 9 heures après l'infection 18cc. Pleurosthonos. Guérison, 


N°2; 5-7 19 -— -- 48cc. Tétanos grave, Survie 

No 3 — 45 — — 48cc. Mort en 3 jours. 

No 4% — 90 — — 43cc. Mort en 2 jours 1/2. 

No 0À — — 18ce. Mort en 45 heures, 24 heures 


après l'injection du sérum. 


Dans toutes ces expériences, il arrive que des cobayes 
meurent qui ont reçu le sérum préventif plus tôt que d’autres 
qui résistent : il arrive encore qu'un cobaye qui n'a eu qu’une 
petite dose de sérum guérit, tandis qu'un autre périt, qui en à 
reçu d'avantage. Ces irrégularités mettent en évidence les diffé- 
rences de réceptivité individuelles. D'ailleurs, il ne faut pas 
oublier que les résultats ci-dessus seraient fort modifiés si nous 


83 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


avions injecté des doses de toxine plus fortes, la prévention de 
la maladie serait alors bien plus malaisée. 

2° INFECTION PAR LE BACILLE TÉTANIQUE. — Lorsque l'infection est 
causée par l'introduction du bacille tétanique dans les tissus, l’in- 
cubation peut être longue ou courte suivant que la culture débute 
aussitôt ou qu'elle est retardée. Nous ne connaissons alors ni 
le moment où la toxine commence à agir, ni les quantités qui 
interviennent, puisque le microbe en élabore tant qu'il est vivant; 
ici l'empoisonnement ne se fait plus en un seul coup, il est con- 
ünu. L'étude de la prévention du tétanos dans ces conditions, 
qui sont celles de l'infection naturelle, donnera des indications 
utiles pour le traitement de la maladie déclarée. 

Infection par spores chauffées à 80° additionnées d'acide lactique. 
— Bien que l'addition d'acide lactique aux spores tétaniques 
privées de toxine favorise leur germination, le tétanos n'apparait 
en général que dans le cours du troisième jour. Le sérum, 
injecté en même temps que le microbe ou dans les heures qui sui- 
vent, aura donc le temps de se répandre dans le corps avant 
la formation de la toxine. 


A une souris de 15 grammes on injecte 1/3 de €. c. d'un sérum qui immu- 
nise à 0cc,00002 contre une forte dose de toxine; immédiatement après, 
l'animal reçoit dans les muscles de la cuisse des spores chauffées à 80 et 
un peu d'acide lactique. Le tétanos débute dans le cours du 3 jour et la 
souris succombe. — A {rois cobayes du poids de 350 grammes environ on 
injecte des doses différentes du même sérum sous la peau, à savoir : {°e,5; 
30,9, 4 c. c., et aussitôt après, dans un muscle de la cuisse, des spores et un 
peu d'acide lactique. Un quatrième cobaye témoin reçoit { c. c. du même 
sérum et, 2 heures après, 1/15 de €. c. d’une culture très toxique (dose tuant 
en 30 heures). Il reste bien portant. Les trois autres prennent le tétanos du 
2° au 6° jour et succombent. 


Les quantités de sérum qui préservent sûrement contre lin- 


fection produite par une dose donnée de toxine peuvent donc 
être insuffisantes contre l’inoculation de spores et d'acide lac- 
tique; elles étaient cependant assez fortes pour donner au sang 
un pouvoir anlitoxique appréciable. 

Spores associées à des microbes favorisants. — L'infection par 
les spores additionnées d'acide lactique pourra paraître trop 
sévère, et d'ailleurs les spores tétaniques que l’on rencontre 
dans la nature ne sont point associées à un acide, mais bien à 


Ex: 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 89 


d'autres microbes qui facilitent leur culture. Dans les expériences 
qui suivent, les animaux ont été inoculés, dans le tissu cellulaire, 
avec des spores chauffées à 80°, et associées à un coccus par lui- 
mème inoffensif. Ce mode d’inoculation donne le tétanos à coup 
sûr, le plus souvent dans le cours du troisième jour, et la mort 
survient en général de 36 à 48 heures après le début des accidents. 

A des cobayes sensiblement du même poids (360 grammes environ) on 
injecte dans le péritoine 4 ec. c. d’un sérum actif à 02c,09002; immédiates 
ment après on les inocule, dans le tissu cellulaire, avec des spores chauffées 
et du coceus favorisant. Un cobaye témoin est inoculé de la même manière, 
il prend le tétanos le 3° jour et meurt 48 heures après. Les cobayes qui ont 
reçu le sérum ne présentent aucun symptôme tétanique et sont encore en 
bonne santé sept mois après. 

La dose de 4 e. c. de sérum était donc suffisante à pré- 
server dans ces conditions d'infection, mais elle était nécessaire. 
En effet, deux cobayes (de 285 et 287 grammes), sont morts mal- 
gré qu'ils aient reçu l’un 1/2 c. c., l’autre 2/3 c. c. du même 
sérum immédiatement avant l’inoculation. 

Il est donc possible de prévenir le tétanos en injegtant le 
sérum immunisant au moment mème de l'infection par des 
spores additionnées de notre coccus. En sera-t-il de même si 
l'intervention a lieu pendant la période d’incubation ? 

Quinze cobayes sensiblement de même poids (380 grammes) sont inoculés 
comme les précédents. Trois servent de témoins: deux d’entre ceux prennent 
le télanos le 3% jour, l'autre le 5° jour; tous succombent. Les douze autres 
reçoivent dans le péritoine, de la 14 à la 62 heures après l'infection, des 
doses de sérum variant de 1 à 3 c. c. L'activité du sérum est de Oce, 00005. 


Dix restent bien portants, deux deviennent létaniques et meurent. Les détails 
de l'expérience sont mis en évidence dans le tableau ci-dessous. 


Cob. n° 1 reçoit 1 de sérum 14 heures après l'infection. Pas de tétanos. 


Eey 9 = Ace LES, 94 Es Le 
— 3 — Acc,S — 24 — — 
—— 4 —  2cc — 9% — — 
== 5 — Dec — 28 —— = 
— 6 — J2cc — 31 — —— 
ÉS 7 nn 110 = 40 == = 
=# S =ADCE — 40 Les = 
= 9 que — 40 — Tétanos. Mort. 
= 10." 9ve — 45 — Pas de tétanos. 
— 44 — 1e — 46 — Tétanos. Mort. 
— 49 —  9cc — 62 — Pas de tétanos. 


Chez les deux cobayes qui sont morts, les premiers symptômes se sont 
montrés 12 heures après l'injection du sérum. 

Dans les conditions de l'expérience, la prévention du tétanos 
est donc possible plus de 40 heures après l’infection, mais comme 


90 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


les spores ne germent pas au même moment chez tous les ani- 
maux, on observe des irrégularités, eton voit mourir un cobaye 
traité à la 40° heure, tandis qu’un autre traité à la 62° heure 
résiste très bien. 

Insertion d'une écharde de bois dans les muscles. — Pour appré- 
cier la valeur préventive du sérum dans diverses conditions 
d'infection, chez des cobayes, nous avons inséré dans les muscles 
d’une patte postérieure une écharde de bois imprégnée de spores 
chauffées à 80° et d'un coccus favorisant. Ce mode d’inocula- 
tion est plus sévère que l’inoculation dans le tissu cellulaire : ïl 
donne le tétanos dans un délai presque fixe de 3 jours et les 
animaux meurent de 36 à 48 heures après le début des accidents. 
Les cas de tétanos à la suite de la pénétration d'une écharde 
dans les tissus sont relativement fréquents chez l’homme. 

Douze cobayes sont infectés ainsi qu'il vient d’èlre dit, au moyen d'une 
écharde mince, longue de { centimètre. Trois servent de témoins et deviennent 
tétaniques 52, 54,78 heures après l'incculation, et meurent 18, 36, et 40 heures 
après le début des accidents. Les neuf autres cobayes reçoivent, de 24 à 52 
heures après l'infection, 2 c. c. d’un sérum actif au dix-millionième. Deux 


sont restés indemnes, deux ont eu un tétanos chronique localisé à la patte 
inoculée, cinq sont morts tétaniques. 


Cob. n°1. Poids 3508r reçoit 2cc desér.24h. après inf. Pas de tétanos. 


— 9 — 405 — 31 Tétanos 58 j. 112 après inject. du 
sérum. Mort. 

— 9 — 335 — 39 Tétanos 12 jours après. Mort. 

— À. — 207 — 45 — 6 —— — 

— 5. — 39% — 47 — 24 heures aprés. Mort. 

— 6. — 410 — 4T — 94 — — 

— T7. — 430 — 48 Pas de tétanos. 

nt OT OO — 45 Tétanos localisé 40h. après. Guér. 

— 9. -- 580 — 52 — 16 —- 


Sur 3 de ces animaux, l'apparition du tétanos parait avoir élé 
retardée. Les accidents ont débuté 3 jours 1/2, 6 jours et 12 jours 
après l'injection du sérum. Les cobayes ont succombé malgré 
que le sérum qu'ils ont reçu fût extrêmement actif. La préven- 
üon est donc plus malaisée à obtenir lorsque linoculation 
est faite dans le muscle. Cela tient, selon nous, à ce que la pha- 
gocytose est beaucoup moins active dans le musele que dans le 
üssu cellulaire. Chez les cobayes infectés dans le tissu conjonctif 
et préservés du tétanos par l'injection de sérum, la préservation 
est définitive : ils sont encore en bonne santé après plusieurs 
mois; quand l’inoculation est faite dans le muscle, la préser- 
vation par le sérum peut n'être que temporaire; dans quelques 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 91 


cas on voit des animaux qui paraissaient d’abord indemnes 
prendre le tétanos mortel 10, 12 et même 16 jours après l’in- 
jection immunisante. Ces cas de tétanos tardifsurviennent lorsque 
la propriété antitoxique du sang a déjà diminué; alors les bacilles, 
mieux protégés contre les phagocytes dans le musele que dans 
le tissu cellulaire, continuent à se cultiver, versent dans l'orga- 
nisme de nouvelles doses de poison télanique, qui ne trouvent 
plus d’antidote dans le corps et tuent l’animal. Le sérum anti- 
toxique provoque une leucocytose très marquée. Chez un cobaye 
qui a reçu 2 c. c. de ce sérum sous la peau, on trouve que déjà 
2 ou 3 heures après, le nombre des leucocytes du sang est 
doublé et même triplé. Cette leucocytose persiste pendant 
6 à 10 heures environ. M. Metchnikoff a vu que le même sérum, 
injecté sous la peau de loreille d’un lapin, détermine une émi- 
gration leucocytaire abondante. On peut donc supposer qu'outre 
son action sur la toxine, le sérum excite l’activité des leucocytes et 
favorise l’englobement des spores tétaniques. L’un de nous a en 
effet déjà insisté sur le rôle des phénomènes leucocytaires dans 
le prophylaxie du tétanos. 

En augmentant les quantités de sérum injectées, l'apparition 
de la maladie est plus retardée. 

Dix cobayes sont infectés par implantation, dans les muscles de la patte 
postérieure droite, d’échardes de bois imprégnées de spores chauffées à 80° 
et d'un coccus favorisant. Chez le témoin le télanos débute le 3° jour et la 
mort survient dans la nuit du ÿ° au 6° jour. Les neuf autres cobayes reçoi- 
vent, dans le péritoine, des quantités variables de sérum antitoxique, à des 
heures differentes après l'infection, mais toujours avant l'apparition de 
tout symptôme tétanique. L'activité du sérum est supérieure à dix millions. 


N° 4. Reçoit 12 h. après l'infection 3t*de sérum. Tétanosle 3tjour. Mort du 6e au 7°). 
N°2 — 158 — acc. Tétanos débute le 8° jour. Mort le 416 j. 
No 0 18 — 18cc. Tétanos débute le 10€ j. Mort le 18e j. 
No 4 — 924 —_ 3ce, Tétanos débute le 8e jour. Mort le 18 j. 
N°5 — 92,4 — 18, Tétanos débute le 9 jour. Mort le 42: j. 
Ne6—- 728 — acc, Tétanos débute le 3e jour. Mort le 110 } 
NT As "71-28 — 18cc. Tétanos débute le 3 jour. Mort le 6e j. 
NAS 536 — oc, Tétanos débule le 32 jour. Mort le se j. 
ND; 9 — 36 — 15e. Tétanos débute le 9% jour. Mort le 14e j. 


Suivant la dose employée l’incubation est prolongée, mais 
la prévention n’est pas durable : au bout d'un temps plus ou 
moins long le tétanos apparaît. Il semble bénin tout d’abord, 
puis redouble après des temps variables et tue l’animal; l'expé- 
rience suivante, dans laquelle l'injection a été plus sévère, en est 
un nouvel exemple. 


© 
19 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Dix cobayes sont infectés par implantation d’écharde dans les muscles 
de la cuisse droite. Ces échardes ont servi plus d’un mois auparavant à 
infecter d'autres cobayes qui sont morts létaniques. Retirées des cadavres, 
elles ont été conservées à l'abri de la lumière. Quatre cobayes témoins pren- 
nent le tétanos en moins de 2% heures et meurent de 40 à 44 heures après 
l'infection. Les six autres reçoivent, dans la cavité péritonéale, du sérum 
antitoxique à doses variables et à des temps différents. L'activité du sérum 
employé est supérieure à dix millions. 


N° 10. Reçoit 12 h. après infection 2ctde sérum.Tétanos débute24h.après infection 
Mort en 3 jours et demi, 


No1l. — 94 —— 4cc, Tétanos débute 48 h. après infection. 
Mort en 8 jours. 

N° 12. .— 23 — 6cc Tétanos débute le 82 jour. Aggravation le 
102 jour, puis état stationnaire. 

N° 13: — 32 _ Sec Tétanos débute 48 h. après l'infection et 
reste stationnaire; 8 jours après, recru- 
descence. Mort. 

No 14 — 46 — 16cc, Tétanos débute 48 h. après l’intection. 
Mort en 3 jours et demi. 

No 15. — 49 — 1Scc. Tétanos débute 51 h, après l'infection. 


Mort en 3 jours. 


Du sang est extrait au cobaye n° 5, le 9° jour, quelques 
heures après le début du tétanos, il est antitoxique à raison de 
40 parties de sang pour une de toxine, mais non à raison de 
4 parties de sang pour une de toxine. 

Du sang est extrait au cobaye n°9, le 9° jour, quelques heures 
après le début du tétanos, 1l est antitoxique à raison de 20 parties 
pour une de toxine. Au moment de la mort, le sang du cœur est 
antitoxique à raison de 50 parties pour une de toxine. 

Du sang est extrait au cobaye n° 12, le 10° jour, au moment 
de l’aggravation du tétanos ; il n’est pas antitoxique, à raison de 
12 parties de sérum pour une de toxine. 

Chez ces cobayes, infectés par le microbe vivant, le pouvoir 
antitoxique du sang diminue beaucoup plus vite que chez les 
cobayes sains qui ont reçu les mêmes doses de sérum; il y a une 
consommation incessante de l’antitoxine. Le bacille tétanique 
croit dans la sérosité antitoxique qui l'entoure, et y élabore son 
poison qui, sécrélé sans cesse, détruit peu à peu l’antitoxine 
introduite ; lorsque celle-ci n’est plus en quantité assez considé- 
rable le tétanos reprend sa marche. C’est un fait remarquable 
que pour entraver la maladie il ne suffit pas que le sang soit 
antitoxique, il faut qu'il le soit à un très haut degré. 

Malgré la culture longtemps prolongée du baoile au sein 
des tissus, il n’y a pas de vaccination des cobayes; ilne peut, en 


CONTRIBTUION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 93 


effet, se faire aucune accoutumance à la toxine puisque celle-ci 
est détruite au fur et à mesure de la production *. 

De nos recherches sur la prévention du tétanos se dégagent 
les conclusions suivantes : 

4° Le sérum antitoxique prévient sûrement le tétanos, même 
à doses extrêmement petites, lorsqu'il est injecté avant la toxine 
tétanique : 

20 Lorsque le sérum est injecté en même temps que la toxine, 
on observe toujours un tétanos local, même quand la quantité de 
sérum injectée est très grande : 

3° Lorsque le sérum est injecté après la toxine, mais avant 
l'apparition de tout symptôme tétanique, il y a toujours un tétanos 
local. La dose de sérum nécessaire pour empêcher la mort est 
d'autant plus forte que celui-ci est injecté plus tard après l’infec- 
tion. Après un certain temps écoulé, variable avec les animaux, 
la prévention n’est plus possible, même avec de grandes quantités 
de sérum ; 

4° Le tétanos est plus ou moins rapide et par conséquent plus 
ou moins facile à prévenir, selon le lieu où linjection de la toxine 
est faite. 

Ces conclusions s'appliquent à des doses moyennes de toxine ; 


4. Puisque l'introduction du sérum antitoxique dans le corps n’empêche pas le 
bacille du tétanos de se cultiver, l’ablation du foyer d'infection favorisera la 
guérison et empêchera le tétanos tardif. L'expérience suivante montre les effets 
de cette ablation et des injections de sérum combinées. 

À douze cobayes on introduit dans les muscles d’une des cuisses postérieures, 
une écharde imprégnée de spores. Deux cobayes servent de témoin et prennent le 
tétanos mortel le troisième et le quatrième jour. Les dix autres sont divisés en 2 lots 
de 5. Les cobayes des deux groupes reçoivent dans le péritoine, 24, 98, 51, 39 et 
45 heures après l'injection, 2 c.c. d’un sérum actif au dix-millionième. Mais dès 
que les symptômes tétaniques se montrent chezles cobayes du 2e groupe, on extrait 
le corps étranger, on enlève largement le foyer d’inoculation et on le cautérise avec 
soin. 


PREMIER LOT 


Cob. 1. Reçoit 2 c. c. sér. 24 h. après infect. Pas de tétanos. 
Cob. 2, — 98 — — 
Co0b792 — 31 == = 
Cob. 4. — 39 — Tétanos le 12e jour, mort. 
Cob. 5. — 45 _ Tétanos le 5e jour, mort. 

98 LOT. ABLATION DU FOYER 
Cob. 1. — 24 — Pas de tétanos. 
Cob. 2. — 28 — Tétanos le 162 jour, guérison. 
Cobe3: — 31 —= Tétanos le 10e jour, guérison. 
Cob. 4. - 39 - Tétanos le 5e jour, guérison. 
Cob. 5. — 45 _— Tétanosle 3° Jour, mort. 


Ainsi deux cobayes télaniques sont abandonnés à eux-mêmes; ils succombent. 
Sur quatre cobayes auxquels on enlève largement le foyer dès le début des acci- 
dents, trois survivent, un seul succombe. 


9% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


50 Lorsque l'infection est produite par le bacille tétanique 
pullulant dans les tissus, la prévention dépend encore de la 
quantité de sérum injecté et du temps écoulé entre le moment 
de l'infection et celui de l’intervention. Elle échoue le plus sou- 
vent quand les animaux sont inoculés de façon à ce qu'ils aient 
un télanos à marche rapide. Elle peut réussir dans les infections 
lentes et encore, dans ces cas, la prévention n'est pas toujours 
définitive, si on n’enlève pas le foyer. La maladie qui paraissait 
enravée peut reprendre son cours et la mort survenir après 
des temps très longs. 


V 
TRAITEMENT DU TÉTANOS DÉCLARÉ. 


Des expériences que nous venons de rapporter sur la pré- 
vention du tétanos, nous pouvons conclure que la guérison de 
la maladie déclarée sera difficile à obtenir sur des espèces 
animales aussi sensibles que les souris et les cobayes. Au 
moment où les premiers symptômes sont constatés, la toxine à 
déjà agi sur les éléments cellulaires, et ceux-ci peuvent être assez 
atteints pour que la mort survienne fatalement. L'antitoxine 
détruit bien le poison qu'elle rencontre dans le corps, mais 
elle est sans action sur les lésions déjà faites. Cependant, 
MM. Bebring et Kitasato ont publié des résultats si favorables, 
entraitant le tétanos déclaré chez la souris et chez le cobaye, que 
nous n'avions qu'à essayer de les reproduire. 

Nos expériences ont porté sur les souris, les cobayes, les 
lapins, les moutons. La réceptivité de ces divers animaux pour 
le tétanos est très différente, et il était nécessaire de voir si le 
traitement, peut-être inefficace chez une espèce sensible, réussis- 
sait chez une espèce plus résistante. Le mode d'infection a été 
varié, et nous étudierons successivement l’action du sérum sur la 
maladie provoquée par l'injection de toxine, par l’inoculation de 
spores télaniques et de terre télanigène. Le plus souvent 
l'infection était faite à une patte, de manière que l’on puisse saisir 
les plus légers signes de la maladie et commencer ladminis- 
tration du sérum dès le début des accidents. Le sérum qui nous 
a servi dans la majeure partie de ces expériences venait d'un 
cheval vacciné: son activité était d’abord de un million etensuite 


CONTRIBUTION A L’'ÉTUDE DU TÉTANOS. 95 


de dix millions. Nous avons injecté d'emblée de grandes doses, 
dans le péritoine, pour que l'absorption soit plus rapide. Chez 
les petits animaux comme les souris, il ne faut pas introduire 
de trop grandes quantités de sérum à la fois, 1l vaut mieux 
répéter les injections à diverses reprises. Chez le cobaye, on ne 
peut guère introduire plus de 15 à 20 c. ce. d’un seul coup dans 
le péritoine, sans quoi la respiration est gênée et l'absorption se 
fait mal. Ces injections massives de sérum de lapin et de cheval 
sont bien supportées par les divers animaux, elles sont inoffen- 
sives. Nous avons toujours gardé un assez grand nombre d’ani- 
maux témoins : cette précaution est surtout nécessaire dans des 
expériences de thérapeutique. Si, dans une série d'animaux 
inoculés, le premier animal pris de tétanos était soumis au trai- 
tement, le second était gardé comme témoin, et ainsi de suite en 
alternant ; lorsque plusieurs animaux devenaient tétaniques en 
même temps, les moins atteints recevalent le sérum, les autres 
servaient pour le contrôle. Parmi les 126 sujets tétaniques que 
nous avons observés, les uns ont eu des tétanos lents, les autres 
des tétanos rapides. Chez ceux qui ont été traités, on a mesuré 
mainte fois le pouvoir antitoxique et le pouvoir préventif du 
sang, soit pendant la vie, soit au moment de la mort. Les 
détails de quelques-unes des expériences sont consignés dans 
l’appendice qui est à la fin de ce mémoire. 

Jo INFECTION PAR LA TOXINE. — A. Souris. — 4 souris sont 
inoculées avec des doses moyennes de toxine (1/2,000 c. c.), 
trois sont gardées comme témoins, 6 reçoivent du sérum actif 
à O0 c.c. 00001 (de ce. e. à 2 e. c: 2/3) aussitôt que les premiers 
signes du tétanos apparaissent. 

Des 3 souris témoins, 2 sont mortes, { a guéri. 

Des 6 souris traitées, # sont mortes, 2 ont guéri. 

B. Cobayes.— 3 cobavessontinoculés avec 1/200 e.c.de toxine : 
2 sont traités, 1 sert de témoin. Is meurent tous les trois, bien 
que le sérum employé fût actif au millionième et que les doses 
injectées aient atteint 1/11° et 1/39% du poids du corps. Le 
sang des cobayes traités était très antitoxique au moment de la 
mort. 

U° INFECTION PAR SPORES TÉTANIQUES (SPORES SANS TOXINE) ADDI- 
TIONNÉES D’ACIDE LACTIQUE. — À. Souris. — 3 souris ont été traitées 
par l'injection de 1 ce. e., 1 e. c. 1/3 et 2 c. c. de sérum actif au 


96 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


cent-millième dès le début du tétanos; elles ont succombhé 
comme la souris témoin. 

B. Lapins. — 1% lapins ont été infectés en deux séries. Sur 
les 6 animaux de la première série, 5 seulement ont pris le téla- 
nos ; # ont été traités et ont guéri; ils pesaient de 2 kilogr. 500 
à 2 kilogr. 800 ; ils ont reçu en une seule fois de 40 ce. e. à 50 c. ce. 
de sérum actif au milionième, soit dans les veines, soit dans le 
péritoine. Le tétanos s’est arrêté, mais la contracture du membre 
inoculé a persisté longtemps. Le lapin témoin a eu le tétanos le 
5e jour et est mortle 10° jour. 

Sur les 8 lapins de la 2° série, 6 seulement prennent le téta- 
nos du 4° au 1° jour ; 3servent de témoins, 2 guérissent, | meurt. 

3 sont traités par injection dans le péritoine de 40 ce. e. à 
80 €. c. de sérum actif au millionième : 2 succombent, le 
troisième guérit. Le sang des animaux qui sont morts était très 
antitoxique pendant la vie. Le sang du lapin qui a reçu 80 c.e., 
immunisait un gramme de souris à la dose de 0:°,0000%. 

Donc: Sur {1 lapins devenus tétaniques, 

4 témoins ont donné 2 guérisons et 2 morts, 

1 traités ont donné 5 guérisons et 2 morts. 

Il semble que le traitement réussisse mieux chez les lapins ; 
cependant, il ne faut pas oublier que la résistance du lapin au 
télanos est assez grande, et que la réceptivité est très variable 
suivant les individus ; il faudrait expérimenter sur un beaucoup 
plus grand nombre d'animaux, traités et témoins, pour bien 
dégager ce qui, dansles cas de guérison, revient à l'influence du 
sérum et à la résistance naturelle. 

III INFEGTION PAR SPORES ASSOCIÉES A UN COCCUS FAVORISANT. 

A. Souris. — 6 souris inoculées : 1 souris témoin : 1 mort. 
B.souris traitées par die "at lacice 200 CPAIC ICONE RCE 
sérum aclif au 0€,00005 : 5 morts. 

B. Cobayes. — 8 cobayes inoculés. 

2 Cobayes témoins, 2 morts (sur un de ces cobayes on a 
enlevé le foyer d'infection dès le début des symptômes). 

6 cobayes traités, 6 morts. (Sur 3 de ces cobayes on a enlevé 
le foyer d'infection aussitôt après l'apparition du tétanos’.) Le 

1.Certaines observations montrent les heureuxeffets del’ablation du foyer d’infec- 


tion chez l’homme et chez les animaux, d’autres prouvent que souvent elle n’em- 
pêche pas la mort. On conçoit, en effet, que cette opération paraisse tantôt 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 97 


sérum injecté était actif au millionième, ces animaux en ont reçu 
des quantités variant de la 6° à la 16° partie du poids du corps. 

LV. INFECTION PAR INTRODUCTION SOUS LA PEAU D ÉCHARDES DE BOIS 
IMPRÉGNÉES DE SPORES CHAUFFÉES A 80°, À. Souris. — 36 souris infec- 
tées, 31 seulement prennent le tétanos. 

12 souris témoins, 11 morts, 1 guérison. 

19 souris traitées, 17 morts, 2 guérisons. 

Les périodes d’incubation ont été: 3 jours, 5 fois; 4 jours, 
15 fois ; 5 jours, 5 fois; 6 jours, 2 fois ; 7 jours, 3 fois; 8 jours, 
1 fois. L’écharde était insérée à la racine de la queue. Pour 
juger du début du tétanos, il suffit de suspendre la souris par là 
queue, l’asymétrie dans la position des pattes postérieures est 
un indice que la maladie commence; ce signe se montre avant 
tous les autres. Ce procédé d'infection par écharde sous la peau 
ne donne pas toujours un tétanos mortel, même chez la souris. 
L'évolution du mal est assez lente. Ce sont là des conditions 
particulièrement favorables pour le traitement. Dans la plupart 
des cas Le sérum était actif au millionième, les doses ont varié 
He ce: c: à 00. c: 4/2: 

B. Cobayes. — 16 cobayes ont été infectés par Pintroduction 
d’une écharde sous la peau à la racine de la cuisse. 15 ont pris 
le tétanos du 4° au 23e jour. Il s’agit d’un tétanos à longue incu- 
bation et à marche lente dans la plupart des cas.” 

1 cobayes témoins sont morts de 48 heures à 7 jours après 
le début des accidents. 

8 cobayes traités sont morts de 34 heures à 21 jours après le 
début des accidents. 

Le traitement était commencé dès que l’on observait le 
moindre changement dans l'attitude de la patte où on avait placé 
l’écharde, quelquefois mème il a été entrepris alors que la gêne 


efficace, tantôt inutile. Elle sera utile si elle est faite à un moment où le bacille 
n’a pas encore jeté dans l’organisme une dose mortelle de toxine; elle limite alors 
l’empoisonnement, puisque la culture du bacille est locale. Il faut donc toujours 
la pratiquer, dès le début du tétanos, quand cela est possible. 

Chez les animaux, au moment où apparaissent les premiers signes de contrac- 
ture, il est souvent trop tard; l’empoisonnement est suffisant pour donner la 
mort, et l’excision du foyer ne produit aucun résullat, Outre les expériences que 
nous avons rapportées sur les cobayes, nous en avons fait d’autres chez les 
lapins. Sept lapins sont inoculés dans les muscles d’une patte postérieure avec 
des spores tétaniques et de l'acide lactique. Le tétanos débute le 3e, le 5e, le Ge, 
le 8 jour; le foyer d'infection est soigneusement enlevé, cautérisé et bourré d’io- 


doforme, 8, 18, 20, 36, 48 heures et 4 jours après le début de la contracture ; 
tous les lapins ont succombé. 


7 


98 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


des mouvements était douteuse. Nous avons donc suivi l’indica- 
tion de M. Kitasato qui recommande d’injecter le sérum théra- 
peutique dès les premiers signes du tétanos. Bien que le sérum, 
employé à fortes doses dès le début (11 à 24 c. c.), fût actif 
au millionième, la marche de la maladie n'a pas été modifiée 
dans #4 cas. Dans 4 autres, le tétanos a paru arrêté, puis une 
recrudescence est survenue soudainement et a déterminé la 
mort les 15°, 17°, 19° et 21e jours. 

L'histoire de ces cobayes est d'autant plus intéressante que 
le pouvoir antitoxique de leur sang a été mesuré à diverses 
reprises; déjà 30 minutes après l'injection du sérum dans le 
péritoine, il était très marqué, et deux heures après il avait atteint 
un degré tel que le sang était préventif à petite dose. Dans les 
jours qui ont suivi la dernière introduction du sérum, la propriété 
antitoxique a baissé; elle n’était plus appréciable, au momentde 
la mort, chez un cobaye qui a succombé le 15° jour, mais elle 
était encore très marquée chez les trois autres cobayes. Chez l’un 
d'eux, à l'instant même de la recrudescence du tétanos, 15 vol. 
de sang neutralisaient 1 vol. de toxine ; chez un autre le sang 
pris dans le cadavre immunisait à la dose de 1 c. c. un cobaye de 
315 grammes contre 1/200 de c. c. d’une toxine très meurtrière. 
N'est-ce pas un fait saisissant que la mort, par le tétanos, de 
ces cobayes dont le sang est antitoxique et mème préventif? 
Le bacille tétanique a done continué à vivre, pendant de longs 
jours, au point d’inoculation, sécrétant son poison malgré la 
propriété antitoxique des humeurs. Ces faits nous montrent que 
tant que le microbe du tétanos reste vivant, un retour de la 
maladie est à craindre, alors même que le sang de l'animal infecté 
possède encore un pouvoir antitoxique notable. 

Il faut donc reprendre les injections thérapeutiques de temps 
en temps jusqu'à ce que les contractures aient disparu. Il est 
probable que l’ablation du foyer préviendrait ces recrudescences 
tardives. Les échardes retirées des cadavres étaient couvertes de 
pus dans lequel on trouvait un coceus et quelques bacilles tétani- 
ques. Le sang du cœur, la pulpe des organes examinés au micros- 
cope ne contenaient aucun microbe: ensemencés, ils n’ont pas 
donné de cultures ;iln°y avait done pas eu d'infections secondaires. 

M. Kitasato ‘ a publié une expérience dans laquelle il a infecté 

4. Zeitschr. f. Hyg., août 1892. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 99 


12 cobayes par des échardes de bois imprégnées de spores téta- 
niques chautfées à 80°; 10 de ces cobayes furent traités, après 
tétanos déclaré, par l'injection de doses de sérum qui ont varié 
de 10c.c.à2c.c.; 8 d'entre eux guérirent, ils avaient reçu 
&c. ce. 5 ce. c., 8 c. c. et 10 c. c. Ges résultats sont en contradic- 
tion avec ceux que nous venons d'exposer; ils sont d'autant plus 
surprenants, que le sérum employé par M. Kitasato venait du 
cheval immunisé par M. Behring, etqu’au moment où l'expérience 
a été faite, le sérum de ce cheval (d’après les renseignements 
publiés par M. Behring) était bien moins actif que celui qui nous 
a servi. De plus, les doses injectées ont été plus faibles. Enfin, 
dans les cas de M. Kitasato, la gravité de l'infection devait être 
tout à fait exceptionnelle, puisqu'il déclare que les premiers 
symptômes ont apparu 24 heures seulement après l’inoculation ; 
c’est à ce moment que le traitement fut entrepris. Jamais, pour 
notre part, nous n'avons vu un cobaye infecté avec des spores 
chauffées à 80° prendre le tétanosen 24 heures, il faut,en effet, aux 
spores le temps de germer et aux bacilles celui de fabriquer la 
toxine. Le tétanos n'apparaît aussi promptement que lorsqu'on 
injecte de la toxine toute préparée, ou encore lorsqu’on insère 
dans les muscles des échardes retirées de cadavres. Il y a dans 
cette expérience des circonstances que nous ne comprenons 
pas, et nous inclinons à croire que M. Kitasato a fait un traite- 
ment préventif plutôt que curatif. 

V. INFECTION PAR INTRODUCTION DANS LES MUSCLES D ÉCHARDES DE 
BOIS IMPRÉGNÉES DE SPORES CHAUFFÉES À 800. — Le tétanos provoqué 
par implantation d’échardes dans les muscles, est, en général, à 
marche rapide. 

Cobayes. — 18 cobayes ont été inoculés en deux expériences, 

1 cobayes témoins, 7 morts. 

11 cobayes traités, 11 morts. 

Les premiers signes de la maladie ont apparu de 36 heures 
à trois jours après l'infection : la mort est survenue à peu près 
dans le même délai pour les témoins et les traités. Dans une 
pes expériences, le sérum employé était actif au millionième ; 
dans l’autre il était actif au dix-millionième. Les doses injectées 
ont varié de la 30° à la 14° partie du poids du corps. Au moment 
de la mort le sang était très antitoxique. L'écharde était entourée 
d’une gaine de leucocytes; on voyait dans ce pus, au microscope, 


100 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


des coccus et des bacilles tétaniques non sporulés. L’ensemen- 
cement du sang et des organes n’a pas donné de cultures. 

Dans une autre série, 4 cobayes reçoivent dans les muscles 
d'une cuisse des échardes qui avaient déjà servi à infecter les 
cobayes d’une expérience précédente, et qui étaient conservées 
depuis deux mois. Letétanos débute en moins de 24 heures; c’est 
donc un tétanos à marche rapide. Le cobaye témoin meurt en 
40 heures. Les 3 autres reçoivent, dès le début de la contracture 
de la patte inoculée, 18 c.c. de sérum dans le péritoine. Ils meurent 
de 16 à 20 heures après l'injection thérapeutique et de 40 à 44 
heures après l'infection. Leur sang esttrès antitoxique. L'activité 
du sérum employé était supérieure à dix millions. 

VI INFECTION PAR INTRODUCTION DE TERRE SOUS LA PEAU. — Cobayes. 
— Un même volume de terre est introduit sous la peau du ventre 
de 6 cobayes; 4 seulement prennent le tétanos, le 4° jour. 
2 servent de témoins et meurent 24 et 31 heures après le début 
des accidents ; 2 sont traités dès l'apparition des premiers symp- 
tômes, ils succombent après 24 heures et 3 jours 1/2. Le sérum 
employé était actif au millionième, les quantités injectées égalent 
la 8° et la 5° partie du poids du corps. Le sang recueilli, après 
la mort, est très antitoxique, il immunise à la dose de 0c,0001. | 

VIL TRAITEMENT DES MOUTONS TÉTANIQUES. — Le mouton prend 
assez difficilement le tétanos; deux moutons inoculés l’un avec 
1/4 de centimètre cubeetl’autreavecl ce. e. d’une culture tétanique 
très active sont restés bien portants; deux autres moutons qui 
ont reçu dans les muscles des spores chauffées à 80°, mélangées 
d'un peu d’acide lactique, n’ont éprouvé aucun mal, tandis qu'un 
lapin inoculé avec quelques gouttes du même mélange devenait 
tétanique le 3° jour et mourait le 6° jour. Le moyen qui nous a le 
mieux réussi pour donner le tétanos au mouton est l’introduc- 
tion dans les muscles d’une écharde imprégnée de spores téta- 
niques et d’un coccus favorisant. 

4 moutons ont été ainsi inoculés en deux expériences. Chez 
deux d’entre eux, l'écharde est implantée dans les muscles de la 
cuisse; ils prennent le tétanos Le 11° jour. On enlève les échardes, 
on excise le foyer, que l’on panse à l’iodoforme. Le moutontémoin 
meurt le 5° jour de la maladie. Le mouton traité reçoit, 12 heures 
aprèsle début, 25 c. ec. desérum actif au dix-millionième dans la ju- 
gulaire, puis toutesles heures 15 c. ce. sous la peau de l'abdomen ou 


|» dl 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 101 


du flanc. Il a ainsi reçu 165 c. ce. dans une seule journée. Il meurt le 
2 jour de la maladie, 36 heures après que le traitement a été 
commencé. Son sang est antixotique à la dose de 8 parties pour 
une de toxine : il immunise une souris à la dose de 0,2. 

Dans la seconde expérience, l’écharde est implantée sous Fa 
peau de l'extrémité de la queue chez deux moutons. 12 jours 
après l’un est pris de tétanos. On ampute la queue, et on injecte 
sous la peau, pendant la première journée, toutes les heures 
20 c.c. de sérum : il recoit au total 160 c. c. On lui administre 
aussi par la bouche du lait très antitoxique d’une vache vaccinée. 
Ilmeurt 4 jours après le début des accidents. Le mouton témoin, 
pris le 15° jour, subit aussi l'amputation de la queue ; 1l meurt 
le 6° jour après le commencement de la maladie. 

Nos expériences ont donc porté : 

Sur 49 souris : 17 souris témoins ont donné 15 morts et 2 gué- 
risons ; 32 souris traitées ont donné 28 morts et 4 guérisons. 

Sur 62 cobayes : 20 cobayes témoins ont donné 20 morts; 
42 cobayes traités ont donné 42 morts. 

Sur 14 lapins : 11 seulement ont pris le tétanos; 4 lapins 
témoins ont donné 2 morts et 2 guérisons; 7 lapins traités ont 
donné 2 morts et 5 guérisons. 

Sur 4 moutons : 2 moutons témoins ont donné 2 morts: 
2moutons traités ont donné 2 morts. 

Soit au total : 

43 animaux témoins : 39 morts, 4 guérisons. 

83 animaux traités : 73 morts, 10 guérisons. 

Quel que soit le mode d'infection, il est donc très difficile de 
guérir le tétanos déclaré chez les animaux. Au moment où appa- 
raissent les premiers symptômes, la quantité de toxine élaborée 
est le plus souvent suffisante à tuer l’animal, ‘elle à agi sur les 
cellules, et l’'antitoxine ne peut rien contre un empoisonnement 
déjà fait. Des doses très fortes d’un sérum très actif ont toujours 
été impuissantes contre un tétanos à marche rapide. 

Quelques minutes après l'introduction du sérum curatif dans le 
péritoine, lesang des animaux traités estantitoxique etimmunisant 
à un très haut degré, et cependant la maladie poursuit son cours. 

Le sérum a prolongé la vie dans les cas de tétanos moins 
sévère, et encore, si on n’enlève pas le foyer d'infection, on n’est 
pas sûr, au moins pour les cobayes, que la maladie ne reprendra 


102 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


pas quand le pouvoir antitoxique du sang aura diminué. Il faut 
ètre en garde contre ces rechutes du tétanos, et renouveler lin- 
jection du sérum une huitaine ou une dizaine de jours après le 
début des accidents, alors même que ceux-ci semblent arrêtés 
et en voie de guérison. 


TRAITEMENT DU TÉTANOS CHEZ L'HOMME. 


Depuis que l’antisepsie a fait disparaître presque complète- 
ment le tétanos post-opératoire des services de chirurgie, il est 
assez rare que le médecin assiste au début de la maladie. Les per- 
sonnes les plus sujettes au tétanos, cultivateurs, ouvriers, 
manœuvres, ne prêtent pas d'attention aux premiers symptômes, 
ou les traitent à leur façon. Elles ne s'adressent au médecin que 
lorsque les contractures leur causent une véritable souffrance. 
Aussi, dans les hôpitaux, nous ne voyons que des tétanos déjà 
prononcés. Ce sont là, assurément, des conditions peu favorables 
au traitement, mais ce sont celles de la pratique ; il faut bien 
prendre les malades quand ils viennent et comme ils viennent. 

Douze observations de tétanos humain, traité par l’anti- 
toxine, ont déjà été publiées. Rappelons-les brièvement. 

1° Le cas d’un enfant, du service de M. Baginsky, à Berlin, 
traité par M. Kitasato, ne nous renseigne nullement sur l’effica- 
cité de l’antitoxine, la maladie étant trop avancée, la quantité de 
sérum injectée trop pelite. 

20 8 cas observés en Italie, tous suivis de guérison. L'anti- 
toxine employée venait du sérum de chiens immunisés, elle était 
préparée par MM. Tizzoni et Cattani; les doses injectées étaient 
peu considérables. M. Rotter à fait des observations italiennes 
une critique très juste, à laquelle nous nous associons pleine- 
ment. Ces observations ne prouvent en aucune façon l'efficacité 
de l’antitoxine de MM. Tizzoni et Cattani; elles se rapportent à des 
tétanos lents, dont les premiers signes n'apparaissent que du 8° 
au 15° jour après la blessure, et dont la guérison est très fréquente 
D'ailleurs, s’il faut en croire le professeur Albertoni, de Bolo- 
gne ‘, l’antitoxine de M. Tizzoni n'aurait pas donné que des suc- 
cès : des cas traités suivis de mort (notamment un cas à Imola), 
n'auraient pas été publiés. 


4. Therapeutische Monatshefte, sept. 1892, p. 437. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 103 


En France, M. Rénon a faitconnaître, dans ces Annales, deux 
observations avec terminaison fatale, malgré que les malades 
aient reçu l’un 57%, et l’autre 80cc d’un sérum très actif. 

Les cas de M. Rénon sont les premiers dans lesquels on ait 
injecté de grandes quantité de sérum à intervalles rapprochés. 

Dans sa monographie sur la sérum-thérapie, M. Bebhring fait 
allusion à dix cas de tétanos humain traités par l’antitoxine, 
mais il n'en cite, avec détails, qu'un seul, observé par le 
D' J. Rotter. Il s’agit d'un tétanos assez sévère, de gravité 
moyenne, qui, d'après ce chirurgien, aurait pu guérir sans 
antitoxine. 


P. Muller, 25 ans, garçon d’écurie, se fit, le 6 juillet, avec un crochet de 
fer, une plaie entre le pouce et l'index. La plaie fut pansée à l'acide phénique 
et paraissait guérie 8 jours après. Le 14 juillet, le patient éprouve de la raideur 
dansla main; il continue à travailler jusqu'au 17. Le 91 juillet survient du tris- 
mus, le malade prend le lit, il est reçu à l'hôpital le 27 juillet. À ce moment les 
contractures s'étendent aux muscles de la face, du cou, du tronc, des jambes. 
Le 28 juillet le traitement est commencé, le sérum employé a une activité 

_Xde un million; dans cette journée on en injecte 66 grammes en 4 piqûres. — 
29 juillet, même état, opisthotonos, secousses convulsives des muscles du 
dos, injection de 50 c. c. de sérum. 30 juillet, le mieux commence, injection 
de 45 c. €. — 31 juillet, amélioration, trismus moins fort, opisthotonos pres- 
que disparu, deux injections de_ 50 c.c."L'étal va oise les jours 
suivants. Le 6 août les sueurs, qui avaient été abondantes jusque-là, cessent 
après une urticaire. Le trismus, les contractures des muscles du dos et des 
jambes ont disparu; la rigidité de la main blessée et de l’avant-bras persistent 
jusqu'au 12 août. À aucun moment il n'y a eu d'élévation de température. 

En résumé, les premiers symptômes ont débuté 8 jours après la blessure, 
ils ont évolué lentement pendant 14 jours et ont commencé à diminuer le 
16° jour. Le traitement a été commencé 22 jours après la blessure, 14 jours 
après l'apparition des premiers signes ; l'amélioration s’est montrée deux 
jours après les premières injections. 


Cette observation nous montre que l'on peut injecter à 
l’homme des doses très considérables (250 €. ce.) d’un sérum très 
actif sans inconvénients. Elle nous fait voir aussi que les contrac- 
tures se maintiennent longtemps, malgré l'emploi de l’antitoxine 
à haute dose. 

Grâäce à l'initiative éclairée de MM. les chefs de service dans 
les hôpitaux et à l'obligeance de MM. les internes, nous avons 
pu faire quelques essais de traitement sur lhomme; nous 
donnons les observations détaillées dans lappendice qui suit ce 


104 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


mémoire. Ici nous résumons les circonstances les plus inté- 
ressantes de chacune d'elles. 

Observation 1. — Service de M. Grancher, hôpital des Enfants, 
recueillie par M. Renaud, interne. Gerf.. Daniel, 11 ans. Trauma- 
tisme, extraction de dents. 

Durée de lincubation de la maladie: 15 jours. 

Durée de la maladie: 6 jours (mort). 

Le traitement a été commencé le 4° jour de la maladie. 

Quantité de sérum injecté : 147 €. c. 

Le pouvoir immunisant du sérum était de 200,000 à 500,000. 

Observation II. — Service de M. Polaillon, hôpital de la Pitié, 
recueillie par M. Martin, interne. M... Eugène, âgé de 42 ans, 
plaie à la cuisse produite par un éclat de pétard. 

Durée de lincubation : 8 jours. 

Durée de la maladie : 5 jours (mort). 

Le traitement a été commencé le 4° jour de la maladie. 

Quantité de sérum injecté : 108 c. e. 

Le pouvoir immunisant du sérum était de trois cent mille. 

Une heure avant la mort, le sang du malade était antitoxique 
à raison de quinze parties de sang pour une de toxine. 

L'injection de 108 e. c. de sérum à cet homme grand et fort 
a suffi non seulement à faire disparaître toute trace de toxine 
du sang, mais encore à donner à celui-ci, en quelques heures, 
un pouvoir antitoxique notable. 

Observation LL. — Recuecillie par le D' Morax de Morges (Suisse) 
et M. Morazx fils, interne des hôpitaux de Paris. Rôhm..., 15 ans 1/2, 
manœuvre dans une tuilerie. Main broyée dans un engrenage. 

Durée de lPincubation: 5 jours. 

Durée de la maladie : 2 jours (mort). 

Le traitement a été commencé 12 heures avant la mort. 

Quantité de sérum injecté : 20 c. c., dont 10 c. c. dans une 
veine. 

Le pouvoir immunisant du sérum était de un million. 

Observation IV. — Service de M. Th. Anger à l'hôpital Beaujon, 
recueillie par M. Domat, interne. Le Cun... 27 ans, employé de 
chemin de fer; plaies multiples par écrasement, renversé par une 
locomotive. 

Durée de lincubation : 8 jours. 

Durée de la maladie : 5 jours (mort). 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 105 


Le traitement a commencé 36 heures après le début des 
accidents. 

Quantité de sérum injecté : 402 e. c. 

Pouvoir immunisant du sérum : un million. 

Le sang extrait 10 heures après que le patient a reçu 100 c. e. 
de sérum ne manifeste pas de propriété antitoxique à raison de 
quinze parties de sang pour une de toxine. Quatre heures après 
une nouvelle injection de 50 c. c. dé sérum, le sang est antito- 
xique dans la proportion de quinze parties de sang pour une de 
toxine. Après que le patient a reçu 260 c. c. de sérum, son sang 
est antitoxique a raison de huit parties pour une de toxine. A la 
dose de 1/3 de centimètre cube, il immunise un cobaye de 
205 grammes. Le sang recueilli après la mort est antitoxique 
dans la proportion de deux parties pour une de toxine; il immu- 
nise un cobaye à la dose de 1/15 de centimètre cube. 

Observation V.— Service de M. Letulle, à l'hôpital Saint-Antoine, 
recueillie par M. Nicole, interne. P... Désiré, 23 ans, jardi- 
nier ; plaie à un doigt par éclat de verre. 

Durée de lincubation : 14 jours. 

Durée de la maladie : 3 jours (mort). 

Le traitement a été commencé le 2° jour de la maladie. 

Quantité de sérum injecté : 247 c. e. 

Pouvoir immunisant du sérum : un million. 

Le sang du malade, deux heures après qu'il avait reçu 127 c. c. 
de sérum, était antitoxique à raison de trente-cinq parties de 
sang pour une de toxine. Douze heures plus tard, la quantité de 
sérum injecté étant toujours de 127 c. c., le sang est antitoxique 
à raison de douze parties de sang pour une de toxine. 

Observation VI. — Service de M. Schwartz à l'hôpital Cochin, 
recueillie par M. Banzet, interne. Bona.…. Gabriel, 12 ans. Plaie de 
la jambe faite par une roue de wagonnet. 

Durée de l’incubation : 15 jours. 

Durée de la maladie : 30 jours (guérison). 

Le traitement a été commencé le 3 jour de la maladie. 

Quantité de sérum injecté : 265 ec. e. 

Pouvoir immunisant du sérum : un million. 

Le sang recueilli dix-sept heures après l'injection de 165 c. c. 
de toxine est antitoxique à raison de douze parties de sang pour 
une de toxine. 


106 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le sang recueilli sept heures après l'injection de 265 c. c. de 
sérum est antitoxique dans la proportion de dix parties de sang 
pour une de toxine. 

Le sang recueilli quarante-huit heures après l'injection de 
265 ec. c. de sérum est antiloxique à raison de six parties de sang 
pour une de toxine. 

Le sang recueilli qnatorze jours après la dernière injection 
est antitoxique à raison de treize parties de sang pour une de 
toxine. 

Observation VII. — Service de M. Barth à l'hôpital Broussais, 
recueillie par M. Mayet, interne. P... Charles, 22 ans, ouvrier. 
Pas de traumatisme, mauvais état des gencives et des dents. 

Durée de l’incubation : inconnue. 

Durée de la maladie : 30 jours (guérison). 

Le traitement a été commencé le septième jourde la maladie. 

Quantité de sérum injecté : 300 c. e. 

Pouvoir immunisant du sérum : dix millions. 

Le sang recueilli après l'injection de 250 c. c. de sérum est 
antitoxique à raison de dix parties pour une de toxine. Il immu- 
nise une souris à la dose de 1 centimètre cube. 

Le sang recueilli après que le malade a reçu 270 e. c. de 
sérum est antitoxique à raison de deux parties pour une de 
toxine. 

Le sang recueilli trente-sept jours après la dernière injection 
est antitoxique à raison de 20 parties pour une de toxine. Il 
immunise une souris de 15 gr. à la dose de 1 €. c. 

A ces sept observations nous pourrions en joindre deux 
autres. L'une, du service de M. Berger, a été communiquée à 
l’Académie de médecine. Il s’agit d’un homme qui avait eu l'extré- 
mité d'un doigt écrasée et qui fut pris de télanos chronique. 
Après l’amputation du doigt, les accidents cessèrent. Le liquide 
épanché dans l'articulation de la deuxième phalange avec la 
troisième, contenait un coccus et du bacille tétanique. Ce malade 
a reçu quelques injections de sérum antitoxique, mais en 
si petite quantité qu'elles n’ont guère pu avoir d'influence sur 
la marche de la maladie. L'autre tétanique était un malade du 
service de M. Landouzy, qui, à la suite d’une blessure faite à la 
figure, par la pointe d’une fourche, eut un tétanos chronique 
limité d’abord à la tête. Après une vingtaine de jours les con- 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 107 


tractures s'étendirent au tronc et des spasmes apparurent, La 
température s'éleva. M. Landouzy fit exciser le point blessé ; 
presque aussitôt la température baissa et les contractures s’elfa- 
cèrent lentement. Aucune injection de sérum ne fut faite à ce 
malade. 

Le sérum employé dans les sept cas de tétanos humain dont 
nous venons de donner l’histoire était très actif, et six fois, au 
moins, les quantités injectées ont été considérables. Persuadés 
que le but à atteindre est de rendre le sang du patient antitoxique, 
aussi rapidement que possible, nous avons introduit sous la 
peau des doses massives en une seule fois. L'examen du sang de 
nos malades nous a montré que, pour un homme pesant environ 
10 kilogrammes, 100 à 150 e. c. de sérum actif au millionième 
suffisent pour donner un pouvoir antitoxique notable. Mais cette 
qualité nouvelle du sang n’a pas arrêté la maladie; nos patients 
sont morts de tétanos avec un sang non seulement capable de 
détruire la toxine, mais encore de donner l’immunité. 

Le tableau ci-dessous résume les principales circonstances 
des cinq cas mortels. 


Nos Durée de l’incubation. Durée de la maladie. Roses a RL Sérum injecté. 

Ale 45 jours 6 jours. 4e jour. 147cc : enfant. 
2 S — 5 — 4e — 108cc 

3. do — 2 — 36 heures. 20cc : enfant. 
4. 8 — D — 36 — 402cc 

>. 44 — 3 — 2e jour. 247ec 


Si le traitement a été fait, pour ces cinq cas, dans des condi- 
tions favorables sous le rapport de l’activité du sérum et des 
quantités injectées, il n’en est pas de même si on considère le 
moment de l'intervention et la gravité du mal, Tous ces tétanos 
sont à marche rapide ; deux d’entre eux, n° 3 el 5, ont eu une 
évolution si courte qu'il n’y à pas à s'étonner que le traitement 
ait échoué. Chez l'enfant (n° 3) traité par le D' Morax, le sérum 
a été injecté tardivement et en petite quantité; l'observation 
présente cette particularité qu’une des injections a été faite 
dans les veines. La maladie était si grave que M. Morax ‘a’ pensé 
que, pour gagner du temps, il fallait introduire directement 
l’antitoxine dans le sang. 

Le malade n° 1 a vécu deux jours après le début du traite- 


108 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


ment, mais chez lui le tétanos portait surtout sur les muscles: 


respirateurs, ce qui aggravait la situation. 

Le malade n° 2 a été traité seulement 24 heures avant la 
mort. Ces quatre exemples (1, 2,3, 5) ne montrent donc qu'une 
chose, c’est que dansle tétanos rapide, lasérum-thérapie, telle que 
nous lPavons faite, a été impuissante, elle n’a modifié en rien la 
marche de la maladie. Nous sommes tombés sur une série parti- 
cubèrement sévère; c’est précisément pour ces tétanos graves 
qu'il faudrait un traitement efficace. Mais, nous le répétons, 
dans la pratique on ne choisit ni les cas ni le moment de 
l'intervention ; les remèdes doivent être essayés dans les condi: 
tions de la pratique, il faut publier tous les cas pour que l’on 
sache ce que l’on peut attendre du sérum antitoxique. 

Dans le cas n° 4, survenu à l’hôpital même, le sérum a été 
donné 36 heures après l'apparition des premiers signes de tétanos, 
et à doses assez fortes d'emblée pour créer rapidement l’état 
antitoxique. Pendant trois jours le tétanos a été en s’aggravant 
chez cet homme, dont le sang était capable de donner limmunité 
contre le tétanos. La rapidité de l'intervention, la quantité 
énorme de sérum injecté nous faisaient espérer un meilleur 
résultat. 

Le tableau ci-dessous résume les principales circonstances 
des deux cas guéris. 


Commencement du traitement après 


Nos Durée de l’incubation. Durée de la maladie. TOR Sérum injecté. 
6. 45 jours. 30 jours. 3e jour. 265ce : enfant (31k). 
1É 4 — 90 — T8 — 300cc 


À aucun moment ces deux malades n'ont donné de sérieuses 
inquiétudes, il était manifeste que chez eux le tétanos était bénin ; 
leur température était normale. Ce sont des cas qui guérissent 
avec toutes les médications, et il est difficile de dire si le sérum 
a eu une influence heureuse sur la durée des contractures. Nous 
en retiendrons seulement que l’on peut donner à l'homme téta - 
nique, sans danger, à doses massives, du sérum de cheval très 
antitoxique, et qu'ilne faut pas hésiter à injecter d'embléeune quan- 
tité suffisante pour rendre le sang antitoxique. Ces deux malades, 
qui ont guéri, ont eu de l’urticaire après les injections. Cette par- 
ücularité à été aussi notée par M. le D' Rotter. Cette éruption 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 109 


est peut-être causée par l'introduction dans l'organisme de ces 
grandes quantités de sérum de cheval. 

On s’est préoccupé, dans ces derniers temps, de savoir quelle 
est la mortalité dans le tétanos, afin de pouvoir estimer la valeur 
du traitement par le sérum. La gravité du tétanos est, en géné- 
ral, en rapport avec la durée de l’incubation, et tout le monde 
est d'avis que la mortalité est d'autant plus forte que l’incubation 
est plus courte. Une incubation de 10 à 15 jours correspond le 
plus souvent à un tétanos de sévérité moyenne. Nos observations 
1 et 5 montrent cependant que des tétanos qui n'ont commencé 
que 14 et 15 jours après le traumatisme, ont eu une évolution 
fatale et très rapide. M. Behring adopte, d’après les statistiques 
de Rose, de Richter et autres, le chiffre de 80 à 90 0/0, comme 
représentant la mortalité dans le tétanos. Le professeur Alber- 
toni admet une mortalité bien inférieure, de 24 0/0, d'après le 
relevé de 176 cas de tétanos observés dans ces dix dernières 
années. M. Sormanni, qui a fait la statistique des hôpitaux italiens 
de 1882 à 1887, constate une mortalité de 44 0/0. Nous pensons 
que le chiffre de 80-90 0/0 est trop fort; en effet, 1l est établi sur 
des statistiques militaires, et on sait qu’en temps de guerre, sur- 
tout avant l’application rigoureuse de l’antisepsie, le tétanos était 
particulièrement meurtrier sur les blessés. Le chiffre de M. Alber- 
toni est assurément trop faible; dans les conditions de la chirur- 
gie actuelle, la proportion de 50 0/0 est, croyons-nous, voisine 
de la vérité. C’est le nombre qui concorde le mieux avec ce que 
nous avons pu observer. 

Les tentatives de traitement que nousavons faites sur l’homme 
ont donné des résultats assez semblables à ceux que nous avons 
obtenus chez les animaux. Le traitement aéchoué dans les tétanos 
graves. En aurait-il été autrement s’il avait été commencé plus 
tôt? De nouvelles expériences répondront. Malgré que notre 
observation no 4 soit de nature à ébranler un peu les espérances 
qu'avait fait naître la belledécouverte de MM. Behring et Kitasato, 
nous ne porterons pas un jugement sur si peu de faits. Il convient 
d'en amasser de nouveaux, et pour aider à ce résultat, dans la 
mesure de nos forces, nous enverrons avec plaisir à nos confrères 
des hôpitaux bien placés pour traiter des tétaniques, du sérum 
thérapeutique desséché et de conservation facile. Il faut en être 
muni à l'avance pour ne pas perdre un temps précieux quand les 


110 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


malades se présenteront. Nous persistons à croire que l'emploi 
du sérum antitoxique constitue, en ce moment, le seul traitement 
rationnel du tétanos.Il est inoffensif, il détruit la toxine élaborée 
dans le foyer d'infection, il sera donc toujours utile. 

Pour nous, la conduite à tenir en présence d’un cas de tétanos 
est la suivante ! : injecter aussitôt et d'emblée une centaine de 
centimètres cubes de sérum très actif, exciser le foyer d'infection. 
Administrer encore le lendemain et le surlendemain 100c.c. de 
sérum, par jour. Sile tétanosestenrayé, aprèsune dizainede jours, 
surtout si on n'a pas pu enlever le foyer, donner encore du sérum 
pourprévenir ces retours de tétanos que nous avons signalés chez 
les animaux. Appliquons-nous donc à augmenter l'activité du 
sérum et à concentrer l’antitoxine sous de petits volumes pour en 
faire pénétrer rapidement de grandes doses. 

Devant les difficultés que nous avons rencontrées à guérir le 
tétanos, nous pensons que, chaque fois que la chose est possible, 
il faut essayer de le prévenir. Pourquoi le médecin appelé pour 
soigner une plaie contuse et souillée de terre n'injecterait-il pas 
préventivement de l'antitoxine? De petites doses suffisent à 
prévenir le tétanos, de grandes doses peuvent ne pas le guérir. 
Lors de la dernière guerre du Dahomey, nous avions envoyé à 
M. le D' Rouch, médecin de la marine, du sérum desséché, 
distribué, par doses de 5 grammes, dans des tubes, pour qu’il 
lemploie préventivement. On sait, en effet, que dans cette partie 
de l’Afrique, les blessures sont souvent suivies de tétanos. 
Malheureusement, le D' Rouch, blessé par le feu de l'ennemi, a 
succombé sans avoir pu mener à bien cette tentative. M. le 
D' Schwartz, chirurgien de lhôpital Cochin, nous a adressé 
dernièrement, pour que nous lui injections préventivement du 
sérum, un homme dont la main avait été broyée par un wagonnet. 
Nous lui avons injecté dans le tissu cellulaire 30 c.c. d’un sérum 
dont le pouvoir immunisant est dix millions. Si cette pratique 
se généralisait, assurément bien du sérum serait employé inuti- 
lement, puisque le tétanosest relativement rare, mais assurément 
aussi, un certain nombre de blessés lui devraient la vie. 


4. La première injection pourrait, dans les cas dont l’incubation a été très 
courte, être faite dans le péritoine, pour que l'absorption soit plus rapide, à la 
condition que lon soit tout à fait sûr de la pureté du sérum. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 111 


APPENDICE 


TRAITEMENT DU TÉTANOS DÉCLARÉ, 


Nous donnons ici les relations de quelques-unes de nos 
expériences, pour que l’on puisse se rendre compte de la 
marche de la maladie chez les animaux traités et chez les 
témoins. 


EXPÉRIENCES SUR LES SOURISe 


Exp. du A1 octobre 1892. Le sérum employé est du sérum de lapin 
vacciné dont le pouvoir immunisant est de un million; il est injecté 
sous la peau. 15 souris sont inoculées au moyen de petits fragments de bois 
de 2 millimètres de long, non stérilisés au préalable, el imprégnés de spores 
chauffées 3 h. à 80°. Ces échardes sont desséchées, elles sont introduites sous 
la peau du dos, à la base de la queue; la plaie est obturée avec un peu de 
collodion. L'inoculation a lieu de 3 à 4h. du soir. 

Souris témoins. N° I. — Poids 13 gr. Début du tétanos le 4 jour, le 
45 oct. L'animal meurt le même jour dans une cerise pendant qu'on 
l’'examine. 

N° II. — Poids 14 gr. Début du tétanos le 4 jour, le 15 oct. Une patte 
postérieure seule est prise le matin; le soir rigidité des deux pattes posté- 
rieures. Mort dans la nuit du 15 au 16. 

N° III. — Poids 14 gr. Début du tétanos le Æ jour, le 15 oct. Le soir, 
rigidité des 2 pattes postérieures. 

Le 16 oct., tétanos généralisé. Mort le soir à 5 h. 

N° IV. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 7° jour. Le 17 oct. au matin, 
asymétrie des pattes postérieures. 

Le 18 oct., mêmes symptômes, pas d’aggravation. 

Le 19 oct., léger écartement des pattes pendant la marche. 

Le 20 oct., même état. 

Le 25 oct.,un peu d’aggravation des contractures des pattes postérieures. 
L'animal meurt brusquement, quand on le saisit pour l’examiner. 

Souris traitées. N° I. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 14 oct., 3° jour 
au matin : les pattes postérieures sont légèrement écartées. A 10 h., injection 
sous-cutanée de 1 c. c. 1/3 de sérum. — A 3 h., injection de 1 c. c. 1/3. 
Aggravation, les pattes postérieures deviennent raides. 

Le 15 oct. 9 h. matin, rigidité absolue des pattes postérieures. Injec- 
tion de { c. c. 1/3. — A 3 h., injection de 1 c. c. 1/3. Même état que le 
matin. 

Le 16 oct., tétanos généralisé, l'animal est couché en rigidité com- 
plète. 

Le 17 oct., mort le soir à 9 h. 

N° IT. — Poids 22 gr. Rien le 14 oct., 3° jour au matin. — A 1 h., léger 


112 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


écartement des pattes postérieures. Injection de 1 c. c. 1/3 de sérum. — 
À 6 h., les symptômes sont plus accentués, la patte droite est un peu raide. 
Injection de 1 ec. c. 1/3. 

Le 15 oct., rigidité de la patte postérieure droite et rigidité commençante 
de la patte postérieure gauche. Injection de 1 c. c. 1/3 de sérum. — A 3 h. 
injection de 4 c. c. 1/3. Même état. 

Le 16 oct., tétanos généralisé. Mort le soir à 7 h. 

N° II. — Poids 45 gr. Début du tétanos le 4 jour. Le 15 oct., gêne des 
pattes postérieures. Injection à 8 h. 30 de 1 c. c. 1/3 de sérum; à 3 h., 
injection de { c. c. 1/3. Rigidité des deux pattes postérieures. 

Le 16., tétanos généralisé, animal couché, respirant mal, 

Le 17, même état. Mort à midi. 

N° IV. — Poids 17 gr. Début du tétanos 6° jour. Le 15 au matin, gêne des 
pattes. Commencement de rigidité. 8 h. 30, injection de 1 c. c. 1/3 de sérum. 
— À 3 h., injection de 1 €. c. 1/3. — Rigidité marquée de la patte gauche. 
Mort dans la nuit du 15 au 16. 

N° V. — Poids 17 gr. Début du tétanos le 4 jour. Le 15 au matin, affais- 
sement de l'arrière-train. Gêne de la patte postérieure gauche. Rigidité de 
la patte droite. 8 h. 30, injection de 1 c. ec. 1/3 de sérum. — A 3 h., injec- 
tion de { c. c. 1/3. Contracture commençante de la patte gauche. 

Le 16 au matin, tétanos généralisé, Mort le soir à 7 h. 

N° VI. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 4 jour. — 15 oct. au matin. 
Affaissement du train postérieur, gène dans les deux pattes.8 h. 30, injection 
de { c. c. 1/3 de sérum. 3 h., injection de 1 c. c. 1/3. Rigidité complète de la 
patte droite. Contracture commençante de la patte gauche. Mort à 6 h. 40 
du soir. 

N° VIT. — Poids 43 gr. Début du tétanos le # jour. — 15 oct. au matin 
patte droite libre, patte gauche un peu raide. 8 h. 30, injection de 1 c. c. 1/3. 
3 h., injection de 1 c. ce. 1/3. Rigidité en extension de la patte gauche, gêne 
très marquée de la patte droite. Mort dans la nuit du 15 au 16. 

N° VITE. — Poids 17 gr. Début du tétanos le 4 jour. — Le 43 oct.au matin, 
gène des pattes postérieures, surtout à gauche. 8 h. 30, injection de 1 e.c. 1/3 
de sérum. 3 h., injection de 1 c. c. 1/3. Rigidité de la patte gauche. Con- 
tracture commençante à droite. Mort dans la nuit du 15 au 16. 

N° IX. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 4e jour. — Le 15 oct. au matin, 
gêne à peine sensible dans le train postérieur. Un peu d'écartement des 
pattes. 8 h. 30, injection de 1 c. c. 1/3 de sérum; à 3 h., injection de 
4 c. c. 1/3. Gêne marquée des pattes postérieures. Mort dans la nuit du 45 
au 16. 

N° X. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 5° jour. — Le 16 au matin, aucun 
symptôme A 1 h. 30, légère raideur de la patte postérieure droite, aussitôt 
injection de 1 c.c. 1/3; à 6 h., injection de 2 c. c. de sérum. Rigidité de la 
patte postérieure droite. 

17 au matin, rigidité de la patte postérieure ganche, crises convulsives ; à 
8 h. 30, injection de { c. ce. 1/3; 5 h., injection de 1 c. c. 1/3. Rigidité de 
deux pattes. 


MT 


PERL N SUR DR > Llec Lee 
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7 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 113 


18 au matin, tétanos généralisé. Mort le soir à 7 h. 

N° XI. — Poids 17 gr. Début du tétanos le T° jour, comme le témoin IV. 
Le 17 au matin, légère asymétrie des pattes postérieures quand la souris 
est suspendue par la queue. Pas de gêne pendant la marche. Aussitôt, à 
9 h. du matin, on injecte 2 c. c. 1/4 de sérum; à 5 h., 1 c. c. 1/3. Un peu 
d'écartement des pattes. 

Le 18 oct., gène dans les mouvements des pattes, surtout à gauche. — 
10 h., injection de 1 e. c. 1/2 de sérum. — 6 h., injection de 1 ce. c. 1/3. 
Commencement de rigidité de la patte gauche. 

Le 19 oct., même état. Le tétanos n’a pas progressé. 

Le 20 oct., même état jusqu'au 26 octobre. 

Le 2 nov., retour à l’état normal. 

Le 22 déc., on injecte à cette souris 1/1400 de c. c. de toxine, à la base 
de la queue. 

Le 24 déc., redressement de la queue. 

Le 25 déc., gène des pattes postérieures. 

Le 26 déc., rigidité de la patte droite. Mort dans la nuit du 26 au 27. 

Un mois et 20 jours après la guérison, cette souris n’a pas l'immunité. 

Expérience du 27 octobre 1892. — Le sérum employé est du sérum de 
lapin : son pouvoir immunisant est de un million. 

14 souris sont infectées comme les précédentes, le 27 oct., de 5 à 6 h. du 
soir. {2 souris seulement prennent le tétanos. À mesure que les souris sont 
prises, une est traitée, l’autre est gardée comme témoin. 

Souris témoins. N°_I. — Poids 14 gr. Début du tétanos 3° jour. Le 30 à 
4 h. soir, asymétrie des pattes postérieures. — Le 31 au matin, redressement 
de la queue. Rigidité commencçante de la patte droite. 6 h. du soir, rigidité 
complète de la patte droite. Mort dans la nuit du 31 oct. au {°° nov. 

N° IL. — Poids 13 gr. Début du tétanos le # jour. Le 31 oct. à 8 h. du 
matin, asymétrie des pattes postérieures, qui sont légèrement écartées 
pendant la marche. 6 h. soir, affaissement du train postérieur: Raideur 
commençante des pattes. — 1‘ nov., rigidité complète des pattes, crises 
convulsives le soir. Tétanos généralisé. Mort dans la nuit. 

N° III. — Poids 19 gr. Début du tétanos le 4 jour. Le 31 oct. vers 3 h., 
redressement de la queue, un peu d'asymétrie des pattes postérieures, gêne 
de la patte droite. — 1° nov., rigidité de la patte gauche, contracture com- 
mençante de la patte droite. Le soir à 4 h., rigidité des deux pattes posté- 
rieures. — 2 nov., télanos généralisé. Mort à 3 h. 

N° IV. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 5° jour. Le 1°7 nov. au matin, 
rigidité de la patte postérieure gauche. Le soir, contracture des deux pattes. 
Mort dans la nuit. 

N° V. — Poids 15 gr. Début du tétanos le 5° jour. Le 1°' nov. au matin, 
redressement de la queue, gêne des mouvements des pattes postérieures. 
Le soir, gêne plus marquée, pas encore de rigidité. — 2 nov., tétanos com- 
plet des deux pattes postérieures. Mort à 4 h. 

N° VI. — Poids 24 gr. Début du tétanos le 6° jour. Le 1° nov., dans la 
soirée, léger écartement des pattes postérieures. — Le 2 nov., affaissement 


8 


Rd 


dé 


114 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


du train postérieur, écartement plus prononcé des pattes pendant la marche. 


Le soir, redressement de la queue. — Le 3 nov., même état. — Le 4 nov., 
rigidité des pattes postérieures. — Le 5 nov., l'animal est très malade. 
Mort à 4h. 


Souris trailées. — N° I. Poids 13 gr. Début du tétanos le 3° jour. Le 
30 oct, à midi, rien d'anormal. Le même jour à 2 heures, il parait exister 
un peu d’asymétrie des pattes postérieures lorsque l'animal est suspendu 
par la queue, la marche est normale, la queue non redressée. À 3 h. 30, 
injection de 1 ec. c. 1/3: à 6 h. 30, injection de 1 e. c. 1/2 de sérum. Gêne un 
peu plus marquée de la patte droite. 

31 oct., 8h. matin, redressement de la queue. Rigidité de la patte droite, 
injection de 1 c. c. 1/3. À 1 h. 30, injection de ! c. e. 1/3. AG h. soir, gène 
marquée de la patte gauche. 

4° nov., rigidité commençante de la patte gauche, Soir, rigidité complète 
des deux pattes. 

2 nov., même état. 

3 nov., le tétanos n'a pas progressé. Les deux pattes postérieures sont 
renversées sur le dos. 

7 nov., même état. 

20 nov., les pattes postérieures sont moins rigides. 

25 nov., amélioration, les pattes sont toujours entrecroisées. 

29 nov., même état. Mort dans la suite du 30 nov. au 4° déc. 

N° II. — Poids 20 gr. Début du tétanos le 4 jour. Le 31 oct. au matin, 
redressement de la queue et asymétrie très légère des pattes postérieures 
pendant la suspension. Aucune gêne de la marche. A 8 h. 30, injection de 
4 c. c.-4/3 ; 4 h- 30;injection de 1 c:-c. 1/3:;.5 h. 30, injection del c*e.175: 
Le soir, gène marquée de la marche. — Le 1°" nov., rigidité de la patte posté- 
rieure gauche, crises convulsives. Mort à 9 h.20 du matin, dans une crise 
convulsive au moment où on prend la souris pour lui injecter du sérum. 

N° HI. — Poids 20 gr. Début du tétanos le 4° jour. Le 31 oct. à 8 h, du 
matin, redressement de la queue, un peu de gêne de la patte gauche pendant 
la marche, Injection de 1 c. c. 1/3 de sérum; 1 h. 30, injection de 1 c. ce. 1/3; 
5 h. 30, injection de 1 c. c. 1/3. Le soir, rigidité commençante de la patte 
gauche. 

Le 1 nov., affaissement du train postérieur. Rigidité complète de la 
patte gauche, gêne de la patte droite. À 8 h. 30, injection de 1 c. c. 1/3 de 
sérum. Le soir, rigidité complète des pattes postérieures. 

Le 2 nov., tétanos généralisé, mort le soir à 4 heures. 

N° IV. — Poids 23 gr. Début du tétanos le 4 jour. Le 31 oct. à 2 h., 
rien d’anormal:; le même jour à 5 h., on constate un peu d’asymétrie des 
paltes postérieures pendant la suspension et une gêne très légère de la patte 
gauche pendant la marche. 5 h. 15, injection de { c. e. 1/3 de sérum. 

Le 4% nov. au matin, rigidité de la patte gauche, la patte droite com- 
mence à se raidir. 9 h., injection de 2 c. c.: 4h, injection de 1 ec. c. 1/3. Le 
soir, rigidité de la patte droite. Mort dans la nuit. 

N° V. — Poids 17 gr. Début du tétanos le 5° jour. Le 4° nov. à 8 h. 30, 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 115 


rigidité de la patte postérieure gauche, rien à la patte droite ; injeelion de 
2e. c. de sérum; à 4 b. injection de 2 c. c. Le soir, rigidité complète de la 
patte gauche; rien à droile. — 2 nov. au matin, gêne très marquée de la 
pattefdroite. AS h., injection de { c. e. de sérum; à h., injection de 1 c. e. 1/3 
de sérum. Le soir, rigidité des deux pattes. Mort dans la nuit. 

N° VI. — Poids {7 gr. Début du tétanos le 5e jour. Le 13 nov. à 8 h, 30, 
redressement de la queue, écartement des pattes postérieures pendant la 
marche. 9 h., injection de 2 c. c. de sérum ; #4 h., injection de 2 ec. c. de 
sérum. Le soir, gène marquée dans les mouvements des pattes de derrière. 
— Le 2 nov. au matin, rigidité des pattes postérieures. À 8 h., injection de 
1e. c. 1/3 de sérum; 5 h., injection de 1 c. e. 1/3. Le soir, l'animal est très 
affaissé, contracture des membres postérieurs. Mort à 6 h. 45. 


20 EXPÉRIENCES SUR LES COBAYES. 


Expérience du 1° nov. 1892. — Dix cobayes reçoivent sous la peau du 
dos, vers la racine de la cuisse gauche, une écharde de bois de 1 ce. de long, 
non stérilisée au préalable, imprégnée de spores tétaniques chauffées à 80° 
pendant 3 heures, puis desséchées La plaie est fermée avec un peu de collo- 
dion. L'opération est faite entre 5 h. et 6 h. du soir. Trois cobayes seront 
traités, trois serviront de témoins. Les traités et les témoins sont désignés 
alternativement, au fur et à mesure que les animaux deviennent tétaniques- 
Le sérum employé provient d'un cheval, il a un pouvoir immunisant de dix 
millions. 

Cobayes témoins. N° I. — Poids 305 gr. Début du tétanos le 5° jour. Le 
6 nov. dans l'après-midi, on remarque que la patte droite de derrière est un 
peu déjetée en dehors pendant la marche et plus trainante que l’autre; elle 
ne présente ni raideur, ni changement appréciable pendant le repos. — Le 
7 nov., même état. — Le 8 nov., la patte est plus déjetée en dehors que la 
veille, avec tendance à l'extension. Tension des muscles abdominaux. Le soir, 
rigidité du tronc, rigidité commençante des pattes antérieures. Mort dans 
la nuit du 8 au 9. 

No Il. — Poids 284 gr. Début du tétanos le 6° jour. Le 6 nov., la patte 
postérieure gauche est moins agile. — Le 7 nov., gène très légère de la 
patte gauche. — Le 8 nov., la patte gauche, déjetée en dehors, traine un peu 
pendant la marche, — Le 9 nov., raideur de la patte gauche. — Le 10 nov., 
patte gauche en extension complète. Mort dans la nuit du 40 au 11. 

N° III. — Poids 348 gr. Début du tétanos le 7° jour. Le 8 nov. au matin, 
patte postérieure gauche déjetée en dehors, traïnante pendant la marche, 
pas de raideur. — Le 9 nov., très légère raideur des muscles de la patte 
gauche. — Le 10 nov., patte gauche en demi-extension. — Le 11 nov., patte 
gauche en extension complète et rigide. — Le 12 nov., raideur du tronc, 
rigidité commençante des pattes antérieures. Mort à 4 h. 

N° IV. — Poids 280 gr. Début du tétanos le 10° jour. Le 10 nov. au soir, 
la patte gauche de derrière est moins agile que la droite et traïne un peu 
pendant la marche. — Le {1 au matin, mêmes symptômes que la veille, plus 
accusés. — Le 12 nov., la patte gauche est écartée du tronc sans raideur. 


mai LA « 


A 


116 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Même état le 13, le 14 et le 15. — Le 16., patte gauche toujours en abduc- 
tion avec légère extension. — Le 17., raideur du tronc et de la paroi abdo- 
minale. Mort dans la nuit. 

N° V. — Poids 405 gr. Début du tétanos le 11° jour. Le 12 nov., la patte 


postérieure gauche est moins agile que la droite. — Le 13 nov., elle est 
légèrement déjetée en dehors pendant la marche. — Le 14 nov., la patte 
gauche commence à se placer en extension, — Le 15 nov., elle traine un peu 
sur le sol. — Le 16 nov., extension presque complète. — Le 17 nov., raideur 


du tronc et des muscles abdominaux. Mort à 6 heures. Le sang de ces 
cobayes ne présente au moment de la mort aucun pouvoir antitoxique. 

Cobayes traités. N° I. — Poids 485 gr. Début du tétanos le 4 jour. Le 
> nov. au matin, la patte postérieure gauche commence à se placer en 
extension, sans raideur bien marquée. 9 h 20, injection de {1 c. c. de 
sérum, dans le péritoine. Du sang est extrait 30 minutes après l'injection, il 
est antitoxique à raison de 10 parties de sang pour une partie de toxine. 
Du sang extrait une heure après l'injection est antitoxique à raison de 
6 parties de sang pour une de toxine. Ce sang n'immunise pas un cobaye 
de 175 gr. à la dose de 1/8 de ce. c. Du sang extrait deux heures après 
l'injection est antitoxique à raison de 3 parties du sang pour une de toxine. 
Il immunise un cobaye de 193 gr. à la dose de 1/8 de c. ce. — 4 h. 30- 
Deuxième injection dans le péritoine de 12 c. e. de sérum. Du sang extrait 
30 minutes après cette seconde injection est antitoxique à raison de 3 parties 
pour une de toxine. — Le 6 nov., rigidité en extension des deux pattes pos- 
térieures, crises convulsives, gêne respiratoire. Mort à 10 h. 15. 

Autopsie. — Pas de liquide dans le péritoine. Pas de microbes dans le 
sang, ni dans la pulpe des organes. Le sang recueilli dans le corps est 
antitoxique à raison de une partie de sang pour une partie de toxine. Il 
immunise un cobaye de 260 gr. à la dose de 1/4 de €. c. 

No IE. — Poids 395 gr. Début du tétanos le 4° jour. Le 5 nov. à midi, rien 
d'anormal; le même jour à 3 h., il semble que la patte gauche est moins 
habile que la droite pendant la marche; elle reste simplement un peu en 
retard quand l'animal court, d'ailleurs pas de raideur. 3 h. 15, injection dans 
le péritoine de 12 c. c. de sérum. — 6 nov. La patte gauche est déjetée en 
dehors et commence à se placer en extension. 10 h., injection dans le péri- 
toine de 12 c. c. de sérum. — 7 nov. Rigidité de la patte en extension. — 
8 nov. Même état, qui persiste jusqu'au 20 nov. A cette date, toujours rigidité 
de la patte qui est en extension complète. — Le 21 nov., le cobaye est couché 
sur le flanc, les membres raidis et agités de secousses convulsives : respira- 
tion précipitée. Mort à 8 h. 35, 17 jours après le début. 

Aulopsie. — Aucune lésion ni dans le péritoine, ni dans les organes. 
L'écharde est entourée d’une gaine blanchâtre formée de leucocytes. On y voit 
au microscope des microcoques et des bâtonnets semblables à ceux du tétanos. 

Du sang recueilli dans le cœur après la mort, et de la pulpe des organes, 
sont ensemencés et ne donnent pas de culture. 

Le sang de ce cobaye a été examiné à plusieurs reprises au point de vue 
de sa propriété antitoxique. Du sang, recueilli 30 minutes après la première 


CONTRIBUTION A L’'ÉTUDE DU TÉTANOS. 117 


injection de 42 c. c. de sérum dans le péritoine, le 6 nov., est antitoxique à 
raison de 15 parties pour une de toxine. Le sang recueilli #5 minutes après 
est antitoxique à raison de 12 parties pour une de toxine. Le sang recueilli 
1 h. 30 après est antitoxique à raison de 8 parties, et ne l'est pas à raison 


de 4 parties pour une de toxine. — Le sang recueillile 9 nov., 3 jours après 
la deuxième injection de 12 c. e. de sérum dans le péritoine, est antitoxique 
à raison de une partie pour une de toxine. — Le sang recueilli après la 


mort, 15 jours après la derniére injection de sérum, est antitoxique à raison 
de 4 parties pour une de toxine, il ne l’est pas à raison de une partie pour 
une de toxine. Il immunise un cobaye de 357 gr. (contre 1/200 de €. €. de 
toxine) à la dose de 1 c. c. On n’a pas essayé d’autres proportions. 

N° III. — Poids 357 gr. Début du tétanos le 5° jour. Le 6 nov. à 8 h. 30, 
la patte postérieure gauche est déjetée au dehors, un peuen extension, sans 
rigidité. — À 9 h. injection de 12 c. c. de sérum dans le péritoine. — A 
4 h. injection de 12 c. c. de sérum. Le soir la palte gauche est plus étendue. 
Le 7 nov., tétanos généralisé, crises convulsives, mort à 10 h. 

Autopsie. — Il reste 6 c. c. de sérum dans le péritoine. 

Le sang recueilli dans le cœur est antitoxique à raison de une partie de 
sang pour une de toxine. Il immunise un cobaye de 264 gr. (contre 1/200 
de c. c. de toxine) à la dose de 1/8 de centimètre cube. 

N° IV. — Poids 274 gr. Début du tétanos le 7° jour. Le 8 au matin, patte 
gauche lègèrement déjetée en dehors et traïnant un peu pendant la marche, 
pas de raideur. À 10 h., injection de {1 ce. c. de sérum dans le péritoine. 
Le 9 au matin, patte gauche plus déjetée en dehors. Même état jusqu’au 
22 nov. On pense que le tétanos est définitivement enrayé. Le 23 nov. au 
matin la patte gauche est rigide et en extension, l’arrière-train est légèrement 
affaissé, un peu de contracture des muscles abdominaux. — 2 h., gêne respi- 
ratoire très marquée. — 2 h. 20, le cobaye est couché sur le flanc et pré- 
sente des crises convulsives presque incessantes. —-3 h., raideur des mem- 
bres, de la nuque, trismus, spasmes au moindre bruit. — Mort à 5 h. 

Autopsie. — Intégrité de tous les organes. Le sang, la pulpe du foie, dela 
rate, ensemencés, ne donnent pas de culture. L’écharde est contenue dans 
une petite cavité à parois rougeâtres, bourgeonnantes, elle est recouverte 
d'un enduit blanchätre. Au microscope, cet enduit est formé de leucocytes, 
de quelques rares coccus, de bacilles nombreux, minces, sans renflement 
terminal; d'autres bacilles semblables, mais plus courts, sont réunis bout à 
bout et en voie de multiplication. Il y a aussi quelques autres bacilles épais, 
appartenant à une espèce différente. Dans quelques leucocytes on trouve une 
ou deux spores tétaniques diminuées de volume, comme en partie digérées. 

Le sang recueilli 31 h. après l'injection du sérum thérapeutique est anti- 
toxique à raison de 3 parties pour une de toxine. 

Le sang recueilli après la mort n’est pas antitoxique à raison de 95 par- 
ties de sang pour une de toxine. 

No VI. — Ce cobaye n’a pas pris le tétanos, Il n'a donc pas été traité. 


Expérience du 3 novembre. — Six cobayes sont injectés au moyen d'une 
écharde introduite sous la peau, absolument comme dans l'expérience pré- 


118 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


cédente. 3 sont traités, 3 servent de témoins. Le sérum a un pouvoir 
immunisant de dix millions; il provient du cheval. 

Cobayes témoins. N° I. — Poids 280 gr. Début du télanos le 6° jour. Le 
9 nov. au matin, la patte gauche est un peu moins agile dans la marche. 
Pas de raideur. — A 3 h. la patte est déjetée en dehors, avec tendance à 
l'extension. — Le 10 nov. la patte est plus écartée du tronc et en extension 
légère. — Le 11 nov. la patte gauche est en demi-extension avec raideur des 
muscles. — Mort dans la nuit du 11 au 12. 

N° Il. — Poids 280 gr. Début du tétanos le 6° jour. — Le 9 nov. au 
matin, la patte postérieure gauche est un peu moins habile dans la marche. 
— 3 h., patte gauche déjetée en dehors et traïnant un peu, avec tendance 
à l'extension. — 10 nov. au matin, patte gauche écartée du tronc et en 
légère extension. — Le 11, raideur des muscles de la patte gauche. — 
Mort dans la nuit du 11 au 12. 

No II. — Poids 405 gr. Début du tétanos le 11° jour. — Le 12 nov. la 
patte gauche hésite pendant la marche. — Le 18 nov., la patte gauche est 
déjetée en dehors. — Le 14, elle commence à seplaceren extension. — Le 15, 
elle traîne sur le sol. — Le 16, extension presque complète du membre pos- 
térieur gauche. — Le 17, raideur du tronc, des muscles abdominaux, rigi- 
dité commençante de la patte antérieure gauche. — Mort à 6 heures. 

Cobayes traités. N° 1. — Poids 255 gr. Début du tétanos au 5° jour. Le 
8 nov. au matin, patte gauche légèrement déjetée en dehors, tendance à 
l'extension, pas de raideur. — 9 h 50, injection de 11 c. c. de sérum dansle 
péritoine. — Le 9 nov., la patte est en extension avec rigidité. — A 2 h., 
injection de 5 c. c, de sérum dans le péritoine. — Le 10 nov., même état. 
— Le A1 nov., un peu de raideur du tronc. — Le 12, raideur plus accentuée 
du tronc. — 14, même état. — Le 15 nov., l’animalest couché sur le flanc : 
spasmes tétaniques incessants. — Mort à 10 heures. 

Le sang, recueilli 1 h. 30 après la première injection, est antitoxique à 
raison de 4 parties pour une de toxine. — Le sang, recueilli 48 h. après la 
première injection, est antitoxique à raison de 1 vol. de sang pour { vol. de 
toxine. — Le sang, recueilli après la mort, est aussi antitoxique que celui de 
la prise précédente. Il immunise un cobaye de 260 gr. (contre 1/200 de 
centimètre cube de toxine) à la dose de 1/59 de centimètre cube. 

N° II. — Poids 513 gr. Début du tétanos le 6° jour. Le 9 nov., la patte 
gauche paraît, par instants, un peu lourde pendant la marche. Pas de rai- 
deur. — À 3 h. la patte traîne un peu et se porte en dehors, tendance à 
l'extension. Injection de 12 c. e. dans le péritoine. — Le 10 nov., même 
état. — Le 11 nov., patte gauche déjetée en dehors, en demi-extension, un 
peu de raideur des muscles. — A 3 h., injection de 5 c. c. de sérum dans 
le péritoine. — Le 12, même élat. — Le 13 nov., la patte gauche est en 
extension complète, raideur des muscles. — 14 nov., même état jusqu’au 
28 nov. — Le 29 nov. au matin, la patte gauche est absolument étendue et 
rigide. — Le soir, affaissement de l’arrière-train, raideur du tronc. — Le 30 
au matin, rigidité commençante des pattes antérieures, contracture des 
muscles du tronc et de l'abdomen, l'animal se traîne avec difficulté, gêne 


+ 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 119 


respiratoire, — Le 31 nov. l'animal est couché sur le flane, cerises convul- 
sives de tout le corps. — Mort à midi. 

Autopsie. — Au point de l'insertion de l’écharde, pas de lésions. Celle-ci 
est recouverte d'un enduit blanchâtre, très mince. Au microscope il est 
formé de leucocytes (dont quelques-uns contiennent quelques microcoques) 
et de petits amas de bacilles en voie de multiplication, qui ont l'aspect des 
bacilles tétaniques. Intégrité complète de tous les organes. Le sang du 
cœur, des fragments de foie, de rate, ensemencés, ne donnent aucune 
culture. 

Le sang, extrait 2 h. après l'injection de 12 c. c. de sérum, est anti- 
toxique à raison de à parties pour une de toxine. 

Le sang, extrait 45 jours après la dernière injection de sérum, est anti- 
toxique à raison de 64 parties de sang pour une de toxine. Il ne l’est pas à 
raison de 35 parties pour une de toxine. 

Le sang recueilli après la mort est faiblement antitoxique; il en faut 
environ 100 parties pour neutraliser une de toxine. 

N° III. — Poids 342 gr. Début du tétanos le 8° jour. Le {1 nov. au matin, 
la patte gauche est peut-être un peu lourde pendant la marche; dans l'a- 
près-midi elle traîne un peu pendant la marche, il n’y a ni raideur, nichan- 
gement d'attitude du membre au repos. — A3 h., injection de 12 c. c. de 
sérum dans le péritoine. — Le 12 nov., patte gauche écartée du tronc, en 
demi-extension, pas de raideur. — Le 13 nov., même état. — Le 14, ex- 
tension presque complète de la patte gauche, un peu de raideur du tronc. 
— Le 15, même état de la patte, raideur plus marquée du tronc. Injection 
de 12c. c. de sérum dans le péritoine à 9 h. du matin. — Le 16 nov., 
extension complète de la patte, raideur plus marquée des muscles du tronc, 
des muscles abdominaux. — Le 19 nov., même état jusqu'au 23. A cette 
date il semble que les contractures diminuent. Le 26 nov., l'amélioration 
persiste et s’accentue jusqu’au 23 nov. — Le 30 nov., la patte est plus rigide 
que la veille, les muscles abdominaux du côté gauche sont plus tendus, 
léger pleurosthotonos. Injection de 12 c. ec. de sérum dans le péritoine, à 
2 heures de l'après-midi, — 7 h. du soir, spasmes tétaniques. — Mort. 

Autopsie. — Intégrité complète des organes. Le sang du cœur, le foie, la 
rate, ensemencés en grande quantité, ne donnent pas de culture. L'écharde 
est contenue dans une logette de tissu conjonctif à parois lisses, de teinte 
ocreuse. L'examen au microscope de l’enduit qui tapisse la logette et le corps 
étranger montre beaucoup de leucocytes : on n'y trouve qu'un seul bâtonnet 
sur toute une préparation et pas d’autres microbes. Il ne semble pas qu'il y 
ait eu une reprise de la culture dans ce cas. 

Le sang extrait le 30 nov. au moment même de la reprise du tétanos, 
est antitoxique à raison de 15 parties pour une de toxine. Il ne l'est pas à 
raison de 10 parties pour une de toxine. 


Expérience du 13 novembre 1892, — Le 13 nov. à 1{ h. du matin, chez 
huit cobayes, on implante dans les muscles de la cuisse gauche une écharde 
de bois sur laquelle on a mis des spores tétaniques chauffées à 80° pendant 
3 heures. Les échardes avaient été prises dans une planche restée exposée 


+ 


120 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


au dehors pendant longtemps. C’est un exemple de tétanos à marche plus 
rapide que dans l'expérience précédente. Le pouvoir immunisant du sérum 
est de dix millions. 

Cobayes témoins. N°1. — Poids : 380 gr. — Début du tétanos le 8° jour. — 
Le 15 nov., à midi, rien d'anormal, — Le même jour, à 4 h. 10, la patte 
gauche est tuméfiée au point d'implantation de l’écharde, elle est un peu 
déjetée en dehors pendant la marche. — Le 16 nov., rigidité en extension de 
la patte gauche.— Le soir, raideur du tronc. Spasmes.— Mort pendant la nuit. 


N°IL. — Poids : 950 gr. — Début du tétanos le 3° jour. — Le 16 nov., au 
matin, rigidité en extension de la patte injectée. — Le 17, iétanos généra- 
lisé. — Mort à 1 h. 


Cobayes traités. N° I. — Poids : 570 gr. — Début du tétanos le 2+ jour. — 
Le 15 nov., au matin, la patte gauche est douloureuse et tuméfiée au point 
d'inoculation, elle traîne pendant la marche, tendance à l'extension. — 
10 h. 30, injection dans le péritoine de 18 c. c. de sérum. — Le 16, au 
matin, rigidité en extension de la patte infectée. Injection de 10 ce. €. de 
sérum dans le péritoine. — Le soir, petites crises convulsives. Gêne respi- 
ratoire. Injection de 6 c. c. de sérum, à 6 h. — Mort dans la nuit. 

Autopsie. — Petit foyer de suppuration autour du corps étranger. Il reste 
3 ©. c. de sérum dans le péritoine. 

Le sang du cœur est antitoxique, à raison de une partie pour une de toxine. 

N° II. — Poids : 375 gr. — Début du tétanos au 2° jour. — Le 15 nov., 
au matin, rien d'anormal. — A 11 h., le même jour, il semble que la patte 
inoculée présente un peu de gêne dans les mouvements, ce qui tient peut-être 
à la présence de l’écharde. À 4 h., la patte est un peu déjetée en dehors, 


sans raideur. Injection de 16 c. c. dans le péritoine. — Le 16, au matin, 
rigidité complète et extension de la patte gauche. — A 9 h. 30, injection 


de 10 c. c. de sérum. — Le soir, même état. — À 6 h. 15, injection de 6. c. ce. 
de sérum. — Mort dans la nuit. 

Autopsie. — Petit foyer de suppuration autour du corps étranger. Il reste 
2 ec. c. de sérum dans le péritoine. Le sang du cœur est très antitoxique, 
il neutralise son volume de toxine. 

N° III. — Poids : 415 gr. Début du tétanos le 3° jour. — Le 15,au matin, 
rien d’anormal. — A trois heures de l'après-midi, un peu de gêne dans la 
patte. — À 6 h., elle est plus accentuée. Injection de 18 c. c. de sérum. — 
Mort dans la nuit. 

Autopsie. — 3 c. c. de sérum dans le péritoine. Foyer purulent autour 
du corps étranger. Le pus contient beaucoup de microcoques, dont beaucoup 
sont inclus dans les leucocytes. On y trouve des bàtonnets assez nombreux, 
semblables à ceux du tétanos. 

N° IV. — Poids : 540 gr. — Début du tétanos le 3° jour. — Le 16, au 
matin, la patte est tuméfiée et un peu déjetée en dehors, elle traine sur le 
sol et est un peu raide. — 9 h., injection de 16 c. c. de sérum. — 6 h., 
injection de 8 ce. c. de sérum dans le péritoine. — Le 17 nov., rigidité et 
extension de la patte inoculée, affaissement du train de derrière, extension 
commençante de la patte droite. — 8 h. 30, injection de 15 c. c. de sérum. 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 121 


— 9 h. Raïideur du tronc, commencement de raideur de la patte antérieure 
gauche. Léger trismus. — 5 h. Crises convulsives. — Mort dans la nuit. 

Aulopsie. — Petit foyer de suppuration autour de l'écharde. 3 c. c. de 
sérum dans le péritoine. 

No V.— Poids : 440 gr. — Début du tétanos le 8° jour. — Le 15 nov. 
au matin, rien. — À 4 h., gêne très légère de la patte inoculée, le membre 
est chaud, douloureux. — Le 16, au matin, extension du membre, injection 
de 16 c. c. de sérum, à 9 h. du matin. À 6 h., injection de 10 €. c. dans le 


péritoine. — Le soir, la patte gauche est rigide, l’arrière-train affaissé. La 
patte de droite en extension. — Mort dans la nuit. 
Autopsie. — Foyer de suppuration autour de l’écharde. 2 c.c. de sérum 


dans le péritoine. ; 

Ne VI. — Poids : 600 gr. — Début du tétanos le 3° jour. — Le 15 nov., 
à 6 h. du soir, tuméfaction de la patte. — Le 16 nov., la patte traîne un 
peu sur le sol, pendant la marche, dans une demi-extension. — 9 h. 30, 
injection dans le péritoine de 16 c. c. de sérum. — Le soir, rigidité de la 
patte inoculée. — 6 h., injection de 12 c. c. de sérum dans le péritoine. — 
Mort dans la nuit. 

Autopsie.. — Foyer de suppuration autour de l’écharde. 3 c. c. de sérum 
dans le péritoine. 


30 EXPÉRIENCES SUR LES LAPINS. 


Expérience du 9 déc. 1892. — Lapins infectés dans les muscles de la 
cuisse par l'injection de 1/3 de cent. cube d’un mélange de trois parties 
de culture tétanique, chauffée à 80°, et de 1 partie d'acide lactique. Sur 
8 lapins inoculés, 6 seulement prennent le tétanos. — Le sérum employé 
est immunisant au millionième de €. €. 

Lapins témoins. — N°1. — Poids : 2kg, 300. — Début du tétanos le 
4 jour. — Le 13 dée., à 4 h. soir, on constate un peu de gêne de la patte 
inoculée, elle fléchit moins bien pendant la marche. — 14 déc., patte en 
abduction, la face dorsale du tarse accroche le sol. — 13 déc., gêne plus 
marquée. — 16, patte en demi extension, avec légère raideur. — Le 17, 
rigidité et extension complètes. — Le 18, même état jusqu’au 31 déc. La 
contracture persiste, la face plantaire du tarse est tournée en haut. Le téta- 
nos reste limité. — Un mois et demi après, le membre est toujours raïidi. 

N° II. — Poids : 2kg,250. — Début du tétanos. — Le 14 déc., au malin, 
gêne très légère des mouvements de flexion de la patte inoculée. — Le 15, 
gêne plus marquée, la face dorsale du tarse frotte sur le sol pendant la 
marche. — Le 16, même état. Le tétanos ne s'étend pas, mais la contrac- 
ture de la patte persiste. Elle dure encore plus d’un mois après. 

N° IT, — Poids : 2ks,500. — Début du tétanos le 7° jour. — Le 15 déc., 
rien d'anormal. — Le 16 déc., la patte inoculée est légèrement écartée du 
tronc et un peu en extension. Le 17, l'extension est presque complète, les 
museles sont rigides. — Le 18, opisthotonos, trismus, raideur de tous les 
membres. Crises convulsives. — Le 19, tétanos généralisé. — Mort dans la 
nuit du 19 au 20. 


122 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
Lapins traités. N° I. — Poids : 2ks, 200. — Début du tétanos le 4° jour. 


— Le 13 déc., au matin, la patte inoculée est un peu écartée du tronc eten 
extension, le tarse (raine un peu sur le sol. 10 h., injection de 40 ce. c. 


dans le péritoine. — Le 14, rigidité complète de la patte en extension. — 
Le 15, même état jusqu'au 25. — 26 déc., affaissement de l’arrière-train, 
léger trismus. — Mort dans la nuit du 26 au 27. 


Le sang recueilli à l’autopsie est antitoxique, à raison de une partie de 
sang pour une de toxine. 

N° IL. — Poids 2k8, 3(0. — Début le 5° jour. — Le 14 déc., la patte ino- 
culée est en extension avec un peu de raideur. — 8 h. 30, injection de 40 €. c. 


de sérum dans le péritoine. — Le {5 déc., rigidité complète de la patte en 
extension, un peu moins de souplesse des oreilles. — Le 16 déc., trismus, 


redréssement des oreilles. À 10 h., injection dans le péritoine de 40 c. c. 
de sérum. Soir, à h., opisthotonos, raideur des muscles lombaires, crises 
spasmodiques quand on touche l'animal. — 17 déc., exagération des symp- 
tômes. Crises convulsives à la moindre excitation. — 18 déc., télanos géné- 
ralisé. — 19 déc., même état. — 20 déc., même état. 

Mort dans la nuit du 20 au 21 décembre. 

Le sang extrait le {6 décembre, avant la 2 injection de sérum, est anti- 
toxique à raison de une partie de sang pour une de toxine. Le sang recueilli 
après la mort a le même pouvoir antitoxique. 11] immunise une souris de 
13 gr. à la dose de 0 c.e 0065, contre 1/1400 de c. c. de toxine. 

N° IL. — Poids : 2 K£, 800. — Début du tétanos le 5° jour. — Le 14 
déc., au malin, il semble que la patte inoculée soit un peu gênée, la face 
dorsale du tarse frotte parfois sur le sol. À 9 h., injection de 40 c. ce. de 


sérum dans le péritoine. — Le 15 déc., gène plus marquée, le tarse traîne 
sur le sol pendant la marche. — Le 16, même état jusqu'au 30 déc. Le 


tétanos s’est arrêté, la contracture existe encore après plus de deux mois. 


TRAITEMENT DU TÉTANOS DÉCLARÉ CHEZ LES MOUTONS. 


Observations de M. Nocard. 


1° 28 décembre 1892. — On implante dans les muscles de la cuisse droite, 
face externe, de deux moutons vigoureux, du poids de 45 kil. chacun, une petite 
écharde de bois imprégnée de spores tétaniques et d'un coceus favorisant, 

Le 8 janvier au matin, l’un des moutons est tétanique, l’autre le devient 
le soir. 

Le 9 janvier au matin, les échardes sont extraites, les parois de la cavité 
excisées, la plaie pansée à l’iodoforme, et le mouton devenu tétanique le 
dernier, il y a douze heures environ, reçoit une injection de 25 ce. c. de 
sérum antitoxique dans la jugulaire. Puis, toutes les heures, on lui injecte, 
sous la peau du flanc ou de l'abdomen, 15 c. c. du même sérum. Au total, 
il reçoit dans la journée du 9 janvier 165 c. c. de sérum. 

10 janvier. — La brebis traitée meurt tétanique dans la soirée. L’utérus 
contient un fœtus. Dans la jugulaire, au point où on a fait l'injection, il y a 
un thrombus. 11 n’est peut-être pas prudent d'injecter directement dans les 


CONTRIBUTION A L’ÉTUDE DU TÉTANOS. 193 


veines d'un animal de grandes quantilés de sérum d'une autre espèce. 

Le sang puisé dans le cœurest antiloxique à raison de 8 parties de sang pour 
{ de toxine. A la dose de 1/5 de c. c., il immunise une souris de 15 gr. Le 
liquide amniolique n’est pas antitoxique à la dose de 5 parties pour une de 
toxine, ni préventif à la dose de 1 ec. c. 1/3, pour une souris de 15 gr. 

13 janvier. — Le mouton non traité succombe en opisthotonos extrême- 
ment prononcé. Son sang télanise une souris à la dose de 1 €. c. 

2 {4 janvier. — Deux moutons vigoureux pesant environ 40 kil. chacun, 
reçoivent sous la peau de l'extrémité de la queue, qui est très longue, une 
écharde préparée comme ci-dessus. L'opération est faite aseptiquement, 

Le 26 janvier, au matin, un des moutons, qui la veille encore n'avait rien 
d'anormal, présente des signes de tétanos, gène du train postérieur, tris- 
mus très accusé. 

La queue est amputée à 15 centimètres au-dessus du point inoculé, et 
l'animal reçoit, en injections sous-cutanées répélées toutes les heures, 
20 c. ce. de sérum antitoxique; il reçoit au total 160 e. c. Il est placé dans 
une écurie obscure et silencieuse; toutes les heures on lui fait ingérer du 
lait antitoxique et chaque matin on lui donne un petit lavement purgatif. 

Il meurt en opisthotonos le 30 janvier. 

29 janvier. — Le mouton témoin est tétanique. Raideur des membres 
postérieurs; pas de trismus. Aussitôt la queue est amputée à 20 centimètres 
au-dessus du point inoculé. L'animal est mis dans une écurie à l'abri de la 
lumière et du bruit. 

4 février. — Il meurt en opisthotonos très accusé. 

Le sérum employé dans ces deux expériences avait un pouvoir immuni- 
sant de dix millions. 


OBSERVATIONS DE TÉTANOS HUMAIN. 
(Traitement par le sérum antitoxique.) 


Observation T. — Service de M. le professeur Grancher à l'hôpital des 
Enfants-Malades.— Observation recueillie par M. Renault, interne. — Gerf..., 
Daniel, 11 ans, s’est fait extraire deux dents, le 27 juin. Le 12 juillet, il se 
plaint de difficultés pour mâcher. — Le 13, la mastication est très difficile ; 
l'enfant se plaint de douleurs à l'épigastre et dans le dos. Un médecin appelé 
administre un purgatif. — Le 14, mastication impossible; les dents sont 
serrées, le malade ne prend que du lait et du bouillon. — Le 15, les dents 
sont serrées, la tête enfoncée dans les épaules, raideur générale de la 
partie supérieure du corps; d'heure en heure il est pris de spasmes dou- 
loureux des muscles du cou, de la mâchoire et du tronc. Dans l'intervalle de 
ces spasmes, dont la durée ne dépasse pas quelques secondes, l’enfant 
joue et reste gai. — Le 16, les spasmes reviennent plus fréquemment 
D'après les parents, la respiration se faisait normalement. 

Le 18, entrée à l'hôpital. La tête est renversée en arrière, les màchoires 
sont serrées. La contracture porte sur les muscles de la nuque, les masse- 
ters, les sterno-cleido-mastoïdiens, le grand pectoral. Elle est permanente; 
elle s’exagère quand l’enfant marche ou fait des mouvements; la dégluti- 


124 : ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tion est impossible. Les membres inférieurs et les bras ne sont pas atteints. 
Toutes les 10 à 15 minutes, spasmes des muscles contracturés, respiration 
fréquente, pouls rapide. Température rectale, 37°,4. Aucune trace de bles- 
sure récente ou ancienne; on ne trouve comme traumatisme que l’ablation 
des dents faite le 27 juin. — Lavement avec hydrate de chloral, 3 gr. 

Le 19, la nuit a été calme; à une heure de l'après-midi, contracture 
subite des muscles du cou, des masséters, des muscles du thorax; la respi- 
ration est arrêtée, la face devient violette, il se fait de loin en loin une ins- 
piration pénible, puis le spasme cesse et la respiration se rétablit. — A 
3 heures, même crise, anxiété extrême, cris et mouvements exprimant 
l'angoisse. Les spasmes ne portent que sur les muscles contracturés d’une 
façon permanente, c'est-à-dire sur les muscles des mâchoires, du cou, du 
thorax, des lombes, de l'abdomen. — Les membres sont souples. Selles et 
mictions involontaires, fausse érection. Jusqu'à minuit, il y a six crises 
semblables durant une minute environ. — A 4 heures du soir, on injecte, 
dans le tissu cellulaire sous-cutané, à l’abdomen, 21 c. c. de sérum anti- 
toxique. À dix heures du soir, on injecte à la cuisse gauche 25 c. c. de sang 
de lapin défibriné. Soit dans la journée 46 c. ce. — Température rectale : 
matin, 37°.4; à 4 heures, aussitôt après l'injection: 37°,4; à 9 heures du 
soir, température axillaire, 39°,2; à 10 heures, 38°,2; à 11 heures, 380,2. — 
On a renoncé à prendre la température rectale parce qu'on provoque des 
crises. — Lavement avec 4 grammes de chloral. 

Le 20, de minuit à minuit, 16 crises convulsives, survenant à l’occasion 
d'un mouvement quelconque; dans l'intervalle, le malade est calme; il 
demande même à jouer; l'intelligence est absolument conservée; quand le 
malade essaie de boire, il a des spasmes violents qui rendent toute alimen- 
tation impossible. À 9 heures 1/2 du matin, injection à la cuisse droite de 
23 ce. e. de sérum; à 5 heures 4/2, injection sous la peau de l'abdomen de 
30 €. c. de sang défibriné, soit dans la journée 53 c. c. Température axil- 
laire le matin, 380,4: le soir, 38°,4. 

Le 21, la nuit a été plus calme, les crises moins fréquentes, moins vVio- 
lentes et moins longues. Le malade est moins abattu, les yeux sont cernés, 
mais le regard est vif. — Pouls, 184. Respiration, 60. À 10 h. 1/2 du matin, 
injection à la cuisse gauche de 24 e. c. de sang défibriné; à 10 heures du 
soir, nouvelle injection de 24 c. c. de sang défibriné, soit dans la journée 
48 ce. ce. — Température à 8 h. du matin, 38; à 11 h. 1/2, 380. Le soir à 
8 heures, 37°,4; à 10 heures, 37°,4. 

A partir de 40 heures du soir, l'état de l'enfant devient presque subite- 
ment très mauvais, la respiration est courte, l’asphyxie commence; dans la 
nuit elle augmente et la mort survient dans une crise. L’autopsie n'a pu 
être faite. Le sérum et le sang défibriné employés provenaient de lapins 
immunisés et leur pouvoir immunisant a varié de 200,000 à 500,000. 

En résumé, l’incubation du tétanos a été de 15 jours, la durée de la 
maladie de 6 jours; le traitement a été commencé le quatrième jour de la 
maladie. La quantité de sérum injectée a été considérable (147 e. c.), étant 
donné le faible poids de l'enfant. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 195 


Dans ce cas, bien que les premiers symptômes n'aient apparu que le 
quinzième jour après le traumatisme, la marche de la maladie a été rapide 
et le traitement tardif. Une amélioration avait semblé se produire après 
les quatre premières injections; elle n'a pas duré. 


Observation IL. — Service de M. Polaillon, hôpital de la Pilié, recueillie 
par M. Martin, interne. — M... Eugène, âgé de 43 ans, a reçu, le 14 juillet 1892, 
un éclat de pétard qui a produit à la région moyenne de la cuisse droite, 
partie externe, une plaie arrondie d'un centimètre et demi de diamètre. Dans 
la plaie on a trouvé de nombreux corps étrangers qui ont été extraits immé- 
diatement. Le malade a été soigné et pansé chez lui. Le 22 juillet, il commence 
à avoir de la raideur des mâchoires et des crampes dans le membre blessé. 
Un médecin preserit du chloral, du bromure de potassium, des inhalations 
de chloroforme. La maladie ne s’améliorant pas, M... est conduit à 
l'hôpital le 25 juillet. Il a du trismus, de la raideur des muscles de la nuque, 
il éprouve de la difficulté à avaler. La température est de 369,6. 

26 juillet. — Il y a de la contracture des membres inférieurs, la temp. 
est à 6 h. du matin de 36°,8, et à 8 h. de 370,6. La plaie présente un fond 
irrégulier, purulent, des bords enflammés entourés d’une zone rouge de 
3centimètres détendue, qui simule une plaque d'érysipèle.M. Polaillon excise la 
plaie et la zone enflammée. Le même jour à 3 h., on injecte dans le tissu 
cellulaire sous-cutané 46 c. c. d’un sérum dont le pouvoir immunisant est 
trois cent mille. Avant l'injection la temp. est de 37,04; le soir à 9 h. elle est 
de 38°,4. Pouls 112. Respirat. 30. On fait alors une deuxième injection de 
46 c. e. Soit dans la journée 92 c. ec. L'état du malade s’est aggravé, la 
contracture a gagné les muscles du tronc du côté blessé et les museles 
droits de l'abdomen. Il y a de l'hyperesthésie du côté droit : si on pince la 
peau de ce côté on provoque des spasmes. 

27 juillet. — Temp. mat. 380,6, le malade a du pleurosthotonos. A 
{1 h., on injecte 16 c. c. de sérum. Vers le milieu de la journée l'hyperes- 
thésie s'étend au côté gauche, l'agitation du malade est grande Des sueurs 
abondantes durent jusqu'au soir. À 2 h. la temp. est de 39,4. A 8 h. du soir 
il répond à peine aux questions, son anxiété est extrême; É température 
axillaire est de 39°,2, la température rectale de 420,0, le pouls est incomptable, 
irrégulier, intermittent; il y a 48 respirations par minute, Au moment de la 
mort, à 8 h. 1/2 du soir, la temp. axillaire est de 39,4, la temp. rectale de 
420,2. 

Un fragment de la plaie a été inséré sous la peau d'un cobaye qui n’a 
pas pris le télanos. Au microscope on n'a pas trouvé de bacilles tétaniques 
dans le pus, on n’a pas isolé de bacilles tétaniques en faisant des cultures 
anaérobies. 

En résumé, l'incubation du tétanos a été de 8 jours; la durée de la 
maladie de 5 jours; le traitement a été commencé le quatrième jour de la 
maladie. La quantité du sérum injectée a été de 108 € 

Une heure avant la mort le sang était antitoxique, à raison de quinze 
parties de sang pour une de toxine. L'injection de 108 c. c. de sérum à cet 
homme Fe et fort avaient suffi non seulement à faire disparaitre toute 


Nos 


ne ae S 1 


Lee 7 La mme à 


126 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


trace de toxine du sang, mais encore à donner à celui-ei un pouvoir anti- 
toxique notable. 


Observation LIL. Recueillie par M. le D' Morax, de Morges (Suisse), et Morax 
fils, interne des hôpitaux de Paris. — Rôhm, âgé de 15 ans 1/2, manœuvre 
dans une tuilerie, a la main droite prise dans l’engrenage d’une machine à 
broyer l'argile, le 5 août à 6 h. du soir. Quatre doigts sont broyés, le pouce 
n'est pas atteint. Il est aussitôt conduit à Morges où il reçoit les soins de 
MM. les Dr" Morax et Soutter. La plaie est régularisée, désinfectée avec le 
sublimé et pansée à l'iodoforme. Les lambeaux ont été réunis par des sutures 
profondes et des sutures superficielles. La graisse et la terre qui souillaient 
les parties blessées rendaient la désinfection très difficile. Le soir, la temp. 
atteint 39,4. Le malade entre à l'infirmerie de Morges le 6 août : la plaie 
suppure abondamment; on enlève les sutures et on fait un pansement au 
sublimé : deux fois par jour on donne des bains de bras d’une heure dans 
la solution de sublimé. Malgré ce traitement il se produit de la lymphangite, 
de la tuméfaction de l’avant-bras, et la suppuration continue. A la limite des 
lambeaux, il se fait une escarre superficielle qui circonvient la plaie. La temp. 
est de 39 le soir, le teint est terreux, le bras douloureux. Insomnie. 

Dans la nuit du 10 au 11 août, le malade éprouve de la gêne au niveau 
du pharynx. Il se plaint de s'être mordu la langue et bientôt il éprouve de 
la difficulté à ouvrir la bouche. 

Le lendemain, 11 août, le trismus est prononcé, la contracture envahit 
les muscles de la face qui prend l'expression du rire sardonique, et du cou 
qui est en extension : la tête ne se fléchit plus. À 10 h. du matin, les muscles 
du dos sont contractés; la déglutition est très gênée, le trismus ne permet 
pas le passage de la langue. La plaie a mauvais aspect, une fusée purulente 
suit le tendon de l’extenseur de l'index, on incise ce foyer et on pratique à 
la périphérie et au centre de la plaie des cautérisations profondes au thermo- 
cautère. Les bains de sublimé sont renouvelés 6 fois dans la journée, le soir 
la temp. est de 389,8. Le pouls bat 92 fois à la minute. La douleur du bras 
est moins forte. Chloral en lavements. 

42 août. — Dans la nuit du 11 au 12 surviennent des contractures qui 
raidissent le tronc et les membres. Les grandes crises sont assez nombreuses; 
dans leur intervalle, le malade a fréquemment de petites secousses spasmo- 
diques des muscles de la face et du cou. Le matin, temp. 37°,8. Pouls 92. 
Respiration 24. A 3 heures, temp. 48°,7; pouls 100; respiration 36. On compte 
de 4 à à grands accès toutes les heures. À 3 h. 1/4, injection de 10 grammes 
de sérum dans une veine superficielle de l'avant-bras. L'injection est poussée 
lentement et ne provoque aucun phénomène. Après l'injection, temp. 389,7. 
Pouls 92. Respiration 36. De 3 h. 1/2 à 4h. 1/2, cinq grandes crises. De 
4 h. 1/2 à 5 h. 1/2,8 grandes crises. L'une a été très violente avec menaces 
d’asphyxie. Après les grands accès, la contracture des mâchoires parait se 
relâcher un peu. Temp. à 4 h. 1/2, 40,8. Pouls déprimé à 139. Respiration 
très rapide 70. Sueurs profuses. Plus de grandes crises, spasmes fréquents 
des muscles de la face. À 7 heures, nouvelle injection de 10 c. c. de sérum 
dans le tissu cellulaire du bras droit. À 9 heures, temp. 400,2, Pouls 120 


hi 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 127 


Respiration 53. Les contractures persistent. La mort arrive à 4h. du matin. 

En résumé : L'incubation a été de 5 jours; la durée de la maladie de 
deux jours, le traitement a été commencé 12 h. avant la mort; la quantité 
de sérum injecté a été de 20 e. ce. dont 10 e. c. dans une veine. Le pouvoir 
immunisant du sérum était de un million. 


Observation IV.— Service de M. Th. Anger, à l'hôpital Beaujon, recueillie par 
M. Domat, interne. — Le Cun..., âgé de 27 ans, a été renversé le 11 octobre 
1892, par une locomotive, il est conduit à l'hôpital où l’on constate les 
lésions suivantes : {° à la tête: plaie allongée en fer à cheval de 7 à 8 cen- 
timèêtres de longueur, mâchée sur les bords, siégeant au niveau du pariétal 
droit; plaie au-dessus du sourcil gauche; plaie de la paupière supérieure 
gauche ; 2 aux membres inférieurs : extrémité du pied gauche écrasé; les 
trois orteils médians sont presque complètements détachés, ils sont insen- 
sibles et froids; au pied droit, légères écorchures superficielles; 3° aux 
membres supérieurs : écrasement des trois doigts médians des deux mains, 
les deuxièmes et troisièmes phalanges sont écrasées, mais encore adhé- 
rentes et vivantes. Dès son entrée, les plaies sont lavées au sublimé au 
14/1000; deux bains antiseptiques des parties lésées sont donnés, et les bles- 
sures sont recouvertes d’un pansement humide au sublimé. La plaie parié- 
tale et la plaie sourcilière sont suturées et un pansement sec à l'iodoforme 
est appliqué dessus. La cicatrisation de ces plaies est régulière et complète 
au bout de huit jours. Le 18 octobre, les orteils sphacélés se sont détachés. 

19 octobre. — Le malade s'aperçoit en bâillant que sa mâchoire était 
raide et qu'il ouvrait la bouche avec difficulté. Le soir, sa tête, au niveau 
de la grande plaie pariètale, était, disait-il, comme morte; de plus, il a une 
vive douleur au creux épigastrique. Pendant la nuit, plusieurs accès doulou- 
reux de contracture. Temp. : 36°,8. 

20 octobre. —Signes non douteux de tétanos. Trismus, les mâchoires ne 
s’'écartent plus, le malade articule difficilement, les muscles de la face, con- 
tractés, donnent au visage l’expression du rire sardonique. Les muscles du 
cou, y compris le peaucier, sont contracturés. Les muscles sacro-lombaires 
et abdominaux sont raidis. Les membres sont libres. Le front est couvert 
d'une sueur froide. Lavage des plaies avec une solution de sublimé au 
14/1000, pansement humide avec la même solution. L'amputation du foyer 
tétanique n’a pu être tentée, étant donné la multiplicité des plaies et l'ab- 
sence de symptômes désignant Île lieu de culture du bacille (cependant 
la plaie du pied gauche paraissait plus douloureuse que les autres). A 
AA h. 1,2, saignée de 359 grammes au bras droit, Injection dans le 
tissu cellulaire sous-cutané de 1,209 grammes de sérum artificiel. Ce trai- 
tement est suivi d'un soulagement notable accusé par le malade, mais les 
contractures n'ont pas diminué, les paroxysmes douloureux persistent ; les 
spasmes laryngés et pharyngés ne se reproduisent plus. Chloral, 4 grammes 
en potion. Temp. à 8 h. 1/2 du soir, 389,3. 

A 9 heures du soir, on injecte en plusieurs points, fesse, région dor- 
sale, cuisse, 50 c.c. de sérum de cheval dont le pouvoir immunisant est de 
un million. Après l'injection, la température est à 9h. 1/4 de 38°; à 10 heures, 


128 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


de 382,4; à 11 heures de 370,8; à minuit, de 38,2; on fait une nouvelle injec- 
tion de 50 c. ec. de sérum dans le dos et aux fesses. À ce moment, il y a des 
spasmes très douloureux des muscles de l'abdomen, du dos, des mâchoires. 
Après la deuxième injection, dans la nuit, la température a varié de 37°,5 
à 370,8. Le malade dort une demi-heure vers 3 heures du matin. 

21 octobre. — Mème état que la veille. Traitement : 15 grammes de chlo- 
ral en lavement, piqûre de À centigramme de morphine. A 10 heures du 
matin, injection de 50 ec. c. de sérum dans le tissu cellulaire du dos. La 
température monte rapidement; à 8 heures du matin, 37°,6; à 4 heures, 
390,6 ; à 6 heures, de 39°,3. À 8 heures du soir, nouvelle Injection de 70 c. c. 
de sérum dans le tissu sous-cutané, au niveau de la poitrine. Le tétanos 
reste limité aux mêmes muscles. À minuit, la température est descendue à 
380,5. 

22 octobre. — Pour la première fois, on observe des crises télaniques dans 
les membres. Ces crises sont douloureuses et se rapprochent. Pendant les 
spasmes, le malade est secoué par un tremblement qui ébranle le lit. 
Température à 3 heures du matin, 37°,2; à 9 heures du matin, 38,3. 
A 10 heures, injection de 40 c. c. de sérum; le malade devient plus calme; 
température, à midi,37°,6. À 7 heures du soir, mieux sensible, la mâchoire 
peut s'ouvrir, la contracture du dos et du cou parait avoir cessé. Injection 
de 45 c. c. de sérum. Après l'injection, l’état s'aggrave. Crises convulsives 
très fortes et rapprochées; de 7 heures à 10 heures, il y a eu trois crises 
très douloureuses. À une heure du matin, quatrième crise très forte. Tem- 
pérature, à 7 h. 1/2, 37°,8; à minuit, 389,7. 

23 octobre. — A la visite du matin,le malade est très agité, il change sans 
cesse de position et se plaint d'une grande fatigue, il demande à être cou- 
ché sur le dos. Jusqu'ici, le malade se tenait sur les genoux. On continue 
l'administration du chloral et de la morphine à cause des souffrances qu’en- 
dure le malade. À 10 h. 1/2 du matin, on fait une injeclion de 40 c. ce. de 
sérum. L'agitation est plus prononcée, les secousses se renouvellent toutes 
les cinq minutes. Contractures et spasmes cloniques des membres infé- 
férieurs, surtout au niveau du pied blessé. De midi à 2 heures, trois fortes 
crises. Vers 3 heures, le malade s'endort; à 6 heures, injection de 55 €. c. 
de sérum; le malade dort de nouveau jusqu'à 8 heures du soir. La nuit est 
très mauvaise. La température a monté dans la journée : 3 h. 1/2 du 
matin, 38,2; 9h. du matin, 39°,2; 5 h. du soir, 38°,0; 6 h. du soir, 39°,0. 

24 octobre. — La contracture a gagné tous les muscles, le malade est 
raide de la têle aux pieds. Les souffrances sont très vives. Le chloral est 
continué à haute dose. Le patient tombe dans un élat de stupeur dont il 
n'est tiré que par des crises douloureuses. A 2 heures, crise convulsive 
violente et mort en état de spasme tétanique généralisé. À 9 heures, la 
température était de 40°,5, et, une heure après la mort, de 41°,5. 

En résumé, l'incubation du tétanos a été de 8 jours; la durée de la 
maladie, 5 jours; le traitement a été commencé 36 heures après le début 
de la maladie. 

La quantité de sérum injectée a été de 402 c. c. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 129 


On a extrait du sang à divers moments pendant la maladie, pour étu- 
dier le pouvoir antitoxique. Le 21 octobre, le malade a reçu en deux fois, 
à 9 heures du soir et à minuit, 100 ce. c. de sérum; dix heures après la 
deuxième injection, on retire un peu de sang; 15 parties mélangées à une 
partie de toxine ne détruisent pas celle-ci. Le 21 octobre, à 10 heures du 
matin, injection de 50 c.c. de sérum; le malade en a reçu 150 c. c. Quatre 
heures après, on retire un peu de sang. Ce deuxième échantillon est anti- 
toxique dans la proportion de 15 parties de sang pour 1 de toxine, mais 
pas à dose plus faible. Le 22 octobre, cinq heures après que le patient a 
reçu 260 e. c., le sang est antitoxique dans la proportion de 8 parties 
pour 1 de toxine. Un tiers de centimètre cube de ce sang immunise un 
cobaye de 209 grammes. Le 23 octobre, après que le malade a reçu 347 c. c., 
le sang est antitoxique à raison de 3 parties pour 1 de toxine. Un quinzième 
de centimètre cube immunise un cobaye de 285 grammes. Le sang recueilli 
après la mort est antitoxique dans la proportion de 2 parties pour 1 de 
toxine, et immunise un cobaye à la dose de 1/15 de centimètre cube. 


Observation V.— Service de M. Letulle à l'hôpital Saint-A ntoine,recueillie par 
M. Nicole, interne. — F..... Désiré, àgé de 23 ans, jardinier, s’est blessé au 
médius de la main droite, le 49 octobre 1892, avec un ca” ‘eau de vitre d’une 
serre. Il continue à travailler sans protéger la plaie et reste bien portant jus- 
qu'au 2 novembre. Dans la matinée de ce jour, il ressent dans la nuque et les 
lombes uneraideur douloureuse qui l’oblige à se mettre au lit. Le 3 novembre, 
au réveil, trismus permanent sans dysphagie. À 10 heures du matin il est 
admis à l'hôpital, il monte l’escalier avec l’aide de l’infirmier, la démarche 
est raide, la tête est rejetée en arrière. La plaie siège à la face dorsale du 
médius de la main droite, au niveau de l'articulation de la deuxième et de 
la première phalange. Elle est longue de 2 centimètres, large de 1 cen- 
timètre, elle est sale et suppure abondamment. Une fois lavée, elle se 
montre peu profonde, d'aspect blanc grisàtre, sans bourgeons charnus. L’ar- 
ticulation sous-jacente ne contient pas de liquide épanché, les mouvements 
se font facilement. La plaie n’est pas douloureuse. Cette blessure est la 
seule que l’on constate sur le corps. La tête est renversc_ en arrière en 
extension exagérée, le malade ne peut larelever; lorsqu'on essaye desoulever 
la tête, le tronc se soulève avec elle. Cette raideur est très douloureuse et 
s'exagère au moindre mouvement. Il en est de même de.la raideur des 
lombes et dutrismus. La déglutition se fait bien, les liquides sont facilement 
absorbés. Les membres supérieurs et inférieurs sont absolument libres. Il 
n'y à pas de spasmes généralisés du tronc : jusqu'ici les contractures sont 
localisées. Le malade est remarquablement musclé. Temp. 37°,3 à 10 h. du 
matin, et 317°,7 à à h. du soir. 

On administre du chloral, 10 grammes à prendre dans la journée. 

4 novembre. — A3 heures du matin, secousses convulsives dans le membre 
supérieur droit, elles s'étendent bientôt au bras gauche et aux jambes. Dans 
la matinée, par moment, le trone se met en arc, et ne touche le lit que par 
la nuque et les fesses. Tremblement général. Les membres inférieurs sont 
dans l’extension, les membres supérieurs raidis exécutent des mouvements 


9 


130 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR: 


successifs de flexion et d'extension, les poings fermés. Les crises sont sépa- 
rées par des intervalles de repos plus ou moins longs. La connaissance est 
conservée, le malade souffre beaucoup et pousse des gémissements et des 
cris pendant les spasmes. Il refuse de se laisser amputer le doigt, il parle 
avec volubilité. Dans la journée, la contracture des membres disparaît. Au 
chloral on ajoute une injection de 1 centigramme de chlorhydrate de 
morphine, qui amène un sommeil entrecoupé de réveils avec secousses du 
tronc et raideur des membres. À 3 h. 1/2, on fait une injection de 27 €. €. 
de sérum de cheval dont le pouvoir immunisant est de 4 million. Le patient 
est somnolent; le trismus, la raideur des reins et de la nuque sont tou- 
jours très marqués. À 5 h., temp. 389,9. Injection de 50 c. e. de sérum à 
5 h. 1/2. A 7 h. 1/2, temp. 39,5; nouvelle injection de 50 c. c. de sérum 
à 8 h. 1/4. À 10 heures du soir, sueurs, état stationnaire, la somnolence 
persiste. De temps en temps le malade boit du lait. 

5 novembre. — La nuit du 4 au 5 a été très agitée, les spasmes ont été de 
plus en plus fréquents, presque incessants. Le patient pousse souvent des 
cris. À 8 heures du matin, temp. 40,6. Pouls 160. — A 10 heures, même 
état, sueurs abondantes sur tout le corps. Injection de 50 ce. c. de sérum. 
À midi, injection de 70 c. c. de sérum. Après-midi délire, convulsions génc- 
ralisées à tout le corps, excepté aux membres supérieurs. Dans un spasme, 
le patient se mord la langue. Sueurs abondantes. A1 h. 1/9, face cyanosée, 
écume sanglante aux lèvres, délire loquace. La mort survient à 2 heures. 
L’autopsie n’a pu être faite. 

En résumé : L’incubation a été de 14 jours; la durée de la maladie de 
3 jours; le traitement a été commencé le deuxième jour de la maladie; la 
quantité de sérum injecté a été de 247 c. c. Son activité était de un million. 

Du sang recueilli avant le commencement du traitement a été injecté à 
une souris (1 c. c. 1/2) qui est restée bien portante. 

Le 4 novembre, de 3 h. à 9 h. du soir, le malade a reçu 127 c. c. de sérum. 
Le sang, recueilli à 11 h. du soir est antitoxique à raison de 35 parties de 
sang pour une de toxine; il ne l’est pas dans la proportion de 15 parties de 
sang pour une de toxine. Le sang recueilli 12 heures après, avant que l'on 
face de nouvelles injections thérapeutiques, est antitoxique à raison de 
15 parties de sang pour une de toxine. 


Observation VI.— Service de M. Schwartz à l'hôpital Cochin. recueillie par 
M. Banzet, interne. — Bona... Gabriel, âgé de 12 ans, est tombé le 19 octobre 
d’un wagonnet en marche, une des roues lui passe sur la jambe droite et lui fait 
une vaste plaie longitudinale de 0,10, à la partie postérieure de la face interne 
de la jambe droite. La plaie est profonde, les bords sont peu eontus, les muscles 
de la région postérieure de la jambe sont décollés, ainsi que les téguments 
en avant sur le tibia, qui est à nu, mais non fracturé. On fait des points de 
suture, on place un drain et on applique un pansement sec. Temp. : 36,6. 

20 octobre. — Temp. : matin, 370,3; le soir, 390,0. 

21 octobre. — Un peu de gonflement et de rougeur autour de la plaie, 


suintement abondant par le drain. Pansement humide. Temp. : matin, 37°,4; 
soir 38°,4. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 131 


22 octobre. — Temp. normale. 

23 octobre. — Ablation du drain. Temp. au-dessous de 37°. 

28 octobre. — Sphacèle assez étendu à la partie postérieure de la plaie. 
30 octobre. — Ablation des points de suture. Lesoir la Lemp. monte à 389,1. 


Le 31 octobre, temp. : matin, 360,3; soir, 379,5. 

3 novembre, — Le malade se plaint de douleurs lombaires très violentes, 
survenant par crises, assez fortes pour lui arracher des-cris, en mêrne temps 
il accuse un peu de gêne de la mastication, l'écartement des mâchoires se 
fait incomplèlement. Sensation douloureuse dans les côtés de la bouche. 
Pas d'angine, pas de dent malade. Pouls très rapide. 

4 novembre. — Les douleurs lombaires ont diminué, celle des mâchoires 
persiste et devient par moment très violente. La nuit a été sans sommeil. 
Le soir le trismus devient plus net, la bouche s'ouvre mais avec difficulté, 
les commissures des lèvres sont relevées. 

3 novembre, — Trismus très net quoique pas très fort. La physionomie a 
une expression spéciale d’anxiété à cause du relèvement des coins de la 
bouche, les dents sont serrées et légèrement découvertes. La mastication et 
la déglutition des solides est difficile, les liquides sont facilement avalés. Un 
peu de raideur de la nuque : à la palpation les muscles sont durs, la tête est 
rejetée en arrière. La flexion et la rotation de la tête sont possibles. Le 
membre inférieur gauche est légèrement contracturé, le genou se fléchit 
bien, mais le pied est en extension forcée, avec adduction et rotation en 
dedans: les tendons des extenseurs des orteils se dessinent sous la peau. 
L'enfant souffre assez peu, sauf par moments où surviennent des crises qui 
lui arrachent des cris; il s’est mordu la langue pendant ces spasmes. 

6. novembre. — Déglutition plus difficile; de temps en temps inspirations 
profondes. Trismus léger, contracture légère des muscles de la nuque qui 
permet les mouvements de la têle. La raideur de la jambe gauche se main- 
tient. Les bras et le tronc sont tout à fait libres. A 2 h. on injecte 
165 c. c. de sérum de cheval dont le pouvoir immunisant est de un million. 
L'injection est pratiquée aux deux cuisses. 

7 novembre. — Les contracturés sont plus marquées à la face, la respira- 
tion parait un peu embarrassée. Hyperesthésie des membres inférieurs, 
l'enfant crie quand on les touche. À 11 h. du matin on injecte 100 c. c. de 
sérum sous la peau de l'abdomen. Lavement de chloral. 

8 novembre. — Les contractures sont les mêmes. Pourtant la déglutition 
est plus facile, l'hyperesthésie des membres inférieurs est moins considérable. 
Les points où on a fait les dernières piqûres sont douloureux au toucher et 
un peu ædémateux. L'état général est bon malgré que l'enfant ait un peu 
maigri depuis le début de sa maladie. Respiration facile. Pouls 142. 

9 novembre. — État stationnaire. Un peu de contracture de la paroi 
abdominale. De temps en temps surviennent encore des spasmes de la face, 
pendant lesquels un cri rauque s'échappe de la gorge. 

11 novembre. — Méme état. Rigidité de la paroi abdominale, contracture 
toujours très marquée de la jambe gauche. Les crises sont rares. Déglutition 
peu gênée. Le soir, { gramme de chloral. 


132 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


15 novembre. — La contracture de la paroi abdominale diminue. La 
flexion de la jambe gauche sur la cuisse est devenue possible, le pied est 
toujours en extension et en adduction légère. 
= 47 novembre. — Éruption généralisée d’urticaire qui disparait le 
18 novembre. 

L'état va s’améliorant graduellement. Le 25 novembre, les contractures 
ont cessé, sauf à la jambe gauche. Quand on veut mettre le pied à angle 
droit sur la jambe, les muscles extenseurs se contractent et se tendent dans 
un spasine qui empêche le redressement complet. 

Le 3 décembre, le pied est redevenu libre, l'enfant quitte l'hôpital. À aucun 
moment, depuis le tétanos déclaré, il n’y a eu d’élévation de température. 

En résumé : L'incubation a été de 15 jours; la durée de la maladie de 
un mois; le traitement a élé commencé le troisième jour de la maladie. La 
quantité de sérum injecté a été de 265 c. c. — Guérison. — Le pouvoir 
immunisant du sérum était de un million. L'enfant pesait 31 kilogr. 

Le sang, recueilli 17 h. après l'injection de 165 c. c. de sérum, est anti- 
toxique à raison de 12 parties de sang pour une de toxine. On n’a pas essayé 
d'autres proportions. — Le sang, recueilli 7 h. après une nouvelle injection 
de 100 c. c. de sérum, est antitoxique dans la proportion de 10 parties de sang 
pour une partie de toxine. On n’essaye pas d’autres proportions. — Le sang, 
recueilli 48 h. après la dernière injection, est antitoxique à raison de 6 parties 
de sang pour une de toxine. — Le sang, recueilli 14 jours après la dernière 
injection, est antitoxique à raison de 13 parties de sang pour une de toxine. 
On n'a pas essayé d’autres proportions. 


Observation VIT. — Service de M, Barth à l'hôpitat Broussais, recueillie par 
M. Mayet, interne. — P... Charles, 22 ans, ouvrier électricien, est tombé 
malade le 9 janvier 1893 ; le matin de ce jour, il est pris, sans cause con- 
nue, de contracture des muscles de la mâchoire; le lendemain, il a de la 
contracture des muscles de la nuque. 

14 janvier. — Il est reçu à l'hôpital. Il ne peut ouvrir la bouche ni flé- 
chir la tête. La déglutition se fait facilement. Les parois abdominales sont 
un peu raides. La sensibilité est intacte et les réflexes normaux. On ne 
constate sur le corps ni plaie ni contusion. Les dents et les gencives sont en 
très mauvais état et la bouche exhale une très mauvaise odeur. La langue, 
que l’on peut encore examiner, est blanche au milieu et rouge sur les bords. 
L'urine est normale. Température : matin, 37,7; soir, 38°,2. On prescrit 
chloral et bromure de potassium, 2 bains de vapeur par jour. 

16 janvier. — Les contractures persistent et s'étendent aux muscles 
dorso-lombaires. Après avoir bu, le malade est pris d’un spasme des 
mâchoires avec constriction du pharynx, puis surviennent des crachote- 
ments convulsifs. On fait des injections de morphine, et M. Barth fait 
demander du sérum antitoxique à l’Institut Pasteur. On injecte dans le tissu 
cellulaire du dos et des cuisses 150 c. c. de sérum en trois reprises. Le 
sérum à un pouvoir immunisant de dix millions. Température : 37,2 le 
matin et 370,6 le soir. 

17 janvier. — Le matin, injections de 50 c. c. de sérum. — Le malade 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 133 


va mieux, la parole est plus facile, les yeux plus attentifs, les mâchoires 
moins contractées, la nuque est moins raide. Il y a de l'hyperesthésie cuta- 
née. Température : 38°,2 le matin, 39°,0 le soir. A 11 h. 1/2 du malin, 
nouvelle injection de 50 c. c. de sérum. 

48 janvier. — Le trismus est moins prononcé, les contractures du tronc 
persistent mais sans incurvation, la déglutition est facile. Le malade peut 
tourner la tête. L'hyperesthésie cutanée est toujours très marquée. Tempé- 
rature : 36°,8 le matin ; 380,2 le soir. 

{9 janvier. — Nuit plus agitée. État stationnaire. Température : matin, 
370,4, soir, 360,8. Injection de 30 c. c. de sérum. 

30 janvier. — Plusieurs crises de contractures, sueurs assez abondantes. 
Température : matin, 36°; soir 36°,8. 

21 janvier. — Nuit précédente agitée, les contractures du tronc persis- 
tent. Injection de 30 ce. e. de sérum. Température : matin, 36°,6; soir, 300,4. 

22 janvier. — Agitation assez grande pendant la nuit. Sueurs; les con- 
tractures diminuent. Température : matin, 36°,6 ; soir, 36°,4. 

23 janvier. — Urticaire généralisé, surtout marqué aux membres infé- 
rieurs et à l'abdomen, les contractures ont presque disparu. 

Du 25 janvier au 3 février. — L'amélioration continue. Cependant, le 
27 février, il a un accès de contracture des mâächoires après avoir bu. Pen- 
dant toute cette période, la température reste au voisinage de 36°. 

La convalescence s’est faite régulièrement. Le 6 février, à la suite d’une 
constipation, il a eu un petit accès de fièvre : 38°,9 le soir; la température 
était normale le lendemain. 

Les contraclures ont disparu complètement vers le 10 février. 

En résumé, la durée de l'incubation est inconnue. La durée de la mala- 
die a été de un mois. Le traitement a été commencé le 7° jour de la mala- 
die. La quantité de sérum injecté a été de 310 c. c. Le pouvoir immunisant 
du sérum était de dix millions. — Guérison. | 

Le sang, recueilli le 17 janvier, après que le patient a reçu 250 c. ce. de 
sérum, est antitoxique à raison de 10 parties de sang pour une de toxine, et 
peut-être à dose plus faible encore. 1 c. c. de ce sang immunise solide- 
ment un cobaye contre Î c. c. de toxine très active. 

Le sang, recueilli le 21 janvier, après que le malade a reçu 270 c. c. de 
sérum, est antitoxique à raison de 2 parties de sang pour une de toxine. On 
n’a pas essayé d'autres proportions. 

Le sang recueilli le 20 février, lorsque le malade est guéri,37 jours après 
la dernière injection, est antitoxique à raison de 20 parties de sang pour une 
de toxine. Il immunise une souris du poids de 15 gr. à la dose de 1 €. c. 


VACCINATION D'UN CHEVAL BRETON ENTIER, AGÉ DE 9 ANS, CONTRE 
LE TÉTANOS. — POIDS, 420 kilogr. 


Observation de M. Nocard. — Le 5 avril 1892, on injecte sous la peau de 
l’encolure 1/2 c. ce. d’un mélange à parties égales de loxine tétanique (tuant 


la souris au 4/2000° de €. c.) et d’eau iodo-iodurée (solution de Gram). 


134 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le 8 avril, injection de 2 e. c. 1/2 du même mélange. 

Le 43 avril, — Æë. c. — 

Le 16 avril, — BE. © — 

Le 21 avril, injection de 10 c. c. d’un mélange de 2 parties de toxine 
pour une de solution iodée. 

Le 24 avril, injection de 10 c. ec. d’un mélange de 2 parties de toxine 
pour une de solution iodée. 

Le 25 avril, injection de 7 c. c. d'un mélange de 3 parties de toxine 
pour une de solution iodée. 

Le 29 avril, injection de 5 €. c. d'un mélange de 4 parties de toxine 
pour une de solution iodée. 

Pendant toute la durée de ces injections, on n'a noté aucun symptôme 
anormal. La température a oscillé entre 37°,5 et 389,3. 

Le 3 mai, on injecte dans la jugulaire 45 €. c. d'un mélange de 15 par- 
ties de toxine et une de solution iodée. 

Le 6 mai, on injecte dans la jugulaire 25 c. c. d'un mélange contenant 
1/30° de solution iodée. 

Le 9 mai, on injecte dans la jugulaire 10 c. c. de toxine pure. 

Le 11 mai, — 15 C2 76: — 

Pendant ces injections intra-veineuses, la température reste normale. Il 
est survenu un peu de phlébite, et on suspend les injections dans la veine. 

Le 19 mai, injection sous-cutanée de 10 c. c. de toxine pure. 


Le 22 imai, = 10 = 
Le 23 mai, — 10 — 
Le 24 mai, — 10 — 
Le 25 mai, — 15 — 
Le 31 mai, = 20 a? 
Le 3 juin, — 2( 4 
Le 7 juin, — 20 == 


Ces injections ne provoquent aucun accident ni local ni général. 

Le 13 juin, on injecte dans la jugulaire 35 c. ec. de toxine pure. 

Au moment de l'injection, à 10 heures du matin, la température était 
de 37°,6; presque aussitôt après l'injection, l’animal sue abondamment, 
aux ars, en arrière de l'épaule, à la face interne des cuisses; bientôt il est 
entièrement mouillé et la sueur ruisselle sur le sol. Il semble aussi éprou- 
ver de légères coliques, il trépigne, il gratte le sol, se couche, se relève 
pour se recoucher de nouveau; à deux ou trois reprises et coup sur coup, il 
se campe, urine et fiente; les crottins d'abord fermes sont bientôt ramol- 
lis, presque diarrhéiques. À 11 heures, l'animal ayant été bouchonné et 
muni d'une couverture, il paraît plus calme. Température : 37°,9; à midi, 
38°,5. Le cheval est moins inquiet et mange un peu de foin. A 2 heures, il 
est gai, il a fini sa ration, sa respiration est un peu rapide. Température : 
390, De temps en temps il a un peu de coliques et les excréments sont 
ramollis. À 4 heures, température, 39,2; à 6 heures, 39. 

Le 14 juin, tout est rentré dans l'ordre, l'animal est gai, a mangé toute 
sa ration. Température : 370,9 le malin, 38°,4 le soir, 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 135 


Le 15 juin, à 9 heures, on injecte dans la jugulaire 150 c. ce. de toxine 
pure. 

Les mêmes phénomènes se reproduisent encore plus intenses que 
l'avant-veille, Sueurs très abondantes, tremblements généraux, coliques, 
diarrhée, un peu d’abattement. Mais, dès le soir, tout a disparu; l'animal 
a pris sa ration du matin un moment dédaignée. La température s'est 
élevée de 37°,7 à 390,5, Le 6 juin elle est à 37°,9. 

Le 17 juin, à 9 heures, nouvelle injection intra-veineuse de 150 ec. e, 
de toxine pure. On assiste à la même succession de phénomènes, mais 
moins accusés et moins durables que précédemment. La température 
s'élève de 37,8 à 399,3. On interrompt les injections pour recueillir 
prochainement du sang et essayer la valeur antitoxique du sérum. Le 
cheval a reçu jusqu'à ce jour 561 c. c. de toxine dans l’espace de 2 mois 
et 12 jours. 

Le 18 juillet, à 9 heures du matin, on recueille avec pureté 2 litres de 
sang qui donnent un sérum dont le pouvoir immunisant est de un million. 

Aussitôt après la saignée, et sans retirer la canule du trocart qui a 
servi à la pratiquer, on injecte dans la jugulaire 150 c. e. de toxine pure, 

Les phénomènes déjà décrits se reproduisent à nouveau plus intenses et 
plus durabies que la dernière fois : tremblements musculaires, sudation 
générale, colique, diarrhée, abattement, anorexie. Température s'élevant 
de 37°,6 à 39°,4; mais dès le lendemain tout est rentré dans l'ordre; la 
température est tombée à 38°,0. 

Les 18, 23, 27 juillet, nouvelles injections intra-veineuses, de 150 e. €. 
de toxine pure; les mêmes phénomènes se reproduisent à chaque fois 
moins accusés, l'animal revient de plus en plus vite à son état ordinaire. À 
chaque injection, la temp. s'élève, du matin au soir, de {°,2 à 1°,6, pour 
revenir, dès le lendemain, à la normale: 

Le 4e août, on porte à 250 c. e. la quantité de toxine injectée d'un seul 
coup dans la jugulaire. Réaction plus intense que jamais. Sudation extrè- 
mement abondante, coliques vives, urination et défécation répétées coup 
sur coup, diarrhée, abattement profond, tremblements généraux, Mais, dès 
le soir, tout est rentré dans l’ordre, et l'animal a repris sa gaieté et son 
appétit. La temp. s’est élevée de 379,7 à 39°,5. 

Le 5 août, nouvelle injection de 260 c, c. de toxine. Réaction beaucoup 
moins accusée que le 4° août; la temp. s'élève de 37°,8 à 39°,5, 

L'animal a reçu depuis le début de l'expérience, 1,671 €, e. de toxine, 

Le 24 août, on recueille purement 2 litres 1/2 de sang. On constate que 
le sérum exsudé a un pouvoir immunisant d'au moins un million. On n’a 
pas recherché s'il est plus actif encore. 

L'animal est laissé en repos jusqu'à la fin d'octobre. 

Le 24 octobre, à 9 heures du matin, on lui injecte sous la peau de l’en- 
colure, un peu en avant de l'épaule gauche, 40 c. c. de culture, non filtrée, 
de bacilles tétaniques, dans de la macération de viande. Cette culture, 
vieille de quelques semaines, est très riche en microbes et en toxine. L'in- 
jection donne lieu immédiatement à une petite tumeur ædémateuse, mesu- 


BE D" 


136 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


rant à cent. sur 10 cent. À ce moment, la temp. est de 37°,5. A 3 heures de 
l'après-midi, l'animal est trouvé couché, un peu triste, la tumeur a aug- 
menté de volume et mesure 20 cent. sur 30 cent., avec 2 ou 3 centimètres 
d'épaisseur ; elle est dure et son contour est très saillant. La temp. est de 
38,7. À 6 heures, l’animal est triste, abattu, l'œil fixe ; la tumeur est plus 
volumineuse, plus saïllante et plus dure. Temp. 39°,9. 

Le 25, au matin, la tumeur est moins volumineuse, moins tendue, son 
contour est moins saillant. Temp. : 38°,2. 

Le 26 octobre, la tumeur est affaissée. 

Le 28 octobre, nouvelle injection sous-cutanée de la même culture. Pro- 
duction rapide d'une tumeur volumineuse, dure, tendue, peu sensible; tris- 
tesse et abattement du sujet. Temp. s’élevant graduellement de 37,7 à 
390,6. 

Le 29 octobre, la tumeur a beaucoup diminué, elle semble se fondre avec 
les tissus voisins Temp. : 38°. 

Le 30 octobre, à 10 heures, temp. : 389,1. Il existe encore un peu d'em- 
pâtement au niveau des injections. On injecte, en 4 endroits, en arrière 
des épaules, 150 c. c. de la même culture complète. Formation rapide de 
tumeurs volumineuses, dures, chaudes. Le sujet est très abattu, il ne mange 
pas, il a des tremblements généraux, sa respiration est très accélérée. La 
temp. s'élève progressivement jusqu'à 39°,7. 

Le 31, à 6 heures du matin, temp. : 380,5, et l'animal est abattu. Il a 
cependant mangé sa ration. A droite, les tumeurs forment une masse 
énorme, qu'on peut à peine saisir avec les deux mains; à gauche, elles ont 
plutôt diminué. Le soir, temp. : 38°. 

Le 1° novembre, temp. : 38°,2, le membre antérieur droit est engorgé 
jusqu'au genou et ses mouvements sont raides. 

Le 2 novembre, même état. Temp. : 380,1. 

Le 3 novembre, temp. : 37°,9. L'animal a repris sa gaieté, les tumeurs 

diminué, le membre antérieur droit est beaucoup plus libre. 

Le à novembre, tout est revenu à la normale, les tumeurs ont complè- 
tement disparu. Temp. : 37°,6 le matin, 380,3 le soir. 

Le 6 novembre, à 9 heures du matin, nouvelles injections sous-cutanées 
de 60 c. c. de culture non filtrée, en 4 points en arrière des épaules. Les 
phénomènes se reproduisent plus intenses encore que précédemment. Tumé- 
faction considérable, dure, tendue, saillante, au niveau de chaque injection. 


A 5 heures, temp. : 39,3. L'animal est triste, mange à peine. 


Le 7 novembre, les tumeurs sont stationnaires. L'animal est gai. 
Temp. : 37°,6. 

Le 9 novembre, tout a disparu presque entièrement. Temp. : 37°,9, 

Le 10 novembre, à 9 heures du matin, temp. : 37°,6. Nouvelle injection 
de la même culture non filtrée, en 3 points différents, sur la face gauche 
de l’encolure, en arrière de chaque épaule. Le soir, à 5 heures, l'animal 
parait abatlu, il mange cependant. Les tumeurs de l’épaule sont volumi- 
neuses. Temp. : 390,4. 

Le 11, à 8 heures, les tumeurs ont augmenté d'étendue, elles ont la lar- 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 137 


geur des deux mains. Temp. : 38°,6. Le soir, les tumeurs sont encore plus 
épaisses, dures, insensibles. Temp. : 39. 

Le 12 novembre, état stationnaire, l'animal est très gai. Temp. : 379,5 
le matin, 38°,4 le soir, 

Le 143, même état. 

Le 45 novembre, la tumeur de l'épaule gauche a presque disparu; au 
. contraire, celle de l'épaule droite semble augmenter en surface et en épais- 
seur. Temp. : 380,4. Le soir, à 5 heures, la tumeur droite a beaucoup aug- 
menté de volume, l’animal paraît triste. Temp. : 39. 

Le 16, à 8 heures, le cheval est très abattu, la tumeur de l'épaule gau- 
che a presque disparu, celle de l'épaule droite est énorme, elle mesure près 
de 40 cent. de diamètre; elle est épaisse, dure, insensible, un peu chaude; 
son contour est saillant, surtout en bas. Temp. : 400,4. Le soir, 409,5, la 
tumeur a augmenté encore, l'animal mange son avoine, ne touche ni au 
foin ni à la paille. 50 respirations par minute. 

Le (7 novembre, à 7 heures, le cheval est moins abattu, il a mangé sa 
ration, la tumeur est stationnaire. Temp. : 39°,7. 

Le 18, la gaieté revient; la tumeur, toujours dure et insensible, a beau- 
coup diminué en haut et en arrière. Temp. 38°,9. 

Le 19 novembre, à 8 heures, abattement très profond. Temp. : 40°. La 
tumeur englobe toute la région de l'épaule, le membre est raide et engorgé 
jusqu'au genou. 

Le 20, tristesse, perte d’appétit, temp. : 39°,2. La tumeur a encore aug- 
menté, elle est dure, chaude, insensible ; le membre antérieur est engorgé 
dans toute sa hauteur. Temp. : 39,5 le soir. 

Le 21, même état. Temp. : 40° le matin, 39,3 le soir. 

Le 22 novembre, la tumeur a diminué, elle est toujours dure, chaude et 
insensible, le membre est raide et engorgé. Temp. : 38,8 le matin; le soir, 
39,8. Le cheval mange à peine, il est très abattu. 

Le 23 novembre. Temp. matin : 39,5. L'animal n'a pas touché à sa 
ration, il est très abattu, la tumeur est moins tendue, le membre moins raide: 
l'urine ne renferme ni sucre, ni albumine, elle est trouble et épaisse, 

Le soir, temp. : 390,1. L'animal n'a pas mangé. 

Le 24,temp. : 38°,9; l'animal n’a pas mangé; on lui offre de l'avoine mêlée 
de sel gris ; il en mange un peu, sans appétit. 

Le 25, temp.: 39,1, même état; le fourreau est très engorgé ; l’ani- 
mal laisse son avoine; il prend volontiers du pain. 

Le 26, temp. : 38°,6. État stationnaire. Le cheval mange à peine un peu de 
pain, d'avoine et de carottes salées. 

Le 27, temp.: 38°,94. L'animal est moins triste ; il a mangé un peu; la 
tumeur diminue un peu. 

Le 28, temp. : 38°. L'animal est gai ; il a mangé son pain et son avoine salée; 
la tumeur n’a plus que la largeur de la main; on sent sous la peau comme 
une masse ovoide très dure, mobile, qui n’adhère ni à la peau ni au thorax. 

Le 29, même état satisfaisant ; 389,2. Le cheval a mangé son avoine et un 
peu de foin. 


‘* 


138 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le 30, 470,8; l'animal a repris son appétit et sa gaieté. La tumeur n’a 
plus que les dimensions d'une petite pomme; elle est toujours dure, assez 
mobile, insensible. 

Depuis cette époque, le cheval a toujours été en bonne santé; sa tempé- 
rature, prise chaque jour, matin et soir, a varié entre37°,2 el 389,6 avec des 
oscillations quotidiennes de 6 à 8 dixièmes de degré. 

La 23 décembre, on a recueilli purement 3 litres de sang dont le sérum 
éprouvé à un pouvoir immunisant de dix millions. 

Le 28 décembre, à neuf heures, injection sous-cutanée de 5 €. c. d’une 
solution au 1/20 de nitrate de pilocarpine; 45 minutes après, l’animal 
salive abondamment; on recueille rapidement un demi-litre de salive; 
éprouvée au Val-de-Grâce, la salive s'est montrée antitoxique à raison de 
100 parties de salive pour une de toxine. 

Le 13 janvier, à neuf heures du matin (temp. 37,8), on injecte dans 
la jugulaire 250 c. c. de toxine pure. Aussitôt après l'injection se mani- 
festent, avec une grande intensité, tous les phénomènes déjà décrits : suda- 
tion très abondante, tremblements, coliques, diarrhée, tristesse, etc. 

A 1! heure, l'animal a repris son aspect ordinaire ; il a mangé presque 
toute sa ration; sa température est à 390,1. 

À 3 heures, 37°4; à 5 heures, il mange avec appétit; 399,1. 

Le 44, au matin, tout est rentré dans l’ordre, temp. : 380,2. 

Le 24 janvier, à 9 heures du matin (temp. : 37°,4), nouvelle injection 
intra-veineuse de 270 ec. c. de la même toxine. Les mêmes phénomènes se 
reproduisent, bien moins intenses qu'au 14 janvier: sudation abondante, 
coliques légères, un peu de diarrhée. Dès midi, l'animal a repris sa gaieté; 
il a mangé toute sa ration; sa température est de 38°,9; à 4 heures, 39953; 
à 8 heures, 390,1. 

Le 25, au matin, le cheval est très gai ; sa température est encore de 38°,6, 

Le 26, tout est rentré dans l’ordre. Temp. : 37°,6 le matin et 38°,2 le soir. 

Le 4 février, à 9 heures du matin (temp. : 379,7), on recueille purement 
3 litres de sang. Aussitôt après on injecte dans la jagulaire 250 c. c. de la 
même toxine. Mômes phénomènes que précédemment, moins accusés 
cependant et moins prolongés. À 2 heures, l'animal parait gai, il a mungé 
sa ration; temp. : 380,6; — à 5 heures, respiration un peu accéléree; 
temp. 390,3; — à 8 heures, le cheval a bien mangé; temp. : 3902, 

Le 5 février au matin, temp. 38,3; appétit, gaité, respiration et cireu- 
lation, tout paraît normal. 

Le 6, temp. 37°,9 le matin, 38°,4 le soir. 

Depuis lors l'animal n’a pas cessé d'être en bonne santé. 

Il a reçu depuis le 5 avril 1892, soit en dix mois, 2,681 €, c. de toxine. 


VACCINATION D'UNE VACHE CONTRE LE TÉTANOS. 
Observation de M. Nocard. — Vache cotentine, âgée, tuberculeuse, mais 


en très bon état. (On n'a pas pu localiser la lésion tuberculeuse, dénoncée 
à dix reprises par l'injection de tuberculine.) Poids 550 kilogr. 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DU TÉTANOS. 139 


A fait, en mars 1892, un veau superbe, qu'elle a nourri et qui n’a pas 
été trouvé tuberculeux à l’autopsie pratiquée en juillet. Donne encore 
6 litres de lait chaque jour. 

La température prise matin et soir depuis longtemps oscille entre 37,7 
et 38°,6. 

Le 26 octobre 1892, on fait une injection sous-cutanée de 4 c. c. d'un 
mélange à parties égales de toxine tétanique et d’eau iodée (solution de 
Gram.) 

Le 27 octobre, injection de 2 c.c. d'un mélange au tiers. 

Le 28, injection de 5 c. c. d'un mélange au tiers. 

Le 29, 5c. c. d'un mélange au 15°. 

Le 30, 12 ec. c. d'un mélange au 1/12. 

Le 3 novembre, on injecte 1/4 de c. c. de toxine pure. 

Le à novembre, 2 c. c. toxine pure. 

Le 7 novembre, 5 €. c. toxine pure. 

Lo 9 novembre, 10 e. e. de toxine pure. 

AP ABTEE 

Pendant toute la durée de ces injections, il a été impossible de noter le 
plus petit trouble dans la santé du sujet; sa température est restée nor- 
male; il n'y pas eu le moindre phénomène inflammatoire au niveau des 
injections. 

Le 12 novembre, à 10 heures du matin (temp. : 38°,2), on injecte sous 
la peau, en arrière des épaules, 40 c.c. d'une toxine nouvelle (tuant la 
souris au cent-millième). 

A midi, la vache est couverte de sueur; elle n’a mangé qu’une partie de 
sa ration; elle a un peu de diarrhée: elle est abattue; le soir, elle a repris 
son aspect ordinaire; elle a bien mangé, sa température est de 40. 

Le 14, tout paraît normal. Temp. : 38°,9 le matin et 389,7. le soir. 

Le 15, temp. : 37°,2 et 380,5. 

Le 16, nouvelle injection de 40 c.c. de toxine; l'animal paraît beaucoup 
moins abattu que le 13; il sue moins et mange mieux; cependant, le soir, 
sa température est à 39°,8. 

Le 17, 38°,7 et 382,9. 

Le 18, 37°,6 et 38, 

Le 20, au matin (temp. : 38°,1). Nouvelle injection sous-cutanée de 60 c. c. 
de toxine. Pas d'autres phénomènes que l'hyperthermie qui atteint, le soir, 
390,5. 

Le 21, la température est encore à 39° le matin et 38°,7 le soir. 

Le 22, 372,8 et 38°,5. 


Le 23, au matin (temp. : 38,3), nouvelle injection sous-cutanée de 


80 c. c. de toxine. Aucun symptôme, sinon de la fièvre, mesurée, le soir, par 
39°,4. 

Le 24, la température est à 380,9 le matin, à 38°,5 le soir. 

Le 23, 38°,1 et 382,4. 

Jusqu'au 7 décembre, tout reste normal. Ce jour-là, à 9 heures (temp. : 
31°,3), on injecte, dans la jugulaire, 250 c, c, de toxine. Presque aussitôt, 


LA 


140 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


l'animal est couvert de sueur; il est comme secoué par de violents tremble- 
ments; il est très abattu; il trépigne, fait des efforts expulsifs et les ma- 
tières deviennent rapidement liquides; à midi, la température està 409,3; le 
soir, l'animal est toujours triste; il n'a mangé qu'à peine ; la température 
est à 40°,2. 

Le 8 décembre, la vache a repris sa gaité et son appétit; elle a encore 
uu peu de diarrhée. Temp. : 382,8. 

Le 16 décembre, nouvelle injection intraveineuse de 300 c. ec. de toxine. 
Les mêmes phénomènes se reproduisent, mais beaucoup moins accusés : 
sueurs, tremblements, diarrhée: la température s'élève de 38°,4 à 40°. 

Le 17, tout est rentré dans l’ordre. Temp. : 380,6. 

Le 14 janvier 1893, nouvelle injection intraveineuse de 9250 c. c. de 
toxine. Réaction bien moins intense que précédemment. La température, de 
38°,2, ne s'élève qu'à 390,8. 

Le 24 janvier, à 9 heures, dernière injection intraveineuse de 280 c. e.de 
toxine. Réaction presque nulle : de 38°,4, la température s'élève, à 2 heures, 
à 39°,3, et, le soir, à 6 heures, elle n’est plus que de 380,9; l'animal n’a pas 
cessé de manger. 

Le lait, à la traite du 30 novembre est antitoxique à raison d'une partie 
de lait pour une toxine, on n'a pas essayé d’autres proportions. 


{ Ne: 


ETUDE SUR LES RÉSULTATS DE L'ASSOCIATION 


DU STREPTOCOQUE ET DU BACILLE TYPHIQUE 


CHEZ L'HOMME ET CHEZ LES ANIMAUX 
Par M. H. VINCENT 


Aide-major de 1re classe 


(Laboratoire de Bactériologie de Hopital militaire du Dey, à Alger). 


Il 


Le pronostic et la marche de la fièvre typhoïde sont subor- 
donnés à des conditions complexes dont le mécanisme intime 
déroute assez souvent les prévisions cliniques du médecin. On 
voit, en effet, le malade succomber assez souvent sans que l’au- 
topsie justifie, par l'abondance de l’éruption intestinale, par 
l’ensemble des complications viscérales ou autres, ce mode de 
terminaison de la maladie. On incrimine alors, non sans 
quelque apparence de raison, soit une virulence exception- 
nelle du microbe typhique, soit la faiblesse de l'organisme qui 
en a été la proie; mais cette double hypothèse ne saurait être 
généralisée à tous les cas. Elle ne cadre pas, en particulier, avec 
certains faits épidémiques étudiés dans un milieu qui se prête 
admirablement à l’observation, dans les casernes, où l’on voit 
des sujets très vigoureux succomber rapidement aux atteintes 
de la fièvre typhoïde,alors que d’autres,beaucoup moins robustes, 
et soumis, d'ailleurs, aux mêmes conditions d'habitat, de nour- 
riture, d’occupations journalières — et aussi d'infection — ne 
présentent que des manifestations moins sévères du même pro- 
cessus. 

Il y aurait donc, semble-t-il, un certain intérêt à déterminer 
quelles règles président à des particularités morbides si insai- 


142 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sissables dans leurs causes, si dissemblables dans leurs effets, 
et s'il n'entre pas quelquefois en jeu un nouveau facteur de 
gravité dont l'intervention tantôt manifeste, tantôt dissimulée, 
imprime à la maladie une allure aussi funeste. 

L'association éventuelle d’un autre microbe avec celui de la 
fièvre typhoïde est peut-être susceptible de fournir l’interpré- 
tation de quelques-uns de ces cas anormaux. 

Le développement simultané de plusieurs germes pathogènes 
chez le même individu a été déjà signalé dans un certain nombre 
d’affections : la tuberculose pulmonaire (R. Koch, Babès); 
l'infection purulente (Rosenbach), la syphilis infantile avec 
fièvre septique ( Hochsinger, Doutrelepont, Chosten), la scarla- 
une (Marie Raskina), etc... Dans certaines maladies mêmes, 
comme le tétanos, l'infection de l'individu exige, ainsi que 
M. Vaillard et nous-même l'avons établi, diverses conditions 
parmi lesquelles les phénomènes de symbiose microbienne, l’addi- 
tion d'organismes adjuvants au bacille de Nicolaïer jouent un 
rôle prédominant. 

Or il existe aussi, ainsi que je vais essayer de le montrer, un 
certain nombre de cas dans lesquels la mort des sujets atteints 
de fièvre typhoïde est justiciable de l’empoisonnement total et 
simultané de l’économie par un second microbe associé au 
bacille d'Eberth. Dans une communication faite à la Société 
Médicale des Hôpitaux (13 novembre 1891), j'ai signalé la fré- 
quence relative, chez l'homme, de l'infection mixte par le strepto- 
coque et le baciile typhique, en insistant sur la gravité toute 
spéciale des symptômes qu’elle détermine. 

Aux cinq cas déjà observés d'infection combinée par les deux 
microorganismes est venu s'ajouter récemment un nouvel 
exemple, dans lequel le malade atteint d’une dothiénentérie de 
moyenne intensité, a été brusquement emporté à la suite d’une 
angine en apparence légère causée par le streptocoque. Les 
expériences qui ont été pratiquées sur les animaux ont confirmé 
la virulence exceptionnelle de la symbiose strepto-typhique, et 
ce travail résume l’ensemble des résultats fournis par l'étude 
bactériologique de cette association parasitaire chez l'homme et 
les animaux. 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 143 


Il 


INFECTION MIXTE CHEZ L'HOMME. 


Si l’on songe comhien sont nombreux, dans la dothiénen- 
térie, les facteurs d’épuisement de l'organisme : empoisonne- 
ment microbien, dépenses vitales amenées par la fièvre, diarrhée, 
défaut d'alimentation, toutes causes qui affaiblissent déjà consi- 
dérablement la résistance du malade vis-à-vis des agents-des 
infections secondaires, on ne peut être surpris de la fréquence 
d'une association microbienne intercurrente, telle que celle du 
streptocoque, dans le cours de la propathie typhoïdique. La 
pénétration des germes secondaires, dans un organisme déjà 
défaillant et vicié, est facilitée par les ulcérations des plaques de 
Peyer, qui sont autant de portes d'entrée ouvertes aux microbes 
infectieux habitant le tube digestif. 

Sur 31 autopsies de fièvre typhoïde, 6 fois les ensemence- 
ments et les examens bactériologiques ont permis de rencontrer, 
dans les organes, le streptocoque mélangé au bacille typhique. 
Bien qu'ils aient manifesté une égale gravité d’allure, ces cas 
n’ont cependant pas offert une même pathogénie et doivent être 
divisés en deux groupes distincts. Dans l’un, qui comprend les 
exemples les plus nombreux, le streptocoque est intervenu dans 
le cours même de la maladie, sur un organisme déjà typhisé : il 
s’agit d'une association microbienne secondaire. Dans l’autre il 
y a eu, au contraire, infection mixte primitive ou d'emblée. Les 
signes qui ont accompagné ces divers modes d'infection, la 
physionomie que prend la manifestation morbide dès le début 
de l’envahissement microbien, enfin les lésions mêmes observées 
dans l’un et l’autre cas présentent, d'ailleurs, malgré un abou- 
üssant commun qui est la mort, une certaine différence qui 
ressortira suffisamment de la brève relation de chaque cas. 
Avant d'entrer, en effet, dans l'exposé de ces recherches, qui 
ont pour point de départ un certuin nombre d'observations 
recueillies au lit du malade et à la table d’autopsie, nous devons 
fournir une énumération succincte des cas qu'il nous a été donné 
d'étudier : l’expérimentation, non moins que les examens bacté- 
riologiques ne peuvent, en effet, être séparés des faits cliniques 
dont ils procèdent. Dans le cas actuel les uns et les autres 


144 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


se prêtent, par le rapprochement, une mutuelle lumière. 

Pour la recherche et l'isolement du streptocoque dans les 
viscères et le sang des sujets morts de fièvre typhoïde, le procédé 
des cultures sur plaques, de Koch, ne pouvait être utilisé. S'il 
est vrai, en effet, qu'un grand nombre de bactéries, en particu- 
lier le bacille d'Eberth, se développent parfaitement dans ces 
conditions, d’autres microbes, et le streptocoque est de ce 
nombre, ne peuvent se multiplier favorablement qu’à une tem- 
pérature comprise entre 30° et 38°, à laquelle ne se prête pas le 
mode de culture en gélatine. 

Il a donc été procédé de la manière suivante. La prise du 
sang du cœur, celle de la pulpe des viscères ont été faites tou- 
jours à une période aussi rapprochée que possible de la mort. 
Après cautérisation de la surface des organes, on a aspiré, dans 
des pipettes flambées, une parcelle de Ja pulpe, en prenant les 
précautions les plus strictes pour éviter la contamination. Le 
contenu des nipettes a été ensuite ensemencé directement dans 
le bouillon de bœuf peptonisé, et le tout a été porté à l’étuve à 
38°. Lorsque le streptocoque existe, il se multiplie dans le 
bouillon en mème temps que le bacille d'Eberth, et il est facile 
de le retrouver dans le dépôt formé au fond du tube. On lisole 
en diluant une goutte de ce dépôt dans l’eau stérilisée et en 
ensemençant sur plusieurs tubes de gélose. 

L'examen microscopique du sang et des frottis de rate a 
élé pratiqué dans tous les cas, en même temps que celui des 
exsudats pathologiques et du pus, lorsqu'il en existait. 

(a) Infectionsmirtes secondaires. — Le quatrième des cas dont l’é- 
numération va suivre, sera seul un peu détaillé. Pour la descrip- 
tion complète des trois autres, nous renvoyons au mémoire 
déjà cité et publié dans les Bulletins de la Société Médicale des 
Hôpitaux en 1891. 


er cas (Février A891). — Arabe ayant offert les signes d’une dothiénen- 
térie de moyenne intensité, présente au quinzième jour une augmentation de 
ja fièvre avec type inverse de la température. Otite moyenne suppurée à 
streptocoques. Mort huit jours après. 

Autopsie. — Lésions intestinales en voie de guérison. Rate énorme 
(830 grammes). Hypérémie des viscères. Pas de phlébite des sinus ni 
d'encéphalite. 

Examen bactériologique. — Dans le sang existent des quantités colossales 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 145 


de microcoques en chainettes en même temps que le bacille typhique. Les 
deux microbes sont retrouvés dans tous les viscères. 


2% cas (Avril 1891). — Homme de 21 ans, très robuste, atteint d'une 
fièvre typhoïde assez sérieuse. Au vingtième jour, angine peu grave, sans 
augmentation de la fièvre ni des phénomènes généraux. Mort cinq jours 
après. 

Autopsie. — Lésions intestinales peu marquées. Pas de lésions viscérales,. 

Exumen bactériologique. — Bacille typhique et streptocoque dans la rate, 
le foie, les ganglions mésentériques. Streptocoque dans le pharynx, les gan- 
glions cervicaux du côté gauche et le sang. 


3e cas (Avril 1891). — Homme de 22 ans présentant une fièvre typhoïde 
assez bénigne et en voie de guérison; température descendue à 37°,6, dès 
le dix-septième jour. Mort en six jours à la suite d'un érysipèle de la face. 
Autopsie, — Trois ou quatre plaques de Peyer presque entièrement cicatri- 
sées. Quelques foyers de suppuration miliaire dans l’un des reins. 
Examen bactériologique. — Streptocoque au niveau de la plaque érysipé- 
lateuse et des ganglions du cou: même organisme dans tous les viscères. 
Bacille typhique (très rare) dans la rate. 


4° cas (30novembre 1892). — Homme de22 ans, atteint d’une fièvretyphoïde 
de faible gravité: la température est descendue à 37° dès le vingtième 
jour de la maladie. A ce moment, angine caractérisée par la rougeur du 
pharynx et une très petite plaque verdâtre de sphacèle superticiel sur la luette. 
La température atteint en deux jours 41°. Gonflement rapide et considé- 
rable de la région latérale droite du cou. Päleur extrême de la face; douleur 
rétro-sternale; stupeur. Mort en deux jours. 

Autopsie. — Quelques plaques de Peyer détergées, petites. Rate très. 
molle (340 grammes); foie très rouge, ramolli. Faible congestion de l’un des 
poumons. Rien ailleurs. 

Pharynx œdématié, tissu cellulaire du cou infiltré d'une sérosité louche 
diffuse, en certains points un peu purulente, mais nullement collectée. 

L'infiltration s'étend jusque dans le tissu cellulaire du médiastin. 

Examen bactériologique. — La petite plaque de sphacèle pharyngé ren- 
ferme exclusivement le streptocoque en quantité innombrable. Même microbe 
dans les ganglions cervicaux tuméfiés, la sérosité qui infiltre le tissu cel- 
lulaire du cou et du médiastin, la rate, le foie, le sang. Le bacille typhique 
est retrouvé en même temps que le streptocoque dans les viscères abdomi- 
naux et dans la sérosité cervicale, Il est seul dans le cerveau et le bulbe. 


De l’ensemble des observations précédentes, résulte déjà 
cette impression essentielle, que la fièvre typhoïde prépare un 
terrain de culture éminemment favorable au développement 
des infections deutéropathiques, et d’une manière élective, à l’in- 
vasion du streptocoque. Alors que, chez un sujet antérieurement 

10 


146 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sain, l’éclosion d’une angine, d’une otite, d'un érysipèle ou de 
toute autre lésion locale par laquelle se traduit la pullulation du 
streptocoque ne présente, en règle générale, qu'un pronostic 
sans gravité, il semble en être autrement lorsque ces mêmes 
affections surviennent chez un malade atteint de dothienentérie. 
L'organisme, déjà ébranlé par l’empoisonnement typhoïdique, 
semble désormais incapable de résister, avec succès, à l'assaut 
d’un nouvel adversaire qui apporte au premier son redoutable 
contingent spécifique et morbide. 

Parmi les exemples ci-dessus, ceux qui dénoncent de la ma- 
nière la plus saisissante, la puissance de l'association strepto-ty- 
phique, sont lestroisième etquatrième cas, danslesquels, bien que 
lafièvre typhoïde fütlégère, bien que le malade fût même toutprès 
d'entrer en convalescence, une simple complication justiciable 
du streptocoque prit subitement un caractère funeste, presque 
foudroyant. Que de fois, sans doute, en face d’un typhoïdique 
porteur, depuis plusieurs jours, d’une angine, d’une suppuration 
à streptocoques, etc., on a mis la gravité des symptômes sur le 
compte de l'infection typhoïdique, aiors qu'elle traduisait, en 
réalité, une infection secondaire méconnue, négligée, et la dis- 
sémination du microbe surajouté dans la circulation générale ! 

C’est, en effet, dans cette généralisation du germe acciden- 
tellement développé sur un terrain déjà envahi par le bacille 
.typhique que réside le danger de l'infection mixte. Les résultats 
des examens bactériologiques le témoignent, et l'on peut suivre 
presque à la trace, par des ensemencements praliqués avecsoin, 
le microbe de l'infection secondaire, depuis son point de départ 
où il s’est extraordinairement multiplié et a pris droit de cité, 
jusqu'aux ganglions voisins qui sout tuméfiés, témoignant ainsi 
du travail de défense qu'ils ont inutilement tenté d'accomplir. 
La barrière ganglionnaire une fois franchie, le streptocoque se 
répand dans l'organisme et le tue. 

(b) Infections mirtes d'emblée. — {n’a été question jusqu'ici que 
des cas d’infection mixte secondaire. Dans une deuxième caté- 
gorie de faits, moins fréquents, mais peut-être plus remarquables 
encore, la multiplication parallèle des deux microbes patho- 
gènes s'opère d'emblée ou tout au moins dès le début de l'infec- 
tion éberthique. La séméiologie morbide semble alors modifiée 
par l’adjonction primitive du streptocoque, mais, de l’ensemble 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 147 


des symptômes cliniques plus ou moins atypiques se détachent 
néanmoins Ceux qui appartiennent en propre à la dothiénentérie 
et l'on trouve à l’autopsie la lésion pathognomonique des plaques 
de Peyer. C'est ce qui advint dans le cinquième cas d'infection 
mixte que nous avonsobservé. Ce cas, qui se termina par une mort 
rapide, ne s'était pas accompagné, comme les précédents, d'une 
lésion des téguments, du pharynx, des muqueuses ou des séreu- 
ses, qui ait préparé un foyer de culture locale austreptocoque etqui 
ait favorisé son irruption dans l’économie. La pénétration de ce 
microbe s’élait faite par les ulcérations intestinales elles-mêmes; 
le streptocoque existait, concurremment avec le bacille typhique, 
dans les ganglions mésentériques les plus voisins de ces ulcéra- 
tions. De là il était allé coloniser dans la rate, de concert avec le 
bacille d'Eberth, et y avait provoqué deux foyers de suppuration. 
À l’autopsie les viscères renfermaient les deux microorganismes 
qui furent retrouvés mème dans l’exsudat méningé. 

Les lésions de l'intestin semblent donc solliciter l'infection 
secondaire de l'individu par les innombrables germes pathogènes 
accumulés dans les voies digestives. En ce qui concerne le strep- 
tocoque, ce microorganisme est un hôte fréquent de la salive 
(Netter). Von Besser l’a également trouvé 7 fois dans la salive 
de 81 sujets. Je l'ai aussi recherché dans les matières fécales, à 
l'occasion de ces cas d'infection mixte, et l’ai trouvé 3 fois sur 
1 dans les matières fécales de typhoïdiques ou de sujets sains. 

Pour terminer l’énoncé des faits d'infection strepto-typhique 
observés chez l'homme, il nous reste à parler d’une forme spé- 
ciale de la maladie constituée étiologiquement encore par la 
combinaison primitive et contemporaine du microbe de Fehleisen 
et du bacille typhique, et dans laquelle on ne trouve, à l’autopsie, 
aucune détermination intestinale qui puisse faire soupçonner l'ori- 
gine de la maladie. Seules les cultures permettent de rapporter 
l'affection à sa véritable origine. 

IT s’agit là, en effet, d’une véritable septicémie strepto-typhique 
qui se comporte comme une sorte d’entité morbide participant 
à la fois, par son origine et ses symptômes, de ceux qui caracté- 
risent la fièvre typhoïde et la septicémie chirurgicale". 

6° cas. — Le malade, âgé de 35 ans et chiffonnier de son métier, 
offrit, dès le début de son affection, une stupeur profonde, Légère diarrhée ; 


4 H. Vincent, Loc. cit. 


148 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


fièvre (3902 à 40°1). Soubresauts tendineux, délire continu. Éruption géné- 
ralisée de petites taches purpuriques. Ces symptômes persistent pendant 
12 jours au bout desquels le sujet succombe. 

Aultopsie. — Congestion, par places, de l'intestin grêle. Plaques de Peyer 
normales. Ganglions mésentériques, rate (230 gr.)non tuméfiés. Congestion 
pulmonaire bilatérale. Hypérémie vive de l’encéphale. OEdème sous- 


arachnoïdien. 

Examen bacteriologique. — Streptocoque très abondant dans le sang. 
Tous les viscères (rate, foie, reins, poumons), la pulpe cérébrale, renferment 
en même temps le bacille typhique et le streptocoque. 


Tels sont, brièvement résumés, les documents tirés des cas 
d'infection mixte strepto-typhique que j'ai constatés chez 
l'homme. Il en résulte déjà une double conclusion, à savoir que 
cette association microbienne paraît présenter une gravité très 
grande, quel que soit le mode d'introduction, primitive ou secon- 
daire, du germe associé, quelle que soit également sa porte d’en- 
trée; en second lieu, qu’elle peut parfois s'offrir avec un 
ensemble de caractères anatomiqnes et symplomatiques qui 
ne permettent pas toujours de la dévisager avec les ressources 
crdinaires de la clinique et en font, en même temps, une sorte 
d’entité à part. De même que le bacille de Koch peut acquérir, 
expérimentalement (tuberculose du type Yersin), la faculté de 
déterminer une septicémie mortelle pour les animaux sans pro- 
duction de sa lésion caractéristique, le tubercule, de même le 
bacille d'Eberth est susceptible de se développer dans l'organisme 
humain et d’entrainer la mort sans détermination intestinale 
spécifique. 

Banti' à rapporté un cas de ce genre. Depuis lors il a été 
publié deux observations analogues, l’une par M. Vaillard et 
nous même; l’autre’ a été résumée ci-dessus. 

Pour nous en tenir à ce dernier cas qui a été plus récemment 
étudié, on pouvait se demander si la marche si rapide et si ori- 
ginale du processus infectieux mixte ne résultait pas d’une viru- 
lence exceptionnelle de l’un ou des deux microbes pathogènes. 
Je l’avais pensé tout d'abord; mais les inoculations qui ont été 
faites, soitavec le bacille typhique. soitavec le streptocoqueisolés 


4. Banti, Arch. ilal. de Biologie, Déc. 1887. 
2. Vaillard et Vincent. De l'infection par le bacille typhique sans lésions intes- 

tinales. Soc. Med. des Hop. 14 mars 1890. 
3. Loc. cit. 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 149 


des viscères du sujet, n'ont pas révélé une activité anormale de 
ces deux germes. Il fallait donc supposer que les deux microbes 
sont plus particulièrement aptes, par l'appui qu'ils se prêtent 
mutuellement dans cette ligne offensive et défensive, à paralyser 
les moyens de défense que leur oppose l'organisme humain. 
C’est ce que permettra, peut être, d'établir l'étude expérimentale 
de l'infection double par le streptocoque et le bacille typhique 
chez les animaux. 


III 


INFECTION MIXTE EXPÉRIMENTALE. 


Si les troubles révélateurs de l'association du streptocoque 
avec le bacille d'Eberth présentent, chez l'homme, une gravité 
exceptionnelle, l'expérimentation montre que les animaux sont 
ausssi particulièrement sensibles aux effets de cette infection 
mixte. L'adjonction du streptocoque au bacille de la fièvre 
typhoïde entraîne le plus souvent chez ces derniers une mort 
rapide précédée d’hyperthermie, de stupeur, de diarrhée, en un 
mot de phénomènes identiques à ceux qu’on observe chez le 
malade lui-même. 

Cette constatalion tire une valeur particulière de ce fait que 
les animaux ne possèdent cependant, en règle générale, qu'une 
réceptivité médiocre à l'égard du microbe de la fièvre typhoïde. 
On sait, en effet, que Galfky n’a jamais réussi à provoquer une 
véritable fièvre typhoïde expérimentale, et que Sirotinin, Beu- 
mer et Peiper, après des essais d'inoculation du bacille d'Eberth 
aux animaux, lui refusent toute activité pathogène envers ces 
derniers et pensent que la mort, lorsqu'elle survient chez eux, 
est due à une intoxication par les produits solubles développés 
dans les cultures. 

Il a été établi, cependant, par d’autres expérimentateurs, en 
particulier MM. Chantemesse et Widal, qu’on peut arriver à 
provoquer chez le lapin et le cobaye une affection fébrile accom- 
pagnée de la multiplication du bacille typhique dans l'intestin, 
les ganglions et la rate. Mais ces divergences d'opinion sont la 
meilleure preuve de l’infidélité des résultats donnés par l’inocu- 
lation du bacille. 


, 


150 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Si l’on prend, du reste, une culture en bouillon d’un ba- 
cille typhique récemment extrait des viscères d’un typhoïdique 
et ensemencé, à la température de 38°, depuis 10 heures seule- 
ment (afin d'opérer avec des milieux peu riches en toxine), et 
si on en inocule dans la veine marginale du lapin ou sous la 
peau 1 c. c.et même davantage, il est bien rare qu'on obtienne 
une affection mortelle. L’injection sous-cutanée détermine 
fréquemment une induration locale qui se résorbe, quelquefois 
un abcès qui se vide partiellement, laissant une sorte d'ulcération 
tenace, chancriforme, à bords saillants en bourrelet. Mais le 
lapin est peu éprouvé dans sa santé générale et guérit habituel- 
lement. 

L'injection intrapéritonéale d’un bacille en culture de 10 heures 
est plus efficace, mais elle n'’amène la mort que si la dose 
inoculée est considérable (2 ec. c. et plus). 

Le cobaye, la souris blanche elle-même, qui est cependant 
l'animal le plus sensible à l'inoculation typhique, exigentle plus 
souvent pour succomber avec généralisation des microbes, une 
quantité élevée de culture récente du bacille. 

Or, tout autres sont les résultats lorsqu'on vient en aide au 
bacille d'Eberth par l’associalion du streptocoque. On possède 
ainsi un moyen de provoquer presque à coup sûr une fièvre 
typhoïde expérimentale avec des lésions des plaques de Pever, 
une hypérémie de l'intestin, l'hypertrophie des ganglions mésen- 
tériques et de la rate. 

Les expériences ont été faites sur cinq séries de trois ae 
en utilisant, chaque fois, un bacille typhique différent extrait 
récemment de la rate d’un typhoïdique et ensemencé dans le 
bouillon depuis 18 heures. Le streptocoque provenait, dans les 
trois premiers cas, du cadavre d’un typhoïdique mort d'infection 
mixte; dans les deux autres il avait été extrait d’un pus phleg- 
moneux. 

On choisit trois lapins À, B et C approximativement de 
même âge et de même poids. On inocule au lapin A:1 ce. c. à 
lc. c. 1/2 de culture du bacille typhique dans la veine de l'oreille, 
ou bien 3/4 de c. c. dans le péritoine: — au lapin B, 1/2 c. c. ou 
1/3 de c. c. de culture du streptocoque dans la veine; — au 
lapin C, un mélange équivalent des deux microorganismes. Cette 
dernière inoculation a été faite tantôt en injectant les deux 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 151 


cultures au même point, tantôt en inoculant le streptocoque dans 
la veine marginale, et le bacille typhique dans le péritoine. 

Les résultats obtenus on été les suivants. Dans les 5 séries, 
les 5 lapins témoins À (bacille typhique), ont guéri. Parmi les 
lapins témoins B (streptocoque), l'un d’entre eux qui avait reçu 
1/2 ce. c. de streptocoque a succombé au bout de dix-huit jours, 
avec des abcès sous-culanés volumineux. Un second lapin a été 
très malade, mais a guéri ainsi que tous les autres. 

L'un des lapins C, après avoir présenté, pendant 4 jours, 
une fièvre voisine de 4!°, à fini par guérir. Les 4 autres sont 
morts de 56 heures à 39 jours après l’inoculation, ayant présenté 
une température élevée, une diarrhée parfois profuse et une 
apathie plus ou moins marquée. 

A l’autopsie, on a toujours trouvé (sauf chez l’un des lapins 
qui est mort au trente-neuvième jour dans un état de cachexie 
avancée), du gonflement hémorragique des plaques de Peyer 
ainsi que la tuméfaction des ganglions abdominaux et de la rate. 
Les ensemencements faits avec la pulpe de la rate, les examens 
microscopiques du frottis des organes, ont fourni à la fois le 
bacille d'Eberth et le streptocoque. Seul, le lapin mort tardive- 
ment donna des ensemencements négatifs. 

Voici, du reste, la relation d’une des expériences qui ont 
fourni les résultats les plus remarquables. 


Expérience (27 juillet 1891). — On injecte dans le péritoine d’un lapin A 


RENE LE Lee Le 


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témoin pesant 2 k. 200, 3/4 de c. c. d’une culture de bacille typhique retiré 
deux jours avant de la rate d'un typhoïdique et ensemencé dans le bouillon 


152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


depuis dix-huit heures. Le lendemain légère prostration, fièvre. L'animal 


mange cependant un peu. 
Les jours suivants diarrhée, faiblesse des membres. Ces symptômes 


Fig. 2. — Courbe de température du lapin B. (X, uérison). 


cessent le 1 août, époque à laquelle le lapin commence à manger. Le 
3 août il était complètement guéri. 

Un deuxième lapin témoin B (poids 2 k. 420) reçoit dans la veine margi- 
nale de l'oreille 4/3 de ec. c. de culture de streptocoque. L'animal a pré- 
senté pendant 6 jours de la fièvre (v. fig. 2), de la faiblesse des membres, 


PORN 


Fig. 3. — Courbe de tempérade du lapin C. 


mais a commencé à manger le 30 juillet etétait guéri quelques jours après. 
On prend un troisième lapin C pesant 2 k. 350 et l'on inocule dans son 
péritoine 3/4 de ce. c. du bacille typhique injecté au premier lapin et, dans 
la veine, 1/3 de c.c. du streptocoque injecté au second lapin. 
Le soir même de l'inoculation, l'animal est très abattu. Le lendemain, 
diarrhée profuse, roussàtre ; fièvre (v. la fig. 3). 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE, 153 


30 juillet. Ventre ballonné. Diarrhée persiste et se complique de prolap- 
sus et de rougeur de la muqueuse anale. Yeux éteints; stupeur absolue, 
Le lapin renversé sur le flanc est impuissant à se relever. Écoulement de 
sérosité sanguinolente par le nez. Mort le 831 juillet, au 4 jour. 

A l’autopsie, l'abdomen fut trouvé distendu par 50 c. c. environ d’un 
liquide très trouble, peuplé d'innombrables bacilles et de streptocoques. 
Mésentère injecté. Quatre plaques de Peyer, saillantes et hémorragiques, à 
la fin de l'intestin grèle. Ganglions mésentériques tuméfiés et mous, con- 
tenant le bacille d'Eberth et le streptocoque. Les mêmes microbes furent 
trouvés dans les viscères, le système nerveux central et le sang. 


Le 6° cas d'infection strepto-typhique qui a été précédem- 
ment signalé chez l’homme avait débuté par l'apparition, sur la 
poitrine du malade, de pustules confluentes consécutives elles- 
mêmes à l'application d’un thapsia. Le pus de ces petits abcès 
était rempli àe streptocoques, et il n’est pas douteux quel intro- 
duction de ce microbe dans l’organisme ne reconnût celte porte 
d'entrée. 

Cet exemple nous a suggéré l’idée de rechercher si l’on ne 
pourrait pas déterminer expérimentalement, chez les animaux, 
une infection mixte par un moyen analogue. 

Trois lapins et deux cobayes après avoir reçu : les premiers 1/2, 
1, et1 c. c. 1/2 de bacille typhique dans le sang, les autres 
1/3 de c. c. du mème bacille dans le péritoine, ont été tondus 
dans la région dorsale, et la peau a été dénudée à l’aide de fric- 
tions de papier verré. Cette surface a élé arrosée avec une cul- 
ture du streptocoque, puis recouverte de plusieurs tranches de 
papier buvard imprégné de la même culture. Les deux cobayes 
et deux des lapins ont guéri. Mais le troisième lapin a offert une. 
rougeur érysipélateuse intense de la peau du dos et de l’abdo- 
men, avec quelques petites pustules, et a succombé au huitième 
jour, présentant à l’autopsie le streptocoque dans son sang, ses 
reins et sa rale, le bacille typhique dans sa moelle osseuse et 
sa rate. Celle-ci était hypertrophiée et molle. 

En raison de sa similitude avec l’un des modes d'infection 
possible chez l'homme, cette expérience établit avec netteté le 
danger des révulsifs appliqués sans précautions antiseptiques 
chez les typhoïdiques, et susceptibles d'ouvrir ainsi une porte 
d'entrée à l’un des microbes des infections secondaires, particu- 
lièrement au microbe de Fehleisen. 

L'injection intra-palmonaire ou intra-pleurale du strepto- 


154 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


coque chez un lapin déjà inoculé avec le bacille d'Eberth amène 
fréquemment aussi la mort avec généralisation des microbes ino- 
culés, alors que les inoculations isolées faites aux animaux 
témoins, aux doses employées et déjà indiquées, ne déterminent 
le plus souvent qu’un retentissement peu grave et éphémère. On 
aurait pu présumer que l'introduction du streptocoque dans le 
système pulmonaire devait provoquer localement soit une pneu- 
monie, soit une inflammation suppurée de la plèvre. L’expé- 
rience démontre que cette présomption n’est pas toujours réa- 
lisée. On n'observe, au contraire souvent, qu’une vascularisation 
plus ou moins marquée du parenchyme pulmonaire. Peut-être 
faut-il interpréter cette particularité par l’état d’affaiblissement 
où la double invasion microbienne jette brusquement l’orga- 
nisme. Elle réduit à néant ses premiers efforts de défense et ne 
lui permet pas d’opposer, dès l’abord, la réaction phagocytaire 
dont la lésion anatomique, pneumonie, pleurésie, est la traduc- 
tion plus ou moins efficace. L'animal se conduit, en pareille 
occurrence, comme un milieu de culture inerte. 

L'association du streptocoque au bacille d'Eberth jouit donc 
de propriétés virulentes entièrement comparables, pour leurs 
effets, à celles que présentent les virus typhoïdiques artificielle- 
ment exaltés de M. Sanarelli et de MM. Chantemesse et Widal”'. 

Lorqu’on inocule une culture ordinaire du bacille typhique 
soit au lapin, soit même au cobaye, on sait déjà qu’on n’a- 
mène qu'une affection rapidement curable. Or, le court passage 
que subit le bacille à travers l’organisme même d’un animal 
peu réceptif, tel que le lapin, est-il cependant sans effet sur 
celui-ci? L’expérimentation tendrait à faire admettre qu'il n’en 
est pas ainsi, car l'inoculation du bacille typhique, même 
alors qu'elle produit seulement une altération fugace de la 
santé, paraît augmenter néanmoins la réceptivilé morbide à l'égard 
de l'infection deutéropathique par le streptocoque. 

Un lapin, du poids de 2k.050, reçoit, le 17 juin 1892, 1.c. c. 4/4 
de culture typhique dans la veine marginale. Guérison à la fin 
du 4° jour. À ce moment on injecte dans la veine 1/4 de c. ce. de 
streptocoque de moyenne virulence, dose qui ne détermine qu’un 
peu de fièvre chez un autre lapin. La température de l'animal 


4. V. ces Annales, n° 11, 25 nov. 1892. 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 155 


monta, le soir même, à 41°7 et le lapin succomba, quatre jours 


après, avec le streptocoque dans son sang et dans sa rate. Quant 
au bacille typhique, il avait à peu près entièrement disparu et ne 
fut retrouvé que dans la moelle osseuse. 

Ainsi, dans cet exemple, il avait suffi de l’affaiblissement dû 
à l'injection d’une dose non mortelle du bacille d'Eberth pour 
rendre l'animal éminemment réceptif pour l’inoculation secon- 
daire d’une quantité de streptocoque normalement inactive : la 
mort était, effectivement, bien due au streptocoque seul. Mais, 
à la vérité, cette prédisposition morbide ne parait pas se pro- 
longer au delà de 24 heures après la cessation de la fièvre, au 
moins chez le lapin, et l'expérience précédente ne réussit pas 
constamment. Ceci s'explique très bien par la grande résistance 
du lapin pour le bacilie de la fièvre typhoïde, et le succès de ces 
inoculations n’en acquiert que plus de valeur. 

Mais si, au lieu du lapin, on emploie un animal plus réceptif 
à la fois pour le streptocoque et pour le bacille — le rat blane, 
par exemple — on obtient des effets encore plus positifs. À un 
rat qui a reçu dans le péritoine 2, 3, quelquefois 4 jours aupa- 
ravant, six à huit gouttes du bacille typhique, il suffit d'inoculer | 
secondairement quelques gouttes du streptocoque sous la peau 
pour amener presque infailliblement la mort. Les deux rats 
témoins, inoculés séparément avec chaque cullure, guérissent 
au contraire le plus souvent. 

N’est-on pas autorisé à conclure que cet accroissement de la 
réceptivité morbide pour un agent d'infection secondaire trouve 
plus d’une fois sa réalisation en pathologie humaine, et ne peut 
on s'expliquer ainsi le danger des manifestations locales dustrep- 
tocoque dans le cours ou mème au déclin du typhus abdominal? 

C’est en cherchant à varier les modes d'infection par les 
deux microorganismes pathogènes que j'ai été amené à faire 
quelques essais qui offrent certaines analogies avec les expé- 
riences décrites par MM. Chantemesse et Widal dans leur récent 
mémoire déjà cité. 

On prend un bacille typhique affaibli, ensemencé depuis 
quatre mois sur gélose. Ce microbe s’est montré à peu près 
dépourvu de propriétés pathogènes pour le lapin, le cobaye et le 
rat. Il tue seulement les jeunes rats blancs, âgés de deux mois, à 
la dose de 1 c. c. dans le péritoine. 


156 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Or, si à cette culture dépourvue de virulence, on associe le 
streptocoque (sept gouttes pour le rat blanc), on réussit à 
entrainer la mort de l’animal avec généralisation des deux 
microbes. Les mêmes expériences peuvent réussir chez le lapin, 
mais à condition d'inoculer le bacille typhique atténué dans le 
péritoine et à la dose de 2 c. c. 

L'injection simultanée du bacille typhique et d’une culture 
stérilisée du streptocoque favorise beaucoup, ainsi que l'ont 
observé MM. Chantemesse et Widal, la pullulation du bacille. 
Dans des essais datant de près d’un an, je me suis servi, pour 
l’associer au bacille typhique, d’une culture de streptocoque 
ancienne de quatorze semaines, et faite dans un ballon d'Erlen- 
meyer contenant environ 200 c. c. de bouillon nutritif. En 
aspirant avec une pipette stérile la partie supérieure de la culture 
laissée au repos, on obtieut un liquide dépourvu de microbes, et 
beaucoup plus actif que la culture filtrée ou chauffée. 

Deux jeunes lapins, du poids respectif de 1 k. 800 et 1 k. 930 
reçoivent, dans la veine, 2 c. c. de ce liquideet, dans le péritoine, 
1/2 c. c. de bacille typhique en culture de 24 heures. Les deux 
animaux ont succombé presque simultanément en 26 heures. 
Des deux lapins témoins inoculés l’un avec la culture du strep- 
tocoque, l’autre avec le bacille typhique, le premier est mort 
après 24 jours, le deuxième a très bien guéri. 

On obtient, de même, des effets tout aussi marqués lorsqu'on 
inocule, en même temps qu’une dose non mortelle du strep- 
tocoque, une culture filtrée du bacille d’Eberth. 

On sait que le streptocoque ne jouit pas de propriétés 
pathogènes à l’égard äu cobaye. On peut avoir cependant raison 
de cette immumité à la condition d’intoxiquer en mème temps 
l'animal avec les produits solubles secrétés par le bacille 
typhique. C’est ainsi que, dans un cas, un fort cobaye a reçu 
dans le péritoine 2 c. ec. de culture filtrée du bacille typhique 
mélangé à 1 c. c. de culture du streptocoque ensemencé 
depuis 24 heures. Le cobaye est mort après 37 heures, avec un 
ballonnement énorme de l'abdomen. Celui-ci était distendu par 
une grande quantité de liquide louche peuplé de chaïnettes. IL 
existait de la péritonite agglutinative et le sang renfermait le 
streplocoque. 

Dans l'expérience qui précède, le mode et le siège de l’inocu- 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 157 


lation ne sont cependant pas indifférents. L’animal peut en effet 
survivre lorsqu'on injecte les deux cultures du bacille filtré et 
du streptocoque, en des endroits différents. Parfois le cobaye. 
succombe, mais l'examen microscopique du sang et du frotlis 
de rate n'indique pas de multiplication du streptocoque : il ya 
eu simple intoxication. Au contraire l'injection du mélange de 
streptocoque et de bouillon typhique filtré, au même point, (par 
exemple dans le péritoine du cobaye), est plus capable de triom- 
pher de l’immunité que présente cet animal pour le streptocoque, 
parce que le liquide filtré constitue déjà, pour le microbe en 
chainettes, un milieu nutritif tout prêt qui favorise le « phéno- 
mène de premier établissement » et permet au germe de braver 
la réaction phagocytaire normalement en éveil. 

Ces phénomènes ne pourraient évidemment se produire si le 
streptocoque et le bacille typhique n'étaient réciproquement 
capables de se multiplier dans un milieu déjà fécondé par l’un 
d'eux. Il résulte de là une preuve que les deux microbes possè- 
dent, dans les cultures artificielles, une tolérance mutuelle aussi 
grande que celle qu'ils montrent chez le vivant. Mais avant 
d'aborder ce point particulier de mes recherches, il convient 
d'étudier d'une manière un peu intime quels phénomènes prési- 
dent, in vivo, au développement simultané des deux microbes, 
quels moyens emploie l’organisme pour essayer de combattre 
leur envahissement, enfin quelles causes font si souvent pencher 
la victoire en faveur de l’association microbienne. 


IV 


APERCU DE LA RÉACTION PHAGOCYTAIRE A L'ÉGARD DE 
L'INFECTION MIXTE. 


L'injection de cultures, soit du bacille typhique seul, soit du 
mélange de streptocoque et de bacille typhique, dans la chambre 
antérieure de l'œil du cobaye et du lapin, amène d'ordinaire une 
suppuration rapide du globe oculaire, assez défavorable à l'étude 
des rapports qu’affectentles phagocytes avecles microbes inoculés. 
Nous avons eu recours, de préférence, pour étudier ce point 
particulier, à l’emploi des lamelles de Ziegler ou des tubes 


158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


capillaires préalablement emplis de cultures et insérés sous la 
peau de l’aine ou de l'oreille du lapin. 

Parmi les animaux d’expérimentation, le lapin nous a 

semblé êlre, pour ces essais, l'animal de choix, car il possède, 
envers le streptocoque et le bacille d’Eberth pris isolément, une 
résistance relative qui permet d'apprécier par comparaison et 
avec plus de facilité, les résultats fournis par l’association des 
deux microorganismes. Pour un motif analogue, on a dû élimi- 
ner l'emploi de cultures très virulentes comme possédant déjà 
séparément la faculté de paralyser trop énergiquement la pha- 
gocytose : leur combinaison amène, dès lors, au point de vue 
spécial qui nous occupe maintenant, des résultats sensiblement 
analogues à ceux que détermine l'emploi des cultures isolées. 
. Après des tâtonnements assez nombreux, nous nous sommes 
arrêté à l'emploi d'un bacille typhique retiré un mois et demi 
auparavant d’une rate de typhoïdique; quant au streptocoque, il 
avait été retiré quatre semaines auparavant du pus d'un abcès 
phlegmoneux. Les deux microbes ont été rajeunis par un réen- 
semencement dans le bouillon de bœuf peptonisé. 

Un certain nombre de lamelles de Ziegler et de tubes capil- 
laires ont donc été chargés : les uns avec la culture du bacille 
typhique, les autres avec un mélange, à parties égales, du 
bacille d'Eberth et du streptocoque. 

1° Rapports des phagocytes avec le bacille typhique. — Au bout 
de 7 heures de séjour dans l'organisme du lapin, le contenu des 
lamelles de Ziegler chargées avec le bacille typhique montre 
déjà, au microscope, un grand nombre de leucocytes polynu- 
cléés — environ 80 à 100 — disséminés au milieu des bactéries. 
La plupart de ces cellules renferment des bacilles nettement 
colorables, mais les microbes qui sont libres ne semblent pas 
avoir subi de multiplication. Après 20 heures, la phago- 
cytose est beaucoup plus marquée et, lorsqu'on a opéré avec 
des tubes capillaires, on voit ceux-ci oblitérés par un bouchon 
leucocytlaire épais ‘. Dans les préparations colorées au bleu de 
Loeffler, il est manifeste que les bacilles libres ont considérable- 
ment diminué de nombre, alors que celui des phagocytes a, au 

1. D'après Gabritchewsky, en effet, le bacille d'Eberth possède des propriétés 


chimiotactiques positives qu'il représente par 00000, (V. Annales de l’Institut 
Pasteur, n° 6, 26 juin 1899.) 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 159 


contraire, beaucoup augmenté. Néanmoins la disparition des 
bacilles n’est pas complète au bout de 51 heures, car on observe 
encore un certain nombre de bâtonnets libres et parfaitement 
colorables. 

20 Rapports des phagocytes avec l'association du streptocoque et 
du bacille typhique. — Lorsqu'on reproduit les essais précédents 
avec un mélange, à parties égales, du bacille typhique et du 
streptocoque, on n'observe plus cette phagocylose intense 
accompagnée de la diminution corrélative du nombre des 
microbes. Bien au contraire, après 7 heures, les préparations 
renferment une très grande quantité de chaînettes et de bacilles 
qui se sont manifestement multipliés. Le chiffre des cellules immi- 
grées est cependant assez grand (40-60 environ par préparation) 
et la plupart d’entre elles ont englobé des microbes. 

Mais, au bout de 24 heures, la prolifération du bacille 
typhique et du streptocoque est devenue véritablement colossale. 
Les préparations montrent des amas microbiens énormes. En 
traitant successivement les lamelles par le procédé de Gram, 
puis par la fuchsine en solution aqueuse, on voit les deux espèces 
microbiennes diversement colorées, et l’on peut s'assurer que, 
dans cette multiplication simultanée des deux parasites, la part 
prépondérante revient au bacille typhique. 

Un fait non moins remarquable, c’est que les phagocytes ont 
presque entièrement disparu. Tandis qu’on en observait un assez 
grand nombre dans les préparations faites après 7 heures, on ne 
rencontre plus, au bout de 24 heures, qu'un chiffre infime de 
cellules immigrées. Au microscope on voit seulement çà et là 
des débris cellulaires irréguliers, informes, colorés parla fuchsine, 
et qui ne sont autre chose que les cadavres de phagocytes tués 
dans la lutte et partiellement digérés eux-mêmes par les diastases 
microbiennes. 

Les lapins qui ont servi de sujets à ces expériences laissent 
souvent écouler, pendant un jour, par l’oritice de la petite plaie 
où ont été introduites les lamelles de Ziegler ou les tubes capil- 
laires, une lymphe claire, très pauvre en leucocyles, et dans 
laquelle se retrouvent encore en abondance les microbes 
inoculés. 

L'adjonction du streptocoque au bacille typhique communique 
donc, aux deux microbes, la propriété de résister victorieusement 


160 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


aux moyens de défense habituels de l'organisme, et il n’est pas 
douteux que la phagocytose ne soit entravée, annihilée par la 
double intoxication parasitaire. Alors que les cellules amiboïdes 
sont capables d'englober et de détruire leurs ennemis pris isolé- 
ment, elles sont impuissantes à triompher de leur association. 
Ou a vu, en effet, plus haut, que l'injection simultanée du strep- 
tocoque et du bacille d'Eberth au lapin ne détermine le plus 
souvent aucune réaction locale, si ce n’est une hypérémie très 
vive et sans formation d’exsudat. D'autre part, on sait que 
l'infection strepto-typhique d'emblée peut n’amener chez l’homme 
aucune lésion caractéristique telle, par exemple, que le gonfle- 
ment des plaques de Peyer et de la rate. Si l’on rapproche ces 
faits du résultat des expériences qui viennent d’être citées, on 
sera tenté d'attribuer ces phénomènes particuliers à l'intensité 
de l'infection double qui sidère la phagocytose avant qu’elle 
n’ait eu le temps de s'établir utilement. L’afflux des leucocytes, 
qui à été constaté dans les premières heures des expériences, 
indique bien que la combinaison du streptocoque et du bacille 
d'Eberth ne possède pas des propriétés chimiotactiques négatives. 
Il semble plutôt que la neutralisation des effets phagocytaires soit 
due à la toxicité particulière des poisons solubles sécrétés par les 
deux microbes et capables eux-mêmes de dissoudre les cellules 
immigrées. 

Cependant, pour que la lutte reste à l’avantage du double 
virus, il est nécessaire que les cultures inoculées possèdent 
déjà une certaine activité. Si l’on répète, en effet, ces essais 
avec des cultures affaiblies ou très anciennes du bacille typhique 
et du streptocoque, on voit, déjà au bout de 5-7 heures, des 
légions de phagocytes qui sont survenus, et ont englobé une mul- 
titude de bactéries. De plus, ceux des microbes qui sont encore 
Libres n’ont pas proliféré : leur nombre a, au contraire, consi- 
dérablement diminué au bout de 24 heures. 3 

Mais si, au lieu d'employer deux virus affaiblis, on associe à 
un bacille typhique ancien une culture très virulente du strepto- 
coque, l'examen des tubes capillaires ou des lamelles de Ziegler 
montre qu'après 8 heures, et malgré une phagocytose abon- 
dante, il y a eu multiplication manifeste du bacille. Sur les 
préparations simplement colorées au bleu de méthylène en 
solution aqueuse, on voit, en effet, un assez grand nombre de 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 161 


bacilles vivement colorés, courts, qui sont les bacilles récemment 
nés, à côté d'autres plus nombreux, mais plus pâles, et 
qui ne sont autre chose que les bacilles anciens non encore 
englobés. La dose très minime des cultures utilisées dans ces 
expériences explique évidemment que cette multiplication du 
bacille d'Eberth soit seulement esquissée et de courte durée. Au 
bout de 24-29 heures, en effet, le nombre des bacilles a beau- 
coup diminué, celui des phagocytes s’est au contraire considéra- 
blement accru, et ces cellules ont entamé une lutte désormais 
efficace. 


IV 
CULTURES MIXTES. 


Puisque l’associalion slrepto-typhique possède, tant chez 
l’homme que chez l'animal, une activité exceptionnelle de ses 
effets, il a paru utile de rechercher si cette faculté de végétation 
parallèle et simultanée que possèdent les deux microbes sur le 
terrain vivant ne se retrouverait pas dans les milieux de cultures 
eux-mêmes. On sait, en effet, qu'à l'exemple de la bactéridie 
charbonneuse, le bacille d'Éberth est très délicat et qu'il est 
facilement gèné dans son développement par la présence d’autres 
germes. Garré ‘ a constaté que le Bac. fluorescens putidus empêche 
la culture du bacille typhique. Reprises par de Freudenreich ?, 
ces expériences lui ont montré que le même bacille est impuis- 
sant à se multiplier dans les cultures des staphylocoques blanc 
et doré, du Hicr. prodigiosus, du pneumobacille de Friedlander, du 
bacille du lait bleu, du bacille pyocyanique, etc... À ces microbes 
nous pourrions ajouter la plupart des germes qui amènent la 
putréfaction. 

Ces mêmes recherches nous ont, du reste, montré que non 
seulement le bacille typhique ne se développe pas dans les cul- 
tures filtrées des microbes précédents, mais encore qu'il est 
rapidement détruit in vitro par quelques-uns d’entre eux lors- 
qu’on l’ensemence dans des cultures déjà anciennes et encore 
vivantes de ces derniers, ou même lorsqu'on l’ensemence simul- 

4. Garré, Correspondenzblalt für Schweizer Aerzle, 1887, n0 13, p. 385. 
2 De Faeuvexreicn, Ann. de Micrographie, I, 1890, p. 1. 
11 


162 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tanément dans un même bouillon. C’est ainsi que les espèces 
suivantes : Mic. prodigiosus, bac. pyocyanique, Bac. coli communis, 
Bact. termo, staphylocoques pyogènes, Bac. luteus putidus, bac. de 
Friedlander, ont paru posséder, à cet égard, les propriétés anta- 
gonistes les plus énergiques. Le bacille est tué dans un inter- 
valle qui varie de 48 heures {Microbac. prodigiosus) à 17 jours ; il 
disparaît encore plus rapidement (24 à 36 heures) lorsqu'on 
l'ensemence dans un milieu nutrilif déjà fécondé par plusieurs 
des espèces précédentes à la fois, ou bien dans un liquide 
putréfié. 

Or si on ensemence le bacille typhique et le streptocoque 
dans un même bouillon de culture, non seulement le bacille n’y 
meurt pas, mais encore il végète très bien de concert avec son 
partenaire. Le bacille peut mème survivre au streptocoque dans 
une culture mixte ancienne. 

Si l’on ensemence également le bacille dans une culture 
datant de six mois, dépouillée ou non de ses germes, le bacille, 
après un faible retard, a bientôt troublé abondamment ce 
milieu’. 

Il n’y acquiert pas, cependant, une virulence plus grande que 
précédemment, mais semble, au contraire, s’y atténuer manifes- 
tement, car l'inoculation de doses, habituellement mortelles 
pour le rat blanc, du bacille reporté dans le bouillon normal 
après un séjour de deux semaines dansle bouillon du streptocoque, 
peut rester sans effet notable. On peut attribuer cette atténuation 
partielle à l'acidité assez grande que possèdent les cultures 
anciennes du streptocoque. En effet, lorsqu'on alcalinise légè- 
rement ces cultures avant de les filtrer, le bacille ensemencé 
dans ce milieu ne subit pas, dans son développement, le léger 
retard qui a été constité, et ne s'y affaiblit plus. 


V 


CONSIDÉRATIONS PRATIQUES AU SUJET DE L'INFECTION MIXTE CHEZ L HOMME. 


L'expérimentation el les recherches bactériologiques confir- 
ment et permeltent, en même temps, d'interpréter dans leur 
ensermble lés résultats constatés, chez l'homme, par l'association 


1. H. Vixcenr, Soc. de Biol., 2 juillet, 1892. 


STREPTOCOQUE ET BACILLE TYPHIQUE. 163 


des deux microorganismes précités. S'il est, du reste, un fait 
remarquable, c'est la prédilection et la fréquence avec laquelle 
le streptocoque se fait le complice des autres microbes pathogènes. 
On le rencontre, en effet, souvent à titre d'agent d'infection adju- 
vante ou secondaire dans la diphtérie (Lüffler, Roux et Yersin, 
H. Barbier); dans la scarlatine, dans la tuberculose, où il joue 
certainement un rôle important dans les phénomènes de con- 
somption (Babes), etc... Nous pensons avoir démontré que le 
mème microbe revendique encore une grande part dans la mort 
qui termine un certain nombre de cas de fièvre typhoïde. 

D'ailleurs sa présence a été déjà signalée, dans la fièvre 
typhoïde, par Netter' qui, examinant seize cas de cette affection, 
l’a trouvé, en particulier, dans un cas compliqué d’endocardite 
ulcéreuse avec infarctus multiples: ils’agissait évidemment d'une 
infection mixte surajoutée, entièrement analogue aux observa- 
ons citées ici. Eugen Fraenkel? a aussi signalé cette fréquence 
du streptocoque dans les complications de la fièvre typhoïde. 
Cette prédominance se retrouve même, pendant le vie, dans les 
complications pulmonaires de la dothiénenterie, où Karlinsky a 
trouvé, 6 fois sur 9, le streptocoque combiné ou non au bacille 
d’Eberth :. 

L'ensemble de ces constatations se double ici d’un intérêt 
pratique assez grand. De ce fait que, sur 30 autopsies de fièvre 
typhoïde, l'association strepto-typhique, primitive ou secondaire, 
a été rencontrée 6 fois, découle déjà une preuve de la fréquence 
de cette infection mixte — nous pourrions ajouter aussi de sa 
gravité. Les complications qui sont sous la dépendance des 
staphylocoques pyogènes blanc et doré paraissent offrir, au 
contraire, des dangers beaucoup moindres que celles qui ressor. 
tüissent au streptocoque. La brève statistique suivante, portant 
sur une des complications les plus habituelles de la dothiénen- 
térie, les suppurations, vient, du reste, à l'appui de cette donnée. 

J'ai examiné pendant la vie ou après la mort 41 abcès ou 
suppurations diverses survenus chez des typhoïdiques « : 32 fois 
cette complication était due soit au Staphylococcus pyogenes aureus, 

4. Nerrer, Soc. Medic. des Hôpitaux, 6 mars 1891. 
2. E. FRraexxkez, Zur Lehre von der Ætiol.?%der {omplic. in abdom : Typhus. 
Jahrbicher der Hamburgischen Staats Krankenaustallen, 1890. 


3. Kancixsky, Forlschr. der Med., n° 18, 1589. 
4. L’un de ces abcès était causé par le bacille d'Eberth. 


164 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


soit au mélange de ce dernier avec l'albus. Or les malades por- 
teurs de ces collections ont tous guéri, malgré des suppurations 
parfois très étendues et des périostites multiples. 

Au contraire le streptocoque a été isolé 8 fois dans le pus 
soit seul, soit associé au bacille d'Eberth : la mort est survenue 
dans 5 cas. Le rôle du streptocoque dans la léthalité typhoïque 
ne saurait être mieux démontré que par ces chiffres. 

Il n'entre évidemment pas dans notre pensée d'affirmer que 
toute complication tributaire de ce microorganisme est, dans la 
fièvre typhoïde, nécessairement fatale. Mais cette éventualité 
morbide doit éveiller les préoccupations du médecin, car elle 
implique très souvent un pronostic grave. 

De ces exemples découle donc l'importance pratique très grande 
de l'examen bactériologique des complications locales qui se présentent 
dans le typhus abdominal. Dues au streptocoque, elles commandent 
une intervention immédiate et énergique. Bien qu’elles puissent, 
sans doute, parfois guérir, elles ne constituent pas moins une 
menace sévère pour la vie du malade par la possibilité et la 
fréquence de la généralisation du streptocoque dans son sang. 

De là résulte encore l'utilité d’une hygiène rigoureuse des 
téguments et des cavités qui peuvent recéler ce germe pathogène. 

Dans un prochain travail nous essaierons de montrer que le 
microbe de Fehleisen ne possède pas seul la propriété de s’allier 
au bacille d'Eberth. D'autres associations microbiennes généra- 
lisées jouent, en effet, dans la pathogénie de la mort pendant la 
fièvre typhoïde, un rôle fréquent que l'absence de signes ou de 
lésions anormales ne permet pas toujours de soupçonner, et 
que les cultures seules donnent la possibilité de reconnaître. 


SUR LES MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES 
DANS L'INFECTION ET DANS L'IMMUNISATION 


PAR 


Mie CLémexce EVERARD, é CAPT 
M. JEeax DEMOOR es 


TR AS Assistant à l'institut botanique). 
(Etudiants en médecine). : I 


(Université de Bruxelles.) 


l 


INTRODUCTION. — MÉTHODE, 


Les maladies infectieuses s'accompaguent d’altéralions pro- 
fondes et multiples du sang. Ces modifications atteignent parti- 
culièrement les leucocytes, ainsi que de nombreuses observa- 
tions, la plupart isolées, l’ont démontré tant pour les maladies 
de l’homme que pour les états infectieux provoqués chez Îles 
animaux. 

Si l’on tient compte du rôle important que jouent les leu- 
cocytes dans la lutte de l'organisme contre l'infection, et des 

changements qui surviennent dans ces éléments lors de la 
maladie, on en déduira que certains rapports fixes et déterminés 
existent probablement entre le processus morbide et les modi- 
fications que subissent les globules blancs. 

Nous nous sommes proposé d'étudier la succession des 
variations quantitatives et qualitatives que présentent les leu- 
cocytes au cours de l'infection et de l'immunisation. Nous avons 
aussi essayé de nous rendre compte de la signification de ces 
phénomènes. Ce travail est purement expérimental. Les recher- 
ches cliniques faites sur l’homme ne contribuent guère à la 
solution des multiples problèmes que soulève la question de 
l'infection : la difficulté de l'observation et les nombreuses 
causes d'erreur provenant de la médication rendent les résultats 
moins nets et moins décisifs que ceux fournis par l’expérimen- 


166 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tation directe. Cependant l'allure générale est la même chez 
l'homme et chez les animaux ‘. 


Voici la méthode dont nous nous sommes servi dans nos 
recherches. Nous piquons une petite veine superficielle de 
l'oreille de l'animal en expérience. Le sang est étalé en couches 
très minces sur des lamelles et fixé par la chaleur : les lamelles 
sont déposées pendant une heure sur une plaque métallique 
chauffée à 650-709. Les préparations ainsi obtenues se conser- 
vent très longtemps ; nous les examinons ultérieurement. Pour 
les colorer, nous les mettons pendant 5 à 10 minutes dans un 
mélange à parties égales des deux liquides suivants : 


1 APOSINME RARE PRIE À gramme. 
ANCOOLER SR EEE A A ER 95 — 
HUE OR A ter DA 
GlVCÉTNME AE TT ESS re PDT de 

DASHÉTMADE VIOLE ETE CEE 1 gramme. 
AÏCOOIPE EM CRT ORNE ER RE 10 — 
ATTEINTE ARTE PE TR CEE 
au A NT AR D NAS 200 — 


On dissout l’alun à chaud dans l’eau ; on filtre après refroi- 
dissement. 24 heures après, la solution d’alun est ajoutée à la 
solution alcoolique d'hématoxyline, et le mélange est filtré après 
un repos de 8 jours (Bühmer). 

La préparation lavée soigneusement à l’eau passe par l'alcool 
à 900, par l'alcool absolu, par l'essence de girofles, et est montée 
dans le baume. Il est recommandable de n’étudier les prépara- 
tions qu'après un ou deux jours. 

Dans ce réactif, l’hématoxyline se porte sur le noyau et 
l’éosine sur les granulations protoplasmiques. 

Nous avons aussi coloré le sang par d’autres réactifs, princi- 
palement par la solution d'orange G, fuchsine acide S et vert 
de méthyle. Par ces méthodes nous obtenions des préparations 
moins faciles à étudier et qui ne fournissaient du reste aucun 
renseignement complémentaire. 


4. CLémexce EverarD Er JEAN Demoor, Les modificalions des globules blancs 
dans les maladies infectieuses. Soc. des Sc. médic. et nat. de Bruxelles, 1892. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 167 


La quantité de leucocytes est déterminée par l'examen de la 
préparation colorée elle-même. On atteint ainsi une précision 
suffisante: pour nous en assurer, nous avons fait plusieurs 
séries d'observations en combinant la numération des globules 
par le procédé Zeiss-Thomas et l'étude des préparations colorées. 
Les résultats oblenus par les deux méthodes concordaient 
complètement. 


* 
# * 


Nous croyons inulile de donner l'historique de la question 
qui nous occupe ; il a été fait très complètement par M. Rieder . 


IT 
DESCRIPTION DES LEUCOCYTES 


Dans le sang du cobaye et du lapin, seuls animaux sur 
lesquels portent les observations consignées dans le présent 
travail, on rencontre les formes suivantes de leucocytes : 

1° Petits leucocytes à noyau unique compact, se colorant 
fortement et uniformément par l’hématoxyline. Le protoplasma 
est très rare et peu coloré par l'éosine. Dans la suite du travail 
ces éléments sont désignés par « Icy. m. ». 

2° Leucocytes à noyau unique vésiculeux. Le noyau se 
colore faiblement par l’hématoxyline; contre sa membrane on 
observe souvent des points plus colorés, en nombre variable. Ce 
noyau présente des formes diverses : sphérique, en haricot, en 
fer à cheval, plus rarement annulaire. Il est rarement central, 
et dans les cas où il n’est pas sphérique, son bord concave est 
tourné vers le centre de la cellule. Le protoplasma de ce 
Jeucocyte est abondant et homogène; il se colore faiblement par 
l’éosine. Ces leucocytes sont notablement plus grands que les 
globules rouges. Ils sont désignés par « Jey. v. ». 

