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ANNALES

DE L'INSTITUT PASTEUR

ANNALES
DE L'INSTITUT PASTEUR

FONDÉES SOUS LE PATRONAGE DE M. PASTEUR
PAR

E. DUCLAUX

COMITÉ DE RÉDACTION

D: CALMETTE, directeur de l'Institut Pasteur de Lille ;
D' CHANTEMESSE, professeur à la Faculté de Médecine ;
D' LAVERAN, membre de l'Institut de France ;

D' L. MARTIN, directeur du service de Sérothérapie ;

P' METCHNIKOFF, sous-directeur de l’Institut Pasteur ;
D' ROUX, directeur de l'Institut Pasteur ;

D' VAILLARD, membre de l'Académie de médecine.

TOME VINGT-SIXIÈME
1912

AVEC VINGT-CINQ PLANCHES

PARIS

MASSON ET C'°, ÉDITEURS
LIBRAIRES DE L'ACADÉMIE DE MÉDECINE

120, Boulevard Saint-Germain (6e).

wÿ

26° ANNÉE JANVIER 1912 Net

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE

Il. — CONSERVATION DE LA VIRULENCE
DES PNEUMOCOQUES HUMAINS POUR LA SOURIS

par CH. TRUCHE el L. COTON.

Le pneumocoque ne possède pas l’extrème fragilité qu’on lui
attribue communément. Ainsi, M. M. Nicolle à pu faire plusieurs
années de suite des expériences, tant à Constantinople qu'à
Paris, sans éprouver de difficultés sérieuses dans la conserva-
lion des germes qu'il étudiait. D’autres auteurs ont cité, de leur
côté, des chiffres rassurants. Il n'en est pas moins vrai que le
problème qui nous occupe n’a 7amais été abordé systématique-
ment, avec la volonté arrêtée de trouver une technique simple
etsûre, capable de s'appliquer indifféremment à tous les échan-
tillons. C’est ce qui légitime les recherches que nous avons
poursuivies depuis plus de deux ans et dont les résultats.
comme on va le voir, nous ont donné pleine satisfaction.

Nous nous sommes proposé le bwf suivant : étant données
des cultures d'origine humaine virulentes pour les souris, con-
server indéfiniment leur activité initiale vis-à-vis des animaux,
sans faire aucun passage, soil par souris, soit par une autre
espèce.

Le principe de notre méthode consiste dans l'emploi de la
gélatine (procédé de M. Nicolle et Adil-bey, pour la conserva-
lion du virus de la peste bovine). Nous allons faire connaître,
successivement, la {echnique suivie et Les résultats obtenus.

fl

[AS]

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

TECHNIQUE SUIVIE.

Voici le schéma, dont nous nous sommes rapprochés autant
que cela était réellement possible. Les lacunes, inévitables en
pareille matière, demeurent négligeables au regard du nombre
d'échantillons étudiés (quinze) et de la quantité de titrages
effectués (des centaines).

On à vu, dans notre travail antérieur, que nous partions
toujours, pour le dosage initial, d’une culture en milieu T (1)
(vingt-quatre heures à 37 degrés). En réalité, nous faisions,
parallèlement, deux cultures-origines. L'une servait à déter-
miner la virulence « au départ »; l’autre (n'ayant donc point
passé par l'animal) était additionnée de deux volumes de
gélatine à l’eau physiologique (gélatine à 15 p. 100, légèrement
alcaline et préalablement fondue). Après mélange intime, on
scellait le tube et on le portait à la glacière (/xbe 1). Au bout
d’un mois, on le retirait, on liquéfiait à une douce chaleur, on
prélevait pour ensemencer en milieu T, on scellait de nouveau
et on reportait à basse température. La culture-fille (fwbe 11),
après vingt-quatre heures d’étuve, était à son tour additionnée
de gélatine et mise dans la glacière (avant l'addition de gélatine,
on avait eu soin de prélever la quantité de liquide nécessaire
à un titrage complet). Au bout d’un mois, le tube IT était traité
comme, jadis, le tube L; et ainsi de suite. On réalisait, de cette
facon, une première série d'expériences, destinée à conserver la
virulence par des passages mensuels 22 vi/r0, suivis de mise à
la glacière après addition de gélatine. Lors de chaque passage,
l’activité des germes était, avons-nous dit, évaluée très exacle-
ment (inoculation dans les muscles gastrocnémiens des souris,
à des doses variées : 1 cent. Cube, 1/10 de cent. cube, 1/100 de
cent. cube...) ; nous verrons, bientôt, ce qu'il en advient.

Il était non moins intéressant de chercher comment se com-
porte la virulence quand on supprime tout passage. Une
seconde série d'expériences, destinée à élucider ce problème, a
été conduite comme il suit. Le tube L (et, éventuellement aussi,
un ou plusieurs des tubes IT, TTL...) était sorti de la glacière
ous les mois pour repiquage et remis aussitôt à basse tempé-

1) Eau peptonisée à 4 p. 100 (peptone Chapotaul), salée à 0,5 p.100 et glu-
cosée à 0,2 p. 100, de réaction légèrement alcaline ‘au tournesol.)

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE 3

rature (après avoir scellé de nouveau lorsque le tube devenait
trop court, on transportait son contenu dans un autre, avec les
précautions ordinaires). Le titrage des cultures-filles mensuelles
se pratiquait comme d'habitude.

11 nous a donc été possible de voir comment la virulence 6vo-
luait, d’un mois à l’autre, dans le cas des repiquages et en
l'absence de ceux-ci. — Ajoutons que cèng échantillons inactifs
«au départ » ont été soumis au mème traitement que les quinze
échantillons actifs mentionnés en commencant.

RÉSULTATS OBTENUS.

L'étude que nous résumons aujourd’hui constituait la base
indispensable de nos recherches sur le pneumocoque. Si elle a
nécessité de notre part un travail compliqué et, disons-le,
assez pénible, elle nous a fourni par contre des résultats non
seulement satisfaisants, mais encore très curieux à certains
égards. Ces résultats se classent, d’après ce qui précède, sous
deux chefs différents.

PREMIÈRE SÉRIE D EXPÉRIENCES. — Les pneumocoques très viru-
lents conservent indéfiniment leur activité; ainsi, l’échantillon
Aynaud amène toujours la mort au dix-milliardième de centi-
mètre cube.

Les cinq pneumocoques avirulents « au départ » (à la dose de
| cent. cube) se sont montrés capables de. tuer la souris, après
quelques passages in vitro, aux doses de 1 cent. cube, 1/10 de
cent. cube et même 1/100 de cent. cube, selon les échantillons.
Nous espérons montrer tout à l'heure que ce résultat, incon- :
testablement inattendu, ne doit pas être considéré comme
entaché de mystère; la façon dont nos expériences ont été con-
duites ne permet point davantage de le considérer comme
entaché d'erreur.

Les pneumocoques peu virulents demeurent le plus souvent
stationnaires; quelquefois ilsaugmentent d'activité, quelquefois
ils fléchissent ou deviennent mème temporairement inactifs :
rarement on les voit perdre leur virulence, mais rien ne permet
alors de conclure, dans l’état actuel de nos recherches, à une
perte définitive (voir plus loin).

Les pneumocoques de virulence moyenne restent généralement

4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

slalionnaires ou n'offrent que des oscillations modérées dans
leur activité.

Par conséquent, les pneumocoques conservés à la glacière
après addition de gélatine et repiqués chaque mois gardent,
dans la règle, leur virulence pleine et entière; tout au plus
observe-t-on des fluctuations sans importance qui paraissent
d'ailleurs inconnues chez les échantillons très infectieux:
“ésullat essentiel au point de vue pratique. — Une minorité de
germes oscille, plus ou moins lentement, autour de notre zéro
(survie après injection intramusculaire de 1 cent. cube). Parfois
on suit l’oscillation tout entière (disparition ef réapparition de
la virulence); parfois, pensons-nous, on n’en suit que la moitié
(disparition où apparition de la virulence). Nous sommes con-
vaincus, en effet, d’après notre pratique de la question, qu'on
doit considérer l'apparition de la virulence chez les échantil-
lons inactifs « au départ » comme une réapparition pure et
simple (ce qui enlève au phénomène toute allure mystérieuse)
— et qu’on peut, par contre, douter du caractère définitif de la
perte de la virulence chez les échantillons actifs tombés à zéro
(une avirulence irrévocable n'aurait, du reste, aucun cachet
énigmatique).

SECONDE SÉRIE D EXPÉRIENCES. — Les pneumocoques très viru-
lents conservent leur activité pendant au moins six mois; /es
pneumocoques peu virulents, pendant deux à trois mois; les
pneumocoques moyennement virulents, pendant un temps inter-
médiaire. D'une façon générale, les résultats se montrent donc
« logiques ». Toutefois, avec certains germes peu actifs, de
curieuses oscillations ont été notées, ici encore. Exemple: on
prélève dans un lube conservé six mois : culture-fille inactive ;
on prélève dans le même tube quatorze mois après : culture-
lille active. Nous pourrions citer d'autres faits de même ordre;
ils démontrent clairement combien il serait imprudent d'affir-
mer le caractère définitif d'une perte de virulence.

Nous n'insisterons pas sur la conservation de la vitalité des
pneumocoques. Elle n'offre aucune difficulté. Même sans repi-
quages mensuels, les germes peuvent rester vivants deux ans
(au moins) à la glacière, après addition de gélatine. A 37 degrés,

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE st

ils peuvent garder un an leur vitalité (les résultats se montrent
ensuite incertains). — Comme il fallait s'y attendre, la virulence
fléchit, dans la règle, bien plus à l'étuve qu'à la glacière; on
observe quelquefois, il est vrai, de bien singulières exceptions.
mais elles sont lrop rares pour mériter une mention détaillée.

Parallèlement aux pneumocoques humains, nous avons
étudié quelques pneumocoques d’origine animale dont il sera
question dans nos travaux ultérieurs etqu'ilconvient, par con-
séquent, de « présenter » dès maintenant. Nous laissons avec
plaisir ce soin à M. Grenier, notre collaborateur de tous les
jours, qui a isolé la plupart de ces échantillons.

IT, — SUR QUELQUES PNEUMOCOQUES D'ORIGINE ANIMALE

(VIRULENCE POUR LA SOURIS
CCNSERVATION DE CETTE VIRULENCE)

par M. GRENIER.

Les germes dont il va être question proviennent du cobaye
(8 échantillons), du lapin (3 échantillons), et du cheva/ (1 échan-
tillon). Comme l’histoire des pneumocoques animaux est en-
core peu avancée, il nous à paru utile de résumer, chemin
faisant, ce que l’on en sait actuellement.

PNEUMOCOQUES DES COBAYES. — M. M. Nicolle, à propos de ses
études sur la morve expérimentale du cobaye, a fait connaître
le pneumocoque qui détermine la « maladie du nez » de cette
espèce animale (1). Il a décrit les symptômes et lésions de
l'affection, dans ses formes nasales et extranasales et men-
lionné les caractères principaux de l’agent pathogène, d'après

(4) Sous le nom, éminemment défectueux, de pseudo-pneumocoque. Nous
sommes convaincu, aujourd'hui, de la nécessité d’abolir radicalement en
bactériologie les préfixes pseudo et para. Il est bien plus rationnel, croyons-
nous, de délimiter d’une facon suffisamment compréhensive chaque groupe
microbien, puis d'y pratiquer les subdivisions intérieures jugées nécessaires,
que de partir d’une définition trop étroite et de se trouver alors obligé
d’opposer à un type « vrai » (seul légitime, seul orthodoxe) des types « faux »
ou « à côté » (expressions aussi arbitraires que vides de sens), procédé qui
conduit fatalement à une indétermination complète. — M. Nrcozze.

6 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

les travaux du D° Girard. Il à insisté aussi sur ce fait que le
pneumocoque des cobayes, qui se rencontre chez les. supets
sains à l'état saprophytique au niveau des voies digestives el
respiratoires, et chez les sujets d'apparence saine au niveau de
certaines lésions latentes, entre fréquemment en activité à la
suite de l'injection des bacilles morveux vivants ou morts el
manifeste alors cette activité sous forme d'infections locales,
localisées ou septicémiques. La « sortie » est particulièrement
à redouler chez les cobaves hypersensibles. Dans les expé-
riences les plus diverses, poursuivies depuis son travail sur la
morve (administration de toxines variées et de microbes,
vivants ou morts, non moins variés), M. Nicolle a pu se con-
vaincre de la banalité Yéritable du phénomène observé par lui,
el les très nombreuses autopsies, qu'il nous a chargé de faire à
ce point de vue, nous ont montré qu'à part quelques’ poussées
épidémiques (somme toute, assez rares) et un nombre limité
de cas sporadiques, les infections pneumococciques des cobayes,
dans leurs différentes formes, reconnaissent pour cause la
« sortie » des germes, provoquée par des injections toxiques ou
virulentes; elle se produit 4 chaque instant et il n’est point de
semaine où l’on ne puisse recueillir plusieurs échantillons des
microbes en question. A la vérité, ceux-ci apparaissent volon-
liers en même temps que la pasteurella (comme l’a indiqué,
également, M. Nicolle), mais leur isolement n'offre aucune
difficulté.

Les spécimens, étudiés par nous, ne représentent qu'une
infime minorité de ceux que nous possédions. Deux d’entre
eux, inactifs vis-à-vis des souris, ont été laissés de côté. Les
autres offraient une virulence moyenne; conservés dans la
glacière après addition de gélatine et repiqués mensuellement,
l’un à perdu son activité, les autres l'ont gardée, avec ou sans
fléchissement selon les cas.

Pxeumocoques DES Lapins. — M. Nicolle a constaté la grande
rarelé des infections pneumococciques « spontanées » des
lapins, mais il a vu « sortir » assez souvent le pneumococoque
chez les sujets sains (en apparence ou en réalité), d’abord dans
ses recherches sur le phénomène d'Arthus, puis au cours:
d'autres travaux où les animaux étaient traités par des injec-

ÉTUDES SUR LE PNEUMOUOQUE Ë

tions de toxines ou de microbes. Parfois la pasteurella de la
«maladie du nez » des lapins apparaissait en même temps.

C'est uniquement chez des lapins soumis à des infections
expérimentales que nous avons trouvé nos (rois échantillons.
Le premier venait d’un animal inoculé avec la bactéridie
charbonneuse, qui nous à été remis par M. Jouan; les deux
autres de sujets inoculés avec le bacille de Schmorl, qui nous
ont été donnés par MM. Cesari et Alleaux. L'échantillon Jouan,
très virulent, a conservé intégralement son activité, grâce au
procédé Truche et Cotoni; les échantillons Cesari et Alleaux,
peu virulents, ont nettement « remonté » dans les mêmes
conditions.

PxeumocoquE pu cHEVAL. — Nous l'avons isolé d’un abcès
pulmonaire à bacille de Schmorl, que nous avait remis M. Ce:
sari. Le mécanisme de son développement in vivo s'explique
par une « sortie » analogue à celle observée chez les deux lapins
dont il vient d'être question. « Au départ », notre microbe
ne luait pas la souris: après quelques passages ?2n vitro (addi-
lion de gélatine et mise à la glacière), il est devenu actif,
comme les cinq pneumocoques humains mentionnés dans le
travail précédent.

Nous espérons avoir le temps de compléter ces données,
encore trop fragmentaires, sur les pneumocoques animaux. Il
semble bien que l'on doive retrouver. chez eux les mêmes
caractères généraux et les mêmes types particuliers que dans’
la série des pneumocoques humains.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION

par ALEXANDRE LEBEDEFF.

Il y a bien peu de questions, dans la chimie biologique,
qui aient, autant que l'extraction de la zymase, attiré
sur elles l'attention des savants, soit par l'importance du
problème à résoudre, soit par les noms illustres qui ont
pris part à la discussion et dont le retentissement a trouvé.
un écho même au delà du cercle étroit des spécialistes. II
s'agissait en eflet de savoir si la fermentation alcoolique est
due aux forces vitales de la cellule de levure ou bien à une
banale diastase.

Je ne suivrai pas ici toutes les péripéties de la discus-
sion dont les grands traits sont connus de tous et qui a été
tranchée d’un seul coup par Buchner; qu'il me soit seule-
ment permis de souligner qu'on a tort de penser que Pasteur
niait la possibilité de l'existence d’une diastase : bien au
contraire, il l’a cherchée lui-même, en collaboration avec
ses élèves, et ce ne sont que les résultats négatifs de ses
tentatives expérimentales, obtenus d’ailleurs par nombre
de savants (1), qui l’ont amené à combattre la théorie de
Moritz Traube, soutenue par Berthelot, comme n'ayant
aucune base expérimentale.

Quelle était la cause de cet insuccès?

Pasteur aussi bien que Buchner, d’après le témoignage de
M. Roux (2), a broyé la levure dans un mortier, en a congelé les
cellules pour les faire éclater et comme Lintner (3) et Van Laer (4)
il a essayé de faire sortir le suc à travers l'enveloppe par
osmose. Mais rien nv fit. Actuellement, après les recherches

(1) Voir la littérature sur ce sujet dans le Zymasegürung (p. 12-14, 1903) de
E. et H. Buchner et M. Hahn et le très intéressant chapitre sur la fermenla-
tion alcoolique dans le livre de J. Duclaux : La Chimie de la matière vivante
(1910).

(2, Annales de la Brasserie et de la Distillerie, p. 512, 1898.

(3) Centralbl. f. Bakteriologie, 1, t. V, p. 796, 1899.

(4) Chem. Centralbl., t. 1, p. 352, 1901.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION a

de Hayduck (1), Delbrück, Lange, Kônig et Haymann (2),
qui ont démontré que l’état de la levure est un facteur très
important de son activilé, la réponse à la question ei dessus
est facile : c'est que Pasteur a pris de la levure qui ne donnait
pas de suc actif. IT arrive souvent, par exemple, que la levure
provenant de la même brasserie donne un jour du suc très
actif et un autre Jour du sue très peu actif ou mème inactif.
D'autre part, la race Joue aussi un rôle prépondérant : la levure
haute, dite « parisienne », comme j'ai pu le constater, ne
donne pas de suc actif ni d’après le procédé Buchner, ni d’après
le mien.

-Or, Buchner a commencé ses expériences avec la levure
de Munich qui donne presque toujours un sue actif et il n’est
pas étonnant qu'il ait réussi. On peut dire, sans vouloir en
quoi que ce soit amoindrir le grand et incontestable mérite de
E. et H. Buchner, mérite de chercher quand môme malgré
l’insuccès complet de ses prédécesseurs, que l'isolement de la
zymase peut servir d'exemple classique du rôle que joue parfois
la chance dans les découvertes scientifiques.

Après les belles expériences de E. et H. Buchner, tout le
monde convenait que l'on ne pourrait extraire la zymase que par
l'action mécanique (broyage, congélation), ou chimique (dis-
solvants divers de la membrane), et que Le procédé de Buchner
était le plus pratique, bien qu'il exigeât un matériel très cher
(presse hydraulique, appareil de broyage, ete.).

En 1907, j'ai commencé mes expériences sur la kynétique de
la fermentation alcoolique, mais au premier pas je me suis
heurté à la difficulté que la presse n'était pas toujours dispo-
nible aussi bien que la levure. Il fallait imaginer quelque chose
pour y remédier et ne pas mettre les expériences sous la
dépendance de ces circonstances accidentelles. Pour cela,
j'ai commencé à employer la levure sèche en la mélangeant
avec de l’eau (une partie de levure pour deux d'eau), et la
broyant (3) ensuite comme d'ordinaire. Les premiers essais

(1) Wochenschrift f. Brauerei, t. I, p. 117, 345, 697, 1884.

(2) Jahrb. der Vers. u. Lehranst. f. Brauerei, t. IV, p. 16, 158, 298, 1901. Cité
d'après Buchner : Loc. cit., p. 69; 275-276.

{3) Le broyage est une opération pénible et qui même n’est pas sans danger
pour la santé.

10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ont mal réussi. Le suc était très peu actif. En cherchant la
cause, j'ai constaté que la levure sèche restait en grande partie
intacte pendant le broyage avec du sable et de la terre d'infu-
soire. C'est pourquoi j'ai laissé la levure avec de l’eau pendant
quelque temps à la température ordinaire Jusqu'à ce qu'il se
forme une masse bien homogène; broyée ensuite, elle a donné
le suc non seulement extrêmement actif, mais s'écoulant de la
presse deux à trois fois plus vite, ce qui était important pour
moi. Ordinairement, c’est-à-dire d'après la méthode de Buchner,
il fallait presser au moins trois heures : d’après la modification
que j'ai apportée, il suffisait d’une heure à une heure et demie:
en outre le suc était très clair et, laissé seul, sans addition de
sucre, il ne dégageait pas d’acide carbonique, étant privé de:
glycogène, circonstance qui dans beaucoup de cas devient très
avantageuse.

J'ai mené alors une série d'expériences parallèles, broyant la
levure fraîche et la même levure préalablement desséchée {4
et J'ai pu constater que le suc de la levure séchée était toujours
plus actif; il arrivait même souvent que le suc de la levure fraiche
(de la brasserie de Schultheiss à Berlin) était presque inactif et ne
s'écoulait que très difficilement, de sorte que d’un kilogramme
de levure je n’obtenais que 100 et même 50 cent. cubes au lieu
de 500 ou 400 cent. cubes, tandis qu'après la dessiccation elle
donnait un suc très actif.

La levure séchée, enveloppée seulement dans le papier-filtre,
conservait son activité très longtemps. Comme exemple je puis
citer ici le cas d’une levure (Schultheiss, à Berlin) qui après deux
ans à montré son pouvoir de fermentation égal à 1,4 au lieu
de 1,9 qu’elle avait donné au commencement. Cette circonstance
permet de faire des expériences absolument comparatives pen-
dant un temps très long, et « last not least », on sait toujours
d'avance la quantité et l’activité du sue qu’on obtiendra d'un
certain poids de levure (2). Je travaillais pendant deux ans en me
servant de cette modification de laméthode de Buchner. En con-

(1; Je commençais par sécher la levure à la température de 35 à 45 degrés,
pendant quatre à cinq heures (d'après le procédé de Buchner et Mitscher-
lich : Zeischr f. Physiol. Chem., &. XLIT, p. 554, 1904), et l'exposais ensuite
à la température ordinaire.

(2) Biochem. Zeitschr., t. XX, p. 116, 1909.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 11

linuant ensuite mes recherches au laboratoire d'Émile Fischer
J ai rencontré une autre difficulté : il y avait bien là la presse
hydraulique, mais pas d'appareil pour le broyage de la levure.
Au lieu de suc j'ai essayé d'employer directement la levure
sèche pour produire synthétiquement l’éther du sucre et de
l'acide phosphorique dont je poursuivais alors l'étude (1). Pour
interrompre la fermentation, je chauffais le liquide de fer-
mentation au bain-marie et c'est pendant cette opération que
mon attention füt attirée par la coagulation de tout le liquide,
comme s'il se fût agi d'une solution des albuminoïdes et non
pas d’une suspension des levures. Cette observation m'a donné
pour la première fois l'idée d'essayer si le suc de macération
ne fermermenterait pas, et mes recherches dans cette direction
ont été couronnées d’un plein succès (2).

Je vais maintenant décrire la méthode de préparation du suc
de macération et les expériences que j'ai entreprises pour pré-
ciser les conditions dans lesquelles on obtient le maximum
d'activité, ainsi que quelques propriétés essentielles du suc.

Méruooe.

On prend un seau de levure fraiche, on le met dans un
récipient cylindrique, d’une contenance d'au moins 50 litres,
on le place sous le robinet d’une conduite d’eau muni d’un
tube de caoutchouc; le récipient une fois rempli, on laisse
couler le robinet légèrement pendant tout le temps du lavage.
De temps en temps on remue bien la levure avec un bâton
en bois. Si l’on fait soigneusement cette opération, l’eau dans
le récipient devient tout à fait claire, la levure, bien divisée
et blanche, tombant vite sur le fond du récipient. On laisse
la levure immergée sous l’eau sans fermer le robinet pendant
une nuil.

En été il est préférable de mettre dans le récipient un gros
morceau de glace après avoir fermé le robinet. Le matin, on
trouve la levure bien déposée au fond du vase. On procède
alors au décantage, puis on prend une grande terrine, sur

(1) Ibid., t. 28, p. 226, 190.
(2) Comptes rendus de l'Acad. des sciences, séance du 3 janvier et du 24 avril
1911. — Bul. de la Soc. chim. de France, séances du 27 janvier et du 24 mars 1911.

12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

laquelle on place un tamis avec des trous assez grands (5 cent.
carrés par exemple), on le recouvre d’une toile à filtrer bien
mince et on jette dessus la levure. Après l'avoir laissée
égoutter pendant quelque temps, on prend les quatre bouts
de la toile, on les réunit ensemble et on les ficelle. Ensuite,
on l'enveloppe avec une toile à presser, on met le tout
sous une presse à main sur laquelle on agil jusqu’à ce que
la levure devienne assez compacte pour la faire passer à
travers un tamis, ayant des mailles de 5 cent. carrés, qui
se trouve au-dessus du papier-filtre placé sur un portoir en
bois. On étale la levure tamisée en une couche de 1 à
| 14/2 centimètre d'épaisseur, et on laisse ensuite sécher à une
température de 25 à 35 degrés. En deux jours la levure est
complètement sèche.

À ceux qui voudraient s'éviter la peine de cette opération
préliminaire et la perte de temps, je conseille de faire venir la
levure de chez M. Schroder, à Munich (1), qui la prépare
d'après mes indications (2). Elle est toujours très active et
propre. Pour obtenir le suc, on prend 50 grammes de levure
séchée (3), on ajoute 150 grammes d'eau, on mélange bien
avec une baguette en verre dans une capsule eton laisse macérer
à 35 degrés pendant deux heures, ou à 25 degrés pendant
six heures. Après on jette la masse sur le filtre ordinaire et on
la laisse s’écouler. Fi n’y a pas besoin de refroidir le filtrat par
de la glace (sinon en été), mais si l'on veut obtenir le plus pos-
sible de sue (en 12 heures on peut en avoir de 70 à 80 cent.
cubes), il est préférable de le faire, parce que la filtration
devient de plus en plus lente (4). On pourrait aussi séparer le
suc de la levure en centrifugeant le mélange à la vitesse de
3.000 tours à la minute, ou en pressant à travers un filtre-
presse, etc. On peut conserver le suc assez longtemps après

(4) Landwehrstr, p. 45, Ko-2 M.

2) I me semble qu'elle pourrait remplacer la levure fraiche ou la levure
desséchée par l’acétone (zymine), dans le traitement de certaines maladies. II
serail intéressant que des expériences dans cette direction fussent faites par
des médecins.

(3) Si l’on veut obtenir une plus grande quantité de suc, 1l est préférable
de faire macérer dans plusieurs capsules en mettant dans chacune 50 grammes
de levure sèche et en en filtrant le contenu, après la macération avec de
l'eau, séparément.

(4) Au commencement de la filtration en 15-20 minutes on obtient de 25 à
30 centimètres cubes de suc.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 13

l'avoir congelé complètement dans un mélange de glace et de
sel, d’après F. B. Ahrens et J. Meisenheimer (1).

En faisant macérer la levure pendant vingt-quatre heures,
à une température un peu au-dessus de 0 degré (3 degrés
par exemple), ce qui est facile en hiver, en opérant dehors,
on oblient ordinairement, mais pas toujours, des sues bien
actifs. Etant donné qu'en été la macéralion à une tem-
pérature aussi basse devient difficile, souvent même im-
possible, surtout si l’on veut la maintenir constante, Je
recommande pour celte raison la macération à 35 degrés au
thermostat, d'autant plus qu'en l’espace de deux heures on
obtient déjà du sue, dont l’activité dépasse souvent celle du suc
obtenu à une température très basse: en outre elle est plus 7-
qulère, ce qui est important pour les recherches comparatives.

Je viens d'indiquer jusqu'ici comment on obtient assez
rapidement le maximum d’activilé; je vais maintenant rendre
compte des expériences entreprises pour arriver à une étude
systématique des conditions qui le favorisent.

Exp. I, a). — Pour celle expérience, ainsi que pour toutes les expériences
semblables, je me suis servi de petites fioles d'Erlenmayer (80 cent. cubes à
peu près avec une soupape de fermentation de Meissl) que je chargeais de
20 cent. cubes de suc, 8 gr. de sucre et de 0,2 cent. cubes de toluène. C’est
par cette méthode que Buchner déterminait le pouvoir fermentatif de son suc
el j'ai jugé utile, pour obtenir des données comparables à celles de Buchner:.
d'adopter la même méthode, purement empirique, bien qu'il soit plus rationnel
d'exprimer l'activité du suc par une constante de la vitesse de la réaction
pour la concentration optima en se servant de l'appareil de Valton (2).

Levure de Moritz du 30 décembre (1 : 3), séchée à 25 degrés. La concentra-
lion a été calculée pour 25 cent. cubes, 8 gr. de saccharose augmentant le
volume du liquide après la dissolution de 5 cent. cubes. Pour 50 gr. de la
levure séchée, j'ai pris 150 gr. d’eau et jai laissé macérer pendant 3 el 6
heures à 25 degrés (N°S 1 et 2). Après filtration j'ai recueilli 20 cent. cubes
de suc en 25 minutes.

GBAMMES DE CO? PAR JOUR

CENT. CUBES | CONCENTRATION GRAMMES
N°S
de suc. p. 100. | 2 3 k 6 7 8 CO:
fl 20 32 0,53[0,48/0,3s/0,21/0,20/0,02/0,00! 1,82
2 » ) 1,27/0.6710,36| » |o,33l0,00! » 2.63

41) Zymasegürung, p. 226, 1903.
2) Biochem., Zeitschr., t. X, p. 456 et t. XXVIII, p. 227-228.

1# ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Exp. I, b). — On a laissé s'écouler le mème suc à la Lempérature ordinaire
pendant une nuit, et le jour suivant, c'est-à-dire après 17 heures de filtration.
on a fait l'expérience analogue à I 4.

: GRAMMES CO? par JOUR
CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

de suc. ». 100. CO:

1,00/0,06/0,03/0,07|u,00 1.16
1,04] — | — |0.60/0.00 1,64

Exr. IT, a). — La même levure macérée pendant 20 heures à 15 degrés, avec
trois parties d'eau.

; GRAMMES CO* PAR JOUR
CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

de suc, p- 100. CO°

0,35| 0.09! 0.02] 0,00

Exp. If, b). — La même levure, macérée à 5 degrés (dehors) avec 3 parties
d’eau pendant 24 heures.
LE 2 2 D 2 RU SF DROLE I, AR GE D RE EN EE 2 RS RCE

| GRAMMES CO? PAR JOUK

CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

de suc. p. 100. 1 2 & 6 7 CO:

32 10,60/0,6810,6010,0610,05!0,00 1799

Exp. 11, c). — Le même suc qu'on a laissé s'écouler pendant 24 heures
à la température ordinaire. Le suc a commencé à fermenter de suile, mais
la fermentation ne dura qu'un jour.

# He ; GRAMMES CO PAR JOUR
CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

CO

[eq
Lo]
Le]

de suc. p: 100.

20 32 0,54 0,02 0.00 0.56

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 145

Exr. III, — La mème levure, mais macérée pendant 19 heures à 25 degrés.
Le suc a commencé à fermenter de suite.

4 GRAMMES (CO? PAR JOUR
ENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

de suc. p. 100.

0,89 0,03 0.00

Exr. IV. — La même levure, mais séchée à 35 degrés, et macérée ensuite
25 degrés, pendant 5,6 et 7 heures, et à 0 degré pendant 24 heures, avec
parties d’eau (N°S 1, 2,3, 4). Le mélange en parties égales de ces quatre sucs
contenait 16,17 p. 100 de résidu sec. Le suc macéré à 0 degré contenait
14,90 p. 100 de résidu sec.

a
0]
2]

GRAMMES CO?

MACÉRATION 6
par jour.

GRAMMES

CO*.

NUMEROS
de suc,
CONCENTRATION

heures. | descrés. 1 2 5 6

0,68/0,36/0,20/0,00
0,77/0,41/0,27
0,19/0,36|0,20
0,5310.5510,00

Exp. V. — La mème levure séchée à la température ordinaire et macérée
ensuite pendant 2 heures à 35 degrés, avec 3 parties d’eau (Résidu sec
15,66 p. 100).

GRAMMES DE C0?
CENT. CUBES CONCENTRATION PASEJOUE GRAMMES

de suc. p. 100. CO*.

Exr. VI. — La mème levure que dans l'expérience IV, mais après trois mois
de conservation, a été macérée pendant 2 heures à 35 degrés.

16 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

GRAMMES DE CO?

CENT. CUBES CONCENTRATION par jour. GRAMMES
de suc. p. 100. | CO*:
1 3 4 5 7 8
20 32 6,4510,6510,13/0,07/0,05[0,00 1,35

Exp. VII, a). — Levure du 10 janvier (Moritz), lavée et pressée le même
jour, séchée à 35 degrés, macérée pendant 4 h. 1/2 à 25 degrés avec deux
parties d'eau. Cette levure broyée avec du sable a donné du suc qui ne fer-
mentait pas du tout le sucre.

La quantité d'acide carbonique dégagé pendant le deuxième
jour est trois fois plus grande que pendant le premier. Ceci
s'explique par ce fait que la fermentation a commencé après
quelques heures seulement. Il y a des cas, d’ailleurs rares, où
la fermentation ne commence qu'après 2% heures et mème
davantage. Il est difficile, sans connaître complètement le méca-
nisme de la fermentation, de donner une explication de ce
phénomène curieux ; on peut faire seulement des suppositions

plus où moins plausibles.

, , É GRAMMES DE (0° PAR JOUR
CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES
de suc. p. 100. 1 2 3 4 6 7 CO
20 32 0,28/0,66/0,46/0,2s/0.,22/0 ,01 1,91
ExP. VII, 6). — Le mème suc qu'on a laissé s'écouler pendant 16 heures à

la lempérature ordinaire.

GRAMMES DE CO° PAR JOUR .
CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

de suc. p. 100. { 9 3 4

20 22 0,41 (LEE

|

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 17

Exr, VIII, a). — Les mêmes conditions que dans l'expérience précédente,
mais la levure à été séchée à 25 degrés.

GRAMMES DE CO? PAR JOUR 6
CENT. CUBES CONCENTRATION ! GRAMMES

de suc. p. 100.

Exr. VIII, b). — Le même suc après 16 heures de filtration à la tempéra-
ture ordinaire.

GRAMMES DE C0? PAR JOUR

CENT. CUBES | CONCENTRATION GRAMMES
de suc. | p. 100. A à k : CO*
20 | 32 0,50 | 0,68 | 0,26 | 0,00 1,4%

Exp. IX, a). — La même levure séchée à 15 degrés et macérée ensuite
pendant # h. 1/2 à 25 degrés avec 3 parties d’eau. Après l'addition du sucre
aucune fermentation ne s'était produite.

Exp. IX, b). — Le même suc après 16 heures de filtration. Il a commencé
à fermenter le deuxième jour.

GRAMMES CO?

CENT. CUBES CONCENTRATION PARTIES ;
GRAMMES CO?

de suc. p. 100.

&

0,11 | 0,03 | 0,00

Exp. X, a). — La même levure, mais pressée le jour suivant, c’est-à-dire,
après le séjour sous l’eau froide pendant la nuit, séchée ensuite à 35 degrés
et macérée 4 h. 1/2 à 25 degrés.

| GRAMMES CO*
CENT. CUBES | CONCENTRATION ESAPRUE
GRAMMES CO?
de suc. | p. 100.

1 2

18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Exp. X, b). — Le même suc après 16 heures de filtration à la température
ordinaire.

GRAMMES DE CO?
par jour.

CENT. CUBES CONCENTRATION :
GRAMMES CO?

de suc.

1 2

0,68 | 0,21 | 0,01 | 0,00

Exr. XI, a). — La même levure (X a) séchée à 25 degrés et macérée ensuite
4 h. 1/2 à 25 degrés avec 3 parties d’eau

GRAMMES DE CO?

CENT. CUBES CONCENTRATION PESTE

GRAMMES CO?

de suc. pML00

1,3010,:6/0,41/0,03/0,00

Les expériences X et XI montrent qu'il est préférable de
laisser la levure sous l’eau froide que de la presser le même
jour, comme dans les expériences VIT et VII.

Exr. XI, bd). — Le mème suc après 16 heures de filtration.

CENT. CUBES + GRAMMES DE CO? PAR JOUR
CONCENTRATION GRAMMES

de sue. p. 100. 5 CO:

0,02 | 0,00

Exp. XII. — Les sucs des expériences X a et XI a ont été mélangés à
parties égales, et à 20 cent. cubes de ce mélange on a ajouté 2 gr. de sucre.

PERL GRAMMES DE CO? PAR JOUR
CENT. CUBES CONCENTRATION GRAMMES

de suc. p. 100. 1 2 3

CO*

20 10 0,66 0,06 0,00 0,72

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 19

Exe. XIII, a). — La même levure que dans l'expérience X, séchée à la
température ordinaire et macérée 4 h. 1/2 à 25 degrés, a donné du suc qui à
commencé à fermenter le sucre (8 gr. pour 20 cent. cubes) le deuxième jour

seulement; il donna en 24 heures 0,33 grammes de CO’, et la fermentation
s'arrêta brusquement.

Exp. XIII, b). — Le même suc après 16 heures de filtration n’a commencé
à fermenter que le deuxième jour. La fermentation ne dura que deux jours.

CONCENTRATION GRAMMES DE CO? PAR JOUR
GENT. CUBES GRAMMES

de suc. p. 100.

Exr. XIV. — Les sucs des expériences IX 6 et XIII b ont été mélangés et à
20 cent. cubes (10 €. €. + 10 €. €.) on a ajouté 2 grammes de sucre. La fermen-
tation commença après 24 heures et continua deux jours. 0,54 grammes
d'acide carbonique se sont dégagés. Il va de soi que du toluène a été ajouté
et même en quantité double (0,4 cent. cubes au lieu de 0,2) en vue de la
faible concentration en sucre.

Le résultat étrange des expériences IX à, IX b et XIIL& et
XIII 4 ne peut être, en aucune manière, attribué à l'infection
du liquide par levure vivante. On ne peut l'expliquer pour le
moment, nos connaissances sur le mécanisme intime de la fer-
mentation n'étant pas encore complètes. Il est à remarquer que
les sucs pris après une longue filtration ne fermentent que
2-3 jours; ce fait est dû évidemment à la destruction de la
coenzyme par une diastase spéciale, dont la présence dans le
suc, d'après Buchner et Klatte, est très probable (1). Le suc
obtenu par macération de la levure séchée à la temperature
ordinaire ne manifeste presque aucune ou une très faible activité
si la concentration en sucre est forte ; si elle est faible, la fer-
mentation commence, mais après un laps de temps plus ou
moins long, pendant lequel se produisent probablement des
réactions, le préparant pour ainsi dire à l’activité. Le temps
de repos est suivi d’une activité croissante; ce phénomène est
analogue à celui qui a lieu dans les réactions chimiques con-
sécutives et qui a été nommé par Bunsen et Roscæ période

(1) Biochem. Zeitschr., t, VIA, p. 520, 1908.

20 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de l'induction (1). Mellor a démontré que celui-ci était une
conséquence nécessaire de la loi de l’action de la masse et
énoncé la loi : « the period of induction is characteristic of
chemical reactions which take place in a series of intermediate
stages » (2). D'autre part, j'ai pu démontrer que la disparition
du sucre et le dégagement de l'acide carbonique dans la fer-
mentation alcoolique sont des processus différents (3); c’est
pourquoi Je propose de nommer la période d'inertie qui pré-
cède la fermentation même, et est suivie ensuite d’une crois-
sance de Ja vitesse de la réaction, comme une période de l’in-
duction; les expériences suivantes montrent que cette période
peut être accélérée par élévation de la température ou diminu-
tion de la concentration du sucre (4).

ExP. XV, a). — La levure Moritz a été séchée à 15 degrés, macérée à 25 de-
grés pendant # h. 1/2 avec 3 parties d’eau (XIII a). On a pris quatre fioles
(1, 2,3, 4) avec des soupapes de fermentation; à chacune d'elles on a ajouté
20 cent. cubes de suc et 0,2 de toluène. Aux fioles 1 et 3 on a ajouté en
outre 8 grammes de sucre à chacune, et, aux fioles 2 et 4, 2 grammes à
chacune. Les deux fioles 4 et 2 ont été mises à fermenter au thermostat à
25 degrés et les autres (3 et 4) à 35 degrés.

La fiole 1 a commencé à fermenter le deuxième jour et a donné dans
24 heures 0,33 grammes de CO®.

La fiole 2 a commencé à ferm enter après 2 heures et a donné 0,71 grammes
de CO?. La fermentation dura 3 jours.

La fiole 3 a commencé à fermenter aussitôt l'addition du sucre et a donné
en 24 heures 0,18 grammes de CO*. Le suc s'étant coagulé, je mis la fiole à
25 degrés ; le deuxième jour il s'est dégagé 0,09, le troisième 0,13, le qua-
trième et cinquième ensemble 0,21 d'acide carbonique, ce qui fait en tout
0,66 grammes.

La fiole 4 a commencé à fermenter aussitôt l'addition de sucre et a donné
dans 24 heures 0,42 grammes de CO®.

Exp. XV, b). — La mème levure séchée à 15 degrés, mais macérée à
35 degrés pendant 2 heures avec 3 parties d'eau. Le tableau suivant donne le
résultat des expériences XV et XV b ensemble.

(4) Voir la littérature sur ce sujet dans le beau livre de Mellor : Chemical
Slalics and Dynamics, p. 113-118. 1908.

(2) Jour. Chem. Soc. t. LXXXI, 1280, 1902.

(3) Biochem. Zeitsch., 1. X, p. 456, 1890, et t. XXVIII, p. 227, 228, 1910. Je
publierai prochainement un mémoire spécial sur la kynétique de la fermen-
tation alcoolique. Jusqu'à présent on admettait ordinairement (Aberson,
Hertzog, Euler) que ce processus était simple et obéissait à la loi d'une
réaction monomoléculaire; en vérité il consiste au moins en deux réactions
consécutives.

(4) Elle peut être considérablement retardée par l'addition des phosphates.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 24

2 2
: vue |e GRAMMES DE CO?
æ| MACÉRATION |à|E .|5 4
cc ma|xe|<« par Jour. 2 a
> A Z k & 25 REMARQUES
z APE 5
descré.|heures. O E 1 2 3 5 6
4 25 4 1/2 20132 »125 » 0,33 0,00 » » 0,33 Commence ?:° jour.
9 » » »| 9,5] »|0,6010,07/0,04/0,00| » |0,71|Après ? heures.
3 » » »|32 »|13510,18/0,09,0,1310,2610,00!0,66| Aussitôt l'addition; coa-
: gœulation à 35°, à partir
du 2° jour mis à 25°.
4 » » »l 9,5| »10.249 0,00 » » » 0,42 2
Sao 2 »|32 »1[2510,8310,3510,1310,05/0,00|1,36| Après quelques heures.
6 » » »l 9,5| »10,65 0,06 0,03 0,00 » |0,74 Aussitôt l'addition.
» » »132 »13510,6210.,00 » » » 0,62 Coagulation.
» » »| 9,5| »|0 ,4210,00 » » » |0,42 À
|

On aperçoit le fait curieux que la levure séchée à 15 degrés
et macérée 4 h. 1/2 à 25 degrés a donné du suc qui fermentait
faiblement (0,33 grammes de C0?) ; macérée au contraire à 35 de-
grés, elle a donné du suc qui fermentait normalement (1,36 gr.
de CO sur 8 grammes de sucre).

Pour mieux faire ressortir l'influence de la dessiccation, de
la température et de la durée de la macération sur l'activité du
suc, Je vais décrire les expériences qui se trouvent réunies
dans les tableaux suivants :

ExPr. XVI. — La levure Moritz du 20 janvier. Concentration du sucre 32 p. 100,
20 cent. cubes de suc pour chaque fiole et 0,2 cent. cubes de toluène. La
fermentation a eu lieu à 25 degrés. Une partie de levure pour trois d’eau.

MACÉRATION GRAMMES CO? PAR JOUR
DESSICCATION GRAMMES
N°S 2
degrés. GO*.
degrés. | heures. d 2 3 4 5 6

1 25 3) il 0,8810,4910,31| — 10,1010.00 1,18
2 » » 2 1,4010,5310,24/10,1010,05/10,01 27939
3 » » G 1,19/0,3810,18/0,06/10,02/0,00 1,83
4 » » % 1.1510,3610,16| — 10,07,0,00 4,14
5 » 25 6 1,2610,3810,1810,0610,0110,00 1,89
6 30 35 2 1,3410,5510,2210,0910,0210,00 2229
7 » » n 1,2010,31/0,10/0,02,0,0010,00 1463
8 » » 6 1,0910,36/0,1710,0110,000,00 1,63
( » 25 6 1,6110,5110,12,0,04/0,0010,00 2,28

22 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Exr. XVIL. — La levure à bocks de Moritz. Mêmes conditions que dans
l'expérience XVI. Pour les numéros 6, 7 et 8 on a pris une partie de levure
pour deux et demi d'eau. Le suc a commencé à fermenter aussitôt l'addition
du sucre. Le suc dn n° 6 contenait 18,95 p. 100 de résidu sec, et celui du
no 8, 19,05.

MACÉRATION GRAMMES CO? PAR JOUR
DESSICGATION GRAMMES

degrés. 4
degrés|heures

3

| 19

|
35
25
35

Se ©
I

0,00
0,00
0,13

12
©

0,19
0,20

0,08

0,10/0,00

SES
© GE
D Co NO

[SU
(œp]

DS OO ÉE © D

Exr. XIII. — On a mélangé 10 cent. cubes de suc du n° 1 avec 10 cent.
cubes de celui du n° 7 (Expérience XVII) non bouilli (n° 1) et bouilli (n° 2),
du tableau ci-dessous), on a ajouté 8 grammes de sucre avec 0,2 cent. cubes
de toluène pour chaque fiole. Le tableau suivant montre la marche de la

fermentation dans les deux cas.

GRAMMES DE CO? PAR JOUR
GRAMMES

0,00

On constate que la levure séchée à la température ordinaire
donne du suc très pauvre en coenzyme ; si l'on mélange le suc
peu actif avec du suc actif après l'avoir fait bouillir, celui-là
devient à son tour bien actif, c’est-à-dire que l’inactivité du sue
ne dépend pas ordinairement de l'absence de la zymase, mais
de la coenzyme. Il y a d’ailleurs des exceptions, comme on
verra plus loin, la levure dite « parisienne » ne donnant pas
de suc actif, même si on le mélange avec du suc très actif préa-
lablement bouilli.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 23

Exr. XIX. — Levure de Munich du 3 février. Cette levure, après avoir été
séchée par Schroder pendant 4 heures à 30-35 degrés, m'a été envoyée encore
humide; bien qu'elle ait supporté un transport par chemin de fer pendant
2 jours, elle a donné après sa dessiccation complète un suc très actif.

MACÉRATION GRAMMES CO? PAR JOUR

NUMÉROS
CONCENTRATION
DESSICCATION

| Ps

3 # 5 6

heures.

CA
v (e]
=
t2

a
co
Co
Co

— |0,1210,00! »
210,11] » |0,06
— |0,4210,06
0,09/0,0210,00
— |0,3710,05
— |0,0310,00

©2

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[Se]
Cr ©

La levure a été macérée avec 3 parties d'eau à l'exception du n° 4. Pour
cette expérience j'ai fait macérer 100 grammes de levure avec 100 grammes
d'eau; néanmoins on voit que la quantité d'acide carbonique dégagée a été
égale à celle du n° 1, c'est-à-dire 2,22 et 2,33 grammes, bien que le suc fût
beaucoup plus concentré. La fermentation était excessivement rapide, mais
elle s'arrêta à cause de la coagulation des albuminoïdes (1). Le suc de levure
à bock commençait à fermenter aussitôt l'addition du sucre, celui de la levure
de Munich après une heure. La levure macérée 6 heures à 25 degrés donnait
le suc qui commençait ordinairement à faire fermenter le sucre plus tôt
que celle macérée 2 heures à 35 degrés.

Pour faciliter l'aperçu des expériences décrites ci-dessus,
dont le but était de préciser l'influence de la dessiccation, de la
durée et de la température de la macération sur l’activité du
suc, Je joins le tableau suivant dans lequel sont réunies les
données expérimentales qui m'ont conduit à la formule de la
préparation du suc que j'ai donnée dans les séances de la
Société chimique de France des 27 janvier et 24 mars 1911.

(1) Voir aussi mon mémoire : La zymase est-elle une diastase? Ces Annales,
n0#9 D 40821911

24 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

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371 ») » 1:09 1/2 » » _—— 8 22419 0,21
38 » » A1ne23 » » — 5 2,47 0,49
39 » » » » » — » 2,41 0,49
40 » » » 9 1/2 » = » 1.56 0 ; 31
41 » » | 1:914/2 5 SES 7 2.04 | 0,29
42 ; | 1:3 3 NEA NI er NON AT CS MIApRES
43 » » » A » — » 1 14 0,35
LA » 35 » 4 4/2 25 — 7 ISIN O2 TT
45 » » » » » 16 3 0.79 0 À 26
46 » » » » » — 6 2 AM 0,36
LT ) » » » » 16 3 0,89 0,30
48 » » » 6 ») = 4 2,28 0,5
49 » » » 2 35 — 5 2,22 | 0,44
50 » » il 2 2 » » — 4 { : 98 0,50
51 )) » (l È 3 » » ——— » D 1939 0.58
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Lie: » » » 4 » — » 1,63 0 41
54 » )) » 6 » ee » 1,63 0.41

(1) La durée moyenne de filtration était égale à 1 heure à peu près pour toutes les
expériences à l'exception des numéros 2, 4, 14, 18, 20, 22, 25, 45 et 417.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 25

Un regard sur le tableau ci-contre suffit pour voir que l’acti-
vité du sue de macération dépend avant tout de la température
de dessiccation, de la durée et de la température de la macé-
ration (sans parler de l'influence de la race et de l’état de levure,
ces deux facteurs ayant la mème influence sur l’activité du
suc, qu'il soit obtenu d’après la méthode de Buchner ou d’après
la mienne).

La durée de la dessiccation joue aussi un certain rôle, mais
toutefois il est beaucoup moins important que celui de Ia tem-
pérature, parce que la levure desséchée à 15 degrés, en deux
jours, donne tout de même le sue inactif, tandis que la même
levure desséchée en deux jours à 25-35 degrés le livre actif.

On observe aussi qu’en macérant à 25 degrés pendant 6 heures
on obtient une très bonne activité, mais il est préférable de
macérer à 35 degrés parce qu’on gagne beaucoup de temps, ce
qui à, pour certaines expériences, une grande importance.

L'influence extrêmement favorable de la dessiccation à une
certaine lempéralure sur l’activité de la levure donne lieu de
penser à l'existence de la prozymase.

Telles sont les conditions qui permettent d'obtenir le
maximum d'activité, dans le temps le plus court possible, et
qui m'ont conduit à donner la formule courte, précise et pra-
tique que voici : Dessécher la levure à 25-30 degrés, faire macérer
ensuite avec 3 parties d'eau à 35 degrés pendant 2 heures.

Ces expériences montrent aussi que l’on peut sécher la
levure à 35 degrés; si l'on perd un peu en activité (d’ailleurs
pas toujours), on gagne en temps de préparation. Si l'épaisseur
de la couche ne dépasse pas 1 cent. 1/2, on obtient la levure
sèche en 24 heures. On pourrait aussi commencer à sécher la
levure à 40 et 45 degrés, comme je le pratiquais en me servant
de la méthode de Buchner (voir plus haut), et finir à 25 degrés
ou même à la température ordinaire, mais la chose la plus
simple, c'est d'employer la levure sèche de Munich qui est très
bien lavée, — circonstance qui dans certains cas n’est pas sans
importance, — et donne toujours du suc très actif.

Aussi était-il intéressant de voir s’il existait un rapport entre
le résidu sec et le pouvoir fermentatif du suc. Pour doser le
résidu sec on a pris chaque fois 10 cent. cubes de suc et on les
a séchés à 100 degrés jusqu’à poids constant.

26

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Exr. XX. — Levure de Munich du 28 janvier macérée avec 3 parties d’eau.
La même levure fraîche traitée d’après le procédé de Buchner et Hahn
(nos 5 et 6) a donné le suc presque inactif (résidu sec 9,77 p. 100).
J IT

& z

1 A AUEAINE MACÉRATION GRAMMES DE, SUGRE RÉSIDU
2 VlÉSUE = PE UE GRAMMES
RE ANSE = sec
5 [cel £ 2 CO°.
7 & ra Z ce p. 100.

: (s) 5 | degrés. | heures. 1 2 6 1]
1 90 | 32 | 35 | © 35 2 |o,18/0,1510,07/0,00! 0,40 13,45
2 » » 95 » » 0,53 0,17 0,09 0,00 0.79 15,73
ne A5 ; » [0,0210,00! » | » | 0,02 5,82
4 » 9.5 15 » » 0.03 0.00 » » 0,03 5,82
DANONE ous ess 5 »_ |0,04/0,02/0.,01/0,00! 0,07 9,71
6 » 32 | — » » 0,0510,0210,0110,00 0,08 TT

Exr. XXI. — Levure de Moritz du 14 février macérée avec 3 parties d'eau.

par jour.

NUMEROS
CENTRATION
DESSICCATION

C. CUBES DE SUC
CON(

S D =

d 2 MES SUC
= MACÉRATION GRAMMES DE SUCRE
AIRE degrés. | heures. 1 DAC)
1 190132 | — — 10829 À £
»|9,5|— — — 0724 , “€
»| 32
» » 25 »} »
} »| » 3) » » 0

100.

REMARQUES

RÉSIDU SEC
P:

15.61)D'après la méthode de Buch-
£ ner. À commencé à fer-
» menter de suite.

6,09|[A commencé après quel-
ques heures.

17,21|De suite.

1113,88|Quelques heures après.

Exp. XXII. — La levure de Munich du 15 février macérée avec 3 parties

Z
a | ©
ONE MACÉRATION
ee D © <
x | PAPE z
— Si A
Z CE (æ]
= 24
_ (æ] "
© | degrés. | heures.
il 20 32 3) 3
2 » » 25

GRAMMES CO?

: RÉSIDU
BADAIQUT: GRAMMES
sec
CO.
p- 100.
al 5 8 1h 12

1,4110,87/0,3210,12/0,00| 2,42
1,1410,8010,2310,03[0,00! 2,42

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 27

d'eau à 35 degrès pendant 2 heures, et à 25 degrés pendant 6 heures, a donné
des sues tout à fait comparables.

Voici les expériences que j'ai faites pour voir comment se
comporte le résidu sec si l’on modifie la température ou la
durée de la macération ou enfin la dilution.

Exr XXIII, a et b). — Levure de Munich du 28 février.

n MACÉRATION RÉSIDU || 2% MACÉRATION RÉSIDU
Se © GRAMMES
2 sec = |DILUTION sec.
= = (CKO)E
7 p- 400: || Æ p. 100.
degrés. | heures. | degrés. | heures.
1 39 2 S* 01000272 30 2 10,98 1,86
39 ) 126020 NS » » 8,66 1,44
k 20 12529034 ANNE » » 6,08 0,6%
% 15 20 1 ST REA IINENE » » 2,07 0,59
ù 5) 20 AO PORN RS RIRE » » 1,30 0,37
IRON BMRENE » 3 5,40 0,30
|

Dans l'expérience XXII 4 on a fait macérer la même levure
avec 2 1/2, 3, 4, 5 et 6 parties d’eau. Il est évident a priort
que plus on ajoute d’eau, plus le suc perd de son activité.

Exr. XXIV. — La levure du 3 février mélangée avec 3 parties d’eau.

Résidu sec.

NOMME ETelSUIEe EN NN NOR ET 22 D 00
NO PA Dre Mineur der ER ORN STN—
NO A Dr SM ADeUTeEMÉ I decrRES RER EU 0 021
No PADrES 2H NEUReS AND Te STÉSERR EN UID CON
MP AULeS IS RREUPESTA 35 degré MR 0e 1 13,02
No 6 Après Æheures à 35: degrés... . AE 33—

Les expériences suivantes rendent compte de l'influence de
la durée de filtration.

28 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Exr. XXV, a et b). — Levure de Munich du 20 février, macérée avec 3 par-
ties d'eau à 35 degrés pendant 2 h. 1/2.

A. — Filtré de suite. B. — Filtré après 24 heures.
2 2 Ü 7 ©]
SUIMe GRAMMES CO? — SRE GRAMMES CO? ®
mn E : = (æ) n = 5 (æ)
< par jour. < par jour.
ma ec un [a œ un
= = es] e + él]
Æ Z CUre a
SAINS Z SAIE Æ
Sin | À = RE £
MONET 5 as So Al4Ee 8 ë

20! 32 |1,6810,5310,13 0,05,0,00/2,39|| 20 | 32 |0,03

,
i Îl

Le même suc ayant été laissé sans contact avec la levure
pendant 24 heures à la température ordinaire ne fermentait
plus, c’est-à-dire que le contact du suc avec la levure est favo-
rable à la conservation de l’activité du suc. H reste à éclaircir
la cause de ce fait curieux.

La durée de la macération a une influence plus grande sur
l’activité du suc que sur la quantité de résidu sec, surtout si
elle est faite à une température élevée, et cela se comprend
parce que, si celle-ci favorise la macération, elle favorise aussi
la destruction de la coenzyme par une diastase (4).

Pour étudier l'influence de la race j'ai fait quelques expé-
riences avec de la levure haute, dite parisienne, en la traitant
d’après la méthode de Buchner et Hahn et d'après la mienne,
mais le suc obtenu restait inactif, quoique la levure fraiche
aussi bien que desséchée fassent fermenter vigoureusement le
sucre. Pour en éclaircir la cause, j'ai essayé d'ajouter au suc
du phosphate de soude, de le mélanger à parties égales avec
du suc très actif, mais bouilli, d’une autre levure, de rajeunir
la levure même d’après le procédé de Hayduck, de la laisser
immergée sous l’eau pendant 24 heures à 0°, mais tous ces
efforts restaient vains, le suc élait toujours inactif.

Si l'on dilue avec du suc bouilli de la levure « parisienne »

(1) Loc. cit.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 29

le suc actif d’une autre levure, celui-là se comporte comme
s’il s'agissait d'eau pure. Il est clair que non seulement le suc
de levure « parisienne » ne contient pas de zymase, mais qu'il
est aussi privé de coenzyme sous forme organique.

Exe. XXVI. — 10 cent. cubes de suc de levure de Moritz (séchée à la tempé-
rature ordinaire), dont le pouvoir fermentatif était 0,76, ont été mélangés
avec 10 cent. cubes d'eau (fiole A) et avec 10 cent. cubes de suc bouilli de
levure parisienne (fiole B); dans les deux cas aucune fermentation du sucre
qu'on a ajouté (8 grammes par fiole) ne s'était produite.

La levure haute de Springer du 28 janvier a donné du suc qui faisait fer-
menter le sucre, mais très faiblement : 0,12 gr. de CO? pour 8 grammes de
sucre et 20 cent. cubes de suc en 3 jours. Le suc contenait 8,85 p. 100 de
résidu sec. Un mélange à parties égales du suc de levure parisienne avec
celui de levure de Springer, qui contenait 9,42 p. 100 de résidu sec, ne fer-
mentait pas le sucre non plus.

Dans une autre expérience, le suc de levure Springer était
tout à fait inactif (résidu sec 7,5 p. 100) même concentré par
congélation (r. s. 12 p. 100). Cette propriété de la levure haute,
de ne pas donner un suc actif, est énigmatique et, pour le mo-
ment, jéprouve de la difficulté à donner une explication plus
ou moins plausible, mais je me propose de continuer l'étude
de ce fait curieux dans l'espoir de l'éclaircir enfin.

De toutes les expériences décrites plus haut il se dégage
pleinement le rôle que jouent, dans l’activité du suc de macé-
ration, les facteurs tels que :

1° température de la dessiccation de la levure;

2° température et durée de la macération (le dernier fac-
teur est une fonction du premier et le rapport entre eux
HER expeme part /— 7; [14];

3° conservation du suc seul ou avec de la levure;

4° degré de la dilution et 5° état et race de la levure, ces
deux facteurs étant d'ailleurs, comme je l'ai dit plus haut,
communs pour l'activité du suc de macération et celui du
broyage.

30 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

INFLUENCE DE LA TEMPÉRATURE SUR LE POUVOIR FERMENTATIF DU SUC.

Exr. XXVII. — Levure sèche de Munich du 15 mars, macérée 2 heures à
35 degrés. Pour 20 cent. cubes de suc, 8 grammes de sucre et 0,2 cent. cubes
de toluène.

£ É GRAMMES DE CO? PAR JOUR É e 5
3 Al ë 7 | DURÉE 23 22 È

SPAS ASS LES CUS TRS OR AO | OA Si ENT
Al 15 |0,70/0,60/0,85/10,27/0,20/0,11[0,09/0,06/0,03/0,01| 142 |2,92 | 0,24
2] 925 |1,19/0,7110,44/0,1010,0510,02| » |» |» |» 7 12,51 | 0,31
Sos Dao 101002102001 Re) SAINS 3 {2,04 | 0,40
4] 25 l4,43l0.4610,0410,00! » 1-1, |, |» |0 2 11.62 0,81

Cette expérience typique suffit (j'en ai fait plusieurs qui ont
donné le même résultat) pour montrer que le suc de macéra-
tion se comporte de la même facon que le suc de broyage (1) :
plus la température est élevée, plus la fermentation devient
rapide et moins d'acide carbonique est produit à cause de la
coagulation des albuminoides et de la décomposition de la coen-
zyme organique (et non de la destruction de la zymase par
l’endotryptase) (2).

PROPRIÉTÉS DU SUC DE MACÉRATION.

La couleur du suc de macération est plus foncée que celle
du suc de broyage. Il est limpide parce qu'il ne contient pas
de glycogène, ni de terre d’infusoire, qui donnent au suc de
broyage un aspect fort opalescent. L'absence de glycogène est
la cause que le suc de macération, abandonné sans addition de
sucre, ne montre presque aucune autofermentation, propriété
bien avantageuse dans certains cas. Le suc a un goût spécifique
désagréable qui est dû à la présence de l'éther du sucre avec
l'acide phosphorique. Selon le schéma de la fermentation alcoo-

(1) Die Zymasegäürung, 1903, p; 145-148.
(2) Loc. cit., p. 149.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 31

lique que j'ai donné (1), l’éther phosphoré qui se forme par
condensation devrait avoir la formule : (CH-HPO:(CHOH
CO CH AH PO); c'est-à-dire qu'à cause de ce fait que l'acide
phosphorique est lié à l'atome du carbone qui se trouve près
du groupement CO, l’hétose, probablement, un acrose, perd
complètement le goût sucré et, en échange, donne le goût
dont je viens de parler.

Le résidu sec obtenu après la macération pendant 2 heures
à 35 degrés, ou 6 heures à 25 degrés, avec 3 parties d’eau,
oscille entre 10 et 19 p. 100 selon la levure, mais le plus sou-
vent il est de 15-16 p. 100.

Le résidu sec du suc de broyage (2) oscille entre 9 et 15 p.100,
moyenne 13 p. 100, c'est-à-dire que mon suc est plus riche en
matières extraclives que le suc Buchner. La quantité des albu-
minoïdes coagulables oscille, pour la levure de bière, entre
2 et Tp. 100; la moyenne se trouve entre 4 et 6 p. 100. Aussi
le suc de broyage semble-t-il un peu plus riche en matières
albuminoïdes coagulables, comme on peut en juger d’après les
données publiées par Buchner et Hahn (3). Je n'ai pas fait
d'expériences comparatives sur ce sujet.

La coagulation commence à 45 degrés, et plus la tempéra-
ture monte, plus la masse se solidifie en se transformant peu à
peu en gelée. Si l’on fait cette expérience dans un tube à essais,
la coagulation consommée, on peut le renverser sans qu'une
goutte ne s'écoule.

TENEUR EN DIASTASES. ENDOTRYPTASE.

Il va de soi que le suc de macération contient toutes les
enzymes qui se trouvent dans le suc de broyage, comme
sucrase, maltase, réductase, catalase, etc. (4). Je ne ferai con-

Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, séance du 10 juillet 1911.
BoerCit pub:
Loc: cit., p. 14 et 292.
(4) D’après une communication orale faite par M. Eugène Wollmann le suc
préparé par mon procédé possède un pouvoir antiprotéolytique extrêmement
marqué; ce pouvoir est surtout accentué vis-à-vis de la pepsine, mais existe
également, quoique à un moindre degré, vis-à-vis de la trypsine. Il y a en cela
concordance parfaite avec les données de Buchner et Hahn (Biochem. Zeitsch.,
D XXI DAS 110)

C'est ainsi que le blanc d'œuf mis en tubes de 1 cent. 5 de longueur est

(1)
(2)
(3)

32 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

naître ici que quelques-unes des expériences que j'ai faites
sur l'endotryptase de Hahn (1), qui Joue un rôle si important
dans les transformations que subit le suc et peul-ètre dans la
macéralion même. S'il est abandonné à la température ordi-
naire sans addition de sucre, un dépôt des albuminoïdes appa-
raît le deuxième ou le troisième jour. À 35 degrés le dépôt peut
se former déjà en quelques heures, surtout avec du suc de la
levure de Munich. Peu à peu le dépôt disparaît en se liqué-
fiant sous l’action de l’endotryptase.

Ainsi on peut toujours observer deux phases: l'apparition du
coagulum et sa disparition progressive. Il est fort probable que
la première phase du phénomène est due à la présence de la
présure, comme le montre l'expérience suivante.

Exr. XXVIII. — J'ai pris deux matras (A et B) avec du lait (100 cent. cubes
dans chacun), j'y ai ajouté une forte quantité de toluène et à l’un d'eux (A),
en outre, 5 cent. cubes de suc de la levure de Munich. Ensuite je les ai mis
au thermostat à 35 degrés. En l’espace d’une nuit, le lait en expérience dans
le matras À était complétement coagulé, tandis qu'il restait tel dans le matras
témoin B.

Deuxième phase. — La dissolution du coagulum sous l’action
de l’endotryplase à été suivie par la méthode de Mett modi-
liée (2), qui a été à son tour contrôlée par le dosage indirect
des albuminoïdes coagulables. Je décrirai ici brièvement quel-
ques expériences faites en vue d'établir le rapport quelconque
pouvant exister entre l’activité du suc et ses propriétés endo-
tryptiques.

MérHoDE.

On a pris des petits tubes à essais (A), d’un diamètre ne
dépassant pas 1 centimètre, et on les a remplis avec de la géla-
line thymolysée. Ces tubes, la gélatine étant solidifiée, ont été

liquéfié à une longueur de 1 centimètre dans les tubes où la solution de
pepsine (à 4 p. 100) est diluée de solution de NaCI à 0,9 p. 100, au bout de
5-6 jours. Dans les tubes où cette soiution est diluée de suc bouilli il n'y a
pas d'attaque perceptible. Pour la trypsine l’action est de moitié plus faible
en présence de suc bouilli.

(RDC rer ip. 287:

(2) FRANz FuRMaNN, Vorlesungen über Baktlerienenzyme, 1907, p. 25.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 33

mis dans le sens inverse dans des tubes à essai d’un diamètre
plus grand (B), qui contenaient du suc à essayer sur son acti-
vité endotryptique, comme le montre le dessin schématique
ci-dessous :

Le dosage indirect des matières albuminoïdes a été fait de la
manière suivante. Avant l'expérience on a
dosé le résidu sec avec du suc, en en sé-
chant à 100 degrés 10 cent. cubes jusqu’à
poids constant; d'autre part, on a pris bouchon

50 cent. cubes de suc et on les a fait coa- TS
guler dans l’eau bouillante dans un matras :
bouché.

Après refroidissement on les à filtrés et
on à dosé le résidu sec comme ci-dessus. B
On mettait au thermostat pendant 24 heures
à 35 degrés quelques dizaines de centimètres .

Luc

cubes du même suc et l’on dosait, après la
coagulation, le résidu sec.

Ce procédé, bien qu'il ne soit pas rigou-
reusement exact, se recommande par sa rapidité et la simpli-
cité de l'exécution.

ÉÉXPAXENIXe

100.

LEVURE DE

mn
©
TS
24
©
=kS
2 "=
S'E
_E
CUÉS,
a
n
©
rs

POUVOIR
digérées.

fermentatif.

P .

ñ
n à
Di
E ©
ce
ES
ECG
œ

9 3
° à
=”
œ

MILLIMÈTRES
de gélatine

coagulables.
liquéfiée à 300.

RÉSIDU SEC

mn
|
[e}
©
CA
re
=
=]
Le]
=
<«

ALBUMINOÏDES

+ I
kæ= © Cr

Munich du 28 février .

Munich du 15 mars. . AE
Moritz du 10 janvier séchée à 15°.
Moritz du 14 février séchée à 350.
Springer du 4 février. .

[°r]
=

1

2]

OO
D ©
Æ Ju &

La première colonne montre la quantité de CO* dégagé par
20 cent. cubes de suc employé plus 8 grammes de sucre, c’est-
à-dire son activité (Gärkraft); la deuxième, les p. 100 du
résidu sec; la troisième, la quantité des albuminoïdes coagu-

3

34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

lables qui ont été dosées après le séjour au thermostat pendant
vingt-quatre heures à 35 degrés; la quatrième, les p. 100 des
albuminoïdes digérées en vingt-quatre heures; enfin, la cin-
quième montre l'épaisseur de la couche de gélatine liquéfiée
dans les tubes.

Bien que trois mois se soient écoulés entre les deux dosages
de résidu sec, les chiffres obtenus ne diffèrent que très peu
entre eux, comme le montre l'expérience suivante :

EXP EX
1 dosage. 2e dosage.
Springer du 4 février . . . Résidu sec : 7,5 6,75
Moritz du 14 février . . . . Résidu sec : 13,88 14,4%
Munich du 28 février. . . . Résidu sec : 8.66 8,70

Ce fait parle en faveur de la méthode indirecte du dosage des
albuminoïdes coagulables, pour éviter le lavage ennuyeux du
coagulum qui est nécessaire si on le pèse directement.

Il ressort de l’expérience XXIX, pour laquelle j'ai choisi
exprès des sucs très différents, qu'il n’y à pas un rapport
direct entre le résidu sec, la teneur en endotryptase et l’acti-
vilé du suc.

La levure de Munich du 28 février a livré le suc anormal
sous tous rapports. Elle n'était pas préparée suivant mes
indications et probablement elle avait été séchée à une tempéra-
ture inférieure à 25 degrés, parce que, pendant la macération
mème, elle fermentait si vivement qu'elle débordait de la
capsule.

Si le suc est laissé sans addition de sucre à la température
ordinaire, il se forme en deux ou trois jours un dépôt cris-
tallin soluble dans l'acide acétique. Ce dépôt consiste en
des phosphates de calcium et de magnésium (1) (en moyenne,
0,5 grammes p. 100 cent. cubes). A la surface du liquide, une
couche graisseuse apparaît. J'ai constaté que ce dépôt ne pro-
vient pas de la décomposition par l’endotryptase des albumi-
noïdes coagulables, j'ai mème pu séparer de la zymase Ja dias-

(1) La présence du calcium a été constatée par l’oxalate d'ammonium ;
celle de l'acide phosphorique par le molybdèate d'ammoniaque. Si l'on ajoute
de l’'ammoniaque à la solution de ce dépôt dans l'acide acétique, on peut
observer au microscope les cristaux caractéristiques du phosphate amm-
oniaco-magnésien.

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 35

tase qui le produit aussi dans le suc bouilli. Cette diastase est
toujours accompagnée de la catalase. De plus, j'ai pu voir que
celle-là détruit la propriété régénératrice du suc bouilli, c’est
à dire sa coenzyme sous forme organique. L'étude de la nature
de celte curieuse diastase, ainsi que de la coenzyme même, fera
l'objet d'une communication ultérieure. Plus tard, en une se-
maine environ, apparaissent les cristaux sphériques, grands, bien
développés de tyrosine. Je n'ai pas fait l'étude aussi détaillée
des produits de la digestion endotryptasique des albuminoïdes
du suc de macération, comme Hahn et Geret (1) l'ont fait pour le
suc de broyage, mais je ne crois pas qu'il y ait, sous ce rapport,
une différence quelconque entre les sucs obtenus par des pro-
cédés différents. Je crois seulement utile de souligner ici qu'on
peut produire à volonté un dépôt de phosphate dans le suc,
même bouilli, en y ajoutant un peu de la diastase que j'ai
isolée.

Il se pose maintenant la question suivante : quelle est la cause
de ce fait que des colloïdes tels que des albuminoïdes sortent de
la cellule ? Doit-elle être attribuée exclusivement aux effets des
forces osmotiques, ou bien les facteurs d'ordre chimique sonl-
ils en jeu? On peut bien supposer que l'entrée brusque de l’eau
dans la cellule desséchée en fait éclater la membrane, mais
l'étude microscopique ne confirme pas cette hypothèse, parce
que au début de la macération la plus grande partie des cel-
lules est intacte et se présente sous l'aspect normal. L'influence
très marquée de la température et de la durée de la macération sur
la quantité du résidu sec et l’activité du sue, fait plutôt admettre
l'action chimique directe ou au moyen d’une diastase, d'autant
plus que ces deux facteurs, la température et le temps, sont en
rapport étroit entre eux, celui-ci étant fonction de celle-là.
Or, on obtient le même effet si l’on fait macérer deux heures à
35 degrés, ou six heures à 25 degrés, c’est-à-dire qu'une élévation
de 10 degrés de température accélère l'effet produit de trois fois,
mais c'est justement la règle généralement admise pour les réac-
tions chimiques! D'autre part, plus la macération dure, plus
on observe au microscope les cellules altérées et disloquées

D

ainsi que leurs débris. En outre, J'ai pu constater, en me ser-

1) Die Zymasegærung, p. 293.

36 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

vant de la méthode de coloration de Schlichtet Winter (1), que
la plupart des cellules de levure, séchées à 25-30 degrés, res-
tent encore vivantes.

Tous ces faits, ainsi que les considérations théoriques, me font
penser que, d’une part, la dessiccation affaiblit la résistance
de la membrane à l’exosmose des colloïdes, en changeant les
propriétés physiques de celle-là et que, d'autre part, une dias-
tase existe qui peut dissoudre la membrane et dont l’action
devient très intense à 35 degrés. Il n’est pas impossible que
cet effet soit produit par l'endotryptase même, la supposition a
déjà été faite par Hahn et Geret (2); dans ce cas, on n'est
pas obligé d'augmenter sans fin la quantité de diastase se trou-
vant dans la cellule de levure. Je me propose d'étudier cette
question de plus près.

L'élévation de la température accélère aussi la destruction
de la coenzyme sous forme organique, le fait a été constaté
par Buchner et ses collaborateurs. On voit que deux actions
diastasiques différentes vont parallèlement : 4° l'extraction des
albuminoïdes, grâce à la dissolution de la membrane; 2° décom-
position de la coenzyme organique. Il est évident qu'à la fin
de la deuxième heure ces deux effets se trouvent dans l’état
d'un certain équilibre, parce qu'on obtient le maximum d’acti-
vilé; si l’on continue la macération au delà de cette limite (qui
peut varier pour des levures de provenance différentes), le
deuxième effet — destruction de la coenzyme — prend le des-
sus, et l’activité du suc va en décroissant. Il n’est pas impos-
sible qu'à cette température élevée la zymase même soit atta-
quée à la fin par l’endotryptase et digérée comme les albumi-
noïdes inactifs qui l’accompagnent. Si les considérations que je
viens de développer ici ne sont pour le moment qu’une hypo-
thèse, c’est tout de même une hypothèse qui peut guider les
recherches dans cette direction. La méthode de macération qui
a donné un si beau résultat avec la levure, peut un jour devenir
générale si on l’applique à l'extraction des diastases bacté-
riennes.

a
(2

) Ann. de la Brasserie el de la Distillerie, 1910, p. 20.
IRLOCMEL., (D 193908:

EXTRACTION DE LA ZYMASE PAR SIMPLE MACÉRATION 37

Résuu.

En jetant un regard rétrospectif sur les faits et expériences
communiqués dans ce mémoire, on parvient à cette conclusion
que le suc de macération, convenablement préparé, est toujours
beaucoup plus actif que le suc de broyage et lui ressemble sous
tous les rapports. En outre, le procédé de macération, sans
parler de la simplicité et de la rapidité avec lesquelles on
obtient du suc, surtout si l'on se sert de la levure sèche de
l'industrie, offre les avantages suivants;

1° Le suc est privé de glycogène;

2° On connaît d'avance, si l'on emploie la même levure, la
quantité et l’activité du suc obtenu d’un certain poids de cette
levure ;

3° La levure séchée conservant longtemps son activité, cette
méthode permet d'entreprendre des recherches comparatives,
impossibles autrefois.

ACTION DE LA LUMIÈRE SUR LES DIASTASES
par H. AGULHON

(Travail du laboratoire de M. G. Bertrand).

[. — ACTION DES DIFFÉRENTES RADIATIONS

Downes et Blunt, Duclaux, Roux, Fernbach ont étudié l’ac-
tion de la lumière solaire sur la sucrase, la présure et la
toxine diphtérique, mais ils n’ont pas cherché à déterminer
la partie active du spectre. Green (1), se servant de la lumière
de l'arc électrique, s’est le premier rendu compte de Paction
destructrice de lultra-violet; son étude porte uniquement sur
la diastase du malt et la salive. En 1904, Hertel (2) a noté
l'atténuation de la toxine diphtérique et de quelques diastases
(amylase, trypsine, présure) sous l'influence de l’éclairement
par une raie bien caractérisée du magnésium appartenant à
l’ultra-violet (2800 à 2750 ua). Plus récemment, M": Cernovo-
deanu et V. Henri (3), Baroni et Jonesco-Mihaiesti (4) ont
observé la destruction de certaines toxines et des propriétés de
certains sérums préparés sous l’action des sources intenses
d’ultra-violet que l’on possède actuellement.

Il m'a paru intéressant d'étendre ces récentes études aux
solutions diastasiques et d'apporter ainsi un complément aux
travaux de Green et de Hertel.

1° Action des rayons ultra-violets. — Je me suis servi dans ces
expériences d’une lampe à mercure Heræus en quartz fondu pre-
nant 3 ampères sur 110 volts. Les solutions diastasiques étaient
exposées à une distance de 15 à 20 centimètres de cette source
lumineuse dans des tubes à essai en quartz et en verre de
46 millimètres de diamètre et d’une épaisseur de 1 millimètre
environ, suffisante pour arrêter dans les tubes de verre les

) Phil. trans. of the R. Sociely, 1897, p. 161.

) Zeilsch. f. allgem. Physiol., t. IV, p. 1 à 43, 1904.

) Comptes rendus de l’Acad. des sciences. t. CXLIX, p. 365, et L. CLI, p. 724.
) Comptes rendus Soc. de Biologie, t. LXVIIT, p. 393, et t. LXIX, p. 227, 1910.

(I
2

9
D

(
(
(
(

ACTION DE LA LUMIÈRE SUR LES DIASTASES 39

radiations inférieures à 3022 ua (M'*° Cernovodeanu et V. Henri).
Après le temps d'exposition désiré, les solutions diastasiques
étaient mises en contact avec les substances qu'elles sont sus-
ceptibles d'attaquer. Des dosages de ces substances permet-
taient de se rendre comple de l’activité des préparations. St
l'on représente l'activité de la solution diastasique exposée dans
un tube de verre par le chiffre 100, les nombres du tableau
suivant expriment l'activité de la méme soiution exposée en
méme temps dans un tube de quartz.

SUCRASE | AMYLASE DU MALT AMYLASE PANCRÉATIQUE
(macération (Diastase (Pancréatine Macquaire).
e commerciale en SL
rure)- ; ;
SYRIE, Aa) 9 p. 100. 0,5 p. 100.
rs RS LR D
Durée
d'exposition. 3 h. dn-21/2:)/ 3h" DRE buis 3h. 8 h.
Activité. 19 40 20 98 97 98 50
|
EMULSINE PEPSINE LA RRSSURE
= : = Li
(E. Merck |(commerciale). SUIS CEA :
sol. D ? 2 PASTILLES
1 ob: ER étendue dans FErRen
1 p. 00/2p.100| 3 parties d’eau. pour 100 ec,
2 ne | | —
Durée |
d'exposition. | 2h. | 6h. SNS 11/2120 PAT GEI 2202 RnSe) M ANTE

Activité. S5 ù7 75 92 71 65 65 | 100 D3u| Cu 10

CATALASE
(de panne de porc).
CR

Durée d'exposition. 1 h. Ba 1 6 h. 1/2.
Activité. 83 39 8

L'examen des chiffres du tableau montre que les huit pré-
parations diastasiques étudiées sont toutes plus ou moins rapi-
dement atténuées par les radiations que laisse passer le quartz
et qu'arréle le verre. Pour la diastase du malt, nous avons,
dans son action sur l’empois d’amidon, une suite d'actions
diastasiques; en suivant d'abord les digestions à l'iode et en
prenant la viscosité des empois traités, je me suis rendu
compte que l’amylopectinase, diastase liquéfiante, et les dias-
tases productrices de dextrines, étaient atténuées comme la
diastase productrice du maltose; de plus, la diastase, ayant
été exposée sous le quartz, ne forme pas d'amidon rétro-

40 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

gradé. L'amylase pancréatique est difficilement attaquée; elle
n'est pour ainsi dire pas touchée en solution à 2 p. 100 ; en
diminuant la concentration, l'attaque se fait plus facilement;
ilen est de même pour la pepsine : il faut voir là l'influence
protectrice d’une légère coloration de la solution et aussi de la
présence d’albumines qui sont opaques pour les rayons ultra-
violets (Green et plus récemment Vallet) (1). La présure est
aussi protégée par la coloration de ses solutions : une solu-
tion de présure commerciale jaune même étendue, est attaquée
à activité égale moins rapidement qu'une solution incolore de
pastilles de Hansen.

Dans le cas de l’émulsine (émulsine Merck en solution
4 p. 100), un phénomène particulier s’est produit; après un
temps très court d'exposition, le liquide du tube de quartz se
trouble et précipite de légers flocons ; toute la diastase encore
active reste dans la solution. Pour la pepsine, la présence de
HCL, libre pendart l'exposition, ne parait pas hâter sa des-
truction.

2° Action de la lumière visible. — La lumière visible a-t-elle
une activité? Des tubes entourés de clinquant étaient placés à
côté des autres pendant leur exposition. On comparait ensuite
leur activité avec les tubes de verre. Pour l’amylase du malt,
la pepsine et la présure, l’action des rayons traversant le verre
semble nulle ; le contenu des tubes entourés de clinquant n’est
pas sensiblement plus actif que celui des tubes entourés de
verre; pour l'émulsine, la perte d'activité dans le tube de verre
après deux heures d'exposition est de 4,2 p. 100, alors qu'elle
est déjà de 17 pour 100 dans le tube de quartz; c’est pour la
catalase que la perte est la plus importante : après 6 h. et demie
d'exposition, le contenu du tube de verre est trois fois moins
actif. On voit donc que l’activité des rayons traversant le verre
nest pas générale; lorsqu'elle existe, elle est infiniment moins
importante que celle des rayons ultra-violets.

La /accase et la tyrosinase de l'extrait glycériné de Russule
sont très lentement attaquées par les rayons ultra-violets lorsque
l'extrait est exposé non étendu d’eau (la glycérine est moins
perméable que l’eau et la solution est colorée); après six heures

(1) Comptes rendus Acad. des sciences, t. CL, p. 632.

ACTION DE LA LUMIÈRE SUR LES DIASTASES 41

d'exposition, on commence seulement à voir une légère diffé-
rence en faveur du contenu du tube de verre en faisant agir la
solution glycérinée sur le gaïacol à 1 p. 100 ; on ne voit aucune
différence dans son action sur une solution de tyrosine saturée.
Au contraire, dans une solution de cet extrait glycériné dans
quatre volumes d’eau, la laccase et la tyrosinase sont notable-
ment atténuées par une exposition de trois heures dans un
tube de quartz. La peroxydiastase du malt est aussi rapide-
ment altaquée dans les mêmes conditions.

En résumé, les dix diastases étudiées sont toutes atteintes
par l’action des radiations ultra-violettes. Les rayons ahiotiques
ne se contentent pas de détruire rapidement les microorga-
nismes, ils n'épargnent aucun des produits actifs de la cellule,
toxine ou diastase, pourvu qu'ils se trouvent dans un milieu
perméable à ces radiations. Sur les diastases, la partie du
spectre supérieure à 3022 va, est presque inactive. Nous allons
maintenant essayer de voir quel peut être le mécanisme de
cette action de la lumière sur les diastases,.

Il. — MÉCANISME DE LA DESTRUCTION PAR LA LUMIÈRE

Roux, avec la toxine diphtérique (1), Fernbach, avec la su-
crase (2), ont montré que l'influence destructive des rayons
solaires sur les diastases est due à une action simultanée de la
lumière et de l’oxygène; ils sont sans action sur un liquide
exposé dans le vide. Hertel (3) rapporte l’atténuation des
enzymes à un phénomène de réduction. Il se base sur ce fait
que le sang exposé en couche mince cesse de donner le spectre
de l’oxyhémoglobine et que les tissus animaux colorés au bleu
de méthylène sont décolorés. L'action de la lumière aurait-elle
un mécanisme tellement différent suivant que l’on opère dans
l'une ou l’autre partie du spectre? En vue d’élucider cette
question, je me suis adressé à un certain nombre de prépara-
tions diastasiques : sucrase obtenue par macération d'Asperqil-
lus niger, émulsine d'amandes Merck, laccase et tyrosinase
de la macération glycérinée de Russula Quelelti.

(1) Annales de l'Institut Pasteur, t. II, p. 629, 1888.
(2) Annales de l'Instilut Pasteur, t. IT, p. 4173, 1889.
(3) Loc. cit.

42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Cinq tubes à essai, dont trois en verre et deux en quartz, contenant une
même solution de la diastase à étudier, sont exposés à 15 ou 20 centimètres
de la lampe en quartz à vapeur de mercure Heræus ; l’un des tubes de verre
est entouré de clinquant et sert de témoin; sans être illuminé, il se trouve
dans des conditions de température analogues à celles des autres tubes ; on
fait le vide dans un des tubes de quartz et dans un des tubes de verre res-
tants à l’aide d’une trompe à mercure, en prenant la précaution de faire
bouillir le liquide dans le vide pendant quelques instants pour chasser l'oxy-
gène en solution.

Après le temps d'exposition désiré, on fait agir une même quantité du cou-
tenu de chaque tube sur une substance appropriée (saccharose à 10 p. 100
en présence de 2 p.1000 d'acide acétique pour la sucrase, amygdaline à 2 p.100
dans le cas de l’émulsine). Le sucre réducteur formé est dosé par la méthode
de Gabriel Bertrand. Voici quelques chiffres expérimentaux :

SUCRASE ÉMULSINE
(2 PRÉPARATIONS (2 PRÉPARATIONS
DIFFÉRENTES) DIFFÉRENTES)
Sucre réducteur Glucose

formé en 1 heure formé en 1 h. 1/2

Temps d'EXPOSILION Ce 2

à 53 degrés.
RE
Première | Deuxième
préparation |préparation

à température ordinaire.
RE TT

Première | Deuxième
préparation | préparation

2 heures. 6 heures. | 4 heures. & h. 1/2.

Milligr. Milligr. Milligr. Milligr.
Témoin entouré de clinqua 88,2 32,8 312,1 18,3
Tube de verre . 86,8 30,95 351 ,1 18,1
Tube de verre vide. 90 ,1 43,3 356,8 18,3
Tube de quartz. . 70,1 DIRE 183,5 5,0
Tube de quartz vide . 75,0 21,8 270 ,1 12,6

On voit qu'en ce qui concerne la sucrase, conformément à ce
qui a déjà été signalé, l’action de la lumière visible est nulle dans
le vide; la destruction par la chaleur semble mème entravée
dans les tubes sans oxygène ; les liquides exposés s'échauffent en
effet vers 28-30 degrés pendant l'exposition; cela expliquerait
les résultats plus élevés trouvés pour le contenu des tubes de
verre vides par rapport aux témoins. Pour l’émulsine, la lu-
mière visible ne paraît au contraire pas perdre absolument son
activité dans le vide; son action destructrice est seulement atté-
nuée; elle n’est d’ailleurs pas très forte dans les conditions des
expériences précédentes, et, pour certaines diastases, J'ai montré
dans la première partie de ce travail qu’elle pouvait être
nulle.

ACTION DE LA LUMIÈRE SUR LES DIASTASES 43

La laccase et la tyrosinase d’une macération glycérinée de
Russule étendue de quatre volumes d’eau sont comme la
sucrase inattaquées dans le vide par les rayons visibles; elles
sont attaquées en présence d'oxygène.

En considérant les chiffres obtenus avec les solutions d’émul-
sine et de sucrase exposées dans les tubes de quartz, on voit que
dans les tubes vides elles ont perdu une grande partie de leur
activité, mais cependant moins qu’en présence d'air. La sucrase,
l’'émulsine, la laccase et la tyrosinase exposées aux radiations
ultra-violettes sont donc attaquées mème dans le vide. Il sem-
blerait que pour cette partie du spectre, la présence d'oxygène
libre ne soit plus nécessaire; il n’en faut pas conclure qu'il ne
s'agit pas d’un phénomène d'oxydation. On sait, d’après de
récentes recherches, que l’eau est décomposée par la lumière
ultra-violette en eau oxygénée et hydrogène libre (1). Dans le
vide, l'hydrogène est simplement mis en liberté; en présence
d'oxygène, au contraire, il se combine à ce dernier élément (2)
et donne une nouvelle proportion d’eau oxygénée ; il se forme
donc à l’air une plus grande quantité de ce corps. Or, celui-ci
détruit les diastases en les oxydant. Ainsi, après quatre heures
de séjour dans l’eau oxygénée à 0,5 p. 100, la laccase et
la tyrosinase de la macération de Russule sont entièrement
détruites.

Les faits observés avec les quatre diastases étudiées corres-
pondent parfaitement bien avec ce qu'on sait sur la production
d’eau oxygénée, On peut résumer le mécanisme de l’action des
radiations lumireuses de la façon suivante :

La lumière visible est active sur les diastases (sucrase, laccase,
tyrosinase), seulement en présence d'oxygène ; elle agit par
oxydation : il y a probablement formation d'eau oxygénée (3),
mais seulement en présence d'oxygène libre;

La lumière ultra-violette, plus active, est susceptible de décom-
poser l’eau, avec formation d’eau oxygénée; aussi détruit-elle
les diastases en solution aqueuse, même en l'absence d'oxygène ;
en sa présence, l’action est encore plus rapide, la formation de

1) Miroslaw Kernbaum. — Comptes rendus de l’Acad. des sciences, t. CIL,
p. 273, 1909.

(2) “Tian, Ibid., t. .CLIT, p-..1012, 1914

(3) Miros!aw Kernbaum. Société de Physique, T juillet 1911.

44 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'eau oxygénée étant plus grande. Il s'agit là encore d’un phéno-
mène d’oxydation.

La présence d’eau, indispensable pour la formation d’eau
oxygénée, est nécessaire à l’attaque des diastases par les rayons
ultra-violets. Après trois heures d'exposition dans le quartz en
solution dans la glycérine à 30 degrés Baumé, la tyrosinase
n'est pas atlaquée, et je ne pense pas qu'il faille voir là une
question d’opacité de la glycérine pour les radiations, comme
le croit Vallet (1). J'ai fait à ce sujet l'expérience suivante :
deux tubes de quartz de diamètre différent sont enchâssés l’un
dans l’autre ; le tube intérieur est rempli de macération glycé-
rinée de Russule étendue d'eau; l'intervalle entre les deux tubes
est rempli soit de glycérine, soit d’eau; la lumière est de la sorte
obligée, avant d'arriver à la solution diastasique, de traverser
un écran d’eau ou de glycérine épais de # millimètres. Après
trois heures d'exposition, la diastase (lLyrosinase) a été détruite
de façon sensiblement équivalente par la lumière ayant traversé
l’une ou l’autre couche de liquide.

On sait que l’eau oxygénée est détruite presque au fur et à
mesure de sa formation sous l’action de l’ultra-violet; si elle se
trouve en présence d’une substance oxydable, comme une
diastase, elle l'oxyde, et une nouvelle quantité s'en forme, mais
la quantité présente en un même moment dans l’eau ne peut
pas être considérable. C’est ce qui explique que l’eau exposée
aux rayons ultra-violets n’agit pas, ou très faiblement, sur les
diastases que l’on y dissout après son exposition.

De l’eau distillée, exposée à 15 centimètres de la lampe dans un tube de
quartz, pendant six heures, est mise en présence d’émulsine (1 cent. cube de
solution à 2 p. 100 dans 5 cent. cubes d’eau exposée); un tube témoin est fait
avec de l’eau non exposée. On laisse en contact pendant dix-sept heures et
on fait agir sur 50 cent. cubes d’amygdaline à 2 p. 100. Après deux heures
d'action à température ordinaire, on titre le glucose formé.

Témoin; eau non exposée. PAM MEN MENRESRED er L95
Eau exposée 6 heures” 00e AE or 002

Avec la présure, je n’ai pas trouvé non plus d'action de l’eau
exposée préalablement ; avec la laccase et la tyrosinase, j'ai pu

(4) Loc. cit.

ACTION DE LA LUMIÈRE SUR LES DIASTASES 45

observer une action très faible en employant de l’eau exposée
vingt heures (1).

Un fait qui tend encore à me faire croire à une action de
l’eau oxygénée dans la destruction des diastases par les rayons
ultra-violels est la production d’un précipité blanc, probablement
dû à la caséine végétale des amandes, qu'on observe dans les
tubes de quartz, exposés vides ou non, contenant de l'émulsine;
ce précipité, dont j'avais déjà noté la formalion dans le pre-
mier paragraphe de cette note, est soluble dans les alcalis; or, si
l'on fait agir sur la même solution d’émulsine une solution d'eau
oxygénée, on obtient aussi un précipité soluble dans les alcalis.

Nous avons vu que l’'émulsine est attaquée légèrement dans le
vide par la lumière visible; ceci nous amène à penser que le
mécanisme d’oxydation par l’eau oxygénée, que je viens de
décrire, et qui explique parfaitement les faits pour la sucrase,
la laccase et la tyrosinase, n'est peut-être pas absolument
général et ne suffit pas à tout expliquer. Il y aurait deux façons
d'être des diastases vis-à-vis des rayons visibles dans le vide.
Nous allons trouver dans la catalase un exemple bien plus
accentué que celui de l'émulsine, d’une attaque dans le vide par
la lumière visible.

D'après Zeller et Jodlbauer (2), les rayons visibles du spectre
ne détruisent la catalase qu'en présence de l'oxygène; la des-
truction par les radiations ultra-violettes n'est, d'autre part,
pas influencée par sa présence ou son absence. Battelli et
Stern (3) sont arrivés au contraire au résultat suivant : la
destruction de la catalase se produit sous l'influence de la
lumière visible avec la même intensité, que l’on se trouve ou
non en présence d'oxygène.

J'ai fait sur ia catalase de panne de porc et sur celle de foie
de veau un certain nombre d'expériences, tant au soleil qu'à la
lumière de la lampe à mercure, et Les résultats auxquels Je suis
arrivé ne sont d'accord ni avec ceux de Zeller et Jodlbauer, ni
avec ceux de Battelli et Stern. Le tableau suivant donne un
certain nombre des chiffres expérimentaux :

(1) Duclaux avait observé une action très nette de l'eau exposée antérieu-
rement aux rayons solaires sur la sucrase. Traité de Microbiologie, t. IT, p. 222.

(2) Biochem. Zeitschr., t. VIII, p. 84, 1908.

(3) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXVIIT, p. 1040, 1910.

46 | ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Poids en milligrammes de l’0° dégagé par 1 cent. cube
de solution diastasique agissant sur 10 cent. cubes d'H°0° à 2 p. 100 (1).

CATALASE DE PANNE DE PORC CATALASE DE FOIE
SR
en Au soleil
À 5 temps Plein soleil.
PE couvert.
en ce dm cu
Exposition. .| 3 h. 3/4 | 3 heures. | 6 heures. 2 heures. 1 h. 3/4,
ns | ons
Témoin 33,28 19,6 40,88 21,02 34,36 38,16
VIE LT ME 13,76 6,2 19,76 20,00 30,6% 30,3
Verre vide. » 10,8 28,64 25,68 33 , 00 33,16
Quartz. 6,4 2 , 0 17 ,16 » » »
Quartz vide.| 17,92 4,3 21 ,+4 » » »

Il ressort de cet ensemble de chiffres que la catalase, bien
que détruite dans le vide par les rayons visibles, l’est cepen-
dant moins qu'en présence d’oxygène, ce qui est en contra-
diction avec les résultats de Batelli et Stern; d'autre part, la
destruction par les rayons ultra-violets est notablement dimi-
nuée en l'absence d'oxygène, contrairement à ce que Zeller et
Jodlbauer avaient annoncé. Des résultats si différents obtenus
au cours de trois travaux successifs sur la même diastase
montrent combien les affirmations sont périlleuses sur de telles
questions ; comme le faisait remarquer Duclaux, la masse même
de la diastase est si petite qu'il peut suffire d'une trace d’'oxy-
sène pour en provoquer l'oxydation par la lumière; d'autre
part, on s’imagine combien peut être grande l'influence des
impuretés inconnues qui accompagnent la diastase.

Un troisième mode d'action de La lumière sur les diastases
se présente à nous dans l'étude de la présure; celle-ci est inat-
taquée par les rayons visibles, tandis que la lumière ultra-
violette la détruit aussi activement en présence qu’en absence
d'oxygène. J'ai expérimenté avec la présure de Hansen en
pastilles, et, pour me rendre compte dans une certaine mesure
de l'influence possible des sels présents, j'ai employé aussi un

(1) Solution de perhydrol Merck. Les dosages étaient faits en dosant H°O*
non décomposé au bout d'un quart d'heure par le permanganate de potassium ;
par le calcul on a déduit le poids d'O* dégagé, le titre de l'H°0? primitive
étant connu.

ACTION DE LA LUMIÈRE SUR LES DIASTASES 47

extrait glycériné de ces mêmes pastilles : les résultats ont été
les mêmes.

On voit, en résumé, que dans l'état actuel des choses, il n’est
pas possible de poser une règle absolue et de donner une unique
explication du mécanisme de l’action de la lumière sur les
diastases. Trois groupes de diastases se présentent à nous :

L'un renferme la sucrase, la laccase et la tyrosinase, atta-
quées seulement en présence d'oxygène moléculaire par les
rayons visibles, et moins rapidement détruites en l'absence de
cet élément par lultra-violet. Le mécanisme d'attaque est
parfaitement bien expliqué par la formation d’eau oxygénée.

Le second comprend la catalase et l'émulsine, détruites dans
le vide par toutes les radiations, moins activement toutefois
qu'en présence d'oxygène.

Le troisième est représenté par la présure, insensible aux
rayons visibles, mais attaquée par les rayons ultra-violets
d'une facon aussi intense en présence d'oxygène ou dans le
vide.

L'existence de ces différents types diastasiques est-il dù à la
présence: dans les solutions de corps étrangers à la diastase ou
à la nature même du substratum de celle-ci? On ne saurait
répondre actuellement à cette question.

GERMINATION /W V/VO DES SPORES D'A. W/GER
ET D'A. FUMIGATUS

par B. SAUTON

L'Aspergillus fumigatus est susceptible de se développer
spontanément dans l'organisme animal, où il détermine une
affection (Aspergillose) observée surtout chez les oiseaux et
assez répandue chez l’homme pour être considérée, parmi les
saveurs de pigeons et les peigneurs de cheveux, comme une
maladie professionnelle.

L'inoculation intraveineuse de spores d'A. fumigatus à un
pigeon détermine la mort en trois à quatre jours. Tout au con-
traire, l'injection d’une grande quantité de spores d'A. niger
est supportée sans inconvénient par les animaux.

Certains auteurs attribuent cette différence d’action des deux
microorganismes voisins à une différence entre leur tempéra-
ture optima, entre la grosseur des spores, etc.

D'après l'hypothèse plus vraisemblable de Pinoy, les spores
de l’espèce pathogène germeraient 27 vivo à la faveur d'une
substance toxique qui les protégerait contre l’action destruc-
trice de l'organisme. La mort de l’animal surviendrait ensuite,
attribuable selon Kotliar (1), Renon (2), etc., uniquement au
développement du mycélium dans les organes, et selon Ceni et
Besta (3), Bodin et Gautier (4), ete., à l’action d’une toxine,
qui aurait été mise en évidence dans les liquides de culture de
l'A. fumigatus et dont l'existence est d’ailleurs mise en doute
par divers auteurs. D'après Macé (5), les spores agiraient
comme un corps solide déterminant un traumatisme local et
aussi par un poison — non isolé par l’auteur — qu'elles con-
tiennent.

(1) Annales de l’Institut Pasteur, 1894, p. 479.

(2) Recherches cliniques et expérimentales sur la pseudo-tuberculose aspergil-
laire, 1893.

(3) Centralbl. [. Pathologie u. palhol. Anatomie, XIII (1902).

(4) Annales de l'Institut Pasteur, 1906, p. 209.

(5) Archives de parasirologie, VII, 1903, p. 313.

DES SPORES D’A. NIGER ET D’A. FUMIGATUS 49

Pour étudier la valeur de ces diverses interprétations, j'ai
effectué l'expérience suivante :

Le mycélium bien sporulé d'une culture d'A. /umigalus est
agité pendant une heure avec du chloroforme, à la tempéra-
ture du laboratoire. Les essais de culture et d’inoculation mon-
trent que les spores ainsi traitées sont tuées. On filtre; on dis-
tille le liquide. Les derniers centimètres cubes du résidu de
cette distillation sont versés dans une capsule contenant des
spores d’A. niger, et évaporés en quelques secondes sur le
bain-marie. Grâce à la rapidité de cette opération, le chloro-
forme n’exerce aucune action nocive sur les spores d’A. niger,
mais il les imprègne des substances extraites de l'A. fumigatus.
Les spores d'A. niger enrobées par l'extrait chloroformique
d’A. fumigatus sont émulsionnées dans du bouillon et aussitôt
injectées dans les veines de deux pigeons. On injecte en même
temps à d'autres pigeons, qui servent de témoins, soit de.
l'extrait chloroformique seul, soit des spores d’A. niger
normales ou enrobées d’un extrait chloroformique d'A. niger
qui les rend plus épaisses, plus résistantes, ou traitées par le
chloroforme seul.

Après plusieurs semaines, aucun des pigeons témoins ne
présente les symptômes d’une affection quelconque.

Il est intéressant de constater que, tout au contraire, les
animaux inoculés avec les spores d'A. niger enrobées de
l'extrait d'A. fumigatus meurent en général du troisième au
sixième jour. Parfois pourtant un pigeon, quarante-huit heures
après l’inoculation, présente un aspect abattu, se met en boule,
puis se rélablit en quelques jours. Dans mes essais, j'ai obtenu
en moyenne la mort de trois animaux sur quatre mis en expé-
rience. On observe à l’autopsie, pratiquée immédiatement
après la mort, les lésions caractéristiques de lAspergillose
expérimentale. Mais contrairement à ce qui se passe dans le
cas de l'inoculation intraveineuse de À. fumigatus au pigeon,
le mycélium est plus localisé au poumon qu’au foie.

Sur des coupes, il est facile d'observer le développement du
mycélium dans les tissus, et des fragments de ces organes
envabis, ensemencés sur gélose, fournissent une culture carac-
téristique d’A. niger.

On peut conclure de cetle expérience que, comme la spore

2
#

50 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Lélanique dans l'expérience de Vaillard, celle d'A. fumigatus
renferme une substance qui la protège contre la phagocytose.
Cette substance, dont je me propose d'étudier la nature, permet
même la germination, dans l'organisme animal, de spores non
pathogènes qui en ont élé imprégnées, et il est probable que
l'expérience effectuée avec l’A. niger pourrait être reproduite
avec d’autres moisissures s'accommodant d'une température de
K0 degrés.

Le fait que, par cet artilice, l'A. niger, non producteur de
toxine, se développe dans Les organes et provoque la mort, fait
présumer que, dans l’Aspergillose, la mort serait due unique-
ment au développement du mycélium et non à l'action d’une
loxine.

Dans l'espoir d'augmenter la résistance des pigeons à l’Asper-
qgiilose, en les accoutumant à la substance toxique contenue
dans les spores d'A. fumigalus, j'ai injecté sous la peau à trois
de ces animaux des doses massives de ces spores à six
reprises et à six Jours d° one Cette injecHon sous-cutanée
ne provoque aucune affection (1). Mais je n'ai pas constaté, par
ce procédé, une plus grande me des pigeons à une inocu-
lation intraveineuse ultérieure, et la mort est survenue du
troisième au quatrième jour.

(4) De mème, j'ai constaté que l'inoculation d'A. fumigalus dans la bourse

plantaire n'était suivie d'aucun effet. Ce procédé, dû à Pinoy, lui a donné
au contraire des résultats positifs dans le cas de l’Aspergillus nidulans.

LA DESTRUCTION INTRASPLÉNIQUE
ET INTRAHÉPATIQUE DE CORPUSCULES ROUGES

DU SANG

DANS LES CONDITIONS NORMALES ET PATHOLOGIQUES
(avec les PI. I et IT)

par le D: [.-I. LINTVAREV

Prosecteur à l'hôpital Alexandre, à Saratov.

Depuis le mémoire de Quincke (1), il est établi que, chez
l'homme adulte et sain, c’est surtout dans le foie que se fait la
destruction de corpuscules rouges du sang. Les érythrocytes,
en se désagrégeant ici, fournissent aux cellules hépaliques le
matériel nécessaire à l'élaboration de la bile, à la transforma-
Lion du pigment sanguin en pigments biliaires.

Il est établi également qu'une destruction d'érythrocytes se
produit aussi dans la rate et dans la moelle osseuse, car on y
trouve des cellules contenant ces éléments figurés. Quineke
estime que les globules rouges du sang sont absorbés par les
leucocytes dans les vaisseaux capillaires du foie.

Mais, dans la littérature scientifique, on ne trouve aucune
indication sur la façon dont les cellules hépatiques incor-
porent les produits de destruction des érythrocytes. La durée
du passage des éléments figurés du sang, de la périphérie
du lobule hépatique à son centre, doit se mesurer en frac-
lions de seconde, quelque ralentie que puisse être la circula-
tion dans le foie. Au point de vue de l'irrigation sanguine, ne
doit-on pas considérer chaque lobule hépatique comme un élé-
ment indépendant auquel le sang est amené par un vaisseau
(veinule-porte ou interlobulaire), l'écoulement en retour se
faisant également par un tube fermé? Donc, en n’interprétant
les choses que par leur côté physico-chimique, on ne saurait
comprendre comment, en ce court laps de temps, l’érythrocyte
parvient à se détruire et à livrer aux cellules hépatiques les
produits de sa destruction. Mais comme, d'autre part, le fail
même de l’absorption de l’hémoglobine par les cellules du foie

52 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

n'est point douteux (on peut toujours déceler l'hémosidérine
dans cet organe), force est d'admettre a priori l'existence de
certaines conditions propres à retenir les éléments figurés du
sang dans les capillaires du foie, rétention qui rendrait possible,
d’un côté, l’action destructive des cellules hépatiques sur ces
éléments et, d’un autre côté, la résorption des produits de cette
destruction.

L'étude d’un cas d'anémie liée à la maladie de Banti (anémie
mégalo-splénique avec cirrhose du foie) nous à fourni l'occa-
sion de constater certaines adaptations, fort simples, de l'orga-
nisme, à l’aide desquelles s'effectuent la destruction et la
résorption des éléments figurés du sang dans la rate et dans
le foie.

Ces recherches ayant donné des résultats importants, je me
permettrai de relater ici le compte rendu de l’autopsie du sujet
mort de la maladie de Banti, autopsie faite Le 19 novembre 1910.

EXAMEN GÉNÉRAL EXTERNE. — Homme de forte constitution,
très amaigri. Téguments pâles, grisätres. Muqueuses pâles.
Conjonctives oculaires légèrement ictériques. Pupilles non
dilatées. Cage thoracique élargie par en bas. Abdomen non bal-
lonné, légèrement excavé. Léger œdème sous-cutané au niveau
des malléoles externes. Aux parties déclives, légère coloration
rougeâtre (hypostase). Rigidité cadavérique peu apparente.

EXAMEN EXTERNE DES CAVITÉS TIORACIQUE ET ABDOMINALE. —
Grand épiploon sans adhérences, pauvre en graisse. Intestins
non distendus. Bord inférieur de la rate à un travers de doigt
au-dessous de l’ombilic. Bord du foie au niveau du rebord des
fausses côtes (sur la ligne mamelonnaire). La cavité abdominale
renferme 1 litre de sérosité limpide. Diaphragme au niveau
inférieur de la cinquième côte, des deux côtés.

Cartilages costaux ossiliés. Triangle cardiaque peu ouvert.
La cavité pleurale gauche contient la valeur d’un verre de séro-
sité. Poumon gauche libre d’adhérences. Poumon droit adhé-
rent par son bord postéro-latéral; son lobe inférieur est libre.
Dans la cavité pleurale droite, quelques dizaines de grammes
d’un épanchement séreux. Le péricarde contient 100 grammes
environ de sérosité.

Cavité thoracique. — Poumons anémiés et œdémateux. Dans

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 53

leurs parties postéro-inférieures, on constate des foyers de
pneumonie hypostatique.

Cœur assez pelit, ventricule gauche non contracté, tissu
cellulaire de l'épicarde muco-purulent. Artères coronaires
sinueuses avec épaississements scléreux qu'on aperçoit même
à travers la paroi vasculaire. Myocarde brunâtre, trouble,
mais nullement flasque. Bords de la tricuspide un peu
épaissis. Dans les cavités droites du cœur, quelques caillots
fibrineux et du sang liquide. Valvules du cœur gauche sans
altérations, quelques caillots sanguins dans les cavités. Dans
la crosse de l'aorte, légères altérations scléreuses de la tunique
interne.

Cavité abdominale. — Kate grosse (longueur, 24 cent. 5;
largeur, 12 centimètres; épaisseur, 5 cent. 5; poids, 845 gr.);
la capsule est mince, peu tendue, l'organe est élastique, modé-
rément dur. Sur les coupes, la surface est lisse, brillante ; par
le raclage, on n'obtient que peu de pulpe. Tissu de la rate de
couleur rouge vif, partout uniforme. Les trabécules sont
bien apparents, les corpuscules de Malpighi ne le sont que peu.
Arlère splénique manifestement sclérosée. Sur la tunique
interne de la veine splénique, petits placards de sclérose. Rein
gauche un peu gros, sa capsule se laisse enlever en totalité.
Substance corticale légèrement élargie, de coloration rouge-
grisätre. Les pyramides sont plus foncées que la substance
corticale. Le rein droit présente le même état avec cette seule
différence que sa capsule adhère par places à l'écorce. Bassinets,
uretères et vessie sans altérations morbides.

Foie légèrement augmenté de volume, mais dans son lobe
droit seulement. Le lobe gauche est petit et présente, le long
du bord gauche du ligament suspenseur, un sillon d’atrophie,
assez profond, sans trace de cicatrices. La surface du foie est
finement granulée sur Les bords, lisse sur les parties convexes.
Le tissu hépatique craque quand on le coupe; la surface de
section sur les bords de l'organe est granulée, par suite de pro-
lifération annulaire du tissu conjonctif. Veinules centrales
sorgées de sang. Les lobules sont bien apparents du fait d'une
coloration rouge-brunâtre de leurs centres, les bords étant bien
plus clairs. La vésicule biliaire contient 30 grammes environ
de bile liquide, jaune-verdäâtre; sa muqueuse ne présente pas

54 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

d’allérations ; les conduits biliaires sont libres, sans mucosités.
Le foie pèse 1.630 grammes.

Muqueuse gastrique un peu tuméfiée, granuleuse, rouge-
grisatre. Muqueuse duodénale congestionnée; orifice du con-
duit biliaire libre. A la partie inférieure de l'intestin grèle, la
muqueuse congestionnée est le siège d’une multitude de petites
ulcérations calarrhales superficielles. Muqueuse du gros intestin
légèrement épaissie, congeslionnée, recouverte de mucosités :
pas d’ulcérations. Certains ganglions mésentériques du volume
d'une noisette, mais non indurés; sur les coupes, leur tissu est
congeslionné, de couleur rose grisàtre. La moelle osseuse des
deux fémurs est rouge.

Épicrise. — Anémie. Ictère léger. Emphysème pulmonaire.
Pneumonie hypostatique double. Atrophie jaune du myocarde.
Sclérose de la crosse de l'aorte et des artères coronaires du
cœur. Splénomégalie. Cirrhose interstitielle portale et cyanose
du foie. Néphrite interstitielle chronique légère. Entéro-colite
catarrhale. Ascite.

DiaënosrTiC ANATOMIQUE. — Anémie mégalosplénique avec
cirrhose du foie : maladie de Banti.

Age, quarante-sept ans. Le début de l'affection remonte à six
ans, époque à laquelle les médecins et le malade lui-même
remarquèrent une augmentalion du volume de la rate.
L'examen hématologique, fait deux mois environ avant la
mort, décela une anémie manifeste : dans 1 centimètre cube
de sang, on comptait 1.665.000 érythrocytes, 8.158 leucocytes,
hémoglobine 55 p. 100. La température, en général irrégu-
lière, atteignait parfois 38°5 et 38°9. L’ascite ne fut remarqué
que dix jours avant la mort. L'iclère existait depuis longtemps.
Antécédents du malade négatifs en ce qui concerne la syphilis
où une Infection malarienne.

Erythrocytes altérés : beaucoup de cyanophiles (polychroma-
tophiles), des macrocytes et des microcytes, ainsi que des élé-
ments de forme anormale : poikilocytes. Ces derniers rares.
Point d’érythroblastes.

Pour l'examen microscopique, on fixait dans l’acétone des
parcelles de rate et de foie. Ce procédé est très commode : il
est rapide, permet de monter les préparations en un bloc
solide, conserve parfaitement les éléments figurés du sang et

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 55

empèche l'issue de l'hémoglobine des érythrocytes, laquelle se
produit toujours avec le montage à la formaline (ou mélanges
formalinés). Malheureusement, presque toutes les préparations
anatomo-pathologiques et histologiques de nos musées se font
au moyen de la formaline, ce qui les rend impropres à l'étude
des globules rouges du sang.

Pour bien mettre en évidence combien la fixation par la
formaline convient peu à l'étude des érythrocytes dans les tissus,
j'ai fait la petite expérience que voici : une coupe lixée dans
l'acétone et où l’on voyait bien la disposition des corpuscules
rouges colorés par l’azur-éosine, d’après le procédé de Giemsa,
fut immergée, pendant deux semaines, dans une solution de
formaline à # p. 100, puis traitée par le même colorant. Pas un
seul érythrocyte ne se colora en rose par l’éosine, et les cellules
contenant des globules rouges du sang apparaissaient comme
dégénérées, avec des vacuoles dont les dimensions correspon-
daient à celles des érythrocytes. Bref, on avait une vacuolisa-
tion dite en rayons de miel (wabige Vacuolisation des auteurs
allemands). En plus, le protoplasma délicat de nombre de
cellules vacuolisées ne se distinguait que très imparfaitement
à l'examen microscopique, si bien qu'on pouvait prendre faci-
lement la cellule pour du détrilus.

J'insiste sur ces défauts de la fixation par la formaline. Si les
remarquables tableaux qu'on voit sur nos préparations n'ont
pas encore été observés par d’autres, on doit en attribuer la
cause uniquement au montage défectueux dans la formaline
dont l’usage est répandu depuis près de vingt ans en techni-
que histologique.

Après ces quelques remarques préliminaires, je passe à la
description de ce que J'ai observé au microscope sur les coupes
de rate et de foie dans la maladie de Banti. Ces constatations
contribuèrent singulièrement à élargir le champ de mes obser-
vations ultérieures.

A l’examen de préparations microscopiques de la rate, je fus
tout d’abord frappé par la teneur abondante de cet organe en
grosses cellules gorgées de globules sanguins. Situées, d’habi-
tude, à l’intérieur des sinus dilatés de la rate (PI. I, fig. 1),
elles ont un protoplasma finement granulé et mou, un noyau
vésiculeux assez volumineux avec un très fin réticule de chro-

56 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

matine. Ces cellules ne sont pas toutes de mêmes dimensions
(entre 1% et 60 y), différence due au nombre de globules
rouges qu'elles renferment : plus il y a d'érythrocytes, plus
grosse est la cellule; les plus petites sont celles qui ne con-
tiennent pas encore de globules rouges, mais elles sont peu
nombreuses. Le proloplasma de ces éléments cellulaires se
colore bien par l’éosine, prenant une teinte rose-violette plus
ou moins intense. Ces cellules sont généralement mononu-
cléaires, mais elles peuvent aussi contenir deux, trois noyaux
ou même davantage. Parfois elles sont si nombreuses qu’elles
remplissent complètement la veine dilatée. Par leur ressem-
blance avec les cellules épithéliales, elles donnent un tableau
rappelant beaucoup les alvéoles carcinomateuses, comme le fit
observer Banti lui-même (2). On voit parfois lesdites cellules
parmi les éléments de la pulpe splénique, mais ici les noyaux
cellulaires ne se laissent pas colorer, pour la plupart, et ils
disparaissent. On rencontre aussi ces éléments anucléés, en
voie de destruction, dans les sinus sanguins et dans les veines.
Cependant, la plupart des cellules situées à l’intérieur des vais-
seaux ne présentent pas de phénomènes de désagrégation. Il
est intéressant de noter que ces cellules s'accumulent de préfé-
rence à proximité et au pourtour des corpuseules de Malpighi
de la rate.

Ces éléments si particuliers renferment, comme nous l'avons
dit, des érythrocytes en nombre variable : certains jusqu'à 50,
d'autres 1 ou 2 seulement. La cellule qui contient beaucoup
d'érythrocytes affecte une forme vésiculeuse, et son proto-
plasma se dispose autour du contenu en une sorte d’enveloppe
très mince dont un point renflé renferme un noyau aplati,
généralement en forme de croissant. Une telle cellule rappelle
beaucoup une cellule adipeuse, avec cette différence, toutefois,
qu'au lieu d’une grosse goutte de graisse, elle englobe un amas
d'érythrocytes. Sur une coupe transversale, elle apparaît comme
un anneau dont le châton correspondrait au noyau et dont la
partie circulaire contiendrait les globules sanguins.

Les érythrocytes happés par ces « érythrophages » (*) de la

(*) Nous sommes les premiers à proposer la dénomination d'érythrophages
pour ce genre de cellules dévoreuses de globules sanguins.

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 57

rate ne perdent pas, d'habitude, leurs caractères morpholo-
giques : ils se colorent par l’éosine tout aussi bien que les glo-
bules rouges voisins encore libres, présentent à leur milieu une
concavité caractéristique à rebord circonvallaire, et ne sont pas
granuleux. Ils ne se distinguent donc en rien des érythrocytes
normaux, si ce n'est par un aplatissement latéral dans les cas
où ils sont nombreux, ce qui précisément donne à leurs groupes,
englobés par les cellules dont il s’agit, l'aspect de rayons de
miel. |

Dans d’autres érythrophages, on trouve, au contraire, des
globules rouges ayant perdu plus ou moins la faculté de se
colorer par l’éosine; certains se désagrègent déjà et ne laissent
subsister après eux, à l’intérieur d’érythrophages également en
voie de destruction, que des granules d’un pigment foncé. Ce
processus de destruction, dans la rate, de cellules contenant
des globules sanguins, était, comme nous l'avons dit, peu
accusé chez notre malade. Les éléments en voie de désintégra-
tion se trouvaient surtout dans la pulpe splénique, mais il n’y
avait que relativement peu d'érythrophages.

Or, il est facile de se rendre compte des proportions immenses
que doit avoir le processus d'absorption des érythrocytes par
ces cellules de la rate, d’après le calcul suivant. Dans le champ
du microscope, avec un grossissement de 400 à 500, on peut,
en moyenne, compter de 8 à 10 érythrophages (fig. 2). Com-
bien de millions de champs pareils ne pourrait-on pas obtenir
en réduisant en coupes microscopiques la masse totale de cette
rate pesant 845 grammes! El si une perte aussi énorme en
globules sanguins ne se couvrait pas par l'activité fonction-
nelle des organes hématopoiétiques (moelle osseuse), des 26 à
30 milliards d'érythrocytes d'un adulte, il n’en subsisterail
plus un seul au bout de quelques jours.

Le foyer principal de cette destruction complète el massive
d'érythrophages et de leur contenu est, sans doute, le foie,
puisque la veine splénique s'ouvre dans la veine porte et que
son sang mélangé au sang d’autres racines de la veine porte
vient irriguer les lobules hépatiques.

Donc, si l’on trouve tant d'érythrophages dans les sinus el
les veines de la rate, on doit en trouver aussi dans les capil-
laires du foie.

L

D8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Et de fait, l'examen histologique de coupes de foie, colorées
également par le Giemsa, nous le montre d’une facon évidente
(fig. 3).

Les parties périphériques des capillaires, légèrement dilatés,
sont bourrées d’érythrophages dont le nombre est si grand ici
que, parfois, il devient difficile de les compter dans le champ
du microscope.

Dans le foie, les érythrophages présentent les mêmes par-
ticularités que dans la rate, et on les y reconnaît à pre-
mière vue : ce sont aussi de grosses cellules gorgées de glo-
bules sanguins. Ils ne diffèrent des érythrophages de la rate
que par la présence de formes de désagrégation. Ainsi, dans
certains d'entre eux, on ne distingue plus de noyau: dans
d’autres, les globules rouges ne se colorent plus, et, à leur
place, on remarque, dans le protoplasma, des granules fon-
cés de pigment, reliquals d’érythrocytes. D’autres encore
se présentent comme des grumeaux troués et fiasques, d’un
protoplasma difficilement colorable. Enfin, il en est qui affec-
tent la forme de cellules plus ou moins remplies de globules
rouges en voie de destruction et qui contiennent, en plus, des
gouttelettes de bile, jaune-verdàtre, de dimensions variables,
ne différant de celles qu'on trouve dans les cellules des travées
hépatiques que par leurs dimensions : les gouttelettes de bile
à l'intérieur des cellules hépatiques sont, le plus souvent,
petites, comme des grains de poussière.

La plupart des érythrophages sont situés dans les capillaires
des parties périphériques du lobule hépatique ; ils adhèrent
aux parois des capillaires et forment un bloc avec les cellules
du foie, dont ils ne sont séparés que par une mince membrane
endothéliale. La cause qui oblige les érythrophages à adhérer
aux parois des capillaires hépatiques, dès leur entrée dans
ceux-ci, réside dans les propriétés mêmes du protoplasma de
ces cellules, propriétés qu'on peut bien étudier, en solution
isotonique, sur des érythrophages n'ayant subi aucun traite-
ment préalable. A cet effet, on n’a qu’à racler légèrement avec
une lame la surface d’une coupe fraîche de foie contenant des
érythrophages et à examiner le suc ainsi obtenu dans du
sérum physiologique. Il est alors facile de déceler ces dévoreurs
de globules rouges (fig. 4)

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 59

Le suc de la rate renferme également, dans certains cas,
nombre d'érythrophages, mais ils n°y sont pas aussi apparents,
car le raclage de la surface d'une coupe de tissu splénique
détache, avec les érythrophages, beaucoup d’autres éléments
figurés de la pulpe et du sang, ce qui rend difficiles la recherche
et l'étude des cellules en question.

En sérum physiologique, les érythrophages se présentent
comme des éléments assez gros (jusqu'à 60 & de diamètre)
avec protoplasma très finement granulé, délicat, dont la quan-
lité dépend du nombre des globules rouges inclus : plus la
cellule en contient, plus elle est volumineuse et plus mince
est aussi la frange protoplasmique qui entoure, à l'instar d'un
anneau, le groupe d’érythrocytes englobés. Le noyau est tou-
jours unique : il est situé quelque part de côté, dans un renfle-
ment du protoplasma. Vésiculeux et assez gros, il n'est pas
bien visible dans toutes les cellules. Le nombre de globules
rouges inclus n'est-il pas considérable, la cellule elle-même est
petite el contient alors relativement plus de protoplasma. La
lorme des érythrophages est des plus variées : sphérique, si la
cellule renferme beaucoup de globules rouges (on le voit par-
iculièrement bien à l'examen d’une goutte pendante), petite,
de forme irrégulière et à bords souvent inégaux, lorsque l’éry-
throphage ne contient que peu ou point de globules rouges.
Ces cellules ont une grande ressemblance avec les éléments
de l’endothélium ou de l’épithélium.

Les érythrophages sont très instables; ils se détruisent avec
une facilité extraordinaire dans les solutions indifférentes. Au
bout de quelques heures, il est déjà difficile de les y déceler :
ils sont transformés en un détritus méconnaissable, et c’est
pour cela que le raclage ne permet pas d'obtenir de prépara-
lions bonnes et durables. Les érythrophages ne supportent
même pas le procédé de fixation le plus delicat. Sur des prépa-
ralions desséchées et colorées, on voit une masse amorphe
étendue sur la lame de verre avec quelques globules rouges
plus ou moins altérés, et, par places, un noyau appartenant
tantôt à un érythrocyte, tantôt à un leucocyte happé par un
globule rouge.

L'instabilité du protoplasma de ces cellules a sa portée phy-
siologique : gràce à elle, la destruction et l'élimination des

60 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

érythrophages s'effectuent assez rapidement pour que de nou-
velles quantités de ces porteurs de globules rouges puissent
pénétrer dans les capillaires du foie. S'ils ne se détruisaient
aussi rapidement dans cet organe, une stase sanguine pourrait
facilement se produire, due à l'occlusion des capillaires hépa-
liques par les masses accumulées. Or, jamais on n'observe
chose pareille, alors même que le processus de destruction des
globules rouges est des plus intenses.

Le protoplasma des cellules dont il s’agit est très visqueux.
On peut en juger par l'examen d’une préparation fraiche en
solution isotonique, le tube du microscope étant tenu horizon-
talement et la préparation elle-même se trouvant dans une
position verticale. Dans ces conditions, les érythrophages se
trouvent immobilisés, tandis que les autres éléments figurés
(globules rouges, cellules hépatiques, leucocyles), entraînés en
bas par la force de la pesanteur, disparaissent du champ du
microscope. Avec ce dispositif, nous avons obtenu le micro-
photogramme que nous donnons ici (fig. #) et sur lequel on
voit deux érythrophages (contenant chacun plusieurs globules
rouges) et quelques cellules hépatiques à côté d'eux.

Ainsi donc, les érythrophages possèdent, d'habitude, un pro-
toplasma volumineux, mou, visqueux et instable. Le globule
rouge y pénètre très facilement, même s'il a conservé toute son
élasticité (Quincke estime qu'un érythrocyte en vieillissant, en
mourant, perd son élasticité). C’est même à cause de sa par-
faite élasticité, sous l'influence du courant sanguin et du bom-
bardement incessant par les autres éléments figurés, qu'il est,
pour ainsi dire, enfoncé dans le protoplasma flasque d’un
érythrophage adhérant, quelque part, à une paroi vasculaire,
sans que, pour le happer, cet érythrophage fût obligé de faire
des mouvements amiboïdes qui, s'ils se produisent, facilitent,
sans doute, l’englobement de l’érythrocyte.

Les érythrophages dévorent donc les globules rouges non pas
mourants, mais aclifs, c'est-à-dire des éléments figurés du
sang, qui viennent en contact avec eux. Il serait, en effet, diffi-
cile d'admettre que l’érythrophage fût doué de cette extraor-
dinaire propriété de ne happer, parmi les milliards de globules
rouges, que ceux qui se meurent. On trouve, il est vrai, à
l'intérieur de phagocytes, des globules rouges intacts, d’autres

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 61

en voie de destruction ou leurs reliquats, du pigment sanguin
et des corpuscules étrangers, mais cela n’est point en contra-
diction avec ce qui vient d’être dit, car les érythrocytes ne se
désagrègent en fragments et en pigment qu'à l'intérieur des
cellules qui les englobent et par une sorte de digestion intra-
cellulaire. Quant aux corpuscules étrangers, ils pénètrent dans
les érythrocytes de la même facon que les éléments figurés.

En conséquence, j'estime que le processus de régénération
des globules rouges dans les anémies, comme aussi dans Îles
conditions normales, s'effectue essentiellement de la facon
suivante : une partie des éléments cellulaires du sang est
constamment absorbée par les érythrophages spléniques dont
certains se détruisent dans la rate elle-même, mais dont la
plupart sont charriés par le sang au foie, où se créent les
conditions les plus favorables à leur destruction et à la résorp-
tion des produits de ce processus. Les éléments détruits du
sang sont remplacés par de nouveaux, élaborés dans la moelle
osseuse. Ainsi, toute la masse sanguine est renouvelée en un
certain temps. Il n'existe ici, entre l’état normal et l’état patho-
logique (anémies), qu'une différence de quantité, et si la moelle
osseuse parvient facilement à remplacer une déperdition nor-
male, sa fonction régénératrice devient, par contre, insufli-
sante lors d'une destruction excessive d’érythrocytes : on a
alors une anémie quantitative. Or, comme, avec une hémato-
poièse forcée, Le sang recoit de la moelle osseuse des éléments
hâtivement formés, donc imparfaits (formes jeunes), on voit
survenir aussi des altérations qualitatives dans sa composi-
tion.

D'autre part, l'érythrophage visqueux et volumineux pénètre
dans un capillaire du foie où la circulation sanguine se ralentit ;
il adhère aussitôt à la paroi du capillaire, vers la périphérie
du lobule hépatique, et s'y arrête. De celte façon se trouvent
réalisées les conditions indispensables à la destruction et à la
résorption de ces éléments et de leur contenu.

On obtient un excellent tableau de ces phénomènes de
destruction d’érythrophages, si, avant de colorer la coupe
microscopique, on fait l’épreuve de la réaction microchimique
du fer (imprégner la préparation de ferrocyanure de potassium,
puis la traiter par l'acide chlorhydrique). On peut alors étudier

62 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

en détail les diverses phases de destruction des globules rouges
incorporés par les érythrophages. |

Sur des coupes de rate, on voit la plupart des érythrophages
renfermer des globules rouges non altérés, dont le fer se trouve
encore à l’état de combinaison organique parfaite : ni ces
olobules ni le corps de la cellule qui les contient ne se colo-
rent par le bleu de Prusse. Parfois seulement, on peut rencon-
trer une cellule dont le corps est légèrement bleuté, mais les
vlobules rouges qu'elle renferme ne donnent pas encore la
réaction du fer. En d’autres parties, on aperçoit des cellules
avec érythrocytes en voie de destruction, puisqu'ils sont colorés
en bleu, et, dans leur corps, on voit déjà des amas libres
d'hémosidérine. Les cellules de ce genre sont situées à l’inté-
rieur des sinus et des veines de la rate. On décèle aussi du fer
dans la pulpe splénique, mais très peu et aux points seulement
où se trouvent des érythrophages en voie de désagrégation, et
dans lesquels on ne discerne plus ni le noyau ni les érythro-
cytes englobés. Dans le stroma de la rate, ainsi qu’au pourtour
des vaisseaux, notamment dans les espaces lymphatiques péri-
vasculaires des artères des corpuscules de Malpighi, on peut
(trouver quelques grains disséminés de bleu de Prusse, parfois
même en pelits amas. Mais en général, il n'y a que peu d'hémo-
sidérine dans la rate. Il en est autrement du foie : une coupe
de cet organe, immergée, pendant quelque temps, dans une
solution de ferrocyanure de potassium, puis plongée dans une
solution d'acide chlorhydrique, commence à bleuir et prend
rapidement une couleur bleue intense, comme si on l’avail
colorée par la solution de bleu de méthylène de Leæffler. Le
foie est donc ferrugineux. À l'examen microscopique des pré-
paralions du foie colorées après ladite réaction, on trouve de
orands dépôts de fer dans les érythrophages, de même que dans
les cellules hépatiques, en partie aussi dans les endothéliums
des capillaires et le long des vaisseaux du tissu conjonelif
interlobulaire. Autour des cellules hépatiques, les dépôts de
ler affectent la forme de petits granules soit disséminés dans
le corps cellulaire, soit amoncelés à une extrémité de la
cellule ou près de son noyau seulement. Certaines cellules
contiennent plus de fer, d’autres en contiennent moins, mais
toujours il est réparti de facon plus où moins uniforme. Or, il

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 63

en est autrement des érythrophages. Dans les capillaires, on
est frappé de la grosseur des amas bleus qui correspondent aux
cellules chargées de globules rouges. Plus ces amas sont appa-
rents, moins ils contiennent de fer et mieux est coloré le noyau
de l'érythrophage. D'autre part, on trouve des exemplaires où
l’on ne peut distinguer ni noyau ni érythrocytes, la cellule
figurantalors un amas de grosses particules de fer incluses dans
une fine enveloppe bleutée ; parfois, on n'aperçoit pas d’enve-
loppe. Entre ces deux extrêmes, il existe nombre de transitions,
d'après lesquelles on peut se faire une idée nette de la marche
progressive du processus de destruction des globules rouges
et des cellules qui les renferment, ainsi que de leur complète
désagrégation et de leur résorption, lorsque, à la place de l'an-
cienne cellule, il ne subsiste plus qu'un stroma troué, à peine
coloré en gris, ou de fins granules de détritus et quelques
particules de fer.

Le fer s'accumule surtout à la périphérie des lobules hépa-
liques, et sa présence en énormes quantités, en ces points,
montre que c'est surtout ici que s'effectue la destruction des
globules rouges. Ce fait est d’un intérèt capital, puisqu'il
montre d’une facon évidente que la destruction massive
d'érythrophages, dans les parties périphériques des lobules du
loie, libère ici-même quantité de produits de désintégration de
globules rouges. Leur accumulation détermine nécessairement
de lirritation des parties périphériques des lobules, irritation
d'autant plus considérable que le processus est, lui-même, plus
accusé. S'il est chronique, il provoque des phénomènes inflam-
matoires dans le tissu conjonctif interlobulaire. Autrement dit,
une destruction intense d'érythrocytes qui se produit, par l'in-
termédiaire des érythrophages, dans les parties périphériques
des lobules du foie, détermine une prohfération du tissu con-
jonctif interlobulaire. Nous avons donc là une explication fort
simple de la pathogénie de la cirrhose du foie.

Revenant maintenant à l’autopsie de notre malade, nous
trouvons, en effet, surtout sur les bords du foie et dans son lobe
sauche, une cirrhose annulaire très accusée. Banti estime que.
dans l’anémie splénique, la cirrhose du foie apparaît non au
début de la maladie, mais dans sa lroisième ou dernière
période, et qu'elle est précédée, de longtemps, d'un étal

6% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

anémique et de splénomégalie. Cet auteur place dans la rate
la cause de la maladie et, en conséquence, il propose d'enlever
cet organe. Et de fait, après splénectomie, on voit la guérison
survenir dans nombre de cas, tandis que, sans cette opération,
la mort est inévitable. Maragliano, dans 11 cas de splénec-
tomie pour maladie de Banti, enregistre 9 guérisons ; Jordan
vit guérir 14 de ses 17 opérés, Bessel-Hagen, Harris et Herzog
je cite d'après F. Klopstock (3)], relatent aussi des guérisons
après extirpation de la rate.

Klopstock (p. 114), se fondant sur ces données, estime, avec
Banti, que « la tuméfaction de la rate dans la maladie en
question, loin de figurer un phénomène concomitant, est le
trait essentiel du tableau clinique ».

Nos recherches ont montré que dans la rate apparaissent, en
énorme quantité, des cellules qui dévorent les globules rouges.
Donc, la splénectomie enlève de l'organisme le foyer où se
produit la destruction d'érythrocytes. Après extirpation de la
rate, on ne trouve plus d'érythrophages dans le foie, donc plus
de produits de leur destruction. Aussi voit-on s'amender les
phénomènes de cirrhose, ou bien celle-ci, lorsqu'elle ne s'était
pas encore développée, ne se montre pas.

Une irritation du tissu conjonctif par destruction excessive
de globules rouges, laquelle, dans le foie, amène finalement
des lésions cirrhotiques, doit se produire aussi, il va sans
dire, dans le stroma de la pulpe splénique, et cela en rai-
son directe du nombre de globules rouges (ou d’érythro-
phages) détruits dans la rate. Dans notre observation de
maladie de Banti, la tuméfaction et l’induration considérables
de la rate dépendaient surtout de la prolifération et de l’épais-
sissement de la pulpe splénique. Des cas ont été décrits où la
splénomégalie était encore plus accusée ; le poids de la rate
atteignait parfois 1.200 grammes et même plus [Zielger (4)|.
Les corpuscules de Malpighi sont altérés : autour des artères,
on remarque un épaississement de la gaine de tissu conjonctit
et, parmi les éléments lymphoïdes de quelques corpuscules de
Malpighi, notamment dans les parties centrales, on relève par-
fois les indices d’une division indirecte des noyaux (phéno-
mènes de prolifération). Dans les parties périphériques, on
peut rencontrer des cellules plus volumineuses, ne se distin-

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 65

guant en rien des érythrophages, et dont certaines contiennent
aussi des globules rouges. On ne constate la présence du fer
qu'autour des artères.

Ainsi donc, dans notre observation de maladie de Banti.
l’anémie, qui avait été très manifeste cliniquement, dépen-
dait d’une absorption excessive de globules rouges par les
érythrophages de la rate. Certains de ces globules étaient
détruits sur place, mais la plupart pénétraient dans le foie.
C'est ici que s’achevait leur destruction, dont les produits
étaient en partie résorbés par les cellules hépatiques, en
partie charriés dans le torrent de la circulation générale.
L'organe dans lequel s'effectue la destruction d’érythrocytes
réagit aux produits de cette destruction, s'ils se trouvent,
en grande quantité, par une néoformation inflammatoire
du tissu conjonctif, laquelle, dans la rate, aboutit à la
splénomégalie (fibro-adénie de Banti), et, dans le foie, à la
cirrhose. La moelle osseuse, passant de l’état quiescent à
l'état actif, devient rouge, lymphoïde et s'efforce de remplacer
la déperdition massive de l'organisme en érythrocytes, mais
son activité est insuffisante quantitativement (anémie quanti-
tative) et qualitativement. Aussi voit-on apparaître dans le
sang des formes incomplètement développées ou jeunes : poly-
chromatophiles, érythrocytes nucléés (formes à teneur insuffi-
sante en hémoglobine), érythrocytes déformés, macrocytes,
microcytes, quelques poikilocytes. En effet, beaucoup d’hémo-
globine ayant été éliminée de l'organisme avec la bile, il n’en
resle pas assez pour la formation de globules rouges normaux,
d'où pléiochromie et, comme conséquence, surproduction de bile
par le foie ou polycholie, ainsi que l’ont montré les travaux de
Naounin, de Stadelmann, de M. I. Afanassiev et d’autres. Une
résorption plus active des produits de destruction de globules
rouges, produits qui sont fébrigènes, détermine en même temps
des hyperthermies constantes, bien qu'irrégulières, et amène,
en général, des phénomènes d'intoxication par les ferments
dérivés des globules rouges [Silbermann (5)].

Cette destruction exagérée de globules rouges est intimement
liée à l«ictère hématogène ». Nous avons vu que dans beau-
coup d'érythrophages du foie, dans la maladie de Banti, on
trouve, en plus des globules rouges et de leurs reliquats, des

b]

66 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

gouttelettes de bile. Il importe de noter la présence de bile dans
ces cellules, puisqu'elle nous fournit l'explication du méca-
nisme de l’ictère par la destruction massive des globules rouges.

L'élaboralion de bile n’est guère possible que par l'activité
des cellules hépatiques. Quincke et ses élèves ont montré que,
dans l’organisme humain, il n’existe pas d'autre lieu, d'autres
cellules pour la production de la bile qui est, de la sorte,
fabriquée exclusivement par les cellules hépatiques. Si donc
les érythrophages du foie contiennent de la bile (*), ils ne
l’élaborent pas eux-mêmes, mais la reçoivent des cellules
hépatiques. La pénétration de bile dans le corps de l’érythro-
phage se fait de la facon suivante : l’érythrophage, en raison
de sa viscosité, s'arrête à la paroi d’un capillaire, ne se trou-
vant séparé de la cellule hépatique que par une très mince
membrane endothéliale. Les conditions sont donc favorables à
l’osmose : les produits de digestion des globules rouges par le
protoplasma des érythrophages pénètrent dans les cellules
hépatiques où ils servent à l'élaboration de la bile. Plus il v à
de ces produits, plus il se forme de bile. Mais où il y a endos-
mose, il y a aussi exosmose: la bile formée dans les cellules du
foie doit pénétrer, au moins en partie, dans le corps des éry-
throphages, et il serait bien étrange si ce phénomène ne se
produisait pas. Par la suite, toujours sous l'influence du
mème processus osmotique, les érythrophages sont complète-
ment détruits, les gouttelettes de bile qu'ils contenaient par-
viennent dans le sang et, s’il y en a beaucoup, on voit appa-
raître une coloration Jaune des téguments, l'ictère.

Expliquer l'ictère lié à une destruction excessive de glo-
bules rouges n’est pas élablir une nouvelle théorie, c'est sim-
plement interpréter un fait non douteux d'observation.

Dans notre cas de maladie de Banti, il y avait ictère léger,
mais incontestable et persistant. Or, comme le montra l'au-
topsie, il n’y avait pas de rétention de bile, donc il ne s'agissait
pas d’un ictère par rétention; les conduits biliaires étaient
intacts, l'orifice du cholédoque dans le duodénum était libre.

Nous avons donc pu élucider le syndrome de l’anémie de
Banti: reste à déterminer la cause première de la multiplica-

‘) Les érythrophages de la rate n'en renferment jamais.

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 67

üon et de la suractivité des érythrophages. Nous en parlerons
plus loin.

Le fait même de la destruction de certaines cellules de
l'organisme par d'autres éléments cellulaires est si apparent
dans notre observation de maladie de Banti qu'il y a lieu de se
demander si les phénomènes que nous avons décrits appar-
tiennent en propre à cette affection et s’il n'existerait pas de
phénomènes analogues, à l’état normal de l'organisme, et dans
d’autres états pathologiques ?

Voyons tout d'abord comment se fait la régénération du
sang dans les conditions normales.

L'étude de notre observation nous a montré que, dans
l'anémie de Banti, le processus de destruction des érythro-
cyles est augmenté el que ce processus existe aussi chez
l’homme sain, mais que, chez ce dernier, il est lent, si bien
que la déperdition de l'organisme en globales rouges détruits
par les érythrophages est contre-balancée iei par l'activité
incessante, bien que relativement faible, des organes hémato-
poiéliques.

Passant maintenant à l’étude des organes normaux dans les-
quels se détruisent les globules rouges et où sont résorbés les
produits de cette destruction, c’est-à-dire de la rate et du foie,
nous devons tout d'abord remarquer que tous les histologistes,
sans exception, décrivent, dans la pulpe de la rate et dans ses
voies sanguines, des cellules volumineuses, appelées cellules
« spléniques » par la majorité des auteurs, dont beaucoup
contiennent des globules rouges ou leurs fragments. A l'examen
microscopique, on peut facilement, sans être histalogiste de
profession, trouver ce genre de cellul:s dans chaque rate. I]
suffit pour cela de Les chercher attentivement, surtout sur des
préparations fixées au moyen d'un liquide autre que la for-
maline. Il est vrai que, dans les condilions normales, ces
cellules ne sont pas nombreuses. Néanmoins, sur une coupe
microscopique on peut toujours en compter une dizaine. Ces
cellules ne sont autre chose que nos érythrophages qui
happent les globules rouges soit pour les digérer sur
place, dans la rate elle-même (qui contient toujours de
l'hémosidérine), soit pour les transporter au foie où ils se
détruisent complètement et cèdent aux cellules hépatiques,

68 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

pour l'élaboration de la bile, les produits de désintégration
des globules rouges.

Les érythrophages se trouvent aussi dans le foie. Quincke
dit que les leucocytes du sang englobent les érythrocytes dans
les capillaires hépatiques, mais il s’agit ici, sans doute, non
pas de leucocytes, mais d'érythrophages provenant de la rate.
À un examen attentif, on découvre des érythrophages dans
chaque foie, surtout si avant de colorer la préparation on fait
l'épreuve de la réaction du fer : on voit alors apparaitre dans
les capillaires des points bleus qui trahissent aussitôt la pré-
sence de ces étranges cellules.

Ainsi donc, même dans les conditions normales, la destruc-
tion des globules rouges se fait surtout par les érythrophages
qui happent dans la rate ces éléments figurés, les digèrent,
et se détruisent en partie dans cet organe, mais dont la plu-
part sont apportés par le torrent circulatoire sanguin au foie
où ils adhèrent, comme nous l'avons dit, aux parois des capil-
laires des parties périphériques des lobules hépatiques el réa-
lisent de la sorte les conditions nécessaires à la rétention des
globules rouges dans le foie. Sans cette rétention d’érythro-
cytes, on ne saurait expliquer leur absorption par les cellules
du foie, la circulation du sang dans cet organe ne s’interrom-
pant pas, alors même qu'elle serait ralentie. Ainsi s'effectue
la destruction de globules rouges dans les condilions nor-
males. 11 n'y a donc, comme nous l'avons déja fait ressortir,
aucune raison d'admettre, en se plaçant au point de vue pure-
ment physique, que seuls les érythrocytes mourants seraient
détruits de cette façon. C'est la moelle osseuse qui, dans les
conditions normales comme dans les conditions pathologiques,
est chargée (chez l'adulte) de la réparation de ces pertes, mais,
n'ayant pas de surcroît de travail, elle ne subit pas de trans-
formation lymphoïde.

Et c'est ainsi que l'étude de la maladie de Banti nous a
permis d'élucider une question demeurée Jusqu'ici obscure,
celle du mécanisme de la destruction de globules rouges dans
les conditions normales et dans les anémies primitives.

Le mérite de Banti est d’avoir indiqué le lien clinique unis-
sant l’anémie, la splénomégalie et la cirrhose du foie. Pour
notre part, nous pûmes, comme nous le croyons, établir entre

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 69

ces trois manifestations cliniques une corrélation physiologique
intime. Nous avons constaté, en effet, que, dans certaines con-
ditions, il se produit dans la rate une absorption excessive de
globules rouges par des cellules particulières, ce qui engendre
l’anémie. D’autre part, la destruction massive de ces cellules
et de leur contenu engendre, dans la rate, la splénomégalie et,
dans le foie, d'énormes dépôts de fer et la cirrhose; parfois
elle produit aussi l’ictère. La moelle osseuse devient rouge,
lymphoïde et répare, comme elle le peut, la déperdition exces-
sive en globules rouges.

Mais étant donnée la connexion intime entre l'anémie et la
cirrhose hépatique dans la maladie de Banti, il y a lieu de se
demander si les autres cirrhoses ne seraient pas également
dues à une destruction excessive de globules rouges dans le
foie?

Comme nous l’enseigne la pathologie (Ziegler, loc. cit.), dans
un foie atteint de cirrhose, notamment dans les parties péri-
phériques de ses lobules, on trouve de grands dépôts de fer
(hémosidérine,. Ziegler (p. 688) fait mème observer que cette
maladie est liée à une destruction excessive d'éléments figurés
du sang.

D'autre part, des travaux de Rosenstein (6) et de Vlaïev (7)
il résulte que, dans les cirrhoses du foie, le nombre des glo-
bules rouges est diminué. Nous avons eu récemment l’occasion
d'examiner le sang d’un cirrhotique, avec ascite manifeste,
chez lequel on comptait 4.800.000 globules rouges et 50 p. 100
d'hémoglobine. On trouvait dans le sang des formes incom-
plètement développées d’érythrocytes: cyanophiles, globules
difficilement colorables, macrocytes, microcytes et poikilo-
cyles, ces derniers en petite quantité. La faible diminution du
nombre d’érythrocytes dans ce cas, jointe à l’amoindrissement
de la teneur en hémoglobine, pouvait dépendre d'un épaissis-
sement du sang par transsudation abondante dans la cavité
abdominale. Grawitz (8) cite le cas d’un cirrhotique dont le
sang devint pauvre en globules rouges lorsque, après ponction
de l’ascite, il se fluidifia par le rétablissement de la circulation.

Bleichræder (9) a montré que, dans les cirrhoses du foie
comme dans les anémies, la moelle osseuse devient rouge;
autrement dit, passe de l’état de repos à l’état d'activité.

70 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Dans toute cirrhose hépatique, les altérations de la rate sont
des plus caractéristiques et la splénomégalie est un pbéno-
mène constant. Ces altérations ne dépendent nullement d'une
congestion. Voici quelle est la différence entre une rate sim-
plement congestionnée et une rate cirrhotique.

La rate congestionnée est dure, couleur rouge-cerise, ses tra-
bécules sont bien apparents, la pulpe ne se laisse pas enlever
par le raclage. L'organe est quelque peu augmenté de volume,
mais souvent il est, au contraire, légèrement atrophié. La rate
cirrhotique est généralement grosse, parfois très volumineuse ;
sa pulpe est molle, rouge claire, elle s'enlève facilement par le
raclage de la surface des coupes, elle est hyperplasiée. A
l'examen microscopique (Bleichræder, loc. cit., p. #47), la rate
congestionnée se distingue de la rate cirrhotique en ce que la
première est toujours gorgée de sang, tandis que, dans la
seconde, la pulpe est souvent relativement pauvre en liquide
sanguin. La rate cirrhotique contient infiniment plus de pig-
ment donnant la réaction du fer, d’où cette conclusion que,
dans les cirrhoses du foie, il se produit dans la rate une forte
destruction de globules rouges. Bleichræder a constaté aussi
dans la rate cirrhotique — à l'encontre de ce qu’on observe
dans la rate congeslionnée — beaucoup de cellules se colorant
par le triacide en un rouge foncé homogène. Des cellules
semblables existent, d'après cet auteur, dans la rate normale,
mais on les trouve surtout dans la rate de sujets atteints de
fièvre typhoïde ou d’autres maladies infectieuses. Ces cellules
sont situées, en partie, parmi les éléments de la pulpe splé-
nique, mais plutôt dans les veines et les sinus sanguins de larale.
Elles s'accumulent parfois en telle quantité qu’elles rappellent
alors les « proliférations sarcomoïdes des cellules de la rate ».
L'auteur n'insiste pas sur la description du protoplasma de ces
éléments, et ne dit rien des inclusions intracellulatres. Mais il
les identifie avec les cellules que M"° Borissova (10) a trouvées
en abondance dans la maladie de Banti et dans deux cas de
splénomégalie. Ce dernier auteur à noté aussi la présence de
globules rouges ou de leurs débris à l’intérieur de ces cellules.

Malheureusement, nous ne possédons pas de telles prépara-
tions de rate cirrhotique. Aussi ne pouvons-nous pas confirmer,
pour notre part, le fait de la présence d’érythrophages dans la

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG FA

rate de ces malades. Toutefois, nous fondant sur les travaux
précités, nous sommes convaincus que les érythrophages s’y
développent. Nous les avons vus, du moins, sur loutes nos
anciennes préparations provenant de cirrhoses hépatiques.
Or, comme je l'ai montré, les érythrophages ne peuvent péné-
trer dans le foie que venant de la rate. Le tableau histologique
de la cirrhose du foie est identique à celui que nous avons
décrit pour la maladie de Banti. On trouve des érythrophages
dans toute cirrhose du foie, atrophique ou hypertrophique.

Ces altérations de la rate ne sont pas, d’après Bleichræder,
l'apanage exclusif des cirrhoses. Bleichræder les a trouvées
régulièrement dans la rate des anémiques, notamment dans
l’'anémie pernicieuse. Il dit (p. 448): « La rate dans la cir-
rhose du foie présente une certaine ressemblance avec la
rate dans les maladies du sang. »

Ainsi donc, dans les cirrhoses du foie, on constate tous les
symptômes caractéristiques de la maladie de Banti, à savoir :

1° Anémie (quantitative et qualitative);

2° Splénomégalie précédant la cirrhose hépatique ;

3° Prolifération du tissu conjonctif du foie;

4° Moelle osseuse rouge.

Les altérations microscopiques de la rate et du foie sont,
comme nous l'avons vu, identiques dans les deux formes de la
maladie. Si l’on apprécie la valeur de tous ces symptômes
morbides, on trouve que, cliniquement, la différence entre ces
deux affections n’est que quantitative. Dans la maladie décrite
par Banti, en effet, les lésions hépatiques n'apparaissent qu'à
la période ultime ; dans la cirrhose du foie, au contraire, les
phénomènes morbides du côté de cet organe prédominent de
bonne heure. Il y a donc entre ces deux affections identité de
cause et de nature. L’anémie de Banti, comme la cirrhose du
foie, est le résultat d'une activité excessive des érythrophages
intraspléniques qui dévorent en masse les globules rouges
dont la destruction dans la rate provoque une augmentation
du volume de cet organe. D'autre part, la destruction massive
et complète des érythrophages dans le foie, notamment dans
les parties périphériques de ses lobules, amène l'irritation et la
prolifération du tissu conjonctif de la capsule de Glisson.
Quant à l'ictère — qui n’est pas obligatoire — il s'explique par

T2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

la destruction, dans les capillaires du foie, d'érythrophages
ayant déjà reçu de la bile des cellules hépatiques. Enfin, la
moelle osseuse devient rouge pour suppléer aux pertes
immenses en globules rouges.

De cette façon, les cirrhoses du foie résultent de l’anémie, et
les altérations viscérales des cirrhotiques sont pareilles à celles
qui se produisent dans les anémies primitives. On peut aussi
en conclure inversement que {oute anénne primitive, hée à une
destruction excessive de globules rouges par les érythrophages,
peut aboutir à une cirrhose du foie, S'il se produit dans cet
organe une destruction massive d’érythrophages pendant une
période de temps plus ou moins prolongée.

Et alors il est logique d'admettre que, dans les maladies
accompagnées d'anémie et au cours desquelles on voit parfois se
développer la cirrhose hépatique, #7 y à aussi érythrophagie,
c'est-à-dire absorption excesssive de globules rouges par les
cellules de la rate et leur destruction dans les capillaires du
foie.

On peut classer dans ce groupe la tuberculose et la syphilis.

On sait que l’anémie est un phénomène constant à toutes
les périodes de la tuberculose (Grawilz, loc. cit.) et dans les
manifestations syphilitiques [Zélénev (11);. D'autre part, tout
le monde ‘sait que, dans la syphilis, le foie est très souvent
alteint, parfois cirrhotique. Bartel et Neumann (12), en étu-
diant l'influence exercée par l'appareil Iymphatique sur la viru-
lence des bacilles de la tuberculose, ont montré que lorsque
l'atténuation de cette virulence peut être obtenue, les animaux
ne prennent pas l'infection tuberculeuse générale, mais présen-
tent des lésions cirrhotiques du foie, sans tuberculose. Ces expé-
riences furent répélées maintes fois, et le professeur Orth
montre souvent à ses élèves comment, sous l'influence de
l'infection tuberculeuse, on voit se produire une cirrhose hépa-
tique. Mouisset et Bonnamour (13) établissent ainsi une corré-
lation entre les lésions tuberculeuses des viscères et les
cirrhoses du foie. Dans les vingt années de ma pratique
anatomo-pathologique, j’eus l’occasion de faire des milliers
a’autopsies de tuberculeux et je puis affirmer que, très sou-
vent, je notais soit des craquements à la coupe du foie, soit
une cirrhose avérée de cet organe. On en trouve la preuve

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 73

dans chaque volume de notre collection de comptes rendus
d’autopsies.

Le tuberculeux a toujours la rate plus ou moins grosse,
hyperplasique (la pulpe s’enlève facilement par le raclage de la
surface de seclion),et, parfois, il y a chez lui splénomégalie
manifeste.

Ainsi donc, dans la tuberculose comme dans la syphilis (au
cours de ces mamifestations, s'entend), on constate toujours
des signes d’anémie el assez souvent des lésions cirrhotiques
du foie avec hypertrophie plus ou moins accusée de la rate. On
peut donc admettre l'existence, dans ces affections, d’une éry-
throphagie excessive. Or, dans le premier cadavre de tubercu-
leux que j'eus l’occasion d'examiner en ce sens (c'était une
tuberculose ulcérée des poumons chez un jeune homme non
encore épuisé}, Je trouvais des lésions dépassant toute attente.
Les microphotogrammes de ces préparations de rate et de foie
sont des plus concluants : la destruction de globules rouges
dans la rate et l'abondance des érythrophages dans le foie sont
ici plusaccusés que dans mon observation d’anémie de Banti.La
moelle osseuse est rouge, hyperplasique, signe manifeste d’une
déperdition considérable en globules rouges.

Dans un cas suivant de tuberculose pulmonaire galopante,
l'examen décela les mêmes lésions de la rate et du foie avec
cette particularité remarquable que, dans ces deux organes, dont
le premier était doublé de volume, on trouvait des tubercules
miliaires nécrosés, pour la plupart, et ne contenant pas de cel-
lules géantes. Ces tubercules étaient si pelits qu'on ne les
apercevait qu'à l'examen microscopique. Presque tous les
tubercules de la rate étaient entourés de cellules gorgées de
globules rouges. Ces érythrophages formaient une ceinture
presque ininterrompue de plusieurs rangées, comme s'ils pro-
tégeaient les tissus contre Le foyer tuberculeux.

Les érythrophages sont donc de véritables phagocytes dans
le sens de Metchnikoff. Ils ont la faculté d’absorber non seule-
ment les globules rouges du sang, mais aussi des substances
hétérogènes à l'organisme ‘encre de Chine, carmin, grains de
charbon ou de pigment, plasmodies de la malaria, bacilles
tuberculeux, spirochètes pâles, etc.). [ls prennent part à la lutte
de l'organisme contre l'infection et ilsse multiplient sous l’in-

7% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

fluence de l’action exercée par le poison sur les éléments
servant à la formation de ces phagocytes (corpuscules de Mal-
pighi de la rate et ganglions lymphatiques). Et comme ces
étonnantes cellules ont la propriété de happer tout ce qui nage
librement dans les tissus de la rate, elles absorbent tout d’abord
et le plus facilement les éléments figurés du sang, érythrocytes
et leucocytes. A l'intérieur de certains érythrophages, on peut
trouver des microbes ayant l’apparance de bacillestuberculeux.
Le professeur Nikiforov (14) put y constater des spirochètes du
typhus récurrent. D'ailleurs, nous n'avons pas encore eu le
temps de nous occuper spécialement des phénomènes de pha-
gocytose par érythrophagisme dans les maladies infectieuses,
et nous pouvons dire seulement que l’anémie des tubereuleux
avec ses conséquences est l'effet d’une action secondaire, peut-
ètre nocive à l'organisme, des phagocytes, qui, eux aussi,
happent les globules rouges, cette propriété leur étant inhérente
en leur quatité de « phagocytes à tout faire ». Elle s'exerce
fatalement chaque fois que l'organisme, sous l'influence de la
toxine tubereuleuse et comme moyen de défense, fait intervenir,
pour la lutte contre l'infection, ces éléments qui agissent autant
en absorbant les agents infectieux qu'en sécrétant des anli-
toxines extra-cellulaires.

Comme il est facile de le comprendre, pareille stase périphé-
rique ne se produit guère autour des tubercules du foie. Ici les
cellules remplies de globules rouges se trouvent dans les capil-
laires hépatiques, accolées à leurs parois et ne pouvant plus
exercer d'action phagocytaire. En plus, ils s'y détruisent très
rapidement avec fout leur contenu, peut-être aussi avec l'agent
infectieux, bacilles tuberculeux, spirochètes pâles, etc., sous
l'influence des sucs cellulaires du foie.

Par insuffisance de cadavres, nous ne pümes vérifier si
l’'anémie syphilitique est également le résultat d’une érythro-
phagie excessive dans la rate, mais sur des préparations
microscopiques de cirrhose syphilitique du foie (de notre collec-
lHion)lesérythrophages abondent dansles capillaires hépatiques,
tout comme dans la tuberculose et les cirrhoses du foie. Il s’en-
suit que, chez les syphilitiques également, les érythrophages
de la rate se trouvent dans un état de suractivité.

Mais 11 faut cependant admettre la possibilité d’une anémie

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG, 75

d’origine splénique dans la tuberculose ou dans la cirrhose du
foie, alors mème que, sur le cadavre, on ne constate pas de
phénomènes d'absorption de globules rouges. Ce sont les cas
où l'organisme renonce à toute lutte, où il ne se produit plus
de phénomènes réactionnels, causes de lésions anatomo-patho-
logiques qu'on constate à l'autopsie.

Récemment nous avons pu observer deux cas de ce genre.
Dans l’un où la mort survint par pneumonie fibrineuse, nous
trouvâmes, par hasard, à l’autopsie, une cirrhose atrophique
manifeste du foie, sans augmentation sensible de la rate, sans
ascite. C'était le cadavre d’un vieil homme extrêmement épuisé
(« rien que la peau et les os », dit le compte rendu de l'au-
topsie). Il existait un léger ictère. Dans les produits de raclage
du foie et de la rate, nous ne pûmes déceler d’érythrophages.
La moelle osseuse était rouge et gélatiniforme dans tous les os
longs, elle s'écoulait en gelée de la surface de l'os sectionnée à
la scie. Une moelle osseuse aussi complètement épuisée ne
saurait, sans doute, suppléer à la perte en éléments figurés du
sang, bien qu'il n'y eût plus de destruction de globules rouges
dans la rate et dans le foie. L'anatomie pathologique nous
enseigne que la dégénérescence mucoïde de la moelle osseuse
se montre dans les états de marasme extrême.

Une seconde fois, nous constatämes l'absence d’érythrophages
à l’autopsie d’un tuberculeux en état de profond marasme, avec
transformation fibrineuse et caséeuse de la lotalité du tissu
pulmonaire. Rate peu augmentée de volume, mais très dure
et fibreuse. Foie anémique. Pas d’érythrophages dans ces
organes. Moelle des os gélatineuse.

Ces résultats négatifs en ce qui concerne l’érythrophagie ne
sauraient, bien entendu, ébranler nos conclusions étavées sur
des faits. Tout au contraire, ils ne font que les confirmer et
montrent seulement que les processus réactionnels s’achèvent
lors des derniers jours de la vie, de telle sorte que, sur le
cadavre, on ne voit que leurs conséquences. La cause produc-
trice des lésions anatomiques une fois disparue, l'organisme
perd son moyen de défense et succombe.

Les faits de ce genre doivent être pris en considération par
ceux qui voudraient bien contrôler mes recherches.

On sait que la cirrhose du foie s’observe le plus souvent chez

76 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

les alcooliques. Tout le monde s’accorde à dire que les vrais
ivrognes sont anémiques, et les cliniciens affirment que « chez
les alcooliques on peut trouver une grosse rate bien avant l’ap-
parition de la cirrhose du foie, laquelle parfois ne se produit
point » [M. Roche (15)}. En présence de ces faits, nous sommes
autorisés à placer l'alcool dans le groupe des poisons qui
engendrent la cirrhose du foie en agissant sur les tissus de cet
organe non pas directement, mais par l'intermédiaire des éry-
throphages de la rate. Ils se multiplient énormément chez les
alcooliques et sont transportés dans le foie pour s'y détruire et
y provoquer une irritation du tissu conjonctif interlobulaire
avec ses conséquences. Et si tout alcoolique n'est pas atteint
de cirrhose du foie, cela tient, d’une part, aux particularités
individuelles (un tel a un foie vulnérable, un autre l'a plus
résistant), et, d'autre part, il est possible que, chez certains
sujets (comme chez les animaux intoxiqués chroniquement par
ces poisons anémiants), les érythrophages soient si instables
que la plupart d’entre eux se délruisent déjà dans la rate. Il
n'en pénètre donc dans le foie qu’un nombre minime, insuffi-
sant à provoquer des phénomènes inflammatoires.

Nous n’hésitons pas à affirmer que toute cirrhose du foie
— et non seulement la cirrhose d’origine splénique, comme
le pense Bleichræder (loc. cit., p. 455) — résulte d'une anémie
par l'effet de substances toxiques, soit exogènes (alcool, malaria,
syphilis, tuberculose, fièvre typhoïde, etc.), soit endogènes,
comme dans certains troubles digestifs, car on sait que, dans la
cirrhose du foie de même qne dans d’autres anémies, on trouve
constamment des altérations plus ou moins apparentes de
l'estomac et de l'intestin. Bleichræder (/oc. cit.), se basant
sur des faits consignés dans la science, attire l'attention sur
l’analogie entre les maladies du sang et les cirrhoses du foie
au point de vue des altérations qu’elles engendrent dans cer-
tains organes.

Il est encore une maladie liée intimement, d’une part, à la
cirrhose du foie et, d'autre part, aux anémies.

Cest la splénomégalie que Gaucher (16) a décrit, le premier,
en 1882.

Nous avons déjà dit que la splénomégalie accompagne
presque constamment la cirrhose du foie. Elle est particulière-

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG ti

ment manifeste dans la cirrhose dite hypertrophique où la rate
est parfois si volumineuse qu'on pourrait parler d'hypersplé-
nomégalie. Nous avons aussi établi la relation entre l'anémie
et les cirrhoses du foie.

Gaucher voulait d'abord faire de la splénomégalie primitive
une entité clinique nouvelle, mais, en analysant son observa-
tion, il constata, en plus de l'augmentation du volume de la
rate, de l’anémie progressive, des ecchymoses, de la pigmen-
tation de la peau, du dermaphéisme, des épistaxis, des hémor-
ragies gingivales et d’autres signes d'anémie grave. Le foie
était tuméfié; à l’autopsie, la rate pesait 4.770, le foie
3.480 grammes, et il y avait cirrhose hépatique manifeste.

D'autres auteurs [Collier, Picou et Ramond, Bowaird,
Brill et le professeur Schlagenhaufer (17)}, décrivant, après
Gaucher, leurs observations de splénomégalie, indiquent la
constance, dans cette affection, d’une anémie qui se traduit
par une réduction à 1.302.000 du nombre des globules rouges
(Picou et Ramond), avee diminution d’hémoglobine à 58 p. 100
(Schlagenhaufer).

La moelle osseuse était constamment rouge et le foie, aug-
menté de volume dans la plupart des cas, présentait toujours
une prolifération plus ou moins accusée du tissu conjonctif.

On voit que la splénomégalie de Gaucher s'accompagne
d'anémie, de lésions cirrhotiques du foie et d'hyperplasie de la
moelle osseuse. On ne saurait done considérer cette affection
comme une entité clinique à part.

Tous les auteurs qui ont fait l'examen histologique des vis-
cères dans la splénomégalie de Gaucher ont noté, dans la rate,
dans le foie, dans quelques ganglions lymphatiques et dans la
moelle osseuse, nombre de grosses cellules épithélioïdes à petit
noyau, parfois à plusieurs noyaux, avec protoplasma vacuo-
lisé, les vacuoles étant, pour la plupart, d'égales dimensions
(vacuolisation en rayons de miel, wabige Vacuolisation).

Dans son mémoire sur la splénomégalie, Schlagenhaufer
donne d'excellents dessins de la rate et d'un ganglion lympha-
tique. Il dessine une masse de grosses cellules ne différant
guère de nos érythrophages et situées, pour la plupart, à linté-
rieur des sinus et des veines. Je me permets de les reproduire
ici (fig. 7 et 8), à titre de comparaison avec mes figures, alin

18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

que chacun puisse se convaincre de leur ressemblance avec les
érythrophages.

Schlagenhaufer et d’autres ne trouvèrent pas de globules
rouges dans le protoplasma de ces cellules. Les inclusions ne
seraient, d'après eux, que l’eflet d'une vacuolisation, puisque,
disent-ils, — et c'est là leur propre argument, — l'hémoglobine
a été extraite des globules rouges par la formaline {Schlagen-
haufer conservait ses préparations par le procédé de Kai-
serling).

Gaucher (/oc. cit.) tient ces cellules pour de l’épithélium, et
il estime qu'on a affaire ici à un épithélioma primitif de la rate.
Bowaird parle d'hyperplasie endothéliale dé la rate.

Les auteurs ont constaté la présence de cellüles toutes pareilles
dans les ganglions lymphatiques, dans la moelle osseuse et
mème dans le foie, où elles s'accumulent par groupes et sont
si serrées qu'il « est difficile de les délimiter entre elles »
(Schlagenbaufer, loc. cit., p. 131). Nous estimoris que ces ditfi-
cultés, dans l'examen des tableaux microscopiques du foie,
sont précisément la cause de ce que les auteurs ne s’aperçurent
point de la présence, dans les capillaires des parties périphé-
riques des lobules hépatiques, d'amas d'érythrophages situés
pour la plupart le long des parois vasculaires et figurant
comme des prolongements des trabécules du foie. Pareille
erreur peut, en effet, se produire lorsque les préparations n'ont
pas subi de traitement approprié.

Dans la splénomégalie de Gaucher, on constate, comme nous
l'avons montré, le même processus d'absorption de globules
rouges par les érythrophages de la rate, leur désintégration
partielle dans cet organe (les auteurs notent la présence de
fragments d'hémosidérine dans la rate) et leur transport par le
torrent circulatoire au foie où ils sont complètement détruits.
La destruction en masse de ces éléments à la périphérie des
lobules hépatiques provoque, dans certains cas, ainsi que nous
l'avons vu, une irritation du tissu conjonctif interlobulaire
avec cirrhose consécutive.

Il s'ensuit que la splénomégalie ne diffère en rien des eir-
rhoses hépatiques et qu'elle relève de la même cause, de
l’anémie résultant d'une destruction excessive de globules
rouges par les érythrophages. Et comme, dans la plupart des

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 79

cas décrits, la splénomégalie s'accompagnait de lésions tuber-
culeuses viscérales, il faut admettre que, dans la majorité des
cas de splénomégalie dite primitive, c'est, en réalité, la toxine
tuberculeuse qui est cause de la suractivité des érythrophages.
Il doit en être de même, dans certains cas du moins, pour les
autres poisons dont il a été question.

(A suivre.)

EXPLICATION DES PLANCHES Let II

F16. 1. — Trois érythrophages à l'intérieur d'une veine de la rate, dans la
inaladie de Banti : deux d'entre eux renferment des globules rouges, le troi-
sième contient un mononueluéaire. Grossissement 120 : 1.

Fr6. 2. — Mème préparation à un grossissement moyen.

F1G. 3. — Erythrophages des capillaires du foie dans la maladie de Banti.
F1G. 4. — Erythrophages du foie en solution physiologique.

Fire. 5 et 5 a. — Erythrophages de la rate dans la tuberculose pulmonaire.
F1G. 6. — Erythrophages du foie d’un tuberculeux pulmonaire. Micropho-

togramme d'après une préparation fixée par le procédé de Koultchitzki et
coloré par la Wasserblau-Eosine.

FiG. 7. — Erythrophages de la rate dans la splénomégalie de Gaucher.
Dessin appartenant au professeur Schlagenhaufer et donné dans les Fir-
chow’s Arch., v. 1817.

FiG. 8. — Erythrophages d'un ganglion lymphatique dans la splénomégalie
primitive. Dessin de Schlagenhaufer, tiré du Firchow's Arch. v. 187.

F16. 9. — Erythrophage de la rate d'un lapin intoxiqué par la pyrodine.

FiG. 10. — Multiplication (mitose) d'éléments Ivmphoïdes des corpuscules
de Malpighi de la rate d'un lapin, sous l'influence de la pyrodine.

FiG. 11. — Transformation en érythrophages d'éléments lymphoïdes des

corpuscules de Malpighi.

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette.

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26° ANNÉE FÉVRIER 1912

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

LORD LISTER

(1827-1912)

Lord Lister, le rénovateur de lachirurgie, est mort le 11 février
dernier. Son nom évoque la révolution apportée, il y a qua-
rante-cinq ans, par le pansement antiseptique. Jusqu'à Lister,
les infections, à la suite des interventions chirurgicales, étaient
si fréquentes, que la vie de tout opéré était menacée et que
l'essor de la Chirurgie était arrèté.

Eviter l'infection post-opératoire a été de tout temps la préoc-
cupation des chirurgiens. Que de procédés, que de pansements
ont été proposés dans ce but, sans résultat certain ! La chirurgie
est restée impuissante contre les infections tant qu’elle n’a pas
eu de doctrine capable d'expliquer la cause de celles-ci. Lister
lui en donna une. Homme de science au courant de toutes les
découvertes, et expérimentateur lui-même, il étendit à la chi-
rurgie la théorie des germes que Pasteur venait d'établir par
l'étude des fermentations. Convaincu que ce sont les infiniment
petits qui provoquent les infections, Lister empêche leur culture
à la surface des plaies au moyen des antiseptiques. Grâce au
pansement phéniqué, son service de Glascow offrait le spectacle,
merveilleux en 1869, d'opérés guérissant sans suppuration et

sans fièvre.

82 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Débarrassés de la crainte des infections, les chirurgiens entre-
prennent des opérations auxquelles ils n'auraient jamais osé
songer avant l'ère Listérienne. Dès lors, la chirurgie commence
son développement triomphal.

Lister avait emprunté sa doctrine à la bactériologie, il a payé
sa detle en ralliant à cette science une foule de partisans. Com-
ment en effet ne pas reconnaitre la vérité de la théorie micro-
bienne, quand sa première application à l’art de guérir épar-
gnait des milliers de vies humaines et rénovait la Chirurgie ?

C'est un devoir pour les disciples de Pasteur de rendre, dans
ces Annales, un suprême hommage à celui qui a su tirer de
l'œuvre de leur maître un si grand bienfait pour l'Humanité.

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES

(DEUXIÈME MÉMOIRE)

ÉTUDE DES BACILLES DE PREISZ-NOCARD

par M. NICOLLE, G. LOISEAU et P. FORGEOT

Les bacilles de Preisz-Nocard jouissent d'une grande ubi-
quité et leur rôle pathogène apparaît de jour en jour plus
important. Ils s’attaquent à diverses espèces animales, occa-
sionnant : chez le cheval, l'acné contagieuse, la lymphangite
ulcéreuse, des abcès rénaux...; chez le mouton, une véritable
pseudo-tuberculose, des altérations caséeuses viscérales et gan-
glionnaires..….; chez le bœuf et le pore, des lésions diverses.
M. Truche les a rencontrés récemment chez le lapin (abcès
« spontanés »). Il serait intéressant de les rechercher chez
l’homme, où tout porte à croire qu'on les trouverait.

Nous avons eu entre les mains un nombre considérable
d'échantillons de bacilles Preisz-Nocard d’origine équine et
ovine; les uns isolés par MM. Panisset et Cesari ainsi que par
nous-mêmes, les autres dus à l’obligeance de M. Carré. Ces
échantillons se classent en deux catégories bien tranchées,
germes virulents et germes avirulents, vis-à-vis du cobaye pris
comme animal réactif. Les avirulents n’ont jamais manifesté
de toxicité (neutralisable par Le sérum spécifique); les virulents,
plus ou moins toxiques sur les milieux solides, formaient dans
les liquides une quantité de « poison soluble » qui n'allait pas
régulièrement de pair avec leur toxicité individuelle.

Comme pour notre mémoire précédent (1), nous nous trou-
vons en face des deux questions suivantes :

(t) Étude des bacilles diphtériques. — Ces Annales, février 1911.

84 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

1° Le poison des bacilles est-il identique à celui des filtrats?

2° Quel est le degré et le mode de toxicité du bacille lui-
même, c'est-à-dire de sa « substance fondamentale »?

Voici le « matériel biologique » employé à résoudre ce double
problème.

1° Toxine soluble. — Nous prendrons comme type le filtrat
(sur bougie) de l'échantillon dit Panisset (isolé d’un abcès du
rein, chez le cheval). Les meilleurs résultats ont été fournis
par le milieu de culture suivant.

On mêle de la viande de cheval hâchée avec le double de son poids d’eau;
on porte cinq minutes à l’ébullition; on filtre sur papier et on additionne
(aa) le filtrat de « bouillon de panse » (préparé selon la formule du D" Louis
Martin et couramment employé, ici, dans la préparation de la toxine diph-
térique); on alcalinise franchement au tournesol; on chauffe à 120 degrés ; on
répartit en ballons; on stérilise à 115 degrés.

Le poison obtenu offre une activité sensiblement égale à
celle dont parle Carré (1). Le maximum est atteint après sept
jours d’étuve; il tue alors les cobayes de 500-600 grammes,
en douze-vingt-quatre heures, sous le volume de 1 cent. cube à
0,1 cent. cube. Nous ne nous sommes pas efforcés de trouver
une toxine plus forte, superflue pour le but que nous nous pro-
posions. Rien ne prouve, d’ailleurs, que les bacilles Preisz-
Nocard soient susceptibles de la produire.

20 Bacilles atoxiques. — Nous possédons plusieurs échantil-
lons de cette catégorie, tous identiques. L'un d'eux, « Cham-
pion », isolé par M. Carré chez la brebis (abcès ganglionnaire),
sera pris comme type de description.

3° Bacilles toxiques. — Nous en avons eu autant que nous
désirions, grâce surtout à l'obligeance de M. Cesari, qui voulait
bien les isoler de son riche matériel de l’abattoir Brancion.
Ces bacilles étaient constamment virulents. La virulence se
traduisait par les réactions caractéristiques : abcès (inoculation
sous-cutanée), vaginalite (inoculation intrapérilonéale), érup-
tion pustuleuse généralisée (inoculation intraveineuse), très
complètement étudiées par M. Panisset sous les yeux de l’un
de nous et décrites en détail dans ces Annales (juin 1910). La
toxicité n’affecte aucun rapport régulier avec la virulence :

(1) Revue gén. de méd. vél., t. IV, 1908.

PPT TC 1 TT

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 85

loin de là. — L'échantillon Panisset sera pris comme type de
description, pour les germes toxiques.

4° Bacilles toxiques el atoxiques, tués par l'alcool-éther. —
Dans nos recherches sur les facteurs de toxicité des bacilles
diphtériques, les germes atoxiques vivants nous ont servi à
établir les propriétés de la substance fondamentale du microbe
de Lôüffler et les filtrats de cultures toxiques celles du « poison
soluble », caractéristique du même microbe. Nous savions
donc, d'avance, ce que donnerail l’inoculation des germes
toxiques vivants, puisqu'ils ne se multiplient ni sous la peau
ni dans le système circulatoire où nous les introduisions — et
l'expérience a justifié schématiquement nos prévisions.

Avec les bacilles Preisz-Nocard, il était également très facile
de deviner ce que donnerait l’inoculation de germes toxiques,
vivants mais avirulents, connaissant les propriétés de la sub-
stance fondamentale (germes atoxiques vivants) et du « poison
soluble » (filtrats de cultures toxiques). Malheureusement,
nous n'avons Jamais rencontré de tels germes : on vient de le
mentionner tout à l'heure. Il fallait donc éliminer la virulence
en conservant, dans une mesure convenable, la propriété
toxique; c’est-à-dire tuer les bacilles sans trop les altérer.
Nous nous sommes arrêtés à l'emploi de l'alcool-éther (aa),
prolongé pendant vingt-quatre heures et suivi de dessiccation
(vide sulfurique). Ainsi qu'on devait s’y attendre, les microbes
soumis à ce traitement sont beaucoup moins actifs que les
microbes vivants; mais les différences d'activité demeurent
constantes entre les spécimens examinés et c’est là tout ce que
nous demandions. Nous n'avons donc pas cherché à obtenir
des produits plus toxiques, soit en diminuant le temps d'ac-
tion de l’alcool-éther, soit en expérimentant d’autres moyens.
La comparabilité des recherches importait seule; aussi le trai-
tement par l'alcool-éther a-t-il toujours été réalisé dans les
mêmes conditions, qu'il s’agit de l’échantillon Panisset ou
d'échantillons différents.

On se rendra compte de la nécessité d'éliminer la virulence
quand on aura vu combien le tableau de l'infection apparaît
complexe et combien il serait téméraire de vouloir l’inter-
préter sans une étude préalable des bacilles. toxiques et aviru-
lents. Mais ceux-ci étant créés artificiellement par l'action de

86 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l’alcool-éther, il fallait, à titre de comparaison, posséder égale-
ment des bacilles atoxiques « alcool-éther »; d’où l'obligation
d'agir avec le type Champion comme avec le type Panisset.

5° Sérum Carré. — Obtenu en injectant au cheval la toxine
soluble d'un germe d'origine ovine et mis gracieusement à
notre disposition par M.Carré,que nous ne saurions trop remer-
cier de l’obligeance avec laquelle il a secondé nos études.

6° Sérwns de chevaux chroniquement infectés. — Comme nous
le verrons plus loin, ces sérums (au moins tous ceux étudiés
Jusqu'ici) jouissent d’un pouvoir antitorique indéniable, souvent
égal et parfois supérieur à celui du sérum Carré. D'où une
méthodenouvelle de diagnose(toxino-diagnostic), aussi nette dans
ses résultats que simple dans son application.

{Par contre, le sérum antidiphtérique demeure aussi ineffi-
cace que le sérum normal de cheval, vis-à-vis de la toxine des
bacilles Preisz-Nocard. On ne s'en étonnera guère quand on
aura vu combien les deux poisons, diphtérique et Preisz-
Nocard, diffèrent profondément l’un de l’autre.]

Pour ce qui concerne la culture des germes envisagés, les
animaux d'expérience, les voies d'introduction de la toxine et
des bacilies, nous renvoyons textuellement à notre précédent
travail. Comme dans celui-ci, deux grandes divisions s’impo-

sent : étude des injections sous-cutanées et étude des injec-
tions intraveineuses.

ÉTUDE DES INJECTIONS SOUS-CUTANÉES

ToxINE SOLUBLE.

Nous avons administré des doses régulièrement décroissantes,
échelonnées entre 5 cent. cubes et 0,1 cent. cube (il n’est ques-
lion, ici, que des filtrats les plus toxiques). Les lésions obser-
vées appartiennent incontestablement, comme on le verra, au
type eschare humide. En réalité, il s’agit de la moins humide
des altérations de ce genre, bien éloignée de celle que déter-
mine, par exemple, le suc pancréatique actif (1), encore plus

| 4

(4) M. Nicozze et Pozerski. — Ces Annales, avril 1911.

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 87

distante de la forme hémorrhagique caractéristique des venins
de vipéridés. Mais, d'autre part, la différence avec l’eschare
sèche de la toxine diphtérique est aussi profonde que celle qui
sépare la mortification due aux alcalis, même assez dilués, de
la mortification due aux acides. Il va de soi qu’à la période
humide initiale fait suite une période de dessiccation secon-
daire et obligée; tellement obligée, que la persistance de
l'humidité, au delà des limites normales, constitue le signe
pathognomonique d’une infection surajoutée (infection à pas-
teurella, le plus souvent).

Au-dessus de 0,2 cent. cube (environ), la mort vient inter-
rompre le cours des accidents, d'autant plus vite, naturelle-
ment, que l’on se rapproche davantage de 5 cent. cubes. De
0,2 à 0,1 cent. cube (environ), l'animal survit régulièrement
et l'évolution locale suit son cours régulier, en trois périodes
bien définies : période d'eschare humide, n'excédant jamais les
vingt-quatre premières heures; période d'eschare sèche, durant
en moyenne quarante-huit heures; période de réparation,
annoncée par la chute de l’eschare et aboutissant à la cicatri-
sation après huit-dix jours. Par conséquent, évolution bien
plus rapide que dans le cas de la toxine diphtérique. Ajoutons,
immédiatement : et non accompagnée ou suivie de complica-
tions paralytiques.

Nous distinguerons, dans notre description, les effets des
doses mortelles et ceux des doses non mortelles.

Doses MORTELLES. De 5 cent. cubes à 2 cent. cubes. — Au
bout de la première demi-heure, on observe, /oco læso, un
empâtement rénitent, plus ou moins allongé (du volume
moyen d'un œuf de pigeon), avec teinte saumonée des tégu-
ments (sur l'étendue de 0 fr. 50 environ). Puis, cette tache,
cerclée de vermillon, gagne les parties voisines, en même
temps que son aspect se modifie. C’est bientôt une maculature
plus foncée (de l'étendue de 2 francs environ), souvent piquetée
de violet et toujours limitée par une zone lie de vin. Pendant
ce temps, l’empâtement s’est accru lentement, tout en dimi-
nuant de consistance. Après cinq-six heures, il est mollasse et
recouvert d'un placard ordinairement elliptique (6 centimètres
sur 3, environ) à centre dénudé, luisant, humide, de coloration

88 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

variée (mélange intime de rouge sombre, de violet et de
brun — « tons de charcuterie », si l’on veut bien nous passer
la comparaison), à périphérie encore recouverte par l’épiderme
et de nuance plus foncée. La mort survient habituellement en
dix-quinze heures; lorsqu'elle est un peu moins rapide, la
lésion locale a conservé son aspect humide central, mais s’est
déjà entourée d’une bordure noirâtre, sèche, comparable à
du vernis écaillé.

Entre 2 cent. cubes et 0,2 cent. cube. — Ici, même après
douze-quinze heures, l'empâtement n'excède pas le volume
d'une noix. Les lésions tégumentaires sont représentées par
une tache (étendue — d'une pièce de 0 fr. 50 à 1 franc) humide
et de coloration saumon sale ou lie de vin au centre, bru-
nâtre à la périphérie. Cette tache se transforme, soit partiel-
lement, soit totalement, en « vernis noir », selon la durée de
la survie (dix-huit à vingt-quatre heures).

Les lésions que 1 on observe à l’autopsie des animaux tués par
la toxine Preisz-Nocard consistent, avant tout : /ocalement,
dans un œdème sous-cutané d'ordinaire rosé, assez souvent
hémorrhagique (gelée de groseille) — au loin, dans une con-
gestion très intense et habiluellement hémorrhagique des
organes abdominaux, surtout de l'estomac (lilas ou « truffé »),
du gros intestin (presque toujours lie de vin) et des reins (par-
fois complètement noirs). Ces altérations, qui ne comportent ni
congestion des surrénales ni épanchement intrathoracique,
contribuent à différencier totalement la toxine Preisz-Nocard
de la toxine diphtérique.

Doses NON MORTELLES (entre 0,2 et 0,1 cent. cube). — En
commençant ce chapitre, nous avons résumé l'évolution des
accidents qu'elles déterminent; il suffira donc d’ajouter quel-
ques détails. La première période est caractérisée par un em-
pètement (allant du volume d’une amande à celui d’une noix),
avec humidité et teinte violacée (plus ou moins pure) des
téguments. Cette maculature (répondant environ, comme sur-
face, à une pièce de 0 fr. 20) brunit, puis noircit et se trans-
forme en une eschare sèche, brillante, couleur de jais, qui
ne tarde point à se soulever sur ses bords et à se détacher de

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 89

la périphérie au centre. On aperçoit, alors, l’ulcus sous-jacent,
tapissé d'un mince exsudat jaunâtre ; uleus bientôt détergé. Le
bourgeonnement se fait activement, l’infiltration hypoder-
mique, qui avait peu à peu rétrocédé, disparaît et la cicatri-
sation est vite accomplie.

[Les doses limites de toxine ne déterminent qu'un empâte-
ment minime et fugace, avec croûtelles ambrées puis éro-
sions transitoires des téguments.]

BACILLE ATOXIQUE (CHAMPION).

Nous étudierons, successivement, l’action des germes
vivants et l’action des germes tués par l’alcool-éther.

GERMES VIVANTS.

La rapide rétrocession de l'infiltrat hypodermique, même
après injection de masses considérables, démontre l’avirulence
complète des bacilles du type Champion (un milliardième de
centigramme de l'échantillon Panisset infecte encore le cobaye
sous la peau!); jointe à l'absence de lésions tégumentaires et
de phénomènes généraux, elle établit péremptoirement leur
atoxicité (au sens : toxine neutralisable par le sérum spéci-
fique).

Avec 1 centigr., on n'observe pour ainsi dire pas de modi-
fications locales. Avec 5-10 centigr., l'empâtement (seul symp-
tôme réactionnel) oscille entre le volume d’une amande et
celui d’une noix; il commence à diminuer, en s’indurant,
après quarante-huit heures et, vers le neuvième-dixième Jour,
on n’en trouve plus de trace. Il faut arriver à 30 centigr. pour
obtenir des infiltrations du volume d'un œuf de pigeon; elles
n'offrent point une évolution bien longue, mais se compliquent
volontiers d'infections (pseudo-pneumocoque et pasteurella),
ce que l’on conçoit sans peine, étant donnée la quantité vrai-
ment exagérée de germes administrés.

Les bacilles Preisz-Nocard atoxiques sont donc mieux ré-
sorbés que les bacilles diphtériques atoxiques (type Brienne B) ;
évidemment, parce que leur substance fondamentale offre une
plus grande décoagulabilité. On ne conservera aucun doute à

90 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cet égard après l'étude des injections intraveineuses (infra) et
même, immédiatement, quand on aura lu ce qui va suivre.

GERMES TUÉS PAR L’ALCOOL-ÉTHER.

Les doses de 1-2 centigr. (poids sec, équivalant à 5-10 centigr.
de microbes frais) réalisent absolument le type D, dû aux
bacilles diphtériques atoxiques (voir notre mémoire précédent),
avec sa double terminaison possible, par résolution lente ou
par élimination du bourbillon sous-cutané. La coagulation des
microbes de Preisz-Nocard ramène donc leur substance fonda-
mentale au niveau de celle des microbes de Lüffler.

BACILLE TOXIQUE (PANISSET).

Nous envisagerons encore, successivement, l'action des
germes vivants et celle des germes tués par l’alcool-éther;
mais en commencant, cette fois-ci, par les derniers, chez les-
quels le facteur-virulence n'intervient pas.

GERMES TUÉS PAR L'ALCOOL-ÉTHER.

Doses mMorTELLES (3 à 2 centigr., poids sec — 15 à 10 centigr.
de microbes frais). — La mort survient en douze-vingt-
quatre heures; les symptômes et lésions sont sensiblement les
mêmes qu'avec la toxine soluble.

Doses NON MorTELLES (1 centigr. à 0 centigr. 5 — 5 à 2,5 centigr.
de microbes frais). — L'évolution étant ici moins brutale, on
ne s'étonnera point de voir apparaître certaines différences
réactionnelles, conséquence obligée des différences qui sépa-
rent la « toxine liquide » des « microbes alcool-éther ».
Ceux-ci apportent, avec eux, un poison coagulé (d’ailleurs
intracellulaire) et une substance fondamentale coagulée, elle
aussi, mais non négligeable, comme nous l’a montré l'étude du
bacille atoxique tué par l’alcool-éther. Il n'en faut pas davan-
lage pour rendre compte des phénomènes observés, que nous
allons brièvement résumer (en les commentant encore plus
brièvement).

À la première période, l'eschare est moins humide qu'avec

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 97

la toxine soluble (libération progressive du poison intracellu-
laire et coagulé); mais, par contre, l’empâtement s'exagère
(effet de la substance fondamentale).

A la période d'eschare sèche, Vempätement continue à
s'étendre et devient mème parfois considérable, tout en restant
mou; d'où une assez grande prédisposition aux 2nfections
surajoutées. L’eschare, moins sèche et moins noire qu'avec la
toxine soluble (conséquence du fort œdème sous-jacent), peut
ètre comparée, comme consistance et coloration, à du varech
séché au soleil.

A la période de réparalion, l'empàtement diminue progressi-
vement et s’indure ; l'eschare tombe, entraînant la majeure
partie d'un bourbillon jaunâtre, dont le reste se retrouve
à la surface de l’ulcus qu'elle recouvrait (on notera l’analogie
avec le type B, décrit dans notre mémoire sur les bacilles
diphtériques); cet ulcus demeure croûteux jusqu'à son entière
cicatrisation.

L'évolution n'est pas beaucoup plus longue que dans le cas
de la toxine soluble, car tout se termine au bout de quinze
jours environ.

Les doses inférieures à 5 milligrammes déterminent des
lésions de plus en plus réduites; finalement (injection d'un
décimilligr.) : léger infiltrat hypodermique, croûtelles et
simples érosions.|

GERMES VIVANTS.

L'injection de germes vivants, à dose régulièrement décrois-
sante, met en évidence un fait des plus curieux. Tant que la
quantité de « poison vif » demeure suffisante pour entraîner la
mort (rapide), tout se passe, grosso modo, comme si on avait
injecté du poison soluble. Mais dès que l’on abaisse sensible-
ment cette quantité, on observe el la survie et une réduction
très notable des lésions toxiques (c'est-à-dire « toxiniques »)
locales — au profit de l'infection, qui se développe graduelle-
ment et sûrement. Il existe donc là une coupure, dont nous
allons indiquer la raison.

Quand on introduit, sous la peau, une masse suffisante de microbes
(masse correspondant à la dose mortelle), la toxine contenue dans les indi-

92 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

vidus déjà morts {qui représentent certainement la majorité au sein des
cultures de plus de vingt-quatre heures) ou dans les individus peu résistants
(et vite détruits) provoque un afflux de substances bactéricides qui décoagu-
lent, à leur tour, un certain nombre de germes moins fragiles. Il s'ensuit la
libération rapide de nouvelles masses de toxine, un nouvel afflux de sub-
stances bactéricides..…. et ainsi de suite, jusqu'à ce que la quantité de
poison résorbée amène la mort de l'animal.

Au contraire, quand on introduit, sous la peau, une masse insuffisante de
microbes (masse inférieure à la dose mortelle), il n’y a plus le quantum de
toxine immédiatement libre (ou libérable) nécessaire à amorcer des décoa-
gulations étendues. La proportion de germes détruits demeure trop restreinte
pour déterminer une lésion locale marquée et aussi, bien entendu, pour
enrayer (par afflux de substances bactéricides) la marche de l'infection. Celle-
ci se développe donc avec régularité; les microbes continuent à fournir de
la toxine, mais isolément et successivement et non plus collectivement et
brutalement. La preuve qu'ils continuent à en fournir, bien que « sous un
autre régime », c'est qu'ils provoquent des lésions rebelles et que le sérum
de chevaux atteints de semblables lésions (nous n'avons pas éludié celui des
cobayes, mais tout démontre qu'il se comporterait comme celui des chevaux)
manifeste, ainsi qu'on le verra, un pouvoir antitoxique très accentué.

Ceci posé, mentionnons que le bacille Panisset tue, à
1! centigr., en vingt-quatre heures; si l’on force les doses, on
peut produire la mort en douze heures; si on les diminue, en
un Jour et demi à deux jours. La coupure se manifeste aux
environs de 1 milligr.

[Les différents germes vivants, étudiés par nous au point de
vue de leur toxicité, se sont montrés très inégalement actifs.
Certains pouvaient supporter la comparaison avec le Panisset,
d’autres lui demeuraient inférieurs, voire très inférieurs. —
Nous avons omis de dire qu'il en va de même pour ces
divers germes, tués par l’alcool-éther. |

Doses morrezces (0,1 centigr. à 10 centigr. et plus). — On
n'observe pas, pratiquement, de différences sensibles entre les
effets de la toxine soluble et ceux des microbes vivants,
lorsqu'on injecte un excès notable de ceux-ci; mais, à mesure
qu'on descend vers la dose mortelle minima, les lésions locales
se montrent (ainsi qu'il fallait s’y attendre) intermédiaires à
celles que détermine le poison soluble et à celles que provo-
quent les microbes alcool-éther (doses subléthales).

Doses NoN morrezces. — L'intoxication tégumentaire se
traduit uniquement ici par une petite tache violacée, dont le
développement reste progressif et qui se transforme en une

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 93

eschare noirâtre. Celle-ci tombeet découvre un uleus peu étendu,
à fond jaune et sec. Au contraire, l'empätementaugmente régu-
lièrement depuis le début et peut devenir considérable.

Ilestrare que l’ulcus évolue franchement vers la cicatrisation.
On voit, dans la règle, le fond se remplir de pus (riche en
bacilles Preisz-Nocard) et les bords se tuméfier et prendre une
teinte rose, animée. Souvent, ces bords, festonnés, représen-
tent une couronne de petits nodules infectieux; d’autres
nodules, satellites, apparaissent habituellement autour de
l’ulcus; et tous forment bientôt autant de pelits abcès, remplis
de germes spécifiques. La réaction ganglionnaire ne tarde point
à se manifester (tuméfaction des glandes inguinales, avec ou
sans corde lymphangitique) et l’on se trouve en présence de
l'infection type, dont la description sortirait entièrement de
notre sujet.

ACTION DU SÉRUM CARRÉ SUR LA TOXINE ET iES BACILLES.

(Mentionnons, pour n'y plus revenir, que /e sérum Carré ne
manifeste aucun pouvoir antivirulent; 1 cent. cube se montre,
en effet, totalement incapable de neutraliser par mélange (une
demi-heure de contact — température ordinaire) 0,01 centigr.
de l'échantillon Panisset.!

Nous avons fait agir le sérum Carré sur la toxine, les bacilles
atoxiques et les bacilles toxiques, simultanément (à distance),
par mélange et préventivement.

SÉRUM A DISTANCE

(dans les muscles gastrocnémiens).

ACTION SUR LA TOiNe. — 2 cent. cubes de sérum empêchent
la mort par 2 cent. cubes de toxine, mais les animaux offrent
une petite eschare locale. Il suffit abaisser quelque peu la
dose de poison, pour que la nécrose fasse défaut. Comme dans
le cas de la toxine diphtérique, le sérum apparaît moins actif
vis-à-vis du facteur-escharificalion que vis-à-vis du facteur-
intoricalion générale.

ACTION SUR LES BACILLES ATOXIQUES (b. vivants ou b. alcool-
éther). — Elle demeure absolument nulle.

‘

94 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ACTION SUR LES BACILLES TOXIQUES. — D. alcool-éther. 2 cent.
cubes de sérum empêchent la mort par 2 centigr. de microbes
alcool-éther (— 10 centigr. de microbes frais), mais les cobayes
présentent, habituellement, une légère mortification des tégu-
ments. — B. vivants. 2 cent. cubes de sérum empêchent la
mort (rapide) par intoxication, quand on injecte 2 centigr. de
germes vivants et l’eschare locale reste minime; bien entendu,
l'infection ultérieure n’est nullement influencée. Tout se passe
comme si l’on avait administré une dose non mortelle (4 milligr.
et moins); le sérum opère, ici, la coupure dont nous avons parlé
plus haut. — Au regard des bacilles toxiques, ainsi qu’au regard
du poison soluble, le sérum se montre donc moins actif sur la
lésion locale que sur l’empoisonnement de l'organisme.

SÉRUM PAR MÉLANGE

(une demi-heure de contact.

ACTION SUR LA TOXINE. — 2 cent. cubes de sérum neutralisent
complètement 2 cent. cubes de toxine. — Le chauffage du
poison détermine les mêmes effets que le sérum.

ACTION SUR LES BACILLES ATOXIQUES (b. vivants ou b. alcool-
éther).— Le sérum, mélangé à ces microbes, exagère volontiers
l’empâtement réactionnel, surtout au début; d'où une certaine
fréquence des infections secondaires.

ACTION SUR LES BACILLES TOXIQUES. — À. alcool-éther. 1 cent.
cube de sérum neutralise complètement 2 centigr. de microbes
alcool-éther. — 8. vivants. 2 cent. cubes de sérum empèchent
et la mort (rapide) et l’eschare locale, quand on les ajoute à
2 centigr. de germes vivants; mais ils ne sauraient conjurer,
naturellement, l'infection subséquente. Le mélange du sérum
aux bacilles toxiques (b. vivants ou b. alcool-éther) favorise,
dans un certain nombre de cas, l'apparition d'infections sura-
Joutées, en exagérant l’œdème initial — Le chauffage des
microbes loxiques les rend totalement inoffensifs, comme fait
le sérum.

Il n’est pas étonnant que le sérum, administré par mélange,
se révèle plus actif que le sérum injecté au loin. — Quant à la
méthode préventive, dont nous allons parler, elle tient le milieu

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 95

entre les deux autres. Nous ne l’avons point employée dans nos
recherches sur les bacilles de Lôffler, parce que l’action de la
toxine diphtérique, toujours lente, se trouve aisément entravée
par l'administration simultanée du sérum — elle s’imposait,
au contraire, 1C1 puisque nous avons affaire à un poison très
rapide dans ses effets et que l’antitoxine, injectée au loin, ne
« rattrappe » généralement pas assez tôt. La méthode préven-
tive offre donc, sur la méthode simultanée, l'avantage d’une
efficacité plus grande; elle offre, sur les mélanges, l'avantage
d'éviter toute infection secondaire (liée à l’exagération de
l’empâtement local) : d'où son usage exclusif dans le toxino-
diagnostic (voir plus loin.

SÉRUM PRÉVENTIF

(la veille, dans les muscles gastrocnémiens).

ACTION SUR LA TOXINE. — 1 cent. cube de sérum empêche la
mort par 2 cent. cubes de poison, mais les animaux offrent une
petite eschare locale. Celle-ci cesse d’ailleurs de se manifester
dès qu’on diminue légèrement la dose toxique.

ACTION SUR LES BACILLES ATOXIQUES (b. vivants ou b. alcool-
éther). — Nulle.

ACTION SUR LES BACILLES TOXIQUES. — P. alcool-éther. 2 cent.
cubes de sérum neutralisent complètement les effets de 2 centigr.
de microbes alcool-éther. — P. vivants. 2 cent. cubes de sérum
empêchent la mort (rapide) et l'eschare locale, quand on injecte .
2 centigr. de germes vivants; sans influer, bien entendu, sur
l'infection ultérieure.

| Le sérum équin normal et le sérum antidiphtérique ne mani-
festent Jamais la moindre action sur la toxine, les bacilles
aloxiques ou les bacilles toxiques.|

L'étude des injections sous-cutanées du poison et des bacilles
(toxiques ou non) soit seuls, soit combinés avec le sérum (admi-
nistré préventivement, par mélange ou à distance), répond
déjà, dans une large mesure, aux deux questions posées en
débutant.

L'identité de la foxine des microbes et de celle des filtrats

96 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ne saurait être contestée, car le sérum Carré neutralise pareil-
lement l’une et l’autre. Quant à la substance fondamentale,
nous connaissons maintenant ses effets locaux (empâtement
sous-cutané), que le sérum exagère volontiers quand on emploie
la méthode des mélanges.

La toxine Preiez-Nocard diffère profondément de la toxine
diphtérique par la rapidité de son action, par la nature des
lésions qu'elle détermine (sur place et au loin) et par l'absence
de paralysies tardives. Elle n'est pas plus justiciable du sérum
antidiphtérique que le poison des bacilles de Lôffler ne l’est du
sérum Carré. La substance fondamentale des microbes Preisz-
Nocard diffère de celle des bacilles diphtériques par sa plus
grande décoagulabilité; aussi n'engendre-t-elle de bourbillon
sous-cutané que si on la ramène au niveau de la substance
fondamentale des microbes de Lôffler, en la coagulant par
l'alcool-éther.

ACTION DU SÉRUM DES CHEVAUX CHRONIQUEMENT INFECTÉS
SUR LA TOXINE ET LES BACILLES.

L'un de nous (Forgeot); possédant au lazaret de l'École Mili-
taire deux chevaux atteints de lymphangite de Nocard, a pro-
posé de comparer le sérum de ces animaux avec le sérum
Carré. L'identité était complète : absence de pouvoir anti-
virulent{, présence d’un pouvoir antitoxique très marqué. Nous
avons alors prié M. Cesari de recueillir fous les sérums de chevaux
sacritiés à l'abattoir Brancion et porteurs de lymphangite ou
d'abcès rénaux, d'origine Preisz-Nocard. Voici comment les
expériences ont été combinées. M. Cesari nous envoyait à la
fois deux tubes étiquetés À et B, sans rien spécifier. Tantôt il
s'agissait de deux sérums équins normaux, tantôt de deux
sérums Preisz-Nocard, tantôt d’un sérum normal et d’un sérum
Preisz-Nocard. Nous injections 2 cent. cubes de chaque sérum
dans les muscles des cobayes et, le lendemain, 2 centigr. de
bacilles toxiques alcool-éther sous la peau de ces animaux et
d'un témoin. Les témoins et les « sujets sérum normal » ont
toujours succombé très rapidement; les « sujets Preisz-Nocard »
ont {oujours résisté, sans lésion locale ou avec une eschare
minime. M. Cesari isolait, de son côté, les bacilles Preisz-

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 97

1

Nocard à l'autopsie des sujets dont il nous avait envoyé le sérum,
et ces germes étaient rigoureusement identifiés.

Nous sommes donc en présence d'une propriété antitoxique
qui paraît constante chez les chevaux chroniquement atteints
et grâce à laquelle le diagnostic des lésions latentes (abcès
rénaux) pourra ètre aisément réalisé intra vitam. Il serait inté-
ressant d'étudier, au mème point de vue, le sérum des cobayes
inoculés et, avant tout, celui des moutons alteints de l’infec-
tion naturelle.

Inutile d'insister sur l'importance théorique et pratique des
faits qui précèdent. Ws établissent l'existence inattendue d’un
pouvoir antitoxique notable au cours d'une affection micro-
bienne chronique ; ils conduisent, corrélativement, à une
méthode de diagnostic non moins inattendue, le ’oxino-
diagnostic (ou antitoxino-diagnostic, si l'on préfère), dont les
applications pourraient bien dépasser l'histoire des maladies
Preisz-Nocard.

(Mentionnons, en terminant, que le sérum des chevaux chro-
niquement infectés se montre parfois plus actif que le sérum
Carré, soit sur le poison soluble, soit sur les bacilles loxiques. |

ÉTUDE DES INJECTIONS INTRAVEINEUSES
ToxINE SOLUBLE.

Pour tuer sûrement les animaux, il faut atteindre le volume
de 1 cent. cube. Au-dessous (jusqu'à 0,1 cent. cube), on déter-
mine une émaciation transitoire, parfois assez marquée mais
sans accidents consécutifs. Le passage de la dose mortelle à la
dose pratiquement inoffensive se fait donc assez brusquement.

4 cent. cube amène la mort en vingt-quatre-trente-six heures
(altération progressive de l’état général); 2 cent. cubes, dans
la nuit (apathie, troubles respiratoires, sensibilité et ballon-
nement du ventre); 3-4 cent. cubes, en quelques heures (coma
à marche rapide, accompagné de phénomènes abdominaux et
de dyspnée croissante); 5 cent. cubes, en une heure et moins
‘embarras respiratoire et convulsions). Quand la terminaison
n'est pas trop précoce, Les lésions viscérales restent les mêmes

98 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

que lors de l'injection sous-cutanée ; autrement, tout se borne
à une congestion banale des organes de l'abdomen.

Qu'on l’introduise par la voie intraveineuse ou par la voie
hypodermique, la toxine Preisz-Nocard apparaît donc toujours
radicalement différente, quant à ses effets,'de la toxine diphté-
rique.

BACILLE ATOXIQUE (CHAMPION).

GERMEs vivanrs.— Lescobayes ensupportentjusqu'à 10centigr.
sans aucun accident immédiat ni tardif (on note, éventuelle-
ment, une légère émacialion transitoire). Avec 15 centigr.,
apparaît le /ype mortel lent, décrit dans notre précédent
mémoire, avec 25 centigr., le {ype rapide. Les bacilles Preisz-
Nocard atoxiques font périr les animaux sous une masse plus
faible que les bacilles diphtériques atoxiques, ce qui tient à la
plus grande décoagulabilité de leur substance fondamentale,
particularité déjà observée lors des injections sous-cutanées.
Voilà donc un caractère différentiel simple, nouveau et assez
inattendu, qui permetira de reconnaître aisément les types
aloxiques du groupe Preisz-Nocard et du groupe Lôffler.

GERMES TUÉS PAR L’ALCOOL-ÉTHER. — 15 centigr. de bacilles frais,
traités par l’alcool-éther puis desséchés, fournissent 3 centigr.
d'une poudre dont l’'émulsion ne produit aucun effet nuisible
quand on l'injecte dans les veines. Cette disparition de Ia toxi-
cité était certaine d'avance, puisque l’alcool-éther coagule la
substance fondamentale des germes en jeu.

BACILLE TOXIQUE (PANISSET).

GERMES vivanrs. — Pour tuer par empoisonnement (rapide),
il faut atteindre 1 centigr.; au-dessous, les sujets n'offrent
jamais de symptômes toxiques (ils s'infectent d’ailleurs, sans
exception, même avec 0 centigr. 061). Nous retrouvons, encore
plus schématique, la coupure dont il a été parlé lors des injec-
lions hypodermiques, ce qui nous permettra d'établir les deux
divisions suivantes.

Intoxication. — 1-2 centigr. amènent la mort dans la nuit;
> cenligr.. en quelques heures; 10 centigr., en une heure et
moins. Ces effets sont dus à la seule toxine, puisque 10 centigr.
de substance fondamentale n'offrent, pratiquement, aucune

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 99

nocuité. Au-dessus de 10 centigr., par contre, cette substance
entre en jeu et l'on comprend facilement queles cobayes puissent
succomber très vite.

[Parmi nos échantillons de bacilles toxiques, certains se sont
montrés aussi actifs que le Panisset ; les autres s’en éloignaient
plus ou moins, parfois beaucoup]

Infection. — La mort survient après cinq-dix Jours (pour
des doses de 0 centigr. 01 à 0 centigr. 001). Voici, en deux
mots, ce que l’on observe. Tout d’abord, rien d’anormal, sinon
une baisse de poids progressive. Vers le 3° jour seulement,
apparaît l’éruption caractéristique, sur les bords de la plaie
opéraloire (région cervicale), puis dans ses environs immédiats.
Les pustules éclosent, ensuite, au niveau du scrotum, des oreilles,
du nez, des lèvres, de la conjonctive..., où elles deviennent
de plus en plus abondantes et volumineuses. Quand la survie
le permet, se manifestent du gonflement des mains et des pieds,
de la kératite (souvent suivie de fonte suraiguë de l'œil) et de
vrais abcès cutanéo-sous-cutanés (scrotum, oreilles, nez...).
A l’autopsie : granulomes du foie, de la rate, des poumons, du
musculus testis et du corps adipeux, de l’albuginée (testicule et
épididyme), du péritoine pariélal..….. et, lorsque la mort n’est
pas trop rapide : gros nodules caséo-purulents du musculus
Lestis, de l’albuginée…

GERMES TUÉS PAR L'ALCOOL-ÉTHER. — Mentionnons simplement
quelques chiffres : 0 centigr. 5 (— 2 centigr. 5 de microbes
frais) tuent en vingt-quatre heures; 1-2 centigr. (— 5-10),
dans la nuit; 3 centigr. (— 15), en six-douze heures.

Mèmes symptômes et lésions qu'avec la toxine soluble et les
bacilles vivants; différences d'activité, parfois très notables,

entre le Panisset pris comme type et les autres échantillons
étudiés.

ACTION DU SÉRUM CARRÉ SUR LA TOXINE ET LES BACILLES.

L'injection de sérum simultanément et à distance était encore
plus contre-indiquée ici que dans nos études sur les bacilles
diphtériques, en raison de l’action particulièrement rapide de
la toxine Preisz-Nocard ; aussi l’avons-nous laissée volontaire-
ment de côté.|!

100 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ToxiNE SOLUBLE. — Préventivement. 2 cent. cubes de sérum
empêchent la mort par 1 cent. cube de toxine.— Par mélange.
| cent. cube neutralise aisément 1 cent. cube de poison.

BaciLLes ATOxIQUES. — |Préventivement et par mélange.]
Action nulle sur les microbes vivants et les microbes alcool-
éther. Nous ne retrouvons donc pas, même avec les germes
vivants, l'hypersensibilité passiveobservée lors de nos recherches
sur les bacilles de Lôffler. À quoi attribuer cette différence?
Certainement, à l'absence d’un pouvoir albuminolytique suffi-
sant du sérum Carré; certainement, aussi, à la nalure des
microbes étudiés. La grande décoagulabilité des bacilles Preisz-
Nocard les rend mortels pour des doses plus faibles que celles
employées dans nos expériences sur les bacilles diphtériques.
D'où moins de latitude dans la recherche de l’hypersensibilité.
Moins de latitude, encore, avec les bacilles toxiques, chez les-
quels le poison spécifique tue déjà rapidement par lui-même
quand on arrive à 10 centigr. [Nous verrons bientôt que
l'Aypersensibilité active peut être obtenue sous certaines con-
ditions. |

BAGILLES TOxIQuEs. — B. vivants. 5 cent. cubes de sérum
préventivement el 2 cent. cubes par mélange empèchent la mort
rapide, quand on injecte 5 centigr. de germes vivants; bien
entendu, l'infection ultérieure survient fatalement. — B.alcool-
éther. 3 cent. cubes de sérum préventivement et 2 cent. cubes
par mélange neutralisent l'effet de 2 centigr.

[Mentionnons l'inefficacité absolue du sérum antidiphtérique
el du sérum équin normal et indiquons que le sérum des chevaux
chroniquement infectés se montre souvent au moins aussi actif
que le sérum Carré.

Pour démontrer l'existence de l’hypersensibililé active, nous avons traité,
parallèlement, deux séries de cobayes par des injections répétées de germes
Ponisset et Champion, chauffés une demi-heure à 55 degrés (on injectait,
chaque fois, 5 centigr. de microbes dans les muscles) — puis, nous avons
éprouvé ces animaux dans les veines, suivant le mode direct ou croisé, avec
10-15 centigr. de microbes homologues ou hétérologues, également chauftés
une demi-heure à 55 degrés. Tandis que les témoins ont toujours parfaite-
ment résisté à l'administration des bacilles ainsi modifiés, les sujets traités
périssaient rapidement, en présentant les phénomènes habituels, suffisam-
ment décrits dans notre travail antérieur pour qu'il soit inutile d'y revenir

ici.

RS der éd dde dd 2 0

LES FACTEURS DE TOXICITÉ DES BACTÉRIES 101

Justiftions les conditions expérimentales choisies par nous. Pour la prépa-
ration des « cobayes Panisset », il était indispensable d'éliminer le facteur-
virulence ; d’où le chauffage des germes (lequel éliminait, en même temps, le
facteur-toxicité) ; ce chauffage s'imposait donc, ipso facto, dans le traitement
des « cobayes-Champion ». Pour l'épreuve, il valait mieux, {héoriquement.
employer les antigènes qui avaient servi à la préparation des animaux; pra-
tiquement aussi, car ils donnent plus de marge que les microbes vivants.

Ceci posé, nous ne devons point dissimuler que les bacilles Preisz-Nocard,
comme l'établissent des expériences répétées entreprises sur le sujet —
expériences dont le détail n'offrirait aucun intérêt — hypersensibilisent moins
facilement les cobayes que ne font les bacilles de Lôffler. Nouveau caractère
différentiel entre ces deux groupes de microorganismes.

L'étude des injections intraveineuses confirme donc l'identité
de la toxine des microbes et de celle des filtrats. Elle complète,
d'autre part, l'histoire de la substance fondamentale, en prou-
vant que celle-ci peut déterminer la mort quand elle pénètre, à
dose suffisante, dans le système sanguin.

Ici encore et d'une manière plus frappante, la toxine Preisz-
Nocard se montre tout à fait différente de la toxine diphtérique
par la rapidité de son action, la nature des lésions qu'elle
engendre et l'absence de complications tardives — ici encore,
la subslance fondamentale apparaît différente de celle des
bacilles de Lôffler par sa plus grande décoagulabilité, que le
traitement à l’alcool-éther permet de faire rétrocéder.

CONCLUSIONS

Parmi les facteurs de toxicité des bacilles Preisz-Nocard, V'un,
constant, est représenté par la substance fondamentale ; V'autre,
inconstant, par la toxine soluble.

La substance fondamentale ne détermine qu'un simple empà-
tement local quand on l’introduit sous la peau, mais elle peut
tuer aisément les animaux lorsqu'on emploie la voie intra-
veineuse. La toxine soluble se caractérise, avant tout, par la
rapidité et l'intensité de ses effets, quel que soit le mode d’admi-
nistration choisi; le sérum spécifique (sérum Carré) et celui des
chevaux atteints d'affections chroniques à microbes de Preisz-
Nocard la neutralisent sans difficulté (tandis qu’ils demeurent
inactifs sur le facteur-virulence).

Toxine soluble et substance fondamentale diffèrent absolu-
ment de celles des bacilles diphtériques.

NOUVEAU PROCÉDÉ DE DIAGNOSTIC
DES INFECTIONS A BACILLES DE PREISZ-NOCARD

par P. FORGEOT et E. CESARI

Dans le travail qui précède, l’un de nous a fait connaître,
avec M. Nicolle et G. Loiseau, l’action inattendue du sérum
des chevaux chroniquement infectés sur la toxine des bacilles
de Preisz-Nocard et indiqué de quelle manière, à la fois simple
et sûre, il était possible de démontrer cette action.

Il nous à paru intéressant de rapporter brièvement les docu-
ments qui ont servi à établir l'existence de cette curieuse pro-
priété des sérums. Ce sont : d'une part, les observations (très
résumées) de deux juments étudiées à l'École Militaire, obser-
vations dues à l'obligeance de notre camarade M. le vétérinaire
en second Larieux; d'autre part, les protocoles d'expériences
faites avec le sérum de onze chevaux de l’abattoir Brancion.

Le sérum des juments de l'École Militaire a été étudié en
connaissance de cause, c'est-à-dire après établissement du
diagnostic clinique et bactériologique. Pour le sérum des
chevaux de l’abattoir Brancion, au contraire, celui qui procé-
dait à l'examen ignorait le diagnostic clinique (ou anatomo-
pathologique) et bactériologique, ainsi qu'il a été mentionné
dans le travail ci-dessus. Il recevait tantôt des sérums
normaux, tantôt des « sérums Preisz-Nocard », tantôt les deux,
sans indication aucune d'origine. Dansles protocoles qui suivent,
les sérums normaux figurent comme témoins et non comme
« pièges », pour la clarté de l'exposition.

Rappelons, en quelques mots, la {echnique employée. Le sérum à examiner
est injecté, à la dose de 2 centimètres cubes, dans les muscles gastrocné-
miens d’un cobaye (animal de 500-600 grammes). Le lendemain, ce cobaye,
ainsi qu'un témoin, reçoit, par la voie sous-cutanée, 2 centigrammes de
bacilles Preisz-Nocard toxiques, tués par l’alcool-éther (et desséchés dans le
vide sulfurique). Le témoin succombe toujours très rapidement, tandis que
le sujet « sérum Preisz-Nocard » résiste toujours, sans lésion locale ou avec
une eschare minime. Un cobaye « sérum équin normal » se comporte cons-
tamment comme un témoin.— Le sérum à examiner peut être injecté, si l’on

DIAGNOSTIC DES INFECTIONS A BACILLES DE PREISZ-NOCARD 103

veut, à deux animaux, comme nous l'avons fait assez souvent au début, mais
il nous semble maintenant inutile d'employer plus d’un cobaye (c'est-à-dire
«eux, avec le témoin).

ANIMAUX DE L'EcorE MiLiTaIrE.

Ces deux juments ont pu être observées au lazaret, grâce à
l'intervention de M. le vétérinaire principal Sandrin, qui les
y avait fait venir et que nous sommes heureux de remercier
1C1.

Jument Cocotte, huit ans. — Entrée à deux reprises à l'infirmerie, en 1907,
pour lymphangite du membre postérieur gauche. Passée aux indisponibles, à
deux reprises, en 1907; à deux reprises, en 1908 ; une fois, en 1910. Réformée
en 1911. Le diagnostic bactériologique et le prélèvement du sérum ont été
faits en novembre 1910.

. Le sérum a servi à de /rès nombreuses expériences; en voici deux, prises au
hasard (avec témoins).

Cobaye I. (Sérum Cocotte). Eschare minime.

Cobaye IT. (Sérum Cocotte). Mème résultat.

Cobaye III. (Sérum équin normal). Eschare étendue, mort en moins de
vingt-quatre heures. Congestion des viscères abdominaux

Cobaye IV. (Sérum équin normal). Eschare étendue, mort en un jour.
-Congestion des viscères abdominaux.

Cobaye V. (Pas de sérum). Mème résultat que pour le cobaye IV.

Jument Déconsidération, sept ans. — Entrée aux indisponibles, deux fois,
-en 1910, pour traumatisme du membre postérieur droit; entrée ensuite à
l'infirmerie, la même année, pour lymphangite de ce membre. Réformée en
1911. Examen bactériologique et prélèvement du sérum en novembre 1910.
Expériences très nombreuses, ici encore, avec le sérum. En voici deux, entre
autres.

Cobaye I. (Sérum Déconsidération). Eschare minime.

Cobaye IT. (Sérum Déconsidération). OEdème transitoire.

Cobaye III. (Sérum équin normal). Eschare étendue, mort en vingt-quatre
heures. Congestion des viscères abdominaux.

Cobaye IV. (Sérum équin normal). Même résultat que pour le cobaye III.

Cobaye V. (Pas de sérum). Encore le même résultat.

ANIMAUX DE L'ABATTOIR BRANCION.

[Le diagnostic bactériologique a toujours élé pratiqué concurremment avec
l’'élude des sérums.]
Cheval A. (Abcès du rein).

Cobaye I. (Sérum A). OEdème transitoire.
Cobaye II. (Sérum A). Même résulta” Tue pour le cobaye I.

104 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Cobaye IIT. (Pas de sérum). Eschare étendue, mort en un jour et demi.
Congeslion gastrique.

Cheval B. (Lymphangite).

Cobaye I. (Sérum B). Eschare minime.

Cobaye IT. (Sérum B). Eschare peu étendue.

Cobaye IIT. (Sérum équin normal). Eschare étendue, mort en deux jours
et demi. Congestion du gros intestin.

Cobaye IV. (Sérum équin normal). Eschare moyenne, mort en un jour.
Congestion des viscères abdominaux. Congestion hémorrhagique de l'estomac.

Cobaye V. (Pas de sérum). Eschare étendue, mort en trois jours. Conges-
tion des viscères abdominaux.

Cheval C. (Abcès du rein).

Cobaye I. (Sérum C). Eschare minime.

Cobaye IT. (Sérum C). OEdème transitoire.

Cobaye IIL. (Pas de sérum). Eschare peu étendue, mort en un jour. Con-
gestion gastrique.

Cheval D. (Lymphangite).

Cobaye I. (Sérum D). OEdème transitoire.

Cobaye IT. (Sérum Dj). Eschare minime.

Cobaye III. (Pas de sérum). Eschare peu élendue, mort en moins de vingt-
quatre heures. Congestion violente et hémorrhagique de l'estomac; conges-
tion des viscères.

Cheval E. (Abcès du rein).

Cobaye I. (Sérum E). Eschare minime.
Cobaye II. (Pas de sérum). Eschare moyenne, mort en un jour et demi.
Congestion des viscères abdominaux.

Chevaux F et G. (Abcès du rein).

Cobaye I. (Sérum F). OEdème transitoire.

Cobaye IT. (Sérum G). Eschare minime.

Cobaye III. (Sérum équin normal). Eschare étendue, mort en un jour.
Congestion des viscères abdominaux.

Cobaye IV. (Pas de sérum). Eschare étendue, mort dans la nuit. Conges-
tion violente des viscères ; congestion hémorrhagique de l'estomac.

Cheval H. (Abcès du rein).

Cobaye I. (Sérum H). OEdème transitoire.
Cobaye II. (Pas de sérum). Eschare étendue, mort en moins de vingt-
quatre heures. Congestion hémorrhagique de l'estomac.

Cheval I. (Abcès du rein).

Cobaye I. (Sérum I). Eschare minime.

Cobaye IT. (Sérum équin normal). Eschare moyenne, mort en un jour el
demi. Congestion violente de l'intestin et de l'estomac.

Cobaye IIT. (Pas de sérum). Eschare étendue, mort en un jour. Congestion
de l'estomac.

DIAGNOSTIC DES INFECTIONS A BACILLES DE PREISZ NOCARD 105

Chevaux J et K. (Abcès du rein).

Cobaye [!. (Sérum J). Eschare minime.

Cobaye IT. (Sérum K). OEdème transitoire.

Cobaye IT (Pas de sérum). Eschare étendue, mort en un jour et demi.
Congestion violente de l'estomac.

Il résulte de ce qui précède que le sérum de treize chevaux.
alteints d'infections chroniques à bacilles de Preisz-Nocard et
pris au hasard s'est montré suffisamment antitoxique pour
conjurer la mort des cobayes traités par le poison homologue,
administré sous la forme de microbes alcool-éther (unique-
ment parce que c’est la plus pratique) et pour réduire à zéro,
ou à peu de chose, la lésion locale. Sur ces treize chevaux,
neuf n'étaient porteurs que de lésions latentes (abcès rénaux),
insoupçonnables par les moyens d'investigation dont nous dis-
posions jusqu'ici. Ce seul fait démontre et la nouveauté et
l'importance du toxino-diagnostic. Il invite également à des
recherches ultérieures, susceptibles de faire connaître : le
moment où s'établit la propriété antitoxique du sérum,
l'évolution de cette propriété et ses rapports quantitatifs avec
l'âge et l'intensité de l'infection.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES

par Micuez COHENDY

Travail du laboratoire de M. le professeur Metchnikoff.)
INTRODUCTION

La vie sans microbes est-elle possible?

Pasteur (1) dit à ce sujet : « Il y aurait grand intérêt à tenter
l'expérience. L'œuf de la poule (s'y) prêterait sans difficulté
sérieuse CL.

Ainsi furent posées les bases de l’étude d'une question si
intimement liée à l’œuvre qu'il venait de créer, la physiologie
des microbes.

Pour Metchnikoff, élucider ce problème biologique, c'était
S'éclairer du même coup sur le rôle tenu envers nous par
les microbes de notre tube digestif, microbes avec lesquels
nous vivons en communauté constante.

Il voulut savoir tout d’abord s’il existait dans la nature des
êtres vivants ne portant normalement « en eux » aucune bac-
térie. Ses recherches lui révélèrent l’asepsie totale de l'intestin
du scorpion et des larves de plusieurs espèces de mites (Gal-
leria, Tinea, elc.) (2). Portier (3), depuis lors, observa que
parmi les chenilles de microlépidoptères, celles de Lithocol-
letis, du Nepticulus du rosier sont toujours aseptiques. Parmi
les helminthes, parasites de l’homme, nous avons trouvé quei-
ques lombrics jeunes vides de microbes; d’autres, adultes, pro-
venant soit de l’homme, soit du chien, bien que très pauvres en
bactéries, en contenaient cependant de deux à quatre espèces.

) Comptes rendus de l'Académie des Sciences, 1885, t. C, p. 66.
) Les microbes intestinaux (revue). Bullelin de l'Institut Pasteur, L. I, n°17,
68.

(3) Comples rendus de la Société de Biologie, 1905, I, avril, p. 605.

(1
(2
2

p.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 107

Weinberg et M"° Inga Sœves (1) n’ont rencontré qu'exception-
nellement des microbes — encore étaient-ils isolés — dans
les coupes du tricocéphale, de l'oxyure et de l'enkylostome de
l'honime et du chimpanzé. be plus, Weinberg nous à commu-
niqué que l'intestin de certains lézards en hibernation, observés
en Tunisie par M. Romanovitch et lui, ne contenait que très
peu ou pas de bactéries.

Chez l’homme, qui devait nous servir de terme de compa-
raison, nous avons complé 1#43.870.000 bactéries, d'espèces très
variées, pour 1 milligramme de fèces (2); chez le chien, nous en
avons trouvé un nombre presque égal, nombre environ quatre
fois plus faible chez les grands fauves en ménagerie ainsi que
chez le sanglier, mille fois moindre chez les oiseaux coureurs
(casoar, tinamou); ce nombre est réduit à quelques milliers
chez les oiseaux de proie (condor, aigle, faucon) et chez le cor-
beau, à une centaine chez Ie perroquet adulte (Chkryzotis ama-
sonica), — une des espèces microbiennes isolées de cet animal
digérait la cellulose, — à quelques unités chez un jeune perro-
quet de la même variété. Tout aussi rares sont les bactéries
dans le tube digestif du caïman.

Nous venons de voir que dans la nature le développement
de certains invertébrés se passe du concours des bactéries; il
ne paraît pas qu'il en soit de mème chez les vertébrés. S'il est
vraisemblable que la richesse de la flore intestinale soit la
même depuis l’origine de l'espèce animale, on admettra aisé-
ment que la coexistence de l'individu et de sa flore ait établi
entre eux une adaptation mutuelle parfaite sans laquelle la vie
deviendrait impossible. C'est l'opinion de Ribbert (3); elle est
comme celle de Pasteur (4), basée sur des conceptions théo-
riques.

Qu'en dit l'expérience?

Maintes fois des recherches furent « tentées », mais non
« sans difficulté sérieuse ».

Nous avouons pour notre part qu'elles nous ont demandé

1) Comptes rendus de la Société de Biologie, 1906, t. LXI, Dée., p. 560.

(2) Comptes rendus de la Société de Biologie, 1906, t. LX, p. 415.

(3) Archiv für Anatomie und Physiologie, Physiologische Abtheilung, Supp. :
1908, p. 173.

(4) Comptes rendus de l'Académie des Sciences, 1885, t. C.

108 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plus de trois années de patience et que nous nous sommes
souvent heurté à des obstacles déconcertants.

Sur les invertébrés, deux essais d'élevage stérile ont été
faits.

Bogdanow (1}, après avoir désinfecié des œufs de mouche,
les introduit dans des récipients contenant de la viande stérile;
une fois, par exception, les larves stériles ainsi obtenues,
s'étaient aussi bien développées que les larves normales, con-
taminées. Il conclut de l’ensemble de son travail que pour se
développer ces larves ont besoin de microbes. Wollman (2),
dont nous avons pu apprécier la parfaite technique expéri-
mentale, à fait, à son tour, vivre stérilement des larves de
mouche (Lucia Cesar et Caliphora vomitoria). Il observe
«que pendant les premiers jours de la vie, ses larves stériles
se développent plus lentement que les lémoins contaminés ;
plus tard les larves stériles atteignent le poids et la taille des
larves adultes normales ». Il arrive finalement à des conclu-
sions différentes de celles de Bogdanow et attribue les résultats
défavorables obtenus par ce dernier à la stérilisation des
milieux d'élevage faite à une température trop élevée.

On le voit, ces derniers faits expérimentaux concordent avec
ceux observés dans la nature. Ils permettent de conclure net-
tement que certains invertébrés peuvent arriver à un dévelop-
pement normal sans le concours des microbes.

Le problème n'est pas résolu pour les vertébrés.

Schottelius (3) a consacré plusieurs années à l'étude de cette
question. Pour ses expériences, il a pris l’œuf de poule. Son
installation comporte un grand laboratoire possédant une
chambre de verre de 6 mètres cubes, à double porte, dans
laquelle sont disposés les petits appareils d'élevage. Ceux-ci
sont des caisses métalliques d'environ 10 décimètres cubes
placées sur un réservoir à température constante réglable de
l'extérieur, ouvertes sur une de leurs faces verticales. Devant
cette ouverture est disposée une glace de verre, mobile,
occupant environ les deux tiers inférieurs. Le tout est stérilisé
d'abord par les vapeurs d’aldéhyde formique, celles-ci sont

(1) Der Todaus Allerschwäche. Bonn, 1908, p. 33.
(2) Annales de l'Instilut Pasteur, Janvier 1941, t. I, p. 79.
(3) Archiv für Hygiene, 1899, t. XXXIV ; 1902, t. XLII; 4908, t. LXVII.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 109

saturées par l’ammoniaque, ensuite on fait une deuxième
stérilisation en brûlant du soufre précipité. L'opérateur, pourvu
d'un vêtement en toile aseptisée laissant libre seulement le
haut du visage, muni de gants et de chaussures en caoutchouc
stérilisés, pénètre dans la chambre de verre le premier jour
de l'expérience et dispose dans les petits appareils d'abord les
aliments (millet et blanc d'œuf) et l’eau de boisson stérilisés
par la chaleur, puis les œufs prêts à éclore, désinfectés. L'éclo-
sion ayant eu lieu, portes et interstices du laboratoire et de la
chambre de verre restent soigneusement clos pendant les pre-
miers jours de l'expérience; vers le 10° jour, et suivant les
besoins de l'expérience, on pénètre de nouveau dans le labora-
toire et la chambre de verre avec les mêmes précautions que
la première fois. L'expérience lerminée, le contrôle est fait par
des ensemencements en gélaline.

Nous avons pu suivre ces expériences dans tous leurs détails
pendant un séjour de plusieurs mois fait au laboratoire du
professeur Schottelius. Souvent répétées par lui, elles l'ont con-
duit à formuler cette opinion que la vie est impossible sans les
microbes.

M®° Metchnikoff (1) a pensé que, parmi les vertébrés, les
larves de Batraciens réunissaient les meilleures conditions pour
l'élevage à l'abri des bactéries. Avec une grande habileté de
technique, elle réussit à faire se développer stérilement toute
une série de têtards de grenouille rousse. Mais ces tètards sont
chétifs, « mal venus ». Dans la suite, M°*° Metchnikoff fait de
nouvelles tentatives en variant les aliments; c’est en vain. Ses
lètards, comme les poussins de Schotlelius, sont moins déve-
loppés que les témoins contaminés ; ils deviennent cachectiques.

Il en est de mème des têtards élevés par Moro (2).

Nuttall et Thierfelder (3) tentèrent l'élevage stérile de petits
cobayes retirés par l'opération césarienne de l’utérus maternel.
Ces pelits animaux ont paru augmenter de poids normale-
ment, mais de très grandes diflicultés techniques obligèrent ces
savants à interrompre leurs expériences le 10° Jour; ce qui fit
dire à Schottelius que l’augmentation de poids des cobayes

(1) Annales de l'Institut Pasteur, 1901, p. 603.

(2) Jahrbuch für Kinderheilkunde, 1905, t. IT, p. 467.
(3) Zeitschrift für physiologische Chemie, 1895, t. XXI, p. 109.

110 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

était fictive et due en réalité au lait ingéré; ce lait coagulé,
mais non digéré, ayant été retrouvé à l’autopsie accumulé dans
le gros intestin.

L'hypothèse, émise par Pasteur, concernant vraisemblable-
ment les vertébrés seuls, paraît donc confirmée par les expé-
riences que nous venons de citer. Cependant le fait contradic-
toire présenté par Nuttall et Thierfelder, bien qu’insuffisamment
établi, ainsi que la pauvreté microbienne de certains orga-
nismes tels que celui du perroquet, du caiman, firent penser à
Metchnikoff que le problème était loin d’être résolu ; c’est alors
qu'il nous pria d'apporter notre contribution à ces études expé-
rimentales de la vie aseptique chez les vertébrés.

Nous avons choisi, comme Schottelius, l'œuf de la poule
léqué par Pasteur.

Nos expériences correspondent à deux périodes distinctes.
Celles de la 1"* période, succinctes, sont des expériences d'essai ;
elles ont été faites lors de notre séjour à l’Institut d'Hygiène
de Fribourg-en-Brisgau, dans le laboratoire du professeur
Schottelius; celles de la 2° ont été exécutées par la suite dans
notre laboratoire.

Après avoir été mis au courant très obligeamment par le
professeur Schottelius et ses élèves des détails de leur instal-
lation et des connaissances techniques d'élevage qu'ils avaient
pu acquérir, nous avons pensé à adopter, pour les expériences
que nous voulions entreprendre, un dispositif particulier. Les
conditions d'existence imposées à l'animal étant de la sorte
différentes, il devenait plus aisé de dégager la part qui revient à
celles-ci dans les résultats obtenus.

Pour ces essais à Fribourg, nous avons établi un appareil de
fortune dont les petites dimensions nous ont permis de sub-
stituer à la stérilisation par l'aldéhyde formique et le soufre la
stérilisation par la vapeur, comme pour les récipients à culture
ordinaires : cet appareil est muni d’une circulalion d'air con-
tinue el rend possible l'apport journalier d'aliments et d’eau
stériles.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 111

Appareil (Figure 1) et Technique. — Une cuve de verre cylindrique, de
28 centimètres de diamètre et de 15 centimètres de hauteur, esf munie d'un
couvercle, d'un diamètre de 30 centimètres, en toile métallique avec rebord
en fer-blanc de 5 centimètres de hauteur. Une épaisse feuille d'ouate placée
dans le couvercle et le débordant de toute part est fortement comprimée entre
sa toile métallique et une 2° (oile métallique de 25 centimètres de diamètre.
à l’aide de solides ligatures de mince fil de laiton. Le couvercleine peut être
mis en place qu'en comprimant fortement la feuille d'ouate entre le bord
extérieur de la cuve et le rebord de fer-blanc du couvercle. Deux trous mé-
nagés dans le couvercle laissent passer l'un: un tube rectiligne (A) en
verre de 12 centimètres.de long, de 2 centimètres de diamètre, placé obli-
quement, son orifice supérieur bouché au coton, son orifice inférieur s’ou-
vrant à 2 centimètres dans l'intérieur
de la cuve ; l’autre : 2 tubes de 1 centi-
mètre de diamètre, d'environ 25 centi-
mètres de long et coudés à la hauteur
de leur tiers supérieur; leur ouverture
inférieure se trouve également à 2 cen-
timètres de profondeur dans la cuve.
Le 1er de ces tubes (C') communique
librement par un tube de caoutchouc
avec un récipient d'eau (C) disposé en
pisselle, soigneusement bourhée el
pourvue d’une rentrée d’air avec gros
filtre de coton ; le 2e (E') est muni d'un
tampon de coton à son orifice supé-
rieur qui est relié par (E) à une trompe
à eau. Les 2 trous ménagés dans le
couvercle sont tamponnés de coton,
lequel est soigneusement ligaturé au-
tour des tubes (A) (C') (E'). En (F) se
trouve un petit tube de bouillon devant
servir de contrôle; il n'a pas été utili-
sable dans la pratique.

Avant la stérilisation, on répartit sur
le fond de la cuve une couche de sable stérilisé une fois à l’autoclave et encore
humide. Sur le sable, on dispose au-dessous de (A) une boîte de Pétri sans
couvercle ; au-dessous de (C'), un autre récipient de verre de même diamètre.
mais 3 fois plus haut.

La figure (2) représente le petit dispositif utilisé pour distribuer journel-
lement la nourriture stérilisée. Un tube de verre de 3 centimètres de dia-
mètre, à fond rond, et d'environ 15 centimètres de long, contient un 2€ tube
de verre de 1,5 centimètre de diamètre dans sa moitié inférieure, de 0,7 cen-
timètre dans sa moitié supérieure, long de 15 centimètres, muni d'un filtre
de coton dans sa partie amincie, bouché au coton à son ouverture inférieure.
La partie amincie traverse le tampon de coton qui bouche le plus gros tube.

L'expérience comporte :

1° Des élèves asepliques élevés dans l'appareil avec aliments et eau stéri-
lisés.

20 Des élèves témoins non aseptiques élevés dans l'appareil avec aliments
eb eau stérilisés, mais souillés ensuite par les mains de l'expérimentateur
et par l'exposition à l'air.

Fred

112 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

30 Des élèves normaux mis en éleveuse d'aviculteur avec aliments et eau
non stérilisés.

Deux appareils, disposés comme il vient d'être dit, munis de leur récipient
{C) et détachés de (E), sont enveloppés de serviettes pour la stérilisation.
Ne disposant pas d’autoclave d'une dimension suffisante, ils sont stérilisés
à deux reprises en marmite de Koch à 99° pendant 4 heures de suite.

Dès qu'un des œufs placés dans l'incubateur artificiel ordinaire est « bêché »,
ce qui se produit du 19 au 20° jour d'incubation, nous prenons six œufs non
bèchés et que nous reconnaissons être bien vivants à l’aide du « mirage ».
Nous les transportons dans un petit laboratoire lavé et fermé depuis la veille ;
là, nous procédons sans perdre de temps à leur désinfection sous l'abri
d'une cage de balance vide et lavée au sublimé. La façon de procéder à
cetle désinfection, qui est celle employée par
Schottelius, consiste à prendre les œufs avec
des gants de caoutchouc stérilisés, à les
brosser pendant 35 secondes avec une solu-
tion de sublimé à 5 p. 1000 chauffée à 400,
puis à les rincer avec de l'eau salée à 10 p. 1000
stérilisée et également à 400. Chaque œuf,
aussitôt désinfecté, est placé dans une boîte
stérilisée, à culture sur pomme de terre.
Pendant qu'un aide entr'ouvre délicatement
le couvercle de l'appareil (dépouillé de sa
servietle), nous déposons 3 œufs dans chacun
des appareils. Ces 2 appareils sont placés
aussitôt dans un rhéostat réglé à 400, bien
aéré et dans lequel est entretenu un degré
d'humidité suffisant pour Féclosion; Île
tube (E') est mis en communication avec la
trompe à eau. L'air de la cuve aspiré en (E!)
est remplacé par l'air du rhéostat, qui se
filtre par son passage à travers la couche
d'ouate comprimée du couvercle.

Le lendemain de l'éclosion, on abaisse à
35 degrés la température du rhéostat et on
donne aux poussins leur 1re nourriture. Dans ce but, on remplit chaque
jour d'aliments la partie élargie du tube intérieur (fig. 2). Rebouché, celui-ci
est replacé dans le gros tube et le tout est porté à l'auloclave pendant
25 minutes à 115 degrés. Au moment où les aliments sortis de l’autoclave
sont encore tièdes, on adapte à la partie amincie du tube intérieur un tube
de caoutchouc à l’aide duquel on fera glisser, par une insufflation, les ali-
ments dans l'ouverture (A) de la cuve: ils tombent en (B).

Chaque jour également l'eau est distribuée en (D) par le tube (C') relié à
la pissette (C).

L'alimentation consiste pour tous les poussins de l'expérience en :

1er jour : rien.
2 jour : miettes de pain rassis, jaune d'œuf dur, le tout écrasé et mélangé.
3° jour : une partie du mélange précédent, une partie d'une pàätée spéciale

\

(maïs, pomme de terre, riz, orge, laitue).
4° et 5e jours : même nourriture mouillée au lail.
6e jours : pälée spéciale, millet, mouches.

Te, 8e, 9e, 10e, 11e, 12e jours : pâtée spéciale, œuf entier broyé, chicorée.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 113

La lumière du jour arrive jusqu'aux poussins par la porte vitrée du rhéostat.

C’est par des déjections prises sur le sable par l'ouverture (A) et ensemencées
en gélose Veillon que nous contrôlons la stérilité au cours de l'expérience.

Tous les 2 jours, la cuve des témoins est nettoyée, le sable lavé et séché.

Résultats. — Après divers échecs accidentels (éclosions
manquées, saute à 46° du rhéostat, contamination, arrêt de
la trompe à eau), nous avons obtenu une expérience dont tous
les œufs, bien vivants, étaient de la même origine (Forêt
Noire) et du même jour d’incubation.

Expérience du 22 juin 1907. — Fribourg.

(A) 3 œufs désinfectés : 2 poussins aseptiques (appareil, figure 1).
(B) 3 œufs désinfectés : 3 poussins témoins, non aseptiques (id.).
(C) 3 œufs non désinfectés : 3 poussins normaux (éleveuse d’aviculteur).

Un des élèves aseptiques (A) est moins développé et moins
alerte que son compagnon. Des témoins (B), l’un, malade,
meurt le 13° Jour, les deux autres sont vifs et bien portants.
Les élèves normaux (C) sont très différents, ils se montrent
très vigoureux, plus développés que les À et les B.

Les déjections, débris alimentaires et plumes des (A) sont
stériles le 9° jour, ceux des (B) et (C) contiennent d'innom-
brables bactéries aérobies et anaérobies avec grande prédomi-
nance de coli et de mesentericus.

Dès le 2° jour, un phénomène physique que nous n'avions
pas prévu, met dans une très fâcheuse situation les poussins
(A) et (B) élevés dans nos appareils. L'élévation de tempéra-
ture produite dans la petite cuve de verre par la chaleur cor-
porelle des animaux fait que la condensation de la vapeur
d'eau se produit sur la paroi interne de l'appareil; il en résulte
au fond de la cuve un mélange boueux formé de sable, d’ali-
ments et de déjections, sur lequel les poussins piétinent cons-
tamment; leurs plumes souillées, restent collées au corps, et
protègent mal contre le froid l'animal, qui frissonne sans cesse.

Pour la même cause, le coton de sûreté de l'extrémité supé-
rieure de E’ (aspiration d'air) s’humidifie, il est gagné peu à
peu par de l'aspergillus niger venu du tube non stérile auquel
cette extrémité est reliée. Devant ce danger imminent de conta-
mination, nous sommes obligé d'arrèter l'expérience le 12° jour.

8

114 ANNALES DE. L'INSTITUT PASTEUR

Les ensemencements des (A) faits en gélose Veillon aérobie
et anaérobie avec des plumes, des déjections intestinales, du
sable, de l’eau, des aliments, des coquilles d'œufs, du coton de
l'appareil sont stériles. Les frottis ne décèlent la présence d’au-
cun microbe. Par contre, ceux du contenu intestinal des témoins
dévoilent une flore bactérienne très abondante et très variée.

Poids respectifs.

(A) No 1 — 54 gr. 10 (B)'Nol= 5er 01» (C) No 4 = 70 gr.
No Scr. 50 No 6 ere 50 N° 2 — 64 gr.
No Mie" > Nos —"68 07:

Les poussins élevés stérilement n'ont nullement souffert par
la suite. Transportés en France avec 2 témoins, ils y ont fait
souche nombreuse.

La lecture des poids respectifs met en lumière un fait expé-
rimental différent de ceux observés jusqu'alors sur un vertébré;
il se trouve que les poussins stériles (A) et ceux non stériles (B)
élevés les uns et les autres dans les mêmes conditions phy-
siques ont augmenté au 12° jour, d'un poids moyen, sensible-

ment égal. Les stériles ont donc pu se développer sans l’aide

des microbes; les microbes n’ont donc été d'aucun secours
comme d'aucune gène pour les non stériles.

Cette constatation (dont des expériences postérieures devaient
nous donner par rapprochement avec elles toute la valeur)
était faite sur des sujets âgés de si peu de jours qu'elle ne fut
pour nous nullement probante: elle nous suggéra cependant la
pensée qu'un dispositif nouveau basé sur le principe de notre
petit appareil de fortune permettrait peut-être de mettre en
évidence une série de faits nouveaux concernant l'élevage des
vertébrés à l'abri des microbes.

Il

L'infériorité du poids et du développement des poussins
élevés dans nos deux petits appareils (A et B), par rapport aux
poussins normaux (C) n’était certainement pas due uniquement
à l'alimentation stérilisée. Les conditions d’existence, encore
défectueuses, que nous leur avions imposées devaient intervenir

so à

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 115

pour une large part. Pour réduire celle-ci au minimum, nous
avons cherché à établir dans la suite un appareil qui offrît aux
animaux en expérience de l’espace, de l'air pur sans cesse
renouvelé, de l'eau fraiche, une mère artificielle à 38°-40°, une
petite cour à température modérée, de la lumière en abon-
dance; l'appareil, comparable à un récipient à culture, devait
être facilement transportable et stérilisable à l’autoclave.

Grâce à M. P. Lequeux, qui parvint à surmonter de grandes
difficultés de construction, nous avons atteint notre but,
regrettant toutefois que les dimensions de l’appareil aient été
forcément restreintes par les exigences de la fabrication. Il
devient, en effet, passé le 40° jour d'élevage, une demeure
trop exiguë pour les poulets.

L'appareil. — La figure représente l'appareil au 1/13 de sa grandeur. Il
se compose de deux parties principales, un cylindre en verre et une chambre
cylindrique en cuivre se faisant suite; à la partie inférieure de l'un et de
l’autre est disposé un plateau métallique, à bords relevés de 1 centimètre,
servant de sol. Le cylindre de verre. de 35 centimètres de diamètre et de 80 cen-
timètres de longueur, représente la cour d'élevage, la chambre en cuivre de
25 centimètres de diamètre et de 25 centimètres de longueur sert de mère
artificielle. La cour et la mère communiquent par une large ouverture devant
laquelle est placé un rideau mobile, en laine, fendu en son milieu et muni
dans le haut d'une glace de mica rendant visible l’intérieur de la mère. Sur
la paroi postérieure de celle-ci est ménagée une ouverture pouvant laisser
passer un œuf. La paroi de la mère est tapissée jusqu'au 2/3 de sa hauteur
d'un épais carton d'amiante, ce qui permet à la chaleur de venir d'en haut,
comme sous la poule.

Le cylindre de verre est maintenu en place par 2 plaques de bronze sur
lesquelles ses bords rodés viennent s'appliquer hermétiquement par l'inter-
médiaire d'un joint de caoutchouc mou et de 4tirants. Sur une des plaques
de bronze s'ouvre à l'intérieur du cylindre et au-dessus de l’entrée de la
mère, un orifice de 3 centimètres de diamètre pour l'entrée de l'air; à cet orifice
est fixé extérieurement un bouchon de coton et intérieurement un bouchon
de caoutchouc percé d'un trou et muni d’un tube de verre s’ouvrant d'un
côté sur le coton, de l’autre au fond et en haut de la mère, Sur la plaque
opposée sont disposés : au-dessous du plateau, un orifice de vidange de
3 centimètres, au-dessus du plateau, une ouverture permettant l’introduc-
tion de la main, une autre le passage d'un tube de verre de 2 centimètres de
diamètre ou d'une pince. Chacune de ces ouvertures ainsi que celle de la
mère pour le passage des œufs est munie extérieurement d’un tube de cuivre
de diamètre correspondant et d'environ 10 centimètres de longueur; ce tube
permet le bouchage au coton, ainsi que pour un tube de culture. Un petit
grillage métallique mobilisable avec le bouchon de coton empêche les
poussins de venir becqueter le coton. Chacun de ces tubes est entouré
d'une chambre cylindrique faisant corps avec la paroi métallique : ces
chambres sont munies d'un couvercle avec vis de pression et joint en caout-

116 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

chouc permettant une fermeture hermétique. Gràce à ce dispositif de ferme-

ture et à celui du cylindre sur la plaque de bronze, l'appareil est étanche

à volonté. Sur la chambre de l'orifice placé au-dessus de la mère et sur
celle de l'ouverture pour le passage d’une pince est disposée une amorce

avec robinet: l'une sert à l'entrée, l'autre à la sortie de l'air filtré. Un cercle
en cuivre ayant un diamètre supérieur de 2 cm. au diamètre du cylindre de

verre est fixé par la plaque de bronze; il permet de bourrer entre le cylindre

et soi-même un cordon d'ouate destiné à empêcher la pénétration des mi-

crobes dans l'appareil au cas où l'étanchéité du joint serait accidentellement

imparfaite. À la plaque de bronze placée à droite sur la figure, est fixé un

serpentin en tube de cuivre nickelé d'un diamètre et d'une longueur déter-

minés, servant de réfrigérant à eau; il pénètre horizontalement dans le haut

du cylindre et en sort sans que sa cavité intérieure ne communique en aucun

point avec l'intérieur de l'appareil. Une gouttière de même métal fixée au-
dessous du serpentin est disposée de facon à recueillir les gouttes d’eau de

condensalion.

Sur le plateau, ou sol, de la cour est disposé, comme tout accessoire,
contre la plaque droite, un petit baquet en argent pourvu de godets latéraux,
d'un couvercle percé d'un trou et d'une vidange placée à 1 millimètre au-
dessous du bord des godets. Le sol de la mère forme un bourrelet de
1 centimètre de hauteur au niveau du rideau: il est percé de 2 trous munis
d'une amorce inférieure, l'un près du fond, l’autre près de la cour; il est
de plus recouvert d'une épaisse toile de lin, recouverte elle-même d'une
toile de nickel marquée d'une dépression médiane faite pour recevoir les
œufs. Un tube de caoutchouc partant de la gouttière et aboutissant au trou
du couvercle de l’abreuvoir y déverse l’eau de condensation: un autre tube
de caoutchouc passant sous le plateau conduit l'eau de la vidange de
l'abreuvoir à l'amorce antérieure du sol de la mère: l'eau, après avoir
imbibé la toile de lin gagne l’amorce postérieure, munie elle-même d'un
tube court par lequel l'écoulement se fait dans l'espace laissé libre entre le
plateau et le cylindre. Un fil de lin parcourant toutes ces petites canalisations
assure par capillarité l'écoulement de l'eau. Un thermomètre est suspendu
horizontalement à la hauteur des œufs dans la mère; ses degrés sont
visibles en dehors du rideau, dans la cour. Un autre thermomètre vertical
est fixé à la gouttière.

L'appareil est entièrement stérilisable à 120 degrés par la vapeur sous
pression.

Un réservoir cylindrique en forme de gaine s'engage autour de la mère :
il est muni d'un régulateur qui commande une petite rampe de gaz à flamme
blanche placée au-dessous du réservoir. Le réservoir et la rampe sont
recouverts librement d'une toile d'amiante.

L'appareil est placé sur une table à la hauteur et près de la fenêtre dans
le laboratoire d'expériences.

Une « avant-chambre » de toile caoutchoutée, stérilisable au sublimé, esL
destinée aux manipulations diverses, faites aseptiquement en dehors de tout
flambage. Elle mesure 60 centimètres de côté, elle est cubique. Une de ses
faces verticales est pourvue d'une ouverture circulaire à coulisse destinée à
recevoir et à enserrer la chambre précédant les ouvertures de l'appareil.
Elle est munie de deux fenêtres de mica, l’une sur la paroi supérieure, l'autre
sur la paroi faisant face à l'ouverture circulaire.

Installation et accessoires. — Le laboratoire d'expériences est transformé en
étuve à température constante, à l’aide d’un calorifère à air chaud, com-

a

ES SUR LA VIE SANS MICROBES

C

EXPÉRIEN

118 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

mandé par un régulateur à gaz et aménagé de telle sorte que sa prise d'air
éoit extérieure et que les gaz de combustion soient conduits au dehors. Le
laboratoire mesure 65 mètres cubes environ ; une grande fenêtre unique, large
de 2 mètres, est exposée à l'est. Porte et fenêtre sont garanties par un
double rideau mobile, leurs interstices sont calfeutrés. Toute circulation
d'air et partant des poussières peut donc être évitée.

Un thermomètre enregistreur est placé à côté de l'appareil.

Diverses canalisations en verre ou caoutchouc sont reliées à l'appareil.
L'une s’ouvrant à l'air extérieur, à près de 1 mètre de distance du bâtiment,
aboutit à l'amorce de gauche ; elle est destinée à déverser de l'air pur dans
l'intérieur de la mère ; sur cette canalisation sont branchés deux filtres dé:
coton faits avec des tubes de verres de 3 centimètres de diamètre et de
35 centimètres de long; en dérivation est mis un barboteur témoin, rempli
d’une solution de sublimé et protégé en outre par un troisième filtre d'air.
Deux tuyaux de plomb conduisent de l’eau, l’un du robinet de débit au réfri-
gérant condensateur, l’autre du réfrigérant condensateur à l’évier.

La mise au point de notre installation a été faite à l’aide d'essais répétés.
d'éclosions d'œufs et d’élevages non stériles.

Un incubateur électrique reçoit les œufs jusqu'à leur mise en place dans
l'appareil.

Les œufs fécondés (que nous nous procurons à grand'peine pendant
l'automne et l'hiver) proviennent de races pures, « Faverolles » ou « Hou-
dan » ; quand cela est possible, nous choisissons de préférence cette dernière
à cause de sa plus petite taille.

Technique expérimentale. — Elle comporte deux séries d’élevages, une
pendant laquelle nous avons donné à nos poussins une alimentation dis-
tribuée chaque jour, l’autre pour laquelle nous avons disposé à l'avance sur
le sol de la cour une quantité de nourriture suffisante pour toute la durée
présumée de l'élevage. Nous avons voulu éviter ainsi, dans cette 2e série,
la cause principale de contamination. De ce fait, les conditions de l'élevage
devenaient moins favorables. Nos petits élèves devaient en souffrir dans
une proportion qu'il nous serait facile de fixer par comparaison avec les
élevages de la 1re série. Dans celle-ci, l'alimentation n’a pas été d’un type
uniforme, nous la décrivons en relatant les élevages stériles. Stérilisée à
1150 degrés pendant 25 minutes dans un tube de verre de 2,5 centimètres,
muni d'un piston, elle est propulsée dans l'appareil à travers la petite
ouverture de gauche protégée par l'avant-chambre. Pour la 2e série, elle est
stérilisée en même temps que l'appareil. Elle consiste uniformément en un
mélange de graines diverses; chardon, sorgho, millet blanc, millet rouge,
chènevis, ortie, moha, alpiste, lin. Afin de faire éclater leur enveloppe et
les rendre plus sûrement stérilisables, elles sont d’abord immergées dans
l'eau bouillante et mise de la sorte à « gonfler » pendant deux heures.
:ssorées et mélangées à du sable lavé et encore humide, elles sont aussitôt
répandues sur le sol de la cour, juste avant la stérilisation.

En même temps, on place dans l'appareil, sur la gouttière et au-dessous
du serpentin, une boite de Petri, sans couvercle, contenant de la gélose
sucrée, el deux tubes ouverts, remplis de bouillon. Boîte et tubes serviront
de témoins d’aseptie ; la dessiccation de la gélose sera évitée au cours de
l'expérience, grâce aux gouttes d’eau de condensation tombant des spires
du serpentin, placées directement au-dessus de la boîte de Petri. Les deux
amorces, ouvertes, sont protégées par du coton; les couvercles des cham-
bres, fermés, sont enveloppés d’une serviette.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 119

Ces préparatifs terminés, on transporte, à l’aide d'un brancard, l'appareil
dans un grand stérilisateur Vaillard. La stérilisation se fait par la vapeur
à 118° pendant 1 h. 30 minutes.

Ensuite l'appareil est replacé dans le laboratoire d'expériences, et relié
aux diverses canalisations. Les écrous des couvercles et des tirants de
bronze sont resserrés; la trompe à eau à l'aide de laquelle se fait la circu-
lation d'air dans l'appareil, est mise en action, le réservoir cylindrique
est engagé autour de la mère, son régulateur est mis en marche. Le calori-
fère de la pièce est allumé plusieurs jours à l'avance.

Le régulateur du laboratoire, le régulateur et le réfrigérant de l'appareil
sont disposés de façon à obtenir, le jour de la mise en place des œufs (la
veille de l’éclosion) et les deux jours suivants, une température de 30° dans
le laboratoire, 40° dans la mère, 27° dans la cour. De cette manière, la tem-
pérature de la cour étant inférieure à celle du laboratoire, la condensation
de la vapeur d'eau ne se fait pas, comme dans notre appareil d'essai, sur
la paroi intérieure du cylindre de verre; l'asséchement de la nourriture et
du sable est Lerminé le 2° jour après la stérilisation.

Le débit d'air pur circulant dans l'appareil est abondant, près de 3 litres
par minute.

La mise en place des œufs est d'une pratique délicate :

A l'aide de sa coulisse, on fixe l'avant-chambre à la chambre de l’ouver-
ture des œufs, de façon à ce que le couvercle de bronze puisse s'ouvrir à
l'intérieur de l'avant-chambre. Suivant l'antique procédé de Lister pour ses
opérations chirurgicales, on pulvérise dans l’avant-chambre de la solution au
sublimé à 5 p. 1000. Ceci fait, on arrête le réfrigérant et on ferme le robinet
des amorces pour le passage de l'air, afin d'établir à l'intérieur de l'appareil
une légère élévation de température produisant une tension d'air suffisante
pour qu'il y ait refoulement, de l'intérieur à l'extérieur, au moment de l'ouver-
ture de la chambre aux œufs. Les œufs, au nombre de 3 ou de #, sont intro-
duits dans l'avant-chambre, stérilisés d’après le procédé de Schottelius (1),
procédé parfaitement inoffensif pour le poussin. Ils sont introduits successi-
vement, aussitôt après leur stérilisation, dans un verre de lampe réguliè-
rement cylindrique, bouché de coton à chaque extrémité et stérilisé. Le cou-
vercle de bronze est ouvert; on débarrasse rapidement de ses cotons le
verre de lampe tenu horizontalement en face de l'ouverture aux œufs; ayant
débouché celle-ci on y engage quelque peu le verre de lampe, puis on pousse
les œufs dans la mère à l'aide d’une baguette stérile introduite dans le verre
de lampe. Les œufs viennent se placer dans la dépression ménagée sur la
toile de nickel. Le bouchon de coton de l'ouverture, remis en place, on
ferme le couvercle de bronze. Cette technique, suivie pendant la 2 série des
élevages, est un peu différente dans la 1r° série, où les œufs désinfectés au
nombre de 4 ou de 5, sont transportés dans la mère à l’aide d’une pince
appropriée à cet usage.

Pendant les manipulations, les mains et les avant-bras recouverts de
gants de caoutchouc à longs crispins sont seuls introduits dans l'avant-

(1) Ce mode de désinfection (v. p.110) n'a aucun effet nuisible ni sur l'éclosion
ni sur le développement consécutif de l'animal, Il en est de même de la désin-
fection au KMnO‘ que nous avons tentée (brossage des œufs 35 minutes avec
la solution à 40 degrés : K Mn O‘1 g.; HCI, 0 g.5; eau distillée, 100 centimètres
cubes). Celle-ci ne présentant cependant aucun avantage, nous nous en
sommes tenu à la première.

120 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

chambre. Etant dans cette position, la fenêtre de mica placée sur la paroi
postérieure de l’avant-chambre se trouve près du visage et permet de voir
l'intérieur éclairé par la 2° fenêtre, située sur la paroi supérieure.

La mise en place des œufs terminée, condensateur et circulation d'air sont
remis en marche. L'œuf trouve dans la mère la chaleur (40°), le degré hygro-
métrique (environ 0,80) et l’air pur nécessaire à l'achèvement de son incu-
bation.

A partir de ce moment, une surveillance de jour et de nuit est préférable,
si l'on veut éviter qu’un incident imprévu ne vienne influencer la tempéra-
ture de la mère et n'empêche l’éclosion. Le lendemain de celle-ci, on abaisse
la température à 36° dans la mère, 24° dans la cour, 27° dans le laboratoire ;
8 jours après, on ramène la mère à environ 32, la cour à 220, le laboratoire
à 250.

Quelques heures à peine après l’éclosion, les poussins viennent sponta-
nément écarter le rideau qui les sépare de la cour. Dès le lendemain, ils
circulent dans la cour, picorent, vont à l’abreuvoir et regagnent d'eux-mêmes
la mère. Cependant pour que les élèves de l'appareil soient « bien venus »
il faut prendre en quelque sorte la place de la mère poule, leur rendre de
fréquentes visites, leur faire prendre de l'exercice en les faisant courir le
long du cylindre à la poursuite de la main. En dehors de ces obligations
« maternelles » les élevages du type de la 2° série ne demandent, pendant
toute leur durée, aucune intervention, mais simplement une surveillance
des débits d’eau et de gaz.

Chaque expérience comprend en dehors des élèves de l'appareil, des
éléves témoins et des élèves normaux. Tous proviennent de la même origine
et de la même couvée.

Les élèves témoins, en nombre inférieur à 5, sont élevés dans des conditions
aussi voisines que possible de celles de l'élevage stérile, sans cependant
être placés dans un appareil identique; les difficultés du nettoyage, indis-
pensable tous les 2 jours, rendaient la chose impossible. Après avoir élé
désinfectés au sublimé, les œufs des témoins sont mis à nouveau dans l'incu-
bateur électrique. Après l'éclosion, les poussins sont « séchés », puis placés
dans leur éleveuse, constituée par une mère chauffée électriquement, com-
muniquant par l'intermédiaire d’un rideau avec une petite cour, l'une et
l’autre de la dimension de celles de l'appareil à élevage stérile. Ils reçoivent
une nourriture identique à celle du poussin de l'appareil : pour la 1re série,
elle est renouvelée chaque jour, mise en tube de verre et stérilisée pendant
25 minutes à 1150; celle de la 2° série est préparée en quantité suffisante
pour toute la durée présumée de l'expérience, mélangée à du sable fin lavé,
stérilisée pendant 1 h. 30, asséchée, mise en provision à l'abri des poussières
et distribuée par fraction surabondante à chaque nettoyage. De l'eau dis-
tillée, fréquemment remplacée, est disposée dans un petit abreuvoir placé sur
le sol de la cour. La pièce où se trouvent les témoins est portée à l’aide
d'un radiateur à vapeur à une température voisine de celle de la cour de
l'appareil à élevage stérile; elle est largement aérée. Les poussins sont
visités chaque jour.

Les élèves normaux sont placés dans la même pièce que les élèves témoins.
La mère et la cour de l'éleveuse sont plus spacieuses. La nourriture, de
même nature, n’est pas mise dans l’eau bouillante ni stérilisée; elle est
remplacée chaque jour pour la 1re série, fréquemment pour la deuxième. De
l'eau de source remplace l’eau distillée. Les œufs n'ont pas été désinfectés.

Le contrôle, dans le cours de l’expérience, est fait à l’aide des tubes de

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 121

bouillon et de la gélose disposés, ouverts, dans l'appareil; nos contaminations
voulues ou accidentelles ont toujours été décelées en moins de quatre jours
par les bouillons ou la gélose ainsi que par l'odeur de l'air entrainé par la
trompe et venant de l'appareil ; cet air est inodore pendant l'asepsie. Tous
les cinq jours pendant l'élevage de la 1re série, des prises de déjections ou de
détritus sont faites avec une pince par le pelit orifice de droite, muni de
l'avant-chambre, et ensemencées en gélose Veillon aérobie et anaréobie.

Un contrôle général de l'asepsie est fait à la fin de l'expérience. Dans la
crainte de laisser passer quelque imperfection dans ce contrôle final, nous
avons demandé l'assistance de notre maître le professeur Metchnikoff el
de nos camarades Besredka et Salimbeni; voici la technique à laquelle nous
sous sommes arrêté :

Le jour fixé pour la fin de l'expérience, nous adaptons un barboteur de
chloroforme à l'entrée du filtre commandant le barboteur témoin d'entrée
d'air; celui-ci est mis en action et bientôt l'animal meurt chloroformé. A
l’aide d'un crochet stérile, on ramène au besoin le poulet près de la grande
ouverture de droite ; là il est pris avec une pince et mis en boite stérile.
On recueille en même temps des déjections, des débris d'œuf, des graines,
des plumes, de l'eau de l’abreuvoir, de l’ouate des bouchons ainsi que la
boîte de gélose elle-même. Cette opération se fait à l'abri de l’avant-chambre
comme toutes celles, du reste, nécessitant l'ouverture d'une des chambres.

Les animaux étant pesés, des ensemencements sont faits en bouillon, en
gélose inclinée, en gélose Veillon profonde, afin de déceler la présence des
aérobies et des anaérobies, avec le sang du cœur, avec le contenu de l'esto-
mac, du duodénum, de l'iléon, du cæcum, du rectum, avec les pattes, les
ailes, le bec et toutes déjections, eau et débris divers puisés dans l'appa-
reil. Le tout est laissé à l'étuve pendant cinq jours.

Comme garantie de la qualité du milieu de culture, on ouvre quelques-uns
des tubes stériles; ils doivent se contaminer rapidement.

Des préparations sont faites en même temps que les ensemencements.

L'état des organes est noté pendant l’autopsie.

On prend également le poids des témoins et celui des poussins de l'éle-
vage normal. Un des témoins est autopsié; le contenu de son tube digestif
est examiné sur préparation et ensemencé.

OBsEervarion. — Nous avons rencontré une fois à l'examen des préparations
de déchets provenant de l'appareil quelques rares formes microbiennes
prenant le Gram. Comme nos ensemencements étaient stériles, nous avons
pensé que ces bactéries pouvaient être vivantes, mais ne pas pousser
dans nos milieux. Il n'en était rien. Du genre Sporogenes Metchnikovii,
ces microbes se trouvaient, avant la stérilisation, dans le sable où nous
avons pu les isoler. Ils se sont très bien accommodés des milieux de cul-
tures du contrôle.

LES ÉLEVAGES sTÉRILES. — Sans entrer dans l’énumération des
écueils que nous avons rencontrés, il est aisé de comprendre
que le succès de l'expérience dépend de facteurs très divers
qu'il n’est pas facile de grouper ou d’écarter à sa guise ; comme
exemple, nous ne donnerons que l'influence défavorable, sur
les éclosions, de toute saison autre que le printemps.

122 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ceci explique pourquoi nos élevages stériles n'ont pas été
effectués en aussi grand nombre que nous l'eussions voulu.

(Première série). — Expérience du 12 mai 1908 (Œufs de
Faverolles).

(A). 3 œufs désinfectés : 1 poussin (appareil d'élevage stérile).
(B). 3 œufs désinfectés : 3 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 5 œufs non désinfectés : 3 poussins (éleveuse normale).

Un seul poussin sur 3 œufs est né dans l'appareil par suite
du manque accidentel d'humidité dans la « mère ».

L'alimentation journalière préparée avec moitié aliments
secs, moitié eau chaude est, comme il a été dit, stérilisée à
115 degrés pendant 25 minutes pour (A) et (B), non stérilisée
et servie tiède pour (C). Elle consiste en :

Le 13 et le 14 mai : rien.

Le 15 : œuf écrasé et sable.

Le 16, 17, 18 : œufs, farine spéciale Spralt’s, sable.

Le 19 : farine Spratt’s, sable, riz, lait, graines Spratt’s.

Le 20, 21, 22, 23 : farine Spratl’s, œufs.

Le 24, 25, 26, 27, 28 : farine et graines Spratt’'s, 8 mouches.

Le 29, 30, 31 mai, le 1°", 2 juin : farine Spratl’s, œufs, sable,
salade.

Le 3, à 9 heures du matin : œufs, sable.

Les prises de contrôle sont faites Les 4°, 10° et 15° jours. Les
séloses couchées et profondes restent stériles.

Le sacrifice est fait par le chloroforme à 10 heures du soir.
L'expérience n’est pas poussée plus avant par crainte de conta-
mination semblable à celles survenues du 12° au 18° jour dans
des expériences précédentes.

L'animal est très gai, très vigoureux pendant les 20 jours
de l'expérience. 17 paraît plus développé que les témoins (B). I
est également plus vorace. Les déchets alimentaires semblent
ètre rendus en plus grande abondance. Leur aspect est très
particulier, en ce sens que l'urine n'est jamais trouble et ne se
mélange pas aux fèces toujours bien formées.

A l’autopsie, les organes se montrent en bon état.

Sur les préparations du contenu intestinal, on ne voit aucune
bactérie. Elles décèlent par contre de très nombreux déchets

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 123

alimentaires. Le duodénum contient de nombreux noyaux
cellulaires. Ce fait que nous avons déjà observé chez un jeune
perroquet à alimentation normale, ne se reproduit pas avec la
même netteté dans les autopsies des expériences suivantes.

Les ensemencements sont stériles le 5° jour d’étuve et se
maintiennent stériles au laboratoire par la suite.

Poids respectifs au 20° jour.

CAEN 06e ST: (BAIN 1 —;85%07 (C)- N° 1 — 84 gr. (une patte
crochue).

N° 2 — (mort NP EST
le 24 mai). N° 3 — (mort le 20 mai).

Expérience du 21 juillet 1908 (Œufs de Faverolles).

(A). 5 œufs désinfectés : 2
4

poussins (appareil).
(B). 5 œufs désinfectés : 4 poussins (éleveuse des témoins).

(C). 5 œufs non désinfectés : : poussins (éleveuse normale).

La cause de la mauvaise éclosion dans l'appareil nous est
inconnue.

L'alimentation est préparée et distribuée de même que dans
l'expérience du 12 mai. Elle consiste en :

Le 21, 22 Juillet : rien.

Le 23, à 8 heures du soir : blanc et jaune d'œuf écrasés et
sable.

Le 24, 25, à 3 heures du soir : blanc et jaune d'œuf et farine
Spralls.

Le 26, à 9 heures du matin : farine Spratt’s, 8 mouches par
poussin, sable.

Le 27, à 1 heure du soir : farine Spratt’s, œuf entier broyé,
sable.

Le 28, à 1 heure du soir : farine et graines Spratt's, sable,
uz. lait.

Le 29, à 11 heures du soir : farine et graines Spratt’s, sable,
lait, graines.

Le 30, 31, à 4 heure du soir: farine Spratt’s, sable, 6 mouches
par poussin.

Le 1° août, le 2 : farine Spratt's, œuf entier broyé.

Le 3, 4 : farine Spratt’s, œuf entier broyé, salade.

Le 5° et 10° jour, des prises de matières sont faites dans l’ap-
pareil; elles sont stériles.

124 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Jusqu'au 15° jour, les 2 poussins (A) sont bien portants, très vifs,
et semblent au moins aussi développés que les témoins (B).
Comme les 2 (A) paraissent d’une taille identique nous en reli-
rons un de l'appareil (après engourdissement au chloroforme)
à l’aide d’une pince, par la grande ouverture de droite, avec
l'intention de laisser le 2° jusqu'au 30° jour. L'opération ne se
fait pas sans difliculté. L'animal est mis dans une cloche à
pomme de terre stérilisée contenant du chloroforme aseptique.
Il est pesé, autopsié, ensemencé ainsi que les déchets et matières
fécales. Les tubes de culture, gélose Veillon et bouillon avec
blanc d'œuf, restent stériles.

Par contre, 2 espèces microbiennes ont pénétré dans l'appa-
reil pendant nos manipulations; elles sont décelées le 9 août
par la gélose contrôle de l’appareil. L'élevage stérile ne com-
porte donc que les résultats du 15° jour.

L'autopsie du poussin stérile ne révèle rien d’anormal, ses
organes ne diffèrent pas de ceux du témoin sacrifié.

Poids respectifs au 15° jour.

CN EME SET: (B)MNAMRENG IST (CYAN GE ere
ND EP? NES lNer: N2E= "6er
N° 3 — 68 gr. N° 3 — 58 gr.
N° 4 — (retiré Nec er-
le 23 juillet).
(Deuxième série). — Expérience du 24 octobre 1909 (Œufs

de Faverolles).
(
(
(

). 3 œufs désinfectés : 1 poussin (appareil).
). 2 œufs désinfectés : 2 poussins (éleveuse des témoins).

A
B
C). 1 œuf non désinfecté : 1 poussin (éleveuse normale).

:)

L'eau de condensation n'ayant pas eu le temps de gagner le
sol de la mère, le manque d'humidité entrave l’éclosion dans
l'appareil.

Le poussin (A), assez chétif pendant les premiers jours,
devient rapidement vigoureux. Un des témoins (B) meurt le
5° Jour. L'appareil n’est pas ouvert pendant toute la durée de
l'expérience, soit 33 Jours.

L'animal est sacrifié au chloroforme. Tous lés ensemence-
ments sont asepliques.

Qc

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 12

Le 33° jour, Le poulet (A) est bien portant et présente cepen-
dant une légère raideur des jambes; (B) a les deux coudes
presque totalement ankylosés ; Le (C) est très bien portant, son
plumage est plus développé.

Poids respectifs au 33* jour.

CNE ES 0er: (B)ANME MISE (GC) ANA M5
N° 2 — (mort
le 10 décembre).

Expérience du 10 juin 1910. (Œufs de ? — pas noté.)

(A). 5 œufs désinfectés : 4 poussins (appareil).
(B). 5 œufs désinfectés : 5 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 4 œufs non désinfectés : 4 poussins (éleveuse normale).

Dès le 5° jour, 2 des animaux de l’appareil sont haletants,
tous les 4 semblent souffrir, ils mangent très peu; les témoins (B)
et les poussins (C) sont très vigoureux. Le 6° jour, un des (A)
meurt, un autre meurt le 8° jour: Les barboteurs témoins
démontrent que, pour une cause qui nous échappe, une très
faible quantité d'air passe dans l'appareil. Les 2 survivants sont
chétifs, visiblement éprouvés par le manque d'air; ils ont les
ailes pendantes, mais ils sont cependant assez vivaces; le 40° jour,
nous clôturons l'expérience.

L'autopsie nous montre que le foie, les poumons et le tube
digestif des (A) sont très anémiés. Les ensemencements ne
donnent aucune culture.

Poids respectifs au 40° jour.

(A). N° 1 = 50 gr. (B).. N° 1 — 180 gr. (C). N° 1 = 162 gr.
INDE PES or: NI MAR ST HO = ur
N° 3 — (mort le 16 mai). N° 3—=U25er NES or.
N° #4 — (mort le 18 mai). No UPS ere No — 130, sr.

N°5 — (mort le?):

Observation. — L'examen de l'appareil démonténous a permis
de constater que l’amorce de sortie (aspiration) d’air était en
partie obstruée.

Expérience du 5 mars 1911 (Œufs de Houdan).

(A). 3 œufs désinfectés : 2 poussins (appareil).
B). 5 œufs désinfectés : 5 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 3 œufs non désinfectés : 3 poussins (éleveuse normale).

y

126 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

De petits fragments de viande et de graisse sont ajoutés à
l'alimentation de (A) (B) (C) dans le but de la rendre plus
riche. Cette graisse, fondue pendant la stérilisation, fait prise
au refroidissement et forme à la surface des aliments une
croûte très dure et en partie inattaquable par les poulets. De
ce fait ceux de (A) et de (B) ont une grande difficulté à se
nourrir. Un des (B), malingre dès le début, meurt le 19° jour.
Les poulets (A\ sont bien portants pendant les trois premières
semaines. Le 25° jour, l’un d'eux est moins vif, ses pattes sont
anémiées, ses plumes par instants se hérissent, il porte l'aile
basse; il en est de même chez deux témoins (B). Le sacrifice
est fait le 9 avril, 35° Jour.

A l’autopsie, le n° 2 des poulets (A) et les n° 1 et 4 des (B)
sont très anémiés. Les cultures de contrôle sont stériles.

Poids respectifs au 35° jour.

CENT re (BANG E Te (CAN STTEEr
N°2 —"64%er. NP 69e re INDE OR en
NS Ode: NE MOrere
NA ion
N° 5 — (mort le 24 mars).

Expérience du 1T avril 1911 (œufs de Houdan).

L

A. 3 œufs désinfectés : 3 poussins (appareil).
(B
(C

4 œufs désinfectés : 4 poussins (éleveuse des témoins).
2 œufs non désinfectés : 2 poussins (éleveuse normale).

).
J.

Les poussins (A) sont très vivaces dès le lendemain de
l'éclosion. Le 5° jour, des graines projetées par les poussins
avec leurs pattes pénètrent dans l’abreuvoir et viennent se
placer entre le tube d'arrivée d’eau et la vidange. L'eau imbi-
bant les graines remonte par capillarité jusqu’à la vidange,
ce qui fait que les godets où les animaux viennent boire restent
vides. Un des poulets souffre dès le lendemain de la soif;
couché sur le flanc le surlendemain, il met 5 jours à mourir.
Les deux autres, plus alertes, saisissent en bondissant de rares
rares gouttes d’eau suspendues à la gouttière et se formant là
chaque jour. Ces quelques gouttes de boisson sont insuffisantes,
les animaux sans cesse assoiffés font des efforts inutiles pour se
procurer de l’eau à l’abreuvoir; ceci nous oblige à arrêter
l'expérience, le 22° jour.

—}

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 12

L'autopsie du n° 1 de (À) ne révèle rien d’anormal, celle du
n° 2 n'est pas faite. Les organes du n° 3 mort depuis 10 jours
sont presque exangues el fort diminués de volume, mais —
ainsi qu'il était facile de le prévoir par suite de l'absence
de bactéries — n'ont subi aucune altération; seule la paroi
du duodénum, de l'iléon et du cæcum est amincie, friable
et semble avoir été en partie digérée. Son contenu intes-
tinal ainsi que toutes les autres prises (habituelles) sont
stériles.

Poids respectifs au 22 jour.

CSN EST (BNP AEA 60e CN NEMR RE
NE 5er: Na2%— 5er. NE RS er
N° 3 — (mort le NO ESMUIE
29 avril). NE 62 er
Observation. — Les témoins n’ont été privés d’eau à aucun

moment de l'expérience.

Expérience du T juin 1911 (œufs de Houdan).

(A). 3 œufs désinfeclés : 2 poussins (appareil).
(B). 4 œufs désinfectés : 4 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 5 œufs non désinfectés : 5 poussins (éleveuse normale). -

Les poulets (A) paraissent identiques aux (B)et aux (C)
jusqu’à une période de temps où ils sont privés d’eau à trois
reprises différentes; la première pendant 1 jour, la deuxième
et la troisième pendant 2 jours. Ce manque d’eau provient de
l'élévation à 20 degrés de la température de l’eau du réfrigé-
rant rendant impossible la condensation. Les témoins (B) ne
reçoivent pas de boisson pendant le même laps de temps. Ces
privations répétées affaiblissent les (A) et les (B): ils man-
quent d’appétit et d’entrain. Ce n'est que le 3° jour après les
deux dernières journées d’assoiffement (17 juillet) qu'ils
retrouvent leur bonne allure. Ils restent bien portants jus-
qu’au 22 juillet, jour du sacrifice (45° Jour).

Les (A) et Les (B) présentent le même développement.

A l’autopsie, on trouve les organes des uns et des autres
assez fortement anémiés.

128 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Poids respeclifs au 45° jour.

(A): N° A=Méter (BANEMEY62 1er (CAN 0er
No ESEer ND — 57 gr. ES UE
NO Dre NS Te er
N° 4 — 57 gr. NORMES
NOUS Te
Observation. — La différence de poids très sensible entre

les (A) et les (B) d'une part, les (C) de l’autre est exceplion-
nelle. Nous croyons pouvoir l’attribuer à la privation de boisson
supportée par les (A) et les (B), seuls.

LES ÉLEVAGES EN CULTURES PURES. — Parmi les contaminations
accidentelles survenues en cours d'expérience, quelques-unes
ont été des cultures pures. De ce fait, ces expériences
sont entrées d’elles-mèmes dans le cadre des recherches que
nous comptons entreprendre ultérieurementsur l’action exercée
par divers microbes isolés ou symbiosés sur l’animal stérile.
Nous les relatons ici parce que les bactéries introduites étant
connues comme saprophytes ou comme faiblement patho-
gènes, ces expériences nous renseignent, dans une certaine
mesure, sur les effets que la vie sans microbes, plus ou moins
prolongée, peut produire sur la sensibilité (à l'infection) de
l'animal.

Elles ont été faites pendant la deuxième période de nos
expériences. Pour les deux premières, nous avons suivi la
technique de la première série (alimentation fréquemment
renouvelée); pour les autres, celle de la deuxième série (alimen-
tation donnée une fois pour toutes).

(Première série). — Æxpérience du 21 juillet 1908 (œufs de
Faverolles). — Symbiose de coli commune d’ En ren et de
mesentericus fuscus de Flügge.

La première DES de cette expérience se trouve décrite
dans l'expérience de la même date, des élevages stériles. La
contamination se fait le 15° jour pendant la prise d'un des
deux poussins aseptiques.

L'expérience se continue pendant 10 jours, jusqu'au 15 août.
L'alimentation donnée seulement tous les deux jours se com-
pose uniformément de farine Spatt's et de salade.

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 129

L'aspect du poulet de l'appareil n'a pas changé; il reste en
parfaite santé ainsi que les témoins. Tous les ensemencements
et la gélose de l'appareil donnent du mesentericus fuscus et un
coli ordinaire.

Poids respectifs au 30° jour.

(A). N° 1 — (sacrifié le (B). N° 1 — (sacrifié le (C). — ?

