Mf ' Neue Methoden

der

Bakterienfoynchung

Dr. N. J. C. Müller

Professor der Botanik an der Königl. Forstakademie, in Münden.

Separat-Ausgabe. aus den „Beiträgen zur Wissensehaftlichen Botanik". Bd.

I. Hälfte.

Mit 20 litliograph. Tafeln.

1

STUTTGART.

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Neue Methoden

der

akterienforschun

von

Dr. N. J. C. Müller

Professor der Botanik an der Königl. Forstakademie in Münden.

arat-Ausgabe aus den „Beiträgen zur Wissenschaftlichen Botanik". Bd.

Mit 40 lithograph. Tafeln.

STUTTGART.

Verlag von Erwin Nägele.
1898.

Inhaltsverzeichnis.

Seite

I. Gesichtspunkt 1

II. Gregebene Methoden 2

A. Koch-Nährgelatine auf dem Objektträger 3

B. Gewöhnliche Gelatine 4

C. Gelatine-Additionsplättchen 4

D. Polarisationserscheinungen 7

III. Methode der Fraktionirung durch die Wärme 12

IV. Methode der Fraktionirung durch Alkoholzusatz 20

V. Methode der Nährgelatine-Objektträgerkultur. Fraktioniren mit Hülfe

der Glasnadel 2.5

A. Leichenpartikel und Gesteinstrümmer 25

a) Feste Partikel direkt geimpft 25

b) Verwesende Teile einer Runkelrübe 27

c) Partikel, dem- Rhein bei Mannheim entnommen 28

1) Fontinalis-Rasen 28

2) Sandsteinpartikel 29

,3) Verwesendes Weidenblättchen 29

4) Holzsplitter '29

d) Partikel aus einem faulen Apfel 30

e) Strolihalmpartikel aus Ackerdung 30

VI. Wasseruntersuchung. Wasser der Quellen, Bäche, Flüsse u. s. f. . . . 30

A. Erste Methode. .Stichimpfung 30

B. Fraktioniren auf dem Objektträger. Direkte Impfung 32

1) Pumpe Vogelsang, Münden 32

C. Stichimpfung im Koch-Gelatinecylinder und Übertragen der Kultur

auf den Objektträger 34

2) Rhein unterhalb Mainz 34

3) Rhein oberhalb Mannheim 34

4) Fulda bei Münden . 3fi

5) Bächlein (Vogelsang, Münden) 37

6) Pumpe (Vogelsang, Münden) 37

7) Feuerteich (Münden) 38

8) Salzbach (Wiesbaden) 39

9) Neckar (Heidelberg) 42

Inhaltsverzeichnis.

Seite

10) Fulda-Eis 43

11) Heidelberger Wasserleitung 44

12) Pumpe, Mannheim 44

D. Methode der Untersuchung von Bakterienhäuten auf Wasserbehältern 45

1) Die vier Differenzversuche 46

2) Cladothrix dichotoma (Neckar) 48

VII. Beispiel der Reinzüchtung durch Abwechselung der Nährsubstrate . . 50

VIII. Parallelversuch über das Fortschreiten einer Bazillenkultur 51

IX. Verdrängung des Bacillus monachae durch Bacterium monachae ... 52

X. Kulturbelag und Zooglöa 53

XI. Die von Sachs'schen Emulsionsfiguren und Theorie des Vorganges auf

der Koch-Gelatine 57

XII. Der Kulturbelag der Rein- und Mischkulturen 61

XIII. Diagnose des Kulturbelages oder der Zooglöa 62

A. Die Reinkulturen; a Micrococcus, b Bacillus, c Bacillus (Vibrio),

d Bacterium 62

B. Die Mischungen: Die Kombinationen ab, a c, a d, b c, b d, c d . . . 65
XIV. Durchführung einer Flusswasserbakterienanalyse 70

XV. Theoretische Betrachtungen 87

A. Vorgänge im Gelatinecylinder 88

B. Vorgänge im Gelatinetropfen 91

I. Mechanische Kategorie 92

II. Mechanische Kategorie .... • 93

C. Die Grundformen der Zooglöen 105

D. Die Apposition der Zooglöen 108

XVI. Schlussbetrachtung 108

XVII. Figurenerklärung der Tafeln 125

Beiträge zur Kenntnis der Baicterien.

I. Bakterien der Gewässer und Theorie der Kulturbelage.

Von

N. J. C. MüSler.

Bakterienuntersuchungen.
I. Gesichtspunkt.

Zu den nachfolgend geschilderten Untersuchungen wurde ich
veranlasst durch eine Reihe von Bakterienkulturen, deren Ursub-
stanzen Partikel aus Insektenleichen waren, so namentlich die Leiche
der Nonne, Liparis monacha, Kiefernspinner u. s. f. Die dort ge-
wonnenen Resultate und Methoden^) suchte ich anzuwenden zur
genaueren Untersuchung der Bakterien in Leichenpartikeln über-
haupt, der Bakterien in den Wässern im besonderen. Das Kultur-
verfahren beginnt in der Mehrzahl der Fälle mit einer Stichkultur
in Nährgelatine und endet mit der Herstellung der mikroskopischen
Tinktionspräparate und deren Interpretation. Dazwischen liegen
Plattenkulturen auf dem Objektträger mit gewöhnlichen Gelatine-
plättchen oder in Tropfen von Koch-Nährgelatine, sowie Fraktio-

^) Gesamtüberblick aller Methoden: A. Die Ursubstanz ist fest; sie wird
mit sterilisiertem Wasser im hohlgeschlift'enen Objektträger angerieben und längere
oder kürzere Zeit mazerirt (1 — 5 Stunden). Die Flüssigkeit wird mit der Platin-
nadel in die Gelatine des Nährcylinders geimpft. Solche Sticlikulturen werden in
einem Thermostatentreibhaus bei geeigneter konstanter Temperatur aufgestellt. —
B. Haben die festen Ursubstanzen eine scharf umschriebene Gestalt, so werden sie
in die Gelatine in Form von Splittern eingeschoben : dies ist namentlich bei der
Objektträgerkultur von Vorteil. — C. Wasser der Quellen, Bäche, Wasserleitungen,
Flüsse u. s. f. können direkt in die Gelatine des Koch-Cylinders geimpft werden,
oder sie werden fraktioniert mit Alkohol, so dass erst die Alkoholwassergemische
zur Impfung gelangen. — D. Bakterienhaltiges Wasser kann anch direkt in Tropfen
von Nährgelatine auf dem Objektträger geimpft werden. ^ ■

Müller, Baktei'ien-Forscliung. 1

2

N. J. C. Müller,

nirungen mit Hilfe der Glasnadel und Präparirlupe, und Fraktio-
nirungen durch Alkoholzusatz und durch Abklatsch der Objekt-
trägerkulturen auf neue Deckgläser.')

II. Gegebene Methoden.^)

Die Kochsche Nährgelatine bildet in allen nachfolgenden Unter-
suchungen die erste Unterlage. Nachdem die Stichkultur der Ur-
substanz in dem Koch-Gelatinecylinder (K C) angegangen ist, werden
die mikroskopischen Tinktionspräparate hergestellt; sodann wird die

') Der Klatscliapparat besteht aus einem Schlitten von Messing, auf wel-
chem zwei Glaswiirfel verschiebbar sind. Einer dieser trägt das Kulturdeckglas,
der andere das Deckglas, welches den Abklatsch aufnehmen soll; die Deckgläser
sind mit AVasser oder, bei pastosen Kulturen, mit Zellenkitt oder Canadabalsam
lose angekittet. Die letzte Annäherung der Würfel geschieht mit Hilfe einer
Mikrometerschraube. (Der Apparat ist nach meiner Angabe von Herrn Univer-
sitätsmechaniker Apel in Göttingen ausgeführt.) Wer eine ganz ruhige Hand hat,
stellt die Abklatsche aus freier Hand her.

') Litteratur:

Dr. von Tuben f, Die Krankheiten der Nonne, Forstlich-naturwissensch.
Zeitschrift, München 1892, Heft I.

Dr. Hof mann. Insektentötende Pilze u. s. f., Frankfurt a. M., 1891.
Zopf, Die Spaltpilze, Breslau 1885.

Dr. F. Hüppe, Die Methoden der Bakterienforschung, Wiesbaden 1891.
W. Migula, Die Bakterien, Leipzig 1891.

Baumgarten, Lehrbuch der patholog. Mykologie, Braunschweig 1890.

Hüppe, Die Formen der Bakterien, Wiesbaden 1886.

De Bary, Vorlesungen über Bakterien, 2. Aufl. Leipzig 1887.

H. Hoffmann, Über Bakterien, Botan. Zeitung, 1869.

F. Cohn, Zur Bakterienfrage, Botan. Zeitung, 1871.

F. Cohn, Untersuch, über Bakterien, in Cohn, Beiträge, Breslau, 1895.

Schroeter, Pigmentbakterien, in Cohn, Beiträge, Heft II, S. 109.

Eidam in Cohn, Beiträge, Heft III, S. 208, Breslau 1875.

Koch, Unters, über die Ätiologie der Milzbrandkrankheit, in Cohn, Bei-
träge, Bd. II, Heft II.

J. Klein, Botan. Bakterienstudien I, Sep.-Abdr. aus dem Centraiblatt für
Bakteriologie und Parasitenkunde, Bd. VI.

De Bary, Vergleichende Morphol. u. Biol. der Pilze u. s. w., Leipzig, 1884.

L. Klein, Botan. Bakterienstudien, Sep.-Abdr. d. Ber. d. D. Bot. Ges., 1889.

Ders. , Über einen neuen Typus der Sporenbildung bei den endosporen
Bakterien. Ber. d. D. Bot. Ges., 1889. Bd. VII.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

3

Festlegung des jeweiligen Zustandes der Kultur dadurch gesichert,
dass, von Tag zu Tag den auffälligen, sichtbaren Veränderungen
folgend, Glasnadeln in die Gelatine eingetaucht und getrocknet wer-
<ien. Kommt es darauf an , die mikroskopische Befundaufnahme
von sechs zu sechs Stunden festzulegen, so werden von vornherein
mehrere Glasnadeln, mit der Ursubstanz befeuchtet, in dem Gelatine-
cylinder versenkt, nach und nach in den gebotenen Zeitintervallen
herausgeholt und untersucht. Je verdünnter die Kultur auf das Deck-
glas übertragen wird, um so deutlicher werden die mikroskopischen
Bilder. Das nach dem langsamen Eintrocknen auf dem Objektträger
entstandene sehr dünne Häutchen wird zur Hälfte mit der verdünn-
ten Pigmentlüsung bei 20 — 25^0. im Exsikkator eingetrocknet, so-
dann wird es mit einer kleinen Menge Glycerin eingeschlossen.

A. Koch-Gelatine auf dem Objektträger.

Zahlreiche Objektträger mit Glasschutzleisten liegen im sterili-
sirten Zustand bereit. Auf diese werden 15 — 18 mm-Deckgläser
mit einem kleinen Tröpfchen Zellenkitt angeheftet. Von der bei
30 — 35" verflüssigten Gelatine werden kleinere oder grössere Tro-
pfen in die Mitte des Deckglases übertragen. Mit dünnen oder
dickeren Glasstäben oder Glasnadeln wird die Flüssigkeit der Ur-
substanz in den Gelatinetropfen geimpft. Solche Objektträgerkul-
turen werden in Zinkblechbehältern eingesetzt und in das Thermo-
statentreibhaus gebracht. Die Feuchtkammern werden aus Zinkblech-
streifen von der Breite der Objektträger zu parallelopipedischen
Kästchen zurechtgebogen. Zwei Seiten am Behälter bleiben offen,
eine Seite wird mit dem Deckel aus demselben Material geschlossen.
Das Parallelopiped hat an einer Kante drei Durchbohrungen, dort
ist ein Flanellstreifen mit Messingdraht angeheftet. Nachdem der
Flanell mit Alkohol sterilisirt, der Behälter im Wasserbad getrocknet
ist, wird der Flanell zuletzt vor dem Gebrauch der Kammer mit
sterilisirtem Wasser befeuchtet.

Tiscliutkin, Die Rolle der Bakterien bei Veränderung der Eiweissstoffe
auf den Blättern von Pinguicula, Ber. d. D. Bot. Ges., Bd. VII.

E. Chr. Hansen, Botan. Unters, über Essigsäurebakterien, Ber. d. Bot.
Ges , Bd. XI, S. 69.

Chr. Bay, Eine neue Infektionsnadel für mykol. Studien, Ber. d. D. Bot.
Ges. Bd. XII, S. 1.

4

N. J. C. Müller,

B. Gewöhnliche Gelatine.

Aus der käuflichen, farblosen Gelatine werden mit dem Loch-
eisen kreisrunde Plättchen geschlagen und in absolutem Alkohol
aufbewahrt. Vor dem Gebrauch werden sie in einem Gemisch von
Alkohol 1, Wasser 2 — 3 befeuchtet, im Wasserbad bei 25° ge-
trocknet, mit sterilisirtem Wasser gesättigt und auf dem Objekt-
träger befestigt. In diese Plättchen wird die Ursubstanz mit Glas-
nadeln eingeimpft. Die Platte wird in der Feuchtkammer in den
Thermostaten gebracht.

C, Gelatine-Additionsplättchen.

Die käufliche Gelatine ist optisch nicht neutral, sie ist aniso-
trop und zeigt in den dünneren Plättchen im Polariskop die Inter-
ferenzen der ersten und zweiten Newtonschen Ordnung. Mit Leicli-
tigkeit lassen sich reine Plättchen auswählen, welche in der Addi-
tion Blau II, in Subtraktionslage Gelb I zu Gypsrot I zeigen. Die
Bestimmung der Elastizitätsaxen in solchen Plättchen würde indes
immer noch mit diesen und jenen Langwierigkeiten verbunden sein,
welche vollkommen gehoben sind, wenn man viele hundert 3 — 4 mm
breite, 2 — 3 cm lange Streifen mit der Schere zurechtschneidet, diese
mit Wasser sättigt und parallel ihrer Längsaxe zerrt, sodann auf
Glasleistenobjektträgern trocknet. Unter 100 solcher Plättchen findet
man 60 — 80, welche bei der Abmusterung im Polariskop sich als
Additionsplättchen Blau II, Gelb I zu Gypsrot I erweisen. Diese
werden als Kulturunterlage so behandelt, wie unter B angegeben ist.
In solchen Plättchen liegt die Axe der grössten Elastizität parallel
der Längskante, die Axe der grössten Dichte parallel der Breiten-
kante. Der Energie einer Bakterie, oder allgemein eines Mikro-
phyten, welcher in dieses Substrat geimpft und von dem gegebenen
Angriffspunkt, Keimpunkt, aus in einer Sphäre (Kreis) dann zum
Ausdruck kommen müsste, wenn das Substrat nach allen Richtungen
um den Punkt homogen wäre, stehen also im Additionsplättchen
zwei zu einander senkrechte Richtungen grössten und kleinsten
Widerstandes gegenüber.

Bei sehr starken Vergrösserungen finden sich in den trockenen
und halbtrockenen pastosen Plättchen sehr zierUche Sphärengebilde,
als einzige mit Immersionssystemen wahrnehmbare Trübungen der

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien

5

Gelatinegrundmasse. Das erste Interesse ist der Umstand, dass diese
Gebilde, welche sich nach ihrer Doppelbrechung als feinste Kristall-
ausblühungen in der Gelatine erwiesen, einmal in der Mitte des
Gelatinestreifens in sphärischer Form des Kristallkomplexes vor-
kommen, so in der Fig. 3, Taf. X, wo die KristalUsationszentren
leicht zu erkennen sind. Zum andern kommen sie am Rande des
gezerrten Gelatinestreifens in Streifen und Bändern vor, deren Längs-
axe mit der Zugaxe in dem Gelatineadditionsplättchen zusammen-
fällt (Fig. 5, Taf. X). Auch hier ist in C ein Kristallisationszentrum
leicht kenntlich. Das Gebilde, welches in Fig. 3 nach allen Rich-
tungen der gegebenen Ebene fast gleichmässig ausgebildet, also
kreisförmig, erscheint, ist in Fig. 5 von C aus polarisirt in dem
Sinne, dass nur in der Richtung des kleinsten Widerstandes in der
Gelatine Kristallfieder zur Ausbildung gelangen.

Man vergleiche Fig. 10, Taf. IX ss mit den Figuren 3 und 5.
Zahlreiche tetramere und hexamere, kleinere Sphären liegen in der-
selben Platte, nicht gleichmässig verteilt, sondern in Längsstreifen
(Fig. 10 und 11, Taf. IX), deren Axe mit der Zugaxe im Gelatine-
plättchen fast genau zusammenfällt. Auch diese Streifen sind in
dem gleichen Sinne als polarisirt anzusehen, oder besser gesagt:
„Eine Erscheinung der Polarisation ist das Auftreten kleinster Kri-
stallzentren in Reihen, welche parallel der Axe grösster Elastizität
im Substrat orientirt sind."

Im November 1893 wurden die Kristallausblühungen der
Kochschen Nährgelatine untersucht und ähnliche Gebilde, wie die
vorstehend verzeichneten, genauer beobachtet und der optischen
Analyse unterzogen. Nach dieser letzteren möge hier nun die Inter-
pretation der vorliegenden Figuren folgen:

Die Fig. 3, Taf. 10 entspricht der Ausblühung eines in der
gewöhnlichen, käuflichen Gelatine vorkommenden kristallisabelen
Körpers. Von einem Punkte aus schiessen Kristalllamellen an,
welche zum Teil gefiederte, zum Teil dichotome Lamellensysteme in
einer und derselben Ebene, der Ebene des gezerrten Gelatine-
plättchens, ausbilden. Der Gesamtkomplex Fig. 3 liegt mehr in der
Mitte des Gelatineplättchens, zeigt aber immerhin in den Spross-
richtungen des Pfeiles ß, die Tendenz, in der Richtung der kleineren
Dichte des Gelatineplättchens im Wachstum vorzueilen. Der Komplex
der Fig. 5, Taf. X liegt näher am Rande des Gelatineplättchens und

6

N. J. C. Müller,

zeigt alle Laraellen, die primären, wie auch die Kristallfieder, in der
Zugaxe orientirt. Es sind namentlich die angepresst liegenden.
FiederkristalUamellen in dieser Hinsicht von Interesse (Fig. 12,.
Taf. IX). In solchen Systemen findet man, scheinbar eingekapselt,,
winzige Kristallzentren, wie bei d, bei e Fig. 3 Taf. X — bei a,
b, c u. s. f. Fig. 5, Taf. X, man findet Zentren mit Umhüllung, wie
bei Fig. 4 a und b. Man findet solche in Ketten, welche nahezu
mit ihrer Axe parallel der Zugaxe in der Gelatine orientirt sind,
und endlich solche, welche frei (ohne kapselartige Umhüllung) in
der Gelatine zerstreut liegen (Fig. 4, Taf. X).

Kontroverse über die Entwickelung.

Als richtige Yoraussetzungen sollen gelten : 1) Die ungleiche
Ausbildung um die Zentren, Fig. 3 und 5, ist Folge der nach 2 zu
einander senkrechten Richtungen verschiedenen Dichte der Gelatine
(Additionsplättchen Blau zu Gyps Rot I). 2) In gleicher Weise ist
die Anordnung Fig. 12, Taf. IX hievon abhängig. 3) ^)ie Kristall-
zentren Fig. 3 und 5 sind hervorgegangen aus kleineren Gebilden,
wie sie in Fig. 5, Taf. X 1-9. Fig. 12B, Taf. IX verzeichnet sind.

a) Die Kristallisationszentren, wie
sie bei d und e und vielleicht
auch a c b der Fig. 3 und 5
als Endsprossungen erscheinen
oder an der Seite der Primär-
kristall - Lamellen angetroffen
werden, waren vorhanden, als
das System Fig. 3 und 5 sich
von C aus entwickelte, so dass
sie nur zufällig an die Orte
zu liegen kamen durch An-
schliessung und Umschliessung
von Seiten der heranwachsen-
den Kristalllamellen aus C.

b) Dieselben kleinen Zentren bei
d und e Fig. 3, a b c Fig. 5
sind später entstanden , also
wirkliche Seitensprosse im letz-
teren, Endsprosse im ersteren
Fall.

Nach a sind die Gebilde unterdrückte Energiezentren, welche
nach der Umschliessung mit kleinerer Intensität wachsen. Nach b
sind es die Zentren, welche nach der Entwickelung der Hauptsyteme

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

7

zur Anziehung gelangten, also wirkliche End- oder Seitensprosse. In
beiden Fällen a und b ist die Stelle e Fig. 3, Taf. X als die Initiale
zu dem ganzen System links an der Fig. 3 anzusehen.

D. Polarisations-Erscheinungen.

Sowie jene Kristallausblühungen feinster Art sich polarisirt
erweisen , ebenso verhalten sich die Gestalten der Kulturbelage der
Mikrophyten, welche absichtlich dem Substrat mit der Glasnadel ein-
geimpft wurden, oder zufällig angeflogen sind. Stimmen die Lagen
der Axen in dem Bakterienkulturbelag Fig. 10 und 11, Taf. IX
nicht vollkommen überein, herrschen Abweichungen von 10 — 15"
oder von 45 so können diese ungezwungen auf den Umstand zurück-
geführt werden, dass in dem Additionsplättchen eine absolute Gleich-
artigkeit der Dichte nach einer Richtung und der dazu senkrechten
Ebene doch nicht so herrscht, wie in einem Gysplättchen. Kulturen
aus den Arthrosporen von Penicillium, Eurotium u. a. m. sind bei
homogener Beschaffenheit des Substrates kreisförmig, Fig. 1, Taf. XVIII,
in dem Additionsplättchen sind sie elliptisch. Fig. 10 und 11, Taf. IX.
Diese Figur zeigt ausser den Kristallausblühungen sämthche durch
Bacillen eingeätzte Figuren h. i. L. M. mit ihrer Längsaxe parallel
der grössten Elastizitätsaxe im Additionsplättchen orientirt. Die
Bakterien zeigen zur Nährgelatine, abgesehen von feineren chemischen
Beziehungen, zunächst dieses Verhalten, sie verflüssigen dieselben,
oder sie verflüssigen nicht. Sie wirken langsamer und rascher, je
nach ihren spezifischen Unterschieden. Aber auch eine und dieselbe
Bacillusspezies wirkt je nach ihrer Rassenenergie schwächer oder
stärker, das heisst, sie verflüssigt rasch oder langsam in verschiedener
Zeit. Das Gleiche gilt für die Kulturen solcher Bakterien auf ge-
wöhnlicher Gelatine.

Was die ungleichartige Ausbildung nach zwei zu einander senk-
rechten Richtungen angeht, so beachte man zunächst die Kulturen
Fig. 7 A und B, welche in Fig. 8, Taf. IX, in dem Additionsplättchen
Blau II zu Gypsrot I zeigen die EUipsenkulturen eines Hühnerei-
bacillus. (Verschiebung um 45" der beiderseitigen Ellipsenaxen.)
Das Substrat ist optisch nicht wesentlich verändert. In einem Pol
und nur in diesem hegen die Bacillenausstrahlungen, Tochterkolonien,
Tochterkulturen. Wirkt die Bakterienkultur auf gewöhnlicher Gelatine

8

N. J. C - Müller,

oder auf Additionsplättchen verflüssigend, so ist leicht ersichtlicli,
dass das Gelatineplättchen an den betreffenden Orten auf Neutral
(Gyps) Rot 1 lierabgestimmt erscheinen muss. Oder kurz gesagt:
„Eine Bakterienkultur, welche Gelatine verflüssigt, macht sich auf
einem Gelatineplättchen Blau II, Gelb I (Newton) kenntlich durch
eine rote Figur auf gelbem oder blauem Grunde, je nach der Sub-
traktions- oder Additionslage des Plättchens. So wirkten die Kulturen
Fig. 8 und 9, Taf. IX nicht. Hier ist die Belagstelle optisch nicht
verändert. Derselbe Impfstoff auf Additionsplättchen Fig. 2, Taf. X
gebracht, zeigt zunächst Ellipsenkulturen, deren Axen fast genau zu-
sammenfallen mit der grössten Elastizitätsaxe des Additionsplätt-
chens ; sie markieren ihre Wirkung aber auch durch Depression
der Interferenz auf Gelb I mit neutralrotem Rand und durch De-
pression grösserer Partien der nicht von der Kultur direkt bedeckten
Gelatinefläche (Fig. 2, 8, Taf. X). Die Interpretation des optischen
Phänomens Fig. 8 lautet: „Auf einem Additionsplättchen Blau II
wirken mehrere Bacillenstichimpfungen so, dass polarisierte ellip-
tische Kulturen entstehen, welche die Elastizitätsaxen um 90° um-
lagern, so dass in der Richtung, in welcher vorher Zug herrschte,
nunmehr Druck herrscht. Der Rand einer solchen Figur zeigt die
Symptome des Verschwindens jeder Art von Spannung, er ist neu-
tralrot, zeigt also das Symptom der Gelatineverflüssigung. Die merk-
würdigste Erscheinung dieser Art wurde in dem Nachfolgenden mög-
lichst genau niedergelegt.

Aus der Dottersubstanz eines faulen Hühnereies wurde eine
Stichkultur in Koch-Gelatine hergestellt (am 13. Febr. 93), Fig. 1,
Taf. IX. Nach fünf Tagen ergab die Kultur die in der Fig. 1 ge-
zeichneten Übergänge, gelbgrüne Verflüssigung mit Sediment. Nach
19 Tagen (4. März) war die Gelatine auf 20 mm unter dem Menis-
cus verflüssigt. Mehrere Impfungen aus dieser Kultur auf gewöhn-
liche Gelatiueplatten (am 2. März) ausgeführt, ergaben nach drei
Tagen Kulturformen von abenteuerhcher Umgrenzung, wie Fig. 2,
Taf. IX. Ein dichter Belag der Gelatine mit bogenlinigen Ausbuch-
tungen und zwei feinen Ausläufern; im Innern zahlreiche hyalinere
Sphären. Unter den Platten dieser Art befand sich eine, in welcher
eine nahezu breitelliptische Kultur die Gelatine verflüssigte (Fig. 3,
Taf. IX). Sie fiel sofort auf durch scharf markirte konzentrische
Schalen von wechselnder Dichte in dem Gelatinefestland, welches

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

9

die Zentrallagiine umgab und durch Radialplatten wechselnder Dichte,
welche von jenen konzentrischen Schalen, diese durchsetzend, 3 bis
4 mm weit in das Gelatinefestland ausstrahlen.

In der Fig. 5, Taf. XXII ist die Konfiguration jener Zeichnung
Fig. 3, Taf. IX zum Kreis abgerundet. Der zentrale, schwarz an-
gelegte Teil bedeutet die Lagune, von welcher Bacillenvölker radial
ausstrahlen und die Gelatine in ihrer optischen Textur umsetzen,
zersetzen. Die Gesamtgrundfläche der Fig. 5, Taf. XXII, welche rot
angelegt ist, entspricht dem nicht ganz homogen elastischen Gelatine-
plättchen , auf welchem die Kultur befindlich ist. Dasselbe soll in
der neutralen Lage zu dem unterliegenden Gypsblättchen Rot I auf-
gefasst sein. Es bedeuten dann die konzentrischen Ringzonen, welche
in zentrifugaler Richtung unter dem Auge des Beobachters an Zahl
zunehmen und ihre Interferenz verändern, konzentrische Schalen in
der Gelatine, welche drei Systemen angehören. Im Innern bis zur
Elastizitätsellipse E steht die Axe grösster Elastizität tangential.
In dem mittleren Schalensystem, welches hier (man beachte den
gelben Quadranten rechts unten) mit sechs Interferenzringen ver-
zeichnet ist, steht die Axe der grüssten Elastizität radial E , — und
in der absoluten Grenzschicht Avieder tangential E ,,. Die in den
äusseren Interferenzquadranten, entsprechend in Farbe, angelegten
Strahlen sagen aus: Das ganze Gelatineplättchen, in einer Radial-
entfernung von 5 — G mm vom Lagunenzentrum, wird in seiner Elas-
tizität, ausser der fortschreitenden Ringzonenbildung, noch in dem
Sinne molekular verändert, dass es in Radialstreifen zerfällt, deren
grösste Elastizitätsaxe parallel dem Strahle orientirt ist. Solche
Platten und Streifen alterniren mit neutralen, und es setzen sich
diese Strahlen in die Ringzonen fort, was in der Farbenfigur nicht
zum Ausdruck gebracht werden sollte und konnte. Zur optischen
Analyse beachte man die acht äusseren Ellipsenfiguren, in welchen
die Elastizitätsellipse des festliegenden Gypsplättchens Rot I schraf-
firt, diejenige in dem äusseren Schalenkomplex weiss gelassen ist.
In den inneren acht Ellipsenfiguren ist die Elastizitätsellipse des
festliegenden Gypsplättchens weiss gelassen, diejenige der Schalen-
komplexe schraffirt.

Da in dieser Figur das soeben hergestellte Additionsplättchen
aus Gelatine a b in der angegebenen Lage additioneil zu Rot I er-
scheint, so folgt, dass der Lagunenrand der Gelatine in dem inneren

10

N. J. C. Müller,

Schalenkomplex in tangentialer Richtung expandirt, im äusseren
Schalenkomplex in eben dieser Richtung komprimirt ist, wie aus
der Verzeichnung der Elastizitätsellipsen in der Farbenfigur hervor-
geht. Die radialen Interferenzen deuten , da sie die Quadranten
durchsetzen und 3 — 4 mm weit in die sonst intakte Gelatine aus-
strahlen, auf Molekularveränderungen in tangentialer Richtung. Das
Gesamtbild des Phänomens lässt sich dementsprechend so definiren :
„Die gesamte Randzone der Primär-Erosion zerfällt in zwei Schalen
oder Ringzonen : die innere ist in zahlreiche dünnere , die äussere
in wenige dickere Kreislamellen difi'erenzirt. Der gesamte Komplex
der inneren Schalen zeigt wechselnde Ringzonen, neutrale und in
tangentialer Richtung expandirte, da die Axe der grössten Elas-
tizität tangential steht. Der gesamte Komplex der äusseren Schalen
zeigt ebensolchen Wechsel von neutralen und in radialer Rich-
tung expandirten Ringzonen, da in den gespannten die Axe der
grössten Elastizität radial steht. Eine ümlagerung der Ela-
stizitätsaxen findet mit dem Fortschreiten der Kultur
(im Zeiträume von 12 Stunden IV2 — 2 mm des Durch-
messers) nicht statt.

Die jeweilige innere gespannte Schale wird zuerst neutral und
dann verflüssigt. Innerhalb 4 — 5 Stunden zeigt sich aber ein Fort-
rücken in der Ümlagerung der Elastizitätsaxen, in den dünnen La-
mellen, in zentrifugaler Richtung. So wurden um 8 Uhr drei innere
Lamellen abgezählt, in welchen die Axe der grössten Elastizität, der
vorstehenden Darlegung entsprechend, tangential steht. Nachmittags
um 1 Uhr wurden solcher Kreislamellen 10 abgezählt und die Spal-
tung der Lamellen durch eine im Innern sich diff'erenzirende Neu-
tralzone deutlich nachgewiesen. Endlich zeigt die absolute mathe-
matische Grenze des Ringes eine nochmalige Ümlagerung der Ad-
ditions- und Subtraktionsquadranten.

Der sicherste und durchschlagende Beweis für die Richtigkeit
der vorstehenden Befundaufnahme liegt nun aber darin, dass in dieser
letzten Randzone die Axe der grössten Elastizität genau so steht,
wie in dem halbkugeligen Abdruck einer Stecknadel, welcher neben
die Kultur in das Gelatineplättchen angebracht wurde. Aus alle
diesem der Schlusssatz: Die Zentralkolonie von Bacillen wirkt auf
eine Strecke von 3 — 4 mm in radialer Distanz voraus, ehe sie in
diesen Tangentialsphären selbst korrodirt oder die Gelatine ver-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

11

flüssigt. Die Wirkung besteht darin, dass sich die Axe der grössten
Elastizität in der Gelatine in den liadius der Sphäre orientirt oder
richtiger gesagt: Um die Lagune wird die Gelatine in molekularem
Sinne in Radialplättchen differenzirt, in welchen die Axe der grössten
Elastizität parallel dem Radius steht, diese wechseln ab mit eben-
solchen Plattenstrahlen , welche neutral sind. Die Korrosion und,
wenn man will, die Erosion vom Rand der Lagune besteht darin, dass
die inneren Schalen mit tangentialer Stellung der grössten Elastizitäts-
axe zuerst neutral und dann flüssig werden, dafür schreitet in der
mittleren Sphäre die Umlagerung der Elastizitätsaxen und die Ver-
mehrung der Tangentialschalen fort.