On trouve dans des cas très rares de très grands leucocytes 
à noyau vésiculeux uniformément pâle et à protoplasma égale- 
ment pâle. 

3° Leucocytes à noyau polymorphe, compact. Le noyau 
est très irrégulier ; ilse compose de masses très colorées réunies 
par de minces filaments; exceptionnellement il est constitué 
par un filament irrégulièrement pelotonné et ne présentant pas 


1. Riever, Beilzage zur Kenntniss der Leukocylose. Leipzig, Vogel, 1892. 


168 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


d'épaississements. Souventle noyau estcomplètementfragmenté: 
on trouve alors épars dans la cellule un nombre variable de 
masses nucléaires isolées. Le protoplasma est abondant: il n’a 
jamais l'aspect homogène qu'il présente chez les leucocytes à 
noyau vésiculeux ; il est grumeleux ou franchement granuleux. 
Les granulations diffèrent entre elles quant à leur taille, à leur 
abondance et à leur pouvoir de fixer les matières colorantes. 
Ces leucocytes ont une laille sensiblement supérieure à celle 
des hématies. Nous les désignons par «ley. pm. » 

On rencontre de temps en temps dans les préparations des 
Icy. pm. réunis en amas dont le centre est occupé par une 
masse légèrement colorée par l’hématoxyline; on dirait que ces 
éléments se sont groupés autour de leucocytes morts. 

Les trois formes de globules blancs que nous venons de 
décrire ne doivent pas, à notre avis, être considérées comme 
des types distincts : on trouve des leucocytes qui offrent tous 
les caractères intermédiaires entre ceux-ci. 

On observe fréquemment des cellules analogues aux ley. m. 
mais à protoplasma plus abondant, et d’autres cellules dont le 
noyau semi-vésiculeux est entouré d’une faible couche de proto- 
plasma. Nous croyons pouvoir considérer ces éléments comme 
des formes de transition entre lcy. m. etley. v. 

Quant à la transition entre Iley. v. et ley. pm., elle nous 
paraît établie par les formes suivantes : leucocytes à novau 
vésiculeux typique et à protoplasma granuleux plus coloré que 
d'habitude; leucocytes à noyau semi-vésiculeux et à proto- 
plasma abondant et granuleux ; leucocytes à noyau fragmenté 
dont certaines portions sont neltement compactes, landis que 
d’autres sont restées vésiculeuses. 

Dans ces derniers temps, l'attention a été beaucoup attirée 
sur les granulations des globules blancs et particulièrement de 
ceux que nous appelons ley. pm. Nous ne pensons pas qu'on 
puisse différencier les granulations en se basant sur leur avi- 
dité relative pour telle ou telle matière colorante, car les gros 
granules très avides d’éosine et des autres substances acides, 
éosinophiles de M. Ehrlich ‘, sont reliés aux granulations 
petites et peu colorées par toutes les transitions imaginables. 


1. P. Earuicar, Farbenanalylische Untersuchungen zur Hislologie und Klinik des 
Blutes. 1. Theil. Berlin, Hirschwald, 1891. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYSES. 169 


II 


RÉSULTATS DES EXPÉRIENCES, 


Afin de permettre au lecteur de consulter plus facilement les 
protocoles des expériences réunis à la fin du travail, nous croyons 
utile de donner ici un résumé des diverses expériences que 
nous avons faites ; nous indiquerons ensuite les résultats obtenus 
pour chacune d'elles. 


Vibrion de Metchnikoff. 


Injection de cultures chauffées à 100, 
à des cobayes neufs. Exp. I, A, B;, Ci, D. — Exp. VI, M. 
à un cobaye vacciné. Exp. VI, L. 
Injection de cultures filtrées 
à des cobayes neufs. Exp. IT, E;, Gi. 
à des cobayes vaccinés. Exp. IF, A;, C2. 
Injection de cultures vivantes 
à des cobayes neufs, 


amenant la mort. Exp. III, F. — Exp. [V, J. 
n’amenant pas la mort. Exp. III, H. — Exe. V, K. 
à des cobayes vaccinés. Exp. Il, B,, D,. — Exp. VI, L, M. 


Bacilles du hog-cholera. 


à des lapins neufs, 
amenant la mort. Exr. VII, C. — Exe. VIT, D. 
n'amenant pas la mort. Exp. VII, A, B. 

à un lapin vacciné. Exe. VIIL, E. 


Staphylococcus pyogenes aureus. 


à des lapins, 
amenant la mort. Exp. IX, F. 
n’amenant pas la mort. Exp. X, G. 
à un cobaye. Exp. IX, N. 


Bacille du charbon. 
à des lapins, 


à un lapin neuf. Exp. XI, J. 
à un lapin vacciné. Exp. XI, H. 


170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


à des cobayes, 
à un cobaye neuf. Exp. XII, O. 
à un cobaye vacciné contre le vibrion de Metchnikoff. Exp. XII, B. 


Bacille du tétanos. 


à un lapin. Exe. XII, K. 
à des cobayes. 
à un cobaye neuf. Exp. XIII, E,. 
à un cobaye vacciné contre le vibrion de Metchnikoff. Exp. XIII, A3. 


Bacillus mycoides. 


à un lapin. Exe. XIV, L. 
à un cobaye. Exp. XIV, G;. 


INFECTION ET IMMUNISATION PAR LE VIBRION DE METCHNIKOFF 
INJECTION DE CULTURES CHAUFFÉES A 100 (avec les microbes). 


1° À des cobayes neufs (Exe.1, cobayes A;, B,, C,, D,. Exe. VI, cobaye M). 
— 2 à 4 heures après l'injection, on constate une augmentation du nombre 
des leucocytes. Cette multiplication des globules blancs est ordinairement 
précédée d'un stade d’hypoleucocytose. Celle-ci est très nette lors de la 
deuxième injection faite aux cobayes A;, B,, C;, et lors dela première injec- 
tion faite aux cobayes B, et C,; elle a complètement fait défaut chez le 
cobaye D;. On ne constate pas non plus d'hypoleucocytose ni chez le 
cobaye À, lors de la première injection, ni chez le cobaye M; il est pos- 
sible, pourtant, qu'elle ait eu lieu, et que son absence apparente soit due 
au retard apporté à Ja prise du sang. 

La diminution du nombre des globules blanes n'est pas la même pour 
les diverses formes : dans la plupart des cas elle est surtout manifeste pour 
les Icy. pm. 

L'augmentation du nombre des leucocytes s'est produite dans tous les cas, 
elle est due principalement à l'accroissement numérique des ley. pm. 

2° A un cobaye vacciné (Exe. VI, cobaye L). — Chez le cobaye L qui à 
été vacciné par des inoculations antérieures de microbes vivants. l'hypoleu- 
cocytose n'a pas été constatée; il est vrai que nous avons étudié le sang 
pour la premiére fois 19 heures après l'injection. Quant à l'hyperleucocytose, 
elle est tardive et légère. Il est à remarquer que chez ce cobaye le nombre 
des leucocytes était extrêmement considérable avant les injections. Ceci 
n'est du reste qu'un cas particulier d'une règle générale : chez les animaux 
vaccinés, les leucocytes, et surtout les Icy. pm., sont plus nombreux que 
chez l'animal neuf. 


INJECTION DE CULTURES FILTRÉES MAIS NON CHAUFFÉES (sans microbes). 


1° À des cobayes neufs (Exr. HI, cobayes E; et Gi). — Le cobaye E, pré- 
sente une hypoleucocytose passagère qui intéresse surtout les ley. pm. ; puis 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 171 


l'hyperleucocytose s'établit, Le cobaye G,; offre d'emblée une augmentation 
du nombre des globules blancs qui porte encore une fois sur les lcy. pm. Le 
sang du second cobaye devient normal avant celui du premier. 

2 À des cobayes vaccinés. (Exr. I, cobayes A4 et C2). — L'hypoleuco- 
cytose ne se manifeste pas. On constate, dès le début, une augmentation 
du nombre des globules blancs, surtout des ley. pm. Comme toujours, le 
sang des cobayes vaccinés, pris avant l'injection, est plus riche en leu- 
cocytes que le sang des cobayes neufs; les Icy. pm. prédominent nettement. 


INJECTION DE CULTURES VIRULENTES ET VIVANTES. 


1° À des cobayes neufs (Exe. II, cobayes F et H; Exr. IV, cobaye J; 
Exr. V, cobaye K). — Les cobayes F et J succombent, les cobayes H et K 
survivent. 

a) Injection amenant la mort de l'animal. — Le sang du cobaye F 
passe par des alternatives d'hypoleucocytose et d’hyperleucocytose. Le sang 
pris dans le cœur de l’animal mort contient très peu de leucocytes, ces élé- 
ments sont des ley. m. et Icy. v. Chez le cobaye J, l'hypoleucocytose se 
maintient jusqu'à la mort; les Iey. pm. font presque complètement défaut. 

b) Injection n'amenant par la mort de l'animal. — Les deux cobayes H 
et K présentent les mêmes phénomènes : hypoleucocytose suivie d'hyper- 
leucocytose, la diminution et l'augmentation du nombre des leucocytes 
étant dues principalement à la pénurie et à l'abondance relatives des 
Icy. pm. 

2° A des cobayes vaccinés (Exe. H, cobayes B, et D,; Exp. VI, cobayes L 
et M). — Chez ces quatre cobayes on observe un appauvrissement manifeste 
du sang en ley. pm. Chez le cobaye B,, on observe en même temps une 
augmentation du nombre relatif des Iey. m. et des ley. v., de sorte que la 
quantité globale des leucocytes est restée sensiblement constante. Chez le 
cobaye M, le seul qui ait présenté des troubles macroscopiques (œdème de 
la cuisse), l'hypoleucocytose a persisté très longtemps. L'hyperleucocytose 
consécutive est très forte chez les quatre animaux; elle est due surtout aux 
Icy. pm. 


INFECTION PAR LE BACILLE DU HOG-CHOLÉRA. 


1° 4 des lapins neufs (Exr. VII, lapins A, B, C; Exp. VIIL, lapin D). — 
Les lapins C et D succombent, les lapins A et B survivent. 

a) Injection amenant la mort de l'animal. — L'hypoleucocytose, qui 
s'établit immédiatement après l'injection, s'accentue jusqu'à la mort de 
l'animal. Elle porte principalement sur les ley. pm. Le sang pris dans le 
cœur de l'animal mort est très pauvre en leucocytes. Chez le lapin D, le 
pus de la cavité péritonéale est très riche en ley. pm. à granulations forte- 
ment colorées ; les ley. m. y font totalement défaut. 

b) Injection n’amenant pas la mort de l'animal. — Succession régulière 
des deux phénomènes : hypoleucocytose et hyperleucocytose. Cette dernière 
persiste environ deux jours, puis le sang redevient normal. Les modifica- 


172 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tions quantitatives des globules blancs portent d'une façon prépondérante 
sur les Icy. pm. 

2° A un lapin vacciné (Exr. VII, lapin E). — Avant l'injection, le sang 
était relativement riche en ley. pm. Trois heures après l'injection on observe 
une hyperleucocytose ; les ley. pm. sont très abondants. Nous ignorons si, 
antérieurement, il y a eu un stade d'hypol'eucocytose. Celle-ci a été-certai- 
nement très passagère. 


INFECTION PAR LE STAPHYLOCOCCUS PYOGENES AUREUS. 


1° À des lapins. 

a) Amenant la mort de l'animal (Exp. IX, F). Le nombre global des 
leucocytes ne varie guère jusqu'à la vingt-deuxième heure après l'injection: 
mais il s'appauvrit en Icy. pm. pour s'enrichir en ley. v. Dans le sang du 
lapin mort, l'hypoleucocytose est manifeste et caractérisée par l'extrême 
rareté des ley. pm. 

b) N'amenant pas la mort (Exp. X, G). Huit heures après l'injection, on 
constate l'hyperleucocytose, caractérisée surtout par l'abondance des ley. pm. 
Nous ne savons pas s’il y a eu hypoleucocytose. 

2° A un cobaye (Exp. IX, N). Le nombre global des leucocytes ne change 
pas, mais la proportion des Icy. pm. augmente. 


INFECTION PAR LE BACILLE DU CHARBON. 


1° À des lapins. 

a) Lapins neufs (Exp. XI, J). L'hypoleucocytose persiste jusqu'à la mort. 

b) Lapin vacciné (Exp. XI, H). Avant l'injection, le sang était plus riche 
en leucocytes et surtout en ley. pm. que celui du lapin neuf J. Pendant 
l'infection on constate une légère hypoleucocytose avec disparition presque 
totale des Icy. m. Malgré la diminution du nombre global des cellules, 
celui des Icy. pm. a augmenté. 

2° A des cobayes. 

a) Cobaye neuf (Exp. XII, O0). On constate d’abord une légère hypoleuco- 
cytose portant surtout sur les lcy. pm. Mais déjà 2 ‘heures après l'injection 
s'établit l'hyperleucocytose avec augmentation progressive du nombre des 
lcy. pm. 23 heures après l’injection, il y a de nouveau hypoleucocytose qui 
se poursuit jusqu'à la mort; cette seconde phase d’hypoleucocytose est 
caractérisée, comme la première, par la rareté des leucocytes pm. et l’abon- 
dance des ley. m. Le sang pris dans le cœur après la mort renferme très peu 
de leucocytes et beaucoup de bacilles. Les Icy. pm. sont très rares; 
quelques-uns d’entre eux contiennent des bacilles. 

Le cobaye meurt avec un œdème considérable de la paroi abdominale. La 
sérosité contient beaucoup de lcy. pm. et de bacilles. 

b) Cobaye vacciné contre le vibrion de Metchnikoff (Exp. XII, B;). 
Avant l'injection, le sang est plus riche en ley. pm. que celui du cobaye O. 
Tout d’abord il y a hypoleucocytose, mais déjà une heure après l'injection 
l'hyperleucocytose commence: elle persiste jusqu'à la trente-troisième 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES 173 


heure. Puis il y a de nouveau hypoleucocylose qui se continue jusqu'à 
la soixante-seizième heure. Il se produit alors une nouvelle phase d'hyper- 
leucocytose qui dure jusqu'à la mort. Ce cobaye présente de l’aseite : le 
liquide renferme presque exclusivement des Icy. pm. 

Les divers stades d’hypo- et d'hyperleucocytose sont dus principalement 
à la rareté ou à l'abondance relatives des ley. pm. L'absence de ceux-ci est 
parfois complète, et inversement, lors de l'hyperleucocytose, ces éléments 
existent souvent tout seuls. 

Les deux cobayes O et B, ont reçu du deuxième vaccin charbonneux, 
dont la virulence était légèrement atténuée par la conservation. Les alter- 
natives d'hypo- et d'hyperleucocytose paraissent indiquer que les animaux 
ont pu, à de certains moments, lutter efficacement contre les microbes qui 
ont néanmoins fini par triompher. 


INFECTION PAR LE BACILLE DU TÉTANOS. 


19 À œn lapin (Exe. XUI, K). Immédiatement après l'injeclion, nous 
ne constatons pas de diminution du nombre global des leucocytes, mais la 
proportion des ley. pm. baisse notablement. Cel élat est très passager 
une demi-heure après l'injection il y a déjà de l'hyperleucocytose a vec prédo- 
minance des ley. pm. Deux jours après l'injection, le nombre des lcy. pm. 
décroil, et le sang reprend ses caractères normaux. 

20 À des cobayes. 

a) Cobaye neuf (Exr. XIII, E2). L'hypoleucocytose avec pénurie des 
ley. pm. se maintient pendant 4 heures; elle fait place à une légère hyper- 
leucocytose avec augmentation du nombre des ley. pm. Survient alors une 
seconde phase d'hypoleucocytose au cours de laquelle les Icy. pm. restent 
abondants. Elle est remplacée peu avant la mort de l'animal par de l'hyper- 
leucocytose. Nous n'avons pas pu étudier le sang de l'animal mort : il ne se 
laisse pas colorer. 

b) Cobaye vacciné entre le vibrion de Metchnikoff (Exp. XIII, A;). Le 
sang de l'animal avant l'injection de bacilles du tétanos est plus riche en 
ley. pm. que celui du cobaye neuf E,. Il y a d'abord une hypoleucocytose 
irès passagère à laquelle succède une hyperleucocytose persistant jusque 
peu d'heures avant la mort. Le sang pris dans le cœur du cobaye mort est 
pauvre en leucocytes. Mais les Icy. pm. prédominent d'une façon très 
marquée. 

Il est curieux d'observer que chez les cobayes immunisés contre le vibrion 
de Metchnikoff et infectés ultérieurement par le bacille du charbon et par 
le bacille du tétanos, la mort se produit lorsque le sang est riche en ley. pm. 
Dans tous les autres cas de mort que nous avons analysés antérieurement, 
nous avons constaté la rareté des Icy. pm. 


INJECTION DU BACILLUS MYCOIDES 


4o A un lapin (Exr. XIV, L). L'hypo- et l'hyperleucocytose sont très 
légères. Pendant le stade d’hypoleucocytose, la proportion de ley. pm. 
s'accroit déjà. - 


174 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


2 A un cobaye (Exp. XIV, G). L'hypo- et l'hyperleucocytose sont 
légères. Dans les deux strdes, ce sont les ley. pm. qui sont principalement 
intéressés. 


IV 
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS. 


Dans ce chapitre nous étudierons les variations du nombre 
global des leucocytes : hypoleucytose et hyperleucocytose ; les 
différences qui existent entre la réaction des animaux neufs et 
celle des animaux vaccinés; la part qui revient aux diverses 
formes de leucocytes dans la lutte contre les microbes : et enfin 
la valeur des diverses formes de leucocytes au point de vue 
spécifique. 


À. VARIATIONS DU NOMBRE GLOBAL DES LEUCOCYTES. 
1. Hypoleucocytose. 


Chez les divers animaux que nous avons examinés, l'injection 
des cultures microbiennes a été suivie de la diminution du 
nombre des leucocytes cireulants, sauf dans les cas suivants : 
cobayes À, et D, (Exp. 1); G, (Exp. ni); A,, B,, C,, (Exp. 11}; 
N (Exp. 1x). — Lapins E (Exp. vin); G. (Exp. x); K (Exp. xiv). 

Les cobayes A,, B, et C,. ainsi que le lapin E sont immunisés 
contre le microbe dont ün leur injecte les produits ou la culture. 
Nous en reparlerons plus loin. 

Chez le cobaye N et chez le lapin G, le sang est pris trop 
longtemps après l'injection pour nous permettre de déduire 
aucune conclusion. 

Restent donc à examiner les cobayes AÀ,, D,, G, et le lapin K. 
Ce dernier n’a pas présenté une hypoleucocytose globale, mais 
la proportion des Icy. pm. a baissé. — Chez le cobaye A,, une 
première injection de 5 de culture chauffée de vibrion de 
Metchnikoff, n'a pas amené d'hypoleucocytose, elle à provo- 
qué une légère hyperleucocytose. Mais lors d'une seconde injec- 
tion de 8 l'animal réagit par une diminution très nette du 
nombre des globules blancs. — Chez le cobaye D,, il y a eu 
d'emblée hyperleucocytose à la suite des deux injections. — Le 
cobaye G,, qui reçoit là culture simplement filtrée, ne présente 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 175 


pas de traces d'hypoleucocytose. — Nous ne comprenons pas à 
quoi peut tenir l'absence d'hypoleucocytose chez ces deux derniers 
animaux. — Ajoutons ici que le cobaye et le lapin, auxquels 
nous injectons dans la cavité péritonéale une cullure vivante de 
B mycoïdes, présentent une hypoleucocytose très faible et très 
passagère. 

Dans tous les autres cas que nous avons étudiés, nous avons 
observé une hypoleucocytose immédiatement après l'injection. 
M. Werigo !, dans le travail qu'il vient de publier, a attiré l’at- 
tention sur celte diminution du nombre de globules blancs: il 
coustate le mème phénomène après l’injection de particules 
solides dans le sang, mais il ne l’a jamais retrouvé après l’injec- 
ton de cultures filtrées. MM. Kanthack et Hankin * ont observé 
une réaction analogue lors de l'injection de cultures stérilisées 
dans la veine de l’oreille, chez le lapin. 

D’après M. Werigo, l'hypoleucocytose du sang circulant est 
due à l’accumulation dans les organes internes (foie, rate, pou- 
mons) des leucocytes qui ont englobé les particules solides telles 
que microbes, grains de carmin, etc. Aussi cet auteur croit-il 
qu'il ne faut pas tenir compte des effets des produits microbiens 
sur l'organisme pour expliquer le phénomène de l’hypoleuco- 
cytose. Nous ne pouvons pas partager cette opinion. En effet, 
le cobaye neuf E,, auquel nous injectons, dans le péritoine, 
1 c. c. de culture filtrée de vibrion de Metchaikoff, présente 
uue hypoleucocytose très nette. D'autre part l'injection dans 
la cavité péritonéale, chez le cobaye G,, de 5 c. c. et, chez le 
lapin L, de 20 c. c. de cultures vivantes de B. mycoïdes, produit 
une hypoleucocytose beaucoup plus passagère et beaucoup plus 
faible que celle du cobaye E,, qui n'a recu pourtant que des 
produits bactériens sans microbes. 

La théorie de M. Werigo nous paraît trop exclusive. On sait 
que les poisons introduits dans l'organisme s'accumulent prin- 
cipalement dans le foie, la moelle des os, la rate *, et y sont 


4. Werico, Les globules blancs comme protecteurs du sang. (Ann. Inst. 
Pasteur, 1892.) 

2, Haxix ET KanTHACK, On the fever produced by injection of sterilized cultures 
of vibrio Metehnikovi. Proceed. of the Cambridge Phil. Soc., 1892. 

3. Communicalion faite par M. JEAN VERHOOGEX au Congrès de Physiologie de 
Liège, 1892. 


176 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


souvent détruits. Il en est probablement de même pour les 
poisons microbiens. Si ceux-ci sont réellement fixés dans ces 
organes, la rareté des leucocytes dans le sang est un résultat 
nécessaire de l’aftlux des globules blancs vers ces points. Lorsque 
les microbes restent vivants et continuent à sécréter des produits 
microbiens, les leucocytes sont retenus dans les organes : quand 
au contraire les bactéries sont détruites, les globules blancs repa- 
raîtront dans le sang dès que l'organisme se sera débarrassé 
des substances toxiques, et on les y retrouvera en nombre 
d'autant plus considérable que les produits bactériens eux- 
mêmes provoquent la multiplication de ces éléments, comme 
M. Rümer ‘ vient de le démontrer. Le peu d'importance de l’hypo- 
leucocytose produite par l'injection du B. mycoïdes se comprend 
par la non pathogénéité de ce microbe. 

Nos expériences nous permettent de confirmer ce qui a été 
signalé par divers auteurs relativement à la forme des leucocytes 
quiinterviennentsurtout dans le phénomène del'hypoleucocytose: 
ce sont les Icy. pm. dont la proportion décroît principalement. 

Chez les animaux qui survivent à l'injection, l'hypoleuco- 
cytose est passagère; elle est suivie d'hyperleucocytose. Chez les 
animaux qui succombent, elle persiste et en général elle s’accen- 
tue jusqu’au moment de la mort. 

Pourtant chez le lapin J, qui succombe au charbon et chez 
le cobaye A, qui meurt du tétanos, le sang contient peu de 
globules blancs, mais les Icy. pm. dominent parmi eux. — 
Le cobaye E, qui meurt du tétanos, présente, environ 12 heures 
avant la mort, de l'hypoleucocytose. Celle-ci disparait partielle- 
ment 7 heures avant la mort; le nombre des ley. est moins 
considérable à ce moment qu'avant l'injection, mais les Icy. pm. 
sont prédominants. Nous n’avonus pas pu étudier le sang de 
l’animal pris après la mort. — Quant au cobaye B,, il suecombe 
au charbon avec une hyperleucocylose très manifeste et une 
forte prédominance des Icy. pm. 


2. Hyperleucocytose. 
On constate l’augmentation du nombre des globules blancs 
dans tous les cas où l'animal survit à l'injection, aussi bien 


1. Fr. Roeuer, Die chemische Reizbarkeil der thierischen Zellen. NVirchow'’s 
An = Q 
Arcluv, 1892, 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 177 


lorsqu'on injecte des cultures chauffées à 100 (et contenant des 
miérobes morts) ou des cultures filtrées (dépourvues de microbes) 
que lorsqu'on injecte des cultures vivantes. L'hyperleucocytose 
a une durée et une intensité variables; elle est le plus accusée 
lors de l’injection de cultures virulentes ; au contraire lorsqu'on 
introduit dans l’organisme des microbes non pathogènes, comme 
le B. mycoïdes, la réaction est à peine marquée. Lors de la gué- 
rison, l'hyperleucocytose disparaît graduellement, et le sang 
reprend son élat normal, à moins que l'opération faite à l'animal 
n'ait suffi à lui donner l’immunité. Nous étudierons ultérieure- 
ment les caractères que conserve le sang dans ce cas. 

Pendant la phase d'hyperleucocytose, les différents leuco- 
cytes n’augmentent pas dans les mêmes proportions. Les Icy. 
pm. prennent la part la plus active dans ce phénomène, mais 
tout au commencement du stade d’hyperleucocytose, il n’est pas 
rare de voir abonder dans le sang les lcy. v. et les transitions 
entre les ley. v. et les lcy. pm. Dans un cas (cobaye N, Exp. 1x) 
nous avons observé l'augmentation considérable du nombre des . 
ley. pm. sans que la quantité totale des leucocytes fût accrue. 
Le lapin H, immunisé contre le charbon, et résistant à l'injection 
du Bacillus Anthracis, a présenté une légère hypoleucocytose 
pendant toute la durée de l'infection, mais il est à noter que le 
nombre des lcy. pm. était fortement augmenté par rapport à 
celui des autres leucocytes. 

Pendant le stade d’hyperleucocytose, les leucocytes se grou- 
pent souvent en amas. Ceux-ci sont formés tantôt par des Icy. 
réunis autour d'une masse centrale légèrement colorée par 
l'hématoxyline et ayant les caractères de ley. détruits, tantôt 
par un ensemble de ley. ayant tous conservé leurs caractères 
normaux. Ces accumulations sonttrès variables; parfois elles sont 
constituées par 20 à 40 cellules, parfois elles comprennent un 
nombre beaucoup plus considérable de lcy. Dans certaines pré- 
parations riches en globules blancs, les Icy. épars dans le 
sang sont très rares, tous sont groupés alors en masses consi- 
dérables très nombreuses. 

La succession régulière des phénomènes : hypoleucocytose, 
hyperleucocytose et retour à l’état normal, fait défaut chaque 
fois que l’animal succombe à l'inoculation des microbes. 

Lorsque la mort survient rapidement, le stade d'hyperleuco- 

12 


178 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


cytose manque complètement : le sang s’appauvrit en globules 
blancs jusqu’au moment de la mort. C’est ce que nous ont montré 
les animaux suivants : Cobaye J (Exp. 1v) qui succombe au 
vibrion de Metchnikoff après 12 heures; lapin C (Exp. vu) qui 
meurt du hog-choléra en 40 heures; lapin D (Exp. vnr) qui meurt 
du hog-choléra en 22 heures 1/2; lapin F (Exp. 1x) qui succombe 
au Staphylococcus pyogenes aureus après 40 heures; lapin J qui 
meurt du charbon en 20 heures. 

Quand la maladie infectieuse a une durée plus longue, les 
phénomènes ne se suivent pas avec la simplicité que nous 
venons de décrire. On observe alors des alternatives d'hypo- et 
d’hyperleucocytose. Iei encore, on peut se rendre compte du 
rôle prépondérant qui revient aux Iley. pm. : chaque stade 
d'hypoleucocytose est caractérisé par la rareté des lcy. pm.; 
chaque stade d'hyperleucocytose, par leur abondance. La réaction 
anormale que nous venons de signaler a été rencontrée chez les 
animaux suivants : cobaye F (Exp. mm), qui succombe au vibrion 
de Metchnikoff après 23 heures; cobaye O et cobaye B, (Exp. xn), 
qui succombent au deuxième vaccin charbonneux après 110 et 
115 heures; cobayes E, et A, (Exp. x), qui meurent du 
tétanos très peu virulent après 40 et 136 heures. 


B. — DirFrÉRENCES ENTRE LA RÉACTION DES ANIMAUX NEUFS ET CELLE 
DES ANIMAUX IMMUNISÉS. 


Le sang de l'individu vacciné se distingue toujours nette- 
ment de celui de l'animal neuf, quel que soit -du reste le mode 
de vaccination. Les cobayes À., B,, C., D, et M sont immunisés 
par l'injection de cultures chauffées de vibrion de Metchnikoff; 
le cobaye L est immunisé par des inoculalions répétées de 
vibrions de Metchnikoff vivants mais peu virulents; le lapin F 
est vacciné contre le hog-choléra par l'injection de sang prove- 
nant d'un lapin mort de cette affection; enfin le lapin H est 
rendu réfractaire au charbon par les vaccins pasteuriens. Le sang 
des animaux vaccinés renferme un nombre de ley. pm. qui est 
de beaucoup supérieur à celui qui existe chez l'animal neuf: 
le plus souvent d’ailleurs, ce sang contient plus de leucocytes 
de toutes les formes. Il semble que chez le vacciné, il persiste 
un certain degré d’'hyperleucocytose. 


2° Te 
2 UE 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 179 


L'injection de cultures filtrées de vibrion de Metchnikoff à 
des cobayes immunisés contre la septicémie aviaire détermine 
d'emblée l'hyperleucocytose sansstade d'hypoleucocytose ;remar- 
quons pourtant qu’une injection analogue, faite à des animaux 
neufs, n’a donné d'hypoleucocytose bien nette que chez un seul 
cobaye; chez un second, nous n’avons pas observé l’abaissement 
du nombre des leucocytes. Chez le lapin E, rendu réfractaire 
au hog-choléra, l'hypoleucocytose consécutive à l'injection de 
microbes vivants ne s’est peut-être pas produite; en tous cas, 
elle a été beaucoup plus passagère que chez le lapin neuf D. 
L'hypoleucocytose du lapin H, vacciné contre le charbon, a été 
beaucoup plus faible que chez le lapin neufJ, lors de l’inoculation 
à tous deux de microbes virulents du charbon. Remarquons en 
outre que l’hypoleucocytose globale du lapin vacciné a été accom- 
pagnée de l'élévation du nombre des ley. pm. 

En somme, il ressort de nos expériences, qui sont malheu- 
reusement trop peu nombreuses, que chez l'animal immunisé, 
l'hypoleucocytose qui suit l'injection de microbes ou de produits 
microbiens est moins accentuée que chez les animaux neufs. Si, 
comme nous le supposons, l’hypoleucocytose est due en partie 
à l'attraction qu’exercent sur les leucocytes les produits micro- 
biens accumulés dans le foie, la moelle des os, la rate, etc., on 
peut en déduire que la destruction de ces substances, dans les 
organes internes, est plus rapide et plus complète chez les indi- 
vidus vaccinés. 

Nous avons étudié quelle est l'influence de la vaccination 
contre un microbe déterminé sur la leucocytose provoquée par 
d’autres microbes. À un cobaye immunisé contre le vibrion de 
Metcknikoff (B,, Exp. xu) nous avons injecté des bacilles 
du charbon ; un autre (A,, Exp. xiu1) a reçu des bacilles du 
tétanos. L'évolution de la maladie et les modifications du sang 
ont été les mêmes chez les vaccinés et chez les témoins. Un fait 
important est à noter : au moment de la mort, les deux ani- 
maux vaccinésprésententune prédominance marquée desley.pm. 


C. — PHAGOCYTISME ET CHIMIOTAXISME CHEZ LES DIVERSES FORMES 
DE LEUCOCYTES. 
Les auteurs sont d'accord pour admettre que tous les leuco- 
cytes ne sont pas également aptes à englober les microbes ; ce 


180 ‘ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sont exclusivement les formes que nous désignons par ley. v. 
et par ley. pm. avec leurs transitions, qui jouissent de cette 
faculté ; encore faut-il en déduire les ley. pm. chargés de grosses 
granulations qui se colorent fortement par l’éosine (éosinophiles 
d'Ebrlich). Pour qu’un leucocyte puisse efficacement accomplir 
sa fonction de phagocvyte, il faut qu’il soit attiré vers les bacté- 
ries gràce à sa sensibilité à leurs produits de sécrétion. Pour 
étudier quels leucocytes sont attirés par les produits micro- 
biens, nous introduisons à des lapins, dans la cavité péri- 
tonéale, des ampoules ouvertes à l’une de leurs extrémités et 
renfermant une culture stérilisée à 100° de premier vaccin du 
rouget des pores. L’ampoule est retirée après 23 heures et son 
contenu fixé et coloré à la manière ordinaire : les ley. pm. à 
granulations faiblement colorées sont presque seuls représentés; 
quelques très rares lcy. m. 

Nous avons fait lamême expérience sur le lapin avecle premier 
vaccin Charbonneux. Dans une ampoule qui a séjourné 3 heures 
dans la cavité péritonéale, nous constatons que presque tous les 
globules sont des lcy. pm. à granulations peu colorées; il y a en 
outre quelques très rares Icy. v. — Dans une ampoule retirée 
après un séjour de six heures dans la cavité péritonéale, le 
nombre des leucocytes est plus considérable : les ley. pm. sont 
de beaucoup les plus fréquents; il y a aussi des ley. v. et quelques 
très rares. lcy. m. 

Comparons aux leucocytes qui ont pénétré dansles ampoules, 
ceux qui constituent le pus accumulé dans la cavité péritonéale 
du lapin D (Exp. vu), mort du hog-choléra : 

Lcy. pm. à granulations colorées, fortement prédominants. 

Lcy. v. et transitions entre ley. v. et lcy. pm. 

Lcy. m. manquent complètement. 

Nous avons trouvé du pus qui présentait les mêmes caractères 
dans le ventre d'un lapin qui avait reçu 35 em° de premier 
vaccin charbonneux. Cet animal a survécu. 

Chez les deux cobayes B, et O (Exp. xu) il s'était formé, 
après injection de deuxième vaccin charbonneux, de l’hydro- 
pisie et de l’œdème des parois abdominales. La sérosité de tous 
deux contenait, d'une façon prépondérante, des lcy. pm. 

Il ressort clairement de ces observations que les Icy. pm. 
sont beaucoup plus chimiotaxiques que tous les autres, Ce qui 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 181 


confirme encore cette manière de voir, c’est qu'eux seuls parti- 
cipent à la formation des amas que nous avons décrits antérieu- 
rement. Dans tous les cas que nous venons de citer, les ley: 
pm. sont chargés de granulations colorées ; mais ils ne sont pas 
comparables à ceux que M. Ehrlich appelle des éosinophiles : ils 
se rapprochent plutôt de ses amphophiles. 


D. — SPÉCIFICITÉ DES DIVERSES FORMES DE LEUCOCYTES. 


Pour distinguer les diverses espèces de leucocytes admises 
par plusieurs observateurs, on se fonde non seulement sur les 
structures variées qu'offre le noyau, mais encore et surtout sur 
la constitution intime du protoplasma. Cette différenciation 
repose sur une technique complexe : elle est basée sur l’avidité 
des granulations protoplasmiques pour telle ou telle matière 
colorante. Enfin, .on a essayé de classer les globules blancs sui- 
vant leur origine probable : rate, ganglions lymphatiques, moelle 
des os, etc. Il n’est pas possible actuellement d'établir l'accord 
entre ces diverses classifications : tel groupe de tel auteur ren- 
ferme des éléments qui appartiennent à plusieurs des groupes 
proposés par tel autre. 

L'étude à laquelle nous nous sommes livrés nous conduit à 
admettre qu’un même leucocyte peut présenter pendant le cours 
de son développement individuel toutes les formes qu’on ren- 
contre chez les animaux sur lesquels nous avons expérimenté. 
Les Icy. m. doivent être considérés, d’après nous, comme les 
cellules les plus jeunes. Leur noyau est compact et le protoplasma 
ne forme qu’une mince couche. — Plus tard, le noyau se gonfle 
uniformément dans toutes ses parties et le protoplasma devient 
plus abondant : l'élément prend ainsi graduellement l'apparence 
du ley. v. Mais les deux phénomènes, gonflement du noyau et 
accroissement de la couche protoplasmique, ne se passent pas 
nécessairement en même temps, et il n’est pas rare de rencontrer 
parmi les formes de transition entre Icy. m. et ley. v., à côté des 
cellules dont lenoyau est semi-vésiculeux et entouré d’une assez 
grande épaisseur de protoplasma, d’autres globules avec une 
quantité notable de protoplasma et un noyau encore compact, et 
d’autres à noyau déjà semi-vésiculeux mais à protoplasma très 
peu abondant. 


182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Les ley. v. ont un noyau arrondi, uniformément pâle, et un 
protoplasma homogène, peu coloré par l'éosine. — Mais ces 
individus typiques sont rares ; la transformation en ley. pm. 
commence bientôt: le noyau devient irrégulier: il prend la forme 
d'un haricot, d'un boudin, d’un fer à cheval; en même temps, il 
perd son homogénéité : certaines portions sont plus compactes 
que les autres; puis il se subdivise, et tandis que certains frag- 
ments sont encore pâles, d’autres sont déjà très avides de 
matière colorante. Quant au protoplasma, il devient rarement 
granuleux : dans la majorité des cas, il prend simplement un 
aspect un peu grumeleux, sans qu'il soit possible d’y distinguer 
les granulations rondes si fréquentes dans les ley, pm. 

Ces derniers ont un noyau compact, lobé ou fragmenté. Dans 
le protoplasma on trouve ou bien un fin réticulum irrégulier ou 
bien des granulations nettes. Nous considérons les leucocytes 
à protoplasma simplement réticulé comme dérivant immédiate- 
ment des ley. v. : ils seraient donc plus jeunes que les leucocytes 
à protoplasma granuleux. Les granulations fixent, à des degrés 
divers, les matières colorantes; par la méthode que nous 
employons, elles se colorent en lilas, en rose pâle ou en rouge 
foncé. Leur volume est très variable. Sans qu'on puisse établir 
un rapport constant entre leur grosseur et leur coloration, on 
peut dire cependant qu'en général les granulations les plus 
grosses sont celles qui absorbent le plus activement la matière 
colorante rouge. 

Nous avons donné antérieurement les raisons pour lesquelles 
nous ne croyons pas devoir admettre la spécificité des divers 
leucocytes basée sur les réactions colorées de leurs granula- 
tions. À ce propos, qu'il nous soit permis d'attirer l'attention 
sur les observations récentes d’après lesquelles le noyau des 
gonocytes mâles se colore en bleu et celui des gonocytes 
femelles, en rouge. M. Strasburger ‘ vient de montrer que si le 
noyau mâle se teint différemment du noyau femelle, cela tient 
non à sa sexualité mais bien à son état de nutrition. — N'’en 
serait-il pas de même pour les granulations des cellules migra- 
trices ? D’après ce que nous venons d’exposer, les ley. pm. sont 
adultes, bien nourris, aptes à accomplir les diverses fonctions 
qui leur sont dévolues : c’est eux qui sont le plus attirés par les 

1. E. SrraspurGer, Ueber des Verhalten des Pollens, etc. Iena, Fischer, 1892. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES, 183 


microbes et qui interviennentle plus largement dans la formation 
du pus; c’esteux qui disparaissent lors de l'hypoleucocytose et 
qui abondent dans le sang pendant l'hyperleucocytose. 

Les ley. pm. auraient donc parcouru tout le cycle de leur 
développement. Il n’est pas rare de rencontrer dans les prépara- 
tions des Icy. pm. qui se désagrègent : on voit alors que les 
noyaux ne sont plus aussi compacts que dans les globules blancs 
normaux ; quant aux granulations, qui sont souvent très grosses 
et très colorées, elles s’éparpillent autour du noyau. 

Il est très probable que tous les leucocytes n'arrivent pas 
jusqu'à ce stade ultime de leur développement. De même, nous 
ne pensons pas que tous les leucocytes soient déversés dans le 
sang sous la forme de ley. m. 


Y 
RÉSUMÉ ET CONCLUSIONS, 


L'injection de cultures microbiennes vivantes ou mortes 
détermine en premier lieu l’abaissement du nombre des leuco- 
cytes circulants, et surlout des leucocytes à noyau polymorphe, 
compact et à protoplasma granuleux. 

Lorsque l’animal résiste à l'infection, la période d’hypoleu- 
cocytose est suivie d’une phase pendant laquelle les leucocytes, 
principalement les leucocytes à noyau polymorphe, compact, et 
à protoplasma granuleux, sont très abondants; puis le sang 
reprend ses caractères normaux. 

La phase typique d’hyperleucocytose fait défaut chezles indi- 
vidus qui succombent à l'infection : tantôt elle manque complè- 
tement (lorsque la mort survient rapidement) ; tantôt elle est 
remplacée par une série d’oscillations (quand la maladie infec- 
tieuse se prolonge plus longtemps). 

Le sang de l'individu vacciné est plus riche en leucocytes, et 
particulièrement en leucocytes à /noyau polymorphe, compact, 
et à protoplasma granuleux, que le sang de l’animal neuf. 

Les diverses formes de leucocytes sont, à notre avis, des 
stades évolutifs d’une même cellule : le leucocyte le plus jeune 
est à noyau unique, compact et à protoplasma peu abondant ; 
puis le noyau devient vésiculeux et le volume du protoplasma 


184 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


augmente considérablement ; enfin, le leucocyte adulte, le plus 
capable d'exercer ses fonctions phagocytaires, possède un 
noyau polymorphe, compact, et un protoplasma chargé de gra- 
nulations. 


* 


* * 


Puisque dans le sang des animaux vaccinés prédominent les 
leucocytes adultes, les plus aptes au phagocytisme, il faut sans 
doute en conclure que, chez eux, les globules blancs passent 
rapidement par les phases successives de leur développement, 
de façon à atteindre plus vite le stade pendant lequel ils peuvent 
efficacement lutter contre les microbes. Les leucocytes de 
l’animal vacciné diffèrent donc de ceux de l’animal neuf, non 
seulement par l'éducation qu'ont subie leurs facultés chimiota- 
xiques ‘, mais encore par la vitesse de leur développement : ils 
deviennent plus rapidement adultes, et parvenus à cet état ils 
sont plus aptes à englober les microbes. 

Les leucocytes ont une vie des plus éphémères : ceux qui 
interviennent pour assurer l’immunité à l'animal réfractaire ne 
sont pas ceux-là qui ont été impressionnés lors de la vaccination, 
mais les descendants de ces derniers ; il faut en conclure que les 
Jeucocytes transmettent à leurs descendants les propriétés 
nouvelles qu'ils ont acquises. Alors que par ses cellules 
sexuelles, l'animal immunisé ne transmet pas l’état réfractaire, 
certaines de ses cellules somatiques conservent, à travers toute 
une série de générations cellulaires, asexuelles, Les caractères 
nouveaux que leur a fournis la vaccination. 

Mais ces propriétés sont soumises à la loi générale de l’évo- 
lution d’après laquelle toute fonction inutile tend à disparaître : 
aussi pour que l’économie garde son immunité, est-il indispen- 
sable de procurer de temps en temps aux leucocytes l’occasion 
d'exercer leur phagocytisme exalté. 


Les recherches exposées dans ce mémoire ont été poursuivies 
dans divers laboratoires : les expériences ont été faites à l’Institut 
Pasteur et à l’Institut botanique de Bruxelles ; l'examen des 


1. JEAN Massarr, Le chimiolaxisme des leucocytes et l'immunité (Ann. Inst. Pas- 
teur, 1892). 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 185 


préparations se faisait à l’Institut botanique et à l’Institut de 
physiologie de Bruxelles. 


VI 


EXPLICATION DE LA PLANCHE. 


Fig. 4 à 4. — Leucocytes à noyau unique, compact, — à prolo- 
plasma clair, peu abondant. 

Fig. 5. — Leucocyte à noyau vésiculeux, — à protoplasma trouble, 
peu abondant. 

Fig. 6 et 7. — Leucocytes à noyau vésiculeux, — à protoplasma 
trouble, abondant. 

Fig. 8 à 10. — Leucocytes à noyau vésiculeux, de forme variable, 
— à protoplasma trouble, abondant. 

Fig. 11. — Leucocyte à gros noyau semi-vésiculeux, — à proto- 
plasma clair. 

Fig. 12. — Leucocyte à noyau semi-vésiculeux, — à protoplasma 
grumeleux, se colorant par l’hématoxyline. 

Fig. 13 et 14. — Leucocytes à noyau semi-vésiculeux, — à proto- 
plasma grumeleux, se colorant par l’éosine. 

Fig. 15 et 16. — Leucocytes à noyau compact, presque régulier, 


— à protoplasma grumeleux ou granuleux, se colorant par l’éosine. 
Fig. 17 à 23. — Leucocytes à noyau compact, très irrégulier ou 
fragmenté, — à protoplasma granuleux, se colorant par l’éosine. 
Fig. 24 à 26. — Leucocytes à noyau compact, irrégulier ou frag- 
menté, — à protoplasma contenant de grosses granulations très 
colorées. 


VII 


PROTOCOLE DES EXPÉRIENCES. 


Dans les tableaux suivants, les termes « augmentation et 
diminution du nombre des ley. » indiquent les variations de ce 
nombre par rapport à la préparation qui précède immédiatement 
celle qui est décrite. 


186 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


IMMUNISATION ET INFECTION 


Expérience 1. — 8 novembre 1892. 


CoBaye A, de 1,130 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 

Nombre de ley. normal. 

Ley. pm. Un grand nombre ont beau- 
coup de granulations fortement colo- 
rées. 

Ley. formant transition entre Icy. m. 
et ICy. v. — Aussi nombreux que les 
précédents. 

Lcy. m. 

Lcy. v. 

L'animal recoit sous la peau 5 cm? de 
culture de vibrion de Metchnikoff, ägée de 
4 jours et stérilisée a 1000. 

2. — Sang pris 1 heure après l'injection. 

Très légère augmentation de tous les 


ley. 


3. — Sang pris 2 heures apres l’injection. 

Légère augmentation des 1cy. por- 
tant surtout sur les 1cy. pm. On trouve 
beaucoup de stades de transition entre 
Icy. v. etlcy. pm. 


4. — Sang pris 19 heures aprés l'injection. 

Le nombre des lcy. a encore légère- 
ment augmenté. 

Ley. pm. prédominent fortement; 
beaucoup d’entre eux ont de grosses 
granulations protoplasmiques très colo- 
rées, 

Lcy. v. rares. Les transitions entre 
lcy. et ley. pm. ont disparu. 


5. — Sang pris 25 heures apres l'injection. 
Le nombre des Icy. a augmenté, 
Ley.pm. prédominent manifestement. 
Lcy. m. assez nombreux. 


6. — Sang pris 49 heures aprés l'injection. 
Légère diminution des ley. 
Les ley. v. avec transition entre Icy. 
m. et ley. v. et entre lcy. v. et lcy. pm. 
dominent. 


Cogaye B, de 750 grammes. 


1. — Sang pris à l'animal normal. 

Le nombre de ley. est plus grand que 
d'ordinaire. 

Lcy. pm., Ilcy. v. et lcy. m. sont 
également représentés. Quelques Iey. 
pm. ont de grosses granulations très 
colorées. 


- L'animal reçoit sous la peau 5 em? de 
culture de vibrion de Metchnikoff àgée de 
4 jours et stérilisée a 1000. 

2, — Sang pris À heure aprés l'injection. 

Diminution très marquée du nombre 
global des ley. 

Il reste quelques ley. v. et quelques 
très rares ley. pm. 

Il n’y a plus de Iey. m. ni de ley. 
pm. à granulations colorées. 
3. — Sang pris 2 heures apres l'injection. 

Le nombre global des Icy. a augmenté 
légèrement. | 

Ley. pm. prédominent. 

Ley. v. et Icy. m. 


4. — Sang pris 19 heures apres l’injection. 
Le nombre des Icy.a augmenté mais 
n’a pas encore atteint le même chiffre 
que dans le sang normal. 
Ley. pm. existent presque seuls. 
Ley. v. rares. 


5. — Sang pris 25 heures aprés l'injection. 
Même état que dans la préparation 
précédente, 


6.— Sang pris 49 heures apres l'injection. 
Le nombre des ley. est égal à celui de 
la préparation 1. 
Ley. pm. prédominent. 
Lcy. v. rares. 
Lcy. m. très rares. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 187 


PAR LE VIBRION DE METCHNIKOFF 


Expérience 1. — 8 novembre 1892. 


Cosaye C, de 850 grammes. 


1. — Sang pris à l'animal normal. 

Le nombre de ley. est normal. 

Ley. faisant transition entre Icy. m. 
et lcy. v. 

Ley. pm. 

Lcy. v. 

Quelques ley. pm. à granulations très 
grosses et très colorées. 


L'animal reçoit sous la peau 3,5 cm3 de 
vibrion de Metchnikoff ägèe de 4 jours et 
stérilisée à 1000, 


2. — Sang pris 1 heure apres l'injection. 

Diminution du nombre des Icy. 

il y a presque exclusivement des ley. 
formant transition entre ley. m, et ley. 
V. 
Ley. v. 

Ley. pm. très rares. 
9. — Sang pris 2 heures aprés l’injection. 

Augmentation assez considérable du 
nombre des ley. 

Les diverses formes deley. se retrou- 
vent dans les mêmes proportions que 
dans la préparation précédente. 


4. — Sang pris 19 heures aprés l’injection. 
Le nombre des lcy. a augmenté. 
Lcy. pm. prédominent; beaucoup 

d'entre eux à protoplasma granuleux 

très coloré. 
Ecy. m. 
Ley. v. 


5. — Sangpris 25 heures après l’ingection. 

Très forte augmentation du nombre 
des Iey. 

Lcy. pm. et transitions entre lcy. 
v. et Icy. pm. existent presque seuls. 
Quelques-uns d’entre eux à grosses 
granulations colorées. 

Ley. m. et lcy. v. très rares. 


6. — Sang pris 49 heures apres l'injection. 
Ley. extrèmement nombreux. 
Lcy. pm. prédominent beaucoup. 
Lcy. m. et transitions vers lcy. v. ont 
augmenté par rapport à la préparation 
précédente. 


Copaxe D, de 1,020 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 
Mèêmes caractères que le sang 1 du 
cobaye CG, avec un peu moins de ley. v. 


w 


L'animal reçoit sous la peau 5 em? de 
vibrion de Melchnikof], ägée de 4 jours 
et stérilisée à 1000. 


2. — Sang pris À heure apres l'injection. 
Augmentation du nombre des lcy. 
Lcy. pm. Quelques-uns ont des gra- 

nulations très grosses et fortement 

colorées. 
Ley. v. 


3. — Sang pris 2 heures aprés l'injection. 
Augmentation du nombre des ley. 
Presque tous sont lcy. pm. 

Quelques rares stades de transition 

entre ley. m. et ley. v. 


4. — Sang pris 19 heures aprés l'injection. 
Mèêmes caractères que le sang n° 5. 


5. — Sangpris 25 heuresaprés l'injection. 
Le nombre des ley. est légèrement 

inférieur à celui de la préparation 4. 
Lcy. pm. existent presque seuls. 


6. — Sang pris 49 heuresaprés l'injection. 

Lcy. aussi nombreux que dans pré- 
paration 1. 

Lcy. pm. prédominent. Beaucoup 
d’entre eux sont réunis, en nombre va- 
riable, autour de masses faiblement 
colorées par l’hématoxyline. 

Ley. m. rares. 


188 


CoBaÿE A, 


7. — Sang pris 15 heures apres l'injection. 
Le sang a repris les caractères du 
sang de la préparation 1. 


8. — Sang pris 97 heures aprés l’injeclion. 
Même nombre global de ley. que dans 
préparation 7. 
Lcy. v. augmentés par rapport à la 
préparation précédente. 


Injection sous -culanée de 8 cm3 de cul- 
ture de vibrion de Metchnikoff, àâgée de 
T jours et chauffée à 1000. 

9. — Sang pris 6 minutes apres 

la 22 injection. 

Diminution du nombre des Icy. 

Ley. v. et transition entre lcy. m. et 
ICy. v. prédominent manifestement. 

Lcy. pm. rares. 


10. — Sang pris 93 minutes apres 
la 2e injection. 
Nombre et caractères des lcy. comme 
dans la préparation précédente. 


11. — Sang pris 55 minutes apres 
la 2e injection. 
Diminution considérable du nombre 
des Icy. 
Ley. m. et transitions vers ley. v. 
Ley. v. 
Ley. pm. 


12. — Sang pris 2 heures apres 
la 2 injection. 

Forte augmentation du nombre des 
Icy: 

Ley. pm. prédominent manifeste- 
ment. 

Lcy. m, 

Lcy. v. rares. 


13. — Sang pris 3 heures apres 
la 2° injection. 
Même nombre:global de ley. que dans 
le sang de la préparation 12. 
Légère augmentation des Icy. m. et 
des transitions vers ley. v. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience 1 (suite). 


CoBaye B, 


7. — Sang pris T5 heures aprés l'injection. 


Le nombre des Iley. a légèrement 
augmenté. 

Lcy. v. prédominent. 

Lcy. pm. un peu moins nombreux. 

Lcy. m. absents. 


8. — Sang pris 97 heures aprés l’injection. 

Nombre des Icy. égal à celui de la 
préparation 7. 

Les ley. m. prédominent d’une façon 
très marquée. 

Lcy. pm. et Icy. v. en nombre égal. 

Injection sous-cutanée de 5 cm? de culture 
de vibrion de Metchnikoff, agée de T jours 
et chauffée à 1000. 

9. — Sang pris 6 minules aprés 

la 2e injeclion. 

Diminution légère du nombre des 
lcy. 

Ley. v. et Icy. pm. en nombre ëgal. 

Ley. m. rares. 


10. — Sang pris 25 minules apres 
la 2e injection. 
Le nombre global est le même que 
dans la préparation 9. 
Il y a presque uniquement des tran- 
sitions entre ley. m. et Icy. v. 
Ley. pm. très rares. 


11. — Sang pris 55 minules après 
la 2 injection. 
Diminution très considérable du 
nombre des Icy. 
Ley. v. 
Ley. pm. 


12. — Sang pris 2 heures apres 
la 2e injection. 
Le nombre des Ilcy. a légèrement 
augmenté. 
Ley. pm. prédominent. 
Ley. v. rares. 


43. — Sang pris 3 heures aprés 
la 29 injection. 
Mèmes nombre et caractères que dans 
la préparation 12. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 


8 novembre 1892. 


Copave C,. 


7. — Sang pris 15 heures apres l'injection. 
Diminition légère du nombre des ley. 
Mèmes caractères que sang de la pré- 

paration 6. 


8. — Sang pris 97 heures apres l'injeclion. 
Le nombre des Iley. a légèrement 
augmenté. 
Ley. pm. nombreux. Beaucoup d’entre 
eux à grosses granulations colorées. 


Injection sous-culance deG cm3 de culture 
de vibrion de Metchnikoff, âgée de 7 jours 
et chauffée a 1000. 


9. — Sang pris 6 minules apres 
la 2e injection. 
Ley. nombreux. 


Ley. m. et transition vers ley. v. 
prédominent. 
40. — Sang pris 25 minules apres 


la 28 injection. 
Nombre global des lcy. diminué. 
Les caractères sont identiques à ceux 
de la préparation 9. 


11. — Sang pris 55 minutes apres 
la 2e injection. 
Diminution du nombre des 1cy. 


19. — Sang pris 2 heures apres 
Ik injection. 
Diminution considérable du nombre 


des Iey. 
Lcy. pm. 
Ley. v 
13. — Sang pris 3 heures apres 


la 2 injection. 

Augmentation très notable du nom- 
bre des lev. 

Lcy. pm. prédominent fortement. 

Beaucoup d’entre eux à grosses gra- 
nulations colorées. 

Lcy. m. et transitions vers | Icy. V. 
rares. 


189 


Copaye D, 


1.— Sang pris 15 heures apres l'injection. 
Le nombre des Icy. a de nouveau 
augmenté. 
Lcy. pm. prédominent. 
Ley. v. sont assez nombreux. 


8. — Sang pris 97 heures aprés l'injection. 

Beaucoup de Iey. 

Ley. pm. ettransitions entre lcy. v. et 
lcy. pm. très nombreux. Beaucoup 
d’entre eux ont un protoplasma très 
granuleux et très coloré. 

Ley. m. et transitions vers Icy. v. 

Injection sous-cutanée de T cm3 de cul- 
ture de vibrion de Metchnikoff, âgée de 
7 jours et chauffée à 1000, 


9. — Sang pris 6 minutes apres 
la 28 injection. 
Nombre et caractères des lcy. comme 
dans la préparation précédente. 


10. — Sang pris 25 minutes 
la 22 injeclion. 
Nombre des ley. resté le mème. 
Ley. pm. prédominent. Beaucoup 
d’entre eux à grosses granulations bien 
colorées. 


Ley. m., 


apres 


Icy. v. avec transitions. 


11. — Sang pris 55 minutes apres 
la 2e injection. 
Le nombre des lcy. n’a pas changé. 
Ley. pm. dominent. Beaucoup d’entre 
eux à granulations fortement colorées. 
-Ley. v. 
Ley. m. avec transitions vers lcy. v. 


12. — Sang pris 2 heures aprés 
la 2e injection. 
Le nombre des ley. est augmenté. 
Lcy. pm. Quelques-uns à granula- 
tions-‘colorées. 
Ley. m:- 
Lcy. v. très rares. 


43. — Sang pris 3 heures apres 
la 2e injection. 
Mème nombre de Icy. que dans le 
sang de la préparation 12. 
Lcy. pm. existent presque seuls. 


190 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


CoBaxE À, 


14. — Sang pris 7 heures 4,4 apres 
la 2 injection. 
. Augmentation du nombre des lcy. 
Ley. pm. existent presque seuls. 


45. — Sang pris 19 heures 1/2 apres 
la 20 injection. 
Idem. 


16. — Sang pris 51 heures apres 
la 22 injection. 

Le nombre global des Icy. diminue 
égèrement. 

Ley. pm. prédominent. 

Lcy. formant transition entre Icy. m. 
et Icy. v. 

17. — Sang pris 68 heures après 
la 28 injection. 

Diminution du nombre des Icy. Ce- 
pendant ils sont plus nombreux que 
dans la préparation 1. 

- Ley. pm. prédominent. 

Ley. m. 

Ley. v. 


CoBayE A. 


Le cobaye À, de l'expérience précédente 
qui a élé immunisé par une premiére in- 
jection fuile le 8 novembre et par une se- 
conde fuile le 12 novembre, reçoit le 15 no- 
vembre, dans la cavité péritonéale, 
4,5 cm3 de culture filtrée, mais non 
chauffée de vibrion de Metchnikoff, âgée 
de 4 jours. — Ce cobaye est dorénavunt 
désigné par A. 

4.— Sang pris 20 minutes apres l'injection. 

Le nombre des Icy. est légèrement 
supérieur à celui du sang avant l’injec- 
tion. (Voir prép. 17 Exp. 1.) 

L'augmentation porte surtout sur les 
lcy. pm, 


2, — Sang pris ? heures apres l'injection. 
Très forte augmentation du nombre 
des Icy. 
Lcy. pm. prédominent fortement. 
Ley. m. etlcy. v. peu nombreux. 


Expérience L (suite). 
CoBayE B, 
14. — Sang pris T heures 1/4 aprés 
la 2e injection. 
Mêmes nombre et caractères que dans 
la préparation 12. 


15. — Sang pris 19 heures 1/2 aprés 
la 2e injeclion 
Idem. 


16. — Sang pris 31 heures aprés 
la 2e injeclion. 
Le nombre global des ley. a légère- 
ment augmenté. 
Ley. pm. de plus en plus prédomi- 
nants. 


17. — Sang pris 68 heures apres la 
20 injechon. 
Nombre considérable de ley. 


Lcy. pm. prédominent, quelques-uns. 


avec granulations colorées. 
Ley. m., ley. v. et transitions, 


Expérience IL. 
CopayE B.. 


Le cobaye B, de expérience préce- 
dente qui a èlé immunisé par une pre- 
mière injection faite le 8 novembre et par 
une seconde fuile le 12 novembre, reçoit le 
45 novembre, sous la peau de la cuisse, 
4 cm3 de culture vivante de vibrion de 
Metchnikof], âgée de 4 jours. — Ce cobaye 
est dorénavant désigné par B,. 


1.—Sang pris 20 minutes apres l’énjection. 
Le nombre global des Icy. est le même 
qu'avant l'injection. (Voir prép. 17. 
Exp. 1.) 
Le nombre des Iey. pm. a diminué 
légèrement. 


2. — Sang pris 2 heures apres l’injection. 
Mêmes nombre et caractères que dans 
le sang de la préparation 1. 
Il y a quelques Icy. pm. réunis en 
amas, 


De 


MODIFICATIONS 


S novembre 1892. 
CoBayE C, 


14, — Sang pris T heures 1/4 apres 
la 20 injection. 


Mêèmes nombre et caractères que 
dans la préparation 13. 
15. — Sang pris 19 heures 1/2 aprés 


la 2e injection. 

Ley. extrêmement nombreux. 

Ley. pm. prédominent fortement; 
beaucoup d’entre eux ont des granula- 
lations très colorées. 

Ley. m. et transitions vers ley. v. 

Ley. v. 

16. — Sang pris 31 heures aprés] 
‘lu 2e injection. | 
Idem. 


17.— Sang pris 68 heures apres l'injection. 
Nombre des ley. légèrement diminué. 
Lcy. pm. prédominent, 

Ley. v., ley. m. et transitions. 


15 novembre 1892, 
Copaye C,. 


Le cobaye C, de l'expérience précédente 
qui & élé immunisé par une premiere in- 
Jeclion faite le 8 novembre, et par une 
seconde faite le 12 novembre, recoit le 
15 novembre, sous la peau de Ja cuisse, 
1 cm3 de culture filtrée mais non chauf- 
fée de vibrion de Metchnikoff, àgée de 
4 jours. Ce cobaye est dorénavant désigné 
par C,. 


1.—Sang pris20 minutes aprés l'injection. 

Le nombre des Icy. est supérieur à 
celui du sang pris avant l'injection. 
(Voir prép. 17. Exp. 1.) 

Lcy. pm. existent presque seuls. 
Quelques rares Icy. pm. à granulations 
colorées. Beaucoup de ley. pm. réunis 
en amas. 

Lcy. m., lcy. v. et transitions. 

2. — Sang pris 2 heures aprés l'injection. 

Mêmes caractères que le sang de la 
préparation 4. 


DES LEUCOCYTES. 


191 


Cosave D, 


1%. — Sang pris 7 heures 1/4 aprés 
l'injection. 
Mèmes nombre et caractères que 
dans la préparation 13. 
15. — Sang pris 19 heures 1/2 apres 
la 2 injection. 
Ley. très nombreux. 
Ley. pm. à protoplasma granuleux 
très coloré existent seuls, 


16. — Sung pris 31 heures apres 
la 2e injection. 
Forte augmentation du nombre des 
Icy. 
ne pm. prédominent. Il y a beau- 
coup d'amas formés de 20 à 50 Icy. pm. 
Ley. v. 


17.—Sang pris 68 heures apres l'injeclion. 
Mêmes nombre et caractères que dans 
la préparation 16. 


Copaye D. 


Le cobaye D, de l'expérience précédente 
qui a élé immunisé par une premiére 
injection faite le 8 novembre et par une 
seconde faile le 12 novembre, reçoit le 
15 novembre, dans la cavité péritonéale, 
1,5 cm3 de culture vivante de vibrion de 
Metchnikof} âgée de 4 jours. Ce cobaye est 
dorénavant désigné par D,. 


1.— Sang pris 20 minutes après l'injection. 
Le nombre des ley. est de beaucoup 
inférieur à celui du sang pris avant 
l'injection. (Voir prép. 17. Exp. I.) 
Ley. pm., lcy. m. et transitions vers 
lcy. v. également nombreux. 


2, — Sang pris 2 heures aprés l'injection. 
Très forte augmentation du nombre 
global des Icy. 
Tous les ley. sont pm., beaucoup 
d’entre eux avec de grosses granula- 
tions colorées, 


19 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


CoBaYE A,. 
3. — Sang pris 3 heures apres l’injeclron. 
Légère diminution du nombre des 
ley. 
La prédominance des Icy. pm. se 
maintient. 


4. — Sang pris 4 heures apres l'injection. 

Légère augmentation du nombre 
des ley. 

Ley. pm. prédominent; beaucoup 
d’amas de ley. pm. 

Lcy. m. et ley. v. 

ll existe dans le sang quelques grands 
lcy. avec un gros noyau vésiculeux 
réniforme. 

5. — Sang pris 5 heures apres l’injection. 

Idem. 

6. — Sang pris 6 heures apres l'injection. 

Augmentation du nombre des Icy. 

Lcy. pm. existent seuls. 


7. — Sang pris 7 heures aprés l'injection. 
Idem. 


8. — Sang pris 12 heures aprés l'injection. 
Même nombre global de Icy. 
Ley. pm. prédominent. 
Ley. m. et lcy. v. assez nombreux. 


9. — Sangpris 22 heures après l'injection. 
Légère diminution du nombre des Icy. 
Elle porte surtout sur les lcy. pm. qui 

pourtant prédominent encore. 


10.— Sang pris 26 heures apres l'injection. 
Diminution du nombre des ley. 
Ley. pm. prédominent légèrement. 
Ley. m. et Icy. v. assez nombreux. 


41.— Sang pris 31 heures apres 
l'injection. 
Le sang a repris les caractères qu’il 
avait avant l'injection. (Voir prépara- 
tion 17. Exp. I.) 


Expérience IT (suite). 


CoBayE B,. 
3. — Sang pris 3 heures aprés l’inection. 
Le nombre des ley. est fortement aug- 
menté. 
Ley. pm. extrêmement nombreux. 
Ley. m. et ley. v. très rares. 


&. — Sang pris 4 heures aprés l'injection. 
Mêmes nombre et caractères des Icy. 
que dans la préparation précédente. 
En outre, quelques très gros amas 
formés de 20 à 40 ley. pm. et beaucoup 
de petits amas formés de 4 à 12 Icy. pm. 


5. — Sang pris5 heures aprés l'injection. 
Idem. 

6.— Sang pris 6 heures apres l'injection. 
Idem. 


1.— Sang prisT heures après l'injection. 
Mème nombre de ley. 
Ley. pm. très nombreux, beaucoup 
d’entre eux réunis en amas. 
Ley. m. et ley. v. très rares. 


8. — Sang pris 12 heures apres l’injeclion. 
Légère diminution du nombre des ley. 
Lcy. pm. prédominent. 

Ley. v. assez nombreux. 


9.— Sang pris 22 heures apres l'injection. 
Idem. 


40.— Sang pris 26 heures apres l'injection. 

Mëme nombre de ley. que dans le 
sang de la préparation 8. 

Ley. pm. prédominent. 

Ley. v. assez nombreux. 

Ley. m. rares. 

411. — Sang pris 31 heures apres 
l'injection. 

Le nombre des ley. est légèrement 
diminué. 

Ley. pm. prédominent. 

Ley. m. assez nombreux. 

Lcy. v. très rares. 


1 
| 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 


45 novembre 1892. 


CoBaye C,. 

3. — Sang pris 3 heures aprés l’injeclion. 
Augmentation du nombre des ley. 
Ley. pm. très nombreux, beaucoup 

d'entre eux avec granulations très 

rouges. 
Lcy. m. et Icy. v. très rares. 

4. — Sang pris heures aprés l’injection. 
Légère diminution du nombre des ley. 
Ley. pm. prédominants. Assez nom- 

breux amas de ley. pm. 


®. — Sang pris 5 heures apres l'injection. 

Idem. 

6. — Sang pris 6 heures apres l'injection. 

Légère diminution du nombre des 
lcy. qui sont pourtant encore très 
nombreux. 

Ley. pm. existent presque seuls. 

Lcy. v. très rares. 

7. — Sang pris T heures apres l'injection. 

Augmentation forte du nombre des 
ley. 

Lcy. pm. très nombreux; quelques- 
uns à granulations protoplasmiques 
très colorées. Beaucoup d’amas de 
lcy. pm. 

8.— Sang pris 12 heures aprés l’injection. 

Légère diminution du nombre des 
lcy. 

Lcy. pm. fortement prédominants. 

Ley. m., lcy. v. et transitions. 

9. — Sang pris 22 heures aprés l’injection. 

Même nombre de Icy. que dans pré- 
paration 7. 

Lcy. pm. nombreux, dont beaucoup 
à protoplasma granuleux, coloré. 

Lcy. m., ley. v. et transitions. 

10. — Sang pris 26 heures aprés l'injection. 

Mêmes nombre et caractères des lcy. 
que dans la préparation 9. En outre 
quelques amas de lcy. pm. 


A1. — Sang pris 31 heures apres 


l'injection. 
Légère diminution du nombre des Icy. 
Lcy. pm. prédominent; beaucoup 


d’entre eux avec de grosses granula- 
tions colorées. 
Ley. m. et lcy. v. assez nombreux. 


193 


CoBayE D,. 
3.— Sang pris 3 heures apres l’injection. 
Le nombre global des ley. est resté le 
même. 
Ley. pm. fortement prédominants. 
LeT. v 


4. — Sang pris 4 heures aprés l’injection. 
Même nombre de Icy. que dans la 
préparation précédente. 
Ley. pm. existent presque seuls. 
Beaucoup d’entre eux ont un proto- 
plasma granuleux très coloré. 
Lcy. v. très rares. 


5. — Sang pris 6 heures apres l'injection. 
Idem. 

6. — Sang pris 3 heures aprés l’injection. 
Idem. 


7. — Sang pris? heures apres l'injection. 

Le nombre des lcy. a beaucoup aug- 
menté. 

Lcy. pm. existent presque seuls, 
souvent réunis en amas. 

Lcy. m. et ley. v. très rares. 


8. — Sang pris 12 heures apres l'injection. 
Idem. 


9. — Sang pris 22 heures après l'injection. 
Légère diminution du nombre desley. 
Ley. pm. prédominent. 

Lcy. m. assez nombreux. 
Ley. v. très rares. 


10. — Sang pris 26 heures apres l’injection. 
Mêmes nombre et caractères des ley. 
que dans la préparation 9. 
En outre beaucoup d’amas de lcy.pm. 


A1. — Sang yris 31 heures après 
l'injection. 
Diminution du nombre des Icy. 
Ley. pm. nombreux, souvent réunis 
en amas. 
Ley. m. et Icy. v. 


13 


CoBAYE A. 
49. — Sang pris 51 heures apres 
l'injection. 
Llem 
13. — Sang pris T8 heures apres 
l'injection. 
Idem. 


Cosaye E, de 820 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 

Nombre normal de lcy. 

Lcy. pm. prédominent légèrement. 

Quelques-uns avec granulations forte- 
ment colorées. 

Ley. m. et formes de transition vers 
lcy. v. presque aussi nombreux que les 
Icy. pm. 

Ley. v. peu abondants. 

L'animal reçoit sous la peau de la 
cuisse À cm3 de culture filtrée mais non 
chauffée de vibrion de Metchnikoff ägée 
de 4 jours. 


2. — Sang pris 20 minutes aprés 
l’anjection. 

Diminution du nombre des ley. 

Lcy. m. et transitions vers lcy. v. 
prédominent. 

Ley. v. assez nombreux. 

Lcy. pm. rares, quelques très rares 
amas de lcy. pm. 


3. — Sang pris 1 heure aprés l'injection. 

Le nombre des lcy. a légèrement aug- 
menté, il est pourtant plus faible que 
dans préparation 1. 

Lcy. formant transition entre Icy. m 
et Icy. v. 

Lcy. pm, dont beaucoup à grosses 
granulations colorées. 

Ley. m. 
4, — Sang pris 2 heures apres l'injection. 

Légère augmentation du nombre des 
Icy. 

Ley pm. prédominent, quelques-uns 
avec granulations colorées. 

Lcy. v. 

Lcy. m. rares. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience IT (suite). 
CoBaye B.. 
12. — Sang pris 51 heures aprés 


l'injection. 
llem. 


43. — Sang pris 18 heures aprés 
l'injection. 
Nombre et caractères des lcy. comme 
avant l’injection. (Voir prép. 17. Exp. L.) 


Expérience LIL. 
Cosaye F de 850 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 

Nombre normal de ley. 

Ley. pm. 

Lcy. m. et formes de transition vers 
CYR 

Lcy. v. 


L'animal reçoit sous la peau de la 
cuisse À cn3 de culture vivante de 
vibrion de Metchnikoff, âgée de 4 jours. 


2. — Sang pris 20 minutes apres 
l'injection. 
Augmentation légère du nombre des 
lcy. 
Ley. m. et lcy. v. prédominent. 
Lcy. pm. assez rares, quelques-uns 
réunis en amas. 


3. — Sang pris À heure après l'injection. 
Idem. 


4. — Sang pris 2 heures apres l’injection. 
Augmentation légère du nombre des 
lcy. 
Ley. pm.prédominent manifestement. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES, 


15 novembre 1892. 
CoBaye C;, 
42. — Sang pris 51 heures apres 
l'injection. 
Légère diminution du nombre des 
lcy. 

Mêmes caractères que dans le sang 
avant l'injection. (Voir prép.17. Exp. I.) 
43. — Sang pris 78 heures apres 
l’injection. 

Idem. 


15 novembre 1892. 


Copaye G, de 850 grammes. 


4. — Sang pris à l’animal normal. 

Nombre normal de Icy. 

Ley. pm. dont beaucoup à granula- 
tions très colorées. 

Ley. v. et transitions entre Icy. m. 
et ICy, v. \ 

Lcy. m. 


L'animal reçoit dans la cavité périto” 
néale 4 cm3 de culture filtrée mais 
non chauffée de vibrion de Metchnikoff, 
ägée de 4 jours. 

2. — Sang pris 20 minutes apres 
l'injection. 

Augmentation légère du nombre des 
lcy. 

Ley. pm. prédominent. 

Lcy. v. assez abondants. 

Pas de Icy. m. 


3. — Sang pris À heure aprés l'injection. 
Augmentation du nombre des ley. 
Tous sont 1cy. pm. 


4, — Sang pris 2 heures après l'injection. 
Ley. en nombre égal à celui de la 
préparation précédente. 
Ley. pm. existent presque seuls. 
Lcy. v. très rares. 


195 


CoBaye D,. 


42. — Sang pris 51 heures apres 
l'injection. 
Diminution du nombre des ley. 
Ley. pm. prédominent. 
Lcy. m. assez abondants. 
Ley. v. un peu moins nombreux. 


143. — Sang pris 18 heures apres 
l'injection. 
Légère diminution portant également 
sur les divers Icy. 
Le nombre global est pareil à celui 
du sang avant l'injection. (Voir. prép. 47. 
Exp. 1.) 


Cosaye H de 490 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 

Nombre normal de lcy. 

Ley. pm. et ley. m. également abon- 
dants. 

Ley. v. et transitions entre Icy. m. 
et Icy. v. 


L'animal reçoit dans la cavité périto- 
néale 0,7 cm3 de culture vivante de 
vibrion de Metchnikoff, àgée de 4 jours. 


9. — Sang pris 20 minules apres 
l'injection. 

Diminution très notable des Icy. 

Lcy. m. prédominent. 

Lcy. pm. rares. 

Lcy. v. très rares. 


3. — Sang pris 1 heure aprés l'injection. 
Très légère augmentation des ley._ 
Lcy. m. et transitions vers lcy. v. 

prédominent. 

Lcy. pm. assez fréquents. 


4. — Sang pris 2 heures aprés l'injection. 
La préparation manque. 


196 


CoBaye E, 


5. — Sang pris 3 heures apres l'injection* 

Même nombre global de Icy. 

Lcy.. pm. prédominants, beaucoup 
d’entre eux à grosses granulations co- 
lorées. 

Lcy. v. assez rares. 

Lcy. m. très rares. 


6. — Sang pris 4 heures apres l'injection. 
! Mêmes nombre et caractères des Icy. 
que dans la préparation 5. 

En outre quelques amas de Icy. pm. 


7. — Sang pris 5 heures aprés l'injection. 

Assez forte augmentation du nombre 
des Icy. 

Lcy. pm. prédominants, beaucoup 
d’entre eux avec granulations très 
colorées. 

Lcy. m., Icy. v. très rares. 


8. — Sang pris 6 heures après l’injeclion. 
Idem. 


9.—"Sang pris A1 heures aprés l'injection. 
: Augmentation du nombre des Iey. 

Mêmes caractères que dans prépara- 
tion 8. 


40. — Sang pris 21 heures apres 
l'injection. 
Lenombredes lcy.aencoreaugmenté. 
Ley.pm.très prédominants et formant 
souvent des amas. 
Lcy. m. assez nombreux. 
Lcy. v. rares. 


41. — Sang pris 25 heures apres 
l'injection. 
Diminution du nombre des lcy., qui 
sont néanmoins encore très nombreux. 
Lcy. pm. légèrement prédominants. 
Ley. v. nombreux. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience IIT (suite). 
CoBaye F. 


9. — Sang pris 3 heures apres l’injection. 
Diminution assez notable du nombre 
des Icy. ; 
Ley. pm. existent presque seuls. | 


6. — Sangpris 4 heures apres l'injection. 
Augmentation du nombre des ley. 
Tous sont Icy. pm. 


7. — Sang pris 5 heures aprés l'injection. 
Liem. 


8. — Sang pris 6 heures apres l’injeclion. 
Légère diminution du nombre global 
des Icy. 
Lcy. pm. existent seuls. 


9.— Sang pris 11 heures apres l’injection. 
Légère diminution du nombre des 
lcy. 
Lcy. pm. prédominent. 
Lcy. m, très rares. 


10. — Sang pris 21 heures aprés 
l'injection. 

Ley. très rares. 

Lcy. m. Icy. v. 

Lcy. pm. manquent. 

Le cobaye F est très malade ; la cuisse 
est fortement gonflée. Il meurt environ 
23 heures apres l'injection. L’œdeème 
s'étend à toute La cuisse et à une partie de 
la paroi abdominale. Nous étudions le sang 
pris dans le cœur, une heure aprés la 
mort. 


41. — Sang pris dans le cœur. 
Très peu de ley. 
Lcy. m. 
Lcy. v. 
Ley. pm. très rares. Quelques-uns à 
granulations colorées. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 


45 novembre 1892, 
Copaye G,. 


D. — Sang pris 3 heures apres l'injection. 
Idem. 


6. — Sang gris 4 heures apres l'injection 
Augmentation du nombre des ley. 
Ley. pm existent presque seuls, beau- 

coup d’entre eux à grosses granulations 

colorées. Quelques amas de ley. pm. 
Ley. m. et lcy. v. très rares. 


7. — Sang prisS heures après l'injection. 
Idem. 


8. — Sang pris 6 heures après l’injection. 
Légère diminution du nombre des lcy. 
Ley. pm. prédominants. 

Lcy. m. et Icy. v. assez rares. 


9. — Sang pris 11 heuresapres l'injection. 
Idem. 


10. — Sang pris 21 heures apres 
l’injection. 

Le nombre des lcy. a encore diminué. 

Lcy. pm. prédominent. 

Lcy. m. et Icy. v. assez nombreux. 


11. — Sang |pris 25 heures apres 
l'injection. 
Même! nombre des ley. Ceux-ci ont 
les mêmes caractères qu'avant l’injec- 
tion, (Voir prép. 1. Exp. 11) 


197 


CoBayxE H. 


5. — Sang pris 3 heures apres l'injection. 
Augmentation du nombre des lcy, 
Ley. pm. prédominent. | 
Lcy. m. ettransitions verslcy. v. assez 

abondants. 


6. — Sang pris 4 heures apres l'injection. 
Nombre desley légèrementaugmenté. 
Lcy. pm. tout à fait prédominants; 

leur protoplasma est très granuleux et 

très coloré. 
Lcy. m. et lcy. v. très rares. 


7. — Sang pris 5 heures apres l’injeclion. 
Idem. 


8. — Sang pris 6 heures apres l’iujection. 
Augmentation très notable du nombre 
des Icy. 
Lcy. pm. très abondants. 
Lcy. m. et Icy. v. rares. 


9, — Sang pris 11 heures apres l'injection. 
Augmentation du nombre des Icy. 
Lcy. pm. à granulations colorées très 

nombreux. 

Lcy. v. assez rares. 
Lcy. m. très rares. 


40. — Sang pris 21 henres apres 
l’injection. 
Mème nombre de ley. que dans la 
préparation 9. 
Lcy. pm. prédominent. 
Ley. m., lcy. v. et transitions assez 
abondants. 


41. — Sang pris 25 heures après 
l'injection. 
Même nombre des ley. 
Ley. pm., v. dont beaucoup à proto- 
plasma granuleux, coloré, 
Lcy. m. et transition vers Icy. v. 
Lcy. v. rares. i 


198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience IL (suile). 
GoBayE E,. CoBave F. 


42. — Sang pris 30 heures apres 
l'injection. 
Idem. 


43. — Sang pris 50 ‘heures apres 
l'injection. 
Diminution du nombre des ley. 
Lcy. m. et transitions vers lcy. v. 
prédominent. 
Ley, pm. 
14. — Sang pris,T8 heures aprés 
l'injection. 
Le sang est redevenu absolument 
normal. 


15. — Sang pris 102 heures aprés 
l'injection. 
Idem, 


Expérience IV. — 8 novembre 1892. 
CogayEe J de 420 grammes 


4. — Sang pris à l’animal normal. 
Nombre normal de ley. 


Ley. m. ley. v. et lcy. pm. également nombreux. Beaucoup de lcy. pm, ont 
des granulations fortement colorées. 


L'animal reçoit dans la cavité péritonéale 4 em? de culture vivante de vibrion 
de Melchnikoff, ägée de 4 jours. 


| 2. — Sang pris À heure apres l'injection. 
Extrêèmement peu de ley. 


Ley. m. avec transitions vers ley. v. 
Pas de lcy. pm, 


3. — Sang pris 2 heures apres l'injection. 
Même absence presque totale de ley. 
Mèêmes caractères que dans préparation 2. Va 
L'animal meurt environ 12 heures aprés l'injection. L'intestin gréle et le péritoine 
pariélal sont trés rouges. Il y a un peu de sérosité dans lu cavité péritonéale. 


4. — Sang pris dans le cœur quelques heures aprés la mort. 
Peu de ley. 
Ley. m. lcy. v. et transitions. 


5. — Serosilé péritonéale. 
Très peu de ley. 
Lcy. v. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 199 


15 novembre 1892. 
CoBaye G;. 
12. — Sang pris 30 heures apres 
l'injection. 
Idem. 


13. — Sang pris 50 heures apres 


l’injeclion, 
Idem. 
44. — Sang pris 18 heures apres 
lPinjection. 
Idem. 


Copaye H. 


12. — Sang pris 30 heures apres 
l'injection. 
Diminution assez forte du nombre 
des ley. 
Lcy. pm. 
Ley. m. avec transitions vers Icy. v. 
presque aussi nombreux que Jcy. pm. 
Le sang a repris ses caractères nor- 
maux, 
13. — Sang pris 50 heures apres 
l'injection. 
Diminution légère du nombre des ley. 
Caractères pareils à ceux du sang de 
la préparation 12. 


14. — Sang pris 78 heures apres 
l’injection. 
Idem. 


45. — Sang pris 102 heures apres 
l’injection, 
Idem. 
Le cobaye survit. 


Expérience V, — 6 avril 1892. 


Cogaye K de 850 grammes. 


4. — Sang pris à l’animal normal. 


Nombre normal de ley. 


Ley. pm. à granulations colorées prédominent. Quelques-uns réunis en amas. 


Ley. m. et transitions vers Icy. v. 
Lcy. v. rares. 


L'animal recoit dans les muscles de la cuisse { cm3 de culture vivante de vibrion 


de Metchnikoff, peu virulente. 


Lo 


2, — Sang pris 4 heures apres l’injection. 


Diminution très notable du nombre global des Icy. 
Ley. pm. et transitions entre lcy. m. et ley. v. également nombreux. 


Lcy. v. assez abondants. 
Ley. m. manquent. 


3. — Sang pris 24 heures 1/2 aprés l'injection. (La cuisse du cobaye est gonflée.) 


Augmentation considérable du nombre des ley. 
Stades de transition entre ley, v. et lcy. pm. prédominent. 


Lcy. v. nombreux. 


4. — Sung pris 50 heures apres l'injection, (E’œdème de lu cuisse a presque disparu. 


Diminution du nombre des Icy. 


Le sang a repris ses caractères normaux. 


L'animal survit. 


200 


Cosaye L de 810 grammes. 


Le cobaye L a été vacciné par 3 inocu- 
lations successives de vibrions de Metchni- 
koff, vivants mais peu virulents. 


4. — Sang pris avant l'injection. 
Ley. très nombreux. 
Lcy. pm. à granulations colorées pré- 
dominent. 
Lcy. formant transilion entre Icy. m. 
etley. v. 
Ley. m. très rares. 


L'animal reçoit sous la peau du ventre 
6cm3 de culture de vibrion de Metchnikoff, 
chauffée à 1000. 


2.— Sang pris 19 heures apres l'injection. 
Même nombre global de Iey. 
Mêmes caractères que la préparation 
précédente. 


3. —Sung pris #1 heures apres l’injection. 
Même nombre et mêmes caractères 
que le sang de la préparation 2. 
Le nombre des Icy. pm. à grosses 
granulations colorées a légèrement 
augmenté. 


Immédiatement apres celte prise de sang 
l'animal reçoit 4 cm3 de culture de vibrion 
de Metchnikoff chauffée à 1000. 


4. — Sang pris 3 minutes aprés la 
2e injection. 
Le sang présente les caractères de la 
préparation 3. 


5. — Sang pris 26 heures apres la 
26 injection. 
Le nombre des ley. reste le même. 
Ley. pm. à granulations colorées très 
abondants. 
Ley. m., lcy. v. et transitions très 
rares. 


6. — Sang pris 40 heures apres la 
26 injection. 
Augmentation du nombre des Icy. 

Ley. pm. avec granulations colorées, 
prédominent. 

Lcy. v. 

Lcy. m. et transitions vers ley. v. 


Immédiatement après la prise de sang, 
l'animal reçoit 0,5 cm3 de culture de vi- 
brion de Metchnikoff vivante et viru- 
lente. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Experience VI (suite). 
CoBayxe M de 830 grammes. 
Le cobaye M est neuf. 


4. — Sang pris avant l’injection. 
Nombre normal de Iey. 
Lcy. pm. à granulations colorées pré- 
dominent. 
Lcy. m. et transitions vers lcy. v. 
Lcy. v. rares. 


L'animal reçoit sous lu peau du ventre 
6 cm3 de culture de vibrion de Metchni- 
koff, chauffée à 1000. 


2. — Sang pris 19 heures apres l'injection. 
Augmentation du nombre des ley. 
Lcy. pm. et transitions entre Icy. v. 

et Icy. pm. prédominent. Ils ont des 

granulations colorées. 
Lcy. v. assez nombreux. 


3. — Sang pris 41 heures apres l'injection. 
Le sang a repris les mêmes caractères 
que celui de la préparation 1. 


Immédialement apres cette prise desang, 
l'animal reçoit kcm3 de cultures de vi- 
brions de Metchnikoff chauffée à 1000. 


4. — Sang pris 3 minutes après la 
2e injection. 
Le sang présente les caractères de la 
préparation 3. 


5, — Sang pris 26 heures apres. la 
2e injection. 
Augmentation du nombre des Iey. 

Transitions entre ley. v. et Icy. pm. 
très abondants. 

Ley. pm. à granulations colorées. 

Lcy. v. 

Lcy. m. et transitions xers lcy. v. 


6. — Sang pris 40 heures apres la 
2e injection. 
Augmentation du nombre des ley. 

Mèmes caractères que dans la prépa- 
ration 5. 


Immédiatement aprés la prise de sang, 
l'animal recoit 0,5 cm? de culture de vi- 
brion de Metchnikoff vivante et virulente. 


: 

“| 

| LY 
sil 


MODIFICATIONS DES LEUCOCŸTES. 201 


2 avril 1892. 
CoBayxe L. 


7.— Sang pris 4 heures apres l’inoculation. 
(La cuisse du cobaye ne présente rien de 
particulier.) 

Légère diminution du nombre des ley. 
Mêmes caractères que dans la prépa- 
ration 6. 


CoBayxe M. 


7.— Sang pris 4 heures après l’inoculation. 
(La cuisse du cobaye est gonflée.) 
Les Icy. sont très rares. 
Ley. v. et transitions entre lcy. m. et 
Icy. v. 
Lcy. pm. 


8. — Sang pris 17 heures apres l’ino- 


8. — Sang pris 17 heures aprés l’ino- 


culation. 
Idem. 


9. — Sang pris 42 heures apres l'ino- 


culation. 


Mèmes caractères que ceux du sang 


de la préparation 1. 


culation. (La cuisse est encore trés 


gonflée.) 


Le nombre des lcy. a augmenté, mais 
est encore très faible. 

Mêmes caractères que dans la prépa- 
ration précédente. 


9. — Sang pris 42 heures apres l’inocu- 


lation. (La cuisse n’est plus que lége- 


rement gonflée.) 


Augmentation très notable du nombre 


des lcy. 


Ley. pm. à grosses granulations colo- 
rées prédominent. 
Ley. v. et transitions entre lcy. m. et 


Icy. v. 


INFECTION PAR LE BACILLE DU HOG-CHOLÉRA. 
Expérience VII. — 19 avril 1892. 


Lapix À de1,530 grammes. 


À — Sang pris à l'animal 
normal. 
Nombre normal de ley. 
Lcy. pm. et transitions 
entre lcy. m. et Icy. v. 
également abondants. 
Ley. v. 
Ley. m. très rares. 
L'animal reçoit sous la 
peau du ventre À cm3 de 
culture peu virulente de 
bacilles du hog-choléra. 


2. — Sang pris 6 heures 
aprés l'injection. 
Diminution très consi- 
dérable du nombre des 
lcy. — Leurs caractères 
restent les mêmes que 
dans le sang de la pré- 

paration 1. 


Lai B de 1,510 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal 
normal. 

Nombre normal de Icy. 

Lcy. v. et transitions 
entre Icy. m. et Icy. v. 
prédominent. 

Ley. pm. un peu moins 
abondants. 

L'animal reçoit sous la 
peau du ventre 1 cm3 de 
culture peu virulente de 
bacille du hog-choléra : 
cetle culture est différente 
de celle qui est injectée au 
lapin À. 


2. — Sang pris 6 heures 
aprés l’injection. 

Diminution légère du 
nombre des 1cy. 

Lcy. pm. prédominent, 
leur protoplasma est gra- 
nuleux, 

Ley. v. 

Ley. m. 


LapiN Cde 1680 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal 
normal. 

Le sang présente les 

mêmes caractères que le 
sang du lapin A. 


L'animal reçoit sous la 
peau du ventre 4 cm de 
culture très virulente de 
bacille du hog-cholera. 


2. — Sang pris 6 heures 
apres l'injection. 

Diminution très consi- 
dérable du nombre des 
lcy. Les caractères sont 
restés les mêmes, mais il 
y a une légère augmenta- 
tion du nombre des Icy. 
m. 


202 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Lapin A. 
3. — Sangpris 22 heures 1/2 
apres l'injection. 
Augmentation du nom- 
bre des lcy. 
Lcy. pm. prédominent. 


Ley. m. assez nom- 


4.— Sang pris 30 heures 1/2 
apres l'injection. 
Augmentation du nom- 
bre des ley. 
Ley. v.etlcy. pm. éga- 
lement abondants. 
Ley. m. 


9. — Sang pris 48 heures 
apres l'injection. 

Le nombre des ley. a 
encore augmenté. 

Ley. pm. et transitions 
entre ley. v. et lcy. pm. 

Transitions entre ley. 
m. et ICy. v. 

Lcy. m. rares. 

Lcy. v. très rares. 


6. — Sang pris 54 heures 
apres l’injection. 
Idem. 


T. — Sang pris T1 heures 
apres l’injection. 
Diminution du nombre 
des ley; les caractères 
restent les mêmes. 


8. — Sang pris T8 heures 
apres l'injection. 
Idem. 


Lapix B. 


3.— Sangpris22 heures 1/2 
apres l'injection. 
Diminution considéra- 
ble du nombre des ley. 
Lcy. v. et Ilcy. pm. 
également abondants. 
Ley. m. 


4. — Sangpris 80 heures 1/2 
apres l'injection. 
Augmentation du nom- 
bre des lcy. 
Lcy. pm. et transitions 
entre Icy. m. et lcy. v. 
Ley. m. 


9. — Sang pris 48 heures 
après l’injection. 

L'augmentation desley. 
perstste. 

Lcy. v. 

Transitions entre ley. 
m. et ley. v.et entre ley. 
v. et lcy. pm. 


6. — Sang pris d4 heures 
apres l’injection. 
Légère diminution du 
nombre des Icy. 
Transitions entre Icy. 
m. et Icy. v. et entre ley. 
v. et lcy. pm. 
Lcy. v. 


T. — Sang pris T1 heures 
apres l'injection. 
Diminution du nombre 
des Icy; les caractères 
restent les mêmes. 


8. — Sang pris 78 heures 
apres l’injection. 
Le nombre des lcy. a 
encore diminué. 


Lcy. pm. et transi- 
tions entre ley. v et Icy. 
pm. 


Lcy. v. presque aussi 
nombreux que les précé- 
dents. 


Expérience VIT (suite). 


Lapin C. 


3 —Sangpris22heures 1/2 
apres l’injection. 

Même nombre de ley. 
que dans la prépara- 
tion 2, 

Ley. m. et ley. v. pré- 
dominent. 

Lcy. pm. rares. 


4. — Sang pris30 heures 1[2 
apres l’injection. 

Le sang continue à 
s’appauvrir en Icy. 

Ley. m. 

Transitions entre ley, 
m. et Icy. v. 

Lcy. pm. 

Le lapin C. meurt envi. 
ron 4) heures après l’in- 
jection. 


à. — Sang pris 48 heures 
apres l’injection. 
(Ce sang est pris dans 
le cœur de l'animal mort.) 
Très peu de ley, 
Lcy. m., Icy. v. 
Transitions entre ley. 
v. et Icy. pm. 
Ley. pm. très rares, 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES, 


19 avril 1892, 
Larix A de 1530 gram. 


9. — Sang vris 95 heures 
apres l'injection. 

Le sang est redevenu 

normal. (Voir prépara- 


tion 1.) tion 1.) 


Lari B de 1510 gram. 


9. — Sang pris 95 heures 
aprés l'injection. 

Le sang est redevenu 

normal. (Voir prépara- 


203 


Lapix C de 1680 gram. 


Expérience VIII. — 21 avril 1892. 


Larix D de 1,620 grammes. 
Le lapin D est neuf, 


4, — Sang pris à l'animal normal. 
Nombre normal de Iey. 
cy. pm. et transitions entre lcy. m. 
et lcy. v. également nombreux. 
Ley. v. rares. 


L'animal reçoit dans la cavité périto- 
néale À cm3 de culture trés virulente 
de bacilles du hog-choléra, et sous la 
peau du ventre 0,5 cm? de la même 
culture. 


9, — Sang pris 3 heures apres l'injection. 
Diminution du nombre global des ley. 
Ley. v. et transitions entre Icy. v. et 

lcy. pm. 

Quelques lcy. pm. à grosses granu- 
lutions colorées, 


3, — Sang pris 19 heures apres l'injection. 
Le nombre des Icy. a encore décru. 
Ley. v. et transitions entre Icy. m. 

etlcy. v. prédominent. 

Ley. pm. rares. 

Le lapin neuf meurt 22 heures 1/2 
aprés l’injection. La cavité péritonéale 
estremplie d'un pus épais. 


4. — Sany pris dans le cœur immedia- 
tement aprés la mort, 
Très peu de ley. 
Lecy. v. et transitions entre Icy. m. 
et ley. v. et entre lcy. v. et Icy. pm. 


3. — Pus de la cavité péritonéale. 

Lcy. pm. à granulations colorées for- 
tement prédominants,. 

Ley. v. et transitions entre ley, v, 
et ley. pm. ; 

Ley. m. manquent complètement. 


Larn E de 2,040 grammes. 


Le lapin E est vacciné. Il a été mis à 
notre disposition par M. Metchnikof]. 


4. — Sang pris à l’animal normal. 

Le nombre des ley. est le même que 
chez le lapin D. 

Lcy. pm. à grosses granulations pré- 
dominent. 

Ley. v. et transitions entre ley. v. et 
lcy. pm. 

L'animal reçoit dans la cavité périlo- 
néale 1 cm3 de culture tres virulente de 
bacilles du hog-choléra, et sous la peau 
du ventre 0,5 cm3 de la même culture. 


2, — Sang pris 3 heures après l’injeclion, 
Augmentation du nombre de ley, 
Lcy. pm. à granulations très colorées 

prédominent. 
Ley. v. 
Ley. m. 


3, — Sang pris 19 heures apres l'injection. 
Augmentation du nombre des ley. 
Lcy. pm. avec granulations colorées 

prédominent. 
Ley. m. rares. 


4. — Sang pris 25 1/2 heures apres 
l'injection. 

Diminution légère du nombre des 
ley. 

Lcy. pm. et transitions entre Icy. v. 
et lcy. pm. tous à granulations colorées. 

Lcy. v. un peu moins nombreux. 

Lcy. m. très rares, 


5. — Sang pris 43 heures aprés l'injection. 
Idem. 


204 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INFECTION PAR LE STAPHYLOCOCCUS PYOGENES AUREUS. 
Expérience IX. — 14 avril 1892. 


CoBaye N de 385 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 

Nombre normal de Iey. 

Lcy. pm. à granulations colorées et 
lcy. v. également abondants. 

Ley. m. 


Le cobuye N reçoit dans les muscles 
de la cuisse 0.5 cm° de culture de staphy- 
lococcus pyogenes aureus. 


2.— Sang pris 5 heures 1/2 aprés l'injection. 
Idem. 


3. — Sang pris 22 heures 1/2 aprés 
l’injeclion. 

Le nombre des Icy. n’a pas varié. 

Lcy. pm. 

Ley. m. 

Ley. v. 


4. — Sang pris #8 heures apres l’injeclion. 
Le nombre de ley. n’a pas changé. 
Ley. pm. 

Lcy. m. 
Ley. v. rares. 


LapiN F de 1500 grammes, 


4. — Sang pris à l’animal normal. 

Nombre normal de ley. 

Ley. pm. à protoplasma granuleux. 

Transitions entre Icy. m. etlcy. v. un 
peu moins nombreux. 

Ley m. 

Ley v. 

Le lapin F. reçoit dans les muscles de 
la cuisse 1 cm3 de culture de slaphylococ- 
cus pyogenes aureus. 


2,— Sang pris 5 heures|/2 apres l’injeclion. 
Idem. 


3. — Sang pris 22 heures 1/2 apres 
l'injection. 

Le nombre global des lcy. n’a pas 
varié. 

Lcy. v. prédominent. 

Ley. m. etlcy pm. 

L'animal meurt environ 40 heures apres 
l’injection. 
4. — Sang pris dans la veine cave in/e- 

rieure 48 heures aprés l'injection. 

Très peu de ley. 

Ley. m. 

Ley. v. 

Lcy. pm. très rares. 


Expérience X. — 16 avril 1892. 
Lapin G de 1800 grammes. 


4. — Sang pris a l'animal normal. 


Nombre normal de ley. 


Ley. v.et transitions entre ley. m. et lcy. v. prédominants. 


Lcy. pm. et lcy. m. rares. 


Le lapin reçoit dans la veine externe de l'oreille 1 cm3 de cu'ture de staphylococeus 


pyogcnes aureus, 


9. — Sang pris 8 heures apres l'injection. 


Augmentation du nombre des lcy. 
Lcy. pm. avec granulations. 


Lcy v. et transitions entre ley. v. et ley. pm. 


Transitions entre Icy. m. etley v. 


3. — Sang pris 25 heures 1/2 apres l'injection. 


Même nombre de lcy. 


La plupart sont Icy. pm. souvent réunis en amas. 
Ley. v. et lcy. m. beaucoup plus rares. 


4. — Sang pris 31 heures 1/2 apres l’injection. 


Idem. 


5. — Sang pris 49 heures 1/2 apres l'injection. 
Augmentation notable du nombre des ley. 
Lcy. pm. avec granulations colorées dominent. 
Ley. v. et transitions entre Iey. m. et lcy.v. 


ad 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 205 


6. — Sang pris 55 heures apres l'injection. 


Même nombre de ley. 


Ley. pm. et transitions entre ley. v. et Icy. pm. prédominent 


Lcy. v. 


7. — Sang pris 12 heures aprés l'injection. 


Même état. 


INFECTION PAR LE BACILLE DU CHARBON 
Expérience XI. — 14 avril 1892. 


Lapix H de 2,670 grammes. 


Ce lapin est vacciné contre le charbon. 
IL a été mis à notre disposition par 
M. Metchnikoff. 

4. — Sang pris à l’animal normal. 

Ley. très nombreux. 

Ley. pm. à granulations colorées, 
prédominent fortement. 

Lcy. m. 

Lcy. v. rares. 

Le lapin reçoit dans la veine externe 
de l'oreille 1 cm3 de culture de charbon 
virulent. 


2.— Sang pris 15 heures aprés l'injection. 
Très légère diminution des ley. 
Lcy. pm. et transition entre Icy. v. 
et lcy. pm. 
Transition entre Icy. m. et Icy. v. 
Lcy. m, rares. 


3. — Sang pris 38 heures apres l'injection. 
Même nombre de Icy. 
Ley. pm. prédominants. 
Transitions entre Ilcy. m. et Icy. v. 
presque aussi nombreux. 
Lcy. m. rares. 


Expérience XII. — 


CoBaye B,, de 775 grammes. 


Le cobaye B; est vacciné contre le vi- 
brion de Metchnikoff (voir Exp. 1) et a 
subi l’inoculation d'épreuve. (voir Exp. n). 

À. — Sang pris à l'animal normal. 

Beaucoup de Icy. 

Lcy. pm. prédominent. 

Lcy. v. 

Lecy. m. rares. 


Le cobaye B, recoit duns la cavite péri- 
tonéale 2 cm3 d’une culture de secondvaccin 
charbonneux. 


LariN J de 1,550 grammes, 
Ce lapin est neuf. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 

Nombre normal de ley. 

Lcy. pm. et formes de transition entre 
lcy. m. et Ilcy. v. et centre Iley. v. et 
lcy. pm. en nombre égal. 

Ley. v. etley. m. plus rares. 

Le lapin reçoit dans la veine externe de 
l'oreille 1 cm? de culture de charbon vi- 
rulent. 


2.— Sang pris 15 heures aprés l'injection. 
Diminution manifeste du nombre des 
lcy. 
Lcy. pm. à granulations colorées. 
Lcy. m. 
Lcy. v. 
Le lapin meurt environ 20 heures aprés 
l'injection. 
3. — Sang pris dans le cœur du lapin 
mort. 
Mêmes caractères du sang que dans 
la préparation 2. 


19 décembre 1892. 


Cosaye O de 395 grammes. 
Le cobaye O est neuf. 


1. — Sang pris a l'animal normal. 
Nombre normal de ley. 
Transitions entre ley. m. et lcy. v. 
prédominent d’une façon très manifeste. 
Lcy. pm. peu nombreux, 
Lcy. m. 
Ley. v. très rares. 


Le cobaye O reçoit dans la cavité péri- 
tonéale 4 cm3 1/2 d'une cullure de second 
vaccin charbonneux. 


206 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


CoBave B;. 


2, — Sang pris 5 minutes apres 
l’injection. 
Forte diminution du nombre des ley. 
Ley. m. 
Ley. v. rares. 
Ley. pm. très rares. 


3. — Sang pris 30 minutes apres 
l'injection. 
Idem. 


4. — Sang pris À heure aprés l'injection. 

Légère augmentation du nombre des 
lcy: 

Lcy. pm. prédominent. 

Ley. m. en nombre presque égal à 
celui des Icy. pm. 

Transitions entre ley. m. et Icy. v. 
rares. 


5. — Sang pris 2 heures aprés l’injeetion. 
Le nombre global des Icy. n'a pas 
varié. 
Lcy. pm. 
Ley. m. et lcy: v. très rares. 


6. — Sang pris 4 heures aprés l'injection 
Idem. 


7. — Sang pris 6 heures après l'injection. 

Le nombre et les caractères des lcy. 
sont les mêmes que dans la prépara- 
tion 5. Mais la proportion des lcy. pm. 
est encore devenue plus forte. 


8. — Sang pris 9 heures aprés l’injection. 
Idem. 


9,— Sangpris 43 heures aprés l'injection. 
Le nombre global des ley. n’a pas 

varié. 
Ley. pm. tout à fait prédominants. 
Lcy. v. 


Expérience XIT (suite. 
CoBayEe O. 


2. — Sang pris 5 minutes apres l'injection. 
Légère diminution du nombre des ley. 
Lcy. m. et 1cy. v. prédominent, 
Lcy. pm. rares. 


3. — Sang pris 30 minutes aprés 


l’injection. 
Légère diminution du nombre des ley. 
Ley. v. 
Lcy. m. 
Ecy. pm. 


4. — Sang pris 1 heure apres l'injection. 
Idem. 


5, — Sang pris 2 heures apres l'injection. 

Augmentation légère du nombre des 
Ilcy. 

Lcy. pm. et transitions entre Icy. v. 
et Icy. pm. prédominent. Les Icy. pm. 
sont souvent réunis en petits amas. 

Ley. m. et Icy. v. rares. 


6. — Sang pris 4 heures apres l'injection. 
Même nombre de Icy. que dans la 
préparation b. 
Transitions entre ley. v. et ley. m. 
Lcy. pm. en nombre presque égal. 
Lcy. m. très rares. 


7. — Sang pris 6 heures après l'injection. 

Légère augmentation. 
Lcy. pm. prédominent. 
Lcy. v. 

Ley. m. très rares. 

8.— Sang pris 9 heures aprés l’injection. 
Forteaugmentation dunombre desley. 
Lcy. pm. à granulations colorées pré- 

dominent. 

Ley. v. et transitions vers Icy. pm. 
Ley.m.ettransitions vers lcy. v.rares. 


9.— Sang pris 13 heures aprés l'injection. 
Le nombre des lcy. n’a pas varié. 
Lcy. pm. et transitions entre lcy. v. 

et Icy. pm. 
Lcy. m. 
Ley. v. 


"A 


: MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES. 


19 décembre 1892. 


CoBayxe B;. 


10. — Sang pris 23 heures apres 
l'injection. 
Idem. 


11. — Sang pris 28 heures apres 
l'injection. 
Idem. 


12. — Sang pris 33 heures apres 
l'injection. 
Le nombre des ley. diminue un peu. 
Ley. pm. 
Lcy. m. et lcy. v. 


43. — Sang pris 49 heures apres 
l'injection. 
Très peu de ley. 
Ley. v. et ley. pm. 


44, — Sang pris 51 heures apres 
l’injection. 

Très peu de ley. 

Lcy. m. prédominent fortement. 

Lcy. v. 

Lcy. pm. rares. 


45. — Sang pris 16 heures aprés 
l'injection. 
Le nombre des ley. a beaucoup aug- 
menté. 
Ley. pm. prédominent. 
Ecy. m. et lcy. v. 


6. — Sang pris 104 heures aprés l’injec- 
tion. Le cobaye B; est trés malade, les 
oreilles sont froides, le sang s'écoule 
avec peine. 

Leucocytes très nombreux. 

Lcy. pm. existent presque seuls. 
Lcy. m. et Icy. v. rares. 

Pas de bacilles dans le sang. 

L'animal meurt environ 115 heures apres 
l'injection. La cavilé périlonéale con- 
tient beaucoup de sérosilé. 

A7. — Sang pris dans le cœur. 


Mêmes nombre et caractères des Icy. 
que dans la préparation 16, 


207 


CoBayxe O0. 

10, — Sang pris 23 heures aprés 
l'injection. 

Légère diminution des lcy. 

Ley. pm. etley. m. en nombre égal. 

Ley. v. 

11. — Sang pris 98 heures aprés 

l'injection. 

Légère diminution des ley. 

Ley. pm. 

Transitions entre ley. m. et ley.v. en 
nombre presque égal à celui des l£y. pm. 
12. — Sang pris 33 heures apres 
l'injection. 

Légère augmentation du nombre des 
lcy. 

Transition entre ley. v. et lcy. pm. 

Lcy. pm. 

Leys ve 


43. — Sang pris 49 heures aprés 
l'injection. 
Diminution légère du nombre des ley. 
Ley. v., lCy. m. et transitions. 
Ley. pm. 


1%. — Sang pris 57 heures apres 
l'injection. 
Diminution très notable du nombre 
des ley. 


Ley. m. et transitions vers ley. v. 
prédominent manifestement. 
Lcy. pm. 


15. — Sang pris T6 heures apres 
l’injection. 
Idem. 


16. — Sang pris 104 heures apres l’in- 
jection. Le cobaye O est très malade, 
les oreilles sont froides, le sang s'écoule 
avec peine. 

Diminution du nombre des lcy. 

Ley. m. et transitions vers Icy. v. 

Lcy. pm. rares, souvent réunis en 
amas. | 

L'animal meurt environ 410 heures aprés 
l'injection. Il présente un ædème con- 
sidérable de la paroi abdominule. 


17. — Sang pris dans Le cœur. 
Très peu de ley. 
Transitions entre lcy. v. et Icy. pm. 
Ley. v. et transitions entre Icy. m. 
et ley. pm. 


208 


CoBaye B;. 


18. — Sérosilé abdominale. 
Lcy. pm. existent presque seuls. 


Lcy. m., ICy. v. 
Beaucoup de bacilles. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience XII (suite). 


CoBAyE 0. 


Ley. m. et lcy. pm. 

Il y a beaucoup de bacilles dans le 
sang. Quelques-uns sont englobés par 
les leucocytes pm. 


| Sérosité de l’œdème. 
Enormément de ley. et de bacilles. 
Lcy. pm. et transitions entre Icy. v. 


et lcy. pm. Beaucoup d’entre eux avec 
granulations colorées. 
Ley. v. et Icy. m. 


INFECTION PAR LE BACILLE DU TÉTANOS 
Expérience XIII. — 19 décembre 1892. 


LariN K de 2,560 grammes. 
Le lapin R est neuf. 


1.— Sangpris sur l’animal 
normal. 

Nombre normal de lcy. 

Ley. pm. à protoplasma 
granuleux coloré. 

Transition entre lcy. m. 
m.etlcy. v. presque aussi 
nombreux que lcy. pm. 

Ley. v. et transitions 
vers 1Ccy. pm. 

Le lapin K reçoit dans 
la cavité périlonéale 2 cm 
d'une culture du bacille du 
télanos tres atlénue par la 
conservation. 

2. — Sang pris à minutes 
aprés l'injection. 

Même nombre global 


de ley. - 
Ley. m. et transitions 
vers lcy. v. 


Lcy. pm. dont un grand 
nombre avec des granu- 
lations colorées. 

Lcy. v. 


3. — Sang pris 30 minutes 
apres l’injection. 
Légèreaugmentation du 
nombre des Icy. 
Lcy.pm.très nombreux, 
dont beaucoup avec gra- 
nulations colorées. 


CoBaye A,;, de 4,160 gr. 


Le cobaye À; a été vac- 
ciné contre le vibrion de 
Metchnikoff. (Voir Exp. 1) 
Il a subi l’inoculation d'é- 
preuve. (Voir Exp. 11.) 
1.— Sang pris sur l'animal 

normal. 

Nombre normal de Icy. 

Lcy. pm. prédominent 
fortement. Beaucoup d’en- 
tre eux ont de grosses 
granulations très colo- 
rées. 

Ley. m. et ley. v. 


Le cobaye À; reçoit dans 
la cavité péritonéale 1/2 cm3 
d’une culture du bacille du 
telanos trés allénué par la 
conservalion. 


2. — Sang pris 5 minutes 
apres l’injection. 

Peu de Iey. 

Ley. m., ley. v. et lcy. 
pm. en nombre égal. On 
ne trouve plus de granu- 
lations dans les lcy. pm. 


3. — Sang pris 30 minutes 
apres l’injection. 
Le nombre des ley. est 
légèrement augmenté. 
Ley. pm. prédominent; 
plusieurs ont des granu- 
lations colorées. 


CoBaye E,, 


Le cobaye E; a reçu 
antérieurement une injec- 
tion de culture filtrée de 
vibrion de Metchnikoff. 
(Voir Exp. 1.) 

1.— Sang pris sur l'animal 
normal. 

Nombre normal de ley. 

Ley. pm. prédominent 
légèrement; quelques-uns 
ont des granulations co- 
lorées. 


Le cobaye E; reçoit dans 
la cavité péritonenle 1/2 cm3 
d'une culture du bacille du 
lélanos très atténué par la 
conservulion. 


2. — Sang pris 5 minules 
aprés l’injection. 
Le nombre des Icy. a 
diminué. 
Lcy. pm. légèrement 
prédominants. 
Ley.m.avectransitions. 
Lcy. v. très rares. 


3. — Sang pris 30 minules 
apres l’injection. 
Peu de ley. 
Ley. m. et Icy. v. 
Lcy. pm. très rares. 


0 


de 665 gr. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES, 


209 


Expérience XIII (suite). - 19 décembre 1892. 


Larix K. 


Lcy. m., ley. v. et tran- 
sitions. 

Il existe un assez grand 
nombre de Icy. à gros 
noyau vésiculeux, peu 
coloré et avec une couche 
de protoplasma très pâle. 


4. — Sang pris 1 heure 
apres l'injection. 
Idem. 


5. — Sang pris 2 heures 
aprés l'injection. 

Même nombre global 
de ley. 

Ley. pm. plusnombreux 
que dans la préparation 
précédente. 

Ley. v. 

Lcy. m. rares. 


6. — Sang pris 4 heures 
apres l'injection. 
Augmentation du nom- 


bre des Iey. 
Ley. pm. prédominent. 
Fey m-eIcy0v =et 


transitions entre ley. v. et 
lcy. pm. 

On rencontre beaucoup 
de ley. pm. désagrégés. 


7. — Sang pris 6 heures 
apres l'injection. 
Idem. 


8. — Sang pris 9 heures 
apres l'injection. 
Idem, 


CoBayE À. 


Ley. m. 
Ley. v. 


4. — Sang pris À heure 
apres l'injection. 
Les ley. présentent les 
mêmes caractères, mais 
les Icy. pm. ne sont plus 
granuleux. 


5. — Sang pris 2 heures 
après l'injection. 
Idem. 


6. — Sang pris 4 heures 
aprés l’injeclion. 
Augmentation du nom- 
bre des ley. 
Ley. pm. prédominent. 
Ley. m. 
Ley. v. 


7. — Sang pris 6 heures 
apres l'injection. 
Idem. 


8. — Sang pris 9 heures 
aprés l'injection. 

Même nombre global 
de lcy. 

Lcy. pm. avec granula- 
lations prédominent. 

Ley. m.,lcy. v. et tran- 
sitions sont très rares. Il 
y a quelques ley. à gros 
noyau vésiculeux peu 
coloré et avec une cou- 
che de protoplasma très 
pèle analogues à ceux qui 
se trouvent dans le sang 
de la préparation 3 du 
lapin K. 


Cosaye E.. 


4. — Sang pris À heure 
aprés l'injection. 
Idem. 


5. — Sang pris 2 heures 
apres l'injection. 
Le nombre des ley. n’a 
pas varié. 
Les Icy. pm. existent 
presque seuls. 


6. — Sang pris 4 heures 
apres l'injection. 
Légère augmentation 
du nombre des ley. 
Lcy. pm.existent pres- 
que seuls, ils sont souvent 
réunis en amas. 


1. — Sang pris 6 heures 
apres l’injection. 
Idem. 


8.— Sang pris 9 heures 
apres l'injection. 
Le nombre des lcy. est 
augmenté. 
Lcy. pm. existent seuls. 


14 


210 


Lapin K. 


9. — Sang pris 13 heures 
apres l'injection. 
Augmentation considé- 
rable du nombre de ley. 
Ley. pm. 
Lcey. v. et transitions 
vers 1Cy. pm. 
Lcy. m. et transitions 
vers lCy. pm. très rares. 


10. — Sang pris 23 heures 
apres l'injection. 
Idem. 


41. — Sang pris 98 heures 
apres l’injection. 
Même nombre de lcy. 
Lcey, pm. dont beau- 
coup avec granulations 
très colorées. 
Transitions entrelcy. v. 
et Icy. pm. 
Transitions entre ley. 
m. et Icy. v. rares. 


12, — Sang pris 33 heures 
apres l’injection. 
Même nombre de ley. 
Ley. pm. prédominent 
fortement. 
Lcy. v. 


43. — Sang pris 49 heures 
apres l'injection. 
Même nombre de Icy. 
Ley. pm. prédominent 
légèrement. 
Transitions entre ley. 
m. et ley. v. nombreuses. 
Lcy. v. 
Lcy. m. 


CoBayE A. 
9. — Sang pris 13 heures 
aprés l'injection. 

Même nombre global 
de Icy. 

Ley. pm. 

Ley. m. avec quelques 
stades de transition vers 
1cy. v. 

Quelques cellules à gros 
noyau peu coloré. (Voir 
préparation 8.). 


40. — Sang pris 23 heures 
aprés l'injection. 
Même nombre de Icy. 
que dans la préparation 

9° 

Ley. pm. 

Lcy. m. rares. 

Il ya encore quelques 
Icy. à gros noyau peu 
coloré. 


41. — Sang pris 98 heures 
aprés l’injection. 

Augmentation du nom- 
bre des ley. 

Ley. pm. existent pres- 
que seuls. 

Transitions entre ley. 
im, et lcy. v. rares. 


42. — Sang pris 33 heures 
apres l'injection. 
Même nombre de ley. 
Ley. pm. existent pres- 
que seuls. 
Ley. m. rares. 


43. — Sang pris 49 heures 
après l’injection. 
Idem. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience XIII (suite). 
CoBAYE E,. 


9. — Sang pris 13 heures 
apres l'injection. 
Le nombre des Icy. a 
diminué. 
Ley. pm. et ley. m. en 
nombre égal. 


10. — Sang pris 23 heures 
aprés l’injection. 
Très peu de ley. 
Ley. pm.existent seuls. 


A1. — Sang pris 28 heures 
aprés l’injection. 
Idem. 


19. — Sang pris 33 heures 
après l’injection. 

Augmentation du nom- 
bre des Iey. 

Lcy. m. prédominent. 

Ley. pm. un peu moins 
abondants. 

Ley. v. rares. 

Ce cobaye meurt environ 
40 heures apres l'injection. 
Le sang pris dans le cœur 
ne se laisse pas colorer. 
Impossible de l’étudier. 


MODIFICATIONS DES LEUCOCYTES, 


19 decembre 1892. 


Lapix K. 


14. — Sang pris 57 heures 
apres l’injection. 

Le sang a repris les 
caractères qu'il avait 
avant l'injection. (Voir 
préparation 1.) 


15. — Sang pris 16 heures 
apres l'injection. 
Idem. 
16. — Sang pris 122 heures 
apres l'injection. 
Idem. 


17.— Sang pris 143 heures 
apres l’injeclion. 
Idem. 


18. — Sang pris 171 heures 
apres l’injeclion. 
Idem. 
19. — Sang pris 197 heures 
aprés l'injection. 
Idem, 


CoBAYE A. 


14. — Sang pris 57 heures 
aprés l’injection. 

Le nombre desley.reste 
le même. 

Ley. pm. existent pres- 
que seuls, tous sont plus 
ou moins chargés de 
grosses granulations très 
colorées. 

Ley. m. très rares. 


45. — Sang pris 16 heures 
aprés l'injection. 

Idem. 

16. — Sang pris 122 heures 
après l'injection. 
Même nombre de ley. 

Lcy. pm. prédominent, 
ils ont les mêmes carac- 
tères que dans la prépara- 
tion 14. 

Ley. m. et lcy. v. très 
rares. 

Le cobuye À; a les mem- 
bres postérieurs tétanises. 
Il meurt environ 136 heures 
après l’injeclion. 

17. — Sang pris dans le 
cœur. 

Diminution très notable 
du nombre des ley. 

Ley. pm. prédominent. 
Ils ont les mêmes carac- 
tères que dans la prépa- 
ration 14. 

Ley. m. et Iey. v.-très 
rares. 


CopayE E,. 


INJECTION DE BACILLUS MYCOIDES 
Expérience XIV. — 19 décembre 1892. 


Larix L, de 2,620 grammes. 


4. — Sang pris à l'animal normal. 


Nombre normal de Icy. 
Ley. m. 


Ley. pm. à granulation coiorées. 


CoBayE G,. 


214 


Le cobaye G, à reçu aniérieurement 


une injection de culture filtrée de vibrion 
de Metchnikoff. (Noir Exp. nr.) 


1. — Sang pris sur l'animal normal. 


212 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Expérience XIV (suile). — 19 décembre 1892. 


Lapin L. 


Ley. v. et transitions entre Icy. m. et 
ICY: v. 


e 
Le lapin reçoit dans la cavité périto- 
néale 20 cm3 de culture vivante de B. 
mycoides. 
2. — Sang pris 5 minutes apres l’injeclion. 
Idem. 


3.— Sang pris 30 minutes apres l'injection. 
Très légère diminution du nombre 
des ley. 
Lcy. pm. à granulations colorées. 
Ley. m. 
Ley. v. ettransitions entre ley. m.et 
lcy. v. 


4. — Sang pris 1 heure apres l'injection. 
Augmentation du nombre des ley. 
Lcy. pm. existent presque seuls, 

beaucoup d’entre eux à granulations 

colorées. 


5. — Sang pris 2 heures aprés l'injection. 
Idem. 


6. — Sang pris 4 heures aprés l'injection. 
Idem. 


1. — Sang pris 9 heures apres l'injection. 
Le nombre des ley. diminue. 
Ley. pm. sans granulations. 
Ley. v. 
Lcy. m. 


8. — Sang pris 13 heures apres l'injection. 
Le sang est redevenu normal. 


CoBayE G,. 


Nombre normal de ley. 

Lcy. pm. à granulations fortement 
colorées. 

Ley. m. 

Transition entre Icy. m. et Icy. v. 

Lcy. v. 

Le cobaye reçoit dans la cavilé périlo- 
néale 5 cm3 de culture vivante de B. my- 
coïdes. 


2. — Sang pris à minules aprés l'injection. 
Diminution légère du nombre des 

lcy., principalement des ley. pm. 

3.— Sang pris 30 minutes apres l’injeclion. 
Augmentation légère du nombre des 

lcy., surtout des lcy. pm. qui forment 

de nombreux amas. 


4. — Sang pris 1 heure apres l'injection. 
Le nombre des ley. est revenu à la 

normale (voir préparation 1), mais le 

nombre des Icy. pm. et des transitions 

entre ley. m. et Icy. v. a augmenté. 

5. — Sang pris 2 heures apres l'injection. 
Idem. 


6. — Sang pris 4 heures après l'injection. 
Idem. 


7. — Sang pris 9 heures apres l'injection. 
Le sang est redevenu normal. 


RECHERCHES SUR LES MICROBES ACÉTIFIANTS 


Par M. WERMISCHEFF. 


En éclairant le mystère de l’acétification, le travail classique 
de M. Pasteur a soulevé une multitude de problèmes que l’on 
peut essayer d'aborder par les méthodes de la bactériologie 
moderne, et dont quelques-uns présentent, outre leur intérêt 
scientifique, une véritable importance industrielle. À quoi tien- 
nent par exemple les difficultés que l’on rencontre à régulariser 
la marche d’une vinaigrerie ? La semence qu’on transporte de 
cuve en cuve est-elle homogène ou composée de plusieurs 
espèces vivantes ? Il y a une forme de développement en voile 
mince et plissé; une autre en pellicules grasses et épaisses ; 
celles-ci peuvent-elles provenir d’une transformation du microbe 
en voile, sous l'influence de la vieillesse ou des conditions 
d'alimentation? Ces productions ‘différentes appartiennent-elles 
au contraire à des microbes différents ? 

C'est une question que j'ai commencé à étudier, et je publie 
mes premiers résultats dans cette note préliminaire. Je suis parti 
d'un ferment obtenu par le procédé de M. Pasteur, c’est-à-dire 
en exposant à l’air, dans une étuve à 20-22°, un mélange de vin 
rouge, d’eau et de vinaigre. Un voile se forme. Pour séparer les 
espèces qu'il peut contenir, je les sème sur de l’eau de levure 
alcoolisée à 3 ou 7 0/0, acidulée avec 1 à 2 millièmes d’acide 
acétique, etadditionnée de 10 0/0 de gélatine, de façon à donner 
un milieu solide qu’on stérilise par trois chauffages à 100 
espacés de 24 heures. On obtient, en diluant suffisamment la 
semence, des colonies isolées sur lesquelles on prend des 
semences nouvelles qu'on soumet de nouveau à la même 
méthode de séparation. Je suis arrivé ainsi à obtenir des colonies 
que je pouvais considérer comme provenant chacune d’un seul 
germe, mais qui présentaient des aspects assez variés que j'ai 
pu ranger sous les six types suivants : 


214 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


1° Colonies rondes, plates, minces, un peu brunes à un faible 
grossissement, homogènes d'aspect et mates, avec un aspect un 
peu chagriné ; 

20 Colonies identiques aux précédentes, sauf que le milieu 
est plus coloré que les bords ; 

3° Colonies transparentes, presque brillantes, en mamelon 
entouré d’une petile dépression dans la surface de la gélatine; 

4° Coloniesd’aspectbrillant, rondes, presque noires au bord, 
brunes au centre, n’ayant plus du tout l'aspect chagriné ; 

5° Colonies rondes, brunes, brillantes, ayant la forme d’un 
bourrelet déprimé en son centre, lequel souvent n’est pas rond, 
mais crénelé ; 

6° Colonies diffuses plus ou moins rondes, blanchâtres, res- 
semblant à une goutte de lait diluée dans le milieu gélatinisé. Au 
microscope leur surface est brune, transparente, mais comme 
couverte d’un feutrage indistinct. Ces colonies sont assez sou- 
vent à une petite profondeur au-dessous de la surface. 

Toutes ces colonies, prises sur des vases de Petri, ont été 
ensemencées avec les précautions requises dans des matras Pasteur 
contenant du vin blanc ordinaire dilué de son volume ou des 2/5 
de son volume d’eau. J’ai obtenu partout une acétification active; 
mais il s’est révélé des différences remarquables dans l'aspect 
macroscopique des matras ensemencés. 

Dans les uns, le liquide est devenu trouble et a donné au 
bout de quelques jours un dépôt farineux; dans d’autres, j'avais 
le voile mince bien connu, grimpant le long des parois, et sur- 
nageantunliquidetrès limpide; dans une troisième série, leliquide 
enrestantlimpide,se couvrait ou seremplissaitde flocons glaireux. 

Ces trois formes persistent après des séries d’ensemence- 
ments successifs sur milieu liquide et solide, et en les comparant 
avec les six types de colonies formées sur gélatine alcoolisée, 
j'ai vu que les types 1, 2, 3, 4 et 5 donnaient toujours les cul- 
tures à liquide limpide et à pellicule cireuse, ou bien le liquide 
trouble avec dépôt farineux. Une semence provenant de l’une de 
ces cultures donnait indifféremment les cinq types de colonies 
sur gélatine; l'aspect microscopique des microbes est d’ailleurs 
partout le même, de sorte que les différences observées tien- 
nent à des différences dans le mode ou les conditions de déve- 
loppement sur le milieu solide. 


."SL# 


RECHERCHES SUR LES MICROBES ACÉTIFIANTS. 215 


Comment expliquer alors Les deux formes de développ emen 
des cinq premiers types? Il est facile de voir que le voile mince 
superficiel sur liquide limpide, et le précipité farineux dans un 
liquide trouble dérivent l’un de l’autre. On peut, en partant d’une 
culture à voile, arriver, par des ensemencements successifs, àune 
culture à précipité, et inversement. En agitant une culture à 
voile, on disloque la pellicule superficielle, et elle tombe en flocons 
qui troublent le liquide et forment au fond le précipité farineux. 
Il m'a paru qu’en vieillissant, la pellicule entrait plus facilement 
en suspension dans le liquide, et je sais qu’à Orléans, dans la 
fabrique où est mis en œuvre le procédé de M. Pasteur, on ne 
laisse jamais vieillir la couche acétifiante sur le liquide, de peur 
de lui enlever sa limpidité. 

Au contraire des cinqpremiers types de colonies, quidonnaient 
presque indifféremment les deux formes de développement que 
je viens d'étudier, le sixième type m'a toujours donné la peau 
glaireuse à la surface. Cette peau s’y épaissit, tombe; à sa place 
il s’en forme une autre, tantôt reliée à la précédente, tantôt 
isolée, et le liquide entier finit par se remplir de masses glai- 
reuses et assez résistantes pour qu'on puisse les manier. C’est la 
forme de peau ou de mère du vinaigre si connue dans l'industrie. 
J'ai eu beau faire varier la composition chimique des liquides, 
les conditions d'aération, de température : celte forme se repro- 
duit toujours identique à elle-même. 

M. Brown’ a constaté le premier que ces productions glai- 
reuses se colorent en bleu quand on fait agir successivement sur 
elles l’acide sulfurique et la teinture d’iode. Il les a appelées du 
nom de bacterium xylinum. Celles que j’obtenais se comportaient 
de même, tandis qu'il m'était impossible de produire la mème 
réaction avec les pellicules de mes deux premières formes de 
développement. 

Ces masses glaireuses m'ont paru se développer plus vite que 
les formes en voile, surtout lorsque l’air ne se renouvelle pas 
facilement à la surface des liquides. Il est évident qu'elles 
absorbent aussi de plus fortes proportions des éléments nutritifs. 
Au point de vue de leur puissance acétifiante, il n’est pas sûr 
qu'elles soient inférieures à la forme en voile, et si l’industrie 
les redoute, c’est pour d’autres raisons. Quoi qu’il en soit de ces 


1. On an acetic ferment which forms cellulose. Journ. chem. Soc., 1886, p. 482. 


216 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


points sur lesquels je reviendrai, voyons si ces différences dans 
l'aspect des colonies et les formes de développement se retrouvent 
dans la forme des microbes. 


IT. — MoRPHOLOGIE. 


Le microbe donnant les voiles minces surnageant un liquide 
transparent et les précipités farineux au fond d’un liquide 
trouble, ressemble tout à fait, pourses formes etses dimensions, 
à l'être que M. Pasteur a décrit et figuré sous le nom de ferment 
acétique. Ce sont des bactéries étranglées en leur milieu et pou- 
vant se présenter, surtout lorsqu'elles sont vieilles, sous forme 
de micrococcus ou de diplococcus. Elles sont entourées d’une 
enveloppe glaireuse, d'aspect brillant, qui devient surtout visible 
quand on colore au bleu de méthylène ou au dahlia. Le microbe 
se teint en bleu foncé, l'enveloppe prend une nuance plus claire. 
On observe parfois des chapelets dont quelques grains, surtout 
ceux des extrémités, sont gonflés. Parfois aussi, dans une même 
chaîne, la division en articles, très nette sur une partie de la 
longueur, devient indistincte sur d’autres, de sorte qu’on a des 
formes bacillaires plus ou moins allongées. Les articles isolés 
possèdent ce balancement sur place qui a été noté par Knierim 
et Mayer ‘. 

Quant au microbe des peaux gélatineuses, il est difficile à 
observer dans la masse dont il fait partie. Il faut pour cela 
prendre une pellicule glaireuse jeune et aussi mince que pos- 
sible, la laver à l’eau, puis avec de la potasse étendue, puis à 
l'acide chlorhydrique dilué. Ces traitements l’amincissent : on la 
dessèche et on la colore aux couleurs d’aniline. Sur les bords de 
préparation, on voit des bâtonnets de couleur foncée, courts, 
serrés l’un contre l’autre dans la masse cellulosique qui les 
englobe. Mais un examen plus attentif montre que ces bâtonnets 
sont formés de chaînes de coccus que le traitement a condensés 
et serrés étroitement. Ces coccus se voient très nettement quand 
on examine un fragment imperceptible de la pellicule glaireuse, 


1. Sur les causes de la fermentation acétique. Landrw. Versuchstat, t. XVI, 1873. 
Voir aussi sur le même sujet Hansen, dans les Comptes rendus du laboratoire de 
Carlsberg, et Brown, L, c., et Action chimique de cultures pures de myc. aceti- 
Journal chem. Soc., 1886, p. 172. 


LS à. 


RECHERCHES SUR LES MICROBES ACÉTIFIANTS. 217 


même sans coloration. Ils sont un peu plus allongés que les coc- 
cus de la forme en voile. 

Ces coccus peuvent comme les précédents donner des fila- 
ments, et je suis d'accord avec M. Brown sur ce fait qu'il n’y a 
pas alors de renflements irréguliers le long du chapelet. 

Il y a donc au moins deux formes de ferment acétique dans 
mes expériences. Faut-il les assimiler au B. aceti et B. pasteuria- 
num décrits par Hansen? Je n'ai pas pu réussir la réaction 
indiquée par ce savant, celle de la teinture d’iode qui colore l’un 
en jaune, l’autre en bleu. Il y a d'ailleurs sans doute de très 
nombreuses espèces de ferment acétique. Ainsi je n’ai jamais 
rencontré dans mes essais ces pellicules demi-solides, couvertes 
de bosselures assez régulières, qui donnent à la surface du liquide 
l'apparence d'un rayon de miel, et que M. Duclaux a décrites 
autrefois ‘. Cette question de la fermentation acétique aurait 
besoin d’être étudiée de plus près qu’elle ne l’a été jusqu'ici. 


1. Microbiologie, p. 594. 


REVUES ET ANALYSES 


J. Korzrar. La morphologie du Microsporon furfur, Vratch., 1892, 
n° 42, p. 1055. 


En 1846 Eichstedt démontrait la présence, dans la pityriasis 
versicolor, d’un champignon particulier qui reçut plus tard de Robin 
e nom de macrosporon furfur, et que l’on s'accorde depuis, à peu 
près généralement, à considérer comme le véritable agent de cette 
affection. 

Bien que ce microorganisme ait été l’objet d’assez nombreux travaux, 
on n'avait pu obtenir jusqu'ici de cultures dans des milieux artificiels. 
Du moins tous les résultats obtenus dans cet ordre d'idées parais- 
saient-ils sujets à contestation. 

L'auteur a été favorisé dans son travail par une circonstance for- 
tuite et passablement désagréable : il était atteint lui-même de l’affec- 
tion en question. 

M. Kotliar opère comme suit. Les squames qui se forment sur les 
endroits atteints de la peau du cou et de la poitrine, sont transplantées 
directement dans de la gélose glycérinée à 5 0/0 que l’on coule ensuite 
dans des boîtes de Pétri (il faut se garder de laver préalablement 
la peau avec de l’alcool et de l’éther, ce qui amènerait la mort de tous 
les microorganismes contenus dans les squames). On obtient, à côté 
de nombreuses colonies de bactéries, de rares colonies du champi- 
gnon. L’expérience ne réussit pas toujours ; bien souvent, le champi- 
gnon est étouffé par des bactéries dont le développement est plus 
vigoureux. Par contre, une fois isolé et transplanté dans un nouveau 
milieu, le microsporon se développe aisément et rapidement. 

La nature parasitaire du microbe a été établie de la manière sui- 
vante. On frotte soigneusement un endroit préalablement rasé de la 
peau d’un lapin avec une certaine quantité de la culture. Un bandage 
aseptique est appliqué par-dessus. On l’enlève huit jours plus tard, et 
l'endroit en question se trouve couvert de taches jaunâtres faisant 
saillie au-dessus de la peau. Ce dernier phénomène est même plus 
marqué que chez l’homme, ce que M. Kotliar explique par le fait que 


REVUES ET ANALYSES. 219 


chez ce dernier les couches supérieures s’usent continuellement par 
le frottement. Sous le microscope, la matière de la tache présente 
l'aspect habituel de la pityriasis. On y remarque notamment les 
petits pelotons caractéristiques composés de conidies du micros- 
poron. Des cultures identiques ont été obtenues par l’auteur à l’aide de 
squames provenant de deux autres personnes atteintes de pityriasis. 

M. Kotliar a cultivé le champignon dans du bouillon glycériné à 
5 0/0, acide ou alcalin, dans de la gélatine peptonisée et glycérinée à 
10 0/0, acide ou alcaline, dans de la gélose alcaline glycérinée à 5 0/0, 
ainsi que sur pomme de terre et sur chou-rave. La réaction du milieu 
ne paraît exercer aucune influence sur le champignon, qui se développe 
également bien en présence d'acides ou d’alcalis. Son développement 
est rapide à 35-36° ; il se ralentit à la température ordinaire. 

Les cultures présentent un aspect très différent selon le milieu. 
Celles faites dans de la gélatine sont particulièrement caractéristiques 
et permettent de reconnaître aisément le Microsporon. Ensemencé 
à la surface de la gélatine, le champignon pousse tout d’abord en 
profondeur, en formant un creux, tapissé d’une masse mycélienne de 
couleur jaune claire. Plus tard, du fond de ce creux s’élève le thalle 
du champignon en proéminences de formes variées. Ensuite, la sur- 
face se plisse en bourrelets. Par contre, l'aspect de la culture par 
piqûre ne présente rien de particulier. 

Dans une très complète description morphologique du micros- 
poron furfur, l’auteur insiste sur l'existence de cloisons dans les hyphes. 
Ces cloisons restent complètement invisibles malgré de très forts 
grossissements (2,250 diamètres). En faisant usage de couleurs d’ani- 
line, on voit parfois les cloisons intercellulaires rester incolores. Tou- 
tefois, l’auteur n’est arrivé à un résultat décisif que par l'emploi suc- 
cessif du chlorure de zinc et d’une solution d’iode dans de l’iodure de 
potassium. Dès lors, les parois se détachent nettement en clair sur 
fond jaune. Les distances qui les séparent sont à peu près égales chez 
la même hyphe, mais elles varient d’une hyphe à l’autre. 

Le microsporon furfur se propage à l’aide de conidies. La forma- 
tion de ces dernières se traduit par l'aspect extérieur de la culture : 
elle blanchit. Bientôt la surface devient grise et pulvérulente. Elle ne 
renferme alors que des conidies seules. Ces dernières sont de formes 
et de tailles diverses. La plupart sont à peu prèsrondes, d'un diamètre 
de 0,5 y environ. D'autres ont une forme ellipsoïdale ou cylindrique. 
Leur longueur varie de 0,75 à 1 x, tandis que leur largeur est à peu 
près deux fois moindre. 

L'auteur a observé la transformation en conidies d’hyphes 
développées dans la profondeur de la gélatine. L'hyphe se partage 


220 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


d’abord, par des cloisons transversales, en petits compartiments. 
Chacun de ces derniers se gonfle, ce qui donne à l'hyphe un aspect 
ondulé. Finalement, les compartiments se séparent. Les conidies 
restent parfois disposées en formes de chaînes continues. 

En comparant ses résultats avec ceux obtenus précédemment par 
MM. Sehlen et Unna, l’auteur arrive à la conclusion que ces savants 
n’avaient pas en main de véritables cultures de microsporon furfur, 
étant donné surtout que tous les essais d’inoculation sur les aninaux 
avaient échoué. 

M. K. fait ressortir en terminant que le nom de microsporon furfur 
n’est pas bien choisi. D'autre part la dénomination botrydion epider- 
miton, mise en avant par M. Barthélemy, ne parait pas meilleure. L’au- 
teur propose oidium subtile à cause de la ressemblance du champignon 
avec l’oidium lactis et de l’extrème ténuité de ses éléments. Mer. 


A. Sccavo. Sur un procédé rapide pour colorer les cils de quelques 
microorganismes. Direction de la Santé, Rome, 1892. 


Nous avons décrit dans ces Annales (t. IT, p. 495) la méthode 
proposée par Loeffler pour colorer les flagelles et les cils des microbes. 
Ce moyen repose, comme on sait, sur l'emploi d'un mordant au tannin. 
La teinture des microbes se modèle de plus en plus sur la teinture 
industrielle. Elle a ses mordants, ses réserves, ses sélections et aussi 
parfois ses caprices. 

Cette méthode ne réussissait pas à colorer les cils de toutes les 
bactéries : aussi Loeffler l’a-t-il un peu modifiée. Il aide à l’action du 
mordant en traitant par une solulion alcaline les bactéries qui rendent 
acide leur milieu de culture, par une solution d'acide sulfurique celles 
qui le rendent alcalin. 

Trenkmann a à son tour proposé des modifications nouvelles. IL 
mordance la préparation par un séjour de 6 à 12 heures dans une 
solution de tannin à 2 0/0 additionnée d’un ou deux millièmes d'acide 
chlorhydrique; puis il la plonge pendant une heure dans une solution 
saturée d’iode. On colore ensuite les cils et les bactéries par un autre 
séjour de 30 minutes dans une solution de violet de gentiane dans de 
l'eau d’aniline. 

Ce procédé n'est pas expéditif. M. Sclavo, n'ayant pas réussi avec 
la méthode rapide de M. Straus (Soc. de Biologie, 1892), en propose 
une autre qui consiste à mordancer la préparation, d’abord avec un bain 
contenant À gr. de tannin dans 100 c. c. d'alcool à 509, puis avec 
un autre formé d’une solution aqueuse d’acide phospho-tungstique 


REVUES ET ANALYSES. 221 


à 5 0/0. On plonge une minute dans le premier, on lave, on porte une 
minute dans le second, on lave rapidement à l’eau distillée et on laisse 
ensuite pendant trois à cinq minutes dans le bain colorant d'Ebrlich, 
légèrement chauffé. On lave, on dessèche et on monte au baume 
dissous dans le xylol. 

Les bacilles avec lesquels on a eu les meilleurs résullats sont le 
bacille du lait bleu, les proteus vulgaris et mirabilis, le bacillus mega- 
tervum, le bacillus mesentericus vulgatus. On n’a pas réussi ainsi à 
découvrir des cils dans les vibrions de Koch, de Metchnikoff, de 
Finkler-Prior, de Deneke et dans le Bacterium coli commune. Les infu- 
sions végétales donnent, en général, des foules de bactéries à cils et à 
flagelles très nettement colorables, 

Dx. 


A. Sccavo. Conservation des virus dans la glycérine. Zome, 1892. 


La glycérine peut servir, comme on sait, à conserver divers virus, 
le virus vaccin, le virus rabique, etc. Exerce-t-elle la même action 
préservatrice sur les bactéries? M. Sclavo a étudié à ce point de 
vue trois bactéries pathogènes, le diplocoque de Fraenkel, le bacille 
du choléra des poules et le bacille charbonneux. Après les avoir élevés 
au plus haut degré de virulence par des moyens appropriés, il préle- 
vait la rate de l'animal qu’ils avaient tué, presque aussitôt après la 
mort, et l’introduisait dans une assez grande quantité de glycérine 
neutre. Le tout était conservé à l'obscurité à la température ordinaire. 
La rate durcissait assez vite. À des époques variées on en taillait un 
morceau qu’on inoculait, après lavage, dans les tissus sous-cutanés 
d’un animal sensible. 

M. Sclavo a trouvé ainsi que le diplocoque de Fraenkel, qui 
d'habitude s’atténue rapidement lorsqu'on le conserve dans son liquide 
de culture, avait encore sa virulence après 67 jours passés dans la 
glycérine. 

Le bacille du choléra des poules tue encore rapidement un lapin 
après 74 jours dans la glycérine; mais, après quatre mois, il était 
devenu inoffensif pour cet animal. 

Le bacille charbonneux, tel qu’il est dans la rate d'un animal qu’il 
a tué, s’atténue au contraire rapidement par son séjour dans la 
glycérine, et sa virulence pour le cobaye a disparu du 72 au 9€ jour 
dans les deux expériences qui ont été faites. 

Il eût été intéressant de voir si ces microbes, devenus inoffensifs 
pour les animaux, étaient restés encore vivants. Quoi qu’il en soit, la 
glycérine peut, comme on le voit, servir à conserver avec leur viru- 


222 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


lence, des microbes qui s’atténuent dans leurs cultures, ou inversement 
rendre inoffensifs, peut-être en les empêchant de donner des spores, 
des bacilles qui maintiennent longtemps dangereux le liquide dans 
lequel ils ont poussé. 

Dx. 


J. G. Sawrcnexxo. Le rôle des mouches dans la propagation de 
l'épidémie cholérique. Vratch., 1892. 


L’auteur a nourri des mouches à l’aide d’un bouillon de culture du 
bacille cholérique, et a recherché ensuite ce microbe dans les excré- 
ments de ces insectes. Deux heures après l’infection, M. S. obtenait, 
à côté d’un grand nombre de colonies de bactéries différentes, quel- 
ques colonies du bacille-virgule. Vingt-quatre heures après, le nom- 
bre de ce dernières était bien plus considérable. 

Afin d’être sûr que ces microbes n’avaient pas adhéré extérieure- 
ment à la mouche, l’auteur, dans une autre série d'essais, plongeait 
ses animaux d’abord dans de l’alcool, puis dans une solution d’acide 
phénique à 5 0/0 et après les avoir séchés rapidement, leur ouvrait le 
ventre et en introduisait le contenu dans un bouillon de culture. Dans 
tous les cas le nombre des bacilles cholériques a été très considérable 
et d'autant plus grand que la mouche avait vécu plus longtemps après 
l'infection. Chez les mouches qui avaient vécu 48 heures, la deuxième 
ou troisième culture ressemblait à des cultures pures du bacille 
cholérique. 

L'auteur infère de ses observations que le rôle des mouches ne se 
borne pas à répandre les microbes qu’elles ont pu avaler, mais que le 
bacille se propage parfaitement dans le canal intestinal de cet insecte. 

D'autres microbes, et notamment le vibrion de Metchnikof, conser- 
vent également leur virulence en passant par le corps de la mouche. 

M. S. s’est servi de petites mouches ordinaires et, concurremment 
avec des dernières, d'une espèce plus grande, qui est particulièrement 
fréquente à Kief vers la fin de l’été. C’est cette seconde espèce qui 
s’est montrée le meilleur propagateur du bacille cholérique. 

Mer. 


PERSONNES MORTES DE RAGE. 223 


INSTITUT PASTEUR 


Personne morte de rage après traitement : 


Linpzey HéserT, 17 ans, de Hudderfeld (Angleterre), mordu le {er août 
1887 par un chien errant, traité à l'Institut Pasteur du 6 au 18 août. 

Les morsures, au nombre de cinq, situées sur la main gauche, étaient 
toutes très pénétrantes et avaient été cautérisées au nitrate d’argent au bout 
d'une heure. 

Les premiers symptômes rabiques se sont manifestés le 31 août 1892 
par des douleurs dans l'épaule gauche et dans la région de la nuque. La 
mort est survenue le 4 septembre, c'est-à-dire cinq ans et un mois après la 
morsure. 

En 1890 Lindley avait eu une lymphangite du bras gauche provoquéepar 
une écorchure profonde faite avec un clou rouillé. 


Personne morte après traitement, d'une affection autre que la rage : 

Duvivier CHARLES, 32 ans, boucher à Paris, mordu au pouce droit, le 
18 octobre 1892, par un chien dont la rage a été constatée par examen vété- 
rinaire. 

La morsure, unique, peu pénétrante, n'avait pas été cautérisée. 

Traité à l'Institut Pasteur du 20 octobre au 3 novembre, Duvivier s'était 
fait quelque temps après, avec son couteau d'étal, à l'index de la main 
gauche une coupure profonde: il est mort le 7 janvier sans avoir présenté 
les symptômes typiques de la rage. A l'examen du cadavre, on constatait 
une traînée lymphangitique partant de l'index et se prolongeant sur toute 
la longueur du bras gauche. Le bras et le côté de la cage thoracique 
étaient gonflés de gaz. Tout le long de cette trainée et surtout dans 
la première phalange de l'index, on trouvait en abondance et à état de 
culture pure un bacille anaérobie qui, inoculé à des cobayes, a amené 
rapidement la mort. 


224 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
INSTITUT PASTEUR 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE — JANVIER 1893. 


A B C 
| | | 
Morsures à la tête ({ simples... ..|»|1 AA 21 4 |”l4i8 
et à la figure multiples... .| »|» » 2| | 4 | 
Cuutérisations efficaces . . : . . . . . . » |» | 3 0 EE RL NO 
— ie NCUCES ren Vol ae DEN RS EU ENS 
Pas de CHUtéRSAUOR. EE EU l ; D POR | pe TT ES | ; 
simples. . . .. »| 41 2 | » |16) »| 6 | 
Morsures aux mains multiples . : Seal ; 16172 » 116122 
Guutérisations efficaces . 7. CA A RS A ET RE ue LE 
— NC COLOR SE OT RE 2|2 1» A EE Re 1e ME PSS EE 
PAS de CLULÉ SALON EEE CE MS OS 0 L fs) AI ES 
Morsures aux mem- simples... ..|»| 4) 5 |» |12)39 | »| 7) 
bres et au tronc multiples... .| v| 1 » 20| »[14(21 
Gautérisations efficaces 5... à | AO SO LE cg a a EL 
— TRE NCACES AN ER ENT A NES EC LE PE CE ee 
Pas decautensation. LEE RE 3| » | » | 21/ » | » MO!» |» 
Habus éChares Re ERNEST 4» |» [27 » | » [19 |» 
HOTSUTES I MINS ie NOR rer 0 CE Se RS ee Te » 
Morsures multiples en divers points du 
COLIS Eee cn Re ta ann Pa Eu JR AO AE A EC 2 EE El 
Cautlerisahions effcuces. LEON SN SN RE ES ER DENE 
— IRON NOUCES TANT NE Lol» ls!» | » |»l»l» 
Pas de cautérisation... +. :. ; . . . . 2 1!» 3/52/2400 
HAbUSTAÉCRES ER RME 5 2| 61 EDP EC NEED 
IMOTSURES RAR PAT RENE DE EAN ES Dell » »l » | » 


Français et Algériens. 10140 58) 38) 
Lotaux;, Etrangers rh dire » | 13) Le E 
| | 
A B C 
mm 
TOTAL'GENÉRAL 2e LENS ROURS 133 


Les animaux mordeurs ont été : chats, 4 fois ; bœuf, 2 fois; 
chiens, 127 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


7m0 ANNÉE MARS 1893. No 3. 


ANNALES 


DE 


L'INSTITUT PASTEUR 


MOYENS DE DÉFENSE DE L'ORGANISME CONTRE LES MICROBES 


APRÈS VACCINATION ET DANS LA GUÉRISON 
Par M. LE D' SANARELLI 


Dôocent d'hygiène à l'Universilé de Sienne. 


(Travail du Laboratoire de M. Metchnikoff.) 


I 


Les remarquables résultats qu'ont produits et fait espérer 
dans ces dernières années les études sur l’immunité contre les 
maladies infectieuses obligent à établir exactement la facon dont 
se produit cette immunité, et dont l'organisme vacciné réagit et 
se défend contre les microbes pathogènes. 

Bien que ces études soient toutes récentes et se limitent 
encore au petitnombre de maladies infectieuses contre lesquelles 
nous possédons un traitement prophylactique, la question est 
tout à fait à l’ordre du jour, et soulève de nombreuses contro- 
verses. 

En peu d'années, de nombreuses théories ont été émises 
pour expliquer le mécanisme de l'immunité acquise ; mais en ce 
moment il n’y a guère en présence, parmi les grands moyens 
de défense de l’organisme vacciné contre les microbes, que les 
cellules et les humeurs. 

Le premier a été signalé par M. E. Metchnikoff, qui a 
ouvert la voie à une série sans cesse grandissante de recherches. 
Il se résume en une modification dynamique de l'organisme, et 
fait intervenir des activités cellulaires pour la destruction des 


15 


226 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


microbes pathogènes. Le grand nombre d'arguments apportés 
par M. Metchnikoff et son école en faveur de cette théorie pha- 
gocytaire n’a pourtant pas empêché d'invoquer, pour expliquer 
l'immunité vaccinale, d'autres conditions statiques, consistant 
en des propriétés chimiques spéciales du sang et des humeurs, 
qui seraient en état de protéger à eux seuls l'organisme. 

Leur puissance sous ce rapport nous paraît aujourd’hui 
pouvoir êlre envisagée sous trois aspects différents : 1° les 
liquides de l'organisme pourraient tuer les microbes (propriété 
bactéricide); 2° ils pourraient se borner à leur enlever leur 
pouvoir pathogène (propriété atténuante); 3° ils pourraient agir 
directement sur les toxines sécrétées par les bactéries pour en 
peutraliser les effets (propriété antitoxique). 

A toutes ces conditions correspondent autant de faits expé- 
rimentaux, sur lesquels on a voulu fonder la théorie générale 
de l'état bactéricide de l'organisme vacciné, et qui font en ce 
moment l’objet de recherches intéressantes et passionnées. 

Parmi les exemples les plus remarquables invoqués en 
faveur de la propriété bactéricide des humeurs, il faut placer 
ceux querapportent MM. Behring et Nissen', dans leurs étudessur 
les propriétés bactéricides du sérum des animaux vaccinés contre 
le Vibrio Metchnikovi: ce vibrion, qui se multiplie activement 
dans le sérum du cobaye normal, périt rapidement au contraire 
dans le sérum du cobaye vacciné. Ce serait là, d’après Behring et 
Nissen, l'unique cause de l’immunité vis-à-vis de l'infection 
déterminée par ce microbe. 

MM.Charrinet Roger ont apporté d’autres preuves du pouvoir 
atténuant du sérum. Déjà, en 1887, Metchnikoff* avait vu que 
les bacilles charbonneux développés dans le sang des moutons 
vaccinés avaient perdu la propriété de tuer le lapin. Charrin et 
Roger ont retrouvé le même fait en cultivant le streptocoque?, le 
pneumocoque* et le bacille pyocyanique dans le sang des 


4. Ucber bacterienfeindliche Eigenschaften verschiedener Blutserumarten 
(Zeitschrift für Hygiene 1890, p. 412.) 

9, Sur l’atténuation des bactéridies charbonneuses dans le sang des moutons 
réfractaires. (Annales de l'Inst. Pasteur, 1887, p. 42.) 

3, Rocer. Propriétés bactéricides du sérum pour le streptocoque de l’érysipèle. 
(Semaine médicale, 1890, p. 397.) 

4. Rocen. (Revue gén. des Sciences, 1891, p. 445.) 

5. Cuarun et Rocer. Atténuation des virus dans le sang des animaux vaccinés. 
(Sociéle de Biologie. 2 juillet 1892.) 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 227 


lapins vaccinés, et ils s’en sont autorisés pour formuler une 
théorie du pouvoiralténuant des humeurs, théorie suivant laquelle 
les microbes pathogènes perdent leur virulence au contact du 
sang des animaux vaccinés. 

Quant aux propriétés antitoxiques des humeurs, elles ont été 
successivement constatées par MM. Behring et Kitasato' pour le 
tétanos et la diphtérie, par G. et F. Klemperer? pour le pneumo- 
coque, et par Ehrlich* pour quelques toxines végétales (ricine, 
abrine, rubine); mais il devient de plus en plus douteux que le 
pouvoir antitoxique des humeurs d’un animal vacciné soit lié au 
phénomène de l’immunité. 

On conçoit pourtant que beaucoup de savants donnent à 
cette influence humorale un rôle exclusif ou prédominant dans 
la production de l’immunité. La question est du reste tellement 
complexe et tellement plurilatérale qu'il faut en séparer et en 
étudier séparément les divers facteurs, les comparer les uns 
aux autres, et se faire ainsi une idée de leur valeur respective. 
C'est ce que fait M. Metchnikoff depuis longtemps, et ce que j'ai 
essayé de faire, sous sa direction, en étudiant sous tous les points 
de vue l’immunité vaccinale contre la maladie déterminée par le 
Vibrio Metchukovi. 


Il 


Cette maladie, décrite pour la première fois par Gamaleïa ‘ 
dans le pigeon et les petits oiseaux, est facilement transmissible, 
comme on sait, au cabaye, chez lequel elle prend les allures et 
les caractères d’une septicémie très aiguë. Elle est inoculable 
par voie sous-cutanée, périlonéale etintra-veineuse, mais on n’a 
pas réussi, contrairement aux résultats de Gamaleïa, à la donner 
aux animaux (cobayes, pigeous) par voie intestinale. 

Depuis Gamaleïa, cette maladie a été bien étudiée et à divers 


4. Ueber das Zustandekommen der Diphterie und der Tetanus Imimumität bei 
Thieren. (Deutsche Medicin. Wochenschrift, 4890, no 49, p. 1118). 

2, Versuche über Immunisirung und Heilung bei der Pneumoniekokkeninfec- 
tion. (Berliner Klin. Wochenschr, 1891, pp. 851-869.) 

3. Experimentelle Untersuchungen über Immunität. (Deutsche Medicin. Wochens- 
chrift, 1891, pp. 976-1218.) 

4. Voir Annales de l'Instilut Pasteur, 1888, pp. 482 et 552; 1889, pp. 542 et 
609 et 256. 


228 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


points de vue par Pfeiffer‘, Behring et Nissen*, et enfin par 
Metchnikoff* qui l’a fait servir à de multiples recherches sur le 
sort des microbes dans l’organisme des animaux vaccinés. 

Ces recherches ont révélé plusieurs faits en grande partie 
inconciliables avec les conclusions de Bebring et Nissen. Elles 
ont démontré que, si les vibrions sont détruits in vitro par le 
sérum des cobayes vaccinés, ils se multiplient au contraire et 
augmentent même de virulence par un séjour prolongé dans le 
sang du même cobaye vacciné. Elles ont démontré aussi que les 
leucocytes des exsudats sous-cutanés ou de la chambre anté- 
rieure de l'œil peuvent englober les vibrions à l’état normal, et 
entraver leur développement, que favoriserait au contraire, si elle 
était seule, la partie humorale de l’exsudat. 

Ces faits si importants méritent d’être étudiés de près et à 
divers points de vue. Étudions d’abord la façon dont se com- 
portent les vibrions dans le sérum des cobayes réceptifs et 
vaccinés. 

On vaccine en quelques jours le cobaye contre la septicémie 
produite par le vibrion aviaire en lui injectant, àdiverses reprises, 
5 à 6 c. c. de culture en bouillon, stérilisée à 120°. Après une 
inoculation d’épreuve, faite avec 1 à 2 c. c. de culture viru- 
lente, les cobayes qui ont résisté peuvent être considérés comme 
tout à fait insensibles à la maladie, et en état de fournir un 
sérum en pleine possession de son pouvoir bactéricide. 

Pour vérifier cette propriété, j'ai pris du sang à un cobaye 
réceptif et à un cobaye vacciné, et, après en avoir retiré 5 c. c. 
de sérum très limpide, j'ai introduit chacun des échantillons 
dans un tube, et l’ai ensemencé tout de suite avec une goutte de 
sang du cœur d’un cobaye mort de l'infection vibrionienne. Ces 
tubes de sérum ont ensuité été mis à l’étuve à 370, et à divers 
intervalles successifs on en prélevait, à l’aide d'une anse de pla- 
tine, une quantité constante, qu’on faisaitservir à une numération 
de microbes par la méthode bien connue des plaques de 
gélatine. 


4, Ueber den Vibrio Metchnikoff und sein Verhältniss zur Cholera asiatica. 
(Zeitschrift für Hygiene, t. VII, 1889.) 

2 Loc. icil. 

3. L’immunité des cobayes vaccinés contre le Vibrio Metchnikovi. (Annales 
de l'Institut Pasteur, 1891, p. 465.) 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 229 


Voici les nombre de colonies obtenues dans ces essais suc- 
cessifs : 


TOUT APRÈS APRÈS | APRÈS APRÈS | APRÈS 


DE SUITE. 9 (h. 6 h. 18 h. 24 h. 40 h. 


NE plaque .| 1.120 D64 
( 22 plaque. 815 90 1.300 


Cobaye normal 


1re pl 36 
Cobaye vacciné \ plaque. 726 
{ 2° plaque. 960 


Ces chiffres sont loin, on le voit, de confirmer les résultats 
de Behring et Nissen. Tant pour le cobaye non vacciné que pour 
l’autre, le sérum a bien manifesté in vitro un certain pouvoir 
bactéricide, mais non sur tous les microbes. Dans les deux 
cas, et surtout pour le cobaye vacciné, pour lequel, après 3 ou 
6 heures, on aurait pu croire à une destruction complète des 
microbes par le sérum, il y a eu des vibrions qui ont résisté, 
se sont adaptés aux conditions de ce nouveau milieu et ont fini 
par peupler les sérums tant de l'animal immunisé que de l’aui- 
mal sensible. 

On dirait un véritable procès de sélection, où les microbes 
les moins résistants périssent pour faire place à une nouvelle 
génération plus forte et moins facilement influencée par les pro- 
priétés bactéricides du sérum. 

Il est bien entendu que je ne prétends pasinfirmer par ce qui 
précèdeles expériences de Behring etNissen.Jetrouve en fait qu'ils 
n’ont pas poussé au delà de la 20e heure les numérations des 
colonies, et c'est peut-être pour cela qu'ils ont été conduitsà voir, 
après 3 à 5 heures, une destruction totale là où 1l y avait seule- 
ment une diminution du nombre des microbes vivants. 

Mes résultats s’étant retrouvés constammentles mêmes dans 
une foule d'occasions, j'ai été conduit à une nouvelle série de 
recherches sur ce que deviennent les diverses propriétés biolo- 
giques des vibrions dans le sérum des cobayes vaccinés. 


230 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


III 


En voyant ce beau développementdes vibrions dans le sérum 
des cobayes vaccinés, on pense tout de suite aux faits récemment 
constatés par Charrin et Roger sur le sérum des lapins vaccinés 
contre la maladie pyocyanique. Dans ce sérum, le bacille pyocya- 
nique se développe en perdant sa virulence et tout pouvoir patho- 
gène. 

Je me suis donc hâté d'essayer sur les cobayes et les pigeons 
l’action du Vibrio M. développé dans le sérum des cobayes neufs 
et vaccinés, et j'ai vu tout de suite que dans le sérum normal 
la virulence restait normale, tandis que les cultures dans le 
sérum d'un cobaye réfractaire avaient perdu toute action patho- 
gène. En effet, à l'exception d’une infiltration plus ou moins 
accusée au point d’inoculation, il n'y a d'ordinaire rien à noter 
sur l’animal, qui survit toujours. 

La conclusion logique serait donc que la culture dans le sérum 
des cobayes vaccinés amène une perte de virulence ; mais, pour 
appliquer ces résultats à l'explication de l’immunité acquise, il 
est indispensable d'expérimenter sur l’animal vivant. Metchni- 
koff a montré que le vibrion conserve assez longtemps sa viru- 
lence dans le corps du cobaye réfractaire; j’ai répété ses expé- 
riences et je puis dire qu'il n'y a pas seulement conservation, 
il y a augmentation notable de virulence: les cultures en bouillon 
obtenues au moyen de l’exsudat d’un cobaye vacciné sont presque 
‘oujours plus actives queles cultures originelles. Cette divergence 
-ondamentale des résultats en dedans et en dehors de l’organisme 
nous oblige à étudier de près ce phénomène. 

Par analogie avec ce qu’on fait quand on sème dans le 
bouillon une goutte de l’exsudat d’un cobaye réfractaire inoculé 
avec le virus vivant, ensemencons dans du bouillon une culture 
du vibrion qui s’est développé in vitro dans ie sérum d’un animal 
vacciné, culture qui se montre inactive même sur les animaux les 
plus sensibles. 

Après 24 heures, cet ensemencement a donné une culture 
très belle et très virulente, car 1 c. c. tue d'ordinaire un cobaye 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 231 


en moins de temps que le virus originel avec lequelon a ense- 
mencé le sérum. Et comme on sait que les cultures du vibrion 
dans le bouillon tendent à s’atténuer au lieu de se renforcer, il 
faut conclure que les vibrions développés dans le sérum des 
cobayes vaccinés non seulement conservent leur virulence, mais 
peuvent l’exalter. 

Il n'y a donc aucune divergence entre ce qu’on observe dans l'or- 
ganisme vivant et vacciné et dans le sérum extrait du corps. Dansles 
deux cas, les vibrions peuvent se multiplier, et, transplantés dans 
le bouillon, ils y prennent un pouvoir pathogène supérieur ou 
au moins égal à celui de la culture originelle. 

Il devient donc plus difficile d'attribuer un pouvoir atténuant 
aux liquides organiques de l’animal vacciné. Mais il reste à expli- 
quer pourquoi l'injection d’une culture développée dans le sérum 
d'un animal vacciné est incapable de donner la septicémie vibrio- 
nienne aux animaux neufs. 

Dans ses recherches sur l’immunité des lapins vaccinés contre 
le Hog-Choléra, M. Metchnikoff a eu l’occasion de faire une 
observation semblable à celle qui précède. Après avoir vu que 
le coccobacillus suinum développé dans le sérum des animaux 
vaccinés tue les lapins neufs beaucoup plus tard que les cultures 
faites dans du sérum de lapin non vacciné, il a eu l’idée de 
séparer les microbes de leur liquide de culture, supposant que le 
sérum pouvait à lui seul ralentir la marche de la maladie. L’ex- 
périence a vérifié cette idée, et le coccobacillus suinum cultivé dans 
le sérum des lapins vaccinés s’est montré plus virulent, 
après lavage au moyen de la solution physiologique de sel 
marin. 

Partant de ce même principe, j'ai soumis à un lavage les 
cultures de Vibrio M. développées dans le sérum des cobayes 
vaccinés. Le moyen qui semble le plus facile pour séparer le 
microbe de son liquide de culture est une simple filtration. Ces 
vibrions ne se développent pas uniformément dans la masse du 
sérum, mais forment à sa surface une pellicule plus ou moins 
abondante qui reste sur le filtre, et peut être lavée à plusieurs 
reprises, soit avec le sel marin à 0,75 0/0, soit avec du bouillon 
stérilisé. Quand on n’a pas le soin d'obtenir cette pellicule, une 
grande partie des bacilles passe à travers le filtre. 

Comme, pour tuer un cobaye par inoculation sous-cutanée, 


232 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


il ne faut pas moins de 0,5 à 1 c.c. de culture, on peut penser 
que les pertes par suite de la filtration et des lavages devront 
exercer une grande influence sur les résultats de l'inoculation 
de ce qui est resté sur le filtre. 

Mes premiers essais sur le cobaye ne m'ayant donné que des 
résultats peu démonstratifs, je me suis décidé à m'adresser 
aux pigeons, beaucoup plus sensibles à ce vibrion, et pour 
lesquels la dose mortelle est beaucoup plus faible que pour ie 
cobaye. 

Voici la technique simple que j'ai adoptée : dans un tube 
d'essai contenant 4 à 5 c.c. de sérum, extrait d’un cobaye vacciné, 
je semais une goutle de sang, ou mieux, un fragment de pulpe 
de larate d’un cobaye mort le même jour de la septicémie ; je 
semais aussi une goutte de sang dans du bouillon ordinaire, et 
les deux cultures étaient mises à l’étuve à 37°. 

Après 48 heures, au moins, j'inoculais trois pigeons dans le 
muscle pectoral, dans l’ordre et le mode suivants : 

1% pigeon, 1 c.c. de culture dans le sérum ; 

2 pigeon, À c.c. de culture dans le sérum, lavée ; 

3 pigeon, À c.c. d’une culture dans le bouillon, obtenue direc- 
tement la veille en prenant la semence dans la culture faite dans 
le sérum. 

Quand je ne connaissais pas avec précision la virulence 
originelle de mes vibrions, j'inoculais aussi un 4° pigeon avec 
4 c.c. de la culture dans le bouillon ensemencée dès l’origine 
avec le sang du cobaye. 

Chaque expérience me donnait quatre nombres différents 
qui me renseignaient : 1° sur la virulence des vibrions déve- 
loppés dans le sérum des cobayes vaccinés, et inoculés avec 
leur sérum de culture; 2° sur la virulence de ces mêmes 
vibrions inoculés sans traces de sérum; 3° sur le gain ou la 
perte de virulence résultant de la comparaison entre la virulence 
de la culture dans le bouillon d’origine et la virulence d’une 
seconde culture ayant passé par le sérum. 

J'ai fait neuf expériences pareilles, et voici les chiffres qui 
indiquent pour chacune d’elles le nombre d’heures écoulées entre 
linoculation et la mort de l'animal. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 233 


Virulence originelle du 
vibrion. 


Virulence du vibrion dans 
le sérum 


Virulence du vibrion dans 
le sérum, après la- 


Virulence après trans- 
port du sérum dans le 
bouillon 


Ces chiffres demandent quelques mots de commentaire. 

Dans toutes les expériences, sauf une (IV), les vibrions 
cultivés dans le sérum des cobayes vaccinés, et inoculés 
avec leur liquide de culture, n’ont pu déterminer d'infection 
générale. 

Dans les expériences V, VI, VII, VIIL IX, les vibrions 
cultivés dans le sérum, mais soumis au lavage, se sont montrés 
plus virulents que ceux de la culture originelle, également 
virulents dans l’expérience Il, moins virulents dans l’expé- 
rience IV. La virulence semble nulle dans l’expérience I; mais, 
dans ce cas, on a opéré sur des cobayes, et la diminution des 
microbes, produite par le lavage, les a peut-être empèchés de 
donner la mort. La même hypothèse s'applique peut-être à 
l'expérience III, bien qu’elle ait porté sur des pigeons. 

Dans toutes les expériences, sauf deux (IL et V), les vibrions 
développés dans le sérum ont donné dans le bouillon des nou- 
velles cultures plus virulentes que la culture originelle, tuant en 
11 h. 50 en moyenne, au lieu de 17 h. 25. Les expériences IT et V 
échappent à la comparaison à cause d’une impureté accidentelle 
de la culture en bouillon. 

L'expérience IX a été faite sur le cobaye, comme l’expé- 
rience Ï[, mais avec cette différence que l’inoculation, au lieu 
d'être sous-cutanée, a été intrapéritonéale, pour éliminer les 
causes d’insuccès dues à la diminution des vibrions par le lavage. 
Les résullats m'en ont paru assez nets pour me faire conclure 
que les vibrions cultivés dans le sérum des cobayes vaccinés ne 
s’atténuent pas, mais conservent où exaltent leur virulence, et 


234 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


prennent, par une nouvelle culture dans le bouillon, une virulence 
presque toujours supérieure à leur virulence originelle. 

Tout cela donne la conviction que, dans le mécanisme de 
l'immunité vaccinale, le sérum n’agit ni par sa propriété bacté- 
ricide, ni par son pouvoir atténuant sur les microbes. 


IV 


Ce sérum, incapable de tuer ou d’atténuer les microbes, 
exerce peut-être une action quelconque sur les toxines élaborées 
par eux pendant leur séjour dans l’organisme; en d’autres 
termes, le sérum des animaux vaccinés contre le Vabrio M. 
possède-!-il un pouvoir antitoxique comme celui des animaux 
vaccinés contre le tétanos et la diphtérie ? 

L’infection déterminée parle vibrion aviaire est en effet accom- 
pagnée de toxines actives, qu’on peut obtenir facilement même 
dans les milieux artificiels. Quelques centimètres cubes d’une cul- 
ture en bouillon, stérilisée à 120°, peuvent tuer un cobaye en quel- 
quesheures avec tous les phénomènes d'unempoisoninement aigu, 
et cette propriété peut être utilisée pour étudier le pouvoir 
antitoxique éventuel du sérum. 

Pour cela j'ai préparé des cultures dans le bouillon simple, 
contenant 5 0/0 de gélatine, et, après 8 à 10 jours à 37°, je les ai 
stérilisées à 120°, laissées en repos 7 à 8 jours, etessayé leur 
pouvoir toxique. J’ai vu que 2 c. c. 5 à 3 c. c. de ce liquide 
vaccinal, injectés sous la peau, suffisaient d'ordinaire à tuer 
100 grammes de cobaye. 

J'ai fait cinq expériences pour vérifier le pouvoir antitoxique 
éventuel du sérum; je choisissais chaque fois deux cobayes aussi 
égaux que possible ; tous deux recevaient sous la peau la dose 
toxique de culture stérilisée, et à l’un d’eux on injectait simul- 
tanément, sous la peau, de 6 à 9 c. c. de sérum d’un cobaye 
réfractaire. Si ce sérum était antitoxique, il aurait dû sauver 
l'animal. Voici, comptés en heures, les délais de mort dans les 

_divers cas : : 


l II III IV Ÿ 
Injection de toxine seule ........ 5) 6 95 15 12 
Toxine et sérum de cobaye vacciné. . » » 82 410: 5249 
Toxine et sérum normal. ..,...., = — 95 11 16 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 235 


Pour expliquer les contradictions apparentes de quelques- 
unes de ces expériences, je dois dire que les cobayes n’ont pas 
tous la même sensibilité vis-à-vis des toxines du Vibrio M. 
Dans mes recherches préparatoires pour établir exactement à 
chaque fois le pouvoir toxique des cultures stérilisées, j'ai, er 
effet, vu à plusieurs reprises mourir des cobayes qui avaient 
reçu 2 à 3 0/0 de leur poids de la culture, et survivre d’autres 
qui en avaient reçu 4 0/0. Ces précédents sont à invoquer au 
sujet des résultats des expériences I et IT. D'un autre côté, les 
résultats, évidemment négatifs, des expériences III, IV et V, 
empêchent d'attribuer au sérum aucun pouvoir antitoxique. 

Dans le but de me faire une idée précise au sujet de l'aptitude 
de notre microbe à produire ses poisons dans des humeurs de 
cobayes réfractaires, j'ai éprouvé l’action toxique des cultures 
du vibrion dans le sérum même des animaux vaccinés. 

Pour cela, j'ai inoculé, dans des tubes à essai, du sérum de 
cobayes hypervaccinés avec du sang riche en vibrions, et j'ai 
laissé le tout pendant 10 à 16 jours à 37°. Après ce temps, les 
pellicules superficielles si caractéristiques s'étaient reformées à 
plusieurs reprises et étaient tombées au fond, formant ainsi un 
fort dépôt. 

On stérilise très suffisamment le tout par un séjour de 3 cu 
4 heures dans un bain d'eau à 60°; on laisse en repos encore 
une dizaine de jours, et on a ainsi un liquide prêt pour l'étude. 
Trois de ces cultures m'ont donné des résultats si concordants 
que je les considère comme définitifs. 

Deux premiers cobayes sont morts en 9 heures après avoir 
recu une dose de ces cullures stérilisées correspondant à 2,5 
et 30/0 de leur poids. Un troisième est mort en 11 heures après 
en avoir reçu l'équivalent de 2 0/0 de son poids. 

Ces empoisonnements sont caractérisés par une hypothermie 
marquée, qui commence tout de suite après l'injection et pro- 
gresse jusqu’à la mort, qu'on voit survenir quasi toujours lors- 
que la température rectale est descendue à 31-32°. 

Le fait notable de ces expériences est d’avoir obtenu l’em- 
poisonnement avec une dose de 2 0/0 du poids de l'animal, ce 
que je n'avais pas réussi à obtenir avec des cultures de mon 
vibrion dans le bouillon simple ou gélatinisé, quoique sa viru- 
lence fût la mème dans un cas et dans l’autre. 


236 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Ces résultats, si démonstratifs dans leur simplicité, me con- 
firment dans ma conclusion que le sérum des cobayes vacci- 
nés contre le Vibrio Metchnikovi n'est pas doué de propriétés 
antitoxiques, mais qu'au contraire les microbes s’y développent 
en formant des toxines plus actives que celles qu’ils forment 
dans les milieux nutritifs ordinaires. 


y 


L'étude du sérum des animaux vaccinés, au point de vue de 
ses propriétés bactéricides, atlénuantes où antitoriques, nous a 
amené peu à peu à éliminer l'influence de ces trois facteurs dans 
le procès de l’immunité acquise. 

Reste toujours à expliquer pourquoi on ne peut déterminer 
l'infection en injectant à un animal une culture du vibrion dans 
le sérum d’un animal vacciné. Si ce sérum ainsi inoculé n’a d’ac- 
tion ni sur ses vibrions ni sur leurs toxines, il faut qu'il en 
exerce une sur l’organisme de l'animal inoculé. Cherchons 
quelle pourrait être cette influence. 

Le premier essai à faire dans cette voie consiste à diluer dans 
le sérum et à inoculer avec lui une dose mortelle de culture 
vivante. Mes recherches à ce sujet ont été assez nombreuses et 
m'ont montré que le sérum des cobayes vaccinés possède , de la 
façon la plus manifeste, des propriétés préventives et thérapeutiques. 

Il suffit en effet de mélanger 0,5 c. c. de sérum à 1 c. c. de 
culture vivante dans du bouillon pour rendre inoffensive l’inocu- 
lation du Vibrio M. : les animaux ainsi traités présentent au point 
d'injection une infiltration plus ou moins marquée qui guérit 
vite; les animaux témoins meurent dans les délais ordinaires. 

Ce sérum des animaux vaccinés ne manifeste pas seulement 
son efficacité préventive quand on l’introduit au point d'injection 
du virus: à l’exerce aussi à distance; seulement, dans ce cas, 
0,5 c. c. ne suffisent pas à empècher l'infection : il faut augmen- 
ter beaucoup la dose et la porter jusqu’à 5 ec. c. J'ai trouvé en 
effet que 4 c. ©. ne sauvent pas l’animal, et retardent seulement 
le moment de sa mort. (Voir Appendice n°1[F, exp. 3.) 


ni 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 237 


Ces effets thérapeutiques du sérum des animaux immunisés 
se manifestent toujours sans exception lorsqu'on a convenable- 
ment vacciné le cobaye auquel on emprunte le sang vaccinal, 
et l’action à distance résulle de ce qu’en inoculant, par exemple, 
le virus sous la peau du cou, et le sérum sous la peau d’un des 
membres postérieurs, ou inversement, l'animal échappe à lin- 
fection aussi bien que si les deux injections avaient été faites au 
même point. Voyons maintenant comment se comportent les 
vibrions dans les tissus des animaux traités par le sérum 
thérapeutique. 

J'ai déjà dit que ce sérum, injecté à proximité ou à distance 
d’une culture virulente, préservait les animaux : il se forme, au 
point d'injection des vibrions, un œdème etune infiltration puru- 
lente plus ou moins étendue, qui persiste plus ou moins, et s’ul- 
cère quelquefois pour se réparer ensuite par du tissu cica- 
triciel. 

Sur des cobayes ainsi traités, j'ai retiré, à divers intervalles 
successifs, du point d'inoculation du virus et du sérum, une 
goutte d'exsudat que j’ensemençais aussitôt dans du bouillon. 
J'ai vu ainsi que le vibrion conserve longtemps sa vilalité et sa 
virulence. Avec un cobaye qui avait reçu sur des points assez 
éloignés l'injection du virus et celle du sérum, j'ai ainsi obtenu 
après six jours des cultures très virulentes. (V. App. IV, exp. 5.) 
Mais il n’est pas facile de pousser très loin ces observations, car 
l’abcès qui se forme presque toujours au point d'injection du 
virus s'ouvre à l'extérieur et est envahi par des microbes 
variés. 

Quandle sérum préventifestinjecté au mème pointquele virus, 
les microbes disparaissent un peu plus vite, l’abcès est un peu 
plus circonserit et se résorbe en général peu à peu sans s'ouvrir. 
Ainsi, sur deux cobayes qui avaient reçu, en même temps que 
4 c. ce. de culture virulente, respectivement 3 et 5 c. c. de sérum 
préventif, je n’ai plus trouvé de microbes vivants après 18 et 
24 heures écoulées depuis l’inoculation. 

Mais malgré ces cas exceptionnellement favorables, dans ies- 
quels le contact du sérum thérapeutique semble accélérer la dis- 
parition des microbes, il reste acquis que les vibrions peuvent 
habiter longtemps les tissus de animal sans perdre de leur viru- 
lence, et alors il y a à se demander comment se comporte l'or- 


238 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


ganisme à l'égard des toxines qui ne peuvent manquer de se for- 
mer, puisqu'elles sont liées à la vie des microbes pathogènes. 

Des expériences que nous avons consacrées plus haut à 
démontrer l'absence du pouvoir antitoxique dans le sérum des 
animaux vaccinés l'on ne peut pas conclure qu'il en soit de 
même dans le corps des cobayes, car nous savons la différence 
des phénomènes qui se passent dans l'organisme et de ceux 
qu'on observe dans le sérum extrait de ce même organisme. On 
peut donc se demander si les cobayes vaccinés ou traités contre 
l'infection par le vibrion avicide sont en état de détruire les 
toxines élaborées par ce vibrion. 

À cette demande ont déjà répondu Gamaleïa, Pfeiffer, Met- 
chnikoff, qui ont vu que les cobayes complètement vaccinés 
contre le vibrion vivant étaient aussi sensibles aux toxines que les 
cobayes non vaccinés. 

Je puis, de mon côté, non seulement confirmer ces résultats, 
mais encore ajouter que plus les cobayes sont vaccinés, plus ils 
se montrent sensibles aux toxines, si bien que dans des expé- 
riences failes pour pousser au maximum la tolérance vis-à-vis 
de ces toxines j'ai dû bientôt m'arrêter, frappé de la sensibilité 
excessive des cobayes vaccinés par comparaison avec les cobayes 
normaux. 

Il y a un dernier point à envisager : les animaux guéris à la 
suite d’un traitement par le sérum thérapeutique n’acquièrent 
pas l'immunité vis-à-vis d’une nouvelle injection virulente, et 
ne fournissent pas un sérum doué de propriétés préventives. 
Ainsi tous ceux de mes pigeons qui avaient survécu à l’injec- 
tion d'une culture développée dans le sérum thérapeutique, ont 
été inoculés successivement à différentes périodes avec des 
cultures virulentes, et sont morts dans les délais ordinaires, 
c’est-à-dire en 8 à 16 heures. De même pour les cobayes, avec 
lesquels la mort arrive seulement avec un retard plus ou moins 
marqué, imputable à la pelite quantité de substance vaccinante 
inoculée avec le virus et le sérum préventif. 

En considérant maintenant la grande facilité de la vaccina- 
tion contre le Vibrio Metchnikovi, et la petite dose de substance 
vaccinante nécessaire pour cela, on ne s'explique pas comment 
les vibrions ne produisent pas ce qu'il faut de vaccin pour con- 
férer l’immunité, pendant leur période de vie dans les tissus. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 239 


En rapprochant ce fait de ce que nous savons sur la manière 
d'être des vibrions dans le sérum des animaux vaccinés, il faut 
retenir que si les vibrions, tout en vivant dans les Lissus et en 
y conservant leur virulence, n'éliminent pas leurs principaux 
produits d'échange, c’est saus doute qu'ils n’y vivent pas libres, 
et sont peut-être à l'intérieur des éléments cellulaires de l'in- 
filtration sous-cutanée qui se forme au point d’inoculation du 
virus. 

Pour se faire une idée précise de celte possibilité, il suffit 
d'extraire une goutte de cette infiltration chez un cobaye 
traité par le sérum thérapeutique, el de l’examiner au micro- 
scope après coloration préalable : on reste alors surpris de l'ab- 
sence complète des vibrious, qu'aucune recherche ne permet de 
découvrir. Si, au contraire, on met à 37°, à l’état de goutte pen- 
dante, un peu de cette sérosité, on y trouve, au bout de quelques 
heures, de nombreux vibrions endocellulaires, qui finissent par 
envahir toute la goutte. D'où sont-ils venus, et comment se sont- 
ils ainsi multipliés en dehors de l’organisme vivant ? 

Les expériences de M. Metchnikoff sur le vibrion avicide et 
le coccobacillus du Hog-Choléra ont montré que les microbes 
peuvent être englobés par les phagocytes et y rester longtemps 
vivants, de facon à pouvoir s’y développer et envahir le liquide 


‘ambiant, dès que le phagocyte est placé dans de mauvaises 


conditions d'existence en dehors de l'organisme. Cela nous 
explique la contradiction apparente que nous venons de signa- 
ler entre les résultats de l'examen microscopique et ceux de la 
culture en goutte pendante, et nous voyons aussi pourquoi, 
pendant leur long séjour dans les tissus d’un animal traité par 
le sérum thérapeutique, les vibrions peuvent rester vivants à 
l'intérieur des leucocytes, et sans donner des produits d'échange; 
nous pouvons admettre enfin que ces leucocytes peuvent être 
un moyen efficace de résistance à la maladie. 


VI 


Quel est le procès de guérison d’un animal traité par le 
sérum thérapeutique ? L'étude de cette question a une impor- 


240 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tance très grande, surtout en ce moment, en présence des tenta- 
tives si nombreuses d’hématothérapie. 

Comme nous avons pu retirer, après plusieurs jours, des 
vibrions virulents du corps d'animaux traités par le sérum 
préventif, on ne saurait attribuer la guérison à une action bacté- 
ricide ou atténuante du sérum. Nous avons pu aussi éliminer la 
possibilité d'un pouvoir antitoxique du sérum lui-même. Il ne 
nous reste donc plus qu’à chercher du côté des éléments 
cellulaires. 

Pour étudier leur intervention dans toutes ses phases, et la 
mettre en rapport avec les phénomènes qui accompagnent l’éli- 
mination des microbes de l’organisme, la meilleure méthode 
est d'étudier pas à pas tout ce qui se passe dans la région limi- 
tant le foyer où se poursuit le procès local de l'infection et de 
la guérison, et de mettre en regard ce procès local et les modi- 
fications qui peuvent se produire dans l’organisme. 

Pour la première partie de cette étude, j'ai choisi 3 cobayes, 
dont un bien vacciné, en prenant soin que leur peau ne füt pas 
pigmentée, ce qui rend plus difficile la comparaison entre les 
manifestations phlogistiques locales. Après avoir dilué dans un 
peu de bouillon une grosse couche de culture récente sur gélose, 
je leur ai inoculé à chacun, dans le pavillon de l'oreille droite, 
5 gouttes de ce liquide. L’un d'eux, un cobaye non vacciné, a 
reçu en outre sous la peau du dos 5 c. c. de sérum tiré d'un 
cobaye vacciné. 

J'avais ainsi trois animaux dans les conditions suivantes : 

I. Cobaye neuf, témoin, inoculé par le virus. 

II. Cobaye vacciné, inoculé par le virus. 

IIT. Cobaye neuf, inoculé par le virus, et ayant subi ultérieu- 
rement une injection de sérum thérapeutique. 

L'objectif principal de cette série d'expériences était l'étude 
des rapports entre les vibrions et les leucocytes au point d'ino- 
culation : ce qui vaudra mieux que toute description, c’est la 
reproduction presque textuelle de mon cahier d'expériences. 

L'inoculation a eu lieu à 9 heures du matin, le 2 août. À 10 
heures, les 3 cobayes présentaient une hyperémie cutanée 
intense. À 11 heures, chez tous apparaissait la tuméfaction 
œædémateuse de l’oreille. 

Ici les différences commencent. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 


[. CoBAyE NEur : 345 gr. 
Le] 


3 h. s. — L’ædème a en- 
vahi la nuque et le cou. 
Oreille pourpre, énormé- 
ment tuméfiée. Dans une 
goutte de l’œdème, quan- 
tité énorme de vibrions 
libres etpas deleucocytes. 
Même résultat pour l’exa- 
men des parties périphé- 
riques de l’infiltration. 


4 h.s.— L'œdème s’é- 
tend rapidement: l'oreille 
est tuméfiée et noire, etla 
peau se lacère sur divers 
points, donnantissueàun 
liquide trouble chargé de 
vibrions. 

5 h. s. — L'animal se 
plaint et semble très ma- 
lade ;ædème énorme,gon- 
flé, noirâtre, forçant l’a- 
nimal à incliner la tête du 
côté de l'oreille inoculée. 


9. h. s. — Mort. Dans 
le liquide de l’æœdème, 
énorme quantité de vi- 
brions libres, avec très 
peu de leucocytes. Cul- 
tures positives du sang et 
des organes. 


EXPÉRIENCE A 


IT. CoBAYE vacaiNÉ : 259 or. 


L'œdème s’est très peu 
étendu au pavillon de 
l'oreille, qui est conges- 
lionnée, mais sans tache 
hémorragique. L’exsudat 
retiré du point d'inocula- 
tion et des régions plus 
périphériques montre peu 
de vibrions libres, au mi- 
lieu d’un grand nombre 
de leucocytes, dont quel- 
ques - uns contiennent 
beaucoup de vibrions 
dans leur protoplasme. 


L’animal va bien. L’œ- 
dème ne s’est pas étendu ; 
le pavillon de l'oreille se 
maintient à l'état hypé- 
rémié. 


Même état. Les leuco- 
cytes à la partie périphé- 
rique de l’æœdème sont très 
nombreux et bourrés de 
vibrions. Encore quelques 
vibrions isolés, mais en 
petit nombre. 


(3 août). L'animal va 
très bien. L’ædème de 
l'oreille tend à disparaitre 
rapidement. La partie 
centrale s’est mortifiée et 
le procès de réparation a 
commencé. Dans le li- 
quide on ne trouve que 
des leucocytes dont beau- 
coup contiennent des vi- 
brions. Pas de vibrions 
libres. Les cultures en 
bouillon faites avec une 
goutte de l’œdéme se mon- 
trent virulentes. 


19 
= 


III. Copaye NEUF : 897 gr. 


L'œdème s’estétendu un 
peu autour de l’oreille, 
qui est très hypérémiée et 
œdémateuse. Les prépa- 
rations faites avec le li- 
quide de divers points de 
la région tuméfiée présen- 
tent beaucoup de vibrions 
et une quantité médiocre 
de leucocytes. 


L'animal va bien. L’œ- 
dème ne s’étend pas, mais 
il reste notable, etla con- 
gestion du pavillon est 
plus grande que chez le 
cobaye vacciné. 


Même état : dans le li- 
quide de l’œdème, peu de 
vibrions et de leucocytes, 
dont quelques-uns con- 
tiennentdes vibrions dans 
leur protoplasma. 


L'animal va bien. L’œ- 
dème a en grande partie 
disparu et tend à se cir- 
conscrire. La peau des 
régions centrales com- 
mence à se mortifier. Plus 
de vibrions libres, mais 
beaucoup de leucocytes, 
dont quelques-uns sont 
chargés de vibrions. Les 
cultures en bouillon faites 
avec une goutte de l’œ- 
dème se montrent viru- 
lentes. 


Ces constatations ont une signification bien claire et ne lais- 
sent aucun doute sur la part réservée aux leucocytes dans le 


16 


242 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


procès complexe de la guérison. Nous voyons d’un côté un ani- 
mal sensible chez lequel l'invasion se fait vite, sans obstacle et 
saus rencontrer de réaction cellulaire. Tous les tissus envahis 
deviennent le siège d’une multiplication abondante des vibrions, 
les leucocytes sont rares ou absents, et en peu de temps l’infec- 
tion se généralise et aboutit à la mort. 

Pendant ce temps, chez l'animal vacciné, l'invasion micro- 
bienne reste limitée, et on voit apparaître au voisinage du point 
d'inoculation des masses de cellules mobiles qui semblent faire 
obstacle à l’expansion des vibrions et en englobent de grandes 
quantités. Ces phagocytes s’avancent jusqu’au centre de la région 
œædématiée, et poursuivent si bien leur œuvre de destruction qu’il 
n’y a plus de vibrions libres au bout de vingt-quatre heures. 
L'animal ne donne aucun signe de souffrance, soit locale, soit 
générale, et se rétablit vite. Un tissu conjonctif remplace la 
région nécrosée, el il n’y a bientôt plus d’autre trace de l’opéra- 
tion qu’un tissu cicatriciel plus ou moins déformé. 

Chez l’animal soumis simultanément au traitement par le 
sérum préventif, la réaction cellulaire est un peu moins marquée 
que chez le vacciné, mais les leucocytes envahissent de la même 
façon la région infectée, et arrivent à circonscrire et à détruire 
peu à peu les germes virulents. Après l’acmé de la maladie, le 
processus de réparation se fait comme dans l’animal vacciné. 

Un fait remarquable dans cette expérience, c’est l’hyperé- 
mie vasculaire qui se manifeste à l'origine chez les trois ani- 
maux. Il contredit l'hypothèse d’après laquelle les bactéries 
pathogènes élimineraient une substance capable de paralyser les 
centres vaso-dilatateurs. 

Dans ces expériences, la paralysie vaso-dilatatrice ne s’est 
pas produite; les phénomènes inflammatoires et, parmi eux, la 
dilatation vasculaire et par suite la possibilité de la diapédèse, 
ne peuvent avoir rencontré aucun obstacle dans les animaux 
neufs ou vaccinés, et malgré cela les premiers sont morts et les 
seconds ont survécu. Geci indiquerait que l'immigration leuco- 
cytaire ne dépend pas de l'influence des produits microbiens sur 
l'appareil nerveux vaso-moteur. 

Dans l'expérience citée par Bouchard * à l’appui de son hypo- 


4. Essai d'une Théorie de l'infection. (Sonderabdruck aus den Verhandl. des X. 
inter. med. Congresses. Berlin, 1890.) 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 243 


thèse, fondée, comme il a été dit, sur les travaux de Charrin et 
Gamaléia ‘, et de Charrin et Gley*, on voit, en effet, que pour 
obtenir une paralysie du centre vaso-dilatateur on doit employer 
une dose de toxines relativement énorme : ainsi ces savants 
injectaient dans les veines du lapin 10 c. e. d’une culture stéri- 
lisée du bacille pyocyanique. 

Or, dans l'organisme, il ne se forme pas à la fois une aussi 
grande quantité de produits microbiens. Cela fait croire qu'aa 
commencement de l'infection, c’est-à-dire quand les toxines ne 
sont encore qu'en quantité minime, et quand débute et se déve- 
loppe l’activité utile des phagocytes, la dilatation vasculaire et, 
à sa suite, la diapédèse ne doivent pas être entravées. En outre, 
d’après les expériences récentes de Massart et Bordet :, l’intro- 
duction d’une dose mortelle des produits bactériens du bacille 
pyocyanique ne donne jamais lieu à une contraction générale des 
vaisseaux sanguins et n’est nullement capable d'empêcher leur 
dilatation. 

Tout ceci est tellement évident et se reproduit, avec le Vibrio 
M., d’une manière si régulière et démonstrative, qu'on ne pour- 
rait, je crois, choisir de meilleur exemple pour dorner une con- 
ception claire des rapports entre les microbes et les éléments 
cellulaires dans la défense de l'organisme lésé. 

Mais les déductions tirées de l’examen microscopique ne 
peuvent résoudre avec exactitude qu’un côté de la question : 
celui qui regarde le mode de réaction des leucocytes envers les 
microbes. Pour éclaircir d’une manière générale le phénomène 
complexe de cette activité cellulaire, il faut préciser l'entité et 
l'importance de l’émigration leucocytaire, il faut établir ses rap- 
ports avec la réaction générale de l’organisme entier. 

La conception ingénieuse de l’école de Bouchard, d’après 
laquelle la guérison serait un phénomène dépendant des poisons 
microbiens, qui provoquent ou entravent la diapédèse, n’est 
point confirmée par l'expérience ci-dessus citée. Cela tient évi- 
demment à ce que le processus de guérison est rattaché à des 


1. Sur l’inflammation. (Comptes rendus de lu Société de Biologie. 5 juillet 1890.) 

2. Recherches expérimentales sur l’action des produits secrétés par le bacille 
pyocyanique sur le système nerveux vaso-moteur. (Archives de physiologie normale 
et pathologique. Octobre 1890.) 

3. Le chimiotaxisme des leucocytes et l'infection microbienne. (Ann. de l’Institut 
Pasteur, 1891.) 


244 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


phénomènes d'ordre général d’une tout autre nature. Après avoir 
vu que la destruction des microbes s’accomplitpar les phagocytes, 
nous pouvons établir par des chiffres l'entité de leur concours. 

Dans ce but, j'ai refait une nouvelle série d'expériences tout 
à fait identiques aux précédentes, avec la préoccupation nou- 
velle d'étudier le nombre des globules blancs (qui doivent être 
considérés comme les phagocytesles plus actifs) dans le courant 
sanguin et dans l’exsudai inflammatoire local pendant toute la 
durée de l'infection et de la guérison. J’étudiais en même temps 
les rapports de ces nombres avec la réaction générale de l'orga- 
nisme, réaction indiquée par le tracé des températures. 

Après avoir d’abord calculé le nombre relatif des leucocytes 
dans le sang, j'inoculais le virus dans l'oreille d’un cobaye neuf, 
d'un cobaye vacciné et d'un cobaye traité par 5 c. c. de sérum 
préventif. Après quoi je répétais cette numération de temps en 
temps, en l’étendant, en outre, au liquide contenu dans l’æœdème 
inflammatoire de l'endroit infecté. 

J'employais, pour compter les leucocytes, le compte-glo- 
bules de Malassez. J'avais soin d’injecter le sérum préventüf à 
celui des deux cobayes neufs dont le sang contenait le plus 
petit nombre de globules blancs. 

Les résultats de ces observations sont exposés sur le tableau 
suivant : 

EXPÉRIENCE B 

I. Cobaye neuf ({émoin). 330 grammes; 

II. Cobaye vacciné, 392 grammes ; 

IT. Cobaye neuf (traité par le sérum préventif), 460 grammes. 

Le # août, à 11 heures du matin, on inocule le virus aux 
cobayes n° I, IT et IT et le sérum au cobaye n° III. 


LEUCOCYTES DE L'ŒDÈME 
———  —  —— — — — —_———û2pEZEpLaLE mm ©" 
HEURES NOMBRE 


"LL 


Pas 203,000 32,000 
20,100 165,000 58,000 
300 600,000 188,000 


COBAYE I. COBAYE II. coBaYE III. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 245 


LEUCOCYTES DU SANG PAR M. M. cC, 


COBAYE COBAYE COBAYE 
AOUT. HEURES, OBSERVATION 


I Il II 


4 10 h. m. 20,000 20,000 11,000 
» MP em On inocule le virus aux cobayes I, 
IT, III, et le sérum (5 c. c) au 
cobaye II. 

» 3h.s. | 15,000 | 18,000 | 19,000 


» 6 h.s. 15,000 | 55,000 | 19,000 


& 3 h. s. 2E 99.000 | 24,000 |+ Le cobaye témoin I est mort à 
3 heures du matin, de l'infection 
généralisée typique. 

6 11 h. m. 24,000 | 21,000 

7 148h/%m° 26,000 | 20,000 

S A42h""m;: 29,000 | 16,000 

9 41h m: 22,000 | 15,000 

10 11 h. m. 20,000 | 14,000 

11 11h-0m: 20,000 | 12,000 

19 L1PhÈm: 18,000 | 12,000 

45 19/h#em 20,000 | 12,000 


Ces chiffres ne font que confirmer les résultats de l'observa- 
tion microscopique, qui ont déjà établi le rôle des leucocytes 
dans le système de défense de l'organisme contre l'invasion 
microbienne. Nous voyons que ce rôle fait presque complète- 
ment défaut dans l’œdème inflammatoire du cobaye témoin. 
Tandis que chez le cobaye vacciné et le cobaye soumis au traite- 
ment, le nombre des leucocytes émigrés dans le foyer d'infec- 
tion atteint, après cinq heures, le chiffre déjà considérable de 
205,000 et de 32,000 par mm. c., chez le cobaye neuf, l'infection 
donne pour résultat le chiffre 0 de leucocytes! 

À 9 heures du soir, quand le phagocytisme parait avoir 
atteint le maximum de sou intensité, les leucocytes immigrés 
dans l’æœdème du cobaye témoin ne sont qu’au nombre de 300 par 
mm. c., tandis que chez le cobaye vacciné etle cobaye traité par 
le sérum thérapeutique ils atteignent le nombre élevé de 600,000 
et de 188,000. 

Les données fournies par le sang s'accordent aussi à mer- 


246 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


veille avec ces résultats : chez le cobaye témoin, le nombre 
des globules blancs commence à subir une décroissance rapide 
tout de suite après l’inoculation du virus, décroissance qui 
persiste jusqu’à la mort. Chez Îles autres cobayes, c'est le 
contraire qui a lieu : il se produit une vraie leucocytose qui 
dure pendant des jours de suite, jusqu'à ce que la guérison 
locale se soit définitivement terminée. (Voir la planche I, 
qui donne aussi la marche des températures pour les 3 cobayes.) 

Comment se produit cette leucocylose générale, destinée à 
exercer une grande influence sur l'issue de l'infection ? 

Nous possédons encore peu de connaissances exactes à ce 
sujet. D’après Werigo ‘ et Limbeck ?, il se produirait une espèce 
d’excitation chimique (peut-être par les toxines microbiennes) 
qui conduirait à une nouvelle production de leucocytes. D'après 
Rœmer *, cette multiplication des leucocytes se produirait par 
voie directe ou indirecte dans le sang même. 

Il n’entre pas dans le cadre de ces recherches d'aborder 
une question qui nous mènerait loin du but proposé. Mais on ne 
peut s'empêcher de se rappeler ici que dans ces derniers temps, 
surtout grâce aux travaux de Leber ‘, Massart et Bordet *, et 
Gabritchevsky °, il a été démontré que les leucocytes sont doués 
d’une sensibilité tout à fait particulière vis-à-vis des substances 
chimiques de différente nature. Cette sensibilité chimique ou 
chimiotaxie est nommée positive, négative ou (neutre) indiffé- 
rente, suivant que les leucocytes sont attirés, repoussés ou point 
du tout influencés par les substances avec lesquelles ils viennent 
en contact. Récemment Massart et Bordet ont en outre démontré 
que le sérum des lapins, vaccinés contre le microbe pyocya- 


4. Les globules blancs protecteurs du sang. (Annales de l'Inst. Pasteur, 1892, 
p. 478.) < 

2. Klinisches und Experimentelles ueber entzundliche Leucocytose. (Zeits- 
chrift fur Heilkunde, Bd. X.) 

3. Die chemische Reizbarkeit thierischer Zellen. (Virchow’s Archiv. 1892, vol. 122, 
p- 28.) 

4. Ueber chemiotaktische Bewegungen von Bacterien, etc. (Untersuch a. d. bot. 
Institut zu Tubingen, Bd. IL.) 

5. Recherches sur l'irritabilité des leucocytes (Journal de la Soc. roy. des 
sciences med. et nat. de Bruxelles, 1890). 

6. Sur les propriétés chimiotaxiques des leucocytes. (Annales de l’Inst. Pasteur, 
p. 434, 1891.) 

7. Le chimiotaxisme desleucocytes et l’infection microbienne. (Annales de l’Inst. 
Pasteur, p. 434, 1891.) 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 247 


nique, attire énergiquement les leucocytes des lapins neufs, grâce 
à une chimiotaxie positive. 

J'ai aussi toujours constaté une leucocytose notable chez le 
cobaye à la suite d’une inoculation de sérum préventif. Ainsi 
j'ai observé une augmentalien considérable des leucocytes dusang 
d'un cobaye de 370 grammes, qui avait reçu sous la peau7 c. €. 
de sérum, retiré d’un autre cobaye vacciné contre le vibrion. 
Avant l'injection 1l possédait 10,000 globules blancs par mm. c.; 
une heure après, ce nombre était monté à 18,000, trois heures 
après à 23,000 : six heures après il était tombé à 1,200, 
et dix heures plus tard il était revenu à l’état primitif, c’est-à- 
dire à 10,000. 

Par conséquent, tous ces faits font croire qu’une grande 
partie de ce travail phagocytaire, qui représente le meilleur 
système de défense contre l'invasion des bactéries dans l’orga- 
nisme du cobaye vacciné ou du cobaye traité par le sérum pré- 
ventif, peut être intimement lié à la propriété chimiotaxique 
positive des leucocytes vis-à-vis du sérum lui-même. 


VI] 


Malgré la valeur démonstrative des expériences ci-dessus 
décrites, il pourrait encore subsister une dernière incertitude sur 
l'importance majeure du rôle des phagocytes dans la guérison, 
incertitude rattachée à l'action du sérum préventif dans l’orga- 
nisme des animaux neufs inoculés par une culture virulente. Il 
est vrai que nous ne connaissons jusqu'ici au sérum préventif 
aueune action sur la vie ou sur la virulence des microbes ; 
néanmoins j'ai cru devoir éliminer quelques doutes à ce sujet 
par une nouvelle série d'expériences, déterminant d’une manière 
absolue la part d'action appartenant au sérum préventif, et 
celle appartenant aux leucocytes durant la période de gué- 
risOn. 

Il est clair que si le sérum préventif n’agit pas indirectement, 
en stimulant l'activité des phagocytes, il doit agir d’une autre 
manière, ou bien en exerçant une influence directe sur les 
bactéries, ou bien en formant des combinaisons éventuelles 


248 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


organiques, capables à leur tour d'influencer la vie etla virulence 
des bactéries elles-mêmes, 

Dans le premier cas, le concours des leucocytes est donc 
indispensable et par suite aussi le fonctionnement normal de la 
chaleur animale, condition essentielle qui maintient ieur vie 
et leur activité. Dans le second cas, le sérum aurait une action 
chimique et devrait alors pouvoir agir aussi sans le concours 
d'une température strictement normale. 

Il est donc nécessaire de vérifier l'influence du refroidisse- 
ment du corps sur l'issue de la guérison après traitement par le 
sérum préventif. 

Il à été souvent constaté que l’abaissement de la température 
du corps, de mème que beaucoup d’autres conditions défavorables 
à l’organisme, diminuent notablement l’activité fonctionnelle 
des leucocytes. Pasteur ‘, Metchnikoff ?, Hess * et Wagner ‘ ont 
ensuite démontré en particulier pour les poules, naturellement 
réfractaires au charbon, que l’on pouvait les tuer par cette 
maladie si on les refroidissait (bain de siège, antipyrine, etc.i. 
Dans ce cas, la mort dépendait toujours de la décroissance de 
l'énergie des leucocytes, et par là de l'impossibilité dans laquelle 
se trouvait l'organisme lésé de réagir et de se libérer des microbes 
pathogènes. 

J’ai fait de la. manière suivante trois expériences sur l'effet 
du refroidissement artificiel sur la résistance du cobaye traité par 
le sérum thérapeutique : 


1, cobaye (témoin). — Injection sous-cutanée de 1 c. c. de 
culture virulente. 
Il, cobaye (témoin). — Injection sous-cutanée de 1 c. c. 


de culture virulente et de 5 c. c. de sérum d’un ‘cobaye 
vacciné. 

III, cobaye. — Injection sous-cutanée de 1 c. c. de culture 
virulente et de 5 c. c. de sérum d’un cobaye vacciné. 

IV, cobaye {témoin). — Aucune inoculation. 

Les cobayes n° I et IT furent laissés en observation dans leurs 


4. Bulletin de l'Académie de médecine, 1878. 

2. Ueber die pathologische Bedeutung d. intracellularen Verdauung. (Fortschritle 
der Medicin, 1884, ne 17.) 

3. Untersuchungen zur Phagocytenlehre. (Virchow’s Arehiv. t. CIX, Heft 3, 1887.) 

4. Le charbon des poules. (Annales de l’Institut Pasteur, 1890, p. 570.) 


ER 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 249 


cages ovdinaires et les cobayes n°% [IT et IV furent mis dans un 
récipient métallique, contenant de l’eau à 20° à peu près, qui 
leur baignait les extrémités et jusqu'au quart du corps. 

Dans cette expérience, le cobaye n°1 servait de témoin pour 
la virulence de la culture employée ; le cobaye n° IT devait 
démontrer l'effet du sérum préventif chez un animal, maintenu 
dans des conditions normales; le cobaye n°III, le même effet 
chez un animal soumis au refroidissement; le cobaye n° IV, 
soumis aux mêmes conditions, mais non inoculé, devait faire 
voir le degré de froid pouvant être supporté par un animal sain. 

Dans toutes les expériences, je constatai la mort des cobayes 
noolet LIT. 

Dans la première expérience, le cobaye n° I mourut après 
dix heures; le cobaye n° IT guérit comme d'habitude; le cobaye 
n° IIT eut un fort et rapide abaissement de température qui dura 
jusqu’au soir, où il fut retiré du bain avec le n° IV, à cause d? 
l'impossibilité de les surveiller la nuit. Le lendemain matin, ils 
furent tous les deux remis au bain. 

Tandis que le cobaye n° IV restait presque complètement 
insensible à l’effet du refroidissement, le cobaye n° IT subit de 
nouveau un rapide abaissement de température et succomba le 
soir même (33 heures après l’inoculalion du virus). Sa tempéra- 
ture rectale élait de 32°,3; l’examen microscopique et les cul- 
tures démontrèrent la RS du vibrion dans le sang et dans 
les organes. 

Dans la seconde expérience, le cobaye témoin n° I et le 
cobaye n° IT se comportèrent comme à l’ordinaire ; ainsi le pre- 
mier succomba après 12 heures et le second guérit complète- 
ment. Le cobaye témoin n° IV ne ressentit presque point l'effet 
du bain froid, tandis que le cobaye traité n° IIT eut un abaisse- 
ment de température rapide et continu dès qu'il fut mis en con- 
tact avec l’eau. Il succomba, après 8 heures, à une infection 
généralisée. Dans ce cas, le sérum préventif ne manifeste non 
seulement aucun effet sur le ralentissement de la maladie, mais 
l'animal traité par lui succomba beaucoup plus tôt que le 
témoin. 


Re on À 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


250 


[mOn fm] ts [25] 5s[4s[55[65[7s] 8s]8m 


6 Septembre 


Survie. 


Cobaye II, 


Survie. 


Cobaye IV. 


PR Es Die ne ee 
==] 


== 
== 
(1 1] 
[5.1 
1e 


Cobaye I. Mort. 


Al] 
EX 
A [AY 


— 
Er 
EN ere] 
nn Cobaye III. Mort. 


4 
| 7 
J | 


EXPÉRIENCE III 


ventif. 


Effet du refroidissement sur un cobaye traité par le sérum pre 


Inoculation du 


I. Cobaye neuf (témoin non refroidi) , 265 grammes. 


virus. 


Inoculation du 


II. Cobaye neuf (témoin non refroidi), 485 grammes. 


virus et injection du sérum préventif. 


Inoculation par le virus et 


IT. Cobaye neuf (refroidi), 375 grammes. 


injection du sérum préventif. 


v 


orammes., N'ayant subi aucune 


D 


Cobaye neuf (témoin refroidi), 333 


UVE 
inoculation. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 251 


Dans la troisième expérience, les cobayes témoins (I et IT) 
se comportèrent comme d'habitude ; le cobaye témoin n° IV, 
après avoir subi un abaissement de température notable, se 
remit bientôt et survécut, tandis que chez le cobaye n° IT Thy- 
pothermie persista sans interruption jusqu'à la mort, qui survint 
8 heures après l’inoculation du virus, et une heure avant la 
mort du cobaye témoin n° [. 

On peut se faire une idée très claire de cette expérience en 
examinant, sur la figure 1, les tracés de température de tous les 
animaux. 

Pour le cobaye II, le bain froid avait été suspendu à 2 heures 
du soir : la température s’est un peu relevée ensuite, mais la mort 
est survenue le même jour à 5 heures du soir. 

Après ce qui a été exposé plus haut, je me crois dispensé de 
faire des commentaires sur ces expériences. 

Elles démontrent encore une fois que le sérum préventif 
n’influence pas l'organisme lésé par une action quelconque sur 
les bactéries, mais bien par une excitation spécifique de l'activité 
des cellules, et que les animaux, rendus malades par l'infection, 
mais susceptibles de guérison, succombent infailliblement s'ils 
sont privés du concours salutaire des phagocytes. 


VIII 


Les conclusions que l’on peut déduire des recherches expo- 
sées dans cet article peuvent être brièvement résumées comme 
il suit : 

Pour ce qui concerne l'issue de l'infection chez un animal 
vacciné, nous avons trouvé que : 

1° Les microbes peuvent se développer sans difficulté, même 
dans le sérum des animaux vaccinés ; 

20 Les microbes, au lieu de s’y atténuer, y acquièrent au 
contraire une virulence plus grande; 

3° Le sérum des animaux vaccinés n’est pas doué d'une pro- 
priété antitoxique et n'empêche pas la formation des toxines 
microbiennes ; 

4° Les animaux vaccinés échappent à l'infection grâce à 
l'efficacité du concours des phagocytes. 


252 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Pour ce qui concerne l’issue de la guérison chez les animaux 
traités par le sérum thérapeutique, nous avons trouvé que : 

1° Le sérum des animaux vaccinés est doué de propriétés 
éminemment préventives ; 

20 L'inoculation de ce sérum aux animaux réussit toujours 
à prévenir la maladie; 

3° Le sérum stimule l’activité cellulaire en provoquant le 
concours des leucocytes dans la circulation générale et au point 
de l’inoculation : 

%o La destruction des microbes dans l'organisme trailé par 
le sérum préventif s'opère toujours par les phagocytes: 

5o Le refroidissement du corps paralyse l’action des phago- 
cytes, qui ne réagissent plus à la stimulation du sérum préventif, 
et l’organisme traité succombe inévitablement à l'infection. 


x 


Mes recherches ont été faites à l'Institut Pasteur, dans le 
laboratoire de M. Metchnikoff et sous sa direction. Je lui 
exprime ici ma vive reconnaissance pour ses conseils précieux 
et pour son aimable hospitalité. 


APPENDICES 


N° 1 


Expériences comparatives qui démontrent l'absence de la propriété atté- 
nuante du sérum et l'action des cultures dans le sérum entier et dans 
le sérum soumis au lavage. 


[. (2 juillet). — On ensemence 5 c. e. du sérum d'un cobaye vacciné, 
avec le sang d'un cobaye mort en 18 heures. 


(4 id). — Un cobaye n° 1 est inoculé sous la peau avec { c. c. de culture 
développée dans le sérum susmentionné ; un cobaye n° 2 est inoculé avec le 
résidu de 3 c. c. de la culture filtrée et lavée ; un cobaye n° 3 est inoculé 
avec 4c. c. d'une culture en bouillon, obtenue un jour avant la culture en 
sérum. Les cobayes n° 4 et n° 2 survivent, le cobaye n° 3 meurt en 10 à 12 
heures. 

Il. (7 id). — On ensemenceS c. c. de sérum préventif avec des fragments 
de rate d’un cobaye mort le même jour. 


(12 id). — Un pigeon (370 gr.) n° { est inoculé sous la peau avec | €. c. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 253 


d'une culture én bouillon, faite avec le sang d'un cobaye mort le T juillet; 
un pigeon n° 2 (276 gr.) est inoculé par { €. c. de culture en sérum; un pigeon 
n° 3 (210 gr.) est inoculé par le résidu de { €. c. d’une culture en sérum 
soumise à la filtration et au lavage; un pigeon n° 4 (315 gr.) est inoculé 
par { e. c. d’une culture en bouillon, obtenue un jour avant la culture 
développée dans le sérum. Les pigeons n% 2 et # survivent (la culture 
inoculée au n° #4 élait souillée), et les pigeons n°% 1 et 3 meurent après 
13 heures 1/2. 


IL. (16 id). — 4 c. c. de sérum préventif sont ensemencés avec un 
fragment de rate d'un cobaye mort en 14 heures. 


(19 id). — Un pigeon n° 1 (320 gr.) est inoculé par 1 e. c. d'une culture 
en bouillon, faite avec le sang d'un cobaye mort le 16. jour; un pigeon 
n° 2 (280 gr.) inoculé par 1 c. c. d’une culture développée dans le sérum; 
un pigeon n° 3 (300 gr.) est inoculé avec le résidu de 1 c. ce. de la même 
culture lavée. 


(20 id). — Un pigeon n° 4 (325 gr.) est inoculé par 1 €. c. d’une culture 
en bouillon, obtenue directement de la culture développée dans le sérum. 
Le pigeon n° { est mort après 14 heures; le pigeon n° 4 après 9 heures; les 
pigeons n% 2 et 3 survivent. 


IV. (20 id). — 5 c. e. de sérum sont ensemencés avec le suc splénique 
d'un cobaye, mort en 16 heures. 


(24 id). — Un pigeon n° { (260 gr.) est inoculé par la culture développée 
de cet ensemencement; un pigeon n° 2 (265 gr.) est inoculé avec le résidu 
de 1 c. e. de la culture en sérum; un pigeon n° 3 (312 gr.) est inoculé avec 
4 c. c. d'une culture en bouillon, obtenue directement un jour avant la 
cuiture en sérum. Le pigeon n° { meurt après 10 heures; le n° 2 après 
27 heures; le n° 3 après 14 heures. 


V. (22 id). — 4 c. c. de sérum sont ensemencés avec du sang d’un cobaye 
mort le même jour. 


(25 id). -— Un pigeon n° 4 (375 gr.) est inoculé avec une culture en 
bouillon, obtenue du sang du cobaye susmentionné; un pigeon n° 2 (339 gr. 
est inoculé par 1 c. c. de la culture en sérum; un pigeon n° 3 (380 gr.) est 
inoculé avec le résidu de 1 c. c. de la même culture filtrée et lavée ; un pigeon 
n° 4 (346 gr.) est inoculé avec 1 ce. e. d’une culture en bouillon, obtenue le jour 
précédent, directement de la culture dans du sérum. Le pigeon n° { meurt 
après 43 heures: le n° 2 survit; le n° 3 meurt après 10 heures; le n° 4 survit 
(la culture était contaminée). 


VI. (27 id). — 5 e. ec. de sérum sont ensemencés avec le suc splénique 
d’un cobaye mort en 20 heures. 


(er août). — Un pigeon n° 1 (390 gr.) est inoculé avec 1 c. c. de la culture 
développée dans le sérum susmentionné ; un pigeon n° 2 (395 gr ) est inoculé 
avec le résidu lavé de 1 €. c. de la même culture; un pigeon n° 3 (382 gr.) 
est inoculé avec 1 c.c. d’une culture en bouillon, ensemencée directement le 


254 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


jour précédent, d'une culture dans du sérum. Le n° 1 survit; le n° 2 meurt 
après 14 heures: le n° 3 meurt après 14 heures. 


VII. (27 juillet). — 5c. c. de sérum sont ensemencés avec le suc splé- 
nique du cobaye de l'expérience VI. 


(ter août.) — Un pigeon n° 1 (255 gr.) est inoculé par 1 €. c. d'une culture 
développée dans le sérum; un pigeon n° 2 (435 gr.) est inoculé avec le résidu 
lavé de À c. c. de la même culture; un pigeon n° 3 (410 gr.) est inoculé 
avee 4 €. c. d’une culture dans du bouillon, obtenue directement un jour 
avant la culture dans le sérum. Le pigeon n° 4 survit ; le n° 2 meurt après 
14 heures; le n° 3 meurt après 16 heures. 


VIII (19 id.). — 4 ce. &. de sérum d’un lapin vacciné sont ensemencés 
avee une culture de vibrion sur gélose, obtenue d’un cobaye mort en 
{8 heures. 


(24 id.). — Un pigeon n° 1 (310 gr.) est inoculé avec 1 c. c. d’une cul- 
ture non filtrée; un pigeon n° 2 (285 gr.) est inoculé avec le résidu lavé 
de 4e. c. de la culture susmenlionnée; un pigeon n° 3 (325 gr.) est inoculé 
avec À ec. c. d’une culture dans du bouillon, culture obtenue un jour avant 
la culture dans le sérum. Le n° 4 survit; le n° 2 meurt après 16 heures; 
le n° 3 meurt après 9 heures. 


IX (Le septembre). — 5 c. c. du sérum d'un cobaye vacciné sont ense- 
mencés avec une culture du vibrion sur gélose. 


(4 id.). — Un cobaye n° 1 (400 gr.) est inoculé dans le péritoine avec 
{e. ec. d'une culture dans du bouillon, obtenue de la susdite culture sur 
gélose; un cobaye n° 2 (412 gr.) est inoculé dans le péritoine avec 1 c. e. de 
la culture dans du sérum non filtré; un cobaye n° 3 (442 gr.) est inoculé dans 
le péritoine avec le résidu lavé de 1 e. c. d'une culture dans du sérum; un 
cobaye n° 4 (395 gr.) est inoculé dans le péritoine avec À c. c. d'une culture 
dans du bouillon, obtenue un jour avant la culture dans le sérum. Le cobaye 
n° { meurt après 16 heures: le n° 2 survit; le n° 3 meurt après 8 heures; le 
n° 4 meurt après 10 heureu. 


Noa 


Expériences qui démontrent l'absence du pouvoir antitoxique du sérum 
des cobayes vaccinés. 


[ (14 août). — Le cobaye n° 1 (310 gr.) est inoculé sous la peau avec 
9 c. c. d’une culture stérilisée (3 0/0 de son poids) et mélangée avec T c. c. 
du sérum d’un cobaye vacciné. Le cobaye n° 2 (300 gr.) témoin, est inoculé 
avèe 9 €. c. d’une culture stérilisée. Le cobaye n° 1 survit; le cobaye n° 2 
meurt après à heures. 


IL (16 id.). — Le cobaye n° 1 (305 gr.) est inoculé sous la peau avec 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 255 


12 ce. e. d'une culture stérilisée (4 0/0 de son poids) et mélangée avec T ce. €. 
du sérum d'un cobaye vacciné; le cobaye n° 2 (318 gr.), lémoin, est inoculé 
avec La même quantité de la culture stérilisée. Le cobaye n° 1 survit, le 
cobaye n° 2 meurt après 6 heures. 


[IL (25 id.). — Le cobaye n° 1 (350 gr.) {émoin, reçoit une inoculation 
sous-cutanée de 8 €. ce. 3/4 d’une culture stérilisée (2,5 0/0 du poids); le 
cobaye n° 2 (340 gr.) est inoculé avec la même dose mélangée avec 7 c. €, 
de sérum d'un cobaye vacciné; le cobaye n° 3 (345 gr.) est inoculé par la 
même dose de la culture stérilisée, mélangée avec 7 e. c. de sérum normal. 
Le cobaye n° { meurt après 25 heures; le cobaye n° 2 meurt après 
82 heures ; le cobaye n° 3 meurt après 25 heures. 


IV (31 2d.). — Le cobaye vacciné n° 1 (395 gr.), témoin, est inoculé sous 
la peau avec 12 c. c. d’une culture stérilisée (3 0/0 de son poids); le cobaye 
n° 2 (380 gr.),est inoculé avec la même dose, mélangée avec 7 c. e. de sérum, 
obtenu trois jours auparavant par une saignée du cobaye n° 1; le cobaye 
n° 3 est inoculé sous la peau avec 12 c. e. de sérum normal, mélangé avec 
9 c. c. d'une culture stérilisée (3 0/0 du poids de l'animal). Le cobaye n° 1 
meurt après 15 heures; le cobaye n° 2 meurt après 10 heures; le cobaye 
n° 3 meurt après {1 heures. 


V (4 àd.). — Cobaye vacciné n° 1 (412 gr.), témoin. Inoculation sous- 
cutanée de 12 c. c. d’une culture stérilisée (3 0/0 du poids); le cobaye n° 2 
vacciné (395 -gr.), témoin, inoculation avec la même dose; le cobaye neuf 
n° 3 (400 gr.) est inoculé avec la même dose, mélangée avec 8 c. c. de 
sérum du cobaye vacciné; le cobaye n° 4 neuf (250 gr.) est inoculé sous la 
peau avec 12 c. c. d'une culture stérilisée et mélangée avec 10 €. €. de 
sérum normal. Le cobaye n° 1 meurt après 12 heures; le cobaye n° 2 après 
9 heures; le cobaye n° 3 après 13 heures; le cobaye n° 4 après 16 heures. 


VI (13 id.). — Un cobaye de 385 grammes est inoculé sous la peau avec 
12 c. c. d’une culture dans du sérum d'un cobaye vacciné. La culture était 
stérilisée après 15 jours, est employée dix jours après (3 0/0 du poids de 
l'animal). Le cobaye succombe après 9 heures. 

VII (13 d.). — Un cobaye de 400 grammes est inoculé sous la peau avec 


10 c.c. de la même culture que celle employée dans l'expérience précédente 
(2 1/2 0/0 du poids de l'animal). Mort après 9 heures. 


VIIL (14 id.). — Un cobaye de 350 grammes est inoculé sous la peau 
avec 7 c.c: de la même culture que dans l'expérience précédente (2 0/0 du 
poids). Mort après 11 heures. 


IN°NSe 


Expériences qui démontrent l'action préventive du sérum 
des cobayes vaccineés. 


I (19 juillet). — Le cobaye n° 1 (600 gr.), témoin, est inoculé sous la 
peau avec 1 c. c, d'une culture virulente dans du bouillon; le cobaye n° 2 


256 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


(650 gr.) est inoculé avec 1 c. c. de la même culture, mélangée avec 3 c. c. 
de sérum d'un cobaye vacciné; le cobaye n° 3 (437 gr.) est inoculé avec 
4 c.c. de la même culture et séparément avec 5 c. c. du même sérum. Le 
cobaye n° { meurt environ 18 heures après; les cobayes n° 2 et n° 3 sur- 
vivent. 

II (21 id.) — Cobaye n° 1 (465 gr.), témoin, est inoculé sous la peau avec 
4 €. ce. d’une culture virulente dans le bouillon; le cobaye n° 2 (435 gr.) 
recoit À c. c. de la même culture mélangée'avec 0,5 ce. c. d’un sérum 
préventif; le cobaye n° 3 (460 gr.) est inoculé avec 1 €. c. de la même culture 
mélangée avec 1 c. c. du même sérum. Le cobaye n° 1 meurt après 20 heures: 
les cobayes n° 2 et n° 3 survivent. 