5 août). _5 août).
NEO gT: N° ? — 102 gr.
NOR EN EE

Expérience du 28 juin 1909 (œufs de Houdan). — Strepto-
coque de Grütenfeld alias entérocoque.
(A). 4 œufs désinfectès : 4 poussins (appareil).
A

(B). 4 œufs désinfectés : 4 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 5 œufs non désinfectés : 5 poussins (éleveuse normale).

La nourriture est donnée tous les deux jours; sa composi-
lion, qui n'a pas été notée chaque jour, se rapproche de celle
du 21 juillet 1908. Les prises de déchets et de fèces faites dans
l'appareil le 8° et le 14° jours sont aseptiques.

Sur la plaque de gélose, en partie desséchée, de très petites
colonies sont visibles seulement le 26 juillet (28 jours). La
troisième prise faite le 27° Jour, révèle la présence d’un petit
diplocoque prenant le Gram, identifié par la suite avec le
streptrocoque de Grütenfeld. En raison de l'abondance des
microbes contenus dans les déchets, nous estimons que la con-
tamination s’est produite peu de temps après la deuxième prise,
entre le 14° et le 22° jour.

Les animaux de l'appareil font preuve de la même turbu-
lence et du mème bon appétit pendant toute la durée de l’expé-
rience, du premier au dernier jour. Il en est de même des
témoins et des poussins normaux. Le sacrifice est fait le
30° jour. L'autopsie montre que les {A} sont en parfaite santé.
Elle n’est pas faite pour les (B). Tous les ensemencements et
toutes les préparations contiennent du Grôtenfeld en culture
pure.

Poids respectifs au 30° jour.

105

(A). N°4 — 8lgr. (B) N°1 gr. : (C). N°1 — 95 gr.
NME er N° 2 104 er Nu2 = Er.
NA Ne 000 Ne SM er.
NOME=E) TE N° 4 68 gr N°20 80 er.

N° 5 — (mort le ?).

y

130 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

(Deuxième série). — Expérience du 15 août 1910 (œufs de
Houdan). — Coli commune d’Escherich.

(A). 3 œufs désinfectés : 2 poussins (appareil).
(B). 3 œufs désinfectés : 3 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 4 œufs non désinfectés : 4 poussins (éleveuse normale).

Les poulets de l’appareil sont en très bon état jusqu'au
10° jour, où ils ont à souffrir pendant quelques heures d'une
mauvaise circulation d’air dans l'appareil. Cet accident n'a
pour eux aucune suite fâcheuse.

La contamination a lieu vers le 25° jour de la vie stérile.
L'aspect des colonies apparues sur la gélose contrôle et l'odeur
caractéristique de l'air entrainé par l’eau de la trompe nous
font penser à du coli. En deux jours les poulets ont changé
d’allure, ils ont presque constamment l'air souffreteux, et il
en est ainsi jusqu à la fin de l'expérience que nous poursui-
vons jusqu'au 60° jour. Leur développement semble s'être arrèté
le 27° jour. À l’autopsie, nous ne relevons aucune lésion orga-
nique, mais seulement de l’hypérémie de tout l'intestin, des
poumons et du foie; le sang du cœur ne contient pas de
microbes. Le contenu intestinal et toutes les prises mis en
milieu de culture donnent de très nombreuses colonies d'un
coli que nous identifions au coli commune d'Escherich.

Poids respeclifs au 60° jour.

CASERNENE 62 0 (B'ANME ME 0er (CAN EME DEEE
NET NES er: ND IG) Er
NAS M021er Nos Ecr
N° 4 — 1463 gr
Observation. — Ce coli que nous avons ingéré (mélangé à du

cacao cuit à l’eau) à la dose de 100 centimètres cubes de culture
de vingt-quatre heures en bouillon Martin n’a en rien modifié
notre bon état de santé. Donné aux mêmes doses à deux chiens
adultes pendant deux jours de suite, il n'a provoqué chez eux
aucun malaise. Il en a été de même chez les poulets (B) et (C)
dont les aliments ont élé arrosés de cultures du 69° au 80° jour.
Peut-êlre des poussins de 20 jours élevés normalement
en auralent-ils souffert; toujours est-il que ce coli reconnu
comme n'élant pas particulièrement pathogène, le fut très net-

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 131

tement pour nos élèves stériles, soit que leur organisme eût
acquis une sensibilité spéciale, — ce que nos élevages stériles
semblent contredire, — soit que son pouvoir pathogène fût
annihilé chez le poulet normal par la présence d’autres bactéries .
il est à remarquer que, dans notre expérience du 21 juillet 1908,
un coli en symbiose avec un mesentericus n’a ni entravé ni
favorisé le développement de poussins ayant été stériles.

Nous attirons l'attention sur les observations que nous
venons de relater, parce qu’elles sont en contradiction avec les
résultats que nous-même avons vu obtenir dans les expériences
du professeur Schottelius. Ce désaccord est-il dû à ce que notre
coli était très éloigné de la variété « gallinarum » employé de
préférence par ce savant? Le fait que nous signalons est-il une
exception? — II ne peut de toute manière infirmer à lui seul
la série des nombreuses observations de Schottelius.

Expérience du 24 janvier 1911 (œufs de Houdan). — Subtilis.

(A). 3 œufs désinfectés : 1 poussin (appareil).
(B). 3 œufs désinfectés : 3 poussins (éleveuse des témoins).
(C). 4 œufs non désinfectés : 3 poussins (éleveuse normale).

Deux œufs mal placés dans la mère de l'appareil n’éclosent pas.

Les 2 premiers jours après l’éclosion, le (A) n’est pas vigou-
reux. Il le devient rapidement ensuite et se porte très bien
jusqu'au 22 février, le 28° jour. Le 23 février, la grande ouver-
ture est ouverte afin de redresser, à l’aide d’une pince, la boîte
de gélose fortement inclinée. Malgré les précautions prises,
l'appareil est contaminé pendant l'opération, car 3 jours après
apparaissent sur la gélose de très petites colonies cristallines.
Le 20 février, l'air aspiré dans l'appareil dégage une odeur de
graines sures. Le 22, l'animal change brusquement d'aspect :
ses pattes sont presque ankylosées, ses ailes sont tombantes;
le lendemain, ses plumes se hérissent, il est mourant. Nous le
sacrifions le même jour. Les poumons sont rétractés, la plèvre
et le péritoine contiennent une sérosité transparente, filamen-
teuse. Les bronches et tout le tube digestif sont tapissés de
spores et de bâtonnets. Il en est de même des graines répan-
dues sur le sol.

132 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Tous les ensemencements donnent un aérobie strict, du sub-
üilis, nettement différencié d’un mesentericus.

Poids respeclifs au 28° jour.

(A). N°1—53gr. (B). N°1 — 61 gr. (C). N° 1 — 66 gr.
IN. er NA ere

N° 3 — (retiré le ?). No 3 — (retiré le ?).

Observation. — Le subtilis, reconnu comme un saprophyte

non pathogène, a eu manifestement sur le poussin stérile des
effets rapidement toxiques. Nous ne croyons pas cependant
devoir les attribuer à une sensibilité particulière du sujet,
mais aux produils de la décomposition opérée sur les graines
par les cultures, ou bien au véritable tapissage exceptionnel
fait par ces cultures dans la trachée et les grosses bronches de

l'animal.

TABLEAU RÉSUMÉ DES MOYENNES DES pois. — Ce tableau nous
montre que, parmi les élevages stériles, deux expériences
(12° jour et 35° jour) donnent pour les poussins de l'appareil
(A) comparés à leurs témoins (B) une différence de poids
insigniliante, l’une en moins, l'autre en plus. En raison des
écarts de poids parfois assez sensibles constatés normalement
entre les poussins d'une couvée, même de race pure, on peul
considérer ces 2 élevages comme équivalents.

Restent 3 élevages stériles (15° jour, 20° jour, 45° jour), d'un
poids nettement plus fort que celui des élevages témoins, et
3 autres (22° jour, 33° jour, 40° jour), d'un poids nettement
plus faible. L'état d'infériorité manifeste dans lequel ont été
mis nos élèves stériles dans 2 de ces derniers élevages (manque
d’eau pour celui de 22 jours, manque d’air pour celui de
40 jours), fait pencher la balance en faveur du poids des élèves
stériles.

D’après le tableau, on voit que ce « meilleur poids » ne se
rapporte pas seulement à des poussins d'un même âge donné,
mais qu'il se retrouve à diverses périodes de leur croissance,
15°, 20°, 35°, 45° jour.

133

»

EXPERIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES

(9) enb — (y
(9) onb + (
(9) onb

(9) nb — (1
(2) enb — («
(9) enb — («
(9) onb — («

15 9) LE (4) 19 (4) onb — (8 ‘418 ge) ‘ quasqd (y) ‘T 09 ne (‘1978 ‘T ça) * :
a8 ç ) LE (g) 10 (4) onb — (« 48 01) - quosad (y) ‘0€ ne (agi T 02) * *
18 1) À (g) v | (g) onb + (g &) FE quosod (y) ‘0€ ne (‘aggs *l gr) : :
è (g) 1 (g)onb—(ç'ax8 8) = quosqd (y) ‘l ça ne (agis ( y)
"Saind Ssounyino Ua Sa0DG2)4
Tosedde,r suep are p onbuext (4

‘18 Le) FE (g) 30 (4) onb + (c'a8 1 ) 88 quosad (y) :[ .gy ne : ouos 3 odAJ
18 17) e (g) 29 (g) onb — («418 98 Et juosad (v) T 07 ne : ou9os .z 9d4J
‘18 £a) LE (4) 99 (4) onb + (c'axsg ) Le quesad (y) ‘[ .cg ne : ons .z 9dA : :
15 LI) ; (a, 10 (4) onb — («48 Gr) 3 quosad (y) "leg ne : ou9os .5 od4)
15 9) s (4)-39 (4) onb — (z'a88 ) ; quosad (y) ‘l .23 ne : ou9s .3 od
48 G JE (ag) 39 (g) onb + («48 Ja) : quosad (y) ‘T .03 ne : ou9s «7 od{
‘48 +) “ (4) 19 (g) onb + (ge as ç) . quesad (y) ‘T .cy ne : ons 7 od4j
13 @] LE (4) 9 (q) anb — {« 418% ) . quosad (+) ‘l'oar ne : a119s 11 dj

"SOJI19}S Sobnaa)

‘SOIOd A SANNAAON S4Q A4ILVHVANON NVATAVI

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134 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La comparaison faite entre les témoins et les élèves nor-
maux établit que l'appareil à élevages stériles permet de
réaliser de très bonnes conditions d'expérience (type de la
1" série); en outre, elle nous permet d'apprécier dans quelle
proportion sensible une de ces conditions expérimentales est
modifiée défavorablement— sans entraver l'expérience, comme
on le voit — par la suppression de l'alimentation journalière
et par sa stérilisation en bloc à 118 degrés pendant 1 h. 30
(type de la 2° série).

A en juger par la moyenne de poids des élevages en cultures
pures, la présence du streptocoque de Grülenfeld semblerait
influencer favorablement le développement du poussin stérile ;
celle du coli en symbiose avec le mesentericus fuscus serait
plutôt défavorable ; le coli seul gènerait considérablement ce
développement qui serait enfin rendu impossible par la pré-
sence d'abondantes cultures de subtilis.

OBSERVATIONS GÉNÉRALES FAITES EN COURS D EXPÉRIENCE. — À Côté
des expériences que nous venons de relater ici, d’autres, que
nous n'avons pas mentionnées, ont été interrompues acciden-
tellement. Ces dernières, nombreuses, nous ont permis sou-
vent, tout aussi bien que les premières, d'observer attentive-
ment la vie du poulet élevé sans microbe. Elle nous a paru en
tous points, sauf en un seul, semblable à celle des témoins ; et
il en est ainsi à tous les stades de leur développement observés
par nous. La seule restriction porte sur la fonction digestive;
l'appétit des stériles est plus développé que celui des témoins,
ses déjections sont plus fréquentes et plus abondantes. Chez les
uns et les autres, même turbulence, même attitude ; même déve-
loppement des pattes, des ongles, du bec et des plumes; mème
état organique, révélée par l’autopsie. Si le poussin stérile
paraît à un moment plus volumineux, c'est, semble-t-il, parce
que n'ayant jamais la peau irritée par des poussières septiques,
il se gratte moins souvent et conserve ainsi son duvet plus
longtemps. Contrairement à un fait signalé par Schottelius, nous
n'avons pas vu, dans les cas d’éclosion normale et en dehors
d'un mauvais fonctionnement accidentel de l'appareil, d’ani-
maux cachectiques ni dès le 10° jour ni plus tard. Nous avons
cependant constaté, à partir du 32° jour chez les stériles, et

:

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 435

chez leurs témoins, de race Faverolles, de la raideur articulaire
des pattes, due vraisemblablement à l'exiguité de l'appareil
et de l’éleveuse des témoins.

Nous ne voulons pas dire cependant que tous nos poulets
stériles soient des animaux extrêmement robustes; ils sont
simplement au moins aussi robustes que leurs témoins, ce qui
seul importe dans les déductions à tirer de l'expérience. En
effet, si les stériles et les témoins de la 1" série étaient aussi
développés que les élèves normaux, — ce qui confirme l'obser-
vation de Belonowsky (1) sur l'alimentation stérilisée donnée
dans des conditions favorables, — il n’en est plus de même
dans la 2° série où élèves stériles et témoins sont, malgré leur
allure souvent très vivace, des animaux de taille plus petite.
aux plumes moins poussées que chez les normaux, et reconnus
à l’autopsie comme étant plus ou moins anémiés.

Le poulet stérile offre une très grande résistance à la mort
par le froid, l'humidité, la soif, la faim. Chacun sait que rien
n’est fragile comme la vie d’un poussin ordinaire; elle est à la
merci d’une ondée, d’une privation; les poussins stériles de
notre 1" expérience ont pu rester impunément pendant 12 jours,
les plumes constamment mouillées et collées au corps ; d’autres,
dont un signalé dans notre expérience du 17-3-11, ont mis plus
de 5 jours à mourir de faim, de soif et de froid. C'est là une
preuve du rôle actif de l'infection s’attaquant au poulet normal
dont la résistance vient d'être amoindrie par une cause phy-
sique.

Tous Les animaux rendus à la vie normale, après une exis-
tence aseptique plus ou moins longue, sont devenus des adultes
bien constitués.

CONLUSIONS.

La vie sans microbe est possible pour un vertébré — le
poulet — pourvu normalement d'une riche flore microbienne.

Cette vie aseptique n’entratne par elle-méme aucune déchéance
de l'organisme.

Telles sont les conclusions qui se dégagent de la lecture du

(1) Centralbl. f. Bakter., I., Origin., 1907, t. XLIV, p. 322.

136 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tableau de la moyenne des poids en même temps que des obser-
vations générales recueillies en cours d'expérience.

Nos sujets stériles ont en effet dépassé victorieusement les
premières semaines critiques pendant lesquelles on supposail
que les sécrétions digestives du jeune animal n'étaient pas
suffisantes pour qu'il pût se passer du secours des bactéries;
ceux de 15 jours sont aussi «bien venus » que ceux de 6 semaines
et réciproquement.

En nous donnant la preuve que leurs fonctions digestives
pouvaient pourvoir à leur développement sans l’aide micro-
bienne, ils ont confirmé du même coup que cette aide était
effective chez le poulet ordinaire, ce que l'expérience n'avait
pas encore élabli; ne voyons-nous pas en effet que les diges-
tions du poulet aseptique sont plus chargées en déchets ali-
mentaires et que ce poulet supplée de lui-même à cette
digestion moins complète en ingérant une quantité plus grande
d'aliments? On peut donc dire que la flore intestinale, wtilisée
par l'animal, ne lui est pas endispensable.

La vie aseptique, plus ou moins prolongée, n'a fait subir
aucune déchéance au sujet en expérience puisqu'il est au moins
aussi développé que ses témoins et que, rendu à l'infection
microbiennenormale, il ne soullre pasde la présence des innom-
brables bactéries, saprophytes et pathogènes, qui, en moins de
24 heures, ont envahi son tube digestif. Il grandit, devient
adulte, fait souche normale. Ce fait expérimental semble
démontrer que la préparation à la lutte contre ces microbes
n'est pas le résultat d’une acquisition individuelle, mais est
bien héréditaire.

Les états cachectiques provoqués par le coli et Le subtilis,
dans les élevages en cultures pures, semblent mettre hors de
cause une hypersensibilité du poussin stérile et faire entrer en
jeu une action parliculière exercée sur l'organisme par une
bactérie mise à l'écart de toute autre influence microbienne.

Les diverses constatations qui précèdent, faites sur le poulet,
se rapportent-elles à une loi générale s'étendant à tout Le règne
animal?

Le fait, déjà établi par l'expérience de laboratoire et l’ob-
servalion puisée dans la nature pour les invertébrés, paraît
se confirmer pour les vertébrés en général depuis que, pour-

EXPÉRIENCES SUR LA VIE SANS MICROBES 137

suivant la série de ses recherches, Metchnikoff, en collabo-
ration avec quatre de ses élèves (1), a fait connaîre la vie nor-
male presque aseplique d’un petit mammifère, le Péteropus
medius, communément appelé la roussette.

De mème que nos poulets stériles, la roussette rejette en
excès des parcelles alimentaires non digérées et une nourriture
plus abondante lui est nécessaire. Son étude a permis d’éclaircir
plusieurs questions très discutées, telles que celle de la trans-
formation de la cellulose par l'organisme et celle de l’origine
microbienne des poisons phénoliques urinaires.

Bien d’autres problèmes concernant la digestion et l'immu-
nité deviendront solubles à leur tour quand l'expérience de
laboratoire pourra utiliser sans grande difficulté comme ani-
maux aseptiques de petits mammifères tels que le chat, le
cobaye, le rat ou le lapin.

Ainsi, le principe d'adaptation indissoluble entre l'animal et
ses bactéries, principe qui semblait s'imposer à nous comme
une loi biologique bien établie, n’est pas d'accord celte fois
avec l'expérience. Nous venons de voir que les microbes — à
l'aide desquels la matière vivante se perpétue dans la nature
— ne sont pas indispensables à certains vertébrés en eux; el
cette constatation, jointe à ce que nous savons de la roussette,
peut déjà nous guider dans la conduite que nous avons à tenir
vis-à-vis du monde microbien peuplant notre tube digestif.

(4) Mercanikorr, WE&iNBERG, Pozersxtr, Disraso et BErTHELOT, Roussettes et
microbes, Annales de l'Institut Pasteur, t. XXIIT, décembre 1909.

LA DESTRUCTION INTRASPLÉNIQUE
ET INTRAHÉPATIQUE DE CORPUSCULES ROUGES
DU SANG

DANS LES CONDITIONS NORMALES ET PATHOLOGIQUES

par le Dr I.-I. LINTVAREV

Prosecteur à l'hôpital Alexandre. à Saratov.

(Suite et fin.)

Dans toutes les affections que nous venons de passer en
revue, maladie de Banti, cirrhoses du foie, splénomégalie de
Gaucher, on trouve une anémie susceptible d'expliquer la
pathogénie de ces états morbides. Ce sont des anémies primi-
tives par suractivité des érythrophages et qui se traduisent par
des altérations qualitatives et quantitatives plus ou moins
accusées du sang, ne différant des anémies dites pernicieuses
que par une moindre intensité des modifications dans la com-
position sanguine.

Dans l’anémie pernicieuse, comme dans les maladies préci-
tées (anémie de Banti, cirrhose du foie et splénomégalie), les
modifications qualitatives de la composition du sang sont
essentiellement les mêmes : apparition de formes jeunes,
incomplètement développées d’érythrocytes (Jugendformen des
auteurs allemands), telles que polychromatophiles (Grawitz,
loc. cit., p. 120), éléments nucléés (érythroblastes), mégalo-
cytes et microcytes (Hayem, Eichhorst, Eisenlohr) (*). En ce
qui concerne les poikilocytes, reste encore ouverte la question
de savoir s’il faut les compter pour des formes dégénératives
ou s’ils peuvent être rangés aussi dans le groupe des éléments
irrégulièrement développés lors d'une néoformation forcée
d'érythrocytes. En tout cas, il n'existe pas dans la littérature
médicale de preuves concluantes de ce que les poikilocytes
soient des formes dégénérées.

(*) Voy. GRawiTz, loc. cit.

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 139

D'ailleurs, leur nombre est généralement des plus restreints
dans les cirrhoses du foie, dans la maladie de Banti et dans
la splénomégalie, et, d'autre part, les formes granulées ne se
rencontrent que dans les anémies pernicieuses Les plus graves.

Cela étant établi, les modifications du sang dans l’anémie
pernicieuse ne se distinguent de celles des trois affections sus-
mentionnées que par le degré d’altération des globules rouges
et surtout par le nombre de ces globules et par leur teneur en
hémoglobine.

Mais, dans l’anémie pernicieuse, l'augmentation du volume
de la rate est, comme on sait, chose presque constante; 1l y à
une splénomégalie qui, d’après les auteurs, proviendrait d’une
hyperplasie de tous les éléments figurés du tissu splénique. Je
n'ai pu trouver nulle part d'étude plus complète de la rate
dans cette forme d'anémie. Cependant, dans quelques cas
d'anémie pernicieuse dont il m'a été donné de faire l’autopsie,
la rate était très augmentée de volume. Les travaux de Heinz (18)
et nos recherches personnelles sur les altérations du tissu splé-
nique dans l'anémie pernicieuse provoquée par des substances
toxiques, permettent de supposer que, dans l'anémie perni-
cieuse chez l’homme, il y a dans la rate, par l'effet d'une
substance toxique, formation excessive d’érythrophages qui
absorbent en masse les globules rouges du sang.

Les recueils scientifiques sont également pauvres en ren-
seignements sur les modifications du foie dans les anémies
pernicieuses. On sait seulement — ce qui nous importe sur-
tout — par les travaux de Quincke que, dans toute anémie per-
nicieuse plastique, la teneur du foie en fer est très augmentée.
Ainsi, chez l’homme sain, la quantité de ce métal pour
100 grammes de substance hépatique desséchée est de 100 à
200 milligrammes, tandis que dans l’anémie pernicieuse elle
atteint 1.900 milligrammes. Cette énorme teneur du foie en fer
est l'indice d'une destruction considérable de globules rouges.
Pareille destruction ne se produit pas, sans doute, dans le
liquide sanguin lui-même, mais elle résulte, comme nous en
sommes convaincu, d'une absorption excessive d'éléments
figurés du sang par les érythrophages de la rate et de leur des-
truction dans le foie. Nous en avons décrit le mécanisme.

La génération des globules rouges destinés à remplacer

140 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ceux qui ont été détruits se fait, comme dans toute anémie,
au sein de la moelle osseuse qui est toujours rouge dans
l’anémie pernicieuse. L'’anémie dite aplasique fait seule excep-
lion à cette règle, mais en pareille occurence, alors qu'il s’agit,
par exemple, d’un néoplasme de la moelle osseuse, l’anémie
est due à l’abolissement de la fonction hématopoiétique de cet
organe. Et il faut remarquer que, dans ce cas, il n'y a pas de
sidérose du foie (Leube, 19). Les altérations du tube gastro-
intestinal dans l’anémie pernicieuse, comme, d’ailleurs, dans
toutes les maladies précitées, sont constantes et se traduisent
par des phénomènes plus ou moins accusés de gastro-entérite.

Nous pouvons donc affirmer que, dans la maladie de Banti, de
même que dans les cirrhoses du foie, dans la splénomégalie et
dans l’anémie pernicieuse, on trouve constamment les altéra-
tions morbides suivantes :

1° Anémie qualitative et quantitative ;

2° Augmentation du volume de la rate:

3° Alltérations du foie: sidérose ou cirrhose ;

4° Lésions atrophiques du tube gastro-intestinal:

5° Moelle osseuse rouge.

Toutes les affections ci-dessus énumérées sont à classer dans
un même groupe d'anémies primitives. Les particularités cli-
niques de chacune de ces formes résultent de la prédominance
d’un ou plusieurs des signes que nous avons indiqués et qui
fixent surtout l'attention du clinicien.

Lorsque prédominent les altérations graves du sang, on
parle d’anémie pernicieuse, attribuant aux autres symptômes
le rôle de phénomènes concomitants. Est-on surtout frappé
par les symptômes liés à l'induration du foie, on dit «cirrhose ».
En présence d'une hypertrophie de la rate, dont les causes ne
sont pas apparentes, on dit « splénomégalie ». Enfin, on
diagnostique la maladie de Banti lorsqu'on a affaire au syn-
drome; anémie, splénomégalie et cirrhose du foie.

Or, la différence entre ces trois formes morbides n’est que
qualitalive.

L'érythrémie ou polyglobulie de Vaquez, accompagnée d'aug-
mentation du nombre de globules rouges, doit aussi être
classée dans ce groupe de maladies du sang, si étrange que
cela puisse paraître.

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 141

On sait que la polyglobulie va de pair avec la splénomé-
galie, l'augmentation du volume du foie et l'hyperplasie de la
moelle osseuse. Au point de vue anatomo-pathologique, cette
maladie — dont nous avons eu l'occasion d'étudier elinique-
ment deux cas — est encore peu ou point connue, mais on
peut supposer que l'augmentation du volume de la rate y est
due à une destruction excessive de globules rouges, tout autre
cause de splénomégalie faisant ici défaut. Comme le mon-
trèrent mes recherches sur la maladie de Banti, ainsi que les
faits constatés par Donitz (20), on peut admettre, avec grande
probabilité, une destruction intrasplénique massive d'érythro-
cytes dans l'érythrémie également. En effet, ce processus se
manifeste 1c1 (comme c'était le cas dans mon observation) par
la présence de formes Jeunes de globules rouges dans le sang
et d’urobiline dans le liquide urinaire. Dès lors, il est facile
d'expliquer l'augmentation du volume du foie où se détruisent
précisément les cellules venues de la rate et ayant happé des
globules rouges.

Mais comme on à affaire ici non à une diminution, mais, au
contraire, à une augmentation du nombre de globules rouges,
il faut admettre que l'élaboration de ces éléments par les
organes hématopoiétiques est également augmentée. En effet,
la moelle osseuse est rouge dans la polyglobulie. Or, pour
avoir une augmentation du nombre de globules rouges dans
un volume donné de sang, pendant que, d'un autre côté, les
érythrocytes sont détruits en masse, leur formation doit être
singulièrement activée, et, sil n'y a pas équilibre entre ces
deux processus contraires, si la formation prédomine sur la
destruction, 11 y aura nécessairement polycytémie.

Il existe actuellement deux explications différentes de cet
état morbide. D'après certains auteurs, l'augmentation du
nombre de globules rouges est l'effet de leur surproduction,
leur destruction demeurant normale. Pour d’autres, l'éry-
thrémie pourrait être due à une destruction ralentie d'érythro-
cytes formés en quantité normale. En ce qui nous concerne,
nous ne pouvons accepter ni l’une ni l’autre de ces inter-
prétalions. Elles ne nous donnent pas, en effet, la cause de
la splénomégalie qui est, pourtant, constante dans cette ma-
ladie.

142 | ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ii faut nous arrêter encore sur une affection particulière,
appelée pseudo-leucémie.

Nos notions sur cette maladie sont si vagues que Virchow
était porté à n'y voir qu'un « fouilli » (Mischmasch). Les signes
cardinaux de pseudo-leucémie ou maladie de Hodgkin sont :
anémie quantitative et, en partie, qualitative; splénomégalie :
tuméfaction des ganglions lymphatiques périphériques et
hyperplasie de la moelle osseuse. Ces symptômes s’accom-
pagnent d'élévalion du degré thermique, laquelle est irrégulière,
comme dans toute anémie primitive. La différence essentielle
de cette maladie d'avec les états anémiques dont il a été ques-
tion, consiste en la présence de ganglions lymphatiques tuméfiés.
La littérature médicale ne renseigne pas sur la question de
savoir si les ganglions sont augmentés dans l’anémie perni-
cieuse et dans la cirrhose du foie. Cependant, comme il a été
dit, Schlagenhaufer a constaté, dans les ganglions Iympha-
tiques hyperplasiés de splénomégaliques, la présence de grosses
cellules avec vacuolisation en rayons de miel. Elles sont si
caractéristiques et ressemblent tant à nos érythrophages que
nous ne doutons pas un instant de leur identité avec ces der-
niers. Chacun peut facilement s'en convaincre en jetant un
coup d'œil sur le dessein du professeur Schlagenhaufer (fig. 8).

Nous retrouvons donc dans les ganglions lymphatiques des
splénomégaliques le même processus d'absorption de globules
rouges par les érythrophages, et il est facile d'expliquer ce phé-
nomène, si l’on admet que la cause qui incite les érythro-
phages à se multiplier dans la rate, agit de même facon sur les
éléments des ganglions lymphatiques où les érythrophages se
forment également. Cela n’a rien d'invraisemblable, puisque
les ganglions lymphatiques ont, dans leur structure, tant d’ana-
logie avec la rate, notamment avec ses corpuscules de Mal-
pighi. Si donc les éléments cellulaires des corpuscules de Mal-
pighi engendrent des érythrophages sous l'influence d’un poison
circulant dans le sang (voir plus haut), pourquoi les gan-
glions Ilymphatiques ne le feraient-ils pas aussi dans des con-
ditions analogues?

Dans notre observation de maladie de Banti, nous avons
noté une hyperplasie des plus manifestes des ganglions mésen-
tériques. Suivant toute probabilité, nous y eussions trouvé des

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 143

érythrophages, mais, en faisant l’autopsie, nous ne pensâmes
pas à conserver ces glandes pour l'examen microscopique, ce
que nous regrettons beaucoup.

Cependant, il fault en convenir, si dans la littérature médi-
cale 1l n'est pas fait mention de ces phénomènes, ni dans
l'anémie pernicieuse, ni dans la cirrhose du foie, il ne s’en-
suit pas que ces altérations ne puissent exister en réalité.
Quant à moi, Je suis enclin à penser que les altérations
décrites par le professeur Schlagenhaufer dans les splénomé-
galies doivent exister également dans les anémies primitives.

Par contre, nous savons, par les travaux de Sternberg (20),
que les ganglions pseudo-leucémiques contiennent nombre de
cellules sur generis, mononucléées ou polynucléées, avec proto-
plasma abondant, à noyau volumineux, rond et polymorphe,
se colorant facilement. Ces cellules rappellent celles des néo-
plasmes. On trouve des formes de transition entre elles et les
cellules endothéliales des capillaires. Renferment-elles des
globules rouges ou des « vacuoles en rayons de miel »? L'au-
teur ne nous le dit pas.

D'après les recherches les plus récentes (V. Bleichræder,
loc. cit., p. #76), on admet, dans la pseudo-leucémie, comme
substratum anatomique de cette affection, trois sortes de modi-
lications des ganglions lymphatiques, se distinguant entre
elles histologiquement et étiologiquement, à savoir :

1° Simple hyperplasie : Iymphome simple;

2° Hyperplasie tuberculeuse : lymphome tuberculeux, et

3° Hyperplasie de la syphilis tertiaire : lymphome gom-
meux.

Sternberg a trouvé ces cellules dans les Ilymphomes tubercu-
leux, Be rh (22) dans les Iymphomes syphilitiques. Ils
les décrivent comme offrant une grande ressemblance avec
les cellules endothéliales et épithéliales. Elles sont, d'après
Sternberg, volumineuses, à protoplasma finement granulé,
mais cet auteur re parle pas de leurs inclusions. On pourra les
trouver, très probablement, dans les hyperplasies simples (si
elles existent) des ganglions pseudo-leucémiques, et il est
permis de supposer que ces cellules sont pareilles à celles que
Schlagenhaufer constata dans les ganglions lymphatiques de
sujets atteints de splénomégalie.

14% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Dans la plupart des cas de pseudo-leucémie, la rate est
crosse, de consistance moyenne, et elle présente des signes
non douteux d'hyperplasie : augmentation du nombre de
corpuscules de Malpighi et prolifération des éléments de la
pulpe. D'après Bleichræder (/oc. cit., p. #47 et 448), la rate
offre des altérations similaires dans la cirrhose du foie, dans
l'anémie pernicieuse et autres maladies du sang où cet organe
accuse une augmentation de la teneur en fer, indice de des-
truction excessive des globules rouges. On y trouve de grosses
cellules particulières (formes irritatives, Beinzungsformen de
Turek) et une prolifération, d'intensité variable, du stroma
conjonclif. D'après Ziegler (/oc. cit., p. 129 à 131), on observe,
dans la pseudo-leucémie, une splénomégalie d’origine tuber-
culeuse. Parfois, elle est accompagnée d'une dégénérescence
caséeuse peu apparente, caractérisée par la formation de
nodules à grosses cellules, sorte de prolifération d'éléments
polynucléés. En admettant, dit l’auteur, que cette splénomé-
galie tuberculeuse fût liée à des lésions analogues des gan-
glions lymphatiques, on pourrait expliquer le tableau clinique
et anatomique de la pseudo-leucémie.

Il est donc permis de supposer — el nous pâmes nous en
convaincre par l'examen de rates de tuberculeux — que
l'anémie quantitative des pseudo-leucémiques est produite
également par l'augmentation du nombre des érythrophages
dans la rate.

Comme le fait a déjà été signalé, la pseudo-leucémie accom-
pagne, dans la plupart des cas, la tuberculose que C. Stern-
berg (loc. cit.) a constaté quinze fois sur dix-huit observations
de pseudo-leucémiques. D'autres ont souvent trouvé des
bacilles tuberculeux dans les ganglions de ces malades, soit à
l'examen purement bactérioscopique (Askanazy, 23) soit, le
plus souvent, après inoculations aux animaux du sue de ces
ganglions, alors même que ceux-ci ne présentaient pas de
lésions microscopiques propres au processus tuberculeux
(Fischer, 24, et Sabrazès, 15).

La présence, dans les ganglions pseudo-leucémiques, d'éry-
throphages dont les dimensions, la forme et le protoplasma
varient suivant leurs inclusions, pourrait peut-être, fournir
au professeur Ziegler lexplication de l'origine des « lym-

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 145

phomes, polymorpho-cellulaires », forme particulière de lésions
tuberculeuses dans les ganglions pseudo-leucémiques (/oc.
cit., p. 149).

Pour ce qui en est de l’élat du foie dans la pseudo-leucémie,
nous n’en savons encore rien, mais, du moment que les éry-

throphages sont nombreux dans la rate — comme nous n’en
doutons pas — on doit évidemment en trouver aussi dans le

foie, où, apportés par le torrent circulatoire, ils se détruisent,
fournisssant en abondance le matériel nécessaire à l’élabora-
tion de la bile et à la production de dépôts d'hémosidérine et
amenant, dans certains cas, des lésions interstitielles.

De cette façon, entre la pseudo-leucémie et les maladies pré-
citées (anémie de Banti), splénomégalie primitive, cirrhose du
foie, anémie pernicieuse d’une part, et la tuberculose ou la
syphilis d'autre part, il existe un lien inlime. Dans toutes
ces affections, l’anémie est due à certaines substances toxiques
produisant dans la rate, dans les ganglions lymphatiques, et
peut-être aussi dans la moelle osseuse, une augmentation con-
sidérable en éléments phagocytaires préexistant à l’état normal,
qui happent les globules rouges du sang et les portent avec
le torrent circulatoire au foie, pour y subir une destruction
définitive ?

Quels sont ces poisons ?

Pour essayer de résoudre cette question, nous avons mis à
prolit les données de l’hématopathologie.

D'après Gravitz (/oc. cit, p. 232 à 233), il y a deux sortes de
poisons du sang qui produisent l'anémie.

Les premiers, une fois introduits dans l'organisme, détrui-
sent les globules rouges dans le sang circulant. Ce sont les
poisons dits hémocytolytiques.

Les poisons du second groupe exerceraient une action dite
plasmotrope : sans altérer les globules rouges de la circulation
sénérale, ils leur conféreraient la propriété de se détruire dès
qu'ils auront pénétré dans la rale ou dans le foie. À ce groupe
apparliendraient la phényl-hydrasine el ses dérivés : pyro-
dine ou acétyl-phényl-hydrasine (hydracéline), l'acide acéty-
lopropionique (anlithermine ou antiorthine), ele.

Mais expliquer l'action de ces poisons par leur « plasmotro-
pisme » nous parait assez élrange. Comment, en effet, com-

10

146 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

prendre que, à dose active, ils n'influenceraient les érythro-
cytes que dans la rate et le foie et non ailleurs? Déjà dans le
travail de Heinz (/0oc. cit.), qui a établi précisément la théorie
de l'action « plasmotrope » de ces poisons, on peut trouver
des indications, de nature à laisser supposer que les choses
se passent, en réalité, autrement que ne le pense l'auteur.
Heinz fait ressortir que, dans les vaisseaux hépatiques, sous
l'influence de la phényl-hydrazine ou des poisons similaires,
les globules rouges des vaisseaux de la rate prennent un aspect
granuleux (Kærnchenbildung), — probablement du fait d’une
organisation particulière de l’endothélium vasculaire, — aug-
mentent de densité et se transforment en pigment granuleux à
l’intérieur des cellules spléniques. Et plus loin Heinz dit que
ces cellules augmentent beaucoup de nombre et de volume et
qu'on peut les trouver aussi bien dans les vaisseaux que dans
les tissus. Elles sont remplies de produits d’altérations morpho-
logiques et chimiques des érythrocytes inclus. On pourrait
observer la dissolution progressive et la disparition de leurs
noyaux. Pour Heinz, ce sont là des cellules endothéliales anor-
malement augmentées de volume par absorption des débris de
globules rouges. Il estime que, sous l'influence du poison, il se
produit primitivement une altération el une destruction d'éry-
throcytes, et que c’est consécutivement qu'apparaissent les
« dévoreurs » de ces éléments avariés.

Mais ne serait-il pas plus simple de supposer que les poisons
anémiants du second groupe, introduits dans l'organisme d’une
façon répétée, excitent les érythrophages préexistant norma-
lement dans la rate et que cescellules, à mesure que s’accroîl
leur nombre, absorbent de plus en plus de globules rouges.
Cette manière de voir n’est pas en contradiction avec ce que
nous savons de la marche des phénomènes chimiotaxiques dont
l'intensité augmente par l'introduction répétée d'éléments
hétérogènes à l'organisme, qu'il s'agisse, en l'espèce, de poi-
sons bactériens ou d’autres substances chimiques.

Nous avons répété sur le lapin les expériences de Heinz,
avec la pyrosine, nous bornant à l'emploi de petites doses, afin
de ne pas provoquer d'intoxication aiguë. La dose thérapeutique
de cette substance, pour l’homme, étant de 0 gr. 10, nous
njeclâmes à un lapin, du poids d’un kilogramme et demi,

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 147

2 milligrammes et demi chaque jour, dans la veine auriculaire.

Avantl'expérience, l'animal pesait exactement1.580grammes;
sa température était entre 37 et 38 degrés, on comptait dans
1 centimètre cube de sang, 5.900.000 globules rouges et
5.100 leucocytes. Le taux de l’hémoglobine était à 85 p. 100
(hémoglobinomètre de Fleischl). Les érythrocytes et les leuco-
cytes ne présentaient rien d'anormal.

Dès le quatrième Jour, donc après trois injections du poison,
on nota l'apparition de polychromatophiles, une certaine dimi-
nution du nombre des érythrocytes (5.780.000) et une augmen-
tation de celui des leucocytes (5.400),

Le cinquième jour, on remarqua des formes nucléées d’éry-
throcytes (rares, il est vrai), à plasma chromatophile. La tem-
pérature était à 39 degrés et le poids du corps avait diminué
jusqu'à 1.562 grammes.

Le huitième jour, la température était à 38°2, le nombre
d'érythrocytes à 5.650.000. Beaucoup de cyanophiles avec ou
sans noyau. Îl y avait souvent des éléments dont le noyau
s’échappait du protoplasma. Parfois, on trouvait aussi des
noyaux complètement libres dont les dimensions et autres par-
ticularités correspondaient à ceux des érythroblastes.

Le neuvième jour, le taux de l’hémoglobine n’était que de
60 p.100 et, dans le sang, à côté des forces constatées anté-
rieurement, il y avait des macrocytes, quelques microcytes
et ce queles auteurs allemands appellent des ombres (Schatten).

Les premiers poikilocytes furent constatés le quinzième
jour: la température variait alors entre 38 degrés et 38°5.

Enfin, le dix-septième jour, après examen hématologique, on
tua le lapin par une piqüre du bulbe. Il pesait 1.670 grammes
(augmentation de 90 grammes). On comptait 4.720.000 érythro-
cytes (diminution de 33 p. 100), 7.225 leucocytes (augmenta-
tion de 1.825) et 47 p. 100 d'hémoglobine {diminution de 33
p. 100). Plus de la moitié des éléments figurés du sang étaient
des polychromatophiles nucléés ou anucléés. On apercevait
quelques microcytes, beaucoup de macrocytes toujours poly-
chromatiques, peu de poikilocytes. Jamais au cours de l’expé-
rience on ne vit de formes granulées.

Autopsie : rate augmentée de volume, comparativement à
celie d’un lapin sain de même poids: capsule tendue, tissa de

148 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

couleur rouge foncé, pulpe flasque, s'enlève facilement par le
raclage; corpuscules de Malpighi bien apparents. Foie sans
altérations. La moelle osseuse des fémurs est partout rouge. La
rate pèse 4 gr. 70 (le poids de la rate d’un lapin normal est de
0 gr. 78), elle mesure 5 centimètres de long sur 1 centimètre
de large, son épaisseur est de 0 cent. 7. Le foie pèse
13 grammes.

À: l'examen microscopique, en solution isolonique, du pro-
duit de raclage de la rate, beaucoup d’érythrophages contenant
des globules rouges, pour la plupart altérés, ou leurs débris;
ou bien du pigment foncé seulement. Les globules rouges ne
présentaient nulle part de phénomènes de désintégration.

L'examen microscopique de coupes de rate et de foie fixées
par l’acétone et par le liquide de Koultchitzki, fit voir ce qui suit :

Sinus et veines gorgés de sang. Les vaisseaux contiennent
des globules rouges dont la colorabilité est variable. Pas de
différence entre les monochromatophiles et les poliochromato-
philes. Abondance de formes nueléées et de noyaux libres. Pas
de globules granuleux ni de fragments d'érythrocytes. Beaucoup
de leucocytes et de grosses cellules contenant des globules
rouges nucléés et anueléés, leurs débris, du pigment foncé ou
seulement des ombres de globules, parfois un leucocyte.
Un spécimen d'érythrophage provenant d’un sinus de rate
de lapin est représenté sur le photogrammme (fig. 9). On ne
trouve que cet unique érythrophage, le reste du champ du
microscope n'étant pas net. Sur les préparations, on peut suivre
toutes les phases de destruction des érythrophages. On voit
beaucoup de formes en voie de désintégration, les érythro-
phages non altérés sont assez rares: on ne Îles aperçoit qu'à
l'intérieur des vaisseaux sanguins (sinus et veines). Ils ont un
noyau assez volumineux, facilement colorable, situé quelque
part à la périphérie, dans une sorte de renflement du
bord protoplasmique, fortement coloré par l’éosine (Giemsa). 11s
contiennent des globules rouges souvent nucléés. En dehors
des vaisseaux de la rate, dans la pulpe splénique, on trouve
des érythrophages à toutes les périodes de la destruction. Très
grand nombre d’érythrophages dans la rate, on peut en compter
10 environ dans le champ du microscope, à un grossissément
moyen.

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 149

Les corpuscules de Malpighi offrent un phénomène très inté-
ressant. Ils sont nombreux et plus ou moins gros, par suite
d'hyperplasie des éléments cellulaires. Sur le photogramme
ci-joint (1), on voit une division par mitose des noyaux des cel-
lules Iymphoïdes des corpuscules de Malpighi. Nombre de cel-
lules des corpuscules de Malpighi de la rate sont hypertro-
phiées et cette hypertrophie intéresse à la fois le corps cellu-
laire et son noyau. Ces grosses cellules sont surtout nom-
breuses à la périphérie du corpuscule, quelques-unes d’entre
elles renferment plusieurs globules rouges encore peu altérés :
ce sont les érythrophages les plus jeunes.

De cette descriplion de l'état des éléments cellulaires des
corpuscules de Malpighi de la rate d'un lapin intoxiqué chro-
niquement par la pyrodine, on peut conclure, avec toute évi-
dence, que les érythrophages proviennent des corpuscules de
Malpighi de la rate, par voie de multiplication et d'hypertrophie
des éléments lymphoïdes, et c'est en cela qu'il faut voir le rôle
principal des corpuscules de Malpighi.

Sur un autre microphotogramme (fig. 11), on voit trois
cellules situées dans un sinus, au bord d'un corpuscule de
Malpighi, dont la partie centrale est représentée sur le micro-
photogramme précédent. La cellule de droite a un gros noyau
en mitose, la cellule moyenne est petite et contient un noyau
à l’état de repos. À gauche, on voit un érythrophage ayant
déjà absorbé plusieurs globules rouges qui se désagrègent.

Ainsi donc, les corpuscules de Malpighi de la rate sont le lieu
de naissanee des érythrophages, ce que confirme aussi ce fait
que la plupart des érythrophages se situent au pourtour et à
proximité des corpuscules de Malpighi.

Notre manière de voir n’est nullement contredite par les
faits enregistrés dans la science. Ainsi, par exemple, nous
lisons dans le mémoire de Dominici (26) : « Les corpuscules
de Malpighi prennent part à l'élaboration des éléments de la
pulpe, lesquels, par la suite, se transforment en myélocytes et
autres cellules de la pulpe. »

On obtient des tableaux très nets sur des préparations de
rate, qu'on traite, avant de les colorer, par le ferro-cyanure de

(4) Voir PI. IT, n° de janvier.

150 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

potassium, puis par l'acide chlorhydrique, pour y faire ressortir
l'hémosidérine.

Par cette réaction microchimique, la coupe, une fois sortie
de la solution ferro-cyanique et plongée dans l'acide chlorhy-
drique, prend rapidement une couleur bleu foncé, car elle
contient beaucoup de fer. À l'examen microscopique, les amas
de fer correspondent surtout aux érythrophages. Presque tous les
érvthrophages d’une rate de lapin donnent avec plus ou moins
d'intensité la réaction du fer; quelques-uns seulement font
exception. Il s'ensuit que, dans les érythrophages de rate de
lapin, le processus lié au dégagement du fer par l'hémoglobine
se fait, sous l’influence de la pyrodine, d’une façon très rapide
et énergique. En plus, par l’action de ce poison, du moins chez
le lapin, la destruction des globules rouges dans la rate se pour-
suit sur une vaste échelle. En effet, avec ce procédé de traite-
ment des préparations microscopiques, on trouve beaucoup
d'érythrophages en voie de destruction à l’intérieur des sinus
et des veines, et surtout parmi les éléments de la pulpe splé-
nique.

Fait à retenir, on peut constater à l'intérieur des érythro-
phages des globules rouges adultes et des globules jeunes,
nucléés. [1 se fait donc, dans les vaisseaux de la rate, une
absorption non seulement d’érythrocytes mourants ou en voie
de destruction, comme le suppose Heinz (/oc. cit.), mais de
tous les éléments figurés venant en contact avec les érythro-
phages : éléments adultes ou jeunes et même leucocytes.

Dans les anémies dues aux maladies que nous avons passées
en revue, on ne trouve guère, dans le sang de la rate, d’élé-
ments en voie de destruclion autres que les érythrophages :
leurs débris, en forme d’amas de pigment, n'apparaissent dans
la pulpe qu'après désintégration complète des cellules conte-
nant des globules rouges. Mème dans les conditions normales,
comme nous l'avons déjà dit, les érythrophages absorbent non
pas des éléments mourants, mais des éléments normaux, dès
que ceux-ci viennent en contact avec leur protoplasma flasque
el visqueux.

Le foie de notre lapin n'est pas altéré. Ses cellules ne se dis-
tinguent pas de celles d'un foie normal. Il en est de même du
Ussu de la capsule de Glisson, dans lequel il n’y à que relati-

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 151

vement peu d'érytrophages. Ceux-ci se situent à la périphérie
du lobule, dans les capillaires, et donnent, tous, la réaction
nette du fer. On en (rouve également dans les cellules hépa-
tiques, mais en pelit nombre. Cependant, en comparant ce foie
à celui d’un lapin normal, la différence apparait nettement.
Dans le foie normal, il est très difficile de déceler des érythro-
phages, tandis qu’on les rencontre iei dans chaque lobule,
sinon dans tous les capillaires.

L'examen de la moelle osseuse montre le tableau habituel
de l'hyperplasie cellulaire bien caractérisée de cet organe,
accompagnée d’une augmentation de l'hématopoièse.

Donc, l’intoxicalion du lapin, par introduction de petites
doses de pyrodine dans le sang, amène une anémie (quantitative
et qualitative) du fait de l'absorption en masse de globules rouges,
non modifiés, par de grosses cellules sui generis dans les vaisseaux
de la rate. Ce sont des érythrophages qui se détruisent avec leur
contenu, et d’une facon si rapide qu'un petit nombre d'entre eux
seulement pénètre dans le foie. Ces remarquables cellules sont
engendrées dans les corpuscules de Malpighi de la rate, dont la
prolifération est activée par le poison.

Ainsi, sous l'influence d’une substance toxique, — de la
pyrodine dans notre expérience, — la destruction des cellules
qui absorbent en masse les globules rouges se fait surtout
dans la rate; ce processus est beaucoup moins intense dans le
foie.

Nous savons déjà qu’un dégagement excessif des produits de
désintégration de globules rouges a lieu dans le foie au cours
des états anémiques chez l'homme et que ce processus, effectué
par l'intermédiaire des érythrophages, aboutit, dans certains
cas, à la cirrhose hépatique. Si, comme on l'observe chez le
lapin sous l'influence de la phényl-hydrasine, ce processus
n'est que de faible intensité dans le foie, on comprend qu'on
ne puisse s'attendre à voir se développer des lésions cirrho-
tiques, même en prolongeant l'expérience. Cest en cela,
croyons-nous, qu'il faut chercher l’explication de ce fait qu'on
n'arrive pas à obtenir artificiellement une cirrhose hépatique
par la pyrodine ou n'importe quel autre poison, notamment par
l'alcool.

Ces expériences sont à vérifier, en particulier en ce qui

152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

concerne l'alcool, mais d'ores et déjà on peut dire que les
insuccès de ceux qui expérimentèrent avec l'alcool tien-
nent, d’une part, à la nature même du poison employé el
des procédés de son introduction et, d'autre part et surtout, à
certaines particularités d'organisation des animaux en expé-
rience, dont les érythrophages sont moins stables que ceux de
l’homme. Il est également probable que les poisons qui inci-
tent les cellules à une activité excessive exercent en même
temps une très forte aclion sur leur protoplasma dont ils
amènent la destruction rapide, de telle sorte que très peu de
ces cellules parviennent au foie. Ces conditions peuvent bien
engendrer la splénomégalie, mais pas la cirrhose hépatique.

Chez l'homme aussi, l'alcool ne produit pas loujours la
cirrhose. Les cirrholiques sont loin d'être aussi nombreux que
les ivrognes.

Certains auteurs font ressortir le caractère primilif des
lésions de la rate dans les cirrhoses du foie. Rosch (/oc. cut.
dit : « Il résulte de nombreuses observations cliniques que les
lésions de la rate précèdent celles du foie. »

Il faut donc admettre que l'alcool agit sur les tissus du foie
indirectement, en y provoquant la cirrhose par l'intermédiaire
des érythrophages de la rate, lesquels, sous son influence, se
multiplient dans les corpuscules de Malpighi, tout en se détrui-
sant dans la rate (qui augmente de volume) et dans le foie, où
peut survenir une prolifération inflammaioire du lissu con-
jonelif interlobulaire, en rapport avec le nombre des érythro-
phages détruits. La différence entre les animaux qui n'ont
jamais de cirrhose alcoolique du foie et l'homme, consiste en
ce que, chez ce dernier, les érythrophages étant plus résistants
à ce poison, sont transportés, avant d'être détruits, par le
torrent circulatoire dans les capillaires des lobules hépatiques,
landis que les érythrophages d'animaux et ceux d'individus
humains sans prédisposition à la cirrhose du foie, sont presque
tous détruits dans la rate elle-même, si bien qu'une partie
infime seulement d’entre eux réussit à pénétrer dans le foie où,
en raison de leur petit nombre, ils ne peuvent amener de
prolifération du tissu conjonctif interlobulaire.

Par rapport à la tuberculose, les animaux ne diffèrent pas
essentiellement de l’homme : dans les deux cas, les érythro-

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 153

phages sont évidemment de même résistance au virus tuber-
culeux el ils passent dans Le foie où, en se détruisant, ils
déterminent une irritalion du lissu conjonctif avec, parfois,
phénomènes de cirrhose.

Il va sans dire qu'il faut tenir aussi compte des différences
individuelles d'exemplaires de la même espèce animale, ainsi
que de la quantité et de la qualité du poison.

D'après ce qui vient d'être dit, il y à lieu de penser que le
nombre de poisons analogues à la pyrodine, à l'alcool et à la
loxine tuberculeuse, poisons produisant de l'anémie avec alté-
Lions, d'intensité variable, de certains organes, ne saurait être
restreint.

On peul, en général, admetlre une aclion anémiante des
poisons par Île mécanisme de l'érythrophagie dans les cas
suivants :

1° Dans nombre de maladies infectieuses (tuberculose,
svphilis, lèpre, malaria, fièvre typhoïde, ete.);

2° Dans les intoxications chroniques (alcool, ete.) ;

3° Dans l'helminthiase (botriocéphale 1) ;

1° Dans les tumeurs malignes (anémie des cancéreux, mais
ici c'est un phénomène inconstant) :

5° Dans les décompositions intestinales et dans la copros
tase (V..chez Grawitz; loc. cit., p.233).

Les thèses que nous venons de formuler appellent, sans
doute, un contrôle rigoureux el de nouvelles recherches dans
la même direction, recherches à faire dans des laboratoires bien
agencés, par plusieurs expérimentaleurs et dans des conditions
plus favorables que celles dont il fallut me contenter. Je ne
larderai pas à y contribuer pour ma part, mais, en attendant,
je voudrais énoncer quelques considérations sur ma cinquième
thèse, concernant les anémies par action des produits anor-
maux de fermentation intestinale et les états pathologiques
qui y sont liés.

Pour provoquer une cirrhose du foie, les expérimentateurs
avaient recours, comme on sait, à divers poisons, surtout à
l'alcool, mais ils en oblenaient loujours des résultats négatifs.

(1) GrRawirz (loc. cit.) qualifie de « plasmotrope » le poison sécrété par
ce parasite.

154 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

On sait aussi que, dans la cirrhose du foie chez l'homme, on
trouve des lésions de degrés divers dans le tube digestif. Cela
étant, L. d’Amato (27) se demanda si l’inflammation du tissu
interstitiel du foie avec production de cirrhose n'était pas liée à
une résorption de produits de décomposition du contenu intes-
tinal. Il entreprit de nombreuses expériences sur les animaux
(lapins et chiens) qu'il intoxiquait soit par les produits de
putréfaction de la viande de bœuf, soit par l'acide butyrique
qui se forme toujours, comme on sait, dans les décompositions
intestinales.

Dans toutes ces intoxications, réalisées pendant un temps
variable, parfois prolongé, l’auteur n’a jamais pu obtenir de
vérilable cirrhose du foie, telle qu'on l'observe chez l'homme.
Tout au plus notait-il une infiltration cellulaire insignifiante,
nullement comparable à la cirrhose hépatique. Par contre, il
observa des lésions de la rate et du foie. Malheureusement,
d’Amalo n'a pas étudié les modificalions du sang ni l’état de
la moelle osseuse.

Pour ce qui en est des altérations de la rate, elles se mani-
festaient, pour la plupart, par une hyperémie très marquée et
par l'abondance de pigment sanguin ; parfois, on trouvait de
grosses cellules dont quelques-unes contenaient du pigment.
On notait aussi une prolifération plus ou moins considérable
et presque constante du tissu conjonctif avec hyperplasie des
corpuscules de Malpighi. Dans un cas (9° expérience avec
l'acide butyrique, p. 451), « certaines cellules Ilymphoïdes des
corpuscules de Malpighi étaient disparues et se trouvaient
remplacées par de grosses cellules mononucléées ».

Le foie présentait les lésions suivantes :

1° Infiltration cellulaire, d'intensité variable, du tissu con-
jonctif interlobulaire ;

2° Altérations des cellules hépatiques, intéressant {es parties
périphériques des lobules. Vacuolisalion constante des cellules
hépaliques, parfois si prononcée qu'il ne subsistait plus qu'un
Hn réliculum de leur protoplasma. Pas d'allérations des
noyaux. Souvent les cellules se colorent mal, se détachent des
lrabécules et sont parfois frappées de nécrobiose. En certains
points, on voit des groupes de telles cellules contenant beau-
coup de pigment sanguin brun jaunâtre (p. 449) ;

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 155

3° Apparition, à la périphérie des lobules, de formations
que l’auteur tient pour des amas de pigment (Pigmentklumpen).
Ces formations sont représentées sur la fig. 1 de la table XIIT.
Ici, d'Amato reproduit nos érythrophages avec tous leurs traits
caractéristiques ;

4° Hyperémie peu apparente ;

5° Parfois, thrombose des veines centrales (l’auteur ne dit
pas de quel genre de thrombose il s'agit).

De cette description des lésions de la rate et du foie dans les
intoxications par les produits de décomposition du contenu
gastro-intestinal, il résulte que d’Amato avait affaire à une
destruction excessive de globules rouges par l'intermédiaire
d'érythrophages en voie de multiplication dans les corpuscules
de Malpighi de la rate. En conséquence, il y avait, dans cet
organe, beaucoup de pigment sanguin et splénomégalie. Les
cellules vacuolisées à la périphérie des lobules hépatiques,
leur nécrobiose plus ou moins accusée, leur teneur en pigment
sanguin (Pigmentklumpen) et la (hrombose des veinules cen-
trales (parces mêmes cellules, probablement, ou, plutôt, par
leurs débris\ : tous ces faits indiquent que l’auteur a trouvé
dans le foie des érythrophages auxquels il a attribué les pro-
priétés des cellules hépatiques pour celte raison, vraisembla-
blement, que, disposés le long des parois des capillaires, ils
se trouvaienten contact intime avec les cellules du foie.

Dans quelques cas, il est vrai, il a vu des cellules « déta-
chées » des travées hépatiques, mais c'élaient là, sans aucun
doute, des érythrophages libres, à l'intérieur des capillaires.

Après ce travail d'Amato, si intéressant pour nous, il
importait d'établir la dépendance entre l’érythrophagie exces-
sive el la résorplion des produits de fermentations anormales
dans les affections du tube digestif.

Nous nous croyons donc autorisés à attribuer une des causes
les plus importantes des anémies primitives et des lésions
qu'elles produisent dans la rate et dans le foie — cirrhose
hépatique ou splénomégalie, anémie pernicieuse ou syndromé
de Banti — à des troubles chroniques du tube qastro-intestinal,
accompagnant la résorption dans le sang des produits de putré-
faction alimentaire, et nous pouvons, en pareil cas, recom-
mander aux médecins de fixer leur attention sur le tube

156 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

digestif des malades atteints de l’une ou de l'autre variété de
ces anémies. Remémorons-nous l'adage du clinicien expéri-
menté qu'était le professeur Leyden : « Qui bene nutrit, bene
medetur. »

Les ferments lactiques du professeur Metchnikoff auront,
nous en sommes convaincus, une place importante dans la
thérapeutique de ces affections.

Une guérison est parfois obtenue par l'élimination du toyer
principal de destruction des érythrophages, de la rate, opéra-
lion que Banti fut le premier à recommander.

CONCLUSIONS

Ma communication étant lerminée, je vais maintenant for-
muler mes thèses principales :

1° Le processus de régénération du sang s'effectue, dans les
conditions normales, par l'intermédiaire de cellules spéciales,
d'érytrophages, qui, dans la rate, happent les éléments figurés,
notamment les globules rouges. Ces cellules sont détruites, en
partie, dans la rate elle-même, mais la plupart d’entre elles
sont transportées, par le torrent circulatoire, au foie où elles se
détruisent définitivement, fournissant aux cellules hépatiques,
pour l'élaboration de la bile, les produits de destruction
intracellulaire des globules rouges. Sans ces adaptations remar-
quables, il serait impossible de se figurer le mécanisme de la
résorption des globules rouges dans les capillaires du foie. La
moelle osseuse remplace par de nouveaux érythrocytes Les glo-
bules rouges détruits.

2° Dans les états pathologiques avec symptômes d'anémie
primitive, l'absorption de globules rouges par les érythrophages
est augmentée d'intensité.

3° La maladie de Banti, la cirrhose du foie, la splénomé-
salie primitive et l'anémie pernicieuse ne sont pas des mala-
dies autochtones. Elles doivent être rangées dans un groupe
commun d’anémies primitives, ne différant entre elles que quan-
litativement par leurs manifestations dans les divers organes.
On parle d'anémie pernicieuse, si au premier plan du tableau
clinique figurent les altérations du sang: de cirrhose hépatique,

LA DESTRUCTION DE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 157

lorsque prédominent les troubles liés au développement!
excessif du tissu conjonctif du foie; de splénomégalie, en pré-
sence d'une tuméfaction de la rate, les troubles du côté du foie
et les altérations du sang étant relégués au second plan; enfin,
de maladie de Banti, si tous ces symptômes cliniques sont au
complet. |

4° Toute cirrhose du foie résulte d’une irrilation inflamma-
toire du tissu conjonctif de la capsule de Glisson par les pro-
duits de désintégration d'érythrophages et de leur contenu,
irritalion qui se localise dans les parties périphériques des
lobules.

5° Dans les états anémiques, la splénomégalie dépend essen-
tiellement d'un développement exagéré du stroma conjonctif de
la rate et de son irritation par des produils résultant de la des-
truction de globules rouges à l’intérieur des érythrophages.

6° Le foyer d'origine des érythrophages est dans les corpus-
cules de Malpighi de la rate. La production excessive de ces
éléments est déterminée par divers poisons, soit élaborés dans
l'organisme lui-même, soit venus du dehors.

1° L'ictère dit hématogène, lors d'une destruction excessive
de globules rouges par les érythrophages, s'explique fort
simplement par l’osmose entre les cellules hépatiques et les
érythrophages.

8° Les allérations du sang dans les anémies primitives con-
sistent, d’une part, en une diminution du nombre total des
globules rouges, du fait de leur destruction excessive, dans
la rate el dans le foie, par le protoplasma des érythrophages
en suractivilé, et, d'autre part, en une modification daus la
composilion qualitative du sang, les globules rouges détruits
étant remplacés par de nouveaux érythrocytes hâtivement
élaborés dans la moclle osseuse. Un surcroit de besoin en glo-
bules rouges fait apparaître dans le sang des formes jeunes de
ces éléments : polychromatophiles, érythroblastes, macroeytes
et microcyles. Les poikilocytes appartiennent, vraisemblable-
ment aussi, à ces formes jeunes.

9% Le poison tuberculeux provoque dans les corpuscules de
Malpighi de la rate une surproduclion de phagocyles pour là
lutte contre lintoxication. Ces phagocytes sont en même
temps des érythrophages : ils engendrent, comme ces derniers,

158 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l’'anémie, l'augmentation du volume de la rate et les lésions
cirrhotiques du foie.

10° Les poisons tuberculeux et syphilitique (quelques autres
aussi) déterminent une surproduction de phagocytes (autre-
ment dire, d'érythrophages), par prolifération excessive des
éléments des corpuscules de Malpighi de la rate et des éléments
analogues des ganglions lymphatiques où se produit aussi,
si les conditions y sont favorables, une multiplication de ces
« phagocytes à tout faire », parfois en grande quantité.

En terminant, je tiens à exprimer ma sincère gratitude au
D' A. A. Vinogradov pour ses beaux microphotogrammes qui
montrent si bien les phénomènes qu'il m'a été donné de
constater,

Saratov, avril 1910.

INDEX BIBLIOGRAPHIQUE

1, OuinckEe. — Deutsch Archiv f. klin. Med., Bd XX und XXV, et Centralblatt
f. med. Wissenchaft., 1887, n° 47.

2. BanrTi. — Splenomegalie mit Lebercirrhose. Ziegler's Beilrüge zur path.
Anat. u. allg. Path., v. XXIV, 1898.
3. Kcopsrock (Félix). — Ueber Milztumor, Icterus und Ascites bei Leber-

cirrhose. Virch. Arch., v. CLXXX VII, 1907.

4. ZteGLER (E.). — Lehrbuch der speciellen pathologischen Anatomie. lena, 1906.

5. SILBERMANN. — Berlin. klin. Wochenschrift, 1886, p. 473.

6. RosEensTEIN. — Ueber chron. Leberentzundung. Ref. f. inner. Med., 1892.

1. WLayew. — Ueber einige Veränderungen des Blutes bei Erkrankungen
der Leber (E. Gravitz, loc. cil.)

8. Gravirz. — Klinische Pathologie des Blutes. Leipzig, 1906.

9. BLercaroEDER. — Ueber Lebercirrhose und Blutkrankheiïten. Virch. Arch.,
v. CLXXVII, 1904.

10. Borissova. — Beiträge zur Kenntniss der Bantichen Krankheiïit und
Splenomegalie. Virch. Arch., v. CLXXII, 1903.

11. ZéLénev. — La chloro-anémie syphilitique (en russe). Thèse de Kiev.

12. BarTez et NEUMaANN. — Lymphocyt. und Tuberkulbacillen. Zentralblatt f.
Bacter., v. XL, fasc. 4, 1905.

13. Mouisser el Bonnamour. — Du foie des tuberculeux. Re». de méd.,
v. XXIV, 1904.

14. Nikirorore. — Phagocytenkampf bei Rückfalltyphus. Beilräüge v. Ziegler,
v. XII, 1892,

15. Rocue. — Relations du foie et de la rate en pathologie, XI° Congrès fran-

çais de Médecine, Paris, 13-15 octobre 1910.
16. GAUCHER. Splénomégalie primitive. Thèse de Paris, 1882.

LA DESTRUCTION BE CORPUSCULES ROUGES DU SANG 159

17. SCHLAGENHAUFER FRiEbricH, Wien. — Ueber meist familiar vorkommende
histologisch charakteristische Splenomegalien (Typus Gaucher). Virch. Arch.,
v. CLXXX VII, 1907.

18. Heinz (R.). — Ueber Plutdegeneration und Regeneration. Zieglers Bei-
träge, v. XXIX, 1901.
19. Leure (W.). — Ueber ein Fall von rapid verlaufene oder schwerer

Anaemie mit gleichzeitiger leukaemischer Beschaffenheit des Blutes (Gravitz,
loC NET Se 322):

20. Doxrrz (W.). — Deutsche Klinik, v. I.

21. STERNBERG (C.). — Ueber eine eigenartige, unter dem Bilde der Pseu-
doleukaemie verlaufende Tuberculose des Ilymphat. Apparates, Zeitschrift f.
Heilk., 1897 (Gravitz, S. 4179.)

22. LoewensacH. — Beitrag zur Histologie der gummüsen Lymphome. Arch.
für Derm. und Syphil., v. XLVIITI, 1899 (Gravitz, loc. cit., S. 482).
23. AsKANAZY. — Verhandi. d. Deutsch. pathol. Gesellsch., 1904 (Gravitz,

loc. cit. S. 418).

24. Fiscner. — Ueber malign. Lymphom. Arch. f. klin. Chir., v. LV (Gravitz,
loc. cit., 418).

25. SaBrazës. — Hématologie clinique. Paris, 1900 (2bid.).

26. Dominic. — Arch. de médecine expérim., 1-13, 1901, p. 32.

27. Auaro (Luigi d'Amato). — Ueber experimentelle vom Magendarmkanal
aus herforgerufene Veränderungen der Leber und über dabei gefundenen
Veränderungen der übrigen Bauchorgane. Virch. Arch., v. CLXXXVII, 190%

ERRATUM
Mémoire pe M. Legoeur, &. XXV, décembre 1911.

Page 890, 16e ligne, lire : « des individus fournisseurs de sérum toujours
les mêmes », au lieu de : « qu'un nombre limité ».

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette.

#

26° ANNÉE MARS 1912 N°3

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

INFLUENCE DE LA TEMPÉRATURE SUR L'ACTIVITÉ
DE L'ÉMULSINE

Par MM. GaBriEL BERTRAND et Arraur COMPTON.

On ne connaît pas encore d’une manière définitive la censti-
tution de l’amygdaline, mais on peut déjà considérer ce gluco-
side comme résultant de l'union du nitrile de l'acide mandélique
(ou phénylglycolique) gauche avec un disaccharide analogue
au maltose.

Traitée par l'extrait diastasique d'amandes douces où émul-
sine, l’amygdaline subit une hydrolyse totale : non seulement
le nitrile est séparé, puis décomposé en aldéhyde benzoïque et
acide cyanhydrique (1), mais le disaccharide lui-même est
scindé en deux molécules de glucose ordinaire.

CHFO"N H2H°0 — CH°.COH + CNH + 2CH"0°

Cette décomposition exige certainement la présence de deux
diastases hydrolysantes dans l'émulsine, car elle peut être
réalisée en deux temps distincts. Si, en effet, comme l’a montré
E. Fischer (2), on fait agir la macération aqueuse de levure sur
l'amygdaline, on n'obtient qu'une hydrolyse partielle : une

1) La décomposition du nitrile, qui s'effectue déjà spontanément au sein
de l'eau, serait accélérée, d'après Rosenthaler, par une diastase particulière.
Biochem. Zeit., t. XIV, p. 238 (1908) ; t. XVII, p. 257 (1909) ; t. XX VI, pp. 1, 7et 9
(1910). Voir aussi K. Feist, Archiv d. Pharm., t. CCOXLVII, p. 226 (1909) et
t. CCXLVIII, p. 101 (1910).

2) Ber. d. chem. Ges.,t. XXVIII, p. 1508 (1895).

11

162 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

seule molécule de glucose est séparée et il reste du mandélo-
nitrilglucoside :

C'HEON _ H°0 = CH=0° + CAHAON.

ce dernier étant séparable, à son tour, par l’extrait d'amandes,
en aldéhyde benzoïque, acide cyanhydrique et une seconde
molécule de glucose.

En admettant le nom d'amygdalose pour le disaccharide
engagé dans l’amygdaline et en se conformant à la nomencla-
ture habituelle des diastases, on peut dire que la macération
de levure renferme de l’amygdalase (1), active seulement vis-à-
vis du disaccharide, tandis que l'émulsine contient, en outre,
de l’amygdalinase, capable de séparer le nitrile de la molécule
sucrée.

Les expériences que nous allons décrire concernant l'influence
de la température sur l’activité de l’émulsine, ont été faites en.
tenant compte de cette manière de voir, c’est-à-dire que nous
avons toujours mesuré simultanément l’activité de l’'amygdali-
nase en dosant l'acide cyanhydrique et celle de l’amygdalase en
déterminant le pouvoir réducteur.

De plus, comme nous avions l'intention de comparer les
résultats obtenus avec ceux fournis antérieurement par l'étude
de la cellase des amandes (2), nous avons opéré avec la même
préparation diastasique — dont nous possédions une réserve
suffisante — et, d'autre part, nous avons réalisé des conditions
équivalentes de concentration en diastase el en substance
hydrolysable.

Ainsi, au cours de nos expériences sur la cellase, nous avions
fait réagir le poids de préparation diastasique extraite des
amandes douces, qui élait capable de dédoubler, après quinze
heures d'action à la température optimale, environ 60 p. 100 du
cellose, celui-ci étant dissous à raison d’une molécule gramme
dans 27 litres 36, soit, pratiquement, de 50 milligrammes dans
4 centimètres cubes.

Nous avons pris, dans chacune des nouvelles expériences, la
quantité (1 milligramme) de la même préparation diastasique

(1) Ce nom a d'ailleurs été proposé déjà par Caldwell et Courtauld (Proc.
Roy. Soc., t. LXXIX, p. 350, 1907).
(2) Bulletin Soc. chim., 4e série, t. IX, p. 100 (1941).

LA TEMPÉRATURE ET L'ACTIVITÉ DE L'ÉMULSINE 163

qui pouvait, aussi après quinze heures d'action à la température
optimale, dédoubler environ 60 p.100 de l’amygdaline dissoute
à la concentration d’une molécule gramme dans 27 lit. 36, soit
de 373 milligrammes dans 20 centimètres cubes d’eau.

Le mode opératoire, comme dans nos précédentes expériences,
a été Le suivant :

La préparation diastasique, en quantité suffisante pour une
série d'expériences, en général 10 milligrammes pesés au
dixième de milligramme, a d’abord été dissoute dans milie fois
son poids d’eau pure, redistillée dans le vide. Une demi-heure
après le commencement de celte dissolution, on a prélevé
1 centimètre cube de liquide que l’on a introduit dans un petit
imatras renfermant 0 gr. 373 d'amygdaline cristallisée et
19 centimètres cubes d’eau pure. Le matras, étant alors bien
bouché, a été plongé dans un bain réglé à température conve-
nable.

Un quart d'heure après le premier prélèvement de la solution
d'émulsine, on a prélevé un nouveau centimètre cube avec
lequel on a préparé un second matras, et, ainsi de suite, de
quart d'heure en quart d'heure, jusqu’à ce que le nombre de
matras devant former une série ait été atteint.

A partir du moment où le premier matras a été laissé le
temps voulu en réaction, on à commencé les analyses. Chaque
matras étant examiné un quart d'heure après l’autre, à cause
du temps nécessaire au dosage de l'acide cyanhydrique.

Voici comment ce dosage a été fait. On a intercalé successi-
vement chaque matras dans un appareil distillatoire entre une
chaudière et un réfrigérant. On a envoyé la vapeur, recueilli le
distillat dans un verre à pied contenant 10 centimètres cubes
d’ammoniaque, 10 centimètres cubes d’iodure de potassium au
centième et quinze gouttes de lessive de soude à 40 p. 100, puis
on a litré avec une solution de nitrate d'argent décinormale,
suivant Denigès (1). A la fin de la distillation, on a pris la pré-
caution d'arrêter le courant de réfrigération de manière à ce
que la vapeur d’eau, cessant de se condenser, entraine les
dernières traces de CNH restées dans l'atmosphère du réfri-
gérant. L'opération a été arrètée aussitôt que la vapeur tendait

(1) Ann, Chim. Phys., 1° série, t. VI, p. 381 (1895).

164 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

à atteindre le mélange à titrer, pour que celui-ci ne s'échauffât
pas, ce qui aurait reculé un peu le point de virage.

Les quantités d'acide cyanhydrique ont été calculées en tant
pour cent de glucoside dédoublé. Limite d'erreur du dosage :
une goutte au plus de solution décinormale d'argent, soit
0 milligr. 27 de CNH ou 1,4 p. 100 d’amygdaline.

Le tableau À contient les résultats donnés par l’'amygdalinase
dans quatre séries d'expériences.

TABLEAU A

P. 100 DE GLUCOSIDE DÉDOUBLÉ EN 15 HEURES
d’après
L'ACIDE CYANHYDRIQUE

TEMPÉRATURES
extrêmes
de
chaque
expérience.

3
38°0-3

38°5-38°

BTe0-568 . .

5S°5-58°9 .

Ces résultats sont représentés d'une manière plus saisissable
par la figure 1, dans laquelle les pourcentages de glucoside
dédoublé sont portés en ordonnées et les températures en
abscisses.

Le tableau B contient les résultats attribuables, dans les
mêmes séries d'expériences, à l’amygdalase. Le pouvoir réduc-
teur du liquide restant dans le ballon après le départ de l'acide

LA TEMPÉRATURE ET L'ACTIVITÉ DE L'ÉMULSINE 165

30° +35 +40 +457 +50 +55° +60
Rire. de

TABLEAU B

P.100 DE GLUCOSIDE DÉDOUBLÉ EN 15 HEURES

TEMPÉRATURES da

extrêmes d'après

LE POUVOIR RÉDUCTEUR
de
chaque

expérience. 1 9 3 A
A NAME € Bet ET RS 18,1 » »
DRE ee) 32,1 34,6 » »
JUL ARS 49,0 » » »
AT OS 6 OCR RE ES DE 0 hé 54,0
JS10=-30 1 EN ET 1 59,0 » »
SARA, 0 AO OM ERA) CRE «sec 58,9
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HILOR ES AUS 62,2 » » »
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RASOIR PET Manque. » »
PROS TC CE PR ETS LOIRE Er 51,0
42°0 . Me alloneantedel ES RRREREt 60,1 »
BOOEREONE, . eloero 16 RIRE 57,0 »
AOL NOR D3,0 » » »
AGO ASS OMR | ER Nl 56,5 » »
PSS SM CIRE RSA RE le 52 Le ve 50,9
REA MENEN ETEEMI REP EREE 5159 »
AREA CESR ie 53,4 » » »
DE MA RO TEMPS | à 3 4 ec à 4 2019
HICTEAD 06 ils ae RER rue 31,7 »
DOC ON EN IPE ERIC 35,0 » »
HE USE 29,8 » » »
57°0-56°8 LÉGER ASE CT 16,3 » »
HE ETONE OI EMRE 1222 » »

cyanhydrique a été déterminé sur une partie aliquote (1/5 du
volume ramené à 100) suivant la technique décrite autre part

166 = ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

par l’un de nous (1); les chiffres, exprimés en glucose, ont servi
ensuite à calculer les proportions de glucoside dédoublé, en
supposant que deux molécules de glucose aient été produites
par une d’amygdaline. Limite d'erreur du dosage : une à
deux gouttes de solution de permanganate à 0,5 p. 100, soit
0 milligr. 27 à 0 milligr. 54 de glucose ou 0,1 à 0,2 p. 100:
d’amygdaline.
Voici la figure tracée avec les résultats :

= 15e 2 0 2/51 . 35° +40° D NET 11)
FTG-22

L'examen des deux tableaux A et B, ou des deux figures I et Il,
montre que, dans les conditions où nous nous sommes placés,
la température la plus favorable au dédoublement de l'amygda-
line par les diastases des amandes douces est située au voisi-
nage de +40 degrés. Nous avions, dans des conditions expéri-
mentales comparables, trouvé + 46 degrés environ pour le
dédoublement du cellose (2;.

Le même examen montre de plus que l’amygdalase et l’imyg-
dalinase se comportent, toujours dans ces conditions spéciales,
à peu près de la même manière sous l'influence de la tempéra-
ture : aux erreurs près d'expériences, en effet, les chiffres sont
identiques et les courbes superposables.

(1) Bull. Soc. Chim., 3e série, t. XXXV, p. 4285 (1906).
(2) Bull. Soc. Chim., 4 série, t. IX, p. 100 (1911).

LA TEMPÉRATURE ET L'ACTIVITÉ DE L'ÉMULSINE 167

Il n’en est plus tout à fait de même si, au lieu de maintenir
15 heures les mélanges en réaction, on limite la durée des
expériences à deux heures (en prenant trois fois plus de diastase,
pour que les proportions de glucoside dédoublé restent faci-
lement mesurables).

Les résultats obtenus dans ces nouvelles conditions sont
rassemblés dans les tableaux C et D ; représentés graphique-
ment, ils fournissent les séries de courbes des figures IE et IV.

TABLEAU C

TEMPÉRATURES P. 100 DE GLUCOSIDE DÉDOUBLÉ EN 2 HEURES
FR d'après
EXTRÈMES L'ACIDE CYANHYDRIQUE
de
chaque
expérience.

GC ER RE PEACE

D5°1-55°5 .

DOPOPATE NAT
5508-56°0 . . .
DHPS-O NOIRE

168 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

TABLEAU D

TEMPÉRATUEES P. 100 D Fo DÉDONSPE EN 2 HEURES
après

CXILEIMES LE POUVOIR RÉDUCTEUR
de
chaque
expérience.

41°8-416 | . .
| 4305-4307 . . .
46:8-46°0 . .
48°6-248°2 .
ADD craie
49°0-49°9 . .
50°8-51°0 .
DURS ee
5908-5300 . . .
5304-5303 . . .

HOME OST
D825-00P20 0
HR EUMENNE

x

Ces nouveaux résultats sont instructifs à comparer soit avec
les précédents, soit simplement entre eux.

Dans le premier cas, ils montrent que la température optimale,
loin d’être une sorte de constante, comme on l’admet habituel-
lement, varie beaucoup, au contraire, avec la durée des expé-
riences. [ci, l’action destructrice de diastase due à l'élévation
de la température étant beaucoup moins marquée que celle
due à la prolongation du chauffage, la température optimale se

trouve située d'autant plus haut que la durée de l'expérience

LA TEMPÉRATURE ET L'ACTIVITÉ DE L'ÉMULSINE 169

est plus courte. Trouvée au voisinage de 56 à 58 degrés après
. < A . . d

deux heures, elle s’'abaisse à 40 degrés environ si on attend

15 heures pour la déterminer.

Fc. 4.

La comparaison des derniers résultals entre eux montre,
d'autre part, que les courbes de l’amygdalase et de l’amygda-
linase, qui étaient sensiblement les mêmes dansles expériences
de 15 heures, sont devenues nettement distinctes : la première

p

170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

présentant un maximum d'activité voisin de +56 degrés et la
seconde de +58 degrés. |
La figure V, obtenue après un décallage en hauteur des cour-
bes partielles et une légère retouche d'ensemble (1), fait ressortir,
en la schématisant un peu, ilest vrai, la manière différente dont
se sont comportées l'amygdalase et l'amygdalinase sous l'in-
fluence de la température, dans les dernières expériences.

\

à
FT

DD MAC TAG RE SU NSE Li FCO ECTS

En résumé, dans la préparation diastasique retirée des aman-
des sous le nom d'émulsine, il y a lieu de distinguer, au point
de vue de l’action sur l'amygdaline, deux diastases différentes :
L° l'amygdalinase, qui, si elle était seule, scinderait la glucoside
en nitrile phénylglycolique et en amygdalose, exactement
comme la vicianinase seinde la vicianine en nitrile phénylgly-
colique et en vicianose (2), et : 2° l'amygdalase, dont l'action

(1) On remarquera qu'en pesant les dix milligrammes de préparation dias-
lasique nécessaires à l'exécution d'une série d'expériences, une erreur d'un
dixième de milligramme correspond déjà à une différence d'un pour cent.
Etant donnés l'état pulvérulent de la préparation et ses propriétés hygrosco-
piques, une différence de plusieurs dixièmes de milligramme est, possible
d'une pesée à une autre. C’est probablement pour cela, surtout, que les
courbes partielles, correspondant à chaque série d'expériences, sont situées
à des hauteurs un peu différentes.

(2) Gab. Berrrano et G. WeisweiLLer, Bull. Soc. Chim., 4 série, t. IX, p. 38,
p. 84 el p. 147 (1911).

LA TEMPÉRATURE ET L'ACTIVITÉ DE L'ÉMULSINE 471

hydrolysante est limitée à l'amygdalose comme celle de la
vicianase l’est au vicianose (1).

L'amygdalinase et l’'amygdalase se comportent à peu près de
même sous l'influence de la chaleur ; elles présentent une tem-
pérature optimale d'autant plus haute que la durée de l'expé-
rience faite pour la déterminer est plus courte. Dans une expé-
rience de 45 heures, la température optimale est presque iden-
tique pour chacune d'elles et voisine de + 40 degrés; dans une
expérience de deux heures, cette température monte à +56 degrés
pour l’amygdalase et à 58 degrés pour l'amygdalinase (2).

Dans les conditions où ils ont été obtenus, ces résultats ne
fournissent pas seulement un argument en faveur de l’indivi-
dualité de l’amygdalinase et de l'amygdalase, ils apportent
encore une preuve nouvelle de la différence, d’abord si difficile
à établir, existant entre ces deux diastases et celle, également
contenue dans l’émulsine, qui hydrolyse le cellose.

Enfin, en se plaçant à un point de vue plus général, ces résul-
tats démontrent de la manière la plus nette que la température
optimale, loin d'être une valeur constante, varie beaucoup avec
la durée de l'expérience et qu'elle ne saurait servir à caractériser
certaines diastases que dans des conditions rigoureusement
comparables.

(1) Gab. BerrranD el G. WEISWEILLER, Bull. Soc. Chim., 4e série, t. IX, p. 38,
p. 84 et p. 147 (1911).

(2) Il est intéressant de rappeler ici qu'en traitant l'amygdaline par l'émul-
sine, à une température non indiquée, Auld a vu se produire relativement
plus de sucre réducteur que d'acide cyanhydrique ou d’aldéhyde benzoïque.
En arrètant l'hydrolyse lorsqu'elle atteignait environ 75 p.100, il a même réussi
à isoler un peu de mandélonitrilglucoside (J. Chem. Soc., t. XCHT, p. 1276,
1908).

H. E. Armstrong, E. F. Armstrong et E. Horton ont observé, d'autre part,
en faisant agir l'émulsine sur l'amygdaline à la température constante de
+ 950, que l'hydrolyse était généralement plus grande lorsqu'on l’'évaluail
d'après le pouvoir réducteur que d’après l'acide cyanhydrique. Dans une
série particulière d'expériences, la différence a augmenté d'abord avec le
temps, puis elle a diminué jusqu'à devenir presque nulle après 25 heures
(Proceedings Roy. Soc., t. LXXX, p. 321, 1908).

Ces résultats, qui ont pu être produits en dehors des différences dans les
températures optima, par la simple disproportion des diastases présentes.
sont au moins d'accord avec les nôtres en ce qui concerne l'existence dis-
tincte de l’'amygdalase et de l'amygdalinase dans l'émulsine.

L'IMPORTANCE DE LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ
DE LA SOURIS

A L'ÉGARD DE QUELQUES FLAGELLÉS

par P. DELANOË

(Avec la PI. III.)

(Travail du laboratoire de M. Mesnil, à l'Institut Pasteur.)

Il y a dix ans que Laveran et Mesxic ont, pour la première
fois, dans un mémoire publié dans ces Annales (1), montré
que l’immunité du rat, blanc ou pie, à l'égard du 7. Lewisi
Kexr, est uniquement d'ordre phagocytaire.

Chez le rat, activement immunisé, ces deux savants on
montré que la destruction des trypanosomes à lieu dans la
cavité péritonéale même, c'est-à-dire au lieu de l'injection, sans
que les parasites puissent pénétrer dans la circulation san-
guine. En observant en goutte pendante et en frottis colorés le
liquide péritonéal d'un rat activement immunisé et récemment
inoculé, Laveran et MEsniz ont très nettement vu toutes les
phases de la phagocytose. Les flagellés, tout en gardant leur
pleine mobilité, se piquent sur les phagocytes. Ceux-ci ne
tardent pas à réagir et poussent de part et d'autre du parasite
deux fins tentacules qui finissent par l'englober en totalité. Le
trypanosome, qui, jusqu'à la fin, n’a cessé de se révolter contre
la prise du leucocyte, une fois inclus dans le cytoplasme de ce
dernier, est très rapidement digéré ; si bien qu'à la coloration,
on ne retrouve, la plupart du temps, à l'intérieur des mononu-
cléaires, que des boules irrégulières présentant les réactions de
la chromatine et qu'il est possible d'interpréter comme les
derniers vestiges de la digestion des trypanosomes.

Chez le rat, passivement immunisé, auquel ils injectent succes-
sivement dans le péritoine un sérum très actif et des trypano-

(1) « Recherches morphologiques et Expérimentales sur le Trypanosome
des Rats (T. Lewisi Kent)», n° du 25 septembre 1901. Voir aussi : Trypanosomes
el Trypanosomiases. Paris, Masson, 1904.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 173

somes, Laverax el Messi constatent la destruction des para-
sites par phagocytose. Les flagellés, demeurés mobiles malgré
l'action agglutinante du sérum, sont englobés en pleine vitalité
et cela tout comme chez le rat en immunité active. Ajoutons
que Laveran et Mesxir ont très minutieusement mis en évidence
que les actions agglutinante et préventive du sérum anti-Lervisi
sont des propriétés nettement distinctes.

Ainsi, dès 1901, Laverax et Mesniz établissent, les premiers,
ces deux faits essentiels : l'immunité active et passive du rat à
l'égard du 7. Lewisi est fonction d'une stimulation phagocy-
taire ; les trypanosomes sont détruits en pleine vitalité.

En outre, dans leur mémoire, ces auteurs montrent que le
cobaye est susceptible de s’infecter légèrement à la suite
d'une inoculation péritonéale de T. Lerwisi : ils constatent, en
effet, pour la première fois, une discrète multiplication des
parasites dans le péritoine de cet animal. Avec KanrHack,
Duran et Bcaxprorp (1), ils établissent que le trypanosome des
rals, inoculé dans le péritoine du cobaye, pénètre dans le sang où
ils le retrouvent déjà vingt-quatre heures après l’inoculation. Les
trypanosomes augmentent d'abord de nombre dans la circula-
tion sanguine jusqu à atteindre 1/20° à 1/50° des hématies, puis
deviennent plus rares et enfin disparaissent. La disparition des
trypanosomes du péritoine est due à la phagocytose.

Il ressort de ces expériences que la phagocytose joue un rôle
capital aussi bien chez le rat, animal réceptif, que chez le
cobaye, animal réfractaire, infectés avec le T. Lewisi. C'est
même pour ces auteurs le seul mode de disparition du
parasite.

Levaprrr et SEvix (2) montrent en 1905 que l'immunité de
la souris et des calfats, naturellement réfractaires au T. paddæ,
est une immunité d'ordre phagocytaire. Le trypanosome,
avant de disparaître, est susceptible de se multiplier légère-
ment.

SAUERBECK (3), dans la consciencieuse étude qu'il a consacrée

(1) Proceedings of the R. Society. t. LXIV, 1898, et Hygienische Rundschau,
no 24, 1898.
(2) Comptes Rendus de lu Soc. de Biologie, 15 avril 1905, p. 694, t. LVIIL.

A

(3) Zeilsch. f. Hyg. und Inf. Krankheilen, 1905.

174 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

à l’histologie pathologique de l'infection des rats, des cobayes,
des lapins et des chiens, par le Trypanosome du Nagana (T. Bru-
cei), considère la phagocytose comme l’arme fondamentale de
la défense. Par la méthode des coupes aussi bien que par celle
des frottis, SauErBEcx a observé la phagocytose dans la rate, le
foie, les ganglions lymphatiques, la moelle osseuse et l’épiploon.
Il a très rarement observé des figures typiques de phagocytose :
il n’a constaté, la plupart du temps, dans les mononucléaires
des viscères et dans les cellules qui leur sont propres (cellules
de Kupffer pour le foie, cellules endo-alvéolaires pour le pou-
mon et peut-ètre cellules endothéliales des sinus pour les gan-
glions lymphatiques) que des restes analogues à des noyaux de
flagellés.

En ponctionnant le péritoine des cobayes inoculés, depuis
vingt-quatre à quarante-huit heures, avec 7. Brucet, SAUERBECK
a pu constater l’attachement des flagellés aux leucocytes, soit
par leur extrémité antérieure, soit par leur extrémité postérieure.
Les trypanosomes attachés à un seul mononucléaire étaient au
nombre de plusieurs, deux, trois el même quatre. SAUERBECK
n'a pu constater l’englobement en pleine vitalité des éléments
lixés. Il ne nie d'ailleurs pas le processus décrit par Laverax et
MEsniz, « puisque ces auteurs l’ont constaté », mais il croit
que ce processus doit être très rare. SAuERBECK pense que le
trypanosome une fois attaché au leucocyte est d'abord paralysé
par un poison que sécrèle le globule blanc. Il perd alors ses
mouvements et, lorsque le phagocyte s'apprête à l’englober, il
est déjà réduit à l’état de « grumeaux » plus ou moins ronds.
Bref, l'originalité de la conception de Sauergeck est que le trypa-
nosome, une fois fixé au phagocyte, est d’abord paralysé par
une sécrétion du globule blanc avant d’être incorporé. « Dans
la règle, dit SauErBECx, il se produit d'abord une fixation, puis
une paralysie (1) ».

Rooer et Varzer (2), dans la rate du rat et du chien naganés
(T. Brucei), constatent à l'approche de la mort et surtout après
elle, une destruction très accentuée des trypanosomes en dehors

(1) « In der Regel aber wird wobhl eine Fixirung und nachfolgende Lähmung
den Process einleiten », p. 717 du tiré à part.

(2) Comptes rendus de l’Acad. des Sciences ; 28 mai 1906, 6 août 1906, 29 juillet
1907, et Archives de Médecine Expérimentale, juillet 1906.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 175

des leucocytes. Pour eux, SauErBEcx à eu tort de négliger ce
phénomène qu'il a vu le premier « pour exagérer l'importance
de la phagocytose (1) ». Celle-cin'’a qu'un rôle secondaire. Elle se
borne à enlever les déchets des trypanosomes détruits par l’action
trypanocide de la rate. Du reste, il n'y a aucun doute. En
mélangeant, entre lame et lamelle, une goutte de sang nagané
et une goutte de suc splénique, Roper et Vazcer n'ont-ils pas
constaté la mort rapide des trypanosomes?

Lavera et Tairoux (2) ont critiqué les résultats obtenus par
Roper et VarLer en ce qui concerne la propriété trypanolytique
de la rate. Leurs expériences ont été faites chez des cobayes
inoculés avec 7. togolense (virus fort de Martini) et des chiens
inoculés avec 7. Pecaudi. Pour Laverax et Tmiroux, les frottis
faits avec la rate, sitôt après la mort, ne montrent pas de trypa-
nosomes désintégrés. L’extrait de rate ne jouit d'aucune action
trypanocide. Les résultats de Roper et Varrer s'expliquent en
grande partie par des fautes de technique (3).

Maxreurez (4), en injectant des T. Lewisi dans le péritoine
de rats immunisés activement ou passivement, a bien vu l’atta-
chement des trypanosomes aux mononucléaires par leur extré-
mité non flagellée. Ce phénomène n'aurait cependant aucune
importance : les trypanosomes, au cours de leurs mouvements,
sont susceptibles de s'attacher à tout ce qu'ils rencontrent sur
leur passage, globules rouges et bulles d'air aussi bien que leu-
cocytes. ManTEUrEL n’a pas vu l'attachement des trypanosomes
être suivi d’englobement. « Une seule fois, il a pu observer,
sans aucun doute, un trypanosome mobile, bien reconnaissable,
à l’intérieur d’un globule blanc. » A l'examen des frottis colorés,

(1) P. 479 du Mémoire des Archives de Médecine Expérir.entale.

(2) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 1‘r et 29 juillet 1907, et Annales de
l'Inslilut Pasteur, t. XXI, août 1907.

(3) Nous noterons ici, simplement à titre documentaire, que Jarré (Centr. f.
Bakter. I, Orig., t. LV, f. 6, 6 septembre 1910, pp. 519-527) a montré que les
produits d'autolyse de la rate du rat, du lapin et du cobaye, neufs ou naganés,
exercent une action trypanocide marquée. Il est, en conséquence, légitime
de se demander si, dans certaines expériences faites in vitro, Roner et VALLET
n'ont pas eu affaire, à leur insu, à des phénomènes d’autolyse. Cette hypo-
thèse est d'autant plus plausible que les expériences de Roner et VALLEr ont
été faites, à Montpellier, en été (p. 481 du mémoire). On sait bien aujourd'hui
que les endoferments cellulaires, responsables des phénomènes d’autolyse,
ont leur optimum d’action à 38 et 40 degrés. Consulter à ce sujet l'excellente
Revue de L. Lauxoy in Bulletin de l'Institut Pasteur, 1908, t. VI.

(4) Arbeilen aus dem Kaiserlichemn Gesundheitsamte, novembre 1909.

1:6 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'auteur n’a rencontré à l'intérieur des leucocytes que de petits
amas, plus ou moins irréguliers, ayant les réactions de la chro-
matine et qu'il interprète comme des vestiges de trypano-
somes. Manrgurez pense que la destruction des trypanosomes
relève exclusivement de la propriété lytique des humeurs.

En février 1909, F. Meswic et E. Brimonr (1) ont étudié le
mode de destruction des trypanosomes du Nagana du Togoland,
T. togolense Mesxiz et Brimonr (2), inoculés dans le péritoine
des souris en mélange in vitro avec le sérum d'un bouc infecté
avec ce virus. Ces auteurs ont constaté que la disparition des
trypanosomes pathogènes a lieu chez la souris d’une manière
identique à celle du 7. Lewisi chez le rat immunisé. L'englobe-
ment du trypanosome du Nagana se fait même plus rapidement
que celui du 7. Lerwisi.

Toujours en février 1909, MassaGcra (3) fit paraître un long
travail dont une grande partie est consacrée à l’étude de l’im-
munité dans les trypanosomiases.

C'est sur le cobaye, injecté avec Le T. Lerwisi, que MassaacrA
poursuivit ses « recherches relatives à la manière dont les
trypanosomes sont détruits quand on les inocule à des animaux
réfractaires ». Les expériences de MassaezrA portent sur deux
cobayes de 300 et 400 grammes.

Pour MassaGzrA, le cobaye serait absolument réfractaire au
T. Lewisi, qui ne passerait pas dans la circulation sanguine et
serait détruit en quelques heures dans le péritoine, à l'endroit
de l'injection. En faisant des ponctions abdominales de demi-
heure en demi-heure, MassaGztA aurait constaté que les trypa-
nosomes ne commencent à êlre détruits qu'au bout d'une
heure et demie à deux heures après le moment de l'injection.
Jusqu'alors, les flagellés resteraient en parfaite intégrité. Il y
a donc, de l’aveu même de MassaGriA, une phase en quelque
sorte latente, qui suit l'injection des parasites, au cours de
laquelle ceux-ci demeurent intacts; phase de durée sensible
puisqu'elle peut persister deux heures, c'est-à-dire la moitié

(1) Annales de l'Institut Pasteur, t. XXIIT, février 1909.

(2) F.'Mesniz. Sur l'identification de quelques trypanosomes pathogènes.
Sociélé de Pathologie Exotique, juin 1910.

(3) Communication faite à la Société médico-chirurgicale de Modène, séance
du 13 février 1909.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 177

du temps nécessaire à la destruction de tous les parasites.
Pour Massaëcra, le rôle de la phagocytose, chez le cobaye, est
sinon nul, du moins très secondaire. Ce sont les trypanoly-
sines contenues dans le liquide péritonéal qui détruisent les
microbes et nullement les phagocytes. La destruction des
trypanosomes à lieu par un mécanisme analogue à celui qui
se passe chez les animaux immunisés contre le vibrion de
Koch (1).

L'immunité active et passive du rat à l'égard du T. Leroisi
serait également pour Massactia d'ordre humoral.

Au mois de septembre 1909, ce savant (2), étendant ses
premières recherches, étudia, dans le laboratoire du professeur
Laveraw, le mode naturel de défense de certains vertébrés à
sang froid — couleuvre à collier, tortues, grenouilles (mainte-
nues à la température ordinaire ou chauffées), tritons, lézards
— à l'égard du trypanosome du Surra, 7. Evansi Sreez, inoculé
sous forme de sang de cobaye, de rat et de souris riche en para-
sites. MassaGciA ne constate pas la phagocytose : les trypano-
somes sont très rapidement détruits en dehors des leuco-
cyles.

Levaorri et Murermizcu (3) ont dernièrement appelé l’atten-
tion sur le mécanisme de la phagocytose.

En mélangeant, dans un tube à essai, 1 goutte de sang de
souris naganée (7. Brucei), des globules blancs de cobaye neuf
et du sérum trypanolytique, préalablement inactivé, de cobaye
saigné au moment de la crise (Roper et Vazcer, MassaGLia), ces

(1) Cette comparaison est faite également par Me Ncar au cours d’un
mémoire sur « le Cycle évolutif du T. Lewisi et du T. Brucei ». Journ. of Inf
Diseases, vol. I, n° 4, 5 nov. 1904, p. 517-543. Voici le passage de Mc NEAL
auquel nous faisons allusion : « By injecting trypanosomes (7. Lewisi) into
the peritoneal cavity of guinea pigs immunized to this organism, and subse-
quently examining the peritoneal fluid, Laveran et Mesniz were able to find
various stages of ingestion ofthe protozoa by the leucocytes. We have attemp-
ted to confirm this by a similar procedure. Instead of phagocytosis, howewer,
we could find evidence only of the immobilization and gradual solution of
the trypanosomes in the peritoneal fluid. Stains made from time to time
showed the protoplasm of the parasites paler than before, until finally it
seemed to have dissolved. The process appeared to be quite analogous to
that met with in the well-Known Pfeiffers phenomenon. In other words, the
trypanosomes disappear as the result of the presence and action of cylolytic
agents rather than by phagocytosis. » P, 526-527.

(2) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, 1 septembre 1909, p. 516.

(3) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, séance du 18 juin 1940, t. LXVIIT.
p. 1079.

42

178 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

auteurs constatent que les trypanosomes, après s'être fixés sur
les leucocytes, sont finalement englobés.

L'attachement des trypanosomes aux leucocytes est un phé-
nomène d'ordre physico-chimique, dans lequel la vitalité des
leucocytes n'est pour rien. Il se produit aussi bien avec des
leucocytes tués (par séjour prolongé à 0 degré, par congéla-
tions et décongélations successives, par chauffage à 45 degrés,
55 degrés et même 60 degrés) qu'avec des leucocytes vivants.

Cet attachement n'en est pas moins spécifique. Mélangés
à une bouillie d'organe (foie ou rein), les trypanosomes se
fixent exclusivement sur les leucocytes contenus dans cette
bouillie.

Le trypanosome, au cours de l’englobement, ne resterail
mobile qu'autant que la région du noyau n'est pas atteinte,
mais, « 4 partir de ce moment, il se meut de moins en moins,
finit par S'immobilhiser et devient transparent (rRYPANOLYSE) avant
qu'il soit totalement phagocyté ». Levavrr et Morermirca
pensent que les leucocytes vivants, excités par l'attachement
de l’objet phagocytable, sécrètent un poison microbicide des-
tiné à imprégner le trypanosome sensibilisé et à le détruire,
avant qu'il soit complètement incorporé. Cette sécrétion aurait
lieu au moment même de l'acte phagocytaire, car il a été impos-
sible à Levanrri et à Murermicu de retirer des globules blancs
une substance capable de détruire in vitro les trypanosomes
sensibilisés.

De cet ensemble de données bibliographiques, il ressort qu'il
existe une divergence d'opinions : Laveran et Mesxir, Mesnir
et Briuoxr décrivent des phénomènes de phagocytose tout à fait
typiques; Massaccra, Manreurez, Roper et Varcer pensent au
contraire que la destruction des trypanosomes relève exclusi-
vement de l’action trypanocide des humeurs, les leucocytes
jouant seulement le rôle de balayeurs de déchets.

SauerBecx est d'opinion mixte : la destruction des trypano-
somes est due au leucocyte. Celui-ei est l’âme même de la
défense. Seulement la destruction des parasites, à cause de
l’activité toxique des globules blancs, arriverait avant que
l’englobement soit complet. Telle est aussi, nous l’avons vu,
l'opinion de Levaprri.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 179

Il n'était donc pas sans intérêt d'envisager à nouveau l’im-
portance de la phagocytose dans la destruction des flagellés.
Nous avons dans ce but étudié, sur les conseils de notre maître

M. Mes, professeur à benne Pasteur, l’immunité de la

souris à l'égard d’un certain nombre de protozoaires.

L'IMMUNITÉ NATURELLE DE LA SOURIS
A L'ÉGARD
DES CULTURES DE BOUTON D'ORIENT ET DE KALA-AZAR TUNISIENS

(Leishmania tropica J. H. Wricur, 1903,
et Leishmania infantum Cu. Nicocce, 1908.)

La souris blanche possède à l'égard des cultures (1) de Kala-
Azar et de bouton d'Orient tunisiens une immunité naturelle
très forte, que des injections péritonéales fréquemment répé-
tées et faites pendant des mois n'arrivent pas à vaincre (1).
Ainsi, du 7 octobre 1910 au commencement de mars 1911, nous
avons, sans aucun succès, inoculé, à cinq ou six Jours d'inter-
valle, douze souris avec des cultures de ces virus arrivées au

(1) Ces cultures ont été aimablement fournies à M. MEsniz par M. Cu.
Nrcore, de Tunis.Elles ont été depuis régulièrement entretenues dans le labo-
ratoire de M. MEesxiz par passages en milieu Novy, simplifié par CH. NicoLLe.

Voici la manière exacte dont nous préparons le milieu de culture : sel
marin, 6 grammes; gélose non lavée, 14 grammes ; eau, 900 cent. cubes. Répartir
dans des tubes sans neutralisation ou alcalinisation préalable, puis stériliser
à l’autoclave par un chauffage à 120 degrés un quart d'heure. Les tubes sont
encapuchonnés et conservés à l'abri de la lumière. Au moment de s'en
servir, on en fait fondre le contenu dans de l’eau bouillante. On les laisse
ensuite se refroidir et quand la température est descendue à 45-50 degrés, on
y incorpore, en volume, un tiers de sang défibriné de lapin. On mélange inti-
mement gélose et sang. Les tubes, afin de permettre au milieu d’adhérer au
verre, sont conservés, inclinés, à 28° pendant une nuit. Le lendemain, on les
encapuchonne de nouveau et on les place à 37 degrés seulement deux à
trois heures. Cela suffit pour permettre au liquide de condensation de se
former en petite quantité. Les tubes sont ensuite placés à la glacière, où on
peut les conserver pendant un mois et plus, à une température voisine de
0 degré, jusqu'au moment de l'ensemencement. Le sang défibriné doit être
aussi frais que possible. Il est entendu qu'avant la préparation des milieux,
on en éprouvera la stérilité par ensemencement en bouillon simple.

(2) MM. A. Laveran et A. Perrir ont pu déterminer chez la souris et le rat
des infections légères, essentiellement guérissables, en leur inoculant une
émulsion de rate et de foie de chien infecté de Kala-Azar tunisien.

180 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

maximum de leur développement. Les injections étaient faites
à la dose de un demi-centimètre cube environ.

Le mécanisme de cette immunité naturelle est des plus
simples. Il est le même, qu'il s'agisse de Bouton d'Orient ou de
Kala-Azar. Il est particulièrement facile à mettre en évidence
avec les cultures de Bouton d'Orient; car ces cultures, en
milieu Novy simplifié, sont sensiblement plus riches que celles
de Kala-Azar. Silôt injectés, les leptomonas de culture se
piquent sur les lymphocytes, gros et pelits, qui normalement
abondent dans le péritoine de la souris. Cette fixation des
flagellés est très rapide. Déjà, une minute après l’injection, on
constale qu'un grand nombre de leptomonas sont adhérents.
En quinze minutes, la fixation est quasi totale. Le nombre des
flagellés attachés à un leucocyte est très variable. On peut en
constater jusqu'à 10 à 12 sur un seul globule blanc. C'est
ordinairement par l’extrème bout du flagelle que les Iepto-
monas se piquent sur les leucocytes, mais ils peuvent y
adhérer soit par leur extrémité postérieure, soit plus rarement
en un point quelconque du corps.

On peut aussi constater, mais rarement, la fixation d’un
leptomonas sur un globule rouge; cette fixation a lieu par
le bout du flagelle. Elle peut être telle que le leptomonas
n'arrive pas à se débarrasser de lhématie, qu'il secoue avec
violence.

La fixation des leptomonas n'a done pas lieu exclusivement
sur les globules blancs. Nous n'avons pas vu plusieurs lepto-
monas attachés à un seul globule rouge. Par contre, ce fait est
très fréquent avec les mononucléaires.

Les lymphocytes ne tardent pas à réagir à la fixation des
protozoaires. On peut les voir, sous le microscope, une fois
accommodés à la température du laboratoire, montrer un petit
promontoire protoplasmique juste au point de fixation du
flagelle, puis, de part et d'autre de celui-ci, allonger deux
minces el fins pseudopodes, transparents et dépourvus de gra-
nulations cytoplasmiques. Ces pseudopodes, peu à peu, gran-
dissent et finissent par saisir en totalité le leptomonas. Une
fois l'englobement complet, le leucocyte rentre ses pseudo-
podes et régularise son contour. Peu après, on voit apparaître
en plein cytoplasme, une vacuole claire, transparente, ronde

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 181

ou plus fréquemment ovalaire, à contours parfaitement nets,
dans laquelle on distingue le leptomonas, renflé en boule,
dont les contours épousent étroitement ceux de la vacuole.
Celle-ci, on le devine, n'est rien autre qu'une vacuole diges-
tive. Rapidement, en effet, le protozaire inclus devient
transparent; les granulations eytoplasmiques de son proto-
plasme sont animées d'un mouvement brownien très net,
diminuent de grosseur, puis de nombre, et ainsi Jusqu'à dispa-
rition complète. Il est d'ailleurs facile de contrôler par des
préparations colorées toutes les phases de la digestion phago-
cytaire qu'on aura pu suivre simplement entre [ame et lamelle.
Il suffit même de déposer sur une lame une goutte de
l'exsudat péritonéal d’une souris neuve et une goutte de cul-
ture et de recouvrir le tout d'une lamelle pour assister en vitro
à toutes les phases de l’englobement.

La technique que nous avons employée, pour la coloration
des frotlis de liquide péritonéal, est la suivante : fixation
humide aux vapeurs osmiques (solution aqueuse à 1 p. 100)
quinze secondes; après dessiccation, surfixation à l’alcool-éther,
parties égales, deux minutes. Laisser sécher. Laver à l’eau
courante et colorer vingt minutes dans une dilution de Giemsa,
au 10° (1 cent. cube de Giemsa pour 10 cent. cubes d’eau dis-
üllée).

Il est nécessaire que la coloration suive de près la fixation.
Des préparations fixées seulement depuis 48 heures se colorent
mal, dans tous les cas moins bien que si elles avaient été
colorées de suite après la fixation.

Pour les frotlis, les dilutions de Giemsa au 10° valent mieux
que les dilutions au 50° ou au 100°. Celles-ci, en raison du
long espace de temps qu’elles exigent (12 à 15 heures au
minimum), donnent lieu à un abondant précipité rougeûtre
qui gène la lecture des préparations. Pour les coupes, au
contraire (nous détaillerons plus loin leur mode de coloration),
les dilutions au 50° ou au 100° valent mieux : le précipité rou-
geâtre est entièrement enlevé par l’acétone au moment de la
déshydratation.

C'est en pleine vitalité que les leptomonas de culture sont
englobés. On se rend surtout compte de ce fait quand on a
affaire à des leptomonas fixés par leur extrémité postérieure.

182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le flagelle, qui est alors la dernière partie englobée, reste
mobile jusqu'à complète disparition. Nous n'avons Jamais con-
staté d'action lytique en dehors des globules blancs. Le sérum
de la souris n’a d’ailleurs aucune action nocive sur les cultures
de Bouton d'Orient et de Kala-Azar; par l’immunisation, on
développe simplement une légère propriété agglutinative qu'on
ne peut d’ailleurs affirmer que dans le cas des cultures de
Bouton d'Orient, puisque le Kala-Azar donne déjà en culture
de nombreux amas de microbes. Notons, en passant, que les
leptomonas des cultures de Bouton d'Orient s’aggelutinent de
facon quelconque; ils se rapprochent les uns des autres et
s’entremêlent sans disposition spéciale. On ne peut donc
trouver ici confirmation de la théorie de Prowazer (1905),
qui prétend qu’au cours de l’agglutination des trypanosomes
en rosaces, le blépharoplaste sécrète une substance visqueuse
qui tend à les réunir les uns aux autres. Si cette théorie était
exacte, les leptomonas auraient tendance à se grouper par
leurs extrémités antérieures.

Bref, l’immunité naturelle de la souris à l'égard des Leish-
mania tropica et infantum, en culture, estune immunité d'ordre
exclusivement phagocytaire. Les leptomonas,introduils dans le
péritoine, sont l'objet d’une phagocytose rapide. En une
1/2 heure à 3/4 d'heure, une souris neuve se débarrasse
totalement des flagellés contenus dans 1/2 cent. cube de culture
arrivée au maximum de richesse.

Enfin, même en injectant de très fortes doses de culture dans
le péritoine d’une souris, 2 à 3 cent. cubes par exemple, on ne
constate Jamais la pénétration des éléments flagellés dans le
sang. La défense est victorieusement assurée par les seuls lym-
phocytes de la cavité péritonéale.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 183

L'IMMUNITÉ NATURELLE DE LA SOURIS
A L'ÉGARD DES CULTURES DE TRYPANOSOMES DIVERS

(T. rotatorium MAYER, 1843; 7°. noctuæ SchAUDINN, 1904; 7”. scardinii
BruuwpT, 1906; 7°. phoxini (1) Brumpr, 1906; 7°. T'heileri LAVERAN,
1902, et 7°. vespertilionis BatraGztA, 1905.)

La culture de ces divers flagellés a été faite, par nous, au
laboratoire de M. MEsniz, dans le milieu de Novy-Nicolle, dont
nous avons donné la formule et le mode de préparation.

Nous avons isolé le T. rotatorium Mayer le 8 mai 1911, d’une
Rana esculenta L., achetée sur les quais de la Seine. La culture
de ce trypanosome fut entretenue pendant # mois. Elle se fait
très abondante du 8° au 10° jour, à la température ordinaire
du laboratoire. L'isolement fut fait en ponctionnant la veine
abdominale, que l’on découvre après incision et écartement de
la peau. Cette veine est recouverte par une légère couche mus-
culaire, qu'il est facile de cautériser complètement sans léser
aucunement le vaisseau. A la ponction, on recueille, par aspi-
ration, plus de 1/2 cent. cube de sang. Ce procédé nous a
paru plus pratique et plus fidèle que celui de la ponction du
cœur : il nous à constamment donné des succès. Nous avons
inoculé aux souris des cultures de T. rotatorium des 5°, 6°, 7°,
8° et 9° générations, faites du 5 juin au 26 juillet 1911.

Le T. noctuæ, avec lequel nous avons expérimenté, provient
du laboratoire du professeur Harrmaxx. Nous l’entretenons
régulièrement depuis le 15 mai 1911. Les cultures de T. noctuzæ
sont remarquables par leur richesse.

Nous avons isolé T. scardini de rotengles (Scardinius ery-
throphtalmus) provenant de l'étang de Garches. L'isolement fut
pratiqué le 25 mars 1910. Ce trypanosome fut entretenu pen-
dant plus d'un an en milieu artificiel. Nous avons inoculé aux
souris des cultures provenant des 15°, 16°, 18° et 19° générations
faites du 27 novembre 1910 au 30 janvier 1911.

(1) Nous employons les noms spécifiques créés par Bruwrr et dérivés du
nom générique du poisson infecté. Mais il est très possible qu'il n’y ait pas
là d'espèces distinctes du T. Danilewskyi LAverAN et MEsxiz de la carpe.

184 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avons isolé T. phoxini de vairons (Phoxinus lœvis
AGass.) achetés sur les quais de la Seine. L’isolement, difficile
en raison de la petitesse de l'animal, fut fait, pour la première
fois, par nous le 29 novembre 1910. Nous avons entretenu ce
trvpanosome pendant 8 mois en milieu Novy-Nicolle. Nous
avons inoculé aux souris des cultures provenant des 3°, 4°, 5°
et 6° générations faites du 14 février au 7 mars 1911.

Nous avons isolé (1), le 15 janvier 1911, un trypanosome
voisin de 7. Theileri des bœufs d'Alfort, dans le service de
M. le professeur Moussu. La première culture fut faite en
bouillon simple, les suivantes en milieu Novy-Nicolle. Nous
avons inoculé aux souris Les cultures des 5°, 6°, 7° et 8° passages,
ensemencées du 3 au 23 mars 1911 et injectées au maximum
de leur croissance, vers Le 7° jour.

Le T. vespertilionis, qui nous a servi, est dû à l’amabilité de
M. Cu. Nicorze. Ce trvpanosome, qui fut cultivé par nous pen-
dant près de deux ans, est isolé depuis 1907; et à partir de ce
moment, il fut sans interruption cullivé en milieu de Novy-
Nicolle.

L'immunité naturelle de la souris à l'égard de ces divers
flagellés est très forte. Les microbes ne pénètrent jamais dans
le sang quand ils sont injectés dans le péritoine, même à haute
dose. Ils sont détruits sur place, en 1/2 heure au plus. On peut
se faire une idée irès exacte de la rapidité de destruction en
mélangeant sur lame une goutte de culture et une goutte de
liquide péritonéal d'une souris neuve. Très rapidement, les
Crithidia el les irypanosomes de culture sont la proie des
mononucléaires (2). Fixés généralement par leur extrémité
postérieure, on peut, en 3 à # minutes, assister à leur englo-
bement complet. Les flagelles, dernière partie englobée, restent
mobiles jusqu'à la fin, c’est-à-dire jusqu’à ce qu'ils soient
entièrement pris par les deux minces pseudopodes du leucocyte.
C'est donc en pleine vitalité que les flagellés des cultures sont
détruits. La phagocytose est le seul mode de destruction des
parasites, et il est très facile de s’en assurer.

(1) Soc. de Pathologie exotique, séance du 11 octobre 1911, t. IV, n°8.
(2) Les polynucléaires sont susceptibles, mais dans une très faible mesure,
de jouer le rôle de phagocytes.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 185

L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS A L'ÉGARD
DE T. LEWISI KENT, 1881.

A. — IMMUNITÉ NATURELLE. SON MÉCANISME.

Les souris sont, en général, réfractaires au T. Leuusi. Le fait
est classique.

Nous avons vu que les flagellés de diverses cultures de pro-
tozoaires sont {rès rapidement phagocytés in vivo comme
in vitro par les leucocytes de la souris.

Avec le 7. Lerisi, il n'en va pas de même. Zn vitro, le mélange
de sang trypanosomé et de liquide péritonéal n'est pas suivi de
phagocytose.

Chez le vivant, l'injection des trypanosomes dans le péritoine
est suivie d’une phase latente, de durée variable, pendant
laquelle les flagellés, non seulement se conservent, mais
peuvent se multiplier, ce qu'atteste la présence de pelites
formes et de rosaces à 4 ou 5 éléments au plus. Levanini
et SEvIN, nous l'avons vu, ont constaté un fait analogue chez
les calfats naturellement réfractaires au 7. paddæ.

Les trypanosomes peuvent, en parlie, facilement pénétrer du
péritoine dans le sang. Après une forte inoculation (1/2 à 1 cent.
cube de sang trypanosomé), déjà 20 minutes à 1/2 heure après,
on peut se rendre compte de cette pénétration : en examinant
une goutte de sang prise à la queue, on y constate de rares
trypanosomes. Ceux-ci augmentent de nombre pendant plu-
sieurs heures (4 à 5 en moyenne), puis leur nombre décroiît
lentement. Les trypanosomes cessent d’être visibles dans le
sang plus rapidement que dans le péritoine. La disparition
totale des parasiles à lieu entre 36 et 48 heures. LAVERAN
et MEsxiz, avant nous, ont, à ce sujet, fait des constatations
analogues. « Après avoir injecté, disent-ils, du sang riche en
trypanosomes dans le péritoine des souris blanches, nous avons
vu que les trypanosomes se retrouvaient dans le péritoine et
dans le sang après 24 heures; au bout de 48 heures, ils avaient
toujours disparu (1). »

(4) Loc. cit.

186 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Lorsqu'on inocule une dose faible, 1 à 2 gouttes de sang, pour
se rendre compte de la présence des trypanosomes dans Île
torrent circulatoire, il faut sacrifier les souris, aspirer le sang
du cœur et le centrifuger : on trouvera des trypanosomes dans
le culot de centrifugation.

Bref, que l’on injecte une dose forte ou faible, la pénétration
des trypanosomes dans le sang a toujours lieu; de telle sorte
que, pour résoudre le problème de limmunité naturelle de la
souris, il faut se demander ce que devient le 7. Lewis, non
seulement dans le périloine, mais encore dans les viscères.

Lorsqu'on ponctionne, à intervalles rapprochés, le péritoine
d’une souris inoculée, on constate très nettement, lors des
deux ou trois premières ponclions, que les trypanosomes sont
tous ou presque tous entièrement libres et dans un parfait état
d'intégrité. Roupsky (1) a vu, à l'état frais, des mononucléaires
de souris phagocyter des trypanosomes, et cela par le même
processus que Laverax et Mesniz ont fait connaître chez le rat
immunisé et chez le cobaye. Nous avons, de notre côté, fail
semblable constatation. Mais il faut ajouter que la phagocytose
se constate rarement. Et c’est bien là qu'est la difficulté du
problème. Le plus souvent, on n’observe que des trypanosomes
fixés par leur extrémité postérieure sur les leucocytes. Ceux-ei
ne réagissent pas à l'attachement des protozoaires et l’on peut,
pendant des heures, observer des trypanosomes piqués sur des
mononucléaires, sans que la moindre réaction se manifeste de
la part du globule blanc. Les leucocytes de la souris, placés
entre la lame et la lamelle, à la température du laboratoire, se
trouvent dans des conditions très désavantageuses pour phago-
cyter le 7. Lewisi. Nous avons vu qu'il en était tout autrement
avec les flagellés des cultures. Pour que la phagocytose du
Leiwisi puisse se faire in vitro, il faut qu'elle débute dans le
péritoine et qu'elle soit déjà en partie faite. De là, sans aucun
doute, la difficulté que l’on éprouve à la constater. Comme l'acte
phagocytaire est difficilement visible, dans l'espoir de mieux le
rencontrer, nous n'avons pas hésité, ainsi que l’a fait MassaGLra
chez le cobaye, à multiplier les ponctions péritonéales. A partir
d'un nombre de ponctions, variable suivant les souris, nous

(4) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 6 mai 1941, &. LXX, p. 693.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 187

avons constaté la présence de trypanosomes détruits en dehors
des leucocytes. Dès lors, il fallait se demander si la disparition
des parasites est due à la phagocytose ou à l’action trypano-
lytique du liquide péritonéal, ou encure à ces deux processus
réunis. Après de nombreuses recherches, nous avons la con-
viction que la phagocytose est le seul processus normal de
destruction des trypanosomes. Par la répétition des ponctions,
on met le péritoine dans un véritable état pathologique. On
sait bien aujourd’hui qu'il suffit d'une simple piqûre de la paroi
abdominale pour amener, durant plusieurs heures, une leuco-
pénie plus ou moins manifeste, sur le déterminisme de laquelle
on ne s'entend pas d'ailleurs pas.

Pour les uns, du fait seul de la piqûre, il y a destruction
d'un nombre plus ou moins considérable de leucocytes; pour
les autres, la piqûre amène la transformation du fibrinogène
du liquide péritonéal en fibrine; le réseau de fibrine, en se
constituant, enserrerait dans ses mailles plus ou moins de leu-
cocytes. Quoi qu'il en soit, il paraît établi que toute piqûre de
la paroi du ventre, si minime soit-elle, surtout chez un animal
aussi petit que la souris, peut entrainer des lésions appré-
ciables. Nous pensons que celles-ci sont constituées, pour une
grande part, par des altéralions leucocytaires. Nous avons,
en effet, constaté sur les froltis de liquide péritonéal, prélevé
après plusieurs piqûres abdominales, des leucocytes avec des
noyaux en karyolyse, réduits à l'état de boules régulières,
mais d'inégale grosseur, répandues dans le cytoplasme : témoi-
gnage histologique indéniable de la souffrance du péritoine.
Grâce aux altérations des leucocytes, les substances trypano-
lytiques contenues dans les phagocytes diffusent dans Île
liquide péritonéal. Cette hypothèse se renforce du fait que
nous avons assisté tn vitro à la destruction extracellulaire des
trypanosomes. En voici, entre plusieurs autres, un exemple
des plus convaincants : le 22 mars 1911, nous inoculons, dans
le péritoine d’une souris neuve, de 20 grammes, un centimètre
cube de sang citraté d’un jeune rat très fortement infecté.
Treize heures après, le sang de la souris contient quinze à
vingt parasites par champ (oculaire compensateur n° 4, objectif
STIASS\IE n° bd). Nous en mettons une goutte entre lame et
lamelle que nous lutons à la paraffine. Nous traitons de même

188 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

une goulte de liquide péritonéal de ponction. Les trypano-
somes, sitôt qu'ils viennent d'être retirés de l'organisme, sont
tous, sans exception, très mobiles. Les préparations, de con-
trôle, au Giemsa, montrent que les trypanosomes sont en
parfait état d’intégrité. Au bout de dix minutes, manifeste-
ment au bout d'un quart d'heure, alors que les flagellés
contenus dans la goutte de sang conservent leur aspect nor-
mal, les trypanosomes contenus dans le liquide péritonéal
montrent des altérations de plus en plus accentuées. Celles-ci
débutent à certains endroits de la préparation; puis, elles
s'étendent et se généralisent. C’est d’abord une paralysie no-
table du trypanosome; le flagelle et la membrane ondulante
se mouvant si paresseusement qu'il devient incapable de se
déplacer. Finalement, c’est l’immobilité complète. Alors, le
protoplasme devient clair, vitreux ; il montre des vacuoles
d'inégale grosseur, de plus en plus nombreuses. Le contour du
trypanosome finit par ne plus être reconnaissable ; on ne voit
plus que le flagelle auquel adhère le blépharoplaste. Bref, le
trypanosome a littéralement fondu, en l’espace de quinze à
vingt minutes, sous l'œil qui l’'observait. La destruction des
trypanosomes s’échelonne pendant plusieurs heures. Au bout
de six heures, presque tous les trypanosomes sont détruits.
Les trypanosomes, contenus dans la goutte de sang, gardent,
au contraire, leur intégrité première. Roupsky (1) a observé, de
son côté, que « le sérum sanguin de la souris blanche consti-
lue un milieu favorable pour la conservation ?n vitro du
T. Lervisi ».

Aïnsi, en conservant, entre lame et lamelle, le liquide péri-
tonéal de souris infectées, les trypanosomes, très mobiles au
sortir de l'organisme, peuvent se détruire complètement en
l'espace de quelques heures et se réduire à l'appareil flagel-
laire.

Il faut, en conséquence, se résigner à ne ponctionner qu'une
fois le périloine des souris et à faire, silôt après la prise, des
frottis avec le liquide péritonéal de ponction. Le seul inconvé-
nient de cette technique est de multiplier beaucoup le nombre
des animaux mis en expérience. On devra également ne tenir

(1) Comples rendus de la Soc. de Biologie, séance du 12 mars 1910.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 189

compie que des préparations d'une parfaite coloration : de la
sorte, on constate que les trypanosomes retirés des péritoines
des souris, quel que soit le moment de la ponction, sont en
parfaite intégrité. Par contre, sur ces mêmes frottis, on ren-
contre, par lame, deux ou trois figures indéniables de pha-
gocytose.

Il est probable que la digestion des trypanosomes se fait très
vite; la digestion du protoplasme serait très rapide, car, avec
la plupart des auteurs, nous n'avons que très rarement observé
dans les leucocytes des trypanosomes renflés en boule à l’inté-
rieur de vacuoles digestives. Nous avons seulement vu, plon-
geant en plein cytoplasme cellulaire et tranchant vigoureuse-
ment par contraste de coloration, le noyau et le blépharoplaste.
Fréquemment, le blépharoplaste existe seul. Aïlleurs, nous
avons observé dans Îles leucocytes des enclaves ayant la
réaction de la chromatine nucléaire; sont-ce des restes de
trypanosomes digérés?

Nous avons aussi recherché la destinée des trypanosomes
dans les viscères. Nous fûmes obligé, dans ce but, d’inoculer
aux souris une forte proportion de virus (au moins 1/2 cent.
cube de sang; la plupart du temps, 1 à 2 cent. cubes de sang).
Avec les doses faibles (1 à 2 gouttes), la quantité de trypano-
somes qui passent dans la circulation est si faible, qu'il serait
puéril de vouloir les rechereher sur les coupes. Nos recherches,
tant par la méthode des frottis que par celle des coupes, ont
porté principalement sur la rate, le foie, les poumons, les gan-
glions lombaires, la moelle osseuse : accessoirement, sur lépi-
ploon et la paroi abdominale fixée en pleine épaisseur muscu-
laire. Les souris étaient tuées au chloroforme ou asphyxiées
au gaz d'éclairage.

D'une manière générale, au point de vue de [a coloration des
trypanosomes, les frottis nous ont donné des résultats bien
supérieurs à ceux des coupes. Nous n'avons pas réussi à diffé-
rencier le flagelle des trypanosomes contenus dans les coupes.
Par contre, nous avons coloré avec une grande netteté le corps
même du trypanosome ainsi que les noyau et blépharoplaste :
le cytoplasme apparaît en bleu délicat, très finement alvéolaire :
le noyau en rouge; le blépharoplaste en violet foneé.

La méthode que nous avons employée pour la fixation et la

190 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

coloration des coupes est à peu près celle qu'a fait connaître
dernièrement Gremsa (1). Comme fixateur, le sublimé hydro-
alcoolique acétique de ScHauninx et PROWAZER :

Solution saturée aqueuse de sublimé . . . . . . 2 parties.
Alcool 'absolutoutan5 "degrés: : . . Tel partie:
Acide acétique pur, 1 p. 100 du total.

Suivant les conseils donnés par M. Borrez dans ses Cours,
c'est à la glacière, à une température voisine de 0 degré, que
nous avons fait nos fixations. Comparativement, les fixations
faites à basse température nous ont paru supérieures à celles
faites à la température du laboratoire. Suivant la grosseur des
pièces, le temps de la fixation varie de 5 à 12 heures. Les
poumons ont été fixés ?n foto, suivant l'excellente pratique
préconisée par M. Borrez (2), la trachée est liée avant que
d'ouvrir le thorax. Puis, tout l'arbre pulmonaire est enlevé d’un
bloc, plongé à même le fixateur et recouvert d'une couche d’ouate
hydrophile suffisante pour empècher les poumons de flotter. Au
bout de 5 à 6 heures, pour faciliter la pénétration du fixateur,
on pratique au bistouri des incisions dans les poumons. Au
bout de 12 heures, la fixation est faite.

La ligature de la trachée avant l'ouverture du thorax a pour
but de fixer le poumon en extension physiologique. Sans cette
précaution, les alvéoles s’affaissent parfois, si bien que les
coupes deviennent absolument illisibles. Avec des alvéoles
moyennement distendues, les coupes de poumons apparaissent
comme une dentelle bien ajourée, et il devient très simple de
s’y retrouver.

Au sortir du fixateur, afin d'être bien certain d'enlever tout
le sublimé, les fragments d'organes sont plongés pendant trois
jours dans l'alcool à 70° iodé. Puis, on les fait passer par la
série classique : alcool à 80 degrés, 24 heures; alcool à 95 de-
grés, 24 heures; alcool à 100 degrés, 12 heures; xylol,
12 heures; xylol-paraffine, 12 heures; paraffine, 12 heures.
Les coupes sont débitées à 6 & et colorées au Giemsa en solu-
tion faible : 1 goutte pour 2-5 cent. cubes d’eau distillée.

(1) Deulsche mediz. Woch., 1910, n° 12.
(2) Annales de l'Institut Pasteur, &. VII, p. 593.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 191

Laisser agir trenle-six à quarante-huit heures, et renouveler
le bain colorant au bout de vingt-quatre heures. La déshydra-
tation, après lavage à l'eau courante, a lieu dans des mélanges,
à proportions variables, d'acétone et de xylol. Il est pratique
de mettre ces mélanges dans des tubes Borrel étiquetés 1, 2,
3 et 4, et de porter les lames successivement du tube 4 au
tube #.
Les mélanges contenus dans les tubes sont les suivants :

Hubete ir ACEtONes 2: 1504000 1-0 0905rcent.icubes:
VID IEEE 4e. 1e |. 1 CPR ESSTS —

RUES PACÉLONES." … . : : SE ee eul0 —
TOITS ET RENNES À —

Tube le = eAGéÉ One 2 de TEE 0 _—
NII ed 6. CU TNT D =

Tube IV. — Xylol pur.

Après passage dans le tube #, il ne reste plus qu'à monter
au baume.

D'après S.-B. Wozcsack et S.-H. Mc Ke, l'addition de colo-
phane à l'acétone (20 p. 100 de colophane) empècherait la
décoloration de l’éosine. Nous n'avons pas obtenu de meilleurs
résultats en appliquant ce procédé (4).

Nous devons tout de suite dire que, sur les nombreuses
coupes que nous avons pratiquées, nous n'avons pas trouvé
une seule figure histologique susceptible d’être interprétée
nettement comme le résultat de la phagocytose. Nous avons
simplement rencontré dans les phagocytes des enclaves ana-
logues à celles des leucocytes du péritoine. Par contre, nous
avons constaté avec la dernière netteté que les trypanosomes
contenus dans les viscères, et notamment dans la rate (2),
sont en parfait état d’intégrité, ce qui rend très improbable
leur destruction par (rypanolyse.

Il nous est arrivé à maintes reprises de voir des trypano-
somes piqués sur les leucocytes et à divers stades de phago-
cytose sur des frottis de rate et de ne rien constater de sem-

1) Journ. of med. Res., t. XXIV, n° 2, avril 1911.

2) Quand on examine, entre lame et lamelle, un fragment de rate trypa-
nosomée disséquée dans de l'eau physiologique, il passe dans le champ du
microscope une série de formes bizarres que l’on pourrait prendre pour
des trypanosomes altérés et qui ne sont en réalité que des amas d'hémato-
blastes. Aussi ne doit-on faire confiance qu'aux préparations colorées.

192 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

blable sur les coupes. Ce résultat s'explique par l'imparfaite
coloration des trypanosomes autant que par le trop grand tas-
sement des éléments cellulaires dans les coupes. Du fait de la
compression des leucocytes, il y a une réelle impossibilité à
dire si les trypanosomes sont à l’intérieur des leucocytes ou
simplement à côté d'eux, étant donné que le cytoplasme du
phagocyte et celui du trypanosome se colorent dans le même
ton, en bleu plus on moins foncé. Les trypanosomes, dans la
rate, se rencontrent au niveau de la pulpe splénique et surtout
au niveau des sinus veineux. Nous n'avons pas noté leur pré-
sence au niveau des corpuscules de Malpighi.

Une lésion est constante au niveau du foie : l'hyperplasie
des cellules de Kupfter. Celle-ci peut présenter tous les degrés.
Tantôt, elle se limite au simple boursouflement du noyau:
tantôt, c'est toute la cellule qui est tuméliée, allongée en un
long fuseau, parallèlement au vaisseau. Il est probable que
les cellules de Kupffer en hyperplasie abandonnent la paroi
des capillaires, car ceux-ci peuvent être dénudés sur un par-
cours plus ou moins long. L'endothélium des capillaires hépa-
tiques joue vraisemblablement un rôle actif dans la phagocy-
tose des trypanosomes. Il nous est cependant impossible d'en
fixer exactement l'importance, car nous n'avons trouvé dans
le cytoplasme des cellules endothéliales que des fragments
irréguliers, ayant les réactions de la chromatine et qu'on ne
pouvait qu'hypothéliquement rapporter à des trypanosomes
dégénérés. |

Les capillaires hépatiques des souris infectées sont plus riches
en globules blancs que normalement. On y rencontre peu de
lymphocytes, surtout des mononucléaires gros et moyens el
quelques mastzellen. Le cytoplasme des mononucléaires des
capillaires contient fréquemment des enclaves chromati-
ques. ;

L'abondance des trypanosomes dans les vaisseaux du pou-
mon contraste singulièrement avec leur rareté dans les vais-
seaux des autres viscères. Cela est, sans doute, dû à ce que
les poumons sont, dans un temps donné, traversés par une
quantité de sang infiniment plus grande que celle qui traverse
les autres organes. Nous avons facilement trouvé des trypa-
nosomes jusque dans les fins capillaires, à peine plus larges

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 193

qu'un globule rouge, qui rampent à la surface des alvéoles.
Ces trypanosomes n'étaient séparés de la lumière alvéolaire
que par la couche endothéliale limitante. Nous n'avons jamais
constaté la pénétration des trypanosomes dans l’intérieur des
alvéoles. L'endothélium alvéolaire ne joue donc aucun rôle dans
la destruction de T. Lewisi. Nous rappelons, par comparaison,
que SauERBECk à Constalé la pénétration de 7. Brucei dans les
alvéoles des poumons du rat, et la phagocytose de ce trypano-
some par l’endothélium alvéolaire.

Le tassement des éléments lymphatiques est tel au niveau
des ganglions lombaires qu'on ne peut avoir aucun renseigne-
ment utile de l'examen de la couche corticale et du système
caverneux. Le tissu sous-capsulaire donne seul des rensei-
gnements utiles : à son niveau, les cellules Ilymphatiques sont
écartées les unes des autres et les trypanosomes peuvent facile-
ment être mis en évidence. On note leur intégrité parfaite. On
trouve également des trypanosomes en parfait état dans les fins
capillaires du tissu graisseux qui entoure incomplètement la
capsule du ganglion.

La moelle osseuse des fémurs et des tibias n'a été examinée
qu'en frottis. Elle contient de rares trypanosomes, tous in-
tacts.

La phagocytose doit être accentuée au niveau de l’épiploon,
à la surface duquel nous avons rencontré, dans un réseau de
fibrine, un grand nombre de leucocytes parfois littéralement
bourrés d’inclusions chromatiques.

En somme, les coupes renseignent sur la distribution topo-
graphique des trypanosomes dans les viscères et l'existence
dans les leucocytes de nombreuses inclusions chromatiques qui
sont vraisemblablement des trypanosomes en voie de digestion.
En plus, elles montrent très nettement l'absence de trypano-
lyse en dehors des globules blancs.

B:

MÉCANISME DE LA GUÉRISON. IMMUNITÉ ACTIVE ET PASSIVE.

SOURIS RÉCEPTIVES.

Il était classique d'admettre jusqu'ici que la souris est réfrac-
taire au T, Lervisi. En modifiant expérimentalement ce virus, et,
pour employer l'expression de MM. Lavera et Perrnir, en le

13

194 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

« renforçant », Roupsxy, le premier, a pu inoculer en série des
souris (1). Il déclare d'ailleurs, avec les auteurs, que cet ani-
mal est réfractaire non seulement au virus normal, mais
encore aux cultures de celui-ci.

Les faits que nous apportons corroborent les données de
Roupsky en les élargissant, si on peut ainsi dire. Nous avons
pu, en effet, à notre grande surprise, infecter d'emblée des
souris avec le Lewisi normal, tel qu'on le trouve soit chez un
rat d’égout (infection spontanée), soit chez un rat blanc ou pie
(infection expérimentale), soit encore dans les cultures (2).

Les souris ont été infectées par inoculation d'une simple
goutte de sang prise à la queue d’un rat, soit au moment de la
période d'état de l'infection sanguine, soit à celle de la multi-
plication des parasites. On peut, au lieu de sang, se servir du
liquide péritonéal d’un jeune rat récemment inoculé. Le pour-
centage des résultats positifs n’est pas plus élevé quand on se
sert d’un sang riche en formes de multiplication. Les souris de
T1 à 8 grammes ne sont pas plus sensibles que les souris de
15 à 20 grammes.

Nos expériences ont été faites avec 3 origines différentes de
Leivisi, que nous numérotons 1, 2 et 3. Les Lewisi 2 et 3 ont
été isolés par nous de rats d'égout. En faisant des inoculations
péritonéales à l’aide d’une goutte de sang de rat infecté, sur
26 souris inoculées avec le Lerisi 1, nous avons eu 6 résultats
positifs; sur 10 souris inoculées avec le Lerwisi 2, 4 succès; et
sur 42 souris inoculées avec le Lewis 3, seulement 5 succès.
On peut, de ces 3 séries d'expériences, conclure que les diffé-
rentes races de Lewisi ne sont pas également inoculables d’em-
blée à la souris; elle peut être complètement réfractaire à
cerlaines races.

La souris peut également être infectée par la voie sous-

(1) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 5 el 12 mars 1910, 12 novembre 1910;
et Comptes rendus de l' Acad. des Sciences, 5 janvier 1941.

(2) Nous avons, pour la première fois, signalé dans les cultures de T. Lewisi
de petits trypanosomes qui, après fixation humide aux vapeurs osmiques el
coloration lente au Giemsa, ont, en moyenne, 1 u 8 de long sur 1 w 7 de large.
Le blépharoplaste fait souvent saillie tout à l'extrémité postérieure du para-
site. Ces petits trypanosomes de culture ressemblent beaucoup aux « small
trypanosomes » signalés par SWELLENGREBEL et SrRICKLAND dans l'intestin de la
puce du rat, Ceratophyllus fasciatus Bosc. Consulter à ce sujet la note que
nous avons fait paraître à la Sociélé de Biologie, Séance du 6 mai 1911, p. S0%,
t. LXX.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 195

cutanée, qui est aussi bonne que la voie péritonéale. Nos injec-
lions, pour la plupart, par simple commodité d'étude, ont été
faites dans le péritoine.

Nous avons pu infecter des souris en leur inoculant des
cultures faites en Novy-Nicolle. Nous avons constamment eu
un pourcentage de résultats positifs plus élevé avec les cultures
qu'avec le sang du rat. Et cette différence, très certainement,
ne tient pas à ce que la dose de culture contenait plus de para-
sites que celle du sang; car, on n’a pas de résultats meilleurs
en inoculant à des souris de fortes doses de virus; l’immunité
naturelle, quand elle existe, est, en effet, une immunité très
solide, que l’on ne peut faire fléchir en injectant de grandes
quantités de trypanosomes. Alors que, sur 26 souris inoculées
dans le péritoine avec une goutle de sang à Lerwvisi 1, 6 seule-
ment prennent la maladie, sur 23 souris inoculées dans le
péritoine avec des cultures de ce virus, 11 s’infectent. De même,
sur 42 souris inoculées avec du sang à Lewvisi 2, 5 succès; et
sur 19 souris inoculées avec les cultures de ce virus, 10 succès.
Il faut en conclure que T. Lerwisi en culture perd un peu de
sa spécificité étroite pour le rat, etque, de ce fait, il peut mieux
infecter la souris. Rappelons, à ce sujet, que Roupsky, dans
la première note qu'il a communiquée, indiquait comme idée
directrice d'élucider l'influence des passages en milieux de cul-
ture sur l’évolution de 7. Lerwvisi.

Il nous a semblé que la maladie n'évolue pas chez la souris
avec cette régularité ponctuelle que Lavera et Mesxiz ont fait
connaître chez le jeune rat. L'infection du sang se fait soit en
même temps, soit après celle du péritoine. La durée de la
maladie est très inégale : en moyene, 15 jours; maximum,
24 jours; minimum, # à 5 jours. La disparition des parasites
a parfois lieu brusquement; bien plus souvent, elle se fait len-
tement, progressivement, durant 2 à 3 jours. Les formes de
multiplication dans le péritoine et dans le sang sont absolu-
ment identiques à celles du rat. A noter dans certains cas la
présence, seulement durant la phase de multiplication des
parasites, de trypanosomes sans flagelle libre, quoique avec
une membrane ondulante bien développée, et surtout de
formies à blépharoplaste seul, sans noyau, et qui, à la colora-
tion, nous paraissaient être en parfaite intégrité. Ces formes à

196 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

blépharoplaste seul sont toujours très rares, au nombre de 4
ou ÿ au plus sur un frottis. Nous avons dernièrement constaté
la présence de formes à blépharoplaste seul dans le sang de
jeunes rats, pesant 15 grammes, inoculés depuis 5 à 8 jours,
en pleine période de multiplication sanguine des parasites.

À la période d'état de l'infection, les trypanosomes, chez la
souris comme chez le rat, sont d’une régularité parfaite.

Il est plutôt exceptionnel que l'infection de la souris soit
légère. Le plus souvent, il y abondante multiplication des
parasites. Notamment, les rosaces sont, dans le sang, quelque-
fois si nombreuses qu'on peut en rencontrer avec un objectif 5,
jusqu'à 7 à 8 dans un champ microscopique. L’infection trypa-
nosomienne peut, ainsi que l’a signalé Roupsxy, entraîner la
mort. Nous avons observé celle-ci 2 fois sur 233 cas, dont 55
positifs. La multiplication des parasites dans ces 2 cas mortels
a duré jusqu'à la mort, survenue 3 et 5 jours après l’inocula-
tion. Le sang était si riche en parasites qu’il était manifeste-
ment décoloré, comme un liquide rosé. Aucune bactérie,
aérobie ou anaérobie, n’a cultivé. Une fois sur deux, la mort
est survenue brusquement, comme chez un rat nagané.

À vrai dire, nous avons observé la mort 5 fois. Seulement,
dans 3 cas, le sang des souris mortes nous a fourni sur gélose
simple une abondante culture microbienne. En conséquence,
nous n avons pas cru devoir attribuer ces 3 décès à l'infection
trypanosomienne.

Comme lésions anatomo-pathologiques macroscopiques, chez
les deux souris dont la mort à pu être avec vraisemblance
imputée au 7. Lewisi, nous avons observé une dégénérescence
granulo-graisseuse accentuée du foie. Les veines intralobu-
laires apparaissent sous forme de taches rouge foncé, irré-
gulièrement arrondies, entourées du tissu lobulaire jaune pâle.
La rate était grosse, violacée, très congestionnée. Les reins
étaient normaux. Chez une souris, nous avons noté un léger
œædème du poumon avec de rares ecchymoses.

A l’examen microscopique, nous avons observé une atteinte
profonde de la cellule hépatique. Les cordons de Reuak, com-
primés par la dilatation des capillaires, étaient partiellement
détruits. Dans les capillaires, nous avons noté une accumula-
ion considérable de leucocytes, formés en majeure partie de

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 197

mononucléaires (moyens et gros) et de plasmazellen; pas de
mastzellen, pas d’hématies nucléées.

A. Perur (1) a montré que, dans diverses trypanosomiases
expérimentales, le foie subit, du fait de l'accumulation de leu-
cocytes, formant manchon autour des vaisseaux hépatiques,
une véritable transformation lymphoïde. D. Rounskx (2) a
observé la même lésion chez les souris inoculées avec le
T. Lewisi Kexr renforcé. Nous n'avons rien constaté de sem-
blable chez les deux souris mortes d'infection trypanosomienne
et chez les souris en cours d'infection. L'accumulation des
leucocytes a lieu simplement dans les capillaires.

La transformation lymphoïde du foie telle que l’a observée
Rouosky semble done bien, ainsi que l’affirme A. Pernr,
répondre à une propriété nouvelle acquise par le T. Leisi
KEwT renforcé.

Nous ajouterons que les tout jeunes rals inoculés avec le
T. Lewvisi normal ne présentent pas la transformation lymphoïde
du foie, méme quand ils succombent à l'infechon trypanoso-
mienne. Nous en avons observé dernièrement 1 cas très nel.
Un jeune rat de 15 grammes, inoculé de sang trypanosomé le
9 octobre, meurt le 30 du mois. A l’autopsie, nous notons une
transformation granulo-graisseuse accentuée du foie, avec
teinte jaune manifeste, mais sans trace aucune de transforma-
tion Iymphoïde.

Avec le Lewisi n° 1, nous n'avons pas réussi les passages
en série de souris à souris. Du moins, avons-nous subi des
échecs répétés. Nous avons groupé sous forme de tableau Îles
différents résultats que nous avons obtenus.

La guérison survient chez les souris réceptives par phago-
cytose. Celle-ci, comme chez les souris qui ont d'emblée
l'immunité naturelle, est difficile à constater lorsqu'on examine,
entre lame et lamelle, le liquide péritonéal de ponction. Les
meilleurs renseignements sont fournis par les frottis colorés,

(1) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, séance du 4 février 1911, t. LXX,
p.165, et Archives internationales de Pharmacodynamie el de Thérapie, fasc. 34,
vol. XXI.

(2) Loc. cit.

198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sur lesquels on peut rencontrer de bonnes figures de phago-
cytose. Les coupes ne donnent rien de particulier ; des inclu-
sions chromatiques dans les mononucléaires de la rate, des
poumons, du foie, dans les cellules de Kupffer hyperplasiées.

NOMBRE DE SOURIS NOMBRE DE SOURIS INFECTÉES

SÉRIES

Du 4° Du 2° Du 3° Du 4e Lors du | Lors du | Lors du | Lors du
passage. | passage. | passage. | passage. 3° &°

der 9e

passage. | passage. | passage. | passage. à

Les souris qui ont eu une première infection sont toujours
réfractaires à une seconde inoculation, quelle que soit la dose
de trypanosomes inoculée dans le péritoine. La souris, comme
le rat, est donc susceptible de s’immuniser activement à l'égard
du 7. Lewisi.

Nous avons constamment observé que les trypanosomes
passent dans le sang lors de la 2° inoculation. Le fait est plus
rare lors de la 3° inoculation. La 4° inoculation n'est jamais
suivie d'infection sanguine : les parasites sont alors détruits
dans la cavité péritonéale même.

Nous avons immunisé nos souris par injection de sang trypa-
nosomé de rat ou de souris. Avec le sang de rat, il faut aller
avec prudence et se contenter d’inoculer 1 à 2 gouttes. Les
doses plus fortes sont mal supportées, et souvent les souris
meurent vers la 6° et 7° réinoculation. Il vaut mieux injecter
du sang de souris infectée. On n’a pas alors à craindre l'effet

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 199

toxique des injections et la phagocytose des globules rouges
ne vient pas compliquer celle des trypanosomes. On peut
encore immuniser des souris avec du sang de souris, puis au
moment où l’on désire étudier le mécanisme de l'immunisation
active, inoculer du sang de rat. La destruction des globules
rouges du rat est alors tardive, celle des trypanosomes précoce.
Les deux phénomènes se succèdent, et on peut les étudier l’un
après l’autre.

La plupart de nos recherches sur l’immunité active ont été
faites sur des souris qui avaient reçu au minimum #4 à 5 injec-
tions.

La première chose qui frappe chez une souris en immunité
active est l’agglutination des trypanosomes. Celle-ci a lieu dès
que l'injection est faite. Au bout de 2 à 3 minutes, on assiste
à la formation de gros amas de trypanosomes, affectant ou non
la forme de rosaces. Les trypanosomes, et cela dépend de
l'importance du traitement que l'on a fait subir à l'animal,
peuvent ètre simplement agglutinés, et alors à cause de leur
mobilité persistante ils se disposent en rosaces (LaAvErAN et
Mesxi), ou à la fois agglutinés et paralysés. La paralysie n’est
d’ailleurs jamais totale. Chez les souris qui ont reçu près de
20 injections, les trypanosomes conservent encore quelques
mouvements de la membrane ondulante et du flagelle. Nous
n'avons jamais observé la lyse des trypanosomes en dehors des
éléments cellulaires. L'immunité active de la souris, si poussée
soit-elle, fait donc apparaître simplement la propriété aggluti-
nante, jointe ou non à la propriété paralysante.

La destruction des trypanosomes, par phagocytose, chez les
souris en immunité active, est facile à observer. La phagocy-
tose est précoce. Déjà 2 à 3 minutes après l'injection, elle est
manifeste. Elle est au maximum au bout de 10 à 20 minutes.
On voit alors de gros amas de leucocytes, au milieu ou
sur le pourtour desquels se rencontrent de nombreux trypa-
nosomes à divers stades d’englobement. Les préparations colo-
rées donnent souvent des déceptions : les amas de leucocytes
et de trypanosomes sont si épais qu’ils prennent la coloration
d’une manière très intense, et il est alors impossible de les
utiliser. Les meilleurs renseignements sont fournis par des
leucocytes isolés, ou par les petits amas de leucocytes. On peut

200 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

alors étudier tous les stades de la phagocytose, depuis le simple
attachement jusqu’à la présence dans le cytoplasme des noyaux
et des blépharoplastes, ainsi que de simples enclaves chroma-
tiques.

Nous avons injecté à des souris en immunité aclive des
trypanosomes du sang de rat et de souris, débarrassés par
centrifugation des globules rouges et lavés deux fois à
l'eau physiologique, ces différentes manipulations ne deman-
dant pas plus d'un 1/4 d'heure à 20 minutes. Nous avons,
dans ce cas, constaté très nettement non seulement la phago-
cytose, mais aussi la destruction extra-cellulaire d'une partie
des flagellés. Nous pensons que la centrifugation, si ménagée
soit-elle, amène de graves altérations chez beaucoup de fla-
gellés.' Certains seraient même, de ce fait, complètement
détruits, réduits au flagelle et au blépharoplaste ainsi que
l’attestent les frottis du eulot de centrifugation colorés au
Giemsa. On comprend, étant donné le trouble apporté dans
léquilibre leucocytaire par la piqûre abdominale, que les try-
panosomes, en voie d’altération grave, puissent continuer à se
détruire avant mème que la phagocytose se produise.

Quand nous avons étudié l’immunité naturelle, nous avons
montré quelles précautions il fallait prendre à l'égard de la
ponction du péritoine. Ici, c’est en quelque sorte l'envers de
la médaille ; et les expériences, rapportées plus haut, montrent
quelles précautions il faut prendre vis-à-vis des {rypanosomes
que l’on injecte.

Pour manifester l’immunité passive, nous avons injecté à
des souris neuves d’abord le sérum immunisant (sérum de rat
ou de souris) et, 2 à 3 minutes après, le sang trypanosomé
(sang de rat ou de souris). Il n'y a aucun inconvénient à
injecter les trypanosomes d’abord, le sérum ensuite. Cette
technique est préférable à celle qui consiste à injecter en même
temps sérum ettrypanosomes, mélangés in vitro. On évite ainsi
la formation de trop gros amas de trypanosomes dus à l'action
agglutinante du sérum.

L'immunité passive est exclusivement d'ordre phagocytaire.
Ce phénomène saute aux yeux, tout autant que l’agglutination
des trypanosomes, quand on inocule une dose forte d’un sérum

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 201

immunisant très actif (2 cent. cubes de sérum pour # à 5 gouttes
de sang trypanosomé). Très rapidement, au bout de 2 à
3 minutes, on constate, par ponction du périloine, qu'un grand
nombre de trypanosomes, demeurés parfaitement mobiles
malgré l’action agglutinante, sont piqués sur les leucocytes
par leur extrémité postérieure. Les trypanosomes, une fois
piqués, ne se maintiennent pas en position plus ou moins per-
pendiculaire par rapport au leucocyte. Ils sont comme atlirés
invinciblement vers lui, si bien que tout le corps du flagellé
arrive en contact avec le leucocyte. Nous avons pu voir ainsi
des amas de 3 ou # leucocytes entièrement cernés par une
véritable couronne de trypanosomes. Ceux-ci gardent toute
leur mobilité. Ils se déplacent, comme en glissant, à la surface
des leucocytes sans cependant pouvoir s'en détacher. Pour
constaler l’englobement du parasite entre lame et lamelle, nous
répélons ici ce que nous avons déjà dit : il faut que cet englo-
bement commence dans le péritoine. Il s'achève alors 2n vitro,
mais il ne peut se faire intégralement entre lame et lamelle,
du moins à la température du laboratoire.

Les leucocytes augmentent rapidement de nombre. Au bout
de 20 à 25 minutes, ils forment de gros amas en marge des-
quels on reconnaît facilement la phagocylose à tous les stades.
Les trypanosomes sont détruits en pleine vitalité. Leur dispa-
rition est plus ou moins rapide, suivant la quantité de sérum
injectée. Avec une dose de sérum faible, égale à celle du sang,
on retrouve des trypanosomes vivants et très mobiles 12 à
15 heures après. Avec une dose de sérum forte, en moins de
2 heures, tous les parasites sont détruits.

CONCLUSIONS

Nous pouvons résumer ainsi l'ensemble de notre travail :

4° L'immunité naturelle de la souris à l'égard des cultures
de Leishmania tropica Wricur, de Leishmama infantum
Cu. Nicozze; de T, rotatorium Mayer; de T. noctuæ SCHAUDINY :
de T. scardinii Brumer; de T. phoxini Brumer; de T. Therleri
Laverax et de T. vespertilionis BatraGziA, est une immunité
d'ordre exclusivement phagocytaire. Les flagellés de culture

202 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sont détruits sitôt qu'ils sont injectés dans le péritoine, et leur
disparition est très rapide;

2° L'immunité naturelle de la souris à l'égard des cultures
de T. Lewisi KENT est une immunité d'ordre exclusivement
phagocytaire. La défense, dans ce cas, n’a pas seulement lieu
dans le péritoine, mais aussi dans tout l’organisme. Dans le
péritoine, la phagocylose se fait durant 36 à 48 heures. Elle
s'effectue par étapes successives. De là, une réelle difficulté à la
manifester. Dans les viscères, les parasites sont très rapidement
détruits, si bien qu'on ne les retrouve plus dans les phago-
cytes qu'à l'état de vestiges tout à fait méconnaissables. Les
coupes montrent neltement l'absence de trypanolyse en dehors
des globules blancs, ce qui nous porte à considérer la phago-
cylose comme le seul mode de destruction des parasites;

3° Certaines souris sont susceptibles de s'infecter par le
T. Lewisi Kexr NorMAL. Le pourcentage des souris infectées
nous à paru plus élevé quand les inoculations étaient faites
avec les cultures:

4° Les souris réceptives acquièrent l’immunité active. Celle-
ci est d'ordre exclusivement phagocytaire. Ce fait est d'autant
plus saillant que l’immunité active a été elle-même plus
poussée ;

5° L'immunilé passive des souris à l'égard de T. Lewisi Kenr
est d'ordre exclusivement phagocytaire. On s'en rend bien
compte quand on inocule une forte dose de sérum immunisant
par rapport à celle du sang trypanosomé;

6° Les flagellés sont détruits en pleine vitalité, ce que l’on
constate avec la plus grande netteté quand la dernière partie
englobée est le flagelle : celui-ci reste alors mobile jusqu'à
complète disparition.

EXPLICATION DE LA PLANCHE III

DESSINÉES SUR LE PLAN DE LA TABLE, AVEC UNE CHAMBRE CLAIRE ZEISS, L'OCULAIRE
COMPENSATEUR ZEISS N° # ET L'OBJECTIF A IMMERSION STIASSNIE 1/15e.

FiGures 1, 2, 3, 4, 5 el 6. — Différents stades de la phagocytose des
flagellés d'une culture de Bouton d'Orient par les mononueléaires de la
souris.

F16. 1. — Le leptomonas est piqué par l'extrême bout du flagelle sur un
lymphocyte.

LA PHAGOCYTOSE DANS L'IMMUNITÉ DE LA SOURIS 203

Fic. 2. — Plusieurs leplomonas, dont les flagelles sont déjà englobés, sont
piqués sur un lymphocyte.

Fic. 3. — Dans un mononucléaire, on ne voit que le noyau et le blépharo-
plaste d’un leptomonas dont on ne distingue plus le contour; dans l'autre
mononueléaire, un leptomonas renflé en boule et un leplomonas en voie
d'englobement.

Fic. 4 et 5. — Mononucléaires avec des vaceuoles dont le contenu prend une
leinte acidophile quasi homogène. Il s'agit vraisemblablement d'un stade
avancé de la phagocytose des leptomonas.

Fi. 6. — Dans le cytoplasme d'un mononucléaire, sous forme de granu-
lations plus ou moins grossières, des enclaves chromatiques qui ne sont
peut-être que le stade ultime de la digestion des leptomonas.

FiG. 7. — Tryp. phoxini Bruupr dans le sang du vairon.

Fi. 8 et 9. — Deux trypanosomes de culture de T. phoxini. Chez l'un des
2 trypanosomes, le flagelle est en division avant que le blépharoplaste ne se
soit divisé. Ce fait est fréquent. Entre lame et lamelle, on se rend compte
que les flagelles de nouvelle formation s’'agitent violemment, à la manière de
véritables microgamètes, ce qui pourrait faire croire à un processus de
fécondation.

FiG. 10 et 11. — Formes de culture d'un trypanosome voisin de T. Theileri
que nous avons isolé des bœufs de France. On remarquera la forme
Leishmania, que SWELLENGRESEL n'a pu retrouver dans les cultures du trypa-
nosome des bœufs de Hollande.

Fic. 12, 13 et 14. — Phagocylose des flagellés de culture de T. nocluæ par
les leucocytes de la souris. Préparation faite vingt minutes après avoir
mélangé sur lame une goutte de liquide péritonéal de souris et une goutte
de culture. La figure 14 représente un polynucléaire qui a phagocyté un
élément cultural.

F16. 15. — Appareils flagellaire et blépharoplastique de T. Lewisi détruits
en conservant entre lame et lamelle le liquide péritonéal de souris infectées.

F16. 16. — Amas de leucocytes, dont on voit mal le contour cytoplasmique,
et de T. Lewisi, à différents stades de phagocytose chez une souris qui a reçu
2 centimètres cubes de sérum immunisant et 1/4 centimètre cube de sang de
souris infectée. En dehors des leucocytes, des granulations de Mastzellen.

FiG. 17. — Petits trypanosomes dans les cultures de T. Lewisi. On remar-
quera les petits trypanosomes renflés en boule et qu'on pourrait facilement
prendre pour des kystes, n'était la coloration du flagelle.

LES AGGLUTININES
ET LES SUBSTANCES SENSIBILISATRICES
DES SÉRUMS DYSENTÉRIQUES

par T. GRYGLEWICZ

(Laboratoire du Dr W. Palmirski, à Varsovie.)

La bactériologie de la dysenterie clinique, dans l’état actuel
de son développement, considère que cette maladie est causée
non seulement par le bacille dysentérique de Shiga-Kruse,
mais aussi par les bacilles dénommés pseudodysentériques.
Kruse (1) est le premier qui fit la distinction entre le bacille
pseudodysentérique et le bacille dysentérique. D'autres auteurs
désignent les bacilles pseudodysentériques sous le nom de
paradysentériques ou de bacilles de Flexner. Shiga (2), dans
son travail récent, les considère comme une variété du bacille
dysentérique. La différenciation des bacilles de la dysenterie a
été facilitée par Lentz et Martini (3) qui ont employé dans ce
but un milieu colorant et un sérum agglutinant de haut pou-
voir. Depuis on a observé de nombreux cas sporadiques ainsi
que des épidémies entières, provoquées par des bacilles para-
dysentériques. On les a même retrouvés plus fréquemment que
le bacille dysentérique.

Dans ce travail, mes expériences ont porté sur cinq cultures
du bacille dysentérique: Shiga de Kräl, Moscou, Cracovie,
Kieff, Varsovie et sur six cultures paradysentériques : Flexner

(1) Kruse, Ueber die Rubr als Volkskrankheit und ihren Erreger. Deutsche
medicinische Vochenschrift, 1900, n° 40, p. 637. — Kruse, Der jetzige Stand der
Dysenteriefrage. Deutsche Ærzteseitung, 1902, n° 2.

(2) Snica, Typen der Dysenteriebacillen, ihr epidemiologisches Verhalten
und serotherapeutische Studien. Zeitschrift für Hygiene und Infeklionskran-
kheiten, Bd LX, H. 1, 1908, p. 15.

(3) Mann: und Lenrz, Die Differenzierung der Rubhrbacillen mittels der
Agglutination. Jbidem, Bd XLI, 1902, p. 540. — Lenrz, Vergleichende kultu-
relle Untersuchungen über die Ruhrbacillen nebst Bemerkungen über den
Lakmusfarbstoff. 1bidem, Bd XLI, 1902, p. 559.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 205

de Kräl, Cracovie, Kieff, Saarbrücken, Müller V, Varsovie I et
Varsovie IT. |

Le tableau ci-dessous donne les résultats de mes expériences
sur la faculté des cultures ci-dessus de produire les acides aux
dépens de différents hydrates de carbone et de la mannite.

DEXTROSE
MALTOSE
SACCHAROSE
DEXTRINE
LACTOSE

Shiga de Kräl . .
Moscou .
Cracovie
Kieftes
Varsovie

da bacille
dysentérique.

m
©
mn
[=]
Es
e)
Le]

Flexner de Kräl.
Cracovie nr:
*]. Saarbrücken. .

. Kieff. .
“1: Varsovie. - -

Cultures
des bacilles
paradysentériques.

J'ajouterai que dans ces expériences je me servais des plaques de Pétri à
l'agar, colorées à l'aide d’asolithmine (1). + désigne que durant 24 à 48 heures

(1) En ce qui concerne la préparation et la technique de l'ensemencement,
je les ai indiquées dans mon travail précédent : « W sprawie etyologii dy-
zenteri i i jej leczenie surow ica. » (L'étiologie de la dysenterie et son trai-
tement par le sérum). Gazeta lekurska, 1908, n° 9 — 13, p. 284.

A 100 cent. cubes d'agar ordinaire de laboratoire à 2 p. 100, contenant
2 p. 100 de peptone de Witte, j'ajoute 1,5 gr. d'hydrate de carbone ou de
mannite, précédemment dissoute dans une petite quantité d’eau et 0,04 gr.
d'asolitmine dissoute dans 1 cent. cube d'eau; je maintiens l’alcalinité de la
solution par l'addition d’une ou de deux gouttes de potasse caustique au fur
et à mesure du besoin; j'ajoute en plus 1 cent. cube de solution de cristal-
violette (1 p. 1000). L'’asolithmine est une substance colorante cristalline bleue-
violette, soluble dans l’eau, insoluble dans l'alcool et l’éther; sa formule
chimique est CTHINO“; comme indicateur de la formation dans le milieu des
acides ou des alcalis, elle se comporte comme le lacmus liquide. Une émul-
sion des bactéries, fortement diluée dans une solution physiologique de
NaCI, est ensemencée sur les plaques de Pétri à la surface de ce milieu
solide à l’aide d'une baguette en verre, courbée à l'angle obtus.

206 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

on a obtenu des colonies nettement rouges; — veut dire que dans cet inter-
valle de temps les colonies n'ont pas changé la couleur bleue-violette du
milieu ; F1 — Flexner.

Hiss (1) distingue quatre groupes divers de bacilles parady
sentériques, et Shiga (2) y ajoute un groupe nouveau. Les
résultats de l'agglutination, obtenus par Hiss et Shiga concor-
daient en règle générale avec cette division. Par contre,
Kruse (3) est d'avis que la faculté de décomposition des
hydrates de carbone que présentent différentes cultures para-
dysentériques n’est pas toujours constante, et qu'il est difficile
par conséquent de s’en servir comme base de classification des
bacilles.

Mes expériences ne font que confirmer l'avis de Kruse. Dans
le tableau ci-dessus je n’ai pris en considération qu'une colo-
ration rouge nettement prononcée obtenue en 24 à 48 heures.
Les cultures paradysentériques FI. Cracovie et FI. Saarbrücken
se comportaient à cet égard d’une manière identique; évidem-
ment ces cullures présentaient une étroite parenté sous d’autres
rapports encore, cependant leurs agglutinines n'étaient pas
identiques, comme on le verra par la suite.

Toutes nos cultures dysentériques ne différaient point de la
culture originale de Shiga. Quant aux cultures paradysenté-
riques, elles se distinguaient non seulement par la faculté de
décomposition des hydrates de carbone et de la mannite, mais
encore par leur propriété de former de l’indol, à l'exception de
la culture paradysentérique Varsovie [. J’appelle l'attention sur
le fait que la culture paradysentérique de Doerr (4), provenant
d’une épidémie à Vienne, ne produisait également pas d’indol:;
cependant l’auteur, se basant sur ses recherches, l'identifie
avec le bacille de Flexner de Manille. Leiner (5) mentionne les
cultures paradysentériques caillant le lait en quelques jours.
Toutes mes cultures paradysentériques ne caillent point je

(4) Hiss, On fermentative and agglutinative characters of bacilli of the
dysentery group. Journ. of med. Research., vol. XIII, 1904.

(2) Surca, Loc. cit.

(3) KrüsE, RirrerrHaus Keue und MEerz, Dysenterie und Pseudodysenterie.
Zeitschrift für Hygiene und Infecktionskrankheiten, 1907, Bd LVII, p. #17.

(4) Dore, Beobachtungen über bacilläre Dysenterie. Centralblatt für Bakte-
rioloyie und Parasitenkunde, Bd XXX VIII, 1905, p. 420.

(5) Leiner (CarL), Ueber einige atypische Dysenteriestäume. Zbidem, Bd XLIIT,
1-8, p. 183.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 207

lait, même en deux semaines à la température de 37 degrés
centigrades.

Toutes les cultures dysentériques se distinguaient en outre
des cultures paradysentériques par la faculté de produire une
vraie toxine soluble, de même que par leur manière de se com-
porter dans l'organisme du lapin et par les altérations qu’elles
produisaient dans le cæcum. J'ai exposé dans mon travail pré-
cédent (1) les résultats de mes expériences sur la toxine dysen-
térique et sur les altérations anatomo-pathologiques qu’elle
peut produire.

Pour obtenir des sérums spécifiques, j'immunisai les lapins.
L'on sait que les bacilles dysentériques sont éminemment
toxiques pour les lapins, c’est pourquoi il était difficile
d'obtenir chez eux une immunité bien prononcée; quant à la
substance sensibilisatrice, dont il sera question plus loin, elle
ne pouvait ètre retrouvée à l’aide de l'épreuve hémolytique
d'après la méthode de Wassermann, que dans le sérum des
lapins ayant préalablement supporté l'injection intraveineuse
de doses considérables des corps bactériens (1/2 à { culture

(4) Loc. cil., p. 183, 203, 233 et 236. J'ai réussi à obtenir une toxine puis-
sante, non seulement des cultures faites dans le bouillon de Martin, mais
aussi des cultures faites dans le bouillon ordinaire de veau, contenant
2 p. 100 de peptone de Witte. La plus forte toxine est celle qu'on obtient des
cultures faites dans un bouillon neutre ou faiblement alcalin. La dose de
toxine mortelle pour un lapin pesant 1.500 gr. atteignait, dans les cultures
sur bouillon de trois semaines, jusqu'à 0,04 cent. cubes (en injection intra-
veineuse). 0,1 cent. cube de filtrat d'une culture de 5 jours, produisait le
même effet. Les extraits de corps bactériens, faits par la solution phy-
siologique de NaCI et filtrés sur une bougie Chamberland, possédaient
tous les caractères de la toxine obtenue dans le filtrat des cultures sur
bouillon. Le sérum des animaux immunisés à l’aide des bactéries avait
des propriétés antitoxiques. La toxine et l’antitoxine se neutralisaient pro-
portionnellement (Gesetz der Multipla). La toxine dysentérique ressemblait
à une vraie toxine soluble. Aussi bien la toxine que les bacilles vivants
provoquent chez les lapins, dans le cæcum, des allérations plus ou moins
profondes.

Ces altérations, on pourrait les exprimer par la gradation suivante :

1. Hyperémie et tuméfaction de la muqueuse;

2. Hémorragies dans la muqueuse;

3. Formation des exsudats des membranes de fibrine et ulcérations super-
ficielles ;

4. Abcès profonds accompagnés d'infiltration de la sous-muqueuse, d'in-
filtration el d'hypertrophie de la couche musculaire.

J'ai constaté ces altérations chez 45 p. 100 des lapins (28 sur 63) et seule-
ment dans le cæcum.

Quant aux bacilles paradysentériques, ils ne produisaient pas ces altéra-
tions et ne formaient pas de toxine soluble.

208 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sur agar). Je commencais l’immunisation par de faibles
doses de cullures sur agar, tuées par le chauffage durant une
demi-heure à la température de 60 degrés centigrades, et
ensuile je passais graduellement aux cultures vivantes. Je
débutais par des injections sous-cutanées de l'émulsion bacté-
rienne, passais ensuite aux injections intrapérilonéales et, enfin,
aux injections intraveineuses. Malgré toutes les précautions
prises, une partie de mes lapins succomba; néanmoins, je suis
arrivé à en immuniser la majorité à tel point que, dans l’es-
pace de 3 à 4 mois, ils supportaient parfaitement l'injection
intraveineuse d'une, même de deux cultures sur agar. Les
bacilles paradysentériques sont, on le sait, peu virulents pour
les lapins, l’immunité y pouvait donc être facilement acquise.
De mes expériences ainsi conduites, je ne citerai que celles
qui concernent l'agglutination et les antigènes recherchés à
l'aide d'hémolyse d’après la méthode de Wassermann.
Je procédais à l’agglutination de la manière suivante :

A 1 cent. cube de sérum, dilué en proportion de 1 p. 25, 1 p. 50, etc.,
j'ajoutais 1 cent. cube d'émulsion de culture sur agar obtenu en 2# heures
dans 2,0 cent. cube d'une solution de NaCI à 0,8 p. 100; je laissais la culture
pendant 8 heures à la température de 37 degrés, après quoi je notais les
résultats. Pour l'absorption des agglutinines, je me servais des plaques de
Petri (9 cent. de diamètre), ensemencées sur toute la surface. Je lavais les
cultures de 24 heures sur chaque plaque à l’aide de 2 cent. cubes d'une
solution de NaCI à 8 p. 100. Je mêlais 3,5 cent. cubes d'’émulsion obtenue de
deux plaques à 0,5 cent. cube de sérum non dilué et je tenais le mélange
pendant 2 heures à la température de 37 degrés centigrades, et pendant
24 heures à la température de la chambre. Puis je procédais à la centri-
fugation du liquide trouble; le liquide transparent obtenu servait aux
épreuves d'agglutination en tenant compte de la dilution créée par l'ab-

ALL 0e T
sorplion 4 TR :

L'exemple suivant prouve, que pour l'absorption de l’agglu-
tinine du bacille dysentérique, des doses beaucoup plus petites
de bactéries étaient suffisantes. Un cent. cube de sérum d'un
lapin immunisé à l’aide du bacille dysentérique Moscou, fut
mélangé avec différentes quantités de corps bactériens du
bacille dysentérique Cracovie :

a) 1 cent. cube de sérum + 2 cent. cubes d'émulsion bactérienne.

b) 1 cent. cube de sérum + 1. cent. cube d’émulsion bactérienne.
c) 1 cent. cube de sérum <+ 0,5 cent. cube d’émulsion bactérienne.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 209

Après 24 heures, on centrifuge les liquides a, b, €, et l'on
procède aux épreuves d’aggelutinalion.

SÉRUM
A à
CULTURES
Après l'absorption.
de bacilles dysentériques. Avant 1
l'absorption.
a b c
SNS AE RTE 1.500 () 0 50
CTACOMEENE AA 1.500 (] 0 100
MOSCOU ERREUR 500 0 0 0
LEE KEN RCE MR NT ARE 500 (] 0 0
MAFSONVIE AR TR UT 800 0 0 100
|

Les chiffres indiquent la plus forte dilution du sérum à laquelle l’aggluti-
nation était encore possible; O, qu'à la dilution de 1/50 l’agglutination ne
se faisait plus; — que l'épreuve n'était pas faite. Les mêmes signes ont
été conservés dans d’autres tableaux concernant l’agglutination.

Cet exemple prouve qu'un cent. cube d'émulsion, contenant
approximativement une quantité de bactéries correspondant à
la moitié d’une plaque en agar, suffisait complètement pour
l'absorption de l’agglutinine d'un cent. cube de sérum.

Par contre, les agglutinines des bacilles paradysentériques,
surtout les agglutinines collatérales, étaient absorbées par les
bactéries beaucoup plus difficilement, de sorte que souvent
3,5 cent. cubes d’émulsion de deux plaques étaient insuffi-
santes pour l'absorption de l’agglutinine de 0,5 cent. cube de
sérum (1). Dans ces cas, je répétais l'absorption des liquides
soumis à La centrifugation après la première absorption.

Toutes ces expériences d’agglutination étaient exécutées
macroscopiquement. Si après l'absorption la quantité de liquide
nécessaire à l’agglutination était très petite, j'exécutais les essais
dans les tubes minces, en utilisant non pas 4 cent. cube entier
de la dilution du liquide, mais0,3 ou 0,4 cent. cube, en y ajoutant

1) Pour les relations entre l'agglutinogène et l’agglutinine, voir le travail
d'Eisenberg et de Volk : « Untersuchungen uber die Agglutination »,
Zeitschrift für Hygiene und Infeklionskrankheiten, Bd XL, 1902, p. 155.

14

210 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

la même quantité d'émulsion d’une culture sur agar dans
12 cent. cubes d’une solution de NaCl à 0,8 p. 100.

AGGLUTININES DES SÉRUMS DES LAPINS
IMMUNISÉS PAR LES CULTURES DU BACILLE DYSENTÉRIQUE.

TABLEAU [. — Sérum du lapin,
immunisé par le bacille dysentérique Cracovie.

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Les résullats furent identiques avec le sérum du lapin
immunisé par le bacille dysentérique Moscou, et avec le sérum
du lapin immunisé par le bacille Kieff, c'est pourquoi je ne
donne point de tableau correspondant à ces expériences.

Il résulte de ces expériences que le sérum de lapin convient
particulièrement pour la distinction des bacilles dysentériques
et paradysentériques. Les premiers ne font presque pas naître,
dans l'organisme du lapin, d'agelutinines collatérales pour les
b. paradysentériques. En mème temps, ces expériences prou-

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 211

vent que toutes les cultures dysentériques, de provenances
diverses, sont parfaitement identiques au point de vue de
l'agglutination. Parmi les bacilles expérimentés, quelques-
uns seulement avaient une faculté d’agglutination moindre
(Moscou, Kieff). Le sérum des lapins, immunisés par une
culture quelconque du bacille dysentérique, acquiert la pro-
priété d’agglutiner toutes les cultures du même bacille.

TABLEAU Il. — Sérum du lapin,
immunisé par le bacille dysentérique Varsovie.

6 £ APRÈS L'ABSORPTION PAR LES CULTURES
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À

Les sérums des lapins immunisés ne montrent presque
aucune parenté entre les cultures dysentériques et paradysen-
tériques. Par contre, le sérum des chevaux immunisés par le
bacille dysentérique, contient en général des quantités notables
d'agglutinines collatérales pour les bacilles paradysentériques.

222 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Dans les expériences d'Eisenberg (1), le sérum d'un cheval
immunisé exclusivement par le bacille dysentérique Shiga,
avait la propriété d’agglutiner le bacille dysentérique en dilu-
tion de 1/1.200 à 1/2.400, et le bacille paradysentérique de
Flexner en dilution de 1/600. Dans les expériences d’absorp-
tion, l’aggelutinine du bacille Flexner montrait les propriétés
de l’agglutinine collatérale : les cultures des bacilles dysenté-
riques absorbaient du sérum leur propre agglutinine aussi
bien que l’agglutinine du bacille de Flexner; quant aux
cultures du bacille Flexner, elles n'absorbaient que leur agglu-
tinine sans changer le pouvoir agglutinatif par rapport aux
bacilles dysentériques.

Dans mes expériences personnelles, le sérum d'un cheval,
immunisé par les cultures dysentériques de trois semaines sur
bouillon, agglutinait les diverses cultures de ce bacille en
dilution de 1/750 à 1/1.200, et les bacilles paradysentériques en
dilution de 1/50 à 1/100. Les cultures dysentériques absorbaient
de ce sérum, à côté de l’agglutinine principale, les agglutinines
collatérales des cultures paradysentériques. Je dois remarquer
que le sérum de ce cheval n'était pas examiné avant l’immu-
nisation; or, dans les expériences failes sur le sérum des
quinze chevaux non immunisés, le sérum de quatre d’entre
eux agglutinait les diverses cultures de bacilles paradysenté-
riques en dilution de 1/60 à 1/120. Ces sérums n'agglutinaient
jamais les bacilles dysentériques en dilution supérieure à
1/10-1 7/20.

Eisenberg (/oc. cit.) mentionne le sérum d'un cheval non
immunisé, qui agglutinait le bacille paradysentérique avec
lequel il expérimentait, en dilution de 1/375.

Les tableaux (HE, IV, V, VI) nous montrent que le sérum
des lapins immunisés par les bacilles paradysentériques ne
contenait point d'agglutinine pour des cultures dysentériques,
et que celles-ci étaient incapables d'absorber de ce sérum les
agglutinines des cultures paradysentériques. Quant à la litté-
rature sur la question, je n'ai trouvé un résullat un peu dif-

(1) Erseneer (Frzre), O pokrewiénstwie obu typow bakteryi ezerwonkowych
na podstawie odezynow biologicznych. (De la parenté de deux types de
bacilles dysentériques, basée sur leurs propriétés biologiques.) Przeglad
lekarski, 1904, no 20.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 213

férent que dans une expérience de Kruse (1). Le sérum d’un
lapin immunisé par le bacille paradysentérique « Constanti-
nople À » agglutinailt ce bacille en dilution de 1/100.000, et
le bacille dysentérique en dilution de 1/100 (expérience micros-
copique ).

AGGLUTININES DES SÉRUMS DES LAPINS
IMMUNISÉS PAR LES CULTURES PARADYSENTÉRIQUES.

TABLEAU III. — Sérum du lapin,
immunisé par le bacille paradysentérique F1. Kral.

APRÈS L'ABSORPTION PAR LES CULTURES

FI. Kieff.

AVANT L'IMMUNISATION
APRES L IMMUNISATION
Moscou
Cracovie.

F1. Cracovie.
F1. Saarbrücken.

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Flexner de Kräl.

Shiga de Kräl.
Moscou. .

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Kieff . .

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FI, Cracovie .
F1
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Culture des
bac.parady-
sentériques.

Dans mes expériences, la culture paradysentérique FI. Kieff
(tableau V) se comportait d'une manière toute particulière. Le
sérum des lapins immunisés par les cultures FI. Kräl, FL. Cra-
covie et FI. Saarbrücken (tableaux TE, IV, VI) n'agglutinait
point cette culture. Mais le sérum du lapin immunisé par la
culture FI. Kieff (tableau V) agglutinait toutes les cultures para-

1) Kruse, Rirrernaus, Kemr et MErz, loco cilato, p. 439.

214 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dysentériques à l'exception des cultures FI. Varsovie I, FI. Var-
sovie Il.

Les cullures paradysentériques dont on se servait pour
immuniser les lapins, absorbaient de leur sérum, à côté
de leur agglatinine principale, des agglutinines collatérales
appartenant aux autres cultures (tableaux III, IV, VI. Le
résultat est différent dans le tableau V. La culture FI. Kieff
n'absorbait de son sérum que son agglutinine propre, sans
absorber celle des cultures FI. Kräl, FI. Cracovie et FI. Saar-
brücken.

Il serait difficile d'expliquer d’une manière satisfaisante ces
relations entre les agglutinines de diverses cultures para-
dysentériques dans ce sérum.

Tagzeau IV. — Sérum du lapin,
immunisé par le bacille paradysentérique F1. Cracovie.

é 8 APRÈS L'ABSORPTION PAR LES CULTURES

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SÉRUMS DYSENTÉRIQUES

TaBceau V. — Sérum du lapin

immunisé par le bacille paradysentérique F1. Kieïf.

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Le rapport entre les agglutinines des sérums particuliers,
correspondant aux cultures en sentériques FI. Kräl, FI. Cra-

covie et FI. Saarbrücken

(tableaux IIE, IV,

VI) pourrait être

exprimé schémaliquement comme suit :

TagLeaU III. — Sérum F1. Kräl (voir p. 213).

Schéma 1.

(+) F1. Saarbrücken
(+)

F Kra/

(+)
(4N
EN

FI. Cracovie

Ce schéma montre que la culture FI. Kräl absorbait de ce

216 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sérum l’agglutinine FI. Cracovie et FI. Saarbrücken ; la cul-
ture F1. Saarbrücken absorbait les agglutinines des cultures
FT. Kräl et FI. Cracovie ; quant à la culture F1. Cracovie, elle
n'absorbait ni l’agglutinine de la culture FI. Kräl, ni celle de
la culture FI. Saarbrücken.

TagLEaAu VI. — Sérum du lapin,
immunisé par le bacille paradysentérique F1. Saarbrücken.

APRÈS L'ABSORPTION PAR LES CULTURES

,

AVANT L IMMUNISATION

,

APRÈS L'IMMUNISATION

Cracovie.

Moscou,
|]. Saarbrücken.

Shiga de Kräl.
Flexner de Kräl,
F1. Cracovie

Shiga de Kräl .
Moscou
Cracovie . . .
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F1. Cracovie .

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TABLEAU IV. — Sérum FI. Cracovie (v. p. 214).

Schéma 2.

FI. Kräl =) € (+) FI. Saarbrücken
NX (+)
2 HN

FI. Cracovie

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 217

Tasceau VI, — Sérum F1. Saarbrücken (voir p. 216).

Schéma 3.

F1 Kral (=) , se F1 Saarbrüken
(=) ù (+)
D NUTE

FI. Cracovie

Le rapport exprimé dans ces schémas pourrait être expliqué
en supposant trois récepteurs agglutinatifs a, b, c, groupés
comme suit :

exe der AIEN RS. | ee CN RE
BAC CON AMENER ENNEMI Ar CS
biASsarhridchent AA UE ES: 0. LIN AIN SRENRENPNRERTS

Le sérum du lapin immunisé par la culture FL Krä
(tableau I, schéma 1), contient les agglutinines correspondant
aux récepteurs & et 4; il agglutine donc également les cultures
F1. Cracovie et FI. Saarbrücken, qui contiennent un de ces
récepteurs ou tous les deux. La culture FI. Cracovie n’absorbe
point des agglutinines de ce sérum, correspondant aux cultures
FL. Kräl et FL. Saarbrücken, car elle n’a que le récepteur 4 et
qu'elle est dépourvue du récepteur a. La culture FI. Saar-
brücken, ayant les deux récepteurs a et b, absorbe les agglu-
tinines de deux cultures FI. Kräl et Fi. Cracovie. Le schéma 2
s'explique de la mème manière (tableau IV); il en est de même
du schéma 3 (tableau VP.

Il suffit d'admettre l'existence de trois récepteurs aggluti-
nogènes a, b et c pour expliquer les résultats acquis. Il n'est
pas impossible que nous puissions trouver encore dans lesdites
cultures, d’autres récepteurs agglutinogènes en examinant,
à l’aide des sérums agglutinants, leurs relations avec les autres
cultures paradysentériques. On peut en tirer la conséquence,
qu'on ne doit point identifier deux cultures paradysentériques,
en se basant uniquement sur leur manière de se comporter par
rapport à un seul sérum agglutinant. Ce n’est que leur manière
de se comporter par rapport aux agglutinines de plusieurs ani-
maux, dont chacun fut immunisé par une autre culture para-

218 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dysentérique, qui permet de se prononcer sur l'identité ou la
différence des deux cultures comparées.

À en juger d'après le schéma 1, les cultures FI. Kräl et
FI. Saarbrücken pourraient être supposées identiques; cepen-
dant, le schéma 2 et le schéma 3 montrent qu'elles diffèrent
par leurs récepteurs agglutinogènes. Il en est de même des
cultures FI. Cracovie et FL. Saarbrücken. Le schéma 2 les
ferait identifier, tandis que les schémas 1 et 3 indiquent leur
différence.

Chacune des six cultures paradysentériques que j'ai étudiées
avait un groupe particulier de récepteurs agglutinogènes.
Quelques-uns d'entre eux étaient communs à la plupart des
cullures paradysentériques. L'immunisation à l’aide d’une seule
culture faisait naître, dans l'organisme animal, des agglutinines
collatérales pour d’autres cultures, ayant un ou deux récep-
teurs agglutinogènes communs. Toutes ces cultures parady-
sentériques n'étaient pas identiques malgré l'étroite parenté
qui les unissait.

En ce qui concerne les cultures dysentériques, nous pou-
vons affirmer catégoriquement que toutes ces cultures sont
identiques, indépendamment de leur provenance.

Les sérums paradysentériques des lapins immunisés n’agglu-
tinaient Jamais les cultures dysentériques. Les sérums dysenté-
riques ne conlenaient que rarement des quantités insignifiantes
d'agglutinines collatérales dans certaines cullures paradysen-
tériques (voir tableau T).

Ceci dit, je passe à la question des substances sensibilisatrices
des sérums dysentériques et paradysentériques, autrement dit,
à la question de la fixation du complément par les extraits
bactériens à l'aide des sérums spécifiques. Bordet (1) identifie
la substance sensibilisatrice découverte par la méthode hémo-
lytique, avec les bactériolisines de Pfeiffer et les ambocepteurs
d'Ebrlich. Wassermann et Bruck (2) ont modifié la technique
de la fixation du complément par les bactéries à l’aide des

(1) Bonner, Les sérums hémolytiques, leurs antiloxines et les théories des
sérums cylolytiques. Annales de l'Institut Pasteur, 1900, p. 257.

(2) Wassermanx und Brucx, Ist die Komplementbindung beim Entstehen
spezifischer Niederschläge eine mit der Präcipitirung zusammenhängende
£rscheinung oder Amboceptorenwirkung? Medicinische Klinik, 1905, n° 55.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 219

sérums spécifiques et ont appliqué, au lieu de l'émulsion bac-
térienne, des extraits aqueux des corps bactériens. Tout récem-
ment, quelques auteurs ont supposé que dans des expériences
exécutées d'après la méthode de Bordet-Gengou ou d’après
celle de Wassermann, /« déviation du complément ne dépend
pas toujours de sa fixation par les corps bactériens ou leurs
extraits à l’aide de l’ambocepteur [Moreschi (1), Neufeld et
Hüne (2), Wassermann et Luchs (3), Krumbein et Scha-
tiloff (4), Ballner et Reibmayr (5)|. La formation du précipité
n'est pas sans influence sur le complément {Pfeiffer et Mores-
chi (6), Moreschi (7)}. Les travaux de B. Zebrowski sur celte
question sont également d'une haute importance (8-9). Il a
démontré que la précipitine ne précipite pas l’ambocepteur
hémolytique dans le sérum.

Le phénomène de la déviation du complément, dans les expé-
riences hémolytiques de Wassermann, concernant les sérums
spécifiques et les extraits bactériens, n’est pas jusqu'ici théo-
riquement étudié. Les expériences de Wassermann ont démontré
la spécificité complète des sérums correspondants, au moins en
ce qui concerne le typhus et le paratyphus. J'ai appliqué les
mêmes expériences aux bacilles dysentériques.

En ce qui concerne la dysenterie, je ne connais que le travail

(1) Morescni, Ueber den Wert des Kromplementablenkungsverfahrens in
der bakteriologischen Diagnostik. Berliner klinische Wochenschrift, 1907,
n° 38.

(2) Neureco und Huxe, Untersachungen über baktericide Immunität und
Phagocytose nebst. Beiträgen zur Frage der Komplementablenkung. Arbeilen
aus der Kaiserl. Gesundheitsamte, Bd XXV, p. 192.

(3) Wassermanx und Leucus, Erwiderung auf die Arbeit von Moreschi.
Berliner klinische Wochenschrift, 1907, n° 49, p. 1506.

(4) KeuwgeiN und Scnaricorr, Untersuchungen über das Meningococcen-
serum. Deutsche medicinische Wochens:hrift, n° 23, p. 1002.

(5) Bazzxex und Rergmayr, Ueber die Verwertharkeit der Komplementa-
blenkungsmethode für die Differenzierung von Mikroorganismen, nebst
Bemerkungen über den Zusammenhang dieses Phänomens mit der Agglu-
tinations-bezw. Prâäcipitationsreaktion. Archiv für Hygiene, 1908, Bd LXIV,
p. 1135.

(6) Preirrer und Morescnt, Ueber scheinbare antikomplementäre und
Antiamboceptorenwirkungen präcipitirender sera im Thierkürper. Berliner
klinische Wochenschrift, 1906, n° 2.

(1) Moreseur, Zur Lehre der Antikomplementen. 1bidem, 1906, p. 100.

(8) Zesrowski (B.), Precipitation et deviation de l’alexine. Centralblatt für
Bakteriologie und Parasitenkunde, 1907, Bd XLIV, p. 556.

(9) Zesrowskti (B.), Ostosunku substancyi uczulajacej hemolityeznej do
precipitynogenu. Gazela lekarska, 1907, n° 38, p. 900.

220 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de Dopter (1), qui touche à cette question. L'auteur a employé
la méthode de Bordet-Gengou, en examinant le sérum, des
animaux immunisés (cheval, lapin) et des hommes atteints de
dysenterie provoquée par le bacille dysentérique ou par les
variétés des bacilles paradysentériques. Les sérums dysenté-
riques et paradysentériques déviaient d'une manière identique
le complément, élant unis soit à l'émulsion des bacilles dysenté-
riques, soit à celui des cultures paradysentériques. Le phéno-
mène se produisait même avec l’émulsion de certaines cultures
de coli-bacille. Se basant sur les résultats acquis, Dopter iden-
üfie presque toutes les cultures dysentériques et paradysenté-
riques; il ne les considère que comme « races » particulières
d'un seul et même bacille, faisant naître la dysenterie chez
l'homme.

Quant à nos expériences, exécutées d’après la méthode de
Wassermann, elles n’ont point démontré d'aussi étroite parenté
des diverses cultures dysentériques et paradysentériques.

J'ai préparé mes extraits aqueux d’après la méthode de
Wassermann. À l’aide de 5 cent. cubes d’eau distillée stérile,
J'ai lavé les cultures de 24 heures sur 140 cent. cubes d’agar.
Les sérums correspondants précipitaient ces extraits, mais la
précipitation ne se produisait qu'en dilution faible; or, les
mélanges des sérums et des extraits en dilutions, dont on se
sert dans les expériences de fixation du complément, restaient
parfaitement limpides, même dans un temps prolongé.

Les sérums des lapins, dont chacun fut vacciné par une
seule culture dysentérique ou paradysentérique étaient préa-
lablement chauffés pendant une demi-heure à 56 degrés centi-
grades. Je me servais comme complément du sérum frais des
cobayes, au plus tard 24 heures après la saignée.

J'ai préparé les sérums hémolytiques en immunisant les
lapins à l’aide des globules rouges du bœuf. Les globules
rouges, servant aux injections des lapins et aux épreuves hémo-
lytiques, étaient soigneusement lavés avec une solution de NaCI
à 0,9 p. 100. J'ai chauffé également les sérums hémolytiques à
56 degrés centigrades pendant une demi-heure.

(1) Dorrer, Sensibilisatrice spécifique dans le sérum des animaux vaccinés
et de malades. Annales de l'Institut Pasteur, 1905, p. 755.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 221

Toutes ces dilutions se faisaient dans une solution de NaCI
à 0,9 p. 400. Je me servais toujours d’un centimètre cube des
dilutions des extraits bactériens, des sérums spécifiques du
sérum hémolytique et de l'émulsion des globules rouges à
> p. 100 en solution dans le NaCI à 0,9 p. 100. J'ai ajouté à
toutes ces épreuves le complément non dilué, soit 0,1 cent. cube.
Le volume du mélange était donc le même dans tous ces essais
et égal à 4,1 cent. cubes. Dans chaque expérience, je me servais
des globules rouges frais. Chacune d'elles était exécutée durant
un Jour. Chaque fois, les doses de contrôle étaient préalable-
ment déterminées ainsi qu'il suit :

1° La plus petite dose du sérum hémolytique dissolvant
complètement les globules rouges à l’aide de 0,1 cent. cube du
complément (D.M.S.= dWdosis minimalis solvens).

2° La dose maximale du sérum spécifique du lapin, qui ne
dévie pas par elle-même le complément (D. max. non abs. S.
— dosis maximalis non absorbens sert);

3° La dose maximale d'extrait bactérien, ne déviant pas le
complément par elle-même (D. max. non abs. E.— dosis mazxi-
malis non absorbens extracti).

Sur les vingt expériences ainsi exécutées, je n’en citerai que
deux comme exemple : l’une concernant le sérum du lapin
immunisé par le bacille dysentérique Cracovie, l’autre concer-
nant le sérum du lapin immunisé par le bacille dysentérique

Kiefr.

Exe. IT. — Le lapin fut immunisé par le bacille dysentérique Cracovie et
il a reçu, depuis le 27 août jusqu'au 28 décembre 1907, des injections sous-
cutanées, intrapéritonéales et intraveineuses, contenant au total l'émulsion
de 10 cultures sur agar. Pour la première fois, l'injection sous-cutanée de
2 milligrammes d’une culture sur agar, tuée à la température de 60 degrés
centigrades, provoqua chez un lapin, pesant 4.000 grammes, une maladie
sérieuse d’une durée de deux semaines. Un autre lapin, ayant recu la même
dose de culture Moscou, succomba après quatre jours. En continuant la vac-
cination très prudemment, je suis arrivé à faire supporter au lapin des
injections intraveineuses d’une et même de deux cultures sur agar.

222

1° Définition de la force du sérum hémolytique (D.M.S.).

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

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0,00025 » » » Hémolyse incomplète.
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(1) 0 indique que les globules rouges restent parfaitement insolubles.
D.M.S — 0,001.

Le complément et le sérum hémolytique eux-mêmes ne faisaient pas dis-
soudre les globules rouges.

20 Détermination de la dose maximale du sérum spécifique ne
déviant pas par elle-même le complément.

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Le sérum spécifique par lui-même, ne dissout pas les globules rouges.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 223

3° Détermination des doses maximales d'extraits des cultures
dysentériques Cracovie et Kieff et paradysentérique F1. Cracovie,
qui par elles mêmes ne déviaient pas le complément.

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Les extraits par eux-mêmes ne dissolvent point les globules rouges.

Cette expérience nous prouve que le sérum du lapin,
immunisé par la culture dysentérique Cracovie, a fixé le com-
plément à l'aide des extraits des cultures dysentériques Kieff
et Cracovie, sans le fixer cependant avec l'extrait de la culture
paradysentérique FI. Cracovie.

Exr. XVIIE. — Le lapin fut immunisé par le bacille paradysentérique FI.
Kieff. Depuis le 2 janvier jusqu'au 8 mars 1908, il a reçu des injections sous-
cutanées, intrapéritonéales et intraveineuses au nombre de 10 cultures sur
agar. À la fin de l’immunisation, il supportait bien une culture sur agar
en injection intraveineuse.

224 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

4° Fixation du complément par les extraits bactériens à l'aide du
sérum immunisé.

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Le sérum contrôlant d'un lapin non immunisé A.

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— |0,075 | 0,1 io » » | Hém. compl. | Hém. compl. | Hém. compl.

Dans cette expérience, on a mis à l'épreuve les extraits
aqueux des trois cultures paradysentériques : FI. Kieff, FI.
Cracovie et FI. Saarbrücken (1).

10 D.M.S. du sérum hémolytique . 7 (ENUZ

DONDAMTAX. MON ADS SN EE RP EN DE 10
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(4) Toutes mes autres expériences furent exécutées d'après les schémas
présentés dans les expériences II et XVIII. Les doses maximales d'extraits
incapables de dévier le complément par elles-mêmes sont entre 0,08 à 0,1
ou bien entre 0,1 à 0,12, les doses correspondantes des sérums sont entre

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 225

5° Fixation du complément par les extraits à l'aide du sérum
immunisé.

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Le sérum contrôlant d'un lapin non immunisé F.

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0,1 à 0,2. Dans Loules mes expériences, je me servais de 1,02 d'extrait, c'est-
à-dire d'une dose quatre ou cinq fois plus petite que la dose maximale
d'extrait, ne déviant pas le complément. La première dose du sérum, égale
loujours à 0,05, étail de moitié plus petite que la dose maximale de ce sérum,
ne déviant pas le complément (0,1 à 0,2). Je me gardais de prendre des
quantités plus élevées d'extraits ou de sérum, de peur que le complément ne
devie pas, parce que les albumines se condensent trop dans les mélanges.
Les résultats très nets, d'expériences ainsi faites, permettaient de reconnaitre
l'identité ou la différence, voire même le degré de parenté des diverses cul-
tures dysentériques et paradysentériques. Par exemple, le sérum du lapin,
immunisé par le bacille paradysentérique FI. Cracovie, fixait le complément
par extrait de ce bacille et de celui du bacille FI. Saarbrücken, sans le fixer
cependant par les extraits d’autres cultures paradysentériques. Les aggluti-
nogènes des bacilles FI. Cracovie et FI. Saarbrücken, sans être parfaitement
identiques, présentaient une parenté plus prononcée que celle qui existe
entre les bacilles FI. Cracovie et FI. Kräl ou entre FI. Cracovie et FI. Kieff el
ainsi de suite (voir table d'agglutination).

15

226 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
Le tableau ci-dessous donne les résultats d’autres expé-
riences, exécutées comme les précédentes :
22 124 2 2 222002 22 2 2 IN 7 2 AN ON 4
SÉRUMS DES LAPINS IMMUNISÉS

F1. F1.

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Cracovie. | Kieff.

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+, veut dire que l'hémolyse était fortement enrayée, comme dans les
expériences HIT ou XVIIT; 0, que l'hémolyse était parfaite dans toutes les
épreuves; —, que l'épreuve n'était pas exécutée.

Le sérum de deux lapins, immunisés exclusivement par des
injections sous-cutanées des cultures paradysentériques FT. Kräl
et FI. Saarbrücken, ne fixait pas le complément par les extraits
des cultures homologues. Ces lapins ont reçu, durant six
semaines, quatre injections sous-cutanées de cultures sur agar.

Moreschi (1) constate qu'on obtient la fixation du complé-
ment aussi bien avec les extraits des bactéries qu'avec leur
émulsion. En ce qui concerne les bacilles de la dysentérie,

1) Moreseur, Ueber den Wert des Komplement ablenkungsverfahren in der
bakleriologischen Diagnostik. Berliner klinische Wochenschrifl, 1906, n° 38,
p. 4243 ; 1907, n° 38, p. 1204.

Levensuxo Scnôxe, Ueber die Verwendbarkeit der Komplemente bindung
zur Typhusdiagnose. Zeitschrift für Hygiene und Infeklionskrankheilen, 1908,
Bd LX, p. 149.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 227

l'expérience suivante démontre que, dans ce but, les extraits
conviennent mieux que les émulsions.

Exr. XV et XXI. — Sérum du lapin ayant recu depuis le 2 janvier jusqu'au
18 mars 1908 en injections sous-cutanées, intrapéritonéales et intraveineuses
un total de 9 cultures de bacille paradysentérique FI. Cracovie.

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La quantité d'extrait 0,02 était 5 à 6 fois plus petite que la dose, qui ne
déviait pas par elle-même le complément. La quantité d'émulsion 0,05 était
deux à cinq fois plus petite que cette dose (0,1 —0,25). Les mêmes doses du
sérum spécifique fixaient fortement le complément à l'extrait sans le fixer
par l'émulsion.

En généralisant les résultats de mes expériences, Je ferai
remarquer qu'elles démontrent l'identité de toutes les cultures
du bacille dysentérique et l'existence de nombreuses variétés
de cultures paradysentériques. Elles ont été exécutées d'après
la méthode ci-dessus, n’ont révélé aucune parenté entre les
bacilles dysentériques et paradysentériques. Les expériences
d’agglutination sur les sérums des lapins immunisés prouvent
aussi que cette parenté n'est que très éloignée.

Le bacille dysentérique se distingue, on le sait, par une
virulence prononcée par rapport aux lapins et par la faculté
de produire une toxine ayant tous les caractères d’une vraie
toxine soluble. Les corps de ces bacilles et leur toxine font

228 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

naître, chez le lapin, le tableau caractéristique de la maladie et
les altérations dysentériques dans le cæcum. Par contre, les
bacilles paradysentériques ne produisent pas de ces altérations
chez les lapins et sont, en général, peu virulents pour ces
animaux. Cependant on les a retrouvés dans les matières fécales
des maladesatteints de dysenterie, là où les bacilles dysentériques
proprement dits faisaient défaut, et le sérum de ces malades
agglutinait les bacilles paradysentériques; — on doit en con-
clure que ces bacilles peuvent, eux aussi, provoquer la maladie.
Les sérums des lapins immunisés par les corps bactériens du
bacille dysentérique, contiennent l'antitoxine, qui neutralise la
toxine de ce bacille. Quant au sérum des lapins immunisés par
les bacilles paradysentériques, il ne contient pas cette anti-
toxine, ce que montre l’expérience suivante :

Lapin 1. Depuis le 26 juin jusqu'au 9 août 1907, on a fait six injections
sous-cutanées de l'émulsion des cultures paradysentériques FI. Saarbrücken
sur agar. Le lapin reçut sous la peau un total de 6 cultures.

Lapin 2, fut immunisé simultanément et de la même manière que le 1, par
le bacille parad. FL Kräl.

Lapin 3, immunisé en même temps que les précédents par des cultures
sur agar du bacille dysentérique Kieff. Il en a reçu trois, dont une sous la
peau.

Le 19 août, j'ai fait des saignées, et j'ai mélangé les sérums recueillis chez
ces lapins dans la proportion de 0,5 cent. cubes a. 5 D.M.D. de toxine de
bacille dysentérique Varsovie. J'ai injecté ces mélanges dans les veines des
lapins.

Lapin 4 a) 5 D.M.L. de Loxine + 0,5 cent. cubes de sérum du lapin 1 (FL
Saarbrücken) succomba le lendemain. Lapin 2 a) 5 D.M.L. de toxine
+ 0,5 cent. cubes de sérum du lapin 2 (FI. Kräl): ce lapin succomba pendant
la nuit. Lapin 3 a) 5 D.M.L. de toxine + 0,5 cent. cubes de sérum du lapin 3,
(Kieft}, supporta sans tomber malade. Le lapin de contrôle, 4 D.M.L. de
toxine, succomba après quatre jours.

Kraus et Doerr (1) ont obtenu des résullats analogues avec
le sérum des chèvres immunisées. Ces auteurs ont, de plus,
démontré que le sérum des chevaux immunisés par le bacille
paradysentérique n'a pas de propriétés (thérapeutiques ni pré-
servatrices, dans l'infection expérimentale des souris par une
culture vivante (non pas la toxine) du bacille dysentérique.

Jusqu'ici, autant que je sache, on ne trouve rien dans la

(1) Kraus und Dorrr, Die experimentelle Grnndlage einer antiloxischen
Therapie der bacillarer Ruhr. Zeitschrift für Hygiene und Infeklionskrankeilen,
1906, Bd LV, p. 33 et 34.

SÉRUMS DYSENTÉRIQUES 21)

littérature qui permette de savoir si les bacilles dysentérique el
paradysentérique provoquent, chez l'homme, des altérations
anatomo-pathologiques parfaitement identiques, et si les bacilles
paradysentériques, comme les dysentériques, ne se trouvent
que dans le gros intestin ou bien s'ils pénètrent dans d’autres
organes. Amako (1) fit l’'autopsie el l'examen bactériologique
de neuf cadavres d'hommes, morts de dysentérie, mais il n'a
pas indiqué quels étaient les cas provoqués par le bacille
dysentérique ni ceux provoqués par le b. paradysentérique.
L'auteur n'a trouvé de bacille dysentérique ni dans le sang, ni
dans la rate, ni dans le foie et la vésicule biliaire.

On range les bacilles dysentériques dans le groupe des
Typhus-Coli. En effet, les bacilles paradysentériques ont des
traits communs avec les bacilles de ce groupe. Quant à la
parenté du bacille dysentérique avec le Typhus Coli, elle me
paraît très éloignée. Je suppose que le bacille dysentérique,
d'après toute vraisemblance, doit occuper dans ce groupe une
place bien à part. C’est cette place à part par rapport au bacille
paradysentérique qui, à mon avis, doit être prise en consi-
dération dans nos efforts tendant à obtenir un sérum curatif (2).
Shiga, au contraire, dans son travail récent, tend à obtenir un
sérum polyvalent curatif pour tous les cas de dysenterie. De ces
cinq types de bacilles, l'auteur choisit ceux dont la parenté est
la plus proche, les réunit en groupes et se sert de chaque groupe
pour immuniser un cheval. Ensuite, en mélangeant les sérums
de tous ces chevaux, l’auteur obtient un sérum polyvalent pour
tous les cas de dysenterie. Shiga, sous ce rapport, ne fait pas
de distinction entre les deux bacilles.

Il me parait douteux qu'on puisse résoudre ainsi d'une
manière catégorique la question de la sérothérapie en dysen-
terie, en se basant sur les résultats d’études expérimentales faites
jusqu'ici. Il existe en effet des cas de maladies, ayant tous les
symptômes cliniques de la dysenterie, et dans lesquels on ne
trouve pas trace de bacille dysentérique ni paradysentérique.
Jusqu'ici ce ne sont que les résultats d'examen bactériologique,
dans chaque cas particulier, qui peuvent nous fournir des indi-

1) Awako, Dysenterie epidemien und Bacillentypen. Zeitschrift f. Hygiene
und Infektionskrankheiten., 1908, Bd LX, H. 1, p. 93.
(2) Shiga, loc. cil.

230 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cations relatives à l'emploi du sérum. Une fois que l'analyse
a démontré qu'un cas donné est provoqué par exemple par le
bacille dysentérique Shiga-Kruse, il n'y a plus lieu d’appli-
quer le sérum polyvalent, d'autant plus que l’action curative
de sérum univalent (Shiga-Kruse) est très prononcée et que
l’action du sérum paradysentérique polyvalent, dans la para-
dysenterie, n'est que peu étudiée jusqu'ici. Le sérum des
chevaux immunisés par le bacille dysentérique et sa toxine
révèle une action principalement antitoxique. La quantité d'an-
liloxine peut être rigoureusement déterminée chez les lapins.
Kruse (1), 1l est vrai, est d'avis que l’homme n'est pas sen-
sible à la toxine du bacille dysentérique, toxine qu'il appelle
« Kaninchengift ». Si cette affirmation de Kruse était juste,
nous ne pourrions attribuer à l'antiloxine du sérum dysenté-
rique aucune action curative chez l'homme atteint de dysen-
terie due au bacille dysentérique. [l nous semble cependant,
qu'il manque jusqu'ici de bases suffisantes pour considérer cet
avis de Kruse comme irrécusable.

Je m'arrêterai, en terminant, sur le travail récent de Kon-
rich (2), travail qui pourrait, jusqu'à un certain point, contre-
dire ma manière de voir. L'auteur a cultivé un bacille doué des
caractères du bacille paradysentérique Flexner, extrait des
matières fécales d'un soldat qui avait eu la dysenterie six mois
avant. Ce bacille cependant, dans les épreuves d’agglutination
et dans l'infection expérimentale des lapins, se comportait
comme le bacille dysentérique. Le bacille de Konrich appartient
aux cultures s’agglutinant bien facilement. L'auteur n’a pas
examiné son bacille au point de vue de la production de la
toxine, et n'a pas fait d'expériences pour démontrer si les lapins
immunisés par ce bacille, acquièrent l’'immunité par rapport au
bacille dysentérique et à sa toxine: il n'a de même pas déter-
miné l’antitoxine du sérum des lapins immunisés.

Varsovie, 17 octobre 1909.

1) Kruse, Rirrernaus, Kewr und Mer, loc. cil.

2) Koxkicu, Ueber eine isoliert gebliebene Epidemie bacillärer Rubr in Mit-
teldeutschland und einen dabei gefundenen, zwischen den Trpen Shiga-
Kruse und Flexner stehenden Bacillus. Zeitschrift für Hygiene und Infektions-
krankeilen, 1908, Bd'LX, p. 281.

LA « PHASE NÉGATIVE » DE WRIGHT
DANS LA VACCINATION ANTITYPHIQUE DES JEUNES LAPINS
par le D' Freperico DE GASPERI.

(Travail du laboratoire de M. le professeur Metchnikoff.)

On sait que Pintroduction de bacilles typhiques dans l’orga-
nisme des animaux de laboratoire amène une infection mor-
telle généralisée, mais celle-ci ne présente pas les caractères
essentiels de la fièvre typhoïde de l’homme, avec ses lésions
du tube digestif; on sait de plus que ces animaux sont sus-
ceptibles d’être vaceinés contre celte infection expérimentale.

Les cobayes et les lapins se prèlant facilement à la vaccina-
lion antityphique et à la vérification de l’immunité contre
l'infection due au bacille d’'Eberth, peuvent nous fournir
d'utiles renseignements qui contribuent, en même temps que
d'autres faits, à nous renseigner exactement sur la valeur des
vaccins antityphiques.

De nombreux auteurs ont étudié les modifications biolo-
giques du sérum des animaux et de l’homme, injecté avec les
divers antigènes typhiques qui ont été préparés jusqu'ici.

Il résulte de ces travaux que dans l’organisme des vaccinés
on décèle, quoique en proportions variables, la présence des
différents anticorps défensifs : agglutinine, précipitine, lysine,
sensibilisatrice, stimuline, opsonine.

Wright, le premier, s'est attaché à l'étude de ces anticorps.
C’est en s'appuyant sur leur présence qu'il a généralisé, dans la
suite, l'emploi de la vaccination antityphique chez l'homme.

Pour ce qui nous intéresse particulièrement, nous devons
rappeler que, dans la fièvre typhoïde de l’homme, d'après
Leishman, les stimulines et, selon Wright, Hektoen, Harrison,
Achard et Foix, etc., les opsonines sont augmentées; elles sont
spécifiques.

üichardson, Weaver et Tunniclif, Cevey, etc., semblent
accorder peu d'importance à l'évaluation des opsonines en tant
que témoins du degré de l’immunité vaccinale.

232 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Sur l'invitation de M. le professeur Metchnikoff, nous avons
étudié la vaccination antityphique sur les jeunes lapins, spé-
cialement le pouvoir opsonique de leur sérum sanguin et la
phase négative consécutive aux inoculations.

Nos expériences ont porté sur quatre lots de jeunes lapins,
composés chacun de trois sujets, dont deux ont été soumis aux
inoculations de vaccin Rene, le {roisième étant gardé
comme témoin.

Dès le premier jour après la première injection de vacein,
nous avons suivi le cours des propriétés opsoniques chez les
deux lapins traités et le témoin normal.

Nous nous sommes servi d’un vaccin préparé par nous-même d'après le
procédé de Pfeiffer et Kolle : des cultures de vingt-quatre heures de bacille
typhique H, virulent, sur gélose inclinée, furent émulsionnées dans 45 cent.
cubes d'eau physiologique; l'émulsion fut chauffée à 60 degrés centigrades,
pendant une heure un quart, puis additionnée dune très faible quantité
d'acide phénique, chauffée à nouveau à 60 degrés pendant une demi-
heure.

Un centimètre cube de ce vaccin correspond à 2 anses de 2 milligrammes
de culture fraiche.

Les lapins ont recu sous la peau trois doses successives, avec les quan-
htés suivantes : 1 cent. cube la première fois, 2 cent. cubes la deuxième,
3 cent. cubes la troisième, en des Fi variables suivant l'apparition et
l'élévation du pouvoir et de l'indice opsonique, ainsi que l’on peut s'en rendre
compte dans quelques-unes des expériences relatées plus loin.

Nous devons ajouter que nous n'attendions pas, pour inoculer soit la
deuxième ou la troisième dose, que la courbe opsonique fléchit spontané-
ment, nous injections les doses suivantes aussitôt que l'indice opsonique
nous paraissait élevé d'une façon notable. Cela dans le but de voir s'il était
possible de gagner du temps et d’abréger ainsi la période vaccinale, tout en
aboutissant à une immunité solide. Ce fait nous parait avoir son impor-
lance.

Une fois vaccinés, les animaux ont reçu dans le péritoine 7/10 d'une cul-
ture et une culture entière de vingt-quatre heures, sur gélose, de bacille
typhique H, émulsionnée dans de l'eau physiologique.

Notre bacille typhique était très virulent; 3/10 d'une culture tuaient les
cobayes de 350 grammes environ, dans un délai de quatorze à vingt-quatre
neures.

Mais de ce que les animaux de laboratoire n'ont qu'une
faible réceptivité pour le bacille d'Eberth, il semble difficile de
conclure, des effets produits chez eux par la vaccination anti-
typhique, à ceux qu'on peut attendre, chez l'homme, de la
même vaccination. L'animal pourra d'autant mieux résister à
l'inoculation d'épreuve qu'il est plus facile à immuniser.

LA « PHASE NÉGATIVE ». DE WRIGHT 233

C'est pourquoi, à l'aide de la technique nouvelle indiquée
par Vincent, nous avons soumis nos lapins vaccinés contre le
bacille d'Eberth, ainsi que les témoins, à un. mode d'infection
tel qu'il amenât, d’une manière constante, la mort des témoins
non vaccinés. Ceux-ci ont succombé à une généralisation du
bacille typhique dans le sang et les organes, y compris l'in-
testin. Voici comment nous avons procédé :

Les lapins vaccinés et les témoins recevaient, sous la peau, 5 cent. cubes
d'une solution hypertonique à 10 p. 100 de chlorure de sodium et immédiate-
ment après, dans le péritoine, une émulsion de bacilles typhiques dans les
doses indiquées ci-dessus (1/10 et 10/10 d’une culture).

Nous avons employé cette même technique pour infecter quatre cobayes;
nous avons obtenu les mêmes résultats satisfaisants. Les animaux ont suc-
combé dans un délai de quatorze à vingt-quatre heures, présentant à l’au-
topsie une péritonite typhique classique : le bacille d'Eberth a été rencontré
dans le sang, les organes et le contenu de l'intestin.

Nous allons maintenant donner, d'une facon détaillée, deux
de nos expériences de vaccination antityphique de jeunes
lapins, pratiquées sous le contrôle de la méthode opsonique.

C'est ainsi que nous avons pratiqué l’'opsono-réaction suivant
la technique indiquée par Wright dans son livre : Studies on
immunisation, en tenant compte toutefois des remarques faites
sur la méthode par Coppelli, c'est-à-dire que nous avons tou-
jours attendu, pour essayer les sérums des animaux vaccinés
et des témoins, que six heures se soient écoulées après le pré-
lèvement du sang.

Cette précaution ne nous à pas paru inulile, car, ainsi que
Coppelli l'a constaté, le pouvoir opsonique du sérum normal,
faible aussitôt après l'extraction, va progressivement et rapide-
ment en augmentant proportionnellement au temps pendant
lequel il reste en contact avec le caillot sanguin, et cela
jusqu'à la cinquième heure; il demeure invariable jusqu'à la
septième et diminue ensuite.

Les leucocytes utilisés étaient loujours empruntés à un
animal neuf de la même espèce que les animaux vaccinés. Les
émulsions microbiennes étaient, autant que possible, de même
concentration. Les tubes de Wright restaient à l'étuve à

<

37 degrés cenligrades, pendant quinze minutes, pour l’accom-

234 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plissement de l'acte phagocytaire: puis ils étaient aussitôt
plongés dans de l’eau froide, afin d'arrêter immédiatement ce
phénomène biologique.

Pour l'évaluation du pouvoir opsonique et la détermination
de l'indice opsonique, nous avons fait le compte des microbes
phagocytés par 50 leucocytes.

EXEMPLE : EXPÉRIENCE II

31 aoûé 1941.

Les lapins n° 61 (1.280 grammes) et 62 {1.350 grammes) recoivent sous la
peau chacun { cent. cube de vaccin antityphique de Pfeiffer et Kolle ; 1 cent.
cube de ce vaccin correspond à 2 anses de culture fraiche.

Le lapin n° 1, pesant 1.400 grammes, est gardé comme témoin.

POUVOIR INDICE
opsonique. opsonique.

Aer septembre.

LAPINS

No 61. Bactéries, 78 : 50 Polynucléaires — 1,56 0,92

Ne 62. — 244: 050 — — il 542 0,83

No 1. _ 86 : 50 = — 1,72 l»
2 septembre.

No 61. Bactéries. 58 : 50 Polynueléaires — 1,16 0,74

No 62. — 33 : 50 —_ — 441700 67

No 1. = 18 : SU — = 1,50 4: »
3 seplembre.

N° 61. Bactéries, 96 : 50 Polynucléaires — 1,92 0,64

No 62. — 85 : 50 — nl 10 0.57

No. 4. — 148 : 50 — — 26 L »
4 seplembre.

No 61. Bactéries, 312 : 50 Polynueléaires — 6,60 241

No 62. — 241 : 50 — #0 282 1,91

No 1 — 120RSU — = 650 in
5 seplembre.

N° 61. Bactéries, 526 : 50 Polynucléaires — 11,24 4,19

No 62. = 493 : 50 — — 9,86 3,67

Ne 1. _ 134 : 50 — — 2:68 10

Les lapins n°s 61 et 62 recoivent sous la peau la seconde injection de
2 cent. cubes de vaccin antityphique de Pfeiffer et Kolle.

6 seplembre.

Ne 64. Bactéries, 109 : 50 Polynueléaires — 2,18 0,94

No 62. Et 103 : 50 = — 906 0,89

N° 1. PE 4115 : 50 ee — 9,30 L »
7 septembre.

No 61. Bactéries, 84 : 50 Polynucléaires — 1,68 0,87

No 62: — SR = T6 0,84

Ne 1. — 96-00 == — 102 12055
S seplembre.

No 61. Bactéries, 252 : 50 Beucocytes — 5,40 3,23

No,62, — 234 ::50 == — 04,26 2,96

INDE — 18 : 50 — 217506 1 »

LAPINS
9 seplembre.
No 61.

No 62.
No 14.

Les lapins n°s 61 et 62 sont réinjectés une troisième fois

LA « PHASE

Bactéries, 414 : 50
= 301 : 50
= So 50

Leucocytes

NÉGATIVE » DE WRIGHT

POUVOIR

II

3 cent. cubes de vaccin antityphique de Pfeiffer et Kolle.

10 septembre.
N° 61.
No 62.
N°21
11 septembre.
N° 61.
No 62.
INPI:
12 septembre.
N° 61.
No 62.
N°21?

14 septembre.

Bactéries, 80 : 50
— HS 50
— 84 : 50

Bactéries, 391 : 50
— 349) : 50
— 93 : 50

Bactéries, 382 : 50
— 348 : 50
_ 68 : 50

Leucocytes

Leucocytss

Leucocytes

HU HU

(RIR

opsonique.

235

INDICE
opsonique.

Les lapins n°5 61 et 62, ainsi que deux autres lapins normaux de même
poids environ que les deux vaccinés, reçoivent d’abord sous la peau 5 cent.
cubes de solution hypertonique de Na CI à 10 p. 100 et immédiatement après,
dans le péritoine, 7/10 d’une culture sur gélose, de vingt-quatre heures, de
bacille typhique H, délayée dans de l'eau physiologique.

16 seplembre.

Le matin à 9 heures les deux lapins témoins sont morts. A l’autopsie, les
cavités péritonéales renferment de la sérosité louche et quelques flocons de
fibrine ; rate, foie et reins tuméfiés, congestionnés; l'intestin grêle est forte-
menti congestionné et contient un liquide séreux sanguinolent.

Le bacille d'Eberth, à l’aide de la gélose de Drigalski, est isolé du sang .
des organes et du contenu intestinal.

Les lapins vaccinés ont résisté aux injections d'épreuve.

E

77)
EE)
EE —

—

DSEL

236 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

EXPÉRIENCE IV

17 septembre 1911.

Les lapins n°° 63 et 64 (820 et 940 grammes) recoivent sous la peau 1 cent.
cube de vaccin antityphique de Pfeiffer et Kolle. Le lapin n° 1 (1.200 grammes)
est gardé comme témoin.

POUVOIR INDICE

opsonique. opsonique.

LAPINS

18 septembre.

No 63. Bactéries, 93 : 50 Polynucléaires — 1,86 0,86

N° 64. — Do 0 = =" 4°) 0,89

No 1. Es 108 : 50 _ — 92,16 1 »
19 septembre.

No 63. Bactéries, 82 : 50 Polynucléaires — 1,65 0,65

N° 64. — 90 : 50 — OÙ 0,72

Nour — 12940 — — 250 l »
20 septembre.

N° 63. Bactéries, 67 : 50 Polynucléaires — 1,34 0,58

No 64. — 1209 0 — 1,44 0.63

NOÉ — 114 : 50 — —12,25 1 »
21 septembre.

No 63. Bactéries, 180 : 50 Peucocytes.—43;f0 1,85

N° 64. — 296 : 50 — Ni 2,32

No 1. = 97 : 50 = — 1,9% 1 »
22 septembre.

N° 63. Bactéries, 442 : 50 Lencocytes — 8,8% 4,23

N° 64. — au al) — — 10,24 4,87

N° 1. Se 105 : 50 = — 9,0 1 »

Ces mêmes lapins recoivent sous la peau une seconde dose de vaccin
antityphique de Pfeiffer et Kolle, dans la quantité de 2 cent. cubes.

23 septembre.

N° 63. Bactéries, 90 : 50 Leucocyles — 1,80 0,86
N° 64. — 106 : 50 — = 217 0,89
Nom: — 1AS : 50 — = 286 12)
2% septembre.
No 63. Bactéries, 80 : 50 L'eucocytes" —"1;60 0,17
No 64. — 85 : 50 — = 0,82
No 4 — 103 : 50 — 2:00 1 RS)
25 septembre.
N° 63. Bactéries, 311 : 50 Peucocytes "16,22 2,54
N° 64. = 410 : 50 == — 8,20 3,36
N° 1. = 122 : 50 — — 9,44 1 »
26 septembre.
| No 63. Bactéries, 383 : 50 Leucocytes.—"\7,66 3,94
| No 64. 2e 850 : 50 = — 8,08 4,16
Noume — SN( 2 GE _ = AY À »

Nouvelle injection sous la peau : 3 cent. cubes de vaccin antityphique de
Pfeiffer et Kolle.

27 septembre.

N° 63. Bactéries, S0 : 50 Leucocytes — 1,60 0,90
N° 64. = 82 : 50 — — 1,65 0,93
INDRUe — S8 : 50 — ail; 17 1 »

LA « PHASE NÉGATIVE » DE WRIGHT 237

se POUVOIR INDICE
RSR opsonique. opsonique.

28 septembre.

No 63. Baciéries;1351: 50 Leucocytes — 1,14 3,46

N° 64. — 416 : 50 —_ — 1932 % »

No 1. — 103 : 50 — —2;00 157»
29 septembre.

N° 63. Bactéries, 498 : 50 Leucocytes — 9,96 5,24

N° 64. — 544 : 50 — — 10,88 D 12

No 1. = 95 : 50 2 — 1,90 ASS

30 septembre.

Les lapins n°s 63 et 64, ainsi que deux lapins normaux du poids de 730 el
S00 grammes, reçoivent d'abord sous la peau 6 cent. cubes d'eau salée à
10 p. 100, et aussitôt, dans le péritoine, une culture entière de vingt-quatre
heures sur gélose, de bacille typhique H, délayée dans de l’eau physiolo-
uique.

ler octobre.

Dans l'après-midi, un lapin témoin est trouvé mort. A l’autopsie, on ren-
contre les lésions d’une péritonite grave, à bacille d'Eberth.

Le deuxième Lémoin esttrouvé mort le jour suivant; autopsié, on remarque
les lésions anatomo-pathologiques de la seplicémie éberthienne.

À l’aide de la gélose de Drigalski, on isole le bacille typhique du sang,
des organes et du contenu intestinal de ces deux lapins.

Les lapins vaccinés ont survécu aux injections d'épreuve.

+&-
È
È

Nos expériences montrent donc que, chez les jeunes lapins
(de 750 à 1.000 grammes), l’inoculation sous-cutanée de vacein
antityphique de Pfeiffer et Kolle amène, d’une facon constante,
une dimiuution du pouvoir opsonique (phase négative) de leur
sang, toujours suivie par une augmentation rapide et considé-
rable si les doses injectées sont appropriées.

238 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La phase négative qui suit la première injection de vaccin,
et qui dure un temps variable, de deux à quatre jours, repa-
rait à l’occasion de la deuxième et de la troisième injection;
mais, dans ces deux derniers cas, elle dure moins long-
temps et est moins accentuée, ainsi que le montrent les
courbes opsoniques que nous donnons plus haut.

Dans la vaccination antityphique des jeunes lapins, Le degré
du pouvoir opsonique semble être proportionnel au degré de
l'immunité par eux acquise.

BIBLIOGRAPHIE

Waicar and DouGras. — Proceed. of the Royal Soc. London, 1905, vol. LXXIV.

Wricar and DoucGras. — The Lancet, 1905.

LEISHMAN, HarRISON, SMALLMAX and TuoLcLocH. — Journ. of Hyg. Cambridge,
1905, vol. CCCLXXX.

CHARLES and Simon. — Reprint from lhe Journ. of exper. meul., 1906.

HEKTOEN and RuEpiGer. — The journ. of Infect. diseases, vol. 11, n°1.

HarrISON (W, S.).— Journ. of the Royal Army Medical corps. 1907.

Pertr et BRETON. — Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1906.

RicnarpsON (M. W.). — Am. Journ. Med. Sc., 1908, vol. CXXXV

AcHaRD et Foix. — Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1909

WeiGar. — Sludies on immunisalion. London, 1909.

CoPPELLI, — Opsonismo e fagocitismo. Parma, 1910.

VINCENT. — Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, vol. CL.

NOTE SUR UNE LAPINE

NATURELLEMENT RÉFRACTAIRE A LA RAGE

par Jues VIALA,

Préparateur au service antirabique.

M. Pasteur (1) a signalé qu'il existait des chiens résistant,
sans préparation, à une sévère inoculation de virus rabique.

Remlinger (2) cite le cas d’un lapin ayant résisté à trois
injections de virus fixe dans le cerveau.

Il est extrêmement rare de rencontrer des lapins ne prenant
pas la rage à la suite d’une inoculation intra-cranienne de virus
rabique. Si, par fortune, on en trouve un qui ne devienne pas
rabique après une première inoculation, le plus souvent il con-
tracte la maladie à une deuxième.

Depuis quinze ans que j'inocule des lapins pour les besoins
du service antirabique, je n'ai observé qu'un seul animal natu-
rellement et complètement réfractaire à la rage.

Nous avons injecté, le 3 octobre 1909, deux lapins par trépa-
nalion avec du virus fixe, l’un prit la rage le 7° jour et l’autre,
qui était une femelle, résista.

Le 3 novembre, cetle lapine est injectée denouveau, en même
temps que deux lapins témoins, qui succombèrent dans le délai
habituel.

Le 3 décembre, on fait à cette mème lapine une troisième
injection intra-cérébrale de virus fixe, laquelle est demeurée
également sans résultat.

Ayant eu l’occasion d’avoir de la matière cérébrale provenant
d'une personne morte de la rage, nous avons éprouvé la résis-
lance de ce lapin au virus humain.

L'inoculation intra-cérébrale est pratiquée le 3 janvier, les

1) Pasreur, Comptes rendus de l'Acad. des sciences, 1. XCVIIT, p. 457.
2) ReMuINGER, Annales de l'Inslilul Pasteur, &. XVII, p. 843.

240 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

lapins témoins succombèrent à la rage le 25° jour, et la lapine
ne présenta aucun symptôme rabique.

Il nous à paru intéressant de savoir si le sérum de celte lapine
neutralisait le virus fixe. Nous avons fait, selon le procédé de
A. Marie, un mélange de X gouttes d’émulsion de matière céré-
brale d’un lapin ayant succombé au virus fixe et X gouttes de
sérum de notre animal réfractaire.

Le lapin inoculé dans le cerveau avec ce mélange n'a pré-
senté aucun symptôme de rage. Un lapin témoin, inoculé de la
même façon, avec X gouttes de la même émulsion et X gouttes
de sérum normal de lapin, prit la rage le 8° jour.

Le sérum de cette lapine présentait donc un pouvoir bacté-
ricide évident. Nous avons aussi voulu rechercher si cette
immunité était héréditaire.

Pour nous placer dans les meilleures condilions, nous avons
mis celte femelle avec le lapin mâle qui avait résisté au mélange
de virus sérum.

Le 27 mai, elle donna le jour à sept petits : Nous avons
éprouvé, quatre et cinq mois après, ces petits lapins par trépa-
nalion avec du virus fixe : tous sans exception prirent la rage
dans le délai habituel.

Nous aurions voulu pouvoir continuer les expériences d'héri-
dité avec cette femelle réfractaire, mais elle succomba au cours
d'une seconde grossesse.

Chez cette lapine, l'immunité antirabique était-elle naturelle
ou élait-elle due à quelque circonstance antérieure inconnue
de nous, par exemple morsure à la ferme d'élevage par un chien
rabique. Il est impossible de le dire, mais la rencontre d'un
lapin réfractaire à la rage est assez rare pour être signalée.

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette.

e ANNÉE AVRIL 1912 N° 4

19
Sri

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

ACTION DU MANGANÈSE SUR LE DÉVELOPPEMENT
DE L'ASPERGILLUS NIGER

par GagriEz BERTRAND et M. JAVILLIER.

L'influence favorable exercée sur la croissance des végétaux
par l'introduction, même à l’état de (races, dans le sol ou les
milieux de culture, de certains éléments chimiques, comme le
manganèse, le bore, le zinc, elc., qui ne se rencontrent, en
général, dans les plantes qu'en très petites proportions, est
démontrée aujourd’hui par de nombreuses expériences, entre-
prises tant au laboratoire que dans la grande culture. L'emploi
de plusieurs de ces éléments, en addition aux engrais ordi-
naires, a pu, dès lors, être proposée avec succès par l’un de
nous qui a désigné ces engrais nouveaux, à cause de leur rôle
probable, sous le nom d'engrais catalytiques (1). C'est ainsi que
le manganèse, principalement à l'état de sulfate ou de carbo-
nate, a déjà pris une place intéressante dans la pratique
agricole.

Nous nous sommes demandé si l'influence exercée séparé-
ment par divers éléments catalytiques était cumulative, c'est-
à-dire s'il était possible, en ajoutant à la fois deux ou trois de
ces éléments, d'obtenir des augmentations de récolte supé-
rieures à celles que l’on obtient par l'addition d'un seul. Il y

(4, Gas. Berrran», Sur l'emploi favorable du manganèse comme engrais.
Comptes rends de l'Acad. des Sciences, L&. CXLI, p. 1255; 1905. — Le manga-
nèse dans la nature. Rev. gén. de Chim., t. VIII, p. 205; 1905. — Sur les
engrais catalytiques. Comptes rendus des Congrès d2 Chim. appliquée d+ Berlin,
1903, de Rome, 1506, ef de Londres, 1909.

16

242 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

avait là, en effet, un problème de grand intérêt au point de
vue théorique comme au point de vue pratique.

Pour arriver à une solulion satisfaisante, nous nous sommes
adressés, en ce qui concerne la plante, à lAspergillus niger
v. Tieg.. et, en ce qui concerne les éléments catalytiques, au
zine et au manganèse. L'Aspergillus offre l'avantage de pouvoir
ètre cultivée en toutes saisons et de fournir, en peu de temps,
des récoltes assez abondantes et très régulières. En outre,
l'influence exercée sur cette moisissure par l’un des éléments
que nous nous proposions d'étudier, le zinc, est déjà bien
connue depuis les recherches de Raulin (1), étendues et pré-
cisées par l'un de nous (2). Quant au manganèse, nous l'avons
choisi parce que son aclion avait été examinée antérieu-
rement par certains auteurs (3). Néanmoins, comme une
lecture attentive des fravaux publiés à ce dernier sujet faisait
naître quelques critiques et ressortir d'importantes lacunes,
nous avons dù, avant d'aborder le problème que nous vou-
lions résoudre, reprendre l’élude particulière de l'action du
manganèse sur l'Asperqillus niger. Ce sont les résultats de cette
étude préliminaire que nous donnons dans le présent mémoire.

Au début de ses recherches sur l’alimentation minérale de
l’Asperqillus niger, en 1863, Raulin considérait le manganèse
comme un élément très utile et presque nécessaire au dévelop-
pement de la moisissure (4). Dans la suite, ce savant découvrit
l'importance, passée d'abord inaperçue, du fer et du zinc, etil
n'obtint plus, avec le manganèse, que des résultats inconstants.
« Faut-il en conclure, écrit-il dans sa thèse (5), que les sels de

4) Etudes chimiques sur la végétation. Thèse dort. ès sc. Paris, 1870.

(2) M. Javrzirk, Sur l'influence favorable de petites doses de zinc sur la
végélation du Sterigmatocystis nigra. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences,
t. CXLV, p. 1212; 1907. — Sur la fixation du zinc par le Sterigmatocystis
nigra. Comples rendus de l’Acad. des Sciences, &. CXLVI, p. 365; 1:08. —
Recherches sur la présence et le rôle du zinc chez les végétaux. Thèse
doct. Sc., Paris 1908. — Le zinc chez les plantes. Ces Annales, L. XXII, p. 720:
1908.

(3) En particulier, Richards, Jahresb. wiss. Bol, |. XXX, p. 665; 1897:
Kanter, Diss. Saint-Pétersbourg, 1903; Güssl, voir ci-après.

(4) Eludes chimiques sur la végétation des Mucédinées, particulièrement
de l’Ascophora niyrans. Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. LVII, p. 298 :
1863.

(5) Thèse citée, p. 168.

”
ACTION DU MANGANÈSE SUR L'ASPERGILLUS NIGER 243

manganèse ont agi par les sels de fer ou de zinc qu'ils pou-
valent contenir ou bien que le manganèse remplace le fer (ou
même le zinc) physiologiquement, comme il le remplace sou-
vent dans les réactions chimiques? » « Jene saurais, ajoute-t-il,
me prononcer à cet égard »; el c’est sans doute par suite de
cetle indécision que Raulin ne fit pas figurer le manganèse
dans la formule définitive de son milieu de culture.

Güssl(1), en 1905, en ajoutant des doses croissantes de sul-
fale de manganèse à des cultures d'Aspergillus niger ou de
Penicillium glaucum, a obtenu, avec des milieux de composi-
lion variable : sucrés, peptonés, glycérinés, des augmentations
croissantes de récolte. Toutefois, cet expérimentateur ne s'est
pas mis en garde contre les causes d'erreur signalées par
Raulin ; il a utilisé des « sels purs » du commerce, sans ajouter
s’il avait vérilié leur degré de pureté et, notamment, l'absence
complète du zinc dans le sulfate de manganèse.

Les produits dont nous nous sommes servis dans nos propres
expériences avaient été examinés au point de vue de la pré-
sence du zinc. En ce qui concerne particulièrement le sulfate
de manganèse, bien quenotie méthode de recherche du zinc(2\,
appliquée à 10 grammes de sulfate pur de manganèse du com-
merce, ne nous ait pas apporté la certitude de la présence du
zinc (3), il nous a paru utile, dans nos dernières expériences,
de le préparer nous-mêmes en partant du permanganate de
potassium pur. Le permanganate a d’abord été recristallisé ; les
cristaux ont ensuite été dissous et la dissolution traitée par un
courant de gaz sulfureux jusqu'à décoloration. Le bioxyde
précipité a élé lavé à fond par une série de délayages dans l’eau
pure (redistillée dans le vide avec un appareil en verre), suivis
de ceutrifugations; il a été finalement remis en suspension
dans l'eau et redissous par un courant d’anhydride sulfureux.

1) Ueber das Vorkommen des Mangans in der Pflanze. Beihefte z. bot.
Centralbl., & XVIII, 1re partie, p. 149 ; 1905.

(2) Bull. Soc. chim., 4e série, t. 1, p. 63; 1907, et t. III, p. 114; 1908.

‘3) Lorsqu'on précipite la solution de sulfate de manganèse par l'eau
oxygénée et l’ammoniaque, l'oxyde de manganèse précipité peut entrainer
partie ou totalité du zinc; lorsqu'il y a une énorme disproportion entre les
quantités de manganèse et de zinc, ce dernier n'étant qu'à l’état de traces, on
peut alors craindre de ne pas réaliser une complète séparation des éléments
en faisant même une série de redissolutions et de reprécipitations.

24% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La liqueur a élé concentrée pour faire cristalliser le sulfate de
manganèse.

Il importait aussi que les diverses substances chimiques
entrant dans la composition du milieu de Raulin fussent
exemples de manganèse. Or, l'examen de ces substances, bien
que nous nous adressions à des produits commerciaux purs,
nous à montré que plusieurs d'entre elles renfermaient des
quantilés appréciables de manganèse. C'était le cas, en parlicu-
lier, pour le carbonate de magné-ium et le sulfate ferreux.
Devant la difficulté d'éliminer rigoureusement le manganèse
de ces deux sels, nous leur avons substitué Le sulfate de magné-
sium et le sulfate ferrico-ammonique, qu'il est plus aisé
d'obtenir purs. La formule de Raulin a dû, par suite, subir une
modification ; elle est devenue la suivante :

AU EE RE NE mu CL a 7 Q00 6. 5
SUCL ER nn nee = el AS AE eue ee dec AS 16 gr. 6

NGNERTARNIQUEMREER CE EE RCE RCE 2 gr. 66
Carbonate de potassium . . . 0 gr. 40
Nilrate d'ammonium . . . . . 2 gr. 66
Phosphateld'ammMmOnIU PEN EEE 0 gr. 40
SULIALe D'AMMONUIN EME EN RE 0 gr. 155
Sulfale de magnésium . . . 0 gr. 710
Alunide Terra TE 0 gr. 081
SUICATE de POISSON ER PEN 0 gr. 046

Des recherches entreprises récemment sur des quantités
suffisantes de matière première nous ont montré que le nitrate
d'anmmonium, le phosphate d’ammonium et le saccharose
que nous utilisions n'étaient pas non plus rigoureu-ement
exempts de manganèse. Le taux d'impureté était de l'ordre du
100.000.000° pour le sucre, du 10.000.000° pour le nitrate
d’ammonium, du 1.000.000° pour le phosphate. Nous devons
dire que nos expériences ont été réalisées avec ces corps,
mais on voit que la proportion de maganèse qui a pu, de
ce chef, être introduite dans les milieux témoins était d’une
extrème petitesse, puisqu'elle n’atteignait pas 1/5.000° de milli-
oramme par 100 cent. cubes de liquide.

Il existait d’ailleurs une autre cause d'introduction de manga-
nèse : c'élait l'attaque des vases mêmes de culture par le liquide
porté, au moment de la stérilisation, à la température de
—-120 degrés. Une expérience conduite dans le but d'appré-

ACTION DU MANGANÈSE SUR L'ASPERGILLUS NIGER 245

cier la quantité de manganèse qui pouvait être introduite par
cette voie dans le milieu de culture nous a montré qu'elle
atteignait environ le double de la précédente. Naturellement,
celte quantité variait avec la richesse du verre en manganèse et
sa plus ou moins grande attaquabilité par le milieu de culture.
C'est en nous appuyant sur ces causes que nous expliquons la
présence de manganèse à l’état de traces très petites et de gran-
deur variable dans nos cultures-témoins (1).

Nos expériences ont élé réalisées dans des condilions
diverses, tant au point de vue de la température (27, 31,
32, 33 degrés) que de la nature des vases (matras de 2 litres,
fioles coniques de Bohème de 1 litre et demi, flacons cylin-
driques en verre vert de 500 cent. cubes) et du volume du
liquide de culture (100,250,500 cent. cubes). Le liquide était
réparti dans les récipients, stérilisé par chauffage à - 120 de-
grés pendant vingt minutes, ensemencé largement avec les
conidies d'une are récente d'Asperqullus : 12 vases étaient
placés dans une chambre thermostat où la température était
aussi régulière que possible. En général, on mettait en séries
plusieurs témoins et plusieurs vases correspondant à chaque
dose de manganèse expérimentée, de facon à atténuer les ditré-
rences individuelles. Les chiffres donnés dans les tableaux sont

alors des moyennes.

POIDS SEC
des récolles,

Exr. 1. — Matras de 2 litres. Milieu : 250 cent. cubes.
Temp., + 271 degrés. Durée de la culture : 6 jours.
Culture témoin . . . RAS UE
Culture en présence de 1 10, 000 Mn. 2er 100
ExP. 2. — Matras de 2 litres. Milieu : 250 cent. sb
Temp., + 31 degrés. Durée de la culture : 4 jours.
Culture témoin . . 23e ANT
Culture en présence de a] 10. 000 Mn. EE NOT 00)
Exp. 3. — Matras de 2 litres. Milieu : 250 cent. cubes.
Temp., + 33 degrés. Durée de la culture : 4 jours.
Culture Témoin: + MARS Eee LT or" e70
Culture en présence de 1/9. 500 Mn RE Tor CH ea hs 7e
Exp. 4. -— Fioles coniques de 1 1. 1/2. Milieu : 250 c. c.
Temp., + 31 degrés. Durée de la cullure : 4 jours
Culture témoin . . . RS DO en eue 2 doit LA)
Culture en présence de 1j. 000 . US ST MR T EIRE

(1) Comme on le verra plus loin, les quantités de manganèse dans les
cultures Lémoins ont varié de 1 à 9 millièmes de milligramme.

Exp. 5.

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

— Fioles coniques de 1 1. 1/2. Milieu :
Temp., + 33 degrés. Durée de la culture :

Culture témoin

DN0 c.c.
4 jours.

Culture en présence de 1/2.500 Mn . 2

POIDS SEC
des récoltes.

Sept expériences ont élé réalisées dans des conditions
diverses pour observer l'influence de doses croissantes de man-
ganèse el rechercher quelle dose de métal provoque les récoltes
les plus abondantes. Il paraîtra suffisant de consigner ici

quatre d’entre elles.

Exr. 6. — Matras de 2 litres. Milieu :
Temp., + 32 degrés. Lurée de la culture :

Cullure témoin :
Culture en présence de 1/100.000 Mn . .

ExP'a1e

20 cent. cubes
4 jours.

de 1/50.100 Mn. . .
de 1)/255000MNnE 00e
de 1/10.000 Mn. . : .
de} A000ENIN EE
de 1/1.000 Mn, .
dev OM PEMMERE
de 1/50 Mn . .

de 1/100 Mn . . .
dé t/50MnEEN er:

— Fioles coniques de 1 1. 1/2 Milieu : 500 c.c.
Temp., + 33 degrés. Durée de la cu'ture : 100 heures.

Cullure en présence de 1/500.0"0 Mn. . -

Exp. 8.

Pour

— Matras

donner

de

un

2 litres. Milieu

Temp., + 32? degrés. Durée de la culture
Culture témoin. . NS RARE AR Te
Culture en présence de 1/:00.000 Mn

aperçu

de 1/100.010 Mn : -
de 1/50.000 Mn

de 1/25.000 Mn

de 1/10.000 Mn

de 1/5.:00 Mn. .

de 1/1.000 Mn.
de 1/500 Mn

: 250 cent. cubes.
: 4 jours.

deM250EI00EMTEREEREr
de 1/100.000 Mn. .

de 1/25.010 Mn .

de 1/10.000 Mn

de 1/2.500 Mn. .

de 1/500 Mn. . NET
deMPAOUEMNENENE NE"

de 1/100 Mn.

des variations

POINS SEC
des récolles.

—
NN
F2]

1 ©
© N
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19 9 C5 > 09 2 2 V2
oo Jo Fe Ve Jo Je Je JO Je Je Je
ESS NES ES NES ES RES LES LES
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D
[=]

SONNNRRÉRkE À
(sje) (
©
Le]

individuelles et

ACTION DU MANGANÈSE SUR L’ASPERGILLUS NIGER 247

montrer la nécessilé d'opérer en séries, nous consignons, à
côté des poids moyens, les poids minima et maxima obtenus
dans cette expérience.

ExP. 9. — Flacon de 500 cent. cubes. Milieu : 100 cent. cubes. Temp., +
31 degrés. Durée de la culture : 5 jours.
POIDS POIDS
ne

minima. maxima. moyens.

CHUTES TTÉMOME MEME. D EETAEE 0 gr. 625 0 gr. 610
Cullures en présence de 1/1.000.000 Mn. 0 gr. 605 0 gr. 680 0 gr. 631
— = de 1/500.010 Mn 0 gr. 600 0 gr. 680 0 gr. 637
- - de 1/100.000 Mn . O0 gr. 655 Ogr. 100 O0 gr 680
— — de 1/10.000 Mn. . 0 gr. 660 0 gr. 750 0 gr. 667
= — de 1/1.000 Mn 0 gr. 665 0 gr. 735 0 gr. 7 0
— — de 1/500 Mn. . 0 gr. 755 0 gr. 810 0 gr. 782
= — de 1/333 Mn. . 0 gr. 735 0 gr. 850 0 gr. 803
— — ded/210/Mn =, 027.800 1 gr. 045 0 gr. 951
— — de 1/100 Mn. . . . O0 gr. 840 À gr. 125 0 gr. 982
— _ de EDRNEES ur: 9 » 0 gr. 170

Ces résultats montrent que le manganèse possède réellement
une influence favorable sur le développement de l'Asserqiilus
niger. L'existence d'un « zone optima » de concentration, si
nelte dans le cas du zinc avec l'Aspergillus (1), dans celui du
bore avec les phanérogames (2), est ici fort imprécise. Les
récoltes augmentent d’abord assez vite avec la proportion du
manganèse, puis de plus en plus lentement. Elles ne diminuent
qu'en présence de très grandes quantilés de métal. Mais, à ce
moment, il faut sans doute allribuer le fléchissment de la
courbe représentative du phénomène plutôt à l'action nuisible
d’une trop forte pression osmolique qu'à l'influence, devenue
nocive, du manganèse.

L'attention doit donc surtout se porter, au point de vue de
la démonstration du rôle favorable exercé par le manganèse,
sur les résultats obtenus avec de très petites doses. Dans ce
cas, en effet, l'influence adventice des impuretés, s'il en est
introduit avec le sel de manganèse, devient tout à fait négli-
geable. D'autre part, l'augmentation du soufre apporté avec le
manganèse n'entre plus en ligne de compte, car il y à déjà,
dans les témoins eux-mêmes, un excès important de soufre
disponible.

(1) M. Javiczer, Thèse citée, p. 63-71.

(2) H. Ac Luox, Recherches sur la présence et le rôle du bore chez les
végétaux. Th?se doct. ès se., Paris 1910.

248 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le manganèse possède également une action qui, sans être
très marquée, est cependant sensible sur la formation des
conidies, autant qu'on en peut juger par la coloration des
cultures Les Aspergillus cultivés svr des doses moyennes de
ce métal (1/25.000 à 1/1.000) sont, à l'arrêt des cultures, sen-
siblement plus noires que les Aspergil/lus témoins, d’une part,
et les Aspergillus plus riches en manganèse, d'autre part.

Il faut nous demander maintenant dans quelle mesure
l’'Aspergillus fixe le manganèse qui lui est offert. Le fixe-t-il en
totalité, au moins pour les petites doses, et se comporte-t-il,
vis-à-vis de ce métal comme vis-à-vis du zinc?

Nous avons fait, pour éclairer ce point, des séries de dosages
de manganèse dans des mycéliums secs.

MANGANÈSE AE POIDS FORS MANGANÈSE RSS LOT

du des
manganèse Ds de mat ère

D

d secs. fixé.

introduit.
SUD cendres. sèche.

Exp. 5 (°).

Témoin. gr. .. 108 0,00008
er. 1419 | 1 mg. 2! 0,0266

r. 0393
». 0469
or. 0526
r. 0552
Fr. 0710
gr. 074%
pr. 0821
. 0907
Pl; 0
1465

0 00006

= SS

SO OS e

1
L'4
1%
1 Le
2
à
2
24
3 Le]
3 €

Do So oo

D

Exp. 9.

0,0015
0,018
0 ,! 020
0,0026
0,015
0,154
0,21
0,448
0,526
PS 0,863
. 06 0,622

Témoin.
0 mg. 1
0,2

1

10

100

200

410

500
1.000
2.000

gr. 0227
or. 0244
rr. 0254
gr. 0256
gr. 0253
r. 025:
r. 0294
1 DS NT
or. 0385
*. 0470
r. 0119

MEN NN NT)
S SOSSCS 0 OS000©
© O7 9 ND © Sœ © © ©

(*) Conditions evpérimentales précédemment indiquées. Dans la note des Com les rendus
de l'Acad. drs Sciences, dont ce mémoire est le développement (t. CLII, p. 225; 1911), les
quantités de manganèse fixées ont été, par erreur, réduites de moitié.

ACTION DU MANGANÈSE SUR L'ASPERGILLUS NIGER 249

Ceux-ci étaient incinérés; les cendres étaient sulfatées de
facon à faire disparaitre toute trace de charbon, et le dosage
effectué colorimétriquement, après transformation du manga-
nèse en acide permanganique, suivant une technique dont le
détail a été donné antérieurement par lun de nous (1).

Ces résultats prouvent, tout d'abord, que du manganèse est
fixé par la plante. Les augmentations de récolte dans les milieux
manganésés ne sont pas seulement dues à la présence du
manganèse dans le liquide ; le métal pénètre dans la cellule, où
il joue, sans doute, un rôle actif dans le processus d'assimi-
lation des aliments.

Les quantités de manganèse fixées par la moisissure sont très
éloignées de celles qui lui sont offertes ; dans aucun des cas ci-
dessus, même celui des plus petites doses, et contrairement à
ce qui a été observé au sujet du zinc (2), l'Aspergillus n'a fixé
la tolalilé du métal. Si l’utilisation du manganèse par les
plantes supérieures a lieu de la même manière, on s'explique
aisément les effets avantageux obtenus en ajoutant du manga-
nèse à des sols qui en renferment déjà une proporlion notable,
même sous une forme assimilable.

On voit aussi que les quantités de manganèse fixées sont, à
partir d’une certaine dose, sensiblement proportionnelles aux
quantités de métal introduites. Dès ce moment, il est vraisem-
blable que la totalité du manganèse n'est pas physiologique-
ment utilisée el qu'au moins une partie se fixe sur les mem-
branes, soit par quelque phénomène de teinture, soit par
formation d'une combinaison insoluble. On peut se demander
aussi quelle part les conidies prennent dans cette fixation ; cette
part est-elle, proportionnellement à leur poids, plus élevée que
celle du mycélium? Il se présente à ce sujet un certain nombre
de problèmes que nous étudions actuellement. Mais nous
sommes, dès maintenant, suffisamment renseignés sur l’action
propre du manganèse pour pouvoir aborder utilement l'étude
de l’action simultanée de cet élément et du zinc; c’est ce que
nous ferons dans un prochain mémoire.

(4) Gas. BerTrAnD, Bull. Soc. chim., 4° série, t. IX, p. 361: 1911.
(2) M. Javizcier, Thèse citée, p. 75.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES
SUR LE TYPHUS EXANTHÉMATIQUE

ENTREPRISES A L'INSTITUT PASTEUR DE TUNIS
PENDANT L'ANNÉE 1911

TROISIÈME MÉMOIRE)

Ce troisième mémoire apporte Ja constatation d'un fait
utile, la sensibilité du cobaye au virus exanthématique. Il con-
tient, en outre, des données nouvelles sur le siège de l'agent
inconnu du typhus et sur les conditions de l’immunité vis-à-
vis de la maladie expérimentale. Enfin, on y trouvera les
résultats de quelques essais thérapeutiques.

LE TYPHUS EXPÉRIMENTAL DU COBAYE

par Cuarres NICOLLE, E. CONSEIL et A. CONOR.

Lorsqu'on inocule, dans la cavité péritonéale de plusieurs
cobayes d'un même lot, des quantités variables (8, 6, 4, 3,
2 cent. cubes) du sang d’un malade atteint de typhus exanthé-
mutique, une parl de ces animaux succombe en quelques jours
dans l’amaigrissement et l'hypothermie, avec parfois des para-
lysies; ce sont ceux qui ont reçu les doses les plus élevées.
Les autres, au contraire, inoculés de quantités faibles (3,2 cent.
cubes), ne présentent d'ordinaire aucun symptôme apparent,
tout au plus une perte de poids peu importante et passagère.
Cependant, si l'on prend la température de ces cobayes qui
n’ont témoigné d'aucune réaction objrelive, on constate que,
chez certains, non chez tous, il se produit une fièvre de quel-
ques jours, comparable à celle que monirent les singes
témoins, inoculés du mème sang et at.eints du typhus expéri-
mental le plus net.

Ces faits nous avaient frappés au cours de nos travaux de

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 251

1910 et nous avions déjà pu nous convaincre de la réalité de
l'infection de certains cobayes, inoculés dans ces conditions,
par le résultat positif d’un passage de cobaye à singe. Mais
d'autres recherches nous absorbaient alors et M. Roux, mis au
courant de nos expériences, nous avait très judicieusement
conseillé d'en remettre à plus {ard l'étude complète et la publi-
calion. Nous nous étions contentés d'une allusion à ces faits
dans nolre précédent mémoire (1).

Nous avons repris en 1911 nos recherches et nous en avons
signalé les premiers résultats dans une note à l'Académie des
Sciences (séance du 6 juin 1911, p. 1632). Ces expériences sont
décisives : Sans présenter la grande sensibilité du singe, qui
demeure l'animal réactif du {yphus exanthématique, le cobaye
offre une sensibilité suffisante vis-à-vis de cette infection pour
qu'elle puisse être mise utilement à profit dans les recherches
expérimentales ullérieures, en particulier pour la conservalion
du virus.

Le typhus du cobaye se résume en une élévation de la tempé-
rature d'une durée de quelques jours. Sans le secours du ther-
momètre, la maladie passerait inaperçue. L'incubation en est
variable : sept à seize Jours. Certains cobayes ne réagissent
pas; d’autres ne présentent qu'une réaction douteuse; dans les
cas les plus nets, la fièvre dure de quatre à onze jours, le ther-
momètre peut atteindre alors et dpasser 41 degrés. L'examen
des courbes reproduites plus loin donnera de [a fièvre
exanthématique du cobaye une idée plasexacte que ne le ferait
une description difficile et oiseuse. Dans quelques cas, on note,
à Ja fin de la période fébrile, un amaijrissement léger: il n°y
a jamais hypothermie consécutive; le retour intégral à la
santé suit immédiatement la chute thermique. Si un grand
nombre de nos cobayes sont morts en cours d'expérience, cette
terminaison est la conséquence de ponetions cardiaques desti-
nées au prélèvement du sang pour les passages. Deux de ces
animaux, cependant, semblent avoir succombé à l'infection :
l’un au cinquième jour de la fièvre, l'autre au premier jour de
l'apyrexie ; leur aulopsie n’a montré aucune lésion apparente

(4) Ces Annales : Recherches expérimentales sur le typhus exanthématique

entreprises à l'Inslilut Pasteur de Tunis pendant l'année 1910 (Deuxième
mémoire, p. 130 et 136).

252 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

des organes. Nous n'avons pratiqué sur aucun cobaye a exa-
mens histologiques du sang.

Il nous a été possible de réaliser deux fois deux passages par
cobaye et une fois trois ; nous n'avons pu dépasser ce chiffre,
soit que les doses inoculées fussent trop faibles, soit que le virus
avec lequel nous opérions ait été trop peu aclif. Pour juger la
question, il eût fallu employer à chaque passage un plus grand
nombre de cobayes que nous ne avons fait, une forte propor-
tion de ces animaux ne présentant à l'inoculation qu'une réac-
tion faible et douteuse. 11 y a là une précaution indispensable
que les expérimentateurs futurs devront connaître et suivre. Il
ne nous à pas paru que les passages par cobaye diminuaient
ou augmentaient la virulence du sang pour cet animal ou pour
le singe.

L'examen des observations qui suivent et du tableau général
qui les accompagne démontre que l'infection transmise au
cobaye dans nos expériences est bien le typhus; on y lira en
effet qu'au 1° passage le sang d'un malade a contaminé deux
cobayes et un singe neufs, mais non un singe vacciné par une
atteinte antérieure de typhus; que le sang d’un des deux cobayes
infectés s'est montré virulent pour un singe et a fourni ensuite
une longue série de passages alternalifs, par cobayes et singes, et
que le singe infecté avec le sang du malade (bonnet 64) à con-
tracté une immunilé consécutive vis-à-vis de l'inoculation ullé-
rieure du virus passé par le cobaye. L'ensemble de ces expé-
riences suffit à trancher définilivement la que-<tion.

Au total, nos essais nous ont fourni pour la plus longue
lignée 10 passages, représentés par la série suivante : malade,
cobaye, singe, cobaye, cobaye, singe, cobaye. singe, singe,
cobaye, singe et cobaye. Nous avons interrompu volontaire-
ment nos expériences ; au dernier passage par singe, l’activité
du virus était la même qu'au début. Nul doute qu'on puisse,
au moyen de passages alternatifs par cobayes et singes, con-
server indéfiniment le virus exanthématlique dans les labora-
toires ; celte constatation est de nature à rendre plus commode
et moins coûteuse l'étude de la maladie.

Dans le typhus expérimental du cobaye, comme dans celui
du singe, /e sang est virulent (de façon constante pour le singe,
animal réactif, et souvent aussi pour le cobaye, animal moins

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 253

sensible), du début de la fièvre jusqu'au dernier jour de celle-ci.
En outre, une expérience nous a montré la présence du virus
dans le sang de ceux-là mêmes de nos cobayes qui ne présentaient
aucune réact'on thermique, au moment où d'autres animaux
(singes ou cobayes), inoculés en méme temps el avec le même
virus, présentaient une fièvre typique. En effet, le sang du
cobaye 75, inoculé du virus du bonnet 70, comme le cobaye 72
et le bonnet chinois 71 qui ont réagi de façon classique, s’est
montré virulent au 44° jour après l'inoculation, en dehors de
toute manifestation thermique.

Le fait est trop intéressant dans sa portée générale pour que
nous croyions ulile d'y insister davantage.

Ce chapitre était rédigé lorsque nous avons eu connaissance
des travaux de Gavino et Girard sur le même sujet. Ils confir-
mentexactement les nôtres; plus heureux cependant, ces savants
ont pu réaliser jusqu'à 11 passages par cobaye. Ce résullat est
dû peut-être à une plus grande activité du virus de la maladie
mexicaine (Zabardillo),à lous autres points de vue identique au
virus africain ; cette différence dans la virulence n'aurait rien
que de naturel, le typhus étant probablement en Amérique
d'importation relativement récente, tandis que, dans nos
régions, où il sévit sur la population aulochtone depuis les
débuts de l'histoire, la résistance des indigènes, issus de
parents si souvent atteints, a pu atténuer ses propriétés patho-
gènes.

Nos constalations et celles de Gaviño et Girard n'ont rien de
comparabl:: aux faits signalés par Pignet (1). Cet auteur expéri-
mentant sur le lapin et le cobaye, avec des poux infectés ou le
sang de malades (friclions sur la peau rasée ou inoculalion
sous-cutanée), a noté des accidents paralytiques, la cachexie et
la mort rapide ou lointaine. Il est probable qu'une part de ces
accidents relève de l'action toxique du sang humain. Ceux de
nos cobayes qui ont recu des doses trop fortes de sang sont
morts en quelques jours, avons-nous dit, de cachexie et d'hy-
pothermie, ainsi que meurent fréquemment les cobayes ino-
culés de doses semblables de sang humain sain, et c’est au con-

(1) Soc, de Pathologie exolique. S décembre 1909, p. 564-267,
9 {l Ï

2*4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

traire parmi ceux qui ne présentaient rien d'anormal que Île
thermomètre a permis de déceler l'infection exanthématique.
Or, Pignet n’a pas fait d'observations thermiques.

Il est à noter que Ricketts et Wilder ont montré la sensibilité
du cobaye au virus de la fièvre tachetée des Montagnes
rocheuses, maladie qui n'est pas sans analogie avec le typhus
exanthématique.

Pièces JUSTIFICATIVES.

Nous ne rapportons 1e1 qu'une seule série d'expériences pra-
tiquées en partant d’un seul malade. Les résultats ont été iden-
tiques avec des virus de souches diflérentes (Epidémies de 1910
et de 1911, Le Djouggar et Tunis).

Des expériences antérieures, qu'il nous paraît inulile de
rapporter ici, nous avaient prouvé que l'inoculation périlonéale
de sang humain normal, à la dose de 2 à 4 cent. cubes, ne don-
nait au cobaye aucune élévation thermique.

Le malade qui a servi de point de départ à nos expériences
se trouvait, au moment où nous avons prélevé sur lui le virus,
au 1° jour d'un typhus exanthématique grave (malade 51,
hôpital de la Rabta, pavillon Emile-Roux). Dix passages ont
été réalisés avec son virus en alternant, comme il suit. cobayes
et singes. Le sang a élé dans tous les cas recueilli par ponction
cardiaque et les inoculations pratiquées dans la cavité périto-
néale des singes et cobayes.

PASSAGE I

Cobaye 50 (Courbe 1), reçoit, le 17 mars 1911, 2 cent. cubes de sang du
malade précédent. La tempéralure de ce cobaye, prise deux fois par jour
depuis un mois, oscillait de façon régulière entre 3805 et 3905.

L'inoculation n'a été suivie chez lui d'aucun symptôme immédiat ; mais,
après 10 yours d'incubation, la fièvre s'est élevée progressivement pour atteindre
4193 au soir du 1%° jour Ace moment, nous pratiquons sur lui une ponclion
cardiaque pour l'inoculation du bonnet chinois 50 : cetle ponction est rapi-
dement suivie de la mort du cobaye. En dehors de la température, nous
n'avions noté sur Jui aucun symptôme ; l’autopsie a donné un résultat
négalif.

Cobaye 51 (Courbe 2), inoculé en même temps que le cobaye 50, avec une
dose identique du même virus.
Ce cobaye a présenté une reaction fébrile légère du 15° au 19% jour. Réino-

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 255

culé le 8 juin, soit 83 jours après la première inoculalion, avec le sang du
bonnet chinois 88, au 9 jour d'une infection sévère, il n'a pas réagi

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(Témoins les bonnets 68, 77 et 82 qui ont contracté un typhus classique. Voir
plus loin).
17 Témoin : Bonnet chinois 64, a recu le même jour 4 cent. cubes de sang

256 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

du même malade. Incubation 6 jours, typhus classique de 10 jours de durée.
2e Témoin : Bonnet chinois 42, vacciné par une atteinte antérieure en août 1940,
reçoit 5 cent. cubes de sang du malade.’ liéaction nulle.

PASSAGE Il

Bonnet chinois 10 (Courbe 3), inoculé le 30 mars avec 3 cent. cubes 1/2 de
sang du cobaye 50, prélevé par ponction cardiaque au 4 jour de son infection
(température 4193). Ce singe a contracté un typhus grave. Incubation 5 jours,
fièvre de 12 jours de durée, suivie de 4 jours d’hypothermie. Une ponction
cardiaque, pratiquée au 4° jour de l'infection du bonnet chinois 70, a permis

PRE
41) A MIRE.

: Rey LIARE

CourBE 3.

le passage au bonnet 71 témoin et aux cobayes neufs 72, qui a réagi, el 75,
dont la température n’a point été influencée et dont le sang cependant s'est
montré virulent (Voir plus bas); d'autre part, le bonnet 6%, vacciné par une
atteinte antérieure, a résisté.

PASSAGE III

Cobaye 72 (Courbe 4), inoculé le 7 avril avec 4 cent. cubes de sang du
bonnet 10, au 4° jour d'un typhus grave. Incubalion 11 jours, fièvre élevée, d'une
durée de 10 jurs, mort spontanée au 1€ jour de l'apyrexie.

À l’autopsie de cet animal, on note des adhérences récentes, mais déjà
organisées, des divers viscères abdominaux (foie, rale, estomac), el consé-
culives à l'inoculation du sang, quelques taches ecchymotiques sur l'intestin
srêle el la vessie et une hypertrophie considérable des capsules surrénales.
Les poumons sont sains, la rate et le foie petits.

Au 3 jour de la fièvre, nous avions pratiqué sur ce cobaye une ponction
cardiaque de 8 cent. cubes, non mortelle et suivie d’une chute momentanée

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 257

de la température. Le sang prélevé a été utilisé pour l'inoculation des
cobayes 78 et 19 et du bonnet chinois 76 (Voir 4° passage).

Cobaye T5, inoculé en même temps que le cobaye 72 avec une dose identique
du même sang. Ce cobaye n'avait présenté aucune réaction thermique, lorsqu'il
est mort, au 14 jour, des suiles d'une ponction cardiaque. Nous jugeons
inutile de reproduire sa courbe thermométrique absolument normale.

Le sang de cet animal s'est montré virulent pour le bonnet 77 et non pour les
“obayes 81 et 89 (Voir plus bas, 4° passage).

ET
ee PLAEE

COURBE 4.

Témoin : Bonnet chinois T1, inoculé en mème temps que les cobayes 72 et
15 avec 4 cent. cubes de sang du bonnet 70. /IncubalionS jours, ltyphus très grave
«lune durée de 12 jours, Suivi d'hypothermie.

PASSAGE IV. — LIGNE ISSUE LU COBAYE 12.

Cobaye 78 (Courbe 5), inoculé le 20 avril avec 2 cent. cubes de sang du
<obaye 72 au 3° jour d'une infection grave.

Incubation de T jours, fièvre de T jou's, aucun autre symptôme ; sacrifié le
{er jour du retour de la température à la normale, pour des expériences qui
n'ont donné aucun résultat.

Au 4 jour de son typhus, ce cobaye a subi une ponction cardiaque pour
l'inoculation du bonnet 178 (Voir 5° passage).

Cobaye 79, inoculé en même temps que le cobaye 78, avec une dose égale
du même virus. Incubation 16 jours, fièvre de T jours de durée, pas d'hypo-
thermie consécutive.

Le sang de ce cobaye, prélevé le 11° jour après l'inoculation, 6 jours avant
le début de la fièvre, n’a pas infecté le bonnet 79 (inoculation de 5 cent. cubes
dans la cavité périlonéale).

Témo n: Bonnel 76. Inoculation pratiquée dans les mêmes conditions que
celles des cobayes 78 et 79 à la dose de 4 cent. cubes de sang.

11

258 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Incubation de 5 jrurs, typhus grave terminé accidentellement par la mort,
au 6° jour de la fièvre, à la suite d'une ponction cardiaque.

Le sang de ce singe s’est montré virulent pour le cobaye 91, non pour le
cobaye 90 (Voir plus bas, 6° passage).

LIGNE ISSUE DU COBAYE 75.
Ce cobaye, inoculé avec le sang du bonnet 70, en même temps que le
cobaye 72, n'avait, au contraire de ce dernier, présenté aucune élévation

ïermique. Son sang s’est montré cependant légèrement virulent pour le
bonnet 77, et non (de façon apparente du moins) pour les cobayes 81 et 89.

D te Le
Prat RUES: 2

RL CAP
PA AN LI

COURBE 5.

Bonne! 17, inoculé, le 20 avril, avec 4 cent. cubes de sang du cobaye 75,
prélevé au 14° jour après l'inoculalion. Inc-balion T jours, lyphus léger de
2 jours de durée comparable aux infections bénignes notées chez certains
singes dans notre mémoire de l'an passé.

Cubaye: 81 el 89. inoculés dans les mêmes conditions que le bonnet 77,
avec 2 cent. cubes et 3 cent. cubes 1/2 du même sang. Aucune réaction consé-.
culire: nous jugeons inutile de reproduire ici leur courbe thermométrique
absolument normale.

PASSAGE V. — LIGxE ISSUE DU COBAYE TS.

Bonnet 18 (Courbe 6). Ce singe reçoil, le 3' avril, 4 cent cubes 1/2 de sang
du be . au 4 jour de son infeclion. Imcubution 5 jours, tyrus Lr°s grave
d'une duree de 12 jours, suivi d'hypothermie et d'un amaigrissement consi-
dérable. Le sang du bonnet 78 a servi à l'inoculation du cobaye 100 (Voir
plus bas)

259

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS

a PAR ED MT ET
L. | RE OR: 2

— FAR ISSN
APM
| |

COURBE 6.

LIGNE ISSUE DU BONNET 76.

Cobayes 90 et 91 (Courbe 7). De ces deux animaux, inoculés le 30 avril, avec
une quantilé égale (5 cent. cubes) de sang du bonnet 76, prélevé au 6° jour
de son typhus, l’un, /e 90, n'a pas réagi; l'autre, Le 91, a présenté une fièvre
de 10 jours de durée, après une incubalion de 8 jours.

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COURBE 1.

260 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

PASSAGE VI
Cobaye 100 (Courbe 8), inoculé le 10 mai, avec 3 cent. cubes de sang du
bonnet 78, au 6e jour d'un typhus grave. Incubation 10 jours, lyphus interrompu

le 6° jour par une saignée cardiaque mortelle de 16 cent. cubes.
Le saug de ce cobaye a servi à inoculer le bonnet 88 et les cobayes 77 et 88.

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CouRrBE 8.

PASSAGE VII

Bonnet 88 (Courbe 9). Ce singe reçoit, le 25 mai, 7 cent. cubes de sang du
cobaye 100, au 6° jour de son infection. Incubalion 4 jours, typhus grave de
11 jours de durée, suivi d'une hypothermie légère.

Le sang de ce singe, prélevé au 9€ Le de son infection, a servi à inoculer
les cobayes 36 et 37, qui n'ont pas réagi, ainsi que plusieurs bonnets chinois
neufs ou vaccinés, desquels nous ne odo ici que le bonnet 68, qui a
permis la continuation des passages.

Cobuye 11, inoculé, le même jour que le bonnet 88, avec 5 cent. cubes du
même sang. {ncubalion 11 jours, typhus net de T jours

Le sang de ce cobaye, prélevé au 7° et dernier Fire de son infection, a été
inoculé sans résultat au cobaye 117 et avec un résullat douteux au cobaye 71.

Cobiye 88, inoculé dans les mêmes conditions que le cobaye 77, avec
; cent. cubes de sang du cobaye 400. /ncubation 8 jours, fièvre légère de 11 jours
de durée.

FASSAGE VIII. — LIGNE DU BONNET 88.

Bonnet 68. Ce singe, non immunisé par une inoculation antérieure el inac-
tive des globules rouges lavés d'un malade atteint de typhus, reçoit, le
6 juin, 5 cent. cubes de sang du cobaye 88, au 9° jour de sa fièvre. Incuba-

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 261

tion 11 jours, typhus grave de 8 jours de durée. La courbe thermique de ce
singe sera donnée au chapitre IIT de ce mémoire (Courbe 22).

Le sang de ce singe a été ulilisé pour l’inoculation des cobayes 52 et 53
(9e passage).

Cobaye 36, inoculé le même jour et dans les mêmes conditions que le
bonnet 68, avec 3 cent. cubes du même sang. Ce cobaye n'avait présenté
aucune réaction thermique, lorsqu'il est mort des suites d'une ponction car-
diaque, au 11° jour après l'inoculation. Un passage, tenté avec son sang
3 cent. cubes) sur le cobaye 92, a donné un résultat négatif.

Cobaye 31, inoculé dans les mêmes conditions que le cobaye 36, avec une
même dose du mème sang. Ce cobaye n'avait présenté aucune réaction ther-
mique, lorsqu'il est mort, des suites d'une ponction cardiaque, au 18e jour
après l’inoculation. Des passages, tentés avec son sang (2 cent. 1/2et 3 cent.
cubes). sur les cobayes 20 et 26, ont donné des résultats négatifs.

SLAArURELT |] re came

COURBE 9.

Nous croyons inutile de reproduire ici les courbes des cobayes 36 et 37,
absolument normales.

LIGNE DU COBAYE 11.

Cobaye 17. Ce cobaye reçoit, le 11 juin, 3 cent. cubes de sang du cobaye 717,
au 7e jour (dernier) de son infection. Resullat négatif.

Cobaye T1, inoculé dans les mêmes conditions et avec une même dose de
sang que le cobaye 17. Très faible élévation thermique du 15° au 18e jour.

PASSAGE IX

Cobaye 52 (courbe 10). Ce cobaye reçoit, le 19 juin, 3 cent. cubes de sang
du bonnet chinois 68, au 3° jour de son infection. facubation 8 jours, typhus
interrompu, le 4 jour de la fièvre, par une ponction cardiaque mortelle.

Courge 10.

Le sang de ce cobaye a été utilisé pour l'inoculation du bonnet 89 et du
cobaye 49.

C'baye 53, inoculé dans les mêmes conditions que le cobaye 52, avec une
même dose du même sang. Incubalion 10 jours, fièvre de 5 jours, terminée
par la mort. Autopsie négative.

PASSAGE X

Bonnet 89 ‘courbe 11}. Ce singe reçoit, le 30 juin, 4 cent. cubes 1/2 de sang

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GRR M OMR RE ES LU

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PARÉGEARRRERERLEE
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Course 11.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 263

du cobaye 52, au 5° jour de son infection. /ncubalion 8 jours, typhus moyen
«le 9 jours.

Cobaye 49, inoculé dans les mêmes conditions que le bonnet 89, avec
1 cent. cube 1/2 de sang du cobaye 52. Résu/lut douteur : élévation de tempé-
rature d’un demi-degré du 8° au 10° jour après l'inoculation ; mort le 13e jour,
autopsie négative.

Nous n'avons tenté d'inoculations, ni avec le sang du bonnet 89, ni avec

celui du cobaye 49; notre série de passages par cobayes et singes s’est donc
trouvée de ce fait arrêtée.

TABLEAU DES PASSAGES ALTERNATIFS PAR COBAYES ET SINGES

(Les parenthèses indiquent les animaux qui n'ont pas réagi.)

Malade 541.

| | ne |
Cobaye 50. Cobaye 51. Bonnet 42, vacciné). Bonnet 64.
Bonnet 70.

|

| SUR |

Cobaye 72. Bonnet 71. (Bonnet 6#, vacciné). (Cobaye 75).

|
Cobaye 78. Bonnet 76. Cobaye 79. Bonnet 77. ({Cobayes 81 et 89).

| |
Bonnet 78. Cobayes(90)et91. (Bonnet 19).

‘Cobaye 190.

|
Bonnet 88. Cobaye 88. Cobaye 71.

{(Cobaye 36). (Cobaye 37). Bonnet 68. (Cobaye 17). Cobaye 71.

|

(Cobaye 92). {/Cobayes 20 et 26).

Cobaye 52. Cobaye 53.

|
}
Bonnet 89. Cobaye 49.

264% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

1kf

DONNÉES EXPÉRIMENTALES NOUVELLES SUR LA NATURE ET LE SIÈGE

DE L'AGENT PATHOGÈNE DU TYPHUS EXANTHÉMATIQUE

par CHarLes NICOLLE, A. CONOR et E: CONSEIL.

Si l'étude expérimentale et l’étiologie du typhus exanthéma-
tique ont fait en ces derniers temps d’utiles progrès, notre
incertitude est encore grande au sujet de la nature de son agent
pathogène. Il est permis d'admettre qu'il s’agit d'un microbe
invisible et filtrant; une de nos expériences de l'an passé ne
comporte pas d'autre conclusion (Cf. ces Annales, 1910, pages 100
et suivantes : Observation du bonnet chinois 47) ; mais la preuve
de celte dernière propriété a élé particulièrement délicate
à établir, en raison du nombre insuffisant des éléments qui
traversent le filtre et de la nécessité d'employer de fortes doses
de virus pour obtenir à coup sûr l'infection des animaux sen-
sibles.

Une localisation du microbe exanthématique dans l'intérieur
de cerlaines cellules donnerait de cette difficulté une explica-
tion des plus claires, la plupart des microbes demeurant pri-
sonniers dans ces cellules. L'un de nous avait émis, dès 1909,
l'hypothèse du siège intraleucocytaire du virus. Des expé-
riences nouvelles, dont nous avons donné, dans une note à
l’Académie des Sciences (séance du 18 septembre 1911, p. 578),
un résumé et les conclusions, viennent à l'appui de cette con-
ceplion.

Des divers éléments du sang, séparés par centrifugation el
lavés, les globules blancs sont, en effet, les plus virulents ; une
dose minime de ces cellules détermine chez le singe une infec-
lion rapide et grave; le plasma, moins actif, semble ne devoir
sa virulence qu'aux leucocytes ou débris leucocytaires, dont il
est malaisé de le débarrasser complètement ; les globules rouges
n'ont pas de virulence. D'autre part, le sérum sanguin centrifugé
est inoffensif pour l’être le plus sensible au virus exanthéma-
lique, l'homme, et une humeur dépourvue de cellules, le liquide
céphalorachidien, se montre également inactive.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 265

À. — VIRULENCE COMPARÉE DES DIVERS ÉLÉMENTS DU SANG
SÉPARÉS PAR CENTRIFUGATION ET LAVÉS.

Exp. |. — Le sang utilisé a ét6 prélevé par ponction veineuse
sur le malade 120, hôpital de la Rabla, pavillon Murchison,
au 7° jour d'un typhus grave. Aussilôt après sa sorlie des vais-
seaux, ce sang a été recueilli par fractions de 18 cent. cubes
dans des tubes à centrifugalion stériles, contenant déjà 2 cent.
cubes d'une solution de citrate de soude à 5 p. 100. Sur trois de
ces tubes, deux ont été centrifugés pendant douze minutes, le
troisième laissé de côté avec son contenu. La centrifugation
terminée, nous avons, de suite, prélevé quelques cent. cubes
de plasma à la parlie supérieure des tubes. D'autre part, la
couche leucocylaire à été recueillie avec soin au moyen d'un
pinceau, fait de petites languettes de caoutchouc, et addi-
tionnée d’eau physiologique à 8 p. 1000 ; quelques centimètres
cubes de globules rouges ont été prélevés ensuite à la partie
la plus profonde des tubes et addilionnés du mème liquide.
Ces manipulations {très minutieuses ont demandé vingt-deux
minutes. Après cela, globules blancs et globules rouges en sus-
pension dans l’eau physiologique ont été soumis à une seconde
centrifugation de dix minutes de durée. Celle-ci terminée, il
nous a fallu six minutes encore pour séparer les cellules du
liquide dans lequel on les avait lavées. Il s’est done écoulé, au
total, cinquante minutes entre le prélèvement du sang et les
inoculations. Celles-ci ont été pratiquées dans la cavité péri-
tonéale de bonnets chinois, ainsi qu'il suit :

Le bonnet 81 a reçu 5 cent. cubes de sang complet citraté
(c'est-à-dire en contact avec le citrate de soude aussi longtemps
qu'ont duré les manipulations).

Le bonnet 82 : 5 cent. cubes de plasma citraté.

Le bonnet 83 : 2 cent. cubes et demi de globules rouges cen-
trifugés et lavés.

Le bonnet 84 : 1 millimètre cube environ de la couche leuco-
cylaire obtenue par centrifugalion et lavée. Examiné à l'ultra-
microscope, ce produit montre plus de globules rouges que de
globules blancs: le chiffre de ceux-ci atteint au plus le quart
ou le cinquième du total.

266 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avions pris soin auparavant d'inoculer dès le moment
de la récolle du sang, avec une dose uniforme de # cent. cubes
et demi de ce produit, un bonnet chinois témoin (57) et deux
autres bonnets (62 et T1), vaccinés par une alteinte antérieure.

Les résultats de cette expérience ont été les suivants :

Bonnet 51, lémoin {sang frais). Incubation 16 jours, lyphus moyen de 12 jours
de durée. La température de ce singe dépasse 40 degrés pendant 6 jours.
La longue durée de l'incubation chez ce singe est due à un degré appré-
ciable. quoique insuflisant, de résistance, qu'expliquent ses antécédents. (CF. à
ce sujel l'observation et la courbe de cet animal au Chapitre suivant : Expé-
riences relatives à l'immunité.)

Bonnels 62 et 71, vaccinés (sang frais). Néant. (Voir leurs observations au
même Chapitre.)

Bonnet 81 (sang citraté). Incubation 12 jours, typhus moyen de 9 jours, la
température dépasse 40 degrés pendant 7 jours (Courbe 12).

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COURBE 12.

Bonnet 82 (plasma citraté). [ncubation 8 jours, typhus de 9 jours de durée. La
température dépasse 40 degrés pendant 6 jours (Courbe 13).

Bonnet 83 (globules rouges). Incub Lion 13 jours, typhus abortif de 5 jours.
La température atteint 40 degrés pendant 2 jours et les dépasse une seule fois
(Courbe 14).

Bonnet 84 (globules blancs). Incubation 6 jours, typhus grave de 9 jours. La
température dépasse 40 degrés pendant ces 9 jours (Courbe 15).

Courses 13, 14, 1.
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268 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Exp. II. — Pratiquée dans les mêmes conditions que la pré-
cédente, avec le sang du malade 69, pavillon Emile-Roux,
hôpital de la Rabta, au 13° jour d’un typhus grave, la veille de
la défervescence. La séparation des divers éléments du sang
a demandé 30 minutes et a élé plus parfaite que dans la pre-
mière expérience; la couche leucocytaire, en particulier, était
manifestement pius abondante et ne contenait qu'une propor-
tion minime de globules rouges.