Der ganze Vorgang lässt sich vielleicht auch auf radiale Ver-
stösse eines beweglichen Bacillus zurückführen. Es lautet alsdann
die Erklärung des Phänomens : Die Zentrallagune wirkt auf das
intakte anliegende Gelatinefestland, wie wenn ein Zug oder Druck
in peripherer Richtung so umgesetzt wird, dass auf 4 — 6 mm Radius
hinaus neutralrote (später flüssige) und subtraktionell gelbe, additioneil
blaue Radiallamellen von Gelatine, also feste GelatinerifFe entstehen,
welche mit jenen neutralroten abwechseln. (Vergl. Abb. über die
Bakterien der Nonnenraupe, Mündener Forstl. Hefte.) Unter allen
Umständen liegt die Gewähr für die Richtigkeit der Interpretation,
wenigstens der optischen Reaktion an sich, in dem Umstand, dass
jene Radialdxfferenzierung auch ohne polarisirtes Licht gesehen
wurde. Der in der Fig. 3, Taf. IX niedergelegte Befund gab erst
Veranlassung, das Phänomen im Polariskop zu analysiren. Rotirt
man die ganze Platte bei gekreuzter Stellung der Nikols und über
dem festliegenden Gypsplättchen Rot I, so verändert sich das Inter-
ferenzbild in den Farbenkreisen der Fig. 5, Taf. XXII nicht. Eine
gegebene Radiallamelle derselben Figur aber geht hiebei von -I-Blau
nach Neutralrot, nach — Gelb u. s. f. über. Der letzte Versuch, das
Verhalten der Kulturfigur zu erklären, liegt ganz in der Molekular-
physik und hat seinen Beginn in dieser Hypothese: Die Bakterien der
Zentrallagune Fig. 5, Taf. XXII bilden Zersetzungsprodukte, welche
der instakten Gelatine des umliegenden Festlandes Wasser entziehen,
oder umgekehrt die schon im gegebenen Zustand wassergesättigte
Gelatine molekular so umlagern, dass ihre Kapazität für Wasser gleich
unendlich wird, weil nach der Befandaufnahme die Lagune an Um-
fang wächst, dadurch, dass die inneren Kreisriff^e flüssig werden, nach-
dem sie optisch neutral (Rot) erschienen waren.

12

N. J. C. Müller,

Iii. Methode der Fraktionirung durch die Wärme.

Keimdaiier aufgeti-ockneter Kulturen.^)

Ehe überhaupt bei einer gegebenen Mischung von Bakterien
zum Fraktioniren mit Hilfe der Methoden von Nägeli-Brefeld-Lister
geschritten wird, kann fraktionirt werden, indem man die Materie
der Stichkultur auf Glasnadeln auftrocknet und längere Zeit, Wochen,
Monate u. s. w. im Exsikkator in mit Watte verstopften Reagens-
gläsern aufbewahrt. Dieser Weg ist der längere und unsichere.
Direkte Erwärmung der sehr stark mit Wasser verdünnten Ursub-
stanz im Reagenscylinder (im Sinn des Fraktionirens) auf 30 °, 50
60— 70^ 90—95° C. für Zeiträume von 30, 60, 90, 120 Minuten
ist der direkte Weg, nachdem an mikroskopischen Präparaten der
Befund festgestellt ist, dass die gegebene Ursubstanz mehrere, oder
wie das Rhein- und Weserwasser, viele Bakterienspezies im Keim-
zustand enthält. Vor dem Beginn der nachfolgenden Untersuchungen
lagen in meiner Hand 20 verschiedene Kulturen auf Glasnadeln auf-
getrocknet. Es waren dies zum Teil Reinkulturen aus den Leichen
der Nonnenraupen, zum Teil Mischkulturen, welche aus verschie-
denen Wässern hergestellt waren.

Diese 20 zu verschiedener Zeit aufgetrockneten Bakterienkul-
turen wurden in Reagenscylindern ti'ocken erwärmt, bei drei ver-
schiedenen Temperaturen, je eine Stunde lang. Nach jedem Ver-
such wurde von jeder Nadel ein 2 — 5 mm langes Stückchen abge-
brochen und in einen Tropfen Nährgelatine auf dem Objektträger
geimpft. Zusammen liegen somit 60 Kulturen als Differenzen vor;
da jede der 20 Kulturen verschieden lang auf den Nadeln im auf-

Litteratur:

Zopf, Methodik der Bakterienforscliung, 1. c. S. 25, S. 43 ff.
Hüppe, Metli. d. Bakterienforscliung, 1. c. S. 191 ft'.
Mig cula, 1. c. S. 70 ff.
Baum garten, 1. c. S. 311 ff.

Hüppe, Die Formen der Bakterien, 1. c. S. 24, 62, 75 ff.
Die Lister-Nägeliscbe Methode des Fraktionirens, Zopf, 1. c, S. 45.
Die Brefeldsche Metliode des Fraktionirens, Zopf, 1. c. S. 45.
Die Kochsche Gelatinekultur, De Bary, 1. c. S. 32 ff.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

13

getrockneten Zustand im Exsikkator ruhte, so liegen in der Parallel-
versuchsreihe für die Energie in deren Abhängigkeit von Alter, des
Kontagiums und ausgestandener Temperatur 1 200 Differenzen vor,
von welchen indes nur ein kleiner Teil erfüllt zu sein braucht.

I. Temperaturenreihe (Samstag, den 20. Januar) :
12" 52 ö C. 12« 40' 48° C.

12" 20' 43" „ 12" 50' 56" „

12" 30' 43 0 „ 1" 58" „

ergiebt als Tempera turmittel 50 " C. und die Temperatursumme 3000 ".

II. Temperaturenreihe :

2" 40' 45" C. 3" 24' 74" C.

2" 50' 65" „ 3" 30' 70" „

3" 00' 68" „ 3" 40' 70" „

3" 10' 64" ^ 3" 50' 72" „

3" 2U' 70" „ 4" 00' 65" „

ergiebt als Temperaturmittel 67,2 "C. und die Temperatursumme 7032".

III. Temperaturenreihe:

4" 25' 96" C. 5" 00' 97" C.

4" 40' 97" „ 5" 10' 97" „

4" 50' 97" „ 5" 25' 97" „

ergiebt als Temperaturmittel 97 " C. und die Temperatursumme 13 852 ".

14 N. J. C. Müller,

Verzeichnis der Kulturen auf Glasnadeln.

Kultur-
ordimiig
Nro.

auf die
Nadel

Zahl der Tage
V. d.Ursubstanz

Zahl der Tage
auf der Nadel

Deszen-
denz

1. Bacillus I. St. mo-

nacliae ....

»y

Zo. j um yo

öOU

^lo

1 9

z. üacillus ii.^t. mo-

3) n »

0 1 Q

ö

6. Bacillus o4 (8) mo-

Tl Q / ■> n Q o

105

94- .Tnni

ü U-Ui I/O

360

919

3 — 6

A TTnfmmn /"Tnh \
rr. JZLUilUaliil ( J. IXlf.)

Bacillus monachae

12G

unbekannt

212

unbek.

5. Bacterium monach.

127

?5 n ?5

212

w

\j, sjcLKjIIHXo \jt toi

1 Oft

Ivo

7) 71 ?)

360

919

3

(weisser Belag)

7. Bacillus C. 112 (8)

112

7) n W

360

212

6

(gelber Belag)

8. Bacillus Hofmann

123

3? 77 77

unbekannt

212

unbek.

JL/ez. VO

juez. jo

3Q 40

T.0, Flaclierie-Raupe

155

v/Ii U. £70

145

90

11. Bach Vogelsang,

IvT i'i Tl n P Tl

To n

Jan.

35

12. Fuldawasser

V 7)

j) r n

40

35

13. Rhein oberh. Mann-

lieini

n »

fi Tin Q4-

U, J tili, i7*±

26

14

14- Tlarill /'o'vfiTicipliill A

Rbeiiij jVIannlieiiu

n n

13. „ 94

26

7

T.O. Pumpe (Münden)

n »

Hj. ijez. y-i

40

oo

16. Micrococcus (Feuer-

teicli)

Jan. 94

12

10

17. Neckar, Heidelberg

26

10

18. Heidelberg, Wasser-

leitung ....

ü »

T )I

26

10

19. Pumpe, Mannheim.

n n

I) !J

26

10

.20. Salzbach, Wies-

n n

' 7! V

26

10

1

Unter Deszendenz ist hier verstanden die Zahl der Übertragungen von der
■ersten nach der zweiten Stichkultur u. s. f. in Nälirgelatine.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien. 15

Kult.-

Serie 1—20

Serie 1 a — 20 a

Serie lb-20b

Ordn.

Temperatur 50" C.

Temperatur 67,32" C.

Temperatur 97 0 q

Nro.

nacli 22 Stunden

nach 19 Stunden

nach 18 Stunden

i.

verunglückt.

Trübung.

schwach oder unent-

schieden.

2.

Trübung u. schwache

schwache Trübung.

do.

Werfung der Gelatine

3.

Bläschen u. Vakuolen

schwache Vakuolen.

schwache Vakuolen-

bildung.

4.

0 oder unentschieden

unentschieden oder 0.

unentschieden.

5.

schwache Vakuolen.

do.

do.

6.

llTlPTlfQOnlAnPTl
UlldiUdUlllCUtl/Il,

uo.

«pli WQ p II p Va Irnnl PTi

7

schwache Vakuolen.

schwache Trübung.

Trübung.

Q
o.

unentschieden.

unentschieden oder 0.

unentschieden.

entschieden Wolken.

entschieden grosse

starke Trübung.

Sphäre.

10.

Q in Ssplipii'pl ci'riQüp

t! f'li Tiro /"»V» P A/olmnlp
auiiwacuc VtlivUOlC.

GpVni^Q p1i P ^Pt*!! KllTI O*

Vakuole.

11.

kleine Vakuole und

entschieden grosse

merkliche Trübung.

Kolonie.

trübe Sphäre.

12.

kleine Kolonie.

unentschieden.

unentschieden.

13.

do.

do.

do.

14.

do.

cntscliißdcn St reifen

merkliche Trübung.

15.

do.

pnf «1 p Iii pH pn l?! pin p

C/il I/o V^XIJL^U.^ 11 l\ll^lll<^

do.

Kolonien.

16.

0 oder unentschieden.

unentschieden.

unentschieden.

17.

kleine Kolonie.

Vakuolen und Kolonien

do.

18.

unentschieden.

unentschieden.

do.

19.

Änfllio* iTTiM \f a Irn n 1 PH

nnpiif^jcni pn php A/ q -.

dtci rlfp Vn ]r nnl PH

kuolen.

20.

0 oder unentschieden.

Vakuole und Verflüs-

unentschieden.

sigung.

16

N. J. C. Müller,

Serie 1—20
Temperatur 50" C.
nach 42 Stunden

Serie la— 20 a
Temperatur 67" C.
nach 40 Stunden

Serie lb-20b
Temperatur 97 " C.
nach 39 Stunden

verunglückte bei der
ersten Abmusterung.
Gelatine geworfen,
schwache Kultur,
unentschieden oder 0.
Gelatine klar, unent-
schieden oder 0.
do.
do.

schwache Trübung,
do.

starke Trübung.
Kultur deutlich.

do.

do.

do.

do.

do.

unentschieden.

Kultur deutlich,
unentschieden.

Kultur deutlich, grosse
Energie,
do.

geringe Trübung
und Verflüssigung.
Vakuolen und geringe
Trübung,
do.
do.

do.
do.
do.

starke Trübung,
grosse Kultur,
unentschieden,
grosse Kultur,
unentschieden,
do.

grosse Kulturenergie,
do.

schwach oder unent-
schieden,
unentschieden oder 0.

do.

do.

do.

Wirkung gleich 0.
do.

do.

do.

do.

schwache Vakuole = 0.
Wirkung = 0.
do.

grosse Kultnrenergie.

deutliche Kultur.

schwache Trübung,
unentschieden oder 0.

Wirkung gleich 0.

deutliche Wirkung,
do.

unentschieden.

AVirkung = 0.
do.
do.

do.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

17

Kult.-

Serie 1—20

Serie la— 20 a

Serie Ib— 20 b

Ordn.

Temperatur 50" C.

Temperatur 67"

Temperatur 97 ° C.

Nro.

nach 71 Stunden

nach 70 Stunden

nach 69 Stunden

1.

Leiseste Trübung,

unentschieden = 0.

unentschieden.

2.

Gelatine geworfen

do.

do.

mit Trübung.

3.

Wirkung = 0.

do.

do.

4.

do.

do.

do.

5.

do.

do.

do.

6.

do.

do.

do.

7.

do.

do.

do.

8.

do.

do.

do.

9.

Deutliche Kultur.

Deutliche Kultur.

Deutliche Kultur.

10.

do.

Wirkung 0.

unentschieden = 0.

11.

Deutliche Kultur,

Deutliche Kultur,

grünschillernd.

grünschillernd.

do.

12.

Deutliche Kultur,

schwach, unentschie-

nicht grünschillernd.

den = 0.

do.

13.

do.

do.

do.

14.

do.

Deutliche Kultur.

Deutl. Kultur, flüssig.

15.

do.

do.

do.

16.

eine einzige kleine

zwei deutliche kleine

unentschieden = 0.

Kolonie.

Kulturen.

17.

Deutliche Kultur.

schwach, unentschie-

do.

den = 0.

18.

unentschieden oder 0.

do.

do.

19.

Deutliche Kultur.

do.

do.

20.

do.

do.

do.

1) Den höchsten Temperaturgrad 97 ° C. (zusammen in 300 Mi-
nuten die Temparatursumme von 12840° C. als Produkt aus der Zeit
in die Temperatur) haben nur diejenigen Kulturen ertragen, welche
im Dezember 1893, etwa 26 Tage vor dem Versuch, hergestellt
waren aus den Ursubstanzen : a) Faules Hühnerei, b) Bacillus aus

Müller, Baliterien-Forscliung. 2

18

N. J. C. Müller,

einer grünschillernden Kultur von Rheinwasser oberhalb Mannheim,
c) Bacillus eines Pumpwassers (Pumpe, Vogelsang Münden; hiezu
Fig. 14—18, Taf. XVII und die Figurenerklärung.)

2) Den zweithöchsten Temperaturgrad 67 C. (zusammen eine
Stunde 50 ° C, eine Stunde 67 C, die Temperatursumme von
7020 C.) haben unter 20 nur 5 Kulturen ertragen, sämtlich im
Dezember 1893, gegen 26 Tage vor dem Versuch aus den Ursub-
stanzen hergestellt; darunter der Bacillus (Faules Hühnerei). Die
übrigen sind die Wässer verschiedener Herkunft. Ausgeblieben sind
sämtliche Leichenbacillen aus Raupen, welche im Juni-August (180 bis
210 Tage vor dem Versuch) auf Glasnadeln getrocknet wurden. Von
den Wasserkulturen aus dem Dezember 1893 ist nur eine ausge-
blieben, die Heidelberger Wasserleitung, deren Energie auch bei
gewöhnlicher Temperatur ausserordentlich klein war. (Die Kultur
enthält bewegUche dreigliedrige Bacillen (Vibrio?); (hiezu Fig. 10 — 13,
Taf. XVI.)

3) Bei dem niedersten Temperaturgrad 50 " C. (Temperatur-
summe 3000 ** C.) sind alle Raupenbakterien aus dem Jahre 1893
(s. oben) und jene schwache Kultur Heidelberger Wasserleitung aus-
geblieben. Alle aus dem Dezember 1893 (26 Tage) sind angegangen,
zum Teil mit grosser Energie. (Hiezu Fig. 4 — 13, Taf. XVII.)

4) Bemisst man die Energie nicht allein in dem Enderfolg, (s.
Abteilung III) der Aufnahmen, sondern auch in der Raschheit, mit
welcher die Kulturen nach dem Impftermin angehen, so ergiebt sich
für die erwärmten Kulturen eine Verzögerung um 20 — 30 Stunden,
bezogen auf die Zeit des Enderfolgs, (72 Stunden bei der Temperatur
von 18 — 21" C.) gegenüber den bei gewöhnlicher Temperatur auf-
bewahrten Kulturen. Dieses gilt auch für alle diejenigen, welche
nur den niedersten Temperaturgrad von 50 ° C. ertrugen.

5) Aus dem Umstand, dass auch bei solchen Kulturen, welche
schliessHch nicht angingen, frühzeitig nach 20 — 24 Stunden, gewisse
Symptome eintraten, welche nach mehreren Tagen ausblieben, kann
auf lösliche Fermentkörper in der Gelatine der aufgetrockneten Kul-
turen geschlossen werden, welche dann noch leise wirksam sind,
wenn die Bakterien selbst als abgestorben angesehen werden müssen.
Solche Symptome sind leise Trübungen und Vakuolenbildung in dem
neuen Substrat, welche nach einiger Zeit verschwinden.

Die drei Kulturen, Avelche den höchsten Temperaturgrad er-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

19

trugen, wurden am 5. Februar 1894, 2 Stunden lang bei 97 ^ C. er-
wärmt, sie haben jetzt die Minutentemperatursumme 24480 ° C, ; sie
wurden am gleichen Tag in Tropfen von Koch-Gelatine geimpft bei
20 ° C. kultiviert. Sonntag, S.Februar. Nach 48 Stunden zeigte
Tseine der Impfungen ausser der Trübung, welche durch das teilweise
Auflösen der an der Nadel befindlichen Impfmasse bedingt ist, eine
sonst charakteristische Kulturbildung.

Da nach unserer Voraussetzung in einem sehr verdünnten Ge-
misch von Bakterien und deren Keimen, wie es im Wasser eines
Stromes (Rhein, Weser u. s. f.) vorhegt, durch die Temperatur 50
welche gegebenen Falles mit 40, 50, 60 Minuten zur Wirkung kommt,
gewisse Arten ihre Keimkraft verlieren, andere nicht, so kann diese
Methode der Fraktionirung offenbar, sowohl für den trockenen Zu-
stand mit wenigen Temparaturen oder selbst nur einer einzigen an-
gewandt werden, indem man die Zeit variabel nimmt. Auch für ver-
dünnte flüssige Gemische verschiedener Bakterien werden Tempera-
turen von 20 30 35 " sicher erfolgreich sein. Für die vorliegenden
drei Parallelreihen- ergaben sich , in Hinsicht auf Keimdauer und
ausgestandener Temperatur, noch diese beachtenswerten Unterschiede :

A. Reinkulturen.

1) Alle Kulturen derNonnenraupenbakterien,welche vor 360 Tagen
eingeleitet waren, trocken auf der Nadel lagen während 212 Tagen
und Deszendenzgrade der Impfung von 3, 3 — 6 und 1 2 aufweisen,
haben die Temperatursumme 3000 " C. (50 ° C.) nicht ertragen.

2) Hiezu im Gegensatz hat der Bacillus monachae (Münden)
Nr. 10 des Verzeichnisses S. 20 oben, mit 145 Tagen als Zeitentfernung
von der Impfung der Ursubstanz, 90 Tage trocken auf der Nadel,
dieselbe Temperatursumme ertragen. Fig. 5, Taf. XVII zeigt eine
wolkig welhge Trübung um das Glasstäbchen, welche gegen die klare
Gelatine scharf abgegrenzt ist.

3) Die Kultur eines Bacillus aus faulem Hühnerei mit 40 bis
50 Tagen nach der Impfung, 30 — 40 Tage trocken auf der Nadel,
aber Deszendenz ersten Grades, hat alle Temperaturen 50 °,
67 °, 97 zusammen die Summe von 12852 Minuten Celsiusgraden
ertragen. Fig. 4 Taf, XVII, Fig. 13 Taf. XVI, Fig. 14 Taf. XVII
zeigen fast gleiche dichtere und mehr hyaline Belage, in der Fig. 14,
Taf. XVII eine intensive Entwicklung.

2Ö

N. J. C. Müller,

B. Mischkulturen.

4) Die Mischkultur (1 Deszendeuzgrades) Bach Vogelsang, Mün-
den, mit 40 Tagen seit der Impfung, 35 Tagen trocken auf der
Nadel, hat 2 Temperaturgrade ertragen 50** C, •57'' C, und bringt
nach dem ersten Temperaturgrad, 50 ^ C, den Bacillus liquefaciens
fluorescens Fig. 6, Taf. XVII. Dieser Bacillus ist mit der zweiten
Temperatur ausgeblieben Fig. 12, Taf. XVI. Hier liegen neben den
Wolkenbelagen scharfbegrenzte Kugelzooglöen. Die höchste Tem-
peratur wurde überhaupt nicht mehr ertragen.

5) Ton 10 Mischkulturen verschiedenster Wässer : Pumpe, Bach,
Rhein, Fulda, Neckar, Teich (Feuerteich, Münden) haben nur drei:
Rhein, Pumpe (Vogelsang, Münden), Feuerteich, Münden den höchsten
Temperaturgrad (97 **) ertragen. Der grünschillernde Bacillus aus
dem Rhein hat 26 Tage nach der Stichkultur und 7 Tage trocken
auf der Nadel; das Pumpwasser die entsprechenden Zeitintervalle
40 und 35 Tage; der Feuerteich 12 und 10 Tage. Von denselben
1 0 Mischkulturen haben den zweithöchsten Temperaturgrad 67 " C.
ertragen: Feuerteich 12 und 10 Tage, Pumpe Münden 40 und 35 Tage,
Bach Vogelsang, Münden, 40 und 35 Tage.

6) Den niedersten Temperaturgrad 50 ^ C haben alle Misch-
kulturen der Wässer ertragen. Fig. 4 — 13, Taf. XVII.

IV. Methode der Fraktionirung durch Alkoholzusatz.')

Als Untersuchungsmaterial wurde das Wasser einer Pumpe in
Münden benutzt, dessen Bakterien durch mikroskopische Probe und
dessen Zoogloea und Belagformen auf Nährgelatine vorher genau
untersucht waren. Es handelte sich hier zunächst um die Frage,
welcher Alkoholgehalt wird von den Bakterien, in dem gegebenen
Wasser überhaupt ertragen. Das gegebene Wasser wird mit gradatim
gesteigerten Alkoholmengen versehen. Aus den Gemischen wird mit
einer Glasnadel in die erkalteten Tropfen von Nährgelatine auf dem

1) Litteratur:

Wasser bewohnende Spaltpilze: De Bary, 1. c. S. 58. — Colin,
Beiträge zur Biologie der Pflanzen, Bd. 1, S. 108 ff. — Zopf, 1. c. S. 95 ff.

Untersuchung des Wassers: Hüppe, Methoden der Bakterienforschung, 1. c.
S. 455 ff.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

21

Objektträger geimpft. Die so eingeleiteten Kulturen werden in ge-
eigneten kleinen Feuchtkaramern in den Thermostaten gebracht. Die
Sphären, Zooglöen können in solchen Objektträgerkulturen im Impf-
punkt entstehen oder in weiterer Entfernung von diesem, wenn sich
die geringe kleine Wassermenge auf dem Gelatinetropfen ausbreitet.

Parallelkultur reihen, gradweiser Alkoholzusatz.

(Hiezu Fig. 19, 20, Taf. XVII, Fig. 2—15, Taf. XVIII.)

Erste Versuchsreihe.

Am 21. Januar 1894 wurde in 10 Reagenzgläser je 14,5 ccm
Wasser gegeben, gradatim vom ersten zum zehnten Alkohol aus dem
Tropfglas, in das erste ein, in das zehnte zehn Tropfen. Alle Gläser
wurden herzhaft geschüttelt. Nach zwölf Stunden wurde geimpft in
Tropfen von Nährgelatine auf dem Objektträger (Sonntag, 21. Jan.).

1.

2.

3.

4. 5.

6. 7. 8. 9. 10.

Montag nach 24 Std.
9 Uhr vorm.

0 oder
unent-
schied.

kleine
Sphären
im Stich

unent-
schie-
den

0 od. unent-
scliieden

0 oder unentsch.

Montag nach 35 Std.
8 Uhr abends

Sp

h a e r 0 i d e

sehr kleine
Sphaeroide

Dienstag nach 47 St.
8» 30'

Grössere und mehr — Sphaeroide —

ileinere und weniger

Am Dienstag um 1 Uhr nachmittags war die Verteilung der
Sphaeroide die nachfolgende:

Nro.

Verhältnis von

Sphaeroide im Impf-

Sphaeroide ausserhalb

Alkohol : Wasser

punkt

des Impfpunktes

1

1 : 435

verunglückt

verunglückt

2

1 : 217

20

10—15

3

1 : 145

20—30

20 — 30 grössere Kol.

4

1 : 109

1

0

5

1 : 87

0

0

6

1 : 72

7

0

7

1 : 62

4-6

0

8

1 : 54

6 — 10

3—4

9

1 : 48

0

1

10

1 : 43

0

2

22

N. J. C. Müller,

Hieraus geht hervor, dass die Grenze mit 1 : 48 bis 1 : 43
nicht ganz unzweideutig erreicht ist. Es muss also noch mehr Al-
kohol angewendet werden.

Zooglöen der ersten Versuchsreihe.')

Ausser der grösseren Belagstelle Fig. 15, Taf. XVIII, welche
dem Gemisch Alkohol 1 : Wasser 54 entspricht, treten in dieser Reihe
drei der Form nach unterschiedene Zooglöen auf: Lichtere aber
scharfbegrenzte Kugeln Fig. 13, Taf. XVIII entsprechen dem Ge-
misch 1 : 72, ebenso Fig. 14, Taf. XVIII entsprechen dem Gemisch
1 : 62 ; dichtere scharfbegrenzte Kugeln Fig. IIa, Taf. XVIII dem
Gemisch 1:217 entsprechend; granulirte, radialgestreifte und mit
konzentrischer Kreisgranulierung versehene Scheiben Fig. 11c' und
Fig. 13 a, Taf. XVIII. Unregelmässig begrenzte wolkig granulirte,
grosse und kleine Anhäufungen Fig. 12, Taf. XVIII, welche dem
Gemisch 1 : 145 entsprechen.

Zweite Versuchsreihe. (Fig. 19 und 20, Taf. XVII.)

Hier wurden am Donnerstag den 25. Januar 1894 in fünf Gläsern
(5, 10, 15, 20, 25 Tropfen Alkohol) gradatim die Mischungen hergestellt.

Alkohol :

"Wasser

Erfolg nach 90 Stunden

1) 1

: 80,7

0, Gelatine vollkommen klar

2) 1

43,5

do.

3) 1

29

deutliche Kultur

4) 1 :

21

do.

5) 1 :

17

keine Wirkung

1) Litteratur:

Das vegetative Verhalten nnd die Ernälirung der Bakte-
rien: r. Cohn, Beiträge zur Biologie der Pflanzen, Bd. I, S. 127, 141, 146, 208 fif.
— De Bary, 1. c. S. 7 ff. — Zopf, 1. c. S. 4, 25 ff. — Migula, 1. c. S. 42 ff. —
Hüppe, Die Formen der Bakterien, S. 2, 7 ff. Die Kontroverse über die Spezies-
konstanz, S. 24, 41 ff.

Die Zooglöen und Belagformen der Bakterien: Cohn, 1. c.
S. 142. — Hüppe, Die Formen der Bakterien, 1. c. S. 75. — De Bary, 1. c., Vör-
ies, über Bakt., S. 10 ff. — Migula, 1. c. S. 80 ff. — Hüppe, Methodik der Bakt.-
Forschg., Taf. I, S. 331. — Metzger und Müller, Mündener forstliche Hefte, I.Bei-
heft, S. 126 ff; Pigmentbakterien, S. 129 ff.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

23

Neben den Impfungen aus solchen Gemischen wurde eine Im-
pfung mit alkoholfreiem Wasser eingeleitet.

Da die alkoholschwächeren 1, 2 und die alkoholstärkste 5 nicht,
die mittleren 3 und 4 aber deutlich angegangen sind (s. Fig. 19 und 20,
Taf. XVII), so ist die Versuchsreihe zwar für die Fragestellung be-
deutungslos, weil in seiner Weise entscheidend. Die Kulturen 3 und 4
aber zeigen ganz verschiedene Konfiguration und Wesenheit. Es
ergibt sich daraus, dass bei Mischkulturen der Alkoholansatz zum
Differenziren der Kulturen benutzt werden kann.

Zooglöen der zweiten Versuchsreihe.

Es lassen sich vier scharfgeprägte Formen definiren : 1) lichte,
scharfumschriebene, homogene Sphären Fig. 19 Ab. 2) Grössere,
granulirte Kugeln mit scharfbegrenzter Kernzone Fig. 19 A. Das
Gemisch 1 : 29, — 3) Pentagonale Belagfläche, mit dicht homogenem
Mittelfeld, lichterer Randzone, welche schwach wellig gebuchtet ist.
Fig. 19 B, demselben Gemisch, wie vorher entsprechend. 4) Grösserer
sphärischer Belag, mit drei konzentrischen Zonen, von welchen die
zentrale die dichteste, daneben eine hyalinere Ausflusszone, Fig. 20,
entspricht dem Gemisch 1 : 21.

Dritte Versuchsreihe. (Fig. 2—8, Taf. XVIII.)

Am Mittwoch, den 31. Januar wurden Gemenge hergestellt:
Von 1 : 87, 1 : 43, 1 : 29, 1 : 21, 1 : IG, 1 : 14, 1 : 12, 1 : 10. Hier
zeigten sich nach 3 Tagen alle Kulturen, aber in sehr verschiedener
Weise, in eigentümlichen Sphärenkolonien angegangen.

Die Zooglöen der dritten Versuchsreihe.

Hier liegen fast ebensoviel Formen vor wie Gemische in An-
wendung kamen. Es mögen daher die Figuren nach den Gemischen
und den Definitionen zusammengeordnet sein :

Gemisch: D e f i n i t i o n d e r F o r m :

Fig. 2 1:87 Formloser homogener Belag, mit wolkigen Trübungen.
Fig. 3 1:43 Hier liegen fünf Formen : Hyalinesphären in Appo-
sition oder Sprossung die Gruppen B und c; eben-
solche mit zahlreichen Sphärensprossen die Gruppe D;
ebensolche mit scharfer Kernzone E ; Sphäre am Rande
gleichmässig radial gestrichelt P; grosse Sphäre mit

24

N. J. C. Müller,

kleinen Kettensphären (kombinirte Zooglöen durch
Apposition oder endogene Entwicklung).
Fig. 4 1 : 29 Einfache Sphärenzooglöen in Ketten, Drillingen und
Tetraden.

Fig. 5 1:21 Drei Formen: homogene Sphäre am Eande ge-
wimpert B; scharfbegrenzte Kugel mit gewimperter
Kernzone c; kombinirte Zooglöa mit drei gegen-
seitig im Verbände abgeplatteten Sphären A ohne
Wimperkranz, kombinirt mit einer gewimperten
Sphäre B.

Fig. 6 1:16 Zwei Formen: Sphäre mit vier dichtem Einschluss-
kugeln ; Kettensphären, zwei an den Ecken mit Ein-
schlusskugeln, die mittlere frei.

Fig. 7 1 : 10 Die Gruppe scharfumschriebener Zooglöen darf viel-
leicht in diesem Sinne interpretirt w^erden : Sie ent-
spricht einer Sprosszooglöa, die mit 1,1 bezeichneten
dunkleren, dichten Kugeln w^aren ursprünglich Zwil-
linge. Aus ihnen gingen hervor 2,2, welche im ge-
gebenen Zeitpunkt die hyalinen Sprosse 3,3 hervor-
bringen 4. 4,4 davon eine an 2, die 4. Generation.

Vierte Versuchsreihe. (Fig. 9, Taf. XVIII.)

Am Sonntag, den 5. Februar wurden die Gemenge 1:14, 1:9,
1:7, 1 : 5,6 — , 1 : 4,0ö — , 1 : 4 — , 1 : 3,5 geimpft wie vorher. Nach
36 Stunden bei 25 ° C. zeigte nur die Mischung 1 : 14 die früher ab-
gebildeten Sphärenkolonien. Alle übrigen Gelatinetropfen waren
intakt. Die Grenze liegt also bei 1:9 bis 1 : 10. Nach 48 Stunden
zeigten nur die ersten beiden Mischungen die beschriebenen Sphären-
kulturen, alle übrigen waren intakt. Die Grenze liegt also in der
Nähe von Vt — Vg. Eine nochmalige genaue Untersuchung solcher
Sphären bei HO2 S J VIII s. Taf. XVIII, Fig. 9 ergiebt für die allerersten
Anfänge : a, b, c, Fig. 10, Taf. XVIII hyaline Sphären, in welchen auch
die Immersion die Bakterien nicht auflöst. In den späteren Phasen d bis k
Ausbrüche oder Teilungen der Sphären von verschiedener Dichte.

Aus diesen Zuständen wurde mit einer Glasnadel eine Probe
auf einem neuen Objektträger mit "Wasser verdünnt und eingeschlossen.
Fig. 8, Taf. XVIII ergiebt den Befund bei S J VIII HO2. Bazillen
mit Kokkenbildung bei a, b und zwei höhere Spaltalgen bei d und e.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

25

Die Grenze für die Sistirung von Kulturen, welche für die Methode
der Fraktionirung bei Wasser der Quellen, Sümpfe, Bäche, Flüsse
u. s. f. in Anwendung kommen soll, wird demnach zu Alkohol 1
Wasser G zu bemessen sein.

V. Methode der Objektträgerkultur in Nährgelatine. Fraktioniren mit

Hilfe der Glasnadel.