III (28 id.). — Cobaye n°1 (580 gr.), témoin, est inoculé avec 1 c. c. d'une 
culture virulente; le cobaye n° 2 (505 gr.) est inoculé avec 1 ce. c. de la même 
culture et, en un autre point éloigné, avec 5 €. c. du sérum préventif; le 
cobaye n° 3 (430 gr.) est inoculé avec 1 ce. c. de la culture et avec 4 c. ce. du 
sérum préventif à distance; le cobaye n° 4 (475 gr.) est inoculé avec 1 €. €. 
de la culture et avec 4 c. c. du sérum à distance; le cobaye n° 5 (520 gr.) 
est inoculé avec ! c. c. de la culture et à distance avec 4 c. c. du sérum 
préventif. Le cobaye n° 1 meurt à peu près en 16 heures; les cobayes n°2 et 
n° 3 survivent ; le cobaye n° 4 meurt après 24 heures; le cobaye n° 5 après 
6 jours. 

IV (2 août). — Le cobaye n° 1 (345 gr.), témoin, est inoculé avec 
4 gouttes d’une culture virulente dans l'oreille; le cobaye n° 2 (395 gr.) 
est inoculé avec à gouttes de la même culture dans l'oreille et avec 5 c. c. 
du sérum préventif sous la peau du dos. Le cobaye n° 1 meurt après 
11 heures; le cobaye n°2 survit. 


V (4 id.). — Le cobaye n°1 (330 gr.), témoin, est inoculé avec 5 gouttes de 
culture virulente sous la peau de l'oreille; le cobaye n° 2 (460 gr.) est inoculé 
avec à gouttes de la même culture sous la peau de l'oreille et avec 5 em. c. 
de sérum préventif sous la peau du dos. Lecobaye n° { meurt après 17 heu- 
res, le cobaye n° 2 survit. 


VI (5 septembre). — Le cobaye n° 1 (450 gr.), fémoin. inoculation sous- 
cutanée d’un €. ec. de culture virulente; le cobaye n° 2 (430 gr.) est ino- 
culé (dans le dos) avec 1 c. c. de la même culture et avec 5 €. ce. de 
sérum préventif à distance (membre postérieur.) Le cobaye n° 1 meurt 
après 12 heures etle cobaye n° 2 survit. 


VII (6 id.) — Le cobaye n° 1 (266 gr.), témoin, est inoculé avec 1 c. €. 
d'une culture virulente; le cobaye n°2 (485 gr.) est inoculé sous la peau du 
cou avec À c. c. de la même culture et à distance (extrémité du dos) avec 
5 c.c. de sérum préventif. Le cobaye n° 1 meurt après 9 heures et le 
cobaye n° 2 survit. 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 


N 0 


4 


Lo 
©: 


Virulence des cultures faites avec l'exsudat des cobayes vaccinés et des cobayes 


traités avec le Sérum préventif. 


NATURE ET ORIGINE DE L'EXSUDAT. 


oo 


1. [Culture de l’exsudat d'un cobaye 
hypervacciné (24 heures après 
l’inoculation du virus) 


Culture de l’exsudat d’un cobaye 
vacciné (24 heures après l’inocu- 
lation du virus). 


3. [Culture de l’exsudat d’un cobaye 
traité avec le sérum préventif 
(24 heures après l’moculation du 
virus et du sérum), 
Culture de l’exsudat d’un cobaye 
traité par le sérum préventif 
(24 heures après l’inoculation du 
virus et du sérum). 
5. [Culture de l’exsudat d’un cobaye 
traité avec le sérum préventif. 
(6 jours après l’inoculation du 
virus et du sérum). 


6. [Culture de l'exsudat d’un cobaye 


traité avec le sérum préventif 


(2 jours après l’inoculation du 
virus et du sérum). 


7. [Culture obtenue de l’exsudat d’un 
cobaye traité avec le sérum pré- 
ventif (4 jours après l’inoculation 
du virus et du sérum). 


POINT 


D'INOCULATION. 


Sous la peau 
du dos. 


Sous la peau 
du dos. 


Sous la peau 
du dos. 


Sous la peau 
du dos, 


Sous la peau 
du dos. 


Sous la peau 
de l'oreille. 


Sous la peau 
de l'oreille. 


N° 5 


RÉSULTAT 
de 


L'INOCULATION. 


Mort après 
8 heures. 


Mort après 
12 heures. 


Mort après 
12 heures. 


Mort apres. 
14 heures. 


Mort après 
16 heures. 


Mort après 
20 heures. 


Mort après 
17 heures. 


POIDS 
de 


L'ANIMAL, 


Expériences qui démontrent l'influence du refroidissement sur les cobayes trai- 
tés par le sérum préventif. 


EXPÉRIENCE Î 


Cobaye n° 1, A0 gr. (témoin non refroidi). Injection de 5 gouttes de cul- 
ture virulente sous la peau de l'oreille. 

Cobaye n° 2, 358 gr. (témoin non refroidi). Injection de 5 gouttes d’une 
culture virulente sous la peau de l'oreille et de 5 c. c. de séram préventif 
Sous la peau du dos. 


47 


258 ANNALES LE L'INSTITUT PASTEUR. 


Cobaye n°3, 370 gr. (refroidi). Injection comme la précédente. 
Cobaye n° 4, 360 gr. ({émoin refroidi). Sans inoculation aucune. 


Températures reclales. 


29 AOÛT. 30 AOUT 21 AOÛT. 


——— 


11 m.| 1. 


9m. |10 m.| LA m.112 m.| 4 s: 113 s: | 5 s. | 68, | 8. | 9 m. [14 m.| 1 s. | 35. A 68. | 8. 


1cer137,9137,9127,8137,2 36,5136,2135,5135,8| » » » » » » » 


9e |38,2138,2137,8138.,0158,5138,5139,5139.2139, 3139,5137,6139,7139,4139,5139,1|: 


30 |38,9137,0133,4132,8133,2133,5130,5126,0/27,7139,3138,7137,7134,8132,3| » 


46 138,6137,4135,9135,7137,2137,7136,5132,8135,2138,6138,6138,5138,1138,3138,3138,5138,9 


EXPÉRIENCE II 


Cobaye n° 1, 425 gr. ({émoin non refroidi) Injection sous-cutanée de 1 €. c. 
de culture virulente. 

Cobaye n° 2, 425 gr. ({émoin non refroidi). Injection sous-cutanée (au cou) 
de 1 c. c. dela même culture et à distance (au dos) injection de 5 c. €. 

Cobaye n° 3, 445 gr. (refroidi). Injection comme la précédente. 

Cobaye n° 4, 430 gr. (témoin refroidi) Aucune inoculation. 


Températures rectales. 


5 SEPTEMBRE. 
ES ——— 
9 m. | 10m. | 11m. | 12m. ile DAS JUS 4 S. DES: 6 s. TES 8 S. 


EXPÉRIENCE III 


Cobaye n° 1, 265 gr. ({émoin non refroidi). Injection sous-cutanée de 
1 c. c. de culture virulente. 

Cobaye n° 2, 485 gr. (lémoin non refroidi). Injection sous-cutanée (cou) 
de 1 c. c. de culture et à distance (dos) injection sous-cutanée de 5 c. c. de 
sérum préventif. 

Cobaye n° 3, 375 gr. (refroidi). Injection comme la précédente. 

Cobaye n° 4, 335 gr. ({émoin refroidi). Aucune inoculation. 


PAST 


DÉFENSE DE L'ORGANISME. 259 


Températures rectales. 


6 SEPTEMBRE. 7 SEPTEMBRE. 
ns — 
I m. $ $. LIU dt se EM 5 S. CE 8 S. 8 M. 


31,0 


32,6 


EXPLICATION DE LA PLANCHE Il. 


Cette planche résume les résultats de l'expérience B (p. 244 et 245). 
Elle donne, pour chacun des cobayes, la température, le nombre des 
leucocytes dans un mill. cube du liquide de l'æœdème et du sang aux 
diverses périodes de l'expérience, La représentation coloriée fait que 
les différences sautent aux yeux. 


LADA, EE AT 2 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DE L'IMMUNITÉ 
ACQUISE CONTRE LE PNEUMOCOQUE 


(Travail du laboratoire de M. Metchnikoff à l’Institut Pasteur), 


Par B. ISSAEFF. 


AVANT-PROPOS 


L'immunité acquise contre le pneumocoque de la pneumonie 
fibrineuse a été l’objet de sérieuses recherches de plusieurs 
savants, mais il suffit de jeter un simple coup d'œil sur leurs 
conclusions pour s’apercevoir des contradictions importantes et 
même du désaccord complet de leurs opinions sur la question 
des causes de l’immunité acquise contre le pneumocoque. C’est 
pour éclairer cette question controversée que nous avons entre- 
pris ce travail sous l'inspiration du professeur Metchnikoff, à qui 
nous tenons à témoigner ici notre profonde reconnaissance pour 
les conseils qu’il nous a prodigués au cours de nos recherches. 

Foa et Carbone (1), puis Emmerich et Fawitzky (2), gué- 
rissaient la pneumococco-septicémie chez les lapins et les 
souris par des injections de sérum et d’humeurs d’animaux 
vaccinés contre le pneumocoque. Ces auteurs attribuent la gué- 
rison à la propriété bactéricide des humeurs de l’organisme 
vacciné. 

Krouse et Pansini (3) arrivent à la mème conclusion, après 
avoir constaté i» vitrola diminution progressive du nombre des 
microbes dans les cultures du pneumocoque dans le sérum 
d'animaux vaceinés. 

Behring et Nissen (4), dans leurs recherches sur le déve- 
loppement de différents microbes dans le sérum d’animaux 
réfractaires à ces microbes, ont trouvé que le pneumocoque, 
ensemencé même en très faible qnantité, se développe très bien 
dans le sérum des rats, des cobayes et des chiens vaccinés. 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 261 


Selon M. Roger (5), la virulence du pneumocoque serait 
atténuée dans le sérum d'animaux vaccinés contre ce microbe. 

M. Arkharoff (6) admet que le sérum peut avoir dans cer- 
taines conditions des propriétés bactéricides. 

Contrairement aux auteurs précédents, M. Mosny (8) trouve 
que la virulence du pneumocoque augmente considérablement 
si on le cultive dans le sérum d'animaux vaccinés. L’immunité 
serait due, pour cet auteur, à une propriété toxinicide du sérum 
du sang. 

MM. G. et F. Klemperer (7), n'ayant pu constater la pro- 
priété bactéricide du sérum en question, cherchent à expliquer 
l'immunité acquise par la propriété qu'aurait le sérum de neu- 
traliser les toxines. Quant aux phénomènes de phagocytose, ils 
ne les contestent pas, mais leur attribuent peu d'importance. 

De cette analyse rapide des opinions de divers auteurs, nous 
voyons donc qu'on peut rapporter ces opinions à trois théories 
principales : 

1° Pour les uns, l'immunité acquise contre le pneumocoque 
résulterait de ce que les humeurs et le sérum du sang de l’orga- 
nisme vacciné empêchent le développement du microbe, qui 
périt dans les humeurs (théorie bactéricide). 

2° D'autres auteurs, tout en admettant la possibilité du déve- 
loppement du pneumocoque dans un organisme vacciné, pen- 
sent, en s'appuyant sur quelques faits, que ce microbe perd ses 
propriétés pathogènes sous l'influence du sérum vacciné, et 
devient par conséquent inoffensif pour l'organisme (théorie de 
l’atténuation). 

3° D'autres enfin nient les deux théories précédentes, et 
cherchent à expliquer limmunité acquise contre le pneumocoque 
par la propriété qu'aurait le sérum d'animaux vaccinés de neu- 
traliser les toxines du pneumocoque (antitoxicité du sang). 

Pour ce qui concerne la propriété bactéricide ou atténuantie 
des humeurs, l'étude est simple, mais les recherches sur la pre- 
priété antitoxique des humeurs sont un peu plus délicates, et au 
cours de nos recherches il y a à surmonter une première diffi- 
culté : pour bien mettre en évidence l’action neutralisante du 
sérum d'animaux vaccinés sur les toxines, il fallait trouver le 
moyen d'obtenir des toxines assez puissantes pour que leur 
action sur l'organisme füt hors de doute. 


[RS] 


62 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


DE LA VIRULENCE ET DE LA TOXICITÉ DES CULTURES DU PNEUMOCOQUE. — 
EXALTATION DE LA VIRULENCE DU PNEUMOCOQUE PAR DES PASSAGES 
SUCCESSIFS DANS LE PÉRITOINE DES LAPINS. — DES TOXINES DU SANG 
DE LAPINS MORTS DU PNEUMOCOQUE. — DES TOXINES DANS L'ÉPANCHE- 
MENT PLEURO-PÉRITONÉAL DE LAPINS ET DE CHIENS MORTS DU PNEU- 
MOCOQUE. 


Le pneumocoque de Talamon-Fraenkel ne produit pas, dans 
les cultures, de toxines fortes et durables. La virulence et la 
toxicité des cultures de ce microbe diminuent d’une façon 
notable déjà 3 ou 4 jours après l'ensemencement; en même 
temps, la culture devient légèrement acide. Du 20° au 30° jour, 
la toxicité a presque complètement disparu. Les cultures dans 
le bouillon de veau (sans peptone), ou dans le bouillon addi- 
tionné de 5 à 10 0/0 de sérum de lapin, amsique les cultures dans 
le jus de viande, ou sur de la gélose, ou dans le sérum gélatinisé 
du sang de lapin, présentent en général un faible pouvoir 
toxique, lors même qu’elles sont récentes. L'injection intravei- 
neuse de ces différentes cultures, stérilisées de diverses façons, 
n’est pas mortelle pour les lapins, même à la dose de 3,5 0/0 du 
poids de l'animal. 

Le sérum du sang de lapin est le milieu le plus favorable 
pour les cultures. L’injection intraveineuse d’une culture en 
sérum stérilisée provoque de graves troubles dans l'organisme 
du lapin. A la dose de 2, 5 0/0 du poids de l’animal, on obtient 
des oscillations de la température du corps atteignant 3°, 5. 

La stérilisation des cultures par le chloroforme ou par l'eau 
chloroformée présente quelques avantages sur la méthode de 
stérilisation par chauffage à 58° pendant 2 heures; elle est 
également préférable à la stérilisation par l'acide phénique ou 
l'acide thymique. 

Une culture de pneumocoque qu'on neutralise à laide d’un 
appareil spécial, laissant tomber goutte à goutte une solution de 
bicarbonate de soude d’une façon automatique et régulière, ne 
devient pas plus forte au point de vue de sa toxicilé. 

Dans des cultures à l’abri de l'air, le pneumocoque se déve- 
loppe moins rapidement et moins abondamment. Ces cultures 


L’IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 263 


n'ont pas présenté de réaction acide, mais leur toxicité est aussi 
faible que celle des cultures ordinaires. 

Les cultures dont nous avons parlé étaient ensemencées avec 
du sang de lapins qui venaient de succomber à l'infection pneu- 
mococcique. Le degré de virulence du microbe était maintenu 
fixe à l’aide d’une série de passages successifs sous la peau des 
lapins. 

Le peu de certitude des recherches sur le pneumocoque dans 
les conditions exposées m'a conduit à chercher les moyens de 
rendre les toxines plus fortes. 

La production de toxines plus ou moins fortes est toujour 
en rapport avec le degré de virulence de chaque microbe. Hi 
paraissait done qu’en augmentant la virulence du pneumocoque 
on devait par là augmenter la toxicité de ses cultures. Or, les 
cultures du microbe exalté, obtenues dans divers milieux nutri- 
tifs, se sont montrées seulement un peu plus toxiques que celles 
du microbe non exalté, car ces cultures ne déterminaient la 
mort des lapins qu’à la dose de 2, 5 0/0 du poids de l'animal. 

L’évaporation dans le vide des cultures stérilisées au chlo- 
roforme ne nous donna pas non plus le résultat cherché. Une 
culture, évaporée au dixième de son volume primitif, et injectée 
dans le péritoine d’un lapin à la dose de 1 0/0 du poids de l’animal, 
provoque de graves troubles, sans cependant amener la mort. 

Ces résultats ne me satisfaisant point, je poursuivis mes 
recherches. 

L'eraltation de la virulence du pneumocoque s'obtient le plus 
facilement par des passages successifs dans le péritoine des 
lapins. Le virus, fixé préalablement par des passages sous- 
cutanés, gagne rapidement en virulence à la suite d’inoculations 
intrapéritonéales. 

Pour les 10 à 12 premiers passages, la quantité de virus 
nécessaire pour l'injection intrapéritonéale doit êtreconsidérable, 
de 1à1,5c. c. de sang d'animaux récemment morts d'infection 
prneumococcique. 

Dans la suite des passages intrapéritonéaux, les lapins suc- 
combent avec un épanchement péritonéal très riche en microbes. 
Leur sang, de couleur rouge foncé, également riche en microbes, 
perd au 10° ou 12° passage la propriété de se coaguler, en même 
temps qu’il devient extrêmement toxique et virulent. Il est, par 


LR 


6% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


conséquent, nécessaire de diminuer la dose dans les inoculations 
successives, à mesure que la virulence du sang augmente. Ainsi, 
après le 10° passage, il suffit d'introduire dans le péritoine du 
11° lapin 6 à 8 gouttes de virus. Si l’on injecte des doses 
plus fortes, la mort des animaux survient en parte du fait de 
l'intoxication. Dans ce dernier cas, le sang est parfaitement clair, 
de couleur presque normale, susceptible de se coaguler, et 
pauvre en microbes. 

De l’action du virus exalté sur les animaux. — Une goutte de 
sang virulent d’un lapin qui vient de succomber, introduite 
dans le péritoine d’un lapin neuf, suffit pour le tuer en 10 ou 
12 heures. Une dose plus forte amène la mort en 8 ou 9 heures. 
En augmentant la dose, il ne faut cependant pas dépasser 
0,75 c. c., car, si l’on injecte, par exemple, 1,5 c. c., les lapins 
succombent parfois au bout de 5 heures 1/2, mais c'est à, 
croyons-nous, l'effet de l’intoxication par les toxines contenues 
dans le sang. 

A la suite d'une injection sous-cutanée de #4 à 6 gouttes 
de sang virulent, les lapins succombent au bout de 12 à 15 heures. 

Si l’on continue pendant longtemps les passages intrapéri- 
tonéaux exclusivement sur les lapins, Le virus s’affaiblit : les ani- 
maux meurent rapidement, et les symptômes de linfection 
changent aussi; au lieu d'une agonie douce, la mort est précédée 
d’une très grande agitation de l'animal et d’une abondante 
diurèse, qui se produit 1 heure ou 4 heure 1/2 avant la mort. 

Mais il suffit de deux ou trois passages intrapéritonéaux sur 
des cobayes ou sur des chiens pour rétablir toute la force du 
virus. Le sang des cobayes et des chiens morts du pneumocoque 
est toujours pauvre en microbes, ce qui nous à fait prendre, 
pour les inoculations, leur épanchement péritonéal, qui est très 
abondant, surtout chez le chien. L’épanchement pleural du 
chien est également abondant et riche en microbes: sa quantité 
atteint parfois 50 à 60 c. e. 

Nous n'avons pu réussir à donner l'injection pneumococcique 
ni aux pigeons, ni aux petits oiseaux, même en associant les 
toxines du Bacterium coli où du Vibrio Metchnikovi. 

De la toxicité du sang virulent des lapins morts du pneumocoque. 
— Le sang stérilisé par chauffage à 58° pendant 2 heures, ou par 
l'acide phénique, n’est pas très toxique, mais cependant ce même 


L’IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 265 
sang, stérilisé par chauffage à l'abri de l'air et injecté à la dose 
de 1 0/0 dans la veine auriculaire d'un lapin, détermine quel- 
quefois la mort de l'animal. Il nous parait que la stérilisation 
par l’eau chloroformée présente quelques avantages. 

Procédé d'obtention de toxines du sang. — 4° Recueillir le sang 
de trois ou quatre lapins, morts récemment du pneumocoque, 
dans un vase stérilisé. Il n'est pas difficile de retirer de 18 à 25 c. e. 
de sang du cœur du lapin, si l'on a soin de faire l’autopsie Immé- 
diatement après la mort: 

20 Ajouter au sang recueilli un volume égal d’eau stérilisée 
contenant 1 0/0 de glycérine, et alcalinisée à l’aide de quelques 
vouttes d'une solution concentrée de bicarbonate de soude 
(5 à 6 gouttes pour 100 c. c. de mélange); 

3° Stériliser le mélange par filtration à l’aide du filtre Cham- 
berland. 

L'injection intraveineuse du produit filtré est quelquefois 
mortelle pour les lapins à la dose de 1 0/0 du poids de l'animal. 

La toxicité de ce produit chauffé à 70° diminue considéra- 
blement, et, après chauffage à 100°, on n'observe plus aucune 
réaction chez les animaux inoculés. 

L'exsudat péritonéal des lapins morts du pneumocoque, 
stérilisé par la chaleur et injecté à la dose de 1 0/0 (du poids de 
l'animal) dans le péritoine, ou dans la veine auriculaire de lapins 
neufs, provoque des troubles très graves dans Porganisme, mais 
n'a pas déterminé la mort des animaux dans notre série d’expé- 
riences. L'épanchement pleuro-péritonéal des chiens morts du 
pneumocoque paraît avoir des propriétés plus toxiques que celui 
des lapins : ces exsudats, stérilisés par filtration et injectés dans 
le sang du lapin, déterminent parfois la mort de l'animal. 


Il 
DE L’IMMUNISATION DES LAPINS. — DE L'INFLUENCE DES TOXINES DU PNEU- 
MOCOQUE SUR LES LAPINS VACCINÉS. — LE SÉRUM DU SANG DES LAPINS 


VACCINÉS CONTRE LE PNEUMOCOQUE POSSÈDE-T-IL LA PROPRIÉTÉ DE 
NEUTRALISER Î VilYO LES TOXINES DE CE MICROBE ? 
L'immunisation des lapins contre l'infection pneumococcique 


ne présente aucune difficulté et s'obtient facilement par différents 
procédés. Nous nous sommes servis principalement de cultures 


266 ANNALES DE L'INSTITUT. PASTEUR. 


stérilisées dans du bouillon ou du sérum, en les injectant successi- 
vement dans le sang des lapins à la dose de 10 à 50 c. ce. Comme 
ces injections provoquaient toujours une réaction plus ou moins 
forte, une élévation de température et une diminution progressive 
du poids de l'animal, nous ne faisions la deuxième injection que 
lorsque les animaux paraissaient complètement guéris de la 
première. Plusieurs lapins ont étéimmunisés à la suite d’injections 
intraveineuses ou intrapéritonéales de sang virulent stérilisé par 
la chaleur ou par l’eau chloroformée. Nous nous sommes servis 
avec un égal succès d’injections de toxines extraites du sang par 
filtration, ainsi que de lexsudat pleuro-péritonéal stérilisé de 
chiens et de lapins morts à la suite d’inoculations intrapéritonéales 
du pneumocoque. Il suffit d’une seule injection de toxines à la 
dose de 10 €. e. dans le sang ou dans le péritoine des lapins 
pour les rendre réfractaires à un haut degré à l'infection pneu- 
mococecique. 

Les lapins immunisés de cette façon ont toujours été soumis 
à deux épreuves à l’aide du sang frais de lapins récemment morts 
du pneumocoque. Pour la première épreuve, j'inoculais 2 à 
4 gouttes; pour la seconde, 0,5 c. c. de sang virulent. Pour 
maintenir limmunité, je répétais ces inoculations toutes les 
quatre semaines: la quantité du virus était variable, mais ne 
dépassait jamais 0,5 c. ce. pour les injections sous-cutanées, et 
5 à 6 gouttes pour les injections intrapéritonéales. Plusieurs 
lapins avaient reçu 9 injections de virus et 5 injections de 
toxines. 

Lorsque les lapins furent complètement remis de leur malaise 
après les inoculations d’épreuve, ils purent servir aux expé- 
riences ; le rétablissement était jugé par l'augmentation du poids 
des animaux en expérience. 

L'action des toxines sur les lapins vaccinés était appréciée 
d’après le degré de leur réaction en comparaison avec les animaux 
témoins. 

Les toxines des cultures en bouillon de divers âges, stérilisées 
de diverses façons, ainsi que les toxines séparées par filtration du 
sang ou des exsudats, étaient toujours injectées directement 
dans le sang des lapins (veines de loreille). Dans un cas seule- 
ment nous avons injecté dans la cavité péritonéale le sang 
stérilisé par l’eau chloroformée. Nous avons fait 16 expériences 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 267 


sur l'influence des toxines sur les animaux vaccinés. Dans les 
premières expériences, pour vérifier la toxicité des cultures, 
nous avons fait des épreuves complémentaires sur une seconde 
série de lapins vaccinés et inoculés avec du bouillon pur. 

Les résultats de ces 16 expériences furent semblables, comme 
on peut en juger d’après les détails de l'appendice I. Malgré les 
variations dans la réceptivité individuelle, les lapins vaccinés 
ont toujours réagi sous l'influence des toxines d’une façon plus 
énergique que les lapins fémoins. 

Dans une expérience (n° 14), le lapin vacciné a succombé 
10 heures après l'injection de toxines, tandis que le témoin 
correspondant a survécu. Dans deux autres expériences 
(n° 13 et 15), les lapins vaccinés ont succombé, ainsi que leurs 
témoins, dans un espace de temps qui a varié de 35 minutes à 
14 heures pour les premiers, et de 11 heures à 16 heures pour 
les seconds. Dans l'expérience n° 10, le lapin vacciné à survécu, 
tandis que son témoin a succombé 1 h. 10 min. après l'injection 
des toxines, mais cette expérience n’est nullement en contra- 
diction avec les précédentes, car le lapin vacciné dontil s'agissait 
était plus fort, âgé de un an, et pesait 3,350 grammes, tandis que 
son témoin était jeune et ne pesait que 2,500 grammes. 

Quant aux différences observées dans le temps que les lapins 
mettent à succomber, elles doivent être aussi considérées comme 
le résultat de leur sensibilité individuelle très variable vis-à-vis 
des toxines. 

Les lapins vaccinés, une fois rétablis de leur première 
épreuve, ont réagi non moins énergiquement à la deuxième et à 
la troisième épreuve avec les toxines {voir tab. [. Exp. n°51,7,10). 

Ces expériences, faites tantôt avec des cultures de bouillon 
faiblement toxiques, tantôt avec des toxines plus actives, nous 
ont convaincu que les lapins, tout en étant complètement réfrac- 
taires contre l'infection par le pneumocoque, restent sensibles à 
un haut degré aux toxines de ce microbe. Même de faibles doses 
de toxines (de cultures en bouillon) ne peuvent être neutralisées 
dans le sang des animaux vaccinés, — ce qui nous amène à cette 
conclusion que l'on ne peut admettre l'existence d'une propriété anti- 
toxique du sang chez les animaux vaccinés contre le pneumocoque. 

A cet égard, la seconde série d'expériences que nous avons 
faites est non moins convaincante (voir tab. II. Appendice). Le 


258 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sérum des lapins vaccinés était mélangé avec un volume égal 
d'une culture fortement toxique de sérum de lapin (stérilisée par 
chauffage à 58°. Ce mélange était injecté dans la veine d’un 
lapin neuf. Un autre lapin, témoin, recevait la même quantité de 
cette culture toxique mélangée avec un volume égal de sérum 
normal, non vacciné. Dans deux expériences (n°7 et 8), les cul- 
tures furent remplacées par des toxines extraites du sang virulent 
par filtration. 

On se servait toujours de mélanges fraichement préparés. 

Dans les huit expériences que nous avons faites, nous n'avons 
pas observé de différence appréciable danslénergie de la réaction 
des deux lapins. Quelques particularités de la courbe thermomé- 
trique de plusieurs lapins sont évidemment en rapport avec 
leurs propriétés individuelles. Dans quatre de ces expériences 
(n9 2, 5, 6. T), nous avons fait des épreuves simultanées de 
l’action thérapeutique du sérum d'animaux vaccinés, et nous 
avons toujours obtenu un résultat positif. Il a suffi d’injecter, en 
même temps que le virus, #, 5 e. ce. de ce sérum pour prévenir 
l'infection générale chez les lapins, qui avaient reçu 0,25 e.c. 
de sang virulent en injection sous-cutanée. 

On voit done par cetensemble de faits que le sérum de lapins 
vaccinés contre le preumonoque ne possède la propriété de neutraliser 
les toxines de ce microbe ni «in vitro », ni duns l'organisme. 

MM.G.et F. Klemperer (7), dans une excellente monographie 
sur l’action thérapeutique du sérum d'animaux vaccinés contre 
le pneumocoque, concluent que le sérum de lapins vaccinés leur 
paraissait avoir la propriété certaine de neutraliser in vitro les 
toxines des cultures de pneumocoque dans le bouillon. Mais ces 
auteurs n'avaient pas étudié l’action des toxines du pneumo- 
coque sur les animaux vaccinés, et même, pour la propriété 
antitoxique in vitro du sérum thérapeutique, ils ne se pronon- 
cent pas sans quelque hésitation. Ainsi la contradiction appa- 
rente de nos expériences avec les conclusions de Klemperer 
tombe-t-elle d'elle-même. 


na”, 


L’IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 269 


HI 
CULTURES DU PNEUMOCOQUE DANS LE SÉRUM DE LAPINS VACCINÉS. — DIVER- 
SES FORMES DU PNEUMOCOQUE, SA VIRULENCE. — MICROBES LAVÉS PRO- 


VENANT DES CULTURES EN SÉRUM DE LAPINS VACCINÉS ET DE LAPINS 

NON VACCINES. 

L’ensemencement du pneumocoque dans le sérum de lapins 
vaccinés donne toujours une culture abondante, mais un peu 
moins riche en microbes que les cultures en sérum normal. Les 
expériences ont été faites avec du sérum frais. Le sang, extrait, 
avec toutes les précautions d'une asepsie rigoureuse, de l'artère 
carotide d’un lapin vacciné et complètement rétabli de l'inocula- 
tion précédente, fut laissé à la température de la chambre pen- 
dant 24 heures, pour la coagulation : après quoi, le sérum recueilli 
avec une pipette stérilisée fut abandonné encore pendant 
24 heures, pour la séparation des éléments figurés du sang. Le 
sérum provenant de cette deuxième séparation fut réparti dans 
des éprouveties stérilisées, et ensemencé avec de très faibles 
quantités de sang virulent à l’aide d’une aiguille en platine. 

Plusieurs lapins vaccinés, comme nous l'avons dit plus haut, 
avaient reçu 9 inoculations de virus et 5 injections de toxines, 
et malgré cela le pneumocoque, ensemencé dans le sérum de ces 
lapins, se développait toujours très bien. L'ensemencement de 
virus dilué nous a donné les mêmes résultats. Et cependant 
l’action thérapeutique de ce sérum était marquée : il a suffi d’in- 
jecter #, 5 à 6 c. ce. du sérum en question pour prévenir l'infec- 
tion généralisée chez les lapins, qui avaient reçu 0,25 c. e. de 
sang virulent. Il ne peut donc plus être question de l’action 
bactéricide in vitro du sérum de lapins vaccinés contre le pneu- 
mocoque. | 

L'aspect des cultures du pneumocoque dans le sérum de 
lapins vaccinés diffère considérablement de celui des cultures en 
sérum normal. Tandis que, dans ces dernières, le microbe pro- 
duit un trouble général, dans les premières, il se dépose au fond 
et en partie sur les parois du vase, et ne rend pas les cultures 
troubles. Le microbe se présente sous la forme de longues chai- 
nettes composées parfois de 10 microbes et même plus; il y a 
du resté beaucoup de diplocoques séparés ou réunis par paires. 


270 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La forme et les dimensions du microbe varient souvent, mais la 
forme prédominante est la forme lancéolée, qui est régulière, 
Lypique. On observe parfois à l’une des extrémités du microbe 
un épaisissement qui se colore facilement par les couleurs d’ani- 
line. Beaucoup de microbes ont une forme légèrement ovale et 
mème tout à fait ronde, en coccus. Mais cette variabilité des 
formes du pneumocoque ne constitue pas un caractère distinctif 
des cultures en sérum vacciné, car on retrouve les mêmes diffé- 
rences de formes dans les cultures en sérum normal. Les diverses 
formes du pneumocoque s’observent également dans l’exsudat 
pleural des cobayes inoculés dans le péritoine. Dans l’exsudat 
pleural des chiens, on trouve des formes en chaïnettes, com- 
posées de 5 à 7 microbes. Nous n'avons pas observé la prédo- 
minance, indiquée par M. Arkharoff (6), des formes dégénéra- 
tives dans les cultures en sérum vacciné, bien que nous ayons 
employé les differents procédés de coloration et, entre autres, le 
bleu de Loeffler, recommandé par M. Arkharoff. 

Quoi qu'il en soit, les cultures de pneumocoque dans le sérum 
d'animaux vaccinés présentent des particularités très caractéris- 
tiques. Sous l'influence des principes chimiques du sérum vac- 
ciné, le microbe se développe moins abondamment, se modifie 
un peu dans sa forme extérieure, mais ces modifications n’ont 
guère de rapport avec le changement de ses propriétés patho- 
gènes. Nous voyons, en effet, que les cultures de pneumocoque 
à l'abri de l'air, quoique pauvres en microbes, sont aussi viru- 
lentes que les cultures ordinaires, toujours très riches en 
microbes; malgré le changement de forme que le pneumocoque 
subit dans les cultures en bouillon (courtes chaïnettes, absence 
de capsule), il ne perd pas ses propriétés pathogènes. 

Du reste, cette question de la virulence du pneumocoque cul- 
üivé dans le sérum de lapins vaccinés mérite d’être étudiée d’une 
façon très attentive,étant donnéeslesobservations contradictoires 
de divers auteurs qui ont fait des recherches spéciales sur ce sujet. 

Les inoculations sous-cutantes de 1 à 2,5 c.c. de culture en 
Sérum thérapeutique datant de 24 à 72 heures déterminent dans 
plus de la moitié des cas une infection générale et la mort chez 
les lapins (voir tab. IV, App.).Les animaux suecombent dans un 
espace de temps qui varie de 42 à 152 heures. Quelquefois l’in- 
fection reste localisée et les lapins guérissent, tandis que les 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 271 


lapins témoins inoculés sous la peau avec la même dose de cul- 
ture en sérum normal meurent le plus souvent d'infection géné- 
rale et d’une façon plus rapide, au bout de 18 à 52 heures (voir 
tab. V, App.). 

M. Roger (5) explique le ralentissement du processus infec- 
tieux et parfois le rétablissement complet, chez les animaux ino- 
culés avec des cultures en sérum thérapeutique, par latténuation 
du microbe sous l'influence de ce sérum. M. Roger inoculait aux 
animaux, en même temps que les microbes, le sérum qui leur 
servait de milieu de culture. Or, c'est à l’action thérapeutique 
de ce sérum que doivent être attribués le ralentissement et mème la 
guérison du processus infectieux. Pour juger du degré de viru- 
lence d’un microbe, il faut annuler l’action thérapeutique du 
sérum qui à servi de milieu de culture. On à démontré pour 
d'autres microbes (Hog-Choléra) que le ralentissement de la 
marche de l'infection, à la suite d’inoculations de cultures en 
sérum vacciné, est dû à l’action thérapeutique de ce sérum. 
Quant à la virulence du microbe, elle ne change point sous l’in- 
fluence du sérum vacciné (Hog-Choléra). Les inoculations de 
microbes séparés des cultures en sérum thérapeutique à laide 
d'un filtre de papier provoquent toujours une infection généra- 
lisée et rapide, — c’est là une expérience fort démonstrative, 
d'autant plus que l'isolement absolu des microbes du liquide de 
culture est impossible. 

M. Mosny (8) trouve, contrairement à M. Roger, que les cul- 
tures de pneumocoque dans le sérum thérapeutique, quoique 
moins riches en microbes, sont cependant plus virulentes que 
les cultures dans le sérum normal. 

M. Arkharoff (6) inoculait les lapins avec des pneumocoques 
cultivés dans le sérum thérapeutique et séparés du liquide de 
culture par des lavages. Les expériences étaient faites la plupart 
du temps avec des cultures trop vieilles. Or,le pneumocoque périt 
rapidement dans les cultures. M. Arkharoff mentionne lui-même, 
dans le mémoire cité, que les cultures du pneumocoque dans le 
sérum d'animaux vaceinés sont mortes déjà du 6° au 8° jour 
après l’ensemencement ’. 


4. Comme le travail de M. Arkharoff (Arch. med. expér., 1892, p. 498) a été 
fait dans mon laboratoire, je me crois obligé de donner quelques explications au 


272 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La question a par conséquent été insuffisamment élucidée. 

Si l’atténuation se fait réellement sous l'influence des humeurs 
de l’organisme vacciné, ce processus doit se faire dans les pre- 
mières heures après l’inoculation du virus. Aussi avons-nous 
fait des expériences avec des cultures jeunes datant de 24 à 
72 heures. 1, 2 ou 2,5 c. ec. de culture en sérum thérapeu- 
tique étaient filtrés sur un filtre de papier. Après quoi on avait 
soin de laver deux ou trois fois les microbes restés sur le filtre 
avec une solution physiologique de chlorure de sodium; ensuite 
le résidu, recueilli à l’aide d’un pinceau stérilisé et délayé dans 
2 ©. ce. de solution de sel marin, était injecté sous la peau d’un 


sujet de ses expériences sur la prétendue atténuation du pneumocoque dans le 
sérum des lapins vaccinés. Sur mon conseil, M. Arkharoff inocula parallèlement 
des cultures entières et des cultures aussi débarrassées que possible du sérum. 
Mais dans la grande majorité de ses expériences il se servit de cultures trop vieilles, 
de 3, 4,etc., et même de 8, 9 et 10 jours. Or, il est suffisamment connu que pour 
l’étude de la virulence il faut se servir de cultures jeunes. Une seule expérience 
de M. Arkharoff (n° XVII), faite avec une culture de 1 jour, a donné un résultat 
positif. Mais la plus grande cause d'erreur des expériences de M. Arkharoff pro- 
vient de ce qu’il a injecté plusieurs fois des cultures mortes, ne donnant plus 
de microbes après le réensemencement dans du bouillon (Exp. XII, XIV, XX). Il 
est évident que les cultures mortes ou à peine vivantes ne peuvent nullement 
servir pour l'étude de la virulence. Si nous excluons les expériences, faites avec 
ces cultures, nous verrons que les faits observés par M. Arkharoff ne confirment 
nullement sa conclusion. Dans trois cas (Exp. nos VII, IX, XXI), auxquels il 
faut ajouter encore un quatrième (que M. A. n'a pas mentionné dans son tableau 
de la p. 5%1), les lapins inoculés avec des cultures entières ont survécu, tandis 
que les lapins qui ont reçu les cultures débarrassées du sérum sont morts en 
2.4 jours. Dans cinq autres expériences (n0s IV, VI, XVII, XVIII, XIX), les lapins 
inoculés avec des cultures privées du sérum sont morts avant leurs témoins. 
Dans une expérience, les deux lapins sont morts en même temps. De tout len- 
semble des expériences de M. Arkharoff, il n'y a en qu'une seule (n° XI) où la culture 
notoirement vivante (dans l'Exp. n° XV le contrôle n’a pas été fait) n’a pas tué le 
lapin auquel elle a été injectée sans le sérum. Mais c’était une culture de 5 jours, 
dont la faiblesse s’explique facilement par son âge avancé. 

Il résulte de cette analyse que les expériences de M. Arkharoff, malgré l’em- 
ploi de vieilles cultures, confirment le résultat obtenu par M. Issaeff, à savoir 
que les cultures dans le sérum des lapins vaccinés sont virulentes, mais pas toujours 
mortelles, à cause de l’action préventive du sérum. 

Je saisis cette occasion pour informer les lecteurs du mémoire de M. Arkharoff 
que cet observateur a confondu plusieurs fois le pneumocoque avec le microbe 
de la pneumo-entérite des pores, très virulent pour le lapin. Une fois M. Arkharoff 
me montra un lapin vacciné, mais mort à la suite de l'injection du pneumo- 
coque dans une oreille œdématiée artificiellement. Comme ce cas semblait indi- 
quer que le pneumocoque, inoculé dans un endroit très pauvre en phagocytes , 
pouvait occasionner la mort d’un lapin vacciné, je me suis mis à l’étudier, et je 
constatai aussitôt qu'il s'agissait du microbe du Hog-Choléra et non du pneumo- 
coque. M. Arkharoff le décrit (p. 321) comme « une des formes modifiées du 
pneumocoque ». L’obstination de M. Arkharoff à ne pas employer la coloration de 
Gram (v. la note de la p. 505 de son mémoire) lui a facilité cette erreur. 


METCHNIKOFF. 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCO UE. 213 


lapin. On inoculait un autre lapin, témoin, sous la peau, avec 
une culture non lavée, à une dose de 1 à 2,5 €. c. 

Malgré le lavage soigné, 1l reste toujours une certaine quan- 
üité de sérum thérapeutique sur les microbes et dans leurs cap- 
sules. Cette circonstance, aussi défavorable qu'inévitable, se com- 
plique d’une autre également inévitable, — d’une perte considé- 
rable en microbes, dont une partie passe à travers le filtre, une 
autre reste sur le filtre et sur le pinceau. Pour mettre en évi- 
dence cette perte en microbes, 1l suffit de toucher, avec le pin- 
ceau qui à servi dans l'expérience, une surface de gélose de 
9 centimètres carrés, pour la voir se couvrir au bout de 8 
heures d’une très riche culture de pneumocoque. 

Eh bien, malgré toutes ces circonstances défavorables, la 
mort des lapins inoculés avec les microbes lavés survient tou- 
jours plus vite que chez les lapins qui ont reçu des cultures non 
liltrées. Sur 17 lapins inoculés avec des cultures brutes, 12 ont 
succombé de 42 à 152 heures après l’inoculation et 5 ont survécu. 
Sur 16 autres lapins inoculés avec des microbes lavés, 14 ont 
succombé à l'infection générale au bout de 30 à 70 heures après 
l’inoculation. L'accélération de la marche de l'infection à tou- 
jours été très marquée chez ces 14 lapins. Dans deux expériences 
seulement, les lapins, inoculés avec des microbes lavés, ont 
survécu, mais ces expériences ne peuvent pas annuler les pré- 
cédentes, étant données les conditions défavorables susindiquées 
et la résistance individuelle très variable des animaux d’expé- 
rience (v. tab. IV, Append.). Cela est d'autant plus vrai que les 
inoculations de cultures brutes en sérum normal ne déterminent 
pas non plus toujours l'infection généralisée et la mort des lapins 
(voir tab. V, App.). 

Pour nous convaincre de l'influence de la perte de microbes 
sur le ralentissement de la marche de l'infection, nous avons fait 
les trois expériences suivantes. Trois lapins inoculés avec des cul- 
tures brutes en sérum normal ont succombé en 20, 24, 30 heures. 
Trois autres lapins inoculés avec des microbes lavés, provenant 
des mêmes cultures ont succombé en 42, 42, 60 heures (voir 
tab. V, App.). 

Quatre expériences ont été entreprises pour avoir une idée 
de l'influence thérapeutique que pourrait exercer 1 e. e. de 
sérum vacciné. Sur quatre lapins, inoculés avec un mélange de 

18 


274 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


cultures lavées en sérum normal et de 1 ec. c. de sérum thérapeu- 
tique, deux lapins ont survécu et deux ont succombé en 
60 et 74 heures. Les témoins correspondants inoculés avec des 
cultures brutes ont succombé en 22, 26, 18 et 51 heures (voir 
tab. V, App.). 

Enfin, pour élucider complètement la question de l’atténuation 
du pneumocoque, nous avons encore fait les cinq expériences 
suivantes, qui nous paraissent très concluantes, et dans lesquelles 
nous avons transplanté le microbe du sérum thérapeutique dans 
du bouillon (voir tab. IV, App.). Si l’atténuation du microbe se 
fait réellement sous l'influence du sérum thérapeutique, le 
pneumocoque atténué étant réensemencé dans un nouveau 
milieu nutritif doit produire une génération également peu viru- 
lente. Or, nous avons observé le contraire : la culture en bouillon 
(soit culture fille B), résultant de l’ensemencement du pneumo- 
coque de la culture en sérum thérapeutique (soit culture mère A), 
était beaucoup plus virulente que la culture mère. 

On voit donc par toutes ces expériences que l’on ne peut 
attribuer une action atténuante quelconque au sérum «de lapins vac- 
cinés contre le pneumocoque. Le pneumocoque, cultivé dans le 
sérum thérapeutique, conserve ses propriétés virulentes, et est 
par conséquent capable de produire des toxines. 

En effet, si on ensemence le pneumocoque dans 15 à 20 c. c. 
de sérum vacciné, et d'autre partdans du sérum normal, sion laisse 
les cultures se faire à 38°, et si ensuite on injecte ces cultures 
stérilisées à deux lapins,on voitlesanimaux manifesterleur intoxi- 
cation avec une mème énergie de réaction, avec des oscillations 
de température de 3° à 3°,5. Ces expériences au nombre de 
cinq ont toutes donné le mème résultat (voir tab. IIE, App.). 


IA 
DU PROCESSUS D'INFECTION LOCALE PAR LE PNEUMOCOQUE. — COMBIEN DE 

TEMPS LE MICROBE INOCULÉ SOUS LA PEAU DES LAPINS VACCINÉS PEUT-IL 

CONSERVER SES PROPRIÉTÉS VIRULENTES ? — COMBIEN DE TEMPS DURE SA 

VITALITÉ? — CONCLUSIONS GÉNÉRALES. 

Passons maintenant à l'étude du processus d'infection locale 
déterminée par le pneumocoque dans lorganisme des animaux. 
Sur le lapin, cette étude se fait très aisément, surtout à la suite 
d'inoculations sous la peau de l'oreille. La température relati- 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 215 


vement basse de l'oreille du lapin présente sans doute une 
condition quelque peu défavorable pour le développement du 
processus infectieux, mais cela ne change point les conditions 
générales, et l'infection se manifeste par les mêmes phénomènes 
que ceux que l’on observe après l'inoculation sous-cutanée en 
tout autre point du corps du lapin. 

Inoculons une goutte de sang virulent sous la peau de loreille 
de deux lapins dont l’un est vaceiné et l’autre neuf (témoin). 
Une heure après l’inoculation, l'oreille malade du lapin vacciné 
présentera un œdème assez marqué, tandis que le témoin n’aura 
qu'une infiltration très légère, mais, au fur et à mesure du progrès 
de l'infection, on verra se produire le phénomène inverse : au bout 
de 24 heures, par exemple, Le lapin témoin aura un œdème assez 
marqué, tandis que chez le lapin vacciné l'œdème sera à peine 
appréciable. | 

Si après avoir retiré une petite quantité de sérosité de 
l’œdème, au point d’inoculation, chez le lapin vacciné, une heure 
après l’inoculation du virus, ou ensemence avec une trace du 
liquide retiré un bouillon, et que l’on fasse la même expérience 
sur le lapin témoin, on pourra observer le fait suivant. Il se 
développera, au bout de 16 à 20 heures, à la température de 38°de 
l’étuve, des cultures également riches en microbes et également 
virülentes pour les lapins neufs, qui succombent 26 à 38 heures 
après l’inoculation sous-cutanée de 4 ec. c. de ces cultures (voir 
tab. VI, App.). 

A l'examen microscopique de la sérosité provenant du lapin 
vacciné, on trouve une grande quantité de phagocytes, les uns 
remplis de microbes, les autres n’en contenant point, et beaucoup 
de microbes libres répandus dans le liquide. Chez le lapin témoin, 
la diapédèse est faible et la phagocytose est rare. 

Si l’on répète l'expérience 2, 4 ou 5 heures après l’inoculation 
du virus, on observe les mêmes phénomènes pour le lapin 
témoin; mais, chez le lapin vacciné, on constate une diapédèse et 
une phagocytose de plus en plus marquées, en même temps 
qu'une diminution proportionnelle du nombre de microbes 
libres. Enfin, 5 ou 5 heures 1/2 après l’inoculation, on ne trouve 
plus, à l’examen microscopique, des microbes libres : ils sont 
tous englobés par les phagocytes. | 

L'ensemencement de la sérosité de l'œdème dans le bouillon 


276 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


produit encore des cultures d’une virulence à peu près égale 
pour les deux lapins. 

Sept à dix heures après le commencement de l’expérience, les 
cultures du liquide œdémateux du lapin vacciné sont peu viru- 
lentes en injection sous-cutanée aux lapins neufs; mais, même 
18 heures après le commencement de l'expérience, l’ædème du 
lapin vacciné peut donner des cultures virulentes pour les 
lapins neufs, à la dose de 3 à 5 e. c. en inoculation intravei- 
neuse. 

Si l’on vient à faire l'examen microscopique de la sérosité 
du lapin vacciné, 24 à 48 heures après l’inoculation du virus, on 
ne irouve plus de microbes, malgré des recherches soigneuses, 
et le bouillon ensemencé avec ce liquide reste clair pendant les 
premières 24 heures, mais au bout de 48 et même 72 heures il 
se développe une riche culture de pneumocoque, qui n’est 
cependant pas virulente pour les lapins. 

Voici encore une expérience qui complétera les observations 
précédentes. Retirons une goutte du liquide æœdémateux du lapin 
vacciné, 5 à 6 heures après l’inoculation du virus, et examinons 
celte goutte pendant qu'elle est encore à l’état frais, et que les 
leucocytes, toujours très nombreux, sont encore vivants. 
Examinons un phagocyte isolé des autres et rempli de microbes, 
qui se présentent sous la forme de petits grains brillants. Si 
l’on continue cet examen pendant plusieurs heures de suite et à 
la température de 36° à 38°, on voit au bout de 8 à 10 heures 
l'enveloppe de la cellule, déjà morte, se rompre sous l'influence 
de la pression des microbes multipliés, qui finissent bientôt 
par envahir tout le champ du microscope. 

Comment peut-on expliquer les phénomènes de ce processus 
cellulaire si marqué dans l'organisme vacciné? Quel est son 
rôle dans l’immunité? 

.. Nous avons vu que la partie liquide du sang d’agimaux 
vaccinés n’a la propriété de neutraliser les toxines du pneumo- 
coque ni ÿn vitro , ni dans l’organisme. Les lapins vaccinés sont 
au contraire plus sensibles aux toxines du pneumocoque que les 
lapins témoins; on ne peut pas, par conséquent, admettre l'anti- 
toricité du sang comme cause de l'immunité acquise contre le pneumo- 
coque. Cette conclusion ne doit plus paraître paradoxale, depuis 
que nous connaissons les observations analogues faites sur 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 271 


d'autres microbes. M. Gamaleia (13) a observé que les cobayes 
vaccinés contre le Vibrio Metchnikori sont plus sensibles aux 
toxines de ce microbe que les animaux témoins. MM. Charrin 
et Gamaleia (14) ont constaté la même action pour les toxines 
du bacille pyocyanique. M. Selander a observé le même phéno- 
mène pour le microbe du Hog-Choléra. M. Metchnikoff a con- 
firmé les observations de Selander, et enfin même pour le 
tétanos, maladie toxique par excellence, le fait présumé de 
neutralisation des toxines dans le sang d'animaux vacecinés ne 
constitue pas une condition indispensable pour limmunité 
acquise contre cette maladie. M. Vaillard {16) a constaté que 
les lapins vaccinés par des inoculations de spores du bacille 
tétanique sous la peau de la pointe de la queue deviennent 
réfractaires au microbe, tandis qu'on ne trouve aucune propriété 
antitoxique ni dans les humeurs, ni dans le sérum du sang de 
ces lapins. 

La propriété bactéricide du sérum de lapins vaccinés contre le 
pneumocoque n’est confirmée ni par les expériences in vitro, ni 
par les observations sur le développement du microbe dans l'or- 
ganisme des animaux vaccinés. Cette théorie doit être par con- 
séquent complètement abandonnée, ce qui est, du reste, l'avis 
de la plupart des auteurs cités plus haut. 

La théorie de l'action atténuante du sérum vacciné n’est pas plus 
admissible. Le pneumocoque cultivé dans le sérum thérapeutique 
et séparé de ce sérum est virulent: il peut produire des toxines 
dans les cultures de sérum vacciné; enfin, et c’est là le fait le 
plus important, le pneumocoque cultivé dans le sérum thérapeu- 
tique est capable de donner des générations virulentes dans le 
bouillon. 

Tous ces faits ne peuvent expliquer que d’une façon indirecte 
les faits que nous avons observés en cultivant le pneumocoque 
dans l'organisme même des animaux vaccinés. Nous avons vu, 
en effet, que le pneumocoque perd rapidement, sous la peau des 
lapins vaccinés, ses propriétés virulentes ; déjà 7 à 10 heures après 
l'inoculation, sa virulence s’affaiblit considérablement(le microbe 
produit des générations peu virulentes dans le bouillon) ; enfin, 
dans mes expériences, après 18 heures de séjour dans l’orga- 
nisme vacciné, l’atténuation du pneumocoque atteint ses limites 
extrêmes, le microbe perd complètement ses propriétés patho- 


278 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


gènes — ses générations dans le bouillon sont inoffensives pour 
les lapins neufs. 

Or. c’est exactement le contraire de ce qui se passe avec le 
pneumocoque transplanté des cultures en sérum thérapeutique 
dans le bouillon — ses générations dans ce cas-là sont virulentes. 

Il est évident que le pneumocoque s’atténue dans l’organisme 
vacciné, mais cette atténuation ne se manifeste que lorsque la 
phagocytose à atteint son plus complet développement. En exa- 
minant au microscope la sérosité de l’ædème des lapins vaccinés, 
retiré 5 heures 1/2 après l’inoculation du virus, nous n'avons 
jamais pu constater la présence de microbes libres dans le 
liquide — tous étaient englobés par les phagocytes, dans le 
protoplasma desquels doit s’opérer la vraie atténuation, et ensuite 
la destruction complète du pneumocoque. 

De tout l’ensemble des faits exposés sur la préservation des 
lapins contre le pneumocoque, nous pouvons donc tirer les con- 
clusions suivantes : 

Le pneumocoque se développe dans l'organisme vacciné, produit 
des toxines, qui, répandues par le sang dans toute l'économie, provo- 
quent une chimiotazie positive des phagocytes, lesquels sont attirés vers 
le point infecté par les microbes. Les phagocytes, ercités par les humeurs 
vaccinées, englobent les microbes vivants et virulents. Ces derniers 
conservent leur vitalité encore assez longtemps, mais finissent par périr 
dans les phagocytes. 


CONCLUSIONS GENÉRALES 


1. Les toxines du pneumocoque de Talamon-Fraenkel pro- 
voquent une réaction plus énergique chez Îles lapins vaccinés 
contre ce microbe que chez les témoins correspondants. 

2. Le sérum du sang de lapins vaccinés contre le pneumo- 
coque, tout en ayant des propriétés thérapeutiques, n’a cepen- 
dant aucun pouvoir antitoxique. 

3. Le sérum de lapins vaccinés n’a pas la propriété d’atténuer 

virulence du pneumocoque. 

4. Le pneumocoque cultivé dans le sérum de lapins vaccinés 
ne perd pas la propriété de produire des toxines. 

5. Le pneumocoque inoculé à un lapin vacciné conserve ses 


5 V3 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 279 


propriétés pathogènes environ 18 heures, et sa vitalité environ 
48 heures après l’inoculation. 

6. Dans l’immunité acquise contre le pneumocoque, la pha- 
socytose joue un rôle des plus importants. 


INDEX BIBLIOGRAPHIQUE 


1. Foa e Carsoxe. Gazzetla medica di Torino. Anno XLIT, fase. 15. 

2. Emmericu und Fawirzxy. Munchener Medicinische Wochens- 
chrift, 1891, n° 32. 

3. Kruse und Paxsixr. Zeitschrift für Hygiene, 1892, Bd. XI 43 p. 279. 

4. BenriNe und Nissex. Zeitschrift für Hygiene, 1890, p. 412. 

5. Rocer. Revue générale des Sciences pures et appliquées, n° 12, 1894. 

6. ArkHarorr. Archives de Médecine expérimentale, 1892, n° 4. 

7.G.undF. Kcemrerer. Berliner klinische Wo:henschrift, 1891 ,n0 42. 

8. Mosxy. Archives de Médecine expérimentale, 1892, n° 2. 

9. A. Boxome. Fortschritte der Medicin, 1891 n° 12. 

10. Foa e Scagra. Gazzetta Medica di Torino, 1892, n°5 13, 14 et 15. 

41. E. Mercaxiorr. Annales de l'Enst. Pasteur, 1891, n° 10. 

42. E. Mercuxixorr. Annales de l'Inst. Pasteur, 1892 (Etudes sur 
l’immunité), cinq mémoires. 

13. Gamazeïa. Annales de l'Inst. Pasteur, 1889, p. 543. 

14. Carr et GAMALEïA. Semaine médicale, 1890. p. 192. 

45. Secaxper. Annales de l’Inst. Pasteur, 1890, p. 545. 

16. Semaine médicale, 1891, p. 254. 


CREME à 10)» SEE 0e 
‘ : FT 


280 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


I. Action des toxines du pneu 


NUMÉROS DES EXPÉRIENCES. 1 2 3 k D] 6 
. © . + — . . = =) 
ES = t- — — — Ac — ne) 
e © © © © © S © © 
Z LS Ca FA CA 4 24 A Z 
NUMÉROS DES LAPINS. Z 2 2 é E 2 = 2 E £ ë £ z ä a 
Ce UE D RU COR Ne AURENRENMRENRS 
« = < 2 < a < = < < A] < “« D] < 
” = 7 = Ca = > z, > > E F > E > 
—  — — | | np, me | me | me | es 

Poids des lapins........ 2130)213512225)/2100[2150|1860[2260/2120|250012300 12200 21% 12150! 2200 2330 

Dose de culture injectée| 15 c.c. 251C:C- 291C.C. ECC 35 c.c. 3DIC Ce: 
dans la veine auricu-| dans le | dans le dans le dans le dans le dans le 
PT RER SRE AD te CE bouillon. | bouillon. | bouillon. | bouillon. < |bouillon.| : | bouillon. E 

S S © 

= E 2 

ù ; ; 7 jours à| = < |7 jours à| & 

Age des cultures........ 6 jours. | 8 jours. |24heures.| l'abri 2 |?24heures.| © l'abri © 
Ta T TD Ê£c =) 

de Pair. é . | de l'air. : 

Le] © Le] 

EVA S o 

3 [à laide de 22 e 

STE 2 heures à |? heures à [2 heures à|2 heures à| filtre à 4 

SIériiSation te 59. 59o. 580. 5Go. Chanbes chloroforme. 

land. 

Temp:trectalé 022. 39.5139.8139.2139.3139.3139.3139.7139.7139.2139 5139.7139.2139.5139.7|139.4 
1 heure après l’injection.|40.4|40.8140.6139.9140.3139.91:0.1139.9139.3139 7139.5/38 8139 7140.7139.1 
2 heures — 40.7140.8/40.2|40.5/40.4/40.5140.8140.5139.3139.7139.0/39 5140 6141.0139.3 
3 heures — 41.1140.4/40.2/40.5140.7140.5140.4/40.0139.3140.6/39.3/39.4139 8140.7|39.6 
4 heures — 39.8139.9139 0 
5 heures = 44,7140.1140.9139.7140.7139.7141.0140.0139.2 10.9/40.0139.6 

SEP ess —|—|— 
6 heures = 41.3139.5140.1139.2139.7139.1|41 0139.8139.2139 .8139.5/39 0[40.7139.7139.5 
71 heures 2% 11.2139,6139.5139,2139.5139,1140.7139.7139.2139 5139. 5139. 2140.6139.7139.5 
8 heures 40.9139.6139.4|139.3 10.2139.6139.2139 4139.6139.3140.5139.5139.5 
9 beures 40.1139.6139.2139.4139.6139 3140.1139.6139.6 

12 heures 41.7140.0 
24 heures 


L'IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 281 


coque Sur les lapins vaccinés. 


Q si = si 24 a 

È a = à À 20 Êre) = 

® a Z z z 2 Z G 7 

- : e 5 = : | sa : #2 2 eZ = S = Z 
= Z Z £ Z Z Z z 2 Z 2 2 Z & Z & 2 “ 
S © 5) o S S © (s] © } e (=) ü © 5 © 6} © 
© = Oo Z = (=) = O =: a] = æ o z - Z (æ] Z 
< S z & = < & < S < & «< < #2 < Es e = 
> = > E< = > = 7 E Ce = Fe Le E Es Fe ES 
—— —  — — | — | | — || — | GE 

A +. 9» ns > eo ra LS _. nm 9% 2 997 D] à 
2375 2050 /212013350125001[2450 2500012500 2850 As £ 2700|250012270 | 2180 


99 c.c. 94 c.c. à Lofo (dur! 35 © € 
dans le | dans le | dans le | 015% | poids deslqy sangl!, %° de 
bouillon. | bouillon. | bouillon. [(du poids! 22 c. c. | lapins) Lun l'exsudat |{ fo des 0,75 0/0 
des des [de sanget| jme [Peural du! foxines des 
lapins) | toxines |un volume d’ chien du toxi 
: eau. ne oxines 
ÊT LS ES des du d’eau. Injection mort du sang. du sang. 
2 Jours |6 Jours à , toxines du sang. Injection À pneum o- & 
neutrali- | j’abri £ jours. | sang Hancie 20e coque. 
- pe 23 Ë la veine. 
sation. de Pair. 


péritoine . 


à l’aide du |à l’aide du 


à l’aide du 


à laide delà laide de 


heures à . filtre filtre 2 heures à filtre filtre filtre 
560. chloroforme. | chloroforme. ES A Chamber - ’ehloroforme. 580. Chamber -| Chamber -| Chamber - 
s land. land. land. land. land. 


39.5139.6139.3139.4139.5|39. 


Ve] 
IS 
2e 
CS 


39.6139.4139.6139.6139.6139.5139.6139.3)39.3 


& 
© 
r 
ÿ 
© 
rs 
re 
© 
1 
= 
rs 


40.9!41.0140.9!41.6 41.6 


Mort 35 minutes après l'injection. 


co 
| Pz]| 
AN 


après 


Mort 4 heure 10 minutes après l'injection. 


injection. 


Mort 16 heures 


© 

[=] 
Mort 11 heures 
après l'injection 


282 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


II. Le sérum des lapins vaccinés est-il antitoxique ? 


NOPNDES { 9 3 L 
EXPÉRIENCES. 
——————— ———— 

PROVENANCE 
du | sl 5 EP NE EMEA NE NICE 
Z < HA < A < < 1 « A “« C2 < 
SÉRG Oo Z œ Z 3) Z 2 O Z a) Z S = 
SERUM. [e] [.4 æ] [A4 © = — © £ © rm. = É 
< © < © < © © Z © Z © z = 
Le CA > CA > LA A 7 CA 7 CA > A 


Poids des la-| 95459 |16801650l1535/1570| 730 | 735 |1900!1010|210012050| 13011980 1890/190 


Quantité de 


A 131C1c 21 20Rc2c: 30%c. c. J0NCTC: 49 ç. c. J01E-1C: 30 c.:c. 30 c. c 
mélange... ue 


48 h. > jours | 5 jours 
5 24 heures|sursérum|dans leldans lel , : : 
Age de Ia cul | 12 jours sur normal bouillon bouillon |? J0TS | toxines | toxines 
ture et son|sursérum sérum | 50 o/ 33 of] 10 0] sur SérUM du du 
milieu ..... normal. De 9 | normal. 


normal, de de sérum|de sérum 
bouillon. | normal. | normal. 


L à l’aide du |à 

sg ee G re à à re à |? esllo el ES 5 

Stérilisation IL heure all heure à|1 heure ä|2 heures à 2 heures à 2 heures à à filtre 
D80e PERS 919. 020, 550. 550, |Chamber- 


Temp-."rec-|} 
(Wfale- ae 


1 heure après 
| l'injection. |” 


zh + 40 ,.5140.9139.9139.6139.6/40.0139.6|41.0 
| © 
| à h — 10.2140.8139.7139.4140.2140.0139.3140.7 
6h — 39.8139.7139.7139,4139.9139.9159.5140.0 
7h _— 39.7139.4139.8139.6139.5/40.0 
sh — 39.8139.6 39,8140.0 
PE) Le 
10h. — 29 elBoLQ 
| 12e — 39.5139.6138.9139.2 
| 
| RER ER AN Re | Le ES Ur NEA USA) RE |A er, 
24h. — 39.8139.6 39.5139.6|: 


L’IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 283 


III. Action toxique des cultures faites sur sérum vacciné et normal. 


N9S DES EXPÉRIENCES. Il 9 3 4 


PROVENANCE es E £ k & 3 Le L = : 
£ < Z z Z z Z Z Z < 
du = = E £ S z 8 2 Ê 2 
SÉRU < 2 < © Æ © Z © Z © 
SÉRUM. > Z = 2 ss > = = = E 
Poids des lapins....| 730 740 1400 | 1470 | 1270 | 1320 900 870 1310 | 1320 
Dose de culture in-|2 °p du poids 
jectée dans la veine des 2 oJo 2 ofo 1 3/4 0fs 2 0/0 
auriculaire ....... lapins. 
Age des cultures, ...| 72 heures. St heures. 84 heures. 12 heures. 72 heures. 
Stérilisation 2 heures à 4: h. 1/2 à ET EME 2 heures à 4 h. 1/2 à 
D Se LU NE Ke 520, 560. 560. D80. 590, 


Temp. rectale.......|-39.6 | 39.5 | 39.6 | 39.6 
Lheureaprèsinjection| 39.7 | 39.9 | 40,2 | 39.8 
2 h — 40.2 | 40.3 ne 39.7 
4h — 40.7 so 40.9 | 40.4 
5 h. — 39.7 | 39.9 D 40.0 
6h. — 38.8 | 39.0 | 39.7 ve nn lu 
fut _ 39.2 | 39.4 | 39,5 ne rue nu 
8h — 39.3 ne Are ANR 
22 h — 39.6 39.6 Fee. A ES 


284 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


IV. Virulence des cultures du pneumocoque faites dans 
le sérum des lapins vaccinés. 


CULTURES B 


= PERL Pa Filles, dans le bouillon 
CULTURES NON LAVÉES A Les es après l’ensemencement par 
MICROBES NON LAVE. TRES 
(CULTURES MÈRES.) provenant des cultures A. 
Ijection 4 c.c. sous la peau. 


A — 
Poids | Doses deculture | Age Résultats Poids Résultats Poids Résultats 


des injectée sous des Re des ETES des eee 
: J SD 2 $S ex ces, : des expériences. 5 des expériences. 
lapins. | la peau du cûté. leultures.| JS EXPÉFiENCES. | Japius. P lapins. P 


N9S LES EXPÉR. 


a ————————— 


1860 18c:Yc: 24 Mort en 42 h. 


2060 ANG: 94 Survie. 2050 | Mort en 48 b. 


Mort en 39 h. 


Survie. 


Mort en Si h. Mort en 60 h. 


1900 Mort en S2h. | 2000 | Mort en 60 h. 


Mort en 106 h.| 1800 | Mort en 70 h. 


1650 Acc: 24 Mort en 50 h. 1700 | Mort en 30 h. 


2050 ATEN (ee 2% Survie. 2100 | Mort en 30 b. 


Mort en 144 h.| 1750 | Mort en 48 h. | 2170 | Mort en 30 h. 


Mort en 48 h. Mort en 40 h. | 2010 | Morten 24 h. 


Mort en 152 h.| 2000 | Morten 70h. | 1980 | Morten 48 h. 


12: | 2100, | 2 cc. 1/2 48 Mort en 48 h. | 2080 | Mort en 24h. 


2990 4 c. c. 48 |Mort en 130 h.| 2160 Survie. 


14 | 2010 {Acc 24 Mort en 73h. | 2060 | Morten 38h. | 2040 | Mort en 50h. 


2080 1 c.c. 24 Mort en 53h. | 227 Mort en 40 h. | 2100 | Mort en 32h. 


‘ 


16 | 2050 Acc: 24 Mort en 60h. | 2090 | Mort en 50h. 


2100 Survie. 


Survie. 


L’IMMUNITÉ CONTRE LE PNEUMOCOQUE. 285 


V. Virulence des cultures du pneumocoque faites dans 
le sérum normal. 


É É MICROBES LAVÉS 
CULTURES NON LAVEÉES. MICROBES LAVES. mélangés avec 
1 c.c. du sérum vacciné. 
< 
Poids | Doses de culture | Age Résultats Poids Résultats Poids Résultats 
des Injectée Sous des des expériences ds des expériences. des | des expériences 
lapins. [la peau du côté. feultures. | "© ‘| lapins AGO lapins. & on EF 
1 | 1880 A cv: 24 Mort en 18 h. 
9. | 4720 le"c: 24 Mort en 51 h. 1750 Survie. 
3 | 1850 rente: 72 Mort en 51 h. 
EN IN9010 2 %c.:c. 1/2 24 Mort en 18 h. 1995 Survie. 
5 | 2065 er 24 Mort en 26 h. | 2020 | Morten 42h. 

EF 2080 1 c. c. 94 Mort en 22 h. | 2100 | Mort en 60 h. | 2120 | Mort en 4° h. 
7 | 2100 { c. c. 2% Mort en 24 h. | 2170 | Mort en 44h. | 2080 | Mort en 60 h. 
8 | 2110 Aer c 48 Mort en 30 h. 

9 Survie. 


VI. Virulence des cultures faites dans le bouillon après l'ense- 
mencement par la sérosité provenant du point d'inoculation du 
virus à un lapin vacciné. 


Vos Nos dec < | Combien de temps après nt : RES ru 
Msn St EOE l'inoculation du virus la! 4, mas ENDROFE RESULTATS 


sérosité était tirée ; at 
injectée, D'INOCULATION, DES EXPÉ N = 
pOur ensemencer. J be oi 


expériences. | lapins. [Lapin s. 
1 heure. . €. [Sous la peau du côté.| Mort en 38 h. 
Sous la peau ducôté.| Mort en 64 h. 

Sous la peau du côté. Survie. 

1S heures. 2 c. c. |Sous la peau du côté. Survie. 


24 heures. 2 c.C.1/2|Sous la peau du côté. Survie. 


48 Heures. 2 c.c. 1/2|Sous la peau du côté. Survie. 


10 heures. 2 c.c. 1/2| Sous la peau ducôté.| Mort en 78 h. 


Dans la veine 


à 4 Survie. 
auriculaire. re 


Dans la veine 


: : Survi 
auriculaire. €. 


Dans la veine 
auriculaire. Mort en 30 h. 


Dans la veine. Survie. 


48 heures. GENE PNES Dans la veine. Survie. 


BACTÉRIES CHARBONNEUNES DANS LA VASE DU FOND D'UN PUITS 


Par M. Le Dr DrIATROPTOFF 


(Travail de la station bactériologique d’Odessa.) 


En février 1892, la Station bactériologique d'Odessa reçut de 
la part de M. R..., propriétaire, un échantillon d’eau de puits, 
avec prière d’y rechercher la bactéridie du charbon. Cette eau 
était soupconnée d’avoir amené une épizoolie de fièvre charbon- 
neuse dans un troupeau de moutons. 

L'analyse bactériologique de cette eau et son inoculation à 
des souris ne donnèrent que des résultats négatifs. Je demandai 
alors à M. R... des échantillons du sol du parc à moutons et de 
la vase du fond du puits dont était sortie l’eau suspecte. 

Ces échantillous furent traités suivant la méthode recom- 
mandée par M. Pasteur pour la recherche du B. anthracis. Avec 
200 grammes de chacun d’eux, on fit six lévigations successives 
chacune dans 250 c. c. d’eau, qu'on abandonna ensuite au repos 
dans un bocal conique. Pour chaque lot, la première de ces 
lévigalions fut rejetée : elle avait donné un précipité trop 
abondant et trop grossier; mais le dépôt des cinq autres fut 
chauffé vingt minutes à 90° et servit ensuite à ensemencer des 
gélatines. Avec les échantillons du sol du pare, je ne trouvai 
aucune colonie suspecte, mais dans deux des cuvettes ense- 
mencées avec la vase du fond du puits apparurent plusieurs 
colonies en tout semblables à celles du bacille charbonneux. Des 
préparations colorées, des ensemencements sur divers milieux, 
confirmèrent ce diagnostic, et enfin des souris, inoculées avec 
0 c. c.25 d’une culture de 48 heures dans du bouillon, des lapins, 
inoculés avec 0 c.c. 5 de la même cultüre, moururent dans les 
délais normaux, en présentant l'aspect anatomique bien connu 
du charbon : bacilles dans la sérosité amassée au point d’inocu- 
lation, dans la rate, le foie, le sang des bêtes mortes. Le sang 
ensemencé donna des cultures caractéristiques du B. anthracis, 


BACTÉRIES CHARBONNEUSES. 287 


et si j'ajoute qu'à ce moment aucune des personnes attachées 
à la Station bactériologique d'Odessa ne faisait de cultures de 
ce bacille, on conclura sans hésitation qu'il y avait des germes 
charbonneux dans la vase du fond du puits. 

M. R..., que j'avais invité à combler le puits suspect, vint 
ensuite me donner à ce sujet les détails que voici. Deux mois 
auparavant, une épizootie charbonneuse avait éclaté dans une 
de ses terres où il nourrissait de nombreux troupeaux. Plusieurs 
moutons, morts coup sur coup, furent enterrés, et les autres 
amenés dans un autre parc, éloigné de plusieurs kilomètres et 
ayant un abreuvoir spécial. Le parc contaminé fut minutieuse- 
ment désinfecté, les parois lavées au sublimé, la terre du sol 
enlevée sur une profondeur de 25 centimètres et remplacée par 
de la terre fraiche. Les moutons, ramenés dans ce pare, après 
s'être très bien portés dans l’autre, présentèrent au bout de quel- 
que temps de nouveaux cas de charbon. Nouvel exode, désin- 
fection, elc. Les bêtes ramenées, la maladie reparut. 

M. R... crut remarquer alors que l’épizootie ne recommençait 
que lorsqu'on se servait de nouveau de l’eau du puits, eau que 
les gens de la ferme dédaignaient d'employer à cause de son 
goût saumâtre. 

Le puits combié, l’épizootie cessa. Il faut admettre que les 
germes charbonneux y avaient pénétré de quelque façon, et 
tombaient au fond, ou y pullulaient plus rapidement qu'à la sur- 
face. On avait remarqué en effet que le charbon sévissait unique- 
ment sur les animaux qui, venus les derniers, n'avaient eu que 
les eaux du fond du puits, d’ailleurs peu profond. 

M. R..., à qui j'avais demandédem'envoyer, en cas de récidive, 
les organes d’une bête morte, pour me convaincre du caractère 
de la maladie, ne m'a rien fait parvenir. J’en conclus que la mala- 
die n’a pas reparu chez lui. Nos propriétaires de bergeries du 
sud de la Russie la connaissent du reste bien par ses symptômes. 


288 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR 


STATISTIQUE ‘ DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — FÉVRIER 1893. 
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Les animaux mordeurs ont été : chat, 1 fois; chiens, 152 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


—— 2 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


7me ANNÉE AVRIL 1893. No 


FE 


ANNALES 


DE 


INSEE ELE PASTEUR 


SUR UNE NOUVELLE FORME DE FIÈVRE 
à RENCONTRÉE SUR LES BORDS DE LA MÉDITERRANNÉE 


Par M. DAVID BRUCE 


Surgeon-Captain, Army medical School, Netley. 


a — 


Pendant mon service à Malte, de 1884 à 1889, j'aieu souvent 
l’occasion d'étudier une forme de fièvre qui y est fréquente et 
qui a été jusqu'ici confondue, soit avec la fièvre typhoïde, soit 
avec la fièvre intermittente. 

Convaineu que la meilleure méthode de diagnose d’une 
maladie infectieuse est l'isolement du microbe qui la produit, j'ai 
cherché le bacille d'Eberth ou le plasmodium de Laveran dans 
le sang et les tissus des malades atteints. Je n’ai trouvé aucun 
de ces parasites, mais j'ai toujours rencontré un micrococcus qui, 
à ma connaissance, n a été découvert dans aucune autre maladie, 
et qui n'existait sûrement pas dans les autres maladies que j'ai 
étudiées à Malte. Les cultures pures de ce coccus, Inoculées sous 
la peau des singes, ont produit la même affection que chez 
l'homme. L'objet de ce mémoire est de donner une Courte des- 
cription de cette fièvre que, faute d’un meilleur nom, j'appelle- 
rai fièvre méditerranéenne, et du microbe qui la produit. Je vou- 
drais aider ainsi à la faire reconnaître, dans le cas où elle 
sévirait aussi à Tunis ou dans quelque autre ville française des 
bords de la Méditerranée. 

19 


290 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La fièvre méditerranéenne peut être brièvement définie 
comme une maladie infectieuse, caractérisée cliniquement par 
de la fièvre, des sueurs profuses, de la constipation, des rechutes 
fréquentes, et qui est accompagnée ou suivie par des douleurs 
vives, de caractère rhumatismal ou névralgique, avec gonflement 
des articulations ou orchite. 

Anatomiquement, la maladie est marquée par l'élargissement 
et le ramollissement de la rale, des altérations parenchymateuses 
de divers organes. Elle diffère de la fièvre typhoïde en ce qu'il 
n'y a ni élargissement ni ulcération des plaques de Peyer, 
ni bacilles d'Eberth, et en ce qu'on y trouve constamment le 
micrococeus de la fièvre méditerranéenne. 

Étiologie. — Cette fièvre, que je n’ai eu occasion d'étudier qu’à 
Malte, est probablement très répandue sur les rivages et les îles 
de la Méditerrannée. On ne peut par exemple pas douter de son 
existence à Gibraltar, où elle porte le nom de Rock fever : on en 
rencontre souvent à l'hôpital militaire de Netley (1), chez des 
rapatriés venant de cette station. J’ai aussi eu l’occasion de voir, 
à l'hôpital naval de Malte, des cas de fièvre contractés sur les 
divers points de la Méditerranée visités par la flotte anglaise, 
et je me suis convaincu de leur identité avec l'affection que je 
vais décrire. 

Il y a aussi, je crois, de bonnes raisons de penser que cette 
fièvre est la même que celle que divers savants italiens ont décrite 
comme adéno-typhoïde, typhoïde intermütente (2), typhoïde atypi- 
que (3), fièvre sudorale (4) et autres noms. Plus tard, quand les 
caractères et la spécificité de cette fièvre seront mieux connus, 
je ne doute pas qu’on ne lui trouve une large aire d'expansion, 
et qu’on ne Jui rapporte pas des cas très nombreux pris aujour- 
d’hui pour des cas de fièvre typhoïde ou intermittente. 

À Malte, la fièvre méditerranéenne est endémiaue, et on en 
observe toute l’année des cas à l'hôpital militaire chez les soldats 
anglais. 

En gros, je peux dire qu'il y a environ 3 0/0 de l'effectif 
attaqués par cette maladie, Mais il y a des cas où elle devient 
épidémique dans une caserne et atteint 15 à 20 0/0 des hommes; 


FIÈVRE MÉDITERRANÉENNE. 201 


cela arrive surtout aux régiments contenant des soldats affaiblis, 
soit parce qu'ils sont trop jeunes, soit pour toute autre cause 
de débilitation, et qui arrivent à Malte pendant la saison chaude. 
Je ne voudrais pourtant pas dire que cette fièvre est une fièvre 
d'encombrement et de débilitation comme le typhus exanthé- 
matique, car elle attaque les officiers et leurs familles, logés 
dans des maisons vastes et bien aérées, dans une aussi large 
mesure que les soldats dans les casernes les plus encombrées. 

Comme on peut s’y attendre, c’estpendantles mois d’été qu’elle 
prévaut à Malte. Pendant les cinq ans que j’y ai passés, j'ai eu 
en traitement 400 cas de fièvre méditerranéenne, sur lesquels 
216 sont entrés à l'hôpital pendant les mois d'été et 184 pen- 
dant le reste de l’année. 

Quand ces malades arrivaient à l’hôpital, on les répartissait 
d'ordinaire dans les salles au milieu des autres malades : je n'ai 
malgré cela observé aucun cas de contagion sur ces malades ou 
sur le personnel de lhôpital. En cela, comme sur quelques 
autres points, la fièvre méditerranéenne ressemble à la fièvre 
typhoïde. | 

Quant à la façon dont elle se répand, si c’est par les voies 
respiratoires ou digestives, on ne sait rien de précis. Il faut pour- 
tant noter que les grandes améliorations apportées au service de 
l’eau dans les grandes villes ont eu peu ou pas d'effet pour 
diminuer le nombre des cas parmi les soldats. Autrefois l’eau 
était puisée dans des citernes souterraines et était facile à conta- 
miner. Maintenant les casernes sont pourvues d’eau potable 
arrivant sous pression constante. 

Les autres points que j'ai à mentionner au sujet de l’étiologie 
de la fièvre méditerranéenne n’exigent que quelques mots. La 
période d’incubation peut varier probablement de quelques jours 
à quelques semaines, car on voit la maladie apparaître sur des 
individus après leur retour en Angleterre, de 15 à 17 jours après 
leur départ de Malte. Quand un malade est atteint, c’est en géné- 
ral pour longtemps. Les soldats font, par exemple, en moyenne, 
un séjour de 90 jours à l'hôpital. La durée de la fièvre est 
pourtant très variable. 

Malgré cette longue évolution, le nombre des cas mortels 


n'est pas considérable et ne dépasse guère 2 0/0. 


292 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Il 


Description clinique. — Donnons tout de suite une courte des- 
cription clinique d’un de ces cas graves de fièvre méditerranéenne 
que l’on observe souvent à Malte. Admis à l'hôpital, le malade 
souffre souvent pendant 8 à 10 jours d’insomnies et de maux de 
tête d'intensité très variable. Il présente ordinairement un visage 
congestionné, fréquemment des bourdonnements d'oreille, par- 
fois des épistaxis. Sa langue est couverte d’un enduit épais, blanc 
jaunâtre, et il y a souvent congestion du pharynx. L’appétit est 
absent; il y a des nausées amenant parfois des vomissements, et 
de la sensibilité dans la région épigastrique. La constipation est 
la règle, mais il y a souvent de la diarrhée dans les cas les plus 
graves, et les évacuations sont souvent marbrées de sang. Le 
foie et la rate sont élargis et mous sous la pression. La tympa- 
nite est rare, mais on la rencontre, et aussi des gargouillements 
dans la fosse-iliaque. 

À ce moment, on observe presque toujours un léger rhume 
avec peu d’expectoration. La respiration a quelque chose 
d'inquiétant. Elle est âpre et craquante, avec, çà et là, de la crépi- 
tation moile. 

La fièvre méditerranéennese distingue dela fièvre typhoïde par 
l'absence de l’éruption rosée caractéristique de cette dernière ma- 
ladie, maislemaladeestsouvent baignédansunetranspiration pro- 
fuse, et présente souvent des sudamina plus ou moins abondants. 
On observe quelquefois un délire plus ou moins prononcé, sur- 
tout la nuit, mais à moins qu’il n’y ait de grands maux de tête 
ou des douleurs dans la région lombaire, le malade ne se plaint 
pas. 

Derniers symptômes. — A la fin de cette période, les maux de 
tète et les symptômes aigus disparaissent d'ordinaire, et alors 
commence une longue et monotone période de maladie, aussi 
désespérante pour le malade que pour le médecin. Le patient a 
son aspect naturel, mais un peu hébété. Sa langue est assez 
nette. Ses intestins ont besoin d'excilants pour fonctionner. La 
transpiration profuse persiste, la température s'élève, et de jour 
en jour le malade s’affaiblit, devient chancelant, et perd de son 
poids. Il dort assez bien, n’a ni délire ni insomnies, ne se plaint 


FIEVRE MÉDITERRANÉENNE. 293 


FURRSE SEPTEMBRE 
18802 


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+ Fig. 1. 


294 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


pas, et prend, sans en souffrir, de grandes quantités de liquide 
et de stimulants. Les seuls changements qui surviennent dans 
son état proviennent d’affections rhumatismales dans ses articu- 
lations. Un jour, c’est le genou qui est rouge, gonflé et très 
sensible au toucher; quelques jours après c’est le poignet. Par- 
fois plusieurs articulations sont atteintes à la fois, ou il peut y 
avoir de la névralgie intercostale, de la sciatique, ou de l’inflam- 
mation et du gonflement dans le testicule. 

Plusieurs semaines se passent ainsi : mais enfin la tempé- 
rature revient peu à peu normale, le malade remonte peu à peu, 
son sang regagne le nombre normal d'hématies, le poids aug- 
mente et les forces reviennent. 

Voilà la description clinique d’an cas ordinaire bien dessiné. 
Mais l'élévation de température est parfois le seul symptôme 
morbide, et, à l'autre extrême, la fièvre peut être au contraire 
assez grave pour être absolument impossible à distinguer de 
la fièvre typhoïde la plus rapidement mortelle. 

Courbe de température. — Sans entrer dans d’autres détails sur 
les symptômes, je crois utile de dire quelques mots sur les 
courbes des températures dans la fièvre méditerranéenne. 

Il suffit d'en examiner quelques-unes pour êlre frappé de 
leur irrégularité. On y voit aussi que dans la grande majorité 
des cas, cetle fièvre a Le type continu, les différences entre les 
températures du matin et du soir n’atteignant pas 1°. Mais 
parfois la fièvre tend à assumer le caractère rémittent ou inter- 
mittent, la température étant normale ou à peu près le matin, 
et montant le soir à 40° ou 400,5. 

Les cas bénins et sans complications donnent une courbe 
atteignant 39,5 ou 40° pendant les 8 ou 10 premiers jours, et 
tombant ensuite au niveau normal du 15° au 20° jour, moment 
où la convalescence commence et se poursuit sans interruption. 

Mais dans les cas typiques ordinaires, la marche est beau- 
coup moins satisfaisante, comme on peut le voir dans le 
diagramme précédent, relatif au même malade, qui montre la 
longue durée de la fièvre et ses rechutes si fréquentes (fig. 1). 

On voit sur ce tracé une première élévation de température, 
arrivant à 40°,5 et descendant ensuite jusqu’à la normale, qui 
est atteinte le 26° jour. Après 8 ou 10 jours d’apyrexie, il y a 
eu une nouvelle ascension thermique atteignant 40°,7, et signa- 


FIÈVRE MÉDITERRANÉENKNE. 295 


lant une rechute qui dure 16 jours. Après 3 semaines, nouvelle 
période pyrétique, un peu plus courte que la précédente, et où le 
thermomètre atteint 40°,3. Après cette rechute, la température 
n'était pas satisfaisante, avait tendance à s'élever au-dessus de 
la normale, et il y a eu comme une menace d’une nouvelle 
attaque entre le 1122 et le 118° jour. Mais cette attaque a avorté, 


NOVEMBRE 


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Fig. 2. 


la température n’ayant pas atteint 38°,5. Elle reste normale à 
partir de ce moment, et le malade, quoique faible et anémié, est 
renvoyé à son régiment pour être employé le premier mois à des 
besognes légères. 

Que ces rechutes puissent se produire longtemps après le 
début, c’est ce que montre le tracé ci-dessus, qui en signale deux 
entre le 1152 et le 160° jour de la maladie (fig. 2). 

Bien que la marche de la température dans la fièvre méditer- 
ranéenne ait une tendance marquée à revêtir la forme ondula- 
toire, il ya pourtant de rares cas où les ondes caloriques sont 
séparées par des périodes régulières d’apyrexie. 


296 ANNALES DE 


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L'INSTITUT PASTEUR. 


SEPTEMBRE 


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FIEVRE MÉDITERRANÉENNE. 297 


Dans la plupart des cas, la température reste un demi-degré 
ou un degré au-dessus de la normale entre les diverses recru- 
descences, et dans quelques-uns l'irrégularité dela fièvre masque 
parlieilement ou complètement la succession des ondes. 

C’est un de ces cas irréguliers que présente le tracé (fig. 3), 
où la température n'atteint sa hauteur normale que vers 
le 100° jour. 

En l'examinant, on voit que la première et la seconde des 
poussées de chaleur sont séparées par une période, non d'apy- 
rexie, mais de températures 
plus basses, et qu'entre la se- 
coude et la troisième poussée, bomli[215[#15[6 17/81 17 
la tempéralure est toujours Hi 
supérieure à la normale, sauf 
en quelques points. 

La troisième onde, du 71° 
au 81° jour, est intéressante 


JUILLET 
be87|8 [9 [ao#felsltalhs| [TTL TT 


comme exemple de ce type 
intermittent que nous avons 
signalé plus haut, la tempéra- 
ture étant à peu près nor- 
male à 8 heures du matin, 
tandis quà 2 heures du 
soir elle est montée à 40°,9 et même une fois à 41°, 
__ Dans les cas mortels, la température monte d'ordinaire rapi- 
dement avani la mort, atteignant 43°,3 ou même, comme dans le 
tracé ci-dessous, 449,2. (Fig. 4.) 

Bactériologie. — Le microbe de la fièvre méditerranéenne 
a élé découvert par moi en 1887 à Malte (6), el sa présence 
constante daus les organes chez les malades morts de celle 
maladie a été vérifiée dans la même île par les deux chirurgiens 
Gipps R. N. et Hughes A. M. S. (7). On ne l’a signalé à ma con- 
naissance dans aucune autre fièvre observée sur les bords de 
la Méditerranée. 

Ce micrococeus (fig. 5), que j'ai appelé M. Melitensis, est rond 
ou légèrement ovale. [l mesure 0,34 de diamètre sur les prépa- 
ralious sèches. Dans l’eau, ce sont des points brillants, en aCUf 
mouvement moléculaire, presque tous simples, rarement par 
paires, jamais en chaînes. Il n’a pas de mouvements spontanés. 


298 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Il se colore bien par les solutions aqueuses de violet de gen- 
Liane, mais non par la méthode de Gram. 

Daus du bouillon peptonisé, à 37°, on n’observe rien les pre- 
miers jours, mais le liquide se trouble ensuite, sans formation 
de pellicule à la surface. 

Le meilleur milieu de culture est du bouillon de bœuf gélosé 
avec 0,5 0/0 de peptone, qu'on inocule soit par piqüre, soit en 
surface. Sur les cultures en piqüre faites avec la rate d'uu cas 
mortel ou une culture antérieure, il n’y a pas de changement 


Fig. 5. Micrococcus Melitensis. 


visible pendant plusieurs jours. On voit ensuite apparaitre de 
petites taches d’un blane de perle autour du point piqué, et de 
petites colonies blanches sur le parcours de l'aiguille. Après 
quelques semaines les colonies de la surface forment une rosette; 
la piqûre est une traïinée massive, de couleur jaune-brun, à 
contour dentelé. Après quelques mois, la culture ne s’est pas 
élendue, et s’est foncée en couleur. 

En surface, les colonies se présentent un peu autrement. 
Quelques-unes atteignent 2 à 3 millimètres de diamètre après 
9 à 10 jours à 37°; elles sont rondes, à contour régulier; elles 
font un peu saillie au-dessus de la surface de la gélose, et ont 
un aspect lisse et brillant. Examinées par transparence, leur 
centre apparaît jaunâtre, la périphérie blanc bleuâtre. Ces mêmes 
colonies, à la lumière réfléchie, ne montrent pas trace de jaune, 
elles sont d’un blanc laiteux. Elles s'étendent peu et ne dépassent 


4 


FIÈVRE MÉDITERRANÉENNE. 299 


pas, au bout d’un couple de mois, la largeur d'un grain de 
chènevis. 

Le temps nécessaire pour queles colonies deviennent visibles 
à l'œil nu est assez constant. Il est de 7 Jours à 25°, de trois 
Jours et demi à 37°. 

Quand les cultures par piqüre sont faites sur de la gélatine 
nutritive à 10 0/0, maintenue à 22, le développement est faible 
ou nul. Après un mois, le trajet de l'aiguille est à peine marqué, 
et à la surface on ne voit qu'une petite colonie blanche de la 
grosseur d'une tête 
d'épingle. La géla- 
line n’est pas liqué- 
liée. 

Les cultures sur 
plaque de gélatine 
nesontpaspratiques, 
à raison de la lenteur 
du développement du 
micrococcus aux tem- 
pératures auxquelles 
ce milieu reste so- 
lide. 

Il ny a pas de 
développement sur pomme de terre à la température du sang. 

Voici la liste et les courbes de température des cas mortels 
desquels j'ai retiré des cultures pures du micrococcus de la fièvre 
méditerranéenne : 


4er Cas. — H. D., 24 ans, admis le 25 juin 1887, mort à 5 h. 30 du 
soir, le G juillet 1887. — Autopsie 10 minutes après la mort. Pas d'’élar- 


gissement ni d'ulcération des plaques de Peyer. Le tracé (fig. 6), donne la 
marche de la maladie. 

2 Cas. — A. B., 24 ans, admis le 26 juin 1887, mort le 11 juillet 4887. 
On n’a pas fait l’autopsie, mais 7 heures après la mort j'ai pu retirer une 
petite portion de la pulpe splénique pour inoculer des tubes de gélose, en 
employant un trocart et une canule stérilisés. 

3° Cas. — B.E., 23 ans, admis le8 juillet, mort à 3 h. 30, le 15 juillet 1887. 
— Autopsie 10 minutes après la mort. Pas d’élargissement ni d’ulcération 
des plaques de Peyer. Voir, pour le tracé, la fig. 4. 

4 Cas. — J. C., âgé de 23 ans. Admis à l'hôpital le 30 juin, 
mort le 23 juillet 1887. — Autopsie 10 minutes après la mort. Pas 


300 


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le 22 septembre 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


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Tracé fig. 


du matin 
18872 Autopsie 10 minutes après la mort. Tracé fig. 8. 


AOUT 


FIEVRE MEDITERRANÉENNE. 301 


6° Cas. — J. G., 23 ans. Admis le 28 juillet 4888, mort à 4 h. 15 du soir, 
le 4 août 1888, — Autopsie 10 minutes après la mort. Tracé fig. 9. 
7° Cas. — L. G., 22 ans. Mort après quelques jours de maladie. La rate 


[_ [JUILLET | AOÛT 

1888 [28/29/30 [51/1 DOCS SE 

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SRE) 


4 


pesait 684 grammes. Pas d’élargissement ni d’ulcération des follicules 
intestinaux. 

8° Cas. — C. D., 28 ans. Admis le 10 septembre 1888; mort le 17 sep- 
tembre 1888. Forte musculature; glandes mésentériques non élargies. Pas 


SEPTEMBRE 


Fig. 10. 
de traces d'engorgement glandulaire ni d'uleération dans le’petit ou le gros 
intestin. La rate pesait 590 grammes et était molle et pulpeuse. Tracé 
fig. 10. 


Je dois les 2 cas suivants à l’obligeance du chirurgien capi- 
taine Hughes, A. M.S$., en ce moment à Malte. 


9% Cas. — H. H., 22 ans, 72 jours de maladie. — À l’autopsie, rate 


302 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


pesant 373 grammes, noire el de consistance assez ferme. Plaques de Peyer 
normales, ainsi que les glandes solitaires. Pas d’ulcération nulle part. 
Glandes mésentériques non élargies. 

109 Cas. — G. S., 24 ans, 8 jours de maladie. — A l'autopsie, un peu 
de congestion à la base du poumon, en arrière. Foie pesant 2,730 grammes, 
élargi et congestionné. Intestins normaux. Rate congestionnée, pesant 
400 grammes. 


De tous ces cas, on a loujours réussi à tirer des cultures 
pures du micrococcus décrit plus haut. D’ordinaire les inocula- 
tions se faisaient avec la rate, mais parfois avec le foie et les 
reins. Le microbe de la fièvre méditerranéenne semble ne jamais 


AOÛT 
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circuler avec le sang, ce que j'ai eu souvent l’occasion de vérifier. 
Cependant le D' Hughes dit l'avoir retiré du sang d'un singe 
mort de la maladie. 

En outre des cultures faites au moyen des organes frais après 
la mort, j'ai réussi deux fois à en obtenir par ponction de la rate 
pendant la vie, si bien qu’on peut considérer comme démontré 
la présence constante de ce micrococcus dans les cas de fièvre 
méditerranéenne à Malte. 

Transmission de la fièvre méditerranéenne aux animaux. — 
On n'obtient que des résultats négatifs en inoculant de petites 
quantités de cultures pures de ce micrococeus sous la peau des 
souris, des cobayes et des lapins. Avec le singe, on réussit mieux, 
comme le montrent les expériences suivantes : 


Exp. 1. — Singe mâle, de l'espèce bonnet. Dans la quinzaine avant l'ino- 
culation, la température de ce singe a varié entre 37°,2 et 37,8. Il était 


FIÈVRE MÉDITERRANÉENNE 303 


vif, mangeait bien et semblait en très bon état. Avec une portion de colonie 
prise sur un tube de gélose et délayée dans une petite quantité d'eau stéri- 
lisée, on lui a fait une inoculation sous la peau de l’avant-bras, avec toutes 
les précautions antiseptiques. Le tube de semence provenait du 1% cas ci- 
dessus et avait un mois de culture. 

Le tracé qui précède montre la marche de la température (fig. 11). 

A l’autopsie, pas de tuberculose pulmonaire; foie congestionné, rate 
énormément élargie; pas d'ulcérations sur la membrane muqueuse des 
intestins. Immédiatement après la mort, on inocule 6 tubes de gélose avec 
la rate et 2 avec le foie. Dans tous, sauf un tube du foie, développement, 


NOVEMBRE 


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HÉHNE 


Fig. 12. 


dans le temps ordinaire, de la culture caractéristique du micrococcus. Le 
tube qui ne l’a pas donnée est resté stérile, 

Exp. Il. — Singe mâle, espèce bonnet. Inoculation comme ci-dessus. La 
température est beaucoup montée, et la mort est survenue en 13 jours. Des 
inoculations sur gélose faites avec les organes ont donné un développement 
après 4 jours. 


Le chirurgien-capilaine Hughes, à Malte, a aussi souvent 
réussi à donner la fièvre méditerranéenne à des singes. Voici le 
résumé d'une de ses expériences qu'il m'a communiquée. 


Exp. III. — Singe mâle, espèce bonnet. L'animal est resté en observation 
pendant deux mois, et avait un bon appétit et une température normale. On 
lui a injecté, à l’avant-bras, 1 c. c. de bouillon stérilisé dans lequel on avait 
délayé une petite quantité d'une culture de 24 jours sur la gélose. La tempé- 
rature a monté de suite, pour atteindre #1°, 1 le 15° jour de la maladie. Les 
dix premiers jours le singe était vif et continuait à manger sa ration. 
Après ce temps, il a commencé à se coucher et à refuser la nourriture. La 


304 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


mort est survenue 16 jours après l’inoculation. Le tracé ci-dessus montre la 
marche de la température (fig. 12). 

A l’autopsie, corps en bon état et cœur d'apparence normale. Poumons 
normaux, sauf une exsudation séro-purulente dans les bronches. Foie élargi 
et congestionné. Intestin normal, sauf un peu de congestion à la valvule 
iléo-cœcale. Rate élargie et congestionnée. Cultures réussies sur gélose avec 
la rate et le foie. 


Sept singes en tout ont été inoculés avec des cultures pures 
du micrococcus de la fièvre méditerranéenne, 4 par le D’ Hughes 
et 3 par moi. Quatre sont morts avec les mêmes symptômes que 
l’homme, et leurs organes ont fourni le micrococcus en culture 
pure. Trois sont guéris après une maladie plus ou moins grave, 
ayant duré deux mois et demi dans deux des cas, trois mois dans 
ie dernier, et qui, suivant le D' Hughes, a présenté d’une façon 
remarquable le type intermittent de pyrexie observé chez 
l’homme. 

Je crois donc démontré que le Micrococcus Melitensis est la 
cause de la fièvre méditerranéenne, et que celte fièvre est une 
maladie spécifique absolument distincte de la fièvre typhoïde ou 
de la malaria. 

Quant à la question importante du mode de pénétration du 
parasite dans l’homme, par l'air, par l’eau ou par les aliments, 
on ne sait encore rien, et les difficultés qu’on rencontre dans la 
culture sont un obstacle à cette recherche, 


BIBLIOGRAPHIE 


1. VEALE. Report on cases of fever from Cyprus, Malta and Gibraltar. 
Netley, 1879. Army medical Reports 1879. 

2. BorreLLr. Tifoïde intermittente. Rivista clinica di Bologna, 18T7. 

3. Capozzi. Della febbre tiloidea atipica. Napoli, 1887. 

4. TowaseLur. La febbre continua épidemica. Calania, 1879. 

9. Gipps. On Malta fever. Trans. of epidem. Soc., 1890. 

6. Bruce. Note on the discovery of a micro-organism in Malta fever, 
Sept. 1887. The Practitioner. 

7. Hucues. Etiology of Mediterranean fevers. The Lancet, 3 dec. 1892. 


he 


SUR LE ROLE PROTECTEUR DES MICROBES 
DANS LA CRÈME ET LES FROMAGES 


Par E. DUCLAUX 


Parmi les problèmes soulevés par mes études sur la matu- 


ration des fromages, et restés encore sans solution, il y a celui-ci : 


la matière grasse s’oxyde avec rapidité, même à la lumière 
diffuse, lorsqu'elle reste exposée à l’air à l’état de division 
extrême, comme dans la crème et les fromages; le premier effet 
de l'oxydation est l'apparition d'une saveur savonneuse ou 
suiffeuse très désagréable, et par là très facile à percevoir. 
Comment se fait-il qu’elle ne soit pas plus fréquente dans la 
pratique, et que de la crème puisse vieillir, que des fromages 
puissent durer des mois ou des années sans prendre la saveur 
du savon de Marseille? 

Sans doute l'expérience a appris à se précautionner contre 
cette vicialion de goût. On sait que la crème ne doit pas être 
exposée à la lumière directe du soleil, même tamisée par des 
vitres, On conserve le plus possible le fromage dans des caves 
où il trouve à la fois la fraîcheur et une demi-obscurité. 
Quand ce fromage doit vieillir, on le couvre, quand cela est 
possible, d’un enduit coloré, continu et imperméable, qui arrête 
à la fois l’oxygène et la lumière, en même temps qu'il évite la 
dessiccation. Voilà quelques-unes des réponses qu'on peut faire, 
en utilisant les faits que j'ai apportés, à la question que je 
posais tout à l'heure. Mais elles laissent de côté Le fait essentiel, 
l'intervention des microbes, qui consomment à leur profit 
l'oxygène qui pénètre jusqu’à eux, soit dans la couche de crème, 
soit dans la masse du fromage. Ce n’est que lorsque le fromage 
vieillit outre mesure, quand les microbes y ont ralenti ou 
arrêté leur action, que l’oxygène agit sur le corps gras, et 
l’oxyde en donnant ces matières résineuses et ces oxyoléates 

20 


306 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


d'ammoniaque auxquels on peut attribuer le noircissement de 
plus en plus marqué de la pâte. 

J'ai visé, en passant, ce rôle des microbes dans les Principes 
de laiterie que j'ai publiés tout récemment; mais jen’aurais peut- 
être pas songé à réunir mes études sur ce sujet sans une cir- 
constance qui m'a permis de les étendre et d’en vérifier les 
premiers résultats. Un grand fabricant de fromages avait cru 
devoir essayer, dans l'intérêt de son industrie, de déplacer 
l’époque de maturité des produits qu'il livre, en les conservant 
pendant quelques mois au voisinage de 0°, température à 
laquelle il supposait, avec raison, que les actions microbiennes 
étaient sinon suspendues, du moins très peu actives. Sitôt les 
fromages moulés, et avant toute fermentation, on‘en garnissait 
une cave qu'une puissante machine réfrigérante amenait à — 2° 
environ. L'expérience montra que dans cette cave le fromage 
ne mürissait pas, mais qu'il en ressortait avec un goût de savon 
très prononcé. 

Ce n’était pas son seul défaut. La réfrigération ayant eu 
lieu par un système à circulation d'air, pour lequel la cave était 
le point chaud du circuit, il y avait eu dans cette cave une éva- 
poration abondante, de sorte que les fromages s'étaient dessé- 
chés. Le déchet était monté à 20 0/0. La facilité de pénétra- 
tion de l’air dans la pâte avait naturellement augmenté, si 
bien que c'était dans toute la masse, et non pas seulement à 
la surface, qu'on relevait du mauvais goût. Seuls avaient été 
préservés, et encore d’une façon irrégulière, les fromages dans 
lesquels, malgré le froid, avaient poussé des moisissures, ou 
bien encore ceux qui, trop largement habités au début, avaient 
été, malgré le froid, la proie des microbes, et avaient subi un 
commencement de putréfaction. Il faut remarquer en effet que 
Vair de la cave, aspiré d’un côlé pour aller à l'appareil réfrigé- 
rant, et refoulé de l’autre, avait fini par se débarrasser de son 
oxygène et n’entretenait pas la combustion des bougies quand 
on rouvrait la cave pour la visiter. La fermentation qui s'était 
établie dans quelques pièces était donc une fermentation anaé- 
robie ou une putréfaction. Ces fromages n'étaient pas savon- 
neux, maisils n’en étaient pas meilleurs. 

Quand le fabricant est venu me consulter, je Jui: ai fait 
observer qu'il aurait pu prévoir une partie de ces effets, et je 


DS 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 307 


lui ai demandé des échantillons de ses produits pour savoir si 
j'y trouverais la confirmation de mes premières expériences. Ce 
sont les résultats de ce travail que je voudrais exposer ici. 


l 


Je dois commencer par indiquer quels ont été mes moyens 
d'étude. D’après les travaux que j'ai publiés jusqu'ici, une 
matière grasse exposée à l'air subit simultanément deux procès 
de destruction différents et indépendants l’un de l’autre, bien 
qu'ils associent leurs efforts : 1° une saponification, qui dédouble 
les corps gras en acides gras et en glycérine; 2° une oxydation 
qui semble porter d’abord de préférence sur l'acide oléique, 
parce que ce n’est pas un acide gras saturé, mais qui finit par 
s'attaquer à toute la masse. 

L'étude des degrés par lesquels passe cette oxydation et du 
niveau qu’elle atteint à un moment donné est des plus difficiles. 
Bien que j'y aie passé beaucoup de temps, je ne suis pas en 
mesure de publier rien de précis. Nous verrons tout à l'heure 
quelques-uns des caractères qui permettent de juger, en gros, 
de l’intensité de cette oxydation. 

La science est un peu plus avancée en ce qui concerne la 
saponification. On sait que c'est là un phénomène normal, irré- 
sistible, que nous pouvons seulement activer ou modérer, mais 
dont il est impossible d’arrèler la marche. Chevreul avait 
découvert des traces d’acides gras libres dans le beurre le plus 
frais, et j ai montré que dans du beurre conservé à l'abri de 
l'air, des microbes et de la lumière, dans des boîtes closes, la 
saponification de la matière grasse croissait fatalement avec 
le temps de conservation. 

Quand ce beurre est exposé à l'air, cette saponification, qui 
commence et se continue de préférence sur les glycérides à acides 
volatils, sur la butyrine, la caproïne et la capryline, permet 
l’évaporation de ces acides. Le beurre se met à sentir le rance. 
Mais cette perte ne se fait vite que dans les couches superficielles, 
parce que les acides gras, même les plus volatils, quittent péni- 
blement la matière grasse qui les contient. Même à l’ébullition, 
un beurre ranci ne laisse pas passer dans la vapeur d’eau tout 
son acide butyrique ni son acide caproïque libres. La perte en 


308 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


acides gras devient au contraire rapide si le beurre peut nourrir 
des microbes qui les consomment ou les brülent, surtout des 
mucédinées, qui, ainsi que je l'ai montré, sont très actives sous 
ce rapport. Dans le fromage, les microbes de la pâte peuvent 
jouer le même rôle. 

Pour apprécier le degré de saponification auquel est arrivé 
un corps gras, il y a deux méthodes principales. L'une, que j'ai 
souvent employée, consiste à additionner la solution éthérée du 
corps gras de chaux finement éteinte. En agitant, on amène, entre 
cette poudre impalpable de chaux et les acides gras de la liqueur, 
la formation d’un savon calcaire insoluble, qui permet de séparer, 
par une simple filtration, les acides gras libres, et d'en étudier 
la nature. J'ai toutefois fait observer que ce moyen n’est bon 
qu'avec les corps gras très faiblement oxydés. Avec les autres, 
le savon de chaux est soluble dans l’éther, et si on peut en 
apprécier la proportion en mesurant la quantité de chaux entrée 
en solution, il devient impossible d'en étudier la nature. 

Le second moyen, qui laisse de côté la question de qualité 
et de nature, permet une appréciation assez exacte de la quantité. 
Il revient à saturer, par une solution alcoolique titrée de potasse, 
l’acide ou les acides libres présents dans la solution éthérée. La 
grosse question est celle de l'indicateur, qui manifeste, par un 
changement de teinte, le moment où la saturation est terminée. 
Ce moment ne correspond pas à la neutralité de la liqueur, le 
savon de potasse étant lui-même alcalin. La teinture de tourne- 
sol ne donne rien et commence à virer au bleu dès que les 
acides dont le poids atomique est le plus faible, les acides 
butyrique et caproïque, sont saturés. L'orangine vire à peu 
près au même moment. C’est la phtaléine du phénol qui semble 
jusqu'ici convenir le mieux. Son virage au rouge est assez brus- 
que quand on ajoute goutte à goutte la solution alcoolique de 
potasse à la solution éthérée de matière grasse. Ce virage 
correspond-il exactement au moment où tout l'acide gras est 
saturé et où il y a de la potasse libre dans la liqueur? C’est ce 
qui n’est pas démontré. Je me suis assuré, en opérant avec de 
l'acide stéarique aussi pur que possible, que le virage au rouge 
violacé correspond assez exactement au moment où il y a de la 
potasse en excès dans la liqueur. Mais il faudrait pouvoir 
compler sur une exactitude absolue, indépendante des circon- 


ie 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 309 


stances extérieures, et l'opération reste encore un peu empirique. 

Quoi qu'il en soit, on remarque que le liquide, qu'un petit 
excès de polasse a fortement rougi, se décolore en quelques 
minutes si on le laisse à l'air. C'est qu’une nouvelle portion de 
matière grasse s’est décomposée, en donnant de la glycérine 
neutre et un acide qui a saturé la potasse libre. En rajoutant 
de la liqueur alcaline, on a une nouvelle coloration, suivie 
bientôt d'une décoloration nouvelle, et on peut aller ainsi 
jusqu'à ce que la couleur finisse par persister. À ce moment, la 
saponification est terminée. 

La présence de potasse en solution dans une liqueur éthérée 
limpide contenant aussi la matière grasse active donc la saponi- 
fication. On sait combien, dans les opérations de l’industrie 
comme daus celles du laboratoire, cette saponification est 
ennuyeuse. Si on chauffe simplement le corps gras en présence 
d'une solution de potasse ou de soude dans l’eau, ce sont 
des heures qu'il faut passer quelquefois à surveiller son ballon 
avant d'y voir disparaitre tout trouble et toute trace de corps 
gras. On peut accélérer un peu l'opération en ajoutant de 
l'alcoo!, mais on s'expose à des pertes par suite de la formation 
d'éther butyrique, et M. Viollette, qui a confirmé mes indica- 
tions à ce sujet, a montré que ces pertes pouvaient atteindre 
10 0/0 de la matière grasse. On saponifie au contraire, en moins 
d'une heure et sans perte, une quantité quelconque de corps 
gras en le mettant, en solution éthérée; en contact avec une 
solution de potasse dans l'alcool, qui sert de trait d'union et 
assure le contact intime de l’aleali et du corps gras. 

Voici comment on peut opérer. On dissout dans environ 
20 c. c. d'éther 3 à # grammes de matière grasse. On ajoute 
un volume égal d’alcoo! à 95°, puis, goutte à goutte, au moyen 
d'une burette graduée, une solution alcoolique étendue de 
potasse que l’on a titrée elle-même au moyen d’une solution 
décime. Du volume versé pour ramener au rouge violacé la 
liqueur additionnée de quelques gouttes d’une solutionalcoolique 
de phénolphtaléine, on conclut la quantité des acides libres. On 
rajoute ensuite d'un seul coup la quantité voulue d’une solution 
plus concentrée de potasse dans de l'alcool fort, dont on connaît 
le titre approximatif. En comptant sur 250 milligrammes d’alcali 
par chaque gramme de corps gras employé, on est sûr d’être 


310 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


toujours au-dessus de la dose nécessaire. Il est inutile d’ailleurs 
d'ajouter un excès d’alcali, la saponification étant presque aussi 
rapide quand on n’a employé que la quantité strictement 
nécessaire. 

Le liquide doit rester limpide ou se troubler à peine. S'il se 
trouble à fond, c’est qu'il s’y précipite un peu de savon, qu'on 
redissout en y ajoutant un peu d'alcool. On l’abandonne à lui- 
même, sans y toucher, pendant une heure. La saponification 
est d'ordinaire terminée en moins d’une demi-heure, mais il est 


plus prudent de lui laisser une demi-heure de plus. On évapore 


alors au bain-marie le liquide alcoolique éthéré, après avoir eu 
la précaution d'ajouter quelques petits fragments de papier à 
filtrer ou de pierre ponce, pour éviter les soubresauts. Puis, 
quand il ne reste plus que quelques centimètres cubes de 
liquide, on reprend par l’eau. Le liquide doit rester parfaitement 
limpide. S'il se trouble, c’est qu’on n'avait pas rajouté assez de 
potasse, ou qu'on ne lui a pas laissé assez de temps pour agir. 

Comme l’opération a eu lieu sans pertes‘, on peut se servir 
de ce liquide pour y apprécier l’excédent d’alcali, suivant la 
méthode de Koettstorfer. Il est coloré en rouge par la phénol- 
phtaléine qu’on y a ajoutée à l’origine, et il suffit d'y verser une 
solution titrée d'acide pour le décolorer. Il m’a toujours paru 
que cette décoloration n’était pas franche, et je ne sais comment 
font les chimistes qui emploient avec tant de sécurité la méthode 
de Koettstorfer à la recherche du quantum de falsification d’un 
beurre. J’ai toujours trouvé préférable de faire servir le savon 
obtenu à la séparation et au dosage des acides volatils, suivant 
la méthode que j'ai fait connaitre ?. 

Dans un vase gradué à 110 c. e., on introduit la solution de 
savon. On ajoute ce qu'il faut d'acide sulfurique pour sursaturer 
légèrement la quantité de potasse employée. On laisse les acides 
gras se rassembler à la surface : au besoin, on les aide par une 


1. On n’observe à aucun moment l'odeur de l’éther butyrique, qui est constante 
pendant la saponification à chaud en présence de l'alcool, et au départ duquel 
est due, sans doute, la perte d’acide butyrique constatée par M. Viollette, Cela 
ent à ce qu’on ne chauffe ici que lorsque tout l’acide butyrique est combiné à 
la potasse : c’est entre le moment où il quitte la matière grasse et celui où il se 
combine à la potasse qu’il est capable de s’unir avec l’alcool dans le mode de 
saponification ordinaire, et de quitter la liqueur à l’état d’éther butyrique. 

2. Le Lait, p. 313. 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 311 


douce chaleur. Quand ils forment une masse fondue et unique, 
on complète à 110 c. c. le liquide qu’ils surnagent, après l'avoir 
laissé refroidir à la température ordinaire. On introduit enfin le 
tout dans une fiole de verre de Bohème de 250 c. ec. environ, 
daus laquelle se fait la distillation. 

Pour pouvoir employer telles quelles les tables que j'ai 
publiées, il faut distiller 80 c. c. sur les 110. Le liquide qu'on 
obtient est trouble par suite de la présence d’un peu d’acide 
caprylique, dont la plus grande partie forme des petites lentilles 
à la surface. On sature le tout au moyen d’eau de chaux titrée, 
et, en multipliant le nombre’trouvé par un facteur convenable, 
on à l'acidité totale due aux acides volatils contenus dans la 
quantité de matière grasse employée. 

L'étude qualitative de ces acides se fait par une distillation 
nouvelle, dans le détail de laquelle j'ai introduit une petite 
modification. Autrefois, je comptais comme mélange d’acide 
caproïque et d'acide butyrique tout l'acide caprylique contenu 
dans le beurre. J'ai vu depuis qu'il était possible d’en faire la 
distraction et le dosage approximatif, en profitant de ce que le 
caprylate de chaux est presque insoluble dans l’eau. 

En évaporant au bain-marie le résidu de la première distilla- 
tion, on voit se former et flotter à la surface des pellicules qui 
se mouillent difficilement. Quand le liquide est réduit à 25 
ou 30 c. c., on le jette sur un petit filtre qui retient ces pellicules, 
formées presque exclusivement de caprylate de chaux. Un 
lavage sommaire avec 15 à 20 c. c. d’eau n’en dissout pas une 
quantité sensible, et entraîne au contraire les sels solubles, 
butyrate el caproate de chaux. 

Dans ce mélange, on met en liberté les acides volatils en y 
ajoutant la quantité voulue d'acide tartrique, et en laissant au 
précipité de tartrate de chaux quelques heures pour se former. 
On décante ensuite le liquide acide. On le ramène à 410 ce. c. 
avec les eaux de lavage, et on l’étudie par les procédés de 
distillation fractionnée que j'ai fait connaître. 

Ces procédés permettent de trouver assez approximativement 
le rapport entre les quantités d'acide butyrique et d'acide 
caproïque contenues dans le dernier liquide distillé. Ils per- 
mettent aussi de remonter de ce rapport à celui que présentaient 
les deux acides dans le liquide de saponification de la matière 


312 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


grasse, et par conséquent dans la matière grasse elle-même. 
Connaissant par le premier dosage à l’eau de chaux la quantité 
totale d'acides volatils, et, par le second, la proportion de l’acide 
butyrique à l’acide caproïque, on peut trouver les proportions 
pondérales de chacun d’eux. 

C’est ici que nous retrouvons la petite modification dont je 
parlais tout à l'heure. Le premier dosage à l’eau de chaux 
correspond à la totalité des acides volatils distillés, acide 
butyrique, caproïque et caprylique. — Avant de faire le calcul 
pour les deux premiers, il faut faire le départ du dernier. On y 
arrive assez facilement et avec une approximation suffisante 
en opérant de la façon suivante. La première saturation faite 
sur la partie distillée du liquide de saponification avait par 
exemple exigé m centimètres cubes d’eau de chaux. Dans la 
deuxième distillation, d’où a été éliminé aussi bien que possible 
l'acide caprylique, on en a trouvé m', et de cette quantité 
correspondant à ce qui a passé dans les 80 c. c. distillés, on 
pent conclure, par les tables que j'ai données, la quantité »’ 
restée dans les 30 c. c. qu’on a laissés dans le vase de distil- 
lation. La quantité d'eau de chaux représentée par 0 +w 
correspond donc à l’acide butyrique et à l’acide caproïque. En 
la retranchant de », la différence 17 —1m —n donne l'acide 
caprylique. : 

Grâce à l’insolubilité du caprylate de chaux dans l’eau, cette 
méthode de dosage, qui n’est bonne que pour un mélange de 
deux acides, peut done convenir à un mélange de trois. Mais il 
n’en est plus de même quand à acide butyrique et à l'acide 
caproïque, éléments normaux de la constitution du beurre, vient 
se joindre l’acide formique que j'ai démontré être un produit 
constant de l'oxydation de la matière grasse. On est averti de sa 
présence en ce que la méthode, qui doit fournir des nombres 
constants, ou à peu près constants, pour le rapport entre l'acide 
butyrique et l'acide caproïque, ne donne plus rien, ou ne fournit 
pour ce rapport que des nombres toujours croissants et sortant 
tout à fait des limites ordinaires. 

Cela tient à ce que l'acide formique, au lieu de passer de 
préférence avec les premières portions de liquide distillé, 
comme le font les acides butyrique et caproïque, s’accumule 
au contraire dans les résidus restant dans le vase de distilla- 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 313 


tion, et la décroissance du titre acide des diverses prises 
faites dans le liquide distillé, au lieu d’être régulière et rapide, 
se fait avec plus de lenteur, et peut même quelquefois, lorsque 
la quantité d'acide formique est notable, aboutir à une augmen- 
talion pour les dernières prises. Ainsi averti, on peut aller 
chercher l'acide formique dans le liquide restant dans la cornue. 
l'est même prudent, toutes les fois qu'on a affaire à du beurre 
qu'on peut soupçonner d’être oxydé pour une cause quelconque, 
de faire cette recherche en poussant plus loin que nous ne 
l'avons dit plus haut la distillation du liquide de saponification. 
On recueille d’abord les 80 c. ce. destinés au dosage par l’eau de 
chaux et à la continuation de l'expérience. On recueille ensuite 
à nouveau 15 à 20 c. c. pour y rechercher l'acide formique par 
le- nitrate d'argent ammoniacal. Comme cet acide reste dans la 
cornue, il y en a naturellement plus dans le résidu de la première 
distillation que dans celui de la seconde, et c'est pour cela que 
nous le cherchons de préférence dans les résidus laissés par le 
liquide de saponification. Un beurre frais n’en donne pas trace. 
Il en donne d'autant plus qu’il est plus oxydé et résinifié. 

Malheureusement je n’ai trouvé aucun rapport bien visible 
entre l'intensité probable de l'oxydation et la quantité d'acide 
formique produit. S'il y a de cet acide formé dès le début de 
l'oxydation, il se forme en quantités très faibles, et n’est pas 
décelable. On ne commence à en trouver que lorsque l'oxydation 
est déjà très avancée. Comme je le disais tout à l'heure, la mesure 
précise du degré d’oxydation est encore à trouver. On n’en a en 
ce moment que deux témoins, la présence de l'acide formique 
que je viens de signaler, et un autre qui est le suivant : quand 
on ajoute de la potasse à la solution éthérée de la matière 
grasse qu'on veut saponifier, la teinte du liquide se fonce à 
peine quand la matière grasse est fraîche; quand elle est oxydée, 
au contraire, il se produit une teinte brune plus ou moins foncée, 
due sans doute à la formation d’un oxyoléate noir de potasse. Il 
faut surveiller ces deux caractères un peu grossiers, mais cepen- 
dant utiles à consulter dans un problème aussi compliqué que 
celui dont nous nous occupons actuellement, 


314 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Il 


Arrivons maintenant à la question que nous nous sommes 
posée en commençant. Je commencerai par l’étude d’un beurre 
qui va nous fournir à la fois une application des méthodes qui 
précèdent, et une notion fondamentale au sujet de cette ques- 
tion. 

A. Beurres maintenus à l'abri de l'air et de la lumière. — 
C’est un beurre primé au concours agricole de Paris, en 1886, 
et analysé une première fois à l’état frais". Ce beurre a ensuite 
été fondu, filtré et enfermé dans un petit flacon à col étroit, 
hermétiquement fermé par un bouchon, dans lequel il n'était à 
l'origine en contact qu'avec ce qu'il pouvait avoir absorbé d'oxy- 
gène pendant les manipulations. Il a été analysé une seconde 
fois six mois, puis une troisième fois un an après la première 
analyse. On ne prélevait à chaque fois que la petite quantité de 
matière nécessaire pour l'opération, et le flacon était rebouché 
et conservé à la lumière diffuse. 

Ces trois essais n'ayant montré que de très faibles variations 
dans la proportion et la composition des acides volatils, on a 
attendu sept ans pour faire une quatrième analyse. Pour abréger, 
je ne donnerai que les résultats de cette dernière étude, et comme 
la saponification y a été faite par le procédé que j'ai décrit plus 
haut, tandis que les trois autres saponifications ont été faites 
par le procédé que j'avais décrit dans mes livres, à chaud et sans 
alcool, je ferai la comparaison de la première et de la dernière 
analyse pour montrer l'identité des résultats. 

En mars 1886, 25,930 de beurre saponifiés à chaud, et le 
savon décomposé par l'acide sulfurique, avaient donné, pour 
110 ce. c. de liquide distillés à 80 c. c., une quantité d'acide 
volatil saturée par 47 c. c. eau de chaux de 22,8 c. c. 

En mars 1893, 3#,130 de beurre ont exigé, saponifiés à froid 
et la distillation faite dans les mêmes conditions, 50,5 ce. c. de la 
même eau de chaux. La proportion est la mème. Elle était la 
même aussi dans les deux essaisintercalaires. La saponification à 
froid donne donc les mêmes résultats que la saponification à chaud, 
el sept années de séjour dans un flacon clos, à la lumière diffuse et 


1. C'est le n° 7 de mon livre : Le Lait, p. 325, et des Principes de laiterie, p. 265. 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 315 


en présence d'une quantité d'air limitée, n'ontrien changé à la propor- 
tion d'acides volatils contenus dans un beurre. 

Voyons maintenant si la composilion de ces acides est restée 
la même. Il n’y a pour cela, nous le savons, qu’à soumettre à 
une distillation fractionnée le produit saturé et évaporé de la 
première distillation, après en avoir séparé la plus grande partie 
du caprylate de chaux au moyen d’une filtration, et remis en 
liberté au moyen d’acide tartrique, les acides volatils qu'il 
contient. Le liquide ramené à 110 ce. e., on distille en préle- 
vant 8 prises successives de 10 ce. ©. Chacune de ces prises 
est saturée à part. Quand tout est terminé et qu'on con- 
naît la quantité totale d’eau de chaux employée, on cherche 
comment elle s’est distribuée dans les diverses prises, et on 
obtient une série de nombres, caractéristiques de la marche de 
la distillation, qai peuvent servir à trouver la nature et la pro- 
portion des acides volatils sur lesquels on a opéré. Voici cette 
série pour l'analyse de 1886 et celle de 1893 : 


1886 1893 
{re prise 24,40, DANTNSC 
2e 43,6 » 43,7 » 
JE 58,9 » 58,8 » 
AR 71,0 » 74,2 » 
DR 80,7 » 81.2 » 
625 88,5 » 89,0 » 
1e » 95,1 » DOME 
se) 100,0 » 100,0 » 


La ressemblance est aussi grande que possible, étant don- 
nées les irrégularités inévitables de toute distillation, alors 
même qu’elle est faite dans le même appareil, à la même pres- 
sion et à la même température. Concluons donc que {4 composi- 
lion des acides volatils est aussi restée constante. 

Reste maintenant à savoir quelle est cette composition. C’est 
uue question difficile quandil y a trois acides mélangés, comme 
c'est ici le cas, et je crois avoir réalisé un petit progrès sur mes 
publications anciennes en procédant de la façon suivante. 

Dans l'analyse de 1893, il avait fallu 50 ce. c. 5 pour la satu- 
ration des acides volatils dans la première distillation. Il en a 
fallu 43 e. c. en tout dans la distillation fractionnée pour saturer 
les huit prises successives de 10 c. c. Le liquide resté dans la 


316 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


cornue dans celte seconde distillation est peu acide et, en comp- 
tant que pour le saturer il faut environ 6 0/0 de la quantité 
d’eau de chaux employée à saturer les 8 prises, on se tient très 
près de la vérité. La quantité d'acide introduite daus la cornue 
à la seconde distillation correspondait donc environ à 
43 c. c. +0,06. 43 c. c. soit à 45,5 c. c. La différence à50,5 c.c., 
soit 5 ©. c., correspond donc à la quantité d'acide caprylique 
passé à la première distillation, et arrêté à la seconde par la fil- 
tration du caprylate de chaux. Gelte quantité d’acide caprylique 
est de 0,0316 gr. qui, pour un poids de matière grasse égal à 
35,130, donnent 1,01 0/0 d’acide caprylique. 

Quant aux acides restants, ils sont formés d’un mélange 
d'acide butyrique et d'acide caproïque facile à calculer avec les 
tableaux que j'ai donnés dans mon livre sur le lait (p.323 et 324). 
On trouve facilement ainsi, pour la matière grasse de ce beurre, 
en 1893, et par suite en 1886, puisqu'il n’y a pas eu de change- 
ment, les nombres suivants : 


ACID DUB YARIS FT ee RIRE PRES. 4,45 0] 
ACIAE CAPE OISE 70 de ae RU 2407 
ACITOSCANLTÉQUE ART RENE 1,01 04 

Home 0080 6 


En 1886, je laissais l'acide caprylique confondu avec les 
deux autres acides, et j'avais trouvé 7,58 0/0 d'acides volatils. Je 
crois ma nouvelle évaluation plus voisine de la vérité, mais je 
ne prétends nullement que j’évalue ainsi out l'acide caprylique 
contenu dans le beurre. Cet acide n’est pas à proprement parler 
volatil à la température de la distillation. Il est entraîné par la 
vapeur d’eau, ce qui n’est pas exactement la même chose. Il est 
de plus assez fortement retenu par la matière grasse restant 
dans la cornue, de sorte qu’il faudrait peut-être insister, et 
multiplier les distillations, pour le recueillir tout entier. C'est 
peut-être pour cela que M. Viollette‘ en trouve plus, en 
moyenne, dans ses essais, que je ne le fais dans les miens. 

Quoiqu'il en soit, la conclusion de cette étude est indépen- 
dante de la solution donnée ou à donner à cette difficulté. 
Quelle que soit la composition des acides volatils, elle ne 


4. Comptes-rendus de l'Académie des Sciences, t. CXI, 1690, p. 345. 


… Lé s'éedie radis de dé raid iles tr SANS 


LES MKROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 317 


subit pas de variations appréciables dans un beurre conservé 
pendant sept ans dans les conditions signalées plus haut. 

J'ai retrouvé cette mème conclusion pour un second beurre ; 
le n° 9 de moa livre sur le lait, qui avait été conservé côte à 
côte avec le premier, et qui a été analysé deux fois, en 1886 et 
en 1893. La proportion totale d’acides volatils y était aussi Ja 
même, bien que la saponification ait été faite à chaud la pre- 
mière fois, à froid la seconde. Quant à l'identité de composition 
de ces acides volatils, elle résulte du parallélisme des deux 
séries suivantes, qui correspondent à celles qui ont été trans- 
crites plus haut. 


1886 1893 
{re prise DORE 2D 07 
2e » 45,3 5 44,6 » 
3e ». 60,3 » 60,1 » 
4e  » 12,5: > 14,1/05 
5e » 82,3 » 82,0 » 
Ge » 89,8 » 89,9 » 
Te » 95,6 » 95,6 » 
8° » 100,0 » 100,0 » 


Concluons donc que la longue conservation du beurre à 
l'abri relatif de l'air et de la lumière n’amène pas de change- 
ments appréciables à nos méthodes d'analyse, dans la proportion 
et la composition de leurs acides volatils. Ces beurres n'étaient 
pourtant plus des beurres frais. Ils avaient très légèrement 
blanchi, sans être devenus incolores après fusion. Leur saveur 
était suiffeuse. L’oxydation en était évidemment commencé, 
mais elle n'était qu'à ses débuts, et, en particulier, il n'y avait 
pas de traces sensibles d'acide formique. 

La saponification, qui, je l'ai dit plus haut, est un phéno- 
mène indépendant de l’oxydation, n’était pas non plus poussée 
très loin. On peut l’évaluer en bloc avec la solution alcoolique 
de potasse titrée et la phénolphtaléine comme indicateur. Il est 
commode de la calculer en acide butyrique par kilogramme de 
beurre. Sur le beurre frais, la quantité d’acides gras saponifiés, 
évalués en acide butyrique, est toujours faible et ne dépasse 
guère 1s°,5 par kilogramme. Elle n'était montée en sept ans 


4. Sur ce total, l’acide butyrique réel ne compte guère que pour 6 à 10 0/0. 


318 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


qu'à 3,9 pour le premier des beurres étudiés plus haut et à 
75,4 pour le second. 

Dans le beurre fondu et filtré, la saponification est donc très 
lente, et, si on protège en outre le beurre contre l’action de l’oxy- 
gène et celle de la lumière, il peut se conserver plusieurs années 
sans changer sensiblement de propriétés. Ce n’est plus du 
beurre frais. La saveur délicate qu'il présente à l’origine est la 
première atteinte et disparait, mais le beurre reste mangeable. 
C’est la justification d’une pratique très répandue dans les cam- 
pagnes. 

Je peux appuyer celte conclusion par l'étude d’un autre 
beurre fondu et filtré, conservé depuis 1886 dans un flacon 
bouché à l'émeri hermétiquement clos, et qui n’avait pas été 
ouvert depuis sept ans. Le beurre y était resté jaune, et, tout en 
ayant pris une saveur légèrement suiffeuse, restait encore man- 
geable. Il n'était nullement rance. La quantité et la proportion 
des acides volatils n’y avait sensiblement pas varié, et, comme 
dans les beurres précédents, la saponification était restée faible, 
puisqu'elle n’atteignait que 3,48 par kilogramme. 


B. Beurre faiblement aéré à l'abri de la lumière. — Com- 
parons maintenant ces beurres à un autre beurre dont voici 
l’histoire. Il m'était arrivé comme garanti par un procédé 
de conservation qui consiste essentiellement à le réduire en fils 
fins comme du vermicelle, et à lui faire subir un séjour plus ou 
moins long daas de l’eau contenant du sel, du sucre et de l’acide 
borique, après quoi on enlève ce liquide, qu’on remplace par de 
l’eau contenant du sel et du sucre. Dans le liquide qui baignait 
le beurre que j'ai reçu, j'ai trouvé 1, 1 0/0 de sel, et des traces 
indosables de sucre. Il n’y avait pas d'acide borique. Le beurre 
avait été conservé dans le flacon, mal scellé avec un bouchon et 
de la cire, dans lequel avait été fait l'envoi. Il avait deux ans. 
Il était, au moment de l'ouverture du flacon, un peu suiffeux, 
mais très peu, moins que certains beurres de seconde qualité 
et vendus comme frais. En somme, il était mangeable. L'étude 
des acides volatils n'a pu être faite par comparaison avec le 
beurre frais de la même époque et de la même provenance, 
mais elle n’a révélé rien d’anormal, sauf la présence d’une trace 
d'acide formique. La quantité d'acides gras saponifiés, évaluée 


DE 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 319 


en acide butyrique, atteignait 225,3 par kilogramme de beurre. 
L'oxydation et la saponification y sont donc beaucoup plus 
avancées, bien que la durée de conservation soit moindre, mais 
il faut noter qu'ici le beurre était resté en contact avec de l’eau 
légèrement salée. Le contact de l’eau, même salée, active la 
saponification. 

C. Beurre fortement aéré à l'abri de la lumière. — Une 
autre portion de ce mème beurre avait été enfermée depuis 
deux ans dans une boîte de bois mal close et conservée au labo- 
ratoire à côté du précédent échantillon. Celle-ci avait subi, à peu 
près à l'obscurité, l’action de l’air et l’évaporation. Au bout de 
deux ans, on a fondu le beurre, qui était devenu très odorant, mais 
n'avait pas perdu sa couleur jaune, sauf dans une couche très 
superficielle. L'étude faite par comparaison avec le même beurre 
conservé en flacon a montré : 4° que la quantité totale d'acides 
volatils avait diminué d'environ un quart par conservation dans 
la boîte au contact de l'air; 2° que l'acide butyrique avait 
diminué dans de plus fortes proportions que les acides caproïque 
et caprylique; 3° que la quantité d'acide formique était aussi 
plus grande que dans le flacon mal clos; 4° que la saponification 
était aussi plus avancée dans la boîte, attendu qu'elle atteignait 
l'équivalent de 715,6 d'acide butyrique par kilogramme de 
beurre. 

Il faudrait ajouter à ce chiffre celui qui correspond à l'acide 
butyrique évaporé et évidemment saponifié avant évaporation. 
J'ai montré depuis longtemps que la saponification, lorsqu’elle 
se fait ainsi sous l’action du temps, porte de préférence sur les 
glycérides à acides volatils. Donc, dans ce beurre soumis à une 
oxydalion lente et à une évaporation facile, 1l y a rancification, 
perte d'acides volatils par évaporation, et surtout d'acide buty- 
rique qui donne au beurre rance son odeur caractéristique. 
La comparaison de ces résultats donne peut-être l’explication 
des nombreuses contradictions qui se sont produites sur le 
point de savoir s’il y a ou non diminution des acides volatils 
pendant la rancification. Voir à ce sujet le livre très complet de 
Zune (Analyse des beurres, Paris et Bruxelles, 1892). I ny a 
pas de perte si le beurre est conservé en vases clos. Il y en a s’il 
est exposé à l'air. 

D. Beurre largement exposé à l'air et à la lumière. — Pour 


320 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


faire un nouveau pas en avant, je mettrai en présence des 
beurres que je viens d'étudier d’autres échantillons de beurre, 
analysés par moi à l’état frais, parce qu'ils avaient été primés 
aux Concours de Paris de 1886 et 1887, et conservés depuis le 
jour de l'analyse dans un tube à essai, où ils avaient été intro- 
duits après fusion et filtration. Ils remplissaient ces tubes à 
moitié environ, et le bouchon fermait assez bien pour que l’éva- 
poration füt difficile, mais assez mal pour que l’oxygène de l’air 
ut empêché de pénétrer. Quand le bouchon s’était trouvé enduit 
de matière grasse, cette pénétration avait été d’abord assez lente, 
car il avait fallu d’abord oxyder la matière grasse du bouchon; 
mais elle avait fini par se faire partout, et on en était averti par 
celte circonstance qu'à une époque variable le beurre, jaune 
jusque-là, avait commencé à blanchir par sa surface supérieure, 
à prendre une odeur suiffeuse très marquée, et que la déco- 
loration et la viciation de goût avaient peu à peu envahi toute la 
masse, 

Le beurre n° 17 de mon livre le Lait, analysé compara- 
tivement en 1887 et 1893, n'avait subi aucun changement dans 
la proportion de ses acides volatils. [l en contenait toujours 
6,68 0/0. La composition de ces acides n’était pas tout à fait la 
même qu à l’origine. Il y avait, en effet, des quantités sensibles 
d'acide formique, et nous savons que l'influence de cet acide 
sur la marche de la distillation fractionnée empêche une compa- 
raison précise entre ce beurre oxydé et le beurre primitif. 
Toutefois à l’apparition de cet acide nouveau devait correspondre 
la disparition par combustion ou évaporation d'un autre acide, 
probablement l'acide butyrique. Concluons seulement que, dans 
ces conditions d’oxydation facile et d'évaporation pénible, le seul 
phénomène saisissable a été une variation dans la composition 
des acides, sans changement bien marqué sur leur proportion 
totale. Quant à la saponification, elle était notablement plus 
élevée qu’au début, mais pas encore très considérable, car elle 
n’alteignait que 25",4 d'acide butyrique par kilogramme. 

Le beurre n° 20 du même livre est un peu plus oxydé que le 
précédent. La comparaison entre les proportions d'acide en 1887 
et 1893 montre qu'il y a une légère augmentation. Une compa- 
raison plus étroite est difficile parce que cette augmentation 
résulte de l'apparition d’un peu d’acide formique. Mais l’aug- 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 321 


mentation n’est pas douteuse. Quant à la saponification, elle est 
exactement au même point que pour le beurre ci-dessus, et 
alteint l'équivalent de 254,4 d'acide butyrique par kilogramme, 

Ainsi, dans ces cas, l'oxydation avait marché plus vite que 
la saponification. 

En résumé, dans tout ce qui précède, nous voyons qu’en 
dehors de toute intervention des microbes et de celle de l’oxy- 
gène la saponification est un phénomène inévitable, mais lent, 
et dépendant des conditions de conservation. Elle s’exagère 
quand il y a en même temps oxydation, mais sans rester liée à 
ce phénomène, qui peut s'exalter beaucoup sans que la saponi- 
fication marche du même pas, quand l'oxygène pénètre faci- 
lement dans le beurre, et que l’évaporation des acides gras est 
difficile. Quand le beurre a le large contact de l'air, il peut, dans 
l'obscurité, perdre son acide butyrique par évaporation et 
prendre l’odeur rance. À la lumière, c’est la saveur suiffeuse 
qui l'emporte, parce que l'effet de l’oxydation dépasse celui de 
la saponification. 

E. Fromages conservés dans diverses conditions d'obscurité. — 
Nous pouvons maintenant faire entrer en scène les fromages 
dont j'ai parlé en commençant. J’en avais à ma disposition trois 
suffisamment comparables. 

L'un était un fromage frais, récemment moulé, et tout à fait 
au début de sa période de maturation, tel qu’on l’introduit dans 
la cave pour qu’il y mürisse. Je serai bref à son sujet. Je n’ai pas 
éludié sa matière grasse, la jugeant très voisine de celle qu’on 
rencontre dans les beurres frais; j'ai simplement constaté ce 
qu'elle contenait au début d'acides gras saponifiés ; j'en ai trouvé 
8 grammes par kilogramme, évalués en acide butyrique. 

Le second fromage était la pièce refroidie ont j'ai parlé en 
commençant, ayant passé cinq mois et vingt jours (du 15 juin au 
5 décembre) dans une cave refroidie à — 2° pendant tout cet in- 
tervalle, sauf pendant une quinzaine de jours, où des réparations 
à la machine ont permis à la température de s'élever pro- 
gressivement jusqu'à — 5°. Celte pièce, qui m'est arrivée le 
20 décembre, répandait une odeur de savon très prononcée, 
surtout sur sa face la plus plane, celle qui était restée appuyée 
sur la planche de support. Le fromage semble en effet n'avoir 
pas été retourné pendant son séjour à la eave, et a pris une 


21 


322 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


forme légerement tronconique par suite de la dessiccation. La 
face supérieure était couverte d’une croûte un peu visqueuse, 
faite d’une multitude de bactéries mélangées à de la pâte du 
fromage. 

Pour éliminer l'influence de ces végétations superficielles 
qui ne sont pas absentes sur la base en contact avec la planche, 
je racle le fromage sur une épaisseur de 4 millimètre environ : 
je trouve alors une couche blanche et homogène; c’est aux 
raclures de cette portion que j’emprunte la matière grasse à 
étudier. 

Cette fois, la marche de la distillation fractionnée révèle 
l'existence de l’acide formique en quantité très sensible. I n'y 
en avait pas avec la matière grasse de la première pièce. Voilà 
donc un nouveau témoin du phénomène d’oxydation. 

Malgré cette oxydation, qui a rendu le fromage immangeable, 
Ja saponificatian est extrèmement peu avancée. Elle n’atteint, au 
moment où je reçois la pièce, que 6,27 d'acide butyrique par 
kilogramme, et elle était certainement moindre quand la pièce 
est sortie de la cave, car elle progresse assez vite depuis le retour 
à la température ambiante. Au bout d'un mois de séjour dans 
une pièce non chauffée, je trouve qu'elle a atteint le chiffre 
de 13,4 d'acide butyrique par kilogramme, tant sous l'influence 
de la chaleur que sous celle des microbes qui se sont réveillés. 
Concluons qu’au froid, et dans un fromage soustrait aussi complè- 
tement que possible à l'influence des microbes, l'oxydation marche, 
mais que la saponification est très lente. 

Nous allons constater des résultats tout à fait inverses des 
précédents en étudiant la troisième pièce, mürie à la facon 
ordinaire, et prête à être consommée. Peut-être même avait-elle 
un peu dépassé la limite de maturité, car ses couches superfi- 
cielles avaient pris cette teinte grisätre qui caractérise les 
fromages très mürs, et présentaient en outre une saveur un peu 
sèche et légèrement suiffeuse. J’attribue la saveur sèche à 
l'augmentation dans la quantité d'acides gras saponifiés, la 
saveur suiffeuse à un effet d’oxydation, mais le changement de 
goût qui en résulte n’est pas défavorable, et il y a des pays où on 
recherche précisément des fromages arrivés à ce degré de 
maturité. Étudions donc la matière grasse de ce fromage. 

Je devrais dire les matières grasses, parce que, malgré les 


LES MICROBES ET LA MATIÈRE GRASSE. 323 


soins du fabricant et l'homogénéité originelle de la pâte, la 
maturation ne marche pas partout du mème pas, et les trans- 
formations de la matière grasse ne se font pas avec la même 
activité sur tous les points de la pièce. 

Une évaluation moyenne du degré de saponification, faite en 
décembre, me donne le chiffre de 225r,1 par kilogramme. En 
janvier, ce chiffre est monté à 24,5. En mars, je trouve sur un 
point 42:,5 d'acides saponifiés par kilogramme, l'évaluation 
faile en acide butyrique; sur un autre, au voisinage de la croûte, 
le chiffre est de 103 grammes. Si tous les acides gras étaient 
saponifiés, ils donneraient, en prenant le mème mode d'évaluation, 
environ 330 grammes d'acide butyrique par kilogramme. Il y a 
donc dans cette partie du fromage environ le tiers de la matière 
grasse saponifiée et transformée en acides gras. C’est un chiffre 
très supérieur à ceux que nous avons constatés jusqu'ici sur les 
beurres, mème après de plus longues durées de conservation. 

La sapomfication s'exagère donc notablement sous l'influence 
de certains microbes, surtout de ceux qui sont des agents com- 
burants. J'avais déjà insisté sur cette notion ‘, mais dans un cas 
plus éloigné de la pratique et moins saisissant. 

En revanche, il n'y a pas dans ce cas d’acide formique. 
L’oxydation a bien un peu fonctionné, puisqu'elle a donné une 
saveur légèrement suiffeuse aux couches extérieures. Mais cela 
date sans doute du jour où les microbes, ayant cessé d’agir, n’ont 
plus été des protecteurs suffisants. Tant qu'ils sont actifs, et j'en 
ai montré d’autres exemples, les microbes protègent la matière 
grasse contre l’action trop intense de l'oxygène de l'air. 

Maintenant quel est le mécanisme de cette action des 
microbes? Peut-être n'est-il pas difficile à découvrir, au moins 
dans un de ses rouages. La saponification est une éthérification, 
par conséquent un phénomène qui se heurte à un phénomène 
antagoniste, et qui par là se modère lui-même. Nous avons déjà 
vu plus haut cette saponification être plus marquée lorsqu'un de 
ses produits, l'acide butyrique, s’évapore eu vertu de sa volatilité. 
Ce phénomène d’évaporation se produit certainement dans le 
fromage, mais il est peu marqué. Le fromage ne sent que bien 
rarement le rance, mais les microbes peuvent faire disparaitre 


4. Le Lait, p. 51. 


324 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


l'acide butyrique en le brülant ou en le combinant à de l’ammo- 
niaque. 

Les acides gras combinés à l’ammoniaque complant comme 
corps saturés dans la mesure du quantum de saponification, il 
faudrait ajouter aux acides gras saponiliés, mesurés par les 
chiffres qui précédent, ceux qui sont combinés avec l’ammo- 


niaque. Ce fromage contenait 35,18 0/0 de matière grasse, 


et 5 ,80 d'ammoniaque par kilogramme. Cette ammoniaque 
aurait exigé pour sa saturalion 195,6 d'acide butyrique, sur 
lesquels il y en avait seulement 2%',1 d'acide butyrique réel. Le 
reste, 17:",5, correspondait à des acides gras. Sur 1 kilogramme 
de fromage, 1] y avait environ 352 grammes de matière grasse. 
C'était donc environ 5 0/0 d'acides gras saponifiés, existant à 
l’état de sels ammoniacaux, el il faudrail ajouter ce nombre aux 
chiffres de saponification donnés’ plus haut. 

Voilà une première cause d'accélération de la saponification, 
mais il y en a une autre, c’est que l'acide butyrique est brûlé peu 
à peu. Quand on étudie à la distillation fractionnée la matière 
grasse de ce fromage, ce qui est facile parce qu'il n’y a pas 
d'acide formique rendant la méthode incertaine, on constate que 
la proportion de l'acide butyrique par rapport aux aulres acides 
volatils a beaucoup diminué : ainsi, dans ce fromage, la pro- 
portion de l’acide butyrique dépassait à peine celle de l'acide 
caproïque, tandis qu'il est au moins du double dans la matière 
grasse fraiche. 

Toutefois, après avoir visé ces deux causes d'accélération de 
la saponification, il ne faudrait pas croire qu’elles expliquent 
tout. Il y a évidemment des influences de milieu. Sans qu’on 
sache encore pourquoi, certaines substances activent la saponi- 
lication, d’autres la retardent. A ces influences d'ordre chimique, 
les microbes ajoutent peut-être des influences d'ordre vital. 
Peut-être saponifient-ils de la matière grasse au moyen d'une 
diastase, pour en retirer la glycérine sur laquelle ils ont action. 
Ce sont là des questions que ce travail ne peut avoir la pré- 
tention de résoudre. Il se contente de les poser. 


RECHERCHES BACTÉRIOLOGIQUES SUR LA NEPPURATION 


CHEZ LES ANIMAUX DE L'ESPÈCE BOVINE 
Par ADRIEN LUCET 


Médecin-vétérinaire à Courtenay, Loiret. 
(Note préliminaire) 


« La suppuration franche, les abcès chauds, par exemple, 
sont-ils, dans toutes les espèces, provoqués par les mêmes 
microbes? En d’autres termes, les staphylocoques et les strep- 
tocoques, qui sont les agents les plus communs de la suppura- 
tion chez l’homme, se retrouvent-ils avec la même fréquence 
chez les animaux? Cette question est loin d'être résolue: je 
ne sache pas que les suppurations des différentes espèces 
animales aient fait l’objet de recherches systématiques analogues 
à celles qu'Ogston, Rosenbach et Passet ont consacrées à l’étude 
du pus de l'homme » (E. Nocarn : in Nouveau Dictionnaire de 
Médecine, de Chirurgie et d'Hygiène vétérinaires; article :| Suppu- 
ration, t. xx, page 505. Paris, 1892.) 

Telle est la question que par des recherches de plusieurs 
années j'ai (âché de résoudre en ce qui concerne les animaux 
de l’espèce bovine, chez qui la suppuration revêt des caractères 
spéciaux tels, que. jusqu'ici, les individus de cette espèce ont 
toujours été considérés comme possédant une aptilude peu 
prononcée à la pyogénie, — chose absolument erronée du reste. 

Entreprises d’abord avec le concours de mon excellent maître 
M. le professeur E. Nocard, que des travaux multiples et plus 
importants ont ensuite occupé ailleurs, ces recherches ont porté 
sur le pus de trente-deuxr abcès chauds ouverts chirurgicalement, 
sur neuf cas de suppuralion par traumatisme, sur sept accidents 
pyohémiques généraux consécutifs à la parturition, accidents 
bien loin d’être rares chez la vache, quoiqu'ils y soient regardés 
comme exceptionnels, et enfin sur quatre autres observations de 
pyohémie, 


326 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Les trente-deux abcès se répartissent de la façon suivante : 


Abcés dela joue droite CORP EE NT Cr 1 
Abees de la joue gauche eee ot ne l 
Abcès de la région parotidienne droite . . . . . . 3 
Abcès de la région parotidienne gauche . . . . . 4 
Abcès de la région du coude gauche . . . . . . .. 1 
Abtes durant eauche PERRET 3 
AbceSdu ane drOI EN EN ER ROMAENEE à) 
Abcés de da région ombilicale 2m Emme 11 
Abcesrde lammamele rem RUE S) 

Éotal enr FSDE 


Les cas de suppuration par traumatisme comprennent : 


Abcès de la région temporo-maxillaire droite, consé- 
cutif à une fracture de la corne du même côté. , 1 

Abcès de la mamelle, consécutifs à des morsures de 
chiens ou à des coups de fourches américaines à 
dents d’acier.. . . . . PROS SAR VER AE Ne PRES 

Décollements de la sole, consécutifs à des plaies péné- 
trantes produites par des fragments de silex pen- 
dantda mare hert seine Mr re 


Toutes ces observations ont été faites sur des vaches entre- 
tenues pour la production laitière. 


Quant aux accidents pyohémiques généraux, ils se rappor- 
tent : 


7 fois à des accidents puerpéraux (vache). 
4 fois à un érysipèle phlegmoneux ambulant (vache). 
3 fois à la pyémie déterminée par la phlébite ombilicale (veaux). 


—— 


Total , 41 


Les produits purulents prélevés dans tous ces cas ont fait l’objet 
d’ensemencements variés et d'examens bactériologiques après 
coloration sur lamelles, qui m'ont permis d'isoler un certain 
nombre de micro-organismes spéciaux non encore décrits. Parmi 
eux, quelques-uns, en raison de leur variabilité, de leur rareté, 
et surtout de leur présence exclusive dans les suppurations à 
contamination multiple (traumatismes, accidents puerpéraux, 
phlébites ombilicales), paraissent être de simples microbes acci- 
dentels, commensaux ou pathogènes par occasion; les autres, au 
nombre de cinq, et que, seuls, j'ai ici en vue, plus constants, plus 


SUPPURATION DANS L'ESPÈCE BOVINE, 327 


abondants dans les cultures ou les examens microscopiques du 
pus, semblent être les microbes pyogènes proprement dits, par suite 
de leur existence suivie dans toutes les collections purulentes, 
closes ou non, ou tout au moins dans la grande majorité d’entre 
elles el dans la plupart des accidents pyohémiques généraux. 
Néanmoins, ceci ne constitue qu'une probabilité, et il eût fallu, 
pour bien déterminer le rôle de ces agents dans les accidents 
pyogènes du bœuf, tenter de reproduire expérimentalement, chez 
les animaux de l’espèce dont ils provenaient, les phénomènes 
inflammatoires qu'ils paraissaient avoir causés. Ces expériences, 
dont l'importance était de premier ordre, je n'ai pu les faire 
jusqu'ici, en raison, d’un côté, de la difficulté de conserver la 
vitalité des microbes isolés, et, d’un autre côté, de l'impossibilité 
de trouver, à époques fixes, des sujets d'expérience d’une 
certaine valeur et d’un entretien fort coûteux. 

J'ai tàché, pour l'instant, d’atténuer ce défaut, en prolongeant 
mes recherches, dont le début remonte à près de six années, en 
multipliant les examens bactériologiques et les cultures des 
produits purulents recueillis, et en étendant ces examens à des 
accidents pyogènes aussi variés que possible. 

Le résultat en a été celui-ci. 2! semble qu'il existe chez le bœuf 
des microbes pyogènes spéciaux, non encore décrits, qui sont : un 
streplocoque, un staphylocoque et trois bacilles. 

Dans le but de les différencier et sans y attacher d’autre 
importance, j'ai appliqué à ces microorganismes les dénomina- 
tions suivantes : Streptococcus pyogenes bovis. Staphylococcus 
pyogenes bovis. Bacillus pyogenes bons. Bacillus liquefaciens pyogenes 
bovis. Bacillus crussus pyogenes boris. 

Le plus commun d’entre eux est ke Streptococcus. Viennent 
ensuite : le Bacillus pyogenes et le Bacillus liquefaciens pyogenes ; 
puis le Staphylococcus et Le Bacillus crassus pyogenes. 

Parfois l’un ou l’autre d’entre eux existe seul, principalement 
dans les collections purulentes closes. D'autres fois, ils sont 
diversement associés, soit entre eux, soit avec d’autres microor- 
ganismes. Ce dernier fait s'observe surtout dans les suppura- 
lions par traumatisme. 

Dans les cinquante-deux observations rapportées plus haut, 
ils étaient répartis de la façon suivante : 


328 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Streptococcus pyogenes bovis, seul.................. 9 fois. 
Staphylococcus pyogenes bovis, seul. ................ 2ye 

Bacillus -pyogenes Dovis Seul 0e loheaste 
Bacillus hquefaciens pyogenes bovis. seul 
Bacillus crassus pyogenes bovis, seul 
Streptococcus et Staphylococcus ...:.............. 


6 

4 

( 

LEES 

Streptococcus et Bacillus pyogenes........,..... MST TR 

2 

l 

2 

1 


sie loue seal eee 


sa .o701e viole e à s «eee 


Streptococcus et Bacillus crassus .................. 
Streptococcus, Staphylococcus et Bacillus crassus . 

Bacillus pyogenes et Bacillus liquefaciens.......... 
Bacillus pyogenes et Bacillus crassus.............. 
L'un ou l’autre de ces agents avec des microbes indé- 


LÉLMMRÉS ANT ONE D EL BEN Te RTS PRE, 14 
avec le Staphylococcus pyogenes albus de l'homme. 1 » 
avec le Staphylococcus pyogenes aureus id Re -PTNE, 

To re 52 » 


Quatre d’entre eux présentent des caractères communs. Le 
cinquième, le Bacillus crassus, diffère quelque peu des autres. 

Tous aéro-anaérobies, les premiers prennent le Gram et 
surtout le Gram Weigert, tandis que le dernier ne supporte pas 
ce moyen de coloration; cependant il s’imprègne facilement 
de toutes les couleurs d’aniline en solutions hydro-alcooliques. 

Perdant leur vitalité, dans les cultures faites au contact de 
l'air, dès la cinquième ou la sixième génération et parfois même 
plus vite encore, si les cultures séjournent quelque peu à l’étuve 
sans être rajeunies, mais la conservant un temps légèrement 
plus long dans les cultures dans le vide, ceux-là cultivent tou- 
jours peu en fournissant des cultures maigres et chétives ; celui-ci, 
au contraire, pousse rapidement dans tous les milieux et y con- 
serve assez longtemps sa vitalité et sa virulence. 

En dehors de ces caractères généraux, chacun d'eux pré- 
sente encore un certain nombre de particularités quant à sa 
forme, sa manière d'être dans les cultures et sa virulence. 
Ces particularités permettent de les différencier assez facilement 
les uns des autres. 

Sans vouloir entrer dans des détails qui trouveront mieux 
leur place dans une étude ultérieure, indiquons, dans cette note 
préliminaire, les grands traits qui les caractérisent. 

Streptococcus pyogenes bovis. — Paraissant être d’un diamètre un 
peu plus petit que le streptocoque pyogène de l’homme, immo- 
bile, il prend la forme en chaînettes, surtout dans les milieux 


SUPPURATION DANS L'ESPÈCE BOVINE. 329 


liquides où il atteint parfois une assez grande longueur. Ses 
éléments sphériques ou ovoïdes ont souvent un diamètre quel- 
que peu variable. 

Sans action liquéfiante sur la gélatine, ne fournissant pas sur 
pomme de terre de culture apparente, quoique y poussant, il 
trouble, au début, les bouillons qui, ensuite, s’éclaircissent en 
laissant un dépôt poussiéreux toujours peu abondant. 

Sa virulence est nulle en injection sous-cutanée et intra-péri- 
tonéale chez le cobaye et chez le lapin, et, chez ce dernier, en 
inoculation intra-veineuse. 

Staphylococcus pyogenes bovis. — Plus petit également que les 
staphylocoques de l’homme, donnant, sur gélose, une maigre 
culture grise, difficile à différencier, à première vue, des cul- 
tures fournies dans le mêmemilieu par le streptocoque, ne liqué- 
fiant pas la gélatine, troublant temporairement les milieux 
liquides, il diffère du premier, en dehors de sa forme, par ses 
cultures sur pomme de terre, où il fournit une mince couche 
crayeuse, mate et à peine saillante. 

Sa virulence est également nulle chez le lapin et le cobaye, 
quel que soit le mode d’inoculation. 

Bacillus pyogenes bovis. — Un peu plus court que le bacille de 
la tuberculose, dont il a, dans les préparations sur lamelles, 
quelque peu l'aspect, immobile, ne poussant pas sur pomme 
de terre, cultivant avec quelque difficulté sur gélatine, il trouble 
à peine et passagèrement les milieux liquides. 

Sa virulence semble variable chez le cobaye. Dans un cas, en 
effet, il a provoqué assez rapidement la mort en irjection sous- 
cutanée, tandis que dans d’autres il est resté sans action. D'un 
autre côté, Hüflich, Enderlen et Hess, qui paraissent lavoir isolé 
de différents cas de Pyelonephrose du bœuf, et qui l'ont déerit sous 
les noms de Bacillus pyélonephritidis bovis et de Bacillus renalis 
bovis, lui attribuent chez le cobaye un pouvoir pathogène irré- 
gulier. 

Bacillus liquefaciens pyogenes boris. — Semblable au précédent 
dans les préparations faites avec le pus ou les cultures, égale- 
ment immobile, il s’en différencie par son action sur la gélatine, 
qu'il liquéfie très lentement et sans aucun trouble. 

Ne cultivant pas sur pomme de terre, il donne dans le bouil- 
lon de veau, qui conserve sa limpidité, un dépôt grisâtre, peu 


330 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


abondant, que la moindre secousse répartit dans tout le milieu 
nutritif, qui se trouble alors passagèrement. 

Un autre caractère important est son action chez Ê lapin. 
Tandis que le Bacillus pyogenes reste inoffensif chez cet 
animal, quel que soit le mode d’inoculation, le Bacillus liquefa- 
ciens provoque chez lui, par injection intra-veineuse, des abcès 
sous-aponévrotiques répandus un peu partout, mais principale- 
ment dans les membres, oùils acquièrent souvent des dimensions 
exagérées, sans presque jamais tendre vers l'ouverture spontanée. 

D'un autre côté il n’est pas virulent pour le cobaye. 

Tous les microbes qui précèdent donnent sur gélose de minces 
couches grises, difficiles à différencier les unes des autres. 

Bacillus crassus pyogenes bovis. — Ce dernier, bien plus volumi- 
neux que les autres, mobile, cultive avec une grande facilité dans 
tous les milieux. 

Sans action liquéfiante sur la gélatine, où il donne une 
épaisse couche blanc nacré à reflets métalliques, il forme, sur 
pomme de terre, un revêtement épais, lisse, mou, muqueux, 
d'aspect lichénoïde. 

Le trouble qu'il produit dans le bouillon de veau est persis- 
tant et le liquide devient muqueux et filant. 

Non virulent pour le lapin, il cause la mort du one en 
trente-six ou quarante-huit heures par inoculation intra-péri- 
tonéale, en déterminant une péritonite accentuée. 

Telle est, dans ses grandes lignes, la physionomie générale 
des microbes que leur présence constante dans les collections 
purulentes closes des bovins me porte à considérer, dès à pré- 
sent, comme les agents pyogènes de cette espèce animale. 

Des recherches ultérieures montreront si réellement ces 
microorganismes que l’on rencontre chez le bœuf, à l'exclusion 
presque complèle des microbes pyogènes de l’homme, ont réelle- 
ment le rôle que je leur attribue. 


EXPLICATION DE LA PLANCHE II, 


I. Streptococcus pyogenes bovis. Culture. obj. 1/16 (Leitz). Oculaire 4 
IL. Slaphylococcus pyogenes bovis.  — — — — 
LT. Bacillus pyogenes bovis. — ou = — 
IV. Bacillus liquefaciens pyogenes bovis. — — — 
V. Bacillus crassus pyogenes  bovis. — — — 


PROPRIETÉS COLORANTES DE L'OXYCHLORURE 
DE RUTHÉNIUM AMMONIACAL 


PAR M. NICOLLE ET J. CANTACUZÈNE. 


(Travail du laboratoire de M. Roux à l’Institut Pasteur.) 


I. — Les matières colorantes employées en histologie et en 
bactériologie appartiennent toutes au groupe des composés orga- 
niques, qu'il s'agisse des couleurs naturelles ou des substances 
artificielles dérivées du goudron de houille, 

Aussi, lorsque M. Joly annonça le 26 décembre dernier que 
l'oxychlorure de ruthénium ammoniacal, découvert par lui‘, pos- 
sédait un pouvoir tinctorial comparable à celui des dérivés de 
l’aniline, était-il tout indiqué d’étudier ce composé minéral, au 
point de vue micro. chimique. C’est ce que nous avons pu faire, 
grâce à l’obligeance de M. Joly, qui a bien voulu nous en con- 
fier un échantiilon. 

Nous allons rappeler, d’après son travail, les principales pro- 
priétés de cette matière colorante. 

Elle se présente sous la forme de cristaux bruns à reflets 
mordorés, solubles dans l’eau et dans la glycérine, insolubles 
dans l'alcool. La solution aqueuse est rouge carmin par traus- 
parence, avec des reflets violets ; elle s’altère à la lumière, mais 
lentement et dans une faible mesure, en donnant un dépôt brun 
de sesquioxyde. L’acide chlorhydrique concentré détermine un 
précipité brun; l'addition d’eau produit une coloration jaune 
qui redevient rouge par dilution. Une faible quantité d’alcali 
fait virer la solution au rouge violet; pour ramener une 
teinte jaune, il faut, non plus de l'acide chlorhydrique étendu, 
mais de l’acide concentré. Il résulte de ces propriétés que les 
üssus colorés par l’oxychlorure de ruthénium peuvent être 
déshydratés par l'alcool absolu sans éprouver de décoloration ; 


4. Ru? (OH)? Clé (A,H5)7 + 3H20. 


332 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


qu'ils ne doivent point subir l’action des acides minéraux : enfin 
que les pièces fixées par ces acides (réactif d'Altmann par 
exemple) doivent être très soigneusement lavées à l'alcool avant 
l'inclusion dans la paraffine. 

Nous ajouterons que l’oxychlorure précipite par le réactif de 
Weingartner (eau : 20; tanin : 1 ; acétate de sodium : 1) à la 
manière des couleurs basiques d'aniline dont il partage les pro- 
priétés histologiques. Il précipite également par l’acide picrique. 
Enfin, sa solution aqueuse se décolore dans une solution 
d'acide osmique. 


IL. — L’oxychlorure de ruthéuium peut être employé pour 
l'étude des tissus et pour celle des microorganismes. Si l’on veut 
colorer les tissus, on les met en contact pendant une à deux minu- 
tes avec une solution aqueuse à un pour mille, puis on lave à 
l’eau et on monte au baume, après dessiccation s’il s’agit 
d'une préparation sur lamelle, après déshydratation et éclaircis- 
sement lorsqu'on a affaire à une coupe. Le procédé est done 
aussi simple que possible. 

A l'examen microscopique, on constate que les noyaux sont 
colorés en rose très vif, avec une remarquable élection pour la 
chromatine ; le tissu conjonctif et surtout le protoplasme sont 
d'un rose moins intense. Il s’agil donc d'une coloration analogue 
à celle que donnent le carmin neutre ou certaines couleurs d’ani- 
line ayant par elles-mêmes une électivité sinon absolue, du moins 
suffisante pour bien mettre en relief les diverses parties d’un tissu 
(bleu de méthylène, vésuvine par exemple). En un mot, il n'ya 
pas de surcoloration excessive. D'ailleurs, il est facile d'obtenir 
une élection purement nucléaire en ajoutant à un centimètre 
cube de la solntion une goutte d'acide acétique à 6 00, ou en se 
servant d'oxychlorure dissous dans la glvcérine. 

L'oxyehlorure colore avec une intensité moyenne les fibres 
musculaires lisses et striées, la matière fondamentale du carti- 
lage, le tissu scléreux, la substance cornée, la fibrine, la mucine. 
Il colore très vivement la substance amyloïde, les zoosper- 
mes. Par contre, il est sans affinité pour le tissu élastique, 
l’hémoglobine et les granulations éosinophiles. Enfin, en sa qua- 
lité de matière colorante basique, il teinte fortementles granula- 
ons des Maslzellen (granulations basophiles de M. Ehrlich), On 


ee” 


COLORATION PAR UN SEL DE RUTHÉNIUM. 333 


peut obtenir une coloration isolée de celles-ci en additionnant 
la solution d’oxychlorure de six gouttes d’acélique (à 6 0[0) par 
centimètre cube. 

Envisagé au point de vue des fixateurs, l’oxychiorure donne 
d'excellentes colorations après l’action de l'alcool à 90°; du 
sublimé acide; du sublimé alcoolique; du liquide de Kleinen- 
berg ; du liquide d'Altmann ; de la liqueur de Muller et, fait très 
imporlant, de l'acide osmique à 1 0[0. Des coupes d'organismes 
délicats (planaires) ayant séjourné plusieurs heures dans la 
solution osmique au centième, se sout colorées avec une netteté 
el une intensité remarquables. | 

L'oxychlorure s'est montré absolument inactif après le 
mélange de Flemming (dans ce cas, il paraît ne colorer que la 
matière fondamentale du cartilage) et il nous a donné de mau- 
vais résullals sur des pièces fixées à l'acide osmique et conser- 
vées très longtemps dans le bichromate à 2 010. 

Enfin les tissus frais (coupes par congélation) sont colorés 
avec une élection toute spéciale pour la chromatine des noyaux. 

Les colorations sur lamelles sont en tout point compa- 
rables à celles des coupes. Nous avons obtenu notamment de très 
belles préparations avec le sang fixé par l'alcool-éther (ää) ou par 
la chaleur (110°-120°). Ajoutons que la stabilité des colorations 
ainsi obtenues s’est montrée absolue depuis le commencement 
de janvier. 

On peut pratiquement employer l’oxychlorure pour la colo- 
ration des Lissus soit tel quel, soit addilionné d'acide acétique. 
Dans ce dernier cas, les noyaux étant seuls colorés, il est facile de 
faire une seconde coloration à l’aide d'une couleur acide jaune 
soit mitrée (acide picrique, jaune de Martius, aurantia), soit 
azoïque (tropéoline), couleur qu'on dissout dans l’eau, dans 
l'alcool ou dans l’essence de girofles, suivant qu'on désire l’em- 
ployer avant ou après la déshydratation. 

Dans les tissus où les mastzellen ont été seules colorées, on 
peut teinter ensuite les noyaux avec de l’hématoïne, ce qui donne 
de fort belles préparations. Le type en est réalisé par les coupes 
d'urticaire pigmentée. 

IT. — A l'exception des bacilles tuberculeux etlépreux, l’oxy- 
chlorure colore, d’une façon plus ou moins intense, les microor- 
ganismes, soit sur lamelles, soit dans les coupes. 


334 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le mode opératoire est le même que pour les tissus. 

Pour les microbes qui prennent le Gram, l'emploi de l’oxy- 
chlorure n'offre pas d'intérêt; pour les autres, il est de beaucoup 
inférieur au bleu de méthylène fixé par le tanin. Cependant, 
par la belle coloration qu'il donne aux tissus et par là netteté 
de forme qu'il accuse chez les microorganismes, il permet de 
faire de très belles préparations de fièvre typhoïde, de choléra 
des poules, de pseudo-tuberculose coccobacillaire, et même de 
chancre mou. Pour la morve, la coloration est un peu faible. 
En outre, sur les coupes colorées au violet aniliné (méthodes 
de Gram ou d’Ehrlich}, il donne une excellente teinte de con- 
traste aux tissus. Enfin il ne colore ni les cils ni les spores. 

IV. — En résumé, l’oxychlorure peut être employé pour 
colorer n'importe quel tissu, même à l’état frais, d’une façon 
rapide et sans craindre de surcoloration excessive; additionné 
d'acide acétioue, il constitue un réactif exclusivement nucléaire, 
mettant en relief le réseau chromatique des noyaux avec une 
absolue précision. Grâce à son grand pouvoir tinctorial et à son 
insolubilité dans l’alcool, il permet de faire rapidement et à coup 
sûr de très bonnes préparations de certains microorganismes qui 
ne prennent pas le Gram; il fournit également de belles colora- 
tions de contraste après les violets. Mais son avantage le plus 
. grand, c’est de colorer mieux, croyons-nous, qu'aucune matière 
végétale ou animale, les pièces qui ont été fixées, même énergi- 
quement, par l’acide osmique. 

Quel que soit pratiquement l'avenir de l’oxychlorure, il est 
intéressant, au point de vue théorique, de rencontrer chez un 
composé minéral des propriétés absolument semblables à celles 
des couleurs basiques d’aniline. 

Il est permis de supposer que ces propriétés, qu'on attribue 
généralement, dans les couleurs artificielles, à la présence du 
radical amidogène (AzH?), sont également ici sous la dépen- 
dance du même groupement atomique. 


LES VACCINATIONS ANTIRABIQUES 
À L'INSTITUT PASTEUR EN 1892 


Par Henri Porrevix. 


[ 


Pendant l'année 1892,1,793 personnes ont subi intégralement 
le traitement antirabique à linsütut Pasteur : 7 sont mortes de 
rage. 

La mortalité totale a done été de 0,39 0/0. 

Nous avons insisté, dans toutes les statistiques des années 
précédentes, sur les motifs pour lesquels il convient, si on veut 
juger de l'efficacité des vaccinations, de ne faire entrer en ligne 
de compte, parmi les morts, que ceux chez lesquels les pre- 
miers symptômes rabiques se sont manifestés plus de quinze jours 
après la dernière imoculation. 

Des 7 personnes mortes en 1892, 3 ont été prises de rage 
moins de 15 jours après la fin du traitement; les résultats défi- 
müifs s'établissent donc de la façon suivante : 


PÉRSOIMESPAILCRS ur. 2iiee du ue LA LIU 1,790 1 
MODS NE Le Lo an NAN con DES ee TM Ro 4 
LL EN IU a LV Le re ER ne ES EEE en à AS 1e 0,22 


Nous avons rapproché dans le tableau ci-dessous ces chiffres 


PERSONNES 


MORTS, MORTALITÉ o/o. 


TRAITÉES, 


Se 
Uo QE 1 oO 
D D Or © à 


œ > = be Lœ 1 RO 
=] 
» 

9 KO C2 

9 Qt 


> 
Le] 
[0 
@ EE & 
2 =] 
© 
12 Le 


4. Ce chiffre diffère de celui 1,193 indiqué plus haut, parce que les trois per- 
sonnes retranchées du nombre des morts doivent aussi être retranchées du nombre 
total des traitées. 


330 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


de ceux qui ont été fournis par les statistiques des années précé- 
dentes !. 

Nous devons signaler 5 personnes mortes de rage au cours 
des inoculations. Le traitement, pour ces personnes, n'ayant pas 
été terminé, nous ne pouvons les compter ni au nombre des 
traitées, ni au nombre des morts après traitement. 


Il 

Les personnes traitées à l’Institut Pasteur sont divisées en 
trois catégories correspondant aux trois tableaux suivants : 

10 Tagceau À. — La rage de l'animal mordeur a été expéri- 
mentalement constatée par le développement de la rage chez des 
animaux mordus par lui ou inoculés avec son bulbe. 

20 TagLeau B. — La rage de l'animal mordeur a été constatée 
par examen vétérinaire. 

30 Tapceau CG. — L'animal mordeur est suspect de rage. 

Les morsures au point de vue de leur gravité sont divisées 
en trois classes : 1° Morsures à la tête et au visage; 2 Morsures 
aux mains ; 3° Morsures aux membres et au tronc. 

Nous donnons ci-dessous les résultats détaillés pour 
l’année 1892. 


NORSURES A LA TÊTE. | MORSURES AUX MAINS. | MORSURES AUX MEMBRES. TOTAUX. 

LEE RECRUE PE RER PRE 
Tableau A...| 19 | 0 0 190143312320 128! 1 |0.78 
Tableau B...| 96 | 0 0 605| 2 |0.33| 361 | 0 0 |1.062| 2 |0.18 


Tableau C...| 37 | 0 0 330! 0 0. | 233 | 4 |0.43| 600! 1 [0.16 


Total ....| 152 1.010 628 1.190| 4 |0.22 


oo 


1. Ce tableau porte dans la colonne des morts pour l’année 1887 le nombre 14, 
et dans le tableau de la statistique de l’an passé la même colonne porte le nom- 
bre 13. C’est qu'un jeune Anglais, traité en 1887, serait, d’après le médecin qui 
la soigné pendant sa maladie, mort de la rage en 1892, c'est-à-dire cinq ans 
après sa morsure. C’est la première fois qu’un fait aussi exceptionnel est signalé 
depuis rene des vaccinations, qui s’élévent, au 31 décembre 1892, au nombre 
de 12,782. 


LES VACCINATIONS ANTIRABIQUES, 337 


Le tableau suivant, qui contient les résultats acquis depuis 


l'origine des vaccinations, permet de juger de la gravité des mor- 
sures d'après leur siège. 


TRAITÉS. MORTS MORTALITÉ. 


Morsures à la tête... ....... 1.078 16 1,48 
Morsures aux mains ,...... RATE 40 0,55 
Morsures aux membres... 4,029 At 0,24 

POI RS EAP T NE EANS 42,782 67 0,52 


Comme on l’a fait remarquer à plusieurs reprises dans les 
statistiques des années précédentes, le caractère de gravité parti- 
cuhère des morsures à la tète ressort non seulement des chiffres 


du tableau ci-dessus, mais encore, et surtout, de ce que la presque 
totalité des personnes chez lesquelles la rage éclate au cours des 
inoculations, ont été mordues à la tête. C’est le fait, en particulier, 
pour les einq cas de mort en cours de traitement que nous avons 
signalés plus haut. | 

Bien qu’on ait souvent et longuement insisté sur ce point, il 
n'est pas rare de voir des personnes gravement mordues à la tête 
arriver à l’Institut Pasteur assez longtemps après la morsure, 


Nous ne citerons qu'un exemple, il est malheureusement typique. 


La jeune Georgette D..., de Vanves (Seine), fut morduele7 février 
par un chien qui, abattu le mème jour, et soumis à l'examen 
d'un vétérinaire, fut déclaré suspect. Le vétérinaire conseilla donc 
de conduire l'enfant à l’Institut Pasteur. La morsure avait déchiré 
la peau du cräne sur une longueur de 10 centimètres environ, la 
paupière gauche avait été fendue. Malgré tout cela, la jeune D... 
ne fut présentée aux inoculations que Le 25 février, dix-huit jours 
après l'accident. Le traitement antirabique fut commencé aussi- 
tôt. Mais la rage éclata le 7 mars, bien avant qu’il fût terminé. 


(nt 
Au point de vue de leur nationalité, les 1,790 personnes 
traitées en 1892 se répartissent de la façon suivante : 


RADOIG LOTERIE  rUE 26 POTAGE ER AL EUR ES 96 
BRRMQUE 2 D soute à: |) Russie.,...... DR LT 1 
ONDES ER RE NO = Me 12 SUISSC PE RE T TER SU 3 
PAPERS, na Es e 142 |C Hollande sr Re 14 
(ERA UE RENE en PRE 19-| Indes anglaises. 1eme 9 
Etats-Unis d'Amérique. .,..... 1 
22 


338 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Soit 206 étrangers et 1,584 Français ou Algériens. 

Au nombre des étrangers figure une sœur de charité 
venue de Madère. C’est au cours de l’année dernière que la rage 
a fait son apparition pour la première fois dans l'ile : elle y a été 
importée par un chien venu de Portugal, qui a mordu plusieurs de 
ses congénères, chez lesquels la rage s’est développée, et dont 
l'un a mordu la sœur traitée à l’Institut Pasteur. 

Le tableau suivant indique la réparütion par départements 
des 1,584 Français, il contient aussi le nombre total des malades 
envoyés à l'Institut Pasteur par chaque département pendant les 
trois dernières années. : 


DÉPARTEMENTS. | 4892 | Total. || DÉPARTEMENTS. [1892 | Total. || DÉPARTEMENTS. | 4892 | Total. 
MIRE LE SNA NGErS RER EE 92610 re RE 4| 5 
AISNE HER MON Gironde 2 17 | 78 || Pas-de-Calais. .| 22 | 48 
RIDE ERA JL 18") Hérault: 63 |116 || Puy-de-Dôme..| 5 | 12 
Alpes Basses-) .| 3 3 || Ille-et-Villaine.| 0 | 12 || Pyrénées(Bses-)| 16 |133 
Alpes(Hautes-):| 11 | 21 || Indre ......... 4 3 || Pyrénées(Hfes-)| 6 | 21 
Alpes-Maritimes! 40 |112 || Indre-et-Loire .| 4 | 13 || Pyrénées-Orles)| 43 | 38 
Alger Te PL GSM DATA |INIS ere RER HOMO | IRNONE Een 31 1195 
ATIÉRE : 0. 2 NIET ER Ceres 4 | 16 || Rhin (Haut-)..| 5 | 7 
AUDE Fret 0) Del Aandes rer 12 | 50 || Saône (Haute-).| 5 | 33 
AUUB EN MENEMRE 99 | 60 || Loir-et-Cher... { | 18 || Saône-et-Loire.| 14 | 29 
Aveyron ...... RIT MIO RES 69 |149 || Sarthe ........ SURUE 
Bouches-du-Re.| 65 |141 || Loire (Haute-).! 7 | 22 || Savoie ........ 21 | 12 
Calvados.,.... 4 | 11 || Loire-Infre....| 0 2 || Savoie (Häute-)| 3 | 17 
Cantal ter 1 MSIE oITeE Rent 3 D ASEINE RE 343 |681 
Charente... ... JADOAEOT A MERE .:..1 41 | 95 || Seine-et-Marne.| 5 | 12 
Charente-Infre.| 6 | 21 || Lot-et-Garonne! 34 | 95 || Seine-et-ODise ..| 47 |142 
CHELLES ETES 2 SUIMÉOZETE RE il 3 || Seine-Infre ....| 9 | 21 
Constantine. ..| 37 |103 || Maine-et-Loire.| 4 6 || Sèvres (Deux-).| 4 | 10 
Corréeze 00 6 | 146 || Manche... ... 0 | 48 || Somme ....... 12 | 26 
COrSË: EE 524 20 D'ADAMREN ET 275 PRE ODA tte SERA E VO Lac 
Côte-d'Or ..... 3 | 21 || Marne(Haute-).| 2 | 10 || Tarn-et-Garne. | 17 | 40 
Côtes-du-Nord.| 45 | 18 || Mäyenne...... 1 JC AUNISIE AE Re 32 | 16 
Ureuse re 4 | 17 || Meurthe-et-Mostie| 7 | 47 || Var........... 1.97 
Dordogne ..... 24 | 43 || Morbihan ..... 1 bAIVendée re 2e 1 | 4 
DOUDS PT AU 0 INMenSe eue 2 0 || Vaucluse... .... 47 | 49 
Drôme..." 93 | 717 || Nièvre... .. 0:10 Vienne res AT 
BUTEUR DES PER 8 IINord:: 477 96 | 81 || Vienne(Haute-)| 7 
Eure-et-Loir...| 4 GA AOIS REF ANERE DTA OS res NE 0NIR9S 
Gard... 62488 SG IAO LAN ARE 199 1294 || Yonne... ..:... O2 
Garonne (Hte-).| 35 | 62 


A la lecture de ce tableau etdes tableaux analogues, publiés tous 
les ans, on peut se convaincre que la rage est très inégalement 
distribuée sur la surface de la France. En 1889, M. Perdrix a 
donné dans ces Annales une carte qui, mieux encore que les 
tableaux, met ce fait en évidence; elle comprend les résultats 


LES VACCINATIONS ANTIRABIQUES. ! 339 


pour les années 1887, 1888, 1889; voici une autre carte, dressée 
dans les mêmes conditions, et comprenant les résultats pour les 
années 1890, 1891, 1892. Dans ces deux périodes successives de 


I] 
il 


T 

| 
] 

Îl 


J 


î À’ 


Répartition par départements des personnes venues à l’Institut Pasteur pour suivre le traitemen 
antirabique pendant les années 1890, 1891, 1892. 
En blanc les départements n'ayant pas envoyé plus de 3 personnes par 100,000 habitants, 
Barrés horizontalement, les départements n’en ayant pas envoyé plus de 5, 
Barrés verticalement, les déparlements en ayant envoyé de 5 à 14. 
Barrés dans les deux sens, les départements en ayant envoyé de 14 à 33. 
= En noir le département de la Seine, qui en à envoyé un nombre plus considérable, 


40 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


trois années, la situation se présente à peu près identiquement 
la même. Tandis que la région de l'Ouest et du Centre est très 
peu éprouvée (certains de ces départements n’envoient pas un 
malade tous les ans à l'Institut Pasteur), les départements du 
Sud et du Sud-Ouest (plus particulièrement ceux de la vallée du 
Rhône et du littoral de la Méditerranée) fournissent toujours 
un contingent considérable de mordus. Une indication pratique 
se dégage de cette constatation. L'application rigoureuse des 
mesures de police sanitaire s’impose pour toutes ces régions 
dans lesquelles la rage prend quelquefois les caractères d’une 
véritable épidémie. Avec plus de vigilance et d'énergie de la 
part des autorités locales, on épargnerait des vies humaines, et 
on éviterait à l’agriculture les pertes très sérieuses que lui fait 
subir la mort par rage de chevaux et de bovidés. 

Les départements de l'Algérie, qui ne figurent pas sur la 
carte précédente, viennent au premier rang parmi ceux qui 
envoient tous les ans à l’Institut Pasteur le plus grand nombre 
de mordus. 

Dans le département de la Seine, le nombre des personnes 
qui se sont présentées aux inoculations a été en croissant pen- 
dant les trois dernières années. Il était de 113 en 1890, il a été 
de 225 en 1891, il est de 343 en 1892. Au mois de mai 1892, la 
Préfecture de police, émue de cette augmentation qui allait en 
s’accentuant de plus en plus, prit des mesures sévères. Il semble 
qu'elles aient eu de bons résultats. Sion compare, en effet, pour 
les deux dernières années, les nombres de mordus traités, d’une 
part, pendant les sept premiers mois, d'autre part, pendant les 
cinq derniers ‘, on trouve : 


En 1891, de janvier à juillet, 128 De août à décembre..,.....,., 98 
En 1892, — 24% nd EE PE 99 


Pendant les premiers mois de 1892, l'augmentation par 
rapport aux mois correspondants de 1891 s’accusait dans la pro- 
portion du simple au double ; grâce aux mesures prises, lle a été 
arrêtée; il est donc à désirer qu’elles soient maintenues. 

1 Nous avons fait la comparaison entre les sept premiers mois d’une part et 
les cinq ‘erniers de l’autre, parce que, l'arrêté de la Préfecture de police étant du 


ler mai, 1l ne fallait pas s'attendre à lui voir produire son plein effet avant les 
mois d'août ou septembre. 


LES VACCINATIONS ANTIRABIQUES. 341 


Nous indiquerons en terminant comment parait varier la 
proportion des cas de rage avec les différentes époques de 
l’année, si on admet, ce qui n’est certainement pas très éloigné- 
de la vérité, que le nombre des personnes traitées à l'Institut 
Pasteur est proportionnel au nombre de cas de rage ayant éclaté 
chez les animaux. 

Le tracé suivant se rapporte au nombre total des malades 


traités pendant les six dernières années. Ce laps de temps est 
déjà presque suffisant pour que les variations accidentelles qui 
peuvent se produire d’une année à l’autre se compensent mutuel- 
lement. 

Il parait done y avoir une période de maximum au printemps 
et une période de minimum à l'automne. 


REVUES ET ANALYSES 


LES CRITIQUES DE LA THÉORIE BIOLOGIQUE 
DE L'INFLAMMATION 


REVUE ANTICRITIQUE 


Popwyssorsky. Le présent de jubilé de Virchow, KiefF, 1892 (en russe). 
ZieGcer. Contribution à l’histoire et à la critique de la théorie de 
inflammation, Beitrage zur pathologischen Anatomie, t. XI, 1892, 
p. 192. Wercerr, Deutsche medic. Wochenschr., 1893, pp. 17, 37. 


I 


Il y a un an, j'ai publié un essai de pathologie comparée de 
l'inflammation ‘. L'étude génétique de ce phénomène, dans la série 
animale, m'a permis d'établir une théorie biologique de l’infla mmation 
d'après laquelle ce processus représenterait une adaptation de l’orga- 
nisme dans sa lutte contre les agents nuisibles. Voici comment j'ai pu 
formuler le sens du phénomène. « L'inflammation doit être envisagée 
dans son ensemble comme une réaction phagocytaire de l'organisme 
contre les agents irritatifs, réaction qui tantôt s’accomplit par les 
phagocytes mobiles seuls, tantôt avec le concours des phagocytes 
vasculaires ou celui du système nerveux » (p. 226). 

Les pathologistes ont déjà reconnu, en analysant les caractères de 
l'inflammation, que le principal élément dans ce phénomène est repré- 
senté par l’ersudation, les trois autres symptômes cardinaux des anciens 
— chaleur, rougeur et douleur, — ne formant que des accessoires. Eh 
bien, dans l’exsudation, le rôle prépondérant est dû aux leucocytes. Ce 
n'est pas seulement le pus qui en renferme des quantités, ce sont 
aussi des exsudats séreux et fibrineux. L’absence des leucocytes dans 
les exsudations inflammatoires est un phénomène rare. 

Le caractère secondaire des exsudats privés de leucocytes se trouve 
en parfaite harmonie avec le fait fondamental de la pathologie com- 
parée de l’inflammation, à savoir que, chez les animaux inférieurs, la 
réaction correspondante consiste en un afflux des cellules phagocytaires, 

1. Paris, Masson, 1892. 


REVUES ET ANALYSES, 343 


comparables aux leucocytes, et non en une accumulation des humeurs 
privées d'éléments cellulaires. 

Tout l’ensemble des faits concernant l'inflammation nous autorise 
donc à mettre les exsudations purement séreuses, et ne renfermant 
pas de leucocytes, au second rang dans cette série de phénomènes 
réactionnels. Il est néanmoins évident que toute théorie scientifique 
de l’inflammalion doit tenir compte de ces phénomènes secondaires. 

La plupart des criliques que j'ai rencontrés m'ont fait cette objec- 
tion que la théorie biologique de l'inflammation laissait complètement 
de côtéles inflammations accompagnées d’exsudats privés deleucocytes. 
D'après M. Podwyssotsky, « certaines inflammalions séreuses peuvent 
se passer de toute réaction phagocytaire », et cependant on n'a pas le 
moindre droit de les rayer du cadre des véritables inflammations. Il 
propose par conséquent de modifier comme il suit la formule ei- 
dessus mentionnée : « L'inflammation est une réaction locale, souvent 
salutaire, exercée par les tissus vivants contre la substance irritante. 
Cette réaction est surtout produite par une activité phagocytaire des 
cellales mésodermiques, en dehors de laquelle 1l existe encore toute 
une série d’adaptations de la part du système vasculaire, ainsi que 
l'action liquéfiante et dissolvante du plasma sanguin et des liquides 
des tissus vis-à-vis de l’agent irritatif. » Cette formuie présenterait 
l'avantage de tenir suffisamment compte des inflammations purement 
séreuses. 

M. Weigert me reproche également d'ignorer les exsudations pri- 
vées de leucocytes, et pense que je ne sais que faire des inflammations 
séreuses. M. Ziegler, quoique d’une façon moins précise, m'adresse la 
même objection. 

Mais, au fond de tout cela, il y a un malentendu qu'il est utile 
d'éclaireir. Quoique l'exposé de la théorie biologique de l’inflammation 
m'ait demandé tout un volume, il y a encore bien des points insuffi- 
samment développés. Ce sont justement ces points qui soulèvent les 
principales objections. 

Le passage des globules rouges et du liquide sanguin dans les 
exsudats inflammatoires doit être considéré cemme le résultat d'une 
activité des cellules endothéliales des vaisseaux. Cette thèse a été 
développée à la page 177 dé mon traité. La présence des globules 
rouges, si fréquents dans les exsudats les plus séreux et totalement ou 
presque complètement privés de leucocytes, indique clairement qu'il 
se fait un passage direct des éléments du sang dans l’exsudat. Si même 
les hématies sont transportés à travers la paroi vasculaire, il est évident 
que le plasma sanguin doit subir le même sort. IL est donc impossible 
d'attribuer l’exsudation séreuse à une activité sécrétoire des cellules 


344 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


endothéliales. Ces éléments doivent, au contraire, permettre le passage 
du plasma et des globules rouges dans l’exsudat, à la suite d’une 
contractilité dont sont certainement douées les cellules endothéliales. 
Ce phénomène peut être comparé (comme je l'ai fait dans mon traité) 
avec l'activité des cellules ectodermiques des éponges, dont la contrac- 
tion ouvre les pores à travers lesquelles passe le liquide ambiant. 
Dans certaines conditions, ces cellules permettentle passage du liquide 
avec les corps qu'il renferme; dans d’autres, la fermeture des pores le 
rend impossible. 

Dans ce passage da liquide à travers la paroi ectodermique de 
l'éponge, comme dans celui du plasma à travers la paroi endothéliale 
des vaisseaux (dans l’inflammation), se manifestent la sensibilité et la 
contractilité des cellules. Ces deux actes ne constituent pas encore des 
phénomènes phagocytaires dans le sens le plus strict de ce mot, mais 
il est évident qu'ils se rattachent d'une façon intime à l'activité phago- 
cylaire. 

Le phagocytisme est un phénomène compliqué. Lorsqu'il se mani- 
feste par les leucocytes, ces cellules sont d’abord impressionnées par 
des substances attirantes. Les leucocytes se dirigent vers celles-ci à 
Paide de leurs mouvements amiboïdes, et ce n’est qu’ensuite qu'ils 
englobent les corps attirants. Plus tard se fait la digestion intra-cellu- 
laire, IT ÿ a donc dans tout cela un ensemble de phénomènes de sensi- 
bilité, de contraction, d’englobement et de production de substances 
digestives. En réalité, cette chaîne est souvent interrompue en un point 
quelconque. Ainsi, lorsqu'un cobaye est infecté par la bactéridie, les 
leucocytes, impressionnés par les produits bactériens, s’approchent 
des microbes ; il se produit une leucocytose, mais le phagocytisme 
s'arrête et il n'y a point ou presque pas d'englobement. Il y a dans ce 
cas une manifestation phagôcytaire qui, cependant, n’aboutit pas à 
sa fin naturelle. 

Dans la réaction phagocytaire la plus complète, tous les phagocytes 
englobent et détruisent les corps irritatifs. Dans d’autres cas, ce sont 
les phagocytes mobiles qui seuls accomplissent ce rôle. Dans une 
troisième catégorie d'exemples, la réaction phagocytaire est encore in- 
complète. Les leucocytes restent dans les organes et dans le sang, et 
ne passent point dans l’exsudat ; les cellules endothéliales réagissent 
seules, mais, au lieu d'accomplir toutes les phases du phagocytisme, elles 
s'arrêtent à un stade de contraction qui permet le passage du plasma 
et des hématies à travers Ja paroi vasculaire. Les exemples les mieux 
connus de cette réaction phagocytaire incomplète se rencontrent dans 
les maladies expérimentales très aiguës. Ce sont en même temps les 
cas les mieux étudiés de l’inflammation purement séreuse. Dans 


REVUES ET ANALYSES. 345 


l'infection aiguë des cobayes avec le vibrion de Gamaleïa (V. Metchni- 
kovi). ou dans celle des lapins avec le coccobacille de la pneumo-en- 
térite des pores, quand la mort survient au bout de quelques heures, 
la réaction de la part des phagocytes se borne à cet état de contraction 
des cellules endothéliales des vaisseaux qui permet à l'exsudation 
séreuse de se produire dans les endroits lésés. 

Dans les cas où l'infection prend une marche encore plus rapide, 
comme dans les exemples les plus foudroyants du choléra des poules 
chez le lapin, il ne se produit plus du tout d’exsudation., La réaction 
phagocytaire est nulle, mais aussi il n’y a point d’inflammation. 

. On voit, d’après ce court aperçu, que l’inflammation séreuse rentre 
parfaitement bien dans la formule générale de la théorie biologique, et 
qu'il n'y a lieu ni de modifier cette formule, ni de prétendre qu’elle 
laisse de côté l’exsudation privée de leucocytes. La formule, étant 
nécessairement aussi courte que possible, ne mentionne que la 
« réaction phagocytaire » dans son ensemble. Il n’est question ni de 
la sensibilité, ni des contractions des. phagocytes, parce que ces 
phénomènes sont déjà compris dans la rubrique générale de la réaction 
phagocytaire. Pour la même raison, il n’a pas été fait une mention 
particulière de la sensibilité et de la contractilité des cellules endothé- 
liales (dont la nature phagocytaire est hors de doute), c’est-à-dire des 
phénomènes jouant un rôle dans l’exsudation séreuse. 

L'examen de cette prétendue contradiction de l'inflammation 
séreuse avec la théorie biologique nous montre que le conflit entre la 
pathologie comparée et la clinique, signalé par plusieurs critiques, 
n'existe point en réalité. Il est incontestable que, lorsqu'une méthode 
scientifique permet de pénétrer un peu plus profondément dans 
l'essence d'un phénomène, il se produit souvent une certaine discor- 
dance entre les notions acquises et les anciennes théories. Ainsi la 
découverte du bacille de la tuberculose a démontré que certaines 
maladies qui, au point de vue clinique, étaient considérées comme 
de la vraie tuberculose, devaient cependant en être exclues (certains 
cas d’actinomycose, pseudo-tuberculose d'Eppinger, etc.) ; d’autres 
maladies (comme certains cas de bronchite chronique etc.), au 
contraire, ont dû être rangées dans la vraie tuberculose. Il n’y 
aurait donc rien de surprenant si la découverte que le phénomène 
fondamental de linflammation consiste en une réaction phagocytaire, 
modifiait la notion clinique de l'inflammation. 

Comme la pathologie comparée de l’inflammation a démontré le 
caractère salutaire et réactionnel de ce phénomène, il est tout naturel 
qu'il présente des passages avec d’autres processus qui s’accomplissent 
dans l'organisme. Ainsi il n'y a aucun lieu de s’étonner que l’inflam- 


TR 


346 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


mation soit reliée par toute une série d'états intermédiaires avec 
d’autres phénomènes phagocytaires, tels que le passage des leucocytes 
à travers les muqueuses (phénomène de Stoer), ou bien que l’inflamma- 
tion chronique soit intimement liée avec l’atrophie de certains tissus. 
Il ne faut pas oublier que, de quelque côté qu’on envisage l’inflamma- 
lion, on trouvera loujours un lien avec d'autres phénomènes naturels. 
Ainsi l'inflammation, examinée au point de vue purement clinique, 
présente des transitions insensibles avec l’hypérémie. 


Il 


La critique la plus sévère contre la théorie biologique de l’inflam- 
mation est sans contredit celle de M. Ziegler, qui pense que l’idée 
d'attribuer une importance fondamentale à la phagocytose dans 
lPinflammation est tout à fait erronée. Je regrette beaucoup de ne pas 
pouvoir reproduire ici, faute de place, tous les arguments du savant 
professeur d'anatomie pathologique. Je me contente donc de citer ses 
principales objections. M. Metchnikoff, dit-il, affirme d'une façon 
tout à fait arbitraire que le phénomène pathologique qui l’intéresse 
présente les caractères de l'inflammation. Il est en outre inconséquent 
dans son exposé, parce qu'il considère comme caractéristique tantôt 
la phagocytose exercée par les leucocytes, tantôt l'accumulation des 
cellules mésodermiques. « Je pense, continue M. Ziegler, que la phago- 
cytose dansle courant d'une inflammation est un phénomène purement 
accidentel, qui s'établit très souvent par la simple raison qu'il se trouve 
sur place des cellules mobiles et aussi un matériel capable d'être 
englohé. » (Ziegler, p. 200.) 

L'analyse de linflammation, faite à l’aide de la méthode géné- 
tique, conduit inévitablement à la phagocytose, comme l'acte le plus 
primitif de la réaction contre les agentsirritatifs. L’inflammation chez 
les vertébrés à sang froid démontre que la chaleur ne constitue pas un 
acte nécessaire de ce processus; la réaction analogue chez les inver- 
Lébrés prouve de plus que Pinflammation peut se passer de tout 
concours de la part des vaisseaux. Les phénomènes se simplifiant de 
plus en plus, à mesure que nous descendons dans l'échelle animale, se 
réduisent à la phagocytose. Comme les leucocytes sont d'origine 
mésodermique, il n'y a aucune inconséquence à admettre une phago- 
cytose leucocytaire et une phagocytose mésodermique. La chose est 
trop évidente pour qu'il soit nécessaire d’insister. 

« Lorsque, dit M. Ziegler, en un point quelconque se trouvent des 
corps, par exemple des bactéries, qui laissent échapper dans les tissus 
des substances attirantes, les leucocytes se dirigent vers ces corps et 
peuvent parfois les englober. » « Dans le cas contraire, où les corps 


REVUES ET ANALYSES. 347 


étrangers, par exemple les bactéries, exercent une action repoussante 
ou paralysante, les cellules prendront une direction opposée ou reste- 
ront sur place. Ce n'est done point le courage des cellules dans le 
combat qui détermine l’émigration et la phagocytose, mais bien la 
propriété des corps étrangers introduits, ainsi que des tissus et des 


humeurs modifiés par ces corps. » « L'idée — conclut M. Ziegler — 
que l’inflammation est caractérisée par une lutte des phagocytes, doit 
donc être rejetée » (p. 202). . 


M. Ziégler oublie que l'attraction et la répulsion des leucocytes 
dépendent non seulement des produits microbiens, mais aussi de la 
propriété des leucocytes. Les mêmes produits qui repoussent les 
leucocytes des animaux sensibles attirent au contraire ceux des 
animaux vaccinés ou naturellement réfractaires. Ce fait est tellement 
général et est si bien établi qu'on n’a plus aucun droit de l'ignorer. Et 
c'est précisément parce que d’un côté il y a les microbes qui se défen- 
dent et attaquent par leurs produits toxiques, et quede l'autre il y ales 
phagocytes qui s’approchent des microbes etlesenglobent, qu'on a for- 
mulé la théorie d’une lutte entreles deux êtres vivants. Toutes lesobjec- 
tions de M. Ziegler ne peuvent nullement renverser cetteinterprétation. 

En continuant sa critique, M. Ziegler invoque un argument dont 
on a fait déjà souvent usage. « Dans certains cas, affirme ce savant, 
la phagocytose, exercée par les leucocytes, peut faciliter la destruc- 
tion des corps étrangers. Dans d’autres cas, la phagocytose peut au 
contraire contribuer à la généralisation d'une maladie infectieuse, 
lorsque les bactéries se reproduisent abondamment dans l’intérieur 
des cellules, comme par exemple dans la lèpre, ou bien lorsqu'elles 
sont transportées par les cellules » (p. 202). Il est incontestable — et 
personne n’a jamais affirmé le contraire — que la réaction phago- 
cytaire est loin de présenter un mécanisme parfait, ainsi qu'en. 
témoigne la fréquence de beaucoup de maladies. Mais il est aussi hors 
de doute que la généralisation des bactéries se fait beaucoup plus 
rapidement dans les cas où ces microbes restent en dehors des phago- 
cytes. On cite souvent la possibilité de dissémination des bacilles 
tuberculeux transportés par les leucocytes dans les endroits atteints 
par un traumatisme ;.mais on oublie que dans la tuberculose les leuco- 
cytes servent surtout à localiser les bacilles, empêchant leur dissémi- 
nation dans l’organisme. On exagère donc beaucoup le rôle transpor- 
teur des leucocytes. 

N’approuvant ni la théorie biologique de l’inflammation, ni la 
méthode comparée qui lui a servi de base, M. Ziegler définit « l’inflam- 
mation comme une dégénérescence locale des tissus, combinée avec des 
exsudations pathologiques des vaisseaux sanguins » (p. 173). Cette 


348 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


définition, qui ne touche point à l’essence du processus inflamma- 
toire, ne fait que transcrire un certain nombre de phénomènes de 
cette réaction. La réunion des cellules migratrices des amphibies 
urodèles autour des corps irritatifs, réunion qui s'opère sans aucune 
part des vaisseaux (Path. comp., de l'inflam. p. 114), ainsi que des 
phénomènes analogues chez les invertébrés, sont tout à fait exclus de 
la formule de M. Ziegler. Et cependant, comme la parenté de ces 
phénomènes avec l'inflammation accompagnée de réaction vasculaire 
ne saurait être contestée, une formule scientifique devrait refléter ces 
affinités naturelles. 

Bien plus. Le tubercule, formé dans l'intérieur des vaisseaux, ne 
rentre pas dans la formule de M. Ziegler, tandis que celui qui se déve- 
loppe en dehorsdu système vasculaires’adaptetrès bien à sa définition. 
Or, il est incontestable que le tubercule intra-vaseulaire et le tubercule 
extra-vasculaire sont, au fond, laseule etmême production pathologique. 

La formule de M. Ziegler, qui ne touche point le fond de la question 
et ne tient pas compte des affinités naturelles, doit donc être rejetée. 

M. Ziegler me reproche de ne pas être médecin. Je me permets de 
lui reprocher de ne pas être assez biologiste. 


IT 


En dehors de la question de l'inflammation séreuse, que nous 
avons -traitée dans le SI, M. Weigert se contente de quelques 
notes critiques au sujet de certains points secondaires de la théorie 
biologique de l’inflammation. Mon savant critique exprime son scep- 
ticisme au sujet de la comparaison des phénomènes de destruction des 
microbes dans les phagocytes, avec la digestion intra-cellulaire. Il 
trouve une contradiction dans ce fait que la digestion intra-cellulaire 
des protozoaires s’accomplit dans un milieu acide, tandis que les phé- 
nomènes dans les phagocytes se passent dans un milieu neutre ou 
alcalin, Mais, en dehors du cas où les phagocytes manifestent une 
réaction acide (cellules exsudatives de la queue des tètards), je dois 
citer l'exemple de la digestion intra-cellulaire des animaux polycellu- 
Jaires. Chez les actinies, cette digestion se fait dans un milieu acide ; 
chez les spongilles, dans un milieu neutre ou alcalin. Et pourtant les 
deux exemples présentent la plus grande analogie entre eux. Il faut donc 
admettre comme règle générale que la digestion intra-cellulaire pré- 
sente, dès les premiers pas, une variabilité considérable et peut s’accom- 
plir dans des milieux de réaction différente. 

M. Weigert trouve encore une contradiction entre mon opinion que 
la destruction des bactéries se fait dans l'intérieur des phagocytes et 
ma citation de la diastase des leucocytes, découverte par M. Leber, el 


dt 


REVUES ET ANALYSES. 349 


agissant en dehors de ces cellules (diastase qui peptonise la gélatine). 
Mais il s’est glissé un malentendu dans cette question. Je n’ai jamais 
affirmé que la destruction phagocytaire des bactéries se faisait à laide 
de diastases quelconques et surtout à l’aide de cellesqui peptonisent la 
gélatine. J’ai toujours franchement reconnu que la question des sub- 
stances intra-phagocytaires qui tuent et génent les microbes reste encore 
complètement ouverte. Peut-être sont-ce certaines diastases digestives 
ou autres, peut-être sont-ce des substances (acides et alcalines) tout à 
fait différentes des diastases. Ce n’est qu'à l’aide de méthodes nouvelles . 
et perfectionnées qu'on pourra aborder ce problème délicat. 

Dans la question des cellules géantes, M. Weigert reste fidèle à son 
ancienne théorie (qui a été discutée dans ces Annales, 1888; p. 604). 
Malheureusement il n’a pas voulu, dans sa critique, entrer en discussion 
au sujet de celte question. Ce serait cependant d’autant plus désirable 
que la découverte de la résistance particulière des cellules géantes de 
la gerbille vis-à-vis du bacille tuberculeux pourrait donner lieu à un 
échange de vues intéressant. Il est inutile de démontrer longuement 
que cette découverte confirme beaucoup ma manière d'envisager 
les cellules géantes comme un moyen de défense phagocytaire. 


IV 


Après avoir répondu aux principales objections faites contre la 
théorie biologique de l'inflammation, il me reste à aborder un point 
d’un ordre tout à fait particulier. M. Ziegler, malgré son opposition 
contre la théorie des phagocytes, revendique certains droits de priorité 
dans cette question.Qu’ilme soit permis de répondre aussi à cetteattaque. 

Voici la réclamation textuelle de M. Ziegler. « La phagocytose est 
un phénomène qui est déjà connu depuis longtemps : dans la sixième 
décade de notre siècle, on faisait souvent des recherches expéri- 
mentales sur l'englobement de la poussière du charbon et des grains 
colorés par les leucocytes, ainsi que sur le transport à l’aide de ces 
cellules. En 1874 j'ai observé, ajoute-t-il, que dans les tissus granu- 
leux, à côté des globules rouges, se sont des cellules présentant les 
caractères des leucocytes à noyau fragmenté qui sont englobées et 
détruites par les grandes cellules. J’arrivai à la suite de mes recherches 
à celte conclusion que, dans ce phénomène, il s’agit d’une assimilation 
du matériel englobé et par conséquent d’un acte de nutrition » 
(p. 197). M. Ziegler insiste donc sur ce fait que ses « recherches sur 
la digestion intra-cellulaire dans les cellules mésodermiques étaient 
publiées huit ans avant les travaux de Metchnikot}, et que, au moment 
de lapparition des premières publications de Metchnikoff sur la 
phagocytose, ce phénomène, après l'introduction des corps étrangers 


350 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dans les tissus de l'homme et des animaux, était très bien connu par 
les pathologistes » (p. 199). 

M. Ziegler s'étonne que je n'aie pas donné de renseignements 
historiques dans mes travaux antérieurs, et surtout dans mon Traité 
sur linflammation. Mais déjà dans mon premier travail, où il a été fait 
mention de phagocytes"', j'ai cité « les résullats précieux des recherches 
des histologistes et des pathologistes au sujet des phénomènes de 
résorption chez les vertébrés » et j'ai renvoyé le lecteur au Manuel 
d'anatomie pathologique de M. Ziegler lui-même. Si je n’ai pas fait 
tout particulièrement mention des travaux de M. Ziegler sur l’englo- 
bement des leucocytes par les cellules des granulations, c’est que ce 
n'est pas du tout M. Ziegler qui à fait la découverte de l’englobe- 
ment des leucocytes par les grandes cellules, mais bien M. Bizzozero*, 
qui, quatre ans avant l’apparition du premier travail correspondant de 
M. Ziegler ®, à émis cette idée que les leucocytes, logés dans le con- 
tenu des grandes cellules du pus, étaient dévorées par celles-ci. 
M. Ziegler a confirmé plus tard cette interprétation, mais, lorsqu'il a 
voulu ranger ce phénomène à côté d'autres processus connus, il s’est 
adressé à l’acte de la conjugaison des cellules. Il compare l’englobe- 
ment des leucocytes à la formation de zygospores chez les spiro- 
gyres, ou bien à la formation des plasmodes par confluence cellu- 
laire, etc. 11 considère done l’englobement plutôt comme une fusion 
de cellules que comme une digestion intra-cellulaire. 

Il va sans dire que dans aucune de mes publications je ne me suis 
jamais approprié la découverte de l'englobement des corps solides par 
les cellules mésodermiques. Je n’ai ni méconnu, ni ignoré le grand 
nombre de travaux qui ont été faits sur ce sujet. Mais, si jusqu'à 
présent je n’ai jamais pu m'arrêter suffisamment sur les détails histo- 
riques, cela tient uniquement à ce que la théorie des phagocytes n’est 
pas encore sortie de la période de lutte. Il a fallu d’abord l’établir 
solidement et ensuite distribuer la part de chacun dans sa fondation. 
Voilà pourquoi je n'ai pas pu examiner jusqu’à présent le rôle des 
savants, teis que Panum, Gaule, Roser, ete., qui ont beaucoup plus 
de droit que M. Ziegler à être comptés parmi les précurseurs de la 
théorie des phagocytes. J'espère trouver bientôt l’occasion de combler 
cette lacune. 

M. Ziegler a tort de penser que la découverte de l’englobement des 
corps solides par des cellules mésodermiques implique nécessairement 
la théorie d'après laquelle l'organisme animal possède dans l’ensemble 


1. Arbeiten de zool. Inst. 7. Wien, 1883. V, p. 157. 
2. Gaz. med. lombarda, 1871 et 1872, Wien. med. Jahrb., 1872, p. 160 


3. Experimentelle Untersuch. üb. die Herkunft der Tuberkelemente. 1875, p. 68, 


. 


REVUES ET ANALYSES. 31 


de ses cellules phagocytaires (mésodermiques et autres) un moyen très 
important de défense contre les microbes pathogènes. M. Ziegler 
devrait le savoir lui-même, puisque, opposé à la théorie des phago- 
eytes, il a été un des premiers à reconnaitre l’englobement des leuco- 
cytes. On peut donc avoir des mérites dans cette question sans être 
l'auteur de la découverte de l’englobement mème. Pour affirmer que 
les phagocytes constiluent un moyen de défense, il à fallu prouver 
que les leucocytes englobent les microbes vivants et virulents, et qu’ils 
les détruisent ou gênent d'une facon quelconque. Pour admettre 
l'importance des phagocytes, il a fallu aussi prouver là généralité de 
leur intervention, Sous ce rapport il a été nécessaire, entre autres 
choses, de démontrer l’inexactitude de l’opposition contre la théorie 
des phagocytes, émanant précisément du laboratoire de M. Ziegler. Ce 
savant a fait faire par deux de ses élèves, — MM. Palm ‘ et Rogo- 
witch ? — des travaux sur la pustule maligne de l'homme et sur le 
charbon symptomatique.M. Palm est arrivé à cette conclusion que, dans 
le charbon bactéridien de l’homme, les « cellules ne jouent pas le 
moindre rôle dans le sens de la phagocytologie de Metchnikoff ». 
M.Rogowitch a émis la même opinion pour ce qui concerne le charbon 
symptomatique chez plusieurs espèces animales. Et cependant il a été 
démontré d’une façon définitive que cette double attaque était basée sur 
des données inexactes. Actuellement il est bien prouvé, pour la pustule 
maligne de l’homme *, aussi bien que pour le charbon symptomatique 
chez les espèces étudiées par M. Rogowitch, que les bacilles sont 
en grande quantité englobés par les phagocytes. L'attaque du labo- 
ratoire de M. Ziegler a donc dû être repoussée. 

Dans la réponse que j'ai été obligé d’adresser aux critiques de la 
théorie biologique de l’inflammation, je n'ai tenu compte que des 
objections qui m'ont paru les plus importantes. Il me semble 
qu'aucune de ces critiques ne touche ni à la base fondamentale de la 
théorie, ni à la méthode qui a été suivie pour son établissement. IL 
n'y a donc aucun lieu de la considérer comme atteinte d’une façon 
quelconque. % E. METCHNIKOFF. 


4, Beitr. z. path. Anat.T. II, p. 480. 

RAID TAN p.291: 

3. Karc, Fortschr. d. Med. T. VI, p, 529. et Lusarscu, Unters, üb. d. Immu- 
nität, 4891, pp. 111-114. M. Lubarsch résume son chapitre par le passage suivant : 
« L'existence de la phagocytose dans le charbon humain, ainsi que son parallé- 
lisme avec la marche de la maladie et la destruction des bacilles, devraient être 
considérés après cet exposé comme étant hors de doute. » On ne comprend pas 
comment M. RoGer (Trailé de médecine de Caarcor et Boucnaro, T. I, p. 559) a pu 
tirer du travail de M. Lusarsca un sens justement contraire, et affirmer que 
dans les cas de ce savant « il n’y avait aucun rapport entre l'intensité de la 
phagocytose et l'évolution de la maladie ». 

4. Pour le charbon symptomatique, V. Annales, 1889, p. 194. Rurrer, Brilish 
medical Journal, 4890, 24 mai. 


392 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR. 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — MARS 1893. 


A B C 

| | | 

Morsures à la tête ( simples... .. 4/8 |») 2144 |lri 
s : | 2 

et à la figure multiples... .| »| 2 » | 9) »| 2) 
Caulérisations efficaces . . . . . . . . . »| | Me AR ÈS ME SP nr. 
= INONNCACERS ER a Ie 21307 {| » » l'a 
Pas de GUALÉRSTAVM EE TR ET 0e ! À | 2 D 10) PE on RRQ LS Lee 5 

1'eare SIMPICS NE 2e | | 3 | » [214) »|8 
Morsures aux mains multiples. : : .| »| 1 ( É 22143 . 17129 
Cuutérisahions CNCACES AC »» Frs fs » M2» |» 
— inefficaces . . . .... | 3» | 41215 l'OMS Sue 
Pas de cautémsahon RENTE CR D EE D UE RER SON RTS ES 
Morsures aux mein- simples... ..| »|2 13 |» [13,94 | »|14)9- 

bres et au tronc multiples... .| v| 4 : » |11\ »[13\ 

pie | 
Gautérisuhions effCALes ELLE SE Die ce re nl rt sl 
-- inefficaces su vs 2 ll La 148) 5:) 3 M2 
Pas-decaulensanon eee. Tee. EDS De UNE » [15] » |» 
Habits déchirés.. . . . . GERC Se SR AUES 2] » | » | 49), » | » 124! » |» 
HOrSUTES MNT RARE TRE has ls Las) 
Morsures multiples en divers points du 

cor P DEP 0 gs al uorse le be os Cain: ee) » D » Ù » » » » » 
Cautérisations efficaces . . . . . . LS A0 sera) ns AS AU ep Done 
— INC NCOCES Ne Rae ENS De CE Di PR EN QT EN 
PuS de CUULÉTISULION. TN TI Mare SEE ME ESS Len D ON EE re D 4 
ELLES SEC AITES EP RERE ER ARS] IA] NE » » ) » »| » » 
Morsures es US See at 72 M | vues = hr 1eS nl atte 

{ Français et Algériens. 8 | 77) 40); 
DOiaux | Etrangers. .. REED 1° i | jrs, 14,54 

| 

A B C 
mm" 

TOTAL /GENER AE EN NE SARA 141 


Les animaux mordeurs ont été : chiens, 138 fois ; chats, 3 fois 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


PArTT: 


7me ANNÉE MAI 1893. No 5. 


ANNALES 


DE 


L'INSTITUT PASTEUR 


FERMENTATION ANAËROBIE 


PRODUITE PAR LE 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS 


SES VARIATIONS SOUS CERTAINES INFLUENCES BIOLOGIQUES 


par M. L. GRIMBERT 


Pharmacien des hôpitaux. 


(Travail du laboratoire de M. Duclaux, à l’Institut Pasteur.) 


Quand un ferment organisé se développe dans un milieu 
autritif, il emprunte à ce milieu les matériaux dont il à besoin 
pour vivre ; il en résulte la destruction du corps fermentescible, 
dont les molécules forment de nouveaux groupements, en mème 
temps que la chaleur dégagée dans la réaction fournit l’énergie 
nécessaire à la fonction du ferment. 

Est-il possible de traduire cette réaction par une équation 
chimique, c’est-à-dire de retrouver dans les corps produits par 
la vie du ferment la totalité des atomes dont se composait la 
matière première fermentescible ? 

Pendant longtemps on a admis avec Dumas que la fermenta- 
tion du sucre sous l'influence de la levure de bière se faisait 
d’après la formule très simple : 

CAP OE= 2 EEHO0EE 260 
Mais quand on eut découvert, dans les liqueurs fermentées, 


l'acide succinique et la glycérine, et qu’on voulut introduire ces 
on. 


9 


304 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


nouvelles substances dans l'équation, celle-ci perdit de sa sim- 
pheité. 

D'ailleurs, les idées reçues sur le mécanisme des fermenta- 
tions se modifiaient profondément, grâce aux travaux de 
M. Pasteur. 

Au lieu des théories de Berzélius et de Liebig qui faisaient 
du ferment un corps inerte, n'agissant que par sa présence ou 
par le mouvement de décomposition qu'il communiquait au 
liquide, M. Pasteur démontrait victorieusement qu'un ferment 
est avant tout un être vivant et que la fermentation n’est que la 
conséquence de la vie. 

Néanmoins, tenantcompte, dans la fermentation alcoolique, de 
la petite quantité de sucre utilisée par la levure pour ses besoins, 
M. Pasteur arrivait à établir une balance assez exacte entre le 
sucre détruit et les différents corps formés, et l'expérience à 
démontré que ce rapport ne varie que dans des limites relative- 
ment restreintes, au moins en ce qui regarde la production de 
l'alcool et de l'acide carbonique. Mais, en est-il de mème pour 
les ferments différents de la levure, et moins limités dans le 
choix de leurs aliments, pour les ferments butyriques, lactiques, 
acétiques et autres ? 

Déjà, dans l'étude de la fermentation butyrique, M. Pasteur ‘ 
constatait que l’expérience ne s’accordait jamais avec la 
formule donnée; que la proportion des gaz dégagés variait dans 
le courant de la fermentation. 

Plus récemment, M. Perdrix * démontrait qu'un même 
ferment peut donner des produits en quantités variables suivant 
son àge. 

Si on envisage la fermentation comme le résultat d'un acte 
vital, le problème se complique de toutes les causes qui peuvent 
influencer la vie du ferment. 

Est-il possible alors d’enfermer le processus de décomposi- 
tion des substances fermentescibles dans les limites d’une équa- 
ion simple, comme s'il s'agissait d’une désagrégation de molé- 
cules sous l’action d’un réactif ? 

Le rapportentre le corps qui fermente et les produits formés, 
sera-t-il constant pendant toute la durée de la fermentation ? 


4. 1. Pasreur, Etudes sur la bière, p. 297. 
2. Ces Annales, t. V, p. 287. 


sde 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 390 


L'âge du ferment aura-t:1l une influence sur le phénomène ? 
Ne faudra-t-1il pas tenir compte de l'éducation de cette semence? 
Tel ferment, par exemple, capable de se développer sur divers 
milieux et de les faire fermenter, variera-t-1il dans ses manifesta- 
tions quand, habitué à vivre dans un milieu donné, on le trans- 
portera dans un autre, ou bien fera-t-1l fermenter ce dernier 
comme s'il y avait toujours vécu ? 

C’est pour répondre en partie à ces questions que j'ai entre- 
pris l'étude des actions chimiques d’un bacille anaérobie que 
j'ai découvert et pour lequel je propose le nom de Bacillus ortho- 
butylicus. 

Depuis les travaux de M. Pasteur sur la fermentation buty- 
rique, l’étude des ferments anaérobies n’a donné lieu qu'à un 
nombre restreint de mémoires. La difficulté du mode opératoire 
entre sans doute pour quelque chose dans cette abstention. La 
plupart des auteurs qui se sont occupés de ces fermentations 
semblent s'être attachés surtout à déterminer minutieusement 
la nature des produits formés, sans s'inquiéter des circonstances 
qui peuvent les faire varier. 

Nous citerons notamment les travaux de Fitz' sur le Bacil- 
lus butylicus et sur le Bacillus ethylicus : ceux de Frankland *? 
et de ses élèves sur le Bacillus ethaceticus, et ceux de Perdrix * sur 
le bacille amylozyme. H ressort, toutefois, des expériences de ce 
dernier, que l’âge d’un microbe, les conditions de milieu dans 
lesquelles il évolue, peuvent apporter des changements dans le 
développement et les produits de la fermentation. Mais le 
phénomène, en se compliquant, restait encore simple, puisqu'on 
pouvait y voir la superposition de deux modes seulement d’exis- 
tence. 

Je diviserai le présent travail en trois parties: 

Dans la première partie.je décrirai l'origine, la morphologie 
et les diverses méthodes de culture du Bacillus orthobutylicus. 
ainsi que les procédés employés pour lanalvse des produits de 
la fermentation, 

Dans la deuxième partie, j'étudierai plus spécialement lin- 
fluence de la réaction du milieu, de l’âge et de l'éducation de la 


4. A. Frrz, Deutsch. chem. Gesellsch., 1876-1877-1878-1880-1882. 
2. Journ. of chem. Soc., XX, 254; XXI, 432, 756. 
3. Sur les fermentations produiles pur un microbe anaërobie de l'eau. 


306 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


semence, et de la durée de la fermentation sur les produits de la 
réaction. 

Dans la troisième partie, je passerai en revue l’action du 
bacille sur les différents milieux qu'il peut faire fermenter. 

Ce travail a été exécuté dans le laboratoire et sous la diree- 
tion de M. Duclaux. Qu'il me soit permis de lui exprimer ici ma 
profonde gratitude pour les bienveillants conseils qu’il n’a cessé 
de me prodiguer. 


Orne. — Le Bacillus orthobutylicus est un microbe anaéro- 
bie du sol. Je l’ai isolé d’une fermentation de tartrate de chaux. 
mise en marche au moyen de quelques gouttes d’une macération 
de graines de légumineuses. — La présence de ce bacille dans 
cette fermentation était tout accidentelle, car, ainsi que je le 
démontrerai plus bas, il est sans action à l’état pur sur le tar- 
trate de chaux. 

J'employai, pour le séparer, le procédé suivant : 

Un chauffage à 100° pendant une minute me permit d'abord 
d'opérer une sélection entre les différents microbes qui pullu- 
laient dans le liquide prélevé. — Les spores du B. orthobutylicus 
résistent en effet à cette température. Le hquide ainsi chauffé 
provoquait une fermentation rapide de tranches de pommes de 
terre cuiles placées dans des tubes à essai dans lesquels on fai- 
sait le vide. Il était au contraire sans action sur le même milieu, 
ayant le bibre accès de Pair. 

Le bacille était donc un anaérobie vrai. Ni les tubes d’'Es- 
march, ni ceux de Vignal, à base de gélatine nutritive, ou sucrée, 
ou additionnée d’amidon cuit, ne m'ont donné de développement: 
il en fut de même de l'emploi de la gélose. Force me fut de reve- 
air aux tranches de pommes de terre elles-mêmes. 

Un peu de liquide fut prélevé à l'extrémité d’un fil de platine 
flambé, et ensemencé par stries, sans recharger le fil, sur plu- 
sieurs tranches de pommes de terre placées dans des tubes de 
Roux. Après y avoir fait le vide, ces tubes furent portés à l’étuve 
à 35°, Au bout de quelques jours, chaque point touché par le fil 
donnait naissance à une trace épaisse et confluente, de couleur 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 307 


blanchàtre, allant en diminuant d'épaisseur dans les derniers 
tubes, au point de ne plus présenter que des colonies isolées. 
Une de ces colonies, diluée dans de l'eau stérilisée, fut ense- 
mencée de nouveau de la même manière, et l'opération fut 
recommencée une troisième fois. On n'avait plus à la fin que 
des colonies pures d’un bacille qui présentait les caractères 
suivants : 


Fig. 4. 


Bacille jeune. | Bacille vieux. 


MorpnoLoGie. — Le B. orthobutylicus se présente au micros- 
cope sous forme de bâtonnets cylindriques arrondis aux extré- 
mités, et mesurant 3 4 à 6 y de long sur 1,5 y de large. Lorsqu'il 
est jeune, il n’est pas rare de rencontrer dans les préparations 
des bacilles renflés à leur extrémité en battant de cloche. Cette 
forme disparait à mesure que le bacille avance en àge, et, dans 
les fermentations vieilles d’une semaine environ, on ne ren- 
contre plus que la forme droite mais munie de spores. Celles-ci 
sont généralement au nombre de 2 à 3 et se distinguent du pro- 
toplasma par leur plus grande réfringeance. Cette sporulation 
correspond à la cessation des mouvements du microbe, qui, lors- 


398 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


qu'il est jeune, est doué d’une mobilité extrême, dans les milieux 
privés d'oxygène. 