Trois singes ont été inoculés dans la cavité périlonéale, savoir :
le bonnet 67, avec 5 cent. cubes de plasma citraté ; le bonnet 68,
avec 3 cent. cubes de globules rouges, centrifugés et lavés ; le
bonnet T9, avec 1 millim. cube de globules blancs représentant
approximalivement le dépôt leucocytaire obtenu par centrifu-
gation de 10 cent. cubes de sang. Il n'a pas été pratiqué d'ino-
culation de sang complet, cilraté ou frais. Les résultats de
celte expérience ont été les suivants :

Bonnet 67 (plasma citraté). Incubalion 13 jours, lyphus léger de 7 jours. La
température n'atteint 40 degrés que trois jours (Courbe 16).

Course 16.

Bonnet 68 (globules rouges). Néant.
Bonnet 69 (globules blancs). Incubaltion 7 jours, ltyphus grave de 11 jours. La
température dépasse 40 degrés pendant 9 jours (Courbe 17).

Eprouvés, 67 jours après la première inoculation, par l'injection intrapéri-
tonéale de 5 cent. cubes de sang du bonnet 88, atteint d'un typhus grave au

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 269

ï° jour de la fièvre, les bonnets 67 et 69 n'ont pas réagi, le 68 (globules rouges)
a présenté un typhus grave après 11 jours d'incubation (Voir plus loin leurs
courbes au Chapitre : Immunité).

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CoureE 17.

Conczusioxs. — Des deux séries d'expériences que nous
venons de rapporter, il est permis de conclure que les globules
blancs représentent dans le sang l'élément le plus virulent,
puisqu'une dose infinitésimale de la couche leucocytaire obtenue
par centrifugation se montre aussi efficace que la quantité
totale du liquide de laquelle elle a été séparée.

Le plasma, moins actif, semble ne devoir sa virulence qu'aux
globules blancs et débris leucocytaires, dont il est bien difficile
de le séparer entièrement.

Les globules rouges sont dénués de tout pouvoir pathogène.
Une dose de ces cellules 2.500 fois supérieure à celle qui est
nécessaire pour obtenir l'infection, lorsqu'il s’agit de globules
blancs, s'est montrée entièrement inactive.

Pour apprécier exactement ces résultats, il convient cepen-
dant de noter que les prélèvements de sang n’ont pas été pra-
tiqués à à la même période de la maladie eine dans nos deux
expériences : 7° Jour, pour le premier cas; 13° jour, pour le
second, et que 1 quantilé de globules blancs obtenue par cen-
trifugation a élé incomparablement plus importante chez le

270 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

deuxième malade que chez le premier. La plus parfaite locali-
sation du virus dans les globules blancs et la moindre activité
du plasma dans Le second cas peuvent être en rapport, au moins
par iellment, avec une réaction de défense de l'organisme
(englobemeut du virus par les leucorytes), et, de fait, chez ce
malade, la défervescence s'est produite le lendemain de l’expé-
rlence.

11 semble cependant acquis que, dès la période d'état, le siège
principal, sinon unique, de l’agent inconnu du Iyphus est le
globule blanc. Celle opinion, à laquel'e les expériences que
nous venons de relater apportent un si grand poids, s'accorde
avec l'existence constatée par l'un de nous de lésions dégéné-
ratives des leucocytrs polynucléaires dans le typhus. La locali-
sation du microbe dans ces cellules donnerait la seule explica-
tion plausible des résullats presque loujours négatifs de la
filtration du sérum. On comprendiait ainsi qu'un microbe
invisible et dont les faibles dimensions devraient par là même
permettre le passage à travers les bougies Berkefeld, retenu
dans des cellules de dimensions plus grandes que les pores du
fillre, ne puisse traverser ceux-ci. C'est là, nous l'avons dit,
nolre opinion. Les expériences qui suivent viennent encore
l'appuyer.

B. — Non vIRCLENCE DU SÉRUM SANGUIN
DÉBARRASSÉ DE SES ÉLÉMENTS CELLULAIRES PAR CENTRIFUGATION.

Le sérum sanguin de coagulation est, théoriquement du
moins, dépourvu de cellules, cell-s-c1 demeurant empri-onnées
dans le caillot au moment de sa rétraction ; il doit donc être,
dans le typhus, si notre hypothèse du siège intralencorylaire
du microbe est exacte, dépourvu généralement de virulence et,
de fait, dans nus expériences de lan pas-é, sur trois singes
inoculés avec des doses suffisantes de sérum provenant de singes
ou homme infect:s, un seul à contracié F1 maladie; chez les
deux autres, on n'a constaté ni infecl on, ni immunité (CI. notre
mémoire de 1910 de ces Annales, p. 102). L'expérience qui à
donné un résultat positif élait un passage de bonnet chinois à
bonnet chinois; celles qui sont demeurées négatives avaient

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 271

élé pratiquées sur le bonnet chinois avec un sang humain dans
un cas et de chimpanzé dans l’autre.

On se souvient que, par contre, le sérum obtenu par centri-
fugation de sang défibriné a donné, dans les deux expériences
de Ricketts et Wilder, des résullats positifs (infection et immu-
nilé des singes inoculés)

Nous avons fourni, FAR notre mémoire antérieur, une Pi
cation de ces faits; DIE est des plus claires, si l’on admet le
siège intraleucocytaire du virus. Les manœuvres de défi-
brination, en déchirant les globules blancs, amènent la
sorlie d'un grand nombre de microbes; ceux-ci, mis en
liberté dans le liquide, lui communiquent un pouvoir patho-
gène dont le sérum de coagu:ation est généralement dépourvu.
Ce sérum ne doit présenter en effet de virulence que s'il
n'est qu ‘incomplètement privé de globules blancs; et c’est là
ce qui élait arrivé sans doute dans notre expérience positive
de l'an passé.

On pouvait nous objecter cependant que la non réussite habi-
tuelle de ces inoculations était due à ce que le singe n'offre à
l'infection exanthématique qu'une sensibilité en somme rela-
tive (il faut pour infecter à coup sûr un bonnet chinois 3 à
4 cent. cubes le sang et la voie péritonéale), suffisante pour une
étude expérimentale, mais non comparable à celle de l'être
normalement atteint, l’homme.

Désirant trancher de façon définitive la question et persuadés
d'avance que nous obtiendrions un résultat négatif, nous n'avons
pas hésité à expérimenter sur l’un de nous (N.).

Le sérum utilisé dans cette expérience nous a été fourni par le bonnet 80,
inoculé dans la cavilé péritonéale, le 21 avril, avec 7 cent. cubes de sang du
malade 88, hôpital de la Rabta, pavillon Murchison, au 10° jour d'un typhus
grave.

Celte inoculation a élé suivie, après 6 jours d'incubation, du dévelop-
pement d'une infection très sérieuse, d'une durée de 13 jours, puis d'hypo-
thermie et d'amaigrissement nolable (Courbe 18).

Au 3€ jour, nous prélevons sur ce singe, par ponction cardiaque, quelques
centimètres cubes de sang que nous plaçons dans une pièce fraîche et, sept
heures plus tard, lorsque le sérum est bien séparé du caillot, nous prélevons
ce liquide et nous le centrifugeons pendant 10 minules; après quoi, un cen-
limètre cube en est injecté dans la veine du bras de l'un de nous, indemne
de loute atteinte antérieure de typhus. Aucun svmptôme fébrile ou autre
n'a suivi cette inoculalion.

RE

212 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ANSE Me E

CourBE 18.

Le résultat négatif de cette expérience ne peut être attribué
à des propriétés bactéricides dont jouirait 2x vitro le sérum san-
guin sur l'agent pathogène du typhus; l'observation du bonnet 35
de notre mémoire de l'an passé démontre qu'il n'en est rien. Ce

singe, en effet, a pu être infecté par l'inoculation intrapérito-.

néale de 15 cent. cubes du sérum du bonnet 19, neuf heures

après la récolte du sang (Cf. notre mémoire précédent, p. 108).
Le sérum sanguin de coagulation est donc, en l'absence de

toute cellule, entièrement dépourvu de pouvoir pathogène.

C. — Non viRULENCE DU LIQUIDE CÉPHALORACHIDIEN.

Ce liquide, qui ne contient aucun élément cellulaire, offre
une virulence nulle; l'expérience suivante le démontre

Le bonnet chinois 85 reçoit, le 23 avril, dans la cavité péritonéale, 45 cent.
cubes du liquide céphalorachidien du malade 93, hôpital de la Rabta, pavil-
lon Emile-Roux, au 9 jour d’un typhus exanthématique grave. Résultat
négalif (la température a élé prise pendant 40 jours).

Eprouvé 44 jours plus tard, par linoculation intrapéritonéale de 5 cent.
cubes de sang du bonnet 88, au 9e jour d'un typhus expérimental classique.
le bonnet 85 a fait une infection des plus nettes, d'une semaine de durée,
après une incubalion de 12 jours (Courbe 19).

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RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 273

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COURBE 19.

D. — ExPÉRIENCE NÉGATIVE DE FILTRATION
DU VIRUS EXANTHÉMATIQUE AVEC DES PRODUITS LEUCOCYTAIRES.

Les leucocytes se montrant hautement virulents, nous espé-
rions qu'il serait peut-être possible d'obtenir, par la désagré-
gation artificielle d'une quantité importante de ces cellules,
assez de microbes libres pour que leur émulsion filtrée infecte
ou immunise le singe. Il n’en à rien été; dans ce cas encore, le
nombre des microbes qui ont traversé le filtre était sans doute
insuffisant.

La couche leucocytaire, obtenue par centrifugation de 70 cent. cubes de
sang citraté du malade 120, au 7e jour d'un Lyphus grave (Voir l'expérience I
de centrifugalion citée plus haut), a été soumise successivement à un broyage,
puis à un laquage par l'eau distillée d'une durée de vingt minutes. enfin
additionnée d'eau physiologique, et filtrée sur bougie Berkefeld du modèle
le plus perméable. Ces diverses opérations ont demandé une heure et demie
cnviron,

Le bonnel chinois 86 a reçu dans la cavité péritonéale la meilleure partie du
dépôt demeuré sur le filtre; le 87 de la même manière, la lotalité du produit
filtré. Les résultats ont été les suivants :

Bonnet 86 (dépôt demeuré sur le filtre). Incubalion 10 jours, lyphus classique
de 10 ours, suivi d'hypothermie {Courbe 20). Ce résultat est à ajouter à ceux
des expériences 1 et IT; il contribue à établir la haute virulence des leuco-

18

274 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cytes etil prouve la résistance du virus au traitement par l'eau distillée et à
des manipulations assez longues.

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COURBE 20.

Bonnet ST (filtrat). Résultal' négatif (température prise pendant 40 jours)
Eprouvé, 48 jours après l'inoculation, par l'injection intrapéritonéale de 5 cent.
cubes de sang du malade 162, hôpital de la Rabla, pavillon Laveran, au
9% jour d'un typhus mortel, ce singe a contracté un typhus de 8 jours de
durée, après une incubation de T jours (Courbe 21).

COURBE 21

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 215

L'extrait leucocytaire fillré s'est donc montré dépourvu de propriélés
pathogènes ou vaccinantes.

L'expérience positive de filtration du virus exanthématique
relatée dans notre précédent mémoire demeure par conséquent
unique.

Que les globules blancs du sang constituent ou non le siège
exclusif du virus exanthématique, la propriété qu'ils offrent de
présenter, sous un volume restreint et facilement maniable,
un produit hautement virulent est intéressante à signaler. Elle
lrouvera utilement son application dans les expériences où
l'emploi de doses fortes el par là même toxiques de sang complet
semblaient jusqu’à présent nécessaires.

BIT

EXPÉRIENCES CONCERNANT L’'IMMUNITÉ

par Cnarres NICOLLE et E: CONSEIL

Nos expériences de lan passé nous avaient conduits à cette
conclusion qu'une première atteinte de typhus expérimental
donnait au singe une immunité solide toutes les fois que la
maladie avait été grave et quel que fûtle mode d'infection (sang,
poux), et qu'au contraire une atteinte légère et abortive (par
sang virulent employé à doses trop faibles ou par voie cutanée,
sérum sanguin ou sang chauffé) n'était généralement pas suivie
d'immunisation; ce qui revenait à dire que, seule, une atteinte
sévère de typhus préservait à coup sûr contre une infection
nouvelle.

Nos recherches de 1911 nous ont permis de confirmer exacte-
ment cette conclusion; les expériences très diverses que nous
allons brièvement rapporter ensont la preuve: elles s'accordent
également à démontrer que l'inmmunité par virus actif s'établit
vite et qu'elle dure au moins une année.

276 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
À. — UNE INOCULATION DE VIRUS ACTIF DONNE UNE IMMUNITÉ RAPIDE

ET DURABLE.

10 [MMUNISATION PAR INOCULATION DE SANG COMPLET.

Bonnet 42. 1e inoculation (1), le 14 août 1910, de 4 cent. cubes 1/2 de sang
du bonnet 20, au 7° jour d’un typhus grave, la veille de la défervescence.
Incubation 12 jours, typhus grave de 11 jours, hypothermie, amaigrissement,
guérison (Voir dans notre mémoire précédent, p.25, l'observation et la courbe
thermique de ce singe).

Inoculation d'épreuve, le 17 mars 1911, avec 5 cent. cubes de sang du
malade 51, hôpital de la Rabta, pavillon Emile-Roux, au 11° jour d’un typhus
grave. Résultat négatif (température prise pendant 40 jours). Trois témoins
neufs, le bonnet 64 et les cobayes 50 et 51, ont présenté un typhus grave (voir
plus haut chapitre 1 de ce mémoire).

Bonnet 64. 1re inoculation, le 17 mars 1911, avec 4 cent. cubes de sang du
malade 51. Incubation 6 jours, typhus classique d’une durée de 10 jours.

Inoculation d'épreuve, le 7 avril, soit 5 jours après guérison de la première
infection, avec 5 cent. cubes de sang du bonnet 70, au 4° jour de sa maladie.
Résultat négatif (température prise pendant 40 jours). Témoins, le bonnet TA et
les cobayes 72 et 15, qui ont contracté le lyphus (voir plus haut, chapitre 1
de ce mémoire).

Bonnet 71. 1re inoculation, le 7 avril 1911, avec 5 cent. cubes de sang du
bonnet 70, au 4° jour de son infection. Incubation 8 jours, typhus grave de
12 jours de durée.

Inoculation d'épreuve, le 21 mai, soit 24 jours après guérison de la
première infection, avec 5 cent. cubes de sang du malade 120, hôpital de la
Rabta, pavillon Murchison, au 6° jour de sa maladie. Résullat négatif (tempé-
rature prise pendant 40 jours). Témoins, les bonnels 81, 82, 8% qui ont
contracté le £yphus (voir plus haut, chapitre IT, première expérience).

20 JMMUNISATION PAR INOCULATION DE PLASMA VIRULENT.

Bonnet 67. 1re inoculation, le 29 mars 1911, avec 5 cent. cubes de plasma
citraté du malade 69, hôpital de la Rabta, pavillon Emile-Roux, au 13° jour de
sa maladie. Incubation 13 jours, typhus relativement bénin de 7 jours (voir
plus haut, courbe 16).

Inoculation d’épreuve, le 6 juin, soit 48 jours après guérison de la première
atteinte, avec à cent. cubes de sang du bonnet 88, au 9° jour de soninfection.
Résultat négalif (température prise pendant 40 jours). Témoins, les bonnets
66, 117 et 85, qui ont contracté le Lyphus (voir plus bas dans ce même chapitre
leurs observations et leurs courbes).

(1) Les inoculations virulentes et les inoculations d'épreuve ont toujours
élé pratiquées dans la cavité péritonéale.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 271
B. — UXE 1NOCULATION INEFFICACE OU INSUFFISAMMENT ACTIVE

NE DONNE PAS D'IMMUNITÉ.

1° NON IMMUNISATIOX A LA SUITE D'UNE INFECTION ABORTIVE PAR INOCULATION DE SANG.

Bonnet 77. le inoculation, le 20 avril 1911, avec 4 cent. cubes de sang du
cobaye 75, au 14° jour après sa propre inoculation, en dehors de toute
réaction thermique. (Cf., chapitre 1, l'observation particulièrement intéres-
sante de ce cobaye.) Incubation 7 jours, typhus abortif de 2 jours de durée.

Inoculation d’épreuve, le 6 juin, soit 38 jours après guérison de la première
alteinte, avec 5 cent. cubes de sang du bonnet 88, au 9° jour de son infection.
Incubation A1 jours, typhus de gravilé moyenne de 11 jours de durée. Les
témoins, bonnets 68 et 85, ayant reçu antérieurement des produits non viru-
lents (globules rouges et liquide céphalorachidien), ont pris le typhus après
une incubation d'une durée identique (voir plus bas).

20 NON IMMUNISATION PAR INOCULATION INEFFICACE DE GLOBULES ROUGES.

Bonnet 68. 1re inoculation, le 29 mars 1911, avec 2 cent. cubes 1/2 des globules
rouges centrifugés et lavés du malade 69 (voir chapitre précédent, deuxième
expérience), résultat négatif (température prise pendant 40 jours).

Inoculation d’épreuve, le 6 juin, soit 19 jours après la première inoculation,
avec 5 cent. cubes de sang du bonnet 88, au 9° jour de son infection. Incubation
11 jours, lyphus grave de 8 jours (courbe 22). Le virus du bonnet 68 a infecté
les cobayes 52 et 53, et, par l'intermédiaire du premier, le bonnet 89.

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CourBE 22,

30 NON IMMUNISATION PAR INOCULATION INEFFICACE DE LIQUIDE CÉPHALORACHIDIEN.

Bonnet 85. 1'e inoculation, le 23 avril 1911, avec 15 cent. cubes de liquide
céphalorachidien du malade 93, au 9° jour d'un typhus grave (voir chapitre
précédent. Résultat négatif (température prise pendant 40 jours).

218 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Inoculation d'épreuve, le 6 juin, avec 5 cent. cubes de sang du bonnet 8s.
au 9% jour d'un typhus grave. Incubation 12 jours, typhus d'une durée de
7 jours (voir plus haut, courbe 19).

C. — EFFETS DES INOCULATIONS SIMULTANÉES OU SUCCESSIVES
DE SANG VIRULENT ET DE SÉRUM PRÉVENTIF (Sérovaccinalion).

Il nous a paru intéressant de rechercher comment se com-
porteraient, vis-à-vis d'une inoculation d’épreuve, les animaux
soumis antérieurement et à la fois à des inoculations de sang
virulent et de sérum de malades convalescents de typhus, soit
que ce sérum ait été employé préventivement, c’est-à-dire
avant l’inoculation du virus, soit qu'il en ait été fait usage
plus tard, pour le traitement de l'infeclion expérimentale
déclarée.

Nos expériences de l'an passé nous avaient montré qu'un
tel sérum, s'il est doué de propriétés préventives manifestes
lorsqu'on le recueille dans les premiers jours qui suivent la
chute de la température, n'offre plus qu’un pouvoir vaccinant
incertain quand il est recueilli plus tard et que, dans tous les
cas, ses propriétés curatives sont des plus faibles (L'applica-
tion de ce sérum au traitement de l’homme malade ne donne
aucun bénéfice appréciable. Des expériences nouvelles nous
l'ont prouvé; nous les rapportons plus loin).

Sur ceux de nos singes qui survivaient de nos expériences
de l'an passé, nous en comptions quatre ayant reçu des injec-
tions de sérum de convalescents, deux au cours de leur infec-
tion déclarée, et deux préventivement. Des deux derniers, l'un
avait été protégé effectivement par un sérum recueilli dans
les premiers jours de la convalescence et suffisamment actif,
l’autre n'avait tiré d'autre bénéfice de l'injection d'un sérum
plus ancien qu'un léger allongement de [a période d’incuba-
tion de son typhus.

Ces singes, soumis en 1911 à une inoculation d’épreuve, on
fourni les résultats auxquels on pouvait s'attendre : les trois
qui avaient présenté une infection nette en 1910 n'ont pas
réagi; celui que le sérum avait alors protégé a montré, sauf
une durée plus longue de la période d'incubation (16 jours au
lieu de 6, 8 et 10), la même sensibilité que les témoins neufs.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 279

La loi que nous avons formulée au début de ce chapitre
trouve, dans ces résultats, une nouvelle confirmation; seule,
une atteinte sévère de typhus préserve à coup sûr contre une
infection nouvelle.

Voici les observations de nos quatre singes.

19 SINGES AYANT PRÉSENTÉ ANTÉRIEUREMENT UN TYPHUS EXPÉRIMENTAL TRAITÉ PAR
LE SÉRUM.

Ils avaient acquis l’immunilé.

Bonnet 56. — Ce singe, inoculé le 5 juillet 1910, dans la cavité péritonéale
(Cf. notre précédent mémoire, courbe 417, p. 52), avec 5 cent. cubes de sang
du bonnet #4, a présenté, après 7 jours d’incubation, un typhus grave. Il
était en pleine infection, lorsqu'il a reçu, les 9e et 10° jours de sa fièvre, en
injections sous-cutanées, 2 inoculations de 2 cent. cubes d’un mélange du
sérum des malades 50 et 51 recueilli les 11° et 9° jours après la guérison de
leur typhus. Ce mélange était doué de propriétés préventives manifestes
(voir plus bas l'observation du bonnet 57). Sous l'influence de ce traitement,
la température du bonnet 56 est Lombée en 48 heures à la normale et l’état
général s’est vite amélioré. Cependant, malgré cette action bienfaisante, la
fièvre a eu, au total, une durée de 12 jours.

L'inoculation d'épreuve, pratiquée le 18 juin 1911, avec 4 ec. c.1/2 de sang du
malade 146, hôpital de la Rabta (pavillon Murchison), atteint d'un typhus
grave à une période imprécise de son infeclion, la veille de la mort, a donné
un résultat négatif (température prise pendant 40 jours).

Bonnet 62. — Ce singe, inoculé le 10 août 1910 dans la cavité péritonéale,
avec 5 cent. cubes de sang du magot 7, au 6° jour d’un typhus sévère, s’in-
fecte, après 7 jours d’incubation. Il présente un typhus grave, lorsque, le
5e jour de sa fièvre, on lui inocule sous la peau 2 cent. cubes d'un mélange
du sérum des malades 37, 54 et 56, guéris depuis 14, 20 et 27 jours; ce
mélange s'était montré doué de propriétés préventives très faibles. Son ino-
culation au bonnet 62 amène une baisse immédiate de la température qui
remonte après 24 heures; on lui fait alors une deuxième inoculation du même
sérum à même dose, nouvelle baisse de 24 heures, puis réascension et la
lièvre dure encore # jours. L'influence du sérum, dans ce cas, a été mani-
feste et la guérison s'est faile sans hypothermie, mais après une durée totale
de 13 jours (Cf. dans notre mémoire précédent l'observation et la courbe de
ce singe, p. 53).

L'inoculation d'épreuve, pratiquée le 18 juin 1911, avec 4 c.c.1/2 de sang
du malade 146, a donné un résultat négalif (température prise pendant
40 jours).

20 SINGE TRAITÉ INEFFICACEMENT PAR UNE INJECTION PRÉVENTIVE D'UN SÉRUM INSUF-
FISAMMENT ACTIF.

Il avait acquis l’immunité.

Bonnet 61. — Ce singe, inoculé le 10 août 1910, dans la cavité péritonéale,
avec 5 cent. cubes de sang du magot 7, au 6e jour d’un typhus grave et en

280 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

même temps sous la peau avec une quantité égale d'un mélange de sérum
des malades 37, 54 et 56, guéris depuis 14, 20 et 27 jours, a contracté quand
mème un typhus grave d'une durée de 7 jours, après 5 jours d’incubation
(Cf. l'observation et la courbe de ce singe dans notre mémoire précédent,
page 50).

L'inoculation d'épreuve pratiquée le 24 mars 1911, avec le sang du malade
62, hôpital de la Rabta, pavillon Emile-Roux, au 15e jour de sa maladie, a
donné un résullat négatif (température prise pendant 40 jours). Témoin le
bonnet 65 qui s’est infecté.

30 SINGE PROTÉGÉ EFFICACEMENT PAR UNE INJECTION DE SÉRUM PRÉVENTIF.
Il n'avait pas acquis l’immunile.

Bonnet 51. — Ce singe avait reçu, le 14 juillet 1910 à midi, une inoculation
cous-cutanée de 4 c.c.1/2 de mélange du sérum des malades 50 et 51, aux
11e et 9° jours de la convalescence de leur typhus, et, le mème jour, à 6 heures
du soir, dans la cavité péritonéale, 4 cent. cubes de sang du malade 37,
atteint d'un typhus grave au 10-12e jour; témoins : le bonnel 20 et le magot 5,
qui se sont infectés. Le bonnet 57 n'avait présenté aucune réaction (tempéra-
ture prise pendant 40 jours).

COURBE 23.

L'inoculation d'épreuve a été pratiquée le 21 mai 1911, avec 4 centimètres
de sang du malade 120, utilisé dans plusieurs expériences relatées plus
haut. Le bonnet 57 a contracté un fyphus grave de 12 jours de durée, suivi
d'hypothermie, après 16 jours d'incubation (courbe 33). Cette longueur anor-
male de l'incubation est le seul bénéfice que ce singe semble avoir tiré de
l'inoculation ineffective de sang virulent, pratiquée dix mois auparavant.

(A suivre.)

LE « MAL DE LURE

PYOHÉMIE SECONDAIRE A L'AGALAXIE CONTAGIEUSE
DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE

(avec la pl. IV)

par H. CARRÉ
Chef du Laboratoire des recherches sur les Maladies infectieuses

(École d’Alfort).

Au cours des recherches systémaliques que je poursuis
depuis plusieurs années sur la suppuration chez le mouton,
j'avais isolé, en novembre 1910, dans le pus d’une mammite
phlegmoneuse de la brebis, mammite cliniquement semblable
à celle due au microbe de la suppuration caséeuse (V. Revue
générale de Médecine Vétérinaire, 1°" décembre 1910), un petit
bacille très délicat existant en abondance dans les lésions.

La brebis provenait d'un lot de bètes en très mauvais état,
achetées au marché de la Villette et d'origine inconnue.

J'avais conservé les cultures de ce bacille, mais, ne lui accor-
dant qu'un intérêt relatif, j'en avais ajourné l'étude appro-
fondie, quand de récentes constatations m'ont fait voir qu'il
pouvait revendiquer une place assez importante dans la patho-
logie ovine et caprine.

En janvier 1911, M. le vétérinaire en 1° Lardeyret m'écri-
vait : « Une maladie épidémique extrèmement grave a sévi sur
un grand nombre de troupeaux au pâlurage, cet été, dans la
montagne de Lure (confins de la Drôme et des Basses-Alpes).

La maladie se manifestait par la fonte purulente des yeux
et par la présence d’arthrites suppurées des genoux, des grassets
et des hanches, avec étisie musculaire progressive suivie
d'épuisement organique.

Elle atteignait plus spécialement les antenais, mais les brebis
de quatre à cinq ans n’en étaient pas exemples. Bien que la
mortalité ne fût pas très élevée, les pertes étaient néanmoins
considérables pour les éleveurs, car les animaux atteints restaient
aveugles, émaciés, boiteux et peu susceptibles d’engraissement
après guérison.

282 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Les lésions consistaient en étisie complète, sans lésions viscé-
rales apparentes, sauf toutefois de légers foyers de broncho-
pneumonie : fonte purulente du globe oculaire avec sanie intra-
orbitaire, abcès articulaires avec pus verdâtre, ramollissement

No 511. — Maladie naturelle.

des ligaments articulaires qui prenaient un aspect gélatini-
forme, lésions d’arthrites suppurées.
C’est la première fois qu'une pareille infection est observée

N° 455. — Maladie expérimentale.

dans le pays et l'ennui des
éleveurs est d'autant plus
grand que les pertes par
maladies contagieuses sont,
chaque année, de plus en
plus nombreuses. »

Avec ces renseignements
précis, M. Lardeyret me
faisait expédier par M. Jeof-
froy, de Forcalquier, deux
sujets atteints de la ma-
ladie; je suis très heureux
de renouveler ici, à ces

messieurs, mes plus vifs remerciements.
Des deux moutons envoyés de Forcalquier, dans un état de
maigreur extrême, un seul présentait des lésions oculaires

(n° 420).

LE « MAË DE LURE » 283

L'examen clinique et celui des lésions révélées par l’autopsie
répondaient intégralement à la description faite par M. Lar-
deyret.

L'examen microscopique du pus de la chambre antérieure du
mouton 420 fit voir, en abondance, un bacille très grèle, prenant
le Gram, refusant de pousser sur les milieux simples, bacille
que Jjidentifiai facilement avec celui que j'avais isolé en
novembre 1910 d’une mammite phlegmoneuse.

L'inoculation de ce microbe au mouton me fournit des résul-
tats tels qu'une étude de la maladie sur place me parut
indiquée.

M. Arlaud, vétérinaire départemental des Basses-Alpes, el
M. Jeoffroy, de Forcalquier, se mirent avec le plus grand
empressement à ma disposition pour me faire visiter les centres
infectés, environs d'Oraison et montagne de Lure, tandis que
mon excellent ami Pleindoux, vétérinaire départemental de la
Vaucluse, m'accompagnail à l’autre extrémité de cette région
montagneuse, vers Orange, dans les contreforts ouest du mont
Ventoux.

Grâce à ces concours empressés, j'ai pu voir nombre de cas
cliniques et retrouver, notamment, en plus des lésions oculaires
et articulaires, les lésions de la mamelle.

Tandis qu'à l’est, vers Forcalquier et Oraison, la mortalité
était en somme exceptionnelle, à l’ouest, au contraire (Gigondas),
nous avons rencontré en pleine montagne un troupeau déjà
visité antérieurement à mon arrivée par M. Pleindoux et dont
il a bien voulu nous communiquer l'histoire.

Je la transcris intégralement ici car elle donne une excel-
lente idée de l'allure de l'affection sous la forme la plus sévère.

Ce troupeau, appartenant à M. F..., de Gigondas, quartier
du Queyron (Vaucluse), était composé de 60 brebis laitières ou
“agneaux et de 20 chèvres.

Vers le commencement de janvier, une affection caractérisée
par de petits abeès sur toutes les parties du corps, par des loca-
lisations inflammatoires de la mamelle, de l'œil et des articu-
lations fait rapidement de nombreuses victimes.

Indistinctement, les brebis, les agneaux et les chèvres étaient
frappés.

Le troupeau avait reçu des animaux nouvellement achetés

28% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

au mois de novembre et provenant d'une exploitation qui est
restée indemne de toute maladie.

Il a été permis de constater trois formes : l’une suraiguë,
l’autre aiguë, la troisième chronique.

Forme suraiquë. — L'animal manifeste brusquement une
grande faiblesse, ne mange plus, suit difficilement le troupeau
et tombe paralysé du train postérieur, quelquefois des quatre
membres.

La fièvre est intense, 41°5 à 42 degrés. On n'observe dans
cette forme aucune localisation : l'animal meurt en deux ou
trois jours, 12 brebis et 4 chèvres ont ainsi succombé.

Forme aiquë. — Moins rapide que la précédente : on cons-
tate chez la brebis et chez la chèvre des lésions de la mamelle,
qui devient chaude et très douloureuse.

La sécrétion lactée est très diminuée : le lait est blanc sale,
grumeleux. Des abcès se forment et s'ouvrent à maturité : il
n’est pas rare de voir une mamelle avec deux ou trois abcès en
voie d'évolution et un ou deux abcès ouverts. La mamelle reste
atrophiée, molle, avec des noyaux indurés : elle est perdue
pour la lactation:

Les accidents articulaires se manifestent principalement aux
genoux et aux jarrets. Ils s’annoncent par une boiterie très
grave : on observe ensuite des lésions d’arthrite et de péri-
arthrite. Les animaux restent couchés, immobiles, car tout
déplacement est douloureux.

Les abcès péri-articulaires s'ouvrent et [a suppuration est
très longue à se tarir. Enfin on peut observer de l’ankylose.
Dans ces cas l'articulation ne s’ouvre pas, elle reste engorgée,
les gaines sont distendues.

La localisation oculaire est très fréquente : elle commence
par de l'opacité de la cornée qui augmente peu à peu et devient
complète.

La conjonctive se tuméfie, le pourtour de l’œil devient rouge,
la cornée s’ulcère et on constate du pus dans la chambre anté-
rieure. À ce moment, l'œil est volumineux, l'irritation causée par
l'écoulement du pus sur la face donne à la tête un aspect hideux.

Quelquefois ces lésions, lorsqu'elles ne sont pas graves
s’amendent, celte forme évolue en vingt à trente jours; elle
est mortelle dans 80 p. 100 des cas.

LE « MAL DE LURE » 285

Tous les agneaux dont les mères étaient malades ont rapi-
dement succombé à la faim et à la maladie.

Forme chronique. — Les 16 animaux qui ont résisté, 3 chèvres,
9 brebis et 4 agneaux, ont vu les accidents s’atténuer et ont
pris la forme chronique.

Les malades se remettent lentement et très difficilement : les
chèvres et les brebis ne pourront plus fournir de lait. Dans
90 p. 100 des cas on à constaté des lésions oculaires et des
mamelles ; dans 50 p. 100, des lésions articulaires existaient.

En résumé : sur 80 bêtes, on ne compte que 16 survivants ;
toutes ont été malades et 64 ont succombé.

Les observations de M. Arlaud, consignées dans son rapport
annuel, concordent avec celles faites par M. Pleindoux; cepen-
dant, et pour des raisons insoupconnées, la maladie a été beau-
coup moins sévère dans Les Basses-Alpes qu'en Vaucluse.

M. Arlaud écrit en effet : « La mort est l'exception, mais les
cas de guérison sont rares; la plupart des sujets atteints mai-
erissent considérablement et continuent à s’entretenir pénible-
ment dans cet état de maigreur, si bien que le propriétaire se
décide à les abattre.

Le mal de Lure est une maladie infectieuse dont la contagion
se fait lentement : c’est ainsi que dans un troupeau de 300 bêtes,
où la maladie règne depuis six mois, il y a eu 50 malades. »

M. Arlaud signale, de plus, que le mal de Lure ne sévit pas
sur les chèvres: il ne semble pas avoir constaté la localisation
mammaire.

On voit, par cet exposé, combien l'affection est variable, dans
ses lésions et dans sa gravité.

NATURE DE LA MALADIE

Les localisations si particulières de la maladie, aux yeux, aux
articulations et à la mamelle devaient logiquement faire penser
à l’agalaxie contagieuse.

Cependant, de l’aveu même des auteurs qui ont tenté l’élude
bactériologique de l’agalaxie, Hess et Guillebeau, Oreste et
Marcone, Bournay et Leclamnche, Cellietde Blasi, aucun microbe
ne s'est montré capable de reproduire la maladie.

286 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Oreste et Marcone isolent bien du lait quatre espèces de coceci,
mais ils n'osent accorder la spécificité à aucun d’eux. Bournay
et Leclainche n'ont rien obtenu avec les produits recueillis
purement au niveau des lésions chroniques de l'œil et des arti-
culations ; des ensemencements sur différents milieux, à l’air et
dans le vide, restèrent stériles presque toujours.

Enfin, les beaux travaux de Celli et de Blasi conduisent ces
auteurs à la découverte d'un virus filtrant qui permet de repro-
duire l’agalaxie et ses différentes localisations.

Nos collègues italiens, qui ont eu à leur disposition un vaste
champ d'observation, puisque l’agalaxie sévit chaque année sur
plusieurs milliers de moutons des provinces centrales et méri-
dionales de l'Italie, signalent la rareté des complications puru-
lentes dans la mamelle et celle, encore plus grande, des suppu-
rations de l'œil et des articulations.

Ils sont complètement muets au sujet des microorganismes
qu'ils ont pu rencontrer dans ces rares lésions purulentes.

À coup sûr, si le microbe que nous avons étudié dans le mal
de Lure était tombé sous les yeux des observateurs précités,
leur attention eût été attirée sur lui.

Étant donné que, dans le mal de Lure, la suppuration était
la règle, que, d'autre part, soit sur les animaux atteints de la
maladie naturelle, soit sur les animaux d'expériences, je cons-
latais des lésions non décrites dans l’agalaxie, j'élais prèt à
regarder, avec nos confrères des Basses-Alpes, le mal de Lure
comme une affection constituant une entité morbide spéciale et
toule nouvelle.

Cependant, si l'expérimentation me permettait de reproduire
les lésions purulentes du mal de Lure, elle me montrait aussi
que le microbe isolé par moi était incapable d'amener l'état
cachectique constalé dans la maladie naturelle. Des brebis,
inoculées expérimentalement et présentant de volumineux abcès
mammaires, continuaient, pendant de longs mois, à jouir d'un
excellent état de santé général et finissaient pas se débarrasser
de toutes leurs lésions.

Je ins à voir de près des animaux atteints d'agalaxie.
M. Scoflié, vélérinaire départemental des Alpes-Maritimes, et
M. Eyriès, vétérinaire à Carpentras, avec une obligeance dont je
ne saurais lrop les remercier, me firent envoyer plusieurs sujets.

LE « MAL DE LURE » 287

Sur les 6 brebis de M. Eyriès, je pus isoler le microbe d’une
seule mamelle, et une chèvre du lot de M. Scoffié, présentant
des lésions oculaires et mammaires, me montra bien le bacille
dans le pus de l'œil, mais le lait altéré de la mamelle ne le
renfermait pas et cependant ce Jait et le filtrat de ce lait infec-
tèrent 3 moutons par la veine, et 2 brebis par la mamelle.

Il devenait évident que les lésions purulentes renfermant le
bacille ne constituaient qu'une complication secondaire de
l’agaiaxie.

Le mal de Lure n'est donc qu'une infection qui vient se
ereffer sur l'agalaxie : son microbe est cependant spécifique,
c'est un nouveau bacille pyogène doué d’une certaine virulence,
auquel j'ai donné le nom de pyobacille du mouton et de lachèvre.

Sa présence augmente de beaucoup la gravité de l'infection
primitive, ses caractères biologiques sont intéressants à plus
d’un titre; pour ces raisons J'ai cru devoir en faire une étude
un peu approfondie.

CLINIQUE

La description qui suit s'applique, il convient de le noter, à
des animaux atteints à la fois d’agalaxie et de mal de Lure. Nous
n'insisterons que sur les lésions dans lesquelles nous avons
constaté la présence du pyobacille ou qui, malgré l'absence de
cet agent pathogène, nous paraissent cependant sous sa dépen-
dance. Nous éclairecirons ce point dans la suite.

No 420 (Forcalquier). Vieille brebis très maigre : la station quadrupédale
est impossible, l'animal marche sur ses genoux qui sont volumineux, aplatis,
indurés et indolores.

Nous ferons observer de suite que cette position est fréquemment cons-
latée sur les malades atteints de la maladie naturelle ou infectés artificiel-
lement.

L'œil gauche, enfoncé dans l'orbite souillée par un pus jaunâtre, et caché
par les paupières, est complètement atrophié : le pus s'écoule de la cavité
orbitaire sur la joue et le chanfrein en se desséchant.

La chambre antérieure renferme quelques gouttes de pus liquide, jaune
verdätre, qui sort facilement par une fistule centrale de la cornée, située au
fond d’un infundibulum.

La sérosité articulaire se montre stérile : le pus de l'œil, par contre, fai
voir en abondance le pyobacille associé à un organisme cocciforme, ne pre-
nant pas le Gram, fcoccus que nous avons rencontré souvent dans la suite
et qui s’est montré dépourvu de tout pouvoir pathogène.

No 440 (Gigondas). Ophtalmie purulente de l'œil gauche, dont le pus est
d'une richesse extrème en pyobacilles (fig. 4, PI. IV).

288 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

N° 441 (Gigondas). Brebis de 2 ans, en assez bon état. Les mamelles sont
augmentées de volume, bosselées. La palpation fait constater la présence de
plusieurs noyaux profonds, fermes, gros comme des noix.

Ces noyaux renferment du pus vert pâle, crémeux : l’un d'eux s’est ouvert,
laissant une petite poche suppurante. Le pus est très riche en pyobacilles-

N° 445. Brebis de 2 ans, en très mauvais élal. Ophtalmie de l'œil droit. A
travers la cornée sort et s'étale un tissu blanchâtre qu'il est impossible de
détacher avec une pince : il s’arrache en lambeaux et parait fixé au fond
de l'œil.

L’extrémité libre du cartilage de l'oreille droite est nécrosée : la pression
sur la peau, à ce niveau, fait sourdre quelques gouttes de pus verdâtre très
riche en pyobacilles. (La nécrose de l'extrémité de l'oreille est fréquente
sur les animaux atteints d'agalaxie et cependant je n'ai trouvé cette lésion
signalée chez aucun auteur.) Le genou droit est le siège d'un engorgement
chaud et douloureux; avec des points fluctuants; l'animal boite d'une façon
intense.

La ponction d'un des points fluctuants donne écoulement à du pus crémeux,
verdâtre, stérile à la culture.

N° 409. Vieille brebis maigre d'origine inconnue. Mamelles bosselées par
des noyaux indurés : une fistule, communiquant avec l'un d'eux, donne du pus
liquide, verdâtre, très riche en pyobacilles.

N° 502. Vieille brebis en très mauvais état d'origine inconnue.

À l'autopsie, un des ganglions mésentériques a le volume d'un œuf de
poule et renferme du pus verdâtre, crémeux, d'une extrême richesse en
pyobacille, paraissant pur au microscope.

N° 510. Chèvre (Nice). L'œil droit porte une fistule centrale donnant par la
pression du pus verdâtre très riche en pyobacilles (fig. 2, PI. IV).

N° 529 (Carpentras). Brebis maigre. La mamelle droite renferme du pus
verdâtre qui, ensemencé en bouillon sérum, donne une culture mixte de pyo-
bacille et de streptocoque.

Dans toutes les lésions renfermant le pyobacille, le pus s’est
montré crémeux, homogène, sans odeur, vert pâle : le microbe
y est facilement constaté car son abondance est extrême, en
général.

Nous l’avons donc rencontré dans l’œil, dans la mamelle,
dans un ganglion et sous la peau du cartilage auriculaire
nécrosé, mais Jamais dans le pus articulaire: Celui-ci s’est tou-
jours montré stérile; disons de suite qu'il en fut presque tou-
Jours de mème chez les animaux infectés artificiellement.

BACTÉRIOLOGIE

Les produits pathologiques examinés furent récoltés sur des
animaux provenant des Basses-Alpes, de la Vaueluse et des
Alpes-Maritimes, ou achetés au marché de la Villette et prove-
nant des régions infectées.

LE « MAL DE LURE » 289

L'examen du pus extrait de la chambre antérieure (4 cas), de
la mamelle (3 cas), d’un chancre de l'oreille (1 cas), d’un gan-
glion mésentérique (4 cas) nous a montré, toujours en abon-
dance, le pyobacille, associé parfois à un fin coccus ne prenant
pas le Gram, et paraissant dénué de toute virulence. Ce coceus,
injecté sous la peau, dans un trayon, dans l'œil, dans la veine
de moutons ou de brebis, a été incapable de créer une lésion
quelconque.

Chose curieuse, le pus des lésions articulaires (4 cas) s’est
toujours montré stérile : nous tenons à faire remarquer de
nouveau que le pus articulaire des animaux infectés expéri-
mentalement était également stérile le plus souvent. Mais si la
dose injectée, dans la veine, est un peu forte, les abeès articu-
laires et péri-articulaires se montrent d’une richesse extrême
en pyobacilles. Il y a là une question de dose, très probable-
ment, le pouvoir bactériolytique du pus se trouvant débordé
par un apport exagéré de germes virulents.

Quoi qu'il en soit, lorsque le pyobacille existe dans le pus, il
sy montre en général très abondant; si dans les lésions
ouvertes il est accompagné d’autres espèces microbiennes, sa
lorme permet de le distinguer aisément.

Avec un faible grossissement (1000-1200 D), il ressemble à
sy méprendre au bacille du rouget. C’est un bacille très grèle,
en articles d'inégale longueur, très polymorphes, libres ou en
petits amas enchevêtrés.

Un objectif puissant est indispensable pour mieux apprécier
la grande variété de formes qu'il affecte, allant du coceus au
bacille, avec des articles renflés en leur centre ou à l’une de
leurs extrémités (PL IV, fig. 3).

Le plus grand nombre des éléments, colorés par le Gram,
qu'ils prennent parfaitement, paraissent composés d’un grain
ou d’une série de deux, trois grains colorés en violet foncé, inclus
dans une enveloppe plus claire, effilée à l’une ou aux deux
extrémités.

CULTURES

La culture en bouillon peptone est nulle ou à peine appré-
ciable ; la présence d’un sérum, même en faible quantité, est
indispensable pour obtenir un développement d'une certaine

19

290 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

importance ; la culture est complète en quatre ou cinq jours, le
milieu devient fortement acide.

La culture se fait en profondeur, au contact de la paroi du
tube si celui-ci est incliné au lieu d'être maintenu debout;
cette paroi se recouvre d'une couche grisätre paraissant formée
de petits amas microbiens séparés. Le liquide ne se trouble pas.

Une agitation modérée du tube met en suspension ces petits
amas ; si l’on insiste, tout se désagrège et le liquide se trouble
uniformément, mais la sédimentation s'opère assez rapidement
et le milieu reprend sa limpidité initiale.

La présence de craie dans le bouillon peptone sans sérum
permet un développement assez appréciable ; il n'y à jamais
de dégagement gazeux, mais production d'une faible quantité
d'indol.

Le sérum (mouton, chèvre) constitue un bon milieu de cul-
ture; dans le lait, le développement est rapide (brebis, chèvre,
vache): le milieu est coagulé en dix-huit ou vingt-quatre heures,
très acide, sans dégagement de gaz.

La gélose sérum montre une couche très mince, translucide,
surtout appréciable au contact du liquide de condensation.

La gélatine, la gélose ordinaires, la pomme de terre, le
sérum coagulé paraissent impropres à la culture du pyobacille.

A la température du laboratoire, on n'observe aucun déve-
loppement. Enfin, les cultures anaérobies sont peut-être plus
riches que celles qui s'effectuent au contact de l’air : le pyoba-
cille est un anaérobie facultatif. Il est immobile.

Ce microbe ne se développe pas sur la gélose ordinaire ; si
l'on ensemence du pus sur ce milieu, le coccus non virulent,
souvent associé au pyobacille, y pousse rapidement. Bientôt,
par-dessus les colonies assez translucides de ce coccus, appa-
raîtront d’autres colonies plus petites, mais plus opaques, de
pyobacilles.

Ces colonies de pyobacilles sont incomparablement plus
riches, dans ce cas, que sur la gélose sérum elle-même.

Pour isoler le pyobacille des autres variétés microbiennes qui
peuvent éventuellement l'accompagner, il est indispensable
d'utiliser la gélose sérum ou, mieux, la gélose sang ; la teinte
foncée de ce dernier milieu permet une différenciation plus
aisée des colonies: dans les espaces libres laissés entre les

LE « MAL DE LURE » 291

colonies volumineuses des autres microbes, on verra apparaître
un fin piqueté composé de colonies de pyobacilles. Leur appa-
rition sera toujours en retard de vingt-quatre, quarante-
huit heures sur celle des autres microbes.

On réussira encore à obtenir le pyobacille à l’état pur en pra-
tiquant deux ou trois passages, de péritoine à péritoine, chez
le cobaye.

Le pyobacille perd manifestement de sa virulence quand on
le cultive en série sans passage par l'organisme animal.

Malgré l'acidité des milieux dans lesquels il se développe, le
pyobacille conserve sa vitalité au moins deux mois à la tempé-
rature du laboratoire.

EXPÉRIMENTATION SUR LES DIFFÉRENTS ANIMAUX

COBAYE.

L'injection de 1 cent. cube de culture sous la peau provoque

un œdème assez élendu et épais, qui se condense ; une petite
poche purulente apparaît, s'ouvre au bout de deux à quatre jours,
laissant une plaie ulcéreuse ; puis la cicatrisation s'opère assez
rapidement : l’animal conserve un excellent état de santé et
guérit.
_ Dansle périloine, l'injection de 1-2 cent. cube de culture tue
parfois l'animal en cinq à huit jours, dans un état cachectique
complet. La séreuse péritonéale renferme un exsudat louche,
plus ou moins teinté en rouge ; des fausses membranes sont
disséminées à la surface des viscères et les anses intestinales
sont accolées les unes aux autres. Sur le péritoine pariétal et
l'épiploon sont répartis de petits abcès recouverts d’une mince
enveloppe et renfermant une gouttelelte de pus vert pâle d'une
richesse extrème en pyobacilles. L'urine est albumineuse.

L'injection intra-péritonéale de pus, provenant d’une lésion
du mouton ou de cobaye, provoque, au bout de deux ou trois jours,
chez le cobaye mâle, une funiculite suppurée : un des testicules,
ou les deux, ne peuvent plus rentrer dans la cavité abdominale :
le scrotum est tendu, rouge, luisant. A l’autopsie, on constate
l'adhérence des feuillets séreux de la gaine vaginale et une
quantité plus ou moins grande de pus: le testicule dont le tissu
propre peut être lésé est fixé au fond de la gaine vaginale.

292 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le Veau (20 cent. cubes dans la veine), le Lapix (1 cent. cube
dans la veine), le PiGron (1 cent. cube dans le muscle), la Souris
blanche (1 cent. cube dans le péritoine) se montrent réfractaires
au pyobacille.

20 cent. cubes de culture sous la peau du cheval ne donnent
lieu à aucun trouble local ou général ; cependant 100 cent. cubes
dans la veine provoquent une brève élévation thermique.

Mouron ET CHÈVRE.

JL. — Jnjection sous la peau.

Le 5 février 1911, un mouton d’un an (n° 430) né au laboratoire reçoit sous
la peau de la cuisse droite 5 cent. cubes d’une culture de pyobacille en
bouillon sérum âgée de trois jours. Le lendemain, un œdème chaud et dou-
loureux, du volume d’un œuf de poule, entoure le point d’inoculation. La
fluctuation apparaît dans les jours qui suivent. La poche purulente s'ouvre
spontanément le 10 février et se vide, laissant une plaie profonde qui se
comble rapidement.

Le 8 mars, la cicatrice est à peine visible. La température, qui s'est main-
tenue au-dessus de 40 degrés (max. 40°8) pendant quatre jours, descend
ensuite lentement vers la normale qu'elle a repris le 10° jour.

L'animal n'a pas présenté d'autres lésions et a toujours conservé un état
de santé général excellent.

Le 17 février, trois agneaux de trois semaines, nés au laboratoire, sont
inoculés sous la peau de la cuisse droite :

Le n° 437 reçoit 1 goutte de culture :

Le n° 438 reçoit 2 gouttes ;

Le n° 439 reçoit 5 gouttes.

Seuls, les n°5 438 et 439 présentent chacun un volumineux abcès qui évolue
et se cicatrise rapidement ; cependant, l'engraissement et l'augmentation de
taille ont été nettement retardés, surtout chez le 439.

Le n° 437 n'a montré aucune trace de l'inoculation et a pris un embonpoint
normal.

D'autres animaux, d’âges différents, ont encore reçu sous la peau des doses
variables de pyobacilles : ces inoculations ont été bien supportées ; en tout
cas, il n’y eul jamais généraiisation de l'infection.

IL. — Znjection dans le péritoine.

Le 5 février 1911, une brebis d'un an, n° 429, née au laboratoire, recoit
dans le péritoine 5 cent. cubes de culture de probacille. L'animal maigrit
rapidement : sa lempérature oscille entre 40°5 et 41 degrés. Sacrifiée le
17 mars, de nombreuses adhérences réunissent les anses intestinales entre
elles et à la paroi abdominale.

À la surface des intestins, on rencontre de nombreuses petites élévations
rosées, en saillie de 1 à 1 cent. 1/2 et renfermant quelques gouttes de pus
verdâtre renfermées dans une capsule charnue. Trois gros abcès, au niveau
de la ligne blanche, font saillie sous la tunique abdominale.

Le pus de ces lésions est d’une richesse extrême en pyrobacilles.

LE « MAL DE LURE » 293

IL. — Injection dans l'œil.

Le 5 février 1911, un mouton d’un an, n° 427, né au laboratoire, reçoit dans
la chambre antérieure de l'œil droit une goutte de culture en bouillon sérum.

Dès le lendemain la cornée est opaque. Le 8, le contenu de l’œil est nette-
ment purulent : la sclérotique est violemment congestionnée. La cornée
s'ulcère et laisse sortir du pus verdâtre. Le 21, une gelée incolore, constituée
par le cristallin, fait hernie par la perforation cornéenne. L'œil s’atrophie de
plus en plus et les paupières le recouvrent complètement. Sacrifié le 19 mai,
cet animal est en parfait état de graisse: l'œil est complètement atrophié ;
la chambre antérieure n'existe plus, le globe oculaire forme une petite masse
uniformément noire sur la coupe. Aucune autre lésion.

IV. — Injection dans la mamelle.

Le 5 février 1911, une brebis d'un an, n° 429, née au laboratoire, reçoit
dans le trayon droit 1 cent, cube de culture de pyobacille. Le 8, on sent,
dans la profondeur de l'organe, à la base du trayon, une induralion du
volume d'un œuf de pigeon.

Un mois après, on perçoit trois noyaux indurés. La ponction de ces
noyaux donne issue à du pus verdâtre, crémeux, très riche en pyobacilles.

Une brebis de quatre ans, en pleine laclation, n° 449, recoit le 21 mars 1911»
une goutte de culture dans le trayon gauche, Dès le 23, la mamelle gauche
est énorme, tendue, rouge, douloureuse ; du trayon, on fait sortir du pus
verdâtre. Bientôt l’autre quartier s'infecte également : on sent, dans la pro-
fondeur de l'organe, des noyaux durs. Au 9 septembre, celte brebis, qui a
toujours conservé un excellent état de santé, a le tissu mammaire complète-
ment atrophié, mais on perçoit encore de pelits noyaux indurés.

Au 13 novembre, toute trace d'infection semble avoir disparu.

V. — Injection dans le vagin.

À une vieille brebis, n° 454, en élat de gestation, on injecte le 7 février,
dans le vagin, 20 cent. cubes de culture : elle met bas, le 29 mars, une
agnelle mort-née.

Les liquides amniotique et allantoïdien sont purulents, très riches en
pyobacilles. Dans les jours qui suivent l'avortement, la vulve laisse écouler
un mucus purulent et sanguinolent.

Le sang du cœur de l'avorton est stérile. Sacrifiée le 5 avril, cette brebis
montre une métrite purulente; l'utérus renferme un exsudat grisàtre peu
abondant, avec grumeaux muqueux, culture mixte de pyobacilles et de strep-
tocoque.

VI. — Ingestion de pyobacilles.

Le 15 avril 1911, on verse, dans la bouche de chacun des agneaux 484 et
185, àgés de trois semaines, le tiers environ d'un tube de culture en bouillon
sérum. Le 28 avril, apparition d'une boiterie au membre postérieur droit.
Le jarret droit s’engorge peu à peu, et, le 15 mai, montre un point fluctuant
en avant. La ponction permet d'obtenir 2 cent. cubes de sérosité louche,
jaunâtre, avec leucocytes, mais sans microbes au microscope. Cette sérosité,
ensemencée, s’est montrée stérile.

294 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

N° 485. — Boite du membre antérieur droit le 22 avril; le 24, le genou
antérieur droit est augmenté de volume, chaud, douloureux, l'animal reste
couché. Le 10 mai apparaît, à la face interne, un point fluctuant.

La ponction permet de recueillir de la sérosité rougeâtre avec grumeaux
purulents. L'examen microscopique et la culture font voir que cette sérosité
est stérile.

L'infection par le tube digestif est donc possible expérimentalement. Nous
en étions déjà persuadé à la suite de la découverte, sur un mouton atteint de
la maladie naturelle, d'un volumineux abcès ganglionnaire mésentérique
rempli de pus très riche en pyobacilles.

Les deux agneaux 4$4 et 485 s'étant complètement retablis n'ont pas été
sacrifiés.

VIL. — Injection dans la veine.

Le 5 février 1911, un mouton d'un an, n° 428$, né au laboratoire, recoit dans
la jugulaire 1 cent. cube de culture de pyobacille en bouillon sérum, âgée de
trois jours.

Le 10 février, apparilion d'une boiïterie accentuée du membre postérieur
droit ; l'animal maigrit à vue d'œil et ne peut bientôt plus se porter sur le
membre malade. Sacrifié le 10 mars, ce mouton est d'une maigreur extrême.
L'articulation fémoro-libiale droite est augmentée de volume, noyée dans un
cngorgement diffus ; en dégageant les muscles ét les tendons qui l’'envelop-
pent, on incise de petites poches purulentes. Les cartilages articulaires
sont détruits ; la surface des épiphyses est vivement enflammée, verru-
queuse. La têLe du fémur renferme un abcès gros comme une noisette (PI. IV,
fig. 4). Le pus verdâätre des lésions articulaires, péri-articulaires et osseuse
est d'une grande richesse en pyobacilles. Le ganglion du flanc droit est
énorme, succulent, long de 8 centimètres.

Aucune autre lésion.

Le 31 mars, une chèvre adulte, n° 464, recoit dans la jugulaire 5 cent. cubes
de culture. Le 3 avril, la chèvre présente de la raideur des quatre membres :
le poil est piqué ; le 4, elle boite du membre postérieur droit qui est rapide-
ment soustrait à l'appui ; la palpation de l'articulation fémoro-tibiale est très
douloureuse.

À partir du 16, l'animal ne peut plus se tenir debout. De nouvelles loca-
lisalions apparaissent aux genoux, droit et gauche, puis au jarret gauche.
On la sacrifie le 29 avril, elle est complètement cachectique. Sous la plèvre,
on rencontre quelques petits abcès avec pus verdâtre riche en pyobacilles.
Les articulations malades sont entourées d'abcès dont le pus a fusé entre
les muscles et les brides tendineuses en les décollant. Les surfaces articu-
laires n'existent plus et sont remplacées par des surfaces tomenteuses,
rugueuses, enflammées. La têle du fémur gauche renferme un petit abcès
en communication avec l'articulation. Les ganglions de la voûte lombaire et
poplité sont énormes, suceulents, mais non purulents.

LÉSIONS

Articulations. — L'articulation et les tissus environnants.
conjonclif, osseux, peuvent être envahis par la suppuration.
L'articulation est augmentée de volume, chaude, douloureuse :

LE « MAL DE LURE » 295

de petits abcès plus ou moins confluents s’établissent entre les
brides tendineuses et les muscles, qu'ils décollent. Les culs-
de-sac tendineux et articulaires renferment du pus verdâtre et
font saillie sous la peau.

Si l'articulation elle-même est envahie, le pus macère les
carlilages articulaires, les détruit, laissant à leur place des
surfaces tomenteuses, rugueuses, vivement enflammées.

L'inflammation ne va pas toujours jusqu’à la formation de
pus et la ponction d’un point fluctuant de l'articulation peut ne
donner issue qu'à de la synovie épaisse, d'une teinte rosée ou
jaune plus ou moins intense. Parfois, enfin, la seule lésion
consiste en un engorgement diffus des tissus au niveau de
l'articulation.

Os (Lésion expérimentale). — La tète des os longs, au niveau
d'une articulation malade, renferme parfois un ou deux petits
abcès avec pus verdâtre ; la moelle osseuse peut être transpa-
rente, gélatiniforme, les vaisseaux capillaires s’y distinguent
dans presque toute l'épaisseur du tissu.

Mamelle. — La lésion mammaire est constituée par des abcès
plus ou moins nombreux, volumineux et profonds. Les con-
duits galactophores peuvent s'infecter et la mulsion permet
d'obtenir par les trayons une quantité variable de pus épais,
crémeux, verdâtre.

Certains de ces abcès s'ouvrent à l'extérieur et laissent une
poche ou une fistule, dont la cicatrisation est très lente à
s'opérer.

D'autres se résorbent au bout de quelques mois, et la
mamelle reste complètement atrophiée.

Ganglions. — Nous avons rencontré, sur un animal atteint
de la maladie naturelle, un volumineux abcès mésentérique
avec pus d’une extrème richesse en pyobaeilles.

OŒil. — Le pus se forme dans la chambre antérieure : sous
la pression interne, la cornée est refoulée en avant; elle
s'amincit en sor centre, puis se déchire; par la fistule ainsi
créée, une petite quantité de pus s'écoule avec des fragments
de tissus macérés.

Deux fois, nous avons constaté la sortie, par la fistule cen-
trale de la cornée, d'un tissu blanchâtre s’étalant à la surface
de l'œil, très fragile et semblant fixé au fond de l'œil.

296 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La petite quantité de pus reste renfermée dans la chambre
antérieure dès que la pression est égalisée; pour en obtenir
une goutte, il convient de presser sur la cornée.

Le pus qui souille les paupières et s'écoule sur le chanfrein
et les joues ne vient pas de l’intérieur de l'œil; il est créé
in situ dans la cavité orbitaire souillée par les poussières et
dont la profondeur varie avec l’état d’atrophie du globe ocu-
laire et sa rétraclion au fond de l'orbite.

Fait curieux, malgré la présence de pus dans la chambre
antérieure pendant deux ou trois mois parfois, l'œil peut
reprendre, en apparence, sa forme et presque son aspect
normal; la vision est abolie, bien entendu. Mais, le plus sou-
vent, le globe oculaire est complètement alrophié, rétracté
au fond de l'orbite; une coupe de l'organe ne permet plus de
différencier les différents tissus ; il est uniformément noir,
comme une petite truffe.

Cartilage auriculaire. — Nous avons signalé la grande fré-
quence de la nécrose du cartilage de l'oreille chez les animaux
agalaxiques. Chez l’un d'eux, l'extrémité de l'oreille était le
siège d’un chancre purulent; sous la peau, décollée, existait
du pus verdâtre, très riche en pyobacilles.

Utérus (Lésion expérimentale). — L'utérus renferme un
exsudat purulent grisâtre; les liquides amniotique et allan-
toïdien sont rougeàtres, purulents.

ÉTIOLOGIE

La clinique et l'expérimentation montrent que l'infection par
le pyobacille se réalise par les voies digestives.

Nous avons rencontré, sur une brebis atteinte de la maladie
naturelle, un volumineux abeès mésentérique à pus très riche
en pyobacilles ; de plus, par l'absorption d'une culture de pyo-
bacilles, nous avons réussi à provoquer, chez deux agneaux,
des lésions articulaires très nettes, mais fugaces.

Mais le tube digestif de l'animal sain et adulte ne semble pas
se prêter au passage du pyobacille et à l'infection consécutive.

Pour créer des lésions comparables à celles de la maladie
naturelle il convient d’injecter le virus dans la veine ou dans
l'organe lui-même, œil et mamelle.

LE « MAL DE LURE » 29%

L’injection intra-veineuse amène à coup sûr des lésions arti-
culaires et, parfois, des lésions oculaires et mammaires.

Pour que l'infection se réalise normalement, il faut de toute
nécessité que l'organisme soit déjà fortement déprimé : cette
dépression organique est réalisée par le virus de l’agalaxie.

Les animaux atteints d'agalaxie sont en général en très mau-
vais état el l’on conçoit très bien qu'ils soient aptes à se laisser
infecter par un agent doué d'un certain pouvoir pathogène,
insuffisant toutefois pour vaincre la résistance d'un animal
sain.

Le pyobacille doit être assez répandu dans les bergeries :
nous croyons l'avoir entrevu dans le pus du moignon de la
queue chez des agneaux du Loiret, à une époque où notre
attention n'avait pas encore été attirée spécialement sur lui;
aucun symptôme se rattachant au mal de Lure n'a été constaté
d'ailleurs dans la suite chez ces agneaux.

Le mal de Lure est localisé dans les Basses-Alpes, la Vau-
cluse, le Var et les Alpes-Maritimes, c'est-à-dire dans les
régions où sévit l'agalaxie contagieuse.

DIAGNOSTIC DIFFÉRENTIEL

Le mal de Lure n’a rien de commun avec les différentes
lésions créées par le microbe de la suppuration caséeuse. On
peut rencontrer sur le même animal des abeès sous-cutanés el
viscéraux (poumon) renfermant le microbe de Preisz-Nocard, et
des lésions suppurées contenant le pyobacille, mais ces deux
agents pathogènes ne se mélangent pas. Chacun d'eux se déve-
loppe séparément et donne naissance aux lésions qui lui sont
propres.

L'examen microscopique et les cultures seront nécessaires
cependant pour différencier les suppurations articulaires et
mammaires; cliniquement on ne peut les distinguer. Mais la
suppuration de l'œil est absolument le fait du pyobacille.

Je crois devoir attirer l'attention sur les difficultés ren-
contrées à chaque pas dans l'étude de ces affections mixtes sur
un même animal et sur la circonspection qu'il convient
d'apporter dans l'appréciation du rôle pathogène de chacun des
virus.

298 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Cependant les résultats expérimentaux sont très nets; le
microbe de la suppuration caséeuse peut, à lui seul, sur l'ani-
mal sain, créer toutes les localisations bien connues actuelle-
ment, le pyobacille ne peut évoluer que sur des sujets déjà
atteints d’agalaxie.

C'est dire que le mal de Lure ne saurait être constaté dans
les régions indemnes de cette affection.

Le pus du mal de Lure a la même teinte verdâtre que le pus
dû au microbe de Preisz-Nocard, mais jamais il n'acquiert la
consistance de ce dernier, il reste toujours assez liquide.

ESSAIS DE VACCINATION

L'injection d’une goutte de culture de pyobacille vivant, non
atténué, étant parfaitement tolérée, sans réaction locale Le plus
souvent, même chez de très jeunes animaux, nous avons logi-
quement été amené à tenter l’immunisation active.

À plusieurs reprises nous avons injecté, sous la peau d’ani-
maux d'expériences d'âges différents, des doses minimes mais
croissantes, de virus non atténué.

Ces injections furent bien supportées, mais l'épreuve de
l'immunisation, si toutefois celle-ci était réalisée, ne ‘nous
fournit que des déboires.

Nous ne pouvions songer à essayer la résistance de nos
vaccinés en leur faisant absorber des cultures de pyobacilles,
puisque ce mode d'infection ne réussit qu'exceptionnellement
au laboratoire.

Force nous fut d'utiliser la voie veineuse et nous dûmes
constater que vaccinés et témoins se montraient aussi sensibles
les uns que les autres à l'injection : l'apparition de lésions
articulaires démontrait le peu de cas qu’il convenait de faire de
la vaccination.

Cependant, sur quelques centaines d'animaux, en pays infecté,
M. Arlaud, vétérinaire départemental des Basses-Alpes, voulut
bien essayer la vaccination. Les résultats parurent satisfaisants
puisque, cette année, plusieurs propriétaires m'ont demandé
de nouveau du vaccin. Je me suis empressé de leur donner
satisfaction, mais, personnellement, j'avoue ne pas avoir
grande confiance dans la valeur de la méthode. Peut-être cette

LE « MAL DE LURE » 299

vaccination se montrera-{-elle capable d'empêcher l'apparition
des lésions suppurées, mais, à coup sûr, elle n'aura aucune
action sur l'infection agalaxique primitive.

C'est contre l’agalaxie que les mesures hygiéniques et pro-
phylactiques doivent être prises; celte maladie étant vaincue,
le mal de Lure disparaïitra.

Tous nos efforts vont porter de ce côté maintenant.

CONCLUSIONS

I. — Le mal de Lure n'est qu'une complication de l’agalaxie
contagieuse du mouton et de la chèvre : c’est une pyohémie
spéciale.

IL. — L'agent spécifique, que nous avons découvert, et auquel
nous avons donné le nom de pyobacille du mouton et de la
chèvre, est doué d'un pouvoir pathogène élevé.

IT. — Les animaux sont d'autant plus sensibles à son action
qu'ils sont plus jeunes.

IV. — Si l'injection sous-culanée est, en général, bien
tolérée, par contre, le dépôt du virus dans la veine, dans l'œil,
dans la mamelle permet de réaliser l'infection et d'obtenir les
lésions typiques de la maladie.

V.— Le pyobacille constitue une nouvelle variété micro-
bienne capable de provoquer, chez le cobaye mâle, le signe de
Strauss, la vaginalite et l’orchile suppurées.

VI. — Le mal de Lure est un nouvel exemple d'une infec-
tion secondaire spécifique se greffant sur une première infec-
tion el en augmentant la gravité.

VII. — Cette complication parait absolument propre aux
ovins et caprins du sud-est de la France. Elle est inconnue sur
les moutons atteints d’agalaxie, en si grand nombre dans les
régions centrale et méridionale de lItalie.

VIT. — II paraît inutile de chercher à prévenir le mal de
Lure; tous les efforts prophylactiques doivent être dirigés
contre l’agalaxie contagieuse, cause première de l’affaiblisse-
ment organique permettant le développement du pyobacille.

DES INFECTIONS SECONDAIRES
DANS LA TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON

par A: VEILLON et G. REPACT

Quand on songe aux conditions dans lesquelles se trouvent
la plupart des cavernes {uberculeuses, on conçoit facilement
qu'elles puissent être le siège de nombreuses infections secon-
daires. À demi remplies de matière caséeuse, de pus, qui
font un excellent milieu pour les cultures microbiennes, for-
mées d'une paroi pathologique en voie de destruction, qui
n'offre aucun moyen de défense, elles semblent vouées forcé-
ment à un envahissement parasitaire intense. Cependant, si la
caverne tuberculeuse est bien disposée pour laisser pulluler
les microbes, faut-il encore que ceux-ci puissent y pénétrer, il
faut qu'il yait ensemencement. Lacommunicationavecles bron-
ches, et par suite avec le nez, la bouche et l’air extérieur,cons-
titue une voie toute naturelle pour cette pénétration. Mais
nous savons que l’air atmosphérique se purifie en passant
par le nez, la bouche et les voies respiratoires supérieures car
les particules solides sont retenues par les parois humides de
ces cavités et nous savons aussi que les bronches se défendent
par un mécanisme biologique bien connu en détruisant les
microbes qui n’ont pas été retenus mécaniquement.

On conçoit donc qu'une caverne puisse échapper à l'infec-
tion secondaire et, en fait, nous verrons que cela existe. En
réalité, l'abondance des sécrétions qui lèsent la muqueuse et
l’'empêchent de se défendre utilement, la stagnation de ces
sécrétions qui arrivent à faire un milieu de culture étendu à
tout l'arbre respiratoire, la permanence même de ces con-
ditions favorisantes font qu'à un moment donné il doit se faire
un ensemencement de la caverne et c'est ce que l’on constate
le plus souvent.

Koch, qui avait trouvé le microbe de la tuberculose, a aussi
donné les premières indications au sujet des infections secon-
daires.

TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON 301

Il fait très Justement remarquer que parmi les nombreuses
espèces bactériennes que le hasard fait pénétrer dans les
cavernes, un petit nombre sera capable de se développer et
quelques-unes seulement pourront jouer un rôle pathologique.
Depuis ces recherches de Koch (1884), nombre d'auteurs (1) se
sont atlachés à confirmer ou infirmer le rôle pathologique de
ces infections secondaires, les uns ne leur attribuant aucune
importance, les autres allant jusqu'à dire que le bacille de la
tuberculose ne pourrait rien sans l’aide des autres microbes.

Nous ne reviendrons pas sur l'historique de ces travaux, qui
a été maintes fois fait; disons seulement que les recherches ont
porté exclusivement sur l'étude des microbes aérobies et qu'il
semble bien résulter de l’ensemble de ces travaux que, si l’in-
fection secondaire par ces microbes est presque constante, elle
ne semble pas jouer un rôle important.

Nous savons maintenant que le bacille de Koch à lui seul
peut faire la granulation tuberculeuse, que c’est lui qui amène
la dégénérescence caséeuse, qu'il est enfin capable de provo-
quer des inflammations pneumoniques, broncho-pneumoniques
et pleurales, qu'il est la principale cause de la fièvre et de la
cachexie tuberculeuse. On constate cependant, dans de nom-
breux cas de tuberculose ulcéreuse, des phénomènes que la
seule présence du bacille de Koch ne saurait expliquer; c’est la
félidité de l’haleine, la putridité des sécrétions, l'aspect gan-
greneux des cavernes et enfin, dans quelques cas, un pyo-
pneumothorax à épanchement putride.

Il semble que ce côté des infections secondaires, dans la
tuberculose pulmonaire, ait été négligé par tous les auteurs
qui se sont occupés de la question, et c'est pour cela que nous
avons entrepris de nouvelles recherches sur ce sujet.

"P_ 3
TECHNIQUE.

Pour nos examens nous nous sommes servis des crachats
de malades atteints de tuberculose ulcéreuse, des sécrétions
recueillies dans l'intérieur des cavernes au cours des autopsies

(4) On trouvera l'analyse de ces travaux et les indications bibliographiques
dans la thèse de Halbron. Tuberculose et infections associées. Thèse de Paris,
1906.

302 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

et enfin du tissu pulmonaire lui-même; dans quelques cas nous
avons aussi examiné le pus de pleurésies, le sang de la circula-
lion générale, etc.

Pour les crachats nous faisons expectorer le malade dans une
boîte de Petri stérilisée ct, immédiatement, un petit fragment
est détaché avec un instrument flambé.

Ce petit fragment, lavé successivement dans plusieurs tubes
(7 à 8) d'eau stérilisée, servait ensuite aux examens microsco-
piques, aux ensemencements, aux inoculations. Cette technique
est d’ailleurs classique pour l'étude des crachats, car elle permet
d'éliminer en grande partie les microbes de la bouche.

Les sécrétions des cavernes, le suc pulmonaire, le sang du
cœur étaient recueillis comme d'habitude avec des pipettes
flambées qui servaient à aspirer le liquide à travers une paroi
préalablement stérilisée par le fer rouge.

Le matériel, ainsi recueilli avec toules les précautions
d’asepsie, était soumis à trois ordres de recherches : examen
microscopique à l'état frais et après coloration par des pro-
cédés variés; cultures sur différents milieux; inoculations à la
souris, au lapin, au cobaye.

Dans ces différentes manipulations, nous nous sommes tou-
jours attachés à employer des méthodes multiples pour pouvoir
mettre en lumière le plus grand nombre d'espèces bactériennes.
Dans une question aussi complexe, il fallait en effet éviter
l’écueil qui consiste à ne trouver qu'une ou deux espèces bac-
tériennes dans un cas où il en existe beaucoup d’autres, ou
bien à ne trouver que l'espèce qu'on recherche « priori.

Les résultats concordants des cultures et des préparations
faites directement avec le matériel ensemencé nous prouvaient
que notre lechnique était bonne. Donc, pour chaque cas, on
faisait des préparations à l’état frais, des préparations colorées
par la méthode de Gram, par le liquide de Ziehl dilué, par le
liquide de Ziehl à chaud suivi d'une décoloralion par l'acide
nitrique dilué au tiers.

Les ensemencements pour cultures d'aérobies étaient faits
sur tubes de gélose ordinaire, sur tubes de gélose ensanglantée,
tubes de gélose ascite et sérum coagulé; pour les cullures des
anaérobies nous avons employé les tubes de gélose sucrée en
couche profonde.

\

TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON 305

Pour faire les ensemencements en surfaces on prend Île
matériel avec une aiguille de platine flambée, et on le porte sur
la surface d’un tube de gélose ; on a soin de délayer le petit
fragment de crachat ou de pus dans le liquide exsudé au fond
du tube et on l'étale sur la surface de gélose ; sans recharger
l'aiguille, on recommence la même opéralion sur un second,
un troisième tube, etc. On fait ainsi de véritables plaques en
surface où toutes les colonies poussent bien isolées. On ense-
mence plus ou moins de tubes, selon la richesse bactérienne
du matériel.

Pour pratiquer l'isolement des microbes anaérobies, nous
avons employé la technique indiquée par l’un de nous et que
nous décrirons rapidement à nouveau, parce qu'il semble
qu'elle n'ait pas toujours été bien comprise et parce qu’elle à
subi des perfectionnements depuis qu'elle a été publiée.

Le milieu que nous employons est de la gélose à 10 p. 1000, préparée avec
la macéralion habituelle de viande (500 grammes pour 1000 d'eau) ; on y ajoute
5 grammes de sel marin, 10 grammes de peptone, 15 grammes de glucose et
1 gramme de nitrate de potasse (1};. Le mélange cuit à l’autoclave est alcali-
nisé et collé avec du blanc d'œuf, chauffé à nouveau, filtré sur papier Chardin,
distribué dans des tubes et stérilisé comme d'habitude, Il faut emplir les
tubes sur une hauteur d'environ 10 centimètres. Le milieu doit être très clair
et transparent.

Pour faire l'ensemencement, on fait fondre au bain-marie à 100 degrés un
nombre de tubes proportionné à la richesse en microbes du produit à examiner
(une dizaine de tubes environ). On les fait refroidir dans de l’eau à 38 degrés,
puis, se servant d’une pipette à longue effilure comme d'une aiguille de
platine, on prélève un peu de semence et on secoue la pipette successive-
ment dans les tubes, sans la recharger, pour faire des dilutions. Les tubes
sont plongés dans l'eau froide pour les solidifier et ensuite mis à l'étuve. Si
les dilutions ont été bien faites, les colonies se développent bien séparées
les unes des autres. Les microbes aérobies stricts poussent dans la zone
supérieure aérée, qui n'excède pas deux centimètres de hauteur; les anaé-
robies stricts ne poussent que dans la zone inférieure privée d'oxygène.
Les facultatifs évidemment poussent dans toute la hauteur du tube.

Pour faire la prise des colonies on se sert d'une pipette à longue eflilure,
brisée à l'extrémité, qu'on introduit à travers le milieu après flambage, jusqu'à
la colonie qu'on désire prélever, et on la fait monter dans la pipette par de très
légers mouvements de va-et-vient.

Pour cette pêche de la colonie, il est préférable de se servir du tube Guil-
lemot. Pour cela on prend un tube de caoutchouc souple de calibre propor-

(1) Le nitrate de potasse est ajouté au milieu pour empêcher la production
des bulles de gaz (hydrogène) qui fragmentent la gélose et empêchent l'iso-
lement. Voir Veillon et Mazé. De l'emploi des nitrates pour la culture el
l'isolement des microbes anaérobies. Comptes rendus de la Soc. de Biologie,
22 janvier 1910.

30% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tionné aux pipettes employées, long environ de 40 centimètres. On fixe une
de ses extrémités à la pipette et l'autre extrémité est reçue dans la bouche.
Il est alors facile, en aspirant légèrement, de cueillir la colonie qu'on touche
avec l'extrémité de la pipette effilée. Bien entendu, au cours de ce prélève-
ment, il faut avoir soin de faire cheminer l'effilure de la pipette entre les
diverses colonies et de ne toucher que celle qu'on veut prélever pour pouvoir
obtenir des cultures pures. La petite portion de colonie ainsi prélevée est
transplantée avec les soins habituels dans un autre tube préalablement fondu,
on chasse la colonie de la pipette en soufflant légèrement par le tube de
caoutchouc. On obtient ainsi des cultures pures de toutes les colonies qu'on
a choisies.

Pour ensemencer dans la gélatine, on suit le même procédé. On se sert
ensuite des cultures pures pour faire des ensemencements dans le bouillon
ou sur différents milieux par les procédés classiques.

Nous avons dit, ailleurs, les avantages de ce procédé d'isole-
ment ; il a continué à donner d'excellents résultats et c'est lui
que nous employons toujours. Il faut avoir soin de prélever
toutes les colonies qui paraissent différentes; on doit remettre
les tubes à l’étuve même après prélèvement, car certaines
espèces poussent lentement, ou bien des colonies qui, au début,
semblaient identiques se différencient peu à peu.

RÉSULTATS OBTENUS.

Par l'emploi de cette technique, nous avons obtenu des résul-
tats intéressants.

Dans un petit nombre de cas nous avons constaté que cer-
laines cavernes ne contenaient pas de microbes autres que le
bacille de Koch; ces cavernes avaient une paroi infiltrée de
tubercules et leur cavité contenait une matière caséeuse blanc
grisätre typique. Les examens microscopiques, les cultures en
milieu aérobie ou anaérobie ont montré qu'il n'y avait pas
d'infection secondaire. Cette évolution pure de la tuberculose,
qui se fait ordinairement ainsi dans les organes fermés comme
le foie, le rein, etc., est exceptionneile dans le poumon ; la com-
munication avec une bronche amène bientôt l'invasion de bac-
téries suraJoutées.

C'est en effet ce que nous avons constaté et nous pouvons
diviser les faits observés en deux classes.

Dans une première classe nous avons trouvé exclusivement
des microbes aérobies ou facultatifs, et voici les espèces micro-
biennes les plus fréquentes :

TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON 305

Streptocoque de la salive, Streptocoque pyogène,
Staphylocoque blanc, Staphylocoque doré,
Pseudo-méningocoque,

Bacille de Friedlander, Bacille pseudo-diphtérique,
Proteus (Une seule fois et très rare),

Sarcine (Une seule fois et très rare),

Coccus non identifié (Une seule fois et très rare).

Ces microbes ont été trouvés dans les crachats ou dans les
cavernes, mais jamais dans Le tissu pulmonaire ni dans le sang
de la circulation générale.

On voit que, dans cette série de faits, nous n'avons observé
rien qui ne soit connu, et nous n'insisterons pas. Répétons
seulement qu'à notre avis, ces infections ne semblent pas
imprimer une évolution spéciale à la maladie; l'aspect des
cavernes, des crachats, n'offre rien qui ne soit banal. Il est
bien entendu, cependant, que, dans certains cas (nous n'avons
pas eu l’occasion d'en observer), ils peuvent être la cause de
broncho-peumonie, de pleurésie purulente, mais ces cas sont
exceptionnels, et ces microbes peuvent pulluler longtemps
dans les cavernes sans causer ce genre de complication.

Nous arrivons enfin à une troisième classe de faits qui,
jusqu'à présent, n'ont pas fait l’objet de recherches systéma-
tiques. En appliquant notre technique pour la culture des
anaérobies, nous avons vu que l'infection par celte classe
d'organismes n'était pas rare et nous avons pu isoler les espèces
suivantes. Nous les énumérerons en suivant l'ordre de l'impor-
tance du rôle qu'ils jouent d'après leur abondance dans les
tissus malades, leur fréquence, leur valeur pathogène.

Bac. Ramosus, Bac. Fragilis (variété Veillon et Zuber),
Bac. Fragilis (variété Guillemot),
Micrococcus Fætidus,

Streptococcobacille de Veillon et Morax ou Bac. Ramosoïdes,

Staphylococcus Parvulus,

Bac. Funduliformis, Bac. Perfringens, Bac. Nebulosus,
Bac. Furcosus,

Streptococcus parvulus,

Spirillum crassum,

Vibrio tenuis.

Nous ne referons pas l’histoire de quelques-uns de ces

20

306 ANNALES 2DEMMINSTITUT PASTEUR

microbes, qui ont été décrits dans un lravail antérieur (f et qui
ont été retrouvés par de nombreux auteurs dans des maladies
diverses. Nous dirons cependant que le Streptococcobacille (2)
(Veillon et Morax), que nous retrouvons jet, est vraisemblable-
ment identique au Bac. Ramosoïdes de Runeberg (3) qui a eu le
erand mérile de l’étudier plus complètement et surtout d'en
montrer la polymorphie. Le Streptococcus parvulus est un
petitcoccus très fin, légèrement ovoïde, lancéolé, en diplocoque,
formant de petites chainettes souvent accolées les unes contre
les autres, en amas. [l donne dans la gélose des colonies gra-
nuleuses à bords nets et lisses. Rencontré plusieurs fois par
l'un de nous, par Guillemot, il est vraisemblablement iden-
lique au très fin streptocoque trouvé par Lewkowiez dans la
bouche des nourrissons, par Lippmann dans des infections
biliaires, par Jeannin dans des infections puerpérales.

Nous parlerons plus longuement des deux espèces suivantes,
qui n'ont pas encore été décrites :

Spirillum crassum. — Cel organisme, dans le pus ou Îles
tissus malades, se présente sous l'aspect d'un fuseau très effilé,
le plus souvent incurvé, quelquefois en forme de croissant.
Quand les éléments sont unis deux par deux, leurs courbures
sont en sens inverses el forment ainsi un S italique allongé.
Examiné à l'état frais, il est mobile par des mouvements de
translation et de rotation. En culture, on voit des formes
analogues, mais il tend à s’allonger, et le filament apparait
comme un spirille à spires peu serrées et toujours courtes.
Les éléments provenant des cultures sont extrèmement
mobiles: ils se déplacent avec une grande rapidité, souvent
par un mouvement de va-et-vient en avant el en arrière; cer-
lains éléments, qui sont immobiles, se détendent brusquement
comme un ressort el se mettent rapidement en marche, pour

(1) VEILLONX, Sur un microcoque strictement anaérobie trouvé dans les
suppurations fétides, Comptes rendus de la Soc. de Bisilogie, AS93. VEILLON el
Zu8er, Sur quelques microbes strictement anaérobies et leur rôle dans la
pathologie. Arch. de Méd. expérim., juillet 1898.

2) VEI.LON et Morax, Péricystite gangréneuse. Annales d'Oculistique, 1900.

(3) BirGer RUNESERG, Sludien über die bei peritonüalen Infeklionen appendi-
cularen Ursprungs vorkoimmenden sauerstoffloleranten sowie obligal anaeroben
Baklerienformen nil besonderer Berücksichtiqung ihrer Bedeutung für die
Pathogenese der artiger Perilonitiden. Berlin, 190$.

TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON 307

s'arrèler bientôt non moins brusquement. Ce spirille est
pourvu de cils très longs et (rès fins qui s'implantent aux
extrémités el aussi le long du corps.

Il se colore par le violet de gentiane, et surlout par la fuchsine
de Ziehl ou le Giemsa. J1 ne se colore pas par la méthode de

diram. Les colonies dans Îa célose ont des caractères assez

Fic. 1. — Spirillum crassum. Cullure en gélose sucrée de 4$S heures.

Formes jeunes et courtes, pour montrer les cils. — Grossissement : 1800 d,

spéciaux. Au bout de quarante-huit heures de séjour à l’éluve,
la colonie forme un point à peine visible à l'œil nu, mais qui
apparait au InIcroscope comme une masse sphérique, jaunâtre,
très granuleuse. En suivant le développement au microscope,
la masse devient jaunätre, mais plus foncée: les bords lisses
sont ondulés et bientôt s’estompent. La colonie, à Fœil nu.
prend alors l'apparence d'une masse blanche, très finement
nuageuse; ce nuage est plus où moins dense, cotonneux d’as-
pect, selon la consistance du milieu (richesse en gélose). Les
cultures en bouillon sont peu abondantes: il se forme un lécer

308 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

trouble et un léger précipité au fond du liquide qui s’éclaircit.
Il ne pousse qu’à la température de l’étuve. Il est peu résistant
et il faut le réensemencer lous les quatre à cinq jours.

Il ne donne pas de gaz, mais les cultures sont nettement
fétides.

Il est peu pathogène pour le lapin, mais donne des abcès
gangreneux au cobaye sous la peau duquel on l’a inoculé, el
qui succombe quelquefois.

Ce spirille, que nous avons trouvé souvent comme infection
secondaire dans la tuberculose ulcéreuse, avait déjà été ren-
contré par l’un de nous dans le pus d'une pleurésie putride et
dans la bouche. Dans l’angine de Vincent, ce qui est appelé
bacille fusiforme serait constitué par deux espèces différentes :
un bacille fusiforme, immobile, anaérobie, et ce spirille, dont
les éléments, dans les tissus pathologiques, sont en forme de
fuseaux légèrement incurvés. Nous l'avons, en effet, cultivé en
partant d'angines ulcéreuses, et c'est ce qui explique la diver-
sence des auteurs, dont les uns considèrent le bacille fusiforme
de l’angine de Vincent comme mobile et les autres comme
immobile.

Vibrio tenuis. — Cet organisme, dans le pus ou les tissus,
se présente sous la forme d’un bâtonnet très court et extrème-
ment fin; une des extrémités est plus effilée que l’autre, ce qui
lui donne l'aspect d’une virqule. Nous le répétons, il est extrè-
mement petit et passe très facilement inaperçu dans des prépa-
rations contenant d’autres microbes qui attirent l'attention.
Dans les cultures en milieu artificiel, les éléments sont un peu
plus longs; unis souvent deux à deux, ils prennent la forme
d'un S italique et, en réalité, on voit qu'il s’agit d’un spirille
très court à spire allongée. Sa mobilité est très vive, mais
difficile à observer ; on peut examiner pendant longtemps des
préparations contenant des amas abondants de ce microbe sans
qu'il semble se déplacer, mais si on concentre son attention
sur un point, notamment vers la périphérie d’un amas, on voit
un des éléments se détendre brusquement, comme un ressort,
el se déplacer avec une grande rapidité en roulant sur lui-
mème; quelquefois, après quelques secondes seulement, les
mouvements s’arrèlent d'un seul coup pour recommencer plus
tard. Dans cerlaines préparations. un grand nombre d'éléments

TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON 309

se déplacent en même temps et on a l’image classique d'un
essaim de moucherons. Toutes ces constatations sont difficiles
à cause de la petilesse extrème de ce microbe.

Il ne se colore pas par la méthode de Gram.

Il se colore assez bien par les autres méthodes, fuchsine de
Ziehl, liquide de Giemsa. Par la méthode de Lœæffler, on constate
qu'il porte à une de ses extrémités ou implanté sur le corps,
du côté de sa concavité, un seul cil, long, très fin.

F1G. 2. — Vibrio lenuis. Culture en gélose de # jours.
Éléments incurvés et en forme 'S italique. — Grossissement : 1800 d.

Il ne se développe qu'à la température de l’étuve. Les colo-
nies, dans l'épaisseur de la gélose, apparaissent au bout de
quarante-huit heures comme des points granuleux très fins;
«Iles s'entourent d'un halo qui estompe la petite masse centrale,
de sorte que, au microscope, la colonie est formée d'un noyau
sombre entouré d'un nuage extrèmement fin, qui va en s’amin-
cissant à tel point qu'on n'en peut distinguer la limite péri-
phérique. A cette période, la colonie, à l'œil nu, apparait
comme un nuage très fin, transparent, avec un point central

310 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plus opaque. Les colonies de ce vibrion ressemblent donc à
celles du Spirilluns crassuin décrit plus haut, mais elles sont
plus fines. plus {ransparentes et plus petites. Les colonies,
d'ailleurs, sont plus où moins opaques selon que le milieu est
plus ou moins chargé en gélose.

Les cultures répandent une odeur fétide, mais il n4 a pas
de produclion apparente de gaz.

En bouillon. la culture est très pauvre: il forme un léger
nuage, à peine visible, qui se précipite.

Il est peu résistant, il faut le réensemencer tous les dix Jours
environ.

Il parait (très peu pathogène pour les animaux.

Ce vibrion <e retrouve à l’état normal dans la bouche et,
comme le Sprrillan crassum, W pullule sur toutes les plaies de
la bouche, il envahit facilement les dents cariées, les abcès
dentaires : on le trouve dans les infections bronchiques.

Ces deux organismes envahissent facilement les organes
respiratoires des {uberculeux et, s'ils ne sont pas très patho-
gènes, ils contribuent pour une large part à donner l'odeur
fétide des exsudats.

On voit que ces espèces microbiennes appartiennent pour la
plupart à des espèces connues: d’autres avaient déjà été vues,
mais insuffisamment étudiées.

Nous les avons rencontrées dans les crachats, dans les
cavernes, dans le tissu infiltré et enfin dans des complications
plus éloignées, gangrènes pulmonaires, pleurésies. Elles nous
paraissent importantes parce qu'elles impriment à l'évolution
de la tuberculose des caractères spéciaux.

Les crachats muco-purulents, très abondants, sont plus
liquides, plus colorés, en jaune, en brun: la destruction des
leucocyles + parait beaucoup plus avancée et la richesse en
microbes est considérable, comme dans les crachats de gan-
erène pulmonaire, et enfin ils sont fétides et donnent à l'haleine
du malade une odeur spéciale. Le contenu des cavernes, au
lieu d'avoir le caractère des matières caséeuses, est moins
compact, plus coloré: il a souvent un aspect putrilagineux et
l'odeur fétide. Les parois des cavernes sont aussi modifiées :
elles sont beaucoup plus déchiquetées, de couleur brunâtre.

TUBERCULOSE ULCÉREUSE DE POUMON 311

Secout dans l'eau, une partie du tissu putréfié s'enlève facile-
ment etla paroi ressemble à une masse d'étoupe.

Par l'examen microscopique on constate aussi des lésions
intéressantes, La matière caséeuse est constituée par un putri-
lage où on ne trouve plus de cellules, ni même de débris de
noyaux cellulaires; en revanche on constate une véritable purée
de microbes de différentes formes. Le lissu des parois caver-
neuses, d'aspect gris sale, nous à montré, dans les coupes
colorées, trois zones : une zone sphacélée où ke tissu n'a plus
de texture et fourmille de microbes variés : une zone leuco-
cytaire où l’on voit des leucocytes dont les uns sont en voie de
destruction el parmi lesquels se retrouvent encore des microbes
de la zone sphacélée, mais moins nombreux: enfin, une zone
congestive, où l’on voit un étal pneumonique avec de la con-
gestion, de petites hémorragies, et cà et là des tubercules.
Dans un cas la destruction gangréneuse était très avancée et,
en certains points, on ne voyait que les lésions décrites plus
haut, sans lubercule.

On voit donc que les crachats, le contenu de la caverne et la
paroi de la caverne elle-même subissent une transformation
spéciale, en relation avec la pullulation de ces microbes anaé-
robies; cette transformalion peut se caractériser par un mot :
c'est le processus putride. |

Comme nous l'avons vu, ces microbes anaérobies pénètrent
profondément dans le tissu de la paroi: ils peuvent aussi péné-
trer Jusque dans le tissu pulmonaire sain, ou relativement
sain, et v causer de petits foyers de gangrène pulmonaire,
comme nous l'avons observé dans un cas. Lorsqu'une caverne
est proche de la plèvre, elle peut infecter cette cavité par con-
liguité, ou même s'ouvrir à son intérieur, et il se produit alors
une pleurésie putride dans le pus de laquelle nous retrouvons
ces mêmes espèces microbiennes, comme nous l'avons vu dans
une de nos observations.

Dans presque tous les cas, la flore est riche et complexe,
c'est-à-dire que les microbes sont (rès nombreux et appar-
hiennent à plusieurs espèces, non seulement anaérobies, mais
aussi aérobies ou facultatives: mais la présence des anaérobies
stricts exisle loujours quand on constate Le processus putride
dont nous avons parlé plus haut.

312 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

D'autre part, l'état général paraît netlement influencé par ce
senre d'infection secondaire, la fièvre hectique semble plus
marquée, les malades présentent un facies un peu spécial,
le teint est plombé, la peau est terreuse, il y a un peu de
subictère, de la diarrhée, une faiblesse plus grande, et la termi-
naison falale est plus rapide.

Pouvons-nous avoir une action sur ces infections secondaires ?
Il semble que la thérapeutique est bien désarmée, les médica-
ments internes ne nous ont donné aucun résultat; mais nous
avons certainement atténué l'évolution de ce processus
pulride en maintenant, dans la pièce où est le malade, un réei-
pient d'eau bouillante additionnée de teinture de benjoin :
l'expectoration était plus facile et un peu moins fétide.

CoxcLusions.

1° Dans certains cas, très rares, les cavernes tuberculeuses
ne contiennent que le bacille de Koch, sans infection secon-
daire.

2° Le plus souvent les cavernes tuberculeuses sont envahies
par une pullulation secondaire de microbes variés.

3° Les microbes aérobies ou facultatifs forment l'infection
secondaire banale, ils n’impriment pas à la maladie primitive
un caractère spécial.

4° Les microbes anaérobies stricts envahissent assez souvent
les cavernes tuberculeuses ; ils constituent une infection secon-
daire intéressante, parce qu'ils impriment à la maladie des
caractères spéciaux, fétidité des crachats, processus gangré-
neux des parois de la caverne, ou sont même la cause de com-
plications importantes : gangrène pulmonaire, pleurésie
putride, aggravation de l'état général.

5° Le processus putride et gangreneux, survenant chez les
tubereuleux à la période cavitaire, est toujours sous la dépen-
dance d’une pullulation de microbes anaérobies stricts.

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE

IV. — AGGLUTINATION DES PNEUMOCOQUES HUMAINS
ET ANIMAUX

par EL: COTONIL et Ca. TRUCHE

Le phénomène de l'agglutination — tel qu'on le réalise
quand on soumet une émulsion microbienne (en eau physiolo-
gique) à l'influence d’un sérum actif — résulte du jeu réci-

proque de deux facteurs : l'agglutinabilité du mucrobe et le
pouvoir agqlutinant du sérum. Aussi, pour comparer entre
eux divers échantillons d'une même espèce de germes, Îles
fait-on « défiler » devant un sérum agglutinant pris comme
type et, inversement, pour comparer entre eux divers échan-
tillons de sérums actifs sur cette espèce, les fait-on « défiler »
devant un germe agglutinable pris comme étalon. Cette
méthode symétrique rend d'incontestables services lorsque le
sérum est « très fort » ou le microbe « très agglutinable »,
c'est-à-dire quand ils possèdent une sphère d’aclion ou de
sensibilité fort étendue. Mais l'individualité parfois très accen-
tuée des germes et la spécificité corrélative des sérums peuvent
imposer une limite aux résultats et on se trouve alors amené
à des expériences d'une extrême complexité. S'il faut faire
« défiler » les microbes devant deux, trois, quatre... sérums et
inversement, les recherches deviennent bientôt impraticables
et, disons-le, sans intérêt aucun, puisqu'elles ne peuvent mener
qu'à une conclusion prévue à l'avance, celle de l’extrème varia-
lion des germes d'une même espèce. Tel est le cas pour les
pneumocoques et nos expériences nous ont montré le peu de
valeur de l’agelutination dans le diagnostic des échantillons
et dans celui des sérums. D’autres espèces microbiennes offrent
une moindre tendance à l'individualisation de leurs représen-
lants et, pour elles, l’agglutination constitue, dans des limites
quelquefois assez étendues, un critérium dont nous ne songeons
point à contester l’importance.

Notre «matériel biologique » se compose de : 31 échantillons de

31% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

pneumocoques (21 pn. humains, 6 pn. du cobaye, 3 pn. du lapin,
l pn. du cheval — déjà mentionnés dans nos publications
antérieures), — de 38 sérums d'individus atteints d'infections
pulmonaires 4 pneumocoques — de deux sérumns « immuns »
cheval et mouton) — et, naturellement, de nombreux sérums
normaux (humains, équius, ovins). Les sérums « immuns » on
été préparés en injectant, sous la peau d’un cheval et d'un
mouton, des quantités marquées de substance pneumococcique
vive. Nous avons choisi, à cet effet, un échantillon devenu
avirulent (dit échantillon A, dont il à été parlé dans notre
premier travail). Les cullures de vingt-quatre heures en
milieu T (voir ce travail) étaient centrifugées avec l'appareil
de Jouan el les culots émulsionnés à l’eau physiologique. On
obtenait environ 3 centigrammes de pneumocoques vivants par
10 cent. cubes de culture (4). Les détails de limmunisation
seront publiés en temps et lieu.

Pour éludier le phénomène de l'agglutination, nous nous
sommes arrêtés à la /echnique suivante :

Les cultures de vingt-quatre heures. en milieu T. étaient centrifugées: les
culots pesés exactement el émulsionnés en eau physiologique, de facon à
obtenir 4 milligr. 1/2 par cent. cube. On faisait agir, sur chaque cent. cube
d'émulsion, des quantités variables de chaque sérum : puis, on bouchait les
tubes et on les abandonnait vingl-quaire heures à 37 degrés. On comptait
comme positifs tous les cas où 1/6 de cent. cube de sérum (ou moins) agglo-
mérail complètement 1 cent. cube d'émulsion {c'est-à-dire 1 milligr. 4/2 de
germes). Ces conditions expérimentales n'ont pas élé. bien entendu, décré-
lées « priori: elles se sont montrées les meilleures à la suite de recherches
d’erientation. — Ajoutons que si l'on compare, au point de vue agglutination,
des cultures en milieu T el des émulsions en eau physiologique contenant
la même masse de germes, on obtient dans le premier cas des résultats
incontestablement moins bons. Ce qui prouve que les pneumocoques, au
cours du développement, donnent naissance à des substances qui gênent
leur agglomération par les sérums. De plus. ces substances varient quanti-
tativement d'un échantillon à l'autre, d'où une absence de parallélisme frap-
pante entre les séries d'° « expériences-milieu T » el les séries d' « expé-
riences-émulsions » correspondantes.

Nous allons rapporter, successivement, les résullats de nos
études sur lagglutinabilité des pneumocoques et le pouvon
agqlutinant des sérums (des malades.

(1) C'est par suite d'un lapsus que, dans notre premier travail (ces Annales,
juin 1911, p. 486), le chifire 4 centigrammes s’est trouvé substitué à la valeur
exacte : 12 cenligrammes.

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE 315
AGGLUTINABILITÉ DES PNEUMOCOQUES.

Pour apprécier le degré d'agglutinabilité de nos échantillons,
nous les avons soumis tout d’abord à l'action des sérums équins
et ovins normaux, puis à l’action du sérum équin « immun »
et du sérum ovin « immun ».

SÉRUMS ÉQUINS NORMAUX. — /S agqlutinent la majorité des
échantillons. Gette propriété est-elle inhérente au sérum du
cheval, ou provient-elle d'infections antérieures? Rien n 'auto-
rise à admettre la dernière hypothèse, car il semble que les
affections pneumococciques et, en particulier, la pneumonie
lobaire aiguë franche soient bien rares chez les équidés.

SÉRUM DU CHEVAL IMMUNISÉ. — Un seul, parmi nos échantillons
inagelutinables par le sérum normal, à été agglutiné par le
séruin « immun »: rien de singulier, puisqu'il S'agit de l’échan-
üillon A, utilisé pour l’immunisation (1. Parmi les pneumo-
coques déjà agglutinables par le sérum normal, les uns l’étaient
davantage par Le sérum « immun », les autres au même degré,
d'autres moins. Fait encore plus curieux : certains échantillons
se sont montrés agglulinables par le sérum normal et point
du tout par le sérum « immun ». La manière dont nos expé-
riences ont été conduites et l'identité des résultats, obtenus à
plusieurs mois d'intervalle, ne sauraient laisser aucun doute
sur l'existence de ce phénomène paradoxal.

Notons que des colonies séparées, venant d'un même malade, voire d'un
mème produit, peuvent se comporter d'une facon différente vis-à-vis des
sérums équins, normaux et « immun ». Exemples : 2 colonies du sang sont
également agglutinables par les sérums ». et &., une colonie du pus périrénal

est inagglutinable par ces sérums, — une colonie du sang est également
agglutinable par les sérums ». et 7., une colonie du pus méningé n'est
agglutinable que par le sérum »., — une colonie du sang est également

agglutinable par les sérums x, et :.. une autre n'est agglutinable que par
le sérum »#. seul. (Dans lous ces exemples, il s'agit de pneumocoques
humains.

SÉRUMS OVINS NORMAUX. — 14 n'agqlutinent qu'une faible
minorité des échantillons. (De mème pour les sérums humains
normaux, Soit dil par anticipation.)

|| En rigueur, l'échantillon A se montre légèrement sensible au sérum
normal (infiniment plus au « sérum A ».

316 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

SÉRUM DU MOUTON IMMUNISÉ. — 8 échantillons, inagglutinables
par le sérum normal, ont été agglutinés par le sérum
« immun » ; parmi eux, bien entendu, le pneumocoque A.
Aucun des échantillons agglutinables par le sérum normal ne
l'était par le sérum « immun »; nous garantissons, ici encore,
l'exactitude des expériences.

Donnons, à nouveau, des exemples montrant la façon différente dont
peuvent se comporter les colonies provenant d'un même malade, voire d'un
même produit (pneumocoques humains, — on a choisi les mémes cas que lout
à l'heure.) 2 colonies du sang ne sont agglutinables que par le sérum
« immun », une colonie du pus périrénal est inagglutinable par ce sérum,
— une colonie du pus méningé n’est agglutinable que par le sérum normal,
une colonie du sang est inagglutinable par les sérums 7. et i., — une
colonie du sang n'est agglutinable que par le sérum ?, une autre est
inagglutinable par les sérums n. et 1.

Il n'existe aucun rapport entre la façon dont un échantillon
se comporte vis-à-vis des sérums équins (normaux el
«immun ») et des sérums ovins (normaux et « immun) », pas
plus que vis-à-vis des sérums humains (normaux). Toutefois,
un nombre assez grand de pneumocoques demeurent inagglu-
tinables dans tous les cas.

Nous nous trouvons en présence de variétés individuelles
qui semblent échapper à toute règle et qui n’affectent de
relations ni avec l'origine des échantillons (homme, lapin,
cobaye, cheval), ni avec leur virulence.

Coxczusions. — Le diagnostic des pneumocoques par le crité-
rium de l’agglutinabilité (méthode des mélanges) semble bien
précaire. Il conviendra dorénavant de s'adresser au mouton (et
non au cheval) pour obtenir un sérum réactif et de pousser
encore plus loin l'immunisation. On évitera ainsi de verser dans
a préparation de sérum bi- ou multivalents, laquelle, au point
de vue diagnostique, nous paraît une véritable pétition de
principe.

POUVOIR AGGLUTINANT DES SÉRUMS (DES MALADES).
Nous avons fait agir les trente-huit sérums de nos malades,

recueillis à diverses périodes de l'infection (parfois avant et
après la crise, dans les pneumonies franches), d'une part sur

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE 317

les pneumocoques correspondants, d'autre part sur deux
échantillons humains inagglutinables par les sérums normaux
(équins, ovins et humains), l’un avirulent, l'autre hypervirulent
pour la souris.

ACTION SUR LES PNEUMOCOQUES CORRESPONDANTS. — Les résultats
ont été positifs dans un quart des cas environ ; il s'agissait,
constamment, d'échantillons inagglutinables par les sérums
humains normaux. Inversement — et nous retrouvons ici
encore le paradoxe déjà mentionné — certains échantillons,
agglutinables par les sérums normaux, ont résisté aux sérums
des malades dont ils provenaient.

ACTION SUR LES DEUX ÉCHANTILLONS INAGGLUTINABLES. — hésultats
nuls, sauf pour un sérum et un échantillon (le pneumocoque
hypervirulent).

Conczusions. — Le diagnostic des infections humaines à
pneumocoques par la recherche du pouvoir agglutinant des
sérums (méthode des mélanges) ne comporte guère de valeur
pratique, méme en s'adressant aux germes homologues. C'est
d’ailleurs ce qu'admet implicitement la majorité des auteurs.

A PROPOS
DE LA NEUTRALISATION DE LA TOXINE TÉTANIQUE
PAR LA SUBSTANCE CÉRÉBRALE

par A MARIE et M. TIFFENEAU

Si l'étude de la neutralisation des loxines microbiennes par
certains principes constituants de la substance cérébrale offre
un grand intérèt au point de vue de la pathologie nerveuse, on
sait aussi que les résultats déjà acquis sur cette question ont
servi à élayer une théorie de l’immunité, celle des chaînes
latérales.

A la suite de nos recherches sur la neutralisation de la loxine
iétanique, le professeur Ehrlich à liré argument des résultats
que nous avions oblenus pour affirmer une fois de plus que
lout concordait à faire admettre « l'identité d'action des anti-
toxines et des récepleurs cellulaires » (1).

La question est donc d'importance el c'est en raison de ce
double intérêt, présenté par lélude de ces phénomènes de
neutralisation, que nous avions entrepris (2) de déterminer la
nature des substances qui, dans les centres, neutralisent la
toxine lélanique. Nos conclusions avaient été les suivantes : pour
une faible portion, environ 3 p. 100, le lipoide complexe qu'esl
leprotagonintervient dans laneutralisation dela {oxine tétanique
par la matière cérébrale des mammifères, la majeure partie
(97 p. 100) de ce phénomène de neutralisalion étant due à une
substance dont nos recherches nous avaient permis d'affirmer
la nature albuminoïdique. Toutefois, nous n'étions jamais
parvenus à isoler cette substance albuminoïde, même en
partant de lencéphale du cobaye, l'espèce dont la matière
nerveuse à, vis-à-vis de la toxine tétanique, les propriétés les
plus fortement neutralisantes.

1) Münch. med. Woch., 1909, n° 50, p. 256.

2) Annales de l'Instilut Pasteur. L. XXIT, p. 289 el 6#t: el Comples rendus de
la Soc. de Biologie, 1. LXX, p. 651.

TOXINE TÉTANIQUE ET SUBSTANCE CÉRÉBRALE 319

Dans un (ravail paru récemment (1), MM. Guy Laroche el
Grigault, après avoir confirmé nos recherches, signalent un
mode d'extraction d'un albuminoïde du cerveau humain qui
jouirait du pourvoir de neutraliser jusqu'à cing doses mortelles
de toxine télanique.

Nous avons tenu à répéter leurs expériences sur des encé-
phales de la même espèce, en suivant exactement la technique
des auteurs, laquelle ne diffère guère de cell8 employée sans
succès par nous-mêmes dans nos travaux antérieurs.

La substance cérébrale est broyée et émulsionnée dans une
solution de sel marin à 10 p. 100: après vingt-quatre heures
de séjour à la glacière, on filtre el le liquide est précipité par
le sulfate d'ammoniaque. On centrifuge après un repos conve-
nable de la masse, et on additionne le dépôt, préalablement
dialysé, de doses variables de foxine tétanique.

Voici, dans le tableau suivant, le résumé de quelques-unes
«le nos expériences.

ACTION DE L'ENTRAIT DE CERVEAU HUMAIN SUR LA TOXINE TÉTANIQUE

1° Janvier 1912 (Mélanges de 2% heures). . . MER RON MAO IUT

Souris 1, reçoit sous la peau 3 cent. cubes du précipité
dialysé + 0.0025 cent. cubes toxine tét ANTENNES RE

Souris 2, recoit 3 cent. cubes du précipité -F 0,001 loxine.| = | =| +

Souris 3, recoit 3 cent. cubes d'eau PRYFIoSs d 0,001
toxine, soit 2 doses mortelles . . : Tu ; = = 1e

LD CEN TE OR SENIOR ne 2 || A GI ANREr 8

Souris 1, reçoit sous la peau 3 cent. cubes du
précipité obtenu avec un autre cerveau humain
+ 0,000 cent. cubes de toxine tétanique (1 d. m. 0 pl

Souris 2, reçoit 3 cent. cubes de précipité + 0,0025
cent. cubes de toxine Létanique (5 d. m.

Comme on le voit d’après ce tableau, il ressort de nos expé-

1) Annales de l'Institut Pasteur, L. XXV, p.892.

320 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

riences que nous n'avons jamais constaté de neutralisation de
la toxine télanique par lalbuminoïde extrait du cerveau de
l'homme, d'après le procédé de MM. Guy Laroche et Grigault :
non seulement cette substance ne pouvait neutraliser cinq
doses mortelles, mais elle s’est montrée absolument inactive
même sur une dose mortelle de toxine tétanique.

Nous continuons done à penser qu'on n'est pas encore
parvenu à isoler du cerveau la substance albuminoïde à laquelle
on accorde, à la suite demnes travaux, la plus grande part dans
les propriétés antitétaniques de la matière nerveuse.

ERRATA

MÉMOIRE DE M. ALEXANDRE LEBEDEFF

« Extraction de la zimase par simple macération ».

Page 12, ligne 1, lire : 0,5 cent., au lieu de : 5 cent.
Page 12/9; re: 05cent. aullieu de : 5 —
Page 24, 5e colonne, ligne 15, lire : 20 cent.
Page 24, 5° — ligne 16, lire : 2 —
Page 24,

2

5e — ligne 17, lire : 5 —
Page

)
5
4, 5° — ligne 34, lire : 2 —

Le Gérant : G. Massox.

PP
Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette.

26° ANNÉE MAI 1912 N°5

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

RECHERCHES
SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE

PAR DIVERS ACIDES EN PRÉSENCE DE LA SUCRASE DE LEVURE

par M. GABRIEL BERTRAND, M. et Mr ROSENBLATT.

Il y a une trentaine d'années, en 1881, Kjeldahl fit con-
naître l'influence remarquable exercée par les acides sur
l’action hydrolysante de la sucrase (1). Depuis, un nombre con-
sidérable d'observations ont été publiées, desquelles il résulte
que presque toutes les diastases sont extraordinairement sen-
sibles à la réaction du milieu : le plus souvent, comme dans le
cas de la sucrase, l'activité diastasique s'élève en présence
d'une très petite proportion d'acide, passe par un maximum,
puis décroît lorsque la proportion d'acide continue d'augmenter.
Il est des diastases, au contraire, pour lesquelles une réaction
alcaline est plus favorable.

Sauf en ce qui concerne ces conclusions générales, Îles
observations précitées sont loin d'être d’accord : non seule-
ment les doses d'acides ou d’alcalis considérées comme les plus
favorables varient d’un expérimentateur à un autre, même
lorsqu'il s’agit d’un seul réactif pour une seule diastase, mais
souvent encore, c'est tantôt la réaction acide, tantôt la réaction
alcaline qui est indiquée comme accélérant l’action de la
diastase en expérience.

C'est que, presque toujours, les conditions expérimentales

(1) Meddelelser fra Carlsberg Labor, t. 1, p. 537.

322 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

EE

ont été mal définies ou quelque notion importante négligée.
Peu d’observateurs, par exemple, ont tenu compte de la nature
de l'acidité, bien différente suivant qu'on l’apprécie avec
l'hélianthine, le tournesol ou la phtaléine comme indicateur;
la plupart ont négligé l'influence des sels et des autres impu-
retés accompagnant la diastase, etc.

Il n’y a rien d'étonnant, dans ces conditions, à ce que l'étude
comparative des réactifs d’un même groupe, par exemple, des
divers acides sur les réactions diastasiques, n’ait pas donné
toutes les indications que l'on était en droit d'espérer. Ainsi,
une des mieux conduites, celle de quelques acides sur la
sucrase, par Fernbach (1), laisse surtout l'impression que chaque
acide possède une influence spécifique, sans relation appa-
rente avec ses autres propriétés.

Les considérations émises par l’un de nous (2), sur la consti-
tution et le mode d’action des diastases, ont conduit à donner
une importance fondamentale aux substances qui interviennent
à titre de complémentaires actives dans les réactions diasta-
siques; à supposer, par conséquent, des relations qualitatives
et quantitatives entre l’influence exercée par ces substances et
l'ensemble de leurs propriétés générales. En ce qui concerne
l'influence des acides, deux d’entre nous, ainsi que Sürensen (3),
ont démontré expérimentalement, dans ces dernières années,
l'existence de telles relations. Nous venons de trouver, en
poursuivant nos recherches, que les doses de divers acides qui
produisent l'activation optimale de la sucrase présentent entre
elles des relations tout à fait comparables à celles qui existent
entre les doses limites d'acides paralysant la peroxydiastase (4).

Dans ces nouvelles recherches, nous avons pris, comme
source de sucrase, la levure haute de boulangerie. Cette levure,
convenablement traitée, donne, ainsi qu'on le verra plus loin,
une solution diastasique suffisamment active pour que la
quantité de substances organiques et minérales introduite avec

(1) Annales de l'Institut Pasteur, t. II, p. 538 (1889).

(2) Gar. BErtrrAND, Bull. Soc. chim., 3° série, t. XVII, p. 623 (1897); Rev. gén.
des Sc., t. XVI, p. 459 (1905); et Revuescient., t. XLVII, p. 609 (1909).

(3) Gas. BERTRAND, Bull. Soc. chim., 4° Série, t. I, p. 1120 (1907); — Gas.
BerrranD et M'e Rosexganp (aujourd'hui Mme RosexeLarr), id., t. V, p. 296 (1909);
— SÔRENSEN, Trav. du Labor. de Carlsberg, t. VIIT, p. 1 (1909).

(4) Loc. cit.

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 323

elle dans le liquide sucré puisse être considérée comme négli-
geable par rapport aux doses d’acides essayées. D'autre part,
pour que les proportions de saccharose hydrolysé restassent
sensiblement proportionnelles aux activités diastasiques, nous
avons eu le soin d'employer un grand excès de saccharose.

Nous décrirons la préparation et les caractères de la solution
de sucrase qui nous a servi, avant d'entrer dans le détail de nos
recherches.

Préparation de la sucrase. — 125 grammes de levure pressée ont été
désagrégés entre les doigts et délayés au mortier dans un demi-litre d'alcool
à 95 degrés. Après quelques minutes de contact (1), on a essoré à la trompe,
dans un entonnoir en porcelaine. La masse, fortement comprimée et bien
égouttée, a été triturée une seconde fois avec un demi-litre d'alcool, essorée
de nouveau, délayée dans 250 cent. cubes d'éther et reversée dans l’enton-
noir; enfin, après ce dernier essorage, elle a été mise à sécher dans le vide
sur l'acide sulfurique.

Nous avons obtenu ainsi 35 grammes d’une poudre faible-
ment jaunâtre, que nous avons tenu en réserve à l'abri de la
lumière, dans un flacon bien bouché.

Pour déterminer les substances solubles de cette poudre,
substances parmi lesquelles se trouve la sucrase, un gramme
a été trituré au mortier avec très peu d’eau (2), on a ajouté
ensuite assez de liquide pour faire 200 cent. cubes; on a
transvasé dans un flacon, ajouté 2 cent. cubes de toluène,
bouché et mis dans une étuve à + 35 degrés. Après vingt-
quatre heures, pendant lesquelles on a agité de temps en
temps, on a filtré sur papier Chardin, en rejetant les premières
portions, troublées par un peu de levure.

La solution, limpide et pour ainsi dire incolore, avait une
réaction alcaline à l'hélianthine et à l’alizarine sulfoconjuguée,
acide à la phtaléine du phénol. En opérant par comparaison
avec un même volume d’eau additionnée de colorant, nous
avons trouvé que 20 cent. cubes de la solution exigeaient :

22 c.c. de SO‘H?N/50 pour être saturés en présence d’hélianthine.
1,1 c.c du même acide pour être saturés en présence d'alizarine.
et 2,25 c.c. de NaOHN/50 pour être saturés en présence de phtaléine.

(1) I ne faut pas prolonger trop longtemps le contact avec l'alcool, sous
peine de diminuer l’activité de la préparation.

(2) L'eau qui nous a servi dans toutes nos expériences avait été redistillée
dans le vide avec un appareil en verre.

324 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

D'autre part, 100 cent. cubes de cette solution ont laissé par
évaporation, au bain-marie, à poids constant, 0 gr. 231 de
résidu sec, dans lequel on a dosé 0 gr. 0385 de cendres. L’alca-
linité de ces cendres, à l’hélianthine, a été déterminée par un
titrage indirect; elle correspondait à 1, 3 cent. cubes de
SO:EE N 7/10.

Ainsi, { gramme de poudre diastasifère donnait :

Substances solubles dans l’eau . . . . . : 0 gr. 462
Alcalinité de ces substances à Lhélanthine . 0 c.c. 44 de SO*H? normal.
Alcalinité de ces substances à l'alizarine . . . 0 c.c. 22 de SO‘“H? normal.
Acidité de ces substances à la phtaléine . . . 0 c.c. 44 de NaOH normal,
Gendres solubles)dans l'eau." . . . 5 de 0 ce 077
Alcalinité de ces cendres à l’hélianthine. . . 0 c.c. 26 de SO“H® normal.

Pour nos expériences sur l’action favorisante des acides sur
la sucrase, nous nous sommes servis d’une solution dix fois plus
étendue que la précédente. Nous la préparions de la même
manière, mais avec 50 milligrammes seulement de poudre
de levure pour 100 cent. cubes. Cette solution était employée
aussitôt filtrée, et nous la renouvellions à chaque série d’expé-
riences. Elle était assez active pour qu'un centimètre cube,
correspondant à 0 milligr. 5 de poudre ou 0 milligr. 23 de
substances solubles, ajouté à 15 grammes de saccharose dis-
sous dans 84 cent. cubes d’eau, suffit à hydrolyser en vingt-
quatre heures, sans aucune addition d'acide :

À la température de + 28 degrés . . 67 milligr. de saccharose;
À la température de -+ 40 degrés . . 111 — de saccharose;
A la température de + 55 degrés . . 38 — de saccharose,

c'est-à-dire un poids de sucre atteignant 480 fois celui des
substances solubles. Bien entendu, il avait été tenu compte “u
faible pouvoir réducteur du sucre mis en expérience.

Cette activité, mise en regard des proportions optimales
d'acides que nous allons étudier, rend tout à fait négligeables
les changements de réaction apportés dans les liquides en
expérience par la solution diastasique, et permet de rapporter
les effets obtenus par l'addition des acides directement aux
doses ajoutées.

Saccharose. — Pour obtenir des résultats comparables, nous
avons dù opérer toujours avec Le même sucre, aussi avons-nous
mis de côté, dès le début de nos recherches, une provision

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 325

importante de saccharose cristallisé, aussi pur que nous avons
pu en trouver dans le commerce (1).

Quinze grammes de ce saccharose, c'est-à-dire le poids
employé dans chaque expérience, donnait avec 85 cent. cubes
d’eau une solution qui exigeait, pour être saturée :

Eniprésencecdhélanthine #2, "0/0 . 10 10 C5 de SOfFEAN/100
et en présence d’alizarine sulfoconjuguée. . . 1 c.c. 2 de SO‘H® N/100

11 y avait dans ces 15 grammes de sucre 0 gr. 0033 de cendres,
formées surtout de sulfate de calcium dont l’alcalinité était
saturée par 1,7 cent. cube de SO:EH2 N/100, en présence
d'hélianthine.

L'alcalinité de ce sucre était assez faible, on le voit, pour que
nous n’ayons pas eu à en tenir compte dans nos recherches.

Acides. — À part les acides sulfoniques, que nous avons
préparés, la plupart des acides utilisés dans nos expériences
étaient des produits commerciaux dont nous avions simplement
contrôlé la pureté. Dans quelques cas, où la pureté nous avait
paru insuffisante, nous avons achevé nous-mêmes la purifi-
cation.

L’acide lactique qui. en solution, est, comme on sait, un
mélange en équilibre d'acide vrai et d'éther lactyllactique,
mélange d'autant plus riche en acide que la solution est plus
étendue, a été titré comme si, à la dilution à laquelle on
l'utilisait, il ne renfermait que de l’acide seul.

Le sulfate monopotassique à été préparé seulement à l'état
de dissolution, en ajoutant une molécule de sulfate neutre de
potassium à une molécule d'acide sulfurique dilué. Les citrate,
tartrate, malonate et succinate monopotassiques ou monoso-
diques ont été préparés aussi en solutions, en ajoutant un poids
convenable de carbonate alcalin, préalablement titré, à la solu-
tion de l'acide et concentrant pour chasser le gaz carbonique.

Exécution des expériences. — C’est par de nombreuses séries
d'expériences, effectuées avec des solutions acides dont les con-
centrations étaient de plus en plus voisines, que nous sommes
parvenus à déterminer, à 10 p. 100 près, pour chacun des

(1) C'était un sucre de premier jet, en petits cristaux, dont le lavage à la
centrifuge avait été poussé plus que de coutume.

326 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

acides ou des sels acides examinés, la dose la plus favorable à
l'action de la sucrase.

L'exécution d'une série d'expériences demandait trois jours. Le premier
jour, on mettait en préparation, comme il a été décrit plus haut, une solu-
tion de sucrase avec 50 milligrammes de levure tuée pour 100 cent. cubes
d’eau et 1 cent. cube de toluène ; on plaçait le mélange à l’étuve pour être
filtré et utilisé le lendemain matin. On préparait, d'autre part, un nombre
convenable de solutions acides, titrées de manière à renfermer dans 84 cent.
cubes la dose d'acide qui devait former avec 85 cent. cubes la dilution à faire
agir sur la sucrase. Enfin, on prélevait sur la provision de sucre en réserve
un poids correspondant au nombre de matras ; on pulvérisait ce sucre et on
le répartissait dans les matras, par portions de 15 grammes. Une certaine
quantité d'eau pure, les solutions acides et les matras étaient alors placés
dans le thermostat, à +280.

Le lendemain matin, après avoir filtré la solution diastasique, on com-
mençait le remplissage des matras. Dans le premier de ceux-ci, on ajoutait
seulement 85 cent. cubes d’eau. Ce matras servait à mesurer l’action réduc-
trice du sucre sur le réactif cupro-alcalin. Nous avons répété cette mesure à
chaque série d'expériences pour nous prémunir contre les petites irrégula-
rités de composition que présentent les différentes parties d’une masse de
sucre cristallisé lorsqu'elle est tant soit peu importante : la nôtre pesait
25 kilogrammes.

Le second matras était additionné de 84 cent. cubes d’eau et de 1 cent.
cube de solution diastasique. Il permettait de déterminer l’activité de la
diastase seule.

Enfin, les autres matras étaient divisés par paires, chaque paire recevant
84 cent. cubes de l’une des solutions acides et, soit (matras impair) 1 cent.
cube de solution diastasique, soit (matras pair) 1 cent. cube d’eau ou de
solution diastasique préalablement inactivée par un chauffage de cinq
minutes au bain-marie bouïllant (1).

Les matras étaient préparés avec un intervalle de 25 minutes entre chaque
paire ; on les additionnait de 2 cent. cubes de toluène, puis, après les avoir
bouchés et bien agités, on les plaçait dans le thermostat à + 280.

Le dosage du pouvoir réducteur avait lieu après vingt-quatre heures
d'action. On le pratiquait, suivant la méthode décrite par l’un de nous (2),
en opérant sur une partie aliquote du liquide, en général 10 cent. cubes, et
l’on rapportait les résultats, calculés en saccharose, à la Lotalité du liquide,

en attribuant à celui-ci la densité 1,06. L'exactitude du dosage atteignait au
moins À p. 100.

Nous nous sommes aperçus, au cours de nos recherches, que
l’activité diastasique de la poudre de levure, ou, plus exacte-
ment des substances solubles qu'on en retire, n’était pas cons-
tante, mais diminuait peu à peu avec la durée de conservation.

Heureusement pour la rigueur des résultats définitifs, des

(1) Nous n'avons pas trouvé que la solution diastasique inactivée se com-
portât autrement que l’eau pure.

(2) Gas. BEerrranD, Bull. Soc. chim., 3e série, t. XXXV, p. 1285 (1906).

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 327

expériences particulières nous ont convaincus en même temps
que la dose optimale d'acide était, dans une large mesure,
indépendante de l’activité diastasique. Nous avons obtenu, par
exemple, avec l'acide monochloracétique et des quantités de
sucrase variant de 1 à 4,les poids suivant de saccharose hydro-
lysé, en vingt-quatre heures et à +28:

CONCENTRATION PROPORTIONS DE SUCRASE
e EE TS UN ee
l'acide. 1 cent. cube. 2 cent, cubes. 3 cent. cubes. 4 cent. cubes.
NO 0 DE US 68 122 221 335
n/ 1800 "2 HA 135 225 342
MA UDOMENSEE 81 151 244% 349
m/2200 000. 75 148 221 38
HN//20 0 0 RE 75 143 218 339

On voit par ces chiffres la concentration optimale d'acide est
restée voisine de m/2.000.

Néanmoins, pour que nos expériences restassent aussi com-
parables que possible, nous avons renouvelé jusqu'à cinq fois
la préparation de la poudre de levure durant l’année qui à été
nécessaire à nos recherches. A en juger par le dosage des
matières solubles, répété sur deux de ces nouvelles prépara-
tions, la composition de la poudre de levure est restée la
même à environ 2 p. 100 près (trouvé : matières solubles, 45,8
et 44,0 p. 100). Quant à l'activité relative de la solution de
sucrase, elle n’a guère varié que dans le rapport de un à un
et demi.

Résultats expérimentaux. — Etant données la sensibilité et la
précision de la technique dont nous nous sommes servis, nous
avons toujours pu déterminer nettement la quantité optimale
d'acide à 10 p. 100 près ; autrement dit, la courbe représen-
tant les résultats d'expériences a toujours présenté une inflexion
accusée pour des teneurs acides différant, en plus ou en moins,
de 10 p. 100 de la concentration donnée comme la plus favo-
rable à l’action de la sucrase. Lorsqu'on fait intervenir, pour le
dosage du sucre hydrolysé, la méthode polarimétrique avec,
presque fatalement, une proportion trop grande de sucrase ou
trop petite de saccharose, on obtient, au contraire, des courbes
à plateau plus ou moins étendu, surtout avec les acides faibles,
et le degré d’approximation diminue d'autant.

328 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ne pouvant donner en détail les résultats de nos expériences
qui ont exigé près d’un millier de dosages de sucre, nous les
résumerons en un tableau.

ne CONCENTRATION ACTIVITÉ
NOMS DES ACIDES ! s A = | aies
moléculaires. optimales. (GI 400) (HCI 100).
Monobasiques :
Benzène sulfonique. . . . . 158 » m/13.000 465 » 104,4
p-Toluène sulfonique. . . . 172 » m/12.000 | 430 » »
p-Xylène sulfonique . . . . 186 » m/12.000 430 » k
Hrichloracétique en 163,5 m/12.000 430 » 15,4
Naphtalène sulfonique . . . 208 » m/10.000 600 »
Dichloracétique rer 129 » my, 6.000 | 215 » DEA
INitniIque ER EPE SR ET 63 » m/ 3.500 125 » 100 »
Chlorhydrique-."… NE 36,5 m/ 2.800 100 » 100 »
Monochloracétique . . . . . 94,5 |m/ 2.000 mes 4,84
HOLMIQUE RCE EE 46 » m/ 400 14,3 1/53
ACÉTIQUEL EE ENTREE 60 » m/ 300 10,7 0,40
SODUVTIQUEN EEE TE 88 » m/ 16 0,57 0,33
Lachquen Enter 90 » m/ 15 0,53 4,07
Butyrique normal. . . . . . 88 » m / 12 0,43 »
PIODIONIQUE- FE 14 » m / 10 0,36 »
BenzOoique MEME 122 » Inactif à saturation m/50.
Bibasiques :
SUR ENEERPIE NES 98 » m/ 3.600 128,5 107,2
OXATIQUE NAME PEN 90 » m/ 500 17,9 37,14
dETATINQUEET A REA 150 » m2 9,82 »
ÉMartriquet etre te 150 » m2 15 9,82 »
Malonique- trie Teen 104 » m / 90 3,21 6.16
MAlqueE ER ER 134 » m / 55 1595 2,54
SUCCIDIQUE CENTER Re 118 » m / 24 0,86 1749
Tribasiques :
PhoSphorique PP Er 98 » 10/0) 0 19,6 18,63
ATSÉMAUE Re CRE SE 142 » m/ 330 11,8 14,43
Citrique MENACE RENTE 192 » ne A0 11,07 SN
Borique ten RAM AE 62 » m / 4 0,14 »
Sels acides :
Sulfate monopotassique . . 136 » m/. 850 30,4 »
Oxalate monopotassique . . 138 » m/ 28 155 »
Citrate monopotassique . . 230 » m / 20 0,72 »
Tartrate monosodique . . . 172 » m / 14 0,50 »
Phosphate monopotassique. 136 » m 11 0,39 »
Malonate monosodique. . . 126 » m / 540 0,2 »
Succinate monosodique. . . 140 » Inactif à saturation 2 m.

La première colonne comprend les noms des composés acides
examinés, divisés en quatre séries : acides monobasiques, biba-
siques, tribasiques et sels acides, séries dans lesquelles les
termes se succèdent d’après leur activité décroissante. C’est

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 329

seulement, en effet, comme dans le cas de la peroxydiastase (1),
après cette subdivision préalable qu'il est possible de faire
ressortir une relation évidente entre l'influence des acides sur
la sucrase et leurs propriétés générales.

Les autres colonnes indiquent successivement les poids
moléculaires des composés acides, supposés exempts d'eau de
cristallisation ou d'hydratation ; les concentrations optimales,
en molécules-grammes par litre, d’après Les courbes que nous
avons dessinées dans chaque cas; les concentrations optimales
rapportées à celle de l’acide chlorhydrique, faite égale à 100;
enfin, pour servir de termes de comparaison, les activités
catalytiques des mêmes acides vis-à-vis du saccharose, quand
elles ont été déterminées d’après les expériences d'Ostwald(2).

Une constatation importante ressort immédiatement de
l'examen comparatif des deux dernières colonnes de ce tableau :
c'est que, dans chaque série d'acides, l'ordre décroissant est le
même, qu'il s'agisse de la concentration optimale vis-à-vis de
la sucrase ou de l’activité catalytique vis-à-vis du saccharose.
Sur les dix-huit acides qui ont été étudiés à la fois par Ostwald
et par nous, il n'y en à que trois, qui fassent exception : les
acides trichloracétique, dichloracétique et lactique. En négli-
geant ces exceptions, on pourrait donc dire, d’une manière
générale, que chaque acide d’une série conserve dans le phé-
nomène diastasique [a même place, par rapport aux autres,
que lorsqu'il agit seul sur la substance hydrolysable.

Ceite relation, est d'accord avec la théorie des actions dias-
lasiques émise par l’un de nous (3), théorie d’après laquelle
l’acide — sous la forme qu'il affecte dans la solution diluée —
est le véritable agent actif de la catalyse ; la substance colloï-
dale, à laquelle on attache trop étroitement d'habitude l’idée
de diastase, n'étant qu'une complémentaire activante.

Si, au lieu de comparer seulement l’ordre de classement des
acides, on examine la grandeur relative de leur activité, on
trouve encore, comme dans le cas de la péroxydiaslase, que la

(1) Loc. cit.

(2) Journ. f. prakt. chem., 2 série, L. XXIX, p. 385 (1884). Les résultats
d'Ostwald sont rapportés aux solutions normales ; nous les avons calculés en
solutions moléculaires pour faciliter la comparaison.

(3) Loc. cit.

330 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

proportionnalité est différente en présence et en l'absence du
ferment. Tandis que, pour les acides monobasiques, par
exemple, l’activité varie, en présence de la sucrase, de 464,3
(acide benzènesulfonique) à 0,57 (acide isobutyrique), elle ne
varie plus, pour les mêmes acides, en l'absence de la diastase,
que de 104,4 à 0,33. On dirait que la substance diastasique
distend l'échelle d'activité des acides. Remarquons que cette
influence est moins grande sur les acides bibasiques et devient
inverse sur les acides tribasiques (1).

A la suite de recherches du plus grand intérêt sur le rôle de
la concentration ionique dans le dédoublement provoqué par
plusieurs diastases, Sürensen est arrivé à conclure que la con-
centration optimale en ions hydrogène dans l'hydrolyse du
saccharose par la sucrase, est, à très peu près, indépendante du
réactif acide utilisé (2). Dans les circonstances où il s’est placé,
cette concentration est restée comprise, pour les acides sulfuri-
que, phosphorique et citrique, entre 10-‘,*et 10,6. Si l’on tient
compte des rapports qualitatifs et quantitatifs qui rattachent

x

l’activité catalytique des acides sur le sucre à leur degré de
dissociation électrolytique, on voit que nos résultats sont, dans
leur allure générale, en accord avec ceux de Sürensen (3); il

(1) C'est mème pourquoi le classement de tous les réactifs acides que
nous avons étudiés en une seule série ne laisse presque pas apparaitre de
points communs avec le tableau d'Ostwald.

(2) En représentant en ions hydrogène les concentrations optimales
données par Fernbach pour les acides sulfurique, oxalique, tartrique, succi-
nique, lactique et acétique dans le cas de la sucrase d'Aspergillus niger,
Kaxirz (Archiv ges. physiol., t. C, p. 547, 1903) avait déjà entrevu cette rela-
tion. Il aurait pu, il est vrai, en entrevoir aussi bien une autre, car il avait
choisi dans les données numériques de Fernbach des valeurs tout à fait arbi-
traires, par exemple 0 gr. 1 d'acide tartrique ou d'acide lactique au lieu de 1
gramme el de 5 grammes.

Les recherches de H. Eurer et Bern af Uccras (Zeits. physiol. Chem.
Lt. LXV, p. 124, 1910), et celles de L. Micuagzis ct H. Davinson (Bioch. Zeils.,
t. XXXV, p. 386, 1911) ont, au contraire, apporté une confirmation à celles de
SÜRENSEN.

(3) A propos de leurs recherches sur la destruction de la sucrase de
levure par les alcalis et les acides, Hudson et Paine (Journ. Amer. chem.
Soc., t. XXXIT, p. 774,1910) ont fourni quelques résultats numériques d'après
lesquels l'hydrolyse diastasique du sucre, à la température de 30 degrés, pré-
senterait un optimum : avec les acides bromhydrique, chlorhydrique, sulfu-
rique et tartrique, à la concentration de 1/2000 normale; avec les acides
nitrique, phosphorique et oxalique, à la concentration de 1/1470 normale ;
avec l'acide acétique, de 1/1000 normale; avec l'acide borique, de 1/715 et
avec l'acide citrique de 1/666.

Ces résultats, malheureusement, ne sont pas assez précis pour que l'on
puisse en tirer avec certitude quelque reiation générale.

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 331

n'en est plus tout à faitde même si l’on considère les exceptions
que nous avons signalées et l'extraordinaire activité relative de
certains acides en présence de la sucrase.

Le déplacement des acides trichloracétique et dichloracétique
par rapport à l'acide chlorhydrique, quand on passe de la
catalyse simple à la catalyse diastasique, ne peut ètre dû à des
erreurs dans'nos expériences; il existe presque aussi net, d’ail-
leurs, dans le cas de la peroxydiastase.

Quant à l'extraordinaire activité des acides placés en tète du
tableau dans l’hydrolyse du saccharose par la sucrase, elle ne
saurait s'expliquer non plus par des erreurs expérimentales. Et
l'on ne peut guère l'expliquer davantage avec les notions
physico-chimiques courantes. Lorsque Ostwald à déterminé
l'activité catalytique des acides sur le sucre, il s'est servi de
solutions acides normales, dans lesquelles la dissociation
électrolytique n'était pas complète. Dans nos expériences, au
contraire, lorsqu'il s’agit des acides placés en tête du tableau,
la dilution est si’grande qu'il faut considérer la dissociation
électrolytique comme totale. Mais alors, les richesses en ions
hydrogène doivent être proportionnelles aux quantités d'acides
ajoutées, et l'on ne peut comprendre comment l’ion hydrogène
provenant de l’acide benzènesulfonique ou de l'acide trichlor-
acétique est environ 4 fois et demi plus actif que celui de l'acide
chlorhydrique.

En résumé, dans le cas de la peroxydiastase, de la sucrase et,
sans doute, de beaucoup d’autres ferments solubles, il semble
nécessaire d'admettre qu'en présence de la substance colloïdale
spécifique, de la complémentaire activante, l'activité des acides
ne dépend pas seulement des ions hydrogène qui proviennent
de leur dissociation électrolytique, mais encore, dans une large
proportion, de la nature des radicaux où anions auxquels cet
hydrogène est attaché dans la molécule acide.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES
SUR LE TYPHUS EXANTHÉMATIQUE

ENTREPRISES A L'INSTITUT PASTEUR DE TUNIS
PENDANT L'ANNÉE 1911

(TROISIÈME MÉMOIRE)

(Suite et fin.)

IV
ANIMAUX RÉFRACTAIRES

par CHARLES NICOLLE et E. CONSEIL.

En dehors des singes et du cobaye, les autres animaux
paraissent réfractaires à l’inoculation du virus exanthématique.
Nos expériences de 1909 et les essais négatifs nouveaux, dont

O ;
l'exposé suit, semblent le démontrer.

D'autre part, dans leur mémoire déjà cité et paru au cours de
la rédaction de cet article, Gaviño et Girard constatent la résis-
tance du chien, du lapin, du porc, de la vache et de l'âne.

) P 1 ?

IMMUNITÉ NATURELLE DE LA CHÈVRE, DU MOUTON, DU CHIEN
ET DELA. POULE.

Le 24 mars 1911, le sang du malade 62, hôpital de la Rabta, pavillon Emile
Roux, au 10° jour d’un typhus grave, a été inoculé à deux bonnets chinois,
l'un 65 neuf, l’autre 81 vacciné par une atteinte antérieure et à une chèvre, un
mouton, un chien, un cog. Les inoculations furent pratiquées dans la cavité
péritonéale et les températures prises pendant 40 jours.

Les résultats ont été les suivants :

Bonnet 65 (témoin neuf), inocuié avec 5 cent. cubes de sang. Incubation
8 jours, typhus grave de 11 jours, suivi d'une longue période d'hypothermie
(une semaine) (Courbe 24).

Bonnet 61 (témoin vacciné), inoculé d'une même dose de sang. Résultat
négatif.

Chèvre, inoculée de 17 cent. cubes de sang. Résultat négatif.

Mouton, inoculé de 21 cent. cubes de sang. Résultat négalif.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 333

Chien (jeune), inoculé de 10 cent. cubes. Résultat négatif.
Cog, inoculé de 4 cent. cubes. Résultat négatif.

Deux souris blanches et deux rats blancs, inoculés dans les mêmes condi-
tions, sont morts rapidement de phénomènes toxiques.

COURBE 24.

IMMUNITÉ NATURELLE DE L'ANE.

ExP. |. — Ane 1, inoculé, le 25 mars, dans la cavité péritonéale, avec 40 cent.
cubes de sang du malade 66, hôpital de la Rabta, pavillon Murchison, au
11e jour, d'un typhus grave. Pas de singe témoin. Résultat négatif.

La température, prise pendant 40 jours, oscille régulièrement entre 37 et
3705, sauf les 9° et 10° jours, où nous constatons une légère élévation : le
9° jour, matin, 38,5; soir, 38,9; le 102 jour : matin, 38,3; soir, 88.

Exp. II. — Ane 2, inoculé, le 21 avril, dans la cavité péritonéale avec 50 cent.
cubes de sang du malade 88, hôpital de la Rabta, pavillon Murchison, au
10e jour, d’un typhus grave. Témoin le bonnet chinois 80, qui a contracté un
typhus très grave de 13 jours de durée après 6 jours d'incubation (Voir plus
haut, Courbe 18.) Résultat négatif. La température a été prise pendant 40 jours.

Mis en éveil par la constatation que nous avions faite sur le cobaye 75 de
la virulence de son sang en l'absence de toute réaction thermique, nous
avons prélevé sur l'âne 2, au 9° jour après son inoculation, 7 cent. cubes de
sang que nous avons inoculé dans la cavité péritonéale d'un bonnet neuf,
le 81. Ce bonnet n’a présenté aucune réaction ; éprouvé, 21 jours plus tard,
par l'inoculation intrapéritonéale de 5 cent. cubes de sang citraté du
malade 120, il a contracté une infection grave de 12 jours de durée, après
12 jours d'incubation. (Voir plus haut, Courbe 12.)

IMMUNITÉ NATURELLE DU LAPIN.

Le 8 mai, deux lapins de 1.800 à 1.900 grammes sont inoculés dans la cavité
péritonéale avec 4 cent. 1/2 de sang du bonnet 38 au 4 jour d'un typhus
grave. Témoin, le cobaye 100 qui a été infecté. (Voir plus haut, Courbe 8.)
Résultat négatif. La température a été prise pendant 40 jours.

334 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le 25 mai, 17 jours après l'inoculation, nous avons prélevé chez l'un de ces
lapins par ponction cardiaque 6 cent. cubes de sang que nous avons inoculés
dans la cavité péritonéale d’un magot neuf; ce singe n'a pas élé infecté.

V
ESSAIS DE TRAITEMENT

par CHARLES NICOLLE et E. CONSEIL.
A. — SÉRUM DE CONVALESCENTS.

Nos expériences de l'an dernier prouvent l'existence, dans le
sérum des malades convalescents de typhus et des singes guéris,
de propriétés préventives spécifiques. Toutefois, ces propriétés
ne sont appréciables que lorsque le sérum à été recueilli dans
les premiers jours qui suivent la chute de la température; rapi-
dement ensuite, elles s'amoindrissent et disparaissent.

Antérieurement à nos recherches, plusieurs médecins, en
particulier Lewaschew, Legrain, Raynaud, avaient empirique-
ment tenté l'emploi du sérum de malades guéris pour le traite-
ment des exanthématiques. Les résultats obtenus par eux sem-
blaient favorables, quoique la durée de l'infection n’en parût
pas sensiblement abrégée.

Au cours de nos recherches de 1910, nous avions poursuivi
quelques essais analogues : sur nos singes infectés d’abord ;
puis, dans un cas, sur l’homme. Les effets furent assez encou-
rageants pour nous décider à entreprendre en 1911 des essais
plus étendus.

Les résultats n’ont pas répondu à notre attente. Nous nous
étions placés pourtant dans les conditions les meilleures, ne
faisant usage que du sérum de malades guéris depuis 5 à 8 jours
(6 le plus souvent), filtré et employé à doses répétées où mas-
sives. Dans aucun cas, la durée de l’infeclion n’a été manifes-
tement abrégée. Sous l’action du médicament, l’état général
semble bien dans certains cas s'améliorer, les symptômes ner-
veux, en particulier, paraissent perdre de leur gravité, mais le
bénéfice est faible, incertain et dans tous les cas nullement en
rapport avec les difficultés d'application de ce traitement :
nécessité de la présence auprès des malades de convalescents

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 339

guéris depuis peu de jours, importance et danger pour ceux-ci
de telles saignées, manipulations longues et délicates (filtra-
tion), etc.

On ne peut donc fonder aucun espoir sur ce : mode de traite-
ment; tout au plus conviendrait-il à des cas exceptionnels.
Pour notre part, nous déclarons y renoncer.

Voici, résumées, les observations de cinq malades; les
essais thérapeutiques tentés sur eux ont nécessité l'emploi
de 685 cent. cubes de sérum, dose fournie par 15 convalescents ;
soit, en moyenne, trois guéris pour un traité.

Trois mélanges de sérums ont été employés : Mélange I provenant des
malades 3, 4, 5, 41, 51, 54 ayant présenté des infections graves et guéris
depuis 5 et 6 jours. Mélange IT : malades 57, 58, 69, 60, 63, 64 (deux infections
graves,quatre légères), guéris depuis 6 et 7 jours. Mélange IT : malades 55,56,66,
guéris d'infections de moyenne gravité depuis 6 jours.

Malade 71 (Courbe 25). Indigène, 30 ans, hôpital de la Rabta, pavillon Emile
Roux, malade depuis 4 jours : fièvre, vertige, abattement, céphalée, éruption
discrète, constipation, langue saburrale. Pouls, 128 ; temp., 4004. Sérodiagnostic
de la fièvre Lyphoïde et des fièvres paratyphoïdes A et B négalifs, absence
d'hématozoaires (mêmes résultats de ces analyses pour les malades sui-
vants) :

PART | | sms

CourBE 25.

Le 31 mars, 5° jour, à 6 heures du soir, on lui injecte sous la peau 35 cent.
cubes du mélange de sérums 1; le lendemain matin, même dose. Ce traite-
ment parait avoir eu peu d'action sur l'évolution de la maladie : la fièvre
persiste, la prostration demeure semblable; on note seulement l'absence de
l'obnubilation habituelle du typhus ; le malade répond avec netteté aux ques-
tions qu'on lui pose.

336 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La défervescence s'est produite, de façon brusque, le 7 avril. Le malade
reste encore abattu quelques jours; le pouls, cependant, est meilleur que
chez la plupart des convalescents et la tension artérielle demeure assez forte,
malgré la complication de phénomènes d'intolérance gastrique.

En résumé : Traitement précoce; dose élevée de sérum (T0 cent. cubes en
2 fois) ; action nulle sur la fièvre et la durée de l'infection ; action douteuse sur
l'état général el le pouls.

Malade 82 (Courbe 26), indigène, quinze ans, entré à l'hôpital de la Rabta,
pavillon Murchison, au 3° jour de sa maladie. Malgré une température de
4003, il est peu abattu, cause, marche et ne se croit pas malade ; il dit souf-
frir seulement de la lête. Dès le lendemain, l'état s'aggrave : prostalion,
gémissements incessants, langue saburrale, quelques taches.

COURBE 26.

Ce même jour (4 avril), 4 jour de la maladie, on lui injecte 75 cent. cubes
du mélange de sérums II sous la peau et, les jours suivants, de ce même
sérum : le 5 avril, matin, 35 cent. cubes; soir, 35 cent. cubes; le 6 avril, 60; le
7 avril, 60. Malgré ces injections répétées, la durée de la maladie ne parait
pas avoir été abrégée; l'état général et le pouls sont cependant un peu meil-
leurs que dans les cas ordinaires de typhus.

La défervescence s’est produite le 12° jour. Pendant la convalescence, le
pouls se ralentit et la tension artérielle s'abaisse.

En résumé : Traitement précoce; doses très élevées el répélées de sérum
(265 cent. cubes en 5 fois); action nulle sur la fièvre; action douteuse sur
l'état général; la convalescence n'a pas été meilleure que chez les malades non
trailés.

Malade 92 (Courbe 27). Indigène, vingt ans, entré à la Rabta, pavillon Emile
Roux, le 11° jour de son typhus, après en avoir présenté antérieurement tous

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 331

les symptômes classiques. L'éruption est en voie de disparition, mais l’état
général demeure très mauvais. Des périodes de délire violent alternent avec
des périodes de prostration ; le pouls seul reste assez bien frappé à 100, Le
13e jour, coma complet.

Nous lui injectons, ce jour même, 120 cent. cubes du mélange IT. Le lende-
main, la prostration est moindre, la malade semble se réveiller. La défer-
vescence se produit au 15 jour; à ce moment, le pouls s’abaisse à 56 et la
tension artérielle devient très faible. La convalescence a été normale.

CORRE 21.

En résumé : Traitement tardif, dose de sérum unique, massive (120 cent.
cubes), amélioration rapide de phénomènes nerveux graves, pas d'autre action.

Malade 96 (Courbe 28). Indigène, vingt {ans, entré à l'hôpital de Ja Rabta,
pavillon Emile Roux, au 8° jour de sa maladie, avec les symptômes clas-
siques du typhus. Deux jours plus tard, on lui inocule, en une fois, sous la
peau, 110 cent. cubes du mélange de sérums IT. A ce moment, l’exanthème
est très marqué, la langue rôtie, la céphalée extrème, l’obnubilation com-
plète, il existe un tremblement fibrillaire des muscles; température, 4002;
pouls, 118.

A la suite de l'injection, la température s’abaisse légèrement, la céphalée
paraît s’amender, mais la maladie continue son évolution et la défervescence
ne survient que le 15e jour. Convalescence normale,

En résumé : Influence nulle d'une dose massive unique de sérum (110 cent.
cubes) dans un cas d'intensité moyenne.

Malade 101 (Courbe 29). Indigène, vingt-cinq ans, entré à l'hôpital de la
Rabta, pavillon Murchison, au 10° jour d’un typhus grave. Il présente alors
un exanthème intense, du délire, une obnubilation intellectuelle complète;
langue fuligineuse, engouement pulmonaire.

On lui injecte, sous la peau, le jour de l'entrée et le lendemain, 60 cent.

22

338 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cubes du mélange de sérums III. Ce traitement ne modifie en rien l'état
général: l'exanthème persiste; les symplômes nerveux s'accentuenl: le
regard devient fixe et, malgré une baisse momentanée de la température, le
malade tombe dans le coma. La défervescence se fait en Iysis du 14 au

/
aile Y

CourBE 29.

17e jour, le pouls demeurant petit et rapide: mais bientôt la fièvre remonte,
un abcès se produit au niveau de la piqûre, et, malgré son ouverture pré-
coce, le malade ne tarde pas à succomber.

L'autopsie ne montre qu'une congestion généralisée des viscères : les cap-
sules surrénales sont normales.

En résumé: Influence nulle d'une dose élevée de sérum (120 cent. cubes en

2 fois); mort dans la convalescence, du fail d'une complication (abcès).

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 339

B. — CuImMIOTHÉRAPIE.

L'ignorance où nous sommes encore de toule connaissance
certaine de l'agent pathogène du typhus devait nous engager à
essayer les nouvelles médications efficaces contre les proto-
zoaires, et à chercher, en même temps qu'une méthode théra-
peutique, un renseignement sur la nature de ce microbe.

Nous avons essayé successivement le Salvarsan d'Ehrlich,
dont l’action sur les spirilloses est si manifeste, et l'émétique,

employé avec quelque succès pour le traitement de certains
trypanosomiases.

I. Sacvarsax. — Nous devons le produit essayé à l'obli-
geance du professeur Ehrlich, auquel nous sommes heureux
d'adresser 1c1 nos remerciements. Les ampoules portaient la
marque Op. 129.

Quatre malades ont été traités; tous par injection intravei-
neuse; les deux premiers ontreçu le Salvarsan en solution alca-
line, les deux suivants en solution acide.

Malade 56 (Courbe 30). Hôpital de la Rabta, pavillon Émile Roux. Indigène
quarante ans, entré au 5° jour de son infection; il vient de la prison civile
où sévit alors une épidémie de typhus et présente le tableau classique des
formes graves de cette maladie : courbature générale, langue saburrale,
tremblements fibrillaires, exanthème typique, délire nocturne; température,
4006. Les symptômes nerveux s’accentuent le lendemain et la fièvre demeure
au-dessus de 40 degrés.

Le 7° jour au matin, nous lui injectons 50 centigrammes de salvarsan en
solution alcaline. L’agitation persiste après l'inoculation; la température
subit une baisse passagère ; le lendemain le pouls reste à 110. La maladie
continue son évolution; deux jours plus tard, le malade tombe dans un état
de prostration profonde qui dure jusqu'au 13° jour, c'est-à-dire exactement
jusqu'à la défervescence. Convalescence rapide.

En résumé : Résultat nul dans une forme grave trailée à la période d'élat.

Malade 51 Courbe 31). Hôpital de la Rabta, pavillon Émile Roux. Indigène,
vingt-cinq ans, venant de la prison civile. Entré au 4e jour de sa maladie, en
présente le tableau ordinaire ; l’'éruption est particulièrement marquée, les
symptômes nerveux sont peu accentués.

Le 6° jour, injection de 55 cenligrammes de salvarsan en solution alcaline.
Aucune modification des symptômes, l'éruption persiste, très intense; la
fièvre évolue jusqu’au 10e jour de la maladie, date à laquelle se produit la
défervescence. Convalescence normale.

En résumé : Effet nul dans une forme de gravilé moyenne, lrailée assez tôt.

Cour8E 30.

RE (RAT

RAIRARNIRZ 7772775
PAT SCTRRRERRRE
IR ANRRERERR

CocRBE 31.

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 341

Devant ces résultats négatifs, nous avions interrompu nos
essais, lorsque nous avons eu connaissance d'un travail de
G. Marañon (Action del arsenobenzol en los enfermedados no
sifiliticas. Brochure, Madrid, 1911). Trois observations de
typhus exanthématique y sont rapportées, dans lesquelles la
guérison serait survenue vingt-quatre heures après l’inocu-
lation de 60 centigrammes de salvarsan. Ces résultats brillants
contrastaient singulièrement avec les nôtres; c’est pourquoi
nous avons repris nos essais, en employant cette fois le médi-
cament en solution acide. L'effet en a été déplorable.

Malade 166 (Courbe 32). Hôpital de la Rabta, pavillon Émile Roux. Indigène,
trente ans, entré dans un étal de prostration grave qui le met dans l'impos-
sibilité de fournir alors aucun renseignement, Le tableau clinique est des
plus nets : éruption, langue rôtie, soubresauts tendineux, constipation, res-
piration stertoreuse ; temp., 40; pouls, 108.

MM). | ENNRRE
PPERNERE "RIRE

l'URL C2

CouRBE 32.

Le lendemain de l'entrée, au 14 jour de l'infection, nous lui injectons
soixante centigrammes de salvarsan, en solution acide. Après une chute pas-
sagère de la température, la maladie reprend son évolution et les symptômes
ne subissent aucune modification dans les deux jours qui suivent.

La défervescence se produit seulement au 18e jour de la maladie (trois
jours après l’inoculation . Le début de la convalescence s'accompagne d'une

342 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

asthénie très marquée, qui laisse le malade pendant plusieurs jours dans un
état assez critique.

En résumé : Action nulle dans un cas grave, traité à la période d'état.

Malade 94 (Courbe 33). Hôpital de la Rabta, pavillon Émile Roux, Indigène,
trente-cinq ans, entré au 4° jour de sa maladie, tableau symptomatique grave,
exanthème marqué. Après une période d'excitation violente, il tombe, le
9e jour, dans un état de prostration voisin du coma ; la température s'élève
à 4097, le pouls devient très rapide, à peine perceptible.

PAL -PPENEE

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CourBE 33.

Devant cette hyperthermie considérable et le mauvais état général, nous
nous décidons à tenter encore, malgré nos échecs précédents, une inocula-
tion de salvarsan. La dose injectée a été de soixante-cinq centigrammes, en
solution acide. Aucune modification de l’état général à la suite de ce traite-
ment, la température se maintient à 4001, le pouls devient imperceptible et
le malade meurt, le lendemain matin.

A l’autopsie, on constate une congestion très intense des reins avec ecchy-
moses par places ; les capsules surrénales sont également congestionnées
et il existe un œdème étendu autour de ces organes et des reins. La rate est
très hypertrophiée (paludisme ancien) et molle; le foie pâle et mou avec
quelques ecchymoses sous-capsulaires, le cœur flasque.

En résumé : action nulle dans une forme grave, mort, et, à l'autopsie, exis-
tence de lésions dont une part doit ètre mise sans doute sur le compte du
traitement.

Nos essais terminés, nous avons connu le travail de Czerno
Schwartz et Holpen (Roussky Vratch, 12 mars 1911) qui, sur
deux malades atteints de typhus, traités par le salvarsan,

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 343

eurent une mort à la suite de l’inoculation intraveineuse de
35 centigrammes du produit, en solution alcaline.

D'autre part, chez le singe infecté, Gaviño et Girard (/060
citato) n'ont tiré aucun bénéfice de l'emploi de ce médiea-
ment.

Le salvarsan se montre donc à la fois énefficace el dangereux
dans le traitement du typhus exanthématique.

Fe EMÉTIQUE.

Ce médicament a été essayé sur deux malades, sous forme
d'injections intraveineuses d’une solution de 1/100, suivant la
technique préconisée par L. Martin et H. Darré pour le traite-
ment de la maladie du sommeil (Bull. de la Soc. de pathologie
exotique, 11 novembre 1908).

Malade 9$ (Courbe 34, Hôpital de la Rabta, pavillon Murchison. Indigène,
quarante ans, typhus d'intensité moyenne.

PPRRCRRREZE

A | de

COURBE 34.

Au $° jour de l'infection, alors que le malade présente une tem pérature de
400% et un exanthème très marqué, on pratique sur lui une inoculation de
25 cent. cubes de la solution, correspondant à une dose de deux centigrammes
el demi d'émélique. La maladie continue son évolution et la défervescence se
produit, en lysis, aux 14° et 15e jours.

En résumé : résultat nul.

344 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Malade 104 (Courbe 35). Hôpital de la Rabta, pavillon Murchison. Indigène,
vingt-cinq ans, fièvre élevée, état général assez bon.

Au 8 jour de la maladie, injection de 40 cent. cubes de la solution et, le
lendemain, de 100 cent. cubes, soit au total quatorze centigrammes d'émélique.
La maladie continue à évoluer, la chute de la température se produit au
15e jour; convalescence normale.

En résumé : résultat nul.

PPRRCEREREREE

COURBE 35.

L'émétique est donc sans action sur le typhus exanthéma-
tique.

C. — OPOTHÉRAPIE.

Plusieurs auteurs, frappés de l’analogie que présentent cer-
tains symptômes du typhus exanthématique, dans ses formes
graves, avec ceux de l'insuffisance surrénale aiguë (rapidité du
pouls pendant la première période, puis abaissement de la
tension sanguine et asthénie) ont cherché, sans preuves cli-
niques ou anatomiques, à faire du typhus une maladie des
capsules surrénales ; d’autres, moins absolus, considèrent ces
organes comme le lieu d'élection du virus exanthématique
(Legrain, Afrique médicale, 1” janvier 1911; A. Henry,
Tunisie médicale, 15 avril 1911; Fournié, Thèse, Alger, 1911).

Sur six autopsies de typhiques pratiquées par nous, jamais 1!
n'a été noté de lésions des capsules surrénales, sauf dans un cas,

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 345

le seul où l’autopsie avait été faite tardivement. Nous sommes
portés à rapporter les lésions décrites par quelques auteurs
dans ces organes à des altérations cadavériques.

D'autre part, nous avons tenté sans succès le traitement par
l'adrénaline de douze malades atteints de typhus. Voici leurs
observations résumées avec quelques courbes, choisies parmi

les plus typiques.

Chez les onze premiers malades, l'adrénaline a été administrée par vote
buccale, aux doses de XV à XXX gouttes d'une solution à 1 p.100, matin et
soir ; chez le douzième, nous avons employé la voie sous-culanée.

Ces essais ne nous ont permis de constater aucune action manifeste du
produit sur les troubles circulatoires (état du pouls), ni sur l’évolution de la
convalescence.

Malade 147 (Courbe 36). Rabta, pavillon Jenner. Nègre 28 ans. Typhus
grave, Traité par l'adrénaline à partir du 6e jour de la maladie. Effet nul sur
l'infection. Pendani toute la durée de la convalescence, le pouls est demeuré
très lent, très dépressible et un état profond d'asthénie a été noté.

D PAM enr AS

Le DT
NTI

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COURBE 36.

Malade 179. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène 16 ans. Typhus grave.
L'adrénaline a été administrée à partir du 10e jour; effet nul, mort au 14 jour.
A l’autopsie, les capsules surrénales sont normales.

Malade 18. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène trente ans. Typhus grave

346 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

traité par l’adrénaline, à partir du 41° jour; action nulle; asthénie, faiblesse
et lenteur du pouls dans la convalescence.

Malade 121. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène vingt ans. Typhus grave
(forme nerveuse), pouls à 130. L'adrénaline a été administrée à partir du
10° jour; effet nul, défervescence en lysis du 16° au 17 jour, suivie d'une
chute considérable de la pression artérielle et du pouls.

Malade 139. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène trente ans. Typhus de
gravité moyenne, traité par l'adrénaline à partir du 13e jour. Effet nul; état
critique les premiers jours de la convalescence, asthénie, pouls lent;
dépressible.

Malade 86 (Courbe 37). Rabta, pavillon Murchison. Indigène trente-cinq ans.
Typhus léger; défervescence aux 10e et 11° jours. Ainsi que cela est habituel
dans le typhus, le pouls est devenu lent et la pression artérielle a baissé
pendant les premiers jours de la convalescence. L’adrénaline, administrée
dès le début de celle-ci, n'a pas amené de modification rapide du pouls;
celui-ci s'est relevé ultérieurement, ainsi que cela s’observe chez les malades
non traités.

Se Ra RRRAL ET R IEC

Courre 31.

Malade 88. Rabta, pavillon Murchison. Indigène trente-cinq ans. Typhus
grave. L'adrénaline a été administrée à partir du 10e jour. Effet nul, déferves-
cence au 15° jour. Abaissement et ralentissement du pouls dans la conva-
lescence.

Malade 93. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène vingt-cinq ans, typhus de
gravité moyenne, traité par l'adrénaline au 12° jour. Effet nul, défervescence

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 347

les 44e et 15° jours. Le pouls s’abaisse ensuite, mais la pression artérielle
demeure assez bonne pendant la convalescence.

Malade 142. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène vingt-cinq ans; typhus
de gravité moyenne, éruption discrète, prostration marquée. Au 13° jour.
alors que le pouls devient faible et rapide, on commence le traitement par
l'adrénaline; résultat nul, le pouls demeure à 110, jusqu’au moment de la
défervescence, survenue les 16° et 17e jours. A noter que, chez ce malade, on
n'a pas observé l'abaissement de la pression artérielle et le ralentissement
du pouls, ordinaires dans la convalescence.

Malade 143. Rabta, pavillon Emile Roux. Indigène trente ans; typhus
grave, pouls fréquent et faible. Au 11e jour, malgré la chute de la fièvre, le
pouls demeure filiforme et l’état général très mauvais (coma). On administre
alors l’adrénaline sans aucun résultat: la mort survient dès le lendemain.

A l’autopsie, on constate les lésions ordinaires de congestion viscérale; es
capsules surrénales sont grosses, mais fermes el paraissent à l'œil nu normales.

Malade 146. Rabta, pavillon Murchison. Indigène vingt-cinq ans; amené
dans un état très grave (coma, exanthème intense); aucun renseignement;
l'adrénaline, administrée dès l'entrée, n'amène aucune modification et la
mort se produit au 4° jour de l'entrée, au milieu d'une crise d’agitation.

A l'autopsie, mêmes constatations que chez ie malade précédent, capsules
surrénales normales.

Malade 122. Rabta, pavillon Murchison. Indigène vingt-cinq ans, entré au
12e jour d’untyphus d'intensité moyenne. On lui injecte aussitôt, sous la peau.
1 cent. cube de la solution d’adrénaline Clin: ce traitement est continué
pendant 8 jours. Action nulle sur l'évolution de la maladie ; défervescence au
15e jour. Le pouls ne descend pas au-dessous de 88 et la tension artérielle
demeure assez bonne pendant la durée de la convalescence.

L'adrénaline nous paraît d’un médiocre secours dans le trai-
tement du typhus exanthématique; ilconviendrait, en tout cas,
de l’employer par voie hypodermique.

D} — ARCÈS DE FIXATION.

Nous avons essayé, d'autre part, les abeès de fixation, selon
la méthode de Morsly (1) et noté, dans les nombreux cas ainsi
traités depuis deux ans, une mortalité plus faible et surtout
une moins grande fréquence des complications secondaires.
Cependant, pour juger définitivement de l'efficacité de ce traï-
tement, il nous paraît nécessaire de s'appuyer sur une très
longue statistique, que nous ne sommes pas encore en mesure
de fournir.

(1) Soc. de Pathologie exolique, octobre 1909.

348 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La méthode ne saurait être, dans tous les cas, qu'un pis
aller. L'abcès de fixation ne semble, en effet, pas agir sur
l'évolution et la durée de la fièvre.

Nous devons des remerciements à M. Blanc, Secrétaire
général du gouvernement tunisien, pour les facilités qu'il a
données à nos recherches en confiant à l’un de nous la mission
de diriger l'hôpital d'isolement de la Rabta.

Wal
CONCLUSIONS

par CHARLES NICOLLE.

Les expériences relatées dans ce troisième mémoire apportent
à la connaissance du typhus exanthématique un certain
nombre de données nouvelles :

I. — Le cobaye est sensible au virus. L'inoculation périto-
néale de 2 à #4 cent. cubes de sang d'homme ou de singe
malades suffit à l'infecter. Une dose plus forte est toxique,
souvent même mortelle, et les symptômes observés (para-
lysies, cachexie, mort rapide) ne diffèrent pas de ceux que
provoque l'inoculation d'une quantité égale de sang humain
normal.

L’incubation est variable : 7 à 16 jours. La maladie expéri-
mentale se résume en une élévation de la température, d’une
durée moyenne d'une semaine (4 à 11 jours); une perte légère
de poids peut se produire à la fin de la période fébrile. Sans le
secours du thermomètre, l'infection passerait inaperçue. Chez
les cobayes sacrifiés et chez ceux qui meurent exceptionnelle-
ment pendant la fièvre, on ne note aucune lésion spéciale des
organes.

Tous les cobayes inoculés avec une même dose du même
virus ne réagissent pas.

Les passages de cobaye à cobaye sont possibles; nous en
avons réalisé trois, Gavino et Girard onze.

Des passages alternatifs par cobayes et singes peuvent être

RECHERCHES EXPÉRIMENTALES SUR LE TYPHUS 349

réussis indéfiniment et servir ainsi à la conservation du virus
dans les laboratoires.

Le sang, chez le cobaye infecté, est virulent du début à la fin
de la période fébrile; il peut également l'être à une période
correspondante chez ceux des cobayes inoculés en même temps

que les malades et qui n’ont pas réagi.

IT. — Isolés par centrifugation et lavés, les globules blanes
se montrent doués de la mème virulence que la masse de sang
de laquelle ils ont été extraits; séparés dans des conditions
analogues, les globules rouges sont dépourvus de tout pouvoir
pathogène ou immunisant. Le plasma semble ne devoir sa
virulence relative qu'aux globules blancs ou débris leucocy-
taires, desquels il est impossible de le débarrasser entière-
ment.

Le sérum sanguin de coagulation provenant d'un singe
infecté el privé par une centrifugation prolongée de tout élé-
ment cellulaire s'est montré non virulent pour l'homme, en
inoculation intraveineuse.

Le liquide céphalorachidien, qui ne contient nul élément
figuré, est inactif.

Ces divers faits plaident en faveur de l'hypothèse déjà for-
mulée par nous du siège intraleucocytaire de l'agent inconnu
du typhus exanthématique.

IE. — Une inoculation de virus actif quelle qu’en soit l’ori-
gine (piqüres de poux dans nos expériences antérieures, sang
dans nos expériences de l’an passé et de cette année, plasma
virulent, etc.) communique aux animaux qu'il infecte une
immunité rapide et durable.

L'inoculation d’un virus insuffisamment actif (sang à doses
trop faibles ou chauffé, etc.) ou d’un produit lui-même aviru-
lent provenant d'un malade (globules rouges lavés, liquide
céphalo-rachidien) ne donne aucune immunité; qu'il y ait eu à
la suite de l’inoculation infection avortée, comme cela peut se
voir dans le premier cas, ou absence de tout symptôme, ainsi
que cela se passe toujours dans le second.

Deux singes infectés, traités par l'injection d’un sérum de
convalescents actif et un singe non vacciné contre une infec-

350 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tion expérimentale ultérieure par l'injection préventive d'un
sérum insuffisamment efficace, ont acquis et conservé à la
suite de leur maladie expérimentale une immunité solide. Un
singe, protégé efficacement contre la maladie expérimentale par
l’inoculation d'un sérum de convalescents suffisamment actif,
n'a pas acquis l’immunité.

La loi générale que nous formulions l’an passé conserve
toute sa valeur. Seule, une infection sévère confère à coup sûr
l’immunité contre le typhus exanthématique.

IV. — Le mouton, la chèvre, l’âne, le chien, le lapin, la
poule sont naturellement réfractaires à l’inoculation expéri-
mentale du virus.

V. — Le sérum de convalescents, recueilli dans les pre-
miers jours après la défervescence, c'est-à-dire à l’époque où
ses propriélés préventives sont le plus développées (Cf. nos
expériences de l’an passé) ne donne aucun résultat appréciable
pour le traitement de l’homme malade. Il n’agit ni sur la
fièvre, ni sur le pouls; la durée et l'évolution de l'infection ne
soni nullement modifiées; peut-être les symptômes nerveux et
l’état général en tirent-ils un léger avantage, mais ce résultat
est incertain et nullement en rapport avec les difficultés presque
insurmontables qu'offre l'application de ce traitement.

Le salvarsan est inactif et dangereux ; l’'émétique inactif.

L'adrénaline n'empêche pas la baisse de la pression arté-
rielle; elle se montre sans action sur la fièvre et la durée de
l'infection. 11 ne semble pas d'ailleurs que le virus exanthé:
matique affecte d’une facon spéciale les capsules surrénales.

Les abcès de fixation diminuent peut-être la fréquence des
complications secondaires.

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE (1)

par M. ROMANOVITCH

(Travail du laboratoire de M. Weinberg, à l'Institut Pasteur.)
(Avec la PI. V).

La littérature médicale est très riche en travaux sur la tri-
chinose : des savants des plus éminents se sont attachés à
l'étude de cette helminthiase; quelques-uns de leurs travaux
font époque et cependant, bien que le mémoire remarquable
d'Askanazy date de 1895, on peut encore aujourd’hui répéter
après cet auteur, qu'il reste encore beaucoup de points à élu-
cider, surtout parce que ces travaux n'ont pas suffisamment
porté sur le côté expérimental de la question.

Ainsi l'étude des points les plus importants : rôle des micro-
bes dans les différents états morbides observés chez les ani-
maux et les sujets trichinés, action toxique des larves de
Trichine sur l'organisme infesté, sort des larves dans l’épais-
seur même des organes parenchymateux où elles doivent
nécessairement être amenées par le courant sanguin, immunité
de quelques espèces animales à l'infection par la Trichine,
enfin, diagnostic précoce et traitementde la maladie, manquent
encore de bases expérimentales sérieuses.

C'est pour répondre à quelques-unes de ces questions que
nous avons exécuté, au cours de ces deux dernières années, un
grand nombre de recherches dont nous allons brièvement
exposer les résultats.

Nos expériences ont porté exclusivement sur le rat et le
cobaye.

(4) A. Raïzzer établit que le nom de ‘richinella doit remplacer celui de

Trichine antérieurement réservé à un genre d'insectes. La Trichine doit donc
s'appeler Trichinella spiralis (RarcLer. Quelques rectifications à la nomencla-
ture des parasites. Rec. de méd. vét., 1896, p. 161). Depuis, les parasitologistes
ont admis ce terme (BLancnarp. Traité de pathologie générale publié par Ch.
3oucHARD, L. II, p. 761). Par conséquent, nous devrions dire Trichinellose
comme le propose Stäubli; mais ce terme n’est pas encore employé assez
couramment pour que nous croyions devoir délaisser l’ancienne terminologie
dont nous nous sommes servis dans nos articles antérieurs.

352 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

PONTE DE LARVES DE TRICHINE ET LEUR DISTRIBUTION DANS
L'ORGANISME INFESTÉ.

Askanazy et Cerfontaine, simultanément (1891-1893), ont
fait une découverte fondamentale dans l'étude de la trichinose,
à savoir que les femelles de Trichine fécondées s’introdui-
saient, pour pondre, dans la muqueuse de leur hôte et notam-
ment dans les vaisseaux lymphatiques. Les larves ainsi pondues
dans l’intérieur même de ces vaisseaux sont ensuite entraînées
par le courant lymphatique. Cette découverte a permis d'expli-
quer pourquoi les larves n'ont jamais été trouvées libres dans
le tube digestif de l'animal infesté, sauf dans deux ou trois cas
où elles ont été rencontrées en nombre insignifiant.

L'absence de larves libres dans le tube digestif de l'hôte
n'empêchait cependant pas, pendant longtemps, les parasitolo-
oistes de prétendre que la femelle de Trichine fait sa ponte dans
le canal mème de l'intestin.

Actuellement, il est admis que les femelles de Trichines
s’enfoncent dans les villosités de l'intestin, s’introduisent entiè-
rement ou seulement par la partie antérieure de leurs corps
dans l’espace Iymphatique central des villosités mêmes ou bien
dans les vaisseaux Iymphatiques plus profonds de la muqueuse
et même dans la sous-muqueuse comme Askanazy l’a observé
une seule fois.

D'après Cerfontaine, la pénétration de Trichines dans la
sous-muqueuse serait un fait banal.

Pour notre part, nous pouvons affirmer, en nous appuyant
sur de nombreuses recherches personnelles, que la Trichine
ne dépasse jamais la muscularis mucosæ.

Les dessins 1 et 2 montrent les endroits où l’on retrouve le
plus souvent ces vers. Tantôt la Trichine (fig. 1) se loge dans le
cul-de-sac glandulaire qu'elle dilate et distend parfois d’une
facon considérable. On voit en a le cul-de-sac ainsi déformé
perdre la plupart de ses cellules épithéliales; Les cellules con-
servées sont atrophiées et devenues, pour la plupart, cubiques.

Très souvent on retrouve la Trichine dans l’intérieur du vais-
seau lymphatique central de la villosité, comme le montre la
figure 2. Le ver est représenté en a et a’. Ce dessin est caracté-

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 393

ristique. On s’y rend bien compte que le vaisseau Iympbhatique
dilaté au niveau où loge la Trichine, reprend plus haut son
calibre normal.

On comprend donc que les larves pondues par la Trichine
soient facilement emportées par le courant lymphatique de la
villosité vers les organes profonds. -

Les cellules endothéliales du vaisseau lymphatique qui loge

OA NOT À 3

Fic. 1. — Coupe d'intestin d'un rat trichiné.

a) Cul-de-sac très dilaté d'une glande de Lieberkühn montrant dans son
intérieur de nombreuses sections d'une Trichine adulte; b,c) glandes de
Lieberkübhn; 4) capillaire Iymphatique du chorion rempli de leucocytes; f
sous-muqueuse infiltrée par des leucocytes.

le parasite souffrent de la présence de la Trichine. Elles sont
souvent hypertrophiées (fig. 2, /')}. Elles montreraient mème
parfois d'après Askanazy, des figures de karyokinèse, ce que
nous n'avons pas trouvé dans nos préparations.

Par contre, nous avons trouvé très souvent et en grand
nombre des cellules épithéliales en karyckynèse, et cela aussi
bien au voisinage des vaisseaux lymphatiques parasités qu'à une
certaine distance de ces derniers.

23

354 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

V. ROUSSEL.

F1G. 2. — Coupe d'inteslin grêle d'un

cobaye trichiné.

Légende de la figure 2.

Cette préparation montre très
nettement la pénétration d’une fe-
melle de Trichine (a, a!) dans le
vaisseau lymphatique très dilaté(c.)
Dans la partie profonde, ce vaisseau
reprend son calibre normal (c!). Une
glande de Lieberkühn, au voisinage
du vaisseau parasité, montre un
grand nombre de cellules en kario-
kynèse (d).

La figure 2 montre en d un
grand nombre de ces cellules
en mitose.

Askanazy, qui a aussi cons-
taté quelquefois, mais plutôt
rarement, la karyokinèse des
cellules des glandes de Liber-
kühn, considère ce phéno-
mène comme normal.

Pour nous, cette multipli-
cation des cellules épithéliales
est certainement en rapport
avec la destruction des cellu-
les glandulaires et de celles
de revêtement, qui est si in-
tense dans la trichinose. Notre
facon de voir est corroborée
par les observations de Zie-
gler (1), qui a constaté quela
division du noyau et de la
cellule ne s'effectue pas seu-
lement au niveau de la perte
de substance, mais aussi à
une certaine distance. Dans
l'intestin, la perte des cellules
épithéliales superficielles est
compensée par la multipli-

(1) Zreccer, Lerbuch der allgemeine

Palhologie und der pathologische Ana-
lomie. Iena, 1901, volume I, p. 302.

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 359

cation des cellules se trouvant au fond des glandes de Lie-
berkühn.

Nous n'avons pas à décrire ici les lésions anatomo-patholo-
giques qu'on trouve dans l'intestin, au niveau de l'infection par
la Trichine; disons seulement que la nécrose et la destruction
en masse des cellules épithéliales de revêtement, qui provoque
la multiplication de l’épithélium profond, va presque toujours
de pair avec l’abrasion de la partie superficielle d'un grand
nombre de glandes de Lieberkühn, avec l'hyperémie de toutes
les parois ainsi qu'une infiltration inflammatoire qui ne dépasse
généralement pas la sous-muqueuse.

Les larves pondues dans l'intérieur des lymphatiques
suivent la voie de ces vaisseaux et gagnent ensuite le courant
circulatoire. Trouvées pour la première fois dans le sang par
Zenker (1), puis par Bouchard et Magnan (2), elles y ont été
recherchées d’une façon systématique par Staubli (3). Pour ce
dernier, les larves de Trichine apparaissent dans le sang sept
jours après l'infection. Nous les y avons quelquefois trouvées
dès le cinquième jour; mais en général elles apparaissent dans
le sang du cobaye le sixième jour et ne le quittent guère que
le vingtième. Chez le rat, elles disparaissent du sang plus tôt
(le seizième Jour).

Une des meilleures techniques de recherches des larves dans
le sang est celle employée par Staubli. Elle consiste à recevoir le
sang dans de l’eau acidulée. Nous prélevions du sang par ponc-
lion du cœur.

Nous avons aussi obtenu de bons résultats en mélangeant le
sang à de l’eau distillée (à parties égales). Ce mélange est cen-
trifugé et Le culot obtenu est examiné au microscope.

En général, une goutte de culot montre 2 à 7 larves. Les
larves ainsi obtenues sont parfaitement vivantes, mobiles, etne
sont nullement endommagées par les manipulations qu'on leur
a fait subir.

Un certain nombre de larves ne suivent pasle courant circu-
latoire mais, nées dans l'épaisseur de la muqueuse, en dehors

(1) Cité par Davaixe, Trailé des Entlosoaires, p. 741.

(2) {bidem.

(3) Sraüezr, Beitrag zur Kentniss der Verbreitungsart der Trichinembryonen.
Vierteljahrsschr. d. Nalur. — Gesellsch. in Zürich, vol. L, 1905, p. 163.

e

356 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

des vaisseaux lymphatiques, elles peuvent gagner de proche
en proche, par mouvement actif, la cavité abdominale où elles
ont été trouvées par plusieurs auteurs (Leuckart, Staübli,
Askanazy et nous-même). Nous avons aussi constaté leur
présence dans la cavité pleurale: Leuckart les a aussi trouvées
dans la cavité du péricarde.

Comment expliquer la présence de larves dans la cavité pleu-
rale et péricardique?

L'hypothèse la plus plausible est qu'elles y viennent en tra-
versant les vaisseaux sous-séreux où elles sont entraînées par
le courant lymphatique. Nous en voyons une preuve dans
l'observation ’Askanazy (1) qui a trouvé des larves sous la
plèvre de l'animal infesté.

D'autre part, on peut également admettre qu'un certain nombre
d’entre elles vient directement du poumon et du cœur. Amenées
dans les capillaires de ces organes et ne pouvant s'y développer,
elles les traversent de proche en proche jusqu'à ce qu'elles
tombent dans la plèvre ou le péricarde. C’est probablement
pour cette raison qu'on ne les trouve pas dans le poumon ni
dans le foie.

Arrivées dans une de ces cavités séreuses, les larves de Tri-
chine n’y trouvent pas un milieu favorable pour leur dévelop-
pement.

On sait que les helminthes égarés dans un endroit de l’orga-
nisme qui ne leur convient pas, périssent rapidement. Il se
forme autour d'eux une paroi inflammatoire qui ne tarde pas à
se calcifier, comme c’est le cas pour les Filaires (Filaria équina
et Filaria labiato-papillosa).

Il en est ainsi de la Fasciola hépatica égarée dans les pou-
mons où l’on trouve souvent, à sa place, une poche à parois
fibreuses infiltrée de sels calcaires et remplie d’une bouillie
couleur chocolat, dans laquelle on ne trouve parfois que quel-
ques débris du parasite.

On peut donc supposer que les larves de Trichine étant de
structure beaucoup moins compliquée que les Helminthes
adultes, se dissolvent entièrement, sans laisser de traces,

(4) Askanazy, Zur Lehre von der Trichinosis., Virchovs Archiv, 1895,
vol. CXLI Xp-15£,

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 351

lorsqu'elles arrivent dans les cavités séreuses où elles ne
trouvent pas les éléments nécessaires à leur nutrition.

Pour en avoir une preuve, nous avons pratiqué l'expérience
suivante :

Nous avons injecté dans la cavité péritonéale d'un cobaye un grand nombre
de larves parfaitement vivantes recueillies dans le périloine, ou dans la plèvre
d'autres cobayes ou bien encore isolées de leur sang.

Deux semaines après, nous n'avons pu, chez le cobaye ainsi traité, trouver
de traces des larves, ni dans sa cavité péritonéale ni dans les muscles. Il est
évident que toutes les larves injectées dans la cavité péritonéale se sont
complètement dissoutes.

Les larves apportées par le courant sanguin dans les muscles,
s'y installent définitivement et s'y développent jusqu'à ce
qu'elles arrivent à l'état adulte asexuel.

Les savants allemands ont admis depuis longtemps que les
larves de Trichine pénètrent à l'intérieur même des faisceaux
primitifs de la fibre musculaire (Virchow, Lévin, Ehrhardt,
Staübli et d'autres).

En France, depuis Chatin, en dépit des affirmations contraires
de Davaine, il est très répandu que les larves en question
s'arrêtent dans le tissu conjonctif interfasciculaire et que leur
pénétration à l'intérieur du faisceau primitif est très rare.
Durante (1), n’admettant pas cette manière de voir, fait néan-
moins une concession partielle à la thèse de Chatin (2) : « La
substance striée parait être l'aliment de prédilection de la larve.
Cependant la trichine peut évoluer en dehors du muscle, puis-
qu'on l’a retrouvée dans le tissu adipeux et dans les tendons. »

Durante a tort de faire cette concession. Si l’on trouve quel-
ques larves dans le tissu conjonctif, il s'agit de parasites égarés.
La substance striée de la fibre musculaire n’est pas seulement
l'aliment de prédilection de la larve de Trichine ; elle est son
aliment unique. Pour en user, la larve doit posséder la pro-
priété spéciale de dissoudre le myoplasme du faisceau primitif.

Nous n'avons pu mettre en évidence cette propriété dans des
expériences #n vitro; cependant, nous sommes conduits à
l’admettre par des constatations histologiques. En effet, aussitôt

(41) Connie et Ranvier, Manuel d'Histologie pathologique, vol. II, p. 387.
(2) CaarTIN, La Trichine et la Trichinose. l’aris, 1883.

358 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

que la larve s'installe dans une fibre musculaire, on y constate
une désagrégation du faisceau primitif ; les stries disparaissent
et laissent à leur place une masse amorphe, et cela dans des
fibres où l’on ne trouve pas du tout le phénomène observé par
Soudakévilch (1).

Si l'on veut avoir une preuve certaine que la larve de Tri-
chine pénètre bien dans le faisceau primitif de la fibre muscu-
laire et y suit son développement, il faut étudier les coupes
histologiques des muscles dès le début de leur infestation par
les parasites.

La planche jointe à ce travail ne laisse pas de doute sur ce
point. On voit en a (PI. V, fig. 1) une larve qui n’a pénétré qu'à
moitié dans la fibre musculaire. La figure 2 est plus nette
encore, Car Ici, la larve est représentée dans toute sa longueur,
ayant pénétré complètement ; elle y est depuis peu de temps (1),
parce que la striation de la fibre est encore tout à fait intacte.

La démonstration décisive est apportée par la figure # qui
montre des cellules musculaires coupées transversalement. On
y voit que la coupe du parasite se trouve en plein myoplasme.

INFECTIONS MICROBIENNES DANS LA TRICHINOSE.

La lésion qui frappe surtout à l'examen d’une coupe d’intestin
d'animal infesté récemment par la Trichine est certainement,
comme nous l'avons déjà dit plus haut, la perte d'épithélium
de recouvrement sur une grande étendue de la muqueuse; de
sorte que la porte reste grande ouverte à tous les microbes
de la flore intestinale. Heureusement, bon nombre de ceux-ci
sont détruits dans l'estomac et les bactéries arrivant dans la
première moitié de l'intestin grêle, peut-être aussi en grande
partie affaiblies, y périssent vite; la plupart d’entre elles ne
sont, d’ailleurs, pas pathogènes.

S'il n’en était pas ainsi, l'infection bactérienne se produirait
toujours et dès les premiers jours de l'infection.

L'idée que la Trichine favorise l'infection microbienne est
déjà ancienne ; déjà en 1877, Piana (2) avait émis cette hypo-

(1) Soupakévrren, Modifications des fibres musculaires dans la trichinose.
Annales de l'Instilul Pasteur, 1892.

(2) Cité par NruMANN, Maladies parasilaires non microbiennes.

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 359

thèse. Friedreich (1) a observé, le premier, chez un malade atteint
de trichinose, une série d’abcès sous-cutanés dont l’un renfer-
mait une Trichine. Comme il a appris plus tard que cette
complication n'est pas rare dans la trichinose, il a admis l’exis-
tence de pustulose et de furonculose trichinées.

D'après ce savant, les larves émigreraient des muscies pour
aller se loger dans le tissu sous-cutané où elles provoqueraient
la production du pus. Staübli s'oppose à cette manière de voir.
Pour lui, la Trichine se trouve dans l’abcès d’une façon
toute accidentelle, étant mise en liberté par une fibre muscu-
laire détruite par la suppuration. Staübli (2) n’a pas trouvé de
larves de Trichine dans les abcès profonds d'un malade qu'il
soignait pour la trichinose. Par contre, il a isolé un staphylo-
coque du pus d'un abcès; le sang et l'urine du même malade
renfermaient un streptocoque, c'est à ce microbe qu'il attribue
la formation d’abcès. Ce savant a également trouvé une infec-
tion bactérienne dans deux cas de trichinose expérimentale.

Comme les larves de la Trichine sont rejetées par cette der-
nière dans les vaisseaux lymphatiques de la muqueuse, il est
évident qu'elles restent stériles et qu'elles ne peuvent pas
porter de microbes dans les muscles. Nous en avons, en effet,
cherché en vain dans les coupes sériées de muscles mastica-
teurs, muscles de diaphragme, etc..., de rats trichinés sacrifiés
à différentes périodes de l'infestation ; nous n'avons trouvé de
microbes qu'une fois dans les muscles d’un rat autopsié seule-
ment vingt-quatre heures après la mort. Si les larves ne pro-
voquent pas d'infection microbienne, la Trichine, qui traverse
la muqueuse toute souillée de microbes, les sème sur son pas-
sage. L'examen histo-bactériologique le montre nettement.

Nous avons pratiqué des ensemencements du sang de 23 rats
sacrifiés à différentes périodes de l’infestation (de sept à vingt-
cinq jours, une fois quarante-huit jours après l’ingestion de
viande trichinée). Treize fois nous avons obtenu des colonies
microbiennes. Six autres rats tués au moment de l'agonie ont
donné des cultures. Il en est de même pour 7 rats trichinés
morts trois à sept jours après l'infestation et autopsiés aussitôt
après leur mort.

(1) Cité par Sraueui, Trichinosis. Wiesbaden, 1909, p. 141.
(2) Loc. cit., p. 141-142.

360 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Sur dix cobayes trichinés, sept fois le sang a donné des cul-
tures. Nous avons également obtenu des résultats positifs en
ensemençant, immédiatement après la mort, le sang de # cobayes
trichinés.

Le plus souvent, ces ensemencements ont donné des colonies
de plusieurs microbes différents (Microbes isolés : coli-bacille,
streptocoque, staphylocoque, un bacille aérobie mobile avec
spore terminale et ovoide, prenant le Gram et liquéfiant la
gélatine, b. subtilis, b. mesentericus anaérobie facultatif (n.
es.) un bacille rappelant la bactéridie charbonneuse et le b.
perfringens (3 rats d’égouts), un diplocoque anaérobie ne prenant
pas le Gram (cobaye).

Depuis la publication de nos notes préliminaires sur la
Trichinose, nous avons pris connaissance d'un travail de H.
Raebiger (1) qui, poursuivant ses recherches parallèlement aux
nôtres, a abordé également la question de l'infection miero-
bienne dans la trichinose. Ce savant a réussi à isoler du sang
du cœur et des organes, dans 11 cas sur 111 rats trichinés, une
bactérie du groupe paratyphique. Mais comme, d'une part, des
rats, infestés par la Trichine, dont le sang était stérile, péris-
saient dans la même proportion que ceux atteints de septicémie
et que, d'autre part, les lésions anatomo-pathologiques étaient
trouvées identiques pour les deux séries de rats, Raebiger
conclut que la présence de microbes dans le sang de rats
trichinés est sans aucune influence sur le cours de la trichinose.

Tout en admettant que la Trichine puisse amener, surtout
dans l'infection massive, des lésions intestinales et musculaires
assez graves pour provoquer par elles-mêmes, sans intervention
microbienne, une mort assez rapide, nous ne pouvons accepter
la conclusion de ce savant. D'abord, nous ne connaissons pas la
virulence exacte du microbe isolé par lui; de plus, l'hémocul-
ture négative n'exclut pas nécessairement une infection micro-
bienne.

Nous restons, au contraire convaincu, en nous basant sur les
recherches publiées par quelques auteurs et sur les résultats de
nos propres expériences, que la fièvre, l'hypertrophie de la

(1) H. RaggiGer. Untersuchungen über die Trichinenkrankheit. Zeitsch. f.
Infectionskr. der Haustiere, 1911, vol. IX, f. 1-2, p. 144.

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 361

rate, les abcès, et, quelquefois, le décès qu'on observe chez
l'homme atteint de trichinose, sont dus à des microbes envahis-
sant l’organisme à la faveur des lésions de la muqueuse pro-
voquées par le parasite.

ACTION TOXIQUE DES LARVES DE TRICHINE.

On a pensé depuis longtemps à l’action toxique des larves
de Trichine. C’est Ehrhardt Oskar (1) qui a, le premier, nous
semble-t-il, attribué la dégénérescence des faisceaux muscu-
laires voisins de ceux envahis par la larve de Trichine, à
l’action des substances toxiques élaborées par le parasite.

Metchnikoff (2) se prononce également en faveur de cette
hypothèse. « Le tableau morbide (dans la trichinose) est plus
compliqué que dans la gale et permet de supposer une action
complémentaire des excreta de la larve dans la production de
l’état fébrile et de certains phénomènes généraux. »

Pour Durante (3), ce parasite agirait à la fois et comme corps
étranger et par les toxines qu'il sécrète. Il pense que « l’on peut
attribuer à l’action locale des toxines sécrétées par le parasite,
les phénomènes de dégénérescence (dégénérescence cireuse et
désintégration granuleuse) limités à une petite étendue. Le foie,
de volume normal, est presque toujours atteint d’une dégéné-
rescence graisseuse que l’on peut attribuer au passage des
toxines trichineuses, toxines très actives qui, dans les cas graves,
sont susceptibles de donner naissance à de l’albuminurie ».

V. Linstow (4) croit que les convulsions, la parésie des
membres et les accidents mortels, qu'on observe quelquefois
dans la trichinose, sont dus à l’action toxique des larves.
Babès (5) a trouvé des lésions chroniques du myocarde et du
rein chez un individu infesté depuis vingt et un an par les larves
de trichine.

(4) EsrnarpT (Oskar), Zur Kentniss der Muskelveränderungen bei der Trichi-
nose der Kaninchens. Beitrag.z. pathol. Anat. und z. allgem. Pathol. ÿ

(2) E. Mercanikorr, L'immunité dans les maladies infectieuses, 1901, p. 4.

(3) Loc. cit., p. 384, 388 et 402.

(4) V. Lnsrow, Die durch tierische Parasiten erzeugten toxischen Stoffe.
VIIIe Congrès international de médecine vétérinaire, Budapest, 1905.

(5) Centralblatt für Bakteriol., vol. XLIT, 1908.

362 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

L. Opalka (1) cite, dans son travail sur la trichinose, 28 cas
de trichinose de l’homme ; dans 10 cas, on a constaté des lésions
du cœur, du foie ou des reins.

H. M. Hôyberg (2) a expérimenté avec le sérum d'animaux
trichinés. Injecté à des animaux neufs, ce sérum ne s'est pas
montré toxique. L'auteur en tire la conclusion que le sérum
d'animaux récemment infestés par la Trichine ne renferme pas
de toxine.

Les expériences de Hüyberg ne nous ont pas convaincu. Nous
avons, en effet, très souvent constaté, à l’autopsie des animaux
(rats et cobayes) morts de trichinose, la présence de lésions des
reins et des capsules surrénales qui ne pourraient être toujours
attribuées à l'infection bactérienne, l’ensemencement du sang
sur milieux aérobies et anaérobies ayant souvent donné des
résultats négatifs. D'autre part, il nous semble impossible
d'expliquer, par la simple action mécanique, les lésions de fibres
musculaires. 11 faut donc penser à la toxicité des produits
d'échange des larves de Trichine.

Ainsi donc, malgré les expériences de Hüyberg, nous persistons
à penser que, si les larves de Trichine sécrètent des substances
toxiques, ces dernières doivent se trouver à un moment donné
dans le sérum de l’animal infesté.

Pour vérilier cette hypothèse, nous avons étudié d’une façon
systématique la toxicité du sérum des cobayes et des rats infestés
par la Trichine.

Ces recherches nous ont permis de constater que le sérum de
ces animaux acquiert vraiment des propriétés toxiques et que
cette toxicité peut déjà apparaître neuf jours après l’ingestion
de viande trichinée ; on la retrouve jusqu'à un mois et demi
après l’infestation. Ces sérums se sont montrés toxiques aussi
bien pour d’autres cobayes que pour des rats; autrement dit:
ils étaient en même temps iso et hétérotoxiques.

Ces expériences portent sur le sérum de quatorze cobayes ;
huit fois, le sérum s’est montré très toxique. Les sérums peu
toxiques proviennent des cobayes chez lesquels on n'a trouvé

(1) L. Oparxka, Beitrag zur Vorkommen der Trichinen bei Menschen. Thèse de
Berlin, 1904.

(2) H. M. Hôvserc, Bilden sich bei Trichinose toxische Stoffe. Zeitsch. f.
Ter. Med’,-vol. X, 41907, p-1°

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 363

à l’autopsie qu’une faible infection par les larves de trichine.

Nous avons éprouvé nos sérums par des injections sous-
cutanées à des cobayes et des rats neufs, à la dose de 4 et 6 cen-
timètres cubes par kilogramme d'animal (1).

À la suite d’une seule injection, ces animaux étaient pris
d’abattement, de tremblement, de bâillements (surtout les rats),
de contractions incessantes des muscles masticateurs. Ils pré-
sentaient en même temps de la dyspnée, de la diarrhée et de
l'amaigrissement. La mort survenait parfois rapidement, parfois
au bout d'un temps assez prolongé ; dans deux cas, le lendemain;
dans un troisième cas, au bout de trois jours ; dans un qua-
trième, cinq Jours ; dans un cinquième, six jours; dans un
sixième, onze Jours; dans un seplième, au bout de vingt-cinq
jours. Dans un cas, les deux cobayes, après avoir manifesté
des troubles graves se sont rétablis après quelque temps.

On pouvait supposer que les phénomènes graves que l’on
observe lorsqu'on injecte à des cobayes neufs du sérum de
cobayes parasités sont dus, tout simplement, à la présence
d'isohémolysines. Il n’en est rien; nous avons en effet recherché
des isohémolysines dans un grand nombre de sérums trichinés,
mais toujours sans résultat.

Les animaux morts à la suite de l'injection du sérum toxique
ont toujours présenté les mêmes lésions, que la mort survint
rapidement, ou bien au bout d'un temps plus ou moins long :
hémorragie de l'intestin, surtout de l'intestin grèle ; hyperémie
intense des vaisseaux de la cavité abdominale, cavités du cœur,
dilatées et gorgées de sang.

Nous avons observé, en outre, chez quelques-uns de ces
animaux, des pétéchies sous-péritonéales et des pointes hémor-
ragiques dans les poumons. Les animaux qui survivent à

(1) Rappelons à ce propos les recherches de Valiardi (Folia serologiea, 1911,
pp. 819-882) sur l'isotoxicité du sérum de cobaye. On recueille le sérum après
avoir fait séjourner le sang une heure à l'étuve et quatre heures à la glacière.
Dans ces conditions, le sérum de cobaye n’est pas isotoxique, même injecté
à la dose de 2 à 6 cent. cubes à des cobayes de 200 grammes.

M. Wassermann et F. Keysser (Zeitschr. f. Hygiène, 1911) mentionnent inci-
demment que le sérum de cobaye recueilli deux heures après la saignée de
l'animal est isotoxique.

Tous ces faits ne font que confirmer l'interprétation que nous avons donnée
des résultats de nos expériences : l'injection de cobayes neufs a été toujours
pratiquée le lendemain de la saignée d'animaux trichinés. De plus, nous avons
fait des injections sous-cutanées et non pas intraveineuses.

36% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'injection de sérum présentent, au bout de quelques jours,
une maigreur extrème.

Nous avons déjà dit plus haut que la toxité du sérum de
cobayes ou de rats trichinés est en rapport avec l'intensité de
l'infestation larvaire. D'autre part, la sensibilité des animaux
à ces substances toxiques est inégale, individuelle. Ainsi, il nous
est arrivé quelquefois de ne tuer, avec la même dose de sérum,
qu’un cobaye sur deux.

En général, le sérum n'est plus toxique six semaines après
l’infestation. Une fois cependant nous avons constaté cette
toxicité deux mois et demi après l'ingestion de viande
trichinée.

Le sérum de rats infestés par la Trichine s’est montré
également iso et hétéro-toxique. Les rats neufs injectés avec ce
sérum ont présenté les mêmes symptômes que ceux décrits plus
haut pour les cobayes. La mort survenait de vingt-quatre heures
à vingt jours après l'injection.

L'injection préalable d’un sérum faiblement toxique peut
rendre plus grave l'infestation ultérieure par la viande
trichinée.

En voici un exemple :

Un rat reçoit en injection sous-cutanée 1 cent. cube 1/4 d'un sérum
provenant d'un autre rat faiblement infesté par la Trichine. Il est malade
pendant quelques jours, puis se remet et paraît se porter très bien.

Quelque temps après, il est nourri avec de la viande trichinée. L ingestion
de cette viande trichinée n'est suivie d'aucun trouble important. Or, quarante-
quatre jours après l'injection de sérum faiblement toxique, ce rat meurt.
Nous n'avons pas trouvé à son autopsie de lésions de trichinose intestinale.
Par contre, son cadavre présentait toutes les lésions que nous avons décrites
plus haut chez les animaux injectés avec un sérum très toxique.

Il est évident que, dans ce cas, l’action du sérum faiblement
toxique, qui par lui-même n'était pas capable de provoquer la
mort de l'animal, a été renforcée par l'apport d’une nouvelle
toxine sécrétée par les larves provenant de l’ingestion de viande
trichinée.

Nous avons pu étudier l'urine de trois cobayes trichinés. Les
trois cobayes neufs injectés sous la peau avec 1 cent. cube 1/4
à 2 cent. cubes 1/2 d'urine ont succombé au bout de deux,
trois et sept Jours.

En résumé, le sérum d’un certain nombre de cobayes et de

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 365

rats trichinés s’est montré en injections sous-cutanées
nettement iso et hétérotoxique.

Cette toxicité n'existe que dans le sérum des animaux très
fortement infestés ; elle apparaît en général neuf jours après
l'infection et ne dure le plus souvent que cinq à six semaines.

Les substances toxiques dues à la présence des larves sont
éliminées par les reins : ainsi, dans trois cas, où l’on a pensé à
éprouver la toxicité de l'urine, cette dernière a provoqué des
symptômes très graves chez les cobayes auxquels elle à été
injectée.

RECHERCHES D'ANTICORPS SPÉCIFIQUES DANS LE SÉRUM
D'ANIMAUX INFESTÉS.

Nous avons fort peu d'éléments pour faire le diagnostic
précoce de la trichinose. L'éosinophilie apparaît bien vers le
huitième jour après l'infestation, mais elle n’a rien de spéci-
lique et ne peut servir d'indication que lorsqu'on a éliminé
toutes les autres causes capables de la provoquer.

L'examen microscopique d’un petit morceau de muscle ne
peut guère être utile que dans les cas d'infection très grave :
il ne donnera rien dans les cas moyens ni dans les cas légers
dans lesquels les larves n’ont envahi que les muscles du
diaphragme el du larynx.

Un renseignement de très grande importance peut être
apporté par la recherche directe des larves dans le sang cir-
culant. Pour arriver à un résultat, il est indispensable de suivre
le malade aussitôt après l’ingestion de viande suspecte et de
pratiquer l'examen de son sang d'une facon systématique et
quotidiennement.

Nous avons indiqué plus haut la bonne technique à suivre.
Chez l’homme, on pourra recueillir du sang au doigt, au lobule
de l’oreille ou bien directement dans la veine du bras.

Comme les larves de Trichine élaborent des produits toxi-
ques, nous nous sommes demandé si l'animal infesté réagit
à la résorption de ces toxines par l'élaboration d’anticorps
spécifiques. S'il en était ainsi, il serait facile d'utiliser la
recherche de ces anticorps pour le diagnostic de la trichinose.

Nous avons recherché la présence d'anticorps spécifiques

366 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dans le sérum d'animaux trichinés par la méthode de fixation
du complément, ainsi que par celle des précipitines.

Comme antigène, nous avons utilisé l'extrait aqueux de muscles farcis de
larves. Les morceaux de muscles broyés dans l'appareil Latapie sont
triturés dans un mortier avec du verre pilé et une petite quantité d’eau
physiologique. Le produit de broyage est placé pendant deux heures à l’étuve
à 31 degré, puis à la glacière jusqu'au lendemain. On passe ensuite à travers
une toile fine et on filtre sur du papier Chardin.

Nos recherches ont porté sur le sérum de trois rats et
trois cobayes, infestés depuis huit à quinze jours. La précipito-
réaction ainsi que la déviation du complément ont donné des
résultats négatifs. Et cependant, dans nos expériences de fixation
du complément, nous avons employé notre antigène à la dose
de 0,1, 0,2. cent. cube, alors que 0,4 d’antigène fixaient par
eux-mêmes le complément.

Strübel (1), qui a également recherché des anticorps dans la
trichinose, prétend avoir obtenu des résultats satisfaisants en
opérant avec le sérum d'animaux et d'hommes infestés depuis
plusieurs mois.

Il a préparé son antigène en traitant du muscle trichiné par
une solution forte de soude caustique et d’antiformine.

En expérimentant ainsi avec les sérums humains, il a obtenu
une fixation nette avec 0,3 cent. cubes d'antigène, alors que
0,4 cent. cubes fixaient seuls le complément. D'autre part, Les
sérums de lapin ont donné des résultats très variables. Nous
ne pouvons donc accepter les conclusions de Strübel qu'avec
une grande réserve.

Quelques espèces animales, comme le cheval, le bœuf, le
mouton et les oiseaux, présentent une certaine immunité natu-
relle contre l’infestation par les larves de Trichine. Si on les
force à avaler de la viande trichinée, on constate que les larves
de Trichine se développent bien dans leur intestin et y attei-
gnent leur maturité sexuelle; et cependant, on ne trouve pas
chez ces animaux d’infestation musculaire.

On s’est démandé, s'il était possible de conférer aux animaux
celte résistance à l'infection par les larves de trichine, par une

(1) Srrôkez, Die Serodiagnostik der Trichinosis. Münch. med Wochens.,
4911, 13, p. 672.

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 307

infestation préalable. Cependant, les observations de Rup-
precht(1) et d’autres, chez l'homme, des recherches expérimen-
tales d’Askanazy et de Staübli ont démontré que les animaux
guéris de trichinose peuvent subir une réinfection.

Nous avons observé des cas de réinfection spontanée chez dix
rats blancs. Ces derniers étaient gardés dans des bocaux avec
d’autres rats trichinés ; ils se sont réinfectés en dévorant leurs
compagnons morts dans la nuit. La réinfection était si intense
que les rats mouraient trois ou quatre jours après le repas
infestant. Une partie des animaux se sont réinfectés trente
jours après l’infestation ; une autre partie au bout de deux
mois.

Nous avons aussi fait quelques recherches sur le traitement
de la trichinose. Les médicaments antihelminthiques sont
incapables de débarrasser l'intestin des femelles de Trichine
fécondées, et cela pour la simple raison que ces dernières sont
logées dans l'épaisseur même de la paroi intestinale. Nous
avons pensé qu'il serait peut-être possible d'agir sur les
embryons au moment où ils ont pénétré dans le courant cir-
culatoire. Nous avons essayé l'effet de l’émétique et du 606.

Staübli avait fait aussi quelques essais avec l’atoxyl et
l’arsacétine. La plupart des animaux traités avec ces produits
sont morts au bout de quinze à trente jours. Cet auteur a
remarqué un certain ralentissement dans le développement
des embryons.

Pour la première série de nos expériences, nous avons préparé une
solution d'émétique à 1/500. Des cobayes infestés le 25 mai ont été traités
par une série d’injections (le 3, le 5, le 6, le 7, le 8, le 10, le 12, le 18 et le
25 juin); à chaque injection, ils recevaient dans la peau 0,02 d’émétique par
kilogramme de leur poids.

Pas un des cobayes traités n'a évité l'infection musculaire. Chez tous,
nous avons retrouvé des larves, soit dans les muscles, soit dans le sang. Il
faut cependant remarquer que nous n'avons pas trouvé de larves enkystées
dans les muscles d'un cobaye mort trente-trois jours après l'infestation, et
que très peu de larves commencaient à s'enrouler. Un cobaye a survécu ;
sacrifié trois mois après le traitement par l'émétique, il a montré des larves
enkystées.

Cinq rats nourris de viande trichinée, le 7 juillet, ont reçu sept injections
sous-cutanées d'émétique (1,5 milligrammes par injection), du 12 au 20 juillet.

(1) Cité par Staübli.

368 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Deux rats sont morts le 24 juillet, avec de la trichinose musculaire ; par
contre, nous n'avons pas trouvé de larves de Trichine ni dans le diaphragme,
ni dans les muscles masticateurs chez le cinquième rat mort dix jours après
l'infestation.

Nous avons également traité cinq cobayes avec du 606 que le professeur
Ebhrlich a eu l'extrême obligeance d'envoyer à M. Weinberg. Les cobayes ont
été injectés quatre fois en l’espace de huit jours, à raison de 0,02 à 0,04 par
kilogramme de leur poids. Tous ces animaux sont morts ou ont été sacrifiés
neuf à seize jours après l'infestation. Leurs muscles étaient déjà envahis.

En résumé, nous n'avons réussi, dans nos essais de traite-
ment, qu'à ralentir quelquefois le développement de la larve
de Trichine.

Notons que des abcès et des escarres produits par des injec-
tions sous-cutanées d'émétique ou de 606 rendent difficile
l'administration prolongée de ces produits.

CONCLUSIONS.

I. — La femelle de Trichine pénètre dans l'épaisseur de la
paroi intestinale ; elle s’arrète ordinairement dans le chorion de
la muqueuse et ne dépasse pas la muscularis mucosæ. Contrai-
rement aux assertions de Cerfontaine, elle n’atteint pas les
ganglions mésentériques.

La femelle pond ses larves, soit dans les vaisseaux Iympha-
tiques, soit dans leur voisinage. Les larves suivent la voie lym-
phatique pour gagner le courant circulatoire. Il serait donc
utile, dans le cas d’ingestion de viande suspecte, de pratiquer
l'examen quotidien du sang. On pourrait ainsi dépister la
trichinose dès le début de son évolution.

IL. — Les cellules épithéliales des glandes de Lieberkühn
montrent souvent de nombreuses figures de karyokinèse, aussi
bien au voisinage immédiat des vaisseaux lymphatiques envabis
par la Trichine qu'à une certaine distance de ceux-ci.

IT. — Les larves peuvent gagner la cavité séreuse (péritoine,
plèvre, péricarde), mais elles y périssent très rapidement.
IV. — Il faut accepter comme définitivement démontrée la

pénétration de la larve de Trichine dans l'épaisseur de la fibre
musculaire primitive. Il est inconteslable que la larve s’intro-
duit dans la cellule musculaire, parce qu’elle y trouve, mieux

RECHERCHES SUR LA TRICHINOSE 369

que partout ailleurs, les éléments nutritifs dont elle a besoin
pour son développement.

V. — En traversant la muqueuse intestinale, la Trichine,
toute souillée de microbes, les sème sur son passage.

Comme le montre l'étude bactériologique du sang de
l'homme el des animaux infestés, le caractère dominant des
infections dues à la Trichine est d'être polymicrobiennes.

Il est difficile de nier que la fièvre, les abcès et la septicémie
mortelle qu’on observe quelquefois chez l'homme ne soient dus
à des microbes inoculés par la Trichine.

VI. — Le sérum d'animaux (rats, cobayes) infestés par la
Trichine acquiert des propriétés loxiques; ces dernières peuvent
apparaître déjà neuf jours après l’ingestion de viande tri-
chinée; elles peuvent se manifester jusqu'à un mois après l’in-
festation. Ces sérums sont toxiques aussi bien pour le cobaye
que pour le rat: c’est-à-dire qu’ils sont en même temps iso et
hétérotoxiques. La toxicité du sérum de cobaye infesté est en
rapport avec l'intensité de l'infestation larvaire. La sensibilité
des animaux à ces substances toxiques est inégale, sujette à des
variations individuelles.

Les animaux qui survivent à l'injection de sérum toxique
présentent au bout de quelques jours une maigreur extrème.

L'urine des animaux fortement infestés peut aussi devenir
toxique.

VII — La recherche d'anticorps spécifiques dans le sérum
d'animaux trichinés n'a pas donné de résultats satisfaisants, ni
par la méthode des précipitines, ni par celle de la fixation
du complément. Dans ces expériences, on a employé comme
antigène l'extrait aqueux de muscles farcis de larves.

VIII. — Les cas de réinfection spontanée observés par nous
confirment les expériences de Rupprecht, d’Askanazy et autres
qui ont montré l'impossibilité d'immuniser les animaux contre
une nouvelle infestation.

IX. — Il n'existe pas de traitement préventif ou abortif de
la trichinose. On peut quelquefois ralentir l’évolution de cette
helminthiase par des injections d'émétique. Le 606 d'Ehrlich
ne paraît exercer aucune action sur les larves de Trichine.

1
rad

370 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

EXPLICATION DE LA PLANCHE V

Ces dessins montrent la pénétration de la larve de Trichine dans l'épais-
seur de la fibre musculaire primitive.

1. — La larve a pénétré à moitié dans la fibre primitive (a);

2, — (a) On voit la larve dans toute sans longueur au centre même d'une
fibre primitive encore tout à fait intacte.

3. — (a) Larve de Trichine: (b) petite cavité résultant d’un défaut de sub-
stance musculaire.

4%, — On a en a,a',a" la coupe transversale de larve ayant pénétré dan
l'épaisseur de la fibre primitive.

5. — a) Larve; c) substance musculaire en désagrégation au voisinage du
myoplasme resté encore intact et gardant encore toute sa striation.

6. — On voit en c dans une fibre parasitée (a), et ayant perdu sa structure
normale, un petit ilot de myoplasme gardant encore sa striation et muni de
plusieurs noyaux.

RECHERCHES SUR LES POISONS
PRODUITS PAR L'ASPERGILLUS FUMIGATUS

par E. BODIN et C. LENORMAND,

Professeurs à l'École de médecine de Rennes.

L'un de nous a signalé dans les cultures d'A. fumigatus
l'existence d’un poison qui a été, provisoirement et sous toutes
réserves, désigné sous le nom de toxine (1). Les recherches
publiées alors n'ont porté que sur le liquide de culture du
champignon, aussi ce premier mémoire comprend-il seulement
la description des symptômes que l'injection du liquide toxique
détermine chez certains animaux, el quelques indications sur
les conditions dans lesquelles la toxicité apparaît dans les
cultures.

Depuis, nous avons continué l'étude de cette question qui
nous est apparue de plus en plus complexe et ce sont les faits
que nous avons observés que nous voulons résumer ici. Si
incomplets qu'ils soient, ils nous ont paru intéressants à
publier : au cours de ces dernières années, en effet, des tra-
vaux remarquables ont attiré l'attention sur les substances
toxiques élaborées par les champignons pathogènes et sur les
modifications que les mycoses peuvent déterminer dans les
humeurs de l'organisme et qui sont très analogues à celles que
l’on observe dans les maladies bactériennes.

Parmi ces travaux, citons ceux de Bruno Bloch et de R. Mas-
sini (2), après ceux de M. Truffi (3) sur les Trichophytons ;

]

ceux de Roger (4) sur les modifications du sérum des animaux

(1) E. Bonn et L. Gautier, Note sur une toxine produite par l'A. fumigalus.
Ces Annales, 1906, p. 209.

(2) Bruno BLocn et R. Massixi, Etudes sur l'immunité et l'hypersensibilité
dans les maladies provoquées par les hyphomycètes. Zeischrirt für Hyg. und
Infeclionkrankheiten, 1909. PI. 13, fasc. 1, p. 68. — Bruno BLocu, Die Tricho-
phytien. Medicinische Klinik. Berlin, 1908, n° 51.

(3) M. Trcrr1, Ricerche sulla trychophitina. Clinica medica italiana, 1904.

‘4) Rocer, Modifications du sérum des animaux vaccinés contre l'Oidium
albicans. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 4 juillet 1896.

3172 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

vaccinés contre l'Oïdium albicans; ceux de Verliac (1) sur
l’Actinomyces ; les découvertes de Widal et Abrami (2), de
Pautrier et Lutembacher (3), de Blanchetière et Gougerot (4),
de de Beurmann sur les propriétés agglutinantes du sérum des
malades atteints de mycoses.

Ajoutons que M. le professeur Roger (5) signalait récemment
dans les extraits d'A. fumigatus, préparés par la trituration
des cellules comme l'indique Concetti pour le muguet, la pré-
sence d’une substance toxique capable de déterminer la para-
plégie chez le lapin.

Tout dernièrement enfin, B. Sauton (6) a montré que les
spores d'A. fumigatus renferment une substance, soluble dans
le chloroforme, qui les protège contre la phagocytose.

EXISTENCE DE DEUX POISONS DIFFÉRENTS DANS LES CULTURES
D'A. fumigatus.

Nous dirons, d'abord, que nous avons trouvé dans les cul-
tures d'A. fumigatus deux poisons distincts, l’un doué de
propriétés tétanisantes et convulsivantes et l’autre possédant
au contraire un pouvoir déprimant chez certains animaux. Ces
substances sont bien les mêmes, à notre avis, que celles qui ont
été signalées dans les cullures de ce champignon par Ceni (7)

(4) VerLrAc, Recherches expérimentales sur les toxines de l'Actinomyces.
Thèse de Paris, 1907.

(2) Wipaz et ABrAmr, Séro-diagnostic de la sporotrichose par la séro-agglu-
tinalion. La coagglutination mycosique, etc. Soc. médic. des h6pit. de Paris,
19 juin 1908. — Winpaz, ABRAMI, JOoLrRAIN, Brissaup et WEIz, Séro-diagnostic
mycosique. Ces Annales, 1910, n° 1.

(3) Paurrier et LurEemBACHER, Premier cas de sporotrichose diagnostiqué par
une subcutiréaction positive. Soc. médic. des hôpit. de Paris, 9 juillet 1909.

(4) BLANCHETIÈRE et GoucEror, Sur la composition chimique du Sporotrichum
Beurmanni. Ses endotoxines. Comptes rendus de lu Soc. cle Biologie, 17 juillet
1909.

(5) Rocer, Les endoloxines microbiennes. Comptes rendus de la Soc. de Bio-
logie, 17 juillet 1909.

(6) B. Saurox, Germination in vivo des spores d'A. niger et d'A. fumigalus.
Ces Annales, 1912, p. 48.

(7) Cenr et Besra, Ueber die toxine von Asp. fumig. und A. flavescens und
deren Beziehungen zur Pellagra. Centralbl. f. allg. Path. uw pathol. Anatomie,
t. XIII, n° 23, déc. 1902, analysé in Bull. de l’Inst. Pasteur, t. 1, p. 33. — CExI
et Besra, Die pathogen. Eigenschaften des Asp. niger mit Bezug auf die
Genese der Pellagra, analysé in Bull. de l'Inst. Pasteur, L. AI, p. 740.

C. Cexr, Potere patogeno dell Asp. ochraceus e suo rapporto coll etiologia
e patogenesi della pellagra. Riv. speriment. di frenialria, vol. XXXI, fase. 2,
1905. — C. CEenr, Nuovi concelti sull’etiologia e cura della pellagra, Giornale

POISONS PRODUITS PAR L’ASPERGILLUS FUMIGATUS 313

et Besta et par Paladino-Blandini (1). Voici l'expérience qui
permet d'établir la coexistence des deux poisons dans une
culture d'A. fumigalus.

Si l'on prend 250 cent. cubes de liquide de cultures d'A. fumigatuws sur
milieu de Raulin, après 5 à 6 semaines à l'étuve à 25 degrés, et si l’on traite
ce liquide par l'éther que l'on évapore ensuite, on obtient un résidu gras,
huileux, qui détermine chez le lapin et chez le cobaye, en injection sous-
cutanée, des accidents tétaniques et convulsifs, débutant au bout de 30 à
40 minutes et qui entrainent la mort en quelques heures.

Or, si l’on reprend les 250 cent. cubes de liquide ainsi épuisés par l’éther
et si on les distille, après action de la trompe pendant un temps suffisant
pour enlever toute trace d'éther, de façon à obtenir rapidement 20 à 25 cent.
cubes de distillat, on constate que ce produit, dont la réaction est fortement
alcaline, est toxique pour le cobaye. Injecté sous la peau de cet animal, il
cause des phénomènes de dépression et de paralysie qui commencent 20 à
30 minutes après l'injection et qui sont mortels en 1 à 2 heures.

Cette expérience permet de conclure à l'existence d'au moins
deux substances toxiques : l'une, convulsivante, soluble dans
l’éther; l’autre, déprimante, insoluble ou peu soluble dans
l'éther et qui passe à la distillation du liquide de culture.

Poison déprimant. — Pour le moment, nous ne pouvons dire
que très peu de chose du poison déprimant, dont la présence ne
nous à pas paru absolument constante dans toutes les cultures.
D'après nos observations, il existe surtout dans les cultures sur
le liquide de Raulin, vieilles de plusieurs semaines et quand le
milieu est devenu bien alcalin.

Il faut distiller le liquide de culture alcalin pour extraire le
poison, car la neutralisation préalable avec un acide quel-
conque empêche la ou les substances toxiques de passer à la
distillation.

Le distillat est lui-même fortement alcalin et il dégage une
odeur ammoniacale ; il agit comme un poison déprimant, même
si on le neutralise exactement avec un acide comme l'acide
tartrique ou l'acide chlorhydrique.

della Reale Soc. Italiana d'Igiene, 1905. — C. Cenr. Di una nuova specie di
As. varians e delle sue proprieta patogene in rapporto coll etiologia della
pellagra, Riv. speriment. di freniatia, vol. XXXI, fasc. 3-4, 1905. — C. Cewr,
Sulla reazione fenolica in rapporto coi Lossici pellagrogeni, Riv. pellagrologica
Italiana, 1906.

(4) Pazanino-BLanpini, Tossici di ifomiceti. Arch. di farmacologia speriment.
e Scienze a‘fini. Anno 5, vol. V, 1906.

374 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ce poison, qui résiste à l’ébullition, est actif sur le cobaye
qu'il {ue avec des phénomènes de paralysie et de dépression,
sans déterminer d'accidents tétaniformes. 20 cent. cubes de
distillat, obtenus avec 200 cent. cubes de liquide de culture de
deux mois sur milieu de Raulin, tuent un cobaye adulte en une ou
deux heures. Par contre, la même dose paraît inactive en injec-
tion sous-cutanée, ou en injection intraveineuse chez le lapin.

Poison télanisant. — Méthode d'extraction : C’est celui que
nous avons éludié partiellement dans notre premier travail,
mais que nous n'avions pas réussi, à ce moment, à extraire
facilement des cultures. Depuis, nous basant sur Les travaux de
Ceni et Besta, de Paladino-Blandini et aussi sur ceux de
Auclair (1), nous avons utilisé une méthode qui nous a donné
de bons résultats. Elle consiste à traiter par l’éther le liquide
de culture, ou mieux les cultures elles-mêmes.

Procédant de la sorte, nous avons constaté que ce poison
existe surtout dans la plante elle-même et qu’il ne passe dans
le liquide qu'en petite quantité, parce qu'il est relativement
peu soluble dans l’eau. Soluble dans l'alcool, l’éther, l’éther de
pétrole, la benzine, le chloroforme, le sulfure de carbone, on
peut aisément l’extraire à l'aide de ces solvants, parmi lesquels
l'éther est celui qui nous a paru le meilleur et le plus com-
mode.

Pour la préparation du poison, nous utilisons le champignon préalable-
ment lavé à l’eau distillée, puis que l’on broie et que l'on met à macérer
pendant 48 heures dans un mélange à parties égales d’alcoo!l à 90 degrés et
d’éther. Le liquide séparé par filtration est ensuite distillé dans le vide à
45 degrés jusqu’à ce qu'il ne reste plus qu'un résidu aqueux trouble. On
reprend ce résidu que l'on agite pendant quelques minutes dans une
ampoule à robinet avec une ou deux fois son volume d'éther. On sépare
l’éther que l’on évapore au bain-marie et l’on obtient un résidu huileux,
jaunâtre, de consistance grasse, dégageant une odeur spéciale, rappelant
celle de certaines plantes fraîches broyées, et dont la toxicité est très
grande pour les animaux sensibles chez lesquels il détermine des accidents

convulsifs et tétaniformes, comme il a élé indiqué dans notre premier
travail auquel nous renvoyons pour la description de ces symptômes.

Propriétés du poison. — Jusqu'ici, nous n’avons pu isoler le
poison, de sorte que nous ne savons pas exactement de quelle

(4) AuczarR, Recherches sur les poisons microbiens. Arch. de méd. expé-
rim., 1903, p. 725.

POISONS PRODUITS PAR L’ASPERGILLUS FUMIGATUS 375

substance chimique il s’agit, ni même s'il n’y à pas plusieurs
poisons. Nous avons pu cependant déterminer quelques-unes
de ses propriétés en expérimentant avec la matière huileuse
extraite des cultures, comme il a été dit précédemment, et qui
renferme le ou les corps toxiques (1).

En ce qui concerne les symptômes que détermine, chez les
animaux sensibles, le poison convulsivant, nous avons fait de
très nombreuses expériences; elles ont toutes confirmé ce que
nous avions dit à ce sujet dans notre premier travail. Nous
indiquerons donc seulement quelques points particuliers et
nouveaux que nous ont appris les nouvelles recherches faites
avec une meilleure méthode d'obtention du poison.

En premier lieu, nous avons pu mettre en évidence la très
grande toxicité de ce poison pour les espèces sensibles comme
le lapin. Chez cet animal, il suffit, par la voie intraveineuse,
de 1/10 de milligramme par kilogramme, de l'extrait huileux,
obtenu comme il a été dit dans la note précédente, pour déter-
miner des accidents graves. Avec 1/2 milligramme par kilo-
gramme, la mort survient presque fatalement. Or, il est évi-
dent que le poison ne représente qu'une partie de l'extrait
injecté.

Comme, dans nos premières expériences, nous avons vu que
la sensibilité du cobaye est moins grande que celle du lapin. Il
faut ordinairement une dose triple (par kilogramme) de la
dose mortelle pour ce dernier pour entrainer la mort du
cobaye.

Ensuite, nous avons tenu à vérifier la résistance du pigeon à
ce poison, résistance que nous avons déjà signalée et qui nous
a semblé d'autant plus étonnante que l’on connaît la sensibi-

(1) Afin de purifier autant que possible le poison, nous avons utilisé sa
solubilité partielle dans l’eau de la façon suivante : l'extrait éthéré de cul-
ture est agité fortement avec de l’eau distillée et il se fait une sorte d’émul-
sion. On filtre alors à la bougie Berkefeld pour obtenir un liquide limpide un
peu opalescent. Ce liquide est repris par l’éther qui, évaporé, abandonne une
huile jaunâtre ayant les caractères du poison. On reprend le résidu qui
s'est déposé sur la bougie, on l'agite avec de l’eau distillée et on recom-
mence l'opération indiquée ci-dessus. En faisant plusieurs fois de suite cette
opération, on arrive à extraire la plus grande partie, mais non la totalité du
poison. Si imparfaile qu'elle soit, c'est cette méthode qui nous a donné
jusqu'ici les résultats les meilleurs, permettant d'obtenir la substance
toxique débarrassée d’une partie des corps gras que l’éther enlève avec elle
aux cultures du champignon.

376 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

lité de cet animal aux inoculations d'A. fumigatus. Divers
essais nous ont donné des résultats identiques à ceux que
nous avions obtenus en 1906; ils ont mis en relief la très
grande résistance du pigeon au poison tétanisant, mais ils
nous ont montré que cette résistance n'est cependant pas
absolue. En employant de très fortes doses, on peut déterminer
des accidents convulsifs et tétaniformes chez le pigeon, comme
chez le lapin et chez le cobaye. Voici deux de nos expériences
à cet égard.

,

Un pigeon ayant reçu la dose 200 fois mortelle pour le même poids de
lapin, a présenté des accidents convulsifs et télaniformes pendant 3 heures :
il s'est rétabli le lendemain de l'injection. Dans une autre expérience, un
pigeon de 330 grammes a reçu 560 fois la dose mortelle pour le même poids
de lapin, il a eu des accidents tétaniques violents pendant 5 heures environ,
mais 48 heures après il paraissait complètement rétabli.

Enfin, nous avons vu que le poison tétanisant est actif, chez le lapin au
moins, quand on l’introduit par la voie digestive. En injectant le poison dans
l'estomac à l'aide d’une sonde, nous avons déterminé des accidents Léta-
niques classiques entraînant la mort, mais il fallut employer une dose beau-
coup plus considérable que dans les injections sous-cutanées ou intra-
veineuses.

ACTION DE LA TEMPÉRATURE.

Dans notre premier travail, nous avions noté que le poison
tétanisant de l’A. fumigatus, chauffé pendant plus de trente
minutes au-dessus de 85 degrés, est certainement atténué,
mais qu'il faut atteindre 120 degrés pendant trente minutes
dans la vapeur d'eau pour que le poison, à la dose plusieurs
fois mortelle, ne détermine plus d'accidents tétaniques chez le
lapin ; remarquons toutefois qu'après avoir subi l’action de la
température dans ces conditions, le poison cause encore chez
les animaux sensibles certains phénomènes tels que anxiété,
hyperexcitabilité, montrant que la substance toxique n’est pas
complètement détruite.

Les nouvelles expériences que nous avons faites confirment
ces conclusions. Par exemple, nous avons injecté au lapin, par
voie sous-cutanée, 48 fois la dose mortelle de poison chauffé à
l’'autoclave à 120 degrés pendant quarante-cinqg minutes;
l'animal à très bien résisté, mais il a offert de l'anxiété au
cours des deux heures qui ont suivi l’injection.

POISONS PRODUITS PAR L'ASPERGILLUS FUMIGATUS 377

En outre, nous avons constaté que les conditions dans les-
quelles le chauffage est opéré ont ici une importance de premier
ordre. Le chauffage en présence de l’eau amène certainement
une altération du poison plus ou moins rapide, suivant le degré
de température et selon le temps de chauffe, tandis que îïe
chauffage à sec semble sans action. Ainsi, en chauffant à
120 degrés pendant quarante-cinq minutes du poison bien sec
dans un tube scellé, nous avons vu que les propriétés toxiques
sont conservées. On peut en conclure que l’eau, à une tempé-
rature élevée et pendantun temps suffisant, exerce une action
sur la molécule chimique du poison et qu’elle doit amener dans
cette molécule des modifications qui atténuent les propriétés
tétanisantes et convulsivantes. De l'indication fournie par ces
faits, il nous paraît intéressant de rapprocher celle que donnent
les expériences relatives à l’action des alcalis.

Action des alcalis et des acides. — En opérant avec la soude,
nous avons vu, dans une série d'essais, que la toxicité du
poison diminue et finit mème par disparaître. Seulement les
conditions de ceite action (temps, température, degré de
concentration, ete...) jouent un rôle très important qu'il nous
est difficile de préciser pour le moment; voici deux expériences
qui permettent de se rendre compte de cette action de la
soude.

Un résidu aqueux contenant 4 fois la dose mortelle pour un cobaye a subi
l'action de la soude à 2 1/2 p. 100 pendant cinquante-deux heures à
40 degrés : après ce temps, il s'est montré dépourvu de toxicité.

Un autre résidu aqueux contenant aussi 4 fois la dose mortelle pour le
lapin, reste encore actif après action de la soude à 1 p. 100 à 37 degrés
pendant quarante heures, mais sa toxicité est atténuée, car il ne délermine
pas la mort.

Les acides nous ont paru beaucoup moins actifs que la
soude; ainsi, en employant l'acide chlorhydrique, nous avons
constaté qu’au taux de 2 1/2 p. 100 et après quatre Jours à
la température du laboratoire, les solutions aqueuses toxiques
ont conservé leur pouvoir nocif vis-à-vis des animaux. Dans
ce cas, il se produit une clarification du liquide sous l'in-
fluence de l'acide, avec formation d’un dépôt au fond du vase.
C’est dans ce dépôt que l'on retrouve la plus grande partie du
poison.

378 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Dialyse. — Ajoutons enfin que le poison tétanisant passe à
travers la membrane du dialyseur. Avec le liquide de culture
ou avec une émulsion aqueuse, obtenue à l'aide de l'extrait
éthéré de la plante elle-même, et après quarante-huit heures de
dialyse à la température du laboratoire, nous avons trouvé le
poison dans le liquide dialysé. Nous ferons remarquer que
cette méthode pourrait être utilisée pour séparer, au moins
partiellement, la substance toxique des extraits de culture.

CONDITIONS D'APPARITION DU POISON
DANS LES CULTURES D'ASPERGILLUS FUMIGATUS.

Munis d'une meilleure méthode d'extraction du poison, nous
avons pu déterminer son existence avec beaucoup plus de pré-
cision que nous ne l’avions fait dans nos premières recherches,
et nous avons vu que la formation de ce poison a lieu, dans
toutes les cultures sur les divers milieux, dans des conditions
beaucoup plus larges que nous ne le pensions tout d'abord.

Ainsi, les cultures sur solutions simplement peptonées à
4 p. 100 dont le développement reste médiocre, contiennent le
poison : nous l'avons vérifié au bout de un mois de séjour de
ces cultures à l’étuve à 25 degrés. Cependant il est certain que
la production de la substance toxique est plus grande dans les
cultures qui se développent abondamment sur les milieux
favorables, comme sur le bouillon peptonisé à 1 p. 100 et glu-
cosé à 3 p. 100. Sur ce milieu, nous avons décelé le poison dans
la plante et dans le liquide de culture dès le quatrième jour, à
l'étuve à 25 degrés. Après un mois, ces cultures sont très
riches en poison.

Ceci est parfaitement conforme aux conclusions de Céni et
Besta sur le même sujet, mais sur un autre point nous sommes
en désaccord avec ces savants. En effet, dans leurs travaux, ils
insistent sur la variation de production des poisons tétanisants
de l’Aspergillus fumigatus (et d’autres champignons aussi), sui-
vant les diverses saisons de l’année. D’après eux, ces plantes
présentent leur maximum de sécrétions loxiques au printemps
et en été; durant l'hiver, ce pouvoir diminue considérablement
ou même disparaît tout à fait. Ce phénomène ne serait pas
seulement en rapport avec les variations saisonnières de tem-

POISONS PRODUITS PAR L'ASPERGILLUS FUMIGATUS 319

pérature, mais aussi avec d’autres condilions, car les auteurs
sus-indiqués ont vu le pouvoir toxique disparaître pendant
l'hiver dans des cultures d'Aspergillus maintenues à l’étuve à
31 degrés.

Or, après une étude de cinq années, au cours desquelles
nous avons recherché un grand nombre de fois le poison téta-
nisant dans les cultures d’Aspergillus fumigatus développées
dans notre laboratoire à l'étuve à 25 degrés, nous avons d’une
manière constante trouvé ce poison quelle que soit l'époque de
l’année et sans que nous puissions observer à cet égard de dif-
férences appréciables entre les cultures faites dans les mêmes
conditions aux différents mois de l’année.

NATURE DU POISON TÉTANISANT.

Actuellement, il nous est impossible de préciser la nature
chimique du poison tétanisant et convulsivant de lAspergillus
fumigatus, et celte question nous paraît très difficile à résoudre.
Céni et Besta pas plus que Paladino-Blandini, qui ont étudié
ce poison, ne se prononcent à ce sujet : les premiers affirment
seulement qu'il n’offre aucun rapport avec les composés phé-
noliques.

Les recherches que nous avons faites depuis 1906 nous auto-
risent cependant à dire que, contrairement à l'hypothèse émise
lors de noire premier travail, le poison tétanisant et convul-
sivant de l’Aspergillus fumigatus n'appartient pas au groupe
des toxines, si l’on prend ce terme dans son acception usuelle.
Sa faible solubilité dans l'eau, sa solubilité très grande dans
l'alcool, l’éther, le sulfure de carbone, le chloroforme, la ben-
zine, sa résistance à la chaleur sont à cet égard des arguments
très importants.

Nous ajouterons aussi que nous avons cherché en vain, avec
nos extraits toxiques, les réactions classiques des alealoïdes. Il
paraît done acquis que nous n'avons affaire, en l'espèce, ni à
une substance d'ordre diastasique ni à un corps de nature
alcaloïdique. C’est tout ce que, pour le moment, nous pouvons
dire d’une façon précise.

S'il nous est permis toutefois de faire ici une hypothèse, sous
toutes réserves, nous dirons qu'il est possible que ce corps,

380 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

doué de pouvoir tétanisant et convulsivant, appartienne au
groupe chimique des substances grasses et particulièrement de
celles que l'on étudie depuis un certain temps sous le nom de
lipoïdes. Nous nous appuyons pour cela sur l’action des
solvants tels que l’éther, l'alcool, le sulfure de carbone, Le chlo-
roforme, la benzine, sur la faible solubilité du poison dans
l'eau, sur sa résistance à la chaleur, toutes propriétés qui se
retrouvent chez les lipoïdes, parmi lesquels des travaux
modernes, notamment ceux de Korschun, de Morgenroth, de
Landsteiner, de Levaditi, d'Iscovesco, de Noguchi, de Lefman,
de Bloch, de Bang, ont fait connaître diverses substances
toxiques élaborées par les cellules vivantes.

DE LA VÉSICULE BILIAIRE
ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE L'IMMUNITÉ
ET A LA PHYSIOLOGIE GÉNÉRALE

par HExrt VIOLLE

de la marine de guerre.

INTRODUCTION

De tous les modes d'inoculation vaccinale, le meilleur à
employer serait assurément celui qui, tout en provoquant chez
l'animal opéré le moins de réaction possible, limmuniseraitrapi-
dement et intensivement. Il est évident que des bactéries ou des
toxines ne peuvent être injectées dans l'organisme par doses mas-
sives intermittentes, ce qui produit chez l'animal des ressauts
de réaction violente, mais plutôt d’une façon lente et continue,
afin que le sujet, recevant à chaque instant le virus ou la toxine,
soit totalement et doucement imprégné par lui. Il peut alors
réagir sans grand fracas et faire inconsciemment, pour ainsi
dire, son immunisation. La méthode des inoculations succes-
sives, par doses croissantes de virus, dont le degré de toxicité
augmente parallèlement, répond à ce but. C'est elle, en effet, qui
dans la pralique des vaccinations fournit les meilleurs résultats.

Mais, là encore, l'immunisalion ne peut se faire que par petits
à-coups, par oscillations successives, dont on ne saurait prévoir
la grandeur ; la période d’immunisation est en outre fortlongue,
se chiffrant par plusieurs mois (4, 5, 6 et plus); et les phéno-
mènes intimes qui président à l'élaboration des anticorps sont
difficiles à surprendre.

Un antigène virulent, placé dans l'organisme en une position
telle qu'il pourrait difficilement se généraliser, mais facilement
être atteint par les leucocytes bactériophages, provoquerait la
formation abondante d'anticorps spécifiques. Mais est-il possible
de résoudre ce problème? Autrement dit, peut-on trouver dans

382 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'organisme un point tel que les bactéries virulentes situées en
ce lieu et ne le pouvant quitter, sauf dans des cas très rares,
restent soumises à l’action des leucocyles, dont le but est de
détruire ces corps bactériens et de produire des anticorps?

Le sac de collodion, chargé de bactéries et déposé dans la
cavité péritonéale d'un animal, afin d'obtenir par des passages
successifs un renforcement de virulence (Roux, Metchnikoff et
Salimbeni), ne paraît pas directement applicable.

En effet, si l’on introduit dans la cavité péritonéale d’un lapin
un sac de collodion renfermant 1 centimètre cube de culture
typhique de 24 heures en bouillon, et que l'on procède tous les
3 jours à des essais de mensuration du taux agglutinatif du
sérum de l'animal, on ne constate qu'un renforcement très
faible des propriétés agglutinantes de ce sérum.

Deux lapins, l’un ayant depuis i mois un sac de collodion,
ensemencé avec une culture typhique, et l'autre servant de
témoin, sont inoculés intrapéritonéalement avec une culture
typhique à dose mortelle (environ 10 centimètres cubes). Les
deux animaux meurent, à peu près dans le même laps de temps;
il n'y a pas eu d’immunisation forte chez le premier sujet dont
la mort survient quelques heures après celle du témoin. Il paraît
s'ensuivre que des corps bactériens inclus dans des cavités
closes et imperméables ne permettent point l'élaboration d'an-
ticorps spécifiques. Toutefois, la question est plus complexe, ce
qui explique quelques résultats différents.

C'est ainsi qu'avec des microbes extrèmement virulents pour
une espèce animale, la méthode des sacs de collodion chargés
de ces cultures a procuré quelques propriétés vaccinantes aux
animaux en expérience. Il en est ainsi avec le choléra des
poules, où Bisanti trouvait qu'après 20 jours les sujets résis-
taient à l'ingeslion d’une culture virulente. Dans ce cas, les
anticorps formés sont antitoxiques, puisque la mince paroi de
collodion s'oppose au passage des corps organisés (microbes
ou phagocytes) mais laissent diffuser dans l'organisme les
loxines microbiennes, ou plus exactement certaines toxines
(Rodet et Guecheff). 11 en résulte que si l’on à affaire à une
toxine dialysabie très active, comme celle pouvant être produite
par le bacille tétanique, les leucocytes, ne pouvant atteindre les
spores protégées par la membrane de collodion ou mieux par

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 383

une membrane de papier, plus perméable à la toxine (Vaillard,
Vincent et Rouget), l'animal succombera au tétanos. En effet,
les spores, se développant, donneront des bacilles qui sécréteront
la toxine mortelle.

Le procédé du sac de collodion serait donc utilisable s'il
pouvait être également perméable aux leucocytes et imper-
méable aux bactéries. Ces conditions, en apparence contra-
dictoires, nous les trouvons dans la vésicule biliaire de certains
animaux et en particulier du lapin.

VÉSICULE BILIAIRE
TECHNIQUE DE L’INOCULATION INTRAVÉSICULAIRE

EL. — VÉSICULE BILIAIRE.

La vésicule biliaire chez le lapin se présente sous la forme
d'un sac ovoïde ayant en moyenne 2 centimètres de longueur
suivant son grand axe et 1 centimètre de largeur. Sa capacité
est d'environ 1 centimètre cube, mais très irrégulière, puisque,
avec des animaux de poids égaux, ce nombre peut varier du
simple au triple.

Sa paroi est constituée par deux tuniques, l’une externe se
subdivisant en deux zones : périphérique, fibreuse: centrale,
musculaire. Cette couche comprend des fibres longitudinales
externes, circulaires internes; l’autre interne, muqueuse, com-
prenant un chorion constitué par un tissu conjonctif réticulé.
Des amas leucocytaires, véritables follicules clos, sont répandus
dans ce chorion qui se soulève en plis saillants, nombreux et
très irrigués. Au-dessus, outre le derme et l’épithélium, on
constate la présence d’une membrane basale. L'épithélium est
simple, prismalique, à noyau ovoïde et revêtu d’un plateau strié.

Mais quels sont les rapports de cette vésicule avec le foie,
avec la circulation locale et générale ? Est-elle, abstraction faite
de la région canaliculaire qui s’anastomose avec le canal hépa-
tique, absolument indépendante ?

Elle présente des connexions avec les tissus hépatiques, et
elle est reliée par des vaisseaux au reste de l'organisme.

Ses faces latérales externe et interne, sa face inférieure et
son pôle, revêtus par le seul feuillet viscéral du péritoine, sont

384 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

libres de toute adhérence et permettent, en n'importe quel
point, d'atteindre la vésicule. Mais sa face supérieure est inti-
mement reliée au tissu hépatique; ni la déplétion, ni la réplétion
de la vésicule ne permettent de la libérer de ses adhérences. La
tunique fibro-musculeuse adhère là au parenchyme par l'inter-
médiaire d'un tissu cellulaire assez épais. Les connexions vont
plus loin : elles sont non seulement tissulaires, mais encore

Fic. 1. — Foie normal de lapin.

A, Point où la vésicule biliaire est liée. — B, Point où la vésicule biliaire
est ponctionnée,

vasculaires; et, dans cette région vésiculaire adhérente, on
trouve les artères perforantes qui vont directement du foie à sa
face supérieure, et des veines cystiques profondes qui pénè-
trent dans la fossette cystique et se ramifient à la manière
des artères, formant un système de veines portes accessoires.
Il en résulte que les communications entre le foie et la vésicule
biliaire restent bien établies, alors même qu’une ligature est
posée au col et comprend le canal eystique, l'artère eystique
et les veines cystiques superficielles. Ces communications

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 385

hépato-vésiculaires sont mises en évidence par les inoculations
de substances toxiques et par celles de corps microbiens.

I. Injection de substances toxiques. — ÆElant donnés deux
lapins de même poids, on inocule à l'un, dans la veine margi-
nale de l'oreille, 10 milligrammes de sulfate de strychnine, dis-

F1G. 2. — Vésicule b'linr'e normale (face supérieure).

a, Muqueuse : endothélium, chorion. — b, Couche musculo-fibreuse.
ce, Tissu hépatique.

sous dans 1 cent. cube d’eau stérilisée. La mort est immédiate
par convulsions et tétanisalion généralisées, se produisant avant
mème que l'aiguille soit retirée.

Si l'on fait une injection semblable au second lapin, mais en
inoculant la solution dans la vésicule biliaire liée, on obtient

25

386 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

des résultals qui, quoique se rapprochant beaucoup des précé-
dents, en diffèrent toutefois par la longueur d'évolution. Là
encore, l'animal meurt, mais les phénomènes morbides n’ap-
paraissent pas avec l'instantanéité précédente : pendant les
10 premières minutes, aucun symptôme ne se manifeste;
puis, ce laps de temps écoulé, quelques convulsions apparais-
sent, donnant le signal du drame qui se déroule en quelques
minutes.

Il. /noculation de microbes. — On prend deux lapins
l’un reçoit en injection intraveineuse 4 centimètre cube d’une
culture charbonneuse en bouillon à 37 degrés, âgée de 8 jours;
l'animal meurt en 24 à 36 heures généralement, avec les
lésions caractéristiques du charbon. L'autre animal reçoit la
mème solution en même quantité dans la vésicule biliaire
liée; il meurt également, mais avec un léger retard, après 48 à
52 heures.

Il résulte de ces faits que la paroi vésiculaire laisse passer
ces différents corps en solution aqueuse, en bouillon, en eau
peptonée , etc.

On voit, en outre, que les antigènes ne subissent pas de
transformalion appréciable dans leur passage à travers le foie,
quoique ce dernier ait un rôle protecteur et éliminateur contre
les toxines exogènes (1) et endogènes (2).

Les propriétés que nous venons de signaler ne sont pas par-
üiculières à la vésicule du lapin. Chez le cobaye, le mouton et le
bœuf, la vésicule présente également des adhérences.

Chez le cobaye, la vésicule biliaire, relativement très grosse,
présente une paroi mince et translucide, à travers laquelle
apparaît la bile, jaune clair et très limpide. La face supérieure
vésiculaire est entièrement et intimement adhérente au foie,
sans présenter de plan de clivage, de telle sorte que toute
séparation des deux organes entraîne un déchirement du tissu
hépatique. Les vaisseaux allant de l’un à l’autre de ces organes
sont situés dans la zone d'adhérence.

Chez le mouton, la vésicule, de dimensions très variables,
parfois même totalement atrophiée, ayant d'ordinaire le

(1) HeGer (1873), RoGer (1881).
(2) Dasrre, Dictionnaire de Physiologie. Article « Foie ».

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 387

volume d’une figue, présente aussi avec le tissu hépatique
des adhérenees, comprenant dans leur intérieur de nombreux
vaisseaux établissant la circulation entre les deux organes. Ces
adhérences sont situées à la face supérieure, laissant libre le
pôle vésiculaire et comprenant seulement la portion moyenne
et canaliculaire de la vésicule.

Chez le bœuf, la vésicule est de forte dimension, ovoiïde,
ayant de 15 à 20 centimètres de long suivant son grand axe, à
parois épaisses, vaseularisées ; le contenu est d'environ 150 à
200 grammes de bile ; la face supérieure présente également de
fortes adhérences avec le foie et de nombreuses vasculari-
sations.

Chez Le cheval, on sait que la vésicule biliaire fait défaut.

II. — TECHNIQUE DE L'INOCULATION INTRA-VÉSICULAIRE.

La méthode que nous avons employée pour faire les inocula-
tions dans la vésicule biliaire du lapin est la suivante :

Dans les premiers essais que nous fimes, nous atteignions la
vésicule en faisant l’incision suivant le rebord des fausses côtes
droites. Le dégagement du foie était plus aisé et la mise à nu
de la poche vésiculaire rendue ainsi très facile; mais l'opération
était un peu longue par suite de la section des plans muscu-
laires et de la ligature souvent obligatoire de l'artère mam-
maire droite.

C'est pourquoi, dans toutes les opérations suivantes, nous
opérâmes suivant la ligne blanche en procédant aux diffé-
rents temps que voici :

L'animal étant attaché par les membres sur un plateau de
zinc, la région à opérer est épilée, puis aseptisée à l'alcool et
à la teinture d’iode. On fait l’anesthésie à l’éther, si l'animal est
trop sensible, car les mouvements brusques à certains temps
délicats (injection dans la vésicule) peuvent compromettre le
résultat de l'opération. Les téguments sectionnés suivant la
ligne médiane, on tombe sur la ligne blanche, que l'on ineise
sur une longueur de 4 à 6 centimètres. On déchire le léger voile
constitué par le péritoine, et le foie apparait. On attire l'organe
en bas, et on l’éverse de bas en haut et d’arrière en avant : le
foie luxé, la face inférieure est ainsi mise à jour. En inter-

388 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

posant, d'une part, des tampons de gaze entre la coupole dia-
phragmatique et le foie; en bourrant, d'autre part, l’espace inter-
médiaire entre la région inférieure du foie et les intestins, on
« cale » la masse hépatique ; et les manœuvres de la vésicule,
très en évidence, sont aisées. On passe sous le col ainsi dégagé,
un fil de soie monté sur une aiguille de Reverdin, et on lie le
canal en ce point. A l’aide d'une seringue de Pravaz ponction-
nant la vésicule à son
pôle libre, on aspire le
contenu vésiculaire qui,
dans beaucoup de cas,
est riche en mucine, en
sels concrétés, et forme
ainsi un liquide épais,
qui difficilement pénètre
dans l'aiguille. En le di-
luant et en lavant la vé-
sicule à plusieurs reprises
avec de l’eau physiolo-
gique jusqu'à ce qu'elle
sorte complètement inco-
lore, on a un réservoir
d'une capacité de 1/2 à
À centimètre cube 17/2,
prêt à recevoir les inocu-
À, Point où la vésicule est d’abord liée. — lations de liquide patho-
B, Point où la vésicule est ensuite ponc- gène. L'aiguille étani
np nn ReniEUOr | loujours en place (er ÿ
cule est liée en ce point. serait, dans le cas où on
l'aurait retirée, très diffi-

cile de retrouver le premier orifice) et la seringue étant chargée
du liquide antigénique, on pousse l'injection doucement jusqu'à
ce que la vésicule ait atteint son volume primitif. À ce moment,
toujours sans retirer l'aiguille, on passe un fil de soie compre-
nant dans sa boucle cette aiguille et la paroi vésiculaire, légè-
rement soulevée et tendue par une pince. Tout en dégageant
l'aiguille, on serre le fil de façon que celle-ci, complètement
retirée, aucune goutte de liquide ne vienne à sortir. Enfin,
pour plus de sûreté, on met une pointe de feu sur l’orifice. On

F16. 3. — Schéma indiquant le mode
d'inoculation intra-vésiculaire.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 389

enlève les tampons, on suture la ligne blanche à l’aide de
trois ou quatre points de catgut. Les téguments sont réunis
par quelques agrafes de Michel. En dernier lieu, on badigeonne
à la teinture d'iode la plaie suturée, que l’on recouvre d'un peu
de collodion.

OBTENTION D'ANTICORPS
PAR INOCULATION DANS LA VÉSICULE BILIAIRE

A la suite d’inoculations intravésiculaires de divers anti-
gènes, l'organisme réagit par la formation d'anticorps spéci-
fiques correspondants.

I. — Mais il est de toute nécessité de transformer la vésicule
en un sac clos, ce qui s'obtient par la ligature du col. Autre-
ment l’antigène inoculé dans la vésicule biliaire préalablement
vidée de son contenu, mais libre, s'éliminera rapidement par
voie intestinale sans provoquer la formation d'anticorps.

Exemple : Lapin n° 26 reçoit le 20 juillet dans la vésicule
libre, sans contenu biliaire et lavée préalablement à l'eau légè-
rement alcalinisée, 1/2 tube de culture cholérique à 37 degrés
sur gélose de 24 heures diluée dans 1 centimètre cube 1/2 d’eau
physiologique. La température, 24 heures après, s'élève très
légèrement (1° à 1° 1/2) durant 24 heures pour revenir ensuite
à la normale. Le taux agglutinatif du sérum qui, avant l'opé-
ration, était de 1 pour 5, se maintient à ce chiffre 8, 10 et
15 Jours après l'opération.

A ce moment, l'animal est sacrifié; la vésicule biliaire est
sans adhérence, sans épaississement des parois, mais présente
une très légère congestion de la muqueuse; son contenu est
vert clair, constilué par de la bile, qui a rempli à nouveau la
poche vésiculaire. Microscopiquement, ce liquide contient une
proportion très élevée de cellules endothéliales ; on ne voit ni
leucocytes, ni bactéries. Toutefois, l’'ensemencement en eau
peptonée est positif et montre la présence de vibrions.

En un mot, l'inoculation de vibrions cholériques dans Ja
vésicule biliaire libre a provoqué une légère réaction de la
muqueuse ; les vibrions cholériques ont disparu en grande par-
tie après 10 à 15 jours et n'ont pas engendré la formation d'an-
ticorps spécifiques.

Les ensemencements en eau peptonée de sang prélevé par

390 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ponction intracardiaque pendant les 15 jours suivant l’inocula-
tion, sont restés négatifs.

11. — Au contraire, l’antigène inoculé dans la vésicule trans-
formée en cavilé close donnera naissance à des anticorps.

Prenons le cas des vibrions cholériques inoculés dans une
vésicule liée : après quelque temps, 10 à 15 jours, le sérum
jouit de propriétés immunisantes.

IT. — Si l’on vient à inoculer dans la vésicule liée une cul-
ture microbienne, mais cette fois préalablement tuée par la
chaleur, l'animal ne paraîtra point réagir, et cette inoculation
passera inaperçue. Toutefois, le sérum contient des anticorps,
comme dans le cas précédent, quoiqu'en plus faible propor-
tion.

A l’autopsie, faite 2 à 3 semaines après l’inoculation, on
rencontre toujours une vésicule hypertrophiée, à contenu
caractéristique. Au contraire, la vésicule est-elle fée après
aspiration de son contenu et laissée vide, elle ne tarde pas à
s'atrophier, et, au bout de quelques semaines, elle présente
l'aspect d'une membrane desséchée et ridée.

Par quel mécanisme peut-on expliquer la production des
divers anticorps?

Anatomiquement, nous constatons toujours, à la suite de nos
opérations sur la vésicule liée, la même série de lésions, quel
que soit l'antigène inoculé (virulent ou non: bactéries, toxines,
hématies ou substances albuminoïdes); la vésicule biliaire à
changé de volume, elle s’est hypertrophiée jusqu'à atteindre
dans certains cas le volume d’un œuf de poule (voir les obser-
vations relatives à l’inoculation du bacille typhique).

La paroi est épaissie, indurée. Histologiquement, on constate
en parcourant la coupe de dedans en dehors (voir figures aux
chapitres « Choléra » et « Tuberculose ») :

1° Que la tunique interne où muqueuse présente :

a) Un épithélium intact, à cellules peu desquamées, n1 atro-
phiée ni hypertrophiées. Mais, entre ces cellules, on rencontre
un très grand nombre de globules blancs {polynucléaires) se
glissant soit vers la tunique externe, où ils transportent avec
eux les anticorps élaborés, soit dans l’intérieur de la vési-
cule à l'effet de détruire l’antigène inoculé:

B) Un chorion très fortement épaissi et dont l'architecture

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 391

est modifiée par la triple présence de globules blancs (polynu-
cléaires et mononucléaires) en abondance, de fibres conjonc-
tives, de vaisseaux de néo-formation consistant en capillaires
nombreux ;

2° Que la tunique externe présente également une abondance
anormale de leucocytes et de capillaires, mais laissant subsis-
ter intacte l'architecture primitive.

A l'intérieur de la poche, on trouve une substance semi-
liquide essentiellement constituée par des globules blancs (poly-
nucléaires).

Si nous prenons le vibrion cholérique, par exemple, nous
voyons qu'à son début, dans les premières heures qui suivent
l'opération, il est en extrême abondance; injecté en petite
quantité, il a pu dans ce milieu favorable se développer; sous
son action, la muqueuse vésiculaire est rouge, congestionnée,
desquamée, laissant tomber dans le liquide une quantité
énorme de cellules endothéliales. Puis, les leucocytes com-
mencent déjà à apparaître; très mobiles, attirés par un chimio-
tactisme positif (toute toxine, tout corps microbien en faible
proportion jouit de cette propriété), ils sont venus des diffé-
rents points de l'organisme. Ils ont passé par les capillaires qui
forment un réseau à la face supérieure de la vésicule, inlime-
ment reliée, nous le savons, à la face inférieure du foie. Grâce
aux anastomoses vasculaires, et malgré la ligature du col qui
intéresse le canal cyslique et la plus grande partie des voies
sanguines irriguant la vésicule, les leucocytes ont pénétré à
travers les diverses tuniques vésiculaires et sont tombés dans
la cavité même, se trouvant ainsi en présence des corps micro-
biens. Là, sous l'influence des toxines sécrétées, une partie
des leucocytes a été détruite; mais l’afflux continuant à se
produire, les globules blancs, à leur tour, toujours renouvelés,
ont pu vaincre la résistance microbienne, et, par leur action
diastatique propre, immobiliser, puis englober et finalement
détruire les vibrions. Aux dépens de ces corps microbiens
disparus, se sont élaborées, dans le cytoplasme leucocytaire, des
substances actives qui, lors d’une nouvelle injection cholérique,
viendront sensibiliser les nouveaux vibrions dont la destruc-
tion sera parachevée par les alexines banales du sérum. C'est
là, schématiquement résumée, dans le cas actuel, la théorie de

392 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Metchnikoff sur l'immunité, théorie phagocytaire grâce à
laquelle les phénomènes qui se passent dans la vésicule s'ex-
pliquent aisément, et sans laquelle, par contre, il est impos-
sible, avec les seules théories humorales, d'interpréter les faits.
Le leucocyte joue dans ces phénomènes d'élaboration des anti-
corps le rôle prépondérant : sans leucocytes, point de vaccina-
tion possible, point d'anticorps pouvant se former. Les expé-
riences citées plus haut le prouvent avec évidence. Vient-on
à favoriser l’afflux leucocytaire dans la vésicule, des anticorps
se forment en plus ou moins grande abondance; vient-on au
contraire à enlraver cette leucocytose, à interdire aux globules
blancs l'entrée de cetle poche vésiculaire, on ne perçoit pas
la plus faible réaction d’immunité.

A la suite de la résorption des corps étrangers, les leucocytes
se mettent à élaborer une grande quantité de sensibilisatrices
ou phylocytases, et l’on admet que la rate, la moelle osseuse,
les ganglions, sont les foyers producteurs de ces substances.
Élaborées en certains points seulement, elles resteraient loca-
lisées dans ces mêmes globules blancs qui les ont engendrées ;
ou bien, éliminées par ces leucocytes encore vivants, elles se
disperseraient dans le plasma, se généraliseraient dans tout
l'organisme. Et, de fait, ces deux hypothèses se justifient par
les constatations suivantes :

1° Dans le sérum on trouve, après quelques jours, des anti-
corps parfois en quantité notable, capables, à faible dose, de
neutraliser des toxines très actives : les agglutinines, les
précipilines, les sensibilisatrices, les antiloxines, etc., sont, en
effet, en circulation dans le plasma.

2° Dans les foyers d'élaboration, ces mêmes substances se
trouvent naturellement présentes. Or, dans le cas d’inoculation
intravésiculaire, le point d’origine de formation des anticorps
est, avant les ganglions, avant la moelle osseuse et la rate,
assurément la vésicule dans laquelle on à inoculé l’antigène (1).

(1) Vu la difficulté qu'il y a à apprécier d'une manière exacte la teneur en
leucocytes dans le sang périphérique d'un lapin, cette teneur variant dans
des limites extrêmes d'un instant à l’autre, 8.800 à 13.000 selon Tallquist et
Villebrand, et, d'après Besançon et Labbé (Trailé d'hématologie, p. 308), « les
variations physiologiques étant encore beaucoup plus étendues » et faussant
tout résultat, nous nous sommes abstenu de faire les numérations leucocy-
Laires,

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D’INOCULATION 393

Les faits expérimentaux le prouvent {voir 2° partie : vibrion
cholérique et bacille tuberculeux).

Le contenu vésiculaire est donc doué de propriétés vacei-
nantes au même titre que le sérum. Autrement dit, il semble
vraisemblable que les globules blancs, générateurs des anli-
corps, conservent ces derniers dans leur cytoplasme en pro-
portion si appréciable que la quantité vaccinante leucocytaire
est supérieure à la dose également vaccinante sérique : c’est-
à-dire que la concentration en anticcrps est plus grande, à
volumes égaux, dans le suc vésiculaire que dans le sérum où
ils se trouvent plus ou moins fortement dilués.

Il est donc probable qu'il y aurait intérèt dans ce cas à
utiliser, comme moyen d'immunisalion, non pas le sérum,
mais les globules blancs qui en contiennent toutes les
substances actives, et ne paraissent pas présenter, par contre,
les mèmes propriétés toxiques.

La présence des leucocytes dans la vésicule persiste très
longtemps. Quel que soit l'antigène inoculé, à l'autopsie, on
trouve toujours dans la poche vésiculaire des globules blanes ;
ils ne sont jamais complètement détruits et résorbés; après
5, 6et 7 mois (dale ultime à laquelle nous avons sacrifié les
animaux), la vésicule a conservé son contenu leucocytaire, la
proportion des éléments vivants aux éléments morts paraissant
passer par trois phases successives :

1° Dans la première, qui suit l'opération, et qui dure de
2% à 48 heures, les leucocytes sont en grande partie détruits,
aussitôt leur arrivée dans la vésicule.

2° Dans une seconde période, allant du 2° au 15° jour envi-
ron, c'est-à-dire durant toute la phase d'élaboration des anti-
corps, la proportion des éléments vivants l'emporte sur celle
des éléments tués.

3° Dans une troisième et dernière période, débutant vers le
15° jour et dont la terminaison ne se fait que très tardive-
ment, de nouveau la proportion de cellules dégénérées vésicu-
laires est supérieure à celle des cellules encore jeunes.

Par contre, la vitalité des corps microbiens dans la vési-
sule se montre de courte durée. Après 15 Jours, dans
tous les cas de choléra observés, l’eau peptonée, ensemencée
avec le liquide vésiculaire restait stérile et les frottis de ce

39% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

liquide n'indiquaient jamais la présence de corps vibrioniens.

Pourtant, d’autres bactéries semblent résister davantage à
l'afflux considérable des leucocytes : le bacille tuberculeux
aviaire, 6 mois après son inoculation dans la vésicule, élait
encore en abondance quoique en quantité moindre qu'au début:
ses formes élaient nettes et le protoplasme se colorait très
aisément. Mais ces bacilles devaient être, sinon tués, du moins
excessivement atténués, puisque le contenu de la vésicule
n'est jamais parvenu, en injection intraveineuse, à tuer le
lapin, et en injection sous-cutanée, à déterminer des lésions
chez le cobaye, alors que les témoins inoculés, avec la même
dose de bacilles frais, mouraient dans un espace de temps très
court (lapin) ou préseutaient des lésions tuberculeuses (cobaye).

Ce fait que, très longtemps, plusieurs mois après l’inocula-
tion, la vésicule montre-encore la présence de leucocytes (la
plupart dégénérés), doit faire émettre l'hypothèse que le sujet
est encore en état d’immunité ou que la vaccination persiste.
Et, en effet, 4 mois après l'injection intra-vésiculaire de
bacilles tuberculeux, l’inoculation à dose mortelle en injection
veineuse de nouveaux bacilles ne provoquait aucune réaction
chez l'animal ; l’immunité avait donc persisté durant tout ce
laps de temps. Il est probable qu'elle se maintient encore
beaucoup plus longtemps.

S'il parait vraisemblable que la formation des anti-corps
est due essentiellement au contenu vésiculaire, la suppression
de la vésicule fera cesser l'immunité. Elle doit replacer l’ani-
mal dans son état antérieur de réceptivité, le jour où les
substances vaccinantes répandues dans l’organisme seront éli-
minées.

Et c'est, en effet, ce que l’on constate

Exemple : Lapin 82 est inoculé le 1° novembre intravésiculai-
rement (vésicule liée) avec une culture cholérique en eau pep-
tonée.

10 jours après l'opération, le taux agglutinatif de 1/10
(chiffre initial) s'élève à 1/500 et s'y maintient.

20 jours après l’inoculation, l'animal est opéré à nouveau et
la vésicule biliaire, gonflée, légèrement hypertrophiée, aux
parois épaissies el déjà indurées, et au contenu leucocytaire
assez abondant, est réséquée.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 395

15 jours après cette ablation vésiculaire, le taux agglutinatif
était redescendu à 1/10.

Dans la plupart des méthodes d’immunisation, il est une
période comprise entre l’inoculation vaccinante et l'appari-
tion des anticorps dans le sang, véritable phase négative pendant
laquelle le sujet est en état de réceptivité vis-à-vis de l'affection
contre laquelle on l'immunise. Besredka, par sa méthode des
bacilles sensibilisés, est arrivé à supprimer cette période d'hy-
poimmunisalion. Par les procédés d’inoculation intravésicu-
laire, cette phase négative serait également absente. Chez deux
lapins, l’un déjà inoculé intravésiculairement avec une cul-

Serraines

Fic. +,

ture cholérique, l’autre neuf, une injection intraveineuse à
dose minima mortelle détermine la mort dans le même laps
de temps (en l'espèce, 10 à 12 heures). Et de même, une dose
maxima non mortelle ne détermine la mort chez aucun des
deux sujets. Il n’y a done pas non plus d’hypersensibilité ré-
ceptrice chez l'animal inoculé intravésiculairement quelques
jours auparavant.

IMPERFECTIONS DE L'INOCULATION DANS LA VESICULE BILIAIRE

L'immunisation par la vésicule biliaire se trouve en défaut
dans le cas des bacilles peu virulents, et ne peut être employée,
sans modifications, dans le cas des bacilles trop virulents.

1° Dans le premier cas, la quantité inoculée, nécessairement

396 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

toujours faible, n’amène pas la formation d'anticorps. C'est ce
qui nous arriva avec le coli-bacille, par exemple (voir 2° partie).
Le sérum d'animaux opérés 8, 15 et 25 jours auparavant, ne
présentait aucune des substances agglutinantes, précipitantes,
indicatrices ou contemporaines de la vaccination.

Cela d’ailleurs ne fait que rentrer dans la loi générale, qui
préside à l'immunisation, et d’après laquelle la proportion
d'anticorps varie parallèlement à la toxicité ou à la virulence
de l’antigène injecté ;

2° Dans le second cas, les bactéries inoculées se généralisent
à l’intérieur de l'organisme, causant rapidement la mort de
l'animal. L'injection intravésiculaire s'est comportée comme
une injection intraveineuse, offrant les mêmes inconvénients
et les mêmes dangers. C'est là ce qui survient lors de toute
inoculation intravésiculaire charbonneuse ; la mort arrive
régulièrement 48 à 52 heures après l'opération. Il en est de
mème avec les bacilles diphtériques, dysentériques, les staphy-
locoques, streptocoques et pneumocoques. Certains bacilles,
le vibrion cholérique, par exemple, restent le plus souvent
localisés dans la vésicule, mais dans quelques cas que l'on ne
peut prévoir, ils passent dans la circulation générale et tuent
l'animal.

On peut tenter le maintien de bactéries virulentes dans
l'intérieur de la vésicule, soit en atténuant leur virulence, soit
en renforçant l’afflux leucocytaire. On obtiendra d'excellents
effets avec les deux procédés employés de concert. L'atténuation
seule de la virulence donne déjà de bons résultats. Elle peut
ètre facilement obtenue par le chauffage au bain-marie des cul-
tures entre 55 et 60 degrés durant 1/2 à 1 heure. Les bactéries
ainsi modifiées deviennent plus aisément la proie des leucocytes ;
elles ne se généralisent donc dans l'organisme que très diffici-
lement. Par contre, elles provoquent l'élaboration d'anticorps,
que l’on met aisément en évidence dans le sérum. Mais la
production de ces récepteurs est moins abondante que celle
qu'entrainent les bacilles vivants et virulents.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 397

POURQUOI LA BILE DOIT ÊTRE ÉVACUÉE DE LA VÉSICULE
ACTION ANTILEUCOCYTAIRE
ACTION DIFFÉRENTE SUR DIVERSES BACTÉRIES

Dans son ensemble, la bile a, vis-à-vis des leucocytes, un
pouvoir chimiotactique négatif intense. Les bactéries inoculées
dans la vésicule, le suc biliaire non retiré, peuvent parfois
rester un temps très long avant de disparaître. Ceci se constate
surtout si les bactéries sont en faible proportion, car un double
effet chimiotactique sera en jeu; d’une part, l'action retar-
datrice puissante de la bile; d'autre part, l’action favorisante
positive très nette des bactéries ou toxines en petite quan-
tilé.

À dose plus élevée, en effet,Ues corps bactériens et toxiques
relardent au contraire la phagocytose el peuvent même l'en-
traver complètement. Suivant donc la quantité de bile laissée
dans la vésicule, et la quantité des bactéries ou toxines ajou-
tées dans cette même vésicule, on obtiendra un mélange dont
l'action résultante sera positive, indifférente ou négative, vis-
à-vis de la leucocytose.

Enfin la bile, milieu extrêmement complexe, a également
une action propre sur les bactéries, mais les modifications
qu'elle peut leur imprimer sont encore profondément diffé-
rentes suivant les cas, parfois même opposées.

La bile vis-à-vis du pneumocoque (Neufeld, Nicolle el
Adil bey), du gonocoque, du méningocoque (Jungano), des
diplocoques se rattachant à cette même famille, aura une
action bactéricide et Ivtique puissante. Dans 2 centimètres cubes
d’une culture en bouillon de pneumocoque, âgée de 24 heures.
une faible quantité (0 cc.1 à 0 cc.2) de bile de bœuf provoquera
la destruction, la désintégration complète des éléments bacté-
riens. La culture s’éclaireit en 15 minutes et l’examen direct,
l'ensemencement, l'inoculation, révèlent l'absence de tout germe
visible, vivant et virulent (phénomène de Neufeld). Les mêmes
phénomènes se produisent avec la bile de lapin dans des cul-
tures de méningocoques et de gonocoques.

Au contraire, la bile pure de bœuf, ensemencée avec une
culture de bacilles Ltyphiques, colibacilles, paratyphiques, etc.,

398 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

favorisera le développement de ces bactéries (milieu d’enri-
chissement de Conradi pour le bacille d'Eberth); il en est de
mème avec la bile de lapin ensemencée avec les bacilles typhi-
que, coli et le vibrion cholérique. Bien mieux, ce sera un
milieu de prédilection pour ces éléments bactériens, qui sy
développeront avec une rapidité beaucoup plus grande que
dans toute autre substance nutritive.

D'autre part, la bile paraît avoir une action particulière sur
la virulence de certains bacilles, de la tuberculose en particu-
lier, la modifiant, l'atténuant dans des proportions sensibles, à
condition toutefois que la bile soit de même origine que le
bacille ; autrement dit, il est nécessaire d'employer de la bile
humaine pour le bacille tuberculeux humain, bovine pour le
bacille bovin, etc. (Calmette). On connaît les essais de vacci-
nation très intéressants qui ont été obtenus par cette méthode
(Calmette et Guérin) (1).

Mais, là encore, dans tous ces différents cas où l’action de la
bile favorise nettement le développement des corps microbiens,
sa présence dans la vésicule biliaire paraît être nuisible, car
son action leucocytaire répulsive l'emporte de beaucoup sur
l'action attirante leucocytaire provoquée par les bacilles.

Il en résulte que l’inoculation de vibrion cholérique, par
exemple, dans la vésicule biliaire non vidée de son contenu,
mais liée, ce qui constitue en réalité un ensemencement du
vibrion cholérique avec de la bile, déterminera (rès rapidement
la généralisation du vibrion dans l'organisme et pourra pro-
voquer la mort, le milieu de culture étant particulièrement
favorable, et rien n’entravant le développement.

Exemple : Lapin n° 57, inoculé le 21 octobre dans la vésicule
biliaire suivant le mode habituel, avec une goutte de culture
en eau peptonée de vibrion cholérique, âgée de 18 heures, à
31 degrés : 12 heures après l’inoculation, mort. A l’autopsie,
peu de lésions ; liquide péritonéal peu abondant, mais louche,
contenant une proportion énorme de vibrions et de polynu-
cléaires renfermant eux-mêmes des vibrions. La vésicule
biliaire est aplatie, flasque, congestionnée, renfermant des

(1) Annales de l'Institut Pasleur et C. R. de l'Académie des Sciences, années
1907 à 1912.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 399

placards de cellules muqueuses avec inclusion des vibrions.
Si l’on répète la même expérience, mais en ne liant point
d’abord la vésicule, on obtient des résultats différents :

Exemple : Lapin n° 55, inoculé le 20 juillet intravésicu-
lairement avec quelques gouttes d’eau peptonée contenant du
vibrion cholérique. Le col vésiculaire n'est pas lié, et la bile
est laissée.

Le taux agglutinatif est mesuré 5, 10, 15, 20 et 30 jours après
l'opération. Primitivement de 1/10, il ne subit aucune varia-
tion et reste identique à ce qu'il était antérieurement.

Le 20 septembre, deux mois après l’inoculation, l'animal est
de nouveau opéré; sa vésicule est mise à nu. Son volume n’est
pas modifié et son contenu, clair, a conservé sa teinte verdâtre.
On retire, par ponctions, quelques gouttes du liquide : sur
frottis, on voit des cellules épithéliales en petite quantité et
point de vibrions cholériques. L'ensemencement de ce liquide
en eau peptonée est cependant positif, et décèle la présence de
vibrions.

On pose une ligature de soie sur le col, transformant ainsi
la vésicule en cavité close; et on suture la paroi abdomi-
nale.

Vingt-quatre heures après, le vibrion cholérique a passé
dans la circulation générale (ensemencement positif en eau
peptonée de 1 centimètre cube de sang retiré par ponction intra-
cardiaque).

Trente-six heures plus tard, animal est mort.

Il résulte de ces faits que le vibrion, contenu dans la
vésicule biliaire libre et chargée de bile, pousse abondamment
dans ce milieu.

Les évacuations intermittentes de tout le contenu étant
fréquentes, les bactéries, au fur et à mesure de leur produc-
tion, sont rejetées dans l'intestin, où elles ne peuvent causer,
chez l'individu adulte, aucun phénomène morbide.

Au contraire, si la vésicule est liée à son col, les vibrions
développés avec intensité dans cet excellent milieu, et ne
pouvant se déverser dans l'intestin, se répandent dans la circu-
lation générale.

En un mot, que la bile ait une action favorable ou nuisible
sur les bactéries, cette action restera toujours minime en regard

400 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de celle beaucoup plus importante qu'elle présente vis-à-vis
des leucocytes.

Et quoiqu'il soit très probable que, dans certains cas (nous
avons en vue le bacille tuberculeux), la bile bien employée,
pourrait, en imprégnant seulement les bacilles laissés quelque
temps en contact avec elle et lavés ensuite, être un adjuvant
utile, il parait nécessaire, dans toutes les inoculations intra-
vésiculaires, de vider totalement le contenu biliaire. Par les
lavages successifs, à l'eau physiologique et mieux à l'eau
légèrement alcalinisée qui a la propriété de dissoudre les
éléments biliaires et la mucine, on obtiendra une poche dans
laquelle on inoculera les bacilles en cultures pures et non
modifiées par le milieu.

_
(A suivre.)

Le Gérant : G. MAssoN.

€
Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette.

96° ANNÉE JUIN 1912 | N°2#6

ANNALES

DE

LENSTITUT PASEEUR

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE
DE L'INFLUENCE DE L'INDOL SUR LES SCLÉROSES
par M. S. DRATCHINSKI
Laboratoire de M. Metchnikoff.)

(Avec les PI: VI à XI.)

L'étude expérimentale de l'action physiologique de lindol el
de ses dérivés sur l'organisme animal présente un grand
intérêt, tant au point de vue théorique qu'au point de vue
pratique.

Presque du premier moment de la vie de l'animal jusqu'à
sa mort, un processus de putréfaction intestinale dû à l’action
de la flore microbienne s’accomplit dans son inlestin; parmi les
produits de putréfaction qui se forment sans cesse, à côlé
d'autres dérivés de la série aromatique, apparait aussi lindol.
Ce produit de l’activité vitale de la flore intestinale, sans cesse
lormé et sans cesse absorbé, se transforme dans le foie en indo-
xylsulfate et en indoxylglycuronate, circule sous cette forme (et
peul-être sous forme d'autres modifications) et est éliminé par
l'organisme dans l'urine.

L'organisme n'en soulfre-t-1l pas”?

En posant ce problème, ou le problème de la toxicité de
l'indol, nous abordons forcément le problème plus général de
l'autointoxication intestinale due à l’action de la flore micro-
bienne, le facteur qui joue, d'après la théorie de Metchni-
koff, un rôle prédominant dans l'usure, dans le vieillissement

26

+02 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de l'organisme en général et dans la sénilité précoce en parti-
culier.

On comprend ainsi l'intérêt théorique qui se rattache à la
solution du problème de la toxicité et de la non-toxicité de
l'indol.

Metchnikoff a aussi indiqué les moyens pratiques de la lutte
contre l’autointoxication intestinale, en préconisant la trans-
formation de la flore sauvage nuisible pour l'organisme en une
flore artificielle utile. L'introduction des microbesutiles dans l’in-
testin (bacilles lactiques, surtout bac. bulgare) crée des condi-
tions qui réduisent au minimum l'action de la flore sauvage.

Le problème de la toxicité de l’indol présente donc aussi un
grand intérêt pratique; si l'indol est un des produits de la
putréfaction intestinale jouant un rôle dans l’autointoxication,
l'abondance de l’indoxyl dans l’urine nous donnera des indica-
tions pratiques pour la lutte contre l'effet désastreux de l’em-
poisonnement ininterrompu de l'organisme, l'introduction des
microbes utiles ou l’utilisation des régimes alimentaires spé-
ciaux pouvant éliminer ce facteur toxique, qui apparaît prin-
cipalement, sinon uniquement, grâce à l'absorption intestinale
de l'indol, de provenance microbienne.

Bien que l'indol ait été découvert par Baeyer (3) en 1868 et
qu'il ait été trouvé par Brieger (4) en 1877 dans les matières
fécales de l’homme, le problème de la toxicité de l’indol attend
toujours sa solution.

Un examen, même superficiel, de la bibliographie nous
montre que les mêmes documents cliniques et expérimentaux
ont donné naissance à des opinions radicalement contradic-
toires : les uns affirment, les autres nient la toxicité de l’indol:
les deux opinions s'appuient sur les résultats obtenus dans
l'étude de l’action aiguë de ce produit.

Herter (5) a observé chez des animaux à sang chaud, après
l'injection intraveineuse de 50-100 cent. cubes et plus d’indol à
0,1 p. 100, les phénomènes suivants : une influence toxique sur
le système nerveux, un affaiblissement de l'activité du cœur et
des organes de respiration, un rétrécissement notable des
pupilles, des convulsions cloniques irrégulières et un affaiblis-
sement de la sensibilité réflexe. Chez l’homme qui recevait par
voie buccale 0,025-2 grammes d’indol par Jour, le même auteur

INDOL ET SCLÉROSES 103

a constaté un étal un peu agité pendant le sommeil, du mal de
tète, des phénomènes accentués de faiblesse, des symptômes de
neurasthénie, sans autres symptômes d’empoisonnement.
L'auteur croit pouvoir tirer de ce fait la conclusion que les
symptômes prodromaux de la neurasthénie peuvent avoir pour
cause l’intoxication par l'indol de provenance intestinale.

Les observations faites sur des aliénés ont amené Lewis
C. Bruce (6) à la conclusion qu'il existe un lien entre l'abon-
dance de l’indoxyle dans l'urine et les états de dépression,
et qu'il faut considérer l’indoxyle comme cause principale
de l’aliénation mentale.

Pardo (7), qui a observé 118 cas d’aliénation mentale, n’est
pas aussi catégorique que l’auteur précédent, mais il croit que
l’indol peut avoir une influence sur les troubles mentaux.

Cette hypothèse a cependant aussi des adversaires. Omoro-
koff (8), en se basant sur des documents cliniques, arrive à la
conclusion que «l’indoxyle ne fait qu'accompagner les maladies
mentales, surtout dans les psychoses dépres-ives et mania-
cales » et « qu'il n'ya pas de relation causale entre l'indoxyle et
les troubles mentaux; il n'y a qu'un parallélisme ».

Ch. Hervieux (9), dans des expériences sur des animaux
divers, surtout sur des chiens, faisait ingérer à ces animaux 2,
3 et même 5 grammes d'indol; n'ayant pas constaté de phéno-
mènes d'intoxication, l’auteur dit que ces expériences « démon-
trent d'une façon absolue que non seulement lindol et le
scatol, mais aussi les autres composés de la mème série sont
dépourvus de toxicité ».

Baumann et Brieger (10) ont fait ingérer à un chien de
24 kilogrammes, en cinq jours, 18 grammes d'indol, sans avoir
provoqué un seul phénomène den tandis que,
dans l'expérience de Nencki (11), 2 grammes ingérés ont pro-
voqué chez un chien de l’hématurie et de la diarrhée.

Une injection sous-cutanée de 1,5-2 grammes d’indol pro-
voque, d’après Rovighi (12), la mort des lapins; 1 gr. suffit
pour le cobaye. La mort est précédée par les phénomènes sui-
vants : somnolence, rétention de l'urine et des matières, affai-
blissement de l'activité du cœur et hypothermie.

Ces expériences plaident contre l'opinion de Ch. Hervieux (9);
elles montrent que de grandes doses d’indol sont, non seu-

40% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

lement toxiques, mais capables même de tuer des animaux «le
laboratoire.

Kukula (13) ne veut pas tirer des travaux cités cette conclu-
sion, qu'imposent les expériences, el affirme qu’en cas d’intoxi-
cation intestinale l'indol ne joue aucun rôle (dass das Indol bei
Aulointoxicationen infolge von Ileusk eine Rolle spielt). Porcher
et Hervieux (14) ne font que répéter sous une autre forme l'opi-
nion de Kukula lorsqu'ils affirment que « l'indol et le scatol ne
doivent pas être compris parmi les facteurs de la toxicité des
produits de la digestion intestinale » ; les auteurs se basent sur
les expériences dans lesquelles les animaux supportaient bien
l'indol introduit par voie buccale à des doses de 4 gr. 2 et
2 gr. 5. Ch. Hervieux (16) arrive ainsi à la conclusion que
« l’indol est le témoin de la formation des produits toxiques
développés au cours de putréfactions ».