A. Leichen Partikel und Gesteinstrümmer. ')

Holzsplitter im stagnirenden Wasser, verwesende Blätter können
mit der Schere und dem Messer in scharfumbeschriebene Abschnitte
zerlegt werden. Diese entwickeln, in den Tropfen von Nährgelatine
geschoben, nach 12 — 24 Stunden in einer Zinkblechfruchtkammer
mehr oder weniger charakteristische Kulturen, welche in Klatschprä-
paraten auf Bakterien untersucht werden können. Die Partikel können
auch vorher mit grösseren oder kleineren Mengen sterilisirten Wassers
mazerirt werden, so dass erst dieser Auszug zur Verwendung kommt.
Die dritte derartiger Methoden zerlegt Gemische, wenn auch zuerst
nicht rein in sterilisirtem Filtrierpapier. Die bakterienhaltige Flüssig-
keit wird auf einen Punkt des Filtrierpapiers getropft, der entstandene
Saugkreis im Papier wird getrocknet, sodann im Scheibenringe zerlegt,
die vom Tropfzentrum aufeinanderfolgenden Ringzonen im Papier
enthalten die Bakterienarten, wenn zunächst nicht absolut rein, frak-
tionirt, die Papierschnitzel der Ringe werden von neuem mazerirt.
Die so erhaltenen Auszüge werden geimpft.

a) Feste Partikel direkt geimpft. (Fig. 1 — 3, Tafel XX.)

Drei feste Holzsplitterchen aus einer Röhre der Pumpe (Vogel-
sang, Münden) in Tropfen von Nährgelatine eingeschoben, Fig. 1 AB C,
ergeben, bei 16° C, nach drei Tagen, drei differente Kulturen:

^) Litteratur :

Gärung, Zersetzung durch Bakterien: De Bary, I. c. S. 51, 85 ff.
— Migula, 1. c. S. 165 ff. — Zopf, 1. c., Eine vollständige Zusammenstellung der
Litteratur bis 1885, S. III ff, ibid. S. 29 ff'.

Die Sporenbildung und Keimung der Bakterien: F. Cohn , 1. c.
Bd. I, S. 127 fl\ — De Barj^, 1. c. S. 12, Endospore und Artlirospore. — Zopf, 1. c.
S. 18, Sporenbildung. — Migula, 1. c. S. 42.

26

N. J. C. Müller,

A. Um den Splitter S eine dichter granulirte Zone mit rückwärts
fiedrig gestellten, dichteren Belagstreifen, eine hyaline Zone, c, um-
gibt jene, bei d ein Kugelzooglöa. Die Übertragung minimaler Mengen
mit Hilfe einer feinsten Glasnadel und der Präparierlupe, ergibt nach
22 Stunden (16 C.) in A Fig. 3 ein fein warzig hyaline Belagzone
mit zahlreichen kleinen hyalinen Kugelzooglöen (derivirte Zooglöa).
Die mikroskopische Probe aus A Fig. 1 ergibt einen beweglichen,
zweigliederigen Bacillus. Seine Bewegung ist undulirend, mit den
Pfeilen links und rechts senkrecht zu seiner Axe und fortschreitend
mit dem mittleren Pfeil. Fig. 2A, Taf. XX.

B. Fig. 1, Taf. XX zeigt in der ersten Kultur einen dichteren,
homogenen, irisirenden, im durchfallenden Lichte braun erscheinenden,
zierlich fächerig, bogeulinig begrenzten, am Rande radialgestreiften
Belag. Dicht bei diesem liegen scharfbegrenzte Kegelzooglöen bei a.
Das Ganze ist eingehüllt in eine hyaline Zone und verunreinigt durch
keimende Gliedersporen eines Schimmelpilzes.

Der derivirte Kulturbelag, B. Fig. 3, Taf. XX ergibt eine
elliptische Kultur, welche von einem Pol parenchymaartige Zoogloen
am anderen Pol und in der Nähe zahlreiche Systeme vielghedriger,
kleiner Zoogloen im Parenchymaverband aufweist. Die mikrosko-
pische Probe aus Fig. 1 B, Taf. XX zeigt mehrgliedrige Bazillen
in Spiralform mit Kurzstäbchen und Arthrosporen (Kokken) Fig. 2 B,
Taf. XX.

C. Fig. 1, Taf. XX. Der Holzsplitter zeigt zahlreiche dichtere
Belagstreifen, welche in Mäander geordnet sind. Dieses System ist
von einer hyalinen Zone umgeben. Die derivirte Kultur Fig. 3 C,
Taf. XX zeigt ähnliche Mäandersysteme in lichterer Grundmasse.
Die mikroskopische Probe Fig. 2 C, Taf. XX ergiebt vorherrschend
die viel und langgliedrigen, breiten Fäden mit wenig kurzgliedrigen
von Crenothrix und feingliedrige Bacillen. Die Methode zeigt somit
die Möglichkeit an, wie zunächst die gröbere Isolirung von drei
differenten Arten in kleinsten Bruchstückchen verwesender Substanzen
eingeleitet werden kann und sie weist ydarauf hin, dass in solchen
Partikeln, sich eine Artenverarmung der Zahl nach vollzogen hat.
(Vergl. weiter unten unter Partikel aus dem Rheinstrom.)

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

27

b) Verwesende Teile einer Runkelrübe.
(Fig. 12-22, Taf. XXVII, Fig. 1 und 2, Taf. XXYIII.

Die Ursubstanz der verwesenden Betapflanze, wie sie aus einer
der Erdgruben entnommen wurde, in welchen die Landwirte in Süd-
deutschland die Runkelrübe zu überwintern pflegen , Hess sich von
vornherein in drei Teile zerlegen :

I. Die verwesende, breiige Par enchymamass e der Rübe.

Der Auszug in Nährgelatine geimpft, ergibt nach 24 Stunden
(16° C.) eine kreisförmige Kultur, deren Mittelfeld gleichmässig gra-
nulirt ist. Der Rand, scharf begrenzt, ist ein hyaliner Ring,
Fig. 12, Taf. XXYII. Nach 48 Stunden zeigt dieser Belag in dem
Kreissektor Fig. ] , Taf. XXVIII einen glatten oder schwach buch-
tigen Rand mit hyaliner Randzone. Auf diese folgt eine dichter
granulirte Ringzone und das homogene, lichtere Mittelfeld. Die
mikroskopische Probe ergibt vorherrschend Hormiscium in der
Sprossform (Sprosshefe) und Micrococcus in Ketten Fig. 2,
Taf. XXVIII.

II. Die Schale derselben Runkelrübe.

Der wässerige Auszug ergibt nach 48 Stunden, bei 16° C. einen
Kreisbelag, von welchem die Fig. 16 A, Taf. XXVII einen Teil dar-
stellt. Die Richtung von oben nach unten rechts entspricht dem
Kreisrand. Es sind Lappen eines dem Anschein nach zerrissenen
Belages von hellroter Farbe. Hellrote, maulbeerartige Zoogloeen in
Ketten, farblose ebensolche und kombinirte aus Hellrot-Gelb, Farb-
los Gelb. Fig. 18, Taf. XXVII, giebt eine Maulbeer-Zooglöa als
Zwilling, mit hyaliner, fein granuhrter Ergusssphäre von einer der
Maulbeersphären ^eoyi^ Das Mikroskop weist in diesen Zoogloen vor-
herrschend Hormiscium und Bacillus nach Fig. 17, Taf. XXVII.

III. Das durch die Verwesung geschwärzte Kraut
derselben Rübe.

Die Kultur aus dem wässerigen Auszug zeigt einen Kreisbelag^
mit zahlreichen Punkten Fig. 13, Taf. XXVII. Die mikroskopische
Probe ergibt vorherrschend Micrococcus Fig. 14, Taf. XXVII in
Ketten, wenig Hefe. Die Entwickelung der Punkte ergibt jene

38

N. J. C. Müller,

Hefenzoogloea Fig. 15, Taf. XXVII als Entwickelungsreihe der Maul-
beersphären, welche schon in Fig. 16, Taf. XXVII berücksichtigt
waren (siehe oben). Die Kultur zeigt nach 48 Stunden in Fig. 21,
Taf. XXVII einen doppelt gezahnten Rand zahlreicher Mamellen-
gruppen im Mittelfeld, sie ist hyalin farblos.

Die Untersuchung der drei Partikel ergibt somit:
Die breiige Masse: Micrococcus und Hormiscium im farb-
losen Belag.

Die Schale: Rein Hormiscium zoogloea farblos , kombinirte
Hormiscium, Bacilluszoogloea Rot oder Gelb. Micrococcus zoogloea
Gelb. Hieraus mit grosser AVahrscheinlichkeit : „Die Kombinirte
Hormiscium-Bacillus-Zoogloea ist die rote."

Das schwarze Kraut ergibt farblose Hormisciumzoögloeen
und in der fortgeschrittenen Kultur Micrococcu-s, mit wenig Hefe.
Die Hefe aber kommt in allen drei Partikeln vor.

c) Partik el, dem Rh einstrom bei Mannheim entnommen.

]) Fontinalis Rasen. (Fig. 3, 12, 13, Taf. XXVIII,
Fig. 1, Taf. XXIX.)

Das Wasser aus dem Moosrasen in Nähigelatine geimpft, er-
gibt nach 48 Stunden Fig. 3, Taf. XXVIII zwei rote a ai und drei
gelbe Kugelzoogloen, von welchen zwei als Appositions- oder Spross-
zwillinge erscheinen. Die Kultur wurde durch Abklatsch auf neue
Deckgläser übertragen. Die Klatsche A, Fig. 12, Taf. XXVIII und 1,
Taf. XXIX sind ausserordentlich feine Belage mit feinen Zähnen.
Die Randpartie des ersten Klatsches, Fig. 12, Taf. XXVIII ergibt
Bacillen, welche wie Geldrollen geordnet liegen parallel der Längs-
axe dichtest an einander gereihet, fast alle von gleicher Länge. Die
Reihen sind wirr durcheinander gelagert. Einer der Zähne in A er-
gibt die, hier möglichst genau in der Zeichnung wiedergegebene Partie
a b, es sind Geschiebe eigener Art, welche den Zahn begrenzen. Das
Auffällige hier, wie in Fig. 1, Taf. XXIX ist, dass die Bacillen alle
in eine Ebene geordnet sind. Der zweite Klatsch aus derselben Kultur,
A Fig. 1, Taf. XXIX zeigt in derselben Fig. B eine noch verwickeitere
gegenseitige Lage. Die Langfäden liegen in Mäandern, alle in einer
einzigen Ebene, wie vorher die Kurzfäden. In den Zähnen c und
den andern, ist ein Faden umgebogen oder es liegen mehrere der-
artige Fädenkonvolute in der Begrenzung d e f g zeigt in der An-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

näherung an den Thatbestand die Reihenfolge der Sprossung und
Strahlung. Bei dem Zahn g liegen nur 2 bis 3 Reihen in Abwechslung
für die Querverfugung. Die letzte Ausstrahlung ist ein einziger
Langfaden. Bei der Behandlung des Klatsches mit verdünntem Gly-
zerin lockern sich die Langfädenkonvolute in die Lage C auf. Hie-
bei erscheinen auf derselben Platte die Spirulinafäden D.

Ein dritter Klatsch aus derselben Kultur, ergibt einen penta-
gonalen Haufen von Mucorinisporen mit Bazillen Fig. 13, Taf. XXVIIL

2) Kleine Sandsteinpartikel.
(Fig. n, 4. 5, Taf. XXVIII).

Der Auszug in Kährgelatine geimpft, ergibt nach 48 Stunden
mehrere Kugelzooglüen Fig. 4, bei 10 — 20facher, zwei dieser a in
Fig. 5 bei 80/1. Der Klatsch ergibt in Fig. Hab die Grenze zweier
Reinzoogloen, die eine Homogenbacillus, die andere Homogen-Micro-
coccus mit zahlreichen Diplokokken. Der Versuch demonstrirt die
Isohrung von zwei Arten, bezogen auf den Artenreichtum im W^asser
des Gesamtstromes, also eine Artenverarmung im engen Wohngebiet.

3) Verwesendes Weidenplättchen.
(Fig. 7, 8, Taf. XXVIIII.)

Nach 48 Stunden zeigt die Jmpfstelle einen Kreisbelag von
2 mm Durchmesser Fig. 7, Taf. XXVIII. Bei zeigt dieselbe
zahlreiche Zoogloen am Rande in Kettenverband, im Mittelfeld in
halbem Parenchymaverband. Die Farbe ist braunrot, a c entlassen
hellgelbe Sprosse, nachdem der rote Belag durchbrochen ist. Fig. 8,
Taf. XXVIII. Diese Fraktionirung erweist dasselbe wie vorher eine
Artenzahl von 2 — 3 : Gelbzoogloea-Braunzoogloea.

4) Splitter von einem in dem Rhein ufer eingerammten
Holzpflock. (Fig. G, 9, 10, Taf. XXVIII.)

Der Auszug ergiebt, wie vorher nach 48 Stunden, mehrere farb-
lose Kugelzooglöen, Fig. G. Der hyaline Rand dieser ist in der Grenz-
zone des Mittelfeldes radial gestrichelt Fig. 9. Das Mikroskop weist
in dieser Zoogloea einen gleichgliedrigen Bacillus nach Fig. 10. Wie
vorher Verarmung der Arten im engeren Wohngebiet bis auf eine.

so

N. J. C Müller,

d) Partikel aus einem faulen Apfel.
(Fig. 2-5, Taf. XXIX.)

Nach derselben Zeit, wie vorher, zeigt die Nährgelatine mehrere
sphärische Zoogloen, welche im Zentrum der Kultur zusammenfliessen,
Fig. 2, Taf. XXIX. Bei erscheint die Kultur (Fig. 3) homogen,
irisirend, durchaus scharf bogenlinig berandet, ohne Randvorstösse,
wie sie sich sonst in Zähnen oder Buchten kenntlich machen. Zahl-
reiche dichtere Kugel- und Ellipsenzoogloen, in Ketten und isolirt,
liegen in der Grundmasse. R R, Fig. 3, entspricht der Richtung
des Randes in der Kreisfigur 2. Die Adhäsionsschicht, welche aus
einer Spur der verdünnten Kultur auf dem Deckglas im trockenen
Zustand sich bildet, besteht (Fig. 4) aus Mäanderbelagstellen, welche
dicht, aber nicht lückenlos zusammengelagert erscheinen. Die mikro-
skopische Analyse ergibt Hormiscium und Bacterium (Fig. 5).

e) Strohhalm Partikel aus Acker du ng.
(Fig. 6-!', Taf. XXIX.)

Die Kultur nach 48 Stunden zeigt in Fig. 6 zwei Sphärenbe-
lage, von welchen in Fig. 7 eine Randpartie R R als ein kombi-
nirtes Zoogloensystem dargestellt ist. Dasselbe mag durch Apposition
der Sphären, zum Teil wohl auch durch Sprossung entstanden sein.
Es ist farblos. Die Sphären zum Teil in Parenchymaverband, zum Teil
mit freien Sphärenenden in Ketten. An einigen Punkten zeigt sich
eine zerrissene, im durchfallenden Lichte dunklere Belagschicht, bei
a und b z. B. Bei b deckt diese von der Scheidewand nach beiden
Sphären, so wie die Scytonemascheiden. Die jetzt herrschenden Zoo-
gloeen in dem Belag sind daher jedenfalls Sekundärdurchbrüche.
Im Klatschpräparat (Fig. 8) erscheint die Zellenstruktur, verwischt die
Masse in Fig. 7, ist daher als halbflüssig anzusehen. Sie enthält
Bazillen, Mikrookken und Diplokokken. (Fig. 9.)

VL Wasseruntersuchung.

(Wasser der Quellen , Bäche , Flüsse.)
A. Erste Methode Stichimpfung.
1) Wass erfüll ung. Das Wasser wird in der Nähe des Wohn-
ortes oder auf Reisen mit einem kleinen Trinkglas, welches vorher
mit absolutem Alkohol abgespült, sodann getrocknet war, geschöpft.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

31

2) Objektträgerprobe. Es wird (am Wohnort) sofort eine
Probe auf dem Objektträger bei 25 " C. eingetrocknet, das entstehende
Häutchen wird mit verschiedenen Pigmenten tingirt. In beiden
Fällen (Wohnort und Reise) wird eine Glasspindel, welche mit
verdünnter Luft gefüllt und beidseitig zwei zugeschmolzene, dünne
Glasröhrchen besitzt, unter dem Spiegel des zu untersuchenden
Wassers geöffnet, zur Hälfte mit dem Wasser gefüllt und sofort (auf
der ßeise mit Hülfe einer Löthlampe für Alkohol) zugeschmolzen.

3) Koch-Gelatinecylinder. Geimpft wird sofort mit einer
feinen Glasnadel, welche stecken bleibt in einem Nährgelatinecylinder
mit einem Stichkanal.

4) Ko ch- G e la tin e 0 b j e k 1 1 r ä ge r. Ebenso wird mit einer
Glasnadel geimpft in Tropfen von Nährgelatine auf dem Objektträger.

5) Gewöhnliche Gelatine und Gelatineadditions-
plättchen. Aus der angegangenen Kultur in 3) wird geimpft auf
sterilisirte Plättchen von gewöhnlicher Gelatine und auf ebensolche
Additionsplättchen. .

(3) Aus den Kulturen 4) und 5) werden mit der Glasnadel wie-
derum auf Nährgelatine die Reinkulturen derivirt.

Zwei Hauptmethoden entwickeln sich aus dem Vorstehenden:
I. Direkte Impfung eines kleineren oder grösseren Tropfens in
einen Tropfen von Nährgelatine auf dem Objektträger. Die Re-
quisiten sind zahlreiche Objektträger mit Glasschutzleisten, welche
mit Kanadabalsam aufgekittet sind. Ahnliche Objektträger mit einem
zweiten Paar kleinerer und niederer Schutzleisten, welche das Deck-
glas so aufnehmen, dass dieses wie auf einem hohlen Objektträger
liegt. Zuerst werden auf den Objektträgern, welche nur ein Paar
Glasschutzleisten am schmalen Rande tragen, die 18 mm Deckgläser
mit einem kleinsten Tröpfchen Zellenkitt, welches an einem Eck des
Deckglases vorsichtig aufgetragen wird, so festgekittet, dass sie mit
Leichtigkeit wieder abgehoben werden können. Auf das Deckglas
wird die bei 30** C. verflüssigte Gelatine in Tropfen von 10— 15 mm
Durchmesser aufgetragen. Die bakterienhaltige Flüssigkeit wird in
den Gelatinetropfen mit dickeren oder dünneren Glasstäben eingeimpft.
Die angegangene Kultur kann direkt für Vergrösserung wie ^^"li
abgemustert werden oder es M'ird das Deckglas um 180** gedreht
und auf die inneren Schutzleisten der zweiten Art von Objektträgern
gelegt, wenn starke Vergrösserungen zur W^irkung kommen sollen.

32

N. J. C. Maller,

II. Minimale Mengen des Wassers werden mit feinen Glas-
nadeln oder Platinanadeln in die Gelatine des Koch-Cylinders über-
tragen. Aus dieser Stichkultur wird sodann nach I in den Tropfen
auf dem Objektträger geimpft. Je nach der Dauer der Stichkultur
kommen viele oder wenige Bakterien zur Entwicklung, und zwar
muss notwendigerweise die Kultur eines Stromwassers, Rhein z. B.,
mit wenigen Arten beginnen, in einer mittleren Kulturphase muss
das Maximum der Artenzahl auftreten, zuletzt muss die Artenzahl
wieder sinken, und zwar genau so, wie wenn jemand für 100 Pflanzen-
arten eines gegebenen Wiesenareals in gegebenen Prozentsätzen die
Sämereien zusammenmischen würde, um ein gleichgrosses pflanzen-
leeres Areal so zu bepflanzen, wie er es an jenem Wiesenareal be-
obachtet hat. Er würde im Beginn hier von einer zur andern Vege-
tationsperiode eine kleinere, später eine grössere Artenzahl in der
von ihm gewünschten Menge antreffen, zuletzt würden weniger Arten,
wie erwartet war, dominirend werden.

B. Fraktionirung auf dem Objektträger, direkte Impfung.

]) Pumpwasser. (Vogelsang, Münden.)

(Fig. 16—21, Taf. XVIII und Fig. 1—6, Taf. XIX.)

Das Wasser wurde (am 20. Februar 1894) direkt mit dem
Glasstab in den Tropfen Koch- Gelatine auf dem Objektträger ein-
geimpft. Nach 48 Stunden sind sechs solcher Platten mit verschieden
gestalteten Sphären bedeckt, welche in den wesenthchen Zügen in
Fig. 16, Taf. XVIII abgebildet sind (s. Figurenerklärung der Fig. 16).
Wir heben von denselben die Zooglöen 1) und 2) heraus:

1) Amöbaähnliche Zooglöa mit
hyaliner Randzone ergibt bei
der Übertragung nach 16 Stun-
den die in Fig. 20 abgebildete
Kolonie dichtkörnig strukturlos
mit zwei Zonen kleiner Zoo-
glöen im Parenchymaverband,
welcher stäi-ker vergrössert in
Fig. 21 dargestellt ist. Das
Klatschpräparat weist hier Ba-
cillus nach (Fig. 1, Taf. XIX).

2) Homogene Kugelzooglöa mit
gevvimpertem Rande, über-
tragen im K C , ergiebt nach
16 Stunden die grosse gewim-
perte Sphäre Fig. 19, Taf.
XVIII, im Innern schwach
angedeutete Sterngranulirung.
Das Mikroskop weist hier einen
zwei-, selten viergliedrigen, be-
weglichen Bacillus nach (Fig.
2, Taf. XIX). Die Maasse für

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

33

A B im Zickzack belegene Kurz-
glieder. Die Maasse der Ba-
cillen sind für den längsten 7,85,
den kürzesten 1,43, das Mitt(>l
3,29 M. (s. Fig. 3, Taf. XIX).

Diese Bazillen (Vibrionen) sind :
der längste 3,21, der kürzeste
],25, das Mittel aus 13 Mes-
sungen 1,75 M. (S. Fig. 4,
Taf. XIX).

Die Zooglöa 3 der Fig. 16, Taf. XVIII ist amöbaartig mit ge-
zacktem hyalinem Rande, ergibt im Klatschpräparat die für Bacterium
charakteristische Randzone des Belages A, Fig. 17 und bei der Auf-
lösung vorherrschend Bacterium, verunreinigt durch wenige Bacillen,
Fig. 17B, Taf. XVIII.

Die hyalinen buchtig berandeten kleinen Sphären (7, Fig. 1 C,
Taf. XVIII) ergaben im Klatsch (Fig. 18) eine hyahne Sphäre a mit
lichterem Rande und, in der vorsichtigen Behandlung mit Wasser,
Micrococcus in zierlichen Mäandergruppen. Es sind somit im Ganzen
aus der Platte vier differente Bakterien isolirt.

Die mit der Nadel nicht weiter zerlegten Zooglöen aus dem-
selben Pumpwasser mögen hier beschrieben sein (Fig. 5 und G,
Taf. XIX). A eine grosse hyaline Sphäre, deren innere Kolonien
allmählich nach der Peripherie kleiner werden, der Rand verdämmert
nach der intakten Gelatine zu. B B, B„ gewimperte Sphären, ohne
Kernzone B„ ; ohne Kernzone mit Sprossung oder Apposition einer
kleineren Sphäre B ; mit Kernzonen in halb ausgeführter Teilung
und dicht dabei solche mit vollführter Teilung der Kernzone B. —
Ketten hyaliner Sphären mit scharfem Rande C. Kugelsphäre D.
Grosse Hyalinsphäre E. Kette abgeplatteter Zooglöen F. Kleinere
Hyalinsphäre G. Die Übertragung der Maasse aus der Gruppe C
ergibt nach 48 Stunden die Zoogloa (Fig. 6, Taf. XIX) mit dichter
grosser Kernzone, in deren Nähe mehrere hyaline Sphären liegen.
Man würde fehlgreifen, wollte man aus dem Form- und Lagerungs-
unterschied der 4 — 5 verschiedenen Zooglöen auf ebensoviel Spezies
von Bakterien schliessen. Von vornherein kommt hier in Erwägung,
dass eine und dieselbe Spezies je nach der Phase, in welcher sie
steht: für Bacillus z. B. vegetativer Zustand (1), Gliederung in Lang-
und Kurzfäden (2), Arthrosporenbildung (3) oder Bildung schwärmen-
der Glieder (3 a) Endosporenbildung (4) verschiedene Zoogloaformen
ausbildet. (Untersuchung dieses Gegenstandes weiter unten.)

Müller, Bakterien-Forschung.

3

34

N. J. C. Müller.

C. Stichimpfung im Nährgelatinecylinder und Über-
tragung der Kultur in Tropfen der Nährgelatine auf
dem Objektträger.

2) Rhein unterhalb Mainz. (Kaiserthor.)

Das Wasser wurde direkt in den Nährgelatinecylinder mit der
Platinnadel geimpft (Ende Dezember 1893) Fig. 1 und 2, Taf. XIII.
In den ersten Tagen des Januar 1894 wurde ein verdünnter Partikel
der Stichkultur auf Tropfen Koch-Gelatine geimpft. Diese Tropfen-
kultur ergibt nach 48 Stunden den Belag Fig. 5, Taf. XIII. Der-
selbe ist fein granulirt, farblos, mit zahlreichen Sterngranulationen
im Mittelfeld. Die mikroskopische Probe (Fig. 6 und 7, Taf. XIII)
lässt 12 verschiedene Mikrophyten unterscheiden. Durchaus vorherr-
schend sind geldroUenähnliche Ketten von Bazillen, zum Teil von
Spitzkegelform, die Gruppen N, Fig. 7, Taf. XIII. Sie liegen
mit der Langseite geschichtet, einige sind w^ie Keile aus der
Reihe vorragend mit der stumpfen Keilseite. Es folgen Glieder
einer höheren Alge A, Fig. 6, Taf. XIII, grössere Diplokokken B C D,
rotirende Ellipsoi'de E, Bacillen dreigliederig , G Gonidienketten,
H bewegliche Diplobakterien, unbewegliche kurze Bazillen I. Un-
dulirend bewegliche Vibrionen K und die feinen Stäbchen von
Bazillen L und M.

Aus demselben Wasser, welches in der zugeschmolzenen Glas-
spindel aufbewahrt war, wurde am 3. Mai 1894 geimpft. Nach
fünf Tagen ist die Kultur im Stichkanal und im Meniscus angegangen,
Fig. 3, Taf. XIII. Die jetzt vorgenommene Impfung in Nährgelatine
auf dem Objektträger ergibt eine sphärische, schillerndgrüne, flüssige
Kultur des Bacillus fluorescens? Fig. 4, Taf. XIII.

3) Rhein oberhalb Mannheim. (Schwimmschule.)

Das Wasser wurde am 27. Dezember 1893 in die Glasspindel
(Fig. 16, Taf. XII) eingeschlossen, gleichzeitig wurde die Stichimpfung
(Fig. 14, Taf. XII) ausgeführt. Diese ergibt bei Zimmertemperatur
(12 — 14° C.) am 2. Januar 1894 leise Trübung im Meniscus und
im Stichkanal. Am 5. Januar ist der Meniscus blasig nach unten
erweitert, der Stichkanal örtlich dichter belegt. Die halbflüssige
Masse aus dem Stichkanal ergibt in einem Tropfen Nährgelatine
auf dem Objektträger einen fein granulirten Kreisbelag, mit lichter

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

35

Randzone (Fig. 15, Taf. XII). Die Kultur begann erst am 10. Januar
vom Meniscus aus grün zu schillern. Die Gelatine blieb fest. Sie war
nach mehreren Tagen zur Hälfte grün, zur andern Hälfte farblos
(Fig. 10, Taf. XIII). Die Untersuchung ergibt jetzt den Bacillus
Fig. 11, Taf. XIII vorherrschend.

Aus der Stichkultur Fig. 14, Taf. XII wurde verdünnte In-
fektionsmasse am 24. Februar 1894 auf mehreren Objektträgern, in
Tropfen von Nährgelatine übertragen. (Fig. 7 — 9, Taf. XIX.) Die
hier zu betrachtende Entwicklung des Kulturbelages dauerte 24 Stun-
den. Fig. 7, Taf. XIX ergibt in A Gruppe von Kugelzooglöen in
schwachem gegenseitigen Kontakt. B eine überaus zierliche und
für das Wesen der hier einschlägigen Erscheinungen beweiskräftige
Konfiguration. Der Rand der Kultur zeigt die öfter schon betonte,
epithelähnliche Lagerung der Zooglöen. Das Mittelfeld ist ausgefüllt
durch Gruppen von Zooglöen in vollständigem Parenchymaverband.
Solche Gruppen aber sind getrennt durch intercellulare Flächen in-
takter Gelatine. Vom Zentrum strahlen fünf fast gleiche Reihen
dichterer (dichter bevölkerter) Zooglöen. Diese Anordnung entspricht
der reinen Aktinomorphie im Sinne der von Sachs'schen Emulsions-
figuren. Wenig später, Fig. 7 c, Taf. XIX, ist im Mittelfeld der
Parenchymakontakt aufgehoben. Dort liegen jetzt dichtere Granu-
lationen. Der Rand zeigt nur schwachen Kontakt der Epithelvakuolen,
die freie Aussenfläche derselben ist gezackelt, gezähnelt. Die Auf-
lösung schliesst ab mit der Fig. 7 D, Taf. XIX. Im Mittelfeld eine
dichter gekörnelte Kreiszone, die Peripherie ist dichter gewimpert
gekörnelt. Die nunmehr vorgenommene Übertragung in
frische Tropfen der Nährgelatine ergibt, nach 12 Stun-
den, die analogen Kulturen, wenn schon nicht in denselben Kreis-
belagformen. Fig. A 9, Taf. XIX entspricht A 7, Taf XIX, unter-
scheidet sich nur durch etwas mehr ausgeprägten Kontakt in einigen
Zooglöengruppen. Fig. B 9, Taf. XIX zu Fig. B 7, Taf. XIX zeigt
eine Belagstelle, in welcher die epithelähnliche Ordnung soeben an-
gedeutet ist und Kugelzooglöen im halben Kontakt. Fig. C D 9,
Taf. XIX Kreisbelag fast homogen, immerhin etwas dichtere Zentral-
zone, der Rand schwach wimperstrahlig zu Fig. C D 7, Taf. XIX.
In derselben Ordnung sind die Bilder der Bacillen für die Zustände
Fig. 7, Taf. XIX, zusammengestellt in Fig. 8, Taf. XIX. A Wenig
langgliedrige zahlreiche kurzgliedrige Bazillen. B Bogenlinige Lang-

36

N. J. C. Müller,

fäden und zahlreiche Arthrosporen. C Kurzgliedrige vielleicht die
Descendenten der Arthrosporen in B. D Nur kurzgliedrige Bacillen.

4) Fulda bei Münden.
(Fig. 8—14, Taf. XI.)

Das Wasser wurde am 10. Dezember nach den oben beschriebenen
Methoden in die Glasspindel eingeschlossen und gleichzeitig wurde
eine Stichimpfung ausgeführt. (Fig. 3, Taf. XI.) Am 13. Dezember
(16° C.) zeigte sich die Trübung, am 4. Januar war die Gelatine bis
35 mm unter dem Meniscus trübflüssig. Aus dem Kulturbestand vom
13. Dezember wurde eine Verdünnung auf Nährgelatine auf dem
Objektträger übertragen. Nach 36 Stunden zeigte diese derivirte
Kultur mehrere sphärische Kolonien Fig. 4.

Die Entwicklung dieser liegt in der Figurenkette Fig. 5 und 6.
Die Kultur Fig. 6 elliptisch im Mittelfeld mit Sternkonfigurationen,
am Rande welhg, mit dichterer Randzone. Yon dieser strahlte aus
im Verlauf der 36 Stunden die Kultur Fig. 5. Hier sind es Kon-
klomerate von Kugelzooglöen in einer zur Strahlungsrichtung quer-
liegenden Platte, in welcher solche Zooglöen im halben Parenchymaver-
band liegen. Hieran schliesst sich die hyaline Masse mit Halbsphären,^
am Rand bedeckt mit Mäandermamellen. Am 16. Dezember, also an-
nähernd dreimal 24 Stunden nach der Impfung, liegt eine Kultur so wie
die Fig. 9 darstellt. Der Kreisbelag hat am Rand eine Kette von
Zooglöen, welche wie Epithelzellen an zwei Flächen der Berührung
plan, an der dem Mittelfeld und an der der Peripherie zugekehrten
gewölbt erscheinen. Das Mittelfeld ist dichter sternartig granulirt.
In halber Deckung liegt über dieser Kultur eine zweite, welche einst-
weilen als Sekundärausflusskultur angesehen sein möge, mit ähn-
lichem Rand, an diesem zwei stärker sich auswölbende Zooglöen a, b.