Ces caractères rapprochent beaucoup le B. orthobutylicus du 
Bacillus butyricus de M. Pasteur et du Bacille amylozyme de 
M. Perdrix ; mais, comme nous le verrons tout à l'heure, il s’en 
distingue par ses fonctions physiologiques. 


Foxcrioxs PnysioLoGiques. — Le 2. orthobutylicus ne se déve- 
loppe pas dans les solutions laissées au contact de l'air. 

Ses spores résistent à une température de 80° pendant dix 
minutes; à 85° elles sont détruites. 

Il fait fermenter les substances suivantes : glycérine, man- 
nite, glucose et sucre interverti, saccharose, maltose, lactose, 
galactose, arabinose, amidon et pommes de terre, dextrine. 
inuline. 

Il est sans action sur le tréhalose, lérythrite, le glycol, le 
lactate de chaux, le tartrate de chaux, la gomme arabique. 

Ses produits de fermentation sont : 

L'alcool butylique normal avec un peu d'alcool isobutylique : 

L'acide butyrique normal; 

L'acide acétique, et dans quelques circonstances un peu 
d'acide formique. 

Les gaz dégagés sont formés d’acide carbonique et d'hydro- 
gène. 

Il offre de plus les particularités suivantes : 

a) I fait fermenter le saccharose, le maltose et le lactose 
sans les intervertir: 

b) Il transforme entièrement l’amidon en maltose et en dex- 
trine, mais cette dernière est transformée en maltose au fur et 
à mesure de sa production : aussi ne peut-on déceler sa pré- 
sence dans le cours de la fermentation ; 

c) H transforme la dextrine en maltose au moyen d'une 
diastase spéciale: 

d) I attaque directement linuline sans la transformer en 


lévulose. 


DISTINCTION AVEC LES AUTRES FERMENTS BUTYRIQUES. — Le B. 
orthobutylicus se distingue du Bacillus butyricus de Pasteur et 
du B. amylobacter de Van Tieghem en ce qu'il ne fait pas fer- 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 399 


menter le lactate de chaux et qu'il n'attaque pas la cellulose. 
De plus, il ne se colore en bleu par l'iode à aucune période 
de son développement. Il se différencie du Bacillus butylicus de 
Fitz par la faculté qu'il a de faire fermenter le lactose et l’ami- 
don, et de ne pas intervertr le saccharose. Enfin la propriété 
qu’il possède de donner de l'alcool butylique normal avec les 
divers hydrates de carbone le sépare nettement du Bacille amy- 
lozyme de Perdrix. 


MÉTHODES DE CULTURES. — Je me suis servi, pour mes cultures. 
du liquide suivant qui diffère peu de celui qu'employait M. Pas- 
teur, dans ses expériences sur la fermentation du tartrate de 


chaux : 
Liquide nutritif. 
Phosphate d’ammoniaque . . . . . . . . . .. Or,40 
Sulfate de magnésie. . . . .. PÉRRN MEET EE Osr,40 
Phosphate/de potasse 232002 SPACE 8,20 
Sulfate-d'ammoniaque tt... eur 08r,20 
DTA des po basses TN RATES te AE 03,20 
Peptone:Séehes tes rt ON Ua FER 287,50 
ADR EE Te A en SELLES ONE Ne or à { litre. 


C’est dans ce liquide que je faisais dissoudre la substance 
fermentescible dans les proportions de 3 à 5 0/0. 

Vases employés pour les cultures. — Un matras d'une capacité 
variant de 500 ce. ec. à 2 litres était muni d'un bon bouchon de 
caoutchouc percé de deux trous ; dans l’un de ces trous s’enga- 
geait à frottement dur un tube de verre droit descendant presque 
jusqu’au fond du matras; dans l’autre trou un autre tube de 
verre, affleurant l’orifice inférieur du bouchon, était recourbé 
deux fois sur lui-même, de façon à ce que son extrémité arrivat 
presque au niveau de la base du ballon. Le tube droit était garni 
d’un petit tampon de coton et recouvert d’un tube en caoutchouc 
fermé par une baguette de verre. Le ballon étant rempli entière- 
ment de liquide, on adaptait le bouchon qu'on fixait solidement 
au moyen d'une ficelle. On faisait alors plonger le tube recourbé 
dans un vase contenant le même liquide que le ballon et dont 
l’orifice était garni d’un tampon de coton. 

Stérilisation. — D'autre part, une autre portion de ce même 
liquide était mise de côté et partagée en deux parties : l’une qui 


330 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


servait à l’analyse, l’autre qu’on introduisait dans des tubes à 
essai garnis de coton. Chaque tube enrenfermait de 5 e. c. à 10 ec. c. 
Le ballon, les tubes à essai et l'échantillon étaient ensuite stéri- 
lisés à l’autoclave à 120°, pendant un temps qui variait de 
15 minutes à 3/4 d'heure, suivant le volume des vases. 

Dans cette opération, une partie du liquide du ballon était 
refoulée dans le vase par l'air expulsé, mais lors du refroidisse- 
ment, un vide partiel se produisant, le liquide du vase faisait 
retour au ballon et le remplissait entièrement, sans courir le 
risque d’être contaminé, grâce au tampon de coton. Le ballon 
refroidi était ensuite porté dans l’étuve à 35°, où il restait en 
observation pendant plusieurs jours avant d’être ensemencé. 

Ensemencement. — Une colonie isolée était prélevée au moyen 
d'un fil de platine flambé sur une tranche de pomme de terre et 
portée aussitôt dans l’un des tubes à essai contenant le même 
liquide que le ballon à ensemencer. Ce tube était ensuite étiré à 
sa partie moyenne. Le coton qui le fermait était flambé avec soin 
et refoulé jusqu'à l’étranglement du tube, puis on étirait en 
pointe la partie supérieure de manière à pouvoir l’engager dans 
le caoutchouc d’une trompe à eau. Le vide étant fait, on fermait 
le tube à la lampe dans sa partie étirée et on le portait à l’étuve. 

Vingt-quatre ou quarante-huit heures après, la fermentation 
étant active, on sortait le tube de l’étuve et, présentant sa pointe 
effilée à la flamme d’un bec de Bunsen, on laissait échapper les 
gaz et on recueillait une petite quantité de liquide au moyen d’un 
tube effilé et flambé. C’est là la semence destinée à ensemencer 
“le grand ballon. 

Pour cela, on ôte avec précaution le tube de caoutchouc qui 
coiffe le tube droit; on flambe le coton qui le ferme et on le 
remplace par un autre préalablement stérilisé. D'autre part, on 
brise avec des pinces flambées l’extrémité de la pipette conte- 
nant la semence, et on l’introduit dans le tube droit en soulevant 
lecoton. ner este plus qu'à remettre le coton en place ainsi que 
le tube de caoutchouc, que pour plus de sûreté on remplace par 
un autre, stérilisé dans une solution de sublimé au millième. 

On reporte alors le ballon à l’étuve, en prenant soin de faire 
plonger l'extrémité du tube recourbé dans un verre contenant 
du mercure, pour éviter toute communication entre latmo- 
sphère et le liquide. 


BACILLUS ORTHOBUT Y LICUS. 301 


DosAGE DES PRODUITS DE LA FERMENTATION. — Pour doser l'alcool. 
les acides et les gaz provenant de la fermentation, nous avons 
suivi une marche qui varie un peu suivant que la fermentation 
s’esteffectuée en présence ou en l'absence de carbonate de chaux. 

A. Fermentation en présence de carbonate de chaux. — Lé 
liquide est filtré au papier, Une petite portion est mise à part 
pour lexamen polarimétrique, le titrage de la substance res- 
tante, la détermination de extrait sec et le dosage de la chaux 
à l’état de sel. Un volume déterminé du liquide filtré est distillé 
pour recueillir l’alcoo!, qu'on ramène, par des distillations suc- 
cessives, à un petit volume (50€ à 100cc), 

Le résidu est additionné d'une quantité d'acide oxalique suf- 
fisante pour précipiter la chaux. On laisse reposer 24 heures et 
l’on sépare l’oxalate de chaux formé; sur le liquide filtré, on 
procède à la détermination qualitative des acides volatils, 
d’après la méthode de M. Duclaux'. 

Le reste du liquide est évaporé en consistance sirupeuse pour 
chasser complètement les acides volatils, puis traité par l’éther 
pour la recherche de l'acide lactique. L’éther évaporé, le résidu 
est repris par l’eau et examiné au polarimètre, finalement saturé 
par l’oxyde de zine et évaporé. 

Quant au carbonate de chaux resté au début sur le filtre, on 
le décompose par l'acide chlorhydrique et l’on agite la solution 
avec un mélange d'alcool et d’éther pour rechercher Pacide 
succinique. Disons tout de suite que nous n’avons jamais con- 
staté la présence de cet acide dans nos fermentations. 

B. Fermentation sans carbonate de chaux. — Dans ce cas, on 
détermine d’abord l'acidité de la liqueur par un moyen quelcon- 
que, on la neutralise ensuite par la chaux, et on la traite ensuite 
comme tout à l'heure. 


DÉTERMINATION DES ÉLÉMENTS. — À. Nature de l'alcool formé. — 
Dans la recherche de l’alcool, le liquide distillé se sépare en 
deux couches : une couche inférieure aqueuse, et une couche 
supérieure mobile à odeur forte rappelant celle de l'alcool amy- 
lique. Lorsque celle-ci n'était pastrop abondante, elle se dissolvait 
par agitation dans le liquide sous-jacent. 


4. Annales de Chimie el de Physique, 6e série, t. VIIT, p. 542. 


362 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


En appliquant à cette dissolution la méthode indiquée par 
M. Duclaux”, j'ai pu recueillir d’utiles indications sur la nature 
de l'alcool produit. En effet, les différents échantillons recueillis 
dans la fermentation des corps suivants m'ont donné : 


Degré Nombre Théorie 

Nature de la fermentation. alcoolique de gouttes pour l’alcool 

à 150. (bec). butylique. 
ADM AO EPS OR Le 49 192 193 
Pommes de terre. . : . 6° 296 224 
Saccharose PRIT re D0,D 219 217 
Mannite sean rer MÉG 6° 224 224 


Dans une autre expérience, cet alcool fut séparé au moyen 
d'une ampoule à robinet et desséché sur du carbonate de 
potasse pour prendre son point d'ébullition : une faible partie, 
environ un cinquième, passa entre 105° et 115, et le reste à116. 

Ce dernier chiffre correspond au point d’ébullition de l'alcool 
butylique normal : 

CH — CH? — CH? — CH?0H. 

La première portion (105 — 115°) était sans doute formée 
d'alcool isobutylique dont le point d'ébullition est de 1080. 

Une solution à 5 0/0 en volume de l'alcool passant à 116° a 
été soumise à l'épreuve du compte-gouttes et m'a donné à 15° 
209 gouttes, chiffre qui coïncide exactement avec le nombre 
donné par M. Duclaux. Dans ces conditions, je n'ai pas hésité à 
me servir, pour le dosage de l'alcool butylique de mes fermenta- 
tions, de la table suivante, empruntée au travail de M. Duclaux:. 


Table pour le dosage de l'alcool butylique. 


Nombre de gouttes à 150. Alcool en volume pour cent, 
LOT DELL RENE PR Re ET NP MERE (ID 
APR PEL LRO ERA SE RS RAA 0,4 
AO ACETS 0,6 
129, . 0,8 
135. . 1,0 
147. . 1,5 
EL VAR RE eue 2 
168. . 2,9 
LATAR 3 
LOS RTE CARE SERRE GNT 4 
209. D 
2245 «er Méta MENT NS RER ETAPE 6 


1. Annales de Chimie et de Phys., 8e série, t. XIIL. 
DA TDoc, cit. 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 363 


RAR led ee, RANTERT UE Sen! 
AT RS MCE TL FE MEL ER F9, 9 
DR A RAC Et Ph rile  eis iO 
Alcool éthylique. — Dans chaque essai, j'ai recherché l'alcool 


éthylique par la réaction de l'iodoforme, je ne l'ai rencontré que 
très rarement et à l’état de traces indosables. 

B. Nature des acides volatuls. — J'ai dit que les acides volatils 
étaient déterminés et dosés par la méthode des distillations frac- 
tionnées '. Je les ai toujours trouvés formés d'un mélange en 
propositions variables d'acide acétique et d'acide butyrique. 
L’acide formique, qui pourrait gèner dans cette étude, n'existe 
jamais qu'en très petite quantité. Pour le déceler, on mettait à 
part les deux dernières prises pour les soumettre à l'essai du 
nitrate d'argent ammoniacal. 

Quant à l'acide butyrique, il a été séparé de l'acide acétique 
au moyen de distillations fractionnées, en ne recueillant que les 
premières portions distillées, et transformé en sel de chaux. 
Une solution aqueuse de ce butyrate de chaux saturée à froid se 
prenait en masse cristalline quand on la chauffait. On sait que 
le butyrate normal de chaux est plus soluble à froid qu'à chaud. 

Le dosage de l’eau dans le sel cristallisé vint confirmer cette 
première indication, Le butyrate normal correspond à la for- 
mule (CH70*)°Ca + H°0, soit 7 gr. 758 0/0 d'eau de cristal- 
lisation, tandis que l'isobutyrate possède 5 molécules d'eau : 
(C‘H'0?} Ca + 5H°0, soit 29 gr. 605 0/0.0r, 1 gr. 627 de butyrate 
de chaux, desséchés à 110° pendant 12 heures, m'ont donné une 
perte de 0 gr. 127, correspondant à 7 gr. 805 0/0 d'eau de cris- 
tallisation (au lieu de 7 gr. 758). 

Enfin du butyrate de chaux sec décomposé par l'acide sul- 
furique m'a donné un liquide dont le point d’ébullition était 
de 160°, nombre qui correspond exactemengau point d’ébullition 
de l'acide butyrique normal. 


CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS. — Nous allons appli- 
quer les données précédentes, en les développant, à l'examen 
d’une fermentation. Les détails dans lesquels nous allons entrer 
une fois pour toutes nous éviteront des répétitions inutiles dans 


1. Annales de Chimie et de Physique, 6e série, t, VIII, 542. 


364 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


l'exposé de nos résultats, la même marche ayant été suivie pour 
chaque analyse des produits fermentés. 


Fermentation du glucose. 


Une solution de glucose pur et cristallisé, dans le liquide 
nutritif décrit plus haut (page 359) cet renfermant 25,40 de glu- 
cose pour 100 centimètres cubes, est additionnée de carbonate 
de chaux, et ensemencée le 2 février 1892, avec une semence de 
Bacillus orthobutylicus àgée de 24 heures, et provenant d’un tube 
de glucose ensemencé lui-même la veille avec une colonie prise 
sur pomme de terre. La fermentation commence le lendemain, 
et est examinée 20 jours après, tout dégagement gazeux ayant 
cessé. 


1° Glucose consommé. — 100 c. c. du liquide primitif renfer - 
maient : 
Glicose AU RTS PTE RAR PR 23" 40 
Aprés la fermentation eee 72 O8r,0 


Proportion de glucose consommé = 100 0/0. 

2° Alcool. — 1,000 c. c. sont distillés de manière à recueillir 
finalement 100 c. c. qui renferment tout l'alcool. Soumis au compte- 
gouttes, le liquide distillé donne 181 gouttes à 18°. Ce qui se 
réduit par correction à 180 gouttes à 15°. 180 gouttes à 15° 
correspondent à 3°%,2 d'alcool butylique pour 100 c. c. en 
volume. Soit en poids (36,2 X 0,824) — 2,64. Ces 26,64 
étaient en dissolution dans les 1,000 ec. c. Par conséquent 
100 c. c. du liquide fermentérenferment 0,264 d'alcool butylique. 

La recherche de l'alcool éthylique, dans le liquide distillé, 
par la réaction de l’iodoforme, ne donne pas de résultat. 

Acides. — Le titrage des acides est obtenu par le dosage de 
la chaux en solution. On opère sur 20 c. ce. du liquide filtré 
par le procédé classique. 100 ce. c. du liquide fermenté renfer- 
maient 0%,375 de chaux. 

Le fractionnement des acides volatils par le procédé Duclaux, 
après précipitation de la chaux par l'acide oxalique, a donné le 
résultat suivant : 

La colonne ; représente pour chaque prise le nombre de 
centimètres cubes d’eau de chaux nécessaires pour saturer 
l'acide passé à la distillation ; 


Do. é À 


BACILLUS ORTHOBUT YLICUS. 369 


La colonne 8 donne le total de l’eau de chaux employée dans 
les 4, 2, 3.:.. 8, 9, 10 premières prises; 

La colonne A contient le rapport, à la quantité totale 
d'acide passé à la distillation, des quantités d'acide passées dans 
les 10, 20, 30, 40, ete., premiers centimètres cubes. 

Enfin le rapport - , déduit des nombres fournis par M. Du- 


claux, représente Le rapport entre les molécules d'acide buty- 
rique et d'acide acétique. 


b 

c B A À 
4): 17,6 17,6 14,9 21 
2; 16,3 39,9 28,1 22 
SE 15,0 48,9 40,5 2,9 
4. 13,5 62,4 D1,7 2.2 
> 12,4 74,8 62,0 225 
6. 11,1 85,9 11,2 22e) 
1: 10,0 95,9 19,5 2,0 
, 9,0 104,9 86,9 2,6 
9. 8,1 113,0 93,6 225) 

10. 7,6 120,6 100,0 » 


LIRE a f 4 6 r Q 
Le rapport - étant sensiblement égal à 2,5, on en déduit 
a er? 
que ne 2. pe 
Par conséquent les 05,375 de chaux se partageront entre 
l'acide acétique et l'acide butyrique dans les proportions de 2/5, 
c’est-à-dire que nous aurops : 
; sr107 de chaux pour l'acide acétique 
et 0:r,268 — — butyrique, 


ce qui correspond à : 


Rede Ace liQUE PS AE 2202 D 0 7 Ne me ne Osr,229 
LC GER TS AT OL CREER EN E TCES Osr,842 


En résumé, les 2%,40 de glucose consommé ont donné : 


AIO DA CTIAMEMR SN LA Res e mhee 05',264. 
HEC ELIQUE STAR LR NRA MSIE Ar 05,229 
CUT. 40.00 U US. seul O:r,842 


La mise en équation de ces données conduit sensiblement à 
la formule 


7 CSH:205 — 2CH:°0 + 2C2H:02 + 5CH80? + 10C0? + 4H + 6H20, 


d’après laquelle on a pour 1 gramme de glucose : 


366 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
Trouvé. 
Alcool butyhiques 72225. 24e 0,147 0,110 
Acide acétique : :. . . + . ee 0,095 0,095 
Acide butyrique 2357240 Fee 0,349 0,350 


ANALYSE DES Gaz. — Pour analyser les gaz dégagés pendant 
la fermentation, on aurait pu les recueillir en plaçant une 
éprouvette sur le mercure dans lequel plongeait l’extrémité du 
tube inférieur des ballons, recourbé à eelte intention. La quan- 
tité considérable de gaz produits rendait cette manipulation diffi- 
cile et lui ôtait toute précision. 

Voici le dispositif que j'ai employé : Dans un ballon à col 
étroit de 200 ec. c., j'introduisais de 20 à 50 c. c. de la solution 
à faire fermenter, préalablement titrée, et après avoir fermé 
l'extrémité du tube au moyen d'un tampon de coton, je stéri- 
lisai le tout à l’autoclave. Le liquide refroidi, ensemencé par 
les procédés ordinaires, le col du ballon était légèrement 
étranglé au-dessous du coton; celui-er, flambé avec soin, était 
refoulé jusqu'à létranglement; puis, l'extrémité bre du col 
étirée à la lampe, on portait le ballon ainsi disposé dans une 
étuve de Roux réglée à 35°, et on le reliait à une trompe à mer- 
cure de Schlæsing au moyen d’un mince tube de plomb péné- 
trant dans l’étuve par une étroite ouverture. 

Le vide étant fait, la fermentation ne tardait pas à s'établir. 
Les gaz étaient recueillis au moyen de la trompe de Schlæsing 
dans une éprouvette graduée et portés sur la cuve à mercure où 
on les analysait par les procédés ordmaires. 

Je n'ai jamais constaté dans les fermentations du Bacillus 
orthobutylicus que la présence de deux gaz : l'acide carbonique 
et l'hydrogène. 

Mais ces deux gaz n’y existent jamais en proportions con- 
stantes. En général, l'hydrogène diminue depuis le commence- 
ment jusqu'à la fin de la fermentation, et inversement l'acide 
carbonique augmente. 

Cette variation dans la composition du mélange gazeux doit 
correspondre à des changements dans les transformations chi- 
miques. C’est ce que nous allons essayer de démontrer. 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS, 307 
Il 
INFLUENCE DE LA RÉACTION DU mieu. — Le Bacillus orthobuty- 


licus, comme nous l'avons dit, produit de l'acide butyrique et de 
l’acide acétique. Ces acides, en s’accumulant dans la liqueur, 
doivent à un certain moment arrêter la fermentation. C’est ce 
qui arrive si l’on n’a pas soin d'ajouter dans les ballons du 
carbonate de chaux. Il nous a paru intéressant de rechercher 
l'influence exercée par cette acidité sur les fonctions du mi- 
crobe et de déterminer en mème temps la dose d'acide capable 
d’entraver la fermentation. Cette quantité n’a rien d’absolu. Elle 
varie avec la nature du corps qui fermente, et pour une même 
substance elle est influencée par divers facteurs au nombre 
desquels il faut certainement compter l’âge et Pactivité de la 
semence, et sans doute aussi la proportion d’alcool formé, 
qui, toutes choses égales, est d'autant plus abondante que 
l'acidité est plus faible. Aussi est-il assez difficile de déterminer 
si l’arrêt d’une fermentation est dû à l'acidité seule de la liqueur 
ou à la somme des produits empèchants fabriqués par le bacille. 
C'est ce qui ressort du tableau suivant dans lequel on voit que 
l'acidité n’est nullement en rapport avec la quantité de matière 
consommée. 

Dans ce tableau, l’acidité est exprimée en acide butyrique 
par litre et les résultals se rapportent tous à des fermentations 
sans carbonate de chaux arrêtées spontanément. 


Concentration de 2 à 3 °/0. 


Nature de la substance Acidité par litre Proportion 2/, de 
fermentée. en acide butyrique. substance consommée. 
CivCérMme CES 1er, 40 DJ 07 
Empois d’amidon . . 181,44 50 °/, 
Glutéscr rer Ne 1:r,58 5220704 
LA ETRES Pr CITES 127,76 39 0/5? 
MÉAMMÉE: 000 le 157,85 50 0}, 
Pommes de terre. . . 28r,08 ? 
SACCHATOSE 26r,20 1507 
DÉSIR TORRES 26r, 59 23 0/5 
InHURE. 1-1 28,76 40 °/5 


1. Semence de 8 jours. 
2. Semence de 1 jour. 


368 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Concentration de 4 à 5 °/,. 


Sucre interverti . . . 15,66 3907, 
Dextrine ee 28r,48 A6 


La fermentation s'arrête donc quand le milieu renferme 
de 42,40 à 2,76 d’acide butyrique par litre. On peut néanmoins 
obtenir une fermentation complète en diminuant suffisamment 
la concentration de la liqueur. Exemple : 


Glucose à 1 07. :: 4g',49 100 97, 


Le rapport entre les divers produits de la fermentation 
varie aussi avec la réaction du milieu. En général on constate 
une augmentation d'alcool butylique quand le milieu s’acidifie, 
et une diminution de l'acide butyrique; Pacide acétique varie à 
peine. Au contraire, quand le milieu est maintenu neutre par 
addition de carbonate de chaux, c’est l'acide butyrique qui 
l'emporte sur l'alcool, et la fermentation peut devenir com- 
plète. 

Dans le tableau suivant, les nombres serapportent à 1 gramme 
de matière fermentée. Le rapport? est le rapport entre la- 
cide acétique et l'acide butyrique, exprimé en poids atomi- 


ques : 
Alcool butylique. Acide acétique. Acide butyrique. . 
RS | Sans craie. 0,329 0,072 0,070 Il 0,66 
l Avec craie. 0,110 0,095 0,350 AR 
ES NNTALS \ Sans craie. 0,316 0,040 0,020 1e 0,33 
; | Avec craie. 0,155 0,044 0,322 1249 
APRES Para \ Sans craie. 0,329 0,094 0,0 A: a0 : 
| Avec craie. 0.069 0,100 0,366 15629 
DNA LEA CE | Sans craie. 0,643 0,026 0,153 1 4 
; | Avec craie. 0,075 0,025 0,228 1e 7 
Pete | Sans craie. 0,280 0,077 0,088 4 : 0,66 
| Avec craie. 0,042 0,092 0,819 4°: 6 
STE SN \ Sans craie. 0,027 0,035 0,510 126 
| Avec craie. 0,036 0,051 0,454 Asa 6 


Ainsi, non seulement la réaction du milieu a une influence 
sur la terminaison de la fermentation; mais on peut voir déjà 


BACILLUS ORTHOBUT YLICUS. 309 


quels troubles profonds elle amène dans la transformation de la 
molécule qui fermente. Il semble que la cellule dans un milieu 
acide devienne moins apte à former de lacide butyrique et que, 
par suite d’une sorte de compensation, cette diminution de l’acide 
corresponde à une augmentation de l'alcool. C’est d’ailleurs ce 
que nous constaterons par la suite chaque fois qu’une cause 
quelconque viendra entraver le libre développement du ferment. 

Remarque. — La chaleur de formation d’une molécule de 
glucose à l’état dissous étant de + 302 calories, si l’on suppose 
que cette molécule se décompose en donnant seulement de 
l'acide butyrique, on aura : 


CSH1206 — CH80? + 2C0? + 4H + 14 cal. 6. 


Si, au contraire, c'est l'alcool butylique seulement qui prend 
naissance on aura : 


CSH1206 — CH100 + 2C0? + H?0 + 41 cal. 9. 


Par conséquent, la formation d'alcool butylique aux dépens 
du glucose, dégage une plus grande quantité de chaleur que la 
formation d'acide butyrique, et fournit ainsi une plus grande 
quantité d'énergie aux cellules du ferment. 

Est-ce à cette particularité qu'il faut attribuer l'augmentation 
de la production d'alcool quand le bacille se trouve gêné dans 
son évolution, ou bien quand il agit dans un milieu dépourvu de 
carbonate de’chaux ? 

Voyons ce qui se passe dans un liquide additionné de 
crale. 

La chaleur de formation du butyrate de chaux étant de 
+ 431,7, si on retranche de ce nombre la chaleur de formation 
de 1/2 molécule de carbonate de chaux = -L 91,8 il restera 
341,9 à ajouter aux 141,6 trouvées précédemment. La décom- 
position du glucose en présence de carbonate de chaux dégagera 
done 181,5 au lieu de 14°1,6. 

Iciencore la différence entre la chaleur dégagée par la produc- 
tion de l'alcool butylique aux dépens du glucose et la chaleur 
produite par la formation de lacide butyrique est encore consi- 
_dérable, et si, dans le cas d’addition de carbonate de chaux, on 


constate la formation d'une plus grande quantité d’acide et une 
24 


910 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


diminution de l'alcool, la cause n’en peut être attribuée à des 
phénomènes thermochimiques, mais plutôt, selon nous, à ce fait 
que l’acide étant saturé au fur et à mesure de sa formation cesse 
de devenir une cause empêchante pour le développement du 
microbe. 


INFLUENCE DE LA DURÉE DE LA FERMENTATION. — Existe-t-il pen- 
dant toute la durée d’une fermentation un rapport constant entre 
le poids de la substance détruite et les divers produits qui résul- 
tent de cette destruction ? 

Si ce rapport varie, dans quel sens se fait cette variation ? 
et sous quelles influences ? Telles sont les questions que nous 
nous sommes proposé de résoudre. 

Nous avons employé comme milieu de culture le glucose et 
le sucre interverti en solution à 5 0/0 environ, en opérant tantôt 
en présence, tantôt en l'absence de carbonate de chaux. Les ballons 
de la mème série étaient ensemencés en mème temps avec la 
même semence âgée au plus de 2 jours, afin d'éliminer certaines 
causes de perturbation dont nous aurons bientôt à nous occuper. 

Nous signalerons tout de suite les différences considérables 
qui existent entre les fermentations du glucose et celles du sucre 
interverti. Nous trouverons bientôt l'explication de cette ano- 
malie, due à la présence du lévulose qui offre une résistance 
notable à l’action du ferment. 


A. — Première série d'expériences. 


GLUCOSE ADDITIONNÉ DE CRAIE 


Concentration de la solution = 4:",75 0/,. 


2 jours. 4 jours. 20 jours. 
J ] 


Poids ‘/, de glu- 
cose consom- 
TN SRE MIA CRUE 42,8 0/, 49 07, 61,2 0/, 


{gramme deglu- 
cose donne : 


Alcool butylique. 0,148 0,135 0,155 
Acide acétique. . 0,091 0,078 0,043 
Acide butyrique. 0,331 0,345 0,322 
Acide formique. Traces. 0 0 
a { il 4 
Rapport TOR 2,5 3 5 


BACILLUS ORTHOBUT Y LICUS. 3 


B. — Deuxième série d'expériences. 
SUCRE INTERVERTI ADDITIONNÉ DE CRAIE 


Concentration de la solution = 5%",85 9/,. 


{ jour. 4 jours. 16 jours. S mois. 


Quantité °/, de 

sucre  con- 

sommé 100: 43 9/0 96 0J 90 
12" sucre inter- 

verti donne : 


Alc.butylique. 0,015 0,059 0,069 0,108 
Ac. acétique.. 0,313 0,114 0,110 0,046 
Ac. butyrique. 0,464 0,423 0,405 0,275 
L 4 { 2 2 ( 
\appor 5°: ï 5 5 3 


C. — Troisième série d'expériences. 
GLUCOSE SANS CRAIE 


Concentration de la solution = 45,75 °/,. 


2 jours. 4 jours. 20 jours. 

Quantité °/, de 

glucose  con- 

sommé. . . . . 20 ‘/, DOTE 26,3 0J, 
1 de glucose 

donne : 
Alcool butylique. 0,254 0,308 0,316 
Acide acétique. . 0,039 0,040 0,040 
Acide butyrique. 0,074 0,040 0,020 
Acide formique.  Fortes traces. Traces. Traces. 
k Le 3 3 3 

appor ra sn 3 5 T 


D. — Quatrième série d’expériences. 


SUCRE INTERVERTI SANS CRAIE 


Concentration de la solution = 52,35 9/4. 


{ jour. 4 jours. 16 jours. 
Quantité °/, de 
sucres con- 
SOMME, 7e 3,1 ‘Jo 22,4 0/, 22,4 0/, 
12 sucre donne : 
Alcool butylique. 0,093 0,295 0,329 
Acide acétique. . 0,251 0,085 0,094 
Acide butyrique. 0,245 0 0 
BR Le 1 { d 
apport 5. . .. 0,66 5 ü 


AT 
&. 
1 


372 ANNALES DE L’INSTITU! PASTEUR. 


Il ressort clairement de ces expériences que pendant toute la 
durée d’une fermentation, quelle que soit la réaction du milieu: 

1° La quantité d'alcool butylique formé va en augmentant : 

2 Les quantités d'acide butyrique et d'acide acétique vont 
constamment en diminuant : 

3° Le rapport? va en diminuant en milieu neutre, et en 


augmentant en milieu acide. 

Ces résultats se trouvent confirmés par l'analyse des gaz 
dégagés pendant la fermentation. Nous avons effectué cette 
expérience, en nous entourant des précautions décrites page 366, 
sur 20 centimètres cubes d'une solution de glucose à 1,03 0/0, 
ensemencés sans addition de craie et placés à l’étuve à 35°. Au 
bout de 22 jours, il ne se dégage plus rien. L'analyse montre 
que tout le glucose est consommé. 


Analyses des gaz dégagés. 


Rapport en volume. 


Durée. HAE co? H = 
d aoure, CO? 
A 7 53,8 
AJOUT 6e 66 AOce, » 110,66 rc 
| + 95,5 
13° jours 0-1 Acc er 32ce,76 Alcc,24 == 
14,9 
ne nr 3 21,5 
22 TOUT CE 22: Sec, 80 Gcc,90 4 ce,90 RS 
E 
399 
ToTATEEeS 7T4cc 46 49cc,66 24cc 80 == 
( ; 666 
La marche du dégagement des gaz et les variations du 
HE ë : : 
rapport 5 indiquent une augmentation continue dans la forma- 


tion de l'alcool butylique. 
En effet, supposons qu'il ne se forme que de l'acide butyrique. 
La réaction la plus simple sera : 


CSH1205 = C{HSO? + 2C0? + 4H. 
H 
CO? 
Si au contraire 1l ne se forme que de l'alcool on aura : 


r 290 
Le rapport en volume > sera égal à = 


CSH1206 — CH120 + 2C0? + H°0. 


1 es de 1e PL Es LGAD Fe * ARS ETES 
Et le rapport & deviendra = Il n’y aura pas d'hydrogène. 


Or nous voyons précisément, dans l'expérience précédente, 


BACILLUS ORTHOBUT Y LICUS. 373 


l'hydrogène diminuer jusqu'à la fin de la fermentation, preuve 

que la seconde équation l'emporte peu à peu sur la première et 

que l'alcool se forme en quantité croissante. Quant à l'acide 

acétique, sa formation ne peut apporter de trouble dans le rapport 

des gaz dégagés, puisque l'équation la plus simple de cette for- 
mation serait: 

GH06=SCH:02: 

Dans le cas particulier qui nous oceupe, nous remarquons que 

= r La LL 33,3 

le rapport moyen entre la totalité des gaz dégagés est de 5 


H Fee 
pour = en volume. C’est précisément le nombre que lon trouve 


en appliquant la formule suivante : 
2C6H2206 — C2H100 + C'HSO? + 4CO0? + AH + H?0, 


et en supposant qu'il ne s’est pas produit d'acide acétique. 

Il faut d’ailleurs remarquer que nous n'avons opéré que sur 
une solution de très faible concentration (1 0/0) permettant au 
glucose d’être transformé intégralement quoique en milieu acide. 

Mais cette équation ne s’appliquerait plus à des solutions 
plus concentrées : elle n'aurait pas été la mème dans la même 
expérience, si nous l’avions interrompue avant que tout le sucre 
n'eût disparu. Dans les expériences qui précèdent, on pourrait 
calculer, pour chacune des phases étudiées des diverses fermen- 
tations, une formule spéciale, la résumant lorsqu'elle est arrivée 
à ce point, mais ne représentant nt son état antérieur, ni son élat 
ultérieur, de sorte que chacune de ces équations n'a qu'une exis- 
tence transitoire et ne représente qu’à un seul moment la réalité 
des choses. 

On ne peut donc assigner une formule unique à une fermen- 
tation. La mise en équation du phénomène, souvent impossible 
au début de l'expérience, varie presque journellement en ten- 
dant vers une simplification qu’elle atteint lorsque toute la sub- 
stance fermentescible est consommée. Il suffit, pour s'en con- 
vaincre, de comparer les fermentations de glucose à 3 0/0 dont le 
glucose a complètement disparu avec les fermentations de la 
même substance à 5 0/0 qui, au bout du même temps, renfer- 
ment encore 30 0/0 de sucre non attaqué. 

Cette variation dans l'équation de la fermentation suit une 
marche régulière, nous venons de le démontrer. La cause doit 


374 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


en être recherchée dans l'accumulation des produits formés dans 
la liqueur. Les jeunes cellules qui éclosent dans ce milieu de 
moins en moins favorable, doivent se ressentir, durant leur évo- 
lution, des mauvaises conditions de leur naissance et se trouver 
moins armées pour la lutte. 

Une fermentation sera done d'autant plus régulière que la 
concentration sera plus faible. 

Un autre point se dégage encore de nos expériences. C’est 
que l'acide formique, que l’on rencontre parfois au début des fer- 
mentations, disparaît dans le courant de celles-ci quand le milieu 
est neutre. Mais on le retrouve, quelquefois même après 
20 jours, quand le milieu conserve sa réaction acide, On peut 
done considérer l’acide formique comme un produit de souf- 
france. Je dois dire que je ne l’ai jamais rencontré qu'à l’état de 
traces. La destruction de l'acide formique par la cellule qui lui 
a donné naissance est un fait qui a été déjà mis en lumière par 
M.Buclaux (Annales de l'Institut Pasteur, VI,593) et que nos résul- 
tats ne font que confirmer. 


INFLUENCE DE L’AGE DE LA SEMENCE. — Si l’on ensemence des 
spores de Bacillus orthobutylicus dans une série de tubes de glu- 
cose, et qu'on examine ces cultures à divers intervalles, on 
remarque, au bout de 24 heures, des bacilles jeunes, très 
mobiles, en forme de battants de cloche, mélangés à des spores 
non germées; huit jours après, les bacilles toujours mobiles 
présentent leurs formes ordinaires: puis au fur et à mesure que 
la culture vieillit les mouvements cessent et les spores se for- 
ment’. À ces phases successives dans l'existence du bacille doi- 
vent correspondre des périodes variables d'activité. C’est ce 
que nous venons de démontrer dans le chapitre précédent. Pen- 
dant toute la durée d’une fermentation, les produits formés 
varient de quantité en suivant une marche assez régulière. 

Si done on prélève, dans des cultures d'âge différent, des 
bacilles doués par conséquent d'activité différente, et qu'on les 
ensemence dans des milieux fermentescibles, ces bacilles,en s’y 
développant, produiront-ils tous la même fermentation, ou bien 
agiront-ils chacun avec leur activité propre? En un mot, quelle 
sera l'influence de l’âge de la semence sur la fermentation ? 


1. Voir fig. 1 et 2, page 357. 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 31 


Pour répondre à la question, une colonie, prise sur pomme 
de terre, est portée aussitôt dans une série de tubes de glucose. 

Le lendemain, on ensemence,avec un de ces tubes, un ballon 
contenant une solution à 2,54 0/0 de glucose additionné de 
craie, et un autre sans craie. 

La semaine d’après on répète la mème opération avec un 
autre tube âgé de 8 jours et l’on attend ensuite quarante-cinq 
jours avant de faire un nouvel ensemencement. Tous les ballons 
sont ensuite examinés au bout de vingt jours. 

Voici les résultats de cette première série d'expériences : 


Première série d'expériences. 
AVEC UNE SEMENCE CULTIVÉE SUR GLUCOSE 


1° Glucose additionné de craie. 


AGE DE LA SEMENCE 


1 gramme de glucose a donné : 1 jour. 8 jours. 45 jours. 
Alcool butylique . . . . .. 0,110 0,175 0,139 
ACITERACÉLIQUEN AT CH 0,095 0,181 0,100 
Acide butyrique. -. .-:.. 0,350 0,177 0,221 
a 2 b) 2 
Rapport n. ......... 5 ; : 


20 Glucose sans craie. 


1 gramme de glucose a donné : 1 jour. 8 jours. 
Alcoolbutylique.: : 2.7 0,329 0,368 
Merderacétique M PL 0,072 0,039 
Acide bhiyrique:. 25:72. 0,070 0,033 
a 3 2 
Rapport? ......... 2 ï 


L'expérience a duré 20 jours. Tout le sucre avait disparu dans les ballons 
avec craie, il n’en avait fermenté que 52 °/, dans le second ballon sans 
craie. 


L'activité initiale de la semence communique donc son 
influence à la génération qu’elle produit. Nous voyons qu’en se 
plaçant au point de vue de la production d’alcool butylique, 
cette activité croît pendant les premiers jours pour décroitre 
ensuite au fur et à mesure de la formation des spores. La pro- 
duction d'acide butyrique suit exactement une marche inverse. 
Son minimum correspond au maximum de l’alcool butylique. 

On peut aussi penser qu’une semence subira une modification 


316 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


d'autant plus rapide que le milieu de culture sera plus fermen- 
tescible, c’est-à-dire que la durée de son évolution sera plus 
courte. 

Par conséquent, si nous cultivons notre bacille dans des tubes 
renfermant de la bouillie de pomme de terre, milieu qu'il fait 
fermenter avec une grande énergie, et si nous nous servons de 
ces nouvelles cultures pour ensemencer des ballons de glucose, 
nous devrons obtenir des différences encore plus marquées que 
dans la première série. 

Nous avons opéré comme ci-dessus, en remplaçant les tubes 
de glucose par des tubes de bouillie de pomme de terre qui nous 
ont servi à ensemencer des ballons contenant une solution à 
3 0/0 de glucose, après 24 heures, 8 jours et 15 jours. 

Les fermentations ont été examinées, comme précédemment, 
au bout de 20 jours, et nous ont donné les résultats suivants : 


Deuxième série d'expériences. 


SEMENCE CULTIVÉE SUR BOUILLIE DE POMMES DE TERRE 
Glucose additlionné de craie. 


AGE DE LA SEMENCE 


a 
1 gramme de glucose donne : 1 jour. S jours. 15 jours. 
Alcool butylique . . . . . 0,209 0,085 0,030 
Acide acétique tr. 0,055 0,066 0,070 
Acide butyrique . . . .. 0,242 0,292 0,415 
a l Î 1 
Rapport AUS Ut 3 3 i 
Proportion de glucose 
CONSOMME. C NA 100 °/, 100 °7, 48,8 0/5 


Nos prévisions se trouvent donc pleinement justifiées. Le 
bacille cultivé sur pommes de terre se trouve modifié plus rapi- 
dement dans ses fonctions que celui qui est cultivé sur glucose, 
et cela probablement à cause de la facilité avec laquelle il se 
multiplie dans un milieu amylacé. 


Troisième série d'expériences. 


Dans cette nouvelle expérience, j’ai préparé deux ballons de 
même volume renfermant la même solution de glucose addi- 
tionnée de carbonate de chaux. Ces ballons sont munis chacun 
d'un tube de verre recourbé à angle droit permettant de les 
réunir au moyen d'un joint de caoutchouc. Ces tubes sont indé- 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 311 


pendants des tubes à dégagement établis comme à l'ordinaire 
(voir page 359). Les ballons étant remplis exactement et stérilisés, 
sont réunis au moyen d'un joint de caoutchoue, et la communi- 
cation entre les deux est interceptée par une pince à vis. Le 
premier ballon que nous désignerons par la lettre A est ense- 
mencé avec une culture prise sur glucose. 

La fermentation ayant cessé au bout de 14 jours, on chasse, 
au moyen d'un insufflateur, un peu de liquide dans le second 
ballon B, qui se trouve ainsi recevoir une semence âgée de 
14 jours, mais qui a poussé librement sous une pression égale 
à celle de l'atmosphère. Cette dernière fermentation est également 
examinée au bout de 14 jours. 

La semence, ici, ne se trouve pas évidemment dans les 
mêmes conditions de développement que celle qui est cultivée 
dans des tubes à essai de petit volume et scellés à la lampe. Si 
l’on examine au microscope des bacilles pris après 14 jours dans 
les ballons, on en rencontre encore doués de mouvements, 
alors que dans les tubes, au bout du même temps, on ne trouve 
plus que des spores. 

C'est sans doute que, dans ce dernier cas, le bacille n’a à 
sa disposition que 0 gr. 30 de glucose environ, tandis que dans 
nos ballons de deux litres, il se trouve en présence de 60 grammes 
de la même substance. Néanmoins, nous allons voir entre les 
produits de la fermentation des deux ballons, une différence très 
sensible dans la quantité d'acide produit et dans le rapport entre 
les acides butyrique et acétique, tandis que le chiffre de l'alcool 
aura peu varié. 


FERMENTATION DE GLUCOSE SANS CRAIE 


Concentration de la solution . . . . . . re. 22,72 LS PR 
Durée de lafermentation"; % 212 5. 14 jours. 
Ballon A. Ballon B. 

Age de la semence. . . 1 jour. 14 jours. 
Glucose consommé. . . 100 07, 100 0/, 
1 gr. de glucose donne : 
Alcool butylique . 0,137 0,130 
Acide acétique. . 0,055 0,086 
Acide butyrique . 0,323 0,254 

« ! l 
Rapport & See 3 5 


378 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


En résumé, quelle que soit la cause agissante (modification 
physiologique, telle que la formation des spores, ainsi que l'a 
remarqué M. Perdrix chez le bacille amylozyme, ou bien accumu- 
lation dans le milieu de culture des produits de la fermentation) 
l'âge d’une semence à une importance capitale dans la marche 
d'une fermentation. 


INFLUENCE DE L'ÉDUCATION DE LA SEMENCE. — Nous avons déjà 
vu que l’origine de la semence peut amener des changements 
dans la fermentation. C’est ainsi que les spores du bacille, déve- 
loppées d’abord sur de la bouillie de pommes de terre avant 
d'être ensemencées sur glucose, acquièrent la propriété de don- 
ner de l'alcool en grande quantité dans ce dernier milieu, 
pourvu toutefois que l’ensemencement ait lieu dans les 24 heu- 
res. Plus tard, nous savons que cette faculté diminue à mesure 
que la semence vieillit. 

Ce fait semble général, et nous en voyons une confirmation 
dans la fermentation du sucre interverti, qui donne des quantités 
variables d’alcool et d'acides suivant que la semence provient 
de pommes de terre ou d’une solution de sucre interverti. 


Exemple : 
Fermentation du sucre interverti. 

Origine de la Alcool Acide Acide a 
semence. butylique. acétique. butyrique. b 
il 
Pommes de terre. 0,105 0,062 0,368 5 
+) 
2 
Sucre interverti. . 0,069 0,109 0,366 & 
+) 


Il était intéressant de voir ce qu'on obtiendrait avec une 
semence habituée à vivre dans un milieu présentant avec le glu- 
cose des différences considérables dans sa fermentation. 

Tel est le cas de l’inuline. 

Nous verrons bientôt que le B. orthobutylicus ne donne avec 
l’inuline que de très faibles quantités d'alcool, quelle que soit 
la réaction de la liqueur: si la semence est vieille, il peut même 
arriver que l'alcool fasse totalement défaut.’ 

Un tel milieu semble remplir les conditions les plus favorables 
à nos recherches. | 


= 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS 319 


Le B. orthobutylicus habitué à vivre sur inuline, milieu dans 
lequel il ne produit que des traces d'alcool, conservera-tl cette 
propriété quand on le transportera sur glucose ? 

Pourra-t-on créer ainsi une sorte de race nouvelle ? 

Pour résoudre la question, nous avons commencé par cul- 


üiver le bacille en série sur inuline, en laissant un intervalle de 


8 jours entre deux ensemencements. 

Nous faisions usage, pour ces cultures successives, de tubes à 
essais renfermant 10 centimètres cubes d’une solution d'inuline 
à 2 0/0 additionnée de carbonate de chaux, et dans lesquels on 
faisait le vide. 

Après 6 passages successifs, nous avons ensemencé, avec un 
de ces tubes en pleine fermentation, un ballon de glucose à 3 0/0 
additionné de craie, ainsi qu’un tube à essai renfermant la même 
solution. 

Celui-ei fut le point de départ d’une nouvelle série de cul- 
tures, sur glucose cette fois, répétées de 8 jours en 8 jours. 

La sixième culture de cette série servit à ensemencer un nou- 
veau ballon de glucose et un ballon d'inuline. 

Le ballon de glucose que nous avons ensemencéavec la culture 
provenant d'un 6° passage sur inuline nous a donné les résultats 
suivants : 

Glucose avec craie. 


Concentration de la solution . . . . . RME ef, 
Durée de la fermentation. . . . : . .. ET 20oUrS. 
Quantité de glucose consommé. . . . . . . . . 400 °/;. 


Calculé pour la formule 


at : 
1 gramme de glucose donne : Re 


Miroolbutyliquez: Mrs Pere 9,205 0,205 

APIdERACÉtIQUE MN 0,084 0,083 

ACISEDURyEIquer Er: 1A. 0,185 0,183 
a 2 

Rapport b SAT UT LT MOT : 5 


Formule approchée de la réaction : 

8CSH2205 = 4C:H100 -L 22H10? + 2C{H$0? + 16C0? + 20H + H20. 

C'est-à-dire que l’on obtient une exaltation de la fonction 
alcool et une notable diminution dans la production d'acide 
butyrique. Ce chiffre 0,205 est en effet le plus élevé que nous 
ayons obtenu pour l'alcool dans toutes nos fermentations de 
glucose faites en présence de craie, si Von excepte cependant une 


380 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


fermentation provoquée par une semence, àgée de 24 heures, 
prise sur une culture de bouillie de pomme de terre. Et c’est une 
semence qui primitivement sur inuline ne donnait que 0 gr. 036 
d'alcool butylique, qui en donne maintenant 0,205 sur glucose, 
après une série de passages sur un milieu spécialement réfrac- 
taire à la production de cet alcool! Mais cette semence nouvelle 
va-t-elle constituer une race et transmettre ses qualités à ses 
descendants? 

L'expérience va nous apprendre qu’il n’en est rien, et qu'au 
bout de plusieurs passages sur glucose, le bacille aura repris ses 
fonctions ordinaires; mais, chose curieuse, il aura acquis du 
même coup, dans ce nouveau milieu, la propriété de faire pro- 
duire à l’inuline des quantités d’alcool butylique relativement 
considérables. 


Fermentation de glucose avec craie. 


ENSEMENCÉE AVEC UNE CULTURE AYANT SUBI SIX PASSAGES SUR INULINE 
ET SIX PASSAGES SUR GLUCOSE 


Concentration de la solution . . . . . . . . . 4,67 0/0 
Dürée de la fermentation2; #0 Rec 17 jours. 
Quantité pour cent de glucose consommée. . 474076 
1 gramme de glucose donne : Calculé. 
Alcool butylique. . . . . . Ste 0,084 0,082 
AeIde-aCELIQUE 7 M Et 0,091 0,088 
Acide butyrique. eve FR 0,402 0,391 
à a il 
Rapport > DS Et RAR LE SR 3 


Formule approchée : 
A5CSH!206 = 3C:H100 + 4C2H102 + 12C*H$0? + 22C0? + 16H + 11H°0. 


Nous voici revenu à des chiffres sensiblement normaux, 
mais Ja même semence portée sur inuline nous donne : 


Fermentation d'inuline (avec craie). 


Concentration.de la*soluition::.-, "71€ Sr 07e 
Quantité pour cent d'inuline consommée . . . . 90 (Jo 
Purée-de lafermentalion® CA CUT 49 jours. 

4 gramme d’inuline donne : Calculé. 
Alcool:butylique 22/2 0,192 0,195 
Acide-acétique sir asie £ 0,106 0,105 
Acide Duty ETS 0,150 0,155 

a (l 

Re + eus CE SR RE - 

apport 3 Ï 


és 


BACILLUS ORTHOBUT Y LICUS. 01 


Formule approchée 
7CSH 100$ + 12H20 = 3C'H100 + 2CHi0? + 2C{H$0? + 18C0? + 40H. 


Il y a là un effet inverse curieux à noter : le passage sur 
inuline exaltant les fonctions du ferment vis-à-vis du glucose, et, 
au contraire, le passage sur glucose rendant le bacille plus apte 
à faire fermenter l’inuline. 

Comment chercher à expliquer ces faits? En supposant, ce 
qui est vraisemblable, que tous les bacilles d’une génération ne 
sont doués ni de la même activité ni de la même force de résis- 
tance, faut-il croire que, par une véritable sélection, ceux-là 
seuls subsistent qui peuvent résister à un milieu peu favorable 
comme linuline ? 

Une fermentation, en eflet, est le résultat de la vie d’une 
foule d'individus, autrement dit est la somme des fermentations 
partielles produites par chacune des cellules du ferment prises 
isolément; on comprend dès lors que les résultats varient 
quand une cause quelconque vient retrancher de cette collectivité 
une catégorie de membres actifs. Dans le cas qui nous occupe, 
ce seraient précisément les individus les moins résistants qui 
disparaîtraient les premiers, ceux-là même qui, dans une solution 
de glucose, donneraient le minimum d'alcool, et qui, surinuline, 
n’en donneraient plus du tout. Les autres, au contraire, subsiste- 
raient avec toutes leurs qualités; aussi, reportés sur glucose, 
produiraient-ils dans ce milieu une augmentation apparente 
d'alcool butylique. 

C’est par une hypothèse de même genre que M. Bordet ‘ 
cherche à expliquer lexaltation du Vibrio Metchnikovii par son 
passage sur des cobayes vaccinés. Dans ce cas, la sélection se 
ferait par les phagocytes qui supprimeraient les individus moins 
armés pour la lutte, ne respectant que ceux qui sont doués d’une 
plus grande toxicité ou de chimiotaxie négative. « Grâce à cette 
sélection, les générations nouvelles de microbes dériveront 
pour la plus grande part des microbes qui auront été doués de 
ces propriétés favorables. » 

Ne peut-on rapprocher ces faits de ce qui se passe chez 
d’autres microbes pathogènes? 


4.J. Borver. Adaptation des virus aux organismes vaccinés. (Annales de l’Ins- 
titut Pasteur, 1592, p. 328.) 


382 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR: 


La bactéridie charbonneuse atténuée ne retrouve-t-elle pas 
sa virulence en passant par l’organisme du chien, animal doué 
de peu de réceptivité pour ce virus? 

D’autres part, les travaux récents de M. Gessard ! nous ont 
montré que le Bacille pyocyanique ensemencé dans du bouillon 
donne à la fois un pigment fluorescent et de la pyocvanine. Mais 
si on le cultive exclusivement sur albumine, milieu dans lequel 
il ne produit que de la fluorescence, et qu'on le reporte ensuite 
sur le bouillon, il ne donnera plus de fluorescence, mais seulement 
de la pyocyanine, « comme s'il était devenu par habitude plus 
exigeant sur l’état où doivent lui être offerts les éléments de la 
production de la fluorescence. » 

Dans le cas du passage sur glucose provoquant une fermen- 
tation plus active de l’inuline, la comparaison subsiste encore 
avec les microbes pathogènes. 

N'est-ce pas par des inoculations suecessives de lapin à lapin 
que le virus de la rage atteint son maximum d'intensité? 

Le rouget du porc, passant en séries sur le pigeon, augmente 
de virulence d’une facon absolue. 

Et cependant, ni le lapin dans le premier cas, ni le pigeon 
dans le second, n’offrent de résistance à ces virus, mais, au con- 
traire,présentent vis-à-vis d’euxune réceptivité toute particulière. 

Quelle que soit l'explication qu'on voudra donner de ces faits, 
la conclusion à tirer de nos expériences, c’est que le milieu dans 
lequel « vécu un ferment peut exercer une influence considérable sur 
l'activité de ce ferment. 


III 


DosaGE DES HYDRATES DE CARBONE. — Avant d'exposer les résul- 
tats de l’action du Bacillus orthobutylicus sur les différents 
milieux qu'il peut faire fermenter, je dirai brièvement les pro- 
cédés d'analyse que j'ai employés pour doser les sucres et les 
matières amylacées. 

Quand Ia solution ne contient qu'une seule matière sucrée, 
je l'ai dosée à la fois par la liqueur de Fehling et par le polari- 


1. GEssarD, Annales de l’Institut Pasteur, V, 1891. 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 389 


mètre, en tenant compte des résultats les plus récents sur la 
valeur du pouvoir rotatoire. Ces résultats sont résumés dans le 
tableau suivant : 


Saccharose te x [al + 670,31. 

Glucose anhydre?. . [4 + 520,50 + 0,018796 p + 0,000517p°. 
Lévulose anhydreÿ.. [xlr — 101°,38 — 0,56€ + 0,108 (p — 10). 
Sucre interverti . . . [als — 24°,22 — 0,981. 

Lactose anhydre‘. . [an + 55°,30 + (20 — 1)0,55. 

Maltose anhydreÿ.. [olo + 140,375 — 0,01837p — 0,0954. 


Quand les dosages sont bien faits. les deux déterminations 
coïncident toujours. 

Dans le cas d’un mélange de saccharose, de glucose et de 
lévulose, on a, pour résoudre le problème, trois éléments : rota- 
tion initiale de la solution et pouvoir réducteur avant et après 
interversion par un millième d'acide sulfurique à l’ébullition. 

Le procédé général pour doser un mélange de maltose et 
de glucose consiste de même à prendre la rotation initiale du 
mélange, à intervertir le maltose et à doser ensuite le glucose 
total. 

Le maltose s’intervertit difficilement sous l’action des acides 
à 1000. I faut, dans ce cas, prolonger l’ébullition. Il n’en est pas 
de mème si l’on opère à 120°. 

Dans ce cas, l’interversion a lieu en vingt minutes avec 
2 0/0 seulement d'acide sulfurique ou d'acide chlorhydrique. 

J'ai utilisé dans ce but l’autoclave à stérilisation en usage 
dans les laboratoires de microbie. Je me suis assuré, par des 
expériences préliminaires, que le glucose chauffé à 120° pen- 
dant une demi-heure avec 2 0/0 d'acide sulfurique, ne subit 
aucun changement sensible dans son pouvoir réducteur ou dans 
son pouvoir rotatoire. 

Amidon et dextrine. — Un grand nombre de procédés ont été 
donnés pour doser la matière amylacée. Le plus simple est 
celui qui consiste à saccharifier l’amidon au moyen d’un acide 
minéral. — Sa transformation complète en glucose, quand on 


. A.GiraRD et DE LUYNES. $ 

. TozLExs, Ber. d. deul. chem. Geselsch., 1876, p. 487, 1831. 

. JuNGrLeisH et GrimBerr, Comptes rendus, 4888, t. VII, p. 390. 
- SCHMOEGER, B. d. d. chem. Ges., 1880, p. 1915-2130. 

. Meisse, Journ. fur. prakt. Chemie (2), XXV, p. 44. 


OT à 0 RO 


384 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


opère à 100°, exige un temps fort long et une quantité d'acide 
assez notable, en même temps que l’on risque d’altérer le 
sucre formé. 

J'ai constaté qu’en opérant à 120°, dans l’autoclave quinous a 
servi äintervertir le maltose, 50 c. ce. d'une solution à 20/0 d'acide 
sulfurique ou chlorhydrique suffisent à saccharifier totalement 
deux à quatre grammes de fécule ou de dextrine en vingt 
minutes. Dans ces conditions, la cellulose n’est pas attaquée. Je 
me suis assuré que la transformation en glucose était complète, 
par la concordance des chiffres trouvés dans le dosage du glu- 
cose par réduction et par rotation. Le poids d’amidon ou de dex- 
trine cherché estégal au poids de glucose trouvé, multipliépar 0,9. 

Maltose et dextrine. — On sait que sous l'influence de l’amy- 
lase, l'empois d’amidon se dédouble en maltose et en dextrines, 
qui, d’après Effront ', auraient le même pouvoir rotatoire 
—(x)j —+218, ce qui correspond pour (4), à (4), — +193? 
et ne réduiraient pas la liqueur de Fehling. Quoique ce dernier 
point ne soit pas admis par tous les auteurs, nous l’accepterons 
pour ne pas compliquer la méthode de dosage. L'erreur apportée 
dans les résultats par le pouvoir réducteur des dextrines est en 
effet d’un ordre très peu élevé. 

L'expérience nous ayant montré que le sucre formé pa 
l’action du Bacillus orthobutylicus sur Pempois d’amidon et sur la 
dextrine est du maltose sans mélange de glucose, nous n'avons 
eu à nous occuper que du dosage d’un mélange de maltose et de 
dextrine. 

Deux procédés peuvent être employés : 

Premier procédé. — Sur une portion de la liqueur on dose par 
réduction le maltose existant. 

On chauffe ensuite une autre portion à 120° pendant vingl 
minutes avec 2 0/0 d'acide sulfurique et on dose le glucose 
formé. Du poids total de glucose on retranche celui qui résulte 
de l’interversion du maltose, et qu'on obtient en multipliant le 
poids de maltose trouvé par le facteur 1,0526. Le glucose restant 
correspond à la dextrine saccharifiée. En le multipliant par 0,9, 
on a le poids de dextrine contenue dans la solution. 


1. Moniteur scientifique, 1887, p. 15. 


aa) r ee 
à. fn — 0,886. 


(4 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 389 


Deuxième procédé. — Si toutes les dextrines possèdent le 
même pouvoir rotatoire, et si le nombre donné par Effront' est 
exact, on pourrait doser optiquement un mélange de dextrine et 
de maltose sans avoir recours à la saccharification. 

Pour cela, on prend la déviation de la liqueur en notant avec 
soin la température. On dose le maltose par réduction. On en 
conclut la déviation correspondant au maltose. On la retranche 
de la déviation totale, le reste est la rotation due à la dextrine 
et il est facile d'en conclure le poids de cette substance. 

La concordance entre les deux méthodes, que nous avons 
vérifiée dans un grand nombre d'expériences, semble, jusqu’à un 
certain point, confirmer les résultats obtenus par Effront. 


FERMENTATIONS DES MATIÈRES AMYLACÉES. — Le Bacillus ortho- 
butylicus attaque facilement les matières amylacées cuites, — 
empois d'amidon où bouillie de pommes de terre. — Avec cette 
dernière, il n’est pas nécessaire de lui fournir le liquide nutritif 
habituel à base de sels minéraux et de peptone (page 359). L'eau 
suflit; le bacille trouve en effet dans les pommes de terre les 
matières protéiques et les sels nécessaires à sa nutrition. 

La fermentation de l’amidon est précédée de transformations 
qu'il nous a paru intéressant d'étudier en détail. 

Dans une première expérience, nous avons ensemencé un 
ballon d’empois de fécule de pomme de terre, à 5 0/0 environ, 
après l'avoir stérilisé soigneusement à l’autoclave, pendant 
3/4 d'heure, à 1209. Dans cette étude des produits de la fermenta- 
ion, nous n'avons pas ajouté de carbonate de chaux à l’empois, 
de façon à ne pas être gêné par la présence des sels de chaux. 

Au bout de 7 jours nous enlevons le ballon de l’étuve. L’em- 
pois est entièrement liquéfié et séparé en deux couches : une 
couche limpide surnage une couche floconneuse sur laquelle 
je reviendrai. 

La partie liquide filtrée, traitée par l’eau iodée, ne donne 
aucune coloration ; additionnée de quatre fois son volume d’alcool, 
il ne se produit aucun trouble. 

I n'y a donc pas de dextrines. 

Une étude comparative faite avec la liqueur de Fehling et le 


4. Loc. cit, 
25) 


380 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


polarimètre montre d’un autre côté qu’elle ne contient que du 
maltose. J'ai observé à plusieurs reprises le même fait. 

L'absence de dextrine dans les expériences que nous venons 
de citer était un fait curieux dont il fallait rechercher la cause. 
La transformation de l’amidon en maltose avait-elle lieu sous 
l'influence d'une diastase? et cette diastase ne produisait-elle 
que du maltose? 

Pour répondre à cette question, nous avons prélevé d’une fer- 
mentation de pommes de terre un certain volume de liquide que 
nous avons filtré aussitôt et qui, étudié au point de vue des dias- 
tases qu'il peut contenir, fluidifie lempois d’amidon, en y produi- 
sant du maltoseet de la dextrine comme le fait l'amylasedu malt. 

D'où vient donc que l’on ne peut retrouver de dextrine dans 
un milieu amylacé en cours de fermentation? Que devient la 
dextrine formée ? 

En faisant un dosage soigneux, on peut constater la présence 
de cette dextrine dans une fermentation à la condition de l’exa- 
miner à ses débuts. 

Une fermentation de pommes de terre, sans carbonate de 
chaux, et âgée de deux jours, a été filtrée. Le liquide ne donnait 
pas de coloration par l’iode, mais précipitait faiblement par l'alcool. 

Il renfermait : 


Matos ee ER RENE Ur 2er,494 0J, 
Dextrines ARE ERA AAA 05,493 


Cette faible quantité de dextrine ne tarde pas à disparaitre, et 
quand on examine une fermentation âgée, on ne trouve plus que 
du maltose sans dextrine. Si le milieu est additionné de craie, 
tout le maltose peut disparaître, si bien que le liquide filtré ne 
donne plus ni réduction ni déviation. 

Comment se fait la disparition de la dextrine ? 

L'expérience va nous montrer que la dextrine fermente à son 
tour sous l'influence du bacillus orthobutylicus. 

Fermentation de la dextrine. — Nous nous sommes servis, 
dans nos expériences, de dextrine blanche, colorable en pourpre 
par l’iode, entièrement soluble dans Peau, ne renfermant pas 


plus de Oër,3 pour cent de cendres et ne donnant avec le réactif 


cupro-potassique que des traces de réduction. 
Cette dextrine, en solution dans le liquide nutritif de la 


El. : 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 387 


page 357, fermente facilemeut quand on l’ensemence avec le 
Bacillus orthobutylicus. 

Une fermentation de cette nature, sans carbonate de chaux, 
examinée le cinquième jour, contenait 1 0/0 de dextrine et 
3,20 0/0 de maltose. 

Pour rechercher si cette transformation de la dextrine en 
maltose a lieu sous l’influence d’une diastase sécrétée par le 
bacille, nous avons ajouté à un même volume d’une solution de 
dextrine, 10 c. c. du liquide en fermentation additionné d’essence 
de moutarde, et 10e. e. du même liquide préalablement chautfé à 
100° pendant 5 minutes, afin de détruire la diastase, si elle existe. 

Les deux flacons ont été portés à l’étuve à 35° et examinés le 
lendemain. Le liquide chauffé est resté ce qu’il était la veille. 
Dans le liquide non chauffé il y avait 27,7 0/0 de dextrine trans- 
formée en maltose. 

Le Bacillus orthobutylicus sécrète done une diastase capable 
de saccharilier la dextrine, soit qu'il vive dansle milieu dextrine, 
soit qu'il vive dans le milieu amidon. 

En effet, une expérience faite dans les mêmes conditions 
que la précédente, en ajoutant à une solution de dextrine le li- 
quide filtré d’une fermentation de pommes de terre, nous a donné 
51 0/0 de dextrine transformée en 24 heures. 

Inversement, le bacille qui a vécu sur le milieu dextrine pro- 
duit une diastase capable de saccharifier l’'amidon. 

Dix centimètres cubes d’une solution de dextrine en fermen- 
tation ajoutée à de l’empois d’amidon, dans les mêmes conditions 
que ci-dessus, ont liquéfié cetempois au bout de deux jours, et le 
liquide filtré contenait 2,15 0/0 de maltose et 1,61 0/0 de dextrine. 

ILest donc probable que la diastase sécrétée est unique: c’est | 
une sorte d’amylase qui se différencie de l’amylase du malt par la 
propriété qu’elle a de saccharifier facilement la dextrine. 

Dans la fermentation, cette saccharification est accompagnée 
de la destruction des produits formés, et du renouvellement 
incessant de la cause agissante : aussi la saccharification est-elle 
complète. Il est en effet démontré par les expériences de 
MM. Duclaux ‘, Lindet* et Dubourg * que l’action d’une diastase 

1. Duczaux, Microbiologie, p. 165. 


2. Observations sur la saccharification par la diastase (C. R., mars 1889). 
3. Dusourc. Recherches sur l'amylase de l’urine (These, 18S9). 


en ST 
7 « 


388 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


est gènée par la présence des produits de dédoublement qu'elle 
engendre. 

De là les différences que nous constatons entre l’action de la 
diastase du B. orthobutylicus agissant seule, et l’action combinée 
de cette même diastase et du ferment organisé. 


Nous allons maintenant passer en revue les divers résultats 
que nous ont donnés les matières amylacées, pomme de terre, 
amidon, dextrine, inuline, etc. 

Ce sur quoi je voudrais appeler l’attention, e’estsur le nombre 
considérable de corps de nature variée que peut faire fermenter 
le bacille et sur les dissemblances que peuvent présenter, dans 
ces fermentations, des corps de même formule chimique. 

Toutes les fois que je le pourrai, je résumerai l'histoire de 
chaque fermentation par l'équation qui la représente le mieux. 
Cette équation donne directement le nombre des molécules 
d'alcool, d'acide acétique et d'acide butyrique produites par la 
fermentation. Il est clair, d’après ce que nous avons vu jusqu'ici, 
que ces nombres sont un peu contingents, et varient suivant la 
nature et l’âge de la semence, les conditions extérieures de la 
fermentation, son état plus ou moins avancé, etc. Mais c’est là pré- 
cisément le fait nouveau de ces études, et en montrant mainte- 
nant les variations possibles dans la formule de fermentation de 
corps du même groupe, je continuerai à prouver qu'il n’y a pas 
de formule possible. 


MATIÈRES AMYLACÉES. — A. Pommes de terre. 
Origine de la semence. . . .. CAES Pomues de terre. 
Age deddsemence ccm ee 2 jours. 

Durée de la fermentation . . . . . 15 jours. 


100 c. c. de la liqueur fermentée renferment : 


Sans craie, Avec craie, 

Alcool butylique . . ee 0,280 0,042 
Acide acetique” 0-2 0,077 0,092 
Acide butyrique. . . . . . . 0,088 0,819 
Acide formique #2" Traces. 0 
a 4 1 
Rapport DNS LEoS 5 G 


B. Empois d'amidon. 


Nous avons fait usage de fécule de pomme de terre, qui 


BACILLUS ORTHOBUT Y LICUS. 389 


nous donnait à l'analyse les chiftres suivants : 


NON OU ee RE ru Ne Ne 80,12 
DNS dr rc RSR ENT 9 ANS SPORE PAS ete A 45,60 
COTES RS ACL LETTRE TON 0,34 
Substances diverses . . . . . . .. RE AE RE 3,94 

100.00 


Pour préparer l’empois, nous prenions 3 parties de cette 
fécule pour 100 parties de liquide nutritif! et nous stérilisions le 
tout à 120° pendant 3/4 d'heure. Ce temps est nécessaire si l’on 
veut avoir une stérilisation complète: sinon, on s'expose à des 


insuccès. 
1° Empois sans craie. 
Concentration: 3 0/0, soit 25°,40 d’amidon vrai. 
Origine de la semence. Pommes de terre. 
Age de la semence . .. 4 jours. 
Durée dela fermentation 5 mois (juillet-novembre). 
Maltose restant °/,.. . . 1,174 
Destrmes es tire 0 
Amidon consommé . . . 15,29 environ, soit 53,7 2/4. 


Formule approchée : 
ISCSH 1005 + 22H20 — 12C:H 100 + C2H:0? + 3C:H802 + 46C0°2 + 76H, 


2° Empois avec craie. 


Concentration . . . . .. 30/,, soit 2:",40 d'amidon vrai. 
Origine de la semence. . Pommes de terre. 

Age de la semence... . . 4 jours. 

Durée de la fermentation. 5 mois, 

Maltose restant °/,. . . . 0 

extreme se Auter 0 

Amidon consommé . . . 227,40, soit 100 °/,. 


Formule approchée : 
13C6H 1005 — 2C:H100 + 3CH:0? + 12C*H$0° + 16C0? + H?0. 


C. Dextrine. 


Concentration de la solution . . . . . . . .. 4,180 °/, 
Onsinerdela semences re Les cr. Dextrine. 
Mse de lalsemerees LAC Ar NS x 5 jours. 
Durée: de la fermentation. . . . - : : . . 3) jours. 


19 Dertrine sans craie. 


100 c. c. de la solution renferment après fermentation : 


4. Voir page 357. 


900 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Maltose. . 2,800 correspondant à dextrine transformée : 2,651 

Dextrine. 0,864 0,864 

TOtAN RENTE RS RES ONE NE TE 3,915 
Dextrine consommée . . . : . . .. 0.665, soit 15,7 17, 


Formule approchée : 


9C6H100$ + 9H20 — AC4H00 + C2Hi02? + AC H80? + 20C02 + 32H. 


20 Dextrine avec craie. 


100 c. c. de la solution fermentée renferment : 


Maltose. . . 23° correspondant à dextrine . . . 45r,89 
Dextrine . . 0 
Dextrine consommée . . . . . . . .. 2er,30, soit 55 0/, 


Formule approchée : 
A2C5H:005 + 6H20 — 6C{H100 + 2C2H402 + 5C'H$0? + 24C0? + 24H. 
D. Jnuline. 


L'inuline dont nous nous sommes servis donnait à l'analyse 
les chiffres suivants : 


PAU a I DER ARR RD DEP AT TER pe EEE PS RES 10,88 
CENURES PEAR ETES ER M EE PT RE 0,9% 
uinuhiaéipar différence sex ot Mec LErnpne 88,18 

DO PRES NET RON Fr En AIR 


2 grammes de cette substance en solution dans 100 €. c. don- 
naient à 15° une déviation de 3——1°,40. Ce qui, en tenant 
compte de l’eau et des cendres, conduit à [4},= — 399,7, 
en considérant l'inuline comme anhydre; et à la formule 
[a], = — 36°,1 pour CSH'°05 + H20. 

Elle ne donnait aucune réduction avec la liqueur de Fehling. 

Pour doser l’inuline dans nos liqueurs, nous nous sommes 
contentés d’évaporer la liqueur à 100, et de défalquer du poids 


de l'extrait sec Le poids des matières solides autres que J'inuline. 
Nous avons dû employer cette méthode approximative, faute de 
procédés plus exacts. 

Nous ne pouvions songer à saccharilier l'inuline à 1000, ni 
encore moins à 120°, au moyen d’un acide minéral, le lévulose 
formé dans ces conditions s’altérant facilement à la chaleur. 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 391 


D'ailleurs, comme nous avons loujours opéré de la mème 
manière, nos résultats restent comparables. 

La fermentation de l’inuline présente quelques particularités 
intéressantes que nous allons faire-connaitre. 

L'inuline est consommée par le Bacillus orthobutylicus sans 
subir de transformation préalable. En aucun cas, nous n'avons 
constaté la présence de sucre réducteur dans nos liqueurs. Ce fait 
est à rapprocher de ce qui se passe avec la dextrine et lamidon 
qui, possédant la même formule que linuline, sont toujours 
dédoublés en maltose par le ferment. La diastase de notre 
bacille n’a donc aucune action sur cette substance. 

Nous avons déjà dit, dans la deuxième partie de ce travail, que 
l'inuline, ensemencée avec une semence ayant vécu dans le même 
milieu, donnait peu d'alcool, quelle que soit la réaction du milieuf 

Voici les chiffres que nous avons obtenus : 


Fermentation d'inuline. 


Concentration de la solution. . . . . . .. 2er 07, inuline vraie. 
Onemedelarsemence rte re; Inuline. 
Age dela sémence 1%. Tue ae “4e { jour. 
Durée de la fermentation. . . . . . . . . . 38 jours. 


1° Inuline sans craie. 


Inuline consommée _: . . -: . .,. .. 0,650, soit 32,5 07. 


Formule approchée : 
17C6H:005 + 36H20 = C:H!°0 + 2C2H10? + 12C{H80? + 46C02 + 1926H. 
Inuline avec craie. 
Inuline consommée. . - . . . . .. 481,33, soit 66,5 0/,. 
Formule approchée : 
12C6H1005 + H20 = C‘H!00 + 2C2H102 + 12C*H802 + 16C0? + SH. 


La production de l'alcool, déjà très faible dans les exemples 
précédents, peut être réduite à zéro quand on emploie une semence 
âgée. Cette imfluence de Päge de la semence à été démontrée 
abondamment dans la deuxième partie. (Voir page 374.) Le fait 


suivant vient encore confirmer la règle. 


| ee. = DER 7 | _ 


392 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Une fermentation d’inuline de faible concentration (0,76 0/0), 
ensemencée avec une semence âgée de 20 jours et provenant 
de pommes de terre, est examinée 42 jours après. La solution 
est additionnée de carbonate de chaux. 

Toute l’inuline a disparu. On ne peut constater que des traces 
indosables d'alcool. 

Formule approchée : 


 ACEH 100$ + 4H20 = C2H:0? + 4CH$0? + 8C0? + 16H. 


FERMENTATIONS DES SUCRES DE FORMULE C°H'°0°. — A. Glucose 
et sucre interverti. — Dans la deuxième partie de ce travail nous 
avons déterminé les circonstances qui faisaient varier les for- 
mules de fermentation du glucose et du sucre interverti. Les 
détails dans lesquels nous sommes entrés nous dispensent de 
donner de nouveaux exemples de fermentation. Nous n’ajoute- 
rons que quelques mots sur certaines particularités que présente 
la fermentation du sucre interverti, et, entre autres choses, sur 
l'inégalité de consommation des sucres qui le composent. 

Une solution de sucre interverti, en contenant 4,83 0/0, est 
examinée au bout de 2 mois de fermentation. 

On trouve à l’analyse qu'elle ne contient plus que du lévu- 
lose, en poids de 1*,93. Le poids de sucre consommé est de 
2,90. 

En d’autres termes, pour 200 parties de sucre interverti 
formées de 100 parties de glucose et de 100 parties de lévulose, 
on à : 


Avant la fermentation. Après. 


CMICOSC RER TEE A NI Re 100 0 
HÉVULOSE RENÉE PEER 100 80 


Le lévulose offre donc au B. orthobutylicus une résistance 
plus grande que le glucose. 

Nous citerons encore une expérience dans laquelle nous 
avons fait fermenter un mélange de saccharose et de sucre inter- 
verti. Îci encore, les sucres sont consommés en quantités 
inégales, et la quantité pour cent de sucre détruit varie 
avec la réaction du milieu. Une solution se composant de : 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 393 
Saccharose. . . .. RE ER NE ALES: de 18°,380 0/7, 
Sucre interverti. . . . .. SES NOUS HE 28r,032 


est répartie dans deux ballons dont l’un est additionné de craie. 
La fermentation est examinée 46 Jours après. 


Sucres existant Sucres consommés 


— U . U [OT 
avant la fermentation, après fermentation, Pour 100, 


Sans craie. 


Saccharose . . . 187,380 0,100 ne 
Glucose . . . .. 4sr,016 0,286 98,1 
Lévulose -: :.. 48,016 0,056 »,9 
Avec craie. 
Saccharose . . . 48r,380 . 0,755 54,7 
Glucose 18,016 0,912 89,7 
Lévulose . . .. 16r,016 0.762 75,0 
B. Galactose. — Le galactose dont je me suis servi avait été 


préparé par interversion du lactose et purifié par plusieurs 
cristallisations dans l'alcool à 800. Il avait son pouvoir rotatoire 
normal. 

Nous ne donnerons qu’une seule fermentation de galactose, 
additionné de craie. Les produits s'y rencontrent dans les mêmes 
proportions qu'avec le glucose. 


Concentration de la solution. . . . . . . .. 30/5 
Oréinede ItSementes "Rite rire Galactose. 
Kgetde-la'semencer.-7.>.:..: CRIE Re 2 jours. 
Durée de la fermentation . . . . .. RTE 5 mois. 
Quantité de galactose consommé. . . . . . .  2:,46 — 82 °J, 


Formule approchée : 
8CSH1206 — 4C#H100 + C2H4O? + 4CH80? + 1400? + 18H + 6H°0. 


FERMENTATIONS DES SUCRES DE FORMULE C°H'°05. — Arabinose. 
— L'arabinose sur laquelle j'ai opéré avait été préparée par 
saccharification de la gomme de cerisier, à l’autoclave à 120°, 
avec 2 0/0 d'acide sulfurique. Après une cristallisation dans 
l'alcool, j'ai examiné son pouvoir rotatoire, que j'ai trouvé égal 
à (x), = + 98°. Ce nombre étant plus faible que celui donné par 
Kiliani ! (+1059,1), j'ai tenu à vérifier l'identité de mon sucre 
par les caractères suivants. 


4. Kicraxt, Deulsch. chem. Gesellsch., t. XIX, p. 30, 29. 


394 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


> grammes de sucre traités par 20 ce. c. d'acide azotique et 
évaporés au tiers : pas d'acide mucique. 

Avec l'oricine et l'acide chlorhydrique : coloration violet 
bleu’. 

C'était done bien de l’arabinose. 


Arabinose avec craie. 


Concentration de la solution. . . . . . . .. on 2 
Origime/de lasemence re ere Arabinose. 
Agerde 14/SémeEnCe EE ETAT Re 4 jours. 
Durée de la fermentation. . . . .. TERRE 3 MOIS. 
Quantité d'arabinose consommée . .  . .. 2,18 soit 70 °/,. 


Si l’on néglige la petite quantité d'alcool produit, la formule la 

plus simple est la suivante : 
GCSH100$ + 4H20 = 4C:H80? + C?H:02 + 12C0? + 22H. 
En tenant compte de l'alcool, il faut : 
42CH100$ + 14H20 = 2C*H100 + TCH1O0? + 28C:H80?2 + 76C0? + 176H. 

Malgré sa formule en C*, l’arabinose se conduit donc vis-à- 
vis du Bacillus orthobutylicus comme un glucose ordinaire, sauf 
pour l'alcool, qui est produit en quantité beaucoup plus faible. 


FERMENTATIONS DES SUCRES DE FORMULE C/2H°2°0°1. — A, Saccha- 
rose. — On à longtemps admis que nul être organisé ne pouvait 
assimiler le sucre de canne qu'après l'avoir interverti. Depuis 
quelques années, divers expérimentateurs ont rencontré des bac- 
téries qui faisaient exception à cette règle. Je signalerai, entre 
autres, la levure de M. Roux, le bacille amylozyme de M. Per- 
drix, et divers ferments lactiques *. 

Le Bacillus orthobutylicus offre un nouvel exemple d’assimila- 
tion directe du sucre de canne. Dans aucune de nos fermentations 
de saccharose nous n'avons pu constater de réduction sensible, 
et la rotation de la liqueur a toujours été dextrogyre. 

La recherche de la sucrase nous à naturellement donné un 
résultat négatif. 

Mais, comme on pouvait supposer que la transformation du 

4. Benrranp, Sur quelques réactions colorées des hydrates de carbone, (B. Soc. 
chim., VI, 259.) 
2. Bourouecor, Sur le non-dédoublement préalable du saccharose et du maltose 


dans leur fermentation lactique. (Journal de Pharmacie et de Chimie (5), VIH, 
18553, 420 


48 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 39) 


sucre se faisait à l'intérieur des. cellules du bacille, nous avons 
filtré une fermentation de sucre de canne, du volume de plusieurs 
litres, de manière à recueillir le ferment. Celui-ci, lavé rapide- 
ment à l’eau distillée, fut broyé au mortier avec de la nouvelle 
eau et mis à digérer dans ce liquide à 35°, pendant plusieurs 
jours, en présence d'essence de moutarde. Dans ces conditions, 
nous pouvions espérer que si le bacille renfermait quelque dias- 
tase inversive, celle-ci se diffuserait dans le liquide ambiant. 

Il n'en arien été. La liqueur filtrée, toujours additionnée d’es- 
sence de moutarde et ajoutée à une solution de saccharose, a été 
sans action sur elle, même après un temps très long. 

La transformation du saccharose à l’intérieur des cellules 
du bacille est donc peu probable. 

Le saccharose non-additionné de craie fermente difficilement. 
Dans l'exemple que nous donnons plus loin, il n’y a seulement 
que 15 0/0 du sucre employé de détruit après 2 mois. 


Fermentation de saccharose. 


Concentration de la solution. . . . . . .. 327,08 0/,. 
Origine dela Semence” 2": ...%.: Saccharose, 
Aee de latsemence #2 Re: 1 jour. 
Durée de la fermentation. . . “: ..: . , 2 mois. 


a. Sans craie. 
Saccharose consommé . .- . ..... : 0,469, soit 15,1 9/0. 


RICO bUIIQUe PER Le à PE TE 0,228 
Aeide racétique enr PRET NE, 0 EE, 0,076 
Acide DuLyrIque LR Ne 0 TRS EE EP 0,392 
«l 2 
RADARS RENE EN ie PURES NN - 


Il n’est pas possible de traduire ces résultats par une for- 
mule unique. C’est ce qui arrive d'ordinaire pour le tout pre- 
mier début d'une fermentation active, et pour les fermentations 
qui s'arrêtent lorsqu'il n’y a qu'une très faible proportion de la 
matière fermentescible détruite. 

La petite quantité de substance consommée est ici une preuve 
de la difficulté qu'éprouve le bacille à attaquer le sucre de 
canne dans un milieu qui devient promptement acide. De là des 
irrégularités dans la marche de la fermentation, qui se tradui- 
sent par l'impossibilité de trouver une formule simple du 
phénomène. 


399 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


b. Aver craie. 


Saccharose consommé. . . . . . . .. COTES AU 


Formule approchée : 

6G2H22011 + 2H20 — 40H10 + 3C2H‘0? + 6C:H80? + 26C0? + 48H. 

Ici la marche de la fermentation est régulière et la formule 
se simplifie. 

Nous donnerons encore les résultats d’une fermentation dans 
laquelle la consommation du sucre a été totale, mais dont la 
durée s’est élevée à 4 mois: cette augmentation dans la durée 
a eu pour effet d’abaisser le taux de l'acide butyrique; e’est là 
une confirmation de la règle que nous avons donnée plus haut. 


Fermentation de saccharose avec craie. 


Concentration de la solution. . . . . . . .. 43010 
Origine/de la semence tierces Saccharose. 
Agetdle lassemence eee EEE { jour. 

Durée de la fermentation. . . . . . . . . .. 4 mois. 
Sacecharose CONSOMMÉ Se Ce 38r,45, soil 100 ?/,;. 


Formule approchée : 
21C12H22011 + 91H20 — 14C'H 100 + 6C2H:02 + 12CH80? + 136C0? + 384H. 


B. Maltose. 


L'étude de la fermentation du maltose se confond avec celle 
de l’amidon et de la dextrine, puisque ces substances sont trans- 
formées intégralement en maltose par le B. orthobutylicus. Nous 
savons aussi que le maltose n’est pas interverti, puisque nous 
n'avons jamais rencontré de glucose dans lesliqueurs. D'ailleurs, 
dans une expérience où nous avons fait agir directement le 
bacille sur le maltose, nous n’avons pas constaté davantage 
d’inversion. 

De même que le saccharose, le maltose ne subit pas l'inver- 
sion et est consommé en nature. 


C. Lactose. 
Le lactose, comme les autres saccharoses, n’est pas dédoublé 
par le Bacillus orthobutylicus. 
Fermentation de lactose additionné de craie. 


Concentration de la solution." 3:900)/): 
Origine dé la semence" 2 nr Lactose. 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 397 
Age de la semence . .. 2 As 2 PR SL HER À 4 jours. 
Durée de la fermentation APE EE à EL 3 mois. 
Lactose consommé . . . .. EST PL AA PC D OUT 


Formule approchée : 
3C!'?H220!1 = C'H100 + C2H10? + 4C'H80? + 14C0? + 32H. 


ALCOOLS POLYATOMIQUES. — A. Mannile. — La mannite ne 
possédant pas de pouvoir rotatoire appréciable, et ne réduisant 
pas la liqueur cupropotassique, nous avons dû, pour la doser, 
opérer comme pour l’inuline, c’est-à-dire défalquer du poids de 
l'extrait sec toutes les substances autres que la mannite et 
déduire Le poids de celle-ci par différence. 

La fermentation de la mannite est lente. 

Dans l'exemple que nous donnons, une solution à 3 0/0 
environ renfermait encore 52 0/0 de mannite après 46 jours de 
fermentation en présence de craie. 

Une analyse de gaz faite dans les mêmes conditions que celle 
de la page 25, c’est-à-dire à l’aide de la trompe de Schlæsing, 
nous montre que la quantité d'alcool formé va constamment en 
augmentant, comme dans la fermentation du glucose. 

En effet : 20 c. ec. de solution de mannite à 2,23 0/0 sont 
ensemencés et mis immédiatement à l’étuve à 35°. 


Volume total k IT 
Durée. à Oo CO? Il apport Co? 
et 760mm, en volume, 
64,9 
LA ET TT PÈRE 1'7ec,42 6,10 11,32 = 
J L 35,1 
_ er Le ce 42,1 
SRJOUES. 2-17 20cc,84 2,06 8,10 = 
J é é D7,9 
_ te 2 41,9 
15 jours . . 36ec,13 21,12 15,01 eu 
D8,) 
: 10,2 
20 jours. - Dec, 12 3,42 2,30 = 
) jours : 57.8 
< a : 46,6 
Total . . 80e, 1 42,10 37,41 7 
D 


Si nous tenons ici le mème raisonnement que pour le glu- 
cose, nous voyons qu'en supposant la mannite fermentant sans 
donner d'alcool, on aurait : 


CSH1406 — CiH802 + 2C0? + 6H. 


398 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Rapport en volume : 


(ll 60 


1 
”! 


C0? 40° 
Si au contraire on n'avait que de l'alcool dans la réaction, 
celle-ci deviendrait : 
CSH*06 = C{H100 + 260? + 9H + H°0, 
Rapport : 


Ce sont précisément les rapports que nous obtenons au com- 
mencement et à la fin de la fermentation. 


Fermentation de mannite avec craie. 


Concentration de la solution . . . . . .. 33,39 0/,. 
Origine de la semence . . . - . . .. .. Mannite. 
Aterdeafementes 2 Pare 27 ec 4 jours. 
Durée de la fermentation. : . : .:. . ..: 46 jours. 
Mannite Consommee 2e Agr,64— 48 0}. 


Formule approchée : 
4C6H 1406 = 2C:H100 + C2H*02 + 2CH802 + 6CO? + 8H + 4H?0. 


B. Glycérine. 


La glycérine se trouvant mélangée dans nos fermentations 
à de l'alcool butylique et à des acides volatils, ou à leurs sels de 
chaux, son dosage présentait certaines difficultés, d'autant plus 
qu'une méthode précise d'analyse de cette substance reste encore 
à trouver. 

J'ai fait usage de la méthode suivante due à M. Pasteur. 

Un volume déterminé de liquide, neutralisé exactement par 
de l’eau de chaux, était évaporé lentement au bain-marie d’abord, 
et finalement dans le vide sec. Le résultat était repris par un 
mélange d'alcool et d’éther. L’éther étant distillé dans un petit 
ballon, on dissolvait la glycérine dans un peu d’eau qu'on évapo- 
rait ensuite lentement au bain-marie, dans une petite capsule de 
platine, en faisant une pesée tous les quarts d'heure. Dès que la 
perte de poids entre deux pesées n’était plus que de quelques 
milligrammes et devenait constante, on pouvait considérer 
celle-ci comme étant due à l'évaporation de la glycérine On 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 399 


adoptait done, comme poids, la pesée à parür de laquelle la perte 
de poids devenait constante. 

Nous n'avons pu constater, dans le cours de nos fermenta- 
tions, la formation d'aucun corps réducteur, mais, en suivant 
exactement la méthode générale que nous avons décrite dans la 
première partie (voir page 361), nousavons rencontré, ,entrès faible 
quantité, il est vrai, de l’acidelactiquegauche, caractérisé par son 
sel de zine. Aucune des fermentations que nous avons examinées, 
autres que la glycérine, ne nous a donné ce corps. Plusieurs 
essais différents, faits dans des conditions de pureté absolue, 
nous ont donné le même résultat; il ne s'agit donc pas là d'un 
accident d'expérience, ni d'une association microbienne. D’ail- 
leurs, la quantité d'acide lactique formé est très faible et nous 
avons dû la négliger dans équation de la fermentation. 


Fermentation de glycérine. 


Concentration de lasolution. 0.777 287,53 0/5 
Origine-dela:sémence.e.,. 5% Eu Pommes de terre. 
APE SEMENCE RMC ENS Mer Monroe l jour. 

Durée de la fermentation, . . . . . . . . . . )2 jours. 


A. Glycérine sans craie. 
Quantité de glycérine consommée . . . 0,13— 29207; 


{ gramme de glycérine donne : 


Alconbubrliques teur EN EE AT: 0,643 
ACIDE ACÉDIQUE ÉD nE L LT ne li re 0,026 
ACTES DEMI RTE Autre au à ee 0,153 
a Ë ! 
RApORRe Te me MR se i 
Acide tactique Ratche St, 01.1: 2€ 12. races, 


Il n’est pas possible d'établir une équation unique. 


B. Glycérine avec craie. 


Glycérine consommée..æ. : : : , .-, 1 S9= 74907 


4 gramme de glycérine douue :- 


Calculé, 
MEDol DubyiqUue: 77. 4 Re 0,075 0,080 
Acide Acétique 5-72 M2 ua, 0,025 0,026 
Acide butyrique. . AR MARS 0,228 0,229 
Remdedaelique es 26 7. (ut Traces. 
(1 I 
R — PR NE = 
apport 5 G 


400 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
Formule approchée : 


DOCH$O$ + 39H20 = SC H100 + 2C2H402 + 12CH$0? + 78CO? + 324H. 


RÉSUMÉ ET CONCLUSIONS 


Dans la première partie de ce travail, j'ai décrit un bacille 
anaérobie nouveau que j'ai isolé et auquel j'ai donné le nom de 
Bacillus orthobutylicus. 

J'ai établi sa morphologie, ses fonctions physiologiques et 
ses caractères distinctifs. 

J'ai indiqué les méthodes employées pour le cultiver à l’état 
de pureté, et déterminé la nature des produits qu'il donne avec 
les différents milieux. Ces corps sont: l'alcool butylique normal, 
l'acide acétique, l'acide butyrique normal, et comme gaz : l'acide 

carbonique et l'hydrogène. 

J'ai décrit les Hihede employées pour doser ces His 
substances dans les fermentations. 

Dans la deuxième partie, j'ai étudié : 

1° L'Influence de la durée de la fermentation. 

J'ai montré : 

1° Que le rapport entre la substance fermentescible consom- 
mée et les produits qui résultent de sa destruction, n’est jamais 
constant pendant le cours d’une fermentation ; 

29 Que la quantité d'alcool butylique va en augmentant tandis 
que le poids des acides butyrique et acétique va en diminuant; 

3° Que le rapport : va en diminuant en milieu neutre et en 
augmentant en milieu acide ; 

4° Que la formule de l'équation est d'autant plus simple qu'il 
y à plus de matière consommée ; 

5° Que la fermentation est d’ autant plus régulière que la con- 
centration de la solution est plus faible ; 

6° Que l'acide formique n'apparait que comme produit de 
souffrance, et qu'il peut être consommé dans le cours d’une 
fermentation. 

20 L’Influence de l’âge de la semence. 

J'ai démontré : 

19 Que l’âge d’une semence a une influence considérable sur 
la marche d’une fermentation : 

2° Qu'au point de vue de la production de l'alcool butylique, 


BACILLUS ORTHOBUTYLICUS. 401 


l’activité d’une semence croît pendant les premiers jours, pour 
décroitre ensuite au fur et à mesure de la formation des 
spores ; 

3° Que la production d'acide butyrique suit une marche 
inverse : 

49 Qu'une semence vieillit d'autant plus rapidement que le 
milieu où on la cultive est plus fermentescible. 

5° L'Influence de l'éducation de la semence. 

J'ai démontré : 

1° Que la nature du milieu sur lequel on cultive une semence 
communique à celle-ci des propriétés spéciales ; 

20 Que si on cultive le B. orthobutylicus sur de linuline, milieu 
dans lequel il ne donne que des traces d'alcool, et qu'on le 
reporte sur glucose, il donnera dans ce milieu une quantité 
d'alcool trois fois supérieure à la normale : 

3° Qu'inversement, cultivé sur glucose, il acquiert la pro- 
priété de faire avec de linuline de l'alcool en notable proportion. 

Ces faits sont comparables à ce qui se passe avec les microbes 
pathogènes. 

49 L’Influence de la réaction du milieu. 

J'ai fait voir : 

1° Que lorsque le milieu s’acidifie, la proportion d'alcool 
formé augmente en même temps que l'acide diminue ; 

20 Qu'inversement l'alcool diminue et :l’acide augmente 
quand le milieu est maintenu neutre par addition de carbonate 
de chaux. 

Dans la troisième partie, j'ai passé en revue l’action du Bacil- 
lus orthobutylicus sur les divers milieux où on peut le cultiver: 
ces milieux sont: 

Les matières amylacées (pommes de terre et empois d’ami- 
don), la dextrine et l'inuline, le glucose et le sucre interverti, le 
galactose, l’'arabinose, le saccharose, le maltose et le lactose, la 
mannite et la glycérine. 

J'ai établi pour chacune de ces substances l’équation de sa 
fermentation. 

J'ai signalé en outre les particularités suivantes : 

1° La bacille sécrète une diastase qui transforme la dextrine 
en maltose; par suite, dans la fermentation des matières 
amylacées, on ne trouve que du maltose sans dextrines ; 

26 


02 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


ts 


2° Les substances lévogyres, telles que le lévulose et l'inuline, 
présentent certaine résistance à son action ; 

30 Il fait fermenter les saccharoses sans les intervertir ; 

49 Il donne toujours, avec la glycérine, de petites quantités 
d'acide lactique gauche ; 

5° L’équation de la fermentation varie avec la nature de la 
substance fermentescible. 

En résumé, la fermentation étant le résultat d'un acte vital 
doit être influencée par les variations multiples auxquelles sont 
soumis les êtres vivants. 

Chaque cellule du ferment, soumise aux lois immuables de 
la vie, passe par un maximum activité, puis vieillit et meurt; 
si l’on réfléchit que dans le courant d’une fermentation on 
rencontre à la fois des cellules qui viennent de naitre et des 
cellules en voie de dégénérescence; si l’on ajoute que les pro- 
duits qui prennent naissance peuvent, à leur tour, entraver 
l'action de ces cellules, on comprendra combien est illusoire 
lidée de vouloir représenter Le phénomène par une formule 
unique et simple! 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA ET LES VIBRIONS 


Par EL. METCHNIKOFF 


PREMIER MÉMOIRE 


Sur la propriété préventive du sang humain vis-à-vis du vibrion 
de Koch. 


Ï 


APERÇU DES ACQUISITIONS NOUVELLES SUR LE CHOLÉRA 


Malgré la découverte d’un vibrion particulier dans lintestin 
de la grande majorité des cholériques, la microbie du choléra 
reste encore bien obscure sous beaucoup de rapports. Cela tient 
surtout à cette circonstance que le choléra est une maladie spéci- 
fique de l’homme. Les animaux sur lesquels on peut expéri- 
menter sont réfractaires à celte maladie. 

Comme nous tenons, avant d'entrer dans le sujet particulier 
de notre élude, à donner au lecteur, qui n’a pas présents à 
l'esprit les détails de publications déja très nombreuses, un 
aperçu sommaire de l’état actuel des connaissances microbiennes 
sur le choléra, nous l'entreliendrons d’abord de l’étiologie de 
cette maladie; nous passerons ensuite aux résultats de l’expéri- 
mentation sur la maladie des animaux, provoquée par le bacille 
virqule. 

D'après les recherches de Koch et deses élèves, le choléra est un 
état particulier de l’homme dans lequel l'intestin renferme des vibrions 
cultioables sur la gélatine nutritive à 10 °/, et produisant une liqué- 
faction moyenne. A l’époque de la découverte de Koch, on 
admettait que ces vibrions se trouvaient dans tous les cas de 
choléra épidémique, bien caractérisé au point de vue clinique. 
Mais pendant la dernière épidémie on a constaté que certains 
malades, qui présentaient tous les symptômes classiques du 
choléra asiatique, peuvent ne pas avoir dans leur intestin de 
bacilles virgules (vibrions de Koch). Ces cas ont été regardés 


\ 


404 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


comme des cas de choléra nostras. Poursuivant ces études, on a 
constaté que le vrai choléra asiatique était toujours accompagné 
d'épidémies de choléra nostras. Et, ce qui est remarquable, c'est 
que ce choléra nostras, sans bacilles virgules, apparaît même en 
hiver. Ainsi M. Rumpel: en a observé trois cas survenus à Ham- 
bourg pendant les froids rigoureux de cet hiver, lors d’une 
petite épidémie de vrai choléra. 

D'un autre côté, on insistait autrefois sur ce fait que le bacille 
virgule ne se trouve que chez des individus atteints de choléra 
léger ou grave. A présent on a abandonné cette opinion, car on 
a constaté ce microbe dans les selles normales d'individus bien 
portants, mais se trouvant dans des milieux atteints par l’épidémie 
cholérique (Rumpel, {. c.). Les partisans de la théorie de Koch 
ont reconnu que le bacille virgule peut se cultiver dans l'intestin 
de l’homme sans provoquer nécessairement le choléra. 

En dehors de la présence constante et exclusive du vibrion de 
Koch chez les cholériques, on a invoqué encore, comme argument 
principal du rôle étiologique de ce microbe, qu'il est absolument 
différent des autres bactéries. Lors des recherches faites en 1883 
et 1884, on pouvait penser, en effet, que le bacille virgule repré- 
sentait une espèce tout à fait particulière et toujours nettement 
distincte. Mais depuis on a découvert toute une série de vibrions 
très semblables, notamment ceux de Deneke et de Gamaleïa. 
Pour les distinguer du vibrion de Koch, il a fallu recourir à des 
caractères de faible importance : degré de liquéfaction de la 
gélatine, détails de forme, etc. Pour maintenir la spécificité du 
vibrion de Koch, on a dû se placer sur le terrain d’un monomor- 
phisme étroit. Les recherches multipliées sur le choléra, faites 
dans différentes parties du globe, ont ébranlé la doctrine de 
l'uniformité du vibrion cholérique. Les premières affirmations 
de M. Cunningham* sur la pluralité des espèces vibrioniennes 
chez les cholériques ont été accueillies avec scepticisme, cette 
pluralité ne se conciliant pas bien avec l’uniformité du vrai 
choléra. Mais M. Max Gruber, qui d’abord * s’est prononcé contre 
la multiplicité des vibrions cholériques, a dû bientôt modifier 
son opinion dans un sens contraire. Dans son travail publié 


. Deutsche medicin. Woch., 1893, p. 460. 
2. Archiv für Hygiene, 4892, t. XIV, p. 45. 
3. Transactions of the VIL Intern. Congress of Hygiene, vol. II, 1892, p. 41. 


PONS 


a nl Re 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 405 


avec M. Wiener !, il reconnait la possibilité de séparer le vibrion 
cholérique en plusieurs espèces voisines. M. Sclavo? admet 
aussi que le vibrion de Massaua, isolé par M. Pasquale, appar- 
tient à une espèce différente du type original découvert dans 
l'Inde. Mais les élèves de M. Kock (R. Pfeiffer, Wassermann, 
Gaffky, etc.) maintiennent l'identité spécifique de tousles vibrions 
cholériques, ce qui n’est possible qu’en admettant un pléomor- 
phisme très large. 

Les faits recueillis dans ces derniers temps compliquent 
donc la question de l’étiologie du choléra, qui sans cela présen- 
tait déjà bien assez de points difficiles et obscurs. 

Comme le choléra est une maladie essentiellement humaine, 
seule l’expérimentation sur l’homme pourrait résoudre le pro- 
bième. Plusieurs savants se sont prêtés à l'expérience et ont 
absorbé des cultures pures du vibrion de Koch. Mais, malgré 
toutes les précautions employées pour faire agir le virus, 
celui-ci n’a amené qu’une diarrhée non accompagnée du cortège 
classique des symptômes du choléra. Ni l’alcalinisation du sue 
gastrique, ni les écarts volontaires de régime, ni la prédispo- 
sition à la diarrhée, n’ont permis au vibrion de Koch de produire 
le vrai choléra. Il est vrai que M. Gaffky *, qui a fourni le virus 
à MM. Pettenkofer et Emmerich, a déclaré que la culture pro- 
venait d’un cas de choléra bénin. Mais cette objection ne 
s'applique pas à MM. Hasterlik et à ses collaborateurs, car 
ceux-ci ont absorbé dans quatre expériences un virus qui pro- 
venait d'un cas mortel de choléra ‘. Lorsque les vibrions ont été 
avalés sans alcalinisation préalable du suc gastrique, l'effet a 
éié presque nul; dans un cas seul où l’ingestion du virus fut 
précédée de celle de bicarbonate de soude, les expérimenta- 
teurs ont eu de la diarrhée simple. A ces six essais négatifs 
(Pettenkofer, Emmerich, Hasterlik et trois de ses collabo- 
rateurs) il faut ajouter encore un nombre plus grand d’ex- 
périences, relatées par M. Ferran. D'après cet observateur”, 
beaucoup de personnes qui n'avaient pas subi préalablement des 

4. Archiv für Hygiene, 1892, t. XIV, p. 254. f 
2. Rivista d’Igiene et Sanita publica, 1592, n° 19. 
3. Semaine medicale, 1893, p. 174. 

4. Wiener klin. Wochenschr., 1893, p. 167. 


5. Revendication de la priorilé de la découverte des vaccins du cholera. Barce- 
lone, 1888, p. 93. 


406 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


injections hypodermiques de bacille virgule, n’eurent qu'une 
« cholérine qui güérit spontanément », après l'absorption deÿ ou 
6 gouttes de cultures capables de tuer le cobaye en injection 
sous-cutanée. D'autres personnes, « vaccinées » préalablement, 
comme M. Ferran lui-même et son assistant, M. Pauli', ont eu 
également une diarrhée légère après l'absorption de quelques 
gouttes de culture, sans alcalinisation préalable de l'acidité 
gastrique. 

Dans un assez grand nombre d'expériences sur l’homme, 
l'effet du vibrion de Koch a donc été ou nul ou insignifiant, si 
on le compare avec la gravité du vrai choléra asiatique. Quelle 
différence sous ce rapport avec un autre spirille, celui de la 
fièvre récurrente, qui, inoculé à plusieurs personnes, leur donna 
toujours la maladie typique et complète ! 

= De quelque côté que nous envisagions l’étiologie du choléra, 
nous voyons que le problème reste très compliqué et que beau- 
coup de travail est encore nécessaire pour l’éclaireir. Il est donc 
tout naturel qu'un grand nombre de bactériologistes se soient 
mis à éludier l'histoire naturelle des vibrions, leur action patho- 
gène sur les animaux, et ceux de leurs produits capables de 
conférer l’immunité. 

Tout le monde aujourd'hui accepte que la maladie expé- 
rimentale provoquée par le vibrion de Koch, chez des animaux 
de laboratoire, notamment les cobayes, diffère essentiellement 
du choléra humain. Mais les uns considèrent cette maladie 
comme une vraie infection, tandis que pour d'autres elle 
est une intoxication. La divergence de vues qui s'est pro- 
duite sous ce rapport entre M. R. Pfeiffer et M. Gruber est 
prête à s’aplanir. Déjà M. Hafkine, en augmentant la viru- 
lence du vibrion cholérique par passages de cobaye à cobaye, 
avait fourni un argument à la théorie de l'infection. Dans sa 
dernière publication, faite en commun avec M. Wassermann, 
M. Pfeilfer * reconnaît que la maladie, provoquée chez le cobaye 
par injection périlonéale du bacille virgule, doit être considérée 
comme un processus mixte d'infection et d'intoxication. Mais il 
estévident aussi que, d'après les données si intéressantes fournies 


1. L'Inoculalion préventive contre le choléra morbus. Paris, 1893, p. 90-92. 
2. Zeilschr. f. Hygiene, 1893, t. XIV, p. 59. 


Lin ss LT OS 
pv” g | 
LA A 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 107 


par ces deux savants, il faut se ranger complètement à l'avis 
de M. Gruber, c’est-à-dire envisager la maladie du cobaye 
comme une vraie et simple infection. D'abord. il ne faut pas 
oublier que dans chaque maladie infectieuse les toxines micro- 
biennes jouent toujours un grand rôle. Mais surtout il faut 
tenir compte du fait, couslaté par MM. Pfeiffer et Wassermann, 
que les cobayes vaccinés contre le virus vivant sont tout aussi 
sensibles que les témoins vis-à-vis de la dose mortelle de 
toxine vibrionienne. Si les cobayes vaccinés ne sont pas immu- 
nisés contre l’intoxication, il est évident que la maladie, contre 
laquelle ils ont été rendus réfractaires, est une infection. 

Poursuivaut leurs études sur l'essence de cette immunité 
acquise par les cobayes, MM. Pfeiffer et Wassermann ont constaté 
plusieurs faits du plus haut intérèt. Je me permets de les men- 
tionner dans cet aperçu parce qu'ils touchent de très près au 
problème général de l’immunité. Ces observateurs se sont 
assurés de ce fait, à savoir : que la propriété préventive du sérum 
ne réside nullement dans un pouvoir antitorique, comme cela a été 
affirmé, surtout en Allemagne. Sous ce rapport, MM. Pfeiffer 
et Wassermann confirment les données qui ont été pour la 
première fois démontrées dans mon mémoire sur la pneumo- 
entérite des porcs ‘. Plus tard le même fait a été constaté dans 
mon laboratoire par M. Sanarelli * pour le vibrion de Gamaleïa 
(V. Metchnikowü), bactérie très voisine du bacille virgule de 
Koch. Pour ce qui concerne le vibrion de Massaua, je peux 
confirmer l'affirmation de MM. Pfeiffer et Wassermann, en me 
basant sur des recherches personnelles faites sur les toxines 
chauffées à différentes températures, ou puisées dans des cultures 
vieilles et devenues stériles. 

Même pour une maladie qui a un caractère toxique aussi 
prononcé que le « choléra » des cobayes, il reste vrai que 
l’immunité et la propriété préventive ne reposent nullement sur 
un pouvoir antitoxique quelconque. MM. Pfeiffer et Wassermann 
voient bien maintenant que cette immunité doit être attribuée à 
une propriété bactéricide de l'organisme. Pour M. Pfeiffer, qui 
depuis longtemps s’est prononcé en faveur de la théorie du pou- 


1. Annales de l’Inst. Pust., 1892, p. 296. 
2. Ibid., 1895, p. 236. 


408 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


voir bactéricide des humeurs, il était tout naturel de supposer 
que celui- ci se manifeste dans la maladie provoquée par le vibrion 
de Koch. Aussi, dans son premier mémoire sur le choléra, 
M. Pfeiffer a envisagé les phénomènes exclusivement au point 
de vue de la propriété bactéricide du plasma sanguin et du 
liquide des exsudats. Voilà pourquoi je dois noter avec une 
grande satisfaction la modification des idées de M. Pfeiffer. Dans 
son dernier travail exécuté avec M. Wassermann. il constate le 
peu d'importance de la propriété bactéricide des humeurs. Ainsi 
le sérum sanguin d’un convalescent du choléra était doué d’une 
propriété préventive très considérable et ne présentait cependant 
qu'un pouvoir bactéricide trop insignifiant pour expliquer 
l'immunité. Sous ce rapport, MM. Pfeiffer et Wassermann, eux 
aussi, arrivent à la même conclusion que M. Sanarelli dans son 
travail sur le vibrion de Gamaleïa. Je puis confirmer ce résultat 
pour les vibrions du choléra. 

Les deux auteurs allemands, dans leur étude sur l’essence de 
l'immunité, n’ont pas fait de recherches spéciales sur la propriété 
atténuante des humeurs, considérant probablement qu’elle ne 
joue aucun rôle dans ce cas. En réalité, les expériences que 
j'ai entreprises sur ce point ont démontré que, dans le « cho- 
léra » des cobayes, les choses se passent tout à fait comme dans 
la maladie provoquée par le vibrion de Gamaleïa, d'après les 
recherches de M. Sanarelli, c'est-à-dire que l’atténuation ne se 
produit pas. La prétendue atlénuation n’est que l'effet de la 
propriété préventive du sérum *. 

Après avoir mis en évidence que les propriétés humorales 


. Ge résultat est déjà acquis pour plusieurs ( au Moins quatre) infections : il peut 
de êtreconsidéré comme quelque chose de gé inéral. Ces faits bien établis répondent 
aux critiques de M, Charrin. Dans un trav ail intitulé : Les antitoxines et l’immunite 
(Semaine médicale, 1893, p.85), ce savant cherche à prouver l’action atténuante du 
sérum des lapins vaccinés sur le bacille pyocyanique. Mais ce microbe convient 
beaucoup moins pour ce genre de recherches que les bactéries du hog-choléra, 
du choléra des cobayes, de la septicémie vibrionienne et de la pneumonie. Cest 
pour cela que je n’analyserai pas dans tous leurs détails les expériences faites 
avec le bacille pyocyanique, et que je ne discuterai pas les points généraux, 
visés dans l’article mentionné. M. Charrin «avoue ne pas comprendre clairement » 
‘p. 86) comment il peut se faire qu'un virus renforcé dans l’organisme vacciné 
arrive à être détruit par ce dernier au lieu de le tuer lui-même. C’est cependant 
très simple. Les phagocytes de l'organisme vacciné se sont à tel point accoutumés 
aux sécrétions toxiques que celles-ci, malgré le renforcement, n’empèchent point 
l'englobement et la destruction des bactéries. 


A. 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA 109 


(antitoxique et bactéricide) n’ont pas d'importance dans l’immu- 
nité et la prévention des cobayes contre le vibrion de Koch, 
MM. Pfeiffer et Wassermann arrivent à ce résultat que, dans 
ces phénomènes, « les processus phagocytaires jouent un rôle ». 
«€ Mais — ajoutent-ils — nous inclinons vers l'opinion que la 
phagocytose n’est qu’un phénomène secondaire, qui suit la mort 
des bactéries, mort provoquée par d’autres processus encore 
problématiques. » (P. 50.) Les adversaires de la théorie des phago- 
cytes, ne pouvant plus invoquer les propriétés bactéricides et 
antitoxiques des humeurs, se retranchent derrière des propriétés 
problématiques et insaisissables. Je regarde, pour ma part, 
cette nouvelle attitude comme un succès pour les idées que 
je défends. Mais, dans le cas qui nous occupe, ilest très facile de 
constater de la façon la plus exacte le rôle bactéricide des phago- 
cytes. Il n'y a qu’à retirer une goutte de l’exsudat des cobayes 
réfractaires, qui ne renferme que des vibrions inclus dans les 
leucocytes, et à le mettre à l'étuve. Dès les premières heures du 
séjour à 38°, on verra les vibrions se développer dans l’intérieur 
des leucocytes, et transformer ceux-ci en sacs volumineux 
remplis d’une masse de vibrions. Bientôt après ces sacs éclatent, 
et les vibrions dispersés dans le liquide de l’exsudat forment une 
culture des plus riches. Ces phénomènes, qui se passent exacte- 
ment comme daus le cas du vibrion de Gamaleïa, montrent 
jusqu’à l’évidence que les vibrions, dans l’exsudat des cobayes 
réfractaires, ne sont point tués par un agent problématique, mais 
bien par une fonction des phagocytes. J'ai pu à plusieurs reprises 
constater ce fait pour les vibrions du choléra. Il est juste de 
rappeler que c’est d’abord M. Gruber‘, et ensuite M. Vincenzi}, 
qui ont attiré l'attention sur le rôle des phagocytes dans le 
« choléra » des cobayes. 

Nous pouvons donc insister sur ce résultat général que 
l'immunité acquise des cobayes vis-à-vis des vibrions du choléra est 
un nouvel exemple en faveur de la théorie des phagocytes. 

Bien moins nette est la question de savoir si les cobayes 
peuvent être sûrement vaccinés contre l'introduction d’une dose 
mortelle de vibrions dans l’estomac. Dans leur dernier travail, 


4. Au Congrès international d'hygiène de Londres, 1891. 
2, Deutsche med. Woch., 1892, p. 394; Archivio per le scienze mediche, 1592, p. 337. 


410 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


MM. Pfeiffer et Wassermann affirment, contrairement à l’asser- 
tion de MM. Gamaleïa, Hafkine, Brieger, Kitasoto et Wasser- 
mann ‘, que les cobayes vaccinés par n'importe quelle méthode 
ne deviennent pas pour cela plus résistants que les cobayes non 
vaccinés à l'action des vibrions introduits dans l'estomac. 

Il est facile de comprendre que ces recherches sur l'immunité 
des animaux vis-à-vis des vibrions présentent non seulement 
un grand intérêt théorique, mais sont d'une grande importance 
pour ce qui concerne les questions purement pratiques de la 
prophylaxie humaine. C'est ce qu'avait déjà senti M. Ferran, qui 
le premier a démontré la possibilité de vacciner les cobayes 
contre le vibrion de Koch. Les premiers expérimentateurs qui 
ont contrôlé les recherches du savant espagnol ont mis en doute 
les résultats qu'il avait annoncés, etjeté la défaveur sur ses tra- 
vaux : mais à présent il est définitivement prouvé que M. Ferran 
avait parfaitementraison. On peutfacilement vaccinerles cobayes 
contre le bacille virgule, par la méthode Ferran, c'est-à-dire 
avec des cultures virulentes en faible quantité ou avec des 
cultures stérilisées. 

M. Ferran a appliqué en 1885, sur une grande échelle, les 
vaccinations anticholériques chez l’homme. 11 a inoculé plus de 
50,000 personnes. Malheureusement les statistiques qu'il donne: 
ne permettent point de se prononcer sur la valeur de ses vacci- 
nations. À ces grands nombres, nous préférerions de beaucoup 
des chiffres plus faibles, mais accompagnés de tous les détails 
nécessaires pour permettre un jugement fondé. D'après quelques 
indications, fournies par le nombre des cas de choléra survenus 
parmi les vaccinés et les non-vaccinés dans les cinq premiers 
jours après la vaccination, il semble résulter que celle-ci a été 
souvent pratiquée dans la partie de la population la moins 
sujette à la maladie (voir notamment les chiffres sur Benifayo, 
Cheste, Masanasa, p. 262-264 du livre de M. Ferran). 

Comme on peut s’en convaincre par la lecture du travail de 
MM. Pfeilfer et Wassermann, bien des points expérimentaux 
sont encore obscurs dans celte question des vaccinations préven- 
tives. M. G. Klemperer * a eu l'idée d'appliquer les données four- 
. Zeülschr. f. Hygiene, 1892, t. XII, p. 163. 


- L'inoculation préventive contre le choiéra, 1898. 
3. Berlin. k'in. Wochenschr., 4892, p. 789. 


1 
2 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. ul 


nies par l'étude de la propriété préventive du sérum à la solution 


de quelques-uns des problèmes que soulève la prophylaxie anti- 
cholérique. C’est aussi par l'étude de cette propriété préventive 
que nous voulons commencer l'exposé de nos recherches, nous 
réservant de publier plus tard nos résultats sur d’autres points 
touchant le choléra. 


I 


PROPRIÉTÉ PRÉVENTIVE DU SANG DE L'HOMME NON ATTEINT 
DE CHOLÉRA (Appendice D. 


M. G. Klemperer!' a constaté le premier que le sang des per- 
sonnes qui n'ont pas eu le choléra, peut préserver les cobayes 
contre l'infection par le bacille virgule. Cette propriélé préventive 
estsi fréquente que, sur sixindividus examinés par M. Klemperer, 
trois l’out présentée d’une façon bien nette : 2 c.c. el, dans deux 
cas même, { ©. c. de sérum sanguin ont suffi pour préserver les 
cobayes contre une dose mortelle du vibrion cholérique. L’au- 


teur en conclut que les trois personnes qui ont fourni le sérum 


préventif avaient l’immunité contre le choléra. M. Lazarus* n’a 
essayé qu'une seule fois le sang de l'homme non atteint de cho- 
léra, et il a vu que le sérum de ce sang était préventif à partir de 
la dose 2 c. c. | 

Mes propres recherches ont porté sur 12 personnes qui n'ont 
jamais eu le choléra. Parmi elles se trouvent trois médecins, 
dont le témoignage présente une importance particulière. La 
propriété préventive de leur sang a élé éprouvée vis-à-vis d’un 
vibrion d’origine indienne qui se rapproche beaucoup du type 
de Koch, et ne s’en distingue que par l’immobilité dans tous les 


. milieux. Ce microbe tue le cobaye par injection péritonéale; sa 


virulence est en général au-dessus de la moyenne. 

Le sérum sanguin d’un de ces médecins, injecté à la dose 
de 1 c. c. dans le péritoine d’un cobaye, ne l’a pas préservé 
contre une infection mortelle, pratiquée le lendemain. Par contre, 
0,75 c.c. de sérum d’un autre médecin et 1,25 c.c. du troisième 
ont empêché l'infection mortelle des cobayes dans les mêmes 
conditions éxpérimentales. 


4. Berlin klin. Wochenschr., 1892, p. 970. 
2. Ibid., p. 1072. 


412 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le sérum fourni par le sang du cordon d’un nouveau-né, 
issu d’une jeune femme de 19 ans qui n’avait jamais eu le cho- 
léra, injecté. à la dose de 1 c. c. dans le péritoine d’un cobaye, ne 
l'a pas empêché de succomber à l'infection par le vibrion déjà 
mentionné. 

Le plus grand nombre des expériences ont été faites avec du 
sérum sanguin de jeunes soldats, entrés à l'hôpital du Val-de- 
Grâce à la suite de différentes maladies autres que le choléra. 
D’après les renseignements qu'ils ont donnés, ils n’ont jamais eu 
le choléra. Le sang de cinq de ces jeunes gens n'a point mani- 
festé de propriété préventive, à des doses de 2 et même 2,5 c. c. 
de sérum. Par contre, trois autres ont fourni un sérum qui était 
préventif à la dose de 1,5 et même de 1 c. c. 

Si à ces 12 cas observés par moi on ajoute les 7 cas de 
MM. Klemperer et Lazarus, on obtiendra un total de 19 cas, 
parmi lesquels 9 ont manifesté un pouvoir prévenuf à des doses 
de 1 à 2 c. c. On peut en conclure que la moitié des Européens 
possèdent dans leur sérum sanguin des substances qui protègent les 
cobayes contre une infection mortelle. En portant la dose du sérum 
au delà de 2,5 c. c. (dose maxima qui ait été employée jusqu’à 
présent) on pourrait peut-être obtenir encore une plus forte pro- 
portion d'hommes possédant cette propriété préventive. Je déduis 
cette conclusion de ce fait que le sang de la poule présente aussi 
le même pouvoir préventif vis-à-vis du vibrion indien, mais le 
plus souvent à partir de 4 e. c. Des doses plus faibles n’exercent 
cette propriété qu'exceptionnellement. 

Faut-il conclure que la moitié des Européens soient naturel- 
lement réfractaires contre le choléra ? M. Klemperer n'hésite pas 
à répondre affirmativement. Pour lui, comme pour beaucoup 
d’autres savants, la propriété préventive du sang est fonction 
de l’immunité et peut mème servir de mesure à cette dernière. 
Lorsque le pouvoir préventif est manifeste, cela veut dire, 
d'après la théorie régnante, que l'organisme qui a fourni le sang 
transmet une partie de son immunité à l'organisme dans lequel 
ce sang (ou le sérum) est introduit. 

Bien que cette théorie soit très répandue, elle est tout aussi 
peu fondée que cette aulre, d’après laquelle la propriété préven- 
tive résiderait toujours dans un pouvoir antitoxique. On arrive 
de plus en plus à envisager celte propriété préventive du sang 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 413 


comme une action stimulant la résistance de l'organisme. C’est 
ainsi que j'ai interprélé ce phénomène dans mon travail sur le 
hog-choléra. M. Stern partage le même avis pour la fièvre 
typhoïde, M. Sanarelli l’a adopté pour le vibrion de Gamaleïa, 
et MM. Pfeiffer et Wassermann viennent d'exprimer la même 
idée pour le choléra des cobayes. « L’immunisation par le sérum, 
—disentcesobservateurs({.c.,p.59)— doitêtreconçuecommeune 
réaction, une modification de l'organisme des cobayes produite 
par des substances spécifiques, encore inconnues, sous l'influence 
desquelles l’animal acquiert la propriété de se débarrasser plus 
rapidement des vibrions. » En d’autres termes, il s’agit ici d'une 
action stimulante sur l'appareil de la défense, c’est-à-dire en 
premier lieu sur le système phagocytaire. Dans ces conditions, il 
est tout naturel que le sang capable d’exciter la réaction dans un 
organisme étranger, puisse rester inactif dans le corps de l’ani- 
mal qui l'a fourni. En effet, il a été déjà constaté à plusieurs 
reprises qu'un organisme sensible peut fournir un sérum pré- 
ventif. Ce fait a été d’abord observé par M. E. Roux et moi! pour 
ce qui concerne le sang des rats par rapport à la bactéridie. Dans 
mon mémoire sur le hog-choléra, j'ai également signalé le cas 
où un lapin vacciné contre cette maladie a fourni un sérum pré- 
ventif, ce qui ne l’a pas empèché de succomber au microbe du 
hog-choléra. MM. Roux et Vaillard * ont recueilli un grand 
nombre de faits, prouvant qu'un animal ou un homme, qui pos- 
sèdent la propriété antitoxique vis-à-vis de la toxine du tétanos, 
peuvent mourir de cette maladie. Pour ce qui concerne la maladie 
des cobayes, provoquée par le bacille virgule, j'ai constaté à plu- 
sieurs reprises que les animaux vaccinés qui succombent à la 
dose minima de la toxine vibrionienne, ou même quelquefois 
au virus, fournissent des humeurs (sérum sanguin et liquide de 
l’exsudat) douées d’une propriété préventive très accusée. Je 
communiquerai les détails de ces expériences dans un de mes 
prochains mémoires. 


4. Annales de l’Institut Pasteur, 189, p. 479. 
2. Ibid., 1893, p. 65. 


A4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


TT 


PROPRIËTÉ PRÉVENTIVE DU SANG DES PERSONNES ATTEINTES 
DE CHOLÉRA (Appendice II) 


Il n’est pas facile de retirer beaucoup de sang aux personnes 
atteintes de choléra plus ou moins grave. Aussi je ne me suis 
décidé à entreprendre ces recherches qu'après m'être assuré 
que des quantités infimes de sang suffisent déjà pour manifester 
la propriété préventive. Grâce à l’obligeance de plusieurs méde- 
cins, notamment de MM. les docteurs Netter, à Paris, Waduet, 
à Lorient, et MM. Marandon de Montvel et Fevré à Ville-Evrard, 
j'ai pu me procurer un certain nombre d'échantillons de sang de 
cholériques. J'en ai recueilli plusieurs lors de mon séjour à 
Lorient. Dans la majorité des cas, il fallait se contenter de 
quelques gouttes de sang qu’on pouvait aspirer dans un tube de 
verre slérilisé, après avoir fait une piqüre ou une.incision au 
bras ou au doigt. Avec du bouillon stérilisé, on délayait le sang 
accolé aux parois du tube et on injectait ce mélange dans le 
péritoine des cobayes. 

J'ai expérimenté avec le sang de vingt-deux personnes 
malades du choléra; parmi elles, quelques unes étaient atteintes 
légèrement; mais la majorité présentaient une maladie grave. Le 
lendemain de l'injection du sang dans le péritoine des cobayes, 
je faisais l'épreuve avec une dose mortelle du vibrion indien 
(mentionné dans le précédent chapitre), injectée dans le même 
endroit. Des cobayes neufs servaient de témoins et fournissaient 
la preuve de la virulence du microbe. 

Malgré la faible quantité de sang injecté, la propriété préven- 
tive a été manifeste dans dix cas sur vingt-deux, c’est-à-dire dans 
45 0/0 des malades. Je n’ai pas pu constater un rapport quelconque 
entre la bénignité de la maladie et l'intensité de la propriété 
préventive. À côté de cas moriels qui fournissaient cependant 
un sang préventif, il y en avail d’autres où les malades guéris- 
saient sans que leur sang ait présenté le pouvoir de prévenir la 
maladie chez les cobayes. Ainsi, dans un cas, à Lorient *, le sang 

{. Mie C., 15 ans, tombe malade le 28 novembre 1892. Elle n’a d’abord que la 


diarrhée, mais le lendemain se déclare une attaque de choléra grave. Facies cho- 
lérique. Vomissements, crampes, selles typiques. Guérison. 


LE NU LS TRS DR nn ge 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 15 


retiré le troisième jour de la maladie, n’a pas empèché un 
cobaye de mourir du vibrion indien; cependant, la malade s’est 
rétablie. Dans un autre cas !, observé aussi à Lorient, quelques 
gouttes de sang, retirées le lendemain du début du choléra, ont 
préservé un cobaye contre une dose sûrement mortelle du mème 
vibrion ; toutefois, le malade est mort en 72 heures. Chez ces 
deux malades, j'ai pu constater la présence de bacilles virgules 
dans les déjections. 

Parmi les cas de choléra sans propriété préventive du sang, 
les plus remarquables sont sûrement ceux que j'ai pu observer, 
grâce à l’obligeance de M. Netter, dans son service au bastion 36, 
à Paris. Il s’agit de deux malades, atteints d’un choléra grave 
au commencement de décembre 1892, qui s’est terminé par la 
guérison. Les bacilles virgules ont été isolés des déjections par 
M. le Prof. Netter. La saignée a été pratiquée le troisième jour 
après le début de la maladie. Des quantités de sérum de 0,5 à 
1,5 ce. c. n'ont pas préservé les cobayes, inoculés avec le vibrion 
indien. [l est à noter que, dans cette expérience, sur deux 
cobayes témoins, un a résisté à la même dose du virus que les 
cobayes traités par le sérum. L'absence de la propriélé pré- 
ventive a été donc bien démontrée dans ces deux cas. Nous 
reviendrons sur l’un d'eux dans notre chapitre sur le sang des 
personnes guéries. 

Les cas où, malgré un choléra mortel, le sang des malades 
manifeste une propriété préventive très accusée, ne servent 
qu'à confirmer le résultat du précédent chapitre, à savoir que 
cette propriélé préventive ne peut nullement servir à mesurer 
limmunité. 


IV 


PROPRIÉTÉ PRÉVENTIVE DU SANG DES PERSONNES MORTES DU CHOLÉRA 


Ce sujet a été déjà traité dans une étude très intéressante 
de M. Botkin, à Saint-Pétersbourg'. Les recherches sur le pou- 


2, M. G..., 45 ans, entre le 145 mars à l'hôpital de Lorient avec tous les signes du 
choléra algide. Crampes, vomissements, anurie, selles riziformes. Mort le 
17 mars. 

1. Sur la pathologie du choléra, dans la Gazette clinique de Botkin, novembre 
1892 (en russe). 


416 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


voir préventif du sang retiré après la mort des cholériques lui 
ont montré que cette propriété s'établit bientôt après le début 
de la maladie. Ce n'est que dans deux cas sur douze, où la 
mort est survenue en 24 heures (à peu près), que le sérum 
sanguin était toxique pour le cobaye. Dans la grande majorité 
des cas, par contre, il était préventif contre le bacille virgule, et 
cela même à partir de 0,5 c. e. Il va sans dire que dans les cas 
où la mort est survenue tardivement dans l’état typhoïde, le 
sérum sanguin était toujours préventif pour le cobaye. 

M. Botkin déduit de ses expériences que Ia mort des 
cholériques n'est que très rarement causée par la toxine du 
vibrion de Koch; dans la grande majorité des cas, l'organisme 
acquiert une immunité vis-à-vis de ce microbe et ne succombe 
que par le fait d’autres causes, non déterminées. Ici encore la 
déduction repose sur ce principe que la propriété préventive du 
sang est nécessairement liée à l’immunité, ce qui ne peut nulle- 
ment être accepté. 

Nos propres recherches ont été failes sur dix personnes 
mortes du choléra dans les services de M. le Prof. Netter, à 
Paris, et de M. le D'Fevré, à Ville-Evrard. Nous exprimons ici à 
ces messieurs toute notre gratitude pour leur obligeant concours. 

Comme chez des personnes non cholériques ou en cours du 
choléra, la moitié des morts de cette maladie nous ont fourni 
un sang préventif. Sur dix cas, cinq ont fourni un sérum sanguin 
préventif v. Appendice LIT). Dans l'exemple du choléra le plus 
foudroyant que nous ayons pu étudier (celui de la veuve D..., 
une maniaque de l’asile de Ville-Evrard, morte neuf heures 
après le début de la maladie ‘), 2 c. ce. de sérum sanguin n'ont 
manifesté aucune propriété préventive. Dans un autre cas 
(M°° A.), survenu dans le même asile, cas où la mort est sur- 
venue en 28 heures, le sérum sanguin était préventif à partir 
de D:5ic20c: 

Quelquefois, malgré la durée beaucoup plus longue de la 
maladie, le sang n’a pas présenté de propriété préventive. 
M.F.., mort dans le service de M. Netter (qui a trouvé de nom- 
breux bacilles virgules dans les selles) dix jours après le début 
de la maladie, a fourni après sa mort un sérum sanguin, dont 


{. Les selles nous ont donné une culture pure du bacille virgule. 


T° 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 117 


1,5 ce. ce. n’ont pas préservé les cobayes contre le vibrion typique 
de moyenne virulence. 

Cette irrégularité dans la propriété préventive du sang, que 
nous avons notée chez les malades cholériques, s’est donc 
retrouvée à l'examen du sang reliré après la mort. 


NI 


PROPRIÉTÉ PRÉVENTIVE DES PERSONNES GUÉRIES DU CHOLÉRA 


Le plus grand nombre des travaux qui ont été faits sur la 
propriété préventive du sang vis-à-vis du bacille virgule, se 
rapporte précisément à des personnes qui ont subi une attaque 
de choléra. C’est M. Lazarus! qui le premier a fourni des rensei- 
gnements sur ce sujet. Dans trois cas de choléra, traités à 
l'hôpital de Moabit, à Berlin, le sérum retiré quelque temps après 
la guérison présentait un pouvoir préservateur extraordinaire : 
un décimilligramme de sérum sanguin suffisait déjà pour 
empêcher la mort des cobayes, inoculés avec le bacille virgule. 
M. Klemperer * a trouvé que le pouvoir préventif du sérum de 
deux personnes guéries du choléra, auxquelles il a retiré du sang, 
était beaucoup plus faible que dans les cas de M. Lazarus. Le 
sérum de l’une était préventif à la dose de 0“",01, celui de l’autre 
à la dose de 0,5 c. c. M. Klemperer explique cette différence par 
la circonstance que ses malades avaient eu un choléra beaucoup 
plus bénin que ceux de M. Lazarus. 

Tout récemment M. Wassermann * a publié les résultats de 
ses recherches sur la propriété préventive du sang dans un cas 
de guérison. Il s’agit d’un choléra peu grave survenu à Berlin 
eu octobre 1892 *. Deux jours après la guérison, le sang était si 
peu préventif que même une dose de 10 c. c. de sérum n’a pu 
sauver un cobaye inoculé avec le bacille virgule. Un mois plus 
tard, le sang a acquis la propriété préventive au même degré que 
dans les expériences de M. Lazarus. Une troisième saignée, 
pratiquée 54 jours après l'entrée en convalescence, a fourni un 


4. Berlin. klin. Woch., 1892, p. 1072. 

2. Ibid., 1267. 

8. Zeilschr.f. Hyg., 1893, t. XIV, p. #2. 

4. Deutsche med. Woch., 1892, p. 927 (Kossel et Beck). 


418 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sérum préventif à la dose de un centimilligramme. Cet exemple 
prouve d’un côté que la guérison peut se faire tout à fait 
indépendamment de la propriété préventive vis-à-vis du ba- 
cille virgule, et de l’autre qu’un choléra bénin n'empêche 
nullement le sang d'acquérir cette propriété à un très haut 
degré. 

Les six cas étudiés par les auteurs cités démontrent déjà 
une grande variabilité dans ce pouvoir préventif du sang chez 
les personnes guéries du choléra. Mes propres expériences 
confirment cette conclusion de la facon la plus claire. Elles 
s'étendent sur 24 cas, que je dois surtout à l’obligeance de 
MM. les docteurs Lesage, Gaillard, Babinsky, Netter et Fevré. 
Ce sont notamment les 12 cas de M. Lesage et 1 cas de M. Netter 
qui présentent le plus grand intérêt, car ils sont appuyés sur 
des recherches bactériologiques. 

Parmi les personnes qui ont manifesté le plus fort pouvoir 
préventif, il faut citer M. H...,quia subi une attaque de choléra du 
9 au 16 septembre 1892 à l'hôpital Saint-Antoine. Le choléra 
était de force moyenne, mais les déjections contenaient une 
quantité énorme de bacilles virgules. Le sang retiré 72 jours 
après le début de la maladie a fourni un sérum préservatif à la 
dose de un milligramme. Mais, à côté de ce cas et d’autres, où le 
sang s’est montré moins actif, il faut citer des exemples inverses 
où le sang n’a pas eu de propriété préventive ou ne l’a manifestée 
qu’en faible proportion. Une vieille femme,M"°P...(71 ans), qui a 
subi une forte attaque de choléra du 31 août au 6 septembre 1892, 
et qui a dù être transfusée, a fourni un sérum (sang retiré 
81 jours après le début de la maladie), dont 0,25; 0,5; 1; 1,5, 
et même 2 c. c. ont été incapables de protéger les cobayes contre 
la dose mortelle minima des bacilles virgules. Et cependant les 
déjections de cette personne renfermaient de nombreux vibrions 
de Koch. Chez une autre femme dont le sang m'a été fourni par 
M. Lesage, la propriété préventive du sérum ne s’est manifestée 
qu'à partir de 1,5 e. e. La saignée a été pratiquée soixante-quatre 
jours après le début du choléra, et, malgré sa gravité moyenne, 
les selles étaient d’une richesse extraordinaire en bacilles vir- 
gules. Chez une troisième personne, qui ne rendait avec ses 
déjections que peu de virgules, 0,75 de sérum sanguin n’ont pas 
préservé un cobaye, tandis qu’un autre, traité avec 2 c. c. de lait 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 119 


de la même femme, a résisté à une dose moyenne! du vibrion 
de Koch. 

Je citerai encore le malade de M. Netter, qui a déjà été 
mentionné dans le chapitre Il comme n'ayant pas la propriété 
préventive dans le cours de son choléra. Saigné une seconde 
fois plus de trois semaines après Le début de la maladie, il a fourni 
un sang, incapable de protéger des cobayes même à la dose 
de 1,5 c. c. Si on se souvient que des quantités bien moindres 
(lc. c. et mème 0,75) du sérum de personnes qui n’ont jamais 
eu le choléra suffisent souvent à prévenir la mort des cobayes, 
on sera étonné de voir le sang de certains individus guéris 
dépourvu de la propriété préventive à des doses de 1,5 et 2 c. c. 

Certaines personnes qui ont eu le choléra fournissent un 
sérum dont la propriété préventive est si élevée qu'il était 
naturel de croire que cette propriété existe chez tous les cholé- 
riques guéris. Or, sur 24 cas de choléra, nous l’avons trouvée 
seulement 14 fois, c’est-à-dire dans 58 0/0 des cas. Par contre, 
nous l’avons constatée à peu près dans la même proportion, 
50 0/0, soit chez des personnes qui n’ont pas eu le choléra, soit 
chez des personnes qui ont succombé à cette maladie. 


IV 


RÉSUMÉ 


Lorsque j'ai entrepris ce travail sur la propriété préventive 
du sang des cholériques, j'avais l'espérance que cette recherche 
pourrait éclairer le rôle du bacille virgule dans le choléra, rôle 
qui est encore si loin d’être élucidé. 

Après les premiers résultats positifs, obtenus sur cette pro- 
priété préventive, M. Klemperer en a tiré la conelusion qu'ils 
« fournissaient une preuve irréfutable du rapport éuologique et 
spécifique du bacille virgule de Koch avec le choléra asiatique » 
(B. kl. Woch., 1892, n° 50). Même en se plaçant à ce point de 
vue, à savoir, que l'établissement dans le cours d’une maladie 
d'un pouvoir préventif du sang vis-à-vis d’un microbe donné, 
prouve l’action spécifique de ce dernier, on doit reconnaitre que 
les faits communiqués plus haut atténuent notablement la 
déduction de M. Klemperer. Mais il n’est nullement prouvé que 


420 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


les bactéries qui occasionnent la maladie soient seules capables 
de produire la propriété préventive du sang. Il est très probable 
que les microbes qui végètent paisiblement dans l'organisme 
possèdent également cette fonction. Aussi pourrait-on expliquer 
la propriété préventive du sang des personnes non atteintes du 
choléra par l’action des vibrions si nombreux dans les organes 
digestifs de l’homme sain. 

D'un autre côté, les recherches multiples sur la propriété 
préventive du sang ont démontré de plus en plus que le rapport 
étroit que l’on croyait exister entre cette propriété et l’immu- 
nité n'existe pas en réalité. Les faits, sommairement rapportés 
dans ce mémoire, fournissent une nouvelle preuve de ce que 
le sang peut être préventif sans que l'organisme soit réfractaire. 

: La recherche que j’ai entreprise ne peut donc pas résoudre 
le problème que je me suis posé. Elle démontre que le but ne 
peut être atteint que par d’autres voies. Et cependant je n'ai 
pas hésité à publier les faits que j'ai pu réunir, car, dès que le 
problème du bacille virgule sera définitivement résolu, ils pour- 
ront facilement être utilisés. Même actuellement, dans l’état 
d'indécision où nous sommes, ils peuvent nous fournir des 
indications précieuses. 

Ainsi, dans la question des vaccinations préventives, il est 
très important d'avoir un point d'appui pour reconnaître la 
méthode qui est la meilleure. M. Klemperer, dont les idées 
ont été souvent exposées dans ce mémoire, croit indispen- 
sable d'atteindre, à l’aide d'injections vaccinales, le plus haut 
degré de propriété préventive du sang qui ait été observé chez 
l’homme guéri du choléra. Tous les moyens qu'il a employés 
étant impuissants à produire ce résultat, M. Klemperer voit de 
très grandes difficultés sur son chemin. Les faits que j'ai 
exposés doivent le rassurer. Il n’est point nécessaire, même 
pour guérir d’un choléra grave, de réaliser la propriété préven- 
tive du sang vis-à-vis du bacille virgule. Dans les essais qui 
pourront être entrepris sur la vaccination de l’homme, il ne faut 
donc nullement tenir compte de cette fonction, et il ne faut 
pas s'arrêter devant l'emploi de virus, malgré le peu de pouvoir 
préventif qu'ils confèrent. 

De nos recherches sur la propriété préventive du sang chez 
08 personnes, il résulte que ce pouvoir — vis-à-vis du vibrion typique 


“ 
LE 
sÂc SES 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 


421 


d'origine indienne — est extrémement variable. I existe presque chez 
la moitié des hommes qui n'ont pas eu le choléra, et dans 58 070 des 
personnes qui en ont subi l'attaque. Presque la moitié des malades 
cholériques et la moitié des individus morts de cette affection présen- 
tent également la propriété préventive du sang. 

La guérison peut se faire sans que cette propriété s’établisse. 


APPENDICE I 


ACTION DU SANG DES PERSONNES QUI N'ONT PAS EU LE CHOLÉRA 


N. 


Dr C. (bien portant) 

. Dr W. (bien portant) 
Dr A. (bien portant) 

. Soldat (pneumonie) 

. Id. (urémie) 

. Id. (bronchopneumonie) 


© © co 1 OH Co NO 


11. Id. (hémiplégie) 
12. Nouveau-né. 


Quantité de 


sérum 


employé en c. €. 


0,75 


1.25 


APPENDICE II 


ACTION 


Moment de la 
saignée 
après k début. 


4. M. D. (lypémanie aiguë) 3 jours 


2. Enfant L. — 48 heures 
3. Mme V., — 8 jour° 
4. Mue C, —_ 4 jours 
5. M. L.N. — 22 heures 
6. Mlle M. C. — 2 jours 
7. Mlle L. C. (diarrhée) > jours 
8. Mme B. (dégénér. ment.) 6 jours 
9. Mme B. de Lorient, — 5 heures 
10. M. L. B. — — 5 jours 
44:-M. Mu. — — 5 jours 
12, M. M. — — 4 jours 
43. Mnue K. — _ 48 heures 
14. M.B. (manie aiguë) 3 jours 
49: N. de Bruxelles, — 

16. N. de Lorient, — 2 heures 
17. M. Ph. désinfecteur, Lorient, 

148. M. G. — = 

A9 MT. — = 
20, Mlle L. — — lendemain 
PAM — _— 4 jours 
22, M. A. — —— 6 jours 


lendemain 1,5 €. c. 
lendemain qq. gouttes 
Jendemain qq. gouttes 


Quantité de 


sang. 


qq. gouttes | 
cc de lue) 
qq. gouttes 

3 gouttes 

1 goutte 

2 gouttes 
O2NC-rC- 

3 gouttes 


9 


q- q- gouttes 
0,25 sérum 
0,75 sérum 

qq. gouttes 
sérum 


qq. gouttes 
qq. gouttes 
qq. goulles 


Pro- 
priété 
préventive. 


Issue de la 
maladie. 


guérison 
guérison 
guérison 
mort 
mort 
guérison 
guérison 
mort 
mort 


guérison 


guérison 


mort. 
guérison 


guérison 


mort en 72 h. 


mort 

guérison 
guérison 
mort. 


Prévention existante ou non, 


DU SANG DES PERSONNES ATTEINTES DE CHOLÉRA 


Résultat de 
l'examen 
bactériologique. 
Bac. virg. 
Bac. virg. 


Bac. virg. 
Bac. virg. 
B. coli seul. 


Beaucoup B. v. 
Nombreux B. v. 


B. v. (Dr Netter). 


B. v. (Dr Netter). 


Bac. virg. 
Bac. virg. 


Point de B. v. 


422 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


APPENDICE [II 


ACTION DU SÉRUM SANGUIN DES PERSONNES MORTES DU CHOLÉRA 


No Durée de la Quantité du Résultat. Bacilles virgules. 
d'ordre. maladie. Sérum en C. €. 

4. Mlle P. 0,75 4 Constatés par M, Netter. 
DANCE 10 jours 1,5 — Nombreux (par Netter). 
3. Vve B. (maniaque) 48 heures 2,0 = Masse, 

4. Ve D. (maniaque) 9 heures 2,0 _ Masse. 

5. Mne À. (lypémanie) 16 heures 0,5 _ , 
6. M.L. — 34 heures 1,5 — Constatés par M. Netter. 
7. Mme D. — 8 jours 0,5 2 

8. Mue KR. — 53 heures 0,5 + 

9. Vre M. — 48 heures 1,00 _ Constatés par M. Netter. 
10. Mme T. — 10 jours 2029 +- Beaucoup (M. Netter.) 


Comme avec le sérum de chaque cas il a été fait plusieurs 


expériences, je ne donne que la dose maximale dans les cas 
négatifs et la dose minimale dans les cas positifs. 


APPENDICE IV 


No Moment de la saignée Quantité de sang où Résultat. Bacilles virgules. 
d'ordre. après le début de de sérum en c.c. 
la maladie. 

APN UD: 49 jours 1,0 + 

2 MST 20 jours 0,5 — 

3. M: C:. 17 jours 1,0 Cie 

4. Mme X. 9 jours 0,33 = 

5. Mne T. 0,5 4. 

6 MUC: 16 jours 1,0 — 

T. MW: 14 jours 0,75 — 

8. Mlle K. 65 jours 0,2 + Nombreux (Dr Lesage). 

9. Mne R. 67 jours 0,125 — Nombreux (Dr Lesage). 

10. Mme M, 56 jours 1,5 + Masse (Dr Lesage). 

44. M: C:. 56 jours 1,5 + Pas de bac. virg. (Dr Lesage). 
49M:H: 73 jours 0,001 + Masse (Dr Lesage). 

43. M. M. S4 jours 455 +- Peu (Dr Lesage). 

14. Mne P. 83 jours 2,0 — Nombreux (Dr Lesage). 
45. Mne L. 80 jours 0,25 —  Abondants (Dr Lesage). 

46. Vve M. 9 jours -qq. gouttes de sang. + 

17. Mmes, 75 jours ee <dete) Se Peu (D' Lesage). 

18. me G. 89 jours 0,5 sérum + Notable quantité (Dr Lesage). 
AD ANA 8S jours qq. gouttes de sérum — Nombreux (Dr Lesage), 

20. Vve P. (diarrhée) 33 jours 0,5 + 

21. Vye Per, (maniaque) 39 jours 0,25 

22. Vre Lar. (mélancolie) 27 jours 0,5 — 

23. Vve Lo (chol. léger) 62 jours 1,0 — 

24. M. M. 22 jours 1.5 — Quantité moyenne (Prof. Netter). 


déinte ‘dé 


REVUES ET ANALYSES 


SUR LES SUCRES À CINQ ATOMES DE CARBONE 
OÙU PENTOSES 


REVUE CRITIQUE 


La marche du progrès est curieuse à suivre depuis quelques années 
dans les applications de la microbiologie à la médecine. C’est d'un 
laboratoire de chimie qu’est partie la première impulsion, et les 
médecins ont en général estimé cette origine un peu suspecte, jusqu'au 
jour où ils ont vu entrer en scène des questions qu’ils jugeaient avec 
raison être de leur domaine, celles qui ont trait à la réaction de l'être 
vivant contre les ennemis qui viennent l'assaillir. «Il n'y a pas que des 
microbes, disaient-ils, il y a un être vivant qui se défend, et qui utilise 
pour cela les propriétés et les réactions de ses tissus, quenous avons la 
prétention deconnaître mieux que personne. » Deleur côté, ceux qu’avec 
une charmante insistance ils appelaient alors des chimistes croyaient, 
à ce moment, pouvoir réduire beaucoup l'importance de ces réactions 
vitales. Le charbon, qui était alors et est encore la maladie infectieuse 
la mieux connue, ne se montrait-il pas particulièrement insouciant des 
questions de race et de résistance individuelle? Il ÿ avait bien l’histoire 
des moutons d'Algérie qui ne prennent pas le charbon comme les 
moutons de France, celle de la poule refroidie qui devient charbon- 
neuse quand la poule ordinaire reste indemne. On avait bien aussi 
constaté des différences individuelles dans une même espèce animale, 
mais ces variations étaient largement dépassées par celles qui prove- 
naient des changements de virulence de la bactéridie, et en somme 
c'était cette bactéridie qui apparaissait comme la pièce mailresse, 
sinon comme la pièce unique du mécanisme. 

C’est peu à peu que l’attention s’est portée sur les rouages du méca- 
nisme résislant : pendant quelque temps on a pu croire que cette 
réaction était d'essence purement vitale, et ne pouvait pas quitter le 


42% ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


terrain de la médecine proprement dite. Mais voilà que, par un nou- 
veau détour, le problème repasse sur le terrain de la chimie, et ce 
serait faire offense à nos lecteurs que de leur rappeler la tournure, 
presque exclusivement chimique, qu'ont prise depuis quelques années 
les questions de phagocytose, de vaccination, d'immunité. Si bien 
qu’en ce moment, après avoir reproché aux chimistes de faire de la 
médecine, voilà que les médecins commencent à faire de la chimie. 

Le tout est de la faire bonne. De quoi se compose done cette cellule 
vivante qui, lorsqu'elle intervient dans la lutte, ne le fait que par ses 
diastases, ses excrétions, ses sécrétions, par les modifications d’ordre 
chimique dont elle devient elle-même le siège aussi bien que par 
celles qu’elle produit dans le milieu ambiant? Quels sont ceux de ses 
éléments chimiques qui jouent un rôle physiologique ? A cette ques- 
tion, les chimistes sont forcés de se gratter un peu l'oreille. La seule 
chose qu’ils sachent bien au sujet de la cellule, c’est qu'ils ne savent 
pas grand’chose. 

Ils en ont assez bien dépecé les membres principaux, et y ont 
reconnu des matières albuminoïdes, des corps gras, des sucres, des 
celluloses, des gommes, des acides divers, des bases alcaloïdiques ou 
autres. Ils savent même en isoler à l’état pur, et y doser certaines 
substances, séparer les corps gras des sucres et des matières azotées; 
mais, quand il s’agit de pénétrer dans le détail, de savoir ce que sont 
ces corps gras, ces sucres, ces matières albuminoïdes, ils sont fort 
embarrassés, et quand ils sont prudents, ils gardent le silence. Il est 
vrai qu'il y en a qui préfèrent parler beaucoup quand iisne savent rien. 

Quand on a par exemple dosé et étudié les cendres dans un tissu 
animal ou végétal, qu'on en a dissous les corps gras au moyen de 
l’éther, qu'on en a précipité les matières albuminoïdes par un ou plu- 
sieurs des nombreux réactifs proposés pour cet usage, quand on en a 
séparé la partie insoluble dans les acides et les alcalis étendus, et 
qui est comptée comme cellulose, il reste un résidu, souvent décoré 
du joli nom d’extractif, dans lequel, si l’opération à été bien faite, 
n'existe plus aucun des éléments précédents, mais quin’en est pas moins 
encore une vraie bouteille à l'encre. En physique, a-t-on dit, il y a de 
grandes découvertes à faire en ce moment aux environs de la qua- 
trième décimale. La chimie, la microbiologie et la médecine réser- 
vent de même leurs plus belles couronnes à qui leur fera connaitre 
ce que c’est que l’extractif, et on peut promettre la gloire au triom- 
phateur heureux d'un bâton de réglisse. 

Les travaux de Fischer, que nous avons résumés récemment", sont 
un premier pas dans cette voie, et leur importance physiologique n'aura 


1. Ces Annales, t. VI, p. 785. 


tif de. 


REVUE CRITIQUE 425 


pas moins frappé le lecteur que leur valeur scientifique. N'’est-il pas 
eurieux, par exemple, que soientseuls capables de fermenter facilement, 
c'est-à-dire de servir aux besoins nutritifs anaérobies des cellules de 
levure, les sucres renfermant trois, six ou neuf atomes de carbone. Un 
procès vital qui enlève ou ajoute à un sucre fermentescible un ou deux 
atomes de carbone le transformeen produit de réserve, inattaquable par 
la cellule qui l’a produit, jusqu’au jour où un nouveau procès vital, 
ajoutant ou enlevant un nouvel atome, fait de cette réserve nutritive 
une nouvelle matière alimentaire. 

La conclusion toute naturelle de ces déductions est que les sucres 
dont le nombre des atomes de carbone n’est pas un multiple de 3, s'ils 
existent, doivent se trouver dans cet extractif quiest en quelque sorte 
le caput mortuum des méthodes analytiques jusqu'ici en usage, et 
qu'on a chance de les y rencontrer, à la condition de les y chercher 
par des méthodes analytiques nouvelles capables de les faire découvrir. 

C’est l'exactitude de celte déduction que je voudrais montrer pour 
les sucres à cinq atomes de carbone, les pentoses, et je n’aurai pour 
cela qu'à résumer les intéressantes études de B. Tollens et de ses col- 
laborateurs Stone, Wheeler, Allen, Gunther et de Chalmot. 

On connaissait jusqu'ici deux seulement des huit pentoses que la 
théorie de Fischer indique comme possibles, Parabinose, découverte 
par Scheibler dans la gomme arabique, le xylose, découvert par Koch 
dans la sciure de bois, surtout de bois de hêtre, et caractérisé comme 


_pentose par Tollens, Wheeler et Allen. 


Ces pentoses C° H!° 0° présentent un certain nombre de réactions 
caractéristiques. En premier lieu, quand on les chauffe avec de l’acide 
chlorhydrique d’une concentration déterminée, ils fournissent non de 
l'acide lévulinique, mais du furfurol C° H* O* en perdant pour cela 
trois atomes de H? O. Ce furfurol est volatil et passe à ia distillation. 
On peut le doser dans le liquide distillé en le combinant avec la 
phénylhydrazine en présence de l'acide acétique. Il se forme une 
hydrazone presque insoluble qu'on peut peser, ou encore estimer par 
un titrage volumétrique, en déterminant ce qu’il faut d'une solution 
de phénylhydrazine d'une concentration déterminée pour précipiter 
tout le furfurol présent dans la liqueur. 

Aucune de ces méthodes n’est, il est vrai, absolument précise, 
mais elles n’en sont pas moins précieuses. Quand on veut se borner 
à déceler la présence du pentose, sans se donner la peine de le doser, 
on peut se contenter de chauffer pendant quelque temps, au bain-marie, 
avec de l'acide chlorhydrique étendu, la matière à étudier : on filtre, 
où ajoute au liquide filtré de l’acide chlorhydrique concentré et un 
peu de phloroglucine : il se développe une belle couleur rouge cerise 


ne 


426 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dans le liquide, pour peu qu’il y ait de l’arabinose ou du xylose pré- 
sent. Ce rouge est encore mieux caractérisé par la belle bande d’ab- 
sorption qu’il fournit quand on lexamine au spectroscope. 

En opérant par ces méthodes, on trouve que les pentoses sont 
extrêmement répandus dans le monde végétal, et même qu'ils consti- 
tuent quelquefois une part importante de l’extractif non azoté, ainsi que 
le montrent les nombres suivants qui donnent, pour chacune des 
plantes analysées, la proportion centésimale d’extractif non azoté et 
la proportion centésimale des pentoses. 


Extrait non azoté. Pentose. 


Paille tte ere RU are 33 0/9 250/9 
Paillecdétiromentes erreurs L'OA 37 26 
Paille Dre RE) HR Le: 87 26 
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Bois de hêtre... ........ PRET i » 24-20 
Boiside Sapin er ne RUE » 8-13 
DÉCO AE MIT Te MR Re RE? 4% 22 
Sonsde fromen tree ren ...  Do-88 25 


Se MORE D bb) 39 


On voit que, dans les pailles alimentaires, les pentoses font plus 
du quart du poids de la paille, et constituent plus de moitié de 
lextractif non azoté. Il y en a aussi beaucoup dans les cossettes de 
betterave et dans le son de froment. Nous rejetons ces matières de 
notre alimentation : les animaux de la ferme s’en nourrissent. Est-il 
défendu de penser que les pentoses sont inassimilables pour nous, 
assimilables pour eux, et qu’ainsi le nombre d’atomes de carbone 
d'une molécule de sucre, que nous venons de voir jouer un rôle dans 
l'alimentation de la levure, en joue un aussi dans l'alimentation des 
animaux supérieurs. 

De même ne peut-on pas se demander si le pentose qu'on trouve 
si abondamment dans ces plantes alimentaires ne serait pas lui-même 
leur sucre alimentaire, et si ce n’est pas pour se faire des réserves 
inassimilables pour elles qu’elles transforment ce pentose en sucre ou 
en amidon assimilables pour nous. On pressent sous cette enveloppe 
d’hypothèses un mécanisme à la fois simple et délicat qu’il faut 
s’efforcer maintenant de mettre au jour. Ce sont des questions de 
structure atomique qui dominent le monde. 

Arrivés à ces notions, nous serions impardonnables de ne pas jeter 
un coup d'œil sur les matières albuminoïdes. Ne se passe-t-il pas là 
aussi des phénomènes de même nature ? Pourquoi l'animal en lactation 
secrète-t-il de la caséine pendant une certaine période, pas avant et 
pas après? Quel est le ressort qui déclanche le mécanisme de Ja 


A 


sécrétion du lait et qui l’arrête ensuite à nouveau? Est-ce qu’à l’état 


REVUE CRITIQUE. 427 


normal il y a sécrétion d'une diastase qui permet à la caséine cons- 
tamment produite d’entrer dans le cycle d’alimentation et de s'y 
détruire, et qui, disparaissant après la gestation, ferait passer la 
caséine à l’état de réserve inassimilable? Y a-t-il là au contraire des 
actions analogues à celles que nous venons de constater chez les 
sucres, et des pentoses et des hexoses parmi les matières albuminoïdes? 

C'est une question que nous ne sommes pas prêts à aborder dans 
toute son étendue, mais sur laquelle nous trouvons précisément un 
renseignement intéressant dans les travaux de M. Tollens et de ses 
collaborateurs. De leurs recherches il résulte qu'en faisant bouillir de 
la fibrine ou de l’albumine avec de l'acide chlorhydrique, il ne se pro- 
duit pas d’acide lévulinique. Cela témoigne qu’il n'entre dans la con- 
stitution de ces substances aucun sucre à six atomes, tels que galactose, 
dextrose, glucose. Mais la caséine et la viande de cheval soigneuse- 
ment débarrassée de toute trace de sucre ordinaire, donnent au traite- 
ment à chaud par l'acide chlorhydrique de petites quantités de 
furfurol ; les autres matières albuminoïdes en fournissent aussi, mais 
beaucoup moins. 

Je ne suis pas prêt à en conclure, comme ces savants, qu'il y a 
quelque part une molécule de pentose dans la molécule très compli- 
quée de la matière albuminoïde. Ces matières ne se débarrassent que 
très difficilement des matériaux qui les accompagnent dans l’orga- 
nisme, et on n’est jamais sûr, quelques soins qu'on ait pris, de les 
avoir complètement purifiées. Il faut donc se méfier des mélanges, et 
se garder de les prendre pour des combinaisons. En particulier, la 
caséine de la vache qui a mangé du foin, la viande de cheval qui a été 
pourri de paille contiendraient un peu de pentose qu'il ne faudrait pas 
en être surpris. Mais ce qui est remarquable et nous ramène à nos 
idées sur l’influence du nombre d’atomes de carbone sur la qualité 
alimentaire d'une substance, c'est que l'acide glycuronique donne, 
comme l’arabinose et le xylose, de grandes quantités, jusqu'à 46 0/0 
de furfurol. Or, cet acide glycuronique apparaît dans lurine de 
l'homme et du chien, dans certains modes d'alimentation. On le 
considérait jusqu'ici comme un des premiers degrés d'oxydation du 
sucre. Il semble, d’après ce qui précède, qu'il ait une constitution plus 
compliquée, et représente un mode d'élimination urinaire des pentoses. 

On voit en résumé combien est riche de promesses ce bourgeon 
nouveau de l’arbre de la science, et pourquoi nous l'avons signalé à 
nos lecteurs dès son apparition. Les microbiologistes ni les médecins 
n'ont plus le droit de rester indifférents à ces découvertes sur la 
chimie de la cellule, et c’est pour eux que travaillent constamment ces 
chimistes autrefois si dédaignés. Dx 


428 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Frirz BAUMANN. — Contribution à l'étude de la maturation du fromage. 
Diss. inaug. Kænigsberg, 1893. 


Je signale ce travail, parce qu'il tranche par ses allures sur la 
majorité des études consacrées depuis quelques années aux bactéries 
du lait et du fromage, et qui étaient construites sur le même type. La 
méthode des cultures sur milieux solides avait séduit tout le monde; 
rien ne valait en dehors d'elle, et il n’y avait aucun compte à tenir de 
ce qui avait été écrit avant qu’elle fût inventée. On trouverait encore, 
sans trop chercher, des savants porteurs de cette espèce de lunettes. 
Mais on commence un peu partout à reconnaître que, si la méthode 
des cultures sur gélatine est incomparable pour séparer et purifier 
les mélanges d’espèces, il avait été fait des cultures pures avant qu'elle 
existât, et que les milieux liquides, moins facilement maniables 
comme moyens de séparation, présentent l'avantage incontestable de 
donner sur la biologie des bactéries, sur les transformations qu’elles 
produisent dans les substances dont elles se nourrissent, sur les pro- 
duits qu’on peut en retirer, des renseignements précieux. La méthode 
des gélatines nous renseigne surtout sur la morphologie, celle des 
bouillons sur la physiologie : or, comme moyen diagnostique, la phy- 
siologie dépasse de beaucoup la morphologie, parce qu’elle est beau- 
coup plus variée. Aussi voit-on de plus en plus l’étude chimique des 
liquides de culture se substituer, dans les cas difficiles, à la descrip- 
tion même minutieuse des formes microscopiques et des colonies sur 
gélatine, gélose ou pomme de terre. 

C'était la voie que j'avais choisie dans mes études sur les microbes 
du lait. Outre qu’elles ont été commencées à une époque où on ne 
connaissait pas les cultures sur milieux solides, la question de forme 
m'a toujours paru secondaire, la question de fonction importante au 
contraire, et j’attache beaucoup plus de prix à avoir démontré nette- 
ment, chez certains microbes, celte double sécrétion de diastases qui 
leur permet de coaguler la caséine avec leur présure, de la redissoudre 
au moyen de leur caséase, qu'à avoir décrit huit ou dix espèces 
de Tyrothrir. 

M. Baumann n’est pas mon élève, il ne semble même pas avoir 
connu toutes mes publications sur ce sujet, mais il marche dans les 
mêmes voies, et va même plus loin, car, ayant à étudier une bactérie 
qu'il juge jouer un rôle dans la maturation de l'Emmenthaler, il ne se 
contente pas de l’ensemencer sur la gélatine et de décrire minutieuse- 
ment la forme et l’aspect des colonies : il se propose, ce qui est infini- 
ment plus difficile, plus méritoire, et plus intéressant, de l’ensemencer 
dans du lait, de fabriquer ensuite du fromage avec ce lait, et de voir 


REVUES ET ANALYSES. 429 


comment se comporte ce fromage sous l'influence de la bactérie qu'on 
y à introduite. 

Ce petit programme a l'air anodin : il n’en est pourtant pas de 
réalisation plus difficile. Pour avoir une culture pure, ou à peu près 
pure, de la bactérie ensemencée dans le fromage, il faut d’abord 
stériliser le lait. Or, pour stériliser le lait, il n’y a que le chauffage, et 
le lait chauffé ne se laisse pas coaguler comme le lait ordinaire. Le 
caillé qu'il fournit sous l’action de la présure est floconneux et ne 
se laisse pas agglomérer en fromage. 

Première difficulté, dont M. Baumann triomphe en montrant 
qu'après deux heures à 70°, le lait donne encore avec la présure un 
coagulum convenable et est à peu près stérilisé. Les microbes qui y 
persistent sont trop peu nombreux pour gêner le développement du 
bacille qu'on y introduira, pour peu que l’ensemencement soit copieux. 

Ce n'est pas tout : il faut aussi se méfier des bactéries qui provien- 
nent de la présure. Celle-ci, toujours riche en microbes, doit être 
stérilisée et; si on la chauffe, on détruit son principe actif. Dans mes 
premières expériences sur ce sujet, j'avais stérilisé ma présure par 
une filtration poreuse, M. Baumann y arrive tout aussi simplement 
en constatant qu'après trois ou quatre chauffages à 5895, durant 
chacun quatre heures trente minutes, et espacés par des intervalles de 
vingt-quatre heures, une présure s’était débarrassée detous ses germes 
sans avoir beaucoup perdu de sa force. Voici une de ses expériences: 


N. de germes dans 1 c. c. de présure initiale............... 1,407,600 
— aprés andre Stérilisation rer DE 10,630 
— vingt-quatre heures après (2e stérilisation)... 31,870 
— aprés la secondesstérilisation "#17. 0 
— vingt-quatre heures après la secondestérilisation 40 
= après les 3e, 4e, 5e stérilisations.......... ue 0 

Force initiale de la présure...... See M COL LES De 100 

Force après la 6e stérilisation... ....... AT PR Dane 56,5 


La présure pouvait donc encore servir à la fabrication du fromage, 
à la condition d’en doubler la dose, et en ensemencçant dans ce fro- 
mage la bactérie qu'il voulait étudier, M. Baumann a pu faire une 
culture en grand, et dans les conditions de la pratique. 

Je peux être bref au sujet de cette bactérie, car il me paraît qu’elle 
est identique à celle que j’ai décrite en 1882, dans mon premier 
mémoire sur le lait, sous le nom d’Actinobacter polyinorphus : je ne 
relève qu'une différence avec celle que M. Baumann appelle Bacillus 
diatrypeticus casei: c’est que son bacille ne lui a pas fourni d'acide 
acétique comme fait le mien, mais au contraire de l'acide lactique. 


430 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Mais, avec ce microbe, l’acide lactique comme l'acide acétique sont des 
produits intérimaires, tantôt présents, tantôt absents suivant les 
conditions de la culture, et dont la présence ou l'absence n’ont rien 
de particulièrement significatif. 

En revanche, les deux microbes se ressemblent par leurs dimen- 
sions et leur forme ; ils produisent de alcool aux dépens du sucre de 
lait, et je me suis assuré depuis que le mien existait souvent dans la 
fermentation panaire, où il donnait aussi de l'alcool. Les deux bacilles 
ont une auréole très large et très nette, et se comportent de même 
dans les différents milieux. En particulier, ils peuvent mener une vie 
anaérobie, et dégager un mélange d’acide carbonique et d'hydrogène. 

Le rôle de ce microbe dans la production des yeux dans la pâte de 
l'Emmenthaler n’est pas douteux, et même M. Baumann explique la 
supériorité reconnue des fromages de la vallée d'Emmen non à la 
supériorité des pâlurages, ni à la richesse du lait en matière grasse, 
mais à ce que le mélange hactérien qui s’y ensemence spontanément 
est plus homogène et mieux adapté aux pratiques de fabrication que 
partout ailleurs. C’est là une conclusion curieuse, analogue à celle qui 
bat en ce moment les buissons de la science au sujet des vins. Si elle 
se confirme, il faudra dresser quelque part une statue à la bactérie de 
l'Emmenthal et à la cellule de levure de Champagne. Ce seront des 


gloires provinciales. Dx. 
E.-J. Koruiar. — L'influence de la lumière sur les bactéries. 


Vraich, n939,p. 975, 4892. 


L'auteur a fait agir sur le bacillus pseudanthracis, la sarcina 
aurantiaca et le micrococcus prodigiosus, la lumière solaire qui tra- 
versait préalablement un certain nombre de couches de gélatine 
colorée. 

La lumière ainsi obtenue s'est montrée à peu près monochroma- 
tique au spectroscope. Les cultures ont été faites dans de la gélose 
ou sur pomme de terre. 

Les microbes ont très bien poussé dans les tubes éclairés par la 
lumière rouge. Leur développement a été à peu près équivalent à celui 
des microbes protégés contre toute lumière, et meilleur que celui des 
microbes exposés à la lumière diffuse. Par contre, dans les tubes 
éclairés par la lumière violette, le développement a été plus lent 
qu’à la lumière diffuse ; il était plus lent encore dans les tubes exposés 
à la lumière solaire entière. 

L'auteur s’est assuré, par des expériences directes, que cette action 
est indépendante de l'élévation de la température qui se produit à la 


E 
< 
2 
x 


PERSONNES MORTES DE RAGE 431 


suite d’une exposition prolongée à la lumière solaire. Les résultats 

de M. K. confirment, sur ce point, ceux obtenus autrefois par M. Duclaux. 

Dans une autre série d'expériences, l’auteur est arrivé à voir que 

la lumière violette exerce une influence favorable sur la formation de 

spores chez le bacillus pseudanthracis, tandis que la lumière rougeest 

défavorable et que la lumière blanche tient le milieu entre les deux. 
Mey. 


INSTITUT PASTEUR 


Personne morte de rage après traitement. 


Miconx Aueusrin, 18 ans, de Versailles ; mordu le 15 mars 1892, 
traité à l’Institut Pasteur du 17 mars au 31 mars. 

Les morsures, au nombre de deux, situées dansle premierintervalle 
intermétacarpien de la main droite et sur le cinquième doigt de la 
main gauche, avaient été pénétrantes et n'avaient pas été cautérisées. 

L'animal mordeur, un chat errant, avait été abattu et soumis à 
l'examen de M. Fouillet. médecin vétérinaire à Versailles, qui avait 
conseillé l'envoi immédiat à l’Institut Pasteur de la personne mordue. 

Les premiers symptômes rabiques se sont manifestés le 10 avril; 
entré à l’hôpital de Versailles, Micoin y est mort le 1. Deux cobayes 
ont élé inoculés avec une portion de son bulbe, le 14 avril ; ils ont 
été pris de rage le 27 avril. 


Personne prise de rage pendant le traitement. 


FerupJa Francois, 12 ans, de Guelma, Algérie ; mordu le 5 avril 1892, 
traité à l’Institut Pasteur à partir du 42 avril. 

Les morsures très profondes étaient au nombre de deux; elles 
siégeaient l’une au niveau de l'arcade sourcilière gauche, l’autre sur 
la face interne de l’avant-bras gauche. Elles avaient été lavées à l’eau 
phéniquée deux heures après l'accident. 

L'animal mordeur, un chien kabyle, avait été reconnu enragé 
après examen vétérinaire. 

Le 23 avril, avant que le traitement ne füt terminé, les premiers 
symptômes rabiques se sont manifestés par de vives douleurs loca- 
lisées vers l’arcade sourcilière gauche au point de la morsure. Frans- 
porté à l'Hôpital des Enfants-Malades, le jeune Ferudja y est mort 
le 26 avril. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


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INSTITUT PASTEUR. 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE — AVRIL 1893. 


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Les animaux mordeurs ontété : chiens, 153 fois ; chats, 9 fois 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire ct Cie. 


NI. POS ET NS 


late ts dal t did etes ana eh rétine tn À 


7m0 ANNÉE JUIN 1893. N° 6. 


ANNALES 


DE 


ANS EUR PASSER 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX 


Par MM. CH. CHAMBERLAND £r E. FERNBACH. 


IL — HISTORIQUE 


Les travaux de M. Pasteur et de ses élèves ont établi que Les 
maladies contagieuses sont produites par des microbes qui se 
développent et se multiplient dans le corps. Ces mêmes travaux 
ont établi que ces microbes ne naissent pas spontanément; ils 
viennent toujours de l'extérieur el pénètrent en nous, soit par 
des plaies ou des déchirures de la peau, soit par les organes de 
la respiration et de la digestion. 

Les maladies contagieuses, qui font chaque année tant de 
victimes, sont donc des maladies évitables, Il suffit d'empêcher 
les germes de pénétrer en nous. Toute la grande hygiène est là. 

Pendant longtemps on a admis que ces germes existaient 
dans l’air. Cette idée était peu faite pour inspirer des mesures 
sérieuses de préservation. Nous vivions dans une atmosphère 
chargée de germes; les vents les transportaient à des distances 
plus ou moins grandes et on les respirait à son insu. Que faire 
pour les éviter? C'était pour ainsi dire impossible. Aussi 
supissait-on les épidémies avec une sorte de fatalisme, se con- 
tentant parfois d'allumer de grands feux pour purifier l'air, ou 
de répandre des odeurs dans les appartements. 


34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Mais, en serrant la question de plus près, en examinant 
attentivement les cas de contagion de diverses maladies, en 
cherchant expérimentalement à provoquer la contagion au 
moyen de germes répandus à dessein dans l'air, on s’aperçut 
bien vite que ce mode de contagion n'existait pas ou du moins 
élait tout à fait exceptionnel. 

En 1887, l’un de nous, dans une conférence faite à Rouen et 
publiée dans la Revue scientifique’, donnait les raisons qui 
militaient contre cette hypothèse de la transmission des maladies 
par les germes répandus dans l'air. Aujourd'hui la conviction 
est faite, et on peut dire que la doctrine de la contagion par l'air 
a vécu. L'eau, nos aliments, le contact direct des objets souillés : 
telles sont les causes vraies de la contagion. 

Le filtre imaginé par l’un de nous permet, en prenant les 
précautions convenables, de se procurer partout de l’eau pure. 
La cause de danger provenant de nos aliments peut ètre facile- 
ment évitée en s’astreignant à ne manger, surtout en temps 
d'épidémie, que des aliments euits. Reste la contagion directe, 
c'est-à-dire le contact avec le malade, avec les linges et autres 
objets souillés par lui. Dans la chambre d’un malade, on peut 
dire que tous les objets qui s’y trouvent, ainsi que les murs et 
le parquet, sont souillés, ou du moins sont susceptibles de l'être. 
C'est là qu'il faut détruire les germes. Tout ce qui peut être 
transporté et subir l’action d’une température élevée est passé 
par l’étuve de MM. Geneste et Herscher. Ces étuves, construites 
sur le modèle de l’autoclave Chamberland, qui est si répandu 
dans les laboratoires, rendent les plus grands services. Mais il 
reste tous les objets qui ne peuvent être chauffés, ou qu’on ne 
peut transporter à l'étuve. Ce sont ceux-là qu'il faut désinfecter 
au moyen de substances chimiques ayant la propriété de détruire 
les microbes et leurs germes. Si ce problème était résolu, on 
pourrait dire que la prophylaxie des maladies contagieuses 
serait complète. 

Ce problème, extrèmement compliqué, a été abordé par un 
grand nombre de savants. Nous l’avons abordé à notre tour 
depuis plusieurs années déjà. Ce sont nos expériences que nous 
faisons connaître dans ce Mémoire. 

Une première question se pose. Jusqu'où doit s'étendre 


1. Les divers modes de la contagion, par Cu. CHaMBERLAN». 


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PLUS DUO CRETE 


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LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 139 


l’action, sur les microorganismes, d’un moyen de désinfection ? 
Il est évident qu'on ne peut accorder aucune confiance à un 
moyen de désinfection qui empèche seulement le développement 
des microbes : un désinfectant n’est sûr qu'à la condition de tuer 
les microbes adultes et leurs germes. S'il ne tue en eflet que les 
microbes adultes, s’il respecte les spores qui sont les formes de 
résistance, le désinfectant ne peut être employé que contre des 
maladies dont les microbes n'ont pas de spores. Bien que les 
spores des microbes de la plupart des maladies infectieuses 
soient encore inconnues, nous ne pouvons affirmer que ces spores 
n'existent pas. Il est donc légitime d’exiger d'un moyen de 
de désinfection qu'il tue les spores aussi bien que les formes 
adultes. 

Mais sur quelles spores faudra-t-1l essayer l’action du désin- 
fectant? La plupart des essais de désinfection ont porté sur les 
spores de la bactéridie charbonneuse qui, en général, résistent 
à ia température de 95 à 98°, mais sont tuées à la température 
de l’eau bouillante. Il est peut-être téméraire d’aftirmer qu'un 
désinfectant qui tue les spores du charbon tuera aussi les spores 
des autres microbes pathogènes. Celles du télanos, en particu- 
lier, résistent, d’après M. le D' Vaillard, 3 à 4 minutes à la 
température de l’ébullition. Les spores, encore inconnues, de 
certaines maladies infectieuses sont peut-être tout aussi 
résistantes, peut-ètre même davantage. Il importe donc 
d'essayer l’action du désinfectant sur des spores très résistantes, 
comme celles qui sont contenues dans la terre de jardin, en 
particulier celles du bacillus subtiles. 

Des expériences ainsi conduites ont montré que les moyens 
ordinaires de désinfection agissent peu sur les spores. Ou bien 
le temps nécessaire pour tuer les spores est très long, ce qui est 
incompatible avec les exigences de la désinfection, ou bien on 
est conduit à exagérer les proportions du désinfectant, ce qui 
n’est pas toujours sans danger. Aussi a-t-on bientôt cherché à 
rendre les désinfectants plus actifs, en combinant leur action 
avec celle de la chaleur. Nous allons passer rapidement en revue 
les principaux travaux exécutés duns ce sens, puis nous analy- 
serons les travaux publiés sur le chlorure de chaux et leau 
oxygénée, qui sont les désinfectants auquels nous nous sommes 
arrêtés. 


436 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


CHALEUR. 


Koch : est le premier qui ait signalé le secours que la cha- 
leur peu! apporter aux désinfectants chimiques. Des vapeurs 
d'acide phénique agissant 45 jours à 20° sur de la terre conte- 
nant des spores de microorganismes ne diminuèrent en rien la 
vitalité de ces spores. Au contraire, les mêmes vapeurs agissant 
3 heures à 55° diminuèrent beaucoup le nombre des colonies; 
2 heures à 75° ne laissèrent plus que quelques spores vivantes. 
Le sulfure de carbone n’agit pas du tout à 20°: à 80°, en2 heures, 
ses vapeurs tuent tous les germes du sol. 

Ienle * trouve que l’action désinfectante de la créoline, du 
sublimé, de l'acide phénique, croît avec la température. Nocht ° 
constate que les solutions de savon phéniqué sont plus actives à 
chaud qu'à froid. 

Remouchamps et Sugg ‘ trouvent que des morceaux de linge 
et de couvertures, souillés par des matières fécales typhiques ou 
cholériques, sont rendus totalement stériles par l'acide phénique, 
la créoline, le lysol, par un séjour de 2 heures dans les solutions 
froides à 1 0/0, tandis que les solutions chaudes (50°) les stéri- 
lisent complètement après un séjour de 30 minutes. 

Behring * tue à 37° les microbes du choléra et de la fièvre 
typhoïde, avec des solutions de sublimé qui ne les tuent pas à 5°. 

Hammer ° fait remarquer que l’action des solutions de crésol, 
dans le métacrésotate de soude, est beaucoup plus énergique 
sur les spores du charbon à 33° qu'à 8° ou 10°. À 55°, les spores 
charbonneuses sont tuées en 5 minutes par des solutions de 
crésol à 10 ou 20 0/0. 

Le travail le plus complet sur l’action combinée de la cha- 
leur et des désinfectants est celui de Heïder ‘. Cet auteur a fait 

4. Ueber Desinfection. Müth. a. d. Kais. Gesundheitsamte, t. Ier, 4881. 
2, Arch. f. Hyg., t. IX, p. 188, 1883. 
3. Zeitschrift f. Hyg., t. VII, 1889. 
a phénique, la créoline et le lysol. (Mouvement hygicnique. Bruxelles, 


5. Ueber Desinfection, Desinfectionsmittel, etc. (Zeitschrift f. Hygiene, t. IX, p.395, 
1890. 

6. Ueber die desinficirende Wirkung der Kresolen, etc. (Archiv, f. Hygiene, 
1891.) 


| 7. Ueber die Wirksamkeit der Desinfectionsmittel bei erhôhter Temperatur. 
(Centralbl. f. Buct., t. IX, 1891, et Archiv. f. Hygiene, 1892.) 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 137 


agir les désinfectants sur des spores charbonneuses, en se ser- 
vant de la méthode des suspensions. L’acide phénique à 5 0/0 
tue ces spores à 15° en 30 à 40 jours, et en 1 heure à 2 heures 
à 550; en 3 à 15 minutes à 75°, L'acide phénylsulfurique (à poids 
égaux) à 5 0/0 tue les mêmes spores en 30 minutes à 50°, en 
1 minute à 75°. Enfin le mélange crésolsulfurique (poids égaux) 
à 5 0/0 tue ces spores à 55° en » minutes. De ces trois corps 
acides, c’est donc le dernier qui est le plus actif. L’acide sulfu- 
rique seul est peu actif sur les spores. La dilution à 10 0/0. à 
15°, ne tue pas en 10 heures ; les dilutions à 10 0/0, 5 0/0, 3 0/0, 
à 559, tuent en 1 heure, 3 heures, 7 heures. 

L'activité des corps neutres ou alcalins est aussi accrue par 
une élévation de température; ils sont d’ailleurs bien moins 
actifs que les corps acides. 

L'action favorable d'une élévation de température semble 
donc bien prouvée par tous ces travaux. 


CHLORURE DE CHAUX, 


La première application du chlorure de chaux à la désinfec- 
tion a été faite par Semmelweiss, qui fit disparaître, par la 
désinfection des mains des élèves sages-femmes à l’aide du 
chlorure de chaux, les épidémies de fièvre puerpérale qui déci- 
maient la Maternité de Vienne. 

Koch *, dans son travail sur la désinfection, a essayé l’action 
d’une solution filtrée à 5 0/0 de chlorure de chaux, sur des spores 
de charbon, séchées sur fil de soie; elles ont résisté 2 jours; au 
bout de 5 jours, elles étaient tuées. Nous ne pouvons nous expli- 
quer ce résultat ; peut-être le chlorure de chaux employé par 
Koch n’était-il pas assez riche en chlore. 

Woronzoff, Winogradoff et Kolessnikoff * trouvent au con- 
traire qu’une solution à 5 0/0 de chlorure de chaux tue en une 
minute les bacilles et les spores du charbon, à l’état sec ou 
humide. Une solution à 2,5 0/0 reste sans effet sur les spores 
séchées sur fils de verre (temps d'action : { minute). Une solution 


1. Ueber Desinfection. (Mitth. a. d. Kais. Gesundheilsamte, t. Ier, 1881.) 
2, De l'influence de différents désinfectants sur le contage du charbon. (Russ- 
kaia Medicina, 1886.) 


438 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


à 5 0/0 mêlée à parties égales avec du sang charbonneux frais 
le désinfecte en 10 minutes. 

Ces résultats sont très satisfaisants. Sternberg ! trouve au 
chlorure de chaux une activité encore plus grande; une solution 
filtrée à 1 0/0 de chlorure de chaux tue les spores du charbon en 
[ à 2 minutes. 

Martens ?, essayant l’action de différents antiseptiques sur les 
microbes du pus, trouve que l’eau de Javel à 41/1000 les tue en 
45 secondes, le chlorure de chaux à 1/100 en 14 secondes, et le 
bichlorure de mercure à 1/1000 en 15 secondes (ce dernier en 
milieu non albumineux). 

Jaeger * a essayé l’action de la pâte de chlorure de chaux 
(solution non fillrée) sur différents microbes. Les concentrations 
des différentes pâtes étaient 1/100, 1/10, 1/5, 1/3 et 1/2, et le temps 
d'action sur les microbes desséchés sur fils de soie de 1 minute. 
La preuve était faite par inoculation aux animaux. La pâle à 
1/100 a tué le choléra des poules, le rouget du porc et les bacilles 
du charbon. Les spores du charbon ont été tuées par la pâte à 
1/3. Les résultats ont été nets avec des cultures de tuberculose, 
du moins avec la pâte à 1/3, car, avec la pâle à 1/5, sur deux 
animaux mis en expérience, un seulement est resté indemne. Il 
en a été de même en faisant agir la pâte à 1/2 sur des crachats 
tuberculeux. Sur le bacille de la morve (pus d’un abcès), la pâte 
à 1/2 à, dans un premier essai, donné un bon résultat, dans un 
deuxième, un mauvais ; les pâtes à 1/3 et 1/10 ont donné de bons 
résultats ({ seul essai pour chaque). Il est regrettable que Jaeger 
n'ait pas essayé sur les spores du charbon, les bacilles de la tuber- 
culose et de la morve, l’action de la pâte à 1/100; il aurait con- 
trôlé les résultats de Woronzolf et de Sternberg, et aurait sans 


doute vu la pâte à 1/100 agir plus efficacement que les pâtes à . 


110, 1/3, 1/2. Néanmoins on peut, d’après ces essais, conclure 
avec Jaeger que le chlorure de chaux doit prendre une des pre- 
mières places parmi les désinfectants: le temps d’action est 
en effet excessivement court (1 minute). 


1. Desinfection and Desinfectants. (Preliminary Report made by the commitlee of 


desinfectants of the Amer. publ. Health Assoc. Philad. ined. News, t. Ier, 4886.) 

2. Beiträige zur Kentuiss der Antiseptica Vérchows Archiv. L. II, 1888. 

5. Untersuchungen ueber die Wirksamkeit verschiedener chemischer Desinfec- 
tionsmittel bei Kurz audauernder Einwirkung auf Infectiousstoffe. (Arbeiten aus 
dem Kais. Gesundtheitsamte, t. V, 1859.) 


TOMATE ENT ER a Lee 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 139 

Nous ferons cependant observer que le temps d’action est en 
réalité beaucoup plus long, car les fils de soie, après avoir été 
trempés, sont séchés un jour avant d'être inoculés aux animaux. 

Chantemesse et Richard' ont fait quelques essais sur la 
désinfection de selles typhiques et dysentériques au moyen du 
chlorure de chaux, en comparant son action à celle d’un lait de 
chaux. 1 c. ce. de lait de chaux à 20 0/0. ajouté à 50 c. c. de selles 
typhiques ou dysentériques, les a désinfectées en une demi-heure, 
tandis que 1 c. c. de chlorure de chaux à 5 0/0, ajouté à 
50 c. ce. des mêmes selles, ne les désinfectait pas en 1 heure. 
Nous ferons remarquer que les proportions du désinfectant sont 
ainsi réduites à 4 0/0 pour la chaux, à 4 0/0 pour le chlo- 
rure de chaux, de sorte que les essais ne sont pas compa- 
rables ; la proportion de chlorure de chaux est trop faible. 

Nissen * a repris le travail de Jaeger. Il trouve d'abord que le 
chlorure de chaux tue rapidement et à de faibles concentrations 
la plupart des microbes sans spores. Le bacille typhique meurt en 
5 minutes, lorsque le bouillon de culture contient plus de 
Oz,12 0/0 de ce sel; le microbe du choléra succombe à la même 
dose en 4 minute à 5 minutes; le charbon bactéridien, le staphylo- 
coccus pyogenes aureus ne résistent pas plus de 1 minute à des 
doses de 0:",1 et 05,2 0/0. 

Nissen a étudié aussi l’action de l’acide chlorhydrique qui 
développe du chlore à l’état naissant dans le chlorure ; l'addition 
de cet acide, dans la proportion de 1, 2, 3 et 5 0/0, active beau- 
coup l’action du chlorure sur les spores du charbon. Des essais 
parallèles montrent que, le chlorure seul tuant les spcres en 
30 minutes, le chlorure additionné d'acide chlorhydrique 5 0/0 
les a tuées en 5 minutes (50/0 d'acide chlorhydrique seul ne tue 
d'ailleurs qu'au bout de 40 minutes). 

Étudiant l’action antiseptique du chlorure de chaux, Nissen 
trouve qu'elle est absolument nulle en ce sens que, dans un 
bouillon, on peut ajouter du chlorure de chaux jusqu'à la dose 
qui tue, sans observer aucune entrave au développement. 

. Enfin l’auteur a montré avec des selles typhiques, préalable- 
ment stérilisées pour tuer les saprophyles, puis réensemencées, 


1. Désinfection des matières fécales au moyen du lait de chaux (Annales 
d'Hygiene publique, 1889). 
2. Uber die disinficirende Eigenschaft des Chlorkalkes (Zeitschr. f. Hygiene, 1890). 


# 


440 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


x 


qu'en mêlant à ces selles 0,5 à 1 gramme de chlorure de 
chaux en poudre pour 100 c. c. de liquide, on arrive à les 
stériliser en 10 minutes dans tous les cas, même si on y ajoute 
de l’albumine ou du sérum. Nissen conclut que le chlorure de 
chaux est un très bon désinfectant, à condition de garder les 
flacons bien fermés et à l'abri de la lumière. 

Geppert !, après avoir contrôlé l’action du sublimé et montré 
que ce corps est loin d’être aussi actif sur les spores charbon- 
neuses que l'avait affirmé Koch, chercha un autre moyen pour 
tuer rapidement ces spores. L’inactivité du chlore gazeux ayant 
été démontrée par Koch, Fischer et Proskauer, Geppert se servit : 
de l’eau de chlore. À 25 c. c. d’eau de chlore à 0,2 0/0, c’est-à-dire 
équivalant par litre à 632 c. c. de chlore, il ajoute 1 c: c. de culture 
de charbon sporulé. Au bout de 15 secondes, 1, 2’ et 3 minutes, 
il reprend 1 c. c. du mélange et le traite par l’ammoniaque éten- 
due ou l’hyposulfite de soude, ou par du sérum de sang stérilisé 
ou des solutions faibles de nitrate d'argent ou d’acétate de plomb, 
pour neutraliser le chlore (ces solutions n’ont d’ailleurs aucun 
pouvoir désinfectant). 15 secondes suffirent pour enlever aux 
spores tout pouvoir d'infection vis-à-vis des cobayes. L'eau de 
chlore ne paraissant pas suffisante, Geppert s’adressa au chlore à 
l'état naissant, obtenu au moyen de deux pâtes de chlorure de 
chaux, une forte etune faible, dont la force en chlore était mesurée 
par la quantité d'iode que chacune libérait de l’iodure de potas- 
sium. La pâte forte correspondait à 0:",17 0/0 de chlore; la pâte 
faible à 0:',08, ce qui respectivement équivaut, en centimètres 
cubes de chlore par litre, à 537c. c. et 253 c. c. On voit d’après 
cela que la première pâte correspond à peu près à notre hypo- 
chlorite de chaux au dixième. L'objet à désinfecter est plongé 
dans la pâte : sur le tout, on verse de l’acide chlorhydrique 
à 3 0/0; on lave à l’eau quelques heures ou on plonge dans 
l’ammoniaque étendue. Les fils métalliques, les lamelles de 
verre sont désinfectés par la pâte faible. Les fils de soie, surtout 
secs, exigent la pâte forte et un temps plus long, qui ne dépasse 
d’ailleurs pas 3 à # minutes. Les résultats sont donc moins satis- 
faisants qu'avec de l’eau de chlore. 

Enfin Geppert a vu que le chlorure de chaux est plus effi- 


1, Zur Lehre von den Antisepticis. — Ueber disinficerende Mittel und Methode», 
Berliner Klinische Wochenschrift (1889, no 36, et 1890, ne 11). 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. A 


cace tiède que froid. [l conseille, pour la désinfection des mains, 
des immersions alternatives dans une solution fiède de chlorure 
de chaux (proportion de la pâte forte) et dans la solution chlor- 
hydrique à 3 0/0. 

Geppert a encore cherché à renforcer l’activité du chlore en 
faisant agir50c. ce. d'acide chlorhydriqne pur sur 100 c. c. d'hypo- 
chlorite de soude en solution concentrée (632 c. c. de chlore par 
litre). Ce liquide n’a qu'un inconvénient, c’est qu'il dégage une 
odeur de chlore absolument suffocante. 

Bombici' a étudié comparativement l’action de quelques 
substances sur les spores du tétanos. Le lait de chaux n’a aucune 
action; l’acide sulfureux atténue seulement la virulence des 
spores; l’hypochlorite de chaux et le goudron, au contraire, 
agissent vigoureusement sur les spores. Bombici en conclut que 
pour désinfecter un local occupé par un tétanique, il faut faire 
des fumigations de chlore et laver les murs avec une solution au 
dixième de chlorure de chaux (équivalente par conséquent à 
notre solution concentrée). 


EAU OXYGÉNÉE. 


Angus Smith, en 1869, déclare que l’eau oxygénée est le 
désinfectant par excellence. 

En 1876, C. T. Kingzett * empêche plusieurs fermentations 
de se produire en employant une eau oxygénée à 10 volumes, 
c'est-à-dire capable de dégager 10 fois son volume d'oxygène. 

Il empèche pendant un certain temps le lait de surir, le blanc 
d'œuf et la pâte de farine de pourrir, la bière et le moût de rai- 
sin de fermenter par l’addition de quantités variables d’eau 
oxygénée. 

En 1877, le Dr Day * rapporte qu'il a traité 65 cas de fièvre 
scarlatine en frottant le corps du malade avec de la graisse con- 
tenant de l’eau oxygénée ; 6 cas seulement furent mortels, 

Gutitmann*, en 1878. étudie les propriétés toxiques el antisep- 


1. Désinfection après des cas de tétanos. (Lo Sperimentale, 15 mai 1894). 

2. Experiments with Peroxyde of Hydrogen (Communication to the British Asso- 
ciation Meeting, 1876). 

3. British medical Journal, mars 1877. 

4. Ueber die physiologische Wirkung des Wassertoffsuperoxyds. (Virchow's 
Archiv. Mai 1878.) 


142 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tiques de l’eau oxygénée. 1 ce. c. d'eau oxygénée acide à 
10 volumes empêche pendant 9 mois 40 c. c. d'urine de se putré- 
fier: cette urine était conservée à l'air libre. Guttmaun fait 
observer que cette urine est acide, ce qui explique peut-être cette 
conservation extraordinaire. De même, l’eau oxygénée (Gutt- 
mann ne dil pas à quelle dose) empêche la putréfaction d’une 
infusion de viande, ou la fermentation du moût de raisin, non 
additionné de levure et placé à 350, alors que la même infusion 
et le même moût de raisin, non additionnés d’eau oxygénée, fer- 
mentent rapidement. 

Paul Bert etRegnard : en 1880 et 1882 trouvent que 1 0/0 d’eau 
oxygénée pure suffit pour arrêter la putréfaction dans des flacons 
contenant du lait, du blanc d'œuf, de l’eau de levure sucrée, de 
l'urine, de l’amidon, etc. Ce résultat s'accorde avec les expé- 
riences de Kingzett. 

Damaschino traite avec succès le muguet en faisant des 
lavages 3 ou 4 fois par jour avec l’eau oxygénée. 

Péan et Baldy * se servent d’eau oxygénée à 2 volumes, 
privée d’acide sulfurique, pour les pansements etles lavages; ils 
l’'emploient à 6 volumes pour les pulvérisations. 

En 1883, Nocard et Mollereau * présentent à l’Académie de 
Médecine une note des plus intéressantes. Si on mélange 1 c. c. 
de jus de viande provenant d’une tumeur de charbon sympto- 
matique à 2 c. c. d’eau oxygénée à 10 volumes, qu'on laisse agir 
4 heures, et qu'on inocule 3 gouttes à un cobaye, ce cobaye ne 
succombe pas et peut supporter l’inoculation de 3 gouttes du 
même jus de viande soumis seulement 1 h. 1/2 à l’action de l’eau 
oxygénée. Après quoi, il a acquis l’immunité contre une inocu- 
lation virulente. De même, une chèvre a pu acquérir l’immunité 
par trois inoculations de virus ayant subi l’action de l'eau 
oxygénée pendant 5 heures, 2 heures et une demi-heure. 

Ebell ‘ remarque que la fermentalion alcoolique d'un jus 
ensemencé de levure fraiche s'arrête immédiatement lorsqu'on y 


4. Action de l’eau oxygénée sur les matières organiques et les fermentations. 
(Comptes Rendus, mai 1882.) 

2. Emplois de l’eau oxygénée. (Journal de Thérapeutique, 1882.) 

3. De l'emploi de l’eau oxygénée comme moyen d'atténuation de certains 
virus. (Comples Rendus d: l’Académie de médecine, 2 janvier 1883.) 

4. Emploi de l’eau oxygénée dans l’industrie et dans la thérapeutique. (Moni- 
teur scientifique, mars 1883.) 


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5 
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:. 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 143 


ajoute de l’eau oxygénée dans la proportion de 3 H°0* pour 
10,000 parties de liqueur, ce qui, rapporté au poids moléculaire de 
l’eau oxygénée, donne 1:,02 0/0, ou en volume 38 ce. c. 25 d’eau 
oxygénée à 10 volumes 0/0; c'est sensiblement la proportion 
trouvée par Kingzett, Paul Bert et Regnard. Paul Bert et 
Regnard ‘ émettent l'idée que l’eau oxygénée peut être employée 
dans le traitement des abcès profonds et fistuleux et l'emploient, 
sans succès, à un essai d'atténuation du virus morveux. 

Miquel ? dans un tableau intitulé : Doses les plus faibles de 
quelques antiseptiques capables de s’opposer à la putréfaction 
d'un litre de bouillon de bœuf stérilisé et neutralisé, dit que l’eau 
oxygénée est active en ce sens à la dose de 1c.c. 875 d’une solu- 
üon à 10 volumes. 

Prien * trouve que 1 c. c. 875 0/0 d’eau oxygénée à 10 volu- 
mes arrête la fermentation alcoolique, 5 e. c. 625 0/0 tuent Îles 
bactéries de la pourriture ; 30 e. ce. 0/0 ne font rien sur les spores 
du bacillus subtilis. 

Bettmann ‘ a essayé d'appliquer l’eau oxygénée à la chi- 
rurgie. Îl a soigné avec de l’eau oxygénée à 11 volumes 50 cas 
d'otite moyenne et a obtenu d'excellents résultats; 4 cas de 
dacryocystite, dont l’un était déjà soigné vainement par lui depuis 
6 mois par tous les moyens connus, guérirent complètement en 
peu de temps par l'emploi de l’eau oxygénée. 

Altehüfer * a soumis à une vérification les assertions de Van 
Hellina Tromp, que l’eau oxygénée est un moyen énergique, 
commode, et peu coûteux, pour désinfecter l’eau de boisson. Il 
ze put pas constater qu’une solution de 1/10000 à 1/5000 d’eau 
oxygénée à 10 volumes remplit ce but, mais il trouva qu'une 
concentration de 1/1000, après 24 heures d'action, suffit pour 
tuer les microbes ordinaires de l’eau, ceux de l’eau d’égout, et 
les bacilles typhique et du choléra dans l’eau. Il faut remarquer 
que Altehüfer n'indique jamais de témoin dans ses expériences, 


4. Sur l'emploi de l’eau oxygénée en médecine. (Société de biologie, 1883.) 

2, Annuaire de l'observatoire de Montsouris pour l’année 1884. 

3. Ueber die Wirkung des Wasserstoffsuperoxyds auf die niederen Organis- 
men, und seine Bedeutung für die Desinfection des Ozonogens. (Arbeiten der rus- 
sischen hygienischen Gesellschaft. T. IV, p. 141, 1885.) 

4. Peroxyde of hydrogen us a medicinal agent. Chicago, 1885. 

5. Desinfection des VWassers durch Wassertoffsuperoxyd. (Centralblatt für 
Bacteriologie, juillet 1890.) 


144 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


et qu'il se peuttrès bien que la dose d’eau oxygénée qu'il intro- 
duit dans la gélose, au moment de l’ensemencement, empêche 
la culture. 

Ensuite vient le travail de Pane :. Cet auteur a étudié l’action 
désinfectante de l’eau oxygénée et aussi son action antiseptique 
sur les spores du charbon et sur le staphylococcus pyogenes aureus. 
Il trouve d’abord qu’une solution d’eau oxygénée de 1/5052 à 
1/352 dans la gélatine ou la gélose empêche le développement 
des spores du charbon. Ces nombres sont rapnortés au poids 
moléculaire de l’eau oxygénée ; les quantités d’eau oxygénée du 
commerce à introduire dans le milieu nutritif pour faire ces 
dilutions sont calculées d’après le titre de cette eau oxygénée. Ce 
serait, pour une eau oxygénée à 10 volumes, 0 €. ©. 75 à 
12 c.c.5p. 0/0. Pane prend ensuite un certain nombre de fils de soie 
restés quelques jours dans ces milieux stériles et les transporte 
dans de la gélose fraiche. Il trouve alors que les fils qui sont 
restés quelques jours dans une solution à 1/352 restent stériles, 
et il en conclut que les spores sont tuées. Nous ferons observer 
qu'il se peut très bien que le fil entraîne une quantité d’antisep- 
tique qui, rapportée au volume de gélose où le fil est semé, 
varierait entre 1/352 et 1/5052, etempêcherait par conséquent le 
développement. Pane ne semble pas avoir fait attention à cette 
cause d'erreur. L'auteur a ensuite étudié l’action désinfectante 
directe de l’eau oxygénée à 6 à 8 volumes sur les spores du char- 
bon, desséchées sur fil de soie ; 15 à 20 fils sont introduits dans 
20 c. c. d’eau oxygénée, et laissés des temps variables. A la fin 
de chaque temps, un fil est retiré et semé dans la gélatine ou la 
gélose : Pane n'indique pas si le fil est lavé, ou s’il est semé dans 
une quantité de gélatine ou de gélose suffisante pour qu'il n’y ait 
pas d’action antiseptique. En admettant que l’auteur se soit mis 
en garde contre cette cause d'erreur, ses résultats sont intéres- 
sants. Pane remarque d’abord une grande variabilité dans l’action 
des diverses eaux oxygénées. Avec la même eau oxygénée, le 
pouvoir germicide augmente avec la température. Ainsi il lui faut de 
% à 14 heures à 6°, et de 40 à 50 minutes à 32°, pour tuer les 
spores du charbon. Le même fait a lieu pour le sublimé dans l'eau 

1. Sull'azione antisettica dell’acqua ossigenata et sull’influenza della tempera- 


tura nelle disinfezione. (Annali dellIstituto d'Igiene sperimentale dell Universila di 
Roma. Volume IT, série IF, 1890. 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 145 


distillée à 1/20000, qui tue les mêmes spores en 2 heures et 
demie à 4°, et en 50 minutes à 34°. Pane trouve des résultats 
analogues pour le staphylococcus pyogenes aureus, pour les bacilles 
de la fièvre typhoïde et du choléra. — Pane examine ensuite 
l’action de l’eau oxygénée sur le pus, et trouve qu’en agitant 
4 c. c. de pus avec 10 c. c. d’eau oxygénée du commerce, les 
corpuscules du pus sont entièrement détruits en peu de temps. 
— Des laparotomies enteprises sur des lapins, en se servant 
de l’eau oxygénée comme désinfectant, ont bien réussi. 

Gibier’ a fait sur l’eau’ oxygénée quelques expériences. 
L'addition de +,5 0/0 à des cultures de bacille typhique, choléra, 
charbon, bacille de la fièvre jaune (?), coceus de l’ostéomyélite, 
bacille pyocyanique, b. prodigiosus et b. megaterium, amènerait 
en quelques instants, d’après l’auteur, la mort de ces microorga- 
nismes. Nous ne savons si cette proportion de 1,5 0/0 désigne 
l'eau oxygénée commerciale, ou de l’eau oxygénée rapportée au 
poids moléculaire: ce dernier cas est plus vraisemblable, ce qui 
donnerait 55c.c.25 d’eau oxygénée à 10 volumes. Les spores du 
charbon, d’après Gibier, seraient tuées très vite, et la virulence 
du virus rabique considérablement atténuée, par leur mélange 
avec l’eau oxygénée. 

Heidenhain ? essaye de stériliser du lait au moyen de l'eau 
oxygénée. Après le mélange du lait avec l’eau oxygénée dans la 
proportion de 10 à F (il s’agit sans doute d'eau oxygénée du 
commerce), il monte à la surface du lait une légère crème jau- 
nâtre qui, après 24 heures, se transforme en une pellicule sèche 
et épaisse, et se sépare du lait sous-jacent par une couche mince 
aqueuse. Ce dernier se conserve alors beaucoup plus longtemps 
que le lait non additionné d’eau oxygénée, et se montre par la 
culture dépourvu d'organismes. Au contraire, dans la couche 
supérieure, on trouve beaucoup de bacilles et de microcoques 
sur la vitalité desquels l’auteur ne se prononce pas. En résumé, 
‘ajoute Heidenhain, le lait cuit est rendu stérile par l'addition 
d’eau oxygénée dans la proportion de 10 0/0. Le lait cru est mis 
à l'abri de la fermentation pendant 3 à 8 jours par l'addition de 


4. Peroxyde of Hydrogen and Ozone. (Medical Times, 17 octobre 1890.) 
2. Ueber Milchsterilisation durch Wasserstoffsuperoxyd. (Centralblatt f. Bacle- 
riologie, T. VIII, n° 16, octobre 1890.) 


446 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


la mème quantité d’eau oxygénée dans les trois premiers jours, 
et est entièrement inoffensif pour les enfants. 


II. —- EXPÉRIENCES SUR LES GERMES HUMIDES 


Nos expériences de désinfection ont d’abord porté sur des 
sermes humides, c’est-à-dire que nous avons essayé l’action du 
désinfectant sur une culture en milieu liquide. Nous avons 
opéré en général de la façon suivante : une certaine quantité 
de culture en milieu liquide, un centimètre cube, par exemple, 
est ajoutée à une certaine quantité de solution désinfectante, 
dix centimètres cubes; le tout est bien agité; on repuise au bout 
de temps croissants, au moyen d’un tube effilé, une petite goutte 
qui est semée dans un volume de milieu de culture assez grand 
pour que la quantité de désinfectant entraînée n'empêche pas la 
culture, ce dont il est facile de s'assurer, soit par une expérience 
préalable, soit en resemant, avec une culture non traitée, un  - 
flacon contenant la mème quantité de désinfectant; ce flacon 
servira de témoin. Somme toute, nous avons employé la méthode 
des suspensions. 

Dans la recherche d’un désinfectant, nous ne pouvions songer 
à faire agir cette substance sur les germes de toutes les maladies; 
beaucoup de ces germes sont d’ailleurs encore inconnus. Nous 
avons pris comme pierre de touche les germes du bacillus subtilis, 
parce que ces germes sont les plus résistants à l’action de la 
chaleur. Nous avons constaté ultérieurement, en les comparant 
à ceux de quelques maladies connues, comme les germes du ï 
charbon, qu'ils étaient également beaucoup plus résistants que | 
ces derniers vis-à-vis des substances désinfectantes que nous 


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avons essayées. Si donc on pouvait détruire les germes du : 
bacillus subtilis, on aurait toutes raisons de penser qu'on 
détruirait également tous les autres germes. Le fait serait : 
d’ailleurs facile à vérifier pour une maladie dont le germe serait : 


connu. 

Il n’est pas difficile de se procurer des spores du bacillus È 
subtilis et d’en graduer, pour ainsi dire, la résistance. On prend 
une culture en bouillon de subtilis, extrait de l’eau de foin; 
lorsque cette culture est âgée de huit jours, le voile s’est dissocié, 


d'us. duré il 2 


ua L 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 447 


est tombé au fond du vase, et la plupart des bacilles ont formé 
leurs spores. Dans des tubes étroits, fermés à un bout et conte- 
nant chacun environ 1 c. c. de bouillon neutre, on introduit une 
goutte de cette culture ; ces tubes sont ensuite fermés à la lampe, 
de façon à y laisser une certaine quantité d'air, et placés dans 
l’eau. On fait bouillir, et on relire au bout de 15, 30, 45 minutes, 
1 heure, 1 h. 1/2. 2 heures, etc., d'ébullition, un certain nombre 
de ces tubes, dix, par exemple, pour chaque temps. Ces tubes sont 
ensuite placés à l'éluve à 34°; au bout de 12 à 24 heures on 
remarque dans un certain nombre d’entre eux une culture de 
bacillus subtilis, bien manifeste par le voile qui s’est formé à la 
surface du liquide. Parmi les dix tubes ayant subi l’action de la 
tempéralure de l’eau bouillante pendant 1 heure, il y aura par 
exemple 7 cultures; les spores ont donc résisté 1 heure à 100° 
(chaleur humide). Un de ces tubes est alors coupé et son contenu 
est ensemencé dans un ballon de bouillon ; au bout de huit jours 
on à ainsi une culture contenant des spores résistant | heure 
à 100°. Les tubes retirés au bout de 15, 30, 45 minutes, donnent 
évidemment des cultures; il en est de même pour 1! h. 1/2 et 
2 heures; on peut même avoir des tubes donnant une culture 
après 6 heures dans l’eau bouillante. Nous nous sommes con- 
tentés, dans nos expériences, de spores résistant 1 heure à 100°. 
Nous avons fait agir les désinfectants soit sur ces spores seules, 
soit en prenant un mélange à volumes égaux de cetie culture et 
d'eau de terre, faite de la facon suivante : de la terre du jardin 
de l’Institut Pasteur était délayée au moyen d’une baguette de 
verre dans un grand verre à expérience, avec de l’eau ordinaire ; 
après quelques minutes de repos, la terre et les grosses particules 
sont tombées au fond. On décante avec précaution le liquide 
supérieur, riche en microbes de toutes sortes. Enfin, dans nos 
dernières expériences, nous avons fait agir les désinfectants sur 
des germes de l’eau de terre, résistant 1 heure à 100°, obtenus 
à peu près de la mème façon que les germes de bacillus subtilis, 
sauf que nous introduisions dans les petits tubes étroits, 1e. ce. de 
bouillon neutre et quelques gouttes d’eau de terre. Toutes ces 
variations seront indiquées dans les tableaux résumant nos 
expériences. 

Au début de nos travaux, nous avons porté nos efforts sur la 
recherche d'un gaz ou d’une vapeur qui, se diffusant dans toutes 


448 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


les parties de la salle à désinfecter, détruirait les microbes. Dans 
un travail antérieur publié dans les Annales ‘, l'un de nous avait 
établi que les vapeurs de certaines essences détruisaient les 
germes du charbon au bout de queiques jours. Mais avec les 
germes du bacillus subtilis les résultats furent nuls. Nous 
essayâämes l'ozone; là encore, malgré des tentatives variées, le 
résultat fut nul. Nous fûmes alors amenés à essayer l’eau 
oxygénée, dont les propriétés oxydantes se rapprochent de celles 
de l'ozone; puis nous essayâmes des oxydants encore plus éner- 
giques, les hypochlorites, et, en particulier, l’eau de Javel et 
la solution de chlorure de chaux du commerce. Voici les prin- 
cipaux résultats de cette élude. 


A. — ACTION DE L'EAU OXYGÉNÉE SUR LES GERMES HUMIDES 


Avant d'entrer dans le détail des expériences, nous croyons 
utile de donner sur l’eau oxygénée quelques renseignements. 
L'eau oxygénée du commerce est toujours acide; comme cette 
acidité pouvait avoir une influence sur le résultat des expériences, 
nous l’avons dosée une fois pour toutes pour chaque eau oxy- 
génée employée, et évaluée par le nombre de centimètres cubes 
de potasse à 10 0/0 nécessaire pour neutraliser un litre d’eau 
oxygénée. De plus, il était utile de connaître le titre ou richesse 
en oxygène de l’eau oxygénée, c’est-à-dire le volume d'oxygène 
qu’elle peut dégager. Ainsi une eau oxygénée qui titre 12 peut 
dégager 12 fois son volume d'oxygène. Au début de nos expé- 
riences, nous mesurions Ce titre en décomposant, dans une 
éprouvelte graduée, l’eau oxygénée par du bioxyde de manga- 
nèse: mais on sait que la réaction entre l’eau oxygénée du 
commerce et le bioxyde de manganèse n’est jamais régulière. 
Pour éviter les incertitudes provenant de ce chef, nous avons 
adopté le titrage à l'hypermangate de potasse en présence de 
l'acide sulfurique. La solution d'hypermanganate est titrée 
comme à l'ordinaire, au moyen de l'acide oxalique, et on sait 
que 158 grammes d'hypermanganate décomposent 85 grammes 
d'eau oxygénée H°0*. Partant de là, il est facile de savoir le 
nombre de volumes d'oxygène que dégage un volume d’eau 
oxygénée du commerce; c'est son titre. 


1. Les essences au point de vue de leurs propriétés antiseptiques, année 1887. 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 429 


Ces détails donnés une fois pour toutes, voici un tableau 
indiquant les résultats obtenus avec une première eau oxygénée 
donnant 10,4 fois son volume d'oxygène, et dont l'acidité corres- 
pondait à 40 e. c. de potasse à 10 0/0 par titre. 


TABLEAU I 


Organismes : Sp. de Bacillus subtilis. Température {. — 15°. 


Titre T de l’eau oxygénée — 10,4. Acidité A — 40. 


| No DILUTIONS TEMPS D'ACTION 

| de TT —————ÛDÛ 

Éies L'EAU OXYGÉNÉE 1’ » 3". # | 5: 450300 4h. 2h13 he 

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1 n = sp 

b) EO pure neutre. = = Fe 

6 ==, — = ÉT ss. 22 
7 ms » | _—— = | —— | LAS 

S Id. colorée. | [LE À] | PE 

9 EO acide 1/2 nl nl 3 

40 » 1 / 3 =b BE 

{1 » 1/4 dE ü dE 

42 » 475 | + | | re 
=> == me | = | | Enr lion 

Q . | 

13 v » 1/10 : | HE + 

14 » 1/21) | | al BA | == 

| | 
| 


Toutes ces expériences ont été faites à 15°, par la méthode 
des suspensions, en opérant sur des spores de bacillus subtilis 
résistant 4 heure à 100°, et en mélangeant 1! c. c. de culture à 
10 c. c. d’eau oxygénée prise telle quelle, ou après neutralisation, 
ou bien diluée au 1/3, au 1/4, etc. Dans l'expérience 8, l’eau 
oxygénée avait été colorée par du bleu de méthylène, qui n’a 
par lui-même aucune action sur les spores. 

Les résultats de ces premières expériences étaient très satis- 
faisants. Les spores du bucillus subtilis étaient tuées en 5 minutes 
par l’eau oxygénée concentrée, en 15 minutes par l’eau oxygénée 
étendue de son volume d’eau. Les dilutions plus grandes 
restaient sans action pendant le même temps. 

Malheureusement, il nenous a pas été possible de retrouver ces 
résultats avec d’autres eaux du commerce, bien que nous en ayons 


employé plusieurs espèces, comme le montre le tableau suivant : 
29 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


LS 
C7 
© 


TABLEAU II 
t. — 159, Ssp : Culture sporulée de Bacillus subtilis. 


Ssp +edt, mélange à parties égales de cette culture et d’eau de terre. 


E DILUTIONS TEMPS D'ACTION 
S ORGANISMES | OBSERVATIONS de ee ee EE 
= L'EAU OXYGÉNÉE AE 40° | 45° | 30° ÎL h°12 h.13 h. É 
1 Ssp T=11 A—60|! EOp acide no 6 | + | + ee] | 
1bis|Ssp cult.filtr. Id. + | + | + | + Re En 
2 Ssp T—10 A—35|EO0Op ac. améric. + | | | SE 
) » T—12 A —11| EOp'acide no! + + | | nu 
L 5 F=11 A —=33l EOpacidens2, | | + = re 
5 » T— 8 A—#4,5] EOp acide sup. + + | + 
ü » [—11 A—60!| EOp acide no 6. LE PHARES ITA | | | TE 
RCE » [—11 A —33| EOp acide no 2. era ee | < L 
| $ » » » id. t- | + |—|— MES 
9 » T=10.5 A—60| EOp acide no 6. | + | + | + | + pe 
10 | Ssp +edt [T—11 A—33| EOp acide n02. | + | +|+|+|+| + |+ | +) 
11 Ssp T—10 A—40[E0 acide électr. | : + 5 | + EM 
42 » Ti EO neutre no 6. + | L TEE ie 
13 | Sp +edt. |ÎT —11 F0 Pueutre ane 2 er El eee) 
14 | Ssp T= 10 EO neutre électr. se ra EE E 
45 | Ssp + edt ÎT — 12 EOp P. onu En nn ras EE 


Toutesceseaux oxygénées empêchent la culture à1/300; nous 
avons alors semé une pelite goutte de suspension, égale à 1/30 de 
centimètre cube, dans 100 ce. c. de bouillon contenu dans de grands 
matras Pasteur, ce qui donne une dilution d’antiseptique de 1/3000. 

Les expériences 1 et 1 bis ont été faites avec la même eau 
oxygénée; mais, dans la deuxième, la culture de sublilis avec 
spores a été filtrée, pour la débarrasser des grumeaux qui sont 
attaqués sans doute plus lentement que les spores isolées; on 
n'a d’ailleurs pas obtenu ainsi un meilleur résultat. L’expé- 
rience 2 a été faite avec une eau oxygénée américaine, désignée 
sous la rubrique Marchands Peroxyde of Hydrogen, et l'expérience 
5 avec une eau oxygénée dite de qualité supérieure; l'expérience 
11, avec une eau préparée par l'électricité, nous n'avons pu 
savoir comment, et enfin l'expérience 15 avec une eau préparée 
au laboratoire en faisant passer un courant d’acide carbonique 
dans de l’eau distillée tenant en suspension du bioxyde de ba- 
ryum pulvérisé; cette eau était très légèrement acide (acidité de 
l'acide carbonique). 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 191 


La conclusion de ce tableau est que, même après trois heures, 
on n’est pas sûr de tuer les spores du bacillus subtilis avec l’eau 
oxygénée. Comme ces expériences ont porté sur un grand 
nombre d'eaux oxygénées, nous adoptons plutôt ces conclusions 
que celles qui découleraient du tableau n° 1. 

Les eaux oxygénées n’agissant pas ou n’agissant qu'après 
des temps très longs sur les spores du bacillus subtilis, 1 était 
intéressant de voir si elles se montreraient plus actives sur les 
germes d’autres organismes moins résistants et sur des microbes 
sans germes. Le tableau IT résume ces expériences. 


TABLEAU III 


CREER 
£ DILUTIONS TEMPS. D'ACTION 

S ORGANISMES | OBSERVATIONS de TT — 

: L'EAU OXYGÉNÉE | 1’ | 5° | 15° | 30‘ [th [2h.13h É 

i Aspergillus T—10 À — 60[E0 pure acide n° 6 CR MES Sent, |), 20 

niger spores.| , » EO p. neutre. SE PNEU een NEA RE 

D, | Spores du | »  » |EOpurescideno6| | — | — | || || + 

charbon D=UMA33 | EOlpure acideno ME |) fées 
x » » » [EO pure acideno2| + | + Sp | 
+ » D=—=10 EO p. neutre n° 6 —|—-|-|-|-|-) + 
mess  |[T=û ro meme 4 
GE » EO acide n° 6 1/5 (ET RE | — | + | 
HE » EO acide n° 64/10) | EE | E|ÆE | + | 
LA Bac.typhique|T—11 A—33| EO acide no 2 — | — = |Ner:| (5 
D Lo CNE ON DE mn ee eu En El 
10 | Levure de bière. DEAR 2 EO acide no 2 Eu = = Ge 


L'aspergillus niger, sur lequel nous avons opéré, provenait 
d'une culture dans le liquide Raulin, agité de façon que les 
spores entrent en suspension. { c. c. de cette suspension noirâtre 
est ajouté à 10 c. c. d’eau oxygénée. lise produit alors un abondant 
dégagement d'oxygène, surtout avec l’eau oxygénée neutre, les 
spores agissant comme un corps pulvérulent. Les spores sont 
immédiatement décolorées. Il est à remarquer que l’eau oxygénée 
neutre à agi plus énergiquement que l’eau oxygénée acide, 
probablement parce qu’elle mouille mieux les spores. 

Pour les expériences sur les spores du charbon, nous avons 


492 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


employé un charbon très virulent, dit virulent de Savagna, et 
en même temps très résistant à la chaleur. 

On voit encore ici que les résultats sont variables avec les 
eaux oxygénées, même avec la même eau oxygénée n° 2, à six 
mois d'intervalle (exp. 2 et 3) : il faut compter sur 15 minutes 
d'action avec une eau oxygénée acide, et sur 30 minutes avec 
une eau oxygénée neutre, pour tuer les spores du charbon. 

Au contraire, l’eau oxygénée agit très vite sur les organismes 
sans spores, comme le bacille typhique et la levure de bière. En 
1 minute, ces microbes sont lués par l’eau acide et en 5 minutes 
par l’eau neutre. La culture du bacille typhique ayant servi dans 
ces expériences était une culture en bouillon âgée de 5 jours, fille 
d’une culture de la rate d’un typhique. Quant à la levure, elle 
provenait d'une culture de levure de Tantonville, rajeunie à 15° 
dans de l’eau de navets sucrée à 5 0/0 de sucre, et faiblement aci- 
dulée par l'acide tartrique. 1 €. c. de cette culture était ajouté 
à 10 c. ce. d’eau oxygénée, et, au bout des temps choisis, une 
petite goutte de la suspension était semée dans 10 c. c. d’eau de 
navets sucrée, placée ensuite à l'étuve à 23°. 

L'eau oxygénée n'agissant pas ou n’agissant que très lente- 
ment à 15° sur les germes du bacillus subtilis, uous avons cherché 
à la rendre plus active. Les expériences de Pane dont nous avons 
parlé plus haut ont montré que l’eau oxygénée est plus active à 
25° qu’à 6° sur les spores du charbon. 

Il était intéressant de voir s’il en serait de même sur les ger- 
mes du subtilis. Seulement, comme ces germes sont beaucoup 
plus résistants que ceux du charbon, nous avons choisi une tem- 
pératare plus élevée; nous avons fait agir les eaux oxygénées 
à 500. 

Nous plongions les tubes contenant les suspensions dans 
un bain-marie chauffé à cette température; les temps sont 
comptés à partir du moment où les tubes sont plongés dans le 
bain. Voici un tableau qui résume nos expériences. Pour la 
signification des abréviations, nous prions nos lecteurs de se 
reporter aux tableaux précédents. 


Fm OS NP MT POP RIT 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 153 


TABLEAU IV 


t. — 500 
5 DILUTIONS TEMPS D'ACTION 
$ ORGANISMES | OBSERVATIONS de RS CE me OP na TS 
à L'EAU OXYGÉNÉE 1 Ù 10 19: 1130%1745 10h: É 
! Ssp T—11 A—33| EOp acide no 2 | + sit LAN et 
[_e » T—10,5 A—60| EOp acide no 6 | + LEZ TE En NA A ss 
3 | Ssp +edt EOp acide no 2 | + | — fer ns mu 
4 | Ssp+edt [|T—12 a —11| EOp acide no 1 + | — | 
T—10 A—8$0| EOp acide no 4 | + | + = Æ È DE 
TEAM S5 EOp acide améric. RE + = = ETS 
T=8 A—24,5| EOp acide sup. | + | + AU FETE 
5 Ssp EOp acide n°2] | +| EE EN AR On ET 
EOp acide n° 4 = CRT | F. 
T—5 A—35|F0p acide améric. CS RE EI EE | 
T—7,5 A—9,0| FOp acide ne 7 à CAE ve 
6 Ssp P—=5"A—#33| E0p'acide ne 2 maire etes re 2 
7 Ssp—+edt |T—11 EOp neutre no 2 ss le FETE 
8 Ssp EN EOp neutre nv 201e fc LEE ne NS 
= 7 5 EOp neutre no 7 AP nn ne AO 
9 Ssp EOp neutre n° 2 SU — — | + 
EUX | Ssp+edt Ti EOp neutre P + | + 2e bi D 


Un premier point se dégage, si l’on compare respectivement 
deux à deux les expériences 8, 9, 10 et 13 du tableau IT, et les 
expériences 1, 2, 3 et 7 du présent tableau. Ges expériences ont 
élé faites en même temps, sur les mêmes germes, avec les 
mêmes eaux oxygénées ; elle ne diffèrent qu'en ceci: les pre- 
mières ont été faites à 15°, les deuxièmes à 50°. Dans toutes, 
l'eau oxygénée s’est montrée beaucoup plus active à 50°, qu'elle 
soit acide ou neutre. Pour les expériences 8 et 1, la différence 
des temps nécessaires pour tuer les spores du subtilis est au 


moins de 1 heure; pour 9 et 2, de 25 minutes «uw moins: pour 


10 et 3, de 3 heures; pour 13 et 7, de 2 heures trois quarts. 

Si maintenant on considère le tableau IV, on voit qu'il y a 
encore une certaine variabilité dans les effets des différentes eaux 
oxygénées. En général, les eaux faiblement acides se sont mon- 
trées moins efficaces ; celle qui a agi de la façon la plus constante 
est l’eau oxygénée n° 2, d’acidité moyenne 33; en 30 minutes 
à 50°, les germes du bacillus subrilis et de l’eau de terre ont élé 
tués. 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


PS 
Æ 


Eofin, avec une même eau, l’acidité intervient un peu pour 
rendre l’eau plus active, comme le témoignent les expériences 
3 et 7 faites en mème temps sur les mêmes organismes, avec la 
même eau oxygénée : acide, elle a Lué en 5 minutes: neutre, en 
15 minutes seulement. 

En résumé, l'eau oxygénée acide où neutre n'agit qu'au bout de 
quelques heures à 15° sur les germes du bacillus subtilis. 

A 50°, ces germes sont tués en 30 à 45 minutes par l'eau oxygé- 
née acide ou neutre. 