Telles étaient les opinions sur la toxicité de l’indol et des
autres dérivés de la série aromatique qui dominaient dans la
science presque jusqu'à ces derniers jours, lorsque Metchnikoff,
dans son travail : « Poisons intestinaux et scléroses » (Ann.
de l'Institut Pasteur, octobre 1910), a jeté une lumière nouvelle
sur ce problème.

D'après Metchnikoff, il s’agit de savoir siles substances de la
série aromatique, élaborées en quantités minimes par la flore
microbienne, ne peuvent pas occasionner une intoxication chro-
nique qui ne se manifeste pas par des phénomènes visibles.
C’est de ce point de vue qu'il faut aborder l'étude expérimentale
du problème. « Etant donné que les bactéries intestinales ne
produisent, en somme, que de petites doses de corps de la
série aromatique, dit Metchnikoff, leur influence sur l'organisme
ne pourrait se manifester que sous forme d'intoxication chro-
nique. »

Les expériences avec le paracrésol, faites sur des lapins,
amènent Metchnikoff à la conclusion « que les phénols, en
cumulant leur action pendant plusieurs mois, sont réellement
capables de provoquer l’artériosclérose chez le lapin ». Dans
ces expériences, dans lesquelles 36 lapins reçurent par voie
buccale 0,04 grammes de paracrésol en solution aqueuse durant
une période de un à quatre mois, 22 (61 p. 100) ont présenté

INDOL ET SCLÉROSES 205

des plaques athéromateuses, avec dépôt calcaire dans la tunique
moyenne dans la plupart des cas.

Si, dans les expériences analogues, faites sur des cobayes, on
n'a pas constaté d'allérations dans l'aorte, les coupes du foie
montraient d'une facon indiscutable les premières phases des
foyers de cirrhose. Des foyers analogues ont été constatés dans
le foie d’un singe; cet animal présentait aussi de la rigidité et
de l’épaississement des vaisseaux ainsi que de la sclérose des
artères rénales. Dans le même travail, Metchnikoff (15) résume
aussi les résultats des expériences du regretté Ohkoubo (1),
qui a étudié dans son laboratoire l’action de l’indol et du scatol.
D'après Ohkoubo, l’indol provoque chez les lapins une dégé-
nérescence athéromateuse des parois de l’aorte, une infil-
tration des espaces péri-vasculaires par des cellules mono-
nucléaires, avec une hypertrophie consécutive du tissu fibreux
dans le foie du cobaye, et les mèmes changements moins
accentués dans les reins. Tous ces résultats amènent Metch-
nikoff à la conclusion suivante: « On ne peut plus mettre en
doute ce fait fondamental que de petites doses de paracrésol et
d'indol, accumulant leur action sur l'organisme pendant un
temps plus ou moins long, sont capables d'amener des lésions
chroniques se traduisant par des phénomènes de sclérose. Ce
sont précisément les lésions que l’on rencontre si fréquemment
dans la vieillesse. »

De ce nouveau point de vue, l'étude de l’action des substances
de la série aromatique prend un intérêt considérable, parce que
la toxicité de ces substances peut, non seulement élucider le
problème de la vieillesse et les changements intimes opérés dans
les tissus d’un âge avancé, mais jeter aussi une lumière nou-
velle sur l’étiologie de l’arlériosclérose, cet important problème
qui attend encore son explication complète.

Ayant abordé, sur la proposition de Metchnikoff, l'étude
expérimentale du rôle de l’indol dans la sclérose, nous devions
aussi Lenir compte de son action toxique aiguë. I fallait, d’un
côlé, fixer une dose considérablement inférieure à la dose
toxique qui provoque les phénomènes visibles de l’intoxica-

1) Le travail de Ohkoubo n'a pu être publié parce qu'il n’a pas laissé de
manuscrit.

406 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tion; d’un autre côlé, 1l fallait connaître les symptômes de
l’intoxication aiguë afin de pouvoir, au cours des expériences
de longue durée avec de petites doses, exclure les phénomènes
toxiques.

Citons quelques exemples parmi les expériences que nous
avons répétées plusieurs fois sur des cobayes; nous avons
fait des injections intrapéritonéales et sous-culanées, l'indol a
élé aussi introduit par voie buccale.

Un cobaye de 660 grammes recoit une injection intrapéritonéale de
0 gr. 25 d'indol dissout dans 1,5 cent. cube d'huile d'olive. 3-5 minutes après
l'injection, on observe une trépidation par secousses de tout le corps, ensuite
une trépidation périodique de groupes musculaires isolés et une faiblesse
du train postérieur. 15-20 minutes après, la trépidation du corps ne s’inter-
rompt plus, la parésie des pattes postérieures s’accentue, l'animal les
traîne dans ses déplacements, il tombe sur le côté et conserve avec difñ-
culté l'assiette normale. Bientôt il tombe et ne peut plus se relever. La
trépidation ininterrompue devient toujours plus forte; de temps en temps
il y a des convulsions; en général, cette crise fait l'impression d'un fort
frisson ininterrompu de fièvre. L'activité du cœur et des organes respira-
toires se ralentit. La température rectale, qui était, avant le commencement
de l’expérience, de 3803, tombe une heure après jusqu'à 36°8 centigrades.
Deux heures après, la trépidation et les convulsions deviennent peu à peu
plus faibles; la paralysie de toutes les extrémités persiste; la piqüre de
la peau ne provoque pas de réaction; absence complète du réflexe oculaire :
on entend à peine le battement du cœur; la respiration est superficielle;
enfin, l'animal tombe dans un coma complet. Cette crise d'intoxication
aiguë a duré trois heures et demie et a entrainé la mort. La rigidité cadavé-
rique ne s’est pas fait attendre longtemps.

Autopsie. — Les vaisseaux sont remplis de sang; celui-ci est
fluide, foncé et rougit à l'air; le cœur est fortement dilaté par
le sang non coagulé. Dans le périloine, il y a une petite
quantité d'huile. Celle-ei, recueillie par une pipette et mélangée
avec de l’eau physiologique, a donné, avec le réactif d'Ehrlich
(p. diméthylaminobenzaldéhyde), la réaction de l’indol d’une
facon très nelte.

Il faut encore indiquer que, dans toutes les méthodes de
détermination de la dose toxique aiguë, l'indol a été dissous
dans lhuile et que les symptômes de l'empoisonnement el
les résullats de l’autopsie étaient toujours analogues à ceux
que nous venons de décrire ; les résultats essentiels de toutes
les autres expériences sont indiqués dans le tableau ci-dessous.

Ajoutons encore que la crise d'intoxication n’entraîne pas

INDOL ET SCLÉROSES 407

toujours la mort; dans ce cas, les phénomènes d'intoxication,
après avoir atteint le maximum, deviennent peu à peu plus
faibles, la température remonte, les battements du cœur et la
respiration reprennent leur rythme habituel, et l'animal, après
avoir fait quelques essais, se lève et se jette sur la nourri-
lure.

Chez le cobaye 4, à l'endroit de l'injection, le tissu sous-
cutané était gonflé et imbibé d'huile contenant l’indol (cons-
taté avec le réactif d'Ehrlich).

DOSE
toxique
provoquant
des
phénomènes
visibles
sur
cobayes
du poids
de 100 gr.

MÉTHODE LA CRISE

de commence DURÉE

l'introduc-

dans de de
tion

NUMÉROS

des cobayes.
introduite.
DOSE MORTELLE
sur cobayes
du poids de 100 grammes.

de un délai la crise. la crise.

l'indol.

QUANTITÉ D'INDOI.

de :

des cobayes en grammes.

Intrapér. | 0,25 | 3-5 min. | 34 m. 1/2 Mort.
Id. D 15 min. Id.
Id. ,05 : 14 h. 1/2 |Guérison.

Sous-cut.| 0.5 |28-30 min.| 6 heures.| Mort.
Id. J 30 min. | 2 heures.|Guérison.

per os. 5 Lo ee ae Mort.
Id. 25 | 4 h. 3/4 | 2 heures.|Guérison.

C2
©
[=]
=)
=
d Co
20

1
2
3
4
D
6
fl

après

l'intro-

duction
de l’indol.

A l’autopsie du cobaye 6, plusieurs hémorragies de la gran-
deur d’un grain de lentille ont été trouvées; la couche supé-
rieure épithéliale de la muqueuse de l'estomac est d'une
couleur blanc grisâtre opaque et se détache facilement. Le
contenu de l'estomac et de l'intestin dégageait une forte odeur
d'indol.

Dans les séries d'expériences 6 et T on à pris, pour la
réaction d'Ehrlich, le sérum et le sang de la veine jugulaire
pendant le paroxysme de la crise ; Le résultat était positif pour
les doses mortelles et négatif pour les doses visiblement
toxiques.

408 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avons indiqué dans notre tableau les doses mortelles
et toxiques; mais si nous examinons les fails de plus près, la
question se pose de savoir si nos chiffres correspondent exacte-
ment à la réalité. Nous avons vu, en effet, que l'huile que
l’on trouve dans le tissu sous-cutané et dans le péri-
toine donne la réaction de l’indol; nous savons aussi que
le contenu de l'estomac et des intestins des animaux auxquels
on fait ingérer l'indol dégage une forte odeur d’indol. Suppo-
sons, en effet, que les phénomènes d'intoxication apparaissent
lorsque l'intestin a absorbé a grammes d'indol. Nos expériences
prouvent que les phénomènes d'intoxication apparaissent d’au-
tant plus vite que l’indol est absorbé plus vite : dans le cas
d'injection intrapéritonéale, ces phénomènes apparaissent
presque aussitôt après l'injection; dans l’injeclion sous-cuta-
née, 15-20 minutes après: dans l'introduction par voie buc-
cale, 1 h. 1/2-2 heures après; l'intervalle de 1 h. 1/2-2 heures
dans le cas de l'absorption intestinale est évidemment néces-
saire pour accumuler dans l'organisme la dose de à grammes,
indispensable pour l’action toxique. Mais avant le commen-
cement de la crise et pendant la crise, une partie de cette quan-
tité hypothétique est éliminée sous forme de sulfales: c'est
pourquoi il est évident que si la crise dure pendant un temps
plus ou moins long, cette perte doit être remplacée aux dépens
du surplus de l’indol introduit par voie buccale.

L'examen des faits cités nous mène ainsi à la conclusion
que les doses indiquées dans notre tableau sont supérieures aux
doses réellement toxiques.

Les résultats anatomo-pathologiques de l’intoxication aiguë
seront communiqués plus tard.

Avant d'exposer les résultats des expériences sur l'intoxi-
cation chronique, nous voulons nous arrêter brièvement sur
le but et les méthodes de nos recherches et sur la technique
de nos expériences.

Le problème qui se posait, d’après les idées de MetchnikofT,
était le suivant : quels changements s’accomplissent dans les
tissus des différents organes, surtout dans l'aorte, si on intro-
duit dans l'organisme animal de petites doses d’indol ne
provoquant pas de phénomènes d'intoxication visibles? Afin
d'imiter l’auto-intoxication naturelle de l'organisme, il fallait

INDOL ET SCLÉROSES : +09

introduire l'indol par voie buccale. Nous avons employé l'indol
de « Bad. Anilin uw. Soda-Fabrik ». Afin d'éliminer linfluence
du dissolvant (de l'alcool, de léther, par exemple), nous avons
pris comme dissolvant l'huile d'olive, comme l'ont déjà fait
Ch. Hervieux (16) et Ohkoubo. On préparait la solution d'in-
dol à 4 p. 100 ex tempore; chaque animal recevait 1 cent.
cube de cette solution, c'est-à-dire 0 gr. 04 d'indol; on se
servait de la seringue pour introduire l'indol dans la bouche,
avec les précautions nécessaires.

Avant le commencement des expériences, on n'a pu, avec
les réactions de Maillard ou d'Obermevyer, constater de traces
d'indican dans l'urine.

Afin de ne pas interrompre le processus d'intoxication, il
fallait introduire l’indol tous les jours, l'expérience nous ayant
montré que la réaction sur l'indican, positive dans notre
mode d'intoxication au bout de vingt-quatre heures, devient
négative au bout de quarante-huit heures. Ce résultat concorde
avec celui de E. Wang (17), qui a constaté, dans ses expé-
riences sur le chien, que l'indol ajouté à la nourriture est
complètement éliminé après vingt-qualre heures; d’après
Grosser (18), il faut quarante-huit heures pour l'élimination
complète. Nous ne voulons pas trancher ici cette question;
disons seulement que si l’on fait ingérer l’indol tous les jours,
la réaction de l'urine au point de vue de l’indican est nette-
ment positive; malgré cela, on n'observe pas, au cours de
l'expérience, de phénomènes d'intoxication tant soit peu mani-
festes.

On se servait pour l'examen microscopique des organes
des animaux tués par le chloroforme ou saignés à blane. On
ensemençait avec le sang du cœur et avec les organes des
milieux de culture stériles; les organes étaient soumis à un
examen histologique seulement dans les cas où le sang et
les organes étaient tout à fait stériles et où 1l n’y avait pas
d'anomalies anatomo-pathologiques macroscopiques.

Nous avons employé comme fixateurs, pour les fragments
d'organes, le sublimé, le liquide de Bouin, l’acétone, etc.;
l'inclusion dans la paraffine se faisait d’après les méthodes
ordinaires. Nous nous sommes servi de l’hématéine-éosine
et du colorant de Van Gieson pour la coloration des coupes;

410 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

pour la coloration des fibres élastiques, du mélange de chaux-
argent nitrique, d'après Weigert.

Avant d'exposer les résultats obtenus dans nos expériences
sur l'intoxication chronique, nous avons à mentionner les
recherches que nous avons faites pour étudier la structure de
l'aorte des cobayes normaux, non soumis au régime de l’indol.
Les résultats de cette étude présentent un intérêt au point de
vue du problème général de la sclérose physiologique de
l'aorte chez les rongeurs. Ils nous serviront aussi de base pour
juger les résultats obtenus dans les expériences sur l’intoxica-
tion chronique.

D'après l'opinion courante, le système vasculaire des
cobayes, surtout l'aorte, montre une résistance tout à fait
particulière ; on affirme que ce système n'aurait pas à souffrir
de l’action des poisons vasculaires et que l’athérome spontané
ne se rencontrerait que dans des cas excessivement rares.

Weinberg (19) a examiné 236 cobayes et n’a constaté qu'un
seul cas de dégénérescence athéromateuse des parois de l'aorte.

Nos études confirment d'un côté l'opinion citée sur la
résistance de l'aorte chez le cobaye : l’examen macrosco-
pique ne nous a jamais révélé de plaques athéromateuses ni
d'autres anomalies dans les parois de ce vaisseau; mais,
d’un autre côté, l'examen microscopique systématique de la
portion ascendante de la crosse de l'aorte dans la région des
valvules nous a donné des résultats qui ne plaident pas en
faveur de la résistance particulière de l'aorte chez le cobaye.

Nous avons été amené à cette étude par les faits suivants :

M. Studzinski (20), qui travaillait en même temps que nous
au laboratoire de Metchnikoff, a trouvé, après l'injection sous-
cutanée de cultures vivantes du B. coli, durant une période de
deux mois, plusieurs parties cartilagineuses près de la base de
l'aorte (1). Bientôt après, nous avons aussi constaté des foyers
carlilagineux chez un cobaye qui a été en expérience un mois
et demi (0,04 grammes d’indol par jour). La durée de l'action
de l’indol nous ayant paru trop courte pour attribuer à ce fac-

(1) M. Griasnow, qui a étudié l'influence du paracrésol sur l’artériosclé-
rose, n'a pas encore publié ses résultats.

INDOL ET SCLÉROSES ail

teur les changements constatés, nous avons entrepris l'examen
systématique de l'aorte.

L'aorte, dans la région des valvules et un peu plus haut, ne
présentait pas d'indications plaidant en faveur d'anomalies
dans la paroi; ce n'est que dans des cas rares que le bord libre
de la valvule montrait un épaisissement d'aspect vitreux. C’est
pourquoi il fallait faire des séries de coupes de toute cette
partie de l’aorte, cette méthode seule permettant d'affirmer ou
de nier avec certitude l'existence des altérations de la paroi.

Sur les premiers dix cobayes normaux, pesant 450-530 gr.,
8 avaient des foyers cartilagineux dans la paroi de l'aorte.
Cette constatation inattendue posait la question de savoir
s'il ne s'agit pas ici d'un détail anatomique normal, ques-
tion d'autant plus justifiée que les grands animaux ont, dans
cette région, non seulement des cartilages, mais aussi des
os. Le cartilage (cartilago cordis) se trouvant dans le cercle
fibreux de l’orifice de l'aorte du cheval, devient osseux chez les
vieux animaux; un cartilage semblable se trouve toujours chez
‘e porc et pas toujours chez les carnivores; les animaux à
cornes ont deux os dans le cœur (ossa cordis).

Une étude plus approfondie nous a fourni une réponse néga-
tive à la question posée. L'examen microscopique des séries de
coupes transversales a montré que ces parties cartilagineuses
ne sont pas réparties d’une facon régulière ni dans le plan
transversal de l'aorte, ni le long de l'aorte {de la base de laorte
jusqu’au bord supérieur libre des valvules). On trouve souvent
des parties cartilagineuses, de forme arrondie ou en triangle
aux angles arrondis, dans la conjonctive qui rattache les val-
vules à la paroi de l'aorte (PI. I, fig. 1). Ces parties cartilagi-
neuses-se trouvent tantôt dans les trois attaches conjonctives
simultanément, tantôt dans une ou deux de ces attaches; ces
variations ne montrent aucune régularité ni sur les coupes de
la même partie de l'aorte, ni sur les coupes des animaux diffé-
rents. On trouve non moins souvent des foyers cartilagineux
de forme ronde ou ovale dans la partie de la paroi de l'aorte
comprise entre les lieux d'insertion des attaches des valvules
(PL 1, fig. 2-3); on n'a pas constaté de relation entre ces
foyers et ceux qui se trouvent à la base des valvules. Ajou-
tons que les foyers ne sont pas localisés d’une facon déter-

412 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

minée dans les tuniques; ils se rencontrent seulement plus
souvent dans la tunique moyenne que dans la tunique adven-
live.

Les foyers ovales ou ronds varient aussi dans leur grandeur,
ce que l’on constate déjà en examinant l'épaisseur de la paroi
de l'aorte; tantôt les tuniques intérieure et extérieure de l'aorte
ne dépassent pas, quant à leur épaisseur, l'épaisseur normale
de la paroi (PI. VI, fig. 1), tantôt elles la dépassent légèrement
(PI. VI, fig. 2); tantôt la tunique moyenne avec l’intima s’épais-
sissent fortement et envahissent en partie la lumière du vais-
seau (PI. VI, fig. 1). Les foyers cartilagineux sont tantôt isolés,
tantôt réunis el imprègnent toute la paroi de l'aorte entre les
attaches des valvules. Comme particularité, il faut citer un cas
anormal où il y avait quatre valvules dans l'aorte : la cloison
divisant la valvule moyenne a été fortement dilatée par les
deux foyers qu’elle contenait; dans deux eas où la cartilagi-
nation de l'aorte était abondante, on a pu observer des figures
de mitose des noyaux des cellules cartilagineuses.

Toutes les constatations précédentes démontrent suffisam-
ment que les foyers cartilagineux ne peuvent pas être consi-
dérés comme un caractère anatomique normal.

En poursuivant l’examen de toute une série de coupes dans
tous les détails, on peut faire la constatation suivante : dans un
endroit quelconque de la paroi de l'aorte (principalement sur
la tunique moyenne et sur la tunique adventive) appa-
raissent des cellules arrondies, à noyau rond, nettement déli-
mité; en s’accumulant peu à peu entre les fibres élastiques,
ces cellules forment des foyers arrondis; les espaces intercel-
lulaires se colorent bien à l'hématéine; les cellules se trou-
vant au centre de ces foyers deviennent plus grandes et
prennent la forme et l'aspect des cellules cartilagineuses
typiques; tout le foyer prend l'aspect d’une partie cartilagi-
neuse, les petites cellules rondes ne restent que sur la péri-
phérie ou sur le tissu avoisinant (PI. VI, fig. 3).

Nous avons ainsi, dans les cas examinés, un processus
pathologique; une sclérose de l’aorte sui generis, se manifes-
lant par un processus de carlilagination de j'aorte, soit en
foyers, soit sous une autre forme.

Nous disons processus sut generis, parce que la cartilagina-

INDOL ET SCLÉROSES 413

lion de l'aorte chez l'homme et chez certains animaux ne se
rencontre pas avec celte constance, qui est caractéristique pour
le cobaye, et, comme nous le verrons plus tard, aussi pour
d'autres rongeurs.

Si développé qu'il soit, le processus de cartilagination ne
frappe qu'avec une rareté extrème la tunique adventive; nous
n'avons trouvé qu'une seule fois un faible épaississement de
l'intima (PL VI, fig. 3).

Nous avons examiné en tout :

À |
ur | POIDS OU AGE do cartel POURCENTAGE
examines.
DR pe, Ten RON
k | embryons quelques 0 0
jours avant la nais-|
|sance.
f | 2 semaines. 0 0
6 | 120-220 grammes. 0 0
10 250-300 — 3 30 p. 100
ÿ | 300-450 — | f 60 —
10 | 450-530 — | 8 80 —
6 545-630 — | 6 100 —
6 650-140 — | ü 100 —
54 | | D] 50 p. 100

Il est plus juste, lorsqu'on fait la totalisation, de ne compter
que les cobayes ayant un poids de 250 grammes et plus; on à
alors le résultat suivant : 27 cas de cartilagination sur 40 ani-
maux examinés, Où 67,5 p. 100.

Nous ne voulons pas, étant donné le nombre encore peu con-
sidérable des cas étudiés, établir une loi de fréquence de la
cartilagination chez les cobayes normaux, mais nous pouvons
certainement conclure que la dégénérescence cartilagineuse est
très fréquente chez les cobayes et que sa fréquence augmente
avec l'augmentation du poids des animaux.

Le poids dépendant surtout de l’âge, nous avons le droit d’af-
lirmer que le processus pathologique constaté peut être consi-
déré comme une maladie de l'âge. S'il en est ainsi, on pouvait
supposer « priori qu'avec l'augmentation de l'âge, Les foyers
cartilagineux peuvent subir des processus de dégénération

+14 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

avec le dépôt consécutif des sels calcaires. Nous n'avons cons-
taté que dans deux cas (2 cobayes pesant 610 et 715 gr.) les
phases primaires du dépôt des sels calcaires dans les espaces
intercellulaires des foyers cartilagineux.

Quelle est l’étiologie de cette maladie?

Il est difficile de donner actuellement une réponse catégo-
rique. Si l'étiologie de l’artériosclérose chez l’homme n'est pas
encore complètement élucidée, ce problème demande une
étude encore plus détaillée lorsqu'il s'agit des animaux. Tous
les facteurs de l’artériosclérose chez l'homme, comme la syphilis,
l'alcoolisme, l’empoisonnement par la nicotine, par les sels de
plomb, etc., ne peuvent évidemment jouer aucun rôle chez nos
cobayes. Il faut aussi éliminer les processus infectieux, l’au-
topsie ne nous en ayant pas révélé de traces. Cela posé, il ne
reste à notre avis qu'à interpréter les processus décrits dans
l'aorte du cobaye, d’après les idées de Metchnikoff; il faut
chercher le moment étiologique dans l’autointoxication intes-
tinale de provenance microbienne, dont les effets désastreux
deviennent plus graves à mesure que l'animal vieillit et peuvent
provoquer une série de changements caractéristiques pour
l'usure de l'organisme.

Nous avons tenté d’abord de prouver notre supposition d'une
facon indirecte. Les conditions de digestion qui entraînent
habituellement un processus de putréfaction intense dans l'in-
testin étant les mêmes chez tous les rongeurs, et l’autointoxi-
calion intestinale étant considérée comme le moment étiolo-
gique de la sclérose du cobaye, on devait aussi constater le
même processus pathologique chez les autres rongeurs.

L'examen microscopique de l’aorte des souris blanches nous
a en effet révélé un processus de cartilagination analogue à
celui que nous avons décrit chez les cobayes.

Mais, peut-on nous objecter, ce sont les conditions spéciales
de la vie en captivité qui provoquent l'anomalie pathologique
dans les vaisseaux. C’est pourquoi nous avons étudié aussi la
structure de l'aorte chez des animaux vivant en liberté, tels
que des rats d’égouts; et nous avons trouvé chez de vieux rats
le même processus de cartilagination dans la paroi de l'aorte,
dans la région des valvules.

Voici maintenant les résultats des expériences d'intoxication

INDOL ET SCLÉROSES AE

chronique des singes el des cobayes avec l’indol. De trois
singes, un seulement a supporté l'expérience Jusqu'au bout,
c'était un Macacus Rhesus femelle; des deux autres, l’un est
mort de tuberculose pulmonaire, l’autre d’une inflammation
aiguë de l'intestin. L'animal qui nous intéresse était jeune et
pesait 2.200 grammes. Durant huit mois, il a reçu tous les
jours, par voie buccale, 0,04 grammes d’indol dissous dans
l'huile d'olive (en tout, 10 gr. 4 d’indol). La réaction de l'in-
dican était faite presque tous les Jours, le résultat élait nette-
ment positif. On n'a pas observé de phénomènes d'intoxication
visibles pendant la durée de l'expérience. Lorsque, après huit
mois, l'animal a été sacrifié (saigné à blanc), il pesait 3.100, il
avait donc augmenté de 900 grammes. L’autopsie n’a pas révélé
de changements pathologiques. Les milieux de culture, ense-
mencés avec le sang et les organes, sont restés stériles.
L'examen microscopique a donné les résultats suivants :

Aorte. — Sur les coupes transversales de la base de l'aorte,
autour des vasa vasorum, des infiltrations de cellules rondes;
infiltrations semblables dans les espaces entre les fibres mus-
culaires du cœur, en contiguité avec l’adventice de la base de
l'aorte.

Foie. — Sur les coupes, une infiltration faible de petites
cellules autour des canaux biliaires et des vaisseaux sanguins.
Reins. — Chaque coupe montre d’une façon nette des phéno-

mènes de néphrite interstitielle. En plusieurs endroits de la
couche corticale ainsi que de la couche médullaire, il y a des
foyers considérables formés par de petites cellules rondes ; les
coupes transversales des tubes urinifères apparaissent comme
des îlots sur le fond de ces infiltrations (PI. VIT, fig. 1); des
infiltrations semblables enveloppent aussi les glomérules, tantôt
de tous côtés (PI. VII, fig. 3), tantôt d'un côté seulement (PI. VI,
fig. 2). Mais ici nous n'avons pas seulement devant nous les
phases primaires de la sclérose, les coupes montrent toutes les
phases, depuis l'infiltration par de petites cellules rondes jusqu’à
la formation du tissu conjonctif; celui-ci peut former des
bandes assez larges qui entourent les glomérules en partie
fortement ratalinés, en partie détruits (PI. VIIE, fig. 1). On
constate les mêmes phénomènes autour des tubes urinifères.
Autour des vaisseaux, infillration non moins abondante par

416 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de petites cellules rondes (PL VIII, fig. 2), avec prolifération
consécutive du tissu conjonctif en contiguilé avec les vaisseaux.

Capsules surrénales. — Les coupes transversales de la capsule
montrent d'une façon très nette une forte prolifération du tissu
conjonctif dans la substance corticale ; dans la couche réticu-
laire, on constate une grande quantité de foyers calcaires. Le
lissu conjonctif se dirige, sous forme de bandes larges, vers la
périphérie de la glande, les bandes deviennent de moins en
moins larges à mesure qu'elles se rapprochent de la périphérie;
prenant naissance presque sur la limite de la substance médul-
laire et de la couche réticulaire de la substance corticale, elles
occupent presque les trois quarts de cette substance. Par
endroits, prolifération du tissu conjonctif. Des lacets de tissu
conjonctif se détachent de nombreux petits îlots de cellules
fortement déformées, à noyaux picnotiques (PI. IX, fig. 4).

On pouvait compter sur chaque coupe jusqu'à vingt parties
calcaires, el même davantage, de forme arrondie ou irrégulière
avec une disposition concentrique de couches de chaux; la
répartition en couches concentriques ne présente pas la même
régularité dans tous les foyers. Sur les coupes décalcifiées, la
couche périphérique de ces foyers est formée par des fibres du
lissu conjonctif montrant une dégénérescence hyaline et se diri-
seant vers le centre. On trouve quelquefois, dans le centre de
ces fovers, des restes de cellules.

Cerveau. — Légère prolifération des cellules névrogliques, el
neuronophagie nette. M. Wladytehko (21) a observé le mème
phénomène chez le cobaye ayant subi l'intoxication par de
petites doses d’indol.

Une intoxication par de petites doses d'indol, d’une durée de
S mois, a provoqué ainsi chez le singe des changements ayant
un caractère scléreux : dans le cerveau, dans le foie, dans
l'aorte, les phases primaires de la sclérose ; dans les reins et les
capsules surrénales, les phases primaires avec la prolifération
consécutive du tissu conjonctif.

Ces phénomènes peuvent-ils être expliqués par coïncidence
accidentelle, ou par la vie en captivité?

Nous reviendrons sur la première objection, lorsque nous
aurons à discuter les résultats de nos expériences sur le cobaye:
la seconde objection tombe parce qu'un singe de la même espèce

INDOL ET SCLÉROSES 417

et du même poids à peu près (2.850 gr.), lenu en cage durant
presque la mème période de 8 mois, ne nous a révélé, à
l'examen histologique, pas même des traces de phénomènes
semblables.

Les expériences sur l'intoxication chronique du cobaye nous
ont donné des résultats non moins intéressants. De 25 cobayes
auxquels on faisait ingérer tous les jours 0 gr. 04 d’indol,
14 seulement peuvent compter pour nos résultats ; les autres
n'ont pas été pris en considération pour diverses causes : six on!
péri accidentellement ; chez un cobaye sacrifié, le sang du cœur
n'a pas été stérile ; dans deux cas où les animaux furent sacrifiés
1 mois 1/2 et 2 mois après le commencement des expériences,
la durée de l’intoxication étail trop courte.

Avant le commencement de l'expérience, le poids des
12 cobayes dont nous tenons compte était de 360-480 grammes ;
l'augmentation ou la diminution du poids à la fin de l'expérience
n’a pas dépassé 70 grammes dans tous ces cas. Deux cobayes
mis au monde par une femelle soumise à nos expériences ont
été pris pour le régime à l’indol lorsqu'ils n'avaient que deux
semaines ; après la période de 8 mois d'intoxication chronique
(0 gr. 04 d'indol par voie buccale tous les jours), ils ne pesaient
que 210 et 230 grammes. La durée de l'expérience dans les
autres cas a été de #4 à 10 mois (2 cobayes, # mois; 2 —
4 mois 1/2; 2 —, 5 mois; 2 —, 6 mois; | —; 6 mois 1/2;
1 —, 7 mois 1/2; 2 —, 8 mois; 2 —, 10 mois 1/2). On n’a pas
observé de phénomènes d'intoxication visibles pendant la durée
de l'expérience. A l’autopsie des cobayes sacrifiés (chloroformés
ou saignés), pas de changements pathologiques ; des milieux
de culture ensemencés avec ce sang sont restés stériles.

L'examen microscopique des séries de coupes a montré les
changements histologiques suivants :

Aorte. — Sur les coupes transversales de la portion ascen-
dante de la crosse de l'aorte dans la région des valvules, autour
des vasa vasorum passant dans le tissu adventice, il y a des
infiltrations de petites cellules rondes, mononucléaires; les
polynucléaires sont excessivement rares ; par endroits, des
foyers de tissu conjonctif couvrent complètement les fibres
élastiques dans la paroi. On trouve aussi dans la tunique
moyenne des foyers allongés de dégénérescence hyaline, ayant

21

2

+18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

la forme d’un ovale comprimé, ou de forme irrégulière ; la
plupart ou la moitié de ces foyers sont imprégnés de sels eal-
caires; des restes de cellules sont disséminés dans les parties
non imprégnées de sels calcaires (PI. X, fig. 1, cobaye 15,
5 mois sous l'expérience). Des foyers semblables, prenant naïis-
sance au bord extérieur de la paroi, traversent obliquement la
tunique moyenne, se heurtant presque à l’intima (PI. X, fig. 2,
cobaye 3, 6 mois en expérience) ou se localisent dans ce bord
de la paroi (PI. XT, fig. a et c). Les foyers calcaires présentent
des variations sensibles dans leur grandeur. On le voit dans les
figures c, a, e et d, PI. XI.

Ces foyers, comme nous avons pu nous en convaincre par
l'examen d’une série de coupes, ne présentent pas les caractères
d’une dégénérescence hyaline des foyers cartilagineux avec
dépôt consécutif des sels calcaires ; nous n'avons pu trouver
ces caractères dans les restes des cellules. Nous avons constaté
des foyers semblables dans quatre cas. On trouve encore des
foyers calcifiés dont la périphérie n’a pas de parties de dégéné-
rescence hyaline non imprégnée. Dans ces dépôts calcaires, on
peut quelquefois constater des restes de cellules à aspect carti-
lagineux ; lorsqu'un foyer semblable se trouve à côté des foyers
cartilagineux, on est forcément amené à supposer que le foyer
calcaire présente une dégénérescence calcaire du foyer cartila-
gineux (PI. X, fig. 3 a, cobaye 1, 6 mois 1/2 sous l'expérience).
Deux cobayes ont présenté des foyers semblables. Enfin, dans
deux cas, nous avons eu simultanément les foyers calcaires de
ces deux aspects différents (PI. XI). Si avancée qu'elle soit,
cette dégénérescence calcaire n’entraine Jamais l'épaississement
de l’intima.

De 14, ou, pour mieux dire, de 12 cobayes (deux aortes des
cobayes ayant subi l'expérience pendant 10 mois ont été malheu-
reusement égarées), 8 présentaient des changements semblables
de l'aorte. Les deux jeunes cobayes (cf. p. 417) ont présenté des
foyers avec une forte cartilaginalion de la paroi de l’aorte dans
la région des valvules.

Reins. — Des foyers, nettement déterminés, d'infiltration
par des cellules rondes mononucléaires ont été trouvés dans les
coupes de reins de tous les cobayes; les polynucléaires sont
excessivement rares ; infiltrations semblables entre les tubes

INDOL ET SCLÉROSES 419

urinifères autour des glomérules et des vaisseaux ; dans la
plupart des cas, prolifération consécutive du tissu conjonctif
et destruction des glomérules. On voit ainsi que ce sont les
mêmes phénomènes qui ont été constatés chez le singe ; c’est
pourquoi nous pouvons nous rapporter, quant à l'aspect micros-
copique, aux figures données pour le singe.

Nous avons aussi constaté presque dans tous les cas des
dépôts calcaires dans les tubes urinifères. Ces dépôts calcaires
coïncidaient avec la calcification de la paroi de l'aorte. Ayant
constaté cette coïncidence, nous nous sommes mis à préparer,
par un procédé rapide, des coupes de reins (fixation dans
l’acétone 1 heure, xylol 10-15 minutes; paraffine 56 degrés,
| heure, elc.); les dépôts calcaires dans les tubes une fois
constatés, nous étions sûrs de trouver les foyers calcifiés dans
l’aorte. Cette supposition ne s’est pas confirmée dans deux cas
se rapportant aux aortes de jeunes cobayes ; ceux-ci, comme on
l'a indiqué plus haut, ne présentaient que des foyers cartilagi-
neux dans leurs aortes.

Foie. — Les coupes du foie présentent la phase primaire de
la cirrhose sous forme d'une infiltration de petites cellules
autour des vaisseaux biliaires'et sanguins; ce phénomène se
manifeste chez tous les cobayes d’une manière légère.

La constance avec laquelle ces changements pathologiques
sé rencontrent chez presque tous les animaux soumis à l'expé-
rience, doit exclure toute supposition d’une coïncidence acci-
dentelle. L'examen de cinq cobayes de contrôle, ayant subi le
régime de captivité durant la même période de 8 mois, ne nous
a pas révélé de processus pathologiques analogues à ceux que
nous avons décrits; la captivité, comme on le voit, ne peut
pas être considérée comme la cause de ces phénomènes.

L'intoxication chronique par l’indol a donc provoqué chez le
cobaye les phénomènes caractéristiques de la sclérose : la
sclérose typique des reins, la phase primaire de cirrhose du
foie et l’athérome spécifique de l'aorte dans la région des
valvules. L'athérome se manifestant chez le cobaye par le pro-
cessus de dégénérescence hyaline (sous forme de foyers) de la
paroi de l'aorte, avec le dépôt consécutif de sels calcaires, a été
constatée dans 8 cas sur 12, tandis que, parmi les 52 cobayes
normaux examinés par nous, deux seulement présentaient les

420 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

phases primaires de calcification des foyers cartilagineux, mais
ces deux animaux étaient d’un poids très élevé (610 et
715 grammes). Ces deux cas de dégénérescence calcaire de
l'aorte des cobayes normaux renforcent notre opinion, que
l'athérome de l'aorte constatée chez le cobaye dans nos expé-
riences, est due à l'intoxication chronique par l’indol, introduit
en petites doses par voie buccale ; c’est pourquoi lindol doit
ètre compris, non seulement parmi les poisons intestinaux qui
occasionnent les processus caractéristiques de la vieillesse, mais
aussi parmi les substances qui provoquent les processus patho-
logiques dans la paroi de l'aorte.

Loin de nous la pensée de considérer les résultats de nos
recherches sur les effets de l’intoxication chronique par l’indol
comme la solution intégrale de ce problème ; mais nous croyons
que notre travail a donné des résultats encourageants pour Île
résoudre et que ces résultats s'accordent avec la conclusion de
Metchnikoff, citée plus haut (p. 405).

Nous pouvons résumer les résultats de notre travail de Ia
manière suivante :

1° Des doses plus ou moins grandes d’indol provoquent chez
le cobaye des crises d'intoxication aiguë se manifestant par des
phénomènes neuro-musculaires pouvant avoir une issue mor-
telle, mais aussi se terminer par la guérison; l'issue fatale
dépend de la dose, le mode d'introduction de l’indol ne jouant
ici aucun rôle.

2° Contrairement à l'opinion courante sur la résistance par-
ticulière naturelle de l'aorte du cobaye, la portion ascendante
de la crosse de l'aorte dans la région des valvules subit sou-
vent, spontanément, une sclérose spécifique. Ce processus
peut se manifester par la dégénérescence cartilagineuse sous
des formes diverses, suivie, dans des cas très rares, de calcifi-
calion.

3° On peut considérer ce processus comme une maladie de
l’âge.

1° On trouve un processus semblable de dégénérescence car-
tilagineuse chez la souris blanche et chez le rat d’égout.

5° L'introduction de petites doses d’indol (0 gr. 04 tous les
Jours, par voie buccale) durant une période assez longue pro-

INDOL ET SCLÉROSES 421

voque chez le cobaye une dégénérescence athéromateuse de la
paroi de l'aorte dans la région des valvules.

6° On consiate aussi, dans ce cas, des processus chroniques
interstitiels dans des organes différents : la sclérose des reins
(singe et cobaye), les phases primaires de la cirrhose du foie
(singe, cobaye), la sclérose de la capsule surrénale (singe), les
phases primaires de la sclérose de l'aorte et du cerveau.

En terminant ce travail, nous accomplissons un agréable
devoir en adressant nos remerciements à M. Metchnikoff, pour
le sujet de recherches qu'il a bien voulu nous proposer et
pour l'intérêt qu'il nous a témoigné en suivant de près notre
travail dans tous ses détails,

BIBLIOGRAPTITE

. E. Mercunixorr. — Etudes sur la nature humaine, 1903.
. E. Mercanikorr. — Essais optimistes, 1907.
. BaAzyER. — Ueber die Reduction des Indigoblaus (Berichte, 1868, 1, 11).

4. BRieGer. — Ueber die flüchtigen Bestandtheile der menschlichen Excre
mente (Berichte, 1811, 10, 1029).

5. HerTER. — An Experimental Study of the toxic proprieties of indol.
(Medic. Journal, 1898).

6. Lewis C. Bruce. — The Clinical Significance of indoxyl in the urine
(The Journal of ment. Science, 1906, t. LIT, p. 218).

7. ParDo (G.). — Ricerche sull indossiluria nelle malatie di mente (Rivist.
spiriment. di Freniatr., vol. XXXIIT, p. 275).

8. Omorokorr. — Sur l'origine de l'indicanurie dans les maladies mentales
(Revue de Psychiatrie et de Neurologie, 1909) (russe).

9. Cu. Herviux. — Sur la prétendue toxicité des corps du groupe de l'indol
(Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1907, p. 895, séance du 18 mai).

10. Baumanx et Briecer. — Ueber die Indoxylschwefel-Saüre, das Indican des
Harns (Zeitschr. für physiol. Chem., 1879, p. 255, v. 3).

A1. Nencki. — Zur Geschichte des Indols und der Fäulnisprozesse im
thierischen Organismus (Berichte, 1876).

12. Rovicur. — Arch. di farmacologia lerapeutica, 1996, IV, 3.

CS 19 —

13. KukuLa. — Untersuchungen über Autointoxicationen (Arch. f. klinisch.
Chirurg., 1901, 36).
14. Ca. Porcner et HEervieux. — Recherches expérimentales sur les chro-

mogènes urinaires du groupe de l'indol (Journ. de Physiologie et de Pathol.
générale, 1906, p. 841).

15. E. Mercaxixorr. — Etudes sur la flore intestinale. Deuxième mémoire.
Poisons intestinaux et scléroses (Ann. de l'Instilut Pasteur, 1910, t. XXIV).

16. Cn. Hervieux. — Recherches biochimiques sur l’indol et l'acide glycu-
ronique (Thèse, 1908, Lyon).

17. E. Wan. — Fütterungsversuche mit Indol (Zeitschr. f. physiol. Chem.,
1899, t. XXVII, p. 557-575).

18. R. Grosser. — Ueber das Verhalten von zugeführten Indol und Scatol
im Organismus (Zeitschr. f. physiol. Chem., 1905, t. XLIV, p. 320-324).

122 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

19. WEINBERG. — Comples rendus de la Soc. de Biologie, 1908, p. 561, séance
du 5 décembre.

20. Srunzixski. — Contribution à l'action du coli-bacille sur l'Organisme
animal (Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1911, p. 255, 24 février).

21. Wiapyrcuko. — Sur l'influence de certains poisons intestinaux sur le
système central nerveux (Rousski Vratch, 1911, 39; p. 1493-94) (russe).

B. DaniLEwsky. — Ueber die Wirkung des Indols auf das Froschherz
(Pflügers Arch. f. die gesamt. Physiologie, 1908, p. 361-376).

LÉGENDE DES PLANCHES VI à XI

Les contours et les détails des coupes ont été dessinés à l'aide de lappa-
reil de Zeiss. Nous nous sommes servi du microscope de Leitz (Obj. 3 et 6.
Ocul. 4).

PL. VI. — Coupes transversales des parois de l'aorte dans la région des
valvules. Cobayes normaux.

Fic. 1. — Foyer cartilagineux dans la région de l'insertion des attaches
qui rattachent les valvules à la paroi de l'aorte.

La grandeur du foyer n’a pas d'influence sur l'épaisseur de la paroi de
l'aorte.

FiG. 2. — Un foyer semblable dans la paroi de l'aorte entre les attaches des
valvules (celles-ci n2 figurent pas sur le dessin). La paroi de l'aorte est un
peu plus épaisse du côté de l’adventice et de l'intima, cet épaississement est
dû au diamètre transversal du foyer.

Fi6. 3. — Un foyer semblable de forme arrondie a dilaté fortement la paroi
de l'aorte et a poussé en avant sa partie intérieure. Le centre du foyer est
occupé par des cellules cartilagineuses typiques; dans la périphérie, une
couche considérable des cellules arrondies de forme de passage.

F16. 4. — Anomalie : 4 valvules. Dans la cloison divisant la valvule moyenne
en deux, on voit distinctement des foyers cartilagineux qui-ont dilaté cette
cloison.

PL. VII. — Coupes transversales du rein de singe (8 mois en expérience).

Fi6. 1. — Un grand foyer d'infiltration -par de petites cellules. Sur le fond
de cette infiltration, les coupes transversales des tubes urinifères appa-
raissent comme des îlots.

F16. 2. — Trois quarts de la périphérie du glomérule sont occupés par
l'infiltration.

F16. 3. — Tout le glomérule est entouré par l'infilltration.

PL. VIII. — Coupes transversales du rein du même singe, colorées d’après
Van Gieson.

FiG. 1. — Les glomérules sont ratatinés et sont enveloppés par une couche

considérable du tissu conjonctif ; deux (a et b) sont presque complètement
détruits.

F16. 2. — Image nette de l'infiltration périvasculaire par de petites cel
lules a, glomérule détruit.

PL. IX. — Coupe transversale de la capsule surrénale du mème singe.
F16. 1. — Forte prolifération du tissu conjonctif dans la substance corti-
cale ; cette prolifération a la forme d'un triangle irrégulier, dont la base

INDOL ET SCLÉROSES 423

touche presque la substance médullaire et dont le sommet est dirigé vers la
périphérie. Des bandes de tissu conjonctif découpent des groupes arrondis
de cellules de la glande, le tissu conjonctif couvre peu à peu toutes les
cellules. On voit des cellules à noyaux picnotiques. On voit aussi sept
parties calcifiées, avec un centre plus clair et une périphérie fortement
colorée.

Pr. X. — Coupes transversales des aortes dans la région des valvules des
cobayes (intoxication chronique par de petites doses d'indol..

F16. 1. — (Cobaye 15, 5 mois en expérience). Dans la tunique moyenne, un
foyer de dégénérescence hyaline, dont les trois quarts sont calcifiés ; dans
les parties libres, on voit des restes des cellules. Tout le foyer a la forme
d'un ovale allongé fortement comprimé ; du côté gauche, on voit une partie
d'une forme irrégulière, sans structure déterminée; de petites cellules y
sont disséminées sans ordre.

Fi6. 2. — (Cobaye 3, 6 mois en expérience). Un grand foyer de dégénéres-
cence hyaline de la paroi de l'aorte; presque toute la moitié gauche est
imprégnée de sels calcaires ; la partie droite ayant la forme d’un croissant
passe à travers toute la partie moyenne de l'aorte el se heurte presque à
l'intima; on voit dans cette partie des restes des cellules.

FiG. 3. — (Cobaye 1, 7 mois en expérience). Deux foyers cartilagineux et
plusieurs cellules cartilagineuses disséminées, un grand foyer calcaire de la
forme d'un triangle irrégulier: on voit dans ce foyer des restes de cellules
cartilagineuses.

PL. XI. — (Cobaye 22,6 mois en expérience). Coupe transversale de l’aorte
à l'endroit où se trouve la valvule moyenne.

Fiçure. — Un grand foyer de dégénérescence hyaline, contenant des
cellules cartilagineuses disséminées; dans le centre, dépôt calcaire de
forme d’une sphère.

Fic. a et e. — Deux foyers de dégénérescence hyaline, ne contenant pas
de traces d’une structure cartilagineuse.

d) Deux petits foyers semblables.

e) Un foyer de dégénérescence hyaline très grand, presque tout imprégné
de sels calcaires.

TECHNIQUE RATIONNELLE
DE LA RÉACTION DE FIXATION

par M. WEINBERG.

On a publié un grand nombre de procédés de réaction de
fixation depuis que Wassermann, Bruck el Neisser ont eu
l'idée d'utiliser le phénomène de Bordet-Gengou pour l'examen
du sérum syphilitique. Cependant, lorsqu'on étudie par ces
procédés une même série de sérums, on obtient souvent des
résultats discordants. Cela tient d’abord à ce que certains
auteurs ont publié leur technique après l'avoir expérimentée
sur un nombre trop restreint de sérums; et, surtout, la plupart
d’entre eux n’ont guère tenu compte, dans l'interprétation des
résultats obtenus, des propriétés hémolvtiques du sérum à
examiner.

Pendant ces quatre dernières années, nous avons examiné un
orand nombre de sérums humains, soit pour y rechercher les
anticorps hydatiques, soit pour y trouver quelques éléments
pouvant aider au diagnostic clinique du cancer; dans tous ces
cas, nous avons fait comparativement la réaction de Wasser-
mann. Voulant nous rendre compte de la cause des résultats
contradictoires qu'on obtient par les procédés usuels, nous
avons étudié, depuis quelque temps déjà et d’une facon systé-
matique, les propriétés hémolytiques et antihémolytiques de
tous les sérums que nous avons utilisés. Cette étude nous
permet de donner une technique et une interprétation des
résultats obtenus dans l'espoir de mettre les travailleurs à
l'abri d'erreurs grossières.

Nous avons ici exclusivement en vue les procédés qui uti-
lisent les globules rouges de mouton. Disons en passant que
nous avons obtenu de bons résultals avec le procédé de
Noguchi, qui exige un sérum anti-humain et des globules
rouges humains. Nous devons cependant modifier quelque peu
les indications de doses à employer dans ce procédé, telles que

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION 425

nous les avons données dans un travail fait en commun avec
Bronfenbrenner (1).

TABLEAU I.

:0S SÉRUM £ L GLOB. ROUGES
N à Q XIN À :
humain HIER ALEXINE Ta humains

dilué Lee tr physiolo- |; 40 p. 100.
au 1/4. hydatique. | 50 p. 100. gique. Se ter

des
tubes

Sérum
suspect.

hydatique
certain

E
D
©
un

TÉMOINS
Sérum
sain

Nous avons remarqué depuis qu'il n'est pas toujours possible
de se contenter de petites doses de sérum; dans deux cas
d'échinococcose, nous avons élé obligé de doubler et mème de
tripler la quantité de sérum indiquée dans ce tableau pour
arriver à un résultat positif.

PROCÉDÉ RAPIDE.

Ceci dit, revenons aux techniques qui nous intéressent ici,
c'est-à-dire à celles où l’on emploie les hématies de mouton.

La technique simplifiée (ou les procédés rapides) ont gagné
beaucoup de partisans parce que, ne demandant ni alexine de
cobaye, ni sérum hémolytique, ils sont à la portée de tout

(1) WeinserG el BRONFENBRENER, Application du procédé de Noguchi à
l'étude des sérums hydatiques. Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1910, TI
p. 249-251.

426 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

travailleur même peu outillé. Cependant, la pratique de ces
procédés d’après les indications fournies par leurs auteurs a
donné des mécomptes. Dès nos premières recherches nous
avons été à même de constater que les erreurs dues à ce pro-
cédé tiennent à la grande variabilité de la teneur du sérum
humain en substances hémolytiques. Nous les avons signalées
au mois de juin 1910 dans des conférences que M. Martin avait
organisées à l’Institut Pasteur pour Les internes des hôpitaux (1).
L'importance qu'il y a à déterminer la richesse, en substances
hémolytiques, du sérum frais, a été, en dehors de nous,
reconnue par MM. Hallion et Bauer (2), et par M. Busilla (3).

Pour comprendre les erreurs auxquelles peut donner lieu la
pratique de la réaction de fixation par le procédé rapide, on n’a
qu'à jeter un coup d'œil sur le tableau II qui résume une
partie de nos recherches sur les propriétés hémolytiques du
sérum.

Aïnsi, sur les 400 sérums étudiés, 9 ont donné l'index hémo-
Iytique 0, c’est-à-dire qu'à la dose de 0,1 cent. cube, ils ne
dissolvaient pas 0,1 cent. cube de globules rouges de mouton.
On obtenait cependant, pour quelques-uns de ces sérums,
l’hémolyse en doublant la dose. D'autres étaient franchement
anti-alexiques. Dans un quart des cas (exactement, 23 p. 100),
l'index n’a pas dépassé 3; dans la moitié des cas, il était de
4 à 7; dans 10 p. 100 des cas, il était de 10-11; enfin, plus

(1) D'ailleurs, déjà en 1909 nous avons constaté qu'il est très important
d'étudier le pouvoir hémolytique du sérum frais lorsqu'on veut pratiquer
la réaction de fixation par le procédé rapide. C’est ainsi qu’en analysant un
travail de M. Parvu, nous avons dit de la méthode simplifiée qu'il préconise
pour le séro-diagnostic de l’échinococcose : qu’ « elle peut donner de bons
résultats à la condition qu'on prenne des précautions, qu'on ne doit jamais
oublier, lorsqu'on se sert de procédés rapides : vérification du pouvoir
hémolytique des sérums à étudier et contrôle par le procédé lent (avec
les globules rouges sensibilisés et l’alexine de cobaye) lorsque le procédé
rapide a donné un résultat nettement négatif ». (Bull. de l'Institut Pasteur,
1909, p. 7174.)

Au moment où parut la note de MM. Hallion et Bauer, nous avions déjà
une grande expérience du procédé rapide pratiqué avec la correction sur
laquelle ces auteurs ont insisté. C'est ce qui nous à permis d'ailleurs
d'indiquer des erreurs que l'on commettrait si l'on suivait certains détails de
leur technique (Bulletrn de l'Institut Pasteur, 1911, p. 10). On trouvera éga-
lement des indications précises du procédé rapide, tel que nous l'employons
depuis deux ans, dans le laris Médical (5 août 1911, p. 232).

(2) Hazcrox et Bauer, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXIX, 29 octobre
1910, p. 305.

(3) Busizza, Revista Slintelor Medicale, n° 10, octobre 1910, p. 838.

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION 427

rarement, il a dépassé ce chiffre pour atteindre exceptionnelle-
ment le chiffre considérable de 21 et même de 23.

Il est évident que le sérum très pauvre en alexine peut
donner lieu à la fixation non spécifique et fausser ainsi le
résultat de l'expérience. Remarquons à ce propos qu'un index
hémolylique élevé, comme celui de 10, par exemple, peut
coïncider, rarement il est vrai, avec. une quantité faible
d’alexine. Dans ces cas, comme nous l'ont prouvé nos recherches,
l'index élevé est dû à une grande richesse du sérum en ambo-
cepleurs.

Enfin, un sérum très riche en alexine et ne refermant qu'une
petite quantité d'anticorps spécifiques, peut ne perdre, par
addition d’antigène, qu’une partie de son alexine. Il en restera
done suffisamment pour déterminer l’hémolyse de globules
rouges ajoutés et donner ainsi lieu à une erreur d'interpréta-
tion.

TABLEAU II.
Propriétés hétérolytiques du sérum humain frais.

LE TEE à OR PP EU RO RE

È QUANTITÉ INDEX
NOMBRE QUANTITÉS de globules hémolytique
Rss CHOTEer à 5 00 nent A ne
9 (crc (DEEE NL) 0
20 (A, Goom Otc- em il
42 ONCACA1 0Ferc2 2
20 (DCS ail (MERE à! 3
43 0er CA 0NCCrE 4
69 | OPerc1 (EE) 5)
58 ORCAc 1 enter. (E 6
51 OMcAc "1 0crem 3l
47 (NOTE DFCrCH8 8
13 (ECC: A1 Dterca 9
92 (DCE GE A) 10
9 DRerC A INEUES fil 11
il TOME | INC ic 12
2 ORCCA 1SCACS 13
3 DRENCAA AC AICÈRE 14
6 Orcrc:r1 | INC CS 15
3 DRC*cA 1NCACAC 16
Il Drerc 1 2C AGE 21

428 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Lorsque nous pratiquons le procédé rapide, nous faisons
d'emblée notre expérience en double, c'est-à-dire que nous
répétons deux fois la première série de deux tubes qui ren-
ferment le mélange de sérum-antigène-eau physiologique ;
nous déterminons en même temps l'index hémolytique du
sérum à examiner dans une série de tubes placés en arrière
de la première série, comme l'indique le tableau IIT. Dans
ces tubes, à 0,1 cent. cube de sérum, on ajoute des doses régu-
lièrement croissantes de globules de mouton. Cela est suffisant,
car dans plus de 90 p. 100 des cas l’index hémolytique ne
dépasse guère 10 (1).

TaBLEeAU III.
Procédé rapide.

RÉACTION DE FIXATION . RECHERCHE
DE LINDEX HEMOLYTIQUE
1 —
o L = 8
: En Me ae a). 3
8 À NME =: 0 à & à 50 Et E
2 pa) ro Et Ze ar 00] IN & Sn eo
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5NO 0,2 0,1 0,2 50 0.1 0,8 0,3
GRO — 0.3 0,2 9 0,1 0,9 0,2
» » » » » 10 0,1 1NC°C: 0,1

Lorsqu'on à quelques raisons de croire (tuberculose, cancer,
suppuration, etc...) qu'on est en présence d'un sérum forte-

(1) La question de l'antigène ne nous préoccupe pas ici. Il est bien entendu
que dans le cas de syphilis nous employons, comme maximum, le tiers de la
dose la plus forte d'antigène, incapable par elle-même d'empêcher l’hémo-
lyse. Nous avons toujours obtenu les meilleurs résultats dans les cas d'échi-
nococcose avec le liquide hydatique de foie de mouton.

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION 429

ment hémolytique, on peut employer des doses doubles
d'hématies, en allant de 0,2 à 2 cent. cubes. D'ailleurs, si, en
procédant d'après les indications ordinaires, on obtient une
hémolyse complète dans le dernier tube, ce qui indiquerait que
l'index 10 peut être dépassé, la durée de l'expérience n’en est
nullement prolongée. En effet, si élevé que soit cet index, on
doit continuer l'expérience de la même facon : ajouter dans
chaque tube de la première série (tubes 1, 2, 3) 0,1 cent. cube
de globules rouges et 0,2 cent. cube dans chaque tube de la
deuxième (tubes 4, 5, 6). On a tout le temps, pendant la
1/2 heure de séjour de ces tubes à l’éluve à 37 degrés, de
compléter la détermination de l'index hémolytique en prépa-
rant de nouveaux mélanges de 0,1 cent. cube avec des doses
plus considérables de globules rouges.

Nous avons dit que nous ajoutions toujours, dans chaque
série de tubes composant une expérience de fixation, la dose
constante de globules rouges (0,1 cent. cube pour la première
et 0,2 cent. cube pour la deuxième série); et en cela aussi notre
pratique diffère de celle conseillée par Hallion et Bauer, d'une
part, et par Busilla, d'autre part. Ces savants déterminent la
dilution maxima de globules rouges dissous par 0,1 cent. cube
de sérum frais et emploient pour leur réaction une émulsion
beaucoup plus faible.

Cette pratique est défectueuse car la dose employée par ces
auteurs est, dans beaucoup de cas, supérieure à celle qui donne
le meilleur résultat. D'autre part, il est très dangereux
d'employer une dilution de globules rouges inférieure à 1/20,
ce que ces auteurs sont nécessairement amenés à faire lorsque
l'index hémolylique est de 1.

Interprétation. — NH arrive exceptionnellement que le sérum
frais soit anti-alexique; dans ces conditions, la pratique du
procédé rapide est impossible. Si l'index hémolytique est 0, on
peut, le plus souvent, comme cela a été déjà indiqué par d’autres
auteurs, obtenir l’hémolyse en doublant la dose de sérum.

Nous avons vu plus haut que dans nos observations, l'index
hémolytique était 91 fois sur 400 de 0 à 3; cela veut dire que,
dans 22,75 p. 100 de cas, le résultat oblenu ne pouvait être
considéré comme définitif que lorsqu'il était nettement négatif.

430 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

On peut parfois obtenir une réaction négative, même en
employant 0,2 cent. cube de globules rouges avec du sérum
dont l'index est de 2 ou 3, surtout en utilisant un antigène très
pauvre en subslances anticomplémentaires.

Lorsque l'index hémolytique dépasse la moyenne (8-10), ilne
faut tenir compte du résultat que s’il est obtenu avec 0,1 cent.
cube de globules rouges. Encore faut-il se rappeler qu'on trouve
des sérums, nous en avons parlé déjà plus haut, qui peuvent
donner un index hémolytique élevé tout en étant pauvres en
alexine. Ces cas sont heureusement très rares.

Lorsque l'index dépasse 10, le résultat positif obtenu avec
0,1 cent. cube d’hématies doit être, en général, considéré comme
certain et définitif.

En somme, pour nous, la pratique de l'expérience en double
et la détermination de l'index hémolytique servent uniquement
à juger avec certitude le résultat obtenu avec 0,1 cent. cube
de globules rouges.

Ceux fournis par 0,2 de globuies rouges ne seront utiles
qu'autant qu'ils confirmeront le résultat négatif obtenu avec
la première dose d'hématies.

On ne doit se contenter du procédé rapide que lorsqu'on
obtient un résultat nettement négatif avec les sérums dont l’in-
dex ne dépasse pas 3, el un résultat nettement positif lorsqu'on
a une fixation très nette avec un sérum dont l'index dépasse 10,
la dose de globules rouges restant de 0,1.

Si les résultats donnés par les deux expériences du procédé
rapide sont contradictoires, on doit les considérer comme dou-
teux, et recourir au procédé lent.

PROCÉDÉ LENT.

Pour que la réaction soit pratiquée dans de bonnes condi-
tions par le procédé lent, il est indispensable que tous les tubes
de l’expérience renferment la même quantité d’ambocepteurs
hémolytiques et d’alexine. Or, ces condilions sont rarement
réalisées; cela provient de la teneur variable du sérum humain
en ambocepteurs anti-mouton, dont l’action s'ajoute à celle du
sérum hémolytique artificiel et trouble ainsi la régularité de
l'expérience.

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION #31

La lecture du tableau IV permet de se rendre compte des
différences quantitatives considérables que présentent les sérums
chaulffés, quant à leur propriété de sensibiliser les globules de
mouton. On y voit que, dans 121 cas sur 254 (dans 47 p.100 des
cas environ), l'index ne dépasse pas 3; que, dans un quart de
cas (62 sur 254), il atteint ou dépasse 10 ; enfin, il peut atteindre
leschiffres 20 et 25, c’est-à-dire que exceptionnellement 0,1 cent.
cube de sérum serait capable de sensibiliser 2 cent. cubes et
mème 2,5 cent. cubes de globules rouges de mouton.

TABLEAU IV.

Propriétés hétérolytiques du sérum humain
chauîfé une demi heure à 56 degrés.

NOMBRE QUANTITÉ ALEXINE AREA E DFI
de sérums de sérum de cobaye de mouton ; SHRETANE
Pre = È a à 5 p. 100 d'ambocepteurs
examinés. employée. à 50 p. 100 ASsontel hétérolytiques.
13 | ONec ri UNCAC Crea (0
37 MAO CI OICICM 0ÉCACA il
31 PH TOC... A 0 e.c. 1 0 c.c. 2 2
40 ONCNCE ONCAC 1 OFCACNS 3
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12 OMC 4A 0rertcui OMerc 5)
20 URCACAA (DE es Ml 0NCAE6 6
11 IMAONC CE ÜRerc ai ORC TC ï
3 | Oc.c.l 0e. c: 1 ÜPereee 8
5 IPRRORG CE 0ACACEE DRCACAI 9
25 PAMONCACE (D'EXer Nl 1NCIC0 10
3 l'M'Ocic 1 0 c.c. 1 1#c.C. 1 11
6 DES ES MI ONercm 111022 12
7 ECC ONerC'El TER EES) 13
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î DE Col OPA el 1NCNCES 15
3 (Das ol Deal 1NC1eM0 16
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3 UNCACAL | ONc:c. 4 21C:C::0 20
LG ce. 1 0 c.c. 1 2 €.c. 3 23
1 | 0 c.c. 1 0er Cu DCR CAE 24
1 | CAGE DNerc DGA 25
254

La richesse parfois considérable du sérum humain chauffé en

432 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Si

ambocepteurs hémolytiques avait inspiré à Bauer un procédé
dans lequel on se passe de sérum hémolytique artificiel. Cette
manière de faire, appliquée uniformément à tous les sérums, est
aussi défectueuse que la pratique dans laquelle on ne tient pas
du tout compte de l'index de la sensibilisatrice.

Notre expérience nous a, en effet, montré que la réaction de
fixation faite avec des globules rouges non sensibilisés, ne peut
donner de résultats convenables que lorsque l'index des sensi-
bilisatrices du sérum chauffé atteint ou dépasse 10.

Or, cet index élevé n'est obtenu, comme nous l'avons vu plus
haut, qu'avec 25 p. 100 des sérums.

De plus, il faut noter qu'on trouve quelquefois des sérums à
index 10, lesquels, examinés par le procédé de Bauer, donnent
une légère fixation non spécifique. L'explication de ce fait doit
être cherchée dans l’action des substances anli-alexiques con-
tenues en quantités plus ou moins considérables dans le sérum
chauffé, et dont l'existence nous a déjà permis de constater la
grande différence qui existe parfois entre l'index apparent et
l'index vrai d'ambocepteurs d’un même sérum chauffé (1).

Dans le procédé lent, on emploie les doses de 0,3 cent. cube
de sérum chauffé; or, l’action des doses croissantes du sérum
chauffé est très inégale. Ainsi les 0,3 cent. cube d’un sérum à
index 10 peuvent, en présence d’une même alexine, provoquer
l’hémolyse d'une quantité de globules notablement inférieure
à 3 cent. cubes, comme le montre le tableau ci-dessous.

Il faudra donc tenir compte de cet affaiblissement du pou-
voir hémolytique des doses croissantes lorsqu'on voudra déter:
miner la quantité de sérum hémolytique à ajouter dans chaque
tube de l’expérience renfermant du sérum chauffé.

Le tableau VI indique les doses que nous employons dans le
procédé lent, que la réaction soit faite avec le sérum syphili-
tique ou échinococcique.

Comme on le voit, nous répétons la première partie de l’ex-
périence en double.

Nous admettons que, pour la bonne conduite de la réaction de
fixation, il faut employer 30 unités hémolytiques; c’est-à-dire
qu'il faut sensibiliser chaque centimètre cube de globules

1) Voir notre communication à la Société de Biologie, séance du 18 novem-
bre 1911, t. LXXI, p. 453.

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION 433

rouges avec 0,1 cent. cube d’une dilution de sérum lapin-
mouton capable par lui-même de sensibiliser 3 cent. cubes
d'hématies.

TABLEAU V:

NOMBRE QUANTITÉ DE GLOB. ROUGES

; INDEX :
de sérums (à 5 p. ne
ayant Ê : Ar dissous par la
le mème d'ambocepteurs mème quantité d’alexine
pouvoir 5 123 après sensibilisation
sensibilisant, ar 0,3 c.c. ë :
sensibilisant Sr Hier par 0,3 c.c. de sérum

El

Te Se

11 0,3 c.c. pour 10 sérums.
: 0,2 c/C, DEMO
0,8 c.c. pour 1 sérum.
9 2 0,6 C'C MESURE
0,5 ce — D o —
0,8 c.c. pour #4 sérums.
10 3 ONIFCNICRE & —
0,5 c.c. — 2 —
: ; ( 1,1 c.c. pour Asérum:
"4 + |
1 08 C.c. — 1 —
& 5 1,3 c.c. pour 1 sérum.
F ; 1:2:cic:1 MAIS rTUME.
À 6 \ 1,5 c.c. pour 3 sérums.
£ 2 l 14 c.c. «—UMNsérum.
2 rl 1,8 c.c. pour 2 sérums.
1 9 2,5 c.c. pourmiesémiEe
\2,5 e.c. pour 1 sérum
à M nCrE Ù !
É a | 20 CORRE
l 11 2,5 c.c. pour 1 sérum.
|
: _ | 3,0 c c. pour 1 sérum.
+ ) 2,5: CCS SÉRUIMISS
1 13 3,0 c.c. pour 1 sérum.
à ; ( 4,0 c.c. pour 1 sérum.
2 de PROGRESS — il —
4 . 3,0 c.c. pour 1 sérum.
É 15 3,5 CCR —
53 53 sérums.

La première série de tubes recevra comme sérum hémoly-
28

43% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tique non pas 30 unilés, mais 30 unités moins le nombre qui
sera indiqué par l'index d’ambocepteurs déterminé pour chaque
sérum à examiner, d'après les indications données dans la
partie droite du tableau VI.

Prenons un exemple concret. Supposons que nous ayons
obtenu le chiffre 6 comme litre de la sensibilisatrice hémoly-
tique anti-mouton du sérum chauffé A. Cela veut dire qu'un
dixième de ce sérum est capable de sensibiliser 0,6 cent. cube
de globules rouges. Ce sérum renferme donc, à la dose de
0,4 cent. cube, 6 unités d'ambocepteurs. Comme nous
employons dans notre expérience de fixation 0,3 cent. cube
de chaque sérum à examiner, il s'ensuit que les 4 premiers
lubes renfermeront déjà, de par la présence du sérum, 18 unités
hémolytiques, tandis qu'il n’y en aura pas du tout dans les
tubes témoins. Comme d'autre part chaque tube de l'expérience
doit recevoir 30 unités, il faudra donc n'ajouter dans les
4 premiers {tubes que 12 unités seulement. En réalité, pour
corriger l’action anti-alexique des doses croissantes de sérum
chauffé, il faut faire le calcul en se basant sur le chiffre d’une
unité inférieure à celui indiqué par l'index.

Ainsi dans notre exemple l'index étant de 6, nous ferons
notre calcul d'après l’index 5. Nous agirons donc comme si les
0,3 cent. cube de sérum renfermaient 15 et non 18 unités
d'ambocepteur.

Il est évident qu'on ne versera pas du tout de sérum hémo-
lytique dans les # premiers tubes de l'expérience lorsque le
titre de la sensibilisation atteint ou dépasse 10.

Pour bien pratiquer la réaction de fixation, il faut titrer avec
soin le sérum hémolytique lapin-mouton et établir exactement
la dilution dont 0,1 cent. cube sensibilise 1 cent. cube de glo-
bules rouges, c’est-à-dire correspondant à 40 unités hémoly-
liques. On prépare rapidement une dilution extemporanée,
supplémentaire, suivant la quantité d'ambocepteurs à ajouter
dans les premiers tubes.

Dans la pratique courante, comme un léger excès de sensibi-
lisatrice n'influe pas défavorablement sur le résultat de la
réaction, nous procédons de la façon suivante : Nous ne tenons
pas compte de l'index tant qu'il ne dépasse pas 3; dans ce cas, il
est inutile de faire l'expérience en double, tous les tubes recoi-

TABLEAU VI.

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION 435

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< NTM LOS ONE SENS
NE AN ed
‘saequ7 SapP soN ER

436 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

vent la même quantité d'ambocepteurs hémolytiques. Lorsque
l'index est de # à 6, sensibiliser chaque centimètre cube de
globules rouges destinés aux 4 premiers tubes de l'expérience
avec 20 unités hémolytiques. Si l'index est de 7,8, 9, employer
15 unités.

On simplifie l'opération en préparant 3 dilutions de sérum
hémolytique dont 0,1 cent. cube représente 30, 15 ou 10 unités
d'ambocepteurs.

Les globules rouges sont utilisés sans sensibilisation préa-
lable, si l'index atteint ou dépasse 10.

Celte manière de faire ne prolonge la durée de l'expérience
que de quelques minutes; ce petit inconvénient s’efface devant
l'avantage d'assurer une précision beaucoup plus grande.

Avant d'aborder l'interprétation des résultats obtenus, il
nous paraît nécessaire d’insister sur un autre détail de tech-
nique. On emploie dans cette expérience le sérum de cobaye.
Or, la teneur du sérum de cobaye en alexine est très variable,
comme cela était déjà observé par Massol et Grysez ainsi que
par Noguchi. Le sérum de cobaye renferme non seulement de
l'alexine, mais aussi des ambocepteurs anti-mouton; ces der-
niers peuvent, exceptionnellement, s’y trouver en quantité
assez considérable.

TABLEAU VIT.
Propriétés hétérolytiques du sérum de cobaye frais.

RANCE QUANTITÉ DATE
de sérums - pe globules de moutons
PRES sérum à 90 p. 100 de à 5 p. 100
examines. employée. dissoute.
19 G'eic (DEEE (1
25 0ÉcC (Drtes
49 (Nestes 7 (DESTE l
33 (MERE OMC: 1
) DT DRCRCRE
B 0ACACMI (LMP ETES NE)
L (Mec 1"CA07r2
|
140 |

L'étude de 140 sérums de cobayes résumée dans ce petit

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION 437

tableau montre que si dans la moitié des cas il faut 0,2 à
0.3 cent. cube de sérum pour dissoudre 0,1 d’hématie de
mouton, dans 10 p. 100 des cas 0,1 cent. cube d’alexine dissout
0,2 et 0,3 cent. cube des mêmes globules. Dans un cas, nous
avons même obtenu l’hémolyse de 1,2 cent. cube de globules
avec la même dose (0,1) d’alexine. Il y a aussi un autre facteur
sur lequel l'attention a été attirée par Noguchi et Bronfen-
brenner.

Ces auteurs ont remarqué que la propriété de l’alexine d’être
fixée par la combinaison antigène-antlicorps est très variable
suivant les cobayes. Leur étude a cependant montré que, dans
la moitié des cas, le sérum de cobaye possède une fixabilité
moyenne.

Il est done bon pour obvier à tous les inconvénients pré-
sentés par la teneur variable du sérum de cobaye en alexine,
ambocepteurs anti-mouton et également par la propriété
variable de se laisser fixer par l'antigène-anticorps, d'employer
un mélange de sérum de 3 cobayes. En tout cas, il est néces-
saire de vérilier les propriétés du sérum de cobaye, lorsque
pour des raisons quelconques on ne disposera que du sérum
d'un seul animal.

Nous avons également employé un autre procédé lent dans
lequel le sérum humain est débarrassé après le chauffage à
56 degrés de tous les ambocepteurs hémolytiques par contact
d'une demi-heure à l’étuve à 37 degrés avec un excès de glo-
bules rouges de mouton. Ce procédé avait déjà été employé par
Apphatil et Lorentz, par nous-même ainsi que par Müntz et
par Rossi. Dans la grande majorité des cas cette technique
donne de bons résultats. Cependant, nous ne conseillons pas de
l'employer, car, dans 2 cas, sur 50 sérums, nous avons obtenu
des résultats peu satisfaisants.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS OBTENUS PAR LE PROCÉDÉ LENT.

Appelons série À la première rangée de tubes où le sérum
hémolytique lapin-mouton n'a été ajouté qu'en quantité sufli-
sante pour compléter les ambocepteurs naturels, et série B la
deuxième série de 4 tubes pour lesquels les globules rouges ont
été sensibilisés de la même facon que pour les tubes témoins.

438 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Remarquons d’abord que la série B ne peut pas donner de
résultat positif si la réaction est négative dans les tubes de la
série À.

Le résultat négatif de A donne une certilude au résultat
négatif de la série B; d'autre part, le résultat positif donné par
la série À est corroboré par la réaction positive donnée par la
série B, dans laquelle les globules sont sensibilisés, le plus
souvent, avec un excès d'ambocepteurs.

Lorsque une réaclion légèrement positive de la série A n'est
pas confirmée par la série B, il faut considérer le cas comme
douteux.

DiscussiON DES RÉSULTATS OBTENUS PAR LES DEUX PROCÉDÉS
POUR LE MÈME SÉRUM.

Il y a des sérums pour lesquels la réaction ne peut être pra-
tiquée d’une facon convenable; il arrive, en effet, exceplion-
nellement, que le sérum renferme soit à l'état frais, soit après
chauffage à 56 degrés, une quantité considérable de substances
anli-complémentaires. L'index anli-alexique d’un des sérums
que nous avons étudié élait de 8; c’est-à-dire que 0,8 cent.
cube d’alexine à 50 p. 100 étaient nécessaires pour neutraliser
l’action anti-hémolytique de 0,1 cent. cube de ce sérum.

Nous présentons ici un petit tableau qui résume les résultats
qu'on peut obtenir en examinant un même sérum simultané-
ment par les procédés rapide et lent.

On voit d’après ee résumé, qu'en somme on ne pourrait se
dispenser du procédé lent que lorsque le procédé rapide donne
une réaction nettement négative avec un index très faible ou
bien en présence d’un résultat franchement positif donné par
un sérum dont l'index atteint ou surlout dépasse 10. Or,
d'après notre statistique de l'index hémolytique du sérum
frais (lableau IT), le nombre de ces cas est limité, surtout si
l’on considère que beaucoup de ces sérums donnent justement
des résultats contraires à ceux que nous venons d'indiquer.

Il faudra donc, pour la plupart des cas, répéter l'expérience
par le procédé lent. Personnellement, nous recommandons
vivement de faire des recherches parallèles par les deux réac-
lions pour se mettre à l'abri de toute erreur. Il y a, en effet, des

TECHNIQUE RATIONNELLE DE LA RÉACTION DE FIXATION #39

sérums frais à index élevé, mais pauvres en alexine; dans ce
cas, la réaction positive à cause du manque d’alexine, sera cor-
rigée par le procédé lent.

RÉACTION OBTENUE | RÉACTION OBTENUE RÉSULTAT
par le | par le doit-être considéré
procédé rapide. | procédé lent. comme :
I “ EE ar ne
pa <25 Û Û
|
Il “ < o] se | + +
— Lx |
HO OLD |
Il a EE 0 Douteux.
= D |
III ae | 0 0
0 DS |
III a = _e Douteux.
: |
IV # & | 0 0
0 D 2? |
D >
IV a == - +
= |
V ; os | 0 (]
— |
V a ES _e Douteux.

Maintenant nous allons examiner l’un après l’autre les cas
qui peuvent se présenter, en laissant de côté, bien entendu, les
résultats concordants par les deux procédés.

Le cas I à doit être considéré comme négatif ; il est évident
que la réaction positive obtenue par le procédé rapide indique
une fixation non spécilique due au manque d’alexine.

Le cas II à doit être considéré comme douteux. Il peut
arriver, en effet, que le chauffage à 56 degrés ait détruit une
trop grande quantité d'anticorps spécifiques pour permettre le
phénomène de fixation du complément. La diminution d'am-
bocepteurs naturels ou d’immunisalion est un fait connu.
D’après notre statistique, la perte en ambocepteurs par Île
chauffage à 56 degrés peut atteindre jusqu’à 80 p. 100. On
comprend alors que le chauffage puisse dans certains cas
influencer défavorablement la réaction de fixation, surtout
lorsque les anticorps ne sont pas en grande quantité.

440 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avons déjà expliqué la raison du cas Il a; on trouve
des sérums frais dont l'index hémolytique élevé (8-10) est sur-
tout dû à l'excès d’ambocepteurs anti-mouton ; le procédé lent
corrige facilement l'erreur du procédé rapide. Ces cas sont rares.

Nous n'avons jamais rencontré de sérum rentrant dans la
catégorie IE a; la raison en est facile à comprendre.

Les cas rentrant dans la catégorie IV à, doivent aussi être
expliqués par la pauvreté relative du sérum frais en alexine.

On comprend aisément que dans le cas V à, la fixation du
complément par le procédé rapide soit masquée par l'excès
d'alexine. Lorsqu'une réaction légère obtenue par le procédé
rapide n’est pas corrigée par un résultat très net du procédé
lent, on se trouve en présence d'un cas douteux.

Ces réactions légères ou douteuses peuvent être dues soit à la
présence d’une quantité insuffisante d'anticorps, soit à des
substances non spécifiques se trouvant momentanément dans
le courant circulatoire et qui sont dues probablement (ou bien)
au régime alimentaire ou bien à l'élaboration de produits
pathologiques au niveau des organes atteints.

Quelle que soit la minutie apportée dans la pratique de ia
séro-réaction, il est impossible d'éviter complètement les réac-
tions légères, douteuses. On peut cependant arriver à leur
juste interprétation en étudiant de près les propriétés anti-
hémolytiques du sérum à examiner.

Les résultats douteux ne peuvent nullement servir au dia-
gnostic clinique de la syphilis ou de l’échinococcose. Mais ils
permettent de suivre la réaction de l'organisme chez les
malades avec le sérum desquels on a obtenu avant le traitement
de la syphilis ou bien avant l'opération de kyste hydatique
une fixation du complément très nelte, négative ou positive.

Nous sommes convaincus que le pourcentage des réactions
positives obtenues chez les malades syphilitiques est bien supé-
rieur à la réalité, justement à cause des réactions légères, non
spécifiques, mais considérées comme positives pour la seule
raison qu’elles concernaient des malades reconnus ensuite
syphilitiques par l'éclosion de symplômes décisifs; et cela
d'autant plus que le nombre de ces réactions douteuses aug-
mente considérablement lorsqu'on pratique la réaction de fixa-
tion sans tenir compte des propriétés hémolytiques du sérum.

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES
DE SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES
DU CERVEAU

par A. MARIE.

Dans l'étude expérimentale des toxi-infections locales,
comme la diphtérie, le tétanos, la rage, la fixation de l’antigène
sur certaines substances chimiques de l'organisme s'offre à
nous comme une recherche des plus intéressantes, puisqu'elle
nous fait pénétrer dans l'intimité des phénomènes et qu'elle
touche à la question des réactions d’immunité.

Mais, tandis qu'on n’a jamais réussi à préparer le composé de
nature albuminoïdique (1) auquel la matière nerveuse doit ses
propriétés antitétaniques, nous avons pu isoler du cerveau une
substance offrant les réactions générales des albuminoïdes et
qui présente le pouvoir de neutraliser le virus de la rage. Dans
ce travail, après avoir exposé les propriétés antirabiques des
extraits de la matière cérébrale, nous montrerons qu'ils sont
doués également d’une certaine toxicité pour l'organisme.

I. — PROPRIÉTÉS ANTIRABIQUES.

Certains faits déjà anciens, en particulier l'action protectrice
des filtrats de substance cérébrale contre une infection rabique,
nous avaient conduit à supposer dans le cerveau l'existence
d’un pouvoir neutralisant. Si l'on injecte dans le sang, à des
lapins, une quantité convenable du filtrat de cet organe, on peut
les voir résister à une infection rabique pratiquée par la voie
oculaire (2). Remlinger avait même observé que le virus filtré,
injecté à dose massive sous la peau, pouvait conférer aux ani-
maux une immunité leur permettant de résister à l’inoculation
virulente sous-méningée (3). Toutefois, en dépit de nombreux
essais pratiqués #n vitro, nousn'avions jamais réussi à démontrer,

442 , ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dans les filtrats cérébraux, l'existence d'un principe neutralisant
du virus.

Ayant eu alors à notre disposition l'encéphale d'une personne
morte de rage, nous avions soumis à l'action du vide sulfu-
rique le liquide obtenu .en comprimant le cerveau broyé avec
du sable à plusieurs centaines d’atmosphères. En reprenant par
l'eau distillée le suc desséché et pesé, on peut préparer une
solution isotonique et la stériliser au moyen d'un filtre Cham-
berland. Elle présente une propriété remarquable : additionnée
de son volume d’une émulsion centésimale de virus fixe, elle la
neutralise en quelques heures, car le mélange injecté dans le
cerveau d’un animal se montre absolument inoffensif pour lui.

Ce pouvoir neutralisant ne se manifeste pas seulement avec
l'extrait de cerveau rabique; on peut l'observer en utilisant
l’encéphale d'individus ayant succombhé aux maladies les plus
diverses, en particulier à des affections nerveuses telles que la
paralysie générale, auquel cas les propriétés antirabiques se
montrent plus énergiques.

Le principe auquel les extraits cérébraux sont redevables de
leur action neutralisante se trouve entrainé par des précipités
offrant les caractères généraux des nucléoprotéides, comme le
prouve le mode de préparation suivant.

On traite par une solution sodique faible (1 p. 100) un
fragment de cerveau humain et on filtre l’émulsion sur bougie.
Après addilion d'HCI, le précipité obtenu est recueilli par cen-
trifugation puis redissous dans un liquide convenable, du
sérum sanguin par exemple. Il présente 2x vitro des propriétés
anlirabiques analogues à celles que nous avons reconnues au
suc de presse, préparé comme nous l'avons dit (4).

Nous avons résumé en un tableau quelques-unes de ces
expériences. (Tableau I.)

Il résulte de celles-ci que le cerveau, le seul organe qui
assure la culture du virus rabique, renferme une subs-
lance douée d'une affinité élective, d'un pouvoir neutrali-
sant pour lui, que cette substance, partiellement soluble à la
faveur des produits complexes entrant dans la composition de
cet organe, est entraînée par des précipités nucléoprotéiniques
et se présente comme étant thermostabile. Nous allons montrer
maintenant que cette substance est de nature albuminoïdique.

SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES DU CERVEAU 443

TABLEAU I
ACTION NEUTRALISANTE EXERCÉE PAR LE SUC DE PRESSE ET LA NUCLÉOPROTÉINE.

ANIMAUX INOCULATION INTRACÉRÉPBRALE | RÉSULTATS

1. Cobaye.|Suc du cerveau rabique humain + VF 1 p. 100 à
2. Lapin. |! partie du même suc + 2 parties de VF 1 p. 100. Ce

3. Cobaye. Suc du cerveau (enfant diphtérique) + VF 1 p. 100
PEN CT 7ARRTE LS UD at Z

4. Cobaye.|Suc cérébral (PGP) ï VF l p. 100. Centrifugation
et'injection du dépôt. . . . . . SM RE ER œ

5. Cobaye./1 partie du même suc cérébral ni parties de VE
END MIO ON DREAM D NOR œ

6. Cobaye. Suc chauffé 40 nee à 55 degrés + VF 1 p. 100
PERRET 200 LA. co

7. Cobaye.|Nucléoprotéine céré Énrale Aura ee F VF 1 p. 100
É LA PA] DIF ENAE, Pa ee - re
8. Lapin. |La même chauffée : à 56 done Le VF 1 P. 100 à PE. =

Dans son travail classique sur les protéines du tissu
nerveux (5), Halliburton admet que la matière albuminoïde s'y
présente sous trois états, une neuroglobuline +, coagulable à
17 degrés, une neuroglobuline 5, coagulable à 70 — 75 degrés,
l’une et l’autre précipitables par les sels neutres et ne contenant
pas de Ph, enfin un nucléoprotéide coagulable à 56 — 60 degrés,
renfermant 0,50 p. 100 de Ph, et pour lequel il préconise le
mode de préparation suivant. L'’encéphale, débarrassé du sang
et des méninges, est broyé et traité par une grande quantité
d'HO pendant vingt-quatre heures, après quoi le liquide surna-
geant est décanté et précipité par l'acide acétique à 33 p. 100,
à raison de 0,50 cent. cubes pour chaque centimètre cube de
liquide ; Le précipité est lavé à l'eau distillée. Il ne diffère guère
de ceux que nous avions obtenus en traitant la matière ner-
veuse par des solutions alcalines faibles, car nous avons constaté
que ce précipité entraîne également la substance antirabique
puisque, additionné, après dialyse, de VF à 1 p. 100, il le
neutralise semblablement.

Par contre, nous avons obtenu des résultats inconstants en
utilisant le mode de préparation indiqué par Levene (6),
consistant à épuiser la matière cérébrale par une solution de
NH:CI à 4 p. 100 et à précipiter le filtrat par l'acide acétique.

444 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Qu'il s'agisse de la technique de Halliburton ou de celle de
Levene, le mode de préparation est assez laborieux, sa lenteur
expose les albuminoïdes du cerveau à des altérations diverses ;
il faut donc obtenir à l’état pur le produit jouissant par lui-
même des propriétés antirabiques. À la suite de nombreux
essais, nous nous sommes arrêté à la technique suivante (7) :

On prépare dans 100 cent. cubes d’eau distillée une émulsion de 10 grammes
de cerveau finement broyé, à laquelle on ajoute X gouttes d'acide acétique
cristallisable. Après agitation convenable, on centrifuge ou bien on jette sur
un filtre le précipité qui est repris par environ 40 cent. cubes d'eau et traité
de nouveau par l'acide acétique (1 cent. cube); on filtre le mélange pour
obtenir le liquide elair qui contient le principe neutralisant ainsi que le
nucléoprotéide du cerveau. On peut alors précipiter celui-ci par NaCI à
20 p. 100.

CA

La solution active isolée de la sorte sera neutralisée et dialysée
avec soin avant d'être mise en contact avec le virus rabique
(pendant vingt-quatre heures).

Ses caractères chimiques sont ceux d'un acidalbuminoïde.
Il ne contient pas de Ph, est précipité de ses solutions par la
dialyse, par neutralisation ; la température de l’ébullition n'y
détermine pas de ccagulum, le sulfate de magnésie à saturation
le précipite. En plus de ces réactions de précipitation, cette
substance présente celles de coloration communes à tous les
albuminoïdes (réactions de Millon, du biuret, xanthopro-
téique).

Si l’on prépare un mélange de cet acidalbuminoïde et de virus
fixe, on trouve que celui-ci ne tarde pas à perdre ses propriétés
pathogènes.

La même émulsion virulente trailée par du sérum neuf
additionné de quantités variables d’acélate de soude, ou encore
par des solutions plus ou moins concentrées de ce sel, conserve
tout son pouvoir pathogène. Un autre organe que l’encéphale,
la rate par exemple, traitée de la même façon que lui, ne montre
aucune propriété neutralisante. (Tableau IL.)

Les propriétés neutralisantes que l’expérimentation révèle
dans cet acidalbuminoïde font défaut dans les autres substances
protéiques du cerveau. Aïnsi le premier filtrat obtenu dans notre
mode de préparation et qui renferme les neuroglobulines, le
résidu laissé par la filtration de la liqueur contenant le nucléo-

SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES DU CERVEAU 445

protéide (1), celui-ci lui-même, n’exercent aucune action neutra-
lisante sur le virus rabique.

TABLEAU II

ACTION NEUTRALISANTE DE L'ACIDALBUMINOÏDE EXTRAIT DU CERVEAU NEUF.

ANIMAUX INOCULATION INTRACÉRÉBRALE RÉSULTATS
1. Cobaye.|Acidalbuminoïde de mouton + VF 1 p. 100 à PE. 2
2, Cobaye.|Acidalbuminoïde de cerveau humain (PGP) +
VIS DARCOS oo
3. Cobaye.|i partie de cet node t Fe 5 er de de VF
Po DD re ce D

4. Cobaye.|Le même, chauffé 30 nes à 56 degré S ‘0 VF

1 p. 100 à PE rar LOL RREE o
5. Cobaye.|Acidalbuminoïde de mouton chauffé à S0 ae

SÉVE P EIDENEREER se co
6. Cobaye.|[Le même, chauffé à 100 asus ts VF 1 P. 400 . ÊRE 2
1. Cobaye.|Acétate de soude à 10 p. 100 + VF 1 p. 100. . . . Rage.
8. Cobaye.|Sérum neuf traité comme le cerveau + VF 1 p. 100. Rage.
9 Lapin. |Rate traitée comme le cerveau + VF 1 p: 100 Rage.

Cette propriété anti d’une substance protéique extraite du
cerveau nous paraît susceptible d'expliquer plus d'un fait
demeuré obscur dans l'étude de la rage. Ainsi nous avons vu
qu'en soumettant la matière cérébrale à une pression de
plusieurs centaines d’atmosphères, on obtient un liquide doué
d'un pouvoir antirabique très appréciable. Ce mode de traite-
ment rappelle une expérience assez curieuse de W. Barratt (8).
Ce savant, ayant imaginé de soumettre à l’action de Pair liquide
dans le broyeur de Mac Fadyan un cerveau rabique, s’aperçut
qu'il perdait sa virulence au bout de quelques heures.
Heller (9) reprit cette expérience et oblint des résultats sem-
blables, que Barratt prétendit expliquer par une destruction mé-
canique du virus de la rage, hypothèse difficilement acceptable.

Les propriétés que nous avons découvertes dans le suc céré-

(1) Sans vouloir entrer ici dans une discussion d'ordre chimique, nous
tenons seulement à rappeler les critiques formulées par Duclaux (ces Annales,
L. VI) contre ces dénominations conventionnelles de la matière albuminoïde,
une mème substance ayant peut-être reçu, en raison de certaines réactions,
des noms très différents. Est-il besoin de faire remarquer en outre que les
propriétés d’un albuminoïde isolé après la mortne peuvent donner qu'une idée
approchée de l'énergie qu'il possède dans le cerveau vivant.

446 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

bral nous conduisent à proposer de cette expérience une toute
autre interprétation. En effet, on peut admettre que l’action
mécanique du broyage a libéré, par suite d'une destruction
profonde des éléments nerveux, la substance active, antira-
bique, de même que leur compression à plusieurs centaines
d'atmosphères l'avait mise en liberté dans notre mode de pré-
paration. Barratt signale, 1l est vrai, une série d'essais des-
quels il conclut que la perte de la virulence n’est pas due à un
pouvoir antirabique de la masse broyée, mais ils ne sont rien
moins que probants : d'une part, il recherche si cette dernière
exerce une aclion neutralisante sur une émulsion virulente
décimale, donc beaucoup trop concentrée ; d’autre part, il faut
se rappeler que la substance active n’a pas été isolée par le
broyage, mais est restée au sein de la masse, fixée sur le virus.
Pour isoler cette substance, on doit faire subir à la matière
nerveuse la préparation que nous avons décrite et qui nous à
permis d'obtenir le principe anlirabique du cerveau sous la
forme d'un nouvel albuminoïde cérébral.

Cette forme sous laquelle nous le préparons lui permet
d'échapper aux processus de coagulation par la chaleur qui
pourraient lui enlever ses propriétés antirabiques; aussi peut-on
chauffer l’acidalbuminoïde à 80 et même à 100 degrés sans lui
voir perdre son pouvoir neutralisant.

La dessiccation paraît avoir sur notre substance une action
plus intense que sur les extraits cérébraux, sur le suc de presse.
qui renferment le principe actif. À plusieurs reprises, nous
avons pu comparer l’action sur l’'émulsion rabique d'un même
précipité isolé du cerveau normal avant et après sa dessiccation
sous le vide sulfurique et ainsi constater que cel albuminoïde
en se desséchant avait perdu une partie de ses propriétés neu-
tralisantes.

Ces faits sont intéressants, car ils se rapportent aux résultats
opposés que l’on obtient suivant que les moelles rabiques sont
desséchées lentement d’après le procédé de Pasteur, ou bien
d’une facon rapide; on sait que, dans ce dernier cas, elles con-
servent intacte leur virulence.

Harris et Shackell (de Saint-Louis, États-Unis) ont repris (10)
récemment cette question, sur laquelle ils professent les mêmes
idées que nous. Ce n'est pas la dessiccation des moelles qui at:

SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES DU CERVEAU #47

ténue leur virulence, mais bien la facon dont elle est conduite :
menée rapidement, elle n'altérera pas l'activité du virus:
abandonnée lentement à elle-même, elle le neutralisera peu à
peu en déterminant une concentration croissante du principe
antirabique contenu normalement dans la substance nerveuse.

La perte de la virulence, dans le procédé des moelles pas-
lcuriennes, est done de nature chimique et c’est en s’opposant
à l’action de l’albuminoïde actif sur le virus que la dessiccation
brusque lui conserve lout son pouvoir infectant. Nos recherches
sur les propriétés biologiques des albuminoïdes du cerveau
apportent, pensons nous, une confirmation expérimentale à
cette manière de voir.

IL était indiqué de rechercher ce que deviennent les pro-
priétés spécifiques de l’acidalbuminoïde cérébral chez les ani-
maux ayant succombé à la rage ainsi que chez ceux vaccinés
contre elle. Déjà nous avons constalé une activité plus grande
dans les extraits cérébraux chez une personne ayant succombé
à la rage. Nos recherches sur l’acidalbuminoïde, qui ont porté
sur plus de 80 expériences, concordent toutes pour révéler le
fait suivant extrêmement suggestif : le pouvoir neutralisant de
celte substance isolée du cerveau, assez faible chez l'animal
neuf, augmente chez celui qui a succombé à l'infection rabique,
et acquiert une énergie considérable chez les animaux vaccinés
contre la rage. Ainsi, tandis que l’acidalbuminoïde extrait du
cerveau de mouton neuf rend inactif environ son volume d'une
émulsion centésimale de virus fixe, on voit la même quantité
de cet acidalbuminoïde préparé avec la substance nerveuse d’un
mouton rabique neutraliser 5 ou 6 volumes de la même dilution
virulente. Mais du cerveau des animaux vaccinés on peut iso-
ler un albuminoïde autrement actif; en voici quelques exemples.

Un mouton traité depuis plusieurs années par des injections
hebdomadaires de virus fixe à fourni un extrait cérébral dont
une partie neutralisait 15 parties de l’'émulsion virulente cen-
tésimale. Chez un autre animal de la même espèce, nous avons
pu isoler du cerveau la même substance douée, cette fois, d’une
énergie surprenante, puisqu'elle neutralisait 40 fois son
volume de la dilution virulente ; le sérum de ces deux moutons
élait extrêmement actif (11).

ES
es
Q0

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

TABLEAU III

ACTION NEUTRALISANTE DE L'ACIDALBUMINOÏDE
EXTRAIT DE CERVEAUX D'ANIMAUX RABIQUES ET D ANIMAUX VACCINÉS CONTRE LA RAGE.

ANIMAUX INOCULATION INTRACÉRÉBRALE RÉSULTATS
1. Cobaye./Acidalbuminoïde de cerveau de 155% rabique +

VE MD -MOOPPE MERE EE a
2, Lapin. |1 partie d'acidalbuminoïde 13 cerveau de De

rabique + 3 parlies VF 1 p. 100. . . . . . es
3. Lapin. |1 partie d’acidalbuminoïde du cerveau de Roiur

rabique + 6 parties VF 4 p. 100 . . . . . D
4. Lapin. |1 partie d’acidalbuminoïde du cerveau de ones

vacciné + 10 parties VF A p. 160 . . . . . co
5. Lapin. |1 partie du même acidalbuminoïde + 17 re

NE D 100 EEE AIAEUERE Rage.
6. Cobaye.!1 partie d'acide ee ir Are Ron vac-

ciné + 20 parties MEBMp 100. … . . . . 2
1. Lapin. |1 partie du même acidalbuminoïde + 40 Dares V F

HS CNAB EN AU | à LENOIR NT C2

Après avoir établi l’activité de l'acidalbuminoïde chez les
animaux ayant acquis une immunité artificielle, il était inté-
ressant de l’étudier chez des espèces qui jouissent d’un certain
état réfractaire à la rage. Nous avons montré (12) que les
oiseaux adultes rentrent dans cette catégorie d'animaux : un
très petit nombre seulement présentent une ou plusieurs
altaques de paralysie longtemps après la trépanation, quelques-
uns même peuvent guérir définilivement.

Or, si l’on prépare notre substance albuminoïde en partant
du cerveau de poules neuves, on constate qu'elle se montre
plus active que chez les mammifères normaux. Dans nos essais,
elle neutralisait de 4 à 5 fois son volume d’émulsion rabique.
De ces faits, nous rapprocherons nos autres observations failes
à propos de l'étude de la rage ehez les oiseaux : état d’immu-
nité naturelle très prononcé, guérison définitive d'un certain
nombre des animaux paralysés, impossibilité d'obtenir un
sérum antirabique très actif chez les oiseaux.

Pour rappeler le pouvoir neutralisant du virus rabique par
la substance albuminoïde que nous avons isolée du cerveau,
nous proposons de lui donner provisoirement le nom d’anti-
lyssine (de avr: et A0csa, rage).

SUBSTANCES ALBUMINOIDES EXTRAITES DU CERVEAU #49

Son pouvoir spécifique est en effet très étroit. Son action sur
la toxine tétanique est nulle : qu'il s'agisse de substance céré-
brale ou médullaire d'animaux neufs ou tétaniques, ou même
d'animaux immunisés contre le tétanos, en aucun cas nous
n'avons observé la moindre atlénuation de la tétanotoxine par
l’albuminoïde actif sur Le virus de la rage.

Voici un autre exemple de la spécificité d'action de cette
substance. On sait que le virus de la poliomyélile se rapproche
par certains traits du virus rabique; mais, de même que du
sérum antirabique reste sans influence sur le virus de la
maladie de Heine-Medin, de même aussi l’albuminoïde extrait
de cerveau humain et si actif sur le virus de la rage n’exerce
pas la plus légère action sur celui de la poliomyélite (13) (1).

IL. —- PROPRIÉTÉS TOXIQUES.

Après avoir étudié les propriétés neutralisantes spéciliques des
extraits cérébraux, il nous faut maintenant montrer que, dans
certaines conditions, les albuminoïdes de la substance nerveuse
sont doués d’un pouvoir toxique plus ou moins intense.

Le point de départ de nos recherches avait été l'observation
suivante, déjà ancienne (14) : quand on injecte à des animaux
des émulsions de matière cérébrale filtrées sur bougie, ils en
sont fortement éprouvés, perdent rapidement de leur poids et
succombent parfois dans un état marastique. Nous avions alors
montré le premier (15) que si l’on précipite en masse par le
sulfate d'ammoniaque pur les albuminoïdes d'une émulsion
de cerveau filtrée sur bougie, on obtient une substance qui,
injectée dans l’encéphale, après dialyse, se montre fortement
toxique pour les animaux : ils succombent, souvent après
avoir présenté des phénomènes convulsifs survenant par crises
et d’une incubation variable.

De même, le suc cérébral que l’on prépare en soumettant un
encéphale à l’action d’une presse peut être, comme nous l'avons
indiqué, desséché et repris par l'eau de façon à avoir une
solution isotonique qui, filtrée sur bougie Chamberland, se
montre également douée d’un pouvoir toxique, variable suivant

(1) L'acidalbuminoïde cérébral n'exerce aucune action neutralisante sur un
autre microorganisme « invisible », celui de la vaccine.

29

450 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sa provenance. Ainsi, l'extrait d'un cerveau rabique, celui
d’encéphale de paralytiques généraux, se montrent incompara-
blement plus toxiques que d’autres.

Enfin, dans notre procédé d'extraction des nucléoprotéines
du cerveau, on obtient encore des substances douées d’une
toxicité souvent élevée.

Qu'il s'agisse donc d'une précipitation en masse par le sulfate
d’ammoniaque, du suc de presse ou de préparations nucléopro-
téiniques, toujours on constate que ces différentes préparations
exercent sur les animaux un pouvoir toxique plus ou moins
élevé, assez comparable dans ses effets.

Pour tenter de l’analyser, nous avons entrepris son élude en
suivant la technique définie ci-dessus pour l'obtention de notre
acidalbuminoïde. De la sorte, nous avons pu nous convaincre,
au moyen d'injections intracérébrales, de la toxicité présentée
par les différentes formes sous lesquelles ce procédé nous offre
la matière aibuminoïde du cerveau.

Le point essentiel de ces recherches nous paraît être le
suivant : les préparations sont nettement plus toxiques avec un
cerveau rabique qu'avec un cerveau normal. De même nous
avons pu constater, à plusieurs reprises, que l’acidalbuminoïde
extrait d'encéphales de paralytiques généraux, et de celui d’une
épileptique morte en état de mal, était beaucoup plus toxique;
dans ces derniers cas, le caractère convulsif des troubles pré-
sentés par les animaux fut des plus accusés et d'une durée
inaccoutumée.

Ici, une objection se présente immédiatement. Le concept
toxicité est quelque chose de très relatif; quand il s’agit d’ino-
culalions dans un organe aussi sensible que le cerveau, et
lorsque la substance ne se montre active pour l'organisme
qu'après un tel mode d'introduction, on ne saurait rien conclure
de précis, à moins de pouvoir provoquer les accidents spéci-
fiques d’empoisonnement avec des quantités tout à fait minimes,
ce qui n’est pas le cas pour nos extraits qui se montrent actifs
aux doses relativement élevées de 0,50, 0,25, 0,10 cent. cubes.

L'étude des propriétés toxiques des albuminoïdes du cerveau
offrirait donc peu d'intérêt si les choses se présentaient ainsi.
Mais nous allons montrer que l’une de ces substances, le nuc/éo-
protéide cérébral, est douée d’un pouvoir toxique en injection

SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES DU CERVEAU 451

intraveineuse, et que l’acidalbuminoïde du cerveau est suscep-
tible de se comporter comme un anligène, qu'ainsi on peut
obtenir un sérum capable de neutraliser ses propriétés.

Récemment, Dold, reprenant des expériences anciennes, à
montré (16) que si l’on injecte dans les veines d’un lapin une
émulsion concentrée du cerveau de cette espèce ou d’une autre,
l'animal succombe en l’espace de quelques minutes, mais que
si l’on a pris soin de chauffer l'émulsion à 60 degrés ou bien de
l’additionner de sérum frais, l'animal n'éprouve aucun dommage
de l’inoculation.

Nous allons prouver le rôle essentiel du nucléoprotéide du
cerveau dans la genèse de ces accidents.

A un premier lot de lapins, on injecte dans les veines une dilution épaisse
de substance cérébrale de la même espèce: ils meurent en quelques minutes.
Un deuxième lot reçoit semblablement la même émulsion, chauffée une heure
à 60 degrés: les animaux survivent, de même que ceux d’un troisième lot,
inoculés avec une émulsion de cerveau additionnée d’un sérum. (sérum
antirabique).

Dans une deuxième expérience, l’'émulsion de l'organe est remplacée par
son nucléoprotéide préparé en la précipitant par l'acide acétique. Les lapins
succombent trois-quatre minutes après avoir présenté les mêmes accidents
que dans la première expérience ; ceux qui ont reçu le nucléoprotéide chaulté
à 60 degrés résistent, de même que ceux injectés avec le mélange nucléopro-
téide + sérum.

De ces expériences, il résulte que la toxicité des extraits
aqueux du cerveau est due au nucléoprotéide (17).

Si maintenant on cherche à obtenir un sérum actif contre les
propriétés toxiques de l’acidalbuminoïde du cerveau, on peut y
parvenir à la condition de soumettre les animaux à des inocu-
lations répétées à de courts intervalles. Un chien, qui avait
reçu onze injections sous-cutanées de l’acidalbuminoïde de
cerveau de mouton, a fourni un sérum (1) qui neutralisait non
seulement les propriétés toxiques de cet albuminoïde, mais aussi
son pouvoir anlirabique.

L'étude des propriétés toxiques de l’acidalbuminoïde du
cerveau, c'est-à-dire de la substance qui présente une affinité
élective pour le virus de la rage, soulève la question de la toxine
rabique.

Son existence n'a jamais élé démontrée par la méthode expé-

(1) Ce sérum ne contient pas de précipitines, mais l'addition d'une minime
quantité de l’acidalbuminoïde suffit pour y provoquer instantanément la

formation d’un coagulum, phénomène rappelant les faits observés par.Canta
cuzène avec la pepsine(Comples rendus de la Soc. de Biologie, t. LXV, p. 271)

452 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

rimentale et les accidents qui ont été attribués à l'action de ce
poison peuvent tout aussi bien l'être à celle des substances
albuminoïdes de la matière nerveuse normale. D'autre part, ce
que nous savons des propriétés fixatrices du cerveau vis-à-vis
d'une toxine, celle du tétanos, nous porte à supposer que le
poison rabique doit être retenu par les cellules cérébrales assez
énergiquement pour résister à tout mode d'extraction connu.

Si la méthode expérimentale n’est pas encore parvenue à
démontrer la présence de la toxine rabique, l'étude clinique
de cette psychose aiguë qu'est la rage nous révèle toute une
symptomatologie extrèmement complexe et difficilement expli-
cable sans l'hypothèse d’un poison spécifique. L'évolution même
de la maladie à la suite d’une trépanation impose l’idée d'une
toxine: ainsi, dès le troisième jour, après une injection intra-
cérébrale de virus fixe, on peut constater la virulence du bulbe,
et cependant l'animal manifestera seulement cinq jours plus
tard les premiers symptômes visibles consistant en ataxie, trem-
blement de la tête, excitation ou torpeur, signes témoignant
incontestablement d’une action d’un poison sur les centres. Or,
puisque nous savons maintenant que l’encéphale renferme un
albuminoïde doué in vitro d'une grande affinité pour le virus,
nous sommes conduit logiquement à supposer que cette même
substance doit l'exercer aussi dans le cerveau vivant.

Au moment de la culture du microbe rabique dars les
centres, on peut supposer que certains éléments cellulaires de
l'encéphale, neurones ou cellules de la névroglie (1), vont réagir
en produisant un excès de l'albuminoïde, et c’est ce qui explique
pourquoi l'on trouve celui-ci en plus grande quantité dans les
cerveaux rabiques. Une partie de cet excès d’albuminoïde
pourra, soit par son action sur les microbes rabiques libérer
leur toxine, soit en se combinant avec elle, provoquer l’en-
semble des symptômes que les auteurs ont, avec raison, consi-
dérés comme ceux d’une intoxicalion nerveuse spécifique.

(1) van Gehuchten est porté à considérer comme une réaction de défense
du neurone les lésions de chromatolyse (si intenses dans la rage), centrale
et périphérique, sans qu'il puisse dire s'ils sont primitifs ou secondaires.
(Anatomie du système nerveux, t. 1, p. 339.)

D'autre part, J. Mawas (Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 2 juillet 1910,
bp. 45), tend à reconnaitre une structure et une signification glandulaires aux
cellules névrogliques chez les vertébrés.

SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES DU CERVEAU 453.

S'il en est ainsi, si la présence d’un excès de cette substance
albuminoïde dans le cerveau à un moment donné de l’incuba-
tion rabique joue un certain rôle dans l’éclosion des accidents
toxiques, c'est-à-dire des signes visibles de la rage, ne pour-
rait-on pas hâter leur apparition, les provoquer à une époque
où ils n'existent pas encore d'ordinaire chez les animaux qui
ont reçu du virus dans l’'encéphale ?

On injecte à deux lapins et à deux cobayes un peu de cerveau
de passage sous les méninges ; quatre jours plus tard, ces ani-
maux reçoivent dans la même région (1) une quantité d'acidal-
buminoïde très inférieure à la dose toxique, et que l’on inocule
semblablement à deux lapins et à deux cobayes témoins. Ces
derniers animaux ne présentent rien d'anormal consécutivement
à l'injection ; au contraire, les lapins et les cobayes, qui avaient
été infectés préalablement avec le virus fixe, sont pris, trois le
lendemain et le quatrième au bout de quarante-huit heures, de
titubation, de parésie, de tremblement de la tête, puis gra-
duellement des signes de la rage confirmée à laquelle ils suc-
combent dans les délais normaux. Ainsi, tandis que les symp-
tômes rabiques n’éclatent jamais avant le 8° jour après la
trépanation, l'inoculation d'une dose, inoflensive par elle-même,
de l’acidalbuminoïde a suffi pour les faire apparaitre plusieurs
jours avant l'échéance normale. Mais ces faits ne se passent pas
toujours avec la même régularité et leur déterminisme nous
échappe en partie.

L'hypothèse, que nous venons de formuler et que l'expérience
paraît confirmer, tend à considérer une substance, élaborée
dans un but de protection des éléments nobles, comme parti-
cipant elle-même à la genèse des accidents rabiques ; autrement
dit, l’action de l’albuminoïde, neutralisante in vitro, serait, au
sein de l'organisme, favorisante de la toxi-infection.

Dans nos expériences de neutralisation du virus par la
substance active, nous n'avons jamais observé de phéno-
mènes toxiques résultant de l'inoculation des mélanges neutres
virus acidalbuminoïde, excepté dans certains cas où nous
faisions usage d'extraits cérébraux préparés avec l’encéphale
d'animaux hyperimmunisés : la substance albuminoïde active

(1) Une deuxième trépanation n'a aucune action fàcheuse pour les animaux.

454% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

existant dans leur cerveau en plus grande quantité, 1l en persis-
tait une dose suffisante pour être toxique. On est done amené à
se demander comment ces animaux hypervaccinés ne sont pas
eux-mêmes intoxiqués par le développement d’une substance
douée d’une aussi grande activité. La réponse à cette question,
qui pourrait se poser pour d’autres produits loxiques de l’orga-
nisme, est fournie par ce fait, déjà signalé plus haut, que
l’acidalbuminoïde se comporte comme un antigène et que l’on
peut accoutumer à son action des animaux dont le sérum finit
ainsi par acquérir un pouvoir spécifique à la fois contre la
toxicité et contre les propriétés antirabiques de cette substance.

On prépare deux mélanges à P. E., le premier de l'acidalbuminoïde de
mouton et de sérum de chien neuf, le deuxième du même acidalbuminoïde
et de sérum de chien immunisé contre lui. Après vingt-quatre heures de
séjour à la glacière, on ajoute à chaque mélange la moitié de son volume
de virus fixe au centième et on inocule les deux préparations dans le
cerveau de deux lots de lapins; ceux au sérum neuf demeurent bien por-
tants, ceux au sérum du chien traité par l’acidalbuminoïde prennent la rage
sans retard : le sérum renfermait donc un anticorps de l’albuminoïde céré-
bral (17).

Cette propriété du sérum d’un animal traité par celte
substance nous paraît être d'importance, car, en même temps
qu'elle précise l’action spécifique de l’acidalbuminoïde, elle
permet d'expliquer comment la vie des animaux immunisés
contre la rage est compatible avec la présence d'une subs-
tance aussi active, si bien qu'ils se trouvent en quelque sorte
vaccinés contre elle et qu’en définitive il doit en résulter pour
eux l’état d'équilibre organique nécessaire.

Au cours de l'immunisation contre la rage, il se produit des
phénomènes nécessairement complexes purmi lesquels nous
constatons, dans le temps : une réaction leucocytaire puissante,
l'apparition des propriétés antirabiques dans les humeurs,
enfin chez les animaux soumis à des vaccinations prolongées,
celle de l’immunité cellulaire, active, de leur cerveau.

Quelles sont les relations qui existent entre les deux
premiers et le dernier de ces actes? Nous ne sommes pas en
état de le dire, mais seulement ceci. Quant on soumet à
l'épreuve de la trépanation une série d'animaux vaccinés
contre la rage, la plupart d’entre eux succombent à l'infection
rabique bien que leur sérum soit souvent très actif. Quelques-
uns résistent à cette épreuve ; chez eux la cellule nerveuse est

SUBSTANCES ALBUMINOÏDES EXTRAITES DU CERVEAU 455

pour longtemps immunisée et le virus introduit dans leur
cerveau paraît bien s’y trouver détruit. N'est-il pas logique
d'admettre que l'albuminoïde spécifique, impuissant chez
l'animal neuf ou insuffisamment vacciné, à s'opposer long-
temps à la culture du virus rabique, s’est, au cours d’une immu-
nisation prolongée, développé au point de devenir efficace au
sein de l’encéphale lui-même? Dans cette hypothèse, le microbe
de la rage ne trouve plus dans le cerveau des animaux hyper-
immunisés un milieu de culture favorable, mais se trouve
soumis à une digestion par certains éléments cellulaires de l’en-
céphale et à une destruction par l’acidalbuminoïde. La propor-
tion de cette substance, énorme relativement à la petite quan-
üité de virus introduit au sein du cerveau chez les animaux
hyperimmunisés que l’on soumet à l'épreuve de la trépanation,
expliquerait pourquoi la destruction du virus par l’acidalbumi-
noïde ne s'accompagne pas généralement des accidents toxiques
que nous avons supposés résulter de l’action exercée par lui
sur la substance rabique.

L'activité si considérable que nous avons constatée dans les
extraits du cerveau des animaux vaccinés nous paraît donc
capable d'expliquer en partie le mécanisme de l’immunité
acquise par l’encéphale, immunité que l’on a vue durer bien
au delà des propriétés antirabiques des humeurs.

OUVRAGES CITÉS.

(4) À. Mare et M. TirrenEAu, Annales de l'Institut Pasteur, t. XXII, p. 289
et 644, et t. AXVI, p. 318.

(2) A. Mare, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LV, p. 1290.

(3) RemuinGer, Annales de l'Institut Pasteur, t. XII, p. 534.

(4) A. Mar, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CXLIX, p. 23%.

(5) HaczrBurtON, Journ. of physiology, t. XV, p. 90.

(6) LEvENE, Arch. neur. el psych., t. II, I. 1899,

(1) A. Mar, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CL, p. 1715, et
Comptes rendus de la Soc. de Biologie, t. LXX, p. 332.

(8) W. Barrarr, Proc. Roy. Soc. t. LXXII, p. 353.

(9) Orro Hezcer, Die Schutzimpfung gegen Lyssa. Fischer, Iena.

(410) Harris et SHaCkELL, Journ. of inf. dis., t. VIII, p. 41.

(41) A. Mare, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, &. CLII, p. 1514 et
Comptes rendus de la Soc. de Biologie, L. LXXI, p. 709.

(42) A. Marie, Comples rendus de la Soc. de Biologie. t. LVI, p. 573.

(43) Levanrri, Annales de l'Institut Pasteur, t. XXV, 25 novembre 1911.

(44) A. Marie, Comples rendus de la Soc. de Biologie, t. LV, p. 1290.

(45) A. Mar, Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CXLI, p. 394.

(416) Dorn, Zeits. f. Immun. u. exp. Therapie, t. X, p. 53.

17) A. MaRiE, Comples rendus de la Soc. de Biologie, Lt. LXXIT, p. 100 et 528.

ÉTUDES SUR LES ENGRAIS CATALYTIQUES

par E. BOULLANGER

Depuis le jour où G. Bertrand et Thomassin ont fait con-
naître les résultats remarquables obtenus en grande culture
par l’emploi du sulfate de manganèse comme engrais, de nom-
breuses expériences ont été entreprises sur les engrais manga-
nésés et sur d’autres engrais calalytiques en France, en Alle-
magne, en Suède, en Belgique, en Hollande, en Italie, au Japon:
elles ont conduit le plus souvent à des résultats favorables: ce-
pendant certains expérimentateurs n'ontoblenu que des résultats
négalifs.

Il nous a semblé intéressant de faire l’étudede cette question
au moyen des méthodes très précises de la culture en pots, car
ces méthodes permettent de placer tous les essais dans des
conditions rigoureusement identiques, de les rendre ainsi par-
faitement comparables, d'éliminer les influences perturbatrices
des variations atmosphériques et de multiplier enfin les essais
pour avoir d’un seul coup une vue d'ensemble sur les modifica-
tions de la récolte sous l’action des engrais catalytiques.

Les méthodes de cultures en pots que nous avons adoptées
sont celles du professeur Wagner, de Darmstadt, qui sont suf-
fisamment connues des agronomes pour qu'il soit inutile de
les décrire ici.

Nos expériences ont porté d'abord, en 1908, sur les pommes
de terre, et nous avons expérimenté avec le chlorure de man-
ganèse sur deux terres différentes, une terre pauvre, siliceuse,
et une terre riche, argileuse. Les engrais ont été incorporés
directement à la terre au moment de la préparation de chaque
pot. Seul, le chlorure de manganèse à été dissous dans un
litre d’eau et la terre a été arrosée avec ce liquide. Les résultats
fournis par cet essai sont réunis dans le tableau suivant: les
chiffres correspondent à la récolte moyenne d’un pot (moyenne
des six pots que comportail chaque série).

ÉTUDES SUR LES ENGRAIS CATALYTIQUES 457

POIDS DES TUBERCULES
en grammes
ER Tr

Terre pauvre. Terre riche.
lSanSiencraistesans MnCl..". . ,.. 438 682
DNA ESS CU MST DATIPO LE 0: LR 168 903
30 SO‘(AzH“} : 20 gr.; KCI : 8 gr.; superphosphate :
DURE AD AS DOL OR RENE + 1 COR 832 S92
49 Engrais complet de la 3° série, plus 1 gr. de
MR CE ÉDATNO DER MERE RE NE: ie : 115 981

Poids de la terre employée pour chaque pot : 40 kil.

On voit que le chlorure de manganèse a augmenté partout le
poids de la récolte, mais cette augmentation se manifeste diffé-
remment dans la terre pauvre et dans la terre riche. Dans la
terre pauvre et en l'absence d'engrais, le chlorure de manga-
nèse n’a donné qu'une augmentation de récolte assez faible sur
le témoin; au contraire, en présence d'engrais complet, l’aug-
mentation de rendement a été considérable, puisqu'elle atteint
34 p. 100 sur la série correspondante sans manganèse. Dans la
terre riche, l’action du manganèse a été très nelte, même en
l'absence d'engrais; le manganèse seul, sans autre engrais,
donne en effet une augmentation de récolte de plus de 32 p. 100
sur le témoin sans manganèse; en présence d'engrais complet,
le manganèse a encore exercé une action, mais plus faible,
car l'accroissement de récolte n’est plus que de 40 p. 100 envi-
ron sur la série correspondante sans manganèse.

Ces faits semblent montrer que le manganèse, qui permet
une utilisation plus active des éléments fertilisants du sol, agit
différemment suivant la richesse des sols en ces éléments. Si
le sol est pauvre, l'influence du manganèse reste faible et elle
n'apparaît nettement que lorsqu'on ajoute au sol les éléments
fertilisants qui lui manquent. Si le sol est riche, le manganèse
agit aussitôt puisque la plante peut disposer d'aliments abon-
dants; en présence de fortes doses d'engrais, il y a encore ac-
croissement de récolte sous l'influence du manganèse, mais cet
accroissement est proportionnellement plus faible, car il ya
évidemment une limite à l'assimilation par la plante.

Ces expériences sur les pommes de terre ont été reprises un
peu différemment en 1909, sur une terre riche, dont chaque
pot a reçu 40 kilogrammes. Les résultats obtenus sont réunis

458 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dans le tableau suivant, dont les chiffres indiquent le rende-
ment d’un pot, en prenant la moyenne des six essais de chaque

Ps
serie.
POIDS DES TUBERCULES
en grammes.

19,S3nS eNLrais > 0e CNP EE 334
20 MNCl Seule 2 Cr DAT DORE . | -t 462
JSOM AZ Seule ET ADAEDONERRE er 455
40 SOHAZH PE 15 gr; MaCRE ERA pAM pot." : . . .. 524
5o SOfAZH“} : 16 or.: superphosphate : 25 gr. par pot. . 500
60 SO‘{AZH‘} : 15 gr.;: superphosphate : 25 gr.;: MnCE :

2IGRADATAPOLEN LE NP à oi. 592
ToSDAZHE) A5 1er: KO MESEMRAMMOLS.,. . . . . :: . 520
80 SOHAZHE)? : 15 gr; KCI : 7 gr.; MnCE : 2 gr. par pot. . 600
909 SO“AZH!} : 15 gr.; KCI : 7 gr.; superphosphate : 25 er.

P'APADOUEMEUERE ELEMENT Le 1e 674
00 SO'(AZH!} : 15 gr.; KCI : 7 gr.: superphosphate : 25 gr.:

Mo CIE 2 Er IDAL DONC ERERREE. - à . » - 760

Les résultats obtenus dans ces expériences confirment ceux
de l’année précédente. L'augmentation de récolte se manifeste
dans tous les cas, mais, comme dans les expériences de 1908,
elle est proportionnellement moins élevée en présence qu'en
l'absence d'engrais.

D'autres essais ont été entrepris en 1909 sur l’action du
manganèse, sur l'orge de brasserie. Nous avons employé la
même terre riche que pour nos expériences sur les pommes de
terre; on en a placé 7 kilogrammes dans chaque pot. Les résul-
tats obtenus sont réunis dansle tableau suivant ;ils représentent
le rendement moyen d’un pot dans chaque série.

POIDS DU GRAIN POIDS DE LA PAILLE

£gn grammes. en grammes.

1Sansiensrais Le. 1. A MACAPNENNNNEENEC 10,5 16,5
20/MnClé seule 0 15 Sr DAT IDO REC 9,8 17,4
30 KCI : 1 gr. par Roc 0000 à 0 OR 11,4 17,0
49 KCI : 1,6 gr.: MnCE : 0,15 gr par pot. - « 10,4 17,6
50 KCL:11;65gr.; pate” 4 fe DAPIpDOL En 21:05 31,0
60 KC1::1,6 gr; SOAAZH*} :, 4er :0MnCT°. :

0IHECT-DATPOL CE bé RU TRE 20 ,4 38,1
10 KCI : 1.6 gr.: superphosphate : 6 gr. par

pot Sete ne SORA EEE T 1255 18.5
8° KCI :1,6 gr.; superphosphate : 6 gr.; MnCI*:

OASIS ADAr DOI CCE 0 11,4 18,7
90 KCI : 1,6 gr.; superphosphate : 6 gr.;

SOAZH!)* : Dr PATDOI ER RENTr 22,2 13,9

10 KCI : 1,6 gr.; superphosphate : 6 gr;
SOMAZHE) : 4 gr ;: MnCE:0,15gr.parpot. 25,95 49,7

ÉTUDES SUR LES ENGRAIS CATALYTIQUES 459

Ces chiffres montrent que l’action du chlorure de manganèse
sur l'orge de brasserie à été nulle dans la plupart des cas. La
récolte en grain est mème en général un peu inférieure, avec
addition de manganèse, à celle des témoins sans manganèse.
L'inverse se produit pour les récoltes en paille, mais les diffé-
rences sont très faibles. Le manganèse ne semble avoir agi
qu'en présence de l’engrais complet, où on observe un excé-
dent de récolte de près de 17 p. 100 pour le grain, et de
143 p. 100 pour la paille. Mais il ne faut pas perdre de vue que
ces méthodes de cultures en pots réalisent en quelque sorte des
conditions idéales de culture, et fournissent toujours des résul-
tats amplifiés ;: en pratique, l'augmentation de récolte serait
beaucoup moins considérable.

Une nouvelle série d'expériences a été entreprise en 1910, et
a porté sur l’avoine, les pois et le trèfle. Dans ces expériences,
nous avons utilisé, au lieu du chlorure de manganèse, les
cograis manganésés des mines de Las Cabesses (Ariège), et
notamment le manganose et la chaux manganésée. Les essais
ont eu lieu sur une terre argileuse riche : chaque pot en à recu
7,5 kilogs. Des expériences préliminaires et très réduites, entre-
prises l’année précédente, avaient semblé indiquer que le man-
ganèse exerçait une action favorable surtout en présence des
engrais polessiques: nous avons donc particulièrement dirigé
nos éludes dans cette voie.

4° Expériences sur l’avoine. — Dans cette série, tous Îles
engrais, azotés, phosphatés, potassiques ou manganésés ont été
incorporés directement à la terre de chaque pot au moment de
la préparation du pot. Les résultats obtenus sont réunis dans le
tableau suivant, dont les chiffres donnent la récolte moyenne
d'un pot dans chaque série.

L'influence des engrais manganésés est très nette et se mani-
feste partout. L'augmentation de rendement est en général assez
faible pour la paille; elle atteint cependant 17 p. 100 avec le
manganose seul sur la série sans engrais, et dépasse 12 p. 100
avec la chaux manganésée en présence d'engrais polassique sur
la série correspondante sans chaux manganésée. Mais en pré-
sence d'engrais complet, l'accroissement de la récolte de paille
est faible. L'influence des engrais manganésés est beaucoup

460 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plus forte sur la récolte de grain, ce qui est bien conforme aux
résultats de G. Bertrand. L'augmentation de la récolte de grain
sous l’action du manganèse, déjà sensible dans la série sans
engrais et dans la série avec engrais potassique seul, où elle
atteint 15 à 22 p. 100, devient considérable en présence d’en-
grais potassique et d'engrais azoté (plus de 45 p. 100) ou en pré-
sence d'engrais complet (27 p.100 pour le manganose, 41 p. 100
pour la chaux manganésée).

POIDS DU GRAIN POIDS DE LA PAILLE

en grammes. en grammes.

12ESans engrais LEE ERA LI EP TETE RER #,2 9979
20,Manganose seul 4-21 Dar pot... 5,0 26.15
3° Chaux manganésée seule : 1 gr. par pot . 4,6 24,3
49 KCI : 0,5 gr. par pot. . ILE NS EO" 5 C3 20,15
5° KCI : 0,5 gr.; manganose : 1 gr. par pot. . 6,1 2162
60 KCI : 0,5 gr.; chaux manganésée : 1 gr. par

DO et ttues A CET ans RSR EEE 6,0 23,2
1°, KCT-: 0,5 gr. SO(AZH:) "er.parspot: Soul 31,45
89 KCI : "0,5 gr: SONAZH‘)} "4 gr :Imanga-

n'ose 1 DE MDATIDOL RAT. ARE PA) 7 4 31,75
90. KCT :: 0,5. «er. QSOUAZHA)* 1, erSéchanx

MANCANÉSÉeEMACT DALIDOL CEE PRTREE 7,55 32,10
10° KCI : 0,5 gr.; superphosphate :2 gr. parpot. 5,05 223
11° KCI : 0,5 gr.; superphosphate : 2 gr.; manga-

ROSE EEE PAT IDOLENEN OPERA 6,15 24,2
12° KCI : 0,5 gr.; superphosphate : 2 gr.; chaux

manganésée : 1 gr. par pot . . . . . . . 6,25 23,8
13° KCI : 0,5 gr.; superphosphate : 2 gr.;

SOMAZHE AL SPÉPALDOL NE CRE 5595 32,0

140 KCI : 05 gr.; superphosphate : 2 gr.;

SO(AZH!} : 1 gr.; manganose : 1 gr. par

Do nier. sé Le 4 ELU 7,6 32,8
159 KCI : 0,5 gr.; superphosphate : 2 gr.;

SO(AZH"} : 1 gr.: chaux manganésée :

197 PAT pots. CNE IONTENORNRERE 8,45 32,6

2° Expériences sur les pois. — Nous avons employé, pour ces
essais, des pois nains qui viennent parfaitement en pots. On
s'est borné à déterminer la récolte de pois écossés, qu’on a fait
sécher avant de les peser. Les résullats obtenus ont été les sui-
vants.

Ces expériences nous amènent aux mêmes conclusions que
les expériences sur les avoines; mais l'influence du manganèse
est encore plus considérable ici. On voit, en effet, que dans les
séries 4, 5, 6, 10, 11, 12, la récolte peut être doublée par le

ETUDES SUR LES ENGRAIS CATALYTIQUES 461

manganèse, sans aucun apport d'engrais azoté. En présence
d'engrais azoté, les accroissements de récolte, quoique toujours
élevés, sont cependant moins considérables. On voit que la
simple addition de manganose ou de chaux manganésée aux
engrais potassiques, permet d'obtenir un rendement presque
aussi élevé qu'avec l’engrais complet sans manganèse.

POIDS DES GRAINS

en grammes.

10 SANSMENCTAIS EEE ONE RER 0 Les © lac 2220
2° Manganose seul : 1 gr. par st : IN: 3,05
JChAUSEMANTANÉSÉCSeUleMUEr DAT POLICE 3,30
RER OIENO NSP DADOLE MEME... 0 LOS AM 2525
SK CI 10 5er -mmansanose): AUSr.DAr DOL:16.-4- MNT 4,25
6° KCI : 0,5 gr.; chaux manganésée : 1 gr. par pot . 4,50
TROIE 0,597 SONAZHA EME sr. (par pot: "0 RP 5,00
8° KCI : 0,5 gr.; SO“ AZH*} : 1 gr.; manganose : 1 gr. par pol . 5,90
90 KCI : 0,5 gr.; SO“(AZH‘} : 1 gr.; chaux manganésée : 1 gr. par
POUR ESROE E E à © 2e. RE RT 6,00
100 KCI : 0,5 gr.; superphosphate : 2 gr. par pot... . . . . . . . 2,29
11° KCI : 0,5 gr.; superphosphate : 2 gr.: manganose : À gr. par
ER ÉGARD ANOE CE MN A EL ot © dot 4,40
120 KCI : gr.; superphosphate : 2 gr.;, chaux manganésée :
ul eu ARE SRE 4,80
130 KCI : 0,5 gr; ne Die. 2 gr.; s O(AzH:} 1 g gr. Dar ne 5,20
14 KCI : 0.5 gr.; superphosphate : 2 gr.; SO“ Sul SM ARET
MAN CANOSE ENS IDALDOL ON NN Due Dalton 5,60
15° KCI : 0,5 gr; superphosphate : 2 gr.; SO D{AzH:): : 1 gr.; chaux
MAN TARÉSC CRIS DARDOD AIT. ON CCR SE 6,10

3° Expériences sur le trèfle. — Ces expériences ont été faites
avec le trèfle blanc, sur 7 kil. 3 de terre. Les résultats obtenus
sont réunis dans le tableau suivant, dont les chiffres indiquent
le poids moyen de la récolte sèche d’un pot de chaque série :

POIDS DE LA RÉCOLTE SÈCHE
en grammes.

TRS OHSNONSTAIR CPR EME RES 15 ODA
20 Manganose seul : 1 gr. par Dole Lt MONS
30 Chaux manganésée seule : 4 gr. par pot . .. . . … : =. 20,00
20, SOA EN TEE D NN EE ie 19,90
D SO0*(AZH}:"1'gr.:-manganose : 1 gr. par pot" 19:90
60 SO#{AZH#} : 1 gr.; chaux manganésée : 1 gr. par pot. . 20,50
1° Superphosphate de chaux : 2 gr. par pot: . . . . . . . 20,10

8° Superphosphate : 2 gr.; manganose : 1 gr. par pot. . . 20.05
90 ne Deere 2 gr.: chaux manganésée : 1 gr. par

10° KCI : 0,5 gr. par os RE I D la ea dla à 0 AA
») gr.; manganose : À gr. par pot - + + 2 PIC
gr.; chaux manganésée : 1 gr. par DOUNIA 30,60

462 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous voyons que les engrais manganésés n'ont exercé aucune
action sensible, soit seuls, soit en présence d'engrais azoté ou
d'engrais phosphaté. Mais l’action en présence d'engrais potas-
sique est très accentuée puisque la récolte augmente de20 p.100
avec le manganose et de 37 p. 100 avec la chaux manganésée.
Nous retrouvons donc iei une action analogue à celle que nous
avons observée pour l’avoine et pour les pois, où les engrais
manganésés ont surtout agi en présence des engrais potassiques.
Ces résultats expliquent en outre certains insuccès qu'on peut
avoir dans l'emploi des engrais manganésés: on voit que le
manganèse n'agit pas toujours et qu’il est nécessaire, pour que
son action se manifeste, que cerlaines conditions de nutrition
minérale, variables, sans doute, avecles diverses cultures, soient
réalisées. En général, la présence d'engrais potassiques parait
ètre un adjuvant de l’action du manganèse.

Les études qui précèdent nous ont engagé à étendre, dans le
cours de l’année 1911, nos recherches sur les engrais manga-
nésés à certaines plantes potagères et à y joindre l'étude d’au-
tres substances telles que le sulfate d’alumine, le silicate de
soude, le sulfate ferrique, le sulfate d'uranium et le soufre en
fleur. Cette étude a porté sur lesearottes, les haricots, les céleris,
les laitues, les oseilles, les chicorées, les pommes de terre, les
oignons et les épinards.

Pour les carottes, les haricots et les céleris, les expériences
ont été divisées en quatre séries : la première n'a reçu aucun
engrais, la seconde n’a reçu comme engrais qu'un des engrais
catalytiques signalés plus haut, la troisième à reçu un engrais
complet composé, pour 30 kilogrammes de terre, d’un gramme
J'azote sous la forme de sulfate d’ammoniaque, d’un gramme
d'acide phosphorique sous la forme de superphosphate de chaux
et d’un gramme de potasse sous la forme de chlorure de
potassium ; la quatrième a reçu le même engrais complet,
additionné d'un des engrais catalytiques énumérés précédem-
ment. Les doses d'engrais catalytiques ont été de 1 gramme
pour 30 kilogrammes de terre, sauf pour le soufre en fleur où
la dose a été seulement de 0 gr. 7. Pour les autres cultures,
les essais n'ont porté que sur les deux premières séries, à cause
du matériel considérable que demandent de semblables études.

ÉTUDES SUR LES ENGRAIS CATALYTIQUES

463

L'engrais complet et le soufre ont été incorporés directement
à la terre au moment de la préparation de chaque pot : les
engrais catalytiques ont été ajoutés en solution dans les
500 cent. cubes d’eau d’arrosage, avant les semailles. Pour
chaque essai, on a disposé plusieurs pots semblables, afin
d’avoir une mesure plus certaine de l'influence moyenne de

chaque substance.

Les résultats obtenus dans ces divers essais sont réunis dans

les tableaux suivants. Ils sont évalués en grammes par pot.

19 SULFATE D ALUMINE

= Er à & EM CA Ou NES
SEINE ARTE S AMIE
s [Sh] © | SNS Role ANeRRers
U EL — Le} A Lau. © æ] © x
Témoin sans engrais . 560/17,9| 360] 79] 133| 137] 218] 84 1207
Sulfate d'alumine sans engrais .| 613/18,7| 442] 78] 147] 142] 241) 96 |293
Témoin avec engrais complet. .| 615/19,7| 3981 109! » | » | »| » |»
Sulf. d’alumine av. engrais comp.| 749119,5| 537] 122), » | » | » »
20 SULIATE DE MANGANÈSE
n nm + h PA _ ü a 0 7
S |8E| 2 JEMMSNNE MONA
MISE NIUE & 5 = ta © a
OASIS £ = = 2 = 5
5 LS SAPENNSN Re RIE Enr
SAIS A © = © =
© el
Témoin sans engrais . . .| 560|17,9| 360] 79| 133| 137| 218| 84 1570
Sulf. de manganèse sans engrais.| 626/15,8| 464| 86| 190! 176| 212| S8 [711
Témoin avec engrais complet. 615119,1| 398] 109! » ÿ » 67
Sulf. de mang. av. engrais comp.| 698121,8| 568] 116) » | » | » | » |7186
30 SILICATE DE SOUDE
é |$a| 4 | LS diese
5 l'es IS aIRe E | S|2 ES
s |Sbl & | 2 CS) RP ET LS
Oo |[FSNOMRE CS |£ |6S |2S
ms | comm | cms | eme | eme ee ———
Témoin sans engrais. . 560/17,9| 360] 79 137] 218] 84 | 207
Silicate de soude sans engrais. 628115,8| 511| 41 99! 206| 82 | 279
Témoin avec engrais complet . .| 615119,7| 398] 109 Da DE | >
Silic. de soude avec engrais com.| 656/19,9| 557| 82 » » »

46%

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

40 SULFATE DE FER

Témoin sans engrais.

Sulfate de fer sans engrais .
Témoin avec engrais complet .
Sulfate de fer avec engrais comp.

Carottes.

560

559

615

Haricots
(grains).

17,9

16,8

19,

T

635120 ,9

59 SOUFRE EN FLEUR

Témoin sans engrais.

Soufre sans engrais . De
Témoin avec engrais complet .
Soufre avec engrais complet. .

Carottes.

560
646
615

74512

Haricots

(grains).

69 SULFATE D'URANIUM

Témoin sans engrais .

Sulfate d'uranium sans engrais. .

Témoin avec engrais complet d
Sulfate d'uranium avec engrais complet.

Nous pouvons tirer des expériences qui

conclusions suivantes :

; ñ : C À à no
SALEMEEN 2 | SUISSE
e 4 | à © S © |A
360| 79| 133| 137| 218| 84 |207
550! 701 162] 71| 192| 96 1273
398 109 D] » » » »
706 9% ») » » » »
© = VE 5 2 a |=%
En = | CHR EAP Le
A = © 5 | © |A
360| 133| 137| 218| 79 | 84 1207
635| 246| 222] 266| 96 | 95 1219
398 » » » » » »
676 ) » | 1] » »
BETTERAVES

570

645

61

819
précèdent les

L'action du sulfate d'alumine est considérable sur la carotte,
le céleri et la pomme de terre, la chicorée et l'oignon ; elle est
douteuse sur le haricot, l'épinard et l’oseille.

L'action du sulfate de manganèse est considérable sur la
carotte, le céleri, la laitue, l’oseille et la betterave; elle est
sensible sur l’épinard, elle est douteuse ou nulle sur l'oignon,

la chicorée et le haricot.

L'action du silicate de soude est considérable sur le céleri et

ÉTUDES SUR LES ENGRAIS CATALYTIQUES 465

la pomme de terre, très sensible sur la carotte, nulle sur
l'oignon et la chicorée, nuisible sur l’épinard et l’oseille.

L'action du sulfate de fer est considérable sur le céleri et la
pomme de terre, sensible sur la laitue et l'oignon, nulle ou
douteuse sur la carotte et le haricot, nuisible sur l’épinard,
l'oseille et la chicorée.

L'action du soufre en fleur est favorable partout : elle est
surtout considérable sur la carotte, le céleri, la laitue, l’oseille
et [a pomme de terre.

Enfin le sulfate d'uranium semble agir très favorablement
sur la betterave.

Si nous envisageons maintenant chaque culture, nous pouvons
grouper pour chacune d'elles les engrais catalytiques de la
façon suivante, par ordre d'activité décroissante, en laissant
de côté ceux qui n’agissent pas ou agissent défavorablement.

Carotte : soufre, sulfate d’alumine, sulfate de manganèse,
silicate de soude.

Haricot : soufre.

Céleri : Soufre, sulfate de fer, silicate de soude, sulfate de
manganèse, sulfate d’alumine.

Epinard : Soufre.

Laitue : Soufre, sulfate de manganèse, sulfate de fer, sulfate
d'alumine.

Oseille : Soufre, sulfate de manganèse.

Chicorée : Soufre, sulfate d’alumine.

Pomme de terre : Sulfate d’alumine, silicate de soude,
sulfate de fer, soufre. Nous avons vu dans la première partie
de ce mémoire que les sels de manganèse agissent aussi très
favorablement sur cette plante.

Oignon : légère action favorable avec le sulfate d’alumine,
le sulfate de fer et le soufre.

Une dernière expérience a été faite pour chercher à déter-
miner le mécanisme par lequel le soufre en fleur exerce son
action favorable.

Deux pots ont reçu, l'un 7 kilogrammes de terre, l'autre la même quantité

additionnée de 0 gr. 16 de soufre en fleur. Deux autres pots ont été stérilisés
au flambeur, ainsi que deux lots de 7 kilogrammes de terre : un de ces lots

30

466 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

a reçu, après slérilisation, 0 gr. 16 de soufre en fleur : le mélange du soufre
et de la terre a été fait dans une cuvette stérile et la terre a été placée
ensuite dans un pot stérilisé ; l'autre lot de terre a été introduit directement,
sans soufre, dans le second pot stérilisé et la terre a été ramenée, dans les
deux pots, à son humidité normale avec de l’eau stérile. On a ensemencé
les quatre pots avec des graines de cressonnette stérilisées. Les deux
cultures en milieu stérilisé ont été placées sous de grandes cloches de verre
également stériles ; elles ont été aérées dans le cours de l'expérience avec
de l’air filtré sur coton, et arrosées avec de l’eau stérile. Les deux autres
pots, en milieu non stérilisé, sont restés à l'air libre. Les récoltes ont été
les suivantes.

GRAMMES
Pot témoin, MIlTeUMMONMElENISe Lt UNSS
Pot avec soufre. milieu non stériliec.... : . . : 229570
Potitémoin;miNeUMSLÉTINSE RME LL PE MUL:S0
Potravec/soufre mmilieutsténie een. . 0... 15:60

On voit que l’action du soufre est considérable en terre non
stérilisée, et qu’elle est très faible en terre stérile. Il est donc
probable que le soufre n’agit qu’indirectement en modifiant la
flore bactérienne du sol et en entravant le développement de
certains organismes. Nous procédons actuellement à de
nouvelles expériences pour élucider le mécanisme de cette

action du soufre.

DE LA VÉSICULE BILIAIRE
ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DE L'IMMUNITÉ
ET A LA PHYSIOLOGIE GÉNÉRALE

par HExrt VIOLLE
de la marine de guerre.

(Avec les planches XII et XIII.)

(Suite et fin.)

EFFETS FAVORABLES OÙ DÉFAVORABLES
DE L'INTRODUCTION DANS LA VÉSICULE BILIAIRE
DE SUBSTANCES CHIMIOTACTIQUES POSITIVES OU NÉGATIVES
POUR LES LEUCOCYTES

Dans le but de reconnaitre le rôle joué par l’afflux leuco-
cytaire dans la vésicule, nous avons étudié l'effet de diverses
substances ayant sur les globules blancs, les unes une action
chimiotaclique positive, les autres une action chimiotactique
négative. Nous avons vu que l'adjonction à un milieu de
culture de bouillon, d'eau peptonée, ou de glucose dans la
proportion de 1 p. 100, en favorisant la leucocytose, aide puis-
samment à la production d'anticorps. Il en serait de même
avec l’essence de térébenthine, mais celle-ci a une action bac-
téricide trop puissante pour qu'on puisse l’employer.

1° Exemple : Lapin, n° 73, inoculé le 5 octobre, recoit dans
la vésicule biliaire 1 centimètre cube d’eau physiologique
contenant en suspension deux cultures de vibrions sur gélose
de 24 heures à 37 degrés; on a ajouté à la dilution 6 gouttes de
térébenthine.

L'agglutination, 10 jours après l'opération, s'élève à 1 p.100.
À l’autopsie, faite 20 jours après, on constate que la vésicule
est très légèrement hypertrophiée, renfermant dans son
intérieur des leucocytes: il n’y a pas de vibrions; par contre,
la térébenthine est restée en très grande partie non résorbée.

2° Exemple : Lapin, n° 79, inoculé le 30 septembre, recoit
dans la vésicule 1/2 centimètre cube de térébenthine et 1/2 cen-

468 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

timètre cube de bouillon ensemencé extemporanément avec
une culture cholérique.

Le sérum présente un taux agglutinatif s'élevant dans les
15 premiers jours à À p. 500, pour redescendre à 1 p. 50,
30 jours après. À l'autopsie, faite à cette époque : absence de
vibrions dans la vésicule.

Lorsque nous avons étudié les anticorps (1), apparaissant à la

suite d’inoculations intravésiculaires d’hématies de mouton,
nous citions les résultats ob-

“1 tenus, toutes choses égales
Et d’ailleurs, dans les cas sui-
vants : le premier, où les hé-
maties sont injectées seules
en milieu isotonique (eau phy-
siologique), le second, où elles
sont en milieu chimiotactique
négatif (acide lactique en so-
lution à 4 p. 100), le troisième,
où elles sont mélangées à des
corps possédant un pouvoir
chimiotactique positif (spores
de charbon tuées). Les résul-
tats sont conformes, dans ces
trois cas, aux règles générales.
Fic. 5. Le pouvoir hémolytique du
sérum, dans le premier cas,
atteint 1 p. 10; dans le second, il reste égal à ce qu'il état
auparavant; dans le troisième, il s'élève àf1 p. 100.

Mais si, dans l'exemple que nous avons pris précédemment,
le fait d'ajouter une substance repoussant les leucocytes permet
de comprendre pourquoi le pouvoir hémolytique reste invaria-
blement au taux qu'il possédait antérieurement, puisque les
hématies n'ont pas élé détruites, il est difficile d'expliquer
comment, avec une substance favorisante, le pouvoir hémo-
lytique s'élève et devient supérieur à ce qu'il eût été sans.
l’adjonction de cette substance.

Peut-être faut-il admettre, ce qui semble d'accord avec les

emolyt ique

Taux

(1) Voir Thèse, page 78.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 469

constatations faites à l'autopsie, que, dans le premier cas, les
leucocytes n’ont pas détruit intégralement toutes les hématies,
tandis que, dans le second, cette désintégration a été complète,
poussée jusqu'à la disparition totale de tout vestige héma-
tique.

Inversement, les substances chimiotactiques négatives, en
repoussant les leucocytes, empêcheront toute formation d’anti-
corps. L’addition de sels de quinine, d'acide lactique, etc.,
en quantité extrèmement faible, à la culture inoculée dans la
vésicule, entravera l'élaboration, mème minime, de substances
immunisantes; et ces résullats sont constants, quel que soit
l’antigène considéré : bactérien, cellulaire ou albumineux.

Les expériences venant à l’appui de cette hypothèse seront
décrites en détail dans la deuxième partie de ce travail, prin-
cipalement aux chapitres, « Choléra » et « Bacille tuberculeux ».

DEUXIÈME PARTIE

Ayant vu dans leur ensemble les modifications apportées
dans les humeurs à la suite d'inoculations antigéniques intra-
vésiculaires, nous allons, dans la deuxième partie de ce
mémoire, nous arrêter plus spécialement sur quelques cas, et
apprécier les transformations humorales subies par l’orga-
nisme, consécutivement à l'inoculation d’'antigènes, soit bacté-
riens, dont l’évolution dans l'organisme est rapide : Vibrion
cholérique, Bacille typhique, Coli-bacille, où moins intense :
Bacille tuberculeux.

CHOLÉRA

Dans ce chapitre, nous dirons un mot des Inoculations intra-
veineuses de vibrion cholérique; puis nous aborderons les
Inoculations intravésiculaires, conférant l’immunisation active,
et les Inoculations intravésiculaires, suivies d'injections intra-
veineuses, lesquelles contrôlent cette vaccination et permettent
l'hyperimmunisation.

Nous terminerons par la description des Propriétés du liquide
vésiculaire, et surtout des Propriétés du sérum : aclion de coa-
gulation et de lyse in vitro el in vivo conférant l’immunité
passive.

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

CS
1
©

INOCULATIONS INTRAVEINEUSES.

Avec les cultures que nous avons utilisées (1), l'inoculation
intraveineuse de vibrion cholérique (3/% à 1 tube de culture
sur gélose de 18 à 24 heures à 37 degrés, dilué dans quelques
centimètres cubes d’eau physiologique) a toujours déterminé
la mort chez le lapin adulte. La mort survenait généralement
quelques heures après l'injection (2).

A l’autopsie, les lésions varient suivant que la mort est sur-
venue très rapidement ou un certain {temps après l'injection.
Dans le premier cas, on ne constate aucune lésion; dans le
second, on note une congestion intense uniforme de l'intestin
grêle, à contenu diarrhéique, donnant à l'organe une colora-
tion rose el rarement hortensia, une congestion légère du
cæcum et de l’appendice, accompagnée de piqueté hémorra-
gique extrêmement net, particulièrement saisissant et fréquent
dans ce dernier organe. Le péritoine est très vascularisé, et un
liquide, plus ou moins clair et en plus ou moins grande abon-
dance, remplit la cavité péritonéale.

INOCULATIONS INTRAVÉSICULAIRES.

L’inoculation intravésiculaire de vibrions cholériques vi-
vants et virulents ne provoque point la mort de l'animal.
Les vibrions utilisés provenaient de culture sur gélose à
31 degrés et âgés de 18 à 24 heures. La quantité que nous
inoculions était très variable : dans nos premières expé-
riences, nous inoculâmes des doses extrèmement élevées, un
tube de culture totale; les résultats furent, quelquefois, la
mort de l'animal par septicémie en 36, 48 ou 52 heures:
donc avec un retard très net sur les témoins. Plus tard, nous
diminuâmes notablement la quantité de culture et nous rem-
placämes le milieu primitif neutre par du bouillon, ou mieux
de l’eau peptonée. Finalement, nous ensemencions extempo-

(1) Culture provenant de l'Institut Pasteur, eL portant la mention : Vibrion
cholérique. Dnieper, due, ainsi que les autres, à l'obligeance de M. LEGroux.

(2) Dans un certain nombre de cas, la mort survint quelques minutes après
linoculation. Elle était due, selon toute probabilité, aux toxines contenues
dans le liquide injecté et non au milieu de culture (gélose) inoffensif chez
les animaux témoins.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 471

ranément À centimètre cube d’eau peptonée avec une üse de
culture cholérique de 24 heures à 37 degrés et nous inoculions
le mélange, pour ainsi dire à «l’état naissant », dans la
vésicule.

Les symplômes présentés chez les animaux inoculés intra-
vésiculairement se réduisent à peu près à rien. On note, dans
les 24 à 36 heures qui suivent l'opération, une très légère élé-
vation de température et un peu d’abattement, mais le choc
opératoire consécutif à une laparotomie peut suffisamment
expliquer des phénomènes d’ailleurs légers et fugaces.

A l’autopsie, on ne constate aucune lésion organique; tous
les organes sont normaux, comme aspect extérieur, coloration,
poids, ete. La vésicule biliaire seule présente des modifications
qui sont analogues à celles que nous avons décrites dans la
première partie de cet ouvrage, el sur lesquelles nous ne
reviendrons point.

INOCULATIONS INTRA VÉSICULAIRES
SUIVIES D’INJECTIONS INTRAVEINEUSES.

L’injection intraveineuse de culture de vibrions vivants et
virulents chez un lapin vacciné intravésiculairement ne dé-
chaîne aucun phénomène morbide, alors que les animaux
témoins meurent en l'espace de quelques heures par intoxica-
tion cholérique.

Les expériences ayant conduit à cette formule, maintes fois
répétées, ont toujours donné des résultats identiques, que nous
pouvons résumer ici en prenant un type moyen.

Exemple : Lapin n° 79, inoculé dans la vésicule le 30 sep-
tembre avec 1/2 centimètre cube de bouillon ensemencé ex-
temporanément avec une culture cholérique de 24 heures sur
gélose à 37 degrés.

Le 3 novembre, c’est-à-dire un mois plus tard, inoculation
intraveineuse de 1 tube de culture cholérique de 48 heures
sur gélose à 37 degrés diluée dans 10 centimètres cubes d’eau
physiologique.

L'animal témoin, lapin n° 56, meurt en hypothermie 6 heures
après l'injection intraveineuse de vibrion cholérique, avec les
signes d'intoxication cholérique suraiguë.

472 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le lapin n° 79, vacciné, ne présente aucune réaction de poids
et de température, soit immédiatement, soit plusieurs heures
ou plusieurs jours après l'injection intraveineuse.

On peut en déduire qu'il était suffisamment vacciné pour
supporter sans réagir une dose mortelle de culture cholérique.

Les résultats n'ont pas toujours été aussi typiques. Il faut
que l'animal soit suffisamment immunisé et la valeur de cette
immunisation peut échapper, puisque aucun moyen de contrôle
n'existe pour la mettre en évidence, si ce n’est précisément
l'injection intraveineuse. Cependant l'agglutination paraît
fournir quelques données précieuses ; et si, sur les 22 animaux
mis en expérience, 2 inoculés intravésiculairement, puis secon-
dairement dans les veines, sont morts, encore qu'avec un
retard très prononcé sur les témoins l'agglulination aurait pu
peut-être permettre de prévoir cet échec, puisque le taux agglu-
tinatif du sérum ne s'était élevé un mois après l'inoculation
intravésiculaire qu'à 1 p. 25.

Mais ce ne sont là que des exceptions et, d'une facon générale,
tout animal suffisamment vacciné intravésiculairement, c’est-
à-dire présentant un sérum capable d'agglutiner à 1 p. 100,
pourra supporter, lorsque ce taux sera atteint, c'est-à-dire 8 à
12 jours après l’inoculation, une dose mortelle intraveineuse
de vibrions.

HYPERIMMUNISATION.

Si quelques jours après, au même animal, on refait une nou-
velle injection intraveineuse avec la même dose de vibrion
cholérique, on arrive à produire une hyperimmunisation très
uette.

Exemple : Lapin n° 38, le 30 mai, inoculation intravésicu-
jaire de bouillon ensemencé avec une culture cholérique ; il ne
présente aucune réaction générale.

Le 3 juillet, il reçoit en injection intraveineuse un tube de
eulture de vibrion sur gélose à 37 degrés de 24 heures.

Le 6 juillet, nouvelle injection identique à la précédente:
réaction fébrile pendant 24 heures.

L'animal à la suite de cette double injection est totalement
mmunisé. Le taux de l’agglutination de son sérum passe, en
l’espace de quelques jours, de 1 p. 100 à 1 p. 30.000. Ce sérum

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 473

offre des propriétés immunisantes très prononcées, comme
nous allons le voir dans le chapitre suivant.

PROPRIÉTÉS DU LIQUIDE VÉSICULAIRE.

Nous savons que la vésicule biliaire présente en son inté-
rieur, bientôt après l’inoculation cholérique, un liquide blanc
crémeux, plus ou moins épais suivant l’époque d’inoculation, et
ne renfermant plus de vibrions après un temps relativement
court. Les frottis sur lames, les ensemencements en eau
peptonée et les inoculations demeurent toujours négatifs.

Toutefois, un point paraît intéressant : ce liquide, dépourvu
alors de bactéries, lourdement chargé de globules blancs, dont
quelques-uns sont en voie de dégénérescence, dont les autres
sont encore en pleine activité (la proportion des uns aux autres
variant en sens inverse au fur et à mesure que l'on s'éloigne
de la date d’inoculation), n'est pas un liquide indifférent,
neutre.

Si l’on inocule à un cobaye (cobaye 53) dans la cavité périto-
néale, tout le contenu, âgé de 1 mois, de la vésicule biliaire
d'un lapin, dont le sérum agglutine à 1 p. 500, l'animal ne
présente aucune réaction générale. Mais si, 6 jours après,
l’on inocule dans cette même cavité péritonéale quelques cen-
timètres cubes d'eau physiologique, contenant en suspension
1/2 tube de vibrion cholérique, âgé de 24 heures sur gélose
à 31 degrés, l'animal ne présente, cette fois encore, aucune
réaction.

Et cependant tout autre cobaye qui recoit seulement cette
demi-culture cholérique meurt certainement en l'espace de
18 à 24 heures. De même mourra tout cobaye dont l’inocu-
lation vibrionienne, intrapéritonéale, sera précédée 6 jours
auparavant de quelques gouttes d'un liquide favorisant l'hyper-
leucocytose, tel que 1 centimètre cube d’eau peptonée glu-
cosée, comme on peut le constater par le tableau ci-après.

Le fait d'avoir fait précéder de 6 jours au moins l'injection
vibrionienne par l'injection du liquide vésiculaire, doit faire
écarter l'hypothèse d’une de ces hyperleucocytoses péritonéales
si faciles à déterminer chez le cobaye, et également très rapide
dans leur évolution, puisque, atteignant leur maximum vers

47% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

la vingtième heure, elles sont totalement évanouies vers le

3° Jour.
À SI à 22 D RL EE DA EE 0 ET 7 0 2 2 TEE ANR er

INJECTIONS INTRAPÉRITONÉALES

1x jour. 1e jour. Résultats.
Liquide vésiculaire. Vibrion cholérique Vivant.
(dose mortelle).
Eau peptonée glucosée. Id. Mort en 1$ heures.
Pas d'injection. Id. Id.

EE

PROPRIÉTÉS DU SÉRUM.

Le sérum, obtenu par les procédés cités dans les chapitres
précédents, présente les propriétés que l’on rencontre dans tout
sérum immunisant, préparé avec les corps bactériens et avec
des toxines.

Il diffère donc des sérums anticholériques obtenus habituel-
lement par ce fait qu'il est non seulement antibactérien, mais
également antitoxique.

Avec ces deux propriétés fondamentales, se manifestent d'une
part, les pouvoirs agglutinants, bactéricides et sensibilisateurs,
d'autre part, le pouvoir précipitant que nous avons déterminés
par les méthodes habituelles.

Pouvoir antibactérien. — (Bactério-agglutinines et sensibili-
satrices ou philocytases, ou ambocepteurs ; et alexines, ou cy-
tases, ou compléments, ou Iysines.)

Le sérum protège le cobaye contre la péritonite cholérique
(expérience positive de Koch). Si on injecte à un cobaye dans
le péritoine 1/2 culture de vibrions cholériques sur gélose à
37 degrés de 18 heures et diluée dans 2 centimètres cubes d’eau
physiologique, on sait que l'animal meurt en 18 à 24 heures en
hypothermie, après avoir présenté du collapsus et des convul-
sions. À l’autopsie, on trouve un intestin congeslionné, teinte
hortensia, et du liquide péritonéal en plus ou moins grande
abondance.

Exrérience 1. — Si l’on ajoute à une dilution semblable de
vibrions 2 centimètres cubes de sérum, et que l’on mette ce

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 475

mélange à l’étuve à 37 degrés durant 1 heure, on peut l'inoculer
dans la cavité péritonéale d'un cobaye, sans déterminer la
mort, ou même sans provoquer de phénomènes réaclionnels.

Expérience Il — Il en sera de mème si le sérum à été
injecté seul dans le péritone 24 heures avant la culture. Les
vibrions sont agglutinés, transformés en granules, dissous
partiellement (phénomène de Pfeiffer). Ces résultats étaient
à prévoir d’après les réactions 2x vitro. Mais, bien que celles-ci
soient extrèmement nettes et généralement intenses, on ne
peut nullement en déduire Ia valeur thérapeutique ou préven-
tive d’un sérum, puisque « le sérum d'un animal fortement
immunisé est toujours plus agglutinant #n vitro qu'il n'est pré-
ventif vis-à-vis de la péritonilte vibrionienne, plus antitoxique
vis-à-vis de l’intoxication cholérique expérimentale qu'il n’est
précipitant èn vitro. Cela veut dire, en d’autres termes, que le
pouvoir préventif nest pas fonction exclusive du pouvoir
agglutinant, comme le pouvoir antiloxique n'est pas fonction
du pouvoir précipitant ». (Salimbeni.)

ExPéRIENCE HE. — Enfin, lorsque l’inoculation de sérum est
faite préventivement sous la peau, les résultats sont encore
positifs.

Exemple : Inoculation sous-culanée à un cobaye, 48 heures
avant l'injection intrapéritonéale vibrionienne, de 5 cen-
timètres cubes de sérum agglutinant x vitro à 1 p. 2.000.
L'animal résiste ; le témoin meurt.

Toutefois, l’on sait que rien n’est plus facile que de protéger
le cobaye contre la péritonite cholérique. Il suffit de lui injec-
ter dans la cavité péritonéale au préalable quelques gouttes de
bouillon, d’eau peptonée, d'eau glucosée, ou simplement d’eau
physiologique. On détermine ainsi une arrivée de leucocytes 27
situ capables d'enrayer l'évolution morbide. D'autre part, la réac-
tion péritonéale n’est point proportionnelle à la virulence du
vibrion. L'expérience II n'est donc pas probante. Au con-
traire, les expériences I et surtout IIT conservent toute leur
valeur.

Une expérience beaucoup plus sévère consiste à faire les
réactions sur des lapins en procédant par inoculation intravei-
neuse.

Si on‘injecte dans la veine marginale de l'oreille d’un lapin

476 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

un mélange laissé préalablement 1 heure à l’étuve à 37 degrés
et constitué par une culture de vibrions cholériques âgée de
18 heures sur gélose à {37 degrés, diluée dans 5 centimètres
cubes d’eau physiologique 'et additionnée de 2 à 3 centimètres
cubes de sérum immunisant, l'animal ne présente qu'une très
faible réaction se traduisant par une légère hyperthermie
durant quelques heures (1), et par un léger abattement. Puis
il se remet complètement et définitivement.

Les témoins meurent dans l'espace de quelques heures en
hypothermie, par suite d'intoxication et d'infection suraiguës.

Si, au lieu d’injecter d'emblée un mélange de sérum et de
vibrions, on inocule, 24 heures avant l'injection intraveineuse
de vibrions, le sérum en injection également intraveineuse,
les résultats sont comparables : le témoin meurt; l'animal
immunisé survit, ayant peut-être présenté encore moins de
phénomènes réactionnels que l'animal qui a recu d'emblée le
sérum et la culture mélangés.

Ces expériences permettent de dire que le sérum est nette-
ment antibactérien, puisque, injecté préventivement, il est
capable d'empêcher l’éclosion des phénomènes cholériformes
provoqués par l'injection de cultures virulentes.

Ajoutons que l'animal qui à reçu le mélange : vibrion +
sérum, sans offrir de réaction générale, n'est point capable par
contre de fournir un sérum doué de propriétés bactéricides.
Son sang ne présente aucun des caractères des sérums im-
munisants : dans notre expérience, 12 jours après l’inocula-
tion du mélange précité, ce sang ne renfermait ni aggluti-
nines, ni précipitines, ni sensibilisatrices, ni antitoxines.
Inoculé à cette époque avec une culture pure, vibrionienne,
identique à celle qu'il reçut la première fois, l'animal à con-
servé sa sensibilité antérieure vis-à-vis du choléra; lui et le
témoin se comportent de même, mourant tous deux en hypo-

(1) Lapin 31 :
Température avantlinjection 0... NN
d‘heure”après l'injection >... Le DE SINeS
SHEUTES ADIES NN)ECHLON PNR TES
ù ——=\irapresMliniection MSEMMEMER CE. :: LU ORNE PR TEAIe
200 = apres MinIeCtiOon EP REER CR Sen
30) — apres MAN]CELION ERP RER NN 00

40:11: Vaprès limjection SMART: 11 MANN ONAMANNE

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 477

thermie, d'intoxication cholériforme avec lésions intestinales
plus ou moins prononcées suivant la rapidité de l’évolution
morbide.

Il en résulte que l'animal n'était pas immunisé, quoique ou
plutôt précisément parce que le sérum ajouté aux vibrions
ainsi sensibilisés était en trop grande quantité, et comme l’a
dit Besredka (1) : « lorsqu'il se trouve en excès, les microbes
injectés en même temps que lui traversent l'organisme sans
que l'animal en garde le moindre souvenir ».

Autrement dit, dans ces conditions, la conservation de la
sensibilité à l'intoxication cholériqne, la mort lors d’une
seconde injection vibrionnienne, prouvent nettement que les
principes toxiques et les vibrions contenus dans le mélange
antérieur avaient élé nettement délruits et neutralisés par ce
sérum [expérience positive des réactions paradoxales de
R. Pfeiffer et Friedberger| (2).

Pouvoir antitorique. — Afin de déterminer le pouvoir anti-
toxique des sérums, nous avons eu recours à deux sortes d’ex-
périences, en faisant agir le sérum sur :

1° La toxine préparée artificiellement:

2° La toxine fabriquée naturellement par l'organisme (cho-
léra expérimental).

1° a) La méthode de Roux, Metchnikoff et Salimbeni pour la
préparation de la toxine cholérique ne nous à fourni qu'un
liquide très faiblement toxique: et celte toxicité très atténuée
est peut-être due au pouvoir toxigène restreint du vibrion que
nous avions.

b) La méthode de Brau et Denier que nous employâmes
ensuite nous à donné des résultats à peu près analogues.

Nous n’obtinmes jamais une toxine normale, moyenne, équi-
valente à celle de Salimbeni, c’est-à-dire déterminant la mort
du cobaye par la seule injection sous-cutanée de 1 centimètre
cube. Nous dûmes avoir recours à des doses 10 ou 20 fois plus
fortes pour obtenir la mort en 48 à 52 heures, et dans quelques
cas les témoins survécurent.

Toutefois, dans leur ensemble, en opérant sur un nombre
relativement élevé de cobayes (16), nous pûmes nous rendre

(4) Annales de l'Instilul Pasteur, 1902, p. 922.
(2) Berliner klin. Wochenschrift, 1902, ne 25.

478 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

compte que le mélange de sérum et de toxine était indifférent
à l'animal, et que l’inoculation préventive de sérum empêchait
tout développement de phénomènes morbides lors d’une injec-
tion de toxine faite 12 ou 24 heures après; les témoins, par
contre, étaient sérieusement éprouvés, et un certain nombre
mouralent.

c) L'autolysat de cultures cholériques d’après la méthode
de Strong (1) nous a donné dés résultats analogues, mais en
employant également, vu le faible pouvoir toxigène de nos
cultures, des doses beaucoup plus fortes que celles qui sont
généralement usitées.

2° Nous essayämes ensuile le sérum, non plus sur une toxine
plus ou moins virulente et ne se rapprochant peut-être que
vaguement des produits élaborés par le vibrion cholérique au
niveau de l'intestin et lancés de là dans l'organisme, mais sur
l'animal atteint de choléra, c’est-à-dire précisément sur cette
toxine diffuse en tous points.

Pour provoquer le choléra expérimental, nous employämes
le procédé de Metchnikoff (2), qui consiste, comme l’on sait, à
faire ingérer à de jeunes lapins à la mamelle, âgés de 2 à 6 jours,
des cultures cholériques associées à des espèces microbiennes
favorisantes et principalement une sarcine et une torula (ou
cryptococcus) à raison de 1 tube de culture de 18 heures à
37 degrés sur gélose, de chacune de ces bactéries : choléra,
sarcine et torula. La mort arrive entre 40 et 60 heures, géné-
ralement en hypothermie; à l’autopsie, on trouve des lésions
typiques congestives de l'intestin avec teinte hortensia de l'in-
testin grêle, rempli d’un contenu diarrhéique et de grains rizi-
formes blanc jaunâtre ou jaune d’or; de la distension de la
cavité abdominale contenant un liquide louche, séreux, etc.

La difficulté de nous procurer de petits lapins a limité le
nombre de nos expériences; nous avons fail 5 essais que voici,
brièvement résumés :

Premier essai. — 11 mai. Sérum frais, agglutinant à
1 p. 1.000, provenant du lapin n° 8 inoculé intravésiculaire-
ment | mois auparavant; ce sérum est injecté sous la peau à
(4) Publications of the bureau of government. Lab. biolog. laborat., n° 16,

1904, Manille.
(2) Annales de l'Institul Pasteur, 1894.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 479

raison de 2,5 centimètres cubes par animai, 48 heures avant
l'ingestion du mélange choléra-sarcine-torula.

Age des lapins au moment de l'ingestion : 52 heures.

Ayant reçu le sérum 2 lapins
on reçu le choléra seul . PR TE RE RO —
N'ayant recu ni choléra ni Sérum .: : "UM ]apin:

Les 2 témoins (choléra seul) meurent, l'un 36, l’autre
48 heures après l’ingestion. Les 3 autres survécurent, indemnes.

Deuxième essai. — 8 novembre. Sérum frais agglutinant à
1 p. 2.500, provenant d’un lapin hyperimmunisé (inoculation
intravésiculaire suivie de 2 injections intraveineuses). Ce sérum
est inoculé à raison de 3,5 centimètres cubes sous la peau de
chacun des animaux 48 heures avant l’ingestion du mélange
(choléra-sarcine-torula).

Age des lapins au moment de l'ingestion : 36 heures.

AWantérecuale SéCUEMMEME ALT +. ONE SZ TADIn EE
AVantreQuMlercholéra Seul er NN CRT DINS
N'ayant -receusni sérum ni choléra. 1 "NS MINIApiIn:

Les 2 témoins (choléra seul) meurent, l’un 24, l’autre
30 heures après l’ingestion, avec lésion cholérique typique. Un
animal ayant reçu le sérum meurt 52 heures après l’ingestion
cholérique. Les 4 autres survécurent, bien portants.

Troisième essai. — 12 novembre. Sérum frais, agglutinant à
1 p. 100 seulement, provenant d’un lapin immunisé intravési-
culairement ; ce sérum est injecté sous la peau des lapins à
raison de 2,5 centimètres cubes, 24 heures avant l’ingestion du
mélange cholérique.

Age des lapins au moment de l’ingestion : 10 heures.

AVANLITEGQUSIENSÉEURR ee 2). - … + 2/8 CM EDS LA DUNS.
Avantrecdrlercholérahseul:. . "1. ESA
N'ayantrecurn1 sérum niICholéra NS PER ATIEN—

Les 4 premiers lapins meurent, le témoin en 24 heures et les
autres en 36, 50 et 62 heures.

Quatrième essai. — 18 novembre. Sérum frais agglutinant à
1 p.10.000 provenant d'un animal hyperimmunisé. Ce sérum est
inoculé à raison de 4 centimètres cubes sous la peau, 12 heures
avant l’ingestion du mélange.

Age des lapins au moment de l'ingestion : 28 heures.
AvVAMETeUn le Sérum . . . . NE Te NAMIADUTS
AYantirecule choléra seul PRE N RRR

480 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Les 2 témoins (choléra seul) meurent en 26, 30 heures.

Les 2 autres résistent, sans avoir présenté aucun symptôme
morbide.

Cinquième essai. — 30 novembre. Sérum frais agglutinant
identique à celui du quatrième essai. Ce sérum est inoculé à
raison de 2 et 4 centimètres cubes sous la peau 2 heures et
12 heures avant l’ingestion du mélange.

Age des lapins au moment de l'ingestion : 32 heures

Ayant reçu 2 cent. cubes de sérum (2 heures avant) . . 2 lapins.
Ayant reçu 4 cent. cubes de sérum (12 heures avant)... 2 —
Avyant-recu-le:choléra seule Rx . CRT... 20

Les deux témoins meurent en 24 heures.
Des lapins ayant reçu le sérum 2 heures auparavant, l'un
meurt, l’autre résiste. Les deux autres résistent également.

Nous ne devons point tenir compte du troisième essai. Un
sérum agglutinant à 1 p. 100 seulement, n'ayant présenté
aucune propriété antitoxique 2n vitro, ne devait point protéger
contre l’intoxication cholérique expérimentale. Nous n’en fimes
l'essai que par la raison qu'au moment où nous eûmes à notre
disposition ces jeunes lapins, nous n'avions pas d'autre sérum
sous la main.

Il résulte donc, cet essai mis à part, que le sérum convena-
blement préparé est nettement antitoxique, non seulement ?#
vitro, mais encore ?n vi.

Le sérum obtenu par l’inoculation intravésiculaire de vibrions
cholériques est donc doué de propriétés immunisantes. Il est
antibactérien et antitoxique. Le fait est intéressant parce que
tout sérum cholérique anlitoxique est exclusivement obtenu
au moyen d'inoculation de toxines cholériques (sérum de
Metchnikoff, Roux et Salimbeni), préparées par injections de
toxine cholérique dans les veines du cheval.

Le sérum de Pfeiffer, préparé avec des corps vibrioniens, a
de très grandes propriétés bactéricides : il protège efficace-
ment le cobaye contre la péritonite cholérique; par contre, il
ne manifeste aucun pouvoir antitoxique : il ne paraît point
pouvoir immuniser les jeunes lapins contre l’ingestion de
vibrions.

Les expériences qui précèdent démontrent que l’on peut pro-
voquer la formation d’antitoxines dans l'organisme d’un animal

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 481

qui ne recoit en injections vaccinantes que des corps micro-
biens, résultat à rapprocher de celui que l’on obtient avec le
sérum antipesteux, également antiltoxique et pourtant exelu-
sivement préparé avec des bacilles pesteux.

BACILLE TYPHIQUE

L'inoculation intravésiculaire de bacilles typhiques (1) pro-
voque, chez l'animal auquel on a fait l'opération, la formation
d'anticorps spécifiques.

Exemple : lapin n° 2, recoit le 12 avril, dans la vésicule
biliaire, 1 centimètre cube d’une culture de bacille d'Eberth en
bouillon de 24 heures à 37 degrés.

Le 21 avril, c'est-à-dire 8 jours après l’inoculation, le sérum,
qui avant l'opération ne présentait aucun pouvoir agglutinatif,
agoglutine à 1 p. 750, et le 29 avril à 1 p. 1.000.

Un lapin témoin, ayant reçu la même quantité de bacilles,
mais en injection intrapéritonéale, présentait, 8 jours après,
un taux agglutinatif n'atteignant point 1 p. 50.

L'animal, opéré intravésiculairement, ne montre à aucun
moment des phénomènes réactionnels ; Le poids, la température
restent normaux.

4 mois après, le taux agglutinatif s'était maintenu à 1 p. 1.000;
aucune des propriétés immunisantes n'avait disparu.

A cette époque, l'animal, bien portant, ayant augmenté de
400 grammes, est sacrifié. On ne trouve aucune lésion organique ;
le foie, la rate, les reins, les poumons, le péritoine sont nor-
maux. Mais la vue est attirée par la vésicule biliaire, formant
une tumeur énorme, blanche, contrastant sur le fond rouge
hépatique. Elle est de la grosseur d’un œuf de poule, à parois
dures, blanches, fibreuses, épaissies. A l’intérieur de cette
tumeur, on trouve le liquide habituel, décrit précédemment,
mais en proportion inaccoutumée (40 cent. cubes); les ensemen-
cements restent stériles.

Le sérum de ce lapin n° 2 a été essayé sur de jeunes lapins
âgés de 1! mois et inoculés intrapéritonéalement avec des cul-
tures typhiques, à raison de 3 et # centimètres cubes de cul-
ture en bouillon de 48 heures à 37 degrés, Le sérum avait été

(1) Culture provenant de l'Institut Pasteur.

31

482 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

inoculé l'avant-veille sous la peau à raison de # centimètres
cubes, et dans la cavité intrapéritonéale à raison de 2 centi-
mètres cubes.

Dans les 8 expériences failes, les 2 témoins moururent, 18 à
25 Jours après, de cachexie, due sans doute à l'élaboration de
toxines typhiques, tandis que les animaux, traités préventive-
ment avec le sérum, survécurent.

Les bacilles que nous employämes, malgré les tentatives.
d’exaltation de virulence par les passages en séries chez le
cobaye et par des cultures en sacs (Chantemesse et Widal),

Avril 1 771 Juillet Août
Dates \12115120 25130 5 |10115120|25130| 5 140115120125 130] 5 | 10145,20125130| 5 10118

T EE nes

RS EEE BP EN CE ii Et v
—
in
5 FE dose

Fic. 6.

(Chantemesse et Balthazard), n’atteignirent jamais, quoique
possédant des propriétés toxiques certaines, une virulence très
grande ; ceci explique la mort lente des témoins.

Le même sérum, essayé comme agent neutralisateur de la
toxine typhique, a donné des résultats analogues.

La toxine, préparée suivant la méthode de Conradi, tuait Les
lémoins en injection intrapérilonéale, et préservait les animaux
qui, dans la cavité péritonéale, avaient recu 48 heures aupa-
ravant le sérum immunisant, ou recevaient extemporanément
un mélange de sérum et de toxine laissé préalablement 2 heures

37 degrés. Les animaux témoins moururent presque tous
(4 sur 5) lentement, quoique la toxine fût injectée en quantité
très grande : 5 centimètres cubes pour de jeunes lapins de
650 à 700 grammes ; on dépassait ainsi de beaucoup les doses
mortelles An par Conradi (0,2 cent. cube) en injection
intrapéritonéale chez le cobaye.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 483

Avant de terminer ce chapitre, rapportons un fait qui peul
être rapproché de ceux que nous avons relatés précédemment,
dans la première partie.

Le lapin n° 1, inoculé intravésiculairement le 12 avril, four-
nissait, 8 jours après l’opéralion, un sérum agglutinant à
4 p. 750. Les 15°, 20° et 30° jour, Le taux agglutinatif était resté
identique.

Le 1° juillet, c'est-à-dire après 2 mois et demi, le taux
agglutinatif était redescendu à 1 p. 5, chiffre initial.

Le sérum du lapin n° 2 inoculé le même jour que le lapin
n° 1 présente, un mois après l'opération, un pouvoir aggluti-
nant égal à 1 p. 1.000, taux qu'il maintenaitencore le 1® juillet.

À l’autopsie, le lapin n° 1 ayant été sacrifié, on remarque
que tous les organes sont sains, mais que la vésicule biliaire
n'offre pas les dimensions qu'on s'attendait à lui trouver;
petite et recroquevillée, elle présente sur une de ses faces
un perluis, signe d'une rupture antérieure.

De ce fait, il semble résulter que les anticorps ne se fabri-
quent et ne restent en circulation dans l'organisme qu'autant
que la vésicule qui les engendre subsiste indemne. Si, pour
une cause quelconque, la vésicule se rompt, les antigènes se
répandent dans la cavité péritonéale ; là, surtout lorsque l’ino-
culation a eu lieu très longtemps avant, et qu’ils sont ou atté-
nués ou en faible porportion, ils ne causent qu'une réaction
infime et ils disparaissent résorbés ou éliminés. De nouveaux
anticorps ne peuvent se former, et quant à ceux qui sont
répandus dans l'organisme, ils ne tardent pas à disparaître
également.

TUBERCULOSE AVIAIRE

Nous suivrons dans ce chapitre le même ordre que dans
celui du choléra, étudiant d'abord les réactions consécutives
aux {njections intraveineuses, puis aux /noculations intravési-
culaires, etaux Inoculations intravésiculaires suivies d'injections
intraveineuses. Nous terminerons par la description des Pro-
priétés du sérum.

Dans tous les cas qui vont être cités, les cultures employées
furent toujours celles de bacilles de tuberculose aviaire (1)

4) Ces cultures tuaient le cobaye en inoculation sous-cutanée, avec pré-
sence de bacilles dans les organes.

484 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

provenant de l’Institut Pasteur, et cultivées à 37 degrés.

Dans les premiers essais que nous fimes, nous utilisämes le
bacille bovin, mais les réactions étant ou trop faibles ou incons-
tantes, et n'amenant pas, dans un laps de temps déterminé
et relativement court, la mort chez les témoins, nous y re-
noncâmes.

Nous avons d’abord utilisé, tantôt des cultures sur pommes
de terre glycérinées à 5 p. 100, tantôt des cultures sur milieu
de Lumière (foie de bœuf glycériné à 6 p. 100); plus tard,
nous avons employé des cultures sur gélose glycérinée à
3 p. 100.

D'ailleurs, la nature du milieu de culture sera indiquée à
chaque observation.

INJECTIONS INTRAVEINEUSES.

Les animaux témoins au nombre de 11, inoculés en injec-
lion intraveineuse, sont tous morts dans une période comprise
entre le 11° et le 22° jour.

Les injections furent
faites avec des cultures
de tuberculose aviaire;
une ou deux spatules de
culture fraiche âgée de
1 à 2 mois et diluée dans
2 à 10 centimètres cubes
d'eau physiologique.

Les symptômes con-
statés étaient générale-

ar ment de l'amaigrisse-

ment, de l’anorexie, de

l'abattement et une élévation de température, surtout les
derniers Jours (voir figure 7). A l’autopsie, les organes sont
normaux comme forme, couleur el poids. On note seule-
ment une hypertrophie légère du foie et de la rate. Le
critérium de la cause de la mort se trouve dans les frottis
de rate et de foie toujours criblés de bacilles très nets, quelle
que soit la coloration employée. C'est Le type classique décrit
par Yersin. Ajoutons, toutefois, que nous n'avons jamais

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 485

rencontré l'hypertrophie « considérable de la rate et du foie »
signalée dans ce cas.

Vois d'ailleurs, le poids moyen des organes des témoins
morts suivant le type Yersin, 11 à 22 jours après l’inocu-
lation.

Foie 65 gr. » Bacilles très nombreux.
Rate. . lo.) Bacilles nombreux.
RES SES (Chaque) "Pas debacilles:
Poumons . . . . 11 gr. (les deux). Pas de bacilles.

Jamais nous n'avons constaté la forme granulique à l'autopsie
des animaux.

INOCULATIONS INTRAVÉSICULAIRES.

Lapin n° 18, reçoit, le 13 mai, une inoculation de bacille
tuberculeux aviaire dans la vésicule biliaire. La vésicule à été

ee.
A D A D A ee

préalablement vidée de son contenu. La quantité de bacilles
inoculés est de deux ôüses environ, diluées dans 1 centimètre
cube d’eau physiologique. Les bacilles proviennent d’une
culture sur pomme de terre glycérinée à 37 degrés, âgée de
1 mois.

Poids de l'animal avant l'opération : 1.570.

Le 26 juin, c'est-à-dire 42 jours après, alors qu'il était en
parfait élat, l'animal est sacrifié (voir figure 8).

L

486 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Son poids avait atteint 2 kilogrammes. Aucune modification
extérieure; l'aspect de tous les organes: poumons, cœur, foie,
rate, reins, intestins et séreuses, est normal.

H. VIOLLE,

FiG. 9. — Vésicule biliaire. — Tuberculose aviaire.

a, muqueuse. — b, couche conjonclivo-fibreuse (très fortement épaissie el
vascularisée). — c, tissu hépatique.

Voici d’ailleurs les poids moyens trouvés dans les autopsies
faites chez différents animaux, dans les mêmes conditions :

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 487

HOIG RENE ON MEME de. 4 MST aMDRerAmMmmes

RATER CR. OR MoN aN2 Ie TAImINeS:
RMS EU. NACRE 1 LIGA ore (UnAseul)
BGUMONS CRE LS... LE Mrs er tlesden)

La vésicule biliaire seule est modifiée (voir figure 9) et pré-
sente les lésions décrites dans la première partie de cet ouvrage.

L'inoculation du liquide vésiculaire, sous le pli de laine
«d'un cobaye, ne donne, après 2 mois, aucun résultat, l'animal
n'ayant pas présenté de réaction locale ni ganglionnaire. A
l’autopsie, aucune lésion organique, ni macroscopique ni mi-
‘€roscopique.

Des frottis des différents organes du lapin inoculé : foie,
rate, reins, poumons, moelle osseuse, ne montrent pas de ba-
cilles tuberculeux.

Des inoculations de fragments de ces différents organes chez
les cobayes restent négatives.

Des coupes histologiques de ces mèmes organes ne révèlent
pas la présence du bacille tuberculeux.

En résumé, le lapin inoculé dans la vésicule biliaire, un
mois et demi auparavant, avec des bacilles tuberculeux à dose
mortelle, a résisté. La réaction a eu lieu seulement localement.
Au niveau de la région inoculée, elle s’est manifestée par un
apport assez considérable de leucocytes. L’infection ne s’est
généralisée à aucun moment; l'organisme ne présente aucune
trace de lésions anciennes ou récentes et une absence totale de
ganglions suspects.

Tous les cas d'animaux inoculés peuvent être considérés
comme calqués sur le précédent.

Les lapins témoins de même poids, inoculés en injection
intraveineuse, avec une quantité équivalente de bacilles tuber-
culeux, sont tous morts rapidement (voir chapitre précédent).

INOCULATION INTRAVÉSICULAIRE SUIVIE D'INJECTION INTRAVEINEUSE.

Inoculation le 13 mai au lapin 36 dans la vésicule biliaire,
préalablement vidée, de 2 üses environ de bacilles tuberculeux
aviaires dilués dans 1 centimètre cube d’eau physiologique. La
culture est âgée de 1 mois sur pomme de terre glycérinée à 37°.

Le 17 juillet, c’est-à-dire 2 mois environ après l’inoculation,
le lapin 36 et le lapin 26 (témoin) recoivent chacun une

488 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

injection intraveineuse de bacille tuberculeux (1/3 tube de
culture diluée dans 2 centimètres cube d’eau physiologique ;
culture aviaire sur pomme. de terre glycérinée de 2 mois à
31 degrés).

Le 31 juillet, c'est-à-dire 13 jours après l’inoculation, le
lapin 26 meurt. A l’autopsie, lésions type Yersin.

Le 19 octobre, plus de 5 mois après la première inoculation
intravésiculaire, bacillaire, et plus de 3 mois après l'injection
intraveineuse également bacillaire, l'animal n° 36, en excellent

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état, est sacrifié. A l’autopsie, aucune lésion macroscopique nimi-
croscopique. Frottis des organes, ainsi qu'inoculations, négatifs.

La vésicule biliaire, de grosse dimension (17 gr. 50), pré-
sente les lésions déjà décrites précédemment.

Le liquide, environ 5 centimètres cubes (polynucléaires, la
plupart dégénérés; et bacilles tuberculeux en assez grande
abondance, prenant mal les colorants), est délayé dans une
quantité égale d’eau physiologique et inoculé à un lapin
(n° 84) en injection intraveineuse : 1 mois après l’inoculation,
l'animal n'avait encore présenté aucune réaction; son poids
avait sensiblement augmenté (voir fig. 11). Le 22 novembre, il
reçoit avec un témoin une injection intraveineuse tuberculeuse.
Le 10 décembre, le témoin meurt avec lésions tuberculeuses:
l’autre animal, tué, ne présente aucune lésion spécifique.

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 489

Le lapin précédent, n° 36, présenta à l’autopsie 3 ganglions;
l'un adossé à la colonne vertébrale, derrière le foie; l'autre,
trachéo-bronchique, le troisième dans le bassin, adossé à une
des veines iliaques ; tous trois élaient de la grosseur d'un grain
de blé, blancs, durs à la coupe, se composant d’une coque
libreuse et d'un contenu caséeux. Sur frotlis, on ne constate
pas la présence de bacilles, mais de quelques cellules géantes.

Inoculés après broyage et dilution en eau physiologique dans
le pli de laine d'un cobaye, les ganglions ne donnent lieu à
aucun retentissement ganglionnaire après plus de 2 mois. En
coupe histologique, ces ganglions montrent des lésions de

Dates | … Pctodre Noverêre
| 19,£1|83126127129| 3 | 917 [9141435
| ES DES El

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a | ue Sie

lis

[2.43 0

EE]
Er: 11°

congestion et quelques lésions paraissant spécifiques, mais sans
bacilles tuberculeux.

Le cas décrit plus haut est le cas courant, rencontré lors
d'une autopsie variant entre 1 et 3 mois, après l’inoculation
intraveineuse, consécutive elle-même à l'inoculation intravési-
culaire. Il est évident que si l'autopsie a lieu dans un espace de
temps beaucoup plus proche de l’inoculation intraveineuse, les
faits ne seront pas absolument identiques. Le bacille qui vient
d’être injecté en très grande quantité dans la circulation géné-
rale persistera dans l'organisme un certain temps. Ce temps est
relativement très court, et c'est là le fait essentiel. Le bacille
en premier lieu ne se développe pas, il ne peut se développer
dans un sérum ou dans des organes baignés par un sérum
qui jouit de propriétés acténi ed ou favorisant la bacté-
riolyse. L'expérience suivante paraît en fournir la preuve.

490 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Lapin n° 42, inoculé le 26 juin, intravésiculairement, avec
une dose de culture aviaire sur gélose glycérinée à 37 degrés
de 50 jours.

Le 22 août, c'est-à-dire 56 jours après l’inoculation, l'animal
en pleine santé recoit une injection intraveineuse tubercu-
leuse (1/2 culture sur gélose glycérinée à 37 degrés de
2 mois 1 /2). Le surlendemain, l'animal est sacrifié. À l'autopsie :
organes normaux, pas de lésions congestives, pas de liquide
dans les séreuses, pas de ganglions. La vésicule présente les
lésions habituelles, macroscopiques et microscopiques ; absence
de bacilles dans tous les organes, sauf la rate, qui en contient
une très faible quantité, et les reins où il y en a moins encore.

D’après ces faits, les bacilles paraîtraient soil éliminés au
dehors (par les reins ou l'intestin), soit détruits 2n vivo
(rate et organes lÿmphoïdes).

La présence de très rares bacilles au niveau de l'épithélium
rénal semblerait permettre de croire à leur élimination par
cette voie. Cependant, les inoculations, chez les cobayes, du
culot de centrifugation de 5 centimètres cubes d'urine recueillie
aseptiquement 24 heures après l'injection bacillaire intra-
veineuse, sont demeurées négatives après plus de 3 mois.

Quant à la voie intestinale, la méthode employée par Calmette
avec succès chez le bœuf nous a donné sur 6 cobayes, après
plus de 3 mois, 6 cas négatifs (inoculation de 1 gramme de
matières fécales recueillies 24 heures après l'injection bacil-
laire intraveineuse).

Afin d'essayer de déterminer la durée de persistance des
bacilles injectés dans les veines après l'inoculation vaccinante
intravésiculaire, nous avons fait la recherche de bacilles tuber-
culeux dans le sang par le double procédé employé chez l’homme
par Nattan-Larrier et Loeper-Louste. On agissait sur 10 cen-
timètres cubes de sang pris par ponction intracardiaque et
hémolysés immédiatement, soit par l’eau distillée dans la pro-
portion de 10 centimètres cubes de sang pour 120 centimètres
cubes d’eau (Nattan-Larrier), soit par l'alcool au tiers dans la
proportion de 10 centimètres cubes de sang pour 20 centi-
mètres cubes d'alcool (Loeper-Louste); puis on laissait reposer
et on centrifugeait. Le culot de centrifugation, étalé sur lames
et coloré, ne nous à jamais permis de découvrir le bacille dans

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION #91

le sang, pris 2%, 48 et 52 heures après l’inoculation intravei-
neuse. D'autres culots délayés dans un peu d’eau physiologique,
puis inoculés aux cobayes (expériences sur 8 animaux), n'ont
donné également aucun résultat positif.

La tuberculose chez le lapin n° 36, vacciné intravésiculaire-
ment, puis inoculé dans les veines, s’est signalée à l’autopsie
par un nombre très élevé de bacilles dans la vésicule, et par
l'apparition de ganglions dans l'organisme.

La présence de bacilles dans la vésicule est normale, puis-
que l'animal avait été inoculé en ce point. Mais ces bacilles
injectés 5 mois auparavant, partiellement dégénérés, ne déter-
minent chez le cobaye et le lapin aucune lésion, et cela établit
que les bacilles sont morts ou que, vivants, ils sont avirulents.

La présence de lésions ganglionnaires dans l'organisme en
des points différents prouve qu'il y a eu lutte contre l’envahis-
sement par le bacille tuberculeux ; mais à quel moment ?

Après l’inoculation intravésiculaire? Assurément non, puis-
que tous les animaux inoculés exclusivement dans la vésicule
biliaire n'ont jamais présenté d’adénite consécutive.

Après l'injection intraveineuse ? Mais toute injection intra-
veineuse de bacilles virulents cause la mort de l’animal en
l'espace de 15 à 20 jours, suivant le type Yersin, c'est-à-dire
sans provoquer aucune réaction ganglionnaire.

Quoi qu'il en soit, la présence de ganglions indiquant une
réaction de défense, on doit en conclure que l'animal était
immunisé; et, comme les ganglions sont peu nombreux et de
petite dimension, et ne présentent ni périadénite, ni suppura-
lion, l’immunité était très active. En fait, 2 mois après l’inocu-
lation intraveineuse des bacilles tuberculeux, aucun vestige
bacillaire ne persiste dans l'organisme. Et cependant ces bacilles
étaient doués d’une grande virulence puisque les témoins
mouraient en l’espace de 2 semaines, alors même qu'ils étaient
inoculés avec des quantités très faibles.

Ainsi, un lapin vacciné par inoculation préalable de bacilles
virulents dans la vésicule biliaire est capable de résister à l’ino-
culation intraveineuse d’une culture tuberculeuse virulente,
inoculation toujours rapidement mortelle chez les témoins.

Un lapin rendu tuberculeux par inoculation sous-cutanée el
mieux intrapéritonéale ou intraveineuse réagit quelquefois

492 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

fortement, généralement avec intensité, mais presque toujours
nettement à une seconde injection tuberculeuse (phénomène
de Koch) en présentant des phénomènes locaux ou généraux,
ou les deux associés (1).

L'absence totale de réaction, même légère, même fugace, chez
un lapin inoculé préalablement dans la vésicule et secondaire-
ment dans les veines avec une culture tuberculeuse, tendrait
done à prouver que l’animal est « vacciné » dans le sens où l’on
emploie couramment ce terme, c'est-à-dire incapable de suc-
comber à une nouvelle atteinte du bacille: qu'il est physiologi-
quement ou humoralement vacciné, c’est-à-dire que dans son
organisme ne circulerait plus de tuberculine capable par l’addi-
üon d’une nouvelle dose de tuberculine (culture de bacilles ou
toxines) de produire des phénomènes de superintoxication ou
d’anaphylaxie.

On pourrait cependant admettre au contraire que l’animal
ainsi vacciné aurait produit d’une facon lente et continue, sous
l'influence de la dose initiale de bacilles tuberculeux inoculés
intravésiculairement, de l’antituberculine, dont la présence ne
se manifesterait par aucune action générale consécutive.

PROPRIÉTÉS DU SÉRUM.

Les lapins inoculés dans la vésicule biliaire avec une cul-
ture tuberculeuse aviaire, suivant la méthode indiquée précé-
demment, fournissent un sérum dont on a essayé de déter-
miner le pouvoir immunisant, soit chez les cobayes, soit chez
les lapins.

Voici quelques exemples tirés des expériences faites :

Premier cas : 28 juin, injection sous-cutanée de 2 centimètres
cubes de sérum (d’un lapin inoculé intravésiculairement 2 mois
auparavant avec une culture tuberculeuse) aux 2 cobayes 28 et 29.

29 juin, 2° injection identique à la précédente.

Ce même Jour, les 2 cobayes 28 et 29 et 2 autres cobayes 30
et 31 (témoins) reçoivent, sous la peau, au niveau de la face

(1) L'épreuve de la tuberculine-réaction, faite chez des lapins ayant reçu des
bacilles tuberculeux, les uns en inoculations intravésiculaires, les autres en
inoculations intraveineuses, d'autres en les deux voies, n'a pas fourni de

résultats caractéristiques. On sait que les lapins réagissent mal, ou plus
exactement, très inégalement, à la tuberculine (Arloing, Rodet et Courmont).

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 493

interne de la cuisse, 1 üse de bacilles tuberculeux aviaires
(cultivés sur milieu de Lumière de 20 jours, à 37 degrés).

Le 30 juin, 3° injection de 2 centimètres cubes de sérum aux
2 cobayes 28 et 29.

Le 1° juillet, 4° injection de 3 cent. cubes de sérum aux mêmes
animaux.

Le 3 juillet, 5° injection de 3 cent. cubes de sérum aux mêmes
animaux.

Le 8 juillet, on constate l'apparition chez tous les cobayes de
petits ganglions roulant sous le doigt, ayant la grosseur d'un
pois et indolores.

Dans le courant du mois de juillet, chez les cobayes témoins
30 et 31, ces ganglions augmentent progressivement du côté
du point d'inoculation, d’autres apparaissent de l’autre côté.
Les ganglions restent petits, unilatéraux el insignifiants chez
le cobaye 28. Le cobaye 29 a succombé peu après l’inoculation,
probablement de septicémie ou d’anaphylaxie.

Le cobaye 31 meurt le 31 juillet, et son autopsie décèle des
lésions typiques de tuberculose : la rate principalement contient
des bacilles.

Le cobaye 30 meurt le 1" août, avec également quelques
lésions tuberculeuses.

Quant au cobaye 29, il était encore vivant 6 mois après l’ino-
culation, ne présentant aucune lésion apparente; son poids
avait passé de 130 à 260 grammes.

Deuxième cas : Cobaye 75 reçoit en injection sous-cutanée
4 centimètres cubes d’un mélange de culture tuberculeuse et de
sérum, resté 1 heure à l’étuve à 37 degrés et présentant après ce
temps une forte agglutination. Le sérum provient d’un lapin
inoculé ! mois 1/2 auparavant dans la vésicule biliaire avec
une émulsion de bacilles tuberculeux virulents.

Cobaye 76 reçoit préventivement en injection sous-cutanée
6 centimètres cubes de sérum, puis 24 heures après, une inocu-
lation de bacilles tuberculeux.

Cobaye 77 reçoit, en injection sous-cutanée, une culture
tuberculeuse seule (animal témoin).

Chez les 3 cobayes, les cultures tuberculeuses inoculées étaient
équivalentes en quantité : ! üse de bacilles tuberculeux de
quinze Jours sur gélose glycérinée à 37 degrés.

494 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le témoin 77 meurt 34 jours après l'inoculation, avec des
lésions tuberculeuses (rate, foie contenant des bacilles tuber-
culeux), après avoir présenté un amaigrissement notable.

Le cobaye 75 est tué à même date. Poids légèrement dimi-
nué. A l’autopsie, ganglions de la grosseur d’une noisette au
niveau du point d'inoculation avec contenu caséeux et bacilles,
mais sans suppuration. Le foie, la rate et le pancréas con-
tiennent quelques bacilles tuberculeux.

Le cobaye 76, tué également le même jour, a augmenté de
poids. Il présente un ganglion à contenu caséeux avec zone
périphérique sclérosée, au point d'inoculation. Très peu de
bacilles dans ce pus. Les organes sont normaux : le foie et
la rate ne contiennent aucun bacille; absence de bacilles égale-
ment dans les autres organes.

Troisième cas : Cobaye 23. Reçoit en injection sous-cutanée
2 centimètres cubes de sérum provenant d'un lapin inoculé
dans la vésicule biliaire 1 mois auparavant avec culture tuber-
culeuse virulente, puis 2 heures après cette première injection
un mélange de # centimètres cubes du même sérum et 2 spa-
tules (environ 6 üses) de bacilles tuberculeux (culture de
23 jours sur pomme de terre glycérinée à 37 degrés).

Cobaye 24, témoin, reçoit une culture tuberculeuse seule, en
quantitééquivalenteà celle quia été inoculée au cobaye précédent.

31 jours après l’inoculation, le témoin meurt, amaigri, avec
lésions tuberculeuses généralisées (rate et foie contenant des
bacilles tuberculeux\.

Le cobaye 23, alors bien portant, et ayant augmenté de
poids, est tué le même jour. Ganglions de la grosseur d’une
noisetle au niveau du point d'inoculation, avec zone fibreuse
périphérique. Le contenu caséeux renferme des bacilles en assez
grande proportion. Aucune généralisalion : {ous les organes
sont sains; le foie et la rate ne renferment aucun bacille.

De tous ces faits, il résulte que les injections sous-cutanées
de cultures vivantes et virulentes de tuberculose aviaire, à
dose très élevée, ont tué, en provoquant des lésions de tuber-
culose généralisée, les témoins en 30 à 35 jours. Par contre,
les animaux qui ont reçu préventivement, en injection sous-
cutanée, du sérum d'animaux vaccinés intravésiculairement,
à la dose de 10 centimètres cubes, résistent, ne présentant

VÉSICULE BILIAIRE ENVISAGÉE COMME LIEU D'INOCULATION 295.

qu'une lésion locale, au niveau du point d’inoculation, et
aucune généralisation du bacille après plus d'un mois. Les
doses moins élevées, injeclées préventivement ou mélangées à
la culture tuberculeuse, semblent insuffisantes.

Le mélange de culture tuberculeuse et de sérum en quantité
suffisante, provenant d'un animal vacciné, paraît avoir perdu
sa virulence. Les résultats furent toujours identiques, quoique
les expériences tendant à établir ce fait fussent par 5 fois répé-
tées. Elles peuvent ètre, dans leur ensemble, résumées ainsi :

Lapin A, recoit un mélange de 5 centimètres cubes de sérum
d'un lapin inoculé intravésiculairement 1 à 3 mois auparavant,
et d’une culture tuberculeuse (1/8 tube de culture de tuberculose
aviaire sur gélose glycérinée de 1 à 2 mois à 37 degrés, diluée
dans 10 centimètres cubes d’eau physiologique). Le mélange
bien agité a été laissé en contact 2 heures à 37 degrés. On
inocule les 10 centimètres cubes dans la veine marginale de
l'oreille d’un lapin neuf.

Lapin B, sert d'animal témoin; il reçoit, en injection intra-
veineuse également, la même quantité de bacilles tuberculeux,
dilués dans la même quantité d’eau physiologique.

Après une période de 12 à 15 jours, l'animal témoin B meurt
de tuberculose à type Yersin.

L'animal À, ayant reçu le mélange, résiste et ne présente à
aucun moment une réaction quelconque, pouvant se traduire
par une diminution de poids ou une élévation de température.
Sacrifié 2 mois après l’inoculation intraveineuse, l'animal, en
parfait état, ne montre aucune lésion tuberculeuse.

Il s'ensuit donc qu'une culture tuberculeuse, additionnée de
sérum selon le mode indiqué, parait totalement avirulente
alors que la même culture, injectée seule, cause la mort de
l'animal témoin très rapidement.

Le mélange préparé comme nous l'avons dit ci-dessus, et
laissé 2 heures à l’étuve à 37 degrés, n’est plus, à l'inverse du
tube témoin qui ne renferme qu'une émulsion de bacille tuber-
culeux, une solution trouble et laiteuse. Le liquide s’est séparé en
deux couches absolument nettes et distinctes : l’une inférieure,
pâteuse, floconneuse, blanche, dense, composée exclusivement
de bacilles; l'autre supérieure, claire, ambrée, qui n’est autre
que le sérum surnageant. Il ÿ a donc eu agglutination totale

496 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ou précipitation en 2 heures de tous les éléments bacillaires
sous l'influence du sérum. Cela peut permettre, à priori, d'in-
terpréter les différences essentielles de réactions que l'on
constatera chez les animaux injectés ou témoins.

CONCLUSIONS

L'inoculation de divers antigènes dans la vésicule biliaire du
lapin, au préalable transformée en sac vide et clos, provoque
chez l'animal opéré la formation d'anticorps correspondants
spécifiques.

Ce mode d’inoculation est aisé à pratiquer. Il ne fait jamais
éprouver à l'animal de violentes réactions.

Bien conduite, l’immunisation se fait rapidement dans la
plupart des cas. Elle ne présente pas de phases négatives; sa
durée semble fort longue.

Dans le cas où cette immunisation paraïîtrait trop légère,
des injections intraveineuses consécutives du même antigène
permettent de mettre, sans réaction, l'animal en état d'hyper-
immunisation.

Les bactéries employées comme antigènes engendrent des
anticorps immunisants (immunisalion active) et le sérum des
animaux vaccinés est généralement doué de propriétés immu-
nisantes, bactériennes et antitoxiques (immunisation passive).

Les anticorps paraissent essentiellement formés aux dépens
des leucocytes qui, attirés par l’antigène, pénètrent dans la
vésicule, grâce aux connections vasculaires hépato-vésiculaires.

Le foie agirait comme réservoir de sang et par suite de
globules blancs.

EXPLICATION DES PLANCHES XII ET XIII

PL. XII. Figure 1. — Muqueuse de la vésicule biliaire. Choléra;
a, polynucléaire; b, figure de mitose: c, cellule de la muqueuse:
d, polynucléaire: e, tissu conjonctif.
Figure 2. — Tissu hépatique contigu à la vésicule biliaire.
a, cellule hépatique; 6, polynucléaire ; c, figure de caryocinèse.
PL. XIII. Figure 1. — Vésicule biliaire et son contenu. Choléra.
a, polynucléaires ; b, chorion; ce, endothélium; 4, tissu conjonctif.

Figure 2. — Vésicule biliaire et son contenu. Tuberculose aviaire.
a, bacille tuberculeux aviaire ; b, globules blancs dégénérés; ce, poly-
nucléaire : d, cellules endothéliales ; e;, mononucléaires; f, tissu conjonctif.

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette.

1

26° ANNÉE JUILLET 1912 N°

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

ENQUÊTE SUR L'ÉPIDÉMIOLOGIE DE LA TUBERCULOSE
DANS LES COLONIES FRANÇAISES

par A. CALMETTE.

(Institut Pasteur de Lille).

On sait depuis longtemps que la tuberculose est très inéga-
lement répandue dans les diverses régions du globe et qu'elle
est surtout fréquente chez les peuples civilisés. Sa diffusion est
en rapports étroits avec l'intensité des échanges commerciaux
et il semble bien que les Européens, qui sont de beaucoup le
plus atteints, constituent les principaux véhicules de l'infection
bacillaire à travers le monde.

Il serait extrèmement prolilable à nos connaissances sur
l'étiologie de cette maladie, si meurtrière, de pouvoir observer
la manière dont elle se répand et les formes qu'elle affecte dans
un pays jusqu'alors indemne. On pourrait sans doute en
déduire les conditions d’une prophylaxie plus efficace que celle
que nous avons essayé d'organiser jusqu'à présent. C’est ainsi
que nous sommes acluellement portés à ne considérer comme
contagieux que les sujets dont les lésions (uberculeuses sont
ouvertes, principalement les phlisiques qui disséminent autour
d'eux une très grande quantité de bacilles avec leurs crachats.
Or, les faits expérimentaux que j'ai récemment publiés avec mon
collaborateur C. Guérin (1) montrent que les animaux (bovidés)

(1) Ces Annales, 25 septembre 1911, p. 625.

498 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

auxquels on a conféré, par les méthodes de vaccination actuel-
lement connues, une résistance plus ou moins grande à l'égard
de l'infection tuberculeuse, ou que ceux qui sont rendus natu-
rellement résistants par une infection bénigne, restée latente
ou occulte, possèdent la faculté d'éliminer en nature, avec leurs
excréments, par les émonctoires normaux de l'organisme (foie
et intestin), un grand nombre de bacilles virulents pour d’autres
animaux mais qui ne provoquent, chez ceux qui les émettent,
aucune lésion tuberculeuse. Il est à supposer que ce phénomène
n’est pas spécial aux bovidés etque beaucoup d'hommes, auxquels
une infection bénigne antérieure ou restée latente a conféré
une immunité relative, sont susceptibles, tout en restant eux-
mêmes en apparence parfaitement indemnes, de semer dans
leur entourage des germes virulents. S'il en est ainsi, on
comprend que la tuberculose puisse être propagée très aisément
par des voyageurs européens, qu'aucun signe objectifne permet
de considérer comme des malades, parmi les populations qui
avaient été précédemment le mieux épargnées à cause de leur
isolement dans des régions encore inexplorées du globe.

Les procédés de diagnostic dont nous disposons aujourd’hui
— principalement la cuti-réaction tuberculinique de Von
Pirquet -— nous permettent de déceler avec une grande pré-
cision l'existence de ces infections latentes ou occultes qui sont
apparemment les sources les plus dangereuses, parce qu'insoup-
connées, de contagion tuberculeuse. Grâce à eux, nous sommes en
mesure de rechercher dans chaque ville, dans chaque village,
dans chaque famille, s'il existe des sujets contaminés par le
bacille ; nous pouvons établir la proportion de leur nombre par
rapport à celui des sujets encore indemnes et chiffrer, par suite,
l'index tuberculeux d'un groupement ethnique, d'une localité ou
de tout un pays. Les données ainsi recueillies sont précieuses, non
seulement parce qu’elles doivent nous servir à éveiller l’atten-
tion des intéressés ou celle des pouvoirs publics et à leur faire
comprendre la nécessité de mesures défensives ou protectrices,
mais aussi parce qu'elles nous apportent des éclaircissements
sur les divers modes d'infection. Par exemple, elles peuvent
nous fixer sur l'importance relative — encore si discutée — des
bacilles d’origine bovine dans la contamination de l’homme.

On comprend donc que, déjà, de nombreuses recherches

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 499

aient été faites dans cette voie (1), et parmi les plusintéressantes
par leurs résultats, je citerai celles publiées récemment par
ÉL. Metchnikoff, Ét. burnet et L. Tarassevitch (2) relatives à
l'extension de la tuberculose dans les steppes des Kalmouks.
Mais pour ce qui concerne les pays situés hors d'Europe, nous
ne possédons que quelques statistiques dressées par Rümer en
Argentine, quelques faits relevés par Peiper en Afrique Orien-
tale allemande et les observations méthodiquement effectuées
par deux de mes élèves, les D Wagon en Guinée française (3)
et Noël Bernard en Annam l4). |

Aussi ai-je pensé qu'il serait utile d'étendre cette enquête et
de l’entreprendre simultanément dans le plus grand nombre
possible de nos colonies, en sollicitant le concours, sur lequel
je savais pouvoir compter, des médecins militaires des troupes
coloniales, celui des médecins des services d'assistance indi-
gène, et celui du personnel de nos Instituts Pasteur coloniaux.

C’est un agréable devoir pour moi de remercier les nombreux
collaborateurs qui ont ainsi répondu à mon appel. Je citerai
leurs noms à l'appui des documents que chacun d'eux m'a
envoyés.

Avant d'énoncer les résultats de ces recherches, je crois utile
d'indiquer la technique suivant laquelle elles ont été uniformé-
ment effectuées. Chacun de mes correspondants à reçu, en
même temps qu'une provision de tubereuline répartie en gros
tubes à vacein de 40 doses (tuberculine glycérinée brute de Koch),
une instruction et un questionnaire.

L'instruction recommandait d'insérer, soit avec un vaccino-
style, soitavec une lancette, dans deux scarifications intéressant
à peine le derme et faites sur l’un des bras, au niveau de la
région deltoïdienne (comme s’il s'agissait d’une opération vacci-
nale), une gouttelette de tuberculine. Une première scarification
devait toujours être faite sans tuberculine pour servir de témoin.
Les sujets devaient êlre revus, pour le contrôle, le cinquième
ou le sixième Jour, afin d'éviter de noter comme positives des

(1) Cazuerre. Conférence internationale de la Tuberculose. Bruxelles,
oclobre 1910, et Cazmerte, V. Grysez et R. LEruLLe. Presse Médicale. 9 août 1911,
(2) Ces Annales, novembre 1911, p. 7K6.

500 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

réactions douteuses et fugaces qui se manifestent par une
simple infiltration dermique, sans formation de la vésico-papule
caractéristique entourée d'une zone irrégulièrement circulaire,
de couleur rouge foncé chez les individus de race blanche.

Le questionnaire sollicitait des renseignements sur la fré-
quence et les formes de tuberculose observées, sur le mode
d'alimentation des jeunes enfants, sur l'existence et la fréquence
de la tuberculose bovine dans le pays.

Je priais en outre de classer les résultats autant que possible
selon l'âge des sujets, de zéro à un an, de un à quinze ans et
au-dessus de quinze ans. Je demandais enfin que l'enquête soit
surtout faite dans les écoles et dans les villages indigènes.

Voici résumées, par groupes de colonies et par centres d’opé-
rations, les données que j'ai pu recueillir.

COLONIES FRANCAISES D'AFRIQUE.

AFRIQUE OCCIDENTALE. — Résultats transmis par le D' Defrieu,
chef du service de santé du Gouvernement général de l'Afrique
occidentale :

1° SÉNÉGAL.

Ville de Saint Louis (Dr Bourret et Bourragué) :

30 enfants de 1 à 15 ans de race blanche. Réact. pos. : 3 — 10,0 p. 100
400 enfants de 1 à 15 ans de race noire ou

métis AL ee NT Réact. pos. : 131 = 34,0 p. 100
106 sujets de race noire, au delà de 15 ans: Réact. pos. : 32 — 30,2 p. 100

Banlieue (Sor el Khor) :
469 enfants de 4 à 15 ans (race noire) . . . Réact. pos. : 20 — 11,8 p. 100
68 noirs au déla de 15 ans eee Réact. pos..:1 143 —9;0fp-100

Tiraouane, cercle du Cayor (D' Comméléran) :

Ecole indigène. — 59 enfants de 5 à 15 ans. . Réact. pos. : 8 = 15,5 p. 100
Dispensaire. — 16 enfants de 0 à 1 an. . . Réact. pos. : 1 — 6,2 p. 100
63 enfants de 1 à 15 ans. . Réacl. pos. : S — 12,6 p. 100
110 sujets au delà de 15 ans. Réact. pos. : 5 — 4,5 p. 100

Keur-Matar-Khaly, à 16 kilomètres à l'est de Tiraouane (village Ouoloff) :

40 enfants de 4 à 15 ans . . Réact. pos. : 4 — 10,0 p. 100
61 sujets au delà de 15 ans . Réact. pos. : 7 — 11,4 p. 100

Mala-Gayben (village Ouoloff à 28 kilomètres cle Tiraouane) :

9 enfants de Va lane mr nReEIel. pos. : À — 1l,{ p.100
39- enfants de 1 à 15»ans….."Réact. pos. : 2 — à,1 p.100

61 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 6 — 9,8 p. 100

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 501

Bakel (D' Fouquernie) :
Douze villages de la Falémé ont fourni :

38 enfants de 0 à 1.an. . . Réact. pos. : 1 — 2,6:p° 100
301 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 38 — 12,6 p. 100
40 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 10 — 25,0 p. 100

Sedhiou (D' Cazeneuve), en Cazamance :

24 enfants de 0 à 41 an . . . Réact. pos. : 0
98 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. pos. : 0

459 sujets de plus de 15 ans . Réact. pos. : 2 — 1,2 p. 100
Bignona-Fogny, en Cazamance (D' H. Baisez), population Diolas :

59 enfants de 0 à 41 an .. Réact. pos. : 2 — 3,4 p..100
463 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 29 — 17,8 p. 100
479 enfants de plus de 15 ans. Réact. pos. : 42 = 23,5 p. 100

Bammako. Niger, population Bambaras et Maure (D' André Léger) :

64 enfants de 0 à 1 an. .- . Réact. pos. ; 0
258 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 31 — 12,0 p. 100
173 sujets de plus de 15 an}. Réact. pos. : 29 — 16,7 p. 100

Les Maures, voyageurs et commerçants, sont beaucoup plus atteints que
les indigènes Bambaras. Sur 62 enfants Maures, 18, soit 20 p. 100, ont réagi;
tandis que sur 186 enfants Bambaras, 13 seulement, soit 6,6 p.100, ont fourni
une réaction positive.

Moyenne générale pour le Sénégal :

207 enfants de 0 à 1 an... Réact. pos. : 5 — 2,4 p. 100

4.573 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 280 — 17,8 p. 100

957 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 146 — 15.2 p. 100
Éasemblest23731S 0e MMM Maur it re M: din 15,1 p. 100

20 GUINÉE FRANCAISE.
Conakry (D' Bonneau) :
140 élèves des écoles, âgés de 5 à 15 ans . , Réact. pos. : 5 — 3,5 p. 100

Mamou (Dr Chatenay) :

80 enfants de 4 à 15 ans. . . . Réact. pos. : 0

20 sujets de plus de 15 ans . . Réact. pos. : 1 — 5 p. 100
Goléah; Cercle de Kindia (Dr Trautmann) :

40 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. pos. : 1 — 2,5 p. 100
Boké (Dr Bougenault) :

446 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. pos. : 0 — 0 » p. 100

Moyenne générale pour la Guinée :

376 enfants de 1 à 15 ans. Réact. pos. : 6 » — 1,6 p. 100
20 suj. de plus de 15 ans. Réact. pos. : 1 » = 5,0 p. 100

= — ——

Ensemble : 396 sujels. . . . . . 1: MRÉACE DOS RP To MES ni L08

502 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
39 CÔTE-D IVOIRE.

Grand-Bassam (D' F. Sorel), village de Mooussou, 2.000 habitants :

9 enfants de 0 à 1 an . . . . Réact. pos. :- 0
45 enfants de 1 à 15 ans. . . . Réact. pos. : 6 — 13,3 p. 100
196 sujets de plus de quinze ans. Réact. pos. : 25 — 12,7 p. 100

Bingerville (D' Guerchet) :
60 enfants de 5 à 15 ans (écoles). . Réact. pos. 2 — 3,3 p. 100
Bouaké. Cercle de Baoulé-Hinterland (D' Arlo) :
506 sujets inoculés au cours des
tournées detvaccine "181% ""Réact pos 036 — 7.1 p: 100
Moyenne générale pour la Côte-d'Ivoire :

610) SHIBIE CNED. HU RéACt DOM — S,£0p- 00

Dans toute l'Afrique occidentale, les rapports des vétéri-
naires, en particulier celui du chef du service zootechnique,
M. Teppaz, signalent la non existence de la tuberculose bovine.
_ Les enfants indigènes sont toujours nourris au sein jusqu'à
six à huit mois. L’allaitement se continue jusqu'à dix-huit mois
chez les garçons et deux ans chez les filles, mais mitigé par
l'alimentation familiale qui comporte surtout du mil ou du r1z,
du poisson frais ou sec, du lait de brebis ou de chèvre, cru ou
caillé. Chez certaines peuplades, comme les Diolas de Caza-
imance, s’il arrive qu'un enfant succombe parce que sa mère ne
peut pas l’allaïiter, celle-ci ne lui survit pas : les membres de sa
famille se chargent de lui faire expier ce qu'ils considèrent
comme un déshonneur.

Dans les cercles de l’intérieur, la tuberculose pulmonaire est
la seule forme que l’on observe : encore est-elle extrêmement
rare. En Cazamance, le D' Chatenay signale deux cas de tuber-
culose osseuse. Celle-ci et les formes ganglionnaires sont plus
fréquentes à la côte et dans Les localités où les indigènes ont été
depuis longtemps en contact avec des Européens.

On pouvait craindre que, chez les sujets de race noire, les
réactions cutanées positives fussent difficiles à constater.
L'expérience prouve qu'il n’en est rien, malgré l'absence de la
zone irrégulièrement circulaire, de couleur rouge foncé, que
présentent les individus de race blanche. L'apparition très nette
de la vésico-papule et la persistance d'une auréole d'infiltration
leucocytaire dans le tissu dermique, autour du point d'inocu-
lation, ne laissent aucun doute à l’observateur attentif.

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 503

AFRIQUE ORIENTALE. — Le D' Vaysse, médecin-inspecteur,
chef du service de santé du Gouvernement général de l'ile, à
bien voulu se charger d'organiser l'enquête qui sera ultérieu-
rement étendue à tous les postes médicaux de la colonie. Il m'a
fait parvenir dès à présent les résultats ci-après :

19 ILE be MabAGAsCaAR :
Tananarive. — Dispensaires d'Ankadifotsy et d'Isotry (D' Certain) :

70 enfants de 0 à an : . . . Réact. pos: : 0
30 enfants de 1 à 15 ans. . . . Réact. pos. : 3 — 10 p. 109
26 sujets de plus de 15 ans . . Réact. pos. : 0

Hôpital (D' Clouard) :
54 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. pos. : 7 = 13,0 p. 100

Province d’'Andovoranto. Côte Orientale (D' Violle) :

1Lentanisde 0am Man. : Réact. pos 00
80 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. pos. : 1 — 1,2 p. 100
282 sujets de plus de 15 ans . Réact. pos. : 13 — 4,6 p. 100
Province de Tuléar (Dr Millon) :
70 enfants de 0 à 1 an, . . Réact. pos. : 1 — 1,4 p. 100
220 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 25 — 11,3 p. 100
477 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 22 — 12,4 p. 100
Moyennes générales pour Madagascar :
4151 enfantstde 0ha ll an LM MREÉACIE DOS MENT ON 400
384 enfants de 1 à 15 ans . . . Réact. pos. : 36 — 9,3 p. 100
487 sujets de plus de 15 ans. . Réact. pos. : 35 = 7,1 p. 100
Ensemble 022 ujets re 000: 5 ETS SO 72 1,0 p. 100

La tuberculose bovine, d’après le rapport de M. Carougeau,
chef du service vétérinaire, n'existe pas dans les provinces du
Nord {Diégo-Suarez, Vohémar, Majunga, Tamatave). Par contre,
celles du Sud sont gravement infectées et l'infection tend à se
propager vers le centre de l’île. Les régions les plus contaminées
sont Tuléar, Fort-Dauphin, Bétroka, Farafangana. A l’abattoir
de Tananarive, sur 10 358 bœufs abattus en 1911, trois animaux
ont été saisis en totalité et on a fait 767 saisies partielles. La
proportion des bovidés trouvés tuberculeux à été de 7,4 p. 100.
Tous provenaient du Sud de l'ile, où l'infection, probablement
d'importation récente, s'est rapidement étendue par suite du
mode d'élevage en parcs nocturnes Jamais nettoyés, où les

504 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

déjections s'accumulent, constituant d’infects cloaques pendant
les saisons des pluies.

Dans l'Emyrne, les enfants sont toujours nourris au sein.
À Tananarive, la mortalité humaine par tuberculose à varié de
1,6 à 6,5 pour 100 décès de 1901 à 1910. Les formes aiguës de
granulie ou de méningite sont inconnues. Les tuberculoses
sanglionnaires et pulmonaires sont les seules observées.

29 JLEe DE Mayotre-SEYCHELLES (D' Amigues) :
16 sujets de plus de 15*aris ".: : Réact. pos. : 13 — 17,1 p: 100
La population de cette île comprend un assez grand nombre de créoles et
des indigènes plus ou moins métissés des diverses races de l'Inde et de
l'Afrique Orientale.
30 ILE DE LA RÉUNION (D' Vincent).
Saint-Denis. Population urbaine :

18 enfants de 0 à 1 an. . Réact. pos. : 0
423 enfants de 1 à 15 ans. . Réact. pos. : 172 — 40,6 p. 100
190 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 154 — 81,0 p. 100

Sainte-Clotilde. Population rurale.

Indiens :
27 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 12 — 44,4 p. 100
30 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 26 — 86,6 p. 100
Noirs :
424 enfants de 1 à 15 ans. . Réact. pos. : 49 — 40,6 p. 100
78 sujets de plus de 45 ans. Réact. pos. : 12 — 79.4 p. 100

Créoles-blancs :

64 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. pos. : 28 — 43,7 p. 100
32 sujets de plus de 15 ans. Réact. pos. : 24 — 75.0 p. 100
Mulätres :
244 enfants de 1 à 15*ans-".Réact. posit. : 83 — 39,3 p. 100
50 sujets de plus de 15 ans. Réact. posit. : 42 — 84,0 p. 100
Moyennes générales pour la Réunion :
48 enfants de 0 à 1 an . . Réact. posit. : 0
846 enfants de 1 à 15 ans. . Réact. posit. : 344 — 40,6 p. 100

380 sujets de plus de 15 ans. Réact. posit. : 308 — 81,0 p. 100

Ensemble A"245 Sujets PRES NR E NRGED PSS AND AUD

L'infection tuberculeuse est donc aussi commune dans cette
vieille colonie que dans nos grandes villes industrielles fran-
caises. Sa propagation est facilitée par les conditions d'existence

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 505

misérable de la population indigène, laquelle est constituée
par un mélange des races aryennes, indo-malaises et africaines.

La tuberculose bovine est également très commune dans
toutes les exploitations agricoles de l'ile. Elle y a sans doute
été introduite depuis fort longtemps par les animaux provenant
d'Europe pour les croisements. Les bœufs importés du nord
de Madagascar sont sains, mais après un an de séjour dans la
colonie, un grand nombre d’entre eux sont déjà contaminés.
C’est ainsi que sur 23 bœufs malgaches arrivés indemnes un an
auparavant, 17 furent trouvés tuberculeux à l'abattoir de Saint-
Denis (73,9 p. 100). Dans une ferme, sur 26 vaches lailières, le
vétérinaire du Gouvernement en trouve 11 qui réagissent à la
tuberculine, soit 42,3 p. 100.

30 p. 100 des laits du commerce sont reconnus infectés de
bacilles tuberculeux par le D' Vincent au laboratoire bactériolo-
gique de Saint-Denis.

Beaucoup d'enfants créoles sont alimentés au lait de vache.
Mais les enfants indigènes sont nourris presque exclusivement
au sein.

Les formes de tuberculose pulmonaire sont les plus commu-
munément observées ; les autres formes (granulies, ménin-
cites, etc.) ne sont pas plus rares qu'en France.

AFRIQUE SEPTENTRIONALE. — Depuis le début de cette année 1912
seulement, les D'° Edmond Sergent, Gillot et Murat à institut
Pasteur d'Algérie, le D' Benoit, délégué financier et maire de
l'Arba, près d'Alger, et le D° Foley, à Beni-Ounif (Sud-Ora-
nais), ont pu soumettre à l'épreuve de la cutiréaction tubercu-
linique un petit nombre de sujets, européens ou arabes. Voici
les résultats qu'ils ont bien voulu me faire parvenir :

19 Institut Pasleur d'Algérie. Ville d'Alger (D'S Gillot et Murat) :

21renfants1del0*a an... .:-Réactposit M5 "3;-p-.100
33 enfants de 1 à 5 ans. . . . Réact. posit. : #4 — 12,1 p. 100
4% enfants de 5 à 15 ans . - . Réact: posit. 926% 2,p 100

Instilul Pasteur d'Algérie. Banlieue d'Alger (D'° Edm. Sergent et L. Nègre):

44 enfants de 0 à Lan... Réact. posit. : 0

SJhenfants demi 5 ans --"RÉACIMpOSIt 205 — M2; SD 00
5-enfants de 6 à 10 ans . . Réact. posit. : 1 — 20,0: p. 100
DRenanLS de MUA 15 ans, .: . VRÉACE DOS M MOTARD ET
2 sujets au delà de 15 ans. . Réact. posit. : 2 — 100,0 p. 100

20 L'Arba. — Douar Sidi naceur (D'S Benoît et Edm. Sergent). Population

506 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

indigène strictement rurale, vivant sur les contreforts des montagnes de
l'Atlas :

41 enfants de 0 à 1 an. . . Réact. posit. : 0

44 enfants de 1 à 5 ans” "Réact. posit. : # — 9,0 p. 100
34 enfants de 6 à 10 ans . . Réact. posit. : 12 — 35,2 p. 100
20 enfants de 11 à 15 ans . . Réact. posit. : 10 — 50,0 p». 100
42 sujets de 16 à 20 ans . . Réact. posit. : 10 — 83.3 p. 100
47 sujets de 21 à 30 ans . . Réact. posit. : 12 — 70,6 p. 100
45 sujets de 31 à 40 ans . . Réact. posit. : 15 — 100.0 p. 100
7 sujets de 41 à 50 ans . . Réact. posit. : 7 — 100,0 p. 100
5 sujets de 51 à 70 ans . . Réact. posit. : 5 — 100,0 p. 100

30 Oasis de Fiquig, près Beni-Ounif, Sahara marocain (Dr Foley). Berbères
et Arabes du village ou de tribus nomades provisoirement sédentaires dans
la région.

3 énfants de 0 à 1 an. . . Réact. posit. : 0
67 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. posit. : 4 — 6,0 p. 100
64 Arabes ou Berbères au
delävde "15 ans. 200 0 MREACE posit. 147010020700
RIT PETER MN SENTE RARE AOL NO Si. 5: —10
La moyenne générale pour l'Algérie est :
52 enfants de 0 à 1 an. -“-"Réact. posit. : : 1—:,4,$ p400
261 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. posit. : 52 — 19,9 p. 109
423 sujets de plus de 15 ans. Réact. posit. : 65 — 52,8 p. 100
Ensemble #-2436%S1n)e LS PR RASE ER PRE Le A LE Un Se II)
COLONIES FRANCAISES D'AMÉRIQUE.
GuabELourE (D' Sauzeau de Puyberneau).
Basse-Terre :
8 enfants de 0 à 1 an. . . . Réact. posit. : 0
336 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. posit. : 128 — 38 p. 100
257 sujets de plus de 15 ans. . Réact. posit. : 113 — 4% p. 100

Asile d'aliénés de Basse-Terre :

400 Sujets de plus de 15 ans. . Réact. posit. : 45 — 45 p. 100
Ile de la Désirade (1 579 habitants) :
301 sujets de plus de 15 ans. Réact. posit. : 109 — 36,2 p. 100

MarriniQue (Drs Noc, Slévenel et Cozanet) :

227 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. posit. : S1 — 35.6 p. 100
477 sujets de plus de 15 ans . Réact. posit. : 1014 — 57,0 p. 100

La moyenne générale pour ces îles des Antilles est :

8 enfants de 0 à 1 an . + Réact. posit. : 0
563 enfants de 1 à 15 ans. . Réact. posit. : 209 — 37,1 p. 100

834 sujets de plus de 15 ans. Réact. posit. : 335$ — 44,1 p. 100

Ensemble 14/405NS0I)eLS 0 ONE ne 2 NS 41 » p. 100

(4) Parmi ces 14 réactions positives figurent 6 malades de l'infirmerie
indigène, cliniquement tuberculeux (3 tub. pulmonaires; 1 ancien pleuré-
tique guéri depuis 6 mois; 1 adénite cervicale et 1 lupus de la face). Tous les
autres étaient des sujets bien portants ou atteints d’affections légères variées.

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 507

Le D' Noc signale que les formes ganglionnaires de tuber-
culose sont fréquentes chez les enfants ; les formes pulmonaires
graves, surtout chez les créoles noirs et métis.

La tuberculose bovine n'existe pas ou serait extrèmement rare
d’après les vétérinaires des Antilles.

Les enfants sont nourris exclusivement au sein à la cam-
pagne.

Dans les villes, l'habitude créole est de faire bouillir deux fois
le lait avant qu'il soit vendu au marché, afin d'éviter sa trop
rapide altération pendant les transports.

Sur 21 soldats européens, 19 ont fourni une réaction positive,
et sur 63 soldats créoles, 39 ont réagi. Dans la population
civile, les sujets d’origine européenne donnent aussi un pour-
centage de réactions positives de près d’un tiers plus élevé que
celui des créoles; mais la tuberculose évolue beaucoup plus vite
chez ces derniers. Jadis, les noirs esclaves étaient rarement
atteints. Dans l'intérêt du planteur ils étaient bien logés, bien
nourris, bien vêlus et on leur prodiguait des soins médicaux
pour éviter les maladies susceptibles de restreindre le rendement
de leur travail. La liberté a, dans une certaine mesure, changé
à leur détriment leurs conditions d'existence et leur a donné la
phlisie. Ils se contaminent maintenant les uns les autres dans
les cases sordides où ils demeurent et dans les villes ou villages
où leurs habitations, malproprement tenues, forment des quar-
üers qu'il est fort difficile d'assainir. En outre, l'alcoolisme
fait parmi eux de terribles ravages et contribue puissamment à
diminuer leur résistance.

COLONIES FRANCAISES D’ASIE.

Tonxix. — A l’Agpital indigène d'Hanoï, le D' Monzels à
soumis 293 sujets à l'épreuve de la cutiréaction tubereuli-
nique. Il a relevé 146 réactions positives, soit 49,8 p. 100 ainsi
réparties :

3 enfants de 0 à 1 an. . . Réact. posit. : 0

21 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. posit. : 1 — 34,3 p. 100
269 sujets au delà de 15 ans. Réact. posit. : 139 — 51,6 p. 100

508 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

A la Prison civile de la méme ville, le D' Gauducheau, sur 455 sujets, trouve

147 réactions positives, soit 32,3 p. 100 dont :

3 enfants de 0 à 1 an. . . Réacl. posit.
16 enfants de 1 à 15 ans . . Réact. posit. :
436 sujets au delà de 15 ans. Réacl. posil. :

Le D' Gauducheau relève, d'autre part :

A l'École Franco-Annamite de Yen-Phu (Hanoi) :

— 16 00p- 100
141 = 33,1 p. 100

Sur 255 élèves de 6 à 15 ans. Réact. posit. : SL — 31,8 p. 100

G'professeurs 1402 LEE Réact. posit. :

Au village de Thaï-Hà-Ap, à 5 kilomètres d'Hanoï :

5 — 83,3 p. 100

Sur 20 sujets adultes. . . . . Réact. posit. : 12 =#2;5 p.100

Au village de Gia-lam, près de Hanoï, sur la rive gauche du Fleuve

Rouge :

Sur 3 enfants de 0 à 1 an . Réact. posit. :

0
Sur 96 enfants de 1 à 15 ans. Réact. posit. : 12 — 12,4 p. 100
0

DUT: 3 /adulies Rat SEE Réact. posit. :

Au village de Ha-Dong, à 11 kilomètres de Hanoï, sur la rive gauche du

Fleuve Rouge :

Sur 3 enfants de 0 à 1 an. Réact. posit. :

(]

Sur 323 enfants de 1 à 15 ans. Réact. posit. : 37 — 10,2 p. 100

DUT 39 AdUIteS 2077. C0 RS Réact. posit. :

A l'École de Bac-Ninh, le D' Martin trouve :

9 — 27,2 p. 100

Sur 4143 enfants de 5 à 15 ans. Réact. posit. ABUS 0Np EL 00

et à la Prison civile de Bac-Ninh :

Sur 77 sujets adultes . . . . Réact. posit. : 51 — 74,0 p. 100

Les moyennes générales pour le Tonkin sont donc :

12*enfants de 0 à 1/an . -"-"/Réact. posit. : 0

824 enfants de 1 à 15 ans. . . Réact. posit. : 158

19,1 p. 100

|

844 sujets au delà de 15 ans . Réact. posil. : 369 — 43,7 p. 100

Au Llotal : 4.680 sujets ont fourni . . . . . Réact. posit. : 527 31,4 p. 100

AxNAM. — À AHué, ville de 60.000 habitants, les D'° P. Noël
Bernard, L. Koun et Ch. Meslin ont soumis à l'épreuve
2825 sujets en divers milieux (écoles, miliciens, fonctionnaires
indigènes, commerçants, ouvriers él paysans, prisonniers et

filles publiques).

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANCAISES 509

Les résultats, d'après l’âge, se classent comme suit :

91 enfants de 0 à 1 mois. . . . . Réact. posit. : 0
77 enfants de 2 mois à 2 ans. . . Réact. posit. : 22 68100
133 enfants de 3 à 5 ans. . . . . Réact. posit. : JS ED 1400
206 enfants de 6 à 10 ans. . . . . Réact. posit. : 51 — 94,1 p. 100
406 enfants de 11 à 15 ans. . . . . Réact. posit. : 118 — 23,3 p. 100
532 sujets de 16 à 20 ans . . . . . Réact. posit. : 175 — 32,9 p. 100
591 sujets de 21 à 30 ans . . . . . Réact. posit. : 9264 — 44,7 p. 100
699 sujets de 31 à 70 ans . . . . . Réact. posit. : 429 — 63,5 p. 100
SUD 2820) EU LSE F Sie DS CON ER à ©: : 1.052 31,2 p. 100

Et d’après les milieux :

Sur 720Vélèves des écoles”... . . . . . Réact, posit. 45121; 1%p: 100
Sur 427 étudiants des écoles supérieures

de Mandarinat, membres du

corps enseignant et haut per-

sonnel des bureaux. . . . . . Réact. posit. : 90 — 30,8 p. 100
OUTII98 PHSONMETENW- EU 1e TRéact:4posit MEN —ETED D 100
DUMAS HlleS publiques ELA." À | Réact. posit. : 8 — 34 8 p. 100
Sur 23 mères de 22 à 40 ans, à la Mater-

MAÉ M A En ere eente + . RÉACT.: DOS OE-ObDA Ne TUD
Sur 23 enfants de 4 à 15 jours, à la Ma-

HORNINES ote ste de "Hi. : RÉACEMDOSItTE: Rte D el00

À Quang-Binh, sur 157 sujels de tous âges, le D' Poux trouve T0 réactions
positives, soit 44,6 p. 100, et à Fai-foo, chef-lieu du Quang-Nam, sur 27 tra-
vailleurs chinois immigrés, âgés de 22 à 45 ans, 27, soit 100 p. 100 de réac-
tions positives.

Au total, en Annam, 3.009 sujets fournissent 1.149 réactions positives, soit
une moyenne de 38,1 p. 100

Cocnixcuixe (D' Brau).

À l'École cantonale de Govap :
Shenfants/de6àa115lanst02% .‘ Réact. posit:M0"=MH/81p100
A l'École d’An-loïi-Xa :
65entants de 6a490ans 0.0. Réact. poste MS D u00
A l'École de Gia-Dinh, près de Saïgon :
4125 enfants de 6,4 131ans.. ..... Réacl poste 2 p 100
A l'École normale de Gia-Dinh :
57 sujets de 15 à 20 ans . . . . Réact. posit. : 14 — 24,6 p. 100
Au total, en Cochinchine. sur 332 sujets, 53 réactions positives. soil une

moyenne de 16 p.100; mais cette statistique ne comprend aucun adulte âgé
de plus de 20 ans.

510 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
CawBonGe (D' Crossouard).

A Pnom-Penk :

43 -enfants:de0 à 1 ans. ... . - = Réact:posif à: 3 —;14p:400
15/enfants;de Là 15 ‘ans... .#. Réactiposihe 12 — 16 p.100

A Koïmpong-Cham, 125 sujets inoculés ne fournissent aucun résultat
positif.

A Soai-Rieng :

40 enfants de 1 à 15 ans . . . . Réact. posit. : 0
128 sujets adultes : 7.10%: .10 Réactiposte té —3;1:p40p

Au total, au Cambodge, sur #11 sujets, 19 réactions positives,
soit 4,6 p. 100. La tuberculose est d’ailleurs signalée par les
médecins comme extrèmement rare dans ce pays. Elle n'y
existe que depuis l'invasion chinoise et annamile. Les Euro-
péens y sont très peu nombreux.

La tuberculose bovine est inconnue dans toute l’Indochine,
sauf au Cambodge, où elle a été signalée par M. Mérals sur des
animaux importés d'Europe pour le croisement avec les races
indigènes. Au Tonkin el en Annam, les vétérinaires du Gouver-
nement n'ont jamais eu l’occasion de l’observer. M. Bauche, de
Hué, attribue cette immunité à ce que les animaux vivent
partout au grand air, quelquefois seulement parqués la nuit,
dans des hangars ouverts à tous les vents.

Les enfants indigènes ne boivent Jamais de lait de vache. Ils
sont alimentés exclusivement au sein ou avec du riz mâché par
la mère et imprégné de salive. Les D Brau en Cochinchine,
et Noël Bernard en Annam, ont pris la peine de relever les anté-
cédents d’un certain nombre de sujets qui leur ont fourni des
réactions positives. [ls ont pu constater la fréquence des conta-
minabons familiales. C’est ainsi que, dans une famille de 13 per-
sonnes, à Hué, 11 réagirent positivement. Or, dans cette famille,
une jeune femme de vingt-cinq ans venait de succomber à la
tuberculose pulmonaire.

Les formes les plus communément observées sont les tuber-
culoses pulmonaires et ganglionnaires. L'extrème rareté des
tubereuloses osseuses ou articulaires est affirmée par tous les
médecins.

L'infection tuberculeuse a probablement été introduite depuis

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 511

longtemps en Indochine par les Chinois, car les centres les
plus atteints sont ceux qui ont été le plus anciennement péné-
trés par la civilisation chinoise. En Chine, la tuberculose est
extrèmement commune, plus peut-être qu'en Europe dans
toutes les grandes villes. On sait aussi qu’au Japon sa fréquence
estconsidérable et que, dans ce pays, les localisations primitives
intestinales s'observent couramment chez les adultes comme
chez les enfants, bien qu'ils ne soient jamais alimentés au lait
de vache. La tuberculose bovine n’a d’ailleurs été observée au
Japon qu'à partir de 1875, à la suite d'importations de bélail
étranger (Xifasato) (1).

COLONIES FRANCAISES D 'OCÉANIE.

De Nouvelle-Calédonie et de Tahiti, les D'° Orfholan et Heusch
n'ont pu m'adresser que quelques renseignements d'ordre
sénéral. Tous deux insistent sur ce fait déjà bien connu que la
tuberculose et la lèpre, récemment importées par les Européens
el par les Chinois, font aujourd'hui de terribles ravages dans
toutes les iles du Pacifique. La tuberculose décime les habilants
des Loyalti, des Nouvelles-Hébrides, de Tahiti et des Marquises.
Dans la population canaque de Nouvelle-Calédonie, elle se
répand aussi avec une intensité terriliante. Les formes aiguës
de granulie et les tuberculoses pulmonaires évoluant en trois à
quatre mois sont le plus communément observées. Chez les
enfants on trouve souvent des formes ganglionnaires, mais
jamais de tuberculoses osseuses ou articulaires.

Il semble que l'intensité de l'infection tuberculeuse, dans
chaque île, soit proportionnelle au nombre d'Européens. Ii est
établi, d'autre part, que les Canaques, transportés dans les villes
de la Côte occidentale d'Amérique, y succombent très rapide-
ment à la tuberculose. C’est ainsi qu'il y a quelques années, un
spéculateur anglais introduisit comme colons à Lima (Pérou),
deux mille indigènes des Marquises. En moins de dix-huit mois
les trois quarts d’entre eux étaient morts de phtisie!

Les indigènes de races polynésiennes ne boivent pas de lait
de vache. Du reste, les bovidés sont d'importation très récente

(1) Zeitsch. für Hygiene, 16 déc. 1904, p. 4171.

512 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ed

dans leurs îles et l'élevage n'y est encore pratiqué que dans
une mesure fort restreinte.

ConcLUSIONS.

De l’ensemble des faits réunis au cours de cette enquête sur
l'épidémiologie de la tuberculose dans les Colonies françaises,
se dégagent les conclusions suivantes :

Dans les régions tropicales, la tuberculose n'est pas sensi-
blement influencée par les climats. Sa fréquence est en rapport
direct avec la civilisation. Elle est extrêmement rare parmi les
populations indigènes de race noire, dans les pays où l'Européen
n'a pénétré que depuis peu d'années; mais la proportion des
sujets contaminés s'accroît chez elles avec l'intensité des
échanges commerciaux et de l'immigration étrangère.

Aucune des races qui peuplent nos colonies ne présente d'im-
munité contre l'infection tuberculeuse. Toutes accusent au
contraire une sensibilité d'autant plus grande qu’elles ont été
précédemment mieux protégées contre limportalion du bacille.

Les races qui se montrent le plus sensibles et chez lesquelles
la tuberculose se manifeste dans ses formes le plus rapidement
mortelles sont les dernières venues à la civilisation : Polyné-
siens de l'Océanie, Nègres de l’Hinterland Africain. Dans nos
anciennes Colonies de la Réunion et des Antilles (Martinique
et Guadeloupe), l'infection tuberculeuse est à peu près aussi
intense que dans les grandes villes européennes : 81 p. 100 à
la Réunion chez les sujets âgés de plus de quinze ans, 57 p. 100
à la Martinique.

Dans les Colonies plus récentes, on constate que le nombre
des sujets infectés progresse partout où des établissements
européens ont été créés et, qu'inversement, les formes de tuber-
culose observées sont d'autant moins graves que l'infection est
plus répandue et plus ancienne.

Ces faits apportent une intéressante confirmation aux concep-
tions basées sur mes expériences avec C. Guérin et que J'ai
développées déjà dans plusieurs notes ou mémoires (1). Ils

(4) Voir La Presse Médicule, 21 février 1912 (Quelques aperçus nouveaux sur
la question de la vaccination contre la tuberculose).

LA TUBERCULOSE DANS LES COLONIES FRANÇAISES 513

montrent que, tout comme les singes transportés des forêts
africaines dans nos villes d'Europe, les hommes qui sont nés
et ont grandi à l'abri de l'infection tuberculeuse, par exemple
les Canaques des iles polynésiennes ou les Nègres des villages
soudanais, se contaminent avec la plus grande facilité lorsqu'ils
se trouvent exposés. à un contact infectant. En outre, la tuber-
culose affecte presque constamment chez eux des formes graves
(granulie ou phtisie à évolution rapide). Par contre, là où l’in-
fection bacillaire est depuis longtemps répandue, le nombre
des sujets chez lesquels les réactions tuberculiniques locales
révèlent l'existence de lésions latentes ou occultes, est énorme ;
la contamination est alors précoce : elle s'effectue dès le jeune
âge et les formes de tuberculose observées sont presque toujours
chroniques, avec tendance aux localisations osseuses, articu-
laires ou viscérales,

L'enquête qui précède nous apporte d'autres enseignements
précieux.

C'est ainsi qu'il n'est plus possible de soutenir l'hypothèse, for-
mulée par Von Behring en 1903, que la tuberculose nulmonaire
de l'adulte n'est que la manifestation tardive d'une infection, le
plus souvent d'origine bovine, contractée dès les premiers mois
de la vie à la suite de l'ingestion de lait de vache baculhfère.

Nous constatons d'abord que, parmi les populations indi-
gènes de l'Afrique Occidentale par exemple, qui sont encore
peu atteintes, où parmi celles d'Indochine qui le sont davan-
lage, les enfants sont trouvés constamment indemnes jusqu’au
sevrage. Ce n'est qu'à cette époque que s'offrent à eux les occa-
sions de contacts infectants familiaux ou autres. En Indocnine,
les grands-parents, le père, la mère ou les enfants plus âgés
mâchent le riz et l'imprègnent de leur salive avant de l’intro-
duire dans la bouche des tout petits. En Afrique occidentale
on fait de même pour le couscouss. Plus tard la pipe, le crachoir
à bétel ou la noix de Kola à chiquer passent d’un membre de
la famille à l’autre. On ne saurait donc être surpris de ce que,
là où elle existe, l'infection se propage avec une extrème facilité,
et beaucoup plus souvent par les voies digestives que par les
voies respiratoires.

Dans aucun cas, du moins en Afrique Occidentale, aux

33

514 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Antilles, en Indochine et en Océanie, l'origine bovine de la
tuberculose ne peut être accusée ni même soupçonnée, puisque
les jeunes enfants ne boivent jamais de lait de vache et que les
races de bovidés indigènes, lorsqu'il en existe, sont encore
complètement épargnées par linfection tuberculeuse. Dans le
sud de Madagascar et à la Réunion seulement, la maladie, d’im-
portalion européenne pour l'espèce bovine comme pour l'espèce
humaine, commence à se répandre. Il est possible qu'elle inter-
vienne alors pour une faible part comme facteur de contami-
nation de l'homme.

Mais on ne peut qu'être frappé de ce fait qu'en Annam par
exemple où, dans certains milieux (Écoles supérieures de man-
darinat, prisons, etc...), la proportion des sujets infectés atteint
ou dépasse 80 p. 100, chiffre égal à celui que nous trouvons
dans la population ouvrière de nos grandes villes du nord de
la France, la contamination d’origine bovine n’entre pour aucune
part. Il en est de même dans les îles polynésiennes où la tuber-
culose est si extraordinairement fréquente et meurtrière. C'est
donc que, dans ces pays, /a contagion interhumaine intervient
seule, avec une intensité égale ou supérieure à celle qui s'exerce
au sein de nos populeuses agglomérations d'Europe.

ACTION COMBINÉE DU MANGANÈSE ET DU ZINC

SUR LE DÉVELOPPEMENT
ET LA COMPOSITION MINÉRALE DE L'ASPERGILLUS NIGER

par GABRIEL BERTRAND et M. JAVILLIER.

Nous avons déjà exposé, dans un précédent mémoire, le but
que nous poursuivons dans nos études actuelles sur l’Asper-
gillus niger (1). I suffira done de le rappeler brièvement.
Lorsqu'on introduit dans le milieu de culture d'une plante, à
côté des éléments fondamentaux comme l'azote, le phosphore,
le potassium, certains éléments tels que le manganèse, le
znc ou le bore, — ceux-ci à l’état de traces seulement, — on
obtient des accroissements de récolte, parfois même considé-
rables. Il est clair que ces augmentations ne se manifestent pas
indifféremment quels que soient l'élément catalytique employé.
la dose ajoutée et l'espèce végétale envisagée. IT appartient à
l'expérience de décider, parmi les éléments, ceux qui sont
favorables et à quelles doses, pour une espèce donnée. Pour
nous en tenir à l'Aspergillus niger, rappelons que le zinc exerce
sur lui une action particulièrement puissante et que le man-
ganèse se montre également, à des doses il est vrai plus
élevées, un adjuvant remarquable de sa végétation.

Nous nous sommes demandé si l'association du zinc et du
manganèse n'aurait pas une action favorisante plus marquée
que l'emploi d’un seul de ces éléments. La question est d’un
grand intérêt au point de vue théorique, et elle apparaît plus
capitale encore au point de vue pratique, puisque, si les résul-
lats sont positifs, on peut espérer les voir s'étendre aux plantes
de grande culture, c’est-à-dire à des végétaux dont l'importance
économique est considérable.

Nous avons donc recherché quelle action exerce sur le déve-
loppement de l’Aspergillus niger la présence simultanée du
manganèse et du zinc dans son milieu de culture. Les expé-
riences ont été préparées comme nous l'avons décrit dans un

4) Ces Annales, 4° série, t. XI, p. 241, 1912.

516

précédent mémoire, avec des corps aussi purs que possible.

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Après un même temps de végétation, nous avons comparé les

P 8 ,

poids de récolte obtenus en l'absence de manganèse et de

zinc, en présence de zinc seul, de manganèse seul, enfin en

présence de ces deux éléments réunis.
Le tableau ci-après résume les résultats obtenus :

FORME

des vases.

Matras

de 2 litres.

Cuvettes
rectang.

Flacons
cylin-
driques

de
0 lit. 500.

Flacons
coniques
de
INTER

— RSS —

VOLUME
du liquide

500

Id.
1d.
Id.

Id.

TEMPÉRATURE

DURÉE
de la culture.

TÉMOINS

=

=

[PACE Re

_—

© © IN

Récoltes.

ZINC
OS
ag Ré-
Dilutions. dites.

î gr.
100.000 | 2 8
Id. 9 57
Id. 2 23
Id. 3 01
Rs |
500.000
Id. 2 53
Id. 2 61
Id. 2 80
Id. 2 87
Id. 2 87
PME 6 -
500.000
_24$: Aer ] 09
25.000.000
1
10.000.000! ! !!
1
 9
1.000.000 | |
1 L 1%
20.000.000! *
1
25.000.000! * 4
Id. h E4
10.000.000| + !°
ld. 5 94
1 DR
5.000.000 | ” ”!
1 ETS
50.000 pres
Id. 4 13

MANGANÈSE

Zn
0 + Mn
; Ré-
Dilutions. Re coltes.
: gr gr.
5.500 i 55 | 2 70
— 1 33 | 2 94
5 — 1 42 | 2 38
1
2 3 61
ro.vov | 2 10
Id. D RO el RE (7
Id. 9 38 || 2:98
Id. 2.65! |: 2:K0
Id. | 2 84 | 2 90
[d. 2 90 | 3 10
Id. 2 92 | 3 08
1 PCI
5.000 2 79 4 35
1 Q) »
95.000 0 82 | 1 16
1
10.000 0278 | A3
1
th 2
couv ES PE
—— à I 4 S2
—— 3 55 | 4 39
49.
Id. 3 54 | 4 71
1
10-600 | MES
Id. 3 81 | 5 68
l
5.000 4 25 | 6 17
Id. SANS lei
Id. 2105115 47

ACTION COMBINÉE DU MANGANÈSE ET DU ZINC 517

L'examen de ce tableau montre nettement qu'on obtient des
poids de récolle plus grands par l'addition simultanée de zinc
et de manganèse que par l'addition d'un seul de ces métaux.

Le poids de matière sèche obtenu avec le liquide témoin
étant 100, les quantités de matières construites se sont élevées
au plus : en présence de manganèse seul à 170, en présence de
zinc seul à 242, et en présence de ces deux éléments réunis à
284. Ce sont là, du moins, les chiffres maxima atteints dans les
expériences en matras ou en flacons, résumées ci-dessus. Dans
l'expérience en cuvettes rectangulaires, également citée, les
chiffres se sont trouvés les suivants :

En l'absence de zinc et de manganèse. . . . . . . . . . 1400
EnADrÉSCnCe CENMMANSANESE,. 2 . . «LUE TE
BHIPRESeNCE De ZINEMRENBU. .,. .\) CNINROERSS 282
Emiprésence detzincietide manganèse 00

Remarquons que le zinc et le manganèse additionnent leur
action, dans une certaine mesure, non seulement aux doses
oplima de chacun d'eux, mais aussi aux doses inférieures à
celles-ci.

Une nouvelle question se greffe naturellement sur celle que
nous venons de résoudre. Comment se comporte l’Aspergillus
vis-à-vis du zinc et du manganèse, au point de vue de la fixa-
tion de ces métaux, lorsqu'il se trouve en présence de l’un et
de l’autre à la fois?

Lorsque le zinc est seul, nous savons qu'il est fixé intégra-
lement si les doses de métal sont extrêmement petites, puis par-
tiellement lorsque celles-ci s'élèvent. Avec le manganèse, nous
n'avons Jamais vu, au moins pour les doses auxquelles son
action était nettement marquée, le métal fixé en totalité; les
quantités fixées étaient toujours très éloignées des quantités
offertes. Que pouvait-il se produire avec les deux éléments
associés ? La plante fixerait-elle chacun d’eux dans les mêmes
proportions que s'il était seul, ou bien, au contraire, en fixerait-
elle une proportion différente, le taux de fixation de l’un et
l’autre élément pouvant ou s’'abaisser ou s'élever? L'expé-
rience seule était capable de répondre à ces questions, de faire
connaître laquelle des hypothèses possibles se réalise.

Nous avons d'abord cherché à résoudre La question de la

518 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

fixation du manganèse en présence du zinc. La possibilité de
doser le manganèse dès le millième de milligramme (1) ren-
dait, en effet, le problème plus abordable de ce côté.

Voici les résultats obtenus dans un certain nombre d’expé-
riences : Nous faisons figurer dans le tableau ci-dessous : d'une
part, les quantités absolues de manganèse fixées par les cul-
tures faites en présence de ce métal seul et en présence de ce
métal associé au zinc; et, d’autre part, les quantités de manga-
nèse fixées, dans l’un et l’autre cas, par 100 de matière sèche.
Il est clair que ce sont ces derniers chiffres qu'il importe
surtout de comparer entre eux.

ER Rp M EL 2 TRAD DT A EAU TI CE TR 07 HE RS RE 21 RS RE SES a

VOLUME POIDS DILUTION Fo DILUTION Pn POIDS ne HE
du de Zn mac e Nu NA des de de matière
milieu. |introduit. CAES ntrodute CNRS récoltes. | Mn fixé. sèche.
c.c. | milligr. millier, or. millier.
1
100 0 » 4 35. OUÙ 0 82 0 052 0,0063
{ 1 a ñ |
0 DORA en Eee ee Eat Ta
100 | O0 ES oo : 25 000 22 QAEN A Er UUE
10 DES 00 : 8
: Hope é 10.000 Rs 0 115 | 0,0148
1 Il
ER PRE ER Dee 9 9
100 0 O1 | 10.000.000 10 10.000 1015 0 225 0,0199
| |
|
1
93 » 25 ——— DNS | 8
> 250 0 25 10.000 22580 20190 0,0080
250 0 1 2% 1 na
25 ) 500.000 29 T0. 00u 2 98 0 560 0,0186
(12501: 010 » 90 1929 | 0 280 | 0,0197
10 5.00% : à dé
(250 | 25 100. 00U 50 go | 238 | 047% | 0,0199
| | 9 1 ds
( 5001" 0 » 20 35.000 3 D4 0 180 0,0050
5 j | il En n
Û 500 | 0 02 35 000.000! 2 on 0 300 | 0,0062
| Pa 1 € » D WA È
; 500 0 | » 50 10.000 3 S1 0 340 0,0085
| | 1 il
500 0 05 | 5 = 5 68 É 1
) 05 25.000000 50 | 50 000 5 68 1 100 0,0194

ARS AR OR A EDR SRE LT D VD EE PUR | 0 2 ES AORSE CREER CRE SRE RENE Ÿ

1) G. BERTRAND, Bull. Soc. Chim., 4° 5!, L. IX, p. 361, 1911.

ACTION COMBINÉE DU MANGANÈSE ET DE ZINC 519

Ces résultats montrent que /e manganèse s'accumule en pro-
portion plus élevée lorsqu'il est associé au zinc que lorsqu'il est
seul.

Toutefois ce fait ne semble exact qu'au-dessous d'une cer-
taine limite. Évident lorsque les doses de zine et de manganèse
introduites dans le milieu de culture sont très petites, il
perd de sa netteté lorsque les doses d'éléments catalytiques
s'élèvent.

Ainsi, dans l'expérience IV, où la dose de manganèse
atteint 1/5.000 et celle de zine 1/100.000, la proportion de
manganèse fixée reste, en présence de zinc, sensiblement la
mème qu'en l'absence de ce métal. Peut-être même le phéno-
nène prend-il une allure inverse lorsque les doses des élé-
ments catalytiques s'élèvent encore davantage. Mais nous nous
bornerons à considérer le cas des petites doses, cas qui est d’ail-
leurs celui des milieux naturels où zinc et manganèse ne se
présentent, en général, qu'à l’état de traces.

Un phénomène du même ordre se produit-il avec le zinc?
C'est-à-dire, y a-t-il fixation supplémentaire de zinc en
présence de manganèse”? Pour les doses extrèmement petites,
celles que l'un de nous à qualifiées de « doses nécessaires » el
de « doses utiles » (1), la fixation du zinc étant totale lorsque
cet élément se trouve seul, la question ne se pose pas. Elle ne
peut être envisagée que dans le cas où le zinc est en excès dans
le milieu et cesse d'être complètement utilisable sans être
(toxique.

Or, ces doses qui débutent, d’après des expériences anciennes,
vers le 250.000°, sont encore d’un ordre de grandeur tel
qu'elles se prètent mal à des déterminations quantitatives
exactes, à moins que l’on multiplie beaucoup les cultures pour
opérer sur une forte quantité de mycélium. Nous nous sommes
contentés, dans la plupart des cas, de vérifier que le zinc était
présent dans les récoltes obtenues avec des milieux additionnés
de zinc et de manganèse, comme dans les récoltes privées de
ce dernier élément.

Dans l’une de nos expériences (exp. IV), où le dosage
précis était possible, nous avons trouvé :

1) M. Javizzier, Thèse de doctorat ès scienses. Paris, 1908.

520 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ZINC FIXÉ
— ——
Poids Par pour 100 de
de récolte matière sèche
récolte en en
en grammes. milligr. milligr.

Culture en présence de Zn (poids ab-
solu de Zn:2 millig.5; dilution :
100 000 RE PETER REES 2,93 0,55 0.024
Culture en présence de Zn et de Mn
(Zn comme ci-dessus; poids absolu
de Mn: 50 milligr.; dilution du Mn:
1/5,000)2 Lee 2, SRE 2 38 0,51 0,021

Le zinc est donc fixé par la moisissure, en présence comme
en l'absence du manganèse; mais, dans l'expérience considérée,
le phénomène de Fate D eutaire ne s'est pas mani-
festé. Si l’on remarque que la dose de zinc employée dans cet
essai a été relativement grande, on est conduit à admettre que
nous avions sans doute atteint la zone, signalée à propos du
manganèse, où le phénomène d’ ation cesse d'être
observable.

Ce n'est pas seulement sur leur fixation réciproque que
les deux éléments catalytiques ajoutés au milieu de culture
influent, c’est sur la fixation globale des éléments minéraux. Le
zinc seul ou le manganèse seul suffisent déjà à accroître la
minéralisation totale de la plante. Voici, pour en témoigner,
quelques chiffres obtenus dans des expériences faites, dans des
conditions diverses, en présence de doses variées et toujours
très petites de zinc ou de manganèse :

PROPORTION DE CENDRES P. 100
DE MYCÉLIL M SEG OBTENU :
Rhin M LE

en l'absence en présence
de Zn et de Mn. de Zn
Expérience 7. . MT à 3,25 3,18
Expérience) .8 NRA 3,29 3.49
en présence de Mn.
Expérience. 94 PER RERe À DCE 3.10
Expérience 10... PRE 3,10 3,80
Expérience 11 RCE JE 3.81

Cette accumulation de matière minérale se manifeste aussi
bien lorsque de petites quantités de zinc ou de manganèse inter-
viennent à la fois et, à part une exception dans le tableau

ACTION COMBINÉE DU MANGANÈSE ET DU ZINC 521

ci-dessous, se trouve même plus marquée. Il est évident qu’il
ne faut comparer entre eux que les chiffres d’une même expé-
rience.

PROPORTION DE CENDRES P. 100 DE MYCÉLIUM SEC OBTENU :
TT " ———

en l’absence en présence en présence en présence
de Zn et de Mn. de Zn. de Mn. de Zn et de Mu.
Expérience 1. 3,20 Jon 3,39 3,61
Expérience 2. 3,25 3,80 3,41 3,63
Expérience 3. 3,65 3,11 3,99 4,30

Ces faits ne sont pas isolés. Déjà, chez les plantes supé-
rieures, on a vu le taux des cendres s’accroître sous l'influence
du manganèse ajouté au sol comme engrais. L'un de nous l’a
observé sur l’avoine (1), et Passerini sur le lupin (2).

Il est donc permis de penser que nous nous trouvons là en
présence d’un fait d'ordre vraiment général.

En résumé, les observations consignées dans ce mémoire
établissent une notion nouvelle : celle de l’action cumulative
des éléments catalytiques; elles nous paraissent, à ce titre,
présenter un réel intérêt pratique dès l'instant où on les étendra
aux végétaux de grande culture (3).

Ces observations sont en outre d'accord avec la théorie qui
inspire nos recherches, théorie d'après laquelle les éléments
rares (} l'organisme, loin d'être des éléments sans intérêt phy-
siolo..ique, loin même de n'être que de simples excitants éner-
cétiques du protoplasma, sont en fait des éléments actifs de la
cellule, des catalyseurs indispensables aux transformations
chimiques dont les êtres vivants sont le siège.

(41) G. BERTRAND, Comptes rendus de l'Acad. des sciences. &. CXLI, p. 1255,
1905.

(2) Boll. Ist. agr. Scandici, p. 3, 1905.

(3) A peine avions-nous énoncé cette notion (Comptes rendus de l'Acad. des
Sciences, t. CLII, p. 900, mars 1911), qu'elle recevait une vérification et,
en même temps, une extension par les intéressantes recherches de J. Stoklasa
{Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLIT p. 1340, mai 1911). Ces recher-
ches établissent en effet, que le manyanèse et l'aluminium associés à doses
convenables accroissent, plus que chacun de ces métaux pris isolément, les
récoltes de blé, de seigle, d'orge, d'avoine et de sarrazin.

ACTION COMPARÉE
DES MICROBES DE LA PUTRÉFACTION
SUR LES PRINCIPALES ALBUMINES

par H. TISSIER.

(Travail du laboratoire du professeur Metchnikoff.)

Nous avons étudié, en 1902 et 1903, avec Martelly et Gas-
ching, la putréfaction spontanée de la viande de boucherie et
du lait. Nous avons isolé des produits putrides les mêmes
bactéries, ef nous avons pu nous rendre compte que la marche
de ces fermentations était sensiblement la même; la constitu-
lion chimique et physique des milieux causant seule quelques
différences.

Il nous a semblé utile de continuer ces recherches en compa-
rant entre eux ces divers microbes protéolytiques. Nous avions
bien vu, au cours de ces études, que certaines espèces bacté-
riennes avaient une puissance supérieure à celle des autres,
que les variétés anaérobies agissaient plus rapidement sur la
molécule albuminoïde:; mais nous n'avions pas poussé plus
loin nos recherches; nous n'avions pas mesuré cette action.

D'autre part, nous n'avions employé que les albumines des
muscles et du lait; il est intéressant de voir si toutes les autres
matières protéiques se comportent de mème vis-à-vis des
diaslases microbiennes.

Il importe au biologiste comme au médecin d’être renseigné
sur ces faits.

On connaît maintenant, et beaucoup par les travaux de ce
laboratoire, toute l'importance de la putréfaction intestinale
sur l’évolution de l'organisme humain comme dans la genèse
des infections du tube digestit. Nous savons que, chez l'enfant,
en réduisant au minimum la fermentation putride des déchets
alimentaires, on diminue de beaucoup les chances d'infection
intestinale; en augmentant, au contraire, ces fermentations
par des régimes surazotés, on décuple ces mêmes chances.

PUTRÉFACTION DES ALBUMINES 523

Etablir un régime suffisant, inoffensif, est la grande préoccu-
pation des hygiénistes et des médecins.

Nous avons choisi, pour ces nouvelles expériences, les prin-
cipaux protéolytiques de la putréfaction spontanée des viandes
de boucherie : le B. Perfringens, le B. Putrificus de Bienstock,
le B. Proteus vulgaris. Pour être mieux renseignés sur le pou-
voir destructif des bacilles putréfiants intestinaux, nous avons
pris des échantillons de B. Perfringens et de Proteus isolés des
matières fécales : le premier provenait des selles normales
d’un adulte soumis depuis cinq ans au régime végétarien; le
second, des selles d’un enfant atleint de diarrhée chronique.
Nous leur avons adjoint deux autres protéolyliques puissants
venant du tube digestif humain. Le premier, isolé et étudié
par M. Metchnikoff au point de vue morphologique, et par
Berthelot au point de vue chimique, le B. Sporogenes: le
second, isolé par nous des selles d’un enfant atteint de diar-
rhée avec coliques violentes et, à cause de ce détail, dénommé
B. Colicogenes. Voici la description succincte des caractères
morphologiques'et chimiques de cette dernière espèce :

Bàätonnet rigide à bouts arrondis de la taille du B. Perfringens, la plupart
du temps isolé, se groupant parfois, dans les cultures jeunes, en courtes
chaïineltes de 2 à 3 éléments. Il se colore par les colorants basiques ordi-
naires et par la méthode de Gram. Il ne donne pas, avec l'iode, la réaction
de la granulose.

Il est très mobile et donne de petites spores rondes très résistantes, Ces
spores prennent naissance dans une extrémité du bacille. Elles se produisent
rapidement dans les milieux de culture ordinaire et même dans les milieux
sucrés. C’est un anaérobie strict qui ne se développe bien qu'à 57 degrés.

Il donne, dans la gélose sucrée profonde, des colonies lenticulaires très
régulières analogues à celles du B. Perfringens, n'émettant jamais de prolon-
gements. Rarement, ces colonies présentent une à deux encoches sur le
bord tranchant. Au bout de vingt-quatre heures, le milieu est complètement
disloqué par les gaz. Il ne pousse que sur la gélatine à 31°. Le milieu est
peptonisé et ne se solidifie plus par le refroidissement.

Dans les milieux liquides peptonisés, avec ou sans sucre, il pousse en
troublant le milieu. Petit à petit, il se forme au fond du tube un dépôt gru-
meleux sans caractère spécial. Il s’en dégage, au bout d'un certain temps,
une odeur assez particulière rappelant celle du fromage de Gruyère. Le lait
est rapidement peptonisé. Il se transforme en un liquide sirupeux jaune
clair à la surface duquel nagent un ou plusieurs blocs caséeux.

C’est un ferment très actif des albumines naturelles : blanc d'œuf, fibrine,
viande, caséine, gélaline.

Il ne donne, au cours de ces attaques, ni phénol, ni indol: mais une
notable quantité d’ammoniaque et d'H?S.

524 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Il attaque faiblement le glucose et le lactose, nullement le saccharose.
Son acidité d'arrêt est de 1,47 p. 1.000 en SO*H°. Il est donc capable de
détruire, même en milieu sucré, toute espèce d'albumine. La méthode de
Duclaux montre qu'au cours de cette attaque des sucres et de la peptone,
il donne un mélange d'acide acétique et d'acide valérianique (2 du premier
pour 1 du second). Il n’attaque pas l’amidon.

C'est donc un ferment simple comme le Putrificus, le Vibrion septique, le
B. Sporogenes.

Il diffère de ces trois espèces par ses caractères morphologiques, biolo-
giques et chimiques. Il n’est pas pathogène pour la souris.

Après avoir rajeuni également les cultures de ces cinq
espèces, nous les avons ensemencées dans de grands ballons
contenant de l’eau peptonée (peptone Chapoteau = 1 p. 100
d’eau distillée) et un poids donné de matière albuminoïde.

Pour plus de commodité, nous avons pris dans le commerce
des matières protéiques désignées : albumine du sang, albumine
du jaune d'œuf, fibrine sèche, albumine végétale, fibrine végétale,
caséine du lait, caséine végétale. Ces deux derniers corps n'ont
pas donné de culture appréciable dans une première série
d'expériences, à cause de leur acidité. En les neutralisant et
en les stérilisant ensuite à 120 degrés, ils subissaient une alté-
ralion profonde. Nous avons dû les mettre de côté.

Le produit désigné A/bumine du sang était un mélange
d’albumine et de globuline. 18 p. 100 étaient précipitées à
30 degrés par le sulfate de magnésie à saturation. Par la
méthode de Kjeldahl, on constatait 11 p. 100 d'azote.

L'Albumine du jaune d'œuf avait une constitution analogue,
30 p. 100 étaient précipitées par le sulfate de magnésie à satu-
ration. Elle contenait 12,5 p. 100 d'azote.

Le corps désigné sous le nom d'Albuwmine végétale était de
composition plus complexe. 12 p. 100 seulement étaient solu-
bles dans l’eau distillée et avaient les réactions des albumines
végétales. 25 p. 100 avaient les réactions des globulines végé-
tales. Les 63 p. 100 restant paraissaient composés d'un mélange
de sels acides de globuline, de protean ou d'acidalbumine. Sa
teneur en azote était de 12,1 p. 100.

La Fibrine végétale provenant de l'usine Schukart, ne corres-
pondait pas à la fibrine du maïs de Ritthausen qu'Osborne range
dans le groupe des prolamines. C’élait un mélange d'une G/u-
teline, d'amidon et de débris de cellulose. Elle ne contenait
que 2,7 p. 100 d'azote.

PUTRÉFACTION DES ALBUMINES 525

Après avoir fait le vide et les avoir fermés à la lampe, sauf
ceux ensemencés avec du Proteus, ces ballons étaient mis à
l’étuve à 37 degrés pendant un mois. Au bout de ce temps, les
cultures étaient filtrées. Le poids du résidu de la culture séché
était retranché du poids primitif de la matière en expérience.
On connaissait ainsi le poids de l’albumine disparue sous
l'action microbienne. À la vérité, il faudrait augmenter légè-
rement les poids d’albumine ainsi obtenus, le résidu de culture
ne doit pas être considéré comme de l'albumine pure, mais
comme un mélange de produits de dédoublements insolubles
de coloration noirâtre et d’albumine inattaquée. En moyenne,
ces résidus culturaux ne contiennent plus que 85 à 90 °/, de
leur azote primitif.

Nous nous sommes également servis de matières alimentaires
riches en azote : viande dégraissée, blanc d'œuf, lait, fromage
de Gruyère, lentilles, haricots, pates alimentaires où les albu-
mines sont à l'état naturel et n'ont pas subi la moindre altéra-
tion. Pour établir la quantité d'albumine disparue, nous avons
dosé l’azote dans ces aliments avant et après la culture. Ces
dosages ont été faits par M. F.-P. Garnier.

Voici le résultat de ces expériences :

| B. B. B. B. ie

| PUTRIFICUS | COLICOGENES | SPOROGENES | PERFRINGENS vulo.
Albumine du sang. 91 88 S6 13 66 »
Fibre, mu 8s S8 s8 0 40 »
Alb. de jaune d'œuf. | 97 97 98 22 85 »
Albumine végétale . 61 ( 72 28 44,5
Fibrine végétale . . 33 40 31 DH T0
VMrandemes Peru 82 I) 100 Ne pousse pas! 18 »
Blanc'dœut. 4-01 "#100 100 100 Ne pousse pas | PAPA
NN NET Re 93 97 98 12 26 »
GEUVÈT ER SN 88 93 100 Ne pousse pas | 60 »
Macaronis ord. . 45 62 6% Id. |. 45 :»
lentilles 2 33 57 53 Id. 2 S0
Haricots blancs 44 55 13 Id. 0 »

*) Seul de tous ces microbes, le Z. Perfringens attaque l'’amidon; comme ce produit
« fibrine végétale » en contient beaucoup, il est possible qu'une certaine partie de ces
37 p. 100 se rapporte à l'amidon disparu. Ce chiffre ne peut donc pas être comparé à
ceux de la même ligne.

526 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

(Dans la première partie du tableau, les chiffres indiquent la
quantité d'albumine disparue pour 100; dans la seconde partie,
la quantité d'azote disparu pour 100.)

Dans les filtrats de toutes ces cultures, nous avons dosé les
acides aminés par la méthode de Sœrensen et nous les avons
calculés en glycocolle pour 100 de liquide. Le mème travail
était fail au préalable dans des ballons témoins; le chiffre
obtenu était retranché de celui donné par les liquides des
cultures.

Pour mieux apprécier l’action de chaque microbe sur les
produits secondaires de la dislocation, nous avons rapporté
les quantités d'acides aminés à 100 grammes d’albumine dis-
parue dans la première moitié du tableau et à 100 grammes
d'azote disparu dans la seconde.

|
B. B. B. B.
PUTRIFICUS |COLICOGENES |SPOROGEXNES | PERFRINGENS

1538
PROTEUS
vule.

Albumine du sang . ,6 1,4 78 | 0,43
Alb. de jaune d'œuf. à “ 1,6 | 2): 0,34
Albumine végétale . x à :5 0,55
Fibrine végétale .

Viande .

OEuf .
Gruyère. .
Macaronis .
Lentilles .
Haricots blancs.

Comme il est facile de le voir par ces tableaux, Les protéo-
lytiques les plus puissants sont des bactéries anaérobies stricts.
Ce ne sont pas les seuls, comme Île croyait Bienstok; avec
Martelly, nous avons vu qu'il y a des aérobies facultatifs
capables de jouer le même rôle, mais leur action est loin d'être
aussi rapide.

Le B. Putrificus et les deux putréfiants intestinaux ont une
activité presque égale. Il peut done se produire des putré-
factions tout aussi complètes que celles où domine ce Purri-
ficus avec des microbes différents. Les protéolytiques isolés

PUTRÉFACTION DES ALBUMINES 527

des matières fécales semblent avoir attaqué les substances
alimentaires : viande, œuf, lait, fromage, lentilles, macaronis,
haricots, avec plus de facilité que les albumines extraites par
des procédés chimiques. Alors qu'ils ont été aussi actifs que le
B. Putrificus sur ces derniers corps, ils se sont montrés plus
puissants sur les autres.

Ces espèces étaient-elles adaptées pour la destruction de ces
substances alimentaires aux dépens desquelles elles vivaient?
Cette hypothèse est appuyée par ce fait que ces deux putré-
fiants ont surtout attaqué avec plus d'intensité que le B. Putri-
ficus les aliments végétaux, et que tous deux proviennent
d’intestins de jeunes enfants au régime lacto-végétarien ou
végétarien.

Cette adaptation est encore plus nette pour le B. Perfringens
dont l’origine est la même; il attaquait, contrairement aux
autres, plus l’albumine végétale que l’albumine du sang ou du
jaune d'œuf.

Ces expériences démontrent encore le faible pouvoir protéo-
lytique de cette dernière bactérie, quand elle provient d'un
intestin normal tout au moins. En présence d’une matière albu-
minoïde seule, elle est encore moins active que les bactéries
aérobies facultatives. [n’en est plus de même quand, à côté de
cette albumine, il se trouve une matière hydrocarbonée : sucre
ou amidon. Sa vitalité s'accroît, son activité diastasique aug-
mente considérablement, Peu actif sur le fromage de Gruyère,
par exemple, il détruit les trois quarts de la caséine du lait dans
le même temps qu'il met à produire son acidité d’arrêt.

Ceci nous éclaire sur la genèse des troubles gastro-intesti-
naux constatés chez certains malades soumis à des régimes de
pâtes, de purées de féculents plus ou moins mélangées de lait
ou d'œuf, Il se produit des ballonnements, des coliques, des
selles molles, mousseuses, accompagnées de violentes émis-
sions de gaz qu'un régime uniquement carné ou ovocarné fait
cesser. Dans ces cas, la flore microbienne gastro-intestinale
contient de nombreux échantillons de B. Perfringens dont
l’activité se décuple au contact du mélange d'albumine et
d'amidon. Quand les déchets digestifs ne contiennent plus que
des albumines, la fermentation diminue et change de type.
Elle n’est plus aussi gazogène, elle prend le type putride. Les

528 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

selles ne sont plus ni molles ni mousseuses; elles deviennent
compactes et félides. Il est bien évident que la cause du mal
n'ayant pas disparu, toute reprise d’aliment riche en amidon
fait reparaître ces troubles.

On voit encore, en consultant ces tableaux, que le Proteus
dont nous nous sommes servis avait un pouvoir protéolylique
égal aux deux tiers environ de celui des {rois premiers anaé-
robies stricts. Par contre, s'il attaque moins la molécule albu-
minoiïde, il pousse plus loin la dislocation et la destruction des
produits secondaires. Contrairement à ce qui se passait pour
les autres microbes en expérience, les produits de culture ne
donnaient jamais la réaction du biuret; la quantité des acides
aminés restants élait toujours inférieure à celle des autres,
sauf pour l’albumine végétale; la quantité d’ammoniaque, tou-
Jours supérieure.

Dans toutes ces expériences, les albumines sont loin d'avoir
résisté de même façon aux diastases microbiennes. Elles se
sont montrées friables dans l’ordre suivant : tout d’abord, le
blanc d'œuf, puis, en ordre décroissant, les albumines du jaune,
celles du lait, du fromage, de la viande, de la fibrine ; puis, en
dernier lieu, les albumines végétales, d'abord celles des farines
de céréales ou des pâtes alimentaires, et enfin celles des
graines de légumineuses. Ces dernières ont résisté deux fois
plus que les albumines animales. Elles ont donné, pour un
même poids d'albumine détruit, une quantité double d'acides
aminés, alors que les protéines des graines de céréales n'en
donnaient pas plus que leurs similaires d'origine animale.
Est-ce dû à une résistance plus grande des produits de cette
dislocation moléculaire, ou plus simplement à une plus forte
proportion de nucléo-albumines ?

Il est intéressant de rapprocher de ces chiffres ceux donnés
par Atwater concernant l’utilisation des aliments chez l’homme.
Les diastases digestives détruisent 97 p. 100 des albumines
animales; 85 p. 100 de celles des céréales; 78 p.100 de celles
des légumineuses. En moyenne, 85 p. 100 des albumines végé-
tales est assimilé. Nos expériences avec F.-P. Garnier donnent
un chiffre moins fort, 77 p. 100. Les diastases microbiennes
sont donc tout aussi actives sur les protéines animales, mais
bien moins que les digestives sur les albumines végétales. Le

PUTRÉFACTION DES ALBUMINES 529

médecin ou l’hygiéniste qui voudra établir des régimes ali-
mentaires ne devra pas perdre de vue que si les protéines
végétales sont moins digestibles, elles sont aussi deux fois
moins putrescibles, ce qui a bien son importance.

Nous avons recherché l’indol et les phénols dans tous les
produits de culture. Mais de toutes ces bactéries putréfiantes,
seuls le B. Proteus donne de l'indol et le B. Perfringens de
l’indol et des phénols. Cette dernière bactérie n’en donne que
peu et la race de proteus choisi n'en donnait presque pas
dans les milieux ordinaires. Elles se sont comportées de
mème facon dans les milieux en expérience.

Enfin, nous avons voulu voir si ces diverses bactéries étaient
susceptibles de donner, avec un ou plusieurs aliments, des
substances particulièrement toxiques. Nous avons filtré à la
bougie Berckfeld les produits de ces cultures, êt nous les avons
inoculés à des souris à la dose de 0 c.c. 5. Les animaux ne
semblent en avoir ressenti aucun trouble.

Comme nous l'avons l’établi avec Gasching en 1903, ces
produits de la putréfaction habituelle ne sont pas toxiques
pour l’homme à faible dose ou mélangés aux aliments. Il n'en
serait peut-être pas de même si ces expériences étaient répé-
tées tous les jours. La clinique montre bien le mauvais effet
des putréfactions intestinales, soit par la résorption quotidienne
des produits putrides, soit par l’appoint qu'elles fournissent au
développement des espèces pathogènes. IT faut espérer que les
recherches entreprises dans ce laboratoire par M. Metchnikoff
et ses élèves résoudront cet important problème.

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE

V. — VIRULENCE DES PNEUMOCOQUES, HUMAINS ET ANIMAUX,
POUR LE LAPIN ET LE COBAYE

par Ch. MRUCHE*eL L. COTONT.

La majorité des auteurs semble admettre implicitement que
le pneumocoque (humain, seul mentionné jusqu'ici dans les.
travaux bactériologiques) se montre volontiers pathogène pour
le /apin, mais il n'existe aucune étude systématique sur le
sujet. La virulence vis-à-vis du cobaye est encore plus mal con-
nue. Nous nous sommes proposé d’élucider ces deux points, en
ulilisant, au fur et à mesure de leur isolement, les nombreux
échantillons de pneumocoques humains el animaux que nous
possédons et dont l’origine se trouve indiquée, en grande
partie, dans nos publications antérieures. [Les germes humains,
isolés depuis, provenaient soit de crachats pneumoniques, soit
de pus oculaire, pleural, méningé, périnéphrétique, urinaire et
sous-cutané — un nouveau germe du lapin (n° 299) a été
extrait du sang d’un animal qui avait reçu, par la voie intra-
veineuse, des bacilles de Shiga tués à l’alcool-éther. |

Pour ce qui concerne la fechnique suivie, nous renvoyons à
ces Annales (juin 1911).

VIRULENCE POUR LE LAPIN.

Aucun pneumocoque,inoffensif vis-à-vis des souris — à la dose
de 1 centimètre cube de culture en milieu T (vingt-quatre heures)
dans les muscles — n'a tué les lapins (animaux de 2.000 gram-
mes, en moyenne) dans les mêmes conditions expérimentales.
Parmi les échantillons plus ou moins actifs sur la souris, la
minorité, seulement, amenait la mort des lapins. Voici la liste
des onze pneumocoques qui constituent cette minorité. Nous
y avons adjoint l'échantillon À, dont il à été question dans nos
recherches antérieures: il n’était mortel (et encore, à l’origine)

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE 531

que sous le volume de 2 centimètres cubes, administrés par la
voie intra-pleurale.

Il convient de noter que les chiffres du £ableau suivant indi-
quent uniquement la « virulence au départ » (première culture
en milieu T).