Die gleichzeitige Übertragung aus der Stichkultur, auf gewöhn-
liche , wassergesättigte Gelatineplatten ergibt Strahlengranulirung
Fig. 8A in dem entstehenden Belage. Nach 48 Stunden ist die
Druckstelle in der gewöhnlichen Gelatine Fig. 7 mit Mäander-
Mamellen oder hirnförmiger Masse bedeckt. Die Gelatine ist in ihrem
Molekulargefüge, wie die Polarisationsfigur darlegt, nicht verändert.
Die mikroskopischen Proben, in Tinktionspräparaten festgelegt, aus
der Stichkultur Fig. 3, Taf. XI ergeben :

Am 13. Dezember 1893: Gruppe eines Bacterium in Zwil-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

37

lingen und isolirten Individuen Fig. 11, Taf. XI in der Grossen-
relation zu einem Bacillus. Fig. 10 — 12 geben die Adhäsionsschicht
der Bacillen, Fig. 13 A bis I, die Gruppirung dieser in einer am
16. Dezember hergestellten Adhäsionsschicht, welche mit Gentiana-
■violett gefärbt wurde. Das Pigment definirt das Bacterium blau, den
Bacillus weinrot. Fig. 14 ergibt grössere Partieen der Adhäsionsschicht,
den Bacillus in der Langfaden- und Arthrosporenbildung begriffen.

5) Wasser eines Bächleins, welches im Vogelsang (Münden)
in die Fulda fällt.
(Fig 10—13, Taf. XII und Fig. 15, 16, 17, 19 Taf. XI.)

Die am 10. Dezember 1894 ausgeführte Stichimpfung zeigte
schon nach drei Tagen AVolkensäcke , welche tief in die Gelatine
hereinragen. Die Gelatine wird verflüssigt unter Gasentbindung und
unter Bildung eines weissen Sedimentes. Am 4. Januar ist die
Gelatine bis 30 mm unter dem Meniscus verflüssigt und im flüssigen
Teile grünschillernd. Am 13. Dezember 1893 wurde die Materie der
Stichkultur in drei Impfpunkten in Nährgelatine auf dem Objektträger
übertragen. Schon nach 24 Stunden zeigt sich in Fig. 12, Taf. XII
die fast genau aktinomorphe, feine mit Mamellen bedeckte , bogen-
hnig begrenzte Kultur mit fünf zentralen Zooglöenstrahlen. In Fig. 13,
Taf. XII eine ebensolche, dichtere Zentralkultur mit zwei ungleichen
Durchbrüchen. Der eine ist mit feinen Halbsphären bedeckt, der
andere ein strukturloser feiner farbloser Belag. Die mikroskopische
Analyse ergibt aus der Stichkultur am 13. Dezember 1893 (man
vergh die Pigurenerklärung und die Fig. 15, 16, 17, 19, Taf. XI)
mindestens 5 — 6 verschiedene Bakterien, unter welchen mindestens
zwei mit Eigenbewegung (nicht Molekularbewegung Brown) be-
gabt sind.

6) Wasser einer in der Nähe des Fuldaspiegels be-
legenen Pumpe (Vogelsang, Münden).
(Fig. 1—9, Taf. XII).

Nach der früheren Methode hergestellt, zeigte die Stichkultur
vom 13. Dezember 1893, Fig. 1 nach 7 Tagen, 16 C. tiefe, flüssige
Wolkensäcke von gelber Farbe. Bis zum 4. Januar, 22 Tage nach
der Impfung, war die Gelatine auf 36 mm unter dem Meniscus flüssig.
Am 13. Dezember wurde von der Masse der Stichkultur in Tropfen

38

N. J. C. Müller,

von Nährgelatine auf dem Objektträger geimpft, Fig. 2. Nach
24 Stunden kommen zwei Formen von Kolonien zum Vorschein, welche
in mehrfacher Hinsicht zum Nachdenken über die Vorgänge heraus-
fordern. Die Kultur Fig. 3 ist schmal elliptisch und hat in ihrer Nähe
zahlreiche Kugelzooglöen im halben Parenchymaverbande. Sie ist im
Mittelfeld mit Stern konfigurationen versehen, dort dichter granulirt,
vfie in der fein gezackten Randzone. Diese ist hyalin und hat zahl-
reiche Radialstreifen, welche vom Mittelfeld ausstrahlen. Ich nenne
diese Figur polarisirt im Sinne der von Sachsschen
Emulsionsfiguren. Fig. 4 zur selben Zeit stellt einen breit-
elliptischen Belag dar, mit ähnlicher Ausbildung des Mittelfeldes, deut-
licher ausgeprägter Randzähnelung , deutlicher Radialstreifung des
Randes und einer etwas exzentrisch zentralen, zierlichen Gruppe, dichter
bevölkerter Zooglöen in Ketten, welche von einem Punkte so aus-
strahlen, dass diese Figur nicht aktinomorph, sondern in der Richtung^
der grossen EHipsenaxe des Gesamtbelages gefördert erscheint. Ich
definire diese Figur im Sinne der von Sachsschen Darlegung der
Emulsionsfiguren „als eine Kombinati on der Aktinom orphie
mit der eins eitigen Polarisation." (Die theoretische Behand-
lung dieser Sache siehe weiter unten.) Zwei Tage später ist die
Konfiguration verwischt, die Kultur ist flüssig, zeigt die Anordnung
der Fig. 5: Dichtere Zentralzone, Ringzone mit Granulationen, die
Zackung des Randes ist vernichtet. Die mikroskopische Probe Fig. 6.
und 7 ergibt nur Bacillus und jene Bacteriumart in der richtigen
Grössenrelation in den genannten Figuren gezeichnet. Der Ubergang
der Kultur von Fig. 4 nach 5 endet bis zum 16. Dezember mit
trüben Flocken Fig. 8 und 9.

7) Wasser aus einem Feuerteich (Münden).
(Fig. 18 — 29. Taf. XII und Fig. 9—12, Taf. XIII).

Die Stichkultur vom 18. Dezember 1893 zeigt nach 2 — 3 Tagen
die Gelatine auf 35 mm unter dem Spiegel des Meniscus verflüssigt
(Fig. 18, Taf. XII).

Das Wasser direkt in Nährgelatine auf dem Objekt-
träger geimpft am 18. Dezember 1893, ergibt nach 24 Stunden
einen Belag mit dichter Zentralzone. Der Gesamtbelag ist milchig
trübe. Derselbe Belag' bei ^/', Fig. 20, Taf. XII zeigt grobe Kristall-
Komplexe der Peripherie Fig. 21 und Fig. 22 und feine des Zentrums

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

39

Fig. 22. Diese Kultur ergab Rein-Micrococcus (Fig. 23). Die Kul-
tur trocknete ein und wurde in diesem Zustand aufbewahrt. Am
9. Januar 1894 wurde sie mit Wasser angerieben und in Nährgelatine
auf dem Objektträger geimpft. Fig. 26, 27 A geben den Überblick
über die Vorgänge. Die Kultur Fig. 26 erscheint bei durchfallendem
Licht weiss, hyalin, sie ist bogenlinig berandet und zeigt feine Ma-
mellen im Mittelfeld und am Rande. Sie ist nach der einen Seite
hin ausgetreten, zeigt in der Pripiärsphäre das aktinomorphe Ketten-
system von Zooglöen. Fig. 27 und 29 dürfen als spätere Phasen
angesehen werden. Auch sie besitzen jene Zooglöen. Beide er-
scheinen im auffallenden Licht irisirend, im durchfallenden in der
Grundmasse braun. Glatter Rand mit Radialstreifung und eigentüm-
liche Bogenfiguren , welche unregelmässig verteilt sind, geben, den
Gebilden ein auffälliges Gepräge. Ganz hyaline, blasige Durchbrüche
dieses Belages bei den Pfeilen kommen bei der einen zweimal, bei
der anderen einmal vor. Die Kultur Fig. 29 ist von einem reich-
gliedrigen System von hyahnen Kugelzooglöen in halbem Parenchyma-
verband umgeben. Zur Seite rechts von der Figur sind diese stärker,
3Go/i^ vergrössert. (Der Interessent wird auf diese Fig. 29 sein Augen-
merk richten, wegen der Synopsis der Kulturformen, siehe unten).
Eine der Kulturen wurde unter dem Deckglas zerdrückt. Es entstand
der dünne Belag Fig. 28, welcher die Micrococcuslagerung in einer
minimalen Partie der Fig. 28 zeigt, wie sie in Fig. 8, Taf. XIII bei
S J. VIII II O2 dargestellt ist. Die Kugelzooglöen der Fig. 29 konnten
mit der Glasnadel leicht belangt werden. Die erhaltene Masse er-
gibt in Nährgelatine auf dem Objektträger eine Sphärenkolonie,
welche sich Fig. 9, Taf XIII als Fast-Reinbacillus erweist.

8) Wasser aus dem Salzbach (Wiesbaden)
(nimmt einen Teil der Kanalwasser der Stadt Wiesbaden auf und

fällt 3 — 4 km unterhalb der Stadt bei Biebrich in den Rhein).
(Fig. 1-5, Taf. XIV. Fig. 12, Taf. XIV. Fig. 13—17, Taf. XIII).

Zwei mit dem Wasser benetzte feine Glasnadeln wurden am
7. Januar in den Nährgelatinecylinder versenkt. Am 10. Januar
zeigen sich trübe Zonen in der Nähe der Nadeln Fig. 1, Taf. XIV.
Am 14. Januar, nachdem die beiden Nadeln herausgenommen waren,
sind die beiden Säcke in der Gelatine trübflüssig.

A Die Masse der ersten Nadel, 5 Stunden nach der Impfung,

40

N. J. C. Müller,

in Tropfen von Nährgelatine auf dem Objektträger übertragen, zeigt
sie den in Fig. 4, Taf. XIV A nach B sehr beachtenswerten Über-
gang in der Kultur. Der Anfangszustand, Fig. 4 oben links, zeigt
ein unregelmässig granulirtes Mittelfeld, hyahnen radial zierlich ge-
streiften Kand die Peripherie bogenlinig gekerbt. Der spätere Zu-
stand, Fig. 4 rechts, zeigt die Kultur elliptisch in der grossen Ellipsen-
axe einen eigentümlichen Sekundärausfluss, welcher die zierliche
Randzone der Hauptkultur durchbricht. Der Rand dieser letzteren
zeigt eine Kette von Sphärenzooglöen im epithelähnlichen Verband.
Das Mittelfeld ist hyalin, bedeckt mit grösseren und kleineren Kugel-
zooglöen, welche vereinzelt und in Kettenverband stehen. Die An-
ordnung kann auch umgekehrt aufgefasst werden. Da jene äusserste
epithelähnliche Randzone samt dem zugehörigen in der Zeichnung
lichter gehaltenen Mittelfeld etwas tiefer liegt, ist jedenfalls die zen-
tralbelegene Kultur die primäre. Die Fetzen einer Schicht, welche
sie bedeckt, bildeten ursprünglich den kontinuirlichen ersten Belag,
welcher gesprengt, eine homogen granulirte, nach der Austrittsstelle
bogenlinig begrenzte, sekundäre Kulturzone austreten lässt, aus
welcher endlich die mit Kettenzooglöen epithelähnlich berandete
Ternärkultur hervorging. Die Masse aus derselben Stichkultur
Fig. 1, Taf. XIV, welche 10 Stunden nach der Impfung mit der
zweiten Nadel in Nährgelatine auf dem Objektträger geimpft wurde,
zeigt ein ganz anderesBild der Entwicklung (Fig. 13 und 14, Taf. XIII).
Die Kultur entwickelt sich rein kreisrund, sie ist am Rand bogen-
linig gebuchtet, die Randzone erhaben wie ein Tellerrand, die ganze
Randfläche mit kleinen granulirten Halbsphären bedeckt. Im End-
zustand Fig. 14 ist das Mittelfeld zerrissen, plan, fein granulirt.

Mikroskopische Probe der ersten Nadel.
(Fig. 2 und 3, Taf. XIV.)

Wir heben hier nochmals den Zooglöenrand der Fig. 4, Taf. XIV
hervor, derselbe ist in Fig. 3, Taf. XIV bei 360 gezeichnet, ein
überaus zartes System von Bläschen, welche nach zwei, unter rechtem
Winkel sich kreuzenden Richtungen fein punktirt erscheinen. Bei
a und b ein solches Gebilde mit Wandbildung, Initiale der Teilung.
Die erste Probe lässt unterscheiden Fig. 2, Taf. XIV: a eine relativ
grosse Micrococcaee in Hexagonal- und Tetragonallagerung. —
b, c Gliederfäden mit ungleich dichten Querwänden, welche auf un-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

41

gleiche Phasen der Querwandbildung hinweisen, d Ebensolche von ge-
ringerem Querdurchmesser. — Sarcinaähnliche Kugeln in Halbirung
und in Quadrantenteilung, f Gruppe ähnlicher in verschiedener gegen-
seitiger Lagerung der Teilungszustände. — g Dickere Kurzstäbe
eines Bacillus im Zickzack gelagert. — h Ahnliche, viergliedrige
Bacillen von geringerem Querdurchmesser. — k — i Bacteriumgruppen
— m langelliptische Zwillinge, n n, . . . solche in Gruppirung
mit Bazillen.

Mikroskopische Probe der zweiten Nadel.
(Fig. 12, Taf. XIV.)

Auch hier möge auf den entsprechenden Kulturbelag Fig. 13
und 14, Taf. XIII zurückverwiesen sein. Die am ]4. Januar heraus-
gehobene Masse wurde mit Fuchsin, Gentianaviolett und Bismarck-
braun tingirt in Präparaten festgelegt.

Gentianaviolett hebt gut hervor: Sehr lange, kurz-
gliedrige, in Arthrosporenbildung begriffene, zum Teil flachspiralige
Bacillen a a, u. s. f. . . — Die Ellipsenzwillinge der Bacteriumform b,
eine Bacillengruppe h — eine Micrococcusgruppe i — ein Macro-
coccusgruppe k.

Fuchsin hebt gut heraus: Zwei Gruppen der Bacterium-
form in Teilung und mit isolirten Individuen c und o.

Bismarckbraun ebenso : Eine Mikrokokkengruppe in Hexa-
gonallagerung f, eine ebensolche in Tetragonallagerung f. Die Ba-
zillengruppen e e, eine Bacillengruppe mit Kurzgliedern und Arthro-
sporen g — eine breite im Bacillus b, — und jene in der Fig. 2,
Taf. XIV schon gefundenen Tetradengruppen d und e (formähnlich
mit Sarcina).

Im Hinblick auf die genaueren Studien des Kulturverhaltens
von Reinkulturen (s. weiter unten) darf hier darauf hingewiesen
werden, dass eine auffällige Revolution in der Formentwicklung, wie
sie in der Figurenreihe 3, 4, Taf. XIV zum Ausdruck kommt, auf
eine gemischte Kultur und aufdieSuccession mehrerer
Mikroben hinweist.

42

N. J. C. Müller,

9) Wasser des Neckars bei Heidelberg, 31. März 1893.
(Fig. 1, 2, Taf. XI,, Fig. G, 7, Taf. XIV.)

Die Stichirapfung vom 21. März 1893 ergibt nach drei Ab-
musterungen eine Verflüssigung bis 48 mm unter dem Meniscus
(16'' C). Das Tinktionsprä-parat, sechs Tage nach der Impfung,
ergibt Bacillus und Bakterien vorherrschend (Fig. 2, Taf. XI).

Neckarvs^asser Heidelberg, 13. März 1894.
(Fig. 5—11, Taf. XXVII.)

Die Stichimpfung ergibt nach zwei Tagen (Zimmertemperatur
13—15° C), Fig. 5, Taf. XXVII, blasige Kolonien am Stichkanal;
diese Belage sind farblos; weitere drei Tage, im ganzen fünf Tage
nach der Impfung, einen tief in die Gelatine ragenden flüssigen Sack,
dieser wolkig trübe. Vom Meniscus aus fängt die Kultur an, grün
zu schillern. Vierundzwanzig Stunden nach der Impfung ergibt eine
Probe in Tropfen von Nährgelatine, auf dem Objektträger über-
tragen, eine Kreiskolonie, Fig. 8, welche, im Mittelfeld granulirt,
mit zerstreuten Sternkonfigurationen versehen, eine hyaline, bogen-
linig gebuchtete Randzone zeigt, bei a eine einzige, exzentrisch
liegende Sphärenzooglöa. Der Rand in B, ^^"/i vergrössert, ist mit
gefiederten Radialgranulirungen versehen. Nach IG Stunden zeigt
eine ähnliche Objektträgerkultur, Fig. 9, eine farblose Grundmasse
mit zwei Halbsphären, welche grünschillernd und halbflüssig sind.
Die mikroskopische Probe aus dieser grünen Flüssigkeit ergibt,
Fig. 10, sehr kleine Bacillen, lebhaft schwärmend, im Spiral oder
in der Lage, wie sie ein Rechteck bilden mit Arthrosporenketten,
hier eingetrocknet, mit Bismarckbraun gezeichnet. Von der grünen
Masse der Kultur, Fig. 9, auf eine wassergesättigte Platte gewöhnlicher
Gelatine (Fig. 11) übertragen, entwickelte sich, als sehr dünner Belag,
die Massenkultur mit zusammenfliessenden Partialkolonien , vielfach
buchtige, landkartenähnliche Konfiguration, zwei Ringkulturen A und
B des aktinomorphen und elHptischen Typus. In einer der Über-
tragungen auf Nährgelatine endhch wurden auch die Zooglöenformen
A B C D, Fig. 7 erzielt: A strukturloser Ellipsenbelag, B ebensol-
cher mit granulirter Grundmasse, gekerbtem Rand und exzentrisch
liegender dichterer Kernzone. C Gruppe freier Kugelzooglöen, ohne
Parenchymaverband. D elhptischer Belag, fein granulirt, mit schar-

Beitr.äge zur Kenntnis der Bakterien.

45

fem Rand, zahllosen endogenen Kugelzooglöen, ohne Verband, und
einer Nachbargruppe a von Zooglöen.

Neckar bei Heidelberg, 24. Dezember 1893.
(Fig. 1-7, Taf. XV, Fig. 6, 7, Taf. XIV.)

Sechs Tage nach der Ausführung der Stichimpfung (Zimmer-
temperatur 13 — 15 "C.) erscheint der Stichkanal sackartig erweitert;
unter dem Meniscus vier farblos^ Sphären (Fig. 1, Taf. XV). Am
5. Januar 1894, 11 — 12 Tage nach der Impfung, ist die Gelatine
auf 35 mm unter dem Meniscus trübflüssig (Fig. 1 B). Die am
5. Januar 1894 bewirkten Übertragungen zeigten schon nach 24 Stun-
den entschiedenen Impferfolg. Auf einer kreisrunden Platte gewöhn-
licher Gelatine (Fig. 2, 3) kreisrunde, farblose, granulirte Belage,
mit bogenhnig gekerbtem Rande zentraler dichterer Zone. Eben-
solche auf dem Gelatineplättchen Fig. 5 zeigen keine Veränderung
der Molekularstruktur der Gelatine. Anders liegt dies für Additions-
plättchen Fig. 6, wo zentrale Depression auf Rot I und Verstärkung
der Interferenz am Rande wahrgenommen wird. Auf Tropfen von
Nährgelatine entsteht ein dünner, farbloser Belag. Die mikrosko-
pische Analyse der Probe aus dem Koch-Gelatinecylinder Fig. 6, 7,
Taf. XIV ergibt: A Gruppe kleinzeUiger Bazillen, zum Teil in
Zickzacklagerung. B dreigliederige, in den Pfeilrichtungen beweg-
liche Vibrionen, C grössere Bazillen, die Kurzglieder im Spiral. D
F G Gruppen von Bazillen mit der Schichtung in Gruppen parallel
der Längswand. Fig. 7, Taf. XIV. Micrococcus und Bazillen; die
letzteren erscheinen hakenförmig gekrümmt.

10) Fulda-Eis, 16. Januar 1894.
(Fig. 14 — 1(3, Taf. XV.)

Die Impfung geschah direkt von dem Schmelzwasser des Eis-
blockes in Tropfen von Nährgelatine auf dem Objektträger. Schon
nach 24 Stunden zeigen sich Zooglöen von verschiedener Form
(Fig. 14). Der Entwickelungsgang für eine Form ist in Fig. 15
niedergelegt: A hyaliner feinkörniger Belag nach 12 Stunden, B kom-
binirte Zooglöa, bestehend aus einer dichteren Halbsphäre mit lich-
terer Halbsphäre, welche eine Kernzone aufweist. Daneben drei
kleinere Kugelzooglöen a, b, c. Die Kultur schreitet bei 12 — 14*' C.
im Thermostaten rasch vor. Fig. 16 gibt eine solche Kultur, 36 Stun-

44

N. J. C. MiUler,

den nach der Impfung. Es ist eine kombinirte Zooglöa; Appo-
sition und vielleicht auch Sprossung kommen hier in Betracht. Die
eine Hälfte zeigt eine Sphärenzooglöa auf einer Halbsphäre, diese
ruht auf der hyalinen Grundmasse mit doppelt gebuchtetem Rande.
Die andere Hälfte zeigt zwei Kugelzooglöen a a, auf dichteren, mit
Mäandern durchsetzten Radialstrahlen grösserer Dichte, diese alle
auf ähnlich am Rande doppelt gebuchteter hyaliner Grundsubstanz.
Daneben zwei Kugelzooglöen in Apposition, jede mit scharf kontu-
rirter Kernzone.

11) Wasser der Heidelberger Wasserleitung.
(Taf. XV, Fig. 10, 13).

Von drei im Dezember 1893 ausgeführten Stichimpfungen der
Wasser aus städtischen Wasserleitungen gaben zwei, Wiesbaden
und Mannheim, keinen Impferfolg. Diese waren zu jener Zeit bak-
terienrein.') Die Heidelberger Wasserleitung ergab in der Stich-
kultur Fig. 10, Taf. XV, vom 24. Dezember 1893 am 2. Januar
1894 einen ausserordentlich dünnen Belag, welcher sich in dem Ka-
pillarraum zwischen der Gelatine und Glaswand in Kreiszonen weiter-
bildet (Fig. 10 B). Es ist dies nach der mikroskopischen Probe die
Reinkultur eines beweglichen dreigliedrigen Bacillus Fig. 12 und 13,
v^elcher im Ruhezustand Langfäden und zweigliedrige Kurzfäden
Fig. 11, Taf. XV ausbildet. .

12) Wasser einer Pumpe in Mannheim.
(Fig. 8-9, Taf. XV und Fig, 8, Taf. XIV.)

Die am 27. Dezember 1893 ausgeführte Stichimpfung ergibt
am 2. Januar 1894 zahlreiche dichtere und hellere Sphären, davon
eine mit Kernzone Fig. 8, Taf. XV (Zimmertemperatur 10" — 14").
Die Kultur ist am 5. Januar auf 25 mm Tiefe verflüssigt. Die Impfung
aus dem Cylinder auf dem Objektträger zeigt nach 24 Stunden
Fig. 9 A, Taf. XV mehrere Kolonien. Die Drucksphäre B mit Aus-
fluss zeigt granulirte, wenig scharf umschriebene Sphären. C Wander-
kolonien in der Austrittsstelle der Sphäre, a, b, c, d aufeinanderfolgende
Entwickelungsstadien derZooglöen bei^''"/^ Die mikroskopische Probe

Soweit das angewandte Näbrsubstrat die Entscheidung der Frage znlässt.
Man vergleiche die Schlussbetrachtung.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

45-

aus der Sticlikultur ergibt a, b, c, d dreigliedrige Bazillen. Fig. 8^
Taf. XIV sehr kleine Bazillen im Zickzack und falscher Astbildung
und Makrokokkengruppen B und C.

13) Wassertropfen verdampft und Auftragen von Nähr-
gelatine auf den festen Rückstand.
(Fig. 4, Taf. XXII. Fig. 15 (I-IV) Taf. XXVIII)

Am Kreisrand der Berührungsfläche des Tropfens auf dem Objekt-
träger bleibt eine weisse Ringzone. In dieser liegen vielgestaltige kleine
Sphären Fig. 4, Taf. XXII, deren Durchmesser beträchtlich grosser ist^
wie der Durchmesser von Bakteriensporen oder Bakterienkurzstäben.
Die Gebilde sind Kalksphäroide (amorphe Niederschläge von kohlen-
saurem Kalk), in welchen Schichten verschiedener Lichtbrechung unter-
schieden werden (Famintzin's Kalksphäroi'de.) Gelegentlich schliessen
diese Bakterienkeime ein. Nach der Behandlung mit verdünnter Essig-
säure bleiben die Bakterieneinschlüsse zurück c, f, Fig. 4, Taf. XXII.
Die Kreisfläche, in welcher solche Sphäroide lagern, wurde mit einem
winzigen Tröpfchen Nährgelatine bedeckt, die Kultur ergibt in der
Feuchtkammer im Thermostaten (18" C.) in IV, Fig. 15, Taf. XXVIII
in a, b, c, d, e einen Keimungsvorgang für Bacillus aus der Endospore,
in f und m ebenso für Kurzstäbe, in n, o, r Keimung und Gliederung
des vegetativen Fadens. Die Figuren V — VII zeigen die analogen
Vorgänge anderer hier xmtersuchter Bakterien und Stichkulturen.

D) Bakterienhäute auf Wasserbehältern.

Die zweite Methode, gegenüber den Bakterienkulturen in Nähr-
gelatine, beruht in der Herstellung und Beobachtung von Häuten,
welche auf stagnirendem Wasser sich nach wenig Stunden, beziehent-
lich Tagen bilden. Ein Blick auf die Vorgänge in einem Trinkglas
Brunnenwasser, es möge dies stagnirendes Wasser einer Pumpe sein,
ergibt dieses : Der Vorrat an assimilabelen Kohlenstoflfverbindungen
ist, wenn das Wasser geschöpft wird, in der Regel nicht ausreichend,
um die in ihm enthaltenen Keime der Saprophyten zu so reicher
Vegetation zu bringen, wie man an den Häuten auf der Oberfläche
nach 6 — 8 Tagen beobachtet. f]s müssen daher chlorophyllhaltige
Algen eine assimilatorische Rolle spielen, um den Saprophyten während
jener beschränkten Zahl von 2 — 8 Tagen das plastische Material zu
hefern. Andererseits muss die Luftzufuhr entscheidenden Einfluss

46

N. J. C, Müller,

haben. Hieraus ergeben sich vier Differenzen für die Analyse eines
und desselben Wassers. Von zwei Kulturbehältern gleichen Inhaltes,
in Form von längeren Glascylindern, wird einer verdunkelt;
der andere kommt in das diffuse Licht des Thermostaten zu stehen.
Ebenso ist mit zwei Kulturbehältern von der Form eines kurzen
•Oylinders, mit grösserer Fläche (Trinkgläser) zu verfahren.

1) Die vier Differenzversuche.

Am 6. Februar 1894 wurden mit Pumpwasser beschickt:
Wasserglas für das Licht ebenso für die Finsternis

Cylinder „ „ „ „ „ „

Die beiden im Licht stehenden befinden sich im diffusen Tageslicht,
Tenster nach Osten. Die beiden für die Dunkelheit sind aussen mit
Stanniol belegt und stehen in demselben Thermostaten unter einem
Blecheimer. Die Wasserflächen ergeben am 10. Februar eine merk-
liche Haut (sie stehen vor Staub geschützt im Thermostaten) Über-
tragung der Häute auf Objektträger erfolgte am Sonntag den 11. Februar.

I. Dif f er en z- Oy lin d er 17 cm hoch, 5 cm Öffnung im
Dunkeln 20» C. (Fig. 1—3, Taf. XVIL)

Sechs Tage nach dem Beginn des Versuches zeigt die mit dem
Deckglas herausgehobene Haut des Wasserspiegels feine Granu-
lierung und örtliche Verstärkung derselben (Fig. 1). Zur Entwickelung
kommen eine grüne Alge a, b, c, d. Die Bacteriumgruppe bei H.
Im übrigen ist ein Kurzstabbacillus A, B, C über die Fläche herrschend.
Die Charakteristik liegt in der Bildung gesonderter Gruppen, welche
durch lockere Ausstrahlung von einer zur andern Gruppe verbunden
sind. Ein anderes Gefüge zeigen die Kolonien E, F, G. Fig. 3
gibt den Unterschied in der gegenseitigen Lage zweier Gruppen,
wie C und F z. B. Fig. 2. Geringste Luftwirkung im tiefen Cylinder,
im Dunkeln, ergibt somit die grösste Artenarmut.

II. Dif f er e n z - Cy 1 in d e r , 27 cm Höhe, 3,5 cm Öffnung im
diffusen Tageslicht 28" C. 6 Tage. (Fig. 5-7, Taf. XVI.)

Die Haut ist dichter, konsistenter und setzt sich aus zahlreichen
bogenlinig begrenzten Gruppen zusammen , wie sie Fig. 5 B und
Fig. 6 darstellen. Das System Fig. 6 ist schwach durchsetzt von
Cladothrixfäden , zeigt ausserdem kleine Gruppen von Micrococcus

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

47

und Bacterium. In den Inseln derselben Figur liegen Bacillengruppen,
mit der charakteristischen Langfadenbildung, mit falscher Astbildung
und der Bildung von Kurzgliedern. Fig. 5 A und Fig. 7.

III. Differenz-Wasserglas 6 cm Höhe, 7 cm Öffnung im
Dunkeln. (Fig. 8—9, Taf. XVI.)

Nach der gleichen Zeit (6 Tage) ist die Haut homogen gra-
nuliert (Fig. 8). Sie erscheint auch bei starker Vergrösserung (Fig. 9)
als fast homogene Reinkultur von Bacillen in Kurzstäben in dichter
Lage mit Ausstrahlungen und einer geringen Durchstrahlung von
Cladothrix. Es ist also die rascheste Entscheidung im Kampf meh-
rerer Keime. Dunkelheit und reiche Luftzufuhr führen zu arten-
armen Bakterienhäuten.

lY. Differenz- Wasserglas, 6 cm Höhe, 7 cm Öffnung,
im diffusen Tageslicht, acht Tage.
(Fig. 1—4, Taf. XVI.)

Die Haut ist viel reicher bevölkert. Es lassen sich mindestens
die vier verschiedenen Gruppen von Chlorophyllalgen A, B, C, D,
Fig, 1, unterscheiden. Auch E ist eine jedenfalls den Oscillarien
angehörende Spaltalge. Es folgt die Gruppe F, welche von einem
Kreis keilförmiger Bacillen G umgeben ist. H, I, K, K kleine Bak-
terienhäufchen. Bei L liegen Mikrokokken in Ketten. Bei M eine
Micrococcus- und Bazillengruppe. N, 0, P und alle anderen Teile
der Haut sind von Beggiatoafäden durchsetzt. Fig. 2, 3, 4 geben
solche Partieen der Haut bei stärkerer Vergrösserung dargestellt.
Fig. 3, 4. Die Beggiatoa alba zum Teil in Sporenbildung begriffen.

Die vier Differenzen ergeben somit die reichste Vegetation im
diffusen Licht, bei geringer Tiefe des Wasserbehälters. Die ärmste
im tiefen Cylinder mit geringer Öffnung im Dunkeln.

Im ganzen wird diese Kulturmethode für die Untersuchung
pathogener Bakterien wenig und selten Anwendung finden, während
sie von Bedeutung werden kann, wenn es sich darum handelt, den
Gesamtbestand der verschiedenen Arten von Wasserpilzen in einem
gegebenen Gewässer festzustellen. Die Differenzirung müsste in
diesem Falle so vorgenommen werden, dass von den zwei Differenzen
etwa III und IV die Hautpartikel in Nährgelatine weitergezüchtet
werden.

48

N. J. C. Müller,

Man wird zu diesem Schlüsse kommen : Je mächtiger der Strom
ist, je mehr die Bakterienkeime sich auf grosse Distanzen auszu-
breiten vermögen, z. B. Rhein Mannheim-Mainz, Donau Linz- Wien,
um so reicher muss der floristische Bestand, wenn man so sagen
darf, des gegebenen Wassers, sein; um so grösser die Artenzahl der
Bakterien, welche aus der Wasserprobe gezüchtet werden können.
Kleinere Flüsse mit grösserer stagnirender Randfläche und geringe-
rem Gefälle sind unter Umständen ärmer an Arten, weil die gegen-
seitige Ausschliessung eine raschere ist. Das gleiche gilt für Pump-
wasser und stagnirende Teiche, Landseen, Altwasser der Flüsse.
Endlich findet man die letzte Differenzirung in Partikeln , welche
im Stromrand mehr oder weniger festliegen , als da sind : einge-
i-ammte Holzpfosten, tote Weiden Schilf blätter, Sandsteinpartikel.
Solche Partikel geben unter Umständen Kulturen von 1 — 2 Bakterien
und selbst Reinkulturen einer einzigen.

Cladothrix dichotoma. (Neckar.)
(Fig. 1, Taf. XXX.)

Das Wasser steht in einem Trinkglas, mit einer Glasplatte be-
deckt, in diffusem Tageslicht. An jedem Tage wird ein Teil der
gebildeten Haut herausgeholt, auf dem Objektträger mit Gentiana-
violett tingirt. Die Tafel XXX gibt die Entwickelungszustände in
den römischen Zahlen I — VI, welche die Tage bedeuten.