Au contraire, l'eau orygénée tue très rapidement en 15 et 
5 minutes, même à 15°, les germes du charbon et des organismes sans 
spores. | 


B. — ACTION DE L'EAU DE JAVEL SUR LES GERMES HUMIDES 


L'eau oxygénée n'agissant que très lentement à 15° sur les 
germes du bacillus subtilis, et l’action à 50° étant variable avec 
les différentes eaux oxygénées, nous avons cherché à trouver 
d’autres corps dont l’action füt à la fois plus énergique et plus 
constante. À défaut de l'oxygène, nous nous sommes adressés 
au chlore. L’inefficacité du chlore sec à l’état gazeux étant démon- 
trée, nous avons pensé à employer l’eau de chlore. Une eau de 
chlore contenant 763 c.c. de chlore par litre a tué à 150 en 
5 minutes les spores du subtilis: la même eau de chlore, dont la 
teneur en chlore était tombée à 200 c. c. par litre, a tué en 
1 minute les spores du charbon. L'eau de chlore est donc très 
efficace ; malheureusement, même lorsque cette eau est diluée 
à 1/100, son odeur est insupportable; or, à cet état de dilution, 
l’eau de chlore s’est montrée absolument ineflicace. 

Nous avons alors essayé les hypochlorites qui réunissent les 
propriétés oxydantes du chlore et de l’oxygène et nous nous 
sommes d'abord adressés à l’eau de Javel du commerce. Cette 
eau, dite eau de Javel concentrée, d’une couleur jaune, marque 
9° à l’aréomètre Baumé; 1 litre équivaut à 5 litres de chlore. 
Ce dernier dosage a été effectué par la méthode de Gay-Lus- 
sac, qui donne de bons résultats à condition que l’on opère à 
l'abri des rayons directs du soleil. Lorsqu'on laisse une solution 
d'hypochlorite exposée quelque temps à la lumière directe du 
soleil, le titre s'élève rapidement jusqu’à l'infini. L'hypochlorite 
se change alors en chlorite qui peut réagir sur les malières colo- 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 459 


rantes, mais ne peut convertir l'acide arsénieux en acide arséni- 
que; d’où il résulte que les premières gouttes d’une solution 
ainsi altérée décolorent immédiatement la liqueur d’épreuve. 
Pour cette raison, nous avons préféré remplacer la solution 
arsénieuse par une liqueur contenant par litre 2,77 d'hyposul- 
fite de soude, sel qui offre l'avantage d’être attaqué par les 
chlorites comme par les hypochlorites. 

En même temps que l’eau de Javel du commerce très chargée 
en carbonate de potasse, nous avons essayé une solution d'hypo- 
chlorite de potasse, légèrement colorée en violet par du perman- 
ganate de potasse, et une solution d'hypochlorite de soude. Les 
résultats de cette étude sont indiqués dans le tableau suivant où 
E J désigne l’eau de Javel du commerce, H P l’hypochlorite de 
potasse, I S l’hypochlorite de soude. 


TABLEAU V 


1 litre — 5 litres de chlore. 


2e TEMPS D'ACTION 
£ £ ORGANISMES DILUTIONS TT le oo le OR 
à ; g | 5 | 10" | 45° | 30/11 h| = 
= à | = 
— | —— | —————— | ————— | — — — — — — 
i Ssp EJ ef] 4 
2 Ssp EJ AIRE | + FIRE 
FT, Ssp 7 EJ De EN Eu en er eur re 
4 Ssp GUEVE EN IEEE E|+ FE 
D) Ssp ET 1/2 RE RON RP En Eee 
6 Ssp MEN ATEN Ann teen) Ca QlÈR ER ae 7e 
130 ES Ssp + edt « pit NE | A + z= 
S Ssp EJ 1/10 || Re EE" 
mn Ssp + edt £ « LE + | + ETES 
» EJ 1/20 PS LEE lee Tee 
» EJ 1/30 Je | 35 | 2 TA TE 
40 Ssp HP 2e RU AE 
HS re Fes E 
m Ssp EJ Hire le tee 
A | 12 | Ssp+edt EJ LE | [= Es 
» EJ/2 + — | —;| E 
= Ssp HP Fa Sie ee 
14 Ssp EJ cree es 
15. Ssp + edt EJ Rs eur 
UE CRE EJ 1/2 ===) + 
16 Ssp + edt EJ 1/4 EEE PE de 
RS TT ON nn EN ee EE um 
Ne en HP Fermer 


456 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Ici encore, l’action des températures est manifeste. Tandis 
que les germes du subtilis ne sont tués qu’en 1 heure à 159 par 
l’eau de Javel concentrée ou à 1/2, ils périssent en 30 minutes à 
33° et en 5 minutes à 50° par l’eau de Javel au quart, en 10 mi- 
nues par l’eau au dixième, L'eau de Javel est donc plus efficace 
que l’eau oxygénée. 

L'eau de Javel agit aussi très énergiquement sur d’autres 
organismes que le bacillus subtilis. Les spores du charbon sont 
tuées à 15° en 5 minutes par l’eau de Javel concentrée ou à 1/2, 
en 10 minutes par les autres dilutions jusqu’à 1/5. Les spores de 
l'asperqillus niger ne résistent pas plus de 15 minutes à l’eau de 
Javel à 1/5, et pas plus de 10 minutes à l’eau au dixième. Enfin 
la levure de bière est tuée en 4 minute par l’eau à 1/5. 

L'eau de Javel du commerce a un grand désavantage pour la 
désinfection : comme elle est très chargée de sels, elle laisse après 
évaporalion un très grand résidu, environ 70 grammes par 
litre. Nous avons donc cherché un autre corps jouissant de pro- 
priétés analogues, et dont la solution fùt moins chargée de 
matières salines : c’est le chlorure de chaux du commerce. 


C. — ACTION DE L'HYPOCHLORITE DE CHAUX SUR LES GERMES HUMIDES 


La solution de chlorure de chaux est faite de la facon sui- 
vante : 100 grammes de chlorure de chaux du commerce sont 
délayés peu à peu dans 1,200 grammes d’eau. On obtient ainsi 
une bouillie blanche que l’on laisse reposer une heure, puis que 
l’on jette sur un filtre; on recueille alors environ un litre d’un 
liquide jaune verdâtre, marquant 5°,5 à l’aréomètre Baumé, et 
titrant 7,7 de chlore par litre. Il est bien évident que ce titre 
dépend de la richesse en chlore du chlorure de chaux employé ; 
comme les chlorures de chaux du commerce dégagent au mini- 
mum 70 à 75 litres de chlore au kilo, on voit que le titre de la 
solution ne doit guère descendre au-dessous de 7 litres : c’est en 
effet ce que nous avons trouvé avec différents chlorures. L'odeur 
de cette solution n’est nullement désagréable : elle rappelle celle 
de l’eau de Javel du commerce, mais elle est moins forte. Cette 
solution contient de la chaux, du chlorure de calcium et de l’hy- 
pochlorite de chaux; c’est pour abréger le langage que nous 
l’appelons hypochlorite de chaux. 

Nous avons essayé l’action de cette solution et de ses dilu- 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 457 


tions sur les germes du sublilis et de l’eau de terre. La solution 
(100 grammes de chlorure de chaux pour 1,200 d’eau) est dési- 
gnée dans le tableau VE et les tableaux suivants par HCp : hypo- 
chiorite de chaux concentré; HG 1/2, HC 1/5 HC, 1/10, etc., 
désignent cette solution étendue à 1/2, à 1/5, à 1/10. 

Nous prenons 10 c. c.de solution pure ou étendue quenousfai- 
sons agir sur 1 c. c. du mélange de culture de subtilis et d’eau de 
terre dans un tube à essai flambé. Lorsqu'on ajoute ce mélange 
dans le désinfectant, 1l se produit un précipité qui, peu à peu, 
semble se redissoudre. 1 goutte de la suspension était semée au 
bout de chaque temps dans 100 c. c. de bouillon dans un grand 
matras Pasteur; un témoin recevant la même quantité d'hypo- 
chlorite de chaux que les autres ballons était resemé directement 
avec une goutte du mélange n’ayantpas subi l’action du désinfec- 
tant. Il faut pour empècher la eulture du bacillus subtilis introduire 
dans le bouillon la dose énorme de 1/30 d’hypochlorite de chaux. 

Voici un tableau résumant les expériences à 15° et à 50. 


TABLEAU VI 
Organismes : Spores de subtilis + eau de terre. 


TEMPS D'ACTION 


OBSERVATIONS DILUTIONS 
DA 151 30° 1 h. |Témoin. 


Températures. 
No p’onpre 


1 11:— 71,692CI. HCp 2e ne } + 


ne 
+ en ec lea à HC 1/5 2 re 
distillée. ARE nr eng lee 
AE + 

L 

KE 


Dilution avec eau HC 
bouillie 3/4 d'heure. 


Dilution avec eau char- HC 
7 gée de CO?, HC 
HC 
HC 1/40 
HC 1/4 — == = 
 CPHC AT Se 


4158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La première conséquence à tirer de ce tableau est que l’hy- 
pochlorite de chaux au dixième et même au vingtième agit plus 
énergiquement que l'hypochlorite de chaux concentré. Ce n’est 
pas là un fait isolé. Nous l'avons retrouvé d’une façon constante 
dans l’action de l’hypochlorite de chaux sur les germes secs 
à 15° et à 50°, comme nous le montrerons plus loin. L’explication 
de ce fait nous échappe pour le moment; peut-être l'hypochlorite 
de chaux pur, coagulant la couche externe de la spore, empêche- 
t-il ainsi le désinfectant de pénétrer. 

L'hypochlorite de chaux ne s’est pas montré plus actif, dilué 
avec de l’eau distillée au lieu d’eau ordinaire qui y détermine, 
comme on sait, la formation d’un précipité. Il l’est un peu 
moins, dilué avec de l’eau distillée privée de la majeure partie 
de ses gaz par une longue ébullition, probablement parce que 
cette eau sans acide carbonique ne décompose plus lhypochlo- 
rite. Par contre, il est un peu plus actif, dilué avec une eau dans 
laquelle on a fait barboter un courant d'acide carbonique pen- 
dant 10 minutes. Quoi qu’il en soit, l'action de l’hypochlorite de 
chaux dilué au dixièmeesttrès énergique ;iltueles spores du subtilis 
à 45°, en 15 minutes; il est donc beaucoup plus actif que l’eau de 
Javel à la même dose et aussi actif que l’eau oxygénée. A 50°:il 
est plus actif que l’eau oxvgénée, mais possède à peu près la 
même activité que l’eau de Javel concentrée, à 1/2 ou à 1/14. Si 
nous ajoutons qu'un litre de notre solution diluée au dixième 
laisse uu résidu solide de 6 grammes, on comprend facilement 
que pour la désinfection elle doit être préférée à l’eau de Javel. 

L’hypochlorite de chaux agittrèsrapidement à 15° surles spores 
autres que celles du subtilis et sur des organismes sans spores. 
Nos spores de charbon ont été tuées en 5 minutes par HC 1/5 et 
HC 1/10, tandis qu’elles ont résisté à la solution concentrée. Les 
microbes du choléra, de la diphtérie, de la fièvre typhoïde, en 
culture en bouillon (1 c. c. pour 10 c. e. de désinfectant), sont 
tués en 5 minutes par l'hypochlorite de chaux au dixième. 

Arrivé à ce point de notre étude, il est intéressant de compa- 
rer les actions des désinfectants qui précèdent à celles d’un 
désinfectant mieux connu : le sublimé. Nous avons essayé l’ac- 
tion du sublimé acide sur les germes du subthilis et de l’eau de 
terre. Nos solutions de sublimé sont acidulées par l’acide tar- 
(rique, cet acide étant toujours dans la même proportion que le 


à 
{ 
; 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 459 


bichlorure de mercure ; ainsi la solution de sublimé au millième 
coatient { gramme de bichlorure de mercure et 1 gramme 
d'acide tartrique pour 1 litre d’eau. Nous avons fait agir 10 €. c. 
de solution sur 1 c. c. du mélange de spores de subtilis et d'eau de 
terre ; une petite goutte était semée dans 200 c. c. de bouillon ; 
un témoin contenant la même quantité d’antiseptique que les 
autres ballons était resemé directement avec une goutte du 
mélange n'ayant pas subi l’action du désinfectant. Voici le tableau 
de ces expériences. 


TABLEAU VII 


Organismes : Spores de bacillus subtilis et eau de terre. 


TEMPS D'ACTION 
Température. | No D'oRDRE DILUTIONS A 
5’ 15’ 30° 4 h° TÉMOIN 
| | 

{ 1/1000 + 22 Le | Le == 

2 5 1/500 SRE Er es me 

150 3 1 /200 CT PERTE = E 

n 1/100 - | 


On voit par là qu'à 15° l’hypochlorite de chaux au dixième 
est aussi actif que le sublimé acide au centième. 

Enfin, nous avons essayé à 15° l’action, sur les germes du 
subtilis, de l'essence de térébenthine pure et à 1/5 (4 alcool, 
1 essence), du thymol à 4 0/0 (thymol 1 gramme, alcool 70 c. c., 
eau distillée 30 c. c.), du lysol en solution aqueuse à 1 0/0 
et 10 0/0 et du lysol pur. Seul, le lysol pur a tué les spores de 
subtilis au bout de 30 minutes. Ces corps sont donc de mauvais 


désinfectants par rapport à l'hypochlorite de chaux. 


III. — EXPÉRIENCES SUR LES GERMES SECS 


Dans les cas de désinfection, la plupart du temps, les 
germes se rencontrent sur les murs, sur le sol, sur les objets. Il 
était donc nécessaire, après avoir essayé l'action des désinfec- 


160 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tants sur des germes humides, de voir si cette action serait la 
même sur des germes secs. 

Les germes ont été desséchés sur des lamelles de verre et non 
sur des fils de soie comme on le fait ordinairement. Ces lamelles, 
découpées aussi égales que possible avec un diamant dans des 
lames de microscope, étaient trempés dans le mélange de 
culture de subtilis et d'eau de terre, et desséchées 48 heures sous 
une cloche, sur une plaque de verre reposant sur un cristallisoir 
contenant de l'acide sulfurique. Faisons remarquer que comme 
nous opérions sur un ensemble d'organismes, les conditions de 
pureté importaient peu dans celte première partie de l'opération. 
Chaque lameile est introduite dans un tube à essai contenant 
ù c. c. de désinfectant, et au bout du temps voulu, reprise avec 
une pince flambée, lavée dans 10 c. c. d’eau stérile, et semée 
dans 100 ec. c. de bouillon. Un témoin recoit deux lamelles ; l’une 
ayant subi le même traitement que les premières, entraînant par 
conséquent la même quantité d’antiseptique ; l’autre n'ayant 
subi aucune action, servant par conséquent à ensemencer le 
témoin. 

Lorque nous avons opéré sur d’autres organismes que les 
germes du bucillus subtilis et de l’eau de terre, les lamelles ont 
été placées chacune dans un tube à essai court, fermé par un 
tampon de coton. Ces tubes sont flambés dans une étuve à 180°, 
et dans chacun on introduit avec un tube effilé quelques gouttes 
de culture de l’organisme sur lequel on opère, de façon à arro- 
ser la lamelle. Ces tubes sont ensuite mis à sécher 72 heures à 
l’éluve à 34°; au bout de ce temps, la culture est si desséchée 
que la lamelle adhère fortement au tube ; il est bon, avant d'in- 
troduire le désinfectant, de détacher les lamelles au moyen 
d’une pince flambée. Le désinfectant est alors introduit dans 
les tubes, avec les précautions d'usage, au moyen d’une pipette 
flambée ; les dilutions sont faites avec de l’eau stérile. Le reste 
de l'opération est conduit comme il est dit plus haut. Nous indi- 
querons, s'il y a lieu, les variantes que nous avons pu introduire 
dans celte manière d'opérer. 

Nous avons essayé sur les germes secs à différentes tempéra- 
tures, l'action de l’eau oxygénée, de l’eau de Javel et de l'hypo- 
chlorite de chaux en comparant cette dernière à celle du su- 
blimé. 


+ 
LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 461 
[. — ACTION DE L'EAU OXYGÉNÉE SUR LES GERMES SECS. 
Voici un lableau résumant les expériences : 
TABLEAU VIII 
Organismes : Spores de bacilles subtilis et eau de terre. 
È TEMPS D'ACTION 
E OBSERVATIONS DILUTIONS  — 
= D'ORDRE st | 45 | 30 = 
= 5 | 15 | 30’ [1 h:|2h.| € 
LIL ENS RTS) SORTE LE CR PS os a 
| 
I LS A —S EO acide no ? 2 RESE tREn 
E Lee EE u n 
LE ne UE 
i = le ÉE + 
T8 A—AI | EO acide FE. CS. | + | + | + Br PET 
150 7 ÉO acide no 2 1/2 | + | TES ÿ 
EO acide no ? 1/10 35] cn A RIENE L 
9 Fo EO neutre no 2 : + RE 2 
10 » | + F1 TE 
11 » = = ze 2È | 
12 ») — lt + + ms: 
EO neutre F. C.S. [HILL +: 
| 


D'après ce tableau, l'eau oxygénée acide ne s’est pas montrée 
plus active que l’eau oxygénée neutre. Dans l’un et l’autre cas, 
dans les circonstances les plus favorables, il a fallu 2 heures 
pour tuer les germes (expériences 4, 5 et 11). 

Si maintenant on compare les tableaux VIILet IT, on voit que 
les germes secs sont beaucoup plus résistants, puisque, avec la 
même eau oxygénée (n° 2), ils sont tués en 2 heures quand ils 
sont secs et en 30 minutes quand ils sont humides. 

Cette résistance s’affirme encore plus par une comparaison 
entre le tableau suivant n° IX et le tableau n° IV donnant l’action 
de l’eau oxygénée à 50° et à 75° sur les germes secs. 


462 " ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
TABLEAU IX 


Organismes : Spores de bacillus subtilis et eau de terre. 


ee TEMPS D'ACTION 


DE OBSERVATIONS DILUTIONS a 
AN RL ÿ | 45 | 30’ Lu h.|2h.| = 
RE PT RM OT AP A Re ne | Or en) PARS Et 
Pi EN CRE Eee EO acide n° 2. RP 7e LS | S ns 

2 EO acide no 2. Ag SR REA ee ER 
2e Sr ere 

ä DAS EO acide F.CS. HI == |—+ 

M re eue ae lines le el = mme 
6 » HE + += + 
EO neutre F.C.S. ++ += |-|+] 

: EO acide no 2 LR po 8 | Meme nn 14 Es 
pe | EO neutre n° 2 4 +- | + | rs F| 


D’après le tableau IX, l’eau oxygénée acide a régulièrement 
tué les germes secs en 30 minutes à 50°; il y a quelque incon- 
stance dans l’action de l’eau oxygénée neutre qui ne s’est 
montrée que dans un cas aussi active que l’eau oxygénée acide 
(expériences 7 et 3). Enfin, à 75°, l’eau oxygénée n’est pas plus 
active sur les germes secs qu'à 50. 

Une comparaison des tableaux VII et IX fait voir que l eau 
oxygénée est plus active sur les germes secs à 50° ou à 75° qu'à 
15° (Expériences 3, 4, 5, 10, 11, 12 de VIIT à rapprocher des 
expériences 1, 2, 3, 5, 6, 1 de IX). Ces expériences ontété faites 
en même temps, avec les mêmes eaux oxygénées, sur les mêmes 
germes ; elles sont donc comparatives. 

Enfin la comparaison du tableau IX et du tableau IV fait voir 
que les germes secs sont plus résistants que les germes humides. 
Tandis que ces derniers ont été tués en général en 15 minutes 
à 50° par l’eau oxygénée acide, les premiers ne le sont qu’en 
30 minutes. 


2. — ACTION DE L'EAU DE JAVEL SUR LES GERMES SECS. 


Le tableau suivant montre que l’eau de Javel est plus active 
à 50° et à 75° qu'à 15° sur les germes secs, comme nous l'avons 
montré pour les germes humides. D'une comparaison entre le 
tableau X et le tableau V, il résulte que les germes secs ne pa- 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 463 
raissent pas beaucoup plus résistants, à l'égard de l’eau de Javel, 
que les germes humides. Cette différence avec l’eau oxygénée 
tient peut-être à ce que l’eau de Javel désagrège assez facilement, 
à 500 surtoul, l'albumine desséchée, ce que ne fait pas l’eau 
oxygénée. 


TABLEAU X 


Organismes : Spores de bacillus subtilis et eau de terre. 


TEMPS D'ACTION 
OBSERVATIONS DILUTIONS 


en 
»)19 


AS) 
ais 


Températures. 
No p'onpni 


L'eau de Javel à 50° agit plus énergiquement que l’eau 
oxygénée ; les germes secs sont tués en cinq minutes par l’eau 
concentrée. 


3. — ACTION DE L'HYPOCHLORITE DE CHAUX SUR LES GERMES SECS. 


Avec l'hypochlorite de chaux, nous allons voir s'affirmer la 
résistance plus grande des germes secs. Voici le tableau résu- 
mant les expériences à 150, 500, 75, 


164 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


TABLEAU XI 


Organismes : Spores de subtilis et eau de terre. 


£ No TEMPS D'ACTION 
E v’onvrel OBSERVATIONS DILUTIONS rt rer 
= 5" |15 | 30H h|2h.| = 
REA Re RE 
l {1— 71449 CI HCP ++ +++ l+ 
2 = 71442 CI HCP ancien DRE En ea 
; 1 — 61250 CI 7 HCP nouveau MEMER ER ETS 
3 0 HC 1/3 nf EE Ones 
LR DES HC 1/10 EE oo aie 
15 : o FRET LT ÉSFURSIEn 
( 0 « pen Les PA T4 
7 o EE [+++ ++ 
QE 2 « Res pes 
HC 1/10 ancien ++ + | + - 
HC 1/10 nouveau CT EDEN IEn ET 
10 IIC 1/10 ancien —- RE EN 
HC 1/10 nouveau ED ++ | + = 
12 0 HC 4/5 [++ |+ [TE 
| 0 HC 1/10 FNAEDie ne 
500 MIT E 7 3 7 gs) . | lp 
14 (e] « + | = | = | Eee | NT 
FR ê « +Fl+l=|= = l+ 
| 16 11=— 714 CI HC 1/10 ancien + | Aa] LE = EURE) 
11=— 625 CI HC 1/10 nouveau + | + Ms 
17 0 HC 1/20 a fre El ce EE 
Te too le ce ele cs lise 
| HC 1/10 == el ele 


Nora. — Dans toutes les expériences marquées du signe 0, 
les dilutions sont faites avec la solution ancienne de chlorure de 
chaux, titrant 7 !, 142. 

Un coup d’œil sur le tableau XI suffit à montrer que l'éléva- 
tion de température accroîil l’activité de l’hypochlorite de chaux. 

En comparant les expériences 1, 11 et 18, on voit que la 
solution concentrée n’a pas tué les germes secs du sublilis et de 
l’eau de terre en 2 heures à 15°, landis qu’elle les tuait dans le 
même temps à 50°, et en 1 heure à 75°. La comparaison des 
expériences 8, 15 et 18 nous montre que la solution au dixième 
ne tue pas en 2 heures à 15°, tue en 30 minutes à 50°, et tue en 
» minutes à 75°. 

A 15°, l'hypochlorite de chaux au dixième ne paraît pas plus 


tue 41 bat #0 
#6 7% $ . 
E, 4 4 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 465 


actif que la solution concentrée, comme le montrent les expé- 
riences { et 8, 2 et ,, qui sont comparatives. Mais il n’en est pas 
de même à 50° (expériences 11 et 15); la solution concentrée 
n'a pas Luë én { heure, alors que la solution au dixième tuait 
en 30 minutes ; la solution au vingtième est aussi efficace que 
celle au dixième. A 75°, les différences entre la solution con- 
centrée et la solution au dixième s’accusent encore (écart de 
30 minutes). 

Enfin les germes secs sont beaucoup plus résistants que les 
germes humides à l’action de l’hypochlorite de chaux. Tandis 
que les germes humides étaient tués en 30 minutes à 15° 
(tableau VI), par la solution au dixième, les germes secs résis- 
tent 2 heures et peut-être même plus ; à 50° les germes humides 
élaient tués en 5 minutes par la même solution; secs, ils sont tués 
en 30 minutes seulement. En définitive, pour obtenir avec la solu- 
tion au dixième le même résultat sur les germes secs que sur 
les germes humides, il faut élever la température à 50°. 

L'hypochlorite de chaux, qui n’agit que dans des condi- 
tions spéciales sur les germes secs du bacillus subtilis, agit très 
rapidement sur des organismes sans germes comme le saphylo- 
coccus pyogenes aureus : desséché sur lamelles de verre, 1l est tué 
en 5 minutes à 15° par la solution au dixième. 

Les spores sèches du charbon sont assez résistantes : une 
heure, à 15° ou à 50°, dans la solution concentrée ne les tue pas : 
30 minutes à 15°, et 5 à 15 à 50°, dans la solution au dixième, 
les tuent ; ainsi s'affirme une fois de plus la supériorité de la 
solution au dixième sur la solution concentrée. 


4, — ACTION DU SUBLIMÉ ACIDE SUR LES GERMES SECS ET COMPARAISON 
AVEC LA SOLUTION D'HYPOCHLORITE AU DIXIÈME 


Nous avons fait agir le sublimé acidulé par l'acide tartrique 
sur les germes secs de subtilis et d’eau de terre; la dose d’acide 
dans nos solutions est la même que la dose de sublimé; une 
solution à 1/1,000 contient 1 gr. de bichlorure de mercure, 
4 gr. d'acide tartrique et 1,000 gr. d’eau, 

Voici un tableau résumant ces expériences : 

30 


te. MAR NE Pret 0 he; vi: 4 


466 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


TABLEAU XII 


Organismes : Spores de bacillus subtilis et eau de terre. 


Ko TEMPS D'ACTION 
DILUTIONS 
D'ORDRE 5 / 5 30 . | 2 h. |Témoin. 


Tenpèratures. 


HgCI 1/100 


” 


HgC! 1/100 
HC 1/10 
HgCI 1/1000 
HC 1/10 
HgCI 1/1000 
HC 1/10 


On voit par ce tableau que l’activité de l’hypochlorite de 
chaux au dixième est à peu près la même que celle du sublimé 
acide à 4 0/0 à 15°. A 50° le sublimé à 1 0/0 est plus actif que 
l'hypochlorite de chaux; il a tué en 5 minutes alors que l’hypo- 
chlorite ne tue qu'en 30. Une expérience faite le 2 juillet 1892 
vient encore à l'appui de ce fait: 40 bouchons de caoutchouc 
sont souillés par un mélange d’eau de terre et de culture spo- 
rulée de subtilis, et séchés sous cloche, au-dessus de lacide 
sulfurique ; 20 sont traités en tubes flambés par l'hypochlorite 
de chaux au dixième (la solution concentrée titre 5 litres de 
chlore), 20 par le sublimé acide à 1 0/0, pendant 30 minutes à 
50°, Ces bouchons sont lavés ensuite à l’eau stérile el semés 
dans du bouillon. Les témoins poussent pour l’hypochlorite et 
pour le sublimé : pour le premier corps, # bouchons sur 20, 
pour le deuxième, 20 sur 20 laissent le bouillon stérile. 

L'hypochlorite de chaux au dixième est pourtant plus actif 
à 50° que le sublimé acide au millième. Le 23 juillet 1892, 
20 lamelles souillées de culture de subtilis et d’eau de terre el 
séchées, sont traitées pendant 30 minutes à 50°, 10 par l’hypo- 
chlorite au dixième, 10 par le sublimé acide au millième. Les 
témoins poussent pour les deux corps. Pour le premier, 2 la- 
melles sur 10,et pour le deuxième 6 sur 10 donnent une culture. 

Si on compare les tableaux XII et VIT, on voit que les germes 
secs sont plus résistants que les germes humides. Tandis que 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 167 


les premiers ne sont tués à 15° par le sublimé acide à 4 0/0 qu'au 
bout de 2 heures, les seconds étaient tués en 15 minutes. 

En résumé, pour obtenir une action rapide de l'eau orygénée, de 
l'eau de Javel, et de l'hypochlorite de chaux ou du sublimé sur les 
germes secs, il faut employer ces désinfectants à 50°; ils agissent alors 
pour tuer les germes secs en 30 minutes environ. 


IV. — TRANSFORMATION DES GERMES SECS EN 


À 

GERMES HUMIDES 4 

Nous venons de voir que les germes secs sont beaucoup plus 4 
résistants que les germes humides. Cette résistance tient sans D 
doute à ce que le désinfectant pénètre plus difficilement dans la À 
cellule, lorsque la membrane de celte cellule est sèche, que À 
lorsqu'elle est humide. L'action du désinfectant sur le germe c 
sec pourrait être décomposée en deux temps : un premier “4 
temps, employé à mouiller la membrane, à rendre en quelque : 
sorte le germe humide; et un deuxième temps, employé à la L, 
pénétration du désinfectant dans la cellule. En particulier, si on 4 
considère l’action à 15° de l'hypochlorite de chaux au dixième À 
sur les germes humides et les germes secs, on voit que les . 
premiers sont tués en 15 à 30 minutes, tandis que les derniers % 
ne sont tués qu’au boul de 1 à 2 heures. Le temps d’humidifica- , 
tion doit donc être à peu près de 1 heure à 45°, À 500, les germes ÿ 
| 


humides sont tués en 5 minutes et les germes secs en 30 minu- 
tes; le tempsd’humidification doit donc être plus court qu'à 15°. 

Si cette hypothèse est vraie, il doit arriver qu’en plaçant au 
préalable les germes secs dans de l’eau à 15° pendant 1 heure, 
et les plongeant ensuite dans le désinfectant à 15°, on observe 
une action plus énergique que si les mêmes germes secs étaient 
plongés directement dans le désinfectant à 15°, et même direc- 
tement dans le désinfectant à 50°, puisque nous avons montré 
que les germes humides sont tués en 15 minutes à 15°et 
les germes secs en 30 minutes à 50°. 

Nous avons d’abord fait l'expérience suivante sur l’hypo- 
chlorite de chaux au dixième (la solution concentrée titre 71,142); 


ue ÉONt. À TESTS Me ee 2 


1° Nous prenons 6 tubes à essai courts non flambés, Dans 5, ; 
nous introduisons de l’hypochlorite de chaux au dixième; dans 7 
le 6° de l’eau stérile; dans chacun des 6, une lamelle de verre | 


longée dans le mélange à parties égales de culture sporulée de 
£ D J D 


468 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


subtilis et d’eau deterre, et desséchée 48 heures à 340, sous cloche, 
au-dessus de l'acide sulfurique. 4 des lamelles servent à semer 
des matras à 100 c. c. de bouillon, au bout de 5, 15, 30 minutes 
et ! heure de séjour dans le chlorure. La 5° et la 6° lamelle servent 
pour le témoin, la 5° introduisant la même quantité d’antiseptique 
que chacune des autres, et la 6° servant à resemer le témoin. 
Ces 6 tubes sont placés à 50° au bain-marie. On voit que la 
6° lamelle subit l’action de l’eau à 50° et non celle du désinfectant. 

20 Dans un tube à essai avec de l’eau stérile, nous mettons 6 de 
ces lamelles portant les germes secs; et nous laissons ce tube 
À heure à 50° dans le bain-marie. 5 de ces lamelles sont intro- 
duites avec une pince flambée dans des tubes contenant l’hypo- 
chlorite de chaux au dixième, à 150, et la 6° dans un tube conte- 
nant de l’eau stérile; 4 serventà semer des matras à 100 c. c. de 
bouillon au bout de 5, 15, 30 minutes et 1 heure; la 5° et la 6° 
servent pour le témoin. 

3° Même expérience que 2; mais les 6 lamelles sont laissées 
À heure dans l’eau stérile à 15°. Voici nos résultats : 


TABLEAU XIII 


Dh 15 30” Ah TÉMOIN 


CC 


Les germes secs ont donc été transformés en germes humides, 
après À heure dans l’eau stérile, aussi bien à 15° qu’à 50v. 

Cette première expérience ayant donné de bons résultats, 1l 
y avait lieu d'essayer de réduire le temps d'humidification. Nous 
avons alors fait l'expérience suivante : 

10 Nous avons fait agir sur les lamelles portant les germes 
secs de subtilis et d'eau de terre l’hypochlorite de chaux au 
dixième à 159 pendant des temps variables jusqu’à 2 heures. 

2o Nous avons fait agir sur ces germes secs l’eau stérile 
à 15° pendant 10, 20,30, 40, 50 minutes et 1 heure. Au bout de 
chaque temps, 2 lamelles sont plongées dans l’hypochlorite de 
chaux au dixième, à 45°, et semées au bout de 5 et 15 minutes. 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 469 


Le témoin est constilué par une lamelle restée 1 heure dans 
l'eau stérile à 15°, et par une lamelle trempée dans l’hypochlorite 
de chaux au dixième. 
3° Même expérience que 2°, mais les germes secs sont placés 
10, 20, 30, 40, 50 minutes et 1 heure dans l’eau stérile à 50. 
Cette expérience ayant été répétée plusieurs fois, nous allons 
résumer les résultats dans un tableau. 


TABLEAU XIV 


N° D'ORDRE 


TEMPS D’ACTION 


2h. |Témoin. 


On voit d’après ce tableau que le temps minimum d’humidi- 
fication est 40 minutes, soit à 15°, soit à 50°. Dansles expériences 
suivantes, nous avons choisi 1 heure comme temps uniforme 
d'humidification, et nous avons fait des expériences comparatives 
en faisant agir à différentes températures les désinfectants, en 
particulier l’hypochlorite de chaux et l’eau oxygénée, sur les 
germes secs, et ensuite sur les mêmes germes laissés au préa- 
lable 1 heure dans l’eau stérile à 15°. Voici nos résultats : 


470 


I. Germes secs mis directement dans le désinfectant, 


elh, dans eau stérile à 150, 


= 


II. Germes secs laissés au préalab 


NOTA. — La solution d’hypochlorite ayant servi à ces expériences, titre 71,142 (HCp, 
HCp ancien). Elle date du 12 janvier 1892. 


Températures. 


No D'ORDRE 


TABLEAU XV 


DÉSINFECTANTS 


OBSERVATIONS 


DILUTIONS 


5! 


15 


11— 71,149 HCp 


11—71,442 HCp ancien 


11 — 61,250 HCp nouveau 


HG 1/10 


HC 1/10 ancien 


HC 1/10 nouvesu 


HC 1/10 ancien 


HG 1/10 nouveau 


EO acide no 2 


EO neutre n° 2? 


Eu 
as 
5 
ge 
WE 
2 
+ 
ae 
Re 
Eee 
LE 
Fe 
EE 
wi 
ZA 
es 


+4 + 


GTA HCp 
HG 1/10 
8 HC 1/10 ancien 
HG 1/10 nouveau 
9 EO acide no 2 
EO neutre n° 2 
ET HCp 
HG 1/10 
11 EO acide no 2 
EO neutre no 2 
HP HCp 
13 HCp ancien 
HCp nouveau 
14 HC 1/10 ancien 
HC 1/10 nouveau 
15 HG 1/10 ancien 
HC 1/10 nouveau 
16 EO acide no 2 
EO neutre n° 2 
HG 1/10 
18 HC 1/10 ancien 
HC 1/10 nouveau 
19 EO acide no 2 
EO neutre no 2 
20 HCp 
HC 1/10 
TOUT EO acide no 2 


— — 


EO neutre n° 2 


Hifi} 


hill itet0  ee 


bon EEE ETES 
EE LE a a a a 


lhlhhhlhtiohhthtdaidhtttnntttt4A4tt | 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


HA 444 


TEMPS D'ACTION 


44e Pr 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 471 


D'après ce tableau, on voit que les désinfectants, hypochlorite 
de chaux et eau oxygénée, se sont montrés plus actifs sur les 
germes rendus humides par 1 heure dans l’eau stérile que sur les 
germes secs, et cela, à toutes les températures. Les activités 
indiquées dans la 2° partie du tableau sont bien les mêmes que 
sur les germes humides. 

Nous avons fait quelques expériences comparatives pour 
savoir si une eau additionnée de 1/1,000 de potasse caustique 
rendrait humides les germes secs, plus vite que l’eau ordinaire. 
Nous n'avons pu observer aucune différence. 

En résumé, si on laisse les germes secs 1 heure dans l'eau, soit 
à 15°, soit à 50°, et qu'on les plonge ensuite dans les désinfectants, ces 
germes sont attaqués aussi rapidement que s'ils étaient humides. 


V. — ACTION DES VAPEURS D'EAU OXYGÉNÉE ET DE CHLO- 
RURE DE CHAUX SUR LES SPORES ET SUR QUELQUES 
ORGANISMES SANS SPORES. 


Après avoir étudié l'action, en tant que liquides, de l’eau 
oxygénée et du chlorure de chaux, sur les germes, il était utile 
de constater si ces corps agiraient aussi par leurs vapeurs. Nous 
avons vu que, dans un travail antérieur, l’un de nous avait établi 
que les vapeurs de certaines essences détruisaient les germes du 
charbon au bout de quelques jours ; malheureusement, en raison 
de leur prix élevé, ces essences ne peuvent entrer dans la pra- 
tique de la désinfection; il était donc intéressant de voir si le 
chlorure de chaux et l’eau oxygénée, d’un usage plus pratique 
que les essences, auraient une action aussi efficace, quoique 
moins volatils. À un autre point de vue, l'emploi de corps vola- 
tils est extrêmement avantageux dans la désinfection, les 
vapeurs, en effet, se diffusent partout et peuvent détruire Îles 
microbes qui n'auraient pas été touchés par la solution désin- 
fectante. 


À. — VAPEURS D'EAU OXYGÉNÉE 
1. — Action sur les spores. 


Il est facile de voir qu'à la température ordinaire, 16°, l’eau 
oxygénée émet des vapeurs en assez grande abondance. Prenons 


472 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


trois flacons à large goulot de 130 c. c. environ; introduisons 
dans le premier 20 c. c. d’eau oxygénée acide (35 c. c. de potasse 
à 10 0/0 par litre) à 12 volumes; dans le deuxième et le troisième 
20 c. c. de cette première eau étendue au 1/10 et au 1/100. Au 
bouchon de chaque flacon est fixé par un fil de fer un morceau de 
papier réactif ioduré amidonné. Les flacons sont abandonnés à 
la lumière diffuse, à la température ordinaire, 16°. Au bout de 
5 minutes, le papier du flacon n° 1 bleuit; au bout de 20 minu- 
tes, il est noir. Au bout de 20 minutes le papier du flacon n° 2 
commence à bleuir; il est bleu foncé après 2 h. 40. Enfin, le 
papier du flacon n° 3 n’a pas bleui, même après 12 heures. 
L'eau oxygénée à 1/100 n'émet donc pas sensiblement de vapeurs 
à la température ordinaire, l’eau oxygénée à 1/10 en émet un peu, 
et l’eau oxygénée concentrée en émet beaucoup et rapidement. Il 
était donc tout indiqué d’expérimenter sur l’eau oxygénée con- 
centrée. Avant de passer au détail des expériences, nous ferons 
remarquer que, les réactions de l’ozone et de l’eau oxygénée 
étant peu tranchées, nous n’avons pu décider si le corps qui 
déplace l’iode dans le papier réactif ioduré amidonné est réelle- 
ment de la vapeur d’eau oxygénée ou de l'ozone; lorsque nous 
parlons de vapeur d’eau oxygénée, nous ne voulons en rien 
préjuger sur la nature chimique de cette vapeur. 

Le 14 février 1891 nous prenons deux flacons à large goulot. 
Dans l’un n° 1, on verse 20 c. c. d’eau oxygénée concentrée acide, 
dans l’autre n° 2, 20 c. c. d’eau ordinaire. Dansle bouchonestfixé, 
au moyen d’un fil de fer, un papier imprégné d’une culture spo- 
rulée en bouillon de bacillus subtilis datant du 4 février 1891. Ces 
flacons sont abandonnés à la lumière diffuse, à 16°; au bout de 
temps croissants, des morceaux des papiers des 2 flacons sont 
coupés avec des ciseaux flambés, saisis avec des pinces flambées 
et semés en 10 c. c. de bouillon. Le papier du flacon n° 2 sert 
de témoin. 

L'expérience a été poussée jusqu'à 180 heures. Le témoin a 
toujours poussé, le papier du flacon n° 1 aussi. Il en résulte 
donc qu'à la température ordinaire (16°) les spores de bacillus 
subtilis résistent 180 heures à l’action des vapeurs d’eau oxygé- 
née, acide, concentrée. 

L'élévation de température exaltant les propriétés désinfec- 
tantes de l’eau oxygénée liquide, il était naturel de penser qu'il 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 473 


en serait de même pour les vapeurs. Le dégagement de vapeurs 
est d’ailleurs plus rapide et plus énergique à température 
élevée. 

Nous avons expérimenté à 35°; l'expérience a été faite de la 
façon suivante : Deux flacons à large goulot reçoivent l’un 20 c. c. 
d’eau oxygénée acide (40 c. c. de potasse à 10 0/0 par litre, 
titre — 10) et l'autre 20 c. c. d’eau pour servir de témoin. Au 
bouchon de chacun est suspendu un disque en toile métallique, 
que l’on flambe, et qui supporte de petits morceaux de papier im- 
prégnés de culture de bacillus subtilis, avec spores résistant 
{ heure à 100°. Ces morceaux de papier sont saisis avec une pince 
flambée pour être semés dans du bouillon; de cette façon, on 
évite de couper le papier avec les ciseaux, ce qui exige un peu 
de temps et peut être une cause d'erreurs. Les deux flacons sont 
placés à l'obscurité à 35° dans une étuve d’Arsonval. 

L'expérience a été poussée jusqu’à 237 heures. Le témoin a 
toujours poussé, les papiers du flacon n° 1 aussi. À 35° les spores 
du bacillus subtilis résistent donc 237 heurés à l’action des va- 
peurs d’eau oxygénée, acide, concentrée. 

Devant ce résultat négatif, il y avait lieu de faire agir les 
vapeurs d’eau oxygénée à température encore plus élevée. On 
sait qu’à un certain degré de concentration l’eau oxygénée peut 
distiller sans subir de variation de titre : au-dessus, elle se 
décompose plus ou moins complètement : au-dessous, elle peut 
se concentrer par l’ébullition. | 

Une de nos eaux oxygénées (acidité : 40 c. c. potasse à 
10 0/0 par litre, titre 4,6) ne change pas de titre après 1/2 heure 
à 55° et passe au titre de 9,1 après ébullition de 1/2 heure, au 
titre de 14,5 après 50 minutes d’ébullition. Il n’en serait proba- 
blement pas de même, si l’eau oxygénée était neutre. 

Quoi qu'il en soit, pendant l’ébullition, qui commence à 
101° C. pour s'élever peu à peu à 102, l’eau oxygénée dégage 
des vapeurs qui bleuissent rapidement le papier ioduré amidonné 
d'un bleu presque aussi intense que si ce papier était plongé 
dans l’eau oxygénée. 

Nos expériences sur les vapeurs de cette eau oxygénée bouil- 
lante ont été faites de la facon suivante. Nous nous sommes 
servis d’une caisse de verre, en forme de parallélipipède rectangle, 
dont le volume est de 110 litres. Elle est fermée par un cou- 


ATA ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


vercle rodé, débordant de 2 c. 5 et percé de 11 ouvertures, 
3 grandes de 10 c. et 8 petites de 3 c. 5 de diamètre. Ces 
ouvertures peuvent être obturées par des disques de verre de 
14 c. et de T ec. 5 de diamètre, au centre desquels est fixé un 
crochet, de façon à pouvoir suspendre des objets dans la 
caisse. 

Les vapeurs d'eau oxygénée, venant d’un ballon chauffé à feu 
nu, passent par un tube que l’on fait pénélrer dans une ouver- 
ture pratiquée dans l’une des petites faces de la caisse; on l’y 
assujettit au moyen d’un tampon de coton. 

L'expérience a porté sur des germes de l’eau de terre résis- 
tant 1 heure à 1000. 

Nous imprégnons avec ces germes de petits carrés de papier 
à filtre percés chacun d’un trou et flambés dans des tubes à essai 
courts, et nous laissons sécher 72 heures à l’étuve. Ces morceaux 
de papier sont ensuite fixés à des armatures en fil de fer, accro- 
chées aux grands disques de la caisse. Ces armatures descen- 
daient à la hauteur du tube de dégagement de la vapeur, de sorte 
que les papiers étaient à des distances horizontales de ce tube 
de 5 c., 20 c., 35 c. La température était donnée par deux 
thermomètres placés l’un à 15 c., l’autre à 35 c. de l’entrée 
de la vapeur. Les temps étaient comptés à partir du moment où 
un morceau de papier ioduré amidonné, suspendu dans le haut 
de la caisse à l’un des petits disques, était complètement bleu, 
ce qui à lieu 2 à 3 minutes après la première condensation de 
vapeur sur les parois de la caisse. Au bout de chaque temps, les 
disques étaient soulevés avec précaution et un morceau de 
papier, pris à chaque armature avec une pince flambée, était semé 
dans un petit matras Pasteur contenant 30 c. c. de bouillon. 

L'expérience a été faite à plusieurs reprises avec des eaux 
oxygénées différentes, et n'a jamais donné que des résultats néga- 
tifs, même après 1 heure 1/2 d'action. La température au bout 
de ce temps ne s’est jamais élevée au delà de 55°. 

La vapeur d’eau oxygénée bouillante n’agit donc pas sur les 
spores du bacillus subtilis. I était intéressant dès lors de voir 
quelle était son action sur des spores moins résistantes, telles que 
celles du charbon. Les résultats de nos expériences sont consi- 
gnés dans le tableau ci-dessous. 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. ATD 


TABLEAU XVI 


No JSUBSTRATUN) DISTANCE TEMPS D’ACTION TEMPÉRATURES DANS LA CAISSE 


des 


| 


» 
D'ORDRE! cpores [la vapeur.| 15° | 30° | 45 [1 h.|11/4l11/2]  Iitiale. pi 45 [1 h.|11/4/11/2 
A | / 
Papier. 5em re Re t 17 10 
20cm ue s“E Te) re RC 
40cm Le FE LA IE 
Papier. | 5cm NN EEE EN EU 
mineral her miles Fr F7 “134 
NON Cu ee me ao ro rad T 
ER = | 227 : = Re) ER | 
Verre. == = 
Papier. 5em RE |— t 18 52 | 56 56 | 55 | 50 
20cm + ne EE EE PE 
35em JR EE en A PE) 7 8 | 52 | 56 | 56 | 55 | 50 
Verre. = == 
Papier. ÿem Lo = t Te Da] MEN EE ES lets) 
TNT ra en more Fruit] 
Dem EN EE Pa ET EN En RENE 
Etofte. 5em AIRES RSS) EPS) RTE 
90cm Aile ne TE TE “e 
32cm = —+ + + == 
Verre. poele 
Papier. ÿem ls 
90cm nE PSE HE ET 
3900 * ER LE Er 2e 
Etofte. ÿem BE) ESRI) SUITE 
20cm ae EE Es EI2TEe 
3ocm SCI SE SE ANSE 
Verre. Lee 


Dans toutes ces expériences, les objets, morceaux de papier, fragments 
d'étoffe, de verre, ont élé flambés en tube à essai court, puis souillés avec 
une cullure sporulée de charbon, puis séchés 48 heures, à l’étuve, à 34. 

Dans ce tableau, T indique le titre de l’eau oxygénée, A son acidité par 
litre, évaluée en centimètres cubes de potasse à 10 0/0; { et f indiquent les 
températures prises à deux thermomètres, distants l’un, {, de 15 c. de l'entrée 
de la vapeur, l’autre, {’, de 35 centimètres. 


L'inspection du tableau donne les résultats suivants : L'action 
des vapeurs d’eau oxygénée est très irrégulière ; ces vapeurs 
n'ont aucune action sur les germes de charbon déposés sur les 
étoffes, agissent d’une façon tout à fait inconstante sur les 
germes déposés sur le papier, mais agissent bien lorsque ces 
germes sont desséchés sur le verre. Ici encore l'influence du 
support entre en jeu; la désinfection est d'autant plus difficile 


476 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


que ce support est plus rugueux. Pour le papier, l’action des 
vapeurs n’est un peu énergique qu à une distance faible (5 cen- 
timètres); destruction des spores du charbon en 1 h. 1/4. 


2. — Action sur les organismes sans spores. 


Les vapeurs d’eau oxygénée, même bouillante, qui n’agissent 
que très peu sur les spores, peuvent tuer des organismes sans 
spores. Nous n’avons expérimenté que sur la levure de bière, que 
nous considérons comme sans spores, bien que dans certaines 
conditions elle puisse en donner. Nous prenons un flacon à 
large goulot dans lequel nous versons 20 c. c. d’eau oxygénée con- 
centrée à 10 volumes, acidité — 33 c. c. potasse à 10 0/0 par litre. 
Au bouchon du flacon est suspendue une petite boîte formée de 
deux fonds de tube à essai coupés. L'un d'eux reçoit 1 c. c. de 
culture de levure de bière, l’autre est placé par-dessus pour 
servir de couvercle, le flacon est bouché et placé à l'obscurité, 
à 35°, dans l’étuve d’Arsonval. Des prises sont faites au bout de 
temps croissants, et sont semées dans des tubes à 10 c. c. d’eau 
de navets sucrée, qui sont placés à l’étuve à 23°. La levure de 
bière a encore poussé au bout de 16, 40, 6%, 110, 158 heures; à 
partir de 182 heures, elle n’a plus poussé; elle est donc tuée par 
les vapeurs d’eau oxygénée concentrée acide dans un temps qui 
varie entre 158 et 182 heures, à 35°. 


B. — VAPEURS DE CHLORURE DE CHAUX 


Les expériences précédentes montrent que l’eau oxygénée 
agit très peu par ses vapeurs sur les spores, et très lentement 
sur les organismes sans spores, à une température relativement 
élevée (35°). Il n’en est pas de même de la solution de chlorure 
de chaux. 


1. — Action sur les spores. 


Nous avons essayé l’action des vapeurs de solution de chlo- 


rure de chaux bouillante sur les spores du charbon. Dans cette 


ébullition, l’hypochlorite de chaux se décompose très peu; 
comme pour l’eau oxygénée, on peut concentrer par ébullition 
une solution de chlorure de chaux, parce que l’évaporation de 
l’eau est plus rapide que la décomposition de l'hypochlorite. II 
est bien évident qu’il n’y a concentration que si on ne tient pas 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 477 


compte de la diminution de volume; dans le cas contraire, il y a 
décomposition, mais elle est très légère; elle ne commence guère 
que lorsque le volume de la solution est réduit à 1/6 du volume 
primilif. 

Nous avons fait agir sur les spores de charbon, desséchées sur 
lamelles de verre, couronnes de papier où d'étoffe flambées, les 
vapeurs d’une solution de chlorure de chaux à 1/10 Uüitrant 588 c. c. 
de chlore par litre. L'expérience a été conduite comme l’expé- 
rience n° 4 du tableau précédent. En voici le résultat : 


TABLEAU XVII 


SUBSTRATUM | DISTANCE TEMPS D'ACTION TEMPÉRATURES DANS LA CAISSE 
2 à l'entrée EE 
es ë 

spores [la vapeur. | 30° | 45° |1 h. PE 1/2] Initiale. [après 30| 45’ |1 h.111/4|11/2 

Papier 0] + | — | — | — | — | t 15 45 50 | 51 | 51 | 51 
20 | Rp ec AN RES rer 
35 ar nn er) ANT 45 | 50 | 51 | 51 | 51 
Etoffe 5] NE EEE | 
AU ESA 2 at EP 
35 Se SE er 
Verre + | + | = | = | 
| l 


Ici encore on voit apparaitre l'influence du support; comme- 
l'eau oxygénée, les vapeurs d'hypochlorite de chaux n’agissent 
qu'à une petite distance; enfin l'action n’est pas très régulière. 


2, — Action sur les organismes sans germes. 


Les vapeurs d’hypochlorite de chaux sont plus énergiques 
que les vapeurs d’eau oxygénée dans leur action sur les orga- 
nismes sans germes. | 

Dans une première expérience nous prenons deux flacons à 
large goulot; dans l'un on verse 20 c. c. d’une solution d’hypo- 
chlorite de chaux au dixième titrant par litre 700 c. c. de chlore, 
dans l’autre 20 c. c. d’eau; c’est le témoin. Aux bouchons sont 
fixés des papiers imprégnés d’une culture en bouillon de bacille 
typhique, vieille de plus de trois mois. Après 51 heures, un 
morceau est coupé à chaque papier et semé dans du bouillon. 
Le témoin pousse, le flacon n° 1 ne pousse pas. L'expérience est 
continuée jusqu’à 68 heures et donne les mêmes résultats. 


AT8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


On peut objecter à cette expérience que le bacille typhique 
employé était vieux et par conséquent facile à tuer. Aussi avons- 
nous entrepris une autre série d'expériences. Dans quatre bocaux 
de 1 litre, fermés au coton, stérilisés, nous plaçons en présence 
de 80 c. c. d’une solution de chlorure de chaux, titrant 7!,142 de 
chlore, de petits. cristallisoirs suspendus au bouchon et conte- 
nant : 2c. c. de culture de levure de bière dans l'eau de navets 
sucrée, âgée de 3 jours; de culture de choléra virulent, en bouil- 
lon, âgée de 1 jour; de culture de diphtérie en bouillon, 3 jours: 
de culture de bacille typhique en bouillon, 3 jours, provenant 
d'une rate typhique, 2° génération. 2 c. c. des mêmes cultures 
sont introduits de même dans de petits cristallisoirs, contenus 
dans 4 bocaux qui ne reçoivent que de l’eau et servent de 
témoins. Ces flacons sont abandonnés à 15° et à la lumière dif- 
fuse. Des prises d'essai sont faites au bout de temps croissants 
et semées en 10 c. c. de bouillon. 

Le tableau suivant indique le résultat de l'expérience : 


TABLEAU XVIII 


APRÈS | APRÈS | APRÈS | APRÈS | APRÈS APRÈS APRÈS 
24 h. 48 h. 12h; | 96 h. 121 0h: |" 140 h. | 148 h. 
Vapeurs d'hy-| Levure... + —- — = = = 
PS ren pee es a ne moe 
1/10. Typhique.… + — — = Æ = 
Diphiéeclr nl re one males 
Témoins...... Choléra se + is al MT Se + 
Typhique.….. +- + 2e 42 2e 2= 
Dipbtérie...| + PETER Æ sa 


En résumé, la levure de bière, le bacille typhique et le 
bacille de la diphtérie sont tués par les vapeurs d’hypochlorite 
de chaux au dixième, à 15°, entre 48 et 72 heures, c'est-à-dire 
entre deux et trois jours ; le microbe du choléra est plus résistant, 
et ne meurt qu'entre quatre et cinq jours. 

On pourrait objecter que si les tubes de bouillon dans lesquels 
ont été semées Les prises n’ont pas poussé, c’est parce que les 
vapeurs de chlorure de chaux ont formé avec le bouillon de cul- 
ture contenu dans le petit cristallisoir un composé qui, introduit 


AL 


ra Lu dr pare iso le D ne D tn tn ae 0 cé tien ed lé cl es EN. É > : 


0 
+ 


LA DÉSINFECTION DES LOCAUX. 479 


avec la prise d'essai dans le bouillon, empêche la culture. Il n’en 
est rien. Tous les tubes de l'expérience précédente qui n’ont pas 
poussé ont élé resemés avec des cultures fraiches, et ont alors 
donné d’abondants développements. 


De nos expériences sur les vapeurs, nous concluons encore 
à la supériorité de la solution de chlorure de chaux sur l’eau 
oxygénée ; efficacité plus grande, prix moins élevé. Si dans la 
désinfection quelques organismes échappaient à l’action de la 
solution désinfectante de chlorure de chaux, ils pourraient être 
tués par les vapeurs qui se dégagent de cette solution. 


VI — CONCLUSIONS 


1° L'eau de Javel du commerce, la solution de chlorure de 
chaux à un dixième (c’est-à-dire la solution de 100 grammes de 
chlorure de chaux dans 1,200 grammes d’eau, étendue de dix fois 
son volume d’eau), l’eau oxygénée du commerce, sont plus actifs 
que la solution acide de sublimé au millième, solution qui est 
appelée solution forte. Ces désinfectants n’agissent pas ou n’agis- 
sent qu'après plusieurs heures sur les germes humides lorsqu'on 
les emploie à la température ordinaire, mais, si ces désinfectants 
sont portés à la température de 40° à 50° et même davantage, 
les germes humides sont détruits beaucoup plus rapidement. 
Quelques minutes suffisent. Il résulte de là que, quel que soit le 
désinfectant employé, il faut le faire arriver au contact des 
germes à la température la plus élevée possible. Ce fait a déjà été 
signalé par quelques observateurs; nous l'avons retrouvé d’une 
façon constante pour tous les désinfectants que nous avons 
essayés. 

20 Les germes desséchés sont beaucoup plus résistants que 
les germes humides. Tandis que ces derniers sont tués en quel- 
ques minutes, les premiers peuvent résister pendant plusieurs 
heures, même à une température de 40° à 50°. De là découle la 
nécessité de rendre ces germes humides avant de faire agir le 
désinfectant, Nous avons constaté qu’en mettant les germes secs 
au contact de l’eau, surtout de l’eau tiède, il arrive qu'au bout 
d’une heure environ ces germes sont attaqués par les désinfec- 
tants aussi rapidement que s'ils étaient humides. La nécessité 
de pulvériser de l’eau sur les parois de la chambre à désinfecter 


Ch 


480 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


avant de faire agir le désinfectant est donc une pratique qui 
s'impose et que nous considérons comme absolument nécessaire. 

Un fait particulièrement digne de remarque, que nous avons 
observé nombre de fois sans jamais rencontrer une exception, 
est que la solution concentrée de chlorure de chaux, telle que nous 
la préparons, estinfiniment moins active que lorsque cette solu- 
tion est étendue de dix et même de vingt fois son volume d’eau 
ordinaire; et cela se produit soit que la solution agisse sur des 
germes humides, soit qu’elle agisse sur des germes secs, à la 
température ordinaire ou à la lempérature de 500. 

Les désinfectants dont nous venons de parler, et qui n’agis- 
sent que dans des conditions spéciales sur les germes du bacillus 
subtilis, détruisent très rapidement, en quelques minutes, et 
même à froid, les spores du charbon, de l'Aspergillus niger, la 
levure de bière, et Le microbe de la fièvre typhoïde. 

Nous avons fait quelques essais avec le thymol, le lysol, 
l'essence de térébenthine. Ce sont de mauvais désinfectants rela- 
tivement aux précédents. Nous concluons de l’ensemble de nos 
recherches que la solution de chlorure de chaux au dixième, 
préparée comme nous l’avons dit, doit être substituée dans la 
majeure partie des cas au sublimé. En effet, cette solution est 
plus active que celle de sublimé au millième (elle possède à peu 
près la même activité que celle de sublimé au centième); elle est 
plus économique (10 litres de solution pour 5 centimes); elle 
peut être mise sans danger entre les mains de tout le monde ; 
enfin, elle ne laisse pas trace de poison dans les appartements 
désinfectés. 


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ÉTUDE SUR L'ANATOMIE PATHOLOGIQUE 
DE LA MORVE PULMONAIRE 


Par MM. E. LECLAINCHE er L. MONTANÉ 
Professeurs à l'École vétérinaire de Toulouse. 


(Avec les Planches IV et V.) 


La morve revêt, dans le poumon du cheval, des expressions 
anatomiques très différentes suivant le mode d'évolution des 
lésions. Alors que les formes aiguës se traduisent par des altéra- 
tions étendues el diffuses simulant l'infection purulente, les 
formes chroniques sont exprimées essentiellement par des 
néoformations discrètes et limitées, d'apparence tuberculeuse. 

Quelques travaux seulement out été consacrés à l'étude des 
lésions de la morve aiguë. J. Rexaur' à montré que celles-ci 
consistent en la présence de foyers confluents de pneumonie 
purulente, analogues à ceux de l’infection pyémique. Les alvéoles 
sont remplies de globules blancs; l’endothélium des vésicules a 
disparu; les parois alvéolaires sont infiltrées de cellules embryon- 
naires. Tout autour du nodule s'étend une nappe translucide 
formée par une hémorragie ancienne. À ce niveau les vésicules 
contiennent de la fibrine granuleuse ou fibrillaire, des globules 
rouges décolorés et de grosses cellules rondes. « Celles-ci ne 
sont autre chose que les cellules endothéliales du poumon qui, 
devenues actives et globuleuses, sont rendues par cela même 
capables d’englober les globules rouges et de les détruire. » 

Les altérations très complexes de la morve chronique ont fait 
l'objet d'assez nombreuses recherches. Durux ? reconnait déjà 
dans le tubercule du poumon la caractéristique anatomique de la 
maladie et, insistant sur la signification diagnostique absolue 


4, J. Rexaur, Art. Morve. (Diction. des Sciences médicales, 1876, t. X, p. 148.) 
2. Duruy, De l'affection luberculeuse vulgairement appelée morve. Paris, 1817. 


31 


482 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


de la lésion, il considère la morve du cheval comme analogue à 
la « maladie tuberculeuse » de l'homme. 

Vincrow ‘, qui entreprend l'analyse histologique des néofor- 
mations, confirme le rapprochement établi entre la « granulation 
morveuse » et le véritable tubercule. Tous deux sont dus à une 
prolifération des noyaux du tissu conjonctif, « déterminée par 
un agent âcre ou irritant »; ils sont constitués par une agglomé- 
ration de petites cellules et par les fibres élastiques du tissu 
primitif. Les nodules ainsi formés subissent dans leur partie 
centrale une dégénérescence caséeuse. En outre, on peut ren- 
contrer dans le poumon des altérations métastatiques, « sous la 
forme de foyers irréguliers, faisant saillie au-dessus.du paren- 
chyme enflammé, et présentant le plus souvent les caractères de 
parties affectées de pneumonie lobulaire. Quelquefois ils 
atteignent des dimensions considérables, celles d’une noix ou 
d’une pomme, se ramollissent et tombent en détritus: ils res- 
semblent alors beaucoup aux grands foyers de l'infiltration 
tuberculeuse ». 

Ravrrscu ? rapporte systématiquement les lésions morveuses 
à une thrombose des vaisseaux veineux et lymphatiques, déter- 
minant des troubles nutritifs dans le voisinage. Au début, le 
tubercule n’est indiqué que par un exsudat fibrineux intra- 
alvéolaire renfermant quelques leucocytes; plus tard, il survient 
une inflammation formatrice de la membrane alvéolaire, avec 
multiplication des éléments fixes du Uissu. 

Lesernc* confirme les données de Virchow quant à la consti- 
(ution histologique du tubercule. Il admet que la lésion se 
développe dans le tissu conjonctif interstitiel, sous l’influence 
d'un contage directement apporté dans le parenchyme par l'air 
inspiré. En outre, il signale une forme anatomique particulière 
(morve infiltrée), caractérisée par des inflammations diffuses du 
tissu conjonctif, étendues à la fois entre les lobules, autour des 
bronches et des vaisseaux. 


4. Vincuow, Handbuch der specielle Pathol., 1855, t. IT, p. 405. — Pathologie 
des tumeurs, Trad. Aronssohn, 1869, t. II, p. 541. 


9, Ravrrseu, Einige Worte ueber die Pathogenese der Rotz-und Wurmkrankheit 
des Pferdes, Virchow's Archiv, 1862, t. XXIII, p. 33. 


3. LeiseniNG, Zur palhologischen Anatomie des Rotzes, Sächs. Veterinär-Bericht 
für 1862. 


AIR. 
ES 


MORVE PULMONAIRE. 483 


Trassor et Conxiz' donnent une description sommaire 
d'une «granulation morveuse » développée autour d’une bronche. 
Le issu est constilué par de nombreuses fibres de tissu lamineux 
etélastique, formant des mailles et un réseau extrèmement serré. 
Dans ces mailles on rencontre des noyaux sphériques dont quel- 
ques-uns présentent autour d'eux des granulations protoplas- 
miques. 

Rage * publie une très bonne étude sur lanatomie patholo- 
gique des diverses localisations morveuses. Le tubercule 
pulmonaire se développe au sein même du parenchyme, et il 
comprend un nombre variable d’alvéoles. Au début, il existe un 
épaississement des cloisons; celles-ci, infiltrées de noyaux, don- 
nent l’idée d'un tissu en voie de prolifération rapide; on ren- 
contre aussi des cellules rondes dans les alvéoles. Un examen 
plus complet montre que les cellules rondes sont surtout abon- 
dantes autour des capillaires, et qu’en réalité le lissu de granu- 
lation part de la surface des capillaires ; ceux-ci sont la source 
des éléments ronds ou elliptiques qui inliltrent le Uissu : les 
alvéoles et l'épithélium alvéolaire ne jouent aucun rôle dans 
leur production. À une période plus avancée, les cavités alvéo- 
laires sont complètement remplies par un tissu de granula- 
tion capable de former du tissu cellulaire, tandis qu'à la 
périphérie du foyer ies parois alvéolaires enflammées s’accolent 
pour constituer la coque fibreuse du tubercule. — Rabe insiste 
encore sur la diversité des accidents pulmonaires observés dans 
la morve chronique, et notamment sur les altérations des voies 
lymphatiques. Les obstacles apportés à la circulation déter- 
minent la stase de la lymphe, l'æœdème et l’infiltration gélatineuse 
des tissus, et plus tard leur induration. Ainsi s’expliquent les 
lésions du tissu interlobulaire et celles des gaines lymphatiques 
qui entourent les vaisseaux el les bronches. 

Czokor* étudie seulement le tubercule morveux, et il le 
différencie histologiquement des lésions appartenant à la 
tuberculose vraie. Alors que celles-ci sont constituées par un 


4. Trassor et Corxi, Note sur la structure des granulations morveuses du cheval, 
(Comples rendus de la Soc. de Biologie, 1866, t. XVII, p. 218.) 

2. Rave, Zur palhologischen Anatomie und Histologie der Rotzkrankheil. (Jahresb. 
der. K. Thierarzneischule zu Hannover, Ber, 9, 12 et 13, 1877-1881.) 

5. Czokor, Vergleichende palhologisch-anatomische Studien ueber den Rolz und die 
Tuberculose des Pferdes. Revue für Thierheillunde, 1885 et 1886. 


48% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


agglomérat irrégulier de très petits foyers, la néoformation 
morveuse revêt toujours une forme nettement arrondie et elle 
est constituée d'emblée par un foyer d’inflammation unique. 
L'examen histologique montre que le nodule morveux débute 
par la tuméfaction trouble et la chute de l’épithélium alvéolaire. 
Peu après on rencontre sur la coupe un détritus central, composé 
d’une accumulation de cellules rondes granuleuses et des parois 
vésiculaires dissociées. La dégénérescence est d'autant moins 
accusée que l’on considère une partie plus éloignée du centre; à 
la périphérie, les cellules rondes ont conservé leur forme et leurs 
caractères. Le foyer central est limité par une zone compacte, 
d'épaisseur variable, formée par une infiltration de leucocytes 
dans les alvéoles. Enfin une troisième couche, extérieure, est 
composée d’un tissu cellulaire dense, ondulé, qui constitue une 
coque isolante pour le foyer inflammatoire. 

LauLanié ' donne une description très exacte du tubercule 
morveux ancien. Au centre, une masse caséo-purulente très 
fragile, que l’on fait sourdre et que l’on extrait par pression à 
l’autopsie, et qui tombe très fréquemment pendant le montage 
des préparations; autour de cette zone centrale, une zone de 
prolifération formée de cellules épithélioïdes parmi lesquelles se 
discernent parfois des cellules géantes; une zone fibreuse qui 
embrasse les formations précédentes et tend à les étouffer; enfin 
une zone de pneumonieinterstitielle dont les alvéoles contiennent 
fréquemment des cellules épithéhoïdes et des cellules géantes. 

Cette revue sommaire suffit à montrer que les lésions 
morveuses à évolution lente sont encore incomplètement déter- 
minées quant à leur forme, et très discutées quant à leur signifi- 
cation. Les recherches que nous avons entreprises ont eu pour 
but de préciser certains points de leur étude. 


Il 
A. — HISTOGENÈSE DU TUBERCULE MORVEUX. 
Lestubercules morveux adultes se présentent, dansle poumon 


du cheval, sous la forme de nodules arrondis, du volume d’un 
grain de mil à celui d’un pois, irrégulièrement disséminés dans 


1. LAuLanié, Étude critique et expérimentale sur les cellules géantes normales et 
pathologiques. Paris, 1888. 


La 
Ÿ 


MORVE PULMONAIRE, 485 


toutes les parties des deux lobes. Les foyers superficiels sou- 
lèvent légèrement la plèvre; ils donnent, à l'exploration du 
doigt, la sensation d’un noyau fibreux dur, enchâssé dans le tissu 
élastique de l'organe. Sur la coupe, le tubercule montre une 
coque fibreuse épaisse, intimement confondue avec le paren- 
chyme voisin, et un contenu caséeux, d’un blanc sale, qui s’éli- 
mine facilement par le grattage. 

D'autre part, on trouve très souvent, dans un même poumon, 
des formes jeunes dont les différents aspects correspondent aux 
diverses périodes de l’évolution. Il est alors facile de suivre les 
modifications successives des tubercules superficiels, et il est 
possible aussi de préjuger de la rapidité des transformations 
subies, d’après le nombre des lésions de mème type qui sont 
rencontrées. 

Le tubercule est annoncé par une ecchymose arrondie, d’un 
rouge foncé, du diamètre d’un grain de mil à celui d’une pièce 
de un centime. — Bientôt apparaît, au centre de la tache hémor- 
ragique, un foyer grisâtre qui s'étend rapidement : le tubercule 
ébauché se présente sous la forme d’une granulation grise, semi- 
transparente, homogène, formée d’un tissu élastique, de consis- 
tance charnue. Parfois persiste à la périphérie une auréole rosée, 
trace de l’ecchymose primitive. — Peu après, on distingue au 
centre de la tache grise superficielle, un foyer profond opaque, 
d’un blanc sale, qui s'étend peu à peu, tandis que la zone péri- 
phérique perd sa transparence et se densifie. — Dès que cette 
densification est complète, on reconnaît seulement une masse 
arrondie, d’un gris jaunâtre uniforme, et le nodule revêt les 
caractères du tubercule adulte déjà décrit. 

L'analyse histologique permet de suivre pas à pas l’évolution 
des altérations. La formation du foyer est précédée par une 
inflammation des voies lymphatiques sous-pleurales et interlobu- 
laires de la région. Les espaces lymphatiques pleuraux et sous- 
pleuraux se montrent pour la plupart dilatés et gorgés de 
celluies rondes : dans le tissu conjonctif interlobulaire, les 
vaisseaux lymphatiques sont également distendus ; en quelques 
points, on rencontre des dilatations remplies de leucocytes et 
simulant un follicule clos minuscule. Les gaines vasculaires 
sont infiltrées, et les vaisseaux dilatés sont entourés par une 
couronne de cellules rondes. Le tissu conjonctif sous-pleural et 


486 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


celui des travées interlobulaires est œdématié et infiliré de 
cellules migratrices, isolées ou réunies en amas (Pr. IV, fig. 1). 
Dans toute l'étendue du territoire envahi, on rencontre des 
bacilles morveux, libres entre les cellules, et régulièrement dis- 
séminés en tous les points. 

C'est toujours au voisinage de la plèvre ou d’une travée 
interlobulaire que les tubercules superficiels se développent ; 
souvent ils siègent au point de réunion de la plèvre et d'une 
travée, ou encore au point de jonction de deux travées voisines. 
Il en résulte que le tubercule se trouve sous-tendu et partielle- 
ment limité par une bande de tissu cellulaire enflammé. 

Le foyer inflammatoire comprend un groupe d’alvéoles 
remplies de fibrine finement granuleuse, reliquat d’une hémor- 
raie primitive, emprisonnant quelques leucocytes mononu- 
cléaires. Les parois alvéolaires sont épaissies ; elles renferment 
des leucocytes, et aussi, notamment dans le voisinage de la 
travée conjonctive, quelques bacilles libres. Cette ébauche du 
tubercule se traduit sous la plèvre par une tache ecchymotique 
arrondie. 

Dans une deuxième période, la partie centrale du foyer 
primitif de pneumonie est envahie par une immigration active 
de leucocytes; ceux-ci infiltrent les parois; ils remplissent les 
alvéoles, qui dessinent sur la coupe une grappe fortement colorée. 
On rencontre des bacilles, encore peu nombreux, dans les parois 
alvéolaires et dans le contenu des vésicules. Autour de ce 
foyer d'apoplexie leucocytaire persiste une zone de pneumonie 
fibrineuse qui ne subit pas de transformations notables; le con- 
tenu des alvéoles est devenu cependant plus granuleux, et il se 
colore légèrement en rose par le picro-carmin. Par contre, le 
tissu pulmonaire voisin éprouve des modifications réactionnelles 
marquées ; cette zone de retentissement est indiquée par l’évo- 
lution d’une pneumonie épithéliale plus ou moins étendue, 
L'épithélium des vésicules se desquame et prolifère en rem- 
plissant les cavités alvéolaires (PL. IV, fig. 2). — C'est à ce 
moment que le tubereule se traduit sous l’aspect d’une granula- 
tion grise et semi-transparente. 

Le foyer central subit rapidement une dégénérescence 
caséeuse frappant à la fois les parois alvéolaires et les leucocytes 
immigrés. Les contours cellulaires perdent leur netteté; on ne 


MORVE PULMONAIRE. 487 


distingue plus que des granulations irrégulières, représentant des 
noyaux en voie de segmentation, et quelques éléments cellu- 
laires à divers degrés de dégénérescence. 

Les bacilles se montrent plus nombreux et ils sont rencon- 
trés dans toute l'étendue du foyer. En mème temps, la couche 
réactionnelle de pneumonie interstitielle s'étend par la multipli- 
cation des cellules conjonctives et des leucocytes ; les cavités 
alvéolaires, progressivement effacées, ne sont plus indiquées que 
par des fentes étoilées. On distingue alors dansle tubercule : un 
centre dégénéré, granuleux et coloré, formé par les détritus 
cellulaires ; une couche moyenne, à contours festonnés, de pneu- 
monie fibrineuse; une couche externe de pneumonie intersti- 
üelle. 

La présence du foyer de dégénérescence est indiquée, à la 
surface du poumon, par l'apparition d’une tache blanche, opa- 
que, au centre de la granulation grise de la précédente période. 

Dans un quatrième stade, la zone de pneumonie interstitielle 
gagne peu à peu sur la couche de pneumonie fibrineuse. Celle-ci, 
indiquée encore par quelques îlots irréguliers, emprisonnés dans 
le tissu néoformé (Pz. IV, fig. 3), a bientôt totalement disparu. La 
pneumonie interstitielle constitue dès lors à elle seule, autour du 
foyer caséeux central, une paroi cellulaire compacte dans 
laquelle on peut distinguer deux couches. L’une, interne, la plus 
large, est formée de grosses cellules jaunâtres, parmi lesquelles 
il n’est pas rare de rencontrer des cellules géantes; l'autre, 
externe, moins épaisse, comprend des faisceaux conjonctifs déli- 
cats, séparés par des cellules rondes à gros noyaux, de nature 
embryonnaire. La couche interne mérite déjà le nom de « zone 
épithélioïde », tandis que la couche externe est l’ébauche de la 
coque fibreuse. La dégénérescence du foyer est complète; 
on ne distingue plus les bacilles dans les parties centrales ; à la 
périphérie seulement, on trouve encore quelques bàâtonnets gra- 
nuleux et à peine colorés. 

Une dernière phase est marquée par l'achèvement des cein- 
tures fibreuse et épithélioïde. 

Il existe alors un foyer central caséeux ; une zone moyenne, 
composée de cellules épithélioïdes et montrant quelques 
fentes étroites, traces des alvéoles disparus ; une zone externe, 
fibro-embryonnaire, due à une accumulation de cellules jeunes, 


488 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


arrondies, fortement nucléées, mélangée de quelques délicats 
faisceaux conjonctifs (PL. IV, fig. 4). Les bacilles ont com- 
plètement disparu, ou du moins ils ne peuvent être mis en 
évidence. A la périphérie du nodule, le parenchyme pulmonaire 
est perméable ; toutefois, les parois des vésicules sont épaissies 
par une néoformation embryonnaire, et elles se confondent avec 
la couche fibreuse extérieure. 

Le tubercule ainsi constitué ne subit plus que des altérations 
régressives sans retentissement extérieur. La zone épithélioïde 
disparaît peu à peu, par suite de la dégénérescence de la surface 
limitante interne et de l'extension de la coque fibreuse externe. 
À une période ultime, on ne trouve plus qu’un contenu granuleux 
amorphe qu’enserre une capsule résistante composée de fais- 
ceaux conjonctifs concentriques, intimement accolés, compre- 
nant entre eux quelques cellules conjonctives. 


B. — ALTÉRATIONS DES VOIES LYMPHATIQUES. 


Les altérations des voies lymphatiques qui précèdent et 
accompagnent l’évolution du tubercule morveux sont constituées 
essentiellement par un afflux de leucocytes dans toutes les 
régions envahies par les bacilles. Le tissu conjonctif sous-pleura. 
et celui des travées interlobulaires est, dès le début, æœdématiéet 
infiltré. Les cellules conjonctives apparaissent nettement; leurs 
prolongements anastomotiques forment un réseau cellulaire 
évident, dont les aréoles sont bourrées de cellules migra- 
trices, isolées ou réunies en petits amas. Les unes sont pour- 
vues d’un gros noyau et d’une mince couche de protoplasma, 
les autres possèdent un noyau plus petit et une zone protoplas- 
mique évidente (PL. IV, fig. 5). 

En quelques endroits aussi, les leucocytes se trouvent accu- 
mulés en ilots plus compacts et plus étendus, régulièrement 
arrondis, situés au sein du tissu conjonctif dissocié. Les élé- 
ments cellulaires, fortement colorés, sont emprisonnés dans un 
fin réticulum (PL. IV, fig. 1). 

Ces foyers de leucocytes peuvent enfin se trouver agglomérés, 
et constituer, par leur réunion, une forme particulièrement inté- 
ressante simulant le lymphadénome. A un faible grossissement, 
on distingue sous la plèvre une masse arrondie, constituée par 


MORVE PULMONAIRE. 489 


dix ou quinze follicules arrondis ou ovoïdes, d'apparence granu- 
leuse, placés dans un stroma de même aspect, mais plus clair, et 
condensé à la périphérie en une coque enveloppante. L'aspect 
rappelle celui d’un ganglion lymphatique. La lésion est déve- 
loppée sur le trajet d’une travée interlobulaire, à peu de distance 
de la soudure avec la plèvre; on voit nettement la travée se 
diviser en deux faisceaux qui s’écartent pour embrasser la néo- 
formalion. L'un, refoulé vers la plèvre, se confond avec elle; 
l'autre sépare le foyer du tissu pulmonaire voisin. Celui-ci est 
resté sain; les alvéoles les plus voisines, comprimées et aplaties, 
se présentent sous la forme de fentes étroites et irrégulières. 

A un plus fort grossissement, les follicules apparaissent 
bourrés de leucocytes fortement colorés et pourvus d’un noyau 
volumineux. Çà et là on rencontre des éléments plus grands, à 
protoplasma jaunâtre, finement granuleux, formant des taches 
grisätres sur le fond rose foncé de la coupe. Les follicules sont 
parcourus par un réseau délicat de capillaires lymph'atiques, et 
l’on distingue, entre les éléments, un fin réticulum conjonctif. 
Les îlots occupant le centre de la lésion renferment des éléments 
qui ont subi un certain degré de dégénérescence vitreuse ou 
cireuse; 1ls se montrent brillants, homogènes et prennent une 
teinte rouge orangé. 

Dans les cloisons interfolliculaires, on rencontre des bacilles 
morveux courts, peu nombreux, mais parfaitement nets. Dans 
les follicules, leur constatation estrendue difficile parla coloration 
intense des cellules rondes, mais on les distingue encore dans 
les espaces clairs situés au voisinage des parois. 

Ces pseudo-tubercules siègent dans le tissu conjonctif 
périlobulaire ou dans les cloisons interalvéolaires. Si le tissu 
conjonctif enflammé des régions voisines rappelle le tissu 
réticulé normal, ces néoformations simulent de très près le lym- 
phadénome. Et la ressemblance sera plus parfaite encore si l’on 
admet que le réticulum des tissus lymphoïdes est un réseau cellu- 
laire, ainsi que tendent à l’établir les recherches de Laguesse ! 
sur le développement de la rate. 

Les tubercules lymphoïdes ont un aspect assez particulier. 
Ils se présentent, à la surface du poumon, sous la forme d’un 


4. LaGuesse, Développement de la rale chez les poissons. (Journal d’Anato- 
mie, 1891.) 


490 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


nodule régulièrement arrondi, nettement délimité, d’une teinte 
légèrement jaunâtre et translucide, ou d’une couleur rosée et 
opaque; sa surface, légèrement convexe, soulève la plèvre; le 
parenchyme voisin ne paraîl pas altéré. Sur la coupe, on trouve 
un tissu de consistance charnue, très finement granuleux, 
parfaitement homogène dans toute sa masse, au moins pendant 
les premières périodes de l’évolution. 

Ces formes paraissent exister dans de nombreux cas de morve 
du cheval, mais l’on n’en rencontre qu’un petit nombre chez le 
même sujet. Chez un premier cheval, qui avait fortement réagi 
à la malléine, nous n’avons trouvé que deux foyers de cette 
nature, en l’absence de toute autre lésion du poumon ou des 
muqueuses. Un deuxième cas nous a été fourni par l'examen 
d’un fragment de poumon, recueilli sur un cheval également 
abattu après l'épreuve de la malléine. Une troisième observation 
a été relevée dans un poumon présentant de très nombreux 
tubercules morveux de différents âges ; un seul nodule offrait Les 
caractères indiqués, et ceux-ci élaient assez nets pour que la 
forme histologique de la lésion ait pu ètre immédiatement prévue. 


C. — PNEUMONIE LOBULAIRE MORVEUSE. 


Le tubercule ne constitue pas la seule expression anatomique 
de la morve pulmonaire chronique, et l’on rencontre parfois des 
foyers de pneumonie lobulaire morveuse. Ces lésions se tra- 
duisent à la surface du poumon, sous la forme de foyers irrégu- 
lièrement disséminés, de dimensions très variables, de couleur 
jaunâtre, entourés, lorsqu'ils sont récents, d’une zone de conges- 
tion intense. Leur coupe montre une surface d’un blanc sale, 
uniforme et granuleuse, à contours irréguliers, limitée par un 
tissu hépatisé de couleur rouge foncé. Le foyer, qui dessine un 
cône à base sous-pleurale, rappelle l'infarctus de l'infection 
purulente. 

Comme le tubercule, la pneumonie se développe dans le 
voisinage de la plèvre ou des travées interlobulaires, souvent 
dans l'angle formé par la plèvre et une travée, parfois dans les 
parties sous-pleurales adjacentes de deux lobules. La plèvre, la 
travée et les parois alvéolaires sont épaissies, œdématiées et 
infiltrées de leucocytes. Les alvéoles sont complètement remplies 


MORVE PULMONAIRE. 191 


par un exsudat fibrineux, et par une accumulation intense de 
cellules rondes en voie de dégénérescence. Quelques éléments 
ont conservé leur aspect normal et la netteté de leurs contours ; 
les autres sont indiqués seulement par des granulations irrégu- 
lières, représentant des noyaux détruits pendant leur segmenta- 
ton. L'épithélium alvéolaire a complètement disparu. Dans 
toute l'étendue du foyer, on rencontre un nombre considérable 
de bacilles grèles, allongés, à espaces clairs évidents ; très 
abondants dans le contenu alvéolaire, ils se retrouvent dissémi- 
nés dans les parois parmi les éléments cellulaires dégénérés 
(Pr NeshS 

La partie du lobule envahi dessine une grappe arrondie, 
limitée par une zone étroite de pneumonie catarrhale. Dans tout 
le reste du lobule, et principalement dans ie voisinage du foyer, 
les vaisseaux sont gorgés de sang, et il existe des hémorragies 
disséminées dansles alvéoles. En ces milieux, on constate encore 
des bacilles, mais ils sont beaucoup plus rares que dans le 
foyer central. 

Ces lésions reproduisent exactement ce que l’on observe 
dans la morve aigué; elles n'en diffèrent que par leur étroite 
localisation. 


D. — ALTÉRATIONS VASCULAIRES ET BRONCHIQUES. 


Les lésions initiales des voies lymphatiques s'étendent rapi- 
dement aux gaines qui entourent les vaisseaux et les bronches. 

Dans les territoires envahis, on note autour des gros vais- 
seaux, dès les premières périodes de l’envahissement, une accu- 
mulation de leucocytes qui distendent la tunique adventice et la 
transforment en une large gaine lymphatique annulaire. Un peu 
plus tard, les parois du vaisseau subissent des altérations mar- 
quées ; des cellules rondes pénètrent dans la tunique moyenne, 
tandis que l’endothélium se gonfle, prolifère et se détache. Les 
leucocytes infiltrent toute la paroi et ils font irruption dans l’in- 
térieur du vaisseau. Avec eux pénètrent de nombreux bacilles, 
les uns libres, les autres renfermés daus les cellules. Les leuco- 
cytes importés ont subi pour la plupart un commencement 
d’altération ; leurs noyaux sont en voie de segmentation. Parmi 
ceux qui contiennent un ou plusieurs bacilles, les uns parais- 


492 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sent encore intacts, les autres montrent un noyau fragmenté, 
granuleux, et leur contour est à peine indiqué (PL. V, fig. 4). 

Très marqués en quelques endroits, les troubles inflamma- 
toires aboutissent à la destruction totale des parois et à l'obstruc- 
tion du vaisseau. On voit alors sur la coupe une zone étendue 
de tissu embryonnaire, renfermant quelques cellules musculaires 
lisses, vestiges de ia tunique moyenne, et, occupant la lumière 
du vaisseau, un bourgeon de tissu embryonnaire. 

Des lésions de même ordre sont rencontrées au niveau des 
bronches. L'infiltration leucocytaire du tissu lymphatique péri- 
bronchique est suivie de là réaction inflammatoire des parois. 
Le derme de la muqueuse, infiltré par de nombreuses cellules 
migratrices, s’épaissit et bourgeonne dans l’intérieur du canal, 
en même temps que l’épithélium se multiplie et se desquame. 
Les leucocytes font irruption à travers les parois, et ils forment 
en quelques points des bourgeons saillants qui obstruent en 
partie la lumière. Avec eux, des bacilles pénètrent dans la bror- 
che; on les rencontre, parfois en très grand nombre, englobés 
avec les éléments cellulaires immigrés et l’épithélium détaché, 
dans un exsudat muqueux qui remplit les culs-de-sac bronchi- 
ques (Pc. V, fig. 2). 

Le bourgeonnement des parois continuant, la cavité se trouve 
progressivement effacée, puis complètement oblitérée en cer- 
tains points par un bourgeon inflammatoire (PL. IV, fig. 6). 


III 


Les observations qui précèdent, bien qu'incomplètes à coup 
sûr, permeltent au moins d’esquisser les modes principaux de 
l'infection pulmonaire. 

Les bacilles sont rencontrés tout d’abord dans les voies lym- 
phatiques. Ils cheminent lentement, provoquant dans tous les 
points la stase de la lymphe el une abondante leucocytose. Ces 
lésions très manifestes n’ont pas échappé aux premiers observa- 
teurs : cesont celles qui constituent la « morve infiltrée » de Leise- 
ring et l’«œdème lymphatique » de Rabe. Mais leur pathogénie 
est très différente de celle qui leur est attribuée ; au lieu de con- 
stituer un phénomène passif, simple résultante mécanique d’un 
obstacle plus ou moins éloigné apporté à la circulation, ils sont 


MORVE PULMONAIRE. 493 


l'expression d'un processus actif de réaction, dû à la présence des 
bacilles; au lieu de traduire un accident secondaire et acces- 
soire, l'œdème lymphatique exprime le fait primordial et 
essentiel de l'infection. 

Les voies lymphatiques jouent surtout le rôle de vecteur du 
virus, et cette constatation estintéressante en ce qu'elle montre 
la similitude des procédés de linfection morveuse dans les 
divers territoires organiques (farcin). Dans ce milieu, le bacille 
n'éprouve très généralement dans sa marche envahissante 
qu'une résistance insuffisante; malgré l'abondance des leu- 
cocytes, la phagocytose ne semble pas s'exercer activement, et 
les bacilles restent libres au milieu des cellules très vivantes 
qui les entourent. Cependant le microbe ne rencontre pas non 
plus des conditions favorables à sa pullulation, et si cette pre- 
mière phase de la défense n’est qu'esquissée le plus sou- 
vent, elle se précise et s’accentue dans quelques cas. Cer- 
tains faits rapportés plus haut tendent à établir que l’infec- 
tion peut être enrayée, au moins momentanément, à la suite 
d'un afflux de cellules migratrices sur certains points. La 
réaction est très nettement indiquée par l'accumulation des 
leucocytes en foyers, et surtout par l'édification des pseudo- 
tubercules constitués par des follicules agminés. À priori, il est 
permis de considérer comme possibles la localisation et la des- 
truction sur place des agents de l'infection dès cette première 
période. 

Très généralement, les milieux lymphatiques n’opposeront pas 
une résistance suffisante à l'invasion, et les bacilles vont diffuser 
dans les travées interlobulaires pour gagner les espaces lympha- 
tiques péri-vasculaires et péri-bronchiques. La pénétration du 
bacille dans les parois alvéolaires s'opère difficilement ; on trouve 
en de nombreux points des lobules parfaitement intacts, qui sont 
limités par une travée épaissie et envahie par de nombreux 
microbes. Certaines conditions accidentelles déterminent sans 
doute un affaiblissement local de la défense, qui permet l’inva- 
sion. Il est remarquable aussi que les tubercules apparaissent 
par poussées successives, et l’on peut admettre que l'infection 
reste localisée dans les voies lymphatiques jusqu’à ce qu’une 
modification de l’état général favorise l’éruption en diminuant 
la résistance des tissus. 


49% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La présence du bacille dans les parois alvéolaires coïncide 
avec la réplétion de l’alvéole par un exsudat fibrineux; plus tard 
seulement s'opérera l’afflux des leucocytes dans les parties 
centrales du foyer. 

Pendant toutes les premières phases de l’évolution, l’on ne 
rencontre qu'un très petit nombre de microbes dans le tuber- 
cule; au sein de granulations grises parfaitement délimitées, 
il est souvent difficile de mettre quelques bacilles en évidence, 
alors qu'ils sont très nombreux dans les travées conjonctives 
voisines. 

La pullulation est annoncée par la dégénérescence centrale 
du tubercule ; à ce moment seulement les bacilles seront facile- 
ment décelés par l'examen direct ou par l'inoculation. 

La réaction inflammatoire des tissus aboutit à l'isolement 
du foyer, mais la virulence persiste un long temps, malgré les 
altérations subies par les microbes ;elle sera ainsi démontrée par 
l'inoculation, alors que l’on ne trouvera plus dans le tubercule 
que quelques granulations sans signification précise. 

Du côté des bronches et des vaisseaux, les bacilles déter- 
minent l’afflux des leucocytes dans les gaines lymphatiques et 
l'inflammation des parois. L'observation directe démontre que 
la pénétration des cellules rondes dans l’intérieur des canaux 
est alors possible, et que des bacilles, libres ou intracellulaires, 
traversent de dehors en dedans les parois altérées du vaisseau 
ou de la bronche. 

Les conséquences de l’envahissement des capillaires du 
poumon par les bacilles ne sauraient être prévues à priori, mais 
celles de la souillure des bronches apparaissent évidentes. Les 
microbes se retrouvent en grand nombre à la surface de la 
muqueuse euflammée, au sein d'un exsudat abondant qui est 
éliminé sous forme de jetage. C’est ainsi que s'explique la viru- 
lence à peu près constante du jetage des animaux morveux, et 
non, comme on le supposait jusqu'ici, par l’ouverture de foyers 
tuberculeux dans les bronchioles. Les altéralions bronchiques 
élant indépendantes de l’évolution tuberculeuse et subordonnées 
seulement à l’envahissement primitif des voies lymphaliques, 
on peut concevoir la virulence du contenu des bronches en 
l'absence de toute lésion macroscopique apparente. Il est théo- 
riquement admissible qu’un animal puisse être trouvé libre de 


- L248 


MORVE PULMONAIRE. 495 


lésions morveuses pulmonaires après une autopsie minulieuse, 
alors qu'en réalité il existe de nombreux bacilles dans certains 
territoires lymphatiques du poumon, dans les bronches des 
régions envahies et par conséquent dans le jetage. L'absence 
des tubercules pulmonaires, en supposant qu'elle puisse être 
affirmée, d'après l’autopsie, n'implique donc nullement l’inexis- 
tence de la morve, et cette constatation n'est pas sans intérèt 
à l'heure actuelle. 


CONCLUSIONS, 


En résumé : 

I. Dans la morve chronique du cheval, l'envahissement du 
poumon s'opère par les voies Iymphatiques; l'infection se traduit 
à la fois par des néoformations tubercuieuses et par des altéra- 
tions des vaisseaux et des bronches. 

IT. Le tubercule morveux débute par une Ilymphangite péri- 
lobulaire ; le lobule est envahi secondairement, de la périphérie 
au centre; la première expression anatomique du tubercule est 
un noyau de pneumonie fibrineuse. 

Le centre du foyer est ensuite le siège d’une apoplexie leu- 
cocytaire, suivie de la dégénérescence caséeuse des éléments 
et d’une réaction périphérique ; celle-ci aboutit au développement 
d'une ceinture épithélioïde doublée d’une enveloppe conjonctive, 

III. Une forme anatomique particulière est due au dévelop- 
pement de foyers lymphoïdes agminés dans les travées interlo- 
bulaires ; le pseudo-tubercule ainsi développé simule histologi- 
quement le /ymphadénome. 

IV. Une altération exceptionnelle est constituée par l’évolu- 
tion d'un noyau de pneumonie alvéolaire, entouré par une zone 
hémorragique; cette forme constitue un fover très limité de 
morve aiguë. 

V. Les vaisseaux et les bronches subissent, dès les premières 
périodes de l’évolution, des altérations importantes. Leurs parois 
enflammées sont traversées par des leucocytes et par des 
bacilles arrivés par les gaines lymphatiques. Même lors de 
lésions très discrètes et localisées en apparence, les bacilles 
pénètrent dans le sang; d'autre part, ils se rencontrent en 
abondance dans les bronches et par conséquent dans le jetage. 


496 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


EXPLICATION DES PLANCHES 


PLANCHE IV 


Fig. 1. — Tubercule morveux sous-pieural ; foyer de pneumonie 
fibrineuse succédant à une hémorragie primitive ; œdème et leucocy- 
tose des voies lymphatiques péri-lobulaires; pseudo-follicules Iympha- 
tiques dans les travées. 

Fig. 2 — Deuxième stade de l'évolution du tubercule; invasion 
leucocylaire dans les parties centrales de la zone fibrineuse; infiltra- 
tion des voies lymphatiques sous-pleurales et péri-vasculaires. 


Fig. 3. — Dégénérescence centrale ; édification d’une zone de 
pneumonie interstitielle substituée à Ia pneumonie fibrineuse. 

Fig. 4 — Tubercule adulte; foyer central caséeux ; couche 
moyenne épithélioïde; couche externe fibro-embryonnaire. 

Fig. 5. — Inflammation du tissu conjonctif interlobulaire; 
réseau cellulaire conjonctif œdématié et infiltré par les leucocytes. 

Fig. 6. — Lésions vasculaires et bronchiques; inflammation des 


voies lymphatiques périphériques ; oblitération par bourgeonnement. 


PLANCHE V 


Fig. 3. — Pneumonie lobulaire morveuse; altérations de l’alvéole 
et des parois. 

Fig. 4. — Allérations des parois bronchiques; pénétration des 
bacilles dans l’intérieur de la bronche. 

Fig. 2. — Capillaires sanguins et lymphatiques des travées inter- 
lobulaires renfermant des bacilles. 

Fig. 1. — Inflammation des parois artérielles ; infiltrations leuco- 


cylaire et pénétration des bacilles. 


ÉTUDE DES TRICHOPHNTIES À DERMITE PROFONDE 


Spécialement de la Folliculite agminée de l’homme 
et de son origine animale 


PARMEME OR: SABOURAUD 


Interne à l'hôpital Saint-Louis. 
(Travail du laboratoire de M. le Dr E. Besniere) 


I — AVANT-PROPOS. 


Ce travail a pour objet d'étudier l’une des trichophyties de 
l'homme dans ses symptômes, dans sa marche, dans ses lésions; 
d'étudier son parasite aussi, ses caractères de culture, et acces- 
soirement ses caractères botaniques; enfin de mettre en relief 
l'origine primitivement animale de la maladie qui n’est chez 
l'homme que le résultat d’une contagion accidentelle. 

J'ai aussi un but plus général, c'est de montrer par un 
exemple que les caractères particuliers de chaque forme de tri- 
chophytie humaine ont pour cause l’action d’une espèce spéciale 
de trichophyton. 

Enfin je devrai exposer quelles raisons j’ai de croire que ces 
êtres dont nous connaissons seulement encore la vie parasitaire, 
doivent exister à l’état saprophyte dans la nature et ne devenir 
parasites que par occasion. 

Mais d’abord cette étude demande comme introduction un 
bref résumé de ce que l’on sait aujourd’hui des teignes 
humaines. 


HISTORIQUE GÉNÉRAL DE LA TEIGNE TRICHOPHYTIQUE 


À. — Quand en 1844 Gruby attribua la teigne de la barbe 
au champignon qui porte à tort le nom de Trichophylon tonsu- 
rans de Malmstein, on connaissait les trois modalités cliniques 
que la teigue trichophytique peut revêtir chez l’homme. 

C'étaient alors : la teigne tondante des cheveux, le syco- 

32 


498 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sis de la barbe, et l’herpès circiné contagieux de la peau glabre. 
Mais les symplômes de la maladie diffèrent beaucoup suivant 
son siège, et il fallut cette notion de l’étiologie parasitaire 
pour grouper côte à côte ces lésions demeurées jusque-là sans 
lien commun; elles sont devenues alors : /a trichophytie pilaire 
des cheveux, la trichophytie pilaire de la barbe, et la trichophytie 
circinée tégumentaire. 

À cette époque, la présence constante de mycéliums crypto- 
gamiques dans les trois lésions, devait faire et fit affirmer l’iden- 
üté absolue de leur parasite causal. 

En sainelogique cependant, on eût dû conclure à leur analogie 
plutôt qu’à leur identité ; mais alors le critérium de l'examen mi- 
croscopique était considéré comme sans appel : la découverte de 
Gruby une fois faite, son extension par Bazin, Malherbe, Leten- 
neur fut donc naturelle et put sembler légitime. L'enseignement 
médical adopta pour un demi-siècle l’idée de l’unité du tricho- 
phyton, et, avecle temps, cette opinion devint un dogme. Pourtant 
ceux qui l'avaient établie ne l’avaient pas formulée sans hésita- 
tion. Leurs successeurs, au contraire, l’acceptèrent en toute 
rigueur; et de 1857 1l faut arriver en 1879, à Patrick Manson, 
pour voir un médecin s'élever au nom de la seule clinique, 
contre l’unité absolue du trichophyton :. 

Les travaux bactériologiques faits sur la question (Duclaux?, 
Verujski ‘)n’avaienteu traitqu'à l'étude botanique du parasite ou à 
seséchanges physico-chimiques; les bactériologistes avaient reçu 
des médecins, sans la discuter, l'affirmation de l’unité tricho- 
phytique, lorsque le premier travail de bactériologie médicale 
fait sur seize cultures trichophytiques, provenant du laboratoire 
de M. Unna à Hambourg ‘, montra quatre parasites différents. Ce 
court mémoire, où la partie clinique était sacrifiée, ne fut malheu- 
reusement pas suivi des recherches plus approfondies que le 
sujet méritait. 

B. — En 1892, me trouvant à l'hôpital Saint-Louis dans le 
service d'un maitre éminent et cher, dont l’appui moral et 


1. Parriex Manson, Tinea imbricata in British Journal of Dermat., janvier 1892. 

2, Ducraux, Bulletin de la Soc. de Biolog., 1886, et These de Feulard, 1886. 

3, Veruiski, Annales Pasteur, 1588. 

4. Vier Trichophytonarten von M. Furramanx (Altona) et G.-H. Neese (Ham- 
burg) in Monatshefte für praktische Dermalologie, XIII Band. 1891, page 478 et 
suivantes. 


TRICHOPHYTIES À DERMITE PROFONDE. 496 


même matériel ne m'a pas un instant fait défaut, ayant d’autre 
part à ma disposition des éléments de travail que tout chercheur 
eût pu envier, j'ai pu commencer l'étude de cette question. 

Voici comment elle se pose chez l’homme, en France, du 
moins : 

Sur cent cas de trichophytie humaine, quatre-vingts environ 
sont des trichophyties pilaires des cheveux. C’est la teigne tondante 
de l'enfant ‘. 

Les vingt autres sont des cas de trichophytie circinée des 
régions glabres, l’ancien herpès circiné contagieux *. 

Eafin dans deux ou trois cas sur cent, il s’agit de la teigne 
pilaire de la barbe, l’ancienne mentagre, l'ancien sycosis *. 

Ces trois trichophyties montrent à l’examen du poil, du 
cheveu, ou de la squame, un parasite cryptogamique caractérisé 
par des chaînes de spores mycéliennes. C’est là le caractère 
commun qui avait fait identifier tous les cas et toutes les formes 
de trichophyties. 

Mais si l'examen microscopique est pratiqué avec soin‘, on 
vbservera que toutes les trichophylies de la barbe chez l'adulte 
et (ous les cas de trichophytie épidermique des parties glabres 
montrent un parasite dont les spores sont plus grosses qu’un 


1. Nous rappellerons pour les lecteurs qui ne sont pas familiers avec la der- 
matologie qu’il ne s’agit pas là de la pelade. Dans la teigne trichophytique dite 
teigne tondante, le cheveu est cassé, mais visible. De plus c’est là une lésion spé- 
ciale aux enfants, et qui ne dépasse guère l’époque de la puberté. La pelade au 
contraire est de tous les âges. 

2. Le caractère commun des trichophyties tégumentaires est la forme absolu- 
ment circinée de la lésion. Ordinairement c’est un cerle dont le centre est sain et 
dont la bordure, région active, présente soit des vésicules analogues à celles de 
l’herpès fébrile des lèvres, soit des croûtes peu épaisses, résultant de la rupture 
des vésicules, soit encore une desquamation furfuracée. Il peut y avoir plu- 
sieurs cercles agminés et la circonférence de la lésion est dite alors polycir- 
cinée. 

3. Grossiérement la trichophytie de la barbe se présente sous trois aspects: 
ou bien il n’y a aucune lésion dermique, comme dans la trichophytie vulgaire des 
cheveux, le poil seul est atteint, cassé à quelques millimètres au-dessus de Ja 
peau ; ou bien la lésion du poil s'accompagne d'accidents locaux de dermite,. c’est 
proprement l’ancien sycosis ; ou bien la lésion se borne à des cercles analogues 
à ceux qu’on voit évoluer sur la peau glabre, et les poils sont à peine envahis 
par le parasite. DE RS 

4. L'examen extemporané se fait ainsi : La squame ou le poil sont portés:sur 
une lame dans une goutte d'une solution de potasse à 40 0/0, on recouvre d'une 
lamelle et on chauffe légèrement, jusqu’à un commencement d’ébullition, Les 
parties grasses-sont éliminées, les éléments cellulaires éclaircis et dissociés: Le 
parasite devient facilement visible, sans aucun artifice de coloration (Oculaire à. 
Object. 7. Leitz), | 


D00 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


globule sanguin (8-9 y) et visiblement contenues dans des fila- 
ments mycéliens distincts (fig. 1). 


À KHARMANSA. 


Fig. 1. — Trichophyton mégalosporon dans le cheveu. Gross. 300. 


Si au contraire on passe à l'examen des cheveux de la teigne 
pilaire des enfants, on verra que le parasite à grosses spores ne 
se retrouve que dans un liers des cas seulement, les deux autres 
tiers montrant un parasite tout différent. 

Ce sont de très petites spores de 2 ou 3 seulement 
de diamètre. Comme les grosses spores, ce sont également des 
spores mycéliennes, mais leur mycélium n'est pas visible, en 
sorte qu'elles paraissent irrégulièrement tassées les unes contre 
les autres, comme des zooglées de staphylocoques. 

Et non seulement elles occupent la totalité du cheveu malade, 
mais elles forment autour de lui comme une gaine plus ou moins 
épaisse (fig. 2). 

Jamais sur une même tête on n’observe les deux types de 
spores mêlés, et dans les contagions familiales la spore garde 
aussi sur tous les individus contaminés la même dimension, le 
même aspect. 

Enfin la petite spore fournit à la cullure une colonie en duvet 
et blanche ; la grosse spore, une colonie aride, poudreuse, ordi- 
nairement jaunâtre. 


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TRICHOPHYTIES À DERMITE PROFONDE. 501 


Et de même que les contaminés de la même famille fournis- 
sent à l'examen la mème spore, de mème ils fournissent à l’en- 
semencement sur tous milieux artificiels invariablement la 
mème culture. 


Fig. 2, — Trichophytcn microspcron dans le cheveu. Gross. 300, 


De ces faits que j'ai exposés longuement ailleurs’, et sur 
lesquels je ne puis insister ici, il résulte qu’il existe chez l’homme 
deux formes, ou mieux deux classes de teignes trichophytiques. 

L'une, causée par le trichophyton microsporon, est essentiel- 
lement une teigne tondante des cheveux et une maladie de 
l'enfance. 

L'autre, causée par le trichophyton mégaloporon, siège ou peut 
siéger dans le cheveu chez l'enfant, dans le poil de la barbe chez 
l'adulte, dans l’épiderme à tous les âges. 

C. — Mais sous ce nom de trichophytons à grosses spores, 
à petites spores, il faut se garder d'entendre deux espèces, 
chacune unique, qui se partageraient à peu près également les 


4. Bulletin et Annales de dermatologie des mois de novembre 92 et février 1893. 


502 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


trichophyties humaines ou animales. Ces noms désignent de 
grandes classes, des groupes d'espèces nombreuses, distinctes 
les unes des autres, ayant chacune ses caractères fixes, hérédi- 
taires et permanents. 

Je n’ai pas à parler ici des trichophytons microsporon ; bien 
qu'ils forment la grande majorité des teignes tondantes de 
l'enfance, ils sont d'espèces peu nombreuses, presque exclusive- 
ment humaines". 

Mais il n’en est pas de même des trichophytons mégalospo- 
ron; Ceux-ci comprennent de multiples espèces dont je dois 
indiquer brièvement le cadre, pour pouvoir, dans ce cadre, 
marquer la place de l'espèce que j'étudierai. 

La construction de ce tableau général est facilité par un fait 
d'observation très important. 

La ressemblance objective de deux lésions trichophytiques 
suppose une ressemblance entre les espèces qui les causent. 
Après un long temps d'observation, il devient donc facile, et je 
dirai même qu'il s'impose, de reconnaître parmi les nombreuses 
espèces du type trichophyton mégalosporon des groupes naturels. 
Et ce groupement, qu'on le fasse en partant de la seule étude 
clinique ou, au contraire, de l’étude mycologique, sera identique, 
puisqu'il rapproche des trichophytons dont les lésions se ressem- 
blent entreelles, — justementcommeils seressemblententre eux. 

Chacun de ces groupes est caractérisé par une forme de 
lésion distincte des autres à l'œil nu quand la trichophytie est 
épidermique ; et quand la lésion est pilaire, à l'examen micros- 
copique des cheveux et poils malades, par la forme spéciale de 
la spore, par son siège ou par son mode d’agmination. 

Chaque groupe renferme plusieurs espèces, ayant entre elles 
dans leur lésion et dans leur culture les points de ressemblance 
les plus frappants. Enfin on peut trouver dans chaque groupe 
une espèce qui en résume nettement les caractères principaux, 
qui en est si l’on veut le prototype. 

Parmi ces groupes, celui dans lequel je prends mon sujet 
d’études est le plus tranché, le plus nettement différencié à tous 

4. Je reviendrai plus loin sur l’herpès contagieux vulgaire du cheval, si fréquent 
chez les jeunes chevaux, dû à un trichophyton microsporon, très peu distant de 
celui des teignes tondantes des enfants. Je n'en parle que pour prévenir d'avance 


toute confusion entre ce trichophyton fréquent du cheval et l’espèce trichophy- 
tique équine beaucoup plus rare que j'étudierai ici. 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. 903 


les points de vue : Aspect clinique de la lésion, localisation et 
morphologie du parasite dans la lésion, aspect général des cul- 
tures, enfin mode de végétation du parasite cultivé. 

Cliniquement, ce groupe est celui des trichophytons à dernute 
profonde et suppurée, car ces trichophytons sont pyogènes. 

Au point de vue microscopique, c'est le groupe des tricho- 
phytons à spores géantes. 

Au point de vue des cultures, le groupe des trichophytons 
mégalosporon à cultures blanches. 

En étudiant ce groupe trichophytique, j'ai été conduit à 
constater la similitude de profession des malades, porteurs de 
l’une de ses espèces, et conduit à rechercher et à trouver, en 
dehors de l’homme, chez l’animal, la cause de la contagion. 

C'est cette espèce, d’origine ordinairement équine, que je 
veux étudier ici. Elle s'impose àl’attention partousses caractères ; 
elle est réellement le centre, l’espèce typique du groupe dont 
elle fait partie; enfin, précisément à raison de sa haute spéci- 
ficité, reproduisant avec un relief particulier, à côté de ses 
symptômes spéciaux, les caractères généraux de toutes les 
autres teignes trichophytiques, c’est un vrai type d'étude, propre 
à fournir avec une grande évidence les déductions auxquelles 
l’examen des autres espèces aurait conduit moins sûrement. 

Résumant donc tout ce que je viens de dire, je définirai ainsi 
l'espèce que je vais étudier : c’est le #richophyton mégalosporon 
pyogène du cheval. 

Il appartient au groupe des trichophytons à dermite profonde 
et à cultures blanches, de la grande famille des trichophytons 
mégalosporon. 

Sa place dans le cadre dont j'ai parlé Re haut est indiquée 
dans le tableau suivant : 


LES TRICHOPHYTONS 


I j IT 


Classe *. LES TRICHOPHYTONS MICROSPORON LES TRICHOPHYTONS MÉGALOSPORON 
Se Se | SRE TE ET RTC LL TELISSELTF 
I II I IL III IV etc. 
Groupe. Teigne tondante Herpès contagieux Les trichophytons 
des enfants. vulgaire du cheval. pyogènes, 


I 
Il LIT 
Espèce. Cheval. Chat. Pore, ete. 


Qt 
(=) 
PS 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


IT. — PARTIE CLINIQUE 


À. — LA LÉSION HUMAINE. SES DIFFÉRENTS SIÈGES. 


La lésion sur l’homme esttout à fait spéciale. Quelque soit son 
siège, ses caractères sont identiques et peuvent se résumer ainsi : 

1° La lésion élémentaire occupe le follicule pileux, c’est une 
folliculite ou périfolliculite : 

2° Son processus très évidemment inflammatoire va jusqu’à 
la suppuration des éléments envahis; 

3° Ces lésions inflammatoires folliculaires sont agminées en 
un gâteau de forme ronde nettement circonscrit ; 

4° Ce placard fait sur la peau saine voisine une saillie consi- 
dérable. À son niveau, le derme est le siège d'une infiltration profonde. 

La surface de la lésion en pleine activité est souvent recou- 
verte de croûtes. Ces croûtes enlevées laissent voir une surface 
exulcérée, d'un rouge vineux, suintante, non pas absolument 
plane, mais un peu mamelonnaire; et par places s’observent 
entre des pustules acuminées assez rares des déchels épithéliaux 
agslomérés. Ce sont des bouchonsjaunes, humides et spongieux, 
ayant la plus grande ressemblance avec le bourbillon du furoncle. 

Quand on les enlève avec une pince, on observe qu'ils sont 
comme enchâssés dans une sorte de crypte, et ils laissent à 
leur place un pertuis occupant l’orifice folliculaire d’un poil. 

Au rebord mème de la néoplasie inflammatoire, suivant une 
ligne de démarcation absolument nette et comme tracée au 
compas, le tégument est légèrement soulevé et se continue avec 
la partie malade. 

En d’autres termes, ce bord n’est pas taillé à pic, mais se 
continue avec le tégument voisin par un talus formé aux dépens 
de la peau saine. 

Enfin autour de la lésion, dans un rayon de quelques milli- 
mètres, existe une zone érylhémateuse un peu violette, où l’épi- 
derme forme une collerette souvent continue de desquamation 
furfuracée. 

La lésion ainsi constituée peut être très large, de 10 à 12 centi- 
mètres environ, ou très petite, de 1 centimètre de diamètre. 
Il peut y en avoir une seule, ce qui est le plus ordinaire, 
ou plusieurs, et j'en ai compté jusqu'à sept sur le même 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. DO 


individu ; elle peut affecter tous les sièges, mais d'ordinaire on 
la rencontre sur les parties découvertes; sur les régions décou- 
vertes revêtues de poils (cuir chevelu, barbe), sur les parties 
glabres (aux mains, aux avant-bras); elle occupe le plus sou- 
vent la face dorsale ou le dos du poignet. 

Au début, l'affection est invariablement confondue avec un 
furoncle ou un petit anthrax (l'absence de douleur spontanée 
vive pourrait cependant faire écarter ce diagnostic), en sorte que 
le patient se présente toujours au médecin en pleine évolution 
de la maladie. 

La guérison demande de trois à six semaines quand la folli- 
culite trichophytique a son siège sur les régions glabres ; deux 
mois environ quand son siège est le cuir chevelu, et en général 
trois mois au moins quand il s’agit d’une localisation à la barbe. 

Le traitement comprend l'épilation de la plaque malade et 
de son pourtour, et les applications iodées, vaseline iodée, 
teinture d’iode. L'application permanente de taffetas de Vigo 
hâte la résolution de la dermite profonde, quand la cicatrisation 
de la surface malade est obtenue. 

Cette cicatrisation superficielle est toujours rapide : toute la 
surface malade se recouvre d’un épiderme d'aspect vernissé, 
extrêmement mince. Alors l’épaississement persistant du derme 
simule un disque enchâssé dans l'épaisseur du tégument. 

Peu à peu la rougeur violacée de la surface s’alténue, ainsi 
que l’empâtement profond, dernier signe qui disparaisse. 

Mais les follicules pileux de la région sont en partie détruits ; 
la cicatrice reste donc marquée au cuir chevelu et dans la barbe 
par une alopécie partielle, mais permanente. Les teignes de ce 
groupe trichophytique sont les seules dont l’évolution spontanée 
puisse créer une alopécie définitive. 

B. — LES OPINIONS MÉDICALES SUR LE SUJET. 

La lésion que je viens de décrire est trop spéciale pour n’avoir 
pas attiré dès longtemps l’attention du médecin. 

a) Au cuir chevelu elle est connue depuis Celse sous le nom 
de kérion. Il est possible que cette désignation ait compris à 
l'origine non seulement cette maladie spéciale, mais beaucoup 
d’autres. Cependant une tradition médicale constante lui a 
exclusivement réservé ce nom. 


506 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Depuis Bazin, son origine trichophytique est reconnue, et, 
l'unité du trichophyton étant jusqu’en ces derniers temps indis- 
cutée, pour expliquer la symptomatologie particulière du kérion, 
on invoquait seulement l'influence des infections secondaires 
staphylococciques. 

Il va de soi qu'elles existent dans une pareille lésion, 
ouverte et non protégée : seulement leur présence n’est pas la 
cause de ses caractères objectifs. 

b) Dans la barbe, on avait décrit, bien avant que la nature 
cryptogamique des teignes fût en question, le sycosis où men- 
tagre. Sous ce nom on désignait les eczémas pilaires, qui dans 
ce siège prennent souvent une forme exulcérée et végétante 
rappelant, sauf la circination, la lésion que nous avons décrite. 
Et la relation de ces dermites avec les polyadénites scrofuleuses 
ayant été remarquée, on en avait fait des eczémas d'origine 
strumeuse, parmi lesquels la trichophytie spéciale dont nous 
parlons restait confondue. 

Quand certains de ces sycosis durent être classés parmi les 
teignes, on garda l'hypothèse de la strume pour expliquer leur 
forme végétante. Enfin on étendit cette hypothèse au kérion du 
cuir chevelu lui-même, et il demeura admis que le kérion et le 
sycosis trichophytiques devaient à la diathèse du malade leurs 
symptômes spéciaux. 

€) Quant à la même lésion de la peau glabre, les idées médi- 
cales étaient plus imprécises encore. 

Les trichophylies tégumentaires banales — dont toutes les 
localisations sur le même individu sont toujours identiques 
parce que toutes leurs inoculations proviennent d'un même 
germe — sont, sur différents malades, pris au hasard, d'un 
polymorphisme tout à fait extraordinaire. 

Avec le temps, le caractère constant de la circination aidant, 
toutes les modalités de la trichophytie furent pourtant recon- 
nues : on vit des cercles d'aspect eczémateux secs et humides, 
des placards vésiculeux, vésico-pustuleux, etc. 

I n’y a donc nul doute que plusieurs fois on ait porté le dia- 
gnostic vrai de trichophytie sur la lésion tégumentaire que nous 
avons décrite plus haut; mais ce qui est certain, c’est que dans 
un grand nombre de cas son origine trichophytique «a été nie. 

Ses caractères formels sont si particuliers qu’on voulut en 


ï g 
“| 2 


Ge, 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. 907 


faire une entité morbide spéciale et, vu ses caractères histolo- 
giques, on la nomma périfolliculite agminée. 

L'hypothèse de la trichophytie fut émise : l'examen micro- 
scopique etmème la culture étant restés négatifs, on affirma que 
la lésion n'était pas trichophytique. Et l’on admit l’existence 
d'une périfolliculite agminée circinée, non trichophytique. 

En résumé, notre part dans la question aura été de réunir 
sous une même dénomination et de rattacher à une même 
origine animale, non seulement le kérion celsi des cheveux, et 
le sycosis circiné de la barbe, dont la parenté n'était pas niée, 
bien que leur origine et leur spécificité fussent inconnues, mais 
encore d'identifier à ces lésions la périfolliculite agminée des 
régions glabres, lésion dont la ressemblance avec les précédentes 
n'avait pas élé mise en lumière, et dont l’origine trichophytique 
elle-même était l’objet de controverses ‘. 


1. L'étude de la folliculite agminée fut commencée par M. le prof. LeLorr, de 
Lille (1884) ; il en fournit une description anatomo-pathologique très exacte, et 
qu'on ne peut que répéter. Il reconnut la spécificité de l’affection, mais, au lieu 
de la rapprocher des kérions et sycosis, il nia l’origine trichophytique, et crut à 
l’action spéciale d’une bactérie dont il fournit la description. 

La question fut reprise par M. Joaxnës Parier (les Périfolliculites suppu- 
rees, 1889) dans sa thèse inaugurale, C’est une monographie de la périfolliculite 
agminée, considérée comme non trichophytique. Le microbe de M. Leloir n’y est 
plus considéré comme spécifique, et le parasite de la lésion serait inconnu. L'ori- 
gine animale est invoquée parmi d’autres idées pathogénétiques. 

Un troisième travail, sorti comme le précédent du service de M. le Dr Quin- 
quaud (Dérérer-Murer, These de Paris, 1891), traite des périfolliculites conglomérées 
trichophytiques, mais il ne parle que du kérion celsi et du sycosis de la barbe. Les 
périfolliculites agminées de la peau glabre n'y sont signalées que comme une 
maladie différente; et cependant la ressemblance objective et histologique entre 
les deux lésions est telle que l’auteur se base sur l'absence de trichophyton à 
Pexamen microscopique pour en faire le diagnostic différentiel. 

En réalité, le trichophyton existe dans toutes ces lésions, mais il est rare que 
des filaments mycéliens nombreux se rencontrent dans la préparation, à moins 
que les produits de râclage examinés ne contiennent un poil malade, ce qui est 
loin d’être la règle. 

La culture au contraire est toujours probante. Si les premières cultures faites 
par M. Leloir en 1884 ne lui avaient pas donné le trichophyton, c’est parce que 
les isolements avaient été faits dans des milieux liquides où la culture mixte du 
trichophyton et des staphylocoques est impossible, le trichophyton n'y pousse pas, 
et, s’il a déjà poussé avant l’ensemencement de staphylocoques, il y meurt. 

Ce fait que nous avons exposé ailleurs (Soc. de Dermatol., 16 février 1893) suffit 
à expliquer l’échec des premières recherches. 

Il est juste de faire remarquer que M. Leloir avait raison en décrivant l’affec- 
tion comme spécifique, bien qu'il ait méconnu sa cause. Nous ferons aussi remar- 
quer que nous excluons du débat la forme serpigineuse de l'affection décrite par 
M. Leloir; nous n’avons rencontré et étudié que la forme circinée. 


908 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


C. — L'ÉTUDE CLINIQUE MONTRE L'ORIGINE ÉQUINE DE LA MALADIE. 


Au début de ces recherches sur le trichophyton, je croyais, 
sur la foi de l'opinion médicale courante, à l’unité du parasite. 
Quand il me fut démontré expérimentalement que cette unité 
n'existait pas, qu'il y avait plusieurs trichophytons, je dus cher- 
cher si chacun n'était pas caractérisé par une lésion spéciale, 
de caractères objectifs différentiels, et la première remarque que 
je fis dans ce sens eut pour sujet précisément l’espèce tricho- 
phytique que je veux étudier ici. 

Il n’en pouvait êlre autrement, car il n’y a pas de tricho- 
phytie plus singulière, objectivement plus reconnaissable que la 
folliculite circinée. 

J'acquis donc et très rapidement la certitude que cette lésion. 
quel que fût son siège, avait toujours le même parasite causal. 

Et comme la culture de ce trichophyton spécial est parfaite- 
ment reconnaissable à l'œil nu, que jamais je ne l'avais retrouvé 
dans des trichophyties épidermiques ordinaires, je fus bientôt 
forcé de conclure non seulement que cette espèce donne lieu 
à la folliculite circinée, mais qu’elle y donne lieu toujours, el 
aussi qu’il n’y a pas d'autre trichophyton qui s’en accompagne. 

Ces propositions sont aujourd'hui vérifiées par seize cas 
ayant leur observation et leurs cultures, quelques-uns même leur 
moulage ou leur photographie. 

Bien que j'eusse noté chaque fois la profession de mes 
malades, qui dans presque tous les cas étaient en contact con- 
stant avec des chevaux, je n'avais pas fait encore ce rapproche- 
ment quand un malade me le mit lui-même sous les yeux. Son 
observation vaut la peine d'être rapportée. 

« À la polyclinique hospitalière de M. le Dr E. Besnier, sur- 
vint un nommé Houdl...; il portait dans la barbe, sur le cou, 
une lésion qui semblait composée de trois furoncles agminés, et 
de lui-même, sans interrogation, il l'annonça comme étant du 
horse-pox. 

« J'appris alors qu'il était employé à la Compagnie générale 
des voitures, et affecté au service des chevaux malades ; qu'un 
des chevaux présentait des boutons sur les naseaux, boutons que 
le vétérinaire avait appelés du horse-pox. 

« Que vraisemblablement cette lésion de la barbe, contractée 


TRICHOPHYTIES À DERMITE PROFONDE. 509 


ces jours derniers, devait être rapportée à cette origine... » 

L'examen microscopique du pus montra des fragments 
de tubes mycéliens en abondance. 

La culture me redonna le type trichophytique déjà connu de 
moi, bien que j'ignorasse encore son origine. — L'examen du 
cheval me montra une lésion presque identique à celle que je 
connaissais sur l’homme, et sa culture fournitle même parasite. 

C'est alors qu’en me reportant à mes notes je pus me con- 
vaincre que l’origine animale, certaine dans ce cas, était plus que 
probablement la même dansles autres, comme je pus aussi le véri- 
fier dans les casdeméêémenature qui survinrentencore par la suite. 

J'ai en ce moment, dis-je, seize observations se rapportant à 
la même lésion, au même parasite. 

Parmi les malades, voici les professions que je relève : 

Deux charretiers, un relayeur d'omnibus, un haleur de 
bateau, un aide vétérinaire, un entraîneur de Chantilly, un artil- 
leur, deux cochers, deux manœuvres et un palefrenier, l'employé 
à la Compagnie générale des voitures dont je viens de parler. 

Bref, sur seize -cas de contagion, onze se rapportent à des 
hommes ayant avec les chevaux des rapports continus, deux 
seulement se rapportent à des enfants (kérion celsi) et un seule- 
ment à la femme, dont la contamination par ce trichophyton 
parait Lout à fait exceptionnelle ‘. 

Dès que l’étiologie de la maladie me fut connue, les détails 
complémentaires purent être abondamment recueillis : les char- 
retiers pansaient leurs chevaux eux-mêmes, l’aide vétérinaire 
n'avait soigné que des chevaux et des chiens malades; le haleur 
de bateau couchait (c'était en hiver) dans l'écurie du cheval de 
halage, — écurie située dans le chaland même, comme on sait ; 
l’artilleur savait que parmi les chevaux de sa batterie il y avait 
eu quelques cas d’herpès, ete. 

De plus, quand j'étudiai les travaux antérieurs sur ce sujet, 

1. Je dois noter inversement que le premier fait qui m’a amené à incriminer le 
chat comme cause de la contagion dans une autre trichophytie de ce groupe, 
c’est que tous mes cas (6), sauf un, ne se rapportent à des femmes ou des enfants. 
La trichophytie du chat affecte la forme d’une plaque à extension rapide, beau- 
coup moins indurée que la folliculite agminée. Le pourtour de la plaque est cou- 
vert d’une éruption confluente de vésicules, rappelant celle de la dysidrose, ou 
encore les brûlures au second degré. Ces vésicules, claires le premier jour, devien- 


nent purulentes, sans infection microbienne secondaire, le second jour de leur 
apparition. 


d10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


je retrouvai, citée dans les observations de M. le Prof. Leloir, de 
M. Joannès Pallier, ete..., la même constatation, le rapport déjà 
explicitement formulé de la périfolliculite agminée (qu’on ne 
savait pas trichophytique) et d’une profession exposant au con- 
tact des chevaux. — J'ignorais que la constatation en eût été 
faite avant moi. — Enfin, en me reportant aux moulages de cette 
affection existant au musée de l'hôpital Saint-Louis, les deux 
pièces les plus typiques (N°S 897 et 1051) se rapportent à un 
cocher et à un palefrenier.… 

Il me semble, bien que je n’aie eu qu’une seule fois l’occasion 
de cultiver le parasite provenant directement du cheval malade, 
qu'une telle réunion de faits atteint à la valeur d’une preuve 
expérimentale directe. 

En résumé, l’origine équine de la maladie humaine paraît 
cliniquement indiscutable dans le plus grand nombre des cas : 
c’est Le point que je voulais d’abord établir. 


D. — VÉRIFICATION EXPÉRIMENTALE DE CETTE HYPOTHÈSE. LA MALADIE 
CHEZ-LE CHEVAL. 


Je n'ai eu, dis-je, qu'une seule fois l’occasion de voir la 
maladie chez le cheval : la lésion occupait l'angle inférieur et la 
partie externe du naseau. 

Et il est à noter que dans deux autres cas où, sans avoir vu 
la lésion, j'ai pu avoir quelque renseignement sur elle, elle occu- 
pait à peu près le même siège; dans les trois cas, elle avait débuté 
à la tête. Ce point est à retenir, et j'y reviendrai en traitant de 
l’origine de la maladie chez le cheval. 

Dans le cas que j'ai pu observer, la iésion formait un placard 
large de 6 centimètres environ, à peu près circiné, et d'aspect 
général furonculeux. 

La lésion, guérie dans sa moitié antérieure, n'avait laissé 
qu'une plaque érythémateuse un peu indurée,avec la trace de la 
folliculite passée. La partie postérieure était encore en activité. 

Son rebord était couvert d’une croûte adhérente, engainant 
les poils et les agglutinant à leur base. Par places la croûte était 
épaissie et acuminée, semblant recouvrir autant de lésions dis- 
tinctes; cet aspect, grossièrement analogue en ces points à des 
boutons de vaccine en régression, juslifiait assez l’erreur dia- 
gnostique du vélérinaire. 


A 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. o11 


Eofin, en dedans de ce rebord croûteux, sur la moilié posté- 
rieure de l’aire occupée par la lésion, on pouvait voir une dizaine 
de pustules acuminées, émergeant du disque de dermite qui, 
chez le cheval comme chez l'homme, forme le fond de la lésion. 

Ces pustules, toutes semblables, de disposition assez régu- 
lière, à peine grosses comme un grain de chènevis, laissent 
voir, quand on les ouvre par grattage, un infundibulum assez 
profond et taillé comme à l’emporte-pièce. 

On voit par cette description que la ressemblance entre la 
lésion du cheval et celle de l’homme est fort accusée. 

Il parait que chez le cheval elle n’est pas d’une évolution très 


lente. 

Sur l’animal que j'ai observé, la lésion s'était formée en 
quelques jours, et sa durée totale, après traitement par une pom- 
made mercurielle simple, n’a pas dépassé cinq semaines. 

Elle n’a pas laissé de cicatrice, malgré l’induration très appa- 


1. Elle ressemblerait en cela à la périfolliculite agminée des régions glabres 
chez l’homme et non au sycosis parasitaire de la barbe, cette dernière modalité 
de la trichophytie devant, à la profondeur d'implantation des poils malades, 
une plus grande résistance au traitement. 

Je dois insister sur la rareté relative de cette maladie chez le cheval. 

La profession des malades atteints de cette affection semblant incriminer 
presque toujours une origine équine, j'ai cru longtemps que l'affection chez le 
cheval était fréquente; c’est une erreur. 

Les chevaux présentent très fréquemment des cas de trichophytie, connus en 
médecine vétérinaire sous le nom ancien d’herpés contagieux. 

C’est une affection non pustuleuse, à peine croûteuse, dépilante, à localisations 
multiples, principalement situées sur la croupe, le dos et les flancs. Cet herpes 
contagieux est dû à un frichophyton microsporon, d'espèce au moins très voisine 
du trichophyton à petites spores de l’enfant, 

C’est donc une trichophytie quin’arien à faire avec celle dont je m'occupe iei. 

Je connais enfin une troisième espèce de trichophyton du cheval, encore très 
différente des deux précédentes, et que j'ai eu occasion d'étudier récemment dans 
une épidémie considérable de chevaux de l’armée. 

Cette espèce, qui appartient aux trichophyties à grosses spores, est caractérisée 
d’une part par son extrême contagiosité pour l’animal et même pour l’homme, et 
d'autre part par la grande extension, on peut dire la confluence des lésions sur 
le même sujet. 

La culture, qui est blanche sur pomme de terre (mais finement pelucheuse et 
non plâtreuse), est jaunâtre sur les autres milieux, avec la forme en gâteau com- 
mune dans les trichophyties humaines, 

Chacune de ces trois espèces a donc, objectivement comme en culture, des 
caractères très différentiels, Il est probable que le cheval peut en présenter 
encore d’autres, si l’on en juge du moins par la multiplicité des trichophyties de 
l'homme ; mais je n’ai encore observé chez lui que ces trois espèces, 

Je devais en présenter succinctement le tableau, autant pour prévenir toute 
confusion que pour mettre les affections trichophytiques sous leur vrai jour. 
L'unité qu'on avait mise dans ce sujet est toute factice, sa complexité réelle est 


extrème, 


12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


rente du derme malade et la profondeur de chaque petit abcès 
folliculaire. C’est un point que j'ai pu vérifier, ayant examiné le 
cheval deux mois plus tard. Il ne m'a pas paru non plus qu’elle 
ait déterminé localement de l'alopécie : en tout cas, pas d’alo- 
pécie totale. 

Elle existait seule, etn’a causé nisur l’animal, nisur ses voisins 
d'écurie, de contagion secondaire. Le cheval était âgé de 10 ans, 

Sur cette lésion, je prélevai du pus et des poils dont l’ense- 
mencement redonna une culture identique à celle que la même 
lésion humaine m'avait fournie si souvent déjà. 

Tels sont les faits cliniques qu'il m’a été possible d'observer; 
je les résumerai par ces trois propositions : 

I. — Identité de la folliculite circinée humaine, identité de 
forme, d'aspect, d'examen microscopique, identité de culture, 
identité de morphologie du parasite, quel que soit le siège de la 
lésion, au cuir chevelu, à la barbe ou sur la peau glabre. 


Il. — Origine équine de la maladie humaine, rendue pro- 
bable par l’enquête médicale et l'examen des commémoratifs. 
IIT. — Origine équine démontrée par l'observation du cheval 


malade, de sa lésion, et de la culture qu’elle a fournie. 

Après l’exposé de ces faits, je dois maintenant rendre compte 
de l’expérimentation qui les a prouvés. 

Je laisserai de côté complètement l'histologie pathologique 
de la lésion, elle a été faite par d’autres et de telle façon qu'il 
n’y a plus à y revenir. 

Ce qui nous intéresse n’est pas d’ailleurs le mode de réaction 
cellulaire des tissus envahis, mais bien le moyen de reconnaître 
la présence du parasite : 1° par l'examen microscopique extem- 
porané dont je parlerai d’abord; 2° par la culture dont la tech- 
nique un peu spéciale devra nous occuper ensuite; 3° de prouver 
par les inoculations le pouvoir pathogène du parasite et son 
pouvoir pyogène ; 4° enfin de donner les caractères qui permet- 
tront de reconnaître cette espèce trichophytique à l'examen 
objectif et à l'examen microscopique de sa culture. 


III. — PARTIE EXPÉRIMENTALE 
A. — TECHNIQUE DE L'EXAMEN MICROSCOPIQUE. 
Qu'il s'agisse d’une trichophytie épidermique ordinaire ou 
d'une trichophytie pilaire, en général rien n’est plus facile que 


à 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE, 013 


de retrouver le parasite à l'examen microscopique extemporané 
de la squame ou du poil. 

Les trichophyties à dermite profonde font exception à cette 
règle, et si quelquefois le parasite peut être mis en évidence faci- 
lement, dans le plus grand nombre des cas il est difficile d'ob- 
tenir extemporanément une préparalion probante, 

Ce fait provient de ce que la localisation des trichophytons 
pyogènes dans le tégument est spéciale. Ce sont des trichophy- 
ties profondes et non pas des trichophyties épidermiques. 

Supposons que la folliculite cireinée siège à la barbe, si l’on 
examine sa surface, ordinairement elle est déglabrée; si par excep- 
tion les poils existent encore, ils ne sont pas cassés, ils ont gardé 
leur longueur; de plus, en les épilant à la pince, on obser- 
vera plusieurs particularités — très spéciales à cette forme de 
trichophytie : le poil vient entier, avec sa racine complète, il a 
gardé sa couleur, il n’oppose aucune espèce de résistance à 
l'épilation. Enfin si l’on pratique l'examen microscopique de ce 
poil, cet examen sera invai cablement négatif. 

Tous ces faits sont en contradiction flagrante avec ceux que 
fournit l’examen des trichophylies pilaires banales. 

Ordinairement, en effet, le poil d’une trichophytie sèche de 
la barbe n’est pas tombé spontanément, il est cassé à 2 ou 
3 millimètres au-dessus de la peau. L’épilation l’amène incom- 
plet, le poil s’étant rompu au-dessus de sa racine; enfin, il 
paraît gris, terne, décoloré, et son examen microscopique le 
montre rempli de chaînes mycéliennes sporulées. 

Icile poil estmort, il est détaché de sa base, mais il n'est pasenvahi. 

A quels éléments de diagnostic microscopique faudra-t-il 
donc s’adresser pour se faire une certitude ? 

Il faudra chercher au bord même de la lésion, dans sa zone 
d'envahissement, non pas un cheveu ou un poil long, adulte, 
mais un poil follet. Le follet qui est envahi par le trichophyton 
reprend les caractéristiques vulgaires du poil trichophytique ; il 
est cassé et quelquefois si près de la peau, qu'il ne traduit sa 
présence que par un léger cône épidermique, visible seulement 
au jour frisant. 

C’est ce petit cône qu'il faut pincer; la pince amènera une 
racine de 2 millimètres de longueur, où les filaments mycé- 
liens se touchent tous. 

33 


d14 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Enfin, s’il est impossible de trouver, après un examen minu- 
tieux de toute la bordure de la lésion, un seul poil malade, 
c’est le pus d’une vésicule qu'il faudra prendre, pour en exami- 
ner une goulte entre deux lamelles, sans coloration. On choi- 
sira une vésico-pustule encore non ouverte, et l’on préparera 
plusieurs lamelles qu’on examinera successivement, Il est rare 
qu'on n’y trouve pas quelque amas mycélien volumineux 
qui certifiera le diagnostic. 

Ainsi donc, il faut rejeter de l’examen ie poil adulte, la 
squame, les déchets épithéliaux de râclage et le pus de la 
surface. L'examen de la squame est négatif, parce que l’épiderme 
s’exfolie par irritation de voisinage et non par un parasitisme 
direct. L'examen du poil adulte est négatif parce qu'il est mort 
sans être envahi. Le pus d’une vésico-pustule, ou l'examen des 
poils follets de la bordure fournissent seuls des réparations 
probantes. 

J'ai pris le cas le plus difficile, celui d'une lésion de région 
pilaire et d’une lésion arrivée à son plein développement. Tout 
autre cas est meilleur. La lésion jeune montre des poils malades 
en abondance, ou bien des vésico-pustules non rompues ; la 
lésion des régions glabres a pour ainsi dire constamment sur son 
pourtour une zone de poils follets qui sont atteints, et des 
vésico-pustules naissantes. Mais cette difficulté de démontrer au 
microscope la présence du parasite, difficulté si rare quand il 
s’agit de toute autre trichophytie, explique bien l'erreur des 
premiers observateurs. 

La technique de l'examen microscopique extemporané est très 
simple : la gouttelette de pus sera examinée sans aucune colo- 
ration; le poil déposé sur une lame dans une goutte de solution de 
potasse à 400/0 recouverte d’une lamelle sera chauffé légèrement, 
puis examiné de suite. Il faut un grossissement de 300 diamè- 
tres environ, un éclairage très puissaut et un diaphragme très 


étroit. 

Examen du poil. — Les trichophytons de ce goupe sont ca- 
ractérisés à l'examen microscopique par deux particularités très 
spéciales : 

1° Tandis que le cheveu ou le poil envahis par un trichophy- 
ton mégalosporon vulgaire contiennent dans leur épaisseur 
tous les filaments mycéliens, et qu’à peine on peut trouver dans 


TRICHOPHYTIES À DERMITE PROFONDE. 515 


leur gaine épidermique un ou deux filaments épars, le plus 
souvent portés là dans les manœuvres de préparation, les 
trichophytons à dermite profonde, et tout spécialement celui-ci, 
végètent surtout au long du poil et hors de lui, formant une 
gaine compacte d'écheveaux mycéliens qui pénètrent la gaine 
épidermique du poil beaucoup plus que le poil lui-même. 

Les trichophytons mégalosporon pyogènes sont les seuls 
trichophytons à grosses spores qui végètent hors du poil, dans 
sa gaine ; 

20 Un second point de diagnostic très important est la 
grosseur énorme de guelques spores dans les filaments mycé- 
liens. Toutes sont grosses, et même nettement plus grosses 
que dans les trichophyties à mégalospores vulgaires. La majo- 
rité atteint de 10 à 114; mais parmi elles, il y en a de beaucoup 
plus volumineuses qui ont de 15-18 & de diamètre‘. 

La présence de ces spores géantes, exclusive à ces espèces, 
est un élément de diagnostic important. 

Examen du pus. — L'examen du pus ne montre jamais 
qu'une très minime quantité d'éléments parasitaires. semblables 
à-ceux du poil, et cela quelque moyen qu’on emploie pour les 
déceler. 

Le même pus qui en culture donnera sur chaque strie une 
ligne ininterrompue de colonies peut ne montrer dans chaque 
préparation qu'une ou deux files d’une dizaine de spores. 

Cette contradiction apparente cesse quand on se sert pour 
l'examen du pus d’un fort éclairage artificiel *. Alors on voit, au 
milieu des globules blancs et des hématies, des quantités de 
débris mycéliens très grèles et très courts qui passaientinaperçus 
à la lumière solaire. 


4. Dans la planche VI qui les représente, le grossissement, pour permettre 
une vue d’ensemble, n’est que de 180 diamètres. Mais dans l’un des angles 
les spores sont figurées avec un grossissement de 300 diamètres, à la même 
échelle que les dessins qui précèdent, fig. 1 et 2 (dans le texte). On peut voir 
par comparaison que ces spores géantes arrivent à une dimension plus que dou- 
ble de celle des mégalo-trichophytons vulgaires. 

Sur ce fragment grossi à 300 diamètres, on peut voir par la teinte spéciale du 
protoplasma de ces spores et leur double contour, comme aussi par leur agmina- 
tion en chaine, que leur nature cryptogamique ne peut faire aucun doute. Un 
simple examen de la préparation permet d’ailleurs de les distinguer des globules 
de graisse, ou de toute cellule épidermique pouvant se trouver autour d'elles. 

2. Il faut employer le condensateur de lumière Abbe et un diaphragme de 
2 millimètres d'ouverture. 


16 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Dans ces conditions, il semble qu’on pourrait espérer beaucoup 
des colorations artificielles. Cependant les colorants nucléaires 
(bleu de méthylène, etc...) ne donnent aucun résultat. Et les colo- 
rants de fond (éosine, fuchsine en solution aqueuse), quoique 
moins mauvais, sont encore loin de donner des préparations 
excellentes. 

Cette difficulté de coloration, encore plus évidente quand il 
s’agit des coupes, a été remarquée par tous les auteurs qui se 
sont occupés des maladies cryptogamiques (tuberculose asper- 
gillaire, actinomycose). 


B. — TECHNIQUE DES CULTURES. 


Après ce que je viens de dire de l’examen microscopique de 
la folliculite circinée, on pourrait croire que l'obtention du 
parasite et sa culture sont difficiles; il n’en est rien. 

Ensemencements. — Trois moyens fournissent sûrement le 
trichophyton : 

1° L’ensemencement de la racine d’un poil malade; 

20 L’ensemencement du pus d’une vésico-pustule non ouverte ; 

3° L’ensemencement de quelques gouttes de sang obtenues 
par scarification de la lésion. 

1° Ensemencement de la partie radiculaire d'un poil. — C'est 
une méthode excellente, quand on sait distinguer à l’œil nu le 
poil follet malade, gris, décoloré, cassé, du poil mort qui a 
gardé sa couleur, sa longueur, sa racine complète. 

Le petit follet épilé n’a pas en tout 3 millimètres, on le 
dépose sur une lame préalablement flambée; avec une aiguille 
coupante on le sectionne en autant de parcelles que l’on peut. 
Chacune donnera une culture. 

20 L’ensemencement du pus d'une vésicule est de tous les moyens 
le plus facile et le plus sûr. 

Avec un fin scarificateur, on ouvre cette vésicule en appuyant 
sur elle, de façon que la gouttelette qu’elle contient passe sur 
le plat de l'instrument. C'est sur le plat de cette lame que l’on 
chargera la baguette de platine de la matière à ensemencer. 

3° Ensemencement du sang, extrait par scarifications locales. — 
Quand la lésion est en régression, qu'il n’y a plus de vésico-pus- 


TRICHOPHYTIES À DERMITE PROFONDE. 917 


tules, tant qu’il reste un empâtement du derme « sensible aux 
doigts », la culture est possible. 

Sur la région, dans un espace de 1 centimètre carré, on 
pratique une dizaine de scarifications de un millimètre de 
profondeur environ et très rapprochées. On recueille dans une 
pipette le sang et la sérosité qui s’écoulent, et l’ensemencement 
est immédiatement pratiqué avec la pipette, en laissant tomber 
à la surface de la gélose nutritive une ou deux gouttes de liquide. 
On étend ensuite ce liquide sur toute la surface du tube. 

Ce moyen indiqué depuis longtemps par M. Duclaux ‘ est 
excellent, il m’a fourni d’abondantes cultures dans des cas où la 
lésion semblait si près de la guérison que l’on pouvait douter d’un 
succès. Toutefois, il ne me semble utile que dans les cas où les 
deux autres méthodes de culture ne pourront plus être employées. 

Quant à l’'ensemencement des produits de raclage, des poils 
morts, du pus qui existe sous les croûtes, il ne donnera le plus 
souvent que des insuccès. 

Milieux. — Les meilleurs milieux de séparation sont le moût 
de bière gélosé, dilué au 1/5 ou au 1/10, ou mème pur, et la 
pomme de terre. La gélose peptone vulgaire est suffisante, mais 
médiocre, comme tous les milieux fortement azotés. 

Température. — J'insisterai sur l'importance d’une tempé- 
rature basse pour toutes ces séparations. La température optima 
est 18°. 

A 330, si la culture n’est pas pure d'emblée, on aura un 
développement de champignons accessoires, de levüres et 
surtout de bactéries, qui pourraient gêner l'isolement définitif. 

Épuration des cultures. — Je ne puis terminer sans parler du 
parasitisme latent des cultures trichophytiques. Ce fait est d’une 
si grosse importance dans le sujet qu'il mériterait une étude toute 
spéciale; au moins dois-je en dire ici quelques mots : 

La colonie trichophytique de l’apparence la plus pure, la plus 
indemne de tout mélange, par quelque méthode d'isolement qu’on 
l'ait obtenue, et je dis ceci pour toute espèce quelconque de tricho- 
phytons à grosses spores, n’est le plussouventqu’unmélange de deux, 
trois et même quatre et cinq espèces cryptogamiques distinctes. 


4. « On peut encore faire quelques scarifications sur une surface atteinte et 
superficiellement stérilisée en recueillant alors une goutte du sang qui s'écoule : 
on a de grandes chances d’y trouver quelques germes venus des profondeurs et 
capables de se développer. » (Duclaux, in These de Feulard, page 96.) 


D18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Il y a des différences techniques primordiales (différences 
qu'il faut connaître sous peine de graves erreurs) entre la 
culture des bactéries et celle des champignons. 

Une culture bactérienne souillée n’a pas ordinairement un 
aspect homogène; le mélange des espèces, au moins sur milieux 
solides, peut se deviner à l’œil nu. 

Il n’en est pas de même pour les champignons. Trois ou 
quatre espèces peuvent naîlre ensemble, se développer sembla- 
blement, entreméler leur mycélium de façon à constituer une 
culture mirte et sur certains milieux le mélange ne jamais 
paraître. 

Ces associations cryptogamiques sont de règle dans la teigne, et il 
est facile de se rendre compte, en y réfléchissant un peu, que les 
moyens de séparation les plus précis employés pour les bactéries 
sont de peu de valeur dans de tels cas. 

Toutes les séparations microbiennes s'appuient sur des pro- 
cédés mécaniques de dilution et ne supposent entre les bactéries 
aucune cohésion. 

Mais les mycéliums cryptogamiques sont moins fragiles, 
jamais on ne peut arriver par ces moyens à obtenir des cultures 
provenant d’un seul article mycélien ou d'une seule spore. 

Il faut donc employer des méthodes de séparation tout 
autres que celles dont on se sert en bactériologie, et utiliser 
pour cela (comme on l’a fait à l’origine de ces études) les pro- 
priétés physiologiques des êtres que l’on veut séparer. 

Je dirai brièvement que le moût de bière étant un excellent 
milieu pour la culture des trichophytons, et ne permettant qu'un 
développement très pauvre des parasites cryptogamiques qui 
ui sont mêlés, sitôt que la culture est devenue adulte sur ce 
milieu {après 15 jours), je pratique, avec un fragment de cette 
culture, un frottis sur pomme de terre. 

Ce nouveau milieu a l'avantage de fournir à chaque cham- 
pignon un aspect reconnaissable. La culture prend alors l'aspect 
d’une culture d'isolement de bactéries. 

Il devient facile de reprendre séparément le trichophyton et 
après deux ou au maximum trois séparations, de l'obtenir pur. 

La pureté de la culture est vérifiée ensuite par l’examen 
microscopique. 

Telle est la méthode pratique à laquelle les nécessités du 


AE ape 


és « 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. D19 


sujet m'ont contraint. Je ne la prétends pas excellente, c’est 
seulement la meilleure que j'ai trouvée t, 


C. — CARACTÈRES DES CULTURES. 


Décrire l’aspect macroscopique de cultures est toujours une 
chose difficile, le moindre coup d'œil apprenant plus sur ce 
sujet que des pages de descriptions. La difficulté s'accroît quand 
il s’agit de cultures cryptogamiques, car elles ont un port 
caractéristique jusque dans le détail, comme des plantes d'ordre 
plus élevé. 

Je limiterai donc autant que possible ces descriptions que 
des épreuves photographiques compléteront : 

- Toutes les cultures de trichophyton ne commencent à être 
visibles que le quatrième jour après l’ensemencement. Il en est 
de mème pour cette espèce et pour toutes Îles autres. 

Sur moût de bière gélosé (en piqüre), la végétation apparait 
sous la forme d’une fine houppe de duvet blanc, qui s’accroit 
progressivement. Elle s’entoure bientôt de rayons à peu près 
immergés dans l'épaisseur du milieu, rayons qui donnent à la 
colonie un aspect d'étoile. Puis en sept ou huit jours toute sa 
surface se recouvre d’une poudre blanche épaisse et plätreuse. 

La culture grandit peu à peu, puis vers le quinzième jour 
paraît en son centre une nouvelle touffe de duvet qui cette fois 
restera permanent. 

La culture alors est adulte et gardera tous ses caractères, son 
centre de duvet blanc, son aréole poudreuse et ses rayons péri- 
phériques arborescents dont le dos est accusé à la surface du 
milieu par de fines traînées de poudre blanche. 

La durée de vie de ces cultures ne m'est pas connue. J’en ai 
datant d’une année dont le milieu est absolument sec et dont la 
poudre blanche est encore féconde. 

Sur gélose peptone (1 1/2 0/0) (en piqüre). La culture adulte 
n'a pas de duvet central; c’est une plaque de poudre blanche, 


1.11 est à remarquer qu'aucun auteur à ma connaissance ne s’est aperçu de ce 
commensalisme du trichophyton qui, dans la teigne à grosses spores, ne souffre 
presque pas d'exception. Le mélange de ces champignons est assez intime pour 
r’avoir été remarqué de personne. F ai reçu de diverses provenances plusieurs cul- 
tures trichophytiques ; pas une seule n’était pure. 


220 à ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dont les rayons périphériques sont couris, peu arborescents. 

Sur pomme de terre (en strie). La strie se recouvre d’abord 
d'un duvet court qui s’élargit jusqu’à occuper 3 à 4 millimètres 
de largeur, puis la surface de ce duvet semble s’aplatir et se 


recouvre de la même poudre blanche que donnent les autres 


milieux. C’est à peine si la traînée blanche fait à la surface de 
la pomme de terre un relief appréciable. 

Sur pomme de terre et sur ce seul milieu, la vie des 
cultures de tous les trichophytons mégalosporon ne dépasse pas 
un mois ou même trois semaines; malgré sa grande vitalité, 
cette espèce suit en ce point la règle commune. 

Tels sont les caractères de ce trichophyton sur les milieux 
usuels de culture. Je n'insiste pas sur la liquéfaction de la 
gélatine, fait commun presque à tous les champignons. 

Toutes les espèces de trichophyton mégalosporon à cultures 
blanches sont douées d’une vitalité, d’une rusticité très supé- 
rieure à celle de tous les autres trichophytons, sans exception. 

Une gélose au moût de bière, dans un matras à fond plat de 
Gayon de 0,10 c. de diamètre, est recouverte dans sa totalité en 
moins d’un mois. 

De plus, la végétation du microphyte y est si exubérante que, 
pour préciser les caractères différentiels des espèces de ce 
groupe, j'ai été amené à appauvrir leur milieu nutritif. 

Les différences des espèces sont excessivement marquées 
sur des géloses au moût de bière dilué au 1/8 ou au 1/10. Et 
c’est le milieu que je préfère pour tout le groupe des tricho- 
phytons à cultures blanches. 

Quant à différencier par une description les espèces de ce 
groupe autres que celle que j’étudie, je crois la chose difficile et 
inutile. Une série de clichés devant montrer mieux que tout 
autre moyen les caractéristiques de chaque espèce, il suffira de 
savoir que ces caractères restent fixes pour chacune après des 
ensemencements indéfinis sur tous milieux, et même après des 
inoculations sériées sur l’homme et sur l’animal. 


D. — IxocuLATIONS. 


Les inoculations de cette espèce trichophytique, comme celles 
de tous les trichophytons en général, sont assez souvent néga- 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. D21 


tives: avec un peu de persévérance cependant et quelques pré- 
cautions d’asepsie, on obtient des résultats positifs. | 

L'inoculation à l'homme amène le 4° jour un point rougeûtre 
déjà turgescent, qui augmente le 5° jour. Son extension esl 
assez rapide. Quelquefois cependant, après avoir nettement 
marqué la végétation du parasite par une plaque circinée, rouge, 
prurigineuse, de 1 centimètre de diamètre, la lésion rétrocède 
d'elle-même et disparait. 

Dans le cas contraire, elle augmente, marquant chaque 
orifice folliculaire d’un point rouge. Vers le 8° jour, la réaction 
inflammatoire est déjà très vive, quoique presque indolore. Le 
raclage de l’épiderme montre le parasite en pleine végétation. 

Je n'ai pas attendu sur l’homme la suppuration pour inter- 
venir. 

Sur le cobaye l’inoculation est très facilement positive, mais 
je ne l'ai vu suppurer qu’au point de la piqüre d’inoculation, sa 
marche est progressive et serpigineuse. 

La maladie est exfoliante et dépilante, mais le poil repousse 
après elle, son extension est indélinie; des inoculations nou- 
velles se produisent incessamment dès que les lésions anciennes 
sont en voie de guérison. ; 

J'ai gardé pendant cinq mois un cobaye inoculé, dont la 
maladie livrée à elle-même continuait toujours son évolution. 

Le peu de ressources d’un service hospitalier sous le rapport 
des inoculations animales ne m'a pas permis de suivre ces 
expériences sur d’autres espèces que le cobaye. Cependant le 
cobaye, comme on va le voir, bien que chez lui cette trichophytie 
ne s'accompagne pas de folliculite suppurée, a pu me servir à 
prouver l’action pyogène des trichophytons à dermite profonde. 

PREUVES DE L'ACTION PYOGÈNE DES TRICHOPHYTONS DE CE GROUPE 

Un certain nombre de trichophyties cutanées, à un moment 
de leur évolution, sont bordées à leur circonférence de vésicules 
plus ou moins fines, assez régulières. 

Ces vésicules, qui avaient fait rapprocher la trichophytie de 
l'herpès fébrile également vésieuleux, et fait donner à la maladie 
son premier nom d'herpès contagieux, peuvent sécher sur place 
ou s'ouvrir sans passer par le stade de purulence. 

Mais, quand la trichophytie tégumentaire est causée par l’une 
des espèces pyogènes, et spécialement par celle que nous étu- 


522 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dions, la purulence de la vésicule se produit toujours et sans 
nulle intervention de microbes étrangers. 

Ce passage à la purulence de la vésicule du début, dont le 
contenu primitif est presque séreux, est l’expression de la vie 
propre du parasite. C’est en surface le même phénomène d’ap- 
port leucocytaire qui se passe dans la profondeur, causant 
l’'empâtement du derme sous-jacent à Ja lésion. 

Je ne veux pas dire que, dans toutes ces trichophylies, toutes 
les pustules contiennent le parasite à l’état de pureté : ce que 
je prétends, c’est qu'il existe, et à l’état de pureté, dans le plus 
grand nombre. 

Ce fait, affirmé il y a déjà longtemps par M. Duclaux !, peut 
être prouvé facilement avec toute trichophytie de ce groupe sur 
laquelle aucune application thérapeutique n’aura été faite 
encore. Je ne parlerai que pour mémoire de la recherche micro- 
scopique négative des staphylocoques. 

Les cultures faites en stries sur gélose au moût de bière, 
avec le pus ainsi recueilli, sont beaucoup plus probantes: elles 
peuvent donner des lignes ininterrompues de cultures sur tous 
les tubes, pas un des tubes ensemencés avec la même lésion ne 
fournissant la moindre colonie d'une bactérie pyogène quel- 
conque. 

J'ai ainsi gardé des tubes par douzaines qui peuvent prouver 
le fait sans réfutation possible, surtout si l’on songe qu'une 
colonie de staphylocoques crée autour d’elle une aire nuisible 
au trichophyton que le microphyte ne recouvrira jamais, 
qu'ainsi la moindre impureté de ce genre se trahirait au premier 
coup d'œil. 

Expérimentalement, les cultures de ces trichophytons en 
milieux pauvres peuvent, étant filtrées et inoculées au cobaye, ne 
donner lieu à aucune réaction appréciable. 

Mais si le milieu de culture était fortement peptonisé (7 0/0), 
le liquide filtré après une culture d’un mois, causera infaillible- 
ment la suppuration, et une suppuration amicrobienne si l’opéra- 
tion est aseptiquement conduite. 

La différence de ces deux résultats peut donner lieu à diverses 


1. Pour le trichophyton tonsurans, on trouvera le plus souvent la semence pure 


dans les phlyctènes purulentes qui entourent parfois la plaque d’herpès. » (In Thése 
de Feulard, p:296?) 


dt ur “anibes 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. 523 


interprétations. Je crois que plus la culture est peptonisée, c'est- 
à-dire azotée, plus il s'y forme des produits chimiotacliques. 


E. — EXxAMEN BOTANIQUE. 


Dans l'examen des cultures de cette espèce trichophytique", je 
laisserai de côté la question de classification botanique, que je ne 
saurais élucider, et dont s'occupent en ce moment des hommes 
compétents; je décrirai succinctement ce que j'ai vu: 

La spore d’un cheveu portée dans une goutte de bouillon 
germe et émet un mycélium; la spore est grosse et possède un 
double contour réfringent. Ce double contour disparait en un 
point qui bientôt forme hernie. Ainsi naît le tube mycélien qui 
s'allonge, se cloisonne et se ramifie. 

Au début, le mycélium ainsi produit est composé d’articles 
courts de 7 et 9 x de diamètre, quelquefois renflés comme de 
nouvelles spores, et c’est de ces premiers articles que le mycé- 
lium vrai, plus élancé et plus grêle (4-5 u) prend naissance par 
groupes ou, si l’on veut, par bouquets. 

Puis chacun des tubes diverge de son voisin, se dichotomise 
et la culture revêt l'aspect d’un lacis de tubes assez distincts, 
laissant entre eux, quand la préparation est bonne, assez d’es- 
pace pour que tous les détails soient visibles. 

Vers le sixième jour environ, les spores se forment, elles 
apparaissent comme des grains de raisin d’une grappe, de part 
et d'autre d’un rameau mycélien *. Elles sont suspendues seule- 
ment à l'extrémité d’une hyphe terminale, comme les fleurs de 
la digitale sur la hampe florale, un peu moins régulièrement 
toutefois et avec plus d’abondance. 

Ces grappes dans une culture vigoureuse deviennent très 
nombreuses ; elles constituent des amas que l'œil ne peut 
traverser, et pour en voir le détail il faut chercher les grappes 
isolées sur les bords de la culture. 

D’autres formes importantes par leur fréquence et aussi par 
leur aspect caractéristique se présentent avec ce parasite. 

1. Ces examens ont été faits sur des cultures en gouttes suspendues. 
2. Dans cette espèce je n’ai jamais vu se produire deux faits, fréquents chez 
d’autres trichophytons. Je veux dire une couronne régulière de spores en un 


point quelconque de la longueur d’un tube mycélien; 2° des spores appendues 
de part et d'autre d’un mycélium sur une grande partie de sa longueur. 


024 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Ce sont des formes régulièrement fuselées, ayant jusqu’à 
1/20 de millimètre de longueur sur 15 y de large environ, divi- 
sées en logettes quadrangulaires par des cloisons perpendicu- 
laires au grand axe de l'organe. , 

Ces fuseaux naissent à l'extrémité ou près de l'extrémité 
d'une tige mycélienne, ils sont suspendus par un fin pédicule 
souvent incurvé ; les uns ont seulement deux cloisons, les autres 
sept ou même huit. 

L'extrémité libre présente souvent un petit renflement en 
bouton, doublant l'épaisseur de l’enveloppe en ce point; celte 


V.ROUSSEL 


enveloppe du reste est visible sur toute la longueur du fuseau et 
figurée par un double contour. 

Dans des notes manuscrites (1886) que M. Duclaux a bien 
voulu me communiquer, j'ai retrouvé le dessin très exact de 
formes semblables. 

MM. Neebe et Furthmann ont été, je crois, les premiers à les 
décrire (1891) dans leur trop court mémoire déjà cité. Pour ces 
auteurs, ce sont « des fruits à loges ». Je crois bien que ce sont 
là seulement des appareils conidiens. Dans une culture adulte, 
quand les spores vraies sont nombreuses, les fuseaux sont 
rares el réciproquement. 

Quelquefois un de ces fuseaux remplace une spore vraie dans 
une grappe, ou mème il remplace le centre de la grappe et porte 
à la base et à la pointe deux bouquets de spores qu'il a écartées 
par son développement. 

J'ai vu aussi ces fuseaux détachés germer à nouveau comme 


E 
| 
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| 
| 
3 


Me a gare 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. 525 


des spores et présenter à une de leurs extrémités deux filaments 
pointus de mycélium jeune. 

Je répète que ces formes naissent principalement dans les 
cultures pauvres ayant souffert, et là où les spores vraies ne 
sont pas nées. 

En dehors de la grappe et des fuseaux, je dois mentionner 
aussi une forme de végétalion très commune à toutes les espèces 
de trichophyton, et qui n’est pas dans cette espèce moins fré- 
quente que dans les autres, c’est la spirale. 

Soit au long d'une tige mycélienne, soit à son extrémité, on 
voit le filament mycélien se vriller sur lui-même et décrire deux, 
trois et même jusqu'à six ou sept tours de spire régulière (fig. 3). 

Les trois formes que j'ai décrites, la spore externe en 
grappe, le fuseau et la spirale se retrouvent dans tous les tricho- 
phytons. 

Comme signes distinclifs de l'espèce, je puis en mentionner 
deux : 

1° La grappe est droite, tandis que dans d’autres, dans le 
trichophyton du chat en particulier, elle est curviligne et d’un 
port bien plus élégant; 

2° Le fuseau est le plus grand qu'aucune espèce de tricho- 
phyton m'’ait montré. 

Je crois qu’il est possible de reconnaître chaque espèce de 
trichophyton et celle-ci en particulier aux caractères diflérentiels 
de la grappe et du fuseau. 


IV. — HYPOTHÈSE SUR L'ORIGINE DE LA MALADIE 


Après avoir étudié la maladie parasitaire de l’homme et son 
parasite, après avoir retrouvé chez le cheval l’origine de la 
maladie humaine, il nous reste à rechercher quelle peut être 
l’origine de la maladie équine. 

Où le cheval prend-il lui-même le germe de la contagion? 

L'opinion médicale actuelle professe qu'une trichophytie 
provient toujours de la contagion d’une trichophytie antérieure. 
Mais il n’y a pas qu'une seule trichophytie. Dans cinquante- 
quatre cas de trichophyties à grosse spore, j'avais pu trouver jus- 
qu’à dix-neuf espèces trichophytiques. 

Ces espèces m'apparaissaient fixes, quand je consultais 


226 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


l'expérience. De plus quelques-unes étaient rares, et bien que 
j'aie soumis à des cultures systématiques tous les cas qui se 
présentaient, il m'est arrivé d’attendre huit mois et plus la réap- 
paritüon d’une espèce. Ces constatations ne sont guère favorables 
à l’idée d’une reproduction incessante par contagion de l'homme 
à l’homme; il semble plus probable que les tricophytons peuvent 
vivre ou bien en saprophytes dans la nature, ou bien en 
parasites pathogènes chez les animaux. 

Cette dernière hypothèse n’exclut pas du reste la première, 
car à elle seule elle n’explique pas tout. Dans les teignes animales, 
les trichophytons ne passent jamais à l’état de végétaux complets, 
et leur reproduction n’est assurée que par leurs spores mycé- 
liennes. Il semble peu probable que ces spores suffisent à assurer 
la vitalité indéfinie de l'espèce, et on revient encore par ce 
détour à l’idée d’une existence saprophyte analogue à celle de 
l'aspergillus fumigatus, qui n’est parasite pathogène que par 
exception. Si la vie saprophytique de l’actinomyces, qui n’est 
encore que très probable, était démontrée, nous aurions là un 
décalque assez exact de ce qui se passe pour lestricophytons. On a 

souvent incriminé les piqûres de graminées dans l’étiologie de 
l’actinomycose. 

Dans les trois cas de teigne du cheval où le siège de la 
lésion m'avait été connu, elle occupait la tête du cheval et plus 
particulièrement les naseaux. 

Enfin je trouvai chez un homme sept médaillons trichophy- 
tiques de cette espèce, occupant les deux avant-bras. Cet homme 
n'avait aucun rapport avec les chevaux, il n’en avait ni pansé, 

ni touché, bien qu'il fût employé au grenier à fourrages de la 
Compagnie des omnibus. 

En revanche, quinze jours avant l'apparition simultanée des 
lésions, il avait été occupé tout une semaine à débotteler du foin. 

Il était donc tout indiqué de rechercher si l'espèce étudiée 
dans ce travail, qui végèle encore abondamment dans des 
milieux assez pauvres, pouvait vivre à l’état saprophytique sur 
les milieux naturels. 

J'ensemençai donc un tube de grains d’avoine stériles, et la 
culture se développa très abondante. De mème sur un matras 
contenant de la graine de lin, sur des graines d'avoine non 
décortiquée. 


Bu on ét ul vitrine: Éalitlent rtint-2f ta bé 


TRICHOPHYTIES A DERMITE PROFONDE. 027 


Je pris alors du bois pourri, de l’humus végétal; en quelques 
jours ils se recouvrirent d’une fine moisissure, qui bientôt les 
envahit en entier. La culture, de retour sur milieux ordinaires, 
retrouva identiquement ses caractères, objectifs et microsco- 
piques. 

Mème sur de l’humus non stérile, j ai pu obtenir des cultures, 
à la vérité bien moins actives, mais où j'ai pu reprendre le 
trichophyton vivant après des semaines. 

Enfin, curieux de voir l’exiguité des besoins de cette espèce, 
j'ai ensemencéavec elles un matras contenant du liquide minéral 
de Winogradsky ; au bout de vingt jours je pus voir au fond du 
matras de petits flocons très ténus, qui se développaient lente- 
ment. Reportés sur une gélose au moût de bière, après quelques 
jours d'attente, ils me redonnèrent l'espèce ensemencée, celle 
dont je parle‘. 

Comment croire, après cela, qu'une espèce cryptogamique si 
robuste, si vivace, dont la vie parasitaire chez le cheval est rare, 
et sur l'homme tout accidentelle, ne se conserve pas par une 
existence saprophyte pour laquelle elle est si bien armée? 

En tout cas, étant donnés les premiers arguments qui rendent 
l'hypothèse si plausible, et les derniers surtout qui la rendent, je 
crois, probable, on ne peut accepter désormais sans conteste 
l'opinion médicale qui n’admet la trichophytie que comme résul- 
tant de la contagion d’un cas de trichophytie antérieur, et c’est 
là seulement ce que je voulais démontrer. 


CONCLUSIONS 


1° La teigne tondante spéciale de l'enfant connue sous le 
nom de kerion celsi : 

La teigne pilaire de la barbe connue sous le nom de 
sycosis circiné trichophytique : | 

Enfin l’entité morbide considérée comme différente et comme 
spéciale sous Le nom de périfolliculite agminée ; 

Sont une même maladie dont la localisation seule est diffé- 
rente ; 

1. Je dois dire cependant que le trichophyton ne pousse pas dans l’eau distillée 
comme on l’a dit pour l’actinomyces. 


D28 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


20 Cette maladie est d’origine mycosique; elle est due à un 
trichophyton spécial, qui, parmi toutes les formes de la tricho- 
phytie humaine, ne peut causer que celle-là; 

30 Ordinairement cette maladie chez l'homme résulte d’une 
contagion animale, et ordinairement aussi c’est du cheval que 
l’homme la contracte; 

4° Chez le cheval, la lésion causée par le parasite ressemble 
de très près à la lésion humaine; c’est également une folliculite 
circinée ; 

5° L'identité constante de la lésion causée chez l'homme par 
ce parasite spécial et l'impossibilité de retrouver cette même 
espèce dans les trichophyties de caractères objectifs différents 
appuient cette idée que chaque espèce de trichophyton produit 
une lésion trichophytique spéciale ; 

6° L'hypothèse d’une existence saprophyte des trichophytons 
— qui semble plausible pour toutes les espèces — est extrème- 
ment probable pour celle-ci en particulier, puisqu'on peut la 
cultiver sur toutes sortes de matières organiques, et jusque dans 
un milieu exclusivement minéral. 


EXPLICATION DES PLANCHES 


PLANCHE VI 


Trichophyton mégalosporon pyogène du cheval dans le cheveu 
humain (Gross — 180). Non seulement le poil mais sa gaine épider- 
mique folliculaire sont envahis par le parasite. 

Un fragment (A) de la préparation a un grossissement de 300 dia- 
mètres. — Mème échelle que les fig. 1 et 3 dansle texte, pages 500 et 501. 


PLANCHE VII 


Fig. 1. — Culture du parasite en matras conique de Gayon, sur 
gélose au moût de bière au 1/5. 
Fig. 2. — Maladie humaine dans sa localisation aux parties 


glabres (folliculite agminée). 
Fig. 3. — Maladie humaine localisée aux parties pilaires (sycosis). 


Faute de place, nous renvoyons au mois prochain la statistique de mai. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


7me ANNÉE JUILLET 1893. No 7. 


ANNALES 


L'INSTITUT PASTEUR 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DES ESSENCES 


AU POINT DE VUE DE LEURS PROPRIÉTÉS ANTISEPTIQUES 


ESSENCE DE NIAOULI, ESSENCE DE CAJEPUT 
Par M. le Dr F. FORNÉ. 


Médecin de la marine, en retraite, 


(Travail du laboratoire de M. Chamberland.) 


Voulant ajouter une nouvelle essence, — l'essence de niaouli‘ 
ou mélaleucène, — à la liste de celles déjà étudiées dans ces 
Annales par M. Chamberland (1887), nous avons naturellement 
appliqué à celle-ci le mode d’expérimentation employé pour les 
autres. 

Cette méthode consiste, comme on sait, à mettre dans un tube 
à deux branches, d’un côté l'essence à étudier, de l’autre le milieu 
de culture qui, dans les essais de M. Chamberland, a été exclusive- 
ment de l’eau de levure neutre et stérilisée. On ferme le tube et 
on le laisse reposer quelques jours, pour donner aux vapeurs 
le temps de saturer le liquide. Puis on ensemence dans ce liquide 
de la bactéridie charbonneuse. 

Il nous a semblé qu'il y aurait quelque intérêt à opérer 
simultanément avec l'essence de niaouli et l'essence de cajeput * 

1. Niaouli, nom canaque qui sert à désigner deux espèces ou variétés de Méla- 


leuques. Melaleuca viridiflora (Gaertner); Melaleuca rubriflora (Vieillard) : arbres 
très répandus à la Nouvelle-Calédonie, où ils forment des forêts considérables. 

2. Caju-puti, caju-kila, noms malais désignant aussi des Mélaleuques qui 
ressemblent au niaouli. Meluleuca leucodendron, appelé caju-puti dans l’Inde 
orientale; melaleuca minor, appelé caju-puti et caju-kila à Amboine : arbres très 
communs à Java et dans les autres îles de l’Asie équatoriale. 

Du mot malais caju-puti on a fait par corruption cajeput. 

Les Mélaleuques comme les Eucalyptus appartiennent à la famille des Myr- 
tacées, tribu des Leptospermées, 


34 


930 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


déjà connue, à cause de la communauté d’origine de ces 
deux essences, communauté que ne laisse pas soupçonner 
leur différence d'aspect physique. En effet, l'essence de niaouli 
rectifiée est incolore, tandis que l’essence de cajepulest toujours 
verte. Cette couleur est due à la présence d’un sel de cuivre 
provenant soit de l'appareil distillatoire, soit, plus probablement, 
d'une addition voulue. 

Pour faire l’expérience, nous avons mis dans des tubes 
Pasteur de l’essence de niaouli et de l'essence de cajeput, en 
présence d'eau de levure neutre et stérilisée. Onze jours après, 
on à ensemencé de la bactéridie charbonneuse dans la branche 
contenant de l’eau de levure. Les tubes contenant les essences 
restent stériles, pendant que des tubes témoins se peuplent abon- 
damment. Onze jours après l’ensemencement, on coupe les 
branches ensemencées et restées stériles des tubes à essence, 
on les ferme avec un tampon de coton stérilisé, et on les met 
à l’étuve. Quatre ou cinq jours après, elles donnent un dévelop- 
pement de la bactéridie charbonneuse. 

On peut donc conclure : 1° que l'essence de niaouli doit être 
rangée dans le groupe nombreux des essences dont les vapeurs 
en vase clos s’opposent à la culture; 

2° Que les vapeurs de l'huile de niaouli, pas plus que celles 
de l’huile de cajeput, ne tuent la bactéridie charbonneuse, 
puisqu'il a suffi de laisser dégager les vapeurs de ces essences 
pour que le terrain ensemencé et resté stérile pendant onze jours 
soit devenu propre à la culture. 

M. Chamberland n'avait pas employé, dans ses premières 
expériences, d’autres microbes d'épreuve que la bactéridie char- 
bonneuse. J’ai pensé qu’il y aurait intérêt à voir comment se 
comportaient les essences ci-dessus sur des mucédinées, et j'ai 
fait, avec l’aspergillus niger et le penicillium glaucum, diverses 
séries d'expériences avec des dispositifs variés. 

Un premier groupe d'expériences a été fait avec le dispositif 
qui précède, sauf que le liquide Rauliu remplace l’eau de levure, 
et que l’aspergillus niger est substitué à la bactéridie charbon- 
neuse. 

Les résultats de cette expérience sont, du reste, identiques à 
ceux déjà signalés : culture complète dans les tubes témoins; 
nulle dans les tubes soumis à l’action des vapeurs d'essence 


ca: À 


SSSENCES DE NIAOULI ET DE CAJEPUT. o31 


tant qu'a duré cette action. Le liquide Raulin resté stérile pen- 
dant 53 jours est devenu fertile dès que les vapeurs d'essence 
ont pu disparaîlre par évaporation ou par oxydation. 


Dans un second groupe d'expériences, j'ai agrandi l’espace 
clos dans lequel le liquide de culture et la vapeur restent en 
présence. Sous une cloche rodée 8 reposant sur une lame de verre 
rodée, on dispose un cristallisoir c contenant l’essence, et, au- 
dessus de ce cristallisoir, un matras n bouché avec un tampon 
de coton et renfermant le liquide de culture. 


Voici le résumé d’une de mes expériences. 


13 mars 1893. — Neuf matras reçoivent chacun 10 €. c. de liquide Rau- 
lin et sont stérilisés. Trois de ces matras serviront de témoins. Ce sont les 
matras T; ils reposent sur des cristallisoirs vides. Les trois matras N et les 
trois matras C sont ceux reposant sur des cristallisoirs qui reçoivent 
respectivement 2 c. c. d'essence de niaouli et d'essence de cajeput. 

Ces neuf matras sont répartis en trois groupes renfermant chacun un 
matras T, un matras N et un matras C. Un jour d'intervalle sépare l’ense- 
mencement des matras de chaque groupe. 

16 mars. — Ensemencement, avec l'aspergillus niger, des matras du pre- 
mier groupe, qui sont recouverts de leur cloche de verre et placés sur 
le rebord intérieur d’une fenêtre du laboratoire. 

24 mars. — Matras T : culture complète, ayant fructifié sur toute la 
surface. Matras N et C, culture stérile; pas la moindre trace de mycélium., 

Réensemencé les matras N et C, opération qui entraîne forcément le 
renouvellement de l'air de la cloche déjà saturé de vapeurs d'essence. 

12 avril. — La culture N est toujours stérile; la culture C présente un 
mycélium constitué par des flocons blancs encore isolés les uns des autres, 


D32 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


30 avril. — Rien encore en N. Exclusivement du mycélium dans le 
matras C. 


L'ensemencement des matras des deux autres groupes a été fait respec 
tivement les 17 et 18 mars, c’est-à-dire après quatre et cinq jours d'action 
des vapeurs d'essence. 

Les résultats de ces deux expériences, à la date du 30 avril, ont été les 
suivants : culture complète dans les matras T; culture exclusivement mycé- 
lienne dans les matras N et C, après un second ensemencement de ces 
matras. 


Ainsi, après un premier ensemencement des six matras 
soumis à l’action des essences, la culture a été nulle dans ces 
matras. 

Après un second ensemencement au bout de buit jours, 
la culture est restée nulle dans un matras N : elle a été exclusi- 
vement mycélienne dans les cinq autres matras. 

Nous avons répété exactement et simultanément les mêmes 
expériences avec les spores de penicillium glaucum, empruntées à 
une culture naturelle sur citron et ensemencées dans neuf matras 
ayant reçu chacun 10 c. c. de liquide Raulin additionné de 
chlorure de calcium à +, et disposés comme dans les expé- 
riences avec l’aspergillus niger. 

Ici encore la culture n’a été complète que dans les trois 
matras témoins ; elle aétéexclusivement mycélienne dans les six 
matras soumis à l’action des essences, mais sans qu'il ait été 
nécessaire de recourir à un double ensemencement de ces 
matras. 

Le fait le plus général qui se dégage du deuxième groupe 
d'expériences peut être ainsi énoncé : en agissant dans des 
espaces clos, les essences étudiées ont toujours empêché la fruc- 
tification des mucédinées. Elles protègent mieux un terrain de 
culture contre l’aspergillus niger que contre le penicillium 
glaucum. 

J'ajoute que l’action de l'huile de niaouli s’est montrée un 
peu plus énergique que celle de l’huile de cajeput dans les deux 
séries d'expériences. 

Remarquons en terminant que le dispositif expérimental 
employéici permettrait de se procurer des quantités considérables 
de mycélium d’une mucédinée si l’utilisation de ce produit pré- 
esntait un jour quelque intérêt. 


ESSENCES DE NIAOULI ET DE CAJEPUT. D33 


Un troisième groupe d'expériences, dans le détail desquelles 
je n’entrerai pas, m'a montré que les deux mucédinées ci-dessus, 
ensemencées dans du liquide Raulin additionné d'essence, y 
restaient sans se développer jusqu’au moment où l'essence 
s'était oxydée ou évaporée au travers du tampon de coton bou- 
chant le matras. 


J'ai cherché alors à préciser l'influence du temps écoulé 
entre le moment de l’addition de l'essence et celui de l’ensemen- 
cement, et j'ai trouvé commode de faire cette étude avec les 
tubes à pomme de terre imaginés par M. Roux. 

L'étranglement qu'ils portent vers leur quart inférieur, qui 
empèche la pomme de terre de tomber au fond, a aussi l’avan- 
tage de créer un réservoir dans lequel on peut déposer diverses 
substances volatiles en vue d'étudier leur action sur les nom- 
breux organismes qui se cultivent sur la pomme de terre. 

J'ai fait avec la pomme de terre et le pericillium glaucum 
un grand nombre d'expériences formant trois séries. 

SÉRIE À. — La série À comprend les expériences dans les- 
quelles l’action des essences est contemporaine de l’ensemen- 
cement de la mucédinée. 


17 mars 1893. — Douze tubes pour culture sur pomme de terre, préala- 
blement stérilisés, sont partagés en trois groupes. 

Quatre de ces tubes, T, serviront de témoins, quatre sont additionnés 
d'essence de niaouli : ce sont les tubes N ; enfin, quatre reçoivent de l’essence 
de cajeput : ce sont les tubes C. 

Dans chacun de ces trois groupes, deux tubes sont ensemencés avec du 
mycélium et les deux autres avec des spores. 

1 avril. — Tubes T. Culture abondante. 

Tubes N et C. Des huit pommes de terre soumises à l’action des vapeurs 
d'essences, il en est quatre — celles ensemencées avec du mycélium — qui 
ont donné une culture exclusivement mycélienne, tout à fait misérable et 
limitée à une partie de la face ensemencée. Les quatre autres, ensemencées 
avec des spores, présentent les caractères suivants : culture nulle à l’extré- 
mité inférieure de la pomme de terre; culture mycélienne au-dessus de 
celte région préservée, mycélium disposé sous forme de plis tortueux 
donnant à la culture un aspect gaufré; ce mycélium n’est sporifère qu’à 
l'extrémité supérieure de la pomme de terre. 

La culture dans les deux tubes Cest plusétendueque dans les deuxtubesN. 


L’addition des essences le jour même de l’ensemencement a 
donc eu pour effet d'empêcher le développement de la mucédinée 


34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sur la portion inférieure du fragment de pomme de terre, et de 
limiter la fructification du mycélium à la région la plus éloi- 
gnée du dépôt d’essence. 

Comment expliquer ce résultat? Il est dû probablement, à la 
fois, à ce que la partie inférieure de la pomme de terre est la 
plus rapprochée du réservoir d'essence, et à ce que sa partie 
supérieure est plus voisine de l’air extérieur, avec lequel elle 
communique au travers du tampon de coton qui ferme le tube. 
La densité de la vapeur, en prenant ce mot dans son sens 
ordinaire, doit donc aller en diminuant du bas au haut du tube. 


SÉRIE B. — La série B comprend 7 expériences analogues 
aux précédentes, comprenant chacune un tube GC, un tube N, 
et un tube témoin, mais dans lesquelles l’ensemencement de la 
mucédinée n’était pas contemporain de l'introduction de les- 
sence : il a été fait après 1, 5, 6, 7, 8, 9 et 10 jours d'action des 
vapeurs d'essence sur la pomme de terre stérilisée. 

Ces expériences ont mis en relief l'importance du rôle joué 
par l’état du terrain de culture au moment de l'ensemencement. 

Le développement des spores de penicillium, si rapide et si 
complet sur les pommes de terre des tubes témoins, reste nul 
à l'extrémité inférieure des pommes de terre soumises à l’action 
des essences, et est constamment retardé sur les points où 1l se 
produit. 

Cette action retardatrice ou empêchante, déjà sensible quand 
l’ensemencement est fait 24 heures après que la pomme de terre 
a été soumise à l’action des vapeurs d'essence, devient de plus 
en plus apparente quand cette aclion précède de plusieurs 
jours lensemencement. Dans ce dernier cas, la culture est de 
moins en moins étendue; elle est réduite à la phase mycélienne 
sur la face ensemencée, dont elle n'occupe qu’une partie, et, 
quand elle devient complète, ce n’est que sur la face de section 
supérieure de la pomme de terre. 


SÉRIE C. — La série C comprend les expériences dans les- 
quelles on a fait agir les essences directement sur les spores de 
penicillium piusieurs jours avant leur ensemencement sur des 
pommes de terre stérilisées par la chaleur. 


« 


ESSENCES DE NIAOULI ET DE CAJEPUT. D39 


13 mars 1893. — Avec deux pipeltes chargées respectivement d'huile de 
niaouli et d'huile de cajeput, nous arrosons les spores de deux cultures de 
penicillium qglaucum sur pommes de terre. 


31 mars. — Ensemencement sur pommes de terre des spores de ces 
deux cultures. 
30 avril. — Il existe un contraste frappant entre les deux cultures : 


Les spores au cajeput ont donné une culture exclusivement mycélienne, 
tout à fait misérable et limitée à une partie seulement de la face ensemencée. 

Les spores au niaouli ont donné un mycélium abondant et d’un blanc 
éclatant, formant des plis ou saillies rappelant par leurs dispositions tor- 
tueuses les circonvolutions cérébrales. Il y a évidemment à la fois hyper- 
senèse de mycélium et obstacle à son étalement en surface ; les plis tortueux 
font une saillie très notable au-dessus du niveau de la pomme de terre et 
débordent de chaque côté les points d'implantation du mycélium. Pendant 
une quinzaine de jours, ces circonvolutions mycéliennes n’ont occupé que la 
face ensemencée; plus tard, le mycélium a gagné les parties latérales. 
Lorsque les spores vertes ont apparu sur ce mycélium blanc, la culture a 
offert un bel aspect qui la faisait facilement différencier des cultures ordi- 
näires de la même mucédinée. 

Finalement, la pomme de terre a été couverte sur les deux tiers de sa 
surface par une couche épaisse de mycélium et de spores. 

Dans une autre expérience, faite avec des spores soumises 22 jours à 
l'action des essences, j'ai retrouvé le même contraste et les mêmes particu- 
larités de culture que dans l'expérience précédente. 


La parité d'action des deux essences cesse donc dès qu’elles 
sont mises directement en contact avec les spores: dans les 
expériences précédentes, les vapeurs seules des essences étaient 
en action, dans les expériences de la série C un nouveau facteur 
est entré en jeu. L'huile de cajeput renfermant une proportion 
notable de cuivre, 1l est possible que ce métal ait eu sa part 
d'action dans la diminution de la vitalité des spores arrosées 
avec cette huile; cette diminution a été telle que la fructification 
de la mucédinée a été impossible et que mème sa végétation a 
été presque nulle. 

L’essence de niaouli, au contraire, pure de toute addition 
métallique et dont l’action, par suite, représente mieux celle 
des essences en général, a exallé l'énergie végétative des 
spores. 


CONCLUSIONS GÉNÉRALES 


I. Les vapeurs d'essence de niaouli comme celles d'essence 
de cajeput agissant dans des espaces clos et étroits s'opposent 


236 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


à la culture de la bactéridie charbonneuse et de l’aspergillus 
niger : 

II. Les mêmes vapeurs agissant dans des espaces clos, mais 
plus larges, ont empêché dans tous les cas la fructification des 
mucédinées ; 

III. L'action empêchante ou stérilisante des vapeurs d’es- 
sence s'exerce principalement sur le milieu de culture ; 

IV. La puissance stérilisante des vapeurs d’essence est pro- 
portionnelle au temps pendant lequel ces vapeurs ont agi sur le 
milieu de culture, et au degré d'imprégnation dudit milieu par 
lesdites vapeurs; 

V. Toutes choses égales d’ailleurs, les vapeurs d'essence de 
niaouli stérilisent mieux un terrain de culture que les vapeurs 
d'essence de cajeput ; 

VI. L'essence de niaouli mise en contact direct avec les 
spores de penicillium glaucum à augmenté leur énergie végé- 
tative. 


SUR LE VIRILLISSEMENT DES VINS 


Par E. DUCLAUX 


Que se passe-t-il dans un vin qui vieillit, et qui, après avoir 
commencé par s'améliorer, finit par vieillarder et se perdre ? C’est 
là un phénomène dont nous ne connaissons encore que le gros, 
et dont les détails nous échappent. L'effet produit résulte évi- 
demment à la fois de la réaction intérieure des éléments du vin 
les uns sur les autres, et de l'intervention des agents extérieurs, 
dont les mieux connus sont d’un côté l’oxygène, de l’autre les 
microbes. En fait d'agents intérieurs, M. Berthelot nous a appris 
qu'entre l'alcool et les acides fixes et volatils du vin il se pro- 
duit des éthers dont l'influence sur le bouquet n’est pas dou- 
teuse. De son côté, l'oxygène qui pénètre dans le vin commence 
par oxyder sa matière colorante, par le dépouiller. J'ai montré 
que, lorsqu'il est aidé de l’action de la lumière, il est capable 
d'agir sur beaucoup d’autres éléments du vin, la glycérine, 
l'acide tartrique, l'alcool, en donnant de l’aldéhyde, de l'acide 
formique, etc. Il est vrai que le vin est toujours conservé à 
l'abri de la lumière, mais, si l’action solaire accélère d’ordinaire 
celle de l'oxygène, elle n’est pas indispensable pour cela, et, de 
même qu'un vin se dépouille fort bien dans une cave obscure, 
il peut se faire aussi que ses autres éléments restent exposés à 
une oxydation lente, mais continue. 

Dans le but d'étudier ces phénomènes, j'avais réservé, lors 
des Études sur le vin‘ que j'avais faites en 1872, des échantillons 
des vins que j'avais étudiés, et dont je connaissais bien la con- 
stitution, tant en acides fixes qu’en acides volatils. Quatre de ces 
vins ont été chauffés, de façon à être soustraits à l’influence des 
actions microbiennes et abandonnés à leurs réactions intérieures. 
Pour accélérer celles-ci le plus possible, sans trop m'éloigner des 
conditions ordinaires de la conservation des vins, j'avais mis mes 


1. Annales de Chimie el de Physique, 59 série, t. IL, 1874, 


D38 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


vins dans des bouteilles en verre blanc, fermées par des bou- 
chons sans cire, et, au lieu de les garder à la cave, je les ai lais- 
sées depuis dans le laboratoire, avec la seule précaution de les 
enfermer dans des armoires où n’entrait pas le jour. La 
matière colorante s’est rapidement précipitée dans ces condi- 
tions. Au bout de 2 à 3 ans, les échantillons étaient complète- 
ment dépouillés. Pour laisser aux autres actions de combustion, 
que je savais plus lentes, le temps nécessaire pour commencer, 
sinon pour devenir complètes, j’ai conservé pendant un peu plus 
de 20 ans ces vins chauffés, et ne les ai analysés qu’en 1893. 

A côté de ces vins chauffés, j'avais placé des échantillons de 
deux des mêmes vins non chauffés, tous deux envahis par le fer- 
ment de l’amer et le ferment du tourné, mais en quantités iné- 
gales. Dans l’un, c'était ie filament du tourné qui dominait de 
beaucoup ; c'était le filament du vin amer dans l’autre. Ces vins, 
déjà malades au moment de la mise en bouteilles, ont continué 
à se détériorer. Il n’était nullement nécessaire d'attendre pour 
eux aussi longtemps que pour les autres. Je les ai analysés en 
1884, après 12 ans de conservation, et j'ai comparé leur état de 
maladie à ce moment avec celui que je leur avais trouvé et décrit 
dans mon mémoire de 1874. 

Les résultats fournis par cette étude comparative étant très 
nets, quelques mots suffiront pour les exposer. 


A. Vin du Puy-de-Dôme, atteint surtout de la maladie de la 
pousse avec quelques filaments de l'amer. —C'est le vin que j'ai étudié 
page 319 de mon mémoire. Son acidité totale évaluée en acide 
acétique, était mesurée par les chiffres suivants : 


Au moment de l'analyse (nombres du mémoire),.... 6 gr. 45 par litre. 
AUMOMENTTAUICRAUTANE EEE ER nacre ee 6 gr. 84 — 
Au moment de la seconde analyse : vin chauffé... ..., 6 gr. 84 — 
Au moment de la seconde analyse : vin non chauffé. 9 gr. 60 — 


L’acidité totale n’a donc pas varié en 20 ans dans le vin 
chauffé, elle a au contraire beaucoup augmenté dans l’autre en 
12 ans. Pour savoir sur quoi a porté l’augmentation, il n'y a 
qu'à chercher ce que sont devenus les acides fixes et les acides 
volatils. 

Dans mon mémoire, j'avais dit que ce vin contenait en 1872 
241,55 d'acide acétique et 2:,60 d'acide métacétique par 
litre. Depuis, l'existence de l'acide métacétique de Nicklès est 


AMP | 


VIEILLISSEMENT DES VINS. d39 


devenue douteuse, et j'ai moi-même dit‘ qu'après avoir étudié un 
échantillon d'acide métacétique qui provenait de Nicklès lui- 
même, je n'avais trouvé aucune différence entre lui et l'acide 
propionique pur, provenant de cyanure d’éthyle. En tenant 
compte de la petite quantité d’impuretés rencontrée dans l’acide 
métacétique de M. Nicklès, j'ai été conduit à modifier légère- 
ment les chiffres qui précèdent, et je considère aujourd’hui ce 
vin comme contenant en 1872 2,58 d’acide acétique et 2*',56 
d'acide propionique par litre. 

Au moment du chauffage, la quantité d’acides volatils avait 
légèrement augmenté, mais leur proportion était restée la 
même, et la marche de la distillation, conduite suivant les 
règles indiquées dans mon mémoire, n'avait pas sensiblement 
varié. Elle n’a pas varié non plus du moment du chauffage au 
moment de la seconde étude. Les acides volatils du vin sont donc 
restés au bout de 26 ans ce qu’ils étaient au moment du chauf- 
fage, et, en particulier, il n’y a eu aucune apparition en quanti- 
tés sensibles d’un acide volatil nouveau par suite d’un procès 
d'oxydation. 

De la constance de l'acidité totale et de l’acidité volatile, je 
crois pouvoir conclure à celle de l'acidité fixe, au moins comme 
quantité. S'il y avait eu transformation chimique d'un acide fixe, 
ce ne pourrait avoir été qu’en un autre acide fixe de même équi- 
valent. C’est un fait dont je ne connais pas d'exemples. Con- 
cluons donc, en ce qui regarde les acides, que le chauffage les a 
immobilisés dans leur quantité et dans leur qualité. 

Restent maintenant à envisager lestransformations subies par 
les corps neutres principaux, alcool et glycérine. Les procédés de 
dosage de la glycérine dans un vin sont trop imparfaits pour 
permettre d'apprécier de petites différences dans la quantité de 
ce produit. Mais la glycérine en s’oxydant donne des acides 
fixes ou volatils, et nous avons vu qu’il n’y avait aucune varia- 
tion de ce chef. L'alcool mérite une étude plus détaillée, parce 
qu'en s’oxydant il peut donner de l’aldéhyde. Je n'avais pas 
recherché ni dosé ce produit dans mon vin en 1872. Je manquais 
par conséquent de terme de comparaison. Je me suis contenté 
de m'assurer que la quantité d’alcool contenue dans le vin 
n'avait pas varié d’une quantité sensible à un dosage alcoomé- 

4. Microbiologie, p. 598. 


Eee. 


540 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


trique, et que l’aldéhyde qu'on trouvait dans le liquide distillé 
était en proportions comparables à celles qu'on trouve dans les 
vins ordinaires, et ne dépassait dans aucun des vins étudiés 
3 décigrammes par litre, le dosage étant fait par le procédé colo- 
rimétrique de Schiff. Ce sont des proportions voisines de celles 
qui, d'après M. Ræser', résultent du fonctionnement normal du 
ferment alcoolique. Il est curieux de voir que cette aldéhyde ne 
s'est pas oxydée en vingt ans, en donnant des acides volatils 
qu’eût manifestés la méthode d'analyse. 

Toute la transformation subie par l'alcool consiste en une 
éthérification au contact des acides volatils contenus dans le vin. 
Cet alcool étaittrès odorant et, étudié au compte-gouttes, d’après 
la méthode que j'ai fait connaître dans mon mémoire de 1872, il 
donnait 144 gouttes et demie pour un titre alcoolique de 9°. À la 
même température, de l'alcool pur au même titre eût donné 
140 gouttes et demie. La différence, qui n’est pas moindre de 
4 gouttes, correspond aux éthers ayant accompagné l'alcool dans 
sa distillation. 

Voilà pour ce qui concerne le vin chauffé. Le vin non chauffé 
a continué à se détériorer de 1872 à 1884. Nous avons vu 
plus haut que l'acidité totale y avait passé de 6,84 à 95°,60, 
l'évaluation faite en acide acétique. Pour étudier la variation 
de l'acidité volatile, il n’y a qu’à soumettre le vin à la distillation 
fractionnée, suivant les procédés que j'ai indiqués dans mon 
mémoire, et à comparer la marche de la distillation pour les 
divers échantillons. Voici comment s’est distribué l’acide 
dans les 10 prises successives, chacune de 10 c.c., obtenues en 
traitant comme je l'ai dit : 1° le vin initial; 2° le même vin au 
moment du chauffage; 3° le même vin 12 ans après, au moment 
de la dernière étude : 


Vin initial 1872. Même vin au Même vin 
moment du chauffage. 12 ans après. 
dre prise 9,4 9,6 9,5 
28 — 18,8 49,2 19,0 
32 — 95,3 28,8 98,7 
40  — 2) 90,4 38,3 
5e — 47,6 48,0 47,9 
6e — 57,4 57,6 57,4 
T2 — 67,3 67,6 67,4 
o° — 77,6 18,0 71,8 
ge — 85,4 88,4 55,4 


100 — 100,0 40020 100,0 
4. Ces Annales, t. VII, p. 41. 


VIEILLISSEMENT DES VINS. 41 


On voit que le parallélisme est aussi parfait que possible. Les 
acides volatils ont donc continué à se produire dans ce vin, dans 
les mêmes proportions que celles qui y existaient à l’origine. 
Voici, dès lors, les quantités d'acide acétique et propionique par 
litre en 1872 et en 1884: 

1872, 2 gr. 58 d'acide acétique et 2 gr. 56 d’acide propionique. 
1884, 3 gr. 9%4 — 3e M — _ 

Comme j'avais eu, en 1872, la précaution de distiller 4 litres 
de vin de façon à en retirer les acides volatils, j’ai pu m’assurer 
que l’acide mélangé à l'acide acétique était bien de l'acide pro- 
pionique. 

Voyons maintenant ce qui est relatif aux acides fixes. L’aci- 
dité totale correspondait en 1872 à 65,45 d'acide acétique et 
à 98r,60 en 1884. D'autre part, les acides volatils signalés ci-des- 
sus correspondent à 45,65 d'acide acétique en 1872 et à Tar,[1 
en 1884. Les acides fixes correspondent donc en 1872 à 1:r,84 
d'acide acétique, et à 2,5 en 1884. Il y a donc eu augmentation 
des acides fixes en même temps que des acides volatils. Il faut 
rapprocher ce fait de ce que le vin était atteint à la fois de la 
maladie de la pousse, qui fait disparaître les acides fixes, et de 
la maladie de l’amer, qui les augmente. Malheureusement tout 
ce qui se rapporte aux acides fixes dans le vin est encore très 
mal connu, et je n’ai pas cru devoir pousser plus loin l’analyse 
des phénomènes. On ne la fera bien que lorsqu'on saura cultiver 
les ferments de ces maladies, et qu'on pourra étudier leurs 
aclions dans des milieux de constitution plus simple que ne 
l'est le vin. 


B. Vin du Puy-de-Dôme, atteint surtout de la maladie de l’amer, 
avec quelques filaments de la pousse. — C'est le vin que j'ai étudié 
page 323 de mon mémoire de 1874. Comme l’élude a été sem- 
blable à celle du vin qui précède, je me bornerai à une simple 
mention des résultats : 


Vin chauffé. 


1872 1893 
Acidité totale évaluée en acide acétique 6 gr. 0 6 gr. 0 
— volatile — — 1 gr. 9 ER, 


L'acidité volatile est une fraction de l'acidité totale plus faible 
qu'avec les vins poussés, mais ni les acides fixes, ni les acides 


42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


volatils n'ont varié en quantité. Il en est de même en qualité : 
c’est, en 1893 comme en 1872, un mélange d'acide acétique et 
d'acide butyrique dans les proportions que nous allons retrouver 
tout à l'heure. 

Le titre alcoolique du vin est de 9°,4. L'alcool à ce titre donne 
147 gouttes au compte-gouttes, au lieu de 142,5 pour l'alcool 
pur. La différence est de 4,5 gouttes. La quantité d’éther formé 
est donc toujours assez grande. 


Vin non chauffé. 


1872 1884 
Acidité totale évaluée en acide acétique 6 gr. 0 8 gr. 6 
— volatile — — 120129 4 gr. 0 
— fixe, par différence 4 gr. 1 4 gr. 6 


Il y a donc eu augmentation simultanée des acides fixes et 
volatils. Fe 

La distillation fractionnée, appliquée à l’étude des acides 
volatils, montre que leur composition est à très peu près la même 
en 1872 et 1884, et correspond à un mélange de 36 molécules 
d'acide acétique contre 1 d’acide butyrique. Il y avait donc dans 
un litre de ce vin : 


1872 1884 
Acide acétique 1 gr. 85 8 gr. 88 
—  butyrique 0 gr. 08 0 gr. 17 


Le vin chauffé a donc encore été ici immobilisé par le chauf- 
fage. Le vin non chauffé a continué à s’altérer sous la double 
influence du ferment de l’amer et du ferment du poussé. Que 
l’action du premier ait été prédominante, c’est ce qui est démon- 
tré à la fois par la faiblesse du chiffre relatif à l'acidité volatile 
dans ce dernier cas, et par la nature de l’acide présent, qui était 
surtout de l’acide acétique à peine mélangé d’un peu d'acide 
butyrique. 

C. Vin du Puy-de-Dôme de 1866. — C’est le vin dont j'ai parlé 
page 311 de mon mémoire. Voici le résultat de la comparaison 
du vin au moment du chauffage en 1872, et du vin chauffé étu- 
dié en 1892 : 

A. — Vin chauffé. 


1872 1892 
Acidité totale évaluée en acide acétique 5 gr. 1 5 gr. ! 
— volatile — 0 gr. 63 0 gr. 65 


VIEILLISSEMENT DES VINS. D43 


Donc, aucune variation ni dans l’acidité fixe, ni dans l’acidité 
volatile qui était dans les deux cas formée de 0f',61 d'acide acé- 
tique et 0k',025 d’acide butyrique par litre. 

L'alcool provenant de ce vin, el titrant 10°,6 à l’alcoomètre, 
donnait au compte-gouttes, à 15°, 148 gouttes au lieu de 146.11 
y avait moins d’éther que dans les vins qui précèdent et celui qui 
suit, sans doute parce que l'acidité volatile y était aussi beaucoup 


plus faible. 


D. Vin du Puy-de-Dôme. — Les résultats fournis par l'analyse 
de ce vin sont les mêmes que pour le vin qui précède. L’acidité 
totale s’est montrée la même en 1872 et en 1893. Les acides 
volatils étaient formés, pour les deux vins, de 1#,98 d'acide 
propionique et de 2:",04 d'acide acétique. Je me suis assuré par 
une épreuve directe qu’il n’y avait pas d’acide formique. Quant 
à l'alcool, il donnait, pour un titre alcoolique de 80,5, 144 gouttes 
au compte-gouttes à 15° au lieu de 139,5. Donc, encoreici, beau- 
coup d’éthers. 

Concluons done de l’ensemble de ces résultats qu'il n'y a 
aucune oxydation sensible dans les vins débarrassés de leurs 
germes de maladie par le chauffage, et maintenus à la cave, 
daos les conditions ordinaires de leur conservation, c’est-à-dire 
à l'abri de la lumière, alors même que l'oxygène peut arriver par 
voie de diffusion au contact du liquide. Le seul effet accessible 
jusqu'ici à l’expérience est une éthérification de l’alcool. Quant 
au dépôt de matière colorante, qui semble exiger une oxydation 
préalable, je ne l’aborde pas ici. Je montrerai bientôt que c’est 
un phénomène de coagulation, dans lequel l'oxygène ne joue 
qu'un rôle secondaire et, sinon effacé, du moins dominé de beau- 
coup par les propriétés colloïdales de la matière colorante. 


SUR LEA PHAGOCYTOSE DANS L'ACTINOMYCOSE 


Par M. Le Pr A. PAWLOWSKY ET Mac. MAKSUTOFF. 


(Travail du laboratoire de pathologie chirurgicale de l'Université de Kieff.) 


(Avec les planches VIII et fig. 3 et 4 de la planche IX.) 


Malgré les nombreux travaux sur l’actinomycose de l’homme 
et des animaux, on n’a pas encore résolu la question de la lutte 
entre l’organisme et le parasite, ni même celle des relations 
réciproques entre ce parasite et les cellules des tissus. Nous 
voudrions montrer qu'il s’agit encore ici d’une phagocytose 
véritable, avec ses formes classiques bien nettes. | 

Bollinger (1; et Israël (2) ont déjà admis que dès quele parasite 
a pénétré dans les tissus par une voie quelconque, il s’entoure 
des éléments granulaires, ce qui a fait donner à la tumeur qui se 
produit dans cette maladie le nom de granulome infectieux 
(Cohnheim). Les recherches ultérieures de Johne (3), Moorbrug- 
ger (4) et autres, ont fait voir qu'il ne s’agit pas seulement d'une 
accumulation des éléments granuleux, qui dégénèrent ensuite, 
mais que, de même queles leucocytes, les cellules fixes du tissu 
néo-formése transforment en cellules épithélioïdes et géantes. On 
a donc été conduit à se représenter la structure d’un nodule actino- 
mycotique comme une sorte de masse mycélienne radiée en forme 
de glande, entourée d'éléments granulaires parmi lesquels se 
trouvent des cellules épithélioïdes etgéantes. Beaucoupd’auteurs 
assimilent même la structure d’un actinomycome à celle d’un 
tubercule. La différenciation résulterait de ce que le tubercule 
devient seulement caséeux, tandis que l'actinomycome subit une 
dégénérescence graisseuse suivant les uns, puriforme suivant les 
autres, et se transforme définitivement en tissu cicatriciel. 

On admet que la propagation du foyer primitif se fait parles 
liquides destissus, ou même parla voiesanguine, sansintervention 
des éléments cellulaires. Dans ces derniers tempsseulement,quel- 
ques observateurs ont vu des parasites dans les cellules : ainsi 


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% À 


PHAGOCYTOSE DANS L’ACTINOMYCOSE. D45 


Marchand (S)en signale dans les leucocytes etlescellules géantes. 
Dans un des meilleurs travaux publiés sur l'actinomycose, 
Bostrôm(6)signale aussi des filaments parasitaires dans lesleuco- 
cytes. Cesfilaments sont parfois plus longs que la cellule, et celle-ci 
a souvent des dimensions exagérées et contient un nucléole 
bulleux. On voit alors avec le temps se former dans cette cellule 
des figures karyokinétiques; son protoplasma perd la propriété 
de se colorer, ses contours et ceux du nucléoles’effacent, et la 
cellule périt, laissant aux filaments toute liberté pour s'épanouir 
en nodules radiés. D’après Bostrôm, la propagation du parasite 
se fait par les leucocytes, mais seulement dans la région de la 
réaction inflammatoire. Ce savantn'a pourtant pas observé dans 
tous ses stades celte transformation du filament en nodules 
radiés, et ne la considère que comme probable : il admet 
aussi que lesleucocytes ne sont pas la seule voie de dissémination 
du parasite dans l'organisme. Avant Bostrôm, Fischer avait 
admis sans la contesterla propagation du champignon par voie 
cellulaire, et Babes (8) avait seulement observé la présence de 
filaments d’une longueur variable dans de grandes cellules sans 
nucléoles. 

La question de la voie de propagation de l’actinomycose dans 
l'organisme reste donc ouverte, si bien que, tout récemment 
encore, Hesse a défendu la théorie de la transmission extra- 
cellulaire. 

Nos observations ont porté sur trois cas d’actinomycose 
humaine:, et sur qualre cas d’actinomycose des bêtes à cornes, 
dont un provenait d'une inoculation faite par l’un de nous. Les 
tissus ont été durcis par l’alcool, puis inclus dans la paraffine : 
les coupes ont été colorées avec l'hématoxyline de Ranvier, puis 
par la fuschine de Gram, ou encore avec l’hématoxyline et 
l'éosine. 

Sur toutes nos préparations, tant humaines qu’animales, les 
tableaux microscopiques étaient tout à fait identiques : Je 
nodule développé avait la forme d’un capitule avec renflements 
périsphériques. Ce capitule était contenu dans ure ou plusieurs 
cellules épithélioïdes (fig. 3,5, 8, 9; pl. VII); des couches d’autres 
cellules toutes pareilles entouraient de tous côtés sur une large 


4. Nous les devons à M. Le Prof. Sonnenburg, de Berlin, auquel nous adressons 
ici nos sincères remerciements. 


39 


D46 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


étendue le bouton parasitaire, et possédaient un nucléole globu- 
laire placé excentriquement (fig. 8 et 9). Quand le nodule était 
jeune, le protoplasma des cellules ainsi que le parasite 
présentaient une coloration bien marquée. 


Auprès de ces parasites en capitules, enfermés dans des cellules 


épithélioïdes, nous avons trouvé dans d’autres cellules toutes 
pareilles des filaments isolés, cylindriques ou renflés sur leur 
longueur (fig. 6). Quelques-uns montraient comme un commen- 
cement de ramification, et les deux rameaux en doigts de gants 
(fig. 1, 4) étaient aussi renflés à leurs extrémités (fig. 9). Parmi 
les cellules épithélioïdes (Bildungszellen de Ziegler, macrophages 
typiques de E. Metchnikoff) se trouvaient des cellules plus petites 
(fig. 8 et 9) placées à la périphérie du bouton parasitaire, munies et 
même parfois bondées de fiiaments en bâtonnets. Plus la cellule 
était jeune, plus elle était petite, et plusles filaments qu’elle con- 
tenait étaient courts et sans renflements (fig. 1, b cd: fig. 2, b). 
En outre, nous avons vu que dès ie commencement de la dégé- 
nérescence régressive du macrophage, les filaments grandissaient 
à l'intérieur de la cellule et se développaient en capitules (fig. 4, 
D 41) 

La question de savoir comment les filaments entrent dans 
les cellulles se résout quand on étudie avec soin un nodule actino- 
mycotique avec son capitule parasitaire entièrement développé. 
Les cellules qui contiennent le mycélium subissent sur beaucoup 
de points, comme nous l’avons dit, une dégénérescence régres- 
sive, et se disloquent successivement. Sous le microscope, ces 
cellules prennent un aspect granuleux, une coloration plus 
faible du protoplasma, une modification de forme du nucléole : 
leurs contours deviennent moins nets, et elles se transforment 
en masses protoplasmiques sans nucléole (fig. 10 à 14, 17, 18). 
À leur voisinage on voit apparaître de jeunes cellules épithé- 
lioïdes qui saisissent les parties libres des filaments des 
capitules parasitaires (fig. 8 et 9, &). 

Si le parasite meurt avec la cellule, ce que traduit la forma- 
tion de renflements et la diminution dans l'intensité de la colo- 
ration, sa dissémination par les nouvelles cellules ne peut plus 
se produire, les formes involutives qu’elles contiennent étant 
mortes. Nous avons cependant souvent observé, au delà des 
limites du capitule, quelques filaments de longueur variable, 


PHAGOCYTOSE DANS L'ACTINOMYCOSE. D47 


plus ou moins altérés, et en voie de croissance. Ce sont précisé- 
ment ces filaments qui peuvent s'implanter dans les cellules 
et devenir les germes de nouveaux nodules. Souvent aussi un 
lilament d’un capitule renfermé dans une cellule s'accroît, avant 
que celle-ci dégénère, au delà des limites du protoplasma, et 
est saisi par un autre phagocyte qui peut le transporter ailleurs 
(fig. 9, b). Quelquefois ce phagocyte reste en place auprès du 
phagocyte primitif, devient ovale ou polygonal en s’agrandis- 
sant, pendant que le filament qu'il contient se développe et 
conserve ainsi ses connexions avec le capitule initial (fig. 8 et 9). 
C'est ainsi que s'explique le fait qu’un même capitule soit sou- 
vent contenu dans deux et mème plusieurs cellules (voir Photo- 
gramme 3, pl. IX). 

On voit d’après cela que le filament qui s’est introduit dans 
une cellule se développe, quoique lentement, en capitule 
(Photogr. 4). En même temps, ce filament subit des altérations 
qui prouvent que la cellule lutte avec le parasite. Si la celiule 
succombe, le parasite se développe el multiplie ses colonies. Si 
le parasite a le dessous, il donne ses renflements en massue, 
se colore peu ou pas, tandis que la cellule conserve la netteté de 
ses contours (fig. 10, 13, 1%, 17, 18). En étudiant alors attenti- 
vement les coupes microscopiques avec l’Apochrom. de Zeiss 
(2 m. m. avec Oc. 8 et 12), on observe des capitules tout à fait 
incolores, en tout ou en parlie, contenus dans de grandes 
cellules. Il y en a de disloqués en gr'anules, filaments et ren- 
flements, dont les uns sont encore colorables et les autres 
non (fig. 18). Les contours de ces capitules sont parfois telle- 
ment confus qu'ils semblent confluer avec le protoplasma et 
qu'ils deviennent même tout à fait invisibles (fig. 12). | 

Il y a donc lutte entre le parasite et les cellules, et c’est pour 
cela que le champignon ne forme pas dans les tissus vivants les 
épais enchevêtrements avec riches ramifications dichotomiques 
que nous rencontrons dans les cultures d’actinomyces. L’inter- 
vention de la phagocytose nous explique aussi pourquoile procès 
pathologique se limite et ne se généralise pas. Le parasite 
possède des propriétés chimiotactiques, et attire ainsi des pha- 
gocytes qui se transforment ensuite en cellules épithélioïdes. 
Dès les premiers signes de la dégénérescence du nodule, les 
éléments cellulaires qui le constituent s’infiltrent de leucocytes 


D48 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


multinucléés, qui augmentent en nombre, amènent la dégé- 
néréscence du nodule, et noient dans le pus les masses détri- 
tiques. 

En outre de cela, dans les infiltrations actinomycotiques, 
nous trouvons des grains ronds, rares ou en grand nombre, 
libres ou rattachés par une substance intermédiaire, de gran- 
deur variable, ayant l'aspect, dans leur forme typique, des 
globules hyalins. Ces formations se colorent fortement par la 
méthode de Gram, de même que le parasite, et ressemblent 
évidemment aux corps hyalins typiques. 

Il y a donc dans le granulome actinomycotique, outre le 
parasite et les infiltrations de cellules épithélioïdes, de nouvelles 
formations tout à fait analogues aux corps hyalins (fig. 12, 413, 
15, 16, 17). La connexité de ces corps avec les élargisse- 
ments en massuc des filaments du parasite n’est pas douteuse : 
ce sont ces renflements qui se détachent des filaments et se 
transforment en globuleshyalins, lesquels sont ainsi le résultat 
de la dégénérescence de l’actinomyces. 

Nous avons donc dans l’actinomycose un exemple bien in- 
structif de la formation des corps hyalins : ils sont, comme dans 
le rhinosclérome (10), un produit de la dégénérescence du 
parasite. Dans l’actinomycose, les corps hyalins sont beaucoup 
plus petits et plus rares que dans le rhinosclérome, les groupes 
et les amas sont moins abondants, mais leur physionomie et leurs 
propriétés sont les mêmes. 

En résumé, le pus des actinomycomes contient des cellules 
épithélioïdes dégénérées, des capilules parasitaires morts, avec 
leurs renflements en massue, des granules de dégénérescence du 
champignon, et des corpuscules puriformes multinucléaires 
avec des grains libres de chromatine. 

Le champignon n’est donc entouré de leucocytes multi- 
nucléés que si les cellules épithélioïdes sont en voie de dégéné- 
rescence : en d’autres termes, l’infiltration de l’actinomycome 
par les Jleucocytes polynucléaires est un signe de la dernière 
période de la dégénérescence, au lieu d’être, comme on l’a admis, 
l'image constante de sa structure. De même nous n’avons pu 
constater la présence des cellules polynucléaires gigantesques, 
décrites par Marchand et d’autres, ni dans les nodules jeunes, 
ni dans ceux qui étaient complètement développés. 


PHAGOCGYTOSE DANS L’ACTINOMYCOSE. D49 


On peut conclure de même au sujet de la formation du 
parasite en dehors de la cellule, et quand on trouve des fila- 
ments libres, provenant d'un capitule inclus dans une cellule 
épithélioïde, et sortant à l'extérieur, ce n’est qu’un phénomène 
temporaire : ce filament est destiné à être repris par une cellule 
nouvelle et ne peut nullement se développer en dehors d’elle 
daus le tissu. 

Voici donc comment se fait la multiplication du parasite dans 
l'organisme. Dès qu’un de ces éléments y a pénétré, n'importe 
comment, il s’entoure de phagocytes (leucocytes à un seul noyau 
et jeunes cellules du tissu conjonctif), qui se transforment en 
grandes cellules épithélioïdes contenant un nucléole, et s’empa- 
rent ensuite des bâtonnets isolés ou des groupes mycéliens. À ce 
moment la lutte commence et, si les cellules possèdent une 
vitalité suffisante, elles détruisent le parasite. Quand celui-ci 
l'emporte, il se développe, sort des limites de la cellule qui 
dépérit, et appelle de nouveaux phagocytes en vertu de son pou- 
voir chimiolactique. Ceux-ci font barrière autour du parasite, 
s'emparent de ses renflements terminaux, arrêtent son accrois- 
sement, et finissent par y provoquer les formes involutives et la 
dégénérescence régressive qui aboutit à la formation des corps 
hyalins (fig. 3, 4, 5, 10, 12, 13, 17 et 18). Ceux-ci, comme 
dans le rhinosclérome, sont un produit parasitaire. 


BIBLIOGRAPHIE 


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für med. Wissench., 1817, n° 27, et Deutsche Zeitshr. für Thiermedicin, 
ÉOLHLASTT.) 

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. Deutsche Zeitschr. für Thiermedicin, t. VIE, 1882. 

. Beitrage zur Klin. Chirurg., édités par Bruns, Tubingen, 1886. 
. Actinomycosis (Eulenburg's Real Encyclopædie, ® édition). 

. Zricuer, Beitrage zur pathol. Anatomie, t. IX, 1890. 

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. Virchow’s Archiv, 1886, t. CV. 

. Deutsche Zeitschr. für Chirurgie, t. XXXV. 

40. A. PawLowsky. Sur l’étiologie et la pathologie du rhinosclérome, 
(Verhandl. des X internation. Medicin Congresses, Berlin, 4890, t. IL.) 

41. Corwie et Bases. Les bactéries, 3° édition, 1890, pages 343 et 326, 


© OO 1 © OÙ à Co 


CILS COMPOSÉS 
CHEZ UNE BACTÉRIE TROUVÉE DANS LES SELLES D'UN CHOLÉRIQUE 


Par M. N. SAKHAROFF, pe Tiruis. 
(Avec la planche, IX, fig. 1, 2 et 5.) 


M. Loeffler, qui a proposé une méthode très répandue aujour- 
d'hui pour la coloration des cils des bactéries, a décrit et 
reproduit dans le Centralblatt f. Bact. (n° 20, 1890) des cils 
spiralés très longs, rencontrés dans une culture de charbon 
symptomatique sur le sérum de sang. Il a recherché sans succès, 
chez d’autres bactéries, ces formes bizarres. 

Comme je n'ai vu apparaître depuis aucun document nouveau 
sur ce sujet, je me décide à décrire des formes semblables chez 
un bacille que j'ai isolé l’été dernier des selles d’un cholérique, 
et que j ai nommé bacillus asiaticus. 

C'est un grand bacille mobile de 4 & et plus de longueur, sur 
1 & d'épaisseur, à bouts arrondis, et formant quelquefois des 
Jongs fils et des chaines. Dans leur intérieur, surtout chez les 
bacilles cultivés sur pommes de terre, on observe des granulations 
noires, en nombre variable, solubles dans l'huile de cèdre. Il 
n’y en a parfois qu'une seule à un bout, ou deux aux deux bouts. 
Cultivé en piqûre sur un tube de gélatine, le bac. asiaticus la 
liquéfie rapidement, en formantun entonnoir rempli d’un liquide 
trouble, couvert par une membrane blanchâtre. Sur plaques, il 
donne des colonies circulaires ou ovales jaunâtres, avec contour 
granuleux, d’où sortent plusieurs jets minces irrégulièrement 
disposés. La présence de ces jets et leur longueur semblent 
dépendre de la température et du degré de solidité dela gélatine. 
Il y a souvent des jets pareils autour du fond de l’entonnoir 
dans la culture par piqüre, ce qui fait ressembler celle-ci à une 
culture de bactéridie charbonneuse. 

La culture sur gélose et pomme de terre donne une mem- 
brane blanchâtre, parfois jaunâtre, avec bords ondulés. 


CILS COMPOSÉS. 551 


Les spores de ces bacilles sont grandes, ovales, et d’une 
teinteverdâtre. On peutles observer dans la membrane développée 
à la surface du bouillon, lorsque la température dépasse 20°. 

Le bac. asiaticus est aérobie, et n’est pas pathogène pour le 
cobaye. Toutes ces propriétés le rapprochent en partie du bac. 
ramosus où du bac. megaterium, mais il n’est identique à aucun 
d'eux. 

Son intérêt principal résulte de la présence des cils spiralés 
mentionnés plus haut. On les observe facilement sans coloration 
dans le liquide trouble qui remplit l’entonnoir de culture sur la 
gélatine. Ils y sont parfois en grande quantité 24 à 36 heures 
après l’'ensemencement, quand l’entonnoir n’a pas encore atteint 
les parois de l’éprouvette. Ils sont immobiles, leurs tours sont 
réguliers et identiques comme chez les spirochætes. Mais leur 
longueur et leur épaisseur sont très variables. IL y a des spirales 
courtes, à peine visibles, et des spirales plus épaisses que les 
bacilles même, et si longues qu'elles traversent tout le champ du 
microscope. Cette variabilité de dimensions prouve qu’elles 
sont composées, et cela devient évident à l'observation des pré- 
parations colorées, dans lesquelles on réussit à voir des spirales 
disloquées et effilochées. Les plus grosses spirales sont certaine- 
ment formées de spirales minces. 

. Mais que représentent ces dernières ? Sont-elles des micro- 
organismes étrangers ayant poussé avec nos bacilles, ou sont- 
elles une de leurs formes évolutives ? La première supposition 
est inadmissible, car il n’est pas possible d'obtenir les bacilles 
sans spirales après une nombreuse série de cultures consécu- 
tives sur plaques de gélatine. Il faut rejeter aussi la seconde 
hypothèse, parce qu'on rencontre ces spirales très tôt, déjà 
24 heures après l’ensemencement. 

Il faut donc accepter, comme la plus probable, l'hypothèse de 
Læffler, qui voit dans ces spirales des ficelles composées de cils. 
Une étude plus approfondie rend cette explication plus certaine. 
Les très jeunes cultures du bac. asiaticus sur gélatine présentent 
souvent des groupes de bacilles évidemment réunis par leurs 
cils, puisqu'ils ne peuvent pas se séparer, bien qu'ils s’agitent 
beaucoup. Les bacilles libres sont visiblement attirés par ces 
groupes. Îls se dirigent vers eux et s’y attachent ou s’en séparent 
après les avoir touchés. Je me suis convaincu, en observant avec 


D02 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


soin ce phénomène, que dans cette rencontre ces bacilles per- 
dent leurs cils, dont l’ensemble forme les spirales. Sur les pré- 
paralions incolores, on ne voit pas ces spirales au début de leur 
formalion, mais seulement quand elles ont grossi par l'apport 
des cils détachés. On rencontre des spirales encore unies avec 
des bacilles, qui n’ont pas eu le temps de s’en séparer. 

Ces spirales n’absorbent pas les couleurs d’aniline les plus 
fortes: elles ne s’en imbibent qu'après l’action des mordants. 
Comme elles sont visibles à l’état incolore, elles sont très com- 
modes pour étudier les détails de la coloration des cils. La mé- 
thode de Læffler leur est inapplicable, attendu que ces cils 
composés (cilia composita : c’est ainsi que je les nomme pour les 
distinguer des cils simples qui les forment) ne se produisent que 
sur la gélatine. Le mélange de Lœæffler, tanin avec sulfate de fer 
acidulé, colore si fortement la gélatine que les cils y disparaissent. 
Je n'ai pu obtenir de bons résultats qu’en affaiblissant l'action 
du sulfate de fer acidulé, pris en solution saturée à la tempé- 
rature ordinaire. Ce mordant pénètre d’abord la gélatine, puis 
les cils; si donc nous le laissons agir seulement une demi- 
minute, et si nous colorons ensuite par la solution de fuchsine 
d'Ebrlich, les cils composés resteront incolores et bien visibles 
sur le fond rouge de la préparation. 

Ces mêmes cils, qui absorbent le mordant plus lentement 
que le fond, le retiennent aussi plus longtemps pendant les 
lavages. Laissons donc agir ce mordant pendant 5 à 10 minutes, 
sur la préparation légèrement chauffée, lavons rapidement avec 
de l’eau et colorons par la fuchsine d’Ehrlich : nous verrons les 
cils bien visibles sur le fond faiblement coloré de la préparation. 
Mais il faut que le lavage soit prompt et que la préparation soit 
rapidement desséchée par le courant d’air d’un insufflateur. 

Les préparations ainsi obtenues montrent des cils beaucoup 
plus nombreux que les préparations incolores. On en trouve 
presque sur chaque champ, avec les dimensions ies plus diverses; 

es uns, plus gros que les bacilles, d’autres plus fins, qui sont 
peut-être les cils primitifs. 

Sur l'indication de M. Læffler, jesuis arrivé à colorer ces 
cils primitifs par une autre méthode. Comme les cultures du 
bac. asiaticus ont une réaction alcaline, j'ai ajouté au mordant 
de Lœffler une demi-goutte d'une solution d'acide sulfurique 


4, 


12 


PL D 


CILS COMPOSÉS,. 553 


à 4 0/0. C'est ce mordant qui m'a donné la coloration la plus 
intense. Il est à noter que c'est aussi celui qui colore le mieux 
les cils des vibrions du choléra. 

Sur les préparations ainsi colorées, on peut voir que les cils 
du bac. asialicus sont longs et nombreux, ce qu’on pouvait 
prévoir. Auprès des bacilles sont beaucoup de cils détachés, en 
forme de spirales minces. J'ai eu beau y mettre du soin, je n'ai 
jamais réussi à éviter ce détachement, et à oblenir des prépara- 
tions avec les cils adhérents, ce qui témoigne qu'ils sont plus 
délicats et plus fragiles que ceux des autres microbes mobiles. 
Peut-être la formation des cils composés s’explique-t-elle par 
cette particularité, mais il reste à expliquer pourquoi leur 
réunion a lieu en spirales régulières. 