SIGNALEMENT DOSE MORTELLE DOSE MORTELLE
de ORIGINE pour le lapin, pour la souris,
l'échantillon. dans les muscles. | dans les muscles.
286 Crachat pneumonique. | 10—7 €. cube. 11e cube
Pneumonie mortelle. (1)
306 Crachat pneumonique. | 10—7 c. cube. 10 -%Ceube:
Pneumonie mortelle.
299 Sang de lapin (ayant reçu| 10— €. cube. AD C cube:
des bacilles de Shiga,
tués par l’alcool-éther,
dans les veines).
Alleaux. Sang de lapin (ayant recu! 10! €. cube. 1 €. cube.
des bacilles de Schmorl).
Cesari. Sang de lapin (ayant reçu! 10—! €. cube. 1#cAcübe:
des bacilles de Schmorl).
IL. Crachat pneumonique. 1Ne-scuDe JC ACube:
Pneumonie ayant guéri
[Echantillon Aynaud.
Ces Annales, 1911,
p. 485].
287 Crachat pneumonique. 1/e-ecubez 11 NC rcube:
Pneumonie mortelle.
Jouan. Sang de lapin (ayant reçu! 1 c. cube. 10— €. cube.
des bacilles charbonneux).|
Merlier. Pus de malade atteint 1"ccube: 10-26 cube:
de panophtalmie.
[Service du D' Morax.]
199 Sang de malade 1 c. cube. 10 rcube-
atteint de pneumonie,
puis de méningite.
Cas mortel.
Hôpital Crachal pneumonique. 1 c. cube. 10—! c. cube.
de la Pitié. Pneumonie ayant guéri.
A. Crachat pneumonique. 2 €. cubes. ie reube:
Pneumonie ayant guéri. (Ici,
[Ces Annales, 1911, p. 486.]| dans la plèvre.)
: 1 i
(1) 10—7 c. cube — —— c. cube — ———— c. cube.
10.000.000

A

Les pneumocoques, virulents pour le lapin, semblent donc
rares chez l'homme et fréquents chez le lapin. Dans un mémoire

532 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

précédent (ces Annales, janvier 1912), M. Grenier à fait voir
comment s'effectue la « sortie » des pneumocoques quand on
injecte, à des animaux sains (réellement ou en apparence),
diverses bactéries et toxines. Il est curieux de constater que
« les pneumocoques de sortie » se sont toujours montrés viru-
lents pour le lapin quand ils provenaient du lapin et constam-
ment avirulents pour le cobaye (et le lapin) quand ils prove-
naient du cobaye:

L'activité (au regard du lapin) de nos échantillons isolés de
l'homme et du lapin x toujours fléchi très vite; la première
culture (culture obtenue avec le cerveau du premier lapin)
était déjà devenue offensive, ou ne tuait que sous le volume de
1 centimètre cube. Æ£lle avait, cependant, conservé sa virulence
initiale (parfois maxima) vis-à-vis de la souris. On a vu d’autre
part, dans un travail antérieur, que les pneumocoques, actifs
sur les souris, gardent cctte activité au moins pendant quel-
ques passages s'ils sont peu pathogènes et indéfiniment quand
ils le sont beaucoup. La virulence pour le lapin se révèle donc
des plus fragiles, contrairement à la virulence pour la souris,
fait aussi curieux qu'inaltendu.

"Si, malgré des isolements très nombreux et une technique
nouvelle donnant des garanties supérieures à celles des mé-
thodes anciennes (voir notre second mémoire), nous n'avons
jamais pu obtenir des pneumocoques doués d’une virulence à
la fois marquée et stable pour le lapin, d’autres chercheurs ont
été plus heureux, comme le montrent les trois exemples sui-
vants dus, les deux premiers à l’obligeance de M. M. Nicolle,
le troisième à celle de M. E. Sergent (les doses indiquées se
rapportent à des cultures de vingt-quatre heures en bouillon-
ascite).

I. — Pneumocoque isolé à Constantinople, en 1895, d'une angine bénigne
chez une fillette. Tuait le lapin à 10—* centimètres cubes {au moins), sous la
peau. S'est maintenu virulent six ans (abandonné ensuite).

II. — Pneumocoque isolé à Constantinople, en 1898 (conjointement avec le
bacille de Lôffler), du sang du cœur d’un enfant mort de diphtérie. Tuait le
lapin à 10— centimètres cubes, sous la peau. S'est maintenu virulent trois
ans (abandonné ensuite).

III. — Pneumocoque isolé à Paris, en 1900, d'un crachat pneumonique.
Tuait le lapin à 10—* centimètres cubes sous la peau. S'est maintenu viru-
lent dix ans (abandonné ensuile). Nous le ferons connaître, en détail, dans un
mémoire ultérieur.

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE 33

Les « pneumocoques M. Nicolle » et le « pneumocoque Ser-
gent » n'ont élé l’objet d'aucun soin spécial, lors de leur isole:
ment et des passages par les lapins. Ceux qui les ont étudiés
nous ont affirméqu'avec nos procédés actuels de travail il nous
aurait été extrêmement facile de conserver l'activité de tels
germes si nous avions eu la chance d’en rencontrer. Nous
sommes donc fondés à les considérer comme vraiment rares. —
Notons que l'ënoculalion directe des produits humains ou ani-
maux au lapin et les passages directs par lapin (avecle cerveau
des sujets infectés) ont donné des résultats encore plus mauvais
que nolre technique habituelle.

NIRULENCE POUR LE COBAYE.

Aucun pneumocoque, inoffensif pour les souris et les lapins,
ne fait périr les cobayes (animaux de 400 grammes en moyenne),
à la dose de 1 centimètre cube de culture dans les muscles.
Parmi les échantillons plus ou moins actifs vis-à-vis des souris
et des lapins, il est exceptionnel d'en rencontrer qui tuent les
cobayes dans les conditions indiquées. Avec des doses notables
(par exemple, 4 centimètres cubes) ou bien en employant des
modes d'inoculation sévères (voies intrapleurale, inlrapérito-
néale, intrapulmonaire, intralesliculaire, intraveineuse), on
accroît artificiellement le nombre des échantillons actifs, mais
fort peu.

Nous indiquons parallèlement, dans le {ableau suivant, la
« virulence au départ » pour le cobaye, le lapin et la souris,
de cinq échantillons d’origine humaine.

On a déjà mentionné que les pneumocoques, isolés des
cobayes (« pneumocoques de sortie », pour la plupart), se sont
toujours révélés inactifs vis-à-vis des cobayes (1) et des lapins;
rappelons que leur virulence au regard de la souris demeurait
également faible, parfois nulle.

Somme toute, le pneumocoque, quelle qu'en soit l’origine,
est rarement pathogène pour le cobaye et, dans les cas positifs,
ne manifeste qu'une activité médiocre. Comment concilier ce

(4) Le Dr Girard a cependant rencontré jadis, chez des cobayes, quelques
échantillons virulents pour cette même espèce. Il s'agit certainement là de
cas exceplionnels ; d'autant plus intéressants, d'ailleurs.

534 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

fait avec la banalité des infections pneumococciques chez les
cobayes (voir le travail de M. Grenier — ces Annales, janvier
1912)?

LAS RS 2 QT TA TN RER AND 9 à HR SE DURE 2 ES REED EC CEE RENNES EE TES PER DESSNNNENNEE à

DOSE

SIGNALEMENT OSE MORTELLE | DOSE MORTELLE

SIGNALEMENT HARMEUE DOSE MORTEL |
de ORIGINE pourlecobaye,! pour le lapin, | pour la souris,

l'échantillon. dans dans les museles.|dans les muscles.

les muscles.

a nee COR 2e ee

286 Crachat pneumonique | 1 €. cube. 110—7 c. cube. |10—‘!c.cube.
Pneumonie mortelle. |
306 Crachat pneumonique.| 4 c. cube. |10—7 c. cube. |10-#“c.cube.
Pneumonie mortelle.
IT. Crachat pneumonique.| 4 c. cubes.|1 c. cube. 10=%c Cube:
Pneumonie
ayant guéri.
287 Crachat pneumonique.| L'animal |1 €. cube. 10=%/c*cube:
Pneumonie mortelle. résiste |
ä1c. Cube.
292 Crachat pneumonique.| L'animal | L'animal 110—%c.cube.
Pneumonie résiste résiste
ayant guéri. à lc.cube | à 1 c. cube
(méme dans
la veine).

ES

Très facilement. Ainsi que nous l'avons dit dans notre
premier mémoire, ce que nous présente l'examen clinique, c'est
uniquement l'image d'une infection plus ou moins sévère, où
l'intensité des phénomènes observés se trouve directement liée
à la virulence de l’agent pathogène et inversement à la résis-
tance du sujet atteint. Dans le cas, habituel ici, des « pneumo-
coques de sortie », l’élat de débilitation antérieure de lorga-
nisme permet à des germes, inoffensifs pour les cobayes nor-
maux, de végéter sans peine ## vivo et de déterminer des
accidents toujours graves, souvent mortels.

CONCLUSIONS.

1. Les pneumocoques humains se montrent rarement viru-
lents pour le lapin, exceptionnellement très virulents.

2. Les pneumocoques du lapin {« pneumocoques de sortie »)
paraissent, dans la règle, virulents pour le lapin.

3. Vis-à-vis du lapin, la virulence des pneumocoques de

ÉTUDES SUR LE PNEUMOCOQUE 535

l'homme ou du lapin fléchit très rapidement; rien de semblable
ne s'observe vis-à-vis de la souris.

4. Les pneumocoques très actifs pour le lapin sont toujours
très actifs pour la souris; les pneumocoques peu actifs pour le
lapin offrent, au regard de la souris, une activité variable.

5. Les pneumocoques très actifs pour la souris peuvent être
peu actifs pour le lapin; les pneumocoques moyennement ou
peu actifs pour la souris sont généralement inactifs pour le
lapin.

6. Les pneumocoques humains se montrent exceptionnelle-
ment virulents pour le cobaye et celle virulence reste toujours
faible.

1. Les pneumocoques du cobaye (« pneumocoques de sortie »)
paraissent, dans la règle, avirulents pour le cobaye.

8. Les pneumocoques actifs pour le cobaye sont toujours très
actifs pour la souris et toujours actifs pour le lapin; /a récipro-
que n'est point vraie.

Nous avons dit, dans notre premier mémoire, qu'il étail
impossible de conclure rigoureusement de la virulence pour la
souris à la virulence pour l’homme et nous maintenons ferme
notre opinion. On ne nous accusera pas, espérons-le, d'être en
contradiction avec nous-mêmes si nous faisons observer qu'une
forte virulence pour la souris, jointe surtout à une virulence
évidente (et, a fortiori, marquée) pour le lapin, constitue néan-
moins une sérieuse présomption en faveur d’une activité notable
au regard de l’organisme humain — et une quasi-certitude,
quand il s’agit de malades sans tares ni infections antérieures.

CONTRIBUTION A LA CONNAISSANCE

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE »

CULTURE, ISOLEMENT
ET ETUDE DE QUELQUES TYPES

par G. REPACI

(Travail du laboratoire de M. le Dr Veillon, à l'Institut Pasteur.)

L'étude des microorganismes spiralés de la bouche est depuis
un certain temps poursuivie très activement.

Leur importance au point de vue étiologique, dans la stomatite
ulcéreuse, fut envisagée à partir du moment où Pasteur le
premier les signala dans le liquide salivaire pris sur un enfant
atteint de cette maladie. Bergeron, Netter les étudièrent plus
tard et cherchèrent à reproduire la lésion chez les animaux.
Vincent montra l'association presque constante d’un spirochèle
au bacille fusiforme dans l’angine et la stomatite ulcéro-
membraneuse.

D'autre part, des spirilles ont été vus dans de nombreuses
affections de la bouche, telles que le noma, les abcès péri-
dentaires, la carie dentaire. Neisser, Baermann et Halbers-
tädter (1) les constatèrent dans une stomalite ulcéreuse d'un
orang-outang ; Veillon et Guillemot (2), dans la gangrène
pulmonaire et dans la pleurésie patride ; Bertarelli, Volpino et
Bovero (3), dans les crachats d’un cardiaque.

Malgré toutes ces constatations, à l'heure actuelle, on est bien
loin d'être fixé, d’une facon exacte, sur leur rôle pathogène.

Etant donné qu’on les constate d'une facon banale dans les
affections les plus diverses, on est en droit de se demander s'il
ne s’agit pas de microorganismes qui pullulent sur les tissus
morts; sion n’a pas affaire, en d’autres termes, à de simples
saprophytes.

(1) Neisser, Barman et Hazsersranter, La syphilis, I-IV, 1906.

(2) Guicceuor, Recherches sur la gangrène pulmonaire. Thèse de
Paris, 1898.

(3) BerrarezL1, Vorrino et Bovero, R. Acc. di medicina di Torino, 1905.

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 537

La difficulté de pouvoir élucider cette question tenait en
orande partie au fait qu'on n'avait pu réussir à isoler et à
cultiver ces microbes.

En effet, les tentatives de culture de spirilles faites soit avec
les pathogènes, soit avec les saprophytes, avaient ou échoué
complètement, ou donné des résultats peu satisfaisants jusqu'aux
recherches de Mühlens' et Hartmann (1) qui, les premiers,
annoncèrent avoir isolé et cultivé purement un spirochète de la
bouche. |

Ces auteurs réussirent à isoler et à culliver, pendant cinq
mois de suite, Spirochete dentium, en employant la méthode
de culture de Veillon, mais substituant à la gélose sucrée de
cet auteur le milieu conseillé par Ellermann pour la culture du
b. fusiforme.

Ils procédèrent de la facon suivante : avec de la gélose neutre
ou légèrement alcaline, ils remplissent à moitié des tubes à
essai qu'on maintient pendant une demi-heure à 100 degrés
dans un bain-marie. Du sérum de cheval est chauffé une demi-
heure à 60 degrés. Après avoir refroidi à 45 degrés la gélose et
le sérum, on ajoute dans les tubes à essai un tiers de sérum. On
ensemence et on refroidit brusquement.

TECHNIQUE.

Dans les recherches que nous poursuivons depuis longtemps
sur la flore bactérienne anaérobie de la bouche de l'homme,
nous avons toujours employé la méthode classique de notre
maîlre Veillon. C’est grâce à cette méthode, qui est d’une
simplicité extrème, que nous avons isolé et cultivé plusieurs
types de spirilles de la bouche.

La méthode conseillée par Schereschewscki (2) pour la
culture du sp. pallida ne pouvait nous servir, car 1l est impos-
sible, par ce procédé, d'obtenir des cultures pures.

Il faut, en effet, penser que les spirochèles provenant soit du
tartre dentaire, soit du matériel pathologique varié qui en con-
tient, sont toujours mélangés avec de très nombreuses espèces.

\ MuuLens el HarTuanx, Zeits. für Hyçiene, vol. LV, 1906.
) ScneREsCuHEwsCK1, Deuls. med. Woch., 1909.

538 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Or, pour obtenir des colonies suflisamment séparées de
façon à pouvoir aisément les isoler, il est absolument indis
pensable ou d'avoir un milieu dans lequel ne poussent que les
seuls spirochètes, ce qui n’est pas le cas du milieu de Scheres-
chewski, où un milieu qui, n'empêchant pas les autres bactéries,
permet aux spirochètes de se développer. Il est certain que quand
il s'agit des microbes anaérobies stricts — et comme on va
le voir, les spirochètes de la bouche sont précisément des
anaérobies stricts — la meilleure technique est celle de Veillon.
Le milieu est extrêmement clair et permet d’apercevoir les plus
petites colonies : en outre, il est convenable, comme nos
cultures le démontrent, pour le développement des micro-
organismes en question. Il ne nous a pas semblé indispensable
d'ajouter du sérum à la gélose sucrée, comme le conseillent
Ellermann (1), Mühlens et Hartmann, car cette opération nous
semble tout à fait superflue, les spirochètes poussant bien dans
l’un comme dans l’autre milieu. De même, nous ne croyons pas
qu'il y à intérêt à employer la gélose simple au lieu de la gélose
sucrée, dans les tubes de Veillon, car la gélose sucrée donne
une anaérobiose plus rigoureuse et plus stable que la gélose
simple.

Pour obtenir la culture des spirochètes, 1l est nécessaire de faire des
dilutions très soigneuses, après avoir dissocié dans le premier tube le tartre
dentaire ou le matériel pathologique, minulieusement. Voici comment nous
procédons : après avoir fait ce que nous venons de dire, nous plaçons
pendant quelques minutes le tube dans l'eau chaude, à 37 degrés environ. Les
gros paquets de tartre dentaire. insuffisamment dissociés, tombent au fond;
les spirochètes libérés par la dissociation des autres microbes étant très
mobiles, nagent dans la partie supérieure du liquide. C’est de cette partie
que nous prélevons le liquide à ensemencer dans les autres tubes, par le
procédé des dilutions successives. Nous ensemencons une quinzaine de
tubes en moyenne. Nous n'insistons pas sur ces détails, car le procédé est
classique et très connu.

Il arrive souvent que, malgré toutes les précautions, on n'arrive pas à
isoler de spirochètes.

Cela tient probab'ement à la composition de la gélose sucrée. Malgré tous
les soins qu'on y met, il est presque impossible d'obtenir toujours une
gélose identique. Souvent, dans un milieu qui a toutes les bonnes apparence
usuelles, les résultats sont complètement nuls. Heureusement, en règle
générale, on arrive presque toujours à isoler les spirochètes. La plus grande

(1) Eccermanx /V.), Ueber die Cultur der fusiformen bacillus. Centralb. für
Bañt., Bd XXXVII.

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 539

difficulté est dans la variabilité de l'aspect des colonies qui n'ont pas de
caractères fixes et bien tranchés et souvent ressemblent aux colonies les
plus banales. Cela impose la nécessité absolue d'isoler et d'examiner toutes
les colonies, sans exception.

Une autre raison qui rend précaire la connaissance des caractères soil
macroscopiques, soit microscopiques, des colonies de ces microbes, est ce
fait, absolument certain, que leurs caractères varient avec les qualités mêmes
de la gélose sucrée employée. De petites colonies à peine visibles
deviennent plus grosses, et, ce qui est plus intéressant, changent du tout au
tout, quand on passe par exemple d'une gélose plus épaisse à une autre
moins dense.

La peptone qu'on emploie, le temps pendant lequel la viande à macéré
avant de faire le bouillon, la viande mème qu'on a à sa disposition, les
différents chauffages peuvent, jusqu'à un certain point, être des coefficients
utiles ou nuisibles pour le développement de ces microbes, qui sont très
délicats et fragiles. Cela revient à dire qu'il est absolument nécessaire, si
l'on veut isoler ces microbes, de s’en tenir scrupuleusement aux détails de
la technique pour la préparation de ce milieu.

RÉSULTATS OBTENUS.

Parmi les spirochètes que nous avons isolés, les trois premiers
que nous allons décrire semblent des espèces distinctes, mais
peuvent être rangés dans un même groupe par leurs caractères
SÉNÉTAUX.

Nous ferons une place à part au quatrième, qui présente des
caractères bien particuliers.

Spirochète À (1). — Il est anaérobie strict. Il pousse, lors du
premier-ensemencement, vers le huitième jour, mais dans les
repiquages ultérieurs, il se développe plus vite, dans un délai
de quatre ou cinq jours environ. Les colonies se présentent sous
la forme de petits points translucides, ressemblant à des goutte-
lettes de rosée, très difficiles à apercevoir si l’on n’a pas soin de
regarder les tubes à l’aide d'une lumière très intense. Au
contraire, quand le microbe s’est suffisamment habitué à nos
milieux artificiels, les colonies deviennent plus apparentes et
peuvent atteindre, si elles sont suffisamment espacées, un
diamètre d'environ un demi à 2 millimètres. Alors elles sont
discoïdes, à bords tranchants, luisantes, le centre de la colonie
est de teinte saumonée.

(4) Reraci, Isolement et culture d'un spirochète de la bouche. Comples
rendus de la Soc. de Biol., 30 mai 1910.

D #0 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La température optima est de 37 degrés, ce microbe ne
pousse pas à la température ordinaire. Il ne produit pas de gaz,
les cultures répandent une faible odeur acétique qui disparaît
très vite. |

IL pousse faiblement dans les milieux liquides. Le. bouillon
reste clair, mais, en l’agitant, on voit des ondes soyeuses ; au
bout d'une vingtaine de jours, un faible dépôt se forme au fond
des tubes. |

Notre mierobe n'ulilise sensiblement pas le glucose, ni le
saccharose, ni la dex-
trine, mais il semble
attaquer légèrement le
lactose. Le lait est aci-
difié très lentement,
mais il n'est pas coa-
gulé. Le blanc d'œufeuit
ne subit pas d'attaque.

La vitalité du mi-
crobe à l'étuve, en tubes
capuchonnés, est d’une
viuglaine de-Jours.

L'étude én goutte

, pendante, avec l’objec-

ee nr RÉ de 5 jours. time Diet

SAME éclairage spécial, mon-

tre des amas de spirochètes enchevètrés, agglutinés entre eux,

très réfringents. C'est en observant les individus libres qui se

trouvent souvent à la périphérie des amas, ou en dissociant

les amas, que l'on peut éludier les mouvements singuliers de
ce microbe. |

On constate d'abord que le microorganisme se comporte
comme un vérilable ressort spiralé, les tours de spires se
rapprochant ou s’éloignant alternativement les uns des autres ;
en même temps, la spirale peut subir des torsions latérales dans
tous les sens, ce qui montre sa grande flexibilité.

Notre microbe offre deux types principaux de mouvements :
des mouvements latéraux, qui se font sur place, par une sorte
d'oscillation pendulaire extrêmement rapide,et des mouvements
de translation, qui s’opèrent par rotation autour de l'axe longi-

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 041

tudinal. Ces derniers — véritables mouvéments de vrille —
ont lieu soit en avant, soit en arrière, avec une rapidité et une
brusquerie remarquables, le microorganisme: passant par
saccades de l'état de repos à l'état de mouvement.

Le nombre des spires, lesquelles sont préformées et ne
disparaissent pas à l’état de repos, est très variable. A côté des
éléments très courts, qui ont l'aspect d’un vibrion où d’un
S italique, on voit des éléments qui peuvent varier de deux
tours de spire complets à une vingtaine et plus.

On conçoit donc qu'ilest bien difficile de pouvoir déterminer
avec ‘exaclitude les dimensions longitudinales du microorga-
nisme. Elles varient selon: le nombre de spires dont chaque
élément est pourvu. Plus facile à déterminer est son épaisseur,
qui est. presque loujours égale : 2/3 de w à 1 y environ.

Les caractères des tours de spires sont tout à fait spéciaux.
L'examen à l'état vivant montre que le corps microbien ne se
trouve pas tout entier sur le même plan : on a donc affaire à
une, spirale complète, comme celle d’une vis. Les spires sont
régulières et parallèles et forment une spirale complète. La
profondeur de la spire est d'environ 1 y, la longueur de 1 à24
Si l’on veut bien comparer ces dimensions avec celles données
par Mühlens et Harlmann pour Sp. dentium, on conçoit la très
grande différence d'aspect qu'il y à entre notre spirochète et
Spirochete dentium.

Dans les cultures âgées d’une dizaine de Re on peul
remarquer des éléments microbiens extrèmement développés.
Ils sont très longs, enroulés sur eux-mêmes, entortillés dans
tous les sens et donnent l'impression de ficelles jetées à terre
au hasard; d'autres ont tout à fait l'apparence d’une natte de
cheveux. On pourrait penser, au premier abord, à une division
longitudinale du microorganisme; il n’en n'est rien : on voit
que c'est un élément qui s’est enroulé sur lui-même très exacte-
ment, ou deux éléments accolés l’un à l’autre.

Ce spirochète se colore. facilement et uniformément et pres-
que instantanément par tous les colorants ordinaires. Il ne prend
pas le Gram. Nous n'avons jamais observé, dans les cultures
jeunes, ni espaces clairs ni points plus intensément colorés.
Les contours sont très nets, le corps microbien cylindrique.
Traité par le Giemsa, il prend une coloration bleuätre.

542 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Par la méthode de Léæffler, modiliée par Nicolle et Morax,
nous avons constaté que ce spirochète est pourvu de cils. Les
formes courbes possèdent un ou deux cils. S'il est unique, le cil
prend naissance à une des extré-
mités ou au milieu du corps, en
s'implantant du côté de la concavité.
Quand il y en a deux, ils prennent
naissance aux deux extrémités en
formant comme des prolongements
du corps, ou bien tous les deux à la
même extrémité, ou un à une extré-

Fic. 2. — Spirochète À. mité et l’autre au milieu du
Forme en natte de che- DE
veux. — Col. par la mé- DCE :
thode Læffler, Nicolle-Mo- Dans les formes à plusieurs tours
rax. Gross., 1.800 D. de spires, les cils sont plus nom-

breux et sont implantés le long du
corps d'un côté et de l’autre à intervalles variables.

C'est la même disposition péritriche que M. Borrel (1) à
décrite chez Sp. Gallinarum et Zetinow (2) chez Sp. Duttoni.
Ces cils dépassent la
longueur du corps
microbien, lorsqu'il
s'agit des formes vi-
brioniennes, ils sont
très flexueux, très
minces. [ls ne sont
pas visibles par la
coloration au Giemsa
ni par aucune colo- Fi6. 3. — Spirochète A. Forme géante,
ration simple. en ficelle. — Gross., 1.800 D.

Les extrémités du
spirochète en question sont arrondies. Dans quelques éléments
on peut observer aussi qu'elles se terminent comme un crochet.

Nous n’avons décelé aucune ébauche de membrane ondu-
lante, ni rien qui paraisse s'en rapprocher, ni par la coloration
au Lœæffler, ni par l’hématoxyline ferrique, en faisant nos pré-

(1) BorreL, Comples rendus de la Soc. de Biologie, t. LX, 1906.
2) ZETINOW, Zeits. für Hygiene, 1906, t. LTE.

DES «. MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 543

parations soit avec du matériel jeune, soit avec des cultures
anciennes, sur lesquelles nous avons fait agir l’eau distillée ou
le taurocholate de soude.

L'examen de notre spirochète, en vue d'étudier le mode de
division, a été fait sur des lames colorées par des procédés
divers et en nous servant de cullures d'âges différents. Etant
donnée la grande importance qu'on attache à certaines formes
pour démontrer la division longitudinale de ces êtres, nous les
avons cherchées de la facon la plus scrupuleuse. Il est certain,
en effet, qu'il existe des formes qui prennent l'aspect d’un Y

Fi6. 4. — Spirochète A. Forme Fic. 5. — Spirochète A. Cils péri-
en Y, avec cils. — Col. par triches. — Col. par la méthode
la méthode Læffler, Nicolle- Léœæffler, Nicolle-Morax. Gross.
Morax. Gross., 1.800 D. 1.800 D.

ou d'un V. Mais nous ne partageons pas l'avis des observateurs
très nombreux qui les considèrent comme des stades d’une
segmentation longitudinale.

Avant tout, il nous semble utile d'établir que nous n'avons
jamais vu ces formes dans les éléments courts. Au contraire,
elles peuvent se voir dans les éléments longs. Mais il s’agit de
différents aspects donnés par l’enroulement sur elles-mêmes des
formes longues. Un spirochète à plusieurs tours de spires, qui
se fléchit à son milieu, les deux moitiés s’accalant sur un
certain nombre de spires, tandis que les deux extrémités
restent libres, peut donner très bien l'apparence d’un Y.
Admettons au contraire qu'au lieu de s'accoler, les deux
moitiés reslent écarlées, elles peuvent donner au spirochète
l'aspect en V. IT faut avouer d'autre part que les dessins donnés

par les différents auteurs qui ont observé ces formes en Y et

544 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

en V ne correspondent pas aux formes observées par nous.

Les formes en V eten Ÿ que nous avons vues sont sûrement
(et il est très aisé de le voir) les différents aspects de l'enroule-
ment du microbe sur [ui-même.

Plus troublantes, au contraire, peuvent être les figures
données par deux spirochètes, l’un long, l’autre court, l'extré-
mité de ce dernier étant réunie au corps de l’autre. Nous avons
vu quelque chose de semblable dans nos préparations, qui
pouvait donner l'impression d'un Y ou d’un V véritable. Mais
au point de vue de leur interprétalion, nous nous rallions à
l'opinion déjà émise par Levaditi (1), qui considère ces dis-
positions comme les résullats de la réunion de deux individus
par suite de l’accolement de leurs prolongements ciliaires, ou
d’un point du corps microbien.

Au contraire, nous avons vu des spirochètes qui montraient,
d’une façon tout à fait nette, la division transversale. Un point
du corps microbien devient plus clair d'abord, puis s’étrangle
et se divise complètement. On peut voir, dans ces différents
stades,.les individus fils réunis encore par un trait de substance
très court, très mince et très pâle, ou bout à bout, déjà complè-
tement séparés. Ce mode de division transversale a été déjà vu
d’une façon indiscutable par Borrel(2), Swellengrebel (3), Borrel
et Cernovodeano (4) chez Sp. Balbianii, Spirillum Giganteum et
Sp. Gallinarum; par Levaditi (5) chez sp. Gallinarum et le sp.
de la Tick-Fever; par Zettnow chez le spirochète de la bouche et
le spirille de la Tick-Fever. |

Ce microorganisme n'a aucune action pathogène sur les ari-
maux de laboratoire.

Spirochète B. — Ce microorganisme est anaérobie strict.
Dans les tubes d'isolement il pousse après trois jours, sous la
forme d’une colonie discoïde, à bords nets, régulière, luisante
et transparente, blanchâtre à la périphérie, jaunâtre au centre,
d'un diamètre d'un millimètre au plus. Cet aspect, qui apparaît

(4) Levavrrr et Rocné, La syphilis, 1909.

(2) BorreL, Comples rendus de la Soc.de Biologie, t. LX, 1906.

(3) S'WELLENGREBEL, Comples rendus de la Soc. de Biologie, 1907, t. LXII; Ann.
de l'Institut Pasteur, 1907.

(4) Borrez et CERNOVODEANO, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1907,
L'APNITE

(5) Levaprrr, Loco cilato.

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 045

tel que nous venons de le décrire, dans la gélose sucrée ordi-
naire, change profondément si on ajoute au milieu un tiers de
sérum de cheval, chauffé une demi-heure à 53 degrés. Dans
ce cas les colonies deviennent rondes, volumineuses, et
prennent l'aspect de petites boules de diamètres variables entre
2à 4 millimètres. Elles sont blanches, nuageuses et montrent!
à la périphérie une ef-
florescence de très fins
el courts prolongements
très délicats.

On pourrait donc pen-
ser que ce microbe aime
le milieu au sérum.

Les nombreuses ex-
périences que nous
avons faites à ce sujet
nous ont montré, au
contraire, que les colo-
nies prennent cet as-
pect,quitémoigne d'une
végétabilité plus active,
aussi bien dans la gélose

dinaireis z | Fi. 6. — Spirochète B. On remarquera
Re ep UE que le corps microbien n’est pas teint d'une

on à eu soin de mettre facon uniforme. — Col. par le Giemsa. Gross.

une proporlion moin- 1800 D.
dre d’agar (7 p. 1.000).

Il semblerait donc que le sérum ajouté n'agit qu'en dimi-
nuant la densité de la gélose.

Au contraire, dans le bouillon sucré et dans le milieu bouillon
pomme de terre, il ne cultive presque pas. On ne voit, après
plusieurs jours, que quelques maigres flocons qui tombent au
fond des tubes et l’on serait bien embarrassé de pouvoir affirmer
que cela ne soit pas la semence qu'on a mise.

La température optima de développement est de 37 degrés à
l’étuve, pendant quarante-huit heures. Il ne se développe pas
à la température ordinaire.

Sa vitalité dans les tubes gardés à l'éluve est de cinq à six
jours, mais il est utile de repiquer la cullure tous les quatre
jours, car, passé ce délai, il arrive souvent que le mierobe soit

35

546 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

déjà mort. Quand les colonies sont suffisamment développées,
on peut les garder un peu plus longtemps vivantes à la tempé-
rature ordinaire.

Examiné en goutte pendante, ce microbe se présente sous
l'aspect polymorphe de bâtonnets incurvés à la façon d'un
vibrion, ou de bâtonnets avec une ébauche de spire, en S itali-
que, ou absolument comme de véritables spirochètes à 4, 5, 6,
8 tours de spire complète.

Les éléments les plus simples, en formes de vibrions,
ressemblent à s'y méprendre au B. fusiforme de Vincent par
ses extrémités nettement pointues et par ses dimensions
longitudinales. D'ailleurs on a l'impression qu'il est un peu
plus mince. Mais, à côté de ces éléments qui sont relative-
ment rares dans les cultures du début, on voit les éléments
longs qui ont l'aspect d’un véritable spirochète, à plusieurs
tours de spire complète. Il est à remarquer cependant que les
tours de spire sont différents de ceux que nous avons décrits
pour Spirochète À, à cause de leur profondeur et de leur
largeur, car, d’une facon générale, ils sont plus amples et
moins profonds. Ajoutons qu'il s’agit d’une spirale complète,
préformée, qui reste telle quelle quand le microbe est au repos.

La mobilité de ce microbe est extrêmement marquée. Ses
mouvements sont ceux précédemment décrits pour Spirochète A
(mouvements pendulaires, mouvements en avant el en arrière,
mouvements de vrille, etc.).

Ce microorganisme, habitué de plus en plus au milieu artiti-
ciel, montre une tendance manifeste à devenir toujours plus
court.

Après une dizaine de repiquages, les éléments sont presque
tous en S italique ou possèdent deux ou trois tours de spire au
maximum, tandis que les formes longues deviennent de plus en
plus rares. Quelle est la raison de ce phénomène?

Tunnicliff (1), étudiant le bacille fusiforme de Vincent, a
soutenu que ce microbe se présente tantôt sous son aspect
ordinaire, tantôt sous l'aspect de véritables spirochètes extrè-
mement semblables à ceux que l’on voit dans l’angine et dans
la stomatite ulcéro-membraneuse. |

(1) Tuxxicuter, The identity of fusif. and Spir. Jour. of inf. Diseases, 1906.

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 547

En s'appuyant sur les constatations faites sur des cullures
pures, il se demande si la symbiose fuso-spirillaire n'est pas,
en somme, le résultat de différents aspects d’un même microbe,
le fusiforme.

Nous ne partageons pas cette facon de voir, et en voici les
raisons : quand nous avons isolé notre microbe, il se montrait
presque exclusivement sous l'aspect de spirochète à plusieurs
tours de spires. C’est dans la suite seulement que les formes
courtes ont apparu. Il est donc raisonnable d'admettre que
cette modification a été causée par sa végétabilité plus intense,
à la suite de son adaptation aux milieux artificiels.

D'autre part, s’il est vrai que le bacille fusiforme de Vincent
peut se présenter incurvé, à la façon d'un vibrion, et affecter
la forme d’un $S italique quand deux éléments se trouvent
bout à bout, il est vrai aussi qu'on ne peut pas dire qu'il pos-
sède une véritable spire. Les formes les plus courtes de notre
microbe se présentent au contraire comme une spire, très visible
au repos, car, dans ces conditions, on remarque bien facilement
qu'il ne repose pas sur le même plan et qu'il est hélicoïdal,
visible de même, avec une extrème évidence, quand il est en
mouvement. Mais, il y a encore ceci : dans les frottis de
l’angine et de la stomatite ulcéro-membraneuse, souvent, très
souvent même, on peut mettre en évidence avec le fusiforme
de Vincent, non pas un seul, mais plusieurs spirilles, par la
taille, par la facon de se colorer, par les caractères et le nombre
des spires, très différents l’un de l’autre. On parle toujours
d'un spirille de Vincent, mais en réalité nous croyons qu'il en
existe plusieurs.

Ce microbe ne se colore pas facilement par les colorants ordi-
naires. La fuchsine diluée ne le colore pas du tout: le violet de
gentiane aniliné le colore très mal après un bain prolongé.
Mais les préparations ne sont pas bonnes, la teinte est très
pâle et à peine visible. On obtient un meilleur résultat par la
fuchsine de Ziehl à chaud: mais la coloration élective est le
Giemsa, qui le colore en bleu un peu pâle quand on fat les
préparations en suivant la méthode rapide, et en bleu plus
foncé si on prolonge le bain une dizaine d'heures. Cependant,
il ne se colore pas uniformément, malgré tous les soins qu’on
y apporte. On obtient au contraire de belles préparations par la

048 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

méthode de Burri, qui est très recommandable pour l'étude de
tous ces microbes.

Par la coloration de Loeffler, modifiée par Nicolle et Morax,
nous avons mis en évidence, dans le microbe en question, la
présence de deux cils qui s'implantent aux deux extrémités;
ils sont très minces, très flexueux. Mais 1l faut remarquer ceci,
c'est qu'il nous à été absolument impossible de mettre en évi-
dence, dans les formes longues, la présence de cils : ils n'étaient
évidents que dans les formes courtes. Pourquoi cette différence,
nous ne saurions le dire.

Il est vrai aussi qu'il est extrêmement difficile d'obtenir de
bonnes préparations. Les colonies de ce microbe ne se disso-
cient qu'avec peine, et malgré tous les soins et les lavages il
reste toujours accolé à leurs corps un peu de la substance du
milieu nutritif, ce qui gène beaucoup pour la coloration et
l'examen de détails si délicats. Il est donc nécessaire de faire
des réserves sur la ciliation de ce microbe, qui est indéniable,
il est vrai, mais impossible à déterminer d’une façon tout à fait
sûre, à cause des difficultés énumérées.

Il se reproduit, comme le premier, par division transversale.
1] ne produit pas de spores. Les cultures dégagent une odeur de
putréfaction.

Ce microbe, inoculé au cobaye, produit une nécrose très
superficielle de la peau, avec formation d’abcès, mais l’animal
guérit après deux semaines. On obtient de même un petit
abcès chez le lapin, qui guérit en peu de temps.

Spirochète G. — Les colonies de ce microbe, anaérobie strict
aussi, apparaissent lors du premier ensemencement, au 5° jour
environ. Elles sont discoïdes, à bords nets, de couleur jaune
safran très nette, d’un diamètre de À millimètre environ. Dans
les ensemencements ultérieurs, les colonies apparaissent vers
le deuxième jour, mais elles sont petites, à peine visibles.
Elles grossissent ensuite et peuvent atteindre, dans un milieu
suffisamment fluide, des dimensions considérables. Dans ce
cas, elles perdent l'aspect discoïde et prennent la forme de
petites boules d’un bleu jaunâtre avec un centre plus forte-
ment coloré, qui tranche nettement sur le reste de la colonie.
Le diamètre des colonies, si elles sont espacées, peut atteindre
jusqu'à 3 ou 4 millimètres. Ce microbe cultive indifféremment

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE)! » 549

dans la gélose sucrée ordinaire et dans la gélose sucrée-sérum
de cheval. La température optima de développement est de
31 degrés; il ne pousse pas à la température ordinaire.

Son développement dans le bouillon sucré et dans le bouillon
de pomme de terre est presque nul.

Il ne donne pas de gaz dans la gélose sucrée, mais les cul-
tures dégagent une odeur légèrement fétide. La vitalité de ce
microbe est de 5 à 6 jours. Il ne produit pas de spores.

F16.1. — Spirochète C. Fic. 8. — Spirochète C. On remarquera
Culture de 4 jours. — au milieu une forme qui peut faire penser à
Prép. à l'encre de Burri. une division longitudinale. — Prép. à l'en-
Gross., 1.800 D. cre de Burri. Gross. 1.800 D.

L'étude en goutte pendante montre qu'il s’agit d'un spiro-
chète pourvu de 2 à 4 tours de spires complètes, rarement
plus long, extrêmement mobile. Ses mouvements ne diffèrent
pas de ceux que nous avons décrits dans les autres espèces.

Un caractère particulier de ce microbe est le peu d'écart
qu'il y a dans la longueur de ses éléments. Celle-ci est, en
général, uniforme, d’une dizaine de # environ. Les formes un
peu plus courtes apparaissent dans les ensemencements ulté-
rieurs, mais, en règle générale, le microbe possède une ten-
dance assez nette à conserver toujours le même aspect. Son
épaisseur est presque égale à celle de l'espèce A, mais les
spires, tout en étant régulières et parallèles, sont nettement

d50 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

différentes de celles que nous avons reconnues dans l’espèce A.
Elles sont un peu moins serrées et moins profondes, car la pro-
fondeur de la spire, bien qu'évidente et nette, est à peine
ébauchée. Les spires, comme dans les variétés précédentes,
sont préformées et persistent aussi quand le microbe est à l’état
de repos. Il se colore faiblement par les colorants ordinaires.
Pour obtenir des images nettes, il faut faire agir un peu longue-

ment le colorant. Il se dé-
F ARR DRTSS colore par la méthode de
Gram.

Par la méthode de Burri,
si on obtient de très belles
| { re : préparalions. Par ce procédé,

Ho on met nettement en évi-

> dence les caractères des ex-
trémilés, qui sont nette-
ment pointues.

séêp- | Par la coloration de Lœæt-

den 7 Le fler, nous avons vu que ce
———————— spirochète esl pourvu de
Fic. 9. — Spirochète C. Cils péritri- très nombreux cils péritri-

ches. — Col. par la méthode Leæffler, ches. Ils ressemblent aux
Nicolle et Morax. Gross., 1.800 D.

cils que nous avons étudiés
dans l’espèce A, mais ils
sont plus rapprochés l’un de l’autre, de façon que lélé-
ment microbien, tout en étant plus court que celui de
l'espèce A, est pourvu d’un plus grand nombre de cils. Dans
les formes courtes, les plus simples, on fait la même remarque.
Ces éléments sont pourvus, en moyenne, de 5 à 6 cils, qui
s'implantent, deux à chaque extrémité et deux autres au
milieu du corps, de l’un ou de l’autre côté.

Pas plus que chez les précédents microbes, nous n'avons
décelé aucune membrane ondulante. Ce spirochète se repro-
duit par division transversale. Nous n'avons jamais remarqué
les formes longues, ni les autres formes que nous avons
longuement étudiées sur l'espèce A.

Ce spirochète n'a aucun pouvoir pathogène pour les
animaux de laboratoire.

Sprrille D. — Ce microbe, anaérobie strict, pousse dans la

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 5o1

gélose sucrée au bout de vingt-quatre à quarante-huit heures,
sous la forme de colonies rondes, irrégulières, moniformes,
d'une couleur rougeâtre, de tailles différentes. Elles ont un
diamètre de deux millimètres environ, mais dans les tubes
où elles sont très espacées, elles peuvent atteindre des propor-
lions énormes, de 5 millimètres de diamètre, et se présenter
sous l'aspect d'une valve d’huître.

Cependant ce microbe, après quelques passages dans les
milieux artificiels, a donné des colonies différant nettement
par leur aspect de ce que nous venons de décrire. Il s'agissait
de colonies punctiformes de coloration nettement saumonée,
avec centre plus opaque, de même couleur, mais plus foncée,
entourées d'un halo cotonneux, beaucoup plus pâle, d’où
parlaient de très fins prolongements donnant à la colonie
Paspect d’une châtaigne.

Croyant à une impureté (car ici on observait cet aspect
différent des colonies dans le même tube et on ne pouvait, par
conséquent, attribuer ce changement à une différence du
milieu), nous avons procédé à de nouvelles séparations.

Or, nous avons, dans tous les passages ultérieurs, constaté
que les colonies gardaient toujours leur aspect double comme
nous venons de le décrire.

Cependant, il s'agissait d'un même el unique microbe,
comme les recherches successives l'ont clairement démontré.

L'examen de ces colonies, en goutte pendante, nous à
montré un microbe incurvé, extrêmement mobile, d’une
épaisseur peu supérieure à 1 », à extrémités arrondies et très
souvent pointues.

La longueur des différents éléments est variable. Certains
ont la taille du fusiforme, mais, en général, ils sont plus
longs, de 10 à 15 ÿ environ.

A l’état de repos, ils se présentent ou incurvés comme des
vibrions, ou sous l'aspect d'un S italique de grande dimension.
Mais quand ils se déplacent, les corps microbiens forment
des spires régulières, parallèles l’une à l’autre, très nom-
breuses. Les mouvements de translation s’opèrent par
rotation autour de l’axe longitudinal et ils sont parfaitement
superposables, à notre avis, à ceux que nous avons remarqués
dans les espèces précédentes.

552 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ce microbe offre aussi le type de mouvements pendulaires,
extrèmement rapides, qui se font sur place et qui ont été
décrits précédemment.

Dans les jeunes cultures, nous avons remarqué des formes
élranges, qui nous semblent bien difficiles à interpréter : il
s'agit de courts éléments présen-
tant en leur milieu un renfle-
ment considérable leur donnant
l'aspect d’un fuseau ventru.

Ce microbe est très difbcile à
colorer par les méthodes ordi-
naires. On obtient de bonnes co-
lorations par le Ziehl à chaud. II
ne prend pas le Gram. Par la
méthode lente de Giemsa, il se
colore faiblement, d’une manière
uniforme, mais il présente au mi-
lieu du corps un point ovoide
qui se colore intensément en bleu
foncé. Ce point est central, même

quand le microbe est en voie de
division. Dans ce cas, le point

Fic. 10. — Spirille D. — Prép. à 2.
à l'encre de Burri. Gross. chromophile se partage égale-

1.800 D. ment dans les deux éléments fils

etreste à leurs extrémités. Par
la méthode de Burri, ce microbe se présente sous l'aspect déjà
décrit, mais les spires s’effacent complètement. Par la méthode
de Loffler, nous n'avons découvert aucun cil, ce qui nous
semble bien surprenant.

La vitalité de ce microbe est très courte, de quatre Jours
environ à l'étuve. Il pousse faiblement dans le bouillon sucré.
Le milieu ne se trouble pas et, après quelques jours, on voit
au fond du tube quelques maigres flocons agglutinés.

Les cultures dégagent une faible odeur de putréfaction. Dans
les milieux solides, il n’y a pas production de gaz. Ce microbe
ne donne pas de spores.

Inoculé au cobaye, il produit une petite eschare noirâtre,
qui recouvre un abcès rempli d'un pus dense, crémeux. Mais
l'animal guérit au bout d’une dizaine de jours.

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » 593

L'inoculation au lapin produit, au lieu injecté, une légère
infillration qui dure quelques jours, puis disparait sans
mème former d’abcès.

Pouvons-nous identifier les microbes ci-dessus étudiés avec
les espèces déjà connues de microbes spiralés de la bouche?

On sait, en effet, depuis fort longtemps, qu'il existe des
spirilles dans le tartre dentaire de la bouche de l'homme. Le
premier observateur, dont le nom mérite d’être cité, c'est
Leuwenhoeck, qui remarqua, parmi les innombrables bactéries
de la bouche « semper magna cum admiratione dictae illi
materiæ (tartre dentaire) multa exigua admodum anima-
lcula jucundissimo modo se moventia ». Bühlmann (1) dans
la suite les observa aussi, mais il ne se prononça pas sur
leur nature animale ou végétale. Jicinus (2), au contraire,
en fit des rapports très détaillés et les appela denticola, en les
classant parmi les infusoires. Nous cilerons encore Robin (3),
qui les compta parmi les algues, pour venir à Miller (4), qui,
en 1892, publia un fort intéressant livre d'ensemble sur les
bactéries de la bouche.

Cet auteur donna la description exacte d'un microorganisme
à forme vibrionienne, qu'il réussit à cultiver sur du sérum
coagulé, et qui fut connu après lui, sous le nom de Spirellum
Sputigenum de Miller.

Il décrivit aussi Spirillum Dentium, mais ne put Île
cultiver, n'ayant pas à sa disposition les méthodes modernes
de cultures des anaérobies que nous possédons aujourd’hui.

Quand Schaudinn et Hoffmann découvrirent Sprrochæte
pallida, l'étude des microorganismes spiralés de la bouche
prit un nouvel essort. C'est tout d’abord Schaudinn qui s’en
occupe et éludie Spirillum Buccalis en partant du tartre
dentaire et lui découvre une membrane ondulante. Lœwen-
thal (5) Hoffmann et Prowazek (6) ont publié ensuite des
travaux fort remarquables sur les spirochètes de la bouche.

(1) Büncuanx, Muller’s Archiv für Analomie, 1S40.

(2) Jronus, Wallers Ammon's Journ. für Chir., 1847.

:3) Roux, Des végétaux qui croissent sur les animaux vivants, 1847. Histoire
nalur. des végél. parasites, 1853.

(*) Mrzcer, Die Mikroorg. der Mundhühle. Leipzig, 1892.

(5) LozwexruAz, Bert. lin. Woch., 1906, n° 10; Mediz. Klinik, 1906.

6) Horruaxx et S. V. Prowazer, Centr. für Bakt., Orig., t. XLI.

554 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Hoffmann et Prowazeck ont étudié ces microorganismes à
l'état frais et sur des préparations colorées au Giemsa ou par
la méthode de Læffler, après fixation par les vapeurs osmiques.
Ils en distinguent trois variétés : une très petite, très mince,
avec des ondulations nombreuses et très serrées, qui se voit
seulement dans les colorations par la méthode de Læffler, et
ils la désignent sous le nom de Spirillum Dentium : une
forme plus épaisse, plus grosse, avec des ondulations plus
lâches et plus rares, qu'ils appellent Spirillum Buccalis, et une
troisième, intermédiaire.

Dans les trois variétés, ils ont mis en évidence une sorte
de cil et un prolongement du périplaste qui peut, chez Spiril-
lum Buccalis, se gonfler et se détacher sous l'action de l’eau
distillée. Ils ont confirmé ainsi les recherches. de Lowenthal.
au point de vue de la présence d’un cil inséré au milieu du
corps de Spirillum Sputigenum, duquel ils donnent deux
photographies. Cette ciliation particulière a été démontrée par
Lowenthal et Zettnow (1).

Mais certainement, le travail le plus considérable sur ce
sujet est celui de Mühlens et Hartmann (2). Ces deux auteurs
ont réussi, nous l'avons déjà dit, à cultiver Spirillum Dentium
el ils en ont fait une étude très minulieuse et très complète.

Les caractères culturaux et morphologiques de ce spirochète
sont tout à fait différents de ceux que nous venons de décrire
à propos des microbes cultivés par nous. La forme des colonies
de Spirillum Dentium. Vimpossibilité de le cultiver dans les
milieux sans sérum, ses dimensions plus petites, suffisent à le
distinguer complètement des microorganismes isolés par nous.

En outre, ils n'ont pas constaté de cils latéraux, mais ils
ont mis en évidence, seulement sur certains éléments, un
ail long et fin qu'ils ne considèrent pas comme un véri-
table eil, mais comme un prolongement du périplaste. Ces
mêmes auteurs, qui soutiennent d’ailleurs comme Hartmann
et Prowazek la nature protozoaire de ces microorganismes,
ont étudié avec la technique de ces derniers le tartre dentaire,
et ils ont constaté, chez Spirillum Buccalis à l'état frais, des

(1) Zerrxow, Loco cilato.
(2) Munrexs et HARTMANN, loco cilalo.

DES « MICROBES SPIRALÉS DE LA BOUCHE » EX5

figures en Y, qu'ils considèrent comme une division longitu-
dinale et, sur lame colorée, des cils terminaux et l'existence
d'une membrane ondulante.

De tout ce que nous venons de passer en revue, très rapide-
ment, il semblerait évident que les espèces décrites par nous
mériteraient d’être séparées de tous les spirochètes actuelle-
ment connus de la bouche.

Il est très probable que les espèces A et Cpeuvent être rangées
parmi les spirochètes de la bouche, intermédiaires à Spirillum
Buccalis et à Spirillum Dentium. Leur ciliation particulière,
leurs dimensions, l'aspect de leurs spires permettent ce
classement provisoire entre le plus gros et le plus petit
spirochète. L'espèce B, décrite par nous, ressemble par bien
des caractères à Spirillum Buccalis, mais en réalité, nous ne
pouvons pas l’affirmer. De nouvelles recherches trancheront la
question qui mérite, à l'heure actuelle, d’être laissée en suspens.

Le microbe D doit être rangé à part, à cause de ce carac-
tère essentiel qu'il n'est pas pourvu de spires comparables à
-celles que nous avons reconnues aux espèces précédentes. Il
se rapproche, par bien des caractères, de Sprrillum Crassum
que Veillon et moi-même venons de décrire, mais il s’en
différencie nettement par sa longueur et par le fait surtout
qu'il s'est montré complètement dépourvu de cils (tout au
moins de cils colorables par les méthodes ordinaires), tandis que
Spiriltum Crassum possède de très nombreux eils péritriches.

En terminant, nous tenons à remercier M. le D' Roux,
directeur de l’Institut Pasteur, qui a bien voulu nous accueillir
et nous permettre ainsi de profiter de la merveilleuse instal-
lation de l’Institut Pasteur de Paris et de l'excellent enseigne-
ment qu'on y recoit. Il nous est particulièrement agréable
d'exprimer ici la reconnaissance la plus chaleureuse à notre
cher maître et ami M. le D' Veillon, qui a bien voulu nous
donner une place dans son laboratoire et nous aider, à tous
les instants, de son expérience et de ses conseils toujours
bienveillants.

Nous devons les excellentes photographies que nous donnons au cours
de ce travail, au talent de M. Jeantet, que nous sommes heureux de remer-
cier ici.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE
DE L’'ASPERGILLUS NIGER

CONTRIBUTION A L’ÉTUDE DE L'INFLUENCE
DE L’ALIMENT CARBONÉ SUR LA SÉCRÉTION DES DIASTASES

PAT GMGREZES

Duclaux (1) pose de la manière suivante le problème qui
nous occupe : « Soit une cellule pouvant vivre aux dépens de
diverses substances qui, comme le sucre candi, l’amidon, la
caséine, ont besoin, avant de devenir assimilables, alimentaires,
de subir l’action d’une diastase spéciale à chacune d'elles.
Cette cellule sécrète-t-elle d’une facon constante, et en quelque
sorte nécessaire, toutes les diastases qu'elle a le pouvoir ou
l'occasion d'utiliser; ou bien la production de ces diastases est-
elle intermittente, subordonnée aux conditions d'alimentation
et liée à la présence de l'aliment qu'il s’agit de digérer? En
d’autres termes, cette cellule sécrète-t-elle à la fois toutes ces
diastases ou seulement chacune d'elles au fur et à mesure de
ses besoins? »

Il cite l'exemple de l’Aspergillus glaucus qu'il a étudié
lui-même. Cette moisissure, cultivée sur du lactate de
chaux, ne sécrèle ni présure, ni caséase, ni sucrase, mais
elle sécrète de l’amylase; cultivée sur saccharose, elle sécrète
de la sucrase, mais pas d'amylase, ni de caséase, ni de pré-
sure. Sur lait, elle donne, au contraire, de la présure et de la
caséase.

Remarquons que, pour Duclaux, l'expression « absence de
diastase » n'a rien d'absolu, car il n’envisage dans ses expé-
riences que les diastases qui diffusent dans le liquide ali-
mentaire. Mais nous avons des exemples d'expériences où l’on
a observé la disparition d’une diastase à l’intérieur de la cellule.

(4) Duccaux, Microbiologie, &. II, p. 83, 1899.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 557

Katz (1) montre que le Penicillium glaucum cultivé sur
l'amidon produit de l’amylase, et que, si l’on ajoute à l’amidon
5 p. 100 de saccharose ou 2 p. 100 de glucose dans le milieu de
culture, la production de diastase est complètement supprimée:
un extrait du mycélium broyé n'a aucune action sur l'amidon.

Dans une étude très étendue sur les diastases du Monilia
sitophila, Went (2) cite un grand nombre de faits analogues.
Il a cultivé cette moisissure sur des aliments carbonés très
divers, choisis parmi les acides gras, les hydrates de car-
bone et les matières protéiques, et, d’après l’ensemble de ses
résultats, il divise les diastases du Monilia sitophila en trois
classes.

Certaines, la sucrase par exemple, sont sécrétées en pré-
sence de tous les aliments carbonés qui permettent au végétal
de se développer.

D’autres, telles que la maltase, ne sont sécrétées qu'avec un
certain nombre de ces aliments.

D'autres enfin, comme la présure, n'apparaissent qu'en pré-
sence de l'aliment qui nécessite leur intervention.

Il ne serait même pas nécessaire de prendre des aliments de
nature différente pour observer l'apparition de nouvelles dias-
tases. Deux corps stéréo-isomères pourraient donner lieu à des
sécrélions différentes.

Pottevin (3) obtient, à partir du mycélium de l'Aspergillus
niger, cultivé sur une solution de méthyl-d-galactoside 8, un
macéré inactif sur le méthyl-d-galactoside +. Mais vient-on à
introduire sous la plante le mélange des deux galactosides, le
macéré est actif à la fois sur le galactoside + et sur le galacto-
side $.

Longtemps avant, on avait observé des faits analogues chez
les levures et les bactéries.

Bourquelot (4) avait établi que la levure de bière en activité,

(1) Karz, Jahrb. Wiss. Bot., 1898, t. XXXI, p. 533.

2) WEnt, Jahrb. Wiss. Bot., 1901, t. XXXVI, p. 611.

(3) Portevin, Annales de l'Institut Pasteur, t. XVII, p. 49, 1903.
(4) Bourquecor, Journal de l'Anat. el de la Physiol., p. 209, 1886.

558 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dans une solution de glucose ou de sucre de canne, ne produit
pas de ferment capable de dédoubler le maltose, mais que,
placée en présence de ce sucre, elle donne un ferment qui le
dédouble.

Wortmann (1), en étudiant l’utilisation de l’amidon par les
bactéries, avait constaté que toute sécrétion d’amylomaltase
cesse lorsque, avec l’amidon, on introduit dans le milieu de
culture un autre élément carboné plus facilement assimilable,
comme le glucose. Ces résultats tendent à montrer qu'étant
donné une plante qui ne sécrète pas normalement une dias-
tase, il est possible qu’elle la sécrète en présence d’un aliment
convenable.

Ce fait important a été récemment mis en doule.

Dans une étude sur les diastases du Penicillium Camemberti,
Wayland Dox (2), n'ayant jamais observé la disparition d'une
diastase sous l'influence de l'aliment carboné, conclut en
disant : «Il n’est pas prouvé que des diastases qui ne sont pas
formées normalement par l'organisme en quantités appré-
clables, peuvent être développées par un mode de nutrition
spécial. L'influence de l'addition d’une substance particulière
au milieu de ecullure ne consiste donc pas à développer une
diastase entièrement nouvelle, mais à stimuler la production
de la diastase correspondante qui est normalement formée
dans toutes les conditions. » |

Cet auteur n'ayant employé dans toutes ses expériences que
des hydrates de carbone comme aliment carboné, il y avait lieu
de se demander si ses conclusions ne seraient pas en défaut
lorsqu'on prendrait un aliment étranger à ce groupe.

C'est ce doute qui a inspiré notre travail.

Nous avons étudié les diastases sécrétées par l’Aspergillus
niger en offrant à cette moisissure de l’acide succinique pour
tout aliment carboné, et nous avons comparé les résultats
obtenus avec ceux d’une culture sur sucre.

(4) WorTmann, Zeitschr. für physiol. Chemie, 1. VI, p. 287, 1882.
Fr U 4 | 0 ‘ . .
(2) Arraur WayLanD Dox, The intracellular enzyms of Penicillium and Asper-
gillus. U. S. Department of Agriculhure, 1940.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 559

MÉTHODE DE CULTURE. CHOIX DE L'ALIMENT CARBONÉ. — Nos expé-
riences ont élé faites sur des cultures pures d’Aspergillus
niger.

Le liquide était introduit dans des fioles d'Erlenmeyer et sté-
rilisé à l’autoclave à 115 degrés pendant vingt minutes: ense-
mencé ensuite à partir d'une culture pure avec un fil de pla-
tine et placé dans une chambre thermostat à la température de
31 degrés. Nous avons adopté comme milieu de culture le
milieu Raulin, dont nous avons éliminé le sucre et l'acide tar-
(rique, suivant notre idée de prendre un aliment carboné
étranger au groupe des sucres et aussi éloigné que possible
de ce groupe; ne renfermant pas, par exemple, de fonc-
tion alcool dans sa molécule. Nous avons tenté des cultures
sur quelques acides organiques; avec les acides gras en parti-
culier, nous n'avons pas obtenu de bonne récolte, mais avec
l'acide succinique, dont la molécule est énergétique, nous avons
eu des résultats très satisfaisants.

L'Aspergillus niger S'accommode fort bien de cet aliment
pendant un grand nombre de générations; nous avons pu
remarquer qu'au bout de la soixantième il était encore très
vivace. |

Pour déterminer la dose d'acide qui convient le mieux à ce
végétal, nous avons fait l'expérience suivante : nous avons
ensemencé cinq séries de trois fioles d'Erlenmeyer de 100 cent.
cubes, contenant chacune 25 cent. cubes de liquide de culture
avec des spores de la 20° génération, en ayant soin d’avoir la
même concentration en acide succinique dans chaque fiole
d'une même série. Les mycéliums récoltés au bout de quatre
Jours ont été séchés dans la chambre thermostat à 37 degrés
jusqu'à poids constant.

Ces nombres ne sont pas tout à fait comparables, car, à la
même époque, toutes les récoltes n'étaient pas arrivées au
même stade de leur développement; les trois dernières séries
élaient en effet bien sporulées, alors que les récoltes de la pre-
mière série ne présentaient encore aucune spore.

560 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Voici les résultats résumés en tableau :

Ar: série.| 2° série.| 3° série. 5e série.
CONCENTRATION DU LIQUIDE — _— — —
DE CULTURE

en acide succinique. 3 p-. 100.4 p. 100./: . 400.2 . 100

( 05395 08282 (8218
Poids des récoltes. 42107325 0,325 0,228
0,365 0,297 0.190

1,115 | 0,907

Rapport du poids
de récolte 0,299 0,302
au poids d'acide.

Néanmoins nous voyons que, jusqu'à la quatrième série, les
rendements relatifs à l'acide succinique ne varient pas beau-
coup, et comme c'est avec les concentrations de 3 ou 4 p. 100
que l’aspect des cultures nous a paru se rapprocher le plus de
celui qu’elles affectent sur le sucre, nous avons adopté l’une ou
l’autre de ces concentrations.

Étant en possession d’un milieu de culture dans lequel le
sucre à été remplacé par l'acide suceinique, milieu qui con-
vient au développement de l'Asperqgillus niger, nous nous
sommes proposé de vérifier si les diastases, dont on à démontré
l'existence lorsque la moisissure pousse sur le saccharose, sont
encore élaborées en présence de ce nouvel aliment. Ne pouvant
faire ce travail pour toutes les diastases qui ont été signalées,
nous avons pensé que nous devions d’abord étudier les dias-
tases qui exercent leur action sur les sucres, puisque à un ali-
ment appartenant à ce groupe nous avons substitué un aliment
qui lui est étranger.

En réalité, nous avons recherché : la sucrase, l’'amylase, la
maltase, l’inulase et l’'émulsine, dans le mycélium récolté sur
l'acide succinique.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 561

MopE D'EXTRACTION DES DIASTASES. — Pour obtenir ces dias-
tases, nous avons opéré de la façon suivante : les mycéliums
extraits du vase de culture étaient dépliés et lavés rapidement
sous un jet d’eau distillée. Ils étaient essorés ensuite entre deux
feuilles de papier filtre, portés dans une chambre thermostat
à 36 degrés et, après dessiccation complète, réduits en poudre
à l’aide d’un moulin à café turc. Nous faisions macérer cette
poudre dans de l’eau distillée pendant quelques heures, et, au
bout de ce temps, nous filtrions sur un filtre de papier pour
avoir une solution limpide.

ETUDE DE LA SOLUTION DIASTASIQUE. — C’est dans cette solution
que nous avons recherché les diastases indiquées précédem-
ment en faisant l'expérience suivante : nous préparions deux
tubes à essai contenant le même volume d’une solution de la
substance à hydrolyser; dans le premier, nous introduisions un
volume déterminé de la solution diastasique, et dans le second,
nous introduisions le même volume de la solution diastasique,
mais après l'avoir préalablement maintenu pendant cinq
minutes dans l'eau bouillante. Nous placions les deux tubes
dans une étuve à 35 degrés, et, au bout d’un temps convenable,
nous dosions le pouvoir réducteur dans les deux tubes par la
méthode de M. G. Bertrand ({). Dans toutes les expériences,
durant plus de deux heures, nous avons ajouté du toluène
comme antiseptique.

RÉSULTATS EXPÉRIMENTAUX. — Dans une de nos expériences,
2 grammes de mycélium récolté sur une solution d’acide succi-
nique à 2,5 p. 100 au bout de cinq jours, ont été traités par
20 cent. cubes d’eau pendant quatre heures. Pour chaque dias-
tase, nous avons pris 2 c.c. 5 de la solution d’épreuve, Î cent.
cube de la solution diastasique, et nous avons dosé le pouvoir
réducteur après quarante-huit heures sur le contenu total des
tubes suivant le tableau ci-après :

(1) G. Bertraxn, Bull. Soc. chimique, t. XXXV, p. 1285, 1906.

36

562 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

SUCRASE AMYLASE MALTOSE | INULASE ÉMULSINE

Composition! 4 gr. 4 gr. fécule 0 gr. 9010 gr. 315| 0 gr. 350

de la sucre. |dans 100 c.c. d'eau |maltose| inuline |[amygdaline

solution |+ 20 c.c.|portée à l'ébullition|+20c.c.|+ 20 c. c.| + 10 c.c.
d'épreuve. eau. pendant 2 minutes.| eau. eau. eau.

Cuivre
réduit
dans le

{er Tube.

99,5

Cuivre

réduit dans 9.9
le tube de
témoin.

Nous voyons que l’Aspergillus niger, cultivé sur l'acide suc-
cinique, élabore encore les cinq diastases étudiées.

Remarque. — Le résultat qui concerne la mallase est à
rapprocher de celui qu'a obtenu Went avec le Monilia sitophila.

Cet auteur a observé la disparition de cette diastase en pre-
nant le succinate de soude comme aliment carboné : mais il
faut remarquer qu'il opérait sur 1 milligramme de récolte,
et celte quantité nous paraît trop faible pour permettre d’af-
firmer un résultat négatif.

On peut penser, en effet, que si on avait eu plusieurs
grammes de récolte, comme dans nos expériences, le résultat
aurait été changé.

ÉTUDE QUANTITATIVE DE LA SÉCRÉTION DE SUCRASE

Dans les expériences qui précèdent, nous avons constaté
qu'aucune des diastases recherchées ne disparaissait du mycé-
um de l’Aspergillus niger lorsque, dans le milieu de culture,
on subslituait au saccharose un corps très différent au point
de vue chimique, comme l'acide succinique. Cela ne veut pas
dire que l'aliment carboné n’a aucune influence sur les sécré-
lions diastasiques : de nombreux auteurs (1\ ont reconnu que

(1) Coin, Thèse de doctorat. Paris, 1911. — WayLanp Dax, Loc. cit.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 563

cette influence se faisail sentir sur la quantité de diastase
élaborée et nous nous sommes proposé d'étudier quantitative-
ment comment elle se manifeste dans le cas de la sucrase.

Pour réaliser cette étude, il faut mesurer la quantité de
diastase présente dans un poids donné de mycélium, ce que
l’on fait généralement à l’aide de deux séries d'opérations.
Dans la première série, on extrait la diastase des cellules en la
faisant passer dans une solution, et dans la seconde on mesure
Pactivité de cette solution. La sucrase est, parmi les diastases
connues, celle qui se prête le mieux à celte mesure : elle diffuse
facilement à l'extérieur des cellules et nous savons, en outre,
mesurer l’activité de ses solutions depuis les travaux de
M. Fernbach (1.

Quant à la méthode que nous avons employée, elle ne diffère
de celle de M. Fernbach que dans le mode d'extraction de la
diastase. Cet auteur broie le mycélium immédiatement après
la récolte et le fait macérer avec de l’eau pour obtenir la solu-
tion diastasique ; en même temps, il récolte une seconde
culture, venue dans les mêmes conditions que la première, il
la fait sécher, la pèse et admet que le poids obtenu est aussi
celui de la première culture. Nous n'avons pas pu le suivre
dans cette série d'opérations, car cette hypothèse, qui peut être
légitime lorsqu'on a affaire à des cultures sur saccharose qui
couvrent rapidement toute la surface du liquide, devient d’une
application presque impossible lorsqu'on à affaire à des cul-
tures qui ne couvrent pas bien, comme celles que nous avons
obtenues avec l'acide suceinique. Pour parer à cet inconvé-
nient, nous avons cru devoir adopter une méthode suggérée
par le mode d'extraction des diastases, que nous avions employé
dans l'étude qualitative.

Principe de la méthode. — Pour comparer l'activité de
deux mycéliums, nous les faisons sécher, dans les mêmes con-
ditions, jusqu'à poids constant; nous les réduisons en une
poudre homogène et nous faisons macérer des poids égaux des
deux poudres dans un même volume d'eau. Nous déterminons
ensuite l’activité de la solution obtenue de la facon suivante :

Pendant deux heures, à 36 degrés, nous avons fait agir, sur

(1) FERN8ACH, Thèse de doctorat. Paris, 1890.

56% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

1 gramme de sucre, un volume de solution diastasique tel
qu'il n'y ait pas plus de 100 milligrammes de sucre hydrolysé:
nous n'avons Jamais eu ainsi plus de 20 p. 100 de sucre hydro-
lysé et nous pouvons admettre que le pouvoir réducteur, déter-
miné par la méthode de M. G. Bertrand, est proportionnel à la
quantité de sucrase.

Le volume total est toujours ramené à 10 cent. cubes, et nous

1
1000 1007
comme l'indique M. Fernbach (1), parce que des expériences
poursuivies au laboratoire de M. G. Bertrand (expériences que

: , l , À
opérons en présence de d'acide acétique au lieu de

r r fr pe ? l
nous avons répétées) ont montré que c’est avec la dose de 55

qu'on obtient l'effet maximum.

Dans chaque cas une expérience témoin, faite avec le même
volume de solution diastasique bouillie, nous indique quelle est
la part de l'acide dans l’hydrolyse ; de sorte que les nombres don-
nés se rapportent uniquement à l'action de la sucrase elle-même.

Étude expérimentale de la méthode. — Nous avons recherché
quelles sont les meilleures conditions expérimentales pour
l'application de cette méthode. Nous faisons macérer les
pelites quantités de poudre sur lesquelles nous opérons dans
de petits flacons de 50 cent. cubes; nous avons soin de
mouiller la poudre en la malaxant avec une petite fraction de
l’eau que nous voulons employer et nous bouchons le flacon.

Ces précautions étant prises, nous avons fait varier les prin-
cipaux facteurs sur lesquels nous pouvions agir.

Influence de la durée de la macération. — Nous avons préparé
six flacons avec 0 gr. 5 de poudre et 25 cent. cubes d’eau dis-
tillée. Nous les avons laissés à 36 degrés, sans les agiter,
pendant des temps différents.

L'activité de chaque solution diastasique a été déterminée
aussitôt après qu’elle a été obtenue.

Durée de la macération. 4 heure. 2h. 8 b., "4 bee

Cuivre réduite ee 95 milligr. 120 130 120 119 121

Nous avons répété cette expérience aux environs de 0 degré;

(1) FerNBACH, loc. cil., p. 31.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 565

nos flacons étaient placés dans de la glace pilée, mais en agitant
fréquemment.

Durée de la macération. 4 heure. Zn: 3 h. 4 D.
Core 12 militer: 125 TES 15

Ces résultats montrent que l’activité obtenue croît d'abord
avec la durée de la macération, arrive à sa valeur maximum et
retombe à une valeur légèrement inférieure qui demeure
constante.

Si, pendant la macération, il y avait simplement dissolution
et diffusion de la sucrase, l’activité maxima devrait se main-
tenir. Puisqu'il n'en est pas ainsi, nous devrions, pour faire
des mesures correctes, répéter pour chaque mycélium l’expé-
rience que nous venons de décrire et convenir de comparer
entre elles les valeurs maximum de l’activité.

En réalité, nous nous sommes borné à une seule macération
de durée toujours égale à deux heures.

Influence de la température. — Dans l'expérience faite à
0 degré, nous avons atteint plus rapidement la valeur maxi-
mum de l’activité, parce que nous agitions fréquemment,
mais cette valeur est restée inférieure à celle qu'avait donnée
l'expérience faite à 36 degrés. Il en est de même de la
valeur constante finale, et ce fait est dû à la différence de
température.

L'expérience suivante, faite sur une autre poudre en donnant
à toutes les macérations une durée de deux heures, montre
que, pour une durée de macération constante, l’activité obtenue
varie avec la température.

Température. 18° 280 34 36° 370
sucre interverti . . 102 milligr. 108 114 114 115

Au point de vue expérimental, nous voyons que la tempéra-
ture peut varier de 2 ou 3 degrés sans que l’on observe une
différence d'activité sensible. Dans tout ce qui suit, les macéra-
tions ont été faites aux environs de 36 degrés.

Influence de la concentration. — Nous avons fait macérer
des poids de poudre variables avec le même volume d’eau,
10 cent. cubes; l’activité a été déterminée en faisant agir sur

566 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

le même poids de sucre des volumes de solution indiqués dans
le tableau.

Nous donnons, dans la dernière colonne, le poids de sucre
interverti, calculé, à partir du résultat de la dernière expé-
rience, en supposant que l’activité des solutions obtenues
soit proportionnelle au poids de poudre employée.

SUCRE INTERVERTI

POIDS DE POUDRE VOLUME DE SOLUTION PT LR
Trouvé. Calculé.

4 gramme. (D BEEN) 244 270
0 gr. 5 INCNC. » 262 270
her 2 1e nc. 25 166 162
0 gr. LC IG. 00) 108 »

Nous voyons que l'hypothèse faite est pratiquement exacte
pour les trois dernières expériences, c'est-à-dire lorsqu'on traite
la poudre par des quantités d’eau variant entre 20 et 100 fois
son propre poids.

Influence de la réaction du milieu. — Les liquides de macé-
ration se sont montrés constamment acides à la phtaléine et
alcalins à l'hélianthine, et nous avons constaté, dans une expé-
rience préliminaire, qu’en prenant 0 gr. 1 de la poudre employée
pour 10 cent. cubes d’eau, 5 cent. cubes du liquide de macéra-

tion nécessitaient 0 c.c. 75 d’une solution de soude pour

x

virer à la phtaléine.
Nous avons alors préparé cinq macérations comme il suit :

Macération I 0 gr. 1 de poudre + 2 c.c. de NaOH 55 + S1c-c. d'eau! (©)

N
Macération IT 0 gr. 1 de poudre + 1 c.c. de NaOH 100 9:c:€. d'eau.

+ N
Macération [IT 0 gr. 1 de poudre + 0 c.c. de NaOH + 10 c.c. d’eau (**)

À c N
Macération IV 0 gr. 1 de poudre + 1 c.c. de SO‘H® 100

+ 9 c.c. d'eau.

ET ; N
Macération V 0 gr. 1 de poudre — 2 c.c. de SO“? 100 + 8 c.c. d'eau (*")

(*) Pour être alcalin à la phtaléine.
(**) Réaction naturelle.
(***) Pour être acide à l'hélianthine.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 567

Nous espérions avoir atteint l'alcalinité à la phtaléine dans
la macération I et l'acidité à l'hélianthine dans la macération V;
en réalité, au bout de deux heures, tous les liquides de macé-
ration ont été encore acides à la phtaléine et alcalins à l'hélian-

N
thine. Avant de filtrer, nous avons ajouté de l'acide —— 100’ de la

N
soude -—— Too °° de l’eau, de facon à avoir 12 cent. cubes de liquide

dans tous les cas et à revenir à la réaction naturelle, et nous
avons attendu quelques instants.

En mesurant l’activité des solutions diastasiques, nous avons
trouvé :

Numéro de la macération . I II III IV \

Suere intervérthi.. "002 02: 41% AG 118 108 104

Il en résulte que la réaction la plus favorable à la prépara-
lion des solutions de sucrase, suivant le procédé employé, est
la réaction du milieu naturel.

L'action défavorable des acides est très marquée; celle des
bases est moins apparente.

APPROXIMATION DES RÉSULTATS, — En résumé, il résulte des
expériences qui précèdent que la méthode est fidèle, qu’elle
donne facilement le même résultat quand on opère avec la
même poudre. Mais les activités des solutions obtenues en par-
tant de deux mycéliums différents sont-elles dans le mème
rapport que les richesses en sucrase de ces dernicrs?

Il en serait ainsi si les poudres qui ont subi une première
macération ne renfermaient pas de sucrase. Les expériences
qui suivent vont nous montrer que cette condition n’est pas
loin d'être réalisée.

Nous avons fait subir une deuxième macération à la même
poudre, après l'avoir filtrée sur un filtre taré à l'avance. Pour
recueillir toute la poudre, nous lavions le flacon à plusieurs
reprises avec la solution fillrée. Cette opération terminée, nous
pesions le filtre avec la poudre humide. Leurs poids à l’état sec
étant connus, nous obtenions ainsi le poids du liquide qui les

imprégnait.

568 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

En admettant que la richesse de ce liquide en sucrase soit la
même que celle de la première solution, on peut calculer
quelle sera l’activité du nouveau liquide de macération si, dans
la première opération, toute la diastase est entrée en solution.

în opérant une seconde macération de deux heures avec la
poudre encore humide, nous n'avons eu aucun gain de suerase.
Mais en faisant sécher au préalable le filtre avec la poudre à
36 degrés, pendant vingt-quatre heures, nous avons eu une
augmentation d'activité qui a été le | de l’activité de la pre-
mière macération pour un mycélium récolté sur du sucre et le

g Pour un mycélium récolté sur de l'acide succinique.

Pour ce qui est de ces deux mycéliums, d'activité très diffé-
rente, nous voyons qu'en prenant pour valeur du rapport de
leur richesse en sucrase, la valeur de celui des activités des
deux solutions diastasiques obtenues dans la première macé-

ration, nous aurions commis une erreur relative d'environ
ane l
8 2010

L'approximalion de ces mesures est suffisante pour nous
permettre de suivre les variations de la sécrétion de sucrase
par l’Aspergillus niger, quand on change le milieu de cul-
Lure.

Nous allons voir, en effet, que l’ordre de grandeur de ces
variations est bien supérieur à celui des erreurs que comporte
la méthode.

Dans toutes les expériences qui suivent, les poudres mycé-
liennes sont trailées par cent fois leur poids d’eau pendant deux
heures à 36 degrés; nous fillrons et nous déterminons immé-
diatement l’activité du liquide de macération par la méthode
indiquée. Nous ramenons la quantité de sucre interverti trouvée
à ce qu'elle aurait été si on avail pris 4 cent. cubes de ce
liquide, et, par convention, nous appelons activité du mycé-
lium la quantité de sucre interverti ainsi obtenue. Cette acti-
vité se rapporte à 40 milligrammes de poudre.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 569

L. Application à l'étude de l'influence de l'aliment. — Afin de
mettre en lumière l'influence de l'aliment carboné sur la sécré-
tion de sucrase par l'Aspergillus niger, nous avons étudié les
cultures suivantes au point de vue de leur activité

1° Une culture venue sur saccharose non interverti;
2° Une culture venue sur saccharose interverti;
3° Une culture venue sur acide suceinique à 3 p. 100.

Dans ces trois cas, les spores ensemencées provenaient d'une
culture sur saccharose.

Il est difficile de savoir à quelle époque on doit récolter les
mycéliums des différentes cultures pour avoir des résultats
comparables, et, pour éviter cette incertitude, nous avons étudié
dans chaque cas les variations d'activité avec l’âge de la culture.
Le tableau suivant résume les résultats que nous avons obtenus :

ALIMENT
CS
SACCHAROSE SACCHAROSE ACIDE SUCCINIQUE
non interverli. interverti. à 3 p. 100.
Activité. Activité. Activité.
Age de la culture :
AÉSTeUTE EU - 140 0 »
16 heures + 1 jour . . 292 285 ()
16 heures + 2 jours. . 172 216 9
16 heures + 3 jours. . 120 61 6
16 heures + 4 jours. . 12 54 2
16 heures + 5 jours. . 24 » »

Ces résultats sont d’ailleurs représentés par des courbes
jointes au texte ; ce sont les courbes [, IL et IT qui leur corres-
pondent.

Avant de les interpréter, il est intéressant de les comparer à
ceux qu'a obtenus M. Fernbach (1),en mesurant la quantité de
sucrase que renferme, à différents âges, une culture d’Asper-
quillus sur saccharose. Les nombres qu'il donne expriment la
quantité totale de diastase présente dans le mycélium ; si on les
divise par les poids des récoltes qu'il indique à côté, on les
rapporte à l'unité de poids. D'autre part, comme nous avons

1) FERNBACH, Loc. cit.

510 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

‘
effeclué les récoltes aux époques choisies par M. Fernbach, les
résultats de nos expériences se rapporlant toujours à un même
poids de mycélium, ils doivent varier suivant la même loi que
les nombres calculés comme il vient d'être dit, c'est-à-dire
qu'ils doivent être entre eux dans un rapport constant.

D'après cela, voici le tableau comparatif que nous avons
établi :

AGE ACTIVITÉ ACTIVITÉ RAPPORT
de la culture. d'après M. Fernbach. d'après nos expériences. <
392
CDRHEULES ER RNE 89 392 = = A7
89 *
$ 3 U 12 :
40 heures + 1 jour . ati 172 ==
Ji
, : ée 120 :
10 heures + 2 jours. 25 120 JE — 4,8
2 72
40 heures + 3 jours. 25 72 5: — 2,9
« 21)
à 24
:0 heures + 4 jours. 21 24 = As

Pour Les trois premières déterminalions, malgré la différence
du mode expérimental, les rapports concordent à 1 p. 10 de
leur valeur, mais pour les deux dernières ils ne concordent pas
du tout et, à partir de la troisième, ils décroissent mème en
progression arithmétique.

Le désaccord entre les résultats donnés par les deux méthodes
pour les mycéliums âgés semble bien tenir à une cause régu-
lière; 1l est remarquable qu'il se produit au moment où la
richesse en sucrase du liquide de culture augmente brusque-
ment, de 5 à 10 d'après M. Fernbach, mais de nouvelles expé-
riences seraient nécessaires pour mettre celle cause entièrement
en évidence.

Ceci posé, remarquons que les courbes obtenues sont très
différentes, la nature de l'aliment carboné à donc une influence
régulatrice considérable sur la sécrétion de sucrase par lAsper-
qulus niger.

Prenons pour terme de comparaison la courbe F obtenue avec
l'Aspergillus cultivé sur saccharose. La richesse du mycélium
en diastase, nulle à l’origine, croît rapidement, passe par un
maximum et décroit en deux temps, d'abord rapidement, puis
plus lentement et proportionnellement au temps.

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 571

Lorsqu'on substitue un autre aliment ausaccharose, onobtient
les courbes IT et IIT déplacées vers la droite et aplaties, la
sécrétion de sucrase est retardée et le maximum d'activité du
mycélium est diminué. Les deux caractères du phénomène sont
de plus en plus accentués à mesure que la nature de l’aliment
s'éloigne davantage de celle du saccharose.

Pere En pe. D en
| ee A
{ LH me” iv :
8 heures 16. 4011. 40h+ijour HChr2i 4047. 40h74].

On voit qu'en passant du saccharose à l’acide suecinique le
maximum d'activité décroît dans le rapport de 40 à 1 environ.
Cette diminution est si grande qu'on peut se demander si, dans
le dernier cas, la sécrétion de sucrase ne persiste pas grâce à
un phénomène d’hérédité.

IL. Application à l'étude du rôle de l'hérédité. — Vour vérilier
cette hypothèse, nous avons fait successivement soixante cultures
d'Aspergillus sur l'acide succinique et, avec les spores de la
soixantième génération, nous avons mis en train deux séries de
cultures, l’une sur acide suceinique et l’autre sur saccharose
non interverli.

572 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

En suivant leur développement, nous avons observé que leur
aspect était bien différent de celui que présentent les cultures
obtenues dans les mêmes conditions avec les spores d’un mycé-
lium habitué au saccharose. Les spores provenant d’une culture
sur saccharose, ensemencées sur acide succinique, nous don-
naient un mycélium qui sporulait sensiblement, à mesure qu'il
se formait, si bien que nous n'avons pu observer de mycélium
sans spores. Les spores de la soixantième génération, au con-
traire, nous ont donné un mycélium d'abord blanc, anfrac-
tueux, qui a sporulé d’abord contre les parois du vase; la
sporulation s’est arrêtée ensuite et la surface du mycélium, au
lieu de devenir franchement noire, est restée grise, tandis que
la face inférieure et le liquide de culture prenaient une teinte
vineuse, rouge violacé.

Nous avons pu constater que les mêmes spores ensemencées
sur du saccharose nous donnaient une culture florissante, mais
qui, par la suite, se comportait tout à fait comme la précédente.
Ces constatations rendent d'autant plus frappants les résultats
que nous avons obtenus en étudiant la sécrétion de sucrase dans
les deux séries de culture dont nous nous occupons.

ALIMENT
A

ACIDE SUCCINIQUE SACCHAROSE
à 3 p. 100. non interverti.
Age de la culture : — —
DEJNEUTES SU RUE SERRE » 132
40 heures AC EE 0 » 208
40 heures = 1jJOur RER 3 » 332
40 heures + 2 jours . . . 9,5 304
40 heures + 3 jours : "5. 3 » 230

Ces résultats sont, en outre, représentés par les courbes IV
CLAVE

La comparaison des courbes Let V, obtenues avec des cultures
sur saccharose, nous montre qu'en prenant des spores d’un
mycélium habitué à l'acide suecinique au lieu de spores d’un
mycélium habitué au saccharose, nous nous trouvons dans des
conditions moins favorables à l'élaboration de la sucrase : la
sécrétion de cette diastase est retardée et diminuée légèrement.
Dans les cas des courbes IIT et IV, c’est-à-dire lorsqu'on prend
l'acide succinique pour aliment, nous observons encore que la

RECHERCHES SUR LA SUCRASE DE L’ASPERGILLUS NIGER 573

sécrétion de sucrase est plus rapide avec les spores d’un mycé-
lium habitué au saccharose et, si nous ne trouvons pas de diffé-
rence appréciable pour les activités maxima, cela tient sans
doute à ce que nous sommes en présence de quantités de sucrase
trop faibles pour que notre méthode nous permette de la
déceler.

CON£ELUSION.

Les phénomènes dus à l’hérédité nous apparaissent comme
capables d'accentuer l'influence de l'aliment carboné sur la
sécrétion de sucrase ; c’est en présence de saccharose, et avec
des spores d’un Aspergillus habitué à cet aliment, que la sécré-
tion de sucrase est la plus rapide et la plus abondante ; et c’est
lorsqu'on ensemence des spores d'un Aspergillus habitué à
l'acide succinique sur cet aliment qu'on se trouve dans les con-
ditions les moins favorables à la sécrétion de sucrase.

Néanmoins, il ne semble pas que, grâce à ces phénomènes, on
puisse observer la disparition complète de sucrase chez l’Asper-
gillus; le fait qu'au bout de soixante générations la sécrétion de
sucrase n'a pas diminué, autant qu'on peut en juger par la
méthode employée, tend à montrer que le pouvoir de produire
cette diastase, étroitement lié à la cellule de l’Aspergillus niger,
est inséparable de son développement.
= Des expériences analogues poursuivies sur d’autres espèces

seraient nécessaires pour généraliser cette conclusion.

Ce travail a été fait au Laboratoire de chimie biologique de
la Faculté des sciences (Institut Pasteur) sous la bienveillante
direction de M. G. BERTRAND.

Nous Le remercions sincèrement de ses conseils éclairés et de
ses encouragements si précieux à un Jeune expérimentateur.

STATISTIQUE DES VACCINATIONS ANTIRABIQUES
A L'INSTITUT PASTEUR DE SAMARA

POUR LES ANNÉES 1886-1910

par le Dr M. ACKER.

L'Institut Pasteur du Zemstwo de Samara a commencé à
fonctionner le 2 juillet 1886.

Depuis celte époque jusqu’au 31 décembre 1910, c'est-à-dire
pendant une période de vingt-quatre ans et six mois, 20.185 per-
sonnes ont subi le traitement anli-rabique à cet Institut.

Ces 20.185 traités comprennent 13.397 hommes (66,4 p. 100)
et 6.788 femmes (33,6 p. 100). Dans ce nombre on y trouve
5.839 cas d'enfants au-dessous de dix ans, soit 28,9 p. 100).

Dans ces 20.185 personnes traitées sont comprises 1.909 per-
sonnes non mordues, mais ayant été en contact quelconque
avec des animaux enragés, 93 personnes mordues par des ani-
maux sains, comme cela a été reconnu plus tard, et 18.183 per-
sonnes mordues par des animaux enragés ou suspects de rage.

Sur ces 18.183 personnes mordues, 228 sont mortes de rage.
La mortalité globale est donc de 1,25 p. 100. Chez 60 personnes
la rage s'est déclarée pendant le traitement, 63 sont mortes
dans les quinze jours qui ont suivi la fin du traitement et 105
plus de quinze jours après la dernière inoculation. La mortalité
réduite est alors de 0,58 p. 100.

Le tableau suivant indique la répartition de ces 18.183,
d'après le degré de certitude de la rage et aussi d'après l'espèce
d'animaux mordeurs et la place des morsures, ainsi que la
mortalité correspondant à chacun de ces groupes.

Comme on le voit d’après le tableau ci-dessous, pour 8.779
personnes la rage de l'animal mordeur n'a pu être constatée,
ni expérimentalement, ni par examen vétérinaire. Mais si l’on
se reporte aux renseignements fournis par les mordus et aux
circonstances dans lesquelles s'est produite la morsure, il est

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À DE PC I RE RE LP ON ER

576 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

facile de se convaincre que, dans la plupart des cas (les deux
tiers au minimum), l'animal mordeur était atteint de rage.
Nous voyons, en effet, que la mortalité pour la catégorie C, est
à peu près la même que pour les deux autres catégories, et la
mortalité réduite pour cette catégorie est mème supérieure à la
mortalité générale.

219 fois seulement sur 228 cas, la période d’incubation de
la rage à pu être déterminée.

Ces 219 cas, d’après la durée d'incubation, se répartissent de
la facon suivante :

DURÉE | Moins De De De De De Au delà
s de 20 | 20 à 40 | 40 à 60 | 60 à 80 | 80 à 100 |100 à 200| de 200
D'INCUBATION | Jours. jours. jours. jours. jours. | jours. jours.
\
——| — — | —| —
Nombre | 91 106 | 46 A7 5 15 9
des cas.
p. 100 | 9,6 48,4 21,0 HS 2,3 6,8 4,1

À l'inspection de ce tableau, on remarque que le plus souvent
(48 p. 100 de cas) la rage se déclare dans la période de vingt
à quarante jours après la morsure ; 79 p. 100 des malades sont
pris de rage dans les premiers soixante jours après la morsure.

La période d'incubation minima de treize jours fut observée
une fois; de quatorze jours — deux fois. Dans 3 cas seulement,
la période d'incubation a duré plus d’un an.

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L. MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Cassette,

26° ANNÉE AOÛT 1912 N° 8

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE
DE LA VIEILLESSE

par A° T. SALIMBENI et Lours GERY.

(Avec les PI, XIV à XVI.)

Grâce aux travaux de Metchnikoff et de son école, l'étude
scientifique de la vieillesse, trop négligée jusqu'à ces dernières
années par les biologistes et les médecins, est, en ce moment, à
l'ordre du jour. Le nombre des faits précis déjà réunis sur cette
importante question nous permet d'espérer qu’on arrivera à
élucider un jour la pathogénie de la déchéance sénile. Cette
pathogénie, en effet, est loin d'être évidente; le temps unique
facteur de vieillesse, ce n’est pas une explication plus satis-
faisante pour l'esprit du elinicien que pour celui du philosophe;
l'observation montre tous les jours que le degré de sénilité ne
se peutnullement mesurer à l'âge du sujet. Tel qu'il a été posé
par Metchnikoff, le problème de la vieillesse doit être envisagé
el poursuivi par la double voie, si féconde en médecine, de
l'étude anatomo-clinique et expérimentale : étude des lésions
spontanées chez les vieux sujets, d’une part; d'autre part, étude
des lésions expérimentales provoquées par les divers facteurs
capables d'affaiblir l'organisme et de produire la déchéance
sénile, en précipitant l’action du temps.

A l'heure actuelle, la partie expérimentale de l'étude de la
vieillesse est peut-être poussée plus loin que l'étude anatomique ;
l’on a pu reproduire chez l’animal des lésions qui sont l’apa-

37

578 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

nage et peuvent être considérées comme la cause de la sénilité :
Metchnikoff (1) a montré que l’athérome aortique, la cirrhose
du foie, la néphrite interstitielle chronique peuvent être déter-
minés chez les animaux par l'ingestion de petites doses journa-
lières de paracrésol continuées pendant des mois. Okhubo (2) et
plus tard Dratchinsky (3) ont produit des lésions organiques
très prononcées et rappelant de très près celles que l’on rencontre
dans les organes des vieillards, en faisant ingérer à des lapins,
cobayes et macaques de petites doses d'indol. Bref, il semble
bien que les substances de la série aromatique, formées cons-
tamment dans l'intestin, agissent comme des poisons lents
capables de provoquer des lésions que l'on rencontre dans la
vieillesse.

L'étude anatomo-pathologique des lésions trouvées chez les
sujets âgés, au contraire, a été rarement entreprise, et nous ne
connaissons que des examens partiels. Il est en effet assez rare
de pouvoir faire dans de bonnes conditions l’autopsie d’un sujet
très âgé. L'occasion s'étant présentée de l'examen complet et
précoce d’une femme de quatre-vingt-treize ans, indemne de
tares organiques, M. Metchnikoff a bien voulu nous confier cette
tâche.

Cette femme, Ivana SL..., Serbe d'origine, était dans un excel-
lent état quand, en juin 1909, toute sa famille émigra en Amé-
rique et l’'emmena avec elle. La Commission américaine d'im-
migralion accepta tous les membres de la famille; elle seule fut
refusée comme « undesirable » du fait de son grand âge. Ses
parents durent l'abandonner; elle repassa l'Océan et la Com-
pagnie transatlantique la débarqua au Havre. Pendant le retour,
la pauvre vieille était devenue folle, alors que, jusqu’à ce
moment, elle jouissait, paraît-il, de facultés intellectuelles suffi-
santes. Le directeur de l’hospice du Havre écrivit à M. Mecht-
nikoff, sachant que ce dernier poursuivait des études sur la
vieillesse. Elle arrive à l'hôpital Pasteur, le 6 août 1909.

Elle est atteinte d’un délire d'angoisse ; elle passe des heures

(1) Annales de l'Institut Pasteur, octobre 1910.
(2) In Metchnikoff, loc. cit.
(3) Annales de l'Institut Pasteur, juin 1912.

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 519

entières à crier et à chanter sur un ton de mélopée. Elle
parle un dialecte slave et il fut assez difficile de trouver un
interprète. Elle appelle sa « maman » ; elle s'adresse à ses
enfants, leur reproche de l'avoir emmenée si loin, elle si vieille;
une phrase revient souvent : « Pourquoi m'avez-vous laissée si
seule dans la nuit? » Souvent elle est fort agitée, elle se lève,
lacère sa chemise, cherche à mordre et à griffer les personnes
qui l’'approchent.

Son état d'agitation empêcha de la garder à l'hôpital Pasteur,
et le 11 août on dut l'envoyer à l’hospice Sainte-Anne, dans le
service du D' Dagonnet.

Elle se calme alors peu à peu et son agitation tombe, la débi-
lité mentale persistant toujours. L'agitation reparut vers la fin
de janvier 1910 et elle mourait le 1° février vers midi, après
trente-six heures de maladie aiguë.

L'autopsie fut pratiquée le mème Jour à 3 h. 45 du soir.

Le cadavre est celui d'une vieille femme de squeletle normalement déve-
loppé. La peau est très ridée sur la face et le cou, légèrement sur le reste
du corps. Elle est épaissie, hyperkéralosique sur la partie antérieure du
thorax. Le front porte deux petites taches café au lait irrégulières; des éphé-
lides nombreuses parsèment le visage, des taches de purpura sénile le dos

580 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

des mains et des pieds; il existe de l'intertrigo. Les cheveux, complètement
blancs, fins, un peu clairsemés, ont une longueur d'environ 10 centimètres.
Les sourcils, gris jaunâtre, sont un peu raréfiés; la lèvre supérieure présente
une légère hypertrichose. Les aisselles sont glabres. A la partie inférieure
de la région pubienne et sur les grandes lèvres, il n'y a que quelques rares
poils gris, très longs.

La graisse sous-cutanée est atrophiée. Les ganglions inguinaux, hypertro-
phiés, font saillie sous la peau. Un peu d'ædème gonfle les extrémités infé-
rieures. Les glandes mammaires sont atrophiées et pendantes. Un gros
mamelon surnuméraire, bien formé, existe un peu en dehors de la ligne
parasternale gauche, sur la 7e côte.

Il ne reste plus qu'une dent, l’incisive supérieure latérale droite.

Les orifices naturels sont normaux, à l'exception de l'anus porteur d'un
bourrelet hémorroïdaire assez volumineux.

A l'ouverture du cadavre, les organes apparaissent dans leurs rapports
normaux. Les anses intestinales, dilatées, ne sont pas recouvertes par l'épi-
ploon, qui est très réduit et pauvre de graisse. Le niveau du diaphragme
remonte, à droite, au 4° espace; à gauche, au bord inférieur de la 5° côte.
Les articulations sterno-claviculaires sont normales, les cartilages costaux
sont calcifiés, mais faciles à couper. Les côtes, atteintes d’ostéoporose, sont
fragiles.

Les poumons, emphysémateux, ne s’affaissent pas comme il est normal à
l'ouverture du thorax et recouvrent en grande partie l'aire cardiaque. L'an-
thracose est peu marquée. Le poumon gauche est complètement libre dans
la cavité pleurale; le droit est au contraire réuni à la paroi par des adhé-
rences faciles à rompre sur toute la hauteur des lobes moyen et inférieur.
La face interne de ce poumon adhère au péricarde. Le sac péricardique est
indemne d'adhérences et d’exsudation.

A l'examen, les différents organes se sont présentés à nous dans l'état
suivant :

Les amygdales sont petites.

Le larynx a ses cartilages calcifiés ainsi que les anneaux de la lrachée.

Le corps thyroïde, volumineux, pèse 42 grammes; son aspect est normal,
peut-être un peu plus pâle que normalement sur la plus grande étendue de
sa surface. Dans la partie droite de l'isthme on trouve une tumeur arrondie
aplatie, du diamètre d'une petile mandarine. À la coupe, elle se présente avec
un aspect blanchâtre, assez ferme et enfermant des kystes à contenu col-
loïide et à contours irréguliers.

Le poumon gauche (215 grammes) présente des adhérences interlobaires
anciennes. Les ganglions du hile, anthracosés, sont hypertrophiés. Le poumon
est fortement emphysémateux, surtout aux bords el au sommet. A la coupe.
on ne trouve pas d'autre lésion qu'un certain épaississement des bronches.

Le poumon droit (615 grammes) est fortement augmenté de volume, surtout
dans son lobe inférieur. Ce dernier est recouvert sur toute sa hauteur par
des fausses membranes fibrino-purulentes jaunâtres; on trouve des adhé-
rences analogues au niveau des scissures interlobaires. La coupe révèle
dans le lobe inférieur la présence d'un gros bloc de gangrène pulmonaire à
forme pneumonique, caractérisée par une coloration foncée, brun violacé,
semée de taches irrégulières jaunâtres, et une odeur assez fétide. La surface
de coupe estassez sèche. Les fragments détachés sont moins denses que l'eau.

Le cœur pèse,entier, 350 grammes el, débarrassé de ses caillots, 295 grammes.

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 581

Son diamètre transversal est de 9 centimètres. Il mesure 8 cent. 5 de la
pointe à l'origine de l'aorte. La pointe est exclusivement formée par le ven-
tricule gauche. Le myocarde, de consistance normale, est légèrement brunâtre.
Le péricarde est lisse, avec une grosse tache laiteuse sur la face antérieure
du ventricule droit et une graisse sous-épicardique légèrement augmentée.
L'endocarde est un peu épaissi et nacré.

Les orifices et valvules du cœur droit sont normaux; l'artère pulmonaire
mesure 7 centimètres au-dessus des valvules sigmoïdes. La suffisance des
valvules paraît parfaite. Dans le cœur gauche, les valvules paraissent égale
ment suffisantes ; la valve aortique de la mitrale présente un athérome assez
marqué surtout au niveau des bords libre et adhérent. Les sigmoïdes
aortiques présentent de petites taches athéromateuses des bords adhérents.
La crosse de l'aorte, ectasiée (circonférence maxima = 11 cent. 5), présente
de nombreuses pustules et ulcérations athéromateuses; mais on trouve
cependant, surtout dans la portion ascendante, de nombreux espaces lisses
et non athéromateux. Dans son trajet thoracique abdominal, l'aorte est
atteinte d'un athérome plus marqué et répond au type de « l'aorte pavée ».

Le foie pèse 1.455 grammes, Il mesure dans son diamètre transversal
26 centimètres, dans son diamètre vertical 8 centimètres et 16 centimètres
dans le sens antéro-postérieur. La capsule de Glisson est lisse et légèrement
épaissie au niveau du bord antérieur du lobe droit. La vésicule biliaire contient
une bile normale de quantité et de coloration. Le parenchyme hépatique, à la
coupe, apparaît ferme et un peu pâle.

La rate (95 grammes, diamètres = 9 X 7 X 2,5 centimètres) est entourée d'une
gangue de périsplénite adhésive. Sa pulpe est ferme et présente de minimes
hémorragies.

Le pancréas (45 grammes) est macroscopiquement normal.

Le rein gauche (140 grammes, diamètres — 11 X 5 X 2,5 centimètres) est de
surface lisse, de décortication facile. A la coupe, si la graisse centrale est
un peu augmentée, la corticale a une épaisseur tout à fait normale et ne
parait présenter aucune lésion.

Le rein droit (135 grammes) est tout à fait semblable au gauche, mis à part
un certain degré de pâleur.

Les surrénales sont volumineuses (la droite pèse 12 grammes) avec des
adénomes multiples,

L'intestin est fortement météorisé surtout au niveau des côlons. L’anse
sigmoïde, très longue, se loge sous la coupole diaphragmatique. L’appendice,
long de 9 centimètres, est mince, régulier, rectiligne.

Le crâne, normal par sa table externe, est, sur sa table interne, sculpté par
les sillons naturels très exagérés, surtout celui de la méningée moyenne ; il
est très mince et transparent au niveau des granulations de Pacchioni. D'une
manière générale les deux tables interne et externe sont papyracées et sépa-
rées par un diploë plus celluleux et moins rouge que normalement.

La dure-mère adhère au crâne dans la région frontale. Elle est peu tendue,
opaque, épaisse; elle est libre d’adhérences sur sa face interne. La méninge
molle est un peu épaisse.

Le liquide céphalo-rachidien est normal d'aspect et de quantité.

Le cerveau (1.090 grammes) a ses circonvolutions très atrophiées surtout
au niveau du lobe frontal. Les artères de la base et les sylviennes présentent
toutes des lésions d'athérome. Les ventricules latéraux sont dilatés. La subs-
tance grise, nettement diminuée d'épaisseur, est pâle. Il n’existe aucune
lésion en foyers ou lacunaire,

582 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La moelle épinière est molle.
L'ostéoporose est manifeste au niveau du tissu spongieux des os.
La moelle diaphysaire est abondante, jaune, très grasse.

ÉTUDE HISTOLOGIQUE
LÉ = APPAREIL RESPIRATOIRE.

Larynx. — L'examen du larynx ne nous a permis d'y décou-
vrir que des lésions minimes ou, sans doute, contingentes.

L'épithélium et les glandes de la muqueuse nous ont semblé
normaux sur toute l'étendue de la coupe. A signaler la pré-
sence, dans le chorion de la muqueuse de la corde vocale supé-
rieure, d’un petit kyste gros comme une tête d’épingle, revêtu
d’un épithélium à deux ou trois assises de cellules cylindriques
et à contenu amorphe.

Les cartilages thyroïde et cricoïide présentent une calcifica-
tion assez marquée, mais beaucoup moins intense que celle à
laquelle on était en droit de s'attendre, surtout étant données
les lésions de cet ordre que l’on rencontre au niveau de certains
cartilages des bronches.

Poumon. — Le parenchyme pulmonaire présente deux
régions très distinctes à considérer : 1° le parenchyme ne pré-
sentant pas de lésions aiguës; 2° le foyer de gangrène.

Sur cette dernière nous serons brefs; il ne s’agit là que d’un
phénomène surajouté, n'ayant rien à faire dans cette étude. De
vastes étendues de poumon sont nécrosées, mais nulle part il
n'existe de fonte du parenchyme : les alvéoles sont parfaite-
ment reconnaissables à leurs contours, mais il n'existe presque
plus de noyaux colorables, tout est acidophile; sur les bords de
la lésion on trouve des noyaux faiblement teintés d’une manière
uniforme par les colorants basiques ; ils sont en caryolyse. Beau-
coup d’alvéoles sont remplies par une substance grenue, avec
des cellules encore reconnaissables bien que le noyau ait dis-
paru ; quelques-unes contiennent du pigment ocre et des par-
ticules de charbon. Souvent le contenu alvéolaire est constitué.
par un réseau fibrineux très net. Les vaisseaux se sont
thrombosés avant de se nécroser.

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA. VIEILLESSE 583

A la limite du foyer de nécrose, on trouve une hépatisation
très nelte, le passage se faisant sans transition d'une lésion à
l’autre. Les alvéoles sont comblées par un réseau fibrineux très
marqué avec de nombreux polynucléaires et des cellules endo-
théliales tuméfiées. Les bronches présentent des lésions assez
peu marquées et banales, sauf lorsqu'elles se trouvent en plein
foyer gangréneux. Les vaisseaux présentent parfois de l’endo-
vascularite, mais le fait est loin d’être constant.

Dans le parenchyme épargné par la gangrène, il existe un
emphysème très marqué ; les parois alvéolaires sont très minces,
souvent rompues, les alvéoles communiquent largement entre
elles, formant de très grosses vésicules qui compriment et apla-
tissent les alvéoles voisines. Les alvéoles dilatées se conti-
nuent directement avec les bronchioles ; on rétrouve de l’épi-
thélium bronchique appliqué directement sur certaines de ces
vésicules. Au niveau des grosses bronches, les îlots cartilagi-
neux présentent presque tous de la calcification centrale ; quel-
quefois cette calcification s'accompagne de la désintégration du
cartilage et une petite cavité se creuse dans ce dernier.

Les artères peuvent présenter des lésions assez légères
d'endartérite chronique; le tissu conjonctif périvasculaire est
un peu augmenté; il semble que le tissu interlobulaire le soit
également.

L'anthracose est marquée, les grains de charbon étant soit
macrophagocytés, soit libres dans le tissu conjonctif. Mais elle
ne dépasse pas en intensité celle que l’on rencontre constam-
ment chez les adultes.

Il. — SYysTÈME CIRCULATOIRE CENTRAL.

Cœur. — Le myocarde présente des lésions de sclérose très
netles et intenses au sommet des piliers de premier ordre,
légères dans le reste.

Au sommet des colonnes charnues, on constate la présence
de véritables bandes scléreuses, formées de fibres de collagène
très tassées. Les bandes peuvent avoir trois ou quatre fois le
diamètre d’uné fibre musculaire, mais elles sont, en général,
assez courtes. Parallèles dans leur ensemble aux fibres muscu-
laires, ces bandes forment un réseau à mailles allongées assez

38% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

inégales, comprenant le plus souvent une seule fibre mais pou-
vant en comprendre plusieurs. Cette sclérose intense cesse
assez rapidement et n'occupe guère que la pointe du pilier;
mais elle à une certaine tendance à s'étendre et à gagner la
gaine des vaisseaux situés plus bas. À ce niveau, les fibres
musculaires paraissent un peu plus étroites. Dans le reste du
myocarde, la sclérose est bien moins intense et exclusivement
localisée au voisinage immédiat des vaisseaux. Ceux-ci pré-
sentent pour la plupart des gaines de tissu scléreux très
épaisses, dans lequel on rencontre quelques rares macrophages
et fibroblastes, ayant tendance à dissocier les fibres, mais seule-
ment sur une petite étendue ; à peu de distance des vaisseaux,
elles reparaissent normales, serrécs les unes contre les autres
ou entrecoupées de travées fibreuses plus ou moins épaisses.

Même dans la profondeur du myocarde les travées interfas-
ciculaires sont plus épaisses que normalement; le tissu inter-
stitiel intrafasciculaire paraît, sauf exceptions déjà signalées,
sensiblement normal.

Les fibres musculaires sont sensiblement normales ; il n’y a
pas de dégénérescence graisseuse, la striation est assez bien
visible, les champs de Conheim sont également très apparents.

La seule lésion qu'on puisse relever est, sur les coupes trans-
versales, une inégalité de diamètre entre les fibres qui ne
semble pas attribuable à l'inégalité normale et doit être rat-
tachée, croyons-nous, à une atrophie soit volumétrique, soit due
à la division longitudinale. On ne voit cependant pas sur les
coupes longitudinales aucune figure de division en train de se
produire.

L'endothélium au niveau des ventricules et des valvules est,
sur de grandes étendues, doublé d'une couche plus ou moins
épaisse de tissu conjonctif, d'aspect adulte, pauvre en cellules
mais assez lâche.

Aorte. — L'’aorte, en dehors des régions athéromateuses, est
relativement saine. Elle ne présente pas, notamment, de lésions
anciennes. En revanche, il y a des lésions très nettes d’endo-
et de périartérite, mais ces lésions paraissent assez récentes et
l’on peut être en droit de les considérer comme subaiguës.

Sur la moitié postérieure de la circonférence de l'aorte,

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 585

l’endartère présente ces lésions d'une manière continue : il
existe une couche de cellules couvrant l’endartère et n’enva-
hissant pas la tunique moyenne sur les bords de la lésion. Elle
n'en dissocie que les lames les plus internes, dans les points où
la lésion est plus marquée.

Cytologiquement, ce sont surtout des cellules de la série
lymphoïde qui composent cette inflammation : en grande majo-
rité ce sont de moyens et de grands mononucléaires mêlés de
quelques fibroblastes en réaction, quelquefois bi-nucléés ;
les lymphocytes y sont rares, les polynucléaires exceptionnels.
L'endothélium ne se retrouve que par places, sous forme de
cellules tuméfiées.

Dans le tissu conjonstif périartériel, on trouve des lésions
inflammatoires composées des mêmes éléments, à cette diffé-
rence près que la réaction fibroblastique y est un peu plus
accentuée. Mais les lésions ici ont une répartition un peu diffé-
rente : on les retrouve bien sur la moitié postérieure de l'aorte,
où le tissu cellulo-adipeux est plus abondant, mais elles ne
forment plus une nappe continue : les cellules se disposent en
amas allongés dans le sens des fibres du tissu conjonctif, ces
amas étant plus gros et plus tassés au voisinage immédiat de
l'artère mais pouvant se trouver à tous les niveaux de la gaine
cellulaire périaortique. Ils sont de dimensions très variables et
l’on peut également rencontrer des cellules diapédétiques dis-
séminées. Les vaisseaux ne paraissent Jouer aucun rôle dans la
réglementation de la topographie des lésions inflammatoires ;
ils sont congestionnés.

En profondeur, l’inflammation n'est pas aussi limitée que du
côlé interne de la paroi aortique, et on peut en retrouver des
traces sur le quart externe à peu près de son épaisseur; par
places les lamelles élastico-musculaires sont dissociées par des
cellules diapédétiques de même nature que précédemment et
des globules rouges (PI. XIV, fig. 1).

Artère pulmonaire. — L'artère pulmonaire nous a paru nor-
male, sauf dans la zone où elle est accolée à l'aorte; sa tunique
péri-arlérielle participe alors aux lésions de la tunique péri-
artérielle de l'aorte.

586 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

LIT. — ORGANES LYMPHOÏDES.

Rate. — La rate est sans doute un des organes qui présentent
les lésions les plus grosses et les plus manifestes.

A un faible grossissement, son parenchyme apparaît pâle,
pauvre ‘en cellules; les corpuscules de Malpighi sont rares,
ceux qui restent sont extrêmement réduits; les travées con-
jonctives et les gaines vasculaires sont épaissies ; les grosses
artères ont leur tunique interne doublée d'un tissu conjonctif
néoformé; à ces lésions vient s'ajouter par places une forte
congestion des sinus.

Au point de vue cytologique, le réticulum est beaucoup
plus visible que normalement et les cellules fusiformes
semblent augmentées de nombre. À la sclérose interstitielle
s'ajoute de la sclérose pulpaire.

Moyens et grands mononucléaires à protoplasma souvent
très acidophile et à noyau assez clair forment la grande majo-
rité des cellules qui composent la pulpe de la rate, les moyens
prédominant un peu sur les grands. On y rencontre aussi des
polynucléaires relativement non rares.

Cette particularité, jointe à la rareté relative des cellules,
donne à la pulpe cet aspect clair que n’a pas la rate de l'adulte.

Quelquefois, plutôt rarement, on trouve au voisinage d’une
artériole un tassement plus marqué de cellules formant au
vaisseau un mince manchon le plus souvent très incomplet et
constiluant un reste minime de corpuscule de Malpighi : c’est
à peu près tout ce qui persiste de pulpe blanche. Au niveau de
ces îlots, les cellules paraissent plus jeunes el beaucoup d’entre
elles ont un protoplasma basophile et un noyau riche en chro-
maline. Les lymphocytes y sont assez nombreux alors qu'ils
sont presque exceptionnels ailleurs.

Le pigment n’est pas augmenté de quantité ; peut-être mème
pourrait-on dire qu’il est moins abondant que normalement si
l’on avait sur cette question un point de comparaison précis.

Les travées et les gaines vasculaires sont épaisses, elles sont
constituées par du lissu fibreux, adulte, les fibres néoformées
se continuant sans distinction avec les fibres primitives. Beau-
coup d’artères, surtout parmi les moyennes, ont leur limitante

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 587

interne doublée d’une couche plus ou moins considérable de
substance hyaline, fortement acidophile, ne donnant pas les
réactions du collagène. Cet état peut aller exceptionnellement
jusqu’à l’oblitération.

Dans la gaine de certaines artères de calibre moyen, on ren-
contre parfois des macrophages isolés ou réunis en îlots de
trois à quatre. Assez souvent on peut trouver de l'athérome.

La congestion que nous avons signalée en passant est parcel-
laire ; elle n’occupe que certaines parties de l'étendue de la
préparation. Par places, il ne semble pas que ce ne soit pas seu-
lement de congestion qu'il s'agisse, mais que la paroi du
sinus ait été rompue et que le sang ait dissocié les cordons de
Billroth (PI. XV, fig. 11).

Ajoutons enfin que dans un point limité du bord de la rate,
la capsule très plissée se rapproche de celle de la face opposée
et que l’espace qui les sépare est à peu près privé de pulpe,
presque réduit aux travées conjonctives et aux vaisseaux ; ceux-
ci, très épaissis, ont une gaine conjonctive présentant au maxi-
mum la dégénérescence hyaline que nous avons décrite au
niveau de la tunique interne des autres artères.

Ganglions lymphatiques. — Les ganglions lymphatiques exa-
minés histologiquement présentent une grosse sclérose hilaire,
de la sclérose interstitielle et une disparition des cordons fol-
liculaires avec persistance des corpuscules de Malpighi.

La sclérose hilaire est importante; en certains points, le
ganglion est uniquement composé de tissu de sclérose sur la
moitié de la surface; ce tissu est composé de fibres de collagène
adulte parallèles entre elles, ondulées, assez grêles, mais
serrées les unes contre les autres. On trouve entre les fibres
de nombreuses cellules lymphoïdes, témoins de l'existence
antécédente de tissu adénoïde à cette place; ces cellules sont
tantôt dispersées dans le tissu scléreux, tantôt agminées, dis-
posant des îlots arrondis de tissu adénoïde dans des logettes
ménagées dans le tissu scléreux. Ces logettes ne dessinent
pas des espaces strictement limités; les cellules diffusent peu
à peu, sans limites nettes, dans le tissu de sclérose avoisinant.
On trouve de nombreux vaisseaux dans le tissu de sclérose;
souvent on les voit entourés de fibres conjonctives, mais il

588 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

n'apparait pas nettement que ce soit eux qui aient commandé
la topographie des lésions scléreuses.

Le squelette conjonctif du ganglion est très développé : la
capsule d’enveloppe est épaisse; de fortes travées en partent
pour rejoindre le tissu de sclérose hilaire. Les vaisseaux qui
les parcourent ne présentent pas, en général, de lésions bien
nettes; cependant, on rencontre, disséminés dans le tissu
adénoïde, de petits corps scléreux formés de fibres concentriques
qui paraissent bien être de petits vaisseaux oblitérés.

La substance propre du ganglion a subi des modilications
très nettes qui lui donnent, au premier abord, le même aspect
qu’à la rate de notre malade : le tissu adénoïde tend à prendre
un aspect partout uniforme. Ici, les cordons folliculaires ne sont
plus reconnaissables ; les follicules clos persistent, mais ils sont
moins nombreux et paraissent plus petits que normalement.

Examinée à un fort grossissement, la pulpe ganglionnaire est
exclusivement formée de cellules Iymphoiïdes, les lymphocytes
y étant l'exception; on constate une abondance considérable de
macrophages, quelques-uns contenant du pigment ocre. Beau-
coup de cellules ont un protoplasme très acidophile; ones
unes un noyau pycnotique.

Au niveau des follicules clos, les lymphocytes deviennent la
majorité. Le centre germinatif n'existe pas: dans un grand
nombre des formations folliculaires, le centre présente une
sclérose très nette, avec fibres de collagène colorable par le
Van Gieson; souvent aussi, on y trouve un grand nombre de
cellules altérées, à noyau pycnotique, plus rarement en
caryorrhexie, et même des grains de chromatine épars.

L'hypoplasie des organes lymphoïdes, pour si manifeste
qu'elle soit, n’est pourtant pas une aplasie absolue : Nous
avons pu trouver dans nos coupes plusieurs figures de karyo-
kinèse, bien qu’elles soient très rares (V. pl. XIV, fig. 4).

Amygdales. — Les amygdales présentent des zones étendues
de lissu adénoïde paraissant normal à première vue. Cependant,
à un grossissement un peu fort, on constate que beaucoup de cen-
tres germinatifs sont scléreux, les fibroblastes constituant leur
presque totalité. Le reste du tissu adénoïde nous a semblé
normal. Entre ces zones de tissu adénoïde, on trouve des plages

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 589

étendues de tissu fibreux dense contenant par places, surtoutau-
tour des culs-de-sac des cryptes, du tissu adénoïde plus ou moins
sclérosé. Entreles fibres de cetissu,ontrouve d'assez nombreuses
cellules Iymphoïdes, notamment beaucoup de macrophages.

L'épithélium est sensiblement normal ; à signaler cependant
que les cellules en migration entre les cellules épithéliales
sont très rares.

Intestin. — L'intestin, dans ses divers segments, semble pré-
senter un certain degré d’atrophie de la muqueuse; les glandes
y sont, semble-t-il, diminuées de nombre et de longueur. Au
niveau de l’iléon, les follicules clos sont très réduits de dimen-
sions; ils ont perdu leur aspect folliculaire; les centres germinatifs
ne sont pas appréciables, les limites sont indécises et le tissu
adénoïde se perd peu à peu dans le chorion avoisinant, lui-
même très infiltré, mais pas plus, semble-t-il, qu'à l’état
normal. La muscularis mucosæ est fréquemment segmentée
par du tissu fibreux, la sous-muqueuse légèrement sclérosée.

L'appendice (PI. XVI, fig. 15) semble ne présenter d'autre
lésion qu'une sclérose très appréciable de la sous-muqueuse.
Les follicules clos paraissent sensiblement normaux comme
nombre et comme développement; cependant, là non plus, ne
voit-on pas de centres germinatifs.

IV. — ORGANES GLANDULAIRES.

Foie. — À un faible grossissement, on ne remarque qu'un
certain degré de congestion sus-hépatique et une infiltration
modérée des espaces de Kiernan. Toute la zone péri-sus-hépa-
tique a ses capillaires distendus et remplis par le sang ; ils sont
beaucoup plus larges que dans la zone périportale. Cependant,
la travée hépatique elle-même est bien conservée et ne pré-
sente aucune des lésions qu'on trouve dans le foie cardiaque ;
pas d'atrophie appréciable, pas de dégénérescence graisseuse.

Les cellules hépatiques apparaissent comme très sensiblement
normales de taille et d'aspect; le plus souvent homogènes et
finement granuleuses, on en rencontre parfois, soit isolées,
soit par petits groupes, ayant un proloplasma tout à fait clair.

Les noyaux sont très fréquemment gros, comme hydro-

590 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

piques ; quelques éléments sont binucléés. Les formes de dégé-
nérescence nucléaire sont exceptionnelles. De loin en loin,
on rencontre au bord des travées ou dans les capillaires des
blocs très acidophiles un peu plus petits qu'une cellule hépa-
tique; tantôt ils sont nucléés, tantôt et plus souvent ne pré-
sentent aucune trace de noyau. Il nous semble que l’on doive
les considérer comme des cellules vieillies, dégénérées et en
voie de disparition. Les cellules hépatiques sont très fréquem-
ment chargées de granulations jaunâtres ayant toute l’appa-
rence du pigment ocre.

Les cellules de Kuppfer sont en état de réaction marquée.
Les espaces portes nous ont paru de dimensions sensiblement
normales et ne présentent pas de modifications scléreuses bien
. accusées. À leur niveau existe, par contre, une infiltration
modérée composée presque exclusivement de moyens mononu-
cléaires et de lymphocytes. On remarque enfin que la paroi
conjonctive des veines sus-hépaliques est un peu épaissie et
infiltrée de cellules rondes de la série Iymphoïde. Au niveau
des artères hépatiques, on remarque des figures de périartérite
caractérisées par une augmentation du tissu conjonctif et une
infiltration de cellules Iymphoïdes.

Reins. — D'une façon générale, les reins, au niveau de la
corticale, ne présentent de lésions scléreuses que d’une façon
parcellaire. Par places, sous la capsule, autour d'un glomérule,
autour d’un tube, autour d’une artère, on voit une surabondance
de tissu fibreux ; mais cet excès reste limité comme étendue et
comme degrés. La surface du rein n'est pas régulière ; de loin
en loin on voit une dépression cicatricielle d'où part une trainée
de tissu conjonctif s'enfonçant vers la médullaire. Le tissu
conjonctif est d'ordinaire adulte et fibreux; mais on trouve
également quelques foyers d'infiltration embryonnaire assez
discrète dont les éléments sont des cellules lymphatiques, pour
la plupart des moyens mononucléaires mèlés à des fibroblastes.

Les foyers peuvent se trouver à n'importe quel niveau, sans
élection bien nette; ils semblent cependant avoir une prédi-
lection pour les zones les plus voisines de la capsule et le long
des vaisseaux (PI. XV, fig. 7).

Au niveau de la médullaire, le tissu conjonctif entourant

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 591

chaque tube droit est abondant et constitué par du tissu fibreux
adulte.

On peut dire cependant que le rein a été relativement peu at-
teint par le processus scléreux, car des étendues notables de pa-
renchyme sécréteur apparaissent sensiblement normales, chaque
tube étant entouré seulement d’une unique fibre de collagène.

D'assez nombreux glomérules présentent des lésions sclé-
reuses diverses ; lésions scléreuses légères du bouquet glomé-
rulaire, sclérose plus ou moins intense péricapsulaire; quelques-
uns, complètement réduits à un bloc de collagène, sont en
« pains à cacheter ». On les trouve de préférence au niveau des
points de néphrite interstitielle parcellaire, mais on en peut
rencontrer en des endroits où le parenchyme avoisinant apparaît
sensiblement sain. D’autres glomérules semblent, par contre,
légèrement augmentés de volume et gorgés de sang.

L'épithélium des tubes tant sécréteurs qu'excréteurs ne pré-
sente pas de lésions bien nettes. D'une façon générale il
parait assez bas ; la lumière des tubes contient une substance
acidophile granuleuse sans qu'il soit question de véritables
cylindres. Un certain nombre de cellules sont desquamées,
d'autres plus acidophiles que normalement. En partie tout au
moins, ces modifications peuvent être mises sur le compte des
fixateurs et de la cadavérisation.

Du côté des vaisseaux on note d'abord une congestion par
places intense, portant sur les artères, les veines, les capillaires,
pouvant s'accompagner de suffusions hémorragiques dans le
tissu interstitiel, dans les tubes voisins, mais l’hémorragie reste
toujours limitée au voisinage du vaisseau.

Certaines artères présentent des lésions d’endartérite et de
périartérite plus ou moins intenses et paraissant anciennes, la
tunique musculaire est dans la plupart des cas assez bien

conservée et dans bon nombre d’artères les lésions sont peu
avancées.

Pancréas. — Le pancréas présente une légère sclérose inter-
lobulaire généralisée à peu près à tout l'organe; Le tissu con-
jonctif interlobulaire est un peu plus abondant que normale-
ment ; il reste lâche et non scléreux.

De plus, de place en place, on trouve un lobule présentant

592 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

un certain degré de sclérose interacineuse. Cette sclérose est
toujours assez peu marquée; elle ne donne pas l'impression
d'être très ancienne; elle est composée de nombreuses cellules
fusiformes et de fibres de collagène, fibres grèles et espacées.
Cette sclérose n’est pas régie par une topographie fixe, parfois
elle est centrée par un canal excréteur, parfois elle semble être
l'expansion de la sclérose interlobulaire, mais souvent aussi elle
existe en dehors de ces deux causes.

Les cellules nobles du pancréas sont à peu près normales ;
les acini ont leur aspect et leurs dimensions normales. Ils sont
cependant plus petits dans Les points où la sclérose interacineuse
atteint une certaine intensité ; en ces points, la sclérose s'accom-
pagne d’un peu d’atrophie.

Certains acini présentent des cellules, surtout parmi les
cellules centro-acineuses, qui présentent une dégénérescence
particulière: l'ergastoplasme disparaît, le protoplasme devient
très fortement éosinophile. A un degré plus avancé, le proto-
plasme pâlit et se creuse de vacuoles ; le noyau paraît rester
normal aussi longtemps que l'on peut reconnaître la cellule.
Ce mode de dégénérescence paraît être tout à fait indépendant
de la sclérose et l’on trouve des acini très nettement dégénérés
dans les points les moins scléreux.

Les îlots de Langherans nous ont paru normaux de nombre,
de dimension et d'aspect.

Les canaux excréteurs sont en général limités par une couche
épaisse de tissu fibreux dense. Quelques-uns ont leur épithélium
desquamé et un peu de réaction conjonctive de la partie interne
de la paroi.

Les vaisseaux sont en général normaux.

L’artère splénique est athéromateuse à un degré léger mais net.

Glandes salivaires. — La parotide présente une sclérose peu
marquée et adulte des espaces interlobulaires, sclérose centrée
indifféremment par les vaisseaux ou les gros canaux excréteurs.
Ce n'est qu'exceplionnellement que, de cette sclérose, part une
ébauche de sclérose interacineuse.

Les acini nous ont paru tout à fait sains et en parfait étal de
sécrétion.

Quant aux vaisseaux, en dehors de la sclérose périvasculaire

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIFILLESSE 593

déjà notée, ils présentent, les artères du moins, un certain degré
d'inflammation chronique de la couche interne.

La sous-maxillaire ne présente que des lésions vasculaires
chroniques et un peu de sclérose autour de certains gros canaux
excréleurs.

Mamelles. — Les mamelles sont constituées pour leur plus
grande partie par un tissu scléreux formé de fibres de collagène
denses et tassées et très pauvre en cellules. Dans cette masse,
on trouve de loin en loin des tubes glandulaires, soit unis par
petits groupes pour constituer des acini atrophiques, soit complè-
tement isolés et perdus dans la sclérose avoisinante. Dans un
sein, quelques-uns de ces tubes sont le siège d’une ébauche de
dilatation; dans l’autre, plusieurs constituent des microkystes
arrondis parfaitement nets; leur lumière est vide ou bien contient
une malière amorphe, acidophile et grenue (PL XVI, fig. 19).

L'épithélium ne paraît présenter aucune modification au
niveau des kystes non ou peu dilatés. C’est un épithélium
cubique bistratifié à protoplasme assez foncé. Il tend à devenir
pavimenteux, restant toujours bistratifié, à mesure que l'état
kystique s'accentue.

Dans un des seins, celui où les formations microkystiques
sont nettes, nous avons relevé au niveau de deux tubes glandu-
laires immédiatement voisins des modifications intéressantes,
deux autres tubes faisant partie du même acini restant
normaux. Ces deux tubes sont très augmentés de volume dans
leur ensemble. L'un d'eux présente un contour très irrégulier,
festonné. L’épithélium est très proliféré ; Le nombre des couches
qui le composent est variable suivant les points. Tantôt on en
compte quatre ou cinq et tantôt une dizaine au moins, si bien
que la lumière est bien plus irrégulière que le contour extérieur,
elle est comme effilochée. Les cellules sont de taille sensible-
ment égale à celles d’un tube normal, ayant une tendance à être
prismatiques. La plupart ont un protoplasme foncé, de mêmes
réactions colorantes que celles de la couche interne des tubes
normaux; Mais on en trouve mêlées aux précédentes qui ont
un protoplasme clair. Toutes ces cellules sont égales entre elles;
on ne conslate ni karyokinèses ni monstruosités cellulaires. La
lumière montre des cellules desquamées plus ou moins altérées.

38

09% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

L'autre tube anormal est modifié d’une façon toute différente.
Ici, le nombre des couches cellulaires est moins considérable,
quatre au plus, mais l'aspect des cellules est beaucoup plus
différent de l’état normal. Ce sont de grandes cellules prisma-
tiques à protoplasme homogène, fortement grenu, un peu
acidophile, à noyau basal. Leur extrémité libre fait saillie dans
la lumière du tube qu’elle dessine irrégulière. Cette dernière
contient des cellules desquamées et altérées. Quelques cellules
de la bordure ont leur protoplasme remplacé par une grosse
vacuole. Ici non plus, on ne rencontre ni Kkaryokinèses ni
monstruosités nucléaires.

IL s’agit là, sans doute, d'hyperplasie adénomateuse, maïs
étant donnée la fréquence de transformations épithéliales
suivant ces deux aspects dans les cancers, on peut se demander
s'il ne faut pas y voir un état précancéreux, un stade de début
de l’évolution vers la tumeur maligne.

Autour de nombreux tubes glandulaires, on peut constater
l'existence d’une infiltration mononucléaire discrète, avec
quelques macrophages.

Les vaisseaux sont en général peu touchés. Cependant une
artère assez grosse présente une dégénérescence calcaire intense
de sa tunique moyenne.

Glandes surrénales. — La capsule fibreuse qui enveloppe
l'organe présente une épaisseur plus grande que normalement;
de sa face interne partent des trousseaux conjonctifs grèles,
encerclant les cellules de la zone glomérulaire. Les travées de
premier ordre sont également un peu plus épaisses qu’à l’état
normal, en sorte qu'il existe un certain degré de sclérose de
la capsule ei de la couche glomérulaire.

Dans l'épaisseur de la capsule fibreuse, on note la présence
assez fréquente de glandes surrénales accessoires qui sont, elles
aussi, le siège de lésions scléreuses.

On y rencontre relativement assez nombreux, surtout au
voisinage de la couche glomérulaire et autour des vaisseaux,
des macrophages et des mononucléaires moyens.

Le parenchyme glandulaire estmanifestement hyperplasique.
La disposition normale des travées cellulaires est bouleversée ;
ces travées cessent d’être parallèles entre elles; elles sont

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 595

coupées par le rasoir sous toutes les incidences et apparaissent
ainsi dessinant des acini. L’épaisseur de ces travées est variable,
souvent plus considérable qu'à l’état normal. Cette hyperplasie
a, par places, une tendance aux formations nodulaires sans
aboutir jamais à l’adénome vrai; elle est variable d'intensité
d'une surrénale à l’autre et d’un point à un autre dans une même
surrénale ; mais elle n'est absente complètement en aucun point.

La couche glomérulaire participe pour son compte à l'hyper-
plasie par l'augmentation de son épaisseur et son boulever-
sement. Mais, en plus, on constate que les îlots de cellules sont
plus espacés que dans le restant de la coupe à cause de la pro-
lifération du tissu conjonctif; un certain nombre d’entre eux
paraissent atrophiés.

Les cellules sont également modifiées : à un très faible gros- .
sissement, la coupe présente un aspect particulièrement clair.
Cela tient à ce que les spongiocytes sont augmentés de nombre
d’une manière manifeste et que leurs vacuoles sont plus nom-
breuses et plus volumineuses que normalement. Cet élat d’hy-
perépinéphrie ne s'accompagne d'aucune dégénérescence cellu-
laire manifeste. De plus, étant donnée l'hyperplasie de la glande,
la disposition des zones claires est beaucoup moins régulière
qu'à l’état normal.

Le pigment nous a paru très nettement augmenté de quan-
tité. Les cellules qui en contiennent sont plus nombreuses et
plus chargées qu'à l’état normal.

L'étude de la zone médullaire ne nous a pas permis d'y
découvrir de lésions bien nettes.

Les vaisseaux présentent d’une facon générale leur paroi
épaissie, sclérosée, souvent infiltrée de cellules de la série lym-
phoïde, moyens mononucléaires et macrophages. On trouve
d'autre part assez fréquemment, par places, de petits îlots de
cellules de diapédèse formés de cellules Iymphoïdes, en majorité
du type macrophage (PL XV, fig. 9).

Corps thyroïde. — Le corps thyroïde présente un certain
nombre de formations nettement tumorales de différentes
tailles. Les unes sont de petits cysto-adénomes bien encapsu-
lés, ne présentant rien de particulier.

Celle qui, plus grosse que les autres, formait une tumeur bien

596 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

caractéristique à l'œil nu, est un fibro-adénome. A la périphérie,
se trouvent des vésicules thyroïdiennes petites et en général
régulières, beaucoup dépourvues de tout colloïde. Au centre
de la tumeur, sur sa plus grande étendue, les vésicules sont
ou très espacées ou complètement absentes. La tumeur est
formée uniquement par un tissu fibreux dense, entremèêlé de
traîinées de cellules diapédétiques mononucléées.Très fréquem-
ment, ce tissu fibreux est dégénéré, devenu hyalin et ne prend
qu'imparfaitement ou nullement les colorants du collagène. Par
places, on trouve de vastes îlots de colloïde, non contenue par
un épilhélium, celui-ci ayant sans doute existé primitivement
et dégénéré par la suite. Cette tumeur est nettement encapsulée,
dans une coque de tissu fibreux bien délimitée et fortement
infiltrée de mononucléaires (PI. XIV, fig. 3).

Nous nous attarderons davantage à l'étude du corps thyroïde
en dehors des régions tumorales. Les régions immédiatement
voisines ont leurs vésicules aplaties concentriquement et atro-
phiées. Les parties du corps thyroïde que l’on peut considérer
comme non influencées par les tumeurs présentent elles-mêmes
des modifications marquées. Le tissu conjonctif y est plus abon-
dant que d'ordinaire, formant des bandes scléreuses assez abon-
damment pourvues de cellules conjonctives et infiltrées de
mononucléaires. Il découpe la glande en lobules assez pelits.
Souvent aussi, le tissu conjonctif interacineux est proliféré.

Les vésicules elles-mêmes sont inégales de taille, mais en
sénéral très petites et pauvres en colloïde. Mème dans celles qui,
plus volumineuses, ont une lumière centrale d’une certaine
étendue, la colloïde est peu abondante et ne remplit qu’en
partie la cavité. Il existe un grand nombre de boyaux épithé-
liaux pleins, certainement beaucoup plus fréquents qu'à l'état
normal. Les cellules thyroïdiennes elles-mêmes ne nous ont
pas paru présenter de lésions.

Hypophyse. — Dans le lobe glandulaire de l'hypophyse, il
semble que, du moins en certains points, le squelette conjonctif
soit plus abondant que normalement, ses mailles sont épaisses
et délimitent des alvéoles plus petites que sur une glande jeune.

Il semble que la colloïde se retrouve à la fois plus fréquem-
ment et en plus grande quantité qu’à l'habitude : en dehors de

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 597

grosses vésicules situées au voisinage du lobe nerveux, on
rencontre souvent, disséminés sur toute la coupe, des acini con-
tenant une boule de colloide plus ou moins considérable, On
n'en lrouve pas dans les vaisseaux.

Au point de vue cytologique, on est frappé du nombre consi-
dérable des cellules acidophiles. Sur la plus grande étendue de
la coupe, elles forment la grande majorité des éléments. Elles
sont assez variables comme dimensions, certaines pouvant être
très grosses ; parfois, elles sont vacuolaires. Leur noyau est
généralement bien coloré; quelquefois, surtout chez les plus
petites, il est pycnotique. On rencontre aussi, en même temps
que des cellules chromophobes plus petites, de grandes cellules
à protoplasme basophile granuleux qui, elles, sont très souvent
vacuolaires. En d’autres points de la coupe, mais plus rarement,
ce sont les éléments chromophobes qui sont en majorité.

Plexus choroïdes. — Les plexus choroïdes présentent en
grand nombre des chalcosphérites ; celles-ci, visibles à l'œil nu
sur les coupes, grâce à l'intensité avec laquelle elles prennent
l’hématéine, sont formées de couches concentriques; elles sont
appendues au côlé des villosités, recouvertes, retenues seule-
ment par une mince couche de tissu conjonctif, l'endothélium
cubique de revêtement manquant très généralement à leur
niveau. Plus rarement, on en peut trouver dans l'épaisseur
des plexus (PI. XV, fig. 16).

Ces formations s’établissent sans doute dans la lumière des
capillaires; parfois, en effet, on peut reconnaître des cellules
endothéliales à leur contact ; le plus souvent cependant, celles-ci
ont disparu ou sont masquées, si bien que la calcosphérite
semble incluse dans le tissu conjonctif.

Dans les portions les moins atteintes, on trouve des amas
calcaires plus petits qui, eux, semblent bien s'être développés
en plein tissu conjonctif; ils sont plus irréguliers de forme et
de contours, ils sont comme épineux.

NV. — ORGANES GÉNITAUX.

Utérus. — L'utérus, au niveau du col, présente un épithé-
lium de revêtement partout continu et d'aspect de prime

598 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

abord normal. Cependant, les cellules des couches superfi-
cielles du corps muqueux sont tuméfiées, extrêmement claires,
comme vésiculeuses, avec des gouttelettes acidophiles. Leur
membrane est épaisse, très acidophile, et les ponts intercellu-
laires n'y apparaissent qu'avec peu de netteté.

Immédiatement au-dessus de l’épithélium s'étend une zone
d'infiltration leucocytique. Cette zone est à peu près continue ;
tantôt très discrète, lantôt très marquée, au voisinage de la
portion 2sthmique de la muqueuse, elle peut donner lieu par
places à de véritables nodules de tissu adénoïde. Les éléments
qui la composent sont en majorité des mononucléaires; on y
trouve quelques polynucléaires; par places, des plasmazellen
assez nombreuses; les macrophages n'y sont point rares, non
pius que les lymphocytes. Mais l'élément dominant est le moyen
mononucléaire ; assez souvent, son protoplasme est abondant et
acidophile. Cette zone d'infiltration s'arrête assez brusquement
et ne pénètre pour ainsi dire pas dans la profondeur. Cepen-
dant,dans toute l'épaisseur de la paroi du col,on trouve dans le
tissu conjonctif des leucocytes en quantité plus considérable,
semble-t-il, qu'à l'état normal.

La paroi du col est constituée surtout par du tissu conjonctif
fibreux dans la plus grande étendue, assez fréquemment adipeux
à la partie externe de sa partie inférieure. Mais jusqu’au bord
du col, on trouve des faisceaux de fibres musculaires lisses,
parfaitement différenciées et bien reconnaissables.

Les vaisseaux présentent souvent, surtout au niveau des ar-
tères d’un certain calibre, de l’endovascularite fibreuse ancienne.

Le passage de l'épithélium pavimenteux à l'épithélium cylin-
drique se fait par une transition assez longue: sur une étendue
assez considérable, l’épithélium est composé d'un petit nombre
d'assises de cellules plates, avant de devenir nettement cylin-
driques. Au-dessous de cet épithélium de transition, on trouve
des glandes kystiques à épithélium cylindrique, mais parfois on
peut rencontrer de petits îlots d’épithélium pavimenteux à deux
ou trois assises sur la paroi de ces glandes. Il est possible qu'il y
ait là une métaplasie pavimenteuse de l’épithélium cylindrique.

Au niveau de la muqueuse du corps, on trouve des modifica-
tions assez importantes : les glandes lubulées sont diminuées
de nombre et celles qui restent sont hyperplasiées; plus longues

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 599

et plus sinueuses que normalement, elles ont une tendance à
se grouper en îlots d'aspect adénomateux ; beaucoup sont
devenues kystiques et forment sous la muqueuse des œufs de
Naboth plus gros qu'un grain de mil (PI. XVI, fig. 17).

La zone d'infiltration sous-épithéliale, qui existait si nette au
niveau du col, n'existe pas dans le corps et cesse dès que l'épi-
thélium a pris nettement le type cylindrique. Le chorion
muqueux est très riche en cellules, mais ces cellules sont de
Lype conjonclif et l’on ne peut dire que leur abondance soit plus
considérable qu'à l’état normal.

Les faisceaux musculaires qui forment la paroi utérine sont
nettement plus grèles que chez un sujet jeune; de plus, ils sont
séparés par de plus grandes étendues d’un tissu fibreux plus
dense. En outre, il semble que, par places au moins, les cellules
musculaires soient plus inégales et quelques-unes atrophiées.

Les artères, surtout celles qui ont un certain calibre, pré-
sentent des lésions très marquées. Presque sur loutes, on trouve
une endartérite fibreuse ancienne qui peut être très accusée, à
tendance oblitérante. Souvent, surtout pour les grosses artères
de la corne utérine, il s’y surajoute de l'athérome. La calcifica-
lion se présente sous forme d’un anneau complet ou incomplet,
mais toujours assez épais, qui se trouve dans l'épaisseur du
tissu fibreux d’apposition endartériel. La musculeuse, peut-
ètre réduite, persiste constamment et n’est pas interrompue
(PI. XVE, fig. 16).

Sur quelques vaisseaux, les fibres du tissu conjonctif consli-
tuant l’endartérite s’écartent, notamment au voisinage des
zones calcifiées, délimitant une petite cavité dans laquelle on
trouve des macrophages.

Ovaires. — Les ovaires sont réduits à l’état de petits corps
uniquement fibreux. Ils sont composés d’une coque assez mince
de tissu fibro-conjonctif fasciculé, très riche en cellules con-
jonctives dessinant des tourbillons; elle ne contient aucune
formation différenciée. Cette coque est interrompue au niveau
du hile. A l'intérieur on remarque d’assez nombreuses forma-
tions rubannées et. pelotonnées constituées par du tissu colla-
gène fibrillaire à peu près dépourvu de noyaux. Leur forme
permet de les identifier à des cicatrices de corps jaunes.

600 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Au centre on trouve de très nombreux vaisseaux, encore que
quelques-uns soient complètement oblitérés. La plupart des
artères présentent de l’endartérite chronique à tendance oblité-
rante. Les grosses artères du ligament large présentent parfois
des placards calcaires dans leur tunique moyenne (PI. XVI,
fig. 18).

VI. — SySTÈME NERVEUX CENTRAL.

Nous serons brefs sur ce chapitre, la question ayant été
étudiée à plusieurs reprises par des neurologistes ou des psy-
chiatres et sur de nombreux cas. Nous nous bornerons donc
ici, et seulement pour être complets, à énumérer rapidement
les lésions que nous avons trouvées à l'examen du système
nerveux central de notre vieille femme.

Cerveau. — Dans toute l'étendue du parenchyme, mais pré-
dominant dans la substance blanche, existe une infiltration
lymphocytaire diffuse discrète, qui s’exagère autour des vais-
seaux, pour former des manchons inflammatoires périvaseu-
laires plus ou moins complets, le plus souvent peu épais. Les
cellules qui composent cette infiltration sont des mononucléaires
moyens et des lymphocytes. Par contre, la névroglie paraît
sensiblement normale, les vaisseaux ne présentent pas de
lésions autres que celles de l’adventice. L'épendyme est très
sensiblement normal.

Les cellules sont souvent très altérées. D'abord il existe
presque toujours une surcharge pigmentaire qui peut être tout
à fait considérable. Les cellules sont atrophiées, plusieurs ont
leurs prolongements disparus et prennent une forme globu-
leuse. Très souvent les noyaux sont en position excentrique
et ce déplacement ne dépend pas toujours de la surcharge pig-
mentaire, le pigment pouvant être en pelite quantité et agglo-
méré à l’autre extrémité de la cellule. Souvent la cellule est
réduite à un petit bloc protoplasmique à peu près méconnais-
sable. Les figures de neuronophagie sont fréquentes.

Cervelet. — Les cellules de Purkinje sont fréquemment
altérées ; elles sont atrophiées, irrégulières, parfois fortement
acidophiles. Les prolongements peuvent avoir disparu. Le noyau
présente des lésions dégénératives. Par contre, les figures de

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 601

neuronophagie sont peu nombreuses. Ces cellules ne contien-
nent jamais de pigment.

Les cellules de la couche des grains semblent être proliférées
dans la partie périphérique de la couche.

Moelle. — La moelle apparaît comme ayant des lésions cel-
lulaires et nucléaires plus marquées que le cerveau; au
contraire les lésions d'infiltration sont moins intenses.

Les lésions dégénératives des cellules nucléaires sont d'autant
plus nomtreuses et accusées que l’on considère une région plus
haute de la moelle. Elles sont plus intenses dans les cornes
postérieures que dans les cornes antérieures ; elles consistent
en atrophie des eellules et surchage pigmentaire, celle-ci étant
moins marquée que dans le cerveau. La réaction neuronopha-
gique est légère.

Les cordons sont sensiblement normaux, à part la présence
d’un grand nombre de corps sphériques calcaires, très abon-
dants dans les cordons postérieurs.

L’épendyme est un peu proliféré et présente une légère infil-
tration dans son voisinage.

Les méninges, normales dans les parties hautes de la moelle,
présentent un léger épaississement au niveau de la pie-mère
lombaire.

Les vaisseaux, généralement normaux, peuvent présenter un
léger degré de sclérose.

VII. — SYSTÈME DE LOCOMOTION.

Os. — La moelle osseuse diaphysaire prélevée dans le tiers
supérieur du canal fémoral est réduite à ses vaisseaux et à du
tissu adipeux ; sur toute l’étendue de la coupe on ne voit qu'un
réseau dessiné par des cellules graisseuses avec de loin en loin
aux points nodaux des noyaux cellulaires. Ces noyaux sont le
plus souvent des noyaux fusiformes des cellules adipeuses.
Parfois viennent s’y joindre des cellules arrondies à protoplasma
basophile relativement abondant. Sur une artère nous avons
constalé une calcification assez marquée de la tunique moyenne
accompagnée d’une légère infiltration de leucocytes mononu-
cléaires. Les autres vaisseaux présentent tous leurs parois

602 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

scléreuses et souvent on rencontre dans leur épaisseur des
mononucléaires assez rares, il faut le dire (PI. XV, fig. 8).

Le crâne présente certainement au niveau du diploé des
mailles beaucoup plus larges que normalement. Les tables
externe et interne par contre (surtout l’externe) sont minces
et composées de tissu presque absolument compact. Le tissu
osseux dans son ensemble présente des ostéoplastes espacés,
la substance fondamentale paraissant plus dense qu'à l’état
normal. |

Les canaux de Havers, relativement rares au niveau de la
surface des tables interne et externe, sont souvent dilatés et
remplis par une moelle fibreuse au voisinage du diploé; assez
fréquemment tout autour d'eux on voit une couronne d’ostéo-
blastes directement opposés sur le tissu osseux déjà formé. A
mesure qu'on approche du diploé, les canaux de Havers s’élar-
gissent et l'on trouve tous les passages entre les canaux et les
lacunes du diploé. À mesure, la moelle devient moins fibreuse
et plus riche en cellules.

La moelle du diploé présente de la graisse en assez grande
abondance ; néanmoins elle est encore riche en cellules. Les
cellules sont des hématies, des myélocytes et de rares hématies
nucléées. Les mégacaryocytes semblent diminués de nombre; les
myéloplaxes sont en nombre sensiblement normal, mais sont
relativement petites, ne renfermant que trois à neuf noyaux en
moyenne, et nous n'en avons vu que rarement en fonction
ostéoclasique.

Côtes. — Au niveau des articulations chondro-costales, on
peut constater plusieurs lésions intéressantes. Trois organes
sont à considérer; le tissu fibreux d’enveloppe (périoste et péri-
chondre), le cartilage et l'os.

Le périoste et le périchondre sont formés de tissu fibreux
dense et extrêmement pauvre en cellule. Au niveau de l'os la
moelle sous-périostée n'existe pas.

Le cartilage est très fortement calcifié dans sa partie cen-
trale; par places de petites cavités se creusent, au sein de cetle
masse dégénérée. Dans les couches périphériques la substance
fondamentale n’est pas hyaline, il y a des différences de teinte
dans les préparations à l’hématoxyline-éosine et au Van Gieson,
il semble qu'il y ait une ébauche de fibrillation. Les cellules

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 603

chondrales présentent également des lésions évidentes. Sur les
bords du cartilage les cellules et les capsules sont disposées
dans toutes les directions, elles sont désorientées ; les capsules
ne contiennent en général qu'une seule cellule, sauf tout à fait
sous le périchondre où l’on trouve d'assez vastes capsules irré-
gulières contenant trois ou quatre chondroblastes plus ou moins
déformés. Un certain nombre de cellules disséminées parmi
les autres sont petites et semblent nécrosées.

Au fur et à mesure que l’on arrive dans l’épaisseur du carti-
lage, la proportion de ces cellules augmente et elles deviennent
la majorité.

L'union du cartilage et de l’os n’est pas non plus normale, le
cartilage déborde l’os en largeur, il forme une petite nouure
— et dans le sens de la longueur, une bande de cartilage
chemine entre l'os et le périoste sur une certaine longueur.
D'autre part, par places, les lamelles osseuses pénètrent dans le
cartilage, ce qui donne une zone d'union irrégulière. Le cartilage
est vascularisé sur une certaine étendue à partir de cette zone.
Le passage du cartilage à l'os se fait brusquement sans aucune
préparation du côté du cartilage; les deux tissus sont simple-
ment juxtaposés suivant une ligne sinueuse (PI. XIV, fig. 5 et6).

L'os est formé par une coque périphérique très mince de
tissu compact et par du tissu spongieux.

Le tissu compact ne présente rien de bien particulier; peut-
être Les ostéoblastes sont-ils moins nombreux que normalement.

Le tissu spongieux présente des mailles extrêmement larges ;
celles-cisontremplies parune moelle très abondante et quisemble
assez active. Cette moelle est perforée par un nombre limité de
cavilés graisseuses relativement petites et n'occupant qu'une
partie bien minime de la surface. Le reste est formé par des sinus
sanguins dilatés, gorgés de sang et de cellules tassées les unes
contre les autres. Ces cellules sont constituées, autant qu'on
peut en juger sur des coupes obtenues après décaleification, par
des myélocytes; les hémalies nucléées sont rares, les mégacaryo-
cytes paraissent diminués de nombre ainsi que les myéloplaxes
qu'on trouve exceptionnellement en fonction ostéoclasique.

Muscles. — Les muscles présentent des lésions qui, du reste,
semblent assez récentes; il y a d’abord une inégalité de diamètre

604 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

des fibres déjà visible sur les coupes longitudinales, manifeste
sur les couches transversales. La plupart sont plus petites que
normalement, soit par atrophie simple, ce qui semble peu vrai-
semblable, étant donné que les noyaux ne sont pas augmentés
de fréquence, soit plus vraisemblablement par division longi-
tudinale, quoique les figures démonstratives de ce phénomène
soient bien rares. Par contre un nombre notable de fibres ont
un diamètre nettement supérieur à la moyenne (1). La section
de nombreuses fibres est nettement plus arrondie que norma-
lement.

D'autre part, des lésions des myofibrilles se rencontrent assez
fréquemment; souvent la fibre est ondulée et en état de dégé-
nérescence cireuse. Moins souvent on note de la dégénérescence
granuleuse,.

Le tissu interstitiel nous a paru normal.

Les artères sont assez souvent atteintes d’endartérite plas-
tique. Les nerfs nous ont paru sains.

Peut-être ne faut-il voir là qu'un état surajouté et dû au
confinement au lit. En effet, il n'y a que des lésions banales,
assez légères, comme on est habitué à en rencontrer dans toutes
les atrophies musculaires bénignes. Mais ces lésions qui sont
très nettes au niveau du droit antérieur du quadriceps sont
beaucoup moins marquées au niveau du temporal, muscle dont
les fonctions ont été forcément mieux préservées jusqu'à un
moment {rès voisin de celui de la mort.

VII. — Técumenrs.

Le cuir chevelu ne nous à pas paru présenter d'autre lésion
qu'une infiltration discrète, par places, surtout nette autour des
vaisseaux et des glandes sudoripares. Cette infiltration est formée
de mononucléaires et de macrophages, avec prolifération des
cellules fixes.

La peau, prélevée au niveau du front et du {horax, présente
des lésions de plusieurs ordres. L’épiderme est atrophique, ne
présente que cinq ou six couches de cellules ; Les karyokinèses
y sont rares, bien que l’on rencontre sans difficultés-des cellules

ee

(1) Les diamètres extrêmes que nous avons trouvés sont 4 et 35 y.

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 605

basales bi-nucléées. IT existe des polynucléaires en migration
entre les cellules.

Mais ce qui frappe le plus à l'examen des couches superfi-
cielles de la peau, c'est la disparition presque complète des
papilles; la ligne d'union dermo-épidermique est presque droite,
sur de longues étendues, brisée seulement de loin en loin par
une papille qui peut être même atrophiée.

Les couches toutes superficielles du derme sont normales,
sauf que l'on rencontre des nids de cellules à pigments, très
nombreuses par places, qui s’insinuent entre les cellules épi-
dermiques. Mais au-dessous, sur les deux régions examinées,
de larges îlots du derme, sur plus des 3/4 de son épaisseur,
présentent un état particulier.

Les fibres de collagène ont perdu toute structure et toute
élection pour les colorants; elles apparaissent sous forme de
masses irrégulières de substance grenue colorée d'une teinte
sale ; il n’y a plus de noyaux, si ce n’est ceux de quelques rares
cellules de diapédèse ; ces masses peuvent être entrecoupées de
fibres et de cellules conjonclives normales. Au-dessous, les
dernières couches du derme et l'hypoderme reparaissent avec
des caractères normaux.

Il existe un léger degré d'infiltration diffuse et de réaction
des cellules fixes, surtout appréciable autour des glandes sudo-
ripares; on y trouve quelques mononucléaires et quelques
macrophages.

CONCLUSIONS

De l'étude anatomique dont nous venons de donner les
résultats, nous nous croyons autorisés à tirer les conclusions
suivantes :

Après avoir éliminé, autant qu'il est possible, les lésions
liées à l'épisode aigu ayant amené sa mort, les modifications
anciennes chez notre vieille femme nous ont paru multiples et
complexes : sclérose, infiltration mononucléaire et macropha-
gique, hypoplasie, dégénérescences cellulaires, calcification
nous ont semblé être les grands processus de sénescence de ses
organes.

De toutes ces lésions, la plus frappante et la plus générale

606 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

est la sclérose, conséquence elle-mème de l’infiltration mono-
nucléaire et macrophagique. Tous les organes en présentent
à des degrés divers.

L'hypoplasie est manifeste dans les organes adénoïdes. Le
volume constaté macroscopiquement, le poids des organes,
l’état histologique, tout concorde pour prouver un ralentisse-
ment des fonctions de ces organes. Cette hypoplasie, bien que
marquée, n'est que relative et n’aboutit pas à l'aplasie, puisque
l'on peut encore y voir des karyokinèses.

Les lésions cellulaires sont parmi les moins marquées et les
moins fréquentes. Rappelons celles que nous avons trouvées
dans le foie et le pancréas ; d'autre part les ganglions présen-
taient quelques lésions nécrotiques unicellulaires. L'hypophyse,
la thyroïde présentent des signes d’hypofonctionnement alors
qu'au contraire la surrénale est en hyperépinéphrie.

La calcification est très fréquente, elle frappe les vaisseaux,
les plexus choroïdes, la moelle.

La question capitale dans l'étude de la vieillesse est celle de
la pathogénie des lésions, et bien souvent l’histologie serait
incapable de la résoudre sans le secours de l’expérimentation.
L'une et l’autre doivent cependant fournir leur appoint à la
solution.

L'hypothèse de Metchnikoff, sur le rôle des poisons intes-
tinaux de la série aromatique, nous parait expliquer un
bon nombre de faits, notamment celui des lésions artérielles
si étendues et si considérables, la plupart des scléroses et des
infiltrations, un certain nombre de dégénérescences cellulaires.

L'on saisit bien le mécanisme de cette intoxication chronique
par voie sanguine, par exemple au niveau du cœur : ce sont en
effet les portions les plus directement en contact avec le sang
qui sont atteintes par la sclérose, portions sous-endocardiques
et portions périartérielles. D'autre part, par l'expérimentalion,
Dratchinsky a reproduit des lésions analogues à celles que
nous avons trouvées dans le cerveau et sur les vaisseaux.

Toutefois, nous nous permettrons de dire que cette hypo-
thèse ne nous semble pas expliquer tous les faits observés et
que d’autres causes doivent intervenir.

L'auto-intoxication ne peut pas être envisagée, croyons- nous,

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 607

pour l'involution de certains organes, comme les organes géni-
taux de la femme, involution qui arrive, peut-on dire, à date
fixe, quel que soit l’état antérieur du sujet et son mode de vie.
Puis, si l'on veut bien se reporter à notre description, l’on
pourra constater que les lésions artérielles sont prédominantes
dans les organes atteints de celte hypoplasie depuis longtemps
constatée dans la vieillesse : organes génitaux, mamelle, rate,
moelle osseuse. D'autre part, les lésions des cellules glandu-
laires ne peuvent pas toutes, à notre avis, s'expliquer par celte
unique cause. On comprend bien l'hyperépinéphrie tenant à
la lutte contre l’intoxication, mais non l’hypofonctionnement
de l’hypophyse et de la thyroïde. La nécrose rencontrée au
niveau de certaines cellules Iymphatiques, des ganglions ne
ressemble pas aux dégénérescences cellulaires du foie et du
pancréas.

Pour toutes ces raisons, nous serions assez portés à admettre
que tout cet ensemble lésionnel complexe ne peut ètre dà qu’à
un ensemble étiologique complexe, une série infinie de causes
dont le temps ne serait que le totalisateur et que l’on pour-
rait essayer de classer en groupes :

1° L’auto-intoxication par les poisons digestifs bien mise
en lumière par M. Metchnikoff et ses élèves garde une place
très importante, sinon la première; elle produirait la plupart
des lésions d'infiltration macrophagique et de sclérose et un
bon nombre de lésions cellulaires (cerveau). Il est à noter que
toutes les cellules de l'organisme ne sont pas aussi sensibles
à ces poisons, les phagocytes et le tissu conjonctif étant les
plus résistants, le collagène restant à peu près immuable une
fois élaboré ;

2° La sclérose peut être produite aussi par d’autres causes :
l’auto-infection canaliculaire ascendante nous à semblé jouer
un rôle indéniable, concurremment du reste avec l’auto-intoxi-
cation sanguine, dans la genèse des lésions pancréatiques, sali-
vaires et peut-être aussi hépatiques ;

3° La série infinie au cours d'une longue existence des mala-
dies infectieuses ou des intoxications exogènes grandes ou
petites, parfois inaperçues, qui chaque fois détruisent une
parcelle de parenchyme, même minime, lequel ne se réginère
qu'en partie et est remplacé par une cicatrice scléreuse, et de

608 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ceci nous pourrions prendre un exemple dans le rein, dont les
lésions tellement parcellaires ne se peuvent guère expliquer
autrement:

4° L'usure des cellules et leur vieillissement, leur impotence
plus ou moins complète à fonctionner nous semble être bien
visible dans les transformations acidophiles du foie, du pan-
créas, de l’hypophyse. L’aboutissant de cette usure nous semble
tout à fait manifeste dans le poumon, où l’on ne constate que
des lésions d'usure presque mécanique, pourrait-on dire, et où
il n'existe ni sclérose, ni trace de réaction inflammatoire ;

5° Une cause qui nous reste tout à fait mystérieuse serait le
ralentissement progressif de la reproduction cellulaire. I ne nous
semble pas douteux que le pouvoir de reproduction des cellules
soit surtout un apanage de la jeunesse et que, à moins de cause
provocatrice spéciale, comme cela se passe dans les néoforma-
tions cancéreuses du reste rares dans la vieillesse avancée,
les cellules ne se reproduisent qu'avec une facilité moindre à
mesure que l'individu avance en âge (1). Ceci aboutirait à l'hy-
poplasie de certains organes, et il est à remarquer que ces
organes le plus hypoplasiés sont précisément ceux qui doivent
fournir la plus grande quantité de cellules à l'organisme, cel-
lules qui, constamment usées, ont besoin d'être constamment
renouvelées, et ces organes sont les organes lymphoïdes et la
moelle osseuse.

Enfin, pour terminer, nous ferons observer qu'il peut paraître
surprenant que, chez une femme aussi vieille, les lésions
séniles soient, somme toute, légères.

La raison en est simple: chez les individus chez qui les causes
de sénilité que nous avons énumérées : aulo-intoxication, diges-
tive, auto-infections, hétéro-infections, hétéro-intoxications,
auront été multiples, les lésions de sénilité seront précoces et
intenses et l'individu ne parviendra pas à un âge avancé.

Au contraire il est permis de supposer que ces causes ont été
minimes chez notre sujet, et ceci nous est un exemple de la
différence existant entre la vieillesse et la sénilité.

(1) Certains organes, cependant, peuvent se régénérer indéfiniment; tels
sont les ongles et les cheveux. Chez notre sujet, les cheveux, coupés à l’ar-
rivée à l'hôpital Pasteur, poussaient de plus d’un centimètre par mois.

e

ÉTUDE ANATOMO-PATHOLOGIQUE DE LA VIEILLESSE 609

EXPLICATION DES PLANCHES

PLaNcee XIV. — Fig. 4. — Aorle dans une partie non athéromateuse.
Infiltration leucocytaire endo et périaortique. G. = 25/1. Van Gieson.
Fig. 2. — Foie. Un espace porte montrant une infiltration mononucléaire

assez abondante. Travées hépatiques normales. G. — 150/1. Van Gieson.

Fig. 3. — Corps lhyroïde. Adéno-fibrome. Infiltration mononucléaire au
niveau de la capsule d’enveloppe. G.— 80/1. Van Gieson.

Fig. 4. — Ganglion lymphatique. a, b,c, d, quatre figures de karyokinèse
trouvées dans différents points d'une même coupe. Fort grossissement. Van
Gieson.

Fig. 5. — Cüle. Union de l'os et du cartilage. Lésions du cartilage. Nouure
costale. G.=— 25/1. Van Gieson.

Fig. 6. — Cüle. Lésions du cartilage. G. = 60/1. Van Gieson.

PLancne XV. — Fig. 7. — Rein. Un foyer de sclérose et d'infiltration mono-
nucléaire au-dessous de la capsule elle-même fortement épaissie à ce niveau.
Sclérose glomérulaire marquée. G. — 80/1. Hématéine-éosine-orange.

Fig. 8. — Moelle osseuse diaphysaire. Transformation graisseuse totale.
Athérome. G. — 80/1. Hématéine-éosine-orange. j
Fig. 9. — Glande surrénale. Foyer d'infiltralion à mononucléaires el à

macrophages. G. = 200/1. Hématéine-éosine-orange.

Fig. 10. — Rate. Sclérose et hypoplasie de la pulpe. Atrophie des corpus-
cules de Malpighi. Lésions artérielles. G. — 30/1. Hématéine-éosine-orange.

Fig. 11. — Rale. Une karyokinèse, et, peut-être, une division directe. Fort
grossissement. Hématéine-éosine-orange.

Fig. 12. — Peau du thorax. Atrophie de l’épiderme. Disparition des papilles.
Augmentation des pigmentophores. Nécrose de la partie superficielle du
derme. Infiltration discrète à mononucléaires. G. = 65/1. Hématéine-éosine-
orange.

Fig. 13. — Plexus choroïdes. Congestion et calcosphérites. G. — 80/1.
Hématéine-éosine-orange.

Fig. 14. — Cuir chevelu. Infiltration à mononucléaires du derme. G.— 90/1.
Hématéine-éosine-orange.

PLancue XVI. — Fig. 15. — Appendice. G. — 20/1. Hématéine-éosine-
orange.

Fig. 16. — Corne ulérine. Atrophie de la muqueuse. Athérome intense.
G.— 60/1. Hématéine-éosine-orange.

Fig. 17. — Ulérus; portion inférieure du corps. Métaplasie pavimenteuse de
l’épithélium cylindrique. Diminution de nombre des glandes. Evolution
adénomateuse et kystique de celles qui persistent. G. — 25/1. Hématéine-
éosine-orange.

Fig. 18. — Uvuire. Sclérose et atrophie. Cieatrices de corps jaunes. Lésions
artérielles. G. = 20/1. Hématéine-éosine-orange.

Fig. 19. — Mamelle. Sclérose. Dilatation kystique de certains culs-de sac
glandulaires. Infiltration leucocytaire autour des culs-de-sac. G. = 80/1.
Hématéine-éosine-orange.

39

RECHERCHES SUR LES MICROBES AMYLOLYTIQUES
DE L'INTESTIN

par le Dr EucÈèxe WOLLMAN.

(Travail du laboratoire de M. Metchnikoff.)

À la suite des recherches de Metchnikoff et de ses élèves sur
la putréfaction intestinale, les microbes producteurs d'acide ont
acquis une importance particulière, et de nombreux travaux (1)
ont déjà apporté sur leur comple des données intéressantes.

Comme la présence de sucres constitue pour l’activité de ces
microbes une condition essentielle, et comme, d'autre part,
d'après toute une série de données concordantes (2), le sucre
ingéré n'arrive pas ou n'arrive qu'en quantilé infime dans le
oros intestin, il élait intéressant de rechercher si la flore intes-
tinale ne renfermait pas de microbes capables de transformer
en sucre les hydrates de carbone insolubles : celluloses et
amidons.

C'est sur les microbes capables de saccharifier l'amidon, les
microbes amylolytiques, que j'ai porté mon attention.

La propriété d'attaquer l'amidon, commune parmi les moisis-
sures, où elle se rencontre assez constamment, est beaucoup
moins répandue chez les bactéries. Toutefois, certains sapro-
phytes (Bac. prodigiosus, Bac. subtilis, Bac. mesentericus, Bac.
megatherium), et quelques bactéries pathogènes (bactéridie
charbonneuse, vibrion cholérique, vibrion de Finkler-Prior),
produisent de l’amylase.

(1) Conexpyx, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1906.

Tissier, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1906.

Beconowsky, Biochem. Zeitschrift, 1907; Ann. de l'Inst. Pasteur, 1907.

G. Berrranp et WEISWEILLER, Ann. de l'Ins!. Pasteur, 1906.

G. Berrrano et Ducnacek, Ann. de l'Inst. Pasteur, 1909, ete.

(2) Macrapyen, Nencki et SIEBER, Arch. f. experim Pathologie und Pharmako-
logie, 1891.

Ewazp, Virchow's Archiv, 1839.

BerrueLor, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1910.

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L'INTESTIN 611

Parmi les microbes de l'intestin étudiés jusqu'ici, on n’a ren-
contré qu'exceptionnellement, et sans s’y arrêter, des formes
possédant un pouvoir amylolylique net. Dans la nouvelle édition
de leur livre (1), Schmidt et Strasburger disent : « Les bactéries
qu'on rencontre normalement dansles malières fécales semblent
dépourvues de pouvoir amylolytique et ne digèrent que le
sucre (2). » Mais ils ajoutent, qu'occasionnellement on peut en
rencontrer : ainsi Kersbergen aurait isolé un microbe capable
d'attaquer l’amidon.

En réalité, l'affirmation de Schmidt et Strasburger n’est pas
tout à fait exacte. Lorsqu'on ensemence des matières fécales
sur de l’amidon (la quantité minime de matière ensemencée
permet d'exclure l’action des traces de diastases digestives qui
peuvent encore se rencontrer dans les fèces), on voit souvent
une dissolution plus ou moins marquée de l’amidon avec pro-
duction de faibles quantités de sucre. Le même phénomène
peut s'observer encore avec des matières fécales chauffées à
100 degrés, où naturellement, il ne peut plus être question de
ferment digestif. Lorsqu'on cherche à isoler les différents
microbes qui ont poussé dans l’amidon, la plupart du temps on
n'en trouve pas qui soient doués d’un pouvoir amylolytique
tant soit peu net. Il est extrèmement probable qu'il s’agit ici
d'un exemple d'association microbienne: il arrive en effet qu'on
obtienne une faible action sur l’amidon avec un mélange de
plusieurs microbes, dont chacun en particulier ne manifestait
aucun pouvoir amylolytique appréciable.

D'autre part, parmi les microbes qui certainement doivent
être rangés dans les « bactéries normales des matières fécales »,
il en est un, le Bac. Welchii ou perfringens, qui est doué d’un
pouvoir amylolytique considérable : ferment puissant, il brûle
le sucre formé avec production d'acides et de gaz.

Quant aux autres microbes, capables d'attaquer l’amidon,
qu'on rencontre plus ou moins fréquemment dans les selles
(Bac. subtilis, Bac. mesentericus), ils ne présentent qu'un intérèt
secondaire (au moins chez l'homme), parce que, d'une part, ils
ne se trouvent probablement dans l'intestin que de passage et

(1) Die Faezes des Menschen, 3° édition, Berlin, 1910.
(2) « Zur amylolyse sind die normalereneise vorkommenden kotbakterien
anscheinend wicht befähigt. Sie vergären nur den Zucker ».

612 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

à l’état sporulé, et que, d'autre part ils brülent complètement
les faibles quantités de sucre formé, sans produire d’acidité tant
soit peu marquée (1).

A ces considérations près, la thèse de Schmidt et Strasburger
semble être exacte : dans une série de tentatives, je n’ai pas
réussi à isoler, chez l'homme normal, de microbe ayant un pou-
voir amylolytique marqué (2).

Je me suis alors adressé aux animaux, au singe, au chien,
ainsi qu'à des espèces qui semblaient devoir, a priorr, héberger
des microbes amylolytiques : au lapin et à la poule.

La technique de l'isolement a toujours été très simple et
sensiblement la même. On préparait des tubes d'amidon stérile
à 3 ou 3,5 p. 100 avec 5 p. 1000 de chlorure sodique. Dans les
premiers essais, j'attendais que l’amidon fût fortement liquéfié
et je réensemençais alors dans un second tube d’amidon;
j'attendais la liquéfaction de celui-ci et ainsi de suite. Après
plusieurs passages, je cherchais à isoler les différents microbes.

N'ayant eu que des échecs et m'étant aperçu que la liqué-
faction, dans les tubes successifs, devenait de plus en plus
faible, j'ai modifié la technique en faisant alors les passages
d’amidon à amidon à très court intervalle (18 heures environ).

L'amidon est, en effet, loin d'être un milieu électif : pour
peu qu'il y ait saccharification, il devient, même en absence de
matières azotées ajoutées (il y en a probablement toujours un
peu dans l’amidon du commerce), un bon milieu de culture pour
de nombreux microbes capables d'utiliser le sucre formé;
ceux-ci, dans les passages successifs, prennent de plus en plus
le dessus et empêchent l'isolement des microbes producteurs
de sucre; on évite en partie cet inconvénient en faisant des
passages à court intervalle.

Parmi les nombreux microbes isolés et étudiés au point de
vue de leur action sur l’amidon, je ne m'’arrèterai que sur les
microbes amylolytiques au sens vrai du mot, c’est-à-dire des
microbes dont l’action sur les hydrates de carbone se ramène
surtout à leur action sur l’amidon. Le sucre produit n’est que

(1) Comme cela avait été constaté par Péré : Ann. de l'Inst. Pasteur, 1896,
et comme j'ai pu le vérifier.

(2) M. Metchnikoff a isolé chez un enfant un microbe qui semble être iden-
tique au Glycobacter proteolyticus, que nous décrivons ici.

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L'INTESTIN 613

très peu attaqué en absence d'aliments azotés; il ne l’est encore
qu'en partie lorsqu'on ajoute au milieu à l’amidon du bouillon
peptoné.

Il semble, par conséquent, que ces microbes soient de véri-
tables ferments producteurs de sucre, dont ils n'utilisent qu'une
très petile partie pour leur propre compte.

Ce fait est assez curieux lorsqu'on songe à la facilité avec
laquelle les microbes les plus divers attaquent les sucres et à
la résistance relative qu'offre l’amidon.

On peut, en se basant sur cette propriété de former du sucre,
donner à ces microbes le nom de glycobacter ; j'en distinguerai
deux types : le g/ycobacter proteolyticus et le glycobacter pepto-
lyticus.

GLYCOBACTER PROTEOLYTICUS.

Comme représentant de ce groupe, je décrirai un bacille isolé
du contenu intestinal (ileum) d’un singe (Macacus cynomolgus) ;
un microbe très voisin, sinon identique, a été isolé par M. Met-
chnikoff chez un nourrisson.

.C'est un bâtonnet à bouts arrondis, le plus souvent recti-
ligne, rarement un peu infléchi, long de 6 # environ sur 1 # de
largeur, la longueur peut d’ailleurs dépasser (sur gélose
inclinée) 10 & ou tomber à 2-3 &. Les bâtonnets sont presque
toujours isolés, rarement disposés deux à deux (formes courtes).
Il ne se forme pas de chaînes. (Fig. 1.)

En bouillon, la longueur des bâtonnets est un peu plus grande.

Ce bacille se colore bien par les couleurs d’aniline basiques ;
il prend très mal le Gram ; il ne donne pas la réaction de la gra-
nulose.

Il donne des spores avec une grande facilité. Dans les cul-
tures sur gélose, celles-ci apparaissent après vingt à vingt-
quatre heures. Il se forme un renflement sublerminal ou
médian, le bâtonnet s’épaissit et prend la forme d’un fuseau.
Les spores résistent bien à la température de l’ébullition ; ce
bacille est très mobile.

Caractères des cultures. — Sur gélose inclinée, dansles cultures
jeunes, les colonies sont tout à fait transparentes, n’atteignant
1 millimètre de diamètre que lorsqu'elles sont bien isolées.

614 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Elles ont une forme irrégulièrement arrondie, à bords nets ;
lorsqu'elles sont confluentes elles forment une nappe transpa-
rente, très mince.

En gélose sucrée profonde, les colonies apparaissent au bout
de vingt heures; elles sont petites, irrégulières ; 1l y a production
de gaz.

F1c. 1. — Glycobacler proteolylicus.

Culture de vingt-quatre heures sur gélose inclinée.

Dans le bouillon ordinaire, il se produit un trouble grume-
leux, avec formation d’un dépôt granuleux après vingt-quatre
heures: dans le bouillon glucosé, les phénomènes sont les
mêmes, mais il y a dégagement de gaz pendant les premières
vingt-quatre heures.

Le lait est faiblement coagulé après quarante-huit heures;
il exsude un liquide clair; la caséine est lentement digérée,
la réaction restant acide.

Dans la gélatine, les colonies sont rondes, assez régulières;

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L'INTESTIN 615

en ensemençant en piqûre, la liquéfaction se fait à partir du
deuxième jour en forme de coupe.

Le blanc d'œuf n’est pas attaqué de façon appréciable; pas
d'odeur; pas de réaction d’indol.

Sur pomme de terre, la culture apparaît au bout de trente à
quarante heures sous forme d’une couche granulée, non sans
analogie avec une culture sur pomme de terre de bacille tuber-
culeux, mais en plus blanc et en plus humide. L’odeur rappelle
celle de ponimes.

L'amidon est rapidement liquéfié et disparaît complètement
lorsqu'on ajoute un aliment azoté.

PROPRIÉTÉS CHIMIQUES.

Ce bacille attaque Les albumines, mais ne semble pas pousser
loin leur digestion. La gélatine, liquéfiée rapidement, donne
encore au bout d’un an la réaction du biuret, de façon très
intense; ce temps écoulé, la recherche de la proline reste
négative, même à des époques moins éloignées. La caséine
digérée donne, après quinze Jours, la réaction très intense du
biuret; les réactions de la tyrosine (tyrosinase), de l’histidine
(acide sulfanilique), du tryptophane (eau de brome) sont
négatives. (Le lait digéré par le mesentericus, par exemple,
donne à ce moment une réaction nette pour l’histidine et une
réaction intense pour le tryptophane.) Dans le bouillon « blanc
d'œuf » les réactions de la tyrosine et de l’histidine sont néga-
tives au bout de quinze jours; on décèle un peu de trypto-
phane à l'eau de brome.

ACTION SUR LES HYDRATES DE CARBONE.

L'amidon est attaqué d’une façon très énergique à l’aide d'une
diastase qu’on peut assez facilement séparer. On fait une cul-
ture sur gélose-pomme de terre, on fait macérer ensuite les
corps microbiens dans une solution de NaCl à 5 p. 1.000; en
filtrant sur bougie Chamberland, on obtient un liquide qui
saccharilie rapidement l’empois d'amidon. Cette amylase dis-
paraît d’ailleurs assez rapidement (soixante-douze heures) du

616 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

filtrat; elle se conserve mieux dans la macération non filtrée de
corps microbiens.

Je n'ai pas réussi à obtenir de l’amylase en cullivant le
microbe sur gélose ordinaire; il semble donc que sa production
soit favorisée par la présence de matières amylacées (1).

Lorsqu'on fait digérer l’amidon en solution dans du chlorure
sodique à 5 p. 1.000 ou dans la solution minérale :

(NHÉPSOMPERS ST CRT. 2 grammes
RENONCER. . . 1 gramme
SNCARMN ENT EMPR.+ - CSERNNRRNE 2 —
NAGER CR. . | 3 —
ÉÉORERNERAE CA SORRRRRe :. . 1.000 —

l'analyse, faite après huit à quinze jours, donne les résultats
suivants :

ExEMPLE I. — 300 cent. cubes d'empois d'amidon à 3 p. 100, en solution dans
du NaCI à 5 p. 1.000, sont ensemencés le 18 avril. Le 26, la culture est filtrée :
on recueille 200 cent. cubes de liquide; /a réaction est neutre au tournesol;
à la phénolphtaléine, 1-2 gouttes d’une solution 1/10 N de soude font virer au
rouge 10 cent. cubes de filtrat. Celui-ci se colore en brun acajou par l’iode.
4 cent. cubes de filtrat réduisent 10 cent. cubes de liqueur de Fehling titrée
à 1 cent. cube = 0,005 gramme de glucose.

Il y aurait, par conséquent, 2,5 grammes de sucre exprimé en glucose; en
réalité, il y a mélange de mallose et de glucose : après inversion de 40 cent.
cubes de filtrat (3 cent. cubes de HCI fumant, au bain-marie bouillant pendant
quatre-cinq minutes) et neutralisation, on a 50 cent. cubes de liquide,
dont 3,5 cent. cubes réduisent 10 cent. cubes de liqueur de Fehling, ce qui
fait au total 3,55 grammes de glucose. 39,5 °/, d'amidon avaient donc été trans-
formés en sucre.

ExemPLe Il. — 300 cent. cubes d'empois d'amidon à 3 p. 100, en solution
dans du NaClI à 5 p. 1.000, sont ensemencés le 18 avril; quinze jours plus
tard, le 2 mai, la culture est fillrée; on recueille 215 cent. cubes de filtrat,
dont la réaction est neutre au tournesol et qui se colore en rouge brun par
l’iode ; avant l’inversion, 3,9 cent. cubes réduisent 10 cent. cubes de liqueur
de Fehling. Après inversion (mêmes conditions que ci-dessus), 3,5 cent. cubes
réduisent 10 cent. cubes de Fehling. La culture contient donc 3,75 grammes
de glucose, ce qui représente: 41,6 p. 100 de l'amidon contenu primitivement
(9 gr. à l’état de poudre d’amidon non desséchée). L'amidon resté sur le filtre
est desséché dans le vide sur HSO* et pesé: 4,3 grammes: 4,3 grammes
+3,15 grammes — 8,05 grammes. Comme, d'autre part, l'amidon en poudre
desséché perd de 0,8 à 1,2 gramme par 9 grammes, le poids primitif d'amidon
était (en moyenne) 9 grammes — 1 gramme = 8 grammes. Nous voyons donc
que la totalité de l’amidon consommé se retrouve dans la quantité de sucre

(4) Un fait analogue a été observé par Wortmann (Lafar I, p. 365).

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L’INTESTIN 617

produit (le léger excès de 0,05 gramme est dû, en partie, au toluène ajouté
à la culture lors de la filtration, en partie aux erreurs d'analyse.

Lorsque le milieu contient des aliments azotés, la marche de
la fermentation est différente. Une partie du sucre formé est
attaquée avec production d'acide; le stade dextrine semble être
franchi très rapidement, du moins le liquide de filtration ne se
colore-t-il jamais par l'iode; les résultats de l'analyse sont
différents suivant que la fermentation se fait en présence ou en
absence de carbonate de chaux.

Exempie III. — Sans carbonate de chaux, 300 cent. cubes du milieu suivant:
AMITON SELS A NET er ONE 30 grammes
B'OULHION RNA NERO DE RX 400 —
PAL RE CT A Le Te Le LV ea Lal CS 608 —
PepioneAtRapol eat EE rRSE 2 —

sont ensemencés le 22 septembre; le 30 septembre, la culture est filtrée; on
recueille 245 cent. cubes de filtrat qui ne se colore pas par l'iode ; l'acidité
est de 1,6 gramme de H?SO“ par litre; 15 cent. cubes de filtrat réduisent
10 cent. cubes de liqueur de Febling.

ExEMP1E IV. — Avec carbonate de chaux, ensemencé le 23 septembre, filtré
le 4 octobre. Quantité de filtrat, 215 cent. cubes; ne se colore pas par
l'iode ; avant l'inversion, 4 cent. cubes réduisent 10 cent. cubes de Fehling,
après l'inversion, 3,5 cent. cubes réduisent 10 cent. cubes de Fehling.

Ce bacille attaque faiblement le glucose, le levulose, le mal-
tose, le saccharose, le lactose: il donne, avec ces sucres, une
acidité correspondant à 1,2 — 1,47 grammes de H*SO‘ par litre;
dans le lactose, le tiers environ, 0,49 gramme, revient aux
acides volatils (acide acétique).

Il se produit, avec ce sucre, une petite quantité d’alcool qui,
évalué en alcool éthylique, forme 0,41 p. 100 du liquide de
culture (1).

GLYCOBACTER PEPTOLYTICUS.
Ce microbe, isolé de la flore intestinale du chien, est inté-
ressant en ce que, à l'encontre de l’énorme majorité des

microbes, doués d'un pouvoir amylolytique marqué (Bac.

(4) C’est Mme Wollman qui a bien voulu se charger de ces déterminations.

618 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

mesentericus, bacléridie charbonneuse, vibrion cholérique,
vibrion de Finkler- Prior, ainsi Dress proteolyticus),
il n’est pas proléolytique.

Ce microbe est un bâtonnet à bouls fortement arrondis, long
de 6 à 74, un peu plus épais que le précédent. Les bâtonnets
sont, le plus souvent, isolés, assez rarement disposés par deux.

Fr&. 2. — Glycobacter peptolylicus.

Culture de vingt heures sur gélose inclinée.

Il se colore bien par les couleurs d’aniline basiques; il garde le
Gram (fig. 2).

La formation de spores se fait ici avec une facilité encore
plus grande que pour le mierobe que nous venons de décrire.
On en rencontre déjà un grand nombre dans les cultures de
dix-huit heures.

La spore est terminale; au commencement, elle n‘entraîne
pas la déformation du bâtonnet, mais lorsqu'elle est müre, son

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L’INTESTIN 619

diamètre peut atteindre le double de celui du bacille. Les
spores résistent bien à la température de l’ébullition.
Ce microbe est assez faiblement mobile.

CARACTÈRES DES CULTURES.

Sur gélose inclinée, les colonies sont assez régulières, rondes,
granuleuses, opaques, à bords clairs.

En gélose glucosée profonde, les colonies sont irréguliè-
rement rondes, à bords bien délimités; il ne se produit pas de
gaz; le milieu s’acidifie légèrement sans devenir opaque.

En bouillon Martin, de même qu'en bouillon blanc d'œuf, la
culture n’est pas très abondante; elle débute souvent par un
mince voile à la surface ; il ne se produit pas d'indol.

En bouilion sucré, il ne se forme pas de voile. Il ne se
produit pas de gaz.

Le lait tournesolé est décoloré, mais n’est pas modifié autre-
ment, même au bout d’un temps très long.

La gélatine n’est pas liquéfiée.

Sur pomme de terre, il se forme une strie jaunâtre.

L'amidon est énergiquement liquéfié.

Voici, à titre d'exemple, quelques analyses :

I. — 300 cent. cubes d’empois d'amidon à 3 p. 100 (NaCI 5 p. 1.000) sont
ensemencés le 2 avril; le 16 avril, le liquide de culture est filtré ; on recueille
210 cent. cubes de filtrat se colorant en bleu par l’iode; celui-ci est neutre
au tournesoli à la phénolphtaléine, 0,5 cent. cube de NaOH à 1/100 N
neutralise 20 cent. cubes de liquide de filtration; avant l'inversion, 10 cent.
cubes de filtrat réduisent 10 cent. cubes de Fehling ; après l'inversion (mal-
tose), 4 cent. cubes de filtrat réduisent 10 cent. cubes de Fehling, ce qui cor-
respond à 2,6 grammes de glucose.

Le poids initial d'amidon desséché dans le vide était de 7,8 grammes, et
celui de l'amidon non utilisé dans les mêmes conditions, 4,6 grammes.

IT. — 300 cent. cubes d'empois d’amidon à 3 p. 100 dans du NaCI à 5 p. 1.000
sont ensemencés les 25 avril; filtré le 10 mai; recueilli 210 cent. cubes de
filtrat qui se colore en bleu violet par l'iode; il est neutre au tournesol;
10 cent. cubes de ce filtrat réduisent 10 cent. cubes de Fehling; après inver-
sion, 4 cent. cubes réduisent 10 cent. cubes de Fehling, ce qui correspond à
2,6 grammes de glucose.

Le poids de l'amidon desséché dans le vide avait élé primitivement de
1,8 grammes; celui de l’amidon non consommé dans les mêmes conditions
est de 4,8 grammes.

Les sucres ne sont attaqués, d'une facon appréciable, qu'en

620 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

présence d'aliments azotés; c’est ainsi que le bouillon-amidon,
de même que le bouillcn glucosé, donne une acidité de
2,4 grammes de H°SO: par litre. Sur ces 2 gr. 4, environ
0,3 gramme par litre reviennent aux acides volatils (acide acé-
tique (?), réaction du chlorure ferrique).

Les différents sucres donnent sensiblement la mème acidité.

Je décrirai ici un fait que j'ai eu l'occasion d'observer chez
plusieurs autres microbes sporulés (et notamment chez le 4/yco-
bacter proteolyticus), mais que j'ai étudié de plus près pour le
microbe qui nous occupe.

Lorsqu'on réensemence à plusieurs reprises un microbe spo-
rulé à un moment où — une partie ayant déjà donné des spores
— la grande majorilé des microbes est encore à l’état végéta-
if (18-20 heures pour le gl/ycobacter peptolyticus; 24-30 heures
pour le glycobacter proteolyticus), on remarque, après un cer-
tain nombre de repiquages, que les spores se forment de
plus en plus tardivement; il est très probable qu'en espaçant
de plus en plus les repiquages et en poursuivant l'expérience
assez loin, on arriverait à supprimer (au moins pendant un
temps très long) la formation de spores (fig. 3, 4, 5).

L'explication de ce fait est probablement la suivante : lors-
qu'on réensemence souvent un microbe dans les conditions
indiquées, il se fait une sélection d'individus ayant le moins
d'aptitudes à sporuler, car les spores mettant un temps plus
ou moins long à germer, les individus asporogènes se multi-
plient beaucoup plus rapidement et forment, dans les cultures
successives, une proportion de plus en plus considérable. On
élimine ainsi les individus qui ont une tendance à sporuler
rapidement. En espacant ensuite les repiquages, on élimine de
même ceux qui donnent des spores plus tardivement.

J'ai pu arriver ainsi, après vingt repiquages (d'abord à
20 heures, ensuite à 48 heures environ d'intervalle), à avoir
des cultures où la sporulalion commençait seulement au bout
de huit jours, tandis que, normalement, chez ce microbe, elle
est déjà abondante après 18 heures de culture.

Ce qui confirme l'explication que je viens de donner du
mécanisme de ce phénomène, c’est le fait que l'aptitude à la
sporulation n’est guère influencée par les repiquages répétés,
lorsque ceux-ci sont trop fréquents (toutes les 12 heures), c’esl-

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L’INTESTIN 621

n, souche primitive; a, souche modifiée par 10 repiquages successifs.

3. — Glycobacter peptolylicus.

Culture de vingt-quatre heures sur gélose inclinée :

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Glycobacter peplolyticus.

FIG. 4.

Culture de quarante-huit heures : n, souche primitive; a, souche modifiée par 10 repiquages.

MICROBES AMYLOLYTIQUES DE L’'INTESTIN 623

à-dire quand il n'y a encore presque pas de spores), ou, au
contraire, trop espacés (toutes les 48 heures), lorsque la très
grande majorité des microbes ont déjà sporulé.

Quant aux autres microbes amylolyliques éludiés, je ne ferai
que citer un bacille en filaments très longs, anaérobie strict,
isolé chez la poule et un autre qui, par ses propriétés, doit être

F1G. 5. — Glycobactler peptolyticus.

Culture âgée de huit jours; souche modifiée par une vingtaine de repi-
quages. La grande majorité des microbes est morte et ne prend plus le
Gram, on voit de nombreuses formes d'involution.

rapproché du glycobacter peptolyticus et qui a été isolé au
cours de recherches entreprises dans un but différent, d'une
macération de topinambour : à côté de son pouvoir amyloly-
tique, ce microbe possédait celui de désagréger énergiquement
le papier Berzelius.

Malheureusement, lorsque, rentré des vacances, j'ai voulu
reprendre son étude, je n'ai pu reproduire cette expérience :

624 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

le microbe, probablement à la suite de conservation dans un
milieu non approprié, avait perdu sa propriété d'attaquer la
cellulose. Le fait s’observe du reste avec les microbes amylo-
lytiques : lorsqu'on les conserve en faisant des passages de
gélose en gélose, leur pouvoir amylolytique baisse. Inverse-
ment, on réussit à les renforcer en faisant des passages suc-
cessifs sur amidon : la saccharification, sans être plus complète,
se fait plus rapidement.

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL \!)

(PREMIER MÉMOIRE)

ROLE PATHOGÈNE — MORPHOLOGIE — CULTURES
BIOLOGIE — ISOLEMENT

par E. CÉSARI et V. ALLEAUX.

Aperçu, pour la première fois, par Lôffler (1884) dans la
diphtérie des veaux, le microbe qui nous occupe a été relrouvé
ensuite (1891), par Schmorl, dans des foyers mortifiés de la
face chez les lapins. Mac Fadyean (1891) constata sa présence
au sein de nécroses hépatiques des bovidés et du mouton et
Bang (1891) démontra l'identité des germes étudiés par ses
prédécesseurs. Puis, Jensen (1895) établit le rôle pathogène
important de ces germes dans une foule d’affections animales.

Nous ne suivrons pas ici le développement ultérieur de la
question. Nous ferons simplement remarquer que les divers
auteurs qui ont-écrit sur le bacille de Schmorl (ou bacille de la
nécrose) sont unanimes à signaler les lacunes de son histoire.
C'est précisément ce qui nous a incité à reprendre de plano
l'étude de cet organisme si curieux.

RÔLE PATHOGÈNE

Il faut se représenter le bacille de Schmorl comme un
microbe qui passe tour à tour du milieu extérieur dans le tube
digestif des herbivores et vice versa. Tel est le cycle habituel
de son existence saprophytique, laquelle l’entretient à l’état
vivant et actif, malgré l'absence de spore. Son rôle pathogène
commence dès qu'il pénètre dans l'intimité des tissus, après
avoir franchi les barrières épidermiques ou épithéliales. Et

(1) Nous croyons équitable de le nommer ainsi, parce que ce sont les
recherches de Schmorl qui l'ont fait connaitre tout d'abord.
A

40

626 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

voici comment se traduit alors sa végétation #7 vivo chez les
diverses espèces sensibles.

Cuevaz. — Le bacille de Schmorl constitue le principal agent des lésions
nécrotiques des extrémités chez cet animal : nécrose du fibro-cartilage de
la 3° phalange (javart cartilagineux), — inflammations podophylliennes, com-
pliquées de mortification des tissus (bleime, seime), ténosite nécrosante
(javart tendineux). On le retrouve, généralement à l'état de pureté, au sein
des foyers nécrotiques ou suppurés des poumons, complications métasla-
tiques fréquentes des affections dont nous venons de parler. Il se rencontre
aussi dans la nécrose de la hanche (gangrène de décubitus) et dans celle du
ligament cervical (mal de nuque, mal d'encolure, mal de garrot). Enfin, il a
été signalé au sein d’exsudats diphtériques de l'intestin, dans un foyer
nécrotique du myocarde, etc.

Boeur. — Le bacille de Schmorl occasionne la stomatite gangreneuse et
l'entérite diphtérique des veaux, — la vagino-métrite diphtérique des vaches,
— des abcès de la panse et des ulcères du feuillet, — des lésions nécrotiques
ou suppurées du foie et des poumons, — de graves morlifications du pied
(gangrène des onglons, panaris, limace, piétin, mal de pied contagieux), —
la nécrose enzootique de la queue, etc... Il est fort probable, également,
qu'on doit rapporter au germe qui nous occupe les poussées gangreneuses
qui aggravent si souvent les localisations podales de la fièvre aphteuse.

Mourowx. — Le bacille de la nécrose provoque, chez cet animal, une atfec-
tion enzootique qui se traduit par des ulcérations des lèvres, du nez et des
membres; on le rencontre aussi dans des abcès hépatiques et il faut voir
en lui l'agent des maladies nécrotiques de l’ongle, le piétin en particulier.

Porc. — Le bacille de Schmorl a été trouvé dans la stomatite diphtérique,
la gangrène de la cloison nasale, les ulcérations intestinales, etc.

Cuiex. — Le bacille de la nécrose serait la cause d'une dermatite phleg-
moneuse et fistuleuse très spéciale.

Lapin. — Le bacille qui nous occupe est l'agent de la « maladie de
Schmorl », ou nécrose envahissante du nez et des lèvres. On l’a noté aussi
dans des lésions variées, notamment dans des foyers pulmonaires infarci-
formes.

Le bacille de la nécrose a été rencontré chez d'autres espèces animales,
mais à titre purement fortuit. On a même constaté sa présence chez l'homme.
Il a déterminé, par infection accidentelle, de petits abcès du doigt chez
Schmorl et son garçon de laboratoire.

Notons, une fois pour toutes, que son rôle pathogène, au moins exclusif,
n'est nullement établi avec rigueur dans l'ensemble des affections citées
plus haut.

En somme, le bacille de Schmorl engendre : du côté des
tissus externes, des affections nécrotiques ou gangreneuses et,
quelquefois, des altérations de nature suppurative, — du côté
des muqueuses, des affections, improprement nommées diphté-
riques (répondant aux nécroses des tissus externes), qui offrent
volontiers le caractère térébrant et gangreneux et, quelquefois,

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 627

des altérations de nature suppurative, — enfin, du côté des
viscères, des nécroses ou des abcès. Nous rappellerons que,
depuis les remarquables travaux de Veillon, il n’est plus permis
de confondre la nécrose, qui représente la mortification des
tissus, avec la gangrène, qui représente leur putréfaction in
vivo, et que cette dernière demeure l'apanage des microbes
anaérobres (lesquels peuvent, d’ailleurs, se borner à déterminer
de simples nécroses). Le bacille de Schmorl, anaérobie, est
capable d’occasionner, selon les cas, des mortifications ow des
gangrènes au niveau des tissus externes et des muqueuses; par
contre, au niveau des viscères, il ne provoque jamais de putré-
faction 2n vivo.

Les lésions dues au microbe qui nous occupe se classent
donc finalement en deux catégories distinctes : nécroses (com-
pliquées ou non de gangrène) et processus suppuratifs. Dans
les deux cas, la fréquence des /hrombo-phlébites explique aisé-
ment celle des métastases qui, selon la voie offerte à la migra-
tion des germes, apparaissent soit au niveau du foie, soit au
niveau des poumons.

Les échantillons du bacille de la nécrose qui ont servi à nos
recherches provenaient de chevaux atteints de javart (foyers
pulmonaires métaslatiques). Ils peuvent être considérés prati-
quement comme identiques entre eux; les quelques différences
observées, d’ailleurs fort légères, seront mentionnées en pas-
sant.

MORPHOLOGIE

Dans les produits pathologiques naturels (1), comme dans
les lésions expérimentales et Les cultures, le bacille de Schmorl
offre des aspects assez variés que l’on peut ramener à deux
types principaux, le {ype allongé (filamenteux) et Le éype court,
dont la filiation se trouve facilement établie par l’examen des
cultures où l’on voit Le second succéder au premier.

La forme allongée, la plus commune, est vraiment caracté-

ristique du bacille de la nécrose. Elle ne fait jamais défaut dans

(4) Nous en avons examiné hislologiquement un grand nombre, tant chez
le cheval que chez le bœuf.

628 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

les lésions en voie d'extension et prédomine dans les lésions
récentes. En culture, c’est elle qui apparaît au début du déve-
loppement, quand on s’adresse aux milieux liquides et surtout
aux milieux liquides glucosés. Elle se manifeste par de longs
filaments, droits ou flexueux, parfois repliés sur eux-mêmes,
souvent enchevètrés. Des filaments entrecroisés peuvent, à un
examen très superficiel, simuler des formes ramifiées, d’où

Fi. 1. — B. de Schmorl (type allongé et type court) dans les produits
pathologiques (foyer de nécrose métastatique du poumon d'un cheval

atteint de javart). Giemsa. Gr. : 1.800.

l'erreur de certains auteurs qui ont classé le bacille de Schmorl
dans le groupe des Streptothricées ; un peu d’attention suffit pour
éliminer cette interprétation. La /onqueur des filaments est
extraordinairement variable. Au sein des lésions, elle atteint
en moyenne 10-20 p, mais il n'est pas rare de rencontrer des
éléments offrant jusqu'à 50-100 w et plus. En culture
(milieux liquides), on obtient des filaments excessivement
longs et difficiles à mesurer en raison de leur enchevêtrement ;
ils occupent souvent plusieurs champs microscopiques (nous

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 629

en avons observé un qui atteignait 360 y). La largeur des
filaments, qui oscille entre 0 & 7 et 1 , peut dépasser 2 & chez
les formes renflées dont on parlera dans un instant. Les types
allongés sont habituellement constitués par une gaine très
fine, enveloppant un protoplasme clair, qui se condense, de
place en place, en granulations chromatiques. Selon les élé-
ments, ces granulalions s’espacent plus ou moins ou confluent,

FiG, 2. — B. de Schmorl. (Culture de vingt-quatre heures en bouillon Martin
glucosé à 2 p. 1000.) Fuchsine phéniquée. Gr. : 1.800.

au contraire, jusqu'à s’accoler véritablement. On rencontre
assez souvent, dans les préparations, des filaments qui semblent
avoir subi un mouvement de torsion sur eux-mêmes.

Rarement (lésions d’inoculation chez le lapin, cultures en
milieux pauvres), on observe des éléments irréguliers, d'habi-
tude longs et épais, à protoplasme finement granuleux, conte-
nant des vacuoles. Ces éléments, dépourvus de corpuscules
chromatiques, présentent parfois sur leur trajet des renflements
en fuseau, ou bien se terminent par des massues analogues aux
chlamydospores de certaines algues.

630 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Quand on suit le développement du bacille de Schmorl dans
les milieux liquides, on constate que les filaments se fragmen-
tent en articles de plus en plus courts. Au sein des vieilles
cultures, qui offraient tout d'abord uniquement des formes
allongées, on ne retrouve à un moment donné que des éléments
de 2 à 3 m de longueur. Ces formes courtes résultent donc de
la division des filaments. Le type court se rencontre dans les
lésions anciennes, comme dans les vieilles cultures. Certains
échantillons du bacille de la nécrose (ceux dont le pouvoir
fermentatif vis-à-vis du glucose est peu marqué) poussent
d'emblée sous la forme courte en milieu liquide.

Le bacille de Schmorl est immobile et n'offre pas trace de cils.
Il ne donne point de spores, ainsi que le démontrent l'étude
histologique et le chauffage des cultures. Il se teint par les
couleurs basiques d’aniline; mais, tandis que les éléments
jeunes fixent ces dérivés avec intensité, les cellules âgées se
colorent très mal. La thionine phéniquée et le Ziehl dilué
teintent fort bien les granulations et le Giemsa leur imprime
une belle métachromasie.

Le bacille de la nécrose se décolore par la méthode de Gram.

CULTURES.

Pour « travailler » avec le bacille de Schmorl, on est, prati-
quement, obligé de se servir de cultures en milieu liquide ; cul-
tures, bien entendu, anaérobies. L’anaérobiose est obtenue,
sans difficulté, par l'emploi combiné du vide et de l'hydrogène ;
nous ne saurions trop recommander, à ce point dé vue, le dis-
positif excessivement pratique dû à M. Legroux et résumé à /a
suite de ce travail. Le meilleur milieu liquide est le bouillon
Martin, glucosé ou non selon le but que l’on se propose, bouilli
dix minutes (puis refroidi) avant l’'ensemencement. Ceci posé,
nous allons indiquer les caractères essentiels du bacille de la
nécrose cultivé, à 37 degrés, dans les divers milieux usuels, où
il pousse aisément à l'abri de l'air.

Bouir£Lon Marrin. — On obtient, en dix-douze heures, un
trouble uniforme du liquide. L’agitation fait apparaître des
ondes soyeuses, moirées, en même temps qu'elle provoque le

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 631

dégagement de quelques bulles gazeuses. Au bout de vingt-
quatre heures, un dépôt blanc sale, crayeux, tassé, adhère au
fond du tube. Après trois-quatre jours, tous les germes se sont
déposés et le milieu demeure indéfiniment limpide. Les cul-
tures dégagent une odeur spéciale, pénétrante et très désa-
gréable, celle du 7avart exactement.

Bouizzon Marrin, éLucosé a 2 p. 1.000. — L'abondance est

F1G. 3. — B. de Schmorl. (Formes renflées.
Lésions d’inoculation chez le lapin.) — Fuschsine phéniquée. Gr. : 1.800.

plus grande que dans le bouillon Martin simple et le déga-
gement gazeux plus considérable (le liquide, non agité, apparaît
toujours surmonté d'une collerette mousseuse). Le milieu
devient très faiblement acide. Certains échantillons fermentent
peu et ne gagnent guère à être cullivés en bouillon Martin
glucosé ; il est à noter que, dans ce milieu, comme dans le
précédent, ils poussent d'emblée agglutinés (et sous la forme
courte).

SÉRUM LIQUIDE. — On voit apparaître, après quarante-huit
heures, des flocons épais, nuageux, qui flottent dans le liquide

632 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

et se déposent peu à peu au fond du tube. Le sérum n'est ni
coagulé, n1 fluidifié.

Larr. — Il se caille, du 4° au 6° jour, par acidification.

Gécarine (à 10 p. 100, au bouillon Martin). — Dans ce milieu,
maintenu à 37 degrés, se forment, comme dans le sérum, des
flocons épais qui ne tombent que lentement à cause de la
viscosité du liquide. La gélatine n’est nullement attaquée, car
elle fait prise au sortir de l’étuve.

GéLose (au bouillon Martin). — Sur la gélose inclinée,
naissent de petites colonies isolées, à bords déchiquetés,
semi-transparentes et légèrement brunâtres. — Dans la gélose
ensemencée par piqure, on observe un axe grisâtre, d’où
partent des prolongements boursouflés, irréguliers, « liché-
noïdes ».

SÉRUM COAGULÉ. — En strie, c'est une traînée grisâtre, à
bords sinueux, finement ridée à sa surface. — En piqure, si

le milieu a été coagulé à la température minima (de façon à
obtenir une gelée transparente), c'est un aspect rameux, rap-
pelant un peu le « sapin renversé » de la bactéridie charbon-
neuse.

Pomme bE TERRE. — Nous n'avons pas obtenu de culture.

BroLoGie.

Le bacille de Schmorl est un anaérobie strict. On peut, cepen-
dant, obtenir sans difficulté des cultures à l’air, dans les milieux
liquides (non bouillis), quand on l'y ensemence avec des
aérobies siricts (b. subtilis — procédé de M. Roux) ou facultatifs
(bacille du rouget). Le 4. subtihis agit en absorbant l'oxygène
du milieu lors de son développement et en maintenant l’anaé-
robiose, mécaniquement et biologiquement, sous son voile
une fois formé. Le bacille du rouget joue le rôle d'un
minuscule appareil à hydrogène sulfuré (on sait qu'il produit
IS — et des mercaptans — aux dépens des peptones). Sur
le conseil de M. M. Nicolle, nous avons entrepris de rem-
placer le bacille du rouget par le sulfure de calcium. Ce
composé, stérilisé en tube ouvert à 180 degrés et ajouté,
à l’état de traces, au bouillon Martin (glucosé à 0,2 p. 100)

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 633

ou au milieu T (1), permet un développement facile du
bacille de la nécrose sans la moindre précaution.

Les milieux au sulfure de calcium nous ont rendu les plus
grands services pour isoler le bacille de Schmorl et pour en
« remonter » les cultures affaiblies (voir plus loin). Dans le
bouillon Martin au sulfure de calcium, soit dit par anticipation,
le bacille de la nécrose donne une toxine aussi active que dans
le bouillon Martin soumis à l’action du vide et de l'hydrogène ;
il en va de même pour le bacille tétanique (expériences
inédites).

Le bacille de Schmorl croît de 30 à 40 degrés; l’optimum se
place entre 37 et 38 degrés. Il ne pousse pas dans les milieux
acidifiés, même modérément. Il fermente le glucose et le lactose
(parfois faiblement), mais n’attaque ni le saccharose, ni la
glycérine. Il ne jouit point du moindre pouvoir protéolytique (la
gélatine, avons-nous vu, n’est même pas liquéfiée). Il produit
de l’indol et dégage l'odeur fétide mentionnée plus haut et que
M. Alilaire attribue à la présence de mercaptans.

Les cultures conservent leur vitalité, à la température ordi-
naire, en bouillon Martin simple, pendant plusieurs mois. Elles
meurent à 37 degrés, en bouillon Martin glucosé, après une
semaine environ.

ISOLEMENT.

11 n'offre guère de difficultés, quand on part de produits où
le bacille de Schmorl existe en abondance et presque à l'état
pur. Sinon, il devient, cela va de soi, d'autant plus ardu que les
germes sont moins nombreux et accompagnés d'une quantité
plus grande de microbes étrangers, notamment d’anaérobies.

Dans le premier cas, on obtient souvent des cultures pures
d'emblée par ensemencement en milieux liquides additionnés
de sulfure de calcium. Si les tubes d’origine sont encore souillés
de quelques impuretés, on arrive généralement à s'en débar-

(1) Milieu employé par MM. Truche et Cotoni dans leurs recherches sur
le pneumocoque et ainsi formulé : peptone Chapoteaut 4 p. 100; glu-
cose 0,2 p.100 ; sel marin 0,5 p. 100 (on alcalinise jusqu'à coloration violet
franc au tournesol).

634 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

rasser grâce à un petit nombre de passages en milieu sulfuré,
répétés à court intervalle.

Dans le second cas, il faut recourir au procédé classique de
Veillon, mais on facilite grandement la réussite quand on fait
une culture préalable en milieu sulfuré, « culture d’enrichis-
sement » qui assure la prédominance du bacille de la nécrose.
Dans les premiers tubes d’une « série Veillon », la gélose est
toujours disloquée par les gaz de fermentation ; dans les derniers,
on trouve des colonies isolées, lenticulaires ou glomérulaires,
opaques, d’un blanc grisâtre, qui apparaissent du 3° au 5° jour
et atteignent, au plus, le volume d'une tête d’épingle.

Le bacille de Schmorl étant isolé, on peut l'ensemencer dans
le bouillon Martin simple ou dans le bouillon Martin glucosé à
2 p. 1.000. Indiquons, nettement, les avantages et inconvénients
respectifs de ces deux milieux. Dans le bouillon Martin simple,
les cultures sont moins abondantes et souvent « capri-
cieuses » (1) ; alors même que l’on fait des passages réguliers
(in vitro), on n’est jamais sûr d'obtenir un développement en
vingt-quatre heures et de temps en temps il faut, pour
« remonter » les microbes devenus paresseux, recourir à un
passage en milieu sulfuré. Par contre, grâce à l'absence de
toute acidification, le bouillon Martin simple constitue le milieu
d'élection pour conserver les germes (lorsque ceux-ci sont un
peu vieux, ils ne « repartent » que dans les liquides sulfurés).
— Dans le bouillon Martin glucosé, les cultures sont plus abon-
dantes et se font régulièrement ; on est toujours sûr d'obtenir
un développement en vingt-quatre heures avec des germes tant
soit peu entraînés. Le bouillon Martin glucosé constitue donc
le milieu d'élection pour les cultures qui suivent l'isolement et
pour le travail courant. En somme, on l’emploiera dans tous
les cas usuels, la conservation exceptée.

(1) Au fond, c'est le cas de tous les anaérobies, cultivés dans le bouillon
Martin non glucosé.

MODIFICATIONS A L'APPAREIL VIDE-HYDROGÈNE

POUR
LES CULTURES ANAÉROBIES EN MILIEUX LIQUIDES

par RENÉ LEGROUX.

L'appareil, nécessitant l'emploi du vide et de l'hydrogène,
décrit par M. Roux en 1887, et qui, depuis, n’a cessé d'être
utilisé couramment pour les cultures anaérobies, présente deux
inconvénients que nous avons cherché à éviter. La manœuvre
successive de deux robinets, pour l'arrivée de l'hydrogène et
pour le vide, est incommode lorsqu'il faut opérer rapidement.
D'autre part, les canalisations sont souvent remplies par l’eau
due à l’évaporation, sous le vide, des bouillons de culture ;
cette eau, chassée par le courant d'hydrogène, mouille le coton
et parfois pénètre jusqu'au milieu nutritif.

Nous remplaçons les deux robinets par un seul, branché à la
suite de l'appareil producteur d'hydrogène (appareil de Kipp,
appareil de Roux, etc.); ce robinet a trois voies, deux latérales,
une verlicale. Par la voie latérale gauche, on relie le robinet au
flacon laveur de Durand et l'on met en communication la voie
latérale droite avec la trompe à eau. La partie centrale tour-
nante du robinet porte une tétine où sort la voie verticale;
cette voie met alternativement en relation les voies latérales
avec le tube de culture. Une seule manette, assez longue,
commande ces différents temps.

Afin d'éviter la présence de l’eau dans la canalisation, il est
d'abord préférable d'employer des tuyaux de caoutchouc à vide
et non des tuyaux métalliques; puis, on placera à l'extrémité du
caoutchouc destinée à porter le tube de culture un réservoir
condensateur de vapeur d'eau. Ce réservoir doit être petit,
pour ne pas prendre trop d'hydrogène à l'appareil producteur ;
il doit être démontable, afin d’être facilement vidé; on le réalise
avec un tube de verre de 15 millimètres de diamètre et de
7 centimètres de long; les deux ouvertures reçoivent chacune

636 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

un bouchon de caoutchouc traversé par un petit tube de verre
effilé à chaque extrémité; l’effilure traversant le bouchon infé-
rieur devra pénétrer dans le tube condensateur de 2 à 3 centi-
mètres, de manière à permettre la collection de l’eau et à

empêcher son reflux dans le tube de culture. Le bouchon supé-
rieur est relié à la canalisation partant de la voie verticale du
robinet; le bouchon inférieur est relié, par l'intermédiaire
d’un autre bouchon de caoutchouc, au tube de culture.

Il y a avantage, pour hâter le vide dans le milieu, à se servir
d'un jet de gaz à flamme bleue, lequel permet en outre de
sceller plus rapidement le tube et de ne pas noircir la verrerie.

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUËDE
DE 1776 À 1875
par AzrRED PETTERSSON.

(Travail du laboratoire bactériologique de l'Institut médical public de Stockholm.)

La loi de 1686 sur les cultes enjoignit au clergé suédois de
tenir, dans les paroisses, des registres sur les mariages, les
naissances et les décès. Peu après cette date, on eut l'idée
d'utiliser ces registres pour établir une statistique sur le pays
tout entier. Cette statistique remonte au milieu du xvi siècle.
A partir de 1749, des tableaux réguliers et complets furent
élaborés sur le mouvement de la population : les naissances
et les décès, etc., y furent indiqués. Les rapports relatifs à la
mortalité devaient, en plus de l’âge, dénoncer aussi la cause
des décès. Grâce à cette disposition, on réussit à recueillir des
matériaux d’une haute valeur scientifique pour l'étude des
maladies contagieuses, et on est à même de fixer la fréquence
et la propagation de plusieurs d’entre elles à partir de 1749.

En ce qui concerne la variole, cette maladie fut englobée,
dans les rapports, avec la rougeole jusqu’en 1774, année où les
deux maladies furent traitées séparément. A partir de cette
époque, on est donc à même de déterminer la mortalité par
la variole, étude qui est d'un grand intérêt, d'autant plus
qu'elle nous permet de constater l'influence de la vaccination
sur la mortalité par cette maladie. Aussi s’est-on souvent servi de
cette statistique dans ce but, et, ce qui est surprenant, non seu-
lement les partisans de la vaccinalion, mais aussi ses adver-
saires, y ont eu recours. En général, on s’est contenté de com-
parer la mortalité causée par la variole avant et après que la
vaccination fut établie. Comme cette mortalité était déjà en
décroissance avant fa vaccination, cette comparaison, comme
nous allons le voir, ne présente pas un argument tout à fait
irréfutable. On s’en est servi pour prouver deux conclusions
parfaitement opposées, à savoir : la valeur préventive ou bien

638 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'impuissance plus ou moins complète de la vaccination vis-
à-vis de la variole.

Mais on peut aussi examiner la répartition des décès sur les
diverses catégories d’âge avant et après l'établissement de la
vaccinalion. Au cas où, après la vaccination, les décès sur-
viennent dans de tout autres catégories qu'auparavant, on à
toute raison de croire que la vaccination est la cause de ce
changement. J'ai traité mon sujet aussi à ce point de vue. La
variole étant d’une fréquence peu considérable en Suède depuis
l’année 1876, mes recherches ne sont pas allées au delà de
celte époque. Pour me limiter à un laps de temps d'un siècle,
je n'ai commencé mes recherches qu’à partir de 1776. Les rap-
ports recueillis au Bureau central de Statistique de Suède
indiquent, jusqu'en 1801, les décès par tranches d'âge de cinq
années. Le premier groupe, celui de 0 à 5 ans, est divisé en
{rois sous-groupes : de 0 à 1 an, — de 1 à 3 ans, et de 3 à 5 ans.
A partir de l'année 1802 jusqu’en 1859, les rapports ne traitent,
au-dessus de dix ans, que les groupes de 10 à 25, de 25 à 50
et celui d'au-dessus de 50 ans. Depuis 1860, on a à sa dispo-
sition les données fournies par les registres paroissiaux.

Ne pouvant disposer tous les matériaux par tranches d'âge
de cinq ans (cette disposition est celle qui offre le plus d'in-
térèt pour ces recherches), j'ai pourtant gardé cette disposition
autant que possible. Pendant la période 1801-1860 seulement,
les tranches de cinq ans sont remplacées par les tranches plus
larges mentionnées ci-dessus. Je donne, en outre, un apercu
des matériaux répartis seulement en ces larges tranches. Les
grandes épidémies ne revenaient (voir le tableau 1) qu’à de
longs intervalles, de durée très différente. Pour obtenir des
résultats exacts, les périodes dans les limites desquelles on veut
comparer la mortalité ne doivent pas êlre trop courtes. C'est
pourquoi, dans ce tableau, j'ai divisé les matériaux en périodes
décennales.

La vaccination fut pratiquée en Suède pour la première fois
en 1801. La vaccination obligatoire est établie depuis 1816.
Dans la période quinquennale 1801-1805, le nombre des vac-
cinés s’éleva à 47.258, soit 13 p. 100 de tous les enfants nou-
veau-nés. Dans la période 1806-1810, 25 p. 100 des nouveau-
nés ont été vaccinés, et, de 1811 à 1816, la proportion s'est

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUËÈDE 639

élevée à #4 p. 100. Voilà un fait qui doit être considéré comme
un très bon résultat produit par la vaccination volontaire. On
ne se trompera pas en considérant la rapide propagation de la
vaccinalion comme un effet dû à l'effort employé antérieurement
pour propager la variolisation. On a prétendu que la varioli-
sation ne fut jamais d’un emploi fréquent en Suède. La pre-
mière inoculation fut praliquée en 1754 à Upsal. Quoique le
peuple s'y opposät obstinément, les médecins départementaux
se donnèrent beaucoup de peine pour la répandre.

Tasceau |. — Décès par la variole de 1776 à 1875.

CAS CAS CAS CAS
ANS de ANS de ANS de ANS de

mort. mort. mort mort.
1716 4.500/1804 . . . 6.05711826 . . . 625|1851 . . . 2.488
NITTUE 1.943/1802 1793 MIS 21 60011852. . . 1.53%
1778 6.607|1803 1.464|[1828 25711853 2119
1779 15.102/1804 1.450|1829 53/1854 20%
1180 3.314/1805 1.090/1830 10411855 41
1781 1.485]1806 1.48211831 61211856 b2
1782 2.48211807 SP HPAN EN 622|1857 560
1783 3.915 [1808 1.81411833 1.145/1858 1.289
1784 12.453|1809 2.404|1834 1.04911859 1.470
1785 5.080[1810 82411835 445|1860 108
1786 671|1811 69811836 13811861 193
1781 1.771/1812 40411837 36111862 148
1788 5.46011813 547|1838 1.805/11863 307
1789 6.764|1814 30811839 # 1.934/1864 141
1790 5.893/1815 47211840 . 65011865 1.336
1791 3.101/1816 69011841 2317/1866 1 217
1192 1.93911817 24211842 . 5811867 1.061
A9 2.103|1818 30511843 . 911868 1.429
1794 3.964|1819 16111844 . 611869 1.474

Les rapports présentés à la diète de 1761 à 1769 (1) men-

(1) Berältelser rürande provincialdoklorernas ämbetsfürräliningar. Stock-
holm, 1761, Berälteiser rürande medicinalverkets tillstand, 1765 et 1769.
Je dois la connaissance de ces rapports à M. E. Almquist.

640 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tionnent souvent des cas de variolisation. Par un seul médecin,
désigné par le Conseil supérieur de santé, 275 variolisations
furent effectuées. A Stockholm; à Gothembourg et à Chris-
tianstad fonctionnaient même, pendant quelque temps, des
hôpitaux spéciaux de variolisation. Après cette date, les rap-
ports exacts font défaut.

En tout cas la variolisation, sans être générale, devint pro-
bablement de plus en plus fréquente. En certains endroits du
moins, à la fin du xvin* siècle, elle paraît avoir été très
répandue. A Gothembourg, à cette époque, presque tous les
enfants furent variolisés. En 179%, selon Almquist (1), la
variole fut inoculée par Carlander à 300-400 enfants, et, en
1799, à 600 enfants environ. A cette époque, les naissances de
la ville n'étaient que de 400 à 500 par an. Il est évident que
l'inoculation de la variole a bien préparé la population à la
vaccination, traitement plus doux, mais aussi moins efficace.

En examinant les cas de mort par la variole, on constate que
la mortalité baissa rapidement à partir de 1801, et qu'après
1810 elle fut, en général, très faible jusqu’à la période 1865-
1875. Celte diminution devient encore plus marquée, si l’on
compare le nombre des décès avec la population, dont le chiffre
avait naturellement augmenté pendant ce laps de temps. Le
tableau IV indique le nombre des décès sur 100.000 habitants
dans les divers groupes d’âge. Pour effectuer ce calcul, j'ai con-
sulté la « Population moyenne », par M. Gustav Sundbärg (2).

La vaccination commenca en Suède à la fin de l’année 1801.
Cependant, on ne peut pas attribuer la diminution de la mor-
talité par la variole, après cette époque, à la vaccination seule.
Déjà, avant qu’elle fût employée, la mortalité était en décrois-
sance.

Dans la période 1776-1780, 274,8 sur 100.000 habitants mou-
rurent par la variole, et, dans les trois périodes quinquennales
suivantes, 237,4, 190,2 et 160,4. Dans la période 1796-1800,
la mortalité montait à 200,8 par suite de la grande épidémie de
1800, mais elle diminua promptement de nouveau, de sorte
qu'elle n’atteignit que 97,3 décès sur 100.000 habitants dans
la période 1801-1805.

1) ALMQUIST (E.), BrnanG till Güresorcs Aülsovardsnümds arsberäüttelse, 1889.
(2) SUNDBARG (Gusrav), Stalislisk tidskrift, 1908.

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUÉDE

641

Tascrau Il. — Décès par la variole de 1776 à 1875. — A. 1776 à 1810.

1776 1781 1786 1791
AGE à à à à
178 1785 1790 1795
AIPANS 7.829 SO 6.160 5.360
à 3 ans 8.854 1.816 6.529 DD
ARDIE— 6 250 6.091 3.921 D-290
AO Vans 22.935 | 19.884 | 16.610 | 14.367
À Du 4.096 DS 2,808 2.673
à 15 — 944 1194 656 544
ADO 352 426 288
AND 139 177 123
AIDE 36 4% 31
à 35 — 17 9 18
à 40 — 5 5 9
AE — 3 3 1
ED 1 l 2
ADO » il »
OUR » » 2
à 3 8 5
2852090 4156620559
B. — 41811 à 1845.
1811 1816 1821 1826
ÂGE à à à à
1815 1820 1825 1830
as lNan 161 468 698 694
à 3 ans 676 366 355 319
AO — 316 189 148 10%
à 5 ans 1.815 1.023 1.201 ea A UT
à 10: — 319 241 142 96
à 15 — l
à 20 — 216 | 248 406 248
225 —.
HE — \
To | |
AUAO ee — 20 \ 26 >» 197 168
à 45 — \ \
à 50 — )
AUDE ;
à:60 t— 5 3 2 10
| 2,429 .541 1.948 1.639

1796
a
1800

1801 | 1806
a a
1805 | 1810
3.323 | 2.300
3.931 | 2.788
2.256 | 1.566
9.510 | 6.744
1.591 | 1.383

1836 1841
a a
1840 1845
1.817 112

136 45
333 13
2.886 110
402 15
\
620 mn
950 | 55
30 32
4.888 316

642 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

GC. — 4846 à 1875.

1851 | 1856 | 1861 ;
a a a
1855 | 1860 | 1865

.6:6 .346 971
491 58 289
175 9%

2.340
223

103

L'épidémie de 1800 ne provoqua qu'une élévation tempo-
raire de la courbe descendante des décès par variole. Si on
les avait répartis sur des périodes décennales, l'épidémie
n'aurait marqué aucun changement sur la courbe et les
chiffres auraient indiqué un abaissement continu (voir le
tableau IT).

Un simple examen démontre que le nombre des vaccinés de
cette période était, par rapport à la population, en trop faible
proportion pour expliquer la décroissance produite, et que la
vaccination y était pour très peu de chose. Dans cette période
le nombre des vaccinés fut de 47.258. On ne se trompera guère
en disant que la plus grande partie d'entre eux était représentée
par les enfants n’ayant pas encore atteint cinqans.

Déduction faite de ce nombre à la population moyenne (au-
dessous de cinq ans), ilreste Les habitants sur lesquels la vacci-
nation n'avait eu aucune prise. En supposant que tous les décès
aient eu lieu parmi les non-vaccinés, ilest facile de calculer com-

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUËDE 643

bien il y avait de décès par variole sur 100.000 habitants de cette
catégorie. Ce calcul donne 755,2, chiffre ‘encore plus bas que
le plus petit nombre précédent, soit 10019 dans la période
1791-1795. Cela prouve que les décès par variole auraient
diminué même sans la vaccination. Bien entendu, on peut
faire une semblable évaluation pour les périodes suivantes. Le
nombre des vaccinés fut, dans la période 1806-1810, 93.595,
soit 25 p. 100 des nouveau-nés ; 1811-1815, 175.632, soit
44 p. 100; 1816-1820, 289.797, soit 72 p. 100. Ces wvaccinés
déduits de la population, les décès par variole sur 100.000 habi-
tants dans le groupe de zéro à cinq ans se présentent de la
manière suivante :

1776-80 : 1696,2 ; 1781-85 : 1440,7; 1786-90 : 1227,2; 1791-95 :
1001,9; 4796-00 : 4257,3; 1804-05 : 755,2; 1806-40 : 677,2;
4811-15 : 307,6; 1816-20 : 603,1; 1821-95 : 1174,8.

Cependant, cette évaluation parle en faveur de la vaccination.
Un certain nombre des vaccinés moururent au cours de cette
mème période et furent par là déjà éliminés de la population
moyenne. Peut-être vaccinait-on, au commencement, desenfants
au-dessus de cinq ans. Ce qui est certain toutefois, c’est qu'il y
avait quelques décès parmi les vaccinés.

Il résulte néanmoins de ce calcul que la mortalité par
variole baissa continuellement jusqu'en 1816-1820. Par la
suite, les chiffres indiquent un accroissement de cette mortalité.
Certes on pourrait dire qu'on arrivait à un si bon résultat
parce que la propagation de la variole, de ses foyers, pouvait
être enrayée par la vaccination autour de ceux-ci. Or, on sait
que la vaccination fut pratiquée, au commencement, surtout
sur les enfantsdes classes aisées, soit à des individus peu exposés
à la maladie. Du reste, si une vaccination de 44 p. 100 des
naissances dans la période 1811-1815 âvait élevé un tel obs-
tacle à la propagation de la variole qu'il y avait seulement
123,5 décès sur 100.000 habitants dans le groupe de 0 à cinq
ans, il serait incompréhensible que la vaccination de 71,5 p. 100
dans la période 1831-35, de 75 p. 100 depuis 1836-40, et de
14 p. 100 depuis 1866-70, ne püût réduire la mortalité dans le
même groupe à moins de 430,0 ; 147,5 et 124,2 sur 100.000 habi-
tants.

Il y a encore une raison qui indique que la mortalité était

644 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

en baisse à la fin du xvin° siècle, baisse qui continuait quelque
temps après que fut établie la vaccination. En comparant la
relation entre la mortalité du groupe de un an à celle de un à
trois ans, on voit que le nombre des décès était presque le
même, quoique un peu prédominant dans le dernier jusqu’à la
période 4811-1815. À partir de cette époque les décès du pre-
mier groupe vont en augmentant (Voir les tableaux IT et IT). Un
examen des décès sur 100.000 habitants (voir le tableau IV)
donne le même résultat. Il est évident que c'est la vaccination
qui a réduit la mortalité dans le deuxième groupe. Souvent
la vaccination ne fut pas pratiquée chez les enfants au-des-
sous d’un an. Néanmoins la mortalité par variole baissait sans
interruption dans ce groupe à partir de 1776 jusqu'à 1821, c’est-
à-dire dans une période de quarante-cinq ans environ.

Nous ne connaissons pas la cause de cette diminution. Peut-
être la variolisation y était-elle pour quelque chose. Cela n’est
pourtant admissible que pour le xvin® siècle, car on doit
supposer que la vaccination la supprima tout de suite. D'ailleurs
la variolisalion n'était pas d'un usage assez fréquent pour qu'on
puisse la considérer comme une cause suffisante de cette
dirainution.

Taszeau III. — Décès par variole de 1776 à 1875
en périodes décennales.

1776 | 1786 | 1796 | 1806 Eu 1826 | 1836 | 1846 | 1856 1865

AGE à à à à à à à à à
1785 1795 1805 1815 1825 1835 1845 1855 1865 1875
0 à 1143 S06144.520| 9.871"3.451|; 1.166! .2.328| 1.929) 2.213. 2:317|t 4.312
4 à 3116.670112.281111.627| 3.464 7121 978 381 107 647] 1.400
3 à 5112.341| 7.176| 6.890! 1.942 331 392 346 270 238 49%

5.481| 4.932] 1.758 383 321 417 368 249 572
1 D 8

10 à 25] 3.162 843 d30 671 654 679 664 993 4| 1.457
25 à 00 124 95 114 56 223 810! 4.005] 1.606! 2.10%! 4.221
50 12 10 22 34 5) 38 62 192 >| 1.368

53.944138.406134.986/111.082| 3.489] 5.519! 5.204] 6.349] 6.804|13.824

Cependant, ce n’est pas dans loutes les catégories quinquen-
nales que se présente cette diminution de la mortalité par
variole. Avant la vaccination, les décès devinrent de plus en

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUÈDE 645

plus rares dans les catégories d'âge avancé. Après la vaccina-
tion, un accroissement se fait bientôt remarquer, accroissement
qui, dans les dernières périodes décennales, atteint un chiffre
très élevé.

Un regard sur les nombres absolus des décès de variole,
suffit pour montrer que ceux-c1 se répartissent tout autre-
ment dans certains groupes d'âge, après la vaccination qu'avant
celle-ci. D'abord laissons de côté l’accroissement de la popu-
lation et n'examinons que le pourcentage des décès sur la mor-
talité totale par variole dans les différentes périodes décen-
nales.

Dans le premier groupe, celui de zéro à un an, le nombre
absolu des décès a subi une forte diminution, fait qui est
tout naturel vu que, en général, la mortalité par variole a
considérablement baissé (tableau I). Mais le pourcentage de
tous les décès par variole (voir le tableau V) est, dans Îles
dernières périodes, le même ou mème plus grand que dans les
premières, c’est-à-dire avant la vaccination. Dans les autres
groupes, au-dessous de dix ans, la mortalité relative a diminué
d’une manière plus ou moins manifeste. Le deuxième groupe,
celui de un à trois ans, présentait, avant la vaccination, la plus
grande mortalité absolue et relative. Après la vaccination, une
diminution commence et va en grandissant pour chaque nou-
velle période décennale. La différence s'élève à 20 p. 100, soit
de 30 p. 100 dans la période 1776-1785 jusqu’à 9,5 p. 100 dans
la période 1856-1865 et à 10,1 p.100 dans celle de 1866-1875. La
diminution est la plus grande chez les enfants âgés de quatre
et cinq ans; à savoir : de 22 p. 100 dans la période 1776-1785,
à 3,5 p. 100 dans les deux périodes 1856-1865 et 1866-1875. A
partir de 1826 et surtout dans les deux périodes ci-dessus, la
mortalité est la plus faible dans le groupe de 3 à 5 ans (en met-
tant de côté les individus au-dessus de cinquante ans). Dans le
groupe de la sixième à la dixième année, la diminution, tout en
n'étant pas aussi forte, est quand même très prononcée. De
semblables oscillations étant inconnues dans les ravages causés
par les maladies contagieuses en général, aussi bien que par la
variole en particulier, avant la vaccination, il faut en chercher
la cause dans le changement qu’a subi le corps humain par la
vaccination.

ANNALES DE. L'INSTITUT PASTEUR

TaBcEeAu IV. — Mortalité par la variole par an
et sur 100.000 habitants.

1776 1786 1791 1801 1806
AGE à à à à à
1780 190 1795 1805 1810
1 an Ph} LA 1687.8 163,9
3 ans 1628,7 1000 ,2 476,4
D — 1256,7 600,4 276,6
5 ans. 1696,2 227,2 | 1001,9 3 460 ,7
10 — 428 ,7 266,2 9 14273
15 — 93,5 64,4 5
20 — 3129 31,0 9
25 — 14,8 13,0 9
30) — 4,2 4,2 ,6
35 — DEP. 2,4 ET
40 — 0,6 162 1
45 — 0,4 0,1 9
50 — 0,18 ,36 4
55 — » 3
60 — ) 4
0,3 5
274 200,8
1811 1816 1821 1826 1831 1836 1841
AGE à à à à à à à
1815 1820 18 5 1830 1835 1840 1845
0 1 an. 217,6 127,8: |} 470, 0 168,0 399,6 439,4 25, 4
1 à 3 ans. 117,4 56,2 48 ,2 40,9 84,8 Bet) G95
3 à D — 69,2 362 21,6 32 32,8 43,9 à up]
5 ans. 12355 63,2 65,7 SEA 130,7 147,5 8,4
10 — 34: Le 19,4 10,2 6,0 118557 23,6 0,8

——_— | —————— | —————— | ———— | ——— | ————

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUËÉDE 647

TaBLeau IV (suite).

1851 1856 1861
à à à
1855 1860 1865

) ans.
10 —

CL OEUT
D & Où © © Où # 1

é Sir
Æ & Co ©

D
il
2

| 2

à

| 3°

RE

=] À OO Or O0: À, CO RICE

Æ
C2

2
ee

Lo)
CO + ©
@ NN

Voilà une preuve irréfutable de l'effet exercé par la vac-
cination. Comme celle-ci ne se pratique souvent qu'à la
fin de la deuxième année, ou même plus tard, on ne peut
s'attendre à une amélioration prononcée dans le groupe de un
à trois ans, mais seulement dans celui de trois à cinq ans.

Dans l’âge de dix à vingt-cinq ans, le nombre des décès
diminue aw début d’une manière considérable, devient ensuite
presque constant, pour subir enfin une petite augmentalion.
Les décès p. 100 de la mortalité totale dans ce groupe d'âge
sont, dans les trois dernières périodes: décennales, deux fois
plus nombreux que: dans Les trois premières.

Le plus grand accroissement des décès par variole se présente
dans le groupe d'âge de vingt-cinq à cinquante ans. La morta-
lité par variole dans les périodes 1856-1865.et 1866-1875 y est
presque aussi grande que dans le groupe de un an. Le pourcen-
tage de tous les décès par variole s'est élevé dans ce groupe
de 0,2 p. 100 dans la période 1776-1795 jusqu'à 30,9 p. 100 et
à 30,5 p. 100 dans les périodes 1856-1865 et 1866-1875. Presque

648 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

le tiers de tous les décès par variole se rencontrent donc
dans cette période, parmi les individus qui sont dans l’âge le
plus actif de la vie. Il en est de même du groupe au-dessus de
cinquante ans. Le coefficient mortuaire s’est élevé de 0,02 p. 100
jusqu’à 6,4 p. 100 pendant ledit intervalle. Voilà un effet pro-
duit par la vaccination, lequel n’est point satisfaisant.

TABLEau V. — Pourcentage des décès sur la mortalité totale
par variole dans les groupes d'âge suivants :

1776 | 1786 Le DA 1816 | 1826 | 1836 | 1846 | 1856 1866
à à à à à à à
1785 | 1795 | 1805 | 1815 | 1825 | 1835 | 1845 | 1855 | 1865 1875

oo
Si

42,2
17,1

31,2
10,1

[=

D =

Il
4
G)
ù
3

La mortalité dans le groupe de 25 à 50 ans a, bien entendu,
une beaucoup plus grande importance au point de vue écono-
mique que celle de la première et de la deuxième années.
A priori, il est évident qu'une vie de 20 ans représente une
plus haute valeur qu'une vie de 1 ou de 2 ans. Les décès sur-
venus dans le groupe 25-50 ans constituent donc une sérieuse
perte sociale. On savait depuis longtemps par les statistiques
des hôpitaux et par les comptes rendus des épidémies confi-
nées dans certaines régions limitées que, parmi les vaccinés
atteints par la variole, le nombre des décès était plus grand sur
les âgés que sur les jeunes. En Suède, M. Almquist (1) a attiré
l'attention sur ce fait pour la ville de Gothembourg. Il est évi-
dent que la connaissance du risque que court l’âge mûr en cas
d'épidémie de variole est de la plus grande importance.

La variole protège contre une nouvelle infection de cette
maladie. Il est rare qu'une personne en soit atteinte deux fois,
et il est encore plus rare que la seconde fois la maladie amène

(1 ALuquisr (E.), So. Lükaresällskapets fürhandlingar, 1908, p. 231.

MORTALITÉ PAR LA VARIOLE, EN SUÉDE 649

une issue fatale. Quant à l'issue mortelle, on peut donc dire
que la variole donne une immunité presque parfaite contre
elle-même. Plus l’âge avance, moins sont nombreuses les
personnes susceplibles de contracter une variole mortelle.
Aussi la mortalité par la variole baissait-elle à mesure que l’on
avançait en âge avant Ja vaccination, parce que les personnes
ayant eu la variole devenaient de plus en plus nombreuses.
Dans les tranches d'âge au-dessus de vingt ans la mortalité
était souvent presque nulle. Il en a été tout autrement après la
vaccination.

Examinons maintenant quel changement doit produire une
immunisation, telle que la vaccination, sur la mortalité par
variole. Aujourd'hui on est d'accord que cette immunisation
n a qu'un effetrestreint. Cependant, elle s'étend sur des périodes
de durée très différente chez différents individus. La vaccina-
ion étant en général pratiquée dans la deuxième année, l'im-
munité acquise doit être la plus parfaite et les décès le moins
nombreux peu après cette époque. Plus le temps écoulé après
la vaccination est long, plus deviendra grand le nombre de
ceux qui sont susceptibles de contracter à nouveau la variole, et
en conséquence plus nombreux les décès. C’est précisément ce
que montrent les tableaux. Ils prouvent que l’immunité séaffai-
blit considérablement après quelque temps. Pour êlre à même
d'apprécier la portée de cet affaiblissement, il faut connaître
le nombre des décès proportionnel à la population dans les
différentes tranches d'âge.

Il ressort de ce qui précède que la méthode de vaccination
employée chez nous jusqu'ici ne donne pas une protection suffi-
sante contre la variole. On peut même se demander si elle
donne des résultats réels. Il faudra donc améliorer cette immu-
nité, si l’on veut combattre la variole par l’immunisation.
Cette amélioration se fait par la revaccination. La question est
de savoir à quel âge celte revaccination doit avoir lieu. I] est
clair qu'il n’y a aucune raison d’avoir recours à cette mesure
à l’âge où les tableaux ne marquent aucun accroissement de la
variole. Mais elle est justifiée à l’âge où se produit cette aug-
mentation. Examinons donc nos matériaux. On ne peut se ser-
vir des registres qu'après 1859, les précédents ne contenant que
deux des groupes au-dessus de 5 ans, qui nous intéressent iei,

650 ANNALES DE: L'INSTITUT PASTEUR:

ceux de 5 à 10 et de 10 à 25.ans (le dernier — celui où l’affai-
blissement de l’immunité acquise par la vaccination commence
à se manifester par l'augmentation des décès par variole —
élant trop grand pour donner un résultat applicable dans la pra-
tique). A partir de 1860 les registres peuvent donner à ce sujet
des informations d’une grande valeur. A cette époque, la
vaceination obligatoire était déjà parfaitement appliquée: Le
tableau IV indique les décès par variole dans Les divers groupes
et sur 100.000 habitants, La mortalité est la plus faible dans
le groupe de 11 à 15 ans. Dans le groupe suivant, elle est
un peu accrue, mais l'augmentation n’est prononcée que dans
le groupe 21-25 ans. L'accroissement des décès est le plus
grand dans le groupe 36-40 ans pour baisser de nouveau
plus tard. En général on peut dire que l’immunité acquise
à l’aide de la vaccination à duré quinze à vingt ans environ.
Chez certains sujets, cela va sans dire, elle a eu une durée
plus longue.

Ce résultat est en parfaite conformité avec les observations
ct les calculs faits par F. Rosander (1) et se rapportant à une
épidémie de cent cas dans un cercle limité de la province du
Geslvikland, en 1893 et 189%. IT constata qu'il n’y avait pas de
cas graves chez ceux qui se trouvaient dans les dix premières an-
nées après leur vaccination. De-ceux qui étaient dans la période
de 10 à 20 ans après leur vaccination, 17 p. 100étaient atteints
de variole grave et dans le groupe de ceux qui n'avaient été
vaccinés que depuis 20 à 30 ans le nombre en montait à
43 p. 100. Rosander fixe l’époque de la revaccination à la
vingtième année. La coutume de revacciner les conscrits est
très bonne dans la pratique. Mais il faut veiller à ceque la
première vaccination soit exécutée minutieusement, pour que
l’immunité dure jusqu'à l’âge de vingt ans. Sans cela, cet
usage n'est pas justifié au point de vue scientifique. IL est du
reste tout naturel qu’on ne veuille procéder à la revaccination:
qu'une fois. Voilà encore une raison pour laquelle on doit
désirer que l'immunité acquise dure autant que possible.

La baisse dela mortalité par la variole au-dessus de 40-
50 ans n'a, bien entendu, aucun rapport avec la vaccination.

(1) RosanDer (F.), Hygiea, 1895.

!

MORTALITÉ PAR: LA VARIOLE, EN SUÈDE 654

Elle exprime une résistance plus grande contre la variole, qui
vient avec l'âge.

TABLeAU VI. — Répartition des décès par sexes.

1776-1800 1860-1875
TR AN ee

HOMMES FEMMES HOMMES FEMMES

Population Décès Population Déoë Population! bscas. Population

Décès. ; À x
°F: | moyenne: moyenne. moy. (i). moyenne.

16.181 L.098115.6 30.582] 2.886| 58.121] 2.674
.863| 55.936118.78 56.4481 896! 107.3601 344
L. 880 .077/12.: 53.6881 3201 100.15
M0! 106.002! 8. 105.210 370! 232.

.014 04.045814. 103.824 165|, 210.5
131 94.236 à 97.305 236| 188.:

295 .417 98.114 DoHIAG SE
2.310 ) 91.203 623| 147.
1.893 ..633 ; 136.
.549 .176 AE UE
.465| D 9.435 122.
.189 .28T 5 107.
434
.065

(==

è

à © © à
Qt

D ©
(=)

57.552|1.050.752158.190|1.132.9:

(1) La population moyenne:se rapporte à la période 1861 à 1875:

Il est curieux de signaler la relation existant entre les
décès des deux sexes après la vacinalion, phénomène démontré
par le tableau VI. Avant la vaccination, autant d'hommes que
de femmes mouraient de variole. Après la vaccination cet état
de choses s’est modifié en faveur des femmes. C'est surtout au-
dessus de vingt ans que cette plus grande mortalité des hommes
se fait remarquer. Pour 100 décès de femmes on peut constater
150 décès d'hommes. Il est évident que ce fait est d'autant plus
à regretter que les hommes étaient déjà auparavant en mino-
rité. Il est très difficile de trouver la cause de ce fait. [Il n'est
pourtant pas probable que la vaccination ait directement agi

652 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

en ce sens. Je suppose que les hommes menant une vie en con-
tact avec d’autres personnes prenaient la variole plus facile-
ment que les femmes, ce qui explique que le nombre des décès
d'hommes élait supérieur à celui des décès de femmes, les
femmes étant retenues à la maison par leurs occupations
domestiques.

ConcLusioNs.

En Suède, la mortalité par variole était en décroissance
manifeste même avant l’époque où fut introduite la vaccina-
tion. Dans les premiers temps après son introduction, la vacci-
nation fut encore d’une pratique trop peu fréquente, pour que
l’on soit autorisé à attribuer à son influence seule la diminu-
tion considérable qui se manifestait dans la mortalité par
variole.

Dans les tranches d’âges les plus basses (au-dessus de 1 an),
par contre, l'effet exercé par la vaccination sur la baisse de la
mortalité par variole est prouvé à l'évidence.

Un autre résultat, celui-ci peu avantageux, qu'amenait
incontestablement la vaccination, est l'accroissement de la
mortalité par variole dans les groupes d’âges au-dessus de
20 ans.

La vaccination préserve de variole mortelle pendant une
période de 15 à 20 ans.

Après l'introduction de la vaccination, la répartition des
décès par variole sur les deux sexes fut autre qu'avant
parmi les adultes, le nombre des hommes succombant à cette
maladie est devenu plus grand que le nombre correspondant
chez les femmes.

LES VACCINATIONS ANTIRABIQUES

A L'INSTITUT PASTEUR EN 1911

par Juzes VIALA, Préparateur au service antirabique.

Pendant l’année 1911, 342 personnes ont subi le traitement
antirabique à l'Institut Pasteur; aucune mort n’a été signalée.

La statistique s'établit donc ainsi :

Personnes HrdItées CUS SR 9)
MORT ER ARR Er MORE RE AAENT ER PRE 0
MORALE RAC ERREUR TIR 0

Le tableau ci-dessous indique les résultats généraux des vac-
cinations depuis l'origine.

ANNÉES PERSONNES TRAITÉES MORTS MORTALITÉ
1886 2.671 25 0,94 p. 100
1887 2.770 14 DITO SE
1838 1.622 9 LEE =
1889 1.830 fl 0,38 —
1890 1.540 5 0,32: —
1891 1.559 4 0,925 —
1892 1.790 4 D221.—
1893 1.648 6 0,36 —
1894 1.387 7 0,50 —
1895 1.520 5 0,38 —
1896 1.308 4 0,30 —
1897 1.521 6 0,39 —
1898 1.465 3 0,20 —
1899 1.614 4 0,25 —
1900 1.420 4 0,28 —
1901 1.321 5 0,38 —
1902 1.005 2 0,18 —
1903 62$ 9 0,32 —
1904 755 3 0,39 —
1905 721 3 0,41 —
1906 772 4 0,143 —
1907 186 3 0,38 —
1908 524 il 0,19 —
1909 467 1 Dan
1910 AUOT 0 0,0 =
1914 342 () 0,0 —

654 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
Les personnes traitées à l’Institut Pasteur sont divisées en

trois catégories correspondant aux tableaux suivants :

Tableau A. — La rage de l'animal mordeur a été expéri-
mentalement constatée par le développement de la maladie
chez des animaux mordus par lui ou inoculés avec son bulbe.

Tableau B. — Ta rage de l'animal mordeur a été constatée
par examen vétérinaire.

Tableau C.— L'animal mordeur est suspect de rage.

Nous donnons ci-après la répartition, entre ces catégories,
des personnes traitées en 1911.

MORSURES

MORSURES MORSURES

à la tête. aux mains. aux membres.

= nn. 020 cn RO OR

ANNÉE |

: S S 5 © : S |

1911 $ SAR = à sis S dE = |

UE 2 | 513 ER EN RREM ES ARE)

EURE SL ÉNENENE AE

= = EE À
Hableat AP #15t1021 0 0
Tableau BE TAILLES 0 0
MADIeAu EPS AITRNS 0 0

Au point de vue de leur nationalité, les personnes traitées se
répartissent de la façon suivante :

Angleterre .
Lorraine .
Indes-Anglaises.
Russie ,
États-Unis
Luxembourg .

[2e

= END

VACCINATIONS ANTIRABIQUES 655

Répartition par départements des 330 Français traités.

EE

NIET ) Maine-et-Loire . 3
Alpes-Maritimes . 24 | AMORDIHANES EN T 2
Aveyron . 2 Meurthe-et-Moselle . 8
Cantal . 13 Nièvre. 5
Charente . 5 Oise. AE à 9
Calvados . 6 Puy-de-Dôme . 16
Corrèze 4 | Pyrénées (Basses-) . f
Creuse . 8 Pyrénées (Hautes-) . 5
Eure-et-Loir . 5 SALE MENT -ATME 4
Finistère . ; MIRSèvres (Des) 4
Garonne (Haute-). à | Seine-Inférieure. 12
Ille-et-Vilaine 9 Seine-et-Marne. . 3
Indre. . 7 5 Seine-et-Oise 15
Indre-et-Loire 4 Seine . 105
Loire-Inférieure 6 somme . 17
Loiret . 3 Vienne 8
ÉaXE SR EE 1% | Vosges 5
Manche. . D) Yonne. 2

Paris. — L, MARETHEUXx, imprimeur, 1, rue Cassette.

Le Gérant : G. Masson.

26° ANNÉE SEPTEMBRE 1912 N°x 9

ANNALES

DE

EENSTITUT EXSEEUR

LA COAGULATION DU SANG
ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE
par les D'S J. BORDET et L. DELANGE

(Institut Pasteur de Bruxelles.)

Nous comptons exposer dans ce mémoire, d’une manière
suffisamment explicite, les recherches que nous poursuivons
depuis assez longtemps sur la coagulation du sang ; nous avons
à vrai dire signalé déjà, dans de brèves notes préliminaires (1),
certains faits que nous avons observés, notamment la production
de fibrin-ferment aux dépens des plaquettes, le mode de réaction
entre celles-ci et le sérum, le pouvoir de la peptone de mettre
en liberté du fibrin-ferment dans certaines conditions ; mais
ces communications sommaires étaient sobres de détails expéri-
mentaux, elles passaient sous silence divers faits dont la
connaissance n'est sans doute point dénuée d'intérêt; aussi,
tout er atlirant aujourd'hui l'attention sur quelques notions
nouvelles, avons-nous Jugé nécessaire de revenir, en les pré-
cisant, sur les données que nous avons antérieurement men-
tionnées. Nous croyons devoir fournir tout d'abord quelques
indications concernant la technique que nous avons suivie et les
motifs qui nous l'ont fait adopter.

Pour mettre en évidence, dans un liquide soumis à l'étude,

(1) Bulletin de l'Académie royale de Belgique, juin 1911; Comples rendus de la
Soc. de Biologie, mars 1912, t. LXXII, p. 510.

42

658 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

le principe actif qui provoque la coagulation et qu'on appelle
communément fibrin-ferment ou thrombine, nous avons très
fréquemment employé le plasma oxalaté, que nous préférons
de beaucoup à la solution dite pure de fibrinogène. On le sait,
le fibrinogène, élément passif, se solidifie sous l'influence de la
thrombine, laquelle n'existe dans le sang circulant qu’à l'état
de substances-mères par elles-mêmes inactives, et ne se forme
aux dépens de ces matières que si le sang extrait du corps est
soumis, en présence de sels calciques, au contact d’un corps
étranger. Les sels de chaux, indispensables à la production de
la thrombine (Arthus et Pagès), ne sont plus nécessaires à la
coagulation dès que la thrombine a pu prendre naissance (Pe-
kelharing, Hammarsten) : un liquide calcifié où de la thrombine
s'est formée peut, après addition d’un excès d'oxalate ou autre
décalcifiant, solidifier le fibrinogène. A condition bien entendu
d’avoir été préparé avec le soin voulu, le plasma oxalaté ne
contient, outre le fibrinogène, que des matières indifférentes
ou des substances-mères condamnées à l’inertie aussi longtemps
que la recalcification n’est pas opérée. Si donc on l’additionne
d'un liquide contenant de la thrombine, en prenant soin natu-
rellement de maintenir un excès d’oxalate, la coagulation qui
survient ne peut être attribuée qu'à cette thrombine préformée,
puisque aucune dose additionnelle du même principe ne saurait
être engendrée dans le mélange. Quant à la solution dite de
fibrinogène pur, et qu'il serait plus conforme aux faits d'appeler
simplement solution de fibrinogène obtenue par précipilations
successives sous l'influence du sel, elle n'offre pas nécessaire-
ment la même garantie. C'est parce qu'elle inspire une fausse
sécurité que l’on croit souvent pouvoir, en vue de déceler la
thrombine d’un liquide, la mélanger à celui-ci en milieu calcifié.
Une méthode de séparation fondée sur le pouvoir insolubilisant
du sel concentré n’est pas très délicate ; il serait étonnant que le
fibrinogène ainsi obtenu n’eût pas entraîné avec lui certaines
matières capables, en présence de chaux, d'intervenir dans la
coagulation, d'autant plus que de telles matières témoignent
d'une réelle aptitude à s’accoler aux précipités. On exige à vrai
dire, comme preuve de la pureté de cette solution, qu'elle ne
soit point susceptible de se coaguler spontanément en milieu
calcifié. D'abord, on n'obtient pas toujours un produit répondant

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 659

entièrement à cette condition. Ensuite, même s'il satisfait à cette
exigence, il ne doit pas néanmoins être considéré comme
sûrement exempt de proferment. Il est bien vraisemblable, on
le sait, que le proferment n’est pas constitué par une substance
unique, et qu'outre le calcium, deux matières, peut-être davan-
tage, participent à la formation de la thrombine. Un fibrinogène
souillé de l’une seulement d’entre elles pourrait donc rester
fluide, même en présence de chaux. Mais en milieu calcifié on
ne pourrait s'en servir en vue de rechercher si un liquide donné
contient réellement de la thrombine. Car, mélangé à un
semblable liquide, il serait capable d'y déceler, non pas exclu-
sivement une thrombine préformée, mais aussi la seconde
matière génératrice dont il est lui-même dépourvu ; en effet,
s'il rencontrait celle-ci, il en révélerait la présence en se
coagulant sous l'influence d’une thrombine à la production de
laquelle il aurait lui-même contribué. Il est donc beaucoup plus
prudent, pour déceler uniquement une thrombine déjà toute
formée, d'opérer en milieu décalcifié. Tout en satisfaisant à
cette condition, le plasma oxalaté, d'autre part, se rapproche
autant qu'il est possible, par sa composition, du liquide sanguin
normal.

Nous n'insistons guère sur les précautions dont la préparation
du plasma oxalaté doit être entourée : 1l faut, lorsqu'on extrait
le sang, éviter toule souillure par le sue de tissus. Le tube (1)
qui sert à la saignée du lapin (nous avons eu généralement
recours à cet animal) doit être enduit intérieurement de
paraffine, afin que le sang, avant de rencontrer la solution
d’oxalate sodique à 1 p. 100, soit préservé du contact avec le
verre. On sait que le contact avec un corps étranger mouillable
joue un rôle déeisif dans la coagulation. Recueilli au sortir de
l'artère, dans un vase enduit de vaseline, le sang ne se coagule
que fort lentement (Freund). En se servant de tubes paraffinés,

1) Nous employons un tube de verre dont la partie inférieure s’effile en bec
rccourbé que l’on introduit dans l'artère, tandis que l'orifice supérieur est
muni d’un tampon d'ouate. Lorsque le sang a atteint la hauteur voulue, on
retire le tube, on perd les premières gouttes et, en soufflant à travers le
tampon, on dirige le jet dans un tube jaugé, également paraffiné, et qui
contient la dose voulue (1 p. 10 du volume total) de solution d'oxalate
sodique à 1 p. 100 (cette solution contient aussi 0,5 p. 100 de NaCI); on
mélange rapidement et on centrifuge en tube de verre ordinaire.

660 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Bordet et Gengou ont obtenu, par centrifugation de sang de
lapin, du plasma limpide qui se maintenait longtemps fluide
en paraffine, mais se solidifiait rapidement dès qu’on le trans-
vasait dans un récipient en verre ; ils ont montré que le contact
avec la paroi, même en l'absence de cellules, hâte considéra-
blement l'apparition de la thrombine. Il est utile de contrôler
que le sang extrait ne s’est pas modifié, soit par le contact (1),
soit par la pénétration de suc de plaie. Dès qu'on a réparti la
majeure partie du sang dans le tube à oxalate, l’excès restant
dans le tube à saigner est introduit dans un verre à pied ordi-
naire (non paraffiné) que l'on garde à l'abri de toute secousse.
Un revêtement solide se forme bientôt contre la paroi, mais 1 1
ne doit s'épaissir que lentement, la partie centrale du liquid e
doitse maintenir fluide fort longtemps. Souvent, vers le milieu,
le sang est encore fluide après plusieurs heures, tandis que les
globules rouges et blancs se déposent; si l’on en pique la
surface avec un tube capillaire, celui-ci se remplit d’un plasma
blanchâtre troublé par les plaquettes, que leur faible densité a
préservées de la sédimentation. Celte expérience très simple est
particulièrement démonstrative au point de vue du rôle du
contact avec la paroi.

Obtenu dans ces conditions, le sang de lapin, oxalaté à
4 p. 1000, fournit par centrifugation énergique un plasma stable
qui, conservé au frais, reste identique à lui-même pendant les
trois ou quatre jours que dure son emploi. S'il y apparaît un
léger caillot floconneux, c’est qu'une faute a été commise.

Pour mettre en relief le pouvoir coagulant d’un liquide et
servir ainsi de réactif de la thrombine, le plasma oxalaté doit
être employé d'une façon qu'il importe de préciser. Il faut
évidemment que la réaction s'opère en milieu décalcifié, e'est-
à-dire que le calcium soluble apporté par le liquide coagulant
soit, comme l’a été celui du plasma, neutralisé par l’oxalate.
Or, contrairement à ce que l’on pensait autrefois, il est certain

(1) En général, les paraffines solides du commerce (même mélangées par
fusion préalable avec leur volume de paraffine liquide) ne représentent
malheureusement pas une paroi tout à fait indifférente pour le sang. Souvent,
celui-ci parvient à la mouiller au bout de quelque temps, à la faveur d’une
adsorption de matières albuminoïdes, et n'est plus protégé dès lors contre la
coagulation par contact. Mais, si l'on opère vite, cel inconvénient n’a pas le
temps de se manifester.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 661

que l’activité coagulante d’un liquide contenant de la thrombine,
du sérum par exemple, souffre du contact avec l’oxalate. Bordet

x

et Gengou ont apporté à cet égard des renseignements que
nous avons pu compléter et sur lesquels il convient de revenir
brièvement. Mais nous devons tout d'abord, pour plus de clarté,
rappeler les constatations de ces auteurs (1) concernant l’affai-
blissement très rapide de la thrombine sous l'influence de la
conservalion.

Du sang de lapin est, au sortir de l’artère, salé à 5 p. 100 par mélange
avec un liers de solution de NaCI à 20 p. 100; la centrifugation fournit un
plasma incoagulable : on sait que la forte concentration saline agit comme
l'oxalate, c’est-à-dire s'oppose à l'apparition de la thrombine, mais qu'il suffit
d'abaisser la teneur saline -par addition d’une quantité convenable d’eau
distillée (4 volumes) pour permettre aux phénomènes de suivre leurs cours
el provoquer ainsi la coagulation. Préparons une telle dilution ; d'autre part,
préparons-en une seconde, identique à la première, que nous avons soin
d'oxalater à 1 p. 1000 (par addition à 9 volumes de 1 volume d’oxalate
sodique à 1 p.100). Par défibrination la première dilution se convertit bientôt
en sérum, dont la thrombine peut être décelée grâce à la seconde dilution.
Quelques minutes après que le sérum s’est formé, transportons-en 0,9 cent.
cube dans un tube contenant 0,1 cent. cube d’oxalate à 1 p. 100; laissons
le contact avec l'agent décalcifiant se prolonger pendant cinq minutes, puis
ajoutons 1 cent. cube du plasma dilué oxalaté. Le mélange se prend en masse
au bout de trois minutes à peine ; le sérum tout récemment obtenu est donc
extrêmement actif. Répétons l'expérience un quart d'heure plus tard ; le sérum
s’est déjà très nettement affaibli; il exige une demi-heure pour coaguler le
plasma oxalalté. Quant à celui-ci, la conservation ne le modifie guère: il se
laisse toujours coaguler rapidement par du sérum frais, lentement par du
sérum vieilli, dont il ne décèle donc la thrombine que fort péniblement.

Mais on peut opérer autrement. Au lieu d'ajouter au sérum lui-même la
dose requise d'oxalate et d'effectuer quelques minutes plus tard le mélange
avec le plasma oxalalé, on peut introduire cette dose dans le plasma oxalaté
auquel on ajoute ensuite le sérum; en d'autres termes, on mélange cette
fois, suivant les mêmes proportions que précédemment, du sérum, non
décalcifié au préalable, à du plasma doublement oxalaté. Cette variante de
technique ne change rien à la constitution du mélange total (dont la teneur
en oxalate reste la même), elle a cependant une influence décisive sur le
temps d'apparition de la coagulalion, surtout lorsqu'il s’agit de sérum un
peu vieilli; la prise en caillot est alors considérablement accélérée. Par
exemple, un sérum âgé d'une heure environ, qui, oxalaté à 1 p. 1000, exige
une à deux heures pour coaguler volume égal de plasma dilué oxalaté à
1 p. 1000, solidifie en quelques minutes, s’il n’a pas été décalcifié au préalable,
volume égal de plasma dilué oxalaté à 2 p.1000. Quand le sérum est très frais
et manifeste corrélativement une énergie extrême, la différence n'est guère
perceptible, la coagulation survenant très vite quelle que soit la manière
d'opérer.

(4) Annales de l'Institut Pasteur, 1904, p. 101. On le sait, Schmidt avait déjà
constaté que la thrombine s'affaiblit en vieillissant.

662 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Il semble résulter de ces faits, constatés par Bordet et
Gengou (1), que la thrombine un peu âgée est altérée par
l’'oxalate lorsqu'elle est touchée par celui-ci avant d'avoir
rencontré le fibrinogène. On pourrait objecter, à vrai dire, que
sans être réellement alteinte par l'oxalate, elle agit plus aisé-
ment en présence de traces de sels calciques solubles et que
précisément la neutralisation de ceux-ci n'est pas tout à fait
instantanée lorsque à du sérum calcifié on mélange volume égal
de plasma oxalaté à 2 p. 1000; la présence de Ca soluble, fàt-ce
pendant de courts instants, suffit peut-être à favoriser beaucoup
la coagulation du fibrinogène par la thrombine. Afin de vérifier
le bien fondé de cette remarque, nous avons complété l'expé-
rience de coagulalion de plasma oxalaté par le sérum, en
réalisant la troisième forme dont elle est susceptible. Si l'on
peut, au lieu de mélanger du sérum et du plasma séparément
oxalatés tout d’abord, ajouter à du sérum non décalcifié du
plasma doublement oxalalé, on peut aussi introduire dans du
sérum doublement oxalaté du plasma non décalcifié; natu-
rellement, dans ce cas, celui-ci doit être préparé immédia-
tement avant l'expérience afin de n'avoir pas eu le temps de se
modifier spontanément. Suivant cette {roisième facon d'opérer,
comme suivant Ja seconde, au moment où la thrombine
rencontre le fibrinogène, un peu de sel calcique persiste dans le
mélange pendant les courts instants nécessaires à la précipi-
tation complète par l'oxalate. Signalons ce détail qu'au lieu de
diluer le plasma salé par de ou distillée pure, ce qui abaisse
trop au-dessous de la normale la concentration en sels calciques,
nous l'avons allongé d’eau distillée contenant une trace de
CaCP (0,015 p. 100), ce qui hâte nettement la coagulation (2).

Exr. I. — Par dilution de plasma salé à 5 p. 100, avec 4 volumes d'eau
distillée légèrement calciliée, on obtient après coagulation et défibrination
un sérum qu'on laisse vieillir une heure. Une autre portion de plasma salé
est diluée de même, immédiatement avant la confection des mélanges indi-
qués ci-dessous. Tant du sérum que du plasma tout récemment dilué, une

(1) Annales de l'Inslilut P'isleur, 1904, p. 11%.

(2) Le plasma salé limpide employé dans cette expérience se coagulait len-
tement, en 2 heures environ, par dilution avec4 volumes d’eau distillée ;
mélangé avec 4 volumes d'eau distillée légèrement calcifiée, il n’exigeait que
45 minutes pour se solidifier. — Bien entendu, la trace de CaC® introduite
est assez minime pour que le sérum obtenu, oxalaté à 1 p. 1600, contienne
un fort excès d'oxalate.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 663

partie est employée telle quelle, une autre est oxalatée à 1 p. 1000, une autre
l’est à 2 p. 1000. On introduit dans les tubes :

A. — 1 cent. cube de plasma dilué récent oxalaté à 2 p. 1000, 1 cent. cube
de sérum non oxalaté.

B. — 1 cent. cube de plasma dilué récent oxalaté à 1 p. 1000, 1 cent. cube
de sérum oxalalé à 1 p. 1000.

C. — 1 cent. cube de plasma dilué récent non oxalaté, 1 cent. cube de sérum
oxalaté à 2 p. 1000.

La coagulation s'opère en 7 minutes dans le tube A, en 3 heures dans le
tube B, en 2 heures 20 minutes dans le tube C. Elle ne se fait donc rapide-
ment que là où le sérum n’a pas été touché par l'oxalate avant de rencontrer
le fibrinogène. Elle est un peu moins lente en C qu’en B (la différence n'est
pas très grande), probablement parce que la thrombine atteinte par l’oxalate
y est dans une faible mesure régénérée grâce à de faibles traces de chaux
provenant du plasma et qui ne sont pas instantanément précipitées par
l’oxalate qu'apporte le sérum.

Pour agir énergiquement, il faut que le liquide contenant
la thrombine n'ait pas été entièrement privé de son propre sel
calcique soluble au moment où il entre en contact avec le
fibrinogène.

Ce qui nous importe surtout ici, c’est l'indication technique.
Quand on aura besoin d’un réactif sensible de la thrombine, on
emploiera le plasma oxalaté à 2 p. 1000, auquel on ajoutera
volume égal de sérum non décalcifié. Quand on voudra mettre
en relief l'existence dans un liquide d'une thrombine toute
fraîche, très énergique, que l’on désire différencier d’une
thrombine plus âgée renfermée dans le même liquide, on mélan-
gera ce liquide au plasma après les avoir oxalatés séparé-
ment à 1 p. 1000.

Nous aurons rarement recours, dans les expériences qui sui-
vent, au plasma salé. Nous emploierons couramment le plasma
de lapin oxalalé à 4 p.1000, soit contenant encore les plaquettes,
soit débarrassé de ces éléments ; nous aurons besoin aussi de
suspensions de plaquettes lavées. Pour obtenir celles-ci, il faut
s'adresser à la technique classique, qui met à profit la remar-
quable légèreté des plaquettes et la résistance corrélative,
signalée par Mosen en 1893, qu'elles offrent à la centrifugation.

Le sang de lapin qu'on vient d'extraire et d'oxalater à 1 p. 1000 est centri-
fugé pendant un quart d'heure environ à vitesse modérée, laquelle suflit à
réaliser le dépôt des globules rouges et blancs et détermine la séparation
d'un plasma très trouble qui a conservé ses plaquettes et qu'on décante. Si
l'on tient à obtenir des plaquettes sûrement exemptes de globules rouges et
de leucocytes, ce qui est indispensable lorsqu'il s’agit d'établir leur part propre

66% = ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dans le phénomène de la coagulation, on centrifuge ce plasma à une vitesse
plus grande, pendant un temps suffisant mais non exagéré. Une bonne partie
des plaquettes se dépose, le plasma surnageant en contient néanmoins encore,
tout en s'étant débarrassé totalement des autres éléments cellulaires. Après
décantation, une nouvelle centrifugation très énergique et très prolongée de
ce plasma fournit un sédiment de plaquettes dont la pureté est contrôlée par
l'examen microscopique à l’état frais ou après coloration par le Giemsa. Pour
en obtenir une suspension, on délaie le sédiment dans un grand volume de
solution physiologique de NaCI (à 0.9 p. 100) oxalatée à 0.5 p. 1000; on centri-
fuge très énergiquement (environ 3.000 tours) pendant 2 heures à peu près,
on décante, on répète le lavage et l'on obtient finalement un dépôt exempt
de plasma, que l’on délaie dans un peu de solution physiologique oxalatée.

Suivant l'énergie et la durée de la centrifugation, on obtient
un plasma oxalaté qui contient encore des plaquettes, ou bien
est très limpide et n'en renferme plus que des traces. A vrai
dire, on ne peut garantir que la turbine puisse jamais éliminer
entièrement ces éléments; son action doit être aussi forte et
aussi prolongée que possible.

Pour provoquer la coagulation du plasma oxalaté, nous le
diluons habituellement avec quatre volumes de solution physio-
logique calcifiée {que pour abréger nous appellerons EPCa),
préparée de telle sorte (1) que ces quatre volumes renferment
une fois et demie la quantité de sel calcique nécessaire à la neu-
tralisation d’un volume d’oxalate à 1 p. 1000, le sang dont le
plasma dérive ayant été oxalaté à 1 p. 1000. Mieux vaut, en effet,
restituer un petit excès de Ca, de telle sorte que malgré la
dilution la concentration en cet agent ne descende pas trop
bas. On rend ainsi la coagulation plus rapide, on rend négli-
geables les minimes inégalités que divers échantillons de sang
peuvent présenter entre eux quant à leur richesse originelle en
sels calciques, et les petites erreurs dans le dosage de l'oxa-
late dont on les à additionnés. On sait que pour provoquer la
coagulation du plasma oxalaté, il n'est nullement nécessaire de
lui restituer la totalité de la chaux dont l’oxalate l'avait privé :
une trace de calcium soluble suffit. Aussi la proportion de
4 volumes de notre EPCa pour un volume de plasma oxalaté
dépasse-t-elle très notablement la dose minima coagulante :

(4) Nous commençons par préparer une solution de CaCEË précipitant exac-
tement volume égal d'oxalate à 1 p. 100; celte solution-mère contient envi-
ron 1 p. 100 de CaCF. Pour obtenir EPCa, nous mélangeons alors 30 cent.
cubes de cette solution à 770 cent. cubes de solution physiologique de NaCI.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 665

pour 1 cent. cube de plasma de lapin, cette dose est environ
de 2 cent. cubes et pour 1 cent. cube de plasma de cobaye
(également oxalaté à 1 p. 1000) environ de 1 cent. cube 50.
Remarquons immédiatement néanmoins que la coagulation
d’un mélange de 1 vol. de plasma oxalaté à 4 p. 1000, et de
4 vol. d'EPCa, fournit un sérum qui, oxalaté lui-même à 1 p.1000,
contient désormais un fort excès d’oxalate sodique.

Comme plasma spontanément incoagulable, nous employons
très fréquemment une dilution du plasma originel, oxalaté à
1p.1000, dans quatre volumes de solution physiologique oxalatée
soit à { p. 1000 (plasma dilué monoxalaté), soit à 2 p.1000 (plasma
dilué dioxalaté). La dilution est donc au cinquième pour le
plasma oxalaté comme pour le sérum.

S I. — RÔLE DES PLAQUETTES DANS LA PRODUCTION
DE LA THROMBINE PENDANT LA COAGULATION DU SANG.

Hayem et Bizzozero, qui ont découvert les plaquettes, leur
attribuaient déjà un rôle important dans la coagulation et expri-
mèrent l'idée qu'elles participaient à la formation de la throm-
bine. Mosen (1), en 1893, constata que le plasma oxalaté se
coagule plus vite par recalcification lorsqu'il est riche en pla-
quettes que lorsqu'il en est dépourvu. D'après Morawitz (2), les
suspensions de plaquettes dans l’eau distillée peuvent provoquer
la coagulation de solutions de fibrinogène et joueraient un
rôle analogue à celui des globules blancs. Pour Nolf (3), les
plaquettes, tout en étant capables de contribuer à la coagulation,
ne jouent en somme qu'un rôle banal et assez effacé : si elles
n'existaient pas, on ne s’en apercevrait presque pas dans l'ob-
servation de la coagulation. Lesourd et Pagniez (4), plus récem-
ment, ont prouvé définitivement que les plaquettes accélèrent
la coagulation du plasma oxalaté recalcifié, coagulent le liquide
d'hydrocèle, interviennent dans la rétractilité du caillot, tandis
que les leucocvtes, purgés de plaquettes par centrifugation frac-

(4) Arch. f. Anat. und physiol. Physiol. Abt., 1893, p. 352.

(2) Deutsche Arch. f. klinische Medizin, 190%, p. 225.

3) Archives internationales de Physiologie, 1908.

(4) Journal de Physiologie et de Pathologie générale, 1909, n° 14.

666 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tionnée, se montrent presque inactifs; les propriétés des pla-
quettes disparaissent par chauffage à 58 degrés.

Selon quel mécanisme les plaquettes interviennent-elles pour
favoriser si nettement la coagulation? Servent-elles de support
au fibrinogène dont la condensation à l’état solide s'opère ainsi
plus facilement? Ne jouent-elles qu'un rôle thromboplastique
banal? Interviennent-elles, au contraire, dans l'élaboration de la
thrombine elle-même et, dans ce cas, leur participation est-elle
plus importante que celle des autres cellules sanguines ? Pour
le savoir, nous avons répété les expériences de Lesourd et
Pagniez, en ayant soin d'évaluer en outre la teneur en thrombine
des sérums issus de la coagulation soit de plasmas riches en
plaquettes, soit de plasmas privés de ces éléments. Nous avons
constaté ainsi des différences frappantes entre ces deux sortes
de sérums: la thrombine est très abondante dans les premiers,
les seconds n'en contiennent que des traces.

Exp. II. — Du plasma oxalaté de lapin, modérément centrifugé et contenant
donc encore des plaquettes mais privé presque complètement de ses globules
rouges el blancs, est divisé en deux parts : l'une est gardée telle quelle, l’autre
centrifugée à fond jusqu'à obtention d'un plasma très limpide que l’on décante
et qui au microscope se montre purgé de toute cellule. Volumes égaux des
deux plasmas sont additionnés de quatre volumes d'eau physiologique calcifiée
(EPCa). Le plasma contenant encore ses plaquettes se coagule en $ mi-
nutes 1/2, l'autre en 39 minutes (à la température du laboratoire).

x

Exe. III. — Le plasma à plaquettes de l'expérience IT contenant encore de
très rares lymphocytes, on procède cette fois d'une manière plus rigoureuse.
Du plasma riche en plaquettes (obtenu par centrifugation modérée) est tur-
biné à nouveau, à grande vitesse, pendant près d'une heure. On décante le
plasma surnageant qui a perdu la grande majorité de ses plaquettes, mais
est encore un peu trouble; une nouvelle centrifugation très prolongée fournit
un sédiment peu abondant formé de plaquettes et Lout à fait exempt d’autres
éléments cellulaires. :

Un peu le plasma surnageant, très limpide, que l’on a décanté est versé sur
le sédiment que l'on y délaie. Volumes égaux de ce plasma à plaquettes et
du plasma très limpide décanté sont additionnés de quatre volumes d'EPCa ;
le premier plasma se coagule en 13, le second en 30 minutes.

Exp. IV. — On répartit dans deux tubes volumes égaux (1 c.c.) d'un mème
plasma oxalaté très limpide el dépouillé autant que possible de ses plaquettes.
On ajoute à l'un des tubes une goulte d'une suspension épaisse de plaquettes
bien lavées (ne contenant pas de leucocytes) qui communique au plasma un
trouble intense. On introduit ensuite dans les deux tubes quatre volumes
d'EPCa. Le plasma enrichi de plaquettes se coagule en 3, l'autre en 30 minutes.

Exr. V. — On déchire les caillots formés dans les plasmas de l'expérience IT,
de manière à faire sourdre les sérums, ‘que l'on oxalate à 1 p. 1000. Cinq

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 667

minutes plus tard, on les mélange à volume égal de plasma dilué oxalaté
à 1 p. 1000. Le sérum issu du caillot sans plaquettes ne provoque pas la
coagulation même après 24 heures; l'autre provoque la coagulation en moins
d'une heure. Le premier est pourtant le plus frais des deux, puisque le
caillot dont il est issu s'est formé après celui du plasma à plaquettes.

Mais on peut aussi évaluer la teneur en thrombine des deux sérums en les
ajoutant, sans les décalcifier, à volume égal de plasma dilué dioxalaté. Dans
ces conditions, le premier sérum (du plasma sans plaquettes) ne provoque la
coagulation qu'après plusieurs heures, l'autre en 16 minutes.

On peut aussi déterminer la richesse en thrombine en recherchant dans
quelle mesure les sérums hâtent la coagulation du plasma très limpide que
l'on vient de recalcilier.

Exr. VI. — Livré à lui-même, ce plasma (dilué et recalcifié par quatre volu-
mes d'EPCa) se coagule en 35 minutes. Mais additionné d’un dixième de son
volume de sérum (on utilise dans ce butles sérums de l'expérience IV) prove-
nant soit du caïllot à plaquettes, soit du caillot sans plaquettes, il se coa-
gule soit en 7, soit en 28 minutes. Le second de ces deux sérums n'accélère
donc que très peu la coagulation.

On le voit, les divers procédés destinés à évaluer la teneur
en thrombine donnent des résultats concordants et la part des
plaqueltes dans la production de ce principe apparaît avec
beaucoup d’évidence.

Lesourd et Pagniez ont signalé que, contrairement à ce qui
se passe pour le plasma oxalaté, le plasma salé que l’on dilue
par l’eau distillée se coagule également vile, soit qu'il contienne
encore des plaquettes, soit qu'il en ait été dépouillé au préalable
par une forte centrifugation. Nous avons observé le même fait
et nous croyons pouvoir l'attribuer à ce que la forte concen-
tration saline extrait aisément le principe actif des plaquettes
qui diffuse alors dans le liquide ambiant; d’autre part, il est
probable qu'en raison de sa densité supérieure {il est plus diffi-
cile de purger un plasma salé de ses plaquettes (ou des débris
de ses plaquettes) par la centrifugation.

L'expérience montre, en effet, qu'un plasma salé à 5 p. 100,
additionné de quatre volumes d’eau distillée (que nous calcilions
très légèrement), fournit, conformément aux données de Bordet
et Gengou, un sérum remarquablement riche en thrombine,
et il importe assez peu, à cet égard, que le plasma salé ait été,
au préalable, modérément turbiné, ou soumis à la centrifuga-
tion très prolongée usitée pour l'élimination des plaquettes.
Mais si l'on sale à 5 p. 100 deux plasmas oxalatés, l’un riche,
l'autre très pauvre en plaquettes, si on les recalcifie et les dilue

668 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ensuite par quatre volumes d’eau distillée, Les temps de coagu-
lation sont respectivement de 1 h. 1/2 et de 4 h. 1/4.

D'autre part, l'influence extractive exercée par le sel concentré
sur les plaquettes peut se démontrer comme suit :

Exp. VIT. — Dans deux tubes A et B on verse 3 cent. cubes de plasma
oxalaté riche en plaquettes; en À, on ajoute 1 cent. cube de NaCI à 20 p. 100, -
puis, cinq minutes plus tard, 16 cent. cubes d'eau; en B, on ajoute 17 cent.
cubes d’un mélange d'une partie de NaCI à 20 p. 100 avec 16 parties d'eau.
Les deux plasmas ont donc désormais la concentration saline ; la seule diffé-
rence, c’est que le plasma du tube A a été exposé à une forte concentration.
On centrifuge les deux tubes pour éliminer les plaquettes, et on recalcifie les
liquides surnageants décantés. Après coagulation (qui s'opère plus vite en A),
on détermine l'énergie coagulante des sérums obtenus; on trouve que le
sérum de A est beaucoup plus actif que celui de B, où les plaquettes n'ont
été en contact qu'avec du sel dilué.

Il ne faudrait pas conclure de cette expérience que lorsque
les conditions de concentration sont normales, les plaquettes
ne mettent aucunement en liberté leurs principes actifs dans
le liquide ambiant.

Cette diffusion s’accomplit en réalité, mais pas instantané-
ment; les suspensions de plaquettes dans la solution physiolo-
gique oxalatée à 0,5 p. 1000, que l’on conserve quelque temps,
un, deux jours par exemple, à la température du laboratoire,
fournissent par centrifugation un liquide presque limpide et
très actif, qui fonctionne donc comme un extrait de plaquettes.

Un caractère important du principe actif des plaquettes,
c'est sa résistance remarquable à la chaleur :

Exp. VIIL — On a préparé une suspension de plaquettes lavées, dans la
solution physiologique oxalatée à 0,5 p. 1000. Une partie est chauffée pen- |
dant 15 minutes à 100 degrés.

Dans trois tubes ABC, on laisse tomber : en A, 5 gouttes de plaquettes
chauffées à 100 degrés : en B, même dose de plaquettes non chauffées ; en C.
même dose de solution physiologique oxalatée à 0,5 p. 1000. On ajoute ensuite
aux trois tubes 2 cent. cubes d'EPCa et 0,5 cent. cube de plasma oxalaté
bien limpide; la coagulation exige en A et B, 10 minutes, en C, 30 minutes.

Des expériences analogues montrent que les plaquettes gardent leur acti-
vité après dessiccation.

La thermostabilité de la substance active des plaquettes per-
met aisément l'obtention de suspensions stérilisées, et, si l’on
fait intervenir la centrifugation, d'extraits stériles très actifs.
Il suffit de placer les suspensions dans le bain de vapeur à

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 669

100 degrés, pendant 6 à 7 minutes, à trois reprises, à quelques
jours d'intervalle. La chaleur favorise le floconnement des pla-
quettes, qui se centrifugent alors aisément. Le liquide surna-
geant, absolument limpide ou à peine opalescent, se montre
très actif et garde longtemps ses propriétés :

Exp. IX. — On introduit dans trois tubes 1 cent. cube de plasma oxalaté
bien limpide, puis 4 cent. cubes d'EPCa. On ajoute ensuite dix gouttes, au
tube A, d'une émulsion de plaquettes fraiches, au tube B, d'extrait de pla-
quettes obtenu comme il vient d'être dit et qui a été conservé pendant deux
mois, au tube C, de solution physiologique oxalatée à 0,5 p. 1000.

La coagulation s'opère en À en 15 minutes, en B en 20 minutes, en C en
deux heures.

MM. Lesourd et Pagniez ont beaucoup insisté sur le rôle des
plaquettes dans la rétractilité du caillot (1). Nous pouvons con-
firmer entièrement leurs observations, ce rôle est extrème-
ment manifeste. En l'absence de plaquettes, la rétraction du
caillot est pour ainsi dire nulle. Le plasma oxalaté limpide,
que l’on additionne de plaquettes, fournit après recalcification
un caillot d'autant plus rétracté que la dose des plaquettes
ajoutées a été plus copieuse. Si à 1 cent. cube de plasma oxa-
laté limpide on ajoute quelques gouttes d’une suspension
épaisse de plaquettes et 4 cent. cubes d'EPCa, la coagulation se
fait en 4 minutes (sans plaquettes le même plasma dilué ne se
coagule qu'après une demi-heure), et le caillot décollé du tube
se rétracte, en devenant très compact, au point de ne pas
dépasser, Le lendemain, la dimension d’un grain de blé.

Sont-ce les matériaux insolubles constituant la trame
même des plaquettes qui interviennent dans ce phénomène de
contraction, ou bien est-ce la substance qui participe à la for-
mation de la thrombine et qui, nous l’avons vu, est susceptible
de se diffuser dans le liquide ambiant? Les faits plaident en
faveur de la première hypothèse. L'extrait limpide de pla-
quettes, obtenu par stérilisation et centrifugation, et qui active
la coagulation, ne favorise pas la rétraction. Les caillots formés
dans les tubes de l'expérience IX ont été décollés peu après
leur formation. On trouve, le lendemain, que seul le caillot du
tube À s’est considérablement rétracté ; ceux des tubes B et C
n'ontguère diminué de volume.

(1) Journal de Physiologie el de Pathologie générale, 1907, IX, p. 579.