Nach dem ersten Tage setzt sich die Wasserhaut zu-
sammen aus Bruchstücken von Cladothrixfäden lA, welche zum
Teil schon die falschen Aste bilden, aus Cladothrixfäden mit kurzen
Gliedern, vielleicht Arthrosporen derselben Pflanze IB. Gonidien-
ähnliche niedere Algen IC. — IDEG. Ein Schizophyt nach dem
Typus Bacterium. — IJ eine Bazillengruppe. IK i'otirender El-
lipsenzwilling.

Nach dem zweiten Tage finden sich in einigen Gliedern
der Cladothrixpflänzchen IIA Arthro- oder Endosporen. Es finden
sich auch selten Spiraleinwickelungen IIB mit zahlreichen Endo-
sporen in Reihen und einige derselben im zentralen Raum der Spirale.
Auch Einzelzellglieder II C machen sich bemerklich. Die begleitende
Gesellschaft zeigt die Gruppe HD (zu vergleichen mit ID) ohne
wesentliche Veränderung. HG eine farblose Sphäre mit algenähn-
lichen Cylindergliedern. II J und K eigentümhche Kegelgebilde, viel-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

49

leicht der Gruppe Bacillus angehörig. IIE sprossende Sphäre.
IIP Gloiocyste mit Bacillen.

Nach dem dritten Tage treten Cladothrixpflänzchen (Keim-
pflänzchen) auf, welche, wie IIIA, eine oder zwei Pseudodichotomien
zeigen, an der Basis kugelig angeschwollen , dort stärker tingirt
erscheinen. Bei IIIA liegen auch isolirte, 10 — ]2gliedrige Fäden,
wahrscheinlich die Deszendenz zu II C. Die Propagation geht also
wahrscheinlich aus jedem beliebigen vegetativen Bruchstück weiter,
wie bei den Oscillarien. Zu beachten sind die begleitenden Mikro-
phyten desselben Wasserhautfetzens, zunächst aber die von Zopf
beschriebene Spirillenform isolirter Zweigstücke HIB. — IIIC Bac-
teriumgruppe, IUI) und E ein in Teilung begriffener Schizophyt von
beträchthcher Grösse. Von den verschiedenartigen Bakterien, welche
nun in der Haut spärlicher oder reichlicher auftreten, mögen III Fund G
hervorgehoben sein. Es sind dies offenbar lebhafter sprossende und
sich spaltende Bakterien, Avelche auf ID zurückgeführt (in IV D und
VI C nach dem vierten und sechsten Tag mit tingirbaren Schleim-
hüllen versehen) werden können. Die Gruppe IIIO steht wahr-
scheinlich mit IIJ in genetischer Verbindung.

Nach dem vierten Tage erscheint die vegetative Pflanze
reicher ausgegliedert. Die letzten Auszweigungen der Pseudodicho-
tomien rollen sich hakig ein. Die Zellteilung führt zu kürzeren
Gliedern; es kommt hier schon zur Arthrosporenbildung IV E. Sehr
dicke und tiefer gefärbte Spiralfäden IVB treten auf, ebenso ganz
feine Spiralknäuel IVO und sehr feine geradläufige, oder am Ende
bogenlinig gekrümmte, in Kurzglieder zerfallende Gebilde IV E.
Bacillen in Gloiocysten mit sieben Kammern und die Gruppe IV D
(zu vergleichen mit VI C) mit Schleimhülle machen sich bemerklich.

Nach dem fünften Tage. Ein Gliederfaden VA mit Ar-
throsporen. Ein intensivgefärbtes S-förmig gewundenes Zw'eigstück
VB mit Sporen (Arthrosporen) fällt auf. Eine Gloiocyste VE auf
III Gr zurückzuführen. Die mehrkammerige Gloiocyste VD entlässt
aus einer Kammer die Bazillen, endlich findet sich eine von dieser
verschiedene Bazillengruppe VF.

Nach dem sechsten Tage. Jene Spiralknäuel zerfallen in
Bogenbruchstücke VIA und VIB.

Die von der Gruppe IIIG nach IV D verfolgte Gruppe lockert
sich in eine mehrfach gelappte Schleimzone, welche schwächer tingirt

Müller, Bakterien-Forschung. 4

50

N. J. C. Müller,

erscheint, wie die eingeschlossene Bakterie VI C. Vielzählige Büschel
junger Cladothrixkeimpflänzchen zum Teil in der Pseudodichotomie
treten auf VID VIE.

VII. Beispiel der Reinzüchtung durch Abwechselung der Nährsubstrate.

Bacillus monachae II.
(Fig. 4—9, Taf. XX.)

Aus der Leiche einer Nonnenraupe wurde am 25. Januar 1893
ein Auszug geimpft, welcher einen Bacillus ergab, der durch l'/2 Jahre
fortgezüchtet werden musste. Die Deszendenzkulturen (die Kultur 8
und ihre Deszendenz) waren mit einem Micrococcus verunreinigt, so
dass die Kulturbelage bald gelb, bald weiss zum Vorschein kamen.
Die Deszendenz (N 181) einer solchen Kultur wurde im verdünnten
Zustand in Nährgelatine auf dem Objektträger geimpft. (Januar,
Februar 1894.) Nach 5 — 6 Stunden ist die Impffläche leicht belegt
und mit zerstreuten Sternkonfigurationen bedeckt Fig. 4, I. Nach
8 — 10 Stunden treten zuerst grössere, zum Teil gewimperte Zooglöen
auf, Fig. 4, II, welche heranwachsend, nach 1.5 Stunden, Fig. 4, III,
zu grosseren hirnförmig geformten Massen zusammenfiiessen.

Dieselbe Kultur wurde gleichzeitig auf gewöhnliche Gelatine
geimpft. Die dort angegangene Kultur wiederum in den Koch-
Gelatinecylinder und von dort aus wiederum auf Nährgelatinetropfen
auf dem Objektträger übertragen. Diese Übertragung auf das nähr-
schwächere Substrat der gewöhnlichen Gelatine elimiriirte den
Micrococcus. Für die Phasen I II III Fig. 5 gelten dieselben Zeit-
intervalle wie für Fig. 4. Der Belag ist gewimpert und entspricht
einer pentameren fast absolut reinen Aktinomorphie. II zeigt das-
selbe für Hexamerie, doppelte Randzone, eine Kugelzooglöe in ex-
zentrischer Lage. III mehrere massige Zooglöen im Zentrum und
vier zum Teil durchbrochene Kreiszonen, alle gewimpert. Fig. 6
ergibt eine ähnliche Reihe aus der gleichen Parallelkultur, ohne
jene Radialplatten und Tangentialzonen, bei allen aber er-
scheinen die Ränder der Figur und die Zooglöen ge-
wimpert. Nach 30 Stunden endlich zeigt die Kultur III, Fig. 4
den Zustand Fig. 9. Die reine Form der Aktinomorphie das
Mittelfeld mit polygonalen, dichteren Belagen, welche indess ohne
vollständigen Kontakt durch hyaline Flächen der Grundsubstanz ge-

Beiträge zui' Kenntnis der Bakterien.

51

trennt sind. Ahnlich diesen sind die Randpolygone, welche in ihrem
dunkeln Belage nach aussen sich in breite Strahlen auflösen. Die
hyaline Grundsubstanz springt am Rande in breiten Zähnen vor,
welche nochmals gezähnelt sind.

Die mit Sorgfalt zusammengestellte Zeichnung der Bazillen in
der mikroskopischen Adhäsionsschicht Fig. 7 aus der Kultur, welche
dreimal in Nährgelatine übertragen war, zeigt dichteste Lage der
Kurz- und Langfäden zum Teil in Mäanderordnung, geringe oder
verschwindende Arthrosporenbildung.

Die Fig. 8, Taf. XX zeigt ein analoges Präparat aus einer
Kultur, welche von der Nährgelatine in gewöhnliche Gelatine, von
dieser wieder zurück in Nährgelatine übertragen war. In der Adhä-
sionsschicht liegen Gruppen von Kurzstäben, Langstäbe, mit der
Seitenanlagerung der Glieder und reiche Arthrosporenbildung. Die
Kulturen der Masse erscheinen gelbweiss und sind frei vouMicrococcus.')

Vlll. Parallelversuche über das Fortschreiten einer Bazillenkultur
in Gelatine und in einer Wasserhauchschicht.

In der Stichimpfung von Rheinwasser, welches in den Weili-
nachtstagen 1893 oberhalb Mannheim geschöpft wurde, entwickelte
sich eine grünschillernde Kultur (Bacillus). Aus dieser wurde am
8. Februar 1894 in gleichgrosse Tropfen von Nährgelatine geimpft
auf dem Objektträger.

Auf einer Reihe von Objektträgern wurden mit dem gleichen
Glasstab, welcher bis zur gleichen Tiefe in die flüssige Gelatine ein-
getaucht war, kreisförmige Belage mit dem Durchmesser von 15 bis
18 mm aufgetragen Auf eine andere Reihe von Objektträgern wurden
schmale Gelatinestreifen und ein kleines Gelatinepünktchen aufge-
tragen. Mit der gleichen feinen Glasnadel wurden Impftröpfchen
von 1 mm Durchmesser in das Zentrum der kreisförmigen Belage
und in jenes feine Pünktchen eingetragen. Drei Temperaturen
konnten hergestellt werden. Thermostat 23 geheiztes Zimmer
14 — 15*^ und ungeheiztes Zimmer 12— 13"C. für jede der Tem-
peraturen kommen zwei Reihen der Entwickelung in Betracht : Das

■j Soweit die Abmusterung diesen Aussin'ueli zulässt. Dass die Kultur ab-
solut frei von Micrococcus sei, ist, der Natur der Sache entsprechend, nicht mög-
lich zu entscheiden.

52

N. J. C. Maier,

radiale Vorrücken in der Nährgelatine und das Vorrücken von jenem
kleinen Gelatinepünktchen durch die Hauchschicht auf dem Glas
nach dem ersten, zweiten u. s. f. Gelatinestreifen. Das Fortschreiten
liess sich scharf beobachten mit Zuhilfenahme der Lupe und einer
0,5 mm Teilung auf Elfenbein.

Nährgelatine.

A) Das Portrücken vom Zentralimpfpunkt in Nährgelatine er-
gibt nach 37 Stunden bei genau 23 im Thermostaten an drei
Platten 5, 4, 3,27 mm, im Mittel 4,09 mm. Für die Stunde zu
1380 Minutengraden also 1,011 mm für den Radius.

B) Im geheizten Zimmer herrschten für 12 Std. 40 Min. 17 " C ,
für 4 Std. 4.5 Min. 14 « C, für 6 Std. 30 Min. ]4,b » C, für 12 Std.
45 Min. 14,5 ° C. Als gesamtes Mittel der beobachteten Tempera-
turen wurde 14,25 *' C. angenommen. Das radiale Vorrücken wurde
zu 2, 1,12 und 1,75 mm gefunden, das Mittel ist gleich 2,435 mm.
Für die Stunde zu 855 Minutengraden ergibt sich = 0,658 mm für
den Radius.

Für das ungeheizte Zimmer ergab sich als Mittel 10,1 ° C. Das
radiale Vorrücken zu 0,125 mm, für die Stunde zu 606 Minuten-
graden Celsius , ist das radiale Vorrücken gleich 0,0038 mm. Die
zweite Reihe, Fortrücken der Bazillen in der Hauchschicht zeigte in
einer Platte ein positives Ergebnis : Die Geschwindigkeit von 1 mm
für 37 Stunden und 23 ^ C. (fragliches Resultat). In einer zweiten
Platte, deren Temperaturgenuss für 50 Stunden 14" C. war, also
7000 Minutengrade Celsius, zeigte sich ein zweiter Punkt, schwach
grünschillernd, zwei Gelatinestreifen waren hier übersprungen. Die
Distanz ist 12 mm. Dies entspricht einem radialen Vorrücken von
0,24 mm für die Stunde.

IX. Verdrängung des Bacillus monachae durch das Bacterium monachae
im Laufe der Kuiturdeszendenz.
(Fig. 10, Taf. XX, Fig. 1—3, Taf. XXI.)

Zur Zeit Ende Juli bis August 1893 wurde aus dem zoologi-
schen Institut der königlichen Forstakademie in Münden von einer
an Flacherie erkrankten Nonnenraupe die Materie (Raupenleiche)
eingeliefert zu einer Stichimpfung, welche Bacillus monachae II er-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

53

gab. Diese Kultur durch den "Winter in dreissigtägigen Intervallen
weiter geleitet, ergab in der Deszendenzkultur am 26. Februar 1894
Fast Rein-Bacterium. Es müssen hier ganz wenige Bacteriumkeirae
allmählich in ihrer vegetativen Energie erstarkt sein, während die
Energie des Bacillus abnahm.

Die Übertragung der verdünnten Deszendenzkultur am 27. Fe-
bruar 1894 in Nährgelatine auf dem Objektträger ergibt nach fünf-
zehn Stunden die Formen der Fig. 10, Taf. XX, welche mit ge-
ringem Versehen als Entwickelungsstadien angesehen werden dürfen.
Die erste Kultur links ergibt einen genauen Kreisbelag, mit zer-
streuten dichteren Sphären im Mittelfeld. Die mittlere Figur zeigt den
Belag mit einem genau zentralen, dreistrahligen System jener mehrfach
hervorgehobenen Zooglöen und im Mittelfeld scharf umschriebene,
endogene dichtere Sphären. Die Figur entspricht der Aktinomorphie,
mit ganz gleichmässiger Ausbildung um das gegebene Zentrum. In
der Nähe dieser Kultur liegen zwei kleine, fast homogene, fein ge-
zahnte und im Mittelfeld fein granuhrte Sphären. Der Schluss der
Entwicklung in der Figur rechts oben zeigt die Randzone dichter
gegenüber dem Mittelfeld. Die Granulirung des Randes löst sich
bei auf in feinpunktirte Zooglöen im Parenchymaverband mit

intercellularen Lamellen der intakten Gelatine (Figur rechts unten).
Der Abklatsch der Kultur Fig. 10, Taf. XX ergibt eine eigentüm-
liche Adhäsionsfigur, von welcher eine kleine Randpartie in Fig. 2,
Taf. XXI hier festgehalten sein möge. Die Bakterienmasse lagert
sich am Rande des Tropfens im engen Parenchymaverband , im
Mittelfeld in weitere Polygone, a b entspricht einem Tropfen Bis-
marckbraunlösung. Die Pigmentlösung bildet in a b ihr eigenes Ad-
häsionssystem für den trockenen Zustand. Die nicht dicht belegten,
in der Figur weiss gelassenen Zellenfiguren , stärker vergrössert
(Fig. 8, Taf. XXI) zeigen kleinere dünne Verästelungen des Bak-
terienbelages. Drei mikroskopische Proben, mit Pigmenten behan-
delt, zeigen verschwindende Spuren von Bacillus (Fig. 1, Taf. XXI
B C). Fuchsin, Gentianaviolett und Bismarckbraun heben dieses
Bacterium am besten heraus. Bacterium ist durchaus vorherrschend.

X. Kulturbelag und Zooglöa.

Da die bakterienhaltige Flüssigkeitscyste (Zooglöa, Vakuole) zu
stände kommt durch partiäre, örtliche, chemische Umsetzung, Zer-

54

N. J. C. Müller,

Setzung des Gelatinesubstrates in Flüssigkeiten von — je nach der
spezifischen Natur der Bakterien — sehr verschiedener Konsistenz,
welche sich in der Kohäsion der kleinsten Flüssigkeitsteile und in
der Adhäsion der gebildeten Flüssigkeit an fester Unterlage kennt-
lich macht, so liegt es nahe, die Theorie der Zooglöabildung abzu-
schliessen mit dem Hinweis auf die Wahrscheinlichkeit, dass bei
gemischten oder unreinen sowohl, wie auch bei reinen Kulturen
solche Verflüssigungen in mehrfachen Umsetzungen in einer und der-
selben Cyste (Vakuole, Zooglöa) beruhen. Wir nennen die Konsis-
tenz des intakten Gelatinesubstrates A, die allmählich abnehmen-
den Konsistenzen a, b, c, wo a die weniger, c die mehr verflüssigte
Masse bedeuten. Das gegebene Volumen des intakten Substrates
der Cyste, in gegebener Phase (Fig. 7, Taf. XVIII) geht durch die
Verflüssigung in die Konsistenz a über. Die entstandene Cyste
nimmt jedenfalls an Volumen zu, bevölkert sich mehr und mehr,
wächst, indem ihre Bevölkerung am Rande der Cyste feste Gelatine
umsetzt, und übt einen hydrostatischen (Quellungs-) Druck auf die
periphere feste Gelatine aus. Hiedurch kommt es zur Ejakulation,
Fig. 7 bei 3 und 4, Taf. XVIII. In der Cyste können in gegebener
Phase mit der Konsistenz a, Häufungen nachfolgender Entwicklungs-
stadien der Bakterien (Arthrosporen, Endosporen in Keimung, vege-
tative Glieder in erhöhter Teilungsenergie) zur Bildung von Zentren
führen, welche die Konsistenz b besitzen. Dieses bedeutet: Eine
mit Quellungsdruck wachsende Cyste b ist eingeschlossen in einer
solchen mit der Konsistenz a (s. Fig. 5 BB, Taf. XIX, C bei E).
Es kommt zur Ejakulation aus b durch a hindurch nach dem Orte
des kleinsten Widerstandes (Fig. 10, ABC, Taf. XXXI). Ein Blick
auf eine Reihe von Nährgelatinecyhndern, in welchen Stichkulturen
eines Flusswassers im Sinne der Alkohol-Fraktionirung ausgeführt
wurden (s. Fig. 10, Taf. XVIII und die Figurenerklärung), zeigt,
dass bei Gegenwart von 10 — 12 diff'erenten, keimfähigen Bakterien-
keimen alle möglichen oder doch eine grössere Zahl von Konsistenz-
übergängen und diesen entsprechende Ejakulationen zustande kom-
men. (Fig. 1, k, ], m, n, Taf. XXXIV, Fig. 2, 3, a, b, c, d,
Taf. XXXIV.)

A. Die einfache Sphäre, Cyste, kann dementsprechend von
Bakterien bewohnt sein, einer und derselben Art Reinkultur; sie
kann sich teilen durch Ejakulation, Sprossung u. s. f. ; sie ist sphärisch

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

55

begrenzt, wächst zunächst durch eigene Energie, wird durch Be-
rührung mit Nachbarcysten abgeplattet und tritt in Parenchymaver-
band (Fig. 1, Taf. XXXIV, Fig. 8, Taf. XXXIII).

B. Sie kann rascher durch Sprossung wachsen, als sie durch
Verflüssigung des umgebenden Substratfestlandes an Volumen zu-
nimmt; sie erscheint in diesem Falle an der Peripherie gewimpert,
gestrichelt, ohne den scharfen Contour und den scharfen Lichtberech-
nungsunterschied der ersteren Art. (Man vergl. Fig. 5 B, Taf. XIX,
mit Fig. 10 h, i, k, Taf. XVIII.)

C. Die einfache Sphäre oder die vielen Cysten im Parenchyma-
verband werden endlich aufgelöst dadurch, dass die Bevölkerung in
Zustände erhöhter Assimilation oder Bewegungsenergie übergeht.
(Man vergl. die Übergänge in Fig. 7 B, C, D Taf. XIX).

Die kleinen Sphären in jenen Figuren entstehen durch örtlich
gesteigerte Häufung der Keime. Die Keimhäufchen bilden Zentren
der Energie in Bezug auf Propagation und chemische Umsetzung
des Substrates. Die Einzelsphäre möge daher zunächst ins Auge
gefasst sein. Die Keimhäufchen vergrössern sich im allgemeinen,
wenn von örtlichen Dichteunterschieden im Gelatinesubstrat abge-
sehen wird, so dass eine Kugel oder im Flächenbelag ein Kreis
entsteht; sie bilden in diesen Formen eine Flüssigkeit, welche mehr
oder weniger viskos, jedenfalls eine andere Konsistenz hat wie das
Substrat in ihrer Umgebung, Von einer solchen bakterienerfüllten
Cyste (Tropfen, Vakuole, Zooglöa?) ausgehend kann man diese Ent-
wickelungsmodalitäten festlegen :

A. Die Sphäre ist reia oder fast rein; das heisst, sie enthält
nur eine Spezies oder doch nur Spuren der Beimengung einer oder
mehrerer differenten Spezies.

a) Sie bildet den Ausgangspunkt zur Propagation der Sphären
durch Sprossung (Fig. 1 a-h, Taf. XXXIV, Fig. 4, 5 G, Taf. XXXIVj.
So verhalten sich auch die Zooglöen, an welchen die dunkleren Be-
lage gesehen werden, aus deren Rissstellen lichtere Sphären hervor-
ragen (s. Fig. 7, Taf. XXIX bei a, b) , und die gelben Blasen,
welche aus braunen oder roten Belagschichten hervorragen (Fig. IG,
Taf. XXVII, Fig. 8, Taf. XXVIII) Diese dürfen als Durchbrüche,
Ausbrüche angesehen werden. Auch die Zooglöa Fig. 1, Taf. XXIII
und Fig. 4, 5, (3, Taf. XXVIII sind vielleicht hierher zu nehmen.

b) Die Propagation geschieht durch Ejakulation. Hierher zähle

56

N. J. C. Müller,

ich die Erscheinungen in Fig. 27, Taf. XII. Die blasigen, am Rande
auftretenden Hyalinsphären sind jedenfalls Durchbrüche der (hier)
braun erscheinenden Belagschicht; die Fig. 9, Taf. XI zeigt solche
Ejakulationen bis zum Austreten von Einzelsphären aus dem Ver-
bände.

c) Die Propagation geschieht durch Teilung der Sphären. Solche
Übergänge findet man in den Figurenreihen 4 und 5, Taf. XXXIV.

d) Die Propagation der Sphären geschieht durch Häufung der
Bakterien in eine Kernsphäre und durch Teilung dieser (Fig. 4, 5
bei g, Taf. XXXIV).

B. Die Cyste ist unrein, entspricht einer Mischkultur. Hierher
sind die Gruppen 4, 5 A und B, Taf. XXXIV zu stellen und für
die Belagkomplexe alle jene Kulturen der Gewässer, wie sie in den
Tafeln XI, Fig. 5, Fig. 8, 9, Taf. XI, Taf. XII, Fig. 3—5, Fig.
12, 13, Taf. XII, Fig. 27, Taf. XII und vielen anderen darge-
stellt sind.

C) Die Cystenbildung tritt reichUch ein, wenn eine Kultur
durch Eingriffe mit einer Glasnadel gestört wird. Ein solcher Ein-
griff bewirkt eben eine erneute differente Häufung der Keime und
bewirkt eine erneute Steigerung durch die Luft (0) Wirkung.

D) Die Cysten häufen sich am Rand und treten in Verband.

a) Sie bilden sich nur am Rand, das Mittelfeld bleibt granulirt
oder homogen. Fig. 9, Taf. XI. Fig. 3 und 4B, Taf. XIV.

b) Sie bilden sich am Rand und im Mittelfeld. Parenchymaver-
band des Mittelfeldes. Fig. 7B, Taf. XIX. Fig. 6, Taf. XXV. Fig. 1,
Taf. XXVII. Fig. 7, Taf. XXIX. Fig. 4, Taf. XXXIII. Fig. 6,
Taf. XXXVI.

E) Die Entwicklung aus D schliesst ab mit Auflösung des
Parenchymaverbandes durch erneute Energie in der Ausstrahlung
oder Wanderung von Keimen, beweglichen Zuständen u. s. f. Fig. 7,
Taf. XIX.

F) Liegen die Keimhäufchen örtlich sehr dicht beisammen, so
treten sie je nach der Energie in den entstandenen Cysten in Ver-
bände mit Abglattung der Berührungsflächen zu Ketten, Tetraden,
Halbsphären, Polyedern, so in den Figuren 5, Taf. XVIII — 5,
Taf. XIX — 1, Taf. XXIII — 16, Taf. XXVII - 1, Taf XXXIV
— 8, Taf. XXXIII für Kettenfigur 4, Taf. XVIII, für Tetraden u. s. f.

In den Belagen von sehr verdünnten Bakterienkulturen, nament-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

57

lieh von Flusswasser, auf Nährgelatine lassen sich diese Übergänge
nachweisen und an der Hand der von Sachs seiner Zeit gegebenen
Erklärung für die Emulsionsfiguren theoretisch darlegen. Der Belag
kann mit gleicher Verteilung der Keime gleichmässig sein und wird
dem Kreise sich annähern und im Allgemeinen diese Form beibe-
halten. Während der Keimung aber bewegen sich in dem Wasser
im Sinne der fein suspendirten leblosen Partikel die Bakterienkeime.
Sie ordnen sich in Emulsionsfiguren, gelangen zur Keimung und markiren
dementsprechend ihre Lage durch Cysten (Zooglöen, welche zunächst
mikroskopisch klein sind). Sie ordnen sich in die Peripherie und
bilden zierliche Kreisketten von Parenchymaform. — Die Ejakulation
und EfFusion ist oben befriedigend erklärt. Flusswasser ist ein Ge-
misch mehrerer oder zahlreicher Bakterienkeime, von welchen immer
mindestens eine Bakterie auskeimt, welche den Leim langsamer oder
rascher verflüssigt. Solche Bakterien stören bald die Anordnung,
es entstehen Lagunen, in welchen die Reste der ersten Kolonien
flottiren, bis in einer weiteren Succession mehr oder weniger kon-
sistente Zooglöen auftreten. In gleichem Sinne wirken leimver-
flüssigende und zugleich bewegliche Bakterien. Diese strahlen rasch
in radialer Richtung von dem Kulturzentrum ins Weite. Es bilden
sich hier unter Umständen Ringzonen.

XI. Die von Sachs'schen Emulsionsfiguren ') und Theorie der Vorgänge
auf der Nährgelatine.

Es möge hier in Kürze die Theorie der Emulsionsfiguren, wie
sie von Sachs für Aigenschwärmsporen entwickelt wurde, für Wasser-
tröpfchen, welche auf Nährgelatine aufgetragen werden, dargelegt
sein. Die sehr feinen und gleichmässig in der Flüssigkeit verteilten
Körperchen (in den Experimenten des Herrn von Sachs waren es
sehr fein verteilte Oltröpfchen, hier sind es die Bakterienkeime:
Arthrosporen, Endosporen oder die vegetativen Glieder der Bakterien)
unterliegen in dem kreisförmigen Tropfen auf der Gelatine Strömungen
infolge des Temperaturunterschiedes zwischen Rand und Mittelfeld

J. von Sachs, Flora 1876 und Handb. d. Verf., Allgem. Botanik, erster
Teil, S. 266. Sachs unterscheidet konzentrische (aktinomorphe) und symmetrische
(polarisirte) zygomorphe Emulsionsfiguren. Die ersteren kommen bei genau gleicher
Verteilung der Temperaturdilferenzen um den Tellerrand zustande.

58

N. J. C. Müller,

des Tropfens eineiseits, zwischen Unterlage und Spiegelniveau des
Tropfens andererseits.

I. Ist dieser Temperaturunterschied an jedem Punkt des Randes»
nach dem Mittelpunkt des Kreistropfens der gleiche, so entstehen,
da in den radialen Strombahnen die kleinen Partikel mehr gehäuft
werden, aktinomorphe Emulsionsfiguren, so hier die Figuren 7, 9,.
Taf. XI - 4, 5, Taf. XIV — 20, Taf. XVII — 7, Taf. XIX -
9, 10, Taf. XX.

II. Ist die Verteilung der Temperaturunterschiede aber ungleich
nach einer gegebenen Richtung der Strahlung, etwa nach einem Fenster
zu stärker, so entstehen die mehr oder weniger symmetrisch polari-
sirten Emulsionsfiguren, so bei den Bakterienkulturen Figuren 7B,
Taf. IX — 9, Taf. IX — 4 B, Taf. XIV — -J, Taf. XII — 3, 4,
26, 27, 29, Taf. XII.

III. In einem jeden Wassertropfen, w'elcher feine feste Partikel
enthält tritt beim Verdampfen eine Häufung der Partikel am Rande ein.

Aus diesen drei physischen Momenten lassen sich ohne Zwang
alle hier in zahlreichen Tafeln genau niedergelegten Fornientwick-
lungen erklären, wenn man beachtet, dass der örtlichen Häufung
der Keime in der Emulsionsfigur die Keimung und Zooglöa oder
Cystenbildung auf dem Pusse folgen, dass Verschiebungen, Ejaku-
lation, Sprossungen und Fortbewegung von Schwärmindividuen, die
Bilder komplizirter machen. Im nachfolgenden die Synopsis aller
Beobachtungen :

A) Ak tinom 0 r p h i e. Nacii der Theorie entstehen vom Mittel-
punkt des Tropfens mehrere oder viele Zirkulationsströme, welche
am Grunde des Gewässers hin. im Spiegelniveau hergerichtet sind.
In diesen Bahnen bewegen sich die Keime, gelangen zur Keimung
und markiren eine aktinomorphe Figur. Siehe Taf. XII, Fig. 4.
Fig. 1, Taf. XXII. Fig. 4, Ö, 7, Taf. XXV. Fig. 2, Taf. XXXI
und viele andere Figuren dieser Art.

a) Aktinomorphie ohne Zentralstrahlen. Hierher
rechne ich jeden Kreisbelag, in welchem sich mehr oder weniger
radial gelagerte Zooglöenketten vorfinden, in welchem randständige
Zähnebuchten sich ausbilden, eine jede Kreisfigur, welche von
'/2 mm, rasch in 24 — 36 Stunden, zu einem Kreis von 4, 6, 10 mm
heranwächst. In jedem solchen Bakterienbelag müssen Verstösse,
Wanderungen von Keimen zunächst vorherrschend in radialer Rieh-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

59

tung vor sicli gehen, weil das Zentrum dicht bevölkert ist, der Rand-
vorstoss in ergiebige intakte Ncährregionen führt.

b) Aktinomorphio mit zentralen aktinomorphen
Strahlen von dichteren Belagstellen und Zooglüen. Dichte Bo-
lagstellen ohne weitere Differenzirung in Zooglöen weisen auf die
Figuren 51, II, Taf. XX — 10, Taf. XX — 1 A, Taf. XXII.
Diese letztt-re Figur zeigt auch ziemlich regelmässige Tangentialbänder.
— Fig. lüB, Taf. XXIV und luA, Taf. XXIV. Diese Figur zeigt
das aktinornorphe System, wie wenn es durch einen Tangential- und
Radialstromwirbel verschoben wäre. Bei guter regelmässiger Aus-
bildung liegen genau so wie hier die dichteren Radialstrahlen.
Zooglüen in Radialketten vielgliedrig mit scharfen Konturen wie
Zellenketten. Solche sind: Fig. 7 B, Taf. XIX fast genau pentamer,
Fig. 10, Taf, XX triamer und durchaus regelmässig gleichstrahlig.

B) Polarisation. Hierher gehören alle schon früher be-
schriebenen Kulturen auf gewöhnlicher Gelatine und alle hier noch
zu nennenden, ferner die Figuren des Herrn v. Tubeuf. (Forstl. natur-
wisscnschaltl. Zeitschrift Januar 1892. Fig. 7 und 8, Taf. IX) iu
unseren Tafeln Fig. 7 A, B, 9, Taf. IX und alle elliptisclien Belage.
Die Polarisation solcher liegt in dem Wiederstand des Substrates,
welcher genau nach zwei zu einander senkrechten Richtungen am
grössten und kleinsten ist, oder im allgemeinen mehr oder weniger
unregelmässig verteilt sein rauss. Dieses Moment hat zunächst nichts
zu thun mit der Polarisation der Emulsionsfiguren im Sinne des
Herrn von Sachs. Die bei von Sachs supponirten Ströme können
aber mit jenem Moment zusammenwirkend eine komplexe Erschei-
nung zustande bringen.

a) Ohne Zentralstrahlung von Cysten oder Zoo-
glöen-Differenzirung im Mittelfeld. Hierher rechne ich
alle auf Nährgelatine sich elliptisch ausbreitenden oder in einer ge-
gebenen Richtung allein wachsenden, sprossenden Kulturen (Fig. 5,
(3, Taf. XI - Fig. 9, Taf. XV — Fig. 7, Taf. XXVII — Fig. 10,
A B, Taf. XXXI — Fig. 6 A, Taf. XXXVI).

b) Mit zygomorpher Strahlung von Cysten oder
Zooglöen im Mittelfeld. So wie es bei von Sachs betont
wurde, dass die einseitig polarisirten Figuren häufiger zustande
kommen, wie die rein konzentrischen (aktinomorphen), so auch hier.
Das Strahlensystem von Zooglöen ist ganz unregelmässig oder nach

€0

N. J. C. Müller,

einer Seite stark gefördert: Fig. 5, Taf. XI — Fig. 12, 26, 27, 29,
Taf. XII — Fig. 6, Taf. XXV.