Il reste aussi à voir si ce microbe se rencontre souvent chez 
les cholériques, et s’il a quelque relation avecle choléra. Plu- 
sieurs médecins du Caucase ont signalé la présence fréquente 
de spirales dans les selles des cholériques, mais ce n’est que si 
le choléra apparaît de nouveau dans nosrégions qu’on pourra 
étudier ces questions. 


Explication des figures 3, 4 et 5 de la PI. IX. 


Fig. 1. — Bacillus asiaticus avec ces cils. Autour de lui sont plusieurs 
cils détachés. Culture sur gélose. Coloration par la méthode de Leœffler. 


Grossissement — ro 


Fig. 2 et à. — Cils composés dans les cultures du bac. asiaticus sur 
: : . ; D ie , 1 
la gélatine. Coloration par la méthode de Læffler modifiée. Grossis. = = 
Microscope à immersion à l’huile de Winkel, système = 


) 


TECHNIQUE DE LA COLORATION DES CILS; 


CILS DES VIBRIONS CHOLÉRIQUES ET DES ORGANISMES VOISINS, 
CILS DU B. TYPHIQUE ET DU B. COEI. 


Par MM. M. NICOLLE Er V. MORAX. 
(Travail du laboratoire de M. le Dr ROUX à l’Institut Pasteur.) 


I 


Parmi les divers procédés de coloration des cils, seul celui de 
Lôüffler est d’une application générale. Le voici, résumé en peu 
de mots. 

On sème sur gélose le microbe qu'il s’agit d'étudier et l’on 
porte à l'étuve. Dès que la culture est nettement développée, on 
en prélève une parcelle qu’on délaye dans une goutte d’eau à la 
surface d’une lamelle propre. Avec cette première dilution, on 
en pratique un certain nombre d’autres, toujours sur des lamelles. 
Celles-ci sont séchées à l’air et à l’abri de la poussière. Puis on 
fixe les préparations en les passant trois fois dans la flamme, et 
l’on procède à la coloration qui comprend deux temps : le mor- 
dançage et la coloration proprement dite. 

Le mordançage, opération absolument indispensable, s’obtient 
à l’aide de l'encre de fuchsine ainsi composée : 


Solution aqueuse de tanin à 20 pour 80, ........ t0Yc rc 
Solution aqueuse de sulfate ferreux saturée à froid. .. 5 c.c. 
Solution saturée de fuchsine dans l’alcool absolu. . . ASC NC 


La coloration se fait avec une solution saturée de fuchsine 
dans l’eau d’aniline, à laquelle on a ajouté peu à peu quelques 
gouttes de soude à un pour mille jusqu'à opalescence commen- 
cante. 

Pour mordancer, on verse sur la lamelle tenue dans une pince 
uvegoutte d'encre de fuchsine, et l’on chauffe au-dessus d’une 
petiteflamme pendant une demi à une minuteen éloignant et rap- 
prochant alternativement le couvre-objet. Ilne faut pas en effet 


en 


TECHNIQUE DE LA COLORATION DES CILS. 550 


atteindre l’ébullition, la température à laquelle le mordant émet 
des vapeurs étant suffisante. On lave ensuite à l’eau distillée et à 
l’alcoolabsolu; puisoncolore en déposant à la surface de la lamelle 
une goutte de fuchsine anilinée alcaline, et en chauifant avec 
précaution pendant une minute. Enfin on lave une dernière fois 
à l’eau, on laisse sécher et l'on monte dans le baume. 

Mais ce n’est pas tout. Suivant l’espèce bactérienne àlaquelle 
on a affaire, il faut, d’après M. Lüffler, modifier la réaction du 
mordant en l’additionnant d'un nombre déterminé de gouttes 
d’alcali (soude à 1 0/0) ou d'acide (acide sulfurique à 1,225 0/0), 
nombre constant pour chaque microbe. Nous n’indiquerons pas 
ici tous ces nombres, la question n'ayant plus d'importance 
aujourd'hui. Il nous suffira de rappeler que les divers vibrions 
(v. cholérique, v. de Finkleret Prior, v. Metchnikovi), le bacille 
pyocyanique, etplusieurs variétés connues de spirilles nécessite 
l'addition d’acide à l’encre de fuchsine — et qu'inversement les 
bacilles typhiques, le b. subtilis, les b. de l’œdème malin et du 
charbon symptomatique, le micrococcus agilis, etc...,ne montrent 
leurs flagella que grâce à un mordant alcalinisé. Un seul orga- 
nisme, parmi ceux que M. Lüffler a étudiés, possède des cils dont 
le mordant pur et simple suffit à révéler l'existence: c’est le 
spiriüllum concentricum. 

La méthode qui vient d’être exposée, tout en consiüituant un 
grand profit dans l’étude morphologique des bactéries, est donc 
malheureusement trop complexe pour être rapidement apprise 
et facilement répétée. Aussi y avait-il intérêt à la simplifier 
sans Jui faire perdre sa généralité. C’est ce que nous nous 
sommes attachés à faire depuis près de deux ans. 

Tout d’abord nous avons remarqué que la quantité d’alcali 
ou d'acide indiquée comme nécessaire au bon mordançage 
d'un microbe donné n'avait absolument rien de précis. Par 
exemple le bacille typhique qui exige, d’après M. Lôüffler, 
l'addition de 1 c.c. de soude à 1 0/0, à l'encre de fuchsine, montre 
des cils tout aussi bien colorés quand on abaisse la proportion 
d'alcali à 15, 10 et même 8 gouttes d’une pipette qui débite 
40 gouttes au centimètre cube. Le même fait s’est présenté 
pour d’autres organismes appartenant aux deux séries établies 
par M. Lôüffler. Cet auteur avait déjà vu du reste que les 
cils du bacille du lait bleu se mordancent à peu près indiffé- 


20) ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


remment dans l'encre de fuchsine acidifiée (10 gouttes) ou 
alcalinisée (15 gouttes). 

Si nous avons pu obtenir d'excellents résultats sans nous 
conformer exactement aux prescriptions de M. Lüffler, c’est 
que la réaction du mordant ne représente qu’un des facteurs de 
la coloration des cils. Cette réaction reste d’ailleurs acide même 
après addition de plus d’un centimètre de soude à 1 0/0 (pour 
16 c. c. d'encre de fuchsine). Le temps pendant lequel on fait 
agir la fuchsine anilinée et surtout le mordant, ainsi que la 
température atteinte lors de ces deux opérations, constituent en 
réalité les éléments essentiels de la méthode. Aussi avons-nous 
pu avec deux solutions d'encre de Lôffler, l’une légèrement 
acidifiée, l’autre légèrement alcalinisée, colorer les flagella d’un 
certain nombre de microorganismes. Il nous suffisait pour 
obtenir de bons résultats de mordancer à plusieurs reprises et 
de chauffer un peu fortement. 

Encouragés par ces résultats, nous avions déjà tenté de 
supprimer complètement l'usage de l’acide et de l’alcali dont le 
rôle nous paraissait de plus en plus problématique, lorsque nous 
avons appris que celle suppression était déjà en usage dans 
certains laboratoires. Quelques recherches nous ont bientôt 
démontré que l'encre de fuchsine pure et simple suffisait en effet 
pour mordancer les cils des divers microbes mobiles. 

La méthode de M. Lüffler se trouvant ainsi fort simplifiée, 
nous avons cherché à éviter un certain nombre d’inconvénients 
inhérents à une technique aussi minutieuse. Il nous a d’abord 
paru nécessaire de modifier le mode de préparation des lamelles. 
Pour pratiquer la dilution des microorganismes, nous prenons 
une petite quantité de culture récente sur gélose et nous l’agi- 
tons dans un verre de montre rempli d’eau ordinaire (préférable, 
comme l'a montré M. Lüffler, à l’eau distillée), de manière à 
obtenir une suspension à peine trouble et absolument homogène. 
Lorsque celle-ci est préparée, nous en mettons une goutte à la 
surface d'une lamelle propre. La lamelle doit avoir été forte- 
ment flambée auparavant, sinon le liquide ne s’y répand pas 
également et se rassemble en gouttes isolées, soit immédiate- 
ment, soit après peu d’instants. 

Notre procédé de dilution et d’étalage des lamelles a pour 
but d'obtenir des organismes isolés avec leurs cils intacts. Il a 


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TECHNIQUE DE LA COLORATION DES CILS. D07 


aussi pour but de n'entraiuer avec les bactéries que le moins 
possible de ces matières muqueuses qui les agglomèrent dans 
les cultures sur milieu solide et qui forment des précipités, sou- 
vent abondants lors de la coloration. Les lamelles une fois pré- 
parées, il est inutile de les fixer dans la flamme (ou autrement). 

Nous nous sommes occupés également du mordant et du 
mordançage. L'encre de fuchsine constitue une solution excel- 
lente et à laquelle il n'y a rien à changer. Elle doit être préparée 
avec du tanin à l'éther de très bonne qualité, si l’on ne veut 
s'exposer à échouer complètement dans ses recherches; c'est là 
un point très important. 

Le mordançage doit être répété trois ou quatre fois en chauf- 
fant chaque fois pendant une dizaine de secondes, de manière 
à ne pas dépasser la simple apparition de vapeurs à la surface 
du liquide. Entre chaque mordançage, il faut laver soigneusc- 
ment la lamelle. Si l’on chauffe, en effet, trop fort ou pendant 
trop de temps lors de chaque mordançage partiel, et si on lave 
insuffisamment la lamelle, on est sûr d'obtenir d'abondants pré- 
cipités. 

Ceux-ci, avons-nous dit, sont dus à la présence de certaines 
substances glutineuses qui agglomèrent les microbes. Il est pos- 
sible, par une dilution suffisante, d’en réduire la quantité, mais 
il s'en trouve toujours, cependant, sur les lamelles. Ces sub- 
stances se colorent un peu plus difficilement que les cils; aussi 
faut-il attendre un degré de mordançage tel que, seuls, les flagella 
aient acquis de l’affinité pour la fuchsine. C’est là le point vrai- 
ment difficile dans la coloration des cils. Si l’on ne mordance 
pas suffisamment, les lamelles, exemptes de précipités, montrent 
des microbes bien teintés, mais pas de cils appréciables. Si l’on 
mordance trop, cils très nets, au contraire, mais précipités abon- 
dants, obscurcissant souvent toute la préparation. Nouscroyons 
qu'en suivant nos indications on arrivera assez facilement à 
trouver le degré convenable de mordançage. Il faut, d’ailleurs, 
savoir qu'on réussit rarement à obtenir une préparation excel- 
lente dans toutes ses parties, à moins de faire des dilutions très 
étendues. 

La coloration proprement dite ne joue qu'un rôle secondaire. 
On réussit aussi bien avec la fuchsine créosotée ou phéniquée, 
avec le violet de gentiane aniliné ordinaire ou même le violet 


DD8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


aqueux, qu'avec la solution préconisée par M. Lôüffler. Nous 
nous servons, pour notre part, du liquide de Ziehl, qu'on a tou- 
jours sous la main dans les laboratoires et qui demeure long- 
temps sans s’altérer. Pour colorer, nous chauffons une ou deux 
fois pendant un quart de minute. Sila dilution n’est pas très éten- 
due et si nous croyons avoir un peu trop mordancé, il vaut mieux 
ne chauffer qu’une seule fois. Dans le cas contraire, on peut 
chauffer deux fois, même assez fortement, car le colorant n’en- 
gendre jamais par lui-même de précipités. 

M. Lüffler conseille de laver la préparation à l'alcool absolu 
entre le mordancage et la coloration. Ce lavage nous atoujours 
paru rendre la coloration plus difficile en enlevant la fuchsine 
déjà fixée sur les cils; aussi l’avons-nous abandonné dès le 
début. 

En résumé, voici comment nous conseillons de procéder : 
Prendre une parcelle de culture récente sur gélose et la diluer 
dans un verre de montre rempli d’eau ordinaire, de manière à 
obtenir un liquide à peine trouble. — Répartir ce liquide avec 
une pipette à la surface de lamelles propres et fortement flam- 
bées par des passages réitérés dans la flamme chauffante d’un 
bec Bunsen. On tient ces lamelles par un de leurs angles à l’aide 
d'une pince de Cornet. Le liquide étant étalé sur toute l'étendue, 
les incliner et aspirer avec la pipette l'excès de la dilution qui 
se rassemble au niveau de l’angle inférieur. — Laisser sécher à 
l'abri de la poussière. — Déposer à la surface d’un des couvre- 
objets une grosse goutte d'encre de fuchsine et chauffer une 
dizaine de secondes sur une petite flamme (flamme veilleuse 
d'un bec Bunsen, par exemple). — Lorsque des vapeurs 
apparaissent, jeter le mordant, incliner la lamelle et faire tom- 
ber sur l’angle supérieur le jet d'une pissette pour bien laver la 
préparation sans détacher la couche de microbes. — Recom- 
mencer encore deux ou trois fois le mordançage et les lavages. 
Avoir soin, après chaque lavage, d’essuyer la face inférieure 
du couvre-objet et l'extrémité de la pince de Cornet; sans quoi, 
lors du mordançage suivant, l'encre de fuchsine s’écoulerait sous 
la lamelle et le long de la pince. — Colorer en versant la fuchsine 
de Ziehl à la surface de la préparation et en chauffant une ou 
deux fois pendant un quart de minute. — Laver une dernière 
fois à l’eau et examiner dans ce liquide. Si la coloration estréussie, 


TECHNIQUE DE LA COLORATION DES CILS. 909 


faire sécher la lamelle et monter dans le baume au xylol. 

Telle est la méthode que nous employons constamment et qui 
nous donne de bons résultats. Elle est assez simple pour que 
les élèves qui suivent les cours de l’Institut Pasteur aient tou- 
jours pu obtenir rapidement avec elle des préparations satisfai- 
santes. 


IT 


A l’aide de notre procédé nous avons étudié, dans ces derniers 
temps, les cils des vibrions cholériques et des organismes voisins. 
Les premiers comprenaientdivers échantillons: vibrions de Shan- 
ghaï, de Calcutta, de Massaouah, de Hambourg, de Courbevoie, 
d'Angers, de Paris (épidémie de 1884), vibrion indien prove- 
nant du laboratoire de M. Koch, et vibrion de Finkler et Prior. 
Les seconds étaient représentés par le vibrio Metchmikovi, le 
vibrion de Deneke et cinq vibrions isolés de l’eau de Seine, l’un 
par M. Blachstein, les autres par M. Sanarelli. 

Tous ces organismes étaient mobiles, à l’exception du vibrion 
indien. Ce dernier, examiné à plusieurs reprises en prenant les 
autres comme Lémoins, s’est toujours montré privé de cils. Les 
autres, constamment pourvus de flagella, se sont présentés 
sous deux types morphologiques très différents. 

Le premier type est caractérisé par la présence d'un cil 
unique situé à l’une des deux extrémités du vibrion. C'est le cas 
des vibrions cholériques de Shanghaï, Hambourg, de Courbevoie, 
d'Angers; du v. de Finkler et Prior, du v. de Deneke, et des 
v. de MM. Sanarelli et Blachstein. M. Lôffler avait déjà vu que 
le v. Metchnikovi, le v. de Finkler et Prior, et le v. cholérique 
qu'il avait entre les mains ne possédaient qu'un seul il. 
MM. Neuhauss et Trenkmann étaient arrivés au même résultat 
par dés méthodes différentes. Enfin M. Straus avait fait 
pareille constatation à l’aide de son procédé de coloration des 
cils des vibrions vivants. 

Le second type, qui comprend les vibrions cholériques de 
Massaouah, de Calcutta et de Paris (1884), est caractérisé par la 
présence de quatre cils situés d'ordinaire deux par deux à chaque 
extrémité. Parfois trois cils occupentun des bouts de l'organisme 
et un seul l’autre bout; exceptionnellement les quatre flagella 
sont massés à un seul pôle. Jamais nous n'avons constaté un 


260 


ANNALES DE 


L'INSTITUT PASTEUR. 


lig. 1. Fièvre typhoïde, — 9. Bac. coli. — 3. B. de Finkler et Prior. — #4, B. de 
Deneke. — 5. V, avicide. — 6. V. de Sanarelli (Suresnes). — 7. V. cholérique 
(Angers). — 8. V. cholérique (Courbevoie). — 9. V. cholérique (Hambourg). — 
40. V. cholérique (Shang-Haï). — 11. V 


— 45. V 


cholérique (Massaouah, forme ronde). 


12. Id. (forme allongée). — 13. V. cholérique 1884. — 14. V. cholérique indien, 


. cholérique (Calcutta). 


TECHNIQUE DE LA COLORATION DES CILS. )61 


plus grand nombre de cils. Par contre, beaucoup d'individus 
n'offrent pas leurs cils au complet, fait qui n’a rien d'étonnant 
pour qui connaît par expérience la fragilité de ces organes. 
M. Lôffler a beaucoup insisté sur cette particularité, notamment 
à propos du seul coccus mobile actuellement connu, le micro- 
coccus agilis qui, bien que muni de plusieurs flagella, n’en 
montre cependant d'ordinaire qu’un seul. 

Ces deux types différents se retrouvent dans les cultures 
successives et ne sont pas modifiés par le passage à travers 
l'organisme des animaux et de l’homme. Il s’agit donc d’un 
caractère paraissant assez constant pouravoir une certaine valeur. 

Il est intéressant en particulier de constater des différences 
morphologiques aussi marquées chez des vibrions isolés de cas 
de choléra typique en divers endroits et à diverses dates, vibrions 
analogues d'autre part par leurs caractères de culture et leur 
action pathogène. 

Dans les vieilles cultures, où les vibrions affectent ces aspects 
en boule décrits jadis par M. Hüppe, etconsidérés par lui comme 


. répondant à des formes de résistance, on retrouve encore 


nombre de flagella même après un mois, dans les vibrions des 
deux groupes. 

Tout en tenant compte du pléomorphisme bien connu des 
vibrions, il convient de faire remarquer que les vibrions unici- 


liés sont d'ordinaire plus courts et plus virgulaires que les 


vibrions pluriciliés. 


III 

Les cils du b. coli et du b. typhique ont attiré notre atten- 
tion depuis longtemps. Voici ce que des examens répétés et 
variés nous ont montré. Le b. coli possède toujours moins de 
flagelles que le b.typhique, le maximum est d'ordinaire 6, excep- 
tionnellement 8 ou 10. Dans le b. typhique, au contraire, les 
flagella sont toujours plus abondants, et il est fréquent d’en 
rencontrer 410 ou 12. D'autre part, les cils du b. coli sont bien 
plus fragiles que ceux du b. typhique. En somme, ilnous semble 
facile de reconnaître les deux organismes lorsque leurs flagella 
ont élé colorés dans les mêmes conditions ; il serait moins aisé 
de distinguer une culture jeune de b. coli d’une culture ancienne 
de b. typhique. 

30 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA ET LES VIBRIONS 


Par EL. METCHNIKOFF 


DEUXIÈME MÉMOIRE 
SUR LA PROPRIETE PATHOGÈNE DES VIBRIONS 


I 


APERÇU DES DERNIÈRES ACQUISITIONS SUR LA MICROBIE 
DU CHOLÉRA. 


Les méthodes perfectionnées, qui permettent de mettre en 
évidence le bacille virgule, ont en même temps appris qu'il est 
souvent très difficile de distinguer ce microbe d'autres vibrions. 
Grâce à ces mêmes méthodes, le nombre des vibrions cultivables 
sur gélatine s’est beaucoup accru. On en a trouvé plusieurs 
dans les déjections humaines et dans l’eau. Rien que dans l’In- 
stitut pour l'étude des maladies infectieuses, à Berlin, on a découvert 
dans l’eau presque une douzaine d'espèces vibrioniennes. 

On comprend facilement que dans ces conditions le diagnostic 
du bacille virgule devient de plus en plus difficile. Tandis que le 
diagnostic bactériologique de la tuberculose, de la pneumonie 
fibrineuse et de tant d’autres maladies peut être fait par chaque 
bactériologue, la détermination du bacille virgule dans les 
déjections et dans l’eau réclame de plus en plus des savants 
particulièrement exercés. M. Flugge' avoue, dans une récente 
publication, que la distinction entre le bacille virgule et les 
espèces voisines n’est pas du tout chose facile. Les différences 
se bornent quelquefois (comme avec le Vibrio Metchnikovi) 
au degré de virulence pour certains animaux d'expérience. 
M. Koch: conseille à qui n'est pas maître dans le diagnostic 
du choléra de renoncer à ce travail. En effet, la publication où 


1. Zeitschr. f. Hyg., V, x1v, 1893, p. 159. 
2, Ib., p. 338. 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. )63 


M. Koch donne ce conseil démontre de la façon la plus claire 
les difficultés considérables qu’on doit surmonter. Les caractères 
qui étaient autrefois signalés comme spéciaux au bacille virgule, 
tels que la forme des bactéries, leur mobilité, leur manière de 
végéter dans la gélatine, ne suffisent plus maintenant, M. Koch 
décrit lui-même un cas de choléra dans lequel les bacilles vir- 
gules liquéfiaient si peu la gélatine que les colonies se présen- 
taient sous forme de boucliers. D'un autre côté, dans le vibrion 
de Massaua, nous avons un exemple d'un bacille virgule qui 
liquéfie la gélatine beaucoup plus que les formes typiques. 
Aussi M. Koch abandonne comme inutiles les cultures par 
piqûre dans la gélatine. L'examen des gouttes suspendues devient 
également très peu important, parce qu’ilaété démontré que des 
bacilles virgules incontestables peuvent être complètement 
dépourvus de mobilité, tandis que d’autres vibrions peuvent 
être très mobiles. 

La forme des vibrions est de même très variable. A côté des 
vibrions recourbés et épais, on trouve des formes sveltes et 
minces, quelquefois à peine incurvées. M. Friedrich! a signalé 
une variété (Shanghaï) qu'on pourrait confondre avec un vrai 
bacille et une autre (Malte) qu’on prendrait plutôt pour un cocco- 
bacille. 

M. Friedrich a aussi décrit les différences que présentent les 
colonies développées sur les plaques de gélatine. En réalité, ces 
différences sont encore plus marquées. On trouve des bacilles 
virgules quiliquéfient la gélatine à 10 0/0 ettrès ferme, beaucoup 
plus que les formes ordinaires, et donnent des entonnoirs rem- 
plis d’une masse de culture uniformément trouble. 

N’attachant plus qu’une valeur diagnostique secondaire à 
tous ces caractères, M. Koch, dans son nouveau mémoire, 
insiste surtout sur la réaction de l’indol et sur la virulence pour 
les animaux. Mais ces deux caractères sont tout aussi peu 
stables que les précédents. La coloration rouge que prennent 
les cultures de bacilles virgules dans de l’eau peptonisée alcaline, 
lorsqu'on ajoute un acide, présente une grande variabilité. A 
côté de races qui donnent une coloration rose très prononcée, il 
y en a d’autres, qui sont des vibrions cholériques incontestables, 


4. Arbeit. d. Kais. Gesundh., 1892, 


964 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR 


et qui, dans les mêmes conditions, ne donnent presque pas la 
réaction de l’indol. D'un autre côté, le vibrion de Gamaleïa 
(V. Metchnikovi), que M. Koch a eu tort d’exclure de son examen, 
présente la même coloralion rose-solférino qui est propre à 
plusieurs variétés du bacille virgule. 

Mais, de tous les caractères, celuiqui offre la moindre stabilité 
est sûrement la virulence. M. Koch ne se décide à reconnaitre 
un vibrion comme cholérique que dans les cas où il présente, 
à côté de la réaction de l’indol, une virulence considérable pour 
le cobaye. Or, dans ces conditions on peut accepter comme 
cholérique le vibrion de Gamaleïa, et refuser la nature cholé- 
rigène à des vibrions assurément cholériques, mais dépourvus 
de virulence pour les auimaux de laboratoire. Les expériences 
que nous relaterons dans ce mémoire prouvent le danger d’une 
pareille interprétation. 

Les détails fournis dans le manuel de M. Petri! ne permettent 
pas non plus de distinguer le vibrion du choléra d'une façon 
précise et nette. Après avoir indiqué la grande analogie de 
celui-ci avec le vibrion de Gamaleïa, M. Petri croit pouvoir les 
distinguer par la plus grande liquéfaction de la gélatine et le 
trouble homogène des colonies sur plaques du V. Metchnikovi. 
Mais certaines variétés du vibrion eholérique, telles que le 
v. de Massaua, présentent les mèmes particularités au point de 
vue de la croissance sur gélatine, 

On savait déjà depuis longtemps que l’organisme de l’homme 
et des animaux renferme un grand nombre de spirilles et de 
vibrions variés, plus ou moins analogues au bacille virgule. 
Mais on se contentait toujours de signaler comme différence 
essentielle que ces microbes ne poussent pas sur les milieux 
nutritifs ordinaires. Il ne faut pas oublier cependant que la crois- 
sance des vibrions, mélangés avec d’autres bactéries, présente 
de grandes variations. Au début du choléra, le bacille virgule 
pousse si bien sur la gélatine qu'il envahit les plaques entières. 
A la fin de la maladie, c’est lui, au contraire, qui cède la place à 
d’autres microbes. On observe quelquefois que le vibrion cholé- 
rique se développe encore assez bien sur des milieux spéciale- 
ment appropriés, mais, semé sur gélatine, il refuse de pousser. 


4. Der Choleracurs. Berlin, 1893, p.32. 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 565 


Lorsqu'on sème les déjections non cholériques sur des pla- 
ques de gélatine, ce sont surtout les bacillus coli et d’autres 
microbes non liquéfiants qui se développent. Mais les mêmes 
déjections, abandonnées pendant des semaines et semées ensuite, 
donnent naissance à un grand nombre de bactéries liquéfiantes. 
Parmi ces dernières, il se rencontre des vibrions recourbés, 
liquéfiant même la gélatine moins que le bacille virgule typique, 
et présentant en général la plus grande analogie avec le vibrion 
cholérique. Ainsi nous avons retiré des déjeclions d’une per- 
sonne bien portante, sujette à la constipation habituelle, des 
vibrions très semblables au bacille virgule de Koch. Dans ce cas, 
il ne pouvait être question d’un rapport quelconque avec le 
choléra. Les déjections avaient été provoquées par un purgatif, et 
cela à Paris, en hiver, en dehors de toute épidémie cholérique, 
chez une personne qui ne buvait que de l’eau minérale ou de 
l’eau stérilisée, et qui n'avait en aucune façon affaire avec le 
choléra. 

Il paraît que la même trouvaille a été faite à l'Institut de 
M. Koch. A la fin de son mémoire sur le diagnostic du choléra, 
nous trouvonsle passage suivant : « Dansles déjections humaines, 
ces vibrions paraissent être extrêmement rares et ne se trouvent 
probablement jamais en grande quantité. » Il s’agit de vibrions 
que leurs cultures sur gélatine et gélose rapprochent de ceux 
du choléra, mais qui ne donnent pas la réaction de l’indol et ne 
sont pas pathogènes pour les animaux. Comme ces deux carac- 
tères ne sont pas du tout dilférentiels, on voit bien la difficulté 
que peuvent présenter ces cas au point de vue du diagnostic. 

Plus fréquente encore est la rencontre de semblables vibrions 
dans les eaux. Comme il n’existe pas de moyens sûrs et faciles 
pour les séparer en espèces, l'arbitraire peut se glisser facilement 
dans l'interprétation de leur valeur étiologique. 

Somme toute, la différenciation du vibrion cholérique, si 
facile dans les cas ordinaires, peut présenter cependant, dans des 
cas particuliers, des difficultés très grandes. Dans l’état actuel de 
la bactériologie, les vibrions ne se présentent pas comine des espèces 
bonnes et bien définies, mais forment un groupe de formes très variable 
et bigarré, dans lequel il est souvent très difficile de S'orienter. 


266 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


IT 


PROPRIÉTÉS PATHOGÈNES DU VIBRIO TYROGENUS (DENEKE). 


Beaucoup de fromages sont un terrain favorable au dévelop- 
pement de vibrions très semblables au bacille virgule. Cette 
découverte a été faite par M. Deneke ‘ à Gættingen, qui trouva 
dans un vieux fromage un vibrion dont la forme et les cultures 
présentaient une grande analogie avec le microbe cholérique. 
Dans les traités de bactériologie, on insiste sur la forme ronde 
des jeunes colonies sur plaques de gélatine, qui serait distinclive 
du vibrion de Deneke. Mais ce caractère n’a pas plus d'impor- 
tance que celui tiré de la liquéfaction de la gélatine, liquéfaction 
plus prononcée avec ce vibrion qu'avec le bacille virgule de Koch. 
L'absence de la coloration rouge (réaction de l’indol) est aussi 
citée comme caractère différentiel pour le vibrion de Deneke. 

Parmi les fromages que j'ai étudiés, le Brie surtout se dis- 
tingue par l'abondance des vibrions dans son écorce rouge si 
caractéristique. J'y ai trouvé deux formes, une qui donna des 
colonies brunes liquéfiant la gélatine beaucoup moins que le 
vibrion de Deneke, et aussi sensiblement moins que beaucoup de 
variétés de vibrions du choléra; et une autre à colonies jaunes, 
qui liquéfient la gélatine comme le v. de Deneke. Les jeunes 
colonies sur plaque de la variété brune ont des contours ondulés 
et sous tous les rapports ressemblent au bacille virgule. 

Comme l’intoxication par le fromage n’est pas du tout chose 
rare, il était naturel de se demander si elle n’est pas due au 
développement de vibrions pathogènes. Et cela d'autant plus que 
le tableau clinique de cette intoxication ressemble singulièrement 
à celui du choléra. Vomissements, diarrhée aqueuse, crampes 
constituent les symptômes communs aux deux maladies *. Dans 
un fromage toxique de Livourne, M. Malenchini * a trouvé, entre 
autres bactéries, le vibrion de Deneke. 

Le fait que le vibrion de Deneke est pathogène pour les 
animaux rend encore plus probable l'hypothèse de son rôle dans 


4. Deutsche medic. Wochensehr., 1885. 

1. V. pour les cas d'intoxication par le fromage les Schmidl's Jarbücher, 1858, 
t. 19, p. 238 ; 1839, t. 21, p. 162; 1842, t. 34, p. 155, 1851, t. 69, p. 470 ; 1863, t. 120, 
p. 299; 1885, t. 208, p. 116; 1887, t. 215, p. 248. 

2, Bolletino chimico pharmac., 15 octobre 1892. 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 567 


l’empoisonnement par le fromage. Il a été constaté à plusieurs 
reprises que ce microbe, introduit dans l’estomac de cobayes 
d'après la méthode de Koch (alcalinisation préalable et injection 
intrapéritonéale d’opium), provoque une maladie mortelle, 
M. Hüppe * a pu donner la maladie mortelle à des cobayes en 
leur injectant des cultures du v. de Deneke dans le péritoine, 

Tout récemment, M. Kasanky* a établi que le vibrion de 
Deneke est pathogène pour le pigeon. Une culture dans du bouil- 
lon, injectée dans le muscle pectoral à la dose de 1 c. c., tue le 
pigeon avec des phénomènes de seplicémie. 

Dans mes expériences, le vibrion de Deneke, cultivé depuis 
plusieurs années dans le laboratoire, et provenant en dernière 
instance de la culture originale de M. Deneke, s’est montré viru- 
lent pour le cobaye et le pigeon. Un cobaye de 350 grammes est 
mort en six heures à la suite de l'injection, dans le péritoine, du 
liquide trouble, obtenu en délayant dans un peu d’eau une demi- 
culture sur gélose, faite à 36° et âgée de 20 heures. L’exsudat 
péritonéal abondant renfermait une masse de vibrions libres et 
mobiles, el ne contenait que peu de leucocytes. Un quart de la 
même culture, injecté dans la cavité abdominale, a également 
tué un cobaye de 355 grammes, mais la mort est survenue plus 
tard et les phénomènes de la réaction phagocytaire étaient 
beaucoup plus manifestes que dans le premier cas. 

L'injection du vibrion dans les muscles de la cuisse de 
cobayes provoque une tuméfaction considérable sans, toutefois, 
amener une maladie grave ou la mort des animaux. L'introduc- 
tion de 7/8 d’une culture de vibrion de Deneke sur gélose dans 
la veine auriculaire d'un lapin n’a pas été suivie d’effet. Par 
contre, une culture sur gélose, injectée dans le muscle pectoral 
d'un pigeon, a provoqué une septicémie, terminée par la mort 
au bout de 7 heures. 

Afin d'établir si le vibrion de Deneke, dont la virulence pour 
les animaux se rapproche de celle du bacille virgule, était patho- 
gène pour l’homme, j'ai fait l'expérience suivante. Après avoir 
bu, à jeun, une solution de un gramme de bicarbonate de soude, 
dans l’eau, j'ai avalé un quart de culture du vibrion de Deneke 


4. Berl. Klin. Woch., 1892, et 17. 
2. Wratch, 1893, p. 495. 


D68 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sur gélose, âgée de 21 heures, et développée à 36°. L'effet patho- 
gène a été pour ainsi dire nul. 

Après avoir ainsi établi qu'un quart de culture était inoffensif 
pour l’homme, j'ai donné à M. D... (après qu'il eut ingéré 50 c. c. 
d’eau distillée renfermant un gramme de bicarbonate de soude), 
une demi-culture du V. D. sur gélose, âgée de 17 heures et 
demie et développée à 36°. La personne qui s’est soumise à l’ex- 
périence était un jeune homme de 17 ans (pesant 95 livres): 
malgré cela, l'effet de l'injection du vibrion a été purement 
négatif. 

On serait tenté de déduire de ces expériences l’innocuité com- 
plète du vibrion de Deneke pour l’homme. Et, cependant, cette 
conclusion ne serait point exacte. Dans deux autres expérien- 
ces, où les personnes ont ingéré une culture entière du V. D., 
celui-ci a produit une certaine action pathogène. 

M. K... a avalé (2 heures et quart après le déjeuner) d’abord 
50 c. c. d’une solution de bicarbonate de soude à 2 0/0 et, aussi- 
tôt après, une culture entière du V. D. sur gélose, en suspension 
dans 4 c. c. de bouillon {culture de 22 heures développée à 36°). 
Quelques heures plus tard, M. K... a éprouvé un malaise, accom- 
pagné de fièvre. 5 heures après l’ingestion des vibrions, la tem- 
pérature axillaire monta jusqu'à 38,1. Pendant la nuit, M. K...a 
été réveillé par le besoin d'aller à la garde-robe. Il s’ensuivit 
une selle abondante, liquide et fétide, qui n'avait été accompa- 
gnée ni de coliques ni de ténesme. Dans la journée, l’état géné- 
ral se rétablit. 26 heures après le début de l'expérience, il se 
produit une seconde selle molle, mais déjà moulée. La maladie 
n'a donc été que de courte durée. 

Une autre personne, M. E..., a bu le matin à jeun 50 c. c. 
d’une solution de bicarbonate de soude à 2 0/0 et, aussitôt après, 
une culture entière du V. D. sur gélose (âgée de 17 heures 30 mi- 
nutes et développée à 36°), en suspension dans du bouillon. A la 
fin de la journée, M. E... a ressenti du gargouillement dans le 
ventre, et, le lendemain, il a eu des coliques qui ont cessé après 
une défécation normale. Le surlendemain, il a été réveillé par 
de fortes coliques, qui ont duré presque toute la journée. Il ne 
s’est pas cependant produit de la diarrhée, et bientôt l’état rede- 
vint complètement normal. 

Ces expériences démontrent que, pris à forte dose, le vibrion 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 569 


de Deneke peut être pathogène pour l'homme. Il n'y a doncrien 
d'improbable dans l'hypothèse que les intoxications choléri- 
formes par le fromage puissent être dues à des vibrions, si, par 
hasard, il s’en développe une variété plus active que celle de 
Deneke. Les recherches ultérieures éclairciront peut-être cette 
question. 


III 


PROPRIÉTÉS PATHOGÈNES DU VIBRIO PROTEUS (FINKLER ET PRIOR). 


L'histoire du vibrion de Finkler et Prior est très obscure. Tan- 
dis que ses auteurs affirment l’avoir trouvé dans toute une série 
de cas d’une épidémie bénigne, survenue à Bonn en 1885, plu- 
sieurs autres savants, notamment M. Koch, insistent sur le fait 
que ce vibrion n’a été trouvé qu’une seule fois, dans des selles 
d'un malade atteint de gastro-entérite aiguë, conservées pendant 
longtemps en dehors de l'organisme. Retrouvé par M. Kuisl dans 
le cæcum d’un suicidé, le vibrion de Finkler et Prior présente 
une analogie incontestable avec la virgule cholérique, bien qu’il 
ressemble moins à celle-ci que le vibrion de Deneke. 

Il a déjà été établi par M. Koch et ses élèves que le vibrion 
de Finkler est pathogène pour le cobaye, si on l’introduit dans 
l'estomac d’après la méthode de Koch. Plus tard M_R. Pfeiffer ! a 
prouvé qu'inoculé dans la cavité péritonéale des cobayes, le 
vibrion de Finkler leur donne une maladie mortelle. Seulement, 
pour obtenir ce résultat, il fallait employer une quantité de 
culture plus forte que celle utilisée dans les expériences avec 
le vibrion cholérique. M. Hueppe a donné la mort à des cobayes 
en leur injectant à peu près la même dose de culture dans le 
péritoine. 

Dans mes expériences, je me suis servi de vibrions provenant 
de la culture originale de Finkler et Prior, et cultivés pendant 
plusieurs années à l’Institut Pasteur, sans qu'on ait fait de 
passages par l'organisme animal. Le vibrion a manifesté des 
propriétés pathogènes pour le cobaye et le pigeon, mais sa 
virulence a été un peu moindre que celle du vibrion de Deneke. 
Les cobayes, inoculés dans le péritoine avec un huitième et 


4. Zeitschr. f. Hyg., 1892, t. XI, p. 408. 


910 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


un quart de culture sur gélose, âgée de 20 heures (et développée 
à 36°), ont résisté, et ce n’est qu’à la dose d’une demi-culture 
que les vibrions ont été mortels pour les cobayes. Injectés dans 
les muscles de la cuisse, les vibrions n’ont provoqué qu'un 
gonflement de l'extrémité, non accompagné de troubles géné- 
raux. Les pigeons, inoculés dans le muscle pectoral avec une 
émulsion d’une cullure entière sur gélose, meurent avec des 
signes de septicémie aiguë. Par contre, un lapin, auquel j'ai 
injecté 3/4 de culture dans ia veine de l'oreille, a résisté sans 
présenter de troubles sérieux. 

L’autopsie des cobayes et des pigeons a présenté tous les 
phénomènes déjà bien décrits, et qui suivent l'injection intra- 
péritonéale et musculaire du vibrion cholérique. L’exsudat 
péritonéal des cobayes renferme, dans la plupart des cas, très 
peu de leucocytes et une grande quantité de vibrions libres et 
très mobiles. Il suffit de faire cette constatation pour conclure 
que ce sont des bactéries bien vivantes qui produisent les 
substances toxiques, nécessaires pour tuer le cobaye. L'hypo- 
thèse d’après laquelle cet effet serait produit par les cadavres 
des vibrions doit être complètement rejetée. 

Je passe aux expériences sur l'homme. Cinq semaines après 
avoir bu sans résultat une émulsion du vibrion de Deneke. 
j'ai avalé à jeun (après avoir pris À gramme de bicarbonate de 
soude dissous dans 40 ce. c. d’eau distillée) l’émulsion dans 
du bouillon d’une culture entière du vibrion de Finkler sur 


gélose. Cette culture a été faite avec le sang d’un cobaye de 


605 grammes (mort en 6 heures et demie après une injection 
intrapéritonéale d’une culture du même vibrion), et est restée 
pendant 14 heures à 36°. L'effet a été complètement nul. 

Dans une seconde expérience, M. P... a bu d’abord 50 c. c. 
d’une solution de bicarbonate de soude à 2 0/0, et aussitôt après 
une émulsion dans du bouillon de la moitié d’une culture du 
V.F. sur gélose, développée pendant 19 heures et 40 minutes 
à 36°. Le lendemain, M. P... a ressenti un peu de coliques. Le 
surlendemain, les coliques sont devenues plus fortes et ont été 
accompagnées de trois selles plus liquides que d'habitude. 
Bientôt après, l’état est redevenu normal. 

Le vibrion de Finkler, comme celui de Deneke, peut donc 
occasionner quelques troubles intestinaux chez homme. Quoi- 


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« 


COOP 


nl 7 4", de 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. d71 


qu'il soit bien établi que le choléra nostras en général n’est point 
lié à la présence de ce microbe, il est possible que dans certains 
cas de cette maladie (qui certainement ne représente pas une 
unité morbide) le vibrion de Finkler joue le rôle d’agent 
pathogène. 


EV 


PROPRIÉTÉS PATHOGÈNES DU VIBRIO METCHNIKOVI. (GAMALEIA.) 


De tous les vibrions qui liquéfient la gélatine dans les 
conditions ordinaires, le vibrion de Gamaleïa est le plus virulent 
pour les animaux. Les travaux de M. Gamaleïa et d’un grand 
nombre d’autres observateurs ont suffisamment démontré que 
ce microbe est très pathogène pour le cobaye, qu’il tue même 
en injection sous-cutanée, el pour le pigeon. Les poulets et les 
lapins sont moins sensibles, mais peuvent également mourir à 
la suite de son introduction dans l’organisme. 

Je peux donc me borner à relater mes expériences sur 
l’homme. Comme je n’avais éprouvé aucun effet après avoir 
avalé les vibrions de Deneke et de Finkler, j'ai renoncé à ingérer 
le vibrion de Gamaleïa, me considérant comme trop indemne 
vis-à-vis de ces microbes. 

Mais deux autres personnes se sont soumises à l'expérience. 
M. Gr... a bu dans des conditions favorables (deux heures après 
un petit déjeuner et aussitôt après l’ingestion de 50 c. c. d’une 
solution de bicarbonate de soude à 2 0/0), la suspension dans 
4 c. c. de bouillon stérile d’un tiers d’une culture du vibrion de 
Gam. sur gélose, développée pendant 23 heures à 36°. Un autre 
tiers de la même culture a été injecté dans le muscle pectoral 
d’un pigeon de 322 gr., et le tiers restant a été introduit sous la 
peau d’un cobaye de 380 gr. Ce dernier mourut au bout de 
5 heures avec les signes d'une infection des plus aiguës. Il ne 
s’est pas formé chez lui d’œdème cutané, mais bien un exsudat 
séreux dans la plèvre et le péritoine. Cet exsudat ne renfermait 
presque pas de leucocytes, mais contenait une masse 
de vibrions mobiles. Le pigeon mourut 8 à 9 heures après 
l'inoculation, présentant le tableau d’une septicémie généralisée. 

Malgré ja virulence du vibrion pour les animaux mention- 


572 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


nés, M. Gr. n’a ressenti aucun malaise. Sa santé a continué à 
ètre parfaite. 
Dans une seconde expérience, l'effet a été aussi nul, quoique 
M. C.. ait avalé (avec les mêmes précautions que dans toutes 
mes expériences sur l’homme) deux tiers d’une culture de V. M. 
sur gélose, développée pendant 19 heureset 45 minutes à 36°. La 
culture était de même origine que celle qui a servi à M. Gr. 
Ces résultats ne sont pas en contradiction avec l’assertion de 
M. Gamaleïa, à savoir que le vibrion qu'il a découvert peut 
engendrer le choléra nostras chez l’homme’. D'ailleurs, cette 
affirmation n’a pas été accompagnée de preuves suffisantes. 


y 
PROPRIÉTÉS PATHOGÈNES DU VIBRIO CHOLERÆ (KOCH). 


Comme je l’aidéjà ditaucommencementde cet article etcomme 
cela a étéconstaté par un grandnombre de chercheurs, la virulence 
du vibrion cholérique est très variable. On cite souvent, comme 
mesure de cette propriété, la donnée fournie par M. R. Pfeiffer, 
d’après laquelle un vingtième d’une culture fraîche sur géiose, 
pesant 1,5 mg., suffirait pour tuer par voie intrapéritonéale 
un cobaye de 300-350 gr. Mais ce résultat se rapporte au vibrion 
de Massaua, recueilli par M. Pasquale et connu par sa virulence 
exceptionnelle. Ce vibrion est très pathogène ; même inoculé 
sous la peau il tue les cobayes ; il fait aussi périr les lapins et 
les pigeons. Dans mes expériences‘, 1/12 d’une culture surgélose 
(âgée de 20 heures et cultivée à 36°), introduit dans le péritoine 
de cobayes de 300 à 400 gr., les tuait en 12 et 15 heures. Un 
sixième de la même culture suffisait pour donner la mort à des 
cobayes par inoculation hypodermique. Des cultures du vibrion 
de Massaua dans du bouillon peptonisé étaient aussi mortelles 
pour les cobayes, à la dose de 1 ce. c. dans le péritoine, ou de 2 c. e. 
sousla peau. Des cultures préparées dans l'eau peptonisée, renfer- 
mant2 à 5 0/0 de gélatine, étaient plus virulentes encore: des frac- 
tions de centimètre cube injectées dans le derme suffisaient pour 

4. Annales de l'Institut Pasteur, 18388. 


2. Le vibrionde Massaua, dont je me suis servi, m'a été obligeamment envoyé 
par M, Sanarelli et provient de la culture originale de M. Pasquale. 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 573 


tuerles cobayes adultes. Même des cultures anciennes du vibrion 
de Massaua, faites dans du bouillon de thymus préparé d'après 
les indications de Wooldridge et de MM. Brieger, Kitasato et 
Wassermann, conservaient leur grande virulence. 

Mais la virulence du vibrion de Massaua ne peut pas servir 
de type pour toutes les variétés du vibrion cholérique. Il est 
vrai que dans ces derniers temps on a trouvé aussi en Europe 
des bacilles virgules doués d’une très forte propriété pathogène. 
Ainsi M. Wyssokowitcht a isolé à Charkoff un vibrion cholérique 
dont 0,5 à 1 c. c. d’une culture en bouillon, âgée de 24 heures, 
suffisait pour tuer des lapins par voie sous-cutanée. Cette viru- 
lence exceptionnelle ne s’est pas conservée longtemps : trois 
mois plus tard, il fallait des quantités 5 à 10 fois plus grandes pour 
obtenir le même résultat. M. Sawtchenko* a pu constater que 
les vibrions cholériques, isolés du contenu intestinal lors de 
l'épidémie de Kieff,en 1892, avaient des virulencestrès différentes. 
A côté de variétés mortelles pour les pigeons, il en a trouvé d’au- 
tres, inoffensives pour cetteespèce. Toutrécemment M. Vincenzis 
a étudié un vibrion, isolé par M. Weiïchselbaum d’un cas de 
choléra à Vienne, el remarquable par sa grande virulence pour 
le pigeon et le cobaye. 

On peut donc tirer cette conclusion générale que même les 
vibrions cholériques récemment isolés du contenu intestinal se 
distinguent par une grande variabilité de leur virulence. Cette 
fonction ne peut donc être considérée comme une qualité stable 
et constante. É 

Les cultures du bacille virgule, entretenues pendant un cer- 
tain temps dans les laboratoires, fournissent une nouvelle sreuve 
de cette instabilité. Certaines d’entre elles, comme, par exemple, 
le vibriou de Massaua, conservent leur grande virulence même 
après une période très longue de culture en dehors de l’orga- 
nisme. On peut encore augmenter l’activité de ce microbe. Dans 
les cultures faites à 35-38° dans une eau peptonisée à 5-10 0/0 et 
contenant en outre de 2 à 5 0/0 de gélatine, ce vibrion devient très 
toxique et virulent. Des passages à travers des cobayes vaccinés 
ont encore augmenté ces propriétés. M. Klemperer ‘ a renforcé 


Wratch, 1893, p. 461. 

. Ibid., p. 26. 

. Archivio per le scienze mediche, 1895, t. XVII, p. 437. 

. Verhandlungen des XII Congresses f. innere Medicin, 1893, p. 65. 


RO 


+ © 


D714 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


le microbe de Massaua à tel point qu'une goutte de culture en 
bouillon, âgée de 24 heures, injectée dans le péritoine, tue sûre- 
ment un cobaye de 300 grammes. 

D'un autre côté, il existe des variétés de vibrions cholériques 
incontestables qui se distinguent par leur faible virulence pour 
les espèces animales. Tel est le vibrion du choléra de Paris, 1884. 
Je possède des cultures de ce microbe, grâce à l’obligeance de 
M. Chantemesse, qui l’a isolé et entretenu depuis lors dans son 
laboratoire. 

Une culture entière de ce vibrion sur gélose, développée pen- 
dant 20 heures à 36°, injectée dans la cavité péritonéale d’un 
cobaye de 415 grammes, ne luia même pas donné d’hyperthermie 
ni d'hypothermie passagère (temp. 5 heures après l’inoculation, 
38,4; 2 heures plus tard, 39,0; 10 heures après le début de 
l'expérience, 39,2). Le cobaye a supporté cette dose énorme de 
vibrions sans le moindre trouble dans sa santé. Parmi trois autres 
cobayes qui reçurent dans le péritoine 1/2, 1/4 et 1/8 des mêmes 
cultures, celui qui a reçu 1/4 de culture (poids 467 grammes) a 
succombé 25 heures après l’inoculation, avec très peu de vibrions 
dans l’exsudat et des signes d’une forte réaction leucocytaire. 
Deux autres cobayes (de 497 et 465 grammes) ont survécu et 
n’ont pas présenté de troubles. Les lapins sont aussi insensibles 
à l'injection intraveineuse de grandes quantités de cultures sur 
gélose du vibrion de Paris, 1884. 

Les cultures des vibrions cholériques que j'ai étudiés au point 
de vue de la virulence peuvent être rangées entre les deux 
extrèmes cités : le vibrion de Massaua et celui de Paris, 1884. Je 
ne mentionnerai ici que le résultat des expériences avec trois 
sortes de cultures : 1° le vibrion de Hambourg, isolé pendant 
l'épidémie de 1892; 20 celui de Courbevoie, isolé par M. Netter 
chez Mie L..., qui a eu une attaque de choléra grave, terminée par 
la guérison, au mois de juillet 1892. Je dois ces deux vibrions à 
l'obligeance de M. le professeur Netter; 30 choléra du laboratoire 
de l’Institut Pasteur, qui m'avait été fournie en octobre 1892 par 
M. Haffkine. 

Les cultures du vibrion de Hambourg sur gélose, dévelop- 
pées pendant 16 heures à 360, tuent des cobayes de 320 à 
415 grammes à partir d’une demi-cullture. Le vibrion de Cour- 
bevoie est plus virulent : un quart de culture sur gélose (déve- 


MP AT Us Lu Le LOIRE 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 915 


loppée pendant17"à36°)suffit pour tuer un cobaye de 570 grammes. 
Ce vibrion est aussi mortel pour le pigeon (3/4 de la même cul- 
ture dans le muscle pectoral)et le lapin (1/2 culture dans la veine 
de l'oreille). Le V. du choléra de M. Haffkine présente une viru- 
lence un peu moindre; 1/3 de culture (préparée dans les mêmes 
conditions) tue sûrement un cobaye adulte; 1/4ne le fait pas périr 
dans tous les cas. Injecté à la dose de 3/4 de culture fraîche dans 
le muscle pectoral du pigeon, il ne lui a donné qu'un malaise 
passager. 

J’insiste sur ces particularités de la virulence, non seule- 
ment pour fournir des documents en faveur de la variabilité de 
cette propriété, mais surtout pour servir de guide dans l’appré- 
ciation des expériences faites sur l’homme avec ces trois variétés 
de vibrions. 

Deux jours après avoir avalé sans effet le vibrion de Finkler 
et Prior, lorsque je pouvais être encore sous l'influence de ce 
microbe, j'ai absorbé (aussitôt après avoir bu 1 gramme de bicar- 
bonate de soude dans 40 c. c. d’eau distillée) une émulsion dans 
du bouillon stérile d’une demi-culture du vibrion de Hambourg. 
Ce microbe avait été cultivé sur gélose pendant 2 jours à 56°, et 
conservé pendant 16 jours à 18-200. La culture renfermait, à côté 
de vibrions et de spirilles, beaucoup de corps ronds, et, réense- 
mencée sur la gélose, elle donna une culture abondante déjà au 
bout de peu d'heures. L’ingestion des vibrions a été faite 2 heures 
après le déjeuner du matin. 

L'autre moitié de la même culture a été avalée exactement 
dans les mêmes conditions par mon aide de laboratoire M. Latapie. 
Ni ce dernier, bien qu'il soit très sujet à des indigestions, ni 
moi ne uous sommes nullement ressentis de la présence d’une 
quantité immense de vibrions cholériques vivants dans notre 
corps. Les selles étaient normales pendant toute la semaine 
qui suivitl'injection, et l'examen le plus minutieux ne me permit 
pas d'y découvrir des bacilles virgules. 

Huit jours après cette première expérience avec le vibrion 
de Hambourg, nous nous sommes soumis à une seconde. 
M. Latapie et moi nous avons ingéré, 2 heures après le 
déjeuner du matin et aussitôt après avoir bu 1 gramme de 
bicarbonate de soude dissous dans 40 c. c. d’eau distillée, une 
demi-culture du vibrion de Hambourg, développée sur gélose 


D76 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


pendant 24 heures à 35°, et conservée dans une armoire obscure 
à 48-20° pendant 6 jours. La culture, mélangée avec du bouillon 
stérile, a donné une suspension très trouble. Cette fois-ci, comme 
dans toutes mes autres expériences, nous ne nous étions soumis 
à aucun régime particulier. Je mangeai beaucoup de végétaux 
crus (radis, salade, concombres, fraises) comme d'habitude. Mais 
malgré ce manque de précautions, aucun de nous ne fut malade 
à la suite de l'infection par les vibrions. Ce n’est qu’à la fin de 
la sixième journée que M. L... et moi ressentimes du gargouil- 
lement dans le ventre el un certain malaise. Le lendemain matin, 
cet état s’est accentué chez moi, et il s'établit un peu de déran- 
gement intestinal. Ce même jour, 2 h. 20 minutes après le pre- 
mier déjeuner, j'absorbais 50 c. c. d’une solution aqueuse de 
bicarbonate de soude à 2 0/0, et aussitôt après la suspension dans 
4 c. c. de bouillon stérile d’un tiers de culture du vibrion de 
Hambourg sur gélose. Cette culture avait été semée 17 heures 
avant, et maintenue pendant tout ce temps à 36°. Sur les prépa- 
rations microscopiques, on pouvait constater des masses de 
vibrions caractéristiques et très peu de corps sphériques. 

Le second tiers de la même culture a été avalé par M. Latapie, 
et le troisième par M. Gr., qui, auparavant, n'avait absorbé 
qu'un tiers d’une culture du vibrion de Gamaleïa. L'ingestion a 
été faite avec les mêmes précautions que celles que j'avais prises 
(deux heares après le déjeuner et aussitôt après l’ingestion de 
50 c. c. d’une solution de bicarbonate de soude à 2 0/0). Dans 
cette expérience, deux entre nous avaient déjà subi l'effet de 
deux ingestions de cultures de Hambourg, tandis que M. Gr. se 
soumettait à l'influence du vibrion cholérique pour la première 
fois. 

Quelques heures après l’ingestion des vibrions, ma santé 
redevint brusquement tout à fait normale. Les jours suivants 
elle était également très bonne. Chez moi, ainsi que chez M. L..., 
il s'établit une tendance vers la constipation. Neuf jours après 
l’ingestion de la culture chez mon aide, il se manifesta une 
diarrhée de peu d'intensité qui dura pendant quelques jours. 
L'examen bactériologique de ses déjections montra la présence 
du bacillus coli et de quelques bactéries liquéfiant la gélatine, 
mais il ne se développa pas une seule colonie du bacille virgule. 
Cette diarrhée n’avait donc rien à faire avec les vibrions ingérés 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 577 


et ne présentait que le retour d’une de ces indigestions fréquentes 
qui avaient été suspendues pendant tout le cours des expériences 
avec le choléra de Hambourg. 

Il m'a été également impossible de découvrir le bacille virgule 
dans mes déjections. : 

Tandis que chez M. L... et moi qui avions absorbé le vibrion 
de Hambourg pour la troisième fois, il ne se manifesta aucune 
maladie, chez M. Gr. il s'établit une diarrhée due sûrement à 
l'influence des vibrions. Malgré que cette personne fût, en géné- 
ral, d’une santé parfaite et pas du tout sujelte à des indigestions, 
il se déclara, 16 heures après l’ingestion des vibrions, une 
diarrhée liquide. M. Gr. a été réveillé à 4 heures du matin par le 
besoin d'aller à la selle, sans éprouver ni de coliques ni d’autres 
troubles quelconques. Pendant le matin et la journée, il se pro- 
duisit quatre selles liquides, mais colorées, qui, quoique renfer- 
mant plusieurs espèces bactériennes, ne donnèrent sur des 
plaques de gélatine qu'une culture pure de bacilles virgules. Le 
jour suivant, il ne se produisit qu’une selle liquide, renfermant 
beaucoup de vibrions cholériques. Le quatrième jour après le 
début de l'expérience, il survint la première selle dure, dans 
laquelle on pouvait cependant retrouver des bacilles virgules. 
Sur des plaques de gélatine, faites avec ces déjections, 1l se 
développa beaucoup de colonies du bacillus coli et très peu de 
colonies vibrioniennes. Mais le lendemain les selles prirent de 
nouveau une consistance plus liquide et donnèrent sur plaque 
une quantité beaucoup plus grande de colonies du bacille virgule. 
À partir du sixième jour après l'ingestion des vibrions, l’état de 
M. Gx. redevint absolument normal. Pendant qu'il avait cette 
légère diarrhée, M. Gr. ne ressentit aucun trouble gastrique ni 
la moindre altération générale de sa santé. 

Quoiqu'il soit difficile de tirer des conclusions certaines d'un 
si petit nombre de faits, il paraît cependant résulter de cette 
expérience sur le vibrion de Hambourg que l’ingestion préalable 
de cultures âgées de plusieurs jours n’occasionne non seulement 
aucun trouble intestinal (ou autre), mais vaccine contre l’action 
diarrhéique de cultures jeunes du même microbe. D'un autre côté, 
il semble résulter que l’ingestion préalable du vibrion de Gama- 
leïa ne protège pas contre cette action du vibrion de Hambourg. 

Le fait de la vaccination par des cultures vivantes ingérées 


37 


218 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


concorde parfaitement avec l'observation de M. Hasterlik ‘. Des 
cultures du bacille virgule dans la gélatine, ingérées sans alca- 
linisation préalable de l’estomac, furent sans action sur M. Has- 
terlik. Plus tard, il n’éprouva non plus aucun effet à la suite de 
l’ingestion du même microbe, même après avoir préparél’estomac 
en avalant 1 gramme de bicarbonate de soude. Un collaborateur 
de M. Hasterlik, qui but d'emblée la même culture après alcali- 
nisation de l’estomac, eut une diarrhée moyenne. M. Gaffky * 
considère cette expérience comme la preuve que M. Hasterlik 
avait été vacciné par les cultures ingérées précédemment. 

Des tentatives de vaccination de l’homme par ingestion de 
cultures stérilisées du bacille virgule ont été entreprises d'abord 
par M. G. Klemperer *, et tout récemment par MM. Sawtchenko 
et Zabolotny ‘. Le premier de ces observateurs ingéra à plusieurs 
reprises une grande quantité (503 c. c.) de cultures de vibrion, 
stérilisées pendant deux heures à 70°. L’ingestion ne produisit 
aucun trouble apparent, et eut comme suite l'augmentation du 
pouvoir préventif du sang. Mais M. Klemperer pense que le 
temps très long qui a été nécessaire pour obtenir ce résultat 
présente un inconvénient trop grand pour que la méthode 
puisse être employée dans la pratique. 

MM. Sawtichenko et Zabolotny ont répété cetle expérience 
avec quelques modifications. Ils ont ingéré des cultures de 
vibrion, stérilisées à 60°-70°, et additionnées d’un 1/20/0 d’acide 
phénique. Dans un espace de plus d’un mois ils avalèrent 
2,318 gr. (Zabolotny) et 1,758 gr. (Sawtchenko) de résidu sec de 
cescultures. Bieutôt après, ces deux observateurs firent une expé- 
rience d’épreuve. Après avoir bu 100 c. c. d’une solution de 
bicarbonate de soude à 2 0/0, ils avalèrent 0,1 c. c. d’une 
culture du vibrion cholérique en bouillon, développée à 37° pen- 
dant 24 heures: 0,5 c. c. de la même culture suffisait pour tuer 
un lapin par injection intrapéritonéale. Les vibrions ingérés ne 
produisirent aucun effet nuisible. La fonction digestive continua 
à être normale, quoique les déjections reufermassent un nombre 
notable de bacilles virgules. 


4. Wiener Klinische Wochenschrift, 1893, p. 167. 

2, Verhandl. des XII Congr. f. inn. Medicin., 1893, p. 49. 
3. Berl. Klin. Woch., 1892, et 50. 

4, Wraich, 1893, p. 572. 


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RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. D79 


Le traitement préventif a duré trop longtemps pour pouvoir 
ètre pratique. En ce qui concerne le résultat fondamental, c’est- 
à-dire l'efficacité de la vaccination, il est très difficile de se faire 
un jugement, parce qu'on ne sail pas comment agirait la même 
dose de culture (0,1 ©. c.) avalée sans traitement préalable. 
MM. Sawtchenko et Zabolotny citent comme témoin M. Emme- 
rich, qui a eu une diarrhée cholériforme à la suite de l’ingestion 
de la même dose de culture en bouillon. Mais M. Emmerich a 
commis certains écarts de régime, ce que n’ont pas fait les deux 
savants russes. | 

Comme nous l’avons déjà dit dans notre premier mémoire, 
les inoculations sous-cutanées de cultures cholériques n’ont pas 
empêché M. Ferran lui-même, ni d’autres personnes men- 
tionnées par lui, d’avoir une diarrhée passagère après qu'ilseurent 
bu des cultures du bacille virgule. M. Pauli', bien qu'il ait été 
vacciné 13 fois (par voie hypodermique), a eu la diarrhée après 
avoir bu quelques gouttes de cultures de vibrions, et même sans 
saturation préalable de l’acide gastrique. Il paraît donc que 
celte méthode n’est point efficace. 

Dans le courant de nos recherches sur l’homme, deux per- 
sonnes ont ingéré un tiers de culture du vibrion de Courbevoie 
(dont la virulence pour les animaux a été spécifiée plus haut) 
sur gélose, développée pendant 19 heures 40 minutes à 36°. Une 
de ces personnes, M. G..., avait subi six mois et demi auparavant 
les deux inoculations préventives de M. Haffkine. La tempéra- 
ture monta après la première injection sous-cutanée à 38°,6. La 
seconde inoculation fut suivie d'une hyperthermie et de troubles 
généraux moins forts que la première. La personne en question, 
jeune homme de 21 ans, robuste (poids 130 livres), n'est sujette 
à aucun trouble des organes digestifs. Elle but, à jeun, 50 c.c. 
d’une solution de bicarbonate de soude à 2 0/0 dans de l’eau 
distillée, et aussitôt après un tiers d’une culture sur gélose en 
suspension dans du bouillon. Le lendemain se déclara une 
diarrhée liquide, accompagnée de quelques coliques, mais sans 
troubles généraux d'aucune sorte. Le jour suivant, la diarrhée 
insignifiante continua encore. Mais le lendemain elle fit place à 
la constipation. Le cinquième jour après l’ingestion de la culture, 


1. L’inocululion préventive contre le choléra. Paris, 1893. 


980 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


la diarrhée reprit un peu plus forte (trois selles dans la journée) 
elle était accompagnée d'un malaise général. Le sixième jour 
M. G... éprouva une faiblesse générale, avec absence d’ap- 
péut; la langue était chargée, et il se produisit une déjection 
très liquide et abondante, mais colorée. On administra 0,5 de 
calomel, en doses fractionnées; après quoi, il y eut encore deux 
selles liquides. Le lendemain matin il se produisit encore une 
évacuation liquide, mais l’état général s’améliora rapidement et 
M. G... guérit d’une façon définitive. L'examen bactériologique 
des déjections a démontré la présence de vibrions cholériques 
pendant cinq jours. Les deux premières journées, les selles 
diarrhéiques ne donnaient sur les plaques de gélatine que des 
cultures presque pures du bacille virgule. Le bacillus coli était 
très rare. Le cinquième jour {après le début de l'expérience), il 
ne se développait que peu de colonies vibrioniennes. Par 
contre, les plaques contenaient un grand nombre de cultures du 
B. coli, ainsi que d'une espèce de cocccbacille liquéfiant forte- 
ment la gélatine. Le jour suivant (recrudescence de la maladie), 
les vibrions cholériques prirent de nouveau le dessus sur les 
autres microbes ; les coccobacilles disparurent complètement 
des plaques. 

Une autre personne, M. S..., a bu un tiers de la même culture 
du vibrion de Courbevoie, el exactement dans les mêmes condi 
tions que M. G... Six mois et demi auparavant, elle aussi avait été 
inoculée par M. Haffkine. Mais l'effet de la première injection 
vaccinale (culture atténuée de M. Haffkine) avait été tellement 
douloureux et l’état général si troublé (la température monta au 
delà de 39°) que M. S... renonça à la seconde inoculation. 

Les quatre premières journées de l'expérience, M. S... se sen- 
tittrès bien, malgré une constipation, des gargouillements et des 
douleurs dans le ventre. Mais le cinquième jour il éprouva un 
malaise général et dut prendre un lavement à la glycérine. Une 
évacuation abondante n’amena pas la guérison. Dans la matinée 
et dans la journée suivante, il se déclara une diarrhée liquide et 
abondante et l’état général s’améliora. Le lendemain il se pro- 
duisit encore une évacuation liquide, après quoi la santé se 
rétablit parfaitement. Les selles normaies, évacuées le lende- 
main de l’ingestion des vibrions, ne donnèrent sur plaques de 
géatine que des colonies non liquéfiantes. Par contre, les déjec- 


LEP EE EUR 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 581 


tions diarrhéiques produisirent des colonies du bacille virgule, 
entremèlées avec celles du D. coli. 

Les vaccinations sous-cutanées de M. Haffkine, pratiquées 
six mois et demi avant l'expérience, n’empèchèrent donc ni 
l’action diarrhéique du vibrion cholérique, ni la provocation d’un 
état de malaise général. 

Une troisième personne, M. B..., qui n’avait jamais été sou- 
mise ni à des vaccinations anticholériques, ni à un traitement 
préventif quelconque, a ingéré un tiers d’une culture sur gélose 
du même vibrion de Courbevoie. Deux heures et quart après son 
déjeuner, et aussilôt après avoir bu 50 c. c. d'une solution 
aqueuse. de bicarbonate de soude, M. B... ingéra # c.c. de 
bouillon stérile, dans lequel était dilué un tiers d’une culture du 
vibrion de Courbevoie sur gélose, développée pendant 22 heures 
à 36°. À peu près 17 heures après l'ingestion des vibrions, 
M. B... a été réveillé par le besoin d'aller à la selle. Il s’ensuivit 
une déjection liquide, colorée. Dans la même journée, il y eut 
encore trois selles présentant les mêmes caractères. L’appétit 
etla santé générale étaient parfaits. Le lendemain, il se pro- 
duisit quatre selles liquides et colorées, accompagnées de gar- 
gouillement. L'état général était tout à fait satisfaisant. Le 
surlendemain, la diarrhée diminua et la santé resta très bonne. 
Le cinquième jour de l'expérience, la diarrhée cessa presque 
complètement, mais, dans la soirée, M. B... commit un impru- 
dent écart de régime : il but plusieurs verres de bière ; après 
quoi, la diarrhée réapparut. Dans la nuit et le lendemain, 
M. B... a eu en tout cinq déjections liquides, colorées. L'état 
général resta inalléré. Le jour suivant, il se produisit encore 
deux selles presque normales et, le lendemain, M. B... était 
complètement rétabli. À l'examen bactériologique, les selles 
liquides donnèrent sur plaques de gélatine des cultures presque 
pures du vibrion cholérique. 

Dans ce cas, malgré l'absence de traitement préventif quel- 
conque, et malgré même un écart de régime, l’effet d’une quantité 
très considérable de vibrions ne se traduisit que par une 
diarrhée moyenne, non accompagnée de troubles généraux. Si 
les deux personnes inoculées par les vaccins de M. Haffkine ont 
eu moins de diarrhée, elles ont éprouvé un malaise général pro- 
noncé qui à fait défaut chez M. B... Parmi les deux personnes 


82 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


qui subirent les vaccinations de M. Haffkine, celle qui avait été 
inoculée deux fois a été plus éprouvée par les vibrions que M. S..., 
qui ne fut vacciné qu'une seule fois. 

Comme dans les expériences anciennes de M. Ferran, on ne 
peut nullement considérer comme prouvé que les inoculations 
hypodermiques des vibrions empêchent l’action de ces microbes 
lorsqu'ils sont introduits dans le canal digestif. 

Parmi les expériences sur l’homme, je dois encore en citer 
une qui a été faite dans des conditions particulières. M. (ratch- 
kowsky, inventeur d’un remède désigné par lui sous le nom de 
« vitaline » (composé d’une solution de borax dans de la glycé- 
rine), se présenta souvent chez moi avec le désir d’être inoculé 
avec des microbes des plus virulents. Subissant journellement 
les injections de son remède, il se considérait comme indemne 
vis-à-vis de beaucoup d’agents morbides. Je consentis à admi- 
nistrer à M. Gatchkowsky une dose de bacilles virgules. Je fis 
préalablement l'expérience de l’action du remède boroglycérique 
sur les animaux. Deux cobayes reçurent dans le péritoine une 
dose mortelle du vibrion du laboratoire (dont la virulence a été 
décrite plus haut) et immédiatement après on leur injecta sous 
Ja peau 1 c. c. du remède. Deux et cinq heures plus tard, ils 
reçurent encore 1 c. ce. de la même solution. Cela ne les empêcha 
point de mourir après 12 à 15 heures, avec une masse de bacilles 
virgules dans l’exsudat péritonéal. 

Dans l'après-midi, deux heures et quart après son déjeuner, 
M. Gatchkowsky absorba d’abord 50 c.c. de bicarbonate de 
soude à 2 0/0 et, immédiatement après, une suspension en 
bouillon d'une demi-culture du vibrion du laboratoire de l'Institut 
Pasteur, développée pendant 24 heures à 35°, et conservée pen- 
dant deux jours à 18°. L’ensemencement avait été fait avec le 
sang d'un cobaye mort d'une infection cholérique péritonéale 
très aiguë. La seconde moitié de la même culture a été injectée 
dans le péritoine d’un cobaye neuf de 490 gr., qui ne tarda pas 
à succomber. 

La dose immense de vibrions ingérés ne provoqua chez 
M. Gatchkowsky aucun symptôme cholériforme. IL s'établit, au 
contraire, une constipation passagère. Le lendemain de l’inges- 
tion des microbes, M. Gatchkowsky a ressenti des douleurs dans 
le ventre et des nausées, ce qui lui à fait prendre jusqu'à 300 


LE 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 83 


gouttes de son remède. Le jour suivant, malgré la constipation, 
sa santé était tout à fait normale. Dans les selles dures du second 
et du quatrième jour de l'expérience, il a été impossible de 
retrouver le bacille virgule, malgré toutes les tentatives faites. 

D'après cette expérience, ainsi que d’après celles relatées 
plus haut, on pourrait supposer que les cultures du bacille vir- 
gule, provenant de l'épidémie de 1892 (Hambourg et Courbe- 
voie), ou d’une variété de laboratoire, quoique virulentes pour 
les animaux, avaient perdu, en grande partie, leur action sur 
l'homme, et cela malgré l'emploi de fortes quantités de cultures 
sur gélose, Le cas suivant prouve qu'en réalité il n’en est point 
ainsi. Un jeune homme de dix-neuf ans, M. J..., avait absorbé 
à jeun, après avoir bu 50 c. c. de bicarbonate de soude à 2 0/0, 
une émulsion d'un tiers d'une culture sur gélose du choléra de 
Paris de 1884, développée pendant 20 heures à 36°. Il a déjà été 
dit plus haut que cette variété était, même à forte dose, inoffen- 
sive pour les animaux. M. J... n’est point sujet aux indigeslions; 
il est, en général, bien portant et rien ne permettait de supposer 
chez lui une prédisposition spéciale. Cependant, les vibrions 
ingérés provoquèrent chez lui un vrai choléra asiatique qui, 
quoique léger, présenta tous les symptômes classiques de cette 
maladie. L'incubation a été de courte durée. Neuf heures après 
l'ingestion des vibrions, M. J... ressentit des coliques faibles et, 
trois heures plus tard, survint la première déjection liquide et 
copieuse. Il s'établit bientôt une diarrhée fréquente qui dura 
pendant deux jours. Les selles, d'abord colorées, ont fini par 
prendre un aspect riziforme tout à fait typique. Il y eut une hypo- 
thermie modérée, des vomissements répétés, et même quelques 
crampes des mollets. Le second jour de la maladie, l’anurie 
était presque complète. Le diagnostic n'était donc pas douteux. 
Le troisième jour de la maladie, la réaction survint, qui amena 
une amélioration et la guérison définitive. Cependant les selles, 
redevenues colorées, ont été liquides pendant plusieurs jours. 

Les selles des deux premiers jours de la maladie, ceiles qui 
étaient colorées ainsi que celles qui étaient riziformes, ense- 
mencées sur gélatine, donnèrent presque des cultures pures de 
vibrions cholériques; il ne poussait que quelques rares colonies 
du bacillus coli. À partir du cinquième jour, les selles donnèrent 
beaucoup de colonies du b. coli: les vibrions ne poussaient que 


D84 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tardivement et en nombre toujours décroissant. Les premières 
selles normales (12° jour), ensemencées sur des plaques de 
gélatine et dans de l’eau peptonisée (1 0/0 peptone, 1 0/0 sel 
marin) avec réensemencement sur de nouvelles plaques, ne 
donnèrent plus une seule colonie de bacilles virgules. Mais, 
ensemencées dans le liquide que j'emploie dans les recherches 
du choléra et, surtout pour le diagnostic {1 0/0 peptone Chapo- 
teaut, 1 0/0 sel marin, 2 0/0 gélatine), elles donnèrent des 
cultures de bacille virgule, et celles-ci, réensemencées ensuite sur 
des plaques de gélatine, ont donné de nombreuses colonies de 
vibrions cholériques. Cette méthode, la plus sensible que je 
connaisse, a révélé la présence de ces microbes jusqu’au 17° jour 
après le début de la maladie, lorsque M. J... était depuis long- 
temps complètement rélabli et que ses selles étaient redevenues 
absolument normales. 

L'idée que dans ce cas le choléra avait été produit par une 
cause autre que les vibrions ingérés doit être complètement 
exclue. Depuis le mois de décembre 1892 (époque à laquelle il 
se produisit quelques cas de choléra très rares), Paris est tout 
à fait indemne de cette maladie. Les cas suspects, signalés dans 
ces derniers mois, étaient tout à fait sporadiques, et dus à d’autres 
causes que le vrai choléra. J’ai eu l’avantage d'examiner la 
plupart de ces cas suspects, grâce à l’obligeance de M. le D' Lion, 
et dans aucun je n'ai pu constater le bacille virgule, malgré les 
méthodes perfectionnées de diagnostic. D'un autre côté, il faut 
tenir compte de ce que M. J... habite l’Institut Pasteur, où, même 
lors de l'épidémie cholérique de 1892, il ne survint pas un seul cas 
tant soit peu suspect. L'Institut Pasteur est irréprochable au 
point de vue hygiénique, de sorte qu'il est impossible d’invoquer 
quelque facteur prédisposant d'ordre local. 

Il est à peine nécessaire d’ajouter que, dans toutes les expé- 
riences ci-dessus, les déjections des personnes traitées ont été 
soigneusement désinfectées, et qu’il ne se produisit ni à l'Institut 
Pasteur, ni dans ses environs aucun cas suspect, 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 585 


VI 
INFLUENCE DU PASSAGE PAR L'ORGANISME HUMAIN SUR LA VIRULENCE 
DU VIBRION CHOLÉRIQUE. 


Comme dans toutes mes expériences sur l’homme la viru- 
lence des vibrions employés était bien connue, j'ai pu facilement 
étudier les changements survenus dans l'activité pathogène 
après le passage par l'organisme humain. 

Il faut distinguer deux catégories de cas. D'abord la série 
des expériences où l’ingestion des vibrions cholériques ne pro- 
voqua qu’une diarrhée légère ou moyenne, et ensuite le cas où 
ces microbes ont donné le vrai choléra. 

Les vibrions de Courbevoie, retirés des selles liquides 
de M. B..., ainsi que les bacilles virgules de Hambourg, passés 
par l'organisme de M. Gr., ont manifesté une virulence notable- 
ment moins forte que les mêmes microbes avant leur passage 
par l'organisme humain. Ainsi, par exemple, le vibrion de Cour- 
bevoie des déjections de M. B. n’a pas tué le pigeon, tandis que 
la culture originelle, injectée dans les mêmes conditions, était 
mortelle pour celte espèce. Le lapin, inoculé dans la veine par 
une demi-culture du vibrion de M. B... ne mourut que beaucoup 
plus tard que son témoin, inoculé par la même quantité de la 
culture originelle, etc. 

Cette tendance vers l’atténuation était moins prononcée dans 
le cas de deux personnes, vaccinées par voie sous-cutanée, qui 
avalèrent plus tard des vibrions de Courbevoie. Par contre, les 
vibrions du choléra de Paris de 1884, isolés des déjections 
cholériques de M. J..., présentèrent un notable renforcement de 
la virulence. Les cobayes, inoculés dans le péritoine, avec une 
culture entière et une demi-culture sur gélose du vibrion, isolé 
des déjections du second jour de la maladie, moururent avec 
les symptômes typiques, et cela malgré leur poids considérable 
de 522 et 623 grammes. Le cobaye de 349 grammes, qui ne reçut 
qu’un quart de la même culture, a survécu après une maladie 
passagère et pas trop forte. Dans une autre expérience, faite 
avec une culture du vibrion des déjections du cinquième jour de 
la maladie, l'injection intrapéritonéale a été mortelle non seule- 


86 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


ment pour un cobaye qui a reçu une demi-culture, mais même 
pour celui (pesant 485 grammes) qui n’en a reçu qu'un quart. 

Mais ce renforcement n’a pas été de longue durée. Les 
vibrions cholériques, isolés des déjections normales recueillies 
le 17° jour après l'injection de la culture par M. J..., ont été inca- 
pables de tuer un cobaye de 490 grammes qui reçut dans la 
cavité abdominale un quart de culture sur gélose (développée 
pendant 20 heures à 36°). Même un cobaye de 462 grammes qui 
fut inoculé de la même façon avec une demi-culture ne présenta 
qu'un malaise passager. 

Le vibrion de Paris 1884, renforcé pendant les premiers jours 
de la maladie, est retombé à sa virulence primitive après la 
guérison de M. J... Cet exemple nous montre combien il serait 
imprudent de nier la nature cholérigène du vibrion en s'appuyant 
sur son innocuité pour les animaux du laboratoire. 


RÉSUMÉ 


Malgré sa parenté étroite avec plusieurs espèces vibrio- 
niennes, surtout avec le vibrion de Gamaleïa, le bacille virgule 
de Koch, dont le diagnostic présente souvent de très grandes 
difficultés, est bien le microbe spécifique du choléra. Quoiqu'il 
existe des points obscurs dans l’étiologie et la marche des 
épidémies cholériques (surtout l’immunité locale), ce n’est plus 
la théorie de Koch qui doit s'adapter aux faits de l'épidémio- 
logie, mais bien cés faits qui doivent être conciliés avec cette 
vérité fondamentale, que le bacille virgule est l'agent spécifique 
du choléra asiatique. 

D'un autre côté, il résulte des expériences rapportées que les 
vibrions cholériques peuvent être ingérés en très grande quantité 
sans provoquer le choléra. Pour que cette maladie se produise, 
il faut une sensibilité particulière de l'organisme humain, dont 
les éléments nous sont inconnus. Il ne s’agit pas ici d’une pré- 
disposition à l’indigestion, mais bien de quelque chose de 
particulier. Les conditions dans lesquelles se trouventles vibrions 
cholériques chez l’homme sont très compliquées. Ces microbes, 
ainsi que leurs produits, entrent en relations multiples avec les 
sucs digestifs et les cellules de l’organisme (les phagocytes jouent 
un rôle incontestable dans le choléra humain, comme j'ai pu 


RECHERCHES SUR LE CHOLÉRA. 587 


m'en assurer par l'observation directe). D'un autre côté, les 
vibrions et les toxines entrent en collision avec les autres 
microbes du canal digestif et subissent l'influence de leurs 
produits divers. Tous ces points délicats ne pourront être éclaircis 
que par des recherches ultérieures. 

A en juger d'après le petit nombre d'expériences qui ont été 
exécutées, la vaccination de l'homme par voie digestive est 
beaucoup plus efficace que celle faite par voie hypodermique. 

Les vibrions analogues au bacille virgule peuvent être aussi 
pathogènes pour l'homme. 

Grâce aux résultats obtenus, les faits réunis dans mon 
premier mémoire sur le choléra peuvent être interprétés d’une 
façon plus précise. On peut considérer comme acquis que la 
guérison naturelle dans le choléra s’accomplit sans que la 
propriété préventive du sang s’établisse. D'un autre côté, cette 
propriété peut se développer sans que cela empêche l’homme 
atteint de choléra de mourir de cette maladie, même dans la 
première période de son évolution. 

Le clioléra humain nous fournit donc un nouvel exemple 
d'une maladie où la guérison ne peut être expliquée par la 
propriété préventive du sang. 


REVUES ET ANALYSES 


PurpiE et Warker. Résolution de l'acide lactique en ses composants 
optiquement actifs. Journal of chem. Soc., 1892. 


L'acide lactique se rencontre si fréquemment parmi les produits de 
l'action des microbes sur les sucres et les substances hydrocarbonées, 
qu'on ne sait plus trop, à vrai dire, ce que c'est qu’un ferment lactique, 
s’il faut appeler de ce nom tous ceux qui donnent naissance à cet 
acide. L'étude de ces divers ferments lactiques est à l’ordre du jour, 
et nous avons inséré à plusieurs reprises, dans ces Annales, des 
documents curieux sur cette question. À ces documents est venu s’en 
ajouter tout dernièrement un nouveau de la plus grande importance, 
c’est la démonstration que l’acide lactique ordinaire inactif peut être 
dédoublé, à la façon de l’acide racémique, par des moyens purement 
chimiques, en deux acides lactiques doués de pouvoirs rotatoires de” 
sens contraires. Chose tout aussi intéressante, MM. Purdie et Walker 
sont arrivés à ce résultat en appliquant les méthodes inaugurées par 
M. Pasteur pour le dédoublement de l’acide racémique, c'est-à-dire en 
utilisant les différences de solubilité des sels formés par les deux 
acides droit et gauche avec un même alcaloïde actif sur la lumière 
polarisée. Dans l'espèce, c’est avec les sels de strychnine qu'ils ont 
opéré. Le lévolactate de strychnine est beaucoup moins soluble dans 
l’eau que le dextrolactate, En soumettant le mélange à une cristallisa- 
tion fractionnée, et en précipitant la strychnine par l’ammoniaque ou 
l’'hydrate de baryte, on a obtenu un lactate droit d’ammoniaque qui, 
transformé en sel de zinc, avait la même composition et la même solu- 
bilité que le sarcolactate de zinc. Son pouvoir rotatoire spécifique, 
50,63, indiquait pourtant qu’il contenait un peu de lactate inactif. De 
ce lactate droit on pouvait séparer, comme on pouvait s'y attendre, 
un acide guuche ressemblant à l'acide sarcolactique, et donnant comme 
lui un anhydride droit. 

Les sels gauches retirés du mélange de sels de strychnine étaient 
mélangés de beaucoup de lactate inactif, qu’on a réussi à éliminer en 
transformant le tout en sels de zinc, et en soumettant à la cristallisa 
tion fractionnée. On en a retiré un acide lactique droit, de même pou- 
voir rotatoire que l’acide gauche, mais de sens opposé, de sorte que 
leur mélange en quantités égales redonnait de l’acide lactique inactif. 


REVUES ET ANALYSES. D8Y 


En mélangeant de même des quantités égales de lactate droit et gauche 
de zinc, cristallisés avec deux molécules d’eau, on formaif du lactate 
de zinc inactif qui se précipitait à cause de sa solubilité plus faible. La 
fermentation lactique ordinaire fournit donc deux acides isomériques, 
de pouvoirs rotatoires égaux et opposés, dont l’un est identique avec 
l'acide sarcolactique, et l’autre avec l'acide de Schardinger. Mais de 
ces deux acides, il peut n'y en avoir qu’un de produit, ou ils peuvent 
être produits ensemble, puis détruits inégalement par le microbe qui 
les a formés. De là, une foule de combinaisons possibles, que les bac- 
tériologistes auront à démêler, maintenant qu'ils savent qu'il y a au 
moins trois acides lactiques, et qu’ils ont le devoir de ne plus les 
confondre. Dx: 


Wyarr Jonxsron. Prise d'échantillons d’eau pour analyse bactériolo- 
gique. Canadian Record of sciences, 1892. 


Il est relativement facile de recueillir des échantillons d’eau pour 
analyses bactériologiques quand on se borne aux eaux de surface. Il 
n'en est plus de même quand on veut puiser ces échantillons à une 
certaine profondeur. M. Miquel a proposé pour cela d’enfoncer dans 
l’eau, à l’aide d'un plomb de sonde, un tube en verre dont le col effilé 
est recourbé en col de cygne, et qu'on à vidé d’air et stérilisé. Une 
hague métallique qui entoure le col et sur laquelle on tire, au moyen 
d'une ficelle, lorsque le tube est arrivé à la profondeur voulue, pro- 
voque une rupture par laquelle l’eau pénètre. Le tube reste ouvert à 
la montée, ce qui est un inconvénient. M. Wyatt Johnston a fait 
construire pour le même objet un petit appareil très maniable, formé 
d'un cadre de fer vertical au milieu duquel le flacon, flambé d’avance 
et bouché, est saisi par deux mors; le tout est enfoncé à l'aide d’un 
poids à la profondeur voulue. Un second cadre, relié au premier par 
deux boudins élastiques, est attaché au bouchon, et peut être 
manæuvré au moyen d'une ficelle qu'on tire lorsque le flacon est arrivé 
au niveau où doit se faire la prise. Le flacon se remplit; quand il est 
plein, on lâche le cadre du bouchon de verre que les boudins remettent 
en place, et on ramène le tout à la surface. Il y aurait intérêt à faire 
des observations pareilles en mer, et à chercher quels sont les microbes 
qui habitent les profondeurs. Beaucoup de savants ont eu cette idée, 
sans qu'aucun l'ait encore, je crois, amenée à réalisation. M. Wyatt 
Johnston, qui a à sa portée de grands fleuves, de grands lacs, et 
l’océan, ferait chose utile en commençant cette élude. 

Dx. 


590 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


G.-K. OKLapxykn. La modification du sang dans le choléra. 
(Vratch, 1892, n° 44, p. 1107.) 


M. Okladnykh a fait des recherches sur le sang des cholériques pen- 
dant la récente épidémie à Saint-Pétersbourg. Il a examiné en tout 
vingt-quatre cas. IL est arrivé aux résultats suivants: 

Le nombre des globules rouges s'accroît fortement dès les premiers 
Jours de la maladie. Il atteint ordinairement six à sept millions par 
millimètre cube. La quantité d’hémoglobine augmente également dans 
de fortes proportions. La leucocyloseest des plus marquées. Le nombre 
des globules blancs est doublé, triplé, voire même quadruplé. Dans 
deux cas, les lymphocytes ont atteint le nombre de 40,000 à 45,000 
par millimètre cube. Le poids spécifique du sang s’accroît; il est ordi- 
nairement de 1,065 à 1,070. 

Pendant la guérison, tous ces phénomènes se manifestent en sens 
inverse. Le nombre des globules rouges tombe à cinq millions par 
millimètre cube et au-dessous, et la densité à 1,040. 

Mey. 


PERSONNES MORTES DE RAGE. )91 


INSTITUT PASTEUR 


Personnes mortes de rage après traitement. 


Micon AUGUSTE, 18 ans, de Versailles. 

Mordu le 15 mars, traité à l’Institut Pasteur du 17 au 31 mars. La 
rage s'est déclarée le 10 avril; transporté à l'hôpital de Versailles, le 
malade y est mort le 11. 

Le 14 avril, deux cobayes ont été inoculés à l’Institut Pasteur avec 
le bulbe de Micoin : ils ont été pris de rage le 27 avril. 

Micoin avait reçu à la main droite et à la main gauche deux mor- 
sures pénétrantes. 

L'animal mordeur, un chat errant, abattu aussitôt, fut soumis à 
l'examen de M. Pouillet, médecin vétérinaire à Versailles, qui prescrivit 
l’envoi à l’Institut Pasteur de la personne mordue. 


CHETAL ANTOINE, 26 ans, cocher à Aix-les-Bains (Haute-Savoie). 

Mordu le 3 mai, traité à l'Institut Pasteur du 4 au 18 mai. 

Les premiers symptômes rabiques se sont manifestés vers le 
29 mai, la mort est survenue le 4er juin. 

Les morsures au nombre de deux, pénétrantes, siégaient dans le 
3° espace interdigital de la main droite et sur l’avant-bras droit. 

Le chien mordeur avait été soumis à l’examen d’un vétérinaire et 
reconnu enragé. 


CHasraiN LÉéoN, 28 ans, employé de la Compagnie des Omnibus à 
Paris ; mordu le 12 mai, traité à l’Institut Pasteur du 15 mai au 3 juin. 

Caasran est entré à l'hôpital Beaujon le 23 juin et y est mort le 25. 

Les morsures au nombre de 5 étaient situées sur le 5e doigt de la 
main droite. L'une d'elles, linéaire, longue de 3 centimètres, très péné- 
trante, s’étendait sur la face antérieure de la première phalange et sur 
le 5 métacarpien. 

Le chien mordeur avait été reconnu enragé par un vétérinaire. 


292 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 


INSTITUT PASTEUR. 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — MAI ET JUIN 1893. 


Morsures à la tête simples: el alt 2|»"|3): » 1). 


et à la figure multiples... .| »| 4 » [4 | »| 6\ 
Cautérisations efficaces . . . . . . . . . 2 A A ES DE EE 
— inefficaces . 12". 7 0 A a CU er D NC 1e 
Pas de cuutérisation. . . . . Rs 21 à » ES] 5» | 35 | > 

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Cuutérisations efficaces . .. . . . . . . | » | Le) ES MN CCE LES AR SE 
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TOTAL GÉNÉRALES SE AN AE 305 


Les animaux mordeurs ontété: chats, 12 fois; chiens, 293 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire ct Cio. 


7me ANNÉE AOÛT 1893. N° 8. 


ANNALES 


L'INSTITUT PASTEUR 


TUBERCULOSE PULMONAIRE EXPÉRIMENTALE 


ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DU PROCESSUS OBTENU PAR INJECTION VEINEUSE 
Par LE D' A. BORREL, pe MonTrELLIER, 


Licencié ès sciences, 


(Travail du laboratoire de M, METCHNIKOFF, à l’Institut Pasteur.) 


La question de la tuberculose pulmonaire est une des grandes 
questions qui ont préoccupé de tout temps les anatomo-patho- 
logistes. 

Avant d'arriver à la description des faits précis qui nous 
sont fournis actuellement par l’expérimentation, il n'est pas sans 
intérêt de passer rapidement en revue les diverses opinions 
émises sur la véritable signification des processus tuberculeux 
dans le poumon. 

Avant Laënnec, on rattachait la tuberculose pulmonaire aux 
processus inflammatoires; les produits tuberculeux étaient 
l'indice et la conséquence d’inflammations chroniques. 

Laënnec, bien avant la découverte de l'agent spécifique, 
avait su voir (Traité de l'auscultation médiate) que la tuberculose 
n'est pas une résultante des inflammations ordinaires, comme le 
prétendait l’école de Broussais; pour lui, les tubercules sont 
de véritables corps élrangers qui se développent dans le poumon 
et peuvent se développer dans tous les organes; il reconnaît 
deux formes à la tuberculose pulmonaire : la granulation tuber- 
culeuse et l’infiltration tuberculeuse, en spécifiant que dans l’infil- 
tration il ne s’agit pas d'une nodosité, mais d’une pénétration 
égale de tout le parenchyme. 

39 


9% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Virchow ‘ n’a voulu voir que la granulation, le tubercule 
grain; pour lui, le tubereule est un nodule qui au moment de 
son premier développement possède la structure cellulaire et 
provient du tissu conjonctif : néoplasie pauvre, misérable, tou- 
jours miliaire. Virchow a raison de distinguer le tubercule 
granulation, il a tort de le faire dériver du tissu conjonctif : il 
est vrai qu à celte époque on ne pouvait apprécier toute l’impor- 
tance des leucocytes et des cellules lymphatiques dans les pro- 
cessus inflammatoires, si bien établie depuis par les travaux de 
M. Metchnikoff. Il a eu le tort aussi de ne pas accepter comme 
produits tuberculeux les infiltrations tuberculeuses de Laëünnec, 
mais il n'avait pas à cette époque la notion du bacille pour éta- 
blir étiologiquement la nature de ces produits. La notion de 
forme était pour lui la question dominante. 

€ Laënnec, dit Virchow, a introduit dans la question du 
tubercule une confusion qui sera bien difficile à dissiper. 
L'infiltration s’écartait complètement de l’idée ancienne; il ne 
s'agissait plus d’une nodosité, mais d’une pénétration égale de 
tout Le parenchyme. On tendait à quitter la voie suivie par l’anti- 
quité, la forme n’était plus comptée pour rien. On en arriva à 
considérer l’état caséeux du tubercule comme un caractère 
commun à toutes les variétés de produits tuberculeux. C'est 
ainsi qu’on en est venu à penser que le tubercule pouvait se 
former dès que, dans un exsudat quelconque, les parties liquides 
élant résorbées, cet exsudat s’épaissit, devient trouble, perd sa 
transparence, prend l’aspect caséeux et reste dans cet élat au 
sein des organes... C’est ce qui a conduit Reinhardt à dire que la 
tuberculose est le résultat de la transformation des produits 
inflammatoires, et que toute masse caséeuse est du pus épaissi. 
Il n'aurait pas commis cette erreur s’il s’en était tenu à l’idée de 
nodosité. Tout ce qui se produit dans le cours de la tuberculose et 
qui n'a pas la forme de nodule est un produit inflammatoire épaissi 
et n'a aucun rapport avec le tubercule. » 

Dans la tuberculose pulmonaire, Virchow ne voit donc que 
les granulations telles qu'on peut les rencontrer dans tous les 
organes. Il méconnait tout un côté de la tuberculose pulmonaire. - 

Grancher ‘ tombe dans l'excès contraire et ne voit daus toute 


4. VincHow, Pathologie cellulaire. 
2. De l'unité de la phtisie. — Thèse de Paris, 1873. 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. D95 


la tuberculose pulmonaire qu’un processus pneumonique. 
Citons les conclusions de son travail sur lunité de la 
phüsie : 

« La définition de Virchow est trop étroite, puisqu'elle ne 
comprend que la granulalion tuberculeuse adulte. Il faut ajouter 
à cette forme typique les jeunes nodules visibles au microscope 
seulement, etles amas irréguliers de tissu cellulo-embryonnaire 
qui ont la même structure et la même destinée que le tubercule, 
et qu'on rencontre soit dans la granulie aiguë, soit dans les 
pneumonies caséeuses sans granulations. 

« La forme n'est pas un caractère absolu, puisque le tubercule 
peut se présenter sous la forme infiltrée. 

« Si l'origine épithéliale des cellules catarrhales du début de 
la pneumonie caséeuse est probable, il n’est pas prouvé que 
l'épithélium n'entre pour rien dans la formation des petites 
cellules, et je crois qu’il y entre pour une grande part. Le siège 
du tubercule nodulaire ne diffère pas de celui de la pneumonie 
caséeuse. Dans les deux cas, les alvéoles sont comblés par des 
cellules nées de la paroi. Seulement le tubercule est formé de 
pelites cellules cohérentes, et la pneumonie au début de grandes 
cellules libres. » 

Tout est pneumonie pour M. Grancher dans la tuberculose 
pulmonaire, el c’est dans le processus alvéolaire qu'il fait con- 
sister l'unité de la tuberculose. 

Baumgarien ‘ accentue encore cette idée de l'identité des 
processus granulique et pneumonique : « Histologiquement 
parlant, la tuberculose miliaire n’est pas autre chose qu'une 
pneumonie miliaire caséeuse, etla pneumonie caséeuse chronique 
n'est pas autre chose qu'un processus tuberculeux du poumon. » 

Comme le travail de Baumgarten, basé sur l’expérimentation, 
a eu un lrès grand retentissement, il est nécessaire, au début de 
notre étude, d’en donner une analyse sommaire. 

Baumgarten rendait les animaux tuberculeux par l'injection 
de bacilles dans la chambre antérieure de l'œil, et sacrifiait les 
animaux à divers intervalles. 

« Les premiers jours, on ne distingue rien macroscopique- 
ment, mais le microscope montre une karyokinèse des diverses 


cellules fixes dans les endroits envahis par les bacilles. Les bacilles 
1. Ueber Tuberkel und Tuberkulose, 


996 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


s'arrêtent dans la paroi des alvéoles et des bronchioles, ils se 
fixent alors en partie sur les cellules endothéliales des capillaires, 
en partie dans le tissu conjonctif inter-alvéolaire. Là ils déter- 
minent un processus d'irritation. 

L'épithélium alvéolaire se détache de la membrane basale, 
tombe à l’intérieur de l’alvéoie, le protoplasma de la cellule 
devient granuleux, tandis que les cellules endothéliales des vais- 
seaux conservent leur transparence. Pour Baumgarten, Îles 
cellules intra-alvéolaires sont indiscutablement des cellules 
épithéliales ; le doute n'est même pas possible. 

Dans le tissu conjonctif des septa interlobulaires, dans la 


paroi des vaisseaux et des bronches ou dans les follicules Iympha- 


tiques, c’est loujours le même processus karyokinélique, pro: 
voqué par la présence des bacilles. 

Quelques jours plus tard, les tubercules peuvent se constater 
à l'œil nu... Quelques jours plus tard encore, l'étude histologique 
montre que les tubercules volumineux sont formés d’un réseau 
d’alvéoles dont l’intérieur est bondé de cellules épithélioïdes… 
Quatorze jours après l'apparition de la tuberculose, les tubercules 
deviennent caséeux. L'évolution ullérieure ne présente plus rien 
de particulier, de nouveaux tubercules continuent à se former et 
fusionnent avec les anciens; ils forment des masses caséeuses. 
Plus tard, quand la caséification est générale, il est difficile de 
distinguer cette caséification tuberculeuse de la pneumonie 
lobaire ou lobulaire soit spontanée, soit provoquée artificiel- 
lement par inhalation de bacilles ou par injection directe de la 
matière tuberculeuse dans le poumon. 

« Dans ce cas, l'infiltration du poumon est beaucoup plus 
rapide, le processus tuberculeux est provoqué tout de suite dans 
un certain nombre de nodules, l'apparition des leucocytes est plus 
précoce et leur nombre plus considérable. Il est vrai qu’on n’a 
pas observé dans ce cas de processus Kkaryokinélique, mais 
l'identité de structure du tubercule miliaire et du tubercule 
consécutif à l'inhalation permet de penser que les mêmes lois 
histogénétiques sont applicables à ces deux cas. » 

Cette dernière phrase de Baumgarten est remarquable, et 
montre bien que toute sa tuberculose pulmonaire, basée simple- 
ment sur la constatation de figures de karyokinèse dans le 
poumon, est loin d’être une interprétation exacte et méthodique 


TUBERCULOSE PULMONAIRE, 297 


des faits. « Quelques jours plus tard, quelques jours plus tard», 
telle est la formule ordinaire de ses constatations ; mais comment 
s’enchaînent tous ces phénomènes, quel est le lien qui unit les 
quatre tableaux que nous fait passer sous les yeux le savant 
allemand, voilà ce qu'on ne trouve pas dans ce travail qui peut 
paraître &@ priori basé sur une expérimentation rigoureuse. 

Comment des cellules d'origines si diverses (cellules alvéo- 
laires. épithélium pulmonaire, endothélium des vaisseaux, 
cellules des follicules lymphatiques, épithélium des bronches) 
arrivent-elles à former les cellules épithéloïdes des granulations ? 
On ne le voit pas très bien. 

En réalité, nous verrons combien la tuberculose pulmonaire 
est différente, et combien une méthode d'inoculation qui aura 
pour but de mettre en contact immédiat bacilles et éléments des 
tissus du poumon nous permettra de suivre avec la plus grande 
rigueur, et jour pour jour, l’enchainement des faits qui sur- 
viennent dans la tuberculose pulmonaire. 

L'infection du poumon par la voie veineuse aura l’avantage 
de nous montrer &@ coup sûr et sans traumatisme les premiers 
termes de l'infection, la réaction immédiate de l'organisme, la 
formalion rapide de véritables granulations tuberculeuses dans 
les vaisseaux mêmes. Ces granulations initiales, véritables tuber- 
cules d’inoculation, évolueront pendant un certain temps sans 
provoquer d’autre réaclion apparente, et aboutiront à la caséifica- 
tion vers le vingtième jour environ. 

A ce moment-là, et sans transition aucune, nous assisterons à 
Ja généralisalion rapide du processus tuberculeux. 

La rate, jusque-là normale, se développe très rapidement : de 
jeunes granulations apparaissent en grand nombre dans tous les 
organes. 

Mais je dois faire remarquer que cette généralisation de la 
tuberculose au vingtième jour est un processus secondaire, méta- 
statique. Dans le poumon, les tubercules d’inoculation sont 
caséifiés, tandis que les granulations métastatiques sont à peine 
visibles dans le foie, les reins et tous les organes. 

Dans ce travail, nous ne nous occuperons que du poumon, 
et nous serons amenés à distinguer ce processus secondaire 
constitué par la formation de granulations nombreuses, autour 
des vaisseaux, sous la plèvre. 


998 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


4 


L'étude du processus pulmonaire nous amènera à voir que 
les granulations tuberculeuses à cette seconde période sont 
toujours développées dans les lymphatiques et aux dépens 
d'éléments lymphatiques. 

Dans le poumon, comme dans les séreuses où Kiener : l’a 
signalée le premier, nous aurons à constater l'élection des 
tubercules autour des vaisseaux ; nous verrons que cette élection 
est due à cette particularité que les tubercules se développent 
presque exclusivement dans le système lymphatique. 

Le système lymphatique est la gangue où se développent 
les tubercules, et non le tissu conjonctif, comme le prétend 
Virchow: la cellule tuberculeuse est toujours une cellule lympha- 
tique, et ne dérive pas tantôt d'une cellule pulmonaire, tantôt 
d’une cellule hépatique, tantôt d’une cellule rénale. Les épithé- 
liums, lorsqu'ils prolifèrent, produisent de l’épithélium et non 
pas des cellules tuberculeuses. 

Ces granulations lymphatiques, si faciles à étudier dans le 
poumon, constituent les véritables tubercules de la plupart des 
savants : ce sont les granulations tuberculeuses de Laënnee, les 
granulations miliaires de Cruveilhier, les tubercules nodulaires 
de Virchow, les granulationsfibro-plastiques de Robin, Empis.elc. 

Andral ? parle de ces tubercules lorsqu'il s'exprime ainsi : 

« Puisqu’en effet les tubercules peuvent se développer dans 
tous les organes, et que partout c’est dans l'intimité de leur trame 
qu'ils prennent naissance, on ne voit pas pourquoi l’on admet- 
trait que dans le poumon ce sont les vésicules aériennes qui leur 
servent de matrice... Îl serait fort singulier que, tandis que 
partout ailleurs, la matière tuberculeuse prend naissance dans 
la profondeur même des différentes trames organiques, il n’en 
fût pas de même pour le poumon, etque, là seulement, contraire- 
ment à tout ce qu'on sait d’ailleurs, elle ne fût autre chose que 
le résultat d’une sécrétion viciée de la membrane qui tapisse les 
dernières extrémités des bronches... » 

Ces granulations lymphatiques périvasculaires existent en 
effet dans le poumon, comme elles existent dans les autres 
organes (qui feront l’objet de travaux ultérieurs); mais dans le 
poumon, à cause de la structure même de l'organe, nous verrons 


1. Kiexer, Tuberculose dans les séreuses (Comptes Rendus, 26 janvier 1880). 
2, ANDRaL, 93° édit. de Laënnee, note, vol. II, page 20. 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 99 


que la matière tuberculeuse peut se présenter sous la forme 
infiltrée, et nous serons amenés à cette conclusion que le pro- 
cessus pneumonique tuberculeux n'est pas dû à la desquama- 
tion des cellules épithéliales des alvéoles, mais à l’épanchement 
dans les alvéoles d'éléments lymphatiques identiques à ceux que 
nous trouvons dans les tubercules intra-lymphatiques. 


MÉTHODE EXPÉRIMENTALE 


Pour étudier histologiquement la réaction de l'organisme 
vis-à-vis du bacille tuberculeux, le poumon, malgré sa structure 
relativement complexe, me paraissail être le premier organe à 
étudier, et cela pour plusieurs raisons : 

1° Par l'injection de cultures pures de tuberculose humaine 
dans la veine de l'oreille du lapin, on détermine dans le poumon 
un processus tuberculeux dont on peut suivre les diverses phases 
avec la chronologie la plus rigoureuse. Le poumon est le premier 
organe où sont envoyés les bacilles après leur introduction dans 
le système circulatoire : il retient à la façon d’un filtre la plus 
grande partie des bacilles injectés. 

20 On évite par ce mode d'inoculation les complications du 
processus dues aux lésions traumatiques inséparables de toute 
inoculation par piqûre directe. Les expériences de Baumgarten 
sur la cornée ne sont pas exemptes de ce reproche, et à plus forte 
raison les expériences de M. Kostenisch et Volkow' dans leur 
étude de la tuberculose rénale. 

L'histogenèse du tuberculé sur laquelle on discute toujours 
n'est donc pas si simple par elle-même : il est tout à fait inutile 
de la compliquer par des lésions de nature purement traumatique. 

Pour cette inoculation intra-veineuse, il est nécessaire de 
prendre quelques précautions dans la préparation de la matière 
à inoculation. 

Il est tout à fait indispensable d’obtenir un liquide d'injection 
ne tenant pas en suspension des grumeaux bacillaires capables 
d'amener des embolies dans les vaisseaux de l'organe, et de 
déterminer ainsi des phénomènes qui n’ont rien à voir avec 
le processus tuberculeux. Avec une baguette de verre, on broie 


1. Développement du tubereule expérimental (Arch. de méd. expérim., nov. 1892). 


600 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


soigneusement la culture dans le tube même où elle s’est déve- 
loppée, afin de dissocier autant que possible les écailles sèches 
formées par l’agglomération des bacilles à la surface de la gélose. 
En opérant à sec, on obtient facilement ce résultat; on ajoute 
ultérieurement et peu à peu la quantité de bouillon nécessaire à 
l'inoculation. On a ainsi un liquide trouble tenant en suspension 
les bacilles bien isolés. On peutencore, pour plus de sûreté, laisser 
déposer les flocons incomplètement dissociés, dans un verre à 
pied préalablement stérilisé. 

Chaqnelapin, dansmes expériences, recevait deux centimètres 
cubes d’une pareille émulsion, les cultures étaient toujours jeunes 
et n'avaient jamais plus d’un mois de date après leur sortie de 
l'étuve. 


TECHNIQUE DES PRÉPARATIONS 


Je me suis servi, comme fixateurs, soit du sublimé acide : 


Sublimé à saturation dans l’eau. 
> 0/0 d'acide acétique cristallisable. 


ou de la liqueur de Flemming : 


Acide chromique à 40/0. . . . .. 15 grammes. 
Acide osmique à 2 0/0. . . . . . . 4 — 
Acide ‘acétique glaciak:1;2 790 l 


ou d'un mélange de sublimé et de liqueur de Flemming : 


Sublimé à saturation. . . . . . .. 500 grammes. 
Acide chromique à 10/0... ... 500 — 
AGidetosmiIque 220020. 10e 1 — 
Acide acétique glacial . . . . . . . 100 _ 


Les animaux en expérience élaient sacrifiés par piqüre du 
bulbe, et les poumons, enlevés immédiatement après la mort, 
étaient plongés en masse dans le liquide fixateur. 

Pour obtenir des coupes bien étalées, totales et d’une lecture 
facile, il est indispensable, après la mort de l'animal, et avant 
l'ouverture de la cage thoracique, de lier la trachée, et d’extirper 
les poumons entiers; on évite ainsi le trop grand ratalinement, 
et les alvéoles sont en extension physiologique. 

Le sublimé, additionné d’acide acétique, est un fixateur 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 601 


excellent et d’une grande pénétration; après un séjour de cinq 
à six heures des poumons entiers dans le fixateur, on peut déjà 
pratiquer des incisions, pour permeltre une pénétralion encore 
plus rapide; on n’a pas à ce moment à redouter la rétraction du 
poumon. 

En douze heures, les poumons sont complètement fixés. 

Du sublimé, les pièces sont portées directement dans la série 
des alcools à 60, 80, 96, 100 degrés, à intervalles de vingt-quatre 
heures; puis, dans le toluène, vingt-quatre heures; dans un 
mélange à parties égales de paraffine et de toluène, vingt- 
quatre heures; dans la paraffine, vingt-quatre heures. 

Les coupes comprennent toujours un lobe entier, et, par 
cela même, permettent de voir dans chacune l’ensemble des 
lésions déterminées dans les différents systèmes constituant le 
poumon. 

Il est facile d'obtenir des coupes très fines, totales et très 
bien étalées, en suivant le procédé que je décris en note ‘; il 
me paraît très pratique et m'a été très utile. 


MÉTHODE DE COLORATION APRÈS LE SUBLIMÉ 


Les coupes fixées sur le porte-objet, il est facile de les trai- 
ter par tous les réactifs. Sans cette méthode des coupes collées 
sur lames, il est impossible de faire une étude sérieuse du pou- 
mon. | 

Le sublimé ne gêne en rien les colorations bactériologiques, 
et me parait devoir remplacer ävantageusement l'alcool, qui 
est l'idéal des mauvais fixateurs. 

Toutes les méthodes de coloration du bacille tuberculeux 
sont applicables aux pièces fixées par le sublimé. Je dois donner 
ici une méthode de coloration du bacille, inédite, je crois, et due 
à M. le docteur Kühne ; elle m’a été communiquée oralement 


4. Les coupes faites sont recueillies à la surface d’un bain tiède (dans une 
boite Petri, par exemple, placée sur une plaque chauffante) ; les coupes, quelles 
que soient leurs dimensions, s’étalent instantanément à la surface de l’eau, dont 
la température ne doit jamais atteindre le point de fusion de la paraffine 
employée. Ainsi étalées,les coupes sont recueillies sur des bandes de papier mous- 
seline et décalquées sur les lames enduites d'une couche d'albumine, séchées 
rapidement par le papier, et chauffées pour produire l'adhésion de la coupe, 


602 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 


par lui, à Wiesbaden, dans son laboratoire, quelques jours à 
peine avant que la mort soit venue interrompre ses travaux. 

Cette méthode est basée sur l'emploi de l’aniline chlorhy- 
drique comme agent de différenciation (Salzsaures Anilhin). Ce 
sel a un pouvoir décolorant très grand, et il a l'avantage d’être 
beaucoup moins nuisible aux éléments des tissus que les acides 
employés jusqu'ici comme agents de différenciation du bacille; 
de plus, l’action de l’aniline chlorhydrique peut être prolon- 
gée longtemps sans inconvénient et sans amener la décolo- 
ration ultérieure du bacille, mais son pouvoir décolorant est si 
grand que quelques secondes suffisent pour amener la décolo- 
ration complète par l'alcool des éléments des tissus et des 
microorganismes autres que le bacille tuberculeux. 

On colore le bacille tuberculeux par le liquide de Ziehl (dix 
minutes à un quart d'heure) et on traite les lames par une solu- 
tion d'aniline chlorhydrique à 2/00 dans l’eau. Puis, on enlève 
la matière colorante par l'alcool, et l’on monte. 

C'est une méthode de coloration du bacille très sûre et très 
simple. La technique des préparations, après la fixation par le 
sublimé pour la coloration du bacille, se résume donc en ceci : 

1° Coloration des noyaux par l’hématoxyline ou mieux l'hé- 
matéine ‘; deux minutes suffisent pour obtenir une belle colo- 
ration nucléaire ; 

20 Lavage à l’eau; 

30 Coloration dans le Ziehl, 45 minutes; 

4 Aniline chlorhydrique à 2/00, quelques secondes; 

50 Décoloration par l'alcool. Xylol. Baume. 

On peut colorer les globules sanguins des capillaires et des 
protoplasmes par l’aurantia ou le jaune indien en solution 
aqueuse, après la décoloration du tissu par l'alcool. Cette colo- 
ration des globules sanguins est très utile dans toute l'étude de 
la tuberculose pulmonaire. 

Le sublimé permet de voir admirablement toutes les figures 


4. L'hématéine remplace très avantageusement l’hématoxyline; elle a l'avan- 
tage d’être beaucoup plus commode à préparer, et les solutions se conservent 
indéfiniment. 

à RÉ te Faire chauffer à l'ébullition. 
4,000 gr. eau. .. { 
gr. hémattine.. . y Mélanger à chaud avec la solution A, laisser 
50 gr. alcoolabsolu. | refroidir, filtrer. ; 


B. 


_ 


TUBERCULOSE PULMO NAÏRE. 603 


de karyokinèse, mais il est incontestable que la fixation par la 
liqueur de Flemming est bien préférable. 

Malheureusement, le liquide de Flemming, excellent fixa- 
teur, ne pénètre nullement, et il est impossible de fixer des 
poumons entiers, comme nous l'avons fait avec le sublimé. 

J'ai pu me servir du liquide de Flemming pour l'étude des 
derniers stades de la tuberculose pulmonaire, alors que le 
poumon inliltré ne se rétracte pas et qu'on peut, sans inconvé- 
nient, couper des tranches minces dans le tissu infiltré. Pour les 
premiers stades, la liqueur de Flemming n’est d'aucune utilité, 
car, si l'on découpe des fragments dans les poumons rétractés, 
-on perd, par cette rétraction, tout le bénéfice que l’on pouvait 
retirer de la fixation du Flemming, les coupes sont beaucoup 
moins faciles à lire. 

Le mélange de sublimé, d'acide chromique et d'acide osmique 
additionné d’acide acétique, pénètre beaucoup mieux que la 
liqueur de Flemming et m'a été très utile; les poumons fixés par 
ce procédé permettent toutesles coloratio®s que permet la liqueur 
de Flemming et donnent des coupes remarquablement belles. 

On peut colorer soit par la safranine, soit par la safranine 
et le Biondi, comme colorant de fond; on obtient ainsi des 
préparations où les noyaux sont colorés en rouge par la safra- 
nine, les globules sanguins en orange; les protoplasmes pren- 
nent des teintes variables et montrent des détails de structure 
très fins. 

J'ai insisté d'une façon particulière sur la technique des 
préparations. Tous ces détails de fixation et de coloration sont 
d’une importance très grande, dans l'étude exacte et approfon- 
die des modifications qui surviennent dans le poumon. 

Il est indispensable surtout d’avoir des coupes de poumon 
bien étalées et totales, afin de voir l’ensemble des lésions. 


I. — RÉACTION INITIALE 


Rôle des leucocytes polynucléaires. 


Pour me rendre compte de ce que deviennent les bacilles 
immédiatement après leur introduction dans le torrent circula- 
toire, j'ai sacrifié un animal tout de suite après l'injection. 


60% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le lapin étant attaché sur le plateau à dissection reçoit une 
injection de bacilles dans la veine de l'oreille : l'injection faite, 
la seringue mise de côté, on sacrifie séance tenante l'animal, la 
trachée est liée, la cage thoracique ouverte, et les poumons extir- 
pés plongés immédiatement dans le liquide fixateur. 

Quelques minutes suffisent pour ces opérations, et pourtant 
les faits que l’on observe sur les coupes sont des plus intéres- 
sants. Tous les capillaires et les vaisseaux du poumon montrent 
une leucocytose polynucléaire intense. Le groupement des leu- 
cocytes est surtout évident dans les endroits où se trouvent les 
bacilles : leur présence en certains points indique d’une façon 
certaine la présence des bacilles. 

A un fort grossissement, il est facile de voir que la plupart 
sont inclus dans les leucocytes. Le phénomène n’est pas limité 
aux seuls capillaires où se trouventdes aggloméralions confuses 
de leucocytes contenant des bacilles, mais les vaisseaux de 
grandes dimensions, où le courant sanguin devait être très fort, 
montrent fréquemmeñt des leucocytes parfaitement isolés au 
centre des amas de globules rouges, et ces leucocytes contiennent 
des bacilles. 

Dans ces gros vaisseaux, mieux que dans les capillaires, on 
peut se rendre compte de la réalité de cette incorporation rapide. 
La figure 1, pl. X, nous montre la coupe d’un vaisseau où l’on 
voit les globules sanguins tassés, devenus polygonaux par la 
pression, etnelaissant entre eux aucun intervalle. Le protoplasma 
des leucocytes polynucléaires, beaucoup moins coloré par l’au- 
rantia, apparaît comme une vacuole au milieu des globules 
rouges. Le noyau des leucocytes est coloré en violet par l’héma- 
téine, et les bacilles colorés en rouge apparaissent manifestement 
contenus dans le protoplasma. 

Lorsque le leucocyte est allongé dans un sens déterminé, on 
peut voir le noyau étiré dans le même sens, et les bacilles eux- 
mêmes disposés en série linéaire suivant la même direc- 
tion. 

Quelquefois un petit amas bacillaire se trouve arrêté dans un 
capillaire du poumon; la masse des leucocytes disposés autour de 
lui est souvent très considérable et ceux-ci formentune barrière 
à plusieurs rangs: ils contiennent presque tous desbacilles. Cer- 
tains sont déjà éloignés du foyer principal et sont libres dans 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 605 


les capillaires avoisinants. C'est ce qui est représenté dans la 
figure 2, planche X. 

Étant donnée laconstance du phénomène, je considère comme 
parfaitement établi ce fait que les bacilles introduits dans la cir- 
culation sont immédiatement appréhendés par les leucocytes 
polynucléaires. L'expérience est facile à faire ; plusieurs fois 
répétée elle m'a toujours donné les mêmes résultats. 

L'incorporation des microorganismes et du bacille tubercu- 
leux en particulier, par les éléments migrateurs de vaisseaux, est 
donc beaucoup plus rapide qu’on ne pourrait le supposer sur les 
données d’observateurs patients ayant compté, d'aprèsleurs obser- 
valions sous le microscope avec la platine chauffante, qu'ilfautun 
quart d'heure à un leucocyte pour englober un microorganisme 
situé dans son voisinage. | 

Les coupes de poumons de lapins inoculés dansles mêmes con- 
ditionset sacrifiési0 minutes, une demi-heure, 3heures,{4heures 
après l’inoculation, montrenttoujours les mêmes faits: une leuco- 
cytose polynucléaire considérable, les bacilles dans les leucocytes. 

Mais déjà au bout d’un jour cette leucocytose est beaucoup 
moins générale dans tous ies vaisseaux du poumon. On trouve 
beaucoup moins de leucocytes isolés porteurs de bacilles dans 
les capillaires, ce qui était le cas ordinaire et constant dans les 
coupes des premiers instants. Les points où l’on rencontre leuco- 
cytes et bacilles sont de plus en plus localisés, soit par le fait 
d’une accumulation de ces leucocytes en ces endroits, soil parce 
que beaucoup de leucocytes isolés disparaissent emportés par le 
torrent circulatoire, et vont se fixer dans d’autres organes dont 
l'étude n’entre pas dans le cadre de ce travail. 

: Du premier au second jour, les coupes ne montrent rien de 
particulier ; toujours il est facile de retrouver les bacilles dans les 
points où l’on trouve des leucocytes polynucléaires. Maïs, au troi- 
sième jour, ces leucocytes commencent à subir un processus de 
dégénération : le noyau devient homogène et trouble, on ne voit 
dans son intérieur ni réseau, ni corpuscules chromatiques, 1l se 
fragmente de plus en plus, se présente sous forme de gouttc- 
lettes chromatiques, parfois très petites, sorte de poussière de 
noyau. À partir du cinquième jour, on ne voit plus trace de leu- 
cocytes polynucléaires; nous verrons ultérieurement quels sont 
“les éléments qui font disparaître ces débris. 


606 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Les leucocytes polynucléaires sont donc impuissants dans la 
lutte contre le bacille et sont tués par lui; mais il n’en est pas 
moins évident qu'ils incorporent les bacilles dès la première 
heure, et je ne puis en aucune façon souscrire aux idées émises 
par M. Kostenisch ‘ et Volkow dans leur mémoire sur la tuber- 
culose oculaire et rénale. 

Ces auteurs, enintroduisant directement par piqüre les bacilles 
dans l'œil ou dans le rein, remarquent un stade de leucocytose 
polynucléaire qui commence à la troisième heure. 

«Les leucocytes polynucléaires abondent dans les vaisseaux 
environnant les foyers et se propagent autour de ces derniers. 
Les jours suivants, l’accumulation des leucocytes polynucléaires 
augmente de plus en plus : ils sont disposés en foyers. Dans 
ces foyers, on trouve presque toujours des bacilles, pour la présence 
desquels les leucocytes polynucléaires sont de bons indicateurs. Très 
souvent, les bacilles et les leucocytes se trouvent dans un voi- 
sinage immédiat. Les leucocytes n’affectent avec les bacilles 
que des rapports de voisinage. Nous n'avons pas pu nous con- 
vaincre que ces leucocytes engloberaient souvent les bacilles… 
Ni dans les vaisseaux, ni dans les voies lymphatiques envi- 
ronnant le foyer d'infection, nous n'avons vu des leucocytes 
contenant des bacilles... » 

Dans le poumon et par l’inoculation intra-veineuse, cette 
incorporation des bacilles est de toute évidence, et je dois la 
considérer comme un fait démontré. 

D'ailleurs les leucocytes polynucléaires sont de bons indica- 
teurs de la présence des bacilles d’après M. Kostenischet Volkow 
eux-mêmes ; les bacilles jouissent à un haut degré de la propriété 
d'attirer les éléments migratiles. (Srraus, Histogenèse du tuber- 
cule. Revue de la tuberculose, n° 1, page 29.) 

Cette leucocytose polynucléaire est la caractéristique des 
premiers moments de l'infection tuberculeuse. 
= Nous avons vu qu'au troisième jour déjà, le rèle des leuco- 
cytes polynucléaires est terminé. — Beaucoup de leucocytes 
chargés de bacilles ont disparu du poumon. Un certain nombre 
sont restés localisés dans les vaisseaux mêmes du poumon; 
d’autres sont sorts des vaisseaux et ont passé dans les alvéoles. 


1. Loc. cit, 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 607 


Nous voyons donc que dans le poumon vont prendre nais 
sance deux processus bien distincts : 

Un processus intra-vasculaire : 

Un processus alréolaire. 


A. — PROCESSUS INTRA-VASCULAIRE. 


Réaction des leucocytes mononucléaires. — Formation des cellules 
géantes intra-vasculaires. Constitution des tubercules primitifs 
untra-vasculaires. 


A la fin du deuxième jour, pendant la désintégration des leu- 
cocytes polynucléaires, on constate dans les vaisseaux et les 
capillaires dilatés, aux endroits où se trouvent réunis bacilles 
et leucocytes polynucléaires, l’arrivée de nouveaux éléments dont 
le rôle sera plus durable : ce sont de grandes cellules à noyau. 
unique, vésiculeux, gros et peu chromatique, à protoplasma 
abondant, présentant des expansions nombreuses. Étant donné 
leur siège intra-vasculaire, leur signification n’est pas douteuse : 
ce sont les grands leucocytes mononucléaires. 

Les leucocytes mononucléaires siègent toujours à la péri- 
phérie du vaisseau ou du capillaire, le centre est occupé par les 
bacilles et les amas de leucocytes polynucléaires. 

L'arrivée des mononucléaires marque toujours lPapparition 
de nombreuses cellules géantes intra-vasculaires. — Pour suivre 
d'une façon rigoureusement exacte la chronologie des faits, c’est 
ici que je dois discuter l’origine et la signification de la cellule 
géante. 


(4) DE LA CELLULE GÉANTE 


Pour les uns, elle résulte de la multiplication du noyau dans 
l'intérieur d’une même cellule dont le protoplasma ne se divise 
pas; pour les autres, la cellule géante résulte de la fusion de 
plusieurs cellules. 

Les cellules géantes dues à la multiplication du noyau par 
fragmentation ou par lobulation n'ont rien à faire avec les cellules 
géantes du tubercule. — Arnold s’est surtout occupé de l’étude 
de pareilles cellules. — On a voulu leur donner le nom barbare 


608 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


de mégacaryocytes (Howel), on pourrait peut-être les appeler sim- 
plement cellules à noyau bourgeonnant. 

On a donné le nom de polycaryocytes aux cellules géantes de 
la tuberculose. — Le nom de cellule géante consacré par l'usage 
me paraît devoir être réservé à cette catégorie de cellules. — Ce 
sont les cellules géantes que l’on trouve dans la tuberculose, la 
lèpre. Depuis longtemps on sait que de pareilles cellules se for- 
ment autour de la plupart des corps étrangers introduits dans 
l'organisme. 

Arnold’ à observé des canalicules où l’épithélium rénal sem- 
blait prendre part à la formation des cellules géantes. Gaule: 
pensait aussi que les cellules géantes pouvaient se produire aux 
dépens de l’épithélium rénal. Il est évident que, dans ces cas, on 
n’a affaire qu’à une apparence grossière, que de pareilles formes 
n'ont rien à faire avec la cellule géante, et n’ont aucun rôle à 
jouer. 

Pour Weigert*, dans le tubercule, les cellules géantes seraient 
dues à un processus d'irritation suffisant pour provoquer la divi- 
sion des noyaux, mais non celle du protoplasma. Le centre de 
la cellule serait nécrosé, la périphérie seule contenant le noyau 
serait vivante. La formation des cellules géantes de la tubercu- 
lose ne me paraît pas demander des explications aussi compli- 
quées. Avec Krause, avec Metchnikoffet bien d’autres, je crois 
que la cellule géante résulte d’un processus de conglomération 
pur et simple. 

L'injection dans le système circulatoire nous montre ce mode 
de formation avec la plus grande évidence. Dès le troisième 
jour, les coupes montrent dans l’intérieur même des vaisseaux 
de nombreuses cellules géantes, et on les voit pour ainsi dire se 
constiluer autour des amas bacillaires. Ici leur origine n’est pas 
douteuse : c’est par la fusion des leucocytes mononucléaires 
qu'elles prennent naissance. Le nombre de noyaux de pareilles 
masses protoplasmiques peut êlre quelquefois très considérable; 
j'ai pu en compter jusqu'à soixante. Bien souvent, dans une 
même masse plasmique, les noyaux sont disposés par groupes 


4. Anxozn, Ueb, Nierentuberculose. 

2. GauLE, Vérch. Arch. 69. 

3. Théorie d, tuberk. Riesenzellen (Deulsche med. Wochenschrift, 1885, 
page 599). 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 609 


et presque toujours en collerette à la périphérie. La disposition 
des noyaux à la périphérie ne me paraît pas bien difficile à 
comprendre si l’on tient compte de ce fait que dans toute cellule 
mobile, c'est toujours la partie privée de noyau qui progresse, 
la portion de la cellule contenant le noyau est toujours la partie 
retardataire. Un amas bacillaire étant donné, on voit les leuco- 
cytes mononucléaires, situés sur la paroi vasculaire, envoyer 
des expansions dans la direction des bacilles, le noyau res- 
tant toujours à la périphérie; ces pseudopodes sont parfois 
très longs et la cellule géante résulte de la confluence pro- 
gressive d'un grand nombre de ces prolongements. Dans 
certains cas, tous les noyaux sont concentrés à un pôle et les 
bacilles situés dans la partie de la cellule privée de noyaux. 
(fig. 4, pi. X.) Cette localisation des bacilles dans les portions cel- 
lulaires privées de noyaux a été remarquée par tous les observa- 
teurs. Elle me paraît s'expliquer très simplement par l'hypothèse 
que j'émets ci-dessus. 

On constate la formation de pareilles cellules géantes, par 
le même processus, dans les alvéoles dès les premiers jours de 
Pinoculation, 

La figure 6, planche XI, représente un alvéole pulmonaire 
contenant un certain nombre de cellules sur la signification 
desquelles nous aurons à nous étendre ultérieurement; on peut 
constater le groupement de ces éléments autour d'un amas bacil- 
laire qui occupe le centre de l’alvéole ; les cellules voisines sont 
sur le point de se réunir à l’amas principal. Cette figure montre, 
prise sur le fait, la formation de la cellule géante. 

Dans cette histoire de la genèse des cellules géantes, nous 
avons parlé tout le temps de cellules mobiles, de prolongements 
mobiles, de pseudopodes, etc., etc., et rien n’est plus frappant 
en effet que cette apparence de mobilité des éléments qui 
entrent en jeu. 

La méthode expérimentale a l'avantage de nous faire assister 
à la genèse de toutes ces formes cellulaires qui, étudiées à l’auto- 
psie par des anatomo-pathologistes, ne donnent l'impression 
que de cellules mortes. 

Cette idée si féconde de la vie cellulaire, de l'attraction réci- 
proque des microorganismes et des cellules, la théorie phagocy- 
taire de l’inflammation, en un mot, si énergiquement soutenue 

39 


610 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


par M. Metchnikolff, a l'avantage d'animer toutes ces cellules trop 
considérées jusqu'à lui comme des squelettes. 

Lorsqu'il est si facile de se convaincre par l’expérimentation 
de la réalité de cette vie cellulaire, on va chercher des explica- 
tions confuses sur l’apparence de pseudopodes dans les cellules 
géantes: 

« Sous l’action des liquides fixateurs, disent M. Kostenisch' et 
« Wolkow, la cellule géante se rétracte, se détache des éléments 
« environnants et les parties ayant pénétré dans les intervalles 
« de ces derniers prennent la forme d’appendices ramifiés : les 
« fibres modifiées réticulaires, et celles du tissu conjonctif, en se 
« fusionnant avec la cellule géante, contribuent à la formation 
« de ces appendices. Si on considère la cellule géante dans ses 
« rapports avec les éléments environnants, on peut se rendre 
« compte de ses connexions, tandis que si on se figure la cellule 
« géante à l’état isolé, ces mêmes appendices peuvent suggérer 
« l’idée erronée de pseudopodes d’une grande cellule amiboïde.» 

Telle n’est pas notreopinion, et l'examen de nos préparations 
ne peut que confirmer la réalité de l'interprétation émise par 
M. Metchnikoff sur la signification et le rôle de la cellule géante. 

Que la cellule géante détruise ou ne détruise pas les bacilles 
comme c’est le cas dans la tuberculose ou la lèpre, il n’en reste 
pas moins acquis que la formation de la cellule géante doit être 
considérée comme un des modes de réaction de l’organisme vis- 
à-vis d’un corps étranger quelconque. 


(b) FORMATION DES TUBERCULES INTRA-VASCULAIRES 


La formation des cellules géantes dans le vaisseau est un 
phénomène tout à fait initial et contemporain @e l’arrivée des 
leucocytes mononucléaires dans les points où se trouvent les 
bacilles. C’est à la fin du deuxième jour et pendant tout le troi- 
sième que se passent tous ces faits. Au troisième jour, les gra- 
nulations tuberculeuses sont déjà constituées, et les coupes à 
cette époque montrent toutes les particularités de leur formation. 

Le centre de la granulation, bien visible au sein du tissu pul- 
monaire environnant, est généralement un capillaire très dilaté : 


me 


1. Loc. cit, page 772, 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 611 


la lumière en est encore marquée de place en place par les 
noyaux des cellules endothéliales. 

Dans le capillaire même, on trouve au centre un amas de 
leucocytes polynucléaires dégénérés, tout autour une ou plu- 
sieurs cellules géantes à nombre de noyaux variable, qui con- 
tiennent toujours des bacilles. Quelquefois toute la lumière du 
vaisseau est remplie par une même masse protoplasmique avec 
30 à 60 novaux disposés en collerette. Le plus souvent les cellules 
géantes contiennent beaucoup moins de noyaux, et tout autour 
on peut voir des leucocytes mononucléaires libres contenant 
des baciiles. 

Cellules géantes et leucocytes mononucléaires montrent des 
granulations chromatiques dont j'ai pu déterminer la véritable 
origine: 

Ces granulations sont de dimensions très variables, tantôt 
elles gardent encore la coloration violette de l’hématéine, tantôt 
elles fixent la coloration rouge de la fuchsine; elles représentent 
les débris des noyaux des leucocytes polynucléaires détruits. 

Les leucocyles mononucléaires sont destinés à devenir les 
cellules épithélioïdes des tubercules d’inoculation : nous les retrou- 
vons toujours dans l'étude du développement de ces tubercules. 

Tout autour du capillaire dilaté, il existe une agglomération 
cellulaire considérable. Dela dilatation même du vaisseau résulte 
untassementdes paroisalvéolairesenvironnantes,quise disposent 
en couches concentriques à la périphérie. Tous les capillaires de 
ces parois alvéolaires sont remplis d'éléments à noyau très chro- 
mätique avec une mince couche de protoplasma; ce sont les lym- 
phocytes. Ils forment de véritables injections, et leur disposition 
en séries linéaires et concentriques indique très bien le trajet des 
capillaires refoulés. 

Parmi eux, on distingue à un fort grossissement des grands 
leucocytes mononucléaires, faciles à voir à cause de leur gros 
noyau vésiculaire, de leur protoplasma granuleuxet de la présence 
dans leur intérieur des corpuscules colorés, débris desleucocytes 
polynueléaires (fig. 1, pl. XIT. 

Les faits que nous venons de décrire sont si rapides, l’accu- 
mulation des éléments cellulaires autour des bacilles introduits 
par l'inoculation veineuse est si précoce, qu'ilest impossible d’ad- 
mettre pour leur genèse aucune autre explication que la concen- 


612 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


ration en un point d'éléments mobiles. D'ailleurs, les phéno- 
mènes les plus importants, la formation des cellules géantes et 
l'arrivée des leucocytes mononucléaires, se passent dans l’inté- 
rieur même du vaisseau : on ne peut admettre l'intervention des 
cellules fixes dans leur formation. 

Les granulations initiales ainsi développées dans les vais- 
seaux mêmes sont l’objet le plus favorable pour l'étude de la 
réaction immédiate de l'organisme vis-à-vis du bacille. Le 
poumon est particulièrement propice, parce que l'injection par la 
veine de l'oreille produit cette infection à coup sür. 

Le même processus initial a lieu dans le foie et les phéno- 
mènes initiaux sont identiques (j'ai pu déjà m’en convaincre); 
mais, dans le foie, avec la tuberculose humaine, il est difficile de 
réaliser à coup sûr cette infection directe par la veine de l'oreille. 
Le travail de M. Yersin ‘ montre de la façon la plus évidente que 
cet auteur n'a pas étudié les phénomènes initiaux : 

« Les bacilles inoculés s’arrètent surtout dans les capillaires 
du foie et de la rate. Là, ils déterminent la formation d’un petit 
coagulum de fibrine, dans lequelils se multiplient jusqu’au 5° et 
T° jour, sans qu'il paraisse y avoir de réaction du côté de l’orga- 
nisme infecté. » 

Tout notre travail va contre cette interprétation, la réaction 
de l'organisme est immédiate, et l’é tude du poumon montre 
toute la rapidité de cette réaction. 

Dans le foie, il est facile de reproduire les mêmes faits, si l’on 
introduit directement les bacilles par l’inoculation dans les veines 
mésentériques. C'est unepetiteopérationtrèsfacileetquin'aaucun 
inconvénient, la plaie locale guérit sans aucune espèce de réaction. 

Les phénomènes sont identiques à ceux que l’on voit dans le 
poumon. Je suis convaincu que les mêmes résultats seraient 
obtenus dans tous les organes. C’est là un processus d’ordre 
général, que nous retrouverions le même partout où nous aurions 
Habit mis en contact les bacilles et . éléments des tissus, 
par la voie sanguine. 

Il doit être très difficile d'étudier ces processus initiaux 
dans la pathologie humaine ; pourtant il est sûr que les mêmes 
faits se reproduisent si l’on admet, comme le prétend, non 
sans raison, Weigert, que beaucoup de tuberculoses miliaires 

4. YErsiN (Annales de l'Institut Pasteur, 1888). 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 613 


aiguës seraient dues à la pénétration dans le torrent circu- 
latoire de masses caséeuses et de colonies bacillaires, formant 
l'équivalent d’une injection dans la veine de l’oreiile. 

Nous étudierons plus loin le développement ultérieur de ces 
tubercules d’inoculation. 


B. — PROCESSUS ALVÉOLAIRE 


Cellules à poussière, leur signification, leur rôle. Formation de cellules 
géantes intra-alvéolaires. Pneumonie aiquë par effraction. 


Nous avons vu antérieurement que les leucocytes polynu- 
cléaires porteurs de bacilles pouvaient sortir des vaisseaux et 
tomber dans les alvéoles. On peut se demander quels sont dans ce 
cas les éléments qui interviennent. 

Nous allons voir que dans les alvéoles il existe une catégorie 
de cellules qui jouent le même rôle que les grands leucocytes 
mononucléaires dans les vaisseaux. 

Ce sont les cellules à poussière, les Staubzellen des auteurs 
allemands. 

A l’état normal, les poumons du lapin adulte contiennent 
toujours un certain nombre de grandes cellules libres dans les 
cavités alvéolaires, bien reconnaissables à la présence de corpus- 
cules noirs dansleur intérieur. Elles sont constituées par un noyau 
vésiculeux très gros, entouré d’une grande quantilé de proto- 
plasma dense et granuleux : les contours cellulaires sont le nlus 
souvent mal délimités. Parfois ces cellules sont accolées à la 
paroi de l’alvéole : on les retrouve, à la surface de l’épithélium 
bronchique, étalées et comme rampant au-dessus de la couche 
des cils vibratiles. 

Ces cellules jouent le plus grand rôle dans toute la pathologie 
du poumon. Il est nécessaire de passer en revue les diverses 
opinions émises à leur sujet. On n’est pas d'accord sur la véri- 
table signification de ces éléments. 

Arnold’ a étudié ces Staubzellen d'une façon toute spéciale 
dans son livre Siaubinhalation und Staubmetastase.  Nirchow 
constate la présence du pigment dans les cellules épithéliales 
(catarrhales). Knauf considère les éléments en question comme 


4. ArNoLD, Staubinhalation und Staubmetastase, Leipzig, 1885. 


61% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


des cellules épithéliales, parce que, dit-il, il a souvent rencontré 
ces cellules non encore détachées de la paroi alvéolaire. Slav- 
jansky arrive à une opinion contraire, et les fait dériver des leu- 
cocytes mononucléaires du sang ; il se base sur le fait suivant : il 
injecte dans la veine de l’oreille, d’une part, et dans la trachée. 
d'autre part, des substances différentes, et il retrouve ces diffé- 
rentes substances contenues dans les mêmes cellules à poussière. 
Ces expériences sont loin d’être à l'abri de toute critique. Ins a 
vu tous les intermédiaires entre les leucocytes du sang et les 
cellules à poussière. Ruppert attribue à l’épithélium pulmonaire 
la propriété d’absorber les particules de charbon. Il conteste, non 
sans raison, les résultats de Slavjansky qui, dit-il, s’est placé 
dans des conditions trop différentes de l’état normal. 

Arnold, dans son livre, arrive à une conclusion mixte, il ne 
peut s'empêcher de reconnaître l'apparence de contractilité que 
présentent les cellules à poussière, et il admet deux origines à 
ces cellules : les unes proviendraient de l’épithélium alvéolaire, 
les autres des cellules lymphatiques. 

M. Tchistowitsch', dans le laboratoire de Metchnikoff, a repris 
cette question des cellules à poussière. Il a montré, par l’étude 
de la vessie nataloire des poissons, que la couche épithéliale 
n'absorbe jamais les poussières; l’épithélium dela vessie natatoire 
est l'homologue de l’épithélium pulmonaire au point de vue 
embryologique. 

L'épithélium du poumon de la grenouille ne jouit pas non 
plus de cette propriété. Il en est de même de l’épithélium pulmo- 
naire des animaux nouveau-nés, qui ne présentent jamais de 
cellules à poussière. 

Malgré tout, la véritable origine des cellules à poussière est 
loin d’être complètement élucidée. Nous allons voir que l'étude 
de la tuberculose pulmonaire nous amènera à considérer ces 
cellules non pas comme des cellules épithéliales desquamées, 
mais comme des cellules d’origine lymphatique. 

Ces cellules, nous l’avons dit, existent à l’état normal, très 
reconnaissables à leur protoplasma dense et à la présence de 
grains noirs dans leur intérieur. 


Au 2° jour de l'inoculation, elles sont en beaucoup plus granä 


4. Phagocytose dans les poumons. (Annales de l'Inst. Pasteur, juillet 4859.) 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 615 


nombre dans le voisinage immédiat des vaisseaux où se passent 
les phénomènes que nous avons déjà décrits ; beaucoup contien- 
nent des bacilles ou des leucocytes polynucléaires à différents 
stades de destruction : tantôt c'est un leucocyte entier bien 
visible dans une vacuole de la cellule, tantôt des fragments de 
chromatine isolés, et très souvent des débris de leucocytes et des 
bacilles (fig. 1 à 5, pl. XD). Le fait que ces cellules incorporent 
avec la plus grande facilité les corps étrangers me paraît déjà 
ètre un argument important en faveur de leur origine lympha- 
tique et non épithéliale. 

D'ailleurs, comme dans les vaisseaux aux dépens des grands 
leucocytes mononucléaires, il se forme à la même époque des 
cellules géantes dans les alvéoles, aux dépens des cellules à. 
poussière. 

La figure 6, planche XI, nous montre une cellule géante 
alvéolaire en voie de formation. Au centre de l’alvéole se trouve 
un amas bacillaire autour duquel sont groupées déjà des cellules 
avec des prolongements bien visibles et dirigés vers les bacilles. 
À une certaine distance, sur les parois alvéolaires ou libres dans 
la cavité, on voit des cellules de même espèce contenant aussi 
des grains chromatiques. L'une de ces cellules va déjà se fusionner 
avec la masse principale. 

On trouve des cellules à poussière libres dans les alvéoles 
pendant toute la première période de l'infection. Quelquefois 
elles sont groupées en grand nombre, contiennent des bacilles 
en voie de multiplication et pourtant on ne peut distinguer 
aucune réaction dans le tissu environnant. — Il ne se forme 
pas de véritables granulations tuberculeuses telles que nous 
les avons vues dans les vaisseaux, avec cellules géantes, cellules 
épithélioïdes et lymphocytes périphériques : le processus est 
simplement alvéolaire; la figure 8, planche XE, montre un alvéole 
ainsi bondé de cellules à poussière, avec des bacilles en voie de 
multiplication, au 15° jour de l’inoculation. 

Bien souvent les cellules alvéolaires prennent part à la forma- 
tion de tubercules dont le centre est manifestement un vaisseau. 
Les alvéoles environnant immédiatement le vaisseau, et qui sont 
refoulées par sa dilatation même, sont remplies de cellules qui 
sont destinées à pénétrer peu à peu au centre de la granulation, 
et à contribuer à l’accroissement de la granulation initiale. — Il 


616 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


se forme ainsi des tubercules vasculo-alvéolaires (fig. 1, pl. XID. 

Qu'’elles soient épanchées dans les alvéoles ou contenues dans 
l’intérieur du vaisseau, ces cellules présentent les mêmes carac- 
tères…. ; elles ont une apparence de contractilité incontestable, 
elles incorporent avec la plus grande facilité les corps étrangers. 

Processus pneumonique aiqu. — Cette identité des deux caté- 
gories de cellules nous paraîtra bien plus manifeste si nous 
analysons le processus aigu que l’on obtient en injectant dans 
le poumon une émulsion contenant des grumeaux bacillaires 
capables de déterminer de véritables effractions. 

Le même processus peut s’obtenir en injectant directement 
dans la trachée une culture de bacilles, ou par l’inhalation de 
grandes quantités de bacilles tuberculeux. 

Onconstatealors aumicroscope, dèsles premiers jours, l’enva- 
hissement des alvéoles pulmonaires par une énorme quantité de 
cellules présentant tous les caractères des cellules à poussière ; 
la plupart de ces cellules contiennent des bacilles et sont comme 
noyées dans un épanchement non moins considérable de leuco- 
cytes polynucléaires: ces leucocytes polynucléaires, là encore, 
subissent les mêmes processus de dégénération, et nous retrou- 
vons au 4 et au 5e jour de cette pneumonie aiguë les cellules 
alvéolaires remplies de granulations chromatiques. Les parois 
alvéolaires sont intactes, l’épithélium pulmonaire est en place, et 
pourtant dès le 3° jour les alvéoles sont comblées : on ne peut 
pas invoquer la multiplication karyokinétique de l’épithélium 
pour expliquer cet envahissement : une telle rapidité serait par 
trop invraisemblable. 

Ces îlots de pneumonie se distinguent avec la plus grande 
facilité sur les coupes à l'œil nu; le plus souvent, le microscope 
montre, au centre de l’ilot ou dans son voisinage immédiat, la 
lumière d’un vaisseau oblitérée par un amas de bacilles et par 
un thrombus formé de leucocytes poly- et mononucléaires. 

D'après la description que donne Baumgarten (page 83)' des 
expériences de M. Samuelson consistant dans l'introduction 
par la trachée de cultures de bacilles, je suis convaincu que nos 
deux processus sont identiques... Baumgarten s'attache à assi- 
miler ce processus aux processus|tuberculeux qu’il décrit. — Mais 


1. Loc cit. 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 617 


il est évident que cette pneumonie aiguë n'a rien à faire avec la 
tuberculose et qu’on obtiendrait probablementles mêmes résul- 
tats en injectant en masse une substance quelconque dans le 
poumon. Ce n’est pas de la pneumonie tuberculeuse, c'est de 
la pneumonie par effraction. 

Ces faits n’en sont pas moins du plus haut intérêt pour nous, 
puisqu'ils nous montrent la véritable origine vasculaire des élé- 
ments que Baumgarten veut considérer comme de l’épithélium 
desquamé. Les cellules épanchées dans les avéoles ne diffèrent 
en rien des cellules à poussière qui existent à l’état normal dans 
le poumon, et ces cas de pneumonie aiguë sont des plus favo- 
rables pour mettre en évidence toutes les transitions entre les 
cellules lymphatiques des vaisseaux et les cellules en hüge. 


DÉVELOPPEMENT DES TUBERCULES INITIAUX. 


L'étude des premiers jours de l'infection nous a permis 
d'établir de la facon la plus nette aux dépens de quels éléments 
se constituent lestubercules initiaux : nous devons étudier main- 
tenant ce que deviennent ces tubercules. 

Macroscopiquement, on peut voir dans les poumons, au 
5e jour, un semis très fin constitué par ces tubercules embryon- 
naires. Jour par jour, ces granulations à peine visibles au 
début grossissent progressivement, toujours bien isolées et 
bien distinctes. 

Au microscope, le poumon conserve son aspect normal en 
dehors des granulations, les alvéoles sont libres, nous n'avons 
affaire qu'à un processus local. Le développement progressif 
des granulations initiales seul attire notre attention. 

Les modifications que nous pourrons signaler sont tout à 
fait secondaires et peu importantes. 

Peu à peu nous voyons les contours des capillaires au centre 
des granulations s’atténuer et disparaître même : le nombre des 
cellules épithélioïdes augmente, les tubercules sont de plus 
grandes dimensions. 

Comment se fait l'augmentation des cellules au centre des 
granulalions? Est-ce par karyokinèse des éléments préexistants ? 
Est-ce par adjonction de nouveaux éléments ? 


618 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Mon attention a été toujours attirée sur cette question des 
figures de multiplication dans la tubercule. Jamais je n’ai vu dans 
le centre des granulations, au milieu des cellules épithélioïdes. 
des figures de multiplication, et pourtant j'ai eu l’occasion de 
voir un nombre considérable de ces granulations par létude 
quotidienne des poumons inoculés. — J'ai pu voir pendant 
toute cette période du 3° au 20° jour (époque de la caséification 
des tubercules initiaux) des figures de division, mais le plus sou- 
vent j'ai pu me rendre compte que les éléments en karyokinèse 
étaient des éléments migrateurs : j'ai compté jusqu’à sept leu- 
cocyies en karyokinèse dans la coupe d’un seul vaisseau. Dans 
les parois alvéolaires, on rencontre toujours des figures de karyo- 
kinèse, mais il est impossible d'affirmer si c’est une cellule 
épithéliale du poumon ou un élément migrateur. Même en 
admettant que ce sont des figures de division d'éléments fixes 
de poumon, il est évident que ces cellules ne contribuent 
en rien au développement des tubercules qui nous intéres- 
sent'. Les figures de division karyokinétique observées ont 
pour caractère d’être disséminées, et je n’ai jamais pu me rendre 
compte de l'existence d’une multiplication plus active autour 
des tubercules, ce qui devrait être le cas, si ces cellules en 
division contribuaient à leur développement. 

La figure 3, planche X, montre un de ces tubercules vascu- 
laires au douzième jour; on peut y voir encore l'indication 
du capillaire par la présence des cellules endothéliales; les 
dimensions du dessin n’ont pas permis de figurer la continua- 
tion du vaisseau qui forme le pédicule d’une massue dont le 
tubercule serait la tète… 

Au douzième, quinzième, dix-huitième jour, nous voyons les 
dimensions des tubercules devenir de plus en plus considérables, 
et cette augmentation nous paraît due à la pénétration de 
nouveaux éléments, soit par les capillaires avoisinant les granu- 
iations, soit par adjonction de nouvelles alvéoles dont la lumière 

1. Je dois faire remarquer que le développement des tubercules que je traite 
ici n’a aucun rapport avec les phénomènes décrits par Baumgarten. Nous verrons 
ultérieurement à quels moments se place, dans notre travail, la tuberculose 
pulmonaire décrite par l’auteur allemand ; nous aurons alors à discuter la signi- 
fication du processus décrit par lui, et à voir quelle place doivent occuper les 
processus pneumoniques tuberculeux, processus qui ne constituent qu'une des 
manifestations de la tuberculose dans le poumon. 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 619 


se remplit d'éléments épithélioïdes dérivés des vaisseaux. Tou- 
jours ces granulations affectent la forme de nodules, et sont nette- 
ment délimitées par rapport aux alvéoles voisines parfaitement 
normales, toujours nous retrouvons une barrière de Iymphocytes 
accumulés à la périphérie et disposés en couches concentriques. 

Il nous faut arriver au vingtième jour environ pour voir 
apparaître, en même temps que la caséification des tubercules 
dont je viens d'étudier longuement l’évolution, ure série de 
modifications beaucoup plus complexes, qui viennent se 
surajouter aux lésions déjà décrites et donner à la tuberculose 
pulmonaire sa véritable physionomie. 


IT. — RÉACTION SECONDAIRE 


Pendant toute cette première période de l'infection du pou- 
mon par la voie veineuse, nous avons assisté à la genèse de 
phénomènes purement locaux. C’est la réaction immédiate de 
l'organisme vis-à-vis des bacilles introduits; elle aboutit à la 
formation de Tubercules d'inoculation : 

Les leucocytes polynucléaires entrent en jeu les premiers et 
sont rapidement détruits. 

Les leucocytes mononucléaires (cellules épithélioïdes et cel- 
lules géantes), bien que leur rôle soit plus durable, finissent par 
succomber, et au vingtième jour environ dans nos préparations 
se produit la caséification. 

La caséification ne parait pas être due à l’absence d'irrigation 
sanguine, les capillaires pénètrent souvent jusqu'au centre 
caséeux. La caséification me paraît s'expliquer beaucoup mieux 
par l’action directe du bacille et de ses produits sur les cellules 
qui les contiennent. Le centre caséeux devient un milieu de cul- 
ture où se développent des quantités énormes de bacilles. 

Dans mes expériences, il est incontestable que la caséifica- 
tion des tubercules initiaux coïncide avec la généralisation de la 
tuberculose. Cette généralisation se traduit par l’éruption d’une 
foule de tubercules dans tous les organes. 

Avec la tuberculose humaine, dans les conditions où je me 
suis placé, avec les doses que j'ai employées, le processus initial 
est localisé au poumon. Les autres organes (foie, reins, elc.) res- 


620 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tent indemnes, à de rares exceptions près. D'ailleurs, l’étude 
histologique des granulations que nous trouvons généralisées à 
ces organes vers le vingtième jour nous montre les stades de 
début, tandis que les tubercules initiaux daus le poumon sont déjà 
caséifiés. De plus, dans ces organes, les tubercules en question 
sont périvasculaires, disséminés sur le trajet des artères rénales, 
par exemple, et non pas développés dans les vaisseaux, comme 
c'était le cas pour les tubercules d’inoculation du poumon. 
Rarement, au milieu de jeunes tubercules, on peut constater la 
présence dans le foie on dans les reins de gros tubercules 
caséifiés qui correspondent à une infection directe lors de l'ino- 
culation veineuse. 

Mais ces tubercules sont rares, et il est impossible d’étudier 
à coupsür leur genèse immédiate, comme nous l’avons fait dans 
le poumon, qui est l'organe de choix lorsqu'on infecte le lapin 
par la voie veineuse. — Le processus de réaction secondaire est 
non moins manifeste dans le poumon lui-même : ilse traduit par 
un ensemble de modifications qu'il s’agit d'élucider, et qui d’ail- 
leurs amènent rapidement la mort de l’animal vers le trentième 
jour. 

À ce moment surtout, 1l est indispensable d’avoir des coupes 
totales pour se rendre compte de l’ensemble des lésions et pour 
voir qu'elles sont toutes sous la dépendance d’un même processus. 


A. — Kéaction lymphatique péribronchique périvasculaire. 
Tubercules intra-lymphatiques. 


Autour des grosses bronches, les ganglions qui existent à 
l'état normal s’hypertrophient et montrent des figures de division 
très nombreuses. Tous les lymphatiques participent à ce pro- 
cessus d’hyperplasie et de multiplication ; ils montrent deux 
catégories de cellules bien distinctes, les unes petites, rondes, 
à noyau très chromatique, les autres grandes, à noyau vésiculeux 
peu chromatique, avecun protoplasma granuleux très abondant. 
Les trajets et les lacunes lymphatiques péribronchiques, péri- 
vasculaires, sous-pleuraux, sontcommeinjectés, etla tuberculose 
pulmonaire peut être considérée comme une des meilleures mé- 
thodes histologiques pour l'étude des lymphatiques pulmonaires. 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 621 


Sur les coupes totales des lobes pulmonaires, il est facile de 
voir l’ensemble de ces modifications; l'énorme développement 
du système lymphatique du poumon est [a caractéristique de 
cette seconde période de la tuberculisation. 

Quand la coupe passe par un plan parallèle à la direction des 
vaisseaux ou des bronches (ce qui est facile à obtenir en faisant 
des coupes totales de lobes pulmonaires parallèlement au grand 
axe), on peut suivre sur une grande étendue le trajet d'un même 
lymphatique ou d’une lacune lymphatique. De distance en 
distance, on remarque des renflements dans le lymphatique 
même, constitués par de véritables granulations tuberculeuses. 
Le centre de ces granulations est occupé par de grandes cellules 
à prolongements multiples contenant souvent des bacilles; à la 
périphérie se trouve une barrière de petites cellules rondes. La 
production tout entière est comme greffée sur la paroi externe 
du vaisseau, la cavité lymphatique se poursuit et va plus loin 
constituer de nouveaux renflements à différents stades d’évolu- 
tion. On peut voir tous les intermédiaires et le mode de forma- 
tion de ces tubercules par le groupement de grandes cellules à 
la partie centrale, etla disposition périphérique des petites celiules. 

Les parois des vaisseaux montrent de distance en distance de 
pareils renflements ; le tubercule, greffé sur la paroi disposé, en 
éventail, prend son insertion par une large base. Si le même 
processus se développe, dans la lumière du vaisseau, par une 
infiltration de cellules lymphatiques sous l’endothélium bien 
conservé et qui fait saillie, on a l'apparence d’une granulation 
nodulaire formée de deux segments, l’un externe, l’autre interne, 
séparés par la paroi du vaisseau réduite à sa plus simple expres- 
sion, Une pareille formation est dessinée lrès exactement. 
(Pz. XIE, fig. 2.) 

La réalité de ces tubercules périvasculaires et leur mode de 
formation dans les trajets lymphatiques est de toute évidence. 
Au début de la réaction lymphatique leur étude est des plus 
faciles ‘. 


1. Je ne comprends pas pourquoi ils n’ont pas attiré l’attention de Baum- 
garten, car d’après sa figure (PI. V fig. 12), on peut juger qu'il a eu affaire à de 
pareilles formations. Le vaisseau qu’il représente en À avec un ‘processus très 
marqué d’endartérite montre à droite un îlot cellulaire compact qui, j'en suis 
convaincu d’après mes préparations, ne représente nullement un alvéole pulmo- 
naire, mais une cavité lymphatique, 


622 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


B. — Processus alvéolaires. — Granulations alvéolaires. — 
Processus pneumonique. 


La réaction lymphatique secondaire dans le poumon n’est 
pas limitée aux seules cavités lymphatiques péribronchiques ou 
péri-vasculaires. Les alvéoles participent au même processus, et 
les cellules que nous avons vues jouer un si grand rôle dans la 
formation des tubercules périvasculaires, épanchées dans les 
cavités alvéolaires, vont constituer de véritables îlots pueumo- 
niques. 

Telle est l’origine des granulations alvéolaires et de la 
pueumonie caséeuse : les mêmes éléments entrent en jeu; c'est 
toujours la même cellule tuberculeuse qui forme dans les 
lymphatiques les granulations, et dans les alvéoles les infiltra- 
tions et les processus pneumoniques. 

Pour Baumgarten et la majorité des auteurs, le processus 
alvéolaire, la pneumonie caséeuse, constituent toute la tuber- 
culose pulmonaire. Les granulations alvéolaires résultent de la 
multiplication des cellules fixes. 

Pour nous, les seuls éléments actifs dans la tuberculose sont 
les cellules lymphatiques; ce sont ces cellules qui prolifèrent, qui 
contribuent à l'énorme développement du système lymphatique 
pulmonaire, à la production de granulations nodulaires véri- 
tables autour des vaisseaux, et qui, épanchées dans les alvéoles. 
constituent le processus pneumonique tuberculeux. 

S1 on ne suit pas les différents stades de cet envahissement, 
par la prédominance même du processus pneumonique, on sera 
amené à ne pas voir autre chose dans la tuberculose pulmonaire. 

La ressemblance des cellules intra-lymphatiques et des cel- 
lules alvéolaires est frappante : elle est facile à constater, car le 
plus souvent les alvéoles remplies de cellules constituent une 
zone circulaire assez bien délimitée autour des tubercules nodu- 
laires que nous avons décrits, autour des bronches, autour des 
vaisseaux. Si l’on étudie le poumon alors que la caséification a 
envahi les parties centrales, la granulation nodulaire centrale 
étant détruite, le processus alvéolaire seul attirera l'attention. 

Si les cellules alvéolaires étaient d’origine épithéliale, on 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 623 


devrait trouver l’épithélium détruit et desquamé dans les endroits 
où la lumière de l’alvéole est comblée d'éléments cellulaires. I] 
n’en est rien, et bien souvent, dans les premiers stades, on peut 
voir l’épithélium intact, en place, sans figure de multiplication, 
bien que l’alvéole contienne un nombre considérable d'éléments 
cellulaires (fig. 4, pl. XID. 

Les cellules alvéolaires absorbent avec la plus grande facilité 
les corps étrangers. J'ai pu m'en convaincre directement en 
faisant respirer un lapin tuberculeux, au 20° jour de l’inoculation, 
dans une atmosphère de noir de fumée. 

Elles forment des cellules géantes typiques, en toutsemblables 
à celles que nous avons étudiées dans les processus initiaux. Les 
cellules géantes abondent dans les alvéoles du 20° au 30° jour de 
l'inoculation. 

Ces cellules prolifèrent dansles alvéoles, et Baumgarten a eu 
raison de le signaler, mais cette prolifération mème ne va-t-elle 
pas à l'encontre de l'interprétation de l’auteur? On ne voit pas 
très bien des éléments différenciés, comme les cellules de l'épi- 
thélium pulmonaire, entrer en karyokinèse après leur chute 
dans l’alvéole ; une cellule desquamée paraît bien plutôt vouée à 
la mort. Tandis que les éléments en question subsistent encore 
longtemps bien vivants, la caséificalion ne survient que beau- 
coup plus tard. 

Quand ces cellules sont situées dans la lumière d’une bronche, 
la distinction en est beaucoup plus facile ; il est manifeste que 
l'épithélium bronchioue n'entre pour aucune part dans leur 
formation : l’épithélium des bronches, lorsqu'il prolifère, ce qui 
est rare, ne fait pas des cellules tuberculeuses, mais de l'épithé- 
lium bronchique. 

Tous les caractères que nous venons de passer en revue me 
paraissent devoir être attribués non pas à des cellules épithé- 
liales desquamées, mais à des cellules mobiles, à des cellules 
lymphatiques. 

Deux faits principaux me paraissent acquis : 

1° Les cellules qui entrent dans la constitution des tubercules 
nodulaires lymphatiques et les cellules épanchées dans les 
alvéoles sont identiques et ont la même origine. 

20 Laformation destuberculesnodulairespérivasculairesetl'en- - 
vahissement des alvéoles, sont deux phénomènes contemporains. 


LOU 2 hu LATA XL AT bar 


624 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Nous ne pouvons pas admettre que les cellules épithéliales 
tombées dans les alvéoles, finissent par pénétrer dans les lym- 
phatiques et aillent constituer les cellules épithélioïdes des 
tubercules péribronchiques et périvasculaires : M. Baumgarten 
lui-même n'irait pas jusqu’à faire jouer un pareil rôle à l’épithé- 
lium desquamé. 

La figure 3, planche XIT, représente à un forl grossissement 
une portion de paroi alvéolaire, elle montre en « des éléments 
cellulaires sphériques qui sont probablement les prétendues 
cellules épithéliales gonflées sur le point de tomber dans l’alvéole. 
D'après mes préparations, je crois que ce sont des cellules 
lymphatiques contenues soit dans les capillaires, soit dans les 
espaces lymphatiques inter-alvéolaires. Ces cellules sont mani- 
festement contenues dans des cavités, elles prennent la forme 
sphérique et ont une apparence d’enveloppe (4). Quand elles 
sont épanchées dans l’alvéole, cette apparence d’enveloppe 
disparait, la cellule a des prolongements multiples (b). 

Le processus si bien décrit du gonflement des cellules 
épithéliales et de leur desquamation dans l’alvéole doits’appliquer 
non pas à l’épithélium pulmonaire, mais à des cellules d’origine 
lymphatique. Dans l'état actuel de nos connaissances sur la 
circulation lymphatique, nous devons admettre que les éléments 
en question arrivent par les vaisseaux et passent dans la circu- 
lation lacunaire. 

Là, sous l'influence de nouvelles conditions d'existence, 
ils se développent et prennent des dimensions plus consi- 
dérables : une partie est entraînée dans les canaux lymphatiques 
et va constituer fes tubercules intra-lymphatiques; les autres, 
épanchées dans le poumon, forment les granulations alvéolaires 
et les îlots de pneumonie tuberculeuse. 

Le caracitère bien spécial de la pneumonie tuberculeuse 
n'avait point échappé à Charcot. : 

« Les noyaux de ces prétendues pneumonies, dit-il, necontien- 
nent en aucun point des produits d’inflammation commune: leu- 
cocytes polynucléaires, cellules épithéliales proliférées, exsudat 
fibrineux, etc. Ils résultent de l’envahissement des parois des 
alvéoles d’abord, puis de leurs cavités, par un tissu embryonnaire 


1. Caarcor (Revue mensuelle. Cours de la Faculté, 1879). 


TUBERCULOSE PULMONAIRE, 625 


particulier soumis à une évolution spéciale... La dégénéra- 
tion frappe d'abord les parties du nodule les plus voisines 
de la bronchiole qui joue le rôle de centre de formation. » 

N'est-ce pas là l'expression des phénomènes que nous avons 
voulu mettre en relief dans ce travail ? 

En résumé, l'étude de la {tuberculose pulmonaire, obtenue par 
injection dans la veine de l'oreille, nous permet de distinguer 
deux stades bien distincts dans l'infection tuberculeuse. 

Dans la première période, qui commence immédiatement 
après l’inoculation, nous assistons à la genèse de phénomènes 
purement locaux qui aboutissent à la formation de tubercules 
d’inoculation. 

Dans la seconde période, qui commence avec la caséification 
des tubercules d’inoculation, et qui doit être plus ou moins 
précoce suivant l'intensité du processus initial, nous assistons à 
l’envahissement de tous les organes et à l’éruption d’une quan- 
tité de tubercules sur tout le trajet des lymphatiques. — Dans le 
poumon, cette seconde période se traduit par l'apparition de 
tubercules intra-lymphatiques péri-vasculaires et péri-bron- 
chiques, et par l’envahissement des aivéoles. | 

Granulations nodulaires, pneumonie caséeuse sont deux 
manifestations morphologiques différentes d’un mème processus, 
tout entier lymphatique. Dans les deux cas, les cellules fixes du 
poumon servent de support passif, et ne jouent aucun rôle im- 
portant dans la réaction de l’organisme. La cellule tuberculeuse est 
toujours une cellule lymphatique. 


En terminant ce travail, je ne puis m’empècher d'exprimer 
toute ma reconnaissance à M. Metchnikoff, qui s'estconstamment 
intéressé à mes recherches, et auprès duquel j'ai toujours trouvé 
de précieux conseils. Je ne dois pas oublier M. le professeur 
Kiener, de Montpellier, qui a été mon premier maître en anato- 
mie pathologique. 


40 


626 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


EXPLICATION DES PLANCHES 


PLANCHE X 


Fig. 1. — Coupe d’un gros capillaire du poumon où l’on voit des 
leucocytes isolés chargés de bacilles, bien isolés au milieu des globules 
rouges. (Quelques minutes après l’inoculation.) 4, leucocytes isolés 
porteurs de bacilles. 

Fig. 2. — Coupe longitudinale d’un capillaire pulmonaire dilaté 
contenant des bacilles et de nombreux leucocytes ayant déjà incorporé 
des bacilles. (Quelques minutes après l’inoculation.) 

Fig. 3. — Un tubercule d'inoculation au douzième jour. Le tuber- 
cule est surtout développé dans un vaisseau énormément dilaté dont 
on retrouve par places les cellules endothéliales en 4: en b on pouvait 
suivre la continuation du vaisseau non dilaté. 

Fig. 4. — Une cellule géante au quatrième jour. Cette cellule géante 
est manifestement contenue dans un capillaire, les noyaux sont con- 
centrés à un pôle, les bacilles sont situés au pôle opposé, au milieu 
d'un feutrage très net de filaments protoplasmiques. 4, leucocytes 


polynucléaires. 
PLANCHE XI 


Fig. 4 à 5. — Cellules à poussière au début de l'infection. Ces 
cellules contiennent des bacilles et des leucocytes polynucléaires à 
différents stades de dégénération. — Fig. 5, 4, un leucocyte dans une 
vacuole de la cellule. — Fig. 2, b, un leucocyte dont le noyau est 
réduit à deux granulations chromatiques contenues dans une vacuole. 
— Fig. 1, 3, 4, différents stades de destruction des leucocytes poly- 
nucléaires. 

Fig. 6. — Formation d’une cellule géante dans une alvéole aux 
dépens des cellules à poussière. Un amas bacillaire est au centre de 
l’alvéole; tout autour sont groupées un certain nombre de cellules 
à poussière, envoyant manifestement des filaments protoplasmiques 
dans la direction des bacilles; sur les parois alvéolaires, on distingue 
des cellules à poussière isolées dont une va se fusionner avec l’amas 
principal. 

Fig. 7. — Deux cellules géantes intra-alvéolaires au quatrième jour 
de l’inoculation. Tout autour dans l’alvéole on peut voir des cellules à 
poussière isolées ou groupées. Ces cellules contiennent toutes des 


TUBERCULOSE PULMONAIRE. 627 


débris chromatiques, indice de la destruction des leucocytes poly- 
nucléaires. 

Fig. 8. — Un amas de cellules à poussière dans l’intérieur d’une 
alvéole au quinzième jour de l’inoculation. Les bacilles se sont déve- 
loppés dans l’intérieur même des cellules. 

En à: on voit une cellule à poussière contenant des bacilles, dans 
l’alvéole voisine : L, paroi de l’alvéole, #, cellules intra-alvéolaires. 


PLANCHE XII 


Fig. 1. — Une granulation tuberculeuse en voie de formation 
au troisième jour. Au centre, on distingue la lumière d’un capillaire 
contenant quelques leucocytes mononucléaires et des bacilles; tout 
autour du capillaire, on peut voir au milieu de l'infiltration de petites 
cellules rondes, de grands éléments qui sont ou des leucocytes mono- 
nucléaires ou des cellules à poussières. En €, une cellule géante avec 
des bacilles ; e, une figure de division de cellule à poussière. 

Fig. 2. — Un vaisseau du poumon à la périphérie duquel s’est 
développé un nodule lymphatique tuberculeux ; les cellules Iympha- 
tiques sont disposées en éventail, quelques-unes épanchées et libres 
dans les alvéoles voisines. (Vingtième jour de l'inoculation.) 

Dans la lumière du vaisseau, l’endothélium est soulevé par une 
infiltration des cellules Iymphatiques. L’ensemble de la figure constitue 
une véritable granulation tuberculeuse; on distingue encore au centre 
la limite du vaisseau. — dd', paroi du vaisseau. — «44, endothélium 
soulevé intact. — b, cellules lymphatiques du tubercule. — ce, cellules 
alvéolaires épanchées tout autour, lymphatiques, non épithéliales. — 
e, capillaire collatéral du vaisseau. 

Fig. 3. — Une portion de paroi alvéolaire de la fig. 4; on dis- 
tingue des cellules dans les cavités de la paroi, que nous considérons 
comme des cellules Iymphatiques, non comme des cellules épithéliales 
gonflées. — b, une cellule libre dans l’alvéole. 

Fig. 4. — Portion du poumon envahi par les cellules lymphatiques. 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE 


FRÉQUENTE SUR LES COTES DE LA MÉDITERRANÉE 


PAR LE CHIRURGIEN-CAPITAINE M. Louis HUGHES, A. M.S. 


(Laboratoire militaire, à Malte). 


Les Annales de l’Institut Pasteur ont publié en avril 1893 un inté- 
ressant travail du chirurgien-capitaine Bruce, de Netley. Les notes 
suivantes ont été écrites à la fois pour confirmer les expériences de 
Bruce, et comme une preuve d'intérêt pour la France, dont le commerce 
et la puissance s'étendent d’année en année sur la Méditerranée, et 
dont les découvertes à propos des fièvres paludéennes ont fait leur 
chemin dans le monde. Elles résument deux ans et demi de travail à 
Malte, où j'ai eu l’occasion de traiter et d'observer, à l'hôpital et au 
laboratoire, des centaines de cas de cette « fièvre méditerranéenne ». 

Cette fièvre est à rapprocher étroitement à la fois de la fièvre 
typhoïde et de la malaria, et a souvent été confondue avec elles, mais 
ses caractères cliniques et pathologiques sont assez distincts et assez 
constants pour qu’on puisse la distinguer de ces deux maladies et de 
toutes les autres. 

Cliniquement, elle présente une courbe de température particuliè- 
rement irrégulière, consistant en ondes intermittentes de pyrexie, du 
type distinctement rémittent, durant de une à trois semaines, avec des 
intervalles d’apyrexie durant généralement deux à trois jours. Dans 
des cas rares, les rémissions peuvent être assez marquées pour que la 
fièvre prenne un caractère intermittent, qu’on peut pourtant distinguer 
assez facilement des paroxysmes de la malaria. Dans les cas graves, 
la température peut être baute d’une façon continue, le patient pré- 
sentant l’état dit typhoïque, et la mort survenir par hyperpyrexie,com- 
plications pulmonaires ou épuisement. IL y a pourtant alors d’ordi- 
paire une rémission marquée le matin, avec augmentation le soir, la 
température atteignant d'ordinaire, entre 2 et 4 heures du soir, un 
maximum supérieur de 00,5 à 10,5 à la température du matin. Après 
cela, la température retombe lentement (souvent après une légère 
exacerbation nocturne) jusqu’à la rémission matinale. La pyrexie est 
donc vraiment chronique, et cela pendant six mois et plus; elle n'est 
tpas affectée d’une façon marquée par la quinine ou l'arsenic. Elle es 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE. 629 


régulièrement accompagnée d’une constipation obstinée (excepté dans 
un certain nombre de cas graves et mortels où on trouve beaucoup de 
congestion intestinale et souvent de la diarrhée); il y a aussi de l’ané- 
mie et de la débilité progressives, suivies dans un grand nombre de 


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Tracé no 1, 


cas par des complications névralgiques et rhumatismales dont le 
patient met parfois deux années à se remettre. Cette fièvre ne protège 
pas contre des attaques subséquentes de fièvre typhoïde, et ne 
donne pas l’immunité contre la fièvre méditerranéenne, La morta- 


630 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


lité est faible (environ 2 0/0), mais la durée moyenne de séjour à 
l'hôpital est de 70 à 90 jours, et le taux des cas de réforme parmi les 
soldats et marins anglais est plus élevé que pour toute autre maladie. 

Pathologiquement, la rate est d’abord beaucoup élargie et ramollie, 
maisauxenvironsde la 5° ou 6esemaine elle devient plus dure, et tombe 
quelquefois au-dessous de sa dimension normale. Le canal alimentaire 
présente des taches irrégulières de congestion, mais sans implication 
des glandes de Peyer, qui restent intactes. Les glandes mésentériques 


JUILLET 


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Tracé no 2. 


sont élargies, mais moins que dans les cas de fièvre typhoïde. Dans 
les cas graves, il y a une tendance à une pneumonie lobulaire ou à 
une inflammation bronchique. 

Le micrococcus melitensis reconnaissable à son apparence et à ses 
modes de culture, a été trouvé dans les organes où les symptômes 
cliniques et les apparences à l’autopsie rendaient sa présence probable, 
et cela huit fois par Bruce, deux fois par Gipps, et par moi dans les 
11 cas qui suivent, soit 21 en tout. 


{er cas. — Dame de ma famille, àgée de 19 ans, qui, deux ans auparavant, 
avait eu à Bruxelles une altaque sérieuse de fièvre lyphoïde avec rechute. 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE. 631 


Ce cas a été caractérisé par de la constipation, des transpirations, de 
l’anémie progressive, des symptômes névralgiques et une tendance à l'hyper- 
pyrexie. Pas d'éruption, de gargouillements iliaques ni d’autre symptôme 
typhoïque, mais une certaine odeur de la respiration et de la peau, que 
j'ai souvent retrouvée dans les cas graves de fièvre méditerranéenne, et qui 
est surtout manifeste dans les autopsies. Guérison. (+ et 1 dans le tracé 
n° {, ci-dessus, indiquent les lavages à l’éponge et les antipyrétiques.) 

2% cas. — W. A. Welch Regiment, 20 ans. Bonne santé antérieure, 
52 jours d'hôpital; mort dans une rechute. Diarrhée exceptionnelle. Autopsie 
une heure après la mort : légère congestion à la base du poumon, rate de 
400 grammes, très molle; son frottis sur lamelle montre quelques micro- 
coceus entre les cellules. Foie de 1,670 grammes, congestionné. Petit intestin 
congestionné sur 75 centimètres, à partir de la valvule iléo-cœcale. Gros 
intestin avec congestion intense jusqu'à 50 centimètres au-dessous de la 
même valvule. Plaques de Peyer et glandes mésentériques intactes. Tracé n° 2. 

3 cas. — H. H.…., Berkshire Regiment, 22 ans. 72 jours d'hôpital. Cas 
semblable au précédent ; mort pendant la première rechute. Autopsie 4 heures 
après la mort. Foie de 1,980 grammes, un peu gras. Rate de 340 grammes, 
noire et de consistance ferme. Pas d'ulcération de l'intestin. Aucun élargisse- 
ment des plaques de Peyer ou des glandes mésentériques. Poumons con- 
gestionnés à la base, 

4 cas. — G. S.., Essex Regiment, 24 ans, 8 jours d'hôpital. Autopsie 
4 heures après la mort. Congestion à la base des deux poumons. Rate de 
400 grammes, élargie et congestionnée. Foie de 2,730 grammes, congestionné 
aussi. Intestins normaux. (Tracé n° 5.) 


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Tracé no 3. 


de cas. — D..., Berkshire Regiment, 23 ans, 15 jours d'hôpital ; mort le 
dix-septième jour de la maladie. Cas semblable au précédent, mais carac- 
térisé par de la diarrhée. Autopsie 7 heures après la mort. Poumons con- 
gestionnés à la base. Rate de 594 grammes, friable et presque liquide dans 
sa capsule. Foie de 2,070 grammes, friable et congestionné. Petites taches 
congestives dans le duodénum et l’iléon. Sur 45 centimètres à partir du 
cæcum, le gros intestin est congestionné et gonflé. Pas d’ulcération; les 
glandes mésentériques sont élargies, mais les plaques de Peyer intactes. 


632 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


6° cas. — S..., Connaught Regiment, 22 ans, 22 jours d'hôpital. Autopsie 
Gheures aprèsla mort. Poumons congestionnés à la base. Rate de 425 grammes, 
foie de 1,815 grammes, tous deux élargis et congestionnés, de même que 
l'intestin sur un petit nombre de points, cas semblable au 4 cas. 

7° cas. — G..., Connaught Regiment, 22 ans ; mort le vingt-septième jour 
de la maladie. Diarrhée. Autopsie 1 heure après la mort. Poumons conges- 
tionnés à la base, foie de 2,184 grammes. Rate de 325 grammes. Duodénum 
congestionné, iléon congestionné par places suivant le trajet des vaisseaux, 
gros intestin très congestionné au pli sigmoïde. Glangdes mésentériques 
légèrement élargies, mais plaques de Peyer intactes. (Tracé n° 4.) 


SEPTEMBRE OCTOBRE 


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Tracé no 4, 


8° cas. — G. C..., Berkshire Regiment, 22 ans; mort le trente-cinquième 
jour de la maladie. Rate de 510 grammes, élargie et congestionnée. Pou- 
mons très congestionnés à la base. Plaques congestives dans l'intestin, mais 
glandes de Peyer normales, pas d’ulcération. Glandes mésentériques un peu 
élargies. (Tracé n° 5.) 
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Tracé no 5. 


9% cas. — C..., Artillerie, 26 ans ; mort le cinquante-septième jour de la 
maladie. À montré un type commun de l'affection, type qui n’est pas 
d'ordinaire fatal. Mort due à des complications pulmonaires. Autopsie 
6 heures après la mort. Poumons œdémateux avec consolidation lobulaire. 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE. 633 


Foie de 2,270 grammes, très congestionné., Rate de 310 grammes, ferme et 
noire. Intestins normaux, sauf un peu de congestion duodénale. Microceccus 
dans le frottis de rate sur lamelle. (Tracé n° 6.) 


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10° cas, — W..., Berkshire Regiment, 23 ans ; mort le dix-neuvième jour. 


Tracé no 6, 
Cas rémittent compliqué d'une maladie cardiaque. Autopsie 12 heures après 
la mort. Poumons très congestionnés. Rate de 350 grammes, élargie et con- 
gestionnée. Foie de 1,415 grammes congestionné, maladie mitrale au cœur. 
Petit intestin congestionné çà et là. Pas d’ulcération. Glandes de Peyer 
normales. (Tracé n° 7.) 


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Tracé no 7. 


634 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


11° cas. — A. A..., Roy. Scots Regiment, 20 ans. Est resté à l’hôpital du 
23 juin au 12 juillet 1891 avec une pyrexie rémittente. Y est revenu le 
29 octobre 1891 avec une pyrexie chronique, rémittente et intermittente, qui 
a duré presque continuellement jusqu’au 29 mars 1892 (5 mois). A l’autopsie, 
apparences dues à l'insuffisance mitrale qui a été la cause immédiate de la 
mort. Plaques de Peyer normales et pas d'ulcération. Rate éiargie. Très 
nombreuses colonies de Mic. Melitensis dans tous les tubes ensemencés avec 
la rate. 

J'ai, dans un grand nombre de ces cas, obtenu des générations 
successives en cultures pures de ce micrococeus : je n’ai trouvé avec 
lui aucun autre microbe présent dans des circonstances semblables, 
et je ne connais pas d'autre maladie où on le trouve, bien que je l’aie 
recherché dans divers cas mortels provenant d’autres causes. 

Bruce ‘ a introduit deux fois des cultures pures de ce microbe dans 
la circulation d’un singe bien portant, et a amené une fièvre analogue 
à la fièvre méditerranéenne. J'ai répété 4 fois la même expérience. 

ExPÉRIENCE [. — Petit singe mâle, resté en observation deux mois, pen- 
dant lesquels son appétit est resté bon et sa température normale. On a fait 
une émulsion, avec À c. c. de bouillon stérilisé, d’une colonie retirée d’une 
culture sur gélose du foie de H. H... (3° cas), et on l’a injectée profondément 
dans les muscles de l’avant-bras gauche, en prenant les précautions usuelles, 
et après avoir soigneusement lavé et purifié la région d'inoculation. Il ne 
s’est rien produit au siège de la piqûre, mais le singe a présenté une forme 
typique de la pyrexie, et, tué le seizième jour, lorsque sa température était 
de 400,6, il a offert des apparences morbides caractéristiques. Nombreuses 
colonies du M. Melitensis par ensemencement du foie, de la rate, du sang 
retiré du cœur avec des instruments stérilisés, 5 minutes après la mort, 
après ligature des gros vaisseaux. A l’aide d'une aiguille fixée à un tube sté- 
rilisé et enfoncée dans le ventricule, on a retiré un peu de sang qu'on a 
ensemencé après avoir rejeté les premières et les dernières gouttes. (Tracé 
n° 8.) 


NOVEMBRE 


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Tracé no 8. 


1. Ce volume, p. 3053. 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE. 635 


ExPérience Il. — Un petit singe africain mâle, en observation depuis un 
mois et en bonne santé, a été inoculé comme le précédent, dans les muscles 
de l’avant-bras gauche, avec les cultures provenant du sang de l'expérience T. 
Il a eu pendant deux mois une pyrexie chronique caractéristique (voir le 
tracé n° 9). 


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Tracé no 9, 


Expérience II. — Singe plus gros, femelle, espèce bonnet. En observation 
depuis 3 mois eten bonne santé. Inoculé dans les muscles de la cuisse droite 
avec des cultures provenant de la rate de l'expérience 1. Forme très carac- 
téristique de ja pyrexie (voir le tracé n° 10) et en même temps symptômes 
rhumatismaux, Ces deux singes ont beaucoup perdu de leur poids, quoique 


636 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


bien nourris et soignés, mais ils ont fini par se rétablir. Les températures 
étaient prises tous les jours à 8 heures matin, 2 heures et 6 heures 30 du soir. 


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Tracé no 10. 


Le Micrococcus melitensis a déjà été décrit, et il suffit de rappeler 
qu’il est un peu ovoïde, qu'il croît lentement même aux températures 
les plus favorables (37-39 c.) sur une surface de gélose avec 1,5 0/0 de 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE, 637 


peptone. A cette température, les colonies deviennent visibles à l'œil nu 
120 à 125 heures après inoculation au moyen d’une rate humaine, et 
semblent des perles plates reposant à la surface de la gélose. 

Elles ne poussent pas de prime abord sur de la gélose un peu plus 
alcaline que ne l’est le sang, mais, par cultures successives sur des 
milieux d’alcalinité croissante, on peut les faire pousser sur des milieux 
très alcalins. La meilleure méthode est d'inoculer avec de la rate 
humaine du bouillon qu’on répartit ensuite dans des tubes à gélose. 
En gouttes pendantes, on les trouve sous forme de coccus et de diplo- 
coccus, avec parfois, spécialement lorsque la culture a lieu sur gélose 
alcaline, une tendance à former de courtes chaînes (fig. 11), que le 


moindre effort disloque. Ces coccus se colorent très bien avec le bleu 
de gentiane, mais se décolorent très vite lorsqu'on les traite par l'alcool 
ou tout autre agent déshydratant et décolorant. 

Épidémiologie. — La maladie a un caractère endémique et épidé- 
mique à la fois. Parmi les troupes de Malte, tandis que le taux d'admis- 
sion pour mille dans les hôpitaux est demeuré assez constant dans les 
derniers trente-trois ans (excepté à de certains moments, où entrait en 
action quelque influence définie et générale), celui des fièvres simples 
continues (fébricules et fièvre méditerranéenne) s’est régulièrement 
élevé lorsqu'on le distribue par cycles de sept ans. Le maximum a été 
de 269,5 p. 1,000 en 1859, et le minimum 91,2 en 1888. 

En ce qui concerne la gravité de la maladie, on peut signaler une 
amélioration sensible, et la mortalité a décru de 3.08 à 0,92 pour mille. 
Les épidémies sérieuses sont devenues rares depuis 1873, et les cas 
rapidement mortels sont rares et largement espacés. Cette améliora- 


638 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tion est probablement due à une diminution dans la puissance des 
virus, provenant sans doute de la diminution ou de la suppression des 
foyers de contagion sous l’influence des mesures sanitaires. Les taux 
d’entrée dans les hôpitaux et de mortalité, calculés sur chaque période 
de sept ans, ont passé ensemble par leur maximum, mais le second 
chiffre est descendu plus tôt et plus vite que le chiffre des hospitalisés. 
Enfin le taux d’admission pour les affections rhumatismales, qui sont 
la conséquence ordinaire de la fièvre méditerranéenne, a subi les mêmes 
variations et la même diminution que la fièvre elle-même. 

Bien que les fièvres paludéennes ne soient pas endémiques à Malte, 
les variations saisonnières de la fièvre méditerranéenne correspondent 
exactement à celles de ce qu’on appelle le poison malarique. Pourvu 
que la chaleur soit assez grande, on peut dire aussi que le taux d’ad- 
mission pour fièvre méditerranéenne véritable varie exactement en sens 
inverse de celui de la quantité et de la persistance des pluies, en ajou- 
tant que la pluie pendant les chaleurs est toujours suivie d’une augmen- 
tation d'activité dans le poison, et d’un accroissement soudain et tem- 
poraire du chiffre des attaques. 

Depuis les premiers documents anglais sur cette maladie, en 1816, 
cette fièvre a paru chaque été, distinctement localisée sur certains 
points, d'où elle éclatait fréquemment sous forme épidémique. Elle a 
toujours été nettement endémique dans : 1°les baraquements, maisons 
et hôtels construits par les chevaliers de Malte du commencement du 
xvie à la fin du xvun siècle; toutes ces constructions ont toujours été 
encombrées et insalubres, bien qu’on les ait améliorées peu à peu ; 
2% dans les terrains avoisinant ces vieux conduits creusés dans la 
roche poreuse; ces canaux ont servi d’égouts pendant de longues 
années : ils servent souvent de drains pour les eaux de surface en 
hiver et au printemps, et restent secs en été et en automne: 4 sur les 
navires à l'ancre dans notre port sale et sans marée. 

La fièvre n'est pas contagieuse d'homme à homme, et je n’ai 
jamais trouvé de raisons d’incriminer la nourriture ou les eaux. L’étude 
des documents et des souvenirs recueillis pendant les soixante-dix 
dernières années, et les résultats de mes recherches pendant quelques 
épidémies localisées récentes, m'ont conduit à penser que l'existence de 
cette fièvre à Malte et à Gibraltar est en relation avec les déjections 
humaines, et il y a de bonnes raisons de croire que le poison est de 
nature aérienne, s’élevant de la matière fécale ou organique des sols 
poreux lorsque vient la sécheresse. Il y a aussi une relation étroite 
entre la fréquence des cas survenant parmi les marins et celle des 
baignades dans notre port contaminé par les égouts, ou de l’exposi- 
tion aux émanations de la vase dans les bassins à sec. J'ai été très 


SUR UNE FORME DE FIÈVRE. 639 


frappé de retrouver, durant mes récentes visites à Tunis et à Naples, 
les mêmes conditions favorables au développement de cette maladie. 
La lenteur du développement de ce microbe et les hautes tempéra- 
tures nécessaires pour sa culture m'ont empêché d'apporter à ce 
sujet des preuves bactériologiques, mais je n’ai pas non plus de 
preuves contraires ; l’avenir décidera. 

Cette fièvre tient donc cliniquement une place entre la fièvre 
typhoïde et la malaria, mais s’en différencie par la présence d'un 
microorganisme spécifique autant que par l’absence du bacille 
d’Eberth et de l’hématozoaire de Laveran. Elle paraît être une fièvre 
contagieuse d'un type mobile, caractérisée par une durée indéfinie 
et une marche irrégulière, causée par un poison du sang d'origine 
fécale et capable de prendre une forme aérienne organisée. Ce n'est en 
tout cas pas une forme abortive, ou modifiée par le climat, de la mala- 
ria ou de la fièvre typhoïde. 


INSTITUT PASTEUR 


Personne morte de rage pendant le traitement. 


Mermonr (Meccxior), chef cantonnier en retraite, à Bonneville 
(Haute-Savoie), mordu le 14 juillet par un chien reconnu enragé à 
l’autopsie, traité à l'Institut Pasteur du 18 juillet au 6 août. 

Les morsures au nombre de dix siégeaient sur les deux faces de la 
région métacarpienne de la main gauche : trois d’entre elles étaient 
très pénétrantes. 

Le 6 août, Mermont ressent des fourmillements dans la main 
gauche, il présente de la paralysie flasque avec anesthésie, localisées 
à l’avant-bras et à la main gauche, pas d’hyperexcitabilité. Le soir, il 
mange d’assez bon appétit, se montre assez gai, mais se plaint en se 
couchant que la paralysie gagne le bras droit. Dans la nuit, il a une 
courte crise, se débat quelques instants dans son lit et meurt. Sur le 
désir formel de la famille, l’autopsie n'a pu être faite. Il est donc 
impossible de dire à quelle affection a succombé Mermont. 


640 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR. 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE, — JUILLET 1893. 


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Les animaux mordeurs ontété: chats, 15 fois ; mouton, 1 fois; 
chiens, 140 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


7me ANNÉE SEPTEMBRE 1893. No 9: 


ANNALES 


L'INSTITUT PASTEUR 


SUR LA COAGULATION DE L'ALBUMINE 


Par E. DUCLAUX 


Il 

Je voudrais, dans ce travail, passer en revue les arguments 
qui ont servi à distinguer, dans le blanc d'œuf, plusieurs 
substances albuminoïdes diverses, et montrer par l'expérience 
qu'ils sont tous caducs, de sorte que, s’ilexiste en réalité plusieurs 
albumines diverses, ce que je suis loin de nier & priori, je 
pourrai conclure au moins qu'elles sont encore à trouver, et 
qu'il faudra, pour les isoler, découvrir des méthodes différentes 
de celles qu’on a employées jusqu'ici. 

On opère en ce moment de la façon suivante. Le blanc d'œuf 
de poule, par exemple, est coupé avec des ciseaux de façon à 
rompre les lamelles et longuement agité dans de l’eau. Il reste 
des pellicules flottantes qu'on élimine, soit en filtrant le liquide 
sous pression au travers d'un nouet de toile serrée, soit en le 
battant en neige, le laissant ensuite reposer, et décantant 
ce qui se réunit peu à peu au fond du vase. On obtient ainsi 
un liquide un peu visqueux, opalescent, sensiblement alcalin au 
tournesol et même à la phénolphtaléine. L’alcalinité au tournesol 
correspond, d’après M. Scholl', à 05,225 d’hydrate de potasse pour 
100 d’albumine, comme moyenne de plusieurs déterminations. 

Ce liquide, saturé de sulfate de magnésium, suivant le procédé 
de Starke, ou bien additionné d’un égal volume d’une solution 
saturée à froid de sulfate d’ammonium, donne un précipité que 
l’on considère comme formé de globulines. Dans un récent 


1. Bacteriologische und chemische Studien ueber das Huhnereiweiss. (Archiv, 
f. Hyg., 1893, p. 535.) 
A1 


642 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


travail sur le sulfate de quinine!, j'ai assez montré le caractère 
illusoire de ces précipitations sous l’action des sels pour pouvoir 
conclure tout de suite que ces prétendues globulines qu'on sépare ne 
sont pas nécessairement distinctes des albumines qu'on laisse 

qu'on va retrouver dans le liquide filtré, de sorte que je peux 
les laisser de côté tout de suite. 

Après avoir épuisé l’action des sels, on a recours d'ordinaire 
à l’action de la chaleur. On sait que les solutions d’albumine se 
coagulent quand on les chaulfe. D'après M. A. Gautier, la coagu- 
lation du blanc d'œuf de poule dilué dans deux fois et demie son 
volume d’eau commence vers 50° par un léger trouble, qui 
augmente et devient notable de 57° à 63°. En filtrant, on sépare 
ainsi environ le 1/5 de l’albumine dissoute; en chauffant lente- 
ment la liqueur filtrée, on n'observe plus de 63° à 71° qu'un 
louche insignifiant. Le reste de l’albumine dissoute ne se coagule 
que de 72° à 73°. De ces expériences, M. À. Gautier avait conclu 
que le blanc d'œuf contient deux espèces d'albumine. 

M. A. Béchamp en distingue trois, qu'il essaie de caractériser 
de même par leurs températures de coagulation et leurs pouvoirs 
rotatoires différents. Je laisse de côté pour le moment tout ce 
qui est relatif au pouvoir rotatoire *, me réservant d'y revenir 
dans un travail spécial. Je me propose surtout d'étudier ici la 
coagulauion sous l’influence de la chaleur, et, en restant dans cet 
ordre d'idées, je relève un dernier travail de MM. Corin et Bérard, 
qui distinguent à leur tour, dans le blanc d'œuf de poule, cinq 
espèces d’albumine dont les températures de coagulation 
sont 570,5; 670: 720: 76° et 820. 

On peut remarquer tout de suite que ces chiffres ne concordent 
pas avec ceux de M. À. Gaulier, et même que l’un d’eux, 67°, est 
à égale distance des limites 63° et 71°, entre lesquelles M. A. Gau- 
tier n’a observé qu'un louche insignifiant. Je pourrais triompher 
de ces discordances, et conclure qu’une méthode qui leur laisse 
place est une pauvre méthode de classification. Mais il vaut 
mieux chercher d’où elles proviennent, ou plutôt à quelles causes 
on est autorisé en ce moment à les rapporter, 

4. Ces Annales, t. VI. 

2, Je ne veux faire observer qu’une chose, c’est que les pouvoirs rotatoires 
qu'on a mesurés l’ont été sur des albumines isolées par l’action de la chaleur. Si 


donc je démontre que cette action ne peut servir à créer des espèces, il importera 
eu que les albumines ainsi séparées aient tel ou tel pouvoir rotatoire. 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 643 


Il 


Il y en a deux principales. La première est que la tempé- 
rature de la coagulation est fort mal définie, parce que la coagu- 
lation n’est jamais un phénomène instantané. Elle dure peu si 
la température est un peu plus élevée, davantage si la tempé- 
rature est plus basse; mais, dans ce dernier cas, en lui laissant 
le temps nécessaire, on la verra se réaliser. 

En étudiant ce phénomène de près, on constate ses ressem- 
blances profondes avec la coagulation produite sur les solutions 
de sulfate de quinine sous l’action des sels. En chauffant 
lentement une solution un peu étendue d’albumine qu'on agite 
constamment, de façon qu'il n’y ait de surchauffe en aucun 
point, on voit la coagulation débuter par un trouble laiteux, 
donnant au liquide des reflets bleus et une transparence rousse; 
c’est l'effet Tyndall, sur lequel j’ai insisté dans une Revue anté- 
rieure, et qui est la première manifestation visible de la coales- 
cence des molécules primitivement dissoutes dans un liquide en 
groupes plus ou moins volumineux. Si ce trouble est saisi à ses 
débuts, et si le liquide est refroidi aussitôt, il peut persister plus 
ou moins longtemps, parfois même disparaître, mais il n’aboutit 
pas à la formation de flocons en suspension ou à une coagulation 
véritable. | 

S'il est assez prononcé, au contraire, et si on arrête le chauf- 
fage en maintenant constante la température atteinte, on voit au 
bout d’un temps plus ou moins long ce trouble uniforme se con- 
créter en flocons, diffus d’abord, plus nets ensuite, et qui finissent 
par former un dépôt d’albumine coagulée. 

Si on a porté d'emblée la température un peu plus haut, le 
dépôt se forme plus rapidement. Il est aussi un peu plus volu- 
mineux et plus lourd. Mais il n’y a aucune raison de le distinguer 
du précédent, à moins de se lancer dans des subtilités sans fin. 
Concluons donc que la température ne suffit pas pour définir un 
phénomène de coagulation et caractériser la substance qui le 
subit : il faut aussi la durée du phénomène. C’est ainsi que, dans 
du lait additionné de présure, la coagulation peut se faire, si on 
lui en laisse le temps, à des températures fort variables, dans 
lesquelles personne n’a eu encore l'idée de chercher la définition 
de diverses espèces de caséine. 


0 


644 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Ajoutons, pour terminer, que tous ces fractionnements 
successifs de l’albumine de l'œuf, sous l’action de la température, 
semblent obéir à la même loi que les fractionnements successifs 
du sulfate de quinine en solution sous l’action des sels, et que 
le liquide qui a donné un premier dépôt devient par là plus 
résistant à en donner un second, de sorte que la précipitation de 
la malière dissoute, au lieu de se faire progressivement et 
régulièrement, se fait par 4-coups, chaque dépôt étant séparé du 
précédent et du suivant par un intervalle dans lequel l’augmen- 
tation de l’action précipitante ne produit aucun effet. Telle est 
probablement l’explication des intervalles de non-précipitation 
constatés tant par M. A. Gautier que par M. A. Béchamp et 
MM. Corin et Bérard. Notons, comme confirmation de la vue qui 
précède, que les températures de précipitation varient d'un de 
ces savants aux autres, absolument comme varient lés propor- 
tions de sel qui peuvent déterminer la précipitation dans des 
solutions de sulfate de quinine de même concentration‘. 


LT: 


J'arrive maintenant à la seconde des raisons qui empêchent 
d'attribuer une valeur quelconque aux températures comme 
moyen de séparer et de définir diverses albumines : c’est que les 
températures de coagulation varient notablement pour de légères 
différences dans la nature et dans la proportion des sels minéraux 
présents dans la liqueur. 

Ur, nature et proportion varient à la fois dans l’albumine des 
œufs d'une même espèce, et dans un même œuf, avec le temps. 
Il me suffira, pour démontrer ce que j'avance, d'emprunter à 
MM. Poleck et Weber, d’un côté, de l’autre, à M. Scholl, les 
résultats de leurs analyses. 

D'après MM. Poleck et Weber, les cendres forment de 6,4 à 
6, 80/0 du poids de l’albumine sèche. Quant à leur composition, 
voici deux analyses quitémoignent qu’elle estloin d’être constante: 


Chlorure de SOIN PR PAPE PA PTE Re 9,16 44,07 
Cioruretde MOSS eee Een SUR 41,29 42,17 
Soude en excès.,.,..... Role A LS ES PAL 23,04 16,09 
Potasge ém'excos MARS Lies a Au er AE 2,36 1,15 


1. Voir sur ce point le mémoire cité. 


SUR LA COAGULATION DE L'ALBUMINE, 645 


ri, GR SES ER A PAREIL tr 4,74 2,19 
Magnésie.,..... Ortse DURE Te TT EE 4,60 8,17 
DEC CRT EEE Le see DÉPUS vs 0,44 0,55 
Acide phosphorique..... DRE 8 LE CR 4,83 3,19 
— carbonique... RE AR CE ARE AE 2 41,60 11,52 
— sulfurique... LE CNOPRC tie SEC sue 2,63 4,32 
SIC IQU'E se mne ed ONCE CORNE HE 0,49 2,04 


Les chlorures de sodium et de potassium forment, comme on 

le voit, environ la moitié du poids des cendres. Le reste des 
bases est combiné aux divers acides relatés dans l'analyse, mais 
de façon que la réaction définitive reste alcaline. Il y a à 
remarquer les variations notables dans les proportions de chaux 
et de magnésie, qui jouent un si grand rôle dans les phénomènes 
de coagulation. Les phosphates sont en quantité très faible. 
L'’acide carbonique relevé dans l’analyse ne provient pas uni- 
quement de la combustion du carbone de l’albumine. M. Scholl 
a montré que l’albumine de l’œuf frais contenait des bicar- 
bonates en quantité suffisante pour fournir au moins la moitié 
de cet acide carbonique, et, autant qu’on peut le voir par les 
chiffres qu’il donne, sans qu’il mentionne expressément le fait, 
ces bicarbonates sont en quantité variable. 
Dans de l’albumine exposée à l’air, ces bicarbonates se décom- 
posent peu à peu et l’alcalinité augmente. Dans de l’albumine 
qu'on conserve dans sa coquille, une autre cause de variation 
provient des phénomènes d’osmose saline entre le blanc et le 
jaune de l'œuf. La composition des cendres du vitellus est très 
différente de celle de l’albumine, et tout aussi variable, comme 
le montrent les analyses suivantes, faites encore par MM. Poleck 
et Weber: 


Il IT 

Soude ,..,.... OR DE PIE En RER 5,12 6,57 
BOLASS CNE AMEN Mr connue TES D 8,93 8,05 
Ehiux era ER RNA TRR ER R EE NE € 12,21 13,28 
MHORÉSIC Sn rer REA HAS OCDE Cle 2,07 2,11 
Dave deter "re 2. ed tea as re 1,45 1,19 
Metde pPhosphorIQuE Sr ma marse des das el 69,53 66,70 

EE SHICIQUES 2 ARR dE Na) VS, Fan 0,55 1,40 


Ici, les chlorures sont en quantité minime ; ce sont les phos- 
phates qui dominent, et probablement les phosphates acides, 
car la réaction de la masse est nettement acide, tandis que celle 
du blanc d'œuf est, comme nous l’avons vu, alcaline, La diffu- 


646 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sion doit avec le temps amener dans le blanc les sels du jaune, 
dans le jaune ceux du blanc. La composition des cendres de 
l’albumine doit donc varier dans un même œuf suivant l’époque 
à laquelle on les étudie, et comme les sels présents ont une 
influence non seulement sur la température, mais encore sur 
mode de coagulation, on s'explique ce fait, bien connu des 
ménagères, qu'un œuf frais ne se coagule pas dans l’eau 
bouillante de la même façon qu'un œuf de quelques jours. 


IV 


Cette question de l'influence des sels sur la coagulation a 
fait l’objet de nombreuses études et controverses depuis le 
moment où Aronstein, en 1874, montra que l’albumine devient 
d'autant plus difficilement coagulable par la chaleur qu'elle a 
été mieux privée de sels par la dialyse. 

Pour nous faire une idée de la sensibilité avec laquelle la 
température de coagulation accuse des variations presque infini- 
tésimales dans la nature ou la proportion des sels en solution, 
nous n'avons qu'à citer les résultats d’un travail de M. Rosen- 
berge, qui a mis fin, pour le moment, à toutes les discussions 
soulevées par la découverte d’Aronstein ‘. 

M. Rosenberg a opéré sur de l’albumine fraîche qu'il soumet- 
tait à la dialyse, soit en lui laissant son alcalinité ordinaire, soit 
après lavoir additionnée de faibles quantités d'acide chlorhy- 
drique de façon à la rendre légèrement acide. 

Pendant la dialyse des solutions acides ou alcalines d'albu- 
mine, il a pu distinguer trois périodes. 

Une première période, qui dure 10 à 15 heures seulement 
pour les solutions acides, 48 heures pour les solutions alcalines, 
aboutit à donner des liquides qui ne sont plus coagulables à 
l’ébullition. C’est la disparition des sels les plus diffusibles, pro- 
bablement celle des chlorures, qui a produit ce résultat. La preuve, 
c’est qu’en ajoutant au liquide dialysé une trace de chlorure de 
sodium on lui rend toutes les propriétés de la solution primi- 
tive, et en particulier celle de se coaguler par la chaleur. 

En continuant la dialyse, on constate que l'aptitude à la 
coagulation à chaud reparait à nouveau, et atteint son maximum 


4, Vergleich, Untersuch. betreff. das Albumin. (Z'hëse de Dorpat, 1883,) 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 647 


après 48 heures pour les solutions acides, au bout de 5 à 6 jours 
pour les solutions alcalines. Des expériences de contrôle ont 
montré qu'à ce moment les solutions ne se coagulaient plus 
lorsqu'on ajoutait un peu d’alcali pour les solutions alcalines, 
d'acide pour les solutions acides. La réapparition de la coagu- 
labilité tenait donc à ce que l’alcali d’un côté, l’acide de l’autre, 
avaient disparu par dialyse en tropfortes proportions,et M. Rosen- 
berg explique le fait en disant qu’il en restait trop peu pour que la 
transformation en acide-albumine ou alcali-albumine soluble ait 
pu se faire sous l’action de la chaleur. Nous nous contenterons, 
pour nous, de ranger l'acide et l’alcali au nombre des substances 
salines dont l'apparition ou la disparition provoque ou empêche 
la coagulation. Il n’y a pas de raison pour faire jouer à cet acide 
ou à cet alcali un autre rôle que celui qu’a joué le chlorure de 
sodium dans la première période : nous dirons donc seulement que 
le mélange d'acides et de sels qui existe à la fin de cette seconde 
période est tel que l’albumine se coagule à chaud, et nous con- 
clurons que la sensibilité de la réaction est grande, puisqu'elle 
traduit la présence ou l’absence de quantités très faibies de sels. 
Enfin, une dialyse plus prolongée fait disparaître définitive- 
ment l'aptitude à la coagulation à chaud. Ici, il ne peut encore 
être question d'une transformation lente de l’albumine en acide- 
albumine ou alcali-albumine, car l'addition d’acides ou d’alcalis 
étendus, avec quelque précaution qu'elle soit faite, dans les 
liqueurs alcalines ou acides, ne déterminent jamais de coagulum. 
C’est à la disparition presque complète des sels qu’est dû le phé- 
nomène. Je dis presque complète, car ces albumines longuement 
dialysées retiennent encore de cinq à quinze dix millièmes 
de sels, formés surtout de phosphates de calcium et de fer, 
corps colloïdaux que la dialyse n’élimine qu'avec une lenteur 
extrême. M. Rosenberg a donc raison de conclure que, totale- 
ment privée de sels, l’albumine ne se coagulerait plus à l’ébulli- 
tion, et que par conséquent cette coagulation est chez elle un 
phénomène aussi contingent etaussi dépendant des circonstances 
extérieures que pour les autres substances coagulables. 


V 
Nous allons faire jaillir un nouveau trait de ressemblance en 
profitant de quelques-unes de ses observations, que nous inter- 


648 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


préterons autrement que lui. Quand on chauffe à l’ébullition 
ces solutions d’albumine longuement dialysées, on constate 
qu'elles deviennent laiteuses, sans pourtant fournir de précipité, 
ni rien laisser sur un filtre. De plus, elles émettent par rétlexion 
de la lumière partiellement polarisée. On reconnaît là tous les 
caractères que présente le premier degré de coalescence des 
molécules dans toutes les solutions coagulables, minérales 
ou organiques, et nous conclurons, par suite, non pas, avec 
M. Rosenberg, que la chaleur qui ne peut plus coaguler l’albu- 
mine, peut au moins la modifier dans ces conditions, mais 
simplement que le degré de dilution auquel la dialyse a amené 
les sels permet à la coagulation de commencer, aux premiers 
degrés de coalescence des molécules de se produire, sans lui 
permettre d'aller plus loin. Cette opalescence sans formation 
de dépôt s’observe sur les solutions étendues d’albumine d'œufs 
très frais; elle précède, comme nous l'avons montré plus haut, les 
coagulations les plus régulières. C’est un phénomène normal, 
c’est la première période de la formation de tout coagulum. 
Lorsque ces solutions opalescentes sont fortement concen- 
trées, l’addition d’une trace de chlorure de sodium les géla- 
tinise et les transforme en une masse molle et élastique; c’est 
ce qu'a montré le premier M. Schutzenberger!. Cette remarque 
ne fournit pas seulement une confirmation des vues qui pré- 
cèdent, elle nous permet de passer à l’étude des conclusions 
de M. Tarchanoff au sujet de l’albumine des œufs des oiseaux 
qui naissent nus et les yeux fermés, moineaux, hirondelles, 
merles, pigeons, etc. L’albumine de ces œufs, au lieu de se coa- 
guler à l’ébullition comme celle de l’œuf de poule, donne une 
masse molle, transparente ou cornée, parfois fluorescente et 
émettant comme telle de la lumière polarisée. La coagulation ne 
se fait qu’à 95°, au lieu de commencer à 57°, comme celle de l'œuf 
de poule. Enfin le caillot est soluble à la longue dans l’eau 
pouillante. Toutes ces propriétés semblent éloigner cette albu- 
mine de celle de l'œuf, et M. Tarchanoff en fait, après MM. Valen- 
ciennes et Frémy, une albumine spéciale, qu'il appelle tata-albu- 
mine. Je ne veux pas dire qu'il n'existe pas d'albumine spéciale 
à ces œufs, ni m'élever contre l'opinion des savants qui attri- 
buent à chaque espèce d'oiseaux une albumine spéciale, bien 
4. Comptes rendus, t. LVIIT, p. 86. 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 649 


que cette vue aille droit contre les tendances de la science, qui 
incline de plus en plus à expliquer les différences entre les élé- 
ments constitutifs des Lissus par des différences dans le dosage 
des divers principes immédiats qui y figurent que par des diffé- 
rences spécifiques dans ces principes eux-mêmes. Tout ce que je 
veux dire, c'est que s’il existe une tata-albumine, son existence 
ne ressort pas des arguments mis en avant pour la prouver. Tous 
ceux qui précèdent, relatifs à la température et à la forme de la 
coagulation, sont sans valeur, en tenant compte de ce que nous 
avons dit plus haut. Rien n’est d’ailleurs plus facile que de passer 
de cette tala-albumine à l'albumine ordinaire. M. Tarchanoff 
lui-même a vu en effet qu’en ajoutant quelques gouttes d'une 
solution concentrée d’un sel neutre, sel marin, sulfate de 
soude, etc., on abaisse notablement la température de coagu- 
lation, et le coagulum qu’on obtient est blanc et opaque comme 
celui de l’œuf de poule. À l’incubation, dit M. Tarchanoff, la 
tata-albumine reprend les propriétés de l’albumine ordinaire : 
c'est sans doute l'effet de la diffusion qui amène dans le blanc 
une partie des sels du jaune, et dans le jaune une partie des 
sels du blanc. M. Tarchanoff argue, à la vérité, de ce qu'il n'y 
a pas, dans la tata-albumine d’un œuf frais, plus de sels ni plus 
d’alcalinité que dans l’albumine d’un œuf de poule; mais nous 
savons que la quantité ne joue pas seule un rôle, qu'il y a aussi 
la qualité, et, jusqu'à nouvel ordre, on est autorisé à chercher 
dans des différences de composition saline l'explication des 
résultats, curieux du reste, de M. Tarchanoff. 

Je pourrais passer en revue, en les combattant au moyen des 
mêmes arguments, les divers travaux publiés sur les œufs, et qui 
ont abouti à la création d'espèces d’albumines. Mais j'ai hâte 
d'abandonner cette voie. Je reconnais en effet que tous ces argu- 
ments, pour probants qu'ils me paraissent, sont incapables de for- 
cer des convictions, surtout des convictions fondées sur des 
réactions aussi subtiles que celles qui ont servi à différencier les 
diverses matières albuminoïdes. « On ne se fait tuer, a dit 
M. Renan, que pour ce dont on n’est pas sûr », et la géométrie 
n'a pas encore eu de martyrs. 


650 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


VI 

Je me suis donc préoccupé de chercher une démonstration 
par l'absurde, comme celle que j’avais trouvée avec le sulfate de 
quinine. En montrant que des sels variés, ou le même sel en 
proportions variées, précipitent toujours du sulfate de quinine 
dans une solution de ce sel, j'ai essayé de ruiner l'argument en 
vertu duquel on voyait des substances différentes dans les préci- 
pités divers que des sels variés ou le même sel en proportions 
variées donnaient dans les solutions d’une matière albuminoïde. 
J'ai cherché de même un sel de composition fixe se précipitant 
sous l’action de la chaleur comme les solutions d’albumine, et se 
prêtant comme elles à des précipitations qu’on peut produire et 
fractionner à son gré. Je crois l’avoir trouvé dans le phosphate 
de chaux. 

Voyons d’abord les ressemblances extérieures. Elles sont sur- 
tout manifestes avec le phosphate de chaux tribasique colloïdal, 
Pour les bien voir, il faut préparer ce corps soi-même. Les 
phosphates de chaux tribasiques du commerce sont en elfet tou- 
jours un mélange de phosphate tribasique et bibasique ou du 
moins ne contiennent jamais la quantité de chaux qui correspond 
à la formule (PO‘)?Ca*. Rien n’est moins sûr du reste que l’exis- 
tence de ce phosphate. Je n’ai pas trouvé d'autre moyen, pour 
obtenir une combinaison de chaux et d’acide phosphorique conte- 
nant 54,2 (0/0 de chaux, comme le veut cette formule, que de 
préparer à l’avance des solutions titrées d'acide phosphorique 
pur et de chaux pure, et de les mélanger dans les proportions 
voulues, Encore faut-il ne pas verser la dissolution alcaline dans 
la solution acide, sous peine de voir apparaître le précipité cris- 
tallin bien connu de phosphate bibasique, qui laisse de la chaux 
en excès. Quand on verse la solution acide dans l’eau de chaux, 
et qu'on opère rapidement, on voit le liquide se remplir d’un 
précipité gélatineux, analogue à de l’aibumine coagulée. Dans 
une de mes expériences, ce précipité contenait 54,1 0/0 de 
chaux, et le liquide qu’il abandonnait en se rétractant ne conte- 
nait, après filtration sur du papier, que 0,0046 0/0 de résidu. Ge 
phosphate gélatineux est done à peu près insoluble dans l’eau. Il 
ne passe pas à travers les filtres de papier, à plus forte raison à 
travers les filtres de porcelaine. 


SUR LA COAGULATION DE L'ALBUMINE. 651 


Mais on sait comment Je rendre soluble, même dans les 
liqueurs alcalines. I suffit d'y ajouter du citrate d’'ammoniaque. 
On a expliqué cet effet par la production de sels doubles, mais la 
disproportion entre la quantité de citrate et celle du phosphate 
de chaux ramené à l'état soluble proteste contre cette explication. 
Il vaut mieux voir là un cas particulier de ces phénomènes de 
solubilisation ou d'insolubilisation produits par les sels sur les 
substances coagulables, et qui échappent à toute loi atomique 
simple. 

Quoi qu'il en soit, ajoutons du citrate d’ammoniaque parfaite- 
ment neutre à notre phosphate de chaux gélatineux. Quand on en 
a ajouté quatre à cinq fois le poids de phosphate, on trouve que 
le mélange passe intégralement au travers du filtre de papier, 
mais ne passe pas intégralement au travers d’un filtre de porce- 
laine. La matière est donc solubilisée, mais incomplètement. Les 
agrégats moléculaires qui constituaient le coagulum ne sont 
pas complètement dissociés. Un autre caractère en avertit. Le 
liquide est opalescent, bleu par réflexion, rougeätre par transpa- 
rence. Il donne la réaction de Tyndall. C’est un liquide où la 
coagulation commence, ou n'a pas encore totalement disparu. 

Un excès de citrate d’ammoniaque ne fait pas disparaître cette 
opalescence : il faut, pour obtenir un liquide limpide, ajouter un 
acide, par exemplede l'acide chlorhydrique.Maison peut ramener 
le louche en saturantavec la potasse. S’iln’y a pas un excès d'alcali, 
ce liquide louchit encore plus quand on le chauffe, et finit par 
donner un liquide tellement identique aux solutions chauffées 
d'albumine non coagulable, qu'il faut un œil très exercé pour les 
distinguer. Comme ces solutions, celle du phosphate de chaux 
dans le citrate conserve son aspect laiteux, sans donner pendant 
longtemps de trouble ni de précipité si on la conserve à chaud. 
Le liquide s'éclaireit si on le laisse se refroidir, ainsi que nous 
avons vu plus haut pour les solutions d’albumine saisies au 
commencement du phénomène de coagulation. 

Cependant, on observe encore ici, comme avec les solutions 
d'albumine et en général de toutes les substances coagulables, 
l'intervention du temps dans le phénomène de coagulation. Une 
solution opalescente filtrée passe trouble au commencement, et, 
si on l’abandonne à elle-même, on y voit se former des flocons 
qui ensuite restent sur le filtre, C’est ainsi que le filtre se bouche 


652 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


peu à peu et ne laisse plus passer ensuite qu’un liquide limpide. 
Bref, ilest impossible de manipuler ce précipité sans rencontrer, 
presque à chaque pas, une manifestation de ce travail de coales- 
cence moléculaire etde condensation progressive qui caractérise 
toute coagulation. 


VII 


Arrivons maintenant à l’action de la chaleur. Appliquée au 
phosphate gélatineux lui-même, elle hâte ce travail de condensa- 
tion, rend le phosphate de plus en plus difficilement soluble dans 
le citrate d'ammoniaque et même les acides étendus. Ce qu’on 
appelle phosphate rétrogadé ne me paraît être que du phosphate 
gélatineux dans lequel la coagulation a resserré les molécules de 
façon à augmenter leur résistance à toute action extérieure. Ce 
n’est pas un phénomène chimique : c’est une action de rétrac- 
tion comparable à la formation du caillot sanguin. 

L'action est la même, comme nous allons le voir, sur le 
phosphate gélatineux en solution. En le dissolvant dans l'acide 
chlorhydrique étendu, on voitque, pour le dissoudre, ilfautajouter 
assez exactement la quantité d'acide chlorhydrique voulue par 
l'équation 


(PO“Cas + 4 HCI — (PO“H2)?Ca + 2CaCP, 


qui correspond à la formation du phosphate monobasique. Il 
existe un autre critérium de l’exactitude de cette conclusion. 
L’acidité de la solution chlorhydrique, mesurée avec la phénol- 
phtaléine comme indicateur, ne change pas quand on y ajoute 
le phosphate tribasique. C’est ce qui doit arriver s’il se forme du 
phosphate monobasique, qui peutencore, comme on sait, saturer 
deux équivalents de base, en faisantle virage avec laphénolphta- 
léine. 

Une solution faite par cette méthode, et contenant 2 0/0 de 
phosphate tribasique, se trouble quand on la chauffe à l’ébulli- 
tion, et laisse déposer avec lenteur des tablettes plates parallélo- 
grammiques, nettement cristallisées, que nous rencontrerons 
souvent dans la suite de cet exposé, et qui sont un hydrate du 
phosphate bibasique de chaux PO*CaH. Ici se présente une 
première remarque. Le corps qui se précipite n’est pas du tout 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 653 


identique à celui qui était en solution, et qui, comme nous l’avons 
vu, était du phosphate monobasique. Son apparition est en outre 
accompagnée d’une diminution d’acidité dans la liqueur, toujours 
en prenant comme indicateur la phénolphtaléine. Or, ces varia- 
tions dans l’acidité de la liqueur s’observent aussi pendant la 
coagulation de l’albumine sous l’action de la chaleur. M. Gautier 
a trouvé que la quantité de soude mise en liberté par la coagu- 
lation de 100 parties d'albumine supposée sèche était de 05,161 
NaOH. L'origine de cet alcali est beaucoup moins nette dans le 
cas de l’albumine que dans le cas du phosphate de chaux. Peut- 
être faut-il en chercher l'origine dans une réaction intérieure des 
sels de l’albumine, au lieu de la chercher dans l’albumine elle- 
même. Quoi qu'il en soit, voilà une réaction que rien ne permet 
de distinguer d’une réaction de coagulation d’albumine sous 
l'influence de la chaleur, sauf qu’elle donne un corps cristallin 
bien connu et facilement reconnaissable, et ce corps n'était 
coutenu qu'en puissance dans le liquide chauffé. La composition 
du précipité est différente du corps en solution. 

Elle est aussi différente de celle du phosphate tribasique 
duquel on était parti. Il y a moins de chaux et plus d'acide phos- 
phorique. Par contre, il reste en solution dans le liquide, une 
fois le précipité formé et séparé par le filtre, plus de chaux et 
moins d'acide phosphorique qu’au début. Ce liquide, saturé en 
partie par un alcali, peut donner, à des températures variables, 
suivant la quantité d’alcali ajouté, des précipités se formant avec 
plus ou moins de lenteur, à des températures qui peuvent varier 
de la température ordinaire à celle de l’ébullition : ces précipités 
sont précédés par une opalescence du liquide, ils sont gélatineux 
parfois au début, pouvant ensuite devenir cristallins. De plus, 
bien que provenant de liquides différents, ils sont tous, au début 
au moins, du phosphate bibasique ‘. Mais nous allons retrouver 
des phénomènes du même ordre en étudiant les solutions acides 
du phosphate bibasique, avec lesquelles nous aurons en outre 
l'avantage que, les précipités ayant la même composition que le 
sel duquel on est parti, nous n’aurons pas dans les eaux mères 
qui auront laissé déposer les diverses cristallisations les varia- 


1. La proportion de chaux y augmente vers la fin, à mesure que le liquide 
s’enrichit en chaux et s'appauvrit en acide phosphorique. 


654 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tions de teneur en chaux et en acide phosphorique que nous 
venons de constater avec le phosphate tribasique. 

Disons tout de suite, pour n'avoir pas à y revenir, que le 
phosphate acide de chaux, qui est soluble dans l’eau,se comporte 
comme les solutions acides ‘de phosphate tribasique: il se 
précipite aussi du phosphate bibasique sous l'influence de la 
chaleur, à une température qui dépend à la fois de la proportion 
du sel dissous et du titre acide de la liqueur. Mais là encore 
il y a des variations de composition que nous allons éliminer en 
étudiant le phosphate bibasique cristallisé. 


VII 


Phosphate bibasique cristallisé. — Ce phosphate est insoluble 
dans l’eau, mais soluble dans les acides, même faibles. J'ai 
surtout opéré avec les solutions chlorhydriques: les résultats 
généraux sont les mêmes avec tous les acides. 

Quand on met de ce phosphate dans une solution étendue 
d'acide chlorhydrique, la dissolution, d’abord rapide, devient de 
plus en plus lente, et tend évidemment vers une certaine limite. 
Si on a mesuré l'acidité initiale de la liqueur avec le méthyl- 
orange et la phénolphtaléine, on constate qu'à mesure que le 
phosphate se dissout, l'acidité diminue au méthyl-orange et 
augmente à la phénolphtaléine. Finalement quand, au bout de 
quelques jours, la liqueur a dissous à peu près tout ce qu’elle 
pouvait dissoudre de phosphate l'acidité est à peu près nulle au 
méthyl-orange et elle a à peu près doublé à la phénolphtaléine. 
Cela démontre qu'ici encore le corps qui entre en solution est le 
phosphate monobasique (PO*H>)* Ca, et que laréaction de disso- 
lution est 


(PO“H}2Ca? + 2HC1 — (PO*H2}Ca + CaCB. 


Nous avons donc là une sorte de liquide saturé, dans lequel 
la production par un moyen quelconque d’un précipité de phos- 
phate bibasique s'accompagnera d’une diminution d'acidité à la 
phénolphtaléine, ou d'une augmentation d’acidité à l’orangine, 
soit dans les deux cas de la mise en liberté d’un peu d’acide 
chlorhydrique jusqu'au moment où, tout le phosphate bibasique 
étant précipité de nouveau, la liqueur se retrouvera ce qu’elle 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 655 


était à l’origine, une simple dissolution d’acide chlorhydrique. 

Or, avec cette solution de phosphate, on n’a que l'embarras 
du choix parmi les moyens de précipitation, les sels neutres, les 
alcalis ou l’action de la chaleur. Je passe sans insister sur l’action 
des sels, pour lesquels nous retrouverions des phénomènes déjà 
connus, et d’autres qui méritent une élude spéciale. Je voudrais 
montrer, ce qui est l'objet essentiel de ce mémoire, qu’en faisant 
agir séparées ou combinées, l’action des alcalis et celle de la cha- 
leur, on peut obtenir, à la température qu'on veut, des coagula- 
tions en tout semblables à celles des dissolutions d’albumine. 

Ilme suffira pour cela de résumer uneexpérience dans laquelle 
j'avais fait dissoudre du phosphate bibasique de chaux pur dans 
une solution à #,1 0/0 d'acide chlorhydrique pur. La liqueur 
n’était pas saturée, car l’acidité avait seulement augmenté de 
moitié, au lieu de devenir double. En somme, le liquide ne con- 
tenait que 11 0/0 de phosphate bibasique. Voyons d’abord 
comment il se comporte sous l'action de la chaleur, et supposons 
que nous opérons sur un volume de 100 c. c. 