670 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Il résulte de l’ensemble des expériences citées ci-dessus que
le rôle des plaquettes dansl'élaboration de la thrombine est con-
sidérable. Mais est-il vraiment prédominant? Sont-elles plus
aptes encore à fournir la thrombine que ne le sont les leuco-
cyles, dont l’intervention est depuis longtemps jugée essen-
tielle dans l'acte de la coagulation? L'étude des exsudats péri-
tonéaux démontre, à n’en pas douter, qu'on doit attacher plus
d'importance au rôle des plaquettes qu'à celui des globules
blancs.

Lorsqu'on injecte, dans le péritoine de lapins, du bouillon ou
simplement de la solution physiologique, il se forme, comme on
sait, un exsudat où l’on ne trouve pas de plaquettes, mais qui
est très riche en leucocytes vivants, et que l’on peut retirer
par ponction en sacrifiant l'animal. S'il ne s'est produit
aucune hémorragie, l’exsudat blanchâtre obtenu ne se coagule
que très péniblement et par fractions ; desheures se passent sou-
vent avant que la totalité du fibrinogène se soit convertie en
fibrine. Certes la partie liquide d'un tel exsudat ne saurait être
identifiée entièrement au plasma, dont elle diffère nettement :
elle renferme moins de fibrinogène, elle contient de la mucine
qui la rend visqueuse, elle est moins riche aussi, comme nous
le verrons plus loin, en certains principes intervenant dans la
coagulation. Néanmoins l’exsudat est apte à fournir des caillots
typiques, son étude peut donc procurer des renseignements
valables, et donne lieu notamment à l’importante constatation
que voici : de pareils exsudats, qui malgré leur richesse extrême
en leucocytes restent si longlemps liquides, se prennent en
masse beaucoup plus vite lorsqu'on les additionne d'une dose
même faible de suspension de plaquettes soigneusement lavées.
On peut, pour rendre l’expérimentation plus aisée, oxalater
l’exsudat dès qu'il est recueilli, et le scinder par centrifugation
en deux portions, l’une contenant tous les leucocytes, l’autre
limpide et qui en est débarrassée. Lorsqu'on recalcifie ces
liquides, la coagulation peut s’opérer, lentement à vrai dire,
mais ©'est dans la portion leucocytaire qu'elle se montre d'abord.
Ceci prouve que les leucocytes jouent un rôle. Toutefois, il
suffit d'ajouter à la portion limpide une trace de plaquettes pour
que la coagulation s’y effectue plus vite que dans la portion
chargée de globules blancs. Ceux-ci pourtant représentent une

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 671

quantité de matière bien supérieure à celle, provenant des pla-
quettes, que l’on a mise en œuvre dans l’autre liquide.

L'exsudat qu'on oblient ainsi chez le lapin après injection
de solution physiologique ne remplit généralement pas toutes
les conditions désirables, en ce sens qu'il est souillé souvent de
traces de sang extravasé que trahit la présence de rares glo-
bules rouges. Aussi vaut-il mieux s'adresser au cobaye, lequel
fournit des exsudats blancs qu'il suffit de centrifuger pour
obtenir, sans que la décalcilication soit nécessaire, un liquide
surnageant pratiquement incoagulable par ses propres moyens :

On injecte le soir 10 cent. cubes de bouillon dans la cavité
péritonéale de deux cobayes. On ponctionne le lendemain
matin et l’on recueille plusieurs centimètres cubes d'un exsu-
dat blanc très peu coagulable, extrèmement riche en leuco-
cytes. Une partie est conservée telle quelle, une autre est cen-
trifugée et fournit par décantalion un liquide surnageant très
limpide. D'autre part,on s'est procuré, par saignée à la carotide
et suivant la technique habituelle, une suspension de pla-
quettes bien lavées de cobaye.

Exr. X. — Dans deux tubes A et B on répartit 0,3 cent. cube d’exsudat
leucocytaire non centrifugé, on ajoute volume égal de solution physiolo-
gique. On introduit ensuite dans A une goutte de suspension assez diluée de
plaquettes (dans la solution physiologique oxalatée à 0,5 p. 1000). Au bout
d'une heure, la coagulation s'est faite en A. Le liquide B est encore liquide
après 4 heures; on le trouve coagulé le lendemain. ;

Exe. XI. — Le liquide surnageant limpide obtenu par centrifugation de
l’exsudat est distribué à dose de 0,3 cent. cube dans deux tubes que l’on
additionne de 0,3 cent. cube de solution physiologique et de 0,3 cent. cube
d'EPCa. L'un des tubes reçoit en outre deux gout'es de la suspension de
plaquettes ; la coagulation s'y effectue en 50 minutes; l’autre mélange est
encore liquide le lendemain.

Ces deux expériences sont réalisées, bien entendu, aussi tôtque possible
après la récolte de l'exsudat. Celui-ci, gardé tel quel, ne se coagule sponta-
nément que le lendemain. L'exsudat débarrassé des leucocytes est encore
fluide après deux jours. Bien entendu, de pareils exsudats sont susceptibles
de se coaguler assez rapidement sous l'influence du sérum, mais nous
reviendrons plus loin sur ce point.

Ces expériences mettent en lumière la supériorité (admise
par Lesourd et Pagniez et mème antérieurement par Morawitz)
des plaquettes sur les leucocytes comme agents de la coagula-
tion. Les exsudats leucocytaires, assez rebelles à la coagula-

672 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tion spontanée et aptes corrélativement à fournir par centri-
fugation un plasma quasi incoagulable par ses propres moyens,
se comportent —- c'est un rapprochement qui s'impose — à la
manière du sang d'oiseau qui (soigneusement préservé du con-
tact avec la plaie) se maintient longtemps liquide, ainsi que
Delezenne l’a montré. Tous deux, le sang d'oiseau et l'exsudat,
renferment des leucocytes, mais sont dépourvus de plaquettes.
Débarrassé autant que possible de ses plaquettes, le plasma
sanguin de lapin se coagule lentement et ne fournit que des
traces de thrombine. Etant donné le contraste très frappant
entre un tel plasma et celui qui a conservé ses plaquettes, il
semble légitime d'admettre que si la centrifugation réussissait
à éliminer totalement ces éléments, et s'il était possible en
outre d'empêcher les plaquettes de libérer par diffusion des
traces de leur principe actif, on obtiendrait un plasma de
lapin se comportant exactement comme celui d'oiseau, c'est-
à-dire à peu près incoagulable spontanément, même en milieu
calcifié. Il nous est arrivé parfois d'obtenir des plasmas lim-
pides si bien épurés de leurs plaquettes, qu'après recalcification
ils exigeaient deux heures et demie pour se coaguler à une
température voisine de 15 degrés. Il fallait attendre près de
deux heures pour observer la formation d’un anneau de caillot,
à la surface du liquide au contact du verre. Et la pénurie en
thrombine se trahissait en ce que la coagulation ne se propa-
geait que fort péniblement à la masse entière du liquide,
même si à ce moment on le soumettait à une défibrination
énergique; la séparation de la fibrine s’effectuait en plusieurs
fois; on devait défibriner très longtemps pour obtenir un sérum
entièrement débarrassé de fibrinogène el incapable de se coa-
guler à nouveau (1).

Une expérience complémentaire, dont nous dirons un mot,

(1) De tels plasmas qui se coagulent lentement et en plusieurs fois con-
viennent spécialement à l'observation des diverses phases de la coagulation.
Une première coagulation donne après défibrination un liquide bien lim-
pide. Quelque temps après, on voit ce liquide se troubler par l'apparition
non pas de filaments de fibrine, mais d’un véritable précipité d'aspect pulvé-
rulent formé de particules qui ne semblent nullement adhérer les unes aux
autres : des oscillations imprimées au liquide y font naître des ondes soyeuses
semblables à celles que l'on observe en inclinant des suspensions micro-
biennes un peu diluées. Puis l'aspect change, une coagulation véritable sur-
vient. Les particules semblent alors enrobées dans une gangue visqueuse

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 673

nous à confirmés dans l'idée que si le plasma limpide, même
bien centrifugé, se coagule encore sans difficulté extrème par
recaleification, cela tient à ce qu'il renferme encore des pla-
queltes ou peut-être seulement des débris de ces éléments : on
peut obtenir, par l’action de l’eau distillée, de CO* et de la cen-
trifugation, un plasma incoagulable spontanément mais coagu-
lable par l'addition de plaquettes. Et l'on a de bonnes raisons
de croire que ce traitement a eu pour effet d'éliminer complète-
ment les plaquettes.

Exr. XIT. — Du plasma oxalaté limpide de lapin, versé dans un tube A, est
addilionné de 9 volumes d’eau distillée ; on y fait passer ensuite un courant de
CO; il se produit un trouble net, pas très intense cependant. On centrifuge
très énergiquement, puis l’on décante dans un tube B environ la moitié
supérieure du liquide, en veillant à ne retirer aucune trace du précipité
qui adhère d’ailleurs au fond et aux parois du tube. Le sédiment est ensuite
agité dans le reste du liquide qu'on a laissé dans le tube A. On dispose donc
de deux plasmas dilués, l’un A, qui renferme tout le précipité, l’autre B, qui
en est privé. On les resale jusqu'à teneur normale en NaCI, puis les recal-
cifie (à 5 cent. cube de chaque liquide on ajoute 0,2 cent. cube de NaCI
à 20 p. 100 el 0,2 cent. cube de CaCË à 5 p. 1000). On trouve que B ne se
coagule pas, même le lendemain, tandis que A se coagule en 55 minutes.
Mais si dans 0,5 cent. cube de B on introduit une goutte de suspension de
plaquettes lavées, la coagulation s'opère en une demi-heure.

Ce qui, d'autre part, fait penser que l'absence de coagulation
spontanée du liquide À est due à une élimination absolue des
dernières traces de plaquettes, c'est que le barbotage de CO:,
dans une suspension de plaquettes allongée au préalable de
plusieurs volumes d’eau distillée, y détermine une violente
agglutination de ces éléments qui se condensent en filaments
compacts aptes à se déposer vite et qui ainsi s'éliminent
aisément du liquide (1).

On obtient encore un plasma dilué B, incoagulable sponta-
nément, mais coagulable par l'addition pure et simple de pla-
quettes, si l’on traite par l'eau distillée et CO* un plasma

qui se les incorpore en devenant filamenteuse et est entrainée par la défi-
brination ; on enlève ainsi une nouvelle fraction du fibrinogène transformé
en fibrine, le liquide redevient limpide. Au bout de quelque temps, nouveau
trouble et répélition des mêmes phénomèmes, L'opinion, généralement
admise d'ailleurs, que la coagulation débute par une précipitation, semble
bien d'âccord avec l'observation.

(1) CO? ne précipite pas les plaquettes lorsque celles-ci baignent dans la
solution physiologique.

43

674 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

oxalaté qui, ayant été insuffisamment centrifugé, contient
sûrement de nombreuses plaqueltes ; on les retrouve dans le
sédiment centrifugé, lequel, agité dans le liquide, lui commu-
nique la coagulabilité spontanée après rétablissement de la
teneur saline et récalcification.

Si done la coagulation d’un sang complet, contenant tous
ses éléments cellulaires, fournit, comme Nolf l'a constaté (1),
un sérum plus riche en thrombine que celle d’un plasma cen-
trilugé, e est essentiellement à l'existence des plaquettes qu'il
convient d'attribuer la raison d’être de ce fait. Pour apprécier
entièrement leur rôle, il faut tenir compte de ce qu'elles se
trouvent dans le sang en nombre énorme, et de ce que, comme
nous le préciserons plus loin, une trace de plaquettes suffit
déjà à produire une dose fort notable de thrombine. On doit
considérer aussi ce fait, signalé par tous les observateurs et
aisément vérifiable, que les plaquettes s'accolent volontiers
aux corps étrangers, c'est-à-dire s'accumulent précisément
aux points où s'exerce l'influence de contact si décisive dans le
processus de formation de la thrombine aux dépens des subs-
tances mères. On conçoit dès lors la supériorité, au point de
vue de l'aptitude à la coagulation par ses propres moyens, du
sang de mammifères sur celui des oiseaux, qui, même au con-
tact du verre, reste longtemps fluide. C’est aux plaquettes
qu'est due cette supériorité. Elles permetlent au sang de
mammilères de se coaguler rapidement sans le secours du suc
de tissu, pourvu bien entendu qu'un contact soit établi avec
un corps solide mouillable.

(A suivre.)

(1) Archives inlernalionules de Physiologie, 1908.

RECHERCHES SUR LA LÈPRE

(PREMIER MÉMOIRE)

LA LÈPRE DES RATS
(LEPRA MURIUM)

par E: MARCHOUX et F. SOREL.

UBIQUITÉ DE LA MALADIE.

En 1903, Stefansky (1) a fait connaître une maladie des rats,
causée par un bacille acido et alcoolo-résistant qui se multiplie
chez ces rongeurs en provoquant des lésions comparables à
celles que le bacille de Hansen produit chez l'homme. Le
savant russe qui, pour la prophylaxie antipesteuse, examinait
quotidiennement à Odessa un grand nombre de rats, avait été
frappé de voir que beaucoup d'animaux étaient porteurs de
ganglions volumineux sans présenter aucun symptôme de
peste. La coloration de Ziehl lui révéla dans ces organes la
présence d’un bacille spécial qui s'y était multiplié avec une
abondance extrème et qu'il rechercha ensuite systématique-
ment. Il le trouva chez 5 p. 100 des rats d'égouts qui lui furent
apportés. Des 3 espèces vivant à Odessa, Mus rattus, M. alexan-
drinus et M. norvegicus, seule cette dernière fournit des
malades.

La lèpre des rats est répandue dans le monde entier. — La
maladie découverte par Stefansky paraît être aussi répandue
que le rat d'égouts. Elle a été signalée à Berlin par Lydia Rabi-
nowitch (2); en Angleterre, par George Dean (3); en Australie,

(1) Sreraxsky, Eine lepraäbnliche Erkrankung der Haut und der Lymph-
drüsen bei Wanderratten. Centr. f. Bakt. Orig., &. XXXIII, 1903.

(2) Lypra Raenowircen, Ueber eine durch saüre-feste Bakterien hervorge-
rufene Hauterkrankung der Ratten. Centr. f. Bakt. Orig., t. XXXIII, 1903.

(3) G. Dean, À disease of the rat caused by an acid-fast bacillus. Centr. fe
Bakt. Orig., t. XXXIV, 1903.

— Further observations on a leprosy-like disease of the ral. Journ. of hyg.,
t. V, 1905.

676 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

par Tidswell Frank (1) et 4. R. Bull (2); aux Etats-Unis, par
W. Wherry (3), Me Coy (4) et A. Walker (5); en Roumanie, par
Mezincescu (6) et Alexandrescu (7): au Japon, par Kitasato (8)
et en Nouvelle-Calédonie, par A. Lebœuf (9). Aux iles Hawaï,
Brinckerhoff (10) l’a recherchée vainement sur 16.000 rats.
Ehlers, Bourret et With (11) ne l'ont pas trouvée aux Antilles
danoises (Sainte-Croix). Nous l'avons rencontrée assez facile-
ment parmi les rats des égouts de Paris. Sur 1.296 rats que
nous avons systémaliquement examinés, 65 étaient porteurs de
bacilles acido-résistants, soit 5 p. 100. C'est, comme on le‘voit,
la proportion qui a élé trouvée par Slefansky à Odessa. Ces
chiffres se rapportent au nombre global des animaux autopsiés,
mais le pourcentage varie beaucoup suivant l’origine des ron-
seurs. Comme Me Coy l’a reconnu à San-Francisco, nous avons
conslalé pour certains lots de rats capturés dans des dépôts d'os,
dans Les clos d'équarrissage et aux abattoirs une proportion de
malades plus forte, s’élevant 14, 19 et même 45 p. 100.

Elle est spéciale aux rats d'égouts. — Tous les animaux
porteurs de bacilles étaient des rats d'égouts. C’est là une cons-

(1) TinsweLz Fraxk, Note on leprosy-like disease in rats. Reports of the boarut
of health on leprosy in New South Wales, 1904, et Lepra, &. VI, 1906.

(2) J. R. Buzz, Leprosy-like disease of the rat. Intercolon. med. journ. Aus-
lralia, Melbourne, 1901. s

(3) W. B. Wuerey, The leprosy-like diseases among rats on Lhe Pacific
coast. Journ. of Amer. Med. Assoc., t. L, p. 1908.

— Notes on rat leprosy and on the fate of human and rat lepra bacilli in
flies. Public health reports, 16 oct. 1908.

— Experiments on vaccination against ral leprosy. Journ. of inf. diseases.
toMVIM1009!

(4) G. W, Mc Cox, Leprosy-like disease in rats. Public health reports,
10 juillet 1908.

— Distribution of the leprosy-like disease of rats in San Francisco. Public
health reports, 6 novembre 1908.

(5) A. WALkER, À report of some cases of ral leprosy. Journ..Amer. Med.
Assoc LO OS.

(6) Mezixcescu, Maladie lépreuse des rats el ses relations avec la lèpre
humaine. Comples rendus de la Suc.de Biologie, 1908 et 1909.

(7) J. Azexanprescu, Lepra Sobolanilor. Thèse de Jasi, 1908.

(8) Kirasaro, Die Lepra in Japan, 2° conférence de la lèpre, 1909, L. IT.

(9) A. Lerour, Existence de Lepra murium en Nouvelle-Calédonie. Bull.
Soc. Puth. Exot., n° T, juillet 1912.

(10) W. R. Briwckeruorr, Rat leprosy. Public health bulletin, n° 30, 1910.

(11) Enrens, Bourrer et Wrra, Recherches sur le mode de propagation et les
procédés de diagnostic bactériologique de la lèpre, Bull. Soc. de Path. Exot.,
t. IX, 19414, p. 253.

LA LÉPRE DES RATS 677

tatalïon qui concorde avec les observations faites par tous les
auteurs. La maladie spontanée n'apparaît qu'à titre tout à fait
exceptionnel chez des rats d'une autre espèce.

Dujardin-Beaumetz (1) à vu un rat blanc très fortement
alteint. Ce rat provenait d’ailleurs des égouts parisiens, où on
rencontre assez fréquemment des albinos. Les rats blanes ne
sont qu'une variété de surmulots, la contamination de cel
animal n'est done pas surprenante. La maladie a été rencontrée
chez Mus raltus au Punjab (2) Kitasato (3) a trouvé un
M. alexandrinus atteint de Lepra murium. Ce sont là les deux
seuls cas jusqu'à présent signalés de maladie de Stefansky en
dehors des surmulots M. norvegicus où decumannus.

LA MALADIE.

L'affection des rats se présente sous deux formes qui ont été
décrites par Stefansky : une purement ganglionnaire, l'autre
musculaire et culanée, celle-ci n'étant qu'un stade plus avancé
de la première.

Forme ganglionnaire. — La forme ganglionnaire, la plus fré-
e) O 1
quente, ne se manifeste extérieurement par aucun signe et n’est
qu'une déccuverte d’autopsie. Elle reste localisée aux ganglions
axillaires, inguinaux ou sous-maxillaires. À Odessa et Berlin,
ce sont les ganglions axillaires qui sont le plus souvent pris.
Nous avons vu qu'à Paris les ganglions inguinaux sont infectés
au moins aussi souvent que ceux de l’aisselle.
Les ganglions sont souvent augmentés de volume, durs,
blanchâtres : ils atteignent quelquefois des dimensions consi-
ë
dérables. À la première période de la maladie, on peut en
trouver qui présentent la grosseur d'un haricot. A la seconde
O ?
leurs dimensions sont parfois énormes; Mc Coy en a rencontré
un qui mesurait 3 cenlimèlres de long sur 1 cent. 5 de large.
Mais si l'augmentation de volume des ganglions est com-
O (®) (®
mune dans la lèpre des rats d’égouts, on ne peut cependant

1) Communication orale.

(2) Reports on plague investigations in India. Journ. of hygiene, t. VIL, n° 6.
décembre 1907, p. 911.

(3) Loco cilato.

678 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

la considérer comme un signe caractéristique et un moyen de
diagnostic de la maladie.

On trouve des rats infectés avec des ganglions relalivement
petits, alors que la plupart des animaux qu’on caplure sont
porteurs de ganglions volumineux sans trace d'infection. Cette
observation tendrait mème à faire croire que l'hypertrophie
est due plulôt à une cause étrangère qu'à la lèpre elle-mème.

Tous les groupes ganglionnaires peuvent être atteints ou
seulement quelques-uns. Dans certains cas, rares d’ailleurs,
nous n'avons trouvé de bacilles que dans un seul ganglion des
groupes inguinaux où médiastinaux; une seule fois, il s'agissait
d’un ganglion axillaire.

Forme musculo-cutanée. — La forme musculo-culanée est
beaucoup plus rare. Stefansky ne l’a rencontrée que 9 fois;
Mc Coy, 22 fois sur 13.500 rats, nous-mêmes 8 fois sur 1.296 rats,
soit sur une proportion de 0,60 p. 100.

Les änimaux sont cachectiques, se meuvent avec difficulté et
peuvent quelquefois ètre pris à la main (G. Dean, Wm B.
Wherry). Ils portent des plaques alopéciques plus ou moins
étendues. La peau est épaisse, bosselée, très adhérente aux
tissus sous-jacents; on y remarque parfois de vrais nodules
qui peuvent atteindre les dimensions d’une noiselte, mais qui,
en général, sont plus étalés que dans la lèpre humaine. Les
parties malades sont souvent ulcérées. Me Coy signale la pré-
sence de ces ulcères comme plus fréquente (63,6 p. 100) que
l’alopécie (55,5 p. 100). ;

A l'autopsie, on constate que, dans les cas les plus légers, la
face interne du derme est chagrinée, recouverte de nodosités
saillantes minuscules et quasi-microscopiques.

À une période plus avancée, la peau se détache difficilement,
Ie tissu graisseux à disparu et a été remplacé par du tissu con-
Jonctif assez serré.

Si, après avoir dépouillé le rat, on en examine la peau par
transparence, les moindres épaississements se manifestent et
permettent de préciser l'étendue et l'importance des lésions
cutanées. Dans tous les cas que nous avons observés, la
maladie élait surtout développée dans la moitié postérieure
du corps, tantôt à la partie dorsale, souvent à la partie ventrale.

LA LÈPRE DES RATS 679

L'infection, dans ce dernier cas, semblait toujours avoir eu pour
point de départ le groupe ganglionnaire inguinal, s'être,

€

F16. 1. — Peau d’un rat lépreux étalée et conservée en Kaiserling.

La photographie a été faite par transparence. Les taches noires indiquent
les nodules.

ensuite, étendue de proche en proche vers la ligne blanche et
surtout vers les flancs. Elle avait amené la formation d'une

680 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sorte de plastron de tissu néoformé se terminant symétrique-
ment en pointes dirigées vers la partie antérieure du corps.

Plusieurs fois, nous avons trouvé les ganglions sous-maxil-
laires hypertrophiés, et dans ces cas, comme dans celui de
(x. Dean, l'affection s’étendait à la glande sous-maxillaire.

Dans les organes profonds, on n'observe pas de lésions
macroscopiques bien marquées. Me Coy a vu de petites nodo-
sités sur le périloine et le péricarde pariélaux, dans le foie et Ia
rate; G. Dean signale dans un cas la présence d’une petite
zone de nécrose dans le foie. Personnellement, nous n’avons
pas rencontré d'infection assez avancée pour qu'aient eu Île
temps de se produire dans les organes profonds, en dehors des
ganglions Iymphatiques et en particulier des ganglions du
médiastin, des lésions visibles à l'œil nu.

HiSTOLOGIE PATHOLOGIQUE.

Le parasite est toujours intracellulaire. — Le bacille de la
lèpre du rat, comme celui de la lèpre humaine, est un parasite
spécial des cellules mésodermiques dans lesquelles il se multi-
plie avec une extraordinaire abondance, paraissant gêner la
cellule hôte par encombrement, plutôt que laltérer par une
sécrélion toxique. Si, dans les tissus, on en trouve des exem-
plaires qui semblent libres, c’est une constatation si rarement
faite qu'on doit la considérer plutôt comme un accident de pré-
paration que comme une réalité physiologique.

Comme tous les bacilles acido-résistants, le bacille de la lèpre
du rat est protégé par sa gaine cireuse et résiste à la phagocy-
tose.

Impuissantes à le faire disparaître, les cellules se distendent
pour contenir la culture et en restreindre le développement.
Mais leur résistance finit par être vaincue; la membrane
d'enveloppe se rompt et les bacilles se répandent au dehors,
promptementenglobés d’ailleurs par les cellules voisines, même
par les plus jeunes, car on rencontre des lymphocytes qui
déjà contiennent des bacilles.

En général, la cellule malade est vite entourée d’un certain
nombre d’autres qui l’aident à défendre l'organisme contre la
pullulation microhienne. Ces cellules, véritables étais sans

LA LÉPRE DES RATS 681

cesse apportés pour soutenir l'édifice protecteur, englobent les
germes dès qu'ils s’échappent et forment une barrière que
l'infection ne franchit pas vite.

Toutes ces cellules sont hypertrophiées, pressées les unes
contre les autres, quelquefois jusqu'à confusion de leur proto-
plasma qui s’est réuni pour constituer une cellule géante. Ce
sont des cellules épitnélioides qui forment par leur ensemble
un vérilable tubercule, mais un tubercule qui, comme l'ont
montré Boinet et Borrel dans la lèpre, n’a pas la constitution
du tubercule de la tuberculose et n'est point entouré d'une
gaine de leucocytes polynucléaires.

Il se répand par les voies lymphatiques. — Du point d'inocu-
lation, l'infection suit les trajets Ilymphatiques comme les
cellules qui la convoient et gagne rapidement les ganglions de
la région. D'abord peu nombreuses, les cellules parasitaires
restent cantonnées près des voies afférentes, à la zone périphé-
rique du ganglion, bientôt immobilisées par la volumineuse
inclusion qu’elles portent et qui ne leur permet plus aucun
mouvement propre. Elles forment des amas qui grandissent peu
à peu autour de celles d’où est partie l'infection. Quand elles
sont peu chargées de bacilles, elles peuvent se mobiliser, et
vont alors constituer des foyers secondaires qui se développent
à leur tour. Tous ces nodules finissent par se réunir et progres-
sivement le ganglion est envahi tout entier. Les follicules com-
primés diminuent de volume et disparaissent, remplacés par des
trainées lymphocytaires qui forment comme des trajets entre
les nodules bacillaires. Le ganglion ne présente aucune ten-
dance à la suppuration.

Du ganglion, il gagne le tissu conjonctif circonvoisin. —
Avant même d'avoir atteint un sérieux développement, l'infec-
tion, dépassant les limites du ganglion, s'étend de proche en
proche; les cellules parasitées vont se loger dans les espaces
lymphatiques du tissu conjonctif et y constituent de petits
nodules qui continuent à essaimer autour d'eux. Le tissu con-
jonctif distendu, non seulement ne laisse plus de Hberté aux
organes qu'il enferme, mais il les comprime et en amène
l'atrophie.

682 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Mamelle. — La glande mammaire voisine est vite atteinte,
le tissu conjonctif interlobulaire s'infiltre de cellules migra-
trices parasitées, s’épaissit, et les éléments glandulaires com-
primés s’atrophient et disparaissent.

Muscles. — Le même phénomène se passe du côté] des
muscles. Les muscles peauciers sont infiltrés les premiers,
mais ensuite la maladie gagne en profondeur. Elle se répand
dans les muscles abdominaux, thoraciques et même dans les
muscles moteurs des membres. Les fibres musculaires s'écar-
tent et s’atrophient par suite du développement excessif du
issu conjonctif interfasciculaire. C'est ce processus de raréfac-
tion des fibres par compression que nous avons observé dars
tous les cas; nous n'avons pas, comme Slefansky, George Dean,
Alexandreseu, constaté l’envahissement de la fibre striée elle-
même. La destruction des muscles moteurs entraîne une impo-
tence fonctionnelle telle que dans certains cas le rat lépreux se
meut difficilement et peut être capturé à la main.

Tissu sous-cutané. — Mais c’est du côté du tissu conjonclif
sous-cutané el du côté du derme que l'envahissement microbien
est le plus accentué. Les bacilles y sont amassés en nodules
énormes, comme dans les ganglions lymphatiques. Leur dispo-
sition rappelle de très près ce qui se passe chez l'homme dans
la lèpre. Les espaces lymphatiques du tissu conjonctif lâche
sont non seulement distendus, mais le tissu lui-même se trans-
forme ; 1l devient dur, fibreux, cicatriciel ; il présente le caractère
succulent et Iymphoïde d'un ganglion selérosé. Gorgé de leuco-
cyles parasités, 1l renferme aussi nombre de cellules fixes char-
gées de bacilles. C'est là uné constatation qui ne doit guère
surprendre, car les grands mononueléaires et les cellules con-
Jonetives ont la même origine et les mêmes fonctions.

L'infection s'étend de proche en proche autour du ganglion et
aussi du point d'inoculation. Elle arrive à provoquer le déve-
loppement d'un véritable plastron qui double la peau et dans
lequel toute trace de tissu graisseux à disparu.

Derme. — Dans le derme, l'infection débute par le tissu con-
Jonctif lâche périvasculaire. Les cellules infectées se disposent

LA LÈPRE DES RATS 683

autour des vaisseaux, qu'elles enferment dans de véritables
manchons où les bacilles abondent. Les glandes qui sont logées
dans ces espaces très irrigués sont encerclées par les nodules
lépreux. De ce fait, elles se trouvent mal nourries et finissent
par s’atrophier. Nous n'avons jamais vu de bacilles dans l'inté-
rieur des glandes ou des cellules glandulaires.

Les follicules pileux sont asphyxiés comme les glandes
sébacées. C'est à leur atrophie que sont dues les plaques alopé-
ciques dont sont porteurs les animaux malades.

Épiderme. — Les cellules migratrices parasitées envahissent
de bonne heure la couche papillaire du derme et s'étendent
comme un tapis au-dessous de la couche germinative de l'épi-
derme. Quelques-unes se glissent entre les cellules de Malpighi,
pénètrent même à leur intérieur et, en tout cas, les infectent.

I n’est pas rare de voir certaines régions de l’épiderme dans
lesquelles presque toutes les cellules des diverses couches
contiennent des bacilles en plus ou moins grand nombre.
Mais la cellule de Malpighi résiste moins facilement à cette
infection que la cellule mésodermique, elle meurt et se détruit.
C'est à celle nécrose que sont dus les ulcères observés chez les
rats lépreux.

Intégrité relative des viscères. — L'envahissement successif
du tissu conjonctif se produit très lentement et il faut sûrement
plus d’une année pour qu'il prenne le développement dont nous
venons de parler. En général, l'animal malade meurt d'une
maladie intercurrente avant que l'infection soit aussi étendue.
Rarement on trouve un rat porteur de lésions considérables du
foie, de la rate ou du système nerveux. Ce qu'on rencontre par-
fois, ce sont de petits nodules dans le foie, la rate, le rein ou
la vessie: Me Coy, en particulier, a insisté sur ces lésions pro-
fondes. Mais ordinairement ces organes sont macroscopique-
ment indemnes. Entre eux et l'infection, le poumon joue le rôle
de tampon.

Rôle protecteur du poumon. — Il arrête les bacilles qui ont
pénétré dans le système circulatoire sanguin. Voici par quel
mécanisme.

68% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

De bonne heure le poumon recoit des bacilles par deux
voies :

1° La voie sanguine. — Les cellules jeunes renfermant peu
de bacilles el par conséquent mobilisables, se trouvent parfois
en pénétrant dans les sinus des ganglions lymphaliques,
entrainées par le torrent circulatoire et dirigées vers le poumon
avec le sang de la petite circulation ;

2° La voie lymphatico-sanquine. — 11 s'échappe aussi par
les voies lymphatiques efférentes quelques leucocytes parasités,
qui par les veines lymphatiques ou le canal thoracique aboutis-
sent au poumon.

Aussi cet organe renferme-t-il toujours des bacilles acido-
résistants, même dès le début de l'infection. C'est en particulier
dans les sommets qu'il faut les chercher. Il nous est arrivé
maintes fois d'en rencontrer dans cette région du poumon, alors
que nos recherches dans les lobes inférieurs demeuraient
vaines. Des frottis de pulpe permettent de juger de leur abon-
dance et Les coupes montrent leur siège. Là comme ailleurs, les
bacilles sont toujours intracellulaires, inclus dans les phago-
cyles spéciaux du poumon, les cellules à poussières. Mais, quel
que soit le stade de la maladie auquel on fasse cet examen,
leur nombre n’est jamais considérable et on ne voit pas comme
ailleurs se former de nodules dans cel organe. Les cellules
parasitées restent loujours isolées.

Elles gagnent individuellement les ganglions de la région,
les ganglions médiastinaux qu'on trouve loujours malades.

L'infection rencontre done là une nouvelle barrière à son
extension et elle y demeure cantonnée longtemps avant de
diffuser par ailleurs. Sans doute ce système défensif n’est pas
parfait. Il se trouve parfois en défaut, et quelques bacilles
échappent à cette sorte de filtre. D'autre part, il arrive un
moment où 1l est débordé.

Mais il est certain qu'il oppose, pour un temps, un solide
obstacle à la diffusion microbienne.

Le même phénomène intervient sans doute aussi dans la
tuberculose, mais avec beaucoup moins de succès parce que le
bacille de Koch est toxique et entrave très vite la mobilité
cellulaire. Les leucocytes chargés de microbes ne quittent pas
le poumon, où ils deviennent le centre d'un tubercule.

LA LÉÈPRE DES RATS 685

INOCULATIONS EXPÉRIMENTALES.

Stefansky, Lydia Rabinowitch n’ont pas pu transmettre la
maladie par inoculations. G. Dean, plus heureux, à conta-
miné des rats blancs. Après lui, Me Coy, Alexandrescu et
d’autres ont également réussi.

Nous avons constaté que, loin d’être difficile à inoculer, la
lèpre du rat est, au contraire, d'une diffusion particulièrement
commode. La raison des insuccès des premiers auteurs réside
dans l'observation trop peu prolongée des animaux d'expérience.
La multiplication des germes se fait très lentement dans l’orga-
nisme des rongeurs infectés el parfois mème avec une lenteur
singulière, Elle n'est décelable qu'après deux ou quatre mois et
mème parfois plus encore.

Lorsqu'on introduit dans le périloine de grosses quantités de
bacilles, on voit se développer des infections massives, comme
celles qu'a produites G. Dean el dont nous possédons, grâce à
l’'obligeance de ce savant, un remarquable échantillon.

Mais ces injections copieuses, qui avaient leur importance
quand il s'agissait de prouver que la maladie est transmissible
d'animal malade à animal sain, ne présentaient, pour nous qui
avions un tout autre objectif, qu'un intérèl secondaire.

Par la voie sous-cutanée, nous sommes parvenus sans peine
à infecter des rats sains.

Les rats blancs sont aussi sensibles que les rats gris. —
Pour nos premières expériences, nous avons employé des
rats d’égouls. En les choisissant Jeunes, nous croyions nous
metlre à l'abri d'infections spontanées; mais, devant les obser-
valions qu'il nous à été donné de faire ensuite, nous avons dû
renoncer à nous en servir. De (rès Jeunes animaux ont été
reconnus infectés; d'autre part, la proportion élevée des
malades, dans certains lots, ne permettait plus de tabler sur
un taux à peu près constant de 5 p. 100 pour les contaminations
naturelles. Les rats blancs d'élevage ont donc remplacé les
rals sauvages dans nos expériences et, contrairement d'ailleurs
à ce que nous pensions, se sont montrés aussi sensibles qu'eux
à la maladie.

686 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Insertion sous la peau de tissu infecté. — Au début de nos
recherches sur l'aptitude des rats à prendre la lèpre par inocu-
lations discrètes, nous restions encore impressionnés par les
insuccès des premiers expérimentateurs.

Aussi, la première méthode que nous ayons employée
avait-elle pour but de protéger temporairement des phago-
cytes les bacilles introduits sous la peau. Elle permettait
aux germes de vivre un certain temps dans un milieu de
culture auquel ils étaient habitués et d'acquérir, pensions-
nous, une résistance suffisante aux moyens défensifs de l’or-

2x

ganisme. Elle consistait à insérer dans le tissu conjonctif,
par une boutonnière faite à la peau, un fragment de tissu ren-
fermant beaucoup de bacilles A. R. (1) et fraichement retiré
d'un rat malade.

L'expérience que nous rapporlons ci-dessous a été faite à la
fois sur des rats gris et des rats blancs. Elle permettra d'appré-
cier la sensibilité relalive des deux espèces.

Exp. I. — Un rat gris, mort récemment de mort violente, porte dans l’aine
gauche un énorme ganglion contenant de très nombreux A. R. De petits
fragments, de la taille d'un grain de millet, en sont découpés et insérés par
une boutonnière sous la peau du ventre de 6 rats blancs et de 8 rats gris.
L'inoculation est faite le 26 juillet 1909.

Le 27 août, un rat gris est tué accidentellement au moment de l'examen.
On ne trouve à l’autopsie aucune trace du fragment introduit. Il y a de
rares À. R. dans les ganglions inguinaux droits et gauches.

Le 28, un deuxième rat gris est trouvé dans la cage, mort et en partie
dévoré. On peut néanmoins faire quelques frotlis d'un ganglion dans lequel
on trouve un petit nombre de bacilles de Stefansky.

27 septembre. — Un troisième rat gris est mort. Pas d'A. R., pas de traces
du matériel d'inoculation.

28 septembre. — Un quatrième rat gris est mort et ne renferme pas non
plus de bacilles.

13 octobre. — Cinquième rat mort. Pas d'infection.

44 octobre. — Sixième rat gris. Pas d'infection.

21 octobre. — Septième rat gris, sacrifié. Au point d'inoculation, se trouve
une plaque de tissu fibro-conjonctif assez épaisse dans laquelle se rencontrent
des masses considérables de bacilles A. R. Les ganglions inguinaux renfer-
ment aussi un petit nombre de bacilles.

11 mars 1910. — Le dernier rat gris est mort. Au point d'inoculation s’est
développé un nodule de tissu conjonctif infiltré de nombreux bacilles. La
peau est ulcérée par-dessus. Des bords de l’ulcère, par grattage et frotlis,
plusieurs préparations sont faites qui renferment de nombreux bacilles. Les

(1) Nous emploierons souvent dans le cours de ce mémoire la formule
abréviative A. R. pour acido-résis!ant,

LA LÈPRE DES RATS 687

éléments microbiens existent en grand nombre aussi dans les ganglions. Il
n'y a pas de généralisation de la maladie.

Le premier rat blanc meurt le 25 novembre 1909. Au point d'inoculation,
tissu conjonctif épaissi, chagriné, chargé de cellules migratrices pleines
d'A. R. Les ganglions de la région ne sont pas perceptibles: on les trouve à
l'autopsie très petits, de la grosseur d'une tête d’épingle; ils ne renferment
que très peu de bacilles.

18 décembre. — Un deuxième rat blanc est sacrifié. Nombreux bacilles au
point d'inoculation, au milieu d'une plaque épaisse de tissu conjonctif. Gan-
glions très petits, renfermant très peu d'A. R.

26 décembre. — Troisième rat blanc trouvé mort dans la cage et complè-
tement putréfié. A. R. au point d’inoculalion.

28 décembre. — Quatrième rat blanc mort. Au point d'inoculation, nodule
de tissu conjonctif, dur et noirâtre, très riche en bacilles. Ganglions peu
infectés.

3 février 1910. — Cinquième rat blanc mort. A. R. nombreux au point
d'inoculation. Ganglions très petits, avec quelques bacilles seulement.

6 février 1910. — Le sixième rat blanc meurt. Nodule au point d'inoculation
volumineux et bourré d'A. R. Quelques bacilles dans les ganglions de laine
el dans ceux de l’aisselle.

En somme, des 14 rats inoculés, 8 gris et 6 blancs, 10 se sont infectés.
L'insertion d'un fragment de ganglion infecté dans le tissu conjonctif sous-
cutané devient donc, dans la plupart des cas, le point de départ d'une infec-
tion qui, à la vérilé, ne montre pas de tendances envahissantes. Il se fait
une sorte de culture in silu, derrière une barrière de cellules épithélioïdes
dont l'accumulation donne naissance à un nodule parfois volumineux. Les
ganglions de la région sont atteints tardivement et ne deviennent le siège
d'une forte infection que lorsque le nodule a pris assez de développement
pour arriver au voisinage du paquet ganglionnaire.

En général, les rats meurent avant que la maladie ait fait de tels progrès.
On a de la peine à conserver quelques-uns de ces rongeurs en cage pendant
plus d'un an. Ils finissent par succomber presque tous à une sorte de
pseudo-tuberculose qui débute de façon insidieuse et se transmet avec une
singulière facilité.

Dans celte expérience, comme dans toutes celles où les
deux espèces ont été employées concurremment, les rats blancs
se sont montrés plus sensibles que les rats gris. Tous se sont
infectés, alors que 4 rals gris sont morts sans qu'on ait pu
trouver chez eux le moindre bacille. À l’autopsie, les A. R.
étaient rencontrés en nombre colossal dans le nodule d'inocu-
lation; on n’en trouvait ailleurs que dans les ganglions et en
très petit nombre. Au lieu de ces foyers compacts qui existent
toujours dans la lèpre spontanée, on ne voyait que des cellules
isolées renfermant quelques bacilles.

688 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Injection sous-cutanée de suspension bacillaire. — Puisque
les rats d'expérience se montrent si sensibles, il n’était donc
point nécessaire de s’entourer de précautions spéciales pour
assurer l'infection. En eflet, l'inoculation sous-cutanée d’un
peu de liquide obtenu par broyage de ganglions infectés en eau
physiologique stérile a donné des résultats aussi constants que
l'insertion d’un fragment sous la peau. Dans ce cas, l'infection
n'est pas toujours très marquée au point d'inoculation, mais
elle gagne vite ies ganglions qu'on trouve presque farcis de
bacilles.

Nous donnons l'expérience suivante à titre d'exemple :

Exp. IL. — 21 juin 1910. Un rat d'expérience est sacrifié. I porte un ganglion
inguinak rempli de bacilles A. R. Ce ganglion est broyé en eau physiologique
el donne par dépôt rapide une suspension louche où les bacilles sont très
abondants. 8 petits rats blancs sont inoculés sous la peau du dos au voisi-
nage de la base de la queue, avec une goutte de ce liquide.

27 juillet. — Un rat meurt de pseudo-tuberculose. Au point d’inoculation,
pas d'A. R. On en trouve quelques-uns dans le ganglion inguinal du côté
droit.

15 septembre. — Un deuxième rat succombe. À. R. rares au point d'ino-
culation, nombreux dans les ganglions inguinaux.
20 septembre. — Mort de trois rats. L'un renferme de nombreux A. R.

dans les ganglions, Le deuxième en présente de très nombreux dans les
ganglions et au point d’inoculation. Le troisième, très peu dans les ganglions,
pas du tout au point d'inoculation.

21 septembre. — Un sixième rat trouvé mort renferme beaucoup d'A. R.
dans les ganglions inguinaux et pas du tout au point d'inoculation.
1er octobre. — A. R. très nombreux dans les ganglions inguinaux du

septième rat; très nombreux aussi au point d'inoculation et dans le tissu
conjonctif de la région abdominale jusqu'au voisinage de la ligne blanche.

11 octobre. — Le dernier rat meurt. Il porte des ganglions inguinaux volu-
mineux des deux côtés. Dans les frottis, on trouve des A. R. à droite et à
gauche, mais alors qu'ils sont rares à gauche, ils sont très nombreux à
droite. Rien au point d'inoculation.

Cette expérience montre que la phagocytose n'était pas à
redouter pour le bacille et que nos premiers essais étaient
entourés d'inutiles précautions. Les phagocyles manifestent à
la vérilé une sensibilité chimiotactique particulièrement grande
vis-à-vis du bacille de Stefansky. Mais celui-ci, bien défendu
par sa cuirasse cireuse, tire plulôt un bénélice de cette sensi-
bilité, comme de la mobilité des cellules qui servent à le
répandre dans l'organisme.

v'est à la mobilité des cellules parasitées qu'il faut

LA LÈPRE DES RATS 689

attribuer cette infection rapide des ganglions superficiels et
le développement si rare d’un nodule au point d'inoculation.

Inoculation par scarification de l'épiderme. — Nous avons
pensé qu'en raison de cette sensibilité des phagocytes au bacille
de Stefansky, il devait être possible de provoquer plus facile-
ment encore l'infection de nos animaux. Nous nous sommes
contentés de beurrer avec de la pulpe septique des scarifica-
tions de la peau. Après avoir arraché les poils sur le dos, près
de la base de la queue et sur une surface équivalente à celle
d’une pièce de 2 francs, nous avons pratiqué au bistouri des
entailles peu profondes et avons frotlé la région ainsi préparée
avec un fragment de ganglion ou de tissu conjonctif renfermant
de nombreux bacilles. Ce procédé d'inoculation s'est montré
parfaitement efficace. Voici, comme preuve à l'appui, Les résul-
tats d'une expérience ainsi faile :

Exp. IT. — 21 juin 1910. Un rat de cage 48, expérience 55, trouvé mort ce
jour, porte au point d’inoculation un gros nodule bourré d'A. R. Ce nodule
est broyé dans un verre avec seulement quelques gouttes d’eau physiolo-
gique. On obtient par cette trituration une pulpe assez épaisse et très riche
en A. R. 6 petits rats sont frottés avec cette pulpe sur des scarifications de
la peau pratiquées à la base de la queue. Ces rats sont enfermés dans
deux bocaux.

20 octobre. — Un rat meurt. A l'autopsie, on constate que les lymphatiques
de la mamelle soni injectés de granulations pigmentaires qui donnent à l’or-
gane une teinte noire assez foncée et qui présentent la réaction des sels de
fer avec le ferrocyanure de potassium. Ces granulations sont ovoïdes et
régulières de forme et de dimensions.

Les ganglions, pigmentés aussi et de la grosseur d’un grain de millet, ren-
ferment, notamment à gauche, une très grande quantité d'A. R. Rien au point
d'inoculation.

21 octobre. — Un deuxième rat est mort. A l’autopsie, on trouve les deux
régions inguinales pigmentées. Des frottis de ce tissu pigmenté renferment
quelques bacilles A. R. Dansles ganglions inguinaux relativement petits, les
acido-résistants de chaque côté se montrent en très grand nombre. Pas d’A.R.
dans les ganglions axillaires. Au point d'inoculation, pas de bacilles dans les
produits de raclage de la face profonde de la peau; nombreux au contraire
dans les produits de raclage de la face externe intéressant l’épiderme et la
couche superficielle du derme.

25 oclobre. — Un troisième rat est mort aujourd'hui. A. R. nombreux dans
les ganglions inguinaux pigmentés comme le tissu de la mamelle et légère-
ment augmentés de volume, nombreux aussi dans le produit de raclage de la
couche superficielle de la peau au point d'inoculation.

3 janvier 1911. — Un quatrième rat est sacrifié. Il porte des ganglions assez
volumineux et pigmentés comme le tissu voisin, remplis d’A. R. Au point

4%

690 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

d’inoculation et dans toute la région qui l’avoisine, la peau est farcie d'A. R.

15 janvier. — Un rat, le cinquième, est mort. A. R. nombreux dans les gan-
glions inguinaux. Quelques-uns dans les ganglions axillaires.
25 janvier. — Le dernier rat est sacrifié. Les ganglions inguinaux, assez

volumineux, renferment un très grand nombre d'A. R. On ne constate pas
d'extension de l'infection dans le tissu conjonctif périphérique.

Comme on le voit, l’infection de tous les rats d'expérience a
été obtenue, c’est-à-dire que l’inoculation dans la couche super-
ficielle de la peau semble plus grave que l'introduction de
bacilles dans le tissu conjonctif sous-cutané. Cette expérience,
qui n'est qu'un exemple, a été répétée un grand nombre de fois
avec le même succès.

On constate à l’autopsie que les bacilles A. R. gagnent très
vite les ganglions de la région d'inoculation, où l'infection est
toujours très marquée. La couche superticielle du derme con-
tient au point d'inoculation un grand nombre d'A. R. L'épi-
derme est indemne et les cellules en tel état, qu'aucun signe
extérieur d'infection n’est perceptible à cet endroit. La multi-
plication des bacilles ne s’est pas faite sérieusement en profon-
deur pendant le temps qu'a duré l'expérience. Les poils n'étaient
nullement atteints dans leur vitalité, comme ils le sont quand le
follicule estinclus dans une couche de cellules mésodermiques
parasitées.

La zone de tissu conjonctif mtermédiaire entre le point d'ino-
culation et les ganglions inguinaux n’a jamais été trouvée
infectée. Il semble donc que les bacilles ne se soient pas arrètés
dans les lymphaliques qu'ils ont empruntés pour gagner le
ganglion.

Pénétration des bacilles au travers de la peau fraîchement
épilée. — Devant un succès si complet avec une porte d'entrée
siélroite, nous avons voulu savoir si une lésion plus superficielle
encore que des scarifications de l’épiderme ne suffirait pas à la
pénétration des germes. Pour produire l'infection, il nous a suffi
de toucher avec un tampon de coton imbibé de liquide septique
la peau simplement épilée.

Exr. IV. — Les ganglions d’un rat 282 renfermant de nombreux A. R. sont
broyés avec un peu d’eau physiologique et donnent un liquide louche ren-
fermant un très grand nombre d'A. R. Avec un tampon de coton imbibé de

LA LÈPRE DES RATS 691

ce liquide, on frotte doucement un espace épilé de la peau de 6 rats adultes.
La surface épilée, de la dimension d’une pièce de 2 franes, est située à la base
de la queue. L'opération est faite le 4 décembre 1910.

18 janvier 1911. — Un de ces rats a été soigné de la gale avecune pommade
au crésol et il est mort. On fait un grattage de la peau au point d'inocula-
tion. Dans aucun des frottis, il ne se rencontre d'A. R. Cependant, dans une
préparation faite avec la pulpe d’un ganglion de laine, l'examen microsco-
pique décèle la présence d'un amas d'A. R.

2 mai 1911. — Un deuxième rat est sacrifié. Rien au point d’inoculation.
A. R. en petit nombre dans les ganglions inguinaux.
26 mai 1911. — Un troisième rat est sacrifié. Ganglions inguinaux assez

volumineux à gauche. L'examen microscopique montre qu'ils renferment
beaucoup d'A.R.

23 juillet. — Un quatrième rat femelle est mort de septicémie hémorragi-
que (accident de parturition). Il y a de très nombreux A. R. dans les ganglions
inguinaux, dans le tissu conjonctif de la mamelle et dans l'épaisseur de la
peau au point d'inoculation.

2 octobre. — Le cinquième rat est mort. Ulcère à A. R. au point d'inocula-
tion. Nombreux bacilles dans les ganglions inguinaux, quelques-uns se ren-
contrent dans les ganglions axillaires.

28 novembre. — Le dernier rat est mort. On ne trouve d’A. R. ni au point
d'inoculation, ni dans les ganglions inguinaux, mais les ganglions bronchi-

ques en renferment en grand nombre. Quelques amas se rencontrent aussi
dans le poumon.

Comme on le voit, le dépôt de bacilles sur la peau épilée
donne aux rats l'infection à tout coup. Sur 6 rats inoculés de
cette façon, 1l v a eu 6 succès.

L'infection par cette voie semble même plus sûre que par
toute autre. Alors que l’inoculation sous-cutanée reste parfois
infructueuse, on a par scarification ou simple épilation
100 p. 100 de succès, ainsi qu'en témoignent les expériences
rapportées ci-dessus à titre d'exemples et corroborées par un
grand nombre d’autres que nous trouvons inutile d'exposer
aussi.

Nous n'avons pas encore pu saisir le mécanisme de pénétra-
tion des germes. C’est une question qui est à l'étude et sur
laquelle nous reviendrons plus lard.

Le bacille ne traverse pas la peau saine. — Si la moindre
lésion superficielle, si la plus minime érosion de l’épiderme
ouvre un chemin à la maladie, il convient de dire que les
cellules épidermiques en état d'intégrité lui opposent une bar-
rière infranchissable, Huit petits rats âgés de huit jours, encore
glabres, mais avec une cicatrice ombilicale parfaite, ont été

692 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

largement badigeonnés avec du liquide de broyage ganglion-
naire riche en A. R. et cela sans résultat. Aucun d’eux n’a pris
la lèpre, alors que d’autres animaux inoculés avec le même
produit se sont infectés.

En somme, l'inoculation du bacille de Stefansky provoque
facilement une infeclion spécifique, et elle semble d'autant plus
efficace qu’elle est plus superficielle, sans d'ailleurs qu'elle
puisse se faire au travers de la peau saine.

Sensibilité de la souris. — Les rats blancs ne sont pas les
seuls animaux sensibles à cette infection. Nous avons reconnu
qu'il était possible de la communiquer à d’autres murins : les
souris blanches. Voici une expérience :

Exr. V. — Le 22 janvier 1911, un rat de l'expérience 281 est sacrifié. Les
ganglions inguinaux qui renferment un assez grand nombre d’A. R. sont
broyés en eau distillée stérile. Avec ce liquide, 12 souris sont inoculées :
19, 4 par injection sous-cutanée ; 2, 4 par badigeonnage après scarification ;
30, 4 par badigeonnage après arrachement des poils.

Première série. 9 février. — Une souris du 1°" bocal est morte. Au point
d'inoculation, elle porte un abcès dans lequel on ne trouve que quelques
rares À. R. Pas de bacilles de la lèpre dans les ganglions, le foie, la rate et
la peau voisine du point d'inoculation.

22 février. — Une 2e souris est morte. Au point d'inoculation se trouve du
tissu conjonctif pigmenté, avec une tache un peu plus noire qui marque le
point précis où a été faite l'injection. De nombreux bacilles infiltrent tous
ces tissus. Pas d’A. R. dans les ganglions, le foie et la rate.

43 juin. — Un mâle du bocal I est sacrifié. Il porte de gros ganglions dans
lesquels on rencontre beaucoup de cellules parasitées. Il y a des foyers très
nets renfermant quelques cellules géantes.

20 novembre. — La dernière souris du 1‘ bocal meurt. Elle porte à la
paroi abdominale, au voisinage de la région inguinale droite et s'étendant le
long du pubis jusqu’à la région inguinale gauche, une vaste tumeur mame-
lonnée et composée de trois lobes ayant chacun le volume d'une noisette.
Cette tumeur est formée de tissu lymphoïde et constitue un vaste nodule
bourré d'A. R. Les ganglions inguinaux renferment beaucoup de bacilles.
On n’en trouve ailleurs ni dans la peau, ni dans les organes.

Deuxième série. 1°* mars 1911. — Le 1re souris du 2° bocal est morte. Quel-
ques bacilles au point d’inoculation, rien dans les ganglions inguinaux.

16 juin. — Une femelle est sacrifiée. Au point d'inoculation, comme dans le
ganglion inguinal droit, on trouve un gros bacille acido-résistant en navette,
présentant souvent un espace clair central. Dans certains amas, quelques
éléments contiennent un granule ou deux qui retiennent plus fortement la
matière colorante rouge. Rien au point d'inoculation.

31 octobre. — Un mâle du bocal 2 est mort. Deux gros ganglions ingui-
naux sont bourrés de bacilles acido-résistants!typiques. Sur le dos la souris
porte un large ulcère, dans les parois duquel se trouvent des bacilles en

LA LÉPRE DES RATS 693

navette semblables à ceux qui ont été découverts dans la souris précédente.

6 novembre. — La dernière souris du 2e bocal est morte. Les ganglions
inguinaux assez volumineux sont bourrés de bacilles A. R. typiques. Les
bacilles sont nombreux aussi au point d'inoculation. Rien dans les ganglions
axillaires, ni dans la rate.

Troisième série. 2 mai 1911. — La 1re souris du 3e bocal meurt ce jour. Elle
porte des ganglions inguinaux assez volumineux. On n’y trouve pas d’A. R.

24 août. — Une 2° souris est morte. Dans le- ganglion inguinal gauche se
trouvent de nombreux A. R. en navette semblables à ceux qui ont été décrits
plus haut. Rien dans le ganglion inguinal droit.

31 août. — Les deux dernières souris du 3e bocal sont sacrifiées. Nombreux
amas de bacilles en navette.

Les souris peuvent donc prendre la lèpre. Mais elles y sont
cependant moins sensibles que les rats. Même quand le nombre
des bacilles est très grand, alors qu'ils amènent la formation
de volumineux nodules, ils ne se répandent pas dans tout
l'organisme, comme chez les rats.

Formes d'involution chez la souris. — Quand l'inoculation
est superficielle, l'infection, loin d’être plus sûre comme chez
le rat, manque souvent et, en tout cas, reste toujours discrète.
Les bacilles subissent même une involution qui les rend
méconnaissables. Et nous ne les aurions pas reconnus, si nous
ne les avions observés dans presque toutes les souris inoculées
par scarification ou épilation.

Chose curieuse, nous avons trouvé des bacilles semblables
dans les ganglions inguinaux de rats inoculés avec des bacilles
de lèpre humaine. Cette observation semblerait indiquer que
les rats présentent à la lèpre humaine une sensibilité atténuée.
En tout cas, cette sensibilité est moins grande que celle des
souris à la lèpre murine, car nous avons inoculé des centaines
de rats avec des bacilles humains; nous les avons tous
autopsiés, et si, chez quelques-uns, nous avons trouvé ces
formes d’involution, jamais nous n'avons vu de bacilles typi-
ques. Celte similitude d’involution peut sans doute être
regardée comme un point de rapprochement entre les deux
germes.

Insensibilité des autres animaux de laboratoire. — Alexan-
drescu a inoculé avec succès des cobayes, Nous avons essayé
d’infecter plusieurs de ces animaux, mais en vain.

694 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous n’avons pas mieux réussi avec un singe.

En somme, la lèpre murine est une maladie spécifique aux
rats. Si on réussit à la communiquer à la souris, espèce voi-
sine, elle n'y prend jamais un développement considérable.
Cette spécificité est importante à considérer et à rapprocher de:
celle du bacille humain.

LE Bacizze.

Le bacille découvert par Stefansky est, nous l’avons dit,
d’une extraordinaire abondance dans les tissus malades.

Réactions colorantes. — Un frotlis de pulpe ganglionnaire,
un raclage de la peau, au voisinage d’un nodule ou d’un ulcère,
renferme une quantité énorme de germes libres ou intracellu-
laires. Si l’on colore rapidement ce froltis par une couleur
basique quelconque en solution hydroalcoolique, tous ces
bacilles se détachent en négatif sur le fond teint, par le violet
de gentiane par exemple. Il faut, pour les mettre en évidence,
faire agir comme pour le bacille de Hansen, la solution phé-
niquée de fuchsine à la température de 50 à 80 degrés. Ils
résistent ensuite à la décoloration par les acides aussi bien et
même mieux que le bacille de la lèpre humaine; l'acide azo-
tique au dixième, l'acide sulfurique au quart, l'alcool chlor-
hydrique à 3 p. 100 n'en altèrent pas la couleur rouge vif. On
les voit se détacher avec la plus grande netteté sur le fond
coloré par le bleu de méthylène. Nous employons, d'ordinaire,
une solution étendue de bleu boraté qui a l'avantage de
colorer en quelques secondes.

En définitive, le bacille de Stefansky prend le Ziehl plus vite
que le bacille de Koch et résiste à la décoloration mieux que le
bacille de Hansen débarrassé de sa gangue glaireuse (1). Il
prend le gram.

Résistance des germes à la digestion phagocytaire. — Les
cellules qui logent le bacille sont, comme nous l'avons dit,

(4) Voir à ce propos, E. Marchoux, culture d’un bacille acido-résistant pro-
venant du mucus nasal des lépreux. Bull. de la Soc. de Path. exot., t. IV,
1911, p. 89.

LA LÈPRE DES RATS 695

des cellules mésodermiques. Ce sont des leucocytes mono-
nucléaires ou macrophages de Metchnikoff. Ce parasitisme des
cellules de défense ne vient point à l'encontre de la théorie
phagocytaire de l’immunité. Les phagocytes, ie1, comme tou-
jours, remplissent exactement leur rôle; ils s'emparent des
germes et les isolent de l'organisme. Nous avons déjà fait
ressortir la sensibilité chimiotactique très grande qui les attire
vers le bacille de Stefansky. Mais leur pouvoir digestif se heurte
à un très sérieux obstacle : la capsule cireuse qui entoure ce
parasite spécial. Si la théorie de Metchnikoff avait encore
besoin d'être défendue, elle trouverait en ces faits un sérieux
appui et une preuve démonstrative que les phagocytes imgèrent
les microbes vivants. Mais rien n’est parfait. Si bien réglées
que soient les fonctions organiques, elles peuvent se trouver en
défaut. Ici, les qualités mêmes des cellules phagocytaires servent
au microbe. Sa résistance aux sucs digestifs met à son service
la sensibilité chimiotactique des leucocytes pour favoriser son
introduction et leur mobilité pour opérer sa diffusion dans
l'organisme.

Les phagocytes ne sont cependant pas totalement désarmés
contre lui. Nous voyons, au contraire, assez souvent, des
bacilles devenus granuleux qui ont, par conséquent, mal résisté
à leur action. Mais ce sont là des faits exceptionnels, 11 faut
bien le reconnaître.

Absence de propriétés toxiques. — En général, le bacille de
la lèpre du rat, comme celui de la lèpre humaine, vit et se
multiplie dans la cellule phagocytaire qui, d’ailleurs, n’en
paraît pas très fâcheusement influencée. Il ne s’agit pas là d'une
infection à proprement parler, mais d’un véritable parasitisme.
Le microbe ne se nourrit pas de la substance propre de la
cellule, mais des mêmes substances qu'elle-même; aussi elle
augmente de volume pour satisfaire à ses propres besoins et à
ceux de son hôte.

Comparaison avec le bacille de Hansen. — Les mèmes
phénomènes se passent dans la lèpre humaine, avec quel-
ques variantes peu importantes; mais ils y sont moins percep-
tibles que dans la maladie du rat, qu'on peut reproduire expé-

696 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

rimentalement chez les animaux de laboratoire. Si les deux
maladies se ressemblent, les bacilles qui causent chacune
d'elles sont très voisins. Par le nombre des éléments qui
s’amassent dans les tissus, le bacille de Stefansky se rapproche
du bacille de Hansen; il s’en distingue par ses caractères de
groupement. Comme celui-ci, il est toujours intracellulaire ; les
germes qu'on trouve disséminés dans la préparation provien-
nent des cellules détruites, comme les coupes permettent de
s’en rendre compte. Les cellules parasitées sont particulière-
ment fragiles et résistent mal aux dommages du frottis. Mais
on en trouve néanmoins toujours quelques-unes qui sont
intactes et permettent de voir que les microbes sont disposés
dans le protoplasma sans ordre et non pas rangés en paquets
de cigares comme les bacilles de Hansen. Les bacilles de Ste-
fansky ne sont pas, comme ceux de la lèpre humaine, entourés
d’une gangue muqueuse; ils ne se disposent jamais en globies.

Ce caractère distinctif n’a peut-être pas, il est vrai, une très
grande valeur, car il est impossible, actuellement, de décider
si cetle sécrétion glaireuse, cette glée, est d'origine micro-
bienne ou provient de la cellule qui limite ainsi l’envahisse-
ment parasitaire. L’impossibilité d'inoculer la lèpre humaine
aux animaux recule indéfiniment la solution de ce problème.

En général, les éléments mesurent de 3 à 5 uw de longueur
sur 1/2 p de largeur. Mais ces dimensions, si elles sont ordi-
naires, ne sont point constantes. Il est commun, au contraire,
de rencontrer des germes plus longs et légèrement ineurvés
avec un bouton terminal à une extrémité. Dans chaque groupe
bacillaire, il y a au moins un individu qui présente ces carac-
tères.

Parfois le bacille de la lèpre du rat, comme son congénère
humain, devient granuleux et prend cette disposition en chai-
nette, en coccothrix de Unna. Il y a même des cas où presque
tous les bacilles ont cet aspect. Nous pensons qu'il s'agit non
pas d'un stade particulier d'évolution, mais d'un processus de
dégénérescence. Nous aurons occasion d'en donner plus loin
des preuves évidentes.

Lydia Rabinowitch, qui a une connaissance si grande des
acido-résistants, a reconnu que ce bacille se distingue très
nettement de tous ceux qu'on obtient en culture. Il a, au con-

LA LÈPRE DES RATS 697

traire, une étroite ressemblance avec le bacille de la lèpre
humaine. L'un et l'autre ont, dans l'organisme, le même
habitat, causent une maladie du même genre, à incubation
longue et à marche très lente. L'un et l’autre restent toujours
contenus dans les cellules où ils se multiplient sans paraître
fabriquer de substance toxique. Ni l’un ni l’autre n'a encore
été sûrement obtenu en cultures successives in vitro.

Leur parenté est très grande, et on pourrait dire que la
lèpre du rat est à la lèpre humaine comme la tuberculose
aviaire est à la tuberculose de l'homme.

Commencement de culture et impossibilité de repiquage. —
Tous les auteurs qui ont essayé de cultiver le bacille de la
lèpre du rat n’y sont pas parvenus (1). Nous n'avons pas eu,
dans nos tentatives, beaucoup plus de succès qu'eux.

Comme pour le bacille de Hansen, on obtient assez facile-
ment une multiplication dans les tissus qui contiennent déjà
des germes, mais il est impossible de transporter celte culture
sur un autre milieu, où même sur un fragment sain du même
tissu. Si on enlève aseptiquement un ganglion inguinal chez
un rat qui est au début de l'infection et qu'on le porte sur un
culot de gélose nutritive, il se fait dans ce ganglion, en quel-
ques semaines, une véritable culture. Le nombre des bacilles
acido-résistants y croît dans des proportions colossales; 1l est
facile de s’en rendre compte en coupant ce ganglion, ainsi
qu'un autre du même rat, fixé au moment de l’extirpalion.
Dans le témoin, quelques rares cellules renferment des amas
de bacilles acido-résistants. Ces cellules disséminées ne sont
pas réunies en foyers compacts. Deux, trois cellules par place
forment les groupes les plus considérables. Des coupes entières
ne contiennent pas de microbes.

Dans le ganglion placé à l’étuve à 37 degrés, les germes se sonl
abondamment multipliés. Il est difficile de dire si cette multi-
plication s’est faite dans la cellule ou dans les espaces inter-
cellulaires, car la plupart des éléments cellulaires sont autoly-
sés. Les bacilles se sont, en réalité, développés dans le proto-

(1) Bayon, au contraire, l'aurait cultivé assez facilement. Transac. Soc. of
Trop. med., t. V, n° 5, p. 166.

698 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plasma fusionné par disparition des membranes d’enveloppe.
En tout cas, la comparaison des deux ganglions prouve qu'il
s'agit ici d’une véritable culture et non point d'amas rassem-
blés après destruction du tissu. Entre les noyaux, on voit
serpenter des chaînes de bacilles acido-résistants, constituées
par des filaments beaucoup plus longs que le diamètre d'une
et même de plusieurs cellules. Ces chaînes de 2, 3, # ou 5 files
de bacilles placés bout à bout, se séparent parfois en Y et se
rejoignent ensuite après avoir contourné un noyau. Il existe
aussi, par places, des amas volumineux, de véritables colo-
nies.

Ce phénomène a été observé à plusieurs reprises; il se
produit, quelle que soit la nature du liquide contenu dans la
sélose, dont l'unique rôle semble être de servir de support
humide.

En portant un fragment de ganglion-culture sur un mor-
ceau de rate de rat stérilisée à 110 degrés el ayant subi un
commencement de digestion par la trypsine, nous avons vu se
former, au moins à la surface, de pelites colonies microsco-
piques, chétives, et montrant peu de tendance à l'extension.
Le transport de ces colonies sur nouvelle rate n’a pas été pos-
sible.

La culture commence assez vite, en moins de huit jours, et
s'arrête rapidement. Au bout d’un mois et demi, les bacilles
dégénèrent et deviennent granuleux. Ils sont morts, comme
nous l’ont prouvé nos essais d’inoculations infructueux.

Le transport de la première culture en ganglion sur ganglion
neuf, prélevé aseptiquement et non chauflé, sur fragment de
rate recueilli dans les mêmes conditions, n’a donné lieu à aucun
développement sur ces organes qui se sont montrés, en défini-
tive, moins bons milieux que la rate chauffée à 110 degrés.

Le bacille dégénère en cultures impures. — La culture en
milieu impur ayant donné, apparemment, à l’un de nous
d'excellents résultats pour la multiplication en dehors de
l'organisme du bacille de la lèpre humaine, il était indiqué
d'appliquer le même procédé au germe de la lèpre du rat. Nos
essais ont totalement échoué. Non seulement le bacille de
Stefansky n’est pas favorisé par le voisinage d’autres germes,

LA LEÈPRE DES RATS 699

mais il est rapidement submergé par eux. Il subit une lyse
rapide. Des cultures mixtes inoculées après cinq et douze
Jours n'ont pas donné d'infection.

Il ne résiste pas à la dessiccation. — A défaut de cultures, la
quantité énorme de bacilles qu'on peut recueillir sur certains
animaux nous à permis de faire quelques recherches sur les
propriétés de ce microbe et en particulier sur sa résistance
à la dessiccation et à la chaleur. De 33 rats inoculés avec du
matériel desséché sous le vide sulfurique, aucun ne s’est
infecté. Chez 2 d’entre eux, on a (rouvé, au point où on les
avait mis el encore trois mois après l’inoculation, des bacilles
granuleux qui, inoculés à d’autres animaux, n’ont donné lieu
à aucune infection. Îls étaient done morts.

Il ne supporte pas plus de 5 minutes un chauffage à 60 degrés.
— Pour mesurer la résistance à la chaleur, nous avons intro-
duit dans des tubes capillaires, fermés à la lampe aux deux
bouts, un peu de matériel broyé en eau physiologique et très
riche en acido-résistants.

Ces tubes ont été plongés dans un bain-marie à 60 degrés,
les uns pendant 5 minutes, d’autres pendant 15 minutes, et Les
derniers pendant une demi-heure.

L'inoculation à été faite dès la sortie du bain-marie à des rats
blancs.

Le matériel, chauffé 5 minutes, a infecté 4 rats sur 8; mais
il est bon d’ajouter que les 4 premiers rats sont morts trop
vite pour que chez eux la maladie ait eu le temps de se déve-
lopper.

Les tubes chauffés plus longtemps n'ont provoqué aucun
accident chez les rats qui les ont reçus.

Nous pouvons donc dire que le bacille de Stefansky résiste
pendant 5 minutes à 60 degrés et qu'il meurt à la même tempé-
rature, quand on l'y maintient pendant un quart d'heure.

CONCLUSIONS.

1° À Paris, comme à Odessa, 5 p. 100 des rats d’égouts sont
porteurs de bacilles de Stefansky. On ne trouve que 0,60 p. 100
de rats lépreux ;

700 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

2° Les ganglions inguinaux sont en général les premiers
pris;

3° Le poumon forme une sorte de filtre qui arrête les germes
et les dirige vers les ganglions médiastinaux ;

4° Le dépôt des germes sur des scarifications de l’épiderme
ou simplement sur la peau épilée donne plus sûrement une
infection aux rats d'expérience que l’inoculalion sous-cutanée ;

5° La peau intacte, même celle encore glabre, de petits rats
de quelques jours s’oppose à la pénétration des microbes:

6° La lèpre de Stefansky est une maladie spécifique du rat.

Les souris peuvent être infectées, mais moins facilement que
les rats. L'infection par la peau épilée ou scarifiée manque plus
souvent que l’inoculation sous-cutanée. On trouve chez elles
des formes d’involution de bacilles comparables à celles qu'on
rencontre chez les rats inoculés de lèpre humaine;

7° Le bacille de Stefansky, Mycobacterium lepræ murium,
comme celui de Hansen, est un parasite des cellules mésoder-
miques. Îl ne vit pas aux dépens de la cellule hôte, mais des
mêmes substances qu’elle;

8° Les bacilles granuleux sont morts;

9° Une première culture est relativement facile à obtenir. La
difficulté commence quand on veut la repiquer;

10° Le bacille succombe rapidement en milieu impur :

11° Il ne résiste pas à la dessiccation.

RECHERCHES
SUR LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE
par J. BRIDRÉ, L. NÈGRE et G. TROUETTE
(Institut Pasteur d'Algérie.)

(Avec la PL XVII.)

Nos recherches ont eu pour but d’éclaircir l'étiologie et la
pathogénie encore obscures de la maladie, d'établir la nature de
son agent spécifique et de trouver un traitement efficace.

Malgré le travail de plusieurs années, nous n'avons pu
réaliser, jusqu'à présent, qu'une faible partie de notre pro-
gramme. Nous nous contenterons d'exposer ici nos observations
et nos expériences, en cherchant à tirer des résultats obtenus
les conclusions qu'ils comportent.

L'étude clinique fournit des renseignements précieux et,
sans nous étendre sur la description déjà faite dans maints
ouvrages des symptômes de la Ilymphangite épizootique, nous
commencerons ce mémoire par un tableau succinct de la
maladie telle que nous l’avons observée en Algérie.

Parmi les nombreuses dénominations qui servent à désigner
la Lymphangite épizootique, celle de Farcin d'Afrique et, depuis
le décret du 4 août 1907, qui en fait une maladie contagieuse
légale, celle de Lymphangite farcinoïde, sont le plus fréquem-
ment employées en Algérie (1).

C’est une affection suppurante et ulcéreuse, déterminée par
la présence d'un parasite spécifique, Cryptococcus farciminosus
de Rivolta.

Elle atteint souvent le cheval, plus rarement le mulet : nous
ne l’avons jamais constatée chez l'âne dans les conditions natu-
relles, ni chez le bœuf.

(1) Les Arabes l'appellent « bou sebh'a », le père du chapelet.

702 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

On l’observe surtout dans la région du littoral, particulière-
ment sur les animaux des camionneurs et des jardiniers.

Début. Symptômes. — 1] semble qu'une plaie préexistante
sert toujours de porte d'entrée à la maladie. L'incubation n’est
indiquée par l’apparilion d'aucun phénomène morbide et, mème
à sa période d'état, la maladie ne paraît avoir aucun retentis-
sement sur la santé générale. La plaie infectée n’a aucune ten-
dance à la cicatrisation ; elle reste ulcéreuse, s'étend lentement
en largeur tandis que ses bords s’épaississent, bourgeonnent et
se renversent en forme de « cul-de-poule ». La périphérie,
légèrement œdématiée, devient douloureuse.

Après un laps de temps variant de huit jours à deux mois,
surviennent les accidents locaux, parfois bruyants, le plus sou-
vent insidieux : boutons, cordes, tumeurs, engorgements.
Tantôt les boutons apparaissent les premiers, tantôt les cordes
les précèdent; parfois, surtout dans Les régions basses du tronc,
un engorgement volumineux est d'abord seul appréciable.

Ces diverses manifestations symptomatiques sont /oujours
douloureuses à la pression.

Les boutons ont communément la grosseur d'une noisette.
Ils évoluent à la facon d’un abcès banal dont ne les diffé-
rencie pas le pus auquel ils donnent écoulement. Ouverts, ils
ont l’aspect en cul-de-poule et l’atonie de la plaie initiale. On
les observe sur le trajet des lymphatiques qui, si l’angioleu-
cite ne les a pas envahis les premiers, s'épaississent, s’indurent,
deviennent les cordes farcineuses dont le diamètre varie de
{à 5 centimètres.

Ces cordes sont dures, noueuses, chaudes, douloureuses. Leur
progression est toujours centripète. Parties, le plus souvent,
des régions inférieures des membres, elles gagnent rapidement
la pointe de l'épaule, l'entrée de la poitrine, laine et, provoquent
parfois des tuméfactions énormes des ganglions pré-pectoraux,
pré-scapulaires ou inguinaux.

L'ouverture des tumeurs ganglionnaires donne écoulement à
une sérosité citrine, au début, et, plus tard, à du pus jaune
provenant de multiples abcès creusés en galeries dans le tissu
de néoformalion, abcès qui, parfois, se collectent et atteignent
alors le volume du poing.

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 103

Les engorgements S'observent dans les régions basses des
membres ou à la face inférieure du tronc. Sur les membres.
ils suivent généralement l'apparition des cordes et des boutons :
ils sont froids, durs, presque indolores, souvent énormes et
couverts de bourgeons saillants, blafards, mollasses. Les engor-
gements de la face inférieure du tronc sont, au contraire,
chauds, douloureux; ils ne présentent que de rares boutons
caractéristiques et le (rajet des cordes noyées dans la masse
est difficilement perceptible.

Des accidents, boutons et cordes, peuvent également se
montrer sur les muqueuses oculaire, pituitaire et labiale. Nous
avons observé sur le corps clignotant d’un cheval atteint à la
face, un bouton spécifique relié par une trainée lymphatique
à une corde voisine qui aboutissait aux ganglions sous-
glossiens.

Deux animaux (un mulet et un cheval) ont présenté avec des
symptômes de lymphangite, des ulcères de la pituitaire de
0 m. 01 de diamètre, arrondis, à bords grisätres, dont le fond
était recouvert de fins bourgeons charnus : ces lésions simu-
laient, à s'y méprendre, le chancre morveux et le diagnostic
différentiel ne put ètre établi qu’à l’aide de la malléine (1). Des
faits semblables ont déjà été signalés par différents auteurs:
Nocard (2), Pricolo (3).

Sur la muqueuse labiale, dans les Iymphangites de la face,
les accidents ne sont point rares et présentent, comme carac-
tères particuliers, des boutons nombreux, rapprochés, du
volume d’un pois.

Nous devons citer encore une forme peu commune de lym-
phangite se traduisant par des boutons répartis sur tout le corps
et non reliés entre eux par des traînées lymphatiques appa-
rentes. Enfin, nous avons observé deux fois des lésions testi-
culaires.

(1) La malléination de tous les chevaux atteints de Ilymphangite est obli-
gatoire, en Algérie : elle nous a permis de constater plusieurs fois la coexis-
tence dela morve et de la lymphangite épizootique. A l’autopsie d'un cheval
morveux nous avons trouvé de petits abcès pulmonaires renfermant des
cryptocoques.

(2) Nocarp, Sur le diagnostic de la lymphangite épizootique. Bull. de la Soc.
centr. de médecine vétérinaire, 1891.

(3) Pricoco, Contribution à l'étude de la lymphangite épizootique. Revue
générale de méd. vétér., 1907, p. 451.

104 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Marche. — La marche de la maladie est tantôt rapide, tantôt
lente. Nous l'avons vue évoluer dans l’espace de huit jours : à
la suite d'une blessure du jarret occasionnée par un coup de
fourche, toute la région de la saphène fut occupée par une
corde moniliforme, pathognomonique. Nous l'avons vme aussi
progresser avec une extrême lenteur et mettre environ qua-
rante jours pour arriver de la plaie initiale, située au-dessus du
genou, au ganglion pré-pectoral (1).

Pronostic. — La lymphangite farcinoïde est une affection
grave en raison de sa fréquence, de sa ténacité, de sa conta-
giosité, de la longue indisponibilité qu’elle entraîne et des
soins dispendieux que nécessite son traitement chirurgical.

Elle est moins grave sur les chevaux de sang que sur les
animaux à tempérament lymphatique. Les mulets arabes gué-
rissent plus facilement que les mulets français.

L'âge et le siège de la lésion initiale, la forme des acci-
dents peuvent fournir d’utiles indications sur la gravité de
l'affection.

L'excision hâtive du cordon peut amener la guérison en
quinze Jours.

Si au contraire on attend, pour intervenir, que les cordes se
multiplient, que des engorgements volumineux s’établissent,
la maladie peut devenir incurable.

Quand la plaie d'entrée se trouve siluée sur les faces laté-
rales du pâturon ou du boulet (2), qu'elle s'accompagne d’un
engorgement rapide et douloureux du canon, on à affaire à une
lymphangite tenace.

Si le eryptocoque pénètre par effraction au-dessus du genou
ou du jarret, l'affection est généralement bénigne et aisément
curable. Il en est de mème des lésions de la tête et de l’enco-
lure.

(1) Ces faits ont une grande importance au point de vue judiciaire : en cas
de litige portant sur la vente d'animaux lymphangiteux, il est impossible de
déterminer, dans la plupart des cas, la date de l'infection avec assez de
certitude pour permettre à un tribunal de trancher le différend en toute
équité.

(2) Nous n'avons jamais vu les plaies de la région antérieure du boulet ou
du pâturon servir de porte d'entrée à la lymphangite épizoolique. Ces plaies
résultant d’une glissade au moment du démarrage sont cependant très com-
munes chez les chevaux de rouliers et camionneurs.

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 503

Celles du thorax présentent un caractère particulier de
gravité lorsque les cordes sont dirigées parallèlement aux
côtes.

On peut considérer la guérison comme prochaine et parfaite
lorsque le symptôme douleur disparaît. Toutes les fois que
nous l’avons vu persister sur des animaux en apparence guéris,
une rechute locale ne lardait pas à survenir.

Après guérison, l'affection ne laisse pas les animaux inutili-
sables malgré la persistance des engorgements du canon et des
reliquats cicatriciels.

Nous n'avons jamais constaté de récidive, même lorsque les
animaux guéris élaient longtemps maintenus au contact des
malades.

RÉPARTITION DES LOCALISATIONS,.

Membre antérieur droit. :. . . . : 110
— — CAUENCEN "NE un ( 233
Les deux membres antérieurs . . , . 14)
Membre postémeuridroite "CMS
— — DANGER Lune 0 HSE 11
Les deux membres postérieurs . . . . (
EDAUIC SAS REA SE Re … sil SE
One NE RE EN). , : CN e
En COURRIER En Le. JU A DA
JF os EN a MP PE OS PEN E 6 }
Généralisation . 0 3 3
MONA NES DA

Au point de vue de la gravité de la maladie, les 364 malades
doivent être ainsi répartis :

32 ont été abattus comme incurables après une ou deux
opérations ;
21 ont été abattus sans opération ;
| a guéri sans intervention;
310 ont été guéris après opération ou traitement.

Fréquence de la maladie suivant les écuries — Les 364 lym-
phangiteux appartenaient à 97 écuries renfermant un total de
1.168 animaux. Mais certaines écuries ont été particulièrement
frappées ainsi :

106 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Une écurie de 180 chevaux ou mulets a eu. . . . . . 20 malades.
= = 65 — — à EURE S —
es = 50 —— —— A CUS EN SEREE 11 e—
_ _ 82 — — à “EUR PER 27 —
= — 12 — _- A EU PRES 7 ——

Total:389 Chevauxsoummulets:, EME Na malades:

Soit : 18,76 p. 100.

Le pourcentage des malades (364) par rapport à l'effectif
total (1.168) des écuries atteintes serait encore plus élevé si
l’on tenait compte des nombreuses écuries ne renfermant qu’un
ou deux animaux.

FRÉQUENCE LE LA MALADIE SUIVANT LES SAISONS.
(Répartition annuelle et mensuelle.)

TOTAUX MOYENNES

Janvier
Février |
Mars. .
Avril. .
Mai .
Juin .

=
2 ©

Le
Lo

=
D 1

AN © Or à
=
A © & 02

Æ

Juillet .

AOÛT RENE
Septembre.
Octobre .

Novembre.
Décembre .

CRE
7 CO © O0 À

=
LA

=
[=]
CN |

Les chiffres qui figurent dans ce tableau représentent les cas
de lymphangite épizootique signalés au service vétérinaire,
sanitaire, dans la 1" circonscription (ville d'Alger). Ils nous
révèlent que la lymphangite épizootique à l'allure d’une aflec-
tion saisonnière : rare pendant la période chaude et sèche
mai à octobre — plus commune pendant la saison froide el

pluvieuse — novembre à avril.

Analomie pathologique. — Le simple examen macroscopique
d’une corde excisée montre que cette corde est constituée par

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 707

du tissu fibreux entourant un canal lymphatique dont les parois
épaissies se confondent avec le tissu néoformé. Si on fait glisser
le doigt le long du cordon, on perçoit, de place en place, de
petites nodosités de volume variable et dont le contenu à un
aspect différent suivant que la nodosité est très petile et récente
ou qu'elle est volumineuse et sans doute plus ancienne. Dans
le premier cas, le contenu est épais, gris rosé; dans le second,
son aspect se rapproche d'autant plus de celui du pus que la
lésion a pris de plus grandes proportions.

Le microscope nous renseigne sur la cause de ces variations
de caractères.

Si on examine à l'état frais le contenu gris rosé d’une nodo-
sité de faible dimension — de la grosseur d'un gros grain de
plomb à celle d'un petit pois — on a l'impression de voir une
véritable colonie de cryptocoques. Parmi un amas de parasites
où les formes de bourgeonnement sont nombreuses, à peine
trouve-t-on quelques rares leucocytes.

L'examen microscopique du contenu des nodosités plus
volumineuses montre, au contraire, que les leucocytes ont
envahi la « colonie »; les formes de bourgeonnement existent
encore, mais en moins grande abondance. Un certain nombre
de parasites sont phagocytés. L'organisme a mis en œuvre ses
moyens de défense. Plus la lésion est volumineuse, plus les
leucocytes sont nombreux et plus la phagocytose est intense.

La coloration des frottis de ces produits permet de faire les
mèmes constatations (pl. XVIL, fig. 3 et 4). Le cryptocoque se
colore assez difficilement par les méthodes ordinaires; il prend
le gram, mais un grand nombre d'éléments restent incolores,
lorsqu'on suit la technique usuelle. La méthode de Claudius
donne d'excellents résultats : il faut prolonger pendant une
heure et plus le contact avec le violet de gentiane et avec la
solution d'acide picrique et bien décolorer ensuite au chloro-
forme : le parasite apparaît alors en bleu violet. La méthode
de Dominici au bleu de toluidine et la coloration de Giemsa,
avec différenciation au tannin, fournissent aussi de bons
résultats. |

Les coupes histologiques d’un cordon lymphatique à petits
nodules offrent également un certain intérêt.

La coloration de Claudius montre chaque nodule formé par

708 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

une colonie de cryptocoques. Les parasites ont envahi lout le
trajet lymphatique et un certain nombre d'éléments appa-
raissent libres entre les cellules conjonctives du tissu de réac-
tion (pl. X VIT, fig. 1 et 2).

Ces observalions établissent que le cryplocoque n'est pas un
parasite des leucocytes et que sa présence dans les globules
blancs n’est qu'un phénomène de phagocytose.

Les auteurs qui ont fait du cryplocoque un protozoaire
parasite des leucocytes ont effectué leurs prélèvements dans
des foyers purulents où la phagocytose est active. Ducloux à
prélevé les produits qu'il a étudiés « par ponction de boutons
arrivés à maturité et par raclage de bourgeons charnus
recouvrant le fond de plaies ulcéreuses ».

Si ces auteurs avaient étudié les lésions jeunes d’un cordon
excisé, ils auraient sans doute conclu différemment (1).

La lymphangite épizootique ne peut être considérée que
eomme une maladie, d’abord locale, qui s'étend vers le centre
en suivant rigoureusement le trajet des Iymphatiques. Les
ganglions de l'entrée du thorax ou de l'abdomen arrêtent le
plus souvent les cryptocoques dans leur marche centripète, et
il est exceptionnel que les parasites franchissent cette barrière
et occasionnent des lésions des organes internes,

LE PARASITE. — SA NATURE.

Le parasite, découvert par Rivolta, en 1873, étudié par
Rivolta et Micellone et désigné sous le nom de Cryptococcus
farciminosus, a été retrouvé par les différents auteurs qui se
sont occupés de la lymphangite épizootique. 11 est unanime-
ment considéré comme l'agent spécifique de cette maladie. En
revanche, sa nature même est très controversée. On en a fait
tour à tour une coccidie (Canalis), un sporozoaire (Piana,
Galli-Valerio), un blastomycète (Fermi et Arusch, Nocard,
Tokishige, Marcone, Baruchello, Sanfelice, Pricolo, etc.), et

(4) Lorsque, sur l'animal vivant, un nodule devient perceptible au toucher,
il est déjà envahi par les leucocytes et la phagocytose a commencé.

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 109

cette dernière opinion élait généralement admise lorsque, dans
ces dernières années, Gasperini (1), ayant repris l'étude du
cryptocoque, a fait du parasite une coccidie qu'il a baptisée
Lymphosporidium equi. Vuis, Ducloux (2), considérant le
cryptocoque comme un parasile des leucocytes, le rapproche
des Leishmania et l'appelle Leucocytozoon piroplasmoïdes.
Les auleurs se trouvent ainsi partagés en deux camps
les uns persistent à voir dans le parasite de Rivolta un
blastomycète ; les autres adoptent les idées de Gasperini ou de
Ducloux et en font un protozoaire [N. Mori (3), Thiroux et
Teppaz (#)|.

Le cryplocoque de Rivolla a été si souvent décrit qu'il serait
inutile de revenir sur sa morphologie, si des descriptions
récentes ne tendaient à le rapprocher de certains protozoaires
connus.

Thiroux et Teppaz, notamment, s'expriment ainsi :

« Les frottis obtenus par ponction des tumeurs non ouvertes
ont été colorés par la méthode de Laveran. On y retrouve,
soit libres, soit contenus dans les leucocyles mono ou polynu-
cléaires ou dans les grands macrophages, de petits corps sphé-
riques ou ovoides de 3 à 5 # de diamètre, semblables au para-
sile du bouton d'Orient de l'homme et n'en différant que parce
qu'ils ne présentent qu'un gros karyosome et pas de micro-
nucleus apparent. »

L'absence de micronucleus apparent marque déjà une
différence appréciable entre le Lymphosporidium de Gasperini

(1) G. GasPerixi, Ulteriori ricerche sulla etiologica protozoaria della linfan-
gile epizootica equina. Acc. med. fisica Fiorentina, séance du 13 février 1908;
Li Speriment., &. LXIT, f. I-II. janvier-avril 1508, 7 pages.

— La linfangite protozoaria ed il suo agente specifico Lymphosporidium
equi. Acc. med. fis. Fiorent., séance du 14 mai 1908, &b.; f. III, mai-juin 1908,
31 pages.

— La linfangite protozoaria equina ed il suo Lymphosporidium secondo
le più recenti ricerche. Sperimentale Arch. di Biol. norm. e palol. Fase. IT,
mars-avril 1909.

(2) Duccoux, Sur un protozoaire dans la lymphangite épizoolique du mulet
en Tunisie. Comples rendus de la Soc. de Biologie, t. LXIV, n° 43, séance du
4 avril 1908, p. 593.

(3) N. Mori, Osservazioni sul cosidetto farcino criptococcico, linfangite
epizootica o saccaromicosi equina. La Clinica vélér., f. 4 et 5, 1908, 14 pages.

(4) A. Tuioux et L. Terpaz, Contribution à l'étude de la lymphangite
épizootique des équidés au Sénégal. Annales de l'Institut Pasteur, t. XXII,
1909, pp. 420-725.

710 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ou le Leucocylozoon de Ducloux et le parasite du bouton
d'Orient; mais ce n’est pas la seule; lorsqu'on examine une
préparation colorée d'un produit pathologique renfermant une
Leishmania, on trouve les parasites inclus dans les mononu-
cléaires; ces parasites affectent la forme d’une poire plus ou
moins renflée et présentent un karyosome et un micronucleus
très nets colorés en violet rouge par le Giemsa. Le protoplasma
est bleu pâle et la membrane d’enveloppe presque imper-
ceptible.

Dans une préparation de pus à cryplocoques, on voit ces
parasites libres ou inclus généralement dans les polynucléaires.
Ils présentent une forme ovale ou elliptique avec une partie
colorée en rouge violet par le Giemsa et le reste en bleu. La
membrane d’enveloppe, quelquefois moins nette chez les para-
sites intraleucocytaires que chez les cryptocoques libres, est
toujours apparente.

En somme, les deux parasites diffèrent par leur forme, leur
constitution, leur habitat, et nous ne pouvons suivre Thiroux et
Teppaz dans leur conclusion « que la présence d’un karyosome
net et l'élection tinetoriale obtenue par le mélange éosine-bleu
ne permettent pas de conserver le moindre doute sur la nature
de ce protozoaire ».

Plus loin, les mêmes auteurs écrivent : « On peut voir aussi
le double contour caractéristique de l'ancien eryptocoque;
cependant, il s’observe moins souvent sur les parasites endo-
leucocytaires et on le retrouve surtout sur les parasites libres
ou contenus dans des débris de leucocytes. Nous pensons que
ce n’est qu'un artifice de préparation, dû à une dessiccation
inégale. »

De même, « l'aspect en petit citron serait dù à la dessicca-
tion »!!

Mais, à l'état frais, cette membrane d'enveloppe, épaisse,
réfringente, accusée par un double contour, existe, sans artifice
de préparation, et les formes en citron ne sont pas rares;
point n’est besoin de dessiccation pour les faire apparaître!

Enfin, les formes considérées généralement comme formes
de bourgeonnement résulteraient, pour les partisans du para-
site protozoaire, de « l'accolement de deux individus ».

Or, si certaines formes peuvent être diversement interpré-

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 711

tées, lorsque la cellule fille possède déjà sa membrane d’en-
veloppe (fig. 1), d'autres représentent indiscutablement des
formes de reproduction : ce sont celles où la membrane réfrin-
gente n'existe plus entre la cellule mère et la cellule fille,
celle-ei formant hernie à travers l'enveloppe de celle-là
(fig. 2).

Ces formes sont particulièrement abondantes dans le contenu
des lésions jeunes dont nous avons parlé plus haut (pl. XVIT,
fig. 3 et 4). On observe même, dans un tel produit, des bour-
geons de deuxième génération (fig. 3).

Gasperini avait abandonné l'hypothèse levure à cause des

VVY

insuccès des cultures (si une levure poussait, elle ne reprodui-
sait pas la maladie), à cause aussi de la résistance extraordi-
naire du germe, de ses caractères de structure et de multipli-
cation. Cet auteur reconnaît parmi les granulations de l'inté-
rieur du parasite (kyste de protozoaire) des mérozoïtes, des
microgamètes pluriflagellés mobiles, des macrogamètes.

On distingue, en effet, à l’état frais, des granulations de
forme variable. Souvent, on n'aperçoit dans l'élément ovale
qu'un petit corps sphérique animé d'un mouvement brow-
nien. Quelquefois, on voit plusieurs corps ronds ou plus ou
moins allongés, immobiles. Que représentent ces corps? Les
granulations des levures facilement cultivables ont été l’objet
de tant de controverses qu'on nous pardonnera de ne pas expri
mer d'opinion sur celles du cryptocoque. Nous nous bornerons
de même à mentionner, sans les interpréter, les grandes formes
observées déjà par d’autres auteurs.

L'insuecès des cultures a été la principale objection émise
contre la nature blastomycétienne du parasite. Si différents
auteurs disent avoir obtenu des cultures sur divers milieux, un
grand nombre d’autres n’ont eu que des échecs, et on peut se
demander pourquoi Marcone, Tokishige, Sanfelice, etc., ont

742 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

réussi à cultiver le cryptocoque, alors que les tentatives faites
dans les mêmes conditions de température, sur les mêmes
milieux, n’ont pas donné de résultats aux autres chercheurs.

Nous avons, nous-mêmes, fait de nombreux essais. Nous avons
ensemencé, sur milieux animaux (sérum, sang, lymphe, extrait
de cordon lymphatique malade, etc.) ou sur milieux végétaux
(pomme de terre, carotte, foin, paille, caroube, ete.) glycérinés,
sucrés, milieux liquides ou solides, en présence ou à l'abri de
l'air, les produits recueillis, soit dans les lésions jeunes, soit
dans les abcès mürs et fermés; nous avons même lavé les para-
siles avant l’ensemencement pour les débarrasser d’hypothé-
tiques substances pouvant nuire à leur développement 2n vitro.
Nous n'avons jamais obtenu de cultures nettes. Peut-être avons-
nous eu un début de développement dans certains milieux végé-
aux où nous avons cru constater un nombre beaucoup plus
grand de formes de bourgeonnement qu’au moment de l’ense-
mencement; mais les réensemencements n'ont jamais rien
donné.

Nos tentatives de cultures n’ont cependant pas toujours été
stériles; nous avons vu plusieurs fois se développer des colo-
nies de levures. Une de ces colonies, dont les éléments présen-
tient une ressemblance frappante avec le cryptocoque, eût pu
nous faire illusion sur son origine, si l’un de nous n'avait anté-
rieurement fait la constatation suivante : un tube de gélose au
foin ensemencé par une simple sirie médiane et laissé à la
température du laboraloire présentait, au bout d'une quinzaine
de jours, une petite colonie d’une levure rappelant assez bien
le cryptocoque sans l'enveloppe à double contour; un examen
à la loupe montra que la colonie s'était développée à côté de la
strie d'ensemencement! Il s'agissait, sans doute, dans ces dif-
férents cas, de levures de l'air, et leur inoculation à des mulets
resta sans résultat.

Cela ne veut pas dire que tous les auteurs qui ont cru culti-
ver le cryplocoque n'aient cultivé qu'une levure étrangère. Il
faut tenir compte, surtout, de l'expérience de J. Sanfelice, qui
dit avoir inoculé avec succès, à un mulet, une culture pure de
quatrième génération. Rien n'autorise à contester cette expé-
rience. Il se peut que, dans certaines conditions, indéterminées
jusqu’à présent, le cryptocoque soit cultivable. Les insuccès

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 713

obtenus avec les ensemencements de pus peuvent s'expliquer
par la faible quantité, dans ce produit, de parasites vivants.
Mais les ensemencements pratiqués avec le contenu des petites
nodosités du trajet lymphatique, où le grand nombre de formes
de bourgeonnement témoigne de l’activité du cryptocoque,
devraient, semble-t-il, donner des résultats positifs. Il n'en est
rien, cependant, et toutes les condilions de la culture, si cul-
ture il y a, restent à fixer.

En admettant même l'impossibilité absolue de cultiver le
cryplocoque, il n'y à pas lieu d'en faire pour cela un proto-
zoaire. Il est à remarquer que, précisément, les protozoaires
dont on à voulu le rapprocher, les Leishmania, se cultivent
aisément; or, personne, jusqu'à présent, n'a annoncé la
cullure du parasite de Rivolla dans les milieux spéciaux.
Nous avons nous-mêmes essayé, à maintes reprises, la cul-
ture sur milieu Novy-Neal-Nicolle sans plus de succès que
sur les milieux à levures. En réalité, comme l’a fait observer
déja Panisset (1), l’insuccès des essais de cultures ne sau-
rait être invoqué en faveur de l’une ou de l’autre manière de
voir.

Les observations que nous avons exposées Jusqu'ici, tant sur
l'habitat que sur la morphologie et le mode de reproduction
du parasite tendaient à nous le faire considérer comme une
levure.

Ne pouvant arriver à renouveler l'expérience de Sanfelice,
nous avons pensé que la méthode de déviation du complément
pourrait apporter dans cette discussion un apercu nou-
veau (2).

I — Nous avons d'abord recherché la sensibilisatrice dans
le sérum d'animaux atteints de Iymphangite épizootique, en
employant comme antigène une dilution de cryptocoques dans
l'eau physiologique.

(1) L. Panisser, La place zoologique du parasite de la lymphangite épizoo-
tique d'après quelques travaux récents. Revue gén. méd. vél., 1 avril 1910,
p. 318, 384.

(2) Comptes rendus de l'Académie des Sciences, séances du 18 avril et du
17 mai 1910.

714 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

(Une « colonie » de la grosseur d'un petit pois, prise sur le lrajet d'un cor-
don excisé, fut émulsionnée dans 8 c.c. environ d'eau physiologique.)

Voici le protocole de l'expérience (l'alexine étant titrée, nous avons fait
varier la dose d’antigène) :

o SÉRUM
2 | chaufé m | ALEXINE APRÈS 1 HEURE RÉSULTATS
> &p d'animal Æ (sérum :
<2 |à lymphan-| © à l'étuve à 36°, après 20 minutes
me gite = | de cobaye
mule" £ 7 É osite
7, | épizootique | « au 1/10). on ajoute : | à l’étuve.
F (mulet).
12 0,5 0.1 Très légère hémolyse
vu) Sérum de cheval (l’antigène était en
aouc De quantité insuffisante).
2 0,5 0,2 0,2 \ La . [Pas d'hémolyse.
» 0,5 0,3 0,2 }globules de chèvre{ pas d'hémolyse.
pes A: 0,2 |
1,6 02 0,2 Id. IHémolvse.
ARE .8 0,2
|
153 0,5 0,2
1,3 0,5 0,2 Id. Hémolyse.
1168) 0,5 0,2
| |

Même expérience avec sérum normal d'âne : hémolyse dans tous les
tubes,

Conclusion. — Le sérum d'animal atteint de lymphangite
épizootique renferme une sensibilisatrice pour le cryptocoque.

Il. — Si le cryptocoque est une levure, peut-être arriverait-
on à des résultats identiques à ceux de l'expérience ci-dessus
en employant comme antigène une culture de blastomycète
connu.

Nous nous sommes servis d'une levure de riz (1) cultivée sur gélose et
émulsionnée dans l'eau physiologique, autant que possible, dans les mêmes
proportions que le cryptocoque dans l'expérience précédente. Puis, nous
avons répété l'expérience en nous servant de levure de bière et de levure
de raisin.

Les doses de sérum, d’antigène et d’alexine étaient exactement les mêmes
que dans l'expérience I.

Résultats. — 1° Avec le sérum d'animal malade, pas d'hémolyse dans les
trois premiers tubes; hémolyse dans les tubes témoins.

2° Avec le sérum normal, hémolyse partout.

(1) Levure fermentant à haute température, isolée en Indo-Chine, par M. le
Dr Calmette.

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 745

Conclusion. — La sensihilisatrice du sérum d'un animal à

lymphangite épizootique manifeste son action en présence d’une
levure.

Nous avons renouvelé les expériences ci-dessus en nous ser-
vant de sérum de cheval malade et de sérum normal de cheval.

L'antigène était soit le cryptocoque, soil la levure.
Comme le montre le protocole de l'expérience, nous avons fail agir les

sérums en présence d'une dose fixe d'antigène et d'une dose variable
d'alexine.

SÉRUM ANTIGÈNE
chauffé APRÈS Î HEURE RÉSULTATS
d'animal (crypto-
à lymphan- ALEXINE à l'étuve à 37 degrés,
gite coque ou j
épizootique on ajoute : à l’étuve.
(cheval). levure).

EAU
physiologique.

après 30 minutes

Sérum de cheval

antic Rev as dhemobes

olobules 4 chèvre.

Id.

Hémolyse.

Id. Hémolyse.

lp:
he as d'hémolyse.
|
|
|
|

Avec le sérum normal de cheval, hémolyse partout.

D'après ce tableau, on peut voir que ces nouvelles expé-
riences ont confirmé pleinement les résultats des premières.

II. — Il fallait voir ensuite si un microbe quelconque, le
Bact. coli, par exemple, ne pouvait agir, comme le cryptocoque
et la levure, en présence de la sensibilisatrice.

Mêmes doses que ci-dessus en employant comme antigène une émulsion
de B. coli cultivé sur gélose.

Le résultat est négatif : il y a hémolyse dans tous les tubes.

IV. — Il restait à voir si le cryptocoque ou la levure
n'étaient pas capable de fixer une autre sensibilisatrice que
celle du sérum d’animal à Ilymphangite.

Nous avons fait agir, toujours aux mêmes doses, du sérum antipesteux en

présence d’émulsions de cryptocoque et de levure.
Résultat négatif : hémolyse partout.

716 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

V. — Nous avons tenté une contre-épreuve des expériences
précédentes en faisant agir sur les différents antigènes, levure
de bière, levure de raisin, cryptocoque, un sérum antilevure,
en l'espèce, sérum de lapin ayant reçu à plusieurs reprises,
sous la peau et dans le péritoine, de la levure de bière.

Ces expériences ont été répétées avec un sérum normal de
lapin et en suivant toujours le même protocole.

Résultats. — Dans toutes les expériences faites avec le sérum
antilevure de bière, que l’antigène soit la levure de bière, la
levure de raisin ou le cryptocoque, les résultats sont les
mèmes : déviation du complément dans les tubes renfermant
le sérum antilevure et les différents antigènes, hémolyse dans
les tubes témoins.

Avec le sérum normal, hémolyse partout.

IV. — Nous avons enfin complété ces expériences en exa-
minant l’action du sérum d'animal à lymphangite épizootique
sur la Leishmania infantum (parasite dont on a voulu rapprocher
celui de la lymphangite épizootique), et sur un autre proto-
zoaire, le Trypanosoma vespertihionis. L'anligène était constitué
par des cultures des protozoaires en milieu Novy-Neal-Nicolle
(liquide de condensation de la culture dilué par moitié dans
l'eau physiologique).

Mème réaction avec le sérum normal.

Toujours même protocole. Nous avons fait des tubes témoins
avec le cryptocoque comme antigène.

Résultats. — 11 y a déviation dans les tubes témoins (anti-
gène, cryptocoque et sérum de lymphangite) et hémolyse dans
les autres tubes.

La sensibilisatrice du sérum des animaux à lymphangite
épizootique ne manifeste pas son action en présence de proto-
zoaires tels que Leishmantia infantum et Trypanosoma vesper-
tihionis.

CoxcLusIONS.

I — Le sérum des animaux atteints de lymphangite épi-
zootique renferme une sensibilisatrice.

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 117

IL. — Cette sensibilisatrice manifeste son action aussi bien
en présence d'une levure qu'en présence du parasite spéci-
fique.

IL. — Un autre microbe tel que le B. coli n'est pas sensi-
bilisé par le sérum d'animal à Ilymphangile épizootique.

IV. — Ni la levure ni le cryptocoque ne sont sensibilisés par
un sérum antimicrobien tel que le sérum antipesteux.

V. — La sensibilisatrice d’un sérum d’animal préparé avec

la levure de bière n’est pas rigoureusement spécifique pour
cette levure; elle manifeste également son action sur une autre
levure telle qu'une levure de raisin.

VI — Un sérum antilevure dévie le complément, aussi bien
en présence du parasite de la Iymphangite épizootique qu'en
présence d'une levure quelconque.

VIL — La sensibilisatrice du sérum des animaux à lym-
phangite épizootique ne manifeste pas son action en présence
de protozoaires tels que Leishmantia infantum et Trypanosoma
vespertilionts.

Puisque : 1° /e sérum d'animal à lymphangite épizootique
dévie le complément en présence des levures comme en pré-
sence du cryptocoque, et que ce sérum ne dévie pas le complé-
ment en présence d’autres microbes ou en présence de proto-
zoaires; 2° qu'un sérum antilevure dévie le complément aussi
bien en présence d'une levure autre que celle qui a servi à le
produire qu'en présence de celle-ci, et que ce même sérum
dévie le complément en présence du parasite de la Iyÿmphangite
épizootique comme en présence des levures; il résulle que,
dans ces diverses expériences, /e sérum d'animal à lymphan-
qile épizootique se comporte comme un sérum antilevure, et le
parasite de la lymphangite épizootique comme une levure.

Ces faits expérimentaux semblent, sinon démontrer, du
moins élayer fortement l'hypothèse de la nature blastomycé-
üienne du parasite de la lymphangite épizootique.

En résumé, les partisans du parasite protozoaire basent leur
opinion sur l'insuccès des cultures, sur une ressemblance avec
certains protozoaires et sur l'habitat du parasite qu'ils trouvent
le plus souvent à l'intérieur des leucocytes.

718 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avons vu que l’insuccès des cultures ne peut être invo-
qué, que le cryptocoque n'a qu’une ressemblance lointaine
avec les Leishmania, et nous croyons avoir démontré que
l'agent de la lymphangite épizootique n’est pas un parasite des
leucocytes.

On peut dire, au contraire, que la ressemblance du crypto-
coque avec certaines levures est frappante, par sa forme même,
par ses caractères de coloration, par son mode de reproduction
par bourgeonnement. Enfin, les résultats de nos expériences
de déviation du complément constituent de sérieux arguments
en faveur du parasite levure, et nous nous rangeons parmi Les
auteurs qui considèrent le parasite de Rivolla comme un blas-
tomycète.

ErroLoG1E.

La fréquence de la Iymphangite énizootique sur le littoral et
à certaines époques de l’année, a amené certains auteurs à
penser que la maladie pouvait être transmise par un insecte
piqueur. Thiroux et Teppaz émettent cette opinion et tendent à
accuser les moustiques. Cette manière de voir cadre assez bien
avec l'hypothèse du protozoaire, qui passerait ainsi par un hôte
intermédiaire, mais aucun fait d'observation ni aucune expé-
rience ne sont venus la confirmer.

Ainsi que nous l'avons dit plus haut, il semble qu’une plaie
préexistante sert toujours de porte d'entrée à la maladie. Il
n'est pas impossible d'admettre que des insectes, les mouches
par exemple, qui affectionnent les plaies, soient les vecteurs
occasionnels du parasite et des agents de contagion. Mais nous
avons pu constater que des instruments de pansage peuvent
remplir le même office : une blessure faite, sur un cheval sain,
par une tondeuse ayant servi à la toilette d’un lymphangiteux
a été le point de départ de l'infection spécifique. La maladie
peut d'ailleurs être transmise par inoculation de pus à crypto-
coques. L'infection n'est pas réalisée à coup sûr : lantôt on
obtient, après un temps variable, un abeès suivi d’une corde
lymphatique et des lésions habituelles; tantôt l’inoculation est
suivie d'un simple et unique abeès au point d'injection, tantôt
même 1l n'y a aucune manifestation consécutive. Ces résultats

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 749

différents tiennent sans doute, d’une part, à la résistance
variable des sujets d'expérience, et d'autre part, à la virulence
du produit inoculé.

Un cas de contagion directe à l'homme a même été constaté :
un vétérinaire s'est infecté par une plaie ouverte du pouce en
opérant un cheval à Iymphangite (1).

L'examen de la statistique rapportée plus haut montre que la
maladie est surtout fréquente pendant la saison froide et plu-
vieuse. Malgré la période d’incubation quelquefois longue, ces
constatations ne sont pas en faveur d’un rôle possible des mous-
tiques. Thiroux et Teppaz ont remarqué que la contagion se
manifeste surtout, au Sénégal, pendant la saison chaude et
humide (hivernage).

Peut-être cette morbidité plus grande pendant les saisons
humides est-elle due simplement à ce que la conservation du
parasite dans le milieu extérieur est favorisée par l'humidité
alors qu’elle se trouve compromise par la dessiccation. Mais ce
n'est là qu'une simple hypothèse.

Essais DE TRAITEMENT.

L'intervention chirurgicale qui consiste à exciser la totalité
des lésions au bistouri ou à les détruire par la cautérisation
ignée, est le seul traitement de la Tlymphangite épizootique
employé par les vétérinaires algériens. Si l'opération jouit
d'une telle faveur malgré ses inconvénients multiples, —
grands délabrements, interruption prolongée du travail, ete.,
c'est qu'elle seule, parmi les nombreux traitements essayés
jusqu'à présent, montre une certaine efficacité. Efficacité rela-
live, d'ailleurs et qui varie avec l’âge et le siège des lésions. La
proportion de guérisons par excision du cordon lymphatique
est d'environ 65 p. 100.

D'après Teppaz (2) qui, au Sénégal, a comparé l’action de
différents médicaments, l’iodure de potassium en injections
intraveineuses aurait, seul, donné des résultats appréciables.

1) Bull de la Soc. de path. exot., &. IV, 1911, p. 394. — J. Brault avait déjà
signalé un cas de Ilymphangite épizootique chez l'homme. Janus, Harlem, 1910.

(2) L. Teppaz, Essais de traitement de la lymphangite épizootique du
Sénégal. Bull. Soc. path. exot., L&. IT, 1910, p. 450.

720 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Mais le grand nombre d'injections nécessaires pour obtenir la
guérison rend le traitement peu pratique.

Le « 606 » méritait d’être essayé, et, élant données la fré-
quence el la gravité de la maladie à Alger, nous étions admi-
rablement placés pour constater l’action de ce produit.

Nous avons déjà annoncé (1) le résultat obtenu sur 9 chevaux
ou mulets. Nos essais ontété poursuivis et nous avons actuel-
lement un total de #3 animaux traités.

Après quelques tâtonnements pour fixer la dose convenable,
nous avons remarqué que la dose relativement faible d'un
gramme donne d'aussi bons résultats que des doses plus éle-
vées. Nous employons le « 606 » (2) en injection intraveineuse
en suivant la technique de préparation indiquée par Ehrlich.

A cette dose nous n'avons jamais observé aucun phénomène
général à la suite de l'injection. La température reste station-
naire. Une seule injection de 3 grammes pratiquée sur une
mule, a été suivie de légères coliques et de diarrhée.

L'effet de l’arsénobenzol sur les lésions lymphatiques est
rapide. Lorsque l'affection est récente, que la plaie initiale est
située dans les parties moyennes des membres (genou, haut
du canon), celle-ci se cicatrise généralement vite, les cordes
diminuent de volume et les boutons déjà apparents s'ouvrent
et s'indurent. Cordes et nodules deviennent indolores à la
pression.

Si la maladie est plus ancienne et la plaie initiale située
dans les régions inférieures des membres, l'effet de l'injection
se manifeste souvent par l'apparition de nouveaux boutons sur
le trajet lymphatique malade. Les boutons existants s'abcèdent
et se vident. On dirait que l'organisme réagit en expulsant les
parasites et un observateur non prévenu pourrait prendre ces
phénomènes de défense pour une aggravation du mal.

Il est nécessaire, pour juger des résultats d’une injection,
d'attendre trois semaines à un mois. À ce moment, la guérison
est assurée lorsque les cordes ont disparu ou diminué considé-

(1) Bull. Soc. path. exot., L. IV, 1911, pp. 386 el 584.

(2) Le dioxydiamidoarsénobenzol (ou 606 d'Ehrlich) que nous avons eu à
notre disposition nous avait été remis par M. le Dr A. Calmette, et provenait
en partie du laboratoire du professeur Ehrlich, en partie de la maison Pou-
lenc frères, de Paris.

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 721

rablement, qu'elles sont devenues indolores à la pression et
que la plaie initiale est cicatrisée; les nodules qui existent
encore, fermés ou ouverts, n'ont aucune importance. Si, au
contraire, la plaie initiale reste ouverte et que la sensibilité de
la corde persiste, il convient de renouveler l'injection.

Le tableau suivant résume nos essais jusqu'au 45 mars 1912.

On peut remarquer que les animaux qui ont dû être abattus,
soit pour cause d'infection purulente, soit par raison écono-
mique, avaient tous été infectés par une plaie des parties infé-
rieures des membres : boulet cu pâturon.

Dans deux cas (chevaux 24 et 30) nous avons fait adminis-
trer de l’iodure de potassium, à la dose de 10 grammes par
jour dans l’eau de boisson, dès le lendemain de l'infection et
pendant une période de quinze jours. Ce traitement mixte n’a
pas paru donner de résultats plus rapides que l'injection seule
de « 606 ».

Il est difficile d'établir le pourcentage des guérisons d'après
ce tableau, un certain nombre de malades ayant été traités
depuis trop peu de temps, mais si l'on considère qu'une grande
parte des animaux qui nous ont élé amenés pour subir l'injec-
lion de « 606 » étaient difficilement opérables, à cause de
l'étendue ou du siège des lésions, on voit que le nouveau médi-
cament peut rendre d'importants services dans le traitement
de la [ymphangite épizootique (1).

Lorsque la corde lymphatique est bien délimitée, qu'elle est
siluée dans une région où l’ablation des lésions peut être faite
sans grands inconvénients, l'opération chirurgicale est loujours
à recommander. Le traitement par l'injection intraveineuse
d'arsénobenzol est, au contraire, indiqué lorsque les lésions
étendues sont inopérables, que leur siège ne permet pas sans

(M) De l’action curative du « 606 » dans la lymphangite épizootique, on ne
saurait tirer de déductions sur la nature discutée du parasite, Cependant
une observation de Pinoy et Ravaut (communication orale), rapprochée des
faits que nous venons d'exposer, Lendrait à confirmer la nature blastomycé-
lique du cryptocoque de Rivolta : ces auteurs ont obtenu une guérison
rapide d'une mycose humaine (gommes à levures, cultures positives) par
l'emploi du « 606 ».

Ces résultats ouvrent au «606 » un nouveau champ d'action dans le domaine
des affections mycosiques.

46

722 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

DÉSIGNATION

des animaux

|

Cheval barbe.

Id.
Cheval breton.
Mule.
Mule.
Cheval barbe.

Cheval breton.
Mulet.
Cheval breton.

Cheval barbe,

Id.

Id.
Jument bretonne.
Cheval barbe.

art

Id.
Id.
Id.
Id.

Id.
Cheval brelon.
Mulet.

Cheval barbe.

Id.
Cheval percheron.
Cheval barbe.

Id.

Id.

Mule.

Cheval barbe.

Mule.

Cheval brelon.
Id.

Cheval barbe.
Id.

Cheval anglo-normand.
Cheval barbe.
Id.

ÉTAT DE LA MALADIE

au début du traitement

Ancienne. Très grave.

Récente. Bénigne.
Ancienne. Opéré. Récidive.
Récente. Grave.

Récente. Assez grave.
Très ancienne, Très grave.

Ancienne. Grave.
Ancienne. Grave.
Ancienne. Assez grave.

Ancienne. Grave.
Récente.

Récente. Grave.
Ancienne. Généralisée.

Ancienne. Opéré quatre fois. Récidive.

Ancienne. Opéré. Récidive.
Ancienne. Opéré. Récidive.
Ancienne.

Ancienne. Grave.
Ancienne.

Récente. Grave.

Ancienne. Grave.
Récente. Bénigne.
Récente. Bénigne.
Récente. Grave.

Ancienne. Opéré. Récidive.
Ancienne. Bénigne.
Ancienne, Grave.

Ancienne. Assez grave.

Récente. Bénigne.
Récente. Grave.

Ancienne. Opéré. Récidive
Récente. Bénigne.
Ancienne. Opéré. Récidive.

Récente. Assez grave.
Ancienne. Opéré. Récidive.
Récente. Bénigne.

Récente. Assez grave.
Récente. Bénigne.

Récente. Bénigne.

Récente. Opéré partiellement:

Ancienne. Grave. .
Ancienne. Opéré. Récidive-
Ancienne. (Grave.

NOMBRE

injections

PAS RE RE ENS

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 723

DATE DES INJECTIONS

30 novembre 1910, 2 février 1914,
22 avril 4911.

8 décembre 1910.

4 janvier 4911.

19 janvier, 2 mai 1911.

19 janvier, 2 mai 1911.

£ février 1914.

9 février, 11 mars, 22 avril 1944.
24 février, 22 avril 1911.
11 mars 1911.

29 avril, 24 juin 1911.

24 mai 1914:

27 mai 1914.

8 juin 19144.

8 juin, 21 septembre 1911.
10 juin 4911.

22 juin, 43 juillet 19144.

24 juin, 13 Juillet 4941.

19 aoûl 1911.

20 août 1914.

20 octobre, 10 novembre 1911.

& décembre 19m.
ü décemdre 4911.
6 décembre 1914.
IS décembre 14914.

18 décembre 1944.
23 décembre 1914,
23 décembre, février 1912.

21 décembre 1911, 20 février 1912,

" décembre 4914.

21 déc mbre 1911, 20 février 1912.
29 décembre 1911.

10 janvier 1944.

10 janvier 1914.

12 janv
11 janv
18 janv 1912.
20 Janvier, février 1912.
29 janvier 1942.
31 Janvier 4942

13 mars 1941.
1912.

Janvier 1942.

Mars 1949,
% Mars 1949,
2 mars 1949.

SIÈGE

de la plaie initiale,

Boulet.

Canon.
Abdomen.
Genou.
Canon.
Päturon.

Abdomen.
Jarret.
Epaule (trajet d'un
séton).
Boulet.
Abdomen.
Jarret.
»
Flanc.

Id.
Genou.
Canon.
Boulet.
Pâäturon.
Boulet.

Id.
(renou.
Boulet.

Id.

Id.

Canon.
Jambe.
Thorax.
Genou.
Boulet.

Canon.
Boulet.
Genou.
Thorax.
Canon.
Boulet.
Genou.

Boulet.
Jarret.
Thorax.

RÉSULTATS

Guérison.

Id.

Mort le 4 février
1911. Infection
purulente.

Guérison.

Id.
Abattu le 30 mai.
Guérison.
Id.
Abattu fin juillet.
Id.

Guérison.

»
Guérison.
Abattu, Infection
purulente,

Id.

Guérison.
Id.

Abattu 29 janvier
1912. Infection
purulente.

Guérison.

Id.

Abattu (par écono-
mie).

En voie de gué-
rison.

Guérison.

En voie de
rison.
Id.
Guérison.
Id.
»
Guérison.

Id.

| En voie de

rison.

724 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dangers, les délabrements nécessaires, ou encore lorsque l’affec-
tion, récente, peut être traitée sans arrêter le travail de
l'animal malade. Il peut être avantageux, dans certains cas,
d'associer les deux méthodes d'intervention, en excisant cer-
taines lésions facilement abordables et en complétant le traite-
ment par l'injection de « 606 ».

Enfin, lorsque l'opération chirurgicale est suivie de l'appa-
rition de nouveaux boutons, le traitement interne trouve son
indication.

Le cas, cité plus haut, de lymphangite épizootique chez
l'homme, s’est terminé par une guérison radicale en trois
jours, après une injection intraveineuse de 0 gr. 60 de « 606 »..

ESsaIS DE PROPHYLAXIE.

Avant nos premiers essais de traitement par Le « 606 » nous
avions voulu voir si des injections hypodermiques de levures
sur les animaux à Iymphangite épizootique n'auraient pas un
effet favorable sur le cours de [a maladie en amenant la pro-
duction d'anticorps capables d'exercer leur action sur les
cryptocoques.

Le cheval n° 1 avait ainsi reçu 5 injections de levures aux dates suivantes :
6 juin 1910, 1% juin, 30 juin, 13 juillet, 14 août. La première — récolte de
3 tubes de gélose (levures de riz el de bière), dans 30 cent. cubes d'eau phy-
siologique — provoqua un engorgement qui disparut rapidement. La seconde
occasionna un œdème assez volumineux qui mit une semaine à se résorber.
La troisième amena la formation d'un abcès à chaque point d'injection. A la
quatrième, des abcès volumineux se formèrent rapidement et s'ouvrirent en
deux ou trois jours. A la cinquième (précédée, la veille, d’une injeëtion de
2 cent. cubes seulement), tous les points d'injection furent le siège’de nou-
eaux abcès qui évoluèrent en moins de quarante-huit heures.

Des constatations semblables furent faites sur un âne neuf
que nous préparions en vue d'oblenir un sérum antilevures.

Nous avons assislé ainsi à des phénomènes qu'on peut rappro-
cher du « phénomène de Koch » (1) dans la luberculose. L’orga-

(1) Il est difficile de dire S'il y a identité de phénomènes : dans le « phé-
nomène de Koch » ce sont les bacilles hébergés par l'organisme qui provo-
quent son intolérance pour de nouveaux bacilles tuberculeux. Dans les

LA LYMPHANGITE ÉPIZOOTIQUE EN ALGÉRIE 725

nisme manifeste à chaque injection nouvelle de levures une
plus grande intolérance. Au lieu d'acquérir une immunité
contre les levures il semble s'habituer à les expulser.

Ces observations nous ont donné l’idée de mettre à prolit
cette intolérance de l'organisme, dans un but prophylactique.
Nous nous sommes demandé si un animal qui a reçu une
injection de levures ne serait pas, par cela même, capable de
mieux résister à l'invasion du cryptocoque, en expulsant plus
facilement les parasites.

Une expérience actuellement en cours nous dira ce qu'il y à
de fondé dans cette hypothèse : dans une écurie de 100 chevaux
parmi lesquels on compte 10 p. 100 de Iymphangiteux, la
moitié environ de l'effectif a reçu dernièrement une injection
de levures. Les chevaux de l’autre moitié serviront de témoins.

Tous les chevaux de l'écurie portant un numéro d'ordre, nous
avons inoculé 46 chevaux à numéros impairs.

L'inoculation a été pratiquée le 3 mars. A l'heure actuelle —
23 mars — trois nouveaux cas de lymphangite épizootique ont
été constatés sur des numéros pairs (témoins): le premier (n°38)
ke 18"mars, le second (n° 40) le 20, le troisième (n° 34) le 21,
Les animaux voisins inoculés n'ont rien présenté d'anormal.

L'avenir nous apprendra s'il y a là autre chose qu’une heu-
reuse coïncidence,

CONCLUSIONS GÉNÉRALES,

L'observation clinique et les faits expérimentaux établissent
que la lymphangite épizootique est transmissible par inoculation
directe, que l'intervention d'insectes piqueurs n’est pas néces=
saire.

L'étude des lésions jeunes montre que le cryptocoque de
Rivolta n’est pas un parasite des leucocytes.

La morphologie, le mode de reproduction du parasite plaident
en faveur de sa nature blastomycétienne.

phénomènes ci-dessus, il semble que l'organisme manifeste son intolérance
mème après s'être débarrassé des premières levures; mais ce n’est pas
certain. Pour pouvoir interpréter des faits d’une facon exacte, il faudrait
savoir ce ue sont devenues les premières levures introduites.

126 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Les expériences de déviation du complément révèlent chez le
cryptocoque et les levures des caractères d’étroite analogie.

Le « 606 » peut être utilisé avantageusement dans le traite-
ment de la lymphangite épizootique.

Nous adressons nos vifs remerciements à M. le D' Ch. Nicolle,
de Tunis, qui a bien voulu nous envoyer des cultures de proto-
zoaires, et à MM. Roig, vétérinaire à Rouïba ; Cavalin, Dauzon,
Adrien et Georges Mantout, vétérinaires à Alger; Ducher et
Savary, vétérinaires militaires, qui ont eu l’amabilité de mettre
à notre disposition de nombreux sujets d'expérience et de nous
fournir les pièces et les matériaux d'étude.

EXPLICATION DE LA PLANCHE XVII

Fic. [. — Coupe d’un vaisseau lymphatique infecté. Coloration par la
méthode de Claudius. Gross. — 40 diamètres.

La coupe est pratiquée au niveau de deux nodules formés par des amas
de cryplocoques. Ces foyers parasitaires sont mal délimités et des crypto-
coques sont disséminés dans le tissu environnant. Les nodules sont séparés
par du tissu conjonctif de réaction m.

Fic. I, — Même coupe vue en » (fig. I), au grossissement de 800 diamètres,
On voit, dans la partie inférieure, quelques leucocytes parmi les crypto-
coques : a, polynucléaires dont un renferme trois parasites: b, mononu-
cléaires ; c, formes de bourgeonnement.

F16. III. — Frottis du contenu d'un nodule jeune. Gross. — 800 diamètres .
Color. : méthode de Claudius.

Les cryptocoques sont libres. Les leucocytes polynucléaires a ou mononu-
cléaires 6, sont rares. Formes de bourgeonnement c, assez nombreuses.

Fi6. IV. — Frottis du même produit coloré par la méthode de Dominicis
Nombreuses formes de bourgeonnement,

ue

SUR L’EXISTENCE DE LA RAGE CANINE
DANS LE HAUT-SÉNÉGAL ET LE NIGER

par G. BOUFFARD,.

Médecin-major de 1' classe des troupes coloniales,
Professeur à l'Ecole d'application de Marseille.

(Travail du laboratoire de Bamako.)

On n'a encore donné aucune preuve de l'existence de la rage
chez l’indigène de l'Afrique occidentale française. Quelques
enquêtes, faites à différentes époques auprès des plus anciens
administrateurs de notre empire de l'Ouest africain, sont restées
négatives et n'ont pu apporter le plus petit indice permettant
de croire à l'existence de la maladie. Alors qu'elle sévit si
cruellement dans nos possessions indo-chinoises et malgaches,
n'existerait-elle donc point dans l'Ouest africain, ou bien serait-
elle ignorée de l’indigène, qui pourrait en êlre victime sans
que son entourage en soit le moins du monde impressionné?
C'est peu probable; le noir n'est point dépourvu d’un certain
esprit d'observation, et s'il a reconnu de tout temps la maladie
du sommeil, il est peu vraisemblable qu'il eût méconnu une
maladie à symptômes aussi accusés, aussi terrifiants que ceux
de la rage.

Dans les archives des directions du service de santé de
l'Afrique occidentale française, on ne trouve trace d'aucune
observation, d'aucune feuille clinique portant la mention
« Rage »; mais on peut lire sur les certificats de rapatriement
de certains fonctionnaires ou officiers, la mention : « Mordu
par un chien enragé, évacué sur l’Institut de Bordeaux ou de
Marseille pour y suivre le traitement antirabique. » Si donc
la rage humaine ne paraît pas avoir été signalée en Afrique
occidentale française, la rage canine y aurait été observée de
tout temps. Elle est fort bien connue des indigènes, qui
appellent « chiens fous » des chiens errants dant les morsures
sont généralement mortelles pour leurs congénères, semblant

728 s* ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

inoffensives pour les hommes. Nos administrateurs considèrent
ces animaux commmie enragés; ont-ils raison ?

Le problème était intéressant à éludier; aussi, dès mon
arrivée à Bamako, en 1906, je cherchai à me procurer un
chien fou. L'administrateur Vidal, fort obligeant, m'aida dans
la circonstance, et bientôt un agent de police m'en amenait un;
malheureusement, l'animal brisait la mauvaise corde qui
encerclait son cou, s’enfuyait dans la cour du dispensaire el
mordait les deux chiens de garde de notre établissement
d'assistance médicale. L'animal suspect gagnait la campagne
et il ne nous restait que ses deux victimes.

L'une, chien à poil ras, de race locale, avait été mordue
légèrement à la patte; elle resta avec. nous pendant un an sans
présenter les moindres symptômes morbides. L'autre, à poil
long, provenant de la région de Tombouctou, était porteur
d’une large et profonde déchirure de l’arcade sourcillière
gauche. L'infirmier lava la blessure à l’eau tiède et la sau-
poudra de salol; après une semaine de traitement, la guérison
était complète. Trois jours après, c’est-à-dire onze jours après
la morsure, l’animal reste couché et mange très peu; le lende-
main, il ne touche pas à sa pâtée et, de loute la journée, ne
quitle pas sa niche. Le soir, vers six heures, il se lève et, l'œil
vif, parcourt avec une agilation manifeste l’enclos où il est
enfermé; je l'observe pendant plus d’une heure; de temps à
autre, il titube, vacillant sur ses pattes de derrière; le lende-
main malin, on le trouve mort dans sa cage.

L'aulopsie ne révèle rien de particulièrement intéressant:
l'estomac est vide.

Un morceau de bulbe, de la grosseur d'un petit pois, est
broyé dans de l’eau stérile ; quelques gouttes sont injectées sous
la dure-mère d'un lapin, qui meurt accidentellement le cin-
quième jour; son bulbe ne fut pas virulent pour d’autres
lapins; je perdais rapidement un virus que je ne devais
retrouver qu'en 1908.

En 1907, au cours d'une tournée d’études de Ia maladie
du sommeil sur les bords du fleuve Bani, je visitais un vil-
lage, assez éloigné du cours d’eau pour être indemne de tsé-tsés
et, par conséquent, habitable pour les chiens, qui ne peuvent
vivre sur les bords de ce redoutable fleuve.

LA RAGE CANINE DANS LE HAUT-SÉNÉGAL ET LE NIGER 729

Un chef de village a toujours l'habitude, quand on l'interroge
sur l'existence possible, sur son territoire, de la maladie du
sommeil, de répondre évasivement et de tenter une digression
en causant de choses et d'autres. Celui-ci me parlait constam-
ment d’une maladie qui sévissait sur les chiens et me deman-
dait un remède. Le village allait, disait-il, perdre ses fidèles
servileurs, très appréciés, non seulement pour les services
rendus comme chiens de garde, mais aussi pour la suceulence
de leur chair, qui en faisait un produit de négoce très apprécié.
« Nos chiens deviennent fous, mordent leurs congénères, sans
épargner les noirs, et meurent. » Il m'affirma que les personnes
mordues restaient indemnes, qu'il ignorait, ainsi que les habi-
tants du village, la maladie dont je lui décrivais les principaux
symptômes. J'étais malheureusement à la fin de ma tournée
d’études, et je n'avais plus à ma disposition d'animaux neufs
me permettant d'attendre l'occasion d’emporter le virus. Mon
temps n'était point complètement perdu, puisque, faute de
renseignements précis sur la maladie du sommeil, je trouvais,
une fois de plus, confirmation de l'existence au Soudan d'une
affection canine transmissible par morsure el paraissant bien
être la rage.

Le 20 août 1909, un fonctionnaire qui s'intéressait à mes
travaux, M. Constantin, rencontrait dans la ville administra-
tive de Kouloubah un chien solidement attaché qui venait de
mordre plusieurs indigènes et que l’on eroyait atteint de rage.
11 me le fit immédiatement conduire au laboratoire; l'animal
présentait tous les signes de la rage mue; J'aurais pu entre-
prendre quelques expériences avant de sacrifier l’animal
(morsure d’un autre chien, inoculation de la bave au lapin, ete.),
mais je craignais de perdre ce virus par fugue de l'animal,
aussi je le tuai par pendaison, à la mode indigène, et l’inocu-
lation de son bulbe sous la dure-mère d'un lapin fut le point
de départ de toute une série de recherches qui paraissent favo-
rables au diagnostic de rage.

La technique employée est celle décrite dans tous les clas-
siques : broyage d'une petite quantité de substance bulbaire
dans un peu d’eau distillée stérile et inoculation, sous la dure-
mère d’un lapin, de quelques gouttes du liquide.

Je n'ai pas la prétention d'apporter iei des expériences com-

730 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plètes ; des raisons multiples ne m'ont point permis de mettre
ce travail expérimental à l'abri de toute critique. J'ai voulu
simplement apporter une preuve expérimentale de l'existence
de la rage canine, et je me suis adressé au lapin comme
animal d'expérience.

Un lapin est donc inoculé le 10 août: jusqu’au 25, l'animal
parait en excellent état; il mange el n'a point maigri; le len-
demain, il reste toute la journée tapi dans un coin de sa cage:
quand on l’incite à se déplacer, on observe des troubles de là
marche dus à une parésie du train postérieur; le 27 au matin,
l'animal est couché avec de l’apnée, une paralysie complète
du train postérieur; il meurt le soir. Avec son bulbe, on fait
un passage sur deux lapins.

Du 10 août 1909 au 26 avril 1910, je fis 13 passages; la durée
de l’incubation fut en moyenne de quinze à vingt jours, deux fois,
de trente-cinq et trente-huit jours. Les animaux réagissaient
presque toujours d’une façon identique: leur état général se
maintenait excellent jusqu’à deux à trois jours avant la mort;
ils perdaient alors l'appétit, restaient tapis dans un coin de
leur cage el, quarante-huit heures avant le décès, survenaient
généralement des signes de parésie suivis de paralysie com-
plète du train postérieur. Trois fois, j'ai pu assister à des
crises de rage furieuse; le lapin se précipitait à notre approche
contre les parois de sa cage, les mordait: l'accès précédait
généralement la mort de douze à vingt-quatre heures.

Pour chaque passage, je me servais toujours de deux ou trois
lapins: J’évitais de la sorte la perte du virus par une mort
prématurée consécutive à un accident ou à une maladie inter-
currente. J'avais d’ailleurs constaté, dès le 1°" janvier, que tous
les animaux inoculés ne prenaient pas la rage ; 4 sur 6 environ
restait indemne, semblant réfractaire.

Rentrant très malade, à une saison où la durée du voyage
sur le fleuve est longue, je ne pouvais songer à rapporter le
virus rabique du Niger. Mon successeur continua les inocula-
tions, mais, n'utilisant qu’un seul lapin, il perdit le virus au
21° passage; l'animal, inoculé le 10 mars 1910, restait indemne.
Son histoire mérite d'être contée.

Ce lapin resta en observation pendant tout l'hiver sans pré-
senter le moindre symptôme morbide. En avril, arrivait au

LA RAGE CANINE DANS LE HAUT-SÉNÉGAL ET LE NIGER 731

Laboratoire le D' M. Blanchard, chargé de faire revivre cet
établissement, qui n'avait plus de titulaire depuis près d'un an.
Dans cette colonie, qui n'avait jamais pu, avant 1906, avoir à
sa disposition d’une facon continue un vaccin antivariolique
virulent, el qui, en quatre ans, avait vu un million de ses
habitants immunisés contre la terrible endémie, il était tout
naturel que le premier soin du D' Blanchard fût de contrôler
l’activité de la pulpe vaccinale de Bamako. Pour ce, il utilisa
le lapin trépané sans résultat le 10 novembre 1909; il le rasa le
30 avril 1910 et beurra la surface rasée de pulpe vaccinale. Le
surlendemain, l'animal présentait des signes de paralysie du
train postérieur; le 3 mai, la paralysie était généralisée; la
mort survenait le lendemain.

Blanchard pensa au réveil d’une rage latente et fit une série
de passages les 3, 13 et 23 mai: la durée de l’incubation fut en
moyenne de dix jours; les lapins mouraient paralysés; mal-
heureusement, l'incident du 21° passage se reproduisit:
l'unique animal, inoculé le 23 mai, résista à la dose de virus;
Blanchard chercha à vaincre sa résistance par les procédés
usuels ; la vaccination resta inefficace ; cette fois, le virus était
définitivement perdu.

Il sera facile de le retrouver; le chien fou n’est pas, dans la
boucle du Niger, une curiosité-pathologique; il sera donc fort
intéressant de reprendre ces recherches qui, loin d’être aussi
rigoureuses et précises que je l’eusse voulu, méritaient cepen-
dant d'être publiées; elles pourront ètre utiles aux camarades
que le sujet intéressera.

Bien que la rage humaine paraisse inconnue dans le Haut-
Sénégal et Niger, je crois cependant que le fait d'avoir pu,
pendant un an, transmettre de lapin à lapin, par injection
intracranienne, une affection présentant tant de points com-
muns avec la rage paralytique, plaide en faveur de l'existence
de la rage canine dans cette colonie.

RECHERCHES
SUR LES PROPRIÉTÉS DU VIRUS RABIQUE

CONSERVÉ A L'ÉTAT SEC

par D. L. HARRIS,

Directeur du laboratoire municipal de pathologie et de bactériologie,
Saint-Louis (États-Unis).

La valeur du traitement antirabique de Pasteur une fois uni-
versellement reconnue, beaucoup de travaux ont été entre-
pris par d’autres investigateurs qui ont essayé, par différentes
modifications à la méthode de Pasteur, de faciliter la prépa-
ration du matériel antirabique. Dans les petits laboratoires, où
les malades sont en petit nombre, le travail journalier néces-
saire pour avoir en tout temps une série complète de moelles
empèche l’entreprise de ce trartement.

Nous ne voulons pas passer en revue les nombreuses
méthodes proposées pour la simplification du traitement. Il
suffit, pour le but de cet article, de noter que Vansteenberghe (1)
a décrit une méthode pour la préservation du virus. Cet auteur
a trouvé que, lorsque le cerveau est rapidement desséché dans
le vide, sa virulence est conservée pendant plusieurs mois.
Marie (2), Remlinger et Nouri (3), Harvey et Mac Kendrick (4),
et d’autres, ont répété avec succès ces expériences, dont le fait
essentiel est que le matériel doit être étendu en couche très
mince et desséché dans un vide sulfurique rapidement produit.
La quantité de substance conservée par cette méthode est trop
petite pour être d'aucune valeur dans le traitement antirabique.

Nous (5) avons décrit une méthode (6) à l’aide de laquelle les

(4) VANSTEENBERGHE, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1903, t. LV, p. 1046.

(2) MARIE, L’élude expérimentale de la rage. Encyclop. scient., 1909.

(3) ReuunGer et Nour, Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1908, t. LXIV,
p. 945.

(4) Harvey and Mc Kexprick, Theory and practice antli-rabic immunization,
43 pages in-4°. Calcutta, 1907.

(5) Harris et SRACKELL, Journ. Infect. Dis., 1911, &. VITI, p. 47.

(6) SHACKELL, Amer. Journ. of Physiol., 1909, &. XXIV, p. 325.

PROPRIÉTÉS DU VIRUS RABIQUE CONSERVÉ A L'ÉTAT SEC 733

cerveaux et les moelles peuvent être desséchés ?n toto, et la
virulence de ces organes peut ètre démontrée après plusieurs
mois. Cette méthode consistait premièrement à congeler le
cerveau avec un mélange de sel et de glace, et, ensuite, sans
le laisser fondre, à le dessécher dans le vide sulfurique. De
nombreux essais ont prouvé que la virulence restante était de
{ p.100 de la quantité primitive. Il à fallu 0 c.c. 2 d’une dilution
de 14 p. 100 (0 gr. 002) d'une moelle sèche pour provoquer la
rage dans le délai usuel, tandis que 6 c.c. 2 d’une dilution de
1 p. 10.000 (0 gr. 00002) de moelle fraîche étaient suffisants
pour produire la maladie dans le même temps.

Nous croyons que la dessiccation des moelles, d’après la
méthode de Pasteur, produit une concentration progressive
des sels et d’autres substances solubles contenues normale-
ment dans les centres nerveux et que la destruction du virus
est proportionnelle à cette concentration. D'un autre côté,
quand les moelles sont successivement congelées, puis dessé-
chées, la concentration des substances solubles et toxiques est
évitée. Notre opinion est que le succès des expériences de
Vansteenberghe dépend de la congélation du matériel dans le
vide rapidement produit, et de la dessiccation sans concentra-
tion.

Depuis la publication de notre premier travail, j'ai essayé
différentes: méthodes: dans le but d'augmenter la somme de
virulence restant après dessiccation complète.

J'ai trouvé que, plus complètement et plus rapidement le
matériel est congelé, plus grande est la somme de virulence
conservée. Quand les cerveaux et les moelles ont été congelés
avec de la neige de CO° et ensuite desséchés, d’après la méthode
que nous allons décrire, on peut conserver de 30 à 50 p. 100
de leur virulence primitive. Il est préférable de réduire le
matériel en poudre pour en faire des épreuves.

Les détails de la méthode sont les suivants : Un ou plusieurs
cerveaux ou moelles sont écrasés dans un mortier de porce-
laine en ajoutant, goulte à goulte, une petite quantité d’eau
jusqu'à ce qu'on obtienne une pâte épaisse et homogène. Un
peu de neige d'acide carbonique est ajoutée lentement à cette
pâte, qui doit ètre constamment agitée durant l'opération pour
éviter de la transformer en une masse solide. Après congélation

13%. : ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

complète, le matériel est aussi fragile que du verre; alors, on
le pulvérise, et très facilement. L'addition d'un peu de neige
de temps en temps est nécessaire pour empêcher le mélange
de se fondre. Le mélange de cerveau et de neige doit ètre
transféré immédiatement dans un vase froid et placé au fond
d'un exsiccateur, préalablement à demi enfoncé dans un
mélange de sel et de glace à une température de —18 degrés
centigrades. Dans la partie supérieure de l’exsiccateur, un vase
contenant de l'acide sulfurique repose sur un réseau de cuivre,
de telle manière que l'air cireule librement entre le vase conte-
nant les moelles congelées et l’exsiccateur. On place l'acide à la
partie supérieure du dessicateur pour éviter sa solidificalion,
qui se fait quand elle est trop près du mélange réfrigérant. Le
vide doit mesurer moins de 2 millimètres de mercure et l’exsic-
cateur doit être faiblement agité d'heure en heure pour répandre
l’eau absorbée partout dans le vase renfermant l'acide. Un
seul cerveau ou moelle traité de cetle manière sera complète-
ment desséché entre trente-six et quarante-huit heures : mais,
jusqu'à la fin de lopération, la température ne doit pas
dépasser — 10 degrés centigrades.

Le produit desséché est une poudre très légère et assez
hygroscopique. Il absorbe rapidement l'humidité atmosphérique
jusqu'à 3 p. 100 ; alors, il se ramollit et, en quelques heures,
perd toute sa virulence. Pour le protéger de toute humidité,
nous l'avons scellé dans de petits tubes en verre.

Beaucoup d'expériences ont démontré que l'injection intra-
cérébrale de 0 gr. 00002 de moelle desséchée produit les symp-
tômes de la rage chez des lapins au 6° jour, et la mort au 7°
ou 8. L'injection de 0 gr. 00001 d'un mélange de cerveau et
de moelles desséchés et conservés pendant un mois à une
température de 8 degrés à 10 degrés centigrades, à l'abri de la
lumière, avait produit la rage; après deux mois de conserva-
tion, sa virulence avait diminué de moitié; après trois mois,
injection de 0 gr. 00005 était suivie de paralysie en sept
jours. Quand le matériel est conservé en présence de P°0°, sa
virulence diminue plus rapidement que lorsqu'il est conservé
en présence de SO:IF.

Les lapins et les chiens peuvent ètre immunisés rapidement
avec ce matériel par la méthode de Hügyes. Nous avons immu-

PROPRIÉTÉS DU VIRUS RABIQUE CONSERVÉ A L'ÉTAT -SEC 735

nisé des chiens avec des moelles desséchées et conservées
depuis trois mois.

Des expériences sont en voie d'exécution pour déterminer
exactement les effets de la température, de la lumière et des
substances chimiques sur la rapidité de la perte de la virulence.
On peut si facilement peser cette poudre et déterminer si
exactement ses propriétés, à n'importe quel moment, que des
études sur ce sujet peuvent produire des données importantes.
Les avantages de posséder du matériel d’une virulence connue
el relativement permanente sont évidents.

oo

Le Gérant : G. MAssox.

Paris. — L. MARETHEUXx, imprimeur, {, rue Cassette.

62: ANNÉE OCTOBRE 1912 N2"10

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

LA COAGULATION DU SANG
ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE
par les Drs J. BORDET et L. DELANGE

(Suite et fin.
S Il. — SACTION DE QUETYES AVEC LE SÉRUM.
S II LA RÉACTION DES PLAQUETTES AVEC LE S

Naunyn, Rauschenbach, Foa et Pellacani, Wooldridge, ont
signalé l’action accélératrice de certains extraits d'organes
(muscles, rate, foie, Intestin, etc.), sur la coagulation du
sang. Les travaux de Delezenne, de Spangaro, d'Arthus, ont
montré combien la coagulation est hâtée lorsque le sang peut
se mélanger, lors de la saignée, à des traces de suc de la plaie
opératoire, Arlhus a vu que le suc de tissu ne contient pas de
thrombine préformée, car, même en milieu calcifié, il ne
coagule pas la solution pure de fibrinogène. Morawitz, Fuld et
Spiro ont mis en évidence ce fait capital que la teneur du
sérum en thrombine s'élève considérablement lorsqu'on le
mélange à l'extrait de tissus. Ces auteurs ont déduit de cette
constatation que la thrombine nait de la réaction de deux
substances. l’une existant dans les cellules de nombreux tissus
— et aussi dans les cellules blanches du sang, — l’autre
répandue dans le plasma dont le sérum dérive. Fuld et Spiro
ont désigné ces matières, la première sous le nom de cyto-
zyme, la seconde sous le nom de plasmozyme. Morawitz les
a appelées respectivement thrombokinase et thrombogène.

47

138 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

D'après Morawitz et les autres auteurs qui se sont occupés de
la thrombokinase ou cytozyme, cette substance est thermo-
labile ; cette opinion ne concorde nullement avec nos obser-
vations.

Nos expériences nous ont montré que les suspensions de
plaquettes lavées se rapprochent beaucoup des extraits de
tissus, en ce sens qu'elles sont aptes, au contact du sérum, à
fournir la thrombine en abondance. Nous appellerons cytozyme
(désignation appliquée par Fuld et Spiro au principe actif de
l'extrait de tissus) la substance active des plaquettes, et nous
nommerons sérozyme la substance à laquelle le sérum doit son
pouvoir de réagir avec le cytozyme des plaquettes pour fournir
la thrombine.

Exp. XIII. — Du plasma oxalaté très limpide de lapin, oxalaté à 1 p. 1000
est additionné de 4 volumes d'EPCa (1). En raison de la pauvreté en pla-
quettes, la coagulation s'opère lentement. On défibrine dès qu'elle débute
et l'on obtient un sérum pauvre en thrombine, que l'on conserve jusqu'au
lendemain en vue de diminuer encore son faible pouvoir coagulant. Le
lendemain donc, on prépare les mélanges suivants :

On verse dans deux tubes A et B 0,4 cent. cube d'EPCa et dans un tube
C, 0,5 cent. cube de cette même solution (laquelle sert de véhicule et intro-
duit en même temps un peu de sel calcique). On ajoute à A et B 0,1 cent.
cube de sérum, obtenu commeil vient d’être dit. On laisse tomber ensuite
en A et C une goutte de plaquettes lavées en suspension dans la solution
physiologique oxalatée à 0,5 p. 1000, en B une goutte de cette solution sans
plaquettes. Bref, l'un des tubes (A) renferme à la fois du sérum et des
plaquettes, les deux autres contiennent uniquement, soit du sérum, soit
des plaquettes. Ouelques minutes plus tard, on introduit dans les trois
tubes 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. La coagulation en bloc
survient dans À en 3 à #% minutes, C ne se coagule jamais, B reste
liquide ou n’est que partiellement coagulé le lendemain (2).

L'addition de plaquettes, non coagulantes par elles-mêmes,
à une dose de sérum d’ailleurs faible, a donc eu pour effet de
rendre le liquide énergiquement coagulant. Il convient de
rappeler que les plaquettes ont été, grâce à un lavage soigneux,
débarrassées entièrement du plasma dans lequel elles bai-

(1) Rappelons une fois pour toutes que EPCa signifie solution physiolo-
gique de NaCI à 9 p. 1000 contenant environ un tiers p. 1000 de CaCP, et que
le plasma dilué dioxalaté est préparé par mélange de 1 volume de plasma
limpide oxalaté à 1 p. 1000, avec 4 volumes de solution physiologique oxala-
tée à 2 p. 1000.

(2) La coagulation pénible qui s'opère en B tient naturellement à ce que
ce mélange contient un peu de sérum, d’ailleurs pauvre en thrombine.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 739

gnaient. Au surplus, il est aisé de prouver que les propriétés
de la suspension de plaquettes ne sont nullement dues à une
souillure éventuelle par des traces de plasma :

Exr. XIV. Identique à la précédente, sauf que dans les tubes A et C on
introduit, au lieu d'une goutte de plaquettes, une goutte de plasma oxalaté
très limpide. On ajoute après quelques minutes le plasma dioxalaté. Les
mélanges sont encore liquides le lendemain.

Nous venons de voir que les plaquettes sans le secours du
sérum, et même en milieu calcifié, ne libèrent pas de throm-
bine. Ajoutons qu'elles n’en libèrent pas davantage lorsque le
contact avec le liquide calcifié dure longtemps. Elles n’en
libèrent pas non plus au contact d’eau distillée (très légèrement
calcifiée). à

Morawitz, Fuld et Spiro ont vu que la production de
thrombine dans le mélange de sérum avec l'extrait de tissus
exige la présence de sels calciques solubles. Ceux-ci sont
également nécessaires à la réaction qui s'établit entre les
plaquettes et le sérum ; en milieu oxalaté, il ne $e forme pas
de thrombine. Les plaqueltes ne favorisent nullement la
coagulation du plasma par le sérum en milieu décalcifié;
l'expérience suivante ‘démontre au surplus la nécessité des
sels calciques :

Exr. XV. — Deux tubes A et B contiennent {0,35 cent. cube d'EPCa et
0,1 cent. cube de sérum (obtenu comme celui des expériences précédentes).
Le tube A reçoit en outre 0,1 cent. cube d’oxalate à 0,5 p. 100. On ajoute
alors aux deux tubes une goutte de plaquettes. Après un quart d'heure de
contact, on introduit en B (qui n'a pas élé oxalaté antérieurement) 0,1 cent.
cube d'oxalate à 0,5 p. 100, et, 5 minutes plus tard, on additionne les deux
tubes de 0,5 cent cube de plasma oxalaté dilué de % volumes de solution
physiologique oxalatée à 1 p. 1000 (plasma dilué monoxalaté). Le liquide
B se prend en masse en une minute, l’autre est encore fluide le lendemain.

On le voit, le mélange plaquettes-sérum ne fournit la throm-
bine qu'à la condition d’être réalisé en milieu calcifié. Mais si
cette condition est remplie, le mélange peut, mème s'il a été
ultérieurement oxalaté, coaguler le plasma oxalaté.

En proportion convenable, le citrate sodique empêche la
réaction même en milieu calcifié. On sait, par les recherches de
Sabbatani, que, sans précipiter les sels calciques, le citrate met
obstacle à leur ionisation, C’est ainsi qu'il s'oppose à leur pré-

740 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cipitation par l’oxalate sodique. Dans un mélange de 0,2 cent.
cube de plasma oxalaté, de 0,1 cent. cube de citrate sodique à
p. 100 et de 0,8 cent. cube d'EPCa, on ne constate pas l’appa-
rition d'un trouble d'oxalate calcique, et le mélange ne se
coagule pas. On sait d'autre part que le citrate se comporte
comme l’oxalate, en ce qu'il n'empêche pas la coagulation par la
thrombine lorsque celle-ei a pu se former au préalable : :

Exr. XVI. — Quatre tubes contiennent 0,3 cent. cube d'EPCa et 0,2 cent.
cube de sérum; on ajoute dans À 0,1 cent. cube de solution de citrate à
2 p. 100, et dans C et D même dose de solution physiologique. On laisse
tomber ensuite une goutte de plaquettes en À, B et C. Quinze minutes plus
tard on additionne B (qui n'avait reçu ni citrate ni solution physiologique)
de 0,1 cent. cube de citrate, et l'on verse dans les quatre tubes, immédiate-
ment après, 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. La coagulation en bloc
survient dans B et C en une minute et demie. Dans A et D la coagulation
n'est que partielle le lendemain.

La forte concentration saline s'oppose aussi à la production
de thrombine aux dépens des plaquettes et du sérum. Si l’on
dilue une solution concentrée de sel avec de l’eau distiilée, et si
l'on ajoute du sérum et des plaquettes, 11 y a formation de
thrombine, qui coagule le plasma dioxalaté introduit après
quelque temps. Mais si l'on mélange le sérum et les plaquettes
dans la solution concentrée et si, après quelque temps, on
ajoute l’eau distillée et, immédiatement après, le plasma dioxa-
laté, la coagulation ne s'opère pas :

Exr. XVII. — Une solution de NaCI à 10 p. 100 est additionnée de CaCFË de
telle facon que sa teneur en ce dernier sel soil quadruple de celle de l'EPCa.
On verse dans deux tubes A et B 0,2 cent. cube de cette solution concentrée
et l’on ajoute à B 1,8 cent. cube d’eau distillée. On introduit ensuite dans
chaque tube 0,4 cent. cube de sérum et 3 gouttes de plaquettes. Quarante
minutes plus tard, on ajoute à A 1,8 cent. cube d'eau distillée et immédia-
tement après, aux deux tubes, 1,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. La
coagulation s'opère en B en cinq minutes, À est encore liquide le lendemain.
La teneur saline ne doit donc pas êlre exagérée. Elle peut par contre, sans
que cela nuise à la réaction du sérum sur les plaquettes, être abaissée dans
une forte mesure :

Exe. XVIIL — On introduit dans un tube 0,4 cent. cube d'eau distillée
contenant 0,3 p. 1000 de CaCP. On ajoute 0,1 cent. cube de sérum et une
voutte de plaquettes. Vingt minutes plus tard, on introduit 0,5 cent. cube de
plasma dilué dioxalaté. Coagulation en moins d'une minute. Un mélange
témoin montre que si l’on n'avait pas introduit de sérum, aucune coagula-
lion ne se serail produite.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 74

Reprenons maintenant la première expérience du présent
chapitre (exp. XII), et recherchons dans quelle mesure nous
pouvons diminuer la dose de sérum tout en obtenant encore la
coagulation du plasma dioxalaté. Le sérum éprouvé est obtenu
comme dans les expériences précédentes, c'est-à-dire qu'il
résulte de la défibrination de plasma oxalaté très limpide addi-
lionné de 4 volumes d'EPCa, et qu'il date de vingt-quatre
heures environ.

Exp. XIX. — Ce sérum est introduit à doses variables dans des tubes
contenant 0,5 cent. cube d'EPCa et une goutte de plaquettes. Après un quart
d'heure on ajoute 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. On trouve ainsi
qu'en présence des plaquettes une dose de 0,02 cent. cube de sérum suffit à
provoquer la coagulation. Une dose moilié moindre (0,01) est inopérante : le
mélange est encore liquide le lendemain. La dose minimale aclive se déter-
mine ainsi assez nettement.

On peut d'autre part rechercher, en faisant agir une dose de
sérum assez forte (0,1 ou 0,2 cent. cube par exemple), de
combien on peut diluer la suspension de plaquettes pour qu’une
goutte de cette dilution soit encore capable de provoquer la
coagulation. La numéralion des plaquettes est naturellement
chose difficile; nous nous bornerons à mentionner que les pla-
quettes agissent à dose très faible : si l’on introduit dans un
tube contenant 0,5 cent. cube d'EPCa et 0,1 cent. cube de

sérum, une goutte de suspension de plaquettes assez diluée

pour que le mélange ne présente qu'un trouble extrêmement
faible, presque imperceptible même, le plasma dioxalaté ajouté
ultérieurement se coagule encore.

Il est aisé de déterminer la durée minima de contact entre
les plaquettes et le sérum, que la production de thrombine
exige. Cette détermination n’a d'ailleurs qu'une précision rela-
tive, car les résultats varient bien entendu suivant les condi-
tions de dilution, peut-être aussi suivant la température
ambiante, etc. On doit néanmoins conclure que la réaction
entre les plaquettes et le sérum n'est pas instantanée, elle exige
un temps mesurable, à vrai dire assez court. Citons une expé-
rience :

Exr. XX. — Plusieurs tubes renferment 0,45 cent. cube d'EPCa et 0,05 cent.

cube de sérum. On introduit une goutte de plaquettes, puis au bout de
temps variables, 0,5 cent, cube de plasma dilué dioxalaté. On trouve ainsi

742 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

que le mélange où le plasma a été ajouté une minute et demie après les
plaquettes, se coagule en trois minutes et demie. Par contre, le mélange où
le plasma a été ajouté 45 secondes après les plaquettes, est encore liquide
une heure plus tard. Ce n'est qu'au bout d’une heure 45! qu'une coagulation
lâche et partielle s'y effectue.

On a depuis longtemps reconnu que la thrombine ne se com-
porte pas, à proprement parler, comme les ferments, qui peuvent
modilier des quantités quasi illimitées de substance et ne sem-
blent guèré se consommer en agissant. Une dose donnée de
thrombine ne peut solidifier qu'une dose donnée de fibrino-
gène. Aussi, par des expériences analogues à celles qui pré-
cèdent, constate-t-on que la coagulation s'opère moins facile-
ment lorsqu'on emploie, au lieu de plasma dioxalaté dilué au
cinquième, du plasma dioxalaté non dilué. Le contraste est
beaucoup plus frappant si l’on à recours à la technique de
l’oxalatation séparée.

Exp. XXI. — Quatre tubes ABCD contiennent 0,4 cent. cube d'EPCa,
0,05 cent. cube de sérum, une goutte de plaquettes. Un quart d'heure après
la confection de ces mélanges, on ajoute à A 0,5 cent. cube de plasma dioxa-
laté dilué (obtenu comme d'habitude par mélange de 1 vol. de plasma
oxalaté avec 4 vol. de solution physiologique foxalatée à 2 p. 1000), à B
0,5 cent. cube de plasma dioxalaté non dilué. Quant à CG et D, on les oxalate
à 4 p. 1000 (par mélange avec 0,1 cent. cube d'oxalate à 0,5 p. 100), puis,
5 minutes plus tard, on les additionne respectivement de 0,5 cent. cube soit
de plasma dilué, soit de plasma non dilué, oxalatés tous deux à 1 p. 1000.
A se coagule en 4, B en 7, C en 8 minutes, D est encore liquide le lende-
main.

Nous avons rappelé antérieurement ce fait que la thrombine
du sérum issu de la coagulation d’un plasma s’affaiblit rapide-
ment par la conservation; plus le sérum a vieilli, moins il se
montre, après oxalatation à 1 p. 1000, apte à coaguler le plasma
oxalaté; nous avons vu que l’atténuation est beaucoup moins
constatable si le sérum n'est pas oxalaté, mais est ajouté à
volume égal de plasma dioxalaté. Il est à peine besoin de dire
que la thrombine issue de la réaction entre le sérum et les pla-
queltes se comporte de même :

Exp. XXII. — On prépare de la thrombine par mélange de sérum et de pla-
quettes en EPCa, et l'on évalue, à différents moments, son énergie coagu-
lante, soit (en l’oxalatant à 1 p.1000), vis-à-vis de volume égal de plasma dilué
mono-oxalaté, soit (sans l’oxalater) vis-à vis de plasma dilué dioxalaté. Les
temps de coagulation sont : suivant la technique de l'oxalatation séparée,

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 743

respectivement quatre et trente minutes pour la thrombine âgée de vingt
minutes ou de deux heures; quand la thrombine est vieille de cinq heures,
elle est incapable de provoquer la coagulation; suivant la technique de la
dioxalatation du plasma, respectivement de deux et de quatre minutes pour
la thrombine âgée de deux heures (ou moins) et de dix heures. On peut donc
être assuré (c'est un fait que nous utiliserons plus loin) de ce qu'un mélange
où la thrombine s’est formée la veille ne se montrera plus capable, si on
l'oxalate séparément, de provoquer à bref délai la coagulation de volume
égal de plasma oxalaté.

La substance propre au sérum, qui réagit avec les plaquettes
pour donner la thrombine, et que nous appelons le sérozyme,
est thermolabile. Elle est détruite par le chauffage d'une demi-
heure à 55°.

D'autre part, le sérum perd également tout pouvoir de réagir
avec les plaquettes lorsqu'on le traite par une dose convenable
de suspension de sulfate de baryte. Bordet et Gengou ont cons-
taté (1) que le contact avec divers précipités minéraux, notam-
ment CaF1E et SO'Ba, prive les plasmas de leur coagulabilité :
les principes actifs adsorbés disparaissent du liquide ambiant;
de même, ces précipités peuvent s'emparer de’la thrombine du
sérum. Un plasma traité par SO‘Ba, incoagulable même en
milieu calcifié par ses propres moyens, se coagule par l’addi-
tion de sérum, à moins que celui-ci n'ait élé lui-même traité

par SO‘Ba.

Exp. XXIIT. — Du sérum (obtenu comme d'habitude par dilution de plasma
oxalaté limpide avec 4 vol. d'EPCa) est introduit, à dose de 1 cent. cube,
dans deux tubes À et B. On laisse tomber dans B, 6 gouttes de solution
physiologique, dans À, 6 gouttes de suspension assez épaisse de SO“Ba (2).
Après un contact d’une demi-heure, on centrifuge et décante; on obtient
ainsi les sérums A et B.

Dans deux tubes AA et BB, contenant 0,4 cent. cube d’'EPCa, on introduit
0,1 cent. cube soit de sérum A, soit de sérum B, puis une goutte de pla-
quettes. Un quart d'heure plus tard, on ajoute 0,5 cent. cube de plasma dilué
dioxalaté ; BB se coagule en trois minutes, AA est encore liquide après deux
jours.

Le sérozyme étant adsorbé par SO‘Ba, le sérum n’est désormais pour les
plaquettes qu'un liquide indifférent. Or, on constate que le plasma se com-
porte de même, c'est-à-dire qu'après traitement par SO‘Ba, il ne se coagule

(4) Annales de l'Institul Pasteur, 1904, p. 36. (Leplasma fluoré).

(2) Le précipité de SO“Ba préparé par mélange de BaCI® avec SO'Na* est
lavé à plusieurs reprises, à l'aide de centrifugations et décantations succes-
sives, par de grands volumes de solution physiologique de NaCI; onle délaie
finalement dans un peu de cette solution, de manière à obtenir une suspen-
sion assez épaisse.

744 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

pas par l'addition de plaquettes lavées. On prépare aisément le plasma
baryté spontanément incoagulable, en mélangeant 30 gouttes de suspension
de SO‘Ba, 4 cent. cubes d'EPCa et 1 cent. cube de plasma oxalaté limpide.
Après plusieurs heures de contact, on centrifuge et décante. Ajoutons que
ce plasma se coagule par addilion de sérum frais, et mieux encore (la coagu-
lation est alors presque instantanée) par l'addition d’un peu de sérum et
d'une goutte de plaquettes.

\

Le fait qu'un tel plasma reste liquide quand on y introduit
des plaquettes sans sérum démontre définitivement que ces
éléments sont incapables de solidifier le fibrinogène pur.
Le plasma baryté représente en réalité un fibrinogène
mieux débarrassé des générateurs de la thrombine que ne
le sont en général les solutions diles pures de fibrinogène que
lon obtient par précipitations successives sous l’influence du
sel concentré. Il est probable que, dans cessolutions, un peu de
sérozyme peut prendre naissance, ce qui explique leur coagu-
labilité, que divers auteurs ont signalée (Morawitz, Nolf), par
addition de plaquettes. Citons une expérience relative au
plasma barvyté :

Exp. XXIV. — Dans trois tubes ABC on introduit 4 cent. cube de plasma
baryté. On ajoute au tube A 3 gouttes de suspension de plaquettes, au tube
B 0,2 cent. cube de sérum (fraîchement obtenu) provenant de plasma oxalaté
limpide recalcifié par 4 vol. d'EPCa, au tube C même dose du même sérum
mais qui au préalable a été additionné d'une trace de plaquettes. A ne se
coagule pas, B se coagule en dix-sept minutes, C en moins d'une minute.

D'autre part, le sérozyme n'est pas absorbé par des globules
sensibilisés, de telle sorte qu'il ne paraît point devoir être iden-
lifié avec l’alexine. Le sérum (obtenu comme d'habitude)
mélangé à un excès de globules de chèvre sensibilisés par du
sérum de lapin antichèvre (chauffé au préalable à 56 degrés),
puis séparé par centrifugation, produit encore de la thrombine
lorsqu'on l’additionne de plaquettes.

. Le mélange sérum-plaquettes, qui coagule presque instanta-
nément le plasma barylé, agit de mème, ainsi qu'il faut s’y
attendre, vis-à-vis de divers liquides contenant du fibrino-
sène, lels que le liquide surnageant obtenu par centrifugation
de l’exsudat péritonéal leucocytaire dont nous avons parlé anté-
rieurement, ou bien encore le liquide surnageant (resalé et
secalcilié) que l’on décante après centrifugation de plasma

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 745

oxalaté traité par l’eau distillée et CO:, et dont il a été question
plus haut. Ces deux liquides, nous l'avons vu, sont quasi-incoa-
gulables spontanément, mais, à vrai dire, peuvent se coaguler
par addilion de plaquettes, ce qui démontre que du sérozyme
peut y prendre naissance. Nous jugeons inutile d'insister sur le
détail de ces expériences. Ajoutons néanmoins, ici, que le sédi-
ment séparé par centrifugation de plasma oxalaté limpide addi-
tionné de. 9 volumes d'eau distillée et traité par C0? se com-
porte comme s'il contenait quelques plaquetles, en ce sens
qu'additionné de sérum, il développe de la thrombine. Ceci
vient corroborer l'idée, exprimée dans notre paragraphe 1°,
que le plasma oxalaté, mème très limpide, contient encore des
traces de plaquettes auxquelles il doit sa coagulabilité par recal-
cification, et dont précisément on peut le priver par l'action
combinée de l’eau distillée et de CO*.

Le sérozyme (ou les substances dont il peut dériver) est-il
largement répandu dans les liquides de l'organisme ? Nous
n'avons examiné à cet égard que l'humeur aqueuse et l’exsu-
dat péritonéal normal. L'humeur aqueuse n’en contient pas:
l'exsudat périlonéal en renferme, mais beaucoup moins qué Île
sérum.

Nous avons vu antérieurement que l’exsudat péritonéal leu-
cocytaire obtenu chez le lapin, ou de préférence chez le cobaye.
par injection de solution physiologique ou de bouillon se coa-
gule paresseusement et peut même fournir, par centrifugation,
un liquide surnageant incoagulable, mais qui se prend en
masse par addition de plaquettes, celles-ci accélérant d’ailleurs
beaucoup, même à dose assez faible, la prise en caillot de
l’exsudat total, d’où la conclusion que les leucocytes sont infé-
rieurs aux plaquettes en ce qui concerne la production de la
thrombine. Cette conclusion est confirmée par l'étude comparée
de l'aptitude des plaquettes et des leucocytes à fournir la
thrombine par mélange avec le sérum. Comme beaucoup d’au-
tres cellules, les leucocytes lavés dont on oblient une suspen-
sion aux dépens d’un exsudat péritonéal libèrent de la throm-
bine au contact du sérum. Mais les suspensions de plaquettes
nous ont paru, à cet égard, beaucoup plus actives : elles agis-
sent encore puissamment, à des dilutions extrêmes, ce qui n'est
pas le cas pour l'émulsion leucocytaire. Nous avons l’impres-

146 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sion que le cytozyme des leucocytes est moins utilisable pour la
coagulation que ne l’est celui des plaquettes, sans doute parce
qu'il reste davantage confiné dans la trame de l'élément cellu-
laire; s'il n’en était pas ainsi, on ne concevrait guère pourquoi
l’exsudat péritonéal, très riche en leucocytes, se coagule plus
vite par l'addition de plaquettes. Cependant le cytozyme des
leucocytes peut être utilisé dans une certaine mesure, puisque
cet exsudat, bien que lentement coagulable, se prend néan-
moins en masse plus vite que le même liquide débarrassé des
cellules, et que, d'autre part, sous l'influence d'une addition
de sérum, l’exsudat se coagule aussi plus vite lorsqu'il contient
encore ses leucocytes que lorsqu'on l'en a dépouillé. Ces consi-
dérations, rappelons-le, sont en harmonie avec celles que sug-
gère la coagulation du sang d'oiseau qui renferme des leuco-
cytes, mais point de plaquettes.

Les auteurs qui se sont occupés des plaquettes croyaient que
les propriétés de ces éléments ne résistaient guère au chauffage ;
il n'en {est rien; le principe actif peut, sans dommage, être
porté à 100 degrés. Nous l'avons vu plus haut, les plaquettes
chauffées un quart d'heure à 100 degrés, ou même qui ont subi,
à quelques jours d'intervalle, trois chauffages pendant cinq à
dix minutes à celte température et ont été ainsi stérilisées, accé-
lèrent encore fortement la coagulation du plasma dilué recal-
cifié. De même, elles ont gardé toute leur aptitude première à
former la thrombine avec le concours du sérum. Le sérozyme
n'est visiblement atteint que si l’on chauffe jes plaquettes à
120 degrés dans l’autoclave :

Exp. XXV. — Quatre tubes A, B, C, D contiennent 0, 4 cent. cube d'EPCa
et 0,1 cent. cube de sérum, obtenu la veille par dilution de plasma oxalaté
limpide avec 4 volumes d'EPCa. On laisse tomber en A-une goutte de sus-
pension de plaquettes non chauffée, en B une goutte de suspension chauffée
30 minutes à 65 degrés, en C, une goutte de suspension chauffée 15 minutes à
100 degrés, en D une goutte de suspension chauffée 15 minutes à 120 degrés.
Un quart d'heure plus tard, on ajoute à tous les tubes 0,5 cent. cube de
plasma dilué dioxalaté. A, B se coagulent en 3 minutes, C en 3 min. 10 se-
condes, D est encore liquide au bout de plusieurs heures.

Le liquide transparent que l'on obtient en centrifugeant une suspension
stérilisée est parfaitement actif, même s’il a été conservé pendant trois mois
en tube scellé.

Exr. XXVI. — Trois tubes A, B, C contiennent 0,4 cent. cube d'EPCa,
0,1 cent. cube de sérum; on ajoute à A une goutte de l'extrait limpide de

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 747

plaquettes stérile conservé pendant trois mois, à B une goutte de plaquettes
fraiches. On introduit ensuite, dans les trois tubes, 0,5 cent. cube de plasma
dilué dioxalaté. À se coagule en 2 minutes, B en 3, CG est encore liquide le
lendemain.

La diffusion du cylozyme hors des plaquettes se fait d’ailleurs à froid
assez rapidement : une suspension de plaquettes centrifugées quarante-huit
heures après sa préparation fournit un liquide surnageant qui réagit fort bien
avec le sérum pour donner de la thrombine.

Jusqu'ici nous avons toujours employé du sérum pour provo-
quer sur les plaquettes la réaction qui donne naissance à la
thrombine. Mais on doit évidemment se demander si le prin-
cipe du sérum qui réagit avec les plaquettes n'existe pas déjà,
avec les mêmes propriétés, dans le plasma oxalaté que l’on
vient de recalcifier et qui n’a pas encore eu le temps de subir
les modifications dont le terme est la coagulation. L'expérience
plaide pour la négative. Un tel plasma ne se comporte pas, lors-
qu'on y ajoute des plaquettes, comme le sérum; pour trouver
de la thrombine dans le mélange, il faut attendre un certain
temps, à la vérité pas très long, car on sait qu’un mélange de
plasma recalcifié et de plaquettes se coagule vite et équivaut
donc bientôt à du sérum. Mais dans le mélange sérum-pla-
quettes, l'apparition de thrombine est plus prompte; elle peut,
nous l'avons vu, se produire en moins de deux minutes. En
opérant soigneusement, on peut comparer, au point de vue du
temps qu'exige la production de la thrombine, un mélange de
plaquettes et de plasma dilué que l’on vient de recalcifier, avec
un mélange identique, sauf qu'il contient du sérum issu de la
coagulation antérieure d’un plasma de même composition.

Exr. XXVIIL — Du sérum a été obtenu la veille par mélange de 1 cent.
cube de plasma oxalaté limpide avec 4 volumes d'EPCa. D'autre part, au
moment même de l'expérience, on prépare un mélange identique. On a donc
un sérum et un plasma tout récent, de même composition initiale. Ces deux
liquides sont dilués de 9 volumes d'EPCa. Aussi rapidement que possible,
on distribue alors ces liquides, à dose de 0,5 cent. cube, dans des tubes où
on laisse tomber une goutte de plaquettes. On laisse ce contact entre les
liquides et les plaquettes se prolonger pendant des temps variables et exac-
tement mesurés, puis l’on ajoute 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté.
On trouve ainsi.que le mélange contenant du sérum et où le contact de
celui-ci avec les plaquettes a duré 1 min. 45 secondes se prend en bloc en
4 min. 45 secondes, tandis que le mélange renfermant du plasma et où le
contact de celui-ci avec les plaquettes a duré 3 min. 10 secondes ne se coa-
gule pas. Celui où le contact plasma-plaquettes s'est prolongé 3 min. 20 se-
condes se coagule, mais assez lentement (18 minutes); celui où ce contact a

748 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

été de 4 minutes se coagule en 5 minules. Des témoins établissent, bien
entendu, que la coagulation ne survient pas en l'absence de plaquettes.

Il semble résulter nettement de cette expérience (inutile de
dire que d'autres essais analogues ont donné des résultats con-
cordants) que le plasma recalcifié tout récemment préparé con-
tient non pas Île sérozyme actif, mais seulement une substance
mère dont celui-ci peut dériver (1). La première phase de la
coagulation se signalerait donc par la transformation d’un
« prosérozyme » en sérozyme aple à réagir avec le cylozyme.
Il se pourrait aussi, à vrai dire, que cette première phase se
signalät par la disparition d’une substance antagoniste empê-
chant le sérozyme d'entrer en activité; d’après cette hypothèse,
le sérozyme existerait dans Le plasma, mais ne pourrait agir
qu'au bout d’un certain temps.

Nous reviendrons d'ailleurs sur ce point à propos de la pro-
duction de thrombine dans les mélanges de sérum et de pep-
tone.

Les matériaux aux dépens desquels le sérozyme naît dans le
plasma sont, comme le sérozyme lui-même, peu résistants au
chauffage. Le plasma oxalaté limpide, chauffé à 56 degrés, puis
dilué et recalcifié, est incapable, comme le sérum chauffé à
cette température, de former de la thrombine en présence de
plaquettes.

Exr. XXVIIL. — Du plasma oxalaté très limpide est chauffé une demi-
heure à 56 degrés; le fibrinogène s’y précipite en flocons. On l’addilionne
ensuile de 4 volumes d'EPCa. En même temps, on dilue semblablement du
plasma identique, sauf qu'il n'a pas été chauffé. Cette seconde dilution se
coagule en une heure environ; on obtient ainsi un sérum dont une portion
est chauffée une demi-heure à 56 degrés.

On introduit ensuite dans un tube À 0,2 cent. cube du plasma chauffé dilué,

(1) C'est pourquoi nous avons choisi, pour désigner la substance du sérum
qui réagit avec les plaquettes, le terme de sérozyme et non celui de plas-
mozyme. Morawitz, Fuld et Spiro avaient montré que le suc de tissus (cyLo-
zyme) réagit avec le sérum pour donner la thrombine. À vrai dire, il s’agit
ici de plaquettes, mais nous montrons plus loin que le cytozyme des pla-
quetltes est très vraisemblablement identique à celui des tissus. Or, Fuld et
Spiro admettent que le principe du sérum qui réagit avec les tissus pré-
existe dans le plasma, ils l’appellent plasmozyme; Morawitz, qui partage
cette opinion, l'appelle thrombogène. En conséquence, à part cette restric-
tion que, d'après nous, le sérozyme n’exisle pas dans le plasma au même état
que dans le sérum, les termes de sérozyme, plasmozyme et thrombogène
sont synonymes.

ane

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 749

dans un tube B mème dose du sérum non chauffé dont il vient d'être ques-
tion, et dans un tube C même dose de ce sérum chauffé. On ajoute partout
0,5 cent. cube d'EPCa, une goutte de plaquettes, puis, 20 minutes plus tard,
0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. La coagulation s'effectue en 2 minutes
dans B; les mélanges À et C sont encore liquides le lendemain.

L'expérience donne le mème résultat si, au lieu de chauffer
le plasma et de le diluer ensuite, on le dilue d’abord et le
chauffe immédiatement après à 56 degrés.

Considérons maintenant plus attentivement la réaction qui
s'établit entre les plaquettes et le sérum, c’est-à-dire entre le
cytozyme et le sérozyme, pour donner de la thrombine. L’une
des substances agit-elle sur l’autre à la facon d’un ferment, ou
bien se consomme-t-elle par le fait mème qu'elle est entrée en
réaction ? Par exemple, un volume donné de sérum pourra t-il,
après s'être trouvé en contact avec une dose notable de pla-
quettes, fournir encore de la thrombine lorsqu'on lui fait
rencontrer ensuite une dose nouvelle de ces mêmes éléments?
Le premier contact ne l'a-t-il pas épuisé de son sérozyme? Le

problème du mode de réaction des générateurs de la thrombine

a déjà préoccupé les chercheurs; nous rappellerons notamment
une expérience due à Nolf : il y a plus de thrombine dans le
sérum issu de sang complet que dans celui qui provient de
plasma limpide, mais on constate d'autre part que le second
sérum est plus apte que le premier à fournir de la thrombine
par mélange avec de l'extrait de rate. D'après Nolf, il y a, dans
la coagulation du sang complet, consommation de thrombogène,
résultant, suivant toute vraisemblance, d’une sécrétion par les
leucocytes du sang d’une quantité plus ou moins considérable de
thrombozyme qui s'unit pendant la coagulalion à l'excès de
thrombogène du plasma. L'expérience est intéressante, mais ne
présente pas toute la rigueur voulue, car elle est trop complexe,
et c'est pourquoi l'interprétation de l'auteur n’est que vraisem-
blable. Il convient d'éliminer les facteurs étrangers, notamment
de mettre hors de cause le fibrinogène et d'éviter ainsi la forma-
tion d’un caillot au cours de la réaction; c’est d'autant plus
nécessaire que, d’après certains auteurs, particulièrement Nolf, le
fibrinogène peut intervenir dans la production de la thrombine.
Il y à donc lieu de mettre en présence uniquement les deux
facteurs de la réaction, le sérozyme sous forme de sérum, le

750 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cytozyme sous forme de plaquettes, sans mélange d’autres
éléments cellulaires. Il faut mettre en œuvre, en d’autres
termes, une technique semblable à celle qui sert à démontrer
la fixation des anticorps sur les antigènes, des sensibilisatrices
sur les globules rouges, par exemple. L'expérience consiste donc
à mélanger à une suspension épaisse de plaquettes, une dose
modérée de sérum. La formation de thrombine qui s'effectue
alors consomme-t-elle le sérozyme? S'il en est ainsi, le sérum
séparé le lendemain par centrifugation doit se montrer inca-
pable de former de nouvelle thrombine par contact avec de
nouvelles plaquettes. Tel est bien le résultat de l'expérience,
dans laquelle on met à profit le fait qu'une thrombine vieillie
n’est plus capable de coaguler rapidement le plasma oxalaté
lorsqu'on emploie la technique de l'oxalatation séparée :

Exe. XXIX. — Du sérum a été comme d'habitude obtenu la veille par dilu-
tion de 1 vol. de plasma limpide dans 4 vol. d'EPCa. On en introduit 0,4 cent.
cube dans 2 tubes A et B, et 0,2 cent. cube dans AA et BB. On ajoute aux
quatre tubes de l'EPCa (0,6 cent. cube dans A et B, 0,8 cent. cube dans AA
et BB) de façon à ce que partout le volume total soit de 1 cent. cube. On
laisse tomber ensuite dans B et BB, deux gouttes de solution physiologique
oxalatée à 0,5 p. 1000 et dans A et AA, deux gouttes d'une suspension épaisse
de plaquettes dans cette mème solution. Le lendemain matin, on centrifuge
les tubes qui contiennent des plaquettes et où de la thrombine a pu se pro-
duire, et l'on décante les liquides surnageants A et AA.

Chacun des quatre liquides est ensuite distribué dans deux tubes, à dose
de 0,45 cent. cube.

Le premier des deux tubes provenant soit de A, soit de B, soit de AA, soit
de BB, est additionné d’une goutte de suspension (plus diluée que la précé-
dente) de plaquettes; le second de chaque groupe de deux tubes est additionné
d'une goutle de la solution physiologique oxalatée à 0,5 p. 1000. Un quart
d'heure plus tard, les huit tubes sont additionnés de 0,1 cent. cube de solution
d'oxalate à 0,5 p.100 {ils sont donc oxalatés à environ 1 p. 1000), puis, 5 mi-
nutes après, de 0,5 cent. cube de plasma dilué oxalaté à 1 p. 1000 (obtenu
par mélange de 1 p. de plasma oxalaté avec 4 p. de solution physiologique oxa-
latée à 1 p. 1000). La coagulation survient en 6 minutes dans le tube auquel
on vient d'ajouter des plaquettes et renfermant du liquide provenant de B,
en 12 minutes dans le tube à plaquettes contenant du liquide de BB.

Les mélanges provenant de A et de AA, avec ou sans addition récente de
plaquettes, ne se coagulent qu'au bout de quatre heures environ, les autres
tardent encore davantage, ou même ne se coagulent que fort incomplè-
tement.

On voit clairement comment les choses se sont passées : En A et AA, il
s'est formé de la thrombine, et celle-ci conservée jusqu'au lendemain ne peut
plus provoquer qu'une coagulation lente lorsqu'on l’oxalate à 1 p.1000 etqu'on
la mélange au plasma oxalaté.

Corrélativement à cette formation de thrombine, le sérum contenu dans A

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 751

et AA, en réagissant avec les plaquettes, a perdu l'aptitude à réagir avec de
nouvelles plaquettes. Dans B et BB, au contraire, pas de plaquettes au début,
pas de formation de thrombine ; le sérum que ces tubes recèlent est encore
parfaitement capable, le lendemain, de réagir avec des plaquettes pour donner
une thrombine qui, étant toute fraiche, provoque très rapidement (6 et 12 mi-
nutes suivant la dose de sérum) la coagulation du plasma oxalaté.

Il résulle immédiatement de cette expérience que le sérum
issu de la coagulation de plasma oxalaté et recalcifié riche en
plaquettes, sérum abondamment pourvu de thrombine, doit se
montrer peu apte à réagir avec la suspension de plaquettes,
pour la raison précisément que le sérozyme a dû être consommé
par les plaquettes lors de la coagulation. C'est ce que l’expé-
rience vérilie; il est aisé de comparer de tels sérums avec celui
qui dérive de plasma limpide :

ExP. XXX. — On dispose de plasma oxalaté À qu'une centrifugation modérée
a débarrassé des éléments cellulaires sauf des plaquettes, et de plasma lim-
pide énergiquement centrifugé B. À une portion de celui-ci, on restitue des
plaquettes (par addition d'un peu de suspension épaisse de plaquettes lavées),
de façon à obtenir un liquide AA plus trouble que ne l’est le plasma modé-
rément centrifugé. Chacun de ces trois plasmas est additionné de 4 vol.
d'EPCa. Les sérums obtenus A, B, AA, sont conservés jusqu'au lendemain,
puis, pour chacun d'eux, on prépare quatre dilutions dans l'EPCa, l'une au
cinquième, la seconde au dixième, la troisième au vingtième, la quatrième
au cinquantième.

On évalue tout d'abord l'énergie coagulante de chacune des trois dilutions
au cinquième, vis-à-vis de volume égal de plasma dilué dioxalaté. On trouve
que le mélange contenant le sérum A se coagule en 9 heures environ, celui
renfermant le sérum AA en 5 heures; celui à base de sérum B est encore
liquide après 10 heures, on le trouve coagulé le lendemain. Ce résultat corro-
bore la notion que les ‘sérums dérivant de plasmas à plaquettes sont plus
riches en thrombine.

D'autre part, on répartit dans des tubes 0,5 cent. cube de chacune des dilu-
tions de chacun des trois sérums; on ajoute une goutte de suspension de
plaquettes, puis un quart d'heure plus tard on introduit 0,5 cent. cube de
plasma dilué dioxalaté. Voici les temps de coagulation observés :

DILUTION AU. . . . 4/5 4/10 4/20 4/50
DércéroneAtee She Smin: EM) ce Se
De-sérum AA. .\M"h."30 min. 2 £? ea

De sérum B . . .|3-4 minutes.|3-4 minutes.|3-4 minutes.| Coagulation
le lendemain.

(1) Le signe w signifie que le mélange reste indéfiniment liquide.

752 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

On voit combien est faible, dans le cas de sérum issu de
plasma à plaquettes, le pouvoir de réagir avec ces éléments. Le
sérum provenant de la coagulation de sang complet se comporte
de même. L'expérience montre toutefois que ce dernier sérum
possède encore, mais à un assez faible degré, le pouvoir de
former de nouvelle thrombine en présence de plaquettes. La
dose de sérozyme que le sang peut livrer est donc un peu supé-
rieure à celle qu'exige la saluration des affinités, pour ce prin-
cipe actif, des éléments cellulaires sanguins.

Il est un phénomène sur lequel Bordet et Gengou (1) ont
insisté el que nos expériences sur les plaquettes permettent
d'expliquer clairement. C'est Le phénomène dit de « l’excito-
production ». Si l’on dilue par 4 volumes d’eau distillée du
plasma salé à 5 p. 100, la coagulation s'effectue, on le sait, au
bout d’un lemps assez notable, une demi-heure par exemple.
Mais elle est considérablement accélérée si, immédiatement
après dilution, le plasma salé est adiilionné d’un peu de sérum
issu de la coagulation antérieure d'un plasma dilué de même
composition. Et, chose curieuse, on trouve que la prompte coagu-
lation ainsi déchainée n’est pas en réalilé passive, c’est-à-dire
due uniquement à la thrombine propre au sérum ajouté, car
elle se signale par une abondante néoformation de thrombine.
Le sérum n’agit pas essentiellement grâce à la thrombine qu'il
apporte, mais parce qu'il exeile, au sein du plasma el aux
dépens des matériaux appartenant à celui-ci, la production de
la thrombine qui, sans son intervention, n'aurait apparu que
notablement plus tard pour réaliser la coagulation spontanée.
Le chauffage à 56 degrés, enlevant au sérum ce pouvoir exeito-
producteur, supprime sa propriété d'accélérer la coagulation du
plasma salé dilué; d'autre part, ce pouvoir résiste mieux que
la thrombine à la conservation à la température ordinaire.

Les recherches de Bordet et Gengou n'avaient pu élucider-
complètement ce phénomène ; Nolf l'a interprété en attribuant
au sérum un rôle thromboplastique analogue à celui que Joue
le contact avec les corps solides. L’explication exacte en est
désormais aisée : Le plasma salé, même bien centrifugé, contient
un peu de cytozyme que le sel à extrait des plaquettes. D'autre:

1) Ces Annales, 190%, p. 4103.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 753

part, le sérum issu de la coagulation contient un excès de séro-
zyme. Si donc, à du plasma salé qu’on vient de diluer,on ajoute
du sérum, la rencontre s'effectue entre les deux principes, de la
thrombine se forme et la coagulation s'opère à bref délai.

Pour faire l'analyse expérimentale du phénomène d'excito-
production, il est commode de se servir de plasma oxalaté qui,
modérément centrifugé, n’a pas été complètement débarrassé
de ses plaquettes et qui (comme le plasma salé) recèle le cyto-
zyme en quantité très suffisante. Le plasma est chauffé à
56 degrés, puis recalcifié ; ainsi traité, il est incoagulable pour
deux raisons : le chauffage non seulement a altéré le fibrinogène,
mais encore, conformément à ce que nous avons vu plus haut,
a enlevé au plasma l'aptitude à produire le sérozyme indispen-
sable à la formation de la thrombine. Mais, nous le savons, le
cytozyme résiste parfaitement au chauffage. L'addition d’un
peu de sérum au plasma chauffé y fera, en conséquence, naître
de la thrombine. Le mélange restera fluide, puisque le fibri-
nogène est altéré, mais se montrera capable de solidifier rapi-
dement le plasma dioxalaté.

ExP. XXXI. — Du plasma oxalaté contenant des plaquettes est chauffé une
demi-heure à 55°8. On vérifie tout d'abord que le mélange d’un tel plasma
avec 4 vol. d'EPEa non seulement ne se coagule pas, mais encore ne se
montre, à aucun moment, capable de coaguler volume égal de plasma dilué
dioxalaté.

Cela étant établi, on introduit dans un tube A 0,2 cent. cube de plasma
chauffé et 0,8 cent. cube d'EPCa, et dans ün tube B 1 cent. cube d'EPCa. On
ajoute aux deux tubes 0,2 cent. cube de sérum, obtenu comme d'habitude
la veille par dilution de plasma oxalaté limpide avec 4 vol. d'EPCa. Quarante
minutes plus tard, on additionne les deux mélanges de 1 cent. cube de plasma
dilué dioxalaté. Le mélange A se coagule en quatre minutes, le mélange B
est encore liquide le lendemain.

L'expérience donne le même résultat si, au lieu de chauffer
d’abord le plasma et de le diluer ensuite, on le chauffe immé-
diatement après dilution par quatre volumes d'EPCa.

L'expérience telle qu’elle est réalisée ci-dessus permet aussi
de démontrer que le plasma oxalaté, lorsqu'il est soigneuse-
ment débarrassé des plaquettes par la centrifugation, ne con-
tient que des traces de cytozyme trop faibles pour permettre la
formation de thrombine en quantité notable :

Exe. XXXIT. -- On répète l'expérience ci-dessus, en préparant en outre un
mélange C constitué comme suit : Du plasma oxalaté bien dépourvu de
48

75% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plaquettes, est chauffé une demi-heure à 5508; on en prend 0,2 cent. cube
qu'on additionne de 0,8 cent. cube d'EPCa et de 0,2 cent. cube de sérum.
Quarante minutes plus tard, on introduit 1 cent. cube de plasma dilué dioxa
laté. Le mélange est encore liquide le lendemain.

Les conditions réalisées dans l'expérience XXXI sont l'image
suffisamment fidèle de celles qui président au phénomène
d’excito-production signalé par Bordet et Gengou, lequel en
conséquence n'offre plus rien de mystérieux. Ajoutons que
d’après ces auteurs, le contact avec un corps mouillable tel
que le verre n'est pas nécessaire à la production de thrombine,
sous l'influence du sérum, au sein du plasma. De même, nous
pensons que ce contact n'intervient pas dans la réaction entre
le sérozyme et le cytozyme des plaquettes.

S IT. — LE cyToZYME DU SUC DE MUSCLES.

Comme nous l'avons rappelé, Morawitz a vu que le suc de
tissus développe de la thrombine lorsqu'en milieu calcifié on
le mélange à du sérum. Ce fait sert de base à la théorie d'après
laquelle la thrombine dérive de deux générateurs distincts.

On admettait que le principe actif de l'extrait d'organes
(cytozyme) ne résiste pas à l’action des températures élevées.
Nous avons constaté le contraire en opérant sur l'extrait de
muscles, lequel à vrai dire devient presque inactif lorsqu'on le
chauffe à 120 degrés, mais garde ses propriétés lorsqu'on l’ex-
pose pendant un quart d'heure à la température de 100 degrés.
Il se comporte donc comme la suspension de plaquettes, en ce
sens que, même chauffé, 1l accélère la coagulation du plasma
oxalaté limpide que l’on vient de recalcifier, et d'autre part
donne naissance à de la thrombine lorsqu'on l’additionne de
sérum.

Exr. XXXIII. — Un fragment de muscle de lapin est broyé et additionné
de solution physiologique contenant 0,5 p. 1.000 d'oxalate. La suspension très
trouble ainsi obtenue est passée sur toile métallique à mailles fines. Une
portion du liquide est conservée telle quelle, une autre est chauffée le len
demain pendant un quart d'heure à 100 degrés, en même temps qu'une
suspension de plaquettes de lapin et un extrait de muscle de bœuf préparé
comme l’a été l’extrait de muscle de lapin.

On verse dans huit tubes 0,3 cent. cube de plasma oxalaté bien limpide
et l’on ajoute 1,2 cent. cube d'EPCa. Immédiatement après, on laisse tomber

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÉSE DE LA THROMBINE 55

dans l’un des tubes (a) une goutte de suspension de plaquettes non chauffée,
dans un second tube une goutte de plaquettes chauffée (b). De mème,
quatre tubes reçoivent soit de l'extrait non chauffé de muscle de Japin (c),
soit cet extrait chauffé (d), soit de l'extrait de muscle de bœuf non chauffé (e),
soit ce même extrait chauffé (f). Aux deux tubes restants g et h, on n’ajoute
rien. Résultat : dans g et h la coagulation s'opère en 22 à 26 minutes (1), dans
a en 6', dans b en 7', dans c en #!, dans 4 en 3, dans e en 14!, dans f en 13.

On constate, soit dit en passant, que le muscle de bœuf est
nettement inférieur au muscle de lapin au point de vue de
l'accélération imprimée à la coagulation du plasma oxalaté
recalcifié ; il agit toutefois nettement.

Exe. XXXIV. — Cinq tubes contiennent 0,4 cent. cube d'EPCa et 0,1 cent.
cube de sérum obtenu comme d'habitude la veille par dilution de 1 vol. de
plasma oxalaté limpide avec 4 vol. d'EPCa, Au tube 1 on n'ajoute rien; dans
les tubes 2, 3, 4, 5, on laisse tomber une goutte, respectivement de plaquettes
non chauffées, de plaquettes chauffées à 100 degrés, d'extrait non chauffé de
muscle de lapin, de ce même extrait chauffé à 100 degrés. Un quart d'heure
plus tard, on ajoute aux mélanges 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté.
Résultat : 1 est encore liquide le lendemain; la coagulation s'opère en 2 à
3 minutes dans les autres tubes.

Nous avons vu plus haut que le chauffage vers 56 degrés
enlève au sérum (ou au plasma) le pouvoir de réagir avec les
plaquettes pour donner de la thrombine. Il en est de même
pour ce qui concerne la réaction avec le suc de muscles (2) :

Exp. XXXV. — On établit tout d'abord qu'un mélange de 0,3 cent. cube
d'EPCa et de 0,2 cent. cube de sérum non chauffé, auquel on ajoute volume
égal (0,5 cent. cube) de plasma dilué dioxalaté, ne se coagule pas (il est
encore liquide le lendemain). Il en est de même, cela va de soi, d'un mélange
semblable, sauf que le sérum non chauffé y est remplacé par 0,2 cent. cube
de ce même sérum préalablement chauffé une demi-heure à 55°4,

Cela étant élabli,on verse dans six tubes 0,3 cent. cube d'EPCa et 0,2 cent.
cube de sérum, soit non chauffé (A, B, C), soit qui a été chauffé une demi-
heure à 55°4 (D,E, F). On laisse tomber en A et D une goutte de plaquettes,
en B et E, une goutte d'extrait de muscles de lapin, en C et F une goutte

(41) Ce temps de coagulation du plasma limpide dilué et recalcifié est rela-
tivement court. Cela tient à ce que la température du laboratoire était fort
élevée (23°) le jour où cette expérience a été réalisée.

(2; Nous ne sommes donc pas d'accord avec les auteurs (Blaizot notam-
ment) d'après lesquels le plasma oxalaté chauffé à 56 degrés se comporte
comme s'il contenait encore du thrombogène. On le sait, le thrombogène
correspond à notre sérozyme. Or, nous avons constaté que si l’on ajoute à
0,2 cent. cube de plasma oxalaté (chauffé,au préalable une demi-heure à
55°8) 0,8 cent. cube d'EPCa et un peu d'extrait de muscle, il ne se forme
pas de thrombine dans le mélange.

756 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

d'extrait de muscle de bœuf, puis, 20 minutes plus tard, 0,3 cent. cube de
plasma dilué dioxalaté. La coagulation s'opère en une et demie à deux et
demie minutes dans les tubes AÀ,B, C; les mélanges D, E, F sont encore
liquides le lendemain.

Dans les expériences qui précèdent, l'extrait de muscle se
comporte exactement comme la suspension de plaquettes. Le
cylozyme de l'extrait est-il entièrement identique à celui des
plaquettes? S'il en est ainsi, on doit prévoir que du sérum
dépouillé de son sérozyme par contact préalable avec des pla-
quettes, se montrera inactif non seulement à l'égard de nou-
velles plaquettes (ce que nous savons déjà), mais aussi vis-à-vis
d'extrait de musele, et qu'inversement le traitement par le
suc de muscle doit enlever au sérum son aptitude à réagir avec
les plaquettes. C'est bien dans ce sens que l'expérience répond :

Exr. XXXVI. — Trois tubes A, B, C contiennent 0,9 cent. cube d'EPCa et
0,6 cent. cube de sérum. On ajoute à A trois gouttes de suspension assez
épaisse de plaquettes lavées, à B même quantité d'extrait de muscle delapin,
à C même dose de solution physiologique oxalatée à 5 p.1 000 (comme le sont
la suspension de plaquettes et l'extrait). Le lendemain, on centrifuge AetB et
décante les liquides surnageants. Chacun des liquides A, B, C est alors réparti,
à dose de 0,45 cent. cube dans trois tubes qu’on additionne respectivement
d'une goutte, soit de plaquettes, soit d'extrait de muscle, soit de solution
physiologique oxalatée à 0,5 p. 1.000. Vingt minutes plus tard, on oxalate les
mélanges à 1 p. 1.000 (par addition de 0,1 cent. cube d'oxalate à 0,5 p. 100),
et au bout de dix minutes, on les additionne de 0,5 cent. cube de plasma
dilué oxalaté à 1 pour 1.000 obtenu par mélange de 1 vol. de plasma oxalaté
limpide avec 4 volumes de solution physiologique oxalatée à 1 pour 1.000).

Aucun des mélanges renfermant le liquide A ou le liquide B
ne se coagule rapidement; ils se solidifient au bout de trois à
quatre heures seulement, sous l'influence de la thrombine qui
s'y est produite la veille et dont l'énergie s’est beaucoup affaiblie
par la conservation. L'addition récente d’une goutte de pla-
quettes où d’une goutte d'extrait n’y a déterminé aucune appa-
rition de thrombine, ce qui démontre que Le sérozyme a disparu
orâce au premier contact, réalisé le Jour précédent, soit avec
les plaquettes, soit avec l'extrait. Au contraire, le sérozyme
s'est maintenu intact dans le liquide C. En effet, les deux
mélanges contenant ce liquide, et qui viennent de recevoir soit
une goutte de plaquettes,soit une goutte d'extrait, se coagulent
en 4-5 minutes. L'expérience montre qu'un sérum épuisé

ÉD is on nude nn dd

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 757

par des plaquettes est devenu inactif à l'égard d'extrait, aussi
bien qu'à l'égard de plaquettes, et vice-versa.

Dans le même ordre d'idées, nous avons éprouvé vis-à-vis de
l'extrait de muscle, les sérums dont il est question dans l’expé-
rience XXX,etqui,provenant de plasmas riches en plaquettes,
ne possédaient, comparativement à du sérum issu de plasma
limpide, qu'une aptitude médiocre à développer de la throm-
bine en présence de plaquettes. On trouve que ces sérums se
montrentégalement peu aptes à réagir avec l'extrait de musele :

Exe. XXXVII. — On reprend les sérums A, B, AA de l'expérience XXX, et
qui proviennent respectivement de deux plasmas riches en plaquettes (A,AA)
ou d'un plasma limpide (B). On dilue ces sérums au dixième (dans EPCa):
chacune de ces dilutions est introduite à dose de 0,5 cent. cube dans trois
tubes A, AA, B ; on ajoute une goutte d'extrait de muscle, et vingt minutes
plus tard, 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. À est encore liquide
après 4 heures (on le trouve coagulé le lendemain); B se coagule en 4 minutes,
A A en 4 heures environ.

Les faits que nous venons de citer autorisent, nous semble-
t-il, à identüfier le principe actif des plaquettes avec le principe
correspondant de l'extrait de muscle ; ces deux principes
peuvent être confondus sous la dénomination commune de
cylozyme.

SPÉCIFICITÉ D'ACTION DU SUC DE TISSUS. — D'après les auteurs
qui se sont occupés de cette question, c'est une loi assez générale
que le suc de tissu venant d’une espèce animale déterminée se
montre spécialement actif à l'égard du plasma provenant de la
même espèce ou d'une espèce voisine. Delezenne avait observé
par exemple que le plasma d’oie se coagule plus vite sous
l'influence d'extrait de tissu d’oie que sous l’action d'extrait de
tissu de mammirères. C'est particulièrement à L. Loeb que l’on
doit de nombreux renseignements concernant l'adaptation
spécifique des sucs de tissus aux plasmas d'espèce identique.
Hewlett, Fuld, Nolf, Muraschew, ont contribué aussi à l'étude
de cette question, laquelle est assez complexe, car à côté de la
spécilicilé possible du cytozyme (c'est-à-dire de son aptitude
plus ou moins grande à réagir avec les sérozymes de même
espèce ou d'espèces différentes) intervient aussi la spécificité
éventuelle de la thrombine née de cette réaction (c'est-à-dire

198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

son aptitude plus ou moins marquée à provoquer la prise en
caillot de tel ou tel fibrinogène). Il semble bien acquis, d’après
les recherches de Bordet et Gengou sur les sérums anticoagu-
lants, que les thrombines provenant d'espèces animales diffé-
rentes ne sont pas chimiquement tout à fait identiques les
unes aux autres, ce qui ne signilie nullement qu'elles soient
incapables de coaguler des fibrinogènes venant d'espèces ani-
males autres que celles dont elles-mêmes dérivent. La spécili-
cité d'action des thrombines ne semble pas, en effet, être très
stricte; ainsi, du sérum de poule provoque sans difficulté la
coagulation de plasma oxalaté de lapin.

Mais l'expérience permet des combinaisons telles, qu'a priori
il peut être assez difficile de dire à quelle espèce animale appar-
tient la thrombine que l'on étudie. Trois espèces animales en
effet peuvent intervenir dans une seule et mème coagulation.
Nous pouvons évidemment faire réagir un sérum d'espèce A
sur des plaquettes ou du suc de tissu d'espèce B, et éprouver
ensuite l'énergie coagulante du mélange sur un plasma
d'espèce C. Dans de pareilles conditions, la thrombine er jeu
appartient-elle à l'espèce A ou à l'espèce B? S'identifie-t-elle
avec l’une ou l’autre des thrombines qu'on obtiendrait soit en
mélangeant du suc de À avec du sérum de A, soit en ajoutant
à du sérum de B, du suc de B? Des recherches dans ce sens
jetteraient sans doute plus de lumière sur le mécanisme intime
de la réaction qui s'établit entre le cytozyme et le sérozyme :
peut-être aurait-on recours utilement, à ce propos, aux sérums
anticoagulants spécifiques obtenus par immunisation contre
l’un ou l’autre des principes actifs.

Quoi qu'il en soit, réservant de tels essais pour une étude ulté-
rieure, nous nous bornerons aujourd'hui à énumérer sans
commentaires quelques constatations recueillies au cours de
nos expériences :

Du plasma de poule qui se coagule sous l'influence de suc de
muscle de poule donne un sérum qui coagule aisément le
plasma oxalaté de lapin. Le sérum de cobaye fournit une
thrombine très active (à l'égard de plasma de lapin) lorsqu'on
le mélange à des plaquettes de lapin. Le plasma oxalaté de lapin
se coagule aisément sous l'influence d’un mélange de sérum de
lapin avec du muscle de bœuf ou d’un mélange de sérum de

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 759

bœuf, soit avec des plaquettes de lapin, soit avec du muscle de
bœuf. Mais, chose assez curieuse, le mélange de sérum de lapin
et de plaquettes de lapin, ou bien encore le mélange de sérum
de lapin et de muscle de bœuf, lesquels coagulent facilement
le plasma dioxalaté de lapin, ne coagulent que très lentement
et très péniblement le plasma üioxalaté de bœuf. Celui-ci
pourtant se coagule très vite sous l'influence d’un mélange de
sérum de bœuf avec des plaquettes de lapin, ou bien encore d’un
mélange de sérum de bœuf avec du muscle de bœuf. Nous avons
vu plus haut que le muscle de bœuf accélère assez nettement
la coagulation du plasma oxalaté de lapin que l’on vient de
recalcilier.

S IV. — LE cYTOZYME DE LA PEPTONE.

Le plasma peptoné spontanément incoagulable qu'on obtient
par saignée des animaux auxquels on vient d'injecter de la
peptone à fait l’objet d’un nombre considérable de travaux.
Nous ne comptons pas le soumettre ici à une étude appro-
fondie ; nous nous bornerons à signaler quelques faits dont les
recherches ultérieures pourront ulilement tenir compte.

L'effet anticoagulant des injections intraveineuses de peptone
s'explique par une réaction de l'organisme à laquelle le foie
semble bien prendre une part prépondérante. Mais quelle est La
substance active de la peptone? Dérive-t-elle de la digestion
pepsique de la viande ou bien préexiste-t-elle dans celle-ci
avant tout contact avec le ferment digestif? Cette seconde hypo-
thèse peut a priori sembler assez plausible en raison de ce fait
bien connu (Conradi, Uhlenhuth et Handel, Dold, etc...) que
l'injection intravasculaire d'extrait de tissus n'ayant subi
aucune influence altérante telle que celle de la pepsine, peut,
tout comme l'injection de peptone, déterminer l'incoagulabilité
du sang.

Pour juger de cette question, il n’est pas inutile de savoir que
la peptone, ainsi que nous allons le démontrer, partage avec le
suc de muscle la propriété, importante à considérer dans
l'étude de la coagulation, de produire de la thrombine en pré-
sence de sérum. |

À vrai dire, l'aptitude de la peptone à réagir avec le sérum

760 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

pour former la thrombine ne peut être mise en évidence qu'à
une condition : la solution peptonée doit avoir été au préalable
additionnée d’alcali jusqu'à réaction exactement neutre ou
légèrement alcaline au papier de tournesol. La peptone du
commerce est très souvent acide et cette acidité s'oppose à la
formation de thrombine.

Exr. XXXVIIL — Nous employons couramment pour les usages bac-
tériologiques une peptone de fort bonne qualité, préparée exclusivement au
moyen de viande de bœuf (peptone de l'hôpital de Diesi, Belgique). On
dissout à froid 10 grammes de cette peptone dans 30 cent. cubes d'eau
distillée. Une partie de la solution est gardée telle quelle, le reste est addi-
tionné de solution de KOH à 10 p. 100 jusqu'à réaction neutre ou très légè-
rement alcaline au tournesol (1).

On verse dans deux tubes A et B 0,5 cent. cube d'EPCa: dans trois tubes
C, D, E, 0,4 cent. cube d'EPCa et 0,1 cent. cube de sérum (obtenu par coagu-
lation de plasma oxalaté limpide de lapin additionné de 4 volumes d'EPCa).
On laisse tomber dans A et C une goutte de solution de peptone non neutra-
lisée, dans B et D une goutte de cette même solution neutralisée. Vingt
minutes plus tard, on ajoute à tous les tubes 0,5 cent. cube de plasma dilué
dioxalaté. Le mélange D se coagule en trois minutes: C et E, liquides après
trois heures, sont trouvés coagulés le lendemain ; A et B restent indéfiniment
liquides.

On le voit, la peptone ne possède par elle-même aucun
pouvoir coagulant ; comme pour le suc de muscle, le concours
du sérum est nécessaire à l'apparition de la thrombine (2). Que,
d'autre part, même en présence de sérum, l'acidité de la peptone
s'oppose à la production de thrombine, on peut le démontrer
d'une manière indiscutable: nous savons que la thrombine
apparaît en abondance dans le mélange de sérum et de suc de
muscle; or, elle ne s’y produit pas si un tel mélange contient
en outre de la solution non neutralisée de peptone. Par contre,
cette solution, qui contrarie la formation de la thrombine, ne

met pas obstacle au pouvoir coagulant de ce principe actif:

Exr. XXXIX. — Trois tubes A, B, C, contiennent 0,35 cent. cube
d'EPCa et 0,15 cent. cube de sérum; on laisse tomber dans B une goutte de

(1) 11 faut à peu près 0.1 cent. cube de cette solution pour 1 gramme de
peptone sèche. La solution de peptone ne renferme qu'une dose modérée
de Ca ; elle précipite faiblement par l'oxalate.

(2) Les traces de KOH pouvant exister dans la solution de peptone alca-
linisée, ne participent pas à la formation de thrombine en présence de sérum,
ainsi qu'on le démontre en constituant des mélanges de sérum et de solutions
très diluées (bleuissant légèrement le papier de tournesol) de KOH, et en
ajoutant ensuite à ces mélanges du plasma dioxalaté.

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÉSE DE LA THROMBINE 761

la solution non neutralisée de peptone, puis dans les trois tubes une goutte
d'extrait de muscle de bœuf. Une demi-heure plus tard, on ajoute à C une
goutte de peptone, puis immédiatement après, aux trois tubes, 0,5 cent.
cube de plasma dilué dioxalaté. Les mélanges À et C se coagulent en quatre
minutes. Dans B, une coagulation Jâche et incomplète apparait après deux
heures seulement.

L'idée fort naturelle que l'aptitude de la peptone à réagir
avec le sérum résulte simplement de ce qu'il s'est maintenu en
elle du cytozyme propre à la viande qui a servi à sa préparation,
trouve une confirmalion dans le fait que, comme l'extrait de
muscle de bœuf, la peptone se montre encore parfaitement
active après chauffage à 100 degrés pendant un quart d'heure.
Ajoutons qu'il n'est pas nécessaire, pour obtenir de la
thrombine par addition de sérum, d'employer des solutions
de peptone aussi concentrées que celle dont nous nous sommes
servis dans les expériences précédentes : des solutions cinq ou
dix fois plus étendues conviennent encore fort bien.

Exr. XL. — Trois tubes A, B, C, contiennent 0,4 cent. cube d'EPCa
et 0,1 cent. cube de sérum. On ajoute à B une goutte de solution neutralisée
de peptone (cinq fois plus diluée que celle des expériences précédentes),
qui a été chauffée un quart d'heure à 100 degrés ; à C, une goutte d'extrait
de muscle de bœuf également chauffé à 100 degrés. Vingt minutes plus
tard, on ajoute aux trois tubes 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté. La
coagulation s'opère en six minutes dans B, en quatre minutes et demie
dans C; A ne se coagule que le lendemain.

Nous avons vu, au cours de nos expériences sur les pla-
quettes, que le sérozyme abondant dans le sérum ne se ren-
contre pas dans le plasma que l’on vient de diluer et de recal-
cifier. Ce fait se constate encore de la manière la plus nette
lorsqu'on emploie la peptone comme réactif du sérozyme :

Exp. XLT. — On a du sérum obtenu par dilution de 1 vol. de plasma oxa-
laté limpide avec 4 vol. d'EPCa. D'autre part, immédiatement avant l'expé-
rience, on prépare une dilution identique {plasma dilué tout récent); trois
tubes A, B, C renfermant 0,4 cent. cube d'EPCa, reçoivent 0,1 cent. cube de
sérum ; deux tubes D,E, contenant aussi 0,4 cent. cube d'EPCa, reçoivent
0,1cent. cube de plasma dilué qu'on vient d'obtenir. Dans les tubes B,C,D;E,
on laisse tomber une goutte de solution neutralisée de peptone, puis, après
3 minutes pour les tubes À et B, après 6 minutes pour le tube C, après
4 minutes pour le tube D, après 7 minutes pour le tube E, on ajoute 0,5 cent.
cube de plasma dilué dioxalaté. Le mélange B se coagule au bout de
8 minutes, le mélange C au bout de 5. Le mélange A ne se coagule que le
lendemain, les mélanges D et E restent indéfiniment liquides.

762 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La production de thrombine dans le mélange sérum-peptone
est assez rapide : elle se constate déjà après trois minutes de
contact: cependant elle ne semble atteindre son maximum
qu'au bout d'un temps un peu plus long :

Exp. XLITI. — Trois tuhes renfermant 0,4 cent. cube d'EPCa et 0,1 cent.
cube de sérum sont additionnés d'une goutte de solution de peptone. On
ajoute 0,5 cent. cube de plasma dilué dioxalaté après 3 minutes pour le
tube A, après 7 minutes pour le tube B, après 15 minutes pour le tube C. On
conslate que À se coagule en 8 1/2, B en 5 1/2, C en 4 minutes.

La peptone ne nous a point paru hâter d'une manière bien
notable la coagulation de plasma oxalaté que l’on vient de
diluer et de recalcifier. Il est nécessaire que le sérozyme prenne
naissance tout d’abord dans le plasma avant que la production
de thrombine aux dépens de ce sérozyme et de la peptone
puisse s'effectuer. Il faut tenir compte, d'autre part, que la pep-
tone employée est d'origine bovine et que le muscle de bœuf
lui-même se montre nettement moins actif, au point de vue de
l'accélération de la coagulation du plasma de lapin, que le
muscle de lapin. Il serait intéressant, mais c'est une expé-
rience que nous n'avons pas réalisée, d'étudier une peptone
fabriquée au moyen de viande de lapin.

Mais, ainsi qu'il faut s’y attendre, la coagulation du plasma
dilué recalcifié est considérablement accélérée quand on l'addi-
tionne à la fois d’un peu de sérozyme sous forme de sérum, et
de peptone. Elle s'opère dans ces conditions beaucoup plus vite
que st le plasma avait été additionné uniquement de sérum :

ExP. XLIII. — On peut opérer de deux façons : ou bien faire réagir tout
d'abord le sérum sur la peptone et ajouter ensuite le plasma dilué recalci-
fié; ou bien introduire successivement, dans ce plasma, le sérum et la
peptone. L'expérience comprend des témoins où le plasma dilué ne reçoit
aucune addition, ou est additionné exclusivement soit de sérum, soit de
peptone.

Le plasma dilué recalcifié {1 vol. plasma oxalaté limpide, 4 vol. d'EPCa)
esl préparé immédiatement avant l'expérience. Cinq tubes contiennent
0,4 cent. cube d'EPCa. Au tube A on ajoute 0,1 cent. cube de sérum et
une goutte de solution neutralisée de peptone, puis 4 minutes 1/2 plus
tard, 0,5 cent. cube du plasma que l'on vient de préparer. La coagulation
survient dans ce mélange au bout de 9 minutes. Au tube B on ajoute
d'abord 0,5 cent. cube de plasma récent, puis une goutte de peptone et
0,1 cent. cube de sérum. La coagulation demande 11 à 12 minutes. Les
tubes C, D, E reçoivent 0,5 cent. cube du plasma récent, mais à C l'on

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 763

n'ajoute rien, tandis qu'à D on ajoute une goutte de peptone, et à E 0,1 cent.
cube de sérum. La coagulation exige 74 minutes dans C, 71 minutes dans D
‘on voit que l'addition de peptone ne hâte guère la coagulation), 48 minutes
dans E. Celui-ci, remarquons-le, ne se coagule pas très vile; il contient
pourtant du sérum, mais ce sérum, nous le savons, est très pauvre en
thrombine parce qu'il vient de plasma dépourvu de plaquettes; le séro-
zyme qu'il renferme reste quasi inutile, car le plasma récent, privé de ses
plaquettes, ne contient que des traces de cytozyme.

Les expériences de ce genre sont plus démonstratives lors-
qu'on les réalise avec du plasma qui, en même temps qu'on le
dilue et le recalcifie, est mis au contact de SO‘Ba, et est
ensuite centrifugé. Nous le savons, un tel plasma est incapable
de se coaguler spontanément.

Exr. XLIV. — A2 cent. cubes d'EPCa, on mélange quinze gouttes d'une
suspension assez épaisse de SO‘Ba bien lavé, et 0,5 cent. cube de plasma
oxalaté limpide. Après trois heures,on centrifuge et décante le liquide sur-
nageant (plasma baryté).

Quatre tubes renferment 0,4 cent. cube d'EPCa. Au tube A on ajoute
0,1 cent. cube de sérum et une goutte de peptone, puis 9 minutes plus tard,
0,5 cent. cube de plasma baryté. La coagulation survient dans ce mélange
au bout de 8 minutes. Au tube B, on ajoute d'abord 0,5 cent. cube de plasma
baryté, puis une goutte de peptone et 0,1 cent. cube de sérum. La coagula-
tion demande 16 minutes. Le tube C reçoit une goutte de peptone; ce
mélange ne se coagule pas. Le tube D reçoit 0,1 cent. cube de sérum; la
coagulation s'y effectue seulement au bout de plusieurs heures.

Cette expérience démontre que par elle-même, sans le secours du sérum,
la peptone est impuissante, même en milieu calcifié, à faire coaguler le fibri-
nogène. Il en est de même, nous le savons, des plaquettes.

CONCLUSIONS.

La coagulation comporte une succession de phénomènes,
qui aboutit à la formation de la thrombine, dont l'apparition
au sein du plasma a pour conséquence immédiate la prise en
caillot. Il paraît bien établi que l'agent direct de la coagulation,
la thrombine, naît de la réaction mutuelle du sérozyme et du
cytozyme. Celui-ci est fourni par les cellules, en particulier par
les plaquettes. Mais d’où vient le sérozyme? L'expérience tend
à faire admettre qu'au début du processus il n'existe pas comme
tel dans le plasma, outout au moins ne peut y entrer en réac-
tion. Grâce à quel mécanisme se produit-il ou bien peut-il agir
à un moment donné? On l'ignore. C’est donc la phase initiale
de la coagulation qui se montre encore la plus mystérieuse. Elle

164 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

se signale par l'apparition du sérozyme, et c'est à ce moment
aussi que se manifeste l'influence si décisive et si obscure
encore du contact avec les corps étrangers.Les cellules et notam-
ment les plaquettes se bornent-elles à fournir le cytozyme ou
bien interviennent elles aussi d'une façon qu'on ne saurait pré-
ciser actuellement, dans la réaction dont le sérozyme résulte ?
Quel est exactement le rôle du contact, à quel moment précis
doit-il se manifester? C’est sûrement au début du processus,
car le contact n'est pas nécessaire à la réaction qui s’établit
entre le cytozyme et le sérozyme. On ne pourra répondre à ces
questions avant d’avoir soumis à des recherches plus appro-
fondies les phénomènes intimes, et notamment la phaseinitiale,
de la coagulation. Nous nous bornerons donc aujourd'hui à
énumérer les constatations principales consignées dans ce
mémoire : |

1° La thrombine, surtout quand elle est âgée, est affaiblie par
la précipitation des sels calciques propres au liquide qui la con-
tient. Un procédé sensible pour la mettre en évidence dans un
liquide consiste à ne pas décalcifier tout d'abord celui-ei, mais à
l’'additionner de volume égal de plasma oxalaté à 2 p. 1.000;

2° En se coagulant, les plasmas débarrassés de plaquettes
donnent un sérum pauvre en thrombine ; celle-ci est abondante
au contraire dans les sérums issus de plasmas à plaquettes,
dont, on le sait, la coagulation s'opère rapidement ;

3° La diffusion du principe actif des plaquettes (cytozyme)
s'opère assez lentement dans le plasma ou lasolution physiolo-
gique, plus rapidement dans les solulions concentrées de NaCl;
ce fait explique que le plasma salé, même bien centrifugé,
fournit un sérum riche en thrombine lorsqu'on en provoque la
coagulation par addition d'eau distillée;

4° La cytozyme des plaquettes résiste au chauffage à 100 de-
grés; on peut obtenir des extraits de plaquettes stérilisés à
100 degrés, et qui accélèrent considérablement la coagulation ;

5° Le rôle des plaquettes dans la coagulation est beaucoup
plus important que celui des leucocytes. C'est pourquoi les
exsudats péritonéaux très riches en leucocytes se coagulent plus
vile lorsqu'on les additionne de plaquettes. Par l'action combinée
de l’eau distillée et de CO*, on peut obtenir un plasma sponta-
nément incoagulable, mais coagulable par addition de pla-

LA COAGULATION DU SANG ET LA GENÈSE DE LA THROMBINE 765

quettes. Il est fort vraisemblable que si les mammifères ne
possédaient pas de plaquettes, leur sang se comporterait comme
le sang des oiseaux, c’est-à-dire ne serait que lentement coagu-
lable mème en milieu calcifié, et fournirait aussi, par centrifu-
galion rapide, un plasma à peu près incoagulable spontané-
ment;

6° En présence de sérum, les plaquettes (eytozyme) donnent
de la thrombine. Celte réaction exige la présence de sels calei-
ques solubles. On peut appeler sérozyme la substance active
du sérum ;

1° Comme l'oxalate, le citrate empêche cette réaction, mais
ne s'oppose pas à l'influence coagulante de la thrombine lorsque
celle-ci a pu se produire. La forte concentration saline met
obstacle aussi à la réaction; celle-ci d'autre part peut s'effectuer
dans un milieu de concentration saline faible ;

S° Il suffit d'une quantité relativement faible de sérozyme et
de cytozyme pour que, la réaction s’établissant, le liquide
acquière une énergie coagulante très manifeste ;

9 La réaction entre le cylozyme et le sérozyme est rapide,
mais pas instantanée ;

10° La thrombine issue de la réaction entre les plaquettes et
le sérum ne peut coaguler qu’une dose déterminée de plasma
oxalaté ;

11° Le sérozyme se détruit par le chauffage à 55 degrés. IL est
absorbé par le précipité de SO‘Ba, lequel enlève d’ailleurs au
plasma le pouvoir d'engendrer du sérozyme. Il n’est pas absor-
bable par les globules sensibilisés:;

12° Le cytozyme des plaquettes intervient plus activement
que celui des leucocytes dans la formation de la thrombine;

13° Les extraits stériles de plaquettes (obtenus par chauffage
à 100 degrés et centrifugation) conservent longtemps leur
pouvoir de produire de la thrombine en présence de sérum ;

14° Le sérozyme, qu'on trouve en abondance dans le sérum,
ne semble pas exister encore (au moins fonctionnellement) dans
le plasma oxalaté que l’on vient de dilueret de recalcifier. L'un
des phénomènes initiaux de la coagulation consiste donc, sui-
vant toute vraisemblance, dans l’apparition au sein de liquide,
de l'aptitude à réagir avec le eytozyme pour donner de la
thrombine :

766 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

15° Chaufté à 56 degrés, le plasma perd l'aptitude à produire
du sérozyme ;

16° Du sérum qui s’est trouvé en contact avec des plaquettes
a perdu, par ce fait même, le pouvoir de réagir avec de nou-
velles plaquettes. Le sérozyme se consomme donc en réagissant
avec le cytozyme. C’est pourquoi le sérum provenant de plasma
contenant des plaquettes (ou de sang complet) est moins apte à
réagir avec des plaquettes que ne l’est le sérum issu de plasma
débarrassé de ces éléments ;

17° Le phénomène « d’excitoproduction » décrit par Bordet et
Gengou (production rapide, par addition de sérum, de throm-
bine au sein du plasma salé dilué) s'explique parce que le
sérozyme du sérum réagit avec le cytozyme du plasma pour
engendrer de la thrombine;

18° Le cytozyme du suc de muscles résiste comme celui des
plaquettes au chauffage à 100 degrés;

19° Les expériences où l’on provoque la coagulation du plasma
oxalaté par une thrombine née du mélange de plaquettes ou suc
de tissus avec du sérum, conviennent particulièrement à l'étude
de la spécificité des principes actifs de la coagulation ;

20° La peptone contient du cytozyme provenant de la viande
qui à servi à sa fabrication. Mème si elle a été chauffée au préa-
lable à 100 degrés, la solution de peptone donne de la throm-
bine lorsqu'on y ajoute du sérum. Cette réaction exige que
l'acidité de la peptone ait été neutralisée. L'acidité en effet
s'oppose à la formation de thrombine, mais non à l'influence
coagulante de celle-ci;

21° Par elle-même, sans le secours du sérum, la peptone,
pas plus que les plaquettes ou le suc de muscle, ne convertit le
fibrinogène en fibrine, mème si le liquide ambiant contient des
sels calciques, à condition bien entendu que celui-ci soit exempt
de sérozyme ou des matières capables d’engendrer ce principe.
Tel est le cas du plasma baryté, dont l'emploi est utile dans
beaucoup d'expériences sur la coagulation ;

22° Le sérozyme qui, dans le sérum, agit sur la peptone
n'existe pas encore dans le plasma oxalaté que l'on vient de
diluer et de recalcifier.

SUR L'EXTRAORDINAIRE SENSIBILITÉ

DE L’ASPERGILLUS NIGER
VIS-A-VIS DU MANGANÈSE

par M. Gagriez BERTRAND

Les recherches que j'ai publiées antérieurement sur la laccase
et sur l'emploi du manganèse comme engrais ont déjà laissé
entrevoir l’extrème petitesse de la proportion de manganèse
qui suffit à impressionner les végétaux. Les expériences que je
vais décrire préciseront celte notion et lui donneront,en même
temps, une valeur inattendue, je pourrais même dire surpre-
nante. Grâce, en effet, à une technique sévère et à des précau-
tions minutieuses, je suis parvenu à obtenir, d’une manière
constante, en opérant avec l'Asperqullus niger, des augmenta-
tions de récolte facilement appréciables par l'addition au milieu
de culture d’une quantité aussi extraordinairement petite qu’un
milliardième et même un décimilliardème de manganèse, soit
une proportion d'un milligramme seulement de métal dans
10.000 litres de liquide nutritif.

Une des grandes difficultés à résoudre pour atteindre ce
résultat a été la purification des substances organiques ou miné-
rales destinées à l'alimentation de l’Aspergillus. Déjà, dans
les expériences que j'ai faites avec Javillier, en vue de savoir
ce que deviennent les récoltes du champignon sous l'influence
combinée du manganèse et du zinc (1), nous avions éprouvé
quelque peine à préparer un milieu de culture dans lequel il
n'y eùt guère plus de 1/500 de milligramme de manganèse
par litre. Or, c’est là une proportion d'impureté relativement
énorme par rapport à celle qu'il me fallait éliminer des subs-
lances destinées à la préparation du milieu nutrilif.

J'ai d'abord essayé la méthode des cristallisations succes-
sives. Même en consentant à de grosses pertes, cette méthode

(1) Annales de l'Institut Pasteur, t. XXVI, p. 241 et p. 515, 1912.

768 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ne ma pas toujours conduit au but. J’arrivais bien, après un
nombre plus ou moins grand de cristallisations, à obtenir des
substances dont une dose relativement élevée ne donnait plus
la réaction cependant très sensible du manganèse par le pro-
cédé que J'ai décrit (1), mais lorsque j'analysais les cendres de
l'Asperqillus développé sur un milieu préparé avec ces subs-
tances, je pouvais encore trouver des traces du métal que la
plante avait en quelque sorte concentrées dans ses lissus. La
méthode des cristallisations successives n’a bien réussi que pour
le sulfate ferrico-ammonique : le sulfate de manganèse, qui se
trouve dans la solution du sel au moment de la préparation,
ne pouvant remplacer ni le fer trivalent, nil’ammonium mono-
valent, reste dans les eaux mères dès la première cristallisation.
Je n'ai employé le sel double, toutefois, qu'après trois cristal-
lisations.

Pour la plupart des autres substances, j'ai éliminé le man-
ganèse à l'état de bioxyde en ajoutant à la solution, rendue légè-
rement alcaline par l’'ammoniaque, un peu d’eau oxygénée
pure. Étant donnée la pureté déjà très grande des substances
sur lesquelles j'opérais, le bioxyde ne s’est pas produit d’une
manière visible. J'en ai assuré la complète séparation en l'en-
trainant par collage à la surface d'un précipité de phosphate
ammoniaco-magnésien obtenu par addition au liquide d'une
molécule de phosphate diammonique et d'une molécule de
sulfate de magnésium (2). Après quelques heures de repos le
liquide a été filtré et concentré dans une capsule de platine.

Cette méthode chimique a été appliquée aussi bien au sac-
charose qu’au nitrate, au phosphate et au sulfate d'ammoniun,
au carbonale de potassium, au sulfate de zinc et à celui de
magnésium. Dans la solution de ce dernier, après avoir ajouté
quelques gouttes d’ammoniaque et l’eau oxygénée, Je n'ai
introduit, pour la précipitation, comme cela se comprend,

(1) Bull. Soc. Chim., 4 série, t. IX, p. 361, 1941.

(2) Par exemple, 0 gr. 66 de phosphate et 1 gr. 23 de sulfate pourun demi-
litre environ de solution à 15-20 p. 100 de la substance à purifier. Le préci-
pité de phosphate ammoniaco-magnésien, dissous et oxydé par le persulfate
de potassium en présence de nitrate d'argent, permet de doser le manga-
nèse qui se trouvait dans la substance. C'est ainsi que j'ai trouvé les poids
de manganèse suivants dans un kilogramme de diverses substances parmi
les plus pures du commerce : 0 milligr. 45 pour le phosphate d'’ammonium,
2 milligr. pour le sulfate de zine, 25 milligr. pour le chlorure de sodium, etc.

SUR LA SENSIBILITÉ DE L'A. NIGER VIS-A-VIS DU MANGANÈSE 769

que du phosphate d'ammonium. Pour obtenir la cristallisation
du saccharose, j'ai poussé la concentration jusqu'à ce que le
sirop contienne un peu plus des deux tiers de son poids de
sucre; je l'ai mélangé alors avec son volume d’alcool à 95 de-
grés redistillé et je l'ai abandonné, après amorcage, dans un
malras bouché. Celui-ci a été brisé lorsque les cristaux n’aug-
mentaient plus. Quant aux sels, après les avoir essorés, ils ont
été lavés et recristallisés en se servant d’eau pure, redistillée
dans le vide avec un appareil en verre.

À côté du saccharose, J'ai utilisé l'acide succinique comme
substance alimentaire carbonée. La purification de cet acide a
été obtenue par une série de cristallisations, d’abord dans
l'acide sulfurique à 5 p. 100, puis dans l’eau seule (1).

IT est à peine utile de dire qu'il m'a fallu prendre les pré-
cautions les plus minutieuses au cours des expériences pour
éviter toutes contaminations par le manganèse, me mettre par
conséquent à l'abri des poussières, ne pas chauffer les solu-
tions de substances pures dans des vases de verre, mais de
quartz ou de platine, ete. |

Les cultures ont été faites dans des matras cylindro-coniques
à large col, de 750 cent. cubes de capacité, en quartz fondu (2).
Chaque matras renfermait en général :

Eau pure, redistillée dans le vide. 200 grammes.

Carbonate de potassium. . . . .. 0 gr. 08
Nitrate d'AMMONIUINN NL" | 0 gr. 60
Phosphate d'ammonium . . . . . . 0 or. 08
SULATe AMMONUNI- 00, 0. 0 gr. 04
Sulfate demagnésiume . : . . 0 gr. 17
ANTHNALE OT ER SERRE 0 gr. 0172 (soit : 0.002 de Fe).
DUAL ERA INC EME 7 0 gr. 0088 (soit : 0.002 de Zn).
DilICA le deRpOlASSIUN EN 6 gr. 008
etiacide suctinique 20e 1.1. . .. $ grammes
CUBA GHAIOSEE (CRE CO Peu: de » grammes.
et acide succinique (pour acidifier). 0 gr. 10

(1) En évaporant à sec, dans une capsule de platine, les eaux-mères
débarrassées par cristallisation et décantation de la majorité de l'acide suc-
cinique qu'elles renfermaient, j'ai obtenu un résidu dans lequel il y avait
0 milligr. 11 de manganèse pour un kilogramme d'acide succinique « puris-
sime » du commerce.

(2) On peut déjà constater l'action d'un cent-millionième et même d'un
milliardième de manganèse en faisant les eultures dans certains matras en
verre peu attaquables ou mieux dans des vases en porcelaine. On utilise
dans mon laboratoire des cuvettes cylindriques en porcelaine recouvertes
d'une sorte de cristallisoir renversé en verre mince que retiennent, pour
éviler l'obturation complète, des crochets en aluminium.

49

710 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le sulfate de manganèse, préparé à partir du permanganate
de potassium, comme je l'ai déjà indiqué (1), était introduit,
sauf, bien entendu, dans les matras témoins, sous forme de
solutions titrées dont on défalquait le poids des 200 grammes
d’eau pure.

Après avoir élé bouchés avec des tampons d’ouate hydro-
phile et recouverts de capuchons en papier, les matras étaient
stérilisés à 115 degrés durant vingt minutes.

Les spores où conidies employées pour les ensemencements
provenaient tantôt d’une race banale, développée sur le liquide
ordinaire de Raulin (expériences 4 à 9), tantôt d’une race par-
ticulière au laboratoire, très sensible au zinc (expériences
1 à 3). Dans ce dernier cas, on mettait 100 fois moins de sulfate
de zinc dans le liquide nutritif qu'il est indiqué ci-dessus.

Deux procédés ont été mis en usage pour les ensemence-
ments. Dans le premier (expériences 1 à 5), on transportait
directement les conidies à la surface du liquide nutritif à l’aide
d’un fil de platine, en multipliant un même nombre de fois
les transports, de manière à compenser autant que possible les
différences qui existaient entre chacun d'eux. Dans le second
procédé (expériences 6 à 9), on préparait d’abord une dilution
de conidies dans l’eau stérilisée, puis, en agitant bien chaque
fois, on prélevait un cent. cube de cette dilution par matras.

Les cultures ont été faites, non dans une étuve, où la tempé-
rature varie trop d’un endroit à un autre, mais dans une
chambre thermostat, à la température uniforme de 35 degrés.
Les récoltes ont eu lieu, suivant les expériences, après neuf à
douze jours.

Voici, rassemblés en un tableau, les résultats de toutes les
expériences que j'ai entreprises avec les doses de 1/100.000.000,
de 1/1.000.000.000 et de 1/10.000.000.000 de manganèse.
Dans ce tableau, les expériences 1 à 7 ont été réalisées avec
l’acide succinique et les expériences 8 et 9 avec le saccharose
acidulé par l'acide succinique comme substances alimentaires
carbonées.

(1) En collaboration avec Javillier. Bull. Soc. chim., 4 série, t. XI, p. 212,
1912.

SUR LA SENSIBILITÉ DE L’A. NIGER VIS-A-VIS DU MANGANÈSE 771

POIDS SEC, EN GRAMMES, DES RÉCOLTES OBTENUES :
©
S :RÉ A
No | DURÉE APRÉS ADDITION DE
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exp. | jours. addition Un Ün Un
cent-millième milliardième déci-milliardième.

den de Mn. de Mn. de Mn.

moy. 3 cult.)

2

1
2

1
1,
0,04
(moy. de 3 cult.)

0,557 2,35 0,603

(moy. de 3 cult.) DR? {moy. de 3 cult.)

Je n'ai pas dosé seulement le poids de matière sèche de
chaque récolle, j'ai préparé aussi les cendres dans lesquelles
j'ai recherché et dosé le manganèse, quand il y avait lieu. Les
conditions de la recherche me permettant d’atteindre jusqu’au
millième et prebablement jusqu'au demi-millième de milli-
gramme du métal cherché, je n'ai trouvé trace de manganèse
ni dans les récoltes témoins (expériences 1 à 7) prises séparé-
ment ou reprises après en avoir réuni quinze ensemble, ni
dans aucune des récoltes obtenues sur les milieux au milliar-
dième et au déci-milliardième. Par contre, j'ai retrouvé de 1 à
1,5 millième de milligramme de manganèse dans les récoltes
développées sur les milieux au cent-millionième, qui en renfer-
malent la quantité absolue de 2 millièmes de milligramme.

Ainsi, malgré toutes les modilications introduites dans la

112 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

composition du milieu nutritif, la race du végétal, la durée de
la culture, modifications qui ont nécessairement fait varier le
poids des récoltes d’une expérience à l’autre, la mème conclu-
sion générale ressort avec évidence de chacune de celles-ci,
prise en particulier, à savoir qu'une proportion ertraordinaire-
ment petite de manganèse suffit au développement de l'Asper-
gillus niger.

Les résultats de ces recherches, bien conformes à l’interpré-
tation catalytique du rôle joué par le manganèse dans les cel-
lules vivantes, sont très suggeslifs.

On possédait jusqu'ici des exemples remarquables de sensi-
bilité de l'organisme aux poisons. En ce qui concerne particu-
lièrement l'Aspergillus niger, Raulin avait montré qu'il suffit
d'ajouter la proportion minima d'un 1/1.600.000 de nitrate
d'argent au milieu de culture pour nuire sensiblement aux pro-
grès du végétal (1). En opposant à ce résultat l'influence favo-
rable exercée sur le même Aspergillus par le 1/10.000.000.000
de manganèse, on voit que l'organisme peut être plus sensible
encore aux substances biogénétiques.

Il va donc falloir considérer avec plus d'attention que jamais
l'intervention possible des traces de métalloïdes et de métaux
présents dans le corps des animaux et des plantes et, par géné-
ralisation, des substances complexes dont la proportion n’est
guère plus élevée. Il faudra envisager aussi comme pouvant
avoir de l'importance dans certains phénomènes physiologiques
ou pathogéniques, dans le degré de fertilité des sols, etc., des
modifications chimiques du milieu en apparence très minimes.

Enfin, il sera nécessaire, dans beaucoup de recherches, de
se mettre très soigneusement en garde contre l'influence des
impuretés. J'ai rencontré dans les préparations les plus pures
de sulfate ferreux du commerce de 0,2 à 0,5 p. 1.000 de man-
ganèse. D’après les expériencesrapportées aujourd'hui, quelques
dixièmes et même quelques centièmes de milligramme de ce
sel peuvent donc suffire pour apporter dans un milieu de cul-
ture une dose de manganèse facilement appréciable par lAs-
pergillus niger el pour faire attribuer, par erreur, au sulfate

(1) Études chimiques sur la végétation. Thèse oct. ès sciences, p.133, Paris,
1870.

LE ROLE DU MANGANÈSE ET LES CONIDIES DE L’A. NIGER 773

ferreux des effets dus exclusivement à une impureté qui l'ac-
compagne.

On peut supposer que, dans mes propres expériences, l’en-
semble des substances nutritives des milieux témoins renfer-
mait encore des traces infinitésimales de manganèse. Est-il
possible d'atteindre un degré de pureté plus parfait et qu'arri-
verait-il alors avec l'Aspergillus? C'est ce que Je me propose
maintenant de rechercher.

SUR LE ROLE CAPITAL DU MANGANÈSE

DANS LA PRODUCTION DES CONIDIES DE L’ASPERGILLUS NIGER

Au cours de ses belles recherches sur le développement de
l'Aspergillus niger, Raulin a mis en évidence le rôle favorable
exercé par une petite quantité de fer sur l'accroissement global
de la plante : la dose de 10 milligrammes de ce métal, à l'état
de sulfate, dans un litre de liquide approprié, lui a fourni les
meilleures récoltes. Raulin n’a pas étudié le mode d’action du
fer; il semble néanmoins lui attribuer un rôle spécial dans la
formation des spores ou, plus exactement, des conidies. « En
l’absence des sels de fer, fait-il, en effet, remarquer, les spores
se forment de plus en plus péniblement à mesure que le
liquide d’où elles naissent a déjà produit un plus grand nombre
de récoltes » (1).

Cette remarque a récemment attiré l’attention de Sauton et
l'a conduit à diverses expériences à la suite desquelles il a
cru pouvoir lier définitivement la production des conidies à la
présence du fer (2).

Une telle conclusion dépassait la portée des résultatsobtenus.
Reprenant les expériences, en collaboration avec Sauton, Javil-
lier a reconnu que le phénomène de la formation des conidies
était plus complexe et dépendait à la fois, mais d’une manière

(1) Thèse de doctorat ès sciences physiques, p. 186, Paris, 1870.
(2) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLI, p. 241, 1911, et Annales de
l'Institut Pasteur, t. XXV, p. 922, 1911.

714 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

différente, de la présence du fer et de celle du zinc. Lorsque,
en effet, on aJoutait les deux métaux à la dose habituelle de
1/100.000, les conidies apparaissaient normalement et, si on
n'ajoutait que du zine, la plante restait stérile; mais, si on ne
metlait ni fer, ni zinc, les conidies se produisaient au moins
aussi vite qu'en présence de fer seul. D'où cette nouvelle mais
évidente conclusion que le fer n'est pas, comme il paraissait
tout d'abord, l'élément indispensable à la sporulation (1).

Ces curieux résultats trouvent leur explication dans certaines
expériences que je poursuis actuellement à propos du rôle bio-
logique du manganèse et que je vais résumer.

Je rappellerai, tout d'abord, combien ilest difficile d'obtenir
les sels minéraux et les produits organiques indispensables à
la culture de l'Aspergillus niger dans un état de pureté suffisant
lorsqu'il s’agit d'expériences précises sur l'intervention biolo-
gique du manganèse. J'ai donné une mesure de cette difficulté
dans les recherches que J'ai faites avec Javillier sur l'influence
combinée du manganèse et du zinc sur la végétation (2); une
meilleure encore dans celles que je viens de publier sur
l'extraordinaire sensibilité de l'Aspergillus niger vis-à-vis du
manganèse (3).

Dans les premières de ces recherches, nous avons, Javillier
et moi, employé des doses relativement grandes de manganèse,
élément dont nous voulions connaître alors la proportion opti-
male, et les milieux nutritifs les purs qui servaient de témoins
renfermaient encore, malgré toutes les précautions, à peu près
1/500 de milligramme de manganèse par litre. Dans ces con-
ditions, nous avions observé que « le manganèse possède une
action qui, sans être très marquée, est cependant sensible sur
la formation des conidies, autant qu'on en pouvait juger par la
coloration des cultures. Les Aspergiilus cultivés sur des doses
moyennes de ce métal (1/25.000 à 1/1.000) étaient, à l'arrêt
des cultures, sensiblement plus noires que les Am
témoins, d’une part, et les Aspergillus plusrichesen manganèse,
d'autre part ».

(1) Comptes rendus de l'Acad. des Sciences, t. CLIII, p. 11477, 1911.
(2) Annales de l'Institut Pasteur, t. XXVI, p. 241 et p. 515, 1912.
(3) Ibid., p. 761.

LE ROLE DU MANGANÈSE ET LES CONIDIES DE L’A. NIGER 775

J'ai réussi depuis, comme on l’a vu (1), à purifier d'une
façon beaucoup plus parfaite toutes les substances nutritives
età opérer dans des conditions où l'influence du manganèse
peut être étudiée avec une très grande précision. J'ai reconnu
alors qu'en présence des doses habituelles (1/100.000) dezinc et
de fer, mais en l'absence de manganèse, il n'y a pas de forma-
tion de conididies par l'Aspergillus niger : les colonies restent
indépendantes les unes des autres, contractées et de couleur
blanche. k

Si, en outre du zinc et du fer, on ajoute une trace de manga-
nèse, on obtient, au contraire, un beau mycélium, dont la
surface, noire et veloutée, est un véritable tapis de conidio-
phores.

J'ai varié mes expériences en introduisant dans le liquide
nutritif soit du saccharose, soit de l'acide succinique, comme
source de carbone; en prenant les conidies soit de la race
banale, spontanée, soit d’une race particulière au laboratoire,
très sensible au zinc, pour les ensemencements; enfin, en
essayant des doses diverses de zincet de manganèse. Les résul-
tats ainsi obtenus me permeltent de formuler les conclusions
générales suivantes :

Le fer, le manganèse, le zinc et, sans doute, tous les éléments
nutritifs, agissent synergiquement sur la croissance et sur la
formation des conidies de l’Aspergillus niger.

Lorsqu'un de ces éléments vient à manquer ou, tout au
moins, à se raréfier beaucoup, la plante se développe à peine,
elle ne produit, en conséquence, presque pas de matière orga-
nique.

Quel que soit l’état de développement, si la proportion de
manganèse passée dans la matière organique est trop minime,
la plante reste stérile; elle se recouvre, au contraire, de coni-
dies, si la quantité de manganèse absorbée par le mycélium
atteint une proportion suflisante.

Ainsi, il y a un rapport entre le manganèse, d’une part, le
fer elle zinc, d’une autre, qui suffit à la croissance de l’Asper-
gillus, mais qui ne permet pas le développement des organes de
reproduction.

(1) Dernière citation.

176 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ces conclusions générales permettent de comprendre ce qui
se passe dans ies cas différents de la culture de lAspergillus
niger, y compris ceux des expériences antérieurement publiées.
Lorsqu'on n’opère pas avec des substances suffisamment pures,
et J'ai rappelé combien cette condition est difficile à remplir, les
très minimes quantités de manganèse introduites dans les
milieux nutritifs peuvent suffire, en présence du fer et du zinc,
pour obtenir des mycéliums abondants, mais sans conidies. Une
nouvelle quantité de manganèse ajoutée alors, soit intention-
nellement, soit comme impureté du sulfate ferreux, lequel en
renferme toujours (1), détermine la sporulation. Lorsque, au
contraire, dans le milieu nutritif, on n'ajoute ni fer, ni zinc, ou
seulement du fer ou du zinc, les mycéliums qui prennent nais-
sance sont si réduits que le rapport de manganèse introduit,
volontairement ou non, au poids de matière organique formée
peut être suffisant à la production des conidies.

Ces recherches, établissant des relations entre le fer, le man-
ganèse et le zinc dans l'équilibre des fonctions physiologiques
de l’Aspergillus niger, sont remarquables à plus d'un point de
vue. Non seulement elles nous fournissent un exemple très net
de l'existence d'éléments dominateurs de certaines fonctions
biologiques, mais elles nous portent à considérer cette notion,
importante et rarement envisagée, sous un aspect nouveau.
Sans doute l'iode, dans l’action complexe de la glande thyroïde,
le fer et le cuivre, dans le rôle convoyeur d'oxygène du sang
chez divers animaux, possèdent le caractère d'éléments domi-
nateurs puisqu'ils font parlie intégrante soit de la thyroïdine,
soit de l’hémoglobine ou de l'hémocyanine, mais la vie devient
rapidement impossible chez les animaux privés de leur glande
thyroïde ou de leur sang, tandis que l’Aspergillus niger peut se
développer admirablement sans formation de conidies. Dans le
cas des animaux considérés, l’iode, le fer ou le cuivre dominent
plus qu'une fonction physiologique, ils dominent la vie tout

(1) J'ai dosé dans les échantillons de sulfate ferreux les plus purs que j'ai
pu me procurer en France et en Allemagne de 0,2 à 0,5 milligrammes de
manganèse par gramme de sel. Pour ce dosage, j'ai opéré directement sur
le sulfate ferreux, suivant la méthode que j'ai décrite antérieurement (Bull.
Soc. Chim., 4 série, t. IX, p. 361, 1911), mais en ajoutant un peu plus de per-
sulfate de potassium et, afin d'atténuer la coloration jaune du composé
ferrique, un gramme de phosphate acide de potassium.

LE ROLE DU MANGANÈSE ET LES CONIDIES DE L'A. NIGER 777

entière; dans celui de l'Aspergillus, le manganèse, indispen-
sable aussi au développement général de l'individu, condi-
lionne, en outre, une fonction de résistance temporaire et de
propagation nécessaire seulement à l'espèce.

Les mèmes recherches, jointes d'ailleurs à celles que j'ai
déjà citées dans ce mémoire, font ressortir d'une manière frap-
pante la synergie des éléments constitutifs de la matière
vivante. À des proportions diverses, grandes ou petites, tous
ces éléments sont nécessaires, tous concourent à la formation,
au moins globale, des liquides et des tissus dont l'individu se
compose. L'insuffisance d’un seul de ces éléments peutentrainer
la diminution de tous les autres et provoquer, parsuite, un arrèl
général de la croissance. Ainsi consolidé par l'expérience
directe, le principe de la synergie des éléments dans l’édifica-
lion de l'organisme prend une grande importance au point de
vue du choix de certaines médications, de l'établissement des
régimes, du choix et du dosage des engrais.

Enfin, la modification profonde apportée dans le cyele évo-
lutif de lAspergillus niger par un minime changement dans la
quantité de manganèse mise à la disposition de cette plante,
apporte un argument bien digne d’être pris en considération
dans la recherche des causes de la subordination des processus
fonctionnels chez les êtres vivants.

LA LÈPRE DES RATS

(SECOND MÉMOIRE)

RECHERCHES ÉTIOLOGIQUES

ET RÉFLEXIONS QU'ELLES SUGGÈRENT A PROPOS DE LA LÈPRE
HUMAINE

par E: MARCHOUX et F. SOREL.

ErroLocit.

La maladie du rat est certes une maladie très intéressante
en elle-même. Mais si nous en avons entrepris l’élude, ce n’est
pas dans le but unique d’en pénétrer les mystères. Nous avons
été surtout atlirés par la ressemblance de cette affection avec la
lèpre humaine et, devant l'impossibilité d'expérimenter sur les
animaux avec le bacille humain, par l'espérance d’appliquer à
la lèpre de l’homme quelques-unes des conclusions de notre
travail sur la lèpre des rats. L’étiologie, les voies de pénétration
des germes, en un mot l’épidémiologie d’où découle Ja pro-
phylaxie, voilà les questions qui nous ont surtout préoccupés.

Dès que nous eùmes constaté l'existence de la maïadie de
Slefansky parmi les rats vivant dans l’agglomération pari-
sienne, nous avons cherché à nous en procurer un certain
nombre pour observer chez les animaux capturés la marche
de l'affection. Comme nos devanciers, nous avons vérilié que la
lèpre étendue à l’épiderme et aux muscles élait rare, alors que
nous la rencontrions beaucoup plus fréquemment limitée aux
ganglions sous-cutanés et à leur voisinage.

Par inoculation péritonéale, le bacille se multiplie dans les
viscères. — Ün pouvait se demander si la localisation presque
exclusive de l'infection à la région superficielle ne tenait pas
à des exigences biologiques du parasite qui se développerait
difficilement à la température plus élevée des organes profonds,
le foie et la rate, si rarement lésés. Pour nous en assurer,

LA LÉPRE DES RATS T0

nous avons inoculé dans le péritoine un certain nombre de rats
blancs.

Exr. VI. — 27 juillet 1911. Un rat d'égouts sacrifié présente des lésions
assez marquées autour du paquet ganglionnaire inguinal. Des lambeaux de
tissu conjonctif sont broyés en eau dislillée stérile. Le liquide louche qui
surnage après dépôt des particules volumineuses, est riche en bacilles A. R.
Quelques gouttes en sont injectées dans le périloine de 5 rats blancs.

20 octobre 1911, — Une mère pleine est morte dans le bocal. Elle porte au
niveau de la rate un nodule de la grosseur d’un petit pois qui est contenu
dans l'épaisseur de l’épiploon et adhère à la paroi pariétale du péritoine. Ce
nodule est rempli d'A. R. Tout l'épiploon en contient. On en trouve aussi sur
la paroi de l’ulérus gravide, mais point dans le placenta, ni dans les fœtus.
Le foie, un peu gras, contient d'assez nombreux bacilles. La rate en renferme
aussi beaucoup. Dans les frottis faits avec de la pulpe provenant des som-
mets du poumon, se voient quelques A. R., mais on en trouve surtoul
en grande quantité dans les préparations de ganglions médiastinaux.

2 novembre. — Un deuxième rat meurt. Les ganglions mésentériques ren-
ferment une énorme quantité de bacilles. La rate en est farcie, de même que
l'épiploon. Pas de bacilles dans les frottis du foie. Les poumons ont été
mangés par les autres rats du même bocal et n'ont pu être examinés. Des
bacilles assez nombreux sont trouvés dans les frottis des ganglions ingui-
naux et axillaires.

3 novembre. — Un troisième rat est sacrifié. Il est beaucoup moins infecté
que le précédent. Dans les ganglions mésentériques, l'épiploon et la rate, il
y a quelques bacilles. On n'en voit pas dans les frottis de foie. Les gan-
glions bronchiques sont pleins d'A. R. Quelques-uns aussi se rencontrent
dans le poumon. Il ÿ en a dans un ganglion inguinal.

5 décembre.— Le rat qui est mort aujourd’hui porte appendue à l'épiploon
une petite tumeur de la taille d'une noisette qui est bourrrée d'A. R. Beau-
coup dans l'épiploon, la rate, les ganglions mésentériques ; moins dans le
foie. Un petit nombre se rencontrent dans les poumons et beaucoup plus
dans les ganglions bronchiques.

20 décembre. — Le dernier rat meurt. A. R. nombreux dans les ganglions
inguinaux, dans les ganglions mésentériques, l'épiploon, la rate, le foie,
dans les ganglions médiastinaux. Quelques-uns dans les poumons. Des frag-
ments de foie et de rate sont fixés et coupés. Dans le foie, les bacilles sont
contenus dans les cellules de Kupfer et aussi dans les cellules du tissu con-
jonctif des espaces porte. La disposition des bacilles dans la rate est la
même que dans les ganglions, les foyers sont aussi compacts.

L'inoculation intra-péritonéale est tout aussi sûre que l’ino-
culation sous la peau et le bacille se développe avec autant
de facilité dans l'épiploon, le foie et la rate, que dans le tissu
conjonctif sous-cutané. Il faut donc admeltre que l'infection
spontanée ne se fait pas dans la profondeur.

L'inoculation spontanée est superficielle. — L'époque tardive
à laquelle apparaissent les lésions des organes abdominaux,

780 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

la précocilé, au contraire, de l’envahissement des ganglions
superficiels, indiquent nettement que la porte d'entrée est
ouverte dans le revêtement cutané ou à son voisinage.

Par nos expériences d'inoculation, nous avons vu que les
bacilles À. R. se rendent très exactement aux ganglions qui
servent de confluents aux lymphatiques de la région inoculée.
Une infection du train postérieur, faite à la partie moyenne du
dos ou sur la ligne blanche, provoque l'infection des ganglions
inguinaux droits et gauches. Si l’inoculation est unilatérale, la
lésion ganglionnaire est unilatérale également.

Faite au-dessus de lombilic, la blessure infectante contamine
les ganglions de l’aisselle, du côté où elle est pratiquée.

De la tête ou du cou, l'infection gagne les ganglions sous-
maxillaires et cervicaux. Cette localisation des germes est si
précise qu'elle peut servir à explorer Le système lymphatique
du rat.

Toutes ces observations sont d'accord pour dénoncer l’ino-
culation cutanée et même signaler la région où elle s'est
faite.

Il fallait alors chercher comment elle se produisait.

Elle ne se fait pas par la cicatrice ombilicale ou le mamelon.
— Un certain nombre de rats capturés très jeunes et conservés
au laboratoire, isolés dans des cages, étaient porteurs de
bacilles quand on les sacrifiait à l'état adulte. Cette constatation
avait, tout d’abord, attiré notre attention sur une infection
possible de la cicatrice ombilicale.

En ce cas, ce serait toujours le groupe ganglionnaire axillaire
qui serait atteint et non pas le paquet de l’aine. La localisation
inguinale, si fréquente, nous a fait rejeter celte hypothèse.

L'infection par le mamelon doit être écartée pour des raisons
du même ordre. Si elle se faisait toujours par cette voie, elle
serait aussi commune dans l’aisselle que dans l’aine. D'autre
part, il est impossible de trouver des mamelons chez les
mâles qui sont, cependant, plus fréquemment infectés que les
femelles. Parmi les rats reconnus spontanément malades, nous
avons trouvé 6% p. 100 de mâles, et seulement 36 p. 100 de
femelles.

LA LÈPRE DES RATS 781

La localisation des germes ne renseigne pas sur le point de
départ de l'infection. — Pensant que la première mulliplica-
tion microbienne et aussi la plus importante devait se faire
toujours 22 situ au point d'inoculation, nous avions entretenu
l'espoir de découvrir la porte d'entrée par l'examen direct.

Sur un certain nombre de rats spontanément infectés, nous
avons pratiqué, avec le bistouri, des raclages successifs de la
parlie profonde du derme, en nous éloignant progressivement
du ganglion infecté. Avec la pulpe ainsi obtenue, nous prati-
quions des frottis et nous y recherchions les bacilles acido-
résistants. Cette méthode, qui nous permettait de trouver des
germes dans des régions assez éloignées de notre point de
départ, ne nous donnait que des indications trop vagues pour
pouvoir en tirer une conclusion.

Nous avons pris le parti de sacrilier le temps nécessaire à
faire l'examen d’un rat malade par fixation et coupe de la peau.

A cet effet, nous avons prélevé et fixé une notable étendue de
peau dans toute la région que les frottis nous avaient indiquée
comme contaminée. Cette pièce recouvrait plus de la moitié de
l'abdomen; elle s'étendaït à droite jusqu’à l’aine et comprenait
la peau du fourreau, des bourses et de la base de la queue.
Cette peau a été partagée en segments el coupée en série. Les
rubans, disposés parallèlement dans des portefeuilles en carton,
formaient des bandes de 25 centimètres environ.

Dix coupes de chaque bande ont été colorées et examinées.
Nous supposions qu'une zone d'infection plus intense nous
permettrait de découvrir le point d’inoculation primitif. Notre
espoir à été déçu, ainsi qu'en témoigne le schéma ci-après.
Nous avons trouvé des foyers échelonnés et nombreux indiquant
ou bien de multiples portes d'entrée, ou encore des lieux
d'élection du bacille qui s’y est multiplié plus qu'ailleurs. En
somme, le rat était plus infecté qu'il ne paraissait au premier
abord, et la maladie, loin d’être à son début, avait déjà envahi
une notable étendue de la peau.

Devant la difficulté de ces recherches histologiques et leur
incerlitude, nous avons renoncé à les continuer. Nos expériences
d'inoculation nous ont, d’ailleurs, averti de l'erreur qui les
avait motivées. Comme nous avons pu nous en rendre compte,
le point d'inoculation, non seulement n’est pas toujours le lieu

782 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

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Fic. 2. — La zone marquée de lettres indique l'étendue de la peau qui a
été fixée el coupée; les parties ombrées, le siège et le nombre relatif de

bacilles.

a

LA LÈPRE DES RATS 783

où les bacilles se sont mullipliés le plus abondamment, mais il
arrive parfois qu'il est le siège d’une infection insignifiante ou
même nulle, alors que les ganglions de la région sont remplis
de bacilles. On en verra des exemples dans les expériences que
nous avons rapportées plus haut.

Il n'y a pas de contagion génitale. — Une contagion génitale
nous avait paru tout d'abord vraisemblable, car nous avons
trouvé assez communément infecté le tissu conjonctif
sous-cutané de la vulve. Il est vrai qu'au contraire, nous
n'avons jamais vu de bacilles acido-résistants, ni dans la
peau du fourreau chez le mâle, ni sous la muqueuse du
pénis.

Pour élucider cette question, nous avons organisé deux séries
d'expériences. Dans l’une, quatre femelles ont été infectées à
la vulve et laissées dans une cage d'élevage en contact avec un
même nombre de mâles. Les animaux sont restés un an en
observation.

Plusieurs générations de petits sont sorties de cette souche.
Ni les mäles ni les pelits n’ont présenté la moindre trace de
bacilles acido-résistants.

Cependant les bacilles traversent la muqueuse saine du
fourreau. — Une autre cage d'élevage a servi à loger d’autres
familles de rats, deux mâles et quatre femelles. Aux deux
mâles, on avait introduit, dans le fourreau, et sans produire
aucune lésion, un peu de matériel très riche en bacilles acido-
résistants. Au bout d’un an, ces rats ont été sacrilés : les
femelles étaient saines, les deux mâles étaient infectés. Les
ganglions inguinaux, assez gros, renfermaient un grand nombre
de bacilles. Il y avait aussi des bacilles dans les ganglions axil-
laires. Chose curieuse, ni sur le pénis, ni sur le fourreau, on
n a trouvé trace d'infection.

Les arthropodes parasites des rats ne véhiculent pas les
germes. — L'hypothèse de la (transmission de la maladie par
des insectes parasités devait être aussi envisagée. Nos recher-
ches dans cette voie se sont trouvées tout naturellement limi-
tées. La lèpre du rat est une maladie très répandue, puisqu'on

78% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'a observée dans toutes les parties du monde. Là où elle existe,
elle frappe un assez grand nombre d'individus. Si ce sont
des insectes piqueurs qui véhiculent la maladie, ces insectes
doivent évidemment se rencontrer partout et s'y rencontrer
en grand nombre.

Trois parasites du rat réunissent ces conditions; ce sont deux
insectes, le pou du rat (Hæmatopinus spinulosus), une puce
(Ctenocephalus serraliceps), et un acarien (Lælaps echidninus).

Puces. — Quand elles sont nombreuses dans un élevage, les
puces font courir aux animaux de sérieux dangers.

Les souris sont tuées en quelques jours, non point comme on
pourrait le croire par un virus que transmettraient les insectes,
puisque l’inoculation du sang d'un animal mort à une souris
saine ne Cause aucun malaise à celle-ci; ce sont les piqüres
multiples auxquelles sont en butte les animaux d'expérience qui
amènent leur mort, soit par empoisonnement venimeux, soit par
anémie grave, comme en témoigne l'augmentation considé-
rable du nombre des poïkylocytes et des globules nucléés, soil
par suite des deux actions réunies.

Les rats sont moins sensibles que les souris, mais ils suc-
combent aussi, quoique moins vite, quand les puces sont nom-
breuses. Aussi doit-on veiller soigneusement à en limiter la
pullulation dans les bocaux d'expériences.

Nos recherches pour découvrir des bacilles dans le tube
digestif ou les organes des puces qui s'étaient nourries sur des
animaux sérieusement infectés, sont toujours restées vaines.

Poux. — En écrasant sur lame des poux prélevés sur des ani-
maux infestés, nous y avons bien découvert des bacilles acido-
résistants, mais différant assez sérieusement d'aspect avec les
bacilles de la lèpre. Ils sont plus gros, plus courts, avec des
extrémités plus arrondies et ne possèdent que des propriétés
acido-résistantes atténuées. A côté d'articles franchement
rouges après action de l'acide azotique au dixième, on en
trouve d’autres qui sont violets ou mème {otalement bleus.

Pensant qu'il ne fallait pas accorder trop d'importance aux
caractères morphologiques, nous avons fait passer des poux
d'animaux malades sur des animaux sains. Quand nous avons

LA LÊÈPRE DES RATS 785

opéré avec des rats gris, rats que nous avions cependant pris la
précaution de choisir très jeunes, nous avons observé qu'un
certain nombre d'entreeux après sixouhuitmoisétaient porteurs
de bacilles acido-résistants typiques dans leurs ganglions. Mais
outre que tous les animaux d’une même expérience n'étaient
pas malades, toutes les tentatives faites pour provoquer l’in-
fection chez des rats blancs d'élevage sont demeurées infruc-
tueuses.

Il faut donc croire à une infection discrète des rats gris,
infection qui s’est accusée au laboratoire avec le temps. Un
certain nombre d’autres rats choisis de même et conservés
dans les mêmes conditions, mais sans être soumis à une
phtyriase expérimentale, étaient infectés dans de semblables
proporlions après six ou huit mois de séjour au laboratoire.

Lœlaps. — Chez les Lœlaps, trois espèces de bacilles A. R.
ont été rencontrés : 1° un bacille court et trapu, ayant tous les
caractères de celui du pou; 2° un bacille long, filamenteux,
extracellulaire non alcoolo-résistant; 3° en grand nombre,
quand il existe un bacille intracellulaire, alcoolo et acido-résis-
tant qui morphologiquement rappelle celui du rat. Des expé-
riences en cours élabliront s'il s’agit d’un germe particulier
ou du bacille de Stefansky. Les Læœlaps infectés, 2 p. 1.000
environ, se trouvent aussi bien sur des rats malades que sur
des rats sains. Les élevages de rats blanes sont envahis par ces
acariens el jamais un cas de lèpre spontanée ne s’y est montré.

Sarcoptes. — Jolly, Mugliston, ont fait jouer aux acariens
de la gale un rôle important dans la transmission de la lèpre
humaine. La gale est une maladie commune des rats; c'est
une affection auss: répandue que la race murine elle-même, il
convenait donc de rechercher son influence dans la diffusion
de la lèpre. Pour élucider la question, nous avons fait vivre
dans la mème cage des animaux atteints de la gale et de lèpre
cutanée et des animaux sains. Voici une expérience qui a été
conçue sur ce thème :

Exp. VII. — % novembre 1909. Un rat d'expérience mâle, chez lequel on
constate la présence de nombreux acido-résistants au point d'inoculation,
situé à la base de la queue, est enfermé dans un bocal avec 4 rats blancs

50

786 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

femelles. Ce rat porte un peu de gale à l’un des points d'élection, c'est-à-dire
à la queue et au voisinage du point contaminé, on n'en voit pas encore ni au
nez, ni aux oreilles.

29 janvier 1910. — Un des rats blancs meurt. On trouve sur lui des puces et
des poux qu'on écrase sur lame et dans lesquels par coloration on ne découvre
aucun A. R. Le rat présente également quelques signes de gale à la base de
la queue.

On fait des frottis par grattage au bistouri des faces superficielles et pro-
fondes de la peau. Aucun A. R. n’est rencontré dans ces frottis, pas plus
que dans les ganglions de l’aine et de l’aisselle.

4 février. — Un autre rat blanc meurt avec les mêmes accidents et les mêmes
parasites que le précédent. Les ganglions inguinaux sont volumineux, mais
on n'y trouve, pas plus d’ailleurs qu'aux différents points de la peau explorés,
trace d'A. KR.

10 février. — Le rat gris infecté meurt. Il porte de très nombreux A. R. au
point d’inoculation et dans le voisinage. À la base de la queue, sous la peau
remplie de sarcoptes on trouve des bacilles en très grande quantité. Le tissu
conjonciif depuis le lien d’inoculation jusqu'aux ganglions inguinaux des
deux côtés renferme des A. R. Les ganglions eux-mêmes ne sont pas volu-
mineux, mais renferment cependant un très grand nombre de microbes
spécifiques.

25 février. — Le troisième rat blanc meurt. II est complètement galeux,
mais ne porte pas trace de lèpre. On ne trouve chez lui, malgré de nom-
breux examens, aucun bacille de Stefansky.

18 mars. — Le dernier rat, couvert de gale, est sacrifié. Pas d’A. R.

Comme on le voit par cette expérience, en passant d'un
animal à l'autre les sarcoptes n'emportent pas avec eux de
bacilles de Stefansky, même quand ils proviennent d'une
région infectée. Cette observation est d'accord avec Les prévi-
sions qu'on pouvait faire. Les sarcoples vivent dans l'épaisseur
de l’épiderme; parfois, à la vérité, ils pénètrent dans le derme,
mais ils sont logés dans leurs sillons et ne changent pas
d'hôtes. Sauf les cas où les animaux parasités les retirent et
les projettent sur d’autres par grattage, c'est par les larves
que la gale se transmet d’un animal à l'autre. Ces larves
passent d’un bocal où se trouvent des rats galeux à un bocal
voisin contenant des animaux sains. Elles se font véhiculer
par des arthropodes qui grimpent sur le verre. Nous avons vu
deux larves de sarcoptides que malheureusement nous n'avons
pu faire déterminer, sur les pattes d'un Lœlaps.

L'expérience que nous rapportons ci-dessus a été corroborée
par un très grand nombre d'observalions faites tant au cours
d'expériences pratiquées spécialement avec des animaux galeux,
qu'à l’occasion de plusieurs autres dans lesquelles la gale est

LA LÈPRE DES RATS 787

intervenue comme un épisode et a atteint non seulement les
animaux inoculés, mais des témoins conservés avec eux.

On peut donc dire que le sarcopte de la gale ne véhicule pas
ordinairement la lèpre. Mais il n'entre pas dans nos intentions
de dénier toute influence à la gale dans la transmission de la
maladie de Stefansky.On a vu, par les expériences d’inoculation
rapportées plus haut, qu'il suffisait d’un bacille bien placé pour
provoquer une infection.

La gale ouvre une porte d'entrée par laquelle la maladie peut
s'introduire, si la peau excoriée vient au contact d'une source
microbienne comme en portent les rats atteints de lèpre ouverte.

Demodex. — Nous n'avons pas pu vérifier par l'expérience
l'hypothèse ingénieuse de Borrel, et rechercher le rôle des
Demodex comme agents de dissémination. Certes, les Demodex
ne manquent pas chez les rats et, dans nos très nombreuses
coupes, nous en avons rencontré beaucoup; mais nous n'avons
jamais observé de rapports étroits entre ces acariens et les
germes qui s'accumulent en quantité si grande autour des
elandes sébacées et des follicules pileux.

Il ne nous paraît pas impossible, si ces Demodex, passant à
l'état de larves d'un animal à l’autre, emportent avec eux quel-
ques bacilles comme l’a vu parfois Borrel, qu'ils puissent com-
muniquer la lèpre aux animaux qu'ils parasitent. La facilité
avec laquelle nous avons obtenu la contamination de nos rats
d'expérience, plaide tout à fait en faveur de cette opinion. Mais
pour que les Demodex servent d'agents de transmission, il faut
un concours de circonstances qui ne doit pas se produire
souvent. La maladie de Stefansky est trop répandue pour n’avoir
que cet unique moyen de contage.

Morsures et contacts septiques servent à la propagation. —
L'influence d’un contact septique est certainement beaucoup
plus grande. Nous avons essayé à plusieurs reprises de la
mettre en évidence, mais nos expériences ne nous ont pas
donné de résultats assez nets pour que nous soyons autorisés
à les rapporter ici. Nous poursuivons d’ailleurs dans cette voie
toute une série de recherches sur lesquelles nous reviendrons
plus tard.

788 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Un phénomène que nous avons en tout cas observé couram-
ment, augmente singulièrement les chances de conlage. Quand
ils sont enfermés dans une même cage, les rals gris se battent
fréquemment, non point comme les souris quand on réunit
deux élevages, mais chaque fois qu'une cause de trouble ou de
frayeur se produit. Les animaux malades sont souvent en
butte à l'hostilité de ceux qui sont bien portants. Aussi, quand
on introduit un rat lépreux et ulcéré avec des jeunes, confiant
dans sa force et pour prévenir une attaque,il se jette en
général sur ses congénères et les blesse, ou même parfois les
tue. Les plus faibles se disposent en groupes pressés dans un
coin de la cage et cherchent à se cacher les uns derrière les
autres. Ce mode de groupement est d'ailleurs, on le sait, la
règle pour tous les animaux de l'espèce murine.

Ces mœurs à la fois batailleuses et craintives sont propres à
assurer d'une part la sortie des germes, et, d'autre part, leur
diffusion. Les blessures qu'on observe le plus facilement
sur les rats capturés sont à la queue ou chez les mâles à la
peau des bourses. Le siège de ces portes d'entrée explique
assez bien que la maladie se transmette fréquemment à l’ar-
rière-train, et que les ganglions inguinaux soient si souvent
atteints.

Pour nous assurer que des blessures de cette espèce peuvent
permettre l'infection, nous avons pratiqué, sur un cerlain
nombre d'animaux, avec la pointe d’un bistouri, des entailles à
la peau, comme pourraient le faire les incisives des rats. Sur
ces petites plaies nous avons très lègèrement, et sans enlever
les poils, passé un tampon de coton trempé dans un liquide
septique.

Exe. VIII. — Le 27 juillet 1911, on prélève sur un rat d'égout un peu de
tissu conjonctif rempli de bacilles A.R., on le broie en eau physiologique
et on le conserve à la glacière jusqu'au 16 août. A cette date, avec un bis-
touri on transperce la peau de 4 rats. La pointe de l'instrument a pénétré
un peu dans les muscles de la région fessière droite. Avec un tampon de
coton imbibé du liquide infectieux extrait de la glacière, on mouille lègère-
ment les poils des animaux blessés au droit de la porte d'entrée qui vient
d'être faite.

25 décembre 1911. — Un rat meurt. 11 porte des bacilles A.R. au point
d'inoculation et dans les ganglions inguinaux, qui sont d’ailleurs assez pelits.

5 janvier 1912. — Un deuxième rat succombe. Bacilles A.R. dans les gan-
glions inguinaux droits et gauches. Plus abondants à droite.

LA LÉPRE DES RATS 7189

9 janvier. — Décès d'un troisième ral qui, comme les deux précédents, a des
A.R. dans les ganglions inguinaux.

23 février 1912. — La mort du dernier rat se produit ce jour. On trouve
dans les ganglions inguinaux de très nombreux A.R.

Cette expérience, comme celles qui ont été rapportées plus
haut, montre la facilité avec laquelle peut se faire et doit se
faire dans la nature la contamination des rats chez lesquels on
trouve des bacilles spécifiques dans les ganglions de laine.

De nombreuses observations faites sur des rats trouvés spon-
tanément infectés contribuent fortement à établir le rôle des
blessures superficielles de la peau dans la transmission de la
maladie. Il arrive très souvent qu’on trouve le tissu conjonctif
périmammaire infiltré de pigment noir. Ce pigment est d’ori-
gine hématique, comme l'indique la réaction au ferrocyanure
de potassium. Or, presque chaque fois qu’existe cet apport pig-
mentaire, il y a infection lépreuse. Cette coïncidence est
mème si commune que nous pouvons presque à coup sûr
prévoir l'existence de bacilles d’après la couleur de la région
mammaire. Or, ce pigment ferrique se dépose dans le tissu con-
jonctif périganglionnaire et dans les ganglions quand on pro-
duit une blessure superficielle de la peau, comme on peut le
voir dans l'expérience II rapportée plus haut. Sa présence chez
des rats spontanément infectés indique donc très vraisembla-
blement que les bacilles se sont introduits par une plaie super-
ficielle de la peau ayant existé sur le territoire drainé par les
lymphatiques du ganglion malace.

Contamination axillaire. — L'infection des ganglions axil-
laires se fait aussi par morsures, nous en avons eu des preuves
indéniables, par envahissement bacillaire de cicatrices récentes,
chez des rats sauvages. Mais elle peut aussi emprunter une
autre voie.

Cerlains auteurs ont pensé à l'infection par les oreilles ou le
museau, qui sont fréquemment atteints de gale. Mais la porte
d'entrée est ici moins perméable qu’à la queue. La présence
des sarcoptes dans ces régions détermine la formation de véri-
tables épithéliomas par prolifération des cellules de Malpighi.
Des excroissances cornées quelquefois très proéminentes
s'élèvent sur le nez et les oreilles, et couvrent les sillons.

790 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

D'autre part, toutes nos recherches pour trouver des bacilles
dans les oreilles sont restées vaines.

L'infection n'a pu être produite au travers de la pituitaire.
— G. Dean signale la présence de germes spécifiques dans le
mucus nasal des rats lépreux, nous n'avons pas eu de peine à
vérifier l'exactitude de cette observation.

L'auteur anglais, appliquant au rat l'hypothèse énoncée par
Jeanselme et Laurens (1), et plus tard par Sticker (2), pense
que la pituitaire est une voie d’excrétion bacillaire et une
voie naturelle de contamination. Nous ne partageons pas cette
opinion. Une expérience qui, à la vérité, nous a surpris par
ses résultats, nous a montré la résistance de la pituitaire à
l'infection.

Nous avons frotté vigoureusement jusqu'à amener un petit écoulement
sanguin, les narines droite et gauche de 12 jeunes rats avec un bout de
coton imbibé de matériel septique qui a servi à en infecter 24 autres. Aucun
d'eux n’a été trouvé porteur de bacilles ni dans le nez, ni dansies ganglions
cervicaux, ni ailleurs.

C'est donc par une autre voie que se fait l'infection des gan-
glions axillaires.

Infection pulmonaire d'emblée par les voies digestives. —
Dans un lot d'animaux provenant d'un clos d'équarrissage, il
nous est arrivé d'en rencontrer un certain nombre chez les-
quels on trouvait des bacilles dans l’aisselle en grande quan-
tité el peu ou pas du tout dans l’aine.

Chacun d’eux avait aussi des A.R. dans le poumon et les
ganglions médiastinaux, phénomène qui ne doit pas surprendre
si on veut se reporter à ce que nous avons dit au chapitre de
l'anatomie pathologique.

Cependant un de ces animaux avait des A.R. seulement dans
le poumon et les ganglions médiastinaux, point du tout ailleurs.
De nombreux el soigneux examens nous permettent de l’af-
firmer.

(1) JEANSELME et Laurexs, Des localisations de la lèpre sur le nez, la
gorge et le larynx. Soc. méd. des H6p., 1897, 23 juillet.

(2) Sricker, Mittheilungen über Lepra nach Erfahrungen in Indien im
JEgypten. Münch. med. Wochensch., 28 septembre-5 octobre 1897 et Lepra
Confercnz. Berlin, 1897, 1re partie, p. 99.

LA LÉPRE DES RATS 791

D'où vient cette localisation intrathoracique ? L'expérience ei-
dessous en donne l'explication.

En faisant absorber à de petits rats des aliments infectés de
bacilles A. R., nous avons reconnu qu'on provoque parfois une
infection primitive du poumon.

Ex». IX. — Le 1° juillet 1910, un rat d'expérience 55 est sacrifié. 11 porte un
volumineux nodule à A.R. qu'on broie dans l'eau physiologique stérile. De
ce liquide très riche en bacilles on fait boire deux gouttes à huit pelits rats
blancs âgés de vingt-quatre jours.

12 octobre. — Un des rats est mort. Pas d'A.R. dans les ganglions super-
ficiels, ni dans les ganglions mésentériques qu'on recherche avec soin et
dont on examine attentivement plusieurs.

Il est un fait assez remarquable, c'est que les rats d'expérience qui ont main-
Lenant quatre mois sont restés notablement plus petits que des rats de cet
âge et même que des jeunes rats nés trois semaines après eux.

16 octobre, 9 heures. — Un des petits rats meurt sans A.R. dans les gan-
glions mésentériques, le foie ou la rate.

er décembre. — Un troisième rat est trouvé mort dans le bocal d’expé
rience. Il est putréfié tellement qu'on ne peut examiner les organes abdomi
naux. En ouvrant le thorax, on remarque que les ganglions médiastinaux sont
volumineux. Ils sont examinés et on y trouve un grand nombre d'A. R. Des
frottis sont aussi préparés avec des fragments des poumons prélevés à diffé-
rents endroits. Dans ceux qui ont été faits avec de la pulpe des sommets,
on rencontre un nombre relativement faible d'A. R. dont quelques-uns sonf
disposés en groupes de trois ou quatre.

2 décembre. — Un quatrième rat est mort aujourd'hui. L'autopsie complète
en est faite avec grand soin. Comme dans le précédent, les frottis des gan-
glions médiastinaux et des sommets pulmonaires renferment des A. R.
Dans la pulpe des deux poumons prise à la partie moyenne ou à la base, point
de bacilles. Tous les ganglions mésentériques qu'on peut trouver servent à
faire des frottis. Dans un d’entre eux, quelques bacilles A. R. peu nombreux
sont rencontrés. Rien par ailleurs.

16 décembre. — Décès d'un cinquième rat, dans lequel on ne trouve point
d'A. R.

5 mars 1911. — Le sixième rat meurt sans A. R.

21 avril. — Les deux derniers rats sont sacrifiés. Aucun A. R. chez eux. Ces

rats de onze mois étaient restés de pelite taille.

Voilà donc des rats d'élevage, nés au laboratoire et par con-
séquent indemnes de toute contamination spontanée, qui ont
simplement absorbé des bacilles, en grand nombre il est vrai,
et qui ont présenté une affection pulmonaire primitive. Dans la
paroi de l’æsophage, dans celles de l'estomac et de l'intestin
on n’a trouvé aucun dépôt bacillaire.

Les ganglions mésentériques n'étaient point particulièrement
volumineux et dans la plupart des cas n'étaient point infectés.

192 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Mais chez deux d’entre eux l'infection s’est faite beaucoup plus

loin
L Es . @ . . = . .
Comment expliquer cette immunité relative des ganglions

de la région qu'a traversée le virus et le transport des bacilles
au poumon? Tout s’est passé comme si les ganglions mésenté-
riques ne recevaient que les lymphatiques de la paroi intesti-
nale, ceux des villosités se dirigeant vers le canal thoracique.
Quant au mode d'introduction des bacilles, on peut le conce-
voir par la rentrée dans le circuit lymphatique de quelques-
unes des cellules migratrices qui existent si nombreuses dans
la lumière intestinale, et qui auraient absorbé un certain
nombre de bacilles. Retenues ensuite par le filtre pulmonaire,
elles ont servi à l'infection des ganglions médiastinaux.

Il faut aussi compter avec l'existence de quelques zones
dénudées d’épithélium le long du trajet de l'intestin. Le fait
que l'infection ne se produit pas dans tous les cas plaiderait en
faveur de cette hypothèse. Faut-il enfin admettre que ce bacille
immobile peut passer au travers des muqueuses saines, comme
il passe au travers de la peau épilée? 11 nous est impossible
pour le moment de prendre parti dans la question. Des expé-
riences en cours nous renseigneront peut-être plus tard.

Quel que soit le mode de pénétration des germes, la paroi
intestinale une fois franchie, la majeure partie des cellules
parasitées se rend, non dans les ganglions mésentériques,
mais dans le canal thoracique, voie par laquelle elles gagnent
le poumon.

Il est vrai qu'on peut faire une autre hypothèse pour expli-
quer cet envahissement pulmonaire précoce et admettre que
l'infection passe par les premières voies digestives .

Mais en ce cas on devrait rencontrer des bacilles dans les
ganglions cervicaux aussi bien que dans les ganglions médias-
tinaux. C’est une constatation que nous n'avons pas faite. La
localisation des bacilles et l'absence de germes dans la sous-
muqueuse æsophagienne nous portent à écarter cette interpré-
tation, Nous sommes au contraire conduits à regarder comme
probable la pénétration au travers de l'intestin, puisque nous
avons dans un cas trouvé des bacilles dans un ganglion mésen-
térique.

Cette observation d'infection pulmonaire dans la lèpre du

LA LÈPRE DES RATS 793

rat après ingestion de matériel septique concorde avec les faits
signalés par Calmette dans la tuberculose. Dans cette maladie
comme dans la lèpre, le bacille spécifique, par la voie Iympha-
tique, arrive très vite au poumon, mais le bacille tuberculeux,
parce qu'il est toxique et qu'il immobilise rapidement la
cellule hôte, reste dans le poumon au lieu d’être évacué sur les
ganglions.