C. Kombinationen aus A und B. Die schönste Kultur
auf Nährgelatine, welche beide Verhältnisse demonstrirt, ist eine
Wasserkultur (Fig. 4, Taf. Xllj. Sie ist breit elliptisch, am Rande
gleichmässig doppelt gebuchtet, mit Radialstrahlen am Rande, im
Mittelfeld gleichmässig mit Sternkonfigurationen bedeckt, also fast
aktinomorph. Etwas exzentrisch liegt das Zentrum für die einseitig
fast genau in der grossen Ellipsenaxe geförderte Zooglöenstrahlung.
Diese sind Zellenketten, aussen einreihig, innen zweireihig. Der
Grundbelag und dieses System sind gleichförmig einseitig polarisirt.
Das Ganze ist eine elegante Kombination der Aktinomorphie und der
zygomorphen Symmetrie.

D. Aktinomorphie und Randvorstösse, Zähne. Ist
das Substrat homogen, haben die Keime eine stabile
Lage gewonnen, sind jene Strömungen im Sinne der
Sachsschen Emulsionsfiguren sistirt, so ist keine
äussere Ursache mehr für die Formentwickelung auf-
zufinden. Von nun ab müssen es innere, in den Bak-
terien belegene Tendenzen sein, welche Rassen- oder
Speziesunterschiede kennzeichnen. Dahin rechne ich die
Gruppirung im Mittelfeld, die Randvorstösse, Zähne, Doppelzähne
u. s. f. Indes werden für eine und dieselbe Bakterie hier immer
noch verschiedene Substrate verschiedene Erscheinungen zustande
bringen. Es müssen daher Parallelkulturen verschiedener Arten,
Gattungen, auf einem und demselben Substrat hier allein massgebend
sein für den spezifischen Unterschied. Dass derartige Unterschiede
bestehen, geht aus der Vergleichung der Mischkulturen von Gewäs-
sern hervor, wie sie oben der Entwickelung nach geschildert wurden.
Aus dem Gegebenen schon lässt sich diese Zustammenstellung geben :
1_ I. Der Gesamtbelag ohne Zellenstruktur granulirt oder mit charak-
teristischen Konfigurationen :

a) der Rand ohne merkliche Buchten.

b) der Rand mit Zähnen oder Doppelzähnen

II. Der Gesamtbelag mit Rand- (Ring-) Zone und Mittelfeldzone

a) Avie vorher.

b) wie vorher.

c) die Randzone radial gestreift.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

61

III. Der Gesamtbelag im Mittelfeld ohne Zellenstruktur, der Rand
mit Epithelstruktur.

IV. Mittelfeld und Rand mit Zellenstruktur.

a) ohne Zooglöenzentralstrahlung.

b) mit solcher.

Mit Leichtigkeit lässt sich aus dem gegebenen Material von
Zeichnungen ein noch mehr in Details eingehender diagnostischer
Schlüssel entwerfen. Vorderhand möge hievon Abstand genommen
sein, ehe der Beweis für die Formenreihenkonstanz beigebracht ist.

XII. Der Kulturbelag der Rein- und Mischkulturen.

Wiewohl von vornherein aus den gegebenen Kenntnissen der
Bakteriengattungen Micrococcus, Bacterium, Bacillus und Vibrio kaum
anzunehmen war, dass verschiedene Spezies a, b, c u. s. f. von Micro-
coccus, Bacterium u. s. f. auf einem und demselben Kulturensubstrat,
Kulturbelage Zooglöen bilden, welche einer gemeinsamen Gattungs-
diagnose sich fügen , so lag doch aus den Beobachtungen in den
Wasseruntersuchungen die Initiative nahe, zuerst Reinkulturen der
Gattungen , sodann Mischkulturen künstlich herzustellen und in Pa-
rallelversuchen zu beobachten. Die Masse der Reinkulturen wurde
mit sterilisirtem Wasser so Aveit verdünnt, dass die Flüssigkeit eben
leise getrübt erscheint. Die Impfung geschah in Nährgelatine auf
dem Objektträger.

A = Micrococcus, B = Bacillus der K. 8, C = Bacillus
der Heidelberger Wasserleitung, D = Bacterium mo-

nachae.

Am Sonntag den 4. März wurden diese Reinkulturen auf Ge-
latinetropfen , zu gleicher Zeit wurden die Kombinationen aller in
gleicher Weise zu je 2 — 3 Platten geimpft.
Kombination A B Micrococcus und Bacillus der Kult. (8).

„ A C „ „ „ „ Heidelb. Wasserltg.

„ A D „ „ Bacterium monachae.

„ B C Bacillus der K. 8 und Bacillus der Heidelb. Wl.

„ BD „ „ „ „ „ Bacterium monachae.

„ CD Bacillus der Heidelberger Wasserleitung und Bact.

monach.

62

N. J. C. Müller,

Die vier Reinkulturen und die sechs Kombinationen , jede zu
drei Platten, ergaben dreissig Platten. Nach zwanzig Stunden waren
alle Kulturen mit grösserer und kleinerer Energie angegangen, mit
Ausnahme des Micrococcus Rein A (und mit Ausnahme der Kom-
bination A C). Da die Impfungen mit der gleichen Nadel ausgeführt
wurden, so können Relationen des Durchmessers der sphärischen
Kolonien hier verzeichnet werden:

I. Reinkulturen: Durchmesser

m mm

A Micrococcus 0,00

B Bacillus der K. 8 2,87

C Bacillus der Heidelberger Wasserleitung 3,00

D Bactorium monachae 3,87

II. Mischkulturen:
A B Micrococcus und Bacillus der K. 8 2,25

3,00
3,25
4,00
2,87
8,58

A C „ y, „ „ Heidelb. Wasserl.

AD „ „ Bacterium monachae ....

B C Bacillus der K. 8 und Bacillus der Heidelb. Wl,

BD „ „ „ „ „ Bacterium monachae .

C D Bacillus der Heidelberger Wasserleitung . . ■ .

Die Kombination AC kam spät, aber entscheidend. Da die
Reinkultur Micrococcus nicht angegangen war, — sie stammte von
einer Trockenplatte aus dem Januar 1893 ab — so wurde am
15. März ein Reinmicrococcus von einem Fussnagel gezüchtet und
nochmals aus den Trockenplatten B, C, D vom 4. März die ent-
sprechenden Gemische hergestellt, geimpft, nach 24 und 48 Stunden
präparirt, gezeichnet und alle Resultate in den Tafeln XXI — XXVII
festgelegt.

XIII. Diagnose des Kulturbelages oder der Zooglöen.

A. Die Reinkulturen,
a) Rein Micrococcus aus dem Abschnitt eines Fuss-
nagels kultivirt.
(Fig. 1—3, Taf. XXII, Fig. 4—11, Taf. XXI.)

Der Belag beginnt mit einer guten aktinomorphen Figur. Diese
ist hexamer mit zwei peripheren geschlossenen Zonen und einer
dritten solchen (Fig. 1 A. Taf. XXII), welche durchbrochen erscheint.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

63

Nach 24 Stunden treten Sphärenhäufungen im Sinne der Strahlen
und Randhäufungen auf, mit sphärisch-mäandrischer Umgrenzung
(F'ig. 1 B, Taf. XXII) ; nach 36 Stunden fliessen diese zu dichteren
Zonen zusammen (Fig 1 C). Die Figuren 4, 5, Taf. XXI ergeben
die Initialen des Belages. Die dunkel gehaltenen kleinen Kreise
geben die Häufung der Micrococcus-Individuen an, senkrecht zur
Ebene der Zeichnung, gegenüber der Lage dieser in einer und der-
selben Ebene. Die Kultur beginnt mit nicht parenchymatösen Gra-
nulirungen und endet mit zusammenfliessenden Sphären. Der Kreis-
belag zeigt einen bogenlinig begrenzten Rand. Die genaueren Ein-
zelheiten des Vorganges ergeben sich aus den Figuren 4 u. s, f.,
Taf. XXI. Der Belag beginnt mit Gruppen von Micrococcus in Ketten,
Diplokokken und Gruppen im Hexagonalverband "(Fig. 4, Taf. XXI).
Hieran schliessen sich einschichtige Sphären, A B, Fig. 5, Wiewohl
in diesen Flächen nur eine Schicht liegt, herrscht doch ein Kohä-
sionsunterschied. Mittelfeld und Randzone lassen in B einen kleinen
Brechungsunterschied wahrnehmen. Auch Abhubreihen, Fig. 6, 7 a,
und am deutlichsten Fig. 8 a a, weisen hin auf Kohäsionsunterschiede
der absoluten Grenzreihen von Mikrokokken, gegenüber den Binnen-
flächen der Kolonie. Auch Durchbrüche bei Fig. 8 b kommen vor.
Die Kreiskolonie a, muss als Sprossung oder Ejakulation aus dem
durchbrochenen Rande angesehen werden. Die Massenanhäufungen
zeigen grosse und kleine Halbkugeln, welche sich über die Grund-
masse modeln (Fig. 10, Taf. XXI. Im Meniscus der Gelatine im
Cylinder, Fig. 11, Taf. XXI, bilden sich zierliche Ketten solcher
Sphären, um den Stichkanal Häufungen solcher (Fig. .S, Taf. XXII),
stärkere Vergrösserung einer Partie im Gelatinemeniscus der Kultur
Fig. 11, Taf. XXI.

b) Rein-Bacillus der Kult. 8, Flacherie-Xonnen raupe.
(Fig. 2—6, Taf. XXIII.)

Die Kultur beginnt mit glattbogenlinig begrenzter Sphäre
(Fig. 2, Taf. XXIII); zuerst granuhrt, erscheint sie bald (Fig. 2 B)
im Mittelfeld sternförmig gestrichelt, am Rande gewimpert (Fig. 2 C);
zuletzt ist der Rand bogenlinig doppelt gesägt. Zahlreiche kleine
Halbsphären in einer Ringzone und flache Mamellen im Mittelfeld,
welche scharf gestrichelt erscheinen. In der Kultur 3 eine

64

N. J. C. Müller,

Sphärenzooglöa mit konzentrischer Kernzone. Die Fig. 4, Taf. XXIII
ergibt die Lagerung der Bazillen in einem Zahn. Die Bazillen im
Klatschpräparat unterscheiden sich: Fig. 4 die Anordnung in einem
Randzahn; Fig. 5 die Kurzfäden aus mehreren Zähnen der Kultur
Fig. 3. Die Bacillen der Zooglöa sind Langfäden in mycelähnlicher
Verflechtung Fig 6. Darf von einer Charakteristik des Kultur-
belages Fig. 3 gesprochen werden, so lautet diese: Flacher,
doppelt gezahnter Rand, erhabenes Mittelfeld, mit
flachen, scharf gestrichelten Sphären, dichter gestell-
ten kleinen Sphären nahe dem Rande, Kurzglieder der
Bacillen in den Zähnen, Lang fä den in den Zooglöa des
Mittelfeldes.

c) Bacillus der Heidelberger Wasserleitung.
(Fig. 7-11, Taf. XXIIL)

Die Kultur dieses beweglichen Bacillus ergibt schon im ersten
Zustand Fig. 7 A ein homogenes, fein granulirtes Mittelfeld, einen
schwach und unregelmässig gezähnelten, hyalinen Rand. Etwas
später erscheint das Mittelfeld stärker granulirt, der Rand fein dicht
gezähnelt, die Randzone fein radial granuHrt, gestreift. Zuletzt,
nach 48 Stunden, ist der Rand tief buchtig gezahnt mit schwachen
Doppelzähnen, In den Zahn hinein ragen dichtere Grundmassen, so
dass die Zahnrandzone mehr hyalin zum Ausdruck kommt als das
dicht granulirte Mittelfeld. Zwei Zähne, Fig. 10, zeigen den Durch-
bruch mehrerer Langfadenbacillen. Der Klatsch Fig. 11, Taf. XXIII
deutet die Lage derselben in Mäanderfiguren an. Fig. HB, der
Abklatsch eines Zahnes, zeigt die bogenlinige Figur der Langfäden
und zwei beginnende Durchbrüche a b.

Die Charakteristik des Endzustandes unter demselben Vorbe-
halt : Der Kulturbelag ist am Rande doppelt gezahnt,
in die Hauptzähne treten amöbaähnliche Radialbuch-
ten ein. Das Mittelfeld ohne Sphären homogener gra-
nulirt mit einer dichteren Randzone. Der Rand ist
nicht gewimpert und ist in keiner der Kulturphaseu
Fig. 7 ABC gewimpert. Die Zähne enthalten sehr lange,
flachspiralige Fäden, die Vibrioform (der Autoren).

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

65

d) Rein Bacterium monachae.
(Fig. 1—6, Taf. XXIV.)

Der genau kreisförmige Belag Fig. 1 B ist überaus homogen
in B granulirt, bei durchfallendem Licht braun, bei auffallendem
etwas irisirend. Zuletzt ist die Kultur (Fig. 2) ein Teller mit etwas
bogenlinig geschweiftem Rande. Die Randzone ist vom Mittelfeld
durch eine erhabene Ringzone geschieden und erscheint radial von
den Buchten aus gestreift. Das Mittelfeld ist homogen ohne jede
scharfe sonstige Konfiguration. Ebenso charakteristisch ist der Klatsch
des Randes bei ^''/i (Fig. 3) und eine kleine Partie dieser Ausfluss-
figur bei S 7 VIII HO2, Fig. 5. Die Bakterien hegen am Rand in
Ketten. Kleine Zähne, Fig. 4 a b, durchbrechen diese Randketten.
Man findet die Bakterien Fig. 5, 6 in der Kultur in allen Phasen
der Teilung. Die Charakteristik : Die Kultur ist im Mittelfeld
homogen, granulirt sehr dicht, die Randzone radial
gestreift, schwach bogenlinig eingebuchtet. Sie iri-
sirt und erscheint bei durchfallendem Lichte braun.
Diese Charakteristik muss, gegenüber den drei vor-
hergehenden, relativ stark oder gut genannt werden.
(Man vergl. alle Endphasen.)

B. Die Mischungen,
ab Micrococcus und Bacillus der Kult. 8.
(Fig. 7—10, Taf. XXIV.)

Der Interessent wird sich die zu a allein und die zu b allein
gehörigen Bilder der Entwickelung (s. Taf. XXIII u. s. f.) möglichst
genau dem Formengedächtnis einprägen. Es kommen für den An-
fangszustand zur Anschauung Fig. 7, Taf. XXIV, homogen granu-
lirtes Mittelfeld und hyaline und an der Peripherie fein gezahnte
Randzone. Fig. 10 A entspricht einer Kombination zwischen Aktino-
morpbie und einseitiger Polarisation (s. oben) Fig. 10 B und eine
berandete, rein aktinomorphe Figur mit sechs fast gleichen Strahlen.
Zu der ersten Form (Fig. 7) gehört, 48 Stunden nach der Impfung,
der Belag der Fig. 8. Derselbe ist im Mittelfeld mit grösseren, am
Rande mit kleineren Mamellen dicht besetzt. Mehrere grosse Kugel-
zooglöen, im Sektor der Fig. 8 liegen deren drei. Die Peripherie
ist dicht gewimpert. Die Mamellen sind scharf gestrichelt.

Müller, Bakterien-Forschung. 5

66

N. J. C. Müller,

Die Charakteristik liegt somit: Mit Rein Mio rococcus hat
unsere Mischkultur das öftere Auftreten der aktino-
morphen Figuren (man vergl. Fig. 10 A und B mit Fig. 1,
Taf. XXII A), die kleineren Halbsphären (Mamellen)
und den nicht gezahnten Ran d — mit der Rein Bacillus-
kultur dagegen die gestrichelten Mamellen (Fig. 8) und
den gewimperten Rand gemein. (Man vergl. Fig. 8 — 10
einerseits mit Fig. 2 C, Taf. XXIII andererseits.) Der gewimperte,
etwas gebuchtete Rand der Kultur Fig. 8 löst sich (Fig. 9) auf in
Fadenbazillen von mittlerer Länge. Der Rand Fig. 10 G zeigt in
der Figur 10 H den Durchbruch der Bazillen durch die Micrococcus-
randzone.

ac Micrococcus und beweglicher Bacillus (Vibrio?)
der Heidelberger "Wasserleitung.
(Fig. 1—5, Taf. XXV.)

Die Kultur beginnt mit dem sehr dünnen Belag Fig. 1 A
(zwanzig Stunden nach der Impfung) , welcher am Rande sehr fein
gezahnt, im Mittelfeld mit unregelmässigen Sternkolonien bedeckt
erscheint. Der Rand, stärker, vergrössert, Fig. 1 B, zeigt nun

in der homogenen Grundsubstanz unregelmässig eckige Vakuolen mit
Bazillen und Bazillenlangfäden, welche durch die Zähne ausstrahlen.
Der Rand ist doppelt gezähnelt. Nach 48 Stunden ist die Kultur
zu einer am Rande tief gebuchteten, im Mittelfeld mit abenteuer-
lichen Mäanderfiguren bedeckten Kreisfigur entwickelt (Fig. 2). Die
Bazillen liegen im Zahn des Randes in Faszikeln, welche zu Poly-
gonen geordnet sind, Fig. 3, Taf. XXV. Eine erneute Impfung am
14. März 1894 ergibt die Kultur Fig. 4 C nach 24, Fig. 4 E
nach 48 Stunden. Hier hegen vom Zentrum ausstrahlende Ketten
von Zooglöen, entsprechend den Radien der Figuren 4 a b. Der
Rand der Kulturen ist mit kleinen Halbsphären bedeckt, w^elche zum
Teil kurzgestielt sind. Das Mittelfeld mit flachen Erhebungen und,
in der Phase C, mit zahlreichen Kugelzooglöen. Der Abklatsch er-
gibt in der Verdünnung die Micrococcusgruppen Fig. 5 A und in B
die Lagerung derselben in einer Micrococcus-Zooglöa und in deren
Nähe. Die Charakteristik liegt in dieser letzteren Kultur: Von
dem Micrococcus hat die Misch kultur die zahlreichen
kleinen Zooglöen. Die Aktinomorphie in den ersten

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

67

Phasen Fig. 4AB den nicht gezahnten Rand (die Wim-
perung fehlt vollständig). Von dem Bacillus (Vibrio) die
etwas ausgeprägtere Buchtung in dem Rande, welche
gleichwohl nicht Zähnelung genannt werden kann.

ad Micrococcus und Bacterium monachae.
(Fig. 6—10, Taf. XXV.)

Ein sehr feiner Kreisbelag leitet die Kultur ein, Fig. 6. Ab-
weichend von allen bisherigen zeigt dieser Zooglüen (Cysten) in voll-
ständigstem Parenchymaverband , sowohl im ganzen Mittelfeld , als
auch am Rande, wo der Epitheltypus herrscht. Der Kontakt ist im
Mittelfeld, bis auf drei Intercellularräume , vollständig. Von dem
Zentrum strahlt ein System kleinster, aber dicht bevölkerter Zoo-
glöen aus, welche in isolirte Radialgruppen geordnet sind. So liegt
die Sache 20 Stunden nach der Impfung. Fig. 7 zeigt dieselbe
Kultur nach 48 Stunden. Der Belag ist nun ein dichterer, die Fläche
irisirt bei auffallendem Lichte, erscheint bei durchfallendem Lichte
hellbraun. Im Mittelfeld ist das Parenchymagefüge soeben noch
schwach erkenntlich, der Rand ist bogenlinig gebuchtet, die Einbuch-
tungen entsprechen den Radialwänden der epithelartigen Randzone.
Die aktinomorphen Zooglöenketten, welche vom Zentrum ausstrahlen,
sind verstärkt und das Mittelfeld zeigt gegen den Rand weisse, radial
gestreifte Konfigurationen (Durchbrüche des äusseren Belages).

Charakteristisch ist die Randbuchtun g, die Tex-
tur des äußsersten Belages, dieFarbe bei durchfallen-
dem Lichte (Bacterium) und die hellen Figurendurch-
brüche (Bacillus); man vergl. die Reinkulturen.

bc Bacillus monachae (Kult. 8) und Bacillus (Vibrio
der Heidelberger Wasserleitung).
(Fig. 11, 12, Taf. XXV, Fig. 1, 2, Taf. XXVI.)

Zwanzig Stunden nach der Impfung zeigt die Kultur Fig. 11,
Taf. XXV einen feingezahnten Rand ; derselbe erweist sich bei stär-
kerer, ^^''/i, Vergrösserung gezahnt mit Sterngruppen von Bazillen
in den Zähnen (Fig. IIB). Die überaus scharfe Charak-
teristik der Kulturkombination kommt nach 48 Stunden (Fig. 1,
Taf. XXVI) zum Ausdruck. Der Belag hat eine zentrale Radial-
gruppe von Kugelzooglöen. Das Mittelfeld ist mit zahlreichen grossen

68

N. J. C. Müller,

und kleinen Halbsphären (Mamellen der Grundsubstanz) bedeckt.
Diese sind scharf gestrichelt (man vergl. Fig. 3, Taf. XXIII).
Beachtenswert ist eine Zone dichtester Kleinsphären nach dem Rande
zu. Diese kommt in den Klatschpräparaten Fig. 12 A B, Taf. XXV
zur besseren Übersicht. In A ist der Rand mit den Sterngruppen
von Bazillen , in B sind die Bazillen der kleineren Sphären besser
zum Abdruck gelangt. Der Rand der Kultur Fig. 1 , Taf. XXVI
ist tief gebuchtet, die Zähne doppelt gekerbt. Der Abklatsch der
Randpartie ergibt im trockenen Zustand eine auffälligste Lagerung
der Bazillen für einen Zahn, Fig. 2, Taf. XXVI für mehrere kleine
Partien in der Nähe der Zähne. Nach diesen Aufnahmen setzt sich
der Zahn zusammen aus Faszikeln von Bazillen, deren Axe in man-
nigfacher Richtung orientirt erscheint. Die letzten Buchten sind
Einzelfaszikel oder verschobene Ketten, Fig. 2 A B, Taf. XXVI.
Die Faszikel sind so geordnet, dass auf je drei Kurzstäbe ein Lang-
stab kommt, welcher die bazillenleeren Interstitien für mehrere Kurz-
stabfaszikel überbrückt. Um diese eigentümliche Lagerung besser
zur Anschauung zu bringen, sind in den Figuren 2 A B, Taf. XXVI
die bazillenfreien Flächenstücke schwarz angelegt. Die Berandung
des Zahnes zeigt auch zahlreiche Faszikel, deren Axe parallel dem
Rande gerichtet, oder solche, deren Axe senkrecht zum Rande steht,
bei Fig. 2 E a, Taf. XXVI. Eine Kette von Kurzstäben bildet nach
aussen die endliche Begrenzung des Systemes. Unter dem Zahn
liegt die aus wirr verflochtenen Langfäden zusammengesetzte Rand-
zone des Mittelfeldes, Fig. 2 E c d. Die Charakteristik der
Kultur liegt im Fehlen der Wimpern, im Vorhanden-
sein der tiefen Buchten und Zähne, der zahlreichen
gestrichelten Halbsphären, Mamellen auf homogener
Grrundsubstanz (vergl. Fig. 3, Taf. XXIII und Fig. 8,
Taf. XXIV) und in der eigentümlichen Lage der Ba-
zillen am Rande.

bd Bacillus monachaeKult. 8 undBacteriummonachae.
(Fig. 3—5, Taf. XXVI.)

In der ersten Phase, 20 Stunden nach der Impfung, Fig. SAB,
ist die Kultur bei auffallendem Lichte weiss, schwach irisirend, bei
durchfallendem Lichte hyalin. Die Randzone zeigt epithelähnlichen
Parenchymaverband, indes in dieser Hinsicht nicht von dem scharfen

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

69

Gepräge der Kontaktflächen wie Fig. 6, Taf. XXV. Diese letztere
Figur ist aber durchaus massgebend, da beide Kombinationen Paren-
chymaverband ergeben , wenigstens in der ersten Phase , da keine
der beiden Bakterien, für sich allein kultivirt, den Verband zeigte,
da alle Kombinationen des gegebenen Bacillus den Verband nicht
zeigen (man vergl. die ersten Phasen der Kombinationen AB, B C,
BD), so bleibt nach der DiflFerenzmethode nur Bacterium als der
Urheber jener Anordnung (also ü ist massgebend, man vergleiche
Fig. 1, Taf. XXVII für die Kombination AD). Nach 48 Stunden
ist die Kultur Fig. 4, Taf. XXVI dicht im Mittelfeld belegt (der
Parenchymaverband ist ganz verschwunden); sie ist bei auffallendem
Lichte weiss und stark irisirend, bei durchfallendem Licht braun,
bis auf die hyalin farblosen sternförmigen Durchbrüche in der Nähe
des Randes. Der Rand ist regelmässig buchtig bogenlinig begrenzt,
zeigt flossenähnliche, tangential geschichtete , farblose Durchbrüche.
Die Randpartie Fig. 5, Taf. XXVI zeigt im trockenen Klatschprä-
.parat dichte Lage der Bakterien in der absoluten Grenze in Reihen,
welche durchbrochen sind von Bazillenlangfäden , diese lockern ort-
ich auch das Gefüge der Bakterienlagerung, bilden Vakuolen , ein
Verhalten, welches dadurch in der Fig. 5, Taf. XXVI sich heraus-
heben liess, dass die Bazillen dunkel angelegt wurden. Die aus-
getretenen Bazillen lagern bei c, e, f parallel dem Rande, brechen
aus dem Rande hervor bei d, brechen durch kleine Zähnelungen
des Bakterienbelages bei b. Konsistenz und optisches Ver-
halten, sowieBerandung stammen somit von dem Bac-
terium, die hyalinen Figuren in der Nähe des Randes
und die zahnähnlichen lokalen Randdurchbrüche ge-
hören dem Bacillus an, die Charakteristik darf eine
starke genannt werden. (Man vergleiche Fig. 2, Taf. XXIV,
Fig. 7, Taf. XXV, Fig. 2, Taf. XXVII die Kombinationen von D)
Kombination von kleiner und grosser zentrifugaler Tendenz.

cd Bacterium monachae und Bacillus der Heidel-
berger Wasserleitung (Vibrio).
(Fig. 1—4, Taf. XXVII.)

Wie bei der vorhergehenden Kombination angedeutet, ist der
erste Zustand nach 20 Stunden (Fig. 1 , Taf. XXVII) durch den
Parenchymaverband und den Epithelcharakter der Randzone kennt-

70

N. J. C. Müller,

lieh. Die Sphären des Mittelfeldes bilden häufiger Radialketten,
welche an eine Epithelzelle Anschluss aufweisen. Nach 48 Stunden
zeigt die Kultur scharf ausgeprägte Kugelzooglöen in Radialketten im
Zentrum, den im durchfallenden Lichte braun erscheinenden, sonst
irisierenden Belag, welcher von bogenlinig begrenzten, sehr grossen,
lichten Flächen durchbrochen ist und auch in der Nähe des regel-
mässig entfernt gebuchteten Randes kleine Aveisse Durchbrüche als
Radialstrichelungen aufweist. Eine grosse, doppelt berandete Zoo-
glöa liegt in der Nähe der Peripherie. Zwei wolkige Flossendurch-
brüche an der äussersten Begrenzung geben Anschluss an Fig. 4,
Taf. XXVI. In dem Klatschpräparat Fig. 3, Taf. XXVII erscheint
der Kontakt der Flächen am Rande in radialer Richtung als ein voll-
ständiger. Bogensternfiguren liegen in der Nähe der Randzone, Fig. 4,
Taf. XXVII. B Bakteriengruppe mit wenig Arthrosporen bildenden
Bazillen, C Bakterien in der Teilung begriffen. Auch hier ist die
Charakteristik befriedigend, der grössere Anschluss liegt nach Fig. 4,
Taf. XXVI . Dichter, irisirender Belag, bogenlinig ge-.
buchteter Rand (Bacterium), mächtige hyaline Durch-
brüche im Mittelfeld, kleinere nahe der Peripherie
und Randdurchbrüche gehören dem Bacillus (Vibrio).
(Man vergl. D und alle Kombinationen zu D , es sind die Fig. 7,
Taf. XXV, Fig. 10, Taf. XXV, Fig. 4, Taf. XXVI).

XIV. Durchführung einer Flusswasser-Bakterien-Analyse.

Aus der Weser bei Münden wurde am 25. Mai (1894) Wasser
geschöpft. In acht Reagensgläsern wurden Alkoholgemische dieses
Wassers hergestellt.

Nr. 1 Reines Wasser.

Nr. 2 Alkohol 1 : Wasser 72.

Nr. 3 „ : „56.

Nr. 4 „ : „ 42.

Nr. 5 „ : „ 33.

Nr. 6 „ : „ 28.

Nr. 7 „ : „ 24.

Nr. 8 „ : „ 21.

Aus den acht Cylindern wurde in acht Nährgelatinecylinder
geimpft und in acht Tropfen von der gleichen Gelatine auf dem

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

71

Objektträger. Beide Reihen von Kulturen wurden für drei Tage
bei einer niederen Temperatur von 10 — 15° C. aufgestellt.

"Wasser der Weser, I. Parallelreilie.
Impfung in Nährgelatinecylinder, Differenzirung
durch Alkoholzusatz.

Die oben beschriebene Reihe zeigte am 1. Juni, also nach fünf
Tagen (Temperatur 10— U^C), dieses Verhalten (s. Fig. 1, Taf.
XXXII), wenn schon nicht eine so glatte Differenzirung, wie der
nicht Eingeweihte erwarten wird, so doch die Richtigkeit der Methode:

Erste Abmusterung. (Fig. 1, Taf. XXXIL)

Nr. 1. Reines Weserwasser. Yier weisse Sphärenkolonien, zwei
Zackenkolonien, eine 4 mm grosse Orangekolonie und eine
2 cm grünschillernde Strahlung. Die letztere ohne Trübung
der Gelatine, die ersteren sind Trübungen in der Gelatine.

Nr. 2. Alkohol 1 : W^eserwasser 72: Fünf weisse Kolonien, die
unterste mit zwei kleinen Orangekolonien. Die grüne Strah-
lung fehlt hier und in allen folgenden.

Nr. 3. Alkohol 1 : Wasser 56: Der Meniskus schwach belegt, vier
Sphären und eine meniskoi'de Zone im Grund des Stichkanals.

Nr. 4. Alkohol 1' : Wasser 42: Meniskus und Stichplatte belegt
ohne Kolonien.

Nr. 5. Alkohol 1 : Wasser 33 : Der Meniskus schwach belegt, drei
kleine Sphären.

Nr. 6. Alkohol 1 : Wasser 28: Der Meniskus diskontinuirlich be-
legt, die Stichkanäle klar.

Nr. 7. Alkohol 1 : Wasser 24: Der Meniskus belegt und eine lichte
Sackzone des Stichkanals.

Nr. 8. Alkohol 1 : Wasser 21: Der Meniskus belegt, die Gelatine
sonst klar.

Zweite Abmusterung,
Kult. 1. Reines Wasser zeigt im Anfangszustand fünf farblose Sphären,
eine grüne Zone und eine Orangekolonie; sie schliesst nach
20 Tagen mit der vollständigen Verflüssigung auf 50 mm
Tiefe. Die Flüssigkeit ist grünschillernd, mit gelblichem
Sediment. Die Orangekolonie ist hiebei verloren gegangen
(kommt aber in Nr. 6 wieder zum Vorschein).

72

N. J. C. Müller,

Kult. 2, Alkohol 1 : Wasser 72: Nahezu wie vorher.

Kult. 3, Alk. 1 : Wasser 56 : Ist nach 20 Tagen auf 48 mm ver-
flüssigt; gelbe Flüssigkeit, gelbes Sediment.

Kult. 4, Alk. 1 : Wasser 42: Nach derselben Zeit nicht ver-
flüssigt, zeigt gelbweissen, scheinbar homogenen Belag.

Kult. 5, Alk. 1 : Wasser 33 : Nach derselben Zeit auf 45 mm grün-
flüssig, mit gelbem Sediment.

Kult. 6, Alk. 1 : Wasser 28: Die Gelatine klar, bis auf eine ein-
zige Orangekolonie.

Kult. 7, Alk. 1 : Wasser 24: Verhält sich wie Kult. 1, auf 50 mm
flüssig.

Kult. 8, Alk. 1 : Wasser 21: Verhält sich wie Kult. 2, auf 50 mm
flüssig.

II, Parallelreihe.
Impfung in Nährgelatin etropfen auf dem Objektträger.

Nach fünf Tagen (1. Juni) wie vorher zeigte die Reihe (siehe
Fig. 3, Taf. XXXII und den vorstehenden Text) in:

Nr. 1. Eeines Weserwasser. Der Tropfen halbverflüssigt und hier

grünschillernd, mit zahlreichen isolirten, weissen Zooglöen.

eine orange Zooglöa.
Nr. 2. Zahlreiche, weisse Zooglöen, die Gelatine fast — wie in

allen mit Ausnahme von Nr. 6 — farblos.
Nr. 3. Drei grosse lichtere Ringzonen, mehrere dichtere Sphären,

diese alle weiss, daneben eine grünblau irisirende Gruppe

und eine Orangegruppe.
Nr. 4. Zwei grosse, weisse Zooglöen, eine grüne Halbsphäre, mit

konzentrischer Orangehalbsphäre.
Nr. 5. Eine grosse, farblose Sphäre, mit kleinerer Orangesphäre

und zwei kleineren farblosen.
Nr. 6. Von den zwei Platten ist der Tropfen der einen intakt,

der andere ist vollständig verschwunden; der Objektträger

trägt einen dünnen, irisirenden Belag.
Nr. 7. Eine winzige, dreigliedrige Zooglöa.