En le chauffant doucement et en le maintenant constam- 
ment agité, de façon à éviter les surchauffes locales, on constate 
que le liquide, limpide jusque-là, louchit à 80° d’une façon pro- 
gressive, et en passant par toutes lesgradations qui indiquent le 
progrès de la condensation moléculaire : apparition d’une teinte 
bleue qui est la première manifestation visible de la coalescence, 
puis formation d'un louche blanc et transparent qui correspond 
à une augmentation de volume des agrégats. À ce moment il 
n’y a pas encore de précipité, mais il ne tarde pas à apparaître 
sous la forme de flocons très ténus qui semblent d’abord amor- 
phes, peut-être parce qu'ils sont très pelits, et qui ne tardent 
pas à prendre l’état cristallin. Pour en accélérer la formation, je 
chauffe au baïn-marie à la température de 85°, que je ne dépasse 
pas. Il se forme un premier précipité A, qui est un hydrate du 
phosphate bibasique (PO*H)Ca:; chauffé au rouge, il pèse 
0:,477 et contient 44, 30/0 de chaux. Disons tout de suite, 
pour n'avoir pas à y revenir, que tous les précipités que nous 
allons rencontrer, analysés, ont montré la mêmeteneur en chaux, 
qui était aussi celle du phosphate bibasique mis en œuvre. Leur 
formation ne changeait donc pas d'une façon sensible le rapport 
entre l'acide phosphorique et la chaux en solution, de sorte 


656 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


qu'on peut, si on veut, les envisager comme des dépôts successifs 
du phosphate bibasique dissous dans l’acide chlorhydrique. Ils ne 
diffèrent entre eux que par la proportion d’eau de cristallisation, 
mais c’est là un point que nous laissons de côté pour le moment 
pour y revenir à la fin de ce mémoire. 

Reprenons le liquide limpide provenant de la filtration des 
cristaux A. Cette filtration peut d'ordinaire se faire à une 
température quelconque sans redissolution sensible du précipité 
cristallin. Il est en effet remarquable que la liqueur refroidie en 
présence de son précipité ne revienne pas à l’état d'équilibre à 
froid duquel elle était partie, et qui correspond à la dissolution 
complète du phosphate. De même lalbumine précipitée ou 
coagulée ne se redissout pas par refroidissement. Mais cette 
multiplicité des états d'équilibre correspondants à une même 
température est le cas habituel dans ces précipitations. Je les 
ai observés et signalés à propos du sulfate de quinine précipité 
sous l’action des sels, et nous essaierons bientôt d'en montrer 
la cause. Contentons-nous pour ie moment d’en signaler le 
double caractère d'originalité et de généralité. On peut dire 
que, pour cette catégorie de corps, le mot solubilité n’a plus de 
sens. 

Chauffons maintenant le liquide filtré. Il reste encore limpide 
à l’ébullition, mais il recommence à se troubler à une tempéra- 
ture de 110° environ, en présentant les mêmes gradations que 
plus haut. Pour le pousser à bout dans cette direction, je le 
maintiens 5 minules à 120° et je recueille 15,037 d’un précipité 
cristallin B, qui est encore un hydrate de phosphate bibasique. 

Le liquide de filtration des cristaux précipiterait sans aucun 
doute à nouveau à une température supérieure. Mais on voit 
alors mal ce qui s’y passe. On peut le ramener à précipiter à 
nouveau à une température plus basse en saturant une partie 
de l'acide avec de la potasse, de la soude ou de l’ammoniaque. 
Il ne faut pas employer la chaux pour ne pas faire varier la 
proportion de cette base à l'acide phosphorique en solution. Dars 
l'expérience que je relate, j'ai ajouté environ 1 gramme de KOH. 
Le liquide limpide se trouble au voisinage de 90°, et, soumis à 
l’ébullition, dépose 05,510 d’un nouveau précipité C qui est 
encore un hydrate de phosphate bibasique. 

Filtrons à nouveau. Nous pouvons amener ce liquide limpide 


SUR LA COAGULATION DE L'ALBUMINE. 657 


à louchir et à donner un précipité nouveau à la température 
ordinaire. Il suffit pour cela d’y ajouter environ 1er,5 de KO. 
On s’arrèle au moment où le précipité gélatineux, qui se forme à 
l'endroit où on verse la solution de polasse, commence à ne plus 
disparaitre. On voit alors le louche qui reste augmenter peu à 
peu, avec une assez grande lenteur, et aboutir à la formation 
d'un nouveau précipité cristallin, formé de tables parallélo- 
grammiques et de rhomboëdres aplatis, groupés en nodules 
irréguliers. Il pèse 1,187, et c’est encore un hydrate D du 
phosphate bibasique, 

Le liquide, limpide après filtration de ce précipité, se trouble 
de nouveau à 60° : en le maintenant quelques minutes à 65°, on 
en tire 0#,280 d’un nouveau précipité cristallin E, très semblable 
au précédent par ses formes cristallines. 

De mème, à 80°, nouveau précipité dans le liquide filtré 
de E. Je ne dépasse pas 85°. Cette fois les cristaux sont des tables 
aplaties, un peu arrondies aux angles, et deforme presque ovale. 
£'est encore un hydrate F de phosphate bibasique. Il pèse Osr,670. 

À 100°, nouveau précipité dans le liquide filtré de l'opération 
précédente. Ii pèse 0,530. Nous l’appellerons G. 

À 120°, nouveau précipité H, faible, pesant seulement 0:,117. 

Nous avons ainsi épuisé à nouveau sur le liquide partiellement 
saturé l’action des températures facilement accessibles, mais 
nous pouvons recommencer un nouveau cycle, en ajoutant à 
nouveau de la potasse pour saturer en partie le liquide résidu 
de l'opération précédente. En y ajoutant environ 1# de KOH, 
on obtient à nouveau un précipité [, gélalineux d’abord, eris- 
tallin ensuite, et se formant très lentement. Au bout de quelques 
heures, 1l n'a encore atteint que le poids de 0:,046. Ce sont des 
prismes à troncatures obliques, dont quelques-unes simulent des 
Josanges. | 

Le liquide filtré reste limpide jusqu'à 77°. Je ne dépasse pas 
19°. Quand on se tient ainsi au voisinage de la température 
d'apparition du premier louche, le précipité met plus longtemps 
à se former, mais la fin du phénomène n’en apparaît pas moins 
d'une facon tres nette. Tant que de nouveaux cristaux se forment 
ou n'ont pas alteint la dimension qui leur permet de se déposer, 
le liquide reste louche ou trouble. Puis il s'éclaircit rapidement 
et aucun louche nouveau n'y apparail, même avec le temps, 

42 


658 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


même lorsqu'on augmente légèrement la température. Il se pro- 
duit un équilibre stable, analogue à ceux que nous avons vus 
présider à la précipitation du sulfate de quinine sous l’action des 
sels. Quand il est atteint, on peut filtrer. Je recueille ici 
0:,250 d’un précipité cristallin J, qui est encore un hydrate du 
phosphate bibasique. 

A l’ébullition, nouveau précipité K pesant 0+r,723. Cette fois, 
celui-cise forme au fond du vase sans trouble préalable du liquide. 
Mais il ne provient pas d’un phénomène d’évaporation, car le 
liquideestchaufféau bain-marie, ell’évaporation yestnégeligeable. 
C'est encore an hydrate de phosphate bibasique, ayant des 
formes cristallines très voisines des précédents. 

A 125°, nouveau précipité L de lames plates, chatoyantes, 
losangiques. Celles-ci sont assez solubles dans l’eau froide, au 
contraire des dépôts précédents,-et le lavage sommaire auquel 
je les soumets ne m'en laisse que 05,437. C’est pourtant tou- 
jours le même hydrate, différant des autres en ce qu'il est très 
soluble dans l'eau froide. C'est ainsi que la tata-albumine de 
M. Tarchanoff peut se dissoudre dans l’eau bouillante sans que 
pour cela elle soit distincte de l’albumine ordinaire. 

Je rajoute de nouveau 0:,9 de KOH au liquide filtré limpide, 
en m'arrêtant cette fois avant l'apparition de tout précipité et de 
tout louche persistant. Le liquide limpide louchit à 60°. Je ne 
dépasse pas 64°. Il se forme des cristaux assez volumineux, qui 
semblent facilement solubles dans le liquide qui se refroidit et 
dans l’eau froide, et que je suis obligé de laver à l’eau à 60°. Le 
précipité M pèse 0:,137. 

Le liquide filtré est chauffé au bain-marie jusqu’à l'apparition 
d’un trouble qui se manifeste seulement à 95 degrés. Cette fois, 
je ne dépasse pas cette température, afin d’assister à la transfor- 
mation du louche initial en un précipité de plus en plus volu- 
mineux N. J’en trouve 0:",582 au bout de deux heures. 

Au lieu d'essayer l’action d’une température plus élevée, je 
rajoute celte fois de l’ammoniaque jusqu'à formation, à froid, 
d’un louche qui aboutit à la formation de quelques tables plates, 
parallélogrammiques, que je filtre, mais que je ne pèse pas. Le 
liquide filtré donne à 100° un précipité cristallin O pesant 05,512. 

En rajoutant de la potasse au liquide refroidi jusqu'à forma- 
lion d’un précipité gélatineux très faible que je filtre, le liquide 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE, 699 


chauffé à 100° donne un nouveau précipité P pesant 0:,502. 

Filtré, et additionné de nouveau de potasse de façon à four- 
nir un précipité gélatineux persistant, ce liquide me donne 
encore à froid 02,434 d'un précipité cristallin Q. 

L'addition d’eau de chaux détermine la formation à 85° d’un 
nouveau précipité R pesant 02,049. Dans le liquide filtré, et que 
l'ébullition ne trouble pas, Paddition de quelques gouttes de 
potasse détermine un dépôt cristallin S, pesant 0:",320. 

Enfin, le liquide qui reste, et dont les saturations précédentes 
ont diminué l'acidité, est saturé à moitié à la température ordi- 
naire, avec une solution de potasse. La masse se remplit d'un 
précipité gélatineux qui devient assez rapidement cristallin. La 
transformation se fait par l’apparition d’une foule de nodules 
crislallins qui grossissent, en même temps qu'à côté disparaissent 
les masses amorphes et granuleuses. Ce n’est pas une transmu- 
tation du dépôt gélatineux en dépôt cristallin qui remplace le 
premier in situ. Ge sont deux formations indépendantes dont 
l’ane se détruit pendant que l’autre se produit. 

Cette fois le précipité cristallin T est volumineux et pèse 
15,150. [l contient, après chauffage au rouge, 4#, 6 0/0 de chaux. 
C’est donc encore du phosphate bibasique. Le liquide qui l’a 
fourni est à peu près épuisé et je l’abandonne. 


IX 


On voit, en résumé, par tout ce qui précède, qu'on peut, en 
ajoutant une quantité convenable d’un alcali à une solution de 
phosphate bibasique de chaux dans l'acide chlorhydrique, mainte- 
nue à une température quelconque, y déterminer la formation 
d’un louche ou d’un trouble gélatineux, aboutissant tous deux 
à un précipité cristallin qui est toujours de même nature. On n'a 
donc aucun droit de considérer comme différents les dépôts d'albumine 
d'œufs divers, obtenus à des températures différentes en présence de 
quantités variables de différents sels ou du même sel. De plus, le 
liquide limpide obtenu par filtration du premier précipité de phos- 
phate peut donner, non pas d’une façon continue, mais par 
à-coups, quand on élève sa température, des précipités nouveaux, 
échelonnés sur la graduation thermométrique, dont les uns sont 
solubles, lorsque le liquide se refroidit à nouveau, et les autres 


660 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


non, à légal des solutions coagulées d'albumine. On n'a donc 
aucun droit de considérer comme différents les divers dépôts d'albumine 
retirés d'un méme liquide chauffé à des temp‘ratures différentes, et 
l’analogie entre tous ces phénomènes se poursuit en ce que, dans 
la précipitation de l’albumine comme dans celle du phosphate 
bibasique, la composition du résidu salin resté dans le liquide 
subit de faibles modifications à la suite de chaque dépôt nouveau. 
Une partie de Ja chaux du chlorure de calcium est, par exemple, 


entrainée à l’état de phosphate dans nos expériences. On n'a donc 


aucun droit d'arquer, comme on la fait si souvent, des différences dans 
la composition des cendres pour différencier les précipités ou les cougu- 
lums qui les ont fournies. Chaque précipité colloïdal se fait dans un 
liquide de composition minérale variable, et entraine, soit sous 
forme de composé chimique, soit par voie d'adhésion molécu- 
laire, une partie variable des éléments minéraux de Ja liqueur. 


X 


Mais ce n’est pas assez que de tirer des faits qui précèdent 
des conclusions négatives. Les précipités que nous venons d’ob- 
tenir ressemblent tellement, pour les lois de leur apparilion, aux 
précipités de matières albuminoïdes, qu'il serait utile de saisir 
le mécanisme de leur formation, assuré qu'on serait d’en tirer 
quelque lumière au sujet du mode de producuon des coagulums 
albuminoïdes. À ce point de vue, les résullals qui suivent ne 
manquent peut-être pas d'intérèl. 

J'ai dit de tous ces précipilés qu'ils étaient des hydrates du 
phosphate bibasique de chaux (PO'IF) Ca°. Il est remarquable 
que, bien qu'ils soient formés en présence du chlorure de eal- 
cium et de quantités variables de potasse, de soude ou d’amino- 
niaque, ils ne contiennent jamais de ces alcalis en quantités 
sensibles, et en particulier on ne lrouve jamais qu'ils se rappro- 
chent, même de loin, de la composition de lapalite, combinai- 
son de phosphale de chaux bibasique et de fluorure de calcium. 
En échange, ce qui est incessamment variable de l'un à l'autre, 
c’est la proportion d’eau contenue dans les cristaux. 

Tous ces précipiltés se dessèchent rapidement quand on les 
laisse à l'air et prennent un poids constant. C’est à cet état qu ils 
out élé pesés. Lorsqu'on les poite ensuite dans l’étuve à eau 


Ÿ=) + 


Le 
2 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 661 


bouillante, ils perdent parfois trois ou quatre millièmes 
de leur poids. Après quoi, le poids ne varie plus. La petite quan 
tilé d'eau éliminée ainsi peut être comptée, soit comme de Peau 
d'imprégnation des cristaux, soit comme de l’eau de eristallisa- 
tion, bien que la partie qui en a disparu à 100° soit très souvent 
inférieure à { molécule d’eau pour 1 molécule de sel, Mais, si or 
prend maintenant cette température de 100° pour point de départ, 
et si on cherche comment se comporte l’eau que les cristaux 
contiennent encore à celte température, on observe des phéno 
mènes singuliers, en désaccord avec les notions actuelles de la 
science. , 

A ce point de vue, nous pouvons fâire deux classes. La pre- 
mière comprend les précipités qui perdent toute leur eau en une 
seule fois, ou au moins entre des limites étroites de température 
en général supérieures à 200 degrés; la seconde comprend les 
précipités pour lesquels la perte d’une partie de l’eau est gra- 
dueile à mesure qu’on s'éloigne de 100°, mais qui, après en avoir 
cédé une partie, en conservent avec obstination une portion 
qu'ils ne cèdent qu'aux mêmes températures que les premiers, 
Donnons un exemple de chacun de ces cas: 


1° Phosphate bibasique et cristallisé de chaux, vendu comme pur et conte- 
nant, en effet, 44,3 0/0 de chaux. On prend dans le flacon le sel non desséché, 


Pertesa 002 /#aprés 4/2%heurc-2 Re 0. F0 801070 
— ANT RER EME ee Te 7,01 0/0 
— DARETRES ARE NE ER ETS 7,63 0/0 
— DITEUNES Nr A tien 7,63 0/0 


En portant alors pendant 1 heure à 125°-130°, il n’y a pas de perte nouvelle, 
il ne s’en manifeste que lorsqu'on chauffe à nu, au-dessus d’un bec de gaz, et la 
perle au rouge atteint 8,03 0,0 du poids du sel à 4000. 


2% Précipité T de la p. 659, pesé après 48 heures de séjour à Pair. 


Perte à 100° après 1/2 heure............... —10:69-070 
— ARHEUTES. PPT Cet 1,48 5» 
= ARhOUTE AIO PRE RER 162; D0Me) 

On porte à 130o. Perte après 1/2 heure............... .. 3,00 070 
_ heure 2 eV ET 3,38 » 

On porte à 1600. Perte après 1/2 heure.................. 5,63 0/0 
— ANHEUTEL EL SE 6,34 » 
—_ 1heure 12; 0. one 6,614 » 

Onfporte a 1480». -Perte-aprés 2/heures...."".."111".2%. 8,87 0/0 
— SANEUTOS PERRET 8,945 » 


Les pertes ont donc cessé ou sont devenues très lentes, puisqu'elles n ont pas 


atteint 4 milligramme en 1 heure à 18ÿ°. Ce même sel, desséché à 180, perd pour- 


tant encore 19,1 0/0 de son poids à 180° lorsqu'on le chauffe au rouge. 


On voit que les deux sels se comportent différemment au- 
dessus de 100°. Pour le premier, il n’y a pas de pertes nouvelles 


662 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


jusqu’au moment où tout ce qui reste d’eau s’en va à la fois. Pour 
le second, les pertes augmentent à mesure qu’on chauffe au delà 
de 100°, mais elles atteignent un terme fixe qu'elles ne dépas- 
sent qu'à une température beaucoup plus élevée. 


XI 

Cela posé, ce qui est remarquable, c’est qu'aucune de ces 
pertes, de quelque façon qu’on les calcule, ne correspond à 
celles que font prévoir les notions scientifiques actuelles. 

D’après ces notions, il y a dans le phosphate bibasique de 
chaux une molécule d’eau de constitution, distincte par le rôle 
qu’elle joue, et le phosphate bibasique cristallin est un hydrate 
du corps PO*HCa. Ce corps, anhydre au rouge, donne du pyro- 
phosphate en perdant 6,6 0/0 d’eau. M. Debray en a signalé un 
hydrate PO*HCa,2H°0 devant perdre 20,9 0/0 de son poids quand 
il a abandonné ses deux molécules d’eau de cristallisation, et 
26,2 0/0 de son poids au rouge. 

Un corps qui aurait pour formule PO'HCa+1/2 H°0 devrait 
perdre de même 6,2 0/0 pour son eau de cristallisation; et au 
rouge 12,4 0/0 de son poids, vu la perte de l’eau de constitution. 

De même pour un corps de formule PO*HCa-L H°0, Îles 
pertes devraient être respectivement 11,7 0/0 à la température 
à laquelle disparaît l’eau de cristallisation, et 17, 5 0/0 au rouge. 

Un corps de formule PO* HCa +3/2 IF°0 devrait perdre de 
mème 16, 6 0/0 et 22, i 0/0 de son poids. J’ai donné il ny a 
qu'un instant le chiffre des pertes pour le sel à 2 molécules 
d’eau, et il n’y a pas besoin de pousser plus loin, car nous 
sommes arrivés à des chiffres de perte que ne dépassent pas ceux 
de mes expériences. 

Je ne peux pas comparer à ces chiffres théoriques ceux que 
j'ai trouvés à la page précédente pour le phosphate de chaux du 
commerce. Ce sel, obtenu probablement par double précipitation 
entre le chlorure de calcium et le phosphate de soude en liqueur 
acide, comprenail sans doute un mélange d'hydrates divers 
obtenus à diverses températures dans l'opération industrielle. 
Mais notre précipité T a été obtenu à température ordinaire, par 
voie de cristallisation lente. On voit pourtant : 4°, qu'à 180° il 
retient encore de l’eau dite de cristallisation ; 2, qu'iln’en relient 


SUR LA COAGULATION DE L’ALBUMINE. 663 


pas un nombre simple de molécules, puisque ce nombre est 
compris entre À et 3/2; 3°, que cette eau de cristallisation ne se 
différencie pas nettement de l’eau de constitution, puisqu'elle 
part à peu près à la mème température. 

On relève les mêmes particularités pour tous les précipités de 
la longue expérience relatée plus haut. Tous ces précipités ont 
été séchés d’abord à l’air pendant 48 heures, puis à 100° jusqu'à 
cessation de la perte de poids. Très généralement la variation 
entre la température ordinaire et 100° était insignifiante. A ce 
moment, on chauffait sur la flamme d’un bec de gaz d'abord, 
sans porter au rouge, ce qui suffisait à éliminer la plus grande 
partie de l’eau. On terminait au rouge vif sur la soufflerie, ce qui 
faisait disparaître seulement quelques milligrammes d’eau qui 
avait résisté jusque-là. 

Le tableau suivant donne les pertes de 100° au rouge trouvées 
pour ces divers précipités. Afin de faire la distinction des tempé- 
ratures variées auxquelles ils ont élé obtenus, on les a rangés 
sur à colonnes indiquant les températures au voisinage desquelles 
chacun d’eux s’est formé. Les températures exactes de formation 
sont reiatées dans le récit de l'expérience, et il n’y a pas utilité 
à préciser davantage dans ce tableau récapitulatif. 


Perte au rouge des divers précipités chauffés à 100. 


150 600 80° 100? 1200 

AMEL » » | 1,8 » » 
HÉERSCUE » » » » 7.49 
Core ? » » 7,54 » 
D s-sleiet eee 920.4 » ) » » 
E fees. » 25,8 » ) » 
EME L » 9,43 ) » 
G ) » » OT) » 
MERE » » » » 1 ,OÙ 

] 95.5 » » » » 

Prune » » 21 +9 » D 
Kaer re » » » 8.84 » 
IDE Jar » » » » 7.32 
M OI » 26,5 » » » 
MERE » » » 40,65 
Or » » » 8.02 

RE » » » 8,0 ) 
(ORALE : 6,4 » " e t 
RTE. » » » » ) 
DRE » ) » 7,46 


Cetableau confirme nos conclusions tirées de l’étude du préci- 
pité T. On voit non seulement que la plupart de ces chiffres ne 


664 . ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


correspondent pas à la perte d’un nombre simple de molécules 
d'eau de cristallisation ou de constitution, mais encore qu'à une 
même température les précipités peuvent contenir des quantités 
d’eau variables, que le chauffage à 100° ne peut pas faire dispa- 
raître (A et J, Net S). En particulier, à 100°, nous n’avons pas 
retrouvé les résultats signalés par M. Debray, qui avait obtenu 
un phosphate anhydre perdant au rouge 6,6 0/0 d’eau. Tous les 
nombres de la 4° colonne sont supérieurs à ce chiffre et celui de 
N notablement supérieur. 

En regard de cette conclusion, en voici une autre qui n'est 
pas moins instructive. A 15°, le précipité est bien voisin de 
la formule PO*HCa, 2H°0. Il en est de même pour le précipité 
M à 60°. Donc, si deux précipités à la même température peuvent ne 
pas être identiques, deux précipités à des températures différentes peu- 
vent au contraire l'être, et voilà encore une nouvelle confirmation 
du scepticisme à porter dans l'interprétation des réactions sur 
les matières albuminoïdes. 

D'une manière générale pourtant, la quantité d’eau que 
retiennent les précipités diminue à mesure qu'ils ont été obtenus 
à plus haute température. 

Commentinterpréter maintenantces résultats? Cette fragmen- 
talion, cet émiettement des précipilés est-il en rapport avec la 
faculté de former deshyärates complexes, entre lesquels se produi- 
rait ensuite une sulure par suite de l'élimination d’une molécule 
d’eau, comme dans la formation des anhydrides. Lacondensalion, 
la coalescence des molécules résulterait-elle de ces soudures multi- 
ples, aboutissant à laformation d'un hydrate complexe susceptible 
de se souder de nouveau à lui-même pour donner un hydrate 
nouveau contenant moins d’eau et plus de sel. Ce sont là des 
idées qui ne sont pas nouvelles dans la science, et il ya longtemps 
qu'on a cherché à expliquer la coagulation des matières albumi- 
noïdes parlaformalion d’hydrates particuliers. Mais mes recher- 
ches placentla question sur un terrain où elle est plus accessible à 
l'expérience, et j'ai commencé à recueillir des documents pour 
la résoudre. Je dois attendre qu’ils soient plus nombreux avant 
de les publier. 


ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE DE L'AIR DEN HAUTEUR 
PUISÉ PENDANT UN VOYAGE EN BALLON 


Privat-docent à l'Université de Genève. 


Ayant eu l’occasion de faire un voyage en ballon, nous en 
avons profité pour puiser de l'air dans des couches très élevées 
de l'atmosphère, plus ou moins directement au-dessus de là 
ville de Genève. 

Les conditions de ce puisage en ballon différent considéra- 
blement de celles d’un puisage fait sur un monument ou une 
montagne. 

En effet, les monuments sont en premier lieu tous de faible 
hauteur et ne constituent en somme que des élévalions du sol, 
dont ils font encore partie. 

Il en est de même des montagnes, et, si des expériences ont 
démontré que les bactéries y sont rares ou mème nulles, cela 
peut tenir autant au fait de l'isolement des montagnes qu'à 
celui de leur élévation sur le niveau de la mer. 

Il était donc intéressant de connaître comment se comporte, 
au point de vue bactériologique, l’air des hauteurs puisé d’une 
manière indépendante du sol. 

Nous sommes partis de Genève avec le ballon Urania, capi- 
taine Spelterini, le 1{ septembre 1892. Les conditions de l'at- 
mosphère étaient les suivantes, d’après le bulletin de l'Observa- 
toire de Genève : 11/IX/92. 


Direction du vent : À heure de l'après-midi : N.-N.-E.-2; 10 heures soir : S.-E.-0. 
Baromètre : 732 (moyenne 727). 

Température : minimum 59 5 cent.: mazimum 189,4 à 5 heures 17°. 

Eau tombée : 0; le 10 :0; le 9: 2mm,$, 


Partis à 4 h. 30 de l'après-midi, nous nous sommes rapide- 
ment élevés à 550 mètres au-dessus du niveau de la mer, soit 
160 mètres au-dessus de Genève. À peine parlis, nous com- 


666 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


mencions l'aspiration au moyen d’une pompe de laboratoire 
(obligeamment prétée par M. le professeur Schiff}, donnant un 
litre d'air par trois coups de piston. Nous aspirions 10 litres 
d'air dans chaque aéroscope et l’aspiration durait un certain 
temps, qu'il est assez difficile d'apprécier en mètres de mon- 
tée : ce temps était d’ailleurs différent au commencement et à la 
fin de l’ascension. Pendant le puisage, nous tenions l’aéroscope 
à la main, au dehors de la nacelle, aussi loin que pouvait arriver 
notre bras étendu. 

Nous avons pu ainsi faire passer 10 litres d’air dans chacun 
des 10 aéroscopes que nous avions portés avec nous, et cela seu- 
lement pendant le trajet de 550 mètres à 1,700 mètres au-dessus 
de la mer, soit de 1450 mètres à 1,300 mètres au-dessus du sol. 
Cela correspond approximalivement à un puisage tous Îles 
100 mètres. La descente eut lieu à 6 h. 1/4, — après que nous 
eùmes atteint environ 3,000 mètres. Les germes furent fixés 
peu après dans les aéroscopes mêmes, dont le fond constituait 
une plaque de gélatine. 

Ici, nous devons ouvrir une parenthèse pour décrire l’aéros- 
cope dont nous nous sommes servis. | 

Dans nos recherches précédentes sur les bactéries de l'air, 
nous avons employé de préférence l’aéroscope de Straus et 
Würtz : d’autres fois nous avons utilisé avec avantage celui de 
Miquel, à barbotage dans le bouillon liquide. 

Comme il nous était impossible de nous servir du feu en 
ballon, nous n’avons pu employer ni le premier de ces instru- 
ments, qui nécessite le chauffage au bain-marie de la gélatine, 
ni celui de Miquel, qui tout en donnant des résultats très précis 
dans un laboratoire, où l’on fait l’ensemencement immédiate- 
ment après le barbotage, re rend plus les mêmes services 
lorsqu'on doit attendre un temps plus long, et expose à des 
erreurs très graves par suite de la multiplication des bactéries 
en suspension dans le bouillon. L’emploi d’une glacière, qui 
obvie à ces inconvénients, ne nous était guère possible dans Île 
ballon. Nous avons tenté de remédier à ces inconvénients en 
modifiant l'appareil de Straus et Würtz, et nous y avons réussi, 
croyons-nous, d'une manière satisfaisante. 

L’aéroscope que nous avons employé n’est au fond qu'une 
combinaison de celui de Miquel avec celui de Straus et Wür£z, 


ANALYSE D’AIR PUISÉ EN BALLON. 667 


de manière à lui donner les avantages des deux, tout en lui 
enlevant les inconvénients qui les rendaient inutilisables dans 
notre cas particulier. Voici la description de notre appareil : 

Un ballon, ayant préférablement le fond plat de ceux d’Erlen- 
meyer, est bouché hermétiquement par un bouchon percé de 
deux trous dans lesquels entrent deux tubes de verre {fig. 1). 


; OO) 


7, 


L'un de ces tubes, 4, est court et recourbé : il dépasse à peine, 
à l'intérieur du ballon, la surface inférieure du bouchon. Dans ce 
tube 1] y a deux tampons de ouate. 

L'autre tube, b, arrive presque au fond du ballon, sans cepen- 
dant le toucher : son extrémité supérieure se termine par un 
évasement recouvert par un capuchon rodé, comme dans les 

matras Pasteur. 

Jusqu'ici l'instrument pourrait servir aussi bien comme 
aéroscope de Miquel avec de l’eau que comme aéroscope de 
Straus et Würtz, avec la gélatine. 

Pour éviter les inconvénients mentionnés plus haut, nous 
versons dans le ballon 10 grammes de bouillon contenant 20 0/0 
de gélatine au lieu du 10 0/0 habituel, et nous stérilisons le tout, 
Lorsque la gélatine est solidifiée, nous y versons avec précau- 
tion une quantité égale de bouillon ordinaire stérilisé. L’extré- 
mité inférieure du tube b n'arrive pas à toucher la couche solide 
de gélatine, qu'il effleure seulement, mais est immergée dans 
le bouillon. | 

Pour faire marcher l'appareil, il suffit d'exercer une aspi- 
ration en & après avoir enlevé le capuchon rodé c. L'air barbote 


668 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dans le bouillon en y laissant ses germes. On aspire ensuite 
plusieurs fois le bouillon dans le tube b pour le laver, et, cela 
fait, on n'a qu'à tremper le fond du ballon dans l’eau tiède pour 
faire fondre Ja. gélatine, qui, en se mélangeant avec le bouillon, 
formera, au lieu d’une gélatine à 20 0/0, un B. P. G. normai à 
10 0/0. Le tout peut être laissé dans le ballon, dont le ford 
constitue une plaque : il va sans dire que l'on peut au besoin 
verser la totalité ou une partie du contenu sur plusieurs plaques, 
ou l’enrouler d’après la méthode d'Esmarch.  * 

Cel aéroscope possède donc les qualités de celui de Miquel, 
c'est-à-dire qu'il peut être employé sans l’aide immédiate d’une 
flamme, et a en outre les avantages de celui de Straus et Würtz, 
de permettre la fixation immédiate des germes dans la gélatine. 
Si on l'emploie en ballon où au sommet d'une montagne, il 
suffit de le plonger dans l’eau tiède dès qu'on arrive dans un 
endroit habité. Cet instrument a en outre sur celui de Straus 
et Wäürtz l'avantage qu'il ne se produit pas d'écume sur la 
gélatine, écume si génante pour la lecture ultérieure des colonies. 
et dont la formation n’est que partiellement empèchée par la 
goutte d'huile préconisée par les auteurs. Comme contrôle et 
complément de l’analyse, on peut remplacer, après la fixation des 
germes, le bouchon porteur des deux tubes par un tampon 
d'ouate et appliquer le bouchon sur un autre ballon contenant 
10 grammes de gélatine à 20 0/0. On verse du bouillon tiède par 
le tube b, qui est ainsi relavé, on met le Lout dans l’eau liède 
pour fondre la gélatine, après avoir laissé tomber dans le ballon le 
deuxième tampon d'ouate du tube a. Les germes qui se dévelop- 
pent dans ce deuxième ballon doivent être ajoutés à ceux du pre- 
mier. On peut aussi plus simplement, lorsque la gélatine du 
premier ballon est liquéfiée, en aspirer dans le tube b et l'y 
laisser figer; s'il reste quelques germes, ils se développeront 
dans le tube. 

L'appareil de Straus et Würtz peut être utilisé de la même 
manière, en raccourcissant le lube central, de manière qu'il 
n'arrive qu'à nu-hauteur de la partie rétrécie du fond : nous 
avons employé celui que nous venons de décrire parce qu'il 
nous a été plus facile d’en obtenir rapidement un certain nombre, 
à peu de frais. 

Revenons à présent à nos dix aéroscopes, dans chacun des: 


ANALYSE D’AIR PUISÉ EN BALLON. 669 


“quels nous avons fait barboter 10 litres d'air. Après la fixation 
des germes par immersion dans l'eau tiède, nous les avons expo- 
sés à une température d'environ 20°, après avoir remplacé 
les bouchons portant les Lubes par des tampons d’ouate, et fait 
encore dix plaques avecle lavage des tubes D de la manière men- 
tionnée plus haut. 

Au bout de quatorze jours, nos ballons donnaient les résul- 
Lats suivants : 


D EDEN 


ALTITUDE | 1 pAËLON | M: — BALLON | ALTITUDE 
AS ; TOTAL 
(au-dessus -de la mer). (aéroscope). Hors (au-dessus dit sol). 
550 mètres. al colonies. | 9 (I moisis.) | où 1604 mètres. 
630 — 21 (1 moisis) | » | 21 240 —— 
TÜ0 —— » | » | -) 310 — 
S00 — Ra (moists Ie? | 9 110 — 
900 — 12 il | 3 510 — 
000 ‘= 42 (4 moisis.) | 7 + | 49 GO: = 
1,100 — Lait | » | [ 710 = 
4,350 = | » » » 060 re 
1,700 — | » » » 1,310 — 


Deux puisages faits daus les mêmes condilions, au niveau du 
so], ont donné : 

Premier (sile tranquilie), trois colonies ; 

Deuxième (jardin fréquenté), dix-huit colonies. 

La première chose qui frappe en lisant ce tableau est la sléri- 
lité de l’air des hautes régions. Les deux expériences faites à 
1.300 et à 1,700 mètres ont laissé les bouillons stériles. Quant 
à celles qui ont été faites à des niveaux inférieurs, quelques 
indications sont nécessaires. 

Les colonies fournies par les six ballons chargés à faible hau- 
teur et ayant donné un résultat positif peuvent se décomposer 
de la manière suivante au poiut de vue de leur aspect extérieur: 


D 


No NOMBRE TOTAL | tete COLONIES COLONIES 
des MOISISSURES 
D'ORDRE Lu | COLORÉES blanches ou grisàtres. 
COLONIES 
| | 

I 33 1 2 50 

1] CH l ) 17 

| IV 9 1 ÿ 
| M 13 » | En 
VE || 41) 1 o 45 

| VII | il » » fl 


670 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


Au point de vue de la manière de se comporter avec la géla- 
tine, il y avait : 


No 
ù TOTAL LIQUÉFIANTES NON LIQUÉFIANTES 
D ORDRE 

I 99 de 92 
ul t 9 19 
1V 9 à ; n 
V 1 3 » 3 
VI 49 2) AT 
VII 1 » l 


Quant à la forme des bactéries, il y avait : 


No {BATONNETS 
; TOTAL COCCI BACILLES | SFIRILLES | MOSNSURES 
D'ORDRE COURTS 
Il ) 45 A1 8 » | 
Il 2 43 4 3 À 1 
IV 9 3 4 2 » | 
V 15 4 À 4 » » 
NE 49 Al 19 15 » 
VII il 1 1 » ) » 


Aucune de ces colonies, parmi lesquelles nous avons distin- 
gué sept espèces bien distinctes (outre les moisissures) ne repré- 
sentait une des formes de bactéries pathogènes bien connues. 

Nous n'avons pas fait de recherches pour déterminer s'il y 
avait aussi des espèces anaérobies, le temps nous ayant manqué 
pendant l'ascension pour puiser de l'air dans un nombre plus 
grand de ballons. 

Que pouvons-nous conclure de cet examen? 

Assurément la quantité de germes que nous avons trouvés 
par 10 litres d'air, à des hauteurs au-dessous de 1,000 mètres, 
nous ferait penser à une impureté bien grande des couches 
supérieures de l'atmosphère, si nous ne songions à la grande 
cause de souillure accidentelle que nous portions avec nous, ou 
mieux qui nous portait avec elle — l’aérostat. Un ballon, cubant 
1,600 mètres, dont lasurface extérieure etles cordages touchent 
le sol pendant le gonflement, doit certainement en commençant 
à flutter dans les airs abandonner à l'atmosphère les poussières 
dont il est saupoudré. 


ANALYSE D’AIR PUISÉ EN BALLON. 671 


La différence très appréciable qu'on remarque entre le 
premier ballon chargé au niveau dusol(dans un coin (ranquille)et 
les premiers ballons chargés à des hauteurs variables entre 550 
et 900 mètres, est sans doute l'effet de la pluie microbienne se 
dégageant des parois du ballon. 

Nous ferons une exception pour le ballon correspondant à 
1,000 mètres, où on remarque une brusque augmentation. C’est 
que nous l’avons chargé en le tenant dans l’intérieur de la 
vacelle et pas au dehors comme les autres. On peut facilement 
se figurer quel doit être l’état de l’air d’une nacelle où 5 voyageurs 
piétinent des sacs de lest et des couvertures poussiéreuses. 

La précaution de puiser l’air dans la direction vers laquelle se 
dirigeait le ballon n’a pas été suffisante pour éviter de recueillir les 
poussières qui s’en détachaient, car ces poussières tombaient d’en 
haut, le ballon faisant sur nous un toit considérablement étendu. 

En somme, le puisage de l’air des hauteurs, fait en ballon 
aérostatique, laisse beaucoup à désirer au point de vue del’exac- 
üilude des résultats obtenus. On pourrait peut-être améliorer 
cette méthode en mouillant avec de l’eau le ballon et toutes ses 
annexes : lesgermes quis’y altacheraient pendant les manœuvres 
y resteraient ainsi accolés : il est vrai que le poids du ballon en 
serait singulièrement augmenté. Je doute d’ailleurs qu'on 
trouverait un aéronaute qui accepterait dans sa nacelle un expé- 
rimentateur qui jui poserait ces conditions. 

Le ballon chargé à 700 mètres est resté stérile : nous nous 
sommes aperçus plus tard que nous avions oublié d’enlever le 
capuchon pendant qu'on exerçait l'aspiration. 

A 1,100 mètres nous avons encore constaté une colonie : tous 
les autres ballons (1,350, 1,700") sont restés stériles. 

La conclusion très évidente qui se dégage de nos recherches 
est que l’air des couches supérieures de l’atmosphère, au-dessus 
de 1,000 mètres, même directement au-dessus d'une ville, est 
extrèmement pur, car, même avec la cause de contamination 
que constiiue un ballon, l'analyse a donné des résultats négatifs. 
Ïl est très probable que cette absence ou rareté de germes com- 
mence beaucoup plus bas, et que les microbes que nous y avons 
rencontrés ont élé apportés au moins en grande partie par notre 
ballon. 


LES VACCINATIONS ANTIRABIQUES À MONCOU EN. 19 
ANSTITUT PASTEUR DE L'OPITAL ALEXANDRE 11 


Communication de M. J. GOLDENDACH, médecin en chef à l'hôpital. 


L2 


Pendant l'année 1892, ont subi le traitement autirabique 
complet 907 personnes, dont 178 appartenant au groupe A des 
staustiques de l'Institut Pasteur, 439 au groupe B, 290 
groupe C. 

Sur ce Lotal, il y avait 613 hommes et 294 femmes. 

I. D’après la place et le nombre des morsures, il y avait : 


Simples. Multiples. 
Morsures à la-tête et au visage..." 15 93 
= AURAPOISNELS PET ee pere Ut 211 
_ aux membres et au tronc......... BI 218 
_ à différentes parties du corps... — 94 
En “516 


Sur ces 94 personnes morduesen différentes points du corps, 
22 avaient des morsures à la têle et au visage, ce qui élève à 
90 le nombre des personnes mordues à la tète. 

IT. D'après la façon dont les morsures ont été traitées, il y a 
eu 117 malades ayant subi une cautérisalion plus ou moins pro- 
fonde. La répartition a eu lieu de la façon suivante : 


Cautérisées. Non cautérisées. 


Morsures a/la téte etau visage tn Re 3 65 
— HE a raser ce or doussomae F5Be D 4 922 
— aux membres et au tronc........ ais 50 319 
— aux différentes parlies du corps....... 10 SL 


III. D'après le genre de l’animal mordeur, nous trouvons : 


0 


Morsüres par des chienstes "Te 769 
— EN MOUSE een. rri ee POLE TR M) 

— OASIS en PAU) 

— RACDOVAUX Nes Modo CCE 11 

— FT A VACRER 2 USE PET AL RE TAERES 8 
— EN RADORCS NRA NS 2 
905 


Dans deux cas, les morsures provenaient d'hommes hydro- 
phobes. 


FA 


VACCINATIONS ANTIRABIQUES A MOSCOU. 673 


IV. D'après linlervalle entre la morsure et l’arrivée à 
l'Institut, 1] y a eu : 


Entrées dans les 2 jours après la morsure .........,...... 28 
— dans la 1" semaine après la morsure............. 445 
— =— 20 = = AT MODE DE PR ME 
— dans la seconde moitié du {2r mois après la morsure. 96 
OC S QUONIN OISE Re ET PRE D2 


V. D’après les mois de l’année, 1l y a eu : 


Ayant terminé le traitement en janvier 1892.,,., 38 personnes 
Entrécsreneanviet RES EE SC rene 11 — 
CREME A MCE aie el D aire Re 65 — 
A CLR TE URS Eee in PEN ete nn tn Ne ON S4 — 
À SOMO NEC AE OR RCE A RE A RE 106 — 
AE DUO ME RS MES EE TS RE A Ie 118 _ 
SRE COSTUMES Se En ne ta ND tone s 0102 — 
ee PURGE EE GANT. Me à de ne de 74 = 
OT LOT R  rnei D Are Friend Ce 15 — 
ARENA Se DLOMULE "SE RE MERS Mr nt 06 — 
= GI OGÉODDD, PR 7 EN Rent ir LE ie 43 - 
AT MOV ED RE MSN LATE AG = 
— ayant terminé en décembre ....... ROIS) — 

907 


Sur ces 907 malades, 275 venaient de la ville ou du gouver- 
nement de Moscou, et par conséquent du voisinage immédiat 
de l’Institut. Aux dernières nouvelles des malades, recues en 
mars et avril 1893, 1l y avait eu six morts. Cesont : 1° Leb..., gou- 
vernement de Kostroma;, 2° Blin... K. (Riazan), 2° Smirn.… I. 
(Moscou). 4% Bonif... A. (Twer), 5° Iwan... Al. (Moscou), 
6° Igonu... An. (Penzd). Cela donne une mortalité de 0.66 0/0. On 
ne meutionne pas daus celte statislique six personnes mortes 
rabiques avant que le traitement ait été terminé. Enfin 12 per- 
sonnes n’y sont pas comptées non plus, parce qu’elles n'ont pas 
désiré ou pu continuer le traitement commencé. L'une d'elles, 
L..., à Kounzewo, est morte rabique le 21 février 1893. 


15/27 août 4893. 


EM 


674 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


TABLEAU STATISTIQUE 


POUR 1892. 


A B C 
Morsures à la tête { simples. . .| » 4 16| ? 7 34l ? 4) 18 
et au visage | multiples. .| » | 12 \ TA » | 14 
Cantons | efficaces 0) » » » » » » » » 
ra | inefficaces .| » » » 3| » » » » » 
SANS SCANTÉLISATLON: Re AG » » 8 » » 18| » » 
Morsures aux poi- | simples » | 881 D72) » | 55 
: les. | j 
gnets multiples. .| » | 42 SI 102174 » 671122 
r : efficaces . . » » » 1 » » Î » » 
Cautérisations (RE : S 
LR | inefficaces.| 9 » | -» | 26] :» » À 17/29 » 
Sans CAUTÉLISANON ENT » » 4147 » » 404 » » 


Morsuresauxmem- | simples. . .| » | 311 85l ” | 70,4183l » | 50,491 


bres etau tronc | multiples. .| » | 34! » [1131 » | 71, 

; te { efficaces . .| 1 » » 2| » » ARS ; 
Cautérisations rrchcaces * « os| , < NES 5 
Sans CAUTÉLISA TION Ce » » | 456|  » » | 106! » » 
Morsures à travers les habits . .| 54 » » | 449] » » 97| » » 
MOrSULES nt 11 » » 24| » » 24| » » 


Morsures multiples aux ‘diffé- 
rentesiparties AUICOnpS Eee) 107 ET NEA S en »11-291629 


Re { efficaces Gest) » » Al » » » » » 
Cautérisations | inefficaces . 3 » » n » » JS » 
Sans iCaulÉrISAION er ete le » » 43| » » 97| » » 
Morsures à travers les habits. . .| 15 » » 38| » » A7| >» » 
Morsures ant. eme UT » » 20) » 29| » » 

178 439 1290 
| 
1 
— ——_—____—_ I © 
TOTALE 28 907 


Le groupe À comprend les personnes mordues par des animaux dont la 
rage a été reconnue expérimentalement; le groupe B celles pour lesquelles la 
rage de l’animal mordeur résulte de son autopsie ou d’observations vétéri- 
naires ; le groupe C celles pour lesquelles la rage de l’animal mordu est 
rendue probable par les circonstances de la morsure. 


EL RE SE 


TABLEAU STATISTIQUE. GT) 


TABLEAU STATISTIQUE. 


DÉS PERSONNES TRAITÉES ET AYANT TERMINÉ LE COURS COMPLET DE 
TRAITEMENT  ANTIRABIQUE A L'INSTITUT PASTEUR DE MOSCOU 
PENDANT LA PÉRIODE DE SIX ANS, DEPUIS LE 2) JUILLET 1886 
JUSQU'AU 29 JUILLET 1892. 


A B C 
nn. A — .. RE Re — — 
Morsures à la tête ; simples » | 25] » | 36), » | 29 
ea o L . . (l Î | 
et au visage. Inulbiples es) mOoE er) 52, , 651101 » | 511 80 
Cléneation { efficaces. . .| » » ) » DEA Ra | a NES) 
ape 5 | inelficaces. .| 4! » | » | 413l » » | 75] » | » 
RasdeCaulLériISaCIon ee NC 4S| » » 88| » » | »2| » » 
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687 1719 | 1155 
I 
ROMADÉGENDRAR me ere 3561 
Parmi les malades mordus en différents points du corps, il y en avait 
porteurs de blessures à la tête ou au visage, 28 du groupe À, 63 du 
groupe CG, 38 du groupe C. 


, 


Moscou. le 18/30 août 1893. 


REVUES ET ANALYSES 


SUR L'ÉTUDE CHIMIQUE DES ALIMENTS 


REVUE CRITIQUE 


On s’adressait autrefois aux animaux quand il s'agissait de savoir 
si une matière élait alimentaire pour eux : on commence maintenant 
à s'adresser au chimiste, et à lui demander de dire « priorisi telle ou 
telle substance peut être introduite sans inconvénient, ou même avec 
avantage, dans l'alimentalion. On ne saurait méconnailre qu’une 
pareille question est embarrassante, etc'est une de celles où le chimiste 
gagnerait à ètre une bête pour pouvoir répondre avec compétence ct 
sécurité. Comme ïil ne réalise pas d’ordinaire cette condilhon, 
il a fait de son micux: il a commencé par analyser les rations nor- 
males des aliments ordinaires et a constalé que, quelle que füt leur 
variélé, elles oscillaient aulour d’une composition moyenne, qu'elles 
comprenaicnt à peu près toutes la même quantité de matières azotées 
et de matières non azotées, eLon à pu ainsi imaginer une ralion type, 
tout à fait théorique, soit pour l'état de repos et d’engraissement, soit 
pour l’état de lactation, soit pour l'état de travail. 

Ce n’était là que la moitié de la tâche. Il est très bon de savoir la 
quantité d'azote qu'un animal doit trouver journalièrement dans son 
alimentation, mais la qualité n’est pas moins importante. Toutes les 
malières azolées ne sont pas également alimentaires pour tous les 
animaux : chacun a ses aliments de prédilection, soit qu'ils conviennent 
à sa nature, soit que son estomac y soit habitué. Un cheval préfère 
la paille, consomme le foin, ne s’accommode pas facilement du regain. 
La vache est plus avide de regain que de foin, et de foin que de paille. 
L'un et l'autre se préoccupent très peu de la composition centésimale, 
et, devant leur diversité de goût, le chimiste reste penaud, parce qu'il 
ne connait guère, lui, que cette composition. 

Il est bien forcé de se dire que cheval et bœuf ont raison, chacun 
en ce qui le concerne, et que leurs préférences doivent être fondées. 
Il voit bien qu’elles tiennent à ce que le foin et la paille, malgré leur 


REVUES ET ANALYSES. 677 


ressemblance apparente au point de vue de la richesse en azote, 
carbone, hydrogène et oxygène, ne sont pas formés des mêmes élé- 
ments, qu’il y a là des mélanges de substances différentes dont la 
connaissance exacte, s’il la possédait, lui donnerait la clef de l'hygiène 
alimentaire du bœuf ou du cheval. Tout ce qui l’arrête, c'est que 
cetle connaissance n’est pas facile à acquérir. Il n’y a rien de plus 
compliqué que l'analyse immédiate d’un végétal quelconque. 

En présence de ces difficultés, quelques chimistes ont eu l'idée 
audacieuse de passer outre sans les résoudre, et de demander à l’analyse 
élémentaire seule la solution des questions en litige. Il a été dépensé 
dans celte direction une quantité énorme d'efforts et de travail, sans 
qu'on puisse dire que la solution du problème a notablement avancé, 
et, au bout de la carrière poursuivie, on commence à voir apparailre 
les signes précurseurs de la présence d’une impasse : des travaux qui 
tournent en rond et n’aboutissent qu’à la création de mots nouveaux, 
comme une philosophie aux abois. [faut courageusement se remettre 
à l’œuvre, abandonnée comme trop difficile. C'est ce qu’on fait de tous 
côtés. Dans une Revue récente, j'ai mis les lecteurs des Annales au 
courant des éludes faites par Tollens et ses élèves sur la question 
des sucres végétaux. Je voudrais parler aujourd'hui des matières 
grasses. 

On sait qu'elles sont dosées à part dans toutes les analyses d’ali- 
ments. Après avoir desséché et finement broyé la matière, on la traite 
en général par l’éther jusqu'à épuisement. Cet éther évaporé laisse un 
vésidu, en générol coloré et toujours complexe, qu’on dote du nom 
commun de malières grasses, et qui entre comme tel dans les tableaux 
d'analyse. Les chiffres ainsi obtenus pour divers aliments sont comparés 
entre eux, sans souci de ce qu'ils peuvent se rapporter à des choses fort 
différentes et de pouvoir alimentaire fort inégal. Bien que nos connais- 
sances ne soient pas encore fort avancées sur les matières grasses, nous 
savons pourtant que léther dissout à la fois, dans les végétaux alimen- 
taires, des glycérides, des acides gras, des résines, des substances 
_cireuses, de la cholestérine et des substances du même ordre, de la 
lécithine, et des matières colorantes, parmi lesquelles la chlorophylle 
est prédominante. 

A ces matières peuvent s’en joindre beaucoup d’autres, si l’éther 
employé était aqueuxoula matière insuffisamment desséchée.Dessucres, 
des acides végétaux, des corps appartenant au monde confus des 
matières extraclives, peuvent alors entrerendissolution et être comptés 
comme matières grasses. Par contre, des matières grasses authentiques 
peuvent échapper à la dissolulion si elles sont finement émulsionnées. 
On sait en effet que l’éther est sans action sur les corps gras en goul- 


678 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


telettes microscopiques disséminées dans un liquide ou dans une 
masse de protoplasma. Les chiffres fournis par divers savants n’ont 
donc pas une valeur absolue : il dépendent de l’habileté ou du soin de 
celui qui les a déterminés; mais ils sont encore plus flottants, quand 
on songe qu'ils se rapportent tous à des mélanges. 

Glycérides. — Dans ce mélange, les triglycérides dominent lorsqu'il 
s’agit de semences ou de graines végétales, tandis que dans le foin, la 
paille, et en général dans les fourrages, ce sont des substances cireuses 
qui sont prédominantes ‘. Or, les cires et les corps gras neutres ne 
s'équivalent pas du tout dans l'alimentation. Les corps gras entrent 
facilement en émulsion et sont facilement absorbés. Encore faut-il 
distinguer parmi eux ceux qui fondent facilement à la température du 
corps de l’animal, et dont l’émulsion est par là beaucoup plus facile 
que pour ceux qui ne fondent qu'au-dessus de 40°. Quant aux cires, elles 
passent souvent intactes dans le canal digestif, et on est presque auto- 
risé à leur refuser toute valeur alimentaire, On voit quelle imprudence 
il y à à ranger dans une même colonne les matières grasses du foin 
et celles de l’avoine. 

Il ya plus: dans un même végétal ou dans une même partie du 
végétal, les matières grasses ne restent pas identiques à elles-mêmes. 
Une graine fraiche ne contient pas les mêmes corps gras qu’une graine 
vieillie. Les corps gras neutres se saponifient peu à peu : une partie 
des acides volatils disparaît. Les acides fixes, surtout l’acide oléique, 
s’oxydent, absorbent l’ammoniaque de l'air et aboutissent à la forma- 
tion d’oxyoléates noirs et de véritables résines peu solubles dans 
l'éther, solubles dans l’alcool et insolublesdans l’eau. Stellwag ? atrouvé 
de grandes quantités d’acides gras libres dans les tourteaux. Dans des 
expériences inédites, j'ai constaté que la même oxydation et une véri- 
table résinification se poursuivaient dans des graines entières et non 
lacérées qu’on avait laissées vieillir. J’ai trouvé 2,5 0/0 d'acides gras 
libres, et 10 0/0 environ de résine dans la matière grasse de graines de 
soleil tournesol que j'avais conservées vingt-deux ans au laboratoire. 
Dans des graines de colza d'hiver du même âge, près de 40 0/0 de la 
matière grasse était résinifiée. Or, on peut, à propos de ces acides gras 
ct de ces résines, répéter ce que nous disions tout à l'heure au sujet 
des glycérides et des cires. Les acides gras sont facilement émulsionnés 
et absorbés, les résines le sont très mal et très peu. 

Cholestérine et substances analoques. — C’est O. Hesse qui a le 
premier découvert, dans la matière grasse des plantes, une substance 

1. Voir sur ce sujet les nombreux travaux publiés dans les Zandiv. Versuchsst, 


par Schulze, Konig, Stellway, ete. 
2. Landiv. Versuchsst, t. XXX VII. 


REVUES ET ANALYSES. 679 


très analogue à la cholestérine et qu'il a appelée physostérine. Depuis 
on en a trouvé dans une foule de graines diverses, et Likiernik'! a 
même montré que les pellicules de lupin et de Phaseolus vulgaris 
contenaient des substances du même type, et qu’il a appelées lupéol et 
phasol. 

La meilleure manière d'isoler ces substances est celle qui a été 
indiquée par M. Gérard. On saponifie le résidu éthéré par la potasse 
alcoolique, et on épuise à l’éther le savon desséché. Par évaporation, 
cet éther fournit des cristaux aiguillés qu’on purifie par une saponifi- 
cation nouvelle en présence d’un grand excès de potasse. Le tout est 
dissous dans l’eau, et la solution très alcaline est agitée avec du chlo- 
roforme. En évaporant ce chloroforme, on trouve de la cholestérine 
impure qu’on purifie en la transformant en éther benzoïque, que des 
cristallisations successives amènent à un point de fusion constant. La 
saponification de cet éther donne de la cholestérine d'une pureté 
absolue. 

En opérant avec tous ces soins, M. Gérard a vu disparaitre entre 
les cholestérines d’origine diverse qu’il a étudiées les différences pro- 
fondes qu’on leur avaitattribuées jusqu'àlui. Ila vu que lescholestérines 
retirées des plantes phanérogames (lupin, fenugrec, datura, olive) 
avaient les mêmes caractères physiques et chimiques que la physos- 
térine retirée par O. Hesse des fèves de Calabar et des pois. Au con- 
traire, les cholestérines retirées des végétaux inférieurs (Penicillium 
glaucum, Æthalium septicum) ressemblaient à l'ergostérine de Tanret, 
retirée de l’ergot du seigle. Voici donc qu'apparaissent des différences 
entre des corps de même type chimique, et que là aussi nous avons 
peut-être des isoméries analogues à celles de la série des sucres. On 
voit combien il était osé de mettre toutes ces substances dans le même 
sac. 

Lécithine. — Ici, nous n'avons plus affaire à un corps gras authen- 
tique, car la lécithine contient de l'azote. Mais elle se trouve en partie 
au moins dans l’extrait éthéré ; de plus, des recherches de Bokay et 
de Hasebrook ont prouvé qu'elle se décomposait dans les mêmes con- 
ditions que les corps gras, en donnant de l'acide glycérophosphorique, 
de la choline et des acides gras qui ont évidemment le même sort que 
ceux qui proviennent de la décomposition des corps gras neutres. Il 
faut donc porter la lécithine plutôt au compte des matières grasses 
que des corps azotés. 

Son caractère intermédiaire en rend le dosage difficile. Nous avons 


4. Bericht d. D. Chem. Gesell, t. XXIV. 
2, Comptes rendus, t. CXIV, p. 1544. 


680 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dit qu’elle n’entrait pas entièrement en solution dans l'éther. C’est pro- 
bablement qu’elle est noyée à l’état de fins granules dans la masse du 
protoplasma où léther n’entre pas en contact avec elle, et par suite 
ne peut la dissoudre et l’entrainer. Aussi la proportion de ce qu'il en 
laisse est-elle constamment variable. Schulze et Likiernik ‘ ont donné 
le moyen de la dissoudre tout entière et de la préparer à l’état pur. 
I suffit de traiter par l'alcool bouillant la matière sur laquelle l'éther 
est resté sans action. On évapore la solution alcoolique et on reprend 
le résidu par l’éther froid, qui dissout facilement la lécithine. 

Il n’est pas nécessaire de la séparer complètement pour la doser. On 
peut profiter de ce qu’elle contient toujours la même proportion de 
phosphore, et faire un dosage d'acide phosphorique sur lextrait 
éthéré total, c’est-à-dire celui qui a été obtenu directement par l'action 
de l’éther sur la matière, aussi bien que celui qui provient du traite- 
ment alcoolique, Les quantités de lécithine ainsi trouvées ne sont pas 
négligeables. D’après MM. Schulze et Steiger ?, le lupin jaune contient 
1,57 0/0 de lécithine sur 5,1 0/0 de matière grasse totale, c’est-à-dire 
que le tiers de son corps gras est formé de lécithine. Pour les lentilles, 
les chiffres sont 1,23, contre 2,2 : la proportion est de plus de moitié. 
Pour l'orge, elle est du tiers. Dansles graines de melon, d'après Forti, 
la proportion de la lécithine à la matière grasse est au contraire infé- 
rieure à 1,2 0/0; et de nouveau nous concluons: Comment mettre au 
même rang et englober dans le même total des matières aussi diffé- 
rentes que la lécithine et la matière grasse banale ? Comment comparer 
utilement entre elles des teneurs en matières grasses dont les uns 
contiennent 1 0/0, les autres 50 0/0 de lécithine? 

On voit en résumé l'intérêt et l’avenir de ce nouveau champ 
d'études; cela est surtout frappant quand on songe à la stérilité rela- 
tive de celui dans leque! la science s’est trop longtemps complu à res- 
ter. Et ce n’est là qu’un commencement! Nous verrons, dans une 
prochaine Revue, qu'il n’est pas moins fécond quand, au lieu des 
matières grasses, on étudie les malières sucrées ou les diverses cel- 
luloses. 

Dx. 


A. Bericht. d. D. Chem. Gesell., &. XXIV. 
9, Chem. Centralbl., 1890. 


ÉTIOLOGIE DE L'INFLUENZA 


On se rappelle le vif émoi excité par l'apparition de l'influenza, 
qui en 1889 envahit rapidement toute l’Europe. Les savants se mirent 
à rechercher activement la cause de cette maladie, mais au début les 
recherches bactériologiques restèrent infructueuses; c’est seulement 
l'an dernier, à la réapparition de l'épidémie en Allemagne, que 
M. Z?. Pfeiffer * parvint à des résultats posilifs sur la cause de celte 
maladie. Déjà en 1890 Pfeiffer, examinant les crachats des malades de 
l'influenza, avait trouvé, sur les préparations colorées par la fuchsine 
de Ziel, une quantité considérable de petits bâtonnets. L'année dernière, 
ses nouvelles recherches sur les crachals des malades lui montrèrent 
toujours les mêmes bactéries, dont la présence ne pouvait donc plus 
être regardée comme accidentelle. De plus, vu le caractère essentiel- 
lement épidémique de cette maladie et sa contagiosité incontestable, 
il était naturel de l’attribuer à un virus vivant, et de chercher ce virus 
dans les sécrélions des malades. Partant de ces réflexions, M. Pfeiffer 
se mit à l'étude minutieuse des crachats de l'influenza, c'est-à-dire 
des sécrétions des voies respiratoires, organes les plus atteints par 
cette maladie. 

Les crachats de l’influenza sont d’une couleur gris-vert, très 
visqueux. Ils sont sécrétés ordinairement en masses compactes et 
souvent très abondantes. C’est dans la cavilé nasale et dans le larynx 
que se forment les sécrétions dans les cas légers, tandis que dans les cas 
graves elles s'accumulent dans le tissu pulmonaire. Dans ses recherches, 
Pfeiffer se servait d'habitude des crachats sécrétés par les poumons, 
parce que ces crachats ne contiennent que des bactéries de l’influenza ; 
dans la cavité nasale et dans le larynx, la présence d’une multitude 
d’autres bactéries (streptocoques, etc.) aurait pu facilement masquer la 
cause réelle de la maladie. Prenant des crachats tout récents, il les 
colorait par le bleu de méthylène de Læffler ou par la fuchsine de Ziel 
diluée dans l’eau. (Ces microbes ne se colorent pas par le Gram.) Les 
bactéries de l'influenza prennent difficilement la coloration; il faut 
laisser les préparalions au moins 10 minutes dans le bain colorant. 
Les bactéries ainsi que les noyaux des cellules se colorent d'habitude 


4. Zeitschr. f. Hyg. 1593. 


TIRCTS 


682 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


fortement; le protoplasma des cellules prend une teinte rosâtre et le 
mucus reste incolore. Dans ces préparations on ne voit qu’un seul 
genre de microbes, toujours en abondance; ces microbes se trouvent 
ordinairement dans le mucus, apparaissent parfois dans le proto- 
plasma des cellules du pus, mais jamais dans leurs noyaux. Ces bacté- 
ries sont excessivement petites; elles sont plus minces que celles 
de la septicémie des souris; elles sont 2 ou 3 fois plus longues 
que larges. On rencontre quelquefois dans les crachats, et plus souvent 
encore dans la culture pure, de longs bâtonnets qu’on nomme faux 
filaments. Dans les cultures vieilles de 3-4 jours, ces filaments sont 
très longs et présentent le début des formes d'’involution. Les bouts 
des bâtonnets sont arrondis; on trouve quelquefois de très courts 
bâtonnets unis par deux; ce sont des individus en voie de division, 
qu'on peut prendre facilement pour des diplocoques. Les bactéries de 
l’influenza n'ont pas de capsules, et sont privées de mouvement dans 
une goutte suspendue. 

Ce n’est que très difficilement que Pfeiffer parvint à obtenir 
la culture des microbes de l'influenza sur des milieux artificiels. 
Pas un des procédés ordinaires d’ensemencement ne donnait de 
résultat. Une fois il obtint une culture par ensemencement de 
crachats frais des poumons, sans lavage préalable, mais cette culture 
se refusa à des passages successifs (gélose, gélatine, bouillon, sérum de 
l’homme et des animaux, etc.). En remarquant que les crachats frais se 
cultivaient sur gélose, et qu'on n’obtenait au contrairerien après /l’ense- 
mencement des crachats lavés à l’eau stérilisée ou dilués dans du 
bouillon, Pfeiffer conclut que le lavage éloigne des crachats quelque 
matière, provenant, par exemple, du pus ou du sang, et nécessaire à 
la nutrition des bactéries; en conséquence, il essaya d’ensemencer sa 
culture initiale sur de la gélose recouverte d’une goutte de sang 
humain. 

De cette manière il parvint à cultiver de nombreuses colonies 
de bâtonnets et à les conserver pendant 8 mois. Pour savoir quelle 
est la partie du sang qui sert d’élément nutritif aux bactéries, il fit 
toute une série d'expériences dont il résulta que ce sont les globules 
rouges du sang qui donnent aux bactéries leurs matières nutritives, 
et que, dans le globule, c'est l’hémoglobine qui fournit l'aliment 
essentiel, surtout à cause du fer qu’elle contient. On peut ajouter, à 
la gélose, non seulement du sang humain, mais aussi celui d’autres 
animaux, et notamment des lapins, des cobayes et des pigeons. C’est 
le sang du pigeon qu’il faut employer de préférence. Ses globules 
rouges, très riches en hémoglobine, n'étant pas stables, se décomposent 
facilement, laissent beaucoup d’hémoglobine à l’état concentré, et 


74 


REVUES ET ANALYSES. 683 


fournissent rapidement des cultures abondantes. Les globules rouges 
du sang humain sont plus stables et rendent l’hémoglobine graduel- 
lement, de sorte que les colonies croissent lentement, mais d’autre 
part le milieu reste plus longtemps nutritif. 

Pour obtenir une culture pure du microbe de l'influenza, Pfeiffer 
emploie le procédé suivant : on prépare une émulsion des crachats avec 
un ou deux centimètres cubes de bouillon. On ensemence cette émulsion 
sur de la gélose enduite de sang; on se sert ordinairement d’une émul- 
sion permettant d'obtenir des colonies peu serrées. Après un séjour 
de vingt-quatre heures à l'étuve, de nombreuses colonies de bâtonnets 
apparaissent; ces colonies ont l’aspect de gouttes incolores. Les colonies 
des microbes de l'influenza ne confluent que très rarement ; d'habitude 
elles croissent séparément, sont excessivement petites, et ne peuvent 
être distinctement vues qu'avec la loupe. Quand lensemencement est 
pauvre, les colonies isolées peuvent atteindre quelquefois la grosseur 
d'une tête d'épingle. À l'examen microscopique, les colonies semblent 
homogènes. Dans les milieux liquides additionnés de sang, les bâton- 
nets de l'influenza donnent des cultures ayant l'aspect de flocons blancs. 
Ces bactéries sont complètement aérobies; elles se développentrapide- 
ment et en 20 heures atteignent à l’étuve le maximum de leur déve- 
loppement; la température la plus élevée qui permet la culture est de 
429, la température la plus basse est de 269 — 270, 

Une certaine quantité d'humidité leur est indispensable; dans les 
crachats humides, les bactéries conservent leur activité jusqu'à 14 
jours. Les crachats ensemencés après une dessic cation de 36 à 40 heures 
ne donnent plus de culture. Il faut donc croire que linfection s’opère 
principalement par contagion, et ce n’est que dans des cas très limités 
qu’on peut altribuer le transport à divers objets, comme par exemple, 
aux lettres, aux vêtements, etc. Ces microbes sont donc très sensibles 
à la dessiccation, ce qui fait supposer l’absence des spores. En effet, 
toutes les tentatives pour les découvrir furent infructueuses. 

Au point de vue clinique, l'influenza présente des tableaux variables 
et apparaît sous trois formes: catarrhale, gastrique et nerveuse; la 
première prédomine et apparaît comme la maladie aiguë et chronique; 
au début de linfluenza catarrhale aiguë, les malades sécrètent une 
grande quantité de crachats visqueux, écumeux, contenant beaucoup 
de bâtonnets libres de l’influenza. Les cellules de pus ne contiennent 
presque pas de bactéries dans celte période. L'aspect microscopique 
des crachats change pendant la marche ultérieure de la maladie : les 
bactéries libres disparaissent; elles sont presque toutes enfermées 
dans les cellules du pus, et, pendant la convalescence, apparaissent 
dégénérées en détritus, se colorent mal et ne donnent pas de culture. 


DE 


684 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La forme chronique de l'influenza se rencontre surtout chez des 
gens ayant les poumons faibles ; ce fait explique la grande mortalité 
des tuberculeux pendant l'épidémie. L'influenza chronique ne présente 
pas de symptômes marqués, et on la reconnait aux crachats caractéris- 
tiques jaune verdâtre, sécrétés en masse, et qui se distinguent neltement 
des crachats ordinaires des tuberculeux. Cette maladie est accompagnée 
d’une fièvre cachectique, qui pourtant peut manquer. L'influenza 
est quelquefois mortelle; si elle finit par la guérison, le pus disparaît 
et en même temps les bactéries de l’influenza. Examinant le sang et les 
organes des morts, Pfeiffer n'y trouva pas de bactéries typiques. Il ne 
les rencontra que dans deux cas à l'intérieur des globules blancs du 
sang des petites veines, où leur présence pouvait être expliquée par le 
transport des cellules migratrices. Ce fait conduisit Pfeiffer à conclure 
que l'état morbide général de l'organisme est provoqué non par l'in- 
fection, mais par l’intoxication. 

L’autopsie des morts de l’influenza chronique montre des changc- 
ments caractéristiques dans les poumons. Les poumons présentent 
une infiltration à une plus ou moins grande distance. Il est facile de 
distinguer la pneumonie de l'influenza de la pneumonie fibrineuse par 
ce fait que, dans le premier cas, les poumons contiennent des foyers, 
séparés les uns des autres par des parties de tissu remplies d’air, ou 
bien confluents entre eux. Dans chacun de ces foyers, ilse trouve une 
petite partie centrale, de la dimension d’une tète d’épingle. On la dis- 
üingue facilement du tissu environnant, grâce à sa coloration gris 
jaune. À l'examen microscopique, on y trouve des bactéries à l'inté- 
rieur des cellules. Par la pression d’un pareil poumon, on peut obtenir 
un pus épais et glaireux qui s'écoule des bronches ; ce pus jaune-vert 
rappelle des crachats de l’influenza. 

Les préparations étalées faites avec les sécrétions du pharynx ou 
de la trachée montrent ordinairement la présence de différentes 
bactéries (streptocoques, diplocoques, etc.), mais ce sont les bactéries 
de l’influenza qui prédominent. Le nombre des autres bactéries diminue 
dans les grandes bronches; dans le tissu pulmonaire les bactéries de 
l'influenza persistent seules. On remarque sur les préparations que 
l'épithélium à cils vibratiles des bronches est en partie détruit : de 
nombreux lambeaux de ce tissu se trouvent dans les cavités bron- 
chiales. D'autre part, cet épithélium est déplacé parles cellules de pus; 
on voit ces dernières aussi sur l’épithélium non lésé, ou bien elles 
s’intercalent entre les cellules cylindriques. Les veines et les capillaires 
environnant les bronches sont chargés de sang; le tissu conjonclif 
péribronchial est infiltré par des cellules migratrices. La partie 
centrale des foyers pulmonaires contient beaucoup de leucocytes 


REVUES LT 'ANAGSYSLS. 68 


remplissant aussi les cavités alvéolaires et leurs parois; tout cela 
change complètement la structure des poumons. Dans le issu ains 
modifié, on rencontre souvent des cavités donnant à la coupe l'aspect 
poreux. Pfeiffer prend ces cavités pour de pelitsabcès dont le contenu 
s'est vidé pendant la préparation de la coupe, ou bien a élé expectoré 
pendant la maladie. Les alvéoles les plus voisines de linfillration 
pulmonaire contiennent encore de grandes cellules souvent pigmentées. 
En s'éloignant du centre, le nombre des cellules de pus diminue et 
l1 structure normale alvéolaire des poumons apparait. Avec la colo- 
ralion par la méthode de Weigert, on remarque l'absence complètede 
fibrine dans les foyers infiltrés du centre; il n’y en à que des traces 
dans les points environnants. 

En cela consiste la différence essentielle entre la pneumonie fibri- 
neuse et celle de l'influenza. Avec un fort grossissement, on voit sur 
les coupes des bronches beaucoup de bâtonnets disposés sur les 
cellules épithéliales et entre elles. On les rencontre également dans je 
tissu conjonctif submuqueux. Les cellules du pus couvrent Pépithélium 
à cils vibratiles, glissent entre ces cellules, et renferment beaucoup de 
bacilles de l’influenza. Cela donne à croire que ces bacilles excitent 
une chimiolaxie positive, et provoquent une hypérémie du tissu 
submuqueux. Ils attirent aussi les cellules migratrices; ces dernières, 
grâce à leurs propres mouvements ou entraînées par le torrent sanguin, 
parviennent à la surface libre des bronches, v englobent les bactéries, 
et forment ainsi les sécrétions caractéristiques de l'influenza. L’autopsie 
des personnes mortes de l'influenza démontre que cette maladie peut 
encore provoquer d'autres changements du tissu pulmonaire, et 
notamment des cas de gangrène pulmonaire, d’empyème, et une 
formation de cicatrices dans les foyers infillrés des poumons. Il 
arrive souvent de rencontrer la cicatrisation sur les cadavres des 
personnes mortes de la tuberculose, compliquée de l'influenza. De telles 
cicatrices tranchent sur le reste des poumons, et on pouvait démontrer 
par l’ensemencement ou sur les préparations étalées les bacilles de 
l'influenza. 

Pfeiffer eut deux fois l’occasion de constater à laulopsie une 
gangrène pulmonaire. De nombreuses bactéries (coccus, diplocoques, 
streptocoques, etc.) se trouvaient souvent dans les poumons ainsi 
modifiés. Sur les coupes faites avec le Lissu éloigné des endroils les 
plus enflammés, les bactéries de linfluenza prédominent.Ilest possible 
que dans ces cas-là la gangrène apparaisse comme un processus secon- 
daire provoqué par différentes bactéries, favorisées par l'influenza, 
Dans un cas de gangrène, on put constater la présence d'un pus pleu- 
rétique. L’examen microscopique y démontra beaucoup de microbes 


686 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


d’influenza, qui, parvenant à la surface des poumons, attirent, à ce 
qu'il paraît, les cellules du pus. Dans les cas d'empyème développé 
à la suite de l'influenza, Pfeiffer ne réussit jamais à prouver la 
présence des bactéries dans le pus. L’empyème était causé par la 
présence des diplocoques de Frænkel et représentait une infection 
secondaire. 

La pneumonie de l’influenza peut aboutir à une dégénérescence 
caséeuse, Ceci a lieu dans les cas où l’infiltration pulmonaire s’est 
formée dans les parties des poumons renfermant déjà des tubercules 
péribronchiaux. Auprès des endroits en voie de dégénérescence caséeuse, 
renfermant de nombreuses cellules géantes avec quelques bacilles y 
contenus, se trouvent des parties qui rappellent la pneumonie de lPin- 
fluenza par leur infiltration leucocytaire. L'infiltration pulmonaire de 
l’influenza se transforme, d’après Pfeiffer, en une dégénérescence 
caséeuse sous l'influence des bacilles tuberculeux. Il ne parvint pas 
à trouver les bactéries de l’influenza dans la substance caséeuse 
même, mais elles se trouvaient toujours dans le pus pulmonaire. 

Parmi les‘complications de l’influenza, on observe encore des cas 
d'otite moyenne et de méningite. Pfeiffer a trouvé dans le pus de la 
cavité tympanique beaucoup de diplocoques de Frænkel, de mème que 
des bacilles de l’influenza fortement modifiés. Dans l'exsudat de la 
méningite on ne rencontrait que des diplocoques. 


Les animaux doivent être regardés commeréfractaires à l'influenza 
spontanée, mais il n’est pas difficile de les infecter par le virus de 
cette maladie. Les singes seuls présentent un tableau caractéristique 
d'infection semblable à celle de l'homme, tandis que chez les autres 
animaux, comme les lapins, par exemple, on ne remarque qu'une 
simple intoxication, comme celle produite par le chloroforme. Dans 
ses expériences avec les singes, Pfeiffer leur injectait les erachats de 
linfluenza ou la culture pure de ce virus. Dans le premier cas, les cra- 
chats dilués dans du bouillon stérilisé furent introduits directement 
dans la trachée, Le singe mourut le 7° jour, et on constata, à l’autop- 
sie, des abcès des poumons pareils à ceux décrits ci-dessus chez 
l’homme. Les cultures pures furent injectées directement dansles pou- 
mons à travers la paroi thoracique. Les singes réagirent à des doses 
faibles (0,5 c. c.) par une fièvre plus ou moins légère, et se remettaient 
au bout de quelques jours. Augmentant les doses, on peut donner aux 
singes une infection plus grave et même la mort. Les préparations 
étalées du sang et des sécrétions pulmonaires de ces singes démon- 
traient un nombre restreint de bacilles de l’influenza, et la mort sur- 
venait probablement par intoxication. 


PERSONNES MORTES DE RAGE. 687 


Pfeiffer a constaté qu'il y avait, dans les cas de broncho-pneumo- 
nie chez les enfants, des bactéries très ressemblantes aux bâtonnets de 
l'influenza. Ces microbes pouvaient être facilement confondus avec 
ceux de l’influenza. Pfeiffer observa 3 cas intéressants de broncho- 
pneumonie ayant apparu comme complication chez les enfants 
malades de la diphtérie. Une pareille complication amenait toujours 
la mort. La modification du tissu pulmonaire sur les cadavres ressem- 
blait beaucoup à celles que produit la pneumonie de linfluenza. 
A l'examen microscopique on voyait, outre les bactéries diphtéritiques 
et les diplocoques, de petits bâtonnets qui étaient renfermés surtout 
dans le protoplasma des cellules du pus, etqui ressemblaient beaucoup 
aux microbes de l’influenza. Leur culture est de même très semblable 
à celle des bactéries de l’influenza, et ne se développe que sur la 
gélose sanguine. En les observant de plus près, on voit que ces micro- 
bes diffèrent de ceux de l’influenza ; ons’en aperçoit surtout à leur crois- 
sance sur la gélose enduite de sang humain. Les bâtonnets de la 
pseudo-influenza sont beaucoup plus grands et ont une tendance à 
former de longs faux filaments, qui font complètement ou presque 
complètement défaut chez les vraies bactéries de l’influenza dans les 
mêmes conditions. Néanmoins, ces bactéries forment deux espèces 
très voisines, qu’on distingue difficilement sur les préparations étalées 
ou dans les coupes. Dans les cas douteux, il faut donc recourir à la 
comparaison des cultures comme ila été décrit plus haut. 

Il n’y a pas jusqu'ici de remèdes spécifiques pour le traitement 
de l’influenza, il faut donc employer les moyens prophylactiques ordi- 
naires, et notamment la désinfection, l’isolement et les autres moyens 
hygiéniques. Tsr. 


INSTITUT PASTEUR 


Personne traitée morte de rage. 

Morez (Auguste), 18 ans, cocher, 11 bis rue Portalis (Paris). Mordu 
le 30 mai à l’aile droite du nez: trois morsures pénétrantes ayant 
amené une perte de sang importante. La cautérisation a été tout à fait 
insuffisante. Le chien mordu a été mis en observation et sacrifié le 
jour même comme enragé; un chien mordu en même temps que 
Morel a été conduit à l’école d’Alfort et est mort de rage le 28 juillet. 

Morel a été traité à l’Institut Pasteur du 30 mai au 16 juin. Le 
A7, il est absent et, malgré nos instances, il ne vient pas achever son 
traitement. Il souffrait déjà depuis deux jours lorsqu'on le conduisit 
le 4 août au soir à l'hôpital Saint-Julien à Chäteau-Gonthier,où ilest mort 
le 5 à 2 heures du matin, après avoir présenté, nous écrit le médecin 
de l'hôpital, M.le Dr Homo, dessignescaractéristiquesderage furieuse. 


688 : ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR. 


STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — AOUT 1893. 


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A B C 
TT, mm" 


TOTARGENERAT NEED ET LATE 135 


1. La colonne À comprend les personnes mordues par des 
animaux dont la rage est reconnue expérimentalement, la 
colonne B celles mordues par des animaux reconnus enragés à 
l'examen vétérinaire, la colonne C les personnes mordues par 
des animaux suspects de rage. 

1. Les animaux mordeurs ont été : chiens, 123 fois; chats, 
12 fois 


Le Gérant : G. MaAssox. 


Sceaux. — Imprimerie Gharaire ct Cie. 


7me ANNÉE OCTOBRE 1893. No 10. 


ANNALES 


DE 


L'INSTITUT PASTEUR 


CONTRIBUTION À L'ÉTUDE MICROBIQUE DE L'EAU 
Par ce Dr BLACHSTEIN. 


(Travail du laboratoire de M. METCHNIKOFF, à l’Institut Pasteur.) 


La méthode généralement employée par les microbistes pour 
déterminer les propriétés d'une eau consiste en une énumération 
des bactéries qu'elle renferme. Mais il est évident que c’est moins 
de la quantité que de la qualité des microbes que dépend le rôle 
nuisible d’une eau quelconque. 

Je me suis donc mis à étudier les propriétés pathogènes 
des microbes qui se développent dans les eaux de différente pro- 
venance. Dans ce but j'introduis 1 c. c. d’eau dans 10 c. ce. de 
bouillon de culture. J'obtiens ainsi un mélange de différentes 
espèces de bactéries dont j’étudie l’elfet sur les animaux de labo- 
ratoire, cobayes, lapins, etc. On peut facilement constater que la 
qualité de ces mélanges joue un rôle beaucoup plus important 
que la quantité des bactéries qui sont contenues. 

Voici quelques exemples tirés de mon carnet d'expériences. 


[. Eau de la conduite du laboratoire de microbie morphologique de T'Ins- 
titut Pasteur.— Des plaques de gélatine, faites avec les cultures de cette eau 
en bouiilon, démontrent la présence de bactéries coliformes. (Sous ce nom 
je désigne en général tous les bacilles qui présentent une analogie avec le 
B. coli commune, et qui donnent des colonies semblables sur les plaques.) 
En outre, on trouve beaucoup de colonies liquéfiantes, composées principa- 
ement de microcoques. 

2 c. c. de culture de cette eau en bouillon, âgée de deux jours, sont bien 
supportés par les lapins, auxquels on les a injectés dans la veine auriculaire. 

0,2 c. c. de la même culture sont inoffensifs pour les souris par inocu- 
lation sous-cutanée. 0,5 c. c., injectés dans le péritoine de deux gros 


44 


690 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


cobayes, ne leur occasionnent aucun trouble. Par contre, l'inoculation d'un 
centimètre cube leur donne une péritonite. Cette même quantité, injectée 
dans le muscle pectoral d’un pigeon, reste sans effet. 


Ces données se trouvent en parfaite harmonie avec le fait que 
l’eau employée (provenant de sources) possède de très bonnes 
qualités hygiéniques et peut être bue sans le moindre danger. 
Jusqu'à quel point la péritonite des cobayes peut-elle indiquer de 
mauvaises propriétés dans une eau? C’est ce que nous diront des 
expériences ultérieures. Mais je pense que le résultat négatif 
obtenu sur des souris, des lapins et des pigeons présente une 
grande importance. 

IL. Eau de la Seine. — I est connu que l’ingestion de cette 
eau peut, dans certaines circonstances, être nuisible à la santé. Le 
meilleur exemple est l'épidémie cholérique de 1892. Toul récem- 
ment, nous avons appris un fait très instructif. Il s'agit d'un 
batelier qui absorbait tous les jours un demi-litre d’eau de la 
Seine et qui subit une attaque cholériforme. Les déjections de ce 
malade, que j'ai eu occasion d'examiner, renfermaient, en outre 
de bacilles coliformes, des bactéries liquéfiantes nombreuses, 
identiques avec les microbes de l’eau. Il faut mentionner enfin 
la découverte des bacilles typhiques dans l’eau de la Seine, faite 
à plusieurs reprises par MM. Thoinot, Vincent, Chante- 
messe, etc. 

Il était donc intéressant d'établir le pouvoir pathogène de 
cette eau, prise à différents endroits, sur les animaux. Dans ce 
but, j'étudiai d'abord les échantillons puisés en amont du Point- 
du-Jour, et semés dans du bouillon nutritif. Les mélanges bacté- 
riens ainsi obtenus se sont montrés comme très nuisibles. Leur 
effet pathogène augmentait avec l’âge des cultures. Ainsi, par 
exemple, la dose mortelle pour un lapin était de 0,5 c. ec. avec 
une culture âgée de 8 jours, tandis qu'avec une culture de 
48 heures elle était de 1 centimètre cube. 

À partir de Billancourt, l'effet pathogène de l’eau de Seine était 
beaucoup moindre, ce que j'attribue à l’épuration naturelle de 
l'eau de rivière. Voici quelques détails sur l’eau de cet endroit : 


Le 2 avril 4893, j'ai pris un échantillon de cette eau. Le lendemain, j'ai 
fait plusieurs transports dans du bouillon, dont l'efficacité a été déterminée 
les 4, 6 et 8 avril. Dans ce cas aussi, j'ai pu constater que, plus le mélange 
est vieux, plus il est nuisible pour les animaux. La dose mortelle pour le 


CONTRIBUTION A L'ÉTUDE MICROBIQUE DE L'EAU. 691 


lapin a été de 1 1/2 à 2 c. c. avec une culture :du 4 avril; de { €. ce. et 
même moins, avec une culiure du 8 avril. 

L'autopsie révèle un résultat constant : les animaux, morts au bout de 
12 à 24 heures. manifestent un catarrhe intestinal très prononcé. Dans le 
contenu de l'intestin on trouve de nombreux éléments épithéliaux et des 
leucocytes. Tous les organes abdominaux sont très byperémiés. La vésicule 
biliaire est très distendue. 

Sur les plaques préparées avec le mélange bactérien de l’eau, se dévelop- 
paient les bacilles coliformes, ainsi que de rares colonies de Proteus, du 
bacille d'Héricourt et d'autres bactéries liquéfiantes. 


Après avoir établi par des expériences multiples que l’eau de 
Billancourt est moins pathogène que celle puisée plus en amont 
de la Seine, je me suis posé cette question : Que devient cette 
eau si on la laisse stagner pendant longtemps ? Dans ce but, j'ai 
abandonné l'eau sur ma table d'étude, exposée à la lumière du 
jour. Huit jours après, j'ai préparé une série de cultures dont 
une, âgée de sept jours, a été examinée le 17 avril. Elle s’est 
montrée presque complètement inactive. Un lapin, auquel on en 
avait injecté 2 c. c. dans la veine auriculaire, ne mourut qu’au 
bout de quatre jours; deux autres (qui reçurent 1 c. c. et0,5 c. c.) 
résistèrent, ainsi qu'un pigeon et deux souris (1 c.c.et 0,5 c. c.). 
Et, cependant, les cultures renfermaient des masses de bacilles 
coliformes et beaucoup de bactéries liquéfiantes. Par contre, 
le Proteus avait disparu, de sorte au'on pouvait se demander si 
l’innocuité de l’eau était due à l'absence de ces microbes. Des 
recherches ultérieures démontrèrent j’inexactitude d’une telle 
supposition, car j'ai pu obtenir des mélanges très pathogènes et 
ne renfermant pas les espèces de Proteus. 

L'analyse bactériologique de mes cultures mélangées m'a 
démontré que dans les mélanges actifs dominaient les bactéries 
coliformes, tandis que les formes liquéfiantes n'étaient qu’en 
minorité. Dans les mélanges inactifs, j'ai observé juste le con- 
traire. Dans des mélanges anciens, l’examen des lamelles colo- 
riées démontra la présence de bactéries en forme de virgules 
minces. J’ai pu, sans difficulté, en isoler une espèce. Sur des 
plaques de gélatine, ces vibrions se développaient à côté des 
bacilles coliformes et du bacille d’Héricourt. Les colonies vibrio- 
niennes se distinguaient de ce dernier par l’absence de frange 
rayonnée et par une liquéfaction beaucoup moins rapide. Les 
colonies sont plus finement granuleuses et plus opaques que 


692 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


celles du vibrion du choléra typique; leur croissance est un peu 
plus rapide que celle du vibrion indien. Par contre, le vibrion 
que j'ai isolé de l'eau de la Seine présente la plus grande analo- 
gie avec le vibrion cholérique de Courbevoie, isolé par M. Netter 
en 1892, et conservé dans le laboratoire de M. Metchnikoff. 

Les vibrions de la Seine ainsi que celui de Courbevoie pré- 
sentent des différences morphologiques et biologiques avec le 
microbe du choléra indien. Des expériences nombreuses m'ont 
démontré, aussi, que les virgules de la Seine sont plus virulentes 
que celles du choléra indien que j'avais entre mes mains. Cette 
virulence exagérée se maintint à travers un grand nombre de 
cultures faites sans passage par l'organisme ‘. 

J'ai étudié encore plusieurs échantillons d’eau de la Seine, 
prise à Saint-Cloud. Les cultures en bouillon faites avec cette 
eau renfermaient des bactéries coliformes, ainsi que quelques 
colonies du bacille d'Héricourt et d’autres bactéries liquéfiantes. 
Les cultures de deux et quatre jours étaient inoffensives pour des 
lapins, souris et pigeons. Dans la même eau, conservée à l’état de 
stagnation pendant trois semaines, ne se développaient que des 
bactéries coliformes, dont les cultures étaient sans effet sur les 
animaux. L'eau de Saint-Cloud se comportait donc de la même 
facon que celle du laboratoire. J'en conclus que la limite de l’épu- 
ration de l’eau de la Seine doit se trouver entre Billancourt et 
Saint-Cloud. 

Je suis loin de vouloir tirer de mes expériences des conclu- 
sions définitives, mais je ne peux m'empêcher de souligner ce 
fait général que, dans toutes mes recherches, les eaux bonnes au 
point de vue de l'hygiène humaine ont été trouvées inoffen- 
sives pour les animaux, lorsqu'on injectait les cultures mélan- 
gées, préparées de la façon indiquée plus haut. 


1. V. Nexcxi: Note au sujet du mémoire de Blachstein et Zunft, dans les 
Anch. Peters. sc: biol., t:IL ft. 4° 


LES VIBRIONS DES EAUX ET L'ÉTIOLOUE DU CHOLÉRA 


PAr LE Dr Joserm SANARELLI 
Docent d'Hygiène, 


Assistant aux Laboratoires Scientifiques de la Direction de Santé Publique à Rome. 


(Travail du laboratoire de M. METCHNIKOFF à l’Institut Pasteur.) 


1! 


LES VARIÉTÉS VIBRIONIENNES ET LE DIAGNOSTIC BACTÉRIOLOGIQUE DU 
CHOLÉPA. 


Les épidémies qui, ces dernières années, se sont succédé 
presque sans interruption dans plusieurs pays de l’Europe, ont 
jeté beaucoup d’obscurité sur la question complexe de l’étiologie 
du choléra asiatique. 

La découverte du vibrion cholérique a fait faire sans contredit 
un grand progrès à nos connaissances, parce qu’elle est venue 
nous indiquer avecprécision le point de départ de nos recherches: 
mais, à mesure qu’on accumulait les documents qui doivent 
servir à l'histoire étiologique de cette maladie, de nouvelles 
observations et de nouveaux faits sont venus à diverses reprises 
compliquer singulièrement cette notion étiologique unitaire, qui 
paraissait solidement établie par les premières études de 
1883-1884. 

Après la description du type originel trouvé par M. Koch, 
dans l’Inde, on a successivement décrit d’autres vibrions, qui, 
associés ou non à la forme clinique du vrai choléra, présentent 
avec le bacille de M. Aoch de notables points de divergence ou de 
contact. 

Les premiers, MM. Finkler et Prior ! ont décrit à Bonn un 


1. Forschungen über Cholerabacterien (Ærganzungshefte zum Centralblatt für 
allg. Gesundheitspfleg., Bd. I, 1885, Heft 5 et G). 


694 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


vibrion trouvé au cours d’une épidémie de choléra nostras. Il 
diffère surtout du vibrion de M. Koch par son épaisseur et par la 
orande rapidité avec laquelle il liquéfie la gélatine. 

Bien que M. Koch affirme que le microbe de MM. Finkler et 
Prior n'a été trouvé qu’une seule fois, dans des déjections 
putréfiées depuis plusieurs jours, et appartenant à un malade 
alteint de catarrhe intestinal aigu, il existe un second mémoire 
de M. Finkler ‘ sur le même sujet, rapportant d’autres cas de 
choléra nostras où il a rencontré, à l’état de culture absolument 
pure, surtout dans les déjections de deux malades, le vibrion 
qu'il avait décrit antérieurement. 

Puis M. Deneke ® à Güttingen isola dans un vieux fromage un 
vibrion, analogue sous beaucoup de rapports au vibrion cholé- 
rique. Plus tard M. Gamaleïa * à Odessa trouva dans le contenu 
diarrhéique de quelques volailles, mortes à la suite d’une entérite 
infectieuse épidémique, le vibrion aviaire, bien connu par ses 
propriétés pathogènes très marquées. Ce vibrion, morphologi- 
quement semblable au vibrion cholérique, ne s’en distingue que 
par sa plus grande virulence et l'énergie de la liquéfaction qu'il 
produit dans la gélatine, 

M. Cunningham “ à Calcutta, dans les déjections de plusieurs 
cholériques, isola diverses variétés de vibrions morphologi- 
quement et biologiquement différents les uns des autres ; 
M. Pasquale®, à Massaua et à Ghinda, trouva deux vibrions 
cholériques différents de ceux qui sont connus et décrits 
aujourd'hui; M. Friedrich * décrivit une variété provenant de 
Shanghaï, qui ressemble plus à un bacille qu’à un vibrion, etune 
seconde variété provenant de Malte, analogue à un coccobacille ; 
enfin MM. Netter * à Paris; Sœwtchenko* à Kiew; Weichselbaum, à 

4. Ucber Bacillen der Cholera nostras (T'ageblatt der 58 Versammlung deutsch. 
Naturf.u. Aersle zu Strassburg, p. 485). 

2. Ueber eine neue, den Choleraspirillen ähnliche Spaltpilzart (Deutsch. med. 
Wochenchrift, 1885, n° 3, p. 33). , 

3. Vibrio Metchnikovi (Annales de l'Institut Pasteur, 1888, p. 489). 

4. On some species of choleraie comma bacilli occurring in Calcutta (7he se, 
mem. by the Med. Off., ete. Calcutta, 1894). 

3. Voir Particle de M. Sclavo : Di alcune differenze fra gli spirilli del 
cholera, ete. (Æivista d'Igiene e Sanita Pubblica, 4892, n° 19, p. 545). 

6. Vergleichende Untersuch. über den Vibrio cholerae asiaticae, ete. (Arbeit. 
a. dem Kaïis. Gesundh., 1892, Bd. VIIT, p. 87). 

7. Recherches bactériologiques sur les cas de choléra ou de diarrhée choléri- 


forme, ete. (Bulletin des Hôpitaux, 1892). 
S. Vr'atch, 1893, p. 461. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 693 


Vienne et Malroz, à Liège ‘ ; Finkelnburg * à Paris et à Ham- 
bourg: Bleich à Cosel * ; et plusieurs autres observateurs en 
Cochinchine, à Calcutta, à Angers, à Toulon, partout en somme 
où ont sévi les récentes épidémies, ont signalé de nouvelles 
variétés de vibrions, qui, soit par leurs caractères dans les 
cultures, soit par leurs autres propriétés morphologiques et 
biologiques, se différencient plus ou moins du vibrion indien 
décrit par M. Koch, vibrion que cet auteur considère comme le 
type spécifique du vrai choléra. 

Récemment MM. Nicolle et Morax * ont fait connaître de nou- 
veaux caractères distinctifs parmi ces vibrions ; ils ont démontré 
qu'un vibrion de provenance indienne ne présentait pas de cils 
vibratiles, tandis que des autres vibrions cholériques d'Angers, de 
Paris (1892), de Hambourg et de Shanghaï avaient un seul cil, 
et d’autres, comme les vibrions de Massaua, de Calcutta et de 
Paris (1884), présentaient régulièrement quatre cils. 

Cette première série de recherches, répétées dans tous les 
pays et en diverses circonstances, a ébranlé fortement la 
doctrine de l’uniformité du vibrion cholérique:; mais d’autres 
observations menacent encore davantage son caractère de 
spécificité. 

Dans les déjections d'individus bien portants, M. Rumpel”, 
à Hambourg, a récemment signalé la présence de vibrions 
cholériques, et les partisans même de la théorie de M. Koch ont 
dû reconnaître que le bacille virgule peut vivre et se multiplier 
impunément dans l'intestin de l’homme, quand celui-ci se trouve 
au milieu d’une épidémie de choléra, sans que pour cela il soit 
fatalement condamné à la maladie. 

Plus récemment M. Metchnikoff $ à Paris, pendant l'hiver et 
en l’absence de toute épidémie cholérique, a vérifié le même 


4. Voir l’article de M. Grixoni : Sulle proprietà biologiche d’alcuni vibrioni 
cholerigeni, etc. (Archivio per le Sciense mediche, 189%, p. 242). 

2. Zur Frage der Variabilität der Cholerabacillen (Centralblatt für Bact. u. 
Parasit., 1893, Bd. XIII, p. 143). 

3. Beitrag zur bakteriologischen Differentialdiagnose d. Cholera (Zeitschrift 
für Hygiène, Bd. XII. p. 31, 1895). 

4. Technique de la coloration des cils, ete. (Annales de l'Institut Pasteur, 1895, 
n° 7, p. 094). 

5. Bacteriologische und klinische Befunde bei der Cholera-nachepidemie in 
Hamburg. (Deutsch. med. Wochenschr., 1893, p. 160.) 

6. Sur la propriété pathogène des vibrions (Annales de l'Institut Pasteur, 
1893, p. 562;. 


696 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


fait chez une personne bien portante, qui ne prenait comme 
boisson que de l’eau minérale. 

En face de constatations semblables, en face d’une variabi- 
lité si universellement établie, il était naturel qu'il s’élevät de 
nombreux problèmes intimement liés au diagnostic bactériolo- 
gique du choléra. 

On ne pouvait plus, en effet, conserver la notion admise d'un 
monomorphisme étroit à la suite de la découverte de vibrions 
dans les déjections du choléra nostras, dans le vieux fromage, 
ou dans le sang des volailles mortes de septicémie aviaire. — 
La constatation de nouveaux vibrions authentiques, et différents 
cependant de celui découvert par M. &och dans l'Inde, imposait 
la notion d'un pléomorphisme qui menaçait à son tour de 
devenir exagéré, bien que M. Friedrich", dans une longue 
série de recherches, eût tenté de démontrer que les diverses 
formes de vibrions pouvaient ne représenter que les variations 
physiologiques d’un mème type. 

M. Koch a senti la difficulté d’une situation si complexe, et, 
dans un récent article ?, il établit d’une manière définitive les 
caractères auxquels doit répondre un bacille virgule pour qu'il 
puisse être considéré comme agent étiologique du vrai choléra. 

Nous nous étendrons un peu plus sur cet article, en raison 
de la nature de nos propres recherches. Après avoir déclaré que 
les méthodes d'examen bactériologique décrites à l'époque de 
ses premières recherches (cultures en goutte pendante, sur 
pomme de terre, gélatine, etc.) n’offrent aujourd'hui aucune 
garantie d’exactitude diagnostique, M. Xoch indique les procédés 
d'investigation par lesquels on peut établir, suivant lui, dans tous 
les cas, un diagnostic rapide et sûr. 

Ces procédés consistent : 1° dans l'examen microscopique 
des déjections ; 2 les cultures dans les solutions de peptone; 
3° les cultures sur plaque de gélatine ; 4° les cultures sur plaque 
de gélose; 5° la réaction indol-nitreuse ; 6° les expériences sur 
les animaux. 

Mais si, au point de vue d’un diagnostic rapide et complet, 
la pratique systématique de cette série d’investigations peut être 

1700 


2. Ueber den augenblicklichen Stand der bakteriologischen Choleradiagnose 
(Zeitschrift für Hygiene, 1893, p. 319, Bd. XIV). 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 697 


considérée, dans certains cas, comme ayant une grande impor- 
tance, d'un autre côté, les quatre premiers procédés d’investiga- 
tion, de l’aveu mème de M. Koch, sont dépourvus de valeur 
absolue. En effet, l'examen microscopique perd beaucoup de sa 
valeur lorsqu'on admet l'existence du vibrion dans les matières 
fécales de l'homme sain ‘: la culture en solution de peptone 
n'est plus probante, parce qu'on obtient le même résultat avec 
les cultures d’autres vibrions, qui, selon M. Koch, n’ont aucun 
rapport avec le bacille virgule ; les cultures sur gélose n'ont 
rien de caractéristique, et les cultures sur plaques de gélatine 
présentent en réalité un polymorphisme si grand qu'aucun 
bactériologiste ne peut aujourd'hui attacher une grande impor- 
tance à la plus ou moins grande rapidité de développement, 
ou au trouble plus ou moins homogène qui se produit pendant 
la liquéfaction de la gélatine. 

Il ne reste donc que deux caractéristiques du vrai bacille vir- 
gule : la réaction indoi-nitreuse (réaction rouge) et l’action 
pathogène sur les animaux. | 

Selon M. Koch, tout vibrion qui ne répond pas à ces deux 
conditions doit être considéré comme n'ayant aucun rapport 
avec l'étiologie du choléra, ce qui équivaut à dire que les 
vibrions pourvus de telles propriétés doivent être considérés 
comme de vrais vibrions cholériques. 


Il 


LES VIBRIONS DANS LES EAUX. 


Il était temps, en effet, que M. Xoch indiquât, d'une manière 
quelcouque, les limites entre lesquelles pouvaient varier, d’après 
lui, les caractères des vibrions, puisque, dans le cours des épidé- 
mies cholériques récentes, on a décrit des types si différents les 
uns des autres. M. C. Fränkel ?, dans l’eau de la fontaine 
Zollhafen, à Duisburg, isola des colonies de vibrions consi- 
dérés par M. Æoch lui-même comme représentant des vibrions 
authentiques. Cependant, les cultures de ces vibrions dans 


1. /dem, p. 338. 
2. Nachweis der Cholerabakterien in Flusswasser (Deutsche med: Woclen- 
schrift, 1892, n° 41). 


698 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


le bouillon n’ont pas donné la réaction rouge, et il ne paraît pas 
que l’anteur ait fait des recherches sur l’action pathogène. 

M. Frœænkel jusüfia en partie l’absence de réaction rouge en 
citant l'exemple d’une autre culture authentique, dans laquelle il 
n'obtenait la réaction rouge qu'après huit jours, et émit l’hypo- 
thèse que la pellicule superficielle, comme la réaction rouge, peu- 
vent quelquefois n’apparaître que sur des cultures successives. 

Voici donc une première exception aux règles fondamen- 
tales établies par M. Koch, exception qui n’a pas été mise en 
doute par lui-même dans son récent article très restrictif, puis- 
que c’est précisément dans cet article que M. Koch accepte 
comme authentique le vibrion trouvé par M. Frænkel dans l’eau 
de Duisburg. 

Il n’est pas dépourvu d'intérêt de constater ce précédent, qui 
soulève une nouvelle incertitude sur les derniers arguments que 
cherche à invoquer la doctrine de l’unicité du vibrion cholérique. 

Plus tard, Günther ‘ rencontra un second vibrion dans l'eau 
de Stralau: ce vibrion ne se développe pas, dans les cultures par 
piqûre dans la gélatine, avec la forme caractéristique en enton- 
noir, il ne croît qu'à la surface; de plus, il ne pousse pas dans 
l'étuve à 37°, n1 dans le bouillon, ni sur gélose; il ne donne pas 
la réaction indol-nitreuse, et il n'est pas pathogène pour les 
animaux. L'auteur conclut de ces faits qu’on a affaire à une 
espèce saprophytique banale. 

Puis, M. Weibel ? fit la même constatation dans l’eau d’un 
puits. M. Bujwid * dans l’eau d'un fleuve, etson assistant, Orlowski, 
dans l’eau d’un puits de Lublin, autour duquel s'étaient mani- 
festés quelques cas de choléra, rencontrèrent deux vibrions. Le 
premier croît lentement et il ne donne qu'une faible réaction 


indol-nitreuse (3 ou 4 jours après), tandis que le deuxième est 


4 


plus anaérobie et se développe plus rapidement. M. Fokker * 
trouva dans l’eau d’un port hollandais exempt de choléra, 
un vibrion non pathogène, qui se développe très bien sur la 


4. Ucber eine neue, im Wasser gefundene Kommabacillenart (Deutsche med. 
Wochenschrift, 1892, no 49). 

2, Ueber eine neue im Brunnenwasser gefundene Vibrionenart (Centralblatt 
für Bakt. uw. Paras., 1892, p. 147). 

3. Ueber zwei neue Arten von Spirillen im Wasser (Cenfralblatt für Bakt. u. 
Parasit., 1892, p. 120). 

4. Ueber einen dem Cholerabacillus ähnlichen Pilz (Deutsche med. Wochen- 
schrifl, 1893, n° 7). 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 699 


gélose à 37°, mais qui, dans les milieux liquides, se développe 
mieux à la température de la chambre, et il exprime l’idée qu’on 
peut avoir affaire à un vibrion cholérique dégénéré; enfin, 
Kiessling ‘, dans le puits d'une maison de Blankenese, dans 
laquelle 1l y avait eu quelques décès de choléra, isolaun autre 
vibrion qui se développe sur gélatine comme le vibrion de ÆXoch, 
mais qui nest pas pathogène; 1l ne se développe pas bien à 37° 
(de mème dans le bouillon et la solution de peptone); ilne donne 
pas la réaction rouge, mais seulement une légère réaction de 
l'indol. — M. Aiessling n’admet aucune relation entre son vibrion 
et le choléra de Blankenese ; il le considère comme un simple 
saprophyte. 

Dernièrement aussi, M. Dunbar * constata dans divers points 
de l'Elbe, à Hambourg, la présence de vibrions, mais il ne four- 
nit aucun détail sur leurs caractères biologiques et leurs cultures. 

M. Koch dit que les vibrions présentant la réaction de l’indol 
et pathogènes pour les animaux, c'est-à-dire répondant seuls au 
type cholérique vrai, ne se rencontrent que dans les eaux des 
régions cholériques et qu'ils disparaissent après la cessation des 
épidémies, mais les dernières études, très nombreuses, sur le 
choléra, ne signalent pas un seul fait dans lequel on ait constaté, 
dans l’eau incriminée d’un fleuve ou d’un puits, un vibrion qui 
répondit exactement au signalement exigé par l'École de Berlin. 
— M. Koch, dans son récent mémoire, parle d’un résultat positif 
obtenu aussi dans l’eau par M. Lubarsch, mais, d’après les 
données de l’article du même auteur, les vibrions ont été 
trouvés dans l’eau stagnante provenant de la cale d’un bateau de 
Hambourg, eau qui avait servi à laver les draps d’un enfant mort 
de choléra trois jours avant. Dans cette eau, M. Lubarsch constata 
jusqu’à 40 vibrions par centimètre cube, ce qui est tout à fait 
d'accord avec la nature et la provenance de celle-ci: il aurait 
été étrange, en effet, qu'il en fût autrement. — M. Günther ‘, qui, 
depuis le 29 octobre, fut chargé d'examiner l’eau de la Sprée, ne 

4. Ein dem Choleravibrio ähnlicher Kommabacillus (Arbeiten a. dem kaïs. 
Gesundh., Bd. VIII, 1893, p. 430). 

2. Untersuchungen über Choleraähnliche Wasserbacterien (Deutsche med. 
Wochenschrift, 1895, n° 7). 

3. Zur Epidemiologie der asiatischen Cholera (Deutsche med. Wochenschrift, 
4892, no 43). 


4. Untersuchung des Spreewassers auf Cholerabacillus (Gesundheits-Ingenieur, 
4892, n9 23, p. 711). 


100 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


réussit jamais à isoler un bacille virgule qui répondit aux condi- 
tions déjà indiquées !. 

Ce fait paraissait encore plus frappant, quand on songe, qu’en 
vertu des connaissances acquises sur la microbiologie du choléra, 
nous sommes amenés à penser que les vibrions trouvent dans 
l'eau un véhicule et un moyen de vie très favorables à leur pro- 
pagation et à leur existence. 

Rien donc de plus intéressant que d'entreprendre une série 
de recherches pour établir d'une manière définitive les rapports 
qui existent entre la nature et la topographie des eaux, et les 
diverses variétés vibrioniennes. Ces recherches étaient aussi 
indiquées, lorsque M. Bluchstein, dans ses expériences sur la conta- 
mination de l’eau de la Seine, eut rencontré un vibrion patho- 
gène capable de donner la réaction indol-nitreuse, comme on 
le verra dans la description que j'aurai l’occasion d'en faire. 
L'absence de choléra pendant l'été dernier, à Paris, me présentait 
une occasion favorable aux études que je m'étais proposées. 

Mon premier soir a été d’abord de rendre le plus simple 
possible la recherche rapide des vibrions dans l’eau. 

IL est hors de doute que les vibrions trouvent un excellent 
milieu nutritif dans la solution à 1 0/0 de peptone, proposée 
pour la première fois par M. Dunham*. D'autre côté, M. Hei- 
chnikoff, dans ses recherches sur le choléra, observa qu’en ajou- 
tant de la gélatine dans la proportion de 2 0/0, on rend la solu- 
tion de peptone beaucoup plus favorable au développement en 
surface de tous les vibrions. Enfin, ayant observé que dans les 
eaux riches en sels nitriques (par exemple dans les drains de 
Gennevilliers) les vibrions existent en grande abondance, j'ai 
obtenu de très bons résultats en ajoutant du nitrate potassique 
dans la proportion de 0,10 0/0. 

La recherche dans l’eau d'une espèce microbique déterminée 
présente des difficultés quelquefois insurmontables, à cause de 
l’excessive dilution dans laquelle elle se trouve constamment. 

1. Ces recherches étaient presque achevées lorsque M. Æubner signala un 
vibrion isolé des eaux de son laboratoire à Berlin par M. Vessser, qui donne 
la réaction rouge et est pathogène pour les cobayes. 

Au sujet de ce vibrion, qu'il appelle vibrio berolinensis, M. Rubner à 
promis un prochain mémoire de M. Veësser ( Hygienische Rundschau. 15 Au- 
gust 1593). 


2. Zur chemischen Reaction der Cholerabacterien. (Zeitschrift für Hygiene, 
4887, Bd. II, p. 337.) 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. : 701 


Aussi, dans l'espèce, avons-nous eu recours avec grand 
avantage à la propriété d’après laquelle les vibrions étant très 
aérobies, ont toujours tendance à se mulliplier à la surface des 
liquides nutritifs. 

Profitant de toutes ces connaissances, j'ai procédé à l'iso- 
lement des vibrions en employant chaque fois de grandes 
quantités d'eau. D’ordinaire, je versais 200 c. c. de liquide dans 
un ballon stérilisé, suffisamment volumineux pour que la surface 
de l’eau eût un large contact avec l'air extérieur; ensuite 
j'ajoutais 8 ce. c. d'un mélange nutritif composé de la manière 
suivante : 


GÉLAUNMES EEE RCE A A RE to Rte 20 
BERIOREISCEN ER EEE PP RNAEAECE ART ES PR ea te ETIC) 
Ghlonnre SOdIQUES RER AIRES Ce 0 
Nitrale potaSSIQue AE eee AA Ne ee Aie 1 


Cette gélatine, préparée d'avance, peut se conserver en 
grande quantité dans des tubes stérilisés. On choisit la propor- 
tion de 4-8 c. c., à peu près, dose suffisante pour transformer 
100-200 ce. c. d'eau d'analyse en solution nutritive, composée 
comme il suit : 


Gélatine 0 77 MN OR EVA At PER 2 2 
Pépionesechess Aa SLR ARC 1 
ChiorureSodique PRE rEr Mere : 1 
Nitrate potassique.. . .. RATÉ PEACE D) 
Bauer Re A ee TA Ce) Le SEE 100 


Dans ces ballons, les vibrions se développent si rapidement, 
qu'après 12 heures de séjour à l’étuve à 37°, si l’eau n’en con- 
tient même qu’une petite quantité, ils se présentent à la surface 
sous forme d’un voile mince et étendu, dont l’examen microsco- 
pique permet toujours de révéler la présence. 

Pour isoler les vibrions en culture pure, il suffit de prendre 
avec un fil de platine une petite quantité de cette pellicule, de 
la délayer dans un tube d’eau stérilisée, et de faire avec cette 
dilution des plaques de gélatine. On peut aussi faire des passages 
dans l’eau’ peptonisée et gélatinisée; on réensemence alors 
toutes les six heures. Les cultures sont mises dans l’étuve à 370. 

On obtient facilement ainsi, comme j’ai eu occasion de le 
vérifier maintes fois, une culture absolument pure des vibrions, 
grâce au procédé de sélection artificielle qui consiste à transpor- 
ter rapidement ces derniers dans des milieux successifs, avant 


702 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


que les autres microbes de l’eau, plus lents dans leur dévelop- 
pement, aient eu le temps de se multiplier et de s’accumuler à 
la surface du liquide. 

En procédant de cette façon, on peut éviter tous les inconvé- 
nients qui ont été indiqués dans la recherche des vibrions dans 
l'eau : cet isolement est partant d’une facilité de technique à la 
portée de tous... 

Une autre modification introduite dans la préparation des 
liquides nutritifs employés pour mes recherches, concerne la 
préparation de la gélose. 

J'ai plusieurs fois constaté que la présence d’une grande 
richesse en albuminoïdes, comme dans le bouillon de viande, est 
un obstacle quelquefois insurmontable au développement des 
vibrions. C’est pour cela qu’à la température de 37°, plusieurs 
vibrions de l’eau qui se développent facilement dans la solution 
gélatinisée de peptone, se refusent absolument à se multiplier 
à la surface de la gélose, préparée à la manière ordinaire. Il est 
facile de comprendre que cet inconvénient empêche la rapidité 
de la recherche et du diagnostic. Pour cette raison, j'ai supprimé 
dans la préparation de la gélose l'emploi de la viande, en substi- 
tuant au bouillon l’eau ordinaire, faisant ainsi un milieu nuütri- 
tif qui, en dehors de l'avantage d’une transparence exception- 
nelle, se prète merveilleusement et indistinctement aux cultures 
de tous les vibrions à la température de l’étuve. 

Au cours de mes recherches, j'ai employé ce milieu comme 
élément de diagnostic différentiel, ayant eu souvent affaire à 
plusieurs espèces vibrioniennes dont je n’aurais jamais pu 
obtenir de cultures abondantes sans l’emploi d’une gélose pré- 
parée selon cette méthode. 


III 


LES VIBRIONS DE LA. SEINE. 


L'eau de la Seine, à cause de son excessive facilité de conta- 
mination, surtout en aval de la ville, a toujours été le véhicule 
par excellence des microbes spécifiques, pendant les fréquentes 
épidémies de toute nature qui ont frappé la banlieue nord-ouest 
de Paris. 

Dans la récente épidémie de 1892, se manifesta de la façon 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 703 


la plus éclatante l’origine hydrique du choléra. C'est surtout 
dans les communes alimentées par la Seine, immédiatement en 
aval de Paris, que la maladie sévit avec le plus d'intensité. La 
zone tributaire de la machine de Saint-Denis et d'Épinay a 
fourni en effet, pendant la dernière année, le maximum de 
cholériques. 

L'épidémie d'Argenteuil (92, 2 morts sur 10.000 hab.) repré- 
senta avec l'épidémie de Sarcelles le fait dominant du choléra 
de 1892 dans le département de Seine-et-Oise, parce qu’au 
commencement de juin l’eau distribuée à Argenteuil par la 
machine d’Épinay ne provenait pas de l'Oise comme d'ordinaire, 
mais de la Seine. 

On connaît très bien le degré extrème de contagion qu'offre 
le fleuve dans cette localité, qui reçoit, entre Saint-Denis et 
Épinay, un égout collecteur de plus : le collecteur départemental 
qui s’abouche à Saint-Denis. 

Aux communes de Saint-Ouen, Aubervilliers et Saint-Denis, 
dans lesquelles on distribua l’eau de la Seine prise à Saint-Denis 
et pourtant un peu moins Contaminée que celle d'Epinay, la 
mortalité fut moindre (20,4-54,6 morts sur 10.000 hab.). — 
En s’approchant toujours plus de Paris, c’est-à-dire à Suresnes, 
au pont de Neuilly et à Sèvres, l’épidémie se manifesta d’une 
manière moins grave, en raison même de la moindre contamina- 
tion de l’eau de la Seine. 

D'autre part, les communes de Rueil, Poissy, Bougival, 
Saint-Brice, Villiers-le-Bel, etc., comprises dans la zone conta- 
minée, ont dû évidemment leur immunité absolue à l’alimenta- 
tion par l’eau de l'Oise. Par conséquent, mes premières obser- 
vations ont eu comme point de départ la recherche du vibrion 
dans l’eau de la Seine, en aval de la ville de Paris, c’est-à-dire 
à Point-du-Jour, Billancourt, Saint-Cloud, Suresnes, Asnières 
et Clichy (Voir la carte p. 705). 

J'isolai 8 vibrions présentant les caractères biologiques 
suivants : 


I. — Ponr-pu-Jour. 
Morphologie : vibrion mobile, assez incurvé, mince, à extrémité effilée, 


présentant souvent une forme spirillaire. 
Culture sur gélatine : formation de la bulle d'air caractéristique après 


10% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


24 heures, et liquéfaction en entonnoir {ypique. Après 4 jours, la culture 
présente un aspect semblable au vibrion de Hambourg. 

Culture dans la solution de peptone-gélutine : développement rapide sous 
forme de pellicule à la surface, après 24 heures. 

Culture sur gélose : développement très marqué sur la gélose n° 1 (avec 
bouillon de viande), comme sur la gélose n° 2 (sans bouillon de viande), à 
la température de la chambre, de même qu'à l'étuve à 37°. 

Culture en bouillon : développement rapide, avec formation de pellicule 
superficielle en 24 heures. 

Culture sur pomme de terre : formation d'une traînée brunàlre peu 
étendue. 

Réaction indol-nitreuse (de Poehl) : très intense après 24 heures. 

Réaction de l'indol (de Legal-Weyl) ! : très abondante après 24 heures ?. 


IT. — BILLANCOURT. 


Morphologie : vibrion incurvé, plus court et plus mince que le précédent. 

Culture sur gélatine : développement sans liquéfaction, tout le long de 
la piqûre ; petite cupule liquéfiée à la surface ; tendance peu marquée à se 
multiplier en profondeur. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : développement abondant, 
uniforme, sans pellicule. 

Culture sur gélose : après une première culture sur la gélose n° 1, il est 
impossible de faire d’autres passages ; le développement est par contre 
rapide et abondant sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : à peine perceptible après plusieurs jours. 

Cullure sur pomme de terre : dépôt blanchàtre peu évident. 

Réaction indol-nitreuse : absente. 

Réaction de l'indol : absente. 


LT SANT CLOUD: 


Morphologie : vibrion mobile, un peu plus gros et plus court que celui 
trouvé au Point-du-Jour; il présente la forme caractéristique de virgule 
plus évidente que dans tous les autres vibrions, et ressemble sous beaucoup 
de rapports au vibrion d'Angers. 

Culture sur gélatine : formation rapide de la bulle d'air, et liquéfaction 
tout le long de la piqüre. Après 4 jours, liquéfaction en entonnoir caracté- 
ristique, présentant l'aspect d’une culture de Massaouabh. 

Culture dans la solution peptone-gélatine : développement rapide et for- 
mation d’une pellicule superficielle. 

Cullure sur gélose : développement rapide et abondant sur gélose n° 1 et 
no 

Cullure en bouillon : multiplication abondante et formation d’une pelli- 
cule superficielle. 

1. Voir le Manuel de M. R. I. Petri : Der Cholerakurs, Berlin, 1893, page 25. 


2. Ce vibrion a été isolé, comme j'ai déjà dit, par M. Blachstein à l'Institut 
Pasteur. 


705 


RA. 


r. 
4 

4 
» 


TIOLOGIE DU CHOLI 


, 


AUX ET E 


la plus abondante et la plus caractéris- 


tique de tous les vibrions du laboratoire ; après quelques jours, toute la sur- 


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4 


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VIBRIONS DES I 


Culture sur pomme de terre 


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45 


très intense, mais seulement après 24 heures. 


Réaction indol-nilreuse 
Réaction de l'indol : idem. 


face de la pomme de terre est couverte d’une couche brunâtre, assez 


épaisse. 


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4 
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706 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


IV. — SURESNES. 


Morphologie : vibrion mobile, très semblable à celui de Billancourt, 
mais avec prédominance de formes plus minces. 

Culture sur gélatine : développement sans liquéfaction, le long de la 
strie ; même cupule de liquéfaction à la surface : peu de tendance au déve- 
loppement en profondeur. 

Culture en solution de peptone-gélatine : développement abondant sur- 
tout à la surface ; après quelques passages par le péritoine des cobayes, on 
obtient des cultures avec la pellicule superficielle. 

Culture sur gélose : positive dans la gélose n° 1, à peu près nulle sur la 
gélose n° 2. 

Culture en bouillon : négative. 

Culture sur pommes de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : absente. 

Réaction de l'indol : absente. 


V. — ASNIÈRES (N° 1). 


Morphologie : vibrion mobile à forme de virgule, très mince et très 
incurvé, un peu semblable au vibrion de Hambourg. 

Culture sur gélatine : développement assez lent tout le long de la piqûre ; 
légère trace de liguéfaction à la surface. 

Culture en solution de peptone-gélatine : développement abondant, avec 
trouble uniforme du liquide; absence de pellicule. 

Culture sur gélose : sur la gélose n° 1, développement à 37°; cultures peu 
manifestes à 20°, plus abondantes à 22°; développement rapide et très 
marqué sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : développement rare dans les premières 24 heures ; 
culture abondante avec formation de pellicule superficielle après 48 heures. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. é 

Réaction indol-nitreuse : après 48 heures, elle se manifeste légèrement. 

Réaction de l'indol : évidente après 24 heures. 


VI. — ASNIÈRES (N° 2). 


Morphologie : vibrion mobile (rès incurvé; plus gros mais plus uniforme 
que le précédent. 

Culture sur gélatine : développement tout le long du trait de la piqûre, 
avec cupule de liquéfaction superficielle plus étendue que celle du n° 1. 

Culture sur la solution de peptone-gélaline : développement imperceptible 
dans les premières 24 heures, avec flocons nageant à la surface du liquide ; 
trouble uniforme après 48 heures; absence de pellicule. 

Culture sur gélose : développement médiocre après quelques jours sur 
la gélose n° 4 à 37°, un peu plus rapide à 2%, abondant à 22°; développe- 
ment très accentué sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : développement très médiocre à 37°; un peu plus 
abondant avec formation d'une légère pellicule à 220. 

Cultures sur pomme de terre : insignifiante. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 707 


Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures dans la solution de 
peptone à 37°; plus évidente dans les cultures à 22°, 
Réaction de l'indol : manifeste après 48 heures. 


NID. — Cream (Ne 

Morphologie : vibrion mobile légèrement polymorphe, présentant en 
général des formes minces, à peine incurvées, et des formes beaucoup plus 
longues semblables à celle du vibrion de Paris de 1892. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqüre, avec godet 
de liquéfaction superficiel assez étendu. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : développement abondant 
spécialement à la surface, avec formation de pellicule superficielle. 

Culture sur gélose : négative dans la gélose n° 1 à 57°, après 24 heures; 
médiocre à 29°; un peu plus abondante à 22°, Sur gélose n°2, culture rapide 
etabondante. 

Culture sur bouillon : médiocre dans les premières 24 heures, plus abon- 
dante avec formation de pellicule après 48 heures. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : très faible après 48 heures. 

Réaction de l'indol : évidente. 

VII. — Cricay (N° 2). 

Morphologie : vibrion mobile à peu près semblable au précédent, mais 
plus incurvé et plus uniforme. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre, avec formalion 
d'un petit entonnoir de liquéfaction à la surface. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : développement abondant, 
surtout dans les couches supérieures, avec formation de pellicule. 

Culture sur gélose : négative sur gélose n° 1 à 37°; discrète à 29°; abon- 
dante à 22°. Sur la gélose n° 2, développement rapide et abondant. 


Culture en bouillon : rare développement avec formation de petits flocons 
à la surface. 


Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : à peine perceptible après 8 jours. 

Réaction de l’indol : évidente. 

La constance et l’uniformité des résultats dans toutes les 
recherches sur la Seine en aval de Paris ont rendu indispensables 
d’autres observations successives en amont du fleuve et tout le 
long de son parcours dans la ville. 

J'ai pris de nouveau de l’eau de la Seine à Ivry et de la Marne 
à Charenton; j'ai pris aussi directement de l’eau de la Seine à 
Bercy (peu après son arrivée dans la ville), et une autre partie 
enfin au pont au Change, près du Châtelet. 

Dans tous ces échantillons d’eau, j'ai réussi à isoler facilement 
neuf vibrions, dont je décrirai les caractères les plus saillants. 


708 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
IX. — Ivry (n° 1). 


Morphologie : petit vibrion mobile, assez court, en forme de virgule, un 
peu semblable à celui de Saint-Cloud. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqüre, avec liqué- 
faction superficielle. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble léger et uniforme 
dans les premières 24 heures; devient plus abondant les trois jours suivants, 
sans formation de pellicule. 

Culture sur gélose : sur la gélose n° 1, développement imperceptible 
dans ies premières 24 heures, lent et modéré dans les jours suivants. 
Sur la gélose n° 2, développement abondant. 

Cuilure en bouillon : développement imperceptible dans les premières 
24 heures; plus manifeste après 48 heures, mais sans formation de pellicule 
superficielle. 

Culture sur pomme de terr2 : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : négative dans les premières 24 heures, se mani- 
feste légèrement au huitième jour. 

Réaction de l'indol : évidente après 24 heures. 


X-— [vas (nt2): 


Morphologie : vibrion mobile, un peu plus mince et plus long que le 
précédent. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre, avec formation 
d'un grand entonnoir de liquéfaction à la surface. 

Culture dans la solution de peptone gélatine : trouble uniforme, mais plus 
intense vers les parties superficielles; pas de pellicule. 

Culture sur gélose : développement très limité dans les premières 
24 heures, mais plus abondant dans les jours suivants, sur la gélose n° { à 
31°; développement rapide et abondant sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : après 24 heures, développement discret avec trouble 
général et uniforme, plus manifeste dans les parties superficielles. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nilreuse : négative après 24 heures; légère après 8 jours 


XI. — CHARENTON (n° 1). 


Morphologie : vibrion mobile très semblable au précédent. 

Culture sur gélatine : développement discret le long de la piqüre, avec 
godet caractéristique de liquéfaction à la surface. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : après 24 heures, léger 
trouble uniforme; apparition de la pellicule après 2 ou 3 jours. 

Cullure sur gélose : très rare sur la gélose n° 1; abondante sur la gélose 
n° 2. 

Cullure en bouillon : très rare. 

Culture Sur pomme de terre : peu évidente. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures; légère après 8 jours. 

Réaction de l'indol : très intense après 24 heures. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 709 


XII. — CHARENTON (n° 2). 

Morphologie : petits vibrions, minces, mobiles, (très incurvés et uniformes. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqüre, avec petit 
godet superficiel de liquéfaction. 

Culture dans la solution de peplone-gélatine : développement surtout en 
surface, sans formation de pellicule. 

Culture sur gélose : sur la gélose n° 1 après 24 heures, un peu plus 
abondante que la précédente; sur la gélose n° 2, développement rapide et 
très manifeste. 

Culture en bouillon : léger trouble uniforme, sans pellicule. 

Cullure sur pomme de terre : à peine perceptible. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures ; très intense aprèss jours 

Réaction de l'indol : très belle après 24 heures. 


XIII. — Bercy (n° 1). 

Morphologie : vibrion mobile très mince, légèrement incurvé comme le 
vibrion indien. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre, avec grand 
entonnoir de liquéfaction limité à la surface. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : léger développement, avec 
formation de flocons nageant à la surface; pas de pellicule. 

Culture sur gelose : absolument négative à 37°, abondante à 22° sur la 
gélose ordinaire n° 1, rapide et abondante après 24 heures sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : négative à 37°, peu évidente à 22°, 

Culture sur pomme de terre : imperceptible. 

Reaction indol-nitreuse : négative. 

Réaction de l'indol : négative. 


XIV. Bercy (n° 2). 

Morphologie : vibrion mobile, plus petit, plus mince et plus incurvé que le 
précédent. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre. avec petit 
godet superficiel de liquéfaction. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble diffus. plus marqué 
aux parties superficielles, où il se manifeste sous forme de flocons 
nageants. 

Culture sur gélose : négative à 37°, assez abondante à 22° sur la gélose no 1, 
et très abondante sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : négative à 37°, développement lent et peu abondant 
à 220. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : à peine perceptible après 8 jours. 

Réaction de l'indol : idem. : 


XV. Poxt-Au-CHANGE (n° 1). 


Morphologie : vibrion mobile, très incurvé, un peu semblable à celui de 
Massaouah. 


710 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. , 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre avec petit godet 
superficiel de liquéfaction. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : léger trouble après les 
premières 24 heures; plus abondante avec formation de pellicule à la surface 
après 3 Jours. 

Culture sur gélose : négative à 37°, modérément abondante à 22° sur la 
gélose n° 1. Développement rapide et très manifeste sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : négative à 37° pendant les 2 ou 3 premiers jours, 
développement discret à 22°. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nilreuse : négative. 

Réaction de l'indol : négative. 


XVI. PoxT-Au-CHANGE (n° 2). 
Morphologie : vibrion mobile, identique à celui de Saint-Cloud, avec 
présence de formes filamenteuses et spirillaires. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre avec formation 
d'une grande capsule de liquéfaction à la surface. 

Culture dans la solution de peplone-gélatine : assez abondante, formation 
d'une pellicule après 24 heures. 

Culture sur gélose : très en retard et pauvre sur la gélose n° 1, abon- 
dante sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : très médiocre à 37°, plus abondante à 22°. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : négative. 

Réaction de l'indol : à peine évidente après 8 Jours. 

Pendant le cours de ces recherches, j'ai souvent examiné 
l'eau d’alimentation de la ville de Paris. Il y a peu de mois 
encore, l’eau qui servait à une certaine partie de la population de 
Paris, provenait parfois de la Seine, puisque les eaux de la 
Vanne, de la Dhuis et de la Vigne, qui alimentaient la capitale, 
devenaient tout à fait insuffisantes dans les périodes de grande 
sécheresse; mais, dans le courant de cette année, l’arrivée de 
l'Avre a permis d'éviter ce grave inconvénient, et la santé 
publique a tiré de grands avantages de l'absence d’eau de Seine. 

Les échantillons recueillis pour mes recherches provenaient 
directement des conduites installées à l’Institut Pasteur, qui font 
partie des conduites générales de la ville. Il ne me fut jamais 
possible de savoir laquelle des quatre espèces d'eau prédomine 
puisque, une fois arrivées à la ville, les eaux de la Vanne, de la 
Dhuis, de la Vigne et de l’Avre entrent ensemble dans la même 
canalisation et se confondent complètement dans le vaste réseau 
de l’eau potable de Paris. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 711 


Après plusieurs tentatives infructueuses, j’ai finalement 
réussi, le 14 août, à isoler dans cette eau un vibrion qui présen- 
tait les caractères suivants : 

XVII. — Morphologie : petit vibrion mobile, mince, trés incurvé, quelque- 
fois en forme spirillaire. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre, avec liquéfac- 
tion superficielle en forme d'entonnoir. 

Culture dans la solution de peptone-gélaline : développement abondant 
avec production de flocons à la surface. 

Culture Sur gélose : assez médiocre sur la gélose n° 1, abondante sur la 
gélose no 2. 

Culture sur bouillon : assez médiocre. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : à peine perceptible après 8 jours. 

Réaction de l'indol : peu manifeste. 


La constatation, après plusieurs tentatives infructueuses, 
dans l’eau potable de Paris, d’un vibrion aussi semblable par 
plusieurs de ses caractères à ceux déjà signalés dans l’eau de la 
Seine, m'a inspiré le soupçon d’un mélange possible d’eau de la 
Seine à l’eau qui sert à l'alimentation de Paris. 

Naturellement, il ne m'a pas été possible de confirmer une 
telle supposition, mais la circonstance que les jours précédant 
le 14 août ont présenté une chaleur excessive, et qu'il est possible 
que, dans ces cas, le nouveau conducteur de l'Avre ait été insuf- 
fisant à satisfaire les besoins de la ville, rend très probable 
l'hypothèse que, pour quelques jours, on ait eu recours à l’eau 
de la Seine pour faire face à l'énorme consommation. 


IV 


LES VIBRIONS DES ÉGOUTS 


Les égouts de Paris déversent toutes leurs eaux dans trois 
collecteurs. Celui de la rive gauche et celui de la rive droite se 
réunissent en un tronc commun qui déverse dans la Seine, en 
aval de Paris, et jettent dans ce fleuve, à Clichy, près du pont 
d’Asnières, les quatre cinquièmes des eaux de Paris, soit en 
moyenne par jour 373,000 mètres cubes. 

Le troisième collecteur, dit départemental, recueille les 
eaux des versants nord de la butte Montmartre et des quartiers 


712 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


hauts de Paris et vient déboucher dans la Seine à Saint-Denis. 
Il a un débit journalier de 40,000 à 60,000 mètres cubes. 

Depuis l'exécution de ces collecteurs et le développement du 
réseau secondaire des égouts, la Seine s'est trouvée gravement 
altérée à partir de Clichy jusqu'aux environs de Mantes. — La 
recherche de vibrions dans l’eau de ces collecteurs, qui prennent 
une si grande part à la contamination de l’eau de la Seine, était 
donc indiquée. ; 

Les recherches dans les deux premiers collecteurs, celui de la 
rive droite et celui de la rive gauche, furent faites immédia- 
tement au point d’abouchement dans le lit de la Seine, près du 
pont d'Asnières. Dans cet endroit, l’eau est excessivement sale; 
elle contient plus de 400,000,000 de bactéries par centimètre 
cube el 38,4 milligrammes 0/0 de matières organiques. On y 
trouve les vibrions en grande quantité, et l’eau préparée de la 
manière déjà indiquée, après 12 heures de séjour à l’étuve à 
31°, présente toujours à la surface une pellicule constituée par 
des vibrions en culture presque pure. 

Dans les cultures sur plaques, on obtient d'innombrables 
colonies caractéristiques, parmi lesquelles il serait assez facile 
d'isoler une série illimitée de variétés; je me suis pourtant 
contenté d'en séparer deux seulement en culture pure, afin de ne 
pas compliquer le matériel de mon étude. 

Voici leurs principaux caractères : 


XVIIT. — CoLLECTEUR D'ASNIÈRES (n° 1). 


Morphologie : petits vibrions mobiles à forme de virgule, semblables à 
ceux de Saint-Cloud, mais un peu plus minces. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre et formation 
d'une grande cupule de liquéfaction à la surface. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : rare dans les premières 
24 heures; après 48 heures, le liquide est tout à fait trouble et présente de 
petits flocons à la surface ; pas de pellicule. 

Culture sur gélose : absolument négative sur la gélose n° 4 à 37°, mani- 
feste à 29, abondante à 22, Développement rapide et très marqué sur la 
gélose n° 2. 

Cullure en bouillon : développement assez léger à 37°, plus abondant 
avec formation de pellicule superficielle à 220. 

Cullure sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : très légère à 37°, après 48 heures. 

Réaction de l'indol : à peine perceptible. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 713 


sXIX. — CoLLECTEUR D'ASNIÈRES (n° 2). 

Morphologie : vibrion mobile, un peu plus grand que le précédent, mais 
plus uniforme, et un peu semblable au vibrion de Paris (1892). 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre, avec petit 
godet de liquéfaction superficiel. 

Culture dans la solution de peplone-gélatine : médiocre dans les premières 
24 heures, plus abondante ensuite avec formation d'une légère pellicule. 

Culture sur gélose : développement lent et limité sur la gélose n° 1, 
abondant sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : développement discret, mais sans pellicule. 

Cullure sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : à peine perceptible après plusieurs jours. 

Reaction de l'indol : idem. 


D’autres recherches furent faites sur le collecteur de Click y, 
dans l’eau prise au passage souterrain, à Levallois-Perret. Dans 
cette eau, qui ne diffère pas, quant à sa contamination, de 
celle qui se jette dans la Seine, près d’Asnières, les vibrions 
sont aussi excessivement abondants. Les trois espèces isolées 
dans ce cas, au hasard, présentent les caractères suivants : 


XX. — LevaLzcois-PERRET (n° 1). 


Morphologie : vibrion mobile, mince et très incurvé, d'aspect générale- 
ment uniforme. On trouve souvent des formes allongées avec flexions. 

Culture sur gélatine : développement limité au trait de la piqüre, avec 
godet de liquéfaction superficiel. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble uniforme et rapide, 
mais sans formation de pellicule. 

Culture sur gélose : très lente et peu manifeste sur la gélose n° 1, abon- 
dante sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : à peine perceptible après 24 heures, abondante avec 
pellicule après 48 heures. 

Culture sur pomme de terre : à peine visible. 

Réaction indol-nitreuse : négative. 

Réaction de l’indol : faible. 


XXI. — LEvALLois-PERRET (n° 2). 


Morphologie : petit vibrion mobile, plus court et plus uniforme que le 


précédent. , 

Culture sur gélatine : développement sans liquéfaction le long de Ja 
piqûre, godet superficiel. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble uniforme, avec très 
légère pellicule sous forme d’anneau à la surface. 

Culture sur gélose : négative sur la gélose n° 1 à 37°; abondante et 
rapide sur la gélose n° 2. 


114 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Culture en bouillon : à peine perceptible après 24 heures, abondante 
avec formation de pellicule après 48 heures. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures, faible au 8 jour. 

Réaction de l'indol : assez faible. 

XXII. — LEevarLots-PERRET (n° 3). 

Morphologie : vibrion mobile, petit et mince en forme de virgule, un 
peu plus polyÿmorphe que le précédent. 

Cullure sur gélatine : développement le long de la piqûre, grande cuvette 
de liquéfaction à la surface. 

Culture dans la solution de peptone-gélutine : développement assez rapide 
et abondant, mais sans formation de pellicule. 

Culture Sur gélose : négative sur la gélose n° 1; abondante sur la 
gélose n° 2. 

Culture en bouillon : à peine perceptible en 24 et 48 heures, plus abon- 
dante les jours suivants, mais sans formation de pellicule. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse: négative après 24 heures; évidente après 8 jours. 

Réaction de l'indol : assez manifeste après 8 jours. 


y 


LES VIBRIONS DE GENNEVILLIERS ET DES EAUX DE DRAINAGE. 


S appuyant sur les travaux de MM. de Freycinet, Schlesing, 
Marié-Davy, Frankland, etc., les ingénieurs de la ville de Paris 
ont conclu à l'épuration des eaux d’égout par l’action d’un sol 
perméable et de la végétation. 

Après des cultures d’essai à Clichy, les eaux d'égout ont été 
envoyées sur la rive gauche de la Seine, dans la plaine de Gen- 
nevilliers. La surface irriguée a subi un développement pro- 
gressif, et elle atteint aujourd'hui plus de 750 hectares. 

La prospérité de la plaine et sa salubrité sont, malgré cela, 
indiscutables; la population a plus que doublé depuis 1872: 
l'expérience est donc concluante et confirme pleinement la 
théorie. L'œuvre de salubrité est en même temps une œuvre de 
fertilisation. 

Après avoir servi à l'irrigation de cette vaste zone de terre, 
l’eau filtrée est recueillie dans un système de drainage destiné à 
faciliter l’abaissement de la nappe souterraine. 

Les modifications organoleptiques, chimiques et biologiques 
subies par ces eaux après son épuration dans le sol de Genne- 
villers, sont surprenantes. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 745 


Après filtration d'un mélange infini de résidus de tout genre, 
d’un liquide infect. contenant des microbes en quantité énorme, 
les cinq drains de Gennevilliers fournissent à la Seine une eau 
limpide, fraîche, agréable, et, par son contenu en microbes (drain 
d'Asnières avec 400 germes par c. c.,) peut-être plus pauvre 
que les eaux employées à l'alimentation de la ville de Paris. 

La recherche des vibrions dans cette eau, avant et après 
la filtration à travers le terrain, présentait, dans ce cas par- 
ticulier, un grand intérêt. Les échantillons d’eau d'irrigation 
ont été prélevés dans un des conduits de distribution qu'on trouve 
aux jardins de la ville de Paris à Asnières ; ceux de l’eau de 
drainage ont été prélevés au drain des « Grésillons », qui 
s’abouche à l'extrémité du même jardin à Asnières. Dans ces 
échantillons, j'ai constaté avec facilité la présence des vibrions 
en grande quantité, et de variétés morphologiquement diverses. 

Voici les principaux caractères de quelques-unes : 


XXII. — GEexNevizziers (n° 1). 

Morphologie : vibrion mobile, mince, uniformément incurvé, plus long 
que les précédents trouvés à Levallois. 

Culture Sur gélatine : développement le long de la piqûre avec un grand 
entonnoir de liquéfaction superficielle. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble homogène, abon- 
dant. mais sans pellicule. 

Culture sur gélose : négalive sur la gélose n°1, abondante sur la gélose n°2. 

Culture en bouillon : très rare après 24 heures; abondante avec 
formation de flocons à la surface, mais sans pellicule, après quelques jours. 

Culture sur pomme de terre : négative. 

Réaction indol-nilreuse : absente. 

Réaction de l'indol : assez faible. 


XXIV. — GENNEVILLIERS (n° 2). 

Morphologie : vibrion mobile tout à fait semblable à celui de Saint-Cloud. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqûre avec formation 
de cupule à peine perceptible à la surface. 

Culture dans la solution de peplone-gélatine : (rouble abondant avec 
mince pellicule annulaire à la surface. 

Culture sur gélose : développement rapide et abondant aussi bien sur la 
gélose n° 1 que sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : assez abondante après 24 heures, avec pellicule 
superficielle. 

Culture sur pomme de terre : {rès rare, blanchâtre. 

Réaction indol-nitreuse : absente. 

Reaction de l'indol : assez faible. 


716 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


XXV. — GENNEVILLIERS (n° 3). 

Morphologie : vibrion mobile, à peu près semblable au précédent, mais 
un peu plus gros et plus long. 

Cullure sur gélatine : développement le long de la piqûre, avecliquéfaction 
en entonnoir à la surface. 

Cullure dans la solution de peptone-gélatine : trouble abondant avec 
pellicule annullaire à la surface. 

Culture sur gélose : négative sur la gélose n° 4, abondante sur la 
gélose n° 2. 

Cullure en bouillon : assez médiocre après 24 heures; ensuite très abon- 
dante avec formation d’une pellicule. 

Cullure sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures, très évidente après 
8 jours. 

Réaction de l'indol : assez faible. 


XXVI. — GENNEVILLIERS (n° 4). 

Morphologie : vibrion mobile, très mince, régulier et incurvé, semblable 
au vibrion de Hambourg. è 

Cullure sur gélatine : développement le long de la piqüre, avec godet de 
liquéfaction superficiel. 

Cullure dans la solution de peptone-gélatine : abondante avec formation 
de pellicule annullaire. 

Culluresur géiose : négative sur la gélose n° 1, abondante sur la gélose n° 2. 

Cullure en bouillon : assez médiocre après 24 heures, ensuite plus abon- 
dante, avec formation de pellicule superficielle. 

Cullure sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nilreuse : négative après 24 heures, très évidente après 
8 jours. 

Réaction de l'indol : positive. 


XXVII. — GENNEVILLIERS (n° 5). 


Morphologie : vibrion mobile, moins incurvé, plus long et un peu plus gros 
que le précédent: présente parfois des formes irrégulières. 

Cullure sur gélatine : développement abondant et liquéfaction le long de 
la piqûre. Bulle d'air caractéristique, mais un peu plus petite que celle du 


vibrion de Courbevoie après 24 heures; après 4 jours, liquéfaction typique | 


en entonnoir. 
Cullure dans la solution de peptone-gélatine : développement abondant, 
avec formation d’une pellicule superficielle après 12 heures. 
Culture sur gélose : abondante et rapide sur la gélose n° 1 et n° 2. 
Culture en bouillon : abondante avec pellicule superficielle après 24 heures. 
Cullure sur pomme de terre : formation d'une légère couche grisâtre. 
Réaction indol-nilreuse : légère après 24 heures; très intense et de colo- 
ration écarlate après 8 jours. 
Réaction de l'indol : très marquée après 24 heures. 


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VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 


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XXVIIL. — DraIN (n° 1). 

Morphologie : vibrion mobile, mince, allongé, très incurvé. 

Culture sur gélaline : développement médiocre le long de la piqüre. Pas 
de liquéfaction. 

Culture dans la solution de peptone-gélaline : très abondante, avec pelli- 
cule annullaire à la surface. 

Culture sur gelose : rapide et intense sur les géloses n° 4 et n° 2. 

Culture en bouillon: abondante avec formation de pellicule après48 heures. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures. Imperceptible après 
8 jours. 

Réaction de l'indol : évidente, mais faible. 

XXIX. —: Drain (n° 2). 

Morphologie : vibrion mobile polymorphe. À côté de quelques formes 
allongées, minces et très incurvées, on observe d’autres formes plus grosses, 
plus allongées, avec renflement terminal. 

Culture sur gélatine : développement le long de la piqüre, avec enton- 
noir de liquéfaction, assez profond. ; 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble abondant, avec 
légère pellicule superficielle. 

Culture sur gélose : négative sur la gélose n° 1, abondante sur la gélose 
n°2. 

Culture en bouillon : discrète avec formation d’une légère pellicule, après 
48 heures. 

Culture sur pomme de terre : insignifiante. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 48 heures, manifeste après8 jours. 

Réaction de l'indol : assez faible. 


XXX. — Draix (n° 3). 

Morphologie : vibrions mobiles plus petits et plus uniformes que les pré- 
cédents, à extrémités affilées comme les vibrions de Suresnes. 

Culture sur gélatine : développement sans liquéfaction le long de la 
piqûre. Godet superficiel. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : abondante avec mince pel- 
licule superficielle 

Culture sur gélose : développement rapideetabondantsur gélose n°1 etn° 2. 

Culture en bouillon : abondante avec pellicule. 

Culture sur pomme de terre : faible et blanchâtre. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 48 heures, discrète après 8 jours. 

Réaction de l'indol : assez faible. 


VI 
LES VIBRIONS DE VERSAILLES. 


L'immunité presque absolue de Versailles pendant toutes les 
épidémies qui, à diverses époques, ont frappé le département de 


718 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Seine-et-Oise, est très connue, et on peut se demander si un tel 
privilège n'est pas dû à la qualité et à la provenance de l’eau 
d'alimentation fournie à la ville. 

En effet, les documents officiels signalent dans la dernière 
épidémie trois décès cholériques à Versailles, mais le dernier 
de ces cas concerne un individu amené déjà malade de Trappes. 
Le premier également ne peut pas être considéré comme ayant 
pris sa maladie à Versailles, parce qu'il arrivait de Bezons, et 
succomba le 6 septembre, après quelques jours de maladie. Le 
6 septembre aussi mourait, après 24 heures de maladie, un soidat 
des chasseurs. Cet homme avait souffert pendant un mois de 
troubles intestinaux dont il avait guéri quelques jours avant. 

En dehors de ces cas, pas d’autres observations. 

Cependant la ville de Versailles, en raison de sa position 
topographique, n'a pas une eau de bonne qualité. Peut-être l'eau 
est-elle encore pire que dans la banlieue de Paris. La plus 
grande partie, en effet, est de l’eau de Seine qui, prise à Bougival, 
est portée par une machine hydraulique jusqu'à la ville; une 
petite quantité d’eau provient de certains étangs des environs, 
dont le contenu, recueilli dans le réservoir de Monthauron, 
après avoir subi une dépuration sommaire, est distribuée à 
quelques fontaines publiques. 

J'ai pris des échantillons aux deux fontaines publiques 
situées sur la place Hoche. L'une distribue l’eau de la Seine, la 
seconde l’eau des étangs. J'ai recueilli aussi un autre échantillon 
du grand canal en croix situé au milieu du parc du château de 
Versailles. 

Dans cette dernière, je n'ai pas pu constater la présence de 
vibrions, mais dans les autres j'ai isolé deux variétés dont voici 
les caractères principaux. 


XXXI. — VERSAILLES (eau de la Seine). 


Morphologie : vibrion mobile mince, allongé, élégamment ineurvé et 
uniforme comme celui de Courbevoie. 

Culture sur gélatine : développement abondant et liquéfaction le long de 
la piqüre, avec petite bulle d'air caractéristique à la surface après 24 heures; 
dans les jours suivants, liquéfaction en entonnoir caractéristique. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : trouble abondant, uniforme, 
avec légère pellicule superficielle. 

Culture sur gélose : rapide et abondante sur les géloses n° { et n° 2. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 719 


Culture en bouillon : trouble uniforme et abondant avec pellicule à la 
surface. 

Culture sur pomme de lerre : léger développement sous forme d’un petit 
dépôt blanchâtre peu étendu. 

Réaction indol-nitreuse : assez évidente mème après 24 heures. 

Réaction de l’indol : abondante. 


XAXIT. — VERSAILLES (eau des étangs). 


Morphologie : vibrion mobile, mince, incurvé, uniforme, semblable à celui 
du drain n°3. 

Culture sur gelatine : développement le long de la piqûre avec liquéfac- 
tion en entonnoir à la surface. 

Culture dans la solution de peptone-gélatine : développement abondant, 
avec pellicule épaisse à la surface. 

Culture sur gélose : négative après 24 heures, peu développée les jours 
suivants sur la gélose n° {, abondante sur la gélose n° 2. 

Culture en bouillon : développement abondant avec pellicule. 

Culture sur pomme de terre : peu appréciable. 

Réaction indol-nitreuse : négative après 24 heures, imperceptible après 
8 jours. 

Reaction de l'indol : légère. 


VII 


LES PROPRIÉTÉS PATHOGÈNES DES VIBRIONS DES EAUX. 


Les caractères des 32 vibrions que nous avons décrits som- 
mairement, sont déjà suffisants pour donner une idée approxi- 
mative de leur extrême variabilité, et pour nous indiquer 
l’opinion que nous devons nous former de leurs rapports avec le 
diagnostic bactériologique du choléra. 

A côté de quelques variétés (V. du Point-du-Jour, de Saint- 
Cloud, de Gennevilliers n° 5, de Versailles) qui se développent 
sur la gélatine d’une manière si caractéristique qu'on ne peut 
pas les différencier des vibrions cholériques authentiques, nous 
trouvons d’autres variétés qui liquéfient peu ou pas la gélatine 
(V. de Gennevilliers n° 2, Drain n° 1), dans laquelle ils se 
multiplient avec grande lenteur et difficulté. À côté de ces 
dernières qui se développent, comme plusieurs autres, dans 
l'étuve à 37°, soit sur gélose ordinaire, soit dans le bouillon de 
viande, nous trouvons de nouveaux vibrions (V. d’Asnières 
n° 1, du collecteur d’Asnières n° 1, de Levallois n° 2 et 3, de 
Gennevilliers n°° 1, 3 et 4, et du Drain n° 2) qui se refusent 


720 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


absolument à se multiplier sur gélose ordinaire; et, d’autres 
enfin (V. de Billancourt et de Suresnes) qui, tout en se cultivant 
sur ce milieu nutritif, trouvent un obstacle si insurmortable à 
croître dans le bouillon de viande qu'on ne réussit à les y 
cultiver, que si celui-ci est soumis à la température de la 
chambre. 

Les seuls milieux qui, à la température de l’étuve, soient com- 
patibles avec la vie de tous les vibrions indistinctement sont donc : 
la gélose à l’eau peptonisée et la solution de peptone-gélatine. 
Mais combien de différences on observe dans les cultures de 
cette nature! Les vibrions de Gennevilliers n° 4, et du Drain 
n° 1, par exemple, qui ne liquéfient que peu ou pas la gélatine, 
et que pour cela on pourrait considérer comme appartenant à 
des variétés extrèmement exigeantes ou dégénérées, se dévelop- 
pent, par contre, sur la gélose ordinaire à 37°, avec une rapidité 
supérieure à celle de tous les autres vibrions. 

1l n'y a pas de rapport entre la difficulté de développement 
à 37° dans les milieux nutritifs ordinaires, et tout autre caractère 
pouvant ètre considéré comme d'ordre dégénératif, puisque les 
vibrions qui ne liquéfient pas la gélatine finissent par se dévelop- 
per à 31°, et que, vice versa, beaucoup d’autres qui iquéfient plus 
ou moins abondamment la gélatine, ne peuvent pas se cultiver à 
la température de l’étuve. 

Quant aux cultures sur la gélatine, on observe une série si 
riche de différences dans l'intensité, la profondeur et l'étendue 
de la liquéfaction, qu'il serait absolument impossible d'établir 
des caractères fixes et de quelque valeur. 

Mais, à l'exception des quatre vibrions que nousavonsrappelés 
(Point-du-Jour, Saint-Cloud, Gennevilliers n° 5. Versailles) 
qui liquéfient la gélatine d’une manière caractéristique tout le 
long de la piqüre, et des vibrions de Gennevilliers n° 2 et 
Drain n° 1, qui liquéfient peu ou pas, tous les autres ne déter- 
minent dans ce milieu qu'une liquéfaction plus ou moins étendue 
sous forme de godet, avec tendance plus ou moins marquée à 
s'étendre en profondeur; ils produisent donc une liquéfaction 
superficielle et atypique. 

Évidemment on a affaire dans ce cas à des vibrions extrème- 
ment aérobies, habitués à vivre à la surface de l’eau et en 
contact immédiat avec l'oxygène de l’atmosphère, et qui, plus 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 721 


exigeants que les autres variétés aérobies, conservent dans les 
milieux artificiels leur ancienne propriété. 

Aussi les cultures sur pomme de terre, que j'ai étudiées 
comme élément de diagnostic différentiel, ne fournissent qu'un 
critérium très incomplet. 

Le vibrion de Saint-Cloud se développe mieux que tous les 
autres; en peu de jours il recouvre la surface de la pomme de 
terre d'un dépôt brunâtre et abondant; le vibrion du Point-du- 
Jour, par contre, ne détermine qu’une prolifération très limitée ; 
le vibrion de Gennevilliers croît sous forme d’une belle couche 
grisätre; le vibrion de Versailles se développe à peine; et tous 
les autres vibrions ne se manifestent que sous forme d’une 
pellicule plus ou moins blanchâtre, plus ou moins étendue, qui 
n’a rien de constant ni de caractéristique, ou bien ils ne se 
développent pas du tout. 

Mais d’autres vibrions authentiques et virulents de l'Inde, de 
Hambourg, de Courbevoie, etc., qui sontdans le laboratoire et qui 
ont été employés dans des expériences de diverse nature, possè- 
dent le même aspect dans les cultures sur pomme de terre; par 
conséquent, il est de tout pointinutile d’insister, comme plusieurs 
avant moi l’ont fait, sur les caractères différentiels d'un milieu 
nutritif de si peu de valeur. 

Quant à la formation de la pellicule superficielle qu’on avait 
considérée autrefois comme étant d’une si grande importance, et 
qu’on considère encore aujourd'hui comme un élément auxiliaire 
de quelque utilité, elle nous offre la même incertitude. 

Quelques vibrions (Point-du-Jour, Saint-Cloud, Charen- 
ton n°1, Suresnes. Gennevilliers n° 5, Drains n° 2 et 5, Ver- 
sailles (étangs), et Versailles (Seine), cultivés dans la solution 
de peptone-gélatine, forment la pellicule dans les premières 
24 heures; d’autres (collecteur d’Asnières n° 2, Clichy n° 1 
et 2, Pont-au-Change n° 1 et 2), après deux ou plusieurs jours; 
d'autres, enfin, ou bien ne la donnent jamais, ou bien n'arrivent 
qu’à former un léger anneau, adhérant à la paroi du tube et 
qui, après un développement limité, devient stationnaire. 

Mais, sans nous arrêter plus longtemps sur ces propriétés 
déjàconsidérées comme trompeuses,il nous faut arriver à d’autres 
caractères bien plus intéressants, c’est-à-dire aux réactions 
chimiques des cultures. 

46 


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Lo 
[Re 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La réaclion indol-nitreuse (réaction rouge) s’observe distinc- 
tement et avec assez d'intensité après 24 heures dans les cultures 
du vibrion de Saint-Cloud; un peu moins intensivement, mais 
encore très nettement, dans les cultures du vibrion du Point-du- 
Jour, Gennevilliers n° 5, et de Versailles (Seine); presque pas 
dans tous les autres. Mais, après 8 jours, elle apparaît distincte et 
caractérisée par une belle coloration rouge dans les cultures 
des vibrions de Charenton n° 2, un peu plus faible mais évidente 
dans les cultures de vibrions d’Asnières n° 2 et Clichy n° 2; 
à peine perceptible ou pas du tout dans la plus grande partie 
des autres vibrions. 

La réaction de l’indol (méthode de Legal-Weyl) est déjà très 
marquée après 24 heures dans les cultures de Saint-Cloud, Point- 
du-Jour, Gennevilliers et Versailles; peu ou pas appréciable 
dans toutes les autres. Mais aussi dans ce cas, après 8 jours, la 
réaction de l’indol se montre sans exception, évidente, quoique 
plus faible, dans toutes les cultures des vibrions que j'ai étudiés. 

Cela démontre que tous les vibrions de l’eau sont capables 


de former dans les cultures de l’indol, tandis que tous ne sont. 


pas capables de réduire les nitrates. 

De l'étude de toutes ces propriétés, on sort avec l’idée qu'on 
a affaire à des caractères inconstants et qui se trouvent sous la 
dépendance intime de conditions qui, par leur nature extrême- 
ment variable, échappent à toute hypothèse. 

Il nous reste à étudier la dernière propriété invoquée par 
M. Koch comme exclusive à la nature cholérique des vibrions, 
l’action pathogène sur les animaux. Je m’empresse de déclarer 
que parmi les 32 vibrions isolés dans les eaux, 4 seulement sont 
pourvus de propriétés extrêmement pathogènes: vibrions de Saint- 
Cloud, Point-du-Jour, Gennevilliers n° 5, et Versailles (Seine). 

Les vibrions isolés à Saint-Cloud sont les plus virulents. 
Comme matériel d’inoculation, j'ai toujours employé des cultures 
sur gélose de 24 heures, et je déduisais les caractères plus ou 
moins pathogènes de chacun des vibrions, suivant que le cobaye 
succombait plus ou moins rapidement, plus ou moins constam- 
ment, après une injection intrapéritonéale de 1,1/2,1/4, 1/6 de ces 
cultures. 

Pour les vibrions de Saint-Cloud, il est tout à fait superflu 
d'employer des cultures sur gélose, puisqu'il suffit de 0,5 c. c. 


sé." tn tu bles fn nat sé 


ncnèts time dnerhs. sé de à, 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 723 


d'une culture en bouillon, injectée dans le péritoine, pour tuer en 
10-12 heures un cobaye assez grand. Les résultats de l’autopsie 
sont tout à fait identiques à ceux qu'on observe après l'injection 
intra-péritonéale d’un vibrion cholérique authentique, c’est-à- 
dire qu’on trouve un exsudat péritonéal plus ou moins abondant, 
plus ou moins hémorragique, et toujours riche en vibrions; la 
congestion aiguë caractéristique de tous les viscèresabdominaux ; 
le météorisme intestinal et la tuméfaction plus ou moins accen- 
tuée de la rate. En outre, dans l’exsudat péritonéal et aussi dans 
le sang, on trouve assez souvent les vibrions en grande quantité. 

Ces résultats, confirmés plusieurs fois, m'ont convaincu de 
l’extrème virulence du vibrion de Saint-Cloud. J’ai voulu expéri- 
menter aussi l’injeclion sous-cutanée, et j'ai constaté que l’inocu- 
lation de 1-2 c. c. d’une culture en bouillon sous la peau tue inva- 
riablement, en déterminant une septicémie vibrionienne intense, 
qui se différencie de celle produite par le vibrio Meichnikowi par 
ce fait que ce dernier pénètre dans le système circulatoire en 
proportion plus grande. En outre, le vibrion de Saint-Cloud 
diffère du vibrion aviaire parce que celui-ci, quoique très virulent, 
présente une réaction rouge assez faible et, cultivé sur pomme 
de terre, se développe plus lentement: il y forme un dépôtsuper- 
ficiel jaunâtre et par conséquent très différent de la coloration 
brunâtre du vibrion de Saint-Cloud. 

Mais celui-ci aussi tue les pigeons et les petits oiseaux 
comme le premier. Il suffit de l'injection de 1-2 c. c. sous la 
peau d’un pigeon adulte pour le tuer en 8-10 heures. Dans tous 
les cas, les vibrions pénètrent dans le torrent circulatoire et sont 
toujours visibles dans les préparations microscopiques. 

Les vibrions isolés au Point-du-Jour sont un peu moins actifs. 
Pour tuer un cobaye d'une grandeur moyenne, il faut injecter 
dans le péritoine 1/4, 1/5 de culture sur gélose; l’injection sous- 
cutanée produit rarement la mort, et la plupart du temps 
détermine seulement une infiltration œdémateuse, abondante, 
qui s’ulcère tout de suite, et guérit, ou bien prend un caractère 
d'invasion, et à la longue réduit l'animal à un état d'extrême 
cachexie qui finit toujours par la mort. Aussi les résultats des 
autopsies des cobayes morts après l'injection intrapéritonéale du 
vibrion du Point-du-Jour sont-ils tout à fait identiques à ceux 
obtenus par tous les autres vibrions cholériques de provenance 


724 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


intestinale. Nous trouvons le même exsudat hémorragique 
riche en vibrions, la congestion des viscères abdominaux, et très 
souvent l'invasion du sang par les vibrions. On obtient des 
résultats identiques avec les injections des vibrions pathogènes 
de Gennevilliers et de Versailles. L’injection intrapéritonéale de 
1/4 de culture sur gélose, et peut-être moins, tue invariablement 
tous les animaux employés dans ces recherches. Pourles pigeons, 
la dose mortelle est plus élevée et plus inconstante, et dans tous 
les cas l'invasion septicémique des vibrions est moins accentuée 
que pour les premiers. 

Je trouve donc inutile d’insister davantage sur les caractères 
de ces injections, qui réalisent le Lype de l'infection cholérique 
expérimentale classique. 

J'ai dit que, parmi les vibrions isolés des eaux, quatre seule- 
ment possèdent des propriétés pathogènes, mais je n’entends pas 
pour cela admettre implicitement que l’inoculation des autres 
soit sans effet sur les animaux. 

Il n’est arrivé souvent de voir des cobayes qui, au premier 
abord, paraissaient supporter impunément l'injection intrapéri- 
tonéale d’une culture inactive, tomber peu à peu dans un amai- 
grissement progressif, pouvant aboutir à une cachexie parfois 
cie, Dans ces cas, en renouvelant l’inoculation, on tue 
presque loujours l'animal, et on constate à l’autopsie et dans 
les cultures une évidente multiplication des vibrions. 

J'ai eu souvent l’occasion de vérifier cette circonstance, 
surtout avec les vibrions de Billancourt, de Suresnes etde Clichy 
(n° 2), avec lesquels j'ai fait plusieurs tentatives pour arriver 
à obtenir un peu de virulence. Mais je dois confesser que ces 
tentatives ne m'ont jusqu'à présent conduit à aucun résultat 
digne de mention. 

Les inoculations à doses massives restent toujours sans effet, 
mais l'injection simultanée des cultures stérilisées de bacterium 
coli, qui sont si efficaces dans la restitution de la virulence aux 
bacilles de la fièvre typhoïde, favorisent la multiplication des 
vibrions et tuent les animaux. Il suffit d'injecter dans le péritoine 
1 c. c. de ces cultures stérilisées (par elles seules tout à fait 
inoffensives) et d’injecter en même temps une petite quantité de 
ces vibrions dans la plèvre pour voir ces derniers se multiplier 
et amener la mort de l'animal. 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 725 


Dans ce cas, le cobaye inoculé succombeinfailliblement après 
12, 18 heures, et à l’autopsie on trouve dans ses deux cavités 
pleurales un exsudat séro-hémorragique , riche en vibrions 
évidemment multipliés et émigrés de l’une à l’autre cavité du 
thorax. 

Quelquefois l’injection de cet exsudat à un second cobaye, 
même sans le secours des cultures stérilisées de bact. coli., peut 
être suivie de la mort, mais jusqu’à présent je ne suis pas arrivé 
à ce résultat, c’est-à-dire à transformer une variété tout à fait 
inactive en une variété virulente fixe. 


VIII 


LES VACCINATIONS RÉCIPROQUES DES VIBRIONS. 


Les notions qui ressortent de ces recherches modifient d’une 
part la conception morphologique unitaire des vibrions, et 
enlèvent en mème temps toute valeur aux caractères spécifiques 
énoncés par M. Koch. 

Il est tout à fait démontré qu’en l’absence de toute épidémie 
cholérique on peut trouver les eaux plus ou moins contaminées 
par des vibrions tout à fail identiques à ceux auxquels on attri- 
bue le rôle essentiel dans l'infection cholérique. 

Une constatation de cette nature, à moins qu'on ne veuille 
interpréter différemment le résultat de nos recherches sur l’étio- 
logie du choléra, est de nature à produire la plus grande incer- 
titude dans le diagnostic bactériologique de cette maladie. 

Il sera difficile maintenant, croyons-nous, de se prononcer 
sur la signification d’un vibrion pathogène isolé dans l’eau, quand 
même celui-ci serait considéré comme la cause de sa contami- 
nation, et présenterait tous les caractères exigés pour le vibrion 
cholérique authentique. Les moyens que nous fournit la bacté- 
riologie sont aujourd'hui insuffisants pour résoudre pratique- 
ment cette question. 

A un point de vue scientifique plus restreint, nous devons 
également porter plus loin nos investigations et étudier la valeur 
réciproque de la vaccination des différentes espèces de vibrions. 

On pourrait en effet invoquer, comme dernière preuve en 
faveur de la théorie unitaire du choléra, l'existence de vibrions 
qui, tout en ne présentant pas les caractères des vibrions cholé- 


126 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


riques, leur ressemblent par la nature de leurs propriétés 
pathogènes. Mais, comme ïl n’est pas possible d'établir la 
nature et le mécanisme biologique d’une infection par le seul 
résultat nécroscopique, il était naturel qu'on eût recours à une 
méthode indirecte, c'est-à-dire à la vaccination préventive. 

Les animaux vaccinés contre les vibrions trouvés dans les 
eaux résistent-ils à l'infection déterminée par les vibrions isolés 
dans les déjections des cholériques, et, réciproquement, ces der- 
niers vibrions peuvent-ils vacciner contre les premiers? 

Pour résoudre ces questions d’une manière définitive, j'ai 
vacciné diverses séries de cobayes, non seulement contre les 
quatre vibrions pathogènes isolés dans les eaux, mais aussi 
contre deux vibrions cholériques authentiques, provenant de 
déjections de cholériques. M. Netter a isolé le premier de ces 
vibrions chez une malade de Courbevoie pendant l'épidémie 
de 1892. M. Metchnikoff a isolé le second chez un cholérique 
d'Angers, au mois de juin dernier. 

Ces deux vibrions présentent tous les caractères exigés 
comme garantie de leur authenticité : développement caracté- 
ristique sur gélatine, réaction indol-nitreuse très marquée, 
el action pathogène sur les animaux. Mais par quelques parti- 
cularités de morphologie et de développement ils diffèrent entre 
eux. Le vibrion de Courbevoie est plus mince, plus long, plus 
incurvé, et hiquéfie la gélatine moins rapidement que le vibrion 
d'Angers; celui-ci, par contre, est plus court, plus gros et plus 
virulent que le premier; il tue, en effet, les cobayes et les 
pigeons même par simple injection sous-cutanée. 

La méthode que j'ai suivie de préférence pour la vaccination 
contre le choléra est une méthode mixte, qui, tout en exigeant 
un temps un peu plus long que les autres, offre par contre 
une garantie absolue, et évite la perte de beaucoup d'animaux 
(comme 11 arrivait souvent quand j’employais d’autres méthodes 
plus rapides, mais plus sévères). 

Je cultive dans un ballon contenant en solution de la peptone- 
gélatine un virus très aclif de passage. Après 8-10 jours de 


séjour dans l’étuve à 37°, je stérilise la culture à 120°; je laisse 


en repos pendant quelques jours, et 4 ou ÿ jours de suite 
j'inocule à un cobaye, sous la peau, 4-5 c. e. du liquide vaccinal. 
Je laisse ensuite passer 2 jours et ensuite j'inocule sous la 


Tr 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 727 


peau 1-2 c. c. de virus actif. Si les animaux ne sont pas encore 
bien vaccinés, ils succombent, ou bien au point d'injection se 
forme une ulcération qui peut finir par guérir; mais, si l'animal 
est bien vacciné, rien de tel ne se produit. 

Chez les animaux témoins, l'injection sous-cutanée de 
1-2 c. c. de vibrions virulents comme ceux employés dans mes 
expériences conduitpresque toujours plus ou moins viteà ia mort. 

Lorsque les animaux ont bien toléré l'injection sous-cutanée 
d'épreuve, ils peuvent être inoculés impunément quelques jours 
après dans le péritoine, avec une dose mortelle de vibrions. 

Les résultats de ces expériences sont résumés dans le 
tableau d'ensemble suivant. Le signe + indique que le cobaye 
- vacciné contre une. variété donnée (indiquée au sommet du 
tableau) survit après l’inoculation de la variété diflérente 
(indiquée au bord): le signe — indique le résultat contraire, 
c'est-à-dire la mort des animaux vaccinés. 


INOCULATION COBAYES VACCINÉS CONTRE LES VIBRIONS PROVENANT DE : 


des 
————  —— 


COBAYES VACCINFS 

avec les vibrions de : Courbevoie. Angers. Point-du-Jour. | Saint-Cloud. | Gennevilliers. | Nersailles. 

Courbevoie ..... » 2: = nu re ae 

Ensers — | » = _ = DE: 
| 

Point-du-Jour... + | — » — + _u 
| 

Saint-Cloud,.... + | — = » _ ne 

Gennevilliers... — + 2 AA TENTE À 

f 
Versailles... .... + + LE nl ne ; 


Comme on le voit à première vue dans le tableau qui 
précède, il n'existe aucun rapport constant de réciprocité vaccinale 
entre les variétés des vibrions des différentes provenances. 

Les animaux vaccinés contre les vibrions cholériques 
authentiques, comme ceux vaccinés contre les vibrions des eaux, 


728 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


donnent à peu près le même résultat: ils démontrent que leur 
vaccination réciproque est tout à fait instable, et que l'immunité 
contre une variété différente est beaucoup plus faible que celle 
qu'on provoque contre la variété avec laquelle chaque animal 
peut être vacciné. 

Mais, en dehors de la vaccination réciproque entre les vibrions 
pathogènes, j'ai encore étudié la résistance des animaux contre 
les vibrions virulents, produite par la vaccination préventive 
avec des vibrions isolés des eaux à l’état d'atténuation mazxima. 

Mes expériences sous ce rapport n’ont été ni nombreuses ni 
systématiques, parce que j'ai employé toujours pour ces recher- 
ches des animaux qui avaient subi préalablement et en plusieurs 
fois, dans le péritoine, des inoculations abondantes de cultures 
qui s'étaient montrées presque inefficaces. 

Cependant, j'ai pu vérifier certains faits qui ont leur impor- 
tance : deux cobayes qui avaient subi en trois fois, du 
13 juillet au 15 août, l’injection intrapéritonéale d'une culture 
abondante de vibrions de Billancourt, furent inoculés, le 17 du 
dernier mois, avec des cultures virulentes des vibrions de 
Courbevoie et de Saint-Cloud. — Tous deux ont survécu. 

J’ai pu aussi obtenir un autre résultat de même nature, avec 
un cobaye qui avait déjà subi, quatre à huit jours avant, 
l'injection intrapéritonéale de vibrions provenant du Drain 
n° 4. — Ce cobaye fut inoculé le 24 août, en même temps qu'un 
second cobaye témoin, avec une dose mortelle de vibrions du 
Point-du-Jour. — Le témoin est mort en douze heures, tandis 
que le cobaye vacciné survit. 

Par contre, d’autres cobayes inoculés préalablement et à 
plusieurs reprises avec des vibrions provenant de Gennevilliers 
n° 2, Drain n° 3, et Versailles (Étangs), succombèrent à l’injec- 
tion successive et répétée des vibrions de Courbevoie et de 
Saint-Cloud. 

Un des cobayes déjà vaccinés contre les vibrions de Billan- 
court, et qui avait résisté à l’inoculation successive d'un vibrion 
aussi virulent que celui de Saint-Cloud, succomba plus tard, 
en 12 heures, à l’inoculation des vibrions de Gennevilliers. 

Nous nous trouvons donc en face d’une grande famille de 
microbes, différents en partie les uns des autres non seulement 
au point de vue morphologique, mais aussi par certaines de leurs 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 729 


propriétés biologiques, qui pour nous sont d’une grande valeur, 
c’est-à-dire la nature de la substance toxique et de la substance 
vaccinante. 

Par conséquent, st nous ne possédons pas encore d'éléments 
suffisants pour aflirmer que les vibrions trouvés à Billancourt 
et dans les drains d’Asnières à l’état saprophytique, et qui 
vaccinent contre les vibrions virulents de Courbevoie, de Saint- 
Cloud et du Point-du-Jour, etc., sont identiques à ces derniers; 
si nous ne pouvons pas faire la même affirmation pour les 
vibrions de Courbevoie et de Saint-Cloud, de Courbevoie et du 
Point-du-Jour, etc., etc., qui se vaccinent cependant récipro- 
quement, néanmoins l’absence de toute vaccination réciproque 
entre les vibrions authentiques de Courbevoie et d'Angers pre- 
mièremevnt, et entre ces derniers et les vibrions de Versailles, 
de Saint-Cloud, etc., prouve d’une manière évidente en faveur 
de l’existence de plusieurs types pathogènes, et vient à l'appui 
de l'hypothèse qui veut que dans toute épidémie cholérique on 
peut avoir affaire à un agent étiologique distinct. 

Ces résultats de laboratoire sont, d'autre part, tout à fait 
d'accord avec les résultats bactériologiques des dernières épidé- 
mies et les confirment implicitement. 


IX 


LE SAPROPHYTISME DES VIBRIONS, 


L'idée de la pluralité des variétés d’une même espèce s’ac- 
centue de plus en plus dans l’étiologie de quelques formes mor- 
bides qu’on avait considérées jusqu’à ce jour comme dépendant 
d’un type unique. 

De même qu’il existe deux types présentant entre eux des 
affinités et capables de déterminer la formation du tubercule; 
plusieurs types de bacterium coli capables de faire fermenter le 
sucre de lait et de produire l’acide lactique lévogyre ou dextro- 
gyre, de même il n’y a pas de raison pour conserver aux vibrions 
cholériques un caractère univoque et une spécificité qui ne 
répondent ni aux résultats de nos études de laboratoire, ni à 
l'observation des épidémies. Nous avons déjà vu en quoi 
consistent les résultats de laboratoire. Quant à l’enseignement 
fourni par l’épidémiologie, il a depuis longtemps établi des dis- 


7130 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tinctions et des divisions entre les diverses formes de choléra. 

Il existe encore là une sorte de génie épidémique, comme 
l’'appelaient les anciens observateurs, qui se caractérise par le 
degré et la virulence des épidémies ; 1l y a des épidémies où tous 
sont attaqués et où personne ne meurt, tandis que dans d’autres 
il y a peu de victimes de la maladie, mais l'affection est presque 
toujours mortelle. 

En outre, l’idée d’une origine purement exotique du choléra 
commence aussi à perdre du terrain. 

À Marseille, l'épidémie légère de 1892 se développa dans la 
même zone, les mêmes voies et jusque dans les mêmes maisons 
que l’épidémie de 1884, et elle fit des victimes surtout dans les 
quartiers alimentés par l'Huveaume, eau infecte et qui constitue 
les vrais égouts d’Aubagne et des deux ou trois villages situés 
aux environs de la ville. 

En l’absence de tout soupçon d'importation (jusqu'à présent 
inséparable du terme choléra) dans la maladie de l'asile de 
Nanterre qui représenta le point de départ de l'épidémie de 1892, 
on a déclaré officiellement cette épidèmie comme diarrhée cho- 
lériforme, mais aujourd'hui il n’y a plus de doute à ce propos : 
le choléra légitime de 1892 est né en France aux portes de Paris: 
c’est en vain qu’on cherche le bateau traditionnel qui a dû l’impor- 
ter de l'Orient’. Mais, comme pendant l’été de cette année 1893 
Paris et sa banlieue ont été absolument exempts de tout 
choléra, quelle déduction auraient tirée les contagionistes abso- 
lus s'ils eussenttrouvé à Saint-Cloud et à Versailles des vibrions 
tout à fait identiques par leurs caractères les plus remarquables 
aux vibrions cholériques de l’Inde? 

Évidemment nous sommes conduits à étendre d’une manière 
imprévue nos opinions actuelles sur la microbiologie au choléra; 
non seulement nous devons admettre l'existence de variétés 
multiples capables de le déterminer, mais nous devons aussi 
chercher pourquoi leur présence dans l’eau n'implique pas la 
nécessité du développement d’une épidémie. 

Il y a aussi plusieurs obscurités sur lesquelles on doit désirer 
un peu de lumière, et qui résultent de ce fait que la présence 
des vibrions pathogènes dans les eaux semble un fait beaucoup 
plus commun et constant qu’on ne le supposerait d'avance. 


1. Voir ArxouLo : Enseignements du choléra (Revue d'Hyg., 1893, n° 1). 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 731 


Les recherches actuelles m'ont donné cette conviction que, 
dans toute eau plus ou moins contaminée, les vibrions trouvent 
les conditions les plus favorables à leur existence et à leur multi- 
plication. Il estbien certain que la plus grande partie des vibrions 
qu’on trouve ne sont pas toujours pathogènes; mais, dans la 
signification pathologique d’une espèce microbienne, sommes- 
nous en droit de faire une distinction absolument précise entre 
saprophytisme et virulence ? 

Devons-nous dénier tout intérêt à la présence dans les eaux 
de vibrions atténués, alors qu'à côté de ceux-là on trouve des 
vibrions très pathogènes? 

Ce ne sont certainement pas les exemples qui manquent 
pour établir l’analogie et les rapports qui existent entre le sapro- 
phytisme et la virulence des microbes, mais l'exemple suivant 
est peut-être le plus convaincant. 

Dans le printemps de 1891 se manifesta une épidémie sur les 
grenouilles de mon laboratoire à Sienne : cette épidémie était 
due à un bacille que je découvris bientôt, et dont je fis l’objet 
d'une étude en l'appelant Bac. hydrophilus fuseus *, à cause de son 
origine incontestablement hydrique et de la coloration brunâtre 
de ses cultures sur la pomme de terre. Ce bacille, très mobile, 
était doué d’une virulence extraordinaire; à très petites doses 
il tuait non seulement les grenouilles et toute espèce de reptiles, 
de poissons et de batraciens sur lesquels j'ai eu occasion 
d’expérimenter, mais il tuait aussi en très peu de temps et avec 
une violente septicémie les souris, les cobayes, les lapins, 
les pigeons, les chats et les jeunes chiens. Il se développait 
rapidement sur la gélose à 37°, et liquéfiait la gélatine avec une 
rapidité exceptionnelle. 

A la même époque, lors d’une épidémie analogue des 
grenouilles de son laboratoire, Ernst ? faisait à Heidelberg la mème 
constatation et décrivait le même bacille. Mais le bacille trouvé 
par Ernst, pathogène pour les grenouilles, restait inoffensif 
pour toute autre espèce animale, et ne se développait pas sur la 
gélose au-dessus de 30°. 


4 Ueber einen neuen Mikroorganismus des Wassers, ete. (Centrabl. f, Bakt. u. 
Par., 1891, nos 6-7). 

2. Die Frühlingsseuche der Früsche und ihre Abhängigkeit, etc. (Z2egler's Bei- 
trage, Bd. VIII, p. 209.) 


132 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Au mois de juillet dernier, Roger !, à Paris, trouva le bac. hydro- 
philus dans une épidémie survenue. chez les grenouilles de son 
laboratoire, mais ce bac. hydrophilus de Roger était doué de 
toute la virulence et de toutes les propriétés de cultures de 
celui que j'ai trouvé à Sienne, comme j'ai eu occasion de le con- 
slater au laboratoire de M. Bouchard. 

Je conserve encore le bac. hydrophilus isolé à Sienne, mais 
depuis longtemps il ne se développe plus ni sur gélose, ni sur 
pomme de terre dans l’étuve à 37°; il n’est pas non plus capable 
de liquéfier la gélatine, et il est devenu immobile et dépourvu 
de toute action pathogène. 

Il n’est pas facile de reproduire dans le laboratoire les mêmes 
conditions qui se rencontrent dans la nature, surtout quand on a 
affaire à des phénomènes qui résultent de l'influence d'éléments 
multiples et pour la plupart inconnus; cependant je n’hésitai 
pas à faire quelques observations destinées à éclaircir le côté le 
plus incomplet de mes présentes recherches sur les vibrions. 

1° Après avoir pris deux grands ballons remplis d’eau de la 
Seine prise à Clichy, près du collecteur d’Asnières, je les ai 
stérilisés à 120°, et après je laissai tomber dans les deux quel- 
ques gouttes d’une culture de vibrion de Saint-Cloud. 

Le premier ballon resta à la température de la chambre, 
c’est-à-dire à 20-249, le second fut mis dans la glacière à 50-10, 

Après un mois j'ai retiré quelques gouttes d’eau du premier et 
du deuxième ballon, et j'ai obtenu de nouveau des cultures des 
vibrions ; mais la réaction indol-nitreuse dans les cultures du pre- 
mier ballon se montra beaucoup plus faible que dans les cultures 
originelles, et daus les cultures du second ballon restait à peine 
perceptible. 

En outre, les vibrions des deux ballons avaient déjà perdu 
leur virulence, et l'injection intrapéritonéale chez les cobayes, 
même à fortes doses, restait sans effet. Les cultures sur gélatine 
avaient conservé, par contre, tous leurs caractères typiques de 
liquéfaction. 

2° De l'échantillon d’eau recueilli à Saint-Cloud et con- 
servé toujours à la température de la chambre, j'ai réussi à 
obtenir, trois mois après, de nouvelles cultures de vibrions mor- 
phologiquement identiques aux précédentes ; mais ces nouveaux 


1. Une épizootie observée chez les grenouilles. (Soc. de Biologie,8 juillet 1893.) 


VIBRIONS DES EAUX ET ÉTIOLOGIE DU CHOLÉRA. 733 


vibrions ne donnaient presque plus la réaction indol-nitreuse, 
liquéfiaient beaucoup plus lentement la gélatine à la surface, et 
étaient dépourvus de toute action pathogène sur les animaux. 

Ces résultats, qui d’une part démontrent la grande résis- 
tance des vibrions dans l’eau, révèlent aussi la facilité avec 
laquelle ils perdent en peu de temps quelques-uns de leurs 
caractères les plus essentiels. 

La perte de la virulence et l’affaiblissement de l’action réduc- 
trice sur les nitrates et de la propriété de former de l'indol sont 
évidemment la preuve d’une existence saprophytique. 

Cet état saprophytique, on pourait peut-être le voir se pro- 
duire moins brusquement dans la nature; mais il représente, 
dans tous les cas, le seul moyen qui reste au vibrion de pouvoir 
s’adapter aux conditions du milieu hydrique et d’y trouver son 
habitat favori. 


Les enseignements qu’on peut tirer des présentes recherches 
nous conduisent à modifier notablement nos connaissances 
actuelles sur la microbiologie du choléra, et d'autre part éclair- 
cissent plus d’un point resté obscur dans l'histoire épidémiolo- 
gique de cette maladie. 

1° La conception morphologique unitaire des vibrions 
cholériques doit être abandonnée : il existe diverses variétés de 
vibrions morphologiquement distinctes les unes des autres, mais 
capables de déterminer, chez l’homme et chez les animaux, le 
même tableau morbide, cliniquement identique. 

2° Le diagnostic bactériologique du choléra, tel qu'il vient 
d’être établi dernièrement par M. Koch, ne correspond ni à 
l’idée d’un monomorphisme restreint, ni à l’acceptation du poly- 
morphisme des vibrions, parce qu’en dehors de toute propriété 
spécifique on peut trouver dans les eaux contaminées de n’im- 
porte quelle provenance des vibrions pathogènes, présentant 
tous les caractères considérés comme spécifiques pourles vibrions 
exotiques. 

3° En dehors de ces vibrions pathogènes absolument ana- 
logues aux vibrions de provenance intestinale, il existedans 


134 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


l’eau un nombre assez grand d’autres variétés non pathogènes, 
mais qui D RÉARIENE des points de contact si évidents avecles pré- 
cédents, qu’on est obligé de les considérer comme des variétés 
d'origine pathogène, et par conséquent capables, dans certaines 
circonstances, d'acquérir à nouveau leurs propriétés perdues. 
La présence constante des vibrions pathogènes dans 

toutes les eaux provenant des égouts démontre la grande impor- 
tance qu'a la contamination de l’eau dans l’origine et la propa- 
gation du choléra. 

5° Entre les vibrions des déjections cholériques et ceux 
trouvés dans les eaux, il existe des liens étroits sous tous les 
rapports, ce qui rend évidente ou très probable leur origine 
commune. 

6° Les vibrions qui sont virulents dans les eaux, ne con- 
servent pas longtemps cette propriété; peu à peu elle dispa- 
raît, de même que d’autres propriétés propres des vibrions : 
le pouvoir réducteur des nitrates et la production de l’indol. Bien 
que les vibrions ne meurent pas, ils s'adaptent à vivre peu à peu 
dans l’eau, dans laquelle on peut les retrouver, etoù ils se multi- 
plient à l’état saprophytique. 

1° L'origine des vibrions qu'on trouve dans l’eau est de 
tout point inconnue, mais il est très possible qu'elle doive être 
cherchée dans les déjections intestinales de l'homme et peut-être 
des autres animaux. La présence des vibrions dans les eaux con- 
taminées par les résidus de la vie animale, et la présence des 
vibrions signalés dans le contenu intestinal de l’homme sain, 
justifient en partie la possibilité d’une telle provenance. 


En terminant mes recherches, je suis heureux d'exprimer 
toute ma reconnaissance à M. Metchnikoff pour l'intérêt qu'il a 
pris à mes recherches, et pour les excellents conseils qu'il m'a 
prodigués. 

Je prie également M. Roux, dont j' ai pu apprécier la grande 
expérience et l’affabilité, de recevoir ici le témoignage de ma 
gratitude. 


PERSONNES TRAITÉES MORTES DE RAGE. 139 


EXPLICATION DES PLANCHES 


PLANCHE XIII 

Fig. I. Cultures de 2 jours sur gélatine. 
Fig. II. Cultures de 4 jours sur gélatine. 
Fig. IT. Culture de 6 jours sur gélatine. 
Dans les trois figures : 

A. Vibrion de Courbevoie. 

B. Vibrion d'Angers. 
Vibrion du Point-du-Jour. 
D. Vibrion de Saint-Cloud. 
E. Vibrion de Gennevilliers. 
F. Vibrion de Versailles. 


Q 


PLANCHE XIV 

Fig. I. Préparation de la pellicule superficielle de Peau du Collecteur 
d'Asnières cultivée à l’étuve pendant 12 heures. 

Fig. Il. Préparation de la pellicule superficielle de l’eau de Seine (pont au 
Change) cultivée à l’étuve pendant 12 heures. 

Fig. II. Vibrion du Point-du-Jour (culture de 24 heures à 37° sur gélose à 
l’eau peptonisée). 

Fig. IV. Vibrion de Saint-Cloud (culture idem). 

Fig. V. Vibrion de Gennevilliers (culture idem). 

Fig. VI. Vibrion de Versailles (culture idem). 


INSTITUT PASTEUR 


Personnes traitées mortes de rage. 


FAGes (ALFRED), 40 ans, maçon à Alais (Gard). Mordu le 12 juillet 
par un chat errant d’allure suspecte. Il portait à la main droite 3 mor- 
sures pénétrantes; il à été cautérisé d’une façon tout à fait inefficace. 
Traité du 14 au 28 juillet à l’Institut Pasteur. Le 15 août, Fages 
éprouve des fourmillements dans la main mordue. Il meurt le 20 août 
à la suite d’une rage parfaitement caractérisée. 

Montessuy (JEeAN-MaRiE), 57 ans, cultivateur à Saint-Pierre-de- 
Rumilly (Haute-Savoie). Mordu le 14 juillet par un chien reconnu 
enragé. Il portait à la main droite 16 morsures toutes pénétrantes; la 
plaie n’a pas été cautérisée. Traité du 18 juillet au 6 août à l’Institut 
Pasteur. Le 21 août, il éprouve des picotements dans le pouce droit. 
Meurt dans la nuit du 23 au 24 août, après avoir présenté, nous écrit 
le D' Saillet, les symptômes caractéristiques de la rage. 


736 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 
INSTITUT PASTEUR. 
STATISTIQUE ! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE. — SEPTEMBRE 1893. 


A B C 
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Morsures à la tête { simples... . .| »| 41 4 | » |3 | 5 l’|2 | 2 
et à la figure multiples: lues » [2 »[» 
Cautérisations efficaces . . . . . . . . . 1» | Plus lol pierre 
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Pas de cuutérisation. . . . . FR CS on Ds D M Pen DE SE LES VE LE À EE 
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Cautérisations efficaces 110 D» 622100 501 AA POUS 
_ inefficaces . . . Fe » | » | 20! » | » 18] » |» 
Pas de cautérisation. 2". JU ur dj 24» PACS Far 14e 
Habits DÉCRATES ER ERREUR. {2-5 | 90:51 "> M6!» 5 
MOrSUreS A MUR RE ER EN le NE: 10 | 5,16 |» | 22161515 
Morsures multiples en divers points du 
COPDS TR CR Cd »| » » » 1 1 »| » » 
Cautérisations efficaces Me En 1 ASSURE » Fo Se MERS 
— IRC NCRCES ERNEST. Do a ASS IAE 
Pas te CHULErISAUON. 1e LMI ENS Lolo» ll» »'} »|» | » 
FLD TES A CCRITES RENE NON EEE 1|» » » » » »| » » 
MOTS UT OS AU NES" à eat lie le LS EN ie JE 19 LE PS ROLE D PT LES 


( Français et Algériens. 4) 4 55! 34; 
TOR EEE nor D MURS » à | 10, 65 5,39 
| | 
A B C 
mm" 
TOTAL GENÉRAD ES 4 Anne 108 


1. Les animaux mordeurs ont été: chiens, 92 fois; chats, 
12 fois; bœufs, 3 fois; cheval, 1 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


v” 


7me ANNÉE NOVEMBRE 1893. N° 11. 


ANNALES 


DE 


BAENSTTEUT PASTEUR 


SUR LA RORMATION DES ACIDES LACTIQUES INOMÉRIQUES 


ar l’action des microbes sur les substances hydrocarbonées, 
P 


pAR À. PERE, PHARMACIEN-MAJOR DE L'ARMÉE, 


Depuis que M. Pasteur, dans sa mémorable expérience sur le 
dédoublement de l’acide racémique par les mucédinées, a mis en 
évidence l'intervention du pouvoir rotatoire de l’aliment sur le 
procès nutritif des êtres inférieurs, on a fréquemment appliqué les 
aclions microbiennes au dédoublement des composés inactifs par 
compensation, et réussi, dans certains cas, à isoler celui des deux 
stéréo-isomères qui avait le mieux résisté à l'attaque du microbe". 

Des notions du mème ordre sont rentrées par une autre porte 
dans la science lorsque, en étudiant certains ferments du glucose, 
on a vu que les uns en faisaient de l'acide lactique droit, les 
autres de l’acide lactique gauche, les autres de l’acide inactif par 
compensation”. 

Iciil ne s’agit plus de séparer deux stéréo-isomères tout formés 
et combinés, il s’agit d'une véritable dislocation moléculaire 
produite par des êtres de la même famille, et aboutissant à des 
corps résiduaires de même constitution chimique, mais non de 
même constitution moléculaire. Et dès lors se dresse devant 
nous la question : quelleestla relation entrelaconstitution molé- 
culaire de l'acide formé etcelle du sucre générateur? Cetterelation 
dépend-elle uniquement de la uature du sucre, ou de celle du 
microbe, ou des deux à la fois ? 

1. Voir surtout les travaux de MM. Le Bel, Engel (Comptes rendus), 

2, M. Schardinger a le premier signalé la formation d’acide lactique actif 
aux dépens des matières sucrées; MM. Nencki, Rekowski, Bischler, Blachstein ont 
fait connaitre depuis des faits semblables, 

47 


138 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Telle est la question que j'ai essayé de résoudre. J’aborderai 
peu, dans ce mémoire, les relations entre la structure chimique 
de l'acide formé et celle du sucre générateur. C'est là une ques- 
tion très complexe, sur laquelle on ne peutse prononcer qu'après 
avoir réuni de très uombreux documents. Je ne me sens pas 
encore assez riche. Je viserai surtout les relations entre le pouvoir 
rolatoire de l’acide lactique et la nature du microbe ou ses con- 
ditions de fermentation. 

Envisagée à ce point de vue restreint, la question présente 
encore une grande importance. Quoi de plus légitime en appa- 
rence, quand on a découvert que tel ou tel microbe fabrique aux 
dépens du sucre tel ou tel acide lactique, que d'inscrire cette 
propriété à son actif et au nombre de ses caractères spécifiques ? 
Depuis que les considérations de pure forme ont perdu toute 
valeur comme moyen de classement et de différenciation, il faut 
bien s’adresser à des caractères plus profonds, examiner non la 
forme, mais la fonction, et définir un microbe, comme l’a proposé 
depuis longtemps M. Duclaux, par les aliments dont il a besoin, 
et les divers produits dans lesquels il les transforme. Quoi de 
plus précieux que de pouvoir dire,en marchant dans cette voie : 
voici deux microbes qui se ressemblent en tout, sauf que l’un 
fait de l’acide droit, l’autre del’acide gauche ? 

Je voudrais montrer que la chose n’est pas aussi simple, et 
qu'il faut encore ici‘ tenir compte non seulement du microbe, 
mais des conditions de culture. Nous allons voir en effet qu’un 
même microbe peut faire des acides lactiques opposés par leur 
pouvoir rolaloire, ou même consommer le glucose sans donner 
d'acide lactique, et cela suivant la qualité et la quantité de l’azote 
autritif qu’on lui offre. 

Par contre, les microbes que j'ai étudiés se sont montrés, 
pour la plupart,indifférents à la nature du sucre mis en fermenta- 
tion. Avec tous les sucres, ils ont donné le même acide lactique. 
Il en est un, cependant, qui a donné des acides lactiques de pouvoir 
rotatoire opposé avec des sucres possédant même poids molécu- 
laire et même fonction chimique, mais de structure différente. 


4, Voir, dans cet ordre d'idées, les travaux de M. Duclaux sur la variabilité 
de la production des diastases, ceux de M. Gessard sur le bacille pyocyanique, 
les miens sur le Bacterium coli commune et lebacilletyphique, dans la collection 
des Annales de l'Institut Pasteur, 


FORMATION DES ACIDES LACTIQUES. 139 


J'ai étudié aussi la formation des corps actifs en partant de 
deux acides racémiques. Le premier a été dédoublé comme 
l'acide lartrique dans l'expérience de M. Pasteur : le microbe a 
choisi entre les deux isomères, el ce pouvoir d'élection ne con- 
stitue pas, comme nous le verrons, un privilège des êtres vivants; 
mais le second a autrement réagi : les deux côtés de la molé 
cule ont rétrogradé parallèlement pour former un nouveau corps 
racémique intérimaire, qui a subi une dégradation plus pro- 
fonde; le dédoublement ne s’est pas produit. 

Disons d’abord un mot des microbes qui ont servi aux expé- 
riences relatées dans ce mémoire. Ce sont : 

1° Bacille typhique tiré d’une rate typhoïdique et reconnu 
aux caractères biologiques qui permettent de le différencier du 
bacterium coli commune : 

2° Bacterium coli commune de l'homme, tré des selles par la 
méthode des plaques et par passages en série dans des solutions 
de peptone additionnées de glucose et de carbonate de chaux 
Je l’appellerai coli-bacille l': 

3° Le coli-bacille d, présentant les mèmes caractères exté- 
rieurs que le précédent. Je l'ai retiré des excréments de certains 
animaux (cheval, lapin) par passages en série dans la peptone 
glucosée ; 

4° Le microbe D, tiré d'un fromage de Brie, où sa présence me 
fut dénoncée par la formation d'acide dextrolactique dans un essai 
de fermentation grossière mise en train par le procédé de Bænsch. 

Nous voici en possession de quatre microbes présentant 
beaucoup de ressemblance et des propriétés biologiques com- 
munes : ous, à des degrés variables, font fermenter le glucose ; 
tous, sauf le premier, attaquent le lactose et font de l’indol avec 
les peptones. Voyons dans quelle mesure la propriété de faire 
des acides lactiques aclifs permet de les séparer. 


il 


Dans l’ordre d'idées qui a dirigé ces recherches, tous ces 
microbes se sont trouvés posséder un attribut commun : ils 
aboutissent à l'acide lévolactique, donnant un sel de zinc dextro- 

4. L’emploi des liquides phéniqués ne me parait pas à recommander, ce 


microbe paraissant affecté dans ses caractères extérieurs et ses propriétés biolce 
giques par des passages répétés dans ces milieux de culture. 


TA0 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


gyre, par l'attaque du glucose, en présence des sels ammonia- 
caux comme source unique d'azole. La proportion d'azote 
ammoniacal n’a exercé aucune influence sur ces résultats'. 

Voici quelle a été la composition des milieux de culture 
employés ? : 


Glucose pur et anhydre........ dONor 0 MATE Sr A Dour 
Phosphate d'ammoniaque...... Os',50 1 — 268,50 250%c.c. 
Sulfate d’ammoniaque......... DES 21,50 | de liquide. 


Mais les différences se révèlent dès que nous changeons la 
nature de l'aliment azoté. En substituant 3 grammes de peptone 


aux sels ammoniacaux dans les liquides précédents, j'ai vu que : 


Le bacille typhique } donnent de l'acide lévolactique dont le 


Le coli-bacille / \ sel de zinc dévie à droite. 
Le coli-bacille d donnent de l’acide dextrolactique dont 
Le microbe D le sel de zinc dévie à gauche. 


Une différenciation apparaît donc, et elle se montre stable, 
car nous pouvons, sans que le résullat varie, introduire dans le 
liquide de culture toute modification qui n'intéressera pas sensi- 
blement la proportion d'azote albuminoïde, soit par addition de 
sels alcalins (phosphate de polasse, chlorure de potassium), 
soit par substitution de syntonine ou de bouillon de viande à une 
certaine proportion de peptone : le microbe typhique et le coli- 
bacille de l’homme se sont montrés également impuissants à 
faire de l'acide lactique droit, même après plusieurs passages 
dans des solutions nutritives de glucose. 

Ainsi se trouvent constilués deux groupes distincts : une 
étude plus approfondie va faire ressortir, entre les membres 
d'un mème groupe, des différences nouvelles, sans doute plus 
difficiles à saisir, mais qui permettent cependant de pousser plus 
loin dans la voie dichotomique. 


L'expérimentation montre, en effet, que pour des poids égaux 
de glucose détruits par un même microbe, il ne se forme pas 
toujours des poids égaux d'acide lactique. On peut dire, en gros, 
que les quantités d'acide lactique retrouvées diminuent d’autant 
plus que les liquides de culture sont plus riches en peptone. 

1. Toutes les fermentations des matières sucrées dont il sera question dans 


ce mémoire ont été faites à la température de 40° C. 
2. Ces liquides étaient neutres et renfermaient du carbonate de chaux, 


FORMATION DES ACIDES LACTIQUES. 741 


Le coli-bacille / m'a conduit aux chiffres suivants, en partant 
de 10 grammes de glucose pur et anhydre pour 250 c. c. de 
liquide : 


Avec 3 grammes de peplone : 


Lactate de zine cristallisé déviant à droile ............ 9sr,68 
Correspondant à acide lévolactique ,.,.,..,.....,..,.. 261,373 


Avec 6 grammes de peptone : 


Lactate de zinc cristallisé déviant à droile ........ PE CU I(E 
Correspondant à acide lévolactique ...........:....... 18,170 

Ilest permis de prévoir, d'après cela, que toute fermentation 
ne produira pas nécessairement de l'acide lactique. J'ai constaté 
ce fait en ensemençant! le coli-bacille / du premier groupe dans 
le liquide précédent, dont la teneur en peptone était portée à 
10 grammes. Je n’ai pu isoler aucun corps doué du pouvoir 
rotatoire ; lous les groupements renfermant le carbone asymé- 
trique étaient entrés en réaction et avaient subi une dislocation 
intégrale. Ce microbe n'est donc plus, dans ces conditions, un fer- 
ment lactique : sa fonction est de produire aux dépens du glucose 
des corps sans action sur la lumière polarisée. 

Au contraire, le bacille typhique laisse toujours de l'acide 
lactique, quelle que soit la richesse du liquide de culture en azote 
albuminoïde, et même lorsqu'on emploie une semence jeune et 
ayant subi plusieurs passages dans les solutions glucosées. Ce 
fait révèle donc une différence fonctionnelle entre les deux 
microbes du premier groupe. 

L'étude des microbes du deuxième groupe met en relief une 
différence d'un autre ordre tirée de la constitution des lactates de- 
zinc. 

Le coli-bacille d ne laisse pas de l'acide dextrolactique pur, 
mais un mélange où les deux isomères entrent en proportions 
variables, et dans lequel l'acide droit domine d'autant plus que 
les conditions de la fermentation ont été plus favorables. Mais 
lorsqu'on’ force la quantité de peptone, on ne retrouve plus 
d'acide lactique ni aucun corps doué du pouvoir rotatoire. 


4. La qualité de la semence joue un rôle dans ce phénomène. La dislocation 
totale des groupements à carbone asymétrique est d'autant mieux assurée que la 
semence est plus jeune et qu’elle a déjà exercé son pouvoir de ferment des 
sucres. 


= 
Fe 


ANNALES DE, L'INSTITUT PASTEUR. 


Une remarque digne d'intérêt, c’esi que la constitution du 
mélange des deux isomères varie aux diverses périodes de la 
fermentation, comme l'indiquent les chiffres qui expriment le 
pouvoir rotatoire du sel de zinc lévogyre : 


Après 48 heures de fermentation................[a], — 6 36. 
Aprés-fermentation complète #""254.tr:c02 [a], =— 3,40. 


C'est donc pendant la première période de la fermentation, 
qui est très active, que la proportion relative d'acide droit est 
plus élevée, et pendant la deuxième période, beaucoup plus 
lente, que se forme surtout l'acide gauche. Ces variations, cor- 
rélatives des variations de composition du milieu dues à la vie 
même du microbe, sont bien conformes à la notion établie par 
M. Perdrix‘ sur la constante variabilité d'un procès fermentatif. 

De son côté, le microbe D a fait de l'acide dextrolactique 
sensiblement pur dans la solution de peptone glucosée; il est 
resté indifférent aux variations du milieu corrélatives de sa vie. 
Le pouvoir rotatoire spécifique du lactate de zinc obtenu après 


une fermentation complète du glucose a été établi suivant les 
données ci-dessous : 


Poids du lactate de zinc cristallisé ............  Osr,9395 
Volume de la solution aqueuse à 20C ....... 49 c.C. 
Déviation au tube de 20 centimèéêtres ...... ARTS — 21 minutes. 


[ol —= — 7.82. 
D 


En résumé, les données acquises permettraient un essai de 
classification, mais on voit que pour l’établir il faut pénétrer pro- 
fondément dans la biologie des bacilles. Ce qu'il importe surtout 
de relever, c’est qu'il y a coli-bacille et coli-bacille, conformé- 
ment à l'opinion de MM. Van Laër et Van Ermengen. Un point 
intéressant, au point de vue de la question si souvent discutée 
des rapports possibles du bacterium coli commune et du bacille 
typhique, c'est que le microbe qui vit normalement dans l'in- 
testin de l’homme” se rapproche, comme producteur d'acide 


1. Sur le ferment amylozyme. Ces Annales, tome V. 

2, J'ai examiné &ix échantillons de coli-bacille /, dont quatre provenaient de 
selles normales et six de selles pathologiques (diarrhée, dysenterie, choléra). Tous 
m'ont donné l’acide lévolactique. Peut-être le coli-bacille 4 pourrait-il se rencon- 
trer aussi dans les selles de homme, suivant les conditions du régime alimen- 
taire. Il est évident que l’un et l’autre pourront être isolés des eaux polluées : 
celui que j'avais examiné dans mon dernier mémoire, et qui faisait de l'acide 
droit, avait été retiré d'une eau d’alimentation. 


FORMATION DES ACIDES LACTIQUES. 143 


lactique actif, de celui que l’on trouve dans la rate typhoïdique. 

A un autre point de vue, tous ces résultats convergent sur 
ce point : certains ferments ne peuvent produire que l'acide 
gauche, mais ceux qui donnent l'acide droit dans des conditions 
de fermentation favorables sont susceptibles de fournir aussi de 
l’acide gauche, comme si la formation de celui-ci était plus 
facile, ou sa destruction plus difficile que celles de son isomère. 


Il 


Nous venons de voir le glucose donner des acides divers avec 
les microbes étudiés. Demandons-nous maintenant si tous les 
sucres se comportent comme le glucose, ou bien s'il existe 
quelque relation entre la nature du sucre générateur et le pou- 
voir rotaloire de l'acide lactique formé. 

Je n’ai pas poursuivi très loin l'étude de cette question; mais 
les expériences faites montrent cependant que la plupart de mes 
microbes ne reconnaissent pas l'influence tenant à la nature du 
sucre mis en fermentation. 

Ceux du premier groupe m'ont donné de l’acide lévolactique 
avec tous les sucres qu'ils attaquent, en présence de la peptone 
comme en présence des sels ammoniacaux. 

De même, le microbe D s’est conduit avec tous les sucres 
comme avec le glucose. En présence de proportions convenables 
de peptone, il a donné de l’acide droit avec les aldoses : dextrose, 
galactose, mannose ‘. De même avec les cétoses : ici la lévulose 
lévogyre donne naissance à un corps droit, aussi bien que le 
dextrose peut fournir un corps gauche. Il en est de même des 
pentoses ?, et aussi des sucres en C'*° qui fermententsans paraître 
subir un dédoublement préalable en glucose : à aucun moment 
de l’attaque, la solution de saccharose ne réduit la liqueur de 
Fehling. ; 

Chez tous ces microbes, la fonction est sous la dépendance 
exclusive de la nature et de la quantité de l’azote nutritif, 


4. J'ai employé la séminose de Reiss, que M. Fischer a identifiée à sa man- 
nose 4. 

2. J'ai fait l’essai sur une arabinose, préparée et déterminée par M. Grimbert, 
que je remercie sincèrement pour sa grande obligeance. 


744 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Mais avec le coli-bacille d, les résultats sont variables : je lui 
ai d’abord donné trois aldoses dextrogyres à six atomes de 
carbone; dans des conditions de fermentation absolument iden- 
tiques, ces sucres ont fermenté avec une vitesse presque égale *, 
etont conduit à des acides lacliques. différents, comme le mon- 
trent les signes et les chiffres ci-après relatifs, aux pouvoirs 
1o‘aloires des sels de zinc obtenus : 


Dextrose : acide dextrolactique, sel de zinc lévogyre..., [aulo = —3,40 
Galactose «a : acide lévolactique, sel de zine dextrogyre.. [xln —+ 4,20 
Mannose d : acide lévolactique, sel de zinc dextrogyre... [ax] —+ 5,86 


La dextrose paraît ainsi plus apte que les autres aldoses à 
former des corps droits ; quand nous passons de la dextrose aux 
autres aldoses, la fonction microbienne est comme intervertie, 
sans autre raison visible de celle inversion qu'une différence de 
structure des molécules mises en jeu. 

La mannite s’est comportée comme la mannose; l’arabinose 
a aussi donné un mélange des deux isomères avec excès d'acide 
lévolactique. 

Les sucres en C'? ont fermenté sans transformation 
apparente en glucoses : le sucre de lait a donné de l'acide lactique 
sensiblement inactif, et le sucre de canne un léger excès 
d'acide dextrolactique. 

Chez le coli-bacille d, la fonction productrice des acides 
Jactiques actifs ne semble donc pas sous la dépendance exclusive 
de Ja nature et de la quantité de l'azote nutrilif; elle est aussi, 
dans une certaine mesure, sous la dépendance du sucre mis en 
fermentation. Sans doute, on ne saurait chercher à établir, sur 
ces données trop incomplètes, les relations qui peuvent exister 
entre la structure stéréochimique des sucres générateurs et la 
structure stéréochimique des acides lactiques formés; mais une 
notion s'en dégage clairement : c'est que toutes les matières 
sucrées, quels que soient leur poids moléculaire et leur pouvoir 
rotatoire, leur fonction chimique et leur structure, sont propres 
à engendrer des corps droits, gauches et inactifs par compensa- 
tion, suivant la qualité du ferment et suivant la composition du 
liquide de culture. 


4, La dextrose fermente un peu plus rapidement que les autres aldoses. 


FORMATION DES ACIDES LACTIQUES. 14) 


III 


Voyons maintenant comment se comportent ces microbes 
quand on leur donne à détruire non pas une molécule dissymé- 
trique comme l’est d'ordinaire celle des sucres, mais un groupe- 
ment de deux molécules dissymétriques, donnant un corps 
racémique. 

Parmi les acides inactifs par compensation, j'ai choisi comme 
sujets d'étude l'acide lactique et l'acide malique, parce que leur 
résolution en deux isomères de pouvoir rotatoire opposé a été 
déjà effectuée par les procédés chimiques dus à M. Pasteur ‘. De 
plus, ils se ressemblent beaucoup par leur constitution, ayant 
tous les deux un seul atome de carbone asymétrique et la fonc- 
tion acide-alcool leur étant commune. 

M. Leukowisch a *, le premier, essayé de dédoubler l'acide 
lactique par l’action des micro-organismes ; mais son expérience 
a déjà fait l’objet d’une juste critique qui atteint au même titre 
celle que j'ai relatée dans mon dernier mémoire * et qui revient à 
ceci : quele Bact. coli communerend active une solution de lactate 
inactif, sans qu'on puisse dire à quoi est due l'apparition de ce 
pouvoir rotatoire. L'expérience de M. Linossier ‘ laisse encore 
planer un certain doute sur la validité des conclusions, cet 
observateur n'ayant pu déterminer posilivement la nature du 
corps actif qui existait en minime proportion dans le liquide de 
culture. 

L'observation publiée récemment par M. Percv-Frankland 
semble plus probante : le ferment a ici attaqué de préférence le 
lactate de chaux droit correspondant à l'acide lévolactique, son 
isomère a pu être isolé et reconnu aux caractères de son sel de 
zinc. 

Nous allons voir que le coli-bacille /, que j'ai étudié plus haut, 
agit dans un sens opposé; mais le choix qu'il fait entre les deux 

1. L’acide lactique a été dédoublé par MM, Walker et Purdie (voir Journal 
of chemic. Soc., 1892, et ces Annales, t. NII, p.588); l’acide malique par M. Bre- 
mer (voir Dictionnaire de Wurtz). 

2. Bull. de la Soc. de Chimie, t. 42, p. 472. 

3. Ces Annales, 1892, 


4. Bull. de la Société de chimie, 1891. 
$. Journal of chemic Soc., août 1893 (voir ces Annales, p. T98). 


746 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


isomères n'est pas toujours également marqué : il n’est pas 
sensible dans les solutions de peptone, et il est d'autant plus 
accusé en présence des sels ammoniacaux que la proportion de 
ceux-ci est plus réduite. Voici une expérience démonstrative : 
J'ai fait un liquide de culture composé de la façon suivante : 


Lactate de chaux pur etinactif!.. 20 grammes. 
Phosphate d’ammoniaque........ 0 gr. 50 pour 10006: 
Sulfate d’ammoniaque .......... . 0 gr. 50 


Un litre de cette solution neutre et stérilisée a été réparti entre 
deux ballons. La semence introduite s’est bien développée à 
36°, et des cristaux de carbonate de chaux ont bientôt tapissé les 
parois des ballons. 

Après 40 jours, le contenu de l’un d'eux est traité par l'acide 
oxalique, filtré, et bouilli avec de l’oxyde de zinc. Cette solution, 
concentrée à 20 c. c. par cristallisation fractionnée, a produit une 
déviation de + 18° au tube de 20 centimètres. Traitée de nou- 
veau par l'acide oxalique, elle a cédé à l’éther un corps dont la 
solution aqueuse est lévogyre. 

Après quatre-vingt-dixjours, le contenu du deuxièmeballonest 
traité par l'acide oxalique ; le liquide filtré et concentré est plu- 
sieurs fois agité avec de l’éther qui laisse, par évaporation, un 
résidu sirupeux dont la solution aqueuse dévie à gauche. Elle est 
bouillie avec l’oxyde de zinc, réduite à quelques centimètres 
cubes parcristallisation fractionnée, puis portée à 20 c. c. Ubservée 
au tube de 20 c., cette solution produit une déviation égale à 
+ 43 minutes; elle laisse par évaporation 0,gr. 9962 de sel de 
zinc cristallisé. Le pouvoir rotatoire de ce sel est donc représenté 
par {ao = + 7.181. Desséché à 100°, ce lactate à perdu 12, 94 0/0 
de son poids. 

C'est bien l'acide lévolactique qui, ayant mieux résisté que 
son isomère à l’action dislocatrice, se trouve en excès dans le 
liquide de culture. 

J'ai pu mettre encore en évidence la plus grande résistance 
de ce corps en faisant des essais de culture dans ses solutions 
neutralisées par le carbonate de chaux et additionnées de 


1. Je crois nécessaire d'examiner au préalable le lactate de chaux au point de 
vue de son inactivité :10 grammes étaient transformés en sel de zinc ; la solution 
réduite à 20° par cristallisation fractionnée était observée au tube de 20cm et ne 
donnait aucune rotation, 

2. fl est évident que ce sel renferme des traces de lactate inactif. 


FORMATION DES ACIDES LACTIQUES. 747 


proportions variables d'azote minéral : toutes ces solutions sont 
restées limpides, même lorsqu'elles étaient riches en sels ammo- 
niacaux, et lorsque la semence provenait d'une culture dans 
l'acide lactoracémique qui n'avait pas été sensiblement dédoublé, 
vu la teneur élevée du liquide en sels nutritifs, et dans laquelle, 
par conséquent, le microbe paraissait aussi bien accoutumé à 
l'acide gauche qu’à l’acide droit. 

L'acide lévolactique ne semble donc pas très apte à entrer 
par lui-même en réaction vis-à-vis du microbe, mais il peut 
réagir lorsqu'il se trouve en présence de l'acide dextrolactique : 
on peut donc croire que, lorsque les deux isomères sont détruits 
avecune vitesse sensiblement égale, c'est que l'attaque de l’acide 
droit favorise celle de l'acide gauche, et que le côté gauche de 
la molécule racémique est entraîné dans le mouvement de dislo- 
cation du côté droit. 

On peut se demander si le choix fait par le microbe serait 
commandé par des raisons d'ordre purement biologique, ou tout 
au moins si des actions dislocatrices d'ordre purement chimique 
ne seraient pas capables d'établir une différence entre les deux 
isomères, Les travaux de M. Duclaux relatifs à l’action combu- 
rante de la radiation solaire sur les substances hydrocarbonées !, 
m'ont suggéré l’idée d'essayer cette mème action, parfois très 
délicate, sur lelactate de chaux inactif. 

Voigi l'expérience : Un litre de solution à 20 grammes de 
lactate pour 1,000 c. e. d’eau distillée, faiblement alcalinisée par 
l'eau de chaux, est divisé en plusieurs fioles coniques remplies à 
moitié et bouchées au tampon de coton. On les expose au soleil 
à dater du 13 mars. Le liquide prend bientôt une faible odeur de 
fruit; après plusieurs jours, quelques petits cristaux de carbonate 
de chaux apparaissent sur les parois des flacons, puis l’action 
s'accélère progressivement comme l’accuse l'augmentation du 
dépôt. Après trois mois d’insolation, le liquide filtré est divisé en 
deux parts égales. La première est précipitée par l'acide oxalique, 
puis bouillie avec l’oxyde de zinc. Cette solution, réduite à 20 c. c., 
produit au tube de 20 c. une déviation de +6 minutes. 

Traitée de nouveau par l'acide oxalique, elle abandonne à 
l’éther des traces d’un corps dont la solution aqueuse est 


1. Annales de l'Institut Agronomique, 1886. 


748 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


lévogyre et devient dextrogyre après une nouvelle ébullition avec 
l’'oxyde de zinc. 

Ici encore nous retrouvons un léger excès d'acide lévolac- 
tique; dans une certaine mesure, la combustion solaire a agi 
comme le microbe et attaqué de préférence l'acide droit. 

La deuxième partie du liquide est de nouveau exposée à la 
lumière solaire directe; l'attaque se poursuit rapidement. Après 
trente jours, cette liqueuresttraitéecommeci-dessus. Or, la dévia- 
tion observée est identique à la précédente : 4 — + 6 minutes. 

Le choix entre les deux isomères ne s’est donc pas continué 
pendant celte deuxième période de l’attaque : le côté gauche de 
la molécule a été décomposé aussi vite que le côté droit, comme 
si celui-ci l'entraînait dans son mouvement de décomposition :. 

Plus nous poussons loin la comparaison entre l’action du 
microbe et l’action de la radiation solaire, et plus nous relevons 
de coïncidences dignes de remarque : dans les deux cas, c’est 
la molécule droite qui est attaquée de préférence, et dansles deux 
cas ce choix s'effectue dans des condilions tout à fait compa- 
rables, c’est-à-dire au moment où l'attaque de la molécule racé- 
mique est réduite à son minimum, comme si les raisons déter- 
minantes de ce choix étaient du mème ordre, quel que soit 
l'agent mis en œuvre. 

L'étude de l'acide malique nous fera assister à un nouveau 
cas de fermentation par entrainement, et nous montrera une dif- 
férence de réaction, vis-à-vis d’un même microbe, de deux corps 
ne différant entre eux que par la constitution différente d’un de 
leurs groupements. 

Le coli-bacille { s’estbien développé dans une solution d’acide 
malique inactif? additionnée d’une pelite proportion d'azote 
minéral; il s’est déposé du carbonate de chaux, mais la solu- 
tion est restée inactive : la molécule racémique n’a pas subi le 
dédoublement. | 

J'ai cherché à m'expliquer ce fait par des cultures dans l'acide 
lévomalique naturel, additionné de proportions variables de sels 


4. Peut-être y aurait-il intérêt à rapprocher cette observation de celle faite 
par M. Duclaux, relativement à la résistance du sucre vis-à-vis de la radiation 
solaire quand il est en solution acidulée par l'acide sulfurique, et à sa décomposi- 
tion lorsqu'il se trouve en présence de l'acide tartrique qui « l’entraine dans son 
mouvement de décomposition ». 

2. Une certaine quantité de chaux était remplacée par de la soude. 


FORMATION DES ACIDES LACTIQUES. 149 


ammoniacaux. Le microbe s’est bien développé dans ces solu- 
tions, même lorsqu'elles étaient très pauvres en azote, ce qu'il 
n'avait pu faire avec l'acide lévolactique. Les cultures ont pris 
une faible odeur de lait aigri; la recherche de l'acide lactique est 
restéesans résultatdans celles qui renfermaient beaucoup d'azote, 
mais j'ai pu isoler de celles qui n’en renfermaient que de petites 
quantités des traces d'acide lévolactique dont le sel de zinc 
déviait à droite. L'interprétation qui s'impose, c'est que l'acide 
malique est transformé en acide lévolactique capable d'entrer ici 
en réaction, parce qu'il est entrainé par la réaction initiale qui 
l’a produit. 

Reportant ces résultats à l'étude de l'acide maloracémique, on 
comprend que celui-ci rétrograde parallèlement par les deux 
côtés de sa molécule pour former de l'acide lactique inacuf à 
litre intérimaire. Aucun des stéréo-isomères de l'acide malique 
ne peut être retrouvé dans le liquide de culture. 

Il semble légitime de supposer, àla lumière de ces faits, que 
l'acide lévomalique naturel ne dérive pas de l'acide malique 
inaclif découvert par M. Gintl dans le Fraxinus excelsior ‘; qu'il 
pourrait être dû, plulôt, à la décomposition d’un corps plus 
complexe, en particulier à la réduction du côté gauche de l'acide 
tarlroracémique, qui conduirait à l’acide lartrique droit et à 
l'acide malique gauche : hypothèse qui tire son caractère de 
vraisemblance de ce que ces deux corps se rencontrent côle à 
côte dans la nature et que, d’après M. Bremer, la réduction par 
les actions chimiques des acides tartriques actifs aboutirait aux 
acides maliques agissant sur la lumière polarisée dans le même 
sens que les corps générateurs. 

Nombreux donc apparaissent les procédés analytiques que la 
cellule peut employer à la formation des corps actiis en partant 
des substances hydrocarbonées : dédoublement d’un acide racé- 
mique à un atome de carbone asymétrique, l’un des côtés de la 
molécule étant transformé en corps dépourvus du pouvoir rota- 
toire, et l’autre conservant sa structure : formation d'acide lactique 
gauche en partant de l'acide lactique inactif; attaque d’un acide 
actif ou inactif par compensation à un atome de carbone asy- 
métrique, et de structure relativement complexe par la constitu- 


À. Bullelin de la Société de Chimie, t. XII, p. 184. 


150 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tion de l’un de ses groupements, cette altaque aboutissant tran- 
sitoirement ou définitivement à un acide actif de structure plus 
simple : formation d'acide lévolactique aux dépens de l'acide malique : 
altaque ménagée d’un acide racémique à deux atomes de carbone 
asymétrique, l'un des côtés conservant sa structure et l’autre 
perdant l’asymétrie dans l’un de ses groupements : procès qui 
pourrait donner naissance à l'acide tartrique droit et à l'acide 
malique gauche en partant de l'acide tartroracémique: enfin 
dislocation d’une molécule complexe à fonction alcoolique ou 
aldéhydique et renfermant {rois ou quatre atomes de carbone 
asymétrique, qui peut conduire, suivant la cellule et suivant la 
composition du milieu, à des corps dextrogyres, lévogyres, racé- 
miques: formation des acides lactiques isomériques aux dépens des 
matières sucrées. 

Nous pouvons soupçonner par cela combien nombreux 
doivent être aussi les procédés analytiques qui président à la 
formation des corps actifs en parlant des matières albuminoïdes, 
dont la molécule si complexe renferme sans doute en grand 
nombre des atomes de carbone asymétrique. 


SUR LES ANALOGIES ENTRE LES PROCEN DE FERMENTATION 
ET DE COMBUSTION SOLAIRE 
Pi EL -DUCEAXUX 


Je crois devoir rapprocher des résultats de la combustion 
solaire des lactates que M. Péré a consignés dans le mémoire qui 
précède, d’autres résultats que j'ai obtenus au courant d'un 
travail sur la combustion solaire des sucres divers, travail qui 
n’est pas encore terminé. Dans le mémoire que j'ai publié en 
1887 dans les Annales de l'Institut agronomique, j'ai fait voir que le 
glucose etle lactose, exposés au soleil en solution alcaline, s'y 
brûlaient peu à peu, en donnant comme produits principaux de 
la combustion, outre une petite quantité d'acide formique, de 
l'alcool et de l'acide carbonique, comme dans une fermentation 
alcoolique. La proportion de l'alcool n’est pas celle d’une fer- 
mentalion, attendu qu’elle n’atteint guère que 3 à 4 0/0 du poids 
du sucre, mais il n’en est pas moins intéressant de voir ce corps se 
former en dehors de toute ingérence des ferments, et l’analogie 
avec la fermentation alcoolique se poursuit en ce que cette pro- 
duction d’alcool s’observe encore, bien qu'avec une lenteur 
plus grande qu'à l'air, dans des flacons hermétiquement clos ou 
dans le vide. Elle ne peut résulter alors que d’une combustion 
intérieure, analogue à celle que le travail de Lavoisier a mise en 
évidence pour la fermentation alcoolique. 

J'ai essayé de voir depuis les changements qui surviennent 
dans la réaction quand on change la nature du sucre ou celle du 
milieu. Mes premiers liquides étaient alcalinisés avec de la 
potasse ou de l’ammoniaque, j'ai employé à la place de la baryte 
et de la chaux. En outre, j'ai opéré sur des sucres divers. 
Quand on opère à Paris, comme j'étais obligé de le faire, les 
combustions sont bien plus lentes qu’à la campagne, et il est 
sage de protéger les liqueurs au soleil contre l'acide carbonique 
de l’air, en ne laissant pénétrer celui-ci qu’au travers d’un tube 
contenant de la chaux sodée, qu'on renouvelle si c'est néces- 


152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


saire. Les liquides brunissent d'ordinaire dans les premières 
semaines, puis se décolorent à nouveau si la dose d’alcali est 
suffisante. Comme ïl se forme des acides fixes, cet alcali est 
saturé peu à peu: il importe que la liqueur n'arrive pas à la 
neutralité, parce qu’alors elle s’immobilise. 