Comment se contaminent dans la nature ces rats sauvages ?
Nous avons pu observer que les murins nourris avec de la viande,
même quand ce sont des rals blancs d'élevage, perdent cette
humeur douce qui les fait rechercher dans les laboratoires. [ls
deviennent batailleurs et mordent fréquemment ceux qui les
soignent£.

Des rats sauvages vivant dans un clos d'équarrissage, se nour-
rissent évidemment de la viande des animaux aballus. Les
batailles parmi eux doivent devenir plus fréquentes, et bien
des animaux parasilés qui, nous le savons, sont souvent en
butte aux attaques des rats sains, succombent dans ces luttes
et sont dévorés par les vainqueurs. Par la voie digestive,
comme aussi par les pattes antérieures, qui sont chez le rat des
organes de préhension, l'infection peut passer assez facilement
aux animaux sains et gagner poumons et ganglions axil-
laires.

Une autre hypothèse dont nous n'avons pas encore pu établir
la valeur, se présente naturellement à l'esprit : le bacille qui
contamine le rat peut vivre aussi dans les débris de viande que
dévorent les rats. Si ce fait était établi, il expliquerait assez bien
pourquoi on trouve en plus grand nombre les rats lépreux
dans les abattoirs, les dépôts d'os et les clos d’équarrissage.

L'alimentation carnée n'influe pas sur la marche de la
maladie. — Nous avions cru qu'il fallait attribuer à l’alimen-
tation carnée la propriété de favoriser le développement des
germes chez les animaux infectés et l'apparition des sligmates
de lèpre.

Pour nous en assurer, nous avons organisé une expérience
sur quarante-deux rats blancs qui tous ont été infectés par
badigeonnage septique de la peau du dos épilée. Ces animaux
ont été partagés en deux lots de vingt et un, dont l’un a reçu

79% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

comme alimentation du pain mouillé et du grain, l'autre du
grain et de la viande crue.

Nous ne rapporterons pas dans le détail cette expérience qui
a duré près de huit mois. En voici les résultats.

Comme dans toutes nos expériences, la plupart des rats sont
morts spontanément de cette pseudo-tuberculose qui nous
enlève tant de sujets d'expérience. Un certain nombre d'entre
eux ont succombé avant que l'infection par les bacilles A. R.
soit facilement perceptible.

Sur les rats nourris avec de la viande l'infection s'est révélée
plus tardivement; le premier animal pris n'a été vu que quatre
mois après le début de l'expérience, alors qu'au bout de deux
mois l’infection était diagnosticable chez les animaux nourris
avec des hydrates de carbone. Du quatrième au huitième mois,
les rats à viande étaient porteurs d'un plus grand nombre de
bacilles que les autres, mais la proportion des malades a été
finalement plus grande chez les rats à hydrates de carbone
(66,6 p. 100, contre 50 p. 100 chez les autres). Il ne faut pas atta-
cher à celte dernière conclusion une importance très grande
parce qu'elle découle naturellement du fait que ces animaux
ont élé porteurs de bacilles d’une facon plus précoce. Ceux qui
sont morts entre le deuxième et le quatrième mois sontnaturelle-
.ment venus corser la stalistique, puisque le premier malade
dans la série à viande ne s’est montré qu'à cette dernière
époque. En somme, le régime carné n'a pas d'influence sur le
développement de la maladie lépreuse des murins.

Chez tous ces rats, comme chez la majeure partie de ceux
que nous avons contaminés expérimentalement, les ganglions
malades n'étaient pas augmentés de volume et l'infection n'avait
point, comme dans la maladie spontanée, gagné les tissus
VOISINS.

On peut se demander tout d'abord si le gonflement ganglion-
naire est bien sous la dépendance de l'infection bacillaire,
comme tendrait à le faire croire l'examen des animaux spon-
tanément atteints de lèpre. Il est permis d'en douter. L'hyper-
trophie des ganglions est tellement commune chez les rats
d'égouts qu'il ne faut guère s’élonner de la rencontrer souvent
sur les rats lépreux. Cette adénite n’est d'ailleurs pas, comme
nous l’avons écrit au début de ce mémoire, aussi constamment

LA LÈPRE DES RATS 795

observée dans la lèpre que certains auteurs l'ont prétendu. En
tout cas, elle n'autorise pas un diagnostic que seul l'examen
microscopique permet de porter.

L'inoculation de virus pur donne toujours la forme ganglion-
naire. — La localisation presque exclusive et constante de
l'infection aux ganglions indique qu'il manque chez les rats
d'expérience un facteur favorisant qui se rencontre dans la
nature pour produire la lèpre vraie. La détermination de ce
facteur a été pour nous pendant longtemps un problème obsé-
dant dont la solution nous a été apportée par une expérience
que nous relatons ci-après.

L'inoculation impure produit la forme musculo-cutanée. —
L'un de nous, ayant obtenu en milieu impur la culture d’un
bacille acido-résistant qui peut être le bacille de Hansen (1),
et étant convaincu du rôle des infections secondaires dans la
généralisation de la lèpre humaine (2), plusieurs expériences
furent entreprises pour rechercher l’action des inoculations
impures sur le développement de la lèpre des rats. L’inspira-
tion était bonne, comme le prouve celle qui suit et que nous
donnons à titre d'exemple.

Exr. X. — Le 18 décembre 1909, un rat blanc d'expérience 52, est sacrifié.

On en retire du matériel septique, ganglions et tissu conjonctif, qui, par
broyage dans l’eau physiologique, donne un liquide très riche en A.R. A ce
liquide est ajouté un peu d’une culture en gélose d’un coccus retiré du mucus
nasal d’un lépreux. Avec ce mélange, six rats blancs sont inoculés sous la
peau du dos à la base de la queue.

26 décembre. — Tous les rats portent une plaque d'induration au point
où ils ont reçu le virus impur. Tous ont des ganglions inguinaux gros el
durs.

3 janvier 1910. — Un des rats est sacrifié. Il porte de gros ganglions, mais
aucun des frottis faits avec la pulpe qui en est retirée ne renferme d'A.R.
Au point d'inoculation, on en retrouve un certain nombre.

18 juin 1910. — Un rat meurt ce jour. Au point d’inoculation, il porte une
plaque de tissu conjonctif chagrinée, très fortement adhérente en son milieu
aux tissus sous-jacents. Les ganglions inguinaux sont volumineux.

Dans le nodule d'incculation, il y a une très grande quantité d’A.R., de

(1) Marcaoux, Culture d'un bacille acido-résistant provenant du mucus
nasal des lépreux. Bull. Soc. de Path. exot., t. IV, 1911, p. 89.

(2) Marcaoux, Les migrations du bacille de la lèpre. II° conférence de la
lèpre, Bergen, 1910, III: vol., p. 57.

796 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

mème que dans les ganglions. On en trouve aussi par raclage de la partie
profonde de la peau entre le point d’inoculation et les ganglions.

Le paquet ganglionnaire de l'aisselle renferme aussi une notable quan-
tité d’'A.R.

6 juillet. — Un troisième rat succombe. Au point d'inoculation, il porte une
plaque de la dimension d'une pièce de 1 franc formée de tissu conjonctif
épaissi et chagriné.

Les A.R. fourmillent dans les frottis faits avec les produits de raclage de
ce nodule.

Tout autour les tissus paraissent normaux, mais ils renferment une notable
quantité de bacilles.

C'est surtout à la face ventrale que se trouvent les lésions les plus
étendues etles plus caractéristiques. Deux larges bandes de tissu conjonctif
épaissi et chagriné entourent les ganglions inguinaux et forment comme un
plastron qui double la peau à la région ventrale d’un flanc à l'autre. Ce
plastron se prolonge en avant par de longues ailes de forme vaguement
triangulaire, qui s'étendent de chaque côté de la ligne blanche jusqu'au
thorax. Du côté droit, le plastron basal est plus large et l’aile antérieure plus
longue, elle atteint l’aisselle.

Les ganglions de l’aine et de l'aisselle sont tous tuméfiés.

Dans ces tissus lésés et dans les ganglions se trouve une masse énorme
de bacilles spécifiques, en nombre aussi considérable que dans la maladie
naturelle.

Il y a des A.R. dans les poumons, les ganglions médiastinaux. On en
trouve aussi dans la rate, le foie et dans un ganglion mésentérique.

271 juillet. — Décès d'un quatrième rat, pour lequel on ne peut trouver la
cause de la mort, ni par examen direct ni par ensemencement du sang ou
des organes. Cet animal porte aussi au point d'inoculation une large plaque
de tissu conjonctif épaissi et bourré d’A.R. Il existe en avant des groupes
ganglionnaires inguinaux des lésions macroscopiques, mais moins impor-
tantes que chez le rat précédent. Il y a également chez cet animal une
infection discrète du foie et de la rate.

9 août. — Les deux rats qui restent sont aveugles. Les trypanosomiases
amenant assez fréquemment de la cécité, on cherche chez eux des trypano-
somes sans en trouver. Les deux animaux sont sacrifiés. Ils sont porteurs de
lésions spécifiques semblables à celles des deux rals précédents.

Chez le premier, le plastron ventral, un peu plus étendu que sur le rat
mort le 27 juillet, l’est cependant moins que sur celui qui a succombé le
18 juin. La lésion est surtout importante à droite. Tous les ganglions super-
ficiels de l’aine et de l’aisselle sont. hypertrophiés et remplis de bacilles.
Lésions discrètes du foie et de la rate.

Le deuxième rat est porteur de lésions semblables, mais un peu moins
étendues. |

En faisant un froltis de la cornée opacifiée, on y trouve une grande quan-
tité d’A.R.

Cette expérience a été vérifiée par plusieurs autres dont les
résultats ont été les mêmes, quoique moins remarquables. C'est
parce qu'elle à été particulièrement démonstrative que nous
l’avons rapportée ici. Pour les autres expériences, ce n'est pas

LA LÉPRE DES RATS 197

le même microbe d'impurelé qui a servi. Chaque fois, il
s'agissait d’un slaphylocoque pyogène, mais différent. Ces
expériences de vérification ont été accompagnées de témoins.
En même temps quétail faite l'inoculation impure à une
série d'animaux, une autre recevait le liquide de broyage
sans addition de germes étrangers. Sans doute, même dans ce
cas, il ne peut être question de pureté absolue, car au cours
de la préparation du liquide, malgré l'emploi de verres, de
baguettes et d’eau physiologique stériles, il s’'introduit des
germes étrangers, mais Ceux-ci, ou bien ne sont pas patho-
gènes el par conséquent sont immédiatement détruits, ou bien
sont en trop petit nombre pour exercer une action importante.

Sur les témoins, il n'a été observé aucun symptôme de géné-
ralisalion. Comme toujours, l'infection était limitée aux gan-
glions, restés de faible volume, et parfois au point d'inoculation.

On peut donc admettre que dans la nature, les mèmes phé-
nomènes se représentent et qu'il faut, pour causer cette lèpre
musculo-cutanée, le concours d’une impureté.

Le fait est que chez les rats malades on rencontre presque
toujours des lésions pyogènes, des abcès produits par des
microbes étrangers, des staphylocoques souvent. Une fois
même, dans des coupes de la peau œdématiée, nous avons
trouvé une infiltration de staphylocoques qui avait fusé dans le
tissu conjonctif et provoqué un «ædème avec diapédèse intense
de polynucléaires.

En revanche, chaque fois que nous avons trouvé des rats à
infection limitée aux ganglions, la peau était très nette et rien
autre que le microscope ne permettait de porter un diagnostic.

PARALLÈLE ENTRE LA LÈPRE HUMAINE ET LA LÈPRE DU RAT.

Si nous voulons établir entre la lèpre humaine et la lèpre du
rat un rapprochement que légitime la similitude des deux affec-
tions, nous pourrons, d’après ce qui précède, formuler sur la
maladie de l'homme quelques hypothèses qui en éclaireront
singulièrement l’épidémiologie.

Infection hansénienne et lèpre ne sont peut-être pas syno-
nymes. — Tout ce qu'on connaît sur la lèpre concourt à

798 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

désigner le revêtement cutané comme le siège de la première
inoculation. Nous venons de voir qu'il en est de même pour
le rat.

La moindre érosion de la peau suffit au bacille de Stefansky
pour pénétrer dans l'organisme. Le bacille de Hansen se com-
porte peut-être bien de la même façon. La difficulté apparente
de contagion de la lèpre ne serait qu'une illusion. Comme chez
le rat, infection ne signifierait pas toujours maladie. Il pourrait
y avoir, dans les pays à lèpre, beaucoup plus de personnes
atteintes qu'on ne le suppose, mais chez la plupart le bacille
spécifique cantonné dans un coin de l'organisme y sommeille-
rait longtemps et souvent pendant toute la vie de l'hôte
insoupçonné qui l'héberge.

Les autopsies de gens vivant au voisinage de malades,
peuvent seules renseigner sur la réalité des faits dont nous
émettons la supposition. Il conviendrait de rechercher les
sermes dans les ganglions superficiels ef dans les ganglions
médiastinaux, ces derniers étant sans doute, chez l’homme
comme chez le rat, un réservoir où se déversent les bacilles
venant de tous les points de l’organisme.

Ces lépreux latents deviendront des Jépreux avérés quand une
impurelé favorisante aura pénétré dans leur organisme ou
quand une cause de déchéance physique aura diminué leur
résistance. Ce serait à de longues somnolences des germes
qu'il faudrait attribuer ces incubations prolongées si fréquem-
ment citées. Ce serait à la lèpre latente qu'il faudrait faire
remonter ces cas erraliques qui surgissent tout à coup dans
une région sans qu'il soit possible d’en établir la filiation.

Chez l'homme, sans doute, comme chez le rat, la lèpre
marche vite quand elle succède à une inoculation impure qui a
provoqué une suppuration; elle évolue tardivement quand les
germes sont restés inclus dans les organes Iymphatiques et
qu'une cause accidentelle vient les réveiller de leur long
sommeil.

Le contact septique est probablement la cause de l'infection.
— Le transport et l'inoculation des germes par les insectes
piqueurs ne méritent sans doute pas plus d'attention pour la
maladie humaine que pour la maladie murine. Quant à la gale,

LA LÈPRE DES RATS 799

elle peut exercer une certaine influence, par les lésions de la
peau qu'elle cause. Rien ne s’oppose à ce que le Demodex soit
un agent de transport. |

La pénétration des germes par les voies digestives est beau-
coup plus difficile à admettre, elle se fait seulement quand
des masses considérables de germes traversent l'intestin. Si
cette éventualité a des raisons de se produire chez les rats qui
se mangent entre eux, il n'en est pas de même pour l'homme,
qui n'ingère de germes qu'à l’élat d'unités et par conséquent
sans courir de grands risques.

Chez l’'homme,comme chez le rat,le mode de contagion habi-
tuei estsürementle contact, mais un contact intime qui n’a plus
que de rares chances de se produire avec la civilisation euro-
péenne actuelle. C'est parce que le voisinage des malades dans
les hôpitaux est bien loin de l'antique promiscuité, que nous ne
voyons plus les cas de lèpre essaimer comme au moyen àge.
Nos malades hospitalisés ne couchent plus à huit dans le
mème lit et portent des vêtements qui leur sont propres.

En dehors des rapports sexuels, les contacts corporels ont
bien peu de chances de se produire entre les membres de la
population parisienne. Il n’en est point de même dans les pays
où la lèpre se multiplie encore. Nous avons constaté une sin-
eulière promiscuité à Saint-Dalmas-de-Valdeblore, où l’un de
nous, en Collaboration avec Bourret (1), fit une enquête dans
un petit foyer de lèpre encore en activité. C'était dans une
maison d’une malpropreté insigne, où les lits n'étaient sans
doute jamais faits, et les draps, autant que nous en pümes
juger par la couleur, jamais changés. Les habitants de cette
maison au nombre de quatre, auraient pu avoir chacun leur
chambre, le nombre des pièces le permettait, cependant ils
couchaient deux à deux. La mère lépreuse partageait son lit
avec son fils, un grand gaillard de dix-sept ans et de 1*80 de
hauteur, et n'y voyait point de mal. Deux sœurs, dont une
lépreuse, dormaient ensemble.

Ces conditions se rencontrent encore très souvent dans nos
colonies, non seulement parmi les indigènes, mais aussi parmi les

(1) Marcuoux et Bourrer, Enquête étiologique dans un foyer de lèpre. Bull.
de la Soc. de Path.exot.,t. I, 1908, p. 288.

800 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Européens, qui perdent très vite dans le milieu où ils vivent
les principes d'éducation et d'hygiène élémentaire qu'on a eu
tant de peine à leur enseigner en France.

Elles se trouvent aussi réunies pour les membres d’une même
famille. Dans beaucoup de pays les conjoints n’ont qu'un seul
lit et couchent souvent leurs enfants avec eux, au moins
quand ils sont jeunes. Les mères lépreuses pour soigner et
allaiter leurs nourrissons les exnosent à de grandes chances d’in-
fection. On est même surpris que dans les familles où la mère
est malade tous les enfants ne soient pas atteints. Si, comme
dans la statistique de Sand (1), on ne relève parmi eux que
10 p. 100 de lépreux, cela ne veut pas dire qu'il n'existe pas
des lépreux latents en bien plus grand nombre.

Il faut peut-être aussi, parmi les causes de contagion, faire
une place assez large au contact indirect par échange de vête-
ments et lavage de linges souillés.

Dans les idées traditionnelles qui ont survécu à plusieurs
générations, il y a presque toujours une part de vérité. Sous sa
gaine glutineuse, le bacille de la lèpre résiste peut-être mieux
que celui du rat à la dessiccation. En tout cas, il peut se trouver
dans des humeurs encore assez fraîches sur des vêtements qui
viennent d'être quittés ou sur du linge qui a récemment essuyé
des plaies septiques. Les blanchisseuses, par profession, ont
souvent l’épiderme des mains éraillé ou fendu, tout préparé
pour recevoir les germes.

L'infection produite chez des rats mâles par simple inser-
tion de bacilles spécifiques dans le fourreau, sans lésion de la
muqueuse, semble indiquer que les rapports sexuels impurs
soient à redouter comme cause de contagion.

Direct ou indirect, le contact joue sûrement le rôle principal
dans l’épidémiologie de la lèpre. Cette importance de l'étroite
promiscuité découle de l'efficacité des mesures prises en Nor-
vège, où il a suffi de faire vivre les lépreux à l'écart des personnes
saines et sans les éloigner de la maison familiale pour arrêter
la lèpre.

(1) A. Saxp, Geschicht die Ansteckung der Lepra durch unmillelbare Ueber=
tragung? II° conférence de la lèpre. Bergen, 1910, Ifle vol., p. 39.

LA LÉPRE DES RATS 801

ConcLuSsIONS.

1° Il n'est pas tué par une exposition de cinq minutes à la
température de 60 degrés. Il meurt à la même température en
un quart d'heure;

20 Si l'infection est plus considérable dans les régions super-
ficielles, c’est qu’elle entre par la peau;

3° Elle suit les trajets Iymphatiques;

4° Le point d’inoculation n'est pas toujours la région de la
peau la plus infectée;

5° Des mâles s’infectent quand on dépose des bacilles dans
le fourreau sans faire aucune lésion de la muqueuse;

6° Cependant la maladie spontanée ne paraît pas se trans-
mettre par la voie génitale ;

1° Les insectes ne véhiculent pas la maladie ;

S° Les sarcoptes de la gale ne peuvent jouer qu'un rôle
indirect dans la diffusion de la lèpre ;

9° Le contact d’une peau lésée avec une peau malade ou
avec des objets fraîchement souillés est le mode de contagion
ordinaire ;

10° Une grande quantité de germes introduits par la voie
digestive donne une infection primitive du poumon ;

11° Les ganglions des rats inoculés artificiellement sont
généralement petits, contrairement à ceux des rats spontané-
ment malades ;

12° C'est la forme ganglionnaire qu’on provoque toujours par
inoculation. Pour donner la forme musculo-cutanée, il faut
injecter des produits impurs.

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL

(SECOND MÉMOIRE)

EXPÉRIENCES SUR LE COBAYE

par E. CÉSARI

Le cobaye passe pour quasi réfractaire au bacille de
Schmorl : il n’en est rien. Le D' Girard (recherches inédites)
a étudié jadis, ici, les îlots nécrotiques que l'on rencontre
à l’autopsie de certains sujets et a pu y déceler, par l'examen
microscopique et les cultures, la présence du bacille de la
nécrose. Mèmes résultats à Mexico, chez un cobaye auquel il
avait injecté, dans le périloine, le sang d’un individu atteint de
typhus exanthémalique. Voilà pour la maladie naturelle; quant
à la maladie expérimentale, elle a été de notre part l'objet de
recherches suivies et nous espérons en montrer tout l'intérêt
dans les lignes qui vont suivre.

Nous étudierons successivement les injections sous-cutanées,
intraveineuses et intrapéritonéales.

INJECTIONS SOUS-CUTANÉES

Suivant les conditions expérimentales, on observe divers
types cliniques qu'il est indispensable de bien connaître. C'est
seulement, en effet, après avoir vu se dérouler sous ses yeux
les images variées qui traduisent les réactions variées de l'or-
sanisme au bacille de la néerose (et à sa toxine, que l’on peut
tenter de pénétrer plus avant dans la pathogénie des affections
dues à ce microbe.

Rien de plus facile que de réaliser les types dont nous par-
lons. Prenons une culture en bouillon Martin glucosé (2 p.1.000),
culture ayant séjourné vingt-quatre heures à 37 degrés (1).

1) Toute notre étude expérimentale a été faite sur l'échantillon dit Prinus.
Nous nous sommes assuré, préalablement, que les autres races, isolées avec
V. Alleaux, déterminaient des effets à peu près identiques.

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 803

Injectons 1 cent. cube du liquide, bien agité, sous la peau d’un
cobaye (animal de 500-600 grammes): nous obtenons un type
que nous appellerons type C (réaction à la somme : microbes
+ toxine). Centrifugeons à fond, avec l'appareil de Jouan, la
même culture et injeetons 1 cent. cube du liquide clair : nous
observons le type dit conventionnellement A (réaction à la
toxine. — Les quelques corps microbiens restés dans le liquide
sont négligeables; on obtient d’ailleurs des effets identiques
avec les filtrats, mais il faut forcer la dose). Lavons (une fois)
lie dépôt de centrifugage à l'eau physiologique et rétablissons
le volume initial de culture avec de l’eau physiologique,
puis injectons 1 cent. cube du liquide bien agité : nous réali-
sons le type E (réaction aux microbes). On Hbc al tous les
types intermédiaires entre À et C{ schématisables par un stade
moyen, B) en centrifugeant de moins en moins complètement
la culture, c’est-à-dire en injectant, avec le liquide clair, des
quantités de plus en plus grandes de microbes. Inversement,
on réalise tous les types intermédiaires entre E et C (schéma-
tisables par un stade moyen, D) en lavant de moins en moins
complètement le dépôt de centrifugage, c'est-à-dire en injec-
tant, en plus des corps microbiens, des doses croissantes de
toxine.

Nous décrirons d’abord, avec les détails nécessaires, les /ypes
principaux : À (toxine), E (microbes) et G (toxine + microbes),
en mentionnant les formes dérivées quantitativement (injection
de volumes de liquide supérieurs ou inférieurs à 1 cent. cube,
injection de cultures plus ou moins vieilles) et qualilativement
(injection de liquides chauffés ou soumis à un centrifugage
exagéré). Il suffira, ensuite, de dire deux mots des types Bet D,
faciles à imaginer.

A la description des types cliniques fera naturellement suite
l'étude des conditions qui permettent de les réaliser.

DESCRIPTION DES TYPES CLINIQUES
Tyre À (Torine).

Forme crassique. — Elle se caractérise par la production d'une
eschare humide, à apparition rapide, dont on peut schématiser
ainsi l’évolution.

804 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Quelques heures après l'injection (1) (4 cent. cube de liquide
clair), on observe un ædème mou, allant du volume d’une
noix à celui d’un œuf de pigeon. Sur cet œdème, la peau
montre une tache vert pâle, humide, cerclée de rouge sombre,
dont la surface répond à celle d’une pièce de 1 ou 2 francs. —
Le lendemain, Vempâtement hypodermique s’est aplati, la
tache cutanée commence à brunir et à sécher par endroits. —
Le surlendemain, Veschare est devenue complètement sèche et
d'un noir de jais; l'infiltrat sous-cutané forme un disque de
consistance rénitente. — Le 4° jour, l'eschare commence à se
soulever et on aperçoit un ulcus sec, alone, couleur maigre de
jambon. — Le 5° jour, le disque sur lequel reposait la lésion
nécrotique s’est très aminci. — Du 6° au T° jour, l'eschare
tombe; l'uleus sous-jacent n'est bordé que par un cerele
induré étroit. — Puis, la perte de substance diminue peu à peu
d'étendue et de profondeur et la cicatrisation est accomplie
quinze jours environ après l'injection. — En dehors des com-
plications (assez rares), les animaux ne succombent jamais;
ils n'offrent qu'une émaciation légère ou même nulle.

FORMES DÉRIVÉES QUANTITATIVEMENT. — Si l’on augmente la
quantité de liquide injectée, les lésions augmentent également
détendue el les complications se montrent plus fréquentes.
Si on la diminue, l'empâtement et l’eschare diminuent, jusqu'à
ce que, finalement, tout se réduise à un infiltrat modéré, recou-
vert de croûtelles (auxquelles font suite des érosions superfi-
cielles), puis à un simple œædème transitoire.

FORMES DÉRIVÉES QUALITATIVEMENT. — Les liquides chauffés,
injectés à dose suffisante, déterminent l'apparition d’un em-
pâtement et d’une eschare aussi marqués que dans le type
classique, mais l'aspect initial diffère. Le premier jour, simple
ædème; le lendemain, fache violette plus ou moins foncée
selon les cas (souvent très pâle) et à peine humide. Puis,
eschare brun foncé, ulcus, ete., comme dans la forme normale.

Coupricarions. — M. M. Nicolle à fait connaître depuis long-
Lemps les complications que l'on rencontre, chez les cobayes, à

(4) Avant la fin de la première heure, l’eschare s'annonce déjà, loco tæso,
par une teinte bleu-verdâtre des téguments.

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 805

la suite de linjection (et, notamment, de l'injection sous-
cutanée) de divers microbes et toxines. Ces complications, géné-
rales ou locales, sont dues, habituellement, soit à la pasteurella,
soit au pneumocoque. Nous croyons inutile de les décrire à nou-
veau. Disons. simplement, qu'au cours de nos expériences sur
les cobayes ce sont surtout les infections secondaires à pasteu-
rella que nous avons observées.

Type E (Microbes).
]

Forme ccassique. — Elle se traduit par le développement
d'un bourbillon sous-cutané, qui évolue schématiquement
comme il sui.

Quelques heures après l'injection (1 cent. cube de culture
lavée), apparaît un œdème mou, généralement peu étendu et
sans mortification de la peau susjacente. — Le lendemain, cet
œædème dessine une tuméfaction arrondie ou allongée, réni-
tente, dont le volume oscille entre celui d’une amande et celui
d'une noix. — Le surlendemain, lempâtement durcit. — Le
4° jour, on perçoit souvent une fluctuation obscure. — Le
»° jour, la fluctualion, toujours nette, répond à lout où partie
de l'intiltrat hypodermique. — Du 6° au T° jour, la ponction
donne issue à du pus, entourant un bourbillon plus ou moins
adhérent encore aux tissus profonds. Ce bourbillon, qui repré-
sente l’exsudat sous-culané nécrosé en bloc, ne diffère en rien
de celui d’un furoncle. Il contient, ainsi que le pus, des
bacilles nombreux et caractéristiques. — Du 8° au % jour, si
l'on n'a pas ponetionné la peau, on la voit offrir, sur un point
limité (tète d'épingle, lentille, au plus), une tache escharo-
tique brunäâtre, qui rappelle l'aspect d’une fine brûlure au
thermocautère. En ce point, les téguments, très amincis,
laissent sortir, par la simple pression, le pus et le bourbillon
hypodermiques. — Du 10° au 11° your, le bourbillon s’évacue
de plus en plus complètement, surtout si on l’aide à se déta-
cher des parties saines. — Pans, la cavité se comble peu à peu,
à mesure que l’empälement limitant rétrocède; la suppuration
diminue régulièrement et lout est fini quinze à vingt jours
après l'injection. — Les complications sont un peu moins rares
que dans le type A. Quand elles font défaut, le pronostic est
aussi bénin.

'

806 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

FORMES DÉRIVÉES QUANTITATIVEMENT. — Si l’on augmente la
quantité de liquide injectée, les lésions augmentent d’étendue
et l'eschare apparaît (passage au type D). Une forme pareille-
ment « exagérée », mais sans eschare, s’observe aussi, de temps
en temps, à la suite de l'injection d'un seul cent. cube (sensi-
bilité plus grande de certains sujets au regard des germes).
Dans les deux cas, les phénomènes caractéristiques ne se
dessinent d'habitude qu'après quelques jours. La lésion s’ac-
croit alors assez rapidement et il se forme un véritable abcès
froid (parfois très vaste) à parois épaisses, dont la marche est
lente et qui devient volontiers le point de départ de complica-
tions locales et générales.

Si on diminue la quantité de liquide injectée, les lésions
diminuent également (pois, lentille), comme ïl fallait s’y
attendre.

FORMES DÉRIVÉES QUALITATIVEMENT. — Si l’on injecte des cul-
tures soumises à un lavage exagéré, on n’observe, pendant plu-
sieurs jours, aucun phénomène réactionnel local. Puis appa-
rait un nodule qui durcit, fluctue au centre et évolue
généralement assez vite. Ses dimensions dépassent rarement
celles d'une amande.

ComericaTions. — Plus fréquentes qu'avec le type À, surtout
dans les formes « exagérées ».

Tvre C(Microbes + loxine).

FORME cLAssiQuE. — Elle représente, cela va de soi, la somme
des types A et E, c'est-à-dire l’eschare humide unie au bourbillon
sous-cutané. Le bourbillon est mis ici directement à nu, sans
suppuralion éliminatrice. L'évolution peut être schématisée
comme il suit.

Quelques heures après l'injection (1) (4 cent. cube de culture
totale), on observe un œdème mou, crépitant (sauf dans le cas
des germes qui fermentent peu le glucose), allant du volume
d'un œuf de pigeon à celui d’un petit œuf de poule. Sur cet
œdème, la peau montre une tache humide, absolument iden-
tique à celle qui caractérise le type A. — Le lendemain,

(1) Comme dans le type A, on peut déjà percevoir au point injecté, avant
la fin de la première heure, un changement de couleur de la peau caractéris-
tique de sa mortification commencçante.

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 807

l’œdème, stationnaire‘fou plus étendu, demeure encore habi-
tuellement crépitant; l’eschare humide offre l'aspect d’une
« peau morte », entourée d’un cercle brun violacé. — Le
surlendemain, V'infiltrat hypodermique s'allonge et devient
plus ferme ; l'eschare brunit, sèche et se plisse. — Le
4° jour, l'eschare fonce et se rétracte. — Le 5° jour, elle à
pris un ton noir de Jais et commence à se soulever; on aper-
çoit, alors, le bourbillon (exsudat nécrosé en bloc, comme dans
le type EË) qui tapisse l’ulcus sous-jacent. L'empâätement, ferme,
a beaucoup rétrocédé. — Du 6° au T° jour, l’infiltration forme
un disque qui offre, souvent encore, des prolongements en
haut et en bas. L'eschare tombe, entraînant une partie du bour-
billon; le reste tapisse un ulcus saignant et se prolonge, sous
ses bords, dans Le disque qui l'entoure. — Du 8° au 9° jour, la
perte de substance commence à diminuer; elle présente un
aspect croûteux. Par pression, on fait sortir du disque et de ses
prolongements, s'il en existe encore, des restes d'exsudat
nécrosé. — Du 10° au 11° jour, lempâtement se réduit à un
anneau mince, dépassant à peine les bords de l’uleus. — Puis,
celui-ci se cicatrise régulièrement et tout est terminé quinze à
vingt jours après l'injection.

Notons que le bourbillon contient des bacilles spécifiques
jusqu’à sa complète disparition. — Les complications s’obser-
vent plus fréquemment ici que dans les types A et E. A l’au-
topsie des animaux qui succombent alors, on peut rencontrer
des nécroses viscérales (reins, poumons, et surtout foie). En
l'absence de complications, le pronostie demeure bénin, bien
que l’émaciation soit parfois assez accentuée.

FORMES DÉRIVÉES QUANTITATIVEMENT. — Comparables, mutatis
mutandis, aux formes correspondantes du type A.
FORMES DÉRIVÉES QUALITATIVEMENT. — Elles font défaut, en

réalité. Par le chauffage des cultures, on rend effectivement le
type C irréalisable et l’on va de plus en plus vers le type A, à
mesure que l’action de la chaleur s'accentue davantage.

CompLicarTioxs. — Fréquentes et précoces, dès que l’on dépasse
1 cent. cube de culture.

808 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Tyres B Er D.

Il est facile de concevoir ce qui à lieu quand on va du type A
vers le type C. L’eschare demeurant la méme, on voit le bour-
billon apparaître et augmenter de plus en plus. On imagine
sans peine ce que sera le type B, situé à mi-chemin.

Il est non moins facile de concevoir ce qui a lieu quand on
va du type C vers le type E. Le -bourbillon demeurant le même,
on voit l'eschare diminuer de plus en plus. On imagine sans
peine ce que sera le type D, situé à mi-chemin.

CONDITIONS EXPÉRIMENT ALES
RÉALISANT LES DIVERS TYPES CLINIQUES

INJECTION DE LIQUIDES CLAIRS
(ou, à doses plus grandes, de filtrats).

Cultures de 24 heures. Nous avons dit qu'avec 1 cent. cube
on réalise le type A classique et qu'avec des doses supérieures
ou inférieures on obtient des formes dérivées quantitativement.
— Cultures plus dgées. À mesure que les cultures vieillissent,
on voit l'eschare diminuer d'étendue. Après 30-40 jours, il faut
doubler la dose pour provoquer des lésions équivalentes à
celles que donnent ies liquides clairs de 24 heures. — Cultures
chauffées une demi-heure à 55 degrés. 4 cent. cubes réalisent le
type À à tache violette, à peine humide. — Cultures chauffées
à minules à 100 degrés. 4 cent. cubes ne produisent qu’un
empâtement transitoire. |

Conczusions. — Dans le bouillon Martin glucosé à 2 p. 1.000,
le bacille de Schmorl sécrète une toxine qui jouit de propriétés
escharifiantes marquées, mais demeure pour ainsi dire sans
action sur l’état général des sujets. L’injection de # cent. cubes
de liquide clair (ou même de culture totale) n’amène jamais la
mort des cobayes, mais ceux-ci sont assez souvent enlevés par
des complications que favorise l'intensité des lésions locales. La
toxicité maxima s'observe après 24 heures. Le poison résiste
assez bien au vieillissement (en tube fermé) dans l’étuve, mais
fléchit déjà nettement à 55 degrés (ses propriétés se modilient
alors quantitativement et qualitativement).

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 809

INJECTION DE CULTURES LAVÉES.

Cultures de 94 heures. On sait qu'un cent. cube réa-
lise le type E classique (quelquefois le type « exagéré » sans
eschare) ; qu'avec des doses supérieures, l'eschare fait son
apparition ; qu'avec des doses inférieures, les lésions dimi-
nuent de volume ; enfin, qu'avec des cultures soumises à un
lavage trop poussé, on obtient le type tardif. — Cultures plus
âgées. Les microbes mourant en quelques jours à l’étuve,
dans le bouillon Martin glucosé, la réaction locale se borne
très vite à un simple empâtement transitoire. — Cultures
chauffées une demi-heure à 55 degrés. 4 cent. cubes réalisent le
type B à tache pâle (à peine humide). — Cultures chauffées
à minutes à 100 degrés. 4 cent. cubes ne produisent qu'un
empâtement transitoire.

Coxczcsions. — Le bacille de Schmorl est peu virulent pour
le cobaye, mais il l’est sans conteste, comme le démontrent
l'existence du type tardif (consécutif à l'injection de cultures
très lavées) et celle des formes extensives. Lebourbillon résulte
de la nécrose de l'exsudat sous-cutané, par la toxine que four-
nissent les germes ?n v2v0 (1). La proportion de poison, sécrétée
dans l'unité de temps, ne permet pas l'attaque des téguments ;
pour obtenir celle-ci, il faut introduire, avec les, germes, une
quantité suffisante de toxine disponible comme dans le cas
suivant.

INJECTION DE CULTURES TOTALES.

Cultures de 24 heures. Nous rappellerons qu'un cent. cube
réalise le type GC classique et que des doses supérieures ou
inférieures engendrent des formes dérivées quantitativement.
— Cultures plus âgées. Comme les germes périssent rapide-
ment à 37 degrés, on tombe vite dans des types de moins en
moins discernables du type À; bientôt, il n'existe plus aucune

(1) Exclusivement dans le type tardif, en majeure partie dans le type E
classique (il faut tenir compte, dans ce dernier cas, du poison non enlevé
par le lavage, lequel suffit à déterminer le type D, quand on dépasse 1 cent.
cube).

810 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

différence entre les effets de l'injection du liquide clair qui sur-
monte le dépôt microbien et de la culture préalablement agitée.
— Cultures chauffées une demi-heure à 55 degrés. À cent. cubes
réalisent le type B à tache violette (à peine humide}. — Cul-
tures chauffées 5 minutes à 100 degrés. À cent. cubes ne
déterminent qu'un empâtement modéré, avec quelques croû-
telles.

Coxcrusioxs. — Nous avons dit que le type C représente la
somme des types À et E; en réalité, il représente à la fois plus
et moins. Plus : l’eschare ne sèche pas aussi vite; l'émaciation
est toujours nette; on peut observer des nécroses hépatiques,
inconnues dans les types À (naturellement) et E. — Mons : les
formes extensives du type E ne s’observent jamais, ce qui tient
(au moins en partie) à l'étendue de l’eschare, laquelle fait de la
lésion sous-cutanée une lésion ouverte. Nous reviendrons plus
tard sur ces questions (1).

INJECTIONS INTRAVEINEUSES

Pour éviter des redites inutiles, nous étudierons successive-
ment ici : l’action des cultures totales (toujours en bouillon
Martin glucosé à 2 p. 1.000 — 24 heures d'étuve), puis celle des
liquides clairs et des cultures lavées qui leur correspondent.

CULTURES TOTALES.
Telles quelles.

Avec 1 cent. cube d'une culture bien toxique, seule consi-
dérée dans ce qui va suivre, on tue d'habitude l'animal « sur
la table », c'est-à-dire que la symptomatologie se trouve réduite
à sa plus simple expression. Immédiatement raideur générale ;

(1) On a vu que la crépitation de l'œdème initial, observée dans le type C
(sauf avec les germes qui fermentent peu le glucose), fait défaut dans les
types À et E. La raison de cette différence est aisée à donner. Quand on
injecte la culture totale, on introduit, sous la peau, un peu de glucose demeu-
rant dans cette culture et des microbes susceptibles de continuer à le dislo-
quer jusqu'à sa disparition complète. Quand on injecte des cultures lavées,
on à éliminé, naturellement, toute trace de sucre. Quand on injecte du
liquide clair, on n'introduit pas trace de zymase (laquelle est considérée
comme exclusivement intracellulaire).

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 811

puis raptus, perte du réflexe cornéen, deux ou trois inspirations
profondes et automatiques; finalement arrèt de la respiration
et des battements cardiaques. — À l’autopsie : cœur immobilisé
en systole, fins caillots entre les piliers ventriculuires, sang
coagulable dans les délais normaux.

Avec un demi-cent. cube (et quelquefois 1 cent. cube), les
sujets peuvent succomber en 5 à 15 minutes environ. On
observe tout d'abord de l’hébétude et de la titubation, puis de
brefs accès convulsifs. Bientôt l'animal tombe sur le côté; sa
respiration devient très pénible {soif d'air) et ne tarde pas à
s'arrêter, en mème temps que les mouvements du cœur. Dans
les cas rapides, une spume sanglante sort par les narines. —
À l'autopsie : congestion des viscères abdominaux; œdème pul-
monaire, avec foyers apoplectiques puncetiformes; cœur immo-
bilisé en systole, mais sans caillots dans les cavités ventricu-
laires; sang un peu moins coagulable que normalement.

Avec un demi-cent. cube, lorsque la mort ne survient pas en
5 à 15 minutes, elle est ordinairement retardée d’une à quatre
heures. Les animaux présentent, au début, de la polypnée et de la
stupeur. Ils restent immobiles, « aplatis », le museau contre le
sol, dans une attitude de plus en plus nettement parétique.
Puis, apparaît une vive sensibilité thoraco-abdominale. Lors-
qu'on presse le sujet entre les doigts, il crie et saute violem-
ment en avant, d'une seule pièce; si on insiste, il tombe sur le
côté, s’agite, puis demeure inerte, dans un état de mort appa-
rente (arrêt respiratoire, perte du réflexe cornéen, battements
cardiaques imperceptibles). Bientôt Le réveil a lieu, mais l'animal
s'achemine peu à peu vers un coma mortel. Finalement, la res-
piration devient de plus en plus rare et superficielle, jusqu’à ce
qu'elle s'arrète. Au cours des accidents, il n’est pas rare
d'observer l'émission d'une urine sanglante ou laquée. — À l'au-
Lopsie : congestion, souvent violente (voire hémorragique),
des viscères abdominaux ; épanchement rosé habituel dans le
péritoine; parfois, urine sanglante ou laquée dans la vessie.
Cœur battant encore après l'arrêt de la respiration ; sang
incoagulable pendant un long temps.

Avec un quart de cent. cube, la morta lieu en 6 à 12 heures
environ. Mème symplomatologie que précédemment, mais ici
les phénomènes se déroulent avec moins de rapidité. Mèmes

812 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

lésions également, mais, en plus : taches congestives ou jau-
nâlres sur le foie (début de foyers nécrotiques).

Avec 1 à 2 dixièmes de cent. cube, l’animal succombe en un
jour ou bien guérit. Les accidents observés sont peu caractéris-
tiques : abattement, poil piqué, sensibilité thoraco-abdominale
modérée. Si le sujet survit, il « s’en tire » avec une émaciation
transitoire. Si, au contraire, la mort doit survenir, on voit
se développer un état comateux progressif; la respiration
sembarrasse de plus en plus et il est difficile de saisir le
moment précis où elle cesse : l'animal s'éteint. — À l'autopsie :
Congestion plus ou moins marquée des viscères abdominaux,
avec épanchement rosé ou citrin dans l'abdomen. Taches nécro-
tiques, en général peu nombreuses, sur le foie (surface et bords).
Ces taches offrent une étendue très variable (grain de mil,
petite amande); petites, elles demeurent arrondies; plus grandes,
elles montrent, par confluence, un centre homogène et un con-
tour irrégulier (en jeu de patience). Leur couleur varie selon
leur âge; d’abord amaranthe, elles deviennent ensuite saumo-
nées, puis Jaunes, puis cuir de botte. Parallèlement, leur
consistance se montre de plus en plus ferme et leur aspect (à la
coupe) de plus en plus sec. Elles contiennent toujours des
bacilles de Schmorl. Les foyers de nécrose sont rares dans les
poumons, la rate et les reins.

Chauffées.

Une demi-heure à 55 degrés. 2 cent. cubes répondent à un

quart de cent. cube environ de culture non chauffée ; 4 cent.cube,

à À ou 2 dixièmes. — 5 minutes à 100 degrés. Aucun effet, avec
2 cent. cubes.

LIQUIDES CLAIRS.

D'une facon générale, on observe les mêmes accidents
(rapides) qu'avec les cultures totales. Pour de fortes doses
(un demi à 1 cent. cube), les différences d'activité se trouvent
masquées par les différences de sensibilité des animaux; pour
des doses plus faibles, elles apparaissent nettement : ainsi un
quart de cent. cube ne tue jamais. — Le chauffage amène le
même fléchissement que dans les cultures totales.

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 813

CULTURES LAVÉES.

Avec 1 cent. cube, aucun effet ; si on sacrifie les cobayes, on
n'observe pas de lésions internes. Avec 2 cent. cubes, 1l en va
généralement de même ; cependant, certains sujets, plus sen-
sibles que la moyenne, succombent en 5 à 6 Jours, après avoir
maigri considérablement. Dans ces cas, on trouve, à l'autopste,
des foyers nécrotiques et des abcès au niveau du foie. Avec plus
de 2 cent. cubes, la mort survient d'habitude en 6 à 12 heures ;
elle doit être rapportée à la présence de toxine « disponible »
en quantité suffisante. — Le chauffage rend les cultures lavées

inoffensives (à la dose de 2 cent. cubes et plus).
CoxcLUSIONS.

Le bacille de Schmorl apparaît, ici encore, peu virulent pour
le cobaye. Il est cependant susceptible d'un développement local
limité dans le foie (rarement ailleurs), même quand on fait
usage de cultures lavées (si les sujets possèdent une sensibilité
suffisante).

La toxine, qui détermine la produclion d’une eschare humide
sous la peau, engendre, dans Îles veines, une gamme de phé-
nomènes dont l'acuité correspond à la dose administrée. Des
quantités notables « assomment » les animaux, avec des coagu-
lations intracardiaques — des volumes moins grands rendent
au contraire le sang incoagulable {comme pour les venins) et
provoquent une congestion viscérale intense, qui affecte prin-
cipalement la circulation thoracique dans les cas les plus rapides
et la circulation abdominale dans les cas plus lents — des doses
suffisamment faibles ne tuent plus ou amènent la mort dans
les 24 heures, sans modifier la « crase » du sang, en portant
uniquement leur action sur les organes de l'abdomen.

On peut retrouver, au niveau du foie, les deux lésions visec-
rales caractéristiques du bacille de Schmorl, foyers nécrotiques
et foyers suppurés, observées chezles diverses espèces animales.

814 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

INJECTIONS INTRAPÉRITONÉALES

Leurs effets sont aisés à résumer. Nous suivrons /e méme
ordre que pour les injections intraveineuses.

CULTURES TOTALES.
Telles quelles.

Avec 1-2 cent. cubes, on tue en 6-12 heures environ. Les
symptômes sont à peu près les mêmes que si l’on avait admi-
nistré un quart de cent. cube par la voie sanguine; toutefois,
comme il fallait s'y attendre, on note une intensité particulière
de la réaction abdominale (ventre gros et toujours très sen-
sible). — À l'autopsie : épanchement rosé ou hémorragique
dans les cas rapides, rosé ou citrin dans les cas plus lents;
fausses membranes fines, notamment sur le foie, quand la mort
ne survient point trop vite ; congestion plus ou moins marquée
des viscères de l’abdomen. L’épanchement, généralement abon-
dant, contient peu de bacilles spécifiques; dès que la terminai-
son dépasse un petit nombre d'heures, il s'y joint d’autres
germes, avant tout les deux « germes de sortie » habituels des
cobayes, pneumocoque et pasteurella. (Nous avons omis de
mentionner leur apparition, observée de temps en temps, lors
des injections intraveineuses).

Avec un demi-cent. cube, les sujets offrent une émaciation
variable et rien de plus. Si on les sacrifie après quelques jours,
on rencontre des taches nécrotiques sur le foie et, dans certains
cas, de petits abcès encapsulés, à pus concret, au niveau de
l'épiploon.

Avec 1 dixième de cent. cube, on ne détermine aucun symp-
tôme anormal et l'autopsie (animaux sacrifiés) ne révèle aucune
lésion.

Chauffées.
Une demi-heure à 55 degrés. Avec 4 cent. cubes, on voit

apparaître des phénomènes abdominaux transitoires (ventre
gros et sensible), accompagnés d'un amaigrissement plus ou

ÉTUDES SUR LE BACILLE DE SCHMORL 815

moins marqué et toujours suivis de guérison. — Cing minutes
à 100 degrés. 4 cent. cubes ne produisent qu'une émaciation
modérée.

LIQUIDES CLAIRS.

% cent. cubes correspondent, grosso modo, à 4 cent. cubes de
culture totale chauffée à 55 degrés; 2 cent. cubes, à 4 cent. cubes
de culture totale chauffée à 100 degrés. — 4 cent. cubes de
liquide clair, chauffé une demi-heure à 55 degrés, ne provoquent
qu'un amaigrissement transitoire ; 4 cent. cubes de liquide
clair, chauffé 5 minutes à 100 degrés, demeurent inotfensifs.

CULTURES LAVÉES.
Telles quelles.

Avec 3-4 cent. cubes, on n'arrive pas à tuer les sujets, mais
ils maigrissent beaucoup. — A l'autopsie (animaux sacrifiés
après quelques jours), on rencontre les mêmes lésions que chez
les cobayes qui ont reçu un demi-cent. cube de culture totale.

Avec 1-2 cent. cubes, on provoque une émaciation variable.
Si on sacrifie les sujets, on constate la présence de lésions
hépatiques discrètes.

Chauffées.

Une demi-heure à 55 degrés. 4 cent. cubes demeurent quasi
inoflensifs.

CONCLUSIONS.

Le bacille de Schmorl se montre, ici encore, peu virulent
pour le cobaye, tandis que sa toxine détermine les accidents les
plus graves. Les phénomènes observés se rapprochent beaucoup
de ceux que produisent les injections intraveineuses, à la condi-
tion, toutefois, de forcer sensiblement les doses administrées,

816 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

CONCLUSIONS GÉNÉRALES

Le cobaye constitue un réactif excellent dans l'étude analy-
tique du bacille de Schmorl in vivo. Les injections sous-cutanées
permettent de faire la part exacte de Ta toxicité et de la viru-
lence de ce microbe, grâce à un examen attentif des apparences
qui se succèdent sous les yeux dans chaque groupe de cas; les
injections intraveineuses restent indispensables pour compléter
l'histoire de la toxicité; les injections intrapéritonéales, enfin,
fournissent un utile contrôle aux notions déjà acquises.

Vis-à-vis du cobaye, le bacille de Schmorl manifeste une faible
virulence. Les formes extensives (injections sous-cutanées)
demeurent peu fréquentes ; les localisations à distance (injec-
tions intraveineuses et intrapéritonéales), presque toujours
limitées au foie, y conservent, somme toute, un caractère discret
indéniable.

Par contre, le cobaye réaqit bien à la toxine du bacille nécro-
sant. Au niveau des téguments, c’est une eschare humide à
apparition rapide, lorsque la quantité de poison disponible le
permet (filtrats, cultures totales); ou un bourbillon caractéris-
tique, quand ce poison n'est sécrété qu’en minime proportion
dans l’unité de temps (germes lavés). La peau fixe énergique-
ment la toxine, puisque les injections sous-culanées n’altèrent
pour ainsi dire pas l’état général. Mais que l’on vienne à intro-
duire le poison dans le courant circulatoire, on en observera
immédialement les effets sur l'économie tout entière. — L'in-
jection intrapérilonéale représente en quelque sorte, ici comme
ailleurs, le « mode mineur » de l'injection intraveineuse.

LES VARIATIONS DE L’'ALEXINE
APRÈS LE CHOC ANAPHYLACTIQUE

DANS LA SÉRO-ANAPHYLAXIE ACTIVE ET PASSIVE

par P.-F. ARMAND-DELILLE.

(Travail du laboratoire de Chimie thérapeutique de l'Institut Pasteur.)

L'étude de la nature du poison anaphylactique à été en ces
dernières années l’objet de nombreux travaux; il faut citer
entre autres ceux de Friedberger, qui est parvenu à obtenir
in vitro, par le mélange d’un sérum antigène avec celui de
l'animal préparé, un poison qu'il nomme anaphylotoxine, parce
qu'il le considère comme identique à la substance toxique qui,
dans l'organisme préparé, détermine les accidents anaphylac-
tiques, au moment de l'injection déchainante.

Cet auteur, ayant reconnu que l’alexine est nécessaire à la
constitution de son anaphylotoxine, a cherché à établir l’iden-
tité du poison obtenu x vitro avec le poison hypothétique qui
se développerait dans l'organisme pour déterminer le choc ana-
phylactique. Reprenant sous une autre forme les premières
recherches de Sleeswijk, il s’est basé sur une série d’expé-
riences pour montrer qu'il se produit toujours, après le choc
anaphylactique, une diminution plus ou moins considérable
de l’alexine du sang circulant.

En contrôlant pour notre part ces expériences, nous avons été
amenés à un certain nombre de constatations qui s’écartent
de celles qu'a exposées Friedberger (1), et,en particulier, nous
avons constaté une différence considérable entre l’anaphylaxie
active et l’anaphylaxie passive au point de vue des variations
de l’alexine. Comme ces faits ont une grande importance pour
la doctrine de l’anaphylaxie, et comme ils paraissent en parti-
culier devoir faire modilier les hypothèses de Friedberger sur la

(1) FRIEDBERGER u. Harrocu, Uber das Verhalten des Komplements bei der
aktiren und passiren Anaphylaxie. Zeitschr., f. Immunilät, L. III, 1910, p. 581.

52

818 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

constitution du poison anaphylactique, nous avons pensé qu’il
serait intéressant de rapporter ici, avec plus de détails, les
expériences dont les conclusions ont été récemment exposées
dans une note à la Société de Biologie (1).

Sleeswijk, dans un travail fait dans le laboratoire de
Bordet (2), a signalé le premier, que chez les cobayes anaphy-
lactiques auxquels on fait l'injection déchaînante dans le péri-
toine, on peut observer une diminution de l’alexine dans le
sang prélevé un certain temps après le choc anaphylactique.

Friedberger, un an après, a fait des constatations analogues,
mais avec l'injection déchaïnante intraveineuse, la 2° prise de
sang étant faite cinq minutes après le choc anaphylactique;
aussi s'est-il considéré comme ayant découvert le fait, ce qui
a nécessité une réclamation de priorité de ia part de Sleeswipk,
lequel à d’ailleurs par la même occasion contrôlé les expé-
riences de Friedberger en se mettant exactement dans les
mêmes conditions que cet expérimentateur (3), tandis qu'au
contraire Tsuru à constaté qu'il n’y avait pas de diminution
constante de l’alexine dans les différentes formes d'anaphylaxie
sauf dans l'anaphylaxie passive par sérum hétérogène.

Nous avons cherché, pour notre part, à réaliser dans les mêmes
conditions et avons pu ainsi reproduire les expériences de ces
auteurs. Comme Tsuru, nous sommes loin d'avoir trouvé avec
une aussi grande constance que Friedberger une chûte nette de
l'alexine dans l’anaphylaxie active, tandis que nous l'avons
comme lui toujours trouvée considérable dans l'anaphylaxie
passive. C'est le point qui nous à paru particulièrement inté-
ressant et sur lequel nous insisterons en terminant.

Toutes nos expériences ont été faites de la manière suivante :
Les cobayes sensibles étaient, pour l'anaphylaxie active, des
animaux préparés avec 0,01 cent. cube de sérum de cheval,

(4) P.-F. Anmano-DeuiLce, L'alexine joue-t-elle un rôle dans la constitution.
du poison anaphylactique? Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 1°" juin 1912,
t. LXXII, p. 869.

(2) Sceeswux, Zur Komplementfrage in der Serumanaphylaxie. Zeifseh. für
Immunitatsforsch, t. V, 1910, p. 580.

(3) Ces auteurs, même dans leurs travaux ultérieurs, netiennent pas compte,
en effet, des recherches de Tsuru (Ueber Komplement abnahme bei der
verschiedenen Formen der Anaphylaxie. Zeit. f. Imm., 1910, t. IV, p. 612), qui
n'avait trouvé aucune diminution de l'alexine après le choc anaphylactique.

LES VARIATIONS DE L’ALEXINE 819

au moins quinze jours auparavant, ou bien des animaux
éprouvés avec du sérum antidiphtérique dans les mêmes con-
ditions. La dose déchainante employée a été soit une dose
minime, mais sûrement mortelle (0,02 cent. cube par
100 grammes d'animal), déterminée par des expériences préa-
lables, soit des doses plus fortes lorsque nous employons du
sérum chauffé. Nous avons, en effet, sur le conseil de M. Nicolle,
expérimenté également avec du sérum chauffé pour être cer-
tains que le sérum de cheval frais n’apportait pas une quantité
d'alexine suffisante pour pouvoir ; intervenir dans l’expé-
rience.

Les prises de sang, toujours de 2 cent. cubes, étaient faites
dans une des carotides, deux minutes avant l'injection déchai-
nante, puis exactement cinq minules après. Le sang était
immédiatement centrifugé et le sérum aussitôt décanté, de
sorte que l'étude du pouvoir alexique était faite une à deux
heures après les prises de sang. Nous avons toujours employé
un système hémolytique composé de globules de mouton
(dilués au 20°) et d'un sérum de lapin antimouton très actif:
son activité était chaque fois titrée et Les globules étaient sen-
sibilisés avec six fois la dose active. Les quantités de sérum
élaient graduées de 0,005 à 0,1. Les résultats de l’hémolyse
étaient notés minute par minute pendant une demi-heure, à
38 degrés, puis, le lendemain, au bout de vingt-quatre heures,
à la température du laboraloire. Pour l’anaphylaxie passive,
nous avons employé du sérum de lapins préparés par cinq à six
injections. Nettement précipitante, la dose injectée au cobaye
dans le péritoine était de 1 cent. cube par 100 grammes
d'animal. La réaction hémolytique était toujours faite en
mème temps qu'une ou plusieurs séries d’anaphylaxie active.

Voici deux types d'expériences, l’une pour l'anaphylaxie
active, l’autre pour l’anaphylaxie passive. Nous ne donnerons
qu'un tableau résumé de nos autres expériences, afin de ne pas
surcharger inutilement cet exposé.

30 mai. — Cobaye À, en anaphylaxie active. Poids : 290 grammes. Reçoit
dans la veine jugulaire, par 100 grammes, 0,02 de sérum de cheval, soit :
1,5 cent. cube de dilution à 1/25.

4 h. 8, saignée, 2 cent. cubes; 4 h. 11, injection déchainante; 4 h. 43,

820 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dyspnée; grandes secousses répétées : 4 h.15, saignée, 2 cent. cubes ; 4 h. 46,
mort.

Expérience faite à 5 h. 40, avec sérum obtenu par centrifugation
des caillots et globules de mouton sensibilisés avec six fois la dose active.

DOSE DOSE
D'ALEXINE HÉMOLYSE D'ALEXINE

avant » m. après
l'injection. l'injection.

HÉMOLYSE

0,005 |Nulle, même ap. 24 heures. 0,005 [Nulle, même ap.2# heures.
0,01 Nulle, même ap. 2% heures. 0,01 Nulle, même ap. 24 heures.

0,02 Légère en 30 minutes, par- 0,02 Très légère en 30 min., par-
elle après 24 heures. tielle après 24 heures.
0,03 Partielle en 30 min., pres- Partielle en 30 min., pres-
.| que totale en 24 heures. 0.03 que totale en 24 heures.
0,05 Totale en 15 minutes. 0,05 Totale en 15 min. (très
léger retard).

0,10 Totale en 10 minutes. 0,10 Totale en 10 minutes.

Il y a eu un léger retard pour les doses hémolysantes, mais
excédant à peine deux ou trois minutes; l’hémolyse est à peu
de chose près parallèle avec l’alexine avant et après la dose
déchaïinante.

30 mai. — Cobaye B. Anaphylaxie passive. Poids : 440 grammes. Reçoit
dans la veine jugulaire, par 100 grammes, 0,02 de sérum de cheval, soit
2,5 cent. cubes de dilution au 1/25.

4 h. 32, saignée, 2 cent. cubes; 4 h. 36, injection déchaïînante ; 4 h. 39,
petites secousses; dyspnée intense, état asphyxique; 4 h. 41, saignée,
2 cent. cubes; 4 h. 42, la dyspnée et l'asphyxie diminuent : l'animal se remet;
4 h. 48, l'animal est tout à fait remis.

Expérience faite à 5 h. 40 avec sérum obtenu par centrifugation
des caillots et globules de mouton sensibilisés avec six fois la dose active.

DOSE DOSE
D'ALEXINE HÉMOLYSE RTE HÉMOLYSE
avant après
l'injection l'injection.
0,005 |[Nulle, même ap. 24 heures. 0,005 |[Nulle, même ap. 24 heures.
0,01 Nulle, même ap. 24 heures. 0,01 Nulle, même ap. 24 heures.
0,02 Légère en 30 min., partielle 0,02 Nulle.
après 24 heures.
0,03 Partielle en 30 min., pres- 0,03 Nulle, même ap.24heures.
que totale en 24 heures.
0,05 Totale en 15 minutes. 0,05 Nulle, même ap. 24 heures.
0,10 Totale en 5 minutes. 0,10 Nulle, même ap. 24 heures.

Par conséquent, même à la forte dose de 0,1 de sérum frais, il n’y a plus
aucun pouvoir alexique dans le sang pris après l'injection.

LES VARIATIONS DE L’ALEXINE 821

Comme on le voit, nos résultats sont loin de concorder avec
ceux de Friedberger pour l'anaphylaxie active; alors que cet
auteur trouve toujours une chute de l’alexine dans le sang
recueilli après le choc anaphylactique, et 5 minutes après
l'injection déchainante, nous n'avons observé ce phénomène
que d'une manière inconstante et légère; nous sommes done
d'accord avec Tsuru sur ce point; au contraire, pour l'ana-
phylaxie passive, nous trouvons, comme Friedberger, une très
forte diminution de l’alexine à la condition d'employer pour
la provoquer un sérum hétérogène, résultats absolument
différents de ceux de Tsuru, lorsque cet auteur a provoqué
l’anaphylaxie passive en employant du sérum de cobaye
hypersensibilisé, mais concordants lorsque, comme Fried-
berger et comme nous, il a employé du sérum de lapin
hypersensibilisé.

Nous donnons ci-dessous le tableau comparatif de nos
résultats :

1° Anaphylaxie active.

N°5 POIDS DOSE ACTION DE L'ALEXINE
k ; prélevée 5 minutes
de DATE des déchaînante RÉSULTAT CAE
après l'injection
l'expérience. cobayes.|intraveineuse. déchaînante.
1911
1 28 déc.” 1295 gr.| Sér. frais Mort Léger retard
0,09 en 5 min. de l'hémoly se.
2 28 déc. |440 gr.| Sér. frais Mort Très léger retard.
1912 DEA en 6 min.
3 3 févr. |415 gr.| Sér. frais Mort Pas de retard.
0,12 en 7 min.
4 SHÉVr- M ler. Intrapé rit. | Se remet. Pas de retard.
d CAC
5 15. févr. |320 gr.| gér. frais | Se remet. | . Très léger retard.
0,09
6 15 févr. |310 gr. Sér, frais Mort Pas de retard.
0,10 en 11 min.
7 22 févr. [235 gr.|Sér. chauffé Mort Retard net.
1Ne:c: en 10 min.
8 22 févr. |250 gr.| Sér. frais Mort Très léger retard.
0,06 en 10 min.
9 25 mars. [230 gr.|Sér. chauffé| Se remet. Pas de retard.
JCACE
10 30 mai. [230 gr.|Sér. chauffé Mort Très léger retard.
0,06 en 5 min.
Témoin. | 25 mai. | An. neuf | Sér. frais Aucun Pas de retard.

410 gr. ANCAC: symptôme.

822 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

29 Anaphylaxie passive.

EL

N°S POIDS hOSE ACTION DE L'ALEXINE
3 prélevée 5 minutes
de DATE des déchainante RÉSULTAT RC x
aprés l'injection
l'expérience cobayes.|intraveineuse. déchaïnante
1912:
fl 16 mars. [300 gr Sérum Se Hémolyse nulle
chautfé remet. à 0,02
1EGSC: même en 24 heures
alors que totale
à 0,01 en 15 min.
dans le témoin.
2 16 mars. |330 gr. Sérum Mort Hémolyse nulle
chaulté en en 24 h. à 0,04
1RGUC: 20 minutes.| alors que totale
en 15 minutes
dans le témoin.
3 30 mai. |440 gr. Sérum Se IHémolyse nulle
‘ frais remet. après 24 h. à 0,03
(ONE SMILE alors que totale
dans le témoin.
Témoin | 20 juin. [320 gr.| Sérum Aucun Aucun retard.
cobaye chauffé | symptôme.
injecté 1MC0C:
sér. lapin
frais. |

À la suite de ces expériences, il nous est permis, nous
semble-t-il, de formuler quelques remarques et de tirer quel-
ques conclusions intéressantes.

Tout d'abord, il est loin d'être démontré que l'alexine soit
nécessaire à la constitulion du poison anaphylactique 2x vivo;
en effet, dans l’anaphylaxie active, où les phénomènes sont les
plus graves et presque toujours mortels, la diminution de
l'alexine est loin d’être constante ; il y a des cas où elle est
imperceplible, pour ne pas dire nulle, ce qui est en opposition
avec la diminution considérable de cette même substance dans
l’anaphylaxie passive, quand même les accidents sont légers et
non mortels.

Dans ces conditions, comment peut-on expliquer la dimi-
nution si considérable de l'alexine dans l'anaphylaxie passive
par sérum hétérogène? On peut faire à ce sujet plusieurs
hypothèses ; la plus légitime, à notre avis, est d'admettre que
l’alexine se fixe sur les précipitines ou sur des anticorps qui

0,0!

0,10

0,03

0,02

0.01

; 0,10

0,05

0,03

0.02

0,01

LES VARIATIONS DE L’ALEXINE 823

coexistent avec les précipitines, car, nous l'avons vu, le sérum
de lapin qui est injecté pour produire l’anaphylaxie passive est

echainante

Î

Î
|
Ï

Aterine prise apres l ‘Injection déchainante
Alexine prise après l'injection &

—
x

s a FR RES

re +

© Le

SA
ÿ

Ë z

x

= NS

purs

a RS is

< = à

= À = D

I 14

= La SE

|
|

Alexiné prise avant l'injection déchafnaænte
\Alexine prise avant 1 injection de

toujours fortement précipilaut, laudis que le sérum des cobayes
en anaphylaxie ne l’est pas ou à peine.

0,10

0,05

0,03

0,02

0,01

0,10

0.05

3

0,0

0,02

0.01

824 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

cd

Nous en arrivons done aux conclusions suivantes :

Étant donné que l’alexine ne diminue que faiblement ou,
dans certains cas, ne varie même nullement après le choc
anaphylactique mortel de l’änaphylaxie active, 11 n'est pas
démontré que le complément soit nécessaire à la constitution
d'un poison anaphylactique qui se produirait dans le sang
circulant. La variation de l’alexine paraît donc être, ainsi que l’a
très justement dit Sleeswijk, un phénomène contingent et
comme le font entrevoir certains travaux récents (1), il est tout
aussi légitime de supposer que l’anaphylaxie peut être produite
par des modifications qui se passent au sein même de la cellule,
lorsque le sérum antigène arrive à son contact.

(1) Signalons, dans cet ordre d'idées, les très intéressantes recherches de
Launoy et de Schultz, portant sur l'anaphylaxie cellulaire.

L. Launoy, Production et caractères du choc anaphylactique sur le cœur
isolé du cobaye hypersensibilisé au sérum de cheval (Comptes rendus de la
Soc. de Biologie, 9 mars 1912, p. 403, t. LXXIL), et : Des conditions nécessaires
à la démonstration du choc anaphylactique sur le cœur isolé d'animaux
hypersensibilisés au sérum de cheval (Comptes rendus de la Soc. de Biologie,
26 01 EVE CL DES CCE PET PI De. @. QD DE

ScauLtiz, Including reaction of muscle from non sensibilised, sensibilised
tolerant and immunised Guinea pigs (Physiological studies on anaphylaxis).
(Hygiene Laboratory, Public Health and marine Hospital service of Un. States.
. Bull., 1080, 1912.

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L, MARETHEUX, imprimeur, 1, rue Casseure.

62°: ANNÉE NOVEMBRE 1912 N°41

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

SUR QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION
INTESTINALE

par EL. METCHNIKOFF et Ecc. WOLLMAN.

(Avec la PI. XVIII.)

INTRODUCTION

Ce mémoire ne représente qu'un anneau de la chaîne des
travaux exécutés à l’Institut Pasteur dans le but d'éclaireir le
problème de la flore intestinale et de ses rapports avec la dégé-
nérescence sénile (1).

Pour répondre à la question : les microbes intestinaux sont-
ils indispensables pour la vie normale des animaux? il a été
entrepris une série de recherches qui peuvent être résumées en
quelques mots. L'un de nous à démontré (2) qu'il est facile
d'élever des mouches à l’abri des microbes et que, dans ces
conditions, tout le cycle du développement de ces diptères se
fait de façon absolument normale. Dans la suite, il a prouvé
qu'il est possible de faire pousser des têtards de grenouille dans
un milieu dépourvu de microbes. Cohendy (3) a réussi à élever
des poussins dans un appareil ingénieusement construit qui
permet d'éliminer toute intervention microbienne.

(1) Une note préliminaire de ce travail a été publiée dans les Comptes
rendus de l’Acad. des Sciences, 10 juin 1912.

(2) Wozzcuan, ces Annales, p. 19, 1911.

(3) 1bid., p. 106, 1912.

03

826 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

La conclusion s'impose donc que les vertébrés supérieurs et
inférieurs, ainsi que les invertébrés, peuvent très bien se passer
du concours des microbes pour leur développement normal et
que même les individus nouvellement éclos, chez lesquels on
avait le droit de supposer l'insuffisance des ferments digestifs,
peuvent se contenter de leurs propres sucs digestifs pour les
besoins de leur nutrition.

Pour ce qui concerne les mammifères adultes, les rous-
settes (1) nous en fournissent un exemple dans lequel la diges-
tion de la nourriture — exclusivement végétale — se fait
également sans intervention des microbes, qui ne se rencontrent
dans les intestins qu'en proportion lout à fait minime. Il est
intéressant que, dans ces conditions, les matières fécales des
roussettes ne contiennent ni indol, ni scatol, et que leurs urines
ne renferment pas trace d'indoxyle ni de phénols. Ce fait fournit
une nouvelle preuve de ce que ces corps aromatiques ne pro-
viennent pas de l’attaque des albuminoïdes par l'organisme
animal, mais sont, en fin de compte, le résultat de l’activité
bactérienne. Etant donné qu'un certain nombre de microbes
seulement sont capables de produire des phénols et de l’indol,
il n’est point étonnant de rencontrer des exemples où, malgré
une riche flore intestinale, l'organisme ne fournit dans ces
excreta aucun des dérivés de ces substances aromatiques. 1l est
généralement admis que le nourrisson au sein ne contient
dans ses urines ni phénols, ni indoxyle. D'un autre côté,
on sait, el ce fait a été récemment confirmé par Ferdinand
Blumenthal et Jacoby (2), que les lapins nourris avec des
carottes ne donnent lieu à aucune production de ces substances.
Mais il suffit de leur donner à manger des pommes de terre
pour que l'indoxyle fasse aussitôt son apparition dans les urines.
Le changement de la flore intestinale s’accomplit avec une si
grande rapidité que, sans changer le genre de nourriture, il
suffit de faire jeuner des lapins nourris aux carottes ou aux
betteraves, pour faire apparaître dans leurs urines des quantités
notables d'indoxyle. Dans ce cas, comme dans le précédent, il
s’agit de la rétrocession des microbes lactiques et de l’augmen-

(4) Ces Annales, jh. 937, 1909.
(2) Biochemische Zeitschrift, t. XXIX, p. #12, 1910.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 827

tation considérable des bactéries qui attaquent les albumines el
les peptones.

L'origine baclérienne des substances aromatiques men-
tionnées (phénols et indol) étantin contestable, d’un côté, et de
l’autre, leur action nuisible sur l’organisme ne pouvant plus
ètre mise en doute, il en résulte que nous nourrissons dans
notre tube digestif des ennemis qui nous causent un empoi-
sonnement chronique. Cette dernière notion n’a pu être
démontrée définitivement que tout dernièrement.

Depuis longtemps on parlait d'intoxication intestinale d’ori-
gine bactérienne, et l’on pensait généralement que la putré-
faction des albuminoïdes dans le tube digestif en était la
source. Plus tard cependant, on s'était cru autorisé à admettre :
que la putréfaction ne se produit dans les intestins qu'à un
degré insignifiant et, en plus, que les produits qui en résultent
ne sont pas toxiques. Ne pouvant nier la toxicité des phénols,
on affirmait que la quantilé qui s'en produit dans l'organisme
est trop faible pour causer le moindre mal. De plus, on admettail
généralement que l’organisme de l’homme et des animaux esl
capable de transformer les phénols et l’indol en substances
inoffensives, telles que les sulfoconjugués.

Une étude plus approfondie de cette question n'a cependant
pas tardé à démontrer que, bien que le phénylsulfate de potas-
sium soit moins toxique que le phénol et le paracrésylsulfate
de potassium, moins que le paracrésol, ces sulfoconjugués sont
tout de même de vrais poisons, capables de faire mourir rapi-
dement les animaux soumis à l'expérience (1).

Les phénols et l'indol, produits par certaines bactéries du
tube digestif, bien qu'insuffisants pour provoquer un empoi-
sonnement aigu, opèrent comme poisons à action lente. Des
lapins et des singes, traités par l’un de nous (2) avec de petites
doses de paracrésol administrées par la bouche, ont présenté,
après une période de peu de mois, des allérations chroniques
dans les artères, le foie et les reins. Dratchinsky (3) a exécuté

1) Nous remercions la maison Hoffmann-Laroche pour l’amabilité avec
laquelle elle a mis à notre disposition les préparations de phénylsulfate e
de paracrésylsulfate de potassium.

2) Ces Annales, p. 155, 1910.

3) Ibid., p. 401, 1912.

828 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

des expériences analogues avec l’indol, qu'il introduisait dans
la bouche de cobayes et de singes et a obtenu le même résultat.
Il se produisait à la longue des phénomènes de sclérose dans
des organes précieux tels que l'aorte, le cerveau, le foie, les
reins et les capsules surrénales. Wladytchko (1) a observé la
prolifération des cellules névrogliques et la neuronophagie
nette dans le cerveau de cobayes D subi l’intoxication par
de petites doses d'indol.

Toutes ces lésions, dont la cause première réside dans la
flore intestinale, présentent une analogie réelle avec des modi-
fications des tissus que l’on observe dans la vieillesse. On savait,
depuis longtemps, que le trait le plus caractéristique de la
dégénérescence sénile consiste dans le développement de tissu
conjonctif aux dépens des éléments nobles de l’organisme. De
même qu à la suite de l'ingestion de paracrésol et d’indol par
des animaux, se manifestent dans la vieillesse la néphrite inters-
titielle chronique, un certain degré de cirrhose du foie, l'arté-
riosclérose et l’envahissement des cellules cérébrales par des
éléments névrogliques.

Tout dernièrement Salimbeni et Gery(2), de l'Institut Pasteur,
ont publié un travail détaillé sur l'anatomie pathologique d’une
femme,morte à quatre-vingt-treize ans, à la suite d’une gangrène
pulmonaire. Dans leurs conclusions, ils insistent sur le fait
que de toutes les lésions étudiées, la plus frappante et la plus
générale est la sclérose, conséquence elle-même de l'infiltration
mononucléaire et macrophagique. Tous les organes en présentent
à des degrés divers (p. 608). Parmi les quelques organes qui
ont échappé à l’investigation des auteurs mentionnés, se trouve
la vessie ;: or, Casper (3) a fait à ce sujet, à la Société urolo-
gique de Berlin, une communication, dans laquelle il annonce
que « les lésions principales de la vessie des vieillards se recon-
naissent dans la couche musculaire et consistent dans l’hyper-
plasie des fibres musculaires, ainsi que dans l'accroissement du
tissu conjonctif intramusculaire ».

Le tableau général de l’empoisonnement chronique par les
substances de la série aromatique provenant de la flore intes-

4) Roussky Vratch, p. 1493, 1911 (en russe).
(2) Ces Annales, p. 511, 1912.
(3) Deutsche med, Wochensch., p. 1522, 1912.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 829
tinale et celui de la dégénérescence sénile, est le mème : enva-
hissement par des cellules mononucléaires et développement
consécutif du tissu conjonctif.

Devant ce fait de la plus haute importance, à savoir : le rôle
de certains microbes intestinaux dans l’étiologie de l'artério-
sclérose et de la sclérose chronique d’autres organes, il devient
urgent de rechercher les moyens de combattre la production
des phénols et de l’indol dans le tube digestif. Il va sans dire
que nous ne prétendons pas qu’il n’y ait pas d’autres causes
de ces lésions que celles qui proviennent de la flore intestinale.
On à souvent constaté que certaines maladies infectieuses,
notamment la syphilis, de mème que l’'empoisonnement chro-
nique par le plomb, l'alcool et le tabac, amènent des altérations
des artères, la néphrite interstitielle et la cirrhose hépatique.
Mais il ne s’agit ici que de causes secondaires qui sont loin de
présenter la constance de l’'empoisonnement par les poisons
intestinaux auxquels sont sujets, en dehors de l’homme, les
animaux riches en microbes du tube digestif.

Les substances de la série aromatique ne sont pas les seuls
poisons de la flore intestinale. L'un de nous (1) a démontré
que, dans le tube digestif de l’homme, se trouvent des bacilles
anaérobies protéolytiques capables de sécréter de vraies toxines.
Mais jusqu'à présent il n'a pas été possible de leur attribuer
quelque rôle dans les phénomènes de la dégénérescence sénile.
De même, les ptomaines des microbes intestinaux se sont
montrées incapables de provoquer ces lésions. La B-imidazoné-
thylamine étudiée par Berthelot et Bertrand (2), malgré son
action extrêmement violente sur le cobaye, lorsqu'on ladmi-
nistre par la voie intraveineuse ou sous-cutanée, est infiniment
moins toxique quand on l’introduit dans l'organisme par la
voie stomaco-intestinale. Ce sont donc les phénols et l’indol
qui se présentent comme les facteurs les plus importants de
l'auto-intoxicatior chronique d’origine bactérienne.

Depuis plus d’un an, nous nous sommes donc mis à étudier
ces poisons provenant de la flore intestinale, dans le but de
restreindre leur production dans le tube digestif et nous pré-
sentons aujourd'hui les principaux résultats de notre travail.

(4) MercaxiKkorr, ces Annales, p. 929, 1908.
(2) Comples rendus de l'Acad. des Sciences, 1912.

830 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

INFLUENCE DU RÉGIME ALIMENTAIRE SUR LA PRODUCTION
DES POISONS INTESTINAUX DE LA SÉRIE AROMATIQUE (!

Les quelques travaux exécutés dans l'intention d'établir la
modification de la flore intestinale sous l'influence du change-
ment de régime, ne visent pas les poisons aromatiques. Les
causes qui règlent l'excrétion de ces substances ont été plutôt
étudiées en clinique et en chimie biologique. Voici le résumé
des notions acquises sur ce sujet; nous le reproduisons d'après
le traité bien connu de Neubauer et Vogel (2) : « Dans l'urine
de l’homme on ne trouve que de très petites quantités de phénol.
Dans les vingt-quatre heures, l'homme en excrète 0,03 grammes
d'après Munk ; 0,70-0,106 grammes avec un régime mixte
d'après Kossler et Penny. La quantité augmente avec la nour-
riture végétale : pendant le jeûne, l'homme excrète autant de
phénol qu'après avoir mangé. Dans l'urine des herbivores, on
en trouve des quantités beaucoup plus grandes » (p. 148).
« Chez les nourrissons nourris au sein, l'urine se présente en
général, d'après Hochsinger et Momidlowski, dépourvue
d'indoxyle. Mais les nourrissons qui reçoivent, en dehors du
lait de femme, celui de vache et qui digèrent normalement,
présentent dans leur urine d'une facon constante de petites
quantités d’indoxyle. Chez l'adulte, d'après les recherches de
Heller, Martin, Carter, Hoppe-Scyler, Jaffé, Senator, etc.,
l’indoxyle se trouve dans toute urine normale de l'homme, de
mème que dans celle des carnivores. 11 se rencontre, en quantité
très grande, dans l'urine des herbivores:; dans celle du cheval
il est plus abondant que dans l'urine des bovidés, ce qui tient
à la plus grande dimension du cæcum. Dans l'urine de lapins
il ne se trouve pas du tout, d’après Rosin. Avec un régime
mixte l’homme rend par ses urines 5 à 20 milligrammes de
bleu d’indigo dans les vingt-quatre heures. Pendant le jeûne

(1) Les résultats analytiques utilisés dans cette partie de notre travail sont
dus à la collaboration de Alb. BERTHELOT.

(2) Anleilung zur Analyse des Harns, rédigé par Hurpert, 10° édition,
Wiesbaden, 1898.

Mine.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 83!

(d’après Müller, chez l’homme, mais pas chez le chien ni le
chat), avec Le régime végétarien prédominant (amidon, pois,
d'après Fr. Müller) de mème qu'après la consommation de
gélatine, l’excrétion d’indoxyle est minime. Au contraire, avec
une nourriture riche en albumine, notamment après consom-
mation de viande, la quantité d’indoxyle, dans les conditions
normales, atteint le maximum » (p. 162).

L'indoxyle se rencontre dans l'urine de presque tous les
hommes en plus ou moins grande quantité, d'après nos propres
recherches. L'absence totale de cette substance ne s’est présentée
à nous qu'à titre exceptionnel, sans parler des nourrissons et
des adultes placés dans les conditions particulières dont nous
parlerons plus loin.

Le taux de l’indoxyle dans l'urine de vingt-quatre heures
oscillait entre 0,002 et 0,211 grammes. I est à remarquer que
ces deux extrèmes se sont rencontrés chez la même personne.
Pendant qu’elle mangeait beaucoup de pâtes et peu de viande,
elle excrétait de très pelites quantités d'indoxyle. Le maximum
a été observé après le changement de régime, qui consistait
dans l’abandon presque complet de farineux et dans la consom-
mation plus grande de viande. Des fluctuations moins amples
ont été remarquées chez d’autres personnes et cela malgré le
même genre de nourrilure. Chez un sujet au régime mixte, le
taux de l’indoxyle oseillait entre 0,016 et 0,051 grammes, sans
que l’on puisse préciser la cause de ce changement.

Bien qu'en général l'abondance de la nourriture animale
amène une quantité assez considérable d'indoxyle (0,066-
0,117 grammes), des personnes qui se nourrissent de préférence
d'aliments d'origine végétale en produisent quelquefois des
quantités notables. Ainsi un sujet adonné depuis des années
au régime végélalien, avec exclusion de toutes sortes de
viande, d'œufs et de lait, n’excrétait pas moins de 0,040 grammes
d'indoxyle.

On voit par ces exemples, ainsi que par les faits concernant
les mammifères mentionnés plus haut, que le problème est
plus compliqué qu'on ne pouvait le préjuger. Pour l’éclaireir,
il a fallu le soumettre à l’expérimentation en tâchant de le
simplifier autant que possible. Le chien ne s’est montré
capable de répondre qu’à quelques questions seulement. Enfermé

832 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dans une cage (ce qui est nécessaire pour recueillir toute
l'urine de vingt-quatre heures), il s'agite trop et ne se sent pas
suffisamment à son aise. De plus, il résiste mal au changement
de nourriture et y réagit par des troubles intestinaux. Le singe
convient bien pour le régime végétal, mais ne se prête pas à
l'alimentation animale. L'écureuil ne nous a renseigné que sur
la valeur des noix (1). C’est Le rat blanc (2) qui doit être considéré
comme l'animal de choix pour les recherches qui nous inté-
ressent ici. Omnivore dans le sens le plus large du mot, il se
prête aux changements les plus brusques et les plus variés du
genre de nourriture. Réunis par plusieurs dans une même cage,
les rats se trouvent très bien ensemble et peuvent être nourris
pendant des semaines et des mois avec le même aliment sans
présenter de troubles intestinaux ni de diminution tant soit peu
notable de poids. Nous n'avons observé que de rares exemples
de rats qui soient morts à la suite de leur régime alimentaire.

Parmi les rats nourris pendant des semaines, exclusivement,
avec un aliment unique, ceux qui recevaient de la nourriture
animale (viande, œufs, fromage, poisson, mollusques, crustacés)
présentaient dans leurs urines des quantités plus considérables
de poisons de la série aromatique que les rats au régime
végétal. Nous avons trouvé le maximum chez les rats qui
mangeaient du poisson d’eau douce cuit (0,527 grammes de
phénols et d’indoxyie par litre d'urine), le minimum chez ceux
quine se nourrissaient que de fromage blanc cru (0,083 grammes
par litre). Entre ces deux extrèmes oscillait le taux fourni par
d'autres nourritures d'origine animale. (V. Appendice I.) Les
œufs entiers, ainsi que le blanc et le jaune d'œuf servis sépa-
rément, la viande de plusieurs sortes (poulet, jambon) four-
nissaient presque toujours des quantités considérables de
phénols et d’indoxyle.

La nourriture exclusivement végétale donnait lieu en général
à une moindre production de ces corps aromatiques. Le

(1) Un écureuil nourri pendant plusieurs semaines avec des noix a donné
0,006 grammes de phénols et 0,015 grammes d'indoxyle par litre d'urine.

(2) Dans les expériences sur les rats, la quantité de substances aromatiques
émises est rapportée au litre d'urine et non à l'urine de vingt-quatre heures,
la quantité totale d'urine analysée étant très approximativement la même
dans la plupart des expériences.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 833

maximum que nous avons constaté s'est rencontré chez des
rats nourris exclusivement avec des bananes des Canaries
(0,224 grammes par litre d'urine) et chez d’autres, nourris avec
des pommes de terre cuites (0,150 grammes par litre), tandis
que le minimum de ces poisons a été observé chez des rats qui
ne mangeaient que du pain blanc (0,0056 grammes par litre).
En comparant ces chiffres, on remarque que quelques aliments
végétaux peuvent produire plus de poisons que certains aliments
d'origine animale tels que le fromage blanc. Entre les deux
valeurs extrèmes que nous venons d'indiquer, nous avons
trouvé toute une échelle de taux de phénols et d'indoxyle après
l'ingestion de divers aliments végétaux. (V. Appendice IT.)
Nous signalerons ici que les aliments riches en sucre, tels que
betteraves, navets, carottes, dattes, amènent en général un
faible rendement en ces poisons. La seule exception que nous
avons observée se rapporte aux bananes qui dans quelques
expériences se sont montrées capables de provoquer une forte
production de poisons aromatiques.

Après nous être ainsi orientés sur la production de ces
poisons, à la suite de l’ingestion d’un seul aliment végétal, nous
avons essayé de combiner plusieurs aliments soit entre eux,
soit avec des aliments d'origine animale. En donnant à manger
à nos rats des pommes de terre (qui dans beaucoup de cas pro-
voquent un fort rendement d'indoxyle et de phénols) mélangées
avec des dattes, nous avons obtenu la disparition de l’indoxyle,
tandis que les phénols continuaient à être produits en quantité
notable. La combinaison de deux aliments végétaux qu? nous a
donné la plus faible quantité de poisons aromatiques, était
constituée par du pain blanc mélangé avec de la betterave
(0,005 grammes par litre). Les autres combinaisons employées
par nous n'ont jamais dépassé le taux de 400 milligrammes par
litre. (V. Appendice II.)

Le mélange de trois aliments d’origine végétale donnait lieu
à une plus forte production de ces poisons que celui qui ne
comprenait que deux sortes de nourriture. Le taux de 100 milli-
grammes par litre était dépassé chez des rats nourris avec un
mélange de millet décortiqué, de sarrazin et de beurre. Les
combinaisons dans lesquelles entraient des aliments végétaux
et du lait donnaient un rendement inférieur. (V. Appendice IV.)

834 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

En dernier lieu, nous avons essayé de combiner quatre sortes
d'aliments. Des rats nourris avec un mélange de jambon, de
pommes de lerre, pris comme forts producteurs de poisons
aromatiques, addilionnés de betteraves et de dattes agissant
dans le sens contraire, excrétaient dans leurs urines au
commencement de ce régime une quantité assez considérable
de phénols et d'indoxyle. Mais avec le temps le taux de ces
poisons diminua d’une facon notable (0,018 au lieu de
0,123 grammes par litre).

Le fait que nous venons de signaler est loin d’être unique.
Nous avons remarqué plusieurs fois que les mêmes rats, nour-
ris avec les mêmes aliments, ne rendaient pas toujours la mème
quantité de phénols et d'indoxyle. Tantôt le taux de ces poi-
sons diminuait, comme dans le cas que nous venons de men-
lionner. Mais quelquefois il présentait une augmentation avec
le mème régime et sans qu'il soit possible de préciser le déter-
minisme de ce changement. Il est évident que, bien que le
genre de nourriture exerce un rôle considérable dans la pro-
duction de poisons de la série aromatique, il existe d’autres
causes encore qui l’influencent. Ce sont certainement les
microbes intestinaux et leurs diverses combinaisons qui entrent
en jeu. C’est leur fonctionnement qui doit expliquer pourquoi,
dans certains cas exceptionnels, même les aliments donnant le
plus fort rendement en phénols et indoxyle, peuvent être absor-
bés sans qu'il y ail production de ces substances. L'exemple le
plus remarquable est Le jaune d'œuf, qui constiluail, pendant des
semaines, l'aliment unique de nos rats. Tandis qu'en général
il fournissait beaucoup de poisons aromatiques, dans un cas,
n’en provoquail qu'une production minime (0,0025 gr. par
litre), inférieure à celle que l’on observe chez des rats nourris
avec des aliments végétaux.

Il est bien connu que la flore intestinale de l'homme et des
animaux est très variable el présente des modifications indivi-
duelles considérables. Ce n’est que chez les nourrissons au sein
qu'elle est presque loujours la même, constituée, pour la plus
grande partie, par le Bacillus bifidus de Tissier. Mais à partir
du sevrage, le nombre des espèces bactériennes augmente beau-
coûp, et c'est alors que les variations individuelles de la flore
intestinale se manifestent de plus en plus fortes. Dans ces con-

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 835

ditions, il devient bien difficile de parler de « flore normale »
de l'homme et de la plupart des animaux (4).

Des rats, nourris avec le mème aliment unique et logés
ensemble dans la même cage, présentaient des différences très
accusées dans leur population microbienne intestinale. Ainsi,
parmi des rats qui ne recevaient comme aliment que des œufs
cuits durs, les matières fécales neutres chez les uns, faiblement
acides ou fortement alcalines chez d’autres, présentaient un
tableau de la flore intestinale sensiblement différent. Quelque-
fois prédominaient de gros bacilles courts prenant le Gram,
mélangés avec de petits coccobacilles qui se décolorent par cette
méthode et qui en grande partie sont représentés par des cocco-
bacilles Proteus (fig. 1). Chez d'autres rats au mème régime,
la flore était plus riche en espèces. À côté d'un grand nombre
de Bacillus sporogenes se trouvaient des Proteus, beaucoup de
ot es et de minces bacilles colorables par le Gram

fig. 2). Chez un autre rat du mème lot, an lieu de petits cocco-
1. se rencontraient une quantité de bacilles ne prenant
pas le Gram (qui sont pour la plupart des colibacilles) et des
bäâtonnets très minces qui se colorent par cette méthode
(fig. 3)

L'ensemencement des matières fécales de ces rats au régime
des œufs durs, dans les milieux nutritifs usités de laboratoire,
amenait une sorte de sélection selon les particularités de ces
milieux. En gélose sur des boîtes de Petri se développait tou-
jours et surtout le colibacille, landis que sur des tubes de gélose
inclinée, ensemencés dans l’eau de condensation {méthode de
Choukevitch), poussait le Proteus qui, en peu de temps, mon-
tait jusqu'à l'extrémité de la gélose. La gélose profonde, ense-
mencée avec des matières fécales, fournissait beaucoup de colo-
nies de Bacillus Welchii (Perfringens) que l'on ne rencontrait
qu'en petit nombre sur des frottis des matières. A côté de ce
microbe, les tubes de gélose profonde présentaient des colonies
du Bac. sporogenes qui produisait une grande quantité d'indol,
et cinq autres espèces bactériennes (parmi lesquelles une anaé-
robie facultative) qui toutes ne donnèrent pas d'indol. Parmi

1) La flore des rats au régime ordinaire (graines) et au regime carné
avait été étudiée par de Gasperi (Centralbl. f. Bakt., 1911.)

836 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ces dernières, la plus remarquable est un bacille anaérobie strict
ne prenant pas le Gram et très polymorphe : il se présente
tantôt sous forme de bâtonnets et de filaments, tantôt sous
forme globuleuse.

Il suffit de jeter un coup d'œil comparatif sur deux tubes,
dont l’un contient l’indoxyle extrait de l'urine de rats nourris
aux œufs, tandis que l’autre renferme l'indoxyle de rats nour-
ris exclusivement avec des dattes, pour être aussitôt frappé
d’une grande différence entre eux. Au contraire, l'examen de
frottis des matières fécales de ces deux catégories de rats n’ac-
cuse que des variations bien moins considérables. Quelquefois,
on est impressionné par la prédominance de la flore colorable
par la méthode de Gram, dans laquelle se rencontrent surtout
des coccobacilles lactiques du groupe des entérocoques (fig. 4).
Mais dans le même lot de rats, vivant dans la même cage et
alimentés, comme les premiers, seulement de dattes, on en ren-
contre dont la flore intestinale est particulièrement riche en
coccobacilles ne prenant pas le Gram et renfermant une assez
grande quantité de Bac. bifidus. Les formes à entérocoque ne
constituent qu’une faible minorité (fig. 5).

Comme exemple de rats ne produisant que très peu de poi-
sons de la série aromatique, nous avons choisi ceux qui ont été
nourris exclusivement avec des carottes. Sur les frottis de leurs
déjections, on rencontre (fig. 6) une quantité de bactéries
incurvées fusiformes, quelquefois extrèmement fines. Elles
prennent mal la coloration de Gram et se décolorent avec une
très grande facilité. Les tentatives faites pour les cultiver
n’ont pas donné jusqu'à présent de résultat. On voit ensuite un
gros bacille à extrémités arrondies, très probablement identique
au Bacillus capillosus de Tissier, et des coccobacilles ne prenant
pas le Gram, parmi lesquels on distingue le colibacille et le
Proteus. En dehors de ces microbes, on rencontre plusieurs
bactéries qui se colorent par le Gram et parmi lesquelles on
reconnaît beaucoup de diplo- et de streptocoques, et de gros
bacilles acidophiles à bouts arrondis.

Les cultures, sur les milieux les plus usuels en bactériologie,
appartiennent en grande partie au bacille acidophile du type
Merechkowsky, qui pousse très abondamment dans des tubes
de gélose profonde (d’après Veillon). Il s’agit ici certainement

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 837

de la variété du Bac. exilis de Tissier. L’acidophile de Moro est
beaucoup plus rare. On l'obtient facilement en ensemençant
les matières dans du bouillon acide. Le Bac. bifidus forme le
1/5-1/6 du nombre total des colonies. Les cultures en gélatine
sur des boîtes de Petri laissent voir surtout des colibacilles,
des Proteus et des Bac. fluorescens liquefaciens. En outre de
ces microbes, nous en avons 1solé encore trois autres : le B. ven-
triosus de Tissier, un streptocoque anaérobie prenant le Gram
et ne donnant pas d'indol, de même qu'un fin bacille anaéro-
bie, formant des chainettes disposées en tresses et n’attaquant
pas les albuminoïdes. (

En comparant la flore des rats aux œufs et aux carottes, nous
voyons que les différences portent surtout sur les points suivants.
L'abondance du B. Welchii, du B. sporogenes et du bacille po-
lymorphe caractérise la flore intestinale des rats nourris avec
des œufs. Chez les rats aux carottes, ce sont les acidophiles
et le bifidus qui prédominent, tandis que chez les rats aux
œufs on ne peut isoler le premier qu'en passant par le bouillon
acide. Le grand producteur d’indol, le colibacille, est commun
aux deux régimes, de même que le Proteus. La grande diffé-
rence dans la production de l'indol doit donc être attribuée aux
quantités proportionnelles des espèces qui constituent la flore
intestinale, et non à la différence qualitative de cette flore.

D'après l’ensemble de données que nous avons pu réunir, on
peut conclure que le régime alimentaire ne constitue qu'un
des facteurs qui agissent dans la production des poisons de la
série aromatique. Le second facteur, et des plus importants,
est représenté par les bactéries de la flore intestinale.

IT

INFLUENCE DE QUELQUES MICROBES SUR LA PRODUCTION
DES POISONS INTESTINAUX DE LA SÉRIE AROMATIQUE

Bien avant la série de recherches que nous avons relatées
dans ce mémoire, on a essayé de modifier notre flore intesti-
nale à l’aide de microbes lactiques. Cette tentative était appuyée
sur deux principes. D'un côté, on avait tout lieu de croire que
les putréfactions intestinales constituaient une source impor-

838 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tante de troubles aigus et chroniques et que, partant, les fer-
ments lactiques pouvaient les diminuer ou mème les supprimer.
D'un autre côté, on se basaitl sur le fait que, parmi les popula-
lions qui consomment beaucoup de lait aigri, on rencontre,
plus souvent que d'habitude, des vieillards bien conservés et
même un plus grand nombre de centenaires. En plus des
exemples mentionnés dans un autre endroit (1), nous pouvons
citer quelques autres cas parvenus à notre connaissance. Un
vétérinaire du territoire de Koubane (dans le Caucase du nord),
M. Atmanskikh, nous a envoyé une brochure sur l’industrie
laitière dans son pays, dans laquelle il annonce que « les pro-
duits de laitage constituent la nourriture principale et cons-
tante de la population ». Parmi ces produits, le plus remar-
quable porte le nom d’ « aïran » : c'est une sorte de lait aigri
préparé avec du lait bouilli auquel on ajoute, lorsqu'il est
devenu liède, quelques cuillerées d’un levain renfermant deux
microbes lactiques (un long bacille et un streptobacille en
chaînettes) et une levure. « Pour les habitants du district
Karatchaï (du territoire de Koubane), l’aïran représente le
principal produit alimentaire; c'est l'unique nourriture de
beaucoup de familles ». « I n'est pas rare que l’aïran, pendant
des semaines, constitue la seule nourriture. L'indigène du pays
reste souvent sans pain et sans viande, mais d’aïran et de fro-
mage il ne peut se passer, ni à la maison, ni au dehors » (p. 7).
Comme résultat de ce régime, il est à signaler que « les habi-
tants de Karatchaï jouissent d’une santé florissante et atteignent
souvent une vieillesse très avancée » (p. 11). Aussi les méde-
cins recommandent beaucoup l’aïran à leurs patients atteints
de troubles gastro-intestinaux. Dans un pays du district de
Karatchaï, pays qui s'appelle Tiberda, une grande quantité de
malades s'empressent en été. Il s’est même formé dans cel
endroit un village composé de villas, remplies de malades qui
suivent la cure d’aïran. Comme corollaire. à sa brochure,
M. Atmanskikh nous a envoyé la photographie de deux beaux
vieillards qui prétendent, tous les deux, avoir atteint l’âge de
cent trente ans et qui habitent précisément Tiberda. Etant
donné qu'au temps où sont nés ces deux hommes, il n’existail

(1) Mercaxikorr, Essais oplimisles. Paris, 1907, p.227 el suiv.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 839

pas encore dans le pays de registre d'état civil, ce nest que
d'après des renseignements verbaux sur les événements de
cette époque reculée que l’auteur de la brochure conelut que
les deux vieillards sont « incontestablement âgés de plus de
cent ans ». Les deux vieillards, dont le physique donne une
bonne impression, ont eu une nouvelle poussée de dents après
la chute des anciennes.

Dans le récit de son voyage dans la Guinée française,
M"° Pobéguin (1) signale le fait que, dans la région qu'elle à
parcourue, les nègres qui mangent beaucoup de lait aigri se
distinguent par leur bonne santé et alteignent fréquemment un
âge très avancé.

M. le D' d'Hérelle écrit ce qui suit, dans une lettre adressée
de la province de la Rioja (nord-ouest de la République
Argentine) : « La longévité est extraordinaire dans cette
région. Il n’y a pas de petit village qui ne compte un ou deux
centenaires, et bien des vieillards de quatre-vingts et quatre-
vingt-dix ans cultivent la terre comme s'ils avaient trente ans
et font leurs dix lieues à cheval sans se fatiguer. Ce qu'il y a
de particulier, c'est que le fond de l'alimentation dans ces
campagnes est une espèce de lait caillé, tout comme en Bul-
garie. J'ai constaté d’abondants ferments lactiques dans les
fèces de deux vieux de quatre-vingt-quatorze et quatre-vingt-
dix-sept ans particulièrement robustes. »

sien que le manque de documents statistiques laisse impré-
cise l'évaluation de l’âge des vieillards, il ne peut être douteux
que dans ces exemples, de même que dans les cas de longévité
des Bulgares et de quelques autres habitants des Balkans, il
s'agit réellement d'hommes très vieux. La femme serbe, men-
tionnée dans notre introduction, qui nous à été adressée
comme centenaire, ne l’étail pas; cependant, d’après des ren-
seignements plus précis, son äge avait atleint quatre-vingt-
treize ans.

L'effet bienfaisant des ferments lactiques dans les maladies
du tube digestif, notamment dans celles que cause la putréfac-
tion intestinale, estadmis d’une façon si générale qu'il est inutile
d'entrer de nouveau dans les détails. Mème chez les petits

A) Le Tour du Monde, 1912.

840 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

enfants, les microbes lactiques exercent une action thérapeu-
tique marquée. Parmi les documents les plus récents à ce sujet
signalons une note du D'R. Clock(1). Après avoir constaté que
le babeurre, que l’auteur employait beaucoup autrefois, n’agit
que d’une façon passagère, il s’est décidé à prescrire aux petits
enfants atteints de troubles digestifs des cultures pures du
bacille bulgare. « Dans chaque cas, le succès ne s’est pas fait
attendre longtemps. Le processus putréfactif de l'intestin
diminua, ce qui se manifestait par les propriétés normales des
matières fécales. L'action curative doit ètre attribuée excelusi-
vementaux bacilles, car on n'a pas employé d’autres mesures
thérapeutiques ou diététiques. »

Il reste encore beaucoup à étudier pour préciser le mécanisme
intime de l’action thérapeulique des microbes lactiques dans le
tube digestif. Il est plus facile de s’en rendre compte d'après
l'examen de leur effet curatif dans des maladies d’organes
moins profonds. Le D'Brindeau a publié récemment(2) un travail
détaillé sur 95 cas de traitement d'infection puerpérale avec
des cultures pures de ferment bulgare, additionné de lactose
stérile. Arrivé à un résultat très favorable, l’auteur conclut en
ces termes : « Le traitement des plaies infectées par les cultures
du bacille lactique donne de bons résultats. Il est logique, car
l'acide lactique est un antiseptique puissant et non toxique. Les
cultures agissent, en outre, en empêchant certaines espèces
pathogènes et en provoquant la leucocytose. Il n’est pas dan-
gereux, Car ce microbe n'est jamais pathogène. Les cultures
lactiques peuvent être employées dans tous les cas de plaies
sepliques ou putrides, mais leur véritable indication se trouve
dans les plaies vulvo-périnéales infectées secondaires à l'accou-
chement. Ces plaies se détergent très rapidement et ce traite-
ment est un excellent moyen de préparation pour les restaura-
lions secondaires du périnée » (p. 15). Il serait intéressant
d'établir la variation du taux de l’indoxyle chez les femmes
traitées avec des bacilles bulgares. Etant donné que la suppu-
ration constitue une source d’indol, il serait facile de démon-
trer la diminution d'indoxyle urinaire sous l'influence de fer-
ments lactiques.

(1) Journal of the americ. medic. assoc.. 1912, 29 juin.
(2) Archives mensuelles d'Obstétrique et de Gynécologie, 3 mars 1912.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 841

Pierre Rosenthal et M. Berthelot (1) ont obtenu la guérison
de gingivites et de pyorrhées alvéolaires rebelles à l’aide de
cultures puresde microbes lactiques. Depuis 1908 L. Fournier(2)
emploie avec succès le bacille bulgare dans le traitement des
infections du pharynx et des fosses nasales. M. Berthelot (242d.),
après avoir démontré que ce bacille est capable d'empêcher le
développement du méningocoque, pense qu'on pourrait peut-
ètre débarrasser les fosses nasales et le pharynx de ce microbe
si dangereux en introduisant dans ces cavités une suspension
de bacilles bulgares dans du lactosérum. On a pensé aussi qu'il
était possible par le mème moyen d'éliminer les bacilles
typhiques et paratyphiques chez des porteurs de ces germes
pathogènes. Malgré quelques cas favorables, les tentatives dans
cette voie n'ont pas été couronnées de succès. La cause de cette
inégalité dans l'action des ferments lactiques nous parait
résider dans la grande différence des conditions extérieures qui
les entourent. Tandis qu’il est facile d'introduire des matières
sucrées, indispensables pour ces ferments, dans les fosses
nasales, le pharynx et le vagin, il n’est point aisé de les faire
parvenir dans les régions profondes du tube digestif, telles que
l'iléon, le cæcum et le côlon. Il est bien établi que les sucres
se résorbent si facilement dans l'estomac et dans les parties
supérieures de l'intestin grêle, qu'il n’en passe rien ou presque
rien dans les parties plus profondes.

M. Berthelot (3) a fait à ce sujet des recherches multiples
d'après lesquelles les sucres introduits avec des aliments riches
en ces hydrocarbonnés, carottes, betteraves, raisins secs et
dattes, ne parviennent qu’en certaine quantité dans le cæcum
du lapin et n'arrivent qu’en quantité très faible dans le cæcum et
le côlon ascendant des macaques. Dans le contenu de Ia partie
supérieure du gros intestin, on n'a retrouvé que peu de sucre
chez le lapin et seulement des traces dans le contenu des côlons
transverse et descendant du singe. D'où cette conclusion que,
pour introduire des matières sucrées dans le gros intestin,
« d'assez nombreux aliments pourraient être employés, mais,
parmi eux, les dattes paraissent le mieux convenir à cause de

(1) Bull. de la Soc. thérapeutique, 8 avril 1908 ; Revue de Médecine, 10 août 1910.
(2) BerraeLor. Comptes rendus de lu Soc. de Biologie, 19 mars 1910.
3) Comptes rendus de lu Soc. de Biologie, 8 janvier 1910.

/

\
54

842 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

leur grande richesse en sucres, de leur faible teneur en eau et
de la texture serrée de leur parenchyme. Après elles, on peut
recommander, entre autres, les raisins secs, les racines comme
la carotte ou la betterave, possédant tous une teneur en sucres
assez élevée ».

Le fait signalé plus haut, que les lapins nourris de carottes et
de betteraves n'exerètent que des quantités minimes ou même
pas du tout d'indoxyle, s'explique facilement par la pénétra-
tion plus abondante de sucres dans le gros intestin, siège de là
putréfaction intestinale. Chez le singe et chez l’homme, les
conditions sont moins favorables sous ce rapport. Il y avait donc
tout lieu de chercher quelque autre source de matières sucrées
dans le gros intestin. Dans cette intention, l’un de nous (1) a eu
l’idée de faire produire par des microbes intestinaux du sucre
aux dépens des aliments amylacés. |

I est bien connu que les matières fécales d'hommes au
régime végétarien ou mixte contiennent toujours ou presque
constamment des restes d’amidon. On en trouve surtout après
un repas de pommes de terre dont les membranes cellulo-
siques protègent les grains d’amidon de la digestion complète.
Mais, même après des repas de riz ou de graines de féculents,
une partie de l’amidon traverse le tube digestif entier et passe
dans les malières fécales (2).

Bien que les microbes capables de produire du sucre avec de
l'amidon ne soient pasrares dans la nature, il a fallu un travail
prolongé et laborieux pour arriver à quelque résultat précis.
Aussi l’un de nous (3) a cherché plus d’un an avant d'aboutir.
La plupart des microbes amylolytiques attaquent en même
temps les substances albuminoïdes, ce qui a pour résultat
qu'introduits dans le tube digestif, ils favorisent la putréfac-
tion intestinale plutôt qu'ils ne l’empêchent. Ce n'est qu avec un
bacille isolé des matières fécales d’un chien qui servait pour
l'étude de l’influence du régime alimentaire sur la production
de corps de la série aromatique, qu'il à été possible d'obtenir
une action amylolytique marquée non accompagnée d'une

(1) Mercuixorr, Bactériothérapie intestinale, Gilbert et Carnot, 2° édit.,
p. 40, 1912.

(2) Saamint und SrRaseuRGER, Die Füces des Menschen, 3° édit., p.76, Berlin, 1910.

(3) Wozcuaw, Ces Annales, p. 610, 1912.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 843

attaque d’albumine et de gélatine. C’est avec ce bacille désigné
sous le nom de G/ycobacter peptolyticus, que nous avons fait
plusieurs séries d'expériences afin d'établir son influence sur la
production des phénols et de l’indol dans l'organisme. Nous
avons d'abord pris des rats auxquels nous donnions divers
aliments farineux, tels que pain, riz, pommes de terre, addi-
tionnés de culture pure du glycobacter. Ce n’est qu'avec des
pommes de terre que nous avons obtenu des résultats encou-
rageants, ce qui tient probablement à la protection plus efficace
des grains d’amidon par la membrane plus dense des cellules
qui les renferment. Dans quelques-unes de nos expériences le
bacille amylolytique faisait disparaitre des urines les phénols,
de mème que l’indoxyle; dans d’autres, l'effet, quoique moins
complet, était néanmoins bien marqué. Ce n’est que dans des
cas rares que l'absorption du glycobacter n'’exercait qu'une
influence minime ou nulle (V. Appendice V.) Les macaques
nourris aux pommes de terre produisent parfois des quantités
tellement considérables de poisons aromatiques qu'il devient
difficile de les diminuer d’une facon tant soit peu notable. Mais
dans d'autres cas où cette production n’est pas exagérée, le
glycobacter s'est montré capable d'assurer ce résultat.

L'effet le plus marqué a été observé chez plusieurs personnes
qui se trouvent parmi les sujets qui, habituellement, donnent
un rendement plus ou moins considérable de phénols et
d'indoxyle dans leurs urines. D'une façon régulière, à quelques
exceptions près, nous avons obtenu chez eux une diminution
plus ou moins accusée à la suite de l'absorption de pommes
de terre additionnées de glycobacter. (V. Appendice VE.)

Après avoir établi que, d'un côté, le régime approprié et, de
l’autre, l'addition de certains microbes, exercent une influence
favorable dans le sens de la diminution des poisons aromatiques
d'origine microbienne, nous nous sommes mis à combiner ces
deux facteurs. Nous avons pris un lot de onze rats recevant
ensemble par jour un mélange de jambon (60 grammes),
pommes de terre (120 grammes), betteraves (120 grammes) et
dattes (60 grammes). Au début de ce régime ils rendaient
avec leurs urines des quantités assez notables de phénols et
d'indoxyle; mais dans la suite le taux de ces poisons accusail
une diminut'on marquée sous l'influence des aliments riches

844 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

en sucre. Ce n'est qu'après l'addition à leur nourriture de cul-
tures pures de ferments bulgares et de glycobacters peptoly-
tiques que nous avons obtenu leur disparition presque com-
plète. (V. Appendice VIT.)

Il est donc possible d'obtenir un régime mixte nutritif duquel
la viande n’est point exclue et qui ne provoque qu'une produc-
tion de poisons aromatiques tout à fait insignifiante. Chez
l'homme, nous sommes arrivés à un résultat semblable. Un de
nous, qui se distinguait pendant longtemps par un fort rende-
ment d’indoxyle urinaire, auquel, à cette époque, étant donnée
l'opinion générale sur l'innocuité de cette substance, il n’atta-
chait pas d'importance, s’est mis plus lard à rechercher un
régime hygiénique capable d'en amener la suppression. Dans
cette intention, il combinait différents aliments additionnés de
microkes bienfaisants. Il s'est trouvé qu'un régime mixte dans
lequel entrait une certaine quantité de viande ou de poisson
(400 à 120 grammes), des farineux, légumes verts et secs,
fruits en compote, diverses sucreries, et 500 à 600 grammes de
lait aigri par le bacille paralactique, un tube de culture pure
du bacille bulgare sous forme de pâte — tout cela réparti
entre les trois repas de la journée — supprima l’excrétion de
l'indoxyle. Il arrivait bien que dans quelques portions de l'urine
on remarquât encore une légère trace d’indigo, mais les urines
de vingt-quatre heures en étaient presque constamment
dépourvues.

Un voyage de deux mois en Russie changea notablement le
régime alimentaire et, partant, le rendement des poisons aro-
matiques redevint assez abondant. Il à fallu plus de deux autres
mois pour arriver à leur suppression à l’aide du régime men-
tionné. L'indoxyle, devenu de plus en plus rare, a fini par dis-
paraître. Une analyse quantitative faite environ onze mois
après le retour, démontre une trace indosable d'indoxyle et
trois à quatre milligrammes de phénols dans l'urine de vingt-
quatre heures, c'est-à-dire une quantité insignifiante en com-
paraison du taux normal, indiqué au début du premier cha-
pitre de ce mémoire. Elant donné ce résultat, il a été inutile
dans cet exemple de recourir à l’action du glycobacter.

Plusieurs personnes de notre entourage qui, normalement,
rendaient des quantités plus ou moins considérables d'indoxyle,

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 845

l'ont vu disparaître après avoir suivi pendant quelques semaines
ou plusieurs mois un régime analogue au régime sus-men-
tionné. N'ayant pas à notre disposition de service hospitalier
ou policlinique, nous n'avons pas pu multiplier le nombre de
nos observations, mais il est désirable que cette lacune soit
comblée dans de bonnes conditions.

Nous n'avons pas la prétention de penser que notre travail
épuise le problème si complexe des rapports de la flore intesti-
nale avec l’intoxication chronique qui cause les seléroses de nos
organes les plus précieux. Nous espérons seulement avoir fait
quelques pas vers ce but. Un long travail est encore à pour-
suivre. Il y a lieu, grâce au perfectionnement des méthodes
d'isolement et de culture des microbes, d'étudier la flore intes-
tinale dans des cas où les poisons de la série aromatique ne sont
produits qu'en quantité très faible, malgré les régimes les plus
variés, souvent riches en albuminoïdes animales. Les condi-
tions de la lutte entre les microbes du tube digestif, souvent si
difficiles à établir, doivent être étudiées avec beaucoup de pré-
cision.

La putréfaction intestinale n'étant pas l'unique source de
poisons intestinaux, il serait utile d'établir le rôle des fermen-
tations acides dans les auto-intoxications. Bien que l'exemple
des peuples qui, pendant presque toute leur vie, se nourrissent
avec du lait aigri, prouve l’innocuité des ferments lactiques, des
expériences directes doivent être dirigées dans cette voie. Il faut
établir encore l'influence des différents régimes sur la longévité
des animaux et de l’homme, ce qui est surtout facile en s’adres-
sant aux petits omnivores, tels que les rats blancs, dont le cycle
de vie est particulièrement court. Des recherches dans ces
directions sont poursuivies dans notre laboratoire.

846 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

APPENDICES

ER ER 2 GOT OGM A RES ARE ROUUE ERNEST PRE. CONS PPS NES CU ENERGIE RE ESRI ER SE SEE A 7

I. — Urine des rats nourris avec un seul aliment d’origine animale.

: ‘ = an 2 no = ©
ste NOM Ées|s | EE Es
CRE DATE ZE [Sa ze | S=

= | de l'aliment. = s|= : S & z &

1 | OŒEufs entiers cuits durs. 30 oct. 191]. 235 | 1,052| 0,16510,2C0
2 Ider2. 10 janv. 1912. | 300 | 1,052] 0,030/0,068
3 Blanc d'œuf cuit dur. 21 janv. 1912. Sù | 1,055! 0,03310,300
4 Idem. 6 févr. 1912. 350 | 4,055 » |0,460
5 Jaune d'œuf cuit dur. 19 mars 1912. 260 | 1,053] 0,12010,178
6 Idem. 25 avril 1912. 250 | 4,041! 0,002 |[ndo-

sable.
7 Jambon cuit. 21 mars 1912. 250 | 1,055! 0,00410,250
8 Poulet cuit. 1er mars 1912, | 270 | 1,053| 0,150/0,357
9 Viande de cheval 30 sept. 1912. 225 | 41,042 » |0,107

et de bœuf cuites.

10 Poisson cru. 11 nov. 1911. 300 | 1,060! 0,09010,084
11 Fromage blanc. 30 avril 1912 280 | 1,035! 0,05010,033
12 Idem. 7 mai 1912. 185 | 1,051! 0,100/0,017
13 Idem. 21 mai 1912. 225 | 1,061| 0,090/0,013
14 Moules cuites. 13-28 août 1912. 260 | 1,055! 0,12510,215
15 | Idem. 3 sept. 1912. 260 | 1,048] 0,133/0,411
16 | Crevettes. 154sept-1912; 260 | 1,050! 0,002/0,040

II. — Urine des rats nourris avec un seul aliment d’origine végétale.

Il Carottes cuites. 26 nov. 1911. 138 » 0.008|0,006
10 janv. 1912.
2 Idem. 15sept. 1912: 300 | 1,031 » [0,008
3 Idem, 21/Sept.41912; 250 | 1,027| 0,03310,00%
4 Pommes de terre 15 nov. 1911. 3170 | 1,031! 0,08010,070
cuites à l’eau.
5 Idem. 3 déc. 1944: 300 | 1,040 » 10,096
6 Idem. 4er janv. 1912. 280 | 1,040! 0,02010,059
7 Idem. 19 janv. 1912. 300 | 1,044! 0,019)0,04%1

8 Idem. 28 févr. 1912. 200 | 1,030! 0,014/0,066

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 847

DATES z = Ÿ D Dr E de
de l'aliment. SEINE | En © | 4 &
© nm | à 8 | £, à
——— | |
Pommes de terre 2S févr. 1912. 265.1"1:023 |.0;, 01210. 037
cuites à l'eau. |
Idem. Août 1912. 300 | 1,034 » [0.012
|
Idem. » 300 | 1,028] » |0,008
Idem. | Sept. 1912. 275 | 1,019] 0,010/0,001
Purée | 15 juin- 290 | 1,029! 0,016|0,006
de pommes de terre. leuil 1912.
Idem. IL 2-9,juil. 1912. 500 | 1,034 » _|0,008
Bananes. 18 avril-14 mai 190 | 1,068| 0,224/0,122
| 11922 |
Idern. | 16 mai-8 juin 210 | 1,036! 0,014/0,003
1912. | |
Idein. | 18 avril 1912. 235 | 1.055, 0,010! Indo-
| | sable.
Idem. |. 10 juin 1912. 250 | 1.046/ » |0,002
| | |
Idem. OT ne 19127 275 | 1,027| 0,02810,038
Idem. 21 juil..19192; 300 | 1,043! 0,03410,01%
| |
Idem. | Août 1912. 210 | 1,065! 0,006| Indo-
| sable.
Choux-fleurs bouillis. 16 mai 1912. 150 | 1,036! 0,016/0,002
Purée de pois. 13 mai 1912. 162 | 1,056| 0,020 !0.,003
Dattes. INSjanv. 1919. 135 | 1,070! 0,00810,006
Pain blanc. 3 avril-9 mai 170 | 1,028] 0,00610,00%
| 1912.
Idem. | 10-15 mai 1912. 200 | 1,031! 0,006| 0
Idem. | 16-20 mai 1912. | 180 | 1,026! 0,043/0,003
|
Idem. 120 mai-3 juin 1912.| 4140 | 1,030| 0,006| Indo-
sable
IIT. — Urine des rats nourris avec deux aliments.
Poisson d’eau douce 15 juin au 260 | 1,063] 0,10010,033
cuit au beurre. 1er sept. 1912.
2 Maquereau 17 sept. 1912. | 250 | 1,052! 0,200!0,032
cuit au beurre. L
3 | Poisson cuit au beurre. 15 juin-16 juil. 110 | 1,070 D 0/425
1912.
Pain et betterave bouillie.| 27 févr. 1912. 300 | 1,053! 0,005| 0
Idem. 128 févr.-26 mars| 355 | 1,052] 0,005| 0
| 1912?
Idem. [27 mars-18 avrill 450 | 1,033 » (]
| 19122
Pain et sucre. 128 janv.-20 avril| 235 | 1,053| 0,066| 0
1912.
Pommes de terre et dattes.| 19 mars 1912. 250 | 1,05310,038 0

848 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Ê ol En m
WE NOM Eeslé 38|È£
LE DATE AES | Am |4=
Ê des aliments <e£sla E A #
= SO PE EC AE à
9 |Pommes de terre etdattes.| 25 avril 1912. 260 | 1,031| 0,100|/Indo-

10 [Pommes de terre beurre.|15 juin-l® juillet| 290
1912.

11 Idem. 15 OPA sept.| 280 | 1,027] 0,015|0 ,008
12 Idem. rs 315 | 1,020! 0.013/0,001
13 Idem. 13 sept. 1912; 290, | 1,025| 0,00710,006
14 |Purée de pommes de terre, » 500 | 1,034 » [0,007
beurre.

15 Idem. » 220 | 1,016! 0,00810,007
16 Idem. 13 sept. 1912. 290 | 1,022] » |d,006
17 Macaroni, beurre. 30 mai13 juin 220 | 1,018! 0,00510,008
18 Idem. 14 0 Suites 260 | 1.018] 0,050/0,014
a9 Idem. 3-13 dt 250 | 1,027! 0,035|0,009
20 Semoule au lait. 14-20 juin 1912. | 220 | 4,02 » [0,029
21 |Farine de maïs avecheurre.| 15-19 juin 1912. | 205 | 1,012! 0,01010,018
22 Idem. 20 juin-20 juil. 425 | 1,015! 0,05010,017
29 Idem. 10-20 SL, 4942. 590 | 1,016 » [0,011
24 Idem. 29 jee août| 300 | 1,009 » [0,002
25 | Petits pois avec beurre. | 5-17 juin 1922. 195 | 1,021 » 10,011
26 Idem. 18juin-2juil.1912.| 180 Indo- |Indo-
sable.|sable

27 Haricots verts beurre. |13 A0 UT sept.| 285 » |0,042
28 | Navets cuits beurre. | 13-98 ni 1912. | 260 0,015|0,002
29 Idem. » 300 0,03410,010
30 Idem. 5 sept. 1912. 300 0,002|0,006
31 | Idem. » 260 0,02310,037
32 Idem. 14 sept. 1912. 260 0,015|Indo-
sable

33 Cerises, abricots, 30 mai-8 juin 215 0,01010,021
34 Idem. 8-15 juin 1912. 185 0,012|0,00:
35 Citrouille, beurre. » 380 0,02910,046
36 Idem. 13 sept. 1912. 290 0,03110,010
37 Haricots verts, beurre. 9 sept. 1912. 310 » |[0,010)

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 849

IV. — Urine des rats nourris avec trois aliments divers.

S

N

(9)
rdre.

ee Ro

[=p] Cr CS

19

2 (2 > A |
NOM Hes|é À 3 £ à E
DATE ABS |2aol ze | <=
de l'aliment, Se s|a = & 8 E &
iz, lait, sucre. 21mars-18 avril 310 | 1,012| 0,011/,0,0021
1912.
Idem. 19 avril-14 mai 195 | 1,018! 0,080 0
1912:
Idem. 15mai-3juin1912.| 310 | 1,013] 0,040/0,042
Millet et sarrazin, 30 mai-11 juin 245 | 1,016| 0,11110,009
décortiqués, beurre. 1612.
Idem. 12.24 juin. 290 | 1,016! 0,100/0,042
Idem. 30juin-9juil.1912.| 280 | 4,027] » |0,042

Y. — Urine des rats nourris avec des pommes de terre.
Influence du glycobacter peptolyticus.

Pommes de terre cuites 15 nov. 1911. 310 | 1,030] 0,08010,070

21NdéC- 1914 300 | 1,035|Indo-| 0

Mêmes rats qu’au n° 1,
sable.

nourris avec des pommes
de terre cuites,
additionnées de culture
pure de glycobacter
peptolytieus.
3 décembre 500 0,096
1911.

1 rats nourris aux
pommes de terre cuites.

1,036 »

Mèmes rats aux pommes 21 décembre 380 | 1,026| 0,02210,058

de terre et glycobacter. 1911.
6 rats aux pommes 13 décembre 500 | 1,038] 0,920/0,059

de terre cuites. 1912.
Mèmes rats aux pommes! 31 décembre 280 | 1,040| 0,01010,024

de terre et glycobacter. 1912:
Pommes de terre. 19 déc. 1911. 300 | 1,036| 0,01910,041
Pommes de terre 12 janvier 300 | 1,055] 0,015/0,015

et glycobac:er. 1912.
Pommes de lerre. Février 1912. 200 | 1,027! 0,014|0,066
Mèmes rats, Février 300 | 1,026! 0,01310,029

pommes de terre NE

et glycobacter.

Pommes de terre. Février 1912. 265 | 1,020! 0,01210,037
Mèmes rats, Février 1912. 250 | 1,030| 0,15 [0,033

pommes de terre
el glycobacter.

850 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

VI. — Urine des personnes au régime mixte.

Influence du glycobacter peptolyticus.

INDOXYLE
ne To
par
litre.

ALIMENTATION

à
15 degrés.

N°S

d'ordre.

et traitement.

DENSITÉ

M®e C., régime mixte. 20 mars
19122
Mème personne 29 mars
après 8 jours de traitement 1912.
avec le glycobacter, puis
avec des pommes de terre.

1 = |

Mème personne
trois semaines après
la cessation
du traitement.

Mu: R., autre personne |13 avril
au régime mixte. 1911.

Mème personne DEA
au régime mixte. 1942?

Même personne $ mars
après 1912.
8 jours de traitemenL
avec le glycobacter
puis avec
des pommes de terre.

M. C., régime mixte. 20 janv.
1912.
Même personne 30 janv.
après traitement 12
avec le glycobacter
et pommes de terre.

M. S., régime mixte. SMÉML
1912.
Même personne Février
après traitement 1912:
avec le glycobacter
et pommes de terre.

Mème personne Février
plusieurs jours 1912.
après la fin du traitement.

Mème personne Mars
avant la nouvelle période 1912.
de traitement,

Même personne 20 mars
à la fin 1912.
d'une nouvelle période
du traitement.

QUELQUES ESSAIS DE DÉSINTOXICATION INTESTINALE 851

VII. — Urine des 11 rats nourris aux quatre aliments.

= o - l'E a | CS A ©
VE NOMS HEC E 2 = 5 = à
us DATES AE A ER RON
5 des aliments. 27 ER 5 ES Ê Es)
1 |Dattes60 gr. : jambon 60 gr: Du 20 355 | 1.04: 0,03710,086
betteraves, 120 er. : | au 28 mars
pommes de terre, 120 gr.| 1912.
2 Méme nourriture. Du 19 avril 525 | 1,038! 0.00710,016
lau 27 avril 4912:
| |
3 Même nourrilure. 28 avril 400 | 1,034! 0,011/0,006
au 2 mars 1912.
4 |[Mème nourriture, eu plus 3 au 7 mai 410 | 1,034| 0,005|Indo-
bacilles bulgares 1912 sable.
et glycobacter.
5 Mème régime S-11 mai 210 | 1,029! 0,006|Indo-
avec bactéries. 1912. sable.
6 Idem. | 12-20 mai 1912. | 224 | 1,056| 0,009 0
|
ji | Seulement jambon | 21-30 mai 1912. 100 | 1,046! 0.021|Indo-
| et pommes de terre. | | sable.
|

EXPLICATION DE LA PLANCHE XVIII

FiG. 1. — Matières fécales de rat nourri avec des œufs durs.

F1G. 2. — Matières fécales très alcalines d’un autre rat au même régime
alimentaire.

FiG. 3. — Matières fécales faiblement acides d'un troisième rat nourri exelu-
sivement avec des œufs durs.

FiG. 4. — Matières fécales de rat, nourri avec des dattes depuis deux mois.

FiG. 5. — Microbes des matières fécales d'un autre rat au même régime.

F1G. 6. — Contenu du cæcum de rat nourri aux carottes.

FiG. 7. — Matières fécales de rat nourri avec des dattes et des pommes
de terre.
F1G. S. — Matières fécales de rat nourri avec du jambon, des dattes, des

pommes de terre et de la betterave.

SUR LE ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES
EN AGRICULTURE (1)

par M. Ga8riEz BERTRAND.

Je me propose d'examiner, dans eette Conférence, une des ques-
tions nouvelles les plus intéressantes au point de vue théorique et
pratique soulevée par l'étude de la composition chimique des espèces
végétales : c'est la question du rôle joué par certains corps, métal-
loïdes et métaux, trouvés dans les plantes en très petites propor-
tions.

Les premiers phytophysiologistes dont les recherches aient porté
sur la composition élémentaire des végétaux n'ont pas tardé àtomber
d'accord pour reconnaitre qu'une dizaine environ de corps simples
étaient nécessaires à l'édification des tissus et au fonctionnement des
cellules : l'Aydrogène et l'oxygène, dont l'association forme l’eau, soit
les 75 à 95 centièmes du poids total des plantes vivantes: le carbone,
qui, lié aux deux précédents, constitue la cellulose, le sucre, les
huiles et les autres substances dites hydrocarbonées; l'azote, qui
entre avec les trois premiers dans la composition de l’albumine, du
gluten et des matières protéiques, ainsi que le soufre et quelquefois
le phosphore, enfin, le potassium, le calcium, le magnésium etde petites
quantités de fer.

L'ensemble de ces dix éléments, de ces dix corps simples, est abso-
lument nécessaire au développement normal des plantes. L'absence
d’un seul entraine la non-utilisation des autres et l'arrêt de la crois-
sance.

Si l'on dispose convenablement, dans un vase rempli d'eau pure,
une graine de haricot, de maïs, d'avoine, de sarrasin,etc., on assiste
bientôt à la germination : une petite plante apparaît, se développe
aux dépens de l’eau et des substances apportées par la graine, aux
dépens aussi de l’acide carbonique contenu dans l'atmosphère, mais
ce phénomène de végétation dure seulement quelques jours; faute
d’autres aliments, la jeune plante ne tarde pas à mourir.

Au contraire, si on remplace l'eau pure par une solution renfer-

(1) Conférence faite au VIIIe Congrès international de chimie appliquée
tenu à New-York au mois de septembre 1912.

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 853

mant, à l'état de sels, de l'azote, du soufre, du phosphore, du potas-
sium, du calcium, du magnésium et un peu de fer, la plante se déve-
loppe normalement, elle produit des fleurs et des graines et, lors-
qu'on sait s’y prendre, la récolte ne le cède en rien à celles que l’on
obtient en pleine terre, dans les conditions habituelles.

L'expérience recommencée encore, mais en supprimant de la solu-
tion nutritive un seul des éléments dont l'ensemble avait produit un
si beau résultat, donne des récoltes misérables, analogues à celles de
l’eau pure.

D'autre part, si on fait l'analyse complète d'un végétal et qu'on
additionne les poids de chacun des éléments trouvés, on obtient, en
ne tenant compte que de ceux énumérés plus haut, un chiffre voisin
et même supérieur à 99,9 p. 100 du poids total.

De sorte que, à moins d’un millième près, les plantes sont consti-
tuées par la réunion de six métalloïdes et de quatre métaux et ces
métalloïdes et ces métaux suffisent à former, par leurs multiples
combinaisons, les énormes quantités de sucre, d’amidon, de cellu-
lose, d'huile et autres substances, que l'industrie sépare ou trans-
forme, et que l'homme et les animaux tirent du règne végétal pour
les besoins de leur alimentation journalière.

Ces notions, malgré leur simplicité, sont fondamentales pour
l'Agriculture. Il est bien évident, en effet, que l’on doit assurer à la
plante la provision de chacun des éléments qui lui sont nécessaires
si l’on veut obtenir de belles récoltes.

Comme dans les expériences de tout à l'heure, il n'y a pas, en
grande culture, à se préoccuper du carbone, que la plante trouve
toujours dans l'atmosphère en quantité supérieure à tous ses besoins.
Pourvu que le sol recoive une proportion d'eau suffisante, sous forme
de pluie ou par irrigation, il reste seulement à compter avec les
autres éléments. Encore, dans la plupart des cas, la terre est-elle si
riche en composés du calcium, du magnésium, du fer, du soufre,
que l’agriculteur n’a plus à subvenir qu’au manque de potassium,
d'azote et de phosphore. C’est ce qu'il fait à l’aide des engrais. En
ajoutant des quantités convenables de nitrates, de phosphates, de
sels ammoniacaux et potassiques, il complète l’approvisionnement
alimentaire du sol et permet à la plante de prélever en proportions
utiles tous les matériaux de sa construction.

Ce sont surtout les recherches de Duhamel, de de Saussure, de
Sachs, de Boussingault, de Liebig, de Georges Ville, qui nous ont
fait connaître cette théorie des engrais dont la grande valeur pra-
tique est confirmée aujourd'hui par tous les agronomes.

Aussi évidente et aussi féconde qu'elle soit, cette théorie ne tient

85% ANNALES DE L’INSTILUT PASTEUR

pas compte, principalement dans son application usuelle, de tous
les résultats obtenus dans l'étude de la composition des végétaux :
elle néglige ceux qui, ajoutés aux 99,9 p. 100 d'éléments déjà con-
sidérés, permettraient d'atteindre le total de 100 p. 100 d'une analyse
parfaite.

De quels corps est formée cette minime fraction qu'il nous faut
maintenant examiner? Tout d'abord, comme on l'a très souvent
vériié, de silicium, de chlore, de sodium, de manganèse et d'alumi-
nium. C'est vous dire qu'il n'y a dans les plantes que très peu de
chacun de ces corps simples, souvent moins de 1/10.000 et même
de 1/100.000. Les végétaux qui croissent au bord de la mer et à
plus forte raison, dans celle-ci, comme les Fucus et d’autres Algues,
renferment beaucoup plus de chlore et de sodium que les autres ; les
Graminées, les Cypéracées, les Equisétacées sont relativement riches
en silicium ; on peut aussi trouver des espèces contenant plus que
des traces de manganèse ou d'aluminium. Mais ce sont là des excep-
tions qui n'empêchent pas de considérer comme très général le fait
que les plantes contiennent seulement des proportions très petites de
chacun des cinq nouveaux éléments dont je viens de vous donner les
noms.

Le silicium, le chlore, le sodium, le manganèse et l'aluminium
sont en si petites proportions qu'il a été très difficile jusqu'ici de se
former une opinion quant à leur valeur nutritive. La plupart des
phytophysiologistes doutent de leur rôle, certains le nient d'une
manière formelle. Ils supposent, pour expliquer la présence de ces
éléments chez les plantes, que les racines sont capables d'absorber
indifféremment toutes les substances solubles contenues dans les
milieux où elles se développent.

Arrivée déjà au nombre de 15, la liste des métalloïdes et des
métaux rencontrés chez les plantes est-elle complète? Loin de là,
elle ne représente que la moitié environ de tous les corps simples que
les méthodes d'analyse, chaque jour plus perfectionnées, ont fini par
porter à notre connaissance : l’iode et le brome, reconnus d’abord dans
les plantes marines, mais dont il y a aussi, d'après Chatin et surtout
Bourcet, des traces dans toutes les autres; le fluor, que Salm
Horstmar à signalé dans l'orge et dans le pois; l'arsenic, trouvé
récemment dans quelques Algues marines par Tassilly et Leroide ;
le bore, reconnu notamment dans le vin où on le eroyait alors d’ori
gine frauduleuse. Et parmi les métaux, le rubidium et le cæsium,
signalés par Grandeau dans la Betterave ; le lithium, découvert par
Bunzen et Kirchoff dans plusieurs végétaux des environs de Heïdel-
berg:; le s/rontium, rencontré par Forchammer dans le Fucus vesicu-

nt de à

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 855

losus; le baryum, mis en évidence par Scheele dans les cendres de
divers arbres et arbrisseaux, aussitôt après sa découverte dans la
magnésie noire ; le zinc, que l’on a d'abord trouvé dans les plantes
des terrains calaminaires ; le cuivre, fréquemment reconnu par Vau-
quelin, Sarzeau, Guérithault et d’autres encore; le cobalt, trouvé
dans la Zostère marine, et même l'argent, dans le Fucus, d’après
Malaguti, Durocher et Sarzeau: enfin, le vanadium et le cérium,
signalés, il y a peu d'années, par Demarçay.

C'est-à-dire qu'aux 15 éléments déjà énumérés, il faut en ajouter
encore 18, ce qui nous donne une liste de 31 éléments sur les
quatre-vingts et quelques actuellement connus.

Ce résultat général de l'analyse chimique des végétaux est vrai-
ment digne de fixer l'attention. S'il est exact, en effet, que tous ou
presque tous les éléments découverts dans les plantes entrent dans
la constitution de leurs tissus ou interviennent dans leurs échanges
nutritifs, il faut admettre que les végétaux possèdent une composi-
tion beaucoup plus complexe qu'on pouvait d’abord l'imaginer. Or,
plus cette composition est complexe, plus augmente l'épaisseur du
voile qui nous cache l’origine du mende végétal, plus deviennent
nombreuses les difficultés qui entourent la solution d'une foule de
problèmes relatifs à la physiologie des plantes.

Mais procédons systématiquement et n’anticipons pas trop vite sur
les faits. Voyons, avant d'aller plus loin, si des éléments comme
l'aluminium, le manganèse, le zinc, le bore, le silicium, etc., dont la
proportion est si petite qu’elle a passé longtemps inaperçue, peu-
vent être des éléments physiologiques, c'est-à-dire nécessaires à la
croissance de la plante, et non pas, comme on l’a soutenu, des corps
étrangers, introduits par un simple phénomène d'osmose à travers
les racines. |

Pour cela, prenons comme exemple le cas du manganèse, le mieux
étudié et le plus démonstratif.

Le manganèse paraît exister chez tous les végétaux. Observé déjà
par Scheele dans les cendres du cumin sauvage et dans celles du
bois, il a été reconnu ou dosé depuis dans une foule de graines, de
racines, de feuilles ou de plantes entières. Sa proportion varie
beaucoup suivant les espèces et suivant les organes; elle est, en tous
cas, fort petite, souvent inférieure au 1/100.009 et même au
1/1.000.000. C’est donc bien un élément qui, s'il est nécessaire au
fonctionnement physiologique de la plante, peut être considéré
comme le type de ceux dont nous recherchons la valeur.

Très frappé par la présence du manganèse dans les plantes, Sachs
avait essayé, vers 1860, à l'aide de la méthode de culture en solutions
salines, si ce métal était de quelque utilité pour les plantes supé-

856 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

rieures; il n’avait pu l'établir. Plus tard, en 1870, Raulin avait
examiné la même question à propos d’une moisissure aujourd’hui
bien connue des physiologistes, l’Aspergillus niger; il n'avait pas été
plus heureux.

Ces insuccès, obtenus par deux expérimentateurs très habiles, ne
suffisent pas à faire rejeter d'une manière définitive la valeur fonc-
tionnelle du manganèse.

Presque tous les sels, même les plus purs fournis par le commerce,
renferment des traces de manganèse. Il en résulte que Sachs et
Raulin introduisaient, sans le savoir, du manganèse dans tous leurs
milieux de culture.

D'autre part, comme toutes les plantes, si elles utilisent ce métal,
ne le font qu'à l’état de traces, il est possible qu'elles en aient trouvé
assez dans les milieux témoins, préparés par Sachs et par Raulin,
pour qu'une addition volontaire soit alors restée sans effet appré-
ciable.

Ainsi, la méthode des cultures s'est montrée tout aussi impuis-
sante que la méthode chimique à nous faire savoir si le manganèse
est de quelque utilité pour la plante.

Heureusement, une série de recherches, n'ayant d'ailleurs à
l’origine, aucun rapport avec la question qui nous occupe, est venue
apporter à celle-ci un argument décisif.

Tout le monde connaît les admirables bibelots de laque dus à la
patience et au talent des artistes japonais. Ces bibelots, comme le
magnifique vernis utilisé presque partout en Extrême-Orient pour
recouvrir de petits meubles et de menus objets, sont préparés avec
une sorte de lait d'origine végétale. Ce lait, ou latex, s'écoule
lorsqu'on pratique des incisions à travers l'écorce de différentes
espèces d'arbres appartenant au genre Æhus : R. vernicifera L. et
R. succedanea L. Il est d’un blanc un peu jaunâtre et possède la pro-
priété curieuse de se colorer au contact de l'air en brun, puis en noir
d'ébène; en même temps, il se transforme en une substance très
résistante aux réactifs et susceptible d'un beau poli.

Ce phénomène est dû à l'oxydation du latex sous l'influence d'un
principe spécial, assez facile à extraire, que j'ai étudié sous le nom
de laccase.

Or, la laccase n'est pas seulement présente dane le latex des
arbres à laque, elle est pour ainsi dire universellement répandue
chez les végétaux, où elle joue le rôle capital d'intermédiaire entre
l'oxygène contenu dans l'atmosphère, et diverses substances orga-
niques, renfermées dans les cellules.

de vais vous montrer, par quelques expériences, d’abord le pouvoir

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 857

oxydant de la laccase, puis l'existence de ce réactif biologique dans
les plantes.

Chacun des petits appareils que voici est essentiellement constitué
par deux tubes de verre soudés l’un à l’autre. Dans le plus petit (A)
on met quelques gouttes de solution de laccase, dans le grand (B)
un certain volume de solution ou d’émulsion du corps à oxyder.
L'appareil étant garni, on y fait le vide avec une trompe à mercure,
de facon à n'y laisser
aucune trace d'air, puis
on le ferme à la lampe.

Vient-on maintenant
à retourner l'appareil,
le contenu de chacun
des tubes s'écoule et se
mélange à l’autre; mais,
comme il n'y a pas d’air
il ne se produit aucune
transformation chimi-
que.

Dès, au contraire,
qu'on laisse pénétrer
l'air en brisant la pointe
de l'appareil, la réaction
commence et le corps
oxydable se colore peu
à peu. Si l'on a pris le
laccol, retiré du latex
de l'arbre à laque où il
accompagne la laccase,
il v a coloration brune,
puis noire.

Avec le tanin des pommes, des marrons d'Inde, etc., la coloration
est rouge-brun.

La résine de gayac devient d’un beau bleu, et ainsi de suite, selon
la nature de la matière organique oxydable.

On peut, en se servant d'une solution alcoolique récente de résine
de gayac, démontrer très facilement l'existence de la laccase dans les
tissus végétaux, à condition que ceux-ci ne soient pas trop colorés.

Je verse quelques gouttes de solution de gayac sur la section d’une
ponune de terre, d’un champignon de couche, d’une pomme : vous
allez voir apparaître lentement, aux endroits où il y a de la laccase,
une coloration bleue caractéristique.

Lorsque le tissu végétal est coloré, comme celui des feuilles, on

5 D)

858 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ne peut évidemment employer le procédé simple que je viens de vous
montrer pour établir la présence de la laccase. Il faut recourir à la
méthode générale, c'est-à-dire à l'extraction du principe oxydant que
l’on essaye ensuite dans le tube à deux branches.

Voici maintenant comment la connaissance de la laccase et de son
importance physiologique se rattache au sujet de notre conférence.

En poursuivant l'étude du principe oxydant de l'arbre à laque, j'ai
trouvé que ce principe était dû à la combinaison d’une matière
organique particulière, jouant le rôle d'un acide très faible, avec une
petite quantité de manganèse. La quantité de métal contenue dans
une préparation de laccase retirée de l’arbre à laque du Tonkin (Rhus
succedanea L.) était de 0,12 p. 100.

Cette petite quantité de manganèse est indispensable au fonction-
nement chimique de la laccase. Si on la lui enlève, elle perd la
propriété d'agir comme fixatrice d'oxygène.

Il faut d’ailleurs remarquer que tous les sels manganeux jouissent,
à un degré plus ou moins grand, du caractère essentiel de la laccase.
Le tableau n° 1 montre que, pour différents sels, la puissance
oxydante augmente en sens inverse de la force de l’acide auquel le
métal est combiné; plus l'acide est faible, plus l'oxydation est
rapide. Ainsi comprend-on que la laccase soit parmi les combinai-
sons les plus actives.

TABLEAU N° 1.

Pouvoir oxydant de divers sels manganeux vis-à-vis de l’'hydroquinone.

(Gabriel BERTRAND).

En agitant pendant vingt heures, à la température de + 14-15 degrés. dans
un ballon de 250 cent. cubes de capacité, une solution de :

HVALOQUINONC 2 NAN 1 gramme
Bautdistllée AMC ET A M0DECcenticubes
Manganèse (sous forme de sel). . . 0 gr. 100

les volumes suivants d'oxygène ont été absorbés :

Avecilazotate te in 1,4 cent. cubes.
—Lletsulfaten. MEME G —
— (le chlorure te RC RETENTS —
— le formiate EAN A —
— le benzoate. . . . . . 15,3 =
=" L'aCétate ee 151 —_
—MletsalicyiAte MEME 3 —
le lactate ere. 17,6 —
— le gluconate. . . . . 21,6 —

— le BUCCMALE 0.122 1 —

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 859

Il est facile d'imaginer par quelle série de réactions une quantité
indéfinie d’exygène est fixée sous l'influence de la laccase ou d’un sel
quelconque de manganèse.

La combinaison manganeuse, que nous pouvons représenter sché-
matiquement par la formule : RMn, est d’abord hydrolysée, du moins
en partie, par l’eau dans laquelle elle est dissoute. IL en résulte un
mélange d'acide libre et de protoxyde de manganèse :

(1) RMn + H°?0 = RH? + MnO.

Le protoxyde de manganèse est une combinaison très oxydable. Au
contact de l'air, il se transforme en bioxyde. Cette propriété est
même la base du procédé Weldon pour la régénération industrielle
du bioxyde servant à préparer le chlore. Pendant cette oxydation :

(2) MnO + O0? — MnO:° +0.

la molécule d'oxygène 0° est fatalement scindée en deux atomes,
atomes non salurés et, par conséquent, plus actifs; l’un d'eux se porte
sur la molécule de protoxyde de manganèse, tandis que l’autre peut
-se fixer, soit sur une seconde molécule de MnO, soit sur un autre
-corps oxydable, comme celui du latex de l'arbre à laque, ou bien
‘encore la résine de gayac, l'hydroquinone, etc., qui seuls résiste-
raient au contact de l'oxygène moléculaire.

Cette phase réactionnelle étant accomplie, on se trouve en présence
d'acide libre, de bioxyde de manganèse et de lexcès de corps
oxydable.

Grâce à ce dernier, dont la chaleur d'oxydation s'ajoute à celle de
‘formation du sel manganeux, il v a réaction entre l'acide et le
bioxyde :

(3) RIE + MnO° = RMn + H°0 + O.

L’atome d'oxygène libéré se fixe sur une nouvelle molécule du
corps oxydable et la combinaison mangancuse primitive est régénérée.
Elle peutentrer à nouveau dans le cyele des réactions que je viens de
décrire et, cela, un nombre de fois qui, théoriquement, est indéfini.

I suit de là qu'un poids déterminé, même très petit, de composé
manganeux peut oxyder, aux dépens de l'oxygène atmosphérique,
un poids illimité de corps oxydable. L'exactitude de cette interpré-
tation a d’ailleurs été démontrée par l'expérience.

Ainsi, d’une part, les végétaux qui ne peuvent se passer d'oxygène
pour accomplir certaines transformations chimiques, utilisent la
laccase comme intermédiaire dans ces transformations ; d'autre part,
la laccase est une combinaison de manganèse. Les végétaux ont donc
besoin de manganèse.

860 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

En outre, comme une quantité même très petite du métal suffit à
fixer des quantités pour ainsi dire indéfinies d'oxygène, on peut
admettre que les végétaux n'ont besoin pour leur fonctionnement
normal que d’une proportion très jetite de manganèse.

Il est possible de démontrer, d'une manière directe, l'exactitude de
cette conclusion.

En se servant de sels purifiés par des méthodes spéciales, d'eau
très pure et en Gpérant dans des vases en quartz fondu, on prépare
une solution nutritive pour ainsi dire rigoureusement exempte de
manganèse.

Si l’on introduit alors dans cette solution des semences de la petit
plante dont je vous ai parlé tout à l'heure, de l’'Aspergillus niger, il y
a germination et développement, mais on n'obtient qu'une très
mince récolte. Par exemple, si on opère avec un quart de litre,
environ 2 gr. 80. Mais si on recommence la culture en ajoutant à la
solution nutritive 0 gr. 000.0025 de manganèse, la plante croît d’une
manière si vigoureuse qu'elle atteint aisément le poids de 11 gr. 75.
Une quantité 10 fois et même 100 fois plus petite de manganèse
donne encore une augmentation de récolte très appréciable en
suivant cette technique perfectionnée.

Voilà donc établie, par des voies différentes, l'utilité pour le
végétal d’un de ces éléments dont la proportion est si petite qu'ils
pouvaient nous sembler tout d’abord accidentels et sans aucune
valeur physiologique.

L'état de nos connaissances n'est pas aussi avancé en ce qui
concerne les métalloïdes et les métaux qui, toujours en très petites
proportions, accompagnent le manganèse. Nous n'avons guère de
notions un peu étendues et bien solides que pour le zinc et le bore.

Comme vous le savez, Raulin avait découvert, en poursuivant des
recherches devenues classiques, qu’une minime proportion de zinc,
environ 1/100.000 du milieu de culture, était nécessaire pour
obtenir de belles récoltes d'Aspergillus. On avait, dans la suite,
expliqué ce résultat en admettant que le sel de zinc agissait d'une
facon indirecte, en détruisant les microbes qui auraient pu envahir
Je milieu et nuire au développement de la plante.

Un de mes collaborateurs, Javillier, a donné la preuve que cette
interprétation est erronée, que le zinc fait partie de la composition
de l'Aspergillus et agit sur sa croissance, à la facon du manganèse.
ILa montré, de plus, que le zinc se rencontre parmi les éléments
habituels des végétaux et il a pu le doser dans un grand nombre
d'espèces très différentes.

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 861

Un autre de mes collaborateurs, Agulhon, s’est livré à une
enquête analogue au sujet du bore. Il à réussi à reconnaître et
même à doser ce mélalloïde dans toutes les plantes qu'il a
examinées.

D’autres recherches sont en cours; elles permettront de distinguer
peu à peu les éléments dont l'existence est normale, de connaître
ensuite la part prise par chacun d’eux dans les phénomènes
nutritifs de la plante. Il faudra, cela est certain, beaucoup de travail
et de temps pour remplir ce programme, mais, déjà, nous pouvons
considérer comme résolue la question fondamentale qui est le nœud
même de cette Conférence, à savoir que des métalloides et des
métaux, présents dans le corps de la plante en proportions infimes,
peuvent cependant être des éléments physiologiques, aussi nécessaires
au métabolisme général que le carbone et l'azote.

Ces métalloïdes et ces métaux, trop peu abondauts pour entrer
dans la composition des appareils de soutien ou des substances de
réserve, ne peuvent avoir, comme le manganèse, qu'un rôle d’inter-
médiaire, de catalyseur, dans les réactions chimiques. I faut qu'ils
entrent dans les cycles de transformations mis en jeu par la culture
pour l’organisation des éléments plastiques, et en sortent alternati-
vement. Leur rôle est, jusqu'à un certain point, comparable à celui
des ferments et on peut les appeler, autant pour faire image que
par commodité, des infiniment petits chimiques.

Il reste à envisager les conséquences qui se dégagent de l'impor-
tante conclusion à laquelle nous venons d'arriver. Limité par le
temps, guidé par la nature de notre Congrès, je m'attacherai seule-
ment ici à l'une d'elles : c'est l'application à l'Agriculture du manga-
nèse, du bore et d’autres infiniment petits chimiques.

J'ai déjà parlé de cette application au VI° Congrès international de
Chimie, tenu à Berlin en 1903. À cette époque, la question était tout à
fait dans l'enfance ; depuis, elle a grandi quelque peu, des expériences
nombreuses ont été faites, en différents pays, par beaucoup de savants
et d'agronomes. La comparaison des résultats obtenus est intéres-
sante, et l’on peut sérieusement prétendre qu'en bien des cas
l'adjonction du manganèse, du bore et d’autres engrais, dits cata-
lyliques, aux engrais ordinaires est d’une grande importance
économique.

On n’a pas manqué, au début, d'objecter contre l'emploi agricole
du manganèse que la terre renfermait habituellement des quantités
si grandes du métal qu'une faible addition devait rester sans effet.

À cette objection, je puis répondre tout d’abord que la quantité
totale de manganèse trouvée dans le sol ne doit pas entrer seule en

862 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ligne de compte. Une grande partie, sinon la totalité, du métal peut
exister sous des formes : silicates, sesquioxyde, etc., difficilement
solubles et, par conséquent, peu assimilables. L'adjonction d'un
faible poids de sulfate ou même de carbonate de manganèse suffit
alors à augmenter, dans une proporlion relativement considérable,
le stock de métal soluble nécessaire au développement de la plante.

Ensuite, comme le montre l'expérience du tableau n° 2, la plante
n'utilise pas la totalité du manganèse disponible.

Elle en absorbe seulement une certaine proportion et cette pro-
portion est d'autant moins grande que le stock est plus élevé. Il est
donc bon de lui en offrir, jusqu'à une certaine limite pratique,
beaucoup plus qu'elle n’en peut prendre.

TABLEAU N° 2.
Influence du manganèse sur la culture de l'Aspergillus niger.
(Gabriel BerrRaAnd el JAviLLIER.

Cullures en matras, de 2 litres.

Volume du liquide nutrilif : 250 cent. cubes.
Température : + 32 degrés.

Durée : 4 jours.

QUANTITÉS DILCTIONS POIDS QUANTITFS
de manganèse du secs de manganèse
introduites. manganèse. des récoltes. fixées.
0 (témoin) — MOTS 0 mgr. 001
0 mgr. 5 1/500.000 l gr. 490 0 mgr. 030
À mgr. » 1/250.000 1 gr. 635 0 mer. 036
2 mgr. 5 1/100.000 À gr. 100 0 mer. 056
10 mgr. » 1/25.000 PE ED 0 mgr. 106
25 mgr. » 1/10.000 2 gr. 380 0 mgr. 190
109 mgr. » 1/2.500 2 gr. 100 0 mgr. 100
500 mgr. » 1/500 2 gr. 765 4 mgr. 000
1250 mgr. » 1/200 3 gr. 510 10 mgr. 000
2500 mgr. » 1/100 3 or. 390 22 mgr. 000

L'expérience agricole est pleinement d'accord avec cette manière
de voir. Il ne m'est pas possible, comme vous le comprenez, de
vous donner un compte rendu détaillé des expériences extrêmement
nombreuses que j'ai faites ou qui sont parvenues à ma connaissance
depuis plus d'une dizaine d'années. La suivante, consignée dans
le tableau n° 3, est parmi les plus typiques. Elle a été répétée à
plusieurs reprises avec le même succès et elle vous donnera une
très bonne idée de ce que l’on peut obtenir en opérant dans des-
conditions précises.

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 86»

TABLEAU N° 3.

Influence du manganèse sur la culture de l’avoine.

(Gabriel BEerrraAnD et THOMAssiN).

Surface de chaque parcelle : 2.000 mètres carrés.

Nature du sol: argileux, très faiblement calcaire. Contient 0.024 p. 100 de
manganèse soluble dans l'acide acétique bouillant au centième et 0.033 p. 100
de manganèse soluble seulement dans l'acide chlorhydrique concentré
chaud.

Engrais ajoutés par hectare : 1° à chaque parcelle, 200 kilogrammes de super-
phosphate minéral à 15 p. 100 environ de P°05 et 75 kilogrammes de sulfate
d'ammoniaque à 20.5 p. 100 d'azote ; 2 à la parcelle en expérience, 50 kilo-
grammes de sulfate de manganèse à 31.58 p. 100 de Mn.

SANS MANGANÈSE AVEC MANGANÈSE

Poids total de la récolte. . . . . . 1.290 kil. 1.580 kil.
A UNDeC Are me TE Tie. UGC AS0 — 1.900 —

Poids après battage :

Poids duierain ee TETE 518 kil. 608 kil.
— _ holhectare me 2 590— 3.040 —
— de la paille et des balles. . . 168 — 968 —
— — à l'heclare. 3.840 — 4,840 —

Analyse du grain :

Poids deilthectoliiree Re 7 0 44 kil. 46 kil.
Baua E0idesrés ti... Cu. 11,48 p. 100 16,85 p. 100
Cendres ir nn: ARR SN ET 2:82), = 2,88 —
MANDAT ET EN EMEA 0004" p:. 100 0,004 p. 100
ADO NOAR AC NET | 1:61-p. 100 1,58 p. 100
Différence en faveur du manganèse :

Pour l’ensemble de la récolte. . . . . . 22,5 p. 100

SNRPIDOUMIENErRAIREN ee. ne) AT

— — la paille. . 26,0 —

En comparant les chiffres placés sous vos yeux, vous voyez qu'une
addition de sulfate de manganèse correspondant à 15 kilogrammes
environ de métal par hectare à fourni une augmentation de 450 kilo-
grammes de grains et de 4.000 kilogrammes de paille, sans compter
un poids notable de racines qui est resté dans le sol et s’y est trans-
formé plus tard en humus.

Ce résultat n’est pas le moins bon, mais il n'est pas non plus le
meilleur. À côté d’autres très faibles ou même nuls, on a signalé des
augmentations de récolte s'élevant jusqu'à 40 p. 100. De telles varia-
tions dépendent, comme dans le cas des engrais ordinaires, des
espèces végétales cultivées et surtout de la nature du sol. Je ne puis
entrer ici dans le détail, mais, en résumant, je vous dirai que l'on à

864 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

obtenu des résultats favorables dans les deux tiers environ des expé-
riences entreprises avec différents sols et différentes plantes.

On n’a pas seulement appliqué le manganèse comme engrais
catalytique. Dans mon laboratoire, Javillier, Agulhon, dont je vous ai
déjà cité les recherches, ont étudié au même point de vue le zinc et
le bore. En Bohême, Stoklasa a essayé l'aluminium ; au Japon, Loew
etses élèves : Aso, Nagaoka, Sawa, Katayama, en France, Boullanger,
ont même fait des expériences avec le fluor, le baryum, le cérium, etc.
De la série de ces expériences, il semble résulter que le bore et,
peut-être, l'aluminium puissent se ranger pratiquement à côté du
manganèse.

Voici, tirée parmi beaucoup d’autres, une expérience d'Agulhon
avec le bore et le maïs (tableau n° 4).

14

TABLEAU N° 4.
Influence du bore sur la culture du maïs.

(AGULHON.)

Surface de chaque parcelle : 2m?5,

Nature du sol : terre de jardin en jachère depuis plusieurs années.

Nombre des pieds par parcelle : 24.

Engrais ajoutés : à la parcelle n° 1, rien ; à la parcelle n° 2, 28 kilogrammes
d'acide borique, soit 5 kilogrammes de bore par hectare; à la parcelle n° 3,
36 kilogrammes d'acide borique, soit 10 kilogrammes de bore par hectare.

Récolte en fourrage après sept semaines :

PARCELLE N° 1 PARCELLE N° 2 PARCELLE N° 3

Poids frais. 3 kil. 835 gr. 6 kil. 985 gr. 6 kil. 190 gr.

Augmentations de poids

frais. . Re » 56 p. 400 61 p. 100
Poids MSeCS Re : 445 » 610 » 620 »
Augmentations de poids

SCENIC RICE » 50 p. 100 39 p. 100

Composition :
Hau:n.2 AE INERIENRRE 88,2 p. 100 88,9 p. 100 90,0 p. 100
Matières sèches. . . . . . 11,8 — LS RE 10,0 —
Cendres p. 100 de matières

sèches. 70e LENS 13,6 — 10m NET ==
Bore p. 100 de cendres. . 0,0241 0,0241 0,0274

— — de matières

sèches: SAP RE: 0,0033 0,0032 0,0042

ainsi qu'une des expériences de Stoklasa avec l'aluminium et la bet-
terave (tableau n° 5).

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 865

TABLEAU N° 5.

Influence de l'aluminium sur la culture de la betterave.

(STOKLASA.)

Surface de chaque parcelle : 5.000 mètres carrés.

Engrais ajoutées par hectare : 1° à chaque parcelle, 50 kilagrammes de P?0>,
à l’état de superphosphate : 60 kilogrammes d'azote, à l’état de nitrate de
sodium ; 80 kilogrammes de K°?0O, à l'état de chlorure de potassium ; 2° en
outre, aux parcelles en expériences, 9 kilogrammes d'aluminium, à l’état de
sulfate.

Poids d'aluminium introduit à l'hectare. » 9 kil.
Poids des racines à l'hectare. . . . . . 35.800 kil. 36.100 —
Anementation anlihectare "mu » 300 —
Poids des feuilles à l'hectare. . MIT OUR 27.500 —
SUCER DDR TeRTACINES RE UE SD 00 5 AD AIO
Sucre total à l'hectare. . . . . 4e 6.193 kil. 6.317 kil.
Augmentation de sucre à MHeciare, LA » 194 —
Augmentation de sucre p. 100 de témoin. » 2,0 p. 100
Poids d'aluminium introduit à l'hectare. » 9 kil.
Poids des racines à l'hectare. . . . . . 36.200 kil. 38.000 —
Augmentation des racines à l'hectare. . » 1.800 —
Poids des feuilles à l'hectare. . . . . . 18.400 — 20.800 —
SUCrep 0e rAEINeS 6 SD MUOMIG TE DOC
Sucre total à l’hectare. . . . NE RCE UE 6.346 kil.
Augmentation de sucre à écrase) DRE » 313 —
Augmentation de suere p. 100 de témoin. » 6,2 p. 100

Il ne faut pas oublier, lorsqu'on expérimente avec les engrais
catalytiques, d'opérer avec un peu de prudence, car ils ont une
grande activité physiologique. Si on en ajoute trop, non seulement
on fait une dépense inutile, mais on peut obtenir, comme cela s'est
vu plusieurs fois, de mauvais résultats. Un tel effet, déjà très sensible
avec le bore, peut même devenir rapidement dangereux avec le zinc.
Il varie d’ailleurs beaucoup avec les espèces végétales et l'on peut voir,
dans un même sol, le maïs résister beaucoup mieux que l'avoine à
l'élévation de dose de l'acide borique.

La connaissance du rôle des infiniment petits chimiques, même
envisagée au seul point de vue agricole, touche à plusieurs problèmes.
Elle touche tout d'abord, comme vous le comprenez, à celui des causes
de la fertilité des sols. Pour apprécier la valeur de ceux-ci, il ne
suffira plus, comme on le faisait jusqu'à présent, de tenir compte de
leur richesse en azote, en phosphore et en potassium ; il va falloir se
préoccuper aussi des autres métalloïdes et des autres métaux qu'ils

866 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

renferment et nous allons être conduits à l'adoption de méthodes
d'analyse dont nous n'avons pas encore l'habitude.

La connaissance du rôle des infiniment petits chimiques nous
apporte un nouvel argument explicatif de la nécessité des rotations
culturales. Lorsque certaines plantes sont maintenues sans discon-
tinuité sur le même sol, il arrive souvent que le poids des récoltes
diminue très vite avec les années pour devenir parfois presque nul,
el, cela, malgré des additions régulières de fumier et d'engrais
chimiques destinés à compenser les pertes d’humus, d’azote, de
potassium et de phosphore. Au contraire, si on établit des rotations,
c'est-à-dire si on fait alterner la culture de ces plantes avec celle
d'espèces végétales très différentes, par exemple la betterave avec
l’avoine et la luzerne, on obtient: chaque fois des récoltes nor-
males.

La tendance est très forte aujourd’hui d'expliquer ce phénomène
par un empoisonnement du sol par les racines. Selon cette expli-
cation, chaque espèce produirait une substance toxique particulière,
comparable à l'urine et aux gaz de la respiration humaine, dans
laquelle elle ne pourrait plus continuer à vivre. Cette substance, non
toxique pour une autre espèce, disparaitrait, par oxydation ou
autrement, dans l'intervalle de la rotation.

N'est-il pas au moins aussi probable qu'une plante peut cesser de
croître dans un sol lorsqu'elle a abaissé au-dessous d’une certaine
proportion la partie assimilable d’un élément catalytique dont elle a
un besoin particulier ? En admettant celte explication, il resterait
encore assez de l'élément considéré sous la forme assimilable pour
une autre espèce moins exigeante et la provision primitive pourrait
alors se renouveler pendant la rotation, grâce aux influences atmo-
sphériques et aux actions microbiennes.

L'examen comparé de ces théories n’a pas seulement un intérêt
spéculatif ; il a aussi une conséquence pratique. En effet, si la seconde
théorie est la bonne, il devra suffire de déterminer la nature et la
proportion de l'élément ou des éléments catalytiques spéciaux à
chaque culture, puis d’en ajouter au sol une quantité convenable
pour rendre à celui-ci toute sa fertilité et se délivrer, si on y trouve
profit, de la nécessité des rotations culturales.

Il est intéressant de remarquer que, lorsqu'on ajoute une substance
fertilisante au sol, on n’agit pas uniquement sur la plante dont on
veut augmenter la récolte. On modifie encore, dans un sens ou dans
l’autre, la nutrition des bactéries, des champignons et de tous les
ètres microscopiques qui vivent dans le sol. Il n’est pas impossible
qu’en ajoutant du manganèse, par exemple, on favorise sélectivement
certains microbes oxydants capables de former des nitrates ou de

ROLE DES INFINIMENT PETITS CHIMIQUES EN AGRICULTURE 867

détruire les produits toxiques, comme ceux dont je vous parlais tout
à l'heure.

Il faut sans doute rechercher dans la richesse relative des sols en
certains éléments catalyliques les causes parfois si obscures de
l'adaptation des espèces végétales, les raisons de la facilité plus ou
moins grande que possèdent les sols de nourrir telle plante et non
pas telle autre.

Enfin, la notion des infiniment petits chimiques peut être intro-
duite jusque dans l'étude de la Pathologie végétale. L’Aspergillus
niger et les moisissures en général utilisent des doses de zinc
beaucoup plus élevées que les plantes supérieures. Or, il a paru, dans
les recherches de Javillier, que le froment, cultivé dans des milieux
additionnés de zinc, élait plus facilement atteint par l'£rysiphe
graminis que la même plante venue dans le milieu témoin, où il ne
pouvait y avoir que des traces du métal.

Ainsi, qu'il s'agisse de parasitisme ou d'occupation du sol, le
conflit des espèces reste sous la dépendance de la composition
chimique du milieu. Et notre esprit entrevoit comment des variations
dans le rapport de certains éléments, dont la présence exige les
méthodes les plus délicates de la physique et de la chimie pour être
démontrée, peuvent entrainer, selon les cas, la prospérité ou la
maladie et la mort.

L'Agriculture est certainement la branche de l'activité humaine
qui augmente le plus le capital d'énergie mondiale. En s’efforcant
d'obtenir des récoltes abondantes de céréales, de textiles, de sucre,
de fourrages, etc., elle favorise la captation d’une énergie étrangère
au globe terrestre et qui ne coûte rien, l'énergie solaire, origine de
toutes les formes d'énergie utilisées par l’homme.

Perfectionner l'Agriculture, forcer le sol au maximum de ren-
dement, c'est donc abaisser le prix des aliments, augmenter les forces
humaines, faciliter l'asservissement de la matière et la libération de
l'intelligence.

Dans un pays où celte grande question à été si bien comprise, il
m'était particulièrement agréable d'évoquer, à l'occasion du Congrès
qui vient de s'ouvrir, une application de la Chimie biologique à
l'Agriculture. Je serais heureux si la notion des infiniment petits
chimiques chez les plantes, que je viens de vous présenter, pouvait
aider l'Agriculture à réaliser de nouveaux progrès.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX

ET

LES TUBERCULOSES DITES ATTÉNUÉES
par Er. BURNET

(Laboratoire de M. Metchnikoff.)

Les recherches récentes sur l’épidémiologie de la tubercu-
lose, chez les peuples les plus divers et dans les conditions les
plus variées, ont abouti à cette notion quil n'existe pas d'im-
munité naturelle à la tuberculose et que les exemples de résis-
tance si souvent observés sont des faits d’immunité acquise.
Le contraste entre l’extrème sensibilité des peuples primitifs,
qui offrent au microbe un terrain vierge, et la mortalité
relativement faible des peuples européens, profondément
imprégnés par le virus, a imposé l’idée que l'immunité soi-
disant naturelle d'un certain nombre de civilisés repose sur
une vaccination inconsciente, et que si l'homme peut con-
tracter pendant l'enfance le germe d'une tuberculose fatale, il
peut aussi surmonter une infection bénigne qui le laisse vac-
ciné (1).

Il faut done qu'il existe des microbes capables de jouer le
rôle de vaccins, et il est tout indiqué de les chercher dans la
nature, avant d'essayer de les fabriquer ou de les perfectionner
dans le laboratoire. Logiquement, les premières investiga-
lions doivent porter sur les tuberculoses que l’on considère
comme bénignes, que l’on appelle couramment des /uber-
culoses atténuées, et que l’on réunit souvent sous le nom

(1) J'adresse mes remerciements aux chefs de services des hôpitaux, qui
ont pris intérêt à ces recherches, et ont bien voulu mettre à ma disposition
le matériel nécessaire : à l'hôpital des Enfants-Malades, M. le professeur
Hutinel, M. le Prof. agrégé Nobécourt et M. Tixier; M. le professeur Kirmisson
et M. Bailleul ; MM. le professeur agrégé Broca et le Dr Trèves; M. le profes-
seur agrégé Terrien et M. Hillion ; à l'hôpital Saint-Louis, MM. le Dr Thibierge
etle D'Ravaut; MM. le Dr Darier et le D' Civatte; à l'hôpital maritime de
3erck-sur-Mer, M. le D' Ménard, ses assistants MM. Andrieu et Calvé et
le Dr Denet.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 869

encore vague de scrofuloses. Telle était la conclusion de l'étude
sur l’épidémiologie de la tuberculose dans les steppes des
Kalmouks, publiée l'an dernier par Metchnikoff, Burnet et
Tarassévitch : « Il doit ètre très utile d'étudier le virus ou,
probablement, les virus scrofuleux, parmi lesquels on trouve-
rait peut-être le vaccin que l’on cherche avec tant de zèle
depuis la grande découverte de Koch (1). »

Scrofulose est-il un terme synonyme de tuberculose atté-
nuée? ou doit-il désigner, en plus, d’autres états infectieux non
tuberculeux? Il y a là à la fois une question de mots et une
question de choses. À mesure que l’on a mieux connu la tuber-
culose et les moyens d'isoler et de cultiver le bacille tubereu-
leux, la plupart des maladies que l’ancienne médecine appelait
scrofuleuses ont pris leur place dans le cadre de la tuberculose ;
il en sera sans doute de même des affections scrofuleuses dont
la nature est encore contestée, — par exemple, la conjonctivite
phlyeténulaire des enfants, — ou bien on en déterminera la
cause propre. Le terrain scrofuleux est-il autre chose qu'un
organisme touché d'une certaine manière par la tuberculose?
c'est une question que nous ne sommes pas encore en état de
trancher. En attendant, on ne soulève aucun problème et l’on
se fait parfaitement comprendre en appelant scrofuloses des
tuberculoses lentes, torpides, d’allure bénigne, auxquelles les
médecins attribuent depuis longtemps le pouvoir de créer une
certaine protection contre la phtisie tuberculeuse.

Bazin considérait la tuberculose pulmonaire comme rela-
tivement bénigne chez les scrofuleux. Lasègue a exprimé la
même opinion. Cordier, médecin lyonnais, disait que la tuber-
culose, comme la syphilis, n'est pas réinoculable au porteur,
et Cornil, que les inoculalions de lupus serviraient peut-être
un jour de vaccination contre la tuberculose. On se rappelle les
conclusions cliniques du mémoire bien connu de Marfan (2)
les lupiques et écrouelleux complètement guéris ne font jamais
de tuberculose pulmonaire; les lupiques et écrouelleux non
guéris en font rarement: les phtisiques qui n'ont jamais eu de
lupus ni d’écrouelles sont beaucoup plus nombreux que ceux
qui en ont; enfin, les phtisiques porteurs de cicatrices

(1) Annales de l'Institu! Pasteur, L. XXV, novembre 1911.
(2) Archives gén.de Médecine, 1.1, p. 423, 1886.

870 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de lupus ou d'écrouelles parfaitement guéries sont une rareté.

La première question qui se pose est de savoir si les bacilles
isolés de tuberculoses bénignes sont des bacilles bénins; si
aux tuberculoses atténuées des cliniciens correspondent, pour
le bactériologiste, des bacilles atténués. On se demandera
ensuite s'il est possible de trouver parmi ces bacilles, sinon
d'emblée un vaccin tuberculeux, du moins des bacilles dont
les propriétés rendent certaine l’idée de l'existence de vaccins
naturels et de vaccination spontanée. Les bacilles atténués
seraient comme la matière première des vaccins que l’on
préparerait au laboratoire.

C'est la question de la virulence des bacilles tuberculeux. Il
ne peut y avoir de vaccination spontanée que s'il existe dans
la nature des bacilles tuberculeux de virulence inégale et si la
qualité du virus joue un rôle important dans l'infection. Or, il
est remarquable que tout en parlant couramment de tubercu-
loses atténuées l’on ait si peu étudié les bacilles tuberculeux au
point de vue de leur qualité, et que lon ait presque toujours
expliqué l'allure des infections et des réinfections par la quan-
tité des microbes qui pénètrent dans l'organisme.

J'ai étudié au point de vue de la qualité, c’est-à-dire de la
virulence, 75 bacilles tuberculeux que j'ai isolés de tuberculoses
articulaires et osseuses (26),de tuberculoses ganglionnaires (23).
de tuberculoses cutanées (10), et de tuberculoses internes
(poumon, rein, méninges) qui ont servi de lermes de compa-
raison. Je n'ai trouvé sur ce nombre qu'un bacille réellement
atténué. Cette rareté des bacilles faibles, loin d’être une preuve
contre l'existence de bacilles-vaccins, montre la voie où les
recherches doivent être poursuivies, toujours avec l’arrière-
pensée de trouver une méthode d'immunisalion artificielle qui
ne serait que limitalion de la vaccination spontanée.

PF tOnreine.

Sur 59 bacilles isolés de tuberculoses externes, je n'en ai
pas trouvé un seul du type bovin. L'aspect des cultures et sur-
tout l’inoculation au lapin ont établi que lous sont du type
humain. Il faut ajouter que tous les sujets sont des Parisiens,

Le fait est intéressant au point de vue de l’épidémiologie de

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 871

la tuberculose. À la suite des affirmations de R. Koch et de son
école, que la tuberculose de l'homme vient avant tout de
l’homme, on a fait un grand nombre de déterminations du {ype
des bacilles, et il est bien établi aujourd’hui que la tubercu-
lose pulmonaire est en somme loujours causée par le bacille
humain : on ne connaît sur 790 cas, bien étudiés bactério-
logiquement, que 6 exceptions : 3 cas à bacille bovin, dont
l'un n’est même pas certain, 2 cas mixtes où le bacille
humain était allié au bacille bovin, et 4 cas où le bacille n’a
pu être déterminé exactement (Kossel; Mohler et Washbourn).
Dans les tubereuloses externes, la proportion des bacilles
bovins est plus forte, ils ne sont mème plus l'exception, sur-
tout dans celles des enfants : la movenne des examens faits par
différents auteurs donne 36 p. 100 de bacilles bovins dans les
ganglions du cou des sujets de cinq à seize ans, et 58 p. 100
chez les enfants au-dessous de cinq ans. Or, mes 23 tubercu-
loses ganglionnaires concernent 3 enfants au-dessous de cinq
ans, 16 de cinq à seize ans, 2 de dix-sept à vingt et un ans,
3 adultes. Bien que le nombre des enfants soit un peu faible,
le total est suffisant pour donner à penser que la fréquence de
l'infection à bacille bovin varie d’une contrée à une autre et
qu'elle paraît être beaucoup moindre à Paris qu'à Londres et
à New-York. De plus, l'absence de bacille bovin dans 23 cas
de tuberculose ganglionnaire et dans 26 cas de tubereuloses
articulaires et osseuses (presque loutes infantiles) est un argu-
ment contre l'importance du lait comme agent d'infection, et
pour la prédominance à peu près universelle de la contagion
d'homme à homme.

Ces faits sont intéressants aussi au point de vue de la viru-
lence des bacilles tuberculeux. Quoique le bacille bovin soit
plus virulent que le bacille humain pour le lapin, le singe, le
cobaye et les bovidés, on a pu penser qu'il l'est moins pour
l’homme. On cite les curieuses expériences de Klemperer et Les
observations de Kleine sur la bénignité des tuberculoses cuta-
nées des ouvriers de boucherie. On va même jusqu'à supposer
que le bacille bovin pût être un vaccin pour l’homme, comme le
bacille humain un vaccin pour le bœuf. Weber et Ungermann (1)

(4) Tub, Arb, aus dem K, Gesundheilsamle, f. 10, 1910, et f. 42, 1912.

872 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ont réuni plusieurs centaines de cas où des enfants ont con-
sommé cru du lait de vache bacillifère sans qu'il s'en soit suivi,
après plusieurs années, aucune infection grave, alors que chez
des veaux et des pores l’ingestion du même lait a été meurtrière.
Or, nos cas de tuberculose osseuse et ganglionnaire sont pour
la plupart cliniquement bénins, ce qui prouve que le bacille
humain se trouve souvent dans les tuberculoses atténuées. La
commission anglaise a enregistré des cas (exceptionnels, il est
vrai) de tuberculose pulmonaire mortelle à bacille bovin, ce
qui prouve que le bacille bovin peut aussi être fatal pour
l’homme. Mais s’il était établi que dans la grande maJorité des
cas la pénétration de bacilles bovins dans le tube digestif de
l’homme et surtout de l'enfant est moins offensive que celle de
bacilles humains, la conséquence serait qu'il faut aussi étudier
les bacilles bovins au point de vue de la virulence et chercher
s'il ne se trouve pas aussi parmi eux des bacilles-vaccins.

JL. — VirtCLENCE.

Quoique l’idée de chercher des différences de virulence
parmi les bacilles tuberculeux soit presque aussi ancienne que
la découverte du bacille lui-même, elle a donné lieu à un
très petit nombre de travaux; et certains ont manqué en partie
leur but, soit parce qu'ils consistaient en inoculations de pro-
duits naturels, pus et tissus, dont la teneur en bacilles était
inconnue, soit parce que les inoculations étaient faites sur le
lapin, animal trop résistant à la tuberculose humaine : ce
sont justement ces inoculalions qui ont abouti au procédé de
diagnostic entre bacilles humains et bacilles bovins par injec-
lion au lapin. Les expérimentateurs, tout en ayant conscience
de la portée de leurs expériences, ne se proposaient pas
délibérément la recherche de bacilles-vaccins, et ils ont enre-
gistré plutôt des nuances que de profondes différences de viru-
lence.

Dès 1887, Arloing (1) essaye de distinguer expérimentalement la scrofule
de la tuberculose par des inoculations comparées de ce qu'il appelle des
virus Ltuberculeux (de tuberculose des poumons et des séreuses) et des virus

(1) Revue de Médecine, L. I, 1887.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 873

scrofuleux (prélevés dans les ganglions du cou chez des enfants ne donnant
aucun signe de tuberculose viscérale).

Il constate que la tuberculose vraie se généralise chez le cobaye et le
lapin, tandis que la scrofulose se généralise seulement chez le cobaye.
Lorsqu'un virus de ganglion tubereulise le lapin, c'est que dans ce cas, pense
Arloing, il y avait de la tuberculose vraie sous la scrofulose. Il croit voir
qu'un virus de tuberculose osseuse devient plus pathogène pour le lapin
après passages par cobayes, tandis que ces passages ne modifient pas un
virus provenant d'un ganglion. « L'organisme du cobaye relève assez rapide-
ment le virus affaibli des tuberculoses chirurgicales et ne semble pas
exercer d'influence sur le virus de la scrofule ganglionnaire. Done, si tant
est que la scrofule dérive du bacille tuberculeux, les microbes qui la déter-
minent sont encore plus éloignés de leur virulence primitive que ceux qui
engendrent les tuberculoses locales. Peut-être en sont-ils assez éloignés
pour constituer une variété fixe, analogue à ces microorganismes qui après
avoir vécu pendant plusieurs générations sur une espèce animale, sont
devenus incapables de tuer l'espèce qui les avait fournis. »

Conclusion : il existe deux virus, ou deux espèces inégalement virulentes
d'un même virus, el l'on peut différencier la tuberculose et la scrofule par
inoculations comparées au lapin et au cobaye.

Nous savons aujourd'hui que le lapin inoculé avec une lechnique conve-
nable ne prend de tuberculose généralisée qu'avec le bacille bovin et se
prête mal à la comparaison des virulences de bacilles tuberculeux isolés
chez l'homme, surtout quand on n'a pas déterminé leur type humain ou
bovin. En outre, Arloing reconnait que, s'il y a des adénites scrofuleuses,
il y en a aussi de tuberculeuses. Enfin nous ne savons rien sur la teneur
en bacilles des produits tuberculeux qu'il inoculail aux animaux. Toul essai
sur la virulence des bacilles tuberculeux doit élre fail par inoculution de quan-
tités définies, pesées, de cultures pures.

Vagedes (1) a étudié 30 cultures pures, dont il inoculait des quantités
pesées. Il a expérimenté sur le lapin, accessoirement sur des rats. Il observe
les lésions avec un soin et une précision remarquables. C'est à ses observa-
tions qu'on doit le procédé de détermination du type humain et du type
bovin sur le lapin : mais comme il n’a pas encore eu lui-même l'idée nette de
cette distinction, il en résulte un certain trouble dans ses résultats.

Nous savons aujourd'hui que dans la tuberculose pulmonaire le bacille
bovin est une rarissime exception, de sorte que 27 des cultures de Vagedes,
sur 30, provenant de tuberculoses pulmonaires (des 3 autres, 2 provenaient
de tuberculoses du bœuf, ! d'un ganglion humain), il n° y a à peu près aucune
chance qu'il ait eu en mains, sur ces 27 cultures, un bacille bovin. Il étail
donc fondé, jusqu'à un certain point, à les répartir, d'après l'étendue des
lésions produites sur le lapin, en trois classes de virulence. Mais l'inoculation
intraveineuse de bacilles humains au lapin produit des phénomènes assez
irréguliers, selon la dose; et ce n’est pas seulement l'étendue des lésions
qu'il faut considérer, mais la durée de vie de l'animal. Or. Vagedes les sacri-
fiait généralement à une époque où ils pouvaient avoir encore beaucoup de
temps à vivre, malgé des lésions plus ou moins étendues, el sans qu'il
y eût un rapport régulier entre l'étendue des lésions et la durée de survie.

Vagedes a montré que, dans quelques cas au moins, à une tuberculose
d'allure bénigne semblait correspondre un bacille moins virulent. Mais plu-

1) Zeilschr. f. Hygiene, t. XXVIIT, 1898, p. 276.

56

874 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sieurs de ces cas « bénins » de l'homme se sont terminés tout à coup par
une généralisation fatale (granulie); dans d'autres, la bénignité clinique était
tout aussi bien attribuable à la situation sociale du malade, qui était riche
et pouvait se soigner parfaitement. L'unique bacille de tuberculose gan-
glionnaire s'est montré peu virulent par inoculation dans la chambre anté-
rieure de l'œil du lapin, mais bien d'autres bacilles humains de tuberculoses
pulmonaires se sont comportés de même. Enfin les différences de virulence-
établies par Vagedes sont faibles: aucun des 30 bacilles ne répond à l'idée-
qu'on se fait d’un vaccin.

Le travail de Krompecher el Zimmermann (1) est plus intéressant pour-
nous parce qu'il porte sur des tuberculoses humaines plus variées. Ces
auteurs expérimentaient sur le lapin et avec des cultures pures. Ils ont
grand soin d'employer des cultures isolées directement de l'homme et
n'ayant pas passé par l'animal : depuis ce temps, beaucoup d'expériences.
ont montré que le passage par cobaye n'exerce pas d'influence notable sur
les propriétés du bacille.

Krompecher et Zimmermann ont étudié des tuberculoses chirurgicales.
Non seulement les bacilles leur paraissent à peu près égaux en virulence,
mais la plus grande partie ont la même virulence que les bacilles de tuber-
culoses internes. La hénignité des tuberculoses est donc plutôt le fait de la.
localisation, du tissu, — peau, os, ou poumon, — que du microbe. Les tubercu-
loses atténuées ne sont pas/le fait de bacilles atténués.

C. Fränkel et Baumann (2), après avoir prouvé que rien n'est plus irrégu-
her et inconstant que l’action d'un même bacille tuberculeux sur des lapins
et sur des souris d’un même lot, éprouvent leurs 37 cultures sur des cobayes.
Leur méthode consiste à inoculer toute une échelle de dilutions afin de fixer
la quantité minima infectante, c'est-à-dire qui détermine une tuberculose
plus ou moins rapide, mais sûrement progressive. Ils n'ont pas eu de bacille
qui ne tuberculisät le cobaye à la dilution de 1 pour 1 milliard (en poids :
0,1 cent. cuhe de la dilution par 100 grammes d'animal); certains tubereuli-
saient à la dilution de 1 p. 100 milliards. Seul un bacille très ancien, entretenu
en cultures sur milieux artificiels depuis les premiers travaux de Koch, ne
tuberculisait qu'à la dilution de 1 p. 1000. Des passages n’en ont pas remonté
la virulence; mais il n'a témoigné d'aucune efficacité vaccinante. Dans l’en-
semble, C. Fränkel et Baumann n'admettent pas de relation entre l'allure
aiguë ou chronique d'une tuberculose humaine et un degré déterminé de
virulence du bacille.

Môller (3) conclut dans le même sens. Il cite un bacille lupus qui fut très
virulent pour le cobaye. L’allure clinique de la tuberculose lui paraît déter-
minée par la localisation des bacilles. Il croit remarquer qu'une cullure qui a
vécu longtemps chez le cobaye est plus virulente pour le cobaye.

On verra plus loin les observations de la Commission anglaise.

Il parait donc bien difficile de s'orienter sur la virulence
des bacilles tuberculeux. Il n'existe pas de méthode plus exacte
que l'observation du plus grand nombre d'individus possible et

\ Zeitschr. f. Hyg. und. Infektionskr., 1. LIV, 1906.
3) Zeitschr. f. Hyg.und. Infektionskr., L. LV, p. 506, 1906.

(4) Centrabl. f. Bakter., Orig., t. XXXITI, p. 580, 1903.
}

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 875

la comparaison des lésions anatomiques. À condition d'observer
des séries assez étendues, les résultats ont une valeur scienti-
fique.

Inoculés aux lapins selon la formule aujourd’hui classique
(10 milligrammes sous la peau), divers bacilles humains
donnent des lésions inégales : certains produisent une tuber-
culose pulmonaire étendue, sans généralisation aux autres
organes, alors que d’autres ne donnent qu’une demi-douzaine
ou même deux ou un seul tubercule pulmonaire, Il est diffreile
d'utiliser ces résultats à notre point de vue. Cependant un fai
est bien net : les bacilles les moins virulents sur cobaye sont
aussi les moins virulents pour les lapins.

Le procédé de Fränkel et Baumann ne m'a pas paru aussi
sûr qu'à ses auteurs. À doses extrêmement faibles, des bacilles
que la suite des expériences à prouvés inégaux en virulence se
comportaient de la même manière : un petit ganglion ingurmal,
et pas de tuberculose progressive, même en un an d’observa-
lion, les différences ne ressortaient pas. Avec des doses fortes,
1 milligramme par exemple (toujours en inoculation sous-
culanée), inconvénient analogue à l’autre bout de l'échelle : tes
différences élaient pour ainsi dire noyées dans des Késions
massives. E

J'ai donc surtout employé, en maintenant loujours des
termes de comparaison, les doses de 1/4, 1/100 et 1/16@0
de milligramme, cherchant à produire une tuberculose pro-
gressive, ni trop rapide ni trop lente, telle que sur des cobayes
assez nombreux, sacrifiés au bout de 8 à 10 semaines, om eût
une expression de la virulence dans l'étendue des lésions. Les
différences individuelles sont si fortes qu'on ne les compense
qu'en faisant des séries nombreuses. Mais comme je visais
surtout des différences de virulence considérables, je ne risquais
guère de les laisser échapper.

Ni la grosseur des divers groupes ganglionnaires, mr La
grosseur et même le degré d'infection de la rate, ne donnent là
mesure de la virulence. Mais le poumon étant, après ces mo-
culations sous-cutanées, le dernier organe visiblement envahi,
c'est l’état des poumons qui m'a paru marquer le mieux là
rapidité et l'extension d’une tuberculose progressive. La durée
de vie des cobayes inoculés dépendant de toutes sortes de

876 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

causes étrangères, je les sacrifiais au bout de huit à dix
semaines, non sans en réserver quelques-uns que je sacrifiais
plus tard. La dose de 1/4 de milligramme m'a rendu des ser-
vices ; lorsque après deux mois des cobayes inoculés avec celte
dose massive n’ont pas de tubercules dans les poumons, le
bacille ne peut manquer de retenir l'attention, et on l’étudie de
plus près. |

Je me dispense de rapporter en détail l'histoire des cen-
taines de cobayes qui m'ont servi. Les résultats d'ensemble
sont nets et c’est ce qui importe. Sur 42 bacilles, étudiés de
près au moyen d'inoculations de doses variées sur de nom-
breux animaux, bacilles de ganglions du cou, tant d'enfants que
d'adultes, bacilles de tuberculoses osseuses et articulaires,
bacilles de poumon pris comme lermes de comparaison, la
plupart de ces affections étant cliniquement assez où com-
plètement bénignes, — aucun n'a pu être dit atténué.

Pas d'atténuation des bacilles de tuberculoses osseuses, à
localisations simples ou multiples, par rapport à des bacilles
de erachats provenant de tuberculoses pulmonaires en pleine
activité. Je puis même affirmer que dans la majorité des cas la
virulence des bacilles de tuberculoses externes est plus grande
que celle des bacilles de crachats pris comme témoins. Bien
loin que les tuberculoses osseuses et articulaires des enfants
soient causées par des bacilles affaiblis, les faits prouvent que
ces bacilles sont en pleine virulence, soit parce que l'organisme
jeure leur résiste mal, soit parce qu'ils proviennent par
contagion presque immédiate de tuberculoses actives, soit
parce qu'ils sont doués d'une aptitude spéciale à se mobiliser
et à se répandre, par la Iymphe et le sang, dans l'organisme
infecté.

Pas d'atténuation des bacilles de Tuberculose ganglionnaire;
ni chez Bouch., fille de six mois, qui était le type même du
nourrisson scrofuleux; ni chez Pel., Gra., Léag., Mar., enfants
de dix à treize ans, dont la santé générale était très bonne; ni
chez Zah., fille de dix-sept ans, qui avait bien résisté à un mal
de Pott et guéri plusieurs adénites antérieures; ni chez Tr.,
homme de (rente-cinq ans; ni chez Urs., femme de vingt-
quatre ans, qui avait son adénite depuis huit ans; ni enfin chez
Desm., femme arrivée à l’âge de cinquante et un ans, avec une

LA VIRULENCE DES BACILLES TUÜBERCULEUX

masse ganglionnaire de 130 grammes dans l’aisselle : gan-
glions durs et fermes qui montraient à peine sur quelques
points un début de caséification.

Pas d'atténuation chez les bacilles de deux lupus d'adultes;
ni d’une gomme cutanée chez un enfant de deux ans et demi;
ni d'une très vaste ulcération de la peau de la jambe chez
Peyr., garcon de treize ans (survenue à la suite d'un héma-
tome causé par un coup de pied; le sujet avait une arthrite
métacarpo-phalangienne tuberculeuse; il est mort depuis); nt
du petit kyste mentonnier de G., fille de huit ans; ni d'une
somme du bras chez un homme adulte.

Il existe des tuberculoses plus ou moins bénignes pour la
santé générale du malade : c'est un fait clinique. Qu'il existe
des bacilles atténués, c'est une autre question. Que la
bénignité d’une tuberculose donnée soit l'effet d’un bacille
atténué, d'après les observalions qui précèdent, c’est faux.
L'allure de la tuberculose paraît dépendre du terrain-sujet ou
du terrain-tissu. Ne confondons pas tuberculose atténuée et
bacille tuberculeux atténué.

Qu'est-ce done que celte hiérarchie établie par certains
auteurs entre les bacilles tuberculeux, et d’après laquelle le haut
de l'échelle des virulences serait tenu par les bacilles des gra-
nulies et des méningites, suivis de près par les bacilles des
tuberculoses pulmonaires; ensuite les bacilles des tuberculoses
« chirurgicales », articulaires et osseuses; puis les bacilles des
ganglions du cou; puis les bacilles des lupus...? Surtout sous
cette forme simpliste, c'est pure fantaisie.

Les examens que j'ai rapportés montraient plutôt qu'on
n'avait pas de chances de trouver dans les tubereuloses chirur-
gicales des bacilles sûrement atténués, et que si de tels bacilles
existent, ils doivent être d'une rareté telle, que les découvrir
ne peut ètre que l'effet du hasard. J'en ai rencontré un seul,
qui m'a du moins donné la preuve que ces bacilles existent.

Sans eux, la tuberculose n'aurait pas d’autres détermi-
nantes que la quantité du virus et la nature du terrain qui le
reçoit, el les auteurs qui ne tiennent pas compte de la qualité
du virus seraient dans le vrai. Ainsi, selon Preisich (1), c'est

1) Gesellsch. f. inn. Med. und Kinderheilkunde. Vienne, 1911, n° 1.

878 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

une inoculation (inhalation ou ingestion) massive qui cause
chez de nourrisson une tuberculose mortelle. Pour Rômer, la
phtisie pulmonaire de l'adulte a pour cause une réinfection
grave ou des réinfections de masse moyenne, mais réitérées,
surtout lorsque l'infection première a été grave, c'est-à-dire
massive. Chez les cobayes et même chez les singes, selon
Webbet Williams (1),on immunise au lieu d’infecter lorsqu'on
imocule des doses minimes, commençant par l'unité, que l’on
élève progressivement.

Sans doute la quantité des microbes à son importance,
même dans la tuberculose expérimentale des animaux. Autre-
fois on inoculait des doses trop fortes; c'est avec de petites
doses que l’on a des chances de produire chez l'animal une
maladie plus semblable à celle de l’homme. Les très petites
doses de bacille aviaire chez le lapin déterminent des localisa-
tions osseuses et articulaires (qui tiennent aussi à l'aptitude
sgpticémique de ce bacille chez le lapin). Chez les cobayes
inoculés avec des dilutions très étendues, comme celles qu'em-
ployaient C. Fränkel et Baumann, on observe souvent, en
même temps que la rareté ou l'absence de localisations viscé-
rales, des adhérences des plèvres et des adénopathies trachéo-
bronchiques sans tubercules dans les organes. Chez les cobayes
inoculés avec une goutte de pus très pauvre en bacilles, la
tuberculose débute très lentement, puis, quand les bacilles se
sont assez multipliés, elle marche avec la rapidité ordinaire :
ce qui prouve encore l'importance de la quantité du virus. La
quantité serait aussi le facteur prépondérant dans les tuber-

culoses de l’homme, s'il n’existait que des bacilles pleinement
virulents.

IT. — ExEmPLES DE BACILLES ATTÉNUÉS.

Z…, jeune homme de dix-neuf ans (hôpital Saint-Louis,
service de M. Thibierge), a depuis l'enfance de la tuberculose
cutanée sur la face externe du pied, la jambe et le genou.
Evolution torpide, à la manière d'un lupus. En plusieurs
anmées les lésions se sont peu étendues. Avant d'être vu par le

(1) Journal of med. Research, t: XX; 14; ebt. XXIN, f: 1.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 879

D' Ravaut, assistant du service, le malade a élé traité par les
rayons X, sans aucun succès. Un fragment de tissu malade est
inoculé à 3 cobayes, sous la peau. L'un de ces cobayes n'avait
au bout de six mois qu'un très petit ganglion inguinal; un
autre fut perdu pour des raisons étrangères à l'expérience; le
troisième, au bout de trois mois et demi, avait de très petits
ganglions inguinaux sans aucune lésion tuberculeuse dans les
organes. Ces ganglions furent reportés sur deux nouveaux
cobayes, dont l'un fournit après trois mois une culture pure.
La première culture fut obtenue facilement (colonies en vingt-
cinq jours sur pomme de terre glycérinée); aspect : type
humain. D'après les inoculations au lapin, type humain
(augmentation de poids et aucun tubercule dans les organes
‘70 jours après l’inoculation sous-cutanée de 10 milligrammes.
Après inoculation de 1 milligramme dans la veine, léger
amaigrissement, trois pelits tubercules dans un poumon, quel-
ques granulations sur les reins).

La première épreuve du bacille fut faite sur plusieurs
cobayes qui reçurent 1, 1/2 et 1/4 milligramme; au bout d’un
mois ils avaient beaucoup augmenté de poids, ne présentaient
pas de chancre, aucun tubercule interne, sauf l’un qui avait
trois petites granulations dans un poumon. Des cobayes témoins,
inoculés avec un bacille de crachat et un bacille de ganglion
du cou, avaient après un mois de gros ganglions caséeux, un
chancre et de la tuberculose pulmonaire; le bacille de crachat
était moins virulent que le bacille de ganglion.

Le bacille de Z. se montra aussi bénin chez des cobayes
inoculés à deux reprises, et chez des cobayes inoculés antérieu-
rement avec des doses minimes d’autres bacilles.

Avec des doses très faibles (de 0.0001 à 0.000.000.02 milli-
grammes) les cobayes n’ont eu que des ganglions inguinaux
minuscules, sans tubercules dans les organes après trois à
quatre mois et demi {sauf un seul cobaye, qui avait reçu
0.000.000.1 milligramme et qui présenta quelques fins tuber-
cules dans le poumon et la rate). Mème avec des doses fortes,
les cobayes n'eurent jamais de chancre.

Je cherchai à confirmer les caractères de ce bacille en l’es-
sayant sur diverses espèces animales, les unes naturellement
très résistantes (lapin, ral), les autres très sensibles (ma-

\

880 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

caques) à la tuberculose humaine. La virulence s’est montrée
sur toutes plus faible que celle de tous les bacilles témoins.

Des 60 origines inoculées au lapin, c'est celui qui a donné les moindres
lésions : aucun tubercule deux mois et demi après inoculation de 10 milli-
grammes sous la peau; seulement l'abcès local.

Des rats de 80 grammes environ n'ont pas accusé les différences de viru-
lence avec des doses de 1 à 3 milligrammes. Mais des rats tout à fait jeunes,
de cinq à huit jours, les ont très bien fait ressortir : alors que les bacilles
de crachat ou de ganglion, bien virulents, donnaient une cicatrice au point
d'inoculation, et des ganglions inguinaux, axillaires et trachéens, l'inoculation
du bacille de Z., ne laissait aucune trace sur la peau, et aucun tubercule
dans le poumon, seulement de minuscules ganglions.

Les expériences sur les singes sont frappantes. Alors que les

autres bacilles ont lué les petits singes, — sinicus, cyno-
molqus, rhesus et mème cynocéphales — en 70 jours au plus

soit par inoculation sous-cutanée de 1 millionième de milli-
gramme, soit par inoculation buccale de 4 milligramme, puis
un mois après 2 milligrammes (la dilution était passée sur les
muqueuses avec pinceau doux, qui ne produisait pas la
moindre érosion), le bacille de Z. aux mêmes doses a laissé des
survies considérables. Et quand on songe aux lésions étendues
que supportent longtemps des animaux, même aussi sensibles
que les singes, on doit croire que dans plusieurs cas, même
en l'absence d’autres causes apparentes, la mort n'a pas été
causée par la tuberculose.

Rhesus 202, inoculé sous la peau avec 1 millionième de milligramme, a
une petite ulcération locale qui guérit complètement: un ganglion inguinal,
du même côté, a suppuré, puis la fistule s’est fermée. Mort au bout de neuf
mois, sans tubercules dans la rate ni le foie, ce qui est exceplionnel chez les
singes, qui meurent de tuberculose après inoculalion par n'importe quelle voie:
dans le poumon, tubercules jeunes; abcès tuberculeux diffus, sus-cranien,
étendu à l'orbite, et ayant perforé le crâne en deux endroits. Il faut dire que
ce singe fut quelque temps dans la même cage qu un autre singe inoculé
avec un bacille virulent.

Rhesus 203, inoculé sous la peau du ventre avec 0,0001 milligramme, mort
au bout de trois mois : localement, ulcération limitée à la peau et n'attei-
gnant pas le muscle sous-jacent; gros ganglion inguinal suppuré. Dans les
organes, tubercules extrêmement rares, ce qui n'est pas le cas des singes qui
succombent à la tuberculose. On ne peut affirmer que ce singe ait succombé à
des lésions si peu étendues.

Rhesus 205 a reçu dans la bouche 1 milligramme et un mois après 2 mil-
ligrammes (avec le pinceau). Mort le dixième mois, après avoir porté huit
mois un paquet de ganglions sous-maxillaires, qui pendant les trois derniers
mois allait diminuant de volume, avec amélioration de l'état de la peau.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 881

Jamais pareille survie n’a été observée dans des conditions semblables chez
les singes inoculés avec d’autres bacilles tuberculeux. À l’autopsie, seule-
ment quelques ganglions mésentériques; semis de fines granulations tuber-
culeuses sur l’épiploon et sur le péritoine recouvrant les reins ; tuberculose
des deux poumons, mais presque tous les tubercules sont jeunes : le tableau
n'est pas du tout celui d'une tuberculose intestinale, mais d'une généralisa-
lion /ardive de la tuberculose des ganglions annexes de la bouche.

Les cobayes et les macaques sont si sensibles à la tuber-
culose qu'un bacille peut ètre atténué pour l'homme et Île
paraitre à peine chez eux. On tirera bon parti, dans ces études,
des cynocéphales (Cyn. Sphinx), beaucoup plus résistants que
les macaques.

Avec les bacilles témoins, les cynocéphales inoculés au pinceau sur la
muqueuse de la bouche (2 milligrammes) mouraient au bout de trois mois
environ, avec de grosses lésions qui répondaient à la fois à une tuberculose
par ingestion et à des accidents d'inhalation. Avec le bacille de Z., mêmes
doses, des cynocéphales sont encore bien portants au bout de huit mois.

Cynocéphale 210 a recu, à intervalles de un mois, 3 injections sous-cut.,
de 1 millionième, 4 millième et 1 centième de milligramme. La dernière
injection seule a laissé une trace : une très petite ulcération déjà en partie
desséchée au moment de la mort, survenue au cours du septième mois
après la première inoculation. Autopsie : animal en bon état; petits gan-
glions mésentériques au centre du mésentère et le long de l'intestin (pas de
bacilles tuberculeux sur frottis; on voit souvent de pareils ganglions, mous,
chez des singes non tuberculeux); petits ganglions trachéo-bronchiques de la
dimension d'une lentille.

Les poumons portent d'assez nombreuses taches grisälres, qui ne donnent
pas sous le doigt la sensation de granulations tuberculeuses; sur des coupes,
pas de tuberculose des ganglions ni des poumons. Le singe n'est certaine-
ment pas mort de tuberculose.

Cynocéphale 206. Recoit par la bouche 1 milligramme, puis (un mois après)
2 milligrammes, puis (trois mois après) 0,01 milligramme sous la peau. Au
point d'inoculation se développe un nodule dur qui roule sous la peau. Ce
nodule ne s’est jamais ulcéré et s'est complètement résorbé. À peine sent-on
de tout petits ganglions inguinaux.

Ce singe meurt dix mois après le commencement de l'expérience, assez
amaigri. On ne retrouve rien au point d’inoculation. Tous les organes sont
indemnes de tuberculose. Tout petits ganglions inguinaux et axillaires.
Petits ganglions mésentériques (mous) et sous-maxillaires. Il n'y a pas dans
tous ces ganglions le plus petit point de caséification. Pas de bacille sur
frottis. La mort ne peut être attribuée aux inoculations.

Il existe quelques exemples de bacilles atténués. La Com-
mission anglaise en à trouvé dans plusieurs cas de lupus
humain et de tuberculose du cheval. Sur 20 bacilles de lupus,
dont 9 bovins et 41 humains, 7 bovins se sont montrés
au-dessous de la virulence du bacille bovin, non seulement

882 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

pour le veau et le lapin, mais mème pour le cobaye et les
singes; et # humains étaient au-dessous de la virulence ordi-
naire du bacille humain pour le cobaye et le singe. Le degré
d’affaiblissement des bacilles n’était pas en proportion de l’an-
cienneté du lupus. Dans la tuberculose du cheval, 2 bacilles
(type bovin) sur 4 étaient au-dessous de la virulence habi-
tuelle.

Les bacilles atténués se rencontreraient-ils surtout dans les
tuberculoses de la peau? Chez les singes inoculés sur la peau,
la peau se défend bien et s'épaissit pour limiter par dessous
la lésion locale, qui ne mord pas sur le muscle. Dans un tra-
vail où il est surtout question des possibilités de transforma-
lion du bacille bovin en bacille humain par un long séjour
chez l’homme, E.-A. Lindemann (1) rappelle les observations
de Kleine sur la bénignité des tubercules d'inoculation des
ouvriers bouchers, el émet l'opinion que dans la peau humaine
le bacille bovin se développe mal et se trouve exposé à des
influences qui l'atténuent; ces influences ne s’exercent pas,
selon lui, sur le bacille humain. On n’a pas encore assez étudié
à ce point de vue les bacilles humains des tuberculoses cuta-
nées. J'en ai isolé plusieurs qui élaient aussi virulents que
des bacilles de crachats.

Le D' Mantoux et moi avons commencé, pour éclaireir cette
question, des inoculations intracutanées de très faibles doses
de bacilles (2). Nous avons été assez surpris de voir que l'ino-
culation dans la peau donnait plus rapidement des ganglions
inguinaux caséiliés que l’inoculation sous-cutanée de la même
dosé, lorsque nous injections des bacilles bien virulents; mais
le bacille Z. s'est montré d'une remarquable bénignité : après
quatre mois, pas de chancre; il n’y a eu au point d'inoculation
qu'une petite papule qui ne s’est jamais ulcérée el qui a guéri;
des ganglions insignifiants; aucun tubercule interne. La dose
était, dans ces inoculations, de 0,005 milligrammes. Cette
méthode a confirmé de la facon la plus nette les caractères
du bacille atténué.

1) Berliner klin. Wochenschr., ÂT juin 1912, p. 1185.
2) Comples rendus de la Soc. de Biolsgie, octobre 1912.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 883

IV. — OScILLATIONS DE LA VIRULENCE.

La première question qui se pose à propos des bacilles
atténués est celle-ci : cette atténuation est-elle constante?

Parmi des bacilles atténués de la Commission anglaise,
3 bacilles bovins sur 8 ont repris par passages sur bovidés la
virulence ordinaire des bacilles bovins pour les bovidés et les
lapins; 4 bacille humain sur 4 a repris la virulence ordinaire
pour le cobaye et le singe; 2 bacilles de tuberculose équine,
sur 5, ont repris, par des passages qui durèrent jusqu’à
huit années, la virulence du bacille bovin.

Le bacille de Z., repris d’un ganglion d’un rhésus sur lequel il
avait vécu trois mois, éprouvé de nouveau sur cobaye, a paru
plus virulent : la rate et le poumon contenaient des tubercules
neuf semaines après l'inoculation de 1/4 de milligramme, ce
qui n'était pas arrivé avec le bacille primitif.

La virulence de ces bacilles atténués est done variable dans
des limites qui ne sont pas encore bien déterminées; elle peut
baisser et remonter; elle accomplit des oscillations. On ne
risque pas de se tromper en affirmant que c'est une propriété
générale des bacilles tuberculeux. Comme depuis plusieurs
années on s'est surtout soucié de la transformation possible des
bacilles bovins en bacilles humains, nous ne possédons pas
beaucoup d'observations sur les oscillations de virulence:
celles que nous avons sont d'autant plus dignes d’être rete-
nues. Weber et Steffenhagen (1) rapportent l'histoire d'un
enfant né de parents sains, élevé dans un milieu où il n'y
avait pas de sujets tuberculeux, mais nourri au biberon avec du
lait de vache qui bien souvent n'était pas bouilli. À deux ans,
tuberculose du 4° métacarpien, avec bacille du type bovin.
Aujourd'hui l'enfant a dépassé l’âge de 13 ans et la tuberculose
est restée locale. De la 8° à la 13° année, 4 ensemencements
et # examens du bacille ont élé pratiqués : toujours il s’est
agi de bacille bovin, mais avec une virulence inégale, et qui
alla en s’élevant, surtout de la troisième à la quatrième prise.
L'enfant ayant été soumis à des traitements variés, — agents

(A) Tub. Arbeilen «us d. K. Gesundheilsamile, 1912, f. 11, p. 419.

881 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

chimiques, Rüntgen, Finsen, — peut-être n'a-t-on pas le
droit d'exclure l'action de ces causes extérieures.

Les oscillations de virulence doivent être incessantes dans
la nature au cours des passages entre les organismes et
les milieux extérieurs. Comment n'auraient-elles pas une
influence sur la maladie tuberculeuse? Un bacille qui passe
sans intermédiaire du poumon d'un adulte dans la bouche
d'un enfant a des chances d'être un bacille pleinement viru-
lent. Le bacille qu'un enfant ramasse sur le plancher d'une
chambre ou le sol d'une rue, peut l'être beaucoup moins. On
a raison d'attribuer une importance à la quantité des bacilles
qui sensemencent sur un organisme. Comment n'en pas
accorder à leur qualité, puisqu'il est établi d’abord que les
bacilles sont très inégaux en virulence, et de plus qu'il y a
des oscillations de virulence? On ne peut d'ailleurs prédire
que ces oscillations doivent rendre impossible l'emploi d'un
vaccin antitubereuleux lorsqu'on aura le bonheur d'en trouver
un. Nous savons que les bacilles tuberculeux sont plus
constants dans les cultures que dans la nature, et l’on conçoit
très bien que les vaccins naturels puissent être fixés au
laboratoire.

V. — LES INOCULATIONS NÉGATIVES.

Tout le monde a fait des inoculations de matière tubereu-
leuse qui sont restées négatives. Il ne s’agit pas des cas où les
cobayes n'ont pas été suivis pendant un temps assez long, ni
des cas où la matière que l’on supposait tuberculeuse ne l'était
pas en réalité (je n'ai eu qu'une surprise de ce genre : un gros
ganglion carotidien de 38 grammes, que le chirurgien avait
enlevé chez un homme de vingt et un ans pour arrêter des
phénomènes douloureux, n’a pas donné de bacilles tubercu-
leux ni sur le cobaye ni en cultures, mais seulement une
streptothricée, voisine de celle d'Eppinger) : il s'agit de cas
où la tuberculose élait sûre au point de vue clinique, et où des
bacilles tubereuleux ont été vus dans la matière inoculée.

La Commission anglaise mentionne un lupus qui n'a rien donné chez le
cobaye (Final Report, p. 16, en note). Ungermann (1, inocule un ganglion

1) Tub. Arbeilen aus d. K. Gesundheitsamte, f. 12, p. 215 ; 1912.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX #95

d'une fillette de dix ans scrofuleuse; le cobaye n'a rien pris. Eber (1), un
ganglion du cou et une tuberculose osseuse, dont les inoculations sont
restées négatives. Sur 28 adénites inoculées par Oehlecker (2), 14 seulement
tuberculisèrent le cobaye : il est vrai que le diagnostic de tuberculose n'était
pas donné comme certain dans tous les cas. En outre, Oehlecker (2), sur
3 cas de tuberculose cutanée, a eu affaire à un lupus et à une tuberculose
verruqueuse de la peau qui n'ont rien donné au cobaye. Dans ses études sur
l'infection des ganglions mésentériques el trachéo-bronchiques chez les
enfants, Gaffky (3) cite deux cas où, les cobayes étant devenus tuberculeux,
la culture n’a pas été possible; il pense que dans ces deux cas il s'agissait
d'un bacille bovin.

Weber el Taute (4) ont observé 17 cas de tuberculose intestinale et mésen-
térique, chez des enfants de trois à neuf ans, où l'inoculation aux cobayes est
restée négative, même après trois et cinq mois : il s'agissait de lésions en
partie guéries, calcifiées ou crétacées. Dans 8 cas, des bacilles tuberculeux
nombreux y avaient été vus au microscope. De plus, 13 cas analogues chez
des adultes : là on doit faire une réserve, la calcification des ganglions pou-
vant provenir d’autres maladies que la tuberculose. Chez quelques-uns des
cobayes inoculés, des bacilles ont été vus au point d'inoculation : étaient-ce
des acido-résistants non pathogènes? Les essais de culture sont restés néga-
tifs, et le report sur de nouveaux cobayes n'a rien donné.

Entre les cas où le bacille est seulement difficile à cultiver,
et ceux où la tuberculose ne se développe pas, il y a des cas
intermédiaires, et il ne faut pas oublier que parfois la tubercu-
lose se développe, et même rapidement, après avoir hésité
pendant des mois. Mais les cas négatifs existent, du moins
dans les limites de nos plus longues expériences; ils ne sont
pas très rares, et l’on ne peut s'empêcher de se demander
quelle est leur signification.

Del, lupus. Fragment inoculé à deux cobayes. L'un meurt au bout de
six semaines : aucune lésion visible. L'autre au bout de quatre semaines,
avec un ganglion inguinal de la taille d’un grain de chènevis, que l’on
reporte sur un nouveau cobaye. Ce dernier, après cinq mois, a un petit gan-
glion, dont une partie est prélevée; on y voit des bacilles, moins rares que
dans la grande majorité des pus qui tuberculisent rapidement les cobayes.
Ensemencement : rien ne pousse. Le cobaye est sacrifié six mois et demi
après l’'inoculation : il a un ganglion inguinal minuscule, un très petil
ganglion mésentérique contenant des bacilles, el une seule granulation
grise dans un poumon. Les ganglions sont reportés sur un cobaye, qui mal-
heureusement est mort d'une infection étrangère à la tuberculose, et sur un
Cynomolqus qui au bout de cinq mois ne présente aucune lésion au point
d'inoculation et aucun ganglion de l’aine ni de l'aisselle.

(1) Centralbl. f. Bakt., Orig., t. LIX.

2) Tub. Arbeilen aus d. K. Gesundheitsamte, f. 6, 1907, p. 145 et 183.

3) Tuberculosis, t. VIT, f.9, p. 437; cité par Rothe,R.Kock's Shift. Arb.,f.2, p.2.
4

(
\
(4) Tub. Arbeilen aus d. K. Gesundheitsamle, f. 6, 1907; p. 24.

886 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Beg..., kyste du cordon spermatique chez un garcon de deux mois : 4 cent.
cubes de liquide citrin; inoculation à un cobaye, dans le péritoine. Le
117e jour, seulement un ganglion inguinal très petit, qui est prélevé stérile-
ment, fragmenté, frotté sur plusieurs tubes à culture : rien n’a poussé. Vu
des bacilles sur frottis. Report sur un deuxième cobaye, qui meurt le
130e jour sans lésion tuberculeuse visible, si ce n’est de minuscules ganglions
(1 inguinal, 1 mésentérique, 1 trachéen) où l'on ne trouve pas de bacille.
Mais six à huit semaines avant sa mort, le cobaye a eu un ganglion bien
net, dont une partie, prélevée aseptiquement, a été reportée sur cobayes. Au
bout de cinq mois, aucun ne paraît tuberculeux.

Sp... garcon de dix-sept ans. Arthrite de la troisième articulation méta-
carpo-phalangienne. Le Dr Bailleul, chef de clinique du service de M. le pro-
fesseur Kirmisson, d’après l'étude radiographique des surfaces articulaires,
qualifie la lésion de rhumatisme tuberculeux. Ponction : 1,5 cent. c. d’un
liquide louche, légèrement jaunâtre, vite coagulé, contenant en majorité des
polynucléaires, le reste, mononucléaire et lymphocytes; vu 1 bacille tubercu-
leux sur une lame. Inoculé à deux cobayes.

Ces cobayes n’ont pu être conservés assez longtemps, soit parce que les
animaux sont morts, soit parce qu'ils étaient très maigres et qu'on les à
sacrifiés pour recueillir leur petit ganglion le plus purement possible; une
série de passages a dù être faite. Mais jusqu'ici il a été impossible d'obtenir
une culture el aucun cobaye n'est devenu tuberculeux, même sept mois
après l’inoculation. L'un des deux premiers cobayes vit encore : il a eu un
ganglion inguinal comme un petit pois assez notable pour qu'on en prélevâtune
moitié pour examen, essai de culture et réinoculation : on y a vu des bacilles.
Les cultures n'ont rien donné. La réinoculation à un macaque est tout à fait
négalive après cinq mois.

Mig.., hydarthrose chronique, indolore, du genou : 20 cent. cubes de liquide
riche en polynucléaires ; les mononucléaires y sont en minorité, deux cobayes
sont inoculés sous la peau et dans le péritoine. Dans le culot de centrifuga-
tion d'une moitié du liquide articulaire, il n'a pas été vu de bacille. Les
cobayes ont eu de petils ganglions, dont l'un a été prélevé en partie, vu
des bacilles sur frottis. Après six mois, les cobayes ne sont pas tubercu-
leux; ganglion inguinal à peine perceptible. Essais de culture du fragment
du ganglion susdit, négatifs.

Laf.…, demoiselle de vingt et un ans. Seconde poussée d'une adénite
carotidienne, d’allure bénigne, 1,5 cent. cube de pus (vu 1 bacille après
recherche assez longue); a été inoculé à des cobayes, sous la peau. Au bout
de deux mois, l’un a un petit ganglion, qu'on est obligé de reporter sur
un cobaye neuf (bacille sur frotlis de ce ganglion). On le reporte aussi sous
la peau d’un macaque. Au bout de quatre mois, ces animaux ‘sont indemnes.
L'autre cobaye donne lieu aux mêmes observations.

Mark.…., fille de dix aus, vaccinée (en Pologne) à l'âge de deux ans; elle a,
depuis cette vaccinalion, une luberculose cutanée, très étendue, du bras, de
l'avant-bras et de la main. Dix jours avant que je l'aie vue, l'enfant a reçu
une seule application de rayons X. Il n'a pas été possible d'abord de prélever
un fragment de tissu : j'ai dû me contenter du pansement, délayé dans de
l'eau avec lavage rapide à l’antiformine. Quelque temps après, un petit frag-
ment de peau a été prélevé et inoculé. Les cobayes ont eu au bout de plu-
sieur semaines un petit ganglion inguinal, contenant des bacilles, qui à
rétrocédé spontanément. Des transplantations ont dù être faites aussi dans
ce cas afin de ne pas perdre la matière tuberculeuse. Aujourd'hui, aucun

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 887

signe de tuberculose chez des cobayes, huit el cinq mois après l'inocu-
lation, soit sous la peau soit dans le péritoine. Deux cobayes ont été ino-
culés une seconde fois, sans plus de résultat. Un macaque n’a rien du tout
au bout de cinq mois.

Voilà six cas dont l'histoire est à peu près la même: une
lésion cliniquement tuberculeuse, bacilles aperçus dans presque
tous les cas. Les cobayes, pour des raisons diverses, ne vivent
pas assez longtemps, et la lésion bénigne qu'ils ont contractée
— un ganglion lymphatique le plus souvent — est reportée sur
cobayes et sur singes, animaux plus sensibles que le cobaye.
Lors des transplantations, on examine le tissu transplanté,
et l’on y constate l'existence de bacilles. Or, dans ces six cas
rien ne s'est développé, même dans des délais prolongés de
six et huit mois. Les essais de culture sont restés stériles. En
sera-t-il de même dans la suite? il est possible que.ces inocula-
tions ne soient pas définitivement négatives; de toute façon,
par comparaison avec tant d’autres cas de tuberculoses gan-
glionnaires, osseuses ou articulaires, ou même cutanées,
ces tuberculoses, qui ne se sont pas développées sur cobaye ni
sur singe, sont très remarquables.

Ces cas « négatifs » ne sont pas très rares, puisque j'en ai
rencontré 6 sur environ 60 tuberculoses non pulmonaires.
Tout indique qu'il s'agit là de bacilles atténués : les bacilles
atténués seraient done beaucoup moins rares que ne le laissent
croire les inoculations et cultures positives.

Il n'y à pas de nécessité de recourir à une autre explication,

— les granulations de Much, — puisque des bacilles tubercu-
O )

leux ont été vus dans ces cas, avec leur forme et leur coloration

classiques.

Dira-t-on que les bacilles aperçus d'étape en élape sont des
acido-résistants non pathogènes? Il n’est pas possible de lad-
meltre, d'abord à cause du caractère clinique très net de la
lésion originelle. Sans doute les ganglions que prennent les
cobayes ne sont pas la preuve d’une tuberculose normale et
virulente, même s'ils se reproduisent en série, lant qu'il ne se
produit pas de tubercules à distance dans les organes : mais
justement il ne s’agit pas de tuberculoses virulentes; et dans
un cas il v avait dans un poumon une granulation tubercu-
leuse typique, de sorte que ce cas marque un degré intermé-

888 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

diaire entre les inoculations du bacille de Z. et les inoculations
négatives ou presque négatives. Celles-ci prennent donc place
dans une série naturelle, à côté des tuberculoses qui se déve-
loppent plus ou moins lentement et sont plus ou moins diffi-
ciles à cultiver. Suppose-t-on qu'il s'agit de bacilles morts ?
C’est très possible dans les cas de Weber et Taute, qui ont ino-
culé des lésions calcifiées et crétacées, nullement dans nos cas
où la tuberculose locale était en activité, où la lésion était
récente, où s'est accompli chez le cobaye un début de dévelop-
pement.

A ces inoculations négatives de matière tuberculeuse, j ajoute
3 inoculations négatives d'une lésion « scrofuleuse » dont la
nature est encore discutée, la conjonctivite phlycténulaire.
Avec MM. Terrien et Hillion, nous avons inoculé à des macaques
(sinicus et cynomolqus), par inserlion totale dans la chambre
antérieure de l'œil et sous la conjonctive, et par friction sur la
conjonclive très légèrement scariliée, trois phlyctènes. choi-
sies comme tout à fait caractéristiques. Après six mois,
résultat nul.

La flore luberculeuse est plus nombreuse et plus variée
qu'on ne le croit d'ordinaire. Nous sentons tous les jours le
besoin de perfectionner nos méthodes d'isolement et de
culture, auxquelles bien des bacilles peuvent échapper. Si
l'aptitude à se développer sur milieux artificiels ne donne pas
la mesure de la virulence, il n'est pas possible qu'elle n’en soit
pas au moins un élément, et dans les infections à bacilles
humains, elle va généralement de pair avec elle. De sorte que
pour avoir des chances de trouver ces bacilles atténués sur les-
quels on fonde l'espoir de trouver des bacilles-vaccins, il faut
les chercher surtout là où on ne les voit pas, car ceux qui. pour
ainsi dire, sautent aux yeux, sont naturellement les plus faciles
à isoler et les plus virulents.

Il existe, même dans les maladies tuberculeuses de l'homme,
des bacilles atténués ; et il existe chez les bacilles tuberculeux,
comme chez toutes les bactéries pathogènes, comme chez
tous les ferments, comme chez toutes les cellules, des oscil-
lations d'activité et de virulence. Les inoculations négatives
font entrevoir encore un degré inférieur dans l'aptitude à se

LA VIRUTENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 889

développer chez les animaux. On en trouvera sans doute
d’autres exemples lorsque après avoir étudié les organismes
infectés, on étudiera davantage le milieu extérieur, le sol, les
planchers, les poussières de toutes sortes. C'est comme une
sous-flore tuberculeuse qui ne peut être sans importance dans
l'éclosion et l’évolution de la tuberculose. À côté des bacilles
qui passent, sans intermédiaire, d’un homme à l’autre, d’une
nourrice malade, par exemple, à son nourrisson, il y a des
bacilles atténués qui s'implantent moins facilement, il y en a
qui végètent plus pauvremernit encore : ce peut être celui qu'un
enfant ramasse en jouant, sur le plancher de la chambre ou à
la promenade. Tel bacille affaibli peut reprendre sa virulence :
mais s’il la reprend lentement, progressivement, il a le temps
de modifier l'organisme sur lequel il évolue. Si certains humains
résistent indéfiniment à des conlagions qui en tuent d’autres,
c'est qu'ils ont été ensemencés d’abord avec des bacilles qui
leur ont conféré une résistance suffisante.

Plusieurs observateurs ont fait appel implicitement à une
pareille explication. Rômer (1) note la rareté de la contagion
tuberculeuse entre adultes, grâce à laquelle les sociétés
d'assurances acceptent des personnes chargées d’'antécédents
de tuberculose même lorsque ces personnes vivent ou ont
vécu avec un conjoint tuberculeux. Petruschky (2) dit n'avoir
jamais observé de contagion matrimoniale. Jacob (3), au cours
de ses enquêtes, n'a pas observé de cas de mort, par tuber-
culose, du second mari d’une femme saine dont le premier mari
était mort de tuberculose. Rômer rappelle le cas rapporté par
Metchnikoff et ses collaborateurs, d’un homme arrivé indemne
à un âge avancé, après avoir élé longuement exposé à la conta-
gion la plus immédiate et la plus dangereuse.

Les faits suivants sont encore plus intéressants à notre point
de vue. D'après les enquêtes de Jacob, les enfants des
maisons où il y a des cas de tuberculose ouverte réagissent
toujours à la tuberculine, mais il y a aussi des enfants qui
réagissent dans des milieux où l’on ne trouve aucune cause

(1) Kritisches und antikritisches z. Lehre v. der Phliscogenese. Beitr. z.
Kinder dub OX F3;

(2) Vorträge über Tuberkulosebekämpfung, 1911 ; cité par Rômer.

(3) Die Tub. und die hygienischen Misstünde auf dem Lande, 1941.

27

890 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

d'infection. Les enfants ont réagi dans la proportion de 30 à
40 p. 100 dans des villages où il n’y a pas eu depuis des années
un seul cas de phtisie. « Encore une preuve, dit Rômer, de
l'extraordinaire extension des chances d'infection, extension
dont nous ne pouvons pas toujours nous rendre compte. » Dans
une contrée des plus saines, des plus pauvres en tuberculose,
où la mortalité par tuberculose ne dépasse pas 9 p. 10.000, et
spécialement dans six communes où l’on n'avait enregistré
depuis dix ans aucun décès de tuberculose, Hillenberg (4) à
trouvé 25 p. 100 des enfants réagissant à la tuberculine, et
conclut que « les bacilles tuberculeux doivent être beaucoup
plus répandus dans la nature qu'on ne le croit généralement ».
Peut-être, ajoute Rômer, les tuberculeux latents contribuent-ils
à la propagation de la maladie de quelque facon qui nous est
inconnue. Par exemple, si l’on introduit dans une élabie
indemne de tuberculose un animal qui réagit à la tuberculine,
toute l’étable s’infecte, car toute l’étable réagit, bien que l'animal
introduit n’ait aucune tuberculose clinique et qu'on ne puisse
démontrer par les méthodes usuelles qu’il élimine des bacilles.

Calmette a bien vu le problème; il est possible, dit-il, que
« beaucoup d'hommes auxquels une infection bénigne anté-
rieure ou restée latente a conféré une immunité relative, soient
susceplibles, tout en restant eux-mêmes en apparence parfai-
temeni indemnes, de semer dans leur entourage des germes
virulents (2). Il s'appuie sur des faits qu'il a observés avec
Guérin : l'élimination, par les émonctoires normaux de l’orga-
nisme (foie et inteslin) et avec les excréments, de nombreux
bacilles virulents, chez des bovidés rendus résistants par une
des méthodes de vaccination actuellement connues, ou par une
infection bénigne restée occulte (3).

D’après ces observations, il y aurait pour la tuberculose,
comme pour tant d'autres maladies infectieuses, des porteurs
de germes au sens strict du mot, c’est-à-dire des individus qui
abritent et répandent des bacilles sans avoir des symptômes
actuels de maladie. Mais dans ces contagions qui ne se mani-
festent pas, comment croire qu'il n’y ait en jeu que des bacilles

(4) Weit, Beitr. z. Entstehung u. Verbreitung der T., Tuberkulosis, 1911, f. 7.
(2) Annalrs de l'Institut Pasteur, t. XXVI, f. 7, p. 4917.
(3) Ibid. L. XXV, f. 9, 25 sept., 1914, p. 695.

LA VIRULENCE DES BACILLES TUBERCULEUX 891

virulents ? Les faits indiquent le rôle des bacilles atténués el
de cette sous-flore tuberculeuse que nous commençons à
étudier. Les conditions dans lesquelles se produit la sensibi-
lité à la tuberculine sont encore trop mal connues pour qu'on
ait Le droit de l’attribuer uniformément à la présence de bacilles
virulents el de lésions actives. Je me propose de continuer
l'étude de la flore tuberculeuse, non seulement dans les orga-
nismes, mais aussi dans le milieu extérieur, afin de contribuer
à la connaissance de cette immunité spontanée qu'il faudra
bien réussir un Jour à imiter par une méthode préventive,
applicable avant tout à l'enfance.

CONCLUSIONS.

Sur 35 cas de tuberculose articulaire, osseuse, cutanée, el
23 de tuberculose des ganglions du cou, il n'a pas été trouvé
un seul bacille du type bovin.

Eprouvés (cultures pures) sur des cobayes el des singes, Les
bacilles de ces tubereuloses ont montré autant de virulence
que des bacilles de erachats, et dans beaucoup de cas une
virulence plus grande.

La bénignité d’une maladie tuberculeuse n'est donc pas
l'effet nécessaire d’un bacille atténué.

Il existe des bacilles tuberculeux atténués. Ils sont très
rares. Jusqu'ici on les a trouvés dans des tuberculoses de la
peau.

La virulence des bacilles tuberculeux accomplit des oseilla-
tions, dans la nature, au cours des passages entre les orga-
nismes et les milieux extérieurs.

La gravité d’une infection tuberculeuse dépend (sans parler
de l’organisme) non seulement de la quantité, mais aussi de la
qualité des bacilles incorporés.

Dans de nombreux cas (presque le dixième), l'inoculation de
matière tuberculeuse reste négative, sans qu'on puisse altri-
buer l’insuccès à l'absence de bacilles, ni à la présence de
simples acido-résistants : il s’agit de bacilles a/fénués, soit d’em-
blée lors de leur pénétration dans l'organisme, soit dans l’orga-
nisme par le fait d’un travail de guérison.

La, flore tuberculeuse est plus nombreuse el plus variée

892 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

qu'on ne croil; nos méthodes d'isolement et de culture laissent
échapper beaucoup de bacilles.

Il existe une sous-flore tuberculeuse dont le rôle dans la
maladie tuberculeuse est encore indéterminé.

Ces faits expliquent les cas d'immunisation spontanée vis-
à-vis de la tuberculose et confirment la possibilité d’une vacci-
nation artificielle.

C'est M. Metchnikoff qui m'a engagé à suivre cette idée
directrice de l’immunisation spontanée et des vaccins naturels ;
qu'il me soit permis de lui exprimer mon affectueuse grati-
tude.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE

(CONORHINUS RUBROFASCIATUS)
INOCULABLE AU RAT ET A LA SOURIS (!)

par le Dr A. LAFONT

Médecin-major de {re classe des Troupes coloniales.

Travail du Bacteriological Laboratory (ile Maurice)
et du service de M. le professeur Mesnil, à l'Institut Pasteur.

(Avec: les PI. XIX et XX)

Le point de départ de cette étude est la recherche de l’arthro-
pode convoyeur de la « Fagellose » des petites euphorbes que
j'ai découverte à Maurice en 1909 (2).

Parmilesespècesd'hémiptèresrencontréesaux diversessaisons
sur les plantes parasitées (Nysius euphorbiæ, Dieuches humulis,
Lachnophorus quitulatus, Corizus hyalinus), se trouvaient de
grands hémiptères sombres (Lygéides), rappelant les Réduves.
On pouvait se demander si des Rédurves, à l’état de larves, de
nymphes ou d'adultes, ne se retrouveraient pas sur nos euphorbes
qu'elles auraient contaminées. Cette recherche a été négative
jusqu'ici, majs elle attira notre attention sur un hémiptère dont
nous apprimes l'existence dans le pays : grande punaise brune
s’attaquant à l'homme.

L'important mémoire de Chagas sur Conorhinus megistus et
son parasite nous fit rechercher avec soin l’espèce mauricienne.
Mais pendant une année (1909-1910), nous tentâmes vainement
de nous procurer un seul de ces insectes.

En mai 1910, nous pûmes nous procurer à prix d'argent un
premier spécimen. Comme nous l’avions pressent, il s'agissait

(1) Note préliminaire dans Comples rendus de la Soc. de Biologie, t. LXXII,

1912.
(2) Voir ces Annales, t. XXIV. 1910.

894 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

bien d'une Réduve d'assez grande dimension, appelée à Maurice
« Punaise maupin » (1).

La détermination faite par M. D'Emmerez, directeur du
Muséum de Port-Louis, fit reconnaître qu'on avait affaire au
Conorhinus rubrofasciatus (2).

Disons de suite que nous avons relrouvé cet hémiptère à la
Réunion, que nous en avons reçu des spécimens des Seychelles,
dus à l’obligeance de M. Lasnier, consul de France à Mahé, el
qu'on nous en à affirmé l'existence à Madagascar (littoral) et
dans l'archipel des Comores.

A la Réunion, l’insecte est désigné par altération sous Île
nom de « Punaise morpin ».

Nousétudierons plus loin la biologie du Conorhinus (+. p.915).

l. — FLAGELLÉS PARASITES DE LA RÉDUVE

L'intestin de cette Réduve renferme à Maurice, dans 80 p.100
des individus, et dans 50 p. 100 à la Réunion, des Flagellés
très polymorphes et souvent en nombre prodigieux.

ÎTUDE DU PARASITE A L'ÉTAT FRAIS.

Une goutte du contenu intestinal, mis entre lame-lamelle,
montre de nombreuses formes pâles, allongées, se déplaçant
parmi des cristaux blanchâtres ou des débris noirâtres à mou-
vements browniens.

1° Parmi ces formes, les unes ont le corps rigide et se
déplacent tout d’une pièce, le flagelle en avant; à première
vue, elles ressemblent à des Leptomonas. I y en a de toutes les
dimensions, de toutes les tailles, de très allongées, d'autres
très courtes, ou des formes arrondies, globuleuses, etc. Elles
paraissent souvent avoir un rudiment de membrane ondulante,
ce qui fait penser aux formes Crithidia. Un certain nombre
d’entre elles se déplacent en ondulant et sont semi-rigides.

(1) Cette appellation indigène « Punaise maupin » Où « morpin » provient du
Gouverneur français Maur, qui fut piqué par celle Réduve et eut un
anthrax à la suite de la piqüre.

(2) La détermination de M. D'Eumuerez a été confirmée par M. BEsnarp, du
Muséum, après entremise obligeante de M. Gravier, et par notre ami Edm.
BorpAGe, chef des Travaux à la Sorbonne.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 395

2° On rencontre aussi, tantôt très rares, tantôt très nom-
breuses, de petites formes se lortillant sur place comme des
vers, avec mouvements d'extension et de rétraction. Ge sont
des trypanosumes de pelites dimensions. Ces petits trypano-
somes évoluent sur place, comme s'ils étaient gênés par le
contenu intestinal ou comme s'ils sortaient d'un kyste; leurs
mouvements sont vifs, rapides. Ils semblent aussi se détendre
comme des ressorts pour traverser très vite Le champ du mi-
croscope.

3° On voit enfin des formes arrondies et des formes allon-
vées, immobiles ou à mouvements très lents. Des individus
séants étonnent par leur dimension ou par leur forme renflée,
en volute, en grenade, etc. Des amas considérables de formes
arrondies ou kysliques ne sont pas rares ; des groupements de
parasites enchevêtrés s’observent également dans la portion
inférieure de l'intestin.

La répartition exacte du parasite le long de la muqueuse
intestinale reste encore à préciser.

Ces diverses formes du parasite se retrouvent rarement dans
l'estomac de la Réduve, bien que j'aie pu y constater leur pré-
sence très nettement en plusieurs occasions et parfois en grand
nombre.

Contenu stomacal. — Le contenu de l'estomac de l'insecte se
présente très souvent comme une masse compacte, rougeûtre,
ayant la consistance du mastic, facilement énucléable et très
difficile à étaler.

En diluant ce mastic rougeàlre dans du sérum d'un animal
(cobaye, lapin, équidé, etc.), de préférence au sérum physio-
logique, on obtient d'excellents étalements, faciles à colorer,
où cristaux et globules sanguins sont parfois encore reconnais-
sables.

Certains estomacs renferment du sang déjà fhémolysé en
totalité ou en partie. Chez les larves, le sang est rapidement
hémolysé après le repas.

Contenu intestinal. — Le contenu de l'intestin varie selon la
partie que l'on examine.

4° La portion avoisinant l'estomac renferme quelquefois un
liquide rougeûtre, particularité qui facilite les examens à l'état
frais.

896 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

20 L'intestin moyen abrite le plus souvent un liquide noir
comme de l'encre et montre parfois, dans sa portion inférieure,
un renflement en ampoule, à contenu également noirâtre, plus
ou moins fluide, plus ou moins visqueux et fourmillant de
parasites plus ou moins mobiles.

3° L'intestin postérieur ou ampoule rectale tranche nette-
ment par son contenu assez abondant, à coloration jaunâtre dans
son ensemble, sur le reste de l'intestin.

Ce contenu, vu au microscope, est formé par des anilliers de
petits grains ordinairement blanchâtres, quelquefois colorés,
ressemblant à un feutrage serré de grains d’amidon, et qui sont
en réalité des cristaux d’urate de soude. Les Flagellés, toujours
beaucoup plus rares dans cetle portion terminale, se meuvent
avec lenteur ou se présentent sous la forme arrondie; mais il
m'est arrivé, en pressant l'extrémité de l'hémiptère pour ne
pas le sacrifier, d'obtenir une goutte de liquide jaunâtre et
sgrumeleux fourmillant de parasites. Notons ici que ces Flagellés
se colorent fort mal et paraissent en voie de destruction.

Sérosité de l’insecte. — Par contre, dans le sang ou sérosité
de l'insecte, recueilli après section d’un membre, d’une antenne
ou après décapitation, je n’ai jamais observé de Flagellés.

Les frottis frais des glandes salivaires se sont aussi montrés
négatifs.

Localisation du parasite. — Le parasite nous à paru localisé
surtout à l'intestin, très rare dans l'estomac et absent des
glandes salivaires, des tubes de Malpighi, des ovaires et de la
cavité générale. Nous avons cru en voir dans des froltis des
organes génitaux mâles, mais une trace infime du contenu intes-
tinal a pu venir fausser notre préparation et nous induire en
erreur.

Conservation entre lame-lamelle à l'état frais. — Sur des
préparations multiples, paraffinées ou non, nous avons pu
conserver et suivre le parasite quatre Jours environ. Nous
l’avons vu vivant et mobile, parfois ébauchant une division ou
formant des amas mobiles; mais bientôt les grandes formes
devenaient granuleuses, ralentissaient leurs mouvements ou
prenaient la forme globuleuse. Les microbes envahissaient les
lames, déterminant la mort, la dissolution ou l’enkystement
du parasite.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 897

ÉTUDE DU PARASITE APRÈS COLORATION.

Nous nous sommes servis de préférence du colorant de
Leishman, dont l’action est}plus rapide et'moins incertaine que
celle du Giemsa, surtout aux Colonies. Les parasites colorés ont
leur protoplasma variant de la teinte bleuâtre à la teinte lilas
ou rose violacé; ‘ces différences de tonalité peuvent tenir aux
temps différents de la coloration aussi bien qu’au degré d’aci-
dité ou d’alcalinité des dilutions du contenu intestinal de la
punaise maupin.

Le blépharoplaste où centrosome a pris habituellement la
teinte violet foncé, parfois virant au noir; le noyau s’est coloré
en rouge foncé ainsi que le fagelle. Nous notons ces teintes
une fois pour toutes.

Sur lames colorées, nous n'avons qu'exceptionnellement des
formes Leptomonas. Celles qu'à l'examen direct nous avions
prises pour des Leptomonas élaient en réalité des formes
Crithidia.

Nos lames renferment donc :

1° Des formes Crithidia, très variées :

2° Des formes 77ypanosoma ;

3° Des formes arrondies ou globuleuses ;

4° Des formes kystiques particulières, allongées ou fusi-
formes ;

5° Des formes variées en voie de division ;

6° Des formes anormales.

Nous allons les décrire successivement avec leurs dimensions
et leurs particularités.

Il suffira du reste d'examiner les planches jointes au mémoire
pour s’en faire une idée d'ensemble.

À. — Formes Crirminia. Elles présentent des formes courtes,
moyennes et longues.

a) Les formes courtes ou légèrement allongées varient en
longueur de 7,8 & à 9,8 y sans flagelle. Leur largeur est de
1,4 à 2,8 et dans les cas extrèmes assez rares 4,2 4; elles sont
alors renflées. Le flagelle libre atteint 4 à 5,2 &. La longueur
totale est ainsi de 11 à 15 2.

Le blépharoplaste va de 0,5 à 1,4 dans sa plus grande lon-

898 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

gueur et de 0,2 à 0,7 » dans sa plus grande épaisseur. C'est le
plus souvent un bâtonnet régulier, situé au-dessous du noyau
auquel il paraît presque adhérer en bien des cas: il peut aussi
s'étrangler à sa partie "moyenne. Mais ses dimensions sont par-
fois inappréciables tant il est petit; ou bien il devient globu-
leux, arrondi irrégulièrement. Cette dernière forme est plus
rare:

Le noyau, moins fortement coloré, se présente ici comme
une petite masse granuleuse, souvent compacte, tantôt placée
lransversalement, tantôt longitudinalement ou dans une orien-
talion intermédiaire.

En position transversale, le noyau peut occuper toute la
largeur du parasite; dans les autres sens, il laisse une marge
appréciable. Sa plus grande longueur va de 4,4 à 2,8 w et sa
largeur de 0,7 à 1,8.

La distance de la face postérieure du noyau à l'extrémité
postérieure du parasite oscille entre 1,4 et 3 w en moyenne,
pour atteindre quelquefois jusqu'à 5-6 v.

L'extrémité postérieure, variable de forme, peut être effilée,
obtuse où franchement arrondie.

Le protoplasma se prolonge presque toujours le long du
flagelle, en une mince membrane qui est rapportée, dans les
mensurations, au corps du parasite.

Quant au flagelle, vigoureusement marqué, il peut traverser
en partie le corps du flagellé pour venir, presque sans excep-
lion, border finalement sa face convexe.

La membrane ondulante, parfois à l'état d'ébauche, est quel-
quefois bien marquée, mais sans grandes ondulations (fig. 4 à
6'et fie. 15).

b) Les formes moyennes, rigides et de belle tenue, ne sont
pas toujours arquées. Elles atteignent 16 à 25 », flagelle com-
pris. Le flagelle oscille de 2 à 7. La largeur est de 1,4 à 2,8; le
blépharoplaste, long de 0,8 à 41,4, épais de 0,2 à 0,5, est orienté
transversalement et collé ou juxtaposé au noyau. Ce dernier
mesure de 1,2 à 2,8 en longueur et 4 à 1,4 en largeur. Il forme
une masse arrondie ou quadrangulaire. Sa distance à la partie
postérieure du parasite atteint de 3 à 7 w. Quand le noyau n’est
pas transversal, sa distance à l'une des faces latérales peut
alteindre 1 y.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE À LA SOURIS 899

Mêmes remarques que précédemment pour les extrémités, le
flagelle, la bande de protoplasma qui l'accompagne et la mem-
brane ondulante plus accentuée (fig. T à 13).

c) Les formes longues. — Ces formes, flagelle compris, vont
de 25 à 50 & et au delà et sont larges de 2 à 4,2. Rubannées
ou arquées, elles sont remarquables par le prolongement d’une
bande étroite de protoplasma accompagnant le flagelle ou par
les plissements de la membrane ondulante. On ne sait plus
parfois où se termine exactement le corps du parasite et les
mensurations en sont rendues difficiles. Cette bande proto-
plasmique peut en effet atteindre un développement de 10 à
12 # pour une largeur inférieure à 1 y.

La partie libre du flagelle donne une moyenne de 4,2 à 12,6.
Il y a même des cas où le flagelle libre parait atteindre le tiers
à la moilié du corps du parasite.

A peine esquissée dans les formes précédentes, la membrane
ondulante est ici parfois très nettement représentée.

Le blépharoplaste, collé où juxtaposé au noyau, en position
longitudinale ou oblique, est épaissi ou arrondi. Ses dimensions
varient de 0,7 à 1,4 et de 0,3 à 0,5 ».

Le noyau se présente en certains cas comme un bloc com-
pact, ovale ou quadrangulaire, parfois presque carré, placé en
lravers ou en long, remplissant ou non toute la largeur du
flagellé. Ses dimensions peuvent être les mêmes en tous les
sens. Le noyau varie de 1,4 à 2,8 et au delà en longueur et de
1,4 à 2,8 en largeur ou épaisseur. Il est aussi granuleux à l’in-
térieur ou sur les bords et l’on peut arriver parfois à compter à
l'intérieur les chromosomes, groupés irrégulièrement ou
reportés à sa périphérie. Selon sa position dans le parasite, il
peut laisser libre à son niveau une notable partie du proto-
plasma.

Dans ces grandes formes, on assiste à toutes les phases de
migration du noyau et du blépharoplaste, à la recherche de leur
position définitive. Aussi la distance du noyau à l'extrémité
postérieure varie de 6 à 18 # et au delà (fig. 14 et 16 à 22).

Cette extrémité postérieure, généralement arrondie ou obtuse,
peut s’effiler (fig. 22). Ceci est intéressant à noter en vue des
particularités que nous observerons par la suite dans les expé-
riences d'inoculations aux petits animaux.

900 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Fait remarquable : dans toutes ces formes que nous venons
de décrire, on n'observe presque pas de divisions.

Parmi les Crithidia, petites, moyennes ou grandes, on en
rencontre qui présentent des vacuoles plus ou moins nom-
breuses dans leur protoplasma, ce qui peut tenir à des inégalités
de coloration, à des phénomènes d'’altération ou de dégénéres-
cence.

Il se trouve aussi des formes, assez nombreuses, présentant
une strie blanche longitudinale, allant d’un bout à l’autre du
protoplasma, comme si le parasite allait se dédoubler. Sur nos
dessins, cette zone blanche tranche remarquablement sur l'azur
du protoplasma et atteint environ 1 y de largeur. Cette parti-
cularité nous a longtemps intrigué; nous verrons plus tard
quelle explication plausible on peut en donner (fig. 1, 5, 6,
11, 16).

B. — Formes Trypaxosoma. Nous avons noté plus haut les
caractères de ce trypanosome, ainsi que sa pelitesse et ses
variations à l’état frais.

Coloré, le parasite présente les caractéristiques suivantes :

1° Un très gros blépharoplaste violet foncé, arrondi ou très
légèrement allongé, occupant l'extrémité terminale ou subter-
minale postérieure ;

2° Un noyau volumineux, très allongé, le plus souvent forle-
ment coloré, placé longitudinalement et collé contre la face
concave du parasite, du moins dans la plupart des cas:

3° Une très courte distance, qui peut être inappréciable,
sépare l'extrémité postérieure du noyau du blépharoplaste.

La constance de ces trois caractères suffit, selon nous, à difté-
rencier ce petit trypanosome des espèces connues (fig. 24 et 26).

Le Jlagelle longe le plus souvent la face convexe du parasite
et présente plus ou moins d'ondulations. La membrane ondu-
lante qu'il borde se colore à peine et offre un espace blanchâtre
des plus nets.

Le trypanosome, dans son ensemble, estla plupart du temps
arqué, tordu, ployé ou recroquevillé sur lui-même.

Voici ses dimensions : sa longueur sans le flagelle est de 7 à
8 : pour les plus beaux individus; sa largeur est de 1,4 à 2,8.

Exceptionnellement on voit des spécimens ayant une lon-
sueur double.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 901

Le flagelle libre varie de 4 à 10 & et la longueur totale oscille
entre 9,7 et 21 avec moyenne de 14 à 15 y.

Blépharoplaste long de 0,7 à 1,4; large de 0,3 à 1.

Très rarement, il se trouve à quelques y de l’extrémité pos-
térieure et on peut alors penser à des formes de transition entre
les petites formes et les formes crithidia moyennes (fig. 27).

Noyau atteint de 2 à 4,2 » d’une part et 0,4 à 2 de l’autre.
Très rarement, sauf dans des formes mal différenciées encore,
ce noyau peut être globuleux ou en position légèrement oblique.
On peut mesurer entre les deux noyaux une distance de 0,2
à 0,7 te.

Cette même distance chez T7. Duttoni, espèce propre à la
souris, est remarquable par sa constance et mesure 6 à 7 y,
d’après Thiroux (1). J'ai pu du reste m'en rendre compte moi-
même sur une lame de sang de souris (provenance : Italie) de
la collection de M. Mesnil.

À son tour, la distance de la face postérieure du noyau à
l'extrémité postérieure varie de 0,3 à 7 y (formes de transition).
La moyenne est de 2 à 3.

De plus, appliqué contre la face concave ou très rapproché
d'elle, le noyau est distant de 0,7 à 2,8 de la face latérale con-
vexe ; il peut aussi, mais très rarement, se trouver au milieu du
parasite.

Toutes ces dimensions ont été notées avec le plus grand soin
pour bien caractériser ce trypanosome.

C. — Formes arronnies. Elles se présentent isolées, plus sou-
vent par deux, et aussi en amas immenses ; elles ressemblent à
première vue à des kystes. Mais je ne crois pas que ce soit là la
véritable interprétation à leur donner. Elles sont généralement
rondes, presque sphériques, ovalaires ou irrégulières.

Leurs dimensions en longueur vont de 4 & pour les plus
petites à 12-14 pour les plus grandes. La largeur varie de 2,8
à Tet9,8 avec un blépharoplaste long de 0,7 à 1,4; large de
0,2 à 0,7. Le noyau mesure dans un sens 1,4 à 2,8 et dans
l'autre 1 à 2 Le.

Quant à l'éloignement du noyau de la face postérieure, là où
il est possible de faire des mensurations, il est de 0,2 à 7 y.

(4) Tuimoux, Annales de l'Institut Pasteur, t. XXI, septembre 1905.

902 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Blépharoplaste et noyau occupent toutes les positions à l’inté-
rieur du corps (centrosome longitudinal, oblique, perpendicu-
laire).

Certains de ces petits parasites rappellent, mais de loin, cer-
taines formes de Leishinania.

Le flagelle souvent ne dépasse pas l’intérieur du parasite,
mais sa parlie libre, quand elle existe, atteint parfois de 4,4 à
30,8 , dimension extrème.

Parmi ces formes, les unes — les plus petites — s’observent
surtout dans l’ampoule rectale et paraissent être tout au moins
des formes de résistance ; les autres, plus grosses, plus ou moins
régulières et à court flagelle, se retrouvent dans la portion de
l'intestin rempli de matière noirâtre sise au-dessus du rectum ;
elles rappellent des formes grégariniennes (fig. 34 à 43).

D. — Kysres rusiroruEs. Ce sont les éléments les plus curieux
du contenu parasitaire intestinal de la punaise maupin.

A l'état frais, ces kystes sont masqués sur les préparations
par les nombreux pigments ou cristaux de l'intestin et n’atti-
rent pas l'attention.

Colorés, ils sont allongés, fusiformes, parcourus dans toute
la longueur par une strie claire qui peut occuper du 1/3 au 1/4
de la surface du kyste. Tantôt cette strie claire occupe la sur-
face du fuseau sans atteindre ses pôles, tantôtelle atteint l'une
ou l’autre extrémité. Dans ce cas, le kyste paraît fendu dans le
sens longitudinal, ou mieux entr'ouvert légèrement comme les
valves d’un coquillage.

Le kyste prend en général une coloration bleuàtre sur laquelle
tranche avec netteté la zone claire. Le parasite, quand on le
voit bien, occupe dans toute sa longueur un côté ou le milieu
du kyste et à l'aspect d’un fuseau aciculé à ses deux bouts. Un
gros noyau granuleux et un petit blépharoplaste arrondi ou
lHinéaire d’où part un très court flagelle occupent généralement
son extrémité antérieure et sont très visibles.

Interprétahions de la strie blanche longitudinale (formes eri-
thidia et éléments fusiformes).

Il peut s’agir d'une empreinte sur le corps du parasite pen-
dant sa libération du kyste ou mieux d’une zone de moindre
épaisseur autour de laquelle le flagellé se replierait comme
une charnière. Quoi qu'il en soit, cette particularité éveille

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 903

l'idée d’un rapprochement entre ces deux formes et fait penser
à une relation entre elles (fig. 1, 6, 11 et 46-49).

Peut-il y avoir deux parasites dans ces corps fusiformes? Il
m'a semblé une fois ou deux voir deux parasites, mais, étant
donnée la rareté du fait, je ne saurais émettre une affirmation
absolue à ce sujet (fig. 32).

Comme dimensions du kyste, j'ai noté 7 à 14 en longueur
et 1,4 à 5,6 en largeur. Je n'insisterai pas sur celles du parasite.

E. — FORMES VARTÉES EN VOIE DE DIVISION ET FORMES ANORMALES.
Ces formes, avons-nous dit plus haut, sont en général rares et
à division à peine ébauchée. Pourtant, sur nos lames, on
retrouve des petites formes arrondies, voisines de celles du
kala-azar ou plus grosses, généralement avec deux petits
noyaux et deux centrosomes. Les centrosomes occupent une
position inverse par rapport l’un à l’autre. Ces formes de divi-
sion ne sont pas rares sur nos préparations.

D’autres échantillons ont en plus deux très courts flagelles,
parallèles ou croisés, et souvent de dimension inégale, ne
dépassant pas le corps du parasite ou émergeant de quelques »
seulement. Avec deux centrosomes, on peut rencontrer un seul
noyau, volumineux, épaissi et irrégulier, formant bloc. Inver-
sement, il peut exister deux gros noyaux avec un seul cen-
trosome ovalaire donnant naissance à un flagelle unique ou à
deux flagelles inégaux (fig. 28-31).

Parmi les kystes fusiformes, j'ai noté une seule fois un gros
noyau quadrangulaire, et au-dessus deux pelits centrosomes
arrondis d’où partaient deux flagelles assez courts, dépassant le
kyste (fig. 32).

Dans les formes Crithidia, c'est surtout chez les formes
renflées, allongées ou géantes que l’on constale des phéno-
mènes de division. Parasites, noyaux, blépharoplastes attei-
enent alors des dimensions anormaies et présentent les mêmes
particularités que celles indiquées ei-dessus. En plus, on
observe un commencement de division du protoplasma, parfois
assez marqué (fig. 29-33).

Nous figurons sur nos dessins quelques-unes de ces formes
d'interprétation assez difficile ou formes de transition.

Etant donnée leur rareté, nous ne les avons pas mensurées,
mais elles atteignent souvent des dimensions considérables.

904 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ESssAIS DE CULTURE.

Ils ont été tentés, mais en trop petit nombre, sur milieu
intestinal de la punaise maupin, mis en pipettes, sur sérum
d'ânon et sur milieu de Nicolle.

Dans les deux premiers milieux, on conservait les parasites
quelques jours vivants et mobiles, et l’on observait vers la
quarante-huitième heure de toutes petites formes en grain
d'orge avec flagelle et assez mobiles.

En milieu de Nicolle, vingt-quatre heures après, j'ai retrouvé
des petites formes libres, analogues à celles vues à l’intérieur
des kystes fusiformes, avec gros noyau débordant le prolo-
plasma à la coloration, centrosome volumineux pour leur taille
et court flagelle, rappelant les formes leptomonas des cultures
(fig. 64-65). Ces formes se voyaient aussi en amas, en rosaces,
avec flagelles à l'extérieur. J'ai pu les suivre plusieurs Jours.
Les grosses formes, au contraire, se mettaient en boule ou
devenaient granuleuses. Malheureusement toutes nos cultures
étaient envahies rapidement par les bactéries, dont la présence
est fréquente, sinon constante, dans le contenu intestinal des
punaises maupin ; et, au bout de huit jours, les parasites
étaient morts. Le temps nous a manqué à Maurice pour procéder
à un grand nombre d’ensemencements.

Il. — EXPÉRIENCES DE TRANSMISSION AUX MAMMIFÈRES-.
INFECTION SANGUINE DE LA SOURIS

Le Conorhinus rubrofasciatus S'attaquant à l'homme et aux
animaux, se nourrissant de leur sang et présentant souvent
des trypanosomides dans son intestin, il était indiqué de
rechercher si ceux-ci n'étaient pas transmissibles aux animaux
de laboratoire.

Nous avons donc institué à Maurice de nombreux essais de
transmission par piqüres, injections sous-cutanées et intrapéri-
tonéales, tenté les passages d’un animal à l’autre, cherché à
établir si l'on se trouvait en présence d'un parasite du sang
des mammifères.

Voici la marche et les résultats de ces différents essais.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 905

A. — Essais DE CONTAMINATION PAR PIQÜRES DE L'INSECTE.

a) Chez le Macacus cynomolqus (1), dans tous les cas, les
poils de l'animal étaient tondus ou rasés en divers endroits,
notamment sur le dos, pour faciliter les piqûres. Un singe
adulte immobilisé fut soumis à diverses reprises à des piqüres
répétées de plusieurs réduves parasitées. Les piqûres, obtenues
non sans peine, se sont montrées douloureuses au moment de
la pénétration de la trompe, mais sans réaction inflammatoire
concomitante. Aucune transmission de parasite ne fut obtenue.

b) Chez les cobayes. Douze cobayes, d'âge variant de un Jour
à plusieurs mois, furent exposés chaque nuit dans d’étroites
corbeilles, entourées de mousseline à mailles fines solidement
lixée, aux piqûres de très nombreuses réduves, provenant de
tous les points du littoral et souvent renouvelées. Chaque
matin les Conorhinus gonflés de sang à éclater étaient mis
de côté. Certains cobayes n'ont été piqués qu'un jour, d’autres
durant plusieurs semaines, mais toujours par un grandnombre
d'insectes.

Chez cinq d’entre eux, l'expérience s'est poursuivie jusqu à
cinq mois et demi.

Les animaux réagissaient vivement à la piqüre, criaient ou
s’affolaient. Certaines piqûres provoquaient des démangeai-
sons et les cobayes se grattaient alors avec acharnement. Il y
eut ainsi quelques excoriations à l'endroit de la piqûre, provo-
quées par le grattage.

La piqûre ne laissait pas de traces, sauf parfois un amai-
grissement passager.

Jamais nous n'avons observé de trypanosomes dans le sang
périphérique. .

Si nos cobayes ont été infectés à un moment donné de l’ex-
périence, l'infection a dû ètre tout à fait passagère. Les
femelles pleines, au nombre de 3, ont pu conduire à terme leur
sestation et les petits ont tous vécu. Or, dans les trypanoso-
miases, au début de l'infection, l'avortement est souvent de
règle; nous l’observions fréquemment à Maurice chez les

(1) Cette espèce existe à l'état sauvage à Maurice.

906 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

génisses surrées. Il peut se faire que le cobaye n'ait pas été
l'animal de choix, mais c'est celui que nous avions le plus faci-
lement à notre disposition.

B. —— KssaIS DE CONTAMINATION PAR INJECTION.

a) Des essais de contamination par injection sous-cutanée on!
porté sur le rat, le cobaye, le lapin, la mangouste et le
Macacus cynomolqus. Us ont tous été négatifs, malgré les fortes
doses injectées de contenu intestinal des Punaises parasilées.
Par injection #ntrapéritonéale, les résultats ont été négatifs chez
la musaraigne, le cobaye, le lapin, le tanrec.

Chez un Macacus cynomolqus, dix jours après (1) une injec-
Lion intrapéritonéale massive (injection du contenu imtestinal de
cinq Réduves parasitées), j'ai vu wne seule fois un grand trypa-
nosome à mouvements très rapides, progressant par ondulations
dans le sang périphérique. J'ai pu le suivre trois heures au mi-
croscope, pensant qu'il s'agissait d'un parasite en voie de divi-
sion. Mais à l'étalement du sang de cette même lame, après colo-
ration, je n'ai plus rien retrouvé. En même temps, je notais une
mononucléose accentuée, atteignant T1 p. 100 avec 29 p. 100 de
erands mononucléaires et 4,5 p. 100 d'éosinophiles.

De nombreux examens par la suite furent constamment
négatifs, ainsi que l’inoculation à un rat, à deux cobayes et une
mangouste de un centimètre cube par animal du sang parasité
du singe. Le singe, plusieurs mois après, était en excellente
santé, n'ayant jamais donné signe de dépérissement.

b) Inoculation intrapérilonéale au rat et à la souris. Nous
avons pensé qu'en nous adressant à des animaux plus petits
rats, souris, et qu'en les injectant à dose massive, on arriverait
peut-être à vaincre leur résistance à l'infection. C'est en effet
chez ces deux espèces que l’inoculation s'est montrée positive.

2. Chez le rat.Nous avons utilisé de gros rats adultes (Mus
rattus et decumanus) tenus longtemps en observation au labo-
ratoire et sûrement non infectés de 7». Lerist.

(1) Dans une note au Bullelin de la Sociélé médicale de l'Ile Maurice,
3e série, n° 23, 1911, nous avons indiqué par erreur le passage du parasite
dans le sang du Maucucus cynomolgus, 30 heures après l'injection, au lieu de
10 jours.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 907

Après injection du contenu total ou partiel de l'intestin du
Réduvide parasité dans le péritoine du rat, on observait de
quelques heures (3-4) à 24-30 heures, la présence du parasite
vivant et mobile dans la sérosité péritonéale en même temps
que d’impressionnants phénomènes de phagocytose.

Aux prises successives, on voyait les grands et moyens
mononucléaires surtout, les polynucléaires en moins grand
nombre, se gorger de grosses granulations noirâtres ou bru-
nâtres, masquant leur noyau à l’état frais. Cette phagocytose
intensive rappelait celle provoquée expérimentalement par
l'injection de carmin (fig. 50).

Les parasites (Crithidia où Trypanosoma)semblaients adapter
à ce milieu; mais à mesure que les particules noirâtres dispa-
raissaient à l'intérieur des leucocytes, ils perdaient de leur
mobilité ou se mettaient en boule. Vers la 24-30° heure, peu
d'entre eux étaient vivants ; le plus grand nombre était déformé
ou détruit. Ceux qui s’enkystaient perdaient parfois leur
flagelle et prenaient la grosseur d’un globule sanguin avec
phénomènes de division nucléaire se poursuivant à l’intérieur,
si bien qu'on pouvait se demander si on ne se trouvait pas en
présence d’un nouveau parasile du sang; mais des formes de
transition et parfois la persistance d’un court flagelle mon-
lraient qu'on avait bien affaire au parasite initial.

Nous n'avons pas figuré ces formes enkystées sur nos
dessins.

Pour n'y plus revenir, notons iei que ces mêmes phénomènes
de phagocytose se sont montrés chez la souris avec peut-être
plus d'intensité encore, car, à peine quelques heures après,
nous retrouvions des leucocytes mélanifères dans la circulation
sanguine. Le parasite de la Réduve à été retrouvé dans le péri-
toine comme chez le ral, mais jusqu'à la 58° heure, le plus
souvent déformé, en boule, élargi, en cerf-volant ou enkysté,
présentant souvent deux noyaux, dont l'un la plupart du temps
éclate en semis de granules.

Après coloration, les formes trypanosomiennes (fig. 52-58)
ont mesuré, flagelle compris, 14 à 21 avec un noyau longi-
tudinal, un protoplasma de dimension ordinaire et un blépha-
roplaste parfois très petil, arrondi, assez rapproché du noyau,
el presque terminal. L'extrémilé postérieure paraissait aiguë

908 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

ou arrondie. On voyait aussi des parasites à diverses étapes de
leur évolution d’après les positions respectives de leur blépha-
roplaste et de leur noyau.

Quant aux Crithidia, moins nombreuses, elles se présen-
taient avec leurs caractères habituels et une extrémité posté-
rieure élargie ou déformée. Il nous a semblé que ces formes
étaient plus facilement altérables au suc péritonéal que les
formes précédentes (fig. 58).

Dans le sang périphérique, chez le rat adulte, nous n'avons
pas réussi à noter le passage des parasites, soit que ces formes
aient été très rares ou qu elles aient élé détruites rapidement
après leur passage dans la grande circulation.

Tous les rats adultes ont succombé par la suite à des causes
indéterminées : captivité, maladies parasitaires, surtout ténias
dont le foie était farci (kystes) et la lumière de l'intestin
obstruée (adultes).

8. Chez la souris (Mus musculus). Nous citerons les résultats
obtenus à la Réunion, à Cilaos (1), avec les parasites d'une
Réduve du littoral dont l'intestin renfermait les mèmes formes
qu'à Maurice (Crithidia, Try panosoma).

Nous donnerons ensuite les résultats plus importants
obtenus à Maurice, fin 1910.

Souris de Cilaos. — Elle reçut dans le péritoine le quart du
contenu intestinal d’une Réduve, dilué dans du sérum physio-
logique. Les trypan. de la Punaise étaient très petits et très
mobiles. Six heures après l'injection, les trypan. avaient déjà
passé dans le sang. J'ai pu les suivre 25 à 30 heures. L'expé-
rience s'est arrêlée là ; la souris ayant succombé à ce moment,
aucun passage n'a pu être fait.

Colorés, les trypan. du sang atteignaient une longueur
totale de 11 à 24 y, le flagelle libre mesurant de 1,4 à 8,4. La
largeur allait de 1,4 à 3,8 avec une moyenne de 2 w.

Le blépharoplaste : 0,7 à 1,4 longueur; 0,5 à 0,7 épaisseur.

Le noyau : 1,4 à 2,8 longueur; 0,7 à 2,8 épaisseur.

La distance du centrosome au bord postérieur du noyau
variait de 0,7 à 2,8 et du noyau à l'extrémité postérieure de
21à 16 LL.

(1) Nous avons séjourné à Cilaos (Réunion), après notre départ de Maurice,
de février à avril 1911. Notre expérience n’a pu avoir lieu qu'en mars-avril.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 909

Cette extrémité elle-même était parfois très effilée et la
membrane ondulante à peine ou largement plissée (fig. 59-63).

Après la mort de la souris, les parasites étaient déjà très
rares où en voie de dissolution.

Souris de Maurice. — Nous avons eu une difficulté extrême
à nous procurer souris et jeunes rats et en nombre très res-
treint, en raison de la peste bubonique qui sévit à l’état endé-
mique à Maurice, avec poussées périodiques épidémiques
de fin août à mars chaque année. Néanmoins nos essais d'ino-
culation ont donné des résultats intéressants. Cinq souris
injectées par la voie péritonéale ont présenté une infection
très légère, légère ou sévère. Le flagellé de la Réduve a passé
dans le sang 30 heures, 48 heures, 3 jours et 7 jours après
l'inoculation.

Dans le sang, à l’état frais, ila pris la forme d'un trypan.
pas très mobile au début, se déplaçant par grandes ondula-
tions. Ce trypan., d'assez grandes dimensions (trois à quatre
fois celles des petits trypan. de l'intestin de la Réduve, du
péritoine du rat et du sang périphérique de la souris de
Cilaos), présentait souvent une extrémité postérieure pointue
ressemblant à un bec effilé. On le rencontrait en pelit nombre,
un pour 7,8 ou 50 champs de microscope (fig. 66, 68, 69, 70,
MS 510, 718 )80;81);

L'infection sanguine de la souris, tantôt passagère, tantôt
prolongée, a varié de un jour à huit jours pleins. Sauf dans un
cas où la souris est morte accidentellement au cinquième jour
de son infection, les parasites ont généralement disparu du
sang au bout de quelques jours, après une période d'augmen-
tation, puis de raréfaction. Mais quatre de ces souris infectées
ont suecombé de un jour à un mois après la disparition des
parasites.

A noter que le trypan. augmentait de mobilité et de dimen-
sions avec la durée de l'infection.

Les plus beaux échantillons ont été obtenus, soit avec le
sang, soit avec les frottis d’organe (foie, reins), notamment
chez la souris 5 (mort accidentelle au 5° jour de l'infection).

Nous avons reproduit de préférence sur la planche IT (fig.
66 à 82) les trypan. du sang et des organes de cette souris 5.

x
B

Les parasites, moins développés au début (30° à 50° heure), ont

910 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

augmenté de taille et de volume et atteint leur plein dévelop-
pement vers la 130° heure après l’inoculation.

Le parasite est remarquable par ses dimensions, par la
courte distance séparant le noyau du centrosome, la position
généralement transversale du noyau, enfin par la mem-
brane ondulante vigoureusement marquée et remarquablement
plissée.

La longueur totale a varié de 28 à 42 p, flagelle compris.

Le flagelle libre de 4,2 à 9,8 est presque toujours terminé
par un léger renflement à son extrémité libre. Nous n'insiste-
rons pas sur ce renflement qui peut tenir à l'intensité ou aux
dépôts du colorant, mais qu'on retrouve aussi sur quelques
trypan. colorés de la souris de Cilaos, sans l'avoir Jamais
rencontré chez les parasites polymorphes de la Réduve, bien
que nous nous soyons servis du même colorant.

Sa largeur, au niveau du noyau, de 1,4 à 4,2 pu, est en
moyenne de 2,8 et dans sa plus grande largeur de 4,2.

Le Blépharoplaste, long de 0,4 à 1 y, épais de 0,4 à 0,7, est
tantôt linéaire, tantôt arrondi, en virgule, parfois triangulaire
eten positions diverses par rapport au noyau, qu'il peut tou-
cher presque. Il parait entouré souvent d’une zone claire. Le
flagelle qui en part présente parfois une sorte de fuseau, ouvert
en éventail et regardant le blépharoplaste (fig. 70, 72, 79, 82).

Le Noyau à 1,4 à 2,8 y de longueur sur 0,7 à 2,1 de largeur.
Ovalaire ou rectangulaire, le plus souvent en position trans-
versale, 11 occupe toute la largeur du parasite ou sa plus
grande partie.

La position oblique, aperçue figures 73 et 78, est certaine-
ment une forme de transition.

Le noyau est granuleux ou compaet, avec d'ordinaire dis-
persion des granules à la périphérie, mais on peut aussi les
voir agglomérés au centre.

La distance du blépharoplaste au noyau oscille entre 1,4 et
3,5 &, sauf dans les figures 67, 69, 73 où elle est inappréciable.
Celle du blépharoplaste à l'extrémité postérieure varie de 2,8
à 9,6 et 14 y dans les cas extrêmes ; celle du noyau va de 4,6
à 12,6 et 17 y (cas extrèmes).

Le noyau est séparé de la face latérale correspondante par
O,Tàadéu.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 911

La membrane ondulante présente une zone blanche longitu-
dinale avec # ou 7 ondulations où le flagelle bordant ressort
avec un grande nelleté.

Quant à l'extrémité postérieure, allongée en bec acéré, elle
peut s’aplalir, se renfler et se montrer plus ou moins obtuse
(fig. 72,74, 82).

Particularité remarquable, nous n'avons jamais réussi à voir
des formes de division, même ébauchées, mais nous attirons
l'attention sur les belles formes élargies (fig. 72, 77, 82) qui
semblent proches de la division.

Nous nous contentons d'ajouter pour mémoire que des ten-
tatives d’inoculation de ce parasite de la souris à de très Jeunes
Mus rattus ont échoué. Ces rats ont succombé assez rapidement
après avoir présenté une infection sanguine à 77. Lewis qu'ils
n'avaient pas au moment de linoculation. Mais le temps
d'observation qui avait précédé cette inoculation avait été trop
court.

III — DISCUSSION DES RÉSULTATS

Après avoir étudié le parasite dans l'intestin du Réduvide et
ses formes de passage dans le péritoine du rat et la circulation
sanguine de la souris, plusieurs questions se posent :

1. Sommes-nous en présence d’un seul parasite ou de plu-
sieurs?

2. N'avons-nous pas eu affaire à de petits animaux sauvages,
déjà parasités ?

3. Les Réduves n'héhergeaient-elles pas les trypan. d’un
autre animal ?

4. S'agit-il d'un parasite déjà connu el comment le classer?

1. — Au premier abord, le polymorphisme des formes flagel-
lées de l'intestin de la Réduve est déconcertant, mais un fail
demeure cependant : c'est la constance de ces formes chez les
nombreux Conorhinus rubrofasciatus examinés par nous. Sur
toutes nos lames, on retrouve les diverses formes crithidiennes,
{trypanosomiennes, arrondies ou fusiformes. Sans doule il y a
parfois prédominance ou balancement du nombre de l’une ou
de l’autre. On a done pu saisir sur le fait un mème parasite à
diverses phases de son évolution.

942 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Bien plus, en consultant nos planches, on retrouvera aisé-
ment entre les Crithidia et les trypan. des formes intermédiaires
assez nombreuses. On constate tous les degrés de la rétrograda-
tion du blépharoplaste qui devient postérieur au noyau.

Les trypan. de diverses dimensions que nous avons repro-
duits semblent attester l’évolution terminale des formes «eri-
thidia » correspondantes.

2. — Les pelits animaux (rats el souris) n'avaient-ils pas de
parasites préexistants dans leur sang?

Une erreur de ce genre a failli se produire chez les tout
jeunes rats qui ont présenté, au cours de l'expérience, une
infection due au Tr. Lewisi. Pour les gros rats, il s'agissait
de sujets en observation depuis plusieurs semaines au Labora-
toire, examinés souvent et reconnus indemnes de tout para-
site; là les observations sont valables.

Pour les souris, les examens aussi ont élé négatifs avant
toute expérience, et de plus, j'ajouterai que, tant à Maurice qu'à
la Réunion, pendant trois années et demie passées dans ces
deux pays, je n'ai jamais rencontré un seul trypanosome chez
plusieurs centaines de sujets examinés qui m'ont servi : à la
Réunion, comme contrôle des souches de vaccin anticharbon-
neux, et à Maurice pour l'étude de la peste, de la méningite
cérébro-spinale et des pneumococcies.

Du reste, il est aisé de voir que lrypanosomes et Crithidia
du péritoine des gros rats et trypanosomes du sang de la
souris de Cilaos se ressemblent; qu'ils rappellent d’une part
les petits trypanosomes de l'intestin de la Réduve et de l’autre
les formes Crithidia petites et moyennes qui en seraient
l’ébauche. Chez les souris de Cilaos et chez les gros rats, on
peut remarquer aussi que les parasites ont été un peu altérés
par l'adaptation à des milieux nouveaux (sang, péritoine),
sans perdre toutefois leurs caractères essentiels (position du
noyau et du blépharoplaste).

Ce qui démontre bien qu'il y a de la part de l'animal inoculé
action modificatrice, c'est le grand nombre de parasites détruits
dans les deux cas dès les premières heures qui ont suivi l’ino-
culation dans le péritoine.

On peut nous objecter encore que l'identité des petits trypa-
nosomes (intestin de la Réduve, du péritoine du gros rat et du

w à

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 913

sang de la souris de Cilaos) n'est pas toujours complète. Le
blépharoplaste, dans les deux derniers cas, n’est ni très gros,
ni terminal; le noyau n’est pas toujours allongé; l'extrémité
postérieure est le plus souvent effilée : tout cela est vrai; mais
déjà pour certains trypanosomes de la punaise nous obser-
vons ces particularités. Entre les petits trypanosomes de l’in-
secte, à gros blépharoplaste terminal et globuleux, el ceux
observés dans nos transmissions chez les petits animaux, on
peut trouver toutes les formes intermédiaires.

Une expérience parle en faveur de l'unité du parasite, malgré
son polymorphisme. En partant des œufs de Réduve, obtenus au
laboratoire, nous avons eu des éclosions nombreuses. Jamais
les larves, isolées et examinées de un jour à quelques semaines
après la naissance, n'ont montré de parasites dans leur tube
intestinal. On peut affirmer que les éclosions récentes sont
indemnes de tout parasite.

Ces larves vierges sont mises à piquer la souris 5, en pleine
poussée trypanosomique, pendant vingt-quatre heures. Retirées
et isolées, elles sont gonflées de sang déjà hémolysé et couleur
rouge cerise par transparence à travers le corps. En les reti-
rant, quelques-unes éclalent comme des groseilles trop mûres
et montrent, entre lame et lamelle, des flagellés, nageant dans
le sang hémolysé et ressemblant à des formes en tétard; les
jours suivants, les parasites s’allongent et augmentent de
volume. Dix jours après, je retrouve des formes /eptomonas
rares, des crithidia variées, des ébauches de trypanosomes et
des formes arrondies et fusiformes. Il s'agissait bien là des
grands trypanosomes de la souris, revenus aux formes crithidia
et à leur polymorphisme habituel dans l'estomac et l'intestin
d'une larve vierge de Conorhinus, habitat normal.

Je n'ai pu suivre cette évolution heure par heure; mais ce
que j'ai constaté est nettement en faveur de l'unité du parasite.
Une étude plus approfondie mettra sans doule en évidence les
anneaux qui peuvent manquer encore.

3. Nos Réduves n'hébergeaient-elles pas les trypanosomes de
quelque mammifère?

Cette objection peut se soutenir, les Réduves mâles et
femelles ayant été parfois capturées dans des parcs à bœufs,
renfermant des animaux surrés et nous arrivant gorgés du

914 ANNALES DE L'INSTIEUT PASPEUR

sang de ces animaux. Mais l'expérience suivante réduit à
néant celle objection. Nous avons en effet soumis un cobaye
surré (cobaye souche surra), à nombreux trypanosomes dans
le sang périphérique, aux piqûres de larves de Conorhinus
d'éclosion récente et #rdemnes de tout parasite.

Aux examens successifs des larves gorgées de sang, on ne
retrouve plus de trypanosomes, mais seulement des débris de
flagelles et des noyaux de parasites.

A la Réunion, où le surra n'existe pas jusqu'ici, les Rédu-
vides des parcs à bœufs n’en hébergent pas moins des flagellés.

4. — Comparaison du parasite de la Réduve avec les try-
panosomes voisins. — Ni l'expérience précédente démontre
bien qu'il s'agit d'un trypan. différent de celui du Surra, ce
trypan. de la Réduve et ses formes « crithidia » n’ont pas
moins des rapports, des points de ressemblance avec certains
trypanosomes, notamment avec le Lewisi du rat et de la souris.
Ce sont d’abord la pelitesse du parasite dans l'intestin de la
punaise et le péritoine du rat ainsi que sa forme tourmentée.

La ressemblance est surtout grande entre les petites formes
lrypanosomes, qui font partie de l'évolution du 77. Lewisi chez
la puce du rat (Swellengrebel et Strickland) et que Delanoë a
retrouvées dans les cultures, et le trypan. de l'intestin de la
Réduve : petite taille; gros blépharoplaste terminal.

A côté de certaines ressemblances entre les formes de notre
flagellé chez la souris et les 7r. Duttoni et Lervisi, il y à de
nolables différences. La distance qui sépare le blépharoplaste
du noyau chez les Tr. Duttoni et Lewisi du sang des rongeurs
est constamment de 6-7 u; cette distance est deux à trois fors
supérieure à celle qu'on observe chez notre parasite.

Par la variété de ses formes, le parasite de la Réduve rap-
pelle le polymorphisme si remarquable des Leptomonas des
mouches du Congo et du Soudan, décrits par Roubaud; par les
formes elles-mêmes, il rappelle encore mieux le 7>. drosophilæ
de Chatton et Alilaire, réétudié récemment par Chatton et
À. Leger et aussi le 7rypan. Grayi Novy, tel que l’ont fait con-
naître Minchin et Roubaud. Nos formes peuvent être classées
dans les Cystotrypanosomes de Roubaud (trypanosomes à
reproduction kystique).

De même, beaucoup de nos formes : formes Crithidia, formes

TRYPANOSOMIDE D UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 915

rondes et ovalaires, rappellent les formes correspondantes de
Conorhinus megistus infectés de Schizotrypanum Cruzt, à tel
point qu'on les croirait parfois calquées les unes sur les autres.

De tout ce qui précède, malgré des concordances parfois
curieuses avec les espèces précitées, en tenant compte des
progrès récents de nos connaissances (Chatton et ses collaho-
rateurs, Roubaud, etc.) sur les formes de passage des Zepto-
monas où Crithidia aux trypanosomes; de l'existence de ces
derniers chez des insectes non piqueurs ainsi que de leur
polymorphisme, — nous sommes en droit de conclure que Île
parasile de notre Réduvide, Conorhinus rubrofasciatus, est un
parasite nouveau, nettement différencié, caractérisé par son
polymorphisme remarquable, par les dimensions de son blé-
pharoplaste et ses rapports de posilion avec le noyau chez le
parasite adulte; y à lieu de classer, provisoirement du moins,
sous un même nom, toutes les formes de l'intestin de la
Réduve et celles des expériences de transmission au gros ral
et aux souris.

Nous lui maintenons donc le nom de 7rypanosoma Boyler (1)
que nous lui avions déjà donné à Maurice.

Nous pensons que des études ultérieures permeltront de
préciser les points encore obscurs du développement de ce
nouveau parasite. Pour les élucider, des envois pourront être
faits en France, à l'Institut Pasteur. Des Conorhinus ont
déjà pu y parvenir vivants; malheureusement, ils n'étaient pas
infectés (2). :

IV. — BIOLOGIE DU CONORHINUS

Conorhinus rubrofasciatus est un bel insecte d'aspect brun
ferrugineux, avec stries transversales couleur de rouille. Ces
stries parallèles, semi-arquées et à concavilé supérieure, par-
courent l'abdomen. Elles sont recouvertes par les ailes et
n'apparaissent libres que sur les bords.

(1) Ce nom est donné au parasite en souvenir de la fondation du Bacterio-
logical Laboratory fin 1908, à Maurice, par le Gouverneur Cavendish Bovle,
fondation réalisée avant tout avec l'important appui de la Station agrono-
mique et les ressources financières des Planteurs Mauriciens.

(2) Ces envois sont dus à l'obligeance de M'° Athénas, de M. le médecin-
major Vincent, chef du laboratoire de bactériologie, et de M. Russel, de
3edfort. Nous tenons à leur adresser {ous nos remerciements.

916 ANNALES DE L'INSTITUT -PASTEUR

Très bombé après la succion, le corps est au contraire forte-
ment déprimé et concave en dessus à l'état de vacuité.

L'hémiptère adulte mesure en moyenne 2 cm. 2 à 2 em. 5. Il
atteint 7 à 10 millimètres de largeur dans les deux sexes, qui
sont facilement reconnaissables. La femelle, en effet, a son
extrémité postérieure pointue et le mâle cette même extré-
mité arrondie.

Le mâle est aussi un peu plus petit que la femelle. Les
antennes*ont 8 à 9 millimètres de long. On rencontre assez
fréquemment l'insecte à l’élat de nymphes ou de larves
dépourvues d'ailes.

Hasirar. Mœurs (1). — Cet insecte se rencontre principale-
ment dans les maisons habitées par la classe la plus pauvre de
la population : engagés indiens, créoles de couleur, villages
d'indiens libres habitant des paillotes ou des campements
recouverts de paille sèche. On le trouve jusque dans les pail-
lasses, bourrées de feuilles de maïs et d'herbes desséchées,
ainsi que sous les cadres grossiers et en cordes de cocos, qui
composent la literie. Il se réfugie aussi dans les fissures des
parois de la case, la toiture en chaume, les cuisines, dans les
étables rustiques, les parcs à bœufs, les porcheries, les écuries
à cobayes. Il n’est pas rare de le rencontrer dans les vieilles
maisons en bois aux cloisons et aux parquets disjoints, même
lorsque ces maisons sont restées inhabitées un certain temps,
un hivernage, par exemple.