Nr. 8. Eine einzige Sphäre mit zentraler Kernzone mit bogen-
liniger Berandung.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

73

Die Wassermischung Nr. 8, Alkohol 1 : Wasser 21.
(Fig. 1—10, Taf. XXXIIT, Fig. 1, Taf. XXXIV.)

Die Wasser-Alkohol-Stichkultur Nr. 8 wurde konzentrirt ge-
impft in gewöhnliche Gelatine, Fig. 1, Taf. XXXIl, in Nährgelatine
auf dem Objektträger, Fig. 2, Taf. XXXII. Das Wasser direkt in
Nährgelatine am 25. — 27. Juni. Aus den Kulturen der verdünnten
Stichkultur in Nährgelatine auf dem Objektträger wurde am 26. Juni
ein Klatschpräparat hergestellt.

Von einer Platte der direkten Impfung des Gemisches in Nähr-
gelatine wurde ebenfalls ein Klatschpräparat hergestellt.

Die Objektträgerkultur der Kult. 8 wurde verdünnt und von
neuem in Nährgelatine auf den Objektträger geimpft (27. Juni), von
der verdünnten Kultur wurden sechs Pigmentpräparate hergestellt.

Die Impfung der konzentrirten Kultur auf gewöhn-
liche Gelatine (Fig. 1, Taf. XXXIII) ergibt eine nahezu kreisför-
mige Kultur mit gezahntem Rande und schwacher Interferenz im
polarisirten Lichte. Vom Zentrum ein zierliches System zum Teil
dichotomstrahliger Rillen.

Die verdünnte Kultur ergibt auf Nährgelatine (Objekt-
träger) nach 36 Stunden granulirten Belag mit hyaliner Randzone,
die Peripherie unregelmässig gebuchtet. Zahllose sehr kleine Kugel-
zooglöen bedecken da.^ Mittelfeld (Fig. 2, Taf. XXXIII).

Das Wasser -Alkoholgemisch direkt in Nährgelatine ge-
impft, ergibt in derselben Zeit einen zentralen dichteren und peri-
pheren lockeren Belag (Fig. 3, Taf. XXXIII). Bei ^o/i zeigten
diese Kugelzooglöen in Teilung und in Apposition (Verschmelzung
durch Heranwachsen, vergl. Fig. 4, Taf. XXXIII).

Für die Impfung der Kultur 8 in Nährgelatine geben die
Figuren 8 A nach B, Taf. XXXIII die Lagerung der Keimhäufchen.
Es sind grössere und kleinere Kügelchen mit scharfem Kontur,
welche rasch sprossen, das heisst wiederum kleine Keimgruppen aus-
senden. Durch Abplattung der zahllosen Vakuolen (Zooglöen) ent-
steht der zierliche Parenchymaverband B Fig. 8, Taf. XXXIII (die
Figur rechts), in welchem die grösseren Sphären aus A noch kennt-
lich, durch kleine Polygonbläschen verbunden sind.

Der analoge Vorgang für die direkte Wasserimpfung ist in
Fig. 1, Taf. XXXIV nahezu entwicklungsgeschichtlich aus der Platte

74

N. J. C. Müller,

Fig. 4, Taf. XXXIII zusammengestellt, a, b, c, d, e sind die Ini-
tialen der Sprossung für zweigliedrige , f, g, h, i dieselben bis zur
Tetrade. Die Gruppe k — n ergibt Sprossung durch Ejakulation
kleiner, zu Bläschen bei dem Austritt geformter Zooglöen mit Rand-
wulst des Mutterbläschens um die Austrittsstelle. Die Gruppe o — s
ergibt den Kettenverband mit Terminalsprossung (solcher Sprossung
der Endglieder), mit Sprossung eines Mittelgliedes, so p. Die üb-
rigen bis y sind die älteren Zustände, und z entspricht einer Ver-
schmelzung mehrerer aus den Gruppen t — y. In der Schraffirung
sind die grösseren, dichter bevölkerten dunkler gehalten.

Aus der Kultur Fig. 4, Taf. XXXIII wurde eine Probe ver-
dünnt von neuem in Nährgelatine geimpft, am 29. Juni 1894. Die
Abmusterung vom 3. Juli ergibt, Fig. 6, Taf. XXXIII, sternför-
mige Konfiguration des Randes. Das Mittelfeld mit sternförmigen,
in gegenseitig in Verband stehenden Gruppen.

Der Zustand der Kultur Fig. 2, Taf. XXXIII hat sich bis
3. Juli nach Fig. 7, Taf. XXXIII verändert, grössere und sehr kleine
Sphärenzooglöen im Kettenverband.

Am 3. Juli ergibt die Kultur Fig. 6, Taf. XXXIII den in
Fig. 9, Taf. XXXni niedergelegten Befund. Bacterium vorherr-
schend. Die Kultur Fig. 7 zeigt weniger Bacterium, dagegen Bacillus
in Fäden a, in Kokken und Endosporen c, Fig. 10, Taf. XXXIII.

Mikroskopische Aufnahme: Das Klatschpräparat aus der
Kultur Fig. 2, Taf. XXXIII ergibt in der Gruppe c Fig. 5 lang-
und kurzgliedrige Bazillen, mit Arthrosporenbildung bei d. In der
Gruppe b Bacterium (Diplobacterium). Im trockenen Zustand zeigen
die Bazillen der Gruppe c eine lichte Umrandung nach der angren-
zenden Gelatine, dunkle Menisken in den Polen und dunklere Quer-
bänder (a ist eine zeichnerische Übertreibung der Vergrösserung
S. J VIII HO2).

Aus der Kultur Fig. 6 , Taf. XXXIII ergibt die mikrosko-
pische Probe Bacterium in Ketten, Fig. 9, Taf. XXXIII. Ahnhche
Aufnahme für Bacterium und Bacillus aus der Kultur Fig. 7,
in Fig. 10, Taf. XXXIII. Dieselben mikroskopischen Proben bei
Zeiss homogen. Imm., 2 mm, Oc. VIII ergeben in Fig. 11 und 12,
Taf. XXXIII.

A Faden mit engerer Teilung in a a, den Endigungen des
Fadens und zahlreiche EUipsenzwillinge. Die Grundmasse ist mit

Beiträge zur Kenntnis der Balcterien.

75

feinen Bazillen ausgefüllt, welche zum Teil Artlirosporen in Ketten
aufweisen.

Eine zweite Aufnahme mit der Zeissschen Immersion, 2 mm,
Ok VIII Fig. 11 ergiebt: A, B, C, D, E Zustände der Fadentei-
lung. E Faden mit drei Gliedern, davon a und b vegetativ, c mit
scheinbar endogenen Ellipsenzwillingen. F Fadenstück mit zwei
solchen ElHpsenzwillingen. Gr zwei solcher in freier Lage. H, I, K
die Ellipsenzwillinge vielleicht in früherer Entwicklungsphase.

Kult. 7. Alkohol 1 : AVasser 24.
(Fig. 2—8, Taf. XXXIV, Fig. 1—15, Taf. XXXV, Fig. 1—5,

Taf. XXXVI.)

Am 3. Juli wurde, wie vorher das Alkoholwassergemisch auf
Nährgelatine, die konzentrirte Kultur auf gewöhnliche Gelatine, die
verdünnte Kultur auf Koch-Gelatine übertragen. Nach 20 Stunden
(Temperatur 14 ° C, ) sind alle angegangen.

Das Alkohol - Wassergemisch, direkt geimpft.
(Fig. 2—8, Taf. XXXIV.)

Zeigt am 4. Juli alle Entwickelungsstadien farbloser Kugel-
zooglöen. Die Kultur erweist sich aus den Zooglöen als Mischkultur:

I. Die Kugelzooglüen , Fig. 2, 3, Taf. XXXIV, beginnen mit
sehr kleinen Sphären, in welchen bald eine dichtere Kernzone auf-
tritt. Die Teilung der Sphäre kann durch Aussprossen ursprünglich
kleinster Sphären erfolgen, so in Fig. 2 c; durch Halbirung der
ganzen Muttersphäre , so in Fig. 2 e, o. Dies kann sich wieder-
holen, so dass Kettensphären entstehen, n, p. Auch die Median-
teilung der Kernzone kommt vor, so in o. Auf dieses Verhalten
ist im molekular-physikaüschen Sinne Gewicht zu legen. Das Gleiche
gilt für die Kern- und Ringzonenbildung in i und 1. Die Figuren-
reihe 3 zeigt einige der Typen nach 46 Stunden. Sie haben alle
ein scharfes Gepräge; a zwei Teilsphären, eine mit, die andere ohne
Kernzone, b ebensolche mit Kernzone und scharf konturirter Scheide-
wand, d Klappenartig scharfe Trennung der Grenzschicht und Aus-
tritt einer kleinen Tochtersphäre ohne Kern, die Muttersphäre mit
Kernzone, e und f die Initialen zu d. g die Zentral- und eine Teil-
sphäre mit Kernzone, die andere Teilsphäre ohne solche, scharfe
Trennung der Sphären mit doppeltem Contour. h Teilung der Kern-

76

N. J. C. Müller,

zone in drei, i Initialen zu e und f, k die Zentralkernzone bildet
zwei seitliche Tochterkernzonen. Die Trennung in den Kommissural-
oder Dehiszenzflächen der Gesamtsphäre. 1 Kettensphären, die zen-
tralen mit Kernzone, die Endsphären ohne solche, m Teilung zu
dröi. Die zentrale Muttersphäre mit Kernzone, n Teilung der Sphäre
und ihrer Kernzone mit scharfer Dehiszenzfläche und Sphärenspros-
sung wie in d.

IL Die Stern- oder Knopfzooglö en. Fig. 4 und 5,
Taf. XXXIV. Auf derselben Platte liegen stern- oder knopfförmige
Sphären, mit zentraler Verdickung, aber ohne Kernzonen. Der Rand
der Gebilde ist mehr oder weniger gebuchtet, oft zierlich strahlig
gezahnt. Die Entwickelung der reinen Form liegt in der Figuren-
reihe 5 a b. Zuletzt erscheinen die Sphären im Radius sternförmig
gestrichelt und mit zierlichen Ringzonen. In b sind sie in Teilung
oder aber auch in Apposition (?) begriffen. Alle übrigen Figuren
derselben Reihen 4, 5 sind unter den Begriff der Apposition, oder
auch Einschliessung der Kugelzooglöen durch Sternzooglöen, zu bringen
(gemischte Zooglöen). Es müssen in der Analogie, nach früheren,
sehr kleine Keimhäufchen beider nahe beisammen gelegen haben,
so dass eine gegenseitige Umschliessung stattfinden konnte.

III. Die gemischten Zooglöen. Es möge hier nochmals
betont sein, dass es sich um flüssige Sphären handelt, von wechseln-
der Dichte, Konsistenz und wechselnder Volksdichte, um das Merk-
würdige des Zusammenlebens, die volle, unabhängige Formentfaltung
zweier spezifisch unterschiedener Volksanhäufungen zum Ausdruck
zu bringen, b c einfache Sternzooglöa Sz mit je einer Kugelzoo-
glöa Kz. d und e ungleich geteilte Sz mit ungleich grossen Kz.
f imd k ebensolche, nahezu gleiche Teilung, g zentrale Lage der
Kz in der Sz. h exzentrische Lage der Kz. i Sz mit einfachen
und Sz mit sich teilenden Kz. 1 m Ketten der Sz mit einfachen
und sich teilenden Kz. n o ebensolche, q r s die späteren Zustände
zu 1 m. Kz in Sz mit Kernzonen in p q r s. Die Figurenreihe 5
zeigt mehr oder weniger exzentrische Lagen der Kz. Teilungen und
klappenartige Dehiszenz in der Gruppe g.

Mikroskopische Aufnahme. Am 5. JuU wurden unter
der Präparirlupe mit sehr feinen Glasnadeln aus I der Kugel- und
aus II der Sternzooglöa Partikel geholt, in sterilisirtem Wasser
verdünnt, die Verdünnung in Nährgelatine auf dem Objektträger

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

77

geimpft. Von derselben Verdünnung wurden mikroskopische Prä-
parate tingirt, von der Platte, welche beide trägt, wurde ein Klatsch-
präparat hergestellt.

Die mikroskopische Analyse ergibt in den Kugelzooglöen der
farblosen Kultur 7 : Bacterium, s. Fig. 8, Taf. XXXIV, die farblose
Sternzooglöa ergibt: Micrococcus, Fig. 7, Taf. XXXIV. Die flüs-
sige grüne Grundmasse ergibt jenen Bacillus flurorescens liquefaciens.
Der Klatsch ergibt mit Gentianaviolett die feinen und kurzgliedrigen
Bazillen mit Arthrosporen in dichter Adhäsionsschicht und in über-
aus zierlichen Verzweigungen, Fig. 14, 15, Taf. XXXV.

Die beiden Zooglöen Sz, Kz der farblosen Kultur ergeben bei
Zeiss homog. Imm. 2 mm Okular VIII indes immer noch-zweierlei:

Sternzooglöa: Eine Micrococcacee mit ungleich grossen Indi-
viduen, Fig. 3, Taf. XXXV, mit Gentianaviolett gefärbt.

Kugelzooglöa : Fig. 4, Taf. XXXV. Eine Micrococcacee oder
Bacterium, welches sich der Systematik nicht fügt, daher die Be-
schreibung :

Faden gegliedert, mit zwei polaren Spaltlingen. Jede dieser
ist zweizelhg; zahlreiche solcher isolirt, daneben Kugeln in Ketten,
zu drei vereinzelt. Rechts eine Gruppe, mit Gentianaviolett blau
gefärbt in roter Unterlage; Fadenmicrococcacee.

Synopsis der aus den Zooglöen Fig. 2, 3, Taf. XXXIV
mit der Glasnadel unter der Präparirlupe derivirten
Kulturen am 7. Juli.

I. Die Impfung aus der Kugelzooglöa Fig. 2, 3, Taf. XXXIV
der farblosen Kultur ergibt den farblosen, irisirenden Belag Fig. 1,
Taf. XXXV mit Randzone a, mehreren Ergüssen aus der Zentral-
kultur, von welchen diese beachtenswert sind: Gezahnte flache
Sphärenauswüchse, Ringzone mit zierlichen Zooglöen c, ein Teil der
Randzone a und Zooglöen im Mittelfeld d. Das Mikroskop ergibt
Reinmicrococcus, gut mit Gentianaviolett gefärbt, Fig. 7, Taf.
XXXIV.

II. Die aus den farblosen Sternzooglöen geimpfte Kultur er-
gibt grössere hyaline Sphären a und zahllose Gruppen gehäufter
kleiner Sphären b, Fig. 2, Taf. XXXV; die sehr verdünnte Über-
tragung im Gentianaviolett-Präparat ergiebt ebenfallsMicrococcus,
Fig. 7, Taf. XXXIV.

78

N. J. C. Müller,

III. Die Kugelzooglöen der grünen Kultur Fig. 5 — -8, Taf.
XXXV ergaben in Fig. 1, Taf. XXXVI eine flüssige, grüne Kultur
mit zahlreichen Sphären, grossen und kleinen. Der Rand derselben
ist granulirt. Die flüssige Grundmasse ist granulirt. Der mikro-
skopische Befund: Bacillus mit Arthrosporen, Fig. 10, Taf.
XXXV.

IV. Die Sternzooglöen der grünen Kultur Fig. 5— H, Taf. XXXV
in der Randzone P ergeben grüne Verflüssigung. Die Zooglöen
hierin sind eigentümlich in Ketten zusammenfliessende, hyaline, fein
granulirte Massen, Fig. 2, Taf. XXXVI. Das Gentianaviolettprä-
parat weist den kurzgliedrigen Bacillus mit geringer Arthro-
sporenbildung nach, Fig. 14, 15, Taf. XXXV.

Zusammen: zwei Micrococcaceen,

eine Micrococcacee in Diplobakterien (s. weiter
unten),

ein grüngefärbter Bacillus (liquefaciens) mit Arthro-
sporen.

Die merkwürdigste Beobachtung in der Kulturenreihe 7 machte
ich am 7. Juh mit der Platte, welche in Fig. 5—8, Taf. XXXV
abgebildet ist. Die Sphären waren bei der Abmusterung schon im
Zerfliessen begriffen. Es waren unregelmässig granulirte Brocken,
grosse und kleine. Der Durchmesser des Kulturbelages mochte 8 mm
betragen. Plötzlich zerlegte sich die Flüssigkeit in 20—30 Strudel^
welche über das Gesichtsfeld hinzogen, Fig. 9, Taf. XXXVII. In
jedem Strudel eine Ringzone, von welcher ans die Partikel, grössere
wie kleinere, sich nach dem Zentrum bewegten und in ihrer Bahn
einen Ring beschrieben. Die Teilchen stürzten sich in den zentralen
Trichter mit grosser Schnelligkeit und kehrten , einen vollen Kreis
beschreibend, wieder nach der Peripherie zurück. Diese Strudel
bewegten sich in der Masse fort, veränderten ihre Kreis- in Ellipsen,
gestalt durch gegenseitige Störung. Das Phänomen dauerte höch-
stens 10 Sekunden, dann trat Ruhe ein. Die Platte mit der grün-
flüssigen Kultur lag vor der Beobachtung 2 — 3 Stunden im Exsik-
kator auf einer Messingplatte. Das Phänomen wurde beobachtet in
dem Zeitpunkt, wo die Platte bei am Mikroskop abgemustert
werden sollte. (Während der Beobachtung herrschte ein starkes
Gewitter.)

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

79

Kult. 6, Alkohol 1 : Wasser 28. '
(Fig. 6—8, Taf. XXXVI, Fig. 1—6, Taf. XXXVII.)

Am 3. Juli wurde das Wasser, wie vorher, geimpft. Da die
Gelatine der Stiohkultur fest und klar, nur einen dünnen Belag im
Meniskus und eine orange- bis mennigrote Kolonie im Innern der
Gelatine trägt, so wurde ein mit der Platinöse geholter Partikel der
Orangekolonie, verdünnt in gewöhnliche und in Nährgelatine, geimpft.
Auch das Wassergemisch wurde in Nährgelatine geimpft. Dem Be-
fund in Fig. 1, 2, Taf. XXXII entsprechend, müssen mindestens zwei
Mikrobien isolirt werden können.

I. Die verdünnte Orangekultur ergibt, olme Verflüssi-
gung der Nährgelatine, eine elegante kombinirte Emulsionsfigur A,
Fig. 6, Taf. XXXVI. Diese ist aktinomorph mit schwacher Polari-
sation und zeigt Radial- und periphere Gruppen zahlloser, scharf
konturirter Zooglöen, deren Teilung und Gruppirung in den klein-
sten Gruppen der Fig. 6 B, Taf. XXXVI dargestellt ist. Der Rand
trägt gegen 10 Zähne, als aktinomorphe Vorstösse infolge stärkerer
Häufung der Keime. Die Figurenreihe C, D, E, F, G, H gibt die
Anordnung der Zooglöen in den Zähnen, nach der Entwicklung ge-
ordnet. Sehr zu beachten sind volkreichere, verstärkte Doppellagen
in F und G, welche wie Riffe vom Mittelfeld in den Zahn aus-
strahlen. Die Zooglöen sind in Furchenteilung begriffen, 12 Stun-
den nach der Impfung maulbeerartig granulirt. Das Mittelfeld in
A zeigt aktinomorphe, dichotome Gruppen, welche in durchschlagen-
der Weise jene Theorie der Emulsionsfiguren bestätigen. H ist ein
solches Partialsystem, K und I geben die Furchenteilung. L eine
radial geordnete Gruppe in Teilung. Nach 36 Stunden (s. M) zeigen
alle einen scharfen, einfachen Kontur, die Vakuole erscheint auf das
Feinste homogen punktirt.

Die mikroskopische Analyse ergibt in Fig. 6, Taf. XXXVI
Q, R, S eine Bacterium-Micrococcacee mit Zweiteilung von sehr un-
gleicher Grösse der Individuen, in der Kultur ohne gegenseitigen
festeren Verband. Mit Gentianaviolett (Q) zeigen die grösseren In-
dividuen einen meniskenförmigen Plasmabelag. Fuchsin R zeigt
vier Plasmaquadranten, Bismarckbraun eine hyaline Randquellungszone.

Die verdünnte Kultur der Orangekolonie (s. Fig. 2,
Taf. XXXII) wurde am 3. Juli auch auf Platten von gewöhnlicher

80

N. J. C. Müller,

Gelatine übertragen. Am 6. Juli zeigt die eine der Platten Fig. 6
N, Taf. XXXVI einen Ellipsenbelag mit bogenlinigem Rande und
hirnmäanderartiger, homogener, irisirender Konfiguration, Fig. 6 0,
Taf. XXXVI. Die mikroskopische Analyse ergibt hier in Fig. 6 P
Bacterium. Der Orangefleck in Fig. 2, Taf. XXXII ist also nicht
rein, sondern ein Gemenge, in welchem jene Micrococcacee mit
wenig Bacterium verunreinigt erscheint. Das Verfahren entspricht
somit einer Reinzüchtung dui'ch Fraktioniren auf zwei verschiedenen
Unterlagen.

Das ursprüngliche Alkohol-Wassergemisch 6 wurde
am 3. Juli ebenfalls in Nährgelatine geimpft. Erst am 6. kamen
die Kugelzooglöen Fig. 1 A, Taf. XXXVII zum Vorschein. Es sind
grössere und kleinere, lichtere, scharf konturirte Sphären, in deren
Nähe dunklere, mit scharfer Klappenteilung des äusseren Belages in
die Augen springen, so in b, c, e, Fig. 1, Taf. XXXVII. Die mikro-
skopische Analyse ergibt hier Reinbacterium (s. Fig. 1 c). Hierin
die Kontrollebestätigung des Ergebnisses für die Kultur auf gewöhn-
licher Gelatine. Fig. 1 D aktinomorphe Kultur auf gewöhnlicher
Gelatine (^/i).

Der Meniskus der Kultur 6. (S. Fig. 1 b, Taf. XXXII.)

Der weisse, langsam wachsende Belag wurde, um mit der
Platinaoadel zu dem Orangefleck zu gelangen, zerstört. Die Kultur
ging nach 24 Stunden in den Zustand der Fig. 8, Taf. XXXVI
über. Drei Orangesphären und eine weisse, sackartige Belagszone,
welche vom Meniskus aus in die Gelatine vorrückt. Die Kultur aus
diesem Belag ergibt zunächst einen sehr feinen Bacillus (s. Fig. 7),
welcher durch den Zusammenhang aller seiner Glieder merkwürdig
ist. Es ist ein dentritisch dichotomes System mit der falschen Ast-
bildung des Cladothrix (s. Zopf 1. c), mit aufsteigender und rück-
gängiger oder absteigender Verzweigung der falschen Aste, mit Ar-
throsporen an einigen der letzten Auszweigungen. Derselbe Belag
des Meniskus, in Wasser verdünnt, die Verdünnung in Koch-Gela-
tine geimpft, ergibt nach 24 Stunden (4. — 5. Juli) in der Fig. 1 B,
Taf. XXXVII einen weissen, irisirenden, fast homogenen Belag mit
Bogen und Sphärenbegrenzung und kleinparenchymatischer Zooglöen-
zone im Mittelfeld. Das Klatschpräparat ergibt Reinbacterium (man
vergl. die Kultur Fig. 1 B mit den Gemischen und Reinkulturen s. o.).

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

81

Synopsis aller Kulturen des Wasser-Alkoholgemisches 6

am 7. Juli.

I. Das ursprüngliche Wassergemisch, in Nährgelatine auf dem
Objektträger geimpft, ergibt die Zooglüen der Fig. 1 A, Taf. XXXVII.
Die mikroskopische Analyse ergibt: Rein-Bacteriura.

II. Die Orangekultur zeigt am 7. Juli bei **"/!, ^^"Ii einzelne
Sphären, sowohl am Rande, wie im Mittelfeld orangegefärbt. Fig. 2,
Taf. XXXVII. Micrococcacee rein. Die Entwicklung in Fig. 6 Q
bis S, Taf. XXXVl, und Fig. 3, Taf. XXXVII mit Zeiss homog.
Imm. Oc. VIII. Daneben eine Bakterie mit Fuchsin tingirt.

III. Der Meniscusbelag ergab jenen Fig. 7, Taf. XXXVI ab-
gebildeten Bacillus subtilissimus mit dichotomen Asten und Arthro-
sporen.

IV. Die Impfung der Orangekultur auf gewöhnliche Gelatine
ergibt die homogene Belagkultur der Fig. G, Taf. XXXVI. Die
Untersuchung ergibt Rein-Micrococcus

V. Der weisse Belag im Sack a Fig. 8, Taf. XXXVI, im ver-
dünnten Zustand geimpft, Fig. 1, Taf. XXXVII, gibt am 7. Juli eine
5 mm Sphäre homogen weiss. Die Untersuchung: Rein-Bacterium.

VI. Die derivirte Kultur im Meniscusbelag in Nährgelatine
ergibt, Fig. 4, Taf. XXXVII, mit Gentianaviolett gefärbte, grössere
Kugeln und solche in Teilung. Zeiss homog. Imm. 2 mm Ocular VIII_

VII. Stäbe, welche sich teilen in die Reihenfolge a, b, c, d, e,
mit Zwillingsellipsen oder Einzelellipsen abschliessen. Zeiss homog.
Imm. 2 mm Ocular VIII. Aus einer Zooglöa des in Nährgelatine
direkt geimpften Wasser-Alkoholgemisches. (Vergl. auch Fig. 6,
Taf. XXXVII, aus dem Abklatsch derselben Kultur.)

Kult. 5. Alkohol 1 : Wasser 33.
(Taf. XXXVII, Fig. 7 -12, Taf. XXXVIII, Fig. 1.)

Am Sonnabend 7. Juli Nm. 6 Uhr wurden übertragen :

I. Das Alkoholwasser direkt in Nährgelatine.

II. Die verdünnte Kultur in Nährgelatine.

III. Die konzentrirte Kultur in Platten der gewöhnlichen
Gelatine.

Von der verdünnten Kultur wurden zur selben Zeit 4 Tinktions-
präparate hergestellt.

Müller, Bakterien-Forschung. 6

82

N. J. C. Müller,

I. Ergab am Sonntag 8. Juli Zooglöen, gemischt aus Kugeln
und flachen amöbaartigen Gebilden , die letzteren mit Kugelein-
schlüssen. Ein gelungener Abklatsch mit Gentianaviolett ergibt zentral
weinrote Sphären, welche von violetten umschlossen sind. Fig. C 7,
Taf. XXXVII. Die Zooglöa enthält jenen sehr feinen Bacillus mit
Arthrosporen Fig. 10, Taf. XXXVII. Zeiss homog. Imm. 2 mm
Oc. VIII.

I A. Am Sonntag wurden unter der Präparirlupe reine Kugel-
zooglöen und gemischte Amöbazooglöen mit der Glasnadel geholt und
von neuem in Nährgelatine geimpft. Beide ergaben Kugelzooglöen.
Die Frage blieb hier unentschieden. Fig. 1, Taf. XXXVIII.

II. Die verdünnte Kultur ergibt am morgen 9. Juli Stern und
Kugelzooglöen Fig. 1, Taf. XXXVIII in solcher Lage auf der Platte,
dass bei dem Übertragen mit der Glasnadel eine Mischung der beiden
ausgeschlossen war.

Die Sternzooglöa ergibt Bacterium. Die Kugelzooglöa
einen kurzgliedrigen Bacillus mit Arthrosporen Fig. 1 1 , Taf. XXXVII
und Beimischung von Bakterien Fig. 1 2 , Taf. XXXVII. Zeiss
homog. Imm, 2 mm Oc. VITI. Diplobacterium der Sternzooglöen.

III. Die konzentrirte Kultur auf gewöhnlicher Gelatine zeigt
eine 8 mm im Durchmesser haltende Lagune flüssiger Gelatine, mit
undeutlicher Parenchymazooglöen. Ihr optisches Verhalten ist Fig. 1 A,
Taf. XXXVIII: In der nächsten Zone der festen Gelatine
steht die Axe grösster Elastizität tangential. In der
äusseren Schale steht sie radial E, E. Die Interpretation
ist nun im Vergleich zu der früheren ähnlichen Beobachtung (Bacillus
aus der Dottersubstanz eines faulen Hühnereis) leichter zu geben,
da mit dem letztern Phänomen alle Daten erschöpft sind.

Die Prämissen lauten: 1) Ein mit Wasser gesättigtes
Gel a t in ep lä ttch en zeigt die Interferenz Blau — Gelb
zu Gyps Rot I und ist in dieser Hinsicht homogen.
Wird in ein solches Plättchen ein halbkugeliger Ein-
druck mit Hilfe einer an der Spitze abgerundeten Glas-
nadel eingebracht, so erscheint im Polariskop eine
Kreiszone, in welchen die je zwei Additions- und Sub-
traktionsquadranten auf die tangentiale Lage der
grössten Elastizitätsaxe hinweisen.

2) Zwei verschiedene Bakterien in eine solche Druckstelle ein-

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

83

geimpft verhalten sich gleich, indem sie eine kreisförmige oder breit-
elliptische Lagune bilden, diese durch Assimilation und Umsetzung
der Gelatine erweitern und das umliegende Gelatinefestland in Ring-
zonen verschiedener Elastizität zerlegen.

3) Sie verhalten sich in ihrer Wirkung auf das die Lagune
begrenzende Gelatinefestland ungleich :

a) Die Ungleichheit kann für verschiedene Bakterien nur darin
zum Ausdruck kommen, dass bei der einen Art die innere Schale
in tangentialer Richtung negativ, die äussere positiv gespannt ist,
während bei der andern für dieselben Schalen die Vorzeichen um-
gekehrt liegen;

b) oder darin, dass jede der zwei Arten nur eine Polarisations-
schale bildet, welche bei der einen tangential positiv, während sie
bei der andern tangential negativ gespannt ist. Nun liegt aber, wenn
man von den Interferenzen in den Strahlen der Fig. 5, Taf. XXII
absieht, hier in Fig. 1 A, Taf. XXXVIII das Phänomen genau so
wie dort. Da ich nach der Supposition 3) bestrebt sein musste,
mehrere solcher Fälle zu untersuchen, so fand ich denn auch noch
im Verlauf der vorliegenden Analyse in der Kultur 3 einen und in
der Kultur 2 den letzten Fall derartiger Molekularumlagerung Fig. 8H,
Taf. XXXVIII, Fig. 6 C, XXXIX. In allen vier Aufnahmen steht
die grosse Axe der Elastizität in der inneren dicht an die Bakterien,
kultur angrenzenden Gelatineschicht tangential. Die einzige einfache
Hypothese lautet: Alle bisher untersuchten Bakterien-
kulturen versetzen die wasser gesättigte Gelatine in
der Nähe der Kultur in tangentialer Richtung in nega-
tive Spannung (Zug), weil sie der Gelatinemasse Was-
ser entziehen.

Kultur 4. Alkohol 1 : Wasser 42.
(Taf. XXXVIII, Fig. 2-7.)

Die Impfung in dieselben Substrate in der gleichen Weise wie
vorher am Sonntag 8. Juli Vorm. (j Uhr:

A. Verdünnte Stichkultur in Koch-Gelatine.

Am 9. Juli, 24 Stunden nach der Übertragung, zeigte der
sphärische 4 — 5 mm im Durchmesser haltende Belag Fig. 2 A,
Taf. XXXVIII wellige, doppelt gebuchtete Begrenzung, flache Mäan-
der-Differenzirung, wie ein Hirn im Basrelief dargestellt erscheinen

84

N. J. C. Müller,

würde. Im Zentrum Kugelzooglöen Fig. 2, A b. Am Rande de»
Belages zwei Flossen hyaliner, zierlich gezähnelter Ausflüsse c. Mit
der feinen Glasnadel konnte die Masse aus c ganz rein, die Masse
aus den Kugelzooglöen des Zentrum unrein und die Masse des
Mittelfeldes rein herausgeholt werden. Das Ergebnis ist:

Die Randflosse Rein-Micrococcus in Ketten, Fig 5,Taf. XXXVIII.

Das Mittelfeld Rein-Micrococcus in Kolonien, Fig. 6.

Die zentrale Zooglöengruppe Rein-Micrococcus in Teilungs-
zuständen, Fig. 7.

Fig. 3, Taf. XXXVni Probe aus der Stichkultur.

Fig. 4, Taf. XXXVIII Probe aus der Zooglöa des in Nähr-
gelatine geimpften Alkoholwassers (decken sich mit Fig. 4 ; s. oben
Taf. XXXVII).

B. Das ursprüngliche Alkoholwasser gemisch in
Koch-Gelatine zeigt einen Sphärenbelag von 4 — 5 mm Durchmesser
mit hyalinem, zierlich doppeltgebuchtetem Rande. Zackenzooglöen, zum
Teil in Verband und in Teilung, im Mittelfeld Fig. 2, Taf. XXXVIII a
der Anfangszustand solcher Zackenzooglöen. Im Zentrum die Kolonie
von scharf konturirten Kugelzooglöen. Fig. 2, B b, Taf. XXXVIII.
Die mit der Nadel aus dem Mittelfeld geholte Probe ergibt: Rein-
Bacterium, mit geringer Beimengung langgliedriger Bazillen.

C. Die konzentrirte Stichkultur, in gewöhnliche Gelatine
geimpft, ergibt den Kreisbelag C. Fig. 2, Taf. XXXVIII, mit flachen
Randbuchten, sonst ohne Differenzirung im Mittelfeld. Die am Mikro-
skop untersuchte Probe ergibt Rein-Bacterium, mit geringer Bazillen-
beimischung wie unter B. Die optische Wirkung ist bis Montag
7 Uhr Nachm. am 9. Juli gleich Null.

Die im Nachfolgenden noch abzuhandelnden Stichkulturen
3, 2, 1, wurden wie bisher auf dieselben Medien übertragen am
Montag, den 9. Juli Nachm. 5 Uhr.

Die Kultur 3. Alkohol 1 : Wasser 5ü.
(Taf. XXXVIII, Fig. 8. Taf. XXXIX, Fig. 1—5.)

Das Alkohol Wasser gemisch direkt in Nährgelatine Fig. 8 A,
Taf. XXXVm ergibt nach 23 Stunden: A Kugelzooglöen, welche
später wolkig trübe, mehr oder weniger buchtig kontourirt und in
Teilung und Apposition begriffen sind.

Die mikroskopische Probe hieraus ergibt fast Rein-Bacterium.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

85

Ebenso am Mittwoch, den 11. Juli, s. Fig. 1, Taf. XXXIX Diplo-
bacterium (Zeiss); bei a zwei Diplobakterien in der Kettenlage.

Die verdünnte Kultur in Nährgelatine ergibt nach 28 Stun-
den die Randzone mit Buchten, das Mittelfeld mit zusammenfliessenden
Kettenzooglöen ; Fig. 8 D, Taf. XXXVIII.

Die mikroskopische Probe ergibt Rein-Bacillus mit Arthrosporen.
Aus den Mäandern (s. Fig. G 8, Taf. XXXVIII) am 11. Juli Vorm.
10 Uhr drei Mikroben: ein feiner Bacillusa, Fig. 2, Taf. XXXIX
b, c, d. Entwicklungsfolge des Diplobakterium. Die Grundmasse
besteht aus den Gebilden der Fig. 3, Taf. XXXIX, welche offenbar
mit b, c, d, Fig. 2, Taf. XXXIX, im genetischen Zusammenhang stehen.

Die konzentrirte Kultur in gewöhnlicher Gelatine ergibt
einen fast homogenen Belag, C, Fig. 8, Taf. XXXVIII, in Ellipsenform.

Die mikroskopische Probe ergibt: Rein-Micrococcus.

Dieselbe Kultur erscheint in Mäander geordnet durch Werfung
der Gelatine (Fig. 8 G). Solche Falten der Werfung konnten im
Polariskop im Anschluss an frühere Aufnahmen (s. Fig. 5 B,
Taf. XXII A — Fig. 1 A, Taf. XXXVIII) untersucht werden: Die
Axe der grössten Elastizität steht in der nächsten
Schale zur Kultur tangential. (Dritte Bestätigung.)

Die verdünnte Kultur in Nährgelatine auf dem Objektträger
ergibt die Fadenform jenes Diplobacterium (Fig. 2, Taf. XXXIX),
den feinen Bacillus mit Arthrosporen a, und Konglomerate eigen-
tümlicher Kugeln c Fig. 4.

Die Stichkultur im Juli untersucht (Fig. 5, Taf. XXXIX) zeigt
die Gruppe a cylindrisch, b spindelig, c die Diplobakterien, d den
Bacillus.

Die Kultur 2. (Alkohol 1 : Wasser 72.)
(Taf. XXXIX, Fig. 6-10.)

I. Das Alkoholwasser direkt in Nährgelatine auf dem
Objektträger ergibt (Fig. (3, Taf. XXXIX) wenig Kugelzooglöen, in
Verbindung mit flachen, buchtig gelappten Zooglöen, b, Avelche mit
den ersteren in mannigfacher Art kombinirt erscheinen.

Mikroskopische Analyse : Jenes Diplobacterium in Fäden Fig. 7A
und eine Coccacee B Fig. 7.

II. Die verdünnte Stich kultur in Nährgelatine auf dem
Objektträger dagegen ergibt Zooglöen Fig. 6d, welche die Entwich-

86

N. J. C. Müller,

lung a, b, c, d durchlaufend, schliesslich stark zentrifugale Aus-
stülpungen zeigen, mit zahllosen Mäanderschraffirungen.

Die mikroskopische Analyse: Jener feine Bacillus in Stäbchen
mittlerer Länge (Fig. 8, Taf. XXXIX).

III. Die konzentrirte Kultur in gewöhnliche Gelatine,
Fig. 6BC, Taf. XXXIX: B elliptische Kultur von 15 mm Durch-
messer, mit polarer Strahlung, diese halbmondförmig. Die Haupt-
kultur ist im Mittelfeld flüssig. Der Komplex ist von einer flüssigen
Sphäre umhüllt. Die Probe aus dem Mittelfeld ergibt einen ausser-
ordentlich feinen Bacillus. Die Randzone dasselbe.

Die optische Analyse der Kultur im Polariskop Fig. G C ergibt
die Axe der grössten Elastizität tangential. (3. Bestätigung zu der
Darlegung s. oben.)

Die Kultur 1. Reines Weserwasser (ohne Alkoholzusatz).
(Taf. XXXIX, Fig. 11.)

I. DieverdünnteSticlikulturin Nährgelatine Fig. 1 1 A B,^
Taf. XXXIX zeigt einen zierlichen Kreisbelag mit zentralen Kugel-
zooglöen A. a in symmetrischer Sprossung und Zerreissung der
peripheren Schale, b polare Sprossung der Kernzone. Apposition
und Sprossung kleinster Sphären in c. Das Mittelfeld und der Rand
zeigen die gebuchteten in Sprossung und Apposition begrifi'enen
hyalinen Zooglöen B.

Die mikroskopische Analyse der Randzooglöen ergibt „Rein-
Bacterium", sehr kleine Individuen.

II. Die konzentrirte Kultur in gewöhnliche Gelatine
zeigt 10 — 15 mm im Durchmesser aufweisende Ellipsenbelage Fig. HC,
einer derselben mit der Randausstülpung, in D bei flach-
muschelige Erhebungen mit zierlichem Rande.

Das Mikroskop zeigt in dem Belag einen Bacillus in Langfäden.

III. Die dekantirten Bakterien im Juni aus der Stich-
kultur bei Zeiss homogene Imm. 2 mm Oc. VIII sind Fig. 1 , Taf. XL.

a) Langfadenbazillen.

b) Kurzgliederbazillen.

c) Kurzgliederbazillen in Spaltung.

d) e, f, g, gl, i, k, 1 zusammengehörige Zustände jenes Dipo-
bakteriura.

h) Bazillengruppe, ein Stab mit zentraler Endospore.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

87

m) Micrococcusgruppe.

n) Bacterium und Diplobacterium.

0) Spindelbacterium in Zwillingen und Tetraden.

p) Kurzstäbe: Bazillen mit Polen verschiedener Lichtbrechung,
r) Grössere Coccacee: isolirte Kugeln.

s) Halbseitig scharf kontourirte Gebilde mit scharfen licht-
brechenden Spindeleinschlüssen.

Synopsis aller Kulturen ihrer Zooglöen und Bakterien.

Z o o g 1 ö a. I n Ii a 1 1.

Kult, 8. Farblose Kugelzooglöen

in Apposition: Diplobacterium. Bacillus.

Kult. 7. Farblose Kugelzooglöa: Micrococcus.

Farblose Sternzooglöa : Micrococcus.

Grüne Kugelzooglöa: Bacillus und Arthrosporen.

Grüne Sternzooglöa: Bacillus.
Kult. G. Orange Zooglöa: Diplobacterium (Micrococcus).

Meniscusbelag : Bacillus mit falscher Dichotomie.

Kult. 5. Sternzooglöa: Bacterium.

Kugelzooglöa: Bacillus.
Kult. 4. liandtlosse : Micrococcus.

Mittelfeld : Micrococcus.

Centralzooglöen : Micrococcus.
Kult. 3. Kugelzooglöa: Bacterium.
Kult. 2. Strahlenzooglöa: Bacillus.

Die genau untersuchte Kultur 4 liefert den Beweis, dass die
Belagform gestaltlich komplizirt erscheinen und doch nur eine oder
wenige Bakterien enthalten kann.

XV. Theoretische Betrachtungen.

Zwischen der Zooglöa und der Bakterien-Spezies oder -Gattung
besteht also keine spezifische Beziehung, wie etwa „Acer monspessula-
num Blatt dreilappig, Acer campestre Blatt fünflappig" u. s. f. Zooglöa
und Belagform auf dem Substrat müssen von allgemeineren physischen
Beziehungen des Verhaltens abhängig sein. Man muss zunächst unter-
suchen: wie benehmen sich Bakterien überhaupt auf dem Substrat?

Wir unterscheiden im physischen Sinne drei Möglichkeiten:

1) Die Keime sind von dem Substrat nach allen Richtungen ein-
geschlossen. (Impfung, Stichkultur im Gelatinecylinder.)

88

N. J. C. Müller,

2) Uie Keime liegen im Meniscus der Gelatine im Cylinder.

3) Die Keime liegen in der Fläche des Gelatineplättchens (der
Gelatinetropfen auf dem Objektträger).

Vorgänge im G el atin e cyl in der.

In dem Moment, wo die Füllung des Cylinders geschieht, ist
die Gelatine isotrop, sie wird aber mit dem Erkalten schon anisotrop
und muss dieses Verhalten mit der Zeit steigern, da sie Wasser
durch Verdunstung verliert. Die Gelatinemasse im Meniscus geht
über von Fig. lOB nach Fig. IIB, Taf. XLVII, um schhesslich,
wenn die Spannung gross genug ist, von dem Glascylinder loszu-
reissen. Die Gelatineraasse in dem Cylinder hat drei Achsen ver-
schiedener Elastizität und Dichte, von welchen eine in der Cylinder-
axe liegt. Da, abgesehen vom Meniscus selbst, jeder Stich parallel
der Cylinderaxe denselben Widerstand für die feine Platinnadel,
wie für wachsende Bakterien erfährt, kommt diese Richtung für die
Form des Belages nicht weiter in Betracht. Anders liegt dies für
die Grenzfläche im Meniscus und für jeden gedachten Transversal-
schnitt durch die Gelatinemasse. Hier liegt die Axe der grössten
Elastizität im Anfang tangential transversal, d. h. eine Bakterie,
welche von gegebenem Punkt aus in transversaler Richtung wächst,
findet auf die Einheit der Weglänge (1 mm) in Richtung des Radius
eine grössere Zahl von Nährmolekeln, aber einen
grösseren Kohäsionswiderstand. Umgekehrt findet sie in
der Richtung der Tangente eine geringere Zahl von Nähr-
moiekeln, aber einen kleineren Kohäsionswiderstand.

Die Sache liegt für alle Bakterien demnach so : Ist a der mit
der infizirten Platinnadel ausgeführte Stichkanal Fig. 14, Taf. LXVI
und bedeutet der Kontour in a die gleichmässige Dichte des Belags
der Impfmasse, so ist kein Grund vorhanden, warum nicht die Zu-
wachse an Bakterien und die Umsetzung der Gelatine so fortschreiten,
wie Fig. 15, Taf. XLVI angibt, also ganz gleichmässig um den
Stichkanal im Meniscus sowohl, wie in der Cylinderfläche des
Kanales, sowie in dessen unterem Querschnitt. Dies kommt nicht
vor, ganz abgesehen davon, dass die Impfmasse von der Nadel schon
in der Nähe des Meniscus an der Gelatine abgestreift wird, so dass
von den Infektionspartikeln in der Nähe des Meniscus viele, im Ende
des Stichkanales wenige liegen, müssen unterschieden werden zwei

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

89

bis drei physische Faktoren und ebensoviel Momente, welche in der
vitalen Energie der Bakterien begründet liegen :

A. Die Bakterie verflüssigt die Nährgelatine nicht.

Die Kultur schreitet im Meniscus in transversaler Richtung
rascher fort, wie im Stichkanal Fig. A 16, Taf. XLVI. In der Nähe
des Meniscus sind zwei Fälle möglich :

a) Die Gelatine ist soeben eingefüllt wasserreich, der Meniscus
flach konkav, die Axe der grössten Elastizität steht, bezogen auf den
Kreis, tangential, Fig. 10, Taf. XLVII (E die Elastizitätsellipse).

a. Die Bakterie hat eine stärkere Zentrifugaltendenz, findet in
radialer Richtung, wie oben betont mehr Nährmolekeln, aber einen
grösseren Kohäsionswiderstand : Der Belag wird aktinomorph
mit tangential geordneten Belagauswüchsen. Fig. lOA,
Taf. XLVII.

ß. Die Bakterie hat eine schwächere Zentrifugaltendenz, Wider-
stand und Elastizität sind wie vorher.

b) Die Gelatine hat einen tiefkonkaven Meniscus, Fig. IIA,
Taf. XLVII. Die Axe der grössten Elastizität steht radial. Die
Bakterie (in diesem Fall Micrococcus) sendet zahlreiche Kugelzooglöen
in radialen Strahlen' hinaus und die Meniscusböschung hinauf, parallel
der Axe des kleinsten Widerstandes.

c) Dieselbe Bakterie, welche im engen Stichkanal, Fig. 16,
Taf. XLVI nur geringen Fortschritt macht, breitet sich rasch auf
der Gelatine aus, wenn diese beim Einführen der Nadel spaltet.
Fig. 16 A und B, Taf. XLVI.

d) Die Bakterie in minimaler Menge der Keime kommt im
Stichkanal zur Entwickelung, Fig. 2A, Taf. XLVII. Diese schreitet
nach B fort, die obere Kolonie eilt rasch vor. Die Interpretation
ist kontrovers: 1) Die dem Meniscus nähere Kolonie a wächst rascher,
weil mehr Keime dort abgestreift waren. 2) Die Kolonie a wächst
rascher, weil sie näher am Meniscus, also am Sauerstoffreservoir liegt.
3) Die Kolonie wächst rascher, weil in ihr mehr Keime abgestreift
waren und weil sie näher am Sauerstoffreservoir liegt.

Die Kolonien wachsen von A nach C Fig. 2, Taf. XLVII heran.
Hier fällt die Annahme der reicheren Keimanhäufung durch Ab-
streifen hinweg. Die Interpretation ist aber immer noch kontrovers:
]) Die untere Kolonie ist grösser weil sie am weitesten vom Sauer-

90

N. J. C. Müller,

Stoffreservoir entfernt liegt.') 2) Der Übergang von A nach C ist
ein Zufall, das heisst von unbekannten Koi'ncidenzen abhängig.

B. Die Bakterie verflüssigt die Gelatine.

I. Der Übergang von A nach B nach C Fig. 9, Taf. XL VII
sagt aus : Die Verflüssigung um einen Stichkanal mittlerer Dicke
schreitet in transversaler Richtung rascher fort, wie in longitudinaler
und in der Nähe des Meniscus rascher, wie in den tieferen Teilen
des Stichkanales. (Zu vergleichen mit Fig. 3, Taf. XLVII.) Hier
sind wiederum wie unter A (s. oben) diese Kontroversen zu er-
wägen : 1) Der Übergang von A nach C ist Folge einer grösseren
Anzahl von Keimen, welche in der Nähe des Meniscus abgestreift
wurden. 2) Er ist Folge der grösseren Nähe am Sauerstoffreservoir.
3) Er ist Folge beider Verhältnisse.

Der Beweis für 3) liegt in Fig. 7, wo die im unteren Quer-
schnitt der Impfnadel haftende Impfmasse ein sphärisches V7ölk-
chen bildet.

II. Die Verflüssigung schreitet bei derselben Bakterie in der
Längsrichtung rascher fort ,Fig. 3, Taf. XLVII A, B, wie in trans-
versaler Richtung um den Stichkanal. Hier ist eine sehr feine Impf-
nadel angewandt worden. Der Voi'gang beweist, dass der Sauer-
stoff der Luft von Belang ist.

III. Der Übergang Fig. 8 A, B, C, Taf. XLVII zeigt beide
Faktoren in Wirkung: EinBuss der Luft vom Meniscus aus und
Transversalwirkung der Keime in der Fläche des erweiterten Kanales.

IV. Die am Rande, in der Grenzfläche, zwischen intakter
Gelatine imd verflüssigter oder von Bakterien bewohnter Gelatine,
liegenden Bakterien gleicher Art müssen sich anders verhalten oder
kürzer gesagt, Grenzvolk und Binnenlandvolli müssen sich in Bezug
auf ihre Ernährung unterscheiden. Der Verstoss des Grenzvolkes
führt in zentrifugaler Richtung in die intakte Gelatine, während der
Verstoss des Binnenvolkes in bewohntes zum Teil zersetztes Substrat
gerichtet sein muss. Hat dieses Moment eine Bedeutung, sa
kommen Übergänge zum Ausdruck wie A nach B und C der Fig. 8^
Taf. XLVII.

V. Die Verflüssigung schreitet in der Längsrichtung rascher

Vielleicht ein AnaeroLier der Autoren.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

91

fort wie in der Transversalen, vergl. Fig. 3, Taf. XLVII, wenn sehr
dünne Nadeln angewendet werden. Drei solche ungleich tiefe Stiche
Fig. 5 A sind ausgeführt. Im Endzustand ist die Gelatine vom
Meniscus a nach dem Niveau b verflüssigt. Das Ende des punktirten
dritten und längsten Kanales reicht noch in die feste Gelatine im
Grunde des Cylinders. Die Endigungon der beiden kürzeren Stich-
kanäle sind durch Sedimentplatten markirt in B. Der Vorgang be-
weist, dass die Stichkanäle den Verkehr mit der Atmosphäre er-
leichtern, bis zu dem Niveau, in welchem sie endigen.

C. Vorgänge im abgeplatteten Gelatinetropfen. (Plattenkult.)

Die bei mässiger Temperatur, 30° — 35 C, verflüssigte Nähr-
gelatine auf Objektträger (besser auf Deckgläser) getropft, bildet
einen Kreis von 10 — 15 mm Durchmesser imd erstarrt. Eine solche
Gelatinekreisplatte ist optisch einaxig. Die optische Axe steht senk-
recht zur Ebene des Objektträgers und kommt für alle die vorstehend
geschilderten und im nachstehenden zu analysirenden Phänomene
nicht in Betracht. In den Richtungen der Fläche ist diese Gelatine-
platte homogenelastisch und dicht oder doch nur schwach anisotrop
am Rande.

Ausser den physischen und chemischen Momenten, welche ich
äussere nennen will und den Kohäsions- und Nährverhältnissen in
dem künstlichen Nährgelatinesubstrat, müssen die zu studirenden Er-
scheinungen endlich noch abhängig sein von der jeweiligen Rassen-
energie und der Entwickelungsphase. Gehen wir, um den
Gedankengang ganz klarzulegen, von der Spore aus, so sind die
Phasen für einen Bacillus z, B :

Beobachteter Formcyclus: Phase:

I. Spore: Keimfaden j y^j-g^^g des Wachsens (1)

II. Langfäden |

III. Kurzfäden: Arthrosporen | y^.gang der Teilung und

f f J Spaltung 12)

IV. Propagation durch j y^rgang der Ausstreuung und

V. Kurzfäden A?throsporen j ' Ejakulation (3)

t

Endosporen .... Ruhe und darauffolgende Keimung (4).

92

N. J. C. Müller,

Bei der Übertragung der Impfmasse in das Nährsubstrat kann
der gegebene Bacillus in der Phase 1 oder 2 u. s. f. stehen und
es muss, wie dies oben bei den Wässern des öfteren erwiesen ist,
je nach der Phase ein verschiedenes Belagsbild entstehen.

In der nachfolgenden Zusammenstellung ist hievon abgesehen.
Sie stellt eine deduktive Entwicklung der Belagsfiguren dar aus
wenigen Prämissen, welche durch die Beobachtung sich leicht er-
geben und hier in kurzen Überschriftssätzen definirt sind :

1) Yon einem gegebenen Punkt, dem Keimpunkt in der Gelatine-
platte, breitet sich die Bakterie in die Kreisform aus, wenn das Sub-
strat homogen ist. Der Hauptbelag ist und bleibt ein Kreis.

2) In Innern dieses differenziren sich wiederum Kreise oder
Kugeln.

3) Im Innern bilden sich Sterngruppen, infolge stärkerer Zen-
trifugaltendenz des vegetativen Zuwachses.

Es ergeben sich somit zwei physische (mechanische) Kategorien
und zwei ebensolche Momente für das Zustandekommen morphotisch
scharfumschriebener Belage durch Bakterien auf Gelatine.

I. Kategorie. Das Substrat ist homogen dicht in seiner
Grenzfläche, welche in der Mehrzahl der Versuche auf dem Objekt-
träger auch die Impffläche ist.

1. Moment. Es herrschen Flüssigkeitsströme im Sinne der
Sachsschen Theorie der Emulsionsfiguren, welche je nach den Be-
dingungen der Ausstrahlung zu aktinomorphen oder zygomorphen (ein-
seitig polarisirten), zunächst unsichtbaren Belagfiguren der Keime führen.

a) Die Bakterie greift das Substrat nicht an, das will sagen,
die Wirkung ist optisch nicht nachweisbar.

b) Die Bakterie greift das Substrat an, mehr oder weniger stark
erodirend, ätzend oder das Substrat verflüssigend oder in seiner
optischen Reaktion verändernd.

2. Moment. Die im Rand der sichtbaren Belags-
figur belegenen Individuen gleicher Art (so bei einer
Reinkultur) liaben, bei zentrifugaler Tendenz der vege-
tativen Entwicklung, andere Ernährungsbedingungen
wie die Individuen, des Mittelfeldes. Daher der meist
hyaline Rand gegenüber dem Mittelfeld, welches dichter granulirt ist.

A) Die gegebene Bakterie hat eine geringe Zentrifugaltendenz:
Micrococcus Sarcina, Bacterium u. s. f.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

93

Der Rand ist alsdann flach bogenlinig oder glatt.
Hierunter nocli a) und b) wie in 1.

B) Die gegebene Bakterie hat eine grosse Zentrifugaltendenz:
Bacillus, Vibrio alle in Fäden wachsende.
Hierunter noch a) und b) wie in 1.

Der Rand ist gezahnt oder tief gezahnt oder tief gebuchtet
oder doppelt gezahnt u. s. f.

II. Kategorie. Das Substi'at ist (wie in der gewöhnlichen
Grelatine und mehr noch in den Additionsplatten derselben) nach
zwei zu einander senkrechten Richtungen ungleich elastisch und dicht.

Unter dieser Kategorie 1. 2. Moment, unter diesen wieder
a) b), unter dem 2. Moment wieder A) a) b) und B) a) b).

Diese physischen oder äusseren Kategorien II. und Momente 1. 2.
mit den im inneren Wesen der Bakterien begründeten Momenten
a) b) und A) B) kombiniren sich nun aber noch mit dem Phasen-
unterschied der Entwicklung 1 bis 4 (Seite 418).

Wir ziehen diesen aber nicht hierherein, führen die aus dem
obigen herzuleitenden Belagfiguren in Abbildungen vor.

I. Mechanische Kategorie. Das Substrat ist homogen
dicht und elastisch.

1. Moment nach der Impfung sehr verdünnter Bakterienkulturen
herrschen in Impfstelle Emulsionströme :

A. Aktinomorphie der durch Emulsionströme entstandenen Figur.

a) Die Bakterie greift das Substrat an, verflüssigt daselbe
aber schwach.

a. Die Zentrifugaltendenz am Rande ist 0 oder sehr klein,
f. Zooglöen werden nicht gebildet.

Der Rand (R) ist gleich dem Mittelfeld (M).

M mit Sterngruppen, Fig. 2, Taf. XL.

M mit Kreisgruppen, Fig. 3.

M vollkommen homogen granulirt, Fig. 1, Taf. XL.
Der Rand ist vom Mittelfeld verschieden.
Der Rand zeigt Häufung.

M mit Sterngruppen, Fig. 4 a, Taf. XL.

M mit Kreisgruppen, Fig. 4 b.

M ist homogen granulirt, Fig. 4 c.
Der Rand zeigt homogene Hyahnzone.

M mit Sterngruppen, Fig. 5 a, Taf. XL.

94

N. J. C. Müller,

M mit Kreisgruppen, Fig. 5 b.
M ist homogen granulirt, Fig. 5 c.
Der Rand zeigt homogene Hyalinzone mit Radialgranulirung.
M mit Sterngruppen, Fig. 6 a, Taf. XL.
M mit Kreisgruppen, Fig. 6b.
M ist homogen granulirt, Fig. 6 c.
Y. Zooglöen werden gebildet, nur ein System. (1. System.)
Nur Randparenchyma.

M homogen granulirt, Fig. 7 a, Taf. XL.
M mit Sterngruppen, Fig. 7 b.
M mit Kreisgruppen, Fig. 7 c.
Rand und Mittelparenchym.

M mit unvollkommenen Yerband-Radialketten, Fig. 8,

Taf. XL.
M vollkommen parenchymatös.
M Pediastrumform des Randes, Fig. 9, Taf. XL.
M Epithel, Epidermisform des Randes, Fig. 10.
M mit Appositionszooglöen, Fig. 11, 12.
M mit losen Ketten, welche an den Rand anschliessen.
Vollkommenen Aktinomorphie, Fig. 13, Taf. XLL
Ausgesprochene Zygomorphie, Fig. 14.
y. Zooglöen werden gebildet 1. und 2. System. Das 2. System
auf homogener — Sterngruppen oder Kreisgruppen-Unterlage.
Zooglöen des 2. Systemes regellos zerstreut.
Randhäufung (s. unter I A a a und -(....).
M homogen, Fig. 15, Taf. XLL
M mit Sterngruppen, Fig. 16.
M mit Kreisgruppen, Fig. 17.
Rand hyalin.

M homogen, Fig. 18, Taf. XLL
M mit Sterngruppen, Fig. 19.
M mit Kreisgruppen, Fig. 20.
Rand hyalin mit Radialpunktirung.
M homogen, Fig. 21, Taf. XLL
M mit Sterngruppen, Fig. 22.
M mit Kreisgruppen, Fig. 23.
Zooglöen des 2. Systems isolirt in Radialgruppen.
Randhäufung.

Beiträge zur Kenntnis der Bakterien.

95

M homogen, Fig. 24, Taf. XLI.

M mit Sterngruppen, Fig. 25.

M mit Kreisgruppen, Fig. 26.
Rand hyalin.

M homogen, Fig. 27, Taf. XLI.

M mit Sterngruppen, Fig. 28.

M mit Kreisgruppen, Fig. 29.
Rand hyalin mit Radialpunktirung.

M homogen, Fig. 30, Taf. XLI.

M mit Sterngruppen, Fig. 31.

M mit Kreisgruppen, Fig. 32.

Zooglöen des 2. Systems in Algenketten. Aktin omorphie
dieser, Taf. XLI, XLII.

Randhäufung: Randhyalin:

M homogen . . Fig. 83. M homogen . . Fig. 36.

M mit Sterngruppen „ 34. M mit Sterngruppen „ 37.

M mit Kreisgruppen „ 35. M mit Kreisgruppen „ 38.

Rand hyalin mit Radialpunktirung.
M homogen . . Fig. 39.
M mit Sterngruppen „ 40.
M mit Kreisgruppen „ 41.

Zygomorphie der Algenketten Taf. XLII.
Randhäufung: Randhyalin:

M homogen . . Fig. 42. M homogen . . Fig. 45.
M mit Sterngruppen „ 43. M mit Sterngruppen „ 46.
M mit Kreisgruppen „ 44. M mit Kreisgruppen „ 47.

Rand hyalin mit Radialpunktirung.
M homogen . . Fig. 48.
M mit Sterngruppen „ 49.
M mit Kreisgruppen „ 50.

£. Zooglöen werden gebildet (erstes und zweites System), das
erste System ist ganz oder zum Teil parenchymatös, das zweite
Zooglöensystem liegt in oder über dem ersten.

96

N. J. C. Müller,

Das Mittelfeld zeigt keine Zooglüen, der Eand zeigt
Zooglöen (des ersten Systems).

Die Zooglöen des zweiten Systems stehen:

Im Aigenkettentypus mit

Über R. und M.

Isolirt in Ra- '

Aktinomor-

Zvsomor-

i/o

zerstreut.

dialgruppen.

phie.

p h i e.

M. liomogen

M. liomogen

M. homogen

M. homogen

Rand- Rand-

Rand- Rand-

Rand- Rand-

Rand- Rand-

epithel Pediast.

epitliel Pediast.

epithel Pediast.

epithel Pediast.

51 52

57 58

63 64

69 70

M. mit Sterngr.

M. mit Sterngr.

M. mit Sterngr.

M. mit Sterngr.

R.-E. R.-P.

R.-E. R-P.

R.-E. R.-P.

R.-E. R.-P.

53 54

59 60

65 66

71 72

M. mit Kreisgr.

M. mit Kreisgr.

M. mit Kreisgr.

M. mit Kreisgr.

R.-E. R.-P.

R.-E. R.-P.

R.-E. R.-P.

R.-E. R.-P.

55 56

61 62

67 68

73 74

Das Mittel

feld und der Rand zeigen Zooglöen des

ersten Systems im Parenchymaverband.

Die

Zooglöen des zw

eiten Systems stehen:

Im Aigenkettentypus mit

Über R. und M.

Isolirt in Ra-

Äktinomor-

Z y g 0 m 0 r -

zerstreut.

dialgruppen.

phie.

p h i e.

Rand- Rand-

Rand- Rand-

Rand- Rand-

Rand- Rand-

epithel Pediast.

epithel Pediast.

epithel Pediast.

epithel Pediast.

75 76

77 78

79 80

81 82

a. Die Zentrifugaltendenz ist merklich, stark bis sehr stark.
Zooglöen des ersten und zweiten Systemes fehlen, Taf. XLIII.
Der Rand ist gewimpert ohne Randabhubzone.

M homogen, Fig. 83.

M mit Sterngruppen, Fig. 84.

M mit Kreisgruppen, Fig. 85.
Der Rand ist gewimpert mit peripherer Abhubzone.

M homogen, Fig. 86.

M mit Sterngruppen, Fig. 87.

M mit Kreisgruppen, Fig. 88.

VerUig fon Ertrin Nägüe, Statujart.

Siu-ltgart.

VerlM Envir, jYa'oeU, Stv.ttjf rt.

Taf. XII.

Taf. 4.

Tal XIV.

Taf. 6

V

10.

N.J C- Uiiüer rai nat dil.

Ulk Ävst.v. Himer lMö:Ur, pranlifitril'M

Verlag von BrwinS'lgeU, Stuttga-rt.

Verlag von Ervidn J^ä'^eU , Suittocirz.

YcrUii nn ErwmNäcieU, Stutlgart-

I

Taf. XVII.

Taf. 9

Yirla^ von ErwinWu'gele, Stu-ttgart.

YerUtg von F.rwin Nabele-, Stuttgart.

i

Taf. XIX.

Taf.ll

5.

Verlag ir^rc E] wlnlUiLjilc, StiL'^tgaJ-t.

nrlai) ro,-. Erwin Nagele, Stixttgart

A

12.

ff

■'III

MJ.C.MiUler aj r.at.del-

I

Verlag mnErwinSaCjtle, Stuttgart

(

Vfrlag vonErwiv J^laaele, Stuttg/irt.

■ ati Rat. dcl.

Utk- Amt. vW-jt

VcrlciP wnErmrtMatrtk, Stuttgart

Vertag rmErr/iRUäyeU, StuUgart

Vcrln^ roiiErmin Md'ade, SmUgart

I

,5>-n"'; Sä,

Verlag von. Envin Nägele, Stiiti^ari}.

Verlag voyi Fri'/in.M'dg sie, Stnttoart-

Verlag von Erwin Nägele, Stuttgart.

Bibiiotheca Botanica

Abhandlungen aus dem Gesammtgebiete der Botanik

herausgegeben von

Prof. Dr. Chr. liuersseu und Prof. Dr. B. Frank
Königsberg. Berlin.

Die Bibiiotheca Botanica erscheint in Quartformat in zwanglosen Heften
mit zahlreichen, zum grossen Teil fä higen Tafeln. — Jedes Heft wird einzeln
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Biologischen Station zu Plön

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Dr. Otto Zacharias

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Prof. Dr. M. Fünfstück

Docent der Botanik an der Kgl. techn. Hochschule in Stuttgart

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Durch die vorzüglichen Abbildungen, den massigen Preis und vor allem
das bequeme handliche Format hat sich der Taschenatlas allerseits Freunde er-
worben, und so durfte auch die zweite Auflage, in welcher verschiedenen an den
Herausgeber gelangten Wünschen Rechnung getragen wurde, dazu berufen sein,
das Buch in den weitesten Kreisen einzuführen, und dasselbe zu einem beliebten
Begleiter bei allen Excursionen zu machen.

Text.