Ce sont les mêmes phénomènes que lorsqu'on se sert de 
potasse ou de soude, mais les résultats définitifs de l’action sont 
tout à fait différents. Il ne se forme plus alors d'alcool : c’est 
de l’acide lactique qui prend naissance, et le fait est d'autant 
plus singulier que l'acide lactique lui-mème peut donner de 
l'alcool dans une combustion solaire en présence de la potasse, 
de sorte qu’on aurait le droit d'interpréter l’ensemble de ces 
résullats de la façon suivante : le sucre donne toujours de 
l'acide lactique en présence de tous les alcalis, mais, en présence 
de la baryte, le lactate formé ne donne pas d'alcool, tandis qu'il 
en donne en présence de la polasse. 

Quoi qu’il en soit, la proportion d'acide lactique formé est 
très sensible, peut atteindre 50 0/0 du poids du sucre. Il y a des 
fermentslactiques quin’en donnent pasaulant, etl’analogieavecla 
fermentation lactique se poursuit en ce qu'il se dégage de l’acide 
carbonique et qu'il se forme aussi des quantités notables d'acide 
acétique. Or, M, Kayser montrerabientôt qu'iln'y a jamais de fer- 
mentalionlactique sans produclionconcomitaute d'acide acétique. 

Ce n’est pas tout. On sait que l'acide lactique formé n'est 
pas toujours le même, et le très intéressant (ravail de M. Péré 
montre à ce sujet les plus curieux exemples de variations. 
M. Kayser montrera bientôt aussi que des ferments lactiques 
divers, tous authentiques, peuvent donner tantôt de l'acide 
droit, tantôt de l'acide gauche, tantôt de l'acide inactif par 
compensation. La combustion solaire m'a donné des exemples 
tout pareils, mais ici le pouvoir rotatoire de l'acide produit 
m'a paru, dans les flacons que j'ai pu étudier parce que la com- 
bustion y était Lolale, dépendre plus étroitement du pouvoir rota- 
toire du sucre mis en œuvre. Ainsi le maltose m'a donné un 
acide lactique droit, donnant un sel de zinc déviant à gauche. Le 
lévulose un acide gauche à sel de zinc droit. Le sucre interverti 
m'a donné un acide inaclif, que je dois croire formé de la 
combinaison de deux acides, droit et gauche, mais dont je n’ai 
pas encore fait le dédoublement. 


FERMENTATIONS ET COMBUSTIONS SOLAIRES. Td: 


Si les sels de chaux des acides droit et gauche sont inégale- 
ment combustibles au soleil, comme le montre M. Péré dans son 
travail, 1l est possible que cette neutralité de l'acide lactique 
produit par la combustion du sucre interverti ne persiste pas en 
prolongeant l’action solaire au delà du point qui correspond à 
la disparition complète du sucre. Quoi qu'il en soit, nous n’en 
avons pas moins un exemple curieux de la formation de corps 
acufs par combustion solaire. Il est important de remarquer en 
outre que ces corps actifs proviennent de corps qui sont aussi 
actifs, et même que le groupement qui, dans la molécule du 
sucre, commande par sa position, dans nos idées actuelles, le 
sens du pouvoir rotaloire, se conserve dans la molécule de 
l'acide lactique produit. Les microbes, dont l’action est autre 
et à certains égards plus profonde, peuvent déplacer ce groupe- 
ment actif et même lui faire changer de sens. La lumière solaire 
déshabille plus doucement la molécule en laissant ce groupe 
ment en place. 

Mais elle peut exercer aussi des actions plus profondes. Ainsi 
l'acide lactique droit, provenant de la combustion solaire du 
maltose en présence de la baryte, contient toujours une certaine 
quantité d'acide lactique inactif. Les sels de zinc se séparent 
assez facilement à cause de leurs différences de solubilité. Bien 
que j'aie purifié avec beaucoup de soin le maltose dont je me 
suis servi, je ne voudrais pas répondre de ne pas y avoir laissé 
un sucre donnant cet acide inactif, mais il me semble plus pro- 
bable que cet acide dérive du maltose lui-même, et il resterait 
alors à voir s'il est inactif par compensation, comme l'acide lac- 
tique ordinaire de fermentation qui provient aussi de corps 
actifs, ou bien si ce ne serait pas plutôt un acide lactique inac- 
tif par nature, qui manque à la série et qui doit sans doute 
exister. 

Ce n'est pas seulement lorsque ie phénomène est terminé 
qu'on peut remarquer les analogies entre les actions de combus- 
tion solaire et les fermentations : c’est du commencement à la 
fin. Ainsi le saccharose, qui, tant qu'il n’est pas interverti, est 
‘inatlaquable par un grand nombre de ferments de sucre, et peut- 
ètre par tous, résiste aussi à la combustion solaire. Pour qu'il 
soit attaqué, il faut qu'il soit d’abord exposé au soleil en milieu 
acide; il s’intervertit alors, et peut être brülé si on le trans- 

48 


794 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


porte en milieu alcalin. L'action solaire en milieu acide remplace 
donc pour lui la sucrase des microbes. 

De plus, quand la combustion commence, les produits bruns 
qui se forment sont tout à fait analogues, par leur constitution 
et leurs propriétés, aux matières humiques existant dans le sol, 
et ont comme elles le caractère colloïdal. Si une partie de l’hu- 
mus du sol provient d'actions microbiennes, une autre provient 
sûrement de la combustion solaire de substances hydrocarbo- 
nées en présence des bases du sol. De même que les terres noires 
se décolorent au soleil, de mème les matières humiques de la 
combustion solaire des sucres se transforment peu à peu en 
produits plus brülés et incolores. En somme, iln’'y a pas à s'éton- 
ner que les actions microbiennes et les combustions solaires 
soient souvent superposées, puisqu'elles semblent au fond pro- 
céder d’un même mécanisme, malgré leurs dissemblances très 
apparentes. 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS 


Par MM. 


L. VAILLARD J. ROUGET 
Médecin-major de {re classe, Médecin aide-major de {re classe, 
Professeur au Val-de-Gràce. Adjoint au laboratoire bactériologique. 


La question de l’étiologie du tétanos a étéplusieurs fois posée 
devant les lecteurs des Annales. Un travail publié par l’un de 
nous en collaboration avec M. Vincent', puis un second 
mémoire ®, plus explicite, ont fait connaître les résultats de nos 
recherches à ce sujet et les notions qu'il était permis sd’en 
déduire, concernant la pathogénie de la maladie dans les condi- 
tions naturelles de l'infection. Nous les rappellerons briève- 
ment. 

Deux points essentiels ont été d’abord établis : 

1° Les spores tétaniques, dégagées de la toxine qu’elles 
élaborent dans les cultures — elles se rencontrent ainsi dans 
les milieux naturels — peuvent, sans provoquer le tétanos, être 
injectées en quantilé considérable dans les tissus normaux d’un 
animal sain. Les cobayes, dont la sensibilité au tétanos est 
bien connue, supportent sans dommage l'inoculation sous- 
cutanée ou intra-péritonéale de 1 c.c., 1,5, parfois même, 
suivant leur taille, de 2 c.c. à 2c,5 d’une culture en bouillon 
très riche en spores, mais privée de toxine par un chauffage 
préalable à 80°. Les lapins reçoivent impunément dans le péri- 
toine de 30 à 65 c.c. des mêmes cultures chauffées. 

2° Ces snores ne germent pas, ne déterminent pas la maladie, 
parce que, dès les instants qui suivent leur pénétration, elles 


4. Varczarp et Vixcexr, Contribution à l'étude du tétanos. (Ann. /nst. Pas- 
Leur, 1891.) 

2. Varzcarp et Roucer, Contribution à l’étude du tétanos. (Ann. Inst. Pas- 
teur, 1892.) 


196 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sont englobées, immobilisées, puis détruites par les cellules 
phagocytaires. La preuve en est que les mêmes spores végètent 
aisément et provoquent le télanos, même à des doses infinité- 
simales, si on les protège contre l’action phagocytaire. Le 
cobaye résiste à l’inoculation d’un nombre de germes évalué, 
pour certains essais, de 1,556.000 à 2,456,000, mais il meurt 
sûrement tétanique si on l’infecte au moyen de quelques spores 
réparties sur du sable fin et incluses dans un sac de papier 
Berzélius qui établit une barrière entre les microbes et les pha- 
gocytes. 

Ainsi les spores tétaniques pures, privées de toxine, se mon- 
trent inoffensives à des doses considérables, variant naturelle- 
ment avec les espèces animales, et il en est ainsi parce qu’elles 
sont mises hors d'état de nuire par les cellules amiboïdes. Si 

Une telle donnée n’était pas sans se poser en contradiction 
avec ce fait que les animaux succombent au tétanos lorsqu'on 
leur inocule une parcelle de terre virulente; cependant, le 
nombre des germes contenus dans la matière inoculée est réel- 
lement infime (quelques unités), si on le compare aux milliers 
ou millions de spores qui restaient précédemment inactives. 
De mème le tétanos de l’homme survient dans des conditions 
où la plaie provocatrice n’a pu être souillée par une quantité de 
spores équivalente à celle que les animaux supportent sans 
dommage. D'où cette présomption que, dans l'infection natu- 
relle, l'introduction des spores au sein des tissus n’explique pas 
toute l’étiologie du tétanos, et que certaines conditions doivent 
nécessairement interveuir pour faciliter leur germination, sans 
doute en diminuant ou en supprimant la défense cellulaire de 
l’organisme. 

Dans la recherche de ces circonstances adjuvantes, nous 
avons été conduits à reconnaitre la part qui revient au trauma- 
tisme lui-même, aux désordres subis par les lissus, à la 
nature des lésions. Nous avons surtout mis en lumière l’action 
des microbes divers qui se trouvent toujours mélangés aux 
germes spécifiques daus {es produits tétanigènes habituels, terre, 
poussières, débris de fumiers, etc. Certaines bactéries inter- 
viennent, en effet, d’une manière si frappante et si sûre pour 
aider àla germination des spores dans les plaies, que, de ce 
fait, il a semblé naturel de les désigner sous le nom de microbes 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS 757 


favorisants : 11 suffit de les retrancher d’un produit tétanigène 
pour le rendre inoffensif, comme il suffit de les ajouter à une 
quantité infinitésimale de spores chaulfées, naguère inactives à 
très hautes doses, pour provoquer le tétanos. En démontrant le 
rôle de ces associations microbiennes dans l'infection expéri- 
mentale et naturelle, nous pensons avoir jeté quelque jour sur 
l’étiologie du tétanos et fourni à l’histoire générale des mala- 
dies parasitaires un fait qui n'est peut-être pas sans valeur. 
Aux yeux de quelques-uns, les notions précédentes ont pu 
paraitre justifiées. A d’autres, elles ont semblé subversives de 
l’ordre établi : elles heurtaient, en effet, cette conviction trop 
générale que les microbes pathogènes ne rencontrent dans l’or- 
ganisme que des condilions favorables à leur évolution, et, par 
suite, que le seul fait de leur accès dans les tissus suffisait à déter- 
miner l'infection. Aussi nos travaux ‘ont-ils soulevé des critiques 
et des assertions contraires, basées sur des recherches dont il 
convient de rendre compte ici même pour en marquer la valeur. 


Il 


M, Klipstein' a entrepris de vérifier si de grandes quantités 
de bacilles tétaniques purs etsans toxine pouvaient être inoculées 
à un Organisme sain sans lui nuire. Pour cela, il a soumis au 
contrôle chacun des faits sur lesquels M. Vincent et l'an de nous 
avaient édifié cette opinion. 

L'un de ces faits avait pour objet de démontrer que, sous la 
forme végétative, non sporulée, le bacille tétanique ne provoque 
pas de maladie, même à dose relativement élevée, lorsque la 
culture employée ne contient pas de toxine. A la température 
de 20-22, le microbe végète assez bien, mais il sécrète lentement 
son poison; aussi, en utilisant au moment opportun les cultures 
de ce genre, peut-on disposer d’un bacille jeune et presque 
totalement dépourvu de toxine, sans le secours d’un autre arti- 
fice. Dans ces conditions, nous avons impunément injecté au 
cobaye 1/4, 1/3 c.c. de cultures riches en bâtonnets. 

Les expériences similaires de M. Klipstein n’ont pas toujours 
abouti au même résultat. 

Ainsi, 1 c.c. d’une culture en bouillon faite à 21° et âgée de 


1. Kzrpsreix, Sur les propriétés des cultures tétaniques privées de toxine 
(Hygien. Rundschau, janvier 1893.) 


158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


six jours est injectée à un cobaye: l'animal meurt en moins de 
vingt-quatre heures. XI n’est pas téméraire d'affirmer que cette 
mort si prompte est due, non au développement du bacille dans 
les tissus, mais à l’action du poison élaboré par lui dans la cul- 
ture inoculée. 

Dans un second essai, il s’agit d’une culture développée à 
250 et àgée de six jours. Un cobaye en reçoit 3/10 c. c. et une 
souris 4 anses de fil de platine. Le cobaye meurt tétanique; la 
souris présente de la contracture localisée à une patte et guérit. 
Mais l'épreuve de la filtration sur terre poreuse démontre que le liquide 
privé de microbe était toxique. 

Ces deux expériences restent donc sans valeur, puisque les 
cultures employées renfermaient, outre les bacilles, une propor- 
tion suffisante de poison pour déterminer le tétanos. 

Deux autres essais ont donné les résultats suivants : 

Une souris recoit sous la peau 4 anses d’une culture en gélatine, 
faite à 210, âgée de cinq jours et riche en bâtonnets; l'animal 
reste en bonne santé. Une nouvelle expérience est faite dans les 
mêmes conditions, et la souris inoculée meurt le cinquième jour. 
M. Klipstein reconnaît pour le premier cas qu’un grand nombre 
de bacilles a pu être impunément inoculé. L’explication lui 
paraît simple : les bactéries jeunes manquent de la puissance 
nécessaire pour vaincre la résistance de l’organisme; d'autre 
part, elles ne possèdent pas la virulence des microbes formés à 
une température plus favorable. En l’espèce, 1l faut entendre 
par virulence l'aptitude à sécréter la toxine. Or, il est facile de 
vérifier que, durant la végétation à 20-22v, cette aptitude des 
bacilles est ralentie, mais non modifiée d'une manière sensible : 
il suffit pour cela d’éprouver la toxicité des cultures âgées de 
dix, douze ou quinze jours, ou encore d'injecter dans les muscles 
du cobaye un mélange d’acide lactique et d’une minime quantité 
de ces bacilles, en apparence inactifs. L'hypothèse d’une rési- 
stance moindre des bactéries jeunes aux éléments défensifs de 
l'organisme n’est guère en rapport avec les faits communément 
observés dans l'étude expérimentale des microbes pathogènes. 
Pour le cas particulier du tétanos, elle se trouve contredite par la 
facilité avec laquelle on communique la maladie aux animaux 
en leur inoculant le pus recueilli dans certaines plaies de 
l'homme ou des animaux, pus dans lequel le microscope ne 


NE :-: 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. 759 


décèle que des formes mycéliennes, non sporulées, du bacille 
tétanique. 

M. Klipstein explique la mort de la deuxième souris par la 
résistance plus grande des bactéries inoculées. L'hypothèse est 
gratuite. Que si le tétanos a été provoqué par la prolifération du 
bacille dans les tissus, la preuve directe en était facile à fournir. 
L'auteur, tout au moins, eüt pu donner à cette expérience une 
valeur réelle s'il avait montré que le produit de filtration de la 
culture inoculée ne renfermait pas de poison déjà élaboré par les 
bâtonnets. Faute de cette démonstration, on peut penser que 
cette culture, comme celle qui avait servi aux deux premiers 
essais, n'était pas exempte de Loxine. 


M. Klipstein utilise ensuite des cultures formées à la tempé- 
rature la plus favorable et parvenues à leur complet développe- 
ment. Tout d’abord il a recours au lavage pour débarrasser les 
germes de la toxine dissoute dans le milieu où ils ont végété. 

Le dépôt d’une culture de vingt jours dans un litre de bouil- 
lon est soumis pendant trois jours à un lavage à l’eau stérile sur 
un filtre Berkefeld. L’enduit recueilli sur l’appareil est délayé 
dans un peu d’eau, ce qui donne une bouillie claire, composée 
uniquement de microbes. Une souris reçoit sous la peau 3 anses 
de ce mélange; le quatrième jour, l’animal présente de la con- 
tracture d’une patte postérieure, mais guérit. Estimant que la 
première opération n’avait pas été suflisante pour entrainer toute 
la toxine, M. Klipstein lave à nouveau le dépôt microbien pen- 
dant six jours, puis en inocule 3 anses sous"la peau d’une souris. 
L'animal reste bien portant. «Il est évident, dit l’auteur, que 
de très grandes quantités de la culture lavée n’ont eu dans ces 
deux expériences sur la souris qu’une influence pathogène faible 
ou nulle. » Mais l'importance de cette épreuve lui paraît minime, 
parce que, avant toute manipulation, la culture employée s'était 
montrée peu aclive, et aussi parce que le lavage a dû exercer une 
influence nocive sur la vitalité des germes. Cependant l’ense- 
mencement du dépôt microbien lavé à fond a donné une cul- 
ture très virulente. L’explication à part, ces résultats n'infirment 
pas ceux qu'il fallait contrôler. 

Mais c’est à l’inoculation des cultures tétaniques privées de 
poison par le chauffage que M. Klipstein, avec juste raison, 


760 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


accorde le plus d'importance; les expériences ainsi faites lui 
paraissent avoir une valeur démonstrative indiscutable. 

Quels ont été ces résultats ? 

Il y a lieu d'éliminer tout d’abord l'expérience suivante, dont 
l’auteur reconnaît lui-même les défectuosités. Une culture de 
trois semaines, riche en spores, est désséchée sur des bandelettes 
de papier, puis soumise à un chauffage à 75° pendant une heure. 
Une de ces bandelettes est eme sous la peau d’une souris 
qui meurt télanique en quatre-vingt-dix-huit heures. 

En premier lieu, comme le mentionne M. Klipstein, la preuve 
n’a pas été faite que le produit inoculé ne renfermait pas de 
toxine : « On peut objecter (ce qui est vrai), dit-il, que la toxine 
desséchée est plus résistante aux influences extérieures que la 
toxine à l’état humide », et, conséquemment, qu'elle n’a pas été 
détruite par la chaleur. D'autre part, le mode d'infection employé 
est loin de donner à l'expérience le degré de simplicité voulu : 
il comporte, pour l'introduction du corps étranger, des délabre- 
ments, un véritable traumatisme, et aussi la pénétration pos- 
sible d’impuretés dans la plaie. Ces conditions ne sont point 
celles que nous avons visées. 

Les résultats de cinq autres expériences se résument ainsi : 


4° Culture en bouillon, âgée de un mois, chauffée pendant une heure à T2. 


Une souris en reçoit 4 anse sous la peau...... pas de tétanos. 
Une souris = 2 anses — ..... mortaus: jour. 

Zo Culture en bouillon, ägée de un mois et demi, chauffée une heure à SO. 
Un cobaye en reçoit 1/40c........:... SAR pas de tétanos. 
Une souris — D ADSCS TNA ARRET RES S = 

3° Culture en bouillon, ägée de deux mois et demi, chauffée une heure à S0e. 
UniCobayetenerecoiA Ace RARE ECC PPT ERTe pas de tétanos. 
Une souris — d ANSÈSS. Rene — 


4 Dépôt d'une culture de deux mois et demi dans 200 ce. c. de bouillon: 
délayé dans 40 ce. c. d'eau stérile, puis chauffé pendant une heure à 90. 


Unefsouris ent recoit anses VERRE TRE pas de tétanos 
Un cobaye - ACC CET NE DEA mort au 5° jour. 
59 Culture en bouillon, ägée de ARTS jours, chauffée une heure & 80». 
Ünicobaye entrecoit DEC SRE PP CURE pas de tétanos. 
Un cobaye — TA VA ATOE OO MERE an 
Deux souris en reçoivent 1/40c€,,... SELCONTE = 
Unesouns entrecoibA AO ESC NAN MERE eEe tétanos local, guérison. 
Une souris — EE ROUTE CAE mort en deux jours. 


Aussi, sur quatorze animaux (cobayes et souris) mis en expé- 
rience, dix ne présentent aucun symptôme morbide, un est 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. 761 


atteint d’un tétanos localisé et curable, trois meurent tétaniques. 

Pris en bloc et sans autre examen, ces résultats ne sont 
guère défavorables à ceux qu'il s'agissait de contrôler. [ls mon- 
trent que de jeunes cobayes supportent jusqu'à 1 c. c. d’une 
culture sans toxine, et prouvent tout au moins que, dans la 
plupart des cas, il est possible, sans provoquer le tétanos, 
d'injecter aux animaux des doses réellement considérables de 
spores tétaniques. M. Klipstein convient d’ailleurs volontiers 
«que de grandes quantités de ces dernières sont souvent sans 


- action ». 


Mais dans trois cas l'infection a abouti à un tétanos mortel. 
L’explication de ces faits contradictoires est visiblement un 
motif d'embarras pour M. Klipstein, et, pour les interpréter, 1l a 
recours encore à des variations dans la virulence et le degré de 
résistance des spores employées. Lorsque l'infection n'a pas 
abouti, c’est que les germes étaient trop peu actifs ou trop peu 
résistants ; ils possédaient toutes les qualités voulues dans le cas 
contraire. Si telle pouvait être la raison des choses, on ne com- 
prend pas pourquoi, la connaissant, l'auteur n’a pas tenu à écar- 
ter celte cause d'erreur en expérimentant toujours avec des cul- 
tures d’une activité et d’une résistance bien établies. Pour notre 
part, nous avons évité cet écueil en utilisant toujours des cul- 
tures d'une activité éprouvée et, de ce chef, nos résultats 
ne sauraient être justiciables de l'interprétation ci-dessus. A la 
vérité, l'explication des faits, en apparence contradictoires, 
observés par M. Klipstein, est tout autre : elle se trouve implici- 
tement contenue dans notre mémoire sur l’étiologie du tétanos, 
que cet auteur ne semble pas avoir connu à l'heure où il publiait 
son travail. 

Dans ce mémoire, les points suivants ont été établis. Contrai- 
rement à l'opinion courante, la toxine tétanique n'est pas radi- 
calement détruite par les températures de 65, 75 et même 80; à 
ces degrés, la chaleur diminue considérablement, mais ne sup- 
prime pas son activité. En second lieu, le corps des bacilles téta- 
niques renferme une très grande quantité de toxine, et celle-ci, 


‘comme le poison dissous dans le milieu nutritif, n’est pas détruite 


par le chauffage auquel on soumet les spores. Dès lors, quand 
on inocule à des animaux très sensibles, comme la souris et le 
cobaye, des doses élevées de spores chauffées à 67, 70, 75 et 


162 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


même 80°, on injecte en réalité des spores contenant encore 
une quantité plus ou moins grande de poison actif, capable de 
produire des symptômes tétaniques et la mort, en dehors de 
toute végétalion des germes inoculés. 

D'autre part, nous avons démontré que, si les spores téta- 
niques sont inoflensives, c’est parce que, dès leur pénétration, 
elles sont mises hors d'état de nuire par les phagocytes. Mais 
cette action protectrice des cellules a évidemment une limite et, 
si on injecte à un animal plus de germes que les phagocytes 
n'en peuvent englober dans le temps nécessaire, il est certain 
que l'organisme, alors débordé par le nombre des envahisseurs, 
succombera dans la lutte. 

Or, sur les trois animaux qui meurent tétaniques dans les 
expériences de M. Klipstein, deux ont reçu un nombre réelle- 
ment excessif de germes. Tel est le fait de l'expérience 4 : le 
dépôt d’une culture dans 200 c. c. de bouillon est délayé dans 
40 c. c. d’eau, puis 1 c.c. de ce mélange est inoculé à un cobaye qui 
meurt au troisième jour. En réalité, cet animal a reçu l’équivalent 
de 5 c. c. de culture. Ailleurs (expérience 5), 0%,5 d'une cul- 
ture en bouillon est injecté à une souris, soit pour un animal du 
poids moyen de 15 grammes, la trentième partie de son poids 
total! De telles doses sont démesurées. Ou bien le trop grand 
nombre de spores a introduit, malgré le chauffage, une quantité 
de poison suffisante pour produire une intoxication mortelle; 
l'examen attentif du foyer montre alors que ces spores n’y ont 
pas végété. Ou bien les leucocytes n’ont pu, en temps opportun, 
englober et immobiliser la totalité des germes qui ont brusque- 
ment inondé le même point du tissu conjonctif. Ne sait-on pas 
qu'en augmentant les doses jusqu'à lexcès on peut rendre 
pathogènes certains microbes réputés absolument inoffensifs ? 

Reste la souris de lexpérience 1 qui meurt le troisième jour 
après l’inoculation de 2 anses d’une culture chauffée à 729, alors 
que d’autres souris ont toléré 3 anses, 1/40 c. c. etmème 1/10 c. ec. 
d'une culture chauffée à 80°. L'auteur ne donnant aucun détail 
sur les constatations qu’il a pu faire au point injecté, ilest diflicile 
d'interpréter ce résultat. Signalons toutefois que le mode d’ino- 
culation employé n’est pas exempt de critique. L'insertion de 
deux anses de platine sous la peau nécessite une plaie, un décol- 
lement du tissu conjonctif, un traumatisme donnant parfois lieu 


NOTE AU SUJET DE L’ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. 163 


à une hémorrhagie ; elle facilite aussi l'introduction des impu- 
retés extérieures dans la plaie : toutes ces conditions peuvent 
avoir donné quelque complexité au résultat obtenu. 

Si l’on tient compte des réserves exprimées ci-dessus, les 
résultats obtenus par M. Klipstein, loin d’infirmer nos observa- 
tions, leur fournissent au contraire un appui indéniable. La 
conclusion qu'il leur donne se formule ainsi : « En contradiction 
avec Vaillard et Vincent, je puis donc dire : Les cultures pures 
du bacille du tétanos que l’on a soumises à la température néces- 
saire pour détruire la toxine peuvent cependant encore se mon- 
trer très nocives vis-à-vis de l'organisme animal. » Mais quelques 
lignes auparavant l’auteur s'exprime en ces termes : « Sans 
doute, lorsqu'on se sert de pareilles cultures, il en faut toujours 
une certaine quantité, d'ordinaire abondante, pour provoquer la 
maladie. Cela n’a rien de surprenant : l'organisme dispose de 
certaines ressources pour se défendre de l'invasion, de la mul- 
tiplication illimitée des germes morbides. » 

La contradiction que relève M. Klipstein est plus apparente 
que réelle. Nous avons affirmé que des doses considérables de 
spores sans toxine pouvaient être impunément introduites dans 
l'organisme vivant. M. Klipstein le constate et le reconnait à son 
tour. Mais, en signalant le fait, nous n’avons pas prétendu dire 
que les animaux devaient tolérer une quantité sans limite de ces 
mêmes spores. Si notre contradicteur a voulu exprimer la même 
idée en disant « que les cultures privées de toxine peuvent 
encore se montrer très nocives », nous nous rangeons d’autant 
plus volontiers à son avis que. dans un mémoire dont il semble 
_ ignorer l'existence, nous avons mentionné les doses susceptibles 
de tuer le cobave et expliqué aussi les raisons de leur nocuité. 

Quoi qu'il en soit, un point essentiel reste acquis : M. Klips- 
tein a observé, comme nous, l’innocuité de doses relativement 
considérables de spores tétaniques. Opposant cette notion à la 
nocuité de celles qui se trouvent à l’état d'unités dans une par- 
celle de terre tétanigène, nous avons présumé d’abord, puis 
démontré, que la pathogénie de l'infection naturelle comportait 
nécessairement l'intervention de facteurs propres à favoriser la 
végétation des germes spécifiques dans les plaies. Telle est aussi 
la conclusion à laquelie aboutit M. Klipstein lorsqu'il recherche 
pourquoi le télanos humain est une maladie si rare, tandis que 


16% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


sa cause animée se trouve si répandue dans les milieux exté- 
rieurs. « Dans les circonstances naturelles, dit-il, le contact 
d'une plaie avec des germes tétaniques ne suffit pas pour que 
l'affection se déclare : il faut de plus certaines conditions acces- 
soires, nécessaires au développement des germes. » Inspiré par 
les faits que l’un de nous a établis en collaboration avec M. Vin- 
cent, il trouve les principales de ces conditions dans le genre et 
la nature du traumatisme, dans l'intervention simultanée des 
microbes mélangés aux spores tétaniques, microbes inoffensifs 
d'habitude, mais qui par leur présence dans les plaies peuvent 
permettre le développement de l'agent spécifique. 

En résumé, le travail de M. Klipstein, quoi qu’en pensentson 
auteur et quelques-uns de ceux qui, sans doute, l’ont apprécié 
trop superficiellement, n’infirme aucune des notions que nous 
avons introduites dans l’étiologie da tétanos ; bien au contraire, 
il leur donne un appui dont nous apprécions la valeur. 


II 


Visant aussi les points fondamentaux de nos recherches, 
M. Roncali, dans un travail exécuté à l’Institut d'hygiène expé- 
rimentale de Rome ‘, s’est proposé de vérifier à son tour les deux 
questions suivantes : 

1° Les spores privées de la toxine élaborée dans les cultures 
donnent-elles constamment lieu à l'infection tétanique? 

2° Les spores contenues dans la terre peuvent-elles, indé- 
pendamment des microbes qui les accompagnent, provoquer le 
tétanos ? 

Pour résoudre la première de ces questions, M. Roncali a 
d’abord recours à l'épreuve des spores traitées par le lavage. 

Des cultures en gélatine, âgées de 40 jours, sont filtrées sur 
une bougie Chamberland. Les germes adhérents à l'appareil sont 
lavés par 12 litres d’eau. Puis, un peu du dépôt microbien est 
prélevé avec une spatule de platine et inoculé à six cobayes : tous 
ces animaux meurent tétaniques de la fin du deuxième jour au 
commencement du troisième. 


1. Roxcaur, Contribution à l’étude de l'infection tétanique expérimentale chez 
Panimal. (Riforma medica, n° 165, juillet 1893.) 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. 165 


Mais l’auteur omet de nous dire à quel volume de culture 
correspondait le dépôt microbien mis en expérience, et aussi à 


quelle unité de mesure se rapporte cet un peu dudit dépôt qu'il 


inocule à chaque cobaye. Ces renseignements méritaient d’au- 
tant plus d'être fournis que la mort très rapide de ces animaux 
conduit à penser que les spores inoculées renfermaientlencore une 
proportion considérable de poison. Les bacilles tétaniques, en 
effet, retiennent à leur intérieur une graude quantité de toxine 
qu'ils abandonnent lentement aux liquides ambiants, et, con- 
trairement à nos prévisions antérieures, un lavage méme de très 
longue durée ne parvient pas à l’extraire en totalité; de là de 
graves difficultés pour obtenir par ce moyen des spores réelle- 
ment privées de leur poison. Restant étranger à cette notion, 
M. Roncali estime avoir suffisamment expurgé ses spores parce 
que les dernières quantités d'eau écoulées de la bougie 
n'étaient pas toxiques ; assurément son opinion eût été autre si, 
après avoir fait macérer dans un volume d'eau l'enduit micro- 
bien recueilli sur le filtre, il avait, au bout de quelques jours, 
injecté à des souris le produit de cette macération. 

Les lacunes de cette observalion et les réserves qu'elle com- 
porte ne permettent pas d'attribuer à ce fait la signification que 
lui donne l’auteur. 

Dans une autre série de recherches, M. Roncali s'adresse 
aux spores traitées par la chaleur, et il fait choix de cultures 
développées sur gélose, à la température de 3°. Ces cultures sont 
soumises à un chaulfage de deux heures à 80°, ou de une heure 
à 85 et 90°. Puis un fragment de gélose est prélevé, pesé (l'auteur 
n'indique ni son volume ni son poids) et inoculé avec les plus 
grandes précautions antiseptiques à des cobayes. Les animaux 
meurent constamment avec un tétanos typique du quatrième au 
cinquième jour après l'infection. D'où l’auteur conclut que les 
spores tétaniques privées de toxine sont parfaitement capables 
de se développer dans le corps de l’animal. 

11 nous plaît de reconnaître que le fait signalé par M. Ron- 


cali est d’une exactitude absolue : l'introduction, sous la peau 
_ des cobayes, d’un fragment d’une culture sur gélose préalable- 


ment chauffée à 80°, provoque sûrement le létanos, et même il 
suffit pour cela d’une quantité bien minime de spores. 
Ainsi, d'un côté, nous avons établi que le cobaye reçoit, sans 


166 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


devenir malade, des doses de cultures er bouillon variant entre 
1 c. e. et 2,5 lorsque celles-ci ont été chauffées à 80°. M. Klips- 
tein reconnait, d'autre part, que 1 c. c. de ces mêmes cultures 
reste inoffensif. Par contre, M. Roncali constate qu'un fragment 
d’une culture sur gélose chautTée à 80°, 85°, 90°, et renfermant un 
nombre beaucoup moindre de spores, détermine à coup sûr le 
tétanos. 

Une contradiction flagrante semble donc exister entre les 
deux séries de faits. Il n’en est rien cependant, car les expé- 
riences de l’auteur italien admettent un correctif important qui 
en change complètement la signification. Ce correetif a échappé 
à la sagacité de M. Roncali; sans doute eùt-il été conduit à 
l’établir lui-même, s'il s'était demandé pourquoi des expérimen- 
tateurs différents avaient pu obtenir des résultats contraires aux 
siens, ou s'il avait voulu croire qu’une erreur matérielle de leur 
part n’était peut-être point l'unique explication de ces diver- 
gences. L’explication à trouver était simple et facile : elle réside 
tout entière dans ce fait, en apparence banal, que M. Roncali, 
au lieu d’expérimenter comme ses devanciers avec des cultures 
en bouillon, a utilisé les cultures sur gélose; cette variante, 
négligeable selon lui, a suffi pour changer radicalement à son 
insu les conditions expérimentales. 

Ce n’est pas sans raison que toutes nos recherches sur l’étio- 
logie du télanos ont été faites au moyen de spores provenant de 
cultures en milieu liquide. En outre des facilités qui en résul- 
taient pour les manipulations et la graduation des doses, le 
choix répondait à une indication dont il faut parler, puisque la 
question se pose. 

Lorsqu'on injecte à un animal des spores tétaniques suspen- 
dues dans un liquide, celui-ci disparait rapidement par absorp- 
tion, et les germes se trouvent en contact direct avec les élé- 
ments des tissus dont rien ne les sépare; si un conflit doit 
s'établir entre l’envahisseur et les agents défensifs de l’orga- 
nisme, aucune barrière ne sera, de la sorte, interposée entre les 
adversaires. Ces conditions sont également celles de l'infection 
naturelle. Les spores apportées par les produits (terre, pous- 
sières, fumiers, etc.) qui souillent les plaies sont disposées à la 
surface de particules minérales, végétales ou autres, mais 
jamais (autant du moins qu’il est permis de l’imaginer) elles ne 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. 167 


sont incluses dans un corps consistant ou solide; alors encore 
le contact direct peut s'établir entre les microbes et les éléments 
des tissus. À ce point de vue donc, les conditions de l'infection 
naturelle sont sensiblement reproduites par celles de l'infection 
expérimentale, lorsqu'on emploie pour cette dernière des spores 
suspendues dans un liquide. 

Mais il n’en est plus de même si, pour infecter les animaux, on 
se sert, comme le fait M. Roncali, d’un fragment de gélose dans 
l'intérieur duquel les germes sont inclus, La gélose est un milieu 
solide et qui reste tel à des températures bien supérieures à 
celles du corps de l'animal en expérience. Ne se liquéfiant pas 
après son introduction dans les tissus, elle retient, conserve les 
spores dans son épaisseur et, de plus, en raison même de sa 
consistance, établit une barrière appréciable entre les microbes 
et les éléments cellulaires. Or, étant acquis en l'espèce que ces 
derniers représentent précisément les moyens protecteurs de 
l'organisme, il y avait lieu de penser, « priori, que ce procédé 
d'infecuüon devait introduire des conditions nouvelles et toutes 
spéciales qui ne sont plus celles de l'infection naturelle. 

Ces conditions toutes particulières et leurs conséquences 
vont ressortir des détails suivants : 

Lorsqu'on introduit sous la peau du ventre ou dans le péri- 
toine des cobayes un cube d’agar taillé dans une culture chauf- 
fée à 80°, ces animaux présentent en général les premiers symp- 
tômes tétaniques du quatrième au cinquième jour, quelquefois 
plus tard, au septième, huitième ou dixième jour, et meurent 
presque toujours dans les vingt-quatre ou trente-six heures qui 
suivent. À 

A l'examen du foyer de l’inoculation, le fragment de gélose 
apparaît enkysté par une membrane lisse, rosée ou rougeûtre. 
Mais quelle qu'’ait été la survie de l'animal, le bloc est entier, 
aussi consistant qu’à l’origine, ses arêtes sont vives ou à peine 
émoussées, ses faces lisses, sans trace de corrosion, sans enduit 
leucocytaire appréciable à l'œil nu. 

Sur les parois du kyste, les leucocytes sont très peu abon- 
dants, et il est exceptionnel d'y rencontrer des microbes : une 
fois seulement, sur onze cas, le bacille tétanique a été trouvé en 
ce point. 

En lavant avec une minime quantité d’eau la surface du bloc 


168 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


de gélose, on ne récolte qu’un nombre très restreint de leucocytes, 
et, sauf dans le cas où des bacilles avaient été vus sur les parois 
de la membrane enkystante, le microscope n'a jamais montré de 
microbes dans le produit de ce lavage. 

Déjà clairsemés à la périphérie du bloc, les leucocytes 
deviennent encore plus rares dans l'épaisseur de ses couches les 
plus superficielles : Ià ils se comptent par unités. Au delà d’un 
tiers ou d’un demi-millimètre d'épaisseur, on n’en rencontre 
plus. Par contre, dans les parties centrales de la masse de gélose. 
apparaissent des bâtonnets résultant de la végétation des spores 
tétaniques. 

Ces constatations ne manquent pas d'intérêt; elles se résu- 
ment dans les deux faits suivants : 

19 Lorsque le tétanos est provoqué par l'introduction sous la 
peau d’un fragment de cultures sur gélose, ce n’est pas au sein 
des tissus vivants, sur les parois de la plaie, mais dans l’épais- 
seur même du bloc que s'effectuent la végétation des spores et 
la multiplication des bacilles: 

29 Les leucocytes n’affluent pas d’une manière active autour 
du bloc de gélose; ils n’y pénètrent qu'avec difficulté et, même 
après un temps très long (onze jours), ne parviennent pas à 
dépasser les couches les plus superticieiles. 

On est naturellement conduit à penser que le premier fait est 
la conséquence directe du second. 

L'absence d’afflux leucocytaire avait lieu de surprendre, 
étant donnée l’intense propriété chimiotaxique que possèdent les 
spores tétaniques privées de toxine par le chauffage. [1 suffit, en 
effet, de les injecter dans le tissu conjonctif sous-cutané pour 
provoquer en ce point une abondante émigration cellulaire. Le 
fait ne se reproduisant plus lorsque les mêmes spores sont 
incluses dans de la gélose, on devait rechercher si les propriétés 
chimiotaxiques de cette substance n'intervenaient pas pour 
modifier ou empêcher le phénomène. Daus ce but, des petits 
cubes ont été taillés dans de la gélose stérile, n'ayant servi à 
aucune culture, et de composition strictement identique à celle 
de la gélose qui avait été employée pour la culture du bacille téta- 
nique. Ces cubes ont été placés sous la peau de différents 
cobayes, puis retirés à des périodes variables. Leur examen a 
toujours permis de faire des constatations semblables à celles 


NOTE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. 169 


qui viennent d'être mentionnées : intégrité de la forme et de la 
consistance du corps étranger, conservation de sa transparence, 
faible quantité des leucocytes à la périphérie du bloc, leur 
extrème rareté dans l’épaisseur des couches les plus superfi- 
cielles, leur absence complète dans les parties centrales de la 
masse. 

Le milieu nutritif à base d’agar semble donc bien n’avoir 
que des propriétés chimiolactiques extrêmement faibles et, sans 
doute aussi, en raison de sa structure particulière, oppose-t-il un 
obstacle considérable à la marche des cellules amiboïdes qui 
tentent de le pénétrer. On comprend dès lors comment quelques 
spores englobées dans un pareil milieu trouvent aisément pro- 
tection contre les phagocytes, végètent et sécrètent le poison qui 
tue l’animal; car, si la gélose est une barrière pour les corps 
figurés, elle n'empêche pas la diffusion des liquides et de la toxine 
élaborée par les bacilles. 

Ce serait donc la seule intervention de la gélose qui, dansles 
expériences de M. Roncali, constituerait le facteur important, la 
cause déterminante des résultats obtenus. 

Pour le démontrer, nous avons eu recours à une expérience 
aussi simple que décisive : elle montre, en effet, que des spores 
prises dans une culture en bouillon chauffée à 80° restent inof- 
fensives lorsqu'elles sont injectées à baute dose, mais suspen- 
dues dans le liquide où elles se sont formées, tandis qu’elles 
donnent sûrement le tétanos et tuent à une dose très minime, 
lorsque pour les inoculer on les incorpore dans un bloc de gélose 
stérile. 

Une culture en bouillon faite à la température de 380, Agée 
de trente jours et ne contenant que des bacilles sporulés, est 
chauffée pendant deux heures à 800. A trois cobayes, on injecte 
sous la peau du ventre 0c,5 de cette culture. D'autre part, des 
cubes mesurant 3 à 4 millimètres de côté sont découpés dans de 
la gélose stérile. Par un petit pertuis fait avecune aiguille chaude 
on introduit au centre de chacun d’eux une fraction de goutte 
de la culture chauffée, puis l’orifice du pertuis est exactement 
oblitéré par la fusion de la gélose. Un de ces cubes est alors 
inséré sous la peau de trois cobayes de même taille que les pré- 
cédents. 

Les animaux qui ont élé inoculés avec 0%,5 de la culture en 

49 


170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


bouillon restent en bonne santé. Ceux qui ont reçu les cubes 
de gélose deviennent tétaniques du quatrième au cinquième 
jour, et meurent dans les vingt-quatre heures suivantes. 

Cette expérience, renouvelée plusieurs fois dans les mêmes 
conditions, a toujours donné des résultats semblables. 

Ainsi des spores de provenance rigoureusement identique 
se comportent de façons fort différentes, suivant que, pour l’ino- 
culation, on les incorpore à tel ou tel véhicule. Disposées dans 
l'épaisseur d’un bloc de gélose, même en proportion infime, elles 
provoquent un tétanos mortel; alors, en effet, elles sont pro- 
tégées contre les leucocytes, germent comme en un tube de 
culture, et sécrètent le poison qui, dialysant à travers le bloc 
solide, intoxiquera l'animal. Suspendues dans un liquide, elles 
restent inoffensives, même à dose considérable, parce que, toute 
protection faisant défaut, l’action phagocytaire a pu s’exercer en 
temps opportun et protéger l'organisme. 

C’est faute de n'avoir point su faire cette distinction que 
M. Roncali a déduit d’une expérience exacte une conclusion qui 
ne l’estpas. [noculer à des animaux un fragment de gélose conte- 
nant des spores chauffées à 80° aboutit, en somme, à reproduire 
l'expérience que nous faisions naguère lorsque, voulant établir 
que lies spores végètent et provoquent le tétanos à la condition 
d’être protégées contre les phagocytes, nous infections les ani- 
maux avec une quaniité très minime de germes desséchés sur 
du sable et enveloppés dans un sac de papier. Cette barrière de 
papier n'est pas infranchissable pour les cellules amiboïdes, 
mais elle suffit à retarder leur migration, ce qui permet aux 
spores de végéter et aux bacilles néoformés de sécréter le poison. 
Or, la gélose constitue un obstacle beaucoup plus efficace, en 
raison d’abord de ses propriétés chimiolactiques presque indiffé- 
rentes, et ensuite parce que sa structure oppose des difficultés 
»lus grandes au passage des leucocytes. L'expérience de M. Ron- 
cali ne peut donc conserver la signification qu'il lui donne; loin 
de prouver, comme il le pense, que, à l’encontre de notre opi- 
nion, les spores tétaniques privées de toxine végètent sans diffi- 
cultés dans l'organisme, elle démontre uniquement que, comme 
nous l’avions dit, les spores germent à coup sr et sans difficulté 
lorsqu'elles sont préservées contre l’action phagocytaire : les 
deux termes ne sembleront pas équivalents. Ce n’est assurément 


NOŸE AU SUJET DE L'ÉTIOLOGIE DU TÉTANOS. y wi | 


pas ce que l’auteur italien se proposait d'établir; nous ne le 
remercions pas moins d’avoir confirmé un pointimportant de nos 
recherches à l’aide d’une variante aussi élégante que commode. 

Cette critique dispensera d’insister sur la partie du travail 
où M. Roncali examine la question de savoir si l'action patho- 
gène des spores tétaniques contenues dans la terre est, oui ou 
non, nécessairement liée à l'intervention des germes étrangers. 
Il suffit, en effet, de mentionner le dispositif employé par l’au- 
teur pour marquer la signification que comporte son expérience. 

300 grammes de terre, répartis en six lots de 50 grammes, 
sont chauffés pendant quinze minutes sur une plaque de cuivre 
portée au rouge. Chaque lot de terre est ensuite inclus dans un 
tube et stérilisé de nouveau à l’autoclave pendant trois jours 
conséculifs. 

Des fragments de cette terre sont alors inoculés à quatre 
cobayes, d’autres sont ensemencés en gélatine; les animaux 
restent en bonne santé; aucune colonie ne se développe sur les 
plaques de gélatine. 

La terre étant reconnue stérile, M. Roncali introduit dans 
chaque lot trois cultures du bacille tétanique sur gélose, et remue le 
mélange avec une baguette de verre stérile, de facon à former une 
pâte très dense de gélose et de terre (una pasta cretacea). Gette 
mixture est portée à l’étuve pendant trente jours. Après ce 
délai, les tubes sont chauffés pendant deux heures à 80°, et un 
peu de leur contenu est inoculé à des cobayes qui tous meurent 
tétaniques après quatre, cinq et six Jours. 

Désireux de conserver à cette épreuve toute la valeur démons 
trative qu'il lui suppose, M. Roncali énumère et réfute par avance 
toutes les objections que l’on ne songera pas à lui faire (persis- 
tance de la toxine malgré le chauffage, introduction de germes 
d'impureté pendant les manipulations), mais il omet la suivante, 
beaucoup plus fondée. Ce n’est point avec une mixture de gélose 
emprisonnant des spores tétaniques que se fait l'infection natu- 
relle ou expérimentale par la terre, mais bien avec un produit 
plus simple où les spores se trouvent accolées à la surface de 
particules minérales ou végétales ; les deux conditions sont trop 
éloignées pour supporter la moindre assimilation. En modifiant 
comme il l’a fait la matière destinée à l’inoculation, l’auteur a 
naturellement introduit dans son expérience une complexité 


172 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dont il ne s’est pasrendu compte. L’adjonction de la terre stérile 
à une culture Létanique sur gélose ne change rien des propriétés 
que nous avons reconnues à ce dernier milieu; inoculer les ani- 
maux avec un semblable mélange se réduit en somme à les 
infecter avec un fragment de gélose, et les mêmes objections 
s'adressent à l’un comme à l’autre de ces procédés. M. Roncali 
croit avoir établi d’une manière péremptoire que les spores 
mélangées à la terre produisent l'infection tétanique sans l’inter- 
vention des microbes étrangers ; il réussit simplement à démon- 
trer pour la seconde fois que les spores sans toxine végètent et 
provoquent le tétanos, lorsqu'elles sont protégées contre les 
cellules migralrices par une enveloppe de gélose, additionnée de 
terre dans le cas particulier. 


Au cours des développements que nous avons consacrés à 
l'étude des associations microbiennes, le fait suivant a été 
établi. Dans la pathogénie du télanos consécutif à l’inoculation 
de la terre, les bactéries que celle-ci renferme, en outre de 
l'agent spécifique, jouent un rôle de premier ordre. Ces bactéries 
produisent des lésions constantes, à la faveur desquelles les 
spores peuvent végéter ; leur concours est indispensable, et, lors- 
qu’il vient à faire défaut, les spores ne germent-pas. Cette opi- 
nion se basait sur une preuve expérimentale. 

Une terre est sürement tétanigène; inoculée aux animaux, 
elle provoque toujours le tétanos. Si on la chauffe à une tempé- 
rature qui, sans amoindrir la vitalité des spores tétaniques, suffit 
cependant à détruire la plupart des autres microbes ou à Îles 
affaiblir assez pour les rendre inactifs, elle perd sa virulence. 
Mais, si à celte terre devenue inactive on restilue certaines 
espèces microbiennes qu’elle renfermait auparavant (abstraction 
faite du bacille tétanique), on lui restitue du même coup son 
pouvoir tétanigène. 

Tel est le fait que M. Roncali a voulu vérifier. Parmi 
différents échantillons de terre, l’auteur choisit celui qui 
provoque le plus souvent le tétanos, et qui, s’il ne détermine pas 
celte maladie, ne tue pas du moins par une autre infection. 

560 grammesdecette terre sont distribués en 14 lots de 40 gram- 
mes, puis inclus dans 14 tubes. Après addition de 70 grammes 
d’eau stérile, M. Roncali inocule à des cobayes, non pas la terre 


NOTE AU SUJET DE L’ETIOLOGIE DU TÉTANOS. 173 


elle même, mais l'eau dans laquelle elle a macéré ; 14 cohayes 
sont ainsi mis en expérience, à raison de { cobaye par tube. 

Des animaux de celte première série, 6 meurent tétaniques, 
8 surviven£. 

Les 14 lots de terre sont ensuite chaullés pendant 1 h. 30 à 
87°. 14 cobayes sont inoculés comme précédemment : 13 meu- 
rent tétaniques du 4° au 6€ jour ; 1 seul survit. 

Enfin à ces tubes de terre chauffés à 87°, l’auteur ajoute soit 
une infusion de viande putréfiée, soit une culture de 10 micro- 
bes divers, soit des bactéries isolées de la terre avant sa stérili 
sation, soit une infusion végétale putréfiée, etc. ; puis il inocule 
14 cobayes : 5 meurent tétaniques, 9 survivent. 

Après avoir signalé ie désaccord qui existe entre ce fait et le 
nôtre, M. Roncali mentionne particulièrement l'exemple de 
& échantillons de terre qui ont donné à la première inoculation 
3 résultats négatifs et 1 infection tétanique ; à la deuxième ino- 
culation, la terre ayant élé chauflée à 87°, 4 cas de tétanos, et à 
la troisième, après addition des saprophytes, 2 cas de tétanos 
et 2 résultats négatifs. L'auteur explique l’action si variable d’une 
mème terre par l’inégale répartition des spores tétaniques dans 
l’eau où elle baignait, par leur inégaie abondance dans les 
diverses portions du liquide successivement inoculé, et il estime 
que des circonstances de ce genre ont dùü rendre l'erreur bien 
facile dans l'expérience que nous avons faite avec la terre. Mais 
c’est précisément pour éviter cette objection très naturelle que 
nous avons utilisé une terre bien choisie, laquelle donnait 
infarlliblement le tétanos quand elle n'avait pas été soumise au 
chauffage ; l'erreur, dans ce cas, devenait difficile à commettre. 

Les résultats rapportés ci-dessus sont, à la vérité, fort sin- 
guliers : on y voit que la terre chauffée à 87° est beaucoup plus 
souvent télanigène (13 fois sur 14) que la terre non chaultée 
(6 fois sur 14); d'où semblerait ressortir que plus la terre est 
pürifiée, débarrassée des microbes divers qui accompagnent les 
spores télaniques, plus aussi elle devient virulente, Renoncant 
à interpréter une telle anomalie, nous nous bornons à l’enregis- 
trer sans commentaires. 

Mais M. Roncali nous paraît déduire de ce fait des conclu- 
sions prématurées lorsqu'il avance que, contrairement à nos 
assertions, la destruction des germes étrangers par la chaleur 


os: | 


74 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


n'a pas empêché le tétanos de se produire, comme aussi l’adjonc- 
tion des saprophytes n’en a pas favorisé l’apparition. Son expé- 
rience ne possède pas sur ce point toute la valeur qu'il suppose. | 

M. Roncali affirme, en effet, que, malgré la destruction des 
germes étrangers, les spores tétaniques se sont développées. Où 
est la preuve de cette destruction des germes étrangers ? De ce 
que la terre a été chaulfée à 87°, il n’en résulte pas forcément 
qu'elle ne contenait plus aucun microbe vivant en dehors des 
spores spécifiques. Or, l’auteur ne dit même pas qu'il ait examiné 
la plaie d’inoculation à ce point de vue. Son expérience eût 
été plus précise s’il avait démontré que, chez les animaux 
infectés avec l’infusion de terre chauffée à 879, il n'existait au 
foyer de l’inoculation ni lésion locale, ni microbes capables 
d’avoir favorisé la germination des spores tétaniques, que celles- 
ci, en un mot, étaient restées seules en cause. Nous croyons 
pouvoir affirmer qu'il n’en était pas ainsi. Dans une note placée 
à la page 39 de notre mémoire sur l’étiologie du tétanos, nous 
avons mentionné la résistance de certains microbes favorisants 
de la terre à l’action des températures élevées; M. Roncali eût 
pu, peut-être, tirer profit de cette indication. 

Dans les expériences du même auteur, l’adjonction des sapro- 
phytes à la terre chauffée n'a pas favorisé le développement du 
tétanos. Ce fait n’arien de surprenant. Nous avons signalé d'une 
manière très explicite que la propriété de favoriser la germination 
des spores tétaniques dans les plaies n'appartenaitpas indifférem- 
ment à tous les microbes; c’est là le lot de quelques-uns, spécia-. 
lement de ceux qui provoquent au point d'inoculalion une lésion 
caractérisée. M. Roncali n’a pas eu la chance de rencontrer des 
microbes de cette espèce dans ses expériences: mais peut-être 
eût-il réussi à les trouvers’illes avait cherchés comme il convient. 

Au demeurant, M. Roncali semble convaincu, à l'inverse de 
M. Klipstein, que l’étiologie du tétanos est beaucoup plus sim- 
ple que ne se l’imaginent la plupart des auteurs. Pour lui, les 
spores létaniques privées de toxine, comme elles se rencontrent 
dans la nature, germent sans difficultés dans les plaies et ne 
réclament pour cela aucune intervention adjuvante. Assurément 
il n’a pas été frappé de l'opposition qui existe entre la rareté de 
la maladie et la fréquence de sa cause spécifique dans les milieux 
extérieurs, la multiplicité des circonstances qui peuvent l’ame- 


À 4 


NOTE AU SUJET DE L’ETIOLOGIE DU TETANOS, 1175 


ner au contact des tissus. Mais, si les conclusions de son travail 
sont formelles et toutes défavorables aux notions que nous 
avons rappelées au début de cette note, il faut convenir que les 
expériences destinées à leur servir de base sont loin de les moti- 
ver : ou bien ces expériences ne prouvent pas ce qu’elles préten- 
dent démontrer, ou bien elles manquent de la précision néces- 
saire pour les rendre pleinement démonstratives. 

Nous réclamons d’autres faits avant d’abjurer nos erreurs 
sur l’étiologie du tétanos. 


SUR LA 


VALEUR ANTISEPTIQUE DE L'OZONE 


Par LE Dr J. pe CHRISTMAS 


La facilité avec laquelle l'intelligence humaine se construit 
des hypothèses et tire des conclusions d’une coïncidence de phé- 
nomènes en vérité toute fortuite, mais qui pour l'esprit préconcu 
devient tout de suite une preuve de cause à effet, est démontrée 
encore une fois, si c'était nécessaire, par l’histoire scientifique 
de l'ozone et toutes les théories auxquelles la découverte de ce 
corps dans l’air atmosphérique a donné licu. L'observation, 
faite par Schoenbein, des effets irritatifs de l’ozone sur la 
muqueuse des bronches a suffi pour qu’on accusât ce gaz d’être 
la cause des épidémies de grippe et de catarrhes des voies 
respiratoires, opinion soutenue par des observations météorolo- 
giques qui toutes prouvaient que la recrudescence des épidémies 
grippales coïncidait avec une augmentation d'ozone dans l'air. 
A cette théorie en apparence sérieuse, on en opposait bientôt 
une autre au moins aussi irréfutable. En examinant de près les 
phénomènes, il devenait évident que l’ozone ne pouvait avoir 
une grande influence sur les catarrhes. D'un côté on trouvait 
que ce corps manque complètement dans l'atmosphère des 
grandes villes, qui pourtant semblent le siège de prédilection 
des affections catarrhales. D'un autre côté on constatait la 
présence d'ozone en proportions considérables, jusqu’à 1 pour 
500,000, dans les parages du pôle Nord, où jusqu'ici on n’a 
jamais observé de cas de fluxion de poitrine. La théorie de 
Schoenbein était donc fortement ébranlée. Elle fut tout à fait 
renversée quand on s’aperçut de la faculté qu’a l'ozone de 
détruire lesmauvaisesodeurs. L'observation, faite par Scoutetten, 
de la viande pourrie qui perd son odeur dans une atmosphère 
ozonisée, et celle de Clemens, qui plaçait des grenouilles dans un 
marais artificiel, où elles succombaient rapidement dès que l’eau 


VALEUR ANTISEPTIQUE DE L'OZONE. 11 


n'était pas purifiée par un courant d'ozone, ont suili pour 
changer les idées sur ce corps, qui, de gaz malfaisant, engen- 
drant les épidémies, devenait un gaz bienfaisant, antiputride et 
antifermentatif, prêt à faire son entrée dans la thérapeutique des 
maladies respiratoires. 

La bactériologie moderne est venue détruire en partie au 
moins ces fantaisies, mais ici les résultats ne sont pas non plus 
d'accord, et il devient très difficile de se former un jugement, 
parce que la plupart des auteurs qui se sont occupés de la 
question de la valeur antiseptique de l’ozone n'ont pas déterminé 
les doses d'ozone employées. Le seul savant ayant fait un dosage 
rigoureux est Sonntag ‘. Son travail enlève toute valeur antisep- 
tique à l'ozone, qu’il produisait avec un appareil de Siemens, 
donnant jusqu’à 15 milligrammes d’ozone par litre d'oxygène. 
Le résultat de ses expériences a été qu'une atmosphère, renfer- 
mant 3 milligrammes d'ozone par litre, ne suffisait pas pour 
tuer les spores de charbon, qui se développaient aussi facilement 
que les spores de contrôle. Il à fallu une quantité d'ozone de 

14 milligrammes environ par litre pour les tuer après 24 heures 
d'exposition. 

Les expériences de Sonntag semblent probantes au point de 
vue de la faible valeur antiseptique de l'ozone. Malheureusement 
cet auteur a borné aux essais sur les spores * ses expériences qui, 
au point de vue de la désinfection pratique, ont leur importance, 
mais qui ne nous renseignent pas sur la valeur de l'antiseptique 
envers les formes végétatives des microorganismes, question 
pourtant importante pour la connaissance exacte de la valeur 
d'un antiseptique, et qu’on semble aujourd’hui laisser un peu de 
côté. Le physiologiste qui mesure la quantité d’un poison néces- 
saire pour Luer une plante, ne s'adresse pas, pour la connaître, au 
fruit de la plante, dont le noyau dur résisterait indéfiniment à ses 
attaques. Le bactériologue, au contraire, ne semble pas attacher 
grande importance à cette différence, pourtant capitale, et il 
lui arrive souvent, comme il est arrivé à M. Sonntag, de refuser 
toute valeur antiseptique à un corps comme l’ozone, qui pour- 


4. Hermann Soxxrac, Ueber die Bedeutung des Ozons als Desinficiens, (Zeitschr 
Î. Hygiene, vol. VIII, 1590.) 


2. Les essais de M. Sonntag sur les bacilles charbonneux desséchés sur des fils 
de soie ne sont pas concluants, comme, du reste, il l'avoue lui-même. 


118 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


tant possède une action toxique très marquée sur les microorga- 
nismes, parce qu'il ne se place pas dans les conditions voulues 
pour l’observer. 

Pour se rendre compte de l'influence de l'ozone sur le déve- 
loppement d'une culture de microbes, il suffit de placer les tubes 
fraîchement ensemencés dans une atmosphère renfermant une 
certaine quantité d'ozone et à une température convenable. Non 
seulement il n’y aura pas de développement, mais les germes 
ensemencés seront morts après un séjour suffisamment pro- 
longé, car, si on les tire de l’atmosphère ozonisée pour les placer 
à l’étuve, on n’observe plus aucun développement. 

Quelle est la quantité d'ozone nécessaire pour obtenir ce 
résuitat? Peut-on espérer trouver des conditions atmosphé- 
riques où la richesse d’ozone sera suffisante pour avoir une 
influence, même restreinte, sur la vitalité des microorganismes 
soumis à son action ? Voilà les questions que je m'étais proposé 
d'examiner. 

Comme source d'ozone, je me suis principalement servi d'un 
appareil construit sur l’ancien modèle de l’appareil Houzeau à 
tubulures multiples. Les décharges électriques étaient obtenues 
par une bobine de Ruhmkorf actionnée par quatre éléments 
Bunsen. L’air ozonisé était conduit de l’appareil dans une cloche 
en verre mise en communication avec un aspirateur, qui était 
réglé de manière à laisser passer par heure un ou deux litres 
d'oxygène pur à travers l'appareil. Le dosage de l’ozone déve- 
loppé était fait par Llitrage de l’iode libre qui se forme dans une 
solution d’iodure de potassium, à travers laquelle le courant 
ozonisé barbotait, et qui était intercalée entre la cloche et l’aspi- 
rateur. La solution d’iodure de potassium était à 5 0/0, le titrage 
de l’iode était fait avec la solution de thiosulfate de soude au 
centième, après addition d’une petite quantité d'acide chlorhy- 
drique. La méthode donne des résultats très exacts, pourvu que 
la solution de thiosulfate soit fraîchement préparée. La tempé- 
rature, pendant tout le temps des essais, variait de 160 à 25°. En 
me servant d'oxygène pur et avec un courant d'un litre à l'heure. 
j'ai obtenu jusqu’à 2 mill. d'ozone par litre. Avec l’air atmosphé- 
rique la quantité d'ozone n’a jamais dépassé 0,5 mill. par litre. 

Pour quelques-unes des expériences, je me servais de 
l'appareil de Poulsen, où le développement d’ozone se fait par le 


VALEUR ANTISEPTIQUE DE L'OZONE. 119 


contact du phosphore avec de l'acide sulfurique dilué. L'appareil 
développe une certaine quantité d'ozone (j'ai obtenu jusqu'à un 
milligramme d'ozone dans la cloche qui mesurait deux litres) 
pourvu que la position du phosphore à la surface du liquide soit 
bien réglée, etque la température ne descende pas au-dessous 
de 16°; mais l'appareil est moins commode pour les essais qui 
nous intéressent, parce qu'il se développe, à côté de l’ozone, des 
vapeurs d'acide phosphoreux en petite quantité, mais dont l'effet 
antiseptique incontestable peut troubler les résultats. 

Voici maintenant le détail de ces essais. 

25 juin. Dix tubes contenant de la gélose nutritive sont 
ensemencés en surface avec une culture de charbon âgée de 
48 heures et ne renfermant pas de spores. Cinq tubes sont 
placés dans la cloche de l'appareil Houzeau, les cinq autres 
sont laissés à l’air libre. La température variait de 16° à 20°. La 
quantité d'ozone était mesurée toutes les 24 heures, elle variait 
de { milligr. 5 à 2 mill. par litre, ou 0,061 à 0,1 vol. 0/0. 

30 juin. Aucun développement dans les tubes à ozone. Belles 
cultures dans les autres. 

La même expérience a été faite avec le staphylococcus aureus, 
le bacille de la fièvre typhoïde, le hacille de la diphtérie et des 
spores d’aspergillus niger. Le résultat n’a pas varié. Aucun des 
tubes exposés à l'ozone ne s’est développé, tandis que les cultures 
de contrôle se développaient régulièrement. 

Après cinq jours, les tubes out été placés dans l’étuve à 30°. 
Les germes étaient morts, à l’exception de l’aspergillus, car 
aucune culture ne s’est développée. 

Le résultat est le même si, au lieu de gélose, on fait une 
culture dans du bouillon. Dans aucun cas je n'ai pu observer 
trace de développement. 

Le temps nécessaire pour tuer le bacille du charbon a été 
déterminé sur des cultures fraîches plongées dans l’atmosphère 
ozonisée, d’où on les a retirées de 24 heures en 24 heures. Le 
résultat a été que 96 heures de séjour dans une atmosphère 
chargée de 1,5 à 2 milligrammes d'ozone par litre les tuent inva- 
riablement. 48 heuresde séjouront déjàäune influencenocive, dans 
ce sens que le développement est ralenti, mais presque toutes 
les cultures ont pourtant fini par pousser. Un séjour de 24 heures 
n'avait aucun effet appréciable sur le développement. 


780 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


La résistance des spores a été examinée sur des spores d'un 
bacillus subtilis qui supportait facilement un chauffage de deux 
heures à 100°. Les spores étaient desséchées sur des fragments 
de lamelles, et exposées à l'atmosphère ozonisée sans inter- 
ruption jusqu'à la mort. Le temps nécessaire pour obtenir ce 
résultat était de huit à dix jours. Si les spores, au lieu d’être 
desséchées sur la lamelle, étaient exposées à l'ozone dans un 
tube renfermant du bouillon, elles ne subissaient aucune altéra- 
tion dans leur vitalité, même après quinze jours de séjour dans 
l'appareil. Preuve de la faible absorption de l'ozone parle liquide. 

Il ressort indubitablement de ces essais que l’ozone possède un 
pouvoir antiseptique réel, car ilsuffit d'une quantité de 0,1 vol. 
pour cent d'ozone dans l'air pour arrêter le développement des 
germes sur la surface des objets plongés dans une telle atmo- 
sphère. Mais aussitôt que la quantité d'ozone s’abaisse au-dessous 
de celle indiquée, son effet antiseptique devient nul. Pour m'en 
rendre compte, j'ai développé de l’ozone dans un petit cabinet 
bien clos, mesurant 6 mèlres cubes. En me servant d'oxygène 
pur, et pour une vitesse de 1 litre d'oxygène à l'heure, l'air du 
cabinet renfermait une quantité d'ozone qui en moyenne peut 
être évaluée à 0,5 milligr. par litre. L’air était fortement odorant 
et difficilement respirable : il n’a pas empêché des cullures de 
différents microorganismes sur gélose de pousser sans aucune 
entrave ni pour le développement ni pour la virulence. 

Les aliments comme le lait, les fruits, placés dans celte 
atmosphère, se putréfiaient avecla même facilité que dans un air 
non ozonisé. 

Si donc l'ozone possède une certaine valeur désinfectante 
quand il se trouve en grande quantité mélangé à l'air, il perd 
cette propriété quand les proportions descendent au-dessous de 
0,05 vol. pour 100, ce qui revient à dire qu'au point de vue 
d'une désinfection pratique de nos demeures, chambres de 
malade, etc., l'emploi de l’ozonecomme désinfectantest à rejeter. 
Non seulement les difficultés pratiques pour obtenir la quantité 
d'ozone nécessaire pour une désinfection valable sont insur- 
montables, mais l’atmosphère devient irrespirable bien avant 
qu'on arrive à la saturation nécessaire, et tous les appareils, 
ozonisateurs, etc., inventés pour un telusage ne reposentque sur 
une pure fiction. 


VACCINATIONS ANTIRABIQUES 
A LA STATION BACTERIOLOGIQUE D'ODESSA EN 1892 


Par Le Dr DIATROPTOFF 


Pendant l'année 1892, 64% personnes ont subi le traitement 
antirabique à la station bactériologique d'Odessa; 7 personnes 
ont, en outre, interrompu leur cure : 4, parce que les animaux 
mordeurs n’élaient pas enragés ; 3, pour des causes inconnues. 
Le traitement a été refusé à 20 personnes qui ne couraient aucun 
risque d'être prises de la rage, n’ayant point de lésions rabi- 
ques. 

Parmi ces 644 personnes traitées (392 hommes et 252 fem- 
mes), 633 avaient été mordues par des animaux enragés, et 11 
menacées de la contagion pour avoir soigné des personnes (3) 
ou des animaux (8) malades. 

Les animaux mordeurs ont été : 


RME OUDS Me lrevere eo clans robe lee en AMAR 6 fois. 
OO OEM RE RNA RS EE RME ET TIRE 593 — 
CHATS MR EEE CURE ER Re RE DS = ae lee aa TS Te 
DREVAUX EME ENS RTE RENE RTS ET HERO TRIO «22 — 

633 fois. 


Les malades, d’après la gravité de leurs morsures, étaient 
divisés en trois catégories : 


o1 Cas très graves. 


316 — graves. 
200 — bénins. 


Les vaccinations antirabiques ont été commencées : 


Dans la 4" semaine après la morsure pour . ,..... 478 cas. 
— 2e ET NE RE D RER Et 0 Oro E 414 — 
nee VU SENTE TR 0e 5 OR D 
SCRS NF ESC RE CRE SRE LE EEE 3 — 


Après # semaines ............4.:...., RES ou 


182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Parmi les 644 personnes qui ont subi les vaccinations anti- 
rabiques, 


4 sèries complètes ont été appliquées à 4 personnes. 


De 5 à S — NM PT RCE Un D at NN SAS — 
De 9à 45 — ER AO 01 0) Aa BTE ne 269 — 
De 16 à 23 — RE NO dore cord 28 — 


Les inoculations antirabiques n’ont duré que : 


7 jours chez 3 personnes. 

14 —  — 94 2= 

DA —  — 579 Les 

28 —  — 17 — 

30 —  — 19 = ‘ 


De toutes les personnes (640) qui ont fini le traitement à la 
station bactériologique en 1892, aucune n'est morte. Cette année. 
notre mortalité est donc nulle. 

Du nombre total (644), 4 personnes sont mortes d’hydropho- 
bie avant la fin du traitement, pendant la durée des inocula- 
tions. Ce sont : J. Was... (Cherson); M. Papan..…. (Bessarabie); 
TI. Zader.... (Cherson); D. Chim..….. (Kieff). 

Outre les personnes énumérées, quatre personnes non traitées 
à la station bactério'ogique sont mortes à l'hôpital. Elles y étaient 
arrivées avec des symptômes d'hydrophobie déjà développés. 
C'étaient une bourgeoise d'Odessa et trois étrangers. Ils étaient 
tous mordus par des chiens enragés, et leurs blessures aux mains 
et aux pieds étaient de moyenne gravité. Un d'eux est mort le 
quatrième jour après son entrée à l'hôpital; les trois derniers 
ont vécu moins de deux jours. Ils furent traités par le personnel 
médical de la station bactériologique. 

La méthode des vaccinations est restée la même; une seule 
innovation à été faite : c'est que dans chaque série de vaccina- 
tions est comprise la moelle séchée depuis trois jours, et que le 
cours du traitement a été diminué. On commence les vaccina- 
ons par la moelle de huit jours. Pour les séries suivantes, on 
emploie la moelle de six, quatre, trois et deux jours; ce n’est que 
dansles cas graves que l’on emploie la moelle d’un jour.On a observé 
que la moelle, avant le troisième jour de séchage, était toujours 
virulente; le quatrième jour, au contraire, son virus élait au 
minimum et variable. Cette circonstance a conduit à vacciner 
avec la moelle de trois jours. La propreté de la moelle est con- 
trôlée chaque jour par ensemencement dans le bouillon. 


VACCINATIONS ANTIRABIQUES A ODESSA. 183 


TABLEAU STATISTIQUE POUR L'ANNÉE 1895. 


A B C 
EE CS RE PR qe 
Morsures à la tête i simples . . .| » 5; ) 21 » 4; 

et à la figure. ! multiples . .| » 6: 11, , gl 10] , | 22! 26 
Cantérisal: { efficaces. . . » » » » » » » » 
autérisation MR CR CBS Ale $ DIRES & SI, ) 
Pas de cautérisation . . . . . . . . 10! » ) 6! » ) 24! » » 
Morsures aux | simples. ..| » | 20: » | 29: » | 371 
mains. | multiples. . .| » | 33 53| ,| 531 82) » 781115 
Ctertons ei) efficaces . . .| » ) » DE) » ) » 
uterisalions | inefficaces. . 12 » » 53 » s 37 ÿ ) 
PAS ITERCAULeTIS AMONT M| >» » 4| » ) 18| » » 
Morsuresauxmem- | simples . ..| » | 13, » | 45; » | 48; 
bres et au tronc. | multiples . .| » | 36! 49| ,|.721117| , |1121160 
nent \ efficaces . . .| » » » 2| » » » ) ) 
SANS LREE, l'inefficaces . .| 13| » ) 35! » » 61| » » 
Pas de cautérisation. . . . . . .. 36| » » 80! » » 99! » ) 
HADIS FA CHITE SE RO EN [= 34/5 » 18| » Die 1004120) 8E EE) 
OMOrSULEN ANNUEL AN rue 451 » » 39| » » 40! » » 
Morsures multiples aux diffé- | 
rentes parties du corps. . . . . 12) AUTOS) 4| 4! » 5, 5 
| ES HiPalione (efficaces 712» » » » » » » » » 
Lautérisations ) inefficaces. . 4! >» » ll » » A 0) » 
| Pas de cautérisation . . . . . . . . » » D 3| » » 3| » ) 
MHADIISQéChITÉS ECS SEE ] » » Ne » 4| » » 
MOrSares onu et. re. tr mnt » » ) 11 » » Al » | » 
| il 
——" ——_ Ts a 
1 
| 114 213 | 306 
| 
| mm 
| 
| TOTAL GÉNÉRALES 2 = cure 633 
En outre, 41 personnes étaient menacées pour avoir soigné des personnes 
» 11p 5 
(3) et des animaux (8) malades. 


La colonne À comprend les personnes mordues par des 
animaux dont la rage est reconnue ‘expérimentalement, la 
colonne B celles mordues par des animaux reconnus enragés à 
l'examen vétérinaire, la colonne C les personnes mordues par 
des animaux suspects de rage. 

Les résultats du traitement opéré sur les personnes à la sta- 
tion bactériologique nous sont communiqués par elles-mèmes 
ou par les autorités civiles des lieux qu’elles habitent. 


STATISTIQUE DE L'INSTITUT PASTEUR 


de la Société médicale de Charkow 


en 1891 et 1892 


Par M. ze Dr WYSOKOWICZ 


Le nombre des mordus traités à Charkow en 1891 et 1892 a 
élé de 543, dont 338 hommes et 205 femmes. Le tiers environ 
des mordus élait au-dessous de 10 ans. Neuf personnes seule- 
ment nous sont arrivées le jour mème de la morsure; 377 sont 
arrivées dans la première semaine après la morsure. 

Le tableau ci-joint donne une idée de la place et de la gravité 
des morsures. La colonne À comprend les cas où la rage a été 
démontrée par des inoculations au lapin ; la colonne B ceux où la 
rage a été certifiée à la suite d’un examen vétérinaire. La colonne 
C comprend les cas où la rage était seulement probable d'après 
les renseignements fournis : la colonne D ceux où elle est restée 
douteuse. | 


Morsures à la tête et au { simples. . . 6 5 8 1 
VISAGE EN CEE | mulliples. . 8 10 16 3 
MOTSUTESICOUIETISCES ENNEMI: — 4 3 1 
Morsures aux membres { simples. . . 28 22 50 9 
supérieurs... v#multiplese 57 27 87 12 
Morsures cautérisées "MR 11 17 35 1 
Morsures aux membres { simples. . . ai 12 34 t( 
inférieurs et au tronc. . | mulliples. . 16 7 42 4 
MONSUNESICOULÉMISÉES EME Lee 6 3 14 2 
Morsures multiples aux divers points 
AUNCONPS RE RL LE CE EI 11 6 33 — 
MOTSURESICQUIETISEES EN ER EE CIC < — 1 8 — 
— NONICAULETISCES EN ENT EN. \ — — — — 
HOOTIS NEC RENE EMEA se Ne Le - 69 21 138 13 
MOT SUTES ONU NE RER Er ee 63 58 132 23 


LOPAUX PT Re ee CORNE 137 89 | 270 36 


VACCINATIONS ANTIRABIQUES A CHARKOW. 785 


Dans ce tableau sont comprises 11 personnes non mordues, 
mais ayant élé en contact avec des hommes ou des animaux 
malades. 

L'animal mordeur a été le chien dans 457 cas ; le chat dans 
31; le loup dans 29 ; le cheval dans 2; la vache dans 9; le porc 
dans 1 et la brebis dans 2 cas. 

Sur ces 543 cas, il y en a eu 8 mortels ; 2 de morsures de 
chiens, 6 morsures de loup. Ce sont: 

Morsures dechien :B...,33ans,mordueàla mainle 4 février 1891, 
traitée du 13 au 20 février, morte le 17 mai. — R..., 36 ans, 
mordu à la pointe du nez le 29 janvier 1891, traité du 14 au 
20 février, mort le 24 mars. 

Morsures de loup :M..., 21 ans, mordu à la main le 25 mars 1891, 
traité du 24 avril au 5 mai, mort le 13 mal. —S...,29 ans, mordu 
à la tête et à la main, et K..., 20 ans, mordu à la face, au cou et 
à la main, le même jour que le précédent, le 12 septembre 1891 : 
traitement commencé pour les deux le 15 décembre. S... est 
mort pendant le traitement, le 24 décembre; K..., le 25 janvier, 
27 jours après la fin du traitement. Trois autres personnes mor- 
dues gravement par le même loup, et traitées, sont en bonne 
santé. — B..., 15 ans, mordu le 11 mars 1892, traité du 18 au 
25 mars, mort le 11 septembre. — G..., 12 ans, mordue à la face 
le 15 mars par le même loup, traitée comme le précédent, morte 
le 10 avril. — D..., 7 ans, mordu à la tête par le même loup, 
traité comme les précédents ; mort le 20 avril. 

Le traitement ayant semblé insuffisant dans quelques cas, 
nous avons commencé l’an dernier à le redoubler. Nous faisons 
un traitement de 7 à 8 jours lorsque les malades nous arrivent, 
et, un mois après, nous refaisons un traitement de 5 jours. Il 
me semble que cette méthode doit donner une immunité plus 
profonde que l’ancienne. Peut-être n’y a-t-il là qu'une coïnci- 
dence, mais l’an dernier nous n’avons eu aucun cas mortel parmi 
les 84 personnes qui ont subi ce traitement redoublé, bien que 
nous l’ayons réservé à tous les cas graves. 


REVUES ET ANALYSES 
SUR L'ÉTUDE CHIMIQUE DES ALIMENTS 


ÉESCELLUEOSES 


REVUE CRITIQUE 


J’ai essayé tout récemment de montrer combien étaient nombreuses 
et différentes les substances que l'on confondait, dans les tableaux 
d'analyse des aliments, sous le nom commun de Matières grasses. Je 
voudrais faire aujourd’hui la même démonstration pour ce qu’on 
appelle la Cellulose. 

Danslelangage ordinaire, ce motaun sens assez vague, mais s'adresse 
pourtant à une substance insoluble dans l’eau et résistant, même à 
l’ébullition, aux acides et aux alcalis étendus. Les chimistes sont obligés 
de préciser davantage, et pour beaucoup d’entre eux la cellulose est la 
substance ternaire qu’on trouve comme résidu quand, après avoir fait 
bouillir un tissu végétal d’abord avec de l'acide sulfurique à 1,25 0/0, 
puis avec de la potasse à 1,25 0/0, lavé avec l'eau, l’alcool et l'éther, 
on dessèche et on pèse. Ce résidu contient, il est vrai, encore quelque 
peu d’azote et des cendres, mais il est facile d’en tenir un compte 
approximatif. L'excédent est la Cellulose : elle se dissout intégrale- 
ment dans la liqueur de Schweizer, et se colore en bleu par le chlorure 
de zinc iodé, ou encore par l’iode et l’acide sulfurique. Toute substance 
jouissant de ces propriétés est comptée comme cellulose. 

A envisager de près cette définition, on voit qu’elle est tout à fait 
arbitraire et conventionnelle. C’est une convention que le choix du 
titre de 1,25 0/0 pour les solutions d'acide sulfurique et de potasse 
caustique ‘. Des solutions plus faibles dissolvent moins de matière, des 
solutions plus fortes en dissolvent plus. Il y a là une gradation régu- 
lière d'action, dans laquelle il est tout à fait arbitraire de prendre un 


1. Le titre adopté par l'Association of official agricultural chemists d'Angle- 
terre est juste double, soit de 2,50 0/0. 


L 


Re 


REVUES ET ANALYSES 187 


échelon pour dire : Tout ce qui est au-dessus sera de la cellulose, et 
au-dessous n’en sera pas. 

Le sentiment de cette convention et de cette incertitude a fait 
proposer d’autres méthodes d'évaluation. Krauch, par exemple, 
a proposé l’emploi de l’eau et de l'infusion de malt pour dissoudre 
dans la substance du végétal tout ce qui n’est pas cellulose. On traite 
la matière finement pulvérisée par l’eau froide et chaude, puis par 
l'extrait de malt, l’alcool el l'éther. Krauch n’a pas de peine à montrer 
que le résidu ainsi obtenu cède encore beaucoup de matière à l'acide 
sulfurique et à la potasse à 1,25 0/0. Ce n’est donc pas de la cellulose 
suivant l’ancienne convention, mais Krauch‘ croit meilleure une con- 
vention nouvelle qui en ferait de la cellulose, et la séparerait ainsi des 
matières plus facilement attaquables (amidon, sucre, dextrine) que le 
traitement a éliminées. Tout au plus concède-t-il que tout ce résidu 
cellulosique n’a pas le même degré de résistance vis-à-vis des agents 
extérieurs; aussi propose-t-il de lappeler cellulose et substance du 
bois : Cellulose und Holzsubstanz. 

W. Hofmeister ? a proposé de son côté une autre définition reposant 
sur l'emploi conventionnel et ménagé du réactif conventionnel de 
Schulze, qui est un mélange de 20 parties d’acide nitrique faible (D — 
1,16) et de 3 parties de chloratede potasse. Le résidu qu'il obtient ainsi 
est d’ordinaire beaucoup plus grand que celui que laisse l’ébullition 
avec les solutions étendues d’acide sulfurique et de potasse, mais il ne 
se confond pas avec la cellulose de Krauch, puisqu'il est un résidu 
d’oxydation, tandis que celui de Krauch est un résidu de sacchari- 
fication. C'est, en somme, une autre définition de la cellulose, mais 
encore une définition de mot, non une dèfinition de chose. 

Nous ne nous attarderons pas à discuter la valeur relative de ces 
conventions. Ce n’est pas avec des conventions que la science se bâtit, 
c’est avec des faits. Tout ce que nous avons à nous demander, c’est si 
à l’une de ces définitions correspond une espèce chimique, ou bien si 
elles sont au contraire toutes des étiquettes de sacs dans lesquels on 
aurait enfermé les choses les plus hétérogènes. Or, ilne peut plus rester 
de doute sur ce point, depuis les conquêtes de ces dernières années. 

Nous savons, en effet, maintenant qu'il n’y a rien de plus com- 
plexe que le résidu non azoté que laisse un végétal quand on en a 
successivement séparé ses éléments les plus connus, acides orga- 
niques, sucres, amidons, dextrines; nous savons aussi qu'entre 
Pextrémité de la chaine des substances hydrocarbonées les plus solu- 
bles, telles que les sucres, et celle des produits les plus insolubles et 


4. Landiw. Versuchst., t. XXV, p. 295, ett. XXIV, p. 221. 
2. Landro. Tahrbucher., t. XNI, p, 239. 


788 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


les plus résistants, tels que les celluloses incrustées, il y a une foule 
d’échelons intermédiaires, de constitution très variable, et dont nous 
allons passer en revue les principaux. 

Partons de la cellulose authentique, celle qui a résisté au traitement 
par les acides, les alcalis, et même le réactif de Schulze. Une cellulose 
ainsi préparée au moyen des enveloppes de la graine de lupin et de pois, 
et qui se dissolvait dans la solution cupro-ammoniacale en ne laissant 
qu'un faible résidu, se colorait en violet rouge intense en chauffant avec 
de la phloroglucine et de l’acide chlorhydrique. D'autres celluloses ne 
donnaient par le même traitement qu’une coloration faible, d'autres, 
comme la cellulose du coton, une coloration nulle. Cette coloration est 
celle du furfurol, dont la présence révèle à son tour l’existence d’un 
sucre à 5 atomes de carbone. Schulze a réussi en effet à extraire de la 
cellulose la substance qui lui donne la propriété de se colorer, en 
traitant longuement var une solution de soude à 5 0/0, et cette matière 
semble identique à la Jomme de bois découverte par Thomsen, étudiée 
depuis par Koch d’abord, puis par Wheeler et Tollens, et qui donne du 
xylose, sucre pentatomique, lorsqu'on la fait bouillir avec Pacide 
sulfurique. 

La quantité de gomme ainsi laissée dans la cellulose n’est pas 
médiocre, ainsi qu'on peut le voir en consultant les nombres que nous 
avons donnés dans notre Revue sur les sucres !‘. M. Hébert* à trouvé 
aussi que la gomme de bois constituait près de 20 00 de la paille du 
blé, et plus de 28 0/0 de la paille d'avoine. Voilà donc, dans la conven- 
tionnelle cellulose, une substance qui n’est pas de la cellulose, si on 
réserve ce nom à celle qui, contenant 6 atomes de carbone, peut abou- 
tir à un sucre ordinaire par saccharification. Ce qui reste, quand on à 
fait cette distraction, est-ce au moins une substance pure et homogène? 

Nullement. Nous allons nous en convaincre en étudiant non ces 
celluloses elles-mêmes, mais le produit de leur traitement par les 
acides. La plupart des celluloses, traitées par les acides concentrés, 
suivant la méthode de Flechsig *, donnent, il est vrai, du glucose. C’est 
ce qui a été constaté par Payen d’abord, puis par Flechsig sur la cellu- 
lose du coton, puis par Schulzef sur les celluloses extraites des 
grains de café ou de sésame, des noix de coco, des enveloppes des 
sraines de lupin, deslupins, des pois, du son de froment, du bois de pin, 
de la paille de seigle et du trèfle rouge. C’est sans doute le cas général, 
et on peut conclure que les celluloses sont formées en grande partie 


4. Ces Annales, t. NET, p. 493. 
2. Annales agronomiques, t. XVI, p. 371. 


3. Zeilschr. f. phys. Chemie, t. NIX, p. 523. 
k. Ber. d. d. chem. Gesell., t. XXIN:et XXII. 


REVUES ET ANALYSES. 189 


d’une substance transformable en glucose. Mais cette substance n’est 
pas seule. Dans les celluloses de café, de coco, de sésame, on trouve 
qu'à côté des glucoses il y a des mannoses. Voilà donc deux substances 
probablement isomériques, donnant deux sucres à 6 atomes de car- 
bone, à côté de la gomme de bois donnant un sucre pentatomique. 

Le résidu, compté comme cellulose, du traitement par les acides et 
les alcalis à 1,25 0/0, est donc un mélange que des acides ou des 
alcalis plus concentrés disloquent. Dès lors, il n’y a aucune raison 
pour que ces acides ou ces alealis à 1,25 0/0 ne dissolvent pas 
aussi des matières complexes de même nature que la cellulose, mais 
moins résistantes aux aclions extérieures. Ces matières étaient jusqu'ici 
comptées comme ertractif, de sorte que la distinction de l'extractif 
et de la cellu lose serait au fond très superficielle. C’est en effet ce qui 
a lieu. A côté des celluloses, il y a, dans les végétaux, un groupe de 
corps analogues, plus facilement attaquables par les acides étendus, 
avec formation de sucres. Schulze', qui a surtout attiré l’attention sur 
eux, propose de les appeler hémi-celluloses. Je ne vois pas l'intérêt 
qu'il peut y avoir à recommencer pour ces hémi-celluloses ce qui a si 
mal réussi pour les celluloses, et à donner un nom commun à des mé- 
langes de corps divers. 

Car ces hémi-celluloses sont aussi des substances complexes. La 
première en date a été découverte par Schulze et Steiger dans les 
enveloppes épaissies des graines de Lupinus Luteus. Elle se trouve 
naturellement dans les matériaux enlevés par l’ébullition dans l’acide 
sulfurique à 1,25 0/0, et elle donne du galactose et un pentaglucose, 
probablement de l'arabinose. Cette substance a été retrouvée depuis 
dans les graines de Faba vulgaris et de Soya hispida. Les graines de 
café contiennent aussi un hydrate de carbone transformable en galac- 
tose. Il y en a vraisemblablement un autre tout pareil dans le coco, la 
datte et les graines de Tropæolum majus, de Pœonia officinalis et de 
Impatiens balsamina, car, avec toutes ces graines, on trouve, dans les 
produits du traitement par l’acide sulfurique étendu, une substance 
qui, traitée par les acides concentrés, donne un glucose transformable 
par oxydation en acide mucique et quiest probablement du galactose. 

A côté de l'hydrate de carbone donnant du galactose, il y en a deux 
autres donnant dans les mêmes conditions du mannose * et de l’arabi- 
nose. Rappelons que Stone et Tollens ont trouvé de l’arabinose et du 
xylose dans les produits de l’action des acides sur la drêche, et nous 
conclurons deux choses : 1° que dans ce que les analyses de matières 


4. Ber. d. d. chem. Gesell., t. XV, p. 290. 
2. Ress, Ber. d. d. chem. Gesell.,t. XXII, p. 609, ScxuLer et Steicer, /4.,t, XXIIL, 
page 3110. 


1906 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 


alimentaires citent et comprennent sous la rubrique d’extractif, 
il y a un mélange très complexe; 2° qu'il y a des matériaux de 
même constitution que la cellulose proprement dite, et n’en diffé- 
rant qu’en ce qu’ils se laissent attaquer plus facilement par les acides 
étendus; 3° qu’on ne saurait donner un nom commun, pas plus celui 
de cellulose que celui d'hémi-cellulose, à des substances qui sont des 
mélanges en proportions diverses de substances n’appartenant pas au 
même type chimique. 

Poursuivons, car ce n’est pas fini. Nous venons de passer de la 
cellulose inattaquable par l'acide sulfurique à 1,25 0/0 à la cellulose 
des semences de lupin, moins résistante, qui entre facilement en so- 
lution dans l'acide sulfurique ou chlorhydrique à 1/100. Nous trouvons 
maintenant devant nous sur l'échelle la substance nommée depuislong- 
tempsamyloïide. C'estencoreunhydrate de carbone donnant du glucose 
sous l’action des acides. Elle ressemble d’un autre côté à l’amidon, en 
ce que l’iode la colore en bleu. C’est un anneau qui rattache cet 
amidon aux celluloses. On en trouve dans les semences de lin, de 
Tropæoluin majus, de pivoine officinale et de balsamine, et Kubn'‘ a 
trouvé, dans les graines de lin et de lupin, des parois cellulaires colo- 
rables directement en bleu par l’iode, ce qui est l'indice de la pré- 
sence de cette amyloïde. 

Enfin, à un niveau inférieur, comme puissance de résistance, nous 
trouverons les amidons, les dextrines et les sucres, toutes substances 
probablement encore complexes, passant les unes aux autres par des 
transitions insensibles, et que tout nous convie à considérer comme 
facilement transformables les unes dans les autres par les actes de la 
vie végétative. Sans qu’on puisse pénétrer encore les causes et les con- 
ditions de toutes ces transformations inverses, on peut dire qu'il y en 
a qui concourent à former des matériaux de réserve, d’autres qui 
tendent à faire constamment rentrer ces matériaux en réserve dans le 
courant général. 

Autant que nous pouvons le voir, cette création de matériaux de 
réserve procède de deux mécanismes bien différents. Il peut d'abord y 
avoir des changements de type chimique, qui font passer un hydrate 
hexatomique de carbone à l'état d hydrate pentatomique, par exemple. 
Nul doute que les deux hydrates ne soient inégalemernt altaquables 
par les cellules vivantes, aussi bien celles des microbes que celles des 
êtres vivants. C’est ainsi qu'on trouve en quantités considérables des 
pentoses dans les déjections des animaux de la ferme, alors que les 
hexoses ont à peu près complètement disparu. C’est probablement à 
une action protectrice de cette nature qu'il faut rapporter la présence 


1. Kuun, Die siweckmassigste Ernahrung d. Rindiwieh’s, 40e édition, p. 56. 


LÀ 1 


REVUES ET ANALYSES. 191 


fréquente de celluloses donnant des pentoses dans les semences des 
graines, dans les léguments chargés de protéger l’embryon pendant 
les premiers jours de son développement, contre l’action des microbes 
du sol où la graine est enfouie. 

Une autre mode de formation de matériaux de réserve est une 
modification d’élat, moitié chimique, moitié physique, qui correspond 
à la coagulation des substances albuminoïdes, ou plus généralement 
des substances colloïdales. La cellulose est une de ces substances, et sa 
résistance aux agents extérieurs dépend de son degré de cohésion. 
La façon dont elle agit sur le milieu qui la contient, les substances 
colloïdales ou cristallisables qu'elle entraîne, la puissance avec laquelle 
elle les cède ou les retient, dépendent alors, comme on le sait, de la 
composition du milieu extérieur. Toutes ces propriétés peuvent varier 
beaucoup pour de faibles variations dans la composition de ce milieu. 
En d’autres termes, nous avons là non des aclions chimiques, mais 
des actions moléculaires, ou, pour mieux dire, ce sont non des combi- 
naisons chimiques, mais des combinaisons moléculaires qui semblent 
jouer le rôle principal. 

C'est là sans doute le secret de toutes ces observations qui ont fait 
créer, pour les expliquer, tant de substances mères dans les liquides 
de l’économie végétale ou animale : la Wultter-substanz de la caséine, 
de la fibrine, la substance mère de la gomme de bois dans les expé- 
riences de Schulze que nous avons signalées plus haut. De ce qu’une 
substance entraînée dans un coagulum, et plus ou moins moléculai- 
rement combinée avec lui, n’obéit pas à ses réactions ordinaires, il ne 
faut pas conclure qu’elle n'existe pas en nature dans le coagulum, et 
qu'elle a besoin d’être dégagée d’une Mutter-substanz. De ce que 
l’eau ne s’évapore pas à 1000, dans les précipités de phosphate 
bibasique de chaux étudiés dans mon travail récent, il ne faut pas 
conclure qu'elle n’existe pas en nature. De ce que l’albumine purifiée 
à fond par dialyse retient obstinément du phosphate de chaux et du 
phosphate de fer, il ne faut pas conclure qu'il y a dans l’albumine une 
substance mère de ces deux phosphates. Il faut seulement se dire 
que les propriétés de tous ces corps coagulés ou mélangés à des coa- 
gulums ne sont pas les propriétés normales. L’immobilisation, la 
mise en réserve de ces corps, leur remise en liberté au moment 
opportun dépendent d’actions aussi variables et aussi contingentes 
que celles qui président à l’évolution des coagulums albuminoïdes. 

Comme conséquence, la digestibilité de toutes ces substances, 
la façon dont elles traversent le canal intestinal de divers animaux, 
n’est pas une qualité qui leur soit propre. Elle dépend aussi de l’animal, 
de son espèce, et même de l’état de son canal digestif au moment où 


192 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


celui-ci entre en jeu. Tout ce qu'on peut dire, c’est que tous les divers 
hydrates de carbone que nous venons de découvrir dans les celluloses, 
et qui ne se comportent pas de même au point de vue de leurs réac- 
tions chimiques, ne se comportent pas non plus de même pour un 
même animal dans des conditions données, et que par conséquent 
une étiquette qui les range dans un même sac et qui leur donne la 
même place dans les analyses des matières alimentaires ne peut qu'être 
une étiquette fallacieuse, que la vraie science doit faire disparaître. 
Elle s’applique en ce moment à faire l’inventaire du sac, ce qui est 
infiniment plus utile, et ce sont ses premiers pas dans celte voie que 
nous avons tenu à faire connaître à nos lecteurs. 
Dx. 


STRICKER. — Studien zur Cholerafrage, 1893. Brochure de 42 pages. 


L'insuflisance de l’expérimentation sur les animaux, pour tout 
ce qui concerne la microbie du choléra, à fait recourir à l’homme 
dans le but d’élucider les questions pendantes sur cette maladie. 

Les expériences connues de MM. de Pettenkofer et Emmerich, exécu- 
tées sur eux-mêmes, n’ont donné que des résultats peu précis et sujets 
à controverse. M. le professeur Stricker, de Vienne, a entrepris toute 
une série d'essais sur l’homme, afin d'obtenir une réponse plus nette. 
Yest M. Hasterlik qui a été chargé d’exécuter ces expériences. Il a 
opéré sur lui-même, ainsi que sur cinq autres personnes : son garçon 
de laboratoire, un docteur en médecine et trois internes. 

Une note préliminaire a été publiée au commencement de l’année, 
mais c’est seulement en septembre qu’a paru la brochure de M. Stricker 
renfermant les détails des expériences si intéressantes de M. Has- 
terlik. 

Quoique les vibrions employés provinssent de cas très graves de 
choléra, et malgré certaines dispositions favorisant l'infection, ni 
M. Hasterlik, ni aucun de ses collaborateurs ne prirent le vrai choléra 
asiatique, avec ses symptômes si caractéristiques. Dans le cas le plus 
grave, — celui de M. Rose, — la diarrhée et les vomissements, surve- 
nus après l’ingestion de 1 ce. c. de culture en bouillon, n'ont été 
accompagnés ni des crampes, ni de l’hypothermie classiques. La tem- 
pérature du corps était, au contraire, fébrile; l’urine, sécrétée en 
quantité moindre que la normale, ne renfermait pas d’albumine. Les 
selles n'étaient point riziformes. et les vomissements ne présentaient 
pas non plus les caractères typiques du choléra. 

S'appuyant sur tous ces faits, M. Stricker, ainsi que M. Drasche et 


REVUES ET ANALYSES. 193 


d’autres médecins, appelés en consultation, diagnostiquèrent la 
maladie de M. Rose comme une sorte de gastro-entérite, différente du 
vrai choléra. 

Tandis que, dans ce cas, les vibrions ont été favorisés par l'inges- 
tion préalable de 100 c. c. d’une solution de bicarbonate de soude à 
1 0/0, dans une autre expérience (faite sur M. le docteur Stockmayer), 
les microbes ont manifesté leur action pathogène sans alcalinisation 
préalable du suc gastrique. Mais, ici aussi (malgré l'ingestion de toute 
une culture sur gélatine), il ne se produisit qu'une diarrhée moyenne 
(non riziforme), sans vomissements ni crampes, et avec une hyper- 
thermie jusqu’à 380,6. 

Des six autres expériences, trois ont été exécutées sur M. Hasterlik 
lui-même, sans provoquer un état pathologique quelconque. Peut-être 
que la première ingestion, faite dans des conditions défavorables (faible 
quantité de vibrions avalés sans alcalinisation du sue gastrique), 
a produit une sorte de vaccination et a préservé l’expérimentateur 
contre l'effet pathogène d’autres cultures de vibrions. 

Dans deux expériences (sur MM. Altenburger et Graf), les microbes 
cultivés sur gélatine et en bouillon, et avalés sans alcalinisation de 
l'acidité gastrique, n’ont produit aucun effet pathogène. Dans une 
autre expérience (sur M. Schütz), où l’ingestion de vibrions avait été 
précédée de celle de bicarbonate de soude (1 gr. dans 100 c. c. d’eau), 
il s’ensuivit une diarrhée légère qui a duré peu de jours. 

Comme les expériences de MM. de Pettenkofer et Emmerich, celles 
de M. Hasterlik n’ont donc donné que des résultats sujets à des inter- 
prétations controversées. M. Stricker l’admet lui-même, signalant 
que, d’après l’avis des bactériologistes viennois, le cas de M. Rose était 
un vrai choléra, tandis que, d’après l’opinion des cliniciens, il ne devait 
nullement être diagnostiqué comme tel. M. Stricker lui-même penche 
vers l'avis des médecins. 

Il est incontestable que la maladie expérimentale de M. Rose ne 
peut être considérée comme un cas de choléra classique, reconnais- 
sable au premier coup d'œil. Mais, d'un autre côté, il n’est pas moins 
vrai qu'il s'agissait chez lui d’un de ces choléras atypiques qui se ren- 
contrent souvent pendant les épidémies de choléra asiatique. On sait 
bien que dans ces cas les phénomènes classiques peuvent faire défaut, 
les selles peuvent ne pas être riziformes, l'urine peut ne pas renfermer 
d’albumine, l’hypothermie peut céder la place à une hyperther- 
mie, etc. 

Cette interprétation ne présente aucun doute depuis la preuve 
fournie à l’Institut Pasteur (V. ces Annales, VII, 583) de ce que les 
vibrions de Koch peuvent produire chez l'homme le choléra asiatique 


19 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


EC 


dans sa forme algide, accompagnée de diarrhée riziforme, de vomis- 
sements, de crampes, d’anurie et d'albuminurie. Le cas auquel je 
fais allusion se distinguait par ceci que ni les bactériologues, ni les 
cliniciens n'ont eu la moindre hésitation à le diagnostiquer comme un 
cas de vrai choléra-morbus, et que, sous ce rapport, il n’y a pas eu la 
moindre divergence de vues. 

Les expériences de M. Hasterlik démontrent encore une fois ce 
fait fondamental que les vibrions cholériques, ingérés en grande 
quantité et dans des conditions exceptionnellement favorables pour 
l'infection, peuvent rester sans effet sur l’homme, ou bien ne donnent 
qu'une cholérine peu grave et pas typique. En d’autres termes, 
l'homme est une espèce, en général, peu sensible pour le microbe du 
choléra. 

Dans les discussions soulevées à la suite de la communication de 
M. Hasterlik, on a posé souvent la question de la virulence des vibrions 
employés. On a pensé, notamment, que le faible effet des microbes 
pourrait s'expliquer par une virulence atténuée. Ilest vrai que M. Has- 
terlik n’a pas fait les expériences nécessaires pour établir la virulence 
de ses vibrions vis-à-vis d'animaux de laboratoire. Mais le fait que 
les virgules employées étaient tout récemment isolées de cas de 
choléra typiques rend très peu probable l'hypothèse de l’atté- 


nuation. 
EL. METCHNIKOFF. 


A.C. AgBorr.— Résultats de l’inoculation de vaches laitières avec des 
cultures de bacille de la diphtérie. (Journal of Pathology, t. IE, p. 35.) 


On sait que le lait a été accusé de propager la diphtérie, sans qu’on 
sache pourtant s’il a puisé ces propriétés infectieuses sur Panimal qui 
l’a fourni, ou si elles lui viennent d’un contact impur depuis la traite. 
Dans trois épidémies de diphtérie survenues en Angleterre, celle du 
nord de Londres, en 1878, de Yorktown et de Camberley, en 1886, et 
de Enfield et Barking, en 1888, l'enquête a paru prouver que le lait était 
infectieux dès sa sortie du pis, conclusion très grave, qui sollicitait 
l'expérience. En vue d'éclairer ce sujet, M. Klein a inoculé sous la peau 
de deux vaches saines 1 c. c. de culture en bouillon du bacille de la 
diphtérie. L’inoculation amena une courte fièvre, et fut suivie d’une 
tumeur peu marquée autour du point piqué. L'un des animaux com- 
mença, le douzième jour, à se montrer souffrant, et mourut le quator- 
zième. L'autre animal était extrémement malade lorsqu'il fut tué, le 
trente-cinquième jour après l’inoculation. 


REVUES ET ANALYSES. 795 


Dans chacun d'eux s'était produit, au bout de six à dix jours, une 
éruption sur la mamelle et les pis, commencant par une papule, arri- 
vant par la vésicule à la pustule véritable, et dont la lymphe, inoculée 
à deux veaux, amena chez eux des désordres pareils à ceux des 
vaches qui avaient fourni le virus. Dans ces vaches, on a trouvé par- 
tout, à l’autopsie, même dans ce qui restait de la tumeur développée 
au point d'inoculation, le bacille de la diphtérie; mais ce qu’il y avait 
de plus grave, c’est qu'on a trouvé des bacilles de la diphtérie dans le 
lait puisé au moment où l’éruption apparaissait sur la mamelle. Plus 
tard, il est vrai, il n’y en avait plus‘. 

En somme, ces expériences corroboraient donc l’opinion qui attri- 
buait le caractère infectieux du lait à la vache elle-même, et celte 
opinion avait d'autant plus de gravité qu'on assimilait à la vraie 
diphtérie une maladie de la vache, bénigne d’ordinaire, et qui donne 
de fausses membranes à l’arrière-gorge. 

Lôffler avait émis, au Congrès médical et international tenu à Ber- 
lin, en 1890, quelques doutes au sujet de la conclusion à tirer de ces 
expériences. M. Abbott a repris l'étude de ces questions, et en opé- 
rant exactement comme M. Klein, c’est-à-dire en inoculant 1 c.c. de 
culture en bouillon du bacille diphtérique à deux vaches, il a trouvé des 
résultats sensiblement différents de ceux de son prédécesseur. L'un des 
animaux est mort en seize jours. Il était très tuberculeux. Il n’a montré 
d’éruption à aucune des phases de la maladie. Son lait, étudié huit fois 
dans l'intervalle compris entre l’inoculation et la mort, n’a jamais pré- 
senté de bacilles diphtériques. Le second animal n’a non plus montré 
aucune éruption ni même aucune maladie bien apparente jusqu’au 
vingtième jour, moment où il aété sacrifié. Son lait, examiné avant 
et après inoculation, à présenté les mêmes caractères, et il n'y a pas 
eu apparition de bacilles de la diphtérie. 

En somme, ces expériences diminuent, si elles ne les font pas dis- 
paraître, les appréhensions légitimes soulevées par les résultats de 
Klein. Dans tous les cas, il serait imprudent de triompher de ces 
résultats contradictoires pour dire que le danger n'existe pas. Les deux 
expérimentateurs s'accordent en ceci, que le bacille peut tuer les vaches 
laitières et se trouver à leur mort dans les tissus. Une fois qu’il existe 
dans les organes, le fait de sa pénétration dans le lait est possible. II 
peut être plus ou moins facile, se réaliser plus ou moins souvent. Le. 
danger peut être plus ou moins grand, mais il existe. M. Abbott avoue 
lui-même qu’il n'aurait pas été surpris de retrouver ce bacille dans le 
lait de ses animaux, car, avec M. Ghriskey, il lui est arrivé de voir ce 
même bacille diphtérique, inoculé sous la peau des cobayes, passer 

4 Étiologie de la diphtérie, Nineleenth annual Report, etc., 1889-1890. 


796 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


dans l’appareil lymphatique du péritoine, transporté sans doute par 
les leucocytes du sang. Un bacille qui voyage à l’état vivant dans un 
leucocyte peut arriver partout, même et surtout dans le sang. La 
question n’est donc pas encore résolue. Il faut la reprendre. 

Dx. 


Sr. Friis. — Contribution à la question du danger de l'infection 
tuberculeuse par le lait ordinaire. (Deutche Zeitschr. f. Thiermed., 
mars 1893.) 


Nous avons déjà insisté à plusieurs reprises, dans ces Annales, sur 
le danger que peut faire courir l'emploi sans précautions de lait de 
vaches tuberculeuses, alors même que la tuberculose dont elles sont 
atteintes ne s’est pas portée sur le pis et affecte des organes plus 
ou moins éloignés de la mamelie. Nous avons aussi parlé des expé- 
riences qui semblaient avoir un peu atténué le danger provenant 
de cette origine, en montrant que le lait est d’autant moins dange- 
reux, et produit, par l'inoculation, des désordres d'autant moins 
étendus qu’il est moins riche en bacilles de Koch, de sorte que, 
lorsque le lait d'une vache tuberculeuse est dilué dans le lait d’un 
certain nombre de vaches saines, il devient à peu près inoffensif. ‘Il 
résulte de là une conclusion pratique. Lorsqu'on est sûr d'un 
animal au point de vue de la tuberculose, c’est-à-dire lorsqu'il n’en 
montre aucun symptôme extérieur et qu’il a en outre résisté à l'in- 
jection exploratrice de tuberculine, on peut, avec grand avantage, 
se borner au lait de cet animal. Par contre, il peut devenir très péril- 
leux d’avoir toujours recours au lait de la même vache lorsque 
celle-ci est tuberculeuse, et elle peut l'être souvent sans le paraitre, 
comme l’ont montré une foule de faits récents. IL ÿ a certainement 
des familles chez lesquelles la tuberculose ne s’est répandue que 
parce qu’elles nourrissaient et soignaient, en s’en réservant le lait, 
une vache tuberculeuse à leur insu. Le danger est bien moindre quand 
on consomme du lait d’une vacherie, ou un mélange de lait de plusieurs 
fermes, comme celui qu’on apportesurles marchésdes villes. La propor- 
tion d'animaux tuberculeux est variable dans un troupeau et peut 
atteindre parfois un niveau assez élevé, comme nous en avons indiqué 
des exemples; mais, même alors, il y a toujours dilution du lait suspect 
de tuberculose, car il y a toujours des animaux sains, et le lait d’une 
vacherie connue esten somme préférable à celui d’une vacheinconnue. 

Le remède général à cette situation est évidemment la création, 


REVUES ET ANALYSES. 10 


dans tous les centres de consommation, de laiteries exerçant une sur- 
veillance attentive sur la santé des animaux fournissant le lait. Il en 
est, comme on sait, qui fonctionnent ainsi et rendent de grands ser- 
vices. Les expériences de M. Friis, faites à Copenhague, montrent que, 
même dans un pays où les questions laitières sont à l’ordre du jour, 
il y a quelque chose à faire dans le sens que nous venons d'indiquer. 

M. Friis s’est proposé de rechercher si le lait ordinaire, vendu au 
détail à Copenhague, est infecté de bacilles tuberculeux, et dans quelle 
mesure. Ï! faisait pour cela prélever sur le marché, et enfermer immé- 
diatement dans des flacons stérilisés, des échantillons de lait, dont il 
inoculait de 5 à 10 centimètres cubes dans le péritoine d'animaux d’ex- 
périence. Chose singulière, tous les cochons d’Inde ainsi inoculés sont 
morts en moins de douze heures d’une affection septique. Il en a été 
de même d’un grand nombre de lapins. Je ne crois pas que nulle part 
ailleurs ces accidents d'expérience se soient produits en aussi grande 
proportion, et il est curieux de voir que dans toute üne région les 
laits soient aussi riches en agents septiques. 

: Quoi qu'il en soit, on a naturellement considéré comme manquées 
les expériences d’inoculation de la tuberculose qui ont abouti à une 
septicémie, et on les a éliminées dans l'examen des résultats. Cette dis- 
traction faite, il est resté 28 échantillons de lait de diverses prove- 
nances, dont quatre ont donné la tuberculose aux deux lapins aux- 
quels on avait inoculé chacun d'eux. C’est environ une proportion de 
1/5 de laits tuberculeux dans le commerce de détail d’une grande ville. 

Armé de cette notion, on a pu se retourner du côté des vacheries 
ou des troupeaux qui avaient fourni les laits contaminés, et on a 
découvert partout un ou plusieurs animaux tuberculeux; chez certains, 
la tuberculose n’était pas apparente, ou ne se révélait que 
par des signes douteux, de sorte qu'il a fallu une longue observation 
pour assurer le diagnostic; mais il y a un exemple où la responsabilité 
du nourrisseur était plus fortement engagée, et que je cite pour 
montrer avec quelle insouciance se fait parfois ce commerce du lait, 
qui revêt dans les imaginations des aspects si champêtres, et évoque 
les souvenirs de l’âge d’or. Un échantillon de lait tuberculeux prove- 
nait d’un lot de 30 vaches bien nourries, mais dont une était atteinte 
d’une tuberculose avancée des quatre quartiers de la mamelle. Son 
lait était devenu une sécrétion jaune avec quelques coagulums blancs, 
et, examiné au microscope, présentait de nombreux bacilles tubercu- 
leux. La vache était en outre atteinte de tuberculose pulmonaire et 
était en si misérable condition qu’elle pouvait à peine se lever. Il 
est vrai que cette vache était en traitement au moment où la visite 
de la vacherie a été faite, et que son lait n’était pas mélangé 


198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


au reste, depuis une quinzaine de jours; mais il l'avait été couram- 
ment jusque-là, alors que la bête avait déjà ses mamelles gonflées et 
une tuberculose apparente. Parmi ses compagnes d’écurie, il y en 
avait en outre plusieurs très suspectes à raison de leur mode de res- 
piration et du gonflement des ganglions sur divers points du corps. Il 
est clair que le lait de ce troupeau était hautement dangereux, et 
n'aurait jamais dù entrer dans la consommation. 

A cela on dira, comme on l’a déjà fait, que ces expériences, malgré 
leur netteté, ne prouvent pas grand'chose, que ces laits ne se sont 
révélés dangereux que lorsqu'on les à inoculés directement dans le 
péritoine de lapins, qu’il n’est pas sûr qu'ils n'auraient pas pu passer 
impunément par le canal digestif. En effet, cela n’est pas sûr; ce qui 
veut dire, en retournant la phrase, qu’il n’eût pas été sûr de les boire, 
et que les hommes intelligents qui font cette objection ne consenti- 
raient sûrement pas à consommer, sans le faire bouillir, un pareil lait, 
précisément parce qu'ils sont intelligents. Quant aux autres, on ne peut 
évidemment s'arrêter à leurs objections. Concluons que le plus sage 
est d'éliminer ces laits dangereux, puisque cela est possible : il 


suffit de le vouloir. 
IDSXe 


PErcy-FRaxckLAND et J. MAc-GRecor. — Acide sarcolactique par fer- 
mentation de lacide lactique inactif. (Trans. of. chem. Soc., 1893, 
p. 1028.) 


Après avoir rappelé les tentatives de Lewkowitsch et de Linos- 
sier pour obtenir un acide lactique actif par fermentation élective de 
l'acide lactique neutre, MM. Percy-Frankland et Mac-Gregor disent y 
être arrivés avec un bacille qu’ils décriront plus tard, et qui, introduit 
dans une solution de lactate de chaux inactif, additionnée d’un peu de 
peptone, la fait fermenter très activement, en attaquant de préférence 
le lactate de chaux droit, contenant de l'acide lactique gauche. Le lac- 
tate de chaux gauche, correspondant à l’acide sarcolactique, est plus 
résistant, et peut être retrouvé dans le liquide et caractérisé très net- 
tement comme tel. Mais il faut pour cela interrompre la fermentation 
à un certain moment. Si on la laisse s'achever, le sarcolactate de chaux 
est atteint à son tour. 

Cette fermentation du lactate de chaux ressemble à une autre fer- 
mentation du glycérate de chaux, étudiée par les mêmes savants, et 
produile par leur bacillus ethaceticus. Là aussi, le glycérate droit est 
attaqué de préférence, le gauche restant comme résidu, Cette fermen- 


CHU” 


REVUES ET ANALYSES. 799 


tation de glycérate de chaux a fourni en outre un très curieux exemple 
d'adaptation. A l’origine des études, le bacille en question ne touchait 
pas du tout au glycérate gauche. Il est arrivé ensuite, par une série 
de cultures continues dans le glycérate inactif, à s’accommoder du 
sel gauche, qu'il attaque un peu moins facilement pourtant que le sel 
droit, de sorte que, pour obtenir un rendement convenable de sel 
gauche, il faut ou interrompre la fermentation avant qu'elle soit 
achevée, ou bien employer un bacille non acclimaté, et cultivé jusque 
là en dehors de tout contact avec le glycérate. Rien de plus curieux 
que ces faits ; il va falloir songer à l’éducation des microbes. 
Dx. 


Porne. — Résolution de l'acide lactique en ses composants actifs. 
(Trans. 1893, p. 1143.) 


M. Pasteur avait indiqué deux méthodes pour résoudre un corps 
racémique en ses composants actifs; la fermentation élective, la cris- 
tallisation des sels d’alcaloïdes. Elles ont toutes deux servi pour la 
résolution de l’acide lactique inactif. M. Gernez en avait indiqué une 
troisième, celle des amorces dans une solution sursaturée, que M. Pur- 
die vient de mettre en œuvre. Une solution convenablement concen- 
trée de lactates neutres de zinc et d’ammonium donne à volonté des 
cristaux dextrogyres, lévogyres ou inactifs, suivant le cristal qu’on 
fait servir d’amorce. Nous reviendrons sur cette question, sur laquelle 
J'ai recueilli quelques documents nouveaux. L'étude de la solubilité 
des Jactates est non pas à refaire, mais à faire. Dx. 


ENS'DÉPUT PASTEUR 


Personne trailée morte de rage. 


GARREAU (Léon), 3 ans, demeurant à Colombes (Seine). A été mordu le 
15 août par un chien reconnu enragé à l’autopsie par un vétérinaire. 
L'enfant portait à la main droile cinq morsures ayant bien saigné. Il a été 
traité à l'Institut Pasteur du 16 août au 2 septembre. Le 1*° septembre, 
l'enfant est pris de rage et il meurt le 6, après avoir présenté les symptômes 
caractéristiques, nous écrit le D' Marelle. 


800 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR. 


STATISTIQUE! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE — OCTOBRE 1893. 


A B C 
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Morsures à la tête | simples... . .| :| 41 4 | » 16) 9 |? 1 \4 
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Cuautérisations efficaces . . . . . . . . . I ON NES PROS OR 
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Cautérisations! efficaces." "0 sx. DA Se PSE ME ES »[» [» 
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Pas de cautérisation. : : +... 3)» | » | 48, » | » | 8] » |» 
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Cautérisations efficaces . . . . . . . . . pl» fs ls | » polo |: 
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( Français et Algériens .| |12|42 81! 26) 
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1. Les animaux mordeurs ont été : chiens, 119 fois; bœufs: 
5 fois; chats, 3 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cie. 


1me ANNÉE 


DÉCEMBRE 1893. N° 12. 


ANNALES 


L'INSTITUT PASTEUR 


RECHERCHES SUR LES HÉMATOZOAIRES DES OISEAUX 


Ier Mémoire, PAR M. N. SAKHAROFF pe Tiruts 
(Avec la planche XV.) 


La découverte des hématozoaires chez les oiseaux, faite par 
M. Danilewsky, a été confirmée par plusieurs observateurs. 
Grâce aux travaux de MM. Celli, Sanfelice, Grassi, Pfeiffer et 
principalement de M. Danilewsky, la morphologie de ces para- 
sites est à présent bien connue. En abordant ce sujet, je laisserai 
de côté les faits solidement établis par les observateurs sus- 
nommés, et je ne m'arrêterai que sur les questions qui ne sont 
pas encore résolues. Telle est la question de la nature des corps 
à flagelles et des leucocytozoaires. 


Les corps à flagelles. 


Ces formes parasitaires, découvertes aussi par M. Laveran 
dans le sang des hommes malariques, sont bien connues de ceux 
qui s'occupent des hématozoaires. Néanmoins ces corps restent 
jusqu’à présent énigmatiques. J’exposerai ici les opinions des 
quelques savants sur ce sujet. Laveran regarde les corps à 
flagelles comme les éléments les plus caractéristiques parmi les 
parasites du paludisme. Il attribue au flagelle détaché une vie 
indépendante. M. Danilewsky croit que les corps à flagelles, 
appelés par lui polimitus, sont une espèce séparée d’hémato- 
zoaires, véritable infusoire du sang analogue au Grassia rana- 
rum (Fisch). D’après Grassi et Felleti, les corps à flagelles sont 
des formes pathologiques. Ils se forment hors de l'organisme et 
leur formation précède la mort des parasites. Canalis regarde 
ces formes comme un stade évolutif des hématozoaires. 

1 


802 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 


Cette variété d’opiuions, due à l’absence d'arguments incon- 
testables, prouve que la nature véritable de ces corps est encore 
inconnue. 

En étudiant cet été les corps à flagelles, je me suis convaincu 
que leur observation à l’état frais est peu instructive, parce que 
nous ne pouvons voir la structure fine du parasite, qui se détruit 
vite sous nos yeux. En outre, ses mouvements énergiques en 
empêchent l'observation détaillée. Il semble donc nécessaire de 
fixer le parasite et de le colorer ensuite. J'ai déjà décrit une 
méthode de coloration par le violet de gentiane, mais cette 
méthode ne permet pas de saisir la structure du parasite, à 
cause de la coloration uniforme qu'elle lui donne. J'ai mieux 
réussi en colorant ces corps par le procédé de M. Romanowsky. 
Après la fixation de la préparation pendant deux heures à la tem- 
pérature 115-120°, on la colore par le mélange d’éosine et de 
bleu de méthyle pendant vingt-quatre heures. 

Les parasites se colorent en bleu, leurs noyaux en rouge ou 
violet, les noyaux des hématies en violet foncé (presque noir), 
leur protoplasme en rose ou grisâtre. 

J'ai fait mes recherches sur les corps à flagelles chez les cor- 
beaux jeunes retirés de leurs nids. Dans le sang de ces corbeaux, 
qu’on m'avait rapportés des régions les plus paludéennes du 
Caucase, j'ai trouvé ces formes parasitaires en grand nombre, 
même dans les préparations desséchées immédiatement après le 
prélèvement du sang. Ils se rencontrent en plus grand nombre 
dans les préparations conservées à l’état frais pendant cinq 
à dix minutes dans la chambre humide et ensuite desséchées. 

On sait que les corps à flagelles, avant leur formation, sont 
inclus dans les hématies, Commençons donc notre description 
par cette forme intracellulaire. Elle est représentée sur la pl. XV. 
L'intérêt principal consiste dans la structure du noyau du para- 
site, bien visible grâce à sa grandeur et sa coloration intense en 
rouge. Ce noyau présente ou un corps avec ses jets, ou une 
agglomération plus ou moins serrée de filaments chromatiques 
(fig. 1-3). Ces filaments présentent parfoisune forme qui rappelle 
celle des figures karyokinétiques (v. fig. #, 5). Les vraies figures 
karyokinétiques (voir fig. 6) se rencontrent rarement. Ce fait, 
peut-être, s'explique par la sensibilité extrême de ces corps 
vis-à-vis des influences extérieures. 


SUR LES HÉMATOZOAIRES DES OISEAUX. 803 


Sur les figures 7-12 nous voyons les parasites immédiatement 
avant leur excapsulation des hématies ; sur les figures 13-17 ils 
sont déjà excapsulés. Dans toutes ces formes nous trouvons le 
même procès: la séparation du noyau en quelques filaments 
isolés et la sortie des filaments du parasite. Les filaments sortis, 
qui sont évidemment les flagelles, ne se distinguent en rien des 
filaments encore inclus dans le parasite. Tous les deux ont par- 
fois à leur extrémité le renflement souvent décrit chez les 
flagelles, la même forme courbe, et sont colorés identiquement 
en rouge ou violet. Les mêmes filaments se rencontrent à l’état 
libre dans les différentes parties de la préparation. Le parasite 
abandonné par les filaments chromatiques se détruit : il se 
gonfle et se colore difficilement par le bleu de méthylène. Enfin 
ses contours deviennent invisibles, et nous trouvons à sa place 
seulement un amas de granulations de mélanine et quelques 
filaments chromatiques (v. fig. 18). Je crois que ces derniers se 
détruisent aussi : on peut le voir sur les préparations fraîches. 
A priori, il est impossible d'admettre que les filaments séparés 
du protoplasme soient capables d’un développement ultérieur. 

Que signifie donc la sortie des filaments chromatiques au 
point de vue biologique ? 

J'admets que nous avons ici affaire à un trouble dans la 
karyokinèse, provoqué par le changement de la température et 
d’autres conditions physico-chimiques. En effet, j'ai vu quelques 
fois que le protoplasme des corps à flagelles se divisait en deux 
parties. Cette division est fréquente chez les corps à flagelles des 
leucocytozoaires, comme nous verrons plus loin. Par analogie, 
nous devons regarder aussi la formation des flagelles dans le 
sang malarique de l’homme comme un procès de sortie des 
filaments chromatiques. Malheureusement l’observation est ici 
plus difficile, par suite de la disposition particulière du pigment 
dans les corps à croissants, qui se transforment en corps à 
flagelles. Ce pigment, en entourant de tous côtés le noyau, 
empêche de voir sa structure et son mode de scission, qui doit 
être sans doute karyokinétique. M. Romanowsky regarde la 
scission des parasites des fièvres tierces comme aussi karyoki- 
nétique. Comme ils donnent aussi des corps à flagelles, nous ne 
pouvons qu'être d’accord avec lui. 

La figure 20 représente l’autre forme mobile des hématozoaires, 


304 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


décrite par M. Danilewsky sous le nom de pseudo-vermiculus. Fest 
intéressant de comparer cette forme avec les corps à flagelles. Le 
pseudo- vermiculus a aussi deux phases d’existence : intracellu- 
laire etlibre. Mais, contrairement aux corps àflagelles, cette forme 
parasitaire a un petit noyau compact et arrondi, qui reste sans 
aucune modification après la sortie du parasite des hématies. En 
errant entre les hématies en forme de fuseaux mobiles, elle se 
nourrit de l’hémoglobine des hématies : on peut voir que plusieurs 
hématies touchées par le parasite perdent leur coloration jaune 
et deviennent invisibles. Ces particularités prouvent que cette 
forme parasitaire, contrairement aux corps à flagelles, n’est pas 
pathologique. Ainsi nous pouvons diviser les hématozoaires 
libres des oiseaux en deux catégories : les parasites avec 
un noyau normal, ou les formes vivantes {corps fusiformes), et 
les parasites avec un noyau détruit où absent (les formes mou- 
rantes ou les corps à flagelles). De ce que la structure de leurs 
noyaux est tout à fait diverse, on peut conclure que ces deux 
catégories appartiennent à deux espèces distinctes de parasites. 

À notre avis, la sortie des filaments chromatiques des parasites 
et leur mouvement énergique à l’état libre dans le plasma du 
sang est un fait qui peut avoir une valeur générale dans la 
biologie cellulaire. 


Leucocytozoaires chez les oiseaux. 


Les leucocytozoaires ne nous sont connus que grâce aux 
observations de M. Daailewsky, qui les a décrits brièvement dans 
ses ouvrages divers. Dans sa Parasitologie comparée du sang, 
il mentionne les sphères incolores sans mélanine, légèrement 
granulées, de dimension qui surpasse toutefois la dimension des 
hémocytes, avec enveloppe contenant un grand noyau. Ces 
sphères, qu'il a trouvées dans le sang de la chouette, sont capables 
de se transformer en corps à flagelles. L'article français’ fournit 
des indications plus précises, et décrit ainsi ces formes : 

« Ces parasites ont l’aspect d’un grand corps fusiforme et 
incolore, dont la partie centrale est granuleuse. Le noyau allongé 
est disposé excentriquement. Quelquefois la masse granuleuse 
a une forme sphérique : une mince capsule incolore et légèrement 
plissée l'enveloppe distinctement. » 

4. Annales Pasteur, 1890, 


SUR LES HÉMATOZOAIRES DES OISEAUX. 805 


Il regarde ces formes comme un stade intracellulaire du 
développement du polimitus, qui diffère du polimitus développé 
dans les hémalies par sa dimension plus grande et le manque 
complet de granulations de mélanine. Il les nomme polimitus 
major. Une cytocapsule qui renferme un leucocytozoaire n’est 
pas, d’après M. Danilewsky, un leucocyte, mais est un héma- 
toblaste. Les formes jeunes des leucocytozoaires se rencontrent 
dans la moelle des os. Ce sont de petits corps ovales ou sphé- 
riques enveloppés par une couche presque homogène de proto- 
plasme. On n'a pas encore pu y constater de noyau. 

Dans le travail publié en allemand, M. Danilewsky commu- 
nique quelques faits qui ne sont pas d'accord avec ceux que nous 
avons mentionnés tout à l'heure : 1° daus les sphères granuleuses 
qui représentent le premier stade du polimitus, on peut voir 
in vivo un noyau rond, clair (représenté sur le dessin avec des 
contours très nets); 2° ces sphères, avant leur transformation 
en polimitus, donnent naissance à plusieurs corps homogènes de 
grandeur variée, munis de flagelles. Ce mode de formation des 
polimitus est propre aux leucocytozoaires, tandis que chez les 
hémocytozoaires les polimitus se forment en nombre unique. 

C’est tout ce que nous savons des leucocytoaires, et, comme 
la description donnée par M. Danilewsky est incomplète et laisse 
place à des malentendus à propos des questions indiquées, je 
crois devoir communiquer mes observations sur ces parasiles, 
que j'ai rencontrés en grande abondance chez diverses espèces 
d'oiseaux. Outre cela, je trouve ces parasites très intéressants au 
point de vue de la théorie phagocytaire. Nous avons ici affaire 
avec des êtres capables de vivre et de se multiplier dans les 
leucocytes, contrairement aux hémocylozoaires, qui périssent 
après leur englobement. Il faut chercher ici s’il y a lutte, dans 
le sens de M. Metchnikoff, entre l’organisme et les parasites, et, 
_s'ilenest ainsi, quels sont les moyens de défense chez les leuco- 
cytozoaires contre l’action phagocytaire des leucocytes. 

J'ai trouvé les leucocytozoaires chez les corbeaux, freux et 
pies. Quoiqu’ils présentent chez ces espèces d'oiseaux des 
formes analogues, néanmoins je préfère les décrire séparément 
pour chaque espèce. Dans ce mémoire, je me bornerai aux 
leucocytozoaires des corbeaux et des freux. 

A. Les leucocytozoaires des corbeaux. — Je les ai trouvés avec 


806 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


les parasites des hématies. Ils présentent le plus souvent les 
formes décrites par M. Danilewsky sous le nom de sphères granu- 
leuses, qui se transforment parfois en corps à flagelles. Nous ne 
répéterons pas ici leur description, faite par M. Danilewsky; 
notons seulement quelques détails supplémentaires. Dans le 
sang des corbeaux, ces formes ne présentent jamais la forme fusi- 
forme représentée par M. Danilewsky sur ses dessins. 

Je n’ai pas pu distinguer le noyau dans ces parasites à l’état 
frais. Dans les préparations colorées par le mélange d’éosine et 
de bleu de méthyle, on peut y voir une tache, d’une teinte rose, 
avec des contours indistincts (fig. 21). Comme cette tache 
s’observe dans la plupart des parasites, c’est évidemment le 
noyau, peu visible, grâce à la présence dans les parasites de 
nombreuses granulations colorées en bleu foncé. Outre les 
granulations, nous voyons dans plusieurs parasites de très petites 
vaeuoles (fig. 22). Comme ces vacuoles se transforment, dans les 
parasites plus grands, en fentes irrégulières, ce sont probablement 
des interstices entre les granulations. 

J'ai observé plusieurs fois la formation des tlagelles chez ces 
corps, et je me suis convaincu que ce phénomène est ici plus 
capricieux que chez les hémocytozoaires, et ne s’accomplit pas 
sous une forme aussi nette que chez ces derniers. Dans les pré- 
parations oùles leacocytozoaires granuleux étaient en abondance, 
la formation des flagelles avait lieu chez très peu de parasites, 
et les autres restaient inaltérés, même à une très longue obser- 
valion. Le procès commence ordinairement par un mouvement 
des granulations, puis le parasite lui-même commence à se 
mouvoir pendant quelque temps. À ce moment, apparaissent 
à sa périphérie un ou plusieurs flagelles, qui s’éloignent vite 
du parasite. Tout ce procès se produit si promptement que je n’ai 
pas pu voir la relation des flagelles avec le parasite. Après 
la disparition des flagelles, le mouvement du parasite cesse 
et leur aspect redevient ce qu’il était avant. Contrairement 
aux corps à flagelles des hémocytozoaires, ils ne se détruisent 
pas sous les yeux de l'observateur, quoique, par analogie, nous 
puissions croire avoir ici le même procès de sortie des fila- 
ments chromatiques que nous avons décrit plus haut. 

Les sphères granuleuses sont les formes stables ; nous les 
rencontrons sans aucun développement ultérieur chez un même 


SUR LES HÉMATOZOAIRES DES OISEAUX. 807 


oiseau pendant un temps indéfini. Je n'ai pas vu leur scission 
chez les corbeaux. Le seul changement que j'aie pu voir dans 
ces parasites est leur dégénérescence ; ils deviennent plus grands, 
leur protoplasme se rarélie, et les vacuoles mentionnées plus haut 
se transforment en fentes irrégulières. Ils ne se colorent plus 
d'une façon aussi intensive qu'auparavant. Toutes ces particula- 
rités morphologiques prouvent que les sphères granuleuses sont 
des formes analogues aux corps à croissant dans le sang mala- 
rique de l’homme, et se multiplient aussi par scission karyokiné- 
tique. 

Des modifications très intéressantes se produisent dans la 
structure du noyau des leucocytes occupés par les parasites 
décrits. Ces noyaux deviennent minces et longs comme une 
bande et entourent le parasite (v. fig. 20 et 21). Cette bande se 
colore en violet foncé, dans d’autres cas elle dégénère et se 
transforme en réseaux qui deviennent de plus en plus elairs 
jusqu’à la destruction complète. 

Dans le même sang des corbeaux, nous avons trouvé en 
grandnombre d’autres formes parasitaires, qui sont aussi rondes, 
mais se distinguent des sphères granuleuses par l'absence de 
granulations (v. fig. 23, 24). Elles se colorent en bleu grisâtre et 
sont de grandeur variée. Leur noyau n’est pas toujours visible. 
Il a les contours irréguliers, ou se sépare en corpuscules ou fila- 
ments, qui ont une disposition rappelant les figures karyokiné- 
tique (v. fig. 25). Chez ces formes j'ai vu la formation des 
flagelles. Ce procès consiste ici aussi dans la sortie des filaments 
chromatiques, comme on peut le voir sur lesfigures 27-30. Parfois 
le parasite se transforme en quelques corps ronds de grandeur 
diverse. Dans ces cas, un filament chromatique peut traverser 
deux corps (v. fig. 27). Chez les parasites décrits on peut voir, 
quoique peu nettement, la scission du parasite en sphères accol- 
lées en forme de müre (v. fig. 26). 

Les modifications du noyau des leucocytes contenant ces 
formes parasitaires sont aussi remarquables. Il entoure le para- 
site presque sur toute sa périphérie. Son bord extérieur est 
régulier, tandis que le bord adhérent au parasite est raboteux ou 
rongé. Les parasites ne remplissent pas entièrement toute la 
cellule occupée par eux; entre les parasites et la membrane du 
leucocyte, nous trouvons une partie considérable de protoplasme 


808 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


homogène (v. fig. 26). Evidemment, nous avons ici affaire à 
des parasites, attaquant le noyau et le détruisant peu à peu. Ce 
sont donc des karyophages. 

En observant les phases diverses des parasites décrits, je 
me suis convaincu que les propriétés karyophages sont des plus 
marquées chez ces parasites jeunes. Ces propriétés, je crois, 
sont absentes chez les corps granuleux, qui représentent le stade 
ultérieur des parasites. Les noyaux des leucocytes en forme de 
bandes minces, que nous voyons chez les corps granulés, ont pris 
évidemment cette forme à cause de la pression. En terminant la 
description des leucocytozoaires des corbeaux, je me permets 
d'émettre l'hypothèse que ces parasites résistent aux phagocytes 
en attaquant et en détruisant leur noyau, cette partie essentielle 
du leucocyte. 

Leucocytozoaires des freux. — Les sphères granuleuses 
trouvées dans le sang des freux, contrairement à celles que 
nous avons rencontrées chez les corbeaux, sont incluses dans 
les cellules avec les noyaux bien conservés. Ces noyaux sont 
presque toujours d'une forme ovale ou semi-lunaire avec les 
contours réguliers. 1ls sont disposés à côté du parasite et se 
colorent toujours intensivement en violet (voir la fig. 36). Les 
sphères granuleuses des freux sont tout à fait identiques à 
celles des corbeaux ‘. Nous passons donc aux autres formes 
parasitaires, que j'ai rencontrées chez les freux jeunes en 
grande variété. Dans ces cas, les hémalies ne contenaient pas 
un seul parasite, condition très favorable pour l'observation 
des leucocytozoaires. 

Nous allons commencer notre description par les formes les 
plus jeunes. Ce sont des corpuscules ovales ou fusiformes, de la 
même dimension que les granulations éosinophiles, qui sont 
souvent aussi fusiformes chez les oiseaux. Ils se distinguent de 
ces derniers par la présence du noyau coloré en rouge ou violet, 
entouré par le protoplasme coloré en bleu, tandis que les granu- 
lations éosinophiles se colorent en rouge uniforme (comparer 
les fig. 42 et 43). Ces corpuscules, qui sont évidemment les spores 
des leucocytozoaires, se trouvent ordinairement dans les petits 


1. Dans ces derniers temps, j'ai trouvé enfin la scission de ces formes en deux 
parties, qui est représenté sur la fijure 37. 


SUR LES HÉMATOZOAIRES DES OISEAUX. 809 


leucocytes avec peu de protoplasme (lymphocytes et leucoblastes) 
et beaucoup plus rarement dans les leucocytes plus grands avec 
protoplasme abondant. On les rencontre aussi souvent libres ou 
accolés aux bords des grandes taches roses, qui sont, comme 
nous verrons, les noyaux dégénérés (lis. 29). Ces spores ne se 
rencontrent jamais dans les leucocytes éosinophiles. Nous croyons 
que les corpuscules fusiformes énigmatiques, trouvés par 
M. Pfeiffer dans le sang de falco tinnunculus, sont identiques avec 
les spores des leucocytozoaires. 

Le noyau des spores a la forme d’un corpuscule rond ou 
d'un bâtonnet plus ou moins courbé. Ces spores, en grandis- 
sant, se développent en parasites adultes. Nous avons pu suivre 
tous les stades de ce développement. Leur noyau se divise en 
quelques très petits corps disposés en forme de cercle, ou en deux 
amas, ou enfin irrégulièrement (voir fig. 38). À mesure de la 
croissance du parasite, le noyau perd la netteté des contours. 
Dans les parasites les plus grands, les noyaux sont complète- 
ment invisibles. Nous avons déjà décrit le même procès de 
disparition des noyaux chez les hémamibes des fièvres irrégu- 
lières ‘, ou il ne doit pas être considéré comme un acte de dégé- 
nérescence des parasites : ces derniers continuent leur dévelop- 
pement et subissent la scission. 

Au contraire, chez les leucocytozoaires des freux, la disparition 
des uoyaux signifie la dégénérescence : les parasites privés des 
noyaux ne se colorent plus guère parle bleu de méthylène, et les 
formes les plus grandes restent tout à fait incolores (v. fig. 34 
et 35). Leur scission n’a pas été observée. 

Au contraire dece qui a lieu pour les leucocytozoaires des cor- 
beaux, chez les freux, on trouve dans un leucocyte plusieurs 
parasites, qui se disposent autour du noyau de leucocyte, ou le 
long de son bord (voir fig. 31-33). Les leucocytozoaires des freux 
se distinguent aussi de ceux des corbeaux quant à leur action 
sur les noyaux des leucocytes. 

4. M. Marcararava, dans son travail, Sulle febre malariche estivo-autumnali, 
page 36, fait observer que ces parasites décrits par moi dans ces Annales 
(4891, VII) sont les mêmes qu’il a décrits antérieurement sous le nom de para- 
sites des fièvres d'été et d'automne (en 1889). Je suis d'accord avec lui, mais je 
me permets de remarquer que le cycle d'évolution de ces parasites a élé indiqué 
par moi aussi en 1889, dans un travail russe (NWalaria sur le chemin de fer trans- 
caucasien). 


810 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Leurs contours ne présentent jamais les indentations que 
nous avons vues chez les noyaux des leucocytes des corbeaux. 
Ils sont ordinairement disloqués à côté du leucocyte, où ils restent 
au milieu, entourés par les parasites, qui produisent à leur 
périphérie des enfoncements (fig. 33). Ces enfoncements sont 
évidemment le résultat de la pression due à la croissance du 
parasite. Toutes ces particularités prouvent que les leuco- 
cytozoaires des freux, contrairement à ceux des corbeaux, ne sont 
pas karyophages. Ils détruisent les leucocytes et laissent leurs 
noyaux intacts. 

Il est nécessaire d'étudier les modifications ultérieures des 
noyaux qui restent libres après la destruction des leucocytes. 

Nous trouvons souvent dans le sang des freux des grandes 
taches faiblement colorées en rose, avec des contours indistincts. 
D'un côté de ces taches, le long du bord, se disposent ordinai- 
rement quelques spores ou quelques leucocytozoaires adultes. 
En observant les stades variés de la formation de ces taches, je 
me suis convaincu qu'elles représentent les noyaux des leuco- 
cytes, distendus et à moitié détruits. Leur destruction est pro- 
duite par l’action du plasma sanguin : le même aspect se retrouve 
chez les noyaux des hématies après la destruction de leur proto- 
plasme par les parasites. Il ne faut donc pas attribuer à l’action 
des parasites la destruction des noyaux des leucocytes chez les 
freux. 

Si ces parasiles ne sont pas karyophages, quels sont leurs 
moyens de défense contre les phagocytes? 

D'abord, nous devons indiquer que la lutte finit ici souvent 
par la destruction et la dégénérescence des parasites. Comment 
donc les autres résistent-ils aux phagocytes? 

M. Danilewsky, en répondant à cette question, admet que les 
parasites pénètrent, non dans les leucocytes, mais dans les héma- 
toblastes, dont l’action phagocytaire est insuffisante. Ainsi, les 
parasites et les hématoblastes continuent parallèlement leur 
développement. 

En effet, nous avons vu que les spores et les parasites jeunes 
(qui ont le noyau bien conservé) se rencontrent le plus souvent 
dans les lymphocytes et les hématoblastes. Je crois donc 
que l'explication de M. Danilewsky est vraisemblable pour les 
leucocytozoaires des freux, mais je ne puis admettre cette expli- 


SUR LES HÉMATOZOAIRES DES OISEAUX. s11 


cation par rapport aux karyophages des corbeaux, qui n’ont pas 
besoin de ce mode de défense. 

Je n'ai pas pu trouver les stades de scission de ces leuco- 
cylozoaires en forme de rosettes ou de müres. Ils étaient absents 
aussi dans la moelle des os et dans les organes parenchymateux. 
Je doute donc de l’existence de ces formes chez les leucocyto- 
zoaires décrits, comme chez les hémamibes des corbeaux. Dans 
mon mémoire prochain, je reviendrai sur cette question. 


EXPLICATION DE LA PLANCHE XV. 


Fig. 1-20. — Les hémocytozoaires des corbeaux. 
o & 


1-3. — Les formes intracellulaires de qui proviennent les corps à fla- 
gelles. Leur noyau est bien coloré en violet. 

4-6. — Les mêmes formes parasitaires avec le noyau en scission Kkaryo- 
kinétique. 


7-12. — Les stades variés de la séparation du noyau par filaments chro- 
matiques et de la sortie des filaments du parasite. 
13-18: — Le même procès chez les formes excapsulées. 
19. — Le corps fusiforme mobile (pseudo-vermiculus de M. Danilewsky). 
20. — Son stade intracellulaire. 
Fig. 21-30. — Les leucocylozoaires des corbeaux. 
21-22, — Les formes stables (sphères granuleuses de M. Danilewsky). 


Les noyaux des leucocytes les entourent en forme de bandes. 

23-25. — Les formes développantes incorporées dans les noyaux des leu- 
cocytes (sphères homogènes). 

26. — La même forme en voie de scission. 

27-30. — Les mêmes formes libres en voie de transformation en corps 
à flagelles. 


Fig. 31-41. — Les leucocytozouires des freux. 
31-33. — Les formes jeunes avec le noyau bien visible. 
34-35. — Les formes dégénérées. 
36. — La forme stable (sphère granuleuse de M. Danilewsky). 
317. — La scission de cette forme. 
38. — Les formes jeunes disposées le long du bord du noyau dégénéré. 
39. — Les spores disposées de la même manière. 
40. — Les formes libres. 
41. — Les spores incluses dans le Iymphocyte. 


42. — Les granulations éosinophiles. 


RECIERCHEN SUR L'INELUENCE DES EXTRAIS DE THYMES 
ET DES TESTICULES SUR L'INFECTION CHARBONNEUSE 
Par M. LE D' A. GRAMATCHIKOFF pe SAINT-PÉTERSBOURG 


(Travail du laboratoire de M. METCHNIKOFF.) 


De nombreuses recherches, publiées dans ces dernières 
années, ont démontré que certains produits des cellules micro- 
biennes empêchent le développement des bactéries infectieuses 
dans l'organisme animal. Une maladie aussi terrible que laf- 
fection charbonneuse des lapins peut être prévenue et empê- 
chée par des injections de cultures stérilisées du bacille pyo- 
cyanique où du pneumo-bacille de Friedlaender, deux microbes 
très différents de la bactéridie. 

Sont-ce seulement les produits bactériens qui exercent cette 
influence bienfaisante, ou bien celle-ci peut-elle être également 
obtenue à l’aide de produits cellulaires des animaux supé- 
rieurs ? 

Celte question, que je me suis mis à étudier, était d'autant 
plus justifiée qu'il existe dans la littérature certaines indica- 
tions d’une influence vaccinante d'extraits du thymus et d'au- 
tres organes, notamment des testicules, contre le charbon. 

Les premières données positives à ce sujet ont été publiées 
par Wooldridge'. Ce savant se servait d'extraits de thymus 
frais et finement haché, macéré pendant vingt-quatre heures 
dans de l’eau. Le liquide filtré, très louche, renferme, d’après 
Wooldridge, la substance fibrinogène qui est précipitée par 
l’ébullition. Pour empêcher cette coagulation pendant la stéri- 
lisation par la chaleur, il alcalinisait le liquide de façon à don- 
ner au papier de tournesol une teinte bleue manifeste. Woold- 
ridge préparait deux sortes de liquide : 1° un extrait très alcalin, 
dans lequel les bactéridies se développent abondamment, con- 


1. Archiv. für Anal. u. Physiol., 1888. 


bé 


INFECTION CHARBONNEUSE. 813 


servant leur virulence (le liquide, même filtré à travers le 
papier, n'est point toxique et ne confère pas l’immunité contre le 
charbon à des lapins); 2° un extrait faiblement alcalin, dans 
lequel le bacille charbonneux ne pousse que très mal; mais 
ces cultures, stérilisées par la chaleur, vaccinent les lapins 
contre l'inoculation consécutive du virus bactéridien. 

Wooldridge explique ces actions différentes par le fait que le 
liquide peu alcalin renferme plus de substance fibrinogène à 
l'état libre. De là il est arrivé à supposer que ces extraits fai- 
blement alcalins, préparés avec le thymus et les testicules, 
pourraient bien tout seuls conférer l’immunité contre le char-. 
bon. En injectant de pareils extraits de substance fibrinogène, 
stérilisés par la chaleur, il a réussi à vacciner deux lapins 
contre le charbon. 

M. Wright' a confirmé ce résultat. Il s’est servi de la 
méthode suivante : des glandes finement hachées sont macérées 
pendant douze heures avec addition de chloroforme, à la raison 
de 4:200. L’extrait aqueux est ensuite passé à la centrifuge et 
filtré. Dans le liquide trouble ainsi obtenu, la substance fibri- 
nogène est précipilée par l'acide acétique (0,5 c. ce. d'acide à 
33 0/0 pour 100 gr. d'extrait). 

Le précipité est recueilli sur le filtre et lavé d’abord avec 
la solution physiologique de chlorure de sodium et ensuite avec 
de l'eau distillée. Tous les liquides employés doivent être légè- 
rement acidulés avec de l’acide acétique pour empêcher la dis- 
solution de la substance fibrinogène. Le précipité lavé, recueilli 
sur le filtre, est dissous dans une solution de soude à 1 0/0; on 
le filtre d’abord à travers le papier et ensuite à travers une 
bougie Chamberland. 

Le liquide ainsi préparé a été injecté par M. Wright à douze 
lapins, dans le but de les vacciner contre le charbon. Plusieurs 
ont, en effet, résisté à l’inoculation d’épreuve, mais un lapin 
témoin a également résisté à la même dose de virus charbonneux. 

La question de la propriété vaccinante de l'extrait du thymus 
a été plus tard étudiée par MM. Brieger, Kitasato et Wasser- 
mann *. Mais ces auteurs n'ont obtenu que des résultats 
négatifs. 


4. British medical Journal, sept, 1891. 
2. Zeitschr [. Hygiene, 1892. 


814 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Le liquide de thymus, tel quel, injecté comme moyen 
prophylactique, n’a jamais pu vacciner des animaux contre le 
charbon. Il est vrai que les auteurs cités se sont servis de sou- 
ris et non de lapins, comme dans les expériences de Wooldridge 
et Wright. 

Par contre, des cullures de différentes bactéries (tétanos, 
diphtérie, choléra, typhus, etc.), préparées dans l'extrait de 
thymus et stérilisées à 65°, ont donné, d'après l'avis de 
MM. Brieger, Kitasato et Wassermann, une immunité acquise 
à différents animaux contre l'introduction des microbes corres- 
pondants. Pour le charbon, cette méthode a été moins efficace. 
Seules quelques expériences avec la rate de cobayes charbon- 
neux, broyée avec du bouillon de thymus et chauffée à 75°, ont 
donné de meilleurs résultats. Des souris ont été préventive- 
ment traitées avec ce liquide pendant quinze jours, et ensuite 
éprouvées avec du virus charbonneux. Les souris traitées mou- 
raient, mais beaucoup plus tard que les témoins. 

MM. Brieger, Kitasato et Wassermann préparaient leur extrait 
comme il suit : deux ou trois glandes de thymus, bien broyées, 
étaient mélangées avec un poids égal d’eau stérile et mainte- 
nues dans une armoire à glace pendant douze heures. Le mélange 
était d’abord passé à travers la mousseline et ensuite le résidu 
soumis à la presse. Le liquide trouble et muqueux ainsi obtenu 
était alcalinisé avec une solution de soude à 1 °/, en suivant les 
règles indiquées par Wooldridge. Dilué avec de l'eau, il était 
ensuite stérilisé dans l'appareil de Koch pendant un quart 
d'heure. 

Comme les résultats négatifs de MM. Brieger, Kitasato et 
Wassermann ont été obtenus sur des souris, animaux beaucoup 
plus sensibles au charbon que les lapins, j'ai voulu me placer 
dans les conditions exactes des expériences de Wooldridge et 
Wright. Mais, avant d'exposer les données que j'ai recueillies, 
je dois d’abord faire quelques remarques préliminaires. 

Je me suis servi de l'extrait du thymus et des testicules. 
Pour avoir toujours à peu près la même quantité de substance 
fibrinogène, je prenais dans toutes mes expériences la même 
proportion de glandes et d’eau : 1 : 2 (ainsi que cela se fait dans 
la préparation du bouillon nutritif). Le thymus et les testicules 
ont été employés à l’état le plus frais. Dans les cas où je lais- 


“ 


INFECTION CHARBONNEUSE. 815 


sais macérer les organes hachés, j’employais de l’eau chloro- 
formée à raison de 1 : 200. Cette précaution était nécessaire non 
seulement pour empêcher la putréfaction, mais aussi pour éviter 
la diminution du fibrinogène qui, d'après M. Salkowsky, est 
sujet à l’autodigestion. 

Imitant rigoureusement les conditions des expériences de 
Wooldridge et Wright, je m'arrangeais pour que mes liquides 
soient toujours de réaction neutre. Les liquides, préparés d’après 
la méthode de Wooldridge, étaient stérilisés par l’ébullition 
après une alcalisation préalable ; ensuite ils étaient filtrés à tra- 
vers le papier suédois. Le liquide filtré, louche et opalescent, 
renfermant de petits flocons de substance fibrinogène, était sté- 
rilisé à l’autoclave pendant un quart d'heure. Les liquides, pré- 
parés d’après M. Wright, étaient stérilisés à l’aide de la bougie 
Chamberland. 

Mes expériences ont été exécutées uniquement sur des lapins. 
Les animaux, après avoir été traités avec les liquides fibrino- 
gènes, ont élé éprouvés avec des cultures charbonneuses, injec- 
tées dans le tissu sous-cutané. Quelquefois le traitement avec des 
extraits des glandes était prolongé jusqu'à la fin de l'expérience 
d’épreuve. Les liquides étaient introduits, suivant la série de 
l'expérience, tantôt dans la veine auriculaire, tantôt dans le 
péritoine ou bien sous la peau. 

Le charbon employé appartenait souvent à la race asporo- 
gène (Roux) ou bien était sporogène, comme d'habitude. En 
tout j'ai sacrifié 57 lapins. Dans toutes mes expériences, j'in- 
jectai à un lapin 1 c. c. d’une émulsion de culture (sur gélose 
glycérinée) dans du bouillon. 

J'ai fait encore plusieurs expériences avec des substances 
albuminoïdes mêmes, préparées avec du thymus et des testi- 
cules. Des organes frais, lavés dans de l’eau stérile, étaient fine- 
ment hachés et mélangés avec du sable stérilisé en une sorte de 
pâte consistante. La masse ainsi obtenue était pressée à un filtre- 
presse, préalablement stérilisé par la chaleur. Le liquide épais 
et brunâtre ainsi préparé était débarrassé des particules suspen- 
dues à l’aide d’une filtration à travers un entonnoir en soie 
stérilisé. Les liquides albumineux clarifiés étaient aussitôt 
injectés à des lapins. Dans les cas où je voulais les conserver 
plus longtemps, je les diluais avec un volume double de solu- 


16 ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR. 


tion physiologique de N°? Cl et les filtrais à travers la bougie 
Chamberland. 

Je commencerai par mes expériences avec les substances 
propres des glandes. 


Expériences avec des liquides frais du thymus et des testicules. 


Si on injecte une ou deux gouttes de liquide, préparé d’après 
la méthode que je viens d'indiquer, dans la veine auriculaire 
d'un lapin, celui-ci manifeste, quelques minutes après, des con- 
vulsions violentes, suivies, cinq à dix minutes après, de la mort de 
l'animal. L'autopsie révèle toujours la coagulation du sang 
dans des sinus de l’encéphale. Six lapins, injectés de cette 
facon, ont tous donné le mème tableau pathologo-anatomique. 
En raison de l'impossibilité d’un traitement par injection dans 
les vaisseaux, j introduisais les liquides dans le péritoine et sous 
la peau. 

Des deux séries d'expériences, une a été faite avec la bacté- 
ridie asporogène, une autre avec la race produisant des spores. 

Première série. Le virus dont je me suis servi dans cette série 
était un charbon asporogène. Un demi-centimètre cube d’émulsion 
dans le bouillon tuait un lapin adulte en deux ou trois jours. 
Des deux groupes d'animaux, un a été traité par des injections 
sous-cutanées des albumines fibrinogènes, un autre par des 
injections intrapéritonéales du même liquide. 

Le premier groupe était composé de six lapins, dont trois 
furent traités avec des injections sous-cutanées du liquide testi- 
culaire et trois autres avec de l'extrait du thymus. La quantité 
de liquide injecté variait de 1 à 2 c. c. Le traitement préventif 
avec ces substances durait dix jours. Les lapins manifestaient 
un amaigrissement progressif. Le résultat a été complètement 
négatif; tous les animaux traités mouraient du charbon en 
: même temps que les témoins non traités. 

Le deuxième groupe, traité par des injections intrapérito- 
néales, a été préparé deux mois plus tard. Il était aussi composé 
de 6 lapins : 3 traités avec du liquide du thymus, 3 autres traités 
avec du liquide testiculaire frais. Avant l’inoculation d’épreuve, 
il a été fait 8 injections préventives avec des doses de liquide 
variant de À à 2,5 ce. c. Les animaux maigrissaient rapidement. 


INFECTION CHARBONNEUSE. 817 


Trois lapins résistèrent au virus charbonneux, dont un lapin, 
traité par l'extrait du thymus, un autre traité avec le liquide tes- 
üculaire et un troisième lapin témoin, qui n'avait subi aucun 
traitement. Ce résultat est donc conforme à celui de Wright et 
peut être expliqué par la virulence trop faible et inconstante de 
la bactéridie asporogène. Un cobaye inoculé avec 1 ce. c. du 
même virus n’a succombé qu’au bout de quatre jours et demi. 
Des lapins neufs résistèrent souvent à cette bactéridie. 

J'ai répété cette expérience avec des liquides albuminoïdes 
du thymus et des testicules, liquides non stérilisés par la 
chaleur, avec un nouveau lot de lapins et dans les conditions 
suivantes. Je me suis servi, pour éprouver la résistance, d’un 
charbon sporogènetrès actif. Le traitement préventif, exécuté sur 
6 lapins, a été pratiqué pendant 9 jours, avec des doses de 1 à 
2,5 c. c. Mais son effet a été nul, car tous les lapins sont morts 
du charbon en même temps que lelapin témoin. Cette expérience 
confirme donc cette conclusion que la survie de trois lapins, dans 
l'expérience précédente, était due à l'inactivité du virus. 

Dans une nouvelle expérience de cette série, six lapins neufs 
ont été traités avec l'extrait de thymus, filtré à travers la bougie 
Chamberland. Je dois mentionner ici que ces liquides filtrés se 
distinguaient notablement des liquides qui n'avaient pas été 
filtrés à travers la bougie. L'’injection intraveineuse des pre- 
miers ne provoquait jamais la mort des animaux et n’amenait 
pas d’amaigrissement appréciable. Dans quelques cas, les pre- 
mières injections occasionnaient une hyperthermie passagère. 
Des six lapins, trois ont été traités par des injections intravei- 
neuses, trois autres par des injections intrapéritonéales. Comme 
les animaux supportaient bien ces injections, les doses employées 
étaient considérables. Ainsi les lapins n°5 1, 2 et 3 reçurent 
dans l’espace de 6 jours 94, 67 et 30 c. c. dans la veine. Trois : 
autres lapins recurent pendant le même temps 76, 67 el 30 c. c. 
de liquide dans le péritoine. L'inoculation d’épreuve a été faite 
avec du charbon sporogène. Tous les lapins, les traités aussi 
bien que le témoin, mouraient du charbon typique. Il faut cepen- 
dant noter que les lapins n° 1, 2, 3 sont morts beaucoup plus 
tard que les autres. 


D2 


S18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Deuxième série. Expériences d'après la méthode de 
Wooldridge. 


Ces expériences aussi ont été exécutées avec la bactéridie 
sporogène et asporogène. Le traitement préventif consistait en 
injections de la substance fibrinogène du thymus et des testi- 
cules. 

Dans une première expérience, sept lapins ont été soumis à 
six injections préventives de l’extrait du thymus de veau, préparé 
d'après la méthode de Wooldridge. Chaque injection était faite 
à dose de 2 à 5 c. c. Quoique l’inoculation d’épreuve ait été faite 
avec Ja bactéridie asporogène, tous les lapins sont morts du 
charbon typique. Mais, tandis que le témoin est mort en 
46 heures, les lapins traités ont vécu pendant 70, 90, 102, 72, 
10 et 60 heures. ; 

Pour vérifier le résultat de cette expérience, j'en ai fait une 
autre, dans laquelle 6 lapins ont été traités pendant 28 jours 
d’après la méthode de Wooldridge. Il a été pratiqué en tout 
12 injections. 

Deux lapins n° 1 et 2 ont été traités par des injections sous- 
cutanées : un d’eux a reçu 24, l’autre 60 c. c. Des quatre autres 
lapins, traités par des injections péritonéales, le n° 3 a reça 12 ; 
le n° 4, 24; le n°5, 60, et le n° 6, 120 c. c. Une semaine après la 
dernière injection, tous les lapins ont été éprouvés chacun par 
Le. c. d’émulsion de culture du charbon sporogène. Le lapin 
témoin est mort en 70 heures; les lapins 1 et2 en 70-80 heures, 
le n° 3, en 134 heures; le n° 4, en 100 heures ; le n° 6, en 
105 heures. Le n° 5 est mort 20 heures avant le témoin (mort en 
50 heures). 

Les expériences avec l'extrait des testicules, préparé d’après 
la méthode de Wooldridge, ont donné le même résultat que 
celles avec le liquide du thymus. 

Des quatre lapins d'expérience, deux ont été traités avec le 
liquide testiculaire, injecté sous la peau; deux autres avec le 
même liquide introduit dans le péritoine. Les deux premiers 
ont été ensuite éprouvés avec du charbon sporogène, deux autres 
avec la bactéridie asporogène. 

Après l’inoculation d’épreuve, le traitement était continué 


INFECTION CHARBONNEUSE. 819 


avec le même extrait de testicules. Malgré cette précaution, 
tous les animaux d'expérience sont morts du charbon en même 
temps que les lapins témoins. 

Le traitement préventif avec des substances albuminoïdes du 
thymus et des testicules, préparées d’après la méthode de 
Wright, n'ont pas préservé les lapins contre l’inoculation 
d'épreuve. Seize lapins employés pour l'expérience sont tous 
morts du charbon. 

Le premier groupe (à lapins) a été soumis au traitement 
préventif et a été encore traité après l’inoculation du virus. Le 
résultat a été négatif: tous les animaux sont morts charbon- 
neux. Le même insuccès a suivi le traitement de six autres 
lapins avec l'extrait testiculaire. 

Cinq lapins ont subi pendant 34 jours le traitement préventif 
avec l'extrait du thymus, préparé d’après la méthode de Wright. 
Ils ont recu 14 fois des injections préventives. Le lapin n° 4 a 
reçu en tout 24 c. c., le n° 2, 70 c. c.; tous deux dans le tissu 
sous-culané. Quatre autres lapins ont été traités dans le péri- 
toine avec des doses suivantes : n° 3, 14; n° 4, 70; n° 5 et 6, 
140 c. e. Dix jours après la dernière injection, les lapins ont été 
éprouvés avec le charbon sporogène. Le résultat de cette expé- 
rience a été complètement négatif. 

On peut donc conclure de tout l’ensemble de mes expériences 
que l'extrait du thymus et des testicules n'exerce aucune influence 
vaccinante contre le charbon des lapins. 


LA DESTRUCTION DE VIRUS CHARBONNEUX 


SOUS LA PEAU DES ANIMAUX SENSIBLES 


Par 2e Dr Josrernm SANARELTI 


Docent d'Hygiène, Assistant aux laboratoires de la Direction de la Santé publique, à Rome. 


L'intéressant article de M. Metchnikoff sur l’immunité dans 
les malades infectieuses ‘ a soulevé de la part de M. Pekelharing * 
quelques objections au sujet de la propriété bactéricide du sang 
vis-à-vis des spores charbonneuses : cette propriété est admise 
par le savant de l’Université d'Utrecht comme un fait établi 
sur des bases irréfutables. 

M. Pekelharing se rapporte, sur cette question, à quelques 
expériences publiées il y a trois ans*, et visant à démontrer 
que non seulement le sérum sanguin, mais aussi la lymphe 
sous-cutanée des lapins, sont à même de détruire la virulence 
des spores charbonneuses. 

Deux travaux vinrent ensuite simultanément nier ce fait, qui 
est d’une importance capitale pour ce qui concerne la doctrine 
de l'immunité. 

Un de ces travaux appartient à M. Trapeznikoff*, et l’autre est 
de moi; ce dernier, qui porte le même titre que cet article, est 
évidemment resté inconnu à M. Pekelharing. 

Mes recherches s'accordent parfaitement avec celles de 
M. Trapeznikolf, pour montrer que la lymphe sous-cutanée des 
lapins non seulement est hors d'état d'agir contre les spores du 
charbon, mais peut au contraire leur offrir un excellent milieu 
nutritif. 

M. Pekelharing renfermait, comme on sait, les spores du 
charbon dans un sac de papier parcheminé qu’il introduisait 

1. Semaine médicale, 1892, pp. 469-474. 
2. Semaine médicale, 1892, p. 503. 
3. Ziegler's Beiträge, Bd. VII, 1890, p. 263. 


. Annales de l'Institut Pasteur, 1891, p. 362. 
5. Atti della R° Accademia dei Fisio-critici. Sienne, 1891, vol. IL. 


OL 


DESTRUCTION DU VIRUS CHARBONNEUX. 821 


ensuite sous la peau des animaux; iltrouvait ainsi que, onze jours 
après, l’inoculation du contenu de ces sacs sur les lapins neufs 
ne déterminait plus la septicémie charbonneuse. 

Au lieu des sacs de papier parcheminé, qui sont sujets à plu- 
sieurs inconvénients, j'employai de petits tuyaux de collodion 
qui peuvent être fermés hermétiquement, de manière à ne laisser 
pénétrer aucun leucocyte : placés sous la peau des animaux, ils se 
remplissent, en peu de temps, d’une lymphe limpide et transpa- 
rente. 

J'ai donné le moyen de préparer ces tuyaux de collodion 
dans le travail ‘ où j'ai montré qu'ils permettaient d'obtenir à 
l’état de pureté la lymphe du sac dorsal des grenouilles. Après 
moi, deux savants italiens, MM. Morpurgo et Tirelhi*, ont obtenu 
dans ces tuyaux, sous la peau des lapins, le développement des 
bacilles de la tuberculose, comme j'avais obtenu, un an aupara- 
vant*, celui des bacilles de la morve et du charbon. 

Pendant mon récent passage dans le laboratoire de M. Met- 
chnikoff à l'Institut Pasteur, j'ai eu aussi l’occasion d'employer 
dans quelques recherches cette méthode, reconnue des meilleures 
pour se procurer la lymphe sous-cutanée des animaux à l’état 
de pureté absolue. 

Les recherches que j'ai ainsi faites, pour vérifier au juste 
l'importance des conclusions de M. Pekelharing, consistaient 
précisément à fabriquer ces tuyaux, à renfermer dans leur inté- 
rieur les spores charbonneuses, et enfin à les introduire sous la 
peau des lapins. 

La lymphe sous-cutanée y pénètre peu à peu, vient baigner 
les spores qui germent, et le contenu se transforme bientôt en 
riche culture de bacilles charbonneux asporogènes et très virulents. 

Cependant, après quelques jours (soit que la culture manque 
de substance nutritive, ou soit gènée par l’excès des produits 
d'échange des microbes), le développement d’abord si vigoureux 
s'arrête, et les bacilles dégénèrent et meurent comme ils le 
feraient dans tout autre milieu nutritif. 

Il y a pourtant une différence entre les cultures au contact de 
l'air et celles qui se font dans nos tuyaux placés sous la peau des 

4. Centralblatt für Bacteriologie und Parasitenk., 18M, n° 14, 15, 16. 


2. Archivio per le scienze mediche. Juin, 1892. 
3. Loc, cit. Juin 1891. 


822 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


lapins ; elle réside dans ce fait très simple, que dans le premier 
cas, après la mort des formes végétatives, les spores survivent, 
et par conséquent la virulence se conserve indéliniment, tandis 
que dans le second cas les spores ne peuvent pas se former, de 
sorte que les formes végétatives dégénèrent et meurent, etsimul- 
tanément progressent l’atténuation et l'extinction du virus. 

Il va saus dire que l’on peut arriver plus ou moins vite à ce 
résultat, suivant que les tuyaux sont plus oumoins volumineux ou 
que leurs parois plus ou moins minces favorisent plus ou moins 
l’arrivée de la lymphe nouvelle et le renouvellement du milieu 
nutritif. 

Mais, en général, avec de bons tuyaux perméables d’envi- 
ron 1 c.c., le virus mortel pour les animaux peut encore s’y con- 
server vingt-sept jours. Plus tard, le contenu des tuyaux n’est 
plus virulent, et les énormes masses de filaments provenant des 
spores ensemencées aboutissent à la dégénérescence et à la mort. 

Cela démontre que les spores ne furent pas tuées, mais au 
contraire ont subi leur évolution normale. 

M. Trapeznikoff avait aussi trouvé dans ses doubles sacs de 
papier parcheminé des spores virulentes, même après quarante- 
cinq jours passés sous la peau des animaux. 

A cette constatation, M. Pekelharing objecte que, si ces spores 
ne sont pas mortes, c’est que, à travers la double feuille des sacs, 
la lymphe ne pouvait pas pénétrer pour exercer son action bac- 
téricide. 

Je ne crois pas à la justesse de cette objection. Je crois au 
contraire que les difficultés de pénétration de la lymphe entra- 
vaient la germination, et, avec elle, le développement et l’épui- 
sement du virus, lequel pouvait ainsi se maintenir longtemps 
iualtéré. En ce qui concerne donc l’action bactéricide des 
humeurs dans les animaux sensibles vis-à-vis des spores du 
charbon, la question reste à présent évidemment en faveur de 
la théorie et des idées de M. Metchnikoff. 


REVUES ET ANALYSES 


LA DISTRIBUTION DE LA MATIÈRE ORGANIQUE 
ET DES MICROBES DANS LE SOL 


REVUE CRITIQUE 


Il n’y a guère de question qui ait été plus étudiée que celle-ci, 
tant au point de vue agricole qu’au point de vue microbien. Maintenant 
que la microbie et l’agriculture ont contracté alliance, on peut utiliser 
les notions qu'elles ont récoltées toutes deux pour faire ia synthèse 
des phénomènes qui se passent dans les couches superficielles du sol, 
et c’est là le tableau que je voudrais essayer de tracer, en m’en tenant, 
bien entendu, à ses lignes générales. 


I 


Voyons d’abord ce qui est relatif à la distribution de la matière 
organique. Cette distribution peut être envisagée soit dans sa quantité, 
soit dans sa qualité. Commençons par la question de quantité, parce 
qu’elle est la plus courte à régler. Il suffit en effet de réfléchir un 
instant pour voir que la matière organique végétale ou animale 
arrive surtout au sol par la surface. Ilest rare que la partie du végétal 
enfoncée dans le sol égale en poids la portion qui en sort, et que la 
matière organique des racines fasse équilibre à celle des branches et 
des feuilles. Pour beaucoup de végétaux, les racines elles-mêmes sont 
assez superficielles, et, bien qu’on en trouve souvent des brins à 1 mètre 
ou 19,50 de profondeur, c’est surtout au voisinage du collet qu'elles 
développent d'ordinaire leur lacis le plus abondant. 

Pour éviter de nous mettre dans un cas particulier, nous supposons 
naturellement que la récolte n’est pas enlevée, et retombe sur la terre 
qui l’a produite : c'est le cas par exemple d’une forêt dont tout le 
feuillage et les branches mortes viennent pourrir sur le sol. Comme la 
vie a pour effet nécessaire, tant dans le monde végétal que dans le 
monde animal, de rendre insoluble la matière organique, la substance 


824 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


des parties aériennes du végétal formerait au pied de l'arbre un tapis 
de plus en plus épais, si les microbes et la lumière ne se chargeaient 
de solubiliser ces matériaux morts pour les faire servir à l'édification 
de tissus nouveaux. 

Ce sont les microbes qui sont les agents principaux de cette trans- 
formation, mais avec eux, comme dans les combustions opérées par Ja 
lumière solaire, le procès de dégradation est graduel, et se fait d’ordi- 
naire par échelons. Le fait est connu depuis longtemps pour les 
substances ternaires. Avant que M. Pasteur nous eût montré le 
vrai mécanisme des fermentations, on avait remarqué que la destruc- 
tion de la matière organique se faisait le plus souvent par une série 
graduée de transformations, dont chacune la prenait à un certain 
niveau pour l’amener et l’abandonner à un niveau inférieur. Ainsi le 
sucre donne successivement de l’alcool, de l’acide acétique, de l'acide 
carbonique ou bien encore de l'acide lactique, de l'acide butyrique, 
de l'acide carbonique. À chacun de ces étages de décomposition une 
partie du carbone, de l'hydrogène, et parfois de l’oxygène de la matière 
initiale disparaissent à l’état gazeux. Dans mes études sur les ferments 
de la caséine, j'ai fait voir qu'il en était de même pour la matière 
azotée, et que les ferments qui la prenaient à l’état initial, à celui 
sous lequel on la trouve dans les tissus vivants, étaient d'ordinaire 
incapables de la pousser au dernier degré de destruction. IL fallait 
pour cela les actions superposées de plusieurs ferments de la matière 
organique azotée, et, si on les avait confondus jusque-là, c’est d’abord 
parce que leurs formes sont très voisines, c'est aussi que chacun 
d'eux donne de l’ammoniaque, c’est-à-dire le corps que l’on considérait 
comme le degré définitif de décomposition de la matière azotée. Cette 
notion est restée exacte, mais à la condition que l’on fasse de l’ammo- 
niaque, dernière forme de destruction de l’azote, l'équivalent exact de 
l'acide carbonique, dernière forme de destruction du carbone de la 
matière organique. De même qu’il se dégage de l’acide carbonique 
dans la fermentation alcoolique sans que la décomposition du sucre 
soit complète, puisqu'il reste de l'alcool, de même il peut se former 
beaucoup d'ammoniaque avec les ferments authentiques de la caséine, 
de la fibrine, et le liquide peut devenir alcalin ou putride sans que la 
décomposition de la matière organique soit à son terme. Des phéno- 
mènes de même nature se passent dans le sol, et à aussi l'ammoniaque 
est, comme l’acide carbonique, le produit commun d’un grand nom- 
bre de microbes. Les recherches récentes de MM. Muntz et Coudon ‘, 
de M. Marchal *, n’ont fait sur ce point que confirmer les miennes. 


1. Comptes rendus, t. CXVI, p. 395. 


2. Sur la production de l’ammoniaque dans le sol par les microbes. Bruxelles, 
1893, 


REVUES ET ANALYSES. 825 


Tous les degrés divers de la transformation de la matière orga- 
nique, intermédiaires entre l'état initial et l’état définitif d'eau, 
d'acide carbonique et d'ammoniaque, doivent donc se trouver con- 
stamment présents dans le sol avec les termes extrêmes, etilest facile 
de comprendre qu'ils doivent présenter en outre tous les degrés de 
solubilité. La matière initiale, celle qui est le point de départ, est 
insoluble, du moins dans quelques-unes de ses parties. La cellulose du 
bois est insoluble, l'amidon de la graine aussi : de même la fibrine des 
muscles : de même aussi, contrairement aux apparences, la caséine du 
lait. Les termes extrèmes de la destruction, acide carbonique, ammo- 
niaque, sont non seulement solubles, mais volatils. Entre ces extrêmes 
se r.ngent les séries de corps intermédiaires, dont les premiers, ceux 
qui sont les plus voisins des corps de départ, les peptones pour les 
substances albuminoïdes, les dextrines, les gommes pour les substances 
ternaires, sont des corps colloïdaux, portant encore la trace de leur 
structure organisée. Puis la solubilité dans l’eau devient plus parfaite ; 
puis apparaît la faculté de cristalliser, qui correspond d'ordinaire à 
un haut degré de simplification de la molécule. Puis enfin on a affaire 
à des corps de constitution bien connue, comme par exemple la 
tyrosine, la leucine, le glycocolle, les sels ammoniacaux à acides 
gras, etc. 

C’est ici que nous allons voir apparaître la question de qualité dans 
la distribution de la matière organique. Une fois solubilisée par 
l’action des microbes, elle peut être entraînée par l’action des arrosages 
et des pluies, et entrer dans le sol. Là, si elle ne rencontrait pas 
d'obstacles à sa circulation, elle pénétrerait comme l’eau, viendrait 
ressortir dans les sources, et, au lieu d'eaux pures et limpides, nous 
verrions jaillir des eaux defumier, lacouche végétale renouvelant sans 
cesse la fumure. S’il n’en est pas ainsi, c’est que le sol arrête au pas- 
sage la matière organique colloïdale ou soluble entraînée par les pluies, 
et maintient ainsi, en quantité, cette matière organique confinée dans 
ses couches supérieures, où la végétation pourra les utiliser. Mais 
il fait plus : il se laisse pénétrer, en moyenne, d’autant plus facilement 
et d’autant plus profondément que la matière organique est plus éloi- 
gnée de l’état colloïdal et plus rapprochée de l’état soluble, de sorte 
que la distribution en qualité n’est pas calquée exactement sur la dis- 
tribution en quantité, et qu’à côté du tassement ii y a un commen- 
cement de classement. 

Qu'est donc cette puissance absorbante du sol qui produit de tels 
miracles ? Il suffira, pour s’en faire une idée, de rappeler brièvement les 
étapes de sa découverte. En 1848, Huxtable et Thompson constatent 
qu'en faisant filtrer du purin sur de la terre arable on obtient un 


826 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


liquide limpide et à peine chargé de matière organique, la terre 
arable ayant à peu près tout retenu. En même temps, H.S. Thompson 
découvre que cette puissance absorbante ne s’exerce pas seulement sur 
la matière organique complexe, et qu’ une dissolution d' ammoniaque 
ou d'un sel ammoniacal s’appauvrit au contact d’une terre arable. 
En 1850, Th. Way étend cette observation à diverses bases, l’explique 
inexactement en y voyant des actions de l’ordre chimique, mais n’en 
tire pas moins la conclusion, neuve et hardie pour son époque, que la 
forme sous laquelle on donne l’engrais aux plantes est indifférente. 
Cette conclusion fut confirmée quelque temps après par Liebig, à la 
suite de recherches dans lesquelles il avait constaté que, quand on 
filtrait des solutions de silicates alcalins, la silice était retenue avec 
l’alcali, et qu'il en était de même pour les phosphates. 

C'est Brustlein ! qui montra le premier que cette absorption n’avait, 
à aucun degré, le caractère d’une action chimique. L’absorption de 
l’ammoniaque en dissolution varie avec la concentration, le temps du 
contact, et s’observe avec des corps de structure et de constitution 
chimique très variées, le terreau, la tourbe, le noir animal, etc. De 
plus l’ammoniaque absorbée n’a pas été transformée ni insolubilisée, 
car on peut l’extraire à nouveau par un lavage. Il ne s’agit là que 
d'actions de contact, analogues à celles quifixent une matière colorante 
sur un tissu, ou même de puissance moindre, car l'adhésion d’un sel 
ammoniacal pour le sol est beaucoup moins intime que celle d'une 
tache de vin sur une nappe. 

Les recherches faites depuis, surtout par M. Schloesing, ont con- 
firmé cette manière de voir, et l’image d’une tache, à laquelle nous 
venons d'arriver, est la meilleure façon de se représenter ces phéno- 
mèênes. Une goutte de vin qui tombe sur une nappe, une goutte de 
teinture de tournesol ou d'indigo sur une feuille de papier, donnent 
deux cercles concentriques d'une remarquable netteté”, dont les 
diamètres sont toujours dans le même rapport lun par rapport à 
l’autre, tant qu’on ne change que le volume de la goutte qui tombe. Le 
cercle intérieur est seul coloré. Cela témoigne que la matière du corps 
absorbant retient plus activement la matière colorante que l’eau, et 
c’est là en gros l’image de ce qui se passe dans la terre arable, qui 
retient les éléments organiques en solution dans l’eau, et ne laisse 
passer que de l’eau à peu près pure. 

Mais à côté des corps qui retiennent plus énergiquement la matière 
en dissolution que l’eau il y en a qui n’exercent aucune action élective, 


4. Ann. de Ch. et de Phys., t. 56, 3° série, 1859. 
2. Voir là-dessus les travaux de Goppelsræder et les miens. (4xx. de Ch. el de 
Phys., t XXV, 408. 1872.) 


REVUES ET ANALYSES. 827 


et donnent des taches de coloration uniforme. Tel est le cas pour les 
solutions d’alun de chrome, de protochlorure de fer un peu concentré, 
de sulfate de cuivre ammoniacal, et, sans aller si loin, d’encre ordi- 
naire, qui teint le papier buvard d’une teinte plate, sans aucune trace 
des cercles concentriques que montre une tache d'orseille ou d’indigo. 
C’est là l'image des corps poreux qui laissent traverser intégrale- 
ment la solution dont on les baigne. Tel est par exemple le sable 
quartzeux, quand il est un peu gros, pour les dissolutions organiques 
qu’il laisse filtrer : c’est à peine s’il les appauvrit au passage. Enfin, 
nous avons aussi des exemples de solutions qui donnent sur le papier 
des taches à cercles concentriques, dont le plus extérieur est le plus 
coloré, c’est-à-dire qui retiennent l’eau plus puissamment que la 
matière colorante. Tel est par exemple le cas pour les solutions de 
cyanure rouge de potassium, ou pour les solutions étendues de per- 
chlorure de fer. Une dissolution de sel marin se comporte de même, 
et du papier qu'on y plonge absorde plus d’eau que de sel. C’est l’image 
de ce que fait le sol avec les chlorures et les nitrates, qu'il laisse dispa- 
raître trop facilement avec les eaux de drainage; une partie impor- 
tante des substances salines qu’on trouve actuellement dans la mer 
était certainement répartie autrefois dans les couches terrestres d’où 
les eaux les ont éliminées peu à peu, par des actions capillaires ana- 
logues à celles que nous essayons de décrire, pour les amener à la 
mer d’où elles ne peuvent plus revenir. C’est un mécanisme identique 
qu'on a fait fonctionner depuis quelques années, pour le dessalage des 
terrains de la Camargne. 

J'ai déjà développé ces idées à plusieurs reprises, même dans ce 
Recueil, et je n’insiste par conséquent pas davantage. Je ne voulais 
montrer qu’une chose, c’est qu'il résulte de ces actions si précises, 
mais parfois si délicates qu’elles en deviennent instables et capri- 
cieuses, une distribution qualitative des matières organiques, plus ou 
moins complètement solubilisées par les microbes. Toutes choses 
égales d’ailleurs, ce sont les matériaux les plus solubles qui pénètrent 
le plus profondément dans le sol, les matériaux les plus colloïdaux et 
les plus voisins de l’état insoluble qui restent les plus voisins de la 
surface. La profondeur à laquelle les uns et les autres s’enfoncent 
dépend, pour un même sol, de leur abondance, car la puissance 
absorbante d’une terre n’est pas indéfinie, et, pour des solutions iden- 
liques de matières organiques, de la nature, de la porosité et de la 
compacité du sol, c'est-à-dire, en somme, de la composition et de la 
surface de développement de la paroi absorbante. 

Au sujet de la composition du sol, il y a à remarquer que ce sont 
les corps colloïdaux qui ont, toutes choses égales d’ailleurs, la plus 


828 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


grande puissance absorbante. Ainsi l’humus et l’argile sont de plus 
puissants absorbants que les calcaires crislallins et le sable quartzeux. 
Quant à l'influence de la porosité du sol, nous allons nous en faire 
une idée en cherchant comment sont retenus, dans la filtration au 
travers du sol, les corpuscules solides et en particulier les germes 
de microbes que les eaux de pluie tendent constamment à entraîner 
dans les profondeurs. 

Nous pouvons pour cela revenir à notre comparaison avec le 
papier à filtrer. Lorsqu'on filtre à travers du papier un précipité 
d’oxalate de chaux ou de sulfate de baryte, ou une eau trouble à 
. travers une bougie d'amiante ou de porcelaine, si le liquide passe 
limpide, ce n’est pas du tout que les éléments retenus soient de 
dimension plus grande que celles des pores à traverser, et soient 
retenus à la façon de la salade dans un panier ‘. Ils pourraient au 
contraire très facilement traverser le papier ou la porcelaine, si, dans 
ce passage, ils n'étaient obligés de circuler à petite distance de surfaces 
absorbantes qui les attirent, les happent au passage, et s’en recou- 
vrent comme d’un vernis. Les chances qu'ils ont d’être immobilisés 
dépendent donc directement du rapport des surfaces filtrantes au 
volume du filtre, c’est-à-dire de sa porosité ou du degré de ténuité 
capillaire des canaux irréguliers et anastomosés qui le traversent. 
De sorte qu’en revisant d'un coup d’œil l’ensemble des conclusions 
auxquelles nous sommes arrivés nous voyons que ce sont les mêmes 
forces d'adhésion capillaire qui retiennent dans les couches superti- 
cielles du sol les substances organiques et les germes de microbes, 
c’est-à-dire la matière alimentaire et les êtres microscopiques qui s’en 
nourrissent. 


IT 


Il y a plus. En amenant, comme nous l'avons vu, une distribution 
qualitative de la matière organique suivant l’épaisseur, les mêmes 
forces amènent aussi, et simultanément, une distribution qualitative 
des microbes. Il est clair que la matière organique la plus voisine de 
son élal primitif, la plus colloïdale, étant cantonnée de préférence dans 
les couches superficielles, c’est là qu’habiteront aussi de préférence 
les microbes chargés de la transformer. Ces microbes sont naturelle- 
ment les plus difficiles sur leur alimentation, ceux qui ont besoin des 
matériaux les plus nutritifs, de ceux que nous utilisons nous-mêmes. 
Il faudra, pour les cultiver, leur offrir de la gélatine, du bouillon, des 
peptones en solution concentrée. Le prix de la vie augmenterait beau- 


4. Voir mon Cours de Physique et de Météréologie. Paris, Hermann, 1592. 


REVUES ET ANALYSES. 829 


coup si nous nous nourrissions comme nous nourrissons dans nos 
laboratoires les microbes de cette catégorie ; il n’y a pas de malade à 
qui on offre des bouillons plus concentrés et en apparence plus 
savoureux. 

Dans les couches profondes du sol, au contraire, là où n'arrive que 
de la matière organique déjà profondément dégradée, les microbes 
qui les transforment et en achèvent le gazéification ne sont plus 
difficiles sur leurs conditions d'existence. J’ai montré ‘ que quelques- 
uns d’entre eux ne peuvent pas consommer la matière organique 
initiale, soit qu’ils ne sécrètent pas normalement la diastase néces- 
saire à la liquéfier, soit parce qu’elle est pour eux une substance inerte. 
Pour cultiver ces microbes, il faudra donc leur offrir des liquides très 
pauvres en matières organiques complexes; souvent des sels ammo- 
niacaux suffiront. Au-dessous d'eux, nous trouverions les ferments 
nitreux et nitriques, que M. Winogradsky a été obligé de cultiver en 
dehors de toute substance organique, dans de Ja silice gélatineuse, 
et avec de l’ammoniaque comme unique source d’azote. 

Cela nous amène tout droit à l’examen critique de ce que nous 
savons au sujet de la distribution des microbes dans le sol. Nous 
avons résumé au fur et à mesure, dans ces Annales, la plupart 
des travaux faits dans cette direction, depuis que M. Miquel leur 
a donné la première impulsion ?. Après avoir cherché une méthode 
sûre, qu'elle ne semble pas du reste avoir encore rencontrée, la 
science est pourtant en possession, depuis les recherches de C. Fraenkel, 
d’un procédé de numération capable d’inspirer confiance, mais dont il 
ne faudrait pas, comme nous allons essayer de le montrer, prendre au 
pied de la lettre tous les résultats. 

Les conclusions de ce travail confirment, dans leurs traits généraux, 
ce qu’on savait avant, à savoir que le nombre des microbes va en 
décroissant à mesure qu’on s'enfonce dans le sol. A cette notion, 
Fraenkel a ajouté celle d'une distribution très inégale des microbes 
dans des couches terrestres très voisines, si bien qu'il peut y en avoir 


1. Ann. de l'Institut agronomique, t, IV, 1880. 

2. Voici les principaux travaux publiés sur ce sujet : 

P. Micuez, Annuaire de l’Obs. de Montsouris, 1879. 

Kocu, Mitcl. a. d. Kai. Gesundh., t. 1, p. 35. 

L. Anamerz, Recherches sur les champignons inférieurs de la couche arable, 
Leipzig, 1876. ; 

Beuer, Sur la bactériologie du sol (Deutsch. med. Wochens., 1886, n° 27). 

MaccorA, Recherches quantitatives sur les microorganismes. (Giorn d. R. 
Accad. di med., A887, t. II.) 

C. FRazxxez, Zeitschrift f. Hyg., t. Il, 1887. 

Voir aussi ces Annales, t. 1, pp. 34 et 246; t. IV, p. 172. 


830 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


beaucoup en un point, et peu ou pas quelques centimètres plus loin. 
Pour donner une idée de ces inégalités dans la distribution, le mieux 
est d'emprunter à M. C. Fraenkelles résultats d'une de ses expériences. 
Voici quelle était, le 4 septembre 1886, la distribution des germes 
suivant la profondeur sur un point de la colline de Pfingstherg, dans 
le parc de Potsdam: 


A la surface 95,000 germes par gramme de terre. 

A 0m,25 de profondeur 120,000 — — — 
On,50 — 65,000 — —= LE 
0,75 ee 3,000 = = 2 
1,00 _ 600 — = sr 
4,25 — 0 — == _ 
4,30 — 100 — -— 
2,00 — 0 _ = de 
2n,50 S 0 a a 2 
3,00 — 150 —- — — 
3,50 — 100 — — — 
4m,00 — 0 — _ — 
Aam,50 er 0 Le te 5 


On aperçoit, dans cette série de nombres, d’abord l'appauvrissement 
relatif de la couche superficielle, dû évidemment à l’action combinée 
de la dessiccation et surtout de la lumière; on voit aussi laugmenta- 
tion du nombre de germes à une profondeur de quelques centimètres, 
puis leur diminution non graduelle, mais par soubresauts, telle couche 
contenant des microbes pouvant être comprise entre deux couches en 
apparence stériles. 

Je dis : en apparence, parce que tous ces résultats, de même que 
ceux sur lesquels se fonde la notion de la décroissance du nombre des 
germes à mesure qu’on s'enfonce dans le sol, devraient être accom- 
pagnées d’un correctif. Il faudrait dire : diminuent de nombre les 
êtres microscopiques cultivables dans les bouillons ou gélatines con- 
centrés que nous employons dans nos laboratoires. Ceux-là, nous 
venons de le voir, doivent précisément habiter les couches superti- 
cielles les plus riches en matière organique complexe, etils deviennent 
rares, ou même ils manquent, à mesure qu’on aborde des profondeurs 
où ne pénètrent que par exception, sous forme de racines ou de radi- 
celles, ou encore par des fissures trop larges pour que les attractions 
capillaires puissent se manifester, de la matière organisée ou de la 
matière organique dans l'état où on la trouve dans les {issus d’un 
animal ou d’un végétal. Dans les profondeurs, au contraire, habitent 
de préférence les microbes peu exigeants, ceux qui redoutent le 
contact des gélatines et des peptones, et si on changeait les bouillons 
de culture, si on prenait pour cela de l’eau pure ou très peu chargée 


REVUES ET ANALYSES. S31 


de matière organique très simplifiée, glycocolle, sels ammoniacaux à 
acides organiques, etc., on trouverait sûrement une distribution tout 
autre que celle que nous connaissons. Peut-être même que les ferments 
nitreux et nitriques sont plus abondants dans la profondeur que dans 
les couches voisines de la surface, et peut-être aussi qu’au lieu de dimi- 
nuer ils iraient en augmentant à mesure qu’on s'éloigne de la surface, 
si la loi générale de la diminution de la matière organique, complexe 
ou simple, avec la profondeur, ne rendait pas de plus en plus rare la 
matière nutritive, et n'empêchait par conséquent la prolifération, 
dans les couches profondes, des microbes qui, par goût et par nature, . 
fuient le voisinage de la couche d’humus et de fumier qui forme la 
croûte superficielle. 

C'est évidemment en se plaçant dans le même ordre d’idées qu’il 
faut concevoir cette stérilité absolue, constatée par M. Fraenkel dans 
des couches terrestres placées en sandwich entre deux couches peu- 
plées et même fertiles. Ce qui est seulement démontré, c’est la stéri- 
lité en germes capables de se revivifier dans des milieux organiques 
très nutrilifs. Sans cette réserve, le mot stérilité ne se comprendrait 
pas, car rien que la diffusion aurait dû amener dans la couche inter- 
médiaire de la matière organique existant dans les deux couches 
supérieure et inférieure, et, avec la matière organique, les microbes 
auraient pénétré comme ils pénètrent partout, même dans les espaces 
capillaires qui n’en laissent pas filtrer les germes, c’est-à-dire par voie 
d’ensemencement et de multiplication. On s’explique au contraire très 
bien que la matière organique de la couche infertile ne soit pas la 
même que celle des couches voisines, soit parce que les éléments qui 
la composent n’ont pas la même faculté absorbante que ceux des 
couches peuplées, soit que la matière organique qui y à pénétré ait 
été détruite plus vite, et ait laissé place à des ferments vivant de ses 
produits de destruction, et se refusant à la culture en gélatine pepto- 
nisée. Une couche où la nitrification est active est par là même une 
région où les ferments qui vivent dans nos bouillons de laboratoire, 
ne peuvent pas prospérer ni même vivre. Les différences de composi- 
tion chimique du sol, de composition organique de deux couches 
voisines sont la loi dans la croûte terrestre, et le nombre des combi- 
naisons possibles entre ces quatre éléments, quantité et qualité de la 
matière organique, quantité et qualité des microbes, est assez grand 
pour expliquer d’une façon suffisante les irrégularités et les contra- 
dictions apparentes relevées par un mode d’expérience qui, en n’étu- 
diant qu’une face de la question, conclut qu'il n’existe rien là où on 
ne trouve rien. 

S'il en est ainsi, on comprend aussi que cette inégalité et cette 


832 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


apparente singularité de la distribution des germes ne se réalise pas 
partout. Elle doit être en particulier beaucoup moins apparente dans 
les terres bien homogènes. C’est ainsi que M. Kramer‘ n’a observé 
rien de pareil dans un sol argileux et assez chargé d’humus qu'il a 
exploré jusqu'à 1",65 de profondeur. Les moyennes de trois expé- 
riences faites en un même point ont donné les nombres suivants : 


AOm,20 de profondeur 650,000 germes par gramme de terre. 


0m,50 _ 500,000 = 
0m,70 — 216,000 = 
4m,00 = 36,000 — 
1m,20 — 5,600 — 
1,40 — 700 — 
1,65 —— quelques germes — 


Ici la décroissance est régulière, bien qu’elle ne soit pas uniforme. 

La conclusion de tout ce qui précède est donc que, sans faire fi des 
résultats acquis, il faut avoir en eux une confiance limitée. Une autre 
conclusion est que, pour avancer dans l'étude de la question, il faut 
employer d’autres méthodes, et en particulier ne pas se contenter des 
ensemencements en gélatine peptonisée qui ont seuls servi jusqu'ici. 
Quand M. Winogradsky a voulu isoler, par cultures sur plaques, les 
ferments nitreux et nitriques qui existent dans tous les sols, c’est préci- 
sément dans les portions de plaques de gélatine où aucune colonie 
n'avait apparu qu il recherchait les germes de ses microbes, pour les 
transporter dans un milieu où il supprimait tout azote organique. 
C'est encore dans des milieux ne contenant pas d'azote qu’il a dù 
ensemencer, pour en obtenir des cultures, les microbes fixateurs 
d'azote dont il a commencé l’étude. Si on ajoute à ces microbes hos- 
tiles aux milieux azotés ces begqiatoa des eaux sulfureuses, et ces 
bactéries des eaux ferrugineuses étudiées par le même savant, si on 
ajoute la tribu confuse encore, mais qui se débrouille peu à peu, des 
bactéries pathogènes qui nous arrivent par les eaux potables, et qui 
ne se développent pas bien dans les gélatines à la peptone, ou y sont 
écrasées par des espèces plus adaptées au milieu, on voit qu’il y a beau- 
coup d'espèces qui nous ont échappé dans nos numérations, et on voit 
aussi qu’il faudra, pour étudier comme ils doivent l'être les microbes 
du sol, recourir à des méthodes un peu moins rudimentaires que 
celles qui consistent à ensemencer dans la gélatine peptonisée un cen- 
timètre cube d’eau ou un gramme de terre. 

Ajoutons enfin que dans tout ce qui précède je n’ai pas parlé des 
anaérobies. Il y a constamment, comme on sait, de l’acide carbo- 
nique dans le sol, et en proportion croissante avec la profondeur. 


1. Die Bakteriologie in ihren Besiehungen zur Landwirthschaft, Vienne, 1890. 


REVUES ET ANALYSES. 833 


Sans doute, il y a toujours aussi de l'oxygène, mais de ce que, en 
moyenne, on ne trouve jamais qu’un mélange où, le gaz azote mis à 
part, l’oxygène domine, il ne faut pas conclure qu'il n'y à partout 
que des actions aérobies et que la vie anaérobie est impossible. De 
ce que dans une cave où fermente de la vendange l'air reste toujours 
respirable s’il y a une bonne ventilation, il ne faut pas conclure qu'il 
n’y a pas quelque part des cellules anaérobies en action, même en 
action puissante. Toutes proportions gardées, les anfractuosités et les 
vides de la terre arable sont des caves plus ou moins bien aérées, 
mais dont les coins recèlent bien des ferments anaérobies. De ceux-ci, 
il n’a pas encore été question: c’est donc encore une question à reprendre. 

La meilleur manière de résoudre le problème général qui se pose 
est peut-être d’en chercher une foule de solutions particulières rela- 
tives chacune à un microbe déterminé. Il n’y a qu’à étudier le mode 
de distribution dans le sol des microbes que nous connaissons déjà, 
et de ceux que nous arriverons à connaître. On a dressé, au prix de 
recherches nombreuses, le catalogue de tous les microbes rencontrés 
dans le sol : c'était un travail bien inutile. Tous les microbes doivent 
exister dans le sol, car d’où viendraient-ils, si ce n’est de là? Dès lors, 
on est autorisé, dès qu’on connait la physiologie, les besoins alimen- 
taires etles moyens de culture d’un microbe quelconque, à rechercher 
comment ses germes sont distribués dans l’épaisseur de la croûte 
terrestre. C’est par une multitude de ces recherches individuelles, 
chacune consacrée à un microbe déterminé et bien connu, qu'on 
arrivera à se faire une idée de la distribution des microbes dans le 
sol, plutôt que par ces expériences en bloc dans lesquelles on récolte 
de l’incertain pour avoir semé de l’inconnu. 

DucLaux. 


M. Wernike : Contribution expérimentale à la connaissance du bacille 
diphtérique de Læffler et à la sérumthérapie (Archiv fur Hygiene, 
t. XVIII, 1893). 


M. Wernike décrit dans ce mémoire ses tentalives pour immuniser 
contre la diphtérie de grands animaux, et notamment les chiens, dans 
le but d'obtenir de grandes quantités de sérum pour traiter l'homme. 
Jusqu’ici on regardait les chiens comme presque généralement réfrac- 
taires vis-à-vis de cette maladie. MM. Roux et Yersin parvinrent les 
premiers à la donner à ces animaux. M. Wernike expose dans cet 
article des résultats analogues : il donne, et même très facilement, la 
diphtérie aux chiens. Il faisait d’ordinaire ses expériences avec une 


po 
J9 


854 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


culture en bouillon âgée de deux jours et très virulente, qui tuait les 
cobayes aux doses de 0,0075 c. c., 0,005 c. c. Les chiens inoculés sous 
la peau avec la même culture, aux doses de 0,4 c. e., 4 c. c., mouraient 
tous en peu de jours. Chez eux la marche générale de la maladie était 
analogue à celle des cobayes, avec la même courbe caractéristique 
de la température et la paraiysie des extrémités. Les données bacté- 
riologiques étaient aussi les mêmes; on ne trouvait des bacilles de la 
diphtérie qu’à l'endroit de l’inoculation, où ils périssaient rapidement. 

M. Wernike choisit alors une nouvelle méthode d’immunisation 
contre la diphtérie : celle de l'alimentation avec de la viande diphté- 
rique.Ilaimmunisé des chiens en lés nourrissant d’un côté exclusivement 
avec de la viande d’une brebis immunisée contre la diphtérie, et d'un 
autre avec celle d’une brebis morte d’une diphtérie chronique. Avec la 
viande de la première brebis on nourrissait 2 chiens; un jeune chien 
(A) pesant 5 1/2 kilogrammes, et un chien adulte (B) de 33,5 kilo- 
grammes. Le jeune chien avait reçu durant six jours une quantité de 
viande égale au poids de son propre corps, tandis que l’autre (B) n’en 
avait reçu qu'un tiers du poids de son corps. Pendant toute la durée 
de cette alimentation, on ne remarqua aucune réaction de l’organisme. 
Après trois Jours, on inocula sous la peau du jeune chien 0,5 c. c. de la 
culture virulente en bouillon. Le témoin mourut le quatrième jour; 
quant au chien A, il présenta pendant quelques jours des phéno- 
mènes morbides, n'ayant apparemment qu'un caractère local (un 
œdème et une petite infiltration); l’état général était normal. Il 
faut noter encore que les bactéries diphtériques se conservèrent 
longtemps (14-24 jours) à l’endroit de l’inoculation : le chien les 
léchait constamment, mais cela ne lui faisait aucun mal. Quelques 
jours plus tard il se forma un œdème sur le ventre et sur la ligne 
médiane de la poitrine de ce chien; à cela se joignit bientôt une 
inflammation cutanée. Mais tous ces phénomènes disparurent rapi- 
ment et l’animal guérit complètement. 

Quant à la viande provenant de la brebis morte de la diphtérie 
chronique, M. Wernike s’en servit pour nourrir aussi deux chiens 
(G et D). 

Partant de l’idée que la nutrition par la viande de la brebis immu- 
nisée donne une immunité plus stable que celle de la brebis ayant eu 
la diphtérie chronique, M. Wernike fit ultérieurement ses expériences 
de contrôle sur l’immunité acquise avec une dose double : ainsi le 
chien B (nourri par la viande de la brebis immunisée) reçut 1 c. c. 
de culture virulente, tandis que le chien C et celui de contrôle n'en 
reçurent que 0,5 c. ce. Cela eut pour résultat la mort du chien B; par 
contre, le chien C resta vivant. 


REVUES ET ANALYSES. 839 


M. Wernike déduit de ce dernier fait, ainsi que des expériences 
exposées plus haut, les conclusions suivantes : 49 La nutrition des chiens 
avec de la viande d'une brebis imm'imisée contre la diphtérie peut lui 
donner l'immunité contre cette maladie. Ge qui prouve que les substances 
immunisantes se trouvent non seulement dans le sérum, mais aussi 
dans les organes internes. De plus, il conclut que les sucs gastriques 
ne produisent sur les substances immunisantes aucun effet nuisible. 

20 L’immunilé acquise à la suite de cette alimentation ne se distingue 
pas pour une grande stabihté. La puissance de l'immunité est en rapport 
direct avec la quantité de viande ingérée. 

S’étant ainsi assuré de la possibilité de donner aux chiens l'im- 
mupité, M. Wernike essaya de la porter à son maximum. 

D’après ses expériences antérieures, les toxines des vieilles 
cultures, inoculées à des doses qui ne provoquent qu’un état morbide 
et non la mort, donnent après un certain temps l’immunité contre les 
cultures virulentes mortelles. C’est pourquoi, voulant renforcer le degré 
de l’immunité, il employa une culture diphtéritique âgée de 4 mois et 
additionnée d’acide phénique. Il ne filtrait pas la culture, croyant que 
les bactéries mortes peuvent augmenter sa force immunisatrice. Il 
commença à inoculer de faibles doses, 1 ce. c., 2 c. c. et ainsi de suite 
jusqu’à 50-60 c. c. La réaction chez les animaux ne se manifestait que 
par une tumeur à l'endroit de l’inoculation. Plus les cultures étaient 
riches en bacilles, plus forte était la réaction ; la tumeur fluctuante se 
transformait en abcès. Après que les chiens furent habitués à de 
grandes doses de vieilles cultures, M. Wernike commença à leur ino- 
culer des cultures en bouillon très virulentes, et à des doses deux fois 
plus grandes que les quantités minima mortelles pour les chiens. Ayant 
commencé par 1 c. c., il aboutit à 170 c. c., c'est-à-dire à une dose 
mille fois plus grande que celle qui tue un jeune chien. 

Les chiens réagirent à ces grandes doses par des phénomènes de 
nature locale et générale. 

Ces cultures provoquaient une élévation de la température qui 
après deux à trois jours atteignait 40°,2-409,7, et s'abaissait ensuite 
graduellement durant huit jours. Parmi les phénomènes locaux, on 
observait un œdème dans le derme, qui se transformait en tumeur 
fluctuante. Sur les deux côtés de la colonne vertébrale (l'endroit où 
l'on faisait ordinairement les inoculations), il se formait des nodosités, 
dont le contenu était purulent et rougeâtre. Pour connaître le sort des 
bactéries séjournant en si grandes doses dans les chiens immunisés, 
M. Wernike ensemençait de ce liquide purulent dans du bouillon et 
sur la gélose, à divers intervalles après l’inoculation, Il inoculait de 
même des cobayes. Les ensemencements donnaient des cultures après 


836 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


vingt-quatre heures; les cobayes réagissaient par des phénomènes 
morbides de nature locale (une nécrose du tissu à l'endroit de l’ino- 
culation, ou un œdème sur le ventre et sur la poitrine), après quoi ils 
se rétablissaient rapidement. 

L’examen microscopique du même liquide démontra beaucoup de 
bactéries libres ; les cellules du pus en contenaient aussi. Il est évident 
que la culture s’affaiblit après avoir séjourné vingt-huit heures dans 
l'organisme des chiens immunisés. Cette même culture affaiblie deve- 
nait de nouveau virulente, si on la débarrassait des cellules du pus 
par réensemencement dans du bouillon. Après quarante-huit heures 
on trouvait encore des bactéries dans ce liquide purulent, mais elles 
se coloraient mal et se trouvaient en grande partie dans les cellules du 
pus; le pus donnait une culture qui ne provoquait même chez les 
cobayes aucun phénomène morbide. Après quatre jours, on ne trouvait 
guère de bacilles dans les abcès, ni à l'aide d’ensemencement, ni au 
microscope. 

Il résulte de toutes ces expériences : 19 que les bactéries diphtéritiques 
inoculées, même âtrès grandes doses, périssent dans l'organisme des chiens 
fortement immunisés après y avoir séjourné quelques jours (3 à 4); 
20 que bientôt après l’inoculation on constate déjà une diminution de leurs 
virulence. 

La cause de l’affaiblissement et de la mort des bactéries dans l’or- 
ganisme immunisé peut être attribuée aux éléments cellulaires ou bien 
aux liquides. Dans le dernier cas, il faut admettre que l’action du sérum 
est tout autre in vitro que dans l’animal vivant : tandis qu’on trouve 
les bactéries détruites ou affaiblies dans ce dernier, elles se dévelop- 
pent et pullulent in vitro. 

M. Wernike a aussi fait des expériences sur le traitement de la 
diphtérie. Il opérait avec des cobayes. Il inoculait aux animaux d’expé- 
riences, ainsi qu’au témoin, 0,0075 c. c. de la culture en bouillon. Cette 
dose étant considérable, tous les témoins mouraient de la diphtérie. Le 
sérum fut inoculé aux animaux traités, vingt minutes après l'infection à 
des doses différentes, et notamment dans la proportion de 1 pour 100 
du poids de l’animal, de 1 pour 5,000, de 4 pour 10,000. II fut con- 
staté que la toxine élaborée par les bactéries inoculées n’était suffisante 
que pour provoquer une nécrose locale; un des animaux traités ne 
présenta même aucun phénomène morbide. 

Le résultat de l’inoculation du sérum, faite huit heures après l’infec- 
tion, prouve incontestablement l’activité paralysante du sérum sur les 
toxines. Même après vingt-quatre heures, c’est-à-dire après un laps de 
temps où les toxines avaient déjà produit leur effet nuisible (un abais- 
sement de température, une difficulté respiratoire), le traitement 


sy 


REVUES ET ANALYSES, S3T 


par le sérum fut encore très favorable : l'animal se rétablissait peu 
à peu et enfin guérissait complètement. Le traitement par le sérum 
peut être efficace après des périodes de temps beaucoup plus longues, 
si on inocule aux animaux des doses plus considérables, Un gramme 
de sérum peut être curatif pour 10 kilos du poids de l’animal, si on 
commence le traitement vingt minutes après l'infection, tandis que 
vingt-quatre heures après l'infection il en faut 1 gramme sur 
100 grammes. M. Wernike avait un sérum dont la force curatrice 
était si grande qu'un gramme de ce sérum immunisait plusieurs cen- 
taines de kilogrammes du poids de l’animal. Si l’on pouvait opérer sur 
l’homme, il suffirait done de quelques centigrammes de sérum pour 
Pimmunisation de l'adulte, et de quelques milligrammes pour celle 
de l'enfant. 

MM. Wernike et Bebring ont en outre employé une méthode parti- 
culière pour donner à l'animal une immunité plus durable. Ils avaient 
antérieurement remarqué que si l’animal avait été infecté par la cul- 
ture ou par la toxine de la diphtérie, avant ou après l’injection du 
sérum, il gardait plus longtemps l’immunité acquise. Se basant sur ce 
fait, ils commençaient par donner aux animaux un certain degré 
d'immunité en leur inoculant de petites quantités du sérum curatif; 
après cela, ils leurs injectaient à certains intervalles des doses de 
cultures de plus en plus considérables. La force immunisante du 
sérum de pareils cobayes était supérieure à la force du sérum des chiens 
même très immunisés, et ces cobayes eux-mêmes supportaient des 
doses de culture suffisantes pour tuer en moins de trois jours 
8,000 cobayes non immunisés. Le sérum du chien est inoffensif pour 
l'homme, même sion l’inocule à de fortes doses (40 c. c.). M. Wernike 
décrit trois cas de traitement de la diphtérie des enfants par le sérum. 
Il obtint toutes les fois les résultats positifs. Il reste à savoir si ces 
résultats sont dus au traitement par le sérum, ou sont seulement 
des cas de guérison naturelle. Une statistique plus étendue pourra 
seule résoudre cette question. 

Ter. 


838 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR, 


STATISTIQUE! DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE, — NOVEMBRE 1895. 


Morsures à la tête simples Sun A US TE D) »| » | 
et à la figure multiples. . . .| »| » | >| 2 cer St 
Cautérisations effieuces à. .….. . LA PROS RERO Pa 26e) LE D ES PO ES 3 20) 
_ INC NCACES MEET DE ND ST ER ES SS >|» |» 
Pas de cautérisation: 7% RATS TAN STE, | »y | »|» | » 
DAETT : simples UE Dot »1 » | » [281 »|45 
Morsures aux mains aniples le le 5 MO e (24 
Caulérisalions efficaces Rene: PARLES) ES SR nm EE 
— inefficaces SU MP ENS ES LS »| » re 29! » » 91 » » 
Pas de cauténisation. NT ER LS" Dole? Al nl Se 
Morsures aux mem- SIMpIes 2e | » | el”? 6 94!” 4 ) 
bres et au tronc multiples... .| |» | » |18! »| 5 9 
Cautérisations efficaces . . . . . . . . . DONS PE EE 2e RD UE 
— IMÉTRCUCES PT a NA EPA ETS ee Eee 
PAS Te CAULETIS AIO EN EN EN | ED AI En) 91 » » | GI» |» 
EFADALS AOCRATÉS NES PM EN et >.» | » |'20| » 10 RIT 
MORSURES TRUE NEA EME ANR »| » | » 4| » » 2 1 ES 
Morsures multiples en divers points du 
CODPS EN RS RES FE Tete EE SH op es moule »| 2/1 9 
Cautérisations efficaces . . . . . . ne D ME FE | ASE Le » SES TI 
— ine f fi CACES EAN MEN Ee D» » » » » »| » » 
Pas Ge CAULÉNISAION NE UN. 0e Ben En le es PNA EU LS >= 9) O8 
RO DITS NOÉ CRITE SE NE ER MD) EN LS LE ES » (AE ER 
MOrSUTES IA NUE CET Eee Le Re Dole ele » SES 
mener semeeer | acces | ecmcus | ces | auumece | aueues | meneur | encs | cure | oem 
Français et Algériens . 5 85! 31) 
Totaux. EtranSOrs MCE D 15 4! 89 ro 
A B C 
mm 
TOTAL GENERAL ER AS NERO 129 


1. Les animaux mordeurs ont été : chiens, 109 fois; chats, 
17 fois; cheval, 1 fois; mouton, 1 fois; pore, 1 fois. 

Errara. — Par suite d’une erreur dans la statistique du 
mois d'octobre dernier, Garreau, Henri, a été porté comme pris 
de rage le 1° septembre; il l'a été en réalité le 1°" septembre. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Charaire et Cio. 


TABLE DES MATIÈRES 


Reubié de.M° Pasteur. 22.07 .çine RARE SUP ENTREE 
Sur les phosphates du lait, par M. Ducraux. . . . . . . . .. 
Étude bactériologique du choléra observé à l'hôpital Saint- 
Antoine, en 1892, par MM. Lesace et MacalGxE . . . .. 
Sur les échanges d’acide carbonique entre les plantes et 
l'atmosphère, par M. Ta. ScnLoesinG fils. . . . . ... ee 
Sur la formation d’aldéhydes pendant la fermentation 
alcootque. par MES ROESER EIRE US Ne 
La théorie des alexocytes, Redue critique . |. : .. . Un ; 
Sumiesmétanisme: dela: coagulation. 72e} 47e etre 
Statistique de l’Institut Pasteur, décembre 1892. . . . . . . ... 


Contribution à l’étude du tétanos ; prévention et traitement 
par le sérum antitoxique, par MM. E. Roux et Varr.- 
ARR: 0e LE ROM RE PONT EDR ES EP NE 

Sur les be de écnoaion du streplocoque et du 
bacille typhique chez l’homme et les animaux, par 
PEN INCENME RS LETTRE n eme FR Re : 

Sur les modifications des leucocytes dans l’infection a 
dans l’immunisation, par Mie CrEm. ÉverarD et 


MMS Massarr et DEmoon::::.0, ea vx He LE Dos 
Recherches sur les microbes acétifiants, par M. Wermis- 
CREER ER A 01 ne dus den ete 


La morphologie du Microsporon furfur, par M. KoTLraAR. . . . .. 
Sur un procédé rapide pour colorer les cils de quelques micro- 

PHUSINeS,. Far MSA SOLAVO , 1.7." NT, CM cleete . 
Conservation des virus dans la glycérine, par M. ScLavo . . . . . 
Le rôle des mouches dans la propagation de l'épidémie cholé- 

ÉtUE par M SAWTOHENKO!:] 5: 020 Len 114 CS PEU SENTE, 
Statistique de l’Institut Pasteur, janvier 1895 . . . . . . . . . . . 


Moyen de défense de l’organisme contre les microbes après 
vaccination et dans la guérison, par M. Saxarezn . . . 
8 > P 


840 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Contribution à l'étude de l’immunité acquise contre Île 
paeumocoque, par M°2ISSAREr 222,266 En COR 
Bactéries charbonneuses dans la vase du fond d’un puits, 
par MDI TROPTORR ES PEL ARR LE ER re 


Statistique de l'Institut Pasteur, février 1893 . . . . . . . . .. . 


Sur une nouvelle forme de fièvre rencontrée sur les bords 
de la Méditerranée, par M. Davin Bruce. 
Sur le rôle protecteur des microbes dans la crème : fe 
fromages, par M. Ducraux . . . . .... He De NM 
Recherches bactériologiques sur la “nanitre des ani- 
maux dans l’espèce bovine, par M. An. Lucer. . . . . .. 
Propriétés colorantes de Poxychlorure de ruthénium 


ammoniacal, par MM. Nicoize et CANTAGUZÈNE . . . . .. 
Les vaccinations antirabiques à l’Institut Pasteur en 1892, 
par M HE: PODTENINE RER RE SN eee 
Les critiques de la théorie biologique de l'inflammation, Revue 
DNTICTQUENR SEE TER RATE AE DE RAR En 2 D PA Ne 1 ES 
Statistique del Institut Pasteur, mars 1893. PEER SU RS à 


Fermentation anaérobie produite par le bacillus orthobuty- 
hous,-par ML "GRIMBERT ES EN ee RER 

Recherches sur le choléra et les ee 1 mémoire 
Sur la propriété préventive du sang humain vis-à-vis 
du vibrion de Koch, par M. MercaNikorr. . . . . . . . . 


Sur les sucres à cinq atomes de carbone, Redue critique. . . . . 
Contribution à l'étude de la maturation du fromage, par M. Bau- 
MANN AT AP ne ER EN Ce ee An RES Er RER PEER 
Influence de la lumière sur les bactéries, par M. Korzrar. . 
Statistique de l’Institut Pasteur, avril 1893 . . . . . . . . .. 


La désinfection des locaux, par MM. CuauserLanp et E. FERN- 


BA CHAN DM) PA ER A REA ; 2e 
Étude sur l'anatomie PAROI tRNE de la morve rer 
par MM. LecLancHE et MONTANÉ . . . . . . . . . .. 


Éd des tricophyties à à dermite profonde, spécialement de 
la folliculite agminée de l'homme et de son origine 
animale, Dar M. R°:SABQURAUD eee lee 

Contribution à l'étude des essences au point Fe vue de leurs 
propriétés antiseptiques : essence de niaouli, essence 


331 


339 


ss 
Le) 
| 


TABLE DES MATIÈRES. 


RACE DOS DAC MEN EGRNEE RL 27207 TNT AC D: 
Sur le vieillissement des vins, par M. DucLaux . . . .. 
Sur la phagocytose dans l’actinomycose, par le de 

Pawrowsev-et Mic: MArSuronr. 5". "420. 4 mir. 
Cils composés chez une bactérie trouvée dans les selles 

d’un cholérique, par M. SAKHAROFF . . . ... ... . . . .. 
Technique de la coloration des cils : cils des vibrions cho- 

lériques et des organismes voisins ; cils du B. typhique 
et du B. cour, par MM. Nicoze et Morax. . . . . . . . .. 
Recherches sur le choléra et les vibrions. 2° mémoire : 
Sur la propriété pathogène des vibrions, par M. Mrr- 
CHNR OI ST me A . 


Résolution de l'acide lactique en ses composants optiquement 

actiiss par MMYPuURprE et: WADKERS 0." ROUTES LEUR 
La modification du sang dans le choléra. par M. OKLaADNvkH . . 
Statistique de l'Institut Pasteur, mai et juin 1593 


SU oN tek Ha Le met ve 


Tuberculose pulmonaire expérimentale : étude anatomo- 
pathologique du processus obtenu par injection vei- 
HOUSE Dar M -DORREL URLS ARRETE ES PER Ee 

Sur une forme de fièvre fréquente sur les côtes de la 
Méditerranée, par M. L. Hucues 


aiMes le Loi-a Viola totrien detre lot se 


Statistique de l’Institut Pasteur, juillet 1893 


Sur la coagulation de l’albumine, par M. Ducraux. . . .. 
Analyse bactériologique de l’air des hauteurs, puisé pen- 

dant un voyage en ballon, par M. Cristian. . . . . . 
Les vaccinations antirabiques à Moscou en 1892 


Sur l'étude chimique des aliments, les corps gras, Revue cri- 


Étiologie de l'influenza, par M. PrEIFFER . . . . . . . . . . . .. 
Statistique de l'Institut Pasteur, août 1893 . . . . . . . . . . . . 


Contribution à l’étude microbique de l’eau, par M. Bcacu- 
SRE PR Poe deu chou dote PR Ces 


Les vibrions des eaux et l’étiologie du choléra, par 
ME SAN ABRDIENe iomeoe sler ec eus dd ME Soie ie ea 


Statistique de l'Institut Pasteur, septembre 1893 . . . . . . . . . 


Sur la formation des acides lactiques isomériques par 


693 
135 


842 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


l'action des microbes sur les substances hydrocarbo- 
nées; par Me PÉREES. 274 RM RU Ne ee 
Sur les analogies entre les procès de fermentation et 
de combustion solaire, par M. Ducraux. . . . . EN 
Note au sujet de l’étiologie du tétanos, par MM. Varrrarn 
etROUCERE «Per. SL RON ee PL NE ER RE 
Sur la valeur antiseptique de l'ozone, par M. pe CHrist- 
MERS IT CPR OU aT  SS e SSRR PNR 2 : 
Vaccinations antirabiques à la station ie 
d'Odessa, par M. le docteur Diarroprorr. . . . . . . .. 
Statistique de l'institut Pasteur de la Société médicale de 
Charkow, en 1891 et 1892, par M. Wyssorowiez . . . 


Sur l'étude chimique des aliments, les celluloses, Revue critique. 
Études sur la question du choléra, par M. STRICKER . . . . . . . 
Résultat de l'inoculation de vaches laitières avec le bacille de la 
diphitérie par M AEBOMNES RESTÉS APCE EIRE SRE 
Contribution à la question du danger de l'injection tuberculeuse 
par le lait ordinaire, par M. FRus . . . . . . PNR RE DE 
Acide sarcolactique par fermentation de l'acide lactique inactif, 
par MM. Percy-FRANKLAND et MAC-GREGOR. . . . . . . . . . . . 
Résolution de l'acide lactique en ses composants actifs, par 


MS Pur DR ENITIAA NT s 


Statistique de l’Institut Pasteur, octobre 1893. . . . . . . . . .. 


Recherches surleshématozoaires des oiseaux, par M. Sakna- 
ROUES: Le D dre me 

Recherches sur ae d ei de He et de 
testicules sur l'infection charbonneuse, par M. A. Gra- 
MATCHIRORT = Te CR AIT: Ê sis tire fitetetiete 

La destruction du virus bonne sous la peau fe 
animaux sensibles, par M. SANARELLI. . . . . . . 


La distribution de la matière organique et des microbes dans le 
SOI RODUE CTIIQUER A NET EE En See RSR LEE ER 
Contribution à l’étude du bacille de Loeffler et de la serumthé- 
rapie, par M. /WERNICKE. . +000 0. COR OR EE EUe 
Statistique de l'Institut Pasteur, novembre 1893 . . . . .. . .. 


812 


820 


823 


833 
838 


TABLE ALPHABÉTIQUE PAR NOMS D'AUTEURS 


TRAVAUX ORIGINAUX 


BLAGHSTEIN . : + à. . Combustion à l’étude microbique de l’eau. 
BoRREL. . . . . . . . . Tuberculose pulmonaire expérimentale. . .. 
Bauce (David). + ”:%: «: Sur la: fièvre méditerranéenne 4: +, . 0. 
CHaAMBERLAND et E. FERNBAcH. Désinfection des locaux . . 4. . . . .. 
Carisrmas (pe). .+.. . Valeur antiseptique de l'ozone. . . . . ... .. 
CRISTLANR. 551 ee. Analyse bactériologique d'air pris en ballon 
DEATROPTOEr "4. Bactéries charbonneuses dans un puits. . . . 
_ Vaccinations à la station d'Odessa . . . . . . 
DROIT. ec aur les phosphates duAait. 25.453 Tete 
—— Sur le rôle protecteur des microbes. 
— Sur le vieillissement des vins. . . . .. oe 
— Sur la coagulation de l’albumine. . . . . .. 
— Fermentations et combustions solaires . . 
Everarp, Massarp et Demoor. Leucocytes dans l'infection. . . . . . . 
DORMI UNE RER ( Essences de niaouli et de cajeput. . . . . . . 
GRAMATCHIKOFF. . . . . Influence des extraits de thymus et de testi- 
cules, sur-le «charbon... DR 
GRIMBERT. . . . .. .. Etude du Bacillus orthobutylicus . . . . .. - 
HÉGHES NE lat “Fievre méditerranéenne: SAXE VE 
NON RENE RES Immunité contre le pneumocoque. . . . . .. 
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—— Etiolosie du choléra ent LUE 
_ Virus charbonneux sous la peau, . . . ... 
SAKHAROFF. . « « « + » 2 CIS /COMMASÉS Er AL ERA A rer 


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844 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


SCHLŒSING. 7. . . -« Echanges gazeux entre l’air et les plantes . 
VariLARD et RouGer. . - : Etiologie du tétanos.”:5: 1.0" ue 
VENCENT. TS Lee Association du streptocoque et du b. typhique. 
WERMISCHEFF . .. . . . Microbes acétihantis à, T'ON EEE 
WYSSO RO WICZ: = = Vaccinations antirabiques à Charkow. . 


REVUES ET ANALYSES 


ABBOIT AU home ee Inoculation diphtérique des vaches. . . .. 
BAUMANN 0 MEET TRS Maturation du fromage: rte 
ERNST IAE NE CURE Infection tuberculeuse par le lait. . . . . . 
KOPARSES SR RER NES, MACTOSPOTONT UT IUT NES INTER EEE 
at er NET Action de la lumière sur les bactéries . . . 
OKDADNYRH 2 LEE Due. Modifications du sang dans le choléra . . 
PErcy-FRANKLAND et Mac-GREGOR. Acide sarcolactique. . . . . . . . . 
PFEIRFERS 0,4 UN. Étiologie de l'influenza. . - . : :. . 
PURDIE EU e Résolution de l'acide lactique. . . . . . . . 
Porte et WaikEr . . . . Résolution de l’acide lactique . . . . . . . 
DAWECHENKO NE Lee ne Rôle des mouches dans le choléra. . . .. 
DOLAVO er sue aiment Procédé de coloration des cils . . . . . .. 
A AR EU ile Conservation des virus dans la glycérine. 
SERICRER AS Mrs eus Études :sur/lé choléra One 
NVERNICRE SN 220 Le Bacille de Loeffler et serumthérapie. 


REVUES CRITIQUES 


La ihéonE des -alexoCyIes.. 20 M APN ENS PARU RTE CERN EEE 
Sur-le mécanisme:de la-coasulationt RATER ER EN 
Les critiques de la théorie biologique de l'inflammation . . . . . . .. 
Sur les sucres à cinq atomes de carbone, ou pentoses . . . . . . . . . 
Sur l’étude chimique des aliments : les matières grasses. . . . . . .. 
Sur l'étude chimique des aliments : les celluloses . . . . . . . . . . . 
La distribution de la matière organique et des microbes dans le sol . 


PLANCHES HORS TEXTE 


Planche [1 mémoire de MM. Everarp, MassarT et DEMOOR. . . . . 
II — SAN AREL DT SE SUR en CP Re 

III — ÉUCET ASS MEN RE TERRE AIRE 

IV et V — LECLAINCHE et MONFANÉ. . . . . . . . 

VI et VII — SABOURAUD Me Re Voie Mere 
VIII — PaAwLowsxy et MAKSUTOFF . . . . . . 

IX _ SARHAROEE vers re PP ef EU 

X,-XD'eb XII — DORRELE LS LE TR RARE 
XII et XIV — DANAREDLIE NL CARRE CR 
XV — SARHAROPR LU ST REC RE EE 


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