Le Conorhinus fuit la lumière du jour et se dissimule dans
les coins obscurs, où il reste immobile le jour pour ne piquer
que la nuit et dans le plus grand silence. Au moindre bruit, à
la moindre lumière. il s'enfuit et se cache. Cependant des plan-

(1) À Maurice, il s'élend à tout le littoral en général excessivement palu-
déen : Rivière-noire (Yémen, Case noyale, la Saline, Morne Brabant, Tamarin,
Barachoa, Lamivoie); Médine, Plaines Meignien, Petite Rivière, Choisy, Trou
d’eau douce, Pamplemousse (Beau Plan, Labourdonnais, The Mount), Poudre
d'Or, Camp de Masque, Rivière claire, Savannah, Beauchamps, Queen Vic-
toria, Union Vale, etc. Mais on le retrouve aussi, quoique plus rarement,
à Coromandel, Rose Hill, Réduit, Quatre-Bornes et jusqu'à Curepipe (excep-
tionnel), c'est-à-dire de 50 à 500 mètres d'altitude.

A la Réunion. Son habitat est aussi de préférence le littoral. J'ai pu m'en
procurer provenant de Saint-Louis, la Possession, Saint-Denis, le Chaudron,
Champ-Borne.

Aux Seychelles, nous n'avons aucun renseignement bien précis sur les con-
ditions de son habitat.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 917

teurs ont pu capturer le soir des adultes, attirés par un éclai-
rage éclatant, mais c’est là un fait exceptionnel.

Des indigènes m'ont affirmé qu'on le rencontrait quelque-
fois, à divers élats de son développement ou à l’état adulte,
sur les tiges de maïs planté aux alentours de la case, et se gor-
geant des malériaux sucrés de la plante. De là, il pénétrerait,
d’après eux, dans l'habitation. Je n'ai pu vérifier ce fait, mais
il est curieux toutefois de constater la prédilection d'habitat de
cet insecte pour les feuilles sèches du maïs servant à la confec-
tion des paillasses à Maurice, dans les groupements de tra-
vailleurs.

Ces Réduves, à l'instar du Reduvius personatus européen,
sucent aussi les punaises des lits (Acanthia lectularia) fré-
quentes dans les mêmes habitations. Elles les transpercent
d'un seul coup de leur trompe courte et robuste et les vident
en un elin d'œil.

J'ai mème essayé quelque temps avec succès de nourrir nos
Réduves en leur donnant des punaises de lit. Des indigènes les
conservaient parfois en leur donnant de la bouse de vache
desséchée comme nourriture. Mais la nourriture de choix est
certainement le sang de l’homme et des animaux, ainsi qu'on
le constate par la dissection de l’insecte.

A certaines périodes, la punaise Maupin dégage une odeur
aigrelelte et pénétrante de vinaigre ou d'acide acétique, et non
pas une odeur nauséabonde comme l'indiquent les indigènes.

J'ai observé fréquemment la mue de celte Réduve, qui est une
véritable crise où je l'ai vue succomber souvent. En cet état,
elle devient rougeàtre et reste inerte de longues heures.

Nurrrriox. Excrérion. — Les adultes des deux sexes et les
nymphes capturées ont toujours du sang dans l'estomac en plus
ou moins grande abondance, hémolysé ou en masse compacte ;
nous l’avons déjà noté.

Quand on met les Réduves piquer un animal, on remarque
que les nymphes à corselet étroit se gonflent de sang avec plus
d’avidité que les adultes et sont gonflées à éclater.

Grosses nymphes et adultes, surtout les femelles, peuvent
absorber environ un centimètre cube de sang et au delà. Nous
en avons vu rester dures comme du bois après un seul repas,ne
plus vouloir piquer et mourir au bout de quinze jours. Ils

918 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

peuvent ainsi rester à jeun deux à quatre semaines ; de là, la
possibilité de les recevoir vivants en Europe, mais habituelle-
ment ces Réduves ont un besoin impérieur de piquer tous les
quatre ou cing jours, surtout les femelles lorsqu'elles pondent.
Les intervalles entre les repas peuvent varier de trois à dix
jours et plus. Le sang dans l'estomac s’hémolyse assez vite en
deux à trois jours ou reste dur, compact un temps indéfini, les
insectes pouvant succomber sans parvenir à digérer cette
masse à consistance de mastic. Nos constatations ont souvent
concordé ici avec celles de Chagas pour C. meyistus.

Quant aux nymphes, elles digèrent plus lentement que les
adultes et piquent moins souvent, tous les sept à huit jours ou
même tous les quinze jours.

Le Réduvide émet spontanément par l'anus deux sortes de
déjections : l'une est un liquide jaunâtre qui se dessèche rapi-
dement à l'air; l’autre, une substance noirâtre, à dessiccation
plus lente, qui poisse les doigts comme le ferait de l'encre noire
épaissie. Ces deux sortes de déjections ont été recueillies soit
par émission nalurelle, soit par pression sur le ventre de lin-
secte et soumises à une analyse chimique, avec la collaboration
de:MM. Bonâme et de Sornay (1), auxquels nous adressons ici
nos très cordiaux remerciements.

Le liquide jaunâtre examiné au microscope ne laisse voir
que des cristaux d’urate de soude. Sa réaction est acide. A
l'analyse il donne (2) :

Résidu après calcinalion. . . . . lraces.

Acide urique, p. 100 . . . . . . . 36,93 (dosé sur 0 gr. 058)
Urée, p. 100 TT. … 3,02 (doséteurt0erm084)
Azote’total,/p. LOU PP. : . 21,24 (dosé Sur) 0/27/0650)
Eau, D 1000 60 RE"... 12, 21(dose eur 0er 1058}

L'acide urique à été dosé suivant la méthode Denigès:
l'urée par la méthode de lhypobromite à l’uréomètre à eau
d'Yvon, l'azote par la méthode de Kjeldahl.

En dehors de l’urée et des urales qui constituent près de
50 p. 100 du produit jaunâtre, 11 S'y trouve d'autres substances

1) Directeur et sous-directeur de la station agronomique du Réduit, à
l'Ile Maurice.
2) MM. Bonâme et de Sornaw.

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 919

azolées qui n'ont pu être déterminées. On pourrait établir sa
composition centésimale de la facon suivante :

AA eo ae 08 CONS 'ORERN ET ETTE
DURÉE 0 MARNE LAN CE MORE ONE 3,04
Urate de soude. . . . PR 0, Ve DATI One)
Azote combiné . Se le R ONE 1259
MAtièsesmndéterminées "RENE RS 70

100,00

Les déjections noires ont une réaction neutre, ne montrent
pas trace d'acide urique et laissent un résidu ferrugineux. Au
microscope on y reconnait des pigments colorés animés de
mouvements browniens. La présence d’une matière minérale
abondante à teneur en fer élevée, permet de penser à des
résidus de la digestion du sang, dont les punaises se nourris-
sent. L'analyse n'a pu se faire que sur le mélange des
déjeclions recueillies dans les verres où avaient séjourné les
punaises. Ce mélange est franchement acide. 0 gr. 801 du
mélange ont donné :

Ba RE ie. LL 0e NMORRRSREETON
Matières minérales "CRD ou
AZOCEAIO PAIEMENTS OR

Les matières minéräles ont fourni la composition suivante :

Chlorure desoditmt::t 0 NSP TE 0
Sesqui-oxyde de fer . «TJ RCE 42,10
Chaux, acide phosnhoriqne, sonfre et indé-
HAT NAN El D à 10.54
140,00
Reeropucriox. — Frappé du grand nombre d'œufs trouvés

dans les récipients où l’on nous apportait les Réduves, ainsi
qu'aux autopsies où ils recouvraient et masquaient parfois l'in-
testin, nous avons conservé et alimenté des femelles, afin de
suivre les pontes, avec des survies allant de quinze à quatre-
vingt-trois Jours.

Les pontes sont successives et peuvent donner en une fois
25, 30 et 40 œufs. Ce dernier chiffre est rare. Avec des Réduves
isolées, j'ai pu recueillir 66, 112 et 182 œufs par insecte.

Souvent, après une ponte excessive, la Réduve refuse de
piquer et semble périr d’épuisement.

D'août à fin décembre 190, les quelques centaines de

920 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Réduves que j'ai pu me procurer ont pondu 13.000 œufs environ.

Il y avait parmi mes Réduves une proportion de un mâle
pour deux femelles. La plupart de ces œufs ont éclos au Labo-
ratoire du Réduit.

Œufs. — Ils mesurent environ 2 millimètres de long sur
1 de large, sont ovoïdes et très blancs au moment de la ponte;
mais ils se foncent rapidement à l'air et prennent une teinte
vieil ivoire (action des oxydases). Les jours suivants, ils
deviennent rougeâtres à la veille de l’éclosion et cette dernière
peut ne pas se produire à celte phase de leur évolution. Le
temps de l'éclosion varie avec la température. En juillet-août,
à Maurice (saison fraiche), les éclosions étaient retardées ou ne
se faisaient pas. De septembre à décembre, elles évoluaient avec
une grande rapidité, parfois en huit-dix Jours.

La Larve, au sorlir de l'œuf, est de coloration rouge vif, de
dimension supérieure à l'œuf et parfaitement conformée. Elle
recherche aussitôt les endroits obscurs et peut resler quinze-
vingt jours sans manger. Ces larves subissent déjà des mues à
celte période. Mises sur un petit animal (souris, rat, cobaye),
elles le piquent aussitôt, se gorgent de sang et se laissent
tomber dès qu'on les touche.

Il y a, à celte période, une certaine analogie entre elles et
les jeunes larves de tiques. Dans leur estomac, le sang s’hémo-
lyse avec une extrème rapidité (grande puissance des ferments
digestils). Les larves ne tardent pas à montrer par transpa-
rence une zone rouge cerise, une zone noirâtre et une zone
blanc jaunâtre, correspondant aux trois zones décrites chez
l'adulte (estomac, intestin, rectum), et déjà parfaitement déli-
mitées.

Placées sur un jeune oiseau tombé du nid et près de mourir,
elles ont cherché à s'enfuir et sont mortes sur le cadavre sans
avoir piqué.

Dans une autre expérience, mises au nombre de plusieurs
centaines sur une souris, elles ont entraîné sa mort en moins de
vingt-quatre heures. J'ai pu en conserver pendant quatre mois
et les voir, après des mues nombreuses, atteindre la dimension
d’une forte lentille. Elles sont alors de teinte foncée et bru-
nâtre. En les mettant dans la main fermée (nymphes âgées de
quatre mois), elles se gonflent rapidement de sang, sans qu'on

TRYPANOSOMIDE D'UN RÉDUVIDE INOCULABLE A LA SOURIS 921

percoive la piqüre et sans que cette dernière laisse de traces;
cela doit tenir à l'extrème ténuité de leur trompe et peut expli-
quer ce fait que les Indigènes sont souvent piqués par des
larves et des nymphes sans rien ressentir.

J'ai dit plus haut que, lorsqu'elles piquent une souris infectée
avec le parasite intestinal de la Réduve, on retrouve ce parasite
dans le sang hémolysé sous forme de tétard ou de /eptomonas.

La possibilité d'inoculation aux petits rongeurs du {rypano-
somide du Conorhinus rubrofascratus, les analogies de son évo-
lution avec celle du Schizotrypanum Cruzi, parasite humain,
amènent à la supposition que le Tr. Boylei est peut-être, lui
aussi, l'agent d’une maladie humaine, inoculée par le Conorhi-
nus. Voici quelques faits en faveur de cette hypothèse :

Les piqûres de notre Réduve chez l'homme sont loin d'être
toujours inoffensives. Le D'Tennant (1) à cité le cas intéressant
d'une de ses malades qui à présenté fièvre et ædèmes. Dans
d'autres observations non publiées, on à observé des lymphan-
gites assez graves. Parfois la fièvre a duré plus de quinze jours,
sans céder à la quinine (2).

J'ai vu à Lamivoie (Rivière Noire, Maurice) des petits
enfants atteints d’anémie prononcée, avec bouffissure intermit-
tente de la face et des membres inférieurs, rate énorme, accès
de fièvre irrégulière, tous symptômes faisant songer à une
trypanosomiase : à aucun prix, les parents n'ont consenti à des
prélèvements de sang, mème au doigt.

J'aienfin signalé sous ce titre « un cas suspect à retenir (3) »,
l'observation d'un homme jeune, ayant succombé en moins d’un
an et demi à une fièvre irrégulière. Les examens pratiqués au
laboratoire ont permis d'éliminer toute affection pyogène, la
tuberculose, la syphilis, lankylostomiase, le paludisme, la
fièvre Lyphoide, la grippe, la fièvre de Malte, la fièvre ami-

(4) Bull. Soc. médic. île Maurice, 29° année, n° 24.

2) J'ai rencontré une fois, dans le contenu intestinal de cette punaise, des
bacilles ovoïdes, voisins du b. de Yersin. Cet hémiptère pourrait accidentel-
lement transmettre la peste à Maurice.

3) Bull. Soc. médic. Ile Maurice, 1911. n° 23.

922 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

bienne, le kala-azar (cultures et inoculation au chien néga-
tives). Les leucocytes, à 2ononucléaires prédominants, tombèrent
progressivement de quelques milliers à 600 par millimètre
cube.

Comme cet homme présentait, en dehors de la fièvre, de
lhypertrophie de la rate, des ædèmes fugaces, de l'anémie pro-
agressive et des diarrhées intermittentes, l'hypothèse d'une
trypanosomiase n'est pas à rejeter. Une enquête, faite à la
Rivière-Noire, m'a de plus appris que le malade, chasseur intré-
pide, couchait souvent dans une case infestée de Conorhinus
rubrofasciatus.

Nous espérons que ces quelques données conduiront quelque
chercheur, plus heureux que nous, à découvrir une trypano-
somiase humaine.

En terminant notre étude, malheureusement incomplète, sur
le parasite polymorphe du Conorhinus rubrofasciatus et sa
transmission dans le péritoine du rat et le sang de la souris,
nous remercions bien vivement MM. Mesniz et CHarron des
excellents conseils qu'ils nous ont donnés sur les documents
rapportés de Maurice ainsi que de leurs critiques judicieuses
dont nous avons essayé de tirer parti.

EXPLICAMON- DES PLANCHES XIX et XX

PLANCHE XIX.

F1c. 1-6 et 15. . — Petites formes Crilhidia.

Fic. 7-13. +. . — Formes moyennes.

FiG. 14-16 et 22. — Grandes formes.

F16. 24-28 . . . — Formes trypanosomes du réduvide.

Fic. 27-33. . . . — Formes diverses en voie de division ou anormales.

PLANCHE XX.

F16. 34-43. — Formes arrondies.

F1c. 46-49. — Kystes fusiformes.

Fic. 44-45. — Passage aux kystes.

F16. 50. . — Phagocyte chargé de pigment brun.

FiG. 51-58. — Formes du péritoine du rat.

F16. 59-63. — Trypanosomes du sang de la souris de Cilaos.
F16. 64-65. — Formes de culture.

F16. 66-82. — Trypanosomes du sang de la souris de Maurice.

RECHERCHES SUR LE FERMENT MANNITIQUE

par E. DUBOURG

On connaît un certain nombre de microbes qui attaquent la
mannite avec formation d'alcool, d'acides fixes et volatils; mais
ce sont tous des anaérobies stricts ; et du reste, il n’a pas encore
été démontré que ces mêmes microbes, qui consomment cet
alcool polyvalent, soient capables d’en former aux dépens du
lévulose.

D'autre part, on à trouvé, dans des vins malades (1), des
ferments donnant naissance à de la mannite; aucun d’eux n’a
été signalé comme la détruisant dans la suite de son évolution.

M. Laborde (2) cependant ayant rencontré dans des vins
tournés, des ferments manniliques, alors que ces vins ne conte-
naient pas de mannite, en a conclu que /« mannite peut ètre
attaquée, après disparition du lévulose, el même disparaitre
complètement à son tour.

Depuis longtemps la question m'avait paru assez digne
d'intérêt pour que j'aie cru devoir vérifier, par des expériences
directes, si la mannite est susceptible de disparaître dans les
vins et aussi dans les liquides artiliciels, sous l'influence des
ferments manniliques, mais J'ai borné mon étude à celui que
nous avons étudié M. Gayon et moi.

Nous avons montré que ce ferment, provenant de vins
malades, ne pouvait être assimilé à ceux de la tourne, qui
produisent un mélange d'acide acétique et d'acide propionique
avec disparition plus ou moins complète de la crème de tartre.
ainsi qu'on peut le constater dans les vins tournés typiques.

Dans ces mêmes vins, les dépôts laissent apparaître au
microscope des filaments qui s’enchevètrent plus ou moins à
mesure que la maladie se prolonge (3).

(1) Gaxox et DusourG, Ces Annales : 189%, 1901, 1904. — LaBorne, Comptes
rendus de l'Acad. des sciences, 1898; Revue de Viticulture, 1901. — Max et
PERRIER, Ces Annales, 1903. — Mazé el Pacorrer, Ces Annales, 1904. — Kavser

et Maxceau, Les Frrments de la graisse des vins. Épernay, 1909.
(2) Lasorbe, Comptes rendus de l'Acad. des sciences, 1904.
(3) Pasteur, Études sur Le vin, 1866. — U, Gavon, Revue de Vilicullure, 1899.

924 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Le 11 novembre 1903, j'institue l'expérience suivante avec
deux vins de l’année mis en bouteilles.

1o Vin de Médoc pasteurisé à 60 degrés (127 témoin).
20 Mème vin non chauffé (2° témoin).
3° Même vin pasteurisé, ensemencé avec le ferment mannitique.
49 Mème vin pasteurisé, addilionné de lévulose (témoin)
5° Le même vin ensemencé.
6e Vin de Saint-Émilion, pasteurisé (1° témoin).
10 Même vin non chauffé (2° témoin).
8° Même vin pasteurisé, ensemencé.
Ces divers échantillons solidement bouchés sont placés dans une armoire
«du laboratoire.
Un premier essai est fait en juillet 1905.

EXAMEN MICROSCOPIQUE.

1. Ni levures, ni microbes.
2, Levures vieilles, nombreux microbes.
3. Nombreux microbes agglomérés, pas de filaments.
4. Quelques microbes jaunâtres.
. Nombreux microbes agglomérés ; pas de filaments.
6. Quelques levures vieilles, pas de microbes.
7. Levures vieilles, nombreux microbes.
8. Quelques rares levures, microbes agglomérés; pas de
filaments.

ANALYSE CHIMIQUE

ACIDITÉ (1) ACTDITÉ SUCRE MANNITE CRÈME

fixe. volatile. de tartre.

RS ane 2 AO 0,80 8,10 0 » 2,88
RE A MES 3,86 1,24 0 » 0 2,18
DOMAINE: 3,14 1,69 0 » 2,65 2,82
LT 2,95 0,78 15,86 (2) 0 » 2,78
GR NE ANA 4,45 2,35 0 » 7,62 2 81
AL 3,28 0,45 21,60 0 » 255
Tete 3,86 0,92 0 0 » 2,92
oc di che 4,92 2,99 0 » 6,65 2252

mm —————…—_—_—"Î2

(1) Les acidités sont calculées en acide sulfurique.
(2) Le vin contenait déjà 8 gr. 70 de sucre, la différence provient du lévulose ajouté.
Tous les éléments sont exprimés en grammes par litre.

RECHERCHES SUR LE FERMENT MANNITIQUE 925

En comparant les témoins aux vins ensemencés, on arrive
aux conclusions suivantes :

1° Les témoins non chauffés 2 et 7 sont altérés, avec dimi-
nution de la crème de tartre, sans formation apparente de
mannile :

2° Le n° 4, lévulosé et ensemencé avec le ferment mannitique,
a fourni des doses de mannite, d’acidité fixe et volatile normales,
sans attaque de la crème de lartre.

J'ajoute que l'acidité volatile était constituée par de l'acide
acétique seul. Enfin, le microscope n’a révélé que des microbes
agglomérés, sans filaments.

Des constatations semblables s'appliquent au n° 8 comparé
avec ses témoins 6 et 7.

Ces différentes déterminations ont été faites environ vingt-
mois après l’ensemencement.

Le 25 novembre 1903, je mets en expérience une seconde
série de vins comme suit :

1° Vin de Léognan; pasteurisé (témoin).

20 Même vin, pasteurisé, ensemencé.

30° Même vin additionné de mannile; pasteurisé (témoin).
,9 Le même, ensemencé.

ANALYSE DE JUILLET 4905

MANNIT
volatile. RAD de lartre.

ACIDITÉ ACIDITÉ ne CRÈME

Ici la mannite et la crème de tartre n'ont pas été atteintes
après vingt mois. Par suite de la disparition du réducteur, il y
a eu, au contraire, apparition de mannite au n° 2 et formation
supplémentaire du même composé au n° #, avec augmentation
corrélative d'acides fixes et volatils dans les deux échantillons.

926 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

En janvier 1904, j'introduis dans des bouteilles de l’eau de
levure à 15 p. 100 très légèrement sucrée avec de l’inverti.

19 Eau de levure, additionnée de mannite (témoin).

20 Même milieu ensemencé.

3° Eau de levure, additionnée de crème de tartre (témoin).

4° Même milieu ensemencé.

59 Eau de levure lévulosée (témoin).

60 Même milieu. ensemencé.

Toutes les bouteilles sont stérilisées, l'ensemencement a lieu
le lendemain.

L'essai est fait en août 1905.
EXAMEN MICROSCOPIQUE.

1, 3, D. Pas de microbes.
2 et 4. Microbes agglomérés, peu nombreux.
6. Nombreux microbes agglomérés.

ANALYSE CHIMIQUE

ACIDITÉ ACIDITÉ : CRÈME

fixe. volatile. ÉORE HOMENEE de tartre.
45 0,48 Traces. 3,02 10,00 »
2 0,71 0,36 0 » 10,85 »
De 1,30 Traces. 4,85 0 » 2,80
4. 1042 0,55 os Traces. 84
D aire ee 0,47 Traces: 10,55 0 » »
GENE 4254 A, 14 CPS 6,48 »

On trouve la mannite intacte en 2, avec une petite quantité
supplémentaire ; il ÿ en a également des traces en 4; elle est
à dose normale dans le n° 6: la crème de tartre se retrouve en
entier dans le n° 4. Le microbe à cultivé en 2, 4 et 6, puisqu'il
y euten2et 4 disparition du sucre avec formation d'acides fixes
et volatils dont la proportion devient plus importante en 6.

J'avais préparé un certain nombre d'échantillons de chacun
des types afin de pouvoir prolonger les expériences. J'ai procédé
à de nouveaux essais en avril 1908 et mai 4911, soit environ
cinq et huit ans après la mise’en œuvre.

RECHERCHES SUR LE FERMENT MANNITIQUE 92%

.

À ces deux époques, j'ai renouvelé mes observations et
analyses sur tous les échantillons déjà examinés en 1905. Les
conclusions que je pourrais tirer de ces déterminations seraient
absolument identiques aux précédentes ; mais, tandis qu'après
vingt mois j'ai pu rajeunir toutes mes cultures, j'ai échoué avec
les vins en 1908 et les milieux artificiels en 1911 ; ces derniers
m'avaient donné des résultats positifs en 1908.

Dans ces conditions, je ne saurais dire à quel moment l’évo-
lution du microbe a été arrêtée. Comme la mannite, même en
1911, n'avait pas diminué, il faut admettre que le microbe ne
l'a pas attaquée sa vie durant.

On arrive à des résultats de même nature avec des cultures.
aérobies en matras Pasteur.

Le 20 mai 1908, j'ensemence 500 cent. cubes d'eau de levure stérilisée
dans des matras de 1 litre, afin de laisser une couche d'air au-dessus de la
culture.

Après six semaines d'étuve à 35 degrés, j'ai fait un premier essai. À ce
moment, j'ai placé les matras dans une armoire et j'ai attendu jusqu’en juin
1911.
1e Culture avec 19 gr. 20 de lévulose par litre.

20 Culture avec 10 gr. 10 de lévulose par litre.
30 Culture avec 11 gr. 10 de sucre interverti.
° Culture avec 5 gr. 15 de sucre interverti.

ru

Le microscope révèle de nombreux microbes dans les quatre
cultures.

ANALYSE CHIMIQUE (1)
À
ACIDITÉ FIXE ACIDITÉ VOLATILE MANNITE
RTE — Re TC RE
Juillet 1908. | Juin 1911. Juillet 1908. | Juin 191. Juillet 1908 | Juin 1911.

1 2 39 (a) 2,95 1,85 1,98 11,86 11,90
2 1,42 1,35 1,12 1,24 5,71 5,74
3 1,66 1,51 1,21 1,37 3,51 3,60
% 1,02 0,93 0,67 0,78 1,27 1,22

(a) Aux acides fixes formés viennent s'ajouter ceux qui sont apportés par l'eau de

levure.

(4) Le sucre avait disparu dans les quatre cultures dès juillet 1908.

928 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

L'expérience a duré trois ans: les microbes des quatre cul-
tures ont pu être rajeunis, et la nannite, on le voit, se retrouve
en entier avec de faibles variations dues à la méthode de dosage.
Il y a eu une légère diminution de l'acidité fixe avec augmen-
tation corrélative de l'acidité volatile : c’est d'observation
constante dans les fermentations mannitiques prolongées.

Avec le ferment mannitique que j'étudie ici, la mannite ne
disparaît donc pas quand il ne reste plus de sucre dans la
culture, que ce soit en vie anaérobie ou en vie aérobie.

Que cette hexite puisse disparaître dans les vins, cela ne
saurait surprendre. Comme l'ont indiqué MM. Mazé et
Pacottet (1), les maladies des vins sont dues, sans aucun doute,
à des associations microbiennes. Certains ferments attaquent la
crème de lartre, d'autres la glycérine ; il en est qui donnent
naissance à de la mannite, peul-être en existe-t-il qui la
consomment. Qu'un même microbe puisse à la fois former el
détruire un même composé chimique, rien ne parail s'y opposer
a priori, puisqu'on en connait déjà; mais ce sont surtout des
moisissures ou des bactéries essentiellement aérobies, les
ferments acéliques, par exemple. Toutefois, 11 devient nécessaire
désormais de démontrer, par des expériences directes, la dispa-
rilion de la mannite, avec d'autres ferments manniliques que
celui que je viens d'étudier.

J'indique en terminant que nous avons retrouvé avec M. Gavon
de la mannite dans un vin de 1878 examiné en 1899 ; et je Liens
de M. Gayon qu’il a eu tout récemment l’occasion d’en vérilier
la présence dans un vin de 1892.

Nous venons de voir qu'une culture de notre ferment peut
être rajeunie après trois ans dans les vins et après cinq ans en
milieux artificiels. On sait d'autre part que, dans ces mêmes
milieux, ce ferment peut consommer des quantités relativement
élevées de divers sucres. Dans les essais comparatifs de fermen-
tations mannitiques, il a toujours été reconnu comme le plus
actif. Ces observations m'ont suggéré ia pensée de faire, à mon
tour, une étude comparée avec le ferment Bulgare et einq autres
microbes lactiques que je dois à la complaisance de MM. Kayser

1) Ces Annales, loc. cil.

RECHERCHES SUR LE FERMENT MANNITIQUE 929

el Mazé. À ma demande, ces savants ont choisi parmi les
ferments les plus actifs de leur collection. Je suis heureux de
les remercier ici.

Pour mesurer l’activité d'un microbe, le moyen le plus simple
consiste à le culliver dans des milieux appropriés, en présence
de sucres divers, et à déterminer les quantités de sucre
consommé par le microorganisme. On peut dresser ainsi des
tableaux comparatifs.

Dans ceux qui suivent, le ferment mannitique est désigné par
le symbole M', le Bulgare par la lettre B, les deux ferments de
Kayser par K'et K?, enfin ceux de Mazé par MMM.

se

Galaclose

Glucose .

Mannose . É

SUCTCAINIeL VERRE ee. 0 ,90129,20
PAGIOS CREME EN. 90128 ,40
MAILS ER 010923 00110: (41)
Saccharose

Raffinose. .

Arabinose .

Xylose..

ce

D ND ND +
t Où

L©

Dei
0
fl
0
0
0

(1) Cette expérience confirme ce!les de M. Gabriel Bertrand. — Ces Annales, 1909.

En milieu maintenu neutre par addition de carbonate de
chaux, on trouve les chiffres suivants :

M B K! K? M! M? M°
Galactose . . . . . . . . .| 65,90158,30 145,15 [42,30 [55.20 154,10 |54,90
Glucose . . nu .....1009,60154540 30 40805008 08760) AP AE SET 0
Mannose. : : . . . . . . .| 58,60153.30 |48,52,/49,90151,60 155,80 153,10
[NV NON 02... 1107,:90158-400) 62 SOS OO EE OCR ITEMS RINS UE
Lactose . . . . . . . . . .| 51,80/62.60 [31,60 |42,50 133,10 [53.00 |46.,15
MATOS ee RS =: .1 95,65] 0 » 139,104) 41060" NOM MO» 45,55
Saccharose. | . .| 65,15] 0 » [63,80 151,60 | 57,60158,80 |49,10
RARTOSE RM EUR, ee Ni 11272 800 A INORORIRTIERn 230 | OCT) CSS ACTION
ATADINOSENL EME 0. 1, 0 LOI OM I NOR RCA IR ORDER ORS
Xylose. = lo Lol GP ER TES MO 2940 0 ) (D » (] » (1) » Or ÜÙ »

Les analyses ont élé failes après cinq semaines d’étuve à

930 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

35 degrés ; le milieu était constitué par de l’eau de levure à
15 p. 100. Les chiffres des tableaux représentent les quantités
de sucre disparu par litre.

On peut fixer une moyenne en laissant de côté les pentoses
el en considérant d'une part les hexoses et d'autre part les
saccharides.

19 Sans carbonate de chaux.

Mt B K1 K° M! M°
HeXOSES RE 41012997 124 260125 402001 2180%
SACCHATITES 1125 1206: 35148-31681 02014027

M B K' K° M: M°
HExXOSCS SR Een TE OM ISS GO) 28 0970159 27058560 |59%07
SACCHAFITES NP ES OM 5 7 650133:8811320 720192610275

On voit, par ces divers résultats, que le ferment man-
nitique tient le premier rang par son activité. Toutefois,
il est bon de remarquer, qu'avec d’autres milieux, les rangs
occupés par chacun de ces microbes pourraient se trouver
modifiés.

On peut expliquer l'énergie destructive du ferment manni-
tique par ce fait qu'il ne donne pas naissance seulement à des
acides, comme les microbes lactiques proprement dits, mais
aussi à d’autres produits de nature diverse dont les actions
nocives ne se surajoutent pas.

Cette activité du ferment mannitique apparaît encore en
présence de certains composés arsenicaux. Ce microbe se cultive
très bien dans des milieux contenant 5 p. 100 d’arséniate de
soude cristallisé, 1,5 p. 100 d’arsénite de potasse, 8 p. 100 de
cacodylate de soude et 7 p. 100 de méthylarsinate di-sodique.
Les autres ferments lactiques éludiés ici supportent avec peine
une dose dix fois moindre. Et l’on observe, avec le ferment
mannitique, un phénomène analogue à celui qui a été signalé

RECHERCHES SUR LE FERMENT MANNITIQUE 931

par M. Trillat dans ses études si intéressantes (1) : La quantité
de sucre disparu est plus considérable, dans les cultures conte-
nant 1 p. 1000 d'arséniale, que dans les milieux témoins.

En résumé, le ferment mannitique étudié dans ce mémoire
n'attaque pas la mannite qu'il a formée, pas plus du reste que
la crème de tartre, quand il est cultivé dans les vins ou des
milieux artificiels qui en contiennent.

La vitalité de ce microbe est considérable ; on peut expliquer
ainsi l'apparition de la mannite, dans les vins d'une même
région, à des intervalles très espacés. Le développement de ce
germe n’est favorisé en effet que dans les années où il y a à la
fois, au moment des vendanges, excès de température et faible
acidilé des moûts. Ces deux circonstances simultanées néces-
saires peuvent ne se rencontrer qu'à des périodes éloignées
pouvant dépasser souvent plus de dix années.

Cette vitalité est très supérieure à celle des ferments lactiques
ordinaires qui ne résistent pas plus de deux ou trois mois en
culture, quand on ne prend pas la précaution d'ajouter du
carbonate de chaux. Le ferment Bulgare, particulièrement
sensible aux acides, doit être rajeuniau moins chaque quinzaine.

Enfin l’activité du ferment mannitique s'étend à tous les
sucres à molécule définie, le tréhalose et l'arabinose exceptés (2):
seul, il attaque le xylose. Néanmoins, il est impuissant à faire
fermenter la mannile ainsi que la dulcite et la sorbite (3).

M. Gabriel Bertrand a établi (4) que le ferment Bulgare,
pourtant très actif vis-à-vis d’un certain nombre de sucres,
n'attaque également aucune hexite.

(1) Comptes rendus de l' Acad. des sciences, 1909 à 1912, passim.
(2) Gaxon et DupourG. loc. cil.

(3) lbid.

(4) G. BERTRAND, loc. cil.

RECHERCHES

SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE
PAR DIVERS ACIDES
EN PRÉSENCE DE LA SUCRASE D’ASPERGILLUS NIGER,

par M. GABRIEL BERTRAND et M. et Me ROSENBLATT.

Toutes les expériences que nous avons publiées récemment
sur lhydrolyse comparée du saccharose par divers acides en
présence de la sucrase ont été faites avec une préparation
retirée de la levure (1). Or, il était possible que la partie du
système diastasique qui, dans la théorie émise par l’un de nous,
représente la complémentaire activante, eût des caractères un
peu différents selon son origine et se comportät, dès lors,
d'une manière non identique avec la série des acides.

Afin de voir quelle part de vérité était contenue dans cette
hypothèse et, au besoin, en tenir compte, nous avons, à la
suite de nos recherches sur la sucrase de levure, examiné
comparativement la sucrase d’Aspergilius niger.

Ces nouvelles recherches ont été conduites exactement de la
même manière que les précédentes, sauf, bien entendu, en ce
qui concerne la préparation de la sucrase.

Nous sommes parvenus à obtenir avec l’Aspergillus une
solution diastasique d'activité sensiblement constante pendant
toute la durée des recherches, non pas en utilisant, comme on
le fait d'habitude, le liquide de plasmolyse du champignon
frais, liquide assez difficile à conserver, mais en préparant
d’abord une poudre mycélienne, puis en faisant macérer
chaque fois un poids déterminé de cette poudre dans un certain
volume d’eau.

Des conidies d’Aspergillus ont été largement ensemencées sur du milieu

Raulin contenu dans des matras. Après trois jours. à la température de
31 degrés, les mycéliums bien développés ont commencé à se recouvrir de

1) Annales de l'Institut Pasteur, L. XNXVI, p. 321, 1912.

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 933

conidies, on les a extraits des matras, lavés à deux reprises par immersion
de quelques minutes dans l'eau distillée, pressés fortement à la main entre
des feuilles de papier à filtre et mis à sécher dans le vide, sur l'acide sul-
furique, à + 35 degrés. Le lendemain, les mycéliums secs ont été réduits en
poudre fine à l'aide d'un moulin à café turc; la poudre, aussitôt enfermée
dans un flacon bien bouché, a été conservée à l'abri de la lumière.

Chaque matras de cullure, du volume d'un litre et demi et renfermant
2:50 cent. cubes de milieu nutrilif, a fourni ainsi 4 gr. 5 environ de poudre
mycélienne.

Pour préparer la solution diastasique, on a trituré peu à peu 200 milli-
grammes de poudre dans 100 cent. cubes d'eau, ajouté 1 cent. cube et demi
de toluène, transvasé le tout dans un flacon et laissé macérer dans l’étuve,
à + 35 degrés. Après vingt-quatre heures, durant lesquelles on a agité plu-
sieurs fois, la solution à élé versée sur un fille à analyse. Elle a passé
rapidement, limpide et incolore. On en a pris 5 cent. cubes par expérience,
quantité équivalant à 10 milligrammes de poudre mycélienne.

Cette quantité de solution diastasique ajoutée seule, sans
acide, à 15 grammes de saccharose dissous dans 80 cent. cubes
d’eau, en hydrolysait environ 65 milligrammes en vingt-
quatre heures à la tempéralure de 28 degrés, au début de
nos recherches, et encore 60 milligrammes environ à la fin,
après quatre mois et demi. La sucrase contenue dans la poudre
mycélienne qui servait, au fur et à mesure des besoins, à pré-
parer la solution diastasique, était donc beaucoup plus stable
que celle de la poudre de levure de nos expériences antérieures.

D'après les essais effectués sur une solulion diastasique
obtenue avec 500 milligrammes de poudre au lieu de 200,
4 gramme de poudre d'Aspergillus donnait :

Substances solubles dans /leau. : - 0 gr. 380
Alcalinité de ces substances à l'hélianthine . 0 c.c. 30 de SO‘H? normal.
Alcalinilé de ces substances à l'alizarine . . 0 c.c. 175 de SO'H® normal.
Acidité de ces substances à la phtaléine. . . 0 c.c. 10 de NaOH normale.
Cendres solubles dans l’eau . . . . . . . 0 gr. 036
Alcalinité de ces cendres à l'hélianthine . . . 0 c.c. 12 de SO'H®? normal.

Ainsi, comme la solution diastasique de levure étudiée dans
notre précédent mémoire, celle d’Aspergillus avait une réaction
alcaline à lPhélianthine et à l’alizarine sulfoconjuguée, acide à
la phtaléine du phénol. Pour saturer au premier de ces réactifs
colorants la légère alcalinité due aux substances solubles de
10 milligrammes de poudre mycélienne, quantité mise en
usage dans chaque expérience, il fallait 3 cent. cubes d’acide
sulfurique supposé 1/1.000 normal, soit à peu près, comme

934 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

LS

on le verra plus loin, 3,5 p. 100 de la proportion de même
acide reconnue la plus favorable à l’hydrolyse diastasique. Il
nous à paru superflu de tenir compte de cette petite correction
dans les chiffres qui expriment nos résultats, le degré d'approxi-
mation auquel nous avons essayé d'atteindre étant de 10 p. 100.

Nous rappelons que dans chaque expérience il y avait
15 grammes de saccharose dissous dans 85 centimètres cubes
de liquide total : eau, acide et diastase, et que les concentra-
tions en acides, données dans le tableau, se rapportent à ces
85 cent. cubes.

Le saccharose et les acides étaient les mêmes que dans les
expériences avec la sucrase de levure.

Voici maintenant les résultats obtenus. Les acides essayés
sont répartis par groupes, suivant leur basicité, et rangés dans
chaque groupe par ordre d'activité décroissante. Les concen-
rations optima sont d’abord exprimées en molécules-grammes
par litre puis rapportées, dans la troisième colonne, à celle de
l'acide chlorhydrique, faite égale à 100. Enfin, pour faciliter
les comparaisons, nous avons ajouté un extrait du tableau
relatif aux expériences effectuées avec la sucrase de la levure.

On voit, par ces résultats, que les conclusions générales
tirées de nos expériences antérieures s'appliquent aussi à la
sucrase d'Aspergillus niger. Seulement, dans ce cas, l'influence
réciproque de la diastase et des radicaux acides ou anions est
plus forte que dans celui de la sucrase de levure, la perturba-
tion apportée de ce fait dans l’ordre de classement des acides
est plus accentuée.

On voit en même temps que les concentrations optima
d'acides sont presque toujours très différentes pour les deux
sucrases. Fernbach avait observé autrefois qu'il fallait des
quantilés plus grandes d'acide acélique pour favoriser l’action
de la sucrase d’Aspergillus que celle de la sucrase de levure (1).
Aux grandeurs près, cette observation est confirmée, mais,
chose curieuse, elle ne peut ètre étendue à tous les acides. Si,
en effet, d'après nos expériences, la plupart des acides sont

1) Annales de l'Instilut Pasteur, L. IV, p. 647 (1890). Il avait obtenu le
maximum d'aclivité avec 1 p. 100 d'acide acétique dans le cas de l'Aspergillus
et 0,2 p. 1000 dans celui de la levure (soil, en molécules-grammes par litre, m/6

et m/300).

RECHERCHES SUR L'HYDROLYSE COMPARÉE DU SACCHAROSE 935

moins actifs avec la sucrase d’Aspergillus, 11 en est, comme
l’acide propionique, dont la concentration optima est la mème
que pour les deux sucrases et d’autres, comme les acides for-
mique, phosphorique et surtout nitrique, qui, au contraire,
agissent à des doses plus faibles avec la sucrase d'Asperqullus
niger qu avec la sucrase de levure.

SEC ECS 2 O2 ED LL SEC I MM DEP EG AP CL REED

|CONCENTRATIONS OPTIMA AVEC LA SUCRASE :
ACTIVITÉ
—
catalytique
D'ASFERGILLUS DE LEVURE
NOMS DES ACIDES des
acides
Rapportées Rapportées
lrouvées. à Trouvées. à seuls (*).
HCI — 100. HCI] — 100.
Monobasiques :
NITIQUue Re TC n/6.500 1" 3095/3500 125 100
Trichloracétique . .°. . . .|m/5.000| 238 m/12.000! 430 15,4
3enzène sulfonique. . . . .|m/4.500| 214 m/13.000! 465 104,%
Dichloracétique. . . . . . .|m/4.510| 214 m/6.000 | 215 ZAR A)
Chlorhydsique "#5", "1:)ml2.100! 10uù m/2.800 100 .| 100
Monochloracélique . . . . .| m/900 42,8 |m/2.000 ils 4,8
FORME EME Er ma /450 21,4 |m/400 14,3 1253
ACÉUQUE CARE LL. |Im)/50 2,38 |m/300 10,7 0,40
PrOpPionique RCE Nm /10 0,48 |[m/10 0,36 »
ISODULYRIQUe RER 0 mil 0,33 |m/16 0,57 0,3
Butyrique normal...” .|m/T 0,33 |m/12 0,43 »
actquee serre: m1 0,33 |m/15 0,53 AP 0n
Bibasiques :
DUURIQUERS SEC -im/2.000 95,25 |m/3.600 128,5 1152
OSEO ER RE mn 280 22,85 |m/500 Te) 31,14
TANQUER EE. 2. m/180 8,51 |m/215 9,82 »
Tribasiques :
Bhosphorique- "0." "|m)830 39,5 |m/550 19,6 18,63
CLIQUE RE MEER ET, LM /260 12,4 |m/310 Il SAM
SODIUM EME 0. M3 0,1% |m/# 0,1%
Sels acides :
Sulfate monopotassique . .| m,500 23,8 |m/850 m 30,4 »
Phosphate monopotassique .| m/9 0,43 |m/11 0,39 »

(*) D'après les expériences d'Ostwald,

Ce ne sont pas les sels ni les autres substances thermo-
stables, accompagnant la sucrase, qui paraissent occasionner
ces différences. Sans doute, en ajoutant un sel neutre au

936 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

mélange d'acide et de sucrase en réaction sur le saccharose
on ralentit la vitesse de l’hydrolyse, mais la diminution n'est
mesurable que si la quantité de sel neutre est assez grande,
par exemple, une molécule de sel pour une d'acide: elie ne
l’est pas si cette quantité est de l’ordre de grandeur de celle
qui existe dans la solution diastasique. Nous avons, dans une
série d'expériences de contrôle, remplacé 5, 10 et même 15 cent.
cubes d'eau par un égal volume de solution diastasique préala-
blement chauffée : soit en l'absence d'acide, soit en présence
d'acide acétique ou d'acide sulfurique, nous n'avons pas obtenu
de modification notable de la vitesse de l’hydrolyse. Ou bien les
quantités de saccharose transformées étaient les mêmes, ou bien
les différences restaient comprises dans la limite d'approxima-
tion. C'est à la partie thermolabile de la solution diastasique
que restent imputables les modifications de l'activité cataly-
tique des acides vis-à-vis du saccharose.

Ainsi, non seulement la concentration en ions hydrogène la
plus favorable à l’hydrolyse conditionnée par la sucrase varie
d'une manière importante avec la nature de l'acide ajouté,
mais il peut y avoir, pour un même acide. des concentrations
optima en ions hydrogène notablement différentes suivant l'ori-
gine de la substance diastasique.

ERRATUM
Mémoires de MM. Marcaoux et Sorez, sur la Lèpre, pages 67 et 718$.

Le n° 41 des conclusions du 2 mémoire, page 801, doit être reporté, sous
le n° 12, à la suite des conclusions du 1er mémoire, page 700.

Le Gérant : G. Masson.

Paris. — L. MARETHEUXx, imprimeur, 1, rue Cassette.

62° ANNÉE DÉCEMBRE 1912 NAPL2

ANNALES

DE

L'INSTITUT PASTEUR

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE
DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE

par H. CARRÉ
Chef du laboratoire des recherches sur les maladies infectieuses

à l'École vétérinaire d'Alfort.

(Avec les planches XXI à XXIII.)

Le présent mémoire a surtout pour objet l'étude expérimen-
tale de l’agalaxie contagieuse; mais, comme la littérature fran-
çcaise ne comporte que deux articles sur ce sujet (1), tous
deux publiés avant l'apparition de communications et de
travaux originaux d'un haut intérèt, nous avons jugé utile de
réunir, sous une forme succincte, les données éparses dans les
différentes publications françaises et étrangères, de façon à
donner une revue d'ensemble permettant de se faire une idée
aussi exacte que possible des connaissances acquises Jusqu'à ce
jour sur cette affection.

Une courte relation historique, clinique, étiologique et expé-
rimentale précédera donc l'exposé de nos recherches person-
nelles.

HisroriQuE.

Ce sont les auteurs italiens qui ont apporté la contribution la
plus importante à l'étude de l’agalaxie; la maladie sévit en
effet depuis fort longtemps dans la péninsule, constituant

(1) Bourway, L'agalaxie infectieuse, Revue vélérinaire, 1896, p. 65, et Nocarp
et LecLacue, Traité des maladies conlagieuses des animaux.

60

938 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

encore actuellement un véritable fléau pour les troupeaux
qu'elle envahit.

Sous le nom de Stornarella, Metaxa la signale pour la pre-
mière fois sur les chèvres et sur les brebis, en 1816; puis
Zangger la rencontre en Suisse sur les chèvres.

Dinella et Provinzano l'étudient en 4862 dans la Basilicate et
dans les Pouilles : ils rapportent que les bergers croient à
l'infection des troupeaux par le séjour dans les herbages fré-
quentés auparavant par des malades (Mal del sito).

Brusasco (1871) publie un intéressant mémoire sur cetle
maladie, que les bergers du Piémont désignent sous le nom de
Mal dell’asciutto (mal du sec); il réussit à infecter quelques
animaux par la traite.

D’autres vétérinaires affirment que la maladie se développe
après l'introduction d’un animal malade dans un troupeau
indemne. Cependant, Oreste, en 1882, 1884 et 1885, expéri-
mentant sur quelques animaux seulement, ne réussit pas à
transmettre l'agalaxie par l’ingestion du lait (deux animaux),
du sang, du mucus nasal, ni par cohabitation : il affirme qu'il
s’agit d’une enzootie dénuée de pouvoir contagieux.

Valentin: (1889-1890) n'obtient que des résultats négatifs en
faisant cohabiter des malades avec des sujets sains, en injectant
du lait altéré dans les canaux galactophores, en inoculant sous
la peau de la synovie ou de l'humeur aqueuse d'ovins atteints
de polyarthrites ou de kératite.

Rocco Marra, en Italie, Barthélemy en France, Schossleitner,
dans le Tyrol, publient des descriptions sommaires de la
maladie.

Le D' Marra (1891) en inoculant le lait altéré dans le trayon
ou sous la peau de la cuisse, aurait reproduit l'agalaxie en
vingt-quatre-quarante-huit heures.

Par contre, Hess et Guillebeau, qui donnent une bonne des-
cription des lésions oculaires et des troubles de la sécrétion du
lait, ne réussissent pas à obtenir l'infection par cohabitation,
ni en injectant le lait dans la mamelle ou sous la peau de
chèvres saines.

Oreste et Marcone publient en 1892 les résultats de leurs
recherches expérimentales.

Bournay, la même année, observe l'affection dans les

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 939

Pyrénées-Orientales : il poursuit quelques recherches avec
Leclainche et résume, dans une monographie, les connais-
sances acquises à celte époque.

Celli et de Blasi (1896-1897) reproduisent deux fois l’agalaxie
en inoculant sous la peau le lait altéré caractéristique. En 1906,
ils annoncent leur découverte d’un virus filtrant et publient le
compte rendu de quelques expériences de vaccination.

Rocco Marra et Nicola Cocciante (1912) montrent que le sang
recueilli au moment de l'élévation thermique, dans les formes
graves, est virulent.

Nous-même, enfin, faisons connaître une pyohémie spéciale,
complication de l’agalaxie, localisée dans les départements du
sud-est de la France et connue sous le nom de Mal de Lure.

DisrriBUTION GÉOGRAPHIQUE.

L'agalaxie n'existe qu'en Europe et seulement dans des
régions assez étroitement limitées. C’est surtout une affection
des pays montagneux: Très répandue en Suisse à un moment
donné, elle paraît avoir sinon disparu, tout au moins considé-
rablement réduit son aire de dispersion.

Connue depuis longtemps sur le versant espagnol des Pyré-
nées (Bournay), on l’observe également dans la Provence, le
Roussillon et la Cerdagne.

Depuis quelques années, les départements du sud-est de la
France, Basses-Alpes, Vaucluse, Drôme, Bouches-du-Rhône et
Alpes-Maritimes voient l'épidémie prendre une extension de
plus en plus grande.

C'est par milliers que les ovins et les caprins des régions cen-
trales de l'Italie sont chaque année envahis par l’agalaxie.

Il est curieux de constater que, malgré sa grande contagiosité,
l’agalaxie ne paraît avoir aucune tendance à s'étendre hors des
départements énumérés plus haut.

Il n’est pas douteux cependant que si les régions infectées
produisaient des reproducteurs pour le dehors, au lieu de se
borner exclusivement à l'élevage des animaux de boucherie,
l'épidémie gagnerail, et très vite, des centres jusque-là
indemnes.

940 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

IMPORTANCE ÉCONOMIQUE.

La morbidité est toujours assez élevée; quelques rares ani-
maux paraissent seuls échapper à l'infection. La gravité de
celle-ci, essentiellement variable, est cependant la cause de
pertes pécuniaires élevées. Les animaux maigrissent, devien-
nent étiques et invendables pour la boucherie; Les brebis, dans
la très grande majorité des cas, gardent leur mamelle atro-
phiée, ne donnent plus de lait et sont incapables d'élever leurs
agnea UX. |

Tandis que dans certains troupeaux la mortalité est consi-
dérée comme insignifiante, elle atteint dans d’autres les deux
tiers de l'effectif. Si, en général, un assez grand nombre d'ani-
maux semblent échapper à la contagion, ou mettent un temps
plus ou moins long à s’infecter, ce qui lient à des causes que
nous étudierons plus loin, nous connaissons, par contre, des
exploitations où tous les animaux sans exception, Jeunes et
adultes, mâles et femelles, brebis et chèvres, ont présenté
rapidement des symptômes graves, nécessitant l'envoi immé-
diat à la boucherie de la totalité du troupeau.

Le vétérinaire départemental des Basses-Alpes, M. Arlaud,
estime que les pertes dues à l'agalaxie, en 1911, dans son dépar-
tement, ont été incomparablement plus élevées que celles dues
à la fièvre aphteuse.

Par ce qu'il nous à été donné de constaler nous-même, cette
opinion nous parait parfaitement fondée.

CLINIQUE.

L'affection, facilement diagnostiquée, présente des symp-
lômes généraux et des symptômes locaux portant sur la
mamelle, l'œil, les articulations, et, ajouterons-nous, parfois
sur la peau; symptômes extrêmement variables dans leur inten-
sité et leur répartition, ce qui a permis de distinguer une
forme aiguë et une forme chronique.

Forme aiguë. — Parfois presque foudroyante : la tempéra-
ture atteint 40-41 degrés; affaiblissement général, inappétence

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 941

et mort avant l'apparition des lésions. Si la marche est moins
rapide, la mamelle, atteinte presque toujours chez les femelles
laitières, est tuméfiée, chaude, douloureuse.

Quand l’inflammation s’atténue, l'organe reste flasque, mou,
ou induré, atrophié, avec des noyaux plus ou moins profonde
et volumineux, durs; un seul ou les deux quartiers peuvent
être lésés.

Une boiterie généralement très intense annonce les locali-
sations articulaires, qui, par ordre de fréquence, se portent sur
le carpe et le tarse, puis sur les articulations fémoro-tibiale,
huméro-radiale, coxo-fémorale, métacarpienne (Hess et Guil-
lebeau).

Tout déplacement est presque impossible, l'animal reste
couché à la même place des Jours entiers : la région articulaire
augmente de volume, devient très douloureuse; parfois, mais
rarement, des abcès s'ouvrent, lents à se cicatriser, suivis ou
non de l'ankylose des surfaces articulaires.

La lésion primitive de l'œil est une kératite parenchyma-
teuse : d'abondantes larmes souillent les paupières dont les
bords sont rouge vif. La cornée est trouble, de teinte plus ou
moins laiteuse; on croirait que la chambre antérieure est rem-
plie de pus; il n'en est rien cependant et l’incision de Pæil
montre que la cornée, très épaissie, donne seule à l'organe cet
aspect particulier, l'humeur aqueuse est parfaitement limpide.
Un large liséré rouge foncé ou brun entoure la cornée. Le
globe oculaire est tendu, volumineux, douloureux. La cornée,
par l'effet de la pression interne, peut être déchirée, l'iris rejeté
en dehors, et le cristallin, luxé, sort par la fistule sous forme
d’une gelée translucide : la vision est abolie. La suppuration
envahit parfois la chambre antérieure; le pus s'écoule sur les
côlés de la face, donnant à celle-ci un aspect véritablement
hideux (fig. 1).

Mais les lésions peuvent rester minimes, les ulcérations de
la cornée se cicatrisent, elle reprend même presque complète-
ment sa transparence.

Il persiste toutefois assez longtemps de petites facettes planes
sur la cornée: on dirait que celle-ci, frappée par un instrument
contondant, a conservé l'empreinte du choc (observation per-
sonnelle).

942 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous ajouterons, comme observation personnelle également,
l'apparition, sur une étendue plus ou moins grande de la sur-
face cutanée, de vésico-pustules arrondies, parfois confluentes.
On avait déjà signalé la présence de petits abcès cutanés sur les
parties dénudées, face et parties lalérales de la tête, mais, en
faisant tondre en entier les animaux, on peut constater facile-
ment l'éruption généralisée que nous signalons, dans des cas
exceptionnels cependant.

Forme chronique. — Les symptômes généraux passent ina-
perçus le plus souvent. La mamelle est affectée en totalité ou
en partie seulement : elle s’atrophie, les trayons deviennent
flasques et l’on percoil des noyaux d’induration arrondis, situés
plus ou moins profondément dans la glande, mais, souvent, à
la base du trayon.

S'il y a des accidents articulaires, on constate la tuméfaction
des épiphyses et l'hydropisie des gaines: en pressant l’articula-
tion et en cherchant à faire mouvoir le membre, auquel la dis-
tension des ligaments articulaires permet des déplacements
latéraux assez étendus, on percoit à la main, on entend même
parfois nettement à distance, une crépilation spéciale (obs.
personnelle).

Les malades marchent à genoux ou en traïnant le train pos-
lérieur sur le sol, ou restent continuellement couchés.

Parfois la boiterie n'est pas permanente. Tel animal dont
l'un des membres est soustrait complètement à l'appui pen-
dant plusieurs jours, se met à marcher droit presque subite-
ment, puis la boiterie réapparaît, moins accentuée générale-
ment. On peut constater ainsi plusieurs attaques successives :
il s’agit alors de lésions peu graves, sans déformation bien
appréciable de l’arliculation. C’est à cette forme que Barthé-
lemy donnait, avec justesse, le nom de rhumatisme arthri-
tique.

L'œil présente une simple opacité de la cornée ou de la kéra-
tite parenchymateuse, de l’ophtalmie interne et, mais rare-
ment, des complications purulentes. D'après Rocco Marra, les
béliers et les boucs montrent parfois de l'inflammation du
scrotum. On a signalé, et nous l'avons constaté nous-même,
des abcès en diverses régions, parotide, médiastin, museles
(Hess et Guillebeau.

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 943

Ces abcès sont dus à des pyogènes vulgaires (staphylocoques
et streplocoques) comme nous nous en sommes assuré.

Les malades maigrissent considérablement et meurent dans
un élat de cachexie complète, si leur envoi à la boucherie ne
vient pas interrompre l’évolution de la maladie.

Durant l'épidémie et l'année d'après, les agneaux qui nais-
sent meurent de [a maladie ou, faute de lait, périssent de faim ;
les brebis avortent, donnent des mort-nés ou des monstres
(Celli et de Blasi).

Nous avons constalé, expérimentalement, la justesse de ces
observations (Voy. paragraphe : Des agneaux).

L'altération du tissu musculaire est remarquable; l'animal
peut encore présenter un certain état de graisse, mais l’atro-
phie des muscles le fait paraître étique.

Par l'exposé clinique qui précède, on voit combien le terme
d'agalaxie, appliqué à une maladie générale avec localisations
aussi variées, est insuffisant et inexact.

On ne peut rapprocher l’agalaxie d'aucune autre affection
de l’homme ni des animaux : c'est une entité morbide d'un
caractère tout à fait spécial.

ALTÉRATION DU LAIT.

Le lait d'une mamelle infectée subit des altérations pro-
fondes dans son aspect, ses qualités physiques et chimiques.
En réalité, très rapidement, le liquide sécrété n’est plus du
lait : dès le début, il est crémeux ou aqueux. Dans le premier
cas il diminue de suite de quantité, dans le second il peut
encore être assez abondant. Il se sépare nettement en deux
couches : l’une supérieure, séreuse, plus ou moins louche, de
teinte parfois un peu verdâtre, et une autre, inférieure, com-
posée de grains, de grumeaux, de tortillons formés d'une
matière puriforme, qui adhèrent aux parois du vase et se ras-
semblent au fond.

Parfois, une faible épaisseur de globules rouges s’intercale
entre les deux couches.

Quand la sécrétion mammaire va totalement cesser, la mul-
sion permet d'obtenir, avec une très faible quantité de liquide
séreux, la matière puriforme qui prend, par son passage forcé

944 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

à travers l'élroit orifice du trayon, la forme de gros vermicelle.

Toujours, le liquide altéré possède une saveur salée carac-
téristique. Il est quelquelois assez difficile d'obtenir le liquide
accumulé dans le sinus mammaire, l'orifice du trayon étant
généralement obstrué par un petit bouchon qu'il convient
d’écraser sous les doigts ; il est bientôt remplacé par un autre;
mais l'extraction en est plus facile. Les doigts qui opèrent la
première mulsion perçoivent netlement une crépitalion spé-
ciale : il semble que de l'air est enfermé et chassé de quelques
vacuoles; en réalité, cette crépitalion est due, selon toute pro-
babilité, à l’écrasement des grumeaux puriformes (Obs. per-
sonnelle).

L'aspect du liquide extrait de la mamelle permet d'apprécier
le caractère de l’inflammalion.

Dans les cas chroniques, ce liquide est séreux; si l’inflam-
mation est aiguë, ilse prend en un caillot, jaune verdâtre, peu
résistant.

Déposé sur un filtre de toile, ce caillot laisse exsuder rapide-
ment la presque totalité du liquide qui l'imprègne, liquide
assez limpide.

Le fromage obtenu avec le lait alléré est de mauvaise
qualité, sec, maigre : sur la coupe, il se montre criblé de
petits trous, alors que le fromage normal est creusé de larges

vacuoles, peu nombreuses (Oreste et Marcone, Hess et Guil-
lebeau).

MopiFicaATIONS CHIMIQUES ÉPROUVÉES PAR LE PRODUIT DE SÉCRÉTION
DES MAMELLES MALADES.

Les liquides analysés provenaient : 1° de six chèvres non
encore infectées et 2° des mêmes animaux atteints de mam-
mite.

La malière grasse fut dosée dans ces deux échantillons au
moyen du procédé Adam, modifié par Meillère. La même prise
d'échantillon servit ensuite au dosage des matières albumi-
noïdes d'après les indications de Patein et Deval et enfin à la
détermination du lactose au moyen de la liqueur cupro-potas-
sique.

Le procédé Kjeldahl fut utilisé pour les dosages de l'azote

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 945

total et de l'azote des différentes fractions des matières azotées.

Dans le tableau suivant, qui renferme les résultats obtenus,
l'azote de la caséine représente l'azote des matières précipitées
à la température ordinaire par l'acide acétique et l'acide car-
bonique; l'azote des albumines est l’azole des matières non pré-
cipitées par l'acide acétique et l'acide carbonique, mais préet-
pitées par l'acide phospho-tungstique; enfin l'azote amidé est
l'azote des substances non précipitées par lacide phospho-
tungslique.

L'examen du tableau montre des modifications intéressantes,
analogues, du reste, à celles constatées par Hess et Guillebeau
dans leur travail sur l’agalaxie infectieuse des chèvres.

Ces modifications portent d’abord sur les éléments caracté-
ristiques de l’activité de l'épithélium glandulaire : la caséine,
le lactose et la matière grasse.

La matière grasse tombe de 33 gr. # par litre à 6 gr. 8 et ce
lactose de 32 gr. 1 à 2 gr. 9. Dans le lait pathologique, la phé-
nylhydrazine permet de constater qu'il s’agit bien de lactose et
non de glucose.

Les matières albuminoïdes augmentent notablement et cet
accroissement se fait surtout sentir pour les matières albumi-
noïdes vraies (albumine et globuline), ce que montrent netic-
ment les chiffres relatifs aux diverses portions de l'azote et leur
pourcentage par rapport à l'azote total.

L'acidité évaluée en acide lactique par litre est manifeste-
ment déprimée. Cette diminution doit ètre attribuée à la dispa-
rition de l'acide carbonique dissous, mais aussi à la présence
d’une dose notable d'ammoniaque, résultant de l'action des
microbes sur les matières albuminoïdes.

Les cendres ont à peine varié comme poids total, mais leurs
différents composants ont nettement changé de proportions.

Une diminution frappante porte sur l'acide phosphorique, la
chaux et la magnésie; une augmentalion nette du chlore
explique le goût salé du lait. Le lait normal contenait 2 gr. 08
de chlore par litre (correspondant à 3 gr. #3 de CINa); le pro-
duit de sécrétion des mamelles malades en accusait 3 gr. 53
(correspondant à 5 gr. 82 de CINa).

Ces modifications, qu'une analyse détaillée met en évidence,
ne sont pas particulières à la manifestation mammaire de l'aga-

946 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

laxie. Dans les mammites, ainsi que l’a indiqué Monvoisin (1),
les cellules des acini étant atteintes dans leur intégrité anato-
mique et physiologique, les produits résultant de leur activité
sont élaborés en moins grandes quantités; le lait fourni par
une mamelle malade passe insensiblement de la composition
du lait normal à celle du sérum sanguin, aussi bien en ce qui
concerne les matières organiques que les matières minérales.

LAIT DE CHÈVRES NORMALES AGALAXIQUES
DEN AB AELEÉE) NL; : . . . +. 1.029 1.023
Acidité (entacide lactique): . . . . . : À gr. 4 DrEE 1
Résidu sec. 30 2 TOR MES 124,95 88,3
MAtLÈT etes SC es 2200 33,4 6,8
Eactose JUNE 34,1 2,9
Malières bandes 5 0 MER 43,9 67,4
CONTES PNR 0, LL, 9,8 9,6
Point de NCORSÉRORRAARENS . |. . .. — 00565 . — 00545
Azotè total Free RS er à! 2, 2 TS Ua 10 gr. 308
VOUEUEMEL ES ENS 000 ENCRES En) 4,690
AZOLELTeSSAIDUNNESPRRER NL 07 2,660 4,853
Azole amidé . 0,631 0,765

Azote de la caséine (en centièmes de l'azote

total) Meme PRES. ©. 53,15 45,49
Azote de bar ne (en centièmes de

l'azote total) 0 RE 31,86 47,08
Azote amidé (en centièmes 1. l'azote total). : 8.99 1,43

ANALYSE DES CENDRES (par litre).

Chlore "+7 LRO An Set en 2: L 2 gr. 08 3 gr. 33
Acide phosphorique 21 5 CFE 1,61 0,72
Chaux ee Ver RE int 10 A COTE 1,80 0,31
Magnésie. . 0,520 0,101

ANATOMIE PATHOLOGIQUE (D APRÈS CELLI ET DE BLAS1).

L. Glande mammaire. — À l'œil nu, dans l’agalaxie con-
lirmée, les mamelles sont diminuées de volume, dures, et sur
la coupe on voit que les acini sont remplacés par du tissu con-
Jonctif de nouvelle formation. L'examen microscopique montre
un processus de mammite interslilielle caractérisée par la dis-
parition du tissu glandulaire avec substitution de tissu fibreux

(4) Moxvoisix, Journal de physiologie et de palhologie générale, janvier 1910,
el Journal de pharmacie et de chimie, juillet 1910.

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 947

plus ou moins condensé suivant la durée de la maladie. La
néoformation conjonctive ne se limite pas seulement au paren-
chyme glandulaire péri-acineux, mais s'étend aussi aux conduits
inter-acineux de moyen et de grand calibre, déterminant la pro-
duction de polypes fibreux endo-canalieulaires revètus d’un épi-
thélium ; dans quelques cas, ces polypes obstruent complète-
ment la lumière des tubes.

De telles formations s'observent surtout dans les cas très
avancés. Dans les formes plus avancées encore, outre l'atro-
phie du parenchyme glandulaire, on peut observer de la dégé-
nérescence calcaire, etc... Rares sont les suppurations et les
abcès de la mamelle; on ne les rencontre que lorsqu'il y a
engorgement lacté, quand on abandonne les femelles sans les
lraire.

Plus rares encore sont les abcès péri-articulaires et intra-
musculaires.

IT. OZ. — La lésion débute par de l'hyperhémie péricor-
néale : dans la suite, on observe de la kéralite parenchymateuse
interstitielle avec taches cornéales. A l'examen microscopique,
on note une infiltration parvicellulaire et des néoformations
vasculaires dans l'épaisseur de la cornée.

Ce processus peut régresser ou entrainer la perforation de la
cornée, le staphylome de l'iris, l'évacuation du contenu de
l'œil et la panophtalmie.

Suivant ces différentes complications, la maladie peut guérir
complètement, laisser de simples leucomes ou des cicatrices
avec cécité plus ou moins complète.

IT. Arculations. — La lésion est caractérisée par de l'infil-
tration et de l’'engorgement du lissu conjonctif périarticulaire.
A la coupe, celui-ci se montre épaissi et infiltré de sérosité,
alors que la synoviale, la synovie et les cartilages apparaissent
normaux. D'autres fois, la synovie augmente de quantité et
devient rougeätre, la synoviale s’épaissit, montre des foyers
nécrotiques et de l’infiltration parvicellulaire, érosion des car-
tilages articulaires : plus rarement des fongosités polypeuses
formées de tissu conjonctif jeune. D’habitude, ces lésions régres-
sent complètement, l'ankylose est rare. Dans le {issu articulaire,
on note un processus d'endo-artérite.

948 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

DOCUMENTS EXPÉRIMENTAUX.

Les différents savants qui ont tenté l'étude expérimentale de
l’agalaxie, Hess et Guillebeau, Oreste et Marcone, Bournay et
Leclainche, Celli et de Blasi, sont unanimes à déclarer qu'aucun
microbe, isolé des lésions, ne s'est montré capable de repro-
duire la maladie.

On rencontre, en effet, parfois, par la culture, dans le lait
agalaxique, des formes microbiennes diverses, les trois variétés
du staphylocoque notamment et le streptocoque.

Nous avons éludié, dans un précédent mémoire, une
pyohémie spéciale, consécutive à l'agalaxie et reconnaissant
comme agent spécifique un fin bacille doué de caractères bien
tranchés (1).

Le contenu des lésions fermées de l'œil et des articulations
se montre stérile le plus souvent : on peut mème, comme nous
l'avons réalisé maintes fois, ensemencer assez largement du lait
agalaxique recueilli avec quelques précautions, sans constater
la moindre culture de microbes colorables. De fait, ainsi que
l'ont démontré en 1906 Celli et de Blasi, l'agent spécifique de
l'agalaxie est un virus fillrant.

Nous donnons ci-après 2x extenso, les conclusions de Celli
et de Blasi qui résument tout ce qui avait été élabli avant nos
recherches ; au point de vue expérimental on verra quelle part
importante ils ont apportée dans l'étude de l’agalaxie.

1° L’agalaxie du mouton etde la chèvre est incontestablement
une maladie contagieuse par le moyen du lait, qui présente des
altérations caractéristiques ;

Deere à

3° Toutes les nombreuses tentatives bactériologiques et his-
tologiques faites pour mettre en évidence et cultiver l'agent
causal de l’agalaxie se sont toujours montrées infructueuses ;

4° L'agalaxie est due à un virus filtrant éliminé avec le lait
malade ;

5° L'ultra-microscope ne permet aucune différenciation parmi
les particules colloïdes du lait filtré:

(4) Voy. Le mal de Lure. Annales de l'Inslitul Pasteur, mai 1912.

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 949

6° Expérimentalement avec le virus (lait) filtré sur Berkefeld
et sur Silbersmith, au moyen d’inoculalions dans le sinus
galactophore et dans le tissu mammaire, on peut reproduire
l'agalaxie; au moyen d'inoculations dans la cornée ou dans le
conduit galactophore, ou sous la peau, l’altération oculaire;
par inoculation intra-articulaire, l’arthrite agalaxique; etenfin,
par l'inoculation sous-culanée, oculaire et endo-articulaire, le
cadre complet de la maladie. En dehors du mouton et de la
chèvre, il est encore possible de reproduire la kératite paren-
chymateuse chez le lapin en injectant le filtrat dans la chambre
antérieure ;

7° Le tableau anatomo-pathologique de l’agalaxie et des
autres localisations expérimentales est identique à celui de
l'infection naturelle ;

8° Rien de semblable ne peut être reproduit par l'injec-
tion des bactéries isolées du lait, des yeux ou des articula-
tions ;

9 Pour reproduire expérimentalement l’agalaxie, dans le sens
étroit du mot, on donnera la préférence à l'injection dans le
conduit galactophore, sous-cutanée ou endo-articulaire. Il
suffit parfois de déposer le virus à l'entrée du trayon. L'agalaxie
doit, par conséquent, se {ransmettre dans la nature par conta-
gion directe ou semi-directe, ou par inoculation. Nous ne pou-
vons pasaffirmer que les arthropodes jouent un rôle quelconque
dans la transmission de l'affection ;

10° Le virus du lait de la chèvre (expérimental) ne paraît pas
se différencier de celui de la brebis;

11° Le virus de l'agalaxie est plutôt labile, car, mème con-
servé dans de bonnes conditions, à 15 degrés dans l'obscurité,
il s'atténue en moins de deux mois. Cette propriété confirme
indirectement la transmission par les modes sus-indiqués ;

12° Le virus de l'agalaxie s’atténue, ou tout au moins ne
s’exalte pas par le passage d'animal à animal, d'œil à œil. Une
atteinte de la maladie est suivie de l’immunité;

13° Nous avons des raisons de croire que l'immunité expéri-
mentale peut être réalisée.

D'une autre série d'expériences, les mêmes auteurs dégagent
ces nouvelles conclusions :

1° Le virus conservé deux mois à 14 degrés est inactif;

950 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

2° Chauffé pendant une heure à 40-45 degrés, le virus possède
des propriétés immunisantes :

3° Le pouvoir infectant des humeurs de l'organisme malade
est au maximum dans la toute première période (primissimo
periodo) de Ia maladie. |

Enfin, en avril 1912, MM. Rocco Marra et Nicola Cocciante,
opérant sur un nombre très élevé d'animaux, montrent que le
sang recueilli dans les formes graves au moment de l'élévation
thermique, est virulent; ils annoncent leur découverte d'un
vaccin, remettant à plus tard des indicalions sur leur facon de
le préparer.

Il nous à semblé cependant qu'il restait encore à élucider
bon nombre de questions importantes. L’envahissement rapide
de nos départements du Sud-Est nous offrait un vaste champ
d'expériences; l’empressement de nos confrères à nous pro-
curer des sujets malades, les plaintes réitérées et trop fondées
des éleveurs, nous décidèrent à poursuivre l'étude de l’aga-
laxie, étude que nous avions déjà commencée avec le Mal de
Lure.

PRODUITS VIRULENTS.

Sans mettre le moins du monde en doute les résultats
obtenus par nos devanciers, nous avons été amené, surtout
dans le but de posséder le virus agalaxique 4 l'état pur, à
rechercher la virulence dans le lait altéré, dans la cornée et
dans la sérosité articulaire.

Nous pouvions l'obtenir facilement par la filtration, mais,
étant donné le but que nous poursuivions, ce procédé ne pou-
vait nous rendre aucun service. Il est en effet préférable
d'opérer avec des produits non filirés, incomparablement plus
riches en éléments virulents.

Pour nous, la filtration n'offre qu’un intérêt très relatif; elle
introduit d’ailleurs dans l’expérimentation une complication el
des causes d'erreurs auxquelles on doit s'efforcer d'échapper
lorsque la chose est possible.

Il est tellement facile de démontrer la virulence du lait, du
suc de cornée malade ou de la sérosité des articulations
atteintes, que l’on reste confondu devant les résultats négatifs

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 951

enregistrés par cerlains auteurs. Ces résultats ne peuvent s'ex-
pliquer autrement que par l'emploi, comme sujets d'expérience,
d'animaux provenant de milieux infectés et ayant acquis l'im-
munité. Il est douteux que l’on puisse rencontrer des animaux
naturellement réfractaires à la maladie. Placé comme nous le
sommes, loin des foyers d'agalaxie, n'utilisant que des mou-
tons nés au laboratoire ou d’origine connue, nous n'avons pu
que constater leur grande réceptivité.

I. Infection par injection de lait dans la mamelle. — Une
seule précaution nous paraît indiquée, celle de n'utiliser que
des femelles présentant encore une sécrétion mammaire, si
minime soit-elle. A deux reprises, sur des vieilles brebis ne
possédant que des mamelles totalement atrophiées, nous avons
vu l'injection d'un produit sûrement virulent rester négative,
tandis que d'autres animaux du même lot, dont la mamelle
donnait encore à la mulsion quelques gouttes de sérosité, con-
tractaient une mammite typique.

Nous n'avons que l'embarras du choix dans nos notes d’ex-
périences pour montrer que l'injection du lait agalaxique dans
le trayon provoque toute la gamme des accidents, depuis les
formes aiguës jusqu'aux localisalions éloignées, arthrite et
kératite.

Brebis 557. — Dans le trayon aroit,1/2 cent. cube liquide mammaire agalaxique
de chèvre; cinq jours après, le trayon parait rouge et turgescent, il donne
5 cent. cubes de liquide louche avec grumeaux puriformes. Quinze jours
après, l'œil gauche est fermé, pleureur, la cornée est louche ; dans la suite
l'animal reste couché, semblant parésié du train postérieur.

II. Infection par injeclion du produit de broyage de la cornée dans la mamelle.
— 1° Une chèvre 545 reçoit, le 26 décembre 1911, dans le trayon gauche,
5 cent. cubes du liquide obtenu en broyant la cornée opaque d’une brebis
envoyée d'Oraison (Basses-Alpes), par notre confrère, M. Allègre. Le 30, la
mamelle donne assez difficilement un liquide filant, puriforme, jaune ver-
dâtre. Le 2 janvier, le quartier gauche est volumineux ; la mulsion doulou-
reuse, donne un liquide purulent avec grumeaux. La présence de pus n'a
rien d’anormal étant donnée l'impureté forcée du liquide injecté. Le 8, la
cornée droite est complètement opaque, entourée d'une large bande rouge
foncé ; l'animal reste étendu sans mouvements.

2° Le 8 janvier, une chèvre 539 reçoit dans le trayon droit le liquide de
broyage de la cornée droite de la chèvre 545 précédente. Le 18, l'animal
boite du membre antérieur gauche dont le genou est sensible, l'œil gauche
est à demi fermé. Le 19, la chèvre reste couchée, la tête repliée versle flanc,
le poil est piqué. Le trayon inoculé donne 15 cent. cubes de liquide louche
avec grumeaux ; le 24, boiterie des deux membres postérieurs ; le 26, la cornée
gauche est complètement opaque, d’une teinte laiteuse, entourée d'une large

952 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

bande rouge foncé. À partir du 25 février, cette lésion régresse ; la cornée
reprend peu à peu sa transparence; la mamelle ne donne plus que quelques
centimètres cubes de liquide avec grumeaux; les membres reprennent leur
liberté d'action.

II. Infection par injeclion intraveineuse de liquide articulaire. — Le 1°" juillet
1911, on retire de l'articulation fémoro-tibiale d’une brebis 419, 4 cent. cubes
de sérosité un peu louche et rosée. 1 cent. cube de cette sérosilé est ense-
mencé en bouillon sérum et se montre stérile. 2 cent, cubes sont injectés
dans la jugulaire d'un agneau 520.

Le petit animal maigrit assez rapidement. Le 10 juillet, il boite du membre
antérieur gauche dont le boulet est sensible; le 18, la boiterie est plus accen-
tuée, le boulet est engorgé, très douloureux; le 22, l'animal conserve pour
manger la position à genoux. Il se rétablit lentement dans la suite.

Ces expériences prises parmi beaucoup d'autres, apportent
la confirmation que le virus agalaxique se rencontre dans les
différentes localisations et montrent que la lésion articulaire
fermée est susceptible de le fournir à l’état pur; malheureuse-
ment, la quantité de sérosité est toujours très minime : le cas
de la brebis 479 qui nous a donné # cent. cubes de liquide est

tout à fait exceptionnel. |
= Par le relevé de nos expériences, nous avons pu établir assez
exactement le temps que mettent à apparaître les différentes
localisations suivant le mode d'infection adopté.

C'est en moyenne trois à quatre jours après l'introduction
du virus dans la mamelle que le lait commence à s’altérer dans
le trayon inoculé; parfois, assez rapidement, le deuxième
quartier s'infecte à son tour, mais il peut aussi rester indemne
très longtemps et mème ne pas être atteint. La mulsion est
parfois douloureuse, les animaux cherchent à fuir, à se défendre;
mais nous avons rencontré des sujets manifestant la plus com-
plète insensibilité à la traite, alors même que la glande tout
entière était infectée et fournissait en abondance du lait altéré
et mélangé à de nombreux tortillons puriformes, dont l’extrac-
tion nécessitait des pressions el des tractions énergiques.

A la suite du dépôt de virus dans la mamelle, cet organe
peut rester seul atteint; l’état général de l'animal subit cepen-
dant des modifications plus ou moins rapides et profondes : il
maigrit beaucoup et peut même devenir cachectique. D'autres
œuérissent, mais la convalescence est toujours longue et ce n’est
parfois qu'après plusieurs mois que l'animal reprend un embon-
point à peu près normal. .

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 953

Il s'écoule toujours un certain temps entre l'infection de la
mamelle et l'apparition des autres localisations, oculaires ou
articulaires, douze-quinze jours en moyenne.

Les localisations survenant après l'injection du virus dans
le muscle (5 animaux) ont une incubation un peu plus courte :
elle est de douze jours au maximum.

Enfin, par les voies digestives (12 animaux), ce n'est que dix-
huit jours en moyenne après le repas infectant que les locali-
sations se développent.

La chèvre s'est montrée, dans la généralité des cas, beaucoup
plus sensible que la brebis à la maladie expérimentale.

LE VIRUS FILTRANT:

Nos recherches à ce sujet confirment entièrement celles de
MM. Celli et de Blasi : l'agent spécifique de l'agalaxie est un
virus filtrant.

I. — Le 26 mai 1911, 3 brebis reçoivent dans le trayon gauche chacune
10 cent. cubes du liquide dilué de la mamelle d’une chèvre 510 (agalaxie natu-
relle, Nice) et filtré sur Berkefeld. V.

Les n°$ 479 et 480 donnent encore quelques cent. cubes de lait, le n° 481 a
les mamelles totalement atrophiées.

Brebis 479. — Dès le 29, le quartier gauche est chaud, tendu. Dans la
suite, la mamelle fournit un liquide louche, un peu verdâtre, avec gru-
meaux. Le 15 juin, éruption généralisée de vésico-pustules sur tout le corps,
ædème de chaque côté de la face; jarret droit engorgé. Le 29, l'engorgement
du jarret a augmenté, la sensibilité apparait, l'animal boite; le 1° juillet, on
retire aseptiquement 4 cent. cubes de sérosité un peu louche.

Le quartier droit s'infecte à son tour et fournit 50 cent. cubes de liquide
séreux, verdâtre, alcalin, qui se prend en caillot comme une sérosité inflam-
matoire.

Brebis 480. — Le 1er juillet, le quartier gauche est beaucoup plus volumi-
neux que le droit, qui est flasque ; le 16, température 4098; le 20, la mamelle
est dure et donne difficilement quelques gouttes de liquide grisâtre, grume-
leux ; le 23, le boulet antérieur droit est engorgé, sensible; le 28, l'animal se
tient à genoux et présente de la difficulté à se remettre debout.

Brebis 481. — N'a jamais eu la moindre lésion ni la moindre élévation de
température, ce que nous croyons devoir attribuer à l'état d'atrophie de la
glande qui n'a pas permis la culture du virus.

II. — Le 10 juin 1911, 10 gouttes de liquide de la mamelle de la brebis 479
sont diluées dans 200 cent. cubes de solution physiologique et filtrées sur
Berkefeld V.

Une brebis en pleine lactalion, 471, reçoit 20 cent. cubes de filtrat dans le
trayon gauche. Le 12, le quartier gauche paraît plus volumineux que le droit.
Le lait obtenu est un peu verdâtre, plus aqueux que celui du droit qui est

61

95% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

blanc mat. Le 16, le quartier gauche donne 50 cent, cubes de liquide ver-
dâtre, alcalin. Le 20, on obtient 200 cent. cubes de liquide jaune verdâtre-
avec grumeaux puriformes; le quartier inoculé est énorme; on y sent des
noyaux indurés, bosselant la peau; le 23, le liquide est louche et de petits
tortillons nagent à sa surface; le 27, la quantité de liquide diminue. La
mamelle s’atrophie dans la suite.

Le 4 juillet, une vieille brebis berrichonne avait recu dans la jugulaire
5 cent. cubes du liquide mammaire 471. Le 10, raideur des quatre membres,
surtout des postérieurs. Sacrifiée le 20, les articulations des genoux et des
jarrets renferment de la sérosité roussâtre, stérile en bouillon sérum.

CONSERVATION DE LA VIRULENCE DANS LA MAMELLE.

MM. Celli et de Blasi écrivent : « Le pouvoir infectant des
humeurs de l'organisme est au maximum dans la toute pre-
mière période (primissimo periodo) de la maladie. »

D'autre part, le D' Rocco Marra, au cours d’une visite que
nous fimes ensemble à un troupeau infecté, dans la campagne
romaine, m'affirma que le lait n'était virulent qu'au seul
moment de l’élévation thermique. On relrouve encore celle
même opinion exprimée dans le mémoire qu'il vient de publier
avec le D' Nicola Cocciante.

Des expériences entreprises antérieurement à mon voyage
en Italie (octobre 1911) et continuées depuis sont en contra-
diction complète avec l'opinion de nos honorables collègues ita-
liens.

Le 21 mai 1911, je recevais au laboratoire 5 animaux agalaxiques que je
devais à l'amabilité de M. Scoffié, vélérinaire départemental des Alpes-Mari-
times. Une vieille chèvre (n° 510) était particulièrement intéressante; elle pré-
sentait les lésions suivantes : l'œil droit un peu atrophié et enfoncé dans
l'orbite montre, en son centre, une fistule donnant issue à du pus verdâtre,
très riche en pyobacilles (1); les deux genoux sont lésés ; on perçoit à la main.
quand on oblige les membres à se fléchir, et on entend mème nettement à
distance, des craquements articulaires. Les deux quartiers de la mamelle
renferment plusieurs noyaux indurés gros comme des noisettes; la mulsion
permet d'obtenir, des deux trayons, un liquide séreux, louche, dans lequel
flottent des grumeaux.

Dans la suite (mai à décembre 1911), la quantité de liquide obtenu diminue
progressivement. On n'obtient plus que quelques centimètres cubes, puis
quelques gouttes; enfin la sécrélion tarit totalement. Au 6 novembre, le
quartier droit est complètement atrophié et on ne peut obtenir une seule
voutte de liquide, deux noyaux indurés sont perçus à la base du trayon: le
quartier gauche renferme un seul noyau induré et fournit encore 3-4 cenl.

|) Voy. Mal de Lure, Annales de l'Institut Pasteur, 1° mai 1912.

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 955

cubes de liquide séreux, louche, avec grumeaux grisâtres, caséeux. Ce
liquide louche et les grumeaux, ensemencés à plusieurs reprises en bouillon
sérum de mouton et sur gélose sang, se sont montrés stériles ou n'ont
donné que de rares colonies de staphylocoques.

Bien que la date exacte du début de la maladie de cet animal
nous soit inconnue, nous estimons, d'après l’état des lésions,
qu'elle remontait à un mois au minimum.

Cette chèvre fut conservée et le liquide de sa mamelle servit
à toute une série d'expériences qui démontrèrent : 1° la pré-
sence du virus filtrant de Celli et de Blasi; 2° la persistance de
la virulence dans le lait.

1° Le T juin 1911, un mouton d'un an, 430, recoit dans la chambre anté-
rieure de l'œil droit 2-3 gouttes du liquide mammaire 510. Dans les jours qui
suivent, l'œil est à demi -fermé et larmoie abondamment; le 10, le trouble
cornéen apparait et s’accentue dans la suite. Le 5 juillet, une taie grisâtre
s'étend sur toute la cornée, qui est entourée d’un large ruban rouge foncé.
On peut piquer la cornée sans que l'animal présente la moindre réaction :
Il y a anesthésie totale. L'animal se rétablit peu à peu sans autres locali-
salions.

20 Le 2 juin 1911, 3 agneaux 437, 438 et 439, reçoivent chacun dans la jugu-
laire, 5 gouttes de liquide mammaire 510.

437. — Le 6 juin, l'œil droit commence à se troubler, la conjonctive est
congestionnée, larmoiement intense; le 10, boiterie du membre antérieur
droit; le 14, l'œil s'ulcère, le genou droit est engorgé, sensible: le 20, l'animal
ne peut plus se relever. À partir du 30, la lésion oculaire guérit, la boiterie
s'atténue et l'animal se rétablit.

438. — Le 10. boiterie à droite derrière; le 14, éruption de vésico-pustules
recouvertes d'une croûte épaisse sur le nez et sur la face; sous les croûtes
existe du pus renfermant du streptocoque. Le 3 juillet, on tond ce mouton
et on s'aperçoit que l’éruption de vésico-pustules s’est généralisée à toute
la surface cutanée; les croûtes s'enlèvent facilement en laissant à leur place
des surfaces rosées, circulaires.

439. — Le 5, ia paupière inférieure gauche est œdémateuse, fermée, l'œil
droit est légèrement louche; le 20, l'œil droit, complètement opaque, est
entouré d'un large liséré rouge foncé.

30 Le 11 juillet 1911, une brebis en lactation, 522, reçoit dans le trayon
gauche 1 cent. cube de liquide mammaire 510. Le 26, l'œil droit est complè-
tement opaque ; le genou gauche est volumineux, chaud, douloureux; le lait
du quartier inoculé a une consistance caséeuse, il est peu abondant et sort
sous forme de torlillons. Au 20 septembre. les mamelles sont atrophiées.

4° Le 28 novembre 1911, une brebis 521 reçoit dans le trayon droit 2 gouttes
obtenues difficilement de la mamelle 510. Le 5 décembre, la base du trayon
et le trayon lui-même sont augmentés de volume, de teinte rouge; la mul-
sion donne 20 cent. cubes de liquide louche, verdâtre, avec tortillons. Le S,
le quartier inoculé est volumineux; le 22, l'œil droit se trouble ; le boulet
antérieur droit est volumineux, chaud, sensible, l'animal n'appuie plus sur
ce membre.

956 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Comme la sécrétion mammaire de la chèvre 510 se Larit
complètement, force nous fut d'interrompre nos inoculations ;
mais cette série d'expériences montre, de la façon la plus nette,
que jusqu'au dernier moment, alors que le trayon ne donne
plus que difficilement 2-3 gouttes de liquide altéré, celui-ci se
montre aussi virulent qu'au début.

Nous le répétons, la chèvre 510, porte-virus, élait arrivée au
laboratoire le 21 mai, le début de sa maladie remontait au
moins à un mois de date et le 28 novembre le liquide de sa
mamelle a encore infecté une brebis : sa mamelle a done cul-
tivé le virus pendant plus de huit mois:

Ce cas n’est pas isolé, el nous pourrions encore rapporter
l'histoire d’une brebis 452 dont le liquide mammaire permit
d'infecter plusieurs animaux dans l'espace de quelques
mois.

Il résulte donc de ces constatations deux faits d’une grande
importance pratique :

1° La mamelle agalaxique peul sécréter pendant plusieurs
mois un liquide dont la quantité va diminuant lentement Jjus-
qu'à ce que la glande soit complètement atrophiée ;

20 Ce liquide, à quelque moment de l’évolution de la maladie
qu'on le recueille, se montre également virulent.

Il conviendra de tenir compte de ces données dans l’établis-
sement des mesures prophylactiques que lon devra prendre
un jour ou l’autre contre l’agalaxie.

DiSSÉMINATION DU VIRUS DANS LE MILIEU EXTÉRIEUR.

Pendant la plus grande partie et souvent la totalité de leur
évolution, les locelisations agalaxiques restent fermées. IT ne
suffit donc pas de laisser des sujets sains cohabiter avec des
malades pour voir forcément la contagion s'effectuer ; il est
indispensable que l’un des malades laisse échapper le virus
d'une façon ou d’une autre.

Il est à présumer que lorsque la mamelle est distendue par
l'inflammation et l'accumulation du lait altéré, quand des
poches suppurantes se forment, que le pus s'écoule après avoir
macéré la peau; lorsque les articulations lésées suppurent;
lorsque la lésion oculaire va jusqu'à la perforation de la cornée,

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 957

le virus agalaxique est largement disséminé sur les aliments
et les litières.

Celle condilion n'était probablement pas remplie dans les
expériences de Valentini, de Hess et Guillebeau, qui ont laissé
en vain pendant neuf semaines des chèvres saines au contact
de chèvres malades. Par contre, Rocco Marra rapporte le cas
d'un troupeau de chèvres qui fut infecté à la suite de lintro-
duction d'un bouc porteur d'une arthrite suppurée. Les lésions
oculaires, en particulier, portent le virus directement au con-
tact des aliments. Nous avons recherché si les larmes s’échap-
pant d'un œil malade, sans perforation, contenaient le virus.
Le 25 avril 1912, nous recucillons 2 gouttes de larmes de l'œil
gauche d'une brebis 58%; la lésion oculaire avait débuté le
24 mars, après absorplion de virus par les voies digestives ; il
n'y à pas eu perforation, mais la cornée est verruqueuse à sa
surface; la lésion est en voie de régression. Ces 2 gouttes de
larmes, additionnées de 10 cent. cubes de solution physiolo-
gique, sont injectées dans le trayon d'une chevrette 594 dont
la mamelle ne donne que 1/2 cent. cube de liquide séreux.
Le 29, on obtient du trayon inoculé 2 cent. cubes de liquide
agalaxique typique, grisâtre, avec pelits grumeaux puriformes.

Il y a donc là un mode insoupçonné de dissémination du
virus qui rend dangereux tout animal porteur de lésions ocu-
laires, même fermées.

ABSORPTION DU VIRUS PAR LES VOIES DIGESTIVES.

Il ne semble pas que des recherches systématiques aient été
poursuivies par nos devanciers dans le but de constater si,
comme la pratique permettait de le supposer, l’infection était
réalisable par la seule absorption de produits virulents. Cette
expérience avait cependant été tentée, sans résultat, par diffé-
rents auteurs, Oreste notamment; elle méritait d'être reprise,
car, à plusieurs points de vue, elle offre un intérêt tout parti-
culier.

En effet, tous les modes d'infection par effraction des tissus
donnent des résultats positifs; il n’est nullement besoin pour
amener l'apparition des localisations mammaires, oculaires ou
articulaires de déposer le virus dans l'organe sur lequel on

958 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

veut provoquer une lésion. La voie veineuse que nous avons
largement utilisée, avec l'injection dans le trayon, nous paraît
répondre à tous les desiderata dans la recherche de la viru-
lence d'un produit donné.

On a pu réaliser l'infection en déposant Le virus à l'entrée du
conduit galactophore (Celli et de Blasi) ou, plus simplement
encore, en opérant la traite avec des mains souillées de lait
malade.

Mais, en pratique, est-ce bien selon ces différents modes que
la contagion s'effectue dans la majorité des cas? Les brebis lai-
lières ne sont pas les seules atteintes, il s’en faut : les agneaux,
les mâles adultes et les femelles non lactifères s’infectent éga-
lement dans la même proportion et, chez eux, naturellement,
les localisations ne peuvent apparaître que sur les yeux et les
articulations, lésions aussi spécifiques que la mammite aga-
laxique.

On ne peut accuser les mains des trayeurs que pour les ani-
maux qui sont exploités en vue de la production du lait, et
c'est encore l'exception; l'intervention des arthropodes soup-
connée par Celli et de Blasi n’a pu être démontrée expérimen-
talement.

Nous avons pensé que le véritable mode d'infection se trou-
vait dans l'absorption du virus par les voies digestives et l'ex-
périmentation, à plusieurs reprises, est venue confirmer nos
prévisions.

I. — Le 11 janvier 1912, 3 moutons d'un an, nés au laboratoire, 549, 550 et
551, absorbent sur du son 150 cent. cubes de lait agalaxique provenant de la
mamelle de la chèvre 545 (le filtrat de ce lait avait donné une mammite aga-
laxique à la chèvre 544).

549. — Reste couché le 4 février; il boite fortement du membre posté-
rieur droit qui est soustrait à l'appui. Les deux yeux présentent de l'opacité
de la cornée; ils sont entourés d'une large bande rouge foncé, lésion aga-
laxique typique.

550 et 551. — N'ont présenté qu'un peu de raideur des membres posté-
rieurs.
IT. — Le 14 février 1912, 3 vieilles brebis, 563, 564 et 565, absorbent sur du

son 50 cent. cubes de lait extrait des mamelles des chèvres 539 et 544.

Le 29, la brebis 564 tient l'œil droit fermé, le bord des paupières est rouge
vif et la cornée est louche, surtout à sa périphérie. Le 6 mars, la cornée es
complètement opaque avec une belle teinte laiteuse; un large ruban rouge
foncé l'entoure.

565. — Avorte le 5 mars. L'avorton, presque à terme, montre des ecchy-

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 959 |

moses à la surface du péricarde et sur le péritoine qui enveloppe la vessie.
Les ganglions du flanc, vivement irrités, sont entourés d’une large zone
hémorragique. L'urine renferme 1 gramme d'albumine environ.

563. — N'a jamais rien présenté d'anormal.

IT. — 4 brebis en état de gestation absorbent le 5, le 7 et le 14 mars, du
lait altéré sur leurs aliments (582, 583, 584 el 585).

Deux ne présentent dans la suite aucun symptôme d'infection (582 et 585).

583, — Boite du membre postérieur gauche du 2 au 16 avril et donne, le
27 avril un agneau petit, très peu vigoureux, qui vit cependant mais reste chétif.

584. — Boite du membre postérieur droit le 24 mars; la cornée commence
à devenir opalescente. Le 26, la cornée est complètement opaque. Au 7 avril,
le [membre est toujours soustrait à l'appui; l'animal maigrit beaucoup. Le
12 avril, celte brebis donne un avorton non viable, qui reste étendu aban-
“donné et sans soins par sa mère et meurt le 14. Il présente des hémorragies
sous-brachiales et autour des ganglions du flanc: son urine renferme
4 gramme d’albumine par litre. La brebis reste toujours couchée, très maigre.

Ces expériences montrent donc très nettement que le virus
peut être absorbé par les voies digestives et provoquer l’appa-
rition des différentes localisations agalaxiques, et cela toutaussi
aisément sur des animaux jeunes, en parfait état de santé
comme nos moutons de la première série, que chez des brebis
usées par l’âge de la deuxième.

L'infection par les voies digestives, si facile à réaliser expé-
rimentalement, nous apparaît comme le mode de transmission
de beaucoup le plus répandu dans la pratique. Le virus aga-
laxique franchit aisément les barrières épithéliales, cultive
dans le sang, comme l'ont fait voir Rocco Marra et Nicola Coc-
ciante, et se localise ensuite dans les centres d'élection.

Cette expérience avait encore pour nous une importance capi-
tale, elle nous permettait d'infecter les animaux sans avoir
recours à l’effraction des tissus, dans nos essais d’immunisa-
tion, et les expériences avaient, de ce chef, une véritable portée
pratique.

D'autres chercheurs n’ont, avantnous, obtenu aucun résultat
«ans leurs essais de transmission de lagalaxie par les voies
digestives.

Nous ne voyons d'autre explication à ces résultats négatifs
que l'emploi d'animaux d'expériences en trop petit nombre, ou
ayant acquis l’immunité par une atteinte antérieure de la
maladie. Nous pouvons même admettre que ces animaux se
sont infectés sans présenter de symplômes cliniques, ce qui a
fait croire à la non-contagion.

960 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Il convient, en effet, d'utiliser un assez grand nombre de
sujets; quelques-uns paraissent échapper à l'infection, car on
ne constate chez eux aucun symptôme bien net.

Première série. — 3 sujets (moutons d'un an), un seul 449,

présente des lésions oculaires; les deux autres, de la raideur à
peine sensible et fugace des membres postérieurs ;

Deuxième série. — 3 sujets (vieilles brebis distomateuses);
une présente des lésions oculaires (56%); une autre avorte (563) ;
Troisième série. — % sujets (brebis en état de gestation); une

fait de l’arthrite (683); une autre de la kératite, de l’arthrite et
donne un avorton (584).

Aïnsi un certain nombre d'animaux qui ont absorbé du virus
paraissent échapper à l'infection. Parmi ceux-ci, il en est qui,
bien que n'ayant rien montré d'anormal, ont cependant subi
une légère atteinte de la maladie, car, inoculés cinq à sixsemaines
après le repas infectant, même avec une très forte dose de virus,
ils se montrent insensibles; ils ont acquis l'immunité.

On peut nous objecter que ces animaux étaient peut-être
doués d'une immunité naturelle avant l'expérience : nous nele
pensons pas.

Tous nos animaux d'expériences, nous le répétons, sont nés
au laboratoire ou proviennent d'exploitations du centre de la
France, parfaitement à l'abri de l’agalaxie; tous se sont montrés
sensibles aux autres modes d'infection pareffraction des tissus.

D'autres sujets, consommant des repas infectants, ne con-
tractent pas la maladie, même sous une forme bénigne, et sans
symptômes cliniques appréciables.

Une brebis 580, après trois repas infectants en dix jours, le 5, le 7 et le
14 mars, est éprouvée le 27 avril avec 1 cent. cube de lait agalaxique dans
le muscle. Le 4 mai, cette brebis présente de la raideur générale, de la sen-
sibilité des articulations et reste couchée dans un coin de la loge; elle n'avait
donc pas acquis l'immunité.

Les n°s 550, 551, 563 et 565, qui n'avaient jamais présenté de signes bien
confirmés d'infection après ingestion de lait altéré, reçoivent dans les mus-
cles de la cuisse 5 cent. cubes de sérosité pleurale de la brebis 588 (cette
sérosité avait donné une belle mammite agalaxique à la chèvre 591) : les
n°$ 582 et 585 qui se trouvaient dans le même eas reçoivent dans la veine
20 cent. cubes du lait de la chèvre 591.

Aucun de ces animaux na réagi à la suite de cette sévère
épreuve.

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 961

Ainsi, expérimentalement, on retrouve ce que l'on constate
dans la pratique, un pourcentage plus ou moins élevé d'ani-
maux contractant la maladie sous ses différentes formes et avec
ses diverses localisations: d’autres acquièrent l’immunité par
une atteinte bénigne; d’autres, enfin, restent plus ou moins long-
temps indemnes, mais toujours sous la menace de la contagion.

Nous ferons observer que jamais, dans la maladie naturelle,
les sujets d’un troupeau infecté n’absorbent des doses aussi éle-
vées de virus que celles distribuées à nos animaux d'expé-
riences, aussi voit-on la contagion se faire parfois très lente-
ment, ne frappant que le tiers ou la moitié de l'effectif dans
l’espace de quelques mois. Il est probable que le mauvais entre-
tien des troupeaux, à tous les points de vue, les rend plus vul-
nérables, même à des doses incomparablement plus faibles de
produits virulents.

On retrouve dans l’agalaxie, comme dans toutes les infec-
tions du moulon, l'influence néfaste de l'encombrement et de
l'hygiène défectueuse, c'est une banalité de le répéter.

LES AGNEAUX.

Les brebis qui contractent la maladie pendant la gestation
avortent, donnent des mort-nés ou des monstres (Celli et de
Blasi); l’infection peut passer de la mère au fœtus et celui-ei
présente à sa naissance des lésions caractéristiques (Labat).
Nous avons eu l’occasion de faire quelques autopsies d’agneaux
chélifs, non viables, véritables avortons, nés au laboratoire de
mères ayant contracté l’agalaxie expérimentalement par les
voies digestives, deux ou trois semaines avant la mise-bas.

Les lésions, assez discrètes, consistaient en une vive irrita-
lion des ganglions, ceux du flanc notamment, entourés d'une
zone hémorragique, en plaques congestives plus ou moins éten-
dues sur le péricarde et le péritoine.

Dans tous les cas (3), l'urine renfermait environ { gramme
d'albumine par litre.

Quand les agneaux naissent viables, ils meurent rapidement
de faim si leur mère a les mamelles infectées; s'ils vivent, ils
se contaminent presque falalement : la localisation de beau-
coup la plus fréquente est l'arthrite.

962 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Il semble que les jeunes animaux, agneaux et chevreaux,
sont moins sensibles à l’agalaxie que les adultes; les boiteries
sont en général peu graves et disparaissent assez rapidement,
c'est, du moins, ce que nous avons constaté au laboratoire. Il
est vrai de dire que l’on peut rencontrer cependant de très
jeunes animaux porteurs d’arthriles volumineuses, avec hydro-
pisie des gaines et fragments de cartilages dans la séreuse,
remplie de synovie plus ou moins teintée.

Nos brebis hyperimmunisées ont donné elles aussi quelques
agneaux : les uns sont morts dès la naissance, les autres,
éprouvés une quinzaine de jours après l'accouchement avec
une forte dose de virus, n’ont jamais présenté le moindre signe
d'infection. Il est à croire que leur immunilé est en rapport
avec celle de leurs mères.

Nous avons constaté d'une façon très nette que les mères
mellant bas au début de l'infection donnaient encore des
agneaux vigoureux et de taille normale; mais si l'accouche-
ment s'effectue après un temps plus ou moins long au cours de la
maladie déclarée, on n'obtient plus que des jeunes chétifs, très
maigres, puis des avortons non viables et enfin des mort-nés
de taille encore plus réduite (expérience comportant 14 brebis
en état de gestation).

Ces faits confirment, expérimentalement, ce qu'avaient déjà
constaté dans la pratique MM. Celli et de Blast.

CRÉATION D'UNE SOURCE ABONDANTE DE VIRUS PUR.

On rencontre, dans l'étude expérimentale de bon nombre
d'affections à virus filtrant non cultivables x vitro, les plus
grandes difficultés pour obtenir le virus à l'état pur, sous une
forme maniable et en quantité assez grande pour permettre de
tenter l’hyperimmunisation et obtenir ainsi un sérum spéci-
fique.

La sécrélion de la mamelle agalaxique est parfois assez abon-
dante, mais, pratiquement, le liquide recueilli est le plus sou-
vent, malgré les précautions prises, souillé de germes ayant
cultivé dans la mamelle ou se mélangeant au liquide à son pas-
sage dans le trayon. Ces impuretés, bien qu'à l’état d'unités,
au début de Ia maladie tout au moins, ne sont pas sans incon-

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 963

vénients, bien que nous ayons pu injecter dans la veine de
fortes quantilés de liquide mammaire sans accidents graves
immédiats ou éloignés. Le produit de broyage des cornées
malades est, lui aussi, fatalement impur, on le conçoit facile-
ment, à un plus haut degré encore que le liquide mammaire.

Enfin, si la sérosité arliculaire peut ètre récoltée aseptique-
ment, sa quantité n'atteint que tout à fait exceptionnellement
quelques centimètres cubes.

Étant donné que le virus agalaxique cultive localement dans
l'organisme, avant sa généralisation, comme la clavelée, par
exemple, nous avons pensé que le procédé utilisé avec succès
par Borrel pour celte maladie, procédé qui consiste à créer
expérimentalement un abondant exsudat par l'injection de
glulen-caséine dans la plèvre, serait susceptible de nous pro-
curer le virus pur en grande quantité.

Ayant eu l’occasion de récolter de la mamelle d’une brebis
agalaxique depuis peu, à la ferme de M. B..., près de Malijai
(Basses-Alpes), un liquide d’une limpidité presque parfaite
après le dépôt des grumeaux au fond du vase, nous n'avons pas
hésité à l’injecter, mélangé au glulen-caséine, dans la plèvre
d'une brebis neuve.

La stérilité absolue de ce liquide était, bien entendu, pro-
blématique, et nous avions l’appréhension de n'oblenir qu'une
pleurésie purulente à staphylocoques ou à streptocoques;
cependant nous avions déjà constaté à maintes reprises qu'il
était possible d'ensemencer assez largement du lait agalaxique
sans oblenir aucun développement.

Le résultat de cette expérience fut des plus heureux. Le
3 février 1912, une brebis 559 reçoit dans la plèvre droite
250 cent. cubes de liquide Borrel, auquel on a ajouté 5 cent.
cubes de liquide mammaire recueilli l'avant-veille à Malijaï.

Au bout de quarante-huit heures, la respiration s'accélère et
paraît gênée ; l'animal est assez lriste; il mange cependant
volontiers el rumine normalement.

Le 10 février, sept jours après l'injection, la brebis 559 est
sacrifiée. La plèvre droite renferme 2 litres et demi environ de
sérosité jaune, un peu verdâtre et louche ; d'abondantes produc-
tions spongieuses, gorgées de sérosité, ont pris la place du
poumon qui est complètement rétracté.

96% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Cetle sérosité, largement ensemencée en bouillon sérum, se
montre stérile.

Dans le but de contrôler la virulence de l’exsudat pleural
provoqué expérimentalement, nous avons injecté, à plusieurs
animaux, par des voies différentes, des doses variables de
liquide pleural. Ces inoculations de contrôle n’ont débuté qu'au
troisième passage par la plèvre, pour être sûr que le produit
injecté était bien une culture in vivo et non une simple dilution
du virus primitivement inoculé.

Comme les courbes le montrent, il n'y a pour ainsi dire pas
d'incubation ; la température commence à monter quelques
heures après l'injection dans la plèvre : la culture est done
extrèmement rapide.

I. — Le 24 février, une brebis 569 reçoit dans la veine 15 cent. cubes de
sérosilé pleurale de la brebis 562 (3e passage). Le 10 mars, la cornée com-
mence à se troubler; le 15, elle est complètement opaque, jaunâtre à sa péri-
phérie, bleutée en son centre, entourée d'une zone rouge foncé. Le 17, boi-
terie du membre antérieur droit. Cette brebis, dont l'état est de plus en plus
précaire, est sacrifiée le 22 mars.

IT. — Le 2 mars, une chèvre 587 recoit dans le trayon droit 1 cent. cube
de sérosité pleurale de la brebis 568.(4 passage). Le 7, le lait commence à
s'altérer, il est plus jaune et plus crémeux que celui du trayon gauche et
renferme quelques fins grumeaux. Dans la suite, le liquide recueilli prend
tous les caractères du lait agalaxique et diminue de quantité. Au 18, la sécré-
tion est complétement tarie : Ja chèvre reste étendue sans mouvements sur
le côté. On la sacrifie le 22 mars. L'urine renferme 0 gr. 75 d’albumine ; la
mamelle est sclérosée, le sinus droit contient une masse puriforme, consis-
tante, jaunätre, sans microbes au microscope. Les articulations huméro-
radiale gauche, fémoro-libiale droite et gauche, présentent dans leur cavité
une masse fibrineuse en voie d'organisation.

IT. — Le 9 avril, une chèvre 591 reçoit dans le trayon gauche 1 cent. cube
de sérosité pleurale de la brebis 588 (5° passage). Le 12, le quartier inoculé
est volumineux, chaud, mais pas très sensible ; il donne 100 cent. cubes de
lait plus aqueux et plus blanc que celui du quartier droit, qui est plus jaune
et crémeux.

IV. — Le 27 avril, un agneau de deux mois, 605, recoit sous la peau de la
cuisse droite ! cent. cube de sérosité pleurale de labrebis 593 (7° passage). Le
5 mai,le membre antérieur gauche est soustrait à l'appui; le 7, l'animal
reste couché et se déplace difficilement; le 10, l'œil droit est maintenu
fermé, des larmes abondantes s'en échappent; le 19, la cornée est complète-
ment opaque avec un large liséré rouge foncé.

V. — Le !7 mai,une chèvre 620 reçoit dans le trayon droit 1/10 de cent.
cube de liquide pleural du mouton 615 (9° passage). Le 23, le trayon inoculé
donne d'abondants tortillons sans liquide; le trayon gauche s'infecte égale-
ment dans la suite.

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 965

Ces exemples suffisent à établir qu’une véritable cullure de
virus agalaxique s'opère dans l’exsudat pleural provoqué.
Comme chaque animal nous donnait en moyenne 500-800 cent.
cubes de sérosité virulente, nous étions en mesure de tenter
l'obtention d’un sérum immunisant sur un certain nombre de
chèvres et de brebis.

[YPERIMMUNISATION.

Les animaux destinés à la production du sérum furent
choisis parmi nos sujels guéris de la maladie spontanée ou
expérimentale. Nous avons peu de chose à noter au cours de
limmunisalion.

Quinze jours après la dernière injection, les animaux sont
saignés une première fois, puis une seconde, huit jours après
la première.

Le matériel virulent se composait, au début, de lait aga-
laxique ; dans la suite, nous avons utilisé presque exclusivement
la sérosité pleurale.

Toutes les injections, soit sous la peau, soit dans la veine,
furent remarquablement bien tolérées et espacées de huit
jours en huit jours. L'injection de liquide agalaxique dans les
veines provoque parfois un peu d'essoufflement passager :
encore peut-on rétarder l'apparition de ces troubles en ino-
culant le liquide dans la saphène au lieu de la jugulaire.

DE LA VACCINATION.

MM. Celli et de Blasi, les premiers, en 1906, ont tenté de
vacciner en utilisant le filtrat de lait agalaxique chauffé pen-
dant une heure à 40-45 degrés. Il ne semble pas que le procédé
ait subi victorieusement l'épreuve de la pratique.

Ce que nous savons des quelques virus filtrants que nous
avons eu l’occasion d'étudier personnellement depuis une
dizaine d'années et les résultats négatifs obtenus par d’autres
dans des affections variées ne nous à pas engagé à tenter le
moindre essai dans cette voie.

Les différentes méthodes d'atténuation, qui donnent de si
merveilleux résultats dans certaines maladies microbiennes,
sont tenues en échec par les virus filtrants.

966 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avons de suite porté nos efforts vers l'obtention d'un
sérum avec l'intention de l'utiliser, concurremment avec le
virus, virus aussi fixe et aussi exallé que possible.

La réalisation de l’exsudat pleural virulent nous fournissailt
tous les facteurs de ces recherches.

Dès le mois de décembre 1911 nous entreprenions l'hy-
perimmunisation de nos animaux et, en février, jugeant leur
élat convenable, nous commencions nos expériences de con-
trôle de la valeur de leur sérum contre un virus doué d'une
haute activité.

Essar PRÉVENTIF DU SÉRUM.

Le 28 février 1912, nous injectons sous la peau de la cuisse de 6 brebis
des doses variables de sérum; le lendemain, nous inoculons à chacun de ces
6 animaux el à 2 autres servant de témoins, la forte dose de 2 cent. cubes
de lait agalaxique dans les muscles de la cuisse droite, épreuve extrêmement
sévère (nos 570, 571, 519, 513, 574, 575. Témoins 516 et 511}.

570. — Reçoit 1 cent. cube de sérum. Boite du membre antérieur droit le
13 mars; le genou est volumineux et sensible. Elle donne le 7 avril un
agneau chétif qui meurt au bout de vingt-quatre heures, bien que sa mère
ait du lait en abondance. L'état général est très mauvais; elle se rétablit
dans la suite. à

571. — Reçoit 2? cent. cubes de sérum. Boite du membre antérieur gauche
le 9 mars. À partir du 26 mars, reste constamment couchée, les deux genoux
sont très volumineux. Vers le 15 avril, elle se tient sur les genoux pour
manger; son élat général est mauvais. Au 20 mai, elle est d'une grande
maigreur. Elle se rétablit lentement dans la suite.

572. — Reçoit 5 cent. cubes de sérum. Boite du membre postérieur droil
le 13 mars. A partir du 26 avril, elle ne boite plus. L'état général est conservé
satisfaisant.

573. — Reçoit 10 cent. cubes de sérum. Boite du membre antérieur droit du
21 au 29 mars. État général satisfaisant.

574. — Reçoit 15 cent. cubes de sérum. Boite pendant quarante-huil
heures du membre antérieur gauche.

575. — Reçoit 20 cent. cubes de sérum. Ne montre absolument rien
d'anormal.

Des deux témoins, l’un, 576, boite du membre antérieur gauche le 11 mars:
à partir du 13, reste couché et meurt le 22 mars; l’autre, 577, boite du
membre antérieur droit le 11 mars, et meurt le 15 mars.

L'épreuve avait été sévère puisque les deux témoins sont
morts quinze jours et trois semaines après l'injeclion de virus.
Aucun des traités n'a succombé, ce qui a une certaine impor-
tance ; de plus, il est facile de constater que la gravité de la
maladie et la durée des lésions locales s’atténuent avecles doses

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 967

croissantes de sérum : 20 cent. cubes ont complètement pro-
légé.

Il était inutile d'éprouver dans la suite l'immunité des
n° 570, 511, 572, 573 et 574, qui avaient manifestement été
infectés. Mais, Le 20 avril, plus d'un mois et demi après l’in-
Jection de sérum et de virus, alors qu'il était permis de penser
que l'action protectrice du sérum avait disparu, nous avons
injecté 20 cent. cubes de lait agalaxique (chèvre 591) dans la
jugulaire de la brebis 575, qui n'avait montré aucun signe d'in-
fection. Cet animal ne parut nullement être incommodé par
cette nouvelle épreuve très sévère, ce qui nous autorise à croire
qu'elle avait acquis une solide immunilé aclive à la suite de [a
première inoculation de virus du 29 mars.

ACTION PRÉVENTIVE DU SÉRUM
(Sérum sous la peau, virus par les voies digestives.)

On utilise un lot de 8 brebis en état de gestation. Les
n% 578 et 579 recoivent sous la peau 10 cent. cubes de sérum;
les n° 580 et 581, 20 cent. cubes le 5 mars 1912.

On leur adjoint # autres brebis témoins : n° 582, 583, 584 et
585. Ces S animaux font le 5, le 7 et le 14 mars un repas infec-
tant composé de son arrosé de lait agalaxique. Les traités
recoivent une deuxième injection de sérum aux mêmes doses
le 17 mars.

Aucune des brebis traitées n'a présenté de symptômes quel-
conques d'infection.

Parmi les témoins, deux (n° 582 et 585) n'ont pas présenté
de symptômes cliniques. 583 boite du membre postérieur
gauche le 2 avril et donne, le 27, un agneau chétif qui vit
cependant. 584 boite du membre postérieur droit; le 24 mars,
sa cornée gauche commence à se troubler ; Le 26, l'œil est com-
plètement louche; le 7 avril, l'appui du membre postérieur est
toujours supprimé; la brebis maigrit beaucoup. Elle donne, le
12 avril, un avorton qui meurt au bout de 48 heures. Au mois
de mai, l'animal boilait toujours et son étal était très précaire.

Là encore l’action préventive du séram fut très nelte, puisque
les quatre trailés restèrent indemnes el que deux témoins sur

968 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

quatre présentèrent des localisations. Comme dans nos précé-
dentes expériences sur l'infection par les voies digestives, nous
avons éprouvé les deux témoins (582 et 585) qui n'avaient pas
montré de localisations, en leur injectant dans la jugulaire à
chacun 20 cent. cubes de lait agalaxique, le 22 avril. Cette
sévère épreuveñfut parfaitement tolérée. Le 22 avril également,
nous avons éprouvé les quatre brebis traitées en leur injectant
dans le muscle à chacune 1 cent. cube de lait agalaxique. Trois
(578, 579 et 581) ne montrèrent rien d’anormal dans la suite;
par contre, 580 s’infecte. Le # mai, elle présente de la raideur
des quatre membres, puis elle reste couchée la plupart du
temps. Cependant elle se rétablit assez rapidement.

Pour celle-là, l’action protectrice du sérum avait donc dis-
paru au bout de un mois environ.

Le résultat le plus net de ces expériences fut qu'il était pos-
sible de vacciner activement par l'emploi du sérum et du virus.
Nous avons donc réalisé l'expérience suivante afin de savoir
quelles doses respectives de sérum et de virus il convenait
d'utiliser pour obtenir l'immunité sans risquer de donner la
maladie.

MÉLANGE EXTEMPORANÉ DE VIRUS ET DE SÉRUM SOUS LA PEAU.

Le virus utilisé fut la sérosité pleurale de la brebis 593 (7° passage),
27 avril 1912. Les moutons 601 et 602 reçoivent un mélange de 1/5 de cent.
cube de virus avec 5 cent. cubes de sérum; 603 et 604 reçoivent 1/2 cent.
cube de virus avec 5 cent. cubes de sérum; agneau 605 et mouton 606 reçoi-
vent 1 cent. cube de virus avec 5 cent. cubes de sérum. Les témoins 600 el
600 bis reçoivent respectivement 1 cent. cube et 1/5 de cent. cube de virus.
L'injection fut faite à tous sous la peau de la cuisse droite.

Cette expérience faillit être nulle par suite du décès précoce
des deux témoins : 600 fut trouvé étranglé dans le râtelier,
600 bis mourut d'une pleurésie purulente à la suite d'une
fistule profonde au niveau du sternum nécrosé, lésion qui avait
passé inaperçue. Fort heureusement l'agneau 605, qui avait
recu À cent. cube de virus et 5 cent. cubes de sérum, fit voir
que le mélange, bien supporté cependant par les autres ani-
maux du lot adultes, qui ne présentèrent aucun signe d'infec-
lion, était cependant dangereux pour un sujet jeune, car, dès le
5 mai, son membre antérieur gauche est soustrait à l'appui;

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 969

le 7, il reste couché dans un coin; le 10, l'œil droit est fermé,
le bord des paupières est rouge; le 19, la cornée, complètement
opaque, est entourée d’un large ruban rouge foncé.

Le 22 mai, trois semaines après l'injection vaccinale, chacun des moutons
601, 602, 603, 604 et 606 reçoit dans les muscles de la cuisse 1/2 cent. cube de
lait agalaxique 591 et 594, récolté au moment de l'inoculation.

Aucun de ces animaux ne présente dans la suite le moindre symptôme
d'infection.

Par contre, une chèvre, qui avait reçu 2 gouttes du même lait dans le
trayon droit, fit une belle mammite agalaxique.

PROPHYLAXIE.

Les conditions dans lesquelles se conserve et se propage le
virus agalaxique sont suffisamment connues, actuellement,
pour permettre de tracer les règles d’une prophylaxie qui pour-
rait être efficace.

Le virus se conserve des mois entiers, nous l'avons démontré,
dans la mamelle lésée; c’est done contre les femelles présentant
de la mammile agalaxique que les mesures les plus sévères
devront être prises. La recherche de ces porte-virus est facile
dans la majorité des cas : les noyaux indurés de la glande, l’as-
peet si spécial du liquide qu'elle sécrète ne laissent guère de
place à une erreur de diagnostic. Ces animaux seront irrévo-
cablement sacriliés.

L'isolement, pour ceux qui sont porteurs de lésions fermées,
permettra leur engraissement toujours long cependant, avant
leur envoi à la boucherie. Par contre, ceux qui présentent des
lésions ouvertes (arthrites suppurées) ou des lésions oculaires,
étant dangereux au premier chef, seront également abattus
dans le plus bref délai.

La désinfection des mains des personnes chargées de la traite
serait une excellente mesure à prendre en tout temps. La désin-
fection lotale des étables et la séquestration, momentanée tout
au moins, du troupeau infecté, jusqu à ce qu’il se soit écoulé
un mois depuis l'apparition du dernier cas, protégeraient les
troupeaux voisins. Tout cela, en somme, serait assez simple,
mais il faut compter avec les difficultés inhérentes au mode
d'entretien du mouton qui rendraient ces mesures parfaitement
illusoires, élant donnée la chronicité de l'affection. Nous augu-

62

970 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
rons mieux de l'emploi de la sérothérapie et de la séro-vacci-
nation.

Des expériences sont entreprises dans cette voie; nous espé-
rons être en mesure, avant peu, de donner des indications pré-
cises sur les résultals obtenus dans la pratique avec l’une et
l'autre de ces méthodes.

CONCLUSIONS.

En plus des quelques observations personnelles d'impor-
tance relative que nous avons relatées dans notre exposé cli-
nique, voici ce que nos recherches nous ont permis de con-

clure :

1° Contrairement à l'opinion d'auteurs aulorisés, la mamelle
agalaxique peut sécréter pendant plusieurs mois, Jusqu'à son
atrophie totale, un liquide doué d’une égale virulence pendant
tout le cours de la maladie;

20 Pour que la contagion s'opère, il paraît indispensable que:
les malades soient porteurs de lésions ouvertes : les larmes de
l'œil lésé, même sans ulcération, sont virulentes;

3° Le virus agalaxique est parfaitement absorbé par les voies
digestives et ce mode d'infection semble de beaucoup le plus.
important dans l’étiologie de l’agalaxie ;

4° Il est possible de créer une source abondante de virus pur
en provoquant un exsudat pleural expérimental ;

5° Le sérum des animaux hyperimmunisés est doué de pro-
priétés préventives très nettes ;

6° La séro-vaccination, réalisée au laboratoire, paraît
devoir rendre de grands services dans la prophylaxie de l’aga-

laxie.

L'éloignement du laboratoire des centres infectés aurait
rendu nos recherches particulièrement longues et laborieuses
si nous n'avions trouvé près de nos confrères le concours le
plus empressé. A MM. Arlaud, vétérinaire départemental
des Basses-Alpes, M. Scoflié, vétérinaire départemental des
Alpes-Maritimes, M. Pleindoux, vélérinaire départemental
de la Vaucluse, M. Allègre, vétérinaire à Oraison, et M. Eyriès

L'AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS ET DE LA CHÈVRE 971

jeune, vétérinaire à Carpentras, nous adressons l'expression de
toute notre gratitude.

Notre ami M. Monvoisin, chef des travaux de chimie à l'Ecole
d'Alfort, a bien voulu mettre à notre disposition sa compétence
toule spéciale pour l'analyse du lait agalaxique, nous l'en
remercions très cordialement.

MM. les professeurs Hess et Guillebeau, de l'École vétéri-
naire de Berne, ont eu la grande amabilité de nous autoriser à
reproduire les remarquables planches en couleurs de leur

mémoire ; nous les prions d’agréer nos bien sincères remercie-
ments.

BIBLIOGRAPHIE

1. Meraxa. — Delle malatlie contagiose epizootiche degli animali domestici,
1816-1817.

2. ZanGGEr. — Die Galti als Seuche bei den Ziegen. Schweïger Archiv für
Thierheilkunde. Neue folge, t. XIII, p. 348.

3. Brusasco. — Due parole intorno ad una-forma di agalassia. 1! medico
veterinario, 1871, p. 241, et Journal de médecine vétérinaire, 1885, p. 543.

4. Rocco Marra. — Agalassia contagiosa. Il moderno zooiatro, 189, p. 495.

5. BarTHÉLEMY. — Rhumatisme arthritique. Journal de médecine vétérinaire.
1894, p. 216.

6. ScHossLerrNER. — Ein Beitrag zur infectiüsen Agalactie der Ziegen. Thie-

rärztl. Centralblatt, 1895, p. 445.

7. H£ss et GuiLzeBEau. — Ueber infectiüse Agalactie bei Ziegen. Landwirt-
schaft. Jahrbuch,t. VIT, 1893, et brochure avec 6 planches coloriées.

8. Oresre. — Bollellino delle notizie agrarie, IS82. — Malatlia del bestiame
ovino della provincia di Aquila. Sulla pretesa contagiosa della Slornarella o
Asciullarella, 1886.

9. OrEstE et MarcoxE. — Mal del sito. Afti del R.Istitulo d'incorag.di Napoli,
t. V (Ser. 4), 1892, et brochure Annali di Agricoltura, n° 210, 1896, p. 30.

10. Bournay. — L'’agalaxie infectieuse. Rev. véter., 1896, p. 65.

11. VaLENTINI. — Communic. al Collegio dei Zooïiulri in Roma. Tornata del
24 marzo 1903.

12. Cecrr et re BLasr. — Etiologia dell agalassia contagiosa delle pecore e
capre. Annali d'Igiene Sperimentale, anno 1906, fasc. Il. — Prime esperienze di
vaccinazione contro l'agalassia contagiosa delle pecore e capre, brochure, Milan,
1906.

13. Rocco Mara et Nicoza CoccranTE. — Etude expérimentale de l’'agalaxie
contagieuse des ovins et des caprins. Giornale della R. Socielà nazionale
veter., 13 et 20 avril 1912.

14. I. Carké. — Le Mal de Lure. Annales de l'Institut Pasteur, 1er mai 1912.

972 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

EXPLICATION DES PL. XXI A XXIII

PL. XXI. — Fic. 1. — OŒùl droit. — A, conjonctive palpébrale; B, conjonc-
tive cornéenne; C, bord brun foncé de la cornée; D, iris; E, moitié supé-
rieure de la cornée (par transparence) traversée par de gros vaisseaux: F,
granulations hypertrophiques; G, pigmentation de la moitié inférieure de la
cornée. |

Fic. 2. — OŒŒEil gauche. — A, conjonctive palpébrale: B, conjonctive
cornéenne; C, bord brun foncé de la cornée; D, iris (par transparence); E,
pupille (par transparence); F, foyer inflammatoire de la cornée avec centre
blanc et bords à pigmentation foncée. Quelques vaisseaux, venant des bords
inférieur et supérieur de la sclérotique, se rendent au foyer inflamma-
toire.

PL. XX1I. — Fi. 1. — OŒEil droit. — À, conjonctive palpébrale; B, conjonc-
tive cornéenne avec dilatation des gros vaisseaux; C, bord brun de la cornée;
D, zone vasculaire de la cornée; E, pupille (par transparence); F, foyers
circulaires de kératite parenchymateuse; G, dégénérescence suppurative de
quelques-uns de ces foyers.

Fic. 2. — OEil gauche. — À, conjonctive palpébrale; B, conjonctive cor-
néenne; C, bord brun de la cornée; D, zone vasculaire de la cornée; E,
zone de kératite parenchymateuse intense.

PL. XXIIT. — Fi6. 1. — OEùil droit. — À, conjonctive palpébrable: B, con-
jonctive cornéenne avec dilatation des vaisseaux; C, bord brun de la
cornée; D, iris; E, pupille: F, foyer inflammatoire vascularisé de la cornée.
Quelques gros vaisseaux venant du bord de la sclérotique traversent la
moilié supérieure de la cornée et s'étendent jusqu'au foyer inflammatoire.
De nombreux petits vaisseaux courent, parallèlement les uns aux autres,
pour se rendre du bord inférieur de la sclérotique au foyer inflammatoire.

F16. 2. — OŒŒEùl gauche. — A, conjonctive palpébrale hyperémiée; B, con-
jonctive cornéeñne vascularisée; C, bord brun foncé de la cornée; D, iris;
E, pupille; F, foyer horizontal non vascularisé de kératite parenchyma-
teuse dans la zone de la fente palpébrale.

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI

ET DES

FORMATIONS SPÉCIALES A LA RAGE A VIRUS FIXE
par Y. MANOUÉLIAN
(Avec les PI. XXIV et XXV.)

Travail du laboratoire de M. Metchnikoff.)

Déjà en 1902, sur le conseil du D' Roux, nous avions entre-
pris l'étude histologique des ganglions cérébro-spinaux et sym-
pathiques dans la rage des rues et dans la rage à virus fixe (1).

Pour nos recherches, nous avions employé des fixateurs dif-
férents : particulièrement le sublimé à l'alcool acétique de
Gilson, le sublimé de von Lenhossek, le liquide de Zenker, le
liquide de Flemming.

En mordançant les coupes provenant des pièces fixées par
les mélanges au sublimé avec des solutions chromiques faibles,
ou encore mieux au liquide de Flemming, puis en les traitant
par la méthode au magenta et au picro-indigo-carmin, nous
avions pu constater dans le cytoplasme des ganglions cérébro-
spinaux et sympathiques, des corpuscules colorés en rouge, de
forme et de dimension variables, présentant une structure
spéciale. Nous avions considéré ces corpuscules comme des
produits de désintégration cellulaire.

En 1903, Negri, appliquant la méthode de Mann, a mis en
évidence dans les centres nerveux et surtout dans la corne
d'Ammon des animaux atteints de rage des rues, des corpus-
cules particuliers, se colorant en rouge, polymorphes, souvent
müûriformes, corpuscules considérés par lui et par nombre
d'auteurs comme les parasites spécifiques de la rage.

Peu après le travail de Negri, nous avons étudié, avec la
méthode de Mann, les corpuscules de Negri dans les centres
nerveux des animaux atteints de rage des rues. Nous avons
constaté qu'ils élaient Surtout abondants dans la corne

(1) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, p. 113, 2% janvier 1903.

974 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

d'Ammon. De plus, nous avons vu des corpuscules encore plus
pelits que ne l'avait signalé Negri. Nous avons pu nous con-
vaincre aussi que les corps dont nous avions constaté la pré-
sence dans les cellules nerveuses des ganglions eérébro-spinaux
et sympathiques des animaux rabiques, n'étaient autres que
ceux décrils par Negri.

La découverte du savant italien est d’une importance capi-
tale pour le diagnostic de la rage des rues ; mais avant d'aller
plus loin, nous aïlons décrire la technique suivie par nous pour
la préparation des corps de Negri dans la rage des rues, ainsi
que celle employée pour la mise en évidence des corpuscules
décrits par nous dans la rage à virus fixe.

TecHNIQuE.

Comme fixateurs, nous citerons : le formol à 10 p. 100, le liquide de Zenker
et surtout le sublimé à alcool acétique de Gilson, le sublimé de von Len-
hossek et le formol picrique de Bouin, qui nous ont donné d'excellents
résultats. Les pièces doivent être incluses à la paraffine.

Si l'on est pressé, on doit se servir d'acétone iodé : on enlève, à l'aide de
ciseaux très fins, de très minces tranches de cornes d'Ammon et on les
immerge dans le mélange suivant :

Avétorme “à 56-HBidegrés. : 7.2. : 50 cent. cubes.
Tenured'ioden fut LR LE ce 6 gouttes.

Trente minutes après, on renouvelle l'acétone qui, cette fois, ne doit pas
contenir d'iode, et on procède, un quart d'heure après, à l'inclusion à la
paraffine, qui peut ne durer que trente minutes et même moins. On peut en
deux heures obtenir des préparations suffisantes pour le diagnostic.

Les coupes doivent être colorées par la méthode de Mann. Voici comment
nous conseillons de procéder :

19 Colorer les coupes de quinze minutes à deux heures à 38-40 degrés, dans
le mélange suivant, préalablement porté à la même température :

Solution aqueuse de bleu de méthyle (ne
pas confondre avec le bleu de méthy-

REne ln) AL pe MOURUT 35 cent. cubes.
Solution aqueuse d’éosine à 1 p. 100. . . . 45 —
Fan disuliée. 25 Se NN 100 —

20 Laver rapidement et soigneusement à l'eau de fontaine ;
39 Déshydrater les coupes à l'alcool absolu;
,9 Faire agir la solution suivante :

Alcool "absolu: if STORE 30 cent. cubes.
Solution de soude caustique à 4 p. 100. . . 10 gouttes.

Attendre jusqu'à ce que les coupes deviennent rouges ;

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI 975

5o Laver à l'alcool absolu, afin d'enlever toute trace de soude caustique;

6° Plonger dans l’eau ordinaire: des trainées rougeûtres quittent les coupes
qui deviennent bleuâtres ;

1° Plonger dans l’eau acidulée par l'acide acétique : 2 gouttes d'acide
dans 40 cent. cubes d’eau. Immédiatement les coupes deviennent bleues.
Attendre une minute.

Déshydrater les coupes par l'alcool absolu, éclaircir au xylol et monter au
baume acide. (Le baume acide se prépare en dissolvant le baume de Canada
dans du xylol préalablement saturé d'acide salicylique.)

En suivant à la letire cette méthode, moins compliquée
qu'elle ne paraît au premier abord, on est sûr d'obtenir d’excel-
lents résultats. Dans les préparations traitées avec les fixateurs
précédents (exceptons-en le liquide de Zenker), le fond est
coloré en bleu, les noyaux des cellules névrogliques en bleu
plus foncé ou bleu violet; le cytoplasme des cellules nerveuses
est en bleu assez pâle, le nucléole en bleu foncé ou bleu violacé
et les autres granulations nucléaires apparaissent en bleu un
peu moins accentué que le nucléole. Seuls les corpuseules de
Negri sont colorés en rouge dans la cellule nerveuse. Le
liquide de Zenker fixe bien le tissu nerveux, mais souvent le
nueléole des cellules nerveuses se colore en rouge aussi, et la
différenciation est moins nette dans ce cas.

On peut avoir de bonnes préparations des corpuseules de
Negri en se servant de la thionine phéniquée, du bleu poly-
chrome de Unna ou encore, simplement, d’une solution aqueuse
à 4 p. 400 de bleu de toluidine : il faut opérer de la manière
suivante :

10 Colorer les coupes pendant deux minutes, avec l'un des réactifs ci-
dessus ;

2° Laver rapidement et soigneusement à l'eau:
30 Différencier avec le mélange :

Glycérine-éther de Unna. . . . . . . . . . 2 cent. cubes.
Alcool à 90 degrés, . . . . . PR AE Ue LONEERETUU —

Alcool absolu, xylol baume neutre.

Le cytoplasme des cellules nerveuses est presque incolore, le noyau est
d'un bleu intense et les corpuscules de Negri d’un bleu azur parsemé de
points bleu foncé.

En moins d'une heure on peut obtenir des préparalions des
corps de Negri rivalisant avec les meilleurs coupes en procé-
dant de la manière suivante :

976 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

1° Faire des frottis de corne d'Ammon rabique ;

20 Fixer immédiatement à l'acétone iodé pendant quelques minutes;

3° Laver à l'acétone pur ou à l'alcool absolu pendant quelques se-
condes,;

4° Laver à l'eau courante pendant une minute;

50 Colorer avec le liquide de Mann pendant un quart d'heure, à chaud, et
différencier comme nous avons indiqué précédemment.

Cette méthode peut rendre service à ceux qui désirent
obtenir rapidement une réponse.

Pour peu qu'on soit exercé, on ne confondra pas les corpus-
cules de Negri extra-cellulaires avec les globules rouges.
D'ailleurs, il y a dans les frottis un assez grand nombre de
cellules nerveuses contenant des corpuscules.

Ce que nous venons de dire précédemment s'applique à
l'étude de la rage des rues. Or, en 1906 (1), nous avons décrit
des corpuscules particuliers fort minuscules, en nombre prodi-
gieux, dans la rage à virus fixe (voir leur description plus loin).
C'était la première fois qu'on y signalait de pareils corpus-
cules ; et il n'existe, du moins à nolre connaissance, aucune
maladie nerveuse où l’on rencontre de pareils éléments.
Comme depuis cette époque aucun auteur n'a confirmé leur
existence, nous donnerons cette fois-ci quelques détails de
technique qui permettront aux chercheurs de les meltre en
évidence.

Ce sont les fixateurs à base de sublimé, surtout le sublimé à
alcool acétique de Gilson et le sublimé de von Lenhossek, qu'il
faudra choisir. Le formol picrique donne de bons résultats
aussi. Quant à l'inclusion, elle demande des soins particu-
liers. On sait, en effet, combien est désastreuse l'inclusion
à la paraffine pour le système nerveux central. Or, si pour
étudier les corpuscules de Negri dans la rage de la rue la
parafline est suffisante, il est endispensable, pour obtenir des
préparations convenables de nos corps, de recourir à la celloï-
dine. Une fois les pièces bien imprégnées, il faudra éviter de
durcir tant soit peu la celloïdine en masse. Il suffira d’entourer
la pièce d’une légère couche de celloïdine assez épaisse et de
laisser sécher à l’air, pendant quelques minutes. Au bout de

(1) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, p. 314, 10 novembre 1906.

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI 977

ce temps 1l faut mettre le morceau inclus dans un mélange
formé de :

AICOOMADE OI ER ES 2 ER RENRReR 50 cent. cubes.
GHIQTOIORNE MAMMA Loire 4 EU 5 —

Ce liquide dureit suffisamment la pièce et remplace l'alcool
absolu dans l'inclusion à la paraffine qui doit suivre l'inclusion
de la celloïdine. Il faudra éviter le xylol et se servir de toluène
ou d'essence de cèdre.

Grâce à cetie inclusion, on obtient de fort belles préparations
de issu nerveux, d'une grande délicatesse. Les prolongements
cylindre-axiles sont conservés aussi.

Mais, nous le répétons, il faut se garder de durcir la masse
de celloïdine ! On suivra la technique que nous venons d’indi-
quer. C'est à ce prix qu'on évitera les plis des coupes, plis qui
résisteraient aux tentatives de déplissement et compromet-
traient gravement le collage ainsi que les colorations. Tandis
qu'en procédant comme nous l'avons fait, il sera très facile
d'obtenir des coupes excellentes et très fines : 1 2.

DESCRIPTION DES CORPUSCULES DE NEGrti.

Les corpuscules de Negri (planche XXIV, figures 2,3, 4,6) se
trouvent, le plus souvent, dans le cytoplasme et dans les gros
prolongements dendritiques des cellules nerveuses. Leur
dimension est variable, généralement de 1 à 27 ps, mais on peut
rencontrer des corpuscules dépassant ces dimensions. Les corps
les plus communs mesurent 3, 4, 8,10 g; il y en a de si petits
qu'ils sont à peine mesurables. Leur forme est aussi variable :
ordinairement elle est en rapport avec leur situation dans la
cellule nerveuse ; généralement arrondie, elle est ovalaire quand
elle est comprimée par le noyau ; cette compression peut donner
aux corpuscules de Negri des formes diverses. Dans les pro-
longements protoplasmiques ils sont plus ou moins fusiformes.

Les corps de Negri possèdent une structure : en les obser-
vant avec un grossissement convenable, on voit, dans une masse
homogène, des corpuscules arrondis plus clairs. Souvent ces
corpuscules contiennent à leur tour un ou plusieurs corpus-
cules.

978 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Quelquefois, à la place de ces derniers corpuseules, il existe des
bâtonnets courts. Parfois, au lieu de se colorer en rouge, ces
inclusions sont teintes par la méthode de Mann en bleu clair
et leur contenu en bleu foncé. Il arrive aussi que les inclusions
restent colorées en rouge et les Lout petits corpuscules, ainsi que
les bâtonnets, se détachent en bleu foncé. 11 y a des corps de
Negri contenant des inclusions de même dimension. Dans
d'autres corps, ilexiste un corpuseule central notablement plus
volumineux que les autres corpuscules qui l'entourent à la
manière d'une couronne. Il y en a qui contiennent un plus
grand nombre d’inclusions volumineuses. Le nombre de ces
inclusions est variable; dans les corpuscules de Negri de grande
taille, on peut en compter 20, 30 et même plus; dans les petits,
65220944

Les corpuscules de Negri sont entourés par une membrane
hyaline visible, même dans les coupes.

Comme nous l'avons dit, la thionine phéniquée, le bleu poly-
chrome de Unna, le bleu de toluidine à 1 p. 100, donnent
d'excellentes colorations des corpuscules, surtout dans les
coupes. Leur masse homogène se colore d'un beau bleu azur,
les inelusions sont d'une teinte pâle et les minuscules corpus-
cules et les bâtonnets d'un bleu très foncé.

Signalons encore l'hématoxyline au fer qui les colore forte-
ment en masse. De sorte que, pour obtenir une différenciation
convenable, il faut décolorer énergiquement les coupes; les
corpuscules résistent encore, alors que dans la cellule nerveuse
tout (même quelquefois le nucléole) est décoloré. Différenciés
suffisamment, les corpuscules laissent voir leur structure.

Le liquide de Flemming, grâce à son acide osmique, donne
aux corpuscules de Negri une coloration brunâtre.

A côté des corpuscules, qui se colorent en rouge par la
méthode de Mann, il y en à qui se colcrent en violet, d’autres
qui sont « dégénérés ». Dans certains cas on peut suivre toutes
les élapes de cette dégénérescence. Nous reviendrons ultérieu-
rement sur cette question.

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI 979

IMPORTANCE DES CORPS DE NEGRI DANS LE DIAGNOSTIC
DE IA RAGE DES RUES.

Nous avons dit que la découverte de Negri était très impor-
tante pour le diagnostic de la rage des rues. En effet, dans la
rage déclarée, les corps de Negri existent presque constamment,
comme le montre le tableau suivant, établi grâce au concours
précieux de M. J. Viala, préparateur au service antirabique :

PRÉSENCE ABSENCE ABSENCE PRÉSENCE
NOMBRE des des des es
corps de Negri corps de Negri corps de Negri corps de Negri
de sujets et épreuve et épreuve et épreuve et épreuve
expérimentale expérimentale expérimentale expérimentale
observés. positive. négative. positive. négative.
201 UGS 82 4 9

Nous dirons aussi que les corpuscules de Negri sont les élé-
ments caractéristiques de la rage des rues. En effet, nous avons
étudié un grand nombre de pièces provenant de maladie des
Jeunes chiens, de paralysie générale, de maladie du sommeil,
d'individus très âgés, et jamais nous n'avons constaté la
moindre trace de corpuscules dans le système nerveux.

D'où vient alors que, dans notre tableau, dans 9 cas, malgré
la présence des corps de Negri, l'épreuve expérimentale ait été
négative ? Est-ce parce que le virus était détruit, ou, étant rare
dans le bulbe des animaux, était-il inoculé en quantité insuffi-
sante? Est-ce encore parce que les cobayes inoculés étaient
réfractaires, ou la maladie a-t-elle demandé une incubation
trop longue (1)?

D'autre part, nous savons qu'il y a des cas où l’inoculation
intra-cérébrale donne des résultats positifs alors que l’inocula-
tion intra-musculaire reste négative. Et comme, pour des
raisons d'ordre spécial (2), au service de la rage, on emploie
généralement la voie intra-musculaire (muscles du cou), il est
probable que dans ces 9 cas on ait eu affaire à la rage.

(1) A l’Institut Pasteur, on garde en observation les animaux inoculés pen-
dant six mois; au bout de ce temps on s’en débarrasse.

(2) L'état de conservation des animaux envoyés à l’Institut Pasteur laissant
souvent beaucoup à désirer, M. J. Viala est obligé de recourir à l’inoculation
intra-musculaire. En effet, malgré le séjour dans la glycérine, l'inoculation
intra-cérébrale provoquerait une infection rapidement mortelle.

980 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Voici deux exemples démonstratifs.

Il s’agit de deux cas de rage humaine (dans les cas de rage
humaine, on a l'habitude de pratiquer en même temps l’inocu-
lation intramusculaire chez le cobaye et de risquer l’inocu-
lation intracérébrale).

Premier cas. — On a fait à un lapin l'inoculation intra-
cérébrale d'émulsion de bulbe, on a inoculé en même temps
deux cobayes dans les muscles du cou; 17 jours après, le lapin
élait paralysé et il mourait au bout de 2 jours On a inoculé
de nouveau le même virus dans le cerveau d'un deuxième lapin :
21 Jours après, il était paralysé, et il succombait 2 jours après.
Les deux cobayes inoculés ne présentaient rien d'anormal au
bout de six mois.

Deuxième cas. — On à fait une inoculation intracérébrale à
un lapin, en même temps on inoculait deux cobayes dans les
muscles du cou : 11 jours après, le lapin présentait des symp-
tômes de rage et il succombait 4 jours après. Quant aux deux
cobayes, 1ls étaient encore indemnes au bout de six mois.

Dans ces deux cas de rage humaine, la corne d'Ammon,
l'écorce cérébrale, le cervelet, la protubérance, le bulbe, la
moelle épinière, les ganglions cérébro-spinaux, le ganglion
cervical supérieur, renfermaient des corps de Negri, mais les
corpuscules étaient surtout abondants dans la corne d’'Ammon.
De même les cornes d’Ammon des trois lapins qui avaient
succombé à la rage expérimentale, contenaient de nombreux
corpuscules de Negri.

Comme on le voit, si l’on s'était contenté d'inoculations
intramusculaires chez les cobayes, l'épreuve expérimentale
aurait été négative.

DE L'EXISTENCE DE FORMATIONS SPÉCIALES DANS LA RAGE
A VIRUS FIXE.

Negri n'avait pas trouvé ses corpuscules dans la rage à virus
fixe. Plus tard Negri et de rares auteurs ont décrit des corpus-
cules plus petits et plus rares que ceux de la rage des rues.
D'autres auteurs nient l'existence des corps dans la rage à
virus fixe.

Parallèlement à nos recherches sur la rage des rues, nous

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI 981

avons étudié les centres nerveux de lapins atteints de rage à
virus fixe. Toujours grâce à l'obligeance de M. J. Viala, nous
avons pu étudier 120 cas de rage à virus fixe chez le lapin.
Dans 102 cas, les animaux étaient sacrifiés à la dernière période
de leur maladie, dans 6 cas au début, et 12 cas dans le cours
de la maladie. Nous avons prélevé chez tous ces animaux la
corne d'Ammon, l'écorce cérébrale, le cervelet, la protubérance,
le bulbe, la moelle épinière, les ganglions cérébro-spinaux et
sympathiques. En utilisant surtout la méthode de Mann, nous
avons observé constamment, chez les animaux arrivés à la der-
nière période de la maladie, et dans les centres nerveux précilés,
des corpuscules colorés en rouge dont les plus volumineux,
d'ailleurs en petit nombre, rappellent Les petites formes décrites
par Negri dans la rage des rues. Plus particulièrement, le tissu
nerveux de l'écorce cérébrale et de la corne d’Ammon est pour
ainsi dire constellé de très fines granulations (planche XXIV,
fig. 5). Dans ces régions du cerveau, les cellules nerveuses
renferment un grand nombre de corpuscules qui sont surtout
abondants dans les grains du corps godronné et dans les petites
cellules pyramidales de la corne d’Ammon. Les expansions des
cellules nerveuses, les grosses dendrites plus que les autres,
ainsi que le tissu interstitiel, contiennent aussi des corpuscules
en quantité inouie. Mais ce sont le cytoplasmeet les troncs prolo-
plasmiques des cellules nerveuses qui en contiennent le plus ;
en effet, la forme du corps cellulaire et des grosses expansions
dendritiques se révèle grâce à de vérilables {raïnées de corpus-
cules.

Ces corpuscules sont généralement fort pelils; en les obser-
vant avec de puissants objectifs on en constate de si minuscules
qu'ils sont à peine visibles, et on a l'impression qu'il doit v
en avoir d’autres qui échappent à l'œil.

Ces formations, qu'on rencontre en bien plus petite quantité
au début, mais déjà en grand nombre dans le cours de la
maladie, manquent chez les animaux témoins (1).

(1) On doit éviter une confusion : il existe, en effet, dans le cytoplasme
des cellules nerveuses des ganglions cérébro-spinaux et sympathiques nor-
maux, des corpuscules qui ressemblent à ceux que nous venons de décrire.
Généralement peu nombreux, mais quelquefois en grand nombre, surtout
chez le lapin. — Ces corpuscules se colorent électivement en rouge par la
méthode de Mann.

982 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

L'hémotoxyline au fer colore aussi ces corpuscules, mais
d’une façon très inégale. En plus, comme tout est coloré en noir
dans les coupes, la bonne différenciation qui existe dans la
méthode de Mann manque ici.

A côté des corpuscules qui se colorent en rouge vif par la
méthode de Mann, il y en d’autres qui sont bleus, bleuâtres; il
y en à qui sont d'un bleu très pâle.

Sur les 102 cas, — animaux arrivés à la dernière période de
paralysie, — huit fois nous avons observé une particularité
curieuse.

Alors que chez ces animaux le cervelet, la protubérance, le
bulbe, la moelle, les ganglions cérébro-spinaux et sympathiques,
renfermaient de petits corps, l'écorce cérébrale et la corne
d'Ammon renfermaient, à part ces petits corps, d’autres corpus-
cules absolument semblables à ceux qu’on rencontre dans
la rage des rues. Nous en avons observé un grand nombre
dont les dimensions dépassaient celles des corpuscules de la
rage des rues (planche XXIV, fig. 6). Un certain nombre d’entre
eux avaient presque la dimension d’une grande cellule pyra-
midale de la corne d’'Ammon !

ÉTUDE COMPARATIVE DES CORPUSCULES DE NEGri
ET DE NOS FORMATIONS AVEC LES CORPUSCULES DES CORPS RÉSIDUELS.
DU TESTICULE.

N

Les corpuscnles de Negri sont-ils des parasites? Negri et
nombre d'auteurs l’affirment. Quant à nous, nous croyons que,
dans l’état actuel de la science, une pareille affirmation serait
téméraire.

D'autre part, il nous a semblé intéressant d'étudier certaines
dégénérescences physiologiques et de chercher si, dans une
cellule ou une portion de cellule qui dégénère, 1l n'y aurait pas
de formations rappelant, par leur forme et leurs caractères
histo-chimiques, les corpuscules de Negri et nos formations de
la rage à virus fixe.

Nous nous sommes adressé à cet effet à l'étude de La sperma-
logénèse chez quelques mammifères : rat, cobaye et lapin. Les
pièces ont été fixées par le sublimé de von Lenhossek, le
liquide de Zenker et par le formol picrique de Bouin.

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI 983

Voici le résultat de nos recherches (1).

On sait que dans la transformation des spermies, de la forme
spermatide à la forme spermatlozoïde, la partie du cytoplasme,
qui ne prend pas part à celte transformation, est destinée à
disparaitre. On y constate alors des corpuscules très fins, qui
deviennent de plus en plus volumineux et se colorent mieux.
Bientôt ces lobes cyloplasmiques en train de dégénérer perdent
la netteté de leur contour et finissent par se détacher des sper-
matozoïdes (planche XX V, fig. 1). On les désigne alors sous le
nom de corps résiduels. Dans les corps résiduels, les corpus-
cules précités se groupent en sphères volumineuses et peu
nombreuses ; ils contiennent alors, parmi une masse homogène,
une ou plusieurs sphérules, qui à leur tour renferment de tout
petits corpuscules. D'autres corps renferment, parmi leur masse
simplement, de fins corpuscules (planche XX V, fig. 2 et 3).

Comme le corps de Negri, ces corps sont entourés par une
masse incolore, et la méthode de Mann les colore en rouge,
quelquefois aussi en bleu; dans la méthode à l'hématoxyline
ferrique, ils se laissent décolorer très difficilement et ils pré-
sentent une coloration brunâtre après la fixation au liquide de
Flemming.

Le processus dégénératif se poursuivant toujours, chaque
corps présente des dépressions à sa surface et des vacuoles dans
son intérieur, et comme à ce moment le syncytium sertolien
commence à se rétracter, les corps résiduels qui se trouvent
incorporés dans ce syncylium sont entraînés vers la couche
génératrice du tube séminifère. Ainsi phagocylés, quelques-
uns se colorent en rouge par la méthode de Mann, mais un
grand nombre se colorent en rouge violacé ou en bleu de plus
en plus pâle. À ce moment, l'acide osmique les noircit plus
complètement. |

Enfin, ces corps cessent d'être colorables par la méthode de
Mann. On peut les colorer en noir par l'acide osmique en même
temps que d’autres subs!ances élaborées par le syncytium. La
phagocytose de ces éléments est terminée.

Or, les petites formes du début, qui apparaissent dans le

1) Y. MaxouÉLiax, Comptes rendus de l'Acal. des sciences, 24 février 1908,

page 419.

98% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

lobe cytoplasmique des spermatides (1), rappellent, par leur
forme et les réactions histo-chimiques, les corpuscules fins
qu'on observe dans la rage des rues, et surtout ceux que nous
avons décrits dans la rage à virus fixe. Quant aux corps plus
volumineux, ils rappellent ceux de Negri dans la rage des
rues.

On pourrait aussi établir un certain rapprochement au point
de vue de la dégénérescence et de leur disparition. En effet,
dans quelques cas de rage des rues, notamment chez l'homme,
à côté des corps de Negri lypiques, nous avons constaté des
corpuscules qui, tout en possédant la mème structure que ceux-
ci, ne se colorent pas aussi électivement. Ils ont une teinte
rougeâtre, violacée ou bleuâtre; peu à peu les vacuoles se
montrent dans leur intérieur et ces corpuscules deviennent de
plus en plus päles; il en existe qui se trouvent à la limite de la
colorabilité (planche XX V, fig. 4). Comme nous l'avons dit pré-
cédemment : dans la rage à virus fixe, à côté des corpuscules
qui se colorent en rouge, il y en a d’autres qui sont bleuâtres:
enfin il y en a qui sont d’un bleu très pâle.

Nous estimons que les faits que nous venons de relater,
doivent faire réfléchir les chercheurs, qui ne se prononceront
pas hâtivement sur la nature parasilaire des corpuscules de
Negri.

CONCLUSIONS.

1° Les corps de Neqri élant les éléments caractéristiques el
presque constants de la rage des rues, leur recherche est de
première importance pour le diagnostic de cette malade.

20 Dans la rage à virus fixe, il existe constamment des forma-
tions spéciales ; tratnées de fins corpuscules en nombre incal-
culable, remplissant surtout le corps et Les gros troncs protoplas-
miques des cellules nerveuses.

3° Au point de vue de leur forme, de leur structure, de leur
caractère histo-chimique et du mode de régression, ü existe une

(1) Signalons la ressemblance de ces formes avec les corps chromatoïdes
des spermatocytes et des spermies.

ÉTUDE DES CORPUSCULES DE NEGRI 985

cerlaine analogie entre les corpuscules de Negri et nos forma-
tions d'une part, et les corpuscules des corps résiduels du testicule
d'autre part.

EXPLICATION DES PLANCHES

Toutes les figures représentent des préparations faites par la méthode de
Mann et dessinées à la chambre claire. Pour toutes les autres indications,
consulter le texte de nolre travail.

PLANCHE XXIV.
Le grossissement des préparations est de 780 diamètres.

F1G. 1. — Coupe de corne d’Ammon de lapin normal. On voit nettement
les neurofibrilles dans la tige protoplasmique et dans le cytoplasme des
cellules pyramidales.

Fi6. 2. — Coupe de la corne d’'Ammon de chien rabique (rage des rues).

F16. 3. — Coupe de la corne d'Ammon d'un autre chien rabique (rage des
rues).

F16. 4. — Frottis de corne d'Ammon de chien rabique (rage des rues).

Fi6. 5. — Coupe de corne d'Ammon de chien atteint de rage à virus fixe;

dernière période de la maladie. Cas habituel.

Fi6. 6. — Coupe de corne d'Ammon de chien atteint de rage à virus fixe ;
dernière période de la maladie. Cas exceptionnel.

PLancne XXV.
Le grossissement des préparations 1, 2, 3 est de 600 diamètres.

Fi6. 1. — Coupe de tube séminifère de rat normal. Les spermatozoïdes
sont groupés en faisceaux. Quelques-uns de ces faisceaux se trouvent tout
près des noyaux de Sertoli (S); d'autres ont déjà gagné les couches plus
profondes du tube. Remarquer les fins corpuscules colorés en rouge qui
existent en nombre incalculable dans la partie interne du tube.

Fi. 2 et 3. — Coupes de tubes séminifères de rat normal. Les spermato-
zoïdes sont dans la lumière des tubes. Il existe de nombreux corps rési-
duels r dans le voisinage des spermatozoïdes ; il s’en trouve aussi dans les
différentes couches. On peut suivre les phases de leur transformation.

Fic. 4. — Cellules nerveuses de la corne d’'Ammon d'un sujet mort de rage.
On y voit la dégénérescence et presque la disparation des corps de Negri.
Grossissement — 180 diamètres.

63

CONTRIBUTION A L'ÉTUDE
DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX

par P.-J. GÉRARD
Pharmacien de 1r° classe.

(Travail du laboratoire de M. G. Bertrand).

Le potassium etle sodium n'ont pas été étudiés jusqu'ici chez
les animaux d'une facon systématique et rationnelle. La litté-
rature chimique nous livre une quantité considérable de faits
isolés qu'il est impossible de grouper, parce que les dosages des
éléments minéraux n'ont pas élé effectués sur les organes de
mêmes individus, ou tout au moins sur des individus se trou-
vant dans les mêmes conditions physiologiques.

Le potassium et le sodium sont cependant parmi les consti-
tuants les plus importants de la matière vivante et il est intéres-
sant d'étudier leur distribution dans l’organisme et, si possible,
leur métabolisme. Sur les conseils de M. le professeur Gabriel
Bertrand, dans le laboratoire duquel un travail d'ensemble sur
les éléments minéraux a été entrepris, je me suis mis à étudier
cette question.

Il fallait avant tout posséder une méthode d'analyse irrépro-
chable, et c’est ce à quoi je me suis tout d’abord attaché. Car
si, comme je le disais à l'instant, la différence des conditions
physiologiques dans lesquelles peut se trouver un organisme en
fait varier la teneur minérale, il est, par contre, une aulre
raison, toute différente d'ailleurs, qui contribue à faire varier
les résultats : ce sont les méthodes d'analyses employées. Le
dosage des alcalis se classe parmi les plus difficiles, et les diffé-
rents auteurs qui se sont occupés de la question du Ka et du Na
semblent souvent se désintéresser par trop de la partie ana-
lytique pure de la question. Dans leur communication, ils
omettent de mentionner leur procédé d'analyse, ou le font de
façon tellement succincte qu'une critique précise est impossible.
Les résultats qu'ils livrent à la littérature perdent de ce fait une
grande partie de leur valeur.

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 987

Mérnopr DE DOSAGE.

Nous ne passerons pas en revue toutes les méthodes de dosage
du potassium et du sodium; qu'il nous suffise de dire que,
rejetant par principe les méthodes volumétriques, nous leur
avons préféré les méthodes gravimétriques, plus longues il est
vrai, mais aussi beaucoup plus précises.

Les procédés à l'acide perchlorique de Schlæsing, à l’hypo-
sulfite de bismuth de Carnot, au bichlorure de platine de Coren-
winder et Contamine, sont, tous trois, de bons procédés d’insolu-
bilisation du potassium, permettant la séparation complète de
ce dernier et l'isolement du sodium que l'on peut peser. Nous
avons donc tous les moyens de contrôle exigibles pour faire un
bon dosage. Nous avons choisi la méthode de Corenwinder et
Contamine, étant donnée la facilité de préparation, à l’état de
pureté, du réactif chloroplatinique, l'insolubilité pour ainsi dire
totale du chloroplatinate de K dans le liquide de lavage alcool-
éther à 10 p. 1 et les bons résultats que différents essais théo-
riques nous ont donnés.

À. Calcination. — Après avoir pesé l'organe à l’état frais, puis
l'avoir desséché à 100 degrés, on procède à la calcination dans
un four à moufle, en ne dépassant jamais la température de
350 à 400 degrés qui correspond à peine au rouge sombre. Dans
ces conditions, aucune perte de chlorures n’est à craindre. Les
cendres, pulvérisées finement, sont épuisées par environ mille
fois leur poids d’eau chaude. De cette facon, tout le potassium
et le sodium sont entraînés, et nous avons dissous fort peu de
calcium et de magnésium, ce qui permet de faire le dosage dans
de très bonnes condilions.

B. Elimination du calcium, du magnésium et de l'acide phos-
phorique. — Pour éliminer en bloc les sels alcalins terreux, on
ajoute à la liqueur du phosphate d'’ammoniaque et de l’ammo-
niaque (ce dernier réactif doit représenter environ 1/5 de la
liqueur totale). On filtre au bout d’une douzaine d'heures, puis
la solution étant ramenée à l'exacte neutralité par addition d'HCI,
on procède à l'élimination de l'acide phosphorique par le pro-
cédé ordinaire (perchlorure de fer et acétate d’ammoniaque).

/

988 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Après le lavage méthodique du précipité ferrique, facilité
d’ailleurs par la centrifugation et l'addition de petites quantités
de chlorhydrate d’ammoniaque, addition qui aide à la conden-
sation du précipité, on évapore à sec toutes les liqueurs de
lavages réunies. :

C. Élimination des sels ammoniacaur. Pesée à l'état de sulfates.
— Sur le résidu sec composé de sels d'ammonium, de potas-
sium et de sodium, on verse d’abord de l'acide sulfurique dilué
au tiers afin d'éviter les projections, puis de l'acide pur jusqu’à
complète dissolution de tous les sels. On chauffe ensuite à feu
nu sur une petite flamme de Bunsen en évitant l'ébullition;
quand toute l’eau est disparue, on peut alors chauffer plus éner-
siquement pour expulser les dernières traces d’acide sulfurique.
Lorsque l’on est arrivé à sec, on fond alors les sulfates acides
de K et de Na pour les transformer en sulfates neutres. Si l’on
opère sur de petites quantités, au maximum 0 gr. 300 desulfates,
il est inutile d'ajouter du carbonate d’ammoniaque pour obtenir
des sulfates neutres. Une fusion de cinq minules suflit large-
ment et l’on peut ensuite procéder à la pesée.

D. Transformation des sulfates en chlorures. Pesée des chlo-
rures. — Les sulfates sont transformés en chlorures par l’addi-
tion d'acétate neutre de plomb. On ajoute à la liqueur 1/5 envi-
ron d'alcool, afin d’insolubiliser complètement le sulfate de
plomb. On filtre et on enlève l'excès de plomb par l'hydrogène
sulfuré, en opérant en milieu très légèrement chlorhydrique.
On condense le précipité au bain-marie et on filtre. L’évapo-
ration à sec en présence d'HCI donne toujours des chlorures un
peu sales. Ceci tient à ce qu'il passe toujours un peu de sulfure
de plomb en solution. Il suffira de porter ces chlorures à 350
ek 400 degrés pendant quelques minutes pour insolubiliser
complètement le sulfure de plomb, reprendre par un peu d’eau
et filtrer; on oblient ainsi des chlorures très blancs que l’on pèse
après une dessiccation de quelques heures à 350 et 400 degrés.
Il faut environ six heures pour arriver à un poids constant.

E. Précipitation du K. Précipitation du Pt du chloroplatinate
el pesée du platine. — On verse sur les chlorures desséchés un
excès de réactif chloroplatinique et l’on concentre au bain-
marie Jusqu'à consistance sirupeuse. Il faut surtout éviter la
surchauffe des parois de la capsule et la dessiccation complète

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 989

du réactif. On ajoule alors au sirop un mélange alcool-éther
à 10 p. 1 (environ 20 volumes) et, après une demi-heure, on
filtre. Le chloroplatinate de K formé reste sur le filtre, tout Le
sodium passe à l’état de chloroplatinate de sodium dissous dans
un excès de réactif chloroplatinique. On redissout le chloropla-
ünate de K dans l’eau bouillante et l'on précipite le platine par
le procédé au magnésium Villiers-Berg, qui donne des résultats
théoriques. Il faut ajouter le magnésium par toutes petites
portions dans le liquide rendu chlorhydrique afin d'éviter les
projections. Le précipité de platine est lavé jusqu'à ce qu'il soit
débarrassé entièrement du chlorure de magnésium. Le platine
est ensuite pesé. Le poids {rouvé multiplié par 0,40195 donne
le poids de potassium correspondant.

F. Précipitation du PE du chloroplatinate de sodium. Pesée
du sodium. — Le liquide éthéro-alcoolique contenant tout le
sodium est ensuite traité par un réducteur afin de précipiter le
platine du chloroplatinate de sodium. Seule, l'action combinée
de l'acide formique et de l'acide sulfureux a donné de bons
résultats. L'essai de tous les autres réducteurs volatils est
incommode el réduit mal le chloroplatinate. On peut encore,
ce qui est aussi pratique, précipiter par HS à chaud en milieu
légèrement acide. On sépare le sulfure de platine par filtration
et le liquide filtré est évaporé en présence d’acide sulfurique.
On pèse le sodium à l’état de sulfate.

Ce procédé, long à expliquer et à exécuter, donne de très bons
résultats et accumule les moyens de contrôle. On peut, en effet,
calculer le sodium d'après le poids de potassium et de sulfates
neutres totaux. La pesée du sodium isolé à l’état de sulfate
viendra confirmer le calcul. Au besoin, la simple pesée des
chlorures pourrait servir de contrôle, car, connaissant par le
calcul, les quantités exactes de sulfate de sodium et de polas-
sium, on peut en déduire les quantités exactes de chlorures que
l’on doit obtenir.

De nombreux dosages théoriques faits en présence de calcium,
de magnésium et de fer ne nous ont jamais donné d'erreurs
supérieures à 2 p. 100. Le chiffre de sodium trouvé à la pesée
est toujours légèrement inférieur au chiffre trouvé par le calcul,
étant données les pertes qu'il est impossible d'éviter lorsque
l'on filtre et lave un précipité. Le chiffre de sodium calculé est

990 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

donc le chiffre qu'il faut prendre, le chiffre de sodium pesé ne
devant servir que de contrôle.

Le plus grand reproche que l’on puisse faire, en général,
aux auteurs qui ont eu à doser le potassium et le sodium, est
d'avoir employé le chlorure de baryum pour précipiter l'acide
sulfurique et l'acide phosphorique. Le sulfate de baryte entraine
toujours, malgré les lavages, une assez grande quantité d’alcalis.
Néanmoins, comme en matière biologique, tout au moins pour
ce qui concerne les alcalis, une rigueur absolue n’est pas néces-
saire, et que c'est seulement d'une suite de dosages pouvant se
comparer que découlent des conclusions intéressantes, notre
critique de tendance analytique ne porte pas sur l’ensemble des
travaux des célèbres physiologues tels que Bunge, par exemple,
travaux d'ailleurs que beaucoup de nos recherches n'ont fait
que confirmer.

RÉPARTITION DU POTASSIUM ET DU SODIUM
DANS L'ORGANISME D'UN CHIEN.

En possession d'une bonne méthode de dosage, nous avons
pu aborder le vif du sujet. Le premier problème que nous avons
essayé de résoudre était de définir, d'une facon aussi précise que
possible, la répartition du potassium et du sodium dans l’orga-
nisme d'un chien adulte. Bien des auteurs jusqu'ici, tels que
Bischof, Volkmann, Hugounencq, etc., s'élaient livrés à l’étude
des éléments minéraux de la matière vivante. Le nombre des
analyses que l’on trouve dans la littérature est énorme, mais
dans beaucoup le dosage des alcalins est omis. Jamais un travail
méthodique n’a été entrepris dans le but d'obtenir des analyses
d'organes que l’on puisse comparer entre elles. Pour ce faire,
il fallait enlever à un chien, par exemple, tous les organes et
les analyser séparément. La plasticité minérale de la matière
vivante est très grande, comme nous le verrons plus tard, et il
est impossible de comparer les teneurs minérales d'organes
ayant appartenu à des chiens différents non soumis au même
régime alimentaire.

Nous avons pris comme sujet d'expérience un chien mâle
de 6 kilog. 060 que l’on tua par une saignée à blanc pratiquée
à la carotide, afin de priver autant que possible de sang tous les

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 991

organes. Nous ne donnerons pas ici le résultat de toutes les
analyses, il suffira, pour se renseigner à ce sujet, de se rapporter
au travail complet (1). Nous nous contenterons de relater les
faits principaux et les quelques idées générales qui peuvent
découler de ce travail :

Il importe avant tout, si l'on veut obtenir un classement
raisonnable des organes par leur teneur en alcalins, d'envisager
non pas la richesse en potassium et en sodium de tel organe
par rapport à son poids frais ou au poids de ses cendres totales,
É potassium

sodium
potassium d’un organe ne vaut que comparée à sa richesse en
sodium, de ce rapport seulement on peut tirer quelques ensei-
onements utiles. Un exemple fera comprendre la valeur de
notre argumentation : si nous classons les organes d’après leur
richesse en sodium par rapport au poids de cendres totales,
nous voyons voisiner dans la liste deux organes tout à fait
dissemblables, le tissu osseux et l'intestin grêle qui est un tissu
nettement glandulaire. Ceci n'a apparemment aucune raison
d'être. En effet, le tissu osseux a ses cendres totales composées
en majeure partie de cendres insolubles auxquelles nous rappor-
tons la teneur en sodium; le tissu glandulaire, au contraire, a
la presque majorité de ses cendres totales solubles. Donc, le
tissu osseux est pauvre en sodium par rapport à ses cendres
insolubles et non par rapport à son potassium, tandis que le
tissu glandulaire est pauvre en sodium par rapport à ses cendres
solubles, c’est-à-dire par rapport à son potassium. Il en est de
même lorsque nous groupons les organes suivant leur richesse
en potassium. Seul, le classement par ordre de grandeur du

mais bien la grandeur du rappor . La richesse en

potassium
FSRPOr sodium
près la classification histologique des tissus.
1° Dans les tissus musculaires (cœur, langue, muscles,
diaphragme), les tissus glandulaires (pancréas, intestin grèle)
L potassium
sodium
il atteint 2,5 et 2,7 el, bien que s’abaissant fortement dans les

semble intéressant, il suit d'ailleurs de très

et les glandes (foie, rate) ont un rappor très élevé,

(1) Thèse Doct. ès. se. nat., Paris, 1912.

992 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

glandes à sécrétion interne, telles que le corps thyroïde et les
capsules surrénales, il ne tombe Jamais au-dessous de l'unité;
: potassium
sodium
assez élevé. Il varie entre 1,96 (hémisphères cérébraux) et 1,00
potassium
sodium
s’abaisse au fur et à mesure de la disparition de la substance
grise. La moelle, qui renferme proportionnellement moins de
substance grise que les hémisphères cérébraux et le bulbe, a un

2° Le tissu nerveux possède aussi un rappor

(nerfs, sciatique et pneumo-gastrique). Le rappor

potassium
sodium
constitués presque uniquement de substance blanche (fibres à
myéline) ont le rapport le plus faible, 1l égale 1,00;
3° Les tissus à fonction de conduction {artères, veines,
urètre), de soutien (cartilage, os) ou de protection (peau, poils,
potassium
sodium

rapport moins élevé; les nerfs, finalement, qui sont

ongles) ont un rapport très faible qui n'atteint

jamais l'unité.

En un mot, on peut dire que les tissus riches en cellules, à
fonction élevée, sont riches en potassium et pauvres en sodium,
tandis que les autres tissus voient leur teneur en potassium
décroître au profit de leur teneur en sodium. Il est donc erroné
de définir, comme on le fait souvent dans les livres, le potas-
sium comme un élément cellulaire et le sodium comme un élé-
ment circulant. Le sodium, lui aussi, peut-être un élément cellu-
laire, et plus important que le potassium, lorsqu'il s'agit de lissus
de soutien comme le tissu osseux, carlilagineux ou de tissu
élastique. Cette notion, que l’on avait fini par étendre à tous les
tissus, venait de ce que l’on appliquait à ceux-ci ce que l'on
sait sur le tissu sanguin, où le Na est entièrement confiné dans
l'élément cireulant (le plasma) et le K fixé presque uniquement
sur les cellules (les globules du sang).

Pour fixer les idées, sans surcharger notre mémoire, nous
donnons le détail de quelques-unes de nos analyses faites sur
les tissus les plus importants. On trouvera, en effet, dans le
tableau suivant, les quantités de potassium et de sodium
trouvées, rapportées à 100 de parties fraiches et à 100 de
cendres totales.

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 993

POUR CENT POUR CENT
de poids de cendres RAPPORT
POINS frais. totales.

frais.

Muscle (échantillon moyen. . .12.782 BINOEMAUIE
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ÉTUDE DES VARIATIONS MINÉRALES DE L'ORGANISME
AU POINT DE VUE DE SA TENEUR EN POTASSIUM ET EN SODIUM.

La teneur minérale d'un organe n’est pas constante, ce fait a
été démontré depuis longtemps. De nombreux auteurs ont vu
qu'un même organe sain, puis malade, ne renfermait pas le
même taux d'éléments minéraux. Le sang, en particulier, a été
très éludié et, dans les cas d’anémie, il a présenté des varialions
considérables. Il nous a paru intéressant d'étudier d'abord
l'influence de la saignée sur la composition sanguine du lapin.
Nous étudierons ensuite l'influence d’une alimentation nette-
ment sodique sur la teneur en potassium et en sodium de
l'organisme el, à ce propos, nous aurons l'occasion de revenir
sur le problème intéressant de la faim de NaCI produite par les
alimentations fortement potassiques, c'est-à-dire végétariennes.
Cette question, que Bunge semblait avoir résolue d’une facon
définitive, à été ensuite fortement controversée; les quelques
expériences que nous avons faites à ce sujet semblent, au con-
traire, confirmer les théories du savant physiologue.

L

994 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

1° Influence de la saignée sur la teneur en potassium et en
sodium du sang du lapin. — On a beaucoup étudié les trans-
formations du sang après la saignée; mais on ne s'est guère
intéressé qu'aux transformations de la composition anatomique
ou organique de ce tissu. De l'ensemble de ces observations, il
résulte que le sang réagit fortement pour se conserver iden-
tique à lui-même, et de même qu'il reconslitue rapidement ses
globules et ses albumines, il rattrape aussi rapidement son taux
salin. Le sang se reconslitue évidemment aux dépens des
tissus. Or, il est d'opinion courante que le potassium est un
élément plus fixe que le sodium et n’abandonne les tissus qu'au
fur et à mesure de leur destruction. Si donc nous saignons un
lapin et lui soutirons une certaine quantité de matières miné-
rales, il est permis de supposer que le sang ne revient pas
aussi vite à son taux primitif de potassium qu'à son taux de
sodium, et que pendant un certain temps ce dernier supplée le
potassium pour maintenir l'isotonie.

Le résultat à confirmé nos suppositions : on enlève à un
lapin de 2 kilogrammes, 20 grammes de sang par une ponc-
lion au cœur, suivant la technique indiquée par Nicolle et
Ducloux; douze heures après, on lui enlève encore 15 grammes
de sang. On attend deux jours, on lui enlève cette fois
0 grammes de sang et, douze heures après, 20 grammes. On
analyse la première, la deuxième et la quatrième ponctions. Le
potassium

sodium
vement égal à 0,68, 0,63, 0,61. Le potassium ne revient pas de
suite à son taux normal, tandis que le sodium est de suite
remplacé par le sodium des tissus. Pendant l'expérience, nous
avons seulement donné à boire au lapin, afin qu'il ne rattrape
son laux minéral sanguin qu'aux dépens de ses tissus.

rapport va toujours en diminuant. Il est successi-

2 Influence de l'alimentation sur la teneur en potassuun et
en sodium de l'organisme des chiens et des souris. — Avant de
relater le résultat de nos expériences, nous allons donner un
rapide aperçu de la question de « la faim de sel » qui se rat-
tache directement à ce chapitre. En effet, en donnant à un
chien uné alimentation fortement potassique, nous nous pla-
cons exactement dans le cas de l'animal ne se nourrissant que

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 99%

de végétaux très riches en potassium et pauvres en sodium.
Bunge avait prétendu que les herbivores seuls ayant besoin
d'un supplément de chlorure de sodium à leur alimentation,
ceux-ci devaient leur appétence spéciale pour le sel à ce que
leur alimentation étailtrès riche en potassium. Après s'être livré
à des expériences 2x vitro, où il montre que du carbonate de
potassium ou du phosphate de potassium en solution aqueuse,
mêlés à du chlorure de sodium, échangent partiellement leur
acide en donnant du carbonate de sodium ou du phosphate de
sodium et du chlorure de potassium, il en déduit qu'in vivo une
réaction identique a lieu. Le carbonate de potassium des végé-
taux donnera du carbonate de sodium et du chlorure de potas-
sium avec le chlorure de sodium du sang. Ces sels ne faisant
pas partie de la composition minérale normale du sang, seront
rejelés par l'urine et à l'absorption de sels de potassium sera
consécutive une élimination de sodium.

Bunge procède alors à une expérience sur lui-même; ïül
ingère 18 grammes de K°0 à l'état de phosphate et 1l constate
une élimination de 8 grammes de sodium par son urine.
Cette quantité de sodium éliminée représente la moitié du
sodium contenu dans les 5 litres de sang. On ne peut donc
douter de la participation des: tissus à cette perte. Si nous
donnons done, pendant un temps assez long, une alimenta-
tion très riche en potassium et pauvre en sodium, il est pro-
bable que nous appauvrirons l'organisme de l'animal en sodium.
Seule l'analyse des organes après un assez long régime et le
bilan exact des entrées et des sorties de potassium et de sodium
peuvent nous donner un renseignement exact à ce sujet et con-
firmer les théories de Bunge qui, d'ailleurs, désirait que de
semblables expériences soient faites. Nous ne possédons pas
d'expériences de ce genre, dit-il, nous ne savons jusqu’à quel
point l'organisme continue à abandonner du sodium sous
l'influence d'une absorption continue de potassium. On ne peut
douter que la limite soit bientôt atteinte, au delà de laquelle
l'organisme retient énergiquement ce qui lui reste de sodium.

Forster et Kemmerich, puis Kurtz, ont réfuté les théories de
Bunge par des expériences dont ce dernier montra la non-valeur.
Puis Lapicque et Fredericq opposèrent à Bunge ce fait décou-
vert par Dibowskvy et Demoussy, à savoir que des nègres de

996 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

l'Afrique centrale salaient leurs aliments avec un condiment
uniquement potassique. Les sels de Berberali, du Congo, de
l’Angoniland, sont, en effet, presque uniquement composés de
sels de potassium. Comment concilier deux faits aussi discor-
dants, disaient-ils, que cet emploi de sels de potassium et la
théorie de Bunge ? Les nègres, en effet, ne peuvent pas se pro-
curer de sel de sodium et ils ne s’en soucient même pas.
Quinton finalement reconnait avec Bunge que les animaux
végétariens ont, en effet, faim de chlorure de sodium, mais
pour lui la cause est toute différente; ce n’est pas parce que les
sels de potassium soutirent le sodium de l'organisme, mais
tout simplement parce que le régime végétarien est pauvre en
sodium d’une facon absolue.

La réfulation de Lapicque et Fredericq n’a pas grande valeur
car elle ne repose pas sur des faits précis. Les indigènes salent
bien leurs aliments avec une substance polassique, mais quels
sont les sels contenus dans les végétaux servant d'aliment?
Ceux-ci renferment peut-être une proportion notable de sodium
capable de compenser les pertes. Bunge a démontré qu'une
alimentation contenant 6 de K pour 1 de Na est suffisante. Nul
ne peut dire si les nègres de l'Afrique centrale n’absorbent pas
la quantité nécessaire minima de sodium. D'autre part, nous
ne répondrons à la théorie de Quinton que par les faits qui
suivent et démontrent l’action nettement antisodique des sels
de potassium.

Deux jeunes chiens nouveau-nés sont lentement acclimatés
à deux régimes différents, l’un végétarien, l’autre carnivore.
D'après les dosages faits sur les aliments, nous arrivons à
donner au végétarien 22 fois plus de potassium que de sodium,
tandis que le carnivore recoit seulement 2,8 fois plus de potas-
sium que de sodium; au bout d’un mois et demi on exagère
les régimes en ajoutant du potassium à la nourriture du végé-
tarien et du sodium à la nourriture du carnivore. Au bout de
trois mois, les deux chiens sont tués. Pendant le cours des
expériences on a prélevé 3 fois du sang, et on a dressé deux
bilans exacts de l'entrée et de la sortie des alcalins. Après le
sacrifice des deux chiens, on a procédé à l'analyse du foie et des
reins.

a) Le sang reste remarquablement constant dans sa compo-

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 997

sition minérale, l'organisme lutle avec succès contre cette
invasion de potassium et parvient à maintenir son sang inté-
gral. Le sang du carnivore ne subit aucune modification
importante.

b) Le chien qui reçoit l'alimentation végétarienne riche en
potassium voit sa croissance arrêtée, bien qu'il reçoive tous
les éléments nécessaires à l'édification de son organisme : albu-
mine, hydrate de carbone, sels minéraux, graisse, etc. L'in-
fluence empêchante des sels de potassium sur sa croissance
semble donc se manifester. Par quel mécanisme ?

c) Les deux bilans nous renseignent à ce sujet. Dans les
deux cas, les bilans faits sur le végétarien nous montrent une
sortie de sodium plus forte que l'entrée. Donc, bien que presque
complètement privé de sodium, l’animal en rejette plus qu'il
n'en reçoit, alors quil devrait au contraire le retenir avec
force. Cette élimination ne peut être attribuée qu’à l'abondance
de phosphate de potassium ingérée, agissant selon le méca-
nisme indiqué par Bunge.

d) Comme cette perte de sodium ne porte pas sur le sang,
qui reste identique à lui-même, elle porte évidemment sur les
tissus. L'analyse du foie et des reins confirme cette hypothèse.
Les organes des végétariens, comparés avec ceux d'un chien
normal et ceux d’un chien carnivore, montrent un net affai-
blissement du taux en sodium ; tandis que le taux en potassium
reste remarquablement constant. Car s’il est possible d’abaisser
la teneur en sodium de l'organisme, il paraît impossible
d'élever le taux en polassium au-dessus de celui fixé par la
nature.

Ces quatre faits concordent avec la théorie de Bunge ; néan-
moins, il nous a paru utile de les appuyer d’une autre expé-
rience, en opérant sur de pelits animaux dans lesquels nous
pourrions doser le potassium et le sodium de l'organisme
total.

Nous avons pris trois lots de Souris blanches composés
chacun de trois Souris. Au premier lot, nous donnons du Blé
simple. Au second lot, du Blé concassé et arrosé d’une solution
PO‘HK?: au troisième lot, du Blé concassé et arrosé de NaCI.
Le dosage des alcalins dans ces différentes alimentations est
édifiant. Le lot touchant le Blé polassique reçoit 0 gr. 0009

998 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Fa ns

de Na pour 0 gr. 0656 de K. Le lot touchant le Blé sodique
reçoit 0 gr. 0402 de Na pour 0 gr. 0080 de K. Grâce à la résis-
tance de ces petits animaux, on est arrivé à réaliser des régimes
presque exclusifs. Etant donné qu’une Souris mange environ
5 grammes de Blé par jour et que celle-ci pèse 15 grammes,
elle absorbe 6 gr. 560 de potassium par kilogramme d'animal
et par jour; tandis que le Chien n'ingérait que 0 gr. 4765 de
potassium par kilogramme d'animal. Dans ces conditions,
nous pouvons manifester d’une façon plus nette encore l’action
désodiliante des sels de potassium.

Les Souris nourries au Blé potassique succombent au bout
de quelques semaines à ce régime. Le corps de ces dernières,
analysé, à montré un abaissement très net de la teneur en

s re otassium
sodium. Nous donnons ici la valeur des rapports pures
sodium
Premier lot (K). 2.41
Deuxième lot (Na) . 1.54
Troisième lot témoin 7

Quelle que soit la richesse en potassium de l'alimentation,
on n'arrive pas à modilier le taux potassique de la composition
minérale, Une autre conclusion s'impose : le potassium est un
déminéralisant, puisqu'il soutire le sodium de l'organisme sans
le remplacer. Nous voyons, en effet, que les Souris nourries au
potassium sont moins minéralisées, mais, contrairement à
notre atlente, ce sont surtout les cendres insolubles qui ont
fléch1.

Peut-être y aurait-il une action du potassium sur la mau-
vaise assimilation ou la désessimilalion des sels de calcium.
On peut, en outre, conclure qu'une vie sans sodium, ou tout
au moins sans un taux minime de sodium, est impossible;
conclusion qui vient absolument à l'encontre des suppositions
de Lapicque, de Frederieq, etc., au sujet des Congolais, puisque
ces auteurs prétendaient voir en ces nègres les exemples
d'organismes ne recevant que du potassium sans en soulfrir
d'aucune facon.

Influence du milieu et de l'alimentation sur la composition
minérale des êtres vivants au point de vue de la teneur en
potassium et en sodium. — Comme les expériences précédentes

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 999

nous avaient démontré la plasticité minérale de la malière
vivante, nous avons voulu voir si une lente acclimatation à un
régime fortement potassique ou fortement sodique ne produi-
rait pas les mêmes modifications que nos brèves expériences de
laboratoire, qui avaient duré à peine quatre mois. Cette lente
acclimatation étant trop difficile à réaliser expérimentalement,
il nous a paru plus facile de nous adresser à des animaux
vivant normalement dans des milieux différents. Les animaux
modifient profondément leurs organes en vue de l'alimentation
à laquelle ils sont destinés; il est tout naturel d'admettre qu’à
ces varlalions morphologiques viennent se superposer des
varialions chimiques, et, de même qu'en des cas de mimétisine
fréquent nous voyons l'animal devenir le véritable reflet du
milieu où il vit, de mème nous devons voir la composition des
organismes devenir, elle aussi, un reflet du milieu minéral qui
les nourrit. Dans le monde, deux milieux se distinguent nette-
ment par leur richesse relative en potassium et en sodium.
Bunge, dans son Cours de chimie biologique, nous en énonce
magistralement les raisons : « Jetons un coup d'œil, dit-il, sur
la distribution des deux alcalis, soude el potasse, à la surface
du globe. Dans la lutte entre l’acide silicique et l'acide carbo-
nique pour la possession des bases, ce dernier présente une
plus grande affinité pour la soude, tandis que le premier s'allie
plus volontiers à la potasse. La désagrégalion des roches sili-
ciques donne naissance à du carbonate de soude, qui se dissout
dans l’eau et filtre avec elle vers les profondeurs. La potasse
reste avec d'autres bases, surtout avec l'argile unie à la silice
à la surface de la terre sous la forme d'un sel insoluble. Le
carbonale de soude arrivant à la mer se transforme sous l’action
des chlorures des terres alcalines; il se forme du chlorure de
sodium et des carbonates terreux insolubles qui se déposent
lentement et forment des montagnes entières de pierre calcaire,
de craie, de dolomie. C'est pourquoi l'eau de mer est riche en
chlorure de sodium, pauvre en sels de potasse, et la surface de
la croûte terrestre riche en sels de potasse, pauvre en sel de
cuisine. » Nous devrions nous attendre à trouver une unifor-
mité presque absolue dans la composition minérale d'individus
vivant dans le même milieu. L'expérience nous apprendra que
nous trouverons de grandes différences chez des animaux

1000 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

marins, tandis que certains animaux terrestres ou d’eau douce
se rapprocheront, sans raison apparente, d'animaux vivant dans
la mer. Ilentre en jeu une quantité de facteurs tendant à modifier
la composition minérale d'un individu, dont un des principaux
est l'alimentation. Et, tout d’abord, le milieu lui-mème, la mer
par exemple, n’exerce pas également son influence sur tous
les organismes qui vivent dans son sein. Les Oursins, les Asté-
ries sont littéralement baignés d'elle; chaque organe trempe
dans le milieu marin et subira bien plus l'influence du milieu
que les organes d'un Poisson quelconque complètement isolé
du milieu marin où il nage. L'Écrevisse vivant dans l’eau douce
ne subira que légèrement l'influence de ce milieu, lui étant
complètement fermée, et sa composition minérale tendra à se
rapprocher de celle des animaux marins de la même famille.
Done, si l'on peut admettre qu'en général un animal vivant dans
: potassium
sodium
animal vivant dans le milieu terrestre, il ne faudra pas non
plus s’élonner de certaines anomalies causées par les multiples
raisons que nous venons d'énumérer.
Nos recherches ont évidemment porté sur la valeur du
É potassium
sodium
toujours été faites sur l'animal entier. A ce sujet, nous
n'admettons pas la théorie de Quinton, qui ne trouve d’intérèt
qu'aux analyses du milieu vital (la Iymphe, le plasma) des
animaux. Quinton avait raison pour le cas particulier qui
l'intéressait : démontrer la constance du milieu vital dans sa
teneur en chlore. Cette loi eût été impossible à démontrer, s’il
avait analysé des animaux entiers et avait rapporté au poids
total le poids de chlore trouvé. Mais comme toutes les parties
du corps d'un individu doivent se ressentir des différences de
teneur minérale de l’alimentalion, puisque toutes ces parties,
même chez les animaux à coquille, sont reliées entre elles par
le milieu nutritif commun dans lequel elles vont chercher les
matériaux de construction, et comme nous envisageons le
potassium
sodium
sodium au poids frais ou aux cendres totales, nos analyses

le milieu marin a un rappor plus faible qu'un

rappor chez différents animaux. Nos analyses ont

rapport et non pas le rapport du potassium et du

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 1001

sur les animaux entiers conservent ainsi loute leur valeur.

Nous avons choisi des animaux dans les différents embran-
chements suivants :

Les Stellérides, les Echinides, les Arthropodes, les Vers, les
Mollusques, les Vertébrés.

Dans chaque embranchement, nous avons choisi, autant que
possible, des représentants vivant dans la mer, dans l’eau douce
et sur la terre. Parmi les verlébrés, nous avons pris des animaux
nettement végétariens et nettement carnivores.

1° Les Stellérides et les Echinides nous ont fourni des
animaux très riches en sodium et très pauvres en potassium ;
les tissus des Oursins et des Etoiles de mer ont une composi-
tion minérale qui tend à se rapprocher de celle du milieu

sis potassium
marin qui les pénètre. Le rapport ———
sodium
et 0,41.

2° Dans l’embranchement des Arthropodes, nous avons
étudié deux classes : 1° les Crustacés : 2° les Insectes. -

Dans la première classe, nous avons choisi des représentants
marins et des représentants d’eau douce (Crangon, Astacus,
potassium

varie entre 0,34

Gammarus). Tous ont uu rapport à peu près sem-

sodium
blable (0,90). L'eau douce ne paraît avoir eu aucune influence
sur la désodification de ces animaux.

Les Insectes, qui sont par excellence des animaux à habitat
terrestre, nous ont donné des chiffres très intéressants. Le

potassium

rappor s'élève considérablement, en effet. Les

sodium
Gyrins ont un rapport égal à 2,1,les Locusta égal à 3,6, les
Pieris à 2,6; généralement chez les Chelonia il alteint 14,2
et 15,9. Ces Invertébrés ont une composition minérale iden-
tique à celle des plantes dont ils se nourrissent. L'adaptation au
milieu et à l'alimentation terrestre est donc très sensible chez
les Arthropodes, puisque l'on voit le rapport passer de 0,9
145,9:

3° Chez les Vers, l'influence du milieu terrestre se fait aussi
sentir. L'Hirudo a un rapport égal à 0,72, tandis que le Luwn-
bricus à un rapport égal à 2,07.

4° Chez les Mollusques, il en est de même. Les Mollusques
6%

1002 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

marins (Cardium, Mytilus), les Mollusques d'eaux douces.
; potassium

sodium
oscille entre 0,24 et 0,87, tandis que les Mollusques terrestres,
tels que l’Helix où Limax, ont des rapports respectivement
égaux à 2,1 et 4,1.

5° Chez les Vertébrés, la plasticilé minérale se manifeste
beaucoup moins grande. Quel que soit le Vertébré auquel on
s'adresse, fût-il Reptile, Batracien ou même Poisson vivant
dans l’eau de mer, on n'obtient jamais de rapport inférieur à
l'unité. Clupea, Gobio, Triton, ont des rapports respectivement
égaux à 1,4, 1,36, 1,09. Quant aux Vertébrés, complètement
adaptés à la vie terrestre, ils ont un rapport plus fort, mais ce
rapport n'’atteint pas les valeurs rencontrées dans d'autres
groupes. Rana a pour rapport 2,00; Cerastes vipera 1,4,
l'urtur 1,8, Mus 1,8, Canis 1,5. Le rapport le plus fort appar-
lient au Cobaye qui a une alimentation très riche en potas-
L potassium

sodium
entier 2,7, tandis que le Syrnium, Oiseau nettement carnivore,
a pour rapport 1,4.

Si nous envisageons maintenant la question, en dehors de
tous groupements, exception faite pour les Vertébrés qui
maintiennent beaucoup plus constante leur composition miné-
rale, malgré l’extrème variation des ressources minérales des
milieux qu'ils habitent, nous pouvons dire que tout organisme
vivant dans le milieu marin ou dans l’eau douce a une teneur
potassium

sodium
pouvons dire aussi que tout organisme vivant dans le milieu
terrestre à une teneur minérale dont le rapport est supérieur
à 1,5. Les deux dernières règles énoncées, pour avoir force de
lois, doivent reposer sur un bien plus grand nombre d'expé-
riences. Nous n'avons pu faire là qu'un travail d'orientation,
la mise au point d'une pareille entreprise demanderait un long
temps d’études. C’est pourquoi nous ne voulions pas donner ces
règles comme absolues. Espérons que si d’autres analyses
sont faites, elles ne feront que confirmer ce qui vient d’être

énoncé.

(Unio, Planorbis, Limnea), ont un rappor

sium. Cet animal a pour rappor e l'organisme

minérale dont le rapport est inférieur à 1,00 ; nous

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 1003

VARIATIONS DES TENEURS EN POTASSIUM ET EN SODIUM
DE DIFFÉRENTES SÉCRÉTIONS

Pour compléter l'étude du potassium et du sodium dans
l'organisme, il nous restait à examiner la composition de
diverses sécrétions et en particulier des sécrétions digestives.
On a beaucoup étudié les différents sucs digestifs, tant au point
de vue du mécanisme de leur sécrétion qu'au point de vue de
leurs actions diastasiques, mais peu de physiologistes se sont
attachés à en connaître d'une façon exacte la composition
minérale. Cette étude a pourtant une grande importance, car
on peut en tirer des conclusions intéressant le mécanisme des
actions diastasiques. Pour rester dans le cadre de notre sujet,
nous nous sommes attachés à connaître la teneur en potassium
et en sodium des sécrétions différentes, et à en suivre les
variations sous diverses influences. Mais il serait à souhaiter
que les analyses se rapportant aux autres composés minéraux
vinssent compléter ce (ravail amorcé. Les quelques auteurs
qui se sont Jusqu'ici intéressés à ces questions ont presque
toujours négligé un côté de la question, soit la partie physio-
logique, soit la partie chimique; et les différences considé-
rables que nous trouvons dans la littérature chimique, dans
les analyses d’une même sécrétion, proviennent souvent de ce
que les chimistes ont recueilli les sucs dans des conditions
différentes : alimentation différente, technique opératoire
imparfaile faisant donner à une même glande des sécrétions
dissemblables. Il importe donc de donner avec beaucoup de
précision lous les détails des conditions dans lesquelles on a
recueilli le produit à analyser. Je dois ici remercier M. Frouin,
qui m'a obligeamment fourni les divers sucs que j'ai analysés
ou indiqué les méthodes de choix pour obtenir ces diverses
sécrétions, me faisant bénéficier ainsi de sa longue expérience
d'expérimentateur et de physiologue averti.

Suc gastrique. — Pour obtenir du suc gastrique pur, il nous
fallait isoler l'estomac en entier ou tout au moins une partie de
l'estomac. En pratiquant l'opération de Pawlow-Chiguin, c’'est-
à-dire en isolant un lambeau de l'estomac, on n’a qu’une partie
seulement de la sécrétion gastrique qui ne correspond pas à la

100% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

sécrétion normale. En effet, les parois voisinantes du cardia et
les parois de la grande courbure ont une sécrétion acide, tandis
que les parois voisinantes du pylore ont une sécrélion alcaline.
Il faut done, si l’on veut une sécrétion normale, isoler complè-
tement l'estomac en sectionnant au cardia et au pylore et rac-
cordant l’æsophage au duodénum.

Un Chien, dont l'estomac est isolé depuis un mois, reçoit
une alimentation composée de viande dessalée par ébullition
dans l’eau et de riz. À ce régime on ajoute 10 grammes de
NaCI par jour. La sécrétion gastrique est normale dans ces
conditions, 500 cent. cubes par jour. On le prive de NaCI,
aussitôt la sécrétion diminue et, au bout de six jours, elle tombe
à 95 cent. cubes. On procède alors à une analyse de suc gas-
trique. On change le régime, on redonne du NaCl, aussitôt la
sécrélion remonte et redevient normale. On analyse à nouveau
le suc. Pendant toute la durée de l'expérience nous avons suivi
l'élimination du chlore total et de l'acide chlorhydrique libre.
Nos résultats ont confirmé ce que Frouin avait déjà nettement
indiqué dans une communication à la Société de Biologie en
1899. Seuls le chlore libre et le chlore fixe sont modifiés. À une
alimentation riche en NaCI correspond un sue gastrique riche
en HCI libre et renfermant peu de chlore fixe ; à une alimen-
tation pauvre en NaCI correspond un suc très peu acide dont
les chlorures fixes augmentent, c'est-à-dire que le potassium et
le sodium éliminés s’accroissent. Dans tous les cas le chlore
total reste fixe.

Il y avait donc intérêt à suivre la varialion du Na et du K en
changeant la base du chlorure de l'alimentation. Nous avons
remplacé pendant deux jours le NaCÏ par du KCÏ, puis par du
CaCF.

Sous l'influence des chlorures, l'acidité du suc gastrique est
élevée, quelle que soit la base, et les bases éliminées sont faibles.
Le Ca, le K ou le Na ajoutés n'influencent pas non plus la
qualité des bases éliminées, qui restent loujours dans le même
potassium

sodium
calcium reste remarquablement fixe. Mais lorsque l’on prive le
Chien de NaCI et que l’on augmente ainsi l'élimination des
chlorures fixes (rapporter au litre bien entendu et non à vingt-

rapport. Le rapport oscille entre 0,200 et 0, 300, le

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 1005

quatre heures), c'est uniquement l'élimination du sodium qui
se trouve augmentée tandis que le potassium reste fixe. Le suc
gastrique analysé dans le cas du Chien privé de NaCl et n'éli-
minant plus que 96 cent. cubes par vingt-quatre heures à un
potassium
sodium
sous l'influence des 10 grammes de NaCI par jour à un rapport
égal à 0, 235.

Bile. — Le premier échantillon de bile examiné était de la
bile normale sécrétée par un Chien à l’état de jeûne depuis vingt-
quatre heures et obtenue par simple évacuation de la vésicule
au moment de l'établissement de la fistule temporaire du canal
cholédoque. Le second échantillon provenait de la bile sécrétée
après l'opération, sous l'influence d'injection de sécréline au
Chien. Cette seconde bile, comme d’ailleurs l'ont déjà trouvé
beaucoup d'auteurs, est beaucoup plus diluée que la première
el renferme un pourcentage de K et de Na moins fort.

Néanmoins le Na a moins subi cette influence, et nous
L potassium

sodium
vésicule a un rapport de 0,132, tandis que la bile fistulaire a un
rapport égal à 0,100.

Salive. — Nous avons d’abord analysé de la salive normale
mixte de Chien, en la puisant à l'aide d'une pipetle dans la
gueule tenue ouverte par un mors. Puis nous avons recueilli
des salives pures des différentes glandes. A cet effet, il a été
pratiqué une fistule parolidienne et une fistule sous-maxillaire.
Au bout de huit jours, après complète guérison, on excila la
sécrétion salivaire en badigeonnant la gueule du Chien avec de
l'acide acétique dilué au cinquantième. On recueillait alors la
salive à l'extérieur dans un tube à essai, en appliquant celui-ci
contre l'ouverture de la fistule.

La salive mixte normale a une teneur en potassium plus
élevée que les deux autres; la salive acétique de la parotide et
celle de la sous-maxillaire ont une teneur en potassium à peu
près égale, mais la teneur en sodium augmente notablement
dans les salives acétiques. Ce fait est d'accord avec la théorie de
Pawlow, qui constate la sécrétion d’un aleali neutralisant lorsque
l'on excite les glandes salivaires par un acide. Le rapport

rapport égal à 0,067 ; tandis que le suc éliminé

constatons un abaissement du rappor + La bile de la

1006 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

potassium

sodium
acétique. La salive mixte normale a un rapport égal à 0,90, la
parotidienne acélique un rapport de 0,27 et la sous-maxillaire
de 0,39.

Suc pancréalique. — La sécrétion pancréatique a été étudiée
sur deux animaux: le Chien et la Vache. Chez le Chien, on a
pratiqué une fistule temporaire pancréatique, et on a recueilli
le suc sécrété sous l'influence d'injection de sécrétine. On a fait
à la Vache une fistule permanente et on a recueilli à deux
reprises différentes du suc pancréatique normal. La Vache
donne normalement six litres de suc pancréatique par vingt-
quatre heures. L'animal pendant cette expérience a toujours
recu la même alimentation. Les compositions de ces liquides
se rapprochent beaucoup les unes des autres, et l'on ne trouve
pas chez le Chien l'augmentation sodique habituelle, quand on
provoque artificiellement une sécrétion abondante. Il est vrai
que nous n'avons pas le seul terme de comparaison valable,
qui serait le suc pancréatique normal de Chien, très difficile à
obtenir en quantité suffisante pour faire une analyse des alcalins.
Le suc pancréatique de Chien à pour rapport 0,124 ; celui de
Vache 0,090.

Suc intestinal. — Le suc intestinal que nous avons analysé
vient de trois Chiens, opérés depuis trois ans, auxquels on a
fait une fistule permanente duodéno-jéjunale de Thiry. Le suc
est le résultat de sécrétions spontanées, qui se sont produites
de trois à sept heures après le repas. Ce suc à été ensuite cen-
trifugé pour le débarrasser d'éléments cellulaires. Les résultats
que nous avons trouvés ne sont nullement comparables à ceux
de Schmidt et Zander, car ceux-ci ont étudié un suc impur,
provenant d'une simple fistule intestinale. Ce suc était donc
mêlé à de la bile et à du suc pancréatique. Seule notre analyse,
portant sur du suc intestinal sécrété par une anse isolée et
débarrassé d'éléments cellulaires par centrifugalion, donne
une idée exacte de la composition minérale du suc pur.

D'après ces analyses, nous voyons que le sodium est le
métal qui forme la base la plus importante de toutes les sécré-
tions, exception faite pour la salive mixte normale et pour le lait
de certains animaux recevantune nourriture riche en potassium

diminue donc dans les deux échantillons de salive

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 1007

(analyses Bunge). Le sodium représente, dans la majorité
des cas, 30 p. 100 des cendres totales environ; si nous Île
supposons allié au chlore, il représente donc à peu près
80 p. 400 des cendres lotales. Le potassium joue après lui
le rôle le plus important, tout au moins comme valeur quanti-
lative. Il représente 3 à 4 p. 100 des cendres totales. Le potas-
sium se trouve dans un rapport assez constant avec le sodium
dans les sécrétions normales. Ce rapport oscille entre 0,19
et 0,09. Si l'on calcule le pourcentage de potassium rapporté au
poids frais, toujours dans des sucs normaux, on voit aussi qu'il
est peu variable; ce pourcentage oscille entre 0,077 et 0,039. I]
en est de même pour le sodium.

Les sécrélions ont, par contre, une composition minérale très
plastique lorsqu'elles ne sont plus normales, et l’on peut faire
varier aisément le rapport du potassium au sodium en produi-
sant artificiellement des sécrétions abondantes. Cette variation

: à NT _ potassium
se traduit toujours par un abaissement du rapport ——
sodium
une élimination plus grande de sodium accompagnant toujours
ces sortes de sécrélions.

ACTION ANTITOXIQUE DU SODIUM SUR LE POTASSIUM.

Nous avons, dans ce dernier chapitre, essayé de répéter les
expériences que Læb a faites sur le Fundulus, poisson complè-
tement insensible à de très grandes variations de pression
osmotique. LϾb place ces poissons dans des aquariums conte-
nant une solution de chlorure de potassium dont la concentra-
tion toxique a été fixée par des expériences précédentes. Notons
en passant que le Fundulus meurt dans une solution contenant
uniquement une quantité de potassium équivalente à celle que
contient la mer. Dans chaque bocal, Lœæb ajoute une quantité
; potassium

sodium
atteint 1/17 environ, le poisson résiste à l’action toxique du
potassium grâce à l’action antitoxique du sodium. Nous avons
donc pensé répéter ces expériences dans des conditions diffé-
rentes afin de voir si le Na se montrait toujours aussi nettement
antitoxique du K.

croissante de chlorure de sodium. Quand le rappor

1008 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

1° Action antitorique du sodium sur le potassium en injec-
lions sous-cutanées.— Nous avons opéré sur des souris blanches,
qui supportent merveilleusement l'injection de grandes quan-
tüités de liquide isotonique, voire même hypertonique. Une
souris de 15 grammes peut recevoir, sans en souffrir, 4 cent.
cubes de sérum hypotonique, isotonique ou hypertonique. Il
est néanmoins difficile de fixer exactement une limite de toxi-
cité du potassium au kilogramme d'animal, car il est difficile
d'injecter, à 1/10 de centimètre cube près, une solution de
Na dans le corps d’une souris, et le coefficient de résistance
individuelle est variable chez des animaux de même âge et de
même poids.

De nombreuses expériences nous ont montré, de plus, fait
non encore signalé à ma connaissance, qu'il est de toute impor-
tance de fixer la concentration de la solution injectée. Un même
poids de mélal n’a pas une égale toxicité en solulion hypoto-
nique, isotonique et hypertonique. Les propriétés toxiques qui
sont à leur maximum en solution hypotonique s'atiénuent dans
des proportions notables en isotonie et en hypertonie. Les
quelques chiffres qui suivent vont fixer les idées. Par consé-
quent, une limile de toxicité n’est valable que lorsqu'elle est
fixée par un grand nombre d'expériences, cette limite se rap-
porlant à une concentration définie du liquide et à des animaux
de même âge et de poids sensiblement égaux. Si ces différents
auteurs avaient eu soin de mentionner leurs résultats sous cette
forme, il est probable que nous ne trouverions pas, dans la
littérature, les énormes différences qui séparent des limites de
toxicité trouvées par différents auteurs pour un mème corps et
pour un même animal.

Une souris blanche de 15 grammes est tuée en une demi-
heure environ lorsqu'on lui injecte sous la peau 0 gr. 694 de
potassium par kilogramme, en solution hypotonique correspon-
dant à la demi-isotonie, c'est-à-dire 4,5 de NaCI par litre.

Une souris de 15 grammes est tuée par 0 gr. 963 de potas-
sium par kilogramme d'animal en solution isotonique.

Une souris de 15 grammes est tuée par 1 gr. 28 de potassium
par kilogramme d'animal en solution hypertonique correspon-
dant à une solution contenant 18 grammes de NaCI par litre.

Le potassium est toujours injecté sous forme de chlorure.

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 1009

Nous avons recommencé nos expériences sur la grenouille, qui
est tuée par 0 gr. 344 de potassium par kilogramme en iso-
tonie,et par 0 gr. 458 de potassium par kilogramme en hypertonie.

La grenouille, qui supporte bien le sodium et l'hypertonie
et qui, de plus, est sensible au potassium, est un bon sujet
d'expérience. Nous avons injecté, en même temps que la dose
toxique minima en hypertonie de potassium égale à 0 gr. 458
par kilogramme d'animal, des quantités croissantes de sodium
jusqu'à 1 gr. 97 par kilogramme, ce qui représente presque
cinq fois plus de sodium que de potassium. Nous n'avons
jamais eu, malgré cette addition, le moindre retard dans la
mort des animaux, qui périssaient tous au bout d'une demi-
heure, comme s'ils avaient été simplement injectés au potas-
sium. Les expériences ont été négatives aussi chez les souris.
On pourra nous objecter que jamais la dose de sodium n'a été
assez forte et n’a Jamais approché celle que Lœb ajoutait aux
solutions potassiques dans lesquelles il faisait vivre ses pois-
sons. Nous répondrons à cela que dès que Læb ajoutait de faibles
quantités de sodium, bien inférieures à la quantité optima, il
constalait des diminulions dans le nombre des poissons morts,
qui commençait ainsi à manifester les propriétés antitoxiques
de ce métal. Nous n'avons jamais rien eu de comparable dans
nos résultats.

2 Action antitoxique du sodium sur le potassium poison du
cœur. — Nous avons cherché à manifester l'action antitoxique
du sodium sur le potassium par d’autres expériences. Pour cela,
nous avons calqué les travaux de Richet sur le cœur de la gre-
noulle, lorsque ce physiologue cherchait à déterminer l'action
des alcalins sur cet organe.

On met à nu le cœur d’une grenouille, en prenant soin
d'enlever le péricarde. Le cœur continue à battre très réguliè-
rement pendant plusieurs heures si on l’abandonne à lui-
même. Richet a montré qu'en versant sur ce cœur quatre
gouttes d'une solution renfermant 52 gr. 5 de potassium par
litre, on obtient un arrêt immédiat et sans reprise des batte-
ments. Si l'on verse une solution ne contenant que 26 grammes
de polassium sous forme de chlorure par litre et ajoutant
quatre gouttes de la solution tous les quarts d'heure, on obtient
un arrêt au bout de la quatrième addition.

1010 _ ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Nous avons essayé l’action combinée des sels de potassium et
de sodium comparés à l’action des sels de potassium seuls.
Nous n'avons obtenu d'arrêt du cœur, avec la solution conte-
nant 52 grammes de K par litre et 78 grammes de Na, qu'au
bout de la troisième addition de quatre gouttes. Avec la solu-
tion contenant seulement les 52 grammes de K, nous avons eu
toujours l'arrêt instantané, en diastole. Si nous admettons que,
dans la première série d'expériences, il ne nous a pas été pos-
sible d'ajouter des quantités suffisantes de sodium pour montrer
ses propriétés antitoxiques, et que nous nous appuyons seule-
ment sur les expériences du cœur de la grenouille, nous voyons
que, chez les mammifères, le sodium a une légère action anti-
toxique sur le potassium. Mais cette action ne se manifeste que
lorsque le sodium est en proportion notable comparativement
au potassium. Or, les nombreuses analyses d'animaux nous ont
montré que jamais le sodium n'existe dans ces proportions
dans l'organisme et qu'il lui arrive même, dans certains cas,
d'en être complètement absent (chenille). Donc, parmi tous les
rôles importants que peut jouer le sodium, il est probable
qu'il ne joue pas le rôle antitoxique vis-à-vis du potassium. Il
peut d'ailleurs être suppléé par d'autres métaux beaucoup
plus actifs que lui, tels que le calcium, dont le pouvoir anti-
toxique sur le potassium a déjà été étudié.

CONCLUSIONS GÉNÉRALES.

Il nous reste, à la fin de ce mémoire, à meltre en valeur, en
les groupant, les conclusions générales délà énoncées à la fin de
o 3 te) .
chaque chapitre : |

1° Après une étude critique, précise et détaillée des procédés
d'analyse du potassium et du sodium, nous avons pu donner
une méthode de recherches nous donnant l’approximalion, à
2 p. 100 près, et par conséquent exempte de tous reproches ;

2° Au point de vue de la répartition du potassium et du
sodium dans l'organisme, on peut conclure à l'absence totale
de spécificité absolue du potassium ou du sodium pour tel
organe ou tel tissu. Les deux alcalis sont répartis, inégalement
il est vrai, dans tous les organes du corps des animaux ;

ÉTUDE DU POTASSIUM ET DU SODIUM CHEZ LES ANIMAUX 1011

3° Un classement rationnel de ces organes ne peut se faire
que d’après le rapport du potassium au sodium et non d'après
le rapport du métal au poids frais. De ce classement, il résulte
que les tissus à fonction importante, riches en cellules, ont
potassium

sodium
de soutien. Donc, si le sodium est un élément circulant, il ne
faut pas définir le seul potassium comme élément cellulaire, le
premier métal, en effet, étant lui-même un élément cellulaire
plus important que le potassium dans certains tissus :

4° La variabilité de la composition minérale de l'organisme
est assez grande en ce qui concerne tout au moins le potassium
et le sodium. Ce fait a été démontré en faisant varier les alealis
du sang par la saignée, en modifiant la composition des sécré-
tions par excitation des glandes à l'aide d’un agent artificiel,
en changeant la teneur minérale des lissus pris séparément et
de l’organisme entier, par des alimentations appropriées. Seul,
le sang paraît conserver intégralement son taux de potassium
et de sodium, malgré les écarts de régime et les additions de
NaCI ou de phosphate de potassium aux aliments. Nous assis-
tons donc à ce fait extraordinaire de la variation minérale de
tissus qui se nourrissent et se baignent dans un liquide de
composition constante ;

5° Des bilans, établis d'une facon aussi précise que possible,
ont nettement montré que la théorie de Bunge, qui attribuait
la faim de sel à l’ingestion de potassium, était exacte. Les
animaux, en effet, sous l'influence du potassium, perdent plus
de sodium qu'ils n’en absorbent, et, bien que vivant en inanilion
sodique, ils éliminent ce métal qu’ils devraient logiquement
conserver avec force, d'où amaigrissement, et parfois mort.
L'organisme a donc besoin de sodium, et l’histoire des Congo-
lais, ne vivant que d'une alimentation purement potassique,
est infirmée par la suite de nos expériences sur la nécessité du
sodium dans l'alimentation ;

6° Il ne nous a pas été possible, en opérant par injections
sous-cutanées, de démontrer d’une facon nette l’action anti-
toxique du sodium sur le potassium, et de faire ainsi une
généralisation des travaux de Læb. Un seul fait est à retenir :
une solution contenant une même quantité de métal devient

un rapport plus élevé que les lissus de conduction et

1012 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

de moins en moins toxique par rapport au kilogramme d'animal
lorsqu'elle passe de l'hypotonie à l'hypertonie ;

1° Finalement, nous avons montré que la teneur en métaux
alcalins des différents animaux se modifiait selon le milieu et
l'alimentation. Exception étant faite pour les Vertébrés, ani-
potassium

sodium
de la matière vivante s'élève, lorsque celle-ci, quittant la mer
et les eaux douces, s'adapte à la vie terrestre et à son alimen-
lation.

maux supérieurs, nous pouvons dire que Le rapport

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG

par GABRIEL BERTRAND et F. MEDIGRECEANU.

En raison de son importance physiologique et médicale et
des difficultés qui ont surgi lorsqu'on à voulu la résoudre, la
question de la présence normale du manganèse dans le sang
de l’homme et des animaux supérieurs a donné lieu à des
recherches nombreuses et contradictoires.

S'il est encore facile, en effet, dans beaucoup de cas, de
déterminer la présence et même le poids d'un élément, mélal-
loïde ou métal, dont on ne peut avoir à sa disposition qu'une
très petite quantité, il n’en est plus ainsi lorsque cet élément
est accompagné d’une énorme proportion de substances étran-
gères, minérales ou organiques. Ou bien, dans ce cas particu-
lier, fréquent en chimie biologique, on court le risque de
perdre l'élément cherché, soit en partie, soit en totalité, au
cours des manipulations; ou bien, au contraire, on court celui
d'en introduire dans le mélange soumis à l'analyse parce aue
cet élément existe parfois, sans qu'on s’en doute, à l’état d'im-
pureté dans la masse des réactifs dont on est obligé de se
servir. Si on le perd, on est conduit à méconnaître son exis-
tence; si, au contraire, on en introduit, on peut être amené à
admeltre sa présence, lors même que la quantité reconnue ou
dosée aurait été apportée exclusivement par les réactifs. L'his-
loire de la découverte de l'arsenic normal dans l'organisme
humain a déjà démontré la justesse de ces observations (1);
celle de la recherche du manganèse dans le sang, dont nous
venons de nous occuper, en fournira une confirmalion nou-
velle et non moins instructive.

La première indication relative à la présence du manganèse
dans le sang à été donnée par Wurzer (2), en 1830. En oxy-

1) GABRIEL BERTRAND, Ann. Chim. Physiq., 5° série, t. XXIX, p. 242 (1903) et
Bull. Soc. Chim., 3° série, t. XXIX, p. 920 (1903). — G. Berrran» et Z. Vauossy,
Ann. Chim. Physiq., 8e série, t. VII, p. 523 (1906).

(2) Schweigger's Journal d. Chem. Plysiqg., t. LVIIT, p. 481 (1830).

1014 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

dant par le nitrate de potassium 2 grammes de charbon pré-
paré dans un creuset à partir du sang humain, puis en repre-
nant le résidu lavé par l'acide chlorhydrique, il a obtenu une
solution dans laquelle l’action successive du succinate d'am-
monium et du carbonate de sodium lui a permis de séparer :

Oxyde deVeL RNeee D Ro on oue (A0R)
Sesquioxyde de manganèse . . . . . . . . . . 0,034

soit une proportion de manganèse égale au tiers environ de
celle du fer.

Marchessaux, selon Riche (1), aurait émis, en 1844, une opi-
nion semblable à celle de Wurzer, sans indiquer toutefois Ia
proportion de métal contenue dans le sang.

À son tour et sans connaître, sans doute, ces publications,
Millon annonça, en 1848, que « le sang de l’homme contient
constamment de la silice, du manganèse, du plomb et du
cuivre ».

Pour rechercher ces éléments, Millon opérait de la manière
suivante : le sang dilué de trois volumes d’eau était introduit
dans un flacon de chlore gazeux qui le coagulait et détruisait
les globules. On filtrait; on évaporait le liquide et on calcinait
quelques instants le résidu pour faire disparaître la petite
quantité de matière organique que le chlore n'avait pas pré-
cipitée. La partie insoluble des cendres était ensuite traitée
« comme un minerai »; elle contenait, entre autres éléments,
de 10 à 24 p. 100 de manganèse.

Après avoir conclu que les éléments ainsi découverts se
fixent, avec le fer, dans les globules et participent comme lui à
l’organisation et à la vie, Millon admit la possibilité d'une
chlorose par défaut de cuivre, de plomb ou de manganèse ou
bien, au contraire, celle de quelque affection obscure et rebelle
par excès de ces métaux, et il invita les médecins à examiner
ces questions (2).

Les résultats et les conclusions de Millon furent vivement
critiqués l’année mème par Melsens. Ayant trouvé qu'en opé-
rant avec des réactifs purs on ne pouvait déceler dans le sang

(4) Journ. Pharm. chim., 4e série, t. XXVIT, p. 542 (1878).

(2) Comptes rendus de l'Acad. «des sciences, &. XXVI, p. #1 (1848). Aussi :
Ann. Chim. Physiq., 3° série, t. XXII, ,p. 372 et p. 508 (1848).

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NO VAL DU SANG 1015

ni cuivre, ni plomb, Melsens émit des doutes sur la précision
des expériences de Millon et, sans nier absolument la présence
du manganèse à propos duquel il n'avait pas fait de recherche
particulière, il se refusa à croire à ses proportions élevées et à
son importance physiologique (1).

Les critiques de Melsens étaient capables de faire ressortir
l'insuffisance des expériences de Millon, elles ne pouvaient
infirmer leur valeur, au moins qualitalive, en ce qui concerne
le manganèse. De nombreuses recherches ou observations
médicales publiées dans la suite semblèrent bien, d’ailleurs,
confirmer l'intervention attribuée au manganèse dans les phé-
nomènes de la vie. Les plus importantes furent celles de
Hannon, de Pétrequin et de Burin du Buisson.

Hannon, de Bruxelles, tout d'abord, avança que l’on pouvait
tirer un parli avantageux des préparations manganésiennes
dans les affections qui ont profondément débilité l'organisme.
D'après lui, certains états chlorotiques seraient liés à un défaut
de fer et de manganèse, d'autres à un défaut de fer seui ou de
manganèse seul; l'administration judicieuse des deux métaux,
associés où séparés, selon les cas, donnerait alors d'excellents
résultats.

Hannon ne s'est pas contenté d'essayer les effets physio-
logiques ou plutôt thérapeutiques du manganèse; il a, de plus,
recherché ce métal dans le sang et, cela, en se plaçant, suppo-
sait-1l, à l'abri des critiques adressées à Millon. Tous ses réac-
tifs furent éprouvés d'avance; il ne se servit que de capsules en
porcelaine ou en platine; ni le chlore, ni le verre, qui auraient
pu apporter du manganèse, ne furent employés dans ses expé-
riences. Voici comment il décrit son mode opératoire : « Je
réduisis en cendre le caillot sanguin d'une personne qui n'avait
pas été soumise au manganèse. Je {raitai la cendre par l'acide
nitrique pur, étendu d’eau distillée. Je neutralisai l'excès
d'acide par du carbonate ammonique pur. Je fis passer dans la
solution un courant de gaz sulfide hydrique, et je laissai

1) Ann. Chim. Physig., 3° série, t. XXIII, p. 358 (1848). Il n'est pas sans
intérêt de noter ici, d'une part, que Deschamps a signalé la présence du
cuivre dans le sang, d'autre part, que Malaguti, Durocher et Sarzeaud, ana-
lysant les cendres du sang de bœuf, y ont trouvé à la fois du cuivre, du
plomb et de l'argent. Comptes rendus de L'Acad. des sciences, &. XXIX, p. 780
(1850) et Ann. Chim. Physig., 3° série, t&. XXNMIIT, p. 129 (4850).

1016 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

reposer la liqueur pendant vingt-quatre heures; il ne se
déposa ni sulfure de cuivre, ni sulfure de plomb. Je versai
goutte à goutte dans le liquide une solulion de suecinate
ammonique et je laissai déposer tout le fer. Je filtrai la liqueur
et l'évaporai à siccité. C’est dans le résidu que se trouve le
manganèse. |

Pour contrôler ce résultat, je trailai d'une manière diffé-
rente le sang d’une autre personne.

Je mêlai le sang défibriné par le battage avec deux fois son
volume d’une dissolution de sulfate de soude concentrée: le
liquide jeté sur un filtre passa incolore et laissa les globules
sur le filtre. Je les lavai par une solulion de sulfate de soude
jusqu à ce que tout le sérum les eût abandonnés.

Pour séparer enfin le sel sodique des globules, je chauffai le
filtre à une température de 100 degrés; ils se coagulèrent et
devinrent insolubles. Je traitai alors le filtre par de l’eau
bouillante, le sulfate de soude fut entrainé et les globules
restèrent purs.

Pour connaître les métaux fixés dans les globules, je les
incinérai dans une capsule en platine, et je traitai la cendre
comme je l'ai dit précédemment.

Cette fois encore je trouvai le manganèse dans le liquide
sanguin.

J'analysai depuis le sang de bien d'autres personnes et
conslamment j'y découvris la présence de ce métal. J'eus
occasion, tout en continuant ces remarques, de constater £e
fait : c'est que la quantité de manganèse varie parfois considé-
rablement dans Les différentes affections.

Je le trouvai en grandes quantités dans le sang d’un homme
pléthorique, d’un typhisé et d'un jeune homme atteint de
syphilis constitutionnelle.

Chez un scrofuleux j'en trouvai moins, moins encore chez un
tubercuieux, chez un anémique et chez plusieurs chloro-
tiques.

Pour s'assurer de ces résultats, il n'est point nécessaire de
faire l'analyse quantitative du sang: la différence de nuance
dans la coloration du verre de borax par la totalité du résidu
de l'analyse suffit pour constater les faits avancés plus haut.
En effet, en employant toujours la même quantité de cendre

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1017

et de borax, plus ce dernier se colorera de violet foncé sous
l’action de la flamme extérieure du chalumeau, plus le manga-
nèse se retrouvera en abondance dans le sang (1).

Les idées émises par Hannon ont été adoptées peu après, en
France, par Pétrequin. Toutefois, en les appliquant, ce der-
nier ordonnait toujours le mélange de fer et de manganèse,
afin d'atteindre son but thérapeutique sans avoir à faire de
diagnostic différentiel des chloroses ferriques et manga-
niques (2).

À la demande de Pétrequir, Burin du Buisson reprit Les
analyses de Millon et de Hannon et, comme ceux-ci, il trouva
« du manganèse en quantité notable dans le caillot du sang
humain ». Ayant, en outre, dosé les globules, le fer et le man-
ganèse sanguins dans trois états de santé différents, il obtint :

POIDS, EN GRAMMES
A CS CE

des de l'oxyde de l'oxyde

globules. ferrique. manganique.
Homme pléthorique . . . 143,500 1,360 0,071
SAT MOIMaAlN 0 0198200 1,220 0,060
Femme chlorotique . . . 63,980 0,500 0,025

chiffres d’après lesquels, fait observer Pétrequin, on voit qu'il y
a, dans les affections qui modifient la compositicn du sang, des
varialions proportionnelles du manganèse, du fer et des glo-
bules et qu'il y aurait erreur à prétendre que tantôt le fer,
tantôt le manganèse fait défaut dans le globule sanguin et
que ce dernier peut être surchargé ou dépouillé de l’un ou de
l'autre de ces deux métaux (3).

La question du manganèse dans Le sang pouvait, à la suite
de ces recherches, passer pour résolue, au moins dans ses

(1) Etudes sur le manganèse, Bruxelles (1849). On trouvera de cette brochure
une analyse assez longue, mais ne renfermant rien de la partie chimique
que nous reproduisons ici, dans Journ. Pharm. Chim., 3° série, t. XVE, p. 41
et 189 (1849).

(2) Gazelle médic. de Paris, 3° série, t. IV, p. 733 (1849). Ce mémoire ren-
ferme une série d'observations relatives à des guérisons d’anémies d'origines
diverses par le manganèse. On en trouvera un extrait dans J. Pharm. Chim.,
3e série, t. XVI, p. 381 (1849).

(3) Bull. gén. de Thérapeut., t. XLIT, p. 193 (1852) et Gazette médic. de Lyon,
t. VI, p. 265 (1854). Le premier de ces mémoires est extrait dans J. Pharm.
Chim., 3° série, t. XXI, p. 469 (1852) et le second reproduit dans le même
Journal, t. XXVI, p. 420 (1854).

65

1018 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

grandes lignes. Une publication de Glénard (1) vint cependant
Jeter sur elle une nouvelle suspicion et obliger à en reprendre
l'étude. Glénard opérait sur le sang humain normal. Après
l'avoir desséché el incinéré dans une capsule de platine, il
éliminait la partie des cendres soluble dans l’eau, traitait le
résidu par l’eau régale, chassait l'excès d'acides par évapora-
ion el reprenait les chlorures obtenus par l'eau distillée. Dans
la solution, additionnée de chlorhydrate d’ammoniaque et
presque neutralisée par lammoniaque, il ajoutait alors du suc-
cinate d'ammoniaque bien neutre, chauffait le tout modéré-
ment et l’abandonnait au repos. Après quelques heures, le suc-
cinate de fer s'était déposé entièrement; la liqueur surna-
geante incolore était filtrée, évaporée à sec et le résidu,
fortement chauffé pour chasser les sels ammoniacaux, était
remis en dissolution à l’aide de l’eau régale. « Fondu avec la
potasse caustique, il ne l'a pas colorée en vert. Chauffé au
chalumeau avec le sel de phosphore et le borax, il n’a pas
donné de perle de couleur améthyste. » Ainsi, il ne renfermait
pas de manganèse. Le même résultat négatif fut obtenu dans
deux expériences à partir d’un litre et demi de sang.

Glénard ne trouva pas davantage de manganèse en détrui-
sant la matière organique d’abord par l'eau régale; il n’en
trouva même pas en opérant sur 336 grammes de sang extrait
de la veine d’un ouvrier des mines de manganèse de Roma-
nèche.

Enfin, ayant appliqué la méthode de Millon à quatre échan-
üillons de 100 grammes de sang, il réussit à constater dans l’un
d'eux des traces non dosables de manganèse, mais les trois
autres n'en contenaient pas.

De sorte que Glénard conclut que le manganèse n’est pas un
élément essentiel du sang humain et que, s’il peut s’y trouver
accidentellement, c’est en quantité très faible, inférieure à
celle qui a été indiquée.

Burin du Buisson allégua contre les résultats et les conclu-
sions de Glénard le témoignage de plusieurs médecins qui
avaient obtenu des guérisons par l'emploi des sels de manga-
nèse et le travail de de Kramer, qui avail, « quoique à petites

(1) Journ. Pharm. Chim., 3° série, t. XXVI, p. 184 (1854).

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1019

doses, toujours pu trouver le manganèse dans le sang d'un
grand nombre d'individus, et en conclut que le sang normal
contient constamment ce métal en petite quantité » (1). Mais
il n’apporta pas lui-même de fait nouveau et surtout ne
fournit aucune explication sur la méthode dont il s'était servi
pour doser le manganèse dans ses expériences (2).

Bonnewyn publia peu après, sans détail opératoire, le
résultat de quelques expériences effectuées en vue de déceler
le manganèse dans le sang de trois personnes, dont une
femme traitée pendant deux mois avec des pilules au sulfate
de manganèse; ce résultat fut entièrement négatif (3). Dès
lors, soit à cause des contradictions nombreuses par lesquelles
elle était passée, soit pour toute autre cause, la question du
manganèse sanguin tomba pendant une assez longue période
dans l’oubli.

Pollacei la reprit en 1870. « J'ai, dit-il, analysé plusieurs
variétés de sang humain, différentes entre elles par le sexe, par
l’âge, par le lempérament, par la santé des individus, et J'ai
trouvé constamment dans tous ces échantillons une certaine
quantité de manganèse; aussi, je puis, en pleine connaissance
de cause, assurer que le manganèse est un des éléments
essentiels du sang (4). » |

Pollacei épuisait par l’eau les cendres du sang, préparées
dans un creuset de platine, de manière à enlever les chlo-
rures. Il traitait le résidu par une petite dose d’acide nitrique
pur, introduisait le liquide dans un tube à essai, évaporait à sic-
cité, puis caleinait en chauffant le tube au rouge. Enfin, après
refroidissement, il versait dans le tube un peu d'acide nitrique
étendu, faisait bouillir avec une petite quantité de bioxyde de

(4) Institut Lombard, L. T1, Milan (1852).

(2) Dans son travail contradictoire, Glénard rapporte que Burin du Buisson
« a fait paraître à Lyon, en 1853, dans la Gazelle médicale, un mémoire inti-
tulé : Sur l'existence du manganèse dans le sang », et il ajoute : « Par ce travail,
le plus complet, le plus détaillé, l'auteur apporte de nouvelles preuves à
l'appui des faits allégués par ses devanciers, les précise plus nettement et y
ajoute des observations nouvelles... » Nous n'avons pu trouver aucune publi-
cation de ce genre dans la Gazelle médicale de Lyon, de 1851 à 1854. Dans le
volume paru en 1853, il y a bien un mémoire de Burin du Buisson, mais il
n'y est pas question du manganèse. Il est probable que l'indication donnée
par Glénard est inexacte, car Burin du Buisson n'y fait lui-même aucune
allusion.

(3) J. Pharm. Chim., 3e série, t. XXVII, p, 284 (1855).

(4) Ibid., 4e série, t. II, p. 375 (1830).

1020 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

plomb. Par le repos, il obtenait un liquide de couleur pourpre,
plus ou moins intense, couleur due à l'acide permanganique.
Le poids de 300 grammes de sang frais donnait la réaction
du manganèse d’une manière assez marquée, pouvant être
rendue plus évidente en portant la quantité de sang à 400 ou
900 grammes.

Huit ans plus tard, Riche fit paraître à son tour un mémoire
détaillé sur le manganèse du sang (1). Dans ce mémoire, le
plus complet qui ait été publié sur la question, Riche expose
d’abord une nouvelle méthode de recherche et de dosage de
petites quantités de manganèse, basée sur l’électrolyse, puis il
applique cette méthode à l'étude du sang de l'homme et de
quelques animaux, bœuf, mouton, porc et cheval.

On connaît le principe de sa méthode : lorsqu'on fait passer
un courant électrique dans une solution faiblement acidulée
de nitrate ou mieux de sulfate de manganèse, on voit appa-
raître la coloration rose de l’acide permanganique, puis le
manganèse se dépose soit sur l'électrode positive, soit en
flocons dans la liqueur, à l’état de bioxyde. Le précipité, lavé
et calciné, en même temps que l’électrode de platine, se trans-
forme en oxyde salin dont le poids permet de calculer celui du
métal cherché.

À la condition d'opérer en l'absence de fer, Riche a reconnu,
dans des expériences synthétiques, la possibilité de retrouver
de petites quantités de manganèse à 1/2 milligramme près,
limite de sensibilité de sa balance.

Pour appliquer la méthode au sang, Riche détruisait les
matières organiques par calcination dans une capsule de
platine, à la température la moins haute possible. Le
résidu débarrassé des parties solubles dans l’eau bouillante
était repris par l'acide chlorhydrique étendu. La liqueur était
évaporée à sec et maintenue une demi-heure à une tempéra-
ture suffisante pour insolubiliser la silice et pour décomposer
une faible quantité de chlorure de platine provenant de l’at-
laque de la capsule pendant l’incinération. La masse étail
reprise par l’eau faiblement acidulée par l'acide chlorhydrique,
la dissolution filtrée, puis mise en digestion pendant vingt-

(1) Zbid., 4° série, t. XXVIL, p. 538 (1878).

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1021 *

quatre heures avec du carbonate de baryum précipité. La
liqueur filtrée était salurée par un léger excès d'acide sulfu-
rique, évaporée à sec après filtration. Enfin, le résidu était
repris par XV à XX gouttes d'acide sulfurique concentré que
l'on promenait dans la capsule et que l’on maintenait pendant
un quart d'heure vers le point où l'acide sulfurique commence
à répandre des fumées. Le produit à peu près sec était repris
par l’eau que l'on entretenait vers Æ 100 degrés pendant
quelque temps, et la liqueur jetée sur un très petit filtre était
recueillie dans le creuset de platine pour être soumise au cou-
rant. Afin d'avoir une acidité convenable, la solution était
saturée par quelques gouttes de potasse pure et la liqueur
neutre sursaturée par IT à IIT gouttes d'acide sulfurique.

Riche a trouvé :

ORIGINE DU SANG Hanoi SU Pt A
BU MERE M 500 gr. 0 gr. 0015
— 150 gr. 0 gr. 0005
en RO miel Se EN TE 1.308 gr. 0 gr. 0003
Mouton . 500 gr. 0 gr. 0025
CR Rem Un à 150 gr 0 gr. 0010
RS PE PL LEUR LS 1.410 gr. 0 gr. 0005
PORC SEE ed be 12550 0 gr. 0015
CREVAlE CPE Cr CU OT r 0 gr. 0015
Femme . 250 gr. 0 gr. 002
— 250 gr. traces.

c'est-à-dire des proportions de manganèse très petites, ayant
pu échapper à ceux de ses devanciers qui avaient conclu néga-
tivement, faute sans doute d’une méthode de recherche assez
sensible, mais tellement au-dessous, d'autre part, de celles qui
avaient été indiquées par Wurzer, Millon, Hannon, Burin du
Buisson, etc., qu'il est nécessaire d'admettre, dans les expé-
riences de ces derniers, des causes d'erreur importantes,
comme l'introduction de manganèse par les réactifs ou
l'emploi de procédés de dosage tout à fait défectueux.

Riche s’est assuré que le bioxyde de plomb, vendu pur à cette
époque, par les divers fabricants, contenait du manganèse et
donnait encore une coloration rose faible, même après plusieurs
lavages à l'acide azotique. C’est Le réactif qui avait été employé
par Pollacei.

1022 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Aussi Riche termine-t-il son mémoire en écrivant que le
manganèse n'existe pas dans le sang « par une loi physiolo-
gique, qu'il n'en est pas un des facteurs indispensables, mais
un principe accidentel, étranger; qu’il ne concourt pas, comme
le fer, à la production du globule sanguin, c'est-à-dire de
l'élément organique principal; qu'il n’y a pas de chloroanémie
produite par le manque de manganèse et même qu'il est loin
d'être démontré, comme on l’affirme dans beaucoup d'ouvrages
de médecine, que le manganèse puisse être employé avec
succès en thérapeutique comme un succédané ou un adjuvant
du fer. »

Cette manière de voir fut également partagée par Maumené,
à la suite des recherches qu'il a publiées en 1884, sur l’exis-
tence du manganèse dans les animaux et les plantes et sur son
rôle dans la vie animale (1). « Le sang, écrit-il, n’en renferme
pas toujours, on le sait; nous avons examiné le sang d’une
femme en couches; ni le caillot, ni le sérum de 100 grammes
ne nous en ont donné trace... On doit considérer le manga-
nèse comme un accident parmi nos éléments constitutifs; nous
le rejetons nettement du liquide vital, etc.

« La médecine doit renoncer à l'emploi du manganèse comme
succédané du fer... Le manganèse est un intrus dont le sang
peut tolérer des traces, mais les rejette sans cesse, parce que le
métal deviendrait nuisible s’il parvenait à s’y accumuler ou
seulement à s'y maintenir. »

Tel était l’état de la question du manganèse du sang lorsque
nous avons été conduit à nous en occuper. Une lecture atten-
tive des travaux analysés ci-dessus, une connaissance particu-
lière des méthodes de recherche et de dosage du manganèse
acquise dans des études antérieures, enfin et surtout une série
d'expériences de contrôle, nous ont fait supposer que cette
question importante n'était pas résolue. Si l’on examine, par
exemple, les travaux de Riche, c’est-à-dire ceux qui offrent le
plus de garantie, on est frappé, à la lecture, par ce résultat
singulier que la proportion de manganèse trouvée dans un
même sang, bœuf ou mouton, est d'autant plus petite que le

(1) Comptes rendus de l'Acad. des sciences, t. XCVITT, p. 1416 (1884).

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1023

dosage porte sur une plus grande quantité de liquide. IT y a [à
au moins la présomption d’une erreur systématique, due sans
doute à ce que les poids de sesquioxydes pesés sont très petits,
d'un ordre de grandeur voisin de la limite de sensibilité de la
balance utilisée pour ces dosages.

Riche s’est servi, comme on l’a vu, du carbonate de baryum
pour séparer le manganèse et le fer. Cetle méthode ne convient
pas, d’après nos expériences, lorsqu'il s'agit de retrouver et de
doser seulement de très petites quantilés de manganèse en
présence de quantités notables de fer : le premier métal est
précipité en partie avec le second.

Nous avons fait nos expériences de contrôle avec le sulfate
de manganèse et l’alun de fer ammoniacal utilisés par l’un de
nous dans des recherches antérieures (1) et du carbonate de
baryum que nous avons préparé bien exempt de carbonate
alcalin en traitant une solution de baryte recristallisée par un
courant de gaz carbonique. Le précipité a été lavé cinq fois à
l’eau chaude, à l’aide de la centrifuge.

Cinq grammes d’alun de fer dans une première expérience,
10 dans une seconde, ont été dissous dans 100 cent. cubes d’eau,
additionnés de 0 milligr. 050 de manganèse à l’état de sulfate
et, peu à peu, de carbonate de baryum, en agitant souvent,
jusqu'à ce que le liquide soit décoloré. On a laissé déposer.
Après vingt-quatre heures, le liquide séparé par centrifugation
el débarrassé de baryum par l’acide sulfurique pur ne contenait
que 0 milligr. 015 de manganèse dans la première expérience
et 0 milligr. 012 dans la seconde, le métal étant dosé à l'état
d'acide permanganique, comme on le verra plus loin. Une
expérience témoin, effectuée en même temps, avec 10 grammes
d'alun de fer seul, n'a pas donné trace de manganèse.

Riche a fait une expérience de contrôle analogue à la nôtre,
avec une plus grande quantité de manganèse, mais il l’a inter-
prétée dans un sens contraire, bien qu’elle ait fourni, au fond, le
même résultat. Ayant pris 0 gr. 200 de fer et une liqueur titrée
correspondant à 0 milligr. 500 de manganèse, il a obtenu par
la pile « une coloration rose très accusée » ; or, on peut
lire, dans la description de sa méthode, qu'une solution de

(1) Annales de l'Instilut Pasteur, t, XXVI, p. 241 et 515 (1912).

102% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

0 milligr. 013 de Mn‘0' donne « une coloration rose très nette »,
qu'une solution en renfermant 0 milligr. 200 fournit un dépôt
de bioxyde « non douteux », et, enfin, qu'avec 0 milligr. 500 le
dépôt « est très net » (1). En supposant que le sel de fer
employé par Riche n'ait pas contenu de manganèse, il y avait
donc une perte notable du métal recherché.

Malgré ce défaut de la méthode, il faut supposer, pour
expliquer les résultats obtenus par Riche avec le sang, que ses
pertes en manganèse étaient compensées et au delà par quelque
cause d'erreur de sens opposé.

Plusieurs des auteurs qui, avant Riche, avaient signalé la
présence du manganèse dans le sang, s'étaient servi, pour
précipiter le fer, du succinate d'ammonium. Nous avons
reconnu que ce réactif ne saurait, guère mieux que le carbonate
de baryum, être employé pour séparer des traces de manganèse
dans un liquide contenant du fer.

Le succinate dont nous nous sommes servi a été préparé en
saturant par l’ammoniaque pure, jusqu'à réaction presque
neutre à l'hélianthine, une solution d'acide succinique purifié
antérieurement (2).

Nous avons pris, dans une première expérience, 5 grammes
d'alun de fer et O0 milligr. 050 de manganèse; la précipitation
a été faite avec trois grammes d'acide succinique à l’état de sel
ammoniacal. Nous avons retrouvé seulement dans le liquide
séparé par centrifugation, évaporé à sec et calciné, 0 milligr. 025
de Mn. Une seconde expérience, avec un poids double d’alun
de fer et aussi, par conséquent, d’acide succinique, nous à
permis de retrouver également 0 milligr. 025 de manganèse.
Enfin, dans une expérience témoin, avec 10 grammes d’alun de
fer et 7 grammes de réactif précipitant, sans addition de man-
ganèse, nous n'avons pas eu, comme il fallait s'y attendre, trace
de ce dernier métal.

(1) Nous avons soumis à une série de vérifications la méthode électroly-
tique de Riche, en nous plaçant au point de vue de la recherche et du
dosage de très petites quantités de manganèse. Nous avons fait varier la
nature du courant, opéré en présence d'acide sulfurique, seul ou additionné
de sulfate alcalin, de traces de platine, etc. Nous n'avons jamais pu
atteindre la limite de sensibilité indiquée par l'auteur. Les résultats décrits
par Riche se vérifient très bien, au contraire, lorsqu'on utilise des solutions
dix fois plus concentrées.

2) Annales de l'Institut Pasteur, 1. XXVI, p. 241 et 515 (1912).

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1025

Nous n'approfondirons pas les causes d'erreur qui ont pu
intervenir dans les autres recherches : à l'apport de manganèse
par le courant de chlore gazeux, déjà invoqué par Melsens
contre les résultats de Millon; ou par le bioxyde de plomb
préparé aulrefois, comme l’a montré Riche, il suffit d'ajouter
celui dû à la plupart des autres réactifs pour expliquer, au
moins en partie, les teneurs en manganèse auxquelles sont
arrivés certains expérimentateurs. D'autre part, Riche n'a pro-
bablement pas perdu beaucoup de métal ; or, il n’en a trouvé
qu'une proportion inférieure à 2 milligrammes par litre. Il est
possible, si cette proportion existe réellement, que Melsens,
Glénard et ceux qui n'ont pas reconnu la présence du manga-
nèse, ont employé des réactions trop peu sensibles. Mais il n’est
pas même certain, en définitive, que la petite proportion de
métal dosée par Riche dans le sang ne soit pas due à ce que les
causes de gain aient dépassé les causes de perte. Il était donc
nécessaire de reprendre la question à l’aide d’une méthode à
l'abri des critiques énumérées plus haut. Voici la description de
celle que nous avons suivie :

Le sang est recueilli, au sortir de la veine, soit directement
dans une capsule de platine, soit dans un flacon spécialement
nettoyé et renfermant, dans le cas où le sang n'est pas immé-
diatement soumis à l’analyse, une quantité d’oxalate d'ammo-
nium pur en poudre correspondant à environ un millième du
poids de liquide, pour éviter la coagulation.

L'échantillon de sang, pesé dans la capsule de platine de
erande dimension, est évaporé à sec dans une étuve puis cal-
ciné au four à moufle, à la température la plus basse possible.
A partir de ce moment, on suit exactement les indications qui
ont été données par l’un de nous pour la recherche et le dosage
de très petites quantités de manganèse dans les matières orga-
niques (1) : sulfatation, reprises successives des cendres par les
acides chlorhydriques et sulfurique, chauffage final pour
chasser les dernières traces de gaz chlorhydrique et décom-
poser les sels de platine.

On dissout le résidu dans l'acide nitrique étendu de trois fois
son volume d’eau, en chauffant un peu, et l’on décante dans un

1) GagriEL BerrrAnD, Bull. Soc. Chim., 4° série, t. IX, p. 361 (1911).

1026 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

tube jaugé. On ajoute un gramme de phosphate monopotas-
sique (1), trois ou quatre gouttes de nitrate d'argent au
dixième et l’on complète le volume marqué par le trait de
jauge. On se place dans de bonnes conditions de concentra-
tion en opérant sur environ 100 grammes de sang et en ame-
nant la solution acide des cendres à 10 cent. cubes. Si l’on
opère à une concentration notablement plus élevée, par
exemple quatre à cinq fois et davantage, la richesse saline gêne
la transformation du manganèse en acide permanganique (2)
et le dosage devient inexact. Il peut même arriver, avec une
concentration finale très forte, que le manganèse passe inaperçu
s'il est en minime proportion. La dilution avec un ou deux
volumes d'acide nitrique au quart permet, dans ce cas, de faire
réapparaître la réaction du manganèse.

S'il arrivait, pour une cause ou pour une autre, dont la prin-
cipale est la présence de platine, que la solution acide des
cendres ne soit pas limpide, il ne faudrait pas filtrer, mais
simplement laisser déposer jusqu'au lendemain, puis décanter
dans un autre tube, où l'on effectuerait le dosage sans avoir à
changer le volume de la solution décantée.

À cause du fer et malgré la présence du phosphate acide de
potassium, la solution des cendres du sang n’est pas tout
à fait incolore, mais faiblement teintée de jaune. Au lieu de
la chauffer lentement après addition de persulfate de potas-
sium, il nous a semblé préférable de la porter d’abord à l’ébul-
lition, puis d’y faire tomber le réactif oxydant : l'acide
permanganique se forme alors d'une manière très rapide et
le virage, jamais très intense dans le cas du sang, devient plus
facile à saisir.

Enfin, la coloration jaune du fer, surtout sensible à chaud,
masquant en partie le rose permanganique, il est indispen-
sable, pour obtenir des dosages colorimétriques aussi exacts que
possible, d'opérer les comparaisons avec des liqueurs titrées
de sulfale de manganèse additionnées d’une proportion conve-
nable d'alun, de fer et de phosphate de potassium.

Nous avons pris les précautions les plus minutieuses, au

(4) GaBriEL BERTRAND, Bull. Soc. Chim., 4° série, L. 11, note page 496.
(2) Il en est de même, comme nous l'avons reconnu, lorsqu'on se sert de la
méthode d'oxydation électrolytique.

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1027

cours de nos recherches, pour éviter les contaminations par
des substances manganésifères : le matériel a été lavé autant de
fois qu'il a fallu à l'acide chlorhydrique concentré et chaud;
nous avons fait attention à ce que des poussières, comme celles
de rouille, provenant des fourneaux, ne puissent tomber dans
les capsules ; enfin, tous les réactifs ont été purifiés au point de
ne donner aucune trace de réaction du manganèse, même en
opérant sur des quantités 10 à 50 fois plus grandes que celles
mises en usage dans une seule expérience.

Les expériences de contrôle suivantes donneront une idée de
la valeur de la méthode employée.

Nous avons d'abord incinéré 25 grammes de saccharose pur
en présence de 0 gr. 500 de chlorure de sodium pur et d’une
très petite quantité de sulfate de manganèse. Nous avons pu
retrouver dans les cendres exactement la première fois les
0 milligr. 100 et la seconde fois les 0 milligr. 010 de manga-
nèse que nous avions introduits.

En nous servant de sang de bœuf, dans lequel, on le verra
plus loin, on ne trouve pas de manganèse lorsqu'on opère dans
les conditions où nous nous sommes placés, 100 grammes de
sang seul ont fourni des cendres dont la solution acide, faible-
ment teintée de jaune, ne virait pas par le persulfate de potas-
sium, tandis qu'après addition de 0 milligr. 050 de manganèse
à l’état de sulfate, avant l’incinération, le virage correspondait
à 0 milligr. 047 de métal introduit.

Voici maintenant, rassemblés en un tableau, les résultats
que nous avons obtenus (voir page suivante).

Lorsque nous n'avons pas trouvé de manganèse, nous
nous sommes assurés que cela n'était pas dû à quelque
circonstance empêchante, en ajoutant O0 milligr. 005 de man-
ganèse à l'essai et en recommencçant l'oxydation par le per-
sulfate : il y a toujours eu alors formation d'une quantité
appréciable d’ acide permanganique et virage net de la
liqueur.

Nous pensons que s'il y avait eu 0 milligr. 003 de manga-
nèse dans l'échantillon de sang analysé nous aurions déjà eu
une réaction positive ; c'est pourquoi, dans le tableau, les
résultats négatifs sont exprimés par une limite.

1028 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR
ORIGINE POIDS POIDS DE MANGANÈSE, EN MILLIGRAMME, TROUVÉ
du du RE CE NU
sang. sang analysé. dans l'échantillon. dans un litre de sang.
Homme 50 gr. 0,000 c.-à-d.< 0,002 0,00 c.-à-d.< 0,02
(mélange de 13 gr. Id. Id.
plusieurs sangs.) 100 gr. 0,002 0,02
Mouton. 100 gr. 0,006 0,06
Cheval. 80 gr. 0,002 0,02
— 100 gr 0,002 0,02
Bœuf. 100 gr. 0,000 c.-à-d.<< 0,002 0,00 c.-à-d.< 0,02
— 100 gr. Id. : Id.
Porc. 100 gr 0,002 0,02
—— 100 gr. 0,000 c.-à-d.<Z 0,002 6,00 ec. à-d.< 0.02
Lapin. 40 gr. Id. Id.
_ 63 gr. Id. Id.
— 89 gr. Id. Id.
— 100 gr. Id. Id.
Phoque. 50 er. Id. Id.
Poule. 30 gr. Id. Id.
Canard. 63 gr. Id. Id.

Nous avons cherché, dans le cas du sang de mouton, quelle
partie, globules ou plasma, pouvait renfermer la plus grande
proportion de manganèse. Dans une expérience préliminaire,
nous avons opéré simplement sur le liquide et le dépôt obtenus
par une puissante centrifugation; dans une seconde expé-
rience, nous avons, en outre, lavé les globules à quatre
reprises différentes avec une solution de chlorure de sodium
pur à 9 grammes par litre, en centrifugeant chaque fois. Nous
avons trouvé : ;

POIDS POIDS MANGANÈSE
de substance de Mn ar

analysée. trouvé. kilogramme.

Plasma (exp. 1) . 100 gr. 0 mgr. 006 0 mgr. 06

— (exp. 2) . 80 gr. 0 mgr. 004 0 mgr. 05

Globules (exp. 1) . 100 gr. 0 mer. 002 0 mgr. 02

—— (exp.12)2° 80 gr. 0 mer. 002 0 mgr. 025
Comme dans la seconde de ces expériences, le lavage avait

été poussé assez loin pour que les globules renfermassent
moins d’un centième de leur poids de plasma, il est certain
qu'il y à du manganèse aussi bien dans les éléments cellulaires
que dans la partie liquide du sang, mais en proportion deux à
trois fois plus petite. Il n’est pas probable que le manganèse des
globules entre dans la constitution de leur matière colorante,

RECHERCHES SUR LE MANGANÈSE NORMAL DU SANG 1029

car nous n'avons pas trouvé trace du métal dans un gramme
d'hémoglobine de sang de cheval purifiée par quatre cristalli-
sations successives el, cela, dans des conditions expérimentales
où 0 milligr. 001 de manganèse aurait été facilement reconnu.

On voit, en résumé, que si le manganèse existe dans le sang
de l’homme et des animaux supérieurs, c'est en proportions
beaucoup plus petites que certaines recherches avaient pu
Jusqu'ici le faire supposer. Nous estimons que, dans nos expé-
riences, une quantité absolue de 2 à 3 millièmes de milligramme
ne nous aurait pas échappée et, d’autre part, que les chiffres
des dosages ont dû être exacts à cette quantité près. Dans les
neuf espèces de sang que nous avons examinées, appartenant à
l'homme ou à des animaux supérieurs, il n’y a donc qu’une
proportion de manganèse inférieure à un dixième et même
généralement à un vingtième de milligramme par litre,
répandue surtout dans la partie liquide ou plasma.

Il reste à savoir si ce manganèse est un élément passif et
inutile ou, au contraire, un élément indispensable au fonction-
nement de l'organisme; c'est ce que nous nous proposons
maintenant de rechercher.

SECONDE NOTE
SUR LA CONSERVATION DES « TOXINES SOLUBLES »

par M. NICOLLE ET CH. TRUCHE.

Nous avons montré (1) l'avantage que présentaient, au point
de vue dela conservation des toxines, les « solutions » glycéri-
nées préparées avec un excès de poison sec, notamment en ce
qui concerne la létanine et la ricine.

Un titrage récent de la solution de fétanine, dite solution-
mère dans notre première note, et de notre solution de ricine
nous à fourni des chiffres instructifs que nous mentionnons
ci-dessous (ex lettres grasses), à la suite des chiffres déjà
publiés (pour fa ricine, les derniers litrages n’ont été faits que
sur les cobayes et les souris — il a paru inutile d’injecter des
lapins).

TOXINE TÉTANIQUE

Solution-mère (titrée, pour la première fois, après deux mois.

Injections inlramusculaires.

ACTION SUR LES COBAYES ACTION SUR LES SOURIS
— || SE.
I £. Il III g. IV g. I g. II g. III g.

Après 2mois.| + en | + en
3 2

Après 10 mois.| + en | + en + en
3j... [2j 1/2 1 j. 4/2
Après 20 mois.| + en + en + en
3 j. 4/2 2 j. 4/2. 2
Après 3 ans Î|T. local| + en | + en
+ 7 mois. 6er) 2;
Après 5 ans. |T. local| + en | + en | + en | + en | + en | +en
SJ 4 j. |£ je MP Pos
Après 7 ans |T. local|T. local| + en | + en |T.local.| + en + en
+ 3 mois. 8: :1/2:15"j. 1/2. 3-41121]-01/2;

(1) Ces Annales, décembre 1910.

CONSERVATION DES « TOXINES SOLUBLES » 1031

RICINE

Solution titrée, pour la première fois, après deux mois (lapins)
et après dix-neuf mois (cobayes et souris).

Injections sous-culanées.

9

| À GOUTIE 10—1 GOUTTE 10—? GOUTTE

|
|
[a : à 1 Ü = al =

Cobayes.| Souris. | Cobayes.| Souris. | Cobayes. | Souris.
|
}

Après 19 mois LE en + en + en + en |Eschare.| + en
20 h. 12h DU 12 h: LP
Après 21 mois . . . .| + en
18 h
Après 26 mois . . . .| + en | + en | + en + en |Eschare.| +en
ae 3h] SHIE 20 h DT
APres 4Tans PEN + en + en + en | + en |Eschare.| +en
4212015 /h: 3]: 20 h. 47.172:

Les chiffres qui précèdent (moyennes de plusieurs expé-
rlences) prouvent qu'après sept ans et trois mois l’activité de
la /étanine n'est pas encore près de disparaitre, malgré une
baisse continue — et qu'après quatre ans la ricine n’a subi
aucun fléchissement appréciable de son pouvoir toxique.

ACTION INHIBITRICE DE L'ACIDE CARBONIQUE
SUR L'HÉMOLYSE ET LA BACTÉRIOLYSE
par le Dr SAWTSCHENKO.

(Travail de l'Institut Pasteur de Bruxelles.)

On peut constater aisément que le gaz carbonique protège
les globules rouges contre l'influence destructive du sérum
hémolytique. À quoi doit-il ce pouvoir ? Pour résoudre cette
question, on réalise les expériences suivantes :

On construit tout d’abord un appareil en verre très simple
figuré ci-contre : en aspirant soit en c, soit en /, on introduit
dans la boule &« un mélange de 0,3 cent. cube de solution
physiologique de NaCl et de 0,3 cent. cube de sang de chèvre
défibriné, préalablement lavé, et dans la boule b, un mélange
de 0,3 cent. cube d’alexine (sérum frais de cobaye) et de 0,6 cent.
cube de sérum hémolytique (préalablement chauffé à 56 degrés)
de lapin immunisé contre les globules rouges de chèvre. On à
eu soin, avant d'introduire ces mélanges dans l'appareil, d'y
faire barboter du CO:.

On ferme alors à la lampe les extrémités effilées e et /, on
raccorde € à la trompe, on fait le vide, on laisse ensuite rentrer
de l’acide carbonique. Pour faciliter l'élimination de l'oxygène
dissout, on a eu soin de placer les boules a et à dans un bain
d'eau à 37 degrés. On fait le vide de nouveau, on introduit encore
CO, el ainsi de suite trois ou quatre fois. Le sang prend une
teinte foncée. Le tube c est alors fermé à la lampe. On retourne
l'appareil de sorte qu’on réunit les deux liquides dans le tube d.
On chauffe alors l’étranglement g, de manière à le fermer en
détachant Le tube 4 de l’appareil. Le mélange renfermé dans le
tube d hermétiquement clos, est donc préservé de tout contact
avec l'atmosphère. Aucune hémolyse ne s’y effectue, même à la
température de l’étuve, tandis qu'un mélange de composition
identique, mais exposé à l'air, s’hémolyse rapidement. Si l’on

ACTION INHIBITRICE DE L’ACIDE CARBONIQUE 1033

vient à ouvrir le tube 4 en l’agitant quelque peu de manière à
favoriser le départ de l'acide carbonique et la pénétration de
l'air dans le liquide, l’hémolyse s’observe. Le gaz carbonique
ne détruit donc pas les substances participant à l’hémolyse,
mais se borne à suspendre leur action. On peut démontrer
ce fait d’une facon plus frappante encore : si, immédiate-
ment après avoir ouvert le tube 4, on fait pénétrer dans un tube
capillaire un peu du liquide qu'il contient, on constate au bout
de quelque temps que l’'hémolyse apparaît exclusivement au
voisinage des deux extrémités ouvertes de ce tube capillaire,
c'est-à-dire au contact de l'atmosphère.

Répétons maintenant, en nous ser-

vant de l'appareil ci-dessus décrit, la d
première expérience, qui nous permet

d'obtenir dans un tube 4 fermé, un q
mélange de globules, de sensibilisa-

trice et d'alexine, où l'hémolyse n’ap- (3

parait pas. Centrifugeons cette fois le

tube d avant de l'ouvrir. Les globules

s'étant déposés, ouvrons le tube et CL
décantons rapidement le liquide sur- ea
nageant. Versons sur le sédiment de L .
globules un peu de solution physio- V4 F:
logique et agitons pour éliminer en-

tièrement CO’. L'hémolyse ne s'opère pas. Les globules sont
pourtant bien sensibilisés, car ils shémolysent aisément si on
les additionne d'un peu d’alexine (sérum normal frais).

Tout se passe donc comme si le gaz carbonique s'était
opposé à la fixalion d’alexine. S'il en est ainsi, nous devons
retrouver celle-ci dans le liquide surnageant, que nous avons
retiré du tube d après la centrifugation. Chose curieuse, ce
liquide se montre incapable d'hémolyser des globules rouges
sensibilisés.

Nous savons pourtant que ce liquide est capable de détruire,
sinon des globules sensibilisés, en tous cas les globules que le
tube d contenait, car si l’on n’avait pas eu recours à la centri-
fugation, si l'on s'était borné à ouvrir le tube d'et à agiter pour
permettre le remplacement de l'acide carbonique par de l'air,
le mélange aurait manifesté l'hémolyse. Il est donc certain que

66

f

74 b

1034 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

les globules du tube 4 ont fixé autre chose que la sensibilisa-
trice. S'ils n'ont pas absorbé l’alexine totale, au moins ont-ils
dû s'emparer de l’un de ses constituants.

On démontre aisément qu'il en est bien ainsi.

En réalité, les globules mélangés, à l'abri de l'air et en pré-
sence d'acide carbonique, au sérum hémolytique, absorbent
non seulement la sensibilisatrice, mais aussi le « mittelstück »,
c'est-à-dire le fragment central de l’alexine. Quant au fragment
terminal (endstück), il se maintient à l'état libre dans le
liquide.

Il est facile, grâce aux recherches inaugurées par Ferrata et
Brand, d'obtenir à l’état isolé les deux constituants de l’alexine.
On peut avoir recours à la technique de Liefmann, qui consiste
à allonger ce sérum normal frais de neuf volumes d’eau distillée
et à y faire barboter du gaz carbonique. Le précipité de globu-
lines centrifugé et lavé contient le « mittelstück » que l’on
redissout dans de la solution physiologique ; le liquide surna-
geant renferme l’endstück.

Or, on constate que pour provoquer l'hémolyse des globules
provenant du tube W, il suffit de les additionner d’enstück, ce
qui démontre qu'ils avaient déjà fixé du mittelstück. D'autre
part, le liquide surnageant décanté de ce mème tube 4 après la
centrifugation, et qui, nous l'avons vu, se montre incapable de
détruire des globules sensibilisés, récupère son énergie hémo-
lytique, vis-à-vis de semblables globules, si on l’additionne de
mittelstück; l'addition d’endstück est inopérante.

En résumé, les globules sensibilisés qui baignent à l'abri de
l'air dans un liquide saturé d’acide carbonique, s'emparent du
mittelstück, mais l'absorption de l’endstück est inhibée.

Nous retrouvons les mêmes phénomènes à propos de la bacté-
riolyse.

On opère sur le vibrion cholérique. On introduit dans
l’une des boules de l'appareil un mélange de 2,7 cent. cubes d’é-
mulsion de vibrions et de 0,3 cent. cube de sérum anticholérique
(préalablement chauffé à 56 degrés), et dans la seconde boule,
un mélange de 1,4 cent. cube d’alexine avec 0,6 cent. cube de
solution physiologique. Après extraction de l’air et introduction
de CO”, les deux mélanges sont réunis dans le tube 4. La bac-

ACTION INHIBITRICE DE L’ACIDE CARBONIQUE 1035

tériolyse ne s'y produit pas, même au bout d'une heure à
37 degrés, tandis qu'elle s'opère aisément dans un mélange
identique exposé à l'air.

BIBLIOGRAPHIE

Branp, Berl. klin. Wochen., n° 34, 1907.

FERRATA, ibid, no 13.

LIEFMANN, Münch. klin. Wochen., n° 41, 1909.
-GENGOU, Zeitsch. f. Immünilats forsch., 1911, IX, XI.

ERRATA

Mémoire de M. Gabriel BErrrans : « Les infiniment petits chimiques
en agriculture ».

Page 853, ligne 19 : au lieu de : « et que l’homme el Les animaux... », lire :
« ou que l’homme et les animaux ».

Page 861, lignes 18 à 21 : au lieu de : « 1! faut qu'ils entrent dans les cycles
de transformations mis en jeu par la cullure pour l'organisation des éléments
plastiques et en sorlent allernativement. », lire : « Il faut qu'ils entrent pour en
ressortir bientôt el se trouver, de la sorte, encore préls à servir, dans les cycles
de transformations utilisés par la cellule, pour organiser les éléments plastiques. »

TABLE DES MATIÈRES

Etudes sur le pneumocoque. — Il. Conservation de la
virulence des pneumocoques humains pour la souris,
par Ch. Trucus et L. Coroni. ne Le

Extraction de la zymase par TES Aa par
Alexandre LEeBeperr. DRASS

Aclion de la lumière sur les EE par H. Me

Germination 2n vivo des spores d'Aspergillus niger et d'A.
fumigatus, par B. Saurow. :

La ‘destruction intrasplénique et M none ik COT-
puscules rouges du sang, dans les conditions nor-
males et pathologiques (avec les planches E et IP,
par J.-J. Linrvarev. ; ne |

Les facteurs de toxicité des He (2° mémoire), par
M. Nicozce, G. Loiseau et P. Forceor. MARINE 2

Nouveau procédé de diagnoslie des infections à bacilles
de Preisz-Nocard, par P. Forceor et E. César.

Expériences sur la vie sans microbes, par Michel Conenoy.

La destruction intrasplénique et intrahépatique de cor-
puscules rouges du sang dans les conditions nor-
males et pathologiques nr et fin), par J.-J. Linr-
VAREV. . 6 :

Influence de la tee EE sur Mactivité 1 l'enalie
par Gabriel Berrranp et Arthur Comprox.

L'importance de la phagocytose dans l’immunité 6 la
souris à l’égard de quelques flagellés (avec la plan-
che IV), par P. DELANOE.

Les agglutinines et les substances Donne .
sérums dysentériques, par T. GRYGLEwicz. :

Ja phase négative de Wright dans la vaccination te
phique des jeunes lapins, par Frederico pe GAsPERI.

Action du manganèse sur l'Aspergillus niger, par Gabriel
BerrranD et M. JAVILLIER.

33

102
106

138

161

231

241

TABLE DES MATIÈRES

Recherches expérimentales sur le typhus exanthématique,
entreprises à l’Institut Pasteur de Tunis pendant
l'année 1911, par Ch. Nicozee, E. Conseiz et A. Conor.

Le mal de Lure, pyohémie secondaire à l’agalaxie conta-
gieuse de la brebis et de la chèvre (avec la planche
IN) parH CARRE. 2e" à

Des infections secondaires dons la berculese Col
du poumon, par A. Veizcon et G. Repaci.

Etudes sur le pneumocoque. — IV. nu du
pneumocoques humains et animaux, par L. Corot
et Ch. TRUCHE. ne

A propos de la EP MR de 1e tort ue par
la substance cérébrale, par A. Marie et À. TIFFENEAU.

Recherches sur l'hydrolyse comparée du saccharose par
divers acides en présence de la sucrase de levure,
par Gabriel BEerrranD et M. et M*° RosENBLATT. . .

Recherches expérimentales sur le typhus exanthématique,
entreprises à l'Institut Pasteur de Tunis pendant
l'année 1911 (3° mémoire) (suite et fin), par Ce
Nicozze et E. Coxsrir. à HO

Recherches sur la trichinose _. i planche Y), par
M. Rouaxovircu. BAR

Recherches sur les poisons ue par l iipersithe
fumigatus, par E. Boni et C. LenoRmAxD.

De la vésicule biliaire envisagée comme lieu d’ ee
tion. — Contribution à l étude de l’immunité et à la
physiologie générale, par Henri Viorre. DR

Contribution à l'étude de l'influence de l’indol sur les
scléroses (avec Les planches VI à XD, par S. Drar-

CHIXSKI. SE AE à Lo us) 5 D
Technique TA LS (de la réaction de fixation, par
M WFIMBERGS AMEN LE LA EU USE

Propriétés biologiques de substances albuminoïdes
extraites du cerveau, par À. Marie. JT ANA

Etudes sur les engrais catalytiques, par E. en

De la vésicule Dliaite envisigée commé lieu d’inocuüla-
tion. — Contribution à l'étude de l’immunité et à la
physiologie générale (suite ef fin) (avec les planches

XII et XI, par Henri VIioLLe.

1037

250

281

300

311

318

321

381

1038 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Enquête sur l’épidémiologie de la tuberculose dans les
colonies françaises, par A. CALMETTE. :

Action combinée du manganèse et du zine sur le der e-
loppementet la composition minérale de l’Aspergillus
niger, par Gabriel Berrranp et M. Javicier.

Action comparée des microbes de la putréfaction sur 1&
principales albumines, par H. Tissrer. ON

Etudes sur le pneumocoque. — V. Virulence des pneu-
mocoques humains et animaux pour le lapin et le
cobaye, par Ch. Trucue et L. Corot.

Contribution à la connaissance des microbes Siné de js

bouche. — Culture, isolement et étude de D
Lypes, par G. REpacr. WEP
Recherches sur la sucrase de l° de niger. — nn

tribution à l'étude de l'influence de l’aliment carboné
sur la sécrétion des diastases, par G. GREZES.
Statistique des vaccinations antirabiques à l’Institut
Pasteur de Samara, pendant les années 1886-1940,
par M: Acrker Re
Contribution à l'étude eo Be 1 e en
lesse (avec les planches XIV à X VI), par A.-T. Sazi-
BENI et Louis GÉéRy. . . .
Recherches sur les microbes te rues "e l' He
par Eugène WozLmax. Dies à ANA AAA
Etudes sur le bacille de el ES PEN AE par
E. Césari et V. ALLEAUXx.
Modification à l'appareil vide- D Du pour ie C
anaérobies en milieux liquides, par René Leroux.
Mortalité par la variole en Te de 1776 à 1875, par
Alfred Pertersson.
Les vaccinations Ne à D nactitnt Pan en AY,
par Jules ViaLa. AT
La coagulation du sang et jee genèse “É la Mr par
L. Bonoer et Det à 2 SR TE
Recherches sur la lèpre (1° mémoire), par E. Marcaoux
et F5 SoRnD. 2. US : ,
Recherches sur la [y HO E oo en es
(avec la planche XVII), par J. Brinré, L. Nècre cet
TROUETTE.

530

14

TABLE DES MATIÈRES

Sur l'existence de la rage canine dans le Haut-Sénégal et
Niger, par G. Bourraro. AREAS ES VS

Redhendies sur les propriétés du virus nn conservé à
l'état sec, par D.-L. Harris. . . . x

La coagulation du sang et la genèse de la D cine par
J- Date et EL DELANGE. LE ONE

Sur l'extraordinaire sensibilité de l° RP niger Vis-
à-vis du manganèse, par G. BERTRAND.

Sur le rôle capital du manganèse dans la A Ge ie
conidies de D niger, par G. BERTRAND.

La lèpre des rats (2° mémoire), par E. Marcnoux et F. Sorez.

Etudes sur le bacille de Schmorl (2° mémoire), par
E. César.

Les variations de Hier? après le te bone
dans la séro-anaphylaxie active et passive, par P.-F.
ARMAND-DELILLE.

Sur quelques essais de te ni nel ns
la planche XVII), par El. Mercanixorr et Eusg.
WOoLLMAN. Un le PRRUE .

Sur le rôle des infiniment petits chimiques en agricul-
ture, par G. BERTRAND.

La bless des bacilles Hooubre el Le cr oulies
dites atténuées, par Et. Burner. . . . . . . A

Trypanosomide d'un réduvide (Conorhinus ne
ciatus) inoculable au rat et à la souris (avec les
planches XIX et XX), par A. Laronr.

Recherches sur le ferment mannitique, PE Duc

Recherches sur l'hydrolyse comparée du saccharose par
divers acides en présence de la sucrase d’Aspergillus
niger, par G. BerrranD et M. et M" RosENBLATT.

L'agalaxie de la brebis et de la chèvre (avec les Es S
XXI à XXIII), par H. Carré.

Etude des corpuscules de Negri et des none spé-
ciales à la rage à virus fixe (avec les planches XXIV
et XXV), par Y. ManouÉLIan.

Contribution à l'étude du potassium et de HR Le
lesanimaux, par P.-J. Gén En

Recherches sur le manganèse normal 4 sang, par
Gabriel Benrrano et F. MeniGRECEANt .

1039

986

1013.

104

ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Seconde note sur la conservation des « toxines solubles »,
par M. Nicorze et Ch. TRüCHE .

Action inhibitrice de l'acide carbonique sur T fenshee et

Table des matières

Pz.
Pre

la bactériolyse, par le D' SawrscHExro

I et IE.
III.
IV.

SOUVENT
ANT AE UE
NEC NUL:
XIV a XV
ONE
VILLES
pet AXE, €
XXE AN XXIIL-"E
XX IVREL XV:

TABLE DES PLANCHES

Mémoire de M. LINTVAREV.

M. DELANOE.
M. CARRÉ.
M. RomAnowITcH.

M. DRATCHINSKI.

M. VIiOLLE. :
M. SALIMBENI ET Gras)

M. A. Laronr.
M. H. Carré.
M. Y. MANOUELIAN.

MM. Baipré, NÈGRE ET PR
MM. Mercaniorr et WoLLman.

1030

1032
1055

TABLE DES MATIÈRES

TABLE ALPHABÉTIQUE PAR NOMS D'AUTEURS

AckEr (M.)

AGULHON (H.). .
Aeseaux (V:).. .
ARMAND-DELILLE (P.-K.).

BERTRAND (Gabriel).

— et Coupron (Arthur).

=— et JAVILLIER (M.). .

— et MEDIGRECEANU (F.).

— et M. et Mare Rosen-
BLATT

Bonin(E.)et LeNoRManxD(C.).
Bonpef (J.) et DELANGE (L.).
BourFFARD ((G.).

BOULLANGER (E.).

Stalistique des vaccinations antirabiques
à l’Institut Pasteur de Samara (1886 à
1910).

Action de la lumière sur IE Fra

Voir CESARIA (ES) RE

Les variations de l’alexine Has le asc
anaphylactique dans la séro-anaphy-
laxie active et passive. F

Sur l'extraordinaire sensibilité # VAs-
pergillus niger vis-à-vis du manganèse.

Sur le rôle capital du manganèse dans la
production des conidies de l’Asper-
gillus niger. :

Sur le rôle des one Er chi-
miques en agriculture.

Influence de la température sur l° te
de l’émulsine,

Action du manganèse sur is développe
ment de l’Aspergillus niger.

Action combinée du manganèse et 4
zinc sur le développement et la com-
position minérale de l’Aspergillus niger.

Recherches sur le manganèse normal du
sang .

Recherches sur l’hydrolyse comparée du
saccharose par divers acides en pré-
sence de la sucrase de levure.

Recherches sur l'hydrolyse comparée a
saccharose par divers acides en pré-
sence de la sucrase d’Aspergillus niger.

Recherches sur les poisons Are par
l’Aspergillus fumigatus. . .

La coagulation du sang et la genèse de la
thrombine. . . . . MeV,

Sur l’exist-nce de la tige canine dans le
Haut-Sénégal et Niger. . .

Etudes sur les engrais res

1041

515

1043

727
456

1042 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Brinré (J.), NÈGRE (L.) et

TrouUETIE (G.).
Burner.(Et.).
CALMETTE (A.).

CARRÉ (H.).

César! (E.).

— et ALLEAUX (V.).

Conenpy (Michel). .
Comeron (Arthur). .

Cowon (A.). .
ConsEIL (E.;.
Corot (L.) .

— et TRUGHE (C ï ie

DELANGE (L.).
DELANOË (P.).

DrATCHINSRI (S.).

Dugourc {E.).
ForGEoT (P.). .

— et CÉsari (E.).

GAspErI (Frederico

GÉRaRD (P.-J.)

GErY (Louis). .
GREzES (G.).

de). .

Recherches sur la lymphangite épizoo-
tique en Algérie (avec la planche X VIT).
La virulence des bacilles tuberculeux et
les tuberculoses dites atténuées. ;
Enquête sur l’épidémiologie de la tuber-
culose dans les colonies françaises. .
Le mal de Lure, pyoémie secondaire à
l’agalaxie contagieuse de la brebis et
de la chèvre (avec la planche IV).
L'agalaxie de la brebis et de la chèvre
(avec les planches XXI à XXIII).
Voir ForGeor (P.). Ë RARE
Etudes sur le bacille de Schmorl Gen mé-

moire). à
Etudes sur le Daoiile de Schinart (er mé-
tire), LES De

Expériences sur la vie sans re ea
Voir BerTrAND (Gabriel).
Voir Nrcozze (Charles).
Vonteurce. (Charles)... ..: 950;
Voir TRUCHE (Ch.) .
Voir TrucHE (Ch.). TAMTR
Etudes sur le pneumocoque. — IV.
Agglutination des pneumocoques hu-
mains et animaux. . . NN Je
Voir DORE AE 2". |. : . 1607,
L'importance de la phagocytose dans
l’immunité de la souris à l'égard de
quelques flagellés (avec la planche IIT).
Contribution à l'étude de l'influence de
l’indol sur les scléroses {avec les plan-
ches VI à XI). :
Recherches sur le au nn no
Voir NicoLee (M.) . à
Nouveau procédé de diagnostic 4 Fe
tions à}bacilles de Preiz-Nocard. .
La phase négative de Wright dans la
vaccination Vs des jeunes
lapins. : VII Rd Re
Contribution à l'étude du potassium et
du sodium chez les animaux. . : . .
Voir SALIMBENI (A.-T.). à
Recherches sur la sucrase de l’ An
niger. — Contribution à l'étude de
l'influence de l'aliment carboné sur la
sécrétion des diastases. .

701

868

GRYGLEWICZ (T.).
Harris (D.-L.).
JAVILLIER (M.).

re pe

Legkperr (Alexandre). .
Lecroux (René).

LENoRMAND (C.).
LiINTVAREV (J.-J.)

Loiseau (G.).
MaNOUÉLIAN (Y.).

MarcHoux (E.)etSorEL(F.).

MARIE (A.).

Marie (A.)etTiFFENEAU(M.).

MEDIGRECEANU (F.) . £

Mercanikorr (E.) et No
MAN (Eug.). .

NÈGRE (L.).

NicoLLE (Ch.), CONSEIL (E.)
et Conor (A.).

NicozLe (M.), Loiseau (G.)
et ForGeor (P.).

Nicoze (M) et Trucr (Ch).

TABLE DES MATIÈRES 1043
Les agglutinines et les substances sensi-

bilisatrices des sérums dysentériques. 204%
Recherches sur les propriétés du virus

rabique conservé à l’état sec. 132
Voir BERTRAND (Gabriel) . 241
Voir BERTRAND (Gabriel) . A 515
Trypanosomide d’un réduvide (Conorhinus

rubrofasciatus) inoculable au rat et à la

souris (avec les planches XIX et XX). 892
Extraction de la zymase par simple macé-

ration. 8
Modification à l” Moro ee = hydrebne

pour les cultures anaérobies en milieux

liquides. 635
Voir Bonin (E.). 371
La destruction intrasplénique et née

hépatique de corpuscules rouges du

sang dans les conditions normales et

ue (avec les planches I!

EN LU Bu fs EE Er Rp RE ES
Voir Nicozze (M.) . . ; 83
Etudes des corpuscules de Ne et 4e

formations spéciales à la rage à virus

fixe (avec les planches XXIV et XXV). 973
Recherches sur la lèpre (12° mémoire). 675
La lèpre des rats (2° mémoire), 778
Propriétés biologiques de tes

albuminoïdes extraites du cerveau , 441
A propos de la neutralisation de la toxine

tétanique par la substance cérébrale. 318
Voir BERTRAND (G.). 1013
Sur quelques essais de désintoxication

intestinale (avec la planche XVIII). 825
Voir Bripré (J.). 701
Recherches expérimentales sur le typhus

exanthématique entreprises à l’Institut

Pasteur de Tunis pendant l’année

LR TAN et A MEL On PAU AE DE
Les facteurs de toxicité des bactéries

(2° mémoire). en RS
Seconde note sur la conservation des

« toxines solubles » . . 1030

PeTTerssoN (Alfred). ,

Mortalité par la variole, en ne “de
1776 à 1875.

104% ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR

Repact (G.).

Romanovircx (M.).

RosENBLATT (M. et Mme).

SALIMBENI (A.-T.) et GÉRY

(Louis).

SAUTON (B.).
SA WTSCHENKO
SOREL (F.).
TirFeNEAU (M.).
Tissier (H.).
TROUETTE (e)

TrucHE (Ch.). .

— et Coront (L.). .

VEILLON (A.) et REpactI (G.).
ViaLa (Jules). .

Viozce (Henri). .

WEINBERG (M.).

WoLLuan (Eugène). . .

Voir VEILLON (a:) 1 d
Contribution à la connaissance re mi-

crobes spiralés de la bouche. — Cul-
ture, isolement et étude de CAEN
types.

Recherches sur “à He .. la
planche V\. Ne 258 EU RE
Voir BERTRAND (Gabriel). . . . .’. 321,

Contribution à l'étude anatomo-patholo-
gique de la vieillesse (avec les plan-
ches XIV à XVI). :

Germination in vivo des Jones doc
qillus niger et d'A. fumigatus.

Action inhibitrice de l'acide carbonique
sur l'hémolyse et la bactériolyse .

MéireMarcaoux (EE) ER MNT

Voir MARIE (A.). ae

Action comparée des Fes ét É ie
.tréfaction sur les principalesalbumines.

Voir BRIDRÉ (J.).

Voir Co1ont (L.).

Voir NicozLe (M). :

Etudes sur le pneumocoque. — Il. Rose
servation de la virulence des pneumo-
coques humains pour la souris. . . .

Etudes sur le pneumocoque. — V. Viru-
lence des pneumocoques humains et
animaux pour le lapin et le cobaye. .

Désinfections secondaires dans la tuber-
culose ulcéreuse du poumon.

Les vaccinations antirabiques à l'Institut
Pasteur en 1911.

De la vésicule biliaire envisagée c comme

lieu d’inoculation. — Contribution à
l'étude de l’immunité et à la physio-
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ANNALES
DE L'INSTITUT PASTEUR

FONDÉES SOUS LE PATRONAGE DE M. PASTEUR

PAR

E. DUCLAUX

COMITÉ DE RÉDACTION

D: CALMETTE, directeur de l’Institut Pasteur de Lille ;

D: CHANTEMESSE, professeur à la Faculté de Médecine;
D: LAVERAN, membre de l'Institut de France ;

D: L. MARTIN, directeur du service de Sérothérapie ;

Pr METCHNIKOFF, sous-directeur de l'Institut Pasteur ;
D' ROUX, directeur de l’Institut Pasteur ; ;
D: VAILLARD, membre de l'Académie de médecine.

TOME VINGT-SIXIÈME
1912

AVEC VINGT-CINQ PLANCHES

PARIS

MASSON ET C' ÉDITEURS
LIBRAIRES DE L'ACADÉMIE DE MÉDECINE
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de bactériologie, méderine, biologie générale, physiologie, chimie biologique à
dans leurs rapports avec la microbiologie. Comité de rédaction : Gab.BERTRAND,
À. BesrEDKA, A. BoRREL, C. DELEZENNE, A. MARIE, F. Mesniz, de l’Institut Pasteur :
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de l’Académie des sciences et de l'Académie de médecine, et G.-H. RoGER, |
professeur de pathologie expérimentale à la Faculté de médecine, membre
de l’Académie de médecine, médecin de l'Hôtel-Dieu. 4 volumes gr. in-8, avec